Source: https://www.slideshare.net/mirian_tinco/analisis-de-pesticidas-en-papa
Timestamp: 2017-03-30 11:47:43+00:00

Document:
Mirian Tinco, practicó
at Scouts La Salle
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÌMICA E.A.P DE FARMACIA Y BIOQUÌMICA Análisis de residuo de plaguicida organofosforado(Methamidophos) en muestras de papa de mercados de Lima Metropolitana TESIS para optar el título profesional de Químico Farmacéutico AUTOR Mónica Sara Aquino Anchirayco Carmen Cecilia Castro Mere ASESOR Jesús Víctor Lizano Gutiérrez Lima – Perú 2008 2.
“A mi madre, principal fuente de energía y ejemplo en mi vida,así como a mi familia en quienes me apoyo para seguir adelante”. Carmen Castro Mere. 3.
“A mis padres y a toda mi familia quienes están a mi lado en cada momento de mi vida, esperando siempre lo mejor para mi” Mónica Aquino Anchirayco. 4.
AGRADECIMIENTOS• Al Dr. Jesús Víctor Lizano Gutiérrez, asesor de nuestra tesis por su comprensión, tiempo y dedicación al momento de la supervisión de nuestro trabajo.• A la Cátedra de Toxicología, por su apoyo en los análisis; Cromatografía en Capa Fina.• A la Corporación MEDCO S.A.C. por su apoyo en los análisis por Cromatografía Líquida de Alta Resolución. 5.
AGRADECIMIENTOS ESPECIALESA los miembros del jurado calificador y examinador • Dr. Carlos Bell Cortez (PRESIDENTE) • Dra. Delia Whu Whu (Miembro) • Dr. Moisés García Ortiz (Miembro) • Dr. Alfonso Apesteguía Infantes (Miembro) Por sus invalorables aportes y sugerencias. 6.
CONTENIDORESUMENSUMMARYINTRODUCCIÓNHIPÓTESISOBJETIVOSI. GENERALIDADESII. PARTE EXPERIMENTAL 2.1 Determinación Cualitativa de Methamidophos por Cromatografía en Capa Fina (CCF). 2.2 Determinación Cuantitativa de Methamidophos por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).III. RESULTADOSIV. DISCUSIÓNV. CONCLUSIONESVI. RECOMENDACIONESVII. BIBLIOGRAFÍAVIII. ANEXOS 7.
RESUMENSe realizó el análisis toxicológico de identificación y cuantificación del residuode plaguicida organofosforado METHAMIDOPHOS en 20 muestras de papa endiferentes puestos de venta en el Departamento de Lima. El análisis cualitativose realizó por cromatografía en capa fina (CCF) y el cuantitativo porcromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Se determinó presencia deMethamidophos en la totalidad de muestras analizadas. De los 10 muestreosrealizados en mercados mayoristas: 7 muestreos (70%) exceden el LímiteMáximo Residual (LMR) mostrando una concentración máxima de 2,7055 ppmde Methamidophos. De los 10 muestreos realizados en mercados minoristas: 2muestreos (20%) exceden el LMR mostrando una concentración máxima de0,1753 ppm de Methamidophos. Se concluyó que dichas concentracionesexceden el LMR establecido por el Codex Alimentarius (LMR = 0,05 ppm).Palabras clave: Residuo Methamidophos, plaguicida, organofosforado, LMR,CCF, HPLC. 8.
INTRODUCCIÓNEl trabajo de la tierra no siempre ha sido igual; con el paso de los años se pasóde una agricultura tradicional basado en elementos naturales (agua, sol, tierra,estiércol) a una agricultura industrial que emplea nuevos elementostecnológicos, como la maquinaria y los productos químicos cada vez mássofisticados.Es por ello que a lo largo de los años han ido variando los métodos para lucharcontra las plagas, no siendo difícil encontrar agricultores que usan plaguicidasque acaban con cualquier tipo de plaga, el uso indiscriminado de estassustancias está ocasionando contaminación de aguas, suelos y alimentos,dicha contaminación se debe a la presencia de residuos de plaguicidas.La contaminación de alimentos es de gran importancia un ejemplo se da en lapapa; ya que el Perú es un país donde la dieta nacional se basa en dichoalimento; cultivo peruano en el cual se utiliza una gran variedad de plaguicidas; 9.
se estima que del total de plaguicidas usados en el Perú, aproximadamente20% se destina a este cultivo; el incremento en el uso de plaguicidas ha tenidocomo consecuencia que se encuentren residuos de estos compuestos en losalimentos dando lugar a la reducción de la calidad del tubérculo; los plaguicidasmás utilizados para este cultivo son los organofosforados y los carbamatos.Lo antes expuesto ha motivado la realización del presente trabajo el cual formaparte de un estudio a nivel del Departamento de Lima realizando el muestreoen dos mercados mayoristas (mercado Tres de Febrero y mercado Manzanilla)y dos mercados minoristas (mercado Ramón Castilla y mercado JorgeChávez), la identificación se realizó utilizando métodos de Cromatografía enCapa Fina (CCF) y Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)determinando presencia y concentración respectivamente del residuo deplaguicida organofosforado METHAMIDOPHOS ya que dicho plaguicida seencuentra dentro de los más usados para este cultivo; el trabajo se realizó en elLaboratorio de Toxicología y Química Legal de la Facultad de Farmacia yBioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y el Área deControl de Calidad de Corporación Medco S.A.C. 10.
HIPÓTESIS:La concentración de residuo de methamidophos en papa, sobrepasa el límitemáximo residual permitido según el Codex Alimentarius.OBJETIVO GENERAL: • Determinar residuos de plaguicidas organofosforados en papas de los mercados de Lima Metropolitana.OBJETIVOS ESPECÍFICOS: • Determinar la presencia de residuos de methamidophos en papa por cromatografía en capa fina (CCF). • Determinar la concentración de residuo de methamidophos en papa por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). • Determinar si la concentración de residuo de methamidophos se encuentra dentro del Límite Máximo Residual (LMR) establecido por el Codex Alimentarius. 11.
I GENERALIDADES1. ANTECEDENTESLa papa es una planta originaria de los Andes, siendo Perú el principal centrode origen de papa nativa, cuya antigüedad data de aproximadamente 7000años antes de las culturas preincas e incas.Los primeros vestigios de papa fueron encontrados durante unas excavacionesrealizadas en las cercanías del pueblo de Chilca, al sur de Lima, en el año de1976; nuestro país es el centro de mayor biodiversidad, con 100 especies y2800 variedades de las 3900 que existen en el mundo.Desde ese momento, y con el correr de los siglos, la historia de la papa haestado relacionada con el desarrollo de variedades adaptables a diversascondiciones ambientales y con su ingreso, en forma exitosa, en casi todos lospaíses del planeta. Haciendo un poco de memoria recordaremos que debido ala conquista española del Imperio Incaico la papa fue introducida en lapenínsula ibérica hacia 1550 y de allí al resto de Europa, llegando a ser en1750 un alimento de gran importancia (1).Hoy la papa representa una de las contribuciones más importantes de la regiónandina (en especial de nuestro país) al mundo entero, por ser uno de loscultivos alimenticios más consumido y apreciado. 1 12.
La papa se cultiva en cerca de 151 países, representa un alimento en la dietade la población Mundial y contribuye a reducir el hambre y lograr la seguridadalimentaria. Los principales países productores de papa son China, Rusia,India, Ucrania y Estados Unidos de Norteamérica, que en conjunto logran el52.8% de la producción Mundial.El comportamiento mensual de la producción nacional de papa esmarcadamente estacional: de julio a febrero la producción nacional mensual depapa oscila alrededor de las 140 mil toneladas; sin embargo, en marzo hay unatendencia creciente que tiene sus valores más altos entre abril y mayo, dondese llega a producir mensualmente alrededor de las 640 mil toneladas (2).Son 19 regiones de todo el Perú los que cultivan la papa. Huánuco, Puno,Junín, La Libertad y Cajamarca concentran el 59.7% de la producción nacional,pero las regiones de Ica, Lima y Arequipa son las que tienen los mayoresrendimientos. Ello se puede explicar, por las tecnologías empleadas en lasiembra del cultivo, el acceso de las unidades agropecuarias a activos públicosy privados, el desarrollo de los mercados agrarios y las condiciones de lanaturaleza.Las regiones de Puno, Pasco, Huancavelica y Huánuco dedican más del 40%de su superficie al sembrado de la papa, lo que indica la importancia de esteproducto en el patrón de cultivos de la región y en la estructura de ingresosagrícolas de los productores.El 60% de la producción total de papa se comercializa, 20% se destina asubconsumo y 20% se guarda para semilla. 2 13.
De acuerdo al III Censo Agropecuario (CENEAGRO), se tiene alrededor de597.235 productores de papa, distribuidos principalmente en Puno (150.000),Cuzco (72.000), Junín (54.000), Cajamarca (49.200), Huanuco (45.978) yHuancavelica (45.763). A nivel nacional se cultiva un promedio de 270.000 Hade papa, que genera 110.000 puestos de trabajo permanentes (30 millones dejornales) (7.700 en la costa y 102.300 en la sierra), contribuyendo al sectoragrario con el 13% del PBI AgrícolaLa Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura(FAO) señala que la invasión de malezas, las enfermedades de las plantas ylos insectos, provocan la pérdida de entre 30 y 35% de las cosechas, sin el usode plaguicidas las pérdida serían mayores. Sin embargo debido al uso deagroquímicos todos los años resultan intoxicados alrededor de 25 millones detrabajadores agrícolas, de los cuales mueren unos 20 000. Esto, sin considerarlos errores de diagnóstico, especialmente cuando los casos deenvenenamiento, no se comunican a las autoridades o no se registran (3).Cada 30 de mayo se celebra el día Nacional de la papa por ResoluciónSuprema Nº 009-2005-AG. Este año se reforzará la identidad de la papamostrando que se trata de un producto, que se originó en nuestros Andes y seconvirtió en fuente de alimento de todo el Mundo. Actualmente, la papa es elcuarto alimento básico en el mundo, después del arroz, el trigo y el maíz. 3 14.
