CELEX: 51967PC0224
Language: nl
Date: 1967-05-17
Title: Gewijzigd voorstel voor een RICHTLIJN VAN DE RAAD betreffende het gebruik van sommige conserveermiddelen voor de oppervlaktebehandeling van citrusvruchten alsmede de controlemaatregelen voor de opsporing en identificatie van conserveermiddelen in en op citrus-vruchten

ARCHIVES HISTORIQUES
DE LA COMMISSION
COLLECTION RELIEE DES
DOCUMENTS "COM"
COM (67) 224
Vol. 1967/0038
 ---pagebreak--- Disclaimer
Conformément au règlement (CEE, Euratom) n° 354/83 du Conseil du 1er février 1983
concernant l'ouverture au public des archives historiques de la Communauté économique
européenne et de la Communauté européenne de l'énergie atomique (JO L 43 du 15.2.1983,
p. 1), tel que modifié par le règlement (CE, Euratom) n° 1700/2003 du 22 septembre 2003
(JO L 243 du 27.9.2003, p. 1), ce dossier est ouvert au public. Le cas échéant, les documents
classifiés présents dans ce dossier ont été déclassifiés conformément à l'article 5 dudit
règlement.
In accordance with Council Regulation (EEC, Euratom) No 354/83 of 1 February 1983
concerning the opening to the public of the historical archives of the European Economic
Community and the European Atomic Energy Community (OJ L 43, 15.2.1983, p. 1), as
amended by Regulation (EC, Euratom) No 1700/2003 of 22 September 2003 (OJ L 243,
27.9.2003, p. 1), this file is open to the public. Where necessary, classified documents in this
file have been declassified in conformity with Article 5 of the aforementioned regulation.
In Übereinstimmung mit der Verordnung (EWG, Euratom) Nr. 354/83 des Rates vom 1.
Februar 1983 über die Freigabe der historischen Archive der Europäischen
Wirtschaftsgemeinschaft und der Europäischen Atomgemeinschaft (ABI. L 43 vom 15.2.1983,
S. 1), geändert durch die Verordnung (EG, Euratom) Nr. 1700/2003 vom 22. September 2003
(ABI. L 243 vom 27.9.2003, S. 1), ist diese Datei der Öffentlichkeit zugänglich. Soweit
erforderlich, wurden die Verschlusssachen in dieser Datei in Übereinstimmung mit Artikel 5
der genannten Verordnung freigegeben.
 ---pagebreak--- EUROPESE ECONOMISCHE GEMEENSCHAP
                           COMMISSIE
                                         COM( 67 ) 224 def .
                                         Brussel , 17 mei 1967
                          Gewijzigd voorstel voor een
                              RICHTLIJN VAN DE RAAD
                betreffende hot gebruik van sommige conserveer-
             middelen voor de oppervlaktebehandeling van citrusvruchten
                alsmede do controlemaatregelen voor de opsporing
             on identificatie van conserveermiddelen in en op citrus-
                                   vruchten
                ( door de Commissie bij de Raad ingediend
                  overeenkomstig artikol 149 » lid 2 van
                              hot EEG- Verdrag )
   COM( 67 ) 224 def .
