Source: http://docplayer.fi/18802684-Esbl-ampc-ja-karbapenemaasituoton-tutkiminen-kiekkoherkkyysmenetelmilla.html
Timestamp: 2019-12-06 21:38:18+00:00
Document Index: 4464256

Matched Legal Cases: ['kko ', 'kko ', 'kko ', 'kko ', 'kko ', 'kko ']

ESBL-, AmpC- ja karbapenemaasituoton tutkiminen kiekkoherkkyysmenetelmillä - PDF Free Download
Download "ESBL-, AmpC- ja karbapenemaasituoton tutkiminen kiekkoherkkyysmenetelmillä"
1 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 1 / 5 1 Menetelmäviitteet ja poikkeamat CLSI Document M31-A3, Vol. 28, No 8. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals; Approved Standard Third Edition. CLSI ISBN X. CLSI Document M100-S20 Vol 30, No.1. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twentienth Informational Supplement. CLSI ISBN Menetelmän tarkoitus ja soveltamisala Tätä menetelmää käytetään tilanteessa, jossa tutkittavana olevien E. coli -, Klebsiella sp.-, tai Proteus mirabilis -kantojen, tai Salmonella -serotyypin herkkyyden kefotaksiimille tai muulle 3. polven kefalosporiinille katsotaan alentuneen merkitsevästi. Jos alentunutta herkkyyttä 3. polven kefalosporiineille todetaan muilla enterobakteereilla, sovitaan jatkotutkimuksista tapauskohtaisesti. 3 Määritelmä(t) Laajakirjoiset β-laktamaasit (ESBL, extended-spectrum β-lactamases) ovat entsyymejä, jotka pystyvät hydrolysoimaan kolmannen polven kefalosporiineja (esim. kefotaksiimi) ja monobaktaameja (esim. atstreonaami) ja joskus myös karbapeneemeja (esim. imipeneemi). Ne pystyvät yleensä hajottamaan myös penisilliinejä sekä ensimmäisen ja toisen polven kefalosporiineja. Laajakirjoisia β-laktamaaseja koodaavia geenejä esiintyy erityisesti gramnegatiivisissa Enterobacteriaceae heimon bakteereissa (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ja Salmonella spp). Niitä on myös muissa gramnegatiivissa sauvabakteereissa. ESBL-geenejä on sekä bakteerien kromosomeissa että plasmideissa. Tärkeimmät geeniperheet ovat nimeltään TEM, SHV, OXA ja CTX. Eri entsyymit numeroidaan perheittäin, esim. TEM-3. AmpC-tyyppisiä β-laktamaaseja ei katsota varsinaisiksi ESβL-entsyymeiksi. ESβLinhibiittorit (esim klavulaanihappo) eivät estä niiden toimintaa. Ne hajottavat kuitenkin yhtä laajasti β-laktaamiantibiootteja kuin ESβL:t. Myös AmpC tyypin geenit voivat olla bakteerisuvusta riippuen sekä kromosomaalisia että plasmideissa. Kromosomaalsia geenejä ei yleensä ilmennetä, ja AmpC+ fenotyyppi johtuu useimmiten entsyymin plasmidivälitteisestä tuotannosta. Karbapenemaasit ovat laajakirjoisimpia β-laktamaaseja. Ne jaetaan A- ja B- (ja D-) tyyppeihin. A-tyyppiä edustaa esim KPC, eli Klebsiella pneumoniae carbapenemase. B-tyyppi muodostuu metallo-β-laktamaaseista (MβL). Karbapenemaaseja tuottavat