Es importante recalcar que la FAO ha declarado el 2008 como el AñoInternacional de la Papa gracias a una iniciativa peruana. La comisiónmultisectorial de celebración está presidida por el Ministerio de Agricultura.2. DEFINICIONES: 2.1. Ingestión diaria admisible (IDA): es la dosis diaria que ingerida durante todo el período vital, parece no entrañar riesgos apreciables para la salud del consumidor. Se expresa en miligramos de sustancia química por kilogramo de peso corporal. 2.2. Límite máximo para residuos de plaguicida (LMR): es la concentración máxima de residuos de un plaguicida (expresada en mg/kg), recomendada por la Comisión del Codex Alimentarius, para que se permita legalmente su uso en la superficie o la parte interna de productos alimenticios para consumo humano y de piensos. Los LMR se basan en datos de Buenas Prácticas Agrícolas (BPA) y tienen por objeto lograr que los alimentos derivados de productos básicos se ajusten a los respectivos LMR y sean toxicológicamente aceptables (4). 2.3. Plaguicida: se entiende cualquier sustancia destinada a prevenir, destruir, atraer, repeler o combatir cualquier plaga, incluidas las especies indeseadas de plantas o animales, durante la producción, almacenamiento, transporte, distribución y elaboración de alimentos, el término incluye las 4 15.
sustancias destinadas a utilizarse como reguladoras del crecimiento de lasplantas, defoliantes, desecantes, agentes para reducir la densidad de fruta oinhibidores de la germinación, y las sustancias aplicadas a los cultivos anteso después de la cosecha para proteger el producto contra la deterioracióndurante el almacenamiento y transporte.2.4. Según la OMS, un pesticida o plaguicida: es cualquiersustancia o mezcla de sustancias de carácter orgánico o inorgánico, queestá destinada a combatir especies indeseables de las plantas y animalesque son perjudiciales para el hombre o que interfieren de cualquier otraforma en la producción, elaboración, almacenamiento, transporte ocomercialización de alimentos.2.5. Residuo de plaguicida: es cualquier sustancia especificadapresente en alimentos, productos agrícolas o alimentos para animales comoconsecuencia del uso de un plaguicida. El término incluye cualquierderivado de un plaguicida, como productos de conversión, metabolitos yproductos de reacción, y las impurezas consideradas de importanciatoxicológica.2.6. Base para el Establecimiento de Limites máximos del Codexpara Plaguicidas: los límites máximos del Codex para residuos serecomiendan teniendo en cuenta datos apropiados sobre residuos,obtenidos principalmente de ensayos supervisados. Los datos sobreresiduos obtenidos de ese modo reflejan las modalidades de empleo 5 16.
registradas o aprobadas del plaguicida, de conformidad con las "buenasprácticas agrícolas".Estas pueden variar considerablemente de una región a otra debido alas diferentes necesidades de control de plagas de cada lugar, necesidadesmotivadas por muy diversas razones. Por consiguiente, también puedenvariar los residuos presentes en los alimentos, particularmente enproximidad de la recolección. Al establecer los LMR del Codex, se tienen encuenta, en la medida de lo posible y según los datos disponibles, esasvariaciones de los residuos debidas a diferencias en las "buenas prácticasagrícolas".Como los LMR del Codex abarcan una amplia gama de modalidades de usoy "buenas prácticas agrícolas" y tienen que reflejar los niveles de residuosinmediatamente después de la cosecha, en algunas ocasiones pueden sersuperiores a los niveles de residuos que se encuentran en las actividadesnacionales de vigilancia. Puede ocurrir eso especialmente con losplaguicidas fácilmente degradables y cuando se efectúa el análisis en unpunto de la cadena de distribución que queda muy lejos de la últimaaplicación del plaguicida (4).Se establecen LMR del Codex sólo cuando se cuenta con pruebas deinocuidad, para los seres humanos, de los residuos resultantes,determinadas por la Reunión Conjunta FAO/OMS sobre Residuos dePlaguicidas, lo que significa que los Límites Máximos del Codex paraResiduos representan niveles de residuos que son toxicológicamenteaceptables. 6 17.
La finalidad primordial de establecer límites máximos para residuos deplaguicidas presentes dentro o en la superficie de los alimentos y enalgunos casos, en los piensos, es proteger la salud de los consumidores.Los LMR y LMRE del Codex sirven para lograr dicha finalidad primordial,puesto que contribuyen a asegurar que se aplique al alimento solamente lacantidad mínima de plaguicida que realmente hace falta para combatir unaplaga. Los LMR del Codex se basan en datos sobre residuos obtenidos enensayos supervisados y no se recaban directamente de las dosis deingestión diaria admisible (IDA), las cuales son una expresión cuantitativade la cantidad de residuos que las personas pueden ingerir diariamente enun período largo y que se establecen tomando como base datostoxicológicos apropiados obtenidos principalmente de estudios conanimales.La aceptabilidad de los LMR del Codex se establece comparando la dosisde ingestión diaria admisible con la dosis de ingestión diaria estimada,determinada mediante estudios de ingestión adecuados. Comparando losdatos de ingestión obtenidos mediante tales estudios, con las dosis deingestión diaria admisible se determina la inocuidad de los alimentos en loque respecta a su contenido de residuos de plaguicidas. Con el patrocinioconjunto del PNUMA, la FAO y la OMS, se han preparado las pautas parapronosticar la ingesta dietética de residuos de plaguicidas. Se estánrevisando las directrices con objeto de obtener estimaciones más realistasque las deducidas aplicando las directrices vigentes. 7 18.
3. CLASIFICACIÓN DE LOS PLAGUICIDAS: 3.1. Según la especie a combatir: Compuestos arsenicales Compuestos fluorados MINERALES Azufre Derivados del selenio Organofosforados ORGÁNICOS DE Organoclorados INSECTICIDAS SÍNTESIS Carbamatos A BASE DE ACEITES Aceites antracénicos MINERALES Aceites de petróleo Nicotina DE ORIGEN VEGETAL Piretrina Rotenona Sales de NH4+, Ca++, Cu++, Fe+++, MINERALES Mg++, K+, Na+, en forma de sulfatos, nitratos, cloruros, cloratos. Fitohormonas Derivados de la urea Triazinas y Diazinas HERBICIDAS Derivados de los fenil sustituidos y las ORGÁNICOS quinoxalinas Derivados de la oxiquinoleína Derivados de las tiadizinas y tiadiazoles Paraquat OTROS Diquat Piclorame Sales de cobre MINERALES Compuestos arsenicales Aceites minerales FUNGUICIDAS ORGANOMETÁLICOS Derivados organomercuriales Carbamatos y ditiocarbamatos Derivados del benceno ORGÁNICOS Amicidas Benzonitrilos Derivados cumarínicos Warfarinas RODENTICIDAS Minerales Sales de talio Cuadro 1. Cuadro según Guía de Seminarios de Toxicología y química Legal del Departamento de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de la Plata (5). 8 19.
3.2. Clasificación de la Organización Mundial de la Salud (OMS):La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha recomendado, sujeta aactualizaciones periódicas, una clasificación según su peligrosidad,entendiendo ésta como su capacidad de producir daño agudo a la saludcuando se da una o múltiples exposiciones en un tiempo relativamentecorto. Esta clasificación se basa en la dosis letal media (DL50) aguda, porvía oral o dérmica de las ratas. Sin embargo; un producto con un baja dosisletal media (DL50) puede causar efectos crónicos por exposiciónprolongada. 3.2.1. Dosis o concentración letal 50 (DL50): Es la cantidad de miligramos de ingrediente activo por kilogramo de peso, requerido para matar al 50% de los animales de laboratorio expuestos. La DL50 en el caso de los plaguicidas, debe determinarse para las diferentes rutas de exposición (oral, dérmica y respiratoria) y en diferentes especies de animales. Clase Ia: sumamente peligroso. Clase Ib: muy peligroso. Clase II: moderadamente peligroso. Clase III: poco peligroso. Clase IV: productos que normalmente no ofrecen peligro. 9 20.