 ---pagebreak---                .    ' T Gewijzigd voorstel voor' 6©n
                         " RICHTLIJN VAN D3 RAAD
        betreffende het; gebruik vari sommige conserveermiddelen
    vo<?r de oppervlaktebehandeling van oitrusvruohten alsmede de
        controlemaatregelen voor de opsporing en identificatie
                   van conserveermiddelen in en op
                                 oitïusvruchten
             ( door de Commissie bij de Raad ingediend
               overeenkomstig artikel 149 » lid 2 van
                      ~   ' het EEG-Verdrag)
A. Het voorstel 'van richtlijn wordt als volgt gewijzigd :
                 ■          ' •••   Artikel 1
De richtlijn van de Raad van 5 november 19°3 betreffende de aanpassing
van de wetgevingen van de lid-sta'ten inzake conserveermiddelen die
mogen worden gebruikt in voor menselijke voeding bestemde waren
wordt als volgt gewijzigd :
1 . De volgende conserveermiddelen worden toegevoegd aan dia welke
zijn opgesomd onder I van de bijlage bij de richtlijn :
                                                               • «/« >
 ---pagebreak---                                        - 2 -
EEG-nummering              Benaming                      Gebruikswi jze
Е 230                Difenyl                 a ) Uitsluitend voor de oppervlakte­
                                                 behandeling van citrusvruchten j
Е 231                Orthofenylfenol         b ) Bij het in de handel brengen van
                                                 citrusvruchten
Е 232                Natriumorthofenyl-          i ) mag het residugehalte per kg
                     fenolaat
                                                     {bale ) oitrusvruchten niet groter
                                                     zijn dan de volgende waarden :
                                                     voor difenyl              70 mg
                                                     en
                                                     voor orthofenylfenol en
                                                     natriura-orthofenylfenolaat ,
                                                     afzonderlijk of te zamen ,
                                                     berekend als orthofenyl-
                                                     fenol                     12 mg
                                                ii ) moet de behandeling als volgt
                                                     worden aangegeven :
                                                     - in de groothandel in de
                                                        facturen en op een der buiten­
                                                       kanten van de verpakking door
                                                        de vermelding : " Geconserveerd
                                                       met ..." gevolgd door de
                                                       benaming van de gebruikte
                                                        stof of stoffen ;
                                                     - in de kleinhandel door een
                                                        vermelding waardoor de consu­
                                                       ment hiervan op ondubbelzinnige
                                                       wijze in kennis wordt gesteld .
 2 . Artikel 5 » lid b ) van de richtlijn vervalt .
 ---pagebreak---                                Artikel 2
1 . ï)e lid-staten nemen alle dienstige maatregelen om te "bewerkstelligen
dat de monsterneming en het onderzoek voor het opsporen en identificeren
van difenyl , orthofenylfenol en natriumorthofenylfenolaat in en op
citrusvruchten geschieden overeenkomstig dé bepalingen van de "bijlagen
1 , II , III en IV van deze richtlijn.'
2 . Bovenbedoelde "bijlagen kunnen volgens de algemene "bepalingen "betref­
fende het opsporen en identificeren van conserveermiddelen in en op
levensmiddelen worden gewijzigd en aangevuld .
                               Artikel 3
De lid-staten treffen de nodige maatregelen om de "bepalingen van deze
richtlijn uiterlijk op 1 juli 19^7 toe te passen en geven daarvan
onmiddellijk kennis aan de , Commissie . ^
                               Artikel 4
Deze richtlijn is gericht tot de lid-staten .
 ---pagebreak---                                 - 4 -
B. In verband met de in het voorstel . van richtlijn aangebrachte
   wijzigingen worden de tweede en dorde considerans van dit voorstel
   vervangen door de beide volgende :
   "Overwegende dat het gebruik van deze stoffen voor de oppervlakte­
    behandeling van citrusvruchten geen gevaar voor de volksgezondheid
    inhoudt indien het residugehalte per kg hele vruchten aan difenyl
    niet groter is dan 70 mg en aan orthofenylfenol en natriumorthofenyl-
    feno laat , berekend als orthofenylfenol , niet groter is dan 12 mg en
    indien de . behandeling in alle stadia van de' handel op passende wijze
    is aangegeven ;
    Overwegende dat de toolating tot het gebruik van de bedoelde drie
    stoffen op communautair vlak eveneens het vastleggen van gemeen­
    schappelijke regels voor de officiële controle van de behandelde
    citrusvruchten noodzakelijk maakt ; dat de op grond van de resultaten
    van het wetenschappelijk onderzoek eventueel vereiste wijzigingen
    en aanvullingen van deze gemeenschappelijke regels uitvoeringsmaat-
    regelen van technische aard vormen en dat deze derhalve volgens do
    algemene voorschriften betreffende de opsporing en identificatie
    van conserveermiddelen in en op citrusvruchten moeten worden
    vastgesteld ,"
                                                                     • •/ • •
 ---pagebreak---                                                                  В1ЛЬ/-СЗ Т
                       Wijze waarop ten behoeve van de controle op conserveer–
                middelen monsters van citrusvruchten moeten worden genomen .
