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Timestamp: 2016-10-25 16:58:50+00:00

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Orden de 16 de febrero de 2000, por la que se modifica el anexo del Real Decreto 2257/1994, de 25 de noviembre, por el que se aprueban los M�todos Oficiales de An�lisis de Piensos o Alimentos para Animales y sus primeras materias y el Real Decreto 1999/1995, de 7 de diciembre, relativo a los alimentos para animales destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos.
Publicado en BOE n�m. 41 de 17 de Febrero de 2000
Vigencia desde 18 de Febrero de 2000.
Vigente desde 18/Febrero/2000
�Modificaci�n del anexo del Real Decreto 2257/1994
�Modificaci�n del Real Decreto 1999/1995, de 7 de diciembre
Las Directivas 92/89/CEE, de 3 de noviembre; 92/95/CEE, de 9 de noviembre, y 94/14/CE, de 29 de marzo; 93/70/CEE, de 28 de julio; 93/117/CEE, de 17 de diciembre y 93/28/CEE, de 4 de junio, todas de la Comisi�n, por la que se establecen diversos m�todos de an�lisis, fueron incorporadas al Ordenamiento Jur�dico interno mediante Real Decreto 2257/1994, de 25 de noviembre, por el que se aprueban los M�todos Oficiales de An�lisis de Piensos o Alimentos para Animales y sus primeras materias.
La disposici�n final primera del Real Decreto 2257/1994, modificada por el Real Decreto 609/1999, de 16 de abril, habilita a los Ministros de Agricultura, Pesca y Alimentaci�n y de Sanidad y Consumo para modificar, en el �mbito de sus respectivas competencias, el anexo de dicho Real Decreto, cuando ello sea consecuencia de la normativa comunitaria.
Asimismo la disposici�n adicional primera del Real Decreto 2068/1999, faculta al Ministro de Agricultura, Pesca y Alimentaci�n para modificar la fecha que figura en la disposici�n transitoria �nica del Real Decreto 1999/1995, de 7 de diciembre, relativa a los alimentos para animales destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos, cuando ello sea consecuencia de la normativa comunitaria.
Aprobadas las Directivas 1999/78/CE, de 27 de julio de 1999, por la que se modifica la Directiva 95/10/CE, de 7 de abril de 1995, por la que se fija el m�todo de c�lculo del valor energ�tico de los alimentos para perros y gatos destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos; 1999/79/CE, de 27 de julio de 1999, que modifica la Tercera Directiva 72/199/CEE, de 27 de abril de 1972, por la que se determinan m�todos de an�lisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales, y 1999/76/CE, de 23 de julio de 1999, por la que se fijan m�todos de an�lisis comunitarios para la determinaci�n de Lasalocid s�dico en los alimentos para animales, todas ellas de la Comisi�n, es preciso proceder a su incorporaci�n, modificando en lo que es preciso los m�todos actualmente vigentes como oficiales.
La presente Orden, que incorpora las citadas Directivas 1999/78/CE, 1999/79/CE y 1999/76/CE, se dicta al amparo de lo dispuesto en el art�culo 149.1.13 y 16 de la Constituci�n, que atribuye al Estado la competencia exclusiva en materia de bases y coordinaci�n general de la actividad econ�mica y de la sanidad, respectivamente.
En su elaboraci�n han sido consultadas las Comunidades Aut�nomas y los sectores afectados, asimismo, el proyecto ha sido sometido al correspondiente informe por la Comisi�n Interministerial para la Ordenaci�n Alimentaria.
En su virtud, a propuesta de los Ministros de Agricultura, Pesca y Alimentaci�n y de Sanidad y Consumo,
Modificaci�n del anexo del Real Decreto 2257/1994 Se modifica el anexo del Real Decreto 2257/1994, de 25 de noviembre, por el que se aprueban diversos M�todos Oficiales de An�lisis de Piensos o Alimentos para Animales y sus primeras materias, de la siguiente forma:
1. Se sustituye el m�todo 34(a).-Determinaci�n del Almid�n (m�todo polarim�trico) por el que figura en el anexo de la presente Orden.