Cuadro 2. Cuadro según clasificación toxicológica de la OMS para plaguicidas de uso agrícola (6).Además de estas categorías existen otros tres grupos de plaguicidas: Grupo V: Incluye a aquellos productos que no implican un riesgo agudo cuando se usan normalmente. Tienen un DL50 oral mayor o igual que 2000 mg/Kg en el caso de los sólidos y mayor o igual a 3000 mg/Kg en el caso de líquidos. Grupo VI: Aquellos productos a los que no se les asigna ninguna categoría por considerarlos obsoletos o descontinuados. Grupo VII: Fumigantes gaseosos o volátiles. La clasificación de la OMS no establece criterios para las concentraciones aéreas en las cuales pueda basarse la clasificación. La mayoría de estos 10 21.
compuestos son de muy alta toxicidad y existen recomendaciones sobre límites de exposición ocupacional en muchos países.• Los plaguicidas Ia y Ib se caracterizan por ser los dos grupos de mayor toxicidad según la Organización Mundial de la Salud. Esta clasificación se basa en la concentración del ingrediente activo con el que ha sido elaborado y el estado físico del producto formulado.3.3. Según el riesgo para la fauna se clasifican en tres categorías: Categoría A: Productos inocuos para la fauna. Categoría B: Productos medianamente peligrosos, que podrían presentar riesgo para la fauna en caso de empleo masivo, repetitivo o inadecuado. Categoría C: Productos muy peligrosos, de uso restringido.Todo producto fitosanitario debe estar etiquetado con tres letras queindiquen su toxicidad. Por ejemplo, A(BC), C(AC), B(BA), La primera letraindica la peligrosidad para el hombre y los animales domésticos(actualmente se sustituye esta denominación por la normalizada de nocivo,tóxico o muy tóxico), la segunda señala la toxicidad para la fauna terrestre,y la tercera indica la peligrosidad para la fauna acuífera. En función de estascategorías, habrá ciertas limitaciones y restricciones para su uso en 11 22.
determinadas zonas (p. ej., un producto de categoría C para la fauna terrestre no puede emplearse en viñedos, olivares, zonas húmedas).4. ETIQUETADO DE LOS PLAGUICIDAS. • Siempre se ha de leer la etiqueta del plaguicida, así como cualquier otra información que lo acompañe en forma de folletos. Si la información de que disponemos nos parece insuficiente debemos requerir al servicio técnico del fabricante para que la amplíe. • Nunca debemos conformarnos con unas inciertas explicaciones orales por parte del comercializador del producto ni del técnico que lo recomienda. La etiqueta del plaguicida debe venir en castellano y contendrá, de manera inexcusable, la siguiente información: a. Nombre comercial del plaguicida. b. Contenido neto del envase. c. Número de inscripción del producto en el Registro Oficial de Productos y Material Fitosanitario. d. Nombre o razón social del titular de la inscripción en el Registro y su domicilio. e. Identificación del lote de fabricación. f. Materia o materias activas y su concentración. g. Tipo de formulación. 12 23.
h. Nombre de las sustancias tóxicas, muy tóxicas o corrosivas que acompañen a la materia activa, si sus concentraciones sobrepasan los porcentajes que indique la legislación vigente. i. Símbolos o indicaciones de peligro en negro sobre fondo amarillo anaranjado, de acuerdo con la vigente reglamentación sobre etiquetado de productos. j. Riesgos de uso. k. Consejos de prudencia. l. Formas de actuar ante una intoxicación, antídoto y recomendaciones al médico. m. Modo de empleo, incluyendo la denominación de los patógenos que controla, los cultivos para los que está autorizado, la dosis de empleo, los plazos de seguridad y la forma de aplicación recomendada. n. Fecha de caducidad. o. Indicación de destruir los envases que hayan contenido productos nocivos, tóxicos o muy tóxicos y, en caso de envases retornables, indicación de ello (p. ej., envases de bromuro de metilo).Si las dimensiones del envase no permiten emplear una etiqueta que puedacontener toda esta información de forma clara y visible, la legislación autoriza aetiquetar con una información parcial, incluyéndose el resto de ladocumentación en un folleto que acompañe a cada envase. 13 24.
5 FISIOLOGÍA DE LAS PLANTASPara comprender lo que sucede cuando se aplica un plaguicida a una planta,ya sea en forma directa por medio de rociado foliares, por el recubrimiento desemillas o en la incorporación al suelo, es necesario conocer la bioquímicafundamental de la planta.El sistema radicular de la planta absorbe el agua y los minerales de la solucióndel suelo; la porción central de la raíz contiene dos tipos importantes de tejidosconductores, el xilema y el floema. El xilema es el responsable del movimientodel agua a través de la planta ya que es continuo desde la punta de la raízhasta las nervaduras de las hojas y contiene una columna de aguaininterrumpida. El agua y los minerales son transportados de las raíces al restode la planta por la corriente de transpiración. En gran medida, el movimientodel agua es causado por la evaporación del agua en la superficie de las hojas,lo cual reduce la presión en las venas foliares y como consecuencia, sesucciona más agua desde las raíces. La presión de succión es sustancial ypuede ser de 10 a 20 veces la presión atmosférica normal; así el agua esfácilmente transportada hacia arriba en contra de la fuerza de gravedad.El flujo normal en el xilema es regulado por el abrir y cerrar de pequeños porosen la superficie de la hoja (estomas) permitiendo el movimiento de gases entrelas células de la hoja y el aire circundante. Por el contrario, los compuestosorgánicos producidos por la fotosíntesis son transportados por el floema. Estees un tejido conductor más complejo que el xilema, ya que también permite elmovimiento hacia abajo, desde las hojas hacia las raíces, de ciertos productosquímicos. 14 25.
Tales productos químicos pueden ser valiosos para combatir organismospatógenos del suelo y se tienen pruebas de que algunos compuestos orgánicossintéticos, actúan por translocación hacia la parte inferior de la planta. Losazúcares circulan hacia abajo y hacia arriba en el floema; la savia del floemacontiene aproximadamente 25% de carbohidratos, en esencia sacarosa, juntocon pequeñas cantidades de aminoácidos.El transporte del sistema del floema está controlado por la presión osmótica;las células de las hojas con elevadas concentraciones de azúcares poseenmayores presiones osmóticas que los tejidos no fotosintéticos de las hojas, asíla diferencia de presión fuerza a los azúcares hacia abajo en dirección de laraíz y de esta manera nutre a toda la planta.El esqueleto de la planta está compuesto principalmente por paredes firmes ygruesas de tejido del xilema, que son necesarias para soportar las fuerzas desucción en el xilema. Las formas características de las diferentes plantas soncontroladas por instrucciones hereditarias contenidas en el código genético deADN de la planta y estas son relativamente independientes de los factores delmedio ambiente. Sin embargo, las instrucciones hereditarias tambiénproporcionan respuestas fisiológicas que pueden modificar el crecimiento de laplanta, por ejemplo, deciden cuando las gemas laterales deben activarse ocomo la planta responde a las alteraciones de los factores externos tales comotemperatura, luz y nutrientes.DEGRADACIÓN DE LOS PLAGUICIDASEl incremento en la producción y uso de compuestos químicos en los últimosaños ha dado origen a una preocupación creciente sobre el efecto que dichos 15 26.
compuestos pueden tener sobre los ecosistemas terrestre y acuático (ver Fig.1). Debido a sus características químicas, los plaguicidas son contaminantespersistentes que resisten en grado variable la degradación fotoquímica,química y bioquímica, por lo que su vida media en el ambiente puede serelevada. La aplicación de plaguicidas sintéticos ha sido una práctica rutinariaen la agricultura en los últimos años. El uso indiscriminado de estoscompuestos, ha producido que en la actualidad se detecten residuos de estosen el ambiente y se asocien con riesgo potencial a la salud pública.Actualmente los residuos de estos plaguicidas han sido identificados en todolos compartimientos ambientales (aire, agua y suelo). Ha demostrado supresencia en organismos de todos los niveles tróficos, desde el plancton hastalas ballenas y los animales del ártico. Estos compuestos se bioacumulan ennumerosas especies y se han biomagnificado a través de todas las redestróficas del mundo. Los seres humanos no están exentos de estacontaminación y los plaguicidas se han podido identificar en diversos tejidos ysecreciones humanos, inclusive de los habitantes de regiones muy aisladas. Fig. 1: Procesos que afectan a los plaguicidas en el medio ambiente (5). 16 27.
Destino y metabolismo en suelo, aire y agua del METHAMIDOPHOSEl Methamidophos es degradado al aire libre en sistemas naturales de agua,tiene una vida media de 15.9 días en el agua y de 7.7 días en el sedimento.Sin embargo el Methamidophos en el suelo es poco persistente y es altamentemóvil.En el agua y en el sedimento es más persistente:A pH 5 tiene una vida media de 309 días.A pH 7 tiene una vida media de 27 días.A pH 3 tiene una vida media de 3 días.Es muy poco soluble en el agua, aplicaciones cercanas a las aguassuperficiales pueden causar contaminación.El Methamidophos es absorbido por el suelo en pequeñas cantidades dado larapidez de la degradación de la sustancia y alta movilidad, ésta se lixivia en lascapas del suelo.La vida media en el suelo es de pocos días y los productos de degradaciónson: el CO2, mercaptán, sulfuro de dimetilo y disulfuro de dimetilo (7).Biodegradación: Sobre la base de los datos relativos a la solubilidad delMethamidophos, es de prever que se produzca bioacumulación, este esdegradado rápidamente por acción del metabolismo de los microbios sufriendouna desmetilación.Efecto en organismos vivos:Moderadamente tóxicas en peces: • Trucha arco iris CL50 25-51 mg/L 17 28.
• Golden orfe 47.7 mg/L • Blueguill 34- 46 mg/LExtremadamente tóxica en crustáceos: • Daphnia CE50: 48 (H) 0,27 mg/lModeradamente tóxica en algas: • CE50 (96 h) 86 mg/LAltamente tóxica en aves: • Pájaros: DL 50 oral aguda 8-11 mg/kg por dieta CL50 47-57.5 mg/L • Pato mallard: DL50 29,5 mg/kg por cinco días CL50 1000-1302 mg/kg • Gallina: DL50 29, 5, 10, 25 mg/kg • Abejas: Altamente tóxicaEn mamíferos la administración oral es eliminado a través de la orina. En lasratas el Methamidophos es metabolizado por desaminación y demetilación.El Methamidophos desaminado y ácido fosfórico se ha encontrado en la orinacomo metabolitos importantes.En las plantas la degradación es por medio de hidrólisis con la pérdida deamino S -metil del grupo O- metil (7). 18 29.