 A , Monsternommg
 I. De monsters moeten volgens wetenschappelijke methoden worden genomen en wel
       zodanig dat representatieve monsters van de te onderzoeken partijen worden
      verkregen .
II . De monsters moeten ten minste aan de volgende eisen voldoen :
      1 . Verpakte waar (kisten , dozen en dergelijke )
                                                                                    I
     Èantal kisten, dozen, e.d.
                                                                                    I
        n de partij
                         •               I
                                           tot
                                           20       j
                                                        van 21
                                                        tôt 500
                                                                     van 501
                                                                     tôt 1000      Iboven
                                                                                      1000
        Minimum .aantal kisten , dozen
        e .d . , waaruit monsters moeten      1            2             3             4
        worden genomen
                                                                                  j
     1
        Hoeveelheid in kg per kist ,
        doos , e.d ., to nemen vruchten       2            2             2             2
        2 . Onverpakte waar
                                                      I
        Hoeveelheid van de partij          tot      I   van 21       boven
        in kg                                           tôt 500      500
                                                    i
        Hoeveelheid te nemen monsters       2              4               8
        in kg
 III . Onder partij wordt verstaan een te leveren hoeveelheid bepaald door
        elementen met dezelfde kenmerken ( soort , graad van rijpheid , grootte ,
        soort verpakking , enz .)
        Verpakking en doorzending van de monsters
        1 . De verpakking van de monsters moet hermetisch zijn gesloten .
        2 . De verpakking moet worden vereegeld .
        3 . Do aldus verpakte monsters moeten zo snel mogelijk aan de controle-
            laboratoria worden doorgezonden .
 ---pagebreak---                                                                   BIJLAGE II
                 Aantoning van residu 's van difenyl , orthofenylfenol en    :
               natriumorthofenylfenolaat . in schillen van citrusvruchten ' ■
1 . Poel en toepassingsgebied                                            ......
    Volgens de hieronder beschreven methode kunnen residu 's van difenyl ,
    orthofenylfenol (OFF) of natriumorthofenylfenolaat in schillen van
    citrusvruchten worden aangetoond . De gevoeligheidsgrens lig voor difenyl
    ongeveer bij 5 rag en voor OFF of natriumorthofenylfenolaat bij 1 mg
    absoluut hetgeen overeenkomt met • 5 mg difenyl (5 ppm ) resp . 1 mg OFF
    (l ppir ) In do 'schillen van 1 kg citvtisvruchten •
    Wanneer citrusvruchten met de bovenbedoelde produkten zijn behandeld
    kan worden geconstateerd dat de residu 's zich voor het grootste deel
    in de schillen van de vruchten bevinden . Kwantitatieve bepaling van
    deze residu 's in hele vruchten blijkt daarom alleen noodzakelijk in
    gevallen waarin de aanwezigheid daarvan in de schillen wordt aangetoond .
2 . Principe "
    De schillen worden in een zuur milieu met dichloormethaan geextraheerd .
    Het extract wordt geconcentreerd en in een dunne laag op ailicagel ge-
    chromatografeerd . De aanwezigheid van difenyl , orthofenylfenol of
    natriumorthofenylfenolaat wordt door fluorescentie en kleuranalyse aan­
    getoond .
3 . Reagentia        -
    cyclohexaan , analysekwaliteit
    dichloormethaan , analysekwaliteit
    zoutzuur van 25 $ (gew./vol .)
    siïicagel CF 254 Merck of geli jkwaardig produkt
    oplossing in aceton van 2,4,7 -trinitrofluorenon (TNF) van 0,5 i° .