2. Se a�aden los m�todos para el c�lculo del valor energ�tico de los alimentos para perros y gatos destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos y Lasalocid s�dico que figuran en el anexo de la presente Orden.
Modificaci�n del Real Decreto 1999/1995, de 7 de diciembre Se modifica la fecha que figura en la disposici�n transitoria �nica del Real Decreto 1999/1995, de 7 de diciembre, por la de 30 de marzo de 2002.
ANEXO 34 (a). Determinaci�n del almid�n METODO POLARIMETRICO 1.
Objetivos y campo de aplicaci�n.
El m�todo permite determinar el contenido en almid�n y en productos de degradaci�n de alto peso molecular del almid�n de la alimentaci�n animal con el objetivo de controlar el cumplimiento de la Directiva 86/174/CEE y la Directiva 96/25/CE.
El m�todo comprende una doble determinaci�n. En la primera, la muestra se trata en caliente mediante �cido clorh�drico diluido. Previa filtraci�n, se mediar� mediante un polar�metro el poder rotatorio de la soluci�n.
En la segunda, la muestra se extrae mediante el etanol al 40 por 100. Tras la acidificaci�n del filtrado por el �cido clorh�drico, defecaci�n y filtraci�n, se mide el poder rotatorio en las mismas condiciones que cuando la primera determinaci�n.
La diferencia entre ambas multiplicada por un factor com�n da como resultado el contenido en almid�n de la muestra.
3.1 Acido clorh�drico al 25 por 100 (p/p), d: 1,126.
3.2 Acido clorh�drico al 1,128 por 100 (p/v).
La concentraci�n debe comprobarse mediante trituraci�n con la ayuda de una soluci�n de hidr�xido de sodio 0,1 N en presencia de rojo de metilo al 0,1 por 100 (p/v) en el etanol al 94 por 100 (v/v). 10 ml = 30,94 ml de NaOH 0,1 N.
3.3 Soluci�n de Carrez I: Disolver en el agua 21,9 g de acetato de zinc Zn (CH3COO)2 2H2O y 3 g de �cido ac�tico glacial. Completar a 100 ml con agua.
3.4 Soluci�n de Carrez II: Disolver en el agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio [K4Fe(CN)6]Completar a 100 ml con agua.
3.5 Etanol al 40 por 100 (v/v), de: 0,948 a 20 oC.
4.1 Erlenmeyer de 250 ml de esmerilado normalizado, con refrigerante de reflujo.
4.2 Polar�metro o sacar�metro.
M�todo operatorio.
Preparaci�n de la muestra.
Triturar la muestra de forma que pase en su totalidad a trav�s de un tamiz de malla redonda de 0,5 mm de di�metro.
Determinaci�n del poder rotatorio total (P o S) (v�ase el punto 7.1).
Pesar, con precisi�n de 1 mg, 2,5 g de la muestra triturada e introducirlos en un matraz aforado de 100 ml.
A�adir 25 ml de �cido clorh�drico (punto 3.2) agitar para obtener un buen reparto de la toma de muestras y a�adir de nuevo 25 ml de �cido clorh�drico (punto 3.2).
Sumergir el matraz en un ba�o de agua hirviendo y, durante los tres primeros minutos siguientes, agitar en�rgicamente y con regularidad para evitar la formaci�n de aglomerados. La cantidad de agua del ba�o debe ser suficiente para permitir mantener el ba�o en ebullici�n cuando el matraz est� sumergido en �l. Este no podr� ser retirado del ba�o a lo largo de la agitaci�n. Despu�s de quince minutos exactamente, retirar el matraz del ba�o, a�adir a ello 30 ml de agua fr�a y refrigerar inmediatamente hasta 20 oC.
A�adir a continuaci�n 5 ml de soluci�n de Carrez II (punto 3.4) y agitar de nuevo durante un minuto. Completar el volumen con agua, homogeneizar y filtrar: Si el filtrado no est� perfectamente l�mpido (lo que es poco frecuente), volver a comenzar el an�lisis empleando una cantidad mayor de las soluciones de Carrez I y II, por ejemplo 10 ml.
