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Timestamp: 2018-05-24 19:56:18+00:00

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Biopsia Embrionaria Aspectos Técnicos by Asebir 1856 views
1. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 1 N° 1 • Junio 2007 Vol. 12 A S O C I A C I Ó N PA R A E L E S T U D I O D E L A B I O L O G Í A D E L A R E P R O D U C C I Ó N ASEBIR REVISTA Actualidad Artículos 4 Comentarios Sobre el Real Decreto 1301/2006 de 10 de 4Efecto de la Eclosión Asistida en Noviembre de 2006 Sobre Células y Tejidos Humanos Relacción al Porcentaje de Gestación en Embriones Criopreservados 4Biopsia Embrionaria “ Aspectos Técnicos” Debates 4 La FIV Convencional Goza de Buena Salud 4 FIV versus ICSI ¿Se Usan de Manera Racional? 4 Guías de Práctica Clínica y Diagnóstico Genético Preimplantatorio 4 ¿Se Esta Aplicando el DGP de Forma Abusiva? 4 ¿Qué le Ocurre a la FIV Convencional Hoy en Dia? Formación Continuada 4 Papel de la Interacción Celular en Foliculogenesis Noticias Agenda Boletín de Inscripción
2. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 2
3. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 3 Í N D I C E Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 3 ASEBIR A S O C I A C I Ó N PA R A E L E S T U D I O D E L A B I O L O G Í A D E L A R E P R O D U C C I Ó N SUMARIO Vol. 12 • N° 1 • Junio 2007 Pág. EDITORIAL 5 M. Grossmann EDITA. ACTUALIDAD Asociación para el Estudio de la Comentarios sobre el Real Decreto 1301/2006 de 10 de Biología de la Reproducción (ASEBIR) noviembre de 2006 sobre células y tejidos humanos. 6 J. Ten, F. Compañ, A. Montoya, R. Bernabeu JUNTA DIRECTIVA. ARTÍCULOS Efecto de la eclosión asistida en relación al porcentaje de Presidente: Antonio L. González-Utor gestación en embriones criopreservados. 12 Vicepresidenta: Carmen Ochoa M. Dorado, M. Hebles, B. Migueles, M. González, P. Sánchez, F. Sánchez Secretaria: Begoña Arán Tesorero: Manuel Ardoy Biopsia Embrionaria “Aspectos Técnicos” 17 J.M. Moreno Vocales: Nieves Cremades, Mark Grossmann, Mª Victoria Hurtado de AULA JOVEN Mendoza, Jorge Cuadros, Juan Manuel Introducción a aula joven 23 Moreno, Mª José de los Santos, Estudio del efecto de prolongar 1 hora el tiempo de incubación en la técnica de swim-up 23 Fernando Marina y Jorge Ten. N. Alcañiz, I. Solvas, M. Grossmann, F. Vidal, MC. Pons PROGRAMA CONGRESO 28 COORDINACIÓN DEBATES DE LA REVISTA. Nieves Cremades Introducción a debate 34 Mark Grossmann La FIV convencional goza de buena salud 34 Mª Victoria Hurtado de Mendoza J. Cuadros, P. Sánchez - Aparicio, L. Andrés, M. Sánchez de Burgos. FIV versus ICSI ¿se usan de manera racional? 35 PUBLICIDAD Y COLABORACIONES. C. Ochoa ASEBIR ¿Qué le ocurre a la FIV convencional hoy en dia? 36 Secretaría ASEBIR: MC. Pons, M. Grossmann. c/ Cronos , nº 20, Bloque 4, 1º, 6 Guías de práctica clínica y diagnóstico genético preimplantacional 37 28037 Madrid MC. Gonzalvo, A. Clavero, S. Calderón, A. Sánchez - León, ML. Pérez, Tel. 91 367 89 94 - Fax 91 377 49 65 ML. González, A. Alonso, JA. Castillo E-mail: asebir@asebir.com ¿Se esta aplicando el DGP de forma abusiva? 38 F. Vidal DISEÑO, MAQUETACIÓN e IMPRESIÓN. FORMACIÓN CONTINUADA RECCO Imagen y Desarrollo, S.L.L. Papel de la Interacción celular en foliculogénesis 41 P. Sánchez- Aparicio, R. Ramos, J. Cuadros. c/ Albarracín, 56 - 28037 Madrid Tel. 91 754 00 26 - Fax 91 754 16 05 NOTICIAS Convocatoria Asebir 07 51 E-mail: recco@recco-sll.com AGENDA 52 Depósito Legal: M-18873-1996 BOLETÍN DE INSCRIPCIÓN 54 ISSN: 1136-4424 Soporte Válido: 78-R-CM IMAGEN DE PORTADA: Cartel anunciador del IV Congreso ASEBIR en Bilbao.
4. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 4
5. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 5 E D I T O R I A L Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 5 Proceso ESHRE de certificación en embriologia clinica Desde la Junta Directiva trabajamos duro para consolidar ASEBIR como sociedad de referencia en los campos de la embriología clínica y la biología de la reproducción. Y un paso más en esta tarea es nuestra participación desde buen comienzo en el proceso de certificación individual en embriología clínica a nivel europeo y que ESHRE, con la colaboración de organizaciones locales como ASEBIR, ha iniciado recientemente. De entrada, de modo retrospectivo y de forma excepcional, ESHRE certificará como “embriólogos/as clínicos/as sénior jefe de laboratorio” a las personas que cumplan los requisitos planteados (licenciatura + 10 años de experiencia + master y/o doctorado + cargo de jefe/director de laboratorio) y que presenten candidatura antes del 31 de Octubre de 2007 según el modelo publicado en la Web de ESHRE/accreditation y en la Web ASEBIR. La lista de personas certificadas se publicará al menos en la Web de ESHRE y se pretende que ellos/ellas sirvan de base, y a su vez puedan avalar la suficiencia de otros, en el largo camino de las certificaciones europeas. Más adelante ESHRE certificará el resto de profesionales que lo deseen (hay voluntad de que este reconocimiento, a medio plazo, se convierta en obligatorio) en dos niveles, uno superior o de “embriólogo clínico sénior” y uno de básico o de “embriólogo clínico” mediante exámenes tipo test y de la presentación de un currículum contrastado. La primera convocatoria de exámenes está prevista durante el congreso de ESHRE de Barcelona 2008, se abrirá únicamente a aquellos candidatos que postulen al nivel superior de “embriólogo/a clínico/a sénior". Y en el horizonte del año 2009 está previsto que se convoquen, al menos una vez cada año, exámenes para los dos niveles acreditativos mencionados ¡Todo un reto! Evidentemente la información de este importante proceso se publicará con suficiente antelación en la Web de ESHRE, y ASEBIR dará cuenta de ella inmediatamente. Aunque esta certificación es voluntaria y, por ahora, carece de respaldo del ejecutivo comunitario, creemos que es un paso de gigante para conseguir el reconocimiento de la especialidad en embriología clínica y esperamos poder comentarla en nuestro congreso. ¡Nos vemos en Bilbao! Mark Grossmann i Camps, Presidente Electo
6. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 6 A C T U A L I D A D Ten, J. et al. Comentarios sobre el RD... 6 COMENTARIOS SOBRE EL REAL DECRETO 1301/2006 DE 10 DE NOVIEMBRE DE 2006 SOBRE CÉLULAS Y TEJIDOS HUMANOS Jorge Ten, Francisco Compañ, Alejandro Montoya, Rafael Bernabeu Instituto Bernabeu, Alicante En este Real Decreto (RD) se estable- para la donación, la obtención, la eva- nas 39475 a 39502. cen las normas para todas las activida- luación, el procesamiento, la preserva- des relacionadas con la utilización de ción, el almacenamiento y la distribu- El Capítulo I hace mención a las dis- células, tejidos humanos y derivados, ción de células y tejidos humanos, posiciones generales, y son varios los destinados a ser aplicados en el ser hu- como la Directiva Europea 2006/17/CE puntos a tener en cuenta. De entrada, mano. El objetivo es claro, ya que trata de la Comisión por la que se aplica la el Artículo 1 contempla que este RD tie- de asegurar la calidad y la seguridad de Directiva 2004/23/CE del Parlamento ne aplicación a las células reproduc- las células y tejidos utilizados para evi- Europeo y del Consejo en lo relativo a toras en todo lo no previsto en la Ley tar la transmisión de enfermedades y determinados requisitos técnicos para 14/2006, de 26 de mayo, sobre técni- facilitar su uso terapéutico. Está enfo- la donación, la obtención y la evalua- cas de reproducción humana asistida. cado básicamente a la regulación de ción de células y tejidos humanos. Por tanto, esto nos obliga a conocer en los trasplantes de células y tejidos hu- profundidad la Ley y el RD. Un aspecto manos, siguiendo los principios de vo- ¿Cómo nos afecta este RD a los cen- importante es la definición que se hace luntariedad, anonimato, altruismo y so- tros de reproducción asistida? ¿Existe de células reproductoras en el Artículo lidaridad que caracterizan el modelo de alguna medida que debemos adoptar? 2, donde se incluyen aquellas células o trasplantes del Sistema Nacional de Estas y otras preguntas son las que nos tejidos que pueden ser utilizados para Salud. No obstante, también se inclu- hicimos en el momento de conocer su la reproducción humana asistida. Por yen las células reproductoras y, por tan- aparición y son las que vamos a co- tanto, habría que considerar también el to, las implicaciones en nuestra área de mentar en este artículo. No obstante, tejido ovárico y el de testículo. Además, trabajo son evidentes. El plazo de adap- como embriólogos y clínicos, no somos los centros de reproducción asistida tación para los centros autorizados es precisamente las personas más apro- podemos considerarnos a efectos de piadas para realizar este tipo de tareas este RD como establecimientos de te- de 12 meses desde la entrada en vigor que casi siempre nos resultan farrago- jidos, ya que llevamos a cabo activida- el pasado 11 de noviembre de 2006. sas. Evidentemente, los cambios cons- des de procesamiento, preservación, tantes en la legislación que regula etc. desde su obtención y hasta su uti- Las actividades reguladas en este RD nuestra área de trabajo hacen que sea lización o aplicación en humanos. incluyen la donación, obtención, eva- inevitable un estudio a fondo de la mis- También podemos ser los encargados luación, procesamiento, preservación, ma. Por suerte, en los últimos años se de la obtención y evaluación de tejidos almacenamiento, distribución, aplica- están creando equipos jurídicos y con- y células. El Capítulo I también contem- ción e investigación clínica de las célu- sultivos que nos están ayudando enor- pla una serie de requisitos, la mayoría las y/o tejidos, existiendo una trazabili- memente en las dudas que siempre de los cuales están recopilados en la dad en cada uno de estos procesos. nos pueden surgir durante la praxis. Ley 14/2006, pero que pueden com- Dicha trazabilidad incluye la ubicación, Sin ir más lejos, en nuestra página web plementar, si cabe, las acciones referi- localización e identificación de las célu- (www.asebir.com) creamos reciente- das a las donaciones de gametos en los las y/o tejidos hasta que llegan al recep- mente un servicio gratuito de Asesoría centros de reproducción asistida: tor o son desestimados y/o destruidos. Jurídica en el que hemos recibido nu- Asimismo, cubre la capacidad de loca- merosas consultas que han sido con- El Artículo 3 fija el carácter volun lizar e identificar cualquier dato rele- testadas y aclaradas. Sin duda, el aná- tario, altruista y de procedimiento no vante de los productos y materiales que lisis exhaustivo de este RD nos plantea gravoso para la donación, pudiendo re- van a estar en contacto directo con las algunas incógnitas que solamente pue- cibir compensación limitada a cubrir células y/o tejidos y que puedan afec- den ser solucionadas por estos profe- gastos, dietas, etc. tar a la calidad y seguridad de los mis- sionales jurídicos. A continuación pasa- n mos. remos a describir los aspectos más im- En cuanto a la promoción y publici- portantes de los 6 Capítulos y los 8 dad (Artículo 4) serán de forma gene- Mediante este RD, tal y como men- Anexos de los que consta este RD, cen- ral, señalando su carácter voluntario, al- ciona la Disposición Final Segunda, se trándonos en los puntos que implican truista y desinteresado. Estará someti- incorporan al ordenamiento jurídico es- fundamentalmente a la donación de da a inspección y en el caso de que sea pañol tanto la Directiva Europea gametos. Para un estudio más detalla- falsa o tendenciosa, que induzca a n 2004/23/CE relativa al establecimiento do, se puede consultar este RD en error, será incompatible con la autori- de normas de calidad y de seguridad www.boe.es con el número 270 y pági- zación de actividad para el centro.
7. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 7 A C T U A L I D A D Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 7 responsable con Titulación Universitaria Por supuesto, se garantizará la con- Superior en el ámbito de la Medicina o Sistema de recogida y custodia de fidencialidad de todos los datos relacio- las ciencias biomédicas y 3 años de ex- la información. Se designará una per- nados con la salud de los donantes, así periencia mínima. Velará, facilitará y sona responsable de la recogida y cus- como de los resultados y trazabilidad aplicará la normativa. Se notificará a la todia de la información. Hay que remi- de sus donaciones, de acuerdo con la Autoridad competente sus datos perso- n tir información trimestral a organismos Ley Orgánica 15/1999 de Protección nales y cualquier sustitución que se re- competentes. Creemos que este punto de Datos de Carácter Personal. Se apli- n alice de esta persona. El resto del per- no nos afecta, ya que está regulado por cará además el nivel alto de seguridad sonal deberá estar perfectamente cuali- la Ley 14/2006, en su Capítulo VII. respecto al tratamiento de los datos re- ficado. Por tanto, si realmente somos n lacionados con los donantes (RD un establecimiento de tejidos, tendría- El Capítulo IV regula la aplicación de 994/1999) mos que adecuarnos a esta normativa las células y tejidos, con los siguientes y realizar estos trámites. No obstante, puntos: El Capitulo II regula la donación y cabe reseñar que, como centros de re- obtención de células y tejidos huma- producción asistida, el Artículo 18 de la Autorización según el RD nos, haciendo referencia a los donan- Ley 14/2006 regula las condiciones de 1277/2003 y el Anexo I.4. Según lo tes vivos y fallecidos, a la selección y funcionamiento de los mismos, desig- comentado en el Capítulo II, en nuestro evaluación del donante, al procedi- nando al director del centro o servicio caso estaríamos regulados por el miento de obtención, empaquetado, como responsable de las actuaciones Artículo 17 de la Ley 14/2006. etiquetado y transporte, así como al sis- de todo el equipo. tema de recogida y custodia de la infor- Acceso a las células y tejidos y con- mación y nos refiere a varios Anexos de Importación y exportación. Autorizado diciones generales de aplicación. Lo este RD. Respecto a las autorizaciones por el Ministerio de Sanidad y podemos interpretar como el acceso de las actividades de los centros y uni- Consumo, previo informe de la ONT. Se entre diferentes centros para llevar a n dades, el Artículo 9 dice que se regula- efectuará a través de los recintos adua- cabo principalmente trasplantes y, por rán según lo dispuesto en el RD neros especificados en el Anexo I del tanto, no lo tendríamos en cuenta. 1277/2003, con una serie de requisitos RD 65/2006, de 30 de Enero, por la mínimos que se detallan en el Anexo I. que se establecen requisitos para la im- Sistema de recogida y custodia de Además, los centros y unidades autori- portación y exportación de muestras n la información. Capítulo V del presente zados para la obtención de células y/o biológicas. Esta norma afectaría al en- RD. Acceso restringido y confidencial. n tejidos deberán facilitar los datos relati- vío y recepción de muestras (por ejem- Remitir informes trimestrales. Lo mis- vos a su actividad que les sean requeri- plo, seminales) con otros países. No mo que en el Capítulo anterior, ya que dos por las autoridades sanitarias com- obstante, en el contexto en que lo lee- este punto está regulado en la Ley petentes de su comunidad autónoma, mos entendemos que sería para llevar 14/2006. que los remitirá a la Organización a cabo trasplantes entre diferentes paí- Nacional de Transplantes (ONT) según ses. Esta es, por tanto, una cuestión Investigación clínica. Según este lo previsto en el Capítulo V de este RD. que habría que aclarar. n RD, los centros tienen que tener la au- No obstante, creemos que esto no nos torización y presentar una documenta- afecta ya que las autorizaciones que Relaciones entre los centros de teji- ción a incluir en la solicitud del proyec- nos regulan están especificadas en el dos y terceros. Establecimiento de con- to. La autoridad informará cada seis artículo 17 de la Ley 14/2006. Además, tratos y registros, donde se especifi- meses de los proyectos autorizados y los registros de donantes y de actividad quen claramente las responsabilidades en ejecución dentro de su Comunidad y resultados de los centros de repro- de los terceros en relación con los pro- Autónoma. Este apartado tampoco nos ducción asistida, así como el suminis- cesos que van a llevar a cabo, así como afectaría ya que estamos regulados res- tro de información quedan regulados una descripción detallada de los mis- n pecto a investigación con gametos y mediante los artículos 21, 22 y 23, res- mos. Esto podría afectar a la distribu- n pectivamente, de la Ley 14/2006. ción de muestras (principalmente semi- preembriones humanos en el Capítulo nales) a pacientes para uso particular o IV de la Ley 14/2006. Además, existe El Capítulo III regula el procesamien- derivación a otros centros. Aunque este una Comisión, dependiente del to, almacenamiento y distribución de punto no esté recopilado en la Ley Instituto Carlos III encargada de emitir las células y tejidos, con las autorizacio- 14/2006, lo que los centros hemos es- informes relativos a los proyectos de in- nes a las que se hacen referencia en el tado llevando a cabo es que la persona vestigación relacionados con la obten- Capítulo II. Podemos destacar los si- que quiere llevarse una muestra propia, ción, desarrollo y utilización de líneas guientes puntos: tiene que firmar una autorización o con- celulares troncales embrionarias. sentimiento haciéndose responsable de Responsable técnico y personal la misma. Por tanto, esto sería algo si- En el Capítulo V se regulan los siste- adscrito. Cada centro deberá tener un milar a lo que el RD pide. mas de información, seguimiento y
8. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 8 A C T U A L I D A D Ten, J. et al. Comentarios sobre el RD... 8 biovigilancia: Garantizará un procedimiento rápido de retirada de todo producto relacionado 1.- Requisitos mínimos Registro de centros. La ONT des- con efectos adversos graves. Podríamos arrollará un registro donde se detallarán considerar que este apartado tampoco c) Cuando el destino de las células o cada centro y cada actividad. Será de nos afecta, ya que no generamos pro- tejidos extraídos sea su derivación a un acceso público y tendrá un responsable blemas de salud pública que requieran establecimiento de tejidos para su pro- de mantenimiento y custodia. Este sistemas de biovigilancia. En la Ley cesamiento, deberá existir un acuerdo apartado lo tenemos regulado en los ar- 14/2006 tenemos una serie de normas de colaboración que incluirá un proto- tículos 21 y 22 del Capítulo VII de la Ley de funcionamiento de los centros y colo consensuado con dicho estableci- 14/2006. equipos, así como de infracciones y miento. sanciones y de seguimientos que regu- n Sistema de información general. La lan la buena praxis de los centros de re- k) Mantener un archivo de sueros de ONT desarrollará un sistema de recogi- n producción asistida. los donantes. En el caso de las célu- da y custodia de la información. las reproductoras, el archivo de sueros Realizará un informe anual, que será En el Capítulo VI se detallan los as- se mantendrá durante dos años a par- accesible al público y se remitirá a los pectos relativos a la Inspección, evalua- tir de la última transferencia. centros. En disposición transitoria pri- ción y acreditación e infracciones y san- mera establece el plazo de 6 meses ciones. i) Disponer de un procedimiento para que la ONT desarrolle este siste- operativo estandarizado para el enva- ma. También lo tenemos regulado en el Inspección y evaluación. Plan de sado, etiquetado y transporte de las Capítulo VII de la Ley 14/2006. inspecciones periódicas, intervalos y células y/o tejidos hasta el punto de n condiciones de realización. destino. Trazabilidad. Anexo VI. Se codificará Inspecciones extraordinarias y peticio- según los anexos VI y VII. Contemplará nes. Como hemos comentado, la Ley 2.- Requisitos técnicos el rastreo de origen a destino de todas 14/2006 recoge en su Artículo 19 la po- las células y tejidos (así como produc- sibilidad de someter a los centros a au- a) En cuanto a la organización y tos y materiales en contacto). ditorias externas en los centros de re- n dirección: producción asistida. La información se guardará y custo- 1º. Además del Director del estable- diará de forma segura durante al me- Infracciones y sanciones. Artículo cimiento se debe designar un respon- nos 30 años a partir de su codifica- 37 de este RD. Reguladas en nuestra sable técnico. ción. Creemos que estas codificaciones Ley 14/2006 en el Capítulo VIII. n no son necesarias en nuestro caso, ya n b) En cuanto a equipo y material: que los datos y registros que generamos Una vez vistos los Capítulos de los están regulados y sometidos a audito- que consta el RD, pasaremos a comen- 3º. Todo equipamiento nuevo o repa- rias externas tal y como refleja la Ley tar los Anexos que puedan ser de inte- rado debe ser evaluado en el momen- 14/2006. rés o que nos pueden afectar. En con- to de su instalación y debe ser valida- creto, en el Anexo IV, sobre selección y do antes de ser utilizado. Sistema de codificación. Anexo VII. evaluación del donante de células re- n Se establecerá un sistema único y obli- productoras, es donde podemos encon- 4º. Las actividades de mantenimien- gatorio de codificación, compatible con trar algún aspecto a incluir en nuestra to, limpieza, desinfección, saneamien- los sistemas de otros estados miembros práctica habitual, y que no contempla n to y revisión del equipamiento crítico de la Unión Europea para identificar de la Ley 14/2006. En concreto, los donan- deben figurar en procedimientos docu- forma única e inequívoca los tejidos y tes de esperma deben tener determina- mentados y se deben llevar a cabo de células. De la misma forma que en el ciones serológicas concretas, y además forma regular. apartado anterior, creemos que este sis- de los habituales, se incluyen marcado- tema de codificación no tiene nada que res negativos para Chlamidia en una c) En cuanto a infraestructura y locales: ver con las actividades que realizamos muestra de orina y por determinación en los centros de reproducción asistida, mediante PCR. Hemos marcado en ne- 2º. Para el procesamiento de células que como hemos comentado en el n grita los aspectos que pueden ser de in- o tejidos en condiciones de exposición apartado anterior tiene sus propias nor- terés y que se escriben a continuación: abierta, se deberán especificar las mas y regulaciones. ANEXO I.- REQUISITOS Y CONDICIO- condiciones de calidad de aire y lim- NES MÍNIMOS PARA AUTORIZACIO- pieza que exigen para minimizar los Sistema de Biovigilancia. Anexo VIII. NES. riesgos de contaminación.
9. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 9 A C T U A L I D A D Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 9 se mantienen en las condiciones es- en áreas de elevada incidencia de 3º. Siempre que las células o tejidos pecificadas. enfermedad. se vayan a procesos en exposición 6º. Las acciones deben estar em- abierta se exigirá una calidad de aire prendidas en tiempos predefinidos. 2.4 En algunas circunstancias se con de partículas y de colonias micro- requerirán tests adicionales (mala- biológicas equivalente a la especifica- d) En cuanto al etiquetado: ria, toxoplasma, Tripanosoma cruzi, da como grado A en el anexo I de la Debido a la extensión de este aparta- dengue, CMV, VEB, RhD). Guía Europea de Normas de Correcta do, y para no hacer demasiado exten- Fabricación. so este artículo, recomendamos la lec- 2.5 El hecho de que los tests sean tura de este apartado en el RD. positivos no impide necesariamente 6º. Para el almacenamiento de las que se puedan utilizar las células células o tejidos, se deberán especifi- ANEXO IV. SELECCIÓN Y EVALUACIÓN obtenidas en casos de donación en- car y definir las condiciones de alma- DEL DONANTE DE CÉLULAS REPRO- tre personas de la misma pareja. cenamiento. DUCTORAS 3.- Donaciones fuera de la pareja 8º. Deberá disponerse de una in- 2.- Donación entre miembros de la fraestructura de almacenamiento que pareja para uso diferido b) Los donantes deben tener mar- permita separar y distinguir aquellos cadores serológicos negativos para tejidos y células que están en cuaren- Cuando las células reproductoras HIV 1 y 2, HVC y HVB y sífilis. Los tena de aquellos que han sido recha- vayan a ser almacenadas o procesa- donantes de esperma deben tener, zados, o de los que han sido acepta- das, se deberán seguir los siguientes además, marcadores negativos para dos. criterios: Chlamidia en una muestra de orina y por determinación mediante PCR. 3.- Requisitos para la autorización 2.1 El facultativo responsable del de procesamiento, almacenamiento proceso de donación de gametos c) Se realizarán tests de determina- y distribución debe determinar y documentar, sobre ción de anticuerpos anti HTLV I y II la base de la historia clínica y la indi- cuando se considere necesario. b) En cuanto al almacenamiento: cación terapéutica, la justificación para la obtención y los criterios de se- d) En algunas circunstancias se 3º. Existirán medios de control am- guridad para la madre y los hijos que requerirán tests adicionales (mala- biental de las áreas de acondiciona- pudieran resultar del proceso. ria, CMV, Tripanosoma cruzi, RhD). miento y almacenamiento. 2.2 Se realizarán los siguientes tests f) Se llevará a cabo una evaluación 5º. Deben poder identificarse cla- serológicos: de la carga genética en relación a la ramente las células y tejidos almace- existencia de genes autosómicos re- nados en todas las fases del procesa- HIV 1 y 2: Anticuerpos Anti HIV-1, 2. cesivos cuando proceda. miento en el establecimiento de teji- dos y debe ser posible distinguir cla- Hepatitis B: Antígeno HBs / g) Se llevará a cabo una evaluación ramente entre aquellas células y teji- Anticuerpos anti HBC. del riesgo de transmisión de enferme- dos que están en cuarentena y los Hepatitis C: Anticuerpos Anti VHC. dades hereditarias conocidas y pre- Cuando los resultados de los tests sentes en la familia. que están listos para ser distribuidos sean positivos o no estén disponi- h) Se deberán realizar tests o los que deben ser descartados. bles, o cuando se sabe que el donan- biológicos: c) En cuanto a su distribución y te tiene algún factor de riesgo de transmisión de estas enfermedades, 1º. Las muestras de sangre se ob- retirada: se deberá programar un sistema de tendrán en el momento de la dona- almacenamiento aislado. ción. 1º. Se deben definir las condicio- nes y el tiempo máximo de transpor- 2º. Las muestras de esperma se te, que permitan mantener las pro- 2.3 Los tests de determinación de anticuerpos anti HTLV I y II se reali- mantendrán en cuarentena, al me- piedades biológicas y funcionales de nos, 180 días, tras lo cual se repe- las células y tejidos. zarán en donantes que viven o vienen de áreas con una elevada incidencia tirán los tests biológicos. Esta se- de enfermedad o cuyas parejas se- gunda evaluación se podrá evitar si 2º. El contenedor debe ser seguro la primera determinación se hizo y garantizar que las células y tejidos xuales o progenitores vengan o vivan mediante test de amplificación de
10. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 10 A C T U A L I D A D Ten, J. et al. Comentarios sobre el RD... 10 ácidos nucleicos. 2.2.2 En el caso de las donaciones m) Etiquetado interno y externo de células reproductoras fuera de la del tejido o grupo celular. ANEXO V. PROCEDIMIENTOS DE pareja habitual, se consignarán ade- n) Fecha de disponibilidad. DONACIÓN, EXTRACCIÓN DE CÉLULAS Y más los siguientes datos relativos a los o) Identificación del centro o TEJIDOS Y SU RECEPCIÓN EN EL ESTA- donantes: talla, peso, raza, color de unidad de aplicación. BLECIMIENTO DE TEJIDOS. piel, color de ojos, color de pelo, tex- tura de pelo, grupo sanguíneo y Rh. 2.- Información a guardar y custo- 1.4.- Documentación del donante diar el centro o unidad de aplicación: 2.2.3. En el caso de células repro- j) En el caso de donantes de esper- ductoras que van a ser utilizadas en a) Identificación del estableci ma la información mínima a consig- el seno de la pareja habitual, los da- miento de tejido proveedor. nar será: tos que se consignarán son: b) Identificación del responsable 1º. Nombre del establecimiento de a) Consentimiento /autorización de la unidad o centro de tejidos de destino. para la extracción. aplicación. 2º. Datos de identificación del do- b) Datos de identificación del c) Tipo de tejido/grupo celular. nante. donante. d) Identificación del producto. 3º. Fecha y hora de la obtención. c) Datos de identificación de la pareja. e) Identificación del receptor o per 1.7.- Etiquetado del contenedor ex- sona en la que se aplica el teji terno de transporte. Debe figurar una d) Lugar de la obtención del grupo do o grupo celular. etiqueta donde se especifique la si- celular. guiente información: e) Células o tejidos obtenidos y sus f) Fecha de utilización, aplicación a)«Muestra biológica de células/te características más relevantes. o en su caso descarte y causa de jidos - Manejar con cuidado». no utilización en este último su b) Identificación del establecimiento ANEXO VI. INFORMACIÓN MÍNIMA puesto. de tejidos de origen del tejido y/o gru- EN EL SISTEMA DE TRAZABILIDAD po celular. Como hemos comentado, este RD c) Identificación del estableci 1.- Información que debe guardar está enfocado hacia los trasplantes de miento de tejidos de destino. y custodiar el establecimiento de te- células y tejidos. Hemos intentado d) Fecha y hora de inicio del transporte. jidos: aclarar un poco cuales son los aspec- e) Especificaciones para mantener tos que nos pueden afectar y que de- las características biológicas de a) Identificación del centro, unidad bemos incluir en nuestros protocolos las células o tejidos durante el u organismo de obtención autorizado. actuales. No obstante, queremos in- transporte. sistir en plantear cualquier tipo de f) Especificaciones de b) Número identificativo único de duda a los profesionales cualificados almacenamiento. donación. que disponemos hoy en día para ello. 2.- Recepción del tejido y/o grupo c) Fecha de obtención. celular en el establecimiento de teji- d) Lugar de obtención. dos e) Tipo de donación /obtención. f) Identificación del estableci 2.1 Condiciones Generales. Se lle- miento de tejidos. vará a cabo un procedimiento docu- g) Tipo de tejido o grupo celular. mentado de verificación de que el en- h) Número de lote, si procede. vío recibido cumple con todos los re- i) Número de subpartición, si quisitos exigidos, tanto en este real de- procede. creto como en las especificaciones del j) Fecha de caducidad. propio establecimiento de tejidos. k) Estatus del tejido/grupo celular: Disponible/Descartado/ Cuarentena 2.2- Registro de datos l) Descripción del producto células o tejido.
