Source: https://es.scribd.com/doc/141629249/Cromatografia
Timestamp: 2017-01-18 04:21:44+00:00

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y estudie la función de cada uno de ellos. 4.Cromatografía de Gases: 1. Establezca diferencia entre separación isocrática y separación con gradiente 6. 4. Establezca diferencias entre los métodos de Cromatografía de Gases  Cromatografía de Gases  Cromatografía de Líquidos 3. Enumere las características de la Fase Estacionaria y Fase Móvil en Cromatografía de Gases 6. Enumere las aplicaciones de la HPLC
. Enumere las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la Cromatografía de Gases Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) 1. Establezca la clasificación de los tipos de HPLC 3. 5. Elabore un esquema con los componentes esenciales de un Cromatógrafo líquido. Estudie las definiciones y términos siguientes  Cromatografía  Cromatograma  Elusión  Fase Móvil  Tiempo de Retención  Ancho de base  Fase Estacionaria  Altura del plato teórico.  Eluyente  Resolución  Tiempo muerto  Números de platos teóricos 2.  Enumere las características de la Fase Estacionaria  Enumere las características de la Fase Móvil  Establezca las características del soporte ideal en la fase est5acionria de HPLC. Clasifique los diferentes detectores utilizados en Cromatografía de Gases. Enumere los tipos de Detectores usados en HPLC 5. Describa el fundamento de HPLC 2. 7. Como afecta los siguientes parámetros en la Resolución de la columna: 7. Identifique los componentes generales de un Cromatógrafo de Gas y estudie la función de cada una de ellas. Como es normalmente un Cromatógrama en Gases.
Altura del Plato Teórico: Se utiliza como una medida de la eficiencia de la columna. Es también una medida del funcionamiento del instrumento.Cromatograma: Es una gráfica u otro tipo de presentación de la respuesta de un detector. La cromatografía es la técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase móvil (liquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contiene la fase estacionaria...4.. ni siquiera en una misma columna cromatográfica.6.Ancho de Base: Es la separación de la longitud de las bases interceptado por agentes delongados en el detector. Registro producido por el cromatógrafo de gas / líquido. la cual puede ser sólida o líquida..1. como una pequeña cantidad en un tiempo breve. Los tiempos de retención no son reproducibles.. la concentración de un analito en el efluente u otra magnitud usada como medida de la concentración en el efluente... interiormente sin desplazarse.5.Elución: Es el procedimiento en el que la fase móvil se pasa de forma continua a través o a lo largo del lecho cromatográfico y la muestra se suministra al sistema de forma discreta. Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma de capa. 1. 1. frente al volumen de efluente o al tiempo.7.-Estudie las definiciones y términos siguientes: 1.2. La fase estacionaria consiste en partículas.1. 1. generalmente sólidas.. 1. 1. este directamente relacionado con la
.3.Tiempo de Retención: Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce la mezcla y el instante en que se detecta la señal propia del componente en su máxima intensidad.Fase Estacionaria: Es la que recubre la columna cromatográfica.8. de forma que presenta un amplio desarrollo superficial. 1. pequeñas y con una superficie microporosa.Fase Móvil: Puede ser un líquido o un gas que recorre la columna cromatográfica transportando los componentes de la mezcla a través de dicho sistema.Cromatografía: Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla y en algunos casos identificar estos si es que no se conoce su composición. 1.
En cromotografía de gases se incluyen todos los métodos cromatográficos en los que la fase móvil es un gas (gas portador). 2. siendo la fase estacionaria un líquido (CGL) o un sólido (CGS)..varianza.Número de Platos Teóricos: Se utiliza como una medida eficiente de la columna. La cromatografia gas-líquido (CGL): Se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida inmovilizada sobre la superficie de un sólido inerte (soporte) o en las paredes interiores de la columna.12. 1. tRA y tRB son los tiempos de retención de los componentes A y B.
La cromatografía gas-sólido (CGS): Tiene una fase estacionaria sólida en la cual se produce la retención de los analitos debido a la adsorción física sobre la superficie del sólido.. si ésta es capilar.10. por ello resulta convenientemente medir la eficiencia de la columna en los términos de varianza y longitud de la columna. Relaciona la capacidad separadora de un sistema cromatográfico para dos componentes.11.. y estudie la función de cada una de ellas:
.9.. 1. Esta técnica ha tenido una aplicación limitada debido a la tendencia de los picos de elución a formar colas y a la retención semipermanente de gases activos sobre la fase estacionaria. 1.Establezca las diferencias Cromatografía de Gases.Identifique los componentes generales de un Cromatógrafo de Gas. 1.Tiempo Muerto: Es el tiempo de retención del componente inerte o gas portador.