Medir a continuaci�n el poder rotatorio de la soluci�n en un tubo de 200 mm mediante un polar�metro o un sacar�metro.
Determinaci�n del poder rotatorio (P' o S') de las sustancias solubles en el etanol al 40 por 100.
Pesar, con precisi�n de 1 mg, 5 g de la muestra, introducirlos en un matraz aforado de 100 ml y a�adir 8 ml aproximadamente de etanol (punto 3.5) (v�ase el punto 7.2). Dejar el matraz en reposo durante 1 hora a temperatura ambiente: A lo largo de este lapso de tiempo, proceder 6 veces a una agitaci�n en�rgica de forma que la toma de muestra est� bien mezclada con el etanol. Llevar despu�s el volumen con el etanol (punto 3.5), homogeneizar y filtrar. Introducir mediante la pipeta 50 ml del filtrado (= 2,5 g de la muestra) en un erlenmeyer de 250 ml, a�adir 2,1 ml de �cido clorh�drico (punto 3.1) y agitar en�rgicamente. Ajustar un refrigerante a reflujo al erlenmeyer y sumergirlo en un ba�o de agua hirviendo. Despu�s del ba�o, retirar el erlenmeyer del ba�o, transvasar su contenido a un matraz aforado de 100 ml limpiando con un poco de agua fr�a, y refrigerar hasta 20 oC. Defecar a continuaci�n con ayuda de las soluciones de Carrez I (punto 3.3) y II (punto 3.4), completar el volumen con agua, homogeneizar, filtrar y medir el poder rotatorio como se indica en los p�rrafos segundo y tercero del punto 5.2.
C�lculo de los resultados
El contenido en almid�n por ciento de la muestra se calcula de la manera siguiente:
Mediciones efectuadas con polar�metro:
2000 (P - P')Porcentaje de almid�n ------------------                         [a]20 �C                            D
P = poder rotatorio total en grados de arco.
P' = poder rotatorio en grados de arco dado para las sustancias solubles en el etanol al 40 por 100.
[a]20 �C = poder rotatorio espec�fico del almid�n puro.   D
Los valores convencionalmente admitidos para dicho factor son los siguientes:
+ 185,9�: almid�n de arroz.
+ 185,4�: almid�n de patata.
+ 184,6�: almid�n de ma�z.
+ 182,7�: almid�n de trigo.
+ 181,5�: almid�n de cebada.
+ 181,3�: almid�n de avena.
+ 184,0�: otros tipos de almid�n, as� como mezclas de almidones de los piensos completos compuestos.
Mediciones efectuadas mediante sacar�metro:
2000 (P - P')Porcentaje de ---------------- x                [a]20 �C                   D
(2N ^ 0,665) x (S - S') -  26,6 N x (S - S') x   ----------------------   ------------------            100                   [a]20 �C                                      D
S = poder rotatorio total en grados sacarim�tricos.
S' = poder rotatorio en grados sacarim�tricos dado por las sustancias solubles en el etanol al 40 por 100.
N = peso en g de sacarosa en 100 ml de agua dando bajo un espesor de 200 mm un poder rotatorio de 100o sacarim�tricos.
16,29 g para los sacar�metros franceses.
26,00 g para los sacar�metros alemanes.
20,00 g para los sacar�metros mixtos.
[a]20 �C = poder rotatorio espec�fico del almid�n puro (v�ase el punto6.1).   D
Repetibilidad.-
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas sobre una misma muestra no debe exceder del 0,4 en valor absoluto para los contenidos en almid�n inferiores al 40 por 100, 1,1 por 100 en valor relativo para los contenidos en almid�n iguales o superiores al 40 por 100.
7.1 Cuando la muestra contenga m�s del 6 por 100 de los carbonatos, calculados en carbonato de calcio, �stos deben ser destruidos mediante un tratamiento con ayuda de una cantidad exactamente apropiada del �cido sulf�rico diluido, antes de la determinaci�n del poder rotatorio total.
7.2 En el caso de los productos de elevado contenido en lactosa, tales como el polvo de suero l�ctico o de leche descremada, proceder como sigue seg�n la adici�n de los 80 ml de etanol (punto 3.5). Ajustar al matraz un refrigerante de reflujo, sumergir el matraz durante treinta minutos en un ba�o de agua a 50 oC.
