Source: http://docplayer.pl/3510358-Mikotoksynotworcze-grzyby-fitopatogeniczne-z-rodzaju-fusarium-i-ich-wykrywanie-technikami-pcr.html
Timestamp: 2017-06-22 14:18:43+00:00

Document:
MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY FITOPATOGENICZNE Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR - PDF
MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY FITOPATOGENICZNE Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR
Download "MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY FITOPATOGENICZNE Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR"
1 POST. MIKROBIOL., 2009, 48, 3, MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY FITOPATOGENICZNE Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR Michalina Suchorzyñska*, Anna Misiewicz Instytut Biotechnologii Przemys³u Rolno-Spo ywczego Zak³ad Mikrobiologii, ul. Rakowiecka 36, Warszawa Wp³ynê³o w sierpniu 2009 r. 1.Wprowadzenie. 2. Charakterystyka rodzaju Fusarium Morfologia Charakterystyka wa nych gatunków Fusarium Fusarium culmorum Fusarium graminearum Fusarium poae Choroby powodowane przez Fusarium sp. 3.Mikotoksyny. 4. Mikotoksyny fuzaryjne Bowerycyna, moniliformina, fumonizyny Zearalenon Trichoteceny Trichoteceny z grupy B Trichoteceny z grupy A. 5. Wystêpowanie mikotoksyn fuzaryjnych w Polsce i na œwiecie. 6. Najwa niejsze czynniki œrodowiska zwi¹zane z tworzeniem mikotoksyn. 7. Geny warunkuj¹ce formowanie zearalenonu i trichotecenów Charakterystyka Tri5, Tri7, Tri3 i Tri Charakterystyka PKS4 i PKS Metody molekularne Metody detekcji i identyfikacji oparte na procedurze PCR SCAR RT-PCR Real-Time PCR. 9. Podsumowanie Mycotoxigenic phythopathogenic fungi of Fusarium genus and their identification by PCR techniques Abstract: Fungi belonging to the genus Fusarium are recognized as one of the most dangerous pathogens causing serious plant, human and animal diseases. In addition, they are able to produce very toxic compounds knows as mycotoxins. Mycotoxins have various toxic effects on microorganisms, plants, animals and humans. The most common mycotoxins found in the natural environment are zearalenone and trochothecenes, including deoxynivalenol. These compounds cause disorders and deformations during plant growth. They also cause human and animal diseases connected with digestive, reproductive and immune system. Lots of genes are recognized in the biosynthesis of these mycotoxins. Essential genes in trichothecenes synthesis are Tri5 and Tri7 genes, and in zearalenone synthesis another two genes PKS4 and PKS14. Molecular methods based on PCR allow to evaluation of mycotoxicity of filamentous fungi. The easiest and most frequently used method is SCAR. Other molecular analyses like RT-PCR and Real-Time PCR are very expensive methods but are also very sensitive and less and less labour-intensive and thus are used in this kind of tests as well. 1. Introduction. 2. Characterization of Fusarium genus Morfology Characterization of important Fusarium species Fusarium culmorum Fusarium graminearum Fusarium poae Diseases caused by Fusarium sp. 3. Mycotoxins. 4. Fusarium mycotoxins Beauvericins, moniliformin, fumonisins Zearalenone Trichothecenes Type B trichothecenes Type A trichothecenes. 5. Occurence of fusarium mycotoxins worldwide and in Poland. 6. The most important factors involved in mycotoxins synthesis. 7. Genes involved in the biosynthesis of zearalenone and trichothecenes Characterization of Tri5, Tri7, Tri3 i Tri Characterization of PKS4 and PKS Molecular methods Detection and identification methods based on PCR SCAR RT-PCR Real-Time PCR. 9. Summary S³owa kluczowe: Fusarium sp, mikotoksyny, PCR, trichoteceny, zearalenon Key words: Fusarium sp., mycotoxins, PCR, trichothecenes, zearalenone 1. Wprowadzenie Grzyby z rodzaju Fusarium nale ¹ do najczêœciej izolowanych patogenów upraw rolniczych na œwiecie [28]. S¹ one przyczyn¹ olbrzymich strat gospodarczych, które wynikaj¹ z wysokiej patogennoœci i toksynotwórczoœci, dlatego te uznano je za jedne z najgroÿniejszych grzybów strzêpkowych. Fusaria infekuj¹ uprawy roœlinne o podstawowym znaczeniu gospodarczym dla cz³owieka [15]. Posiadaj¹ tak e zdolnoœæ do syntezy wysoce niebezpiecznych i toksycznych metabolitów, zwanych mikotoksynami [47]. Mikotoksyny tworzone przez Fusaria okreœlono mianem mikotoksyn fuzaryjnych. Uwa a siê, i odegra³y one istotn¹ rolê w historii, pocz¹wszy od œredniowiecznej Europy, przez czasy kolonialne obu Ameryk, a do czasów obecnych. Dodatkowo wysuwano liczne hipotezy, i mikotoksyny produkowane przez Fusaria mog³y byæ przyczyn¹ wyginiêcia Etrusków czy pomoru w Atenach w V w p.n.e. [15, 60]. W œrodowisku naturalnym wykrywa siê obecnoœæ kilku klas mikotoksyn fuzaryjnych: zearalenonu, trichotecenów, fumonizyn, moniliforminy oraz bowerycyny. Wykazuj¹ one dzia³anie toksyczne w stosunku do mikroorganizmów, roœlin, a tak e ludzi i zwierz¹t [57]. Zwi¹zki te wytwarzane s¹ przewa nie przez: F. culmorum, F. graminearum, F. nivale, F. avenaceum, F. sporotrichioides, F. poae, F. oxysporum, F. verticillioides [49, 52, 58]. Na terenie Polski dominuj¹ F. culmorum, F. graminearum [3, 38]. Problemy wynikaj¹ce z patogennoœci i zdolnoœci do syntezy mikotoksyn przez grzyby z rodzaju Fusarium * Autor korespondencyjny: Instytut Biotechnologii Przemys³u Rolno-Spo ywczego, Zak³ad Mikrobiologii, ul. Rakowiecka 36, Warszawa; (022) , (022) ;2 222 MICHALINA SUCHORZYÑSKA, ANNA MISIEWICZ s¹ jednym z wa niejszych zagadnieñ rolnictwa zarówno w krajach ubogich jak i bogatych. O randze tego problemu mo e œwiadczyæ fakt, i w 2006 r. Unia Europejska wprowadzi³a ujednolicone normy dla zawartoœci mikotoksyn, które najczêœciej wystêpuj¹ w produktach pochodzenia zbo owego. Ponadto coraz wiêksze znaczenie przywi¹zuje siê do metod maj¹cych zapobiegaæ zaka eniom p³odów rolnych przed zbiorem [38, 57]. Ogromne znaczenie maj¹ techniki pozwalaj¹ce na wczesne wykrycie obecnoœci patogena i okreœlenie jego zdolnoœci do tworzenia mikotoksyn. S¹ to decyduj¹ce i obecnie podstawowe elementy profilaktyki ochrony przed zanieczyszczeniem toksynami upraw rolniczych oraz uzyskiwanych z nich produktów spo ywczych i paszowych [28]. W celu unikniêcia strat upraw spowodowanych tworzeniem przez patogeny mikotoksyn wykorzystuje siê ró ne metody biologii molekularnej. Metody te umo liwiaj¹ szybkie zastosowanie œrodków zaradczych i unikanie ska onej ywnoœci [3, 28]. 2. Charakterystyka rodzaju Fusarium 2.1. Morfologia Rodzaj Fusarium zosta³ utworzony w roku 1809 przez Link a na podstawie charakterystycznych cech tj. obecnoœæ kajakowato- lub bananowato-kszta³tnych zarodników konidialnych [43]. Zgodnie z najnowsz¹ systematyk¹ [43] grzyby z rodzaju Fusarium zosta³y zaliczone do: Gromady: Eumycota Grzyby w³aœciwe Podgromady: Fungi imperfecti Grzyby niedoskona³e Klasy: Hyphomycetes Strzêpczaki Rzêdu: Moniliades Moniliowce Rodziny: Tuberculariaceae Gruze³kowate Grzyby z rodzaju Fusarium s¹ szeroko rozpowszechnione w glebie, szczególnie zasiedlaj¹ yzne, urodzajne gleby, zaœ stosunkowo rzadko leœne [33]. Mog¹ rozwijaæ siê równie na ró nych czêœciach roœlin, resztkach roœlinnych i innych zwi¹zkach organicznych [12]. Fusaria tworz¹ zarodniki bezp³ciowe zwane konidiami. Wyró nia siê trzy typy zarodników: makrokonidia, mikrokonidia oraz chlamydospory [43]. Przy pomocy tych zarodników nastêpuje rozprzestrzenianie siê grzybów z wiatrem czy deszczem w œrodowisku naturalnym. Makrokonidia s¹ wielokomórkowe zaokr¹glone lub wyd³u one. Najczêœciej przyjmuj¹ kszta³t sierpowaty, prosty lub grzbietowo-brzuszny. Wielkoœæ makrokonidiów jest stosunkowo sta³a dla danego gatunku, dlatego wykorzystuje siê je do okreœlania przynale noœci do danego gatunku Fusarium sp. Drugim typem zarodników s¹ mikrokonidia, wytwarzane na pojedynczych fialidach, w rzekomych g³ówkach czy ³añcuszkach. Przybieraj¹ kszta³t owalny, eliptyczny lub maczugowaty. Obecnoœæ lub brak mikrokonidiów jest cech¹ diagnostyczn¹ za pomoc¹ której mo na okreœliæ dany izolat do gatunku. Trzecim rodzajem zarodników s¹ chlamydospory. Podobnie jak w przypadku mikrokonidiów ich tworzenie przez izolaty Fusarium sp. jest wa n¹ cech¹ w identyfikacji gatunkowej. Zarodniki te mog¹ wystêpowaæ pojedynczo, w parach lub skupieniach [43, 56] Charakterystyka wa nych gatunków Fusarium Fusarium culmorum Fusarium culmorum nale y do sekcji Discolor. Powszechnie wystêpuje w klimacie umiarkowanym, dominuje w rejonach ch³odniejszych tj. Pó³nocna, Zachodnia Europa. Izolowany jest ze wszystkich czêœci roœlin rolniczych tj. pszenicy, jêczmienia, yta, owsa, kukurydzy, pomidorów. Toleruje zmiany temperatury oraz mo e rozwijaæ siê w warunkach ma³ego potencja³u wodnego. Syntetyzuje zearalenon oraz mikotoksyny z grupy trichotecenów w tym deoksyniwalenol, niwalenol [3, 43]. Fusarium culmorum nie tworzy stadium doskona³ego. Wytwarza krótkie, grube, z mocno wygiêt¹ czêœci¹ grzbietow¹ makrokonidia. Makrokonidia przedzielone s¹ zazwyczaj 3-ma lub 4-ma przegrodami. F. culmorum nie produkuje mikrokonidiów. Chlamydospory mog¹ wystêpowaæ pojedynczo, w ³añcuszkach i skupieniach [43, 69]. Z filogenetycznego punktu widzenia jest podobny do F. graminearum oraz do F. crookwellense Fusarium graminearum Fusarium graminearum jest kolejnym wa nym fitopatogenem. Podobnie jak F. culmorum nale y do sekcji Discolor. Gatunek ten dominuje na obszarach o klimacie cieplejszym jak œródziemnomorski (Europa Po³udniowa) czy zwrotnikowy pora aj¹c g³ównie zbo- a drobnoziarniste oraz kukurydzê [3]. Wytwarza dwa typy konidiów. Cienkie, d³ugie makrokonidia, o kszta³cie sierpowatym i prostym, sk³adaj¹ce siê z 5-ciu do 6-ciu przegród. Drugim typem zarodników s¹ okr¹g³e chlamydospory wystêpuj¹ce w grzybni pojedynczo, w skupieniach oraz ³añcuszkach. Izolaty