Title: wetten.nl - Regeling - Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria (PPE) 2007 - BWBR0023558

Source: https://wetten.overheid.nl/BWBR0023558/

Content:
{"title": "wetten.nl - Regeling - Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria (PPE) 2007 - BWBR0023558", "content": "Besluit van het Productschap Pluimvee en Eieren van 14 juni 2007 houdende voorwaarden\n                                    voor de erkenning van laboratoria alsmede voorschriften met betrekking tot de werkwijze\n                                    (Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria (PPE) 2007)\n\nHet bestuur van het Productschap Pluimvee en Eieren;\n\nGelet op artikel 4, zesde, zevende, achtste en tiende lid van de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften\n                                       pluimveehouderij (PPE) 2007 alsmede artikel 4, zesde lid, van de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende\n                                       industrie (PPE) 2007;\n\nBesluit:\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit besluit verstaat onder branchemethode: de door het productschap vastgestelde methode\n                                    voor de analyse van monsters.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe voorzitter kan een laboratorium als bedoeld in artikel 4 van de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften pluimveehouderij (PPE) 2007 en artikel 4 van de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie (PPE)\n                                       2007 erkennen, indien het naar zijn oordeel voldoet aan de in bijlage l opgenomen voorwaarden voor erkenning.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nEen laboratorium dat door de voorzitter op grond van artikel 2 erkend is, blijft voldoen aan de in de bijlage l genoemde voorwaarden voor erkenning.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe voorzitter kan een laboratorium tijdelijk erkennen en kan een verleende erkenning\n                                    intrekken indien het laboratorium niet meer aan de in de bijlage l genoemde voorwaarden voor erkenning voldoet.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nHet laboratorium voert de analyse van de monsters uit overeenkomstig de voorschriften\n                                    opgenomen in Bijlagen II en III.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n1 Dit besluit wordt aangehaald als: Besluit erkenningsvoorwaarden en werkwijzen laboratoria\n                                          (PPE) 2007.\n\n2 Dit besluit treedt in werking met ingang van de tweede dag na de dag van dagtekening\n                                          van het Verordeningenblad Bedrijfsorganisatie, waarin het wordt geplaatst.\n\nZoetermeer, 14 juni 2007\n\nJ.J. \nRamekers\n\nvoorzitter\n\nS.B.M. \nJongerius\n\nsecretaris\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nErkenningsvoorwaarden voor laboratoria die de analyses van monsters uitvoeren inzake\n                                 het aantonen van Salmonella en Campylobacter.\n\nA. Een laboratorium dat erkend wil worden dient een schriftelijke aanvraag voor een erkenning\n                                       in bij het productschap.\n\nB. Het laboratorium beschikt voor de analyse van Salmonella en Campylobacter over een\n                                       door de Raad voor Accreditatie verleend accreditatiecertificaat op basis van de norm\n                                       ISO/IEC 17025. De scope van de accreditatie moet toereikend zijn voor de matrices\n                                       waarin de bepalingen worden uitgevoerd.\n\nC. Indien het laboratorium is gevestigd buiten Nederland toont het aan dat het beschikt\n                                       over een erkenning van de bevoegde autoriteiten van de staat van herkomst, gelijkwaardig\n                                       aan het onder B genoemde accreditatiecertificaat.\n\nD. Om Salmonella en Campylobacter in een monster aan te tonen, maakt het laboratorium\n                                       gebruik van de branchemethoden, opgenomen in Bijlage II. Nieuwe analysemethoden kunnen worden ingediend bij het productschap, om als branchemethoden\n                                       te kunnen worden toegepast, indien deze van een validatierapport zijn voorzien. Op\n                                       basis van dit validatierapport beoordeelt de Raad voor Accreditatie de geschiktheid\n                                       van de analysemethode voor accreditatie. Na een positief advies beslist het productschap\n                                       of deze analysemethode als branchemethode kan worden vastgesteld.\n\nE. Het laboratorium gebruikt \u00e9\u00e9n van de toegelaten methoden per micro-organisme-matrix\n                                       combinatie. Om te bepalen of het monster wel of niet besmet is met Salmonella of Campylobacter\n                                       mogen niet meerdere testen (methoden) naast elkaar toegepast worden.\n\nOm verder te kunnen serotyperen dient echter bij toepassing van \u00e9\u00e9n van de snelle\n                                       Salmonella branchemethoden een positief monster wel te worden ge\u00efsoleerd door middel\n                                       van de MSRV-methode.\n\nF. Indien het laboratorium bij toepassing van een snelle branchemethode een positieve\n                                       bevinding doet, en de Salmonella-stam ten behoeve van de serotypering niet verder\n                                       ge\u00efsoleerd kan worden, moet op het analysecertificaat hiervan melding worden gemaakt.\n\nG. Het laboratorium neemt deel aan het Salmonella detectie-ringonderzoek en aan het Salmonella\n                                       serotypering-ringonderzoek, beide georganiseerd door het Nationaal Referentie Laboratorium\n                                       Salmonella, welke gesitueerd is bij het Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu\n                                       te Bilthoven.\n\nH. Het laboratorium neemt deel aan het Campylobacter-ringonderzoek, georganiseerd door\n                                       het Nationaal Referentie Laboratorium Campylobacter, welke gesitueerd is bij Animal\n                                       Sciences Group te Lelystad en Voedsel en Waren Autoriteit te Den Haag.\n\nI. De serotypering van de Salmonella-isolaten wordt uitsluitend verricht door een laboratorium\n                                       dat voor deze verrichting uiterlijk op 1 januari 2008 een accreditatiecertificaat\n                                       van de Raad voor Accreditatie heeft verkregen.\n\nJ. Het laboratorium stelt een lijst op met de typen Salmonella die zij kunnen serotyperen.\n\nK. Het laboratorium voert de serotypering uit conform het antigenenschema van Kaufmann-White.\n\nL. Het laboratorium dat de serotypering uitvoert analyseert tevens de isolaten afkomstig\n                                       van een erkend laboratorium dat geen dan wel een beperkt aantal serotypen bepaalt.\n\nM. Het laboratorium hanteert bij het uitwisselen van de analyse resultaten een door het\n                                       productschap vastgestelde code voor de verschillende serotypen Salmonella.\n\nN. Het laboratorium geeft de resultaten van de analyse van de monsters binnen 10 werkdagen\n                                       door aan het productschap door middel van een voorgeschreven format.\n\nO. Het laboratorium hanteert voor de analyse van de monsters van opfok-, fok- en vermeerderingsbedrijven\n                                       en leghennenbedrijven alleen de PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella\n                                       met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee (PVE-SALMONELLA-MSRV-140607).\n\nP. De resultaten van het Salmonella detectie-ringonderzoek en het Salmonella serotypering-ringonderzoek\n                                       van het laboratorium dienen te voldoen aan de norm van het productschap welke is opgenomen\n                                       in Bijlage IV.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAnalysemethoden voor het aantonen van Salmonella en Camopylobacter in dons, mest en\n                                    vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nVoor het aantonen van Salmonella of Campylobacter in de pluimveesector staan de volgende door de Raad voor Accreditatie geaccrediteerde\n                                 en door het productschap vastgestelde branchemethoden ter beschikking.\n\nPVE-SALMONELLA-MSRV-140607\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nPVE-SALMONELLA-SERO-140607\n\nToelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema.\n\nPVE-SALMONELLA-VIDAS-140607\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van VIDAS SLM in dons, afkomstig van pluimvee.\n\nPVE-SALMONELLA-IQ-140607\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van iQ CheckTM real time PCR in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nPVE-CAMPYLOBACTER-140607\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van Preston en CCDA in mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nPVE-CAMPYLOBACTER-VIDAS-140607\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van VIDAS CAM in vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nAlgemene informatie alsmede bovenstaande branchemethoden zijn tevens beschikbaar via\n                                 de website: www.pve.nl en kies vervolgens voor bedrijfsnet.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest\n                                       en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van Salmonella in dons, mest\n                                       en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\nDe versie van de hier beschreven PVE Branchemethode MSRV is gebaseerd op Annex D va\n                                       ISO 6579. De wijzigingen in het huidige protocol ten opzichte van de vorige versie\n                                       (2004) zijn samengevat in hoofdstuk 9.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSalmonella: micro-organismen die de voor deze bacteri\u00ebn karakteristieke groei vertonen\n                                       en specifieke biochemische en serologische reacties vertonen wanneer wordt gekweekt\n                                       respectievelijk getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nNa voorincubatie van de te onderzoeken matrix in een voorophopingsmedium, wordt ge\u00ebnt\n                                       op een half-vast medium, waarna wordt afgestreken op een selectief isolatiemedium,\n                                       met aansluitend biochemische bevestiging en serotypering.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe samenstelling en bereiding van media en reagentia is opgenomen in bijlage 1. Er\n                                       mag echter ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                       zijn.\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn.\n\nVoor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder\n                                       verwezen naar NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw.\n\nNiet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water\n\nBPw\n\nbijlage 1.1\n\nSelectief ophopingsmedium\n\nmodified semi-solid Rappaport-Vassiliadia medium\n\nMSRV\n\nbijlage 1.2\n\nSelectieve agar\n\nxylose lysine desoxycholaat agar\n\nXLD\n\nbijlage 1.3\n\nBevestigingsmedia\n\nUreumagar\n\ntriple-sugar agar\n\nlysine-decarboxylase medium\n\nUA\n\nTSI\n\nLDC\n\nbijlage 1.4\n\nbijlage 1.5\n\nbijlage 1.6\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGebruikelijke apparatuur en glaswerk voor een microbiologisch laboratorium en in het\n                                       bijzonder de onderstaande:\n\n5.1 Broedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.2 Broedstoof voor het bebroeden bij 41, 5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.3 Waterbad ingesteld op 47 \u2013 50 \u00b0C\n\n5.4 Steriele entnaalden met een oog (\u00f6ses) van ca 1 \u00b5l.\n\n5.5 Steriele pipetten met een schaalverdeling van 0,1 ml en een meetvolume van 1 ml.\n\n5.6 Petrischalen met een middellijn van ca 9 cm.\n\n5.7 Cultuurbuizen van 17/18 x 150 mm en van 8 x 160 mm.\n\nOpmerking:\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (1-8 \u00b0C)\n                                          te worden aangeleverd. Zie voor de ontvangst van monsters en registratie van afwijkingen\n                                          bijlage III.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                          echter binnen 48 uur na monstername op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht\n                                          worden met het inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na het tijdstip\n                                          van monstername is verstreken.\n\nStel monsters zo min mogelijk bloot aan temperatuurschommelingen.\n\nOpmerking:\n\nKomen mestmonsters mee met vleesmonsters in een koelbox, sla dan alle monsters gekoeld\n                                          op. Worden mestmonsters per post ongekoeld verstuurd, sla dan op bij kamertemperatuur,\n                                          tenzij deze monsters pas de volgende dag worden ingezet.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoeg zoveel monster toe aan BPw (kamertemperatuur) zodat het monster (minimaal) 1:10\n                                          verdund wordt (bijvoorbeeld 25 g monster in 225 ml BPw).\n\nEen ruimere verdunning dan 1:10 is toegestaan, een kleinere verdunning niet.