Dejar a continuaci�n refrigerar y seguir con el an�lisis tal como se indica en el punto 5.3
7.3 En el caso de que las siguientes materias primas est�n presentes en una cantidad importante en los alimentos para animales, ocasionar�n interferencias al determinar el contenido de almid�n mediante el m�todo polarim�trico y por lo tanto pueden obtenerse resultados incorrectos:
Productos derivados de la remolacha (azucarera), como la pulpa de la remolacha (azucarera), las melazas de la remolacha (azucarera), la pulpa de remolacha (azucarera) melazada, las vinazas de remolacha (azucarera) y el az�car de remolacha, pulpa de c�tricos.
Semillas de lino, torta de presi�n de lino, harina de extracci�n de lino.
Semillas de colza, torta de presi�n de colza, harina de extracci�n de colza, c�scaras de colza.
Semillas de girasol, harina de extracci�n de semilla de girasol, harina de extracci�n de girasol parcialmente decorticado.
Torta de presi�n de copra, harina de extracci�n de copra.
Pulpa de patata.
Levadura deshidratada.
Productos ricos en inulina [por ejemplo, plaquitas y harina de aguaturma (pataca)].
M�todo de c�lculo del valor energ�tico de los alimentos para perros y gatos destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos 1. Modo de c�lculo y expresi�n del valor energ�tico El valor energ�tico de los alimentos para perros y gatos destinados a objetivos de nutrici�n espec�ficos deber� calcularse, seg�n la f�rmula que figura m�s adelante, a partir de los porcentajes de determinados componentes anal�ticos de los alimentos. Dicho valor se expresar� en megajulios (MJ) de energ�a metabolizable (EM) por kilogramo de alimento compuesto:
a) Alimentos para perros y gatos, excepto alimento para gatos con un contenido en humedad superior al 14 por 100:MJ/kg de EM = 0,1464 x % prote�na bruta + 0,3556 x % materias grasas brutas + 0,1464 x % extracto no nitrogenado.
b) Alimentos para gatos con un contenido en humedad superior al 14 por 100:MJ/kg de EM = 0,1632 x % prote�na bruta + 0,3222 x % materias grasas brutas + 0,1255 x 5 extracto no nitrogenado - 0,2092.
F�rmula en la cual el porcentaje de extracto no nitrogenado se calcula determinando la diferencia entre 100 y los porcentajes de humedad, de cenizas brutas, de prote�na bruta, de materias grasas brutas y de celulosa bruta.
2. Tolerancias aplicables a los valores declarados Si los controles oficiales establecidos en el art�culo 12 de la Directiva 79/373/CEE arrojan una diferencia entre el resultado del control y el valor energ�tico declarado que suponga un incremento o una disminuci�n del valor energ�tico del alimento, se aplicar� una tolerancia del 15 por 100.
3. Expresi�n del resultado El resultado obtenido despu�s de la aplicaci�n de la f�rmula antes mencionada se expresar� con un decimal.
4. Procedimiento de toma de muestras y m�todos de an�lisis aplicables La toma de muestras del alimento compuesto y la determinaci�n de los contenidos de los componentes anal�ticos indicados en el m�todo de c�lculo se realizar�n, respectivamente, de acuerdo con los procedimientos de toma de muestras y los m�todos de an�lisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales.
67. Determinaci�n de lasalocid s�dico SAL SODICA DE UN POLIETER DE ACIDO MONOCARBOXILICO PRODUCIDO POR STREPTOMYCES LASALIENSIS
Objeto y �mbito de aplicaci�n
El presente m�todo permite la determinaci�n de lasalocid s�dico en los alimentos para animales y premezclas.
El l�mite de detecci�n es de 5 mg/kg; el de determinaci�n de 30 mg/kg.
El lasalocid s�dico se extrae de la muestra con metanol acidulado y su contenido se determina mediante cromatograf�a de l�quidos de alta resoluci�n (CLAR) de fase inversa con detecci�n espectrofluorim�trica.