Fusarium graminearum przypominaj¹ wygl¹dem F. culmorum, F. crookwellense oraz F. pseudograminearum. Patogen ten jest zdolny do tworzenia m.in. zearalenonu, fuzaryny C oraz metabolitów z grupy trichotecenów [43] Fusarium poae Fusarium poae jest patogenem zaliczonym do sekcji Sporotrichiella, izolowanym przewa nie w klimacie umiarkowanym. Jest on czynnikiem chorobotwórczym owsa, a tak e jêczmienia, pszenicy czy yta [36]. Krótkie, sierpowate przedzielone 3-ma przegrodami3 MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR 223 makrokonidia oraz chlamydospory tworzone s¹ bardzo rzadko. Wytwarza on g³ównie okr¹g³e, nie przedzielone przegrodami mikrokonidia na monofialidach. F. poae pora aj¹c wiechy i k³osy zbó posiada zdolnoœæ tworzenia fuzaryny X, oraz trichotecenów (niwalenolu, fuzaryny X, diacetoksyscirpenolu, T-2 toksyny) [36, 43] Choroby powodowane przez Fusarium sp. Stosowane w nowoczesnym rolnictwie uprawy monokultur bez tradycyjnego p³odozmianu, oszczêdnoœciowe systemy uprawy (minimum tillage system) oraz jednostopniowy zbiór plonów skutkuje wzrostem pora enia upraw rolniczych przez patogeny [38]. Grzyby z rodzaju Fusarium infekuj¹ wiele upraw roœlinnych, w tym zbo a drobnoziarniste (pszenica, pszen yto, yto, jêczmieñ), a tak e kukurydzê, ziemniaki oraz wiele innych roœlin wa nych dla cz³owieka [15, 40, 43]. Roœliny s¹ pora ane w ró nych fazach rozwojowych, powoduj¹c choroby przed- i powschodowe, tj. fuzaryjna zgorzel podstawy ŸdŸb³a i korzeni, zamieranie ziarna, zgorzel siewek, fuzariozy k³osów i wiech owsa, choroby podsuszkowe czy fuzariozê k³osów pszenicy (ang. scab, FHB) [15, 36, 46, 58]. Pora one uprawy cechuj¹ siê obni on¹ wartoœci¹ konsumpcyjn¹ i handlow¹. Dodatkowo uzyskiwane plony s¹ zanieczyszczone niebezpiecznymi dla ludzi i zwierz¹t mikotoksynami [15, 58, 61]. Niektóre z tych mikotoksyn jak deoksyniwalenol wywieraj¹ dzia³anie fitotoksyczne, przejawiaj¹ce siê wzmo on¹ patogennoœci¹ grzybów [66]. 3. Mikotoksyny Mikotoksyny s¹ wtórnymi metabolitami wytwarzanymi g³ównie przez grzyby z rodzaju Aspergillus, Penicillium i Fusarium. Choroby powodowane przez grzyby tworz¹ce mikotoksyny to mikotoksykozy, zaœ nauka zajmuj¹ca siê ich badaniem nosi nazwê mikotoksykologii [6]. Mikotoksyny mog¹ byæ produkowane przez grzyby zarówno w czasie wzrostu roœlin, ale tak e podczas ich przechowywania, transportu i przetwarzania. Ww. zwi¹zki mog¹ wykazywaæ dzia³anie fitotoksyczne, zootoksyczne. Poza tym s¹ szkodliwe dla innych mikroorganizmów [57]. Metabolity te wykazuj¹ ró ne dzia³anie toksyczne tj. cytotoksyczne, genotoksyczne, neurotoksyczne, hepatoksyczne czy immunosupresyjne. Wynika to z budowy strukturalnej tych zwi¹zków, które mog¹ sk³adaæ siê od prostych pierœcieni heterocyklicznych, po nieregularne 6 lub 8 cz³onowe pierœcienie [18, 57]. Zwi¹zki te mog¹ wchodziæ w sposób poœredni i bezpoœredni do ³añcucha pokarmowego ludzi i zwierz¹t: poœrednio przez spo ywanie miêsa i mleka zwierz¹t skarmianych ska onymi produktami lub bezpoœrednio spo ywaj¹c produkty roœlinne pora one przez Fusaria czy inne grzyby strzêpkowe [24]. Obecnie do mikotoksyn zaliczono oko³o 400 zwi¹zków. Pod wzglêdem ekonomicznym i toksykologicznym w skali œwiatowej istotne znaczenie ma 5 klas mikotoksyn: aflatoksyny, ochratoksyny, zearalenon, fumonizyny i trichoteceny [57, 67]. Aflatoksyny i ochratoksyny s¹ wytwarzane g³ównie przez gatunki grzybów z rodzaju Aspergllus i Penicillium. Grzyby te rozwijaj¹ siê w czasie z³ego przechowywania produktów zbo owych. Pozosta³e klasy mikotoksyn s¹ produkowane przez patogenne gatunki Fusarium sp. [18, 24, 57]. Mikotoksyny tworzone przez Fusaria okreœlono mianem mikotoksyn fuzaryjnych [15, 60]. 4. Mikotoksyny fuzaryjne Grzyby z rodzaju Fusarium ze wzglêdu na patogennoœæ oraz wysok¹ toksycznoœæ stwarzaj¹ powa ne problemy w nowoczesnym rolnictwie. Wœród wszystkich gatunków Fusarium produkuj¹cych mikotoksyny do najbardziej mikotoksynotwórczych gatunków na œwiecie zaliczono: F. culmorum i F. graminearum. Fusarium culmorum jest patogenem dominuj¹cym w regionach ch³odniejszych np. w Europie Pó³nocnej, zaœ F. graminearum w rejonach cieplejszych [24, 52, 58]. Wa ne znaczenie maj¹ równie : F. sporotrichioides, F. poae, F. verticillioides, F. oxysporum i F.sambucinum [49]. Fusaria s¹ w stanie wytwarzaæ kilka mikotoskyn: moniliforminê, bowerycynê, fumonizynê, zearalenon oraz trichoteceny [23, 49]. Mikotoksyny fuzaryjne wykazuj¹ silne, zró nicowane dzia³anie toksyczne. Wystêpowanie ró nych gatunków grzybów z rodzaju Fusarium jest du ym problemem w rolnictwie. Wynika to z pora ania roœlin oraz negatywnego wp³ywu mikotoksyn na ich rozwój. Negatywny wp³yw na roœliny przejawia siê zamieraniem komórek, chlorozami, zahamowaniem wzrostu roœlin, kie³kowania nasion, zamieraniem ziarna. Mikotoksyny s¹ czynnikami wywo³uj¹cymi zaburzenia w procesach mitozy i metabolizmie bia³kowym u roœlin. Wytwarzanie mikotoksyn w strefie korzeniowej roœlin uwa ane jest za g³ówn¹ przyczynê zmian w pobieraniu i rozmieszczaniu sk³adników pokarmowych w roœlinie m.in. na skutek zahamowania rozwoju korzeni i w³oœników. Mo e równie wp³ywaæ niekorzystnie na proces mikoryzy [9]. Zwi¹zki te kumuluj¹ siê w zainfekowanych komórkach roœlinnych i w ten sposób mog¹ tak e dostawaæ siê do ³añcucha pokarmowego ludzi i zwierz¹t [57, 67]. Mog¹ wówczas byæ przyczyn¹ powa nych chorób, jak hyperestrogenizm, rozmiêkania leukodystroficznego upoœledzeñ w¹troby, nerek, a tak e nowotworów4 224 MICHALINA SUCHORZYÑSKA, ANNA MISIEWICZ (prze³yku, w¹troby) [3, 57]. W dodatku produkty zbo- owe s¹ coraz czêœciej wykorzystywane w przemyœle farmaceutycznym oraz kosmetycznym [36]. Ze wzglêdu na powszechnoœæ wystêpowania w œrodowisku naturalnym, wynikaj¹ce z tego niebezpieczeñstwo dla ludzi i zwierz¹t oraz straty gospodarcze za najwa niejsze mikotoksyny fuzaryjne uznano trichoteceny oraz zearalenon [49] Bowerycyna, moniliformina, fumonizyny Bowerycyna (BEA) zosta³a odkryta jako naturalne zanieczyszczenie kukurydzy we W³oszech, Austrii, Polsce oraz Afryce Po³udniowej Jest syntetyzowana przez F. avenaceum, F. proliferatum, F. subglutinans, F. semitectum [44]. Ten cykliczny heksapipeptyd wykazuje specyficzn¹ aktywnoœæ inhibicji acetylotransferazy cholesterolu. Mo e powodowaæ apoptozê komórek i fragmentacjê DNA. BEA posiada aktywnoœæ owadobójcz¹ i jest wysoce toksyczna dla larw Artemia salina [59]. Moniliformina (MON) jest wytwarzana przez F. verticilloides, F. proliferatum, F. subglutinas i F. oxysporum [65]. Moniliformina jest silnie kardiotoksyczn¹ mikotoksyn¹, D³ugotrwa³e spo ywanie produktów zanieczyszczonych t¹ toksyn¹ jest czynnikiem powoduj¹cym wady serca [24, 55]. Fumonizyny produkowane s¹ przez F. verticillioides, F. proliferatum, F. nygamai, F. napiforme. Zosta³y podzielone na trzy grupy A, B, C, na podstawie ró nic w strukturze chemicznej. Do najwa niejszych fumonizyn nale y fumonizyna B1, fumonizyna B2 i fumonizyna B3 [39, 50]. Fumonizyny stanowi¹ powszechne zanieczyszczenie produktów konsumpcyjnych i pasz otrzymywanych z kukurydzy, w takich regionach jak Chiny, Europa, Afryka Po³udniowa i Ameryka Pó³nocna. Dzia³anie tych mikotoksyn zosta³o skorelowane z metabolizmem sfingolipidów zaanga owanych w regulacje cyklu komórkowego w komórkach roœlinnych, ró nicowaniem i zamieraniem komórek, indukowaniem stresu oksydacyjnego [16, 57, 60, 67] Zearalenon Zearalenon (ZEA) tworzony jest g³ównie przez F. culmorum i F. graminearum. Sklasyfikowano go jako niesterydowy estrogen lub mikoestrogen, zwany czasami fitoestrogenem. Zredukowana forma zearalenonu, zwana zearalenolem wykazuje zwiêkszon¹ aktywnoœæ estrogeniczn¹ Obecnoœæ mikotoksyny w roœlinach powoduje zmiany w ró nicowaniu kalusa pszenicy oraz rozwoju generatywnym roœlin. U zwierz¹t, które by³y karmione zanieczyszczon¹ pasz¹ mo e skutkowaæ uszkodzeniami organów rozrodczych oraz zak³óceniami reprodukcyjnymi [6, 24, 51, 57] Trichoteceny Trichoteceny stanowi¹ rodzinê pochodnych ponad 60 seskwiterpenoidów, które s¹ wytwarzane przez liczne rodzaje grzybów tj. Fusarium, Myrothecium czy Trichoderma [6]. Trichoteceny zosta³y podzielone pod wzglêdem budowy na 4 grupy: A, B oraz C i D. W œrodowisku powszechnie wystêpuj¹ trichoteceny nale- ¹ce do grupy A (T-2 toksyna, HT-2 toksyna oraz diacetoksyscirpenol i neosolaniol) oraz B (deoksyniwalenol oraz jego pochodne, niwalenol i fuzaryna X) [20, 57]. Trichoteceny z grupy B posiadaj¹ grupê funkcyjn¹, ketonow¹ w pozycji wêgla C-8, natomiast zwi¹zki z grupy A posiadaj¹ w tym miejscu inn¹ grupê tlenow¹ [24]. Ze wzglêdu na czêstotliwoœæ wystêpowania w produktach pochodzenia roœlinnego przeznaczonych na cele spo ywcze i paszowe uwa a siê, i trichoteceny z grupy B wywieraj¹ wiêkszy wp³yw na cz³owieka i œrodowisko. Zaœ w tej grupie do najwa niejszych mikotoksyn zalicza siê deoksyniwalenol (DON, womitoksyna) i jego pochodne (3AcDON i 15AcDON) oraz niwalenol (NIV) [3, 6, 38] Trichoteceny z grupy B Deoksyniwalenol oraz niwalenol produkowane s¹ g³ównie przez F. culmorum, F. graminearum, a tak e przez F. poae [24]. Z przeprowadzonych badañ wynika, i niwalenol wykazuje a o 14 razy wiêksz¹ toksycznoœæ w stosunku do deoksyniwalenolu. Jednak- e niwalenol jest mniej toksyczny od trichotecenów z grupy A [68]. Dzia³anie fitotoksyczne DON-u i NIV-u oraz ich pochodnych przejawia siê hamowaniem kie³kowania nasion, hamowaniem wzrostu korzeni i pêdów, redukcjê œwie ej masy organów roœlinnych, wiêdniêciami, chlorozami i nekrozami. Spo ywanie zaka onej ywnoœci przez zwierzêta i ludzi prowadzi do zaburzeñ: uk³adu pokarmowego, rozrodczego czy immunologicznego. Poza tym zwi¹zki te powoduj¹ istotne zmiany na poziomie komórkowym, obni aj¹c aktywnoœæ bia³ek i enzymów oraz hamuj¹c ich syntezê. Powoduj¹ zaburzenia w przepuszczalnoœci