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12. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 12 A R T Í C U L O S Dorado, M. et al. Efecto de la Eclosión Asistida... 12 EFECTO DE LA ECLOSIÓN ASISTIDA EN RELACIÓN AL PORCENTAJE DE GESTACIÓN EN EMBRIONES CRIOPRESERVADOS Effects of Assisted Hatching on the rates of gestation in cryopreservation embryos. Mónica Dorado*, Maria Hebles**, Beatriz Migueles*, Mercedes González*; Pascual Sánchez**, Fernando Sánchez** *Fundación Guadalquivir de Investigación Médica.**Clínica Ginemed, c/Farmacéutico Murillo Herrera, nº 3, 41010, Sevilla, España. ginemed@ginemed.com RESUMEN: El objetivo del estudio es comprobar el efecto de la eclosión asistida con ácido Tyrode en embriones descongelados. Se estudiaron un total de 1224 parejas sometidas a ciclos de reproducción asistida. Observamos y evaluamos la calidad de los embriones descongelados en relación al número de embriones que sobreviven y el porcentaje de blastómeras lisadas de dichos embriones. Comparamos el porcentaje de embarazos en ciclos de descongelados con y sin eclosión asistida. Aparecen diferencias significativas en el porcentaje de embarazos en el grupo de embriones que han sido sometidos a eclosión asistida (P<0,05), y también observamos una mejor tasa de embarazos en transferencias con embriones de calidad inferior (supervivencia inferior al 60%) cuando son sometidos a eclosión asistida. Palabras clave: eclosión asistida, Tyrode, criopreservación de embriones SUMMARY: The objetive of this study is to evaluate the impact of embryos assisted hatching with Tyrode’s acid in thawed embryos. It was studied a total of 1124 couples undergoing infertility treatment. We observed and evaluate the quality of thawed embryo in relation to the number of that survived, and the rate of blastomeres death. We compared the rate of pregnancies on thawed embryos cycles with and without assisted hatching. There were some significant differences between two group, we also detect a better rate pregnancy using assisted hatching when the survival is badly (surviving rate is less than 60%). Key words: Assisted hatching, Tyrode, cryopreservation embryos INTRODUCCIÓN La baja tasa de implantación del em- mento en el número de embriones ción y embarazo disminuida con res- brión humano es uno de los factores limi- respecto a un ciclo natural, buscamos pecto a los mismos en fresco (Turcker tantes para las técnicas de reproducción en parte solucionar el menor poder et al. 1991). asistida (Bernabeu et al., 2004). implantatorio de los embriones cultiva- dos in vitro ( Ernest Hung Yu Ng et al. Una de las causas de la disminu- La estimulación ovárica en los tra- 2005). Habitualmente se transfieren 2 ó ción de la implantación puede ser de- tamientos de fecundación in vitro 3 embriones, quedando embriones bida al endurecimiento de la zona pe- (FIV) pretende conseguir un desarro- para congelar según criterios de cali- lúcida (ZP) ( Gabrielsen et al 2004), llo folicular múltiple para la obtención dad, como número de blastómeras, producido durante el proceso de con- de varios óvulos y consecuentemente grado de fragmentación y ausencia de gelación - descongelación. Otra causa un número mayor de embriones. Esto multinucleación. Los embriones crio- puede ser la presencia de blastóme- permite una mayor selección de em- preservados y posteriormente descon- gelados tienen una tasa de implanta- ros lisados e intactos en un embrión briones para transferir. Con este au-
13. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 13 A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 13 tras la descongelación, este hecho dio. embriones puede afectar la viabilidad de los in- tactos y comprometer el desarrollo Realizamos un estudio compara- Todos los embriones excedentes embrionario (Belil et al 2002). tivo de las tasas de embarazo e im- fueron crioconservados con Freezen plantación embrionaria obtenidas en kit 1™ (Vitrolife) en pajuelas de 0,5 Ernest Hung Yu Ng et al. 2005 ciclos de embriones congelados y mL (CryoBio System) en un congela- han planteado la eficacia de la eclo- descongelados de pacientes que han dor manual Nicool MS21 de Air sión asistida sobre la implantación sido sometidos a hatching frente a Liquide. El congelador fue programa- embrionaria, especialmente en em- los que no se les ha realizado hat- do para bajar 2ºC/min desde una briones que han sufrido congela- ching. temperatura de 25ºC hasta -6,9ºC. ción-descongelación. Estudios in vi- Tras esperar 8 min a esta temperatu- tro con embriones humanos han Programación del ciclo inicial de ra se realiza el seeding de forma ma- mostrado que una abertura en la ZP FIV-ICSI nual. A continuación el congelador mejora significativamente capacidad está programado para bajar del blastocisto para eclosionar (De Los ciclos de ICSI seleccionados 0,3ºC/min hasta llegar a -29,9ºC Vos et al. 2000). fueron realizados en protocolo corto cuando la pajuela es depositada en tras un mes de reposo ovárico con el nitrógeno líquido a -196ºC y alma- Dos recientes meta-análisis (Edi- anticonceptivos. Para supresión se cenadas en cantaras adecuadas Osagie et al. 2003 y Sallam HN et al. utilizó análogos de la GnRH (aGnRH, hasta su utilización. 2003) refieren que el hatching asis- Decapeptyl diario®) comenzando en tido (AH) incrementa el porcentaje el Día 2º del ciclo menstrual a dosis Preparación para las transferencias de implantación y embarazos, espe- de 1/2 vial al día. Según los niveles en ciclo de congelados cialmente en mujeres mayores o con séricos de FSH, LH y estradiol, y en valores aumentados de FSH. Tao y función de la edad de la paciente, se Tras comprobar por ecografías Tamis 1997 mostraron un aumento fijan las dosis de estimulación ovárica que el endometrio era delgado, el día significativo en el porcentaje de em- con hormona folículo estimulante 5º del ciclo se comienza con una barazos con hatching asistido me- (FSH, Gonal-F®) y Menotropina sustitución de estrógenos en parches diante acido de tyrode en pacientes (Menopur®). (ESTRADOT®) comenzando con con pobre pronóstico, en mujeres parches de 50 y aumentando en fun- mayores de 38 años y embriones de La administración de estos se indi- ción de la respuesta a nivel endome- mala calidad. Cohen et al. 1999 tam- vidualiza de acuerdo al control ecográ- trial hasta obtener una endometrio bién documentaron un aumento sig- fico del ciclo. El criterio para la admi- que sea anecógeno, en triple línea y nificativo en ciclos de donación de nistración de la hormona gonadotró- por encima de 7 mm de espesor en- óvulos. fica humana (10.000 UI de hCG, tre ambas capas. Durante todo el Lepori®) es la presencia de la mayo- tiempo de tratamiento con estróge- El objetivo de este estudio es ría de la cohorte de folículos con 16 nos se suplementa con AAS (AAS- comparar el efecto del hatching o más mm. de diámetro. La adminis- 100®) y se valora el flujo sanguíneo asistido en la implantación y des- tración de aGnRH y FSH se suspen- al útero. Los ciclos en los que hay un arrollo de