Source: https://www.scribd.com/document/148821411/4-Optimizacion-del-detector-DAD-y-resolucion-de-problemas-tipicos-de-HPLC
Timestamp: 2019-02-21 22:22:59+00:00

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4.Optimización_del_detector_DAD_y_resolución_de_problemas_típicos_de_HPLC
4.Optimización_del_detector_DAD_y_resolución_de_pr...
Optimización del Detector DAD y Resolución de Problemas Típicos de HPLC.
Isidre Masana
Especialista de Productos UHPLC/MS
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC?
¿Cómo Mejorar Sensibilidad?
¿Cómo Resolver Solapamientos?
¿El pico es Puro? ¿Detecto todas las impurezas?
1220 Infinity 1260 Infinity
¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras?
¿Transferencia de métodos entre distintos modelos?
¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios?
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones con Detección DAD
Sens. x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth
Optimizando Condiciones Detección DAD
Diseño Óptico DAD/MWD Agilent Series (1090/1050) 1100/1200/1260 Infinity: Optimizado para la Mejor Sensibilidad y Flexibilidad. +30años Experiencia* Verificación
Lámpara de Tungsteno Lentes Filtro de Óxido de Holmio
Automática de Longitudes de Onda Excelente Resolución Espectral
"Diode-Array" de 1024 Elementos
Amplio Rango de Longitudes de Onda
Rendija Programable 1 a 16 nm Red Holográfica
Optimización Rápida de la Sensibilidad y Resolución
Tecnología compartida con Espectrofotómetro UV/VIS Agilent-8453
*1er DAD:1979 LC-DAD:1982 HP-1040
pero una menor resolución espectral. Página: 5 . No obstante la anchura típica de las bandas espectrales en disolución (30-60nm) se ve poco afectada por la utilización de p.e.Optimización de Sensibilidad / Resolución Espectral con Rendija Programable Espectro benceno perfil NO habitual en LC 1 nm 2 nm slit Rendija “slit” 4 nm 8 nm Ruído < 1x10-5AU Rendijas más gruesas proporcionan mayor intensidad de luz. rendijas de 8 nm. y en consecuencia mejor sensibilidad.
Señal: 255/30 Ref.Rendija: 8nm (16) .Resumen Optimización de Sensibilidad con Detectores “Diode Array – Agilent” Ácido Anisídico Longitud de Onda Analítica ÓPTIMO: . 340/100 Ancho de Banda de Referencia mAU 100 nm 30 nm Ancho de Banda al 50% de la altura Longitud de Onda de Referencia (lo más próxima posible a la analítica) 340 nm Longitud de onda (nm) Página: 6 .
Ahorro de espacio de disco duro .1 3.Mejora sensibilidad sin pérdida resolución .8 1 Ruido estadístico Detector α 1 n Válido para cualquier tipo de detector HPLC / GC / CE n = número de puntos promediados 1.3 seg 1.3 sec S/N 0.3 seg 0.05 0.0 seg 0.01 0.Influencia de la Frecuencia de Adquisición de Datos en la Sensibilidad 2.7 1.1 mAU 0./pico RSD%10-12% 8 ptos.3 sec 0.1 seg Tiempo de PeakWidth Respuesta (min) * Tiempo (min) 2.1 sec Ventajas optimización: . * Utilizar un PK WD de adquisición del orden del WIDTH (integración) del pico más fino de interés RSD% ~ 100 / (S/N)pico-pico RSD%<1% >15 ptos.Reprocesado más rápido de los datos./pico 1<RSD%<3% 12 ptos.005 6.0 sec 0./pico .1 0.
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver Solapamientos? ¿El pico es Puro? ¿Detecto todas las impurezas? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 8-37m ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? Página: 8 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones con Detección DAD Espectralmente Sens.
Abs B A tR Posibilidad de restar la absorbancia de una zona en la que el compuesto interferente absorbe lo mismo Longitudes Onda Analítica Referencia Absorbancia SUPRESIÓN ESPECTRAL del compuestos B B 285 nm con Ref.Resolución Espectral de Picos Cromatográficos Solapados: ¿Cómo cuantificar A en presencia de B? 285 nm sin Ref. 325 Abs A A tR (Referencia alternativa Longitud Onda (nm) 260) 285 325 Longiºtud de Onda Longitud de Onda Analítica referencia Página: 9 .