b³on komórkowych. Mikotoksyny te ingeruj¹ w fazy inicjacji, elongacji i terminacji, przyczyniaj¹ siê te do indukcji aberracji chromosomowych, zaburzeñ mitozy, a tak e apoptoz i nekroz [6, 9, 23, 24, 49, 57, 67, 71] Trichoteceny z grupy A Zwi¹zki te s¹ wytwarzane przez F. poae oraz F. sporotrichioides. T-2 toksyna i diacetoksyscirpenol (DAS) wykazuj¹ dzia³anie cytotoksyczne, immunosupresyjne [24].5 MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR Wystêpowanie mikotoksyn fuzaryjnych w Polsce i na œwiecie Uprawy roœlinne w tym uprawy zbó drobnoziarnistych mog¹ byæ infekowane przez wiele gatunków Fusarium. Istotne znaczenie ma to na terenach, gdzie z jednej strony panuj¹ warunki klimatyczne dogodne dla wzrostu ró nych gatunków Fusarium, z drugiej zaœ zmienne warunki klimatyczne przyczyniaj¹ce siê do rozwoju ró nych gatunków Fusarium w ka dym roku uprawy. Do najczêœciej wystêpuj¹cych Fusarium na œwiecie nale ¹ F. culmorum oraz F. graminearum [38, 49]. Fusarium culmorum przewa a w regionach o klimacie umiarkowanym, np. morskim, charakteryzuj¹cym siê œrednimi temperaturami w ci¹gu lata (Niemcy, Holandia, Skandynawia, Polska). Fusarium graminearum dominuje na obszarach o klimacie cieplejszym, gdzie odnotowywane s¹ wysokie temperatury w okresie letnim (Ameryka Pó³nocna), œródziemnomorskim (Europa Po³udniowa) i zwrotnikowym (Chiny) [3]. Grzyby te zdolne s¹ do syntezy najwa niejszych mikotoksyn: deoksyniwalenolu i jego pochodnych (15-AcDON, 3-AcDON) oraz niwalenolu. Patogeny wytwarzaj¹ce 3-AcDON s¹ bardziej pospolite w Europie i Azji, natomiast tworz¹ce 15-AcDON w Ameryce Pó³nocnej i Po³udniowej. Na pocz¹tku XXI wieku wyizolowano w Kanadzie Fusaria zdolne do syntezy zarówno 3- i 15-AcDON. Deoksyniwalenol (DON) jest najczêœciej wykrywany na pszenicy, jêczmieniu, kukurydzy i owsie, zaœ rzadziej w ycie i ry u. Niwalenol (NIV) jest powszechnie syntetyzowany przez izolaty grzybów rozwijaj¹cych siê w Japonii, rzadko wykrywany w Ameryce Pó³nocnej i Po³udniowej [42, 57]. Na terenie Polski wystêpuj¹ grzyby produkuj¹ce wszystkie rodzaje mikotoksyn fuzaryjnych. Stê enie tych mikotoksyn jest jednak znacznie ni sze w produktach zbo owych ni w krajach Europy Zachodniej i Pó³nocnej. Fusaria tworz¹ce DON oraz NIV izolowane s¹ g³ównie na pszenicy, pszen ycie, ycie i kukurydzy. Wysokie stê enie moniliforminy wykryto na pszenicy, pszen ycie oraz owsie, a fumonizyn na kukurydzy [3, 38]. 6. Najwa niejsze czynniki œrodowiska zwi¹zane z tworzeniem mikotoksyn Mikotoksyny mog¹ byæ wytwarzane przez grzyby zarówno w czasie przed- i po niwnym, podczas przechowywania, transportu i przetwarzania. Tworzenie tych zwi¹zków powi¹zane jest ze stresem roœlin, nadmiernym uwodnieniem magazynowanych produktów. Niew³aœciw¹ praktyk¹ przechowywania i nisk¹ jakoœci¹ produktów zbo owych [17]. Grzyby produkuj¹ce mikotoksyny rozwijaj¹ siê w temperaturze o zakresie C, przy ph 4 8, na suchej powierzchni [41] lub na produktach zbo owych o wilgotnoœci 12 13%. Udowodniono, i optymalne warunki dla wzrostu grzybów nie musz¹ byæ najlepszymi dla syntezy mikotoksyn [34]. Zwi¹zki te mog¹ byæ tworzone w trudnych warunkach dla wzrostu grzyba. Dowiedziono i, stosowanie œrodków grzybobójczych nie wp³ywa hamuj¹co na wytwarzanie mikotoksyn, a mo e powodowaæ efekt odwrotny. Pod wp³ywem fungicydów grzyby mog¹ byæ poddane nadmiernemu szokowi, co skutkuje zwiêkszon¹ produkcj¹ mikotoksyn [10, 27]. 7. Geny warunkuj¹ce formowanie zearalenonu i trichotecenów Przeprowadzone badania biochemiczne i genetyczne nad gatunkiem Fusarium sporotrichioides umo liwi³y zidentyfikowanie wielu genów zaanga owanych w biosyntezê mikotoksyn [70]. Powi¹zano syntezê trichotecenów z kompleksem szlaków który rozpoczyna siê od zwi¹zku, zwanego trichodienem i zawiera du ¹ liczbê reakcji chemicznych tj. utlenienie, cyklizacje czy estryfikacje [21]. Wiele genów zwi¹zanych z produkcjê trichotecenów zosta³o zidentyfikowanych wewn¹trz 26-kpz segmentu DNA [11]. Wyró niono 16 genów bior¹cych udzia³ w syntezie trichotecenów, wiêkszoœæ z nich tworzy zgrupowanie genów okreœlonych mianem zbioru Tri. Znajduj¹ siê w nim geny wykazuj¹ce szczególny wp³yw na formowanie trichotecenów. S¹ to Tri5, Tri7, Tri13 oraz Tri3 [1, 2]. Poza zbiorem genów Tri znajduj¹ siê tam 4 inne geny wp³ywaj¹ce na syntezê trichotecenów [24, 49]. Na prze³omie ostatnich kilku lat zauwa ono silne oddzia³ywanie zearalenonu na œrodowisko [36]. Dlatego rozpoczêto doœwiadczenia z wykorzystaniem ró nych metod molekularnych na detekcjê genów bior¹cych udzia³ w formowaniu zearalenonu [26, 45]. Zearalenon powstaje w szlaku octanowo-polimalonianowym [22]. Wykazano, i w jego syntezie bierze udzia³ wiele genów, które koduj¹ enzymy okreœlane mianem syntaz poliketydowych (PKSs) [8]. Geny te zosta³y zaliczone do typu I syntaz poliketydowych (PKSs). Dzieli siê je na redukuj¹ce PKS i nie-redukuj¹ce geny PKS wœród których najwa niejsze to PKS4 i PKS Charakterystyka Tri5, Tri7, Tri3 i Tri13 Gen Tri5 koduje enzym syntazê trichodienu, katalizuj¹cy cyklizacjê i izomeryzacjê fosforanu furanylu do trichodienu. Jest on pierwszym genem bior¹cym6 226 MICHALINA SUCHORZYÑSKA, ANNA MISIEWICZ udzia³ w biosyntezie trichotecenów. Je eli gen Tri5 jest nieobecny w genomie wówczas grzyby nie s¹ zdolne do syntezy trichotecenów [24]. Geny Tri7 i Tri13 kontroluj¹ typ powstaj¹cej mikotoksyny [69]. Z badañ L e e i in. oraz B r o w n a i in. wynika, i gen Tri7 powoduje acetylacjê niwalenolu i jego przemianê do 4-acetyloniwalenolu (4-ANIV) [11, 42]. Przeprowadzone eksperymenty wykaza³y, i grzyby posiadaj¹ce niefunkcjonalny gen Tri7 nie s¹ zdolne do syntetyzowania NIV, ani jej pochodnej 4-ANIV [32]. Gen Tri13 powoduje konwersjê DON w NIV. Jeœli nast¹pi¹ zaburzenia ekspresji tego genu grzyby nie s¹ zdolne do syntezy niwalenolu [11, 42], natomiast tworz¹ deoksyniwalenol [14]. Gen Tri3 odpowiada za tworzenie pochodnych deoksyniwalenolu, powoduj¹c jego acetylacjê w pozycji 3 lub 15 [62] Charakterystyka PKS4 i PKS13 Stwierdzono istnienie korelacji pomiêdzy syntez¹ zearalenonu, a aktywnoœci¹ jednego genu, oznaczonego jako PKS4. Uwa a siê, i obecnoœæ genu PKS4, œwiadczy o potencjalnej zdolnoœci do syntezy zearalenonu przez izolaty Fusarium sp. PKS4 koduje enzym, który stymuluje ekspresjê innego genu PKS13 niezbêdnego w syntezie zearalenonu. Bia³ko kodowane przez gen PKS13, bierze udzia³ w koñcowym etapie formowania zearalenonu. Powoduje przy³¹czenie jednostki wêglowej do koñcowego zwi¹zku poœredniego [26, 45]. 8. Metody molekularne Ogromne znaczenie maj¹ techniki pozwalaj¹ce na wczesne wykrycie obecnoœci patogenu i okreœlenie jego zdolnoœci do tworzenia mikotoksyn. S¹ to decyduj¹ce i obecnie podstawowe elementy profilaktyki ochrony przed zanieczyszczeniem toksynami produktów spo- ywczych i paszowych [28]. W celu unikniêcia strat upraw spowodowanych wystêpowaniem patogenów wykorzystuje siê ró ne metody biologii molekularnej. Metody te umo liwiaj¹ szybkie zastosowanie œrodków zaradczych i unikanie ska onej ywnoœci [3, 28, 29, 30]. Opieraj¹ siê one na analizie struktury DNA, a wyniki z analiz molekularnych nie zale ¹ od stanu fizjologicznego badanego organizmu Metody te pozwalaj¹ na ³atwiejsz¹ oraz szybsz¹ ocenê mikotoksynotwórczoœci w porównaniu do tradycyjnych metod [3, 53] Metody detekcji i identyfikacji oparte na procedurze PCR Opracowanie w 1974 r. przez K a r y M u l l i s a techniki s³u ¹cej do specyficznego powielania sekwencji okreœlonych odcinków DNA, sta³o siê pocz¹tkiem rozwoju du ej liczby badañ w patologii roœlin [19]. Metoda reakcji ³añcuchowej polimerazy PCR znalaz³a wiele zastosowañ m.in. w klasyfikacji izolatów grzybów, badañ interakcji gospodarz-patogen. Szczególny rozwój tej techniki nast¹pi³ po 1988 r., kiedy wykorzystano po raz pierwszy enzym polimerazê z bakterii Thermus aquaticus (Taq),wykazuj¹c¹ stabilnoœæ w wysokich temperaturach [31]. Wœród licznych metod molekularnych s³u ¹cych do wykrywania, identyfikacji i klasyfikacji patogenów s¹ stosowane s¹ obecnie techniki tj. SCAR, RT-PCR, Real-time PCR SCAR Metoda SCAR (specyficzny PCR) polega na powielaniu za pomoc¹ pary starterów œciœle zdefiniowanego obszaru genomu [5]. Startery, które s¹ wykorzystywane w tej technice mog¹ byæ uzyskane z badañ metod¹ RAPD, a ich d³ugoœæ wynosi nukleotydów [28]. Analiza SCAR jest metod¹ bardzo przydatn¹ w identyfikacji, wykrywaniu i charakteryzowaniu patogenicznych grzybów z rodzaju Fusarium. Stosowana jest jako analiza porównawcza genomów organizmów, do ustalania lub weryfikowania przynale noœci gatunkowej badanych izolatów [28]. SCAR jest wykorzystywany do wykrywania okreœlonych genów w populacjach grzybów. Ma to szczególne znaczenie w kontekœcie w³aœciwoœci patogenów tj. ró norodna patogenicznoœæ oraz zdolnoœci do syntezy mikotoksyn. Za pomoc¹ starterów zaprojektowanych na podstawie fragmentów genów odpowiedzialnych za formowanie wielu mikotoksyn w tym, trichotecenów mo na dokonaæ rozró nienia izolatów zdolnych do syntezy tych zwi¹zków. W takich badaniach wykorzystuje siê startery ulokowane m.in. na genach Tri5, Tri7 [14, 32, 30]. Na podstawie sekwencji genów PKS4 i PKS13 mo na okreœliæ potencjaln¹ zdolnoœæ grzybów do syntezy zearalenonu [45]. Przyk³adowe pary starterów pozwalaj¹ce na analizê genów bior¹cych udzia³ w syntezie trichotecenów i zearalenonu zamieszczono w tabeli I RT-PCR RT-PCR (Reverse-transcription PCR) jest metod¹ wykorzystuj¹c¹ enzym odwrotn¹ transkryptazê do przemiany RNA w cdna przez amplifikacjê PCR. Analiza RT-PCR umo liwia zbadanie aktywnoœci genu i stanowi wa ny krok do zrozumienia jego funkcji, dzia³ania i aktywnoœci [4, 48]. Technika RT-PCR pozwala badaczom w jasny sposób stwierdziæ, czy dany grzyb wykazuje aktywnoœæ produkcji mikotoksyn. Okreœlenie jej jest