Title: wetten.nl - Regeling - Besluit Protocollen hygiënevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999 - BWBR0011393

Source: https://wetten.overheid.nl/BWBR0011393/

Content:
{"title": "wetten.nl - Regeling - Besluit Protocollen hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999 - BWBR0011393", "content": "Besluit Protocollen hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999\n\nHet Bestuur van het Productschap Pluimvee en Eieren heeft,\n\ngelet op de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999,\n\nop 31 mei 2000 vastgesteld het navolgende\n\nBESLUIT\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit besluit neemt de terminologie, als omschreven in artikel 1 van de Verordening hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999, over.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLaboratoria die erkend willen worden, als bedoeld in artikel 3, vijfde lid, van de verordening, dienen te voldoen aan de in Bijlage I opgenomen erkenningsvoorwaarden.\n\nErkende laboratoria dienen de analyse van de monsters uit te voeren overeenkomstig\n                                    de voorschriften opgenomen in Bijlagen II, III, IV en V.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n1 Dit besluit kan worden aangehaald als \"Besluit Protocollen hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende\n                                          industrie 1999\".\n\n2 Dit besluit treedt in werking met ingang van de dag van zijn publicatie in het Verordeningenblad\n                                          Bedrijfsorganisatie.\n\nir. R.J. \nTazelaar\n\nvoorzitter\n\ndrs. S.B.M. \nJongerius\n\nsecretaris\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nA. Sinds 1 juli 2000 dienen de laboratoria de laboratoria geaccrediteerd te zijn voor\n                                       de door de branche opgestelde analyse methode inzake de bepaling van Salmonella en\n                                       per 1 januari 2005 voor de bepaling van Campylobacter Dat wil zeggen dat het laboratorium\n                                       met ingang van deze datum over een accreditatiecertificaat op basis van de norm ISO/IEC\n                                       17025 moet beschikken die door de Raad voor Accreditatie te Utrecht (hierna te noemen\n                                       RvA) wordt verleend. Hieronder dient tenminste de bepaling van Salmonella in de matrix\n                                       mest volgens de door de branche opgestelde analyse methode te vallen.\n\nB. Voor laboratoria die in het buitenland zijn gevestigd zal geen Nederlandse accreditatie\n                                       door de RvA vereist zijn maar een gelijkwaardige erkenning van het betreffende land.\n\nC. De laboratoria dienen voor de bepaling van Salmonella en Campylobacter gebruik te\n                                       maken van door de branche opgestelde analyse methodes. De analyse methodes zijn bij\n                                       dit besluit opgenomen. Aangezien de RvA volledig gevalideerde analysemethoden accrediteert,\n                                       dienen de branche-methodes van een validatie rapport te worden voorzien. Het Productschap\n                                       draagt zorg, op basis van het aangeleverde validatierapport, voor de beoordeling van\n                                       de methode door de RvA inzake zijn geschiktheid voor accreditatie als branchemethode.\n\nD. Het laboratorium heeft de mogelijkheid tot het gebruik van \u00e9\u00e9n van de toegelaten methoden.\n                                       Er mogen, om te bepalen of het monster al dan niet besmet is met Salmonella, niet\n                                       meerdere testen naast elkaar toegepast worden. Om verder te kunnen serotyperen dient\n                                       echter bij toepassing van \u00e9\u00e9n van de snelle detectiemethoden een positief monster\n                                       worden ge\u00efsoleerd middels de MSRV-methode.\n\nE. Indien het laboratorium bij toepassing van een snelle detectiemethode een positieve\n                                       bepaling wordt gedaan en het monster ten behoeve van de serotypering niet verder ge\u00efsoleerd\n                                       kan worden, moet op het uitslagenformulier hiervan melding worden gemaakt.\n\nF. Alle laboratoria dienen mee te doen met Salmonella-ringonderzoek, tot nu toe georganiseerd\n                                       door het Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieuhygi\u00ebne te Bilthoven (hierna\n                                       te noemen RIVM). Zodra een ringonderzoek voor Campylobacter is opgezet, dient een\n                                       laboratorium ook aan dit ringonderzoek mee te doen.\n\nG. Het laboratorium verstrekt het Productschap elk kwartaal een overzicht waarop is aangegeven\n                                       hoeveel koppels of hoeveel analyses door het betreffende laboratorium zijn onderzocht\n                                       respectievelijk zijn uitgevoerd. Tevens geeft het laboratorium aan hoeveel koppels\n                                       of analyses hiervan positief waren. Voor zover afgesproken met de pluimveehouder/broederij\n                                       of slachterij zendt het laboratorium op aanvraag de resultaten van analyses door aan\n                                       het Productschap (bijvoorbeeld Salmonella paratyphi B var. Java)\n\nH. Jaarlijks moeten de laboratoria monsters Salmonella enteritidis (S.e.) of Salmonella\n                                       typhimurium (S.t.) opsturen naar het RIVM. Dit ten behoeve van het faagtyperingsonderzoek,\n                                       dat het RIVM uitvoert in het kader van de EU- Zo\u00f6noserapportage.\n\nI. De serotypering van Salmonella enteritidis en Salmonella typhimurium mag door ieder\n                                       erkend laboratorium worden uitgevoerd. De serotypering van de overige Salmonella serotypen\n                                       mag uitsluitend uitgevoerd worden door de erkende laboratoria die voor deze verrichting\n                                       uiterlijk op 1 januari 2005 een erkenning hebben bij de RvA. Het betreft serotypen\n                                       die op een door het Productschap opgestelde lijst van veel v\u00f2\u00f2rkomende serotypen in\n                                       pluimvee staan vermeld. De op deze lijst vermelde serotypen kunnen worden gewijzigd\n                                       als de in pluimvee/pluimveeproducten v\u00f2\u00f2rkomende serotypen wijzigen.\n\nJ. De laboratoria die de serotyperingen uitvoeren zijn verplicht:\n\nde serotyperingen uit te voeren conform het antigenen schema van Kaufmann White;\n\njaarlijks maximaal 10 isolaten door te sturen naar het RIVM ter serotypering. Dit\n                                             is een duplo onderzoek om de kwaliteit van het serotyperen te toetsen;\n\ndeel te nemen aan ringonderzoeken, die de kwaliteit van het serotyperen eveneens testen;\n\nisolaten, afkomstig van andere erkende laboratoria die geen serotypering van de typen\n                                             met uitzondering van S.e. en S.t. kunnen uitvoeren, te analyseren. Hiervoor mogen\n                                             geen afwijkende tarieven in rekening worden gebracht.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor het aantonen van Salmonella en/of Campylobacter in pluimvee(vlees) en eieren\n                                 staat de pluimveesector een aantal analysemethoden ter beschikking, welke goedgekeurd\n                                 zijn door de Raad voor Accreditatie.\n\nHet laboratorium kan deze analysemethoden toepassen voor de analyses in het kader\n                                 van de Verordening Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveehouderij 1999 en de Verordening Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999. Het laboratorium dient dan wel de betreffende analysemethode onder haar accreditatie\n                                 van de Raad voor Accreditatie (ISO/IEC 17025) onder te brengen.\n\nDe analysemethoden zijn:\n\n1. PVE Branchemethode MSRV voor het aantonen van Salmonella in dons, faeces, vellen en\n                                       eindproduct afkomstig van pluimvee.\n\n2. Alternatieve PVE Branchemethode ProbeliaTM PCR voor het aantonen van Salmonella in dons, faeces, vellen en eindproduct afkomstig\n                                       van pluimvee.\n\n3. Alternatieve PVE Branchemethode VIDAS SLM voor het aantonen van Salmonella in dons\n                                       afkomstig van pluimvee.\n\n4. PVE Branchemethode voor de bepaling van de aan- of afwezigheid van thermotolerante\n                                       Campylobacter spp. in monsters pluimvee, pluimveeproducten en omgevingsmonsters.\n\n5. PVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter spp. met behulp\n                                       van de VIDAS CAM test in pluimveeproducten.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van Salmonella in dons, faeces\n                                       (mest) en vellen en eindproduct afkomstig van pluimvee. De Raad voor Accreditatie\n                                       heeft de methode goedgekeurd voor de matrix mest, dons, vellen en eindproduct.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSalmonella: micro-organismen die de voor deze bacteri\u00ebn karakteristieke groei vertonen\n                                       en specifieke biochemische en serologische reacties vertonen wanneer wordt gekweekt\n                                       respectievelijk getest volgens de beschreven werkwijze.\n\nDetectie van Salmonella: bepalen van de aan- of afwezigheid van deze micro-organismen\n                                       als het onderzoek wordt uitgevoerd volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNa voorincubatie van de te onderzoeken matrix in een voorophopingsmedium, wordt ge\u00ebnt\n                                       op een half-vast medium, waarna wordt afgestreken op een selectief isolatiemedium.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het gedestilleerde water moeten van analysekwaliteit\n                                       zijn.\n\ngebufferd pepton water\n\nBPw\n\nbijlage 1.1\n\nmodified semi-solid Rappaport-Vassiliadis medium\n\nMSRV\n\nbijlage 1.2\n\nbriljant groen agar\n\nBGA\n\nbijlage 1.3\n\nureumagar\n\nUA\n\nbijlage 1.4\n\ntriple-sugar-ironagar\n\nTSI\n\nbijlage 1.5\n\nlysine-decarboxylase medium\n\nLDC\n\nbijlage 1.6\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe samenstelling en bereiding van media en reagentia is opgenomen in bijlage 1. Er\n                                          mag echter ook gebruik gemaakt worden van media die commercieel verkrijgbaar zijn.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGebruikelijke apparatuur en glaswerk voor een microbiologisch laboratorium en in het\n                                       bijzonder de onderstaande:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n5.1. Broedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C\n\n5.2. Broedstoof voor het bebroeden bij 42 \u00b0 C \u00b1 0,5 \u00b0 C\n\n5.3. Waterbad ingesteld op 47 \u00b0 C \u00b1 2 \u00b0 C\n\n5.4. Steriele entnaalden met een oog met een diameter van ca. 3 mm.\n\n5.5. Steriele pipetten met een schaalverdeling van 0,1 ml en een meetvolume van 1 ml.\n\n5.6. Petrischalen met een middellijn van ca. 9 cm.\n\n5.7. Cultuurbuizen van 17/18 x 150 mm en van 8 x 160 mm.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                       echter binnen 48 uur op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht worden met het\n                                       inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na de datum van monstername\n                                       is verstreken.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVerdun het monster 1:10 in BPw.\n\nIn de volgende tabel1 is ter illustratie de relatie tussen de verschillende monsterhoeveelheden en het\n                                          volume BPw weergegeven:\n\naantallen\n\n(hoeveelheid (circa))\n\nBPw\n\ntype monster\n\n2x25\n\nswabs\n\n(12,5 gram)\n\n112,5 ml\n\nswabs broederijen\n\n3x20\n\nswabs\n\n(10 gram)\n\n90\n\nml\n\nswabs stallen\n\n2x 15\n\nswabs\n\n(7,5 gram)\n\n67,5 ml\n\nswabs\n\n2\n\npaar\n\n(10 gram)\n\n90\n\nml\n\noverschoentjes\n\n6x 25\n\nswabs\n\n(12,5 gram)\n\n112,5 ml\n\nswabs\n\n2x 30\n\nswabs\n\n(15 gram)\n\n135 ml\n\nswabs\n\n30\n\nswabs\n\n(15 gram)\n\n135 ml\n\nblinde darmmest\n\n25\n\ngram\n\n(25 gram)\n\n225 ml\n\ndons\n\n25\n\ngram\n\n(25 gram)\n\n225 ml\n\neindproduct\n\n25\n\ngram\n\n(25 gram)\n\n225 ml\n\nvel van de borstkap\n\n40\n\nstukjes\n\n(60 gram)\n\n540 ml\n\ninlegvellen\n\nIncubeer de potten BPw 18 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C.\n\nDe potten mogen tussentijds gedurende 2 dagen in de koelkast bewaard worden, deze\n                                          \u2018koudestap\u2019 is mogelijk.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBreng 0,1 mI BPw-cultuur op een MSRV plaat (bij 9 cm platen 3 druppels, met een gezamenlijk\n                                          volume van 0,1 ml in een driehoek. Incubeer de platen 1 x 24 \u00b1 2 uur bij 42 \u00b0 C \u00b1\n                                          0,5 \u00b0 C. De platen moeten met het deksel van de petrischaal naar boven ge\u00efncubeerd\n                                          worden, aangezien het een half-vast medium is. Niet verdachte of negatieve platen\n                                          dienen nogmaals 1 x 24 \u00b1 2 uur bij 42 \u00b0 C \u00b1 0,5 \u00b0 C bebroed te worden. Een verdachte\n                                          MSRV-plaat vertoont groei in de agar (zwerming vanuit de entingsplaats) en heeft een\n                                          wit/grijze kleur. Verdachte platen worden afge\u00ebnt door aan de rand van de zwermzone\n                                          met een \u00f6se materiaal uit de agar te nemen en daarmee een gedroogde BGA plaat te be\u00ebnten.