CELEX: 32000D0428
Language: ro
Date: 2000-07-04 00:00:00
Title: Decizia Comisiei din 4 iulie 2000 de stabilire a procedurilor de diagnosticare, a metodelor de prelevare de probe și a criteriilor de evaluare a rezultatelor testelor de laborator pentru confirmarea și diagnosticul diferențial ale bolii veziculoase a porcului [notificată cu numărul C(2000) 1805]Text cu relevanță pentru SEE.

03/Volumul 33
            
            
               RO
            
            
               Jurnalul Ofícial al Uniunii Europene
            
            
               57
            
         32000D0428
   
               L 167/22
            
            
               JURNALUL OFÍCIAL AL UNIUNII EUROPENE
            
            
               
            
         
      DECIZIA COMISIEI
   
   din 4 iulie 2000
   de stabilire a procedurilor de diagnosticare, a metodelor de prelevare de probe și a criteriilor de evaluare a rezultatelor testelor de laborator pentru confirmarea și diagnosticul diferențial ale bolii veziculoase a porcului
   [notificată cu numărul C(2000) 1805]
   (Text cu relevanță pentru SEE)
   (2000/428/CE)
   COMISIA COMUNITĂȚILOR EUROPENE,
   având în vedere Tratatul de instituire a Comunității Europene,
   având în vedere Directiva 92/119/CEE a Consiliului din 17 decembrie 1992 de introducere a măsurilor generale comunitare pentru controlul anumitor boli ale animalelor și a măsurilor specifice privind boala veziculoasă a porcului (1), astfel cum a fost modificată ultima dată prin Actul de aderare a Austriei, Finlandei și Suediei, în special anexa II, alineatul (3),
   întrucât:
   
               (1)
            
            
               Este necesar să se instituie, la nivel comunitar, proceduri de diagnosticare, metode de prelevare de probe și criterii de evaluare a rezultatelor testelor de laborator pentru confirmarea bolii veziculoase a porcului și diferențierea rapidă față de febra aftoasă pentru a se asigura un control mai bun al ambelor boli.
            
         
               (2)
            
            
               Anexa III la Directiva 92/119/CEE a Consiliului stabilește funcțiile și îndatoririle laboratorului comunitar de referință pentru boala veziculoasă a porcului în vederea coordonării, în consultare cu Comisia, a metodelor aplicate în statele membre pentru diagnosticarea bolii; aceste funcții și îndatoriri includ organizarea testelor comparative periodice și furnizarea de reactivi standard la nivel comunitar.
            
         
               (3)
            
            
               Recent au fost efectuate teste de laborator pentru a se asigura că boala veziculoasă a porcului este diagnosticată și diferențiată rapid de febra aftoasă.
            
         
               (4)
            
            
               Rezultatele celor mai recente teste comparative efectuate la nivel comunitar arată, în special, că au fost elaborate teste fiabile pentru detectarea antigenului sau a genomului virusului bolii veziculoase a porcului și că aceste teste pot completa cu succes testul de izolare a virusului pentru diagnosticul virusologic al bolii veziculoase a porcului.
            
         
               (5)
            
            
               Experiența dobândită în controlul bolii veziculoase a porcului în ultimii ani a dus la identificarea celor mai adecvate proceduri de prelevare de probe și criterii de evaluare a rezultatelor testelor de laborator pentru un diagnostic corect al acestei boli în diferite situații.
            
         
               (6)
            
            
               S-a ținut seama de avizul și recomandările Comitetului științific pentru sănătatea și bunăstarea animalelor cu privire la boala veziculoasă a porcului.
            
         
               (7)
            
            
               Măsurile prevăzute de prezenta decizie sunt conforme cu avizul Comitetului veterinar permanent,
            
         ADOPTĂ PREZENTA DECIZIE:
   Articolul 1
   (1)   Statele membre se asigură că pentru confirmarea bolii veziculoase a porcului și diagnosticul diferențial în raport cu febra aftoasă se întreprind:
   
               (a)
            
            
               detectarea semnelor clinice ale bolii;
            
         
               (b)
            
            
               detectarea virusului, antigenului sau genomului în probele de țesut epitelial, lichid vezicular sau fecale;
            
         
               (c)
            
            
               demonstrarea unui răspuns cu anticorpi specifici în probele de ser,
            
         în conformitate cu procedurile, metodele de prelevare de probe și criteriile de evaluare a rezultatelor testelor de laborator stabilite în manualul anexat la prezenta decizie.
   (2)   Cu toate acestea, laboratoarele de diagnosticare naționale, menționate în anexa II alineatul (5) la Directiva 92/119/CEE, pot aplica modificări la testele de laborator menționate în manualul anexat la prezenta decizie sau pot utiliza teste diferite, cu condiția să se demonstreze o sensibilitate și o specificitate echivalentă.
   Sensibilitatea și specificitatea acestor teste modificate sau diferite trebuie să fie evaluate în cadrul testelor comparative periodice organizate de laboratorul comunitar de referință pentru boala veziculoasă a porcului.
   Articolul 2
   Prezenta decizie se aplică de la 1 octombrie 2000.
   Articolul 3
   Prezenta decizie se adresează statelor membre.
   
      Adoptată la Bruxelles, 4 iulie 2000.
      
         
            Pentru Comisie
         
         David BYRNE
         
         
            Membru al Comisiei
         
      
   
   
      (1)  JO L 62, 15.3.1993, p. 69.
   ANEXĂ
   MANUAL PRIVIND PROCEDURILE DE DIAGNOSTICARE, METODELE DE PRELEVARE DE PROBE ȘI CRITERIILE DE EVALUARE A REZULTATELOR TESTELOR DE LABORATOR PENTRU CONFIRMAREA ȘI DIAGNOSTICUL DIFERENȚIAL ALE BOLII VEZICULOASE A PORCULUI
   CAPITOLUL I
   Introducere, obiective și definiții
   1.   Prezentul manual:
   
               (a)
            
            
               prevede orientări și cerințe minime privind procedurile de diagnosticare, metodele de prelevare de probe și criteriile de evaluare a rezultatelor testelor de laborator pentru diagnosticul corespunzător al bolii veziculoase a porcului. Cu toate acestea, se pune un accent deosebit și pe diagnosticul diferențial în raport cu febra aftoasă;
            
         
               (b)
            
            
               încorporează prevederile anexei II la Directiva 92/119/CEE, în special alineatele (4), (7) și (8);
            
         
               (c)
            
            
               se adresează în principal autorităților responsabile de controlul bolii veziculoase a porcului. Prin urmare se pune accentul pe principiile și aplicarea testelor de laborator și pe evaluarea rezultatelor lor și nu pe tehnicile detaliate de laborator.
            