00 .D) 10 min : 630/30 nm ref: 590/38 nm E-132 Suprimido Espectralmente 400 200 50 25 0 450 500 550 600 650 700 nm 0 4 6 8 *DAD1.00.152 & 4. 20.706 & 10. 4.) Ref=8.00.E-132 E-104 E-124 E-129 mAU 175 *DAD1. 150 125 100 75 50 1000 25 800 E-132 0 600 E-133 4 6 8 *DAD1. 9.D mAU 175 150 125 100 75 50 25 0 4 6 10 min Ref: 590 612 630 Ref: 645 : 612/30 nm ref: 645/20 nm E-133 Suprimido Espectralmente 8 Esta opción permite “Resolver Espectroscópicamente Picos Cromatográficamente Solapados”.D mAU 175 150 125 100 75 E-133 Selectividad Agilent DAD’s: Supresión Espectral de Picos Utilizando Longitud de Onda de Referencia DAD1 B. 30.952 of 001-2801.50 Ref=570.00 Ref=645. .D *DAD1.592 of 001-2801. Sig=630. 30.292 (203 mAU.00 . Sig=430.D Norm.Apx) Ref=4.079 (1162 mAU. TT (COLO0219\001-2801.100. EXT of 001-2801.00. 38. Página: 10 10 min .00.00 Ref=590. Sig=612. EXT of 001-2801.
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver Solapamientos? Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 10-35m ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? Página: 11 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones con Detección DAD Espectralmente Sens.
BW 4 nm 4 5 Tiempo (min) 6 Anchos de banda de 80-100 nm permiten disponer de un detector "Universal” . BW 80 nm BANDA ANCHA 80nm. BW 4 nm BANDA ESTRECHA 4nm WL 280 nm.Muy útil en optimización composición del eluyente . WL 250 nm.Detección UV "Universal" Detección DAD con Banda Ancha WL 260 nm.Detección de compuestos no esperados (Debe ser > ó = anchura de la rendija seleccionada) Página: 12 .
2 mAU.527 7 8 8.806 & 6.212 of 001-3001.D Norm.D *DAD1.081 525/250 nm: detecta todo lo que absorba entre 400 y 650 nm.Apx) Ref=8.) Ref=4. Sig=512.412 9 min mAU 250 200 150 100 50 0 512/50 nm *DAD1. .D) 5. TT (COLO0219\001-2801.D *DAD1.D) mAU 250 200 150 100 50 0 7 8 9 9.412 of 001-3001.D *DAD1. Sig=525.100.5 mAU.412 3.1 mAU.50 Ref=570. TT (COLO0219\001-2801.289 5. 4.959 & 3. .) Ref=5.081 min 4 E-104/102 E-124/129 E-132E-133 3 620/60 nm E-102:Tartrazina E-104: Amarillo Quinolina E-124: Ponceau 4R E-132: Carmín Índigo 5 6 7 8 4. 9.505 of 001-3001. 5. . 8. 3.100.9 mAU.Universalidad Agilent DAD’s: Utilizando Detección con Banda Ancha DAD1 A.445 & 5.) Ref=5.057 4. 5.232 of 001-3001.) Ref=8.066 of 001-3001. Sig=430. TT (COLO0219\001-2801.D) 3.100.345 & 8.) Ref=2. .527 5.299 (1.7 mAU.4 mAU. . Sig=620.406 (2.903 9.065 (1. 3 4 5 6 DAD1 C. 5.250 Ref=800.219 & 4.059 (4.926 & 9.289 2 1 0 3 4 9 min 400nm 400 500 600 650nm 700 800 Página: 13 .D) mAU 250 200 150 100 50 0 8.50 Ref=650.903 BANDA ANCHA 250nm. 3 4 5 6 DAD1 E.912 (1.D *DAD1.659 of 001-3001. TT (COLO0219\001-2801.60 Ref=750.057 7 8 9 min mAU 250 200 150 100 50 0 430/50 nm 3 4 5 6 DAD1 D.100.D *DAD1.532 (1.