6 TOXICIDAD:Existen varios tipos de riesgos potenciales asociados con el uso de plaguicidas.Las personas expuestas, por un mal uso y manejo a algunos tipos deplaguicidas, pueden sufrir problemas de salud a corto o largo plazo. Por otraparte, una excesiva cantidad de residuos de plaguicidas en el ambiente puedeconducir a la alteración de la calidad del agua o dañar la vegetación no incluidaen el tratamiento, así como puede afectar a los insectos benéficos, las aves yotras formas de vida silvestre. Por último, los plaguicidas mal usados, tambiénpueden tener efectos fitotóxicos, es decir, pueden causar daños a las plantas,ya sea en los cultivos, plantas ornamentales o plantas silvestres con elconsiguiente costo económico, estético y ecológico. Además, el usoindiscriminado de plaguicidas puede provocar una resistencia de la plaga aciertos compuestos o la interrupción del control biológico, mediante ladestrucción de enemigos naturales.La toxicidad de un plaguicida se puede definir entonces como la capacidadinherente de este para producir daño o provocar la muerte. Los síntomas sepueden presentar durante la exposición, pocas horas después o días despuésde la exposición.Se debe conocer y manejar adecuadamente la toxicidad de los plaguicidaspara evitar daños a las personas, animales o el ambiente. La toxicidad de losplaguicidas varía. Por ejemplo, una pequeña cantidad de un plaguicidaaltamente tóxico puede provocar daños severos a diferencia de uno menostóxico, del cual se necesita una mayor cantidad para causar un daño similar. 19 30.
6.1 LA TOXICIDAD SE PUEDE CLASIFICAR EN TOXICIDAD AGUDA Y TOXICIDAD CRÓNICA. 6.1.1 Toxicidad aguda: la toxicidad aguda es la capacidad de una sustancia de causar daño durante su exposición a esta. Los síntomas se pueden presentar durante la exposición, pocas horas después, o pocos días después de la exposición. 6.1.2 Medición de la toxicidad aguda: Uno de los métodos utilizados para expresar la toxicidad aguda es la dosis letal media, información que debe estar indicada en la etiqueta del envase de cada plaguicida. Se ha establecido una clasificación toxicológica de los plaguicidas de uso agrícola de acuerdo con el riesgo que representa su uso para las personas, con el fin de recomendar precauciones para su manipulación y aplicación. Mientras más tóxico es el plaguicida significa que se necesita menor cantidad de este para causar daño. 6.1.3 Toxicidad crónica: la toxicidad crónica es la propiedad de una sustancia de causar daños a largo plazo. Estos efectos tienen un período de latencia y se manifiestan después de un largo tiempo. Los efectos tóxicos crónicos pueden resultar de una exposición simple severa o repetidas exposiciones a lo largo de un período. 6.1.4 Medición de la toxicidad crónica: La toxicidad crónica se mide a través de pruebas a distintas especies de animales. Los animales son expuestos a pequeñas cantidades de plaguicidas. Los términos sólidos y líquidos se refieren al estado físico del producto o formulación que está siendo clasificado durante toda la vida. Luego son examinados para 20 31.
determinar la presencia de efectos crónicos en ellos y en generaciones sucesivas. La evidencia de efectos crónicos se asocia usualmente con la exposición a largo plazo de los animales a prueba a dosis relativamente altas. De esa manera, las personas que corren el mayor riesgo de desarrollar efectos crónicos son los aplicadores expuestos a altos niveles de plaguicidas por un mal uso, durante muchos años. El desarrollo de un plaguicida dura, en promedio, diez años, de los cuales, al menos 7 años son dedicados a estudios de Toxicología y Ecotoxicología donde se evalúa su toxicidad aguda y crónica. En la toxicología crónica se evalúan los efectos neurológicos, mutagénicos, teratogénicos, cancerigenos, y del sistema reproductor. Una vez evaluados, los plaguicidas salen al mercado con recomendaciones técnicas de uso que salvaguardan el riesgo asociado a ellos.6.2 Exposición a Plaguicidas: existen varias formas por las cuales losseres humanos pueden verse expuestos a los plaguicidas: por medio deaccidentes, en los lugares de trabajo, en el hogar, a través de los alimentosy agua para beber. 6.2.1 Exposición accidental: usualmente los niveles más dañinos de exposición a plaguicidas son como resultado de accidentes. Cada año, el sector agrícola presenta accidentes relacionados con plaguicidas, la mayoría de ellos provocados durante el mezclado y aplicación. Muchos de estos accidentes provocan intoxicaciones. Los derrames o accidentes que involucran plaguicidas pueden resultar en 21 32.
exposiciones a grandes cantidades de estos productos. El uso de ropasprotectoras y la rápida utilización de los procedimientos de emergenciareducen en gran medida las posibilidades de serios daños cuando unapersona resulta involucrada en este tipo de accidentes.6.2.2 Exposición relacionada con el trabajo: existen diferentesformas en que las personas entran en contacto con los plaguicidascuando trabajan, pero las más comunes son durante el mezclado,aplicación y cuando entran o trabajan en las zonas tratadasinmediatamente después de la aplicación.Entre las personas que usan y manejan plaguicidas, las quepreparan las mezclas de plaguicidas son las que están expuestas almayor riesgo, debido a que el producto está en su más altaconcentración. Un segundo grupo de riesgo lo constituyen losaplicadores de plaguicidas, ya que a pesar de trabajar con productosdiluidos, ellos trabajan diariamente con estos productos.Un tercer grupo de riesgo son las personas que deben entrar atrabajar a áreas que han sido tratadas con plaguicidas o que esténtrabajando cerca de un área donde se están aplicando estos productos. (4)6.2.3 Exposición por residuos de plaguicidas en alimentos: losresiduos de plaguicidas pueden permanecer en los alimentos porvariados períodos. El consumo de alimentos con altos niveles deresiduos es otra forma de exposición a los plaguicidas.Los casos en que las personas se han intoxicado debido a residuosilegales han sido el resultado de un uso inadecuado de estos productos. 22 33.
6.2.4 Exposición por residuos de plaguicidas en alimentos: losresiduos de plaguicidas pueden permanecer en los alimentos porvariados períodos. El consumo de alimentos con altos niveles deresiduos es otra forma de exposición a los plaguicidas.Los casos en que las personas se han intoxicado debido a residuosilegales han sido el resultado de un uso inadecuado de estos productos.Por tal motivo, se han establecido normas de tolerancia de residuos, loscuales limitan las cantidades y tipos de plaguicidas admisibles en losalimentos humanos y animales. La etiqueta del plaguicida establece ladosis a usar y la frecuencia de uso para prevenir que se excedan loslímites de tolerancia. El período de carencia, indica el tiempo específicoque debe transcurrir entre la aplicación del plaguicida y la cosecha, parareducir los residuos de plaguicidas en los productos.Los plaguicidas también se usan para prevenir el daño de plagas yenfermedades a los alimentos durante el almacenamiento yembalaje dentro y fuera de las bodegas de almacenamiento. Entratamientos preventivos a menudo se realiza mediantefumigaciones. Ocasionalmente, los productos alimenticios puedencontaminarse por el uso inadecuado de plaguicidas en estasoperaciones (4).6.2.5 Exposición por aguas contaminadas con plaguicidas: el usoinadecuado de plaguicidas o la eliminación indebida de éstos, ya seaenterrando envases con restos de plaguicidas en el suelo o vertiendo losexcedentes en cursos de agua, puede contaminar directamente tanto las 23 34.
aguas superficiales como las subterráneas mediante el filtrado a través del suelo. Si estas aguas son usadas como agua potable, éstas constituyen otra vía potencial por la cual las personas pueden ingerir plaguicidas.7 PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS:Se denominan compuestos organofosforados (COF) a aquellas sustanciasorgánicas derivadas de la estructura química del fósforo.Sin embargo el uso más relevante de los COF es en la agriculturafundamentalmente como insecticidas, y en menor grado como helminticidas,acaricidas, nematicidas, fungicidas y herbicidas. En la actualidad losinsecticidas organofosforados (IOF) son los plaguicidas empleados con mayorfrecuencia en todo el mundo y por ello son frecuentes las intoxicaciones porestas sustancias (8).La fórmula estructural general de estos compuestos, que se caracterizan por lapresencia en general de tres funciones éster, es la siguiente: Fig. 2. Estructura COFEn la que R1 y R2 son radicales alquilo, generalmente metilo o etilo, el grupo Xes característico de cada especie química, siendo frecuentemente un radicalarilo, y suele contribuir de forma importante a sus propiedades físicas, químicas 24 35.
y biológicas. A tenor de los elementos concretos que ocupen determinadasposiciones en la molécula, los organofosforados se pueden dividir en 14grupos, de los que los más importantes son: fosfatos, con un O en lasposiciones [1] y [2]; O-fosforotioatos o tionatos, con un S en [1] y un O en [2],S-fosfortioatos o tiolatos, con un S en [2] y un O en [1]; fosforoditioatos otiolotionatos, con un S en [1] y en [2]; fosfonatos, con R1 (en lugar de R1O),O o bien S en [1] y O en [2], y fosforoamidatos, con un O en [1] y un N en [2]Se trata de compuestos, en general, marcadamente apolares, lo que significaque desde el punto de vista químico la mayoría son escasamente solubles enagua, aunque con grandes diferencias de un compuesto a otro, y desde elpunto de vista biológico tienden a disolverse en grasas. Por tal motivo, la piel,donde se encuentra una importante capa de tejido con elevado contenido enlípidos, puede constituirse en una importante vía de entrada. La estabilidad delos organofosforados depende del pH del medio; a pH fuertemente alcalino sedescomponen, lo que puede ser utilizado para destruirlos. 7.1 METABOLISMO: La acetilcolinesterasa, además de encontrarse en los glóbulos rojos, donde no se le conoce acción fisiológica, regula la transmisión de los impulsos nerviosos en las terminaciones colinérgicas (por hidrólisis de la acetilcolina, que actúa como neurotransmisor, una vez ha alcanzado su destino) de las neuronas preganglionares del sistema simpático y parasimpático (receptores nicotínicos), de las postsinápticas del sistema parasimpático (receptores muscarínicos), de una parte importante de las sinapsis existentes entre neuronas del propio SNC, y de las 25 36.
terminaciones motoras en los músculos estriados (voluntarios), en las uniones neuromusculares, también con receptores nicotínicos (ver Fig. 3).Fig. 3. Sistema nervioso periférico con los principales neurotransmisores preganglionares y postganglionares, y tipos de receptores en los efectores. En general los compuestos organofosforados (COF) son sustancias muy liposolubles. Su volatilidad es variable, aunque se suelen utilizar como insecticidas organofosforados (IOF) los compuestos menos volátiles. Una vez que entran en un organismo vivo, poseen una corta vida media en el plasma y un elevado volumen de distribución en los tejidos. 26 37.