\n                                          Incubeer deze platen gedurende 24 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nControleer de bebroede BGA-platen op de vorming van roze kolonies. Dergelijke kolonies\n                                          worden als \u2018vermoedelijk positief\u2019 aangemerkt.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor de bevestiging uit met minimaal 1 tot maximaal 3 specifieke kolonies per plaat\n                                          in geval van reincultuur en tot 5 specifieke kolonies (indien aanwezig) in geval van\n                                          mengcultuur totdat een positief resultaat wordt verkregen. De kolonies worden vanaf\n                                          de BGA plaat ge\u00ebnt in UA middels het afstrijken op het oppervlak van de agar en in\n                                          TSI middels ladderen over het schuingestolde oppervlak en een steekenting tot op de\n                                          bodem van de buis. Be\u00ebnt tevens een buis LDC door een hoeveelheid koloniemateriaal\n                                          tegen de wand van de buis net onder het vloeistof oppervlak af te strijken. De buizen\n                                          worden 24 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C ge\u00efncubeerd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nWanneer geen goed losliggende kolonies op de BGA plaat zijn verkregen of bij de aanwezigheid\n                                          van veel spreidende of overgroeiende stoorflora is het nodig ter zuivering een nieuwe\n                                          reinstrijk op een gedroogde BGA- of nutri\u00ebntenagarplaat te maken. Bij verontreiniging\n                                          van de Salmonella- kolonie met andere bacteri\u00ebn wordt een afwijkend biochemisch patroon\n                                          verkregen. Het is toegestaan om eerst de bevestigingstest met de TSI uit te voeren,\n                                          en bij een verdachte uitslag door te gaan met ureum en LDC.\n\nNa incubatie geven voor Salmonella verdachte kolonies de volgende biochemische resultaten:\n\nTSI agar\n\nonderin de buis\n\n- geel\n\n- zwart\n\n- bellen/scheuren\n\n- glucose positief (100%)\n\n- vorming van H2S (91,6%)\n\n- gasvorming van glucose (91,9%)\n\nschuine gedeelte\n\n- rood/onveranderd\n\n- lactose en/of sucrose negatief (resp. 99,2% en 99,5%)\n\nUreum agar\n\n- geen kleuromslag van het medium\n\n- negatief (100%)\n\nLDC\n\n- paarse kleur en groei in medium\n\n- positief (94,6%)\n\nHet gebruik van biochemische kits (zoals API, Crystal) is ook toegestaan.\n\nBiochemisch verdachte kolonies dienen serologisch bevestigd te worden met een polyvalent\n                                          serum. Dit werkvoorschrift is opgenomen in bijlage 3.1.\n\nDe totale beoordeling van biochemische en serologische resultaten is als volgt:\n\nBiochemische reacties\n\nAuto-agglutinatietabel\n\nAgglutinatie met serum\n\nWerkwijze / Resultaat\n\npos\n\nneg\n\npos\n\nSalmonella\n\npos\n\nneg\n\nneg\n\nRIVM\n\npos\n\npos\n\n--\n\nRIVM\n\nIndien een stam alleen biochemisch verdacht is, wordt deze opgestuurd naar het RIVM.\n                                          Een andere mogelijkheid is het inzetten van een zogenaamde \u2018lange bonte rij\u2019 of een\n                                          biochemische kit. Op het resultaat van het RIVM hoeft niet gewacht te worden, alvorens\n                                          een uitslag wordt afgegeven.\n\nVoor de donsmonsters en faecesmonsters vindt serotypering plaats voor de 4 hoofdgroepen\n                                          van Salmonella (B, C, D en E) en indien van toepassing identificatie van Salmonella\n                                          Enteritidis en Salmonella Typhimurium. (indien nog niet bij pluimveehouder het serotype\n                                          nog niet bekend is). In bijlage IV is het werkvoorschrift opgenomen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor de eerstelijnscontrole 2 van de methode dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle\n\nNegatieve controle\n\nBlanco controle\n\nDe eerstelijnscontroles met MSRV platen staan beschreven in bijlage 2.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeef het resultaat op als \u2018aan- of afwezigheid van Salmonella in het betreffende monstermateriaal\u2019\n                                       (zie bijlage III) als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens dit protocol. Bij de uitslag kan\n                                       tussen haakjes aangegeven worden om hoeveel gram het ongeveer gaat dat is onderzocht.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters door de opdrachtgever afwijkingen worden\n                                       geconstateerd van de wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient\n                                       het laboratorium hierover schriftelijk een opmerking te maken richting de opdrachtgever\n                                       (zie bijlage V).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNEN-EN 12824 Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders - horizontale methode\n                                             voor het aantonen van Salmonella (ISO 6579:1993, gewijzigd).\n\nZee, van der H., E. De Boer, P. Van Netten, 1990, Salmonella isolatie met behulp van\n                                             MSRV, De Ware (n) chemicus 20: 189-199.\n\nHartman, dr. E.G., Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee\n                                             faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis (MSRV)-medium, september\n                                             1999\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nsamenstelling:\n\npepton\n\n10,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nNa2HP04.12H20\n\n9,0 g\n\nKH2P04\n\n1,5 g\n\nwater\n\n1000 ml\n\nbereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 \u00b1 0,2 bedraagt bij 25 \u00b0 C.\n\nVerdeel het medium over daarvoor geschikte flessen.\n\nSteriliseer in een autoclaaf (15 min. 121 \u00b0 C).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\noplossing A (basis):\n\ntryptose\n\n4,59 g\n\ncaseine hydrolysaat\n\n4,59 g\n\nNaCI\n\n7,34 g\n\nKH2P04\n\n1,47 g\n\nMgCl2\n\n10,93 g\n\nmalachietgroen oxalaat\n\n0,037 g\n\nagar\n\n2,7 g\n\ngedestilleerd water\n\n1000 ml\n\nbereiding\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water.\n\nBreng het mengsel onder voortdurend schudden aan de kook (NIET AUTOCLAVEREN).\n\nStel de pH op 5,2 \u00b1 0,2.\n\nKoel het mengsel af tot 50 \u00b0 C.\n\noplossing B (novobiocine):\n\nLos 10 mg novobiocine op in 2 ml gedestilleerd/demi water.\n\nSteriliseer de oplossing d.m.v. filtratie (filter 22 \u03bc m).\n\nbereiding MSRV medium:\n\nVoeg oplossing B toe aan 500 ml oplossing A.\n\nMeng de oplossing.\n\nGiet uit in petrischalen en verwijder de luchtbellen.\n\nEven aan de lucht drogen om een nat oppervlak te voorkomen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\noplossing A (basis):\n\nvleesextract\n\n5,0 g\n\npepton\n\n10,0 g\n\ngistextract\n\n3,0 g\n\nNa2HP04\n\n1,0 g\n\nNaH2P04\n\n0,6 g\n\nagar\n\n12 g tot 18 g3\n\nwater\n\n900 ml\n\nbereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig via verhitting).\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,0 \u00b1 0,2 is.\n\nSchenk het medium in daarvoor geschikte buizen/flessen.\n\nSteriliseer in een autoclaaf (15 min. 121 \u00b0 C).\n\noplossing B (suiker/fenol rood oplossing):\n\nlactose\n\n10,0 g\n\nsucrose\n\n10,0 g\n\nfenolrood\n\n0,09 g\n\nwater tot een eindvolume van 100 ml\n\nbereiding:\n\nLos de componenten op in \u00b1 50 mI water.\n\nVul met water aan tot een eindvolume van 100 ml.\n\nVerhit gedurende 20 min. in een waterbad van 70 \u00b0 C.\n\nKoel af tot 47 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C.\n\nGebruik de oplossing direct.\n\noplossing C (briljant groen oplossing):\n\nbriljant groen\n\n\u00b1 0,5 g\n\nwater\n\n100 ml\n\nbereiding:\n\nVoeg het briljant groen (concentratie tussen 4,5 mg/l en 6 mg/l) toe aan het water.\n\nBewaar de oplossing tenminste 1 dag in het donker zodat auto-sterilisatie optreedt.\n\nbereiding complete medium:\n\noplossing A\n\n900 mI\n\noplossing B\n\n100 ml\n\noplossing C\n\n1 mI\n\nbereiding:\n\nVoeg, onder aseptische omstandigheden, oplossing C toe aan de (tot 47 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C)\n                                                afgekoelde oplossing B.\n\nVoeg deze oplossing toe aan oplossing A en meng het medium.\n\nbereiding van de agar platen:\n\nGiet het vers bereide medium in grote (\u00b1 40 ml) of in kleine petrischalen (\u00b115 ml).\n\nLaat de platen stollen.\n\nDroog de platen voor gebruik.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\noplossing A (basismedium):\n\npepton\n\n1,0 g\n\nglucose\n\n1,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nKH2P04\n\n2,0 g\n\nfenolrood\n\n12,0 mg\n\nagar\n\n12,0 tot 18,0 g4\n\ngedestilleerd water\n\n1000 mI\n\nbereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water.\n\nStel de pH op 6,8 \u00b1 0,2 bij 25 \u00b0 C en filtreer de oplossing.\n\nSteriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 121 \u00b0 C in een autoclaaf.\n\nLaat de oplossing afkoelen tot 47 \u00b0 C.\n\noplossing B (ureumoplossing):\n\nureum\n\n400 g\n\ngedestilleerd water\n\n1000 ml\n\nbereiding:\n\nLos de ureum op in het water\n\nSteriliseer de oplossing d.m.v. filtratie en controleer de steriliteit.\n\nbereiding complete medium :\n\noplossing A\n\n950 ml\n\noplossing B\n\n50 ml\n\nbereiding:\n\nVoeg oplossing B (ureumoplossing) toe aan oplossing A (basismedium).\n\nVerdeel het medium over steriele buizen, per buis 10 ml medium.\n\nLaat de buizen stollen zodat een schuin gedeelte ontstaat.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nsamenstelling:\n\nvleesextract\n\n3,0 g\n\ngistextract\n\n3,0 g\n\npepton\n\n20,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nlactose\n\n10,0 g\n\nsucrose\n\n10,0 g\n\nglucose\n\n1,0 g\n\nijzer (III) citraat\n\n0,3 g\n\nnatriumthiosulfaat\n\n0,3 g\n\nfenoIrood\n\n0,024 g\n\nagar\n\n12,0 tot 18,0 g5\n\ngedestilleerd water\n\n1000 mI\n\nbereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,4 \u00b1 0,2 is.\n\nVerdeel het medium over buizen, per buis 10 ml medium.\n\nSteriliseer de oplossing gedurende 15 min bij 120 \u00b0 C in een autoclaaf.\n\nLaat de buizen stollen zodat er bovenop 2,5 cm agar onderin de buis, een schuin gedeelte\n                                                ontstaat.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nsamenstelling:\n\n1-lysine monohydrochloride\n\n5,0 g\n\ngistextract\n\n3,0 g\n\nglucose\n\n1,0 g\n\nbromocresol purper\n\n0,015 g\n\nwater\n\n1000 ml\n\nbereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting).\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 6,8 \u00b1 0,2 is.\n\nVerdeel het medium over smalle reageerbuizen; per buis 5 mI medium.\n\nSteriliseer in een autoclaaf (10 min. 121 \u00b0 C).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDeze bijlage beschrijft een methode voor de eerstelijnscontrole op de analyse van\n                                          Salmonella met MSRV.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nOm de kwaliteit van de geproduceerde media te bewaken, dient iedere dag een controle\n                                          volgens onderstaand schema te worden uitgevoerd.\n\nInoculum:\n\nKolonie aanstippen met entoogje en afstrijken langs de wand van een buisje met gebufferd\n                                                         peptonwater (BPW). Ca. 24 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C incuberen in BPw (108 ) en verdunnen tot 103 of commercieel verkrijgbaar bij de IGB Groningen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een 24-uurs methode voor het aantonen van Salmonella met behulp\n                                       van de PROBELIATM test (Bio-Rad Laboratories) in dons, faeces (mest), vellen en eindproduct afkomstig\n                                       van pluimvee. De methode is gevalideerd ten opzichte van de door de branche opgestelde\n                                       en door de Raad voor Accreditatie goedgekeurde analyse methode MSRV.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSalmonella : Salmonella spp. , d.w.z. alle typen Salmonella waarvan het DNA aan de\n                                       hand van de Polymerase Chain Reactie (PCR) wordt aangetoond, wanneer wordt getest\n                                       volgens de beschreven werkwijze.\n\nDetectie van Salmonella : bepalen van de aan- of afwezigheid van deze micro-organismen\n                                       als het onderzoek wordt uitgevoerd volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nUit een voorophopingsmedium wordt, na voorincubatie, het DNA van Salmonella ge\u00efsoleerd.\n                                       Vervolgens vindt amplificatie plaats van een voor Salmonella specifieke en gepatenteerde\n                                       DNA- sequentie, het lagA gen, met behulp van de PCR. Het vermenigvuldigde DNA wordt\n                                       na hybridisatie op een microtiterplaatstrip aangetoond middels een colorimetrische\n                                       reactie. Inclusief voorophoping wordt een positieve of negatieve uitslag verkregen\n                                       binnen 24 uur.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe PROBELIATMSalmonella test bestaat uit kant-en-klare reagentia, inclusief voorophopingmedium.\n                                       Het te gebruiken gedestilleerde water moet van analysekwaliteit zijn.\n\nNiet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water (BPw)\n\nBio-Rad code 356-4684 (500 g)\n\n[bijlage 1.1]\n\nof Bio-Rad code 355-4170 (225 ml)\n\nPROBELIA TMSalmonella test\n\nAmplificatie kit\n\nBio-Rad code 357-8000\n\n[bijlage 1.2]\n\nDetectie kit\n\nBio-Rad code 357-8001\n\n[bijlage 1.2]\n\nDe samenstelling en bereiding van media en kits is opgenomen in bijlage 1.