CELEX: 32007R0702
Language: de
Date: 2007-06-21 00:00:00
Title: Verordnung (EG) Nr. 702/2007 der Kommission vom 21. Juni 2007 zur Änderung der Verordnung (EWG) Nr. 2568/91 über die Merkmale von Olivenölen und Oliventresterölen sowie die Verfahren zu ihrer Bestimmung

22.6.2007   
            
            
               DE
            
            
               Amtsblatt der Europäischen Union
            
            
               L 161/11
            
         
      VERORDNUNG (EG) Nr. 702/2007 DER KOMMISSION
   
   vom 21. Juni 2007
   zur Änderung der Verordnung (EWG) Nr. 2568/91 über die Merkmale von Olivenölen und Oliventresterölen sowie die Verfahren zu ihrer Bestimmung
   DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
   gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft,
   gestützt auf die Verordnung (EG) Nr. 865/2004 des Rates vom 29. April 2004 über die gemeinsame Marktorganisation für Olivenöl und Tafeloliven und zur Änderung der Verordnung (EWG) Nr. 827/68 (1), insbesondere auf Artikel 5 Absatz 3,
   in Erwägung nachstehender Gründe:
   
               (1)
            
            
               In der Verordnung (EWG) Nr. 2568/91 der Kommission (2) sind die physikalischen und chemischen Merkmale von Olivenölen und Oliventresterölen sowie die Verfahren zur Bestimmung dieser Merkmale festgelegt. Diese Verfahren sowie die Grenzwerte für die Merkmale von Olivenölen müssen unter Berücksichtigung des Gutachtens der Chemie-Sachverständigen und im Einklang mit den Arbeiten im Rahmen des Internationalen Olivenölrats aktualisiert werden.
            
         
               (2)
            
            
               Die Chemie-Sachverständigen sind insbesondere der Auffassung, dass die veresterten Öle durch die Analyse des prozentualen Gehalts an 2-Glycerinmonopalmitat genauer bestimmt werden können. Die Herabsetzung des Grenzwerts für Stigmastadien in nativen Olivenölen erlaubt auch eine bessere Trennung von nativen und raffinierten Olivenölen.
            
         
               (3)
            
            
               Im Interesse des reibungslosen Übergangs zur neuen Regelung und bis alle für die Anwendung der Regelung erforderlichen Mittel bereitstehen, sollte, auch um den Handel nicht zu beeinträchtigen, diese Verordnung erst ab 1. Januar 2008 gelten. Aus denselben Gründen ist vorzusehen, dass Olivenöle und Oliventresteröle, die vor dem genannten Zeitpunkt rechtmäßig in der Gemeinschaft hergestellt und etikettiert oder rechtmäßig in die Gemeinschaft eingeführt und in den freien Verkehr übergeführt werden, in Verkehr gebracht werden dürfen, bis die Lagerbestände verbraucht sind.
            
         
               (4)
            
            
               Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der Stellungnahme des Verwaltungsausschusses für Olivenöl und Tafeloliven —
            
         HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:
   Artikel 1
   Die Verordnung (EWG) Nr. 2568/91 wird wie folgt geändert:
   
               1.
            
            
               Artikel 2 Absatz 1 sechster Gedankenstrich erhält folgende Fassung:
               
                           „—
                        
                        
                           prozentualer Anteil an 2-Glycerinmonopalmitat nach dem Verfahren des Anhangs VII“.
                        
                     
         
               2.
            
            
               Die Anhänge werden gemäß dem Anhang der vorliegenden Verordnung geändert.
            
         Artikel 2
   Diese Verordnung tritt am dritten Tag nach ihrer Veröffentlichung im Amtsblatt der Europäischen Union in Kraft.
   Sie gilt ab 1. Januar 2008.
   Erzeugnisse, die vor dem 1. Januar 2008 rechtmäßig in der Gemeinschaft hergestellt und etikettiert oder rechtmäßig in die Gemeinschaft eingeführt und in den freien Verkehr übergeführt werden, dürfen jedoch in Verkehr gebracht werden, bis die Lagerbestände verbraucht sind.
   
      Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmittelbar in jedem Mitgliedstaat.
      Brüssel, den 21. Juni 2007
      
         
            Für die Kommission
         
         Mariann FISCHER BOEL
         
         
            Mitglied der Kommission
         
      
   
   
      (1)  ABl. L 161 vom 30.4.2004, S. 97. Berichtigung im ABl. L 206 vom 9.6.2004, S. 37.
   
      (2)  ABl. L 248 vom 5.9.1991, S. 1. Verordnung zuletzt geändert durch die Verordnung (EG) Nr. 1989/2003 (ABl. L 295 vom 13.11.2003, S. 57).
   
      ANHANG
      Die Anhänge der Verordnung (EWG) Nr. 2568/91 werden wie folgt geändert:
      
                  1.
               
               
                  Das Inhaltsverzeichnis wird wie folgt geändert:
                  
                              a)
                           
                           
                              Der Titel von Anhang II erhält folgende Fassung:
                              „Bestimmung der freien Fettsäuren, Kaltverfahren“;
                           
                        
                              b)
                           
                           
                              der Titel von Anhang VII erhält folgende Fassung:
                              „Bestimmung des prozentualen Gehalts an 2-Glycerinmonopalmitat“.
                           
                        
            
                  2.
               