         2.   În sensul prezentului manual, se aplică următoarele definiții:
   
               (a)
            
            
               „porc seropozitiv” înseamnă orice porc al cărui ser are un titru de anticorpi egal sau mai mare decât serul de referință 4 pentru boala veziculoasă a porcului menționat în capitolul X din testul de neutralizare a virusului utilizat de laboratorul național;
            
         
               (b)
            
            
               „fals seropozitiv” înseamnă orice porc seropozitiv unic într-o fermă, care înregistrează un rezultat pozitiv la testele serologice pentru boala veziculoasă a porcului, dar care nu are nici un istoric de contact cu virusul bolii veziculoase a porcului și în legătură cu care nu există dovezi de răspândire a infecției la porcii de contact. Un porc seropozitiv este confirmat ca fiind un fals seropozitiv dacă sunt îndeplinite condițiile menționate în capitolul VIII litera (C);
            
         
               (c)
            
            
               „porci de contact” înseamnă porcii care au contact direct sau au avut contact direct, în ultimele 28 de zile, cu unul sau mai mulți porci seropozitivi sau cu unul sau mai mulți porci suspectați că sunt infectați cu virusul bolii veziculoase a porcului. Porcii de contact pot fi sau pot să fi fost în același țarc sau în țarcuri învecinate, dacă există posibilitatea de contact între porci din țarcuri învecinate.
            
         CAPITOLUL II
   Orientări privind controlarea porcilor care prezintă semne clinice de boală veziculoasă a porcului
   1.   Statele membre se asigură că, atunci când se suspectează prezența virusului bolii veziculoase a porcului într-o fermă, veterinarul oficial controlează cât mai rapid porcii într-un număr semnificativ din punct de vedere statistic pentru a detecta semnele clinice ale bolii menționate la capitolul IX.
   2.   Statele membre se asigură că, atunci când porcii prezintă semne clinice care sugerează boala veziculoasă a porcului sau febra aftoasă, se efectuează diagnosticarea diferențială prin prelevare de probe și investigații de laborator corespunzătoare, în conformitate cu prevederile menționate în capitolele IV, VII și VIII din prezentul manual.
   CAPITOLUL III
   Proceduri generale pentru prelevarea de probe și transportul probelor
   1.   Orice persoană care intră sau iese din ferma de porci în care se bănuiește că ar fi prezentă boala veziculoasă a porcului trebuie să respecte cele mai stricte măsuri de igienă necesare pentru reducerea riscului de contaminare sau de răspândire a virusului.
   2.   Toți porcii de la care s-au prelevat probe trebuie să fie marcați unic în așa fel încât să poată fi identificați pentru o eventuală repetare a prelevării de probe. Se recomandă ca locul în fermă a fiecărui porc de la care s-au prelevat probe să fie înregistrat împreună cu marcajul unic de identificare, în special dacă sunt prelevate probe de la porci suspecți.
   3.   Probele trebuie trimise la laborator însoțite de formularele corespunzătoare, care să includă detaliile privind antecedentele porcilor de la care s-au prelevat probe și semnele clinice observate, dacă este cazul.
   4.   Având în vedere că orice simptome veziculoase la porci pot semnala febra aftoasă, trebuie luate măsuri speciale de precauție pentru ambalarea în condiții de siguranță a probelor suspecte. Aceste măsuri de precauție trebuie adoptate în special pentru a se preveni spargerea recipientelor sau scurgerile din recipiente, precum și riscul de contaminare, dar sunt importante, de asemenea, pentru a se asigura că probele ajung la destinație într-o stare satisfăcătoare. Dacă se pune gheață într-un pachet, trebuie împiedicată scurgerea apei. Nici un recipient cu probe suspectate că ar conține virusul bolii veziculoase a porcului nu trebuie deschis după ce a plecat de la locul infectat până când ajunge în laborator.
   5.   Probele suspectate că ar conține virusul bolii veziculoase a porcului trebuie să fie analizate numai într-un laborator autorizat să manipuleze virusul febrei aftoase în scopul diagnosticării, în conformitate cu legislația comunitară privind controlul febrei aftoase, în afară de cazul în care suspiciunea de febră aftoasă a fost deja eliminată.
   6.   Toate probele pot fi transportate la o temperatură de 4 °C, dacă durata anticipată a transportului până la laboratorul de destinație este de mai puțin de 48 de ore, în caz contrar acestea trebuind menținute la o temperatură care să nu depășească -20 °C.
   7.   Pentru probele destinate laboratorului comunitar de referință și provenind din alte state membre decât Regatul Unit, singura metodă de transport permisă este pe calea aerului către aeroporturile Londra (Heathrow) sau Londra (Gatwick). Înainte de expediere, laboratorul trebuie să fie informat prin fax [(44-1483) 23 26 21] sau e-mail cu privire la detaliile zborului, data, ora prevăzută pentru sosire și numărul de conosament aerian, astfel încât pachetul să poată fi identificat la destinație. Coletul trebuie adresat către:
   