3.Eluyente: Es aquella sustancia que se pone en contacto con la fase estacionaria y permite que se desplace la muestra.Resolución: Es el parámetro que expresa el grado de separación que se puede obtener en un sistema cromatográfico para dos componentes dados.. y aA y aB son las anchuras de los picos del cromatograma de los anteriores componentes. Se define como:
Donde Rs es la resolución.
000 (platos teóricos/m) y se usan para muestras complejas. aluminio. nitrógeno o argón. o Las columnas capilares: Tienen un diámetro interior inferior a 1 mm (320-250 μm) y una longitud de 5 a 50 m. con un diámetro interior entre 2 y 4 mm y una longitud entre 2 y 3 m. Cada columna se diseña para aprovechar alguna propiedad de los diferentes componentes que resulte adecuada para generar distinta velocidades de avance para cada uno de ellos durante el recorrido de la columna.
. La eficacia está en torno a 1. Es un dispositivo capaz de convertir una propiedad física. vidrio y teflón. Podemos expresar que el detector son los "ojos" de un cromatógrafo. máximo 10 componentes. Las columnas semicapilares tienen un diámetro interior de 530 μm que admiten cantidades de muestra similares a las columnas de relleno.000-2. Inyector: Es sólo una pequeña cámara colocada inmediatamente antes de la(s) columna(s) de separación. donde se accede mediante una jeringa adecuada o con una válvula de inyección. Columnas: El sistema de columnas cromatográficas constituyen el corazón de todo cromatógrafo. ha de ser conocido y controlado. El caudal del mismo que pasa por la columna. El Inyector es el lugar por donde se introduce una pequeña cantidad de muestra (del orden de 1 cm3 de gas o 1 micro-litro de líquido) en medio de la corriente de gas. en una señal elaborable y ofrecernos información sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad física. Detector: Es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eluídas a la salida de la columna cromatográfica. El sistema de detección genera una señal cuando un componente de la mezcla completa el recorrido del sistema de separación. Existen dos tipos: o Las columnas de relleno: Suelen ser de cobre. También se encarga de vaporizar las muestras cuando éstas no son gaseosas. acero inoxidable. Suelen emplearse para muestras poco complejas. no medible directamente. la temperatura del inyector ha de ser superior a la del punto de ebullición del componente de la mezcla menos volátil. generalmente helio.
Gas Portador: es un gas inerte. La fase estacionaria se depositada sobre las paredes interiores del tubo capilar.000 (platos teóricos/m). Cumple básicamente dos propósitos: Transportar los componentes de la muestra. Así. de elevado grado de pureza. Suelen construirse con sílice fundida que le dan gran resistencia física y flexibilidad. y proporcionan mayor eficacia que éstas. Alcanzan una eficacia hasta de 4. Un sistema de Integración: para cuantificar la señal generada por cada componente en el Detector. y crear una matriz adecuada para el detector.
Electroquímico. Detectores según su Modo de Respuesta: o Dependientes del Flujo Másico: Producen una señal que es proporcional a la cantidad de soluto que pasa a través de él en la unidad de tiempo pero es independiente del volúmen de gas portador requerido para la elución. o Específicos ó Selectivos: Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de substancias con un mínimo de respuesta a otras.Enumere las características de la Fase Estacionaria y Fase Móvil en Cromatografía de Gases:
. o Dependiente de la Concentración: Dan una señal proporcional a la cantidad de soluto por unidad de volúmen de gas portador que pasa a través de él. Ópticoespectroscópico. etc. obviamente.Clasifique los diferentes detectores utilizados en la cromatografía de Gases: Estos pueden ser clasificados:  Detectores según su Grado de Selectividad : o Universales: Responde a la mayoría de los solutos que pasan por él. Esta clasificación. es en referencia a si la muestra es destruída o no. Detectores Destructivos y No destructivos.. Detectores según el proceso de detección Ionización.