mo liwe przez detekcjê (mrna) dla transkryptu genów zaanga owanych w formowanie metabolitów wtórnych. Jeœli geny biosyntezy mikotoksyn ulegaj¹ transkrypcji wówczas dany metabolit jest wytwarzany [24].7 MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR 227 Tabela I Wybrane startery wykorzystywane w technice SCAR do detekcji genów Tri5, Tri7 oraz PKS4 i PKS13 Gen Piœmiennictwo Para starterów Sekwencja starterów Wielkoœæ produktu Tri5 [25] HA TriF HA TriR 5 -CAGATGGAGAACTGGATGGT-3 5 -GCACAAGTGCCACGTGAC-3 260pz Tri7 [14] M_Tri7F M_Tri7R 5 -TGGATGAATGACTTGAGTTGACA-3 5 -AAAGCCTTCATTCACAGCC-3 483pz PKS4 [45] PKS4 F PKS4R 5 -AGATGGCCATGGTGCTTCGTGAT-3 5 -GTGGGCTTCGCTAGACCGTGAGTT pz PKS13 [45] PKS13F PKS13R 5 -AGCCGGGAAAGCCATACCATACAT-3 5 -GCTTGCAATCTCGATCGCCATAAT-3 400pz Analiza RT-PCR zosta³a szeroko wykorzystana w genetyce grzybów do kontroli ekspresji specyficznych genów pod dzia³aniem ró nych warunków fizjologicznych [4]. RT-PCR zosta³ tak e u yty do monitorowania ekspesji genów mikotoksyn powi¹zanych z syntez¹ trichotecenów [37] oraz zearalenonu [45]. W tabeli II zamieszczono przyk³adowo stosowane startery w metodzie RT-PCR Real-Time PCR Real-Time PCR jest technik¹, która w czasie przeprowadzania analizy umo liwia mierzenie powstaj¹cych produktów automatycznie po ka dym cyklu reakcji w zamkniêtych probówkach za pomoc¹ specjalnych sond DNA [4, 24, 64]. Bezpoœredni pomiar gromadzonego produktu pozwala na kontrolê faz w czasie trwania reakcji. Pocz¹tkowa iloœæ badanego DNA w analizie mo e byæ powi¹zana z liczb¹ cykli, w której obserwowany jest znacz¹cy wzrost fluorescencji [4]. Produkty PCR mog¹ byæ monitorowane przy u yciu zarówno fluorescencyjnych, interkaluj¹cych barwników DNA tj. SYBR Green lub sekwencjê specyficznej sondy nukleotydowej, Przyk³adem mo e byæ sonda TaqMan, która obecnie jest najpowszechniej stosowana w tej metodzie [4]. B u r l akoti i in. przeprowadzili badania z wykorzystaniem tej techniki dowodz¹c tym samym jej zastosowanie w analizach mikotoksynotwórczoœci [13]. Analiza Real-Time PCR wraz ze specyficznymi starterami i sond¹ TaqMan umo liwi³a ocenê wytwarzania trichotecenów ró nych gatunków Fusarium sp., w tym F. graminearum z ziarna jêczmienia [63]. Uwa a siê, i iloœciowy Real-Time PCR jest prawdopodobnie w obecnych czasach najlepsz¹ metod¹ do detekcji grzybów syntetyzuj¹cych mikotoksyny [29, 35, 54]. Przyk³adowe sekwencje starterów wykorzystywanych w tej technice znajduj¹ siê w tabeli III. 9. Podsumowanie Grzyby z rodzaju Fusarium uznano za najniebezpieczniejsze patogeny wywo³uj¹ce powa ne choroby u roœlin, a tak e ludzi, zwierz¹t. W dodatku s¹ one zdolne do syntezy wysoce toksycznych zwi¹zków zwanych mikotoksynami. Najczêœciej wystêpuj¹ce w œrodowisku to zearalenon oraz trichoteceny, w tym deoksyniwalenol. Zwi¹zki te s¹ przyczyn¹ zaburzeñ we wzroœcie i rozwoju roœlin, a tak e chorób zwi¹zanych z uk³adem Tabela II Wybrane startery u ywane do identyfikacji genów odpowiedzialnych za syntezê mikotoksyn w technice RT-PCR [wg 45] Gen PKS4 PKS13 PKS14 Para starterów PKS4-1 PKS4-2 PKS13-1 PKS13-2 PKS14-1 PKS14-2 Sekwencja starterów 5 -AGATGGCCATGGTGCTTCGTGAT-3 5 -GTGGGCTTCGCTAGACCGTGAGTT-3 5 -AGCCGGGAAAGCCATACCATACAT-3 5 -GCTTGCAATCTCGATCGCCATAAT-3 5 -AGGGCTCGATTGTTGCGGATTCT-3 5 -TTCTTCCCGCCGACTTCAAAACA-38 228 MICHALINA SUCHORZYÑSKA, ANNA MISIEWICZ Tabela III Wybrane startery stosowane do detekcji genów bior¹cych udzia³ w syntezie mikotoksyn w technice Real-Time PCR Gen Piœmiennictwo Tri5 [13] Pks4 [45] PKS13 [45] Para starterów Sekwencja starterów Wielkoœæ produktu Tri5-F 5 -TCTTAACACTAGCGTGCGCCTTCT-3 193pz Tri5-R 5 -CATGCCAACGATTGTTTGGAGGGA-3 193pz PKS4-PS.1 5 GTGGGCTTCGCTAGACCGTGAGTT3 400pz PKS4-PS.2 5 ATGCCCTGATGAAGAGTTTGAT3 400pz PKS13-PS.1 5 CCCCCAACTCGACGTCAAATCTAT 3 400pz PKS13-PS.2 5 TTCTTCCCGCCGACTTCAAAACA3 400pz pokarmowym, rozrodczym czy odpornoœciowym u ludzi i zwierz¹t. Za tworzenie trichotecenów i zearalenonu odpowiedzialnych jest szereg genów. Istotn¹ rolê w biosyntezie trichotecenów odgrywaj¹ geny Tri5, Tri7, a w syntezie zearalenonu geny PKS4 i PKS13. Metody molekularne oparte o reakcjê PCR umo liwiaj¹ dokonanie szybkiej oceny mikotoksynotwórczoœci wœród grzybów strzêpkowych. Do powszechnie stosowanej metody molekularnej ze wzglêdu na prostotê wykonania nale y SCAR. Coraz czêœciej stosowane s¹ badania z wykorzystaniem technik Real-Time PCR i RT-PCR, które pomimo wysokich kosztów analiz cechuj¹ siê wysok¹ wra liwoœci¹, wiêksz¹ powtarzalnoœci¹ i mniejsz¹ pracoch³onnoœci¹. Piœmiennictwo 1. Alexander N.J., McCormick S.P., Hohn T.M.: Tri12, a trichothecene efflux pump from Fusarium sporotrichioides gene isolation and expression in yeast. Mol.Gen. Genet. 261, (1999) 2. Alexander N.J., McCormick S.P., Larson T.M., Jurgenson J.E.: Expression of Tri15 in Fusarium sporotrichioides. Curr. Genet. 45: (2004) 3. Arseniuk E., Góral T.: Fuzarioza k³osów czynniki sprawcze i gospodarcze znaczenie choroby. IHAR w Radzikowie. ( 2005) 4. Atkins S.D., Clark I.M.: Fungal molecular diagnostics: a mini review. J. Appl. Genet. 45, 3 15 (2004) 5. Bednarek P.T., Chwedorzewska K.: Markery molekularne, ich charakterystyka genetyczna oraz wybrane zastosowania w analizie genetycznej roœlin. Biotechnologia, 1, 9 34 (2001) 6. Bennet J.W., Klich M.: Mycotoxins. Clin. Microbiol. Rev. 16, (2003) 7. Berg J., Tymoczko J.L., Stryer L.: Poznawanie genów. [w:] Biochemia, Wyd. V. Wyd. Naukowe PWN SA, Warszawa 2005, str Bingle L.E., Simpson T.J., Lazarus C.M.: Ketosynthase domain probes identify two subclasses of fungal polyketide synthase genes. Fungal Genet. Biol. 26, (1999) 9. Bis H.: Uzdolnienia do produkcji mikotoksyn grzybów wyizolowanych z gleb Krakowa i jego okolic. Zesz. Nauk. Uniwersytetu Przyrodniczego we Wroc³awiu (Rolnictwo), 89/546, (2006) 10. Boyacioglu D., Hettiarachchy N.S., Stack R.W.: Effect of three astemic fungicides on deoxynivalenol (vomitoxin) production by Fusarium graminearum in wheat. Can. J. Plant Sci. 72, (1992) 11. Brown D.W., McCormick S.P., Alexander N.J., Proctor R.H., Desjardins A.E.: A genetic and biochemical approach to study trichothecene diversity in Fusarium sporotrichioides and Fusarium graminearum. Fungal Genet. Biol. 32, (2001) 12. Burgess L.W.: General ecology of the fusaria. p [In:] Nelson P. E., Toussoun T. A., Cook R. J., (ed): Fusarium: diseases, biology, and taxonomy. Penn. State University Press, University Park, Burlakoti R.R., Estrada R., Rivera V.V., Boddeda A., Secor G.A., Adhikari T.B.: Real-time PCR quantification and mycotoxin production of Fusarium graminearum in wheat inoculated with isolates collected from potato, sugar beet and wheat. Phytopatol. 97, (2007) 14. Chandler E.A., Simpson D.R., Thomsett M.A., Nicholson P.: Development of PCR assays to Tri7 and Tr13 trichothecene biosynthetic genes, and charakterisation of chemotypes of Fusarium graminearum, F. culmorum and F. cerealis. Physiol. Mol. Plant Pathol. 62, (2003) 15. Che³kowski J.: Mikotoksyny, wytwarzaj¹ce je grzyby i mikotoksykozy. Wyd. SGGW-AR, Warszawa Cole R.J., Jarvis B.B., Schweikert M.A.: Handbook of secondary fungal metabolites, vol. III. Acad. Press, New York Coulumbe R.A.: Symposium biological action of mycotoxins. J. Dairy Sci. 76, (1993) 18. Creppy E.E.: Update of survey, regulation and toxic effects of mycotoxins in Europe. Toxycol. Lett. 127, (2002) 19. Czembor P.Cz.: Markery PCR w badaniach grzybów fitopatogenicznych. IHAR, Radzików 1995, s Desjardins A.E., 2006: Fusarium mycotoxins chemistry, Genetics and Biology. Am. Phytopathol. Soc.Press, St. Paul, MN Desjardins A.E., Hohn T.M., McCormick S.P.: Trichothecene biosynthesis in Fusarium species chemistry, genetics, and significance. Microbiol. Rev. 57, (1993) 22. Dewick P.N.: The actetate pathway: fatty acids and polyketides, p In P.N. Dewick (ed.), Medicinal natural products. A biosynthesic approach, 2 nd ed. John Wiley & Sons LDT, West Sussex, England, D Mello J.P.F., Placinta C.M., Macdonald A.M.C.: Fusarium mycotoxins: a review of global implications for animal health, welfare and productivity. Anim. Feed Sci. Tech. 80, (1999)9 MIKOTOKSYNOTWÓRCZE GRZYBY Z RODZAJU FUSARIUM I ICH WYKRYWANIE TECHNIKAMI PCR Edwards S.G., O Callaghan J., Dobson D.W.: PCR-based detection and quantification of mycotoxigenic fungi-review. Mycol. Res. 106, (2002) 25. Edwards S.G., Pirgozliev S.R., Hare M.C., Jenkinson P.: Quantificaion of trichothecene-producing Fusarium species in harvested grain by competitive PCR to determine efficacies of fungicides against Fusarium head blight of winter wheat. Appl. Environ. Microbiol. 67, (2001) 26. Gaffoor I., Trail F.: Characterization of two polyketide synthase genes involved in zearalenone biosynthesis in Gibberella zeae. Appl. Environ. Microbiol. 72, (2006) 27. Gareis M., Ceynowa J.: Influence of the fungicide Matador (tebuconazole/triadimenol) on mycotoxin production by Fusarium culmorum. Lebensmittel-Untersuchung-Forsch. 198, 244: 248 (1994) 28. Goliñska B., Naro na D., M¹drzak C.J.: Zastosowanie metod molekularnych do wykrywania, identyfikacji i charakterystyki grzybów z rodzaju Fusarium. Biotechnologia, 3, (2002) 29. Halstensen A.S.: Species-specific fungal DNA in airborne dust as surrogate for occupational mycotoxin exposure. Int. J. Mol. Sci. 9, (2008) 30. Halstensen A.S., Nordby K.CH., Klemsdal S.S., Elen O., Clasen P.E., Eduard W.: Toxigenic Fusarium spp. As determinants of trichothecene mycotoxins in settled grain dust. J. Occup. Enrivon. Hyg. 3, p (2006) 31. Henson J.M., French R.: The polymerase chain reaction and plant disease diagnosis. Annu. Rev. Phytopathol. 31, (1993) 32. Jennings P., Coates M.E., Tuner J.A., Chandler E.A.: Determination of deoxynivalenol and nivalenol chemotypes of Fusarium culmorum isolates from England and Wales by PCR assay. Plant Pathol. 