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe gebruikelijke apparatuur voor een microbiologisch laboratorium en de voor de PROBELIATM test benodigde apparatuur en verbruiksmaterialen, zoals onderstaand vermeld:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n5.1 Broedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b1 10 C\n\n5.2 Micropipetten (5-50 en 20-200 \u03bcl)\n\n5.3 Microcentrifuge voor 1,5 ml centrifugebuisjes (max. 10.000-15.000 rpm)\n\n5.4 Verhittingsblokken of waterbaden ingesteld op 56\u00b1 1 \u00b0C en 100 \u00b1 1 \u00b0C\n\n5.5 Bio-Rad iCycler thermocycler voor PCR\n\n5.6 Bio-Rad microtiterplaat shaker/incubator Model Stat-Fax\n\n5.7 Bio-Rad microtiterplaat washer Model PW-40/41\n\n5.8 Bio-Rad microtiterplat reader Model 550 met 450 nm en 620 nm filters\n\n5.9 Stomacherzak met filter\n\n5.10 Steriele centrifuge buisjes 1,5 ml\n\n5.11 Steriele micropipetpunten met filter\n\n5.12 Steriele PCR-tubes 200 \u03bcl\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPCR technologie is zeer gevoelig: amplificatie van een enkel molecuul genereert miljoenen\n                                       identieke kopie\u00ebn van de gewenste sequentie. Deze kopie\u00ebn kunnen via a\u00ebrosolen in\n                                       de laboratorium ruimte circuleren.\n\nOm besmetting van nieuwe monsters met DNA sequenties vanuit amplificaties van voorgaande\n                                       monsters te voork\u00f2men, is het essenti\u00ebel om de ruimtes waar de monster behandeling\n                                       en het mixen van de reagentia plaatsvindt (pre-PCR ruimte) te scheiden van de ruimte\n                                       waar de amplicon analyse plaatsvindt en de centrifugebuisjes worden geopend (post-PCR\n                                       ruimte).\n\nHet gebruik van de PROBELIATM PCR test vereist een minimum van 2 afgescheiden ruimtes. Elke ruimte is voorzien\n                                       van eigen gebruiksmaterialen zoals pipetten, handschoenen, laboratorium jassen, etc.,\n                                       die niet mogen circuleren van de ene werkplek naar de andere.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nZie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage V.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                       echter binnen 48 uur op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht worden met het\n                                       inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na de datum van monstername\n                                       is verstreken.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVerdun het monster 1:10 in BPw in een stomacherzak met filter. Stomacher, en incubeer\n                                          de BPw gedurende 18\u00b1 2 uur bij 370 C \u00b1 10 C.\n\nBij verwerking van nekvel ten behoeve van de verdunning dient zo min mogelijk onderhuids\n                                          vet meegesneden te worden; een overmaat vet kan de isolatie van DNA bemoeilijken en\n                                          inhibitie van de PCR-reactie veroorzaken. Mest en dons vergen geen bijzondere voorbehandeling.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNa voorophoping wordt de inhoud van de stomacherzak lichtjes gehomogeniseerd middels\n                                          voorzichtig zwenken. Vervolgens wordt met een steriele pipet (bij voorkeur met filter)\n                                          1 ml homogenaat uit de stomacherzak gepipetteerd in een 1,5 ml centrifuge buisje.\n                                          Hierbij moeten geen vet, donsresten of andere vaste substanties worden meegepipetteerd.\n\nOverige stappen worden uitgevoerd conform de gebruiksaanwijzing van de PROBELIATMSalmonella testkit (instructie van de fabrikant).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nResultaten worden beoordeeld conform de gebruiksaanwijzing van de PROBELIATMSalmonella testkit (instructie van de fabrikant). Deze zijn gebaseerd op bepaling\n                                          van de optische densiteit (OD) verkregen op de Salmonella detectiestrip (H1), vergeleken\n                                          met de OD van hetzelfde monster op de detectiestrip van de interne controle (H0).\n                                          Zie ook onderstaande tabel:\n\nSalmonellae (H1)\n\nInterne controle (H0)\n\nResultaat\n\n1\n\nOD > 0.070\n\nniet van belang\n\npositief\n\n2\n\nOD < 0.070\n\nOD > 0.070\n\nnegatief\n\n3\n\nOD < 0.070\n\nOD < 0.070\n\ninhibitie\n\nIn het geval van inhibitie van de amplificatiereactie (de OD\u2019s voor monster en corresponderende\n                                          interne controle zijn lager dan de gestelde cut-off value van 0.070) dient een nieuwe\n                                          test te worden uitgevoerd. Hiertoe wordt het supernatant van het betreffende monster,\n                                          verkregen na isolatie van DNA, 1:10 verdund met steriel water (instructie van de fabrikant).\n                                          Vervolgens wordt de PCR opnieuw ingezet.\n\nVoor een positief resultaat geldt: Salmonella aanwezig. Voor een negatief resultaat\n                                          geldt: Salmonella afwezig. Verdere bevestiging van positieve uitslagen verkregen met\n                                          de PROBELIATMSalmonella is ter beoordeling van de gebruiker maar is niet vereist.\n\nEchter in die gevallen waarin volgens de Verordening Hygi\u00ebnevoorschriften pluimveehouderij\n                                          1999 of de Verordening Hygi\u00ebnevoorschriften pluimveeverwerkende industrie 1999 nadere\n                                          serotypering van de Salmonella bevinding is vereist, dient met dezelfde BPw-voorophoping\n                                          als waaruit de PCR is uitgevoerd alsnog een isolatie met MSRV en BGA uitgevoerd te\n                                          worden, zie hiervoor de PVE branchemethode MSRV.\n\nIn bijlage IV is het werkvoorschrift voor serotypering van isolaten opgenomen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe PROBELIATMSalmonella test kit bevat \u00e9\u00e9n positieve en twee negatieve controles. Een additionele\n                                       interne controle in elk monster bepaald de effici\u00ebntie van de PCR-reactie en is een\n                                       indicator voor vals-negatieve reacties. Genoemde controles worden in elke test meegenomen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe OD van de beide negatieve controles dient kleiner te zijn dan 0.050; deze waarde\n                                          bevindt zich meestal tussen de 0.020 en 0.030. De OD van de positieve controle dient\n                                          groter te zijn dan 2.000. De test is alleen geldig indien de optische densiteit van\n                                          de controles voldoet aan bovengenoemde condities.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle\n\nNegatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                                negatieve controle komen te vervallen)\n\nBlanco controle\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet resultaat wordt opgegeven als \u2018aan- of afwezigheid van Salmonella in het betreffende\n                                       monstermateriaal\u2019 als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens dit protocol.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters door de opdrachtgever afwijkingen worden\n                                       geconstateerd van de wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient\n                                       het laboratorium hierover schriftelijk een opmerking te maken richting de opdrachtgever\n                                       (zie bijlage V).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nFach P., Dilasser F., Grout J., and Tache J., Evaluation of a polymerase chain reaction-based\n                                       test for detecting Salmonella spp. in food samples: PROBELIATMSalmonella spp. Journal of Food Protection, Vol. 62 (12): 1387-1393 (1999).\n\nHartman E.G. Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee\n                                       faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis (MSRV)-medium, Gezondheidsdienst\n                                       voor Dieren, projectnr 401919, september 1999.\n\nMiras I., Hermant N., Arricau N., Popoff M.Y. Nucleotide sequence of lagA and lagB\n                                       genes involved in invasion of HeLa cells by Salmonella enterica subsp. Enterica ser.\n                                       Typhy . Research in Microbiology, Vol. 146 (1): 17-20 (1995).\n\nPROBELIATMSalmonella spp .: AFNOR certification, attest SDP-07/2-06/96.\n\nProductschappen Vee, Vlees en Eieren, Verzamelband Actieplan Salmonella en Campylobacter\n                                       in de pluimveevleessector 2000+ .\n\nVan der Zee, H., et al. Vergelijking van de Salmonella bepaling met behulp van de\n                                       conventionele branchemethode (MSRV) en een snelle alternatieve detectiemethode (PROBELIATM PCR) in de pluimveesector. PVE, september 2002.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSamenstelling:\n\nPepton\n\n10,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nNa2HPO4\n\n3,5 g\n\nKH2PO4\n\n1,5 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting)\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 \u00b1 0,2 bedraagt bij 250 C\n\nVerdeel het medium over de daartoe geschikte flessen\n\nSteriliseer in een autoclaaf (15 min. , 1210 C)\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSamenstelling amplificatie kit\n\nA1\n\nLysis reagens\n\n1 fles\n\n22 ml\n\nA2\n\nSalmonella spp. amplificatie mix\n\n2 buizen\n\n2 x 2,5 ml\n\nA3\n\nPCR Positieve controle\n\n1 buis\n\n0,25 ml\n\nA4\n\nPCR Negatieve controle\n\n1 buis\n\n0,5 ml\n\nA5\n\nDenaturatie reagens\n\n1 fles\n\n6 ml\n\nSamenstelling detectie kit:\n\nH0\n\n96 wells plaat (12x8) gecoat met een probe specifiek voor de interne controle\n\n1 microtiterplaat\n\nH1\n\n96 wells plaat (12x8) gecoat met een probe specifiek voor Salmonella spp.\n\n1 microtiterplaat\n\nH2\n\nHybridisatie buffer\n\n1 fles\n\n100 ml\n\nH3\n\nPeroxidase-gelabelde probes specifiek voor Salmonella spp. en de interne controle\n\n1 buis\n\n100 ml\n\nH4\n\nWas buffer (10x geconcentreerd)\n\n1 fles\n\n100 ml\n\nH5\n\nSubstraat buffer\n\n1 fles\n\n60 ml\n\nH6\n\nChromogeen: tetramethulbenzidine (TMB)\n\n1 buis\n\n1 ml\n\nH7\n\nStop oplossing (1,5 N zwavelzuur) Afdekfolie voor de microtiterplaat\n\n1 fles 20 stuks\n\n28 ml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een 48-uurs methode voor het aantonen van Salmonella met behulp\n                                       van de VIDAS SLM test (bioM\u00e9rieux) in dons afkomstig van pluimvee. De methode is gevalideerd\n                                       ten opzichte van de door de branche opgestelde en door de Raad voor Accreditatie goedgekeurde\n                                       analyse methode MSRV.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSalmonella : Salmonella spp. , d.w.z. alle typen Salmonella waarvan zowel O als H\n                                       antigenen met behulp van de Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA) techniek worden\n                                       aangetoond, wanneer wordt getest volgens de beschreven werkwijze.\n\nDetectie van Salmonella : bepalen van de aan- of afwezigheid van deze micro-organismen\n                                       als het onderzoek wordt uitgevoerd volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVIDAS SLM is een enzym immunoassay voor detectie van Salmonella antigenen, waarbij\n                                       gebruik wordt gemaakt van de ELFA methode en geautomatiseerd uitgevoerd op het VIDAS\n                                       analyse apparaat.\n\nDe voorophoping en de selectieve ophopingen vinden achtereenvolgens plaats gedurende\n                                       18 uur in een voorophopingsmedium, 6-8 uur in 2 verschillende selectieve ophopingsmedia\n                                       en als laatste gedurende 18 uur in een 3e ophopingsmedium. Van dit laatste ophopingsmedium wordt een hoeveelheid verhit en\n                                       in een reagens strip gebracht. De reagens strip wordt in het VIDAS analyse apparaat\n                                       gebracht, waarna het aantonen van aanwezigheid van Salmonella antigenen met behulp\n                                       van een cocktail van specifieke monoclonale antilichamen en een fluorescentie reactie\n                                       volledig geautomatiseerd verloopt. Het test resultaat van deze aantoningsstap is na\n                                       ca. 45 minuten beschikbaar.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nAlle gebruikte grondstoffen en het gedestilleerde water moeten van analysekwaliteit\n                                       zijn.\n\nNiet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water\n\nBPw bijvoorbeeld bioM\u00e9rieux ref. 42043\n\nof Branchemethode MSRV [bijlage 1]\n\nSelectief ophopingsmedium\n\nRappaport-Vassiliadis bouillon\n\nRV\n\nbijvoorbeeld bioM\u00e9rieux ref. 42073\n\nseleniet cysteine bouillon\n\nSC\n\nbijvoorbeeld bioM\u00e9rieux ref. 42052\n\nM bouillon\n\nMb\n\nbijvoorbeeld bioM\u00e9rieux ref. 42077\n\nSelectieve agar\n\nbriIjant groen agar\n\nBGA PVE Branchemethode MSRV\n\nBevestigingsmedia\n\nureumagar\n\nUA\n\nPVE Branchemethode MSRV\n\ntriple-sugar-ironagar\n\nTSI\n\nPVE Branchemethode MSRV\n\nlysine-decarboxylase medium\n\nLDC\n\nPVE Branchemethode MSRV\n\nSalmonella polyvalent agglutinatie serum\n\nPVE Branchemethode MSRV\n\nDe samenstelling en bereiding van media en reagentia is opgenomen in bijlage 1 van\n                                       de PVE Branchemethode MSRV. Er mag echter ook gebruik gemaakt worden van media die\n                                       commercieel verkrijgbaar zijn.\n\nDe VIDAS SLM test bestaat uit kant-en-klare reagentia, zoals omschreven in de gebruiksaanwijzing\n                                       van de VIDAS SLM 30 702 test, instructie van de fabrikant.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe gebruikelijke apparatuur voor een microbiologisch laboratorium en de voor de VIDAS\n                                       SLM test benodigde apparatuur en verbruiksmaterialen, zoals onderstaand vermeld:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\nBroedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b0 C \u00b1 1\u00b0C\n\nBroedstoof voor het bebroeden bij 42 \u00b0 C \u00b1 0,5\u00b0C\n\nMicropipet (500 \u03bcl)\n\nSteriele micropipetpunten\n\nWaterbad (1000 C) of equivalent\n\nSteriele entnaalden met een oog met een diameter van ca. 3 mm.