\n\nIn Tabel 1 is ter illustratie de relatie tussen de verschillende monsterhoeveelheden\n                                          en het volume BPw weergegeven:\n\naantallen\n\nhoeveelheid (circa)\n\nBPw\n\n15 swabs\n\n7,5\n\ngram\n\n67,5\n\nml\n\n20 swabs\n\n10\n\ngram\n\n90\n\nml\n\n25 swabs\n\n12,5\n\ngram\n\n112,5\n\nml\n\n30 swabs\n\n15\n\ngram\n\n135\n\nml\n\n2 paar overschoentjes\n\n10\n\ngram\n\n90\n\nml\n\n25 gram dons\n\n25\n\ngram\n\n225\n\nml\n\n25 gram vlees\n\n25\n\ngram\n\n225\n\nml\n\n40 stukjes inlegvel\n\n60\n\ngram\n\n540\n\nml\n\nTer uitvoering van Verordening (EG) nr. 2160/2003 is in Verordening (EG) nr. 1003/2005 aangegeven dat de monsters van vermeerderingskoppels van Gallus gallus als volgt behandeld dienen te worden:\n\nInlegvellen van uitkomstladen:\n\n\u2013 Plaats de inlegvellen in 1 liter BPw (kamertemperatuur) en schud voorzichtig. Volg\n                                          verder de procedure vanaf 6.3.\n\nOverschoentjes:\n\n\u2013 Pak het paar overschoentjes zorgvuldig uit om te vermijden dat aanhangend fecaal materiaal\n                                                loskomt en plaats ze in 225 ml BPw (kamertemperatuur);\n\n\u2013 Bij samenvoegen van vijf paar overschoentjes tot twee monsters: breng vijf afzonderlijke\n                                                monsters in minimaal 225 ml BPw en zorg ervoor dat alle monsters volledig ondergedompeld\n                                                zijn;\n\n\u2013 Zwenk om, zodat het monster volledig verzadigd is, en volg verder de procedure vanaf\n                                                6.3.\n\nAndere feces (mest) monsters:\n\n\u2013 Breng in het laboratorium elk monster (of verzamelmonster) over in een even groot\n                                                gewicht BPw en schud voorzichtig;\n\n\u2013 Laat het monster 10-15 min zacht worden en schud voorzichtig;\n\n\u2013 Neem onmiddellijk na het mengen 50 g van het mengsel en voeg dat bij 200 ml BPw (kamertemperatuur).\n                                                Volg verder de procedure vanaf 6.3.\n\nOpmerking:\n\nBelangrijk is dat de overschoentjes minimaal 1:10 verdund worden in BPw. Bij 1 paar\n                                          overschoentjes kan 225 ml BPw een grote overmaat zijn. Het is eventueel mogelijk om\n                                          het paar overschoentjes te wegen en vervolgens zoveel BPw toe te voegen dat de overschoentjes\n                                          minimaal 1:10 verdund zijn. Bijvoorbeeld als 2 paar overschoentjes 10 g weegt volstaat\n                                          het om 90 ml BPw toe te voegen (zorg wel dat de monsters volledig ondergedompeld zijn).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nIncubeer de BPw 18 uur \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\nIn uitzonderlijke gevallen kan de BPw na incubatie maximaal 2 dagen bewaard worden\n                                          bij 5 \u00b0C \u00b1 3 \u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBreng 0,1 ml BPw-cultuur op een MSRV plaat (9 cm) door 3 druppels, met een gezamenlijk\n                                          volume van 0,1 ml, in een driehoek op de MSRV aan te brengen. Incubeer de platen 24\n                                          uur \u00b1 3 uur bij 41, 5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.De platen moeten met het deksel van de Petrischaal\n                                          naar boven ge\u00efncubeerd worden, aangezien het een half-vast medium is. Niet verdachte\n                                          of negatieve platen dienen nogmaals 24 uur \u00b1 3 uur bij 41,5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C bebroed te worden.\n\nEen verdachte MSRV-plaat vertoont groei in de agar (zwerming vanuit de entingsplaats)\n                                          en heeft een wit/grijze kleur.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVerdachte MSRV platen worden afge\u00ebnt door aan de rand van de zwermzone met een (1\n                                          \u00b5l) \u00f6se materiaal uit de agar te nemen en daarmee een gedroogde XLD plaat te be\u00ebnten.\n\nIncubeer de XLD platen gedurende 24 uur \u00b1 3 uur bij 37 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\nDe meeste Salmonella stammen zijn lactose-negatief en HIS-positief en zijn op Xt-D te herkennen als roze\n                                          kolonies met een zwart centrum (vaak helemaal zwart). Lactosenegatieve en H2S-negatieve stammen vormen alleen roze kolonies (zonder zwarting).\n\nBeschouw daarom alle roze kolonies, met en zonder zwart centrum, als verdacht voor\n                                          Salmonella.\n\nEr zijn ook lactose-positieve en H2S-positieve Salmonella stammen die op XLD gele kolonies met een zwart centrum vormen en lactose-positieve\n                                          en H2S-negatieve stammen die helemaal geel zijn. Deze laatste twee groepen (met gele kolonies)\n                                          komen bij pluimvee zelden voor.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoer de bevestiging uit met minimaal 1 tot maximaal 3 specifieke kolonies per plaat\n                                          in geval van reincultuur en tot 5 specifieke kolonies (indien aanwezig) in geval van\n                                          mengcultuur totdat een positief resultaat wordt verkregen. De kolonies worden vanaf\n                                          de XI-D plaat ge\u00ebnt in UA middels het afstrijken op het oppervlak van de agar en in\n                                          TSI middels ladderen over het schuin gestolde oppervlak en een steekenting tot op\n                                          de bodem van de buis. Be\u00ebnt tevens een buis LDC door een hoeveelheid koloniemateriaal\n                                          tegen de wand van de buis net onder het vloeistofoppervlak af te strijken. De buizen\n                                          worden 24 uur \u00b1 3 uur bij 37 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C ge\u00efncubeerd.\n\nOpmerking:\n\nWanneer geen goed losliggende kolonies op de XLD plaat zijn verkregen, of bij de aanwezigheid\n                                          van veel spreidende of overgroeiende stoorflora, is het nodig ter zuivering een nieuwe\n                                          reinstrijk op een gedroogde XLD- of nutri\u00ebntenagarplaat te maken. Bij verontreiniging\n                                          van de Salmonella-kolonie met andere bacteri\u00ebn wordt een afwijkend biochemisch patroon verkregen. Het\n                                          is toegestaan om eerst de bevestigingstest met de TSI uit te voeren, en bij een verdachte\n                                          uitslag door te gaan met ureum en LDC.\n\nNa incubatie geven voor Salmonella verdachte kolonies de volgende biochemische resultaten:\n\nTSI agar\n\nonderin de buis\n\n\u2013 geel\n\n\u2013 zwart\n\n\u2013 bellen/scheuren\n\n\u2013 glucose positief (100%)\n\n\u2013 vorming van H2S (91,6%)\n\n\u2013 gasvorming van glucose (91,9%)\n\nschuine gedeelte\n\n\u2013 rood/onveranderd\n\n\u2013 lactose en/of sucrose negatief\n\n(resp. 99,2% en 99,5%)\n\nUreum agar\n\n\u2013 geen kleuromslag van het medium\n\n\u2013 negatief\n\n(100%)\n\nLDC\n\n\u2013 paarse kleur en groei in medium\n\n\u2013 positief\n\n(94,6%)\n\nHet gebruik van biochemische kits (zoals bijvoorbeeld API of BBI- Crystal) is ook\n                                          toegestaan.\n\nAlle biochemisch verdachte kolonies dienen geserotypeerd te worden volgens het Kauffmann-White\n                                          schema. Een toelichting op de serotypering van 6 veel voorkomende Salmonella serotypes is beschreven in PVE-SALMONELLA-SERO-140607.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\n\u2013 Blanco controle,\n\n\u2013 Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                             negatieve controle komen te vervallen),\n\n\u2013 Positieve controle.\n\nDe kwaliteitscontrole per batch MSRV is beschreven in bijlage 2.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGeef het resultaat op als \u2018Salmonella aangetoond / niet aangetoond in het betreffende monstermateriaal\u2019 als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan tussen haakjes\n                                       aangegeven worden hoeveel gram monstermateriaal is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd van de\n                                       wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden (zie bijlage III) dan dient het laboratorium op het analysecertificaat hierover een opmerking te maken\n                                       en de eventuele gevolgen voor de betrouwbaarheid van de uitslag aan te geven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe huidige versie van de PVE Branchemethode MSRV is gebaseerd op Annex D van ISO 6579.\n                                       Om de PVE branchemethode zoveel mogelijk gelijk te trekken met Annex D van ISO 6579\n                                       zijn de volgende wijzigingen ten opzichte van het vorige protocol (2004) doorgevoerd:\n\n\u2013 De concentratie novobiocine in het selectieve ophopingsmedium MSRV is gewijzigd in\n                                             10 mg/L (was 20 mg/L);\n\n\u2013 De pH eis van MSRV bij kamertemperatuur is 5,2 gebleven, echter de range is 5,1 -\n                                             5,4 geworden (in plaats van 5,2 \u00b1 0,2);\n\n\u2013 De incubatietemperatuur van MSRV is gewijzigd in 41, 5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C (was 42 \u00b0C \u00b1 0, 5\n                                             \u00b0C);\n\n\u2013 Het uitplaatmedium is gewijzigd in Xylose Lysine Desoxycholaat (XLD) agar (was Briljantgroen\n                                             agar: BGA). Voor het uitplaten kan worden volstaan met standaard formaat Petrischalen\n                                             met XLD (ca 9 cm diameter).\n\nMet deze wijzigingen is de PVE branchemethode MSRV zoveel mogelijk gelijk gemaakt\n                                       aan Annex D van ISO 6579. Echter op een tweetal aspecten verschilt de PVE branchemethode\n                                       nog met Annex D:\n\n\u2013 Annex D schrijft voor dat het uitplaten vanaf MSRV dient te geschieden op XLD en op\n                                             een tweede selectieve agarplaat naar keuze. In de PVE branchemethode is alleen XLD\n                                             als uitplaatmedium aangegeven. Dit is in lijn met de vorige versie(s) van de PVE branchemethode\n                                             MSRV waarin ook slechts \u00e9\u00e9n uitplaatmedium werd voorgeschreven, zijnde BGA. Uit literatuur\n                                             blijkt dat XLD een hoge sensitiviteit en specificiteit heeft (Cooke et al., 1999) en in sommige pluimveemonsters een hoger percentage positiviteit vertoont\n                                             dan BGA (Rall et al., 2005). De belangrijkste Salmonella serotypes die bij pluimvee worden gevonden groeien op XLD (Feldsine et al., 2003), zodat verwacht mag worden dat een tweede uitplaatmedium naast XLD weinig\n                                             extra informatie toevoegt.\n\n\u2013 De biochemische bevestiging zoals beschreven in Annex D is uitgebreider dan die van\n                                             de PVE branchemethode. Echter, de in de PVE branchemethode beschreven bevestigings\n                                             testen zijn reeds voldoende om de meerderheid van de Salmonella verdachte kolonies op XLD als biochemisch verdacht te kenmerken. Na de biochemische\n                                             bevestiging vindt ook nog een serotypering plaats wat uiteindelijk de definitieve\n                                             uitslag voor Salmonella geeft.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 Cooke, V.M., R.J. Miles, R.G. Price and A.C. Richardson, 1999. A novel chromogenic\n                                             ester agar medium for detection of Salmonellae. Applied and Environmental Microbiology, 1999, Vol. 65, no 2, p 807-812.\n\n\u2022 Feldsine, P.T., Lienau, A.H., Leung, S.C., Mui, L.A., Humbert, F., Bohnert, M., Mooijman,\n                                             K., Schulten, S, in \u2019t Veld, P., Rollier, P., Leuschner, R and Capps, K., 2003. Detection\n                                             of Salmonella in fresh cheese, poultry products, and dried egg products by the ISO 6579 Salmonella culture procedure and the AOAC official method: Collaborative study. Journal of AOAC\n                                             International, vol 86, no. 2, 2003, 275-295.\n\n\u2022 Hartman, dr. E.G., 1999. Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis\n                                             (MSRV) medium. Gezondheidsdienst voor dieren, GD projectnummer 401909, rapport nr.\n                                             1, september 1999.\n\n\u2022 ISO 6579:2002 / Amendment 1:2007. Annex D: Detection of Salmonella spp. in animal\n                                             faeces and in environmental samples from the primary production stage. International\n                                             Standardisation Organisation, Geneva, Switzerland.\n\n\u2022 PVE-SALMONELLA-SERO-140607. Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer.\n                                             www.pve.nl\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013 Horizontale\n                                             methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013\n                                             Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie\n                                             Instituut, Delft.