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Timestamp: 2017-06-23 15:21:32+00:00

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El sitio de José Luis Ares: abril 2014
Principios y fundamentos metodológicos. El índice de ácidos grasos
volátiles solubles o índice de Reichert o Reichert-Meissl-Mellny, es
el número de mililitros de una solución acuosa de álcali 0,1 N, requeridos para neutralizar los ácidos grasos volátiles solubles en agua de una cantidad de 5 gramos de grasa en las condiciones que se especifica en esta metodología. El índice de ácidos grasos
volátiles insolubles o índice de Polenske, es el número de mililitros de solución acuosa de álcali 0,1 N, requeridos para neutralizar los
ácidos grasos volátiles insolubles en agua, obtenidos en una muestra de 5 gramos de grasa, en las condiciones del método. Después de saponificar la grasa
con una solución de sodio hidróxido en glicerina, la solución
jabonosa se diluye con agua y se acidifica con ácido sulfúrico. Los
ácidos grasos volátiles se destilan y los ácidos grasos insolubles
se separan de los solubles por filtración. La solución acuosa de
ácidos solubles y la solución etanólica de ácidos insolubles se
valoran separadamente con una solución de álcali normalizada. El método es empírico porque
sólo determina una parte de estos ácidos; por tanto, los aparatos utilizados y las especificaciones referentes al procedimiento se deben
seguir rigurosamente para obtener resultados exactos y reproducibles.
1.Matraz de fondo plano de
vidrio al borosilicato de 300 ml de capacidad (A).
4.Receptor, es un matraz aforado con las rayas circulares de aforo a 100 y 110 ml
5.Lámina de amianto o asbesto de 120
mm de diámetro, 6 mm de espesor con una abertura central circular de
40 a 50 mm de diámetro, para sostener el matraz durante el
calentamiento (E).
6.Piedra pómez triturada
que pasa a través de un tamiz de malla circular de 1,44 mm.
En la figura se representan las
dimensiones en mm y el montaje del aparato de destilación; para las
conexiones se puede utilizar tapones de caucho, neopreno o silicona,
o juntas de vidrio esmerilado “estandar” 24/40.
de fenolftaleína.
La glicerina empleada tiene las siguientes características: d = 1,26;
98% (p/p).
Para preparar la solución acuosa de sodio hidróxido (44% p/p) se usa sodio hidróxido al 97% en lentejas (PA), y se disuelve en agua destilada (PA). Se recomienda su conservación en una botella protegida del dióxido de carbono, y utilizar siempre la porción limpia
libre de precipitado de carbonatos.
La solución acuosa de sodio
hidróxido 0,1 N (SV) o potasio hidróxido 0,1 N, debe estar normalizada exactamente.
El alcohol etílico al 96% (v/v
PA) debe ser neutro a la fenolftaleína; el agua usada debe ser destilada o de
una pureza al menos equivalente.