Los COF son atacados por una serie de enzimas (esterasas, enzimasmicrosomales, transferasas), fundamentalmente en el hígado, sufriendo unaserie de transformaciones químicas. Estas transformaciones tienden aaumentar la hidrosolubilidad del plaguicida, y por consiguiente facilitan suexcreción La Fig. 4 representa el esquema básico del metabolismo de losorganofosforados. Todos estos compuestos resultantes son solubles enagua y se eliminan por la orina y las heces (ver Fig. 5, con los principalesalquilfosfatos). Pero a veces el metabolismo aumenta su toxicidad, comosucede con las formas oxón en que son transformadas el paratión y elmalatión (8).Debido a su alta liposolubilidad los COF se acumulan en tejidos ricos engrasas, como el panículo adiposo o el tejido nervioso, desde donde puedenser liberados nuevamente al torrente sanguíneo.Los COF se eliminan por vía urinaria y heces, en su forma activa o previametabolización hepática. Fig 4 . Esquema elemental del metabolismo de los organofosforados, papel de la MFO (Mixed Function Oxidase) y transformación final en alquifosfatos. 27 38.
Fig 5. Estructura de los dialquilfosfatos, resultantes del metabolismo de los plaguicidas organofosforados7.2 MECANISMO DE ACCION : los COF pueden producir cuatro tipos de efectos tóxicos: a. Inhibición de la enzima CE, produciendo una sobreestimulación colinérgica, que será la que dominará el cuadro. 28 39.
b. Acción tóxica directa sobre distintos parénquimas, al igual que cualquier otro tóxico.c. Disfunción de la placa neuromuscular postsináptica, dando lugar al llamado "síndrome intermedio".d. Inhibición de la enzima esterasa neurotóxica (ENT), produciendo una neuropatía retardada (NR).La acetilcolina actúa como neurotransmisor de todas las fibras autonómicaspreganglionares, de todas las fibras parasimpáticas postganglionares y dealgunas fibras simpáticas postganglionares; además es un neurotransmisorde la placa motora y de alguna sinapsis interneuronal del SNC. La enzimaCE liberada desde las terminaciones nerviosas hidroliza la acetilcolina a dosfragmentos inactivos, colina y ácido acético.La CE tiene un centro activo con dos sitios reactivos principales: un sitioaniónico (por el que se une a la acetilcolina), y un sitio estereásico (al quese une los COF). Hay dos tipos de CE: CE eritrocitaria (CEE) o verdadera(presente en eritrocitos y en tejido nervioso) y CE sérica (CES).Tras la exposición a un COF éste o sus metabolitos se unen mediante suradical fosfórico al lugar estereásico de la CE, produciendo una inactivaciónde la misma, con la consiguiente sobreestimulación colinérgica. Tanto laCEE como la CES son inhibidos por los COF.La unión COF-CE es inicialmente fuerte, aunque es todavía susceptible deser reactivada mediante la administración precoz de unos fármacosdenominados oximas. En las primeras horas se producen unas reacciones 29 40.
químicas que hacen la unión COF-CE más estable, hasta quedar una uniónirreversible que tarda entre 60 minutos y varias semanas en deshacerse. Lavelocidad de este proceso se denomina " envejecimiento de la enzima", yvaría en función de la estructura química del COF.Al comienzo, la intensidad y la duración de los efectos toxicológicos queocurren después de la intoxicación por COF vienen determinados en granparte por la naturaleza del tóxico, su vía y velocidad de entrada en elorganismo, su liposolubilidad y su velocidad de la degradación metabólica.Los COF muy liposolubles pueden producir síntomas y signos dehiperactividad colinérgica durante un largo periodo de días o semanas, apesar de un tratamiento aparentemente exitoso. Este fenómeno se debe alalmacenamiento del COF en la grasa, en el tejido celular subcutáneo o en eltubo digestivo, de donde se siguen las liberaciones repetidas del mismo. Alproceso se le denomina "reintoxicación endógena",Unos pocos COF bicíclicos no inhiben la CE; son antagonistas específicosdel gammaaminobutirato (GABA).7.3 EPIDEMIOLOGÍA: los IOF no solo son tóxicos para las plagas a lasque combaten, sino también para el ser humano. Debido a su uso creciente,cada vez cobran más importancia las intoxicaciones agudas (IA) por IOF,siendo en la actualidad un importante problema de Salud Pública enmuchos países.Aunque globalmente los IOF suponen cerca del 30% de los plaguicidas quese emplean en la actualidad, son los responsables de casi el 80% de las 30 41.
intoxicaciones por plaguicidas que requieren atención médica y del 75% de las muertes por plaguicidas. Las IA por IOF son especialmente frecuentes en las zonas agrícolas, donde estos tóxicos se usan de forma habitual.7.4 COMPUESTOS MÁS UTILIZADOS 7.4.1 Clorpirifos: es un insecticida-acaricida activo por ingestión, contacto e inhalación. Su toxicidad es moderada (DL50 oral para la rata de 96-270 mg/kg). Posee un amplio campo de actividad. Se utiliza no solo en la agricultura sino también en los hogares, contra las cucarachas. 7.4.2 Dimetoato: es un insecticida-acaricida sistémico con actividad por ingestión y contacto. Su toxicidad es moderada (DL50 oral para la rata de 255-310 mg/kg). Se utiliza con frecuencia en las zonas olivareras de nuestro país. 7.4.3 Fentión: es un insecticida penetrante, con acción por ingestión y contacto. Su toxicidad es moderada (DL50 oral para la rata de 250 mg/kg). Es muy tóxico para abejas- y aves. 7.4.4 Isofenfos: es un insecticida sistémico con actividad por ingestión y contacto. Su toxicidad es alta (DL50 oral para la rata de 20 mg/kg). 7.4.5 Malatión: su descubrimiento en 1950 fue un hito en la historia de los IOF, puesto que fue el primer IOF que mostró un amplio espectro de acción y una baja toxicidad para los mamíferos. Es un insecticida- acaricida con acción por ingestión y contacto. En los organismos vivos 31 42.
se metaboliza a maloxón, su forma más tóxica. Su toxicidad es baja (DL50 oral para la rata de 1.000-2.800 mg/kg). 7.4.6 Methamidophos: es un insecticida-acaricida con actividad por vía sistémica, ingestión y contacto. Su toxicidad es alta (DL50 oral para la rata de 20 mg/kg), por lo que está prohibido su uso en invernaderos y en recintos cerrados. 7.4.7 Monocrotofos: es un insecticida-acaricida con actividad por vía sistémica y por contacto. Su toxicidad es alta (DL50 oral para la rata de 8- 23 mg/kg).7.5 VÍA DE ENTRADA DEL TÓXICO: La vía de entrada del IOF en elorganismo puede ser digestiva, cutáneo-mucosa, respiratoria o parenteral. 7.5.1 Vía digestiva: es la habitual en los intentos suicidas. Con menor frecuencia es la responsable de intoxicaciones involuntarias, al consumir alimentos contaminados accidentalmente con IOF. En nuestro medio el 20% de las intoxicaciones ocurren por esta vía. La entrada digestiva del tóxico se ha asociado a intoxicaciones graves. 7.5.2 Vías cutáneo-mucosa y respiratoria: se asocian a intoxicaciones profesionales, al no guardar las medidas de seguridad aconsejadas al manejar los IOF. En nuestro medio el 80% de las intoxicaciones son por estas vías. Habitualmente son intoxicaciones menos graves que las anteriores. 7.5.3 Vía parenteral: la entrada del tóxico por vía parenteral es excepcional. Se suele asociar a intentos autolíticos en pacientes que utilizan drogas por vía parenteral. 32 43.
7.6 INTOXICACIONES CRÓNICAS POR INSECTICIDASORGANOFOSFORADOS: en los últimos años se presta gran importancia alos posibles efectos crónicos que puedan ejercer los IOF sobre los sereshumanos.Es difícil calcular el número de intoxicaciones crónicas (IC) por IOF7.7 NEUROPATÍA RETARDADA POR INSECTICIDASORGANOFOSFORADOS: algunos COF, además de una intoxicacióncolinérgica, una toxicidad directa y un síndrome intermedio, son capaces deprovocar una neuropatía de aparición retardada. Esta NR por IOF aparecedespués de la fase aguda de la intoxicación, alrededor de la 2ª-4ª semana,o tras un periodo de tiempo indeterminado en la IC. Se debe a lafosforilación de una enzima denominada ENT. Se caracteriza por ser unapolineuropatía sensitivo- motora de predominio axonal, de carácter agudo ybilateral, afectan fundamentalmente a los nervios periféricos. Evoluciona deforma retrógrada y ascendente, pudiendo llegar a afectar al SNC.El nombre de NR por IOF es de acuñación reciente, y viene a correspondercon lo que anteriormente se habían denominado " parálisis flácidas por IOF"o "manifestaciones neurológicas tipo III de Wadia de la IA por IOF".Por lo tanto, tras el contacto con los IOF pueden aparecer diversasmanifestaciones neurológicas en los seres vivos, que cronológicamenteson: 1. Manifestaciones neurológicas en la fase aguda de la intoxicación. 2. Síndrome intermedio, a los 1-4 días de la IA. 33 44.
