Source: https://www.olympus-lifescience.com/es/news/423-id.209715292.html
Timestamp: 2019-08-24 09:09:24+00:00

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El profesor Yoshinori Ohsumi, catedrático honorario del Instituto Tecnológico de Tokio, recibió el Premio Nobel 2016 de Fisiología/Medicina por su descubrimiento de la autofagia (autofagocitosis). Su investigación sobre la autofagia comenzó observando levaduras con un microscopio óptico. El interés por la autofagia, desde células de levaduras hasta células de mamíferos y de otros animales, se ha expandido a través del trabajo de muchos investigadores. La autofagia es actualmente el centro de atención de muchos grupos de investigación en todo el mundo.
La investigación de la autofagia abarca desde temas básicos, como comprender su funcionamiento a nivel molecular y el papel que desempeña en los organismos vivos, hasta las aplicaciones clínicas que estudian de qué forma la autofagia está asociada con la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurológicos. Los microscopios biológicos de Olympus han contribuido a estas investigaciones de vanguardia sobre la autofagia.
La fluorescencia ha sido usada para observar la participación de la proteína Atg17 en la autofagia y membranas de la vacuola en levaduras en brotación (proteína mutante Atg17). Los investigadores usan iluminación oblicua con la lente de objetivo de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF) de alto aumento (150X) y el microscopio invertido IX3.
Vacuolas unidas a autofagosomas
(Vph1-mCereza)
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Imagen combinada de proteína Atg17 (verde) y
vacuolas unidas a autofagosomas (magenta)
Microscopio de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF) en el laboratorio del Dr. Ohsumi del Instituto Tecnológico de Tokio
Datos de imagen por cortesía de Hayashi Yamamoto y Yoshinori Ohsumi, Centro de Investigación Fronteriza del Instituto Tecnológico de Tokio.
Yamamoto H, Fujioka Y, Suzuki SW, Noshiro D, Suzuki H, Kondo-Kakuta C, Kimura Y, Hirano H, Ando T, Noda NN, Ohsumi Y. The Intrinsically Disordered Protein Atg13 Mediates Supramolecular Assembly of Autophagy Initiation Complexes [Proteína intrínsecamente desordenada Atg13 actuando como mediador en el ensamblaje de mecanismos supramoleculares de los complejos en la iniciación de la autofagia]. Developmental Cell. 11 de julio de 2016;38(1):86-99.
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Observación de fluorescencia tricolor simultánea de orgánulos y autofagosomas en células COS7 con un microscopio de escaneo láser basado en un microscopio invertido de la serie IX completamente motorizado. Esta configuración aplicar la fluorescencia tricolor simultánea.
Primera observación dinámica mundial de la formación de autofagosomas a partir de mitocondrias en forma de red (RFP-SEC61β en rojo) y retículos endoplasmáticos (TFP-mito en azul).
Sistema convencional de observación por fluorescencia tricolor simultánea
Nuestro sistema convencional actual de observación por fluorescencia tricolor simultánea
Sistema de microscopio con imagen de célula viva en el laboratorio del Dr. Yoshimori
La figura de la izquierda muestra el sistema de imagen por fluorescencia tricolor simultánea usado para capturar imágenes que han sido publicadas en la revista científica Nature. Este sistema está basado en la versión completamente motorizada de un microscopio IX81 invertido. La figura de la derecha es una versión actualizada basada en el microscopio completamente motorizado IX83.
Maho Hamasaki y Tamotsu Yoshimori, Departamento de Genética, Facultad de posgrados en Medicina de la Universidad de Osaka.
Maho Hamasaki, Nobumichi Furuta, Atsushi Matsuda, Akiko Nezu, Akitsugu Yamamoto, Naonobu Fujita, Hiroko Oomori, Takeshi Noda, Tokuko Haraguchi, Yasushi Hiraoka, Atsuo Amano y Tamotsu Yoshimori.
Autophagosomes form at ER-mitochondria contact sites [Formas de autofagosomas en sitios de contacto de mitocondrias y retículo endoplasmático (RE)].
Nature. 2013 Mar 21;495(7441):389-93. DOI: 10.1038/nature11910. ePub, 3 de marzo de 2013.