1.Preparación de la
muestra: Fundir aproximadamente 50 g de la muestra de mantequilla en una estufa estándar a una temperatura inferior a 50 ºC, hasta conseguir la separación de las fases acuosa y grasa; seguidamente, hay que separar la capa de grasa por decantación, y clarificarla en la estufa a unos 40 ºC; después se filtra empleando un papel de filtro seco, evitando que pase la fase acuosa por el filtro. 2.Determinación del índice de ácidos grasos volátiles solubles: Pesar 5 g de grasa en el matraz A, con una aproximación de
0,01 g; añadir 20 g (16 ml) de glicerina (PRS), y 2 ml de solución de sodio hidróxido (44%). Para añadir la
solución de sodio hidróxido debe usarse una bureta protegida de la entrada
de dióxido de carbono, limpiando previamente la punta de la bureta y desechando
las primeras gotas. Calentar el matraz a fuego directo, evitando el sobrecalentamiento, y agitando continuamente hasta que el líquido no forme
espuma y se vuelva límpido. Dejar enfriar el matraz hasta 90 ºC, añadir 90 ml de agua destilada (PA) recién hervida a la misma
temperatura aproximadamente, y mezclar hasta que el líquido obtenido sea límpido. Añadir de 0,6 a 0,7 g de piedra pómez y 50 ml de
solución de ácido sulfúrico 1 N (SV). Conectar inmediatamente el
matraz al aparato de destilación calentando ligeramente hasta que
los ácidos grasos libres formen una capa superficial limpia. En el calentamiento debe regularse la llama de modo que se recojan en el matraz
aforado 110 ml de destilado en unos 19-21 minutos, considerándose el comienzo de la destilación el momento en que se forma la primera
gota en el refrigerante. Se debe regular el flujo de agua del refrigerante de
modo que se mantenga la temperatura del agua que sale del mismo a 20 ± 1 ºC. Una vez recogidos los 110 ml de destilado, quitar el mechero inmediatamente y
sustituir el matraz aforado por un pequeño vaso. A continuación, mezclar el
contenido del matraz aforado agitando suavemente, y sumergir el matraz
en un baño de agua a 20 ± 1 ºC durante 10-15 minutos, quedando la
señal correspondiente a los 110 ml del matraz aforado por debajo del nivel del agua del
baño; se debe agitar el matraz en varias ocasiones. Tapar el matraz y
mezclar invirtiéndolo 4 o 5 veces sin agitar. Filtrar los 110 ml de
destilado a través de un papel de filtro seco de velocidad media (diámetro
80-90 mm), que se ajusta en un embudo. El filtrado debe
ser límpido, empleando un filtro con las dimensiones adecuadas para que un volumen
de 15 ml lo llene por completo. Pipetar 100 ml de filtrado y
pasarlos a un matraz erlenmeyer de 300 ml, añadir 0,5 ml de la
solución indicadora de fenolftaleína al 1% (RE), y valorar con
la solución acuosa de álcali “estándar” 0,1 N hasta obtener un color rosa
persistente durante 30-60 segundos.
3.Ensayo en blanco: Se realiza sin grasa, y en lugar de saponificar a fuego directo hay que calentar en baño de agua hirviendo durante 15 minutos. Para la
valoración es suficiente con emplear 0,5 ml de la solución de álcali normalizada. En caso contrario, se deben preparar nuevas soluciones del reactivo.
4.Determinación del índice
de ácidos grasos volátiles insolubles (Polenske): Previamente, se debe lavar el filtro
con tres volúmenes sucesivos de 15 ml de agua destilada (PA) a la
temperatura de 20 ± 1 ºC, una vez que hayan pasado cada uno a
través del refrigerante del vaso pequeño y del matraz aforado. Colocar el embudo y el filtro en el cuello de un matraz cónico, limpio
y seco, de 200 ml de capacidad. Disolver los ácidos grasos
insolubles repitiendo los lavados, usando volúmenes de 15 ml de alcohol etílico de 96% (v/v, PA). Valorar con la solución acuosa de
álcali normalizada (0,1 N) el conjunto de los lavados utilizando alcohol etílico de 96% (v/v, PA), y 0,5 ml de solución indicadora de fenolftaleína al 1% (RE), hasta un color rosa persistente
durante 30-60 segundos.
1.Índice de ácidos grasos
volátiles solubles (índice de Reichert):
Índice de Reichert = 11. t .
(V1 – b)
= Volumen en mililitros de la solución normalizada (0,1 N) de álcali,
utilizados en la valoración de la muestra.
b = Volumen en mililitros de la solución normalizada (0,1 N) de álcali,
utilizados en el ensayo en blanco.
t = Normalidad exacta de la solución normalizada (0,1 N) de álcali. El resultado obtenido se redondea a la primera cifra decimal.
2.Índice de ácidos grasos
volátiles insolubles (índice de Polenske): Índice de Polenske = 10 . t . V2
V2 = Volumen en mililitros de la solución normalizada (0,1 N) de álcali
utilizada en la valoración de la muestra.
= Normalidad exacta de la solución normalizada (0,1 N) de álcali.
Se debe redondear
el resultado a la primera cifra decimal.