3.1 Fosfato de dihidr�geno y potasio (KH2PO4).
3.2 Acido ortofosf�rico, w = 85 por 100.
3.3 Soluci�n de �cido ortofosf�rico, 6 = 20 por 100.
Diluir 23,5 ml de �cido ortofosf�rico (3.2) con agua hasta llegar a 100 ml.
3.4 6-metil-2-heptilamina (1,5-dimetilhexilamina), w = 99 por 100.
3.5 Metanol de calidad CLAR.
3.6 Acido clorh�drico, p20 1,19 g/ml.
3.7 Soluci�n amortiguadora de fosfato, c = 0,01 mol/l.
Disolver 1,36 g de KH2PO4 (3.1) en 500 ml de agua (3.11), a�adir 3,5 ml de �cido ortofosf�rico (3.2) y 10,0 ml de 6-metil-2-heptilamina (3.4). Ajustar el pH a 4,0 con soluci�n de �cido ortofosf�rico (3.3) y diluir con agua (3.11) hasta 1 000 ml.
Metanol acidulado.-
Pasar 5,0 ml de �cido clorh�drico (3.6) a un matraz aforado de 1 000 ml, enrasar con metanol (3.5) y mezclar. Esta soluci�n debe prepararse justo antes de su utilizaci�n.
3.9 Fase m�vil para la CLAR: Soluci�n amortiguadora de fosfato + metanol, 5 + 95 (V + V).
Mezclar 5 ml de soluci�n amortiguadora de fosfato (3.7) con 95 ml de metanol (3.5).
3.10 Sustancia patr�n: Lasolocid s�dico de pureza garantizada C34H53O8Na (sal s�dica de un poli�ter de �cido monocarbox�lico producido por Streptomyces lasaliensis) E763.
Soluci�n madre de patr�n de lasalocid s�dico, 500 lg/ml.
Pesar, con precisi�n de 0,1 mg, 50 mg de lasalocid s�dico, en un matraz aforado de 100 ml, disolver y enrasar con metanol acidulado (3.8) y mezclar. Esta soluci�n debe prepararse justo antes de su utilizaci�n.
Soluci�n intermedia de patr�n de lasalocid s�dico, 50 lg/ml.
Pasar con pipeta 10,0 ml de la soluci�n madre de patr�n (3.10.1) a un matraz aforado de 100 ml, enrasar con metanol acidulado (3.8) y mezclar. Esta soluci�n debe prepararse justo antes de su utilizaci�n.
Soluciones de calibraci�n: Pasar 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 y 10,0 ml de la soluci�n intermedia de patr�n (3.10.2) a una serie de matraces aforados de 50 ml.
Enrasar con metanol acidulado (3.8) y mezclar. Estas soluciones corresponden a 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 y 10,0 lg de lasalocid s�dico por ml, respectivamente, y deben pasarse justo antes de su utilizaci�n.
3.11 Agua de calidad CLAR.
4.1 Ba�o de ultrasonidos (o ba�o de agua con agitaci�n), de temperatura controlada.
4.2 Filtros de membrana, 0,45 lm.
4.3 Equipo para CLAR con sistema de inyecci�n que permita unos vol�menes de inyecci�n de 20 lm.
4.3.1 Columna de cromatograf�a de l�quidos de 125 mm x 4 mm, de fase inversa C18, con empaquetamiento de 5 lm o equivalente.
4.3.2 Espectrofluor�metro con ajuste variable de las longitudes de onda de excitaci�n y de emisi�n.
Prueba en blanco.-
Para la prueba de recuperaci�n (5.1.2) debe analizarse un pienso en blanco a fin de comprobar la ausencia de lasalocid s�dico y de sustancias de interferencia. El pienso en blanco debe ser de tipo similar a la muestra y en �l no debe detectarse lasalocid s�dico ni sustancias de interferencia.
Prueba de recuperaci�n.-
Debe realizarse una prueba de recuperaci�n analizando el pienso en blanco que se habr� enriquecido por adici�n de una cantidad de lasalocid s�dico similar a la presente en la muestra.