               
                  Anhang I erhält folgende Fassung:
                  
                     „ANHANG I
                     MERKMALE VON OLIVENÖLEN
                     Anmerkungen:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 Die Analyseergebnisse müssen bis auf die gleiche Anzahl Dezimalstellen angegeben werden wie die für jedes Merkmal vorgesehenen Werte.
                                 Beträgt die nächstfolgende Dezimalstelle über 4, so ist die angegebene letzte Stelle hinter dem Komma aufzurunden.
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 Auch wenn nur ein einziges Merkmal nicht mit dem vorgesehenen Grenzwert übereinstimmt, muss das Öl einer anderen Kategorie zugeordnet werden oder als nicht seinen Reinheitskriterien entsprechend erklärt werden.
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 Die mit einem Sternchen (*) gekennzeichneten Ölqualitätsmerkmale bedeuten:
                                 
                                             —
                                          
                                          
                                             im Falle von Lampantöl, dass die betreffenden Grenzwerte nicht alle gleichzeitig erfüllt werden müssen;
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             im Falle nativer Olivenöle, dass die Nichterfüllung des Grenzwerts auch nur eines einzigen Merkmals eine Umstufung innerhalb der Kategorie der nativen Olivenöle zur Folge hat.
                                          
                                       
                           
                                 d)
                              
                              
                                 Die mit zwei Sternchen (**) gekennzeichneten Ölqualitätsmerkmale bedeuten im Fall der betreffenden Oliventresteröle, dass die jeweiligen Grenzwerte nicht alle gleichzeitig erfüllt werden müssen.“
                              
                           
                                 Kategorie
                              
                              
                                 Säuregehalt
                                 (%) (*)
                              
                              
                                 Peroxidzahl und
                                 meq O2/kg (*)
                              
                              
                                 Wachse
                                 mg/kg (**)
                              
                              
                                 2-Glycerinmonopalmitat
                                 (%)
                              
                              
                                 Stigmastadien
                                 mg/kg (1)
                                 
                              
                              
                                 ECN42-Differenz zwischen HPLC-Messwert und theoretischer Berechnung
                              
                              
                                 K232 (*)
                              
                              
                                 K270 (*)
                              
                              
                                 Delta-K (*)
                              
                              
                                 Sensorische Prüfung Fehlermedian
                                 (Md) (*)
                              
                              
                                 Sensorische Prüfung Fruchtigkeitsmedian
                                 (Mf) (*)
                              
                           
                                 
                                             1.
                                          
                                          
                                             Natives Olivenöl extra
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,8
                              
                              
                                 ≤ 20
                              
                              
                                 ≤ 250
                              
                              
                                 ≤ 0,9 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % ≤ 14
                                 ≤ 1,0 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % > 14
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 2,50
                              
                              
                                 ≤ 0,22
                              
                              
                                 ≤ 0,01
                              
                              
                                 Md = 0
                              
                              
                                 Mf > 0
                              
                           
                                 
                                             2.
                                          
                                          
                                             Natives Olivenöl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 2,0
                              
                              
                                 ≤ 20
                              
                              
                                 ≤ 250
                              
                              
                                 ≤ 0,9 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % ≤ 14
                                 ≤ 1,0 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % > 14
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 2,60
                              
                              
                                 ≤ 0,25
                              
                              
                                 ≤ 0,01
                              
                              
                                 Md ≤ 2,5
                              
                              
                                 Mf > 0
                              
                           
                                 
                                             3.
                                          
                                          
                                             Lampantöl
                                          
                                       
                              
                                 > 2,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 300 (3)
                                 
                              
                              
                                 ≤ 0,9 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % ≤ 14
                                 ≤ 1,1 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % > 14
                              
                              
                                 ≤ 0,50
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 Md > 2,5 (2)
                                 
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             4.
                                          
                                          
                                             Raffiniertes Olivenöl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 5
                              
                              
                                 ≤ 350
                              
                              
                                 ≤ 0,9 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % ≤ 14
                                 ≤ 1,1 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % > 14
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 1,10
                              
                              
                                 ≤ 0,16
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             5.
                                          
                                          
                                             Olivenöl — bestehend aus raffinierten und nativen Olivenölen
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 15
                              
                              
                                 ≤ 350
                              
                              
                                 ≤ 0,9 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % ≤ 14
                                 ≤ 1,0 wenn Gesamtgehalt an Palmitinsäure % > 14
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,90
                              
                              
                                 ≤ 0,15
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             6.
                                          
                                          
                                             Rohes Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 > 350 (4)
                                 
                              
                              
                                 ≤ 1,4
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             7.
                                          
                                          
                                             Raffiniertes Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 5
                              
                              
                                 > 350
                              
                              
                                 ≤ 1,4
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 2,00
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             8.
                                          
                                          
                                             Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 15
                              
                              
                                 > 350
                              
                              
                                 ≤ 1,2
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 1,70
                              
                              
                                 ≤ 0,18
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                        
                     
                                 Kategorie
                              
                              
                                 Gehalt an Fettsäuren (5)
                                 
                              
                              
                                 Summe trans-Isomere Ölsäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Summe trans- Isomere Linol und Linolensäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Zusammensetzung der Sterine
                              
                              
                                 Sterine insgesamt
                                 (mg/kg)
                              
                              
                                 Erythrodiol und Uvaol
                                 (%) (**)
                              
                           
                                 Myristinsäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Linolensäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Arachninsäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Eicosensäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Behensäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Lignocerinsäure
                                 (%)
                              
                              
                                 Cholesterin
                                 (%)
                              
                              
                                 Brassicasterin
                                 (%)
                              
                              
                                 Campesterin
                                 (%)
                              
                              
                                 Stigmasterin
                                 (%)
                              
                              
                                 Beta-Sitosterin
                                 (%) (6)
                                 
                              
                              
                                 Delta-7-Stigmasterin
                                 (%)
                              
                           
                                 
                                             1.
                                          
                                          
                                             Natives Olivenöl extra
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             2.
                                          
                                          
                                             Natives Olivenöl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             3.
                                          
                                          
                                             Lampantöl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5 (7)
                                 
                              
                           
                                 
                                             4.
                                          
                                          
                                             Raffiniertes Olivenöl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,30
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             5.
                                          
                                          
                                             Olivenöl — bestehend aus raffinierten und nativen Olivenölen
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,30
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             6.
                                          
                                          
                                             Rohes Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 2 500
                              
                              
                                 > 4,5 (8)
                                 
                              
                           
                                 
                                             7.
                                          
                                          
                                             Raffiniertes Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,40
                              
                              
                                 ≤ 0,35
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 800
                              
                              
                                 > 4,5
                              
                           
                                 
                                             8.
                                          
                                          
                                             Oliventresteröl
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,40
                              
                              
                                 ≤ 0,35
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < Camp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 600
                              
                              
                                 > 4,5
                              
                           
               
            
                  3.
               