               Institute for Animal Health, Pirbright Laboratory
            
         
               Community Reference Laboratory for swine vesicular disease
            
         
               Ash Road, Pirbright, Woking
            
         
               Surrey GU24 ONF
            
         
               United Kingdom, UK
            
         Următoarele informații trebuie incluse, de asemenea, pe etichetă: „Material patologic animal fără valoare comercială. Perisabil. Fragil. A se ridica la aeroport de către destinatar. A nu se deschide în afara laboratorului.”
   Ridicarea autorizată a trimiterilor la aeroport se face de către personalul de la laboratorul comunitar de referință cu un permis special de import general emis în acest scop de către Ministerul agriculturii, alimentației și pisciculturii din Regatul Unit. Aceasta este o dispoziție permanentă, nefiind necesar un permis separat pentru fiecare import. Este interzisă manipularea materialelor veziculoase suspecte de către personal neautorizat pe teritoriul Regatului Unit. Nu este permisă utilizarea companiilor de curierat.
   8.   Transportul probelor la laboratoarele naționale trebuie să se facă în conformitate cu instrucțiunile prevăzute de autoritatea competentă din statele membre.
   CAPITOLUL IV
   Proceduri de prelevare de probe într-o fermă cu porci suspecți clinic
   1.   Atunci când se bănuiește prezența virusului bolii veziculoase a porcului într-o fermă, întrucât au fost observate semne clinice ale bolii, trebuie colectate probe corespunzătoare de la grupuri reprezentative de porci care prezintă aceste semne pentru confirmarea bolii și diagnosticul diferențial cu febra aftoasă.
   2.   În aceste ferme, probele preferate pentru diagnostic sunt epiteliul și lichidul vezicular din vezicule nesparte sau sparte recent, colectate de la porci care prezintă semnele tipice ale bolii, în care se pot detecta virusul bolii veziculoase a porcului, antigenele sau genomul acestuia. Se recomandă să se preleveze probe de la circa cinci sau șase astfel de porci.
   3.   Chiar dacă sunt disponibile țesut epitelial și lichid vezicular în cantitate suficientă (1 g sau mai mult), trebuie colectate și următoarele probe:
   
               (a)
            
            
               probe de sânge de la porcii suspecți și de la porcii de contact, pentru testare serologică și
            
         
               (b)
            
            
               probe de fecale de la porcii suspecți și de pe podeaua țarcului lor și din țarcurile învecinate pentru testare virusologică.
            
         4.   Probele trebuie prelevate și transportate în conformitate cu următoarele proceduri:
   
               (a)
            
            
               pentru probele de epiteliu și lichid vezicular:
               
                           —
                        
                        
                           dacă este posibil, se colectează cel puțin 1 g de țesut epitelial dintr-o veziculă nespartă sau spartă recent. Se recomandă ca porcii să fie sedați înainte de prelevarea probelor pentru a evita accidentarea personalului, precum și pentru bunăstarea porcilor;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           dacă transportul la laboratorul național se efectuează imediat (în mai puțin de trei ore), probele epiteliale pot fi transportate uscate și refrigerate. Cu toate acestea, dacă durata călătoriei este probabil să depășească trei ore, probele trebuie introduse într-un volum mic de mediu de transport, constând din cantități egale de glicerol și soluție tampon de 0,04 M fosfat sau altă soluție tampon (Hepes) astfel încât pH-ul să fie menținut în intervalul optim pentru supraviețuirea virusului febrei aftoase (pH între 7,2 și 7,6). Mediul de transport trebuie să conțină antibiotice, ca măsură suplimentară anti-microbiană. Antibioticele adecvate și concentrația lor finală pe ml sunt:
                           
                                       (i)
                                    
                                    
                                       penicilină 1 000 UI;
                                    
                                 
                                       (ii)
                                    
                                    
                                       sulfat de neomicină 100 UI;
                                    
                                 
                                       (iii)
                                    
                                    
                                       polimixină-B sulfat 50 UI;
                                    
                                 
                                       (iv)
                                    
                                    
                                       micostatin 100 UI;
                                    
                                 
                     
                           —
                        
                        
                           dacă se poate colecta lichid vezicular dintr-o veziculă nespartă, acesta trebuie păstrat nediluat într-un recipient separat;
                        
                     
         
               (b)
            
            
               pentru probele de sânge:
               
                           —
                        
                        
                           probele de sânge pot fi prelevate pentru teste serologice sau virusologice. Totuși, în general acestea sunt prelevate numai de la porcii despre care se presupune că s-au restabilit după infecția clinică sau sub-clinică, pentru detectarea anticorpilor, deoarece probele de epiteliu, lichid vezicular și fecale de la porcii care prezintă semne clinice de boală sunt mai indicate pentru detectarea virusului decât probele de sânge. Se recomandă ca toate probele de sânge să se preleveze folosind sisteme de recoltare tip vacutainer fără anticoagulant și ca acestea să fie transportate fără a se deschide;
                        
                     
         
               (c)
            
            
               pentru probele de fecale:
               
                           —
                        
                        
                           probele de fecale recoltate de pe podeaua locațiilor suspecte că ar adăposti sau că au adăpostit porci infectați cu boala veziculoasă a porcului sau tampoanele fecale și probele fecale de la porcii vii suspectați trebuie introduse în recipiente rezistente, etanșe.
                        
                     
         Recipientele cu probe suspecte trebuie dezinfectate în exterior înainte de a fi transportate la laborator. Dezinfectante adecvate sunt:
   
               —
            
            
               hidroxid de sodiu (diluție 1:100);
            
         
               —
            
            
               formalină (diluție 1:9 pentru o soluție de formalină care conține minimum 34 % formaldehidă) și
            
         
               —
            
            
               hipoclorit de sodiu (2 % clor disponibil).
            
         Aceste dezinfectante trebuie manipulate cu grijă.
   CAPITOLUL V
   Proceduri de prelevare de probe pentru supravegherea serologică a bolii veziculoase a porcului
   1.   Atunci când supravegherea serologică se realizează în următoarele scopuri:
   
               (a)
            
            
               pentru supraveghere în ferme în care nu există dovezi sau suspiciuni privind prezența bolii;
            
         
               (b)
            
            
               pentru supravegherea în abatoare, piețe, centre de colectare sau locuri similare prin prelevarea de probe serologice de rutină;
            
         
               (c)
            
            
               ca supraveghere nediscriminatorie a porcilor primiți din alte state membre la ferma importatoare,
            
         probele de sânge trebuie prelevate de la porci pentru testare serologică în conformitate cu prevederile stabilite prin programele sau planurile de monitorizare sau eradicare aprobate în cadrul Deciziei 90/424/CEE (1) sau Directivei 90/425/CEE (2) sau, în lipsa acestor prevederi, cu procedurile stabilite de autoritatea competentă a statelor membre.
   2.   Atunci când supravegherea serologică se realizează în următoarele scopuri:
   
               (a)
            
            
               pentru supravegherea fermelor situate în zone de protecție și supraveghere, stabilite în urma confirmării focarelor bolii în conformitate cu anexa II alineatele (7) și (8) din Directiva 92/119/CEE sau
            