\n\n\u2022 Rall, V.L.M., R. Rall, L. Casale Aragon and M. Guimaraes da Silva, 2005. Evaluation\n                                             of three enrichment broths and five plating media for Salmonella detection in poultry. Brazilian Journal of Microbiology, 2005, 36: 147-150.\n\n\u2022 \nVerordening (EG) nr. 1003/2005 ter uitvoering van Verordening (EG) nr. 2160/2003 van het Europees Parlement en de Raad wat betreft een communautaire doelstelling\n                                             voor het verminderen van de prevalentie van bepaalde serotypen Salmonella bij vermeerderingskoppels van Gallus gallus en tot wijziging van Verordening (EG) nr. 2160/2003. Publicatieblad van de Europese Unie, L 170/12, 01072005.\n\n\u2022 Zee, van der H., E. De Boer, P. Van Netten, 1990. Salmonella isolatie met behulp van MSRV. De Ware (n) chemicus 20: 189-199.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling:\n\nPepton\n\n10,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nNa2HPO4.12H2O\n\n9,0 g\n\nKH2P04\n\n1,5 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 \u00b1 0,2 bij 25\u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Verdeel het medium over daarvoor geschikte flessen of potten;\n\n\u2013 Steriliseer in een autoclaaf ( 15 min. 121\u00b0C).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nOplossing A (basis):\n\nTryptose\n\n4,6 g\n\nCaseine hydrolysaat\n\n4,6 g\n\nNaCI\n\n7,3 g\n\nKH2P04\n\n1,5 g\n\nMgCI2\n\n10,9 g\n\nMalachietgroen oxalaat\n\n0,04 g\n\nAgar\n\n2,7 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water;\n\n\u2013 Breng het mengsel onder voortdurend mengen aan de kook (verhit niet te lang!);\n\n\u2013 NIET AUTOCLAVEREN;\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na verhitten 5,2 (5,1 - 5,4) bij 25 \u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Koel het mengsel af tot 47 - 50 \u00b0C.\n\nOplossing B (novobiocine):\n\n\u2013 Los 0,05 g novobiocine op in 10 ml water;\n\n\u2013 Steriliseer de oplossing d.m.v. filtratie (filter met poriegrootte van 0,22 \u00b5m).\n\n\u2013 Indien de oplossing niet direct wordt gebruikt kan deze opgeslagen worden bij 5 \u00b0C\n                                             \u00b1 3 \u00b0C voor maximaal 4 weken, of bij -20 \u00b0C \u00b1 5 \u00b0C voor maximaal 1 jaar.\n\nBereiding MSRV medium:\n\n\u2013 Voeg 2 ml van oplossing B aseptisch toe aan oplossing A (1000 ml), bij 47 - 50 \u00b0C;\n\n\u2013 Meng de oplossing voorzichtig;\n\n\u2013 De eind pH dient 5,2 (5,1 - 5,4) bij 25 \u00b0C te zijn;\n\n\u2013 Giet uit in Petrischalen (15-20 ml in Petrischalen met een diameter van 9 cm);\n\n\u2013 Laat het medium stollen en behandel de platen voorzichtig;\n\n\u2013 Bewaar de platen, rechtop, bij 5 \u00b0C \u00b1 3 \u00b0C (in het donker) voor maximaal 2 weken;\n\n\u2013 Keer de platen niet om, de agar is hiervoor te slap;\n\n\u2013 Indien nodig, droog de platen vlak voor gebruik, bijvoorbeeld door ze rechtop zonder\n                                             deksel in een Laminar Air Flow kabinet te plaatsen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling\n\nGistextract\n\n3,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nXylose\n\n3,75 g\n\nLactose\n\n7,5 g\n\nSucrose\n\n7,5 g\n\nL-lysinehydrochloride\n\n5,0 g\n\nNatriumthiosulfaat\n\n6,8 g\n\nIJzer(III)ammoniumcitraat\n\n0,8 g\n\nFenolrood\n\n0,08 g\n\nNatriumdesoxycholaat\n\n1,0 g\n\nAgar\n\n9 g tot 18 g (afhankelijk van de gelsterkte)\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water en breng het mengsel onder voortdurend mengen\n                                             aan de kook en verhit tot de agar is opgelost (verhit niet te lang!);\n\n\u2013 NIET AUTOCLAVEREN;\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na verhitten 7,4 \u00b1 0,2 bij 25 \u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Koel het mengsel af tot 47-50 \u00b0C en giet vervolgens uit in Petrischalen (15-20 ml\n                                             in Petrischalen met een diameter van 9 cm);\n\n\u2013 Laat het medium stollen;\n\n\u2013 Bewaar de platen bij 5 \u00b0C \u00b1 3 \u00b0C voor maximaal 5 dagen;\n\n\u2013 Indien nodig, droog de platen voor gebruik.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nOplossing A (basismedium):\n\nPepton\n\n1,0 g\n\nGlucose\n\n1,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nKH2P04\n\n2,0 g\n\nFenolrood\n\n12,0 mg\n\nAgar\n\n9,0 tot 18,0 g (afhankelijk van de gelsterkte)\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig middels verhitten);\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 6,8 \u00b1 0,2 bij 25 \u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Steriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 121\u00b0C in een autoclaaf;\n\n\u2013 Laat de oplossing afkoelen tot 47-50 \u00b0C.\n\nOplossing B (ureumoplossing):\n\nUreum\n\n400 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ureum op in het water;\n\n\u2013 Steriliseer de oplossing d.m.v. filtratie (filter met poriegrootte van 0,22 \u00b5m).\n\nSamenstelling compleet medium:\n\noplossing A\n\n950 ml\n\noplossing B\n\n50 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Voeg oplossing B (ureumoplossing) aseptisch toe aan oplossing A (basismedium) 50\u00b0C;\n\n\u2013 Verdeel het medium over steriele buizen, per buis 10 ml medium;\n\n\u2013 Laat de buizen stollen zodat een schuin gedeelte ontstaat.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling:\n\nVleesextract\n\n3,0 g\n\nGistextract\n\n3,0 g\n\nPepton\n\n20,0 g\n\nNaCl\n\n5,0 g\n\nLactose\n\n10,0 g\n\nSucrose\n\n10,0 g\n\nGlucose\n\n1,0 g\n\nIJzer (III) citraat\n\n0,3 g\n\nNatriumthiosulfaat\n\n0,3 g\n\nFenolrood\n\n0,024 g\n\nAgar\n\n9,0 tot 18,0 g (afhankelijk van de gelsterkte)\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,4 \u00b1 0,2 bij 25\u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Verdeel het medium over buizen, per buis 10 ml medium;\n\n\u2013 Steriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 121\u00b0C in een autoclaaf;\n\n\u2013 Laat de buizen stollen zodat er bovenop 2, 5 cm agar onderin de buis, een schuin gedeelte\n                                             ontstaat.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling:\n\n1-Lysine monohydrochloride\n\n5,0 g\n\nGistextract\n\n3,0 g\n\nGlucose\n\n1,0 g\n\nBromocresol purper\n\n0,015 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 6,8 \u00b1 0,2 bij 25 \u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Verdeel het medium over smalle reageerbuizen; per buis 5 ml medium;\n\n\u2013 Steriliseer gedurende 15 min bij 121\u00b0C in een autoclaaf.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nOnderwerp\n\nDeze bijlage beschrijft een methode voor de kwaliteitscontrole van batches MSRV.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVolg onderstaand schema voor de kwaliteitscontrole per batch MSRV.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nInoculum: Kolonie aanstippen met een entoogje en afstrijken langs de wand van een buisje met\n                                       (10 ml) gebufferd peptonwater (BPw). Incubeer 18 uur \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C. De\n                                       cultuur zal in BPw uitgroeien tot circa 108 cfu/ml. Maak verdunningen in BPw tot circa\n                                       103 cfu/ml.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAls negatieve controle kan een Escherichia coli stam gebruikt worden.\n\nKweek de stam op zoals beschreven voor de positieve controle. Maak verdunningen in\n                                       BPw tot 105 \u2013 106 cfu/ml.\n\nVolg de procedure zoals beschreven voor de positieve controle.\n\nE. coli dient geen zwerming te vertonen op MSRV.\n\nOpmerking:\n\nControlestammen zijn onder andere verkrijgbaar bij de VWA in Groningen (www.vwa.nl/chek).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nToelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoor de serotypering van Salmonella spp. volgens het Kauffmann-White schema (Popoff, 2001) worden door diverse fabrikanten\n                                          verschillende voorschriften geleverd.\n\nVoor de juiste wijze van typeren dient dan ook altijd het voorschrift van de fabrikant\n                                          gevolgd te worden.\n\nDetails over de taxonomie van Salmonella alsmede over de antigene formules van de Salmonella serotypen staan beschreven in Popoff (2001 ). Onderstaande informatie is een korte\n                                          toelichting hierop.\n\nDe serotypering van Salmonella spp. bestaat uit de volgende stappen:\n\n\u2013 Selectie van een Salmonella verdachte kolonie (vastgesteld middels biochemische typering);\n\n\u2013 Onderzoek naar auto-agglutinatie;\n\n\u2013 Agglutinatie met O-antisera: voor het aantonen van O-antigenen in het Lipopolysaccharide\n                                                (LPS) van de bacterie;\n\n\u2013 Agglutinatie met H-antisera: voor het aantonen van de H-antigenen in de flagellen\n                                                van de bacterie.\n\nIn het onderstaande stuk wordt de procedure beschreven voor het serotyperen van 6\n                                          Salmonella serotypes welke momenteel (2007) regelmatig bij pluimvee worden aangetroffen (zie\n                                          ook bijlage 1). Deze 6 Salmonella serotypes betreffen:\n\nSalmonella Typhimurium (1, 4, [5], 12 : i : 1, 2)\n\nSalmonella Paratyphi B var. Java (1, 4, [51, 12 : b : 1, 2)\n\nSalmonella Enteritidis (1, 9, 12 : g, m : -)\n\nSalmonella Infantis (6, 7, 14 : r : 1,5)\n\nSalmonella Virchow (6, 7, 14 : r : .1,2)\n\nSalmonella Hadar (6, 8 : zlo : e, n, x)\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nKweek een reincultuur van een kolonie welke middels biochemische typering als verdacht\n                                          voor Salmonella kan worden beschouwd. Gebruik de kweekmethode en het medium zoals voorgeschreven\n                                          door de fabrikant.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoer het onderzoek naar auto-agglutinatie uit volgens het voorschrift van de fabrikant.\n                                          De wijze van onderzoek naar auto-agglutinatie alsmede het aflezen geschiedt op gelijke\n                                          wijze als de agglutinatie met O-antisera (zie ook 4. Agglutinatie met O-antisera).\n\nEen voorbeeld voor onderzoek naar auto-agglutinatie is hieronder beschreven.\n\nBreng op een objectglas een druppel zoutoplossing (0,85% NaCl);\n\nBreng met een steriele entnaald bacteriemateriaal in de druppel zodat een lichte melkachtige\n                                          suspensie wordt verkregen;\n\nBeweeg het objectglas heen-en-weer (druppel laten zwenken). De tijd van zwenken varieert\n                                          per fabrikant van 5 sec tot 60 sec;\n\nBeoordeel de suspensie. De aanwezigheid van klontjes in het preparaat duidt op autoagglutinatie\n                                          van de onderzochte stam. De stammen die auto-agglutinatie vertonen kunnen niet verder\n                                          onderzocht worden voor serotypering.\n\nControleer voor gebruik of de antisera (O en H) helder zijn. Indien troebeling zichtbaar\n                                          is volg dan de aanwijzingen van de fabrikant.\n\nOpmerking: Bewaar goed getypeerde Salmonella stammen van ringonderzoeken om antisera te testen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoor het aantonen van de 6 bovengenoemde Salmonella serotypes worden de volgende O-antisera gebruikt (in volgorde van de hierboven genoemde\n                                          serotypes):\n\nBegin de agglutinatie met O:4 antiserum. Levert dit een negatief resultaat op, test\n                                          dan met O:9 antiserum. Levert dit ook een negatief resultaat op test dan met O:7 antiserum.\n                                          Levert dit ook een negatief resultaat op test dan met O:8 antiserum.\n\nVolg voor de uitvoering en het aflezen van de agglutinatiereactie strikt het voorschrift\n                                          van de fabrikant.\n\nEen aantal fabrikanten gebruikt een objectglas methode voor het agglutineren. Daarbij\n                                          wordt een druppel antiserum gemengd met bacteriemateriaal (direct vanaf plaat of vanuit\n                                          een bacteriesuspensie) op het objectglas, zodanig dat een lichte melkachtige suspensie\n                                          wordt verkregen. Het objectglas wordt vervolgens heen-en-weer bewogen (druppel laten\n                                          zwenken).\n\nVervolgens wordt de reactie afgelezen. De aanwezigheid van klontjes in het preparaat\n                                          duidt op een positieve reactie. Per fabrikant kunnen o.a. de volgende zaken verschillen:\n\n\u2013 Grootte van de druppel op het objectglas (bijv. \u201825 \u00b5l\u2019 of \u2018een druppel\u2019);\n\n\u2013 Wijze van opbrengen van antiserum en bacteriemateriaal op het objectglas (bacteriemateriaal\n                                                direct vanaf agar of via een suspensie toevoegen aan een druppel antiserum op het\n                                                objectglas of antiserum toevoegen aan een druppel \u2018bacteriesuspensie\u2019, op het objectglas);\n\n\u2013 Zwenktijd van het objectglas (kan vari\u00ebren van 5 sec tot 60 sec);\n\n\u2013 Wijze van aflezen van het resultaat (met blote oog, met vergrootglas, tegen een donkere\n                                                achtergrond, etc.);\n\n\u2013 Interpretatie van de resultaten (lees met name de voetnoten m.b.t. de beperkingen)\n                                                .