               
                  Anlage 1 wird wie folgt geändert:
                  
                              a)
                           
                           
                              Der erste Gedankenstrich erhält folgende Fassung:
                              
                                          
                                                      „—
                                                   
                                                   
                                                      Säuregehalt
                                                   
                                                
                                       
                                          Anhang II
                                       
                                       
                                          Bestimmung des Gehalts an freien Fettsäuren, Kaltverfahren“;
                                       
                                    
                        
                              b)
                           
                           
                              der 13. Gedankenstrich erhält folgende Fassung:
                              
                                          
                                                      „—
                                                   
                                                   
                                                      Gesättigte Fettsäuren in 2-Stellung
                                                   
                                                
                                       
                                          Anhang VII
                                       
                                       
                                          Bestimmung des prozentualen Gehalts an 2-Glycerinmonopalmitat“.
                                       
                                    
                        
            
                  4.
               
               
                  Der Titel von Anhang II erhält folgende Fassung:
               
            
                  5.
               
               
                  Anhang IV erhält folgende Fassung:„
                     ANHANG IV
                     KAPILLARGASCHROMATOGRAFISCHE BESTIMMUNG DES WACHSGEHALTS
                     1.   GEGENSTAND
                     Diese Arbeitsvorschrift beschreibt ein Verfahren zur Bestimmung des Wachsgehalts von Olivenölen. Die Wachse werden nach der Zahl der Kohlenstoffatome getrennt. Das Verfahren kann insbesondere zur Unterscheidung zwischen abgepresstem und extrahiertem Olivenöl (Oliventresteröl) verwendet werden.
                     2.   PRINZIP
                     Das Fett wird mit einem geeigneten internen Standard versetzt und chromatografisch über eine Kieselgelsäule fraktioniert; die unter Versuchsbedingungen zuerst eluierte Fraktion (schwächerer Polarität als Triglyceride) wird gesammelt und sofort kapillargaschromatografisch analysiert.
                     3.   GERÄTE
                     3.1.   Erlenmeyerkolben, 25 ml
                     3.2.   Glassäule für Gaschromatografie, Innendurchmesser 15,0 mm, Länge 30—40 cm, mit Hahn
                     3.3.   Gaschromatograf, geeignet für die Verwendung von Kapillarsäulen, mit Direkteinspritzung, bestehend aus:
                     3.3.1.   Säulenofen mit Temperaturprogrammierung
                     3.3.2.   Kalteinspritzsystem zur Direktaufgabe der Probe auf die Säule
                     3.3.3.   Flammenionisationsdetektor mit Verstärker
                     3.3.4.   Integrator mit Schreiber, mit Verstärker (3.3.3) zu koppeln, Ansprechzeit max. 1 Sekunde, variabler Papiervorschub. (Es können auch Informatiksysteme verwendet werden, bei denen die GC-Daten mittels PC erfasst werden.)
                     3.3.5.   Glaskapillarsäule oder Fused-silica-Säule, Länge 8—12 m, Innendurchmesser 0,25—0,32 mm, Innenwand belegt mit Trennflüssigkeit, gleichmäßige Schichtdicke zwischen 0,10 und 0,30 μm. (Geeignete Trennflüssigkeiten vom Typ SE 52 oder SE 54 sind im Handel erhältlich.)
                     3.4.   Mikroliterspritze, 10 μl, zur Direkteinspritzung in die Säule, mit gehärteter Nadel
                     3.5.   Elektrorührwerk
                     3.6.   Rotationsverdampfer
                     3.7.   Muffelofen
                     3.8.   Analysenwaage mit einer Messgenauigkeit von + 0,1 mg
                     3.9.   Übliche Laborgeräte.
                     4.   REAGENZIEN
                     4.1.   Kieselgel mit einer Korngröße zwischen 60 und 200 μm
                     Das Kieselgel wird im Muffelofen vier Stunden auf eine Temperatur von 500 °C erhitzt und nach dem Abkühlen mit 2 % Wasser, bezogen auf die betreffende Menge Kieselgel, versetzt. Durch gründliches Schütteln homogenisieren. Vor Gebrauch mindestens 12 Stunden im Dunkeln aufbewahren.
                     4.2.   n-Hexan, zur Chromatografie
                     4.3.   Ethylether, zur Chromatografie
                     4.4.   n-Heptan, zur Chromatografie
                     4.5.   Standardlösung aus Laurylarachidat 0,1 % (m/V) in Hexan (interner Standard) (Es kann auch Palmitylpalmitat oder Myristylstearat verwendet werden.)
                     4.5.1.   Sudan 1 (1-Pheny-azo-2-naphthol)
                     4.6.   Trägergas: Wasserstoff oder Helium, rein, zur Gaschromatografie
                     4.7.   Hilfsgase
                     
                                 —
                              
                              
                                 Wasserstoff, rein, zur Gaschromatografie
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Luft, rein, zur Gaschromatografie
                              
                           5.   VERFAHREN
                     5.1.   Vorbereiten der Chromatografiesäule
                     15 g Kieselgel (4.1) werden in n-Hexan (4.2) suspendiert und in die Säule (3.2) aufgegeben. Nach der Spontansedimentation wird die Phase mit einem Elektrorührwerk (3.5) nachbehandelt, um eine möglichst homogene Chromatografieschicht zu erzielen, und zur Entfernung etwa enthaltener Verunreinigungen wird mit 30 ml n-Hexan gespült. Genau 500 mg der Probe werden mithilfe der Waage (3.8) in den 25-ml-Erlenmeyerkolben (3.1) eingewogen und entsprechend dem vermuteten Wachsgehalt mit der geeigneten Menge interner Standardlösung (4.5) versetzt. So werden z. B. bei Olivenöl 0,1 mg Laurylarachidat und bei Oliventresteröl 0,25 bis 0,5 mg zugesetzt. Die derart gewonnene Probe wird unter Verwendung von je zwei Teilen 2 ml n-Hexan (4.2) in die Chromatografiesäule überführt.
                     Das Lösungsmittel bis zu einem Stand von 1 mm über der oberen Absorbensgrenzfläche ablaufen lassen und dann zur Entfernung der natürlich enthaltenen n-Alkane noch mit 70 ml n-Hexan spülen. Mit der chromatografischen Elution beginnen und 180 ml des n-Hexan/Ethylether-Gemischs, Verhältnis 99:1, bei einem Durchsatz von etwa 15 Tropfen/10 Sekunden auffangen. Die Elution der Probe ist bei einer Umgebungstemperatur von 22 ± 4 °C durchzuführen.
                     Anmerkungen:
                     
                                 —
                              
                              
                                 Das n-Hexan/Ethylethergemisch (99:1) muss jeden Tag frisch zubereitet werden.
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Für eine visuelle Kontrolle der Elution der Wachse können der gelösten Probe 100 μl Sudan (1 % im Elutionsmittel) zugesetzt werden. Die Retentionszeit des Farbstoffs liegt zwischen derjenigen der Wachse und derjenigen der Triglyceride. Wenn die Färbung das Ende der Säule erreicht, sind daher alle Wachse eluiert und die Elution kann beendet werden.
                              