         
               (b)
            
            
               pentru supravegherea fermelor menționate în articolul 9 din Directiva 92/119/CEE,
            
         probele de sânge trebuie prelevate de la porci pentru testare serologică în conformitate cu următoarea schemă:
   
               —
            
            
               în cazul fermelor de reproducere, trebuie efectuată o procedură de prelevare de probe randomizată astfel încât să se detecteze o prevalență de 5 % a seroconversiei cu un grad de fiabilitate de 95 %;
            
         
               —
            
            
               în cazul fermelor care adăpostesc numai porci pentru îngrășat, procedura de prelevare de probe trebuie să garanteze că numărul total de probe prelevate este cel puțin egal cu numărul necesar pentru detectarea unei prevalențe de 5 % cu un grad de fiabilitate de 95 %. În orice caz, probele trebuie luate din cât mai multe țarcuri aleatorii posibil;
            
         
               —
            
            
               în cazul fermelor mixte de reproducere și pentru îngrășat, de la fiecare grup de porci care se află în locații separate trebuie prelevate probe în așa fel încât să se detecteze o prevalență de 5 % a seroconversiei cu un grad de fiabilitate de 95 %.
            
         CAPITOLUL VI
   Acțiuni suplimentare și proceduri de repetare a prelevării de probe în cazul în care se constată că există porci seropozitivi
   1.   În cazul în care se detectează un singur porc seropozitiv într-o fermă în urma supravegherii menționate în capitolul V alineatul (1) litera (a) sau în capitolul V alineatul (2), autoritatea competentă se asigură că:
   
               (a)
            
            
               dacă nu au fost deja aplicate, măsurile menționate la articolul 4 din Directiva 92/119/CEE sunt aplicate în ferma respectivă;
            
         
               (b)
            
            
               se efectuează un control în fermă în conformitate cu prevederile menționate în capitolul II alineatul (1);
            
         
               (c)
            
            
               sunt colectate probe de sânge pentru testare serologică de la:
               
                           —
                        
                        
                           porcul suspect;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           porcii de contact care trăiesc în același țarc sau în țarcurile învecinate cu cel al porcului suspect; acestor porci trebuie să li se preleveze probe în așa fel încât să se detecteze o prevalență de 50 % a seroconversiei cu un grad de fiabilitate de 95 % în țarc.
                        
                     
         2.   Cu toate acestea, autoritatea competentă poate decide să ridice măsurile menționate la alineatul (1) litera (a) dacă:
   
               (a)
            
            
               ancheta epidemiologică efectuată în conformitate cu articolul 8 din Directiva 92/119/CEE sugerează că boala veziculoasă a porcului nu a fost introdusă în fermă;
            
         
               (b)
            
            
               nici un semn clinic de boală veziculoasă a porcului nu a fost detectat în fermă și
            
         
               (c)
            
            
               ferma nu este situată într-o zonă de supraveghere sau de restricție stabilită în urma confirmării unui focar al bolii sau supusă altor restricții aplicate în legătură cu un focar confirmat al bolii
            
         și cu condiția ca:
   
               —
            
            
               nici un porc să nu părăsească ferma în cadrul schimburilor comerciale intracomunitare și
            
         
               —
            
            
               porcii din ferma respectivă să părăsească ferma doar pentru a fi duși la un abator pentru sacrificare imediată sau la o altă fermă din care nici un porc nu intră în schimburi comerciale intracomunitare,
            
         până când rezultatele controalelor suplimentare și ale testelor serologice indică faptul că suspiciunea legată de boala veziculoasă a porcului poate fi eliminată definitiv.
   3.   În cazul în care controalele și testele serologice efectuate în conformitate cu alineatul (1) literele (b) și (c):
   
               (a)
            
            
               produc rezultate negative sau numai porcul descoperit pozitiv anterior este confirmat pozitiv (fals seropozitiv), suspiciunea legată de boala veziculoasă a porcului poate fi eliminată. Măsurile menționate la alineatul (1) litera (a) sunt ridicate, în afară de cazul în care ferma este situată într-o zonă de protecție sau de supraveghere stabilită în jurul unui focar de boală în care măsurile de eradicare a bolii trebuie să rămână în vigoare în conformitate cu anexa II alineatul (7) sau (8) din Directiva 92/119/CEE;
            
         
               (b)
            
            
               indică faptul că în fermă se găsește mai mult de un porc seropozitiv, trebuie fie confirmată boala veziculoasă a porcului, fie, în cazul în care condițiile stabilite în anexa II alineatul (4) la Directiva 92/119/CEE nu sunt îndeplinite pentru a confirma prezența bolii, trebuie prelevate probe suplimentare din fermă, în conformitate cu procedurile de prelevare de probe menționate la alineatul (4).
            
         4.   În cazul în care sunt detectați mai mulți porci seropozitivi într-o fermă în urma prelevării de probe și a testării serologice menționate în capitolul V alineatul (1) litera (a), alineatul (1) litera (c) sau alineatul (2), însă nu sunt îndeplinite condițiile stabilite în anexa II alineatul (4) la Directiva 92/119/CEE pentru a se confirma boala veziculoasă a porcului, autoritatea competentă trebuie să se asigure că:
   
               (a)
            
            
               prevederile menționate în articolul 4 din Directiva 92/119/CEE sunt aplicate sau continuă să fie aplicate;
            
         
               (b)
            
            
               se efectuează un control al fermei, în conformitate cu prevederile menționate în capitolul II alineatul (1);
            
         
               (c)
            
            
               sunt prelevate suplimentar probe de sânge pentru testare serologică de la porcii seropozitivi și de la porcii de contact, în conformitate cu alineatul (1) litera (c);
            
         
               (d)
            
            
               sunt prelevate probe de sânge pentru testarea serologică de la porcii din alte clădiri din fermă în conformitate cu procedura menționată în capitolul V alineatul (2);
            
         
               (e)
            
            
               sunt prelevate un număr suficient de probe fecale pentru teste virusologice de la:
               
                           —
                        
                        
                           porcii seropozitivi;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           de pe podeaua țarcurilor cu porci seropozitivi și a țarcurilor învecinate;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           din țarcuri selectate aleator din alte clădiri din fermă.
                        