\n\nSteriele pipetten met een schaalverdeling van 0,1 ml en een meetvolume van 1 ml.\n\nPetrischalen met een middellijn van ca. 9 cm.\n\nCultuurbuizen van 17/18 x 150 mm en van 8 x 160 mm.\n\nStomacherzakken (met filter)\n\nVIDAS analyse apparaat\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nZie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage V.\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                       echter binnen 48 uur op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht worden met het\n                                       inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na de datum van monstername\n                                       is verstreken.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVerdun het monster 1:10 in BPw (25 gram dons in 225 ml BPw).\n\nStomacher, en incubeer de BPw 18 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBreng na incubatie van de BPw 1 ml van deze suspensie over in 10 ml SC bouillon. Incubeer\n                                             6-8 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C .\n\nBreng tegelijkertijd ook 0,1 ml van deze BPw suspentie over in 10 ml RV bouillon.\n                                             Incubeer 6-8 uur bij 42 \u00b0 C \u00b1 0,5 \u00b0 C\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBreng na incubatie van de SC bouillon 1 ml hiervan over in 10 ml M bouillon. Breng\n                                          na incubatie van de RV bouillon 1 ml hiervan over in een 2e buis met 10 ml M bouillon. Her-incubeer de SC bouillon en de RV bouillon voor nog\n                                          eens 18 uur, om bevestiging achteraf mogelijk te maken. Incubeer de M bouillon buizen\n                                          gedurende 18 uur bij 42 \u00b0 C \u00b1 0,5 \u00b0 C.\n\nMeng de M bouillon buizen na incubatie en breng uit elke buis 1 ml over in een eppendorfbuisje.\n                                          Sluit de buisjes en verhit gedurende 15 minuten in een kokend waterbad. Voer vervolgens\n                                          de VIDAS SLM test uit volgens de gebruiksaanwijzing van de fabrikant.\n\nBewaar de overgebleven bouillons bij 2-8 \u00b0 C voor bevestiging.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nResultaten worden beoordeeld conform de gebruiksaanwijzing van de VIDAS SLM test,\n                                             gebruiksaanwijzing van de fabrikant. Deze zijn gebaseerd op metingen van de fluorescentie\n                                             en worden gestandaardiseerd naar de zgn. Test Value. Resultaten met een Test Value\n                                             onder de 0,23 betreffen monsters waarin Salmonella antigenen niet aantoonbaar waren.\n                                             Resultaten met een test Value = 0,23 worden als Salmonella -positief gerapporteerd.\n                                             Positieve resultaten moeten worden bevestigd met behulp van de bewaarde ophopings-\n                                             en na-ophopingsmedia.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nEnt met een \u00f6se vanuit de ophopingsbouillons (RV en SC) vanuit de broedstoven en vanuit\n                                             de M bouillons vanuit de koeling af op gedroogde BGA platen. Incubeer deze platen\n                                             gedurende 24 \u00b1 2 uur bij 37 \u00b0 C \u00b1 1 \u00b0 C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nControleer de bebroede BGA-platen op de vorming van roze kolonies. Dergelijke kolonies\n                                             worden als \u2018vermoedelijk positief\u2019 aangemerkt. Bevestiging van deze specifieke kolonies,\n                                             zowel biochemisch als serologisch, vindt vervolgens plaats zoals omschreven in de\n                                             PVE Branchemethode MSRV.\n\nVoor donsmonsters vindt serotypering plaats voor de 4 hoofdgroepen van Salmonella\n                                             (B, C, D en E) en indien van toepassing identificatie van Salmonella enteritidis en\n                                             Salmonella typhimurium (indien bij de pluimveehouder het serotype nog niet bekend\n                                             is). In bijlage IV is hiervoor het werkvoorschrift opgenomen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe VIDAS SLM test kit bevat een positieve en een negatieve VIDAS reagens controle\n                                       en een bijbehorende standaard. Deze worden meegenomen in de bepalingen zoals omschreven\n                                       in de gebruiksaanwijzing van de VIDAS SLM test, instructie van de fabrikant.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle\n\nNegatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                             negatieve controle komen te vervallen)\n\nBlanco controle\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeef het resultaat op als \u2018aan- of afwezigheid van Salmonella in dons\u2019, als Salmonella\n                                       al dan niet is aangetoond volgens dit protocol.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters door de opdrachtgever afwijkingen worden\n                                       geconstateerd van de wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient\n                                       het laboratorium hierover schriftelijk een opmerking te maken richting de opdrachtgever\n                                       (zie bijlage V).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHartman, E.G., Validatierapport van de isolatie van Salmonella uit de matrix pluimvee\n                                       faeces m.b.v. het Modified Semi-solid Rappaport Vassiliadis (MSRV)-medium, Gezondheidsdienst\n                                       voor Dieren, projectnr. 401919, september 1999.\n\nISO 6579:1993(E). Microbiology. General guidance on methods for the detection of Salmonella\n                                       .\n\nProductschappen Vee, Vlees en Eieren, Verzamelband Actieplan Salmonella en Campylobacter\n                                       in de pluimveevleessector 2000+ .\n\nVan der Zee, H. et al. Validatierapport van de Salmonella bepaling in de matrix dons\n                                       met behulp van de VIDAS SLM methode. PVE, september 2002.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter\n                                       spp. (in dit protocol verder als Campylobacter aangeduid) in pluimvee, verse pluimveeproducten\n                                       en omgevingsmonsters zoals mestmonsters en blindedarm mestmonsters.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNEN-EN-ISO 6887-1:1999 , Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Voorbereiding\n                                       van het monster en bereiding van verdunningen door microbiologisch onderzoek; Deel\n                                       1: Algemene regels voor de bereiding van de primaire verdunning en verdere decimale\n                                       verdunningen.\n\nNEN-EN-ISO 6887-2:2002, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Voorbereiding\n                                       van monsters en bereiding van verdunningen voor microbiologisch onderzoek; Deel 2:\n                                       Specifieke werkwijze voor vlees en vleesproducten.\n\nNEN-ISO 7218:1996, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders - Algemene regels\n                                       voor microbiologische onderzoeken.\n\nNVN-ENV-ISO 11133-1:2000, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Richtlijnen\n                                       voor de kwaliteitsborging en productie van kweekmedia; Deel 1: Algemene richtlijnen\n                                       voor kwaliteitsborging van de voorbereiding van kweekmedia in het laboratorium\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nCampylobacter : micro-organismen die de voor deze bacteri\u00ebn karakteristieke groei\n                                       vertonen en specifieke morfologische, biochemische en serologische reacties vertonen\n                                       wanneer wordt gekweekt respectievelijk getest volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMestmonsters en blindedarm mestmonsters worden rechtstreeks ge\u00ebnt op een selectieve\n                                       vaste voedingsbodem (mCCDA).\n\nPluimveeproducten (bijvoorbeeld vel van de borstkap of filet) worden in porties van\n                                       25 gram gedurende 1 minuut gestomacherd met 100 ml selectief ophopingsmedium (Preston).\n                                       Hierna wordt het monstermateriaal verwijderd en alleen het ophopingsmedium gedurende\n                                       24 uur bebroed bij 41,5\u00b0C. Vervolgens wordt afge\u00ebnt op een selectieve vaste voedingsbodem\n                                       (mCCDA).\n\nSelectieve vaste voedingsbodems worden microa\u00ebroob gedurende 48 uur bij 41,5\u00b0C bebroed,\n                                       waarna beoordeeld wordt op aanwezigheid van specifieke kolonies.\n\nSpecifieke kolonies worden bevestigd met behulp van oxidase reactie en microscopie.\n                                       Als extra controle wordt een deel van de isolaten biochemisch en/of serologisch bevestigd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGebruik materialen die voldoende zuiver zijn.\n\nGebruik gedestilleerd of op een andere wijze gedemineraliseerd water. Het water mag\n                                          geen voor micro-organismen giftige bestanddelen bevatten.\n\nVoor een goede reproduceerbaarheid van de resultaten verdient het aanbeveling uit\n                                          te gaan van in de handel verkrijgbare droge ingredi\u00ebnten of geschikt bevonden droge\n                                          voedingsmedia. De instructies van de fabrikant voor de bereiding moeten nauwgezet\n                                          worden gevolgd.\n\nGebruik voor de meting van de pH een pH-meter; referentietemperatuur 25\u00b0C.\n\nIndien het voedingsmedium niet direct wordt gebruikt, moet dit in het donker tussen\n                                          1\u00b0C en 5\u00b0C worden bewaard en onder omstandigheden waarbij geen veranderingen in de\n                                          samenstelling optreden. Bewaar het voedingsmedium niet langer dan een maand, tenzij\n                                          elders in dit protocol anders wordt aangegeven.\n\nEr mag ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                          zijn.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVleesextractpoeder6\n\n10,0\n\ng\n\nPepton7\n\n10,0\n\ng\n\nNatrium chloride8\n\n5,0\n\ng\n\nNatrium pyruvaat9\n\n0,25\n\ng\n\nNatrium metabisulfiet10\n\n0,25\n\ng\n\nIjzer (II) sulfaat11 (FeSO4.7H2O)\n\n0,25\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting). Stel de pH zo\n                                                in dat deze na sterilisatie 7,5 \u00b1 0,2 bedraagt bij 25\u00baC. Steriliseer gedurende 15\n                                                minuten bij (121 \u00b1 1)\u00baC.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPolymyxine-B\n\n5000\n\nIU\n\nRifampicine\n\n0,01\n\ng\n\nTrimethoprim lactaat\n\n0,01\n\ng\n\nAmphotericine-B\n\n0,01\n\ng\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als Preston supplement. Let op, ook\n                                                het \u201cvroeger\u201d gebruikte Preston supplement, met cycloheximide in plaats van amphotericine-B,\n                                                is nog steeds verkrijgbaar. De voorkeur wordt echter gegeven aan gebruik van supplement\n                                                met amphotericine-B.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                                \u03bcm filter)\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nKoel het basismedium af tot onder de 45\u00baC.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig.\n\nOPMERKING\n\nIn de originele beschrijving van Preston ophopingsmedium (en in daarop volgende beschrijvingen\n                                                in bijvoorbeeld ISO) wordt paardenbloed gebruikt. In dit NEN voorschrift wordt echter\n                                                geen paardenbloed toegepast, omdat uit recent onderzoek is gebleken dat dat voor onderhavige\n                                                monstermatrix niet noodzakelijk is (Jacobs- Reitsma et al ., 2003).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVleesextractpoeder12\n\n10,0\n\ng\n\nPepton13\n\n10,0\n\ng\n\nNatrium chloride14\n\n5,0\n\ng\n\nBacteriologische charcoal\n\n4,0\n\ng\n\nCase\u00efne hydrolysaat\n\n3,0\n\ng\n\nNatrium deoxycholaat\n\n1,0\n\ng\n\nIjzer (II) sulfaat (FeSO4.7H2O)\n\n0,25\n\ng\n\nNatriumpyruvaat\n\n0,25\n\ng\n\nAgar\n\n12,0\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting). Stel de pH zo\n                                                in dat deze na sterilisatie 7,4 \u00b1 0,2 bedraagt bij 25\u00baC. Steriliseer gedurende 15\n                                                minuten bij (121 \u00b1 1)\u00baC.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nCefoperazone\n\n32\n\nmg\n\nAmphotericine-B\n\n10\n\nmg\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als mCCDA supplement.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                                \u03bcm filter)\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nKoel het basismedium af tot ongeveer 45\u00baC.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig. Giet de\n                                                agar uit in petrischalen met nok en laat stollen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nN,N,N\u2019,N\u2019-tetramethyl-1,4-fenyleendiammoniumdihloride\n\n0,1\n\ngram\n\nWater\n\n10\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos het N,N,N\u2019,N\u2019-tetramethyl-1,4-fenyleendiammoniumdihloride op in het water. Bereid\n                                                   het reagens vlak voor uitvoering van de oxidasetest.