3.Reproducción de los
resultados: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones
duplicadas, obtenidos simultáneamente o inmediatamente
uno detrás de otro por el mismo analista, no debe exceder de 0,5
para el índice de Reichert o de 0,3 para el índice de Polenske.
ácidos grasos volátiles,
índice de Polenske,
índice de Reichert,
Mediante el Real Decreto 227/2014, de 4 de abril, del Ministerio de Hacienda y Administraciones Públicas del Gobierno de España, se aprueba el Estatuto de la Agencia de Información y Control Alimentarios. La Ley 12/2013, de 2 de agosto, de medidas para mejorar el funcionamiento de la cadena alimentaria crea, en su disposición adicional primera, la Agencia de Información y Control Alimentarios, con naturaleza jurídica de organismo autónomo y con los fines de controlar el cumplimiento de las medidas que la citada ley dispone y gestionar los sistemas de información de los mercados oleícolas (aceite de oliva y aceituna de mesa) y lácteos y aquellos otros alimentos que, por su importancia estratégica, determine el Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente porque incidan significativamente en la producción y comercialización agraria y alimentaria.
Por otro lado, resulta necesario adaptar el Real Decreto 401/2012, de 17 de febrero, por el que se desarrolla la estructura orgánica básica del Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente, al objeto de que recoja en el mismo la adscripción de la Agencia de Información y Control Alimentarios a la Secretaría General de Agricultura y Alimentación. En su virtud, a iniciativa del Ministro de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente, a propuesta del Ministro de Hacienda y Administraciones Públicas y previa deliberación del Consejo de Ministros en su reunión del día 4 de abril de 2014, se dispone lo siguiente: Artículo único. Aprobación del Estatuto de la Agencia de Información y Control Alimentarios.
L12/13,
L6/97,
mercado oleícola,
RD1065/88,
RD227/14,
RD401/12
Con respecto a determinados aspectos contemplados en las mencionadas normas de calidad, en concreto, las características organolépticas y algunas características intrínsecas, son parámetros que ya no se utilizan por resultar de poco interés y haber quedado obsoletos y, en cualquier caso, sólo podrían ser exigibles a las leches de consumo elaboradas en España al no estar regulados en la normativa comunitaria. En cuanto a la fecha de caducidad de la leche pasterizada establecida en la correspondiente norma de calidad y no prevista en la normativa comunitaria, se considera procedente su supresión ya que según las nuevas directrices de la Unión Europea, es el propio elaborador del producto el responsable del establecimiento de la fecha de duración mínima que figure en el etiquetado y quién garantice que el producto cumple con los requerimientos tanto sanitarios como de composición durante toda su vida útil. Además, este es un requisito que podría impedir la comercialización de la leche pasterizada con una fecha límite de consumo más amplia, como consecuencia de la aplicación de procedimientos tecnológicos autorizados, pudiendo por tanto constituir un obstáculo para su circulación.
DCEE92/46,
leche pasterizada,
leche UHT,
O11/2/87,
O3/10/83,
O7/10/83,
OPRE/406/06,
RCE2597/97,
RCEE1898/87,
RD1334/99,
RD142/02,
RD1679/94
Mediante el Real Decreto 1054/2003, de 1 de agosto, del Gobierno de España, se aprueba la Norma de calidad para determinados tipos de leche conservada parcial o totalmente deshidratada destinados a la alimentación humana. Las Normas de calidad para la leche evaporada, la leche condensada y la leche en polvo fueron aprobadas por la Orden de 7 de octubre de 1983, por la que se aprueba la norma general de calidad para la leche evaporada destinada al comercio interior; la Orden de 25 de octubre de 1983, por la que se aprueba la norma general de calidad para la leche condensada, destinada al mercado interior, y la Orden de 23 de noviembre de 1984, por la que se aprueba la norma general de calidad para la leche en polvo destinada al consumo para el mercado interior, respectivamente. Dichas órdenes recogían los requisitos establecidos por la Directiva 75/118/CEE del Consejo, de 18 de diciembre de 1975, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros sobre determinados tipos de leche conservada parcial o totalmente deshidratada destinados a la alimentación humana.