                     Probele fecale prelevate în conformitate cu prima și a doua liniuță de mai sus trebuie să fie examinate cât mai curând posibil. În caz că aceste probe sunt negative, dar rezultatele testelor serologice sugerează faptul că virusul bolii veziculoase a porcului s-a putut extinde la alte clădiri, probele fecale prelevate în conformitate cu a treia liniuță de mai sus trebuie examinate, la rândul lor.
            
         Dacă, în urma acestor controale și teste suplimentare, condițiile stabilite în anexa II alineatul (4) la Directiva 92/119/CEE nu sunt îndeplinite pentru a confirma prezența bolii veziculoase a porcului, porcii seropozitivi trebuie să fie omorâți sau sacrificați în conformitate cu prevederile menționate în anexa II alineatul (4) litera (d) la Directiva 92/119/CEE. Cu toate acestea, în cazul în care și alți porci au fost găsiți seropozitivi în plus față de cei deja descoperiți ca fiind seropozitivi în urma prelevării anterioare de probe, prevederile și procedurile stabilite la literele (a), (b), (c), (d) și (e) vor fi aplicate în continuare mutatis mutandis.
   5.   Fără a aduce atingere măsurilor menționate în articolul 9 din Directiva 92/119/CEE, în cazul în care sunt detectați unul sau mai mulți porci seropozitivi în urma activităților de supraveghere menționate în capitolul V alineatul (1) litera (b) sau capitolul V alineatul (1) litera (c), autoritatea competentă se asigură că:
   
               (a)
            
            
               atunci când este necesar și fezabil, se efectuează controale suplimentare corespunzătoare, inclusiv prelevare de probe, pentru a confirma sau infirma existența bolii veziculoase a porcului în locul în care au fost detectați acești porci, ținând seama de situația locală;
            
         
               (b)
            
            
               măsurile menționate în articolul 4 din Directiva 92/119/CEE sunt aplicate în ferma de origine a acestor porci;
            
         
               (c)
            
            
               se efectuează un control în ferma de origine a acestor porci, în conformitate cu prevederile menționate în capitolul II alineatul (1) și
            
         
               (d)
            
            
               sunt prelevate probe de sânge pentru testare serologică de la porcii din ferma de origine a porcilor seropozitivi, în conformitate cu prevederile menționate în capitolul V alineatul (2).
            
         6.   Cu toate acestea, autoritatea competentă poate decide să ridice măsurile menționate în alineatul (5) litera (b) dacă:
   
               (a)
            
            
               ancheta epidemiologică realizată în conformitate cu articolele 4 și 8 din Directiva 92/119/CEE a Consiliului sugerează că boala veziculoasă a porcului nu a fost introdusă în fermă;
            
         
               (b)
            
            
               nici un semn clinic de boală veziculoasă a porcului nu a fost detectat în fermă;
            
         
               (c)
            
            
               ferma nu este situată într-o zonă de supraveghere sau restricție stabilite în urma confirmării unui focar al bolii sau supusă altor restricții aplicate în legătură cu un focar confirmat al bolii
            
         și cu condiția ca:
   
               —
            
            
               nici un porc să nu părăsească ferma în cadrul schimburilor comerciale intracomunitare și
            
         
               —
            
            
               porcii din ferma respectivă să părăsească ferma doar pentru a fi duși la un abator pentru sacrificare imediată sau la o altă fermă din care nici un porc nu intră în schimburi comerciale intracomunitare,
            