\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nNa het agglutineren met O-antisera, vindt de agglutinatie met H-antisera plaats.\n\nSalmonella bezit vaak twee typen H-antigeen (fase 1 en fase 2). Indien bij difasische stammen\n                                          \u00e9\u00e9n H-fase negatief wordt gevonden, dient de tweede fase aangetoond te worden middels\n                                          een fase-inversie methode. Bij fase-inversie wordt het dominante H-antigeen onderdrukt\n                                          zodat het 2e H-antigeen tot expressie kan komen en kan worden aangetoond.\n\nHet medium dat hiervoor gebruikt wordt dient zodanig te zijn dat Salmonella hier goed in kan bewegen. Een voorbeeld van een dergelijk \u2018zwerm medium\u2019 is Sven\n                                          Gard agar.\n\nEen voorbeeld van een fase inversie methode wordt onder 6. beschreven.\n\nVolg voor zowel het opkweken van de stam als voor het uitvoeren en het aflezen van\n                                          de agglutinatiereactie met H-antiserum de voorschriften van de fabrikant.\n\nGebruik de volgende H-antisera voor het aantonen van de 6 hierboven genoemde Salmonella serotypes.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAgglutineer met H:i \u00e9n H:2 antisera. Indien beiden een positief resultaat opleveren\n                                             dan is de uitslag: Salmonella Typhimurium.\n\nVoor Salmonella Paratyphi B var. Java dient de agglutinatie met H:b \u00e9n H:2 antisera positief te zijn.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nTest met H:G(complex) antiserum. Indien dit een positief resultaat oplevert, test\n                                             dan vervolgens met H:m antiserum. Indien dit ook een positief resultaat oplevert voer\n                                             dan een negatieve controle uit op H:g, H:s en H:t antisera. Indien het resultaat als\n                                             volgt is:\n\nH:G : + , H:m : + , H:g : -, H:s : - en H:t : -, test dan met 0:46 of met O:12 (O:2,12\n                                             of O:4, 12) . Indien vervolgens de agglutinatie met O :46 negatief is, of de agglutinatie\n                                             met O: 12 positief is, dan is de uitslag: Salmonella Enteritidis.\n\nN.b.: Let op bij de aanschaf van H:G(complex) antiserum dat onderscheid gemaakt kan\n                                                worden tussen H:g,m en H:m,t. Bijvoorbeeld: met H:g,p antiserum kan onderscheid gemaakt\n                                                worden tussen H:g,m en H:m,t. Echter met een H:g,m antiserum kan dit onderscheid niet\n                                                gemaakt worden. Bovendien kan met een H:g,m antiserum geen H:g aangetoond worden bij\n                                                H:g,m stammen. Dit kan wel met H:g,p antiserum.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAgglutineer met H:r \u00e9n H:2 \u00e9n H: 5 antisera.\n\nIndien H:r \u00e9n H: 5 positief zijn dan is de uitslag: Salmonella Infantis.\n\nIndien H:r \u00e9n H: 2 positief zijn dan is de uitslag: Salmonella Virchow.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAgglutineer met H:z10 \u00e9n H:x antisera. Indien beiden positief zijn agglutineer dan vervolgens met O:6,7\n                                             of met O:61 antiserum. Indien ook O:6,7 of O:61 een positief resultaat oplevert dan is de uitslag: Salmonella Hadar.\n\nN.b.: Let op bij de aanschaf van O:6, 7 antiserum dat dit antiserum ook goed reageert\n                                                met O:6,8 stam en (informeer bij de fabrikant).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nHet hieronder beschreven voorbeeld voor een fase inversie methode betreft de serotypering\n                                          van Salmonella Typhimurium. In zijn algemeenheid is de methode ook toepasbaar voor andere Salmonella serotypes.\n\nIndien O:4 en H:i positief zijn en H:2 negatief, handel dan als volgt:\n\nBereid een agarplaat met anti-H:i (bijvoorbeeld Sven Gard serum-mix welke H:i bevat).\n                                          Ent de stam op het centrum van deze plaat (volg voorschrift van de fabrikant). Agglutineer\n                                          na incubatie met H:2. Indien dit opnieuw een negatief resultaat oplevert, agglutineer\n                                          dan opnieuw met H:i. Indien H:i een negatieve of zwakke agglutinatie vertoont dan\n                                          is het resultaat geen Salmonella Typhimurium. Indien H:i wel een positieve (sterke) agglutinatie vertoont voer dan\n                                          een tweede fase inversie uit. Bereid hiertoe opnieuw een agarplaat met anti-H:i. Neem\n                                          bacteriemateriaal van de buitenrand van de eerste fase inversie plaat voor het be\u00ebnten\n                                          van de tweede fase inversie plaat. Herhaal de procedure zoals hierboven beschreven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 Popoff, M.Y, 2001. Antigenic formulas of the Salmonella serovars. WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella. Institute Pasteur, Paris, France.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van VIDAS SLM in dons, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit protocol beschrijft een 48-uurs methode voor het aantonen van Salmonella met behulp van de VIDAS SLM test (bio M\u00e9rieux) in dons afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSalmonella: alle typen Salmonella waarvan zowel O als H antigenen met behulp van de Enzyme Linked Fluorescent Assay\n                                          (ELFA) techniek worden aangetoond, wanneer wordt getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVIDAS SLM is een enzym immunoassay voor detectie van Salmonella antigenen, waarbij gebruik wordt gemaakt van de ELFA methode en geautomatiseerd uitgevoerd\n                                          op het VIDAS analyse apparaat.\n\nDe voorophoping en de selectieve ophopingen vinden achtereenvolgens plaats gedurende\n                                          18 uur in een voorophopingsmedium, 6-8 uur in 2 verschillende selectieve ophopingsmedia\n                                          en als laatste gedurende 18 uur in een 3e ophopingsmedium. Van dit laatste ophopingsmedium wordt een hoeveelheid verhit en\n                                          in een reagens strip gebracht. De reagens strip wordt in het VIDAS analyse apparaat\n                                          gebracht, waarna het aantonen van aanwezigheid van Salmonella antigenen met behulp van een cocktail van specifieke monoclonale antilichamen en\n                                          een fluorescentie reactie volledig geautomatiseerd verloopt. Het test resultaat van\n                                          deze aantoningsstap is na ca. 45 minuten beschikbaar.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn.\n\nDe samenstelling en bereiding van media en reagentia is opgenomen in bijlage 1 van\n                                          PVE-SALMONELLA-MSRV-140607 dan wel NEN-EN-ISO 6579: 2002. Er mag echter ook gebruik\n                                          worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar zijn.\n\nDe VIDAS SLM test bestaat uit kant-en-klare reagentia, zoals omschreven in de gebruiksaanwijzing\n                                          van de VIDAS SLM 30 702 test, instructie van de fabrikant.\n\nVoor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder\n                                          verwezen naar NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw.\n\n4.1 Niet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water\n\nBPw\n\nbijvoorbeeld bio M\u00e9rieux ref. 42043\n\n4.2 Selectieve ophopingsmedia\n\nMuller-Kaufmann tetrathionate broth met novobiocine\n\nMKTTn\n\nbijvoorbeeld bio M\u00e9rieux ref. 42114\n\nRappaport-Vassiliadis Soya bouillon\n\nRVS\n\nbijvoorbeeld bio M\u00e9rieux ref. 42110\n\nM bouillon\n\nMb\n\nbio M\u00e9rieux ref. 42077\n\n4.3 Selectieve agar\n\nXylose Lysine Desoxycholaat agar\n\nXLD\n\nbijvoorbeeld bio M\u00e9rieux ref. 43563\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe gebruikelijke apparatuur voor een microbiologisch laboratorium en de voor de VIDAS\n                                          SLM test benodigde apparatuur, zoals onderstaand vermeld:\n\n5.11 Broedstoof voor het bebroeden bij 37\u00b0C \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.12 Broedstoof voor het bebroeden bij 41,5\u00b0C \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.13 Micropipet (500 \u00b5l)\n\n5.14 Steriele micropipetpunten\n\n5.15 Waterbad (95-100 \u00b0C) of equivalent\n\n5.16 Steriele entnaalden met een oog met een diameter van ca. 3 mm\n\n5.17 Steriele pipetten met een schaalverdeling van 0,1 ml en een meetvolume van 1\n                                          ml\n\n5.18 Petrischalen met een middellijn van ca. 9 cm\n\n5.1 9 Cultuurbuizen van 17/18 x 150 mm en van 8 x 160 mm\n\n5.20 Stomacherzakken (met filter)\n\n5.21 VIDAS analyse apparaat\n\nOpmerking:\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nZie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage III.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                             echter binnen 48 uur na monstername op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht\n                                             worden met het inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na het tijdstip\n                                             van monstername is verstreken.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVerdun het monster 1 : 10 in BPw (25 gram dons in 225 ml BPw).\n\nStomacher, en incubeer de BPw 18 uur \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBreng na incubatie van de BPw 1 ml van deze suspensie over in 10 ml MKTTn bouillon.\n\nIncubeer 6-8 uur bij 37\u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\nBreng tegelijkertijd ook 0,1 ml van deze BPw suspensie over in 10 ml RVS bouillon.\n                                             Incubeer 6-8 uur bij 41,5\u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBreng na incubatie van de MKTTn bouillon 0,1 ml hiervan over in 10 ml M bouillon.\n                                             Breng na incubatie van de RVS bouillon 1 ml hiervan over in een 2e buis met 10 ml\n                                             M bouillon. Herincubeer de MKTTn bouillon en de RVS bouillon voor nog eens 16-20 uur,\n                                             om bevestiging achteraf mogelijk te maken.\n\nIncubeer de M bouillon buizen gedurende 16-20 uur bij 41,5\u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\nMeng de M bouillon buizen na incubatie en breng uit elke buis 1 ml over in 1 gezamenlijk\n                                             eppendorfbuisje. Sluit het buisje en verhit gedurende 15 \u00b1 1 minuten in een waterbad\n                                             van 95-100\u00b0C. Voer vervolgens de VIDAS SLM test uit volgens de gebruiksaanwijzing\n                                             van de fabrikant.\n\nBewaar de overgebleven bouillons bij 2-8\u00b0C voor eventuele bevestiging.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nResultaten worden beoordeeld zoals omschreven in het voorschrift van de fabrikant\n                                             (gebruiksaanwijzing VIDAS SLM 30 702 test). Deze zijn gebaseerd op metingen van de\n                                             fluorescentie en worden gestandaardiseerd naar de zgn. Test Value. Resultaten met\n                                             een Test Value onder de 0,23 betreffen monsters waarin Salmonella antigenen niet aantoonbaar waren. Resultaten met een test Value > / = 0,23 worden\n                                             als Salmonella-positief gerapporteerd. Positieve resultaten moeten worden bevestigd met behulp van\n                                             de bewaarde ophopings- en na-ophopingsmedia.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nEnt met een \u00f6se vanuit de ophopingsbouillons (MKTTn en RVS) en vanuit de koel bewaarde\n                                             M bouillons af op gedroogde XLD platen. Incubeer deze platen gedurende 24 uur \u00b1 3\n                                             uur bij 37\u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe meeste Salmonella stammen zijn lactose-negatief en H2S-positief en zijn op XLD te herkennen als roze kolonies met een zwart centrum (vaak\n                                             helemaal zwart). Lactosenegatieve en H2S-negatieve stammen vormen alleen roze kolonies (zonder zwarting).\n\nBeschouw daarom alle roze kolonies, met en zonder zwart centrum, als verdacht voor\n                                             Salmonella.\n\nEr zijn ook lactose-positieve en H2S-positieve Salmonella stammen die op XLD gele kolonies met een zwart centrum vormen en lactose-positieve\n                                             en H2S-negatieve stammen die helemaal geel zijn. Deze laatste twee groepen (met gele kolonies)\n                                             komen bij pluimvee zelden voor.\n\nBevestiging van verdachte kolonies, zowel biochemisch als serologisch, vindt vervolgens\n                                             plaats zoals omschreven in PVE-SALMONELLA-MSRV-140607 en PVE-SALMONELLA-SERO-140607.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe VIDAS SLM test kit bevat een positieve en een negatieve VIDAS reagens controle\n                                          en een bijbehorende standaard. Deze worden meegenomen in de bepalingen zoals omschreven\n                                          in de gebruiksaanwijzing van de VIDAS SLM test, instructie van de fabrikant.