Source: https://www.leica-microsystems.com/es/productos/microscopios-confocales/detalles/product/show/Products/leica-tcs-sp8-sted-one/
Timestamp: 2019-08-18 07:33:30+00:00

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Leica TCS SP8 STED | Productos | Leica Microsystems
Nanoscopia multicolor: 3 STED + 1 canal confocal. STED: Vimentina-Alexa 647 (rojo), alfa-tubulina-Alexa 594 (verde), F-actina- Alexa 488 faloidina (turquesa). Confocal: DNA-DAPI (azul). Cortesía de Eugene Katrukha, Universidad de Utrecht, Países Bajos.
«El STED 3X ha dado un salto cuántico al expandirse en nuevas dimensiones: la captura y el procesamiento de imágenes de súper-resolución multicolor de la célula seguramente revolucionarán la biología celular».
Cubriendo todo el espectro de luz visible
Las aplicaciones multicolor dan acceso a información detallada sobre las interrelaciones de varias estructuras. Los estudios de colocalización se realizan de forma rutinaria con el nanoscopio STED ONE. Las múltiples líneas láser STED del STED 3X a 592 nm y 660 nm y el láser pulsado a 775 nm, que alcanza resoluciones por debajo de 30 nm, cubren todo el espectro de luz visible y dan acceso a una gran variedad de fluoróforos disponibles.
El láser de luz blanca, el AOBS (divisor de haz acústico-óptico) y los detectors espectrales sintonizables le permiten, de un modo coordinado, capturar cualquier tipo de combinación de fluoróforos y le ofrecen la mayor flexibilidad para su experimento multicolor.
Cuando se trata de resolver detalles muy pequeños, es crucial comenzar con la mejor óptica. La excepcional corrección cromática de las tres lentes de la familia de objetivos STED WHITE asegura la superposición óptima de la excitación y STED PSF en z en todo el intervalo del espectro visible. Se puede utilizar el láser de luz blanca como fuente de excitación para STED a 592/660/775. Disfrute de la libertad de elegir entre más fluoróforos que nunca para la nanoscopia STED.
La familia de objetivos STED para nanoscopia profunda de células vivas
Las muestras fijadas estándar se capturan como imágenes con facilidad con el objetivo de aceite STED WHITE (HC PL APO 100x/1.40 ACEITE). Proporciona una AN y una resolución más altas. Para experimentos más complejos, el nuevo objetivo de glicerina STED WHITE (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) crea nuevas oportunidades. El anillo de corrección motorizado permite un ajuste rápido y preciso de las lentes ópticas para variar el grosor del cubreobjetos de vidrio, los cambios de temperatura y la falta de homogeneidad de la muestra. Ilumine los detalles del interior de su muestra con STED 3D no solo a temperatura ambiente, sino también a 37 °C.
"Este objetivo es imprescindible, todos deberían tenerlo!"
"El objetivo STED 93x de glicerina abre una puerta a nuevas aplicaciones en microscopía, de gran relevancia en el ámbito de la biología."
Timo Zimmermann, Center for Genomic Regulation, Barcelona, Spain
NOVEDAD! Objetivo de agua STED
El nuelvo objetivo HC PL APO 86x/1.20 W motCORR brinda los mejores resultados en sus experimentos en medios acuosos. La tecnologìa motCORR combinanda con una optima elección del índice de refacción hacen de esta nueva lente STED WHITE un aliado poderoso en aplicaciones de células vivas.
Aberración cromática de los objetivos STED WHITE. Profundidad de campo representada en línea gris discontinua.
Nanoscopía STED en células vivas: vesículas de núcleo denso marcadas con ANF GFP moviéndose a lo largo de axones aprox. a 10 μm de profundidad dentro de una larva intacta de Drosophila anestesiada. Se adquirieron una imagen confocal y una imagen STED cada 0,45 segundos. Vídeo anterior: Seguimiento de partículas realizado con TrackMate (Fiji).
Reconstrucción renderizada en superfidie de la imagen STED tridimensional. Los datos STED muestran un claro aumento de la resolución lateral cuando se utiliza STED para maximizar la resolución en xy (sector verde trasero) o en todas las dimensiones (sector verde delantero) en comparación con el resultado confocal (rojo). Claramente, la mejor representación de la estructura observada se obtiene por STED 3D.
Mejoras en resolución mediante la asignación de la luz a las dos vías STED: la mejor resolución lateral se logra mediante el clásico dónut vórtice, y la mejor resolución vertical mediante el dónut z. También se puede optimizar para el volumen focal más pequeño.
El asistente Smart STED le permite controlar el instrumento con tres correderas simples. Con ayuda del diseño de la PSF eficaz, se define el nivel general de resolución por debajo de la barrera de difracción que necesite. Para obtener resultados óptimos, el asistente configura todos los ajustes necesarios, como la intensidad del láser STED, el tamaño de los píxeles, el tamaño del paso z, el pinhole, los ajustes del portal y el promediado.
Flujo de trabajo de Smart STED: 1. Ajuste la PSF eficaz deseada con el STED y la corredera 3D. 2. Elija entre señal-ruido y número de imágenes con la corredera de dosificación. 3. Defina el área de interés durante un barrido confocal en vivo y ajuste la excitación en consecuencia. 4. Recopile sus datos con una resolucíon muy por debajo del límíte de difracíon capturando una imagen o comenzando una serie.

References: resolución 
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