3. NR, a las 2-4 semanas de la IA, o después de un tiempo indeterminado en la IC. 4. Manifestaciones neuropsicológicas de la IC.7.8 MECANISMOS BIOQUÍMICOS Aunque en diversos animales podemos provocar una NR al administrar experimentalmente IOF, los estudios de neurotoxicidad se han desarrollado básicamente en gallinas adultas (Gallus domesticus), ya que en ellas se produce una neuropatía similar a la descrita en los humanos. Sin embargo no hay correspondencia exacta entre la NR de las gallinas y la del hombre, por lo que son fundamentales estudios de NR en humanos intoxicados por IOF. Los IOF pueden ser neurotóxicos o precisar transformarse en otra sustancia para desarrollar su poder lesivo. Una vez que el IOF o sus metabolitos neurotóxicos circulan por el organismo, se producen una serie de mecanismos bioquímicos que van a desencadenar la NR. Estos procesos se pueden dividir según Johnson en tres fases: iniciación, desarrollo y expresión. 7.8.1 Fase de iniciación: el lugar de iniciación en la neurona del proceso degenerativo se ha considerado durante muchos años que estaría en el soma neuronal, y la NR por IOF se incluía en las degeneraciones que Cavanagh denominó en 1964 "dying back". Bajo este término se agrupaban las neuropatías en las que, debido a déficit energéticos en el soma neuronal, se afectarían los segmentos más 34 45.
distales de segmentos largos por las dificultades del transporte demateriales. Sin embargo posteriores estudios han demostrado que bastala acción bioquímica de un COF en un segmento localizado de 1,5 cmpara producir los efectos neurológicos periféricos en un nervio conaxones de hasta unos 25 cm; es decir, el lugar de iniciación delmecanismo es la fibra, y no el cuerpo ni las terminaciones sensorialeso motoras.Durante esta fase se producen dos fenómenos moleculares que son lafosforilación de una proteína diana, la ENT, y el envejecimiento de lamisma.7.8.2 Fase de desarrollo: durante la fase de desarrollo de la NR porIOF ocurren una serie de acontecimientos a nivel celular y molecularcon una extensión aproximada de una semana, de los que se tienenescasos conocimientos. Las principales líneas de investigación apuntanen diferentes direcciones: 1) Lípidos: se ha demostrado un incremento del 25% en la tasa de 32 incorporación de P en el trifosfoinosítido del nervio cíatico de gallinas tratadas con TOCF. 2) Proteínas: en animales tratados con TOCF la fosforilación de proteínas aumenta tardíamente. 3) Actividades enzimáticas: aunque son muchos los enzimas estudiados en la NR por IOF, los resultados son poco concluyentes. 35 46.
4) Metabolismo energético: puesto que el tejido nervioso es particularmente dependiente de glucosa como fuente de ATP, se ha sugerido que diversas neurotoxinas afectarían la glucólisis, por lo que habría una disminución del aporte de energía en la fibra nerviosa, ocasionando la NR 5) Transporte axonal: puede haber una inhibición del transporte axonal retrógrado en los nervios de gallinas tratadas con COF. 7.8.3 Fase de expresión: durante la fase de expresión se manifiestan clínicamente los síntomas y signos de la NR por IOF, que a continuación se describen.7.9 MANIFESTACIONES CLÍNICAS: las manifestaciones clínicascomienzan a aparecer habitualmente entre la 2ª y la 4ª semana tras una IA,o tras un tiempo indeterminado tras una IC. Cuando los síntomas y signosse hacen evidentes, el valor de la ENT ya se ha normalizado. 7.9.1 Sistema nervioso periférico: el cuadro se inicia con síntomas sensitivos en forma de calambres y parestesias en las extremidades inferiores (EI), sin manifestaciones dolorosas. Pero las manifestaciones que dominan el cuadro son las derivadas de la afectación motora de las EI, que se desarrolla a continuación. Así aparece un cuadro típico de segunda motoneurona o inferior, con debilidad muscular, ataxia bilateral y simétrica y, en casos graves, parálisis flácidas. La hiporreflexia es común en todos ellos. El cuadro progresa de forma retrógrada y ascendente, pudiendo llegar a afectar a las extremidades superiores (ES) en 3-10 días, con una clínica 36 47.
similar a la de las EI. La afectación del sistema nervioso periférico (SNP) alcanza su pico máximo a las dos semanas del inicio de los síntomas: La intensidad del cuadro es de grado variable, pero puede llegar a dejar tetrapléjico al paciente. La afectación sensorial es escasa. En casos evolucionados pueden aparecer atrofias bilaterales simétricas de los pequeños músculos de los pies y de los perineos y en menor grado de las manos, con trastornos tróficos cutáneos concomitantes. Las atrofias no son tan importantes como se sospecharía por la severidad de las parálisis. Recientemente se ha descrito la afectación de las cuerdas vocales (CV), que sigue un curso parecido a la afectación de los nervios de las extremidades. 7.9.2 Sistema nervioso autónomo: se manifiestan en forma de frialdad y sudoración en pies y piernas y otros fenómenos vasculares periféricos. 7.9.3 Sistema nervioso central: consiste en un síndrome piramidal o de primera motoneurona o superior. Habitualmente suele presentarse a los 2-3 meses de la IA; a veces aparece antes, pero suele enmascararse por la afectación del SNP.7.10 El paciente comienza con signos de espasmo. Los reflejos tendinosos profundos, que antes estaban disminuídos, ahora se vuelven hiperactivos, especialmente en los segmentos proximales de las extremidades; una excepción es el reflejo aquileo, que está abolido o disminuido. También aparecen clonus y el signo de Babinski.7.11 Ocasionalmente puede haber temblor intenso. 37 48.
8 METHAMIDOPHOS8.1. NOMBRES COMERCIALES ANIQUILADOR 600 MISIL 600 SL GUSADRIN-M 2.5% PS NINYA 600 SL RONDERO 600 TAMIDEX 60 EC MATADOR 600 SL METASAC META NITOFOL 400 SL MEFOS PLUS CIMET 600 MONOFOS ALRRIN 2.5 % PS TAMARON 600 SL S-KEMATA 600 SL STERMIN 600 SL LASSER 600 THODORON QMATA 600 TAFOS 600 HAMIDOP MAGNUM 600 SL METASAC 600 METHACROS 600 CS AZOTE CURAFOS 600 CIPERMETA HORTAL 600 SL CAPORAL 540 EC METAFOS 600 SHOCK MONITOR 600 BAYTROID TM 525 SL MTD-600 TAMARON COMBI 525 SL METHARON 600Methamidophos es clasificado como un compuesto de la clase I y debe llevar lapalabra de señal “Peligro-Veneno” en los productos comerciales. Los pesticidasen esta clase de la toxicidad son los pesticidas restrictos del uso. Lastolerancias para los residuos de methamidophos en productos agrícolas crudosse extienden a partir de 0.05 PPM como es el caso de la papa o en melones a1.0 PPM como en el brócoli y los tomates. Es un insecticida, acaricida. Sumodo de acción en insectos y mamíferos está disminuyendo la actividad deuna enzima importante para la función nerviosa del sistema llamadaacetilcolinesterasa. Esta enzima es esencial en la transmisión normal de losimpulsos de nervio. Methamidophos es un inhibidor potente de la 38 49.
acetilcolinesterasa. Es eficaz en contra de insectos y se utiliza contra losgusanos de la papa y los escarabajos de la misma y muchos otros. Lasaplicaciones de la cosecha incluyen el brócoli, las coles de Bruselas, la coliflor,las uvas, el apio, las remolachas, algodón, el tabaco y las patatas. Lasformulaciones disponibles en el comercio incluyen el concentrado soluble,concentrado emulsivo, polvo mojable, gránulos, aerosol ultra-bajo del volumeny riegan el concentrado miscible del aerosol. Generalmente, losmethamidophos no se consideran fitotóxicos si está utilizado según lo dirigido,solamente ha ocurrido el deshoje cuando es aplicado como vapor foliar a lafruta de hojas caducas. Es compatible con muchos otros pesticidas, pero no seutiliza con los materiales alcalinos. Methamidophos es levemente corrosivo alacero suave y a las aleaciones de cobre. Este compuesto es altamente tóxicoa los mamíferos, a los pájaros, y a las abejas. No pastar las áreas tratadas ypara seguridad usar la ropa protectora incluyendo respirador, los anteojosquímicos, los guantes de goma y la ropa protectora impermeable.8.2 CARACTERÍSTICAS FÍSICAS Y PAUTAS 8.2.1 Características físicas: • Aspecto: Sólido cristalino, con color grisáceo y olor acre • Nombre químico: O, S-Dimethylphosphora-midothiolate • Número del CAS: 10265-92-6 • Peso molecular: 141.12 • Solubilidad de agua: 90g/L a 20 ºC. • Solubilidad en otros solventes: No disponible • Punto de fusión: 112 ºF; 44.5 ºC 39 50.