Como es normalmente una Cromatografía de Gases. MS. se ajustan las temperaturas de la cámara de inyección. 4. 3. por equilibrios sucesivos entre fase móvil y estacionaria cada componente se desplaza por la columna a velocidades diferentes. donde se vaporizan.. Cuando la señal del detector es constante (sin ruidos la línea base) se hace la inyección de la muestra. La separación de los compuestos de una mezcla se realiza en las siguientes etapas: 1.-Una vez elegida la columna y fase estacionaria.Enumere las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la Cromatografía de Gases: CUALITATIVAS  Identificación Cromatográfica: o Por Datos de Retención o Por Serie Homólogas (Indices de Retención de Kovacs)  Identificación No Cromatográfica: o Análisis Clásicos o Identificación por: • Adición de Estándar • Formación de Derivados • Sustracción de un Componente  Identificación con Técnicas Auxiliares: UV. los solutos que salen de la columna. así como el caudal de gas portador. pasan al detector y se obtiene el cromatograma. IR.-Las muestras se inyectan en cantidades inferiores a 1 µl cuando son líquidas y sobre 1 ml si son gaseosas. 2. 7.-Los componentes se fijan en una pequeña zona de la columna. columna y detector. y son arrastradas hasta cabeza de columna.Fase Estacionaria:    Es la forma más habitual La fase estacionaria es no polar y la móvil es polar Utiliza disolventes no polares
6..-Finalmente. se introducen en la cámara de inyección. RMN
CUANTITATIVAS  Normalización de Área  Normalización de Área con Factores de Respuesta  Estandarización Externa  Estandarización Interna
. basándose en las diferentes retenciones que experimentan los componentes de la misma al pasar a través de una fase estacionaria.Describa el fundamento de la HPLC: La cromatografía líquida es una técnica cuyo objetivo es la separación de los distintos componentes de una mezcla de sustancias..
volatilidad. El compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria. . La fuerza de adsorción aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interacción entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparación a la fase móvil) aumenta el tiempo de retención.
. uno remoto y otro próximo Fundamento remoto: Este fundamento se encuentra en alguna o algunas propiedades físicas o físico químicas de los analitos: solubilidad.El equilibrio establecido entre esos componentes debe ser lo mas completo posible.químicas frente a un sistema cromatográfico dado. La fuerza de interacción no sólo depende de los grupos funcionales del compuesto de interés. y se caracteriza por separar los compuestos en base a su polaridad. Por tanto. la separación de los componentes de la muestra se produce debido a sus interacciones entre una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida.cuando la muestra es eluida por una fase móvil líquida.Los componentes de los sistemas empleados deben estar en intimo contacto entre si. sino también en factores estericos de forma que los isómeros estructurales a menudo se pueden diferenciar el uno del otro. tamaño. Esta técnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil apolar. Así. Para explicar el fenómeno cromatorgráfico es necesario establecer dos tipos de fundamento. La mezcla de sustancias a separar se coloca en una situación experimental dinámica donde exhiben dos de estas propiedades. reactividad química o bioquímica.. La utilización de disolventes más polares en la fase móvil disminuye el tiempo de retención de los compuestos mientras que los disolventes más hidrofóbicos tienden a aumentar el tiempo de retención. o bien una de ellas pero por duplicado tal como la solubilidad en dos líquidos diferentes como ocurre en cromatografía liquido . Fundamento próximo: Se encuentra en el hecho de que es muy improbable que dos especies presenten cuantitativamente el mismo par de propiedades físicas o físico . que pueden ser muy pequeñas.Establezca la Clasificación de los tipos de HPLC:  Cromatografía de fase normal:
Fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo de la química. se basa la separación cromatográfica. contenida en una columna cromatográfica.liquido. 2. etc. adsorción (tendencia a ser retenidos en sólidos finamente divididos). en estas diferencias. carga. y se utiliza cuando el compuesto de interés es bastante polar. Deben cumplirse las condiciones siguientes: .