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver Solapamientos? Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente ¿Transferencia de Trazas y Mayoritarios? métodos entre distintos modelos? 13-32m Página: 14 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones con Detección DAD Espectralmente Sens.
o con un umbral de mínima intensidad espectral correcto y en un rango de long. Onda con buena linealidad (no empiece a saturar detector). éste se deberá ajustar correctamente.Consideraciones para la Determinación de la Pureza Espectral de un Pico. con uno (o varios) que se toman como referencia • El pico deberá estar bien integrado. • Alternativa: definir arrastrando el ratón la zona del pico para calcular su pureza.e. Página: 15 . • En caso de picos impuros revisar en que zona del pico y del espectro se produce la desviación. • Si no se utiliza el cálculo automático del factor de pureza mínimo. Se fundamenta en calcular la similitud de los espectros a lo largo del pico. tomando como referencia el factor de pureza que den patrones a concentración similar. • p.
del espectro se representa por un punto en función de su absorbancia entre los 2 espectros a comparar. Correlación = 0.999963 Factor de Similitud = 999.963 x1000 Patrón (mAU) Patrón (maU) o Espectro de Referencia 300 Normalizado 60 40 20 Patrón o Espectro de Referencia Desconocido 200 Cada nm. Correlación = 0.Cálculo Pureza Espectral del Pico Ejemplos Cálculo Factor de Similitud 100 80 Coef.056 Factor de Similitud = 56 100 0 250 300 350 400 0 10 20 30 Longitud de Onda (nm) Página: 16 Desconocido (mAU) . 100 0 0 0 50 100 150 250 300 Longitud de Onda (nm) 100 80 60 40 20 0 Desconocido (mAU) Desconocido 300 Normalizado Patrón o Espectro de Referencia 200 Coef.
La Importancia del Ajuste del Umbral de Intensidad Espectral Mínima para Pureza de Pico • En un pico mal integrado y con un “Threshold” espectral excesivamente bajo es habitual obtener “falsos picos impuros” 100 83 80 60 100 83 80 60 40 20 0 Patrón Patrón 220n m + 2 +1 0 Pureza Mínima calculada automáticamente 40 20 0 2 2 Ajuste de regresión 3 4+ + lineal 0 2280nm 3 +0 Coeficiente de correlación = 0.99 0 +5 3 60 + 3 10 0 + 23 0 + +3 0 100 20 40 60 80 0 Desconocido 220 250 280 300 Página: 17 .92399 2 7+ 2 0+ Factor de Similitud = 923.
Ejemplo picos Puro/ Impuros Espectralmente Arrastrando icono se define la franja del pico para calcular su pureza cuando su umbral e integración son incorrectos Pico impuro: impureza en la cola del pico Pico puro mal integrado pero con umbral intensidad espectral correcto Página: 18 .
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? con Detección DAD Espectralmente Sens. x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver Solapamientos? Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente ¿Transferencia de Trazas y Mayoritarios? métodos entre distintos 30x Rango Dinámico con HDR-DAD modelos? 19-26m Página: 19 .
Agilent 1200 Infinity High Dynamic Range (HDR-DAD) Solution 1260/1290 Infinity HDR-DAD Página: 20 .Incremento 30x del Rango Dinámico Lineal para cuantificar en 1 sola inyección compuestos a muy distinta concentración.
) API 1 API 1: iny.) API 1+2: iny. 100 ml (API 2 satura detector. 10 ml (API 1 baja resp. 70 ml con HDR Página: 21 .Combinaciones Dosis Fijas de Varios Principios Activos (API) con Muy Distinta Respuesta: *from Roche Switzerland Sin la opción HDR-DAD se requerirán 2 inyecciones con distinto volumen 7 UA • Agilent 1200 (black): API 2: 10 ml injected • Agilent 1200 (red): API 1: 100 ml injected • Infinity HDR-DAD (blue): API 1 and 2 simultaneously: 70 ml injected 3 UA API 2 API 2: iny.