Código Alimentario Español,
DCE2001/114,
DCEE75/118,
leches conservadas,
O23/11/84,
O25/10/03,
RD1054/03,
RD72/98
Mediante el Real Decreto 271/2014, de 11 de abril, del Ministerio de la Presidencia del Gobierno de España, se aprueba la Norma de Calidad para el yogur o 'yoghourt'. Dicha norma ha sido modificada parcialmente, principalmente, en lo relativo a los aspectos sobre higiene de los alimentos, mediante el Real Decreto 176/2013, de 8 de marzo, por el que se derogan total o parcialmente determinadas reglamentaciones técnico-sanitarias y normas de calidad referidas a productos alimenticios, donde en el artículo 53, se deroga el subapartado 7.3.7, así como los apartados 8 a 11, excepto el subapartado 1 de este último, y el apartado 13 del Real Decreto 179/2003. Entre otras cuestiones, el citado Real Decreto 176/2013 ha derogado la especificidad del etiquetado de la fecha de caducidad del yogur, así como el límite de venta de veintiocho días desde su fecha de fabricación, exigidos anteriormente en la mencionada norma de calidad para el yogur.
Por otra parte, es preciso adecuar la normativa sobre el yogur a la nueva realidad del mercado, eliminando restricciones que puedan situar a los productores españoles en una situación de desventaja, con el fin de garantizar la competencia leal entre las industrias, mejorar la competitividad del sector y dotar de las mismas condiciones a todos los productores en el marco de la Unión Europea. En consecuencia, se considera necesario aprobar una nueva norma de calidad, eliminando los apartados derogados por el Real Decreto 176/2013, y actualizando su contenido, a fin de facilitar su correcta aplicación, y derogando, por tanto, el Real Decreto 179/2003, de 14 de febrero. En el proceso de elaboración de esta norma han sido consultadas las comunidades autónomas y las entidades representativas de los sectores afectados, habiendo emitido informe favorable la Comisión Interministerial para la Ordenación Alimentaria. La presente disposición ha sido sometida al procedimiento previsto en la Directiva 98/34/CE del Parlamento Europeo y del Consejo, de 22 de junio, por la que se establece un procedimiento de información en materia de las normas y reglamentaciones técnicas, y en el Real Decreto 1337/1999, de 31 de julio, por el que se regula la remisión de información en materia de normas y reglamentaciones técnicas y reglamentos relativos a los servicios de la sociedad de la información, que incorpora esta Directiva al ordenamiento jurídico español.
1.«Yogur» o «yoghourt»: El producto de leche coagulada obtenido por fermentación láctica mediante la acción de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus thermophilus a partir de leche o de leche concentrada, desnatadas o no, o de nata, o de mezcla de dos o mas de dichos productos, con o sin la adición de otros ingredientes lácteos indicados en el apartado 2 del artículo 5, que previamente hayan sufrido un tratamiento térmico u otro tipo de tratamiento, equivalente, al menos, a la pasterización. El conjunto de los microorganismos productores de la fermentación láctica deben ser viables y estar presentes en la parte láctea del producto terminado en cantidad mínima de 10 millones (107) unidades formadoras de colonias por gramo o mililitro de producto.
d) Gelatina, únicamente en los yogures con fruta, zumos y/u otros alimentos y en los aromatizados, con una dosis máxima de 3 g/kg de yogur. Cuando además de la gelatina se utilicen estabilizantes, la cantidad máxima total será de 3 g/kg de producto terminado.
DCE98/34,
norma calidad yogur,
RD1337/99,
RD176/13,
RD179/03,
RD271/14,
D1043/73,
D2481/67,
D2519/74,
FORPPA,
norma calidad queso,
O29/11/85,
Principios y fundamentos metodológicos. El fundamento del método es la obtención
de los ésteres metílicos de los ácidos grasos mediante la reacción con una solución de potasio hidróxido en alcohol metílico y la consiguiente inyección de la disolución de los ésteres metílicos directamente en el cromatógrafo. Este método es aplicable a las grasas de mantequillas u otras que
contengan ácidos grasos de longitud de cadena inferior al C14 y siempre que el contenido en ácidos libres no exceda de 1%
expresados en ácido oleico.