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\n\u2013 Blanco controle,\n\n\u2013 Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                                negatieve controle komen te vervallen),\n\n\u2013 Positieve controle.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGeef het resultaat op als \u2018Salmonella aangetoond / niet aangetoond in het betreffende monstermateriaal\u2019 als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan tussen haakjes\n                                          aangegeven worden hoeveel gram monstermateriaal is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd van de\n                                          wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden (zie bijlage III) dan dient het laboratorium op het analysecertificaat hierover een opmerking te maken\n                                          en de eventuele gevolgen voor de betrouwbaarheid van de uitslag aan te geven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 Gebruiksaanwijzing VIDAS SLM 30 702 test, instructie van de fabrikant.\n\n\u2022 Hartman, E.G., Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis\n                                                (MSRV)-medium, Gezondheidsdienst voor Dieren, projectnr. 401919, september 1999.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013 Horizontale\n                                                methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013\n                                                Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie\n                                                Instituut, Delft.\n\n\u2022 PVE-SALMONELLA-MSRV-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n\u2022 Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl PVE-SALMONELLA-SERO-140607.\n                                                Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer.\n                                                www.pve.nl bol\n\n\u2022 Van der Zee, H. et al. Validatierapport van de Salmonella bepaling in de matrix dons met behulp van de VIDAS SLM methode. PVE, september 2002.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van iQ CheckTM realtime PCR in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit protocol beschrijft een 24-uurs methode voor het aantonen van Salmonella met behulp van de iQ CheckTMSalmonella kit (Bio-Rad Laboratories b.v.) in dons, mest en vlees afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSalmonella: alle typen Salmonella waarvan het DNA aan de hand van de Polymerase Chain Reactie (PCR) wordt aangetoond,\n                                          wanneer wordt getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nUit een voorophopingsmedium wordt, na voorincubatie, het DNA van Salmonella ge\u00efsoleerd.\n\nMet behulp van de real-time polymerase chain reaction (PCR) worden Salmonella-specifieke DNA sequenties gelijktijdig vermenigvuldigd en gedetecteerd middels fluorescente\n                                          probes.\n\nInclusief voorophoping wordt een positieve of negatieve uitslag verkregen binnen 24\n                                          uur.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe samenstelling en bereiding van media en reagentia is opgenomen in bijlage 1. Er\n                                          mag echter ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                          zijn. De iQ Check.TM\u00a0Salmonella kit bestaat uit kant-en-klare reagentia.\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn.\n\nVoor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder\n                                          verwezen naar NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw.\n\n4.1 Niet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water (BPw)\n\nbijlage 1.1\n\n4.2 iQ CheckTM Salmonella kit\n\nBio-Rad code 357-810, bijlage 1.2\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe gebruikelijke apparatuur voor een moleculair/microbiologisch laboratorium en de\n                                          voor de iQ CheckTM\u00a0Salmonella test benodigde apparatuur en verbruiksmaterialen, zoals onderstaand vermeld:\n\nOpmerking: Gesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\nApparatuur\n\n5.1 iCycler Thermal Cycler met 96-wells reactiemodule (Bio-Rad cat. #: 170-8720)\n\n5.2 iCycler iQ Optical Module (Bio-Rad cat. #: 170-8740)\n\n5.3 iCycler iQ Filter set Texas Red/ Rox Dyes (Bio-Rad cat. #: 170-8781)\n\n5.4 Stomacher\n\n5.5 Broedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.6 Verhittingsblok voor 1,5 ml buizen 100 \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.7 Tafelcentrifuge (maximaal 12.000 rpm, voor 1,5 ml buizen)\n\n5.8 Vortex\n\n5.9 Magnetische roerder\n\n5.10 20 \u00b5l, 200 \u00b5l and 1000 \u00b5l micropipetten\n\n5.11 Combi-tips pipetten\n\nOpmerking: Het gebruik van een universal power source (UPS) in combinatie met de iCycler iQTM\n                                          wordt aanbevolen. Inmiddels staat ook de Chromo4 Real time PCR machine in de gebruiksaanwijzing\n                                          vermeld.\n\nVerbruiksmaterialen\n\n5.12 iCycler iQ 96-well PCR platen (Bio-Rad cat. #: 223-9441)\n\n5.13 iCycler iQ Optical sealing tape (Bio-Rad cat. #: 223-9444)\n\n5.14 200 ml 8-strip tubes (Bio-Rad cat. #: 223-9469)\n\n5.15 200 ml 8-strip caps for 200 \u00b5l tubes (Bio-Rad cat. #: 223-9472)\n\n5.16 Stomacher zakken met filter\n\n5.17 1 ml en 10 ml pipetten\n\n5.18 Steriele filtertips, passend op 20 \u00b5l, 200 \u00b5l en 1000 \u00b5l micropipetten\n\n5.19 1,5 ml Eppendorf SafeLock buisjes\n\n5.20 Combi-tips tips, steriel, individueel verpakt\n\n5.21 2 ml and 5 ml steriele buizen of flesjes\n\n5.22 Poeder-vrije handschoenen\n\n5.23 Milli-Q of gedestilleerd steriel water\n\n5.24 Ethanol 96% of NaOH 5%\n\nOpmerking:\n\nMLP-9601 PCR plates (Bio-Rad) in combinatie met MSB 1001 Sealing film is ook mogelijk.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe test dient te worden uitgevoerd door op juiste wijze getraind personeel.\n\nMonsters en kweken dienen te worden behandeld en afgevoerd als potentieel infectieus\n                                          materiaal.\n\nDe kwaliteit van de resultaten is afhankelijk van een strikte uitvoering conform Good\n                                          Laboratory Practice, in het bijzonder aangaande PCR:\n\n\u2022 Gebruik specifieke, gescheiden sets laboratorium benodigdheden zoals pipetten en buizen\n                                                voor bijvoorbeeld DNA extractie en de bereiding van PCR mix.\n\n\u2022 Het is van groot belang dat gebruik wordt gemaakt van een positieve en negatieve controle\n                                                in elke serie van amplificatie reacties (\u2018PCR run\u2019).\n\n\u2022 Gebruik geen reagentia waarvan de houdbaarheidsdatum is verstreken.\n\n\u2022 Homogeniseer reagentia voorafgaand aan gebruik.\n\n\u2022 Controleer regelmatig de nauwkeurigheid en precisie van alle pipetten en apparatuur.\n\n\u2022 Verwissel handschoenen met enige regelmaat, vooral indien contaminatie wordt verondersteld.\n\n\u2022 Voer periodieke reiniging uit van de werkplaats met tenminste 5% bleekmiddel.\n\n\u2022 Vermijdt gebruik van latex handschoenen met poeder. Voorkom vingerafdrukken op het\n                                                optisch sealing tape.\n\n\u2022 Schrijf niet op de dopjes van PCR-buizen. In beide gevallen zal de real-time dataacquisitie\n                                                hinder ondervinden.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (1-8\u00b0C) te\n                                             worden aangeleverd. Zie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage III.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                             echter binnen 48 uur na monstername op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht\n                                             worden met het inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na het tijdstip\n                                             van monstername is verstreken.\n\nStel monsters zo min mogelijk bloot aan temperatuurschommelingen.\n\nOpmerking:\n\nKomen mestmonsters mee met vleesmonsters in een koelbox, sla dan alle monsters gekoeld\n                                             op. Worden mestmonsters per post ongekoeld verstuurd, sla dan op bij kamertemperatuur,\n                                             tenzij deze monsters pas de volgende dag worden ingezet.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nOphopingsmedium dient op incubatie temperatuur (37\u00b0C) te zijn voorafgaand aan gebruik.\n\nHomogenizeer 25 g monster in 225 ml gebufferd pepton water, in een stomacher zak met\n                                             filter.\n\nIncubeer zonder schudden gedurende 21 uur \u00b1 1 uur bij 37\u00b0C.\n\nOpmerking:\n\nBij verwerking van borstvel ten behoeve van de verdunning dient zo min mogelijk onderhuids\n                                             vet meegesneden te worden; een overmaat vet kan de isolatie van DNA bemoeilijken en\n                                             inhibitie van de PCR-reactie veroorzaken. Mest en dons vergen geen bijzondere voorbehandeling.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPipetteer 1 ml ophoping met een disposable pipet in een 1,5 ml Eppendorf buis (voorkom\n                                             pipetteren van grote fragmenten van monsterresten). Schudt de ophoping niet voorafgaand\n                                             aan het pipetteren van het monster.\n\nDe overige stappen voor de DNA extractie worden uitgevoerd zoals omschreven in de\n                                             gebruiksaanwijzing van de iQ CheckTM\u00a0Salmonella testkit (Bio-Rad, 2004).\n\nOpmerking:\n\nIn geval van ophopingen met een vettig supernatant, neem het monster juist onder deze\n                                             vetlaag.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nApparatuur en software gebruik, uitvoering PCR en data analyse worden allen uitgevoerd\n                                             zoals omschreven in de gebruiksaanwijzing van de iQ CheckTM\u00a0Salmonella testkit (Bio-Rad, 2004).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nResultaten worden ge\u00efnterpreteerd middels analyse van de Ct-waarden (threshold cycle)\n                                             van elk monster. Volg hiervoor het voorschrift van de fabrikant.\n\nEen positief Salmonella monster dient een Ct-waarde > / = 10 voor de FAM fluorophore te hebben.\n\nIndien de Ct-waarde lager dan 10 is, dient het verloop van de amplificatiecurve gecontroleerd\n                                             te worden via de \u2018Background subtracted\u2019 mode; de curve dient een vlakke basislijn\n                                             te vertonen, gevolgd door een geleidelijke toename van fluorescentie. Indien de curve\n                                             correct is, kan het monster positief voor Salmonella worden bevonden.\n\nIndien geen Ct-waarde (Ct = N/A, \u2018not applicable\u2019) voor FAM is toegekend aan een monster,\n                                             of de curve een niet-kenmerkend verloop vertoont, moet de interne controle van dat\n                                             monster worden geanalyseerd. Wanneer geen Ct-waarde (Ct = N/A) wordt verkregen voor\n                                             FAM, dan is de uiteindelijke interpretatie van het resultaat afhankelijk van de interne\n                                             controle:\n\n\u2022 Een monster wordt negatief beschouwd voor Salmonella indien geen Ct-waarde voor FAM is toegekend, en de interne controle (Texas Red) een\n                                                   Ct-waarde > 10 heeft.\n\n\u2022  Indien de interne controle ook geen Ct-waarde is toegekend (Ct = N/A), dan is interpretatie\n                                                   van het resultaat onmogelijk. Een dergelijk resultaat kan een indicatie zijn van remming\n                                                   van de PCR reactie. In dit geval dient het monster (DNA-extract) 1/10 verdund te worden\n                                                   in steriel gedestilleerd water en moet de PCR reactie worden herhaald.\n\nInterpretatie van monsterresultaten:\n\nSalmonella detectie\n\n(FAM-490)\n\nInterne controle detectie\n\n(Texas Red-575)\n\nResultaat\n\nCt > / = 10\n\nNiet van belang\n\nPositief\n\nCt = N/A\n\nCt > 10\n\nNegatief\n\nCt = N/A\n\nCt = N/A\n\nInhibitie *\n\n* Wanneer zowel Salmonella als interne controle detectie een Ct = N/A oplevert, dient het monster opnieuw getest\n                                             te worden middels een 1/1 0 verdunning van het DNA-extract.\n\nOpmerking:\n\nBio-Rad heeft inmiddels software ter beschikking gesteld waarin de FAM en Texas Red\n                                             waarden via \u2018Copy-Paste\u2019 ingevuld kunnen worden. Er volgen automatisch antwoorden\n                                             per monster als: positief, negatief en inhibitie. Tevens worden automatisch de waarden\n                                             van de kitcontroles gevalideerd. Dit rapport kan in een PDF file geconverteerd worden.\n                                             De software heet : iQCheck Analysis TM.\n\nVoor een positief resultaat geldt: Salmonella aangetoond.\n\nVoor een negatief resultaat geldt: Salmonella niet aangetoond.\n\nVerdere bevestiging van positieve uitslagen verkregen met de iQ CheckTM\u00a0Salmonella test is ter beoordeling van de gebruiker maar is niet vereist.