Para a�adir una concentraci�n de 100 mg/kg, poner 10,0 ml de la soluci�n madre de patr�n (3.10.1) en un matraz Erlenmeyer de 250 ml y evaporar la soluci�n hasta que queden unos 0,5 ml; a�adir 50 g del pienso en blanco y mezclar cuidadosamente; dejar en reposo durante diez minutos, volviendo a mezclar varias veces, y pasar a la fase de extracci�n (5.2). Si no se dispone de un pienso en blanco de tipo similar al de la muestra (v�ase el punto 5.1.1), otra posibilidad consiste en realizar una prueba de recuperaci�n mediante el m�todo de adici�n de patr�n. En este caso, la muestra que debe analizarse se enriquece con una cantidad de lasalocid s�dico similar a la que ya est� presente en la misma. Esta muestra se analiza junto con la muestra sin enriquecer, y la recuperaci�n se calcula por sustracci�n.
Extracci�n.
Alimentos para animales.-
Pesar, con precisi�n de 0,01 g, entre 5 y 10 g de la muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 ml con tap�n. A�adir con pipeta 100,0 ml de metanol acidulado (3.8). Tapar sin apretar el tap�n y agitar para dispersar. Poner el matraz en un ba�o de ultrasonidos (4.1) a unos 40 0C durante veinte minutos; sacarlo despu�s y enfriar a temperatura ambiente. Dejar en reposo durante una hora hasta que sedimente la materia en suspensi�n; pasar despu�s una parte al�cuota a trav�s de un filtro de membrana de 0,45 lm (4.2) a un recipiente apropiado. Proceder a la determinaci�n mediante CLAR (5.3).
Premezclas.-
Pesar, con precisi�n de 0,001 g, unos 2 g de la premezcla sin triturar en un matraz aforado de 250 ml. A�adir 100,0 ml de metanol acidulado (3.8) y agitar para dispersar. Poner el matraz y su contenido en un ba�o de ultrasonidos (4.1) a unos 40 0C durante veinte minutos; sacarlo despu�s y enfriar a temperatura ambiente. Enrasar con metanol acidulado (3.8) y mezclar cuidadosamente. Dejar en reposo durante una hora hasta que sedimente la materia en suspensi�n; filtrar despu�s una parte al�cuota a trav�s de un filtro de membrana de 0,45 lm (4.2). Diluir un volumen adecuado del filtrado claro con metanol acidulado (3.8) para obtener una soluci�n final de prueba que contenga unos 4 lg/ml de lasalocid s�dico. Proceder a la determinaci�n mediante CLAR (5.3.).
Determinaci�n mediante CLAR.
Par�metros.-
Las siguientes condiciones se proponen con car�cter indicativo, por lo que podr�n aplicarse otras si ofrecen resultados equivalentes:
Columna de cromatograf�a de l�quidos (4.3.1):
125 mm x 4 mm, fase inversa C18, empaquetamiento 5 lm o equivalente.
Fase m�vil (3.9): Mezcla de soluci�n amortiguadora de fosfato (3.7) y metanol (3.5), 5 + 95 (V + V).
Flujo: 1,2 ml/min.
Longitudes de onda de detecci�n:
Excitaci�n 310 mm.
Emisi�n 419 mm.
Volumen de inyecci�n 20 ll.
Comprobar la estabilidad del sistema cromatogr�fico inyectando varias veces la soluci�n de calibraci�n (3.10.3) con 4,0 lg/ml, hasta obtener alturas (o �reas) de pico y tiempos de retenci�n constantes.
Curva de calibraci�n.-
Inyectar varias veces cada soluci�n de calibraci�n (3.10.3) y determinar las alturas (�reas) medias de los picos correspondientes a cada concentraci�n. Trazar una curva de calibraci�n poniendo las alturas (�reas) medias de los picos en ordenadas y las concentraciones correspondientes en lg/ml en abscisas.
Soluci�n de muestra.-
Inyectar varias veces el extracto de la muestra obtenido en 5.2.1 � 5.2.2 utilizando el mismo volumen que el empleado para las soluciones de calibraci�n y determinar la altura (�rea) media de los picos de lasalocid s�dico.