7 mm “ path-length“ para altas concentraciones 3.Rango Dinámico x30 con HDR-DAD Combina 2 DAD‘s con celdas Max-Light de 3.7 mm path-length 60 mm path-length 10 x mayor sensibilidad ~3x mayor límite superior Conc [µg/mL] 30x Rango Dinámico (HDR-DAD) Página: 22 .7 mm y 60 mm Detector Signal [AU/cm] Cálculo de la señal combinada: 60 mm “ path-length“ para bajas concentraciones 3.
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens. x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente ¿Transferencia de Trazas y Mayoritarios? métodos entre distintos 30x Rango Dinámico con HDR-DAD modelos? 22-23m Página: 23 .
5 1.6x50.5µm 45 – 90% B en 3 y 2 min A:25mM Na2HPO4 .0 0.0 0.5 Time (min) 0.5 2. Diltiazam 2.REDUCCIÓN TIEMPO ANÁLISIS: Reducir Tg Aumentando F Al mantener TG x F = constante el perfil de la separación NO varía 5 F = 2. Flunarizina F = 3. pH 3 B: Metanol 2 y 3 mL/min 35°C Fármacos Cardiacos:1.Flujos Elevados Mejoran la Capacidad de Separación con Gradientes Parámetro dependiente de: Flujo (ml/min) K‘ = (87 x F x Tg) / ( % x V0 x S) “Factor de Capacidad ó Retención” en Gradientes Tiempo del gradiente (min) • Analito • Modificador Orgánico Volumen muerto de la columna % de incremento de Modificador Orgánico •S: definirá la “sensibilidad” del analito a variaciones en la proporción de modificador orgánico.0 mL/min Tg = 3 min 1 Columna: Gradiente Fase Móvil: 4 3 2 3 Flujo: Temperatura: Muestra: ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.0 0. 3. Lidoflazina 5. Dipyradamole 3.0 1. •Valores típicos S: aumentan con el tamaño de la molécula 2-5 moléculas pequeñas / 10 moléculas grandes (péptidos) / 40 moléculas muy grandes (proteínas) •Al aumentar el tamaño de la molécula aumenta su “sensibilidad” a cambios de composición del eluyente. AUMENTAR el flujo aumentará capacidad de separación EJEMPLO .0 3. Sí K’ aumenta el poder de separación aumentara.0 Time (min) Página: 24 . Nifedipina 4.0 1.0 mL/min Tg = 2 min 1 2 3 5 4 2 min min 2.5 1.5 2.5 3.
7um Flujo 3.140secPW Muestra de tranquilizantes Columna: Porosa superficial Poroshell-120 50 x 2.Agilent Poroshell: el poder de separación de flujos elevados Ideales para UHPLC con } 0. 2.095sec PW 0.7µm Núcleo Sólido 1.5µm equipos de 400bars 2. ~ 700 bar Gradiente 2-92% ACN en 0.7um Columnas Superficialmente Porosas: permiten muy elevadas velocidades lineales con elevada resolución y menor presión (↓40-50%) que las <2µm 10 segundos!! 2 segundos!! 0.1mm.5ml/min.5 s Página: 25 .4min T= 80 °C 0.
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente ¿Transferencia de Trazas y Mayoritarios? métodos entre distintos 30x Rango Dinámico con HDR-DAD modelos? 26-19m Página: 26 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens.
LCxLC: Cromatografía Bidimensional Exhaustiva “Comprehensive 2D-LC“ and heart-cutting 2D-LC “Comprehensive 2D-LC“ (LCxLC): El eluyente completo de la primera columna se inyecta a la 2ª columna y se analiza con gradientes muy rápidos. El tiempo en la 2 ª dimensión coincide con el de la recolección del eluyente y los picos se LC1 reconstruyen mediante software. un pico de la primera dimensión debe muestrearse al menos 3 a 4 veces. LC2 LC1 LC2 1st peak from 1st dimension 2nd peak from 1st dimension 3rd peak from 1st dimension Página: 27 .