53, (2004) 33. Jeschke N., Nelson P.E., Marasas W.F.O.: Fusarium species isolated from soil samples collected at different altitudes in the Transkei, Southern Africa. Mycol. 82, (1990) 34. Joffe A.Z.: Fusarium species: their biology and toxicology. John Wiley & Sons, New York 1986, s Keswani J., Kashon M.L., Chen B.T.: Evaluation of interference to conventional and real-time PCR for detection and quantitation of fungi in yeast. J. Environ. Monit. 7, (2005) 36. Kiecana I., Mielniczuk E., Perkowski J., Goliñski P.: Pora- enie wiech przez Fusarium poae (Peck) Wollenw. oraz zawartoœæ mikotoksyn w ziarnie owsa. Acta Agrobotanica, 58, (2005) 37. Kimura M., Kaneko I., Komiyama M., Takatsuki A., Koshino H., Yoneyama K., Yamaguchi I.: Trichothecene 3-O-acetyltransferase protect both the producing organism and transformed yeast from related mycotoxins. Cloning and characterisation of Tri101. J. Biol. Chem. 273, (1998) 38. Kobras M., Horoszkiewicz-Janka J.: Znaczenie i mo liwoœci ograniczenia szkodliwych metabolitów pochodzenia grzybowego. Progr. Plant Protect. 47, (2007) 39. Krska R., Welzig E., Boudra H.: Analysis of Fusarium toxins in feed: review. Anim. Feed Sci. Tech. 137, (2007) 40. Kwaœna H., Che³kowski J., Zajkowski P.: Flora polska. Grzyby (Mycota). Instytut Botaniki PAN, Warszawa, Lacey J.: Natural occurrence of mycotoxins in growing and conserved forage crops. str [In:] Smith J. E., Henderson R. E., (Eds.), Mycotoxins Anim. Foods. CRC Press, Boca Raton, Lee T., Han Y-K, Kim K-H, Yun S-H, Lee Y-W.: Tri13 and Tri7 determine deoxyniwalenol and nivalenol producing chemotypes of Gibberella zeae. Appl. Environ. Microbiol. 68, (2002) 43. Leslie J.F., Summerell B.A.: The Fusarium Laboratory Manual. Blackwell Pub. Prof. first ed., Logrieco A., Moretti A., Castella G., Kostecki M., Goliñski P., Ritieni A., Che³kowski J.: Beauvericin production by Fusarium species. Appl. Environ. Microbiol. 64, (1998) 45. Lysoe E., Klemsdal S.S., Bone R., Frandsen R.J.N., Johansen T., Thrane U., Giese H.: The PKS4 gene of Fusarium graminearum is essential for zearalenone production. Appl. Environ. Microbiol. 72, (2006) 46. acicowa B., Wagner A.: Grzyby towarzysz¹ce Gaumannomyces graminis w tkankach pszenicy i pszen yta. Zesz. Probl. Post. Nauk Rol. 374, (1989) 47. awiecki T., Kobras M.: Reakcje wybranych odmian jêczmienia browarnego na pora enie k³osów grzybami z rodzaju Fusarium. Progr. Plant Pathol. 42, (2002) 48. ojkowska E.: Diagnostyka molekularna roœlin. [w:] Biotechnologia roœlin. Red. Malepszy S., Wyd. Naukowe PWN, Warszawa, 2001, s Magan N., Hope R., Colleate A., Baxter E.S.: Relationship between growth and mycotoxin production by Fusarium species, biocides and environment. Eur. J. Plant Pathol. 108, (2002) 50. Marcidska I., Biegasa-Koœcielniak J.: Wp³yw zearalenonu, GA3 i kinetyny na proces ró nicowania kalusa pszenicy oraz rozwój generatywny zregenerowanych roœlin. Curr. Tops. Biophys. 22, A-92 (1999) 51. Marasas W.F.O., Miller J.D., Riley R.T., Visconti A.: Fumonisins-occurrence, toxicology, metabolism and risk assessment, p [In:] Summerell B. A., Leslie J. F., Backhouse D., Bryden W. L., Burgess L. W. (ed.), Fusarium. Nelson P. E., Memorial Symposium. APS Press, St Paul, Minn., Miller J.D.: Epidemiology of Fusarium graminearum diseases of wheat and corn. In: Mycotoxins in grain: compounds other than aflatoxins (Miller J.D., Trenholm H.L., eds.) Eagon Press, St Paul, MN., 1994, str Mitchell T.G., Sandin R.L., Bowman B.H., Meyer W., Merz W.G.: Molecular mycology: DNA probes and applications of PCR technology. J. Med. Vet. Myc. 32, (1994) 54. Morrison E., Kosiak B., Ritieni A., Aastveit A.H., Uhlig S., Bernhoft A.: Mycotoxin production by Fusarium avenaceum strains isolated from Norwegian grain and the cytotoxicity of rice culture extracts to porcine kidney epithelial cells. J. Agric. Food Chem. 50, (2002) 55. Nagaraj RY., Wu W., Will J.A., Vesonder R.F.: Cardiotoxicity of moniliformin in broiler chickens as measured by electrocardiography. Poultry Sci. 74, 1 21 (1995) 56. Nelson P.E., Dignani M.C., Anaissie J.: Taxonomy, biology, and clinical aspects of Fusarium species. Clin. Microbiol. Rev. 7, (1994) 57. Packa D.: Mikotoksyny zagro eniem dla ludzi, zwierz¹t i roœlin. Rolnicze ABC, 11, 5 6 XI (2006) 58. Parry D.W., Jenkinson P., McLeod L.: Fusarium ear blight (scab) in small grain cereals a review. Plant Pathol. 44, (1995) 59. Pascale M., Visconti A., Pronczuk M., Wiœniewska H., Che³kowski J.: Accumulation of fumonisins, beauvericin and fusaproliferin in maize hybrids inoculated under field conditions with Fusarium proliferatum. Mycol. Res. 106, (2002)10 230 MICHALINA SUCHORZYÑSKA, ANNA MISIEWICZ 60. Pittet A.: Natural occurrence of mycotoxins in food and feeds an updated. Rev. Med. Vet. 149, (1998) 61. Polley R.W., Turner J.A.: Surveys of stem base diseases and Fusarium ear diseases in winter wheat in England, Wales and Scotland, Ann. Appl. Biol. 126, (1995) 62. Quarta A., Mita G., Haidukowski M., Santino A., Mule G., Visconti A.: Assessment of trichothecene chemotypes of Fusarium culmorum occurring in Europe. Eur. Food Addit. Contamin. 22, (2005) 63. Sarlin T., Yli-Mattila T., Jestoi M., Rizzo A., Paavanen- Huhtala S., Haikara A.: Real-time PCR for quantification of toxigenic Fusarium species in barley and malt. Eur. J. Plant Pathol. 114, (2006) 64. Schena L., Franco N., Ippolito A., Gallitelli D.: Real-time quantitative PCR: a new technology to detect and study phytopathogenic and antagonistic fungi. Eur. J. Pant Pathol. 110, (2004) 65. Schutt F., Nirenberg H.J., Deml G.: Moniliformin production in the genus Fusarium. Mycotoxin Res. 14, (1998) 66. Snijders C.H.A., Krechting C.F.: Inhibition of deoxynivalenol translocation and fungal colonization in Fusarium head blight resistant wheat. Can. J. Bot. 70, (1992) 67. Stêpieñ M., Sokó³-Leszczyñska B., uczak M.: Mykotoksyny, produkty spo ywcze a zdrowie cz³owieka. Post. Mikrobiol. 46, (2007) 68. Ueno Y.: Trichothecenes: chemical, biological and toxicological aspects. Elsevier, Amsterdam, Wagacha J.M., Muthomi J.W.: Fusarium culmorum: Infection process, mechanisms of mycotoxin production and other role in pathogenesis in wheat-review. Crop Protection, 26, (2007) 70. Ward T.J., Bielawski J.P., Kistler H.C., Sullivan E., Nell K.: Ancestral polymorphism and adaptive evolution in the trichothecene mycotosin gene cluster of phytopathogenic Fusarium. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99, (2002) 71. Williams K.C., Blaney B.J.: Effect of the mycotoxins, nivalenol and zearalenone, in maize naturally infected with Fusarium graminearum on the performance of growing and pregnant pigs. Aust. J. Agr. Res. 45, (1994) Podobne dokumenty
Możliwości ograniczania mikotoksyn Prof. dr hab. Marek Korbas Zakład Mikologii Instytut Ochrony Roślin PIB Poznań Mikotoksyny są wytwarzane przez wiele różnych rodzajów grzybów, jednakże większość z nich Bardziej szczegółowo ZAPOBIEGANIE POWSTAWANIU MIKOTOKSYN ROŚLINY ROLNICZE
ZAPOBIEGANIE POWSTAWANIU MIKOTOKSYN ROŚLINY ROLNICZE Ekspertyza pod redakcją: prof. dr. hab. Marka Korbasa i dr inż. Joanny Horoszkiewicz-Janka, Instytut Ochrony Roślin - PIB Metabolity grzybów nazywa Bardziej szczegółowo Techniczne nauki М.М.Zheplinska, A.S.Bessarab Narodowy uniwersytet spożywczych technologii, Кijow STOSOWANIE PARY WODNEJ SKRAPLANIA KAWITACJI
Techniczne nauki М.М.Zheplinska, A.S.Bessarab Narodowy uniwersytet spożywczych technologii, Кijow STOSOWANIE PARY WODNEJ SKRAPLANIA KAWITACJI SKLAROWANEGO SOKU JABŁKOWEGO Skutecznym sposobem leczenia soku Bardziej szczegółowo 3.2 Warunki meteorologiczne
CZY WIELKOTOWAROWE GOSPODARSTWA ROLNE MOG PRODUKOWAÃ ZDROW ÝYWNOÚÃ? Istnieje doœã powszechne przekonanie, e tradycyjne, chùopskie, maùe gospodarstwa rolne stanowi¹ w obecnych czasach jedyn¹ gwarancjê produkcji Bardziej szczegółowo TEST dla stanowisk robotniczych sprawdzający wiedzę z zakresu bhp
TEST dla stanowisk robotniczych sprawdzający wiedzę z zakresu bhp 1. Informacja o pracownikach wyznaczonych do udzielania pierwszej pomocy oraz o pracownikach wyznaczonych do wykonywania działań w zakresie Bardziej szczegółowo Zagro enia fizyczne. Zagro enia termiczne. wysoka temperatura ogieñ zimno
Zagro enia, przy których jest wymagane stosowanie œrodków ochrony indywidualnej (1) Zagro enia fizyczne Zagro enia fizyczne Zał. Nr 2 do rozporządzenia MPiPS z dnia 26 września 1997 r. w sprawie ogólnych Bardziej szczegółowo Dokumentacja obejmuje następujące części:
Załącznik nr 6 WYMAGANIA, JAKIM POWINNA ODPOWIADAĆ DOKUMENTACJA NIEZBĘDNA DO OCENY SUBSTANCJI CZYNNEJ JAKĄ SĄ MIKROORGANIZMY, W TYM TAKŻE WIRUSY I GRZYBY, ZAWARTE W PRODUKCIE BIOBÓJCZYM Wymagania ogólne. Bardziej szczegółowo Klasyfikacja i oznakowanie substancji chemicznych i ich mieszanin. Dominika Sowa
Klasyfikacja i oznakowanie substancji chemicznych i ich mieszanin Dominika Sowa Szczecin, 8 maj 2014 Program prezentacji: 1. Definicja substancji i mieszanin chemicznych wg Ustawy o substancjach chemicznych Bardziej szczegółowo Harmonogramowanie projektów Zarządzanie czasem
Harmonogramowanie projektów Zarządzanie czasem Zarządzanie czasem TOMASZ ŁUKASZEWSKI INSTYTUT INFORMATYKI W ZARZĄDZANIU Zarządzanie czasem w projekcie /49 Czas w zarządzaniu projektami 1. Pojęcie zarządzania Bardziej szczegółowo Tematy prac licencjackich w Zakładzie Fizjologii Zwierząt
Tematy prac licencjackich w Zakładzie Fizjologii Zwierząt Zegar biologiczny Ekspresja genów i białek zegara Rytmy komórkowe Rytmy fizjologiczne Rytmy behawioralne Lokalizacja neuroprzekźników w układzie Bardziej szczegółowo SCENARIUSZ LEKCJI WYCHOWAWCZEJ: AGRESJA I STRES. JAK SOBIE RADZIĆ ZE STRESEM?
