Source: https://www.olympus-lifescience.com/es/microscopes/inverted/ixplore-spinsr/
Timestamp: 2019-11-22 04:39:42+00:00

Document:
IXplore SpinSR: Súper resolución confocal para todas las muestras de células vivas | Olympus Life Science
Súper resolución confocal par todas las muestras celulares vivas
Resuelva las imágenes confocables a una resolución de hasta 120 nm XY usando la técnica confocal y la súper resolución de Olympus (OSR).
*Imagen: Fibras en tensión de célula de Hela: tinción de anticuerpos con Faloidina-Alexa488 (verde) para actina, Alexa 568 (rojo) para cadena pesada de miosina. Imagen cortesía de: Keiju Kamijo,Ph.D. División de Anatomía y Biología celular, Facultad de Medicina, Universidad de Medicina y Farmacia de TOHOKU.
Iimágenes rápidas
Imágenes rápidas usando un disco giratorio y un procesamiento de la resolución súper rápido que permiten obtener una visualización en directo de las muestras. La viabilidad de las células durante la creación de imágenes confocales de lapso de tiempo es muy prolongada, gracias a la reducción de la fototoxicidad y el blanqueo en 3D.
*Vídeo: GFP-EB3 en la punta de microtúbulos extendidos en células HeLa.
Imagen por cortesía de: Dr.Kaoru Katoh, Instituto de Investigación Biomédica, Instituto Nacional de Ciencias y Tecnología Industrial Avanzada
Los usuarios pueden cambiar entre los 3 modos (campo amplio, confocal y súper resolución).
*Imagen: Tinción de Odf2 (Alexa 488) del cilios en la sección superior del cuerpo basal. Imagen cortesía de: Hatsuho Kanoh, Elisa Herawati, Sachiko Tsukita,Ph.D. Facultad de Posgrado en Biociencias Fronterizas y Facultad de Posgrado en Medicina, Universidad de Osaka.
Estructuras 3D en imágenes
Obtenga datos de imágenes 3D precisos con super resolución durante el tratamiento de imágenes en intervalos.
SpinSR10: imágenes 3D en intervalos de neuronas
Imagen 3D en intervalos de neuronas:
Imagen en intervalos de neurona primaria de ratón marcada con EGFP después de co-cultivo celular con astrocito para 2 semanas. Diferencia fácil de ver entre la espina inmadura (flecha amarilla) y espina madura (flecha azul) y detección del cambio morfológico en función del tiempo.
Imagen 3D adquirida en tiempo de exposición de 500ms/fotogramas, en paso Z de 0,15 micrómetros para 41 cortes. Imágenes adquiridas cada 2 minutos durante 1 hora. Imagen 3D mostrada por FV31S-DT.
Datos de imagen por cortesía de: Yuji Ikegaya, PhD.
Laboratorio de Farmacología química, Facultad de posgrados en Ciencias farmacéuticas, Universidad de Tokio
Súper resolución con TruSight
Obtenga imágenes claras usando el algoritmo de deconvolución de Olympus.
*Imagen: Riñón de ratón tintado con Alexa488
Imágenes bicolor simultáneas
El sistema IXplore SpinSR puede usar dos cámaras simultáneamente para generar rápidamente imágenes de localización bicolor.
Huso mitótico en metafase celular
Células HeLa provenientes de cáncer cervical humano fijadas y teñidas respectivamente con α-tubulina (microtúbulos, rojo) y Hec1 (cinetocoro, verde). DNA teñido con DAPI (cromosomas, azul):
Los cromosomas interactúan con los microtúbulos que constituyen el huso mitótico a través de cinetocoros dispuestos en la región centromérica de los cromosomas.
Datos de imagen por cortesía de Masanori Ikeda y Kozo Tanaka, Departamento Oncológico Molecular, Instituto de Desarrollo, Envejecimiento y Cáncer, Universidad de Tohok
Principio OSR
La tecnología de súper resolución de Olympus proporciona una resolución lateral (XY) por debajo de los 120 nm. Esta ha sido desarrollada exclusivamente para aprovechar de los datos de alta frecuencia espacial en las imágenes confocales. Después de su procesamiento, las imágenes finales no solo son más nítidas gracias a una reducción en el tamaño del punto, sino que también pueden solucionarse mejor cuando existen estructuras muy juntas.
Índice mitótico de células epiteliales
Cromosoma: azul; tubulina: verde; ZO1: rojo
Procesamiento de imágenes rápido con súper resolución y amplio campo de visión
En lugar de escanear laboriosamente el completo campo de visión, el sensor de adquisición de imagen sensible del sistema SpinSR10 captura imágenes instantáneas de una completa área de muestra en un solo paso a fin de ofrecer rápidamente imágenes, que facilitan la observación de fenómenos biológicos a alta velocidad. En el modo confocal y de campo amplio, el sistema óptico del microscopio presenta un número de campo (FN) 18 para capturar imágenes a través de un campo de visión más extenso, mientras que las dos cámaras permiten adquirir simultáneamente imágenes bicolores con súper resolución.
Basada en el sistema óptico confocal, la tecnología de súper resolución de Olympus ejecuta un seccionamiento óptico para adquirir imágenes claras con súper resolución a fin de reducir distorsiones de fondo.