\n\nOmdat echter in alle gevallen van Salmonella-positieve monsters betreffende het PVE actieplan 2000+ een nadere serotypering van\n                                             de Salmonella bevinding is vereist, dient met dezelfde BPw-voorophoping als waaruit de PCR is uitgevoerd\n                                             alsnog een isolatie met MSRV en XLD uitgevoerd te worden volgens PVE-SALMONELLA-MSRV-140607,\n                                             gevolgd door serotypering van het isolaat (PVE-SALMONELLA-SERQ-140607).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe iQ CheckTM\u00a0Salmonella test kit bevat een positieve en een negatieve controle. Een additionele interne controle\n                                          in elk monster bepaald de effici\u00ebntie van de PCR-reactie en is een indicator voor\n                                          vals-negatieve reacties. Genoemde controles worden in elke test meegenomen.\n\nTen behoeve van de validatie van het gehele experiment dienen de controles te voldoen\n                                          aan de volgende eisen, weergegeven in onderstaande tabel. Is dit niet het geval, dan\n                                          moet de PCR reactie worden herhaald.\n\nSalmonella detectie\n\n(FAM-490)\n\nInterne Controle detectie\n\n(Texas Red-575)\n\nNegatieve controle\n\nCt = N/A *\n\n30 < Ct < 40\n\nPositieve controle\n\n26 < Ct < 36\n\nNiet van belang\n\n* De software geeft een Ct waarde \u2018N/A (not applicable)\u2019 indien de fluorescentie van\n                                          een monster niet significant boven de achtergrond ruis uitkomt en dus de threshold\n                                          niet snijdt.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode als geheel dienen te worden meegenomen:\n\n\u2013 Blanco controle,\n\n\u2013 Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                                negatieve controle komen te vervallen),\n\n\u2013 Positieve controle.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGeef het resultaat op als \u2018Salmonella aangetoond / niet aangetoond in het betreffende monstermateriaal\u2019 als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan tussen haakjes\n                                          aangegeven worden hoeveel gram monstermateriaal is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd van de\n                                          wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden (zie bijlage III), dan dient het laboratorium op het analysecertificaat hierover een opmerking te\n                                          maken en de eventuele gevolgen voor de betrouwbaarheid van de uitslag aan te geven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 AFNOR Validation Certificate, iQ CheckTM\u00a0Salmonella, attest BRD-07/06-07/04.\n\n\u2022 Gebruiksaanwijzing van de iQ CheckTM\u00a0Salmonella Test. Bio-Rad Laboratories b.v., 30 augustus 2004, Veenendaal, NL.\n\n\u2022 Miras l., Hermant N., Arricau N., Popoff M.Y. Nucleotide sequence of lagA and lagB\n                                                genes involved in invasion of HeLa cells by Salmonella enterica subsp. Enterica ser.\n                                                Typhy. Research in Microbiology, Vol. 146 (1): 17-20 (1995).\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 6579:2002. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013 Horizontale\n                                                methode voor het aantonen van Salmonella spp. Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders \u2013\n                                                Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie\n                                                Instituut, Delft.\n\n\u2022 PVE-SALMONELLA-MSRV-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van Salmonella met behulp van MSRV in dons, mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Productschap\n                                                Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl\n\n\u2022 PVE-SALMONELLA-SERO-140607. Toelichting op de serotypering van Salmonella volgens het Kauffmann-White schema. Productschap Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer.\n                                                www.pve.nl\n\n\u2022 Tyagi, S. and Kramer, F.R. Molecular Beacons: Probes that fluoresce upon hybridization.\n                                                Nature Biotechnology 14: 303-308 (1996).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling:\n\nPepton\n\n10,0 g\n\nNaCl\n\n5,0 g\n\nNa2HPO4.12H2O\n\n9,0 g\n\nKH2PO4\n\n1,5 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\n\u2013 Los de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting);\n\n\u2013 Indien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 \u00b1 0,2 bij 25\u00b0C bedraagt;\n\n\u2013 Verdeel het medium over daarvoor geschikte flessen of potten;\n\n\u2013 Steriliseer in een autoclaaf (15 min. 121\u00b0C) .\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nSamenstelling:\n\nID\n\nReagens\n\nVerstrekte hoeveelheid\n\nA\n\nLysis reagens\n\n1 fles (22 ml)\n\nB\n\nFluorescente probes\n\n1 buis (0.550 ml)\n\nC\n\nAmplificatie mix\n\n2 buizen (2 x 2.25 ml)\n\nD\n\nPCR negatieve controle\n\n1 buis (0.5 ml)\n\nE\n\nPCR positieve controle\n\n1 buis (0.250 ml)\n\nDe iQ-CheckTM\u00a0Salmonella kit, Bio-Rad code 357-8 100, bevat reagentia ten behoeve van 96 testen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter met behulp van Preston en CCDA in mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter (in dit protocol verder als Campylobacter aangeduid) in monsters mest en vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nCampylobacter: micro-organismen die de voor deze bacteri\u00ebn karakteristieke groei vertonen en specifieke\n                                          morfologische, biochemische en serologische reacties vertonen wanneer wordt gekweekt\n                                          respectievelijk getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nMestmonsters en blindedarm mestmonsters worden rechtstreeks ge\u00ebnt op een selectieve\n                                          vaste voedingsbodem (mCCDA).\n\nVlees (bijvoorbeeld vel van de borstkap of filet) wordt in porties van 25 gram gedurende\n                                          1 minuut gestomacherd met 100 ml selectief ophopingsmedium (Preston). Hierna wordt\n                                          het monstermateriaal verwijderd en alleen het ophopingsmedium gedurende 24 uur bebroed\n                                          bij 41,5 \u00b0C. Vervolgens wordt afge\u00ebnt op een selectieve vaste voedingsbodem (mCCDA).\n\nSelectieve vaste voedingsbodems worden microa\u00ebroob gedurende 48 uur bij 41,5 \u00b0C bebroed,\n                                          waarna beoordeeld wordt op aanwezigheid van specifieke kolonies.\n\nSpecifieke kolonies worden bevestigd met behulp van oxidase reactie en microscopie.\n                                          Als extra controle kan een deel van de isolaten met behulp van een latex agglutinatie\n                                          test worden bevestigd.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn.\n\nEr mag ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                             zijn.\n\nVoor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder\n                                             verwezen naar NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n4.2.1 Preston basismedium\n\n4.2.1.1 Samenstelling\n\nVleesextractpoedera\n\n10,0\n\ng\n\nPeptona\n\n10,0\n\ng\n\nNatrium chloridea\n\n5,0\n\ng\n\nNatrium pyruvaatb\n\n0,25\n\ng\n\nNatrium metabisulfietb\n\n0,25\n\ng\n\nIJzer (II) sulfaatb (FeSO4.7H2O)\n\n0,25\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\nOPMERKING\n\na ook tezamen kant-en-klaar verkrijgbaar onder de naam Nutri\u00ebnt Broth No.2\n\nb ook tezamen verkrijgbaar als supplement (zgn. \u2018groeisupplement\u2019 of FBP supplement)\n\n4.2.1.2 Bereiding\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nIndien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,5 \u00b1 0,2 bij 25\u00b0 C bedraagt.\n\nSteriliseer gedurende 15 minuten bij 121 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\n4.2.2 Preston antibiotica oplossing\n\n4.2.2.1 Samenstelling\n\nPolymyxine-B\n\n5000\n\nIU\n\nRifampicine\n\n0,01\n\ng\n\nTrimethoprim lactaat\n\n0,01\n\ng\n\nAmphotericine-B\n\n0,01\n\ng\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als Preston supplement. Let op, ook\n                                             het \u2018vroeger\u2019 gebruikte Preston supplement, met cycloheximide in plaats van amphotericine-B,\n                                             is nog steeds verkrijgbaar. De voorkeur wordt echter gegeven aan gebruik van supplement\n                                             met amphotericine-B.\n\n4.2.2.2 Bereiding\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                             \u00b5m filter)\n\n4.2.3 Compleet Preston ophopingsmedium\n\n4.2.3.1 Samenstelling compleet Preston ophopingsmedium\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n4.2.3.2 Bereiding compleet Preston ophopingsmedium\n\nKoel het basismedium af tot onder de 47\u00b0C.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig.\n\nOPMERKING\n\nIn de originele beschrijving van Preston ophopingsmedium wordt paardenbloed gebruikt.\n                                             In dit voorschrift wordt echter geen paardenbloed toegepast, omdat uit onderzoek is\n                                             gebleken dat dat voor onderhavige monstermatrix niet noodzakelijk is (Jacobs-Reitsma\n                                             et al., 2003).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n4.3.1 mCCDA Basismedium\n\n4.3.1.1 Samenstelling\n\nVleesextractpoedera\n\n10,0\n\ng\n\nPeptona\n\n10,0\n\ng\n\nNatrium chloridea\n\n5,0\n\ng\n\nBacteriologische charcoal\n\n4,0\n\ng\n\nCase\u00efne hydrolysaat\n\n3,0\n\ng\n\nNatrium deoxycholaat\n\n1,0\n\ng\n\nIJzer (II) sulfaat (FeSO4.7H2O)\n\n0,25\n\ng\n\nNatriumpyruvaat\n\n0,25\n\ng\n\nAgar\n\n12,0\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\nOPMERKING\n\na ook tezamen kant-en-klaar verkrijgbaar onder de naam Nutri\u00ebnt Broth No.2\n\n4.3.1.2 Bereiding\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nIndien nodig, stel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,4 \u00b0C \u00b1 0,2 bij 25 \u00b0C bedraagt.\n\nSteriliseer gedurende 15 minuten bij 121 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\n4.3.2 mCCDA antibiotica supplement\n\n4.3.2.1 Samenstelling\n\nCefoperazone\n\n32\n\nmg\n\nAmphotericine-B\n\n10\n\nmg\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als mCCDA supplement.\n\n4.3.2.2 Bereiding\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                             \u00b5m filter)\n\n4.3.3 Complete mCCDA voedingsbodem\n\n4.3.3.1 Samenstelling\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n4.3.3.2 Bereiding\n\nKoel het basismedium af tot 47-50 \u00b0C.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig.\n\nGiet de agar uit in petrischalen met nok en laat stollen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n4.4.1 Oxidase reagens\n\n4.4.1.1 Samenstelling\n\nN,N,N1,N1-tetramethyl-1,4-fenyleendiammoniumdichloride\n\n0,1\n\ngram\n\nWater\n\n10\n\nml\n\n4.4.1.2 Bereiding\n\nLos het N,N,N\u2019,N\u2019-tetramethyl-1,4-fenyleendiammoniumdichloride op in het water. Bereid\n                                          het reagens vlak voor uitvoering van de oxidasetest.\n\nDit reagens is ook kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar. Handel dan volgens de gebruiksaanwijzing\n                                          van de fabrikant.\n\n4.4.2 Latexagglutinatietest voor bevestiging van Campylobacter\n\nLatexagglutinatietesten voor bevestiging van thermotolerante Campylobacter zijn commerci\u00ebel verkrijgbaar.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGebruikelijke toestellen en steriel glaswerk voor microbiologische laboratoria en\n                                          in het bijzonder de onderstaande:\n\n5.1 Broedstoof voor het bebroeden bij 41,5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C.\n\n5.2 Suspendeertoestel, Stomacher 5.3 Geschikte apparatuur en hulpmiddelen om te bebroeden\n                                          in een micro-a\u00ebrobe atmosfeer (ca. 6% zuurstof, 10% kooldioxide en 84% stikstof).\n                                          Voor het verkrijgen van microa\u00ebroob milieu kan gebruik gemaakt worden van commerci\u00eble\n                                          systemen (\u2018gas-zakjes\u2019).\n\n5.4 Microscoop, bij voorkeur met fase-contrast, vergroting 1000x.\n\nOPMERKING\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (l -8 \u00b0C)\n                                             te worden aangeleverd. Zie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage III.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                             echter binnen 48 uur na monstername op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht\n                                             worden met het inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na het tijdstip\n                                             van monstername is verstreken.\n\nStel monsters zo min mogelijk bloot aan temperatuurschommelingen.\n\nOpmerking:\n\nKomen mestmonsters mee met vleesmonsters in een koelbox, sla dan alle monsters gekoeld\n                                             op. Worden mestmonsters per post ongekoeld verstuurd, sla dan op bij kamertemperatuur,\n                                             tenzij deze monsters pas de volgende dag worden ingezet.