                           Die derart gewonnene Fraktion wird im Rotationsverdampfer (3.6) so lange getrocknet, bis das Lösungsmittel nahezu restlos verdampft ist, wobei die letzten 2 ml im schwachen Stickstoffstrom abgeblasen werden; der Trocknungsrückstand wird mit 2—4 ml n-Heptan versetzt.
                     5.2.   Gaschromatografische Analyse
                     5.2.1.   Vorarbeiten
                     Die Säule in den Gaschromatografen (3.3) einsetzen, wobei der Säulenanfang an das On-column-System und das Säulenende an den Detektor angeschlossen wird. Sodann ist der Gaschromatograf auf Dichtigkeit der Gasleitungen, Betriebsbereitschaft des Detektors und des Schreibers usw. zu überprüfen.
                     Wird die Säule zum ersten Mal verwendet, wird empfohlen, sie einzufahren. Einen schwachen Gasstrom durch die Säule geben, den Gaschromatografen einschalten und allmählich über einen Zeitraum von etwa 4 Stunden auf eine Temperatur von 350 °C aufheizen. Die Temperatur ist mindestens 2 Stunden konstant zu halten; sodann sind die Analysebedingungen einzustellen (Gasstrom, Zünden der Flamme, Anschluss an den elektronischen Schreiber (3.3.4), Temperatur des Säulenofens, des Detektors usw.). Anschließend das Signal mit einer Empfindlichkeit aufzeichnen, die mindestens doppelt so groß ist wie bei Durchführung der Analyse. Die Grundlinie muss linear verlaufen, ohne Peaks oder Drift.
                     Eine negative Drift ist ein Indiz für einen undichten Anschluss der Säule, eine positive deutet auf ein mangelhaftes Einfahren der Säule hin.
                     5.2.2.   Wahl der Arbeitsbedingungen
                     Anhaltspunkte für die Arbeitsbedingungen:
                     
                                 —
                              
                              
                                 Säulentemperatur:
                                 
                                              
                                          
                                          
                                             20 °C/Min.
                                          
                                          
                                              
                                          
                                          
                                             5 °C/Min.
                                          
                                          
                                              
                                          
                                          
                                             20 °C/Min.
                                          
                                          
                                              
                                          
                                       
                                             Ausgangstemperatur 80 °C
                                             (1′)
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             240 °C
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             325 °C
                                             (6′)
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             340 °C
                                             (10′)
                                          
                                       
                           
                                 —
                              
                              
                                 Detektortemperatur: 350 °C
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Einspritzvolumen: 1 μl der n-Heptanlösung (2—4 ml)
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Trägergas: Helium oder Wasserstoff mit der für das gewählte Gas optimalen linearen Strömungsgeschwindigkeit (vgl. Anlage)
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Geräteempfindlichkeit, die den nachstehenden Bedingungen genügt:
                              
                           Diese Bedingungen können je nach Beschaffenheit der Säule und des Gaschromatografen abgewandelt werden, damit eine Trennung aller Wachse und eine ausreichende Auflösung der Peaks (siehe Abbildung) erzielt werden. Die Retentionszeit des internen Standards C32 muss 18 ± 3 Minuten betragen, und der größte Wachspeak muss mindestens 60 % des Vollausschlags erreichen.
                     Die Parameter für die Peakintegration sind so zu wählen, dass für die in Betracht kommenden Peaks korrekte Werte erzielt werden.
                     
                        Anmerkung: In Anbetracht der hohen Endtemperatur ist eine positive Drift von höchstens 10 % der Skala zulässig.
                     5.3.   Durchführung der Analyse
                     Mit der 10-μl-Spritze 1 μl Probelösung aufziehen und dabei den Kolben der Spritze so weit einziehen, dass die Nadel leer ist. Die Nadel in das Einspritzsystem einführen, nach 1—2 Sekunden schnell einspritzen, dann nach etwa 5 Sekunden die Nadel langsam herausziehen.
                     Das Chromatogramm aufzeichnen, bis alle vorhandenen Wachse eluiert sind.
                     Die Grundlinie muss stets den vorgeschriebenen Anforderungen genügen.
                     5.4.   Identifizierung der Peaks
                     Die Peaks werden anhand der Retentionszeiten durch Vergleich mit Wachsgemischen identifiziert, deren Retentionszeiten bekannt sind und die unter denselben Bedingungen analysiert wurden.
                     Die Abbildung zeigt ein Chromatogramm der Wachsfraktion eines nativen Olivenöls.
                     5.5.   Quantitative Bestimmung
                     Die Peakflächen des internen Standards und der aliphatischen C40- bis C46-Ester werden mithilfe eines Integrators ermittelt.
                     Der Wachsgehalt jedes einzelnen Esters in mg/kg Fett wird nach folgender Formel berechnet:
                     
                        
                     Dabei ist:
                     
                                 Ax
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 jeweilige Ester-Peakfläche, in mm2
                                 
                              
                           
                                 As
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 die Peakfläche des internen Standards, in mm2
                                 
                              
                           
                                 ms
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 das Gewicht des zugegebenen internen Standards, in mg
                              
                           
                                 m
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 Masse der zur Bestimmung entnommenen Probe in g.
                              