         până când rezultatele controalelor suplimentare și ale testelor serologice efectuate în locul în care au fost detectați porcii seropozitivi și în ferma de origine indică faptul că suspiciunea legată de boala veziculoasă a porcului poate fi eliminată definitiv.
   CAPITOLUL VII
   Principiile și aplicațiile testelor virusologice și evaluarea rezultatelor acestora
   A.   Detectarea antigenului virusului
   1.   Un test sandwich ELISA indirect a înlocuit testul de fixare a complementului ca metodă de preferință pentru detectarea antigenului virusului bolii veziculoase a porcului. Testul este același ca cel utilizat pentru diagnosticul febrei aftoase. Testele pentru cele două boli trebuie să fie efectuate în același timp, cu excepția cazului în care febra aftoasă a fost deja infirmată. Se recomandă în special pentru probele de epiteliu sau de lichid din leziunile veziculare, în care pot fi prezenți atât virusul bolii veziculoase a porcului, cât și cel al febrei aftoase la titruri mari la porcii cu infecție acută și care sunt detectați în câteva ore (3).
   Rânduri duplicat din plăcile ELISA multigodeu sunt acoperite cu antiser de iepure la virusul bolii veziculoase a porcului și la fiecare dintre cele 7 serotipuri ale virusului febrei aftoase. Acestea sunt seruri de blocare. Suspensii ale probei de testat se adaugă la fiecare dintre cele două rânduri. Se includ de asemenea și controalele corespunzătoare. Se adaugă ser de detecție omolog de cobai la rândurile respective în etapa următoare, apoi ser de iepure anticobai conjugat cu o enzimă, cum ar fi peroxidaza de hrean. Se realizează spălarea intensivă între fiecare etapă, pentru a se îndepărta reactivii nelegați. Testul este pozitiv dacă există o reacție de colorare la adăugarea cromogenului și a substratului. Reacțiile intens pozitive sunt evidente cu ochiul liber, dar rezultatele pot să fie citite, de asemenea, spectrofotometric, caz în care un factor de abrosbție de 0,1 peste limita de fond indică o reacție pozitivă.
   2.   Se pot utiliza teste alternative ELISA bazate pe anticorpi monoclonali, care utilizează anticorpi monoclonali selectați ca anticorpi de blocare și anticorpi monoclonali conjugați cu o peroxidază ca anticorpi de detecție, pentru detectarea antigenului bolii veziculoase a porcului și pentru diagnosticul diferențial în raport cu febra aftoasă pe probele de epiteliu, lichid vezicular sau cultură de țesut infectat.
   3.   Se poate utiliza un test ELISA bazat pe anticorpi monoclonali pentru a se studia variația antigenică a tulpinilor virusului bolii veziculoase a porcului. Antigenele virusului crescute în culturi de țesut sunt blocate cu un ser hiperimun de iepure contra bolii veziculoase a porcului, adsorbit în faza solidă. Se determină apoi reacția secvențelor corespunzătoare de anticorpi monoclonali și se compară legătura anticorpilor monoclonali la tulpinile sălbatice cu legătura anticorpilor monoclonali la tulpinile mamă. O legătură similară indică prezența unor epitopi împărțiți între tulpinile-mamă și cele sălbatice.
   B.   Izolarea și creșterea virusului
   1.   De regulă, se inoculează suspensii filtrate de probe de epiteliu, lichid vezicular sau fecale suspecte de a conține virusul bolii veziculoase a porcului în culturi de celule sensibile. Dacă cantitatea și calitatea probelor prelevate din leziuni și supuse examinării sunt insuficiente pentru examinarea imediată prin ELISA, este necesară creșterea de virus în cultură de țesut pentru a amplifica producția de antigene.
   2.   Pentru a izola și a crește virusul, suspensia epitelială filtrată este inoculată în culturi monostrat de celule IB-RS-2. Trebuie utilizate două diluții de suspensie epitelială, una de concentrație mare (1/500) și una de concentrație mică (1/10), pentru a evita interferența cu virusul crescut pe interferon, a cărui eliberare va interfera cu virusul bolii veziculoase a porcului. Pentru izolarea virusului, se adaugă numai antibiotice în mediul de cultură. Pentru diagnosticul diferențial în raport cu febra aftoasă, trebuie inoculate, de asemenea, celule tiroidiene primare de bovine sau celule renale de pui de hamster (BHK-21).
   3.   Dacă apare un efect citopatic, lichidul supernatant trebuie extras din culturile pozitive, atunci când efectul este complet, și utilizat în testul ELISA pentru identificarea virusului. Culturile negative trebuie inoculate pe culturi de țesut proaspăt de 48 sau 72 de ore, iar acest pasaj orb trebuie examinat după 72 de ore. În absența efectului citopatic, după un pasaj orb ulterior, proba poate fi declarată negativă în ceea ce privește prezența virusului viu.
   4.   Se pot prelucra suspensii de probe de fecale ca în descrierea de la alineatul (1). Întrucât, în general, concentrația de virus din fecale este mai mică decât în epiteliu, este esențial ca, în absența unui efect citopatic la primele două pasaje, să fie inclus un al treilea pasaj orb.
   5.   Inocularea simultană a unei linii celulare porcine și a unuia dintre sistemele de cultură de țesut menționat anterior (de preferat celule tiroidiene bovine primare) este un ghid util pentru a determina dacă probele veziculare conțin virusul bolii veziculoase a porcului sau virusul febrei aftoase, pentru că primul se dezvoltă numai în celule de origine porcină. Cu toate acestea, tulpinile de virus al febrei aftoase cu o istorie îndelungată de transmitere între porci pot, de asemenea, să se dezvolte preferențial în sistemele de culturi celulare de origine porcină.
   C.   Reacția în lanț a polimerazei (RLP) pentru detectarea genomului
   1.   Se pot utiliza metode de recunoaștere a acidului nucleic pentru a detecta genomul virusului bolii veziculoase a porcului în materialul clinic, utilizând RLP, și pentru a stabili legături între tulpinile izolate de virus al bolii veziculoase a porcului, prin determinarea secvenței de nucleotide a unei părți de genom. Au fost puse la punct tehnici care folosesc RLP pentru a se îmbunătăți sensibilitatea diagnosticului. Au fost descrise proceduri de transcriptază-RLP ușor diferite, folosind primeri care corespund unor regiuni intens conservate din genele 1C și 1D.
   2.   Tehnica RLP este rapidă (rezultatele sunt de obicei disponibile în 24 de ore), permite detectarea tuturor genotipurile de virus al bolii veziculoase a porcului și este suficient de sensibilă pentru a se utiliza pe probe prelevate de la cazurile suspecte clinic de boală.
   3.   Atunci când există suspiciunea de infecție sub-clinică sau atunci când probele sunt prelevate după dispariția bolii clinice sau la prelucrarea probelor de fecale, tehnicile RT-RLP perfecționate, cum ar fi RT-RLP de tip „nested”, RLP imună, ELISA-RLP și metode mai elaborate de extracție a ARN, dau naștere unui sistem de detectare cel puțin la fel de sensibil, dar considerabil mai rapid decât pasajul multiplu pe cultura de țesut.
   4.   Prin secvențierea a aproximativ 200 de nucleotide din cadrul genei 1D care codifică proteina structurală majoră VP1, este posibilă gruparea tulpinilor virusului bolii veziculoase a porcului, conform omologiei lor de secvență, precum și a tulpinilor înrudite epidemiologic și care provoacă boli în regiuni diferite sau în perioade diferite.
   D.   Evaluarea rezultatelor testelor virusologice
   Detectarea de antigene sau de genom a virusului bolii veziculoase a porcului prin metodele ELISA sau RLP are aceeași valoare de diagnostic ca și izolarea virusului.
   Cu toate acestea, izolarea virusului trebuie considerată testul de referință și trebuie utilizată ca test de confirmare, dacă este necesar, în special dacă un rezultat pozitiv ELISA sau RLP nu este asociat cu:
   
               (a)
            
            
               detectarea de semne clinice ale bolii;
            
         
               (b)
            
            
               detectarea de porci seropozitivi sau
            
         
               (c)
            
            
               o legătură epidemiologică directă cu un focar confirmat.
            