2 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 2 / 5 enterobakteerit ovat nousemassa epidemiologisesti entistä tärkeämmäksi patogeenityypiksi sekä humaani- että eläinlääketieteessä. 4 Periaate ESβL-AmpC -menetelmässä tutkitaan testikiekkojen avulla bakteerikannan herkkyyttä kolmannen polven kefalosporiinille (kefpodoksiimi) ilman ESβL- tai AmpCinhibiittoreita ja niiden kanssa, Testin täydentää kiekko, jossa on kefalosporiinin lisäksi molempia inhibiittoreita. Karbapenemaasituottajien seulontaan käytetään meropeneemiä ja ertapeneemiä. Meropeneemille selvästi resistentit kannat testataan A ja B -karbapenemaasityypeille soveltuvien inhibiittoreiden avulla. Testisarja voi havaita myös mahdollisen AmpCaktiivisuuden. 5 Mahdolliset virhelähteet Suoritustekniset virheet, katso menetelmäohje Evira ESBL-fenotyyppi voi peittyä, jos kanta tuottaa samanaikaisesti klavulaanihapolle resistenttejä betalaktamaaseja. Virhepositiivisen tuloksen voivat antaa ne K. pneumoniae - ja E. coli -kannat, jotka ylituottavat keftatsidiimiresistenssiä aiheuttavaa SHV-1-entsyymiä (ei ESBL). 6 Työturvallisuus Mikrobiologisessa laboratoriossa työskenneltäessä noudatetaan toimintaohjetta LAB 223. Laajakirjoisia beetalaktaaaseja ja karbapenemaaseja tuottavien bakteerien käsittelyssä noudatetaan toimintaohjetta LAB Ympäristöolosuhteet ja testaustilat 1. Tavanomainen laboratorioympäristö 8 Laitteet ja välineet 1. Mikrobiologinen perusvälineistö 2. Lämpökaappi 36,0 ± 1,0 C, 3. McFarland 0.5 -standardi tai nefelometri 4. Steriilejä pumpulipuikkoja 5. Dreija petrimaljojen pyörittämiseen 6. Työntötulkki tai viivain
3 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 3 / 5 9 Elatusaineet ja reagenssit 9.1 Elatusaineet 1. veriagar % NaCl tai ei-selektiivinen kasvatusliemi (tryptic soy broth, BHI-liemi, Müller-Hinton -liemi) 3. Müller-Hinton-II -agar (perusalusta) 9.2 Antibioottikiekot Maljan paksuuden tulee olla sen keskikohdassa n. 4 mm. Maljojen valmistajasta riippuen tällainen malja saadaan, kun 9 cm maljalle valetaan ml agaria. ESBL - AmpC tuotto: Mast Group Ltd, D68C AmpC & ESβL Detection Set Kiekko A: Kiekko B: Kiekko C: Kiekko D: CPD10 (kefpodoksiimi) CPD10 + ESβL inhibiittori CPD10 + AmpC inhibiittori CPD10 + ESβL inhibiittori + AmpC inhibiittori Ertapenem 10 µg (CT1761B, Oxoid) Meropenem 10 µg (CT0774B, Oxoid) Karbapenemaasituoton varmistus: Rosco Neo-Sensitabs ConfirmID (Carbapenemase/Metallo-β-Lactamase Confirmative Identification Pack) kiekot Meropenem 10 μg, koodi MRP10 Meropenem 10 μg + boronihappo, koodi MR+BO Meropenem 10 μg + kloksasilliini, koodi MR+CX Meropenem 10 μg + dipikoliinihappo, koodi MR+DP 10 Kontrollikannat ESBL - AmpC -tuotto: E. coli ATCC 25922, Evira 257, ESBL/AmpC-negatiivinen Klebsiella pneumoniae ATCC , Evira 639, ESBL-positiivinen E. coli, /62, EC-4.7, AmpC-positiivinen Ertapeneemi- ja meropeneemikiekoille käytetään vain negatiivista kontrollikantaa E. coli ATCC 25922, Evira 257 Karbapenemaasituotto: Klebsiella pneumoniae ATCC , Evira 639, KPC ja MBL-negatiivinen Klebsiella pneumoniae BAA-1705, Evira 662, KPC-positiivinen