\n\nCampylobacter is zeer gevoelig voor invriezen en daarom is het invriezen van monsters niet toegestaan.\n\nIn alle gevallen geldt dat de agarplaten na be\u00ebnten zonder uitstel onder micro-a\u00ebrobe condities ge\u00efncubeerd dienen te worden, omdat Campylobacter obligaat micro-a\u00ebrofiel is en onder andere omgevingscondities snel afsterft.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n6.2.1 Monstervoorbehandeling\n\nMonsters waarin hoge aantallen Campylobacter worden verwacht, zoals mest en blindedarm, worden rechtstreeks op het isolatiemedium\n                                             afgestreken.\n\nMaak 1 mengmonster van de 30 afzonderlijke blindedarmen door deze elk op steriele\n                                             wijze open te knippen en uit elke darm een evenredige hoeveelheid materiaal over te\n                                             brengen in een lege steriele petrischaal. Meng goed (bijvoorbeeld met een steriele\n                                             swab of entoog).\n\n6.2.2 Isolatie\n\nBe\u00ebnt vanuit het mengmonster met behulp van de swab of entoog een halve mCCDA-plaat.\n\nBe\u00ebnt de rest van de plaat middels verdunningsstrepen met behulp van een steriele\n                                             \u00f6se, zodanig dat na incubatie losliggende kolonies kunnen ontstaan.\n\nIncubeer mCCDA platen micro-a\u00ebroob gedurende 48 uur \u00b1 4 uur bij 41, 5 \u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n6.3.1 Monstervoorbehandeling\n\nBreng 25 gram \u00b1 1 gram van het monster, bijvoorbeeld een stuk huid van de borstkap\n                                             of filet, in een stomacherzak en voeg 100 ml Preston bouillon toe. Stomacher gedurende\n                                             1 minuut en scheidt het monstermateriaal van de ophopingsbouillon (bijvoorbeeld door\n                                             het verwijderen van de binnenzak van de stomacherzak met daarin het monstermateriaal\n                                             of door overschenken van de ophopingsvloeistof in een schoon steriel flesje).\n\n6.3.2 Ophoping\n\nIncubeer de ophopingsbouillon 24 uur \u00b1 2 uur bij 41, 5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C in micro-a\u00ebroob milieu.\n\nIndien ge\u00efncubeerd wordt in flesjes of (stomacher)-zakken met weinig kopruimte (d.w.z.\n                                             < / = 2 cm), kan zonder eisen aan het milieu ge\u00efncubeerd worden.\n\n6.3.3 Isolatie\n\nEnt met behulp van een entoog (10 \u00b5l) de Preston-cultuur na incubatie uit op een mCCDA-plaat.\n                                             Incubeer mCCDA platen micro-a\u00ebroob gedurende 48 uur \u00b1 4 uur bij 41,5 \u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBeoordeel bebroede mCCDA-platen op de aanwezigheid van kolonies met de volgende morfologische\n                                             eigenschappen: grijs, metalig, laag convex, amorf en de neiging om met de entstreep\n                                             mee te groeien. Deze kolonies worden als \u2018verdacht positief\u2019 aangemerkt.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoer de bevestiging uit met minimaal 1 tot maximaal 3 verdachte kolonies per plaat\n                                             in geval van reincultuur en tot 5 verdachte kolonies (indien aanwezig) in geval van\n                                             mengcultuur, totdat een positief resultaat wordt verkregen.\n\nTer bevestiging wordt een oxidase reactie uitgevoerd en worden de verdachte kolonies\n                                             microscopisch beoordeeld. Voer zonodig eerst een reinstrijk uit op bijvoorbeeld een\n                                             bloedplaat of een mCCDA-basis agar plaat (zonder antibiotica supplement).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nEnt met een entoog (anders dan van nikkel/chroom) vanaf de mCCDA plaat een verdachte\n                                             kolonie op een filtreerpapiertje bevochtigd met oxidasereagens. Lees na maximaal 10\n                                             seconden de reactie af. De reactie is positief bij paarskleuring en negatief indien\n                                             er geen verkleuring optreedt.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nMaak van de verdachte kolonie een hangende-druppel-preparaat of nat-preparaat en beoordeel\n                                             met een fasecontrast of donkerveld microscoop (100x objectief) op de karakteristieke\n                                             kurketrekker-vormige morfologie en grote beweeglijkheid van Campylobacter.\n\nBij kleuring volgens Gram tonen Campylobacter bacteri\u00ebn zich als kurketrekker-vormig gebogen Gram-negatieve staafjes. De karakteristieke\n                                             vorm is ook goed te zien bij kleuring met Oost-Indische inkt. Bij oude culturen (\n                                             > 2 dagen op plaat) kan Campylobacter cocco\u00efde en minder beweeglijke vormen aannemen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBij twijfel of als extra controle op de juiste identificatie wordt aanbevolen om regelmatig\n                                             een aanvullende bevestiging uit te voeren met een latexagglutinatietest, bijvoorbeeld\n                                             met 1 op 50 bevestigde kolonies.\n\n7.4.1 Latexegglutinatietest\n\nLatexagglutinatietesten zijn bij diverse firma\u2019s commercieel verkrijgbaar en moeten\n                                             volgens de gebruiksaanwijzing van de fabrikant worden uitgevoerd en afgelezen.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nCampylobacter bacteri\u00ebn vertonen de karakteristieken zoals omschreven in tabel 1.\n\nTest\n\nOmschrijving\n\nCampylobacter-specifiek resultaat\n\nMicroscopie\n\nKarakteristieke kurketrekkervormige morfologie en grote beweeglijkheid\n\n+\n\nOxidase\n\nPaarsvorming\n\n+\n\nLatexagglutinatie\n\nVolgens voorschrift fabrikant\n\n+\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\n\u2013 Blanco controle,\n\n\u2013 Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                                negatieve controle komen te vervallen),\n\n\u2013 Positieve controle.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGeef het resultaat op als \u2018Campylobacter aangetoond / niet aangetoond in het betreffende monstermateriaal\u2019 als Campylobacter al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan tussen haakjes\n                                          aangegeven worden hoeveel gram monstermateriaal is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd van de\n                                          wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden (zie bijlage III), dan dient het laboratorium op het analysecertificaat hierover een opmerking te\n                                          maken en de eventuele gevolgen voor de betrouwbaarheid van de uitslag aan te geven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 Jacobs-Reitsma, W. (1994). Epidemiology of Campylobacter in Poultry. Thesis Agricultural University Wageningen, The Netherlands.\n\n\u2022 Jacobs-Reitsma W., M. van der Wal, R. Achterberg and J. Wagenaar. Comparative studies\n                                                on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation A-12 at the 12th\n                                                International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. of Med. Microbiol.,\n                                                Vol. 293 Suppl. 35, p. 6-7.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 10272:1995. Microbiology of food and animal feeding stuffs \u2013 Horizontal\n                                                method for the detection of thermotolerant Campylobacter + technical corrigenda (ISOIO272:1995/Cor.1:1996(E)\n                                                and ISO 10272:1995/Cor:1997(E). Nederlands Normalisatie Instituut, Delft.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders -\n                                                Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie\n                                                Instituut, Delft.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter spp. met behulp van VIDAS CAM in vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter (in dit protocol verder als Campylobacter aangeduid) in vlees, afkomstig van pluimvee.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nCampylobacter: alle typen Campylobacter waarvan de specifieke antigenen met behulp van de Enzyme Linked Fluorescent Assay\n                                          (ELFA) techniek worden aangetoond, wanneer wordt getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nVIDAS CAM is een enzym immunoassay voor de detectie van Campylobacter antigenen, waarbij gebruik wordt gemaakt van de ELFA methode en die geautomatiseerd\n                                          wordt uitgevoerd op het VIDAS analyse apparaat.\n\nPluimveevlees (bijvoorbeeld vel van de borstkap of filet) wordt in porties van 25\n                                          gram gedurende 1 minuut gestomacherd met 100 ml selectief ophopingsmedium (Preston).\n                                          Hierna wordt het monstermateriaal verwijderd en alleen het ophopingsmedium gedurende\n                                          48 uur bebroed bij 41,5 \u00b0C. Vervolgens wordt de VIDAS CAM assay uitgevoerd. Het test\n                                          resultaat van deze aantoningsstap is na ca. 70 minuten beschikbaar. Verdere bevestiging\n                                          van positieve uitslagen is niet noodzakelijk.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn.\n\nEr mag ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                             zijn.\n\nVoor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder\n                                             verwezen naar NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n4.2.1 Preston basismedium\n\n4.2.1.1 Samenstelling\n\nVleesextractpoedera\n\n10,0 g\n\nPeptona\n\n10,0 g\n\nNatrium chloridea\n\n5,0 g\n\nNatrium pyruvaatb\n\n0,25 g\n\nNatrium metabisulfieta\n\n0,25 g\n\nIJzer (II) sulfaatb (FeSO4.7H2O)\n\n0,25 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nOPMERKING\n\na ook tezamen kant-en-klaar verkrijgbaar onder de naam Nutri\u00ebnt Broth No.2\n\nbook tezamen verkrijgbaar als supplement (zgn. \u2018groeisupplement\u2019 of FBP supplement)\n\n4.2.1.2 Bereiding\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nStel de pH zo in dat deze na sterilisatie 7,5 \u00b1 0, 2 bedraagt bij 25\u00b0C.\n\nSteriliseer gedurende 15 minuten bij 121 \u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n4.2.2 Preston antibiotica oplossing\n\n4.2.2.1 Samenstelling\n\nPolymyxine-B\n\n5000\n\nIU\n\nRifampicine\n\n0,01\n\ng\n\nTrimethoprim lactaat\n\n0,01\n\ng\n\nAmphotericine-B\n\n0,01\n\ng\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als Preston supplement. Let op, ook\n                                             het \u2018vroeger\u2019 gebruikte Preston supplement, met cycloheximide in plaats van amphotericine-B,\n                                             is nog steeds verkrijgbaar. De voorkeur wordt echter gegeven aan gebruik van supplement\n                                             met amphotericine-B.\n\n4.2.2.2 Bereiding\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                             \u00b5m filter).\n\n4.2.3 Compleet Preston ophopingsmedium\n\n4.2.3.1 Samenstelling compleet Preston ophopingsmedium\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n4.2.3.2 Bereiding compleet Preston ophopingsmedium\n\nKoel het basismedium af tot onder de 47\u00b0C.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig.\n\nOPMERKING\n\nIn de originele beschrijving van Preston ophopingsmedium wordt paardenbloed gebruikt.\n                                             In dit voorschrift wordt echter geen paardenbloed toegepast, omdat uit onderzoek is\n                                             gebleken dat dat voor onderhavige monstermatrix niet noodzakelijk is (Jacobs-Reitsma\n                                             et al., 2003).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGebruikelijke toestellen en steriel glaswerk voor microbiologische laboratoria en\n                                          in het bijzonder de onderstaande:\n\n5.1 Broedstoof voor het bebroeden bij 41,5 \u00b0C \u00b1 1\u00b0C.\n\n5.2 Suspendeertoestel, Stomacher\n\n5.3 Geschikte apparatuur en hulpmiddelen om te bebroeden in een micro-a\u00ebrobe atmosfeer\n                                          (ca. 6% zuurstof, 10% kooldioxide en 84% stikstof). Voor het verkrijgen van microa\u00ebroob\n                                          milieu kan gebruik gemaakt worden van commerci\u00eble systemen (\u2018gas-zakjes\u2019), bijvoorbeeld:\n\nGenBox micro-a\u00ebrofiel (10 zakjes, ref. 96125, bioM\u00e9rieux).\n\n5.4 VIDAS of mini VIDAS analyser (bioM\u00e9rieux).\n\n5.5 VIDAS CAM assay (30 testen, ref. 30111, bioM\u00e9rieux)\n\nOPMERKING\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (1-8 \u00b0C)\n                                          te worden aangeleverd. Zie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage III.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                          echter binnen 48 uur na monstername op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht\n                                          worden met het inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na het tijdstip\n                                          van monstername is verstreken.