                           6.   DARSTELLUNG DER ERGEBNISSE
                     Die Summe der Gehalte an den einzelnen Wachsen von C40 bis C46 wird in mg/kg Fett (ppm) angegeben.
                     
                        Anmerkung Die mengenmäßig zu bestimmenden Bestandteile sind an den Peaks der Ester mit gerader Kohlenstoffzahl von C40 bis C46 abzulesen, wie als Beispiel im nachstehenden Chromatogramm der Wachse von Olivenöl dargestellt. Wenn der C46-Ester doppelt erscheint, ist zur Identifizierung die Wachsfraktion eines Oliventresteröls zu analysieren, bei dem der C46-Peak deutlich überwiegt und daher leicht zu erkennen ist.
                     Die Ergebnisse werden mit einer Dezimalstelle angegeben.
                     
                        Abbildung
                     
                     Chromatogramm der Wachsfraktion eines Olivenöls (9)
                     
                     
                        
                  
                  
                     Anlage
                     Bestimmung der linearen Strömungsgeschwindigkeit
                     In den auf Normalbedingungen eingestellten Gaschromatografen werden 1—3 μl Methan (oder Propan) eingespritzt, und die Säulendurchlaufzeit des Gases wird vom Zeitpunkt des Einspritzens bis zum Peak-Austritt (tM) gemessen.
                     Die lineare Strömungsgeschwindigkeit in cm/s ist durch die Beziehung L/tM definiert; dabei ist L die Länge der Säule in cm und tM die gemessene Zeit in Sekunden.
                  “
            
                  6.
               
               
                  Anhang VII erhält folgende Fassung:
                  