Datos de aplicación por cortesía de: Hatsuho Kanoh, Tomoki Yano, Sachiko Tsukita
Facultad de Posgrados en Biociencias fronterizas y Facultad de Posgrados en Medicina, Universidad de Osaka
Imágenes brillantes de células vivas con el disco giratorio
El modelo de alta sensibilidad viene equipado con el disco SoRa para poder adquirir imágenes de súper resolución más brillantes gracias al disco giratorio con microlente, que se ubica en el estenopo confocal. Cada estenopo confocal permite obtener imágenes con menor potencia láser, lo que reduce el fotoblanqueo y la fototoxicidad en la muestra en función, al mismo tiempo que otorga imágenes brillantes de súper resolución.
Izquierda: modelo estándar; derecha: modelo de alta sensibilidad
Principios de CSU-W1 con disco SoRa
Configuración de CSU-W1 con disco SoRa
En microscopios confocales regulares, la formación de imágenes es producto de la función de propagación del punto de iluminación (PSF) y su detección. Al observar la formación de imágenes en el estenopo a partir de la posición D en el eje óptico, se observa el producto de la iluminación PSF y su detección, además de ver que la información de la posición D/2 a partir del eje óptico se transmite, pero no se resuelve. Para corregir esto, se instala una microlente en el orificio, y los puntos focales individuales proyectados en el estenopo se reorientan ópticamente hacia el centro, creando una imagen ideal y aumentando su brillo y resolución. Este proceso hace que la resolución sea casi igual a la de un microscopio confocal idóneo en el que el estenopo se reduce a un tamaño infinitesimal.
Referencia: T. Azuma and T. Kei, «Super-Resolution Spinning-Disk Confocal Microscopy Using Optical Photon Reassignment» Opt. Express 23, 15003-15011 (2015).
Iluminación uniforme mediante una visualización de campo completo
El cambiador de aumento está desarrollado para el microscopio invertido IX83P2ZF con el fin de proporcionar una iluminación uniforme en todo el campo de visión. El sistema óptico telecéntrico del cambiador maximiza el rendimiento de los objetivos, al mismo tiempo que permite un cambio motorizado sin interrupciones entre resolución confocal y la súper resolución.
Resolución en Z mejorada
Los objetivos de inmersión en silicona están desarrollados para observaciones profundas en tejidos. La profundidad de la observación es afectada negativamente por la aberración esférica, derivada de la diferencia en el índice de refracción. El índice de refracción del aceite de silicona (ne = 1,40) es cercano al de las células vivas o cortes de tejidos cultivados (ne = 1,38), lo que permite otorgar una súper resolución a las imágenes de estructuras celulares internas en decenas de micrómetros de profundidad con una aberración esférica mínima.
Reducir la aberración esférica
El collar de corrección remoto es usado para ajustar fácilmente la posición de la lente dentro del objetivo con el fin de corregir la aberración esférica que puede ser causada por la diferencia en el índice de refracción. La unidad IX3-RCC funciona con cualquier objetivo UIS2 dotado de un collar de corrección.
Fototoxicidad reducida
Administrar experimentos complejos
El administrador de procesos facilita la adquisición de imágenes multicolores, en intervalos y apiladas en Z. El administrador de experimentos gráfico programable (GEM) permite que los usuarios creen automatizaciones más complejas a partir de una interfaz visual para soportar una amplia variedad de protocolos de imagen experimentales y accionamiento de dispositivos. La personalización flexible de los protocolos experimentales puede ser modificada según sea necesario durante el procesamiento de las imágenes.
Con la función de super resolución, la capacidad para realizar ajustes de precisión de la platina es fundamental. La platina ultrasónica IX3-SSU de alta precisión es fácil de usar y controlar con el software o controlador de platina. La platina presenta una deriva térmica baja para la adquisición de imágenes múltiples reproducibles y estabilidad durante experimentos a intervalos prolongados.
Empuñadura de platina
Método de observación > Súper resolución
Filtro de súper resolución de Olympus (OSR)
Estereocilios y quinetocilios de células ciliadas internas en el órgano de Corti (naranja: actina; verde: tubulina)
Datos de imagen por cortesía de: Hatsuho Kanoh1, Toru Kamitani1,2, Hirofumi Sakaguchi2, Sachiko Tsukita1
1Facultad de Posgrados en Biociencias fronterizas y Facultad de Posgrados en Medicina, Universidad de Osaka.
2Facultad de Otorrinolaringología: cirugía de cabeza y cuello, Universidad de Medicina de la Prefectura de Kioto.
SpinSR10: Índice mitótico de células epiteliales. Cromosoma: azul; tubulina: verde; ZO1: rojo
Índice mitótico de células epiteliales (azul: cromosoma; verde: tubulina; rojo: ZO1)
Datos de imagen por cortesía de: Hatsuho Kanoh, Tomoki Yano, Sachiko Tsukita
Mitocondria marcada con GFP. La adquisición en 30 fps permite visualizar los movimientos individuales de la mitocondria.
Datos de imagen por cortesía de: Kumiko Hayashi, Ph.D., Facultad de Estudios de Posgrado en Ingeniería, Universidad de Tohoku
Células Purkinje marcadas con GFP. Imagen XYZ con imagen confocal y de súper resolución en diferentes posiciones Z. Las imágenes con súper resolución son proyectadas por Z (10 cortes). Imagen 3D mostrada por FV31S-DT.
Datos de imagen por cortesía de: Michisuke Yuzaki, PhD., Departamento de fisiología, Facultad de medicina, Universidad de Keio.
Microscopio de investigación invertido IXplore SpinSR
Microscopio confocal de disco giratorio con súper resolución SpinSR10
SpinSR10: GFP-EB3 en la punta de microtúbulos extendidos en células HeLa
SpinSR10: Presentación de la unidad de disco giratorio

References: resolución 
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