• Presión del vapor: 4 mmHg a 30 ºC • Coeficiente de partición: -1.74 • Coeficiente de adsorción: No disponible9 ASPECTOS LEGALESMuchos países en América Latina no poseen una lista de tolerancias deResiduos de Plaguicidas en Alimentos.Estos países aceptan las tolerancias recomendadas por la Comisión ConjuntaFAO/OMS de Expertos en Plaguicidas del Codex Alimentarius; estasaceptaciones son teóricas porque en general, no se efectúan análisis deresiduos en los alimentos.El Perú no cuenta con laboratorios que realicen dichos análisis ocasionalmentelos que se realizan son llevados a cabo por instituciones privadas como elINASSA o como en nuestro caso para fines de investigación; pero aún no serealiza una vigilancia periódica (monitoreo).En América Latina como se da en muchos casos lo plaguicidas son aplicadosde manera indiscriminada (excesiva) y sin tener en cuenta las medidas deseguridad entre la última aplicación, la recolección y el almacenamiento.El uso de manera indiscriminada de plaguicidas se ve reflejado en los altosvalores de residuos en los alimentos debido a la venta libre de productosaltamente tóxicos, falta de aplicadores capacitados, falta de ética de algunasindustrias nacionales y trasnacionales. 40 51.
Actualizar las normas o legislación con referencia a los plaguicidas, comosustancias tóxicas ya que este tema debe ser de gran preocupación.En las últimas décadas el impacto del uso de agrotóxicos ha provocado eldeterioro alarmante de la salud y el ambiente; esto ha motivado queorganismos internacionales y algunos gobiernos presten una mayor atención aestos problemas. La proliferación de sustancias toxicas, como las utilizadas enla actividad agrícola, en el mundo ha permitido una diseminación causandoserios problemas a los diversos ecosistemas. Por lo que se hace necesariotomar medidas políticas y técnicas para reducir sus impactos en la salud de laspersonas y el ambiente.Que de acuerdo con lo dispuesto por el Artículo 17º del Decreto Ley Nº25902, Ley Orgánica del Ministerio de Agricultura, se creó el Servicio Nacionalde Sanidad Agraria (SENASA) como encargado de desarrollar y promover laparticipación de la actividad privada para la ejecución de los planes yprogramas de prevención, control y erradicación de plagas y enfermedades queinciden con mayor significación socioeconómica en la actividad agraria; siendoa su vez , el ente responsable de cautelar la seguridad sanitaria del agronacional.Que por Decreto Supremo Nº 16-200-AG, se aprueba el Reglamento para elRegistro y Control de Plaguicidas Químicos de Uso Agrícola, disponiendo en suartículo 53º que el SENASA publicará en el mes de cada año, la relación deplaguicidas agrícolas con registro vigente y la relación del os plaguicidasrestringidos, prohibidos y cancelados. 41 52.
II PARTE EXPERIMENTAL ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO REALIZADO PARA DETERMINAR RESIDUO DE METHAMIDOPHOS EN PAPA A100g de muestra agregarle n:hexano:acetona (1:1) Agitar por 30min. Dejar reposar por 15min. Filtrar directamente en una pera de bromo Adicionar 25mL de éter etílico al filtrado colectado. Agitar por 5min. Separar la fase etérea Colectar la fase etérea Evaporar a sequedad (Baño María) Residuo Disolver con 1mL de n-hexanoCromatografía en Capa Cromatografía Líquida de Fina (CCF) Alta Resolución (HPLC) Revelado Lectura de concentración 42 53.
MÉTODOS UTILIZADOS PARA LA DETERMINACIÓN DE RESIDUO DEMETHAMIDOPHOS (PLAGUICIDA ORGANOFOSFORADO): Determinación cualitativa de METHAMIDOPHOS por cromatografía en capa fina (CCF). (9)(10) Determinación cuantitativa por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). 2.1. DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE METHAMIDOPHOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF). (9)(10) 2.1.1. METODOLOGÍA 2.1.1.1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO: los plaguicidas organofosforados a separar se desplazan en una dirección predeterminada por medio de un material sólido insoluble inorgánico: Silicagel G 60 como fase estacionaria y la fase móvil que en este caso es la mezcla de hexano: acetona: alcohol isopropílico los cuales van a migrar a través de la superficie de la placa. La fase móvil va arrastrar a los plaguicidas organofosforados por un proceso de reparto múltiple que se da en toda sustancia de mediana o baja polaridad como es el caso de los plaguicidas organofosforados. La sensibilidad del método de cromatografía de capa fina (CCF), es de 0.5 microgramos. (10) 43 54.
2.1.2 MATERIALES, EQUIPOS, ESTÁNDARES Y REACTIVOS 2.1.2.1 MATERIALES DE LABORATORIO • Beaker de 10mL • Pipetas de 1mL, 5mL y 10mL • Cronómetro • Pera de bromo de 250mL y 500mL • Rayador • Matraz de vidrio con tapa de 500mL • Embudo de vidrio • Probeta de 100mL • Capilares de vidrio para CCF • Papel de filtro wathman Nº 1 de 12cm X 12cm • Placas cromatográficas de silicagel G-60 Merck de 20 x 20cm • Campana extractora • Cuba cromatográfica • Baguetas • Atomizador 2.1.2.2 EQUIPO DE LABOTARORIO • Balanza: marca Sartorius, modelo 7000 de 0.1mg de sensibilidad. • Baño maría • Refrigerador • Horno: marca Labor, modelo LP 302. 2.1.2.3 ESTÁNDARES SECUNDARIOS • Methamidophos 44 55.
• Dimetoato• Clorpirifos2.1.2.4 REACTIVOS• Acetona p.a• N – hexano p.a• Éter etílico p.a• Bicloruro de paladio p.a• Alcohol isopropílico p.a• Verde brillante Q.P• Acido clorhídrico 2N• Fast blue p.a• Hígado de vaca• Agua de Bromo• Ácido sulfosalicílico• Tricloruro de hierro• Agua destilada2.1.2.4.1 PREPARACION DE REACTIVOS REVELADORES Dicloruro de paladio: Pesar 250mg de bicloruro de paladio (PdCl2) colocar en una fiola de 50mL y enrasar con agua, agregando de II – IV gotas de ácido clorhídrico (HCl) 2N. Agitar para disolver a fuego lento. Verde brillante: Pesar 500mg de verde brillante, trasvasarlos a una fiola de 100mL y enrasar con acetona. 45 56.
Reactivo bioquímico: Tomar 100g de hígado de vaca llevarlo a un beaker de 250mL, triturar el hígado con una bagueta en 200mL de agua destilada hasta obtener una solución. Agua de bromo: agitar con 1L de agua destilada 12 mL de Br; se prepara de nuevo cuando el reactivo se decolore. Mezcla de tricloruro de fierro al 0.1% en etanol. Ácido sulfosalicílico Fast blue2.1.3. METODO OPERATORIO TOMA DE MUESTRA: Se tomaron un total de 20 muestras, de papas que estaban a la venta en los mercados mayoristas (Tres de Febrero y Manzanilla) y minoristas (Mercado Ramón Castilla; y Jorge Chávez) de Lima Metropolitana, las muestras fueron tomadas en forma aleatoria. Se tomaron aproximadamente 1kg, se envasaron en bolsas de polietileno y se transportaron al laboratorio de Toxicología y Química Legal de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNMSM para realizar su posterior análisis. 46 57.
PREPARACION DE LA MUESTRA: Se procedió a triturar la papa debidamente lavada y pelada. Se pesó 100g de la muestra triturada. EXTRACCION: se llevó la muestra pesada a un matraz de 250mL adicionando 100 mL de la mezcla n-hexano: acetona en una proporción de 1: 1; se agitó vigorosamente por un periodo de 30 minutos. Dejar en reposo 15 minutos. Se filtró luego directamente en una pera de bromo de 250mL con ayuda de un embudo y papel wathman Nº 1 de 12cm x 12cm. SEPARACION: luego se agregó 25mL de éter etílico a la pera de bromo, agitando por 5 minutos. CONCENTRACION: la fase etérea se colocó en un beaker, evaporando ha sequedad en baño maría (40 – 60ºC). Hasta obtener un residuo. Disolviendo el residuo en 1 mL de n-hexano.FASE ESTACIONARIA:Se emplearon placas cromatográficas de silicagel G- 60 Merck de 20 x 20 cm.FASE MÓVIL:n-hexano : acetona : alcohol isopropílico (5 : 3 : 0.5)REVELADORES: • Dicloruro de paladio al 1% • Verde brillante • Mezcla de tricloruro de Fe al 0.1% en etanol. • Ácido sulfosalicílico al 1% 47 58.
• Prueba bioquímica: extracto de hígado de vaca con fast blue. Estos reactivos reveladores son atomizados sobre la placa observándose manchas claramente diferenciadas tanto para los diferentes estándares secundarios como para las muestras sembradas. (Ver Cuadro 3)ANÁLISIS DE RESULTADOSLos resultados se expresan en términos de presencia o ausencia deMETHAMIDOPHOS (plaguicida organofosforado).Se comparan las manchas y los valores Rf de las muestras con el estándarsecundario analizados. 48 59.
2.2. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE METHAMIDOPHOS POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC): 2.2.1. METODOLOGÍA 2.2.1.1. FUNDAMENTO: la separación del analito a cuantificar se da por su afinidad a la fase móvil o a la fase estacionaria (columna cromatográfica), detectado a una determinada longitud de onda (210nm). 2.2.2. MATERIALES, EQUIPOS, ESTÁNDARES Y REACTIVOS 2.2.2.1. MATERIAL DE LABORATORIO Beaker de 10mL Pipetas de 1mL, 5mL y 10mL Cronómetro Pera de bromo de 250mL y 500mL Rayador Matraz de vidrio con tapa de 500mL Embudo de vidrio Probeta de 100mL Papel de filtro wathman Nº 1 de 12cm X 12cm Baguetas 2.2.2.2. EQUIPO DE LABORATORIO Equipo HPLC marca LACHROM-HITACHI, modelo ELITE de Merck S. A. Campana extractora Refrigerador Baño maría Balanza Sartorius, modelo 7000 de 0.1mg sensibilidad. 49 60.