\n\nDit reagens is ook kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar. Handel dan volgens de gebruiksaanwijzing\n                                                   van de fabrikant.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLlatexagglutinatietesten voor bevestiging van thermotolerante Campylobacter zijn commerci\u00ebel\n                                                verkrijgbaar. Enkele leveranciers staan vermeld in Bijlage A.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVleesextract\n\n3,0\n\ng\n\nGistextract\n\n3,0\n\ng\n\nPepton\n\n20,0\n\ng\n\nNatriumchloride\n\n5,0\n\ng\n\nLactose\n\n10,0\n\ng\n\nSucrose\n\n10,0\n\ng\n\nGlucose\n\n1,0\n\ng\n\nIJzer (III) citraat\n\n0,3\n\ng\n\nNatriumthiosulfaat\n\n0,3\n\ng\n\nFenolrood\n\n0,024\n\ng\n\nAgar\n\n12,0\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting). Stel de pH zo\n                                                   in dat deze na sterilisatie 7,4 \u00b1 0,2 is.\n\nVerdeel het medium over geschikte reageerbuizen, 10 ml medium per buis.\n\nSteriliseer gedurende 15 minuten bij (121 \u00b1 1)\u00baC.\n\nLaat de agar stollen, zodat er bovenop 2,5 cm agar onderin de buis, nog een schuin\n                                                   gedeelte ontstaat.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGebruikelijke toestellen en steriel glaswerk voor microbiologische laboratoria (zie\n                                       ook NEN-ISO 7218) en in het bijzonder de onderstaande:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBroedstoof voor het bebroeden bij (41,5 \u00b1 1) \u00b0 C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSuspendeertoestel, Stomacher\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeschikte apparatuur en hulpmiddelen om te bebroeden in een micro-a\u00ebrobe atmosfeer\n                                          (ca. 6% zuurstof, 10% kooldioxide en 84% stikstof). Voor het verkrijgen van micro-a\u00ebroob\n                                          milieu kan gebruik gemaakt worden van commerci\u00eble systemen (\u2018gas-zakjes\u2019).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMicroscoop, bij voorkeur met fase-contrast, vergroting 1000x.\n\nOPMERKING\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMonstername is geen onderdeel van de methode zoals beschreven in deze norm. PVE heeft\n                                       de procedure voor de monstername in een apart besluit vastgelegd.\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (1-4\u00b0) te\n                                       worden aangeleverd. Zie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage V. Indien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd in de\n                                       wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient het laboratorium hierover\n                                       schriftelijk een opmerking te maken richting opdrachtgever.\n\nCampylobacter is zeer gevoelig voor invriezen en daarom is het invriezen van monsters\n                                       niet toegestaan.\n\nMonsters dienen binnen 48 uur na monstername te worden ingezet.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIn alle gevallen geldt dat de agarplaten na be\u00ebnten zonder uitstel onder micro-a\u00ebrobe\n                                          condities ge\u00efncubeerd dienen te worden, omdat Campylobacter obligaat micro-a\u00ebrofiel\n                                          is en onder andere omgevingscondities snel afsterft.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMonsters waarin hoge aantallen Campylobacter worden verwacht, zoals mest en blindedarm,\n                                             worden rechtstreeks op het isolatiemedium afgestreken.\n\nMaak 1 mengmonster van de 30 afzonderlijke blindedarmen door deze elk op steriele\n                                             wijze open te knippen en uit elke darm een evenredige hoeveelheid materiaal over te\n                                             brengen in een lege steriele petrischaal. Meng goed (bijvoorbeeld met een steriele\n                                             swab of entoog).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBe\u00ebnt vanuit het mengmonster met behulp van de swab of entoog een halve mCCDA-plaat.\n                                             Be\u00ebnt de rest van de plaat middels verdunningsstrepen met behulp van een steriele\n                                             \u00f6se, zodanig dat na incubatie losliggende kolonies kunnen ontstaan.\n\nIncubeer mCCDA platen micro-a\u00ebroob gedurende 48 (\u00b1 4) uur bij 41,5 (\u00b1 1)\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBreng 25 gram \u00b1 1 gram van het monster, bijvoorbeeld een stuk huid van de borstkap\n                                             of filet, in een stomacherzak en voeg 100 ml Preston bouillon toe. Stomacher gedurende\n                                             1 minuut en scheidt het monstermateriaal van de ophopingsbouillon (bijvoorbeeld door\n                                             het verwijderen van de binnenzak van de stomacherzak met daarin het monstermateriaal\n                                             of door overschenken van de ophopingsvloeistof in een schoon steriel flesje).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIncubeer de ophopingsbouillon (24 \u00b1 2) uur bij (41,5 \u00b1 1)\u00b0C in micro-a\u00ebroob milieu.\n\nIndien ge\u00efncubeerd wordt in flesjes of (stomacher)-zakken met weinig kopruimte (d.w.z.\n                                             = 2 cm), kan zonder eisen aan het milieu ge\u00efncubeerd worden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nEnt met behulp van een entoog (10 \u03bcl) de Preston-cultuur na incubatie uit op een mCCDA-plaat.\n                                             Incubeer mCCDA platen micro-a\u00ebroob gedurende (48 \u00b1 4) uur bij (41,5 \u00b1 1)\u00b0C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBeoordeel bebroede mCCDA-platen op de aanwezigheid van kolonies met de volgende morfologische\n                                          eigenschappen: grijs, metalig, laag convex, amorf en de neiging om met de entstreep\n                                          mee te groeien. Deze kolonies worden als \u2018verdacht positief\u2019 aangemerkt.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor de bevestiging uit met minimaal 1 tot maximaal 3 verdachte kolonies per plaat\n                                          in geval van reincultuur en tot 5 verdachte kolonies (indien aanwezig) in geval van\n                                          mengcultuur, totdat een positief resultaat wordt verkregen.\n\nTer bevestiging wordt een oxidase reactie uitgevoerd en worden de verdachte kolonies\n                                          microscopisch beoordeeld.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nEnt met een entoog (anders dan van nikkel/chroom) vanaf de mCCDA plaat een verdachte\n                                          kolonie op een filtreerpapiertje bevochtigd met oxidasereagens. Lees na maximaal 10\n                                          seconden de reactie af. De reactie is positief bij paarskleuring en negatief indien\n                                          er geen verkleuring optreedt.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMaak van de verdachte kolonie een hangende-druppel-preparaat of nat-preparaat en beoordeel\n                                          met een fasecontrast of donkerveld microscoop (100x objectief) op de karakteristieke\n                                          kurketrekker-vormige morfologie en grote beweeglijkheid van Campylobacter . Bij kleuring\n                                          volgens Gram tonen Campylobacter bacteri\u00ebn zich als kurketrekker-vormig gebogen Gram-\n                                          negatieve staafjes. De karakteristieke vorm is ook goed te zien bij kleuring met Oost-Indische\n                                          inkt. Bij oude culturen (> 2 dagen op plaat) kan Campylobacter cocco\u00efde en minder\n                                          beweeglijke vormen aannemen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBij twijfel of als extra controle op de juiste identificatie wordt aanbevolen om regelmatig\n                                          een aanvullende bevestiging uit te voeren met een latexagglutinatietest of een TSI-buis,\n                                          bijvoorbeeld met 1 op 50 bevestigde kolonies. Voer eerst een reinstrijk uit op bijvoorbeeld\n                                          een bloedplaat of een mCCDA-basis agar plaat (zonder antibiotica supplement).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLatexagglutinatietesten zijn bij diverse firma\u2019s commercieel verkrijgbaar (zie Bijlage\n                                             A) en moeten volgens de gebruiksaanwijzing van de fabrikant worden ingezet en afgelezen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBe\u00ebnt een TSI buis middels ladderen van het schuin gestolde deel en middels steek-enten\n                                             in de agar. Incubeer deze buis (24 \u00b1 2) uur bij (41,5 \u00b1 1)\u00b0C in micro-a\u00ebroob milieu.\n                                             Beoordeel de reacties als weergegeven in tabel 1.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nCampylobacter bacteri\u00ebn vertonen de karakteristieken zoals omschreven in tabel 1.\n\nTest\n\nOmschrijving\n\nCampylobacter\n-specifiek resultaat\n\nMicroscopie\n\nKarakteristieke kurketrekker- vormige morfologie en grote beweeglijkheid\n\n+\n\nOxidase\n\nPaarsvorming\n\n+\n\nTSI\n\nrood/onveranderd\n\ngeen zwartkleuringNegatief:\n\n-\n\n-Glucose (zuurvorming)\n\ngehele buis rood\n\nPositief: voet geel, schuine deel rood;\n\n-\n\n-Glucose (gasvorming)\n\nNeg.:geen bellen/scheuren\n\nPos.: belletjes en/of scheuren in agar\n\n-\n\n-Lactose\n\nPositief: gehele buis geel\n\n-\n\n-Sucrose\n\nPositief: gehele buis geel\n\n-\n\n-H2S-vorming\n\nPositief: zwarte kleur in voet\n\n-\n\nLatexagglutinatie\n\nVolgens voorschrift fabrikant\n\n+\n\n* Indien het een Campylobacter coli betreft kan de buis toch enige zwarting te zien geven (dit species is namelijk beperkt\n                                          in staat tot H2S-vorming).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeef het resultaat op als \u2018aan- of afwezigheid van Campylobacter in het betreffende\n                                       monstermateriaal\u2019 als Campylobacter al dan niet is aangetoond volgens 8 (werkwijze).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPrestatiekenmerken zijn vooralsnog niet voorhanden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVermeld in het verslag:\n\nde gevolgde methode;\n\nde gegevens die noodzakelijk zijn voor de identificatie van het monster;\n\nde gevolgde methode van monsterneming, indien bekend;\n\nhet resultaat volgens hoofdstuk 8;\n\neventuele bijzonderheden die tijdens de bepaling zijn waargenomen die het resultaat\n                                             kunnen hebben be\u00efnvloed.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNEN-EN ISO 10272.:1995 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal\n                                       method for the detection of thermotolerant Campylobacter + technical corrigenda (ISO10272:1995/Cor.1:1996(E)\n                                       and ISO 10272:1995/Cor:1997(E).\n\nJacobs-Reitsma, W.F. (1994). Epidemiology of Campylobacter in Poultry. Thesis Agricultural\n                                       University Wageningen, The Netherlands.\n\nJacobs-Reitsma W., M. van der Wal, R. Achterberg and J. Wagenaar. Comparative studies\n                                       on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation\n                                       at the 12th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms,\n                                       september 2003, Aarhus, Denmark.\n\nPVE Branchemethode (MSRV) voor het aantonen van Salmonella in dons, faeces, vellen\n                                       en eindproduct afkomstig van pluimvee (inclusief 5 bijlagen), d.d. 20-07-01 Vb. Bo.\n                                       nr. 31.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBeschikbare latex agglutinatie testen voor bevestiging van thermotolerante Campylobacter\n                                       zijn onder andere:\n\nDryspotCampylobacterTest , Oxoid DR 150M Oxoid ltd., Basingstoke Hampshire, England\n\nIn NL via :\n\nOxoid\n\nPieter Goedkoopweg 38\n\nPostbus 490, 2000 AL Haarlem\n\nTel: 023 5319173\n\nFax: 023 5310543\n\nINDX\u00ae - Campy (jcl)\u2122 50 test kit Catalog # 2200-01-50\n\n(voorheen Meritec\u2122-Campy (jcl), #203050, Meridian Diagnostics)\n\nIntegrated Diagnostics, Inc.\n\nBaltimore, MD 21227 USA\n\nin NL via:\n\nBiotrading\n\nPostbus 254\n\n3640 AG Mijdrecht\n\nTel: 0297 286848\n\nFax: 0297 287570\n\nMicroscreen \u00aeCampylobacter , M46\n\nMicrogen Bioproducts Ltd. (voorheen Mercia Diagnostics)\n\n1, Admiralty Way, Camberley, Surrey GU15 3DT, UK\n\nIn NL via:\n\nLucron bioproducts BV.\n\nPostbus 57\n\n6590 AB Gennep\n\nTel: 0485 511675\n\nFax: 0485 512052\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIndien op het laboratorium monsters eindproduct worden opgehoopt in Preston bouillon,\n                                          dan wordt een onge\u00ebnte Preston-buis (of -zakje) gebruikt als blanco controle. Deze\n                                          controle buis wordt afge\u00ebnt op een mCCDA-plaat. Na incubatie volgens de beschreven\n                                          procedure mag er geen groei zijn op de mCCDA-plaat.\n\nIndien een hoeveelheid (blindedarm)mest direct met behulp van een swab wordt ge\u00ebnt\n                                          op een mCCDA-plaat, dan wordt een onbe\u00ebnte mCCDA-plaat gebruikt als blanco controle.\n                                          Na incubatie volgens de beschreven procedure mag er geen groei zijn op deze mCCDA-plaat.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHiervoor wordt gebruik gemaakt van een referentiestam van C. jejuni . (bijvoorbeeld\n                                          ATCC 29428).