-Matraces con boca
esmerilada y fondo redondo de 50 y 100 ml de capacidad.
-Pipetas aforadas de 1, 2 y
-Matraces aforados de 50 y
100 ml de capacidad.
-Jeringa de características
adecuadas para la inyección de la muestra, graduada en décimas de
ml, con una capacidad total de 1 a 10 ml.
-Cromatógrafo apto para
trabajar en fase gaseosa, provisto de horno capaz de ser calentado
hasta 250-300 ºC y sistema de regulación que permita controlar la
temperatura con un error de ± 1,0 ºC. Equipado con programador de
temperatura capaz de llevar la temperatura del horno de 60 ºC a 180 ºC
a una velocidad de 4 ºC/minuto, y provisto de regulación independiente de
la temperatura del inyector, que podrá ser calentado a una
temperatura superior al menos en 50 ºC a la máxima alcanzable por
el horno provisto de un sistema de detección sensible, de ionización
de llama de hidrógeno, que pueda ser mantenido a la temperatura de
la columna, a unos 50 ºC por encima de la del horno.
-Registrador con una
tensión de entrada adecuada a la salida del amplificador del
cromatógrafo, con una velocidad de respuesta mínima capaz de
producir la deflexión completa de la escala en un segundo; y una
velocidad de desplazamiento del papel de 5mm/min, que permita la
posibilidad de variar esta velocidad, acelerando o retardando el
-Tubo de nitrógeno a
presión, utilizable como gas portador, debiendo tener una riqueza
mínima del 99,8%.
-Tubos de hidrógeno y aire
a presión necesarios para el caso en que se utilice detector de
llama de hidrógeno. El hidrógeno deberá tener una riqueza mínima
del 99,8%, debiendo además estar seco. Como medida de seguridad, es muy
conveniente colocar a la entrada de los gases en el cromatógrafo,
sendos tubos de desecación, provistos de tamiz molecular 13X.
-Columna cromatográfica: 1.Columna que satisfaga
las condiciones que se indican en las observaciones (punto 1).
2.Columna de vidrio con
diámetro interior de 4 mm y una longitud aproximada de 2 mm.
Rellenada con Chromosorb G, W o Q (80-100 mallas), conteniendo de 2,5
a 5% de un poliéster; pudiendo utilizarse cualquiera de los tres siguientes: dietilenglicolsuccinato (DEGS), etilenglicolsuccinato (EGS) o etilenglicoladipato (EGA), y polietilenglicoladipato (PEGA). Antes de emplear una columna
nueva en la resolución de problemas analíticos, debe ser
acondicionada, eliminando todos aquellos productos volátiles que
pertubarían la buena marcha de la cromatografía. Para ello, la columna se monta en
el cromatógrafo, sin conectarla al detector, y se calienta el horno
a unos 10 ºC por encima de la temperatura máxima a que vaya a ser
utilizada dicha columna en trabajos posteriores; haciendo pasar al mismo
tiempo, una corriente de nitrógeno de 30 a 40 ml/minuto, que se
mantiene durante 24 horas como mínimo. La columna será
apta para su utilización si, una vez conectada al detector y en
funcionamiento normal, la línea base dibujada por el registrador
acusa la estabilidad del sistema.
El éter de petróleo n-hexano deben tener un contenido en benceno no superior a 0,1%, además de cumplir el resto de las especificaciones en ambos reactivos. En la preparación de la disolución de potasio hidróxido 2 N en alcohol metílico se disuelven 11,2 g de potasio hidróxido al 85% en lentejas (PA) en 100 ml de alcohol metílico.
Los éteres metílicos deben tener la pureza adecuada para poder ser utilizados como patrones en cromatografía gaseosa. Para ello, se dispondrá de los ésteres metílicos de los ácidos
mencionados a continuación, debiendo tener una pureza mínima de 99%,
determinada por cromatografía gaseosa:
butanoico (butírico).
pentanoico (valeriánico).
hexanoico (caproico).
octanoico (caprílico).
decanoico (cáprico).
dodecanoico (laúrico).
tetradecanoico (mirístico).
hexadecanoico (palmítico).
octadecanoico (esteárico).