DOPALACZE - nowa kategoria substancji psychoaktywnych CZYM SĄ DOPALACZE? Dopalacze stosowana w Polsce, potoczna nazwa różnego rodzaju produktów zawierających substancje psychoaktywne, które nie znajdują Bardziej szczegółowo POMIAR STRUMIENIA PRZEP YWU METOD ZWÊ KOW - KRYZA.
POMIAR STRUMIENIA PRZEP YWU METOD ZWÊ KOW - KRYZA. Do pomiaru strumienia przep³ywu w rurach metod¹ zwê kow¹ u ywa siê trzech typów zwê ek pomiarowych. S¹ to kryzy, dysze oraz zwê ki Venturiego. (rysunek Bardziej szczegółowo DZIA 4. POWIETRZE I INNE GAZY
DZIA 4. POWIETRZE I INNE GAZY 1./4 Zapisz nazwy wa niejszych sk³adników powietrza, porz¹dkuj¹c je wed³ug ich malej¹cej zawartoœci w powietrzu:...... 2./4 Wymieñ trzy wa ne zastosowania tlenu: 3./4 Oblicz, Bardziej szczegółowo Temat: Czy świetlówki energooszczędne są oszczędne i sprzyjają ochronie środowiska? Imię i nazwisko
Temat: Czy świetlówki energooszczędne są oszczędne i sprzyjają ochronie środowiska? Karta pracy III.. Imię i nazwisko klasa Celem nauki jest stawianie hipotez, a następnie ich weryfikacja, która w efekcie Bardziej szczegółowo Tabela. Kukurydza kiszonkowa odmiany badane w 2014 r.
Kukurydza. Kukurydza odznacza się wszechstronnością użytkowania i jest wykorzystywana na cele: pastewne, spożywcze, przemysłowe. Jako pasza energetyczna (ziarno, kiszonka z całych roślin, kiszonka z kolb, Bardziej szczegółowo Fusarium mycotoxins and methods of assessing the mycotoxicity: a review. Mikotoksyny fuzaryjne oraz sposoby ustalania mikotoksynotwórczości: przegląd.
Journal of Central European Agriculture, 2013, 14(1), p.169-180 DOI: 10.5513/JCEA01/14.1.1177 Fusarium mycotoxins and methods of assessing the mycotoxicity: a review. Mikotoksyny fuzaryjne oraz sposoby Bardziej szczegółowo Prezentacja dotycząca sytuacji kobiet w regionie Kalabria (Włochy)
Prezentacja dotycząca sytuacji kobiet w regionie Kalabria (Włochy) Położone w głębi lądu obszary Kalabrii znacznie się wyludniają. Zjawisko to dotyczy całego regionu. Do lat 50. XX wieku przyrost naturalny Bardziej szczegółowo Szybkoschładzarki SZYBKOSCHŁADZARKI. Szybkoschładzarki z funkcją 50 szybkozamrażania
SZYBKOSCHŁADZARKI Szybkoschładzarki z funkcją 50 szybkozamrażania SZYBKOSCHŁADZARKI DLACZEGO WARTO ICH UŻYWAĆ? Wszystkie świeże produkty zawierają naturalną florę bakteryjną, która w sprzyjających warunkach Bardziej szczegółowo PRAWA ZACHOWANIA. Podstawowe terminy. Cia a tworz ce uk ad mechaniczny oddzia ywuj mi dzy sob i z cia ami nie nale cymi do uk adu za pomoc
Efektywna strategia sprzedaży F irmy wciąż poszukują metod budowania przewagi rynkowej. Jednym z kluczowych obszarów takiej przewagi jest efektywne zarządzanie siłami sprzedaży. Jak pokazują wyniki badania Bardziej szczegółowo FUNDUSZE EUROPEJSKIE DLA ROZWOJU REGIONU ŁÓDZKIEGO
Dotyczy projektu: Wzrost konkurencyjności firmy poprzez wdrożenie innowacyjnej technologii nestingu oraz Województwa Łódzkiego na lata 2007-2013. Numer umowy o dofinansowanie: UDA-RPLD.03.02.00-00-173/12-00 Bardziej szczegółowo PROCEDURA OCENY RYZYKA ZAWODOWEGO. w Urzędzie Gminy Mściwojów
I. Postanowienia ogólne 1.Cel PROCEDURA OCENY RYZYKA ZAWODOWEGO w Urzędzie Gminy Mściwojów Przeprowadzenie oceny ryzyka zawodowego ma na celu: Załącznik A Zarządzenia oceny ryzyka zawodowego monitorowanie Bardziej szczegółowo Dz.U. 1999 Nr 47 poz. 480 ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ZDROWIA I OPIEKI SPOŁECZNEJ
Proces wprowadzania nowo zatrudnionych pracowników poradnik dla bezpoêredniego prze o onego wprowadzanego pracownika WZMOCNIENIE ZDOLNOÂCI ADMINISTRACYJNYCH PROJEKT BLIèNIACZY PHARE PL03/IB/OT/06 Proces Bardziej szczegółowo Rekompensowanie pracy w godzinach nadliczbowych
Rekompensowanie pracy w godzinach nadliczbowych PRACA W GODZINACH NADLICZBOWYCH ART. 151 1 K.P. Praca wykonywana ponad obowiązujące pracownika normy czasu pracy, a także praca wykonywana ponad przedłużony Bardziej szczegółowo Phytophthora cactorum (Leb. & Cohn) Schröeter
PAŃSTWOWA INSPEKCJA OCHRONY ROŚLIN I NASIENNICTWA GŁÓWNY INSPEKTORAT PIORIN ul. Wspólna 30, 00-930 Warszawa tel: (22) 623 23 02, fax: (22) 623 23 04 www.piorin.gov.pl; e-mail gi@piorin.gov.pl Phytophthora Bardziej szczegółowo Specjalizacja: biosynteza mykotoksyn, filogeneza, grzyby Fusarium, identyfikacja molekularna, markery DNA
Dr hab. Łukasz Stępień E-mail: lste@igr.poznan.pl Telefon: (+48 61) 65 50 219 Zakład Genetyki Patogenów i Odporności Roślin Zespół Interakcji Roślina-Mikroorganizm Specjalizacja: biosynteza mykotoksyn, Bardziej szczegółowo Steelmate - System wspomagaj¹cy parkowanie z oœmioma czujnikami
Steelmate - System wspomagaj¹cy parkowanie z oœmioma czujnikami Cechy: Kolorowy i intuicyjny wyœwietlacz LCD Czujnik wysokiej jakoœci Inteligentne rozpoznawanie przeszkód Przedni i tylni system wykrywania Bardziej szczegółowo Wapniowanie żyzna gleba wyższe plony
Wapniowanie żyzna gleba wyższe plony www.pulawy.com 1 Kiedy i jak wapnowaæ? Termin wapnowania Najbardziej optymalnym terminem jest okres po niwach, późne lato do późnej jesieni. Zastosowanie wapna w tym Bardziej szczegółowo CENTRUM BADANIA OPINII SPOŁECZNEJ
CENTRUM BADANIA OPINII SPOŁECZNEJ SEKRETARIAT OŚRODEK INFORMACJI 629-35 - 69, 628-37 - 04 693-46 - 92, 625-76 - 23 UL. ŻURAWIA 4A, SKR. PT.24 00-503 W A R S Z A W A TELEFAX 629-40 - 89 INTERNET http://www.cbos.pl Bardziej szczegółowo 4. OCENA JAKOŒCI POWIETRZA W AGLOMERACJI GDAÑSKIEJ
4. OCENA JAKOŒCI POWIETRZA 4.1. Ocena jakoœci powietrza w odniesieniu do norm dyspozycyjnych O jakoœci powietrza na danym obszarze decyduje œredni poziom stê eñ zanieczyszczeñ w okresie doby, sezonu, roku. Bardziej szczegółowo Bielsko-Biała, dn. 10.02.2015 r. Numer zapytania: R36.1.089.2015. WAWRZASZEK ISS Sp. z o.o. ul. Leszczyńska 22 43-300 Bielsko-Biała ZAPYTANIE OFERTOWE
Bielsko-Biała, dn. 10.02.2015 r. Numer zapytania: R36.1.089.2015 WAWRZASZEK ISS Sp. z o.o. ul. Leszczyńska 22 43-300 Bielsko-Biała ZAPYTANIE OFERTOWE W związku realizacją projektu badawczo-rozwojowego Bardziej szczegółowo Polskie Stowarzyszenie Ochrony Roœlin. CommonGround. œrodki ochrony roœlin: ludzie i idee
CommonGround œrodki ochrony roœlin: ludzie i idee Idea projektu COMMONGROUND Ýywnoœã wolna od chorób i szkodników Dostêpnoœã ywnoœci a wybór konsumenta Rolnictwo integrowane Bioró norodnoœã Odbiór spoùeczny Bardziej szczegółowo Warszawska Giełda Towarowa S.A.
KONTRAKT FUTURES Poprzez kontrakt futures rozumiemy umowę zawartą pomiędzy dwoma stronami transakcji. Jedna z nich zobowiązuje się do kupna, a przeciwna do sprzedaży, w ściśle określonym terminie w przyszłości Bardziej szczegółowo Lekcja 173, 174. Temat: Silniki indukcyjne i pierścieniowe.
Lekcja 173, 174 Temat: Silniki indukcyjne i pierścieniowe. Silnik elektryczny asynchroniczny jest maszyną elektryczną zmieniającą energię elektryczną w energię mechaniczną, w której wirnik obraca się z Bardziej szczegółowo II edycja akcji Przedszkolak pełen zdrowia
II edycja akcji Przedszkolak pełen zdrowia Odporność wzmacniamy, bo o zdrowe żywienie i higienę dbamy I tydzień: Uświadomienie dzieciom, co oznaczają pojęcia : zdrowie i choroba. Jakie są objawy choroby Bardziej szczegółowo Probiotyczne napoje fermentowane
Probiotyczne napoje fermentowane Waldemar Gustaw Katedra Technologii Owoców, Warzyw i Grzybów UP Lublin Probiotyki probiotyk pro bios - dla życia probiotyki to pojedyncze lub mieszane kultury żywych mikroorganizmów, Bardziej szczegółowo SYSTEM FINANSOWANIA NIERUCHOMOŚCI MIESZKANIOWYCH W POLSCE
SYSTEM FINANSOWANIA NIERUCHOMOŚCI MIESZKANIOWYCH W POLSCE Wstęp Rozdział 1 przedstawia istotę mieszkania jako dobra ekonomicznego oraz jego rolę i funkcje na obecnym etapie rozwoju społecznego i ekonomicznego. Bardziej szczegółowo Zarządzanie projektami. wykład 1 dr inż. Agata Klaus-Rosińska
Zarządzanie projektami wykład 1 dr inż. Agata Klaus-Rosińska 1 DEFINICJA PROJEKTU Zbiór działań podejmowanych dla zrealizowania określonego celu i uzyskania konkretnego, wymiernego rezultatu produkt projektu Bardziej szczegółowo Podzadanie 2: Monitoring zmian składu gatunkowego w populacji Fusarium spp. oraz ocena zagrożenia skażeniem ziarna pszenicy mikotoksynami fuzaryjnymi.