                     „ANHANG VII
                     BESTIMMUNG DES PROZENTUALEN GEHALTS AN 2-GLYCERINMONOPALMITAT
                     1.   GEGENSTAND UND ANWENDUNGSBEREICH
                     Diese Arbeitsvorschrift beschreibt das Analyseverfahren für die Bestimmung des prozentualen Gehalts an Palmitinsäure in 2-Stellung der Triglyceride mittels Bestimmung von 2-Glycerinmonopalmitat.
                     Die Methode eignet sich für bei Raumtemperatur (20 °C) flüssige pflanzliche Öle.
                     2.   PRINZIP
                     Die vorbereitete Olivenölprobe wird der Wirkung der Pankreaslipase ausgesetzt. Die hierdurch bewirkte partielle und spezifische Hydrolyse an den Positionen 1 und 3 des Triglyceridmoleküls ergibt ein 2-Monoglycerid. Der prozentuale Gehalt an 2-Glycerinmonopalmitat in der Monoglyceridfraktion wird nach Silylierung durch Kapillargaschromatografie bestimmt.
                     3.   GERÄTE UND LABORAUSSTATTUNG
                     3.1.   Erlenmeyerkolben, 25 ml
                     3.2.   Bechergläser, 100 ml, 250 ml und 300 ml
                     3.3.   Glassäule für Chromatografie, 21—23 mm Innendurchmesser, 400 mm Länge, mit gläsernem Frittenboden und Hahn
                     3.4.   Messkolben, 10, 50, 100 und 200 ml
                     3.5.   Rundkolben, 100 ml und 250 ml
                     3.6.   Rotationsverdampfer
                     3.7.   Zentrifugengläser mit konischem Boden, 10 ml, mit Schliffstopfen
                     3.8.   Zentrifuge für 10- und 100-ml-Gläser
                     3.9.   Thermostat, einstellbar auf 40 °C mit einer Genauigkeit von ± 0,5 °C
                     3.10.   Messpipetten, 1 ml und 2 ml
                     3.11.   Injektionsspritze, 1 ml
                     3.12.   Mikroliterspritze, 100 μl
                     3.13.   Trichter, 1 000 ml
                     3.14.   Kapillargaschromatograf mit ‚Cold-on-column‘-Injektor zur Direkteinspritzung der Probe in die Säule und mit auf 1 °C genau einstellbarem Ofen
                     3.15.   ‚Cold-on-column‘-Injektor zur Direkteinspritzung der Probe in die Säule
                     3.16.   Flammenionisationsdetektor und Elektrometer
                     3.17.   Für das Elektrometer geeigneter Integrator mit Schreiber, Ansprechzeit max. 1 Sekunde, variabler Papiervorschub
                     3.18.   Glaskapillarsäule oder Fused-silica-Säule, Länge 8—12 m, Innendurchmesser 0,25—0,32 mm, beschichtet mit Methylpolysiloxan oder Phenylmethylpolysiloxan 5 %, Schichtdicke 0,10—030 μm, verwendbar bis 370 °C
                     3.19.   Mikroliterspritze, 10 μl, mit gehärteter Nadel, Länge mindestens 7,5 cm, für Direkteinspritzung.
                     4.   REAGENZIEN
                     4.1.   Kieselgel mit einer Korngröße zwischen 0,063 und 0,200 mm (70/280 mesh), hergestellt wie folgt: Kieselgel in eine Porzellanschale geben, im Trockenschrank 4 Stunden bei 160 °C trocknen, anschließend im Exsikkator auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Ein 5 % der Kieselgelmasse entsprechendes Volumen Wasser wie folgt zugeben: 152 g Kieselgel in einen 500-ml-Erlenmeyerkolben einwiegen, 8 g destilliertes Wasser zugeben, den Kolben verschließen und leicht schütteln, bis eine gleichmäßige Verteilung des Wassers erreicht ist. Vor der Verwendung mindestens 12 Stunden ruhen lassen.
                     4.2.   n-Hexan, zur Chromatografie
                     4.3.   Isopropanol
                     4.4.   Isopropanol, wässrige Lösung 1/1 (V/V)
                     4.5.   Pankreaslipase: Die verwendete Lipase muss eine Aktivität zwischen 2,0 und 10 Lipaseeinheiten je mg haben (Pankreaslipasen mit einer Aktivität zwischen 2 und 10 Einheiten je mg Enzym sind im Handel erhältlich).
                     4.6.   tris-Hydroxymethylaminomethan-Pufferlösung: 1 M wässrige Lösung durch Zusatz von konzentrierter HCl (1/1 V/V) auf pH 8 gebracht (durch Potenziometer überprüfen)
                     4.7.   Natriumcholat, Enzymqualität, 0,1 %ige wässrige Lösung (diese Lösung ist innerhalb von 15 Tagen nach ihrer Herstellung zu verbrauchen)
                     4.8.   Calciumchlorid, 22 %ige wässrige Lösung
                     4.9.   Diethylether, zur Chromatografie
                     4.10.   Elutionsmittel: Gemisch von n-Hexan/Diethylether (87/13) (V/V)
                     4.11.   Natriumhydroxid, 12-Gew. %-Lösung
                     4.12.   Phenolphthalein, 1 %ige Lösung in Ethanol
                     4.13.   Trägergas: Wasserstoff oder Helium, zur Gaschromatografie
                     4.14.   Hilfsgase: Wasserstoff, Reinheit mindestens 99 %, frei von Feuchtigkeit und organischen Stoffen, und Luft, gleicher Reinheitsgrad, zur Gaschromatografie
                     4.15.   Silylierungsreagenz: Gemisch von Pyridin, Hexamethyldisilazan und Trimethylchlorsilan im Verhältnis 9/3/1 (V/V/V). (Gebrauchsfertige Lösungen sind im Handel erhältlich. Daneben gibt es auch andere Silylierungsreagenzien, z. B. bis-Trimethylsilyltrifluoracetamid + 1 % Trimethylchlorsilan, das mit gleichen Teilen wasserfreiem Pyridin gemischt werden muss.)
                     4.16.   Referenzproben: reine Monoglyceride oder Gemische von Monoglyceriden mit bekannter Zusammensetzung, die möglichst der Zusammensetzung der Probe ähnlich ist.
                     5.   VERFAHREN
                     5.1.   Vorbereiten der Probe
                     5.1.1.   Öle mit einem Gehalt an freien Säuren unter 3 % brauchen vor der Säulenchromatografie mit Kieselgel nicht neutralisiert zu werden. Öle mit einem Gehalt an freien Säuren über 3 % sind gemäß Ziffer 5.1.1.1 zu neutralisieren.
                     5.1.1.1.   50 g Öl und 200 ml n-Hexan in den 1 000-ml-Trichter (3.13) geben. 100 ml Isopropanol und so viel 12 %ige Natriumhydroxidlösung (4.11) hinzufügen, wie dem Gehalt des Öls an freien Fettsäuren, zuzüglich 5 %, entspricht. Eine Minute lang kräftig schütteln, 100 ml destilliertes Wasser zugeben, erneut schütteln und absetzen lassen.
                     Nach dem Dekantieren die untere, die Seifen enthaltende Schicht sowie etwaige Zwischenschichten (Schleim, unlösliche Stoffe) entfernen. Die Hexanlösung des neutralisierten Öls mehrmals mit je 50—60 ml der Isopropanol/Wasserlösung (1/1 V/V) (4.4) waschen, bis die Rosafärbung des Phenolphthaleins verschwindet.
                     Den größten Teil des Hexans unter Vakuum (z. B. im Rotationsverdampfer) abdestillieren. Das Öl in einen 100-ml-Rundkolben (3.5) überführen und bis zur vollständigen Entfernung des Lösungsmittels unter Vakuum trocknen.
                     Nach diesem Verfahren muss der Säuregehalt des Öls unter 0,5 % liegen.
                     5.1.2.   1,0 g des wie beschrieben vorbereiteten Öls in einen 25-ml-Erlenmeyerkolben (3.1) geben und in 10 ml Elutionsmittel (4.10) lösen. Die Lösung vor der Kieselgelsäulenchromatografie mindestens 15 Minuten ruhen lassen.
                     Wenn die Lösung trüb ist, sollte sie zentrifugiert werden, um optimale Chromatografiebedingungen zu schaffen. (Es können gebrauchsfertige SPE-Kartuschen (500 mg) verwendet werden).
                     5.1.3.   Vorbereiten der Chromatografiesäule
                     Etwa 30 ml Elutionsmittel (4.10) in die Säule (3.3) geben, einen Wattebausch mit Hilfe des Glasstabs bis auf den Grund der Säule schieben; dabei die Luft herausdrücken.
                     In einem 100-ml-Becherglas 25 g Kieselgel (4.1) in etwa 80 ml Elutionsmittel suspendieren, dann mithilfe eines Trichters in die Säule geben.
                     Zur restlosen Überführung des Kieselgels in die Säule ist das Becherglas mit dem Elutionsmittel (4.10) zu spülen. Hahn öffnen und soviel Elutionsmittel ablaufen lassen, bis der Elutionsmittelspiegel etwa 2 mm über dem Kieselgel liegt.
                     5.1.4.   Säulenchromatografie
                     In einen 25-ml-Erlenmeyerkolben (3.1) wird genau 1,0 g der gemäß Ziffer 5.1 vorbereiteten Probe eingewogen.
                     Die Probe in 10 ml Elutionsmittel (4.10) auflösen und die Lösung in die gemäß Ziffer 5.1.3 vorbereitete Chromatografiesäule geben. Nicht umrühren.
                     Hahn öffnen und die Probenlösung bis zur Kieselgelschicht ablaufen lassen. Mit 150 ml Elutionsmittel eluieren. Die Durchlaufgeschwindigkeit auf 2 ml/Min. einstellen (so dass 150 ml die Säule in 60 bis 70 Minuten durchströmen).
                     Eluat in einem zuvor austarierten 250-ml-Rundkolben auffangen. Das Lösungsmittel unter Vakuum eindampfen und letzte Lösungsmittelspuren im Stickstoffstrom entfernen.
                     Den Rundkolben wiegen und den Extrakt berechnen.
                     (Bei Verwendung von gebrauchsfertigen Kieselgel-SPE-Kartuschen ist wie folgt vorzugehen:
                     1 ml der Lösung (5.1.2) in die mit 3 ml n-Hexan vorbereiteten Kartuschen geben.
                     Nach der Perkolation der Lösung mit 4 ml h-Hexan/Diethylether 9:1 (V/V) eluieren.
                     Das Eluat in einem 10-ml-Glas auffangen und im Stickstoffstrom bis zur Trockne eindampfen.
                     Die Pankreaslipase (5.2) auf den Rückstand einwirken lassen. Es ist wichtig, die Fettsäurezusammensetzung vor und nach dem Durchlaufen der SPE-Kartusche zu überprüfen).
                     5.2.   Hydrolyse durch Pankreaslipase
                     5.2.1.   0,1 g des gemäß Ziffer 5.1 zubereiteten Öls in ein Zentrifugenglas einwiegen. 2 ml Pufferlösung (4.6), 0,5 ml Natriumcholatlösung (4.7) und 0,2 ml Calciumchloridlösung zugeben und nach jeder Zugabe gut schütteln. Das Glas mit dem Schliffstopfen verschließen und bei 40 + 0,5 °C in den Thermostaten stellen.
                     5.2.2.   20 mg Lipase zugeben, vorsichtig schütteln (Befeuchten des Stopfens vermeiden) und das Glas genau 2 Minuten in den Thermostaten stellen. Herausnehmen, genau 1 Minute kräftig schütteln und abkühlen lassen.
                     5.2.3.   1 ml Diethylether zugeben, das Glas verschließen und kräftig schütteln, dann zentrifugieren und die Etherlösung mithilfe einer Mikroliterspritze in ein sauberes und trockenes Glas überführen.
                     5.3.   Zubereitung der silylierten Derivate und Vorbereitung der Gaschromatografie
                     5.3.1.   Mithilfe einer Mikroliterspritze 100 μl der Lösung (5.2.3.) in ein 10-ml-Zentrifugenglas mit konischem Boden geben.
                     5.3.2.   Das Lösungsmittel im schwachen Stickstoffstrom austreiben, 200 μl Silylierungsreagenz (4.15) zugeben, das Glas verschließen und 20 Minuten ruhen lassen.
                     5.3.3.   Nach 20 Minuten 1 bis 5 ml n-Hexan (je nach Chromatografiebedingungen) zugeben; die erhaltene Lösung ist bereit für die Gaschromatografie.
                     5.4.   Gaschromatografie
                     Betriebsbedingungen:
                     