9-octadecanoico (oleico).
9,12-octadecadienoico (linoléico).
sicosanoico (aráquico).
La solución de referencia I se prepara en un matraz aforado de 50 ml donde se pesa 1 g de metilo pentanoato, con una exactitud de ±0,1 mg, disolviéndolo en n-heptano (PA), y completando
hasta el volumen de enrase.
La solución de Referencia
II se prepara en un matraz aforado de 100 ml donde se pesan 200 g de metilo pentanoato, con una exactitud de ±0,1
mg, disolviéndolo en n-heptano (PA), y
completando hasta el volumen de enrase.
1.Preparación de los
ésteres metílicos: En un matraz de fondo redondo de
50 ml, pesar 1 g de grasa, con exactitud de ±0,1 mg, añadiendo 10 ml de éter de petróleo 40-60 ºC (PRS) o n-hexano (PA), y agitar suavemente
hasta disolución de la grasa. En el caso de que se quiera
efectuar una determinación cuantitativa de los ácidos butírico y caproico en la muestra, hay que agregar a la disolución en éter de petróleo
de la grasa, 1 ml de la solución de referencia
más adecuada, medida exactamente. En el caso de que las muestras contengan de 1 a 4% de ácido butírico se utilizará la solución de referencia I; en cambio, si contienen menos de 1% de ácido butírico se emplea la solución
de referencia II. Si se desea efectuar solamente un
análisis completo de la fracción de ácidos grasos, para lo que se
aplica el método de normalización interna, no será necesario el
empleo de la solución de referencia. A la solución en éter de petróleo de la muestra, adicionada o no de solución de referencia, se debe agregar 0,5 ml de disolución de potasio hidróxido 2 N, agitando la muestra hasta que se ponga transparente, durante un tiempo aproximado de 20-30 segundos. Casi inmediatamente después de observar la clarificación de la solución suele
apreciarse un ligero enturbiamiento debido a la separación de glicerol, que
se sedimenta rápidamente. Nada más terminada la reacción y observada la sedimentación, hay que tomar la
cantidad necesaria con la jeringa e inyectarla en el cromatógrafo; una
demora en la inyección de los ésteres metílicos daría lugar a la
formación de jabones, con el consiguiente error en la determinación analítica.
2.Determinación
cromatográfica: 2.1.Condiciones de trabajo: -Temperatura de la columna: Temperatura programada de 60 a 160 ºC con una velocidad de 4 ºC/minuto.
-Gas Portador: Nitrógeno (o
helio) con flujo de 60 ml/min.
-Flujo de hidrógeno y aire para
la alimentación del detector: Los flujos dependerán del tipo de
detector utilizado, debiendo determinarse previamente para optimizar
-El registro obtenido del
cromatograma: Debe satisfacer las condiciones establecidas a continuación; en caso contrario, se debe repetir la inyección modificando la
cantidad inyectada o la sensibilidad de trabajo hasta obtener un
cromatograma satisfactorio. Los requisitos exigibles son los
a) El área total descrita en el
registro, referida a la sensibilidad máxima utilizada en el curso de
la operación, debe ser aproximadamente de 2.000 mm2 con una velocidad del papel en el registrador de 5mm/minuto. De esta
forma, los componentes presentes en una cuantía de 0,1% deben dar un
pico, como mínimo de 2 mm2 , siendo, por tanto perfectamente
b) Con el fin de conseguir que
todos los picos caigan dentro del papel registrador, se utilizará,
en cada caso, la atenuación de sensibilidad que sea necesaria, cuidando que el pico de mayor intensidad no sea atenuado más de ocho
veces. Una vez conseguido un registro
satisfactorio, y habiendo alcanzado nuevamente la pluma la línea
base, se interrumpe el funcionamiento del registrador y se retira el
papel con el registro para la identificación de los picos y/o
2.2.Identificación de los
picos. Se seguirán los criterios establecidos en el apartado de observaciones (punto 2).