Zadanie 6.6: Monitoring zmian składu gatunkowego w populacji Fusarium spp. oraz ocena zagrożenia skażeniem ziarna pszenicy i kukurydzy mikotoksynami fuzaryjnymi Podzadanie 1: Monitoring zmian składu gatunkowego Bardziej szczegółowo BEZPIECZE STWO PRACY Z LASERAMI
BEZPIECZE STWO PRACY Z LASERAMI Szkodliwe dzia anie promieniowania laserowego dotyczy oczu oraz skóry cz owieka, przy czym najbardziej zagro one s oczy. Ze wzgl du na kierunkowo wi zki zagro enie promieniowaniem Bardziej szczegółowo Rudniki, dnia 10.02.2016 r. Zamawiający: PPHU Drewnostyl Zenon Błaszak Rudniki 5 64-330 Opalenica NIP 788-000-22-12 ZAPYTANIE OFERTOWE
Zamawiający: Rudniki, dnia 10.02.2016 r. PPHU Drewnostyl Zenon Błaszak Rudniki 5 64-330 Opalenica NIP 788-000-22-12 ZAPYTANIE OFERTOWE W związku z planowaną realizacją projektu pn. Rozwój działalności Bardziej szczegółowo 2. Posiadane dyplomy, stopnie naukowe/ artystyczne - z podaniem nazwy, miejsca i roku ich uzyskania oraz tytułu rozprawy doktorskiej:
Załącznik 2 AUTOREFERAT 1. Imię i Nazwisko: Łukasz Stępień 2. Posiadane dyplomy, stopnie naukowe/ artystyczne - z podaniem nazwy, miejsca i roku ich uzyskania oraz tytułu rozprawy doktorskiej: tytuł magistra Bardziej szczegółowo SPECYFIKACJA ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA DLA PRZETARGU NIEOGRANICZONEGO CZĘŚĆ II OFERTA PRZETARGOWA
Powiat Wrocławski z siedzibą władz przy ul. Kościuszki 131, 50-440 Wrocław, tel/fax. 48 71 72 21 740 SPECYFIKACJA ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA DLA PRZETARGU NIEOGRANICZONEGO CZĘŚĆ II OFERTA PRZETARGOWA Bardziej szczegółowo Urząd Miasta Bielsko-Biała - um.bielsko.pl Wygenerowano: 2016-06-17/10:16:18
Europejski Dzień Prostaty obchodzony jest od 2006 roku z inicjatywy Europejskiego Towarzystwa Urologicznego. Jego celem jest zwiększenie społecznej świadomości na temat chorób gruczołu krokowego. Gruczoł Bardziej szczegółowo Rodzaje i metody kalkulacji
Opracowały: mgr Lilla Nawrocka - nauczycielka przedmiotów ekonomicznych w Zespole Szkół Rolniczych Centrum Kształcenia Praktycznego w Miętnem mgr Maria Rybacka - nauczycielka przedmiotów ekonomicznych Bardziej szczegółowo CONSUMER CONFIDENCE WSKAŹNIK ZADOWOLENIA KONSUMENTÓW W POLSCE Q3 2015
CONSUMER CONFIDENCE WSKAŹNIK ZADOWOLENIA KONSUMENTÓW W POLSCE Q3 2015 Najwyższy wzrost od Q2 2005 Poziom zadowolenia polskich konsumentów w Q3 15 wyniósł 80 punktów, tym samym wzrósł o 10 punktów względem Bardziej szczegółowo UCHWAŁA NR 1 Nadzwyczajnego Walnego Zgromadzenia Spółki ABS Investment S.A. z siedzibą w Bielsku-Białej z dnia 28 lutego 2013 roku
UCHWAŁA NR 1 w sprawie: wyboru Przewodniczącego Walnego Zgromadzenia Działając na podstawie art. 409 1 kodeksu spółek handlowych oraz 32 ust. 1 Statutu Spółki Nadzwyczajne Walne Zgromadzenie Spółki ABS Bardziej szczegółowo Waldemar Szuchta Naczelnik Urzędu Skarbowego Wrocław Fabryczna we Wrocławiu
1 P/08/139 LWR 41022-1/2008 Pan Wrocław, dnia 5 5 września 2008r. Waldemar Szuchta Naczelnik Urzędu Skarbowego Wrocław Fabryczna we Wrocławiu WYSTĄPIENIE POKONTROLNE Na podstawie art. 2 ust. 1 ustawy z Bardziej szczegółowo Komunikat 16 z dnia 2015-05-07 dotyczący aktualnej sytuacji agrotechnicznej
Komunikat 16 z dnia 2015-05-07 dotyczący aktualnej sytuacji agrotechnicznej www.sad24.com Wszystkie poniższe informacje zostały przygotowane na podstawie obserwacji laboratoryjnych oraz lustracji wybranych Bardziej szczegółowo biuro@cloudtechnologies.pl www.cloudtechnologies.pl Projekty uchwał dla Zwyczajnego Walnego Zgromadzenia
Warszawa, 11 kwietnia 2016 roku Projekty uchwał dla Zwyczajnego Walnego Zgromadzenia w sprawie przyjęcia porządku obrad Zwyczajne Walne Zgromadzenie przyjmuje następujący porządek obrad: 1. Otwarcie Zgromadzenia, Bardziej szczegółowo WYMAGANIA EDUKACYJNE Z PRZEDMIOTÓW ZAWODOWYCH ODBYWAJĄCYCH SIĘ W SZKOLNYM LABORATORIUM CHEMICZNYM
WYMAGANIA EDUKACYJNE Z PRZEDMIOTÓW ZAWODOWYCH ODBYWAJĄCYCH SIĘ W SZKOLNYM LABORATORIUM CHEMICZNYM PSO jest uzupełnieniem Wewnątrzszkolnego Systemu Oceniania obowiązującego w GCE. Precyzuje zagadnienia Bardziej szczegółowo NAPRAWDÊ DOBRA DECYZJA
KARTA SERWISOWA NAPRAWDÊ DOBRA DECYZJA Gratulujemy! Dokonali Pañstwo œwietnego wyboru: nowoczesne drewniane okna s¹ ekologiczne, a tak e optymalne pod wzglêdem ekonomicznym. Nale ¹ do najwa niejszych elementów Bardziej szczegółowo Opinie mieszkańców Lubelszczyzny o zmianach klimatu i gazie łupkowym. Raport z badania opinii publicznej
Opinie mieszkańców o zmianach klimatu i gazie łupkowym Raport z badania opinii publicznej Lena Kolarska-Bobińska, członek Komisji Przemysłu, Badań Naukowych i Energii w Parlamencie Europejskim, Platforma Bardziej szczegółowo Polska-Warszawa: Usługi w zakresie napraw i konserwacji taboru kolejowego 2015/S 061-107085
1/6 Niniejsze ogłoszenie w witrynie TED: http://ted.europa.eu/udl?uri=ted:notice:107085-2015:text:pl:html Polska-Warszawa: Usługi w zakresie napraw i konserwacji taboru kolejowego 2015/S 061-107085 Przewozy Bardziej szczegółowo SUBSTANCJE ZUBOŻAJĄCE WARSTWĘ OZONOWĄ
SUBSTANCJE ZUBOŻAJĄCE WARSTWĘ OZONOWĄ I) INFORMACJE OGÓLNE W ostatnich latach stosowanie licznych, szeroko rozpowszechnionych substancji syntetycznych napotkało na nowe ograniczenie, którym jest ochrona Bardziej szczegółowo Warto wiedzieæ - nietypowe uzale nienia NIETYPOWE UZALE NIENIA - uzale nienie od facebooka narkotyków czy leków. Czêœæ odciêtych od niego osób wykazuje objawy zespo³u abstynenckiego. Czuj¹ niepokój, gorzej Bardziej szczegółowo Temat lekcji: Bakterie a wirusy.
Anna Tomicka Scenariusz lekcji biologii Dział: Różnorodność organizmów. Klasa: I b Temat lekcji: Bakterie a wirusy. 1.Cele lekcji: Cel ogólny: Uczeń: omawia budowę komórki bakterii oraz wirusów, wyjaśnia Bardziej szczegółowo Warunki Oferty PrOmOcyjnej usługi z ulgą
Warunki Oferty PrOmOcyjnej usługi z ulgą 1. 1. Opis Oferty 1.1. Oferta Usługi z ulgą (dalej Oferta ), dostępna będzie w okresie od 16.12.2015 r. do odwołania, jednak nie dłużej niż do dnia 31.03.2016 r. Bardziej szczegółowo Zmiany te polegają na:
Z dniem 1 stycznia 2013 r. wejdzie w życie ustawa z dnia 11 maja 2012 r. o zmianie ustawy o emeryturach i rentach z Funduszu Ubezpieczeń Społecznych oraz niektórych innych ustaw (Dz. U. z 6 czerwca 2012 Bardziej szczegółowo WYMAGANIA EDUKACYJNE SPOSOBY SPRAWDZANIA POSTĘPÓW UCZNIÓW WARUNKI I TRYB UZYSKANIA WYŻSZEJ NIŻ PRZEWIDYWANA OCENY ŚRÓDROCZNEJ I ROCZNEJ
WYMAGANIA EDUKACYJNE SPOSOBY SPRAWDZANIA POSTĘPÓW UCZNIÓW WARUNKI I TRYB UZYSKANIA WYŻSZEJ NIŻ PRZEWIDYWANA OCENY ŚRÓDROCZNEJ I ROCZNEJ Anna Gutt- Kołodziej ZASADY OCENIANIA Z MATEMATYKI Podczas pracy Bardziej szczegółowo Jakie są te obowiązki wg MSR 41 i MSR 1, a jakie są w tym względzie wymagania ustawy o rachunkowości?