    ( Fluka , B.D.H. of geli jkwaardig produkt )
 ---pagebreak---                                         - 2 -
    oplossing in ethanol van 2,6-dibromo-benzochnon-4-chlorimide van 0,1
    (houdbaarheid : ten hoogste 1 week in een koelkast )
    geconcentreerde oplossing van ammoniak , s.g . 0,9
    referentiooplossing in cyclohexaan van zuiver difenyl van 1 fc referentie-
    oplossing in cyclohexaan van zuiver orthofenylfenol van 1 $
4 . Apparatuur
    mixer
    kolf van 250 ml met geslepen hals en terugvloeikoeler
    va cuumverdamp e r
    micropipetten
    toestel voor chyomatografie in een dunne laag , met plaatjes van 20 x 20 cm
    ultravioletlamp ( 254 run ): de sterksto moet zodanig zijn dat een vlek van
    5 mg difenyl nog te herkennen is
    verstuiver
    droogkast .
5 . Weikwijze
    a) Bereiding van het monster en extractie
        De vruchten yaaruit het gehele ter controle genomen monster "bestaat
        worden in tweeën gesneden . Een helft van iedere vrucht wordt "bestemd
        voor de bepaling van de residu 's van difenyl en/of orthofenylfenol .
        Van de ander^ helften worden stukken schil genomen om een monster van
        ongeveer 80 ^ te verkrijgen . Deze stukken worden klein gesneden , in
        do mixer fijngemaakt en in de kolf van 250 ml gebracht } vervolgens
        voegt men 1 ml HCL-oplossing alsmede 100 ml dichloormethaantoe . Dit
        mengsel wordt onder terugvloeiïng 10 minuten lang verhit . Na afkoeling
        en uitspoeling van het koeltoestel met ongeveer 5 ml dichloormethaan
        wordt door een vcuwfilter afgefiltreerd . De oplossing wordt met enige
        kooksteent jes in de verdamper opgesloten en onder vacuum bij 60°
        goconcentreerd totdat een eindvolume van ongeveer 10 ml is verkregen .
        Indien een roterende verdamper wordt gebruikt moot de kolf vaststaan ,
        om difenylverliezen door vorming van een dun laagje van het verdampings-
        residu op do wand van de kolf te vermijden .
     /
 ---pagebreak--- b ) Chromatografie
    30 g silicagel en 60 ml water worden in een mixer een minuut lang
    gemengd , waarna het mengsel over 5 chromatografeerplaat jes wordt
    verdeeld en daarop in een laagje van ongeveer 0,250 mm dik wordt
    uitgestreken . De aldus behandelde plaatjes worden 15 minuten lang
    blootgesteld aan een stroom hete lucht en vervolgens geplaatst in
    een droogkast , waar zij 30 minuten lang bij een temperatuur van
    110° C verblijven . Na afkoeling wordt het op ieder plaatje aangebrachte
    laagje door evenwijdige strepen , die tot het glasoppervlak reiken ,
    verdeeld in stroken van 2 cm breed . Op iedere strook wordt op een
    afstand van ongeveer 1,5 cm van de rand 50 ml van het te onderzoeken
    extract in een rij druppels naast elkaar gebracht . Ten minste één
    strook is bestemd voor het referentiemonster , bestaande uit een
    mengsel van 1 ml ( d.i . 10 mg ) van elk der difenyl- en orthofenylfenol-
    referentiopri jzen .