                                 —
                              
                              
                                 Injektortemperatur (‚On-column-Injektor‘) unter dem Siedepunkt des Lösungsmittels (68 °C),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Detektortemperatur: 350 °C,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Säulentemperatur: Temperaturprogramm des Ofens: 1 Minute 60 °C, dann Erhöhung um 15 °C pro Minute bis auf 180 °C, dann um 5 °C pro Minute bis auf 340 °C, dann 13 Minuten 340 °C,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Trägergas: Wasserstoff oder Helium, mit für die Auflösung gemäß Abbildung 1 geeigneter linearer Strömungsgeschwindigkeit. Die Retentionszeit des Triglycerids C54 muss 40 ± 5 Minuten betragen (siehe Abbildung 2). (Die hier vorgeschlagenen Arbeitsbedingungen sind Anhaltspunkte. Bei der Durchführung der Analyse sind sie so zu optimieren, dass die gewünschte Auflösung erzielt wird. Die Höhe des 2-Glycerinmonopalmitat-Peaks muss mindestens 10 % der Skala des Schreibers entsprechen.)
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Einspritzmenge: 0,5—1 μl der (5 ml) n-Hexanlösung (5.3.3).
                              
                           5.4.1.   Identifizierung der Peaks
                     Die einzelnen Monoglyceride werden auf der Grundlage der erhaltenen Retentionszeiten bestimmt, die mit den Retentionszeiten von unter den gleichen Bedingungen analysierten Standardmischungen von Monoglyceriden verglichen werden.
                     5.4.2.   Quantitative Bestimmung
                     Die einzelnen Peakflächen werden mithilfe eines elektronischen Integrators berechnet.
                     6.   DARSTELLUNG DER ERGEBNISSE
                     Der prozentuale Gehalt an Glycerinmonopalmitat errechnet sich aus dem Quotienten der Peakfläche des entsprechenden Peaks und der Summe der Peakflächen aller Monoglyceride (vgl. Abbildung 2) nach folgender Formel:
                     Glycéryl monopalmitate (%): 
                     (Glycéril monopalmitate = Glycerinmonopalmitat)
                     Dabei ist:
                     
                                 Ax
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 Peakfläche von Glycerinmonopalmitat
                              
                           
                                 ΣA
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 Summe der Peakflächen aller Monoglyceride
                              
                           Das Ergebnis wird mit einer Dezimalstelle angegeben.
                     7.   ANALYSEBERICHT
                     Im Analysebericht ist Folgendes anzugeben:
                     
                                 —
                              
                              
                                 Verweis auf diese Methode,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 alle für die vollständige Identifizierung der Probe erforderlichen Angaben,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Analyseergebnis,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 jede Abweichung von dieser Methode aufgrund einer Entscheidung der Beteiligten oder aus anderen Gründen,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Angaben zum Labor, Analysedatum und Unterschrift der für die Analyse verantwortlichen Personen.
                              
                           
                        Abbildung 1
                     
                     Chromatogramm der Produkte der Silylierungsreaktion, die durch Einwirkung der Lipase auf ein raffiniertes Olivenöl mit 20 %igem Zusatz an verestertem Öl (100 %) gewonnen wurden
                     
                        
                     
                        Abbildung 2
                     
                     
                        Chromatogramm von:
                     
                     A)   Olivenöl, nicht verestert; nach Lipase; nach Silylierung; unter diesen Bedingungen (Kapillarsäule 8—12 m) wird die Wachsfraktion gleichzeitig mit der Diglyceridfraktion oder kurze Zeit später eluiert.
                     
                     
                        Nach der Lipase darf der Triglyceridgehalt 15 % nicht übersteigen.
                     
                     
                        
                     
                        Chromatogramm von:
                     
                     B)   verestertem Öl nach Lipase; nach Silylierung; unter diesen Bedingungen (Kapillarsäule 8—12 m) wird die Wachsfraktion gleichzeitig mit der Diglyceridfraktion oder kurze Zeit später eluiert.
                     
                     
                        Nach der Lipase darf der Triglyceridgehalt 15 % nicht übersteigen.
                     