\n\nIndien op het laboratorium monsters eindproduct worden ingezet, dan wordt een Preston-buis\n                                          (of -zakje) aange\u00ebnt met de referentiestam en gebruikt als positieve controle. Deze\n                                          positieve controle buis wordt afge\u00ebnt op een mCCDA-plaat. Na incubatie volgens de\n                                          beschreven procedure moet op de mCCDA-plaat groei te zien zijn met de typische morfologische\n                                          kenmerken.\n\nIndien op het laboratorium monsters (blindedarm)mest worden ingezet, dan wordt een\n                                          mCCDA- plaat aange\u00ebnt met de referentiestam en gebruikt als positieve controle. Na\n                                          incubatie volgens de beschreven procedure moet op de mCCDA-plaat groei te zien zijn\n                                          met de typische morfologische kenmerken.\n\nTevens kan deze referentiestam gebruikt worden als positieve controle bij de uitvoering\n                                          van de oxidase test, de microscopie en eventueel de agglutinatie test en/of TSI-buis.\n\nVoor de ingangscontrole van een batch dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle\n\nzie boven\n\nNegatieve controle\n\nHiervoor wordt gebruik gemaakt van een referentiestam van E. coli (bijvoorbeeld ATCC\n                                          25922). Deze controlestam mag op een mCCDA-plaat geen \u2018verdachte\u2019 kolonies te zien\n                                          geven.\n\nIndien geen ingangscontrole wordt uitgevoerd, maar alleen eerstelijnscontrole, dan\n                                          moet bij deze eerstelijnscontrole altijd een blanco, een positieve \u00e9n een negatieve\n                                          controle meegenomen worden.\n\nAlleen indien de controles een juiste uitslag geven mag de uitslag van de monsters\n                                          afgegeven worden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een methode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter\n                                       spp. (in dit protocol verder als Campylobacter aangeduid) in verse pluimveeproducten.\n                                       De methode is gevalideerd ten opzichte van de door de branche opgestelde en door de\n                                       Raad voor Accreditatie goedgekeurde analyse methode.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nNEN-EN-ISO 6887-1:1999 , Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Voorbereiding\n                                       van het monster en bereiding van verdunningen door microbiologisch onderzoek; Deel\n                                       1: Algemene regels voor de bereiding van de primaire verdunning en verdere decimale\n                                       verdunningen.\n\nNEN-EN-ISO 6887-2:2002, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Voorbereiding\n                                       van monsters en bereiding van verdunningen voor microbiologisch onderzoek; Deel 2:\n                                       Specifieke werkwijze voor vlees en vleesproducten.\n\nNEN-ISO 7218:1996, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders - Algemene regels\n                                       voor microbiologische onderzoeken.\n\nNVN-ENV-ISO 11133-1:2000, Microbiologie van voedingsmiddelen en diervoeders; Richtlijnen\n                                       voor de kwaliteitsborging en productie van kweekmedia; Deel 1: Algemene richtlijnen\n                                       voor kwaliteitsborging van de voorbereiding van kweekmedia in het laboratorium\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nCampylobacter : Campylobacter spp., dat wil zeggen alle typen Campylobacter waarvan\n                                       de specifieke antigenen met behulp van de Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA) techniek\n                                       worden aangetoond, wanneer wordt getest volgens de beschreven werkwijze.\n\nDoor de selectieve ophoping te incuberen bij 41,5 \u00b1 1\u00ba C wordt geselecteerd op alleen\n                                       de thermotolerante Campylobacter species.\n\nDetectie van Campylobacter : bepalen van de aan- of afwezigheid van deze micro- organismen\n                                       als het onderzoek wordt uitgevoerd volgens de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVIDAS CAM is een enzym immunoassay voor de detectie van Campylobacter antigenen, waarbij\n                                       gebruik wordt gemaakt van de ELFA methode en die geautomatiseerd wordt uitgevoerd\n                                       op het VIDAS analyse apparaat.\n\nPluimveeproducten (bijvoorbeeld vel van de borstkap of filet) worden in porties van\n                                       25 gram gedurende 1 minuut gestomacherd met 100 ml selectief ophopingsmedium (Preston).\n                                       Hierna wordt het monstermateriaal verwijderd en alleen het ophopingsmedium gedurende\n                                       48 uur bebroed bij 41,5\u00b0C. Vervolgens wordt de VIDAS CAM assay uitgevoerd. Het test\n                                       resultaat van deze aantoningsstap is na ca. 70 minuten beschikbaar. Verdere bevestiging\n                                       van positieve uitslagen is niet noodzakelijk.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGebruik materialen die voldoende zuiver zijn.\n\nGebruik gedestilleerd of op een andere wijze gedemineraliseerd water. Het water mag\n                                          geen voor micro-organismen giftige bestanddelen bevatten.\n\nVoor een goede reproduceerbaarheid van de resultaten verdient het aanbeveling uit\n                                          te gaan van in de handel verkrijgbare droge ingredi\u00ebnten of geschikt bevonden droge\n                                          voedingsmedia. De instructies van de fabrikant voor de bereiding moeten nauwgezet\n                                          worden gevolgd.\n\nGebruik voor de meting van de pH een pH-meter; referentietemperatuur 25\u00b0C.\n\nIndien het voedingsmedium niet direct wordt gebruikt, moet dit in het donker tussen\n                                          1\u00b0C en 5\u00b0C worden bewaard en onder omstandigheden waarbij geen veranderingen in de\n                                          samenstelling optreden. Bewaar het voedingsmedium niet langer dan een maand, tenzij\n                                          elders in dit protocol anders wordt aangegeven.\n\nEr mag ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar\n                                          zijn.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVleesextractpoeder15\n\n10,0\n\ng\n\nPepton16\n\n10,0\n\ng\n\nNatrium chloride17\n\n5,0\n\ng\n\nNatrium pyruvaat18\n\n0,25\n\ng\n\nNatrium metabisulfiet19\n\n0,25\n\ng\n\nIjzer (II) sulfaat20 (FeSO4.7H2O)\n\n0,25\n\ng\n\nWater\n\n1000\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting). Stel de pH zo\n                                                in dat deze na sterilisatie 7,5 \u00b1 0,2 bedraagt bij 25\u00baC. Steriliseer gedurende 15\n                                                minuten bij (121 \u00b1 1)\u00baC.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPolymyxine-B\n\n5000\n\nIU\n\nRifampicine\n\n0,01\n\ng\n\nTrimethoprim lactaat\n\n0,01\n\ng\n\nAmphotericine-B\n\n0,01\n\ng\n\nWater\n\n4\n\nml\n\nOPMERKING\n\nDeze antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als Preston supplement. Let op, ook\n                                                      het \u201cvroeger\u201d gebruikte Preston supplement, met cycloheximide in plaats van amphotericine-B,\n                                                      is nog steeds verkrijgbaar. De voorkeur wordt echter gegeven aan gebruik van supplement\n                                                      met amphotericine-B.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nLos de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22\n                                                \u03bcm filter).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBasismedium\n\n1000\n\nml\n\nAntibiotica oplossing\n\n4\n\nml\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nKoel het basismedium af tot onder de 45\u00baC.\n\nVoeg op aseptische wijze de antibiotica oplossing toe en meng zorgvuldig.\n\nOPMERKING\n\nIn de originele beschrijving van Preston ophopingsmedium (en in daarop volgende beschrijvingen\n                                                in bijvoorbeeld ISO) wordt paardenbloed gebruikt. In dit NEN voorschrift wordt echter\n                                                geen paardenbloed toegepast, omdat uit recent onderzoek is gebleken dat dat voor onderhavige\n                                                monstermatrix niet noodzakelijk is (Jacobs-Reitsma et al ., 2003).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGebruikelijke toestellen en steriel glaswerk voor microbiologische laboratoria (zie\n                                       ook NEN- ISO 7218) en in het bijzonder de onderstaande:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBroedstoof voor het bebroeden bij (41,5 \u00b1 1) \u00b0 C.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSuspendeertoestel, Stomacher\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeschikte apparatuur en hulpmiddelen om te bebroeden in een micro-a\u00ebrobe atmosfeer\n                                          (ca. 6% zuurstof, 10% kooldioxide en 84% stikstof). Voor het verkrijgen van micro-a\u00ebroob\n                                          milieu kan gebruik gemaakt worden van commerci\u00eble systemen (\u2018gas- zakjes\u2019), bijvoorbeeld:\n\nGenBox micro-a\u00ebrofiel (10 zakjes, ref. 96125, bioM\u00e9rieux).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVIDAS of mini VIDAS analyser (bioM\u00e9rieux).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVIDAS CAM assay (30 testen, ref. 30111, bioM\u00e9rieux)\n\nOPMERKING\n\nGesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMonstername is geen onderdeel van de methode zoals beschreven in deze norm. PVE heeft\n                                       de procedure voor de monstername in een apart besluit vastgelegd.\n\nBederfelijke pluimveeproducten zoals borstvellen en filet dienen gekoeld (1-4\u00b0 C)\n                                       te worden aangeleverd. Zie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage IX van het gewijzigde Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveehouderij (PVE, 2004-I). Indien bij het aanleveren van de monsters afwijkingen worden geconstateerd\n                                       in de wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient het laboratorium\n                                       hierover schriftelijk een opmerking te maken richting opdrachtgever.\n\nCampylobacter is zeer gevoelig voor invriezen en daarom is het invriezen van monsters\n                                       niet toegestaan.\n\nMonsters dienen binnen 48 uur na monstername te worden ingezet.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nBreng 25 gram \u00b1 1 gram van het monster, bijvoorbeeld een stuk huid van de borstkap\n                                          of filet, in een stomacherzak en voeg 100 ml Preston bouillon toe. Stomacher gedurende\n                                          1 minuut en scheidt het monstermateriaal van de ophopingsbouillon (bijvoorbeeld door\n                                          het verwijderen van de binnenzak van de stomacherzak met daarin het monstermateriaal\n                                          of door overschenken van de ophopingsvloeistof in een schoon steriel flesje).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIncubeer de ophopingsbouillon (48 \u00b1 2) uur bij (41,5 \u00b1 1)\u00b0C in micro-a\u00ebroob milieu.\n\nIndien ge\u00efncubeerd wordt in flesjes of (stomacher)-zakken met weinig kopruimte (d.w.z.\n                                          = 2 cm), kan zonder eisen aan het milieu ge\u00efncubeerd worden.\n\nOPMERKING\n\nIn tegenstelling tot de branchemethode is de incubatietijd in dit voorschrift 48 uur.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMeng het ophopingsmedium na incubatie en breng 2 ml over in een eppendorfbuisje. Sluit\n                                          de buisjes en verhit gedurende 15 minuten in een kokend waterbad. Voer vervolgens\n                                          de VIDAS CAM test uit volgens de gebruiksaanwijzing. Runtime VIDAS CAM test bedraagt\n                                          ongeveer 70 minuten.\n\nOPMERKING\n\nIndien de VIDAS CAM test niet direct kan worden uitgevoerd is het mogelijk de ophoping\n                                          (of een deel ervan) in te vriezen voor maximaal 48 uur. Na ontdooien moet de ophoping\n                                          opgekookt worden en kan bovenstaande werkwijze worden gevolgd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nResultaten worden beoordeeld conform de gebruiksaanwijzing van de VIDAS CAM test.\n                                          Deze zijn gebaseerd op metingen van de fluorescentie en worden gestandaardiseerd naar\n                                          een zogenaamde Test Value (TV). Resultaten met een TV onder de 0,1 betreffen monsters\n                                          waarin Campylobacter antigenen niet aantoonbaar waren. Resultaten met een TV = 0,1\n                                          worden als Campylobacter -positief gerapporteerd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe in dit voorschrift beschreven VIDAS CAM methode is een detectie methode. Verdere\n                                       confirmaties zijn niet nodig.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe VIDAS CAM test kit bevat een positieve en een negatieve VIDAS reagens controle\n                                       en een bijbehorende standaard. Deze worden meegenomen in de bepalingen zoals omschreven\n                                       in de gebruiksaanwijzing van de VIDAS CAM test.