\n\nCampylobacter is zeer gevoelig voor invriezen en daarom is het invriezen van monsters niet toegestaan.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nBreng 25 gram \u00b1 1 gram van het monster, bijvoorbeeld een stuk huid van de borstkap\n                                             of filet, in een stomacherzak en voeg 100 ml Preston bouillon toe. Stomacher gedurende\n                                             1 minuut en scheidt het monstermateriaal van de ophopingsbouillon (bijvoorbeeld door\n                                             het verwijderen van de binnenzak van de stomacherzak met daarin het monstermateriaal\n                                             of door overschenken van de ophopingsvloeistof in een schoon steriel flesje).\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nIncubeer de ophopingsbouillon 48 uur \u00b1 2 uur bij 41, 5 \u00b0C \u00b1 1 \u00b0C in micro-a\u00ebroob milieu.\n\nIndien ge\u00efncubeerd wordt in flesjes of (stomacher)-zakken met weinig kopruimte (d.w.z.\n                                             < / = 2 cm), kan zonder eisen aan het milieu ge\u00efncubeerd worden.\n\nOPMERKING\n\nIn tegenstelling tot PVE-CAMPYLOBACTER-140607 is de incubatietijd in dit voorschrift\n                                             48 uur.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nMeng het ophopingsmedium na incubatie en breng 2 ml over in een eppendorfbuisje. Sluit\n                                             de buisjes en verhit gedurende 15 minuten in een kokend waterbad. Voer vervolgens\n                                             de VIDAS CAM test uit volgens de gebruiksaanwijzing. Runtime VIDAS CAM test bedraagt\n                                             ongeveer 70 minuten.\n\nOPMERKING\n\nIndien de VIDAS CAM test niet direct kan worden uitgevoerd is het mogelijk de ophoping\n                                             (of een deel ervan) in te vriezen voor maximaal 48 uur. Na ontdooien moet de ophoping\n                                             opgekookt worden en kan bovenstaande werkwijze worden gevolgd.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nResultaten worden beoordeeld conform de gebruiksaanwijzing van de VIDAS CAM test.\n\nDeze zijn gebaseerd op metingen van de fluorescentie en worden gestandaardiseerd naar\n                                             een zogenaamde Test Value (TV). Resultaten met een TV onder de 0,1 betreffen monsters\n                                             waarin Campylobacter antigenen niet aantoonbaar waren. Resultaten met een TV = 0,1 worden als Campylobacter-positief gerapporteerd.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe in dit voorschrift beschreven VIDAS CAM methode is een detectie methode. Verdere\n                                          confirmaties zijn niet nodig.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nDe VIDAS CAM test kit bevat een positieve en een negatieve VIDAS reagens controle\n                                          en een bijbehorende standaard. Deze worden meegenomen in de bepalingen zoals omschreven\n                                          in de gebruiksaanwijzing van de VIDAS CAM test.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode als geheel dienen te worden meegenomen:\n\n\u2013 Blanco controle,\n\n\u2013 Negatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                                negatieve controle komen te vervallen),\n\n\u2013 Positieve controle.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nGeef het resultaat op als \u2018Campylobacter aangetoond / niet aangetoond in het betreffende monstermateriaal\u2019 als Campylobacter al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan tussen haakjes\n                                          aangegeven worden hoeveel gram monstermateriaal is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd van de\n                                          wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden (zie bijlage III), dan dient het laboratorium op het analysecertificaat hierover een opmerking te\n                                          maken en de eventuele gevolgen voor de betrouwbaarheid van de uitslag aan te geven.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n\u2022 Jacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, E. Samu\u00ebls and J. Wagenaar. Evaluation of the\n                                                VIDAS Campylobacter Assay for detection of Campylobacter in fresh poultry products after various enrichment methods. Posterpresentation A-18\n                                                at 12th International Workshop on Campylobacter,\u00a0Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. Med. Microbiol.,\n                                                Vol. 293 Suppl. 35, p. 6.\n\n\u2022 Jacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, R. Achterberg, J. Wagenaar. Comparative studies\n                                                on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation A-21 at 12th International\n                                                Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, September 2003, Aarhus, Denmark. Intern. J. Med. Microbiol.,\n                                                Vol. 293 Suppl. 35, p. 6-7.\n\n\u2022 NEN-EN-ISO 7218:2005 Ontw. En. Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders -\n                                                Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken. Nederlands Normalisatie\n                                                Instituut, Delft.\n\n\u2022 PVE-CAMPYLOBACTER-140607. PVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante\n                                                Campylobacter met behulp van Preston en CCDA in mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Productschap\n                                                Vee, Vlees en Eieren, Zoetermeer. www.pve.nl\n\n\u2022 Samu\u00ebls, E.L.A.M. en W. Jacobs-Reitsma, Validatierapport van de Campylobacter bepaling in de matrix pluimveevlees met behulp van de VIDAS CAM methode. (Onderzoek\n                                                in het kader van het PVE Plan van Aanpak/Actieplan 2000 + Salmonella en Campylobacter in de pluimveesector), april 2004.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nIndien afwijkingen in de voorgeschreven kwaliteit en wijze van aanleveren van monsters\n                                    zijn geconstateerd, moet in ieder geval bij de volgende punten richting de opdrachtgever\n                                    een opmerking worden gemaakt, waaruit blijkt dat er in de procedure van monstername\n                                    en inzenden een afwijking is geconstateerd en om welke afwijking het gaat.\n\nTen algemene:\n\n\u2192 Indien bij de inzending \u00e9\u00e9n van de volgende gegevens ontbreekt: monsterdatum en tijdstip,\n                                          stalnummer en KIP-nummer.\n\n\u2192 Indien monsters niet deugdelijk zijn verpakt in monsterpotten of -zakken.\n\n\u2192 Indien monsters zodanig zijn geadresseerd dat voor transporteur en laboratorium verwarring\n                                          kan ontstaan.\n\n\u2192 Indien er tussen het tijdstip van monstername en het tijdstip van ontvangst op het\n                                          laboratorium meer dan 48 uur is verstreken.\n\nMonsters.\n\nInlegvellen (opfokbedrijven, opfokvermeerderingsbedrijven en vleeskuikenbedrijven):\n\na) Indien onvoldoende inlegvellen worden aangeleverd.\n\nb) Indien de monsters inlegvellen onvoldoende groot zijn.\n\nc) Indien de monsters inlegvellen niet duidelijk met mest zijn besmeurd.\n\nDons (broederijen):\n\na) Indien het monster niet minimaal 25 gram dons bevat.\n\nb) Indien het monster geen natte dons bevat.\n\nMest (swabs of overschoentjes) ((op)fokbedrijven, vermeerderingsbedrijven en vleeskuikenbedrijven):\n\nSwabs:\n\na) Indien onvoldoende swabs worden aangeleverd.\n\nb) Indien de swabs onvoldoende met mest zijn besmeurd.\n\nc) Indien de swabs niet tot twee mengmonsters zijn gepoold (tenzij de swabs individueel\n                                          zijn verpakt).\n\nOverschoentjes:\n\na) Indien onvoldoende paar overschoentjes zijn aangeleverd (2 paar bij vleeskuikenbedrijven\n                                          en 5 paar bij fok- vermeerderingsbedrijven).\n\nb) Indien de overschoentjes niet duidelijk met mest zijn besmeurd.\n\nBlindedarmmest (slachterijen):\n\na) Indien niet minimaal 30 blindedarm monsters zijn genomen.\n\nb) Indien de blindedarm monsters van onvoldoende formaat zijn.\n\nBorstkapvellen (slachterijen):\n\na) Indien het monster vel van de borstkap niet minimaal 25 gram weegt.\n\nb) Indien het monster niet gekoeld (1-8 \u00b0C) getransporteerd en bewaard is.\n\nEindproducten (slachterijen/uitsnijderijen):\n\na) Indien het monster eindproduct niet minimaal 25 gram weegt.\n\nb) Indien het monster niet gekoeld (1-8 \u00b0C) getransporteerd en bewaard is.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\nA. Norm Salmonella detectie-ringonderzoek\n\nMonsters met Faeces\n\n- blanco\u2019s: min. 80% negatief\n\n- hoog besmette capsules: min. 80 % positief\n\n- laag besmette capsules: min. 50 % positief\n\nControles\n\n- blanco\u2019s: 100% negatief\n\n- hoog besmette capsules: 100 % positief\n\n- laag besmette capsules: min. 50 % positief\n\nGoed: Als aan bovenstaande eisen voldaan wordt\n\nOnvoldoende: Als niet aan bovenstaande eisen voldaan wordt\n\n\u2022 Consequenties indeling resultaten\n\no Goed: Geen consequenties\n\no Onvoldoende: Extra monsters worden nagestuurd. Wanneer bij dit extra onderzoek onvoldoende\n                                    gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk geschorst voor de detectie van\n                                    Salmonella totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek detectie Salmonella\n                                    van het NRL \u2019goed\u2019 zijn.\n\nB. Norm Salmonella serotypering-ringonderzoek\n\n\u2022 Voor de beoordeling van de fouten wordt uitgegaan van de opgegeven lijst van te\n                                    typeren stammen per laboratorium.\n\n\u2022 Onderverdeling in grove fouten en kleine fouten. Per grove fout krijgt het laboratorium\n                                    2 punten en per kleine fout l punt. Het totale aantal punten bepaalt hoe het laboratorium\n                                    gescoord heeft bij het ringonderzoek.\n\no Geen fout\n\n- Typering derden voor stammen die niet op de opgegeven lijst staan\n\n- Niet volledig uittyperen van stammen die niet op de opgegeven lijst staan\n\no Kleine fouten (l punt)\n\n- Typering derden voor stammen die op de opgegeven lijst staan\n\n- Serotype naam fout, maar groep goed van stammen die niet op de opgegeven lijst staan\n\no Grove fouten (2 punten)\n\n- Serotype naam fout en groep fout (ongeacht of het serotype op de lijst staat of\n                                    niet)\n\n- Serotype naam fout van stammen die op de opgegeven lijst staan\n\n- Niet volledig uittyperen van stammen die op de opgegeven lijst staan\n\n- Onterecht S. Enteritidis of S. Typhimurium afgeven\n\n- Indeling op basis van fouten\n\no Goed: O - l punt\n\no Matig: 2 - 4 punten\n\no Onvoldoende: meer dan 4 punten\n\n- Consequenties indeling resultaten\n\no Goed: Geen consequenties\n\no Matig: Advies kan worden opgevraagd bij het WKL-Salmonella te Bilthoven.\n\no Onvoldoende: Extra set stammen wordt nagestuurd. Wanneer bij dit extra onderzoek\n                                    onvoldoende gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk geschorst voor het\n                                    typeren totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek serotypering Salmonella\n                                    van het NRL \u2019matig\u2019 of \u2019goed\u2019 zijn.\n\n[Regeling vervallen per 01-01-2010]\n\no 2 keer \u2019onvoldoende\u2019: Extra set stammen wordt nagestuurd. Wanneer bij dit extra\n                                    onderzoek onvoldoende gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk geschorst\n                                    voor het typeren totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek serotypering Salmonella\n                                    van het NRL \u2018goed\u2019 zijn.\n\no l keer \u2018onvoldoende\u2019 en l keer \u2018matig\u2019: Extra set stammen wordt nagestuurd. Wanneer\n                                    bij dit extra onderzoek onvoldoende gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk\n                                    geschorst voor het typeren totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek serotypering\n                                    Salmonella van het NRL \u2018matig\u2019 of \u2018goed\u2019 zijn.\n\no 2 keer \u2019matig\u2019: Extra set stammen wordt nagestuurd. Wanneer bij dit extra onderzoek\n                                    onvoldoende gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk geschorst voor het\n                                    typeren totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek serotypering Salmonella\n                                    van het NRL \u2018matig\u2019 of \u2018goed\u2019 zijn.\n\no 3 keer \u2018matig\u2019: Extra set stammen wordt nagestuurd. Wanneer bij dit extra onderzoek\n                                    onvoldoende gepresteerd wordt, wordt het laboratorium tijdelijk geschorst voor het\n                                    typeren totdat de resultaten bij een volgend ringonderzoek serotypering Salmonella\n                                    van het NRL \u2018goed\u2019 zijn.\n\nNB. De score van het extra onderzoek wordt meegerekend om de uiteindelijke indeling\n                                    van het laboratorium te bepalen."}