                     
                        
                     8.   ANMERKUNGEN
                     
                        Anmerkung 1:   HERSTELLUNG DER LIPASE
                     Lipasen mit ausreichender Aktivität sind im Handel erhältlich. Sie können aber auch im Labor wie folgt hergestellt werden:
                     5 kg frisches Schweinepankreas auf 0 °C abkühlen. Das umhüllende feste Fett und die anhängenden Gewebe entfernen und Pankreas im Mixer zu einem flüssigen Brei zerkleinern. Diesen Brei 4 bis 6 Stunden mit 2,5 l wasserfreiem Aceton rühren, anschließend zentrifugieren. Den Rückstand noch dreimal mit dem gleichen Volumen Aceton, dann zweimal mit einer Mischung von Aceton und Diethylether 1:1 (V/V) und zweimal mit Diethylether extrahieren.
                     Den Rückstand 48 Stunden im Vakuum trocknen, bis ein stabiles Pulver entsteht, das vor Feuchtigkeit geschützt im Kühlschrank aufbewahrt werden sollte.
                     
                        Anmerkung 2:   PRÜFUNG DER LIPASEAKTIVITÄT
                     Durch Rühren (10 Min.) eines Gemischs von 165 ml Gummiarabikumlösung (100 g/l), 15 g gemahlenem Eis und 20 ml neutralisiertem Olivenöl mit einem geeigneten Rührgerät eine Ölemulsion herstellen.
                     10 ml dieser Emulsion in ein 50-ml-Becherglas geben, anschließend 0,3 ml Natriumcholatlösung (0,2 g/ml) und 20 ml destilliertes Wasser hinzufügen.
                     Das Becherglas bei 37 °C in einen Thermostaten stellen; die Elektroden des pH-Meters und den Spiralrührer einsetzen.
                     Mit Hilfe einer Bürette tropfenweise 0,1 N Natriumhydroxidlösung hinzufügen bis zu einem pH-Wert von 8,3.
                     Eine ausreichende Menge der wässrigen Lipasesuspension (0,1 g/ml Lipase) hinzufügen. Sobald das pH-Meter 8,3 anzeigt, die Stoppuhr anstellen und Natriumhydroxidlösung so zutropfen lassen, dass der pH-Wert bei 8,3 gehalten wird. Das Volumen der pro Minute verbrauchten Lösung notieren.
                     Die Werte in ein Koordinatensystem eintragen, und zwar die Zeitablesungen als Abszisse und die Anzahl ml 0,1 N Alkalilösung zur Aufrechterhaltung eines konstanten pH-Werts als Ordinate. Dabei muss sich eine Gerade ergeben.
                     Die Lipaseaktivität, ausgedrückt als Lipaseeinheiten je mg, wird mit folgender Formel angegeben:
                     
                        
                     Dabei ist:
                     
                                 A
                              
                              
                                 die Aktivität in Lipaseeinheiten/mg
                              
                           
                                 V
                              
                              
                                 die Anzahl der pro Minute verbrauchten Milliliter 0,1 N Natriumhydroxidlösung (berechnet aus der grafischen Darstellung)
                              
                           
                                 N
                              
                              
                                 die Normalität der Natriumhydroxidlösung
                              
                           
                                 m
                              
                              
                                 das Gewicht der Lipaseprobe in mg.
                              
                           Die Lipaseeinheit wird als die Menge Enzym definiert, die 10 Mikroäquivalente Säure pro Minute freisetzt.“
                  
               
            
                  7.
               
               
                  Anhang XA Ziffer 6.2 erhält folgende Fassung:
                  
                              „6.2.
                           
                           
                              Die Methylester werden nach der im Anhang XB beschriebenen Methode B hergestellt. Fette mit einem Gehalt an freien Fettsäuren von mehr als 3 % müssen nach dem im Anhang VII unter Ziffer 5.1.1 beschriebenen Verfahren neutralisiert werden.“
                           
                        
            
         (1)  Summe der mittels Kapillarsäure (nicht) abtrennbaren Isomere.
      
         (2)  Oder wenn der Fehlermedian höchstens 2,5 beträgt oder der Fruchtigkeitsmedian gleich 0 ist.
      
         (3)  Öl mit einem Wachsgehalt zwischen 300 mg/kg und 350 mg/kg wird als Lampantöl eingestuft, wenn der Gesamtgehalt an aliphatischen Alkoholen höchstens 350 mg/kg oder der Gehalt an Erytrodiol und Uvaol höchstens 3,5 % beträgt.
      
         (4)  Öl mit einem Wachsgehalt zwischen 300 mg/kg und 350 mg/kg wird als rohes Oliventresteröl eingestuft, wenn der Gesamtgehalt an aliphatischen Alkoholen über 350 mg/kg oder der Gehalt an Erytrodiol und Uvaol über 3,5 % beträgt.
      
         (5)  Gehalt an anderen Fettsäuren (%): Palmitinsäure: 7,5—20,0; Palmitoleinsäure: 0,3—3,5; Heptadecansäure: ≤ 0,3; Heptadecensäure: ≤ 0,3; Stearinsäure: 0,5—5,0; Ölsäure: 55,0-83,0; Linolsäure: 3,5—21,0.
      
         (6)  Summe aus: Delta-5,23-Stigmastadienol+Clerosterin+Beta-Sitosterin+Sitostanol+Delta-5-Avenasterin+Delta-5,24-Stigmastadienol.
      
         (7)  Öl mit einem Wachsgehalt zwischen 300 mg/kg und 350 mg/kg wird als Lampantöl eingestuft, wenn der Gesamtgehalt an aliphatischen Alkoholen höchstens 350 mg/kg oder der Gehalt an Erytrodiol und Uvaol höchstens 3,5 % beträgt.
      
         (8)  Öl mit einem Wachsgehalt zwischen 300 mg/kg und 350 mg/kg wird als rohes Oliventresteröl eingestuft, wenn der Gesamtgehalt an aliphatischen Alkoholen über 350 mg/kg und der Gehalt an Erytrodiol und Uvaol über 3,5 % beträgt.
      
         (9)  Nach der Elution der Sterolester darf das Chromatogramm keine signifikanten Peaks aufweisen (Triglyceride).