    Vervolgens worden do plaatjes met een mengsel van cyclohexaan en
    dichloormethaan ( 25 * 95 ) öntwikkeld in bakjes die tevoren van binnen
    met filtreerpapier zijn bekleed .
c ) Aantoning en identificatie
    De aanwezigheid van difenyl en orthofenylfenol blijkt uit het optreden
    van vlekken in ultraviolet licht ( 254 nm ). Nadat het natriumorthofenyl-
    fenolaat bij de extractie in een zuur milieu in orthofenylfenol is
    omgezet , wordt de aanwezigheid daarvan door het orthofenylfenol aan­
    getoond . De produkten kenmerken zich op de volgende wijze :
    i ) het difenyl geeft bij daglicht een gele vlek bij besproeiing met
        de TNF-oplossingj
    ii ) het orthofenylfenol geeft een blauwe vlek bij besproeiing met de
        oplossing van 2 , 6-dibromo-benzochuinon-4-chlorimide , en daarop­
        volgende korte nabehandeling in een stroom hete lucht alsmede in
      . een met ammoniak verzadigde atmosfeer .
 ---pagebreak---                                                                        BIJLAGE III
                                Bepaling van difenyl-residu's in citrusvruchten
1.          Doel en toepassingsgebied.
            Volgens de hieronder beschreven methode kunnen residiis van difenyl in
            ( hele ) citrusvruchten -worden bepaald . Voor difenylgehalten van meer
            dan 10 ..mg per kg vruchten ( 10 ppm ) zijn de resultaten tot op + 10 $
            nauwkeurig .         .            .
2.         "Principe
            Na "distillatie met waterdamp in een zuur milieu en daaropvolgens extractie
            niet cyclohexaan wordt het éxtract in een dunne laag op silicagel gechroma-
            tografeerd. Na ontwikkeling van het chromatogram wordt het difenyl
            geëlueèrd en spéctrofoiometrisch bij 248 nm bepaald.
 3 ,.       Reagentia
       - geconcentreerd zwavelzuur
          ■ antischuimoplossing op silicönbasis
        ' cyclohexaan , analysekwaliteit               •' '
       • hexaan , anàlysekwaliteit
      " ethanol , 'analysekwaliteit ''
          'watervrij -natrium sulfaat'
            ailicagel GP '254 Meïck 'of gelijkwaardig -produkt
            referehtieopiossing van zuiver difenyl van 1 ^ in cyclohéxaan r voor de
' ■ • vergelijking met cyclohexaan tot ( a ) 0,6 $ Vg/yl f (h ) 1 ug/ul ;
             ( c ) 1,4 pg/yl verdunnen.
 4.         Apparatuur
            mixer van 1 1
            distilleerkolf van 2 1 met afscheider van gewijzigd Clevenger-type en
             terugvloeikoeler ( zie sohema )
        ' maatkolf vari 10 mi       '
     - micropipetten van 50 pi ■            •- '
             toestel voor chromatografie in 'een dunne 'laag , met plaatjes van 20x20 cm
             droogkast
             cent rifugeërtoe stel met conische buizen van 15 ml
             spectrofotmeter voor metingen in ultraviolet licht
         ♦ >  л  \ • * *
                                                                                   • • •/• • •
 ---pagebreak--- Werkwi jze
a )Bereiding van het monster en extractie
     De vruchten waaruit het gehele ter controle genomen monster bestaat
 :   worden in tweeën gesneden . Een helft van elke vrucht wordt bestemd
     voor het aantonen van de residu 's van difenyl , OFF of NaCFF . De
     andere helften worden bijeengebracht , in een molen klein- of fijnge­
     maakt totdat een homogeen mengsel is verkregen . Hieruit worden ten
     minste twee ondermonsters van 200 g genomen , welke op de hieronder
     beschreven wijze worden onderzocht . Ieder ondermonster wordt met
     100 ml wat^r in een mixer gebracht en bij geringe snelheid gedurende
     enkele seconden fijngemaakt . Er wordt water bijgevoegd totdat het
     volume van het mengsel 3/4 van de inhoud van de mixer bereikt . Ver­
     volgens wordt met hoge snelheid gedurende 5 minuten fijngemaakt . De
     aldus verkregen brij wordt in de distilleerkolf van 2 1 overgebracht .