         CAPITOLUL VIII
   Principiile și aplicațiile testelor serologice și evaluarea rezultatelor acestora
   A.   Testul de neutralizare a virusului (NV)
   1.   Micro-testul cantitativ de neutralizare a virusului (NV) pentru detectarea anticorpilor virusului bolii veziculoase a porcului se efectuează pe celule IB-RS-2 sau pe un sistem de celule echivalent, pe plăci de microtitrare cu fundul plat pentru culturi de țesut.
   2.   Virusul este crescut în monostraturi de celule IB-RS-2 și depozitat fie la -20 °C după adăugarea de glicerol 50 %, fie la -70 °C fără glicerol. Serurile sunt inactivate înaintea testării la 56 °C timp de 30 minute.
   B.   Testele ELISA
   1.   Testul ELISA pentru detectarea anticorpilor este un test ELISA de competiție bazat pe anticorpi monoclonali. Dacă proba de ser conține anticorpi ai virusului bolii veziculoase a porcului, legătura unui anticorp monoclonal selectat conjugat cu peroxidaza cu antigenul virusului bolii veziculoase a porcului va fi inhibată.
   În acest test ELISA, antigenul virusului bolii veziculoase a porcului este blocat în faza solidă utilizându-se anticorpi monoclonali; apoi se incubează probele de ser în diluție corespunzătoare și de adaugă anticorpul monoclonal conjugat cu peroxidaza. Ulterior, se măsoară inhibarea legăturii anticorpului monoclonal cu antigenul bolii veziculoase a porcului cu ajutorul unui substrat și al unui cromogen.
   2.   Testul ELISA indirect de blocare, care folosește anticorpi monoclonali specifici în funcție de izotip pentru a se detecta IgG sau IgM specifice virusului bolii veziculoase a porcului, este util pentru evaluarea timpului de infecție a porcilor sau de contaminare a spațiilor.
   În cazul testului ELISA cu izotip specific, antigenul virusului este blocat în faza solidă folosindu-se un anticorp de captare a antigenului. Dacă proba de ser conține anticorpi pentru virusul bolii veziculoase a porcului, aceștia sunt detectați cu ajutorul unui anticorp IgG antiporc sau IgM antiporc monoclonal conjugat cu peroxidaza. Ulterior, această legătură este măsurată cu ajutorul unui substrat și al unui cromogen.
   Testul ELISA cu izotip specific poate fi util, de asemenea, pentru deosebirea falsului seropozitiv de adevărații porci pozitivi, așa cum se prevede la litera (C).
   C.   Aplicarea testelor serologice și evaluarea rezultatelor
   1.   Testul NV și testul ELISA sunt testele serologice recomandate. Capitolul X enumeră serurile de referință care sunt disponibile la laboratorul comunitar de referință pentru a standardiza testele serologice efectuate în Comunitate.
   Testul NV trebuie considerat testul de referință, însă are dezavantajul că durează 2 sau 3 zile și necesită facilități pentru culturi de țesuturi.
   Testul ELISA este mai rapid și poate fi mai ușor standardizat. Testul ELISA de competiție cu anticorpi monoclonali este cel mai fiabil test ELISA descris până în prezent pentru detectarea anticorpilor bolii veziculoase a porcului. Este recomandat ca test de depistare pentru un număr mare de probe.
   Cu toate acestea, testul NV trebuie utilizat ca test de confirmare, dacă este necesar, în special după prima detectare de probe pozitive într-o fermă. Porcii pozitivi la testul ELISA, dar negativi la testul NV, pot fi ignorați.
   2.   Se poate suspecta prezența unui fals seropozitiv (4) atunci când este detectat un singur porc seropozitiv și când sunt îndeplinite următoarele criterii:
   
               (a)
            
            
               nu există semne clinice de boală în fermă;
            
         
               (b)
            
            
               nu există un istoric relevant de boală clinică în fermă;
            
         
               (c)
            
            
               nu există antecedente de contact cu un focar de boală.
            
         3.   Un porc este confirmat drept fals seropozitiv atunci când:
   
               (a)
            
            
               după testare nu sunt identificați alți porci seropozitivi;
            
         
               (b)
            
            
               prelevarea de probe efectuată la porcii de contact după prima detectare a falsului seropozitiv nu indică seroconversie;
            
         
               (c)
            
            
               titrul de anticorpi pentru o prelevare de probe repetată rămâne constant sau descrește.
            
         4.   Cu toate acestea, următoarele criterii și principii suplimentare trebuie, de asemenea, să fie luate în considerare pentru confirmarea unui fals seropozitiv:
   
               (a)
            
            
               prevalența de falși seropozitivi este de aproximativ 1 la 1 000 de porci;
            
         
               (b)
            
            
               serurile de la falși seropozitivi au în general următorul profil:
               
                           —
                        
                        
                           titrul anticorpilor scăzut la testul NV;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           reacție pozitivă la limită la testul ELISA de competiție pe bază de anticorpi monoclonali;
                        
                     
                           —
                        
                        
                           exclusiv IgM și nici un IgG la testul ELISA cu izotip specific pentru boala veziculoasă a porcului (5).
                        