2.3.Determinaciones
cuantitativas: La determinación cuantitativa se basa en el principio
de que los pesos de cada uno de los componentes separados en la
mezcla son proporcionales a las áreas comprendidas dentro de los
triángulos dibujados debajo de cada pico. El área de cada triángulo
se obtiene trazando rectas tangentes a las líneas dibujadas en el
registro, prolongándolas hasta su intersección con la línea base y
multiplicando la altura del triángulo por la mitad de la base. En el
caso de haber trabajado con atenuaciones diferentes para cada pico,
se referirán todas las medidas a una misma sensibilidad del
registrador, multiplicando la altura por el factor de atenuación correspondiente en cada caso, y el valor de la altura así corregida
por la mitad de la base.
3.Determinación del
contenido de los ácidos butírico y caproico en la materia grasa: Esta determinación se realiza por el método del patrón interno,
siendo el patrón elegido el metilo pentanoato. 3.1.Preparación de la
mezcla de calibración: Con una exactitud de ±0,1 mg y en un matraz
aforado de 50 ml, pesar unos 100 mg de cada uno de los siguientes
patrones: metilo butanoato, metilo pentanoato y metilo caproato. Se
disuelve la mezcla de n-heptano y se diluye completando hasta el volumen de enrase. Inyectar la cantidad necesaria de
la solución anterior, normalmente 0,2-0,4 µl, para que, trabajando a la sensibilidad media del aparato, se
consiga situar los máximos de los picos en una posición del 70-80%
del recorrido total de la pluma del registrador. Los tres picos
deberán registrarse a la misma sensibilidad. Si fuese necesario, se
diluirá la solución anterior con n-heptano en la relación
necesaria para poder ajustarse a las prescripciones fijadas.
Efectuar, cuando menos, tres determinaciones consecutivas, que no
deben discrepar entre sí mas del 1%.
4.Análisis cuantitativo de
la totalidad de los componentes de la fracción de ácidos grasos,
comprendiendo el C4 al C20 y el C18:3
4.1.Preparación de la
mezcla de calibración: Determinar previamente el factor de
corrección para cada ácido componente de la mezcla, referido a uno
cualquiera de ellos que se toma como patrón, eligiéndose normalmente para este fin el ácido palmítico y, debiendo tener la
mezcla de calibración una composición análoga a la de la mezcla
problema. Para ello, si no se conoce
previamente el orden de composición del problema, se realizará una
determinación cromatográfica de orientación, en el
registro se hará la cuantificación de los componentes, con el mismo
factor de respuesta para todos ellos, efectuando un reparto
proporcional entre las áreas medidas. En un matraz aforado de 50 ml,
pesar, con una exactitud de ±0,1 mg, las cantidades de los ésteres
metílicos patrones que se indican a continuación proporcionales a
las cifras de composición encontradas en el análisis de orientación
anteriormente aludido, o previstas con anterioridad para la muestra.
Los patrones que deben pasarse son los siguientes: metilo butanoato,
metilo hexanoato, metilo octanoato, metilo decanoato, metilo
dodecanoato, metilo tetradecanoato, metilo hexadecanoato, metilo
octadecanoato, metilo oleato, metilo linoleato y metilo eicosanato.
Se disuelve la mezcla de n-heptano agregando la cantidad adecuada de
disolvente en relación al peso total de ésteres metílicos que se
hayan pesado; para unos 50 ml de n-heptano (PA). A continuación
inyectar 0,2-0,4µl para que, trabajando a la sensibilidad media del
aparato, se consiga situar el máximo del pico correspondiente al
componente mayoritario, en una posición del 70-80% del recorrido
total de la pluma del registrador. Todos los picos deben registrarse
a la misma sensibilidad, lo cual suele ser perfectamente factible
en la grasa de leche; en aquellos casos en que la relación entre el
pico mayoritario y el pico minoritario no permita registrar este
último con las dimensiones adecuadas para efectuar una
cuantificación correcta de su área, se podrá efectuar el cambio
necesario en la atenuación del registro, procurando que éste no
sobrepase la relación de 4:1. Si fuese necesario, se diluirá la
solución con n-heptano en la relación necesaria para poder
ajustarse a las prescripciones fijadas. Efectuar, cuando menos, tres
determinaciones consecutivas, que no deben discrepar entre sí más
1-Cálculo de los factores
de corrección para los ácidos butírico y caproico: Se determinan
las áreas de los tres picos, siguiendo las normas que se contienen
en el apartado ya descrito en la técnica de cromatografía de gases de esteroles, y se calculan los dos factores correspondientes
al C4 y C6, del modo siguiente:
= x. Ap/ P. Ax
x = factor de corrección del componente ácido x.