C�lculo de los resultados A partir de la altura (�rea) media de los picos obtenidos por inyecci�n de la soluci�n de la muestra (5.3.3), determinar la concentraci�n de lasalocid s�dico en lg/ml mediante la curva de calibraci�n.
El contenido w de lasalocid s�dico de la muestra, expresado en mg/kg, se obtiene mediante la siguiente f�rmula:
B . V1w = -------- (mg/kg)       m
v = concentraci�n de lasalocid s�dico en la soluci�n de la muestra (5.2.1) en lg/ml.
V = volumen del extracto de la muestra seg�n 5.2.1 en ml (es decir, 100).
m = masa de la porci�n de muestra en g.
El contenico w de lasalocid s�dico de la muestra, expresado en mg/kg, se obtiene mediante la siguiente f�rmula:
B . V2 . f .w = ------------ [mg/kg]         m
B = concentraci�n de lasalocid s�dico en la soluci�n de la muestra (5.2.2) en lg/ml.
V = volumen del extracto de la muestra seg�n 5.2.2 en ml (es decir, 250).
f = factor de diluci�n de acuerdo con 5.2.2.
Validaci�n de los resultados
Identidad.-
Los m�todos basados en espectrofluorimetr�a est�n menos expuestos a sufrir interferencias que los que utilizan detecci�n por UV. La identidad del analito puede confirmarse por cocromatograf�a.
Cocromatograf�a. Se enriquece un extracto de la muestra (5.2.1 � 5.2.2) mediante adici�n de una cantidad adecuada de una soluci�n de calibraci�n (3.10.3).
La cantidad de lasalocid s�dico a�adido debe ser similar a la cantidad de lasalocid s�dico que se encuentre en el extracto de la muestra. Solamente debe aumentar la altura del pico de lasalocid s�dico, en una proporci�n basada en la cantidad a�adida y en la diluci�n del extracto. La anchura del pico a la mitad de su altura debe estar dentro del margen del >10 por 100 de la anchura inicial del pico de lasalocid s�dico del extracto de la muestra antes de ser enriquecido.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas con la misma muestra no debe superar:
El 15 por 100 del resultado superior en caso de contenido de lasalocid s�dico entre 30 y 100 mg/kg.
15 mg/kg en caso de contenido de lasalocid s�dico entre 100 y 200 mg/kg.
El 7,5 por 100 del resultado superior en caso de contenido de lasalocid s�dico mayor de 200 mg/kg.
Recuperaci�n.-
En el caso de una muestra de pienso (en blanco) enriquecida, la recuperaci�n debe ser como m�nimo del 80 por 100. En el caso de una muestra de premezcla enriquecida, la recuperaci�n debe ser como m�nimo del 90 por 100.
Resultados de un estudio en colaboraci�n Se organiz� un estudio en colaboraci�n (1) en el que 12 laboratorios analizaron dos premezclas (muestras 1 y 2) y cinco piensos (muestras 3 a 7). De cada muestra se hicieron an�lisis por duplicado. Los resultados se recogen en el siguiente cuadro:
Muestra 1 Premezcla de pollo
Muestra 2 Premezcla de pavo
Muestra 3 Gr�nulas de pavo
Muestra 4 Gr�nulas de pollo
Muestra 5 Pienso de pavo
Muestra 6 Pienso de aves de corral
Muestra 7 Pienso de aves de corral
Media (mg/kg)
32,6 Sr (mg/kg)
1,75 Cvr (porcentaje)
5,37 SR (mg/kg)
3,49 CVR (porcentaje)
10,70 Contenido nominal (mg/kg)
L: n�mero de laboratorios.
n : n�mero de valores individuales.
Sr : desviaci�n t�pica de la repetibilidad.
SR : desviaci�n t�pica de reproducibilidad.
CVr : coeficiente de la repetibilidad. Porcentaje.
CVR : coeficiente de variaci�n de la reproducibilidad.
* : contenido declarado por el fabricante.
+ : pienso preparado en el laboratorio.
(1) Analyst, 1995, 120,2175-2180. Ver Texto ');

References: Real Decreto 
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