Infinity Detector 1290 Infinity Binary Pump 1290 Infinity Autosampler or 1260 HiP Autosampler Optional Loop2 1260/1290 Infinity Detector 1ª Dimensión 1260 Infinity Capillary Pump 1260 Infinity Autosampler For 1st dimension chromatogram and peaktriggering 1260/1290 Infinity detector 2ª Dimensión To monitor waste-line 1260 Infinity Binary or Quaternary Pump La mayoría de Bombas o Autoinyectores Agilent sirven en la 1st dimensión! Casí todos los detectores están soportados! La 2ª dimensión requiere una Bomba 1290 Infinity Binaria.Hardware LCxLC – Flexibilidad de Módulos 2ª Dimensión 1290 Infinity Binary Pump 1ª Dimensión 2pos/4port-duo One or two 1290 Infinity TCC Loop1 waste Nueva vávula Agilent 2D-LC con 2 rutas de flujo completamente simétricas y vaciado a Optional contracorriente de 1260/1290 ambos “loops“. Página: 28 .
Muy Sencilla y Rápida Programación Gráfica del Gradiente de la 2ª dimensión. Muy sencilla programación gráfica del gradiente de la 2ª dimensión (operación muy tediosa y laboriosa por procedimientos habituales) Página: 29 .
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth SFC ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente ¿Transferencia de Trazas y Mayoritarios? métodos entre distintos 30x Rango Dinámico con HDR-DAD modelos? 30-15m Página: 30 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens.
Exceso Enantiomérico (impurezas): Típica Aplicación Farmaceútica “díficil”. 0. 5 µm (Chiral Technologies) CO2 Supercritical Fluid Modifier Outlet Pressure Flow Rate MeOH w.05% !!! Página: 31 .6 ID x 250 mm.1% DEA 150 bar 2. 220 nm OH OH Permite el Análisis de impurezas Quirales < 0.1.0 mL/min % modifier 25% 30°C 5 µL Isocratic Temperature Injection Volume Detection DAD. Mezcla Racémica: R. 4.1’-bi-2-naphthol y S– 1.1’-bi-2-naphthol Column ChiralCel OD-H.1% TFA + 0.
Precision and Dynamic Range >10. data analysis and reporting  Agilent warranty and service quality  Single Vendor Solution – Single Vendor Support Makes routine analytical SFC a reality! Página: 32 ..01% level impurities Lowest Operating Cost.000 for accurate quantitation of 0. Ever  HPLC-like Sensitivity. Customers can reconfigure their SFC system for HPLC. Reliability and Ease-of-Use Highest Analytical SFC Performance. reversible design.  ChemStation control.  Upgrade option* for pre-exisiting Agilent 1100 and 1200 LC systems (*incluye bomba binaria SFC).. Flexibility and Reliability  Highest investment protection by modular. Cost-efficiency.The Agilent 1200 Infinity Analytical SFC System The New Standard in Performance.. Green Chemistry  10-15x lower operating costs by compatibility with standard grade CO2 instead of liquid SFC grade CO2  Lowest solvent consumption and waste generation Ease of use.
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens. x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth SFC ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ISET ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 32-13m ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? 30x Rango Dinámico con HDR-DAD Página: 33 .
25 % AmAc.Problema: Reproducción de Analisis en Gradiente con diferentes HPLC´s: . Eluent: A =0 . 150 Gradient: 0-15 min.872 9.325 7. DAD1B.763 mAU Sample: 0.937 mAU 200 1290 Infinity LC 10 12 8.45 ml/min.480 7. 0.40 (B:\RIC\AGI.930 DAD1 B.951 50 2.744 0 Página: 34 2 4 6 8 9.975 8.393 .. 5-57 % B 100 El resultado: • Diferencias en los RT y resolución • ¡Se juntan 2 picos! 10 10.545 10 10..673 2 4 6 8 DAD1 C.328 2.884 6.747 3. Sig=275.005 12.RIC DATA\1 PHARMA METOCLOPRAMIDE\WAD PHARMA\XBRIDGE-2000004.538 9. B = ACN.379 12 12. 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI. 3. DAD1B.4 Ref=400.887 3.5% impurities in formulation (metoclopramide) 200 12.049 2 4 6 8 DAD1 C.395 12.D) 6.323 8..088 6.5 µm dp.249 12 150 100 50 0 2. 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI.923 9.D) 8.747 9. DAD: Signal B.A\GV 1PHARMA\HPLC000003.A\GV 1PHARMA\HPLC000001.159 Xbridge C18. 150x3 mm.215 12..121 8.320 9.630 12.. DAD: Signal B.Impacto del volumen muerto y de la calidad de la mezcla 150 8.D) mAU 200 1200 Series LC Quatenary Pump 100 50 0 2..744 6.