\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen [bijlage ]:\n\nBlanco controle\n\nPositieve controle\n\nNegatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                             negatieve controle komen te vervallen)\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nGeef het resultaat op als \u2018aan- of afwezigheid van Campylobacter in het betreffende\n                                       monstermateriaal\u2019 als Campylobacter al dan niet is aangetoond volgens 8 (werkwijze).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPrestatiekenmerken zijn vooralsnog niet voorhanden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVermeld in het verslag:\n\nde gevolgde methode;\n\nde gegevens die noodzakelijk zijn voor de identificatie van het monster;\n\nde gevolgde methode van monsterneming, indien bekend;\n\nhet resultaat volgens hoofdstuk 8;\n\neventuele bijzonderheden die tijdens de bepaling zijn waargenomen die het resultaat\n                                             kunnen hebben be\u00efnvloed.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPVE Branchemethode voor het aantonen van thermotolerante Campylobacter. Bijlage VI van het Besluit tot wijziging van het besluit protocollen hygi\u00ebnevoorschriften\n                                          pluimveehouderij 1999 (2004-I) (Verordeningenblad Bedrijfsorganisaties).\n\nPVE Acceptatie criteria, Opmerkingen opdrachtgever bij aanleveren afwijkende monsters,\n                                       Bijlage IX van het Besluit tot wijziging van het besluit protocollen hygi\u00ebnevoorschriften\n                                          pluimveehouderij 1999 (2004-I) (Verordeningenblad Bedrijfsorganisaties).\n\nJacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, E. Samu\u00ebls and J. Wagenaar. Evaluation of the\n                                       VIDAS Campylobacter Assay for detection of Campylobacter in fresh poultry products\n                                       after various enrichment methods. Posterpresentation A-18 at 12th International Workshop\n                                       on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, september 2003, Aarhus, Denmark.\n                                       International Journal of Medical Microbiology, Vol. 293 Suppl. 35, p. 6.\n\nJacobs-Reitsma, W., M. van der Wal, R. Achterberg, J. Wagenaar. Comparative studies\n                                       on Campylobacter isolation methods from fresh poultry products. Posterpresentation\n                                       A-21 at 12th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms,\n                                       september 2003, Aarhus, Denmark. \u00ccnternational Journal of Medical Microbiology, Vol.\n                                       293 Suppl. 35, p. 6-7.\n\nSamu\u00ebls, E.L.A.M. en W. Jacobs-Reitsma, Validatierapport van de Campylobacter bepaling\n                                       in de matrix pluimveevlees met behulp van de VIDAS CAM methode. (Onderzoek in het\n                                       kader van het PVE Plan van Aanpak/Actieplan 2000+ Salmonella en Campylobacter in de\n                                       pluimveesector), april 2004.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n1. Eerstelijnscontrole van de methode\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode dienen te worden meegenomen:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIndien op het laboratorium monsters eindproduct worden opgehoopt in Preston bouillon,\n                                          dan wordt een onge\u00ebnte Preston-buis (of -zakje) gebruikt als blanco controle. Deze\n                                          controle wordt getest met de VIDAS CAM test en dient negatief te zijn\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHiervoor wordt gebruik gemaakt van een referentiestam van C. jejuni (bijvoorbeeld\n                                          ATCC 29428).\n\nIndien op het laboratorium monsters eindproduct worden ingezet, dan wordt een Preston-\n                                          buis (of -zakje) aange\u00ebnt met de referentiestam en gebruikt als positieve controle.\n                                          Deze positieve controle wordt getest met de VIDAS CAM test en dient positief te zijn\n\nVoor de ingangscontrole van een batch dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle zie boven\n\nNegatieve controle\n\nHiervoor wordt gebruik gemaakt van een referentiestam van E. coli (bijvoorbeeld ATCC\n                                          25922). Deze negatieve controlestam wordt getest met de VIDAS CAM test en dient negatief\n                                          te zijn.\n\nIndien geen ingangscontrole wordt uitgevoerd, maar alleen eerstelijnscontrole, dan\n                                          moet bij deze eerstelijnscontrole altijd een blanco, een positieve \u00e9n een negatieve\n                                          controle meegenomen worden.\n\nAlleen indien de controles een juiste uitslag geven mag de uitslag van de monsters\n                                          afgegeven worden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDit protocol beschrijft een 24-uurs methode voor het aantonen van Salmonella met behulp\n                                       van de iQ Check\u2122 Salmonella kit (Bio-Rad Laboratories b.v.) in dons, mest en vlees\n                                       afkomstig van pluimvee. De methode is gevalideerd ten opzichte van de door de branche\n                                       opgestelde en door de Raad voor Accreditatie goedgekeurde analyse methode MSRV dan\n                                       wel analyse methode Probelia\u2122.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSalmonella: Salmonella spp., d.w.z. alle typen Salmonella waarvan het DNA aan de hand\n                                       van de Polymerase Chain Reactie (PCR) wordt aangetoond, wanneer wordt getest volgens\n                                       de beschreven werkwijze.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nUit een voorophopingsmedium wordt, na voorincubatie, het DNA van Salmonella ge\u00efsoleerd.\n                                       Met behulp van de real-time polymerase chain reaction (PCR) worden Salmonella -specifieke\n                                       DNA sequenties gelijktijdig vermenigvuldigd en gedetecteerd middels fluorescente probes.\n                                       Inclusief voorophoping wordt een positieve of negatieve uitslag verkregen binnen 24\n                                       uur.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n1. Niet-selectief voorophopingsmedium\n\ngebufferd pepton water (BPw)\n\nBio-Rad code 356-4684 (500 g) of Bio-Rad code 355-4170 (225 ml)\n\niQ Check\u2122 Salmonella kit\n\nBio-Rad code 35 7-8100\n\nDe iQ Check\u2122 Salmonella kit bestaat uit kant-en-klare reagentia.\n\nDe samenstelling en bereiding van medium en kit is opgenomen in resp. bijlage 1 en\n                                       bijlage 2.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe gebruikelijke apparatuur voor een moleculair/microbiologisch laboratorium en de\n                                       voor de iQ Check\u2122 Salmonella test benodigde apparatuur en verbruiksmaterialen, zoals\n                                       onderstaand vermeld:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n5.1 iCycler Thermal Cycler met 96-wells reactiemodule (Bio-Rad cat. #: 170-8720)\n\n5.2 iCycler iQ Optical Module (Bio-Rad cat. #: 170-8740)\n\n5.3 iCycler iQ Filter set Texas Red/ Rox Dyes (Bio-Rad cat. #: 170-8781)\n\n5.4 Stomacher\n\n5.5 Broedstoof voor het bebroeden bij 37 \u00b1 1\u00b0C\n\n5.6 Verhittingsblok voor 1,5 ml buizen (100 \u00b1 1\u00b0C)\n\n5.7 Tafelcentrifuge (maximaal 12.000 rpm, voor 1,5 ml buizen)\n\n5.8 Vortex\n\n5.9 Magnetische roerder\n\n5.10 20 \u03bcl, 200 \u03bcl and 1000 \u03bcl micropipetten\n\n5.11 Combi-tips pipetten\n\nOpmerking: Het gebruik van een universal power source (UPS) in combinatie met de iCycler\n                                          iQTM wordt aanbevolen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n5.12 iCycler iQ 96-well PCR platen (Bio-Rad cat. #: 223-9441)\n\n5.13 iCycler iQ Optical sealing tape (Bio-Rad cat. #: 223-9444)\n\n5.14 200 ml 8-strip tubes (Bio-Rad cat. #: 223-9469)\n\n5.15 200 ml 8-strip caps for 200 \u03bcl tubes (Bio-Rad cat. #: 223-9472)\n\n5.16 Stomacher zakken met filter\n\n5.17 1 ml en 10 ml pipetten\n\n5.18 Steriele filtertips, passend op 20 \u03bcl, 200 \u03bcl en 1000 \u03bcl micropipetten\n\n5.19 1,5 ml Eppendorf SafeLock buisjes\n\n5.20 Combi-tips tips, steriel, individueel verpakt\n\n5.21 2 ml and 5 ml steriele buizen of flesjes\n\n5.22 Poeder-vrije handschoenen\n\n5.23 Milli-Q of gedestilleerd steriel water\n\n5.24 Ethanol 96% of NaOH 5%\n\nOpmerking: Gesteriliseerde materialen voor \u00e9\u00e9nmalig gebruik mogen worden toegepast.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe test dient te worden uitgevoerd door op juiste wijze getraind personeel.\n\nMonsters en kweken dienen te worden behandeld en afgevoerd als potentieel infectieus\n                                       materiaal.\n\nDe kwaliteit van de resultaten is afhankelijk van een strikte uitvoering conform Good\n                                       Laboratory Practice, in het bijzonder aangaande PCR:\n\nGebruik specifieke, gescheiden sets laboratorium benodigdheden zoals pipetten en buizen\n                                             voor bijvoorbeeld DNA extractie en de bereiding van PCR mix.\n\nHet is van groot belang dat gebruik wordt gemaakt van een positieve en negatieve controle\n                                             in elke serie van amplificatie reacties ('PCR run').\n\nGebruik geen reagentia waarvan de houdbaarheidsdatum is verstreken.\n\nHomogeniseer reagentia voorafgaand aan gebruik.\n\nControleer regelmatig de nauwkeurigheid en precisie van alle pipetten en apparatuur.\n\nVerwissel handschoenen met enige regelmaat, vooral indien contaminatie wordt verondersteld.\n\nVoer periodieke reiniging uit van de werkplaats met tenminste 5% bleekmiddel.\n\nVermijdt gebruik van latex handschoenen met poeder. Voorkom vingerafdrukken op het\n                                             optisch sealing tape.\n\nSchrijf niet op de dopjes van PCR-buizen. In beide gevallen zal de real-time data-\n                                             acquisitie hinder ondervinden.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nZie voor de acceptatie criteria voor monstermateriaal bijlage V van Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999 (PPE,\n                                       2004-II).\n\nDe monsters dienen binnen 4 uur na ontvangst ingezet te worden. Indien de monsters\n                                       echter binnen 48 uur op het laboratorium aanwezig zijn, mag gewacht worden met het\n                                       inzetten van de monsters totdat maximaal 48 uur + 4 uur na de datum van monstername\n                                       is verstreken.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHomogenizeer 25 g monster in 225 ml gebufferd pepton water, in een stomacher zak met\n                                                filter.\n\nIncubeer zonder schudden gedurende 18-20 uur bij 37 \u00b0C.\n\nOpmerking: Bij verwerking van borstvel ten behoeve van de verdunning dient zo min\n                                          mogelijk onderhuids vet meegesneden te worden; een overmaat vet kan de isolatie van\n                                          DNA bemoeilijken en inhibitie van de PCR-reactie veroorzaken. Mest en dons vergen\n                                          geen bijzondere voorbehandeling.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nPipetteer 1 ml ophoping met een disposable pipet in een 1,5 ml Eppendorf buis (voorkom\n                                                pipetteren van grote fragmenten van monsterresten). Schudt de ophoping niet voorafgaand\n                                                aan het pipetteren van het monster.\n\nDe overige stappen voor de DNA extractie worden uitgevoerd zoals omschreven in de\n                                          gebruiksaanwijzing van de iQ Check\u2122 Salmonella testkit (Bio-Rad, 2004).\n\nOpmerking : In geval van ophopingen met een vettig supernatant, neem het monster juist\n                                          onder deze vetlaag.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nApparatuur en software gebruik, uitvoering PCR en data analyse worden allen uitgevoerd\n                                          zoals omschreven in de gebruiksaanwijzing van de iQ Check\u2122 Salmonella testkit (Bio-Rad,\n                                          2004).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nResultaten worden ge\u00efnterpreteerd middels analyse van de Ct-waarden (threshold cycle)\n                                          van elk monster.\n\nEen positief Salmonella monster dient een Ct-waarde = 10 voor de FAM fluorophore te\n                                          hebben. Indien de Ct-waarde lager dan 10 is, dient het verloop van de amplif\u00efcatiecurve\n                                          gecontroleerd te worden via de \"Background subtracted\" mode; de curve dient een vlakke\n                                          basislijn te vertonen, gevolgd door een geleidelijke toename van fluorescentie. Indien\n                                          de curve correct is, kan het monster positief voor Salmonella worden bevonden.\n\nIndien geen Ct-waarde (Ct=N/A) voor FAM is toegekend aan een monster, of de curve\n                                          een niet- kenmerkend verloop vertoont, moet de interne controle van dat monster worden\n                                          geanalyseerd. Wanneer geen Ct-waarde (Ct=N/A) wordt verkregen voor FAM, dan is de\n                                          uiteindelijke interpretatie van het resultaat afhankelijk van de interne controle:\n\nEen monster wordt negatief beschouwd voor Salmonella indien geen Ct-waarde voor FAM\n                                                is toegekend, en de interne controle (Texas Red) een Ct-waarde > 10 heeft.