2.2.2.3. ESTÁNDARES SECUNDARIOS Methamidophos Dimetoato Clorpirifos 2.2.2.4. REACTIVOS Acetona p.a N – hexano p.a HPLC Éter etílico p.a Alcohol isopropílico p.a Agua destilada Bomba de nitrógeno 2.2.3. MÉTODO OPERATORIO: PURIFICACIÓN: La fase etérea se pasa por una columna decarbonato de sodio anhidro seguido de florisil y por último de columna decarbonato de sodio anhidro (4, 5 y 4cm respectivamente) seguido de unasolución de 50 mL de n-hexano; la solución purificada por la columna se recibeen un frasco ámbar. Esta solución se lleva a sequedad utilizando Baño María a 60 ºC y nitrogenando la muestra para una mejor sequedad. Se reconstituye el residuo con 1 mL de n-hexano, se sonica por 15 segundos, se procede a filtrar con filtros de poliamida 0.22um y luego se procede a inyectar al HPLC. 50 61.
CONDICIONES DEL CROMATÒGRAFOColumna: Lichrospher 100 RP-8 MERCK (250 x 4.6mm) dimensiones de la columnaTemperatura de la columna: 25ºCFase móvil: ACN : H2O (acetinitrilo : agua) 60:40Volumen de inyección: 80uLDetector: UV (ultravioleta)Longitud de onda: 210nmFlujo de la fase móvil: 1mL/minHabiendo programado el cromatógrafo convenientemente, mediante elintegrador de superficie, el resultado es determinado inmediatamente en ppm. 51 62.
III RESULTADOS RESULTADOS GENERALES DE LA IDENTIFICACIÓN DE METHAMIDOPHOS EN PAPA POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF) Y CROMATOGRAFÍA LÌQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) Cromatografía Líquida de Límite MáximoNº de Cromatografía en Capa Fina (CCF) alta Residual (LMR) Mercado Resolucióncasos (HPLC) Rf Rf No estándar muestra Positivos Negativos ppm exceden exceden 1 0,8255 0,8191 X 0,0023 X 2 0,8233 0,8140 X 0,0029 X Ramón 3 Castilla 0,8139 0,8121 X 0,,0400 X 4 0,8226 0,8197 X 0,0132 X 5 0,8125 0,8101 X 0,0043 X 6 0,8133 0,8092 X 0,0029 X 7 0,8213 0,8159 X 0,0464 X Jorge 8 Chávez 0,8202 0,8113 X 0,1753 X 9 0,8189 0,8124 X 0,1122 X 10 0,8099 0,8003 X 0,0201 X 11 0,8165 0,8101 X 0,0124 X 12 0,8077 0,8023 X 0,4576 X Tres de 13 Febrero 0,8156 0,8066 X 2,5041 X 14 0,8111 0,8087 X 0,0038 X 15 0,8066 0,8089 X 2,7055 X 16 0,8122 0,8099 X 2,0312 X 17 0,8088 0,8023 X 0,1916 X 18 Manzanilla 0,8134 0,8096 X 0,0495 X 19 0,8128 0,8094 X 0,1517 X 20 0,8055 0,8003 X 0,1180 X Cuadro 3. Resultados generales de la identificación y cuantificación de Methamidophos en papa por CCF y HPLC 52 63.
Gráfico 1. Concentraciones de residuo de plaguicida Methamidophos en la totalidad de muestras analizadas CONCENTRACIÓN DE RESIDUO DE PLAGUICIDA METHAMIDOPHOS 2,5041 2,7055 2,0312LÍMITE MÁXIMO RESIDUAL PERMITIDO 0,4576 0,1753 0,1916 0,1517 0,1122 0,1180 0,05 0,0464 0,0495 0,0201 0,0132 0,0124 0,0040 0,0043 0,0038 0,0029 0,0029 0,0023 NÚMERO DE MUESTRAS 53 64.
RESULTADOS DE CROMATOFRAFÍA EN CAPA FINA REVELADOR UTILIZADO FORMA DE LA PLAGUICIDA MANCHA VERDE REVELADOR TRICLORURO DE DICLORURO DE PALADIO BRILLANTE BIOQUÍMICO FIERRO Pequeñas manchas Crema Rosado intensoMETHAMIDOPHOS REDONDA Amarillo anaranjado. oscuras amarillento DIMETOATO REDONDA Amarillo Blanco cremoso Rosado tenue Manchas negruzcas Amarillo fosforescente, amarillo Crema CLORPIRIFOS REDONDA Rosado tenue Manchas negruzcas verdoso, marrón claro, blanquecino Cuadro 4. Resumen de resultados de CCF 54 65.
DIMETOATO METHAMIDOPHOS M.P CLORPIRIFOS CARBOFURÁN Fig 6. Revelado cromatográfico con Verde Brillante. 55 66.
DIMETOATO METHAMIDOPHOS M.P CLORPIRIFOS CARBOFURÁNFig 7. Revelado cromatográfico con Dicloruro de Paladio. 56 67.
DIMETOATO METHAMIDOPHOS M.P CLORPIRIFOS CARBOFURÁN Fig 8. Revelado cromatográfico con Tricloruro de Fierro. 57 68.
DIMETOATO METHAMIDOPHOS M.P CLORPIRIFOS CARBOFURÁNFig 9. Revelado cromatográfico con Revelador Bioquímico. 58 69.
Tabla 1. PRESENCIA DE METHAMIDOPHOS EN PAPA SEGÚN CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF) Resultados Nº de casos Porcentaje (%) Positivos 20 100 Negativos 0 0 TOTAL 20 100 PRESENCIA DE METHAMIDOPHOS EN PAPA POR CCF PARA MERCADOS DE LIMA METROPOLITANA Negativos; 0; 0% Positivos Negativos Positivos; 20; 100% Fig 10. Identificación por CCF de methamidophos 59 70.
Tabla 2. CONCENTRACIÓN DE METHAMIDOPHOS EN PAPA PARA MERCADOS DE LIMA METROPOLITANA QUE EXCEDEN LOS LMR LMR Nº de casos Porcentaje (%) Exceden 9 45 No exceden 11 55 TOTAL 20 100 NÚMERO DE MUESTRAS QUE EXCEDEN LOS LMR PERMITIDOS PARA METHAMIDOPHOS EN PAPAS DE MERCADOS DE LIMA METROPOLITANA Exceden; 9; Exceden No exceden; 45% 11; 55% No exceden Fig 11. Muestras que exceden el LMR 60 71.
Tabla 3. DISTRIBUCIÓN DE CONCENTRACIÓN DE METHAMIDOPHOS QUE EXCEDE EL LMR, SEGÚN ORIGEN LMR Mercado Total de muestras Porcentaje Exceden Ramón Castilla 5 0 0 Jorge Chávez 5 2 10 Tres de Febrero 5 3 15 Manzanilla 5 4 20 TOTAL 20 9 45 DISTRIBUCIÓN DE CONCENTRACIÓN DE METHAMIDOPHOS QUE EXCEDE EL LMR SEGÚN ORIGEN ; Ramón Castilla; 0 ; Jorge Chávez; 2 Manzanilla; 4 Tres de Febrero; 3 Fig 12. Muestras que exceden el LMR según su origen 61 72.
Tabla 4. DISTRIBUCIÓN DE CONCENTRACIÓN DE METHAMIDOPHOS EN PAPAS PROVENIENTES DE MERCADOS MAYORISTAS Y MINORISTAS LMR Mercado Total de muestras Porcentaje Exceden Minorista 10 2 10 Mayorista 10 7 35 TOTAL 20 9 45 DISTRIBUCIÓN DE CONCENTRACIÓN DE METHAMIDOHOS EN PAPAS PROVENIENTES DE MERCADOS MAYORISTAS Y MINORISTAS Minorista; 2 Minorista Mayorista Mayorista; 7 Fig 13. Mercados mayoristas vs mercados minoristas 62 73.
IV DISCUSIÓN• El análisis cualitativo se trabajó en cromatografía en capa fina (CCF) debido a que es un método rápido y eficaz para realizar determinaciones toxicológicas; después de realizar varias pruebas se utilizó acetona y n- hexano como solvente extractor y placas de silicagel G-60 de Merck; como fase estacionaria; de igual manera se da en el trabajo de investigación realizado por Valdivieso A. (9)• De acuerdo al análisis cualitativo cromatografía en capa fina (CCF) de las 20 muestras de papa tanto para mercados mayoristas como minoristas se determina presencia de residuo de plaguicida organofosforado METHAMIDOPHOS en papa, en la totalidad de las muestras (ver Cuadro 3; Tabla 1 y Fig 10); donde se detalla los valores Rf de las muestras analizadas similares del estándar secundario analizado; estos resultados son similares al trabajo de investigación realizado por Cornejo Y. (11)• En la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se escoge la columna LICHROSPHER RP-8 de 25cm, debido a que presenta una mejor resolución y picos con menor asimetría lo que permite separar con mayor facilidad el analito principal (METHAMIDOPHOS) de otras impurezas que existan en las muestras; después de haber realizado numerosas pruebas con diferentes columnas.• De acuerdo al análisis cuantitativo por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se determina las siguientes cantidades de residuo de METHAMODOPHOS en papa para las 20 muestras de los mercados mayoristas y minoristas: 63 Recommended

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 Artículo 17
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