                     
         CAPITOLUL IX
   Semne clinice și caracteristicile bolii veziculoase a porcului
   Boala veziculoasă a porcului este o boală contagioasă a porcilor produsă de un enterovirus din familia Picornaviridae care poate evolua sub forma veziculoasă sub-clinică, ușoară sau severă, în funcție de tulpina de virus implicată, de calea și doza care au produs infecție, precum și de condițiile de creștere în care au fost ținuți porcii. Factorii de stres suplimentari, precum transportul, aglomerarea cu alți porci și temperaturile extreme, pot, de asemenea, predispune la dezvoltarea de semne clinice.
   Boala se caracterizează printr-o febră ușoară și apariția de vezicule pe bureletul coronarian, pe protuberanțele călcâielor, pe pielea membrelor și, mai puțin frecvent, pe rât, buze, limbă și mameloane. Rata morbidității poate fi de până la 100 %, dar mortalitatea este foarte scăzută sau nulă.
   Infecția se poate dezvolta sub o formă asimptomatică sau ușoară, doar cu o degradare tranzitorie a stării generale a porcilor și care duce la dezvoltarea de anticorpi ce neutralizează virusul în câteva zile (6).
   Din cauza naturii sub-clinice sau ușoare a bolii, suspiciunea apare deseori mai întâi ca urmare a testelor serologice pentru supravegherea bolii sau pentru certificarea exportului. Focarele europene recente de boală veziculoasă a porcului au fost caracterizate prin semne clinice mai puțin severe sau chiar prin lipsa acestora, diagnosticul depinzând adesea de testele serologice.
   Cu toate acestea, semnele clinice ale bolii veziculoase a porcului nu se pot deosebi de cele ale febrei aftoase. Orice formă veziculară trebuie tratată inițial ca suspectă de febră aftoasă, iar diagnosticul diferențial trebuie obținut cât mai curând posibil.
   Perioada de incubație a bolii veziculoase a porcului la porcii individuali este, de obicei, între 2 și 7 zile, după care urmează o febră pasageră de până la 41 °C, dar semnele clinice pot deveni evidente în fermă după o perioadă mai lungă. Veziculele se dezvoltă apoi pe bureletul coronarian, în special la joncțiunea cu călcâiul. Acestea pot afecta întregul burelet coronarian, ducând la pierderea copitei. Mult mai rar veziculele pot, de asemenea, să apară pe rât, în special pe suprafața dorsală, pe buze, pe limbă și pe mameloane, iar răni superficiale pot fi observate și pe genunchi. Porcii afectați pot șchiopăta și pot refuza hrana câteva zile.
   Porcii mai tineri sunt mult mai sever afectați, deși mortalitatea cauzată de boala veziculoasă a porcului este foarte rară, spre deosebire de cea dată de febra aftoasă la efectivul tânăr.
   Au fost raportate semne de nervozitate, dar acestea sunt neobișnuite. Avortul nu este o caracteristică tipică a bolii veziculoase a porcului. Insuficiența cardiacă datorată miocarditei multifocale poate fi o caracteristică a febrei aftoase și a encefalomiocarditei, în special la purceii tineri, dar nu apare în boala veziculoasă a porcului.
   Vindecarea este, de obicei, completă în 2 sau 3 săptămâni, singura urmă a infecției fiind o linie orizontală, întunecată, pe copită, acolo unde creșterea acesteia a fost întreruptă temporar.
   Porcii afectați pot excreta virusul prin orificiile nazale și pe gură și prin fecale, cu 48 de ore înainte de manifestarea semnelor clinice. Cea mai mare cantitate de virus este produsă în primele 7 zile după infecție, iar excreția de virus prin orificiile nazale și pe gură se oprește, în mod normal, după două săptămâni. Virusul poate fi izolat din fecale timp de până la 20 de zile după infectare, deși a fost semnalată prezența sa până la 3 luni. Acesta poate persista pentru o perioadă considerabilă în țesutul necrozat asociat cu vezicule rupte și în fecale.
   CAPITOLUL X
   Seruri de referință pentru boala veziculoasă a porcului
   
               Ser de referință
            
            
               Origine
            
            
               Comentariu (7)
               
            
         
               1
            
            
               Ser normal de porc (SNP)
            
            
               Ser de control negativ
            
         
               2
            
            
               Ser colectat la 21 de zile post infecție (zpi) de la porci infectați cu tulpina virusului bolii veziculoase a porcului UKG 27/72 (net)
            
            
               Ser de control intens pozitiv
            
         
               3
            
            
               Diluție de 1:10 în SNP a unui ser colectat după 5 zpi de la un porc infectat cu tulpina bolii veziculoase a porcului Italia 8/94
            
            
               Un ser slab pozitiv prelevat de la un porc imediat după infectarea cu o tulpină de virus europeană recentă a bolii veziculoase a porcului. Serul a fost diluat pentru a da un rezultat slab pozitiv la testul ELISA și la testul NV.
            
         
               4
            
            
               Diluție de 1:40 a unui ser colectat după 21 zpi de la un porc infectat cu tulpina virusului bolii veziculoase a porcului UKG 27/72
            
            
               Un ser slab pozitiv care definește nivelul cel mai scăzut de anticorpi pe care laboratoarele naționale de referință ale Uniunii Europene ar trebui să îl evidențieze ca fiind consistent pozitiv prin metoda ELISA și prin metoda de neutralizare a virusului.
               Echivalent cu serul RS 01-04-94 (8).
            
         
               5
            
            
               Ser colectat după 4 zpi de la un porc infectat cu tulpina virusului bolii veziculoase a porcului UKG 27/72 (net)
            
            
               Un ser slab pozitiv prelevat de la un porc imediat după infectare.
            
         
               6
            
            
               Ser colectat după 5 zpi de la un porc infectat cu tulpina virusului bolii veziculoase a porcului UKG 27/72 (net)
            
            
               Un ser slab pozitiv prelevat de la un porc imediat după infectare.
            
         
      (1)  JO L 224, 18.8.1990, p. 19.
   
      (2)  JO L 224, 18.8.1990, p. 29.
   
      (3)  Rezultatele pozitive ELISA sunt asociate cu prezența a cel puțin 105 TCID50 (doze infecțioase de cultură de țesut) de virus în probă.
   
      (4)  Un număr mic de reactivi fals seropozitivi poate fi detectat prin orice test serologic curent utilizat pentru boala veziculoasă a porcului. Factorii responsabili pentru apariția falșilor seropozitivi sunt necunoscuți. Reactivitatea serologică încrucișată cu virusul bolii veziculoase a porcului poate apărea din cauza infectării cu un alt picornavirus, încă neidentificat, sau poate fi datorată altor factori nespecifici prezenți în ser.
   
      (5)  Numai IgG specifică sau atât IgG, cât și IgM sunt, de obicei, detectate în probe de ser de la porcii infectați cu virusul bolii veziculoase a porcului, în vreme ce serul de la falșii pozitivi conține în general numai IgM. IgG specific nu va fi detectată în probele de ser de la porcii infectați cu virusul bolii veziculoase a porcului într-o perioadă de până la 10 sau 14 zile, deși IgG specifică trebuie să fie detectată în a doua probă de sânge. Cu toate acestea, porcii infectați recent nu pot fi deosebiți cu siguranță de falșii seropozitivi înainte ca răspunsul imun al acestora să treacă de la producerea de IgM la cea de IgG. A se vedea, de asemenea, capitolul IX și nota de subsol 7.
   
      (6)  De obicei, IgM specifică poate fi detectată în sânge în 2 sau 3 zile după infectare și dispare după 30 până la 50 de zile; de regulă, IgG specifică poate fi detectată în sânge în 10-14 zile după infecție și persistă câțiva ani. Ig izotip poate fi determinată prin intermediul testului ELISA descris în capitolul VIII litera (B) alineatul (2).
   
      (7)  Aceste comentarii se referă la testarea porcilor individuali. Pentru supravegherea serologică, trebuie să se țină seama de sensibilitatea testului utilizat.
   
      (8)  Adică un ser cu un titru suficient mai mare față de cel al serului de blocare care să producă întotdeauna un rezultat pozitiv la testele ELISA și NV la testarea repetată.