los embriones que han de le día de la administración de la SOPQ la paciente se encuentra en sido sometidos a procesos de con- hCG. tratamiento con Metformina gelación - descongelación. (Diamben 850®) con una o dos pas- Las punciones se realizaron a las tillas al día en función de tolerancia y MATERIAL Y MÉTODOS 36 horas de la administración de la de forma continua. En el caso de que hCG por vía vaginal ecoguiada. La en el Doppler que se hace de rutina Selección de pacientes microinyección se llevó a cabo entre en la arteria uterina el flujo sea dis- las 3 y 6 horas de la captación ovoci- continuo se añade un tratamiento Se realizó un estudio observacio- taria. La fecundación se evaluó a las con Pentoxifilina (HEMOVAS 400®) nal retrospectivo que incluye 1224 16-20 horas y la selección de em- ciclos de transferencia de embrio- briones a transferir a las 42-44 horas Cuando el endometrio está listo nes descongelados procedentes de (día 2) o las 66-68 horas (día 3) ca- (mayor de 7 mm en triple línea y ciclos de ICSI y que fueron conge- talogando los embriones según el anecógeno), se prepara para la lados en día +1 y/o día +2 en un úni- número de blastómeras, simetría de transferencia de los embriones: se co centro. Todas las parejas con em- tamaño y la cantidad de fragmentos administran por vía vaginal dos com- briones congelados fueron informa- citoplásmicos. primidos de progesterona das para poder participar en el estu- Procedimiento de congelación de (Utrogestan 200mg®) cada 12 horas
14. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 14 A R T Í C U L O S Dorado, M. et al. Efecto de la Eclosión Asistida... 14 con un total de 800 mg al día. Se co- Procedimiento de AH de Chi-cuadrado. mienzan a administrar 3 días antes de la transferencia. El tratamiento Los embriones que iban a ser RESULTADOS con estradiol y progesterona se man- transferidos fueron colocados en mi- tiene igual hasta el día de la _-hCG crogotas de 25 µm de Oocyte Wash Los datos del presente trabajo (dos semanas) y si ésta es positiva se Buffer (Cook) de forma individual fueron obtenidos en el periodo mantiene hasta la semana 12 de em- bajo aceite mineral de Cook® . Para comprendido entre Abril del 2003 y barazo. llevar a cabo el procedimiento se uti- Abril 2006. Durante este tiempo se lizó una placa Falcon 1006 (Becton realizaron un total de 1224 ciclos Todas las pacientes se suplemen- Dickinson, Dinamarca). de descongelación, de los cuales a tan con ácido fólico a partir de la 590 ciclos se les practicó el hat- transferencia de los embriones. La pipeta Holding (20 µm) y la de ching asistido (grupo estudio) y a hatching (9-10 µm) eran proporcio- 634 ciclos no les fue practicado (gru- Procedimiento de descongelación nadas por Humagen. El control de sali- po control). Debido al proceso de da del ácido de Tyrode (Medi-Cult) ha- descongelación 61 ciclos fueron ex- Se procede a la extracción de las cia la zona pelúcida era llevado a cabo cluidos por la no supervivencia de los pajuelas de congelación y se elimina con un microinyector (Narishige, embriones entre ambos grupos. el exceso de nitrógeno de la pajuela. Dinamarca). Se deja unos 30 segundos a tempe- Nosotros comparamos 1726 em- ratura ambiente y se pasa al baño térmi- Para la realización del hatching briones a los que se les realizó AH co a 30ºC otros 30 segundos. Después, se realizó un orificio de 30 µm de en 590 transferencias con el grupo pasamos los embriones por cada uno de diámetro. Una vez efectuado, el control de 1862 embriones en 634 los medios secuenciales de Thaw-kit embrión se llevó al otro lado de la transferencias a los que no se les re- 1™ (Vitrolife) preparados en placas gota para liberarlo del ácido. A con- alizó. Los embriones no fueron da- Nunc™ para eliminar el crioprotector. tinuación fue pasado a la placa de ñados durante el procedimiento. La doble pocillo (Falcon 353037) en edad de las mujeres en el momen- Una vez terminado el proceso de medio Blastocyst (Cook) para la to de la aspiración de los ovocitos descongelación se pasan los embrio- posterior transferencia. Se utiliza- fue similar (33,32 frente a 33,17 nes a la placa de cultivo hasta el mo- ron 2 microinyectores Narishige en años). No existen diferencias en el mento de la transferencia. una placa calefactora a 37ºC en un número previo de ciclos, respuesta microscopio de contraste de fase ovárica y número de ciclos de des- El protocolo de descongelación Nikon con óptica de Hoffman. congelados. se lleva a cabo en función del día en que se congelaron los embriones: Si Análisis estadístico La media de embriones transfe- la congelación se hizo en pronúcleos ridos en el grupo estudio y grupo la descongelación se realiza dos días La comparación estadística fue control fue de 2,92 y 2,93 respecti- antes de la transferencia y si fue reali- llevada a cabo mediante el test de vamente. zada en día +2, el día de antes de la Student, test de Chi-Cuadrado y test de ANOVA. Consideramos que Consideramos embarazo cuan- descongelación. do se observa en la ecografía latido existen diferencias significativas fetal. Como muestra la tabla I exis- Una vez descongelados se verifi- cuando se obtienen valores ten diferencias significativas entre ca la calidad de los embriones y de P<0,05. ambos grupos en el porcentaje de acuerdo con el protocolo se realiza embarazo global 116 (19,66 %) fren- hatching asistido. La edad media de las pacientes te a 101 (15,93 %). La tabla II com- entre el grupo control (grupo al que para el porcentaje de embarazos en La transferencia se realiza aproxi- no se realizó el AH) y el grupo estu- relación a la tasa de supervivencia de madamente una hora después de dio (grupo con AH) fue comparada la cohorte de embriones descongela- haber realizado el hatching. El nú- utilizando el test de Student. dos. mero de embriones transferidos va- ría de 1 a 3 en función de la calidad. El embarazo clínico fue definido En esta tabla también observamos Todas las transferencias fueron reali- por la presencia de 1 o más sacos un mayor porcentaje de embarazos zadas con medio G2™ version 3 de de gestación. Para analizar la tasa cuando realizamos hatching en embrio- Vitrolife y catéter de Gynetics®. de embarazo entre ambos grupos nes que tienen una tasa de superviven- se utilizó el test de ANOVA y el test cia menor del 60%, en concreto 20
15. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 15 A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 15 Tabla I: Comparación de ciclos con y sin hatching
16. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 16 A R T Í C U L O S Dorado, M. et al. Efecto de la Eclosión Asistida... 16 (15,38%) frente a 8 (6,35%). es aconsejables la realización del AH, zen embryo transfers of donor oocyte. pues observamos una diferencia significa- Ferti. Steril 1999; 72:(Suppl 1), S5. DISCUSION tiva entre ambos grupos, favorables al gru- po al que se le practicó el AH. De Vos A, Van Steirteghem A. Zona har- La transferencia de embriones que dening, zona drilling and assisted hat- han sufrido un proceso de congelación- En conclusión, el AH con ácido de ching: new achievements in assisted descongelación arroja una tasa de em- Tyrode mejora considerablemente en reproduction. Cells Tissues Organs barazo menor que con la transferencia embriones descongelados en transferen- 2000; 166:220-227. de embriones en fresco, incluso tratán- cias en las que no todos los embriones dose de embriones de igual calidad son de buena calidad. Hemos paliado la Edi-Osagie E, Hooper L, Seif MW. The (Gabrielsen et al., 2004). mala calidad embrionaria con la aplica- impact of assisted hatching on live ción del AH consiguiendo las mismas ta- birth rates and outcomes of assisted Como se ha comentado anteriormen- sas de embarazo que embriones de bue- conception: a systematic review. te, esto puede ser debido, entre otras na calidad. Human Reprod 2003; 18:1828-35. causas a una degeneración de blastóme- ras y a un endurecimiento de la zona pe- En descongelaciones en las que la Gabrielsen A, Agerholm I, Toft B, et al. lúcida. tasa de supervivencia es menor del 60% Assisted hatching improves implantation también es recomendada su aplicación rates on cryopreserved-thawed embryos. Turcker et al. (1991) explicaron que ya que mejora significativamente la tasa A randomized prospective study. Hum la reducción de implantación en ciclos de de embarazo. Reprod 2004; 19:2258-62. FIV-ET puede ser debido al endureci- miento de la zona pelúcida. Para embrio- Cuando la transferencia se lleva a Ng EHY, Naveed F, Lau EYL, Yeung nes tanto frescos como descongelados el cabo con embriones de buena calidad WSB, et al. A randomized double- cultivo in vitro puede llevar a un endure- no se observa un incremento en la tasa blind controlled study of the efficacy of cimiento de la zona pelúcida (Cohen et de embarazo, por lo tanto no está justifi- laser-assisted hatching on implanta- al., 1990) cada su realización por rutina. La reali- tion and pregnancy rates of frozen- zación del AH selectivo mejora la tasa de thawed embryo transfer at the cleava- En nuestro estudio hemos observado gestación respecto a realizarla a todos ge stage. Hum Reprod 2005; 20:979- que con la transferencia de 2 embriones los embriones. 85. de calidad a los que se les practicó el hat- ching obtenemos tasas de embarazo BIBLIOGRAFÍA Sallam HN, Sadek SS, Agameya AF. equiparables a la transferencia de 3 em- Assisted hatching- a meta-analysis of briones de calidad; por tanto, podríamos Al-Nuaim LA, Jenkins JM. Assisted hat- randomized controlled trials. J Assist disminuir el número de embriones a ching in assisted reproduction. Br J Reprod Genet 2003; 20:332-42. transferir, bajando así la probabilidad de Obstet. Gynaecol. 2002; 109:856-62. embarazo múltiple. Tao J, Tamis R. Application of assisted Belil I, Vanrell I, Castelló C, et al. ¿Puede la hatching for 2-day-old frozen-thawed La tasa global de embarazo entre am- eclosión asistida incrementar el rendi- embryo transfer in a poor-prognosis bos grupos muestra diferencias significa- miento del ciclo de criotransferencia? population. J Assist Reprod Genet tivas cuando realizamos el AH. Comunicación oral XXIV Congreso 1997; 14,128-30. Observamos que hay una tendencia a Nacional SEF 2002; 257. una tasa de embarazo mayor tras la Turcker MJ, Cohen J, Massey JB, Mayer, transferencia de embriones a los que se Bernabeu R, Brotons A, Mendiola J, et Wiker S, Wright G. Partial zona dissec- les practicó el AH cuando no todos los al. Estado actual del conocimiento de tion of zona pellucida of frozen thawed embriones son de buena calidad, con lo la implantación embrionaria humana. human embryo may enhance blas- cual estaría justificada su realización. RIF 2004; 21:167-73. tocyt hatching, implantation, and pregnancy rate. Am J Obstet Gynecol Gabrielsen et al. (2004) obtienen Cohen J, Elsner C, Kort H, et al. 1991; 165,341-45. unos resultados que apoyan nuestro es- Impairment of the hatching process tudio. A pesar de ello, Al-Nuaim y Jenkins following IVF in the human and impro- (2002) concluyeron que es inapropiada vement of implantation by assisting hat- la realización por rutina por no existir evi- ching using micromanuipulation. dencias del beneficio en embriones de Human Reprod 1990; 5:7-13. buena calidad. Cohen MA, Lindheim SR, Sauer MV. Cuando la tasa de supervivencia de los Assisted hatching causes beneficial af- embriones descongelados es baja (<60%) fects on the outcome of subsequent fro-
17. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 17 A R T Í C U L O S Junio 2007 Vol. 12 • Nº1 17 Biopsia Embrionaria “Aspectos Técnicos” Embryo Biopsy “Technical Aspects” Juan Manuel Moreno Unidad de Reproducción Hospital Clínica Vistahermosa de Alicante. e-mail:lab@urvistahermosa.com RESUMEN La Biopsia embrionaria es una técnica que se utiliza en los laboratorios de reproducción asistida con el ánimo de mejorar la eficacia de los procesos de fecundación in vitro. Actualmente, entre las razones que hacen difícil apreciar el beneficio verdadero de esta técnica es su heterogeneidad metodológica, por lo que se pretende describir y valorar su utilidad a la luz de los conocimientos existentes. Palabras clave: Biopsia embrionaria, transferencia embrionaria, ácido Tyrode, DGP. ABSTRACT The Embryo Biopsy is a technique that is used in the Assisted Reproduction Laboratories with the spirit to improve the efficacy of the In vitro fertilization cycles. At the moment, between the reasons that make difficult to appreciate the true benefit of this technique is its methodological heterogeneity, reason why it is tried to describe and to value his utility to the light of the existing knowledge. Key words: Embryo biopsy, embryo transfer, Tyrode´s acid, PGD. INTRODUCCIÓN La biopsia embrionaria es una técnica mente utilizada no sólo en parejas genéticas o adquiridas (Verlinsky et que consiste en extraer una o dos cé- portadoras de enfermedades genéti- al., 2007), aunque algunas de estas lulas de un embrión en división para cas hereditarias, anomalías cromosó- indicaciones no están exentas de po- analizarlas genéticamente (diagnósti- micas o enfermedades monogénicas lémica tanto desde el punto de vista co genético preimplantacional, DGP) (Renwick and Ogilvie, 2007) sino de su utilidad como desde la ética y así poder seleccionar aquellos em- también para aumentar las tasas de (Coulam et al., 2007; Kuliev and briones libres de una determinada al- implantación en parejas de fecunda- Verlinsky, 2005; Munné et al., 2006; teración genética antes de ser trans- ción in vitro de mal pronóstico (Kuliev Patricio et al., 2007; Twisk et al., feridos al útero. El resultado posibilita and Verlinsky, 2005) tales como pa- 2006). la identificación de anomalías en es- cientes de edad materna avanzada tadios previos a la implantación, evi- (Rubio et al., 2005), con fallos de im- VALORACIÓN DE LOS MÉTODOS DE tando el desarrollo de anomalías ge- plantación (Caglar et al., 2005), abor- REALIZACIÓN DE BIOPSIA néticas y previniendo el aborto espon- tos previos (Munné et al., 2006) o fac- táneo provocado por estas. tor masculino (Donoso et al., 2006). Según la literatura existente, es acon- Incluso, se han incorporado otras in- sejable realizar la microinyección in- La combinación de estos dos proce- dicaciones como la detección de de- tracitoplasmática (ICSI) para generar sos, biopsia y posterior estudio gené- terminados tipos de cáncer (Davis et los embriones que se vayan a biopsiar, tico, surgió en 1990 como alternativa al., 2006), enfermedades degenerati- ya que la ausencia de espermatozoi- al diagnóstico prenatal en parejas con vas y tipaje de HLA para transplante des y células de la granulosa adheri- un elevado riesgo genético de células madre procedentes de das a la zona pelúcida, presentes du- (Handyside et al., 1990). sangre de cordón umbilical en niños rante una fecundación in vitro conven- Actualmente, es una técnica amplia- afectos de patologías hematológicas, cional (FIV), evitarían riesgos de con-