     De mixer wordt met water uitgespoeld en het spoelwater bij de inhoud
    ■van de kolf gevoegd ( de totale voor het fijnmaken en spoelen te ge­
     bruiken hoeveelheid water bedraagt 1 1 . Aan het mengsel worden 2 ml
     zwavelzuur , 1 ml antischuimoplossing en enige kooksteent jes toege­
     voegd . De afscheider en de koeler worden op de kolf geplaatst . In de
     afscheider wordt gedistilleerd water   gebracht totdat het water duide­
     lijk boven de onderste aftakking van de zijbuis voor de terugvloeiing
     staat , waarna 7 ml cyclohexaan wordt toegevoegd . Er wordt ongeveer
     2 uur gedistilleerd . Vervolgens brengt men   de inhoud van de afscheider
 • over in de njaatkolf van 10 ml , spoelt de afscheider uit met ongeveer
     1,5 ml cyclohexaan , voegt de spoeloplossing bij de inhoud van de kolf
     en vult met cyclohexaan aan tot de streep . Ten slotte wordt een weinig
     watervrij natrium sulfaat bijgevoegd en geschud .
b ) Chromatografie
     30 g silicagel en 60 ml water worden in een mixer een minuut lang ge­
     mengd , waarna het mengsel over 5 chromatografeerplaat jes wordt ver­
     deeld en daarop in een laagje van ongeveer 0,250 nm dik wordt uitge­
     streken . De aldus behandelde plaatjes worden 15 minuten lang blootgesteld
     aan een stroom hete lucht en vervolgens geplaatst in een droogkast ,
     waar zij 30 minuten lang bij 110 0 C verblijven . Na afkoeling wordt
     het op ieder plaatje aangebrachte laagje door evenwijdige strepen ,
     die tot het glasoppervlak reiken , verdeeld in 4 stroken van 4 >5 cm breed .
 ---pagebreak---     Op een van de stroken wordt 9 op een afstand van ongeveer .       om van
    rand. van het plaatje en in rijen druppels , naast elkaar , 50 u.1 van het
    te onderzoeken extract gebracht en op ieder van de andere Arie stroken
    50 yl van de referentieoplossingen ( a ), (b ) en ( c ), overeenkomende met
    hoeveelheden difenyl van 30 , 50 . resp . 70 yg .
    Bij serie onderzoek "behoeven geen referentie oplossingen op ieder plaatje
    te worden gebracht ; in dit geval kan "voor de ijkkromma het gemiddelde
    worden genomen van de waarden die op ten minste 5 plaatjes met dezelfde
    referentiehoeveelhedëri'zi jn verkregen .
c ) Ontwikkeling van de chromatograromen en elttie
    De chromatogrammen worden    OVER een hoogte van 17 CB m®t hexaan
    ontwikkeld in bakjes die tevoren van binnen met filtreerpapier zijn
    bekleed . De plaatjes worden aan de lucht gedroogd. De zones waarig het
    difenyl voorkomt worden aangetoond in ultraviolet licht van 254 » ni en
    in   rechthoeken met gelijk oppervlak afgebakend .
    Van de aldus afgebakende oppervlakken wordt het opgebrachte laagje on­
    middellijk met een spatel over de gehele dikte afgekrabd . Hieruit wordt
    het difenyl gedurende 10 minuten met 10 ml ethanol geëxtraheerd waarbij
    herhaaldelijk wordt geschud . Het produkt wordt overgebracht in de cen-
    trifugeerbuizen en daarna wordt 5 minuten lang gecentrifugeerd met een
    snelheid van 2500 omwentelingen per minuut .
    Op dezelfde wijze wordt een vergelijkingsmonster van dezelfde afmetingen
    genomen . Bij serie-onderzoek wordt dit uit een niet benutte strook van
    het plaatje genomen , bij afzonderlijk onderzoek uit een met een referentie
    monster behandelde strook onder de zone die het difenyl bevat .
d ) Spectrofotometrische bepaling
    De in de bakjes van de spectrofotometer bovendrijvende vloeistof wordt
    afge schonken en de extinctie bepaald bij 248 nm , door vergelijking met
    een extract afkomstig van een zone van het chromatogram die geen difenyl
    bevat .