\n\nIndien de interne controle ook geen Ct-waarde is toegekend (Ct = N/A), dan is interpretatie\n                                                van het resultaat onmogelijk. Een dergelijk resultaat kan een indicatie zijn van remming\n                                                van de PCR reactie. In dit geval dient het monster (DNA-extract) 1/10 verdund te worden\n                                                in steriel gedestilleerd water en moet de PCR reactie worden herhaald.\n\nInterpretatie van monsterresultaten:\n\nSalmonella detectie (FAM-490)\n\nInterne controle detectie (Texas Red-575)\n\nResultaat\n\nCt=10\n\nNiet van belang\n\nPositief\n\nCt = N/A\n\nCt > 10\n\nNegatief\n\nCt = N/A\n\nCt = N/A\n\nInhibitie21\n\nVoor een positief resultaat geldt: Salmonella aangetoond. Voor een negatief resultaat\n                                          geldt: Salmonella niet aangetoond.\n\nVerdere bevestiging van positieve uitslagen verkregen met de iQ Check\u2122 Salmonella\n                                          test is ter beoordeling van de gebruiker maar is niet vereist.\n\nEchter in die gevallen waarin volgens het Plan van Aanpak/Actieplan 2000+ nadere serotypering van de Salmonella bevinding is vereist, dient met dezelfde BPw-voorophoping\n                                          als waaruit de PCR is uitgevoerd alsnog een isolatie met MSRV en BGA uitgevoerd te\n                                          worden (PVE Branche methode MSRV, PPE, 2004-II).\n\nIn bijlage IV van Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999,\n                                          wijziging 2004-II, is het werkvoorschrift voor serotypering van isolaten opgenomen\n                                          (PPE 2004-II).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nDe iQ Check\u2122 Salmonella test kit bevat een positieve en een negatieve controle. Een\n                                       additionele interne controle in elk monster bepaald de effici\u00ebntie van de PCR-reactie\n                                       en is een indicator voor vals-negatieve reacties. Genoemde controles worden in elke\n                                       test meegenomen.\n\nTen behoeve van de validatie van het gehele experiment dienen de controles te voldoen\n                                       aan de volgende eisen, weergegeven in onderstaande tabel. Is dit niet het geval, dan\n                                       moet de PCR reactie worden herhaald.\n\nSalmonella detectie (FAM-490)\n\nInterne Controle detectie (Texas Red-575)\n\nNegatieve controle\n\nCt = N/A22\n\n30 < Ct < 40\n\nPositieve controle\n\n26 < Ct < 36\n\nNiet van belang\n\nVoor de eerstelijnscontrole van de methode als geheel dienen te worden meegenomen:\n\nPositieve controle\n\nNegatieve controle (indien een ingangscontrole per batch wordt toegepast, kan deze\n                                             negatieve controle komen te vervallen)\n\nBlanco controle\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet resultaat wordt opgegeven als 'Salmonella aangetoond dan wel niet aangetoond in\n                                       het betreffende monstermateriaal' als Salmonella al dan niet is aangetoond volgens\n                                       dit protocol.\n\nIndien bij het aanleveren van de monsters door de opdrachtgever afwijkingen worden\n                                       geconstateerd van de wijze waarop de monsters aangeleverd moeten worden, dan dient\n                                       het laboratorium hierover schriftelijk een opmerking te maken richting de opdrachtgever\n                                       (zie bijlage V van Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999,\n                                       wijziging 2004-II (PPE, 2004-II).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nAFNOR Validation Certificate, iQ Check\u2122 Salmonella, attest BRD-07/06-07/04.\n\nBio-Rad Laboratories b.v., Gebruiksaanwijzing van de iQ Check\u2122 Salmonella Test. 30\n                                       augustus 2004, Veenendaal, NL.\n\nEuropean Standard NF EN ISO 6579. Microbiology of food and animal feeding stuffs -\n                                       Horizontal method for the detection of Salmonella spp. December 2002.\n\nMiras L, Hermant N., Arricau N., Popoff M.Y. Nucleotide sequence of lagA and lagB\n                                       genes involved in invasion of HeLa cells by Salmonella enterica subsp. Enterica ser.\n                                       Typhy. Research in Microbiology, Vol. 146 (1): 17-20 (1995).\n\nProductschap Pluimvee en eieren (PPE). Verzamelband Actieplan Salmonella en Campylobacter\n                                       in de pluimveevleessecor 2000+ (zie ook: www.pve.nl) .\n\nProductschap Pluimvee en eieren (PPE). Opmerkingen opdrachtgever bij aanleveren afwijkende\n                                       monsters, Acceptatiecriteria. Bijlage V bij Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999,\n                                       wijziging 2004-II (d.d. 09-09-2004). Vb. Bo. Nr. 61, d.d. 08-10-2004. (ook via: www.pve.nl)\n\nProductschap Pluimvee en eieren (PPE). PVE Branche methode MSRV voor het aantonen\n                                       van Salmonella in dons, faeces, vellen en eindproduct afkomstig van pluimvee. Bijlage\n                                       II bij Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999,\n                                       wijziging 2004-II (d.d. 09-09-2004). Vb. Bo. Nr. 61, d.d. 08-10-2004. (ook via: www.pve.nl)\n\nProductschap Pluimvee en eieren (PPE). Serologische bevestiging en serotypering. Bijlage IV bij Besluit Protocollen Hygi\u00ebnevoorschriften Pluimveeverwerkende industrie 1999,\n                                       wijziging 2004-II (d.d. 09-09-2004). Vb. Bo. Nr. 61, d.d. 08-10-2004. (ook via: www.pve.nl)\n\nTyagi, S. and Kramer, F.R. Molecular Beacons: Probes that fluoresce upon hybridization.\n                                       Nature Biotechnology 14: 303-308 (1996).\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n1. Samenstelling van het voorophopingsmedium\n\n2. Samenstelling iQ Check\u2122 Salmonella test kit\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nVoorophopingsmedium: Gebufferd pepton water (BPw)\n\nSamenstelling:\n\nPepton\n\n10,0 g\n\nNaCI\n\n5,0 g\n\nNa2HPO4\n\n3,5 g\n\nKH2PO4\n\n1,5 g\n\nWater\n\n1000 ml\n\nBereiding:\n\nLos de ingredi\u00ebnten op in het water (indien nodig d.m.v. verhitting)\n\nStel de pH, zodat deze na sterilisatie 7,2 \u00b1 0,2 bedraagt bij 25 \u00b0C\n\nVerdeel het medium over de daartoe geschikte flessen\n\nSteriliseer in een autoclaaf (15 minuten, 121 \u00b0C)\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSamenstelling\n\nID\n\nReagens\n\nVerstrekte hoeveelheid\n\nA\n\nLysis reagens\n\n1 fles (22 ml)\n\nB\n\nFluorescente probes\n\n1 buis (0.550 ml)\n\nC\n\nAmplificatie mix\n\n2 buizen (2 x 2.25 ml)\n\nD\n\nPCR negatieve controle\n\n1 buis (0.5 ml)\n\nE\n\nPCR positieve controle\n\n1 buis (0.250 ml)\n\nDe iQ-Check\u2122 Salmonella kit bevat reagentia ten behoeve van 96 testen.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nMonsters die in de pluimveevlees- en eiersector worden genomen voor bacteriologisch\n                                 onderzoek:\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in inlegvellen\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nCloacaswabs 4 weken:\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in swabs\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in swabs\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in dons\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSwabs:\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in swabs\u2019.\n\nOverschoentjes:\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in overschoentjes\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in blindedarmmest\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in vellen\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in eindproduct\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nHet laboratorium bepaalt of Salmonella aan- dan wel afwezig is. Indien Salmonella\n                                    is aangetoond dan is de uitslag \u2018aanwezigheid van Salmonella in swabs\u2019.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\n=> Breng op een objectglas een druppel zoutoplossing (0,85% NaCl).\n\n=> Breng met een steriele entnaald een beetje materiaal van de te onderzoeken kolonie\n                                             in de druppel zodat een troebeling ontstaat.\n\n=> Beweeg gedurende 30-60 seconden het objectglas heen-en-weer (druppel laten zwenken).\n\n=> Beoordeel het resultaat tegen een donkere achtergrond (met een vergrootglas). De\n                                             aanwezigheid van klontjes in het preparaat duidt op auto-agglutinatie van de onderzochte\n                                             stam. De stammen die auto-agglutinatie vertonen worden niet onderzocht met polyvalent\n                                             O-serum.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nAgglutineer van Salmonella-verdachte kolonies met polyvalent serum A t/m E of A t/m\n                                       G; indien negatief vervolgen met polyvalent serum A t/m S.\n\n=> Breng op een objectglas een druppel antiserum.\n\n=> Breng met een steriele entnaald een beetje materiaal van de te onderzoeken kolonie\n                                             in de druppel zodat een lichte troebeling ontstaat.\n\n=> Beweeg gedurende 30-60 seconden het objectglas heen-en-weer (druppel laten zwenken).\n\n=> Beoordeel het resultaat tegen een donkere achtergrond (met een vergrootglas). De\n                                             aanwezigheid van klontjes in het preparaat duidt op een positieve reactie van de onderzochte\n                                             stam.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nAgglutineer van Salmonella-verdachte kolonies eerst met serum A t/m E of A t/m G;\n                                    indien negatief vervolgen met polyvalent serum A t/m S.\n\nBij een positieve agglutinatie met polyvalent A t/m G wordt geagglutineerd met de\n                                    groepssera B, C (C1 en C2), D en E (1 t/m 5).\n\nIndien positief met B, dan wordt vervolgens geagglutineerd met flagellair antiserum\n                                    H-i. Hiertoe wordt een schuine agar (bijvoorbeeld nutri\u00ebntenagar) be\u00ebnt (middels ladderen)\n                                    met de te agglutineren Salmonella en wordt 1 druppel fysiologisch zout (0,85% NaCl)\n                                    aan deze buis toegevoegd. Na 24 \u00b1 2 uur incuberen bij 37 \u00b0 C wordt cultuur van de\n                                    vochtige schuine zijde genomen voor de agglutinatie met H-i serum.\n\nIndien H-i positief dan heeft men een Salmonella typhimurium. Indien H-i negatief\n                                    dan is het een Salmonella B groep.\n\nIndien positief met D, dan wordt vervolgens geagglutineerd met flagellair antiserum\n                                    H-m.\n\nIndien H-m positief dan heeft men een Salmonella enteritidis.\n\nIndien H-m negatief dan heeft men Salmonella D groep.\n\nSalmonella die alleen met polyvalent A t/m S agglutineren, kunnen, indien gewenst,\n                                    voor typering opgestuurd worden naar het RIVM, t.a.v. Infectieziekten, Diagnostiek\n                                    en Screening laboratorium. Dit geldt tevens voor alle niet-serotypeerbare Salmonella.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nIndien afwijkingen in de voorgeschreven kwaliteit en wijze van aanleveren van monsters\n                                 zijn geconstateerd, moet in ieder geval bij de volgende punten richting de opdrachtgever\n                                 een opmerking worden gemaakt, waaruit blijkt dat er in de procedure van monstername\n                                 en inzenden een afwijking is geconstateerd en om welke afwijking het gaat.\n\nTen algemene.\n\n=> Indien er tussen de datum van monstername en de datum van ontvangst op het laboratorium\n                                       meer dan 48 uur is verstreken.\n\n=> Indien bij de inzending \u00e9\u00e9n van de volgende gegevens ontbreekt: monsterdatum, stalnummer\n                                       en KIP-nummer.\n\n=> Indien monsters zodanig zijn verpakt dat lekkage is opgetreden en zodanig zijn\n                                       geadresseerd dat voor transporteur en laboratorium verwarring kan ontstaan.\n\nMonsters.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\na) Indien onvoldoende inlegvellen worden aangeleverd.\n\nb) Indien de monsters inlegvellen onvoldoende groot zijn.\n\nc) Indien de monsters inlegvellen niet duidelijk met mest zijn besmeurd.\n\nd) Indien de monsters inlegvellen niet worden aangeleverd in een plastic monsterpot of\n                                          -zak.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\na) Indien het monster niet minimaal 25 gram dons bevat.\n\nb) Indien het monster geen natte dons bevat.\n\nc) Indien het monster niet in een monsterpot of -zak wordt aangeleverd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\nSwabs:\n\na) Indien onvoldoende swabs worden aangeleverd.\n\nb) Indien de swabs onvoldoende met mest zijn besmeurd.\n\nc) Indien de swabs niet tot twee mengmonsters zijn gepoold (tenzij de swabs individueel\n                                          zijn verpakt).\n\nd) Indien de swabs niet in monsterpotten worden aangeleverd.\n\nOverschoentjes:\n\na) Indien onvoldoende paar overschoentjes zijn aangeleverd.\n\nb) Indien de overschoentjes niet duidelijk met mest zijn besmeurd.\n\nc) Indien de overschoentjes niet in monsterzakken worden aangeleverd.\n\nd) Indien elk paar overschoentjes niet in een aparte monsterzak is verpakt.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\na) Indien onvoldoende blindedarm monsters zijn genomen.\n\nb) Indien de blindedarm monsters van onvoldoende formaat zijn.\n\nc) Indien de blindedarm monsters niet in kunststofbakjes zijn aangeleverd.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\na) Indien het monster vel van de borstkap niet minimaal 25 gram weegt.\n\nb) Indien het monster niet gekoeld ( 0 \u2013 4 \u00b0C) getransporteerd en bewaard is.\n\n[Regeling vervallen per 10-02-2008]\n\na) Indien het monster eindproduct niet minimaal 25 gram weegt.\n\nb) Indien het monster niet gekoeld ( 0 \u2013 4 \u00b0C) getransporteerd en bewaard is."}