5 min Página: 35 .Como trabaja (1290 con un 1200) mAU 400 350 300 250 200 150 Inyecctión Mismas condiciones de gradiente pero desplazando el gradiente y emulando el perfil del gradiente a clonar 100 50 Programa de gradiente 1290 gradiente 1200 gradiente 0 0 0.5 1 1.Tecnología de Emulación Inteligente .5 3 3.5 2 2.
Seleccionar modelo autoinyector Página: 36 June 28.Selección de Modelos a Emular Seleccionar modelo Bomba Emulación de “cualquier” HPLC/UHPLC con el 1290 y la nueva tecnología ISET. 2012 .Intelligent System Emulation Technology ISET .
25 min mAU 10 5 0 1 Página: 37 1.25 1.92 1290 Infinity LC 0 1 1.25 1.5 2.25 2.5 2.25 0 min mAU 10 5 Rs= 2.5 1.8 µm mAU 10 5 Rs= 3.75 2 2.75 3 3.6 x 50 mm.75 3 Rs= 3.75 2 2.25 2.25 2.29 1290 Infinity LC con iSET 3.5 1.Analisis de Impurezas con 1100 y 1290 Binario Columna: 4.5 1.5 2. 1.25 min .25 1.75 3 3.75 2 2.23 1100 Series Binary LC 1 1.
x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth SFC ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD Bomba Cuaternaria 1290 Infinity con ”BlendAssist”. Nueva bomba ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ISET ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 36-9m ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? 30x Rango Dinámico con HDR-DAD Página: 38 .¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens.
D). B.4% TFA en ACN. 5 to 95% gradiente de ACN con 0.1% TFA en Agua y 0. 20 – 80% gradiente de ACN con 0.08% TFA in ACN. Water Water 1% TFA Ejemplo de 2 métodos con modificadores: 1. 2. C. ACN ACN 1% TFA Con BlendAssist: basta programar el gradiente binario H2O/ACN y definir el factor de dilución! Página: 39 .5% TFA en Agua y 0.Nueva Bomba 1290 Infinity Cuaternaria: Asistente de Mezclas ”BlendAssist” “BlendAssist“: una sencilla herramienta para la programación del gradiente y dilución “online“ de tampones y modificadores a partir de soluciones stock. o mediante el uso de soluciones stock de TFA en agua y en ACN programar complejos gradientes cuaternarios (% A. Sin BlendAssist necesita o mezclar perviaemnte los disolventes necesarios.
Bomba 1290 Infinity Cuaternaria con ”BlendAssist” Programación ”BlendAssist” • • • Ahorra tiempo de personal: al reducir necesidad de preparar tampones. Versión opcional „BlendAssist Pro“ con funcionalidades adicionales Página: 40 . Reduce posibilidad de error y mejora la trazabilidad. Nueva tecnología de mezclado a baja presión con “InletWeaver” y “active damping”: • Gradientes con elevada exactitud y precisión de 1-99% (en rango composición). Mejora la reproducibilidad (distintos días). • Sólo <350µL volumen retado del gradiente.
30 25 20 15 6 fases móviles mezcladas dinámicamente 10 5 0 1 2 3 4 min Norm. 40 35 El mezclado dinámico mejora considerablemente la reproducibilidad* de tiempos de retención (*entre días y entre usuarios) 6 fases móviles mezcladas manualmente (por diferentes usuarios) Usuarios1 a 6 1 2 3 4 min 30 25 20 15 10 5 0 Página: 41 . Manual con Diferentes Usuarios Análisis of Glucocorticoides Norm.Comparación de Mezcla de Fases Móviles: Dinámica (“online”) vs.