 ---pagebreak---                                        - 4 -
6. Berekening van de resultaten
   Er wordt een ijkkromme getrokken , waarbij als coördinaten de hoeveelheden
   difenyl van 30,50 resp . 70   en de overeenkomstige met de spectrofoto-
   meter bepaalde extincties worden genomen . De aldus verkregen kromme
   is een rechte lijn die door het nulpunt loopt . Uit deze kromme kunnen
   de difenylgehalten van de monsters in ppm rechtstreeks uit de extinctie-
   waarden van hun extracten worden afgelezen .
 ---pagebreak---                                                                     BIJLAGE IV
                      . Bepaling van residu 's van orthofenylfenol en
                        riatriumorthofenylfenolaat in citrusvruchten
Poel en toepassingsgebied.
Volgens de hieronder "beschreven methode kunnen residu 's van orthofenyl-
fenol ( OFF ) en natriumorthofenylfenolaat (NaOFF ) in ( hele ) citrusvruchten
worden bepaald. Bij een OFP of NaOFF-gehalte van ongeveer 12 ppm ver­
tonen de resultaten een gemiddelde afwijking naar "beneden van 10-20 $.
Principe
Na distillatie in een zuur milieu en extractie met di-isopentylether
wordt het extract gezuiverd en "behandeld met een oplossing van 1-fenyl-
2,3 dimethyl-4 aminopyrazolon ( 5 ) (=4-aminoantipyrine ). Er treedt rood­
kleurig op , waarvan de intensiteit spectrofotometrisch "bij 510 nm wordt
gemeten .
Reagentia
Fosforzuur van 70 i°
antischuimemulsie op siliconbasis
di-isopentylether ,- analisekwaliteit
gezuiverd cyclohexaan : driemaal met een natriumhydroxyde-oplossing
van 4       uitgeschud v.en driejnaal ' met gedistilleerd water uitgewassen ,
natriumhydroxydeoplossing van- 4 f* ■ .                 •   ,i
bufferoplossing met pH 10,4 » 6>64 g boorzuur, 8,00 g kaliumchloride
en. 93 ,1 . ral natriumhydroxydeoplossing I _ N worden in een- maatkolf van
2 1 gebracht , gemengd en met gedistilleerd, water tot . de streep .aange­
vuld .
reagéns I : 1,0 "g l-fenyl-2 ,3dimethyl-4-aminopyzazolon ( 5 ) (* 4-aminoan-
tipyrine ) wordt 'in 100 ml gedistilleerd Water opgelost .
reagens II » 2 ,Ö g kaliümf arrocyanide wordt in 100 ml gedistilleerd 'water
opgelost .
De reagentia I en II moeten in een fles van donker glas worden bewaard
eri zijn ongeveer 14 dagen houdbaar .
silicagel
 ---pagebreak--- referentieoplossing : 10 mg OFP wordt in 0,5 ml NaOH 0,01 N opgelost ,
en met 0,2 mg natriumboraatoplossing tot 100 ml aangevuld (l ml = 100 ug )
Voor de ijkkromme moet tot 1 : 10 met de bufferoplossing worden verdund .