Jakie są te obowiązki wg MSR 41 i MSR 1, a jakie są w tym względzie wymagania ustawy o rachunkowości? Obowiązki sprawozdawcze według ustawy o rachunkowości i MSR 41 Przepisy ustawy o rachunkowości w zakresie Bardziej szczegółowo KLAUZULE ARBITRAŻOWE
KLAUZULE ARBITRAŻOWE KLAUZULE arbitrażowe ICC Zalecane jest, aby strony chcące w swych kontraktach zawrzeć odniesienie do arbitrażu ICC, skorzystały ze standardowych klauzul, wskazanych poniżej. Standardowa Bardziej szczegółowo LASERY I ICH ZASTOSOWANIE
LASERY CH ZASTOSOWANE Laboratorium nstrukcja do ćwiczenia nr Temat: Pomiar mocy wiązki laserowej 3. POMAR MOCY WĄZK LASEROWEJ LASERA He - Ne 3.1. Cel ćwiczenia. Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z metodą Bardziej szczegółowo ZASADY WYPEŁNIANIA ANKIETY 2. ZATRUDNIENIE NA CZĘŚĆ ETATU LUB PRZEZ CZĘŚĆ OKRESU OCENY
ZASADY WYPEŁNIANIA ANKIETY 1. ZMIANA GRUPY PRACOWNIKÓW LUB AWANS W przypadku zatrudnienia w danej grupie pracowników (naukowo-dydaktyczni, dydaktyczni, naukowi) przez okres poniżej 1 roku nie dokonuje Bardziej szczegółowo Porażenie podstawy źdźbła pszenicy ozimej przez Fusarium spp. przyczyny i skutki. MAŁGORZATA NARKIEWICZ-JODKO 1, ZYGMUNT GIL 1, MAREK URBAN 2
ACTA AGROBOTANICA Vol. 58, z. 2 2005 s. 319 328 Porażenie podstawy źdźbła pszenicy ozimej przez Fusarium spp. przyczyny i skutki. MAŁGORZATA NARKIEWICZ-JODKO 1, ZYGMUNT GIL 1, MAREK URBAN 2 1 Zakład Technologii Bardziej szczegółowo ZAKRES OBOWIĄZKÓW I UPRAWNIEŃ PRACODAWCY, PRACOWNIKÓW ORAZ POSZCZEGÓLNYCH JEDNOSTEK ORGANIZACYJNYCH ZAKŁADU PRACY
ZAKRES OBOWIĄZKÓW I UPRAWNIEŃ PRACODAWCY, PRACOWNIKÓW ORAZ POSZCZEGÓLNYCH JEDNOSTEK ORGANIZACYJNYCH ZAKŁADU PRACY Szkolenia bhp w firmie szkolenie wstępne ogólne 8 Obowiązki pracodawcy Podstawowy obowiązek Bardziej szczegółowo WYTYCZNE MCPFE DO OCENY LASÓW I INNYCH GRUNTÓW LEŚNYCH CHRONIONYCH I ZE STATUSEM OCHRONNYM W EUROPIE
Living Forest Summit Czwarta Konferencja Ministerialna w sprawie Ochrony Lasów w Europie 28-30 kwietnia 2003 r., Wiedeń Austria WYTYCZNE MCPFE DO OCENY LASÓW I INNYCH GRUNTÓW LEŚNYCH CHRONIONYCH I ZE STATUSEM Bardziej szczegółowo Spis treści. www.wsip.com.pl 3
Spis treści 1. Wprowadzenie................................................... 9 1.1. Żywność jako źródło składników pokarmowych...................... 9 1.1.1. Normy żywienia dla ludności................................ Bardziej szczegółowo 2.Prawo zachowania masy
Wpływ promieni słonecznych na zdrowie człowieka Światło słoneczne jest niezbędne do trwania życia na Ziemi. Dostarcza energii do fotosyntezy roślinom co pomaga w wytwarzaniu tlenu niezbędnego do życia. Bardziej szczegółowo USTAWA. z dnia 26 czerwca 1974 r. Kodeks pracy. 1) (tekst jednolity)
Dz.U.98.21.94 1998.09.01 zm. Dz.U.98.113.717 art. 5 1999.01.01 zm. Dz.U.98.106.668 art. 31 2000.01.01 zm. Dz.U.99.99.1152 art. 1 2000.04.06 zm. Dz.U.00.19.239 art. 2 2001.01.01 zm. Dz.U.00.43.489 art. Bardziej szczegółowo www.naszanatura2000.pl
1 Biuro Projektu Stowarzyszenie Tilia ul. Przysiecka 13, 87-100 Toruń Tel./fax: 6 67 60 8 e-mail: tilia@tilia.org.pl www.tilia.org.pl Szkoła Leśna na Barbarce www.szkola-lesna.torun.pl www.naszanatura2000.pl Bardziej szczegółowo KLASYFIKACJI I BUDOWY STATKÓW MORSKICH
PRZEPISY KLASYFIKACJI I BUDOWY STATKÓW MORSKICH ZMIANY NR 3/2012 do CZĘŚCI II KADŁUB 2011 GDAŃSK Zmiany Nr 3/2012 do Części II Kadłub 2011, Przepisów klasyfikacji i budowy statków morskich, zostały zatwierdzone Bardziej szczegółowo Wyznaczanie współczynnika sprężystości sprężyn i ich układów
Ćwiczenie 63 Wyznaczanie współczynnika sprężystości sprężyn i ich układów 63.1. Zasada ćwiczenia W ćwiczeniu określa się współczynnik sprężystości pojedynczych sprężyn i ich układów, mierząc wydłużenie Bardziej szczegółowo NOWOŚCI Z ZAKRESU SYSTEMU SWR
System rur i kształtek wentylacyjnych SYSTEM KOMINUS SYSTEM RUR I KSZTAŁTEK WENTYLACYJNYCH SYSTEM KOMINUS SYSTEM RUR I KSZTAŁTEK WENTYLACYJNYCH IZOLOWANYCH IZOLACJA 30 MM SYSTEM KOMINUS CHARAKTERYSTYKA Bardziej szczegółowo SPRAWOZDANIE. z prowadzenia w 2012 r. badań podstawowych na rzecz rolnictwa ekologicznego
SPRAWOZDANIE z prowadzenia w 2012 r. badań podstawowych na rzecz rolnictwa ekologicznego w zakresie rozporządzenia Ministra Rolnictwa i Rozwoju Wsi z dnia 18 maja 2010 r. w sprawie stawek dotacji przedmiotowych Bardziej szczegółowo RAPORT KWARTALNY za pierwszy kwartał 2012 r. Wrocław, 11 maj 2012 roku
RAPORT KWARTALNY za pierwszy kwartał 2012 r. Wrocław, 11 maj 2012 roku SPIS TREŚCI: 1. PODSTAWOWE INFORMACJE O SPÓŁCE... 3 2. WYBRANE DANE FINANSOWE Z BILANSU ORAZ RACHUNKU ZYSKÓW I STRAT... 4 WYKRES 1. Bardziej szczegółowo Regulamin Rady Rodziców. przy Gimnazjum w Jasienicy. Postanowienia ogólne
Regulamin Rady Rodziców przy Gimnazjum w Jasienicy Postanowienia ogólne 1. Rada Rodziców zwana dalej Radą a/ reprezentuje interesy ogółu rodziców, b/ wpływając na sprawy szkoły może przyczynić się do lepszej Bardziej szczegółowo (KOD CPV: 80511000-9 - Usługi szkolenia personelu)
Fortress Poland Spółka z o.o. Korpele 27/7 12-100 Szczytno Korpele, dnia 21.12.2012 e- mail: anna@eufunds.pl Tel.: 502 207 430 Nr sprawy: WNEFS.042-7/2012 Zapytanie ofertowe W związku z realizacją przez Bardziej szczegółowo WP YW STRUKTURY U YTKÓW ROLNYCH NA WYNIKI EKONOMICZNE GOSPODARSTW ZAJMUJ CYCH SIÊ HODOWL OWIEC. Tomasz Rokicki
46 ROCZNIKI NAUK ROLNICZYCH, T. ROKICKI SERIA G, T. 94, z. 1, 2007 WP YW STRUKTURY U YTKÓW ROLNYCH NA WYNIKI EKONOMICZNE GOSPODARSTW ZAJMUJ CYCH SIÊ HODOWL OWIEC Tomasz Rokicki Katedra Ekonomiki i Organizacji Bardziej szczegółowo KARTA CHARAKTERYSTYKI
Strona: 1 Data opracowania: 10.03.2014 Nr weryfikacji: 1 Sekcja 1: Identyfikacja substancji/mieszaniny i identyfikacja przedsiębiorstwa 1.1. Identyfikator produktu Nazwa produktu: Kod produktu: DF1518 Bardziej szczegółowo SZKOLENIE PRACOWNIKÓW NARAśONYCH NA SZKODLIWE CZYNNIKI CHEMICZNE. Szkolenia bhp w firmie szkolenie pracowników naraŝonych na czynniki szkodliwe 27
SZKOLENIE PRACOWNIKÓW NARAśONYCH NA SZKODLIWE CZYNNIKI CHEMICZNE Szkolenia bhp w firmie szkolenie pracowników naraŝonych na czynniki szkodliwe 27 Informowanie pracowników Pracodawca ma obowiązek poinformowania Bardziej szczegółowo I. Charakterystyka przedsiębiorstwa
I. Charakterystyka przedsiębiorstwa Firma odzieżowa jest spółką cywilną zajmującą się produkcją odzieży i prowadzeniem handlu hurtowego w całym kraju. Jej siedziba znajduje się w Chorzowie, a punkty sprzedaży Bardziej szczegółowo ZAPYTANIE OFERTOWE nr 4/KadryWM13
Białystok, dn. 16.01.2014r. ZAPYTANIE OFERTOWE nr 4/KadryWM13 DOTYCZY: postępowania opartego na zasadzie konkurencyjności mającego na celu wyłonienie najkorzystniejszej oferty dotyczącej realizacji szkoleń Bardziej szczegółowo Szkolenie wstępne InstruktaŜ stanowiskowy ELEKTRYK. opracowanie: Henryk Batarowski pod red. Bogdana Rączkowskiego
Szkolenie wstępne InstruktaŜ stanowiskowy ELEKTRYK opracowanie: Henryk Batarowski pod red. Bogdana Rączkowskiego Zgodnie z rozporządzeniem Ministra Gospodarki i Pracy z dnia 27 lipca 2004 r. w sprawie Bardziej szczegółowo WZÓR SKARGI EUROPEJSKI TRYBUNAŁ PRAW CZŁOWIEKA. Rada Europy. Strasburg, Francja SKARGA. na podstawie Artykułu 34 Europejskiej Konwencji Praw Człowieka
WZÓR SKARGI EUROPEJSKI TRYBUNAŁ PRAW CZŁOWIEKA Rada Europy Strasburg, Francja SKARGA na podstawie Artykułu 34 Europejskiej Konwencji Praw Człowieka oraz Artykułu 45-47 Regulaminu Trybunału 1 Adres pocztowy Bardziej szczegółowo Regulamin konkursu Konkurs z Lokatą HAPPY II edycja
Regulamin konkursu Konkurs z Lokatą HAPPY II edycja I. Postanowienia ogólne: 1. Konkurs pod nazwą Konkurs z Lokatą HAPPY II edycja (zwany dalej: Konkursem ), organizowany jest przez spółkę pod firmą: Grupa Bardziej szczegółowo WYROK. Zespołu Arbitrów z dnia 22 czerwca 2005 r. Arbitrzy: Krzysztof Błachut. Elżbieta Zasadzińska. Protokolant Katarzyna Kawulska
Sygn. akt UZP/ZO/0-1432/05 WYROK Zespołu Arbitrów z dnia 22 czerwca 2005 r. Zespół Arbitrów w składzie: Przewodniczący Zespołu Arbitrów Urszula Borowska - Zaręba Arbitrzy: Krzysztof Błachut Elżbieta Zasadzińska Bardziej szczegółowo Sprawozdanie Rady Nadzorczej KERDOS GROUP Spółka Akcyjna
Sprawozdanie Rady Nadzorczej KERDOS GROUP Spółka Akcyjna z oceny sprawozdania Zarządu z działalności KERDOS GROUP S.A. w roku obrotowym obejmującym okres od 01.01.2014 r. do 31.12.2014 r. oraz sprawozdania Bardziej szczegółowo OPINIA RADY NADZORCZEJ
W SPRAWIE ZATWIERDZENIA SPRAWOZDANIA ZARZĄDU Z DZIAŁALNOŚCI mbanku S.A. ORAZ SPRAWOZDANIA FINANSOWEGO mbanku S.A. ZA ROK 2013 (Uchwała nr 1) Podjęcie przez WZ przedmiotowej Uchwały nr 1 wynika z obowiązku Bardziej szczegółowo FORMULARZ POZWALAJĄCY NA WYKONYWANIE PRAWA GŁOSU PRZEZ PEŁNOMOCNIKA NA NADZWYCZAJNYM WALNYM ZGROMADZENIU CODEMEDIA S.A
FORMULARZ POZWALAJĄCY NA WYKONYWANIE PRAWA GŁOSU PRZEZ PEŁNOMOCNIKA NA NADZWYCZAJNYM WALNYM ZGROMADZENIU Z SIEDZIBĄ W WARSZAWIE ZWOŁANYM NA DZIEŃ 2 SIERPNIA 2013 ROKU Niniejszy formularz przygotowany został Bardziej szczegółowo 4.3. Warunki życia Katarzyna Gorczyca
POZNAJ NAJNOWSZE INFORMACJE NA TEMAT BADAŃ NAD ZDROWIEM Przewodnik dla instruktora dotyczący raka skóry (Plany lekcyjne) AUTORZY FINANSOWANIE: Plan lekcyjny dla modułu 3 Rak skóry bez tajemnic I. Wprowadzenie Bardziej szczegółowo FORUM ZWIĄZKÓW ZAWODOWYCH
L.Dz.FZZ/VI/912/04/01/13 Bydgoszcz, 4 stycznia 2013 r. Szanowny Pan WŁADYSŁAW KOSINIAK - KAMYSZ MINISTER PRACY I POLITYKI SPOŁECZNEJ Uwagi Forum Związków Zawodowych do projektu ustawy z dnia 14 grudnia Bardziej szczegółowo Instrukcja. sporządzania rocznych sprawozdań Rb-WSa i Rb-WSb o wydatkach strukturalnych
Załącznik nr 40 Instrukcja sporządzania rocznych sprawozdań Rb-WSa i Rb-WSb o wydatkach strukturalnych 1. 1. Jednostka sporządza sprawozdanie z wydatków strukturalnych poniesionych z krajowych środków Bardziej szczegółowo LEKCJA 3 STRES POURAZOWY
LEKCJA 3 STRES POURAZOWY Stres pourazowy definicje Stres pourazowy definiuje się jako zespół specyficznych symptomów, które mogą pojawić się po przeżyciu ekstremalnego, traumatycznego zdarzenia. Są to Bardziej szczegółowo Nowoczesne rozwiązania w wentylacji chlewni. Zbigniew Naparty Specjalista ds. trzody chlewnej Agramatic
Nowoczesne rozwiązania w wentylacji chlewni Zbigniew Naparty Specjalista ds. trzody chlewnej Agramatic ZŁOTE PRAKTYKI Nowoczesne rozwiązania wentylacji w chlewni 2011 Zbigniew Naparty Specjalista ds. techniczno Bardziej szczegółowo 2017 © DocPlayer.pl Polityka prywatności | Warunki świadczenia usług | Zwrotny adres

References: ART. 151
 art. 409
 art. 2
 art. 5
 art. 31
 art. 1
 art. 2