Nueva bomba ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? Autoinyectores con capacidad de Mezcla/ Derivatización ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico ISET ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 40-5m ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? 30x Rango Dinámico con HDR-DAD Página: 42 . x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth SFC ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD Bomba Cuaternaria 1290 Infinity con ”BlendAssist”.¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens.
1100.e.-INYECTAR ARG GLU Bomba a columna deshecho LEU LYS VAL PRO 100 ASN ASP SER THR TYR MET ILE PHE ORN 50 HIS CYS-CYS TRP 0 ROJO: muestra AAS libres 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min También es útil para mezclar patrones durante la puesta a punto de métodos o p.-Toma O µl agua (vial 1) . Wavelength=338 nm.lavado exterior aguja 8. Ejemplo Derivatización precolumna: Aminoácidos (OPA + FMOC) Disponible en : 1290 Infinity.-Toma O µl agua (vial 1) – lavado aguja 6.-Mezclar 8 µl 3 veces – Derivatiza AAS SECUNDARIOS 10.lavado exterior aguja 4. Wavelength=338 nm. TT (AASM0531\007-0401.D) Muestra Reactivo ALA Unidad de Muestreo Dosificador de Muestra 350 DERIVATIZACION AMINOACIDOS 300 GLY 250 200 150 1. 1050.D) VWD1 A.-Toma O µl agua (vial 1) .D) VWD1 A.-Toma 1 µl muestra AAS (vial X) 5. TT (AASM0531\095-0101.Preparación Muestra en Inyector Automático. TT (AASM0531\003-0201. 1200. 1090 mAU VWD1 A. Wavelength=338 nm.-Toma 5 µl tampón Borato (vial 2) 2.-Toma 1 µl reactivo FMOC (vial 3) 9.-Mezclar 7 µl 6 veces – Derivatiza AAS PRIMARIOS 7.1260 Infinity. para automatizar la derivatización con FMOC en el análisis de Glifosato y AMPA por LC/MS Página: 43 .-Toma 1 µl reactivo OPA (vial 3) 3.
¿Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC? Soluciones Cromatográficas Espectralmente Sens. x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth SFC ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD Bomba Cuaternaria 1290 Infinity con ”BlendAssist”. Nueva bomba ? ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Detección DAD con Banda Ancha ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de AMDS LC/MS Tampones y Muestras? Autoinyectores con capacidad de Mezcla/ Derivatización ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico ISET ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? 42-3m ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? 30x Rango Dinámico con HDR-DAD Página: 44 .
LC/MS-QqQ: La clave para la Productividad • 1 columna para todo C18 • Los mismos eluyentes • ESI+: A: 0. Aflatoxinas Vitaminas.... Herbicidas.... Micotoxinas. • Métodos (gradientes y transiciones) específicos para cada familia.1%HCOOH Pesticidas...... beta-gonistas.. Sudanes. Fármacos Antibióticos. REDUCE COSTES especialmente de mano de obra .. Melaminas.. Hormonas.. Página: 45 .1%HCOOH B: 95% ACN/ 0... La selectividad y robustez de QqQ en MRM calibrando sobre matriz permite el uso de columnas y eluyentes comunes para una gran variedad de aplicaciones....
Nueva bomba LC/MS AMDS Detección DAD con Banda Ancha passed ¿Cómo Reducir Tiempo en la Preparación de Tampones y Muestras? ¿Detecto todas las impurezas? ¿El pico es Puro? Pureza Espectral de un Pico Autoinyectores con capacidad de Mezcla/ Derivatización ¿Transferencia de métodos entre distintos modelos? ISET Página: 46 ¿Cómo Cuantificar Simultáneamente Trazas y Mayoritarios? 30x Rango Dinámico con HDR-DAD . x10 con celda 60mm con Tecnología Max Ligth Espectralmente ¿Cómo Mejorar Sensibilidad? Optimizando Condiciones Detección DAD SFC ¿Cómo Resolver LCxLC Solapamientos? UHPLC y Flujos Elevados Bomba Cuaternaria 1290 Infinity con ”BlendAssist”.Resumen: Algunas Soluciones a Problemas Típicos en HPLC Sens.
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