Apparatuur
vlees- of andere molen
mixer
distilleerkolf van 1 1 met afscheider van gewijzigd Clevenger-type en
terugvloeikoeler ( schema : zie " Bepaling van difenyl residu 's  in
citrusvruchten " )
infraroodbad
schei trechter van 200 ml
maatglazen van 25 en 100 ml
maatkolven van 25 en 100 ml
pipetten van 1 - 10 ml
maatpipetten van 0,5 ml
spectrofotometer met bakjes van 5
Werkwi jze
De vruchten waaruit het gehele ter controle genomen monster bestaat
worden in tweeën gesneden . Een helft van iedere vrucht wordt bestemd
voor het aantonen van reaidu 's van difenyl , 0FF of NaOFF . De andere
helften worden bijeengebracht , in een molen klein- of fijngemaakt tot­
dat een homogeen mengsel is verkregen . Hieruit worden ten minste twee
ondermonsters van 250 g genomen welke op de volgende wijze worden onder­
zocht . Ieder ondermonster wordt in een mixer met 500 ml water gebracht
en fijngemaakt totdat een op de tast volkomen homogene brij is verkregen
waarin geen oliecellen meer kunnen worden waargenomen . Naar gelang van
het vermoede OFFgehalte wordt 150 tot 300 g van de brij afgewogen en
in de distilleerkolf van 1 1 gebracht met behulp van een zondanige
hoeveelheid water dat het mengsel in de kolf 500 g bedraagt . Na toe­
voeging van 10 ml fosforzuur van 70      enkele kooksteent jes en 0,5 ml
antischuimemulsie plaatst men de afscheider en de koeler op de kolf .
In de afscheider wordt 10 ml di-^isopentylether gebracht , waarma de kolf
in het infraroodbad langzaam wordt verhit om aankoken of overschuimen
van de brij te voorkomen . Er wordt ongeveer 6 uur gedistilleerd .     /
 ---pagebreak---                                        - 3 -
   Na "beëindiging van het distillatieproces "brengt men de inhoud van de
   afscheider in de scheitrechter van 200 ml , spoelt de afscheider en de
   koeler met 60 ml cyclohexaan en vervolgens met 60 ml water uit en voegt
   de spoelvloeistoffen "bij de inhoud van de schei trechter. Deze wordt
   krachtig geschud , en na scheiding der lagen wordt de waterfase afge­
   schonken en verwijderd .
   Voor de extractie van het OFF wordt de organische fase vijfmaal steeds
   3 minuten net 10 ml natriumhydroxyde van 4     krachtig geschud . De
   alkalische oplossingen worden bijeengebracht met behulp van fosforzuur
   in aanwezigheid van fenolftalëinepapier tot een pH 9-10 geneutraliseerd
   en met gedistilleerd water tot 100 ml aangevuld . Ten einde de licht
   troebele oplossing helder te maken voegt men een mespuntje silioagel toe ,
   schudt om en filtreert door een droog, filter met nauwe poriën . Aangezien
   de grootste gevoeligheid en nauwkeurigheid bij de ontwikkeling van de kleu­
   ring ligt tussen 10 en 70 yg OFF , worden overeenkomstig de te verwachten
   hoeveelheden OFF afgeronde delen van 0,5 tot 10 ml van de aangevulde
   oplossing in een maatkolf van 25 ml gepipetteerd . Daarbij wordt 0,5 ml
   reagens I , 10 ml bufferoplossing en ten slotte 0,5 ml reagens II gevoegd ,
   waarna met de bufferoplossing tot de streep wordt aangevuld en krachtig
   geschud .
   Na 5 minuten moet men de extinctie van de roodkleuring spectrofotometrisch
   bij 510 nm door vergelijking met een zonder extract verkregen blanco .
   De intensiteit van de kleuring verandert gedurende 30 minuten niet . De
   beoordeling geschiedt aan de hand van een onder dezelfde omstandigheden
   met de referentieoplossing verkregen ijkkromme OFF .
6. Opmerkingen
   Aanbevolen vordt voor ieders analyse de algehele bepaling ten minste
   tweemaal te verrichten en de spectrofotometrische meting als dubbele
   bepaling met verschillende volumes van het geneutraliseerde alkalische
   extract uit te voeren .
   Voor niet–behandelde citrusvruchten vindt men volgens deze methode blanco-
   waarden die voor sinaasappelen 0,5 PP® en voor oitroenen 0,8 ppm kunnen
   bereiken .