4 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 4 / 5 11 Suoritus Toimi Evira menetelmäohjeen kohdan 10 mukaisesti. Ei-selektiivisessä alustassa (liemessä) kasvatettua bakteerisuspensiota levitetään kahdelle Müller- Hinton-II maljalle. Näistä toiselle asetetaan Mast D68C kiekot A, B, C ja D alla olevan kuvan mukaisesti. Toiselle maljalle asetetaan meropeneemikiekko (CT0774B) ja ertapeneemikiekko (CT1761B). Kuva: Mast A, B, C ja D kiekkojen asettaminen maljalle Kiekkojen ympärille syntyneiden estokehien halkaisijat (kuva) mitataan mm-mitalla tai työntötulkilla. Mikäli estokehän halkaisija meropeneemikiekon ympärillä on suurempi kuin 22 mm, kanta ei ole karbapenemaasien tuottaja. Mikäli halkaisija on pienempi kuin 16 mm, resistenssiä selvitetään tarkemmin karbapenemaasi kiekkosarjan avulla. Välillä mm olevan estokehän tulkinnasta päätetään tapauskohtaisesti. Edellä kuvatulla tavalla tehdylle Müller-Hinton II maljalle asetetaan MRP10, MR+BO, MR+CX ja MR+DP kiekot yllä olevassa kuvassa esitetyllä tavalla. Kiekkojen järjestyksellä ei ole merkitystä. Kiekkojen ympärille syntyneiden estokehien halkaisijat mitataan mm-mitalla tai työntötulkilla. Mikäli estokehän halkaisija ertapeneemikiekon ympärillä on suurempi kuin 25 mm, kanta ei ole karbapenemaasien tuottaja. Mikäli halkaisija on pienempi kuin 22 mm, kannan jatkotutkimuksista sovitaan erikseen. Välillä mm olevan estokehän tulkinnasta päätetään tapauskohtaisesti. 12 Tulokset 12.1 Tulosten tulkinta Mittaa estovyöhykkeen halkaisija millimetrin tarkkuudella kirkkaan estovyöhykkeen reunasta eli kohdasta, jossa bakteerikasvu heikkenee jyrkästi. Valitse mittauspisteet siten, että ne ovat mahdollisimman kaukana viereisistä kiekoista ja maljan reunasta. Mittaa estokehän reunassa oleva, heikosti havaittava huntumainen kasvu mukaan estovyöhykkeeseen.
5 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 5 / 5 Mast D68C kiekot ESβL -tuottaja: Z B -Z A ja Z D -Z C 5 mm ja Z D -Z B ja Z C -Z A < 5 mm AmpC -tuottaja: Z B -Z A ja Z D -Z C < 5 mm ja Z D -Z B ja Z C -Z A 5 mm ESβL ja AmpC -tuottaja: Z D -Z C 5 mm ja Z B -Z A < 5 mm ESβL ja AmpC negatiivinen: kaikkien kehien erot 2 mm (vrt kuva) Roscon karbapenemaasikiekkosarja Estokehän laajuus verrattuna MRP10 kiekon estokehään MR+BO MR+CX MR+DP Tulkinta ======================================================== 5 mm 5 mm 3 mm AmpC (+ mahd. poriinin menetys) 5 mm 3 mm 3 mm KPC 3 mm 3 mm 5 mm MβL 5 mm 3 mm 5 mm mahd. KPC sekä MβL AmpC, KPC ja MβL -negatiivinen: kaikkien kehien erot 2 mm Tulkinnan helpottamiseksi on molempia testejä varten laadittu MS Excel taulukot, joihin syötetään vain estokehien mitatut halkaisijat. Taulukot MAST_ESBL_AmpC_laskin.xlsm ja Rosco_karbapenemaasi_laskin.xlsm sijaitsevat AMBIn hakemistossa ESBL Tulosten ilmoittaminen Vastaa testin tulos samassa vastauksessa VetMIC-tuloksen kanssa käyttäen seuraavia koodeja: esblneg: Tutkittu kanta ei tuota laajakirjoista β-laktamaasia (ESBL) esblpos: Kanta tuottaa laajakirjoista β-laktamaasia (ESBL) ampcneg: Tutkittu kanta ei tuota AmpC β-laktamaasia ampcpos: Tutkittu kanta tuottaa AmpC β-laktamaasia Elmo-tutkimusvastauksessa kaikkien beetalaktaamien tulokset luokitellaan resistenteiksi, myös amoksisilliini-klavulaanihapon. Karbapenemaasimäärityksen tulosta ei toistaiseksi lisätä tutkimustodistukseen ilmiasuun perustuvan tyypityksen epävarmuustekijöiden takia. Meropeneemille resistentit bakteerikannat toimitetaan genotyypitykseen Terveyden- ja hyvinvoinnin laitokseen (THL/Jari Jalava). Näytteen lähettämisestä on sovittava aina erikseen Kontrollikantojen käyttö E. coli ATCC 25922: testattava ESBL -AmpC -kiekkosarjalla Klebsiella pneumoniae ATCC : testattava molemmilla kiekkosarjoilla Klebsiella pneumoniae BAA-1705: testattava karbapenemaasikiekkosarjalla