dónde la R es una cadena alquil tal como C18H37 ó C8H17. Por este motivo. las moléculas muy grandes pueden ver reducida la interacción entre la superficie del compuesto y la fase estacionaria. El tiempo de retención es mayor para las moléculas de naturaleza apolar. otras modificaciones de la fase móvil pueden afectar la retención del compuesto. por ejemplo. En general. La fuerza conductora en la unión del compuesto a la fase estacionaria es la disminución del área del segmento apolar del analito expuesto al disolvente. Esto modifica el coeficiente de partición de forma que el compuesto se mueve por la columna y eluye. pero también
. la mayoría de métodos utilizan un tampón como el fosfato de sodio por controlar el valor del pH. Otra variable importante es el pH puesto que puede cambiar la hidrofobicidad del compuesto. un compuesto con una cadena alquil larga se asocia con un tiempo de retención mayor porque aumenta la hidrofobicidad de la molécula. Una de las fases estacionarias más comunes de este tipo de cromatografía es la silica tratada con RMe2SiCl. la adición de sales tiende a aumentar el tiempo de retención. El tiempo de retención aumenta con la adición de disolvente polar a la fase móvil y disminuye con la introducción de disolventes más hidrofóbicos. mientras que las moléculas de carácter polar eluyen más rápidamente. El tiempo de retención aumenta con el área de superficie hidrofóbica que suele ser inversamente proporcional al tamaño del compuesto. y una fase estacionaria apolar.
Consiste en una fase inmóvil apolar y una fase móvil de polaridad moderada.Este efecto hidrofóbico está dominado por la disminución de la energía libre de la entropía asociada con la minimización de la interfase compuestodisolvente polar. Los compuestos ramificados suelen eluir más rápidamente que sus isómeros lineales puesto que la superficie total se ve reducida. Las características del compuesto de interés juegan un papel muy importante en la retención. La cromatografía de fase reversa se basa en el principio de las interacciones hidrofóbicas que resultan de las fuerzas de repulsión entre un disolvente relativamente polar. Aun así. Estos tampones controlan el pH. Aparte de la hidrofobicidad de la fase móvil. un compuesto relativamente apolar. y como que la entropía de la interfase compuestodisolvente está controlada precisamente por la tensión superficial. La cromatografía de fase reversa es tan utilizada que a menudo se lo denomina HPLC sin ninguna especificación adicional. la adición de sales inorgánicas provoca un aumento lineal en la tensión superficial. El efecto hidrofóbico disminuye con la adición de disolvente apolar a la fase móvil.
También es muy útil para la determinación de la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las proteínas purificadas. la retención se basa en la atracción electrostática entre los iones en solución y las cargas inmovilizadas a la fase estacionaria. Generalmente se trata de una cromatografía de baja resolución de forma que se suele utilizar en los pasos finales del proceso de purificación. la fase estacionaria consiste en largos polímeros entrecruzados que forman una red tridimensional porosa. A los fines prácticos. lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos por las moléculas que acceden al interior de esta. o más precisamente. Aun así. y el tamaño de los poros es tal que algunas moléculas (las demasiado grandes) no podrán ingresar a esos poros. Las columnas de fase reversa se echan a perder con menor facilidad que las columnas de silica normales. muchas columnas de fase reversa están formadas por silica modificada con cadenas alquil y no se deben utilizar nunca con bases en medio acuoso puesto que éstas podrían dañar el esqueleto de silica subyacente. según su radio de Stokes. El efecto de los tampones sobre la cromatografía puede variar. estas partículas son porosas. Cromatografía de exclusión molecular
También conocida como cromatografía por filtración en gel. En consecuencia. La cromatografía de filtración molecular es un método de cromatografía en columna por el cual las moléculas se separan en solución según su peso molecular. la columnas se empaquetan con pequeñas partículas esferoidales formadas por esos polímeros entrecruzados. Los iones de la misma carga son excluidos mientras que los de carga opuesta son retenidos por la columna. en tanto que otras (las suficientemente pequeñas) podrán pasar libremente. pero en general mejoran la separación cromatográfica. En esta cromatografía. Las columnas se pueden utilizar en ácidos en medio acuoso pero no deberían estar expuestas demasiado tiempo al ácido porque puede corroer las partes metálicas del aparato de HPLC. Los poros quedan conectados formando una malla o red. separa las partículas de la muestra en función de su tamaño. Algunos tipos de intercambiadores iónicos son: i) Resinas de
.neutralizan la carga o cualquiera resto de silica de la fase estacionaria que haya quedado expuesta y actúan como contraiones que neutralizan la carga del compuesto. Cromatografía de intercambio iónico:
En la cromatografía de intercambio iónico.