Ap = área medida en el registro para el patrón del pentanoato. Ax
= área medida en el registro para el ácido x.
3-Cálculo de los factores de corrección: Una vez determinadas las áreas de todos los picos, siguiendo las normas descritas en el procedimiento analítico, se calcula el factor de corrección de cada ácido, referido al ácido palmítico, como unidad de referencia, empleando la fórmula incluida en este apartado (punto 1), para lo que se sustituye el área Ap y el peso P del compuesto patrón por los valores correspondientes al metilo palmitato. 4-Cálculo de la composición de la fracción de ácidos grasos: Se calcularán las áreas corregidas de cada uno de los componentes de la fracción multiplicando el área medida en el registro por el factor de corrección determinado según lo indicado en el apartado anterior (punto 3). El contenido de cada componente se calcula mediante la siguiente fórmula:
9.6. Observaciones: 1.La puesta a punto de la
columna se determina obteniendo la resolución de dos productos
críticos como son el metilo oleato y el estearato. La resolución
viene determinada por la siguiente expresión:
distancia entre los dos máximos de los picos del oleato y el
= ancho de la base del pico correspondiente al estearato.
Estos valores se determinan sobre
el cromatograma obtenido con una muestra conteniendo cantidades
aproximadamente iguales de metilo estearato y oleato, inyectando una
cantidad tal que la altura de estos picos alcance al 25-50% del ancho
del papel de registro. Si la resolución calculada es igual o mayor
que 1,0 la columna y el instrumento se encuentran en condiciones
satisfactorias. Todas las columnas en el transcurso de su utilización
sufren una pérdida gradual en la resolución de los picos; cuando el
valor llegue a ser inferior a 1,0 deberá instalarse una nueva
2.Para la identificación de
los picos se pueden seguir los dos criterios siguientes:
2.1.Criterio basado en los
tiempos de retención: Refiriéndose exclusivamente a los ácidos que
entran normalmente en la composición de las grasas naturales, sus
ésteres aparecen en el cromatograma en orden creciente de sus átomos
de carbono y a su insaturación. Esto significa que el palmítico (C16)
aparece delante del esteárico (C18), y los ésteres en
C18 aparecen en el orden estearato, oleato, linoleato y
linolenato. El éster del ácido aráquico (C20:0),
usualmente, aparecen antes del linoléico (C18:3),
pero en algunos casos puede ocurrir lo contrario, dependiendo del
tipo de columna y de las condiciones de su utilización, o incluso
superponerse uno al otro. Operando en condiciones
constantes, los tiempos de retención son reproducibles en cada
especie química, siendo el criterio más frecuente empleado para su
identificación. El tiempo de retención viene
dado por la distancia, medida en el cromatograma, entre el máximo
del pico del aire y la posición del máximo de la banda. Trabajando
con detector de llama de hidrógeno, la salida del aire no se
detecta, pudiéndose escoger, en este caso, el momento en que se
inicia la salida del disolvente, acusada por una fuerte deflexión de
la pluma del registrador.
2.2.Criterio basado en los
tiempos de retención relativos: Los tiempos de retención relativos
son más reproducibles. Las retenciones relativas vienen
determinadas por el cociente de dividir el tiempo de retención de
cada pico por el tiempo registrado para el pico del metilo palmitato,
o bien por otro éster que se tome como comparación, determinados
todos ellos según el criterio expuesto en el párrafo anterior.
ácido graso cadena corta,
cromatógrafo,

References: Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 artículo 53
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 Real Decreto 
 artículo 5
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