18. ASEBIR 007+++:revista manolo junio06 08/02/10 17:01 Página 18 A R T Í C U L O S Juan Manuel Moreno. Biopsia Embrionaria... 18 taminación durante el análisis genéti- el análisis genético. De hecho en un ejecutar, no de muy buenos resultados co posterior (Lissens and Sermon, estudio (Evsikov and Verlinsky, 1998) debido a que el pequeño orificio que 1997; Sermon et al., 1998). donde se biopsiaron células proce- se crea por la aguja de disección, pro- dentes de la masa celular interna del duzca la posterior estrangulación del Hay estudios que demuestran que blastocisto se observó un porcentaje blastocisto cuando intenta eclosionar la biopsia embrionaria en la etapa de elevado de blastocistos con mosaicis- (Cohen et al., 1990). Otro método me- 8 células. mo. Mas recientemente, Coulam cánico, con resultados prometedores es (Coulam et al., 2007) ha demostrado el piezo-micromanipulador que consiste la presencia de un 75% de embriones en un sistema de vibración de alta fre- con una situación de mosaico, discor- cuencia que rompe la zona pelúcida. Sin dantes cuando se hace biopsia de dos embargo su inconveniente principal es células y estudio cromosómico de las que al igual que el láser es un método mismas mediante FISH en día tres; costoso (Nakayama et al., 1999). aunque un tercio de estos embriones anómalos se autocorrigen (Munné et En otro estudio también prospecti- al., 2005) no se puede excluir, en es- vo randomizado (Jones et al., 2006) tos casos, la posibilidad de una diso- donde se evaluó el método químico mía uniparental. Además, hay un es- con ácido de Tyrode y el láser en el tudio experimental para la beta-talase- desarrollo del blastocisto, ambos mé- mia (Kokkali et al., 2007) que sugiere todos dieron un resultado similar al no que la biopsia del trofoectodermo pue- encontrar diferencias significativas en no es perjudicial para el desarrollo Embrión humano en el estadio de 8 células de ser más ventajosa que la biopsia del la proporción de blastocistos obteni- posterior del blastocisto debido a que embrión en división con respecto al re- dos. El método químico, aunque re- el índice mitótico es más alto, com- sultado del diagnóstico al obtener una quiere entrenamiento previo, tiene la pensando así con mayor rapidez la cé- tasa de implantación del 47,6% frente ventaja de estar al alcance de cual- lula perdida y además, la ausencia de al 26,7% procedente de la biopsia y quier laboratorio (Moreno and López, compactación en los embriones per- análisis efectuado en día 3. 2006a) pero debemos tener cuidado mite que dicho estadio celular sea el con el ácido pues corremos el riesgo idóneo para realizar el proceso (Hardy Para poder extraer la célula del de que un volumen excesivo dañe al- et al., 1990; Cieslak-Janzen et al., embrión es necesario realizar previa- guna célula de los embriones. Por otro 2006). mente la eclosión asistida que consis- lado, el láser endurece el área de la te en crear, de manera artificial, un zona pelúcida expuesta (Malter et al., Al parecer, si se extrae una célula orificio en la zona pelúcida del em- 2001), pudiendo dificultar la posterior en el estadio de cuatro células, duran- brión. En la literatura hay descritos va- aspiración de la blastómera. Sin em- te el desarrollo del blastocisto se redu- rios métodos (mecánicos, químicos, bargo, las ventajas de utilizar el láser ce la relación de la masa celular inter- con láser) y cada laboratorio usa uno frente al ácido de Tyrode son la veloci- na con el trofoectodermo (Tarín et al., u otro dependiendo de la experiencia dad y precisión en su ejecución, no es 1992). No obstante, los embriones en del embriólogo que lo realiza y la dis- tóxico y puede que se constituya como el estadio de 6 u 8 células presentan ponibilidad técnica. En cualquier método de elección al reducir la expe- un cierto grado de compactación de- caso, el proceso requiere mucho cui- riencia técnica necesaria para llevarla a bido a la formación de uniones celula- dado en su ejecución para que no se cabo (Joris et al., 2003). En otras pala- res calcio-dependientes. Esto se pue- produzca la lisis de alguna de las cé- bras, puede estandarizar una técnica de solucionar utilizando un medio que lulas del embrión y reste posibilidades que actualmente no está normalizada. bloquee las uniones entre las células de éxito. Además, se ha valorado si la (Dumoulin et al., 1998) y permita rea- eclosión asistida provocaba algún Varios estudios relacionan el tama- lizar la extracción de forma correcta. efecto perjudicial en los embriones y ño del orificio en la zona pelúcida con Sin embargo, para algunos autores se demostró que la técnica no afecta el incremento de la frecuencia de ge- esto puede provocar la despolariza- en la tasa de anomalías cromosómicas melos monocigóticos (Hershlag et al., ción de las células interfiriendo en el en los nacidos vivos (Ma et al., 2006). 1999; Schieve et al., 2000) por lo que desarrollo posterior del embrión se aconseja no realizar aberturas muy (Antczak and Van Blerkom, 1999; Un estudio prospectivo randomiza- pequeñas que puedan causar la her- Edwards and Beard, 1997; Tarín and do (Makrakis et al., 2006) que compa- niación del blastocisto. Handyside, 1993). Otra posibilidad es raba los métodos mecánicos y el láser Tampoco son recomendables las realizar la biopsia en la etapa de blas- dio como resultado una tasa de im- aberturas muy grandes ya que se co- tocisto, en los días 5 y 6 de desarrollo. plantación significativamente más alta rre el riesgo de la salida de algún blas- Se obtendría un mayor número de cé- en el grupo del láser, además de una tómero que comprometa la capacidad lulas que permitiría una mayor fiabili- tasa de embarazo a término mayor de desarrollo del embrión. La abertura dad en el diagnóstico aunque se dis- aunque no significativa. Puede que el del orificio debe ser aproximadamente ponga de menos tiempo para realizar método mecánico, aunque fácil de _ partes el diámetro del blastómero a

References: Real Decreto 
 Real Decreto 
 REAL DECRETO 
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 Artículo 9
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