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Imagen en vivo de la proteína relacionada con la autofagia LS3 en huevos fertilizados de un pez cebra (danio rerio) transgénico GFP-LC3-RFP-LC3 ΔG. Los investigadores han usado un objetivo de inmersión en silicona de 30X (UPLSAPO30XS) y un microscopio confocal de escaneo láser FLUOVIEW.
Hideaki Morishita y Noboru Mizushima, Departamento de Bioquímica y Biología molecular,
Facultad de posgrados en Medicina, Universidad de Tokio.
An Autophagic Flux Probe that Releases an Internal Control. [Sonda de flujo de autofagia que establece un control interno].
Mol Cell. 2016 Oct 25. pii: S1097-2765(16)30589-5. doi: 10.1016/j.molcel.2016.09.037. [ePub en encabezado de impresión]
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Análisis de localización del receptor de proteínas de fusión sensibles a N-etilmaleimida (proteínas SNARE) que causan la fusión de membranas en células de fibroblastos embrionarios de ratones genéticamente deficientes en base al gen ATG3 relacionado con la autofagia bajo condiciones de inanición (una hora después de la inanición).
Observación mediante colocalización de proteínas SNARE SECFP-STX17 y myc-SNAP29 (flecha blanca).
MEF en estado natural (izquierda) y MEF genéticamente deficiente con proteína ATG3 (derecha)
Barra de escala = 10 μm; barra de escala con imagen aumentada entre el marco blanco = 2 μm
Microscopio confocal FV1000 en laboratorio del Dr. Laboratorio Mizushima de la Universidad de Tokio
Datos de imagen por cortesía de Kotaro Tsuboyama, Ikuko Honda y Noboru Mizushima, Departamento de Bioquímica y Biología molecular, Facultad de posgrados en Medicina, Universidad de Tokio.
The ATG conjugation systems are important for degradation of the inner autophagosomal membrane. [Los sistemas de conjugación ATF son importantes para la degradación de la membrana interna de los autofagosomas].
Science 20 de octubre 2016: DOI: 10.1126/SCIENCE.AAF6136.
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Investigadores tratando imágenes en vivo de membranas de autofagosomas en fibroblastos de ratón con la función de super resolución mediante el microscopio de super resolución SD-OSR y la lente del objetivo en silicona de tipo inmersión (UPLSAPO100XS).
SD-OSR (Lado izquierdo de la película)
GFP-p62 expresando MEF
AA(-) para 35 minutos
Láser de 488 nm ; intensidad: 40
Exposición: 1000 msec
Intervalo: 0 sec
UPLSAPO100XS (aceite de silicona)
Placa para cultivo TOKAI HIT, MI-IDC
Barra de escala: 1 μm
Confocal (Lado derecho de la película)
Proteína p62 expresada en fibroplasto embrionario de ratón (MEF) mediante GFP
AA(-) para 38 minutos
Láser de nm ; intensidad: 20
Exposición: 200 msec
Imágenes con super resolución de la proteína GFP-p62 en fibroblastos de ratón capturadas por 35 minutos en modo continuo (izquierda). Los autofagosomas aparecen como anillos (derecha) mucho más claros que aquellos producidos por imagen confocal convencional.
Datos de imagen por cortesía de Kotaro Tsuboyama,
Facultad de Anatomía e Histología. Universidad de Medicina de Fukushima.
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Debido a que el microscopio SD-OSR es un producto bajo solicitud especial, póngase en contacto con nosotros para obtener más detalles.
El software FV-OSR permite obtener imágenes con super resolución usando el microscopio FV3000. Los investigadores usan este sistema para capturar imágenes de la proteína WIPI2 que inicia la formación de autofagosomas (AlexaFluor488) y la proteína de membrana externa mitocondrial TOM20 (AlexaFluor568) en MEF fijados con PFA después de la inducción de autofagia (1 hora y media de crecimiento en un medio de cultivo sin aminoácido).
Estas imágenes muestran una sección horizontal de una imagen apilada de porción Z. La figura de la derecha es mejorada con la función de dimensión del software cellSens®. Imágenes XYZ con super resolución procesadas mediante la función de deconvolución 3D del software, que proporciona a su vez una resolución mejorada en Z.
Datos de imagen por cortesía de Ikuko Honda y Noboru Mizushima,
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