con una longitud de 10-30
. El sistema de bombeo debe seguir los siguientes requerimientos: 1.poliestireno. 5.5%) Componentes resistentes a la corrosión (acero inoxidable o Teflón) Reproducible
Tipos de Bombas: • Bombas reciprocas • Bombas de desplazamiento • Bombas neumáticas .Elabore un esquema con los componentes esenciales de un Cromatógrafo líquido. 3. En general los intercambiadores iónicos favorecen la unión de iones elevada carga y radio pequeño. específicos y reversibles. interacciones hidrofóbicas y puentes de hidrógeno entre las partículas de la muestra y la fase estacionaria.Bomba: Envía al solvente a través de caños de diámetro pequeño.1 a 10 ml/min(con control del 0.  Cromatografía basada en bioafinidad
Este tipo de cromatografía se basa en la capacidad de las sustancias biológicamente activas de formar complejos estables. interacciones electrostáticas. Un incremento en la concentración del contraión (respeto a los grupos funcionales de la resina) reduce el tiempo de retención. Un incremento en el pH reduce el tiempo de retención en las cromatografías de intercambio catiònico mientras que una disminución del pH reduce el tiempo de retención en las cromatografías de intercambio aniònic. ii) intercambiadores iónicos de celulosa y dextranos (geles) y iii) Silica porosa o vidrio de tamaño de poro controlado. Son. generalmente de acero inoxidable. y estudie la función de cada uno de ellos. Un equipo para cromatografía líquida de alta resolución puede representarse por el siguiente esquema: . 3. 2. Se producen pequeñas cantidades de muestra (0. La formación de estos complejos implica la participación de fuerzas moleculares como las interacciones de Van der Waals. interacciones dipolo-dipolo. generalmente de Acero inoxidable. 4. Generación de presiones por encima de 6000 psi(~410 atmósferas) Flujo libre de pulsaciones Intervalo de caudales de 0.1-100μL)
Columna: Se produce la separación de los componentes.. la muestra contenida en un aro o loop de volumen calibrado.Válvula Inyectora: Consiste en una válvula de seis vías que permite introducir en el flujo de solvente.
Deben de tener un volumen interno pequeño para reducir el ensanchamiento de pico. la cual es proporcional a la cantidad de sustancia
.) Registrador Integrador: Realiza un gráfico de intensidad en función del tiempo (cromatograma) que idealmente.) y en una propiedad del soluto (absorbancia en UV.1. sílice o resinas de intercambio iónico.. De 1-10μm tamaño particula-40.Características de la Fase Estacionaria:
Puede ser alúmina.cm y un diámetro interno de 4-10mm.  La composición del relleno debe ser semejante a la columna analítica
Detector: Produce una señal eléctrica proporcional a la cantidad de materia y esa señal es enviada al registrador. Para que el líquido inmovilizado sea útil debe poseer diferentes coeficient5es de participación con los solutos. Basados en una propiedad de la fase móvil (refracción. Este que El integrador calcula además el área correspondiente a cada pico. se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a un componente de la muestra original.000 platos/metro. PRECOLUMNAS  Se colocan delante de la columna para eliminar la materia en suspensión y contaminantes de las disolvente. fluorescencia etc. densidad etc.000-60.
 El líquido.  Los solutos con puntos de ebullición casi idénticos.Para que un soluto presente un tiempo de residencia razonable en la columna. Existen muchos diseños de estos detectores.Características estacionaria de HPLC
La función básica del soporte es la de “mantener” (sotener.Enumere los tipos de detectores utilizados en HPLC: Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en: • Detectores basados en una propiedad de la fase móvil .
3. Químicamente es casi todo sílice.. Hay básicamente tres tipos: o Detector de Longitud de Onda Fija o Detector de Longitud de Onda Variable o Detector de Arreglo de Diodos • Detector de Indice de Refracción.3.. Ejemplo: Detector de Fluorescencia. 4. pero solamente existen ahora dos tipos: o Tipo Deflexión o Tipo Fresnel
. Detector Ultravioleta Los detectores más utillizados en HPLC son: • Detector UV. retener) la fase estacionaria  La mayoría d elos soportes cromatográficos está hecha de diatomita. el orden de elusión generalmente sigue al orden de puntos de ebullición. cuando éstos difieren suficientemente son factibles separaciones limpias. el cual puede ser puro o una mezcla de solventes. una cierta compatibilidad (solubilidad) con la fase estacionaria.. debe poseer por lo menos. con algunas impurezas. pero de diferentes polaridades.Características de la Fase Móvil: Es un solvente líquido. Ejemplo: Detector de Indice de Refracción • Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. por efecto de la gravedad. se obliga a pasar a través del sólido bajo presión o bien se deja percolar a través de él.  Entre solutos de polaridad similar.2. retendrán selectivamente uno o más de los componentes por interacción dipolo o por formaciones de abducto
3.  El tiempo de retención aumenta con la adición de disolvente polar a la fase móvil y disminuye con la introducción de disolventes más hidrofóbicos.