6 Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 6 / 5 13 Menetelmän status Kansainvälisen menetelmäkokoelman menetelmä Virallinen menetelmä Sisäinen menetelmä 14 Laadunvarmistusmenetelmät Laboratorioiden väliset vertailututkimukset Menetelmävertailut Vertailukantojen/kontrollikantojen käyttö Siirrostetut näytteet Rinnakkaismääritykset Kontrollikiekot Valvontakortit/vihko 15 Viitteet CLSI Document M31-A3, Vol. 28, No 8. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals; Approved Standard Second Edition. CLSI ISBN X. CLSI Document M100-S20 Vol 30, No.1. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twentienth Informational Supplement. CLSI ISBN Bakteerien lääkeherkkyyden määrittäminen kiekkomenetelmällä. Versio 5.0. FiRestandardi. Suomalainen mikrobilääkeresistenssin tutkimusryhmä Finnish Study Group for Antimicrobial Resistance (FiRe), Jaakkonen, A., Laajakirjoisen β-laktamaasiresistenssiyden kehittyminen ja detektio, kandidaatintyö, Teknillinen korkeakoulu, kemian ja materiaalitieteiden tiedekunta, Kansanterveyslaitos, mikrobiekologian laboratorio, ESBL-taustaa, mus/laajakirjoiset_beetalaktamaasit_esbl/ Rosco Diagnostican karbapenemaasi testisarja mases%20-%20metallo-b-lactamase.pdf 16 Muutokset edelliseen versioon Päivitetty kohdat 6 ja 10. Tämän ohjeen laadinta: Suvi Nykäsenoja, Katariina Pekkanen
Vastuuhenkilö Suvi Nykäsenoja Sivu/sivut 1 / 5 1 Menetelmäviitteet ja poikkeamat CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals;
Enterobakteerien määrittäminen. Pesäkelaskentatekniikka.
Vastuuhenkilö Satu Hakola Sivu/sivut 1 / 5 1 Menetelmäviitteet ja poikkeamat ISO 21528-2:2017 (VRBG 37 C/24h, ravintoagar/tsa 37 C/24h, oksidaasikoe, glukoosiagar 37 C/24h) 1) Siirrostettava näytemäärä
ESBL-KANTOJEN PIPERASILLIINI- TATSOBAKTAAMIHERKKYYS- MÄÄRITYS ERI MENETELMILLÄ
Opinnäytetyö (AMK) Bioanalytiikan koulutusohjelma Bioanalytiikka 2013 Paula Lehtonen & Anniina Toivonen ESBL-KANTOJEN PIPERASILLIINI- TATSOBAKTAAMIHERKKYYS- MÄÄRITYS ERI MENETELMILLÄ OPINNÄYTETYÖ (AMK)
Mari-Ella Välitalo VERTAILUTUTKIMUS LAAJAKIRJOISTA BEETALAKTAMAASIA TUOTTAVIEN BAKTEERIEN KASVATUSMALJOISTA
Mari-Ella Välitalo VERTAILUTUTKIMUS LAAJAKIRJOISTA BEETALAKTAMAASIA TUOTTAVIEN BAKTEERIEN KASVATUSMALJOISTA VERTAILUTUTKIMUS LAAJAKIRJOISTA BEETALAKTAMAASIA TUOTTAVIEN BAKTEERIEN KASVATUSMALJOISTA Mari-Ella
Sofia Seittenranta-Vekkeli. ESBL-kantojen genotyyppien kartoitus multiplex PCR:llä
Sofia Seittenranta-Vekkeli ESBL-kantojen genotyyppien kartoitus multiplex PCR:llä Metropolia Ammattikorkeakoulu Sosiaali- ja terveysala Bioanalytiikan koulutusohjelma Opinnäytetyö 4.6.2012 Tiivistelmä