de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil. La utilización de presión en este tipo de cromatografías incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la columna y reduce así su difusión dentro de la columna mejorando la resolución de la cromatografía.. En el ejemplo. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la columna se denomina tiempo de retención y se considera una propiedad identificativa característica de un compuesto en una determinada fase móvil y estacionaria. Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan fluorescencia nativa o inducida por derivatización . El gradiente separa los componentes de la muestra como una función de la afinidad del compuesto por la fase móvil utilizada respecto a la afinidad por la fase estacionaria. El agua puede contener tampones. Pueden ser clasificados en tres tipos: o Detector Amperométrico o Detector Conductimétrico o Detector Potenciométrico
5. que ayudan a la separación de los compuestos.Establezca diferencia entre una separación isocrática y separación con gradiente: En la HPLC isocrática el compuesto pasa por la columna cromatogràfica a través de la fase estacionaria (normalmente. El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. un cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna. o compuestos como el ácido trifluoroacético. Un gradiente normal en una cromatografía de fase reversa puede empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. Detector de Fluorescencia Inducida por Laser o Según la Fuente de Excitanción o Según el sistema óptico Detectores Electroquímicos. utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos más hidrofílicos eluirán a mayor concentración de agua. El gradiente utilizado varía en función de la hidrofobicidad del compuesto. mientras que los compuestos más
. Los disolventes más utilizados son el agua. el metanol y el acetonitrilo. conocida como elución en gradiente. Una mejora introducida a la técnica de HPLC descrita es la variación en la composición de la fase móvil durante el análisis. sales.•
ácidos orgánicos. Estas columnas se suelen denominar columnas de rango analítico y normalmente están asociadas a un detector UV-VIS. En cambio. A menudo. Aparte. como las de tipo capilar. 6. pero la presión que se requiere por obtener una velocidad lineal óptima aumenta de forma inversamente proporcional al cubo del diámetro de la partícula. aumentaría la resolución de la columna. hace falta realizar una serie de pruebas previas por tal de optimizar el gradiente de forma que permita una buena separación de los compuestos. hidrocarburos polinucleares. 7.Enumere las aplicaciones de la HPLC  Compuestos iónicos. como aminoácidos.  Análisis de compuestos vitamínicos es posible en corto tiempo.hidrofóbicos eluirán a concentraciones elevadas de acetonitrilo.  Compuestos de alto peso molecular. etc. con un diámetro inferior a 0. productos naturales. como vitaminas. Esto significa que disminuir la medida de las partículas a la mitad. y se caracterizan por el aumento la sensibilidad y la minimización del consumo de disolventes que conllevan. sales inorgánicas. pero a la vez. esteroides. drogas y un producto muy grande de otros productos farmacéuticos.3 mm.  Compuestos termolábiles y no volátiles.. pesticidas. plastificantes. aumentaría la presión necesaria en un factor de ocho. las columnas de diámetro interno menor (4-5 mm) se utilizan en el análisis cuantitativo de las muestras. Estas partículas pueden tener diferentes medidas.
. Partículas más pequeñas ofrecen una mayor superficie y una mejor separación.
Es un aspecto crítico que determina la cantidad de muestra que se puede cargar a la columna y también influye en su sensibilidad.Cómo afectan los siguientes parámetros en la Resolución de la columna:
La mayoría de HPLC tradicionales se realizan con una fase estacionaria unida al exterior de partículas esféricas de silica.. siendo las de 5\mum de diámetro las más utilizadas. como polímeros. Las columnas de diámetro interno más grande (>10 mm) se utilizan normalmente en la purificación de compuestos para su utilización posterior. existen otros tipos de columnas. etc. utilizadas principalmente en espectrometría de masas.
 El análisis de medicamentos (determinación de los componentes activos de una tableta analgésica. ya que su finalidad no es la separación de compuestos individuales.
. nucleósidos) por cromatografía de intercambio iónico. sino de grupos diferentes de sustancias presentes en las mezcla. Determinaciones de constituyentes de ácidos nucleicos (nucleótidos.  En separaciones según el tipo químico.  Determinación de esteroides. anticonceptivos. análisis de barbitúricos. etc).
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