CELEX: 31982L0434
Language: es
Date: 1982-05-14 00:00:00
Title: Segunda Directiva 82/434/CEE de la Comisión, de 14 de mayo de 1982, sobre la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros relativas a los métodos de análisis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos

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31982L0434

Segunda Directiva 82/434/CEE de la Comisión, de 14 de mayo de 1982, sobre la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros relativas a los métodos de análisis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos  

Diario Oficial n° L 185 de 30/06/1982 p. 0001 - 0028 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 12 p. 0071  Edición especial en español: Capítulo 15 Tomo 3 p. 0179  Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 12 p. 0071  Edición especial en portugués: Capítulo 15 Tomo 3 p. 0179 

 SEGUNDA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 14 de mayo de 1982    sobre la aproximación de las legislaciones de los   métodos de Estados miembros relativas a los   análisis necesarios para el control de la   composición de los productos cosméticos     ( 82/434/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea ,    Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo , de 27   de julio de 1976 , relativa a la aproximación de las   legislaciones de los Estados miembros en materia de   productos cosméticos (1) , modificada por la   Directiva 79/661/CEE (2) y , en particular , el   apartado 1 del artículo 8 ,    Considerando que la Directiva 76/768/CEE prevé   unos controles oficiales de los productos cosméticos   tendentes a comprobar que se cumplen las condiciones   previstas por las disposiciones comunitarias relativas   a la composición de los productos cosméticos ;    Considerando que conviene establecer , a la mayor   brevedad , todos los métodos de análisis necesarios   y que habiéndose realizado la primera etapa   para alcanzar este objetivo mediante la fijación de   determinados métodos en la Directiva 80/1335/CEE de   la Comisión (3) , la fijación de los métodos   de identificación de los agentes de oxidación   y de determinación del peróxido de hidrógeno en los   productos capilares , de identificación y de   determinación semicuantitativa de determinados colorantes   de oxidación en los tintes para el cabello , de   identificación y de determinación de los   nitritos , de identificación y de determinación del   formaldehído libre , de determinación de la   resorcina en los champúes y en las lociones capilares ,   de determinación del metanol con relación al   etanol o al propanol-2 , constituyen una segunda   etapa ;    Considerando que las medidas previstas en la   presente Directiva se atienen al dictamen del   Comité para la adaptación al progreso técnico   de la Directiva 76/768/CEE ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros adoptarán todas las medidas   apropiadas para que , al realizar los controles   oficiales de los productos cosméticos :     - la identificación de los agentes de oxidación   y la determinación del peróxido de hidrógeno   en los productos capilares ,     - la identificación y la determinación   semicuantitativa de determinados colorantes de oxidación   en los tintes para el cabello ,     - la identificación y la determinación de los   nitritos ,     - la identificación y la determinación del   formaldehído libre ,     - la determinación de la resorcina en los   champúes y en las lociones capilares ,     - la determinación del metanol con relación   al etanol y al propanol-2 , se efectúen de acuerdo   con los métodos descritos en el Anexo .    Artículo 2    Los Estados miembros aplicarán las disposiciones   legales , reglamentarias o administrativas necesarias   para cumplir las disposiciones de la presente Directiva ,   a más tardar el 31 de diciembre de 1983 e informarán   de ello inmediatamente a la Comisión .    Artículo 3    Los destinatarios de la presente Directiva serán los   Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 14 de mayo de 1982 .    Por la Comisión    Karl-Heinz NARJES    Miembro de la Comisión    (1) DO n º L 262 de 27 . 9 . 1976 , p. 169 .    (2) DO n º L 192 de 31 . 7 . 1979 , p. 35 .    (3) DO n º L 383 de 31 . 12 . 1980 , p. 27 .    ANEXO    I . IDENTIFICACIÓN DE LOS AGENTES DE OXIDACIÓN   Y DETERMINACIÓN DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO EN   LOS PRODUCTOS CAPILARES    OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    La determinación yodométrica del peróxido de   hidrógeno en los productos cosméticos es posible   en ausencia de cualquier otro agente de oxidación   que reaccione con los yoduros para formar yodo . Antes   de emprender la determinación yodométrica   del peróxido de hidrógeno es , por tanto ,   indispensable detectar e identificar los demás   agentes de oxidación eventualmente presentes .   Dicha identificación se efectúa en dos operaciones ,   la primera se refiere a los persulfatos , los bromatos   y el peróxido de hidrógeno , la segunda al   peróxido de bario .    A . IDENTIFICACIÓN DE LOS PERSULFATOS , DE LOS   BROMATOS Y DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO    1 . PRINCIPIO    El persulfato de sodio , de potasio y de amonio , el   bromato de potasio y de sodio y el peróxido de   hidrógeno , provengan o no del peróxido de bario ,   se identifican por cromatografía descendente   sobre papel con ayuda de dos disolventes de   desarrollo .    2 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    2.1 . Soluciones acuosas de referencia al 0,5 %   ( m/v ) de los compuestos siguientes :    2.1.1 . persulfato de sodio    2.1.2 . persulfato de potasio    2.1.3 . persulfato de amonio    2.1.4 . bromato de potasio    2.1.5 . bromato de sodio    2.1.6 . peróxido de hidrógeno    2.2 . Disolvente de desarrollo A , etanol al   80 % ( v/v )    2.3 . Disolvente de desarrollo B ,   benceno-metanol-alcohol isomílico-agua ( 34-38-18-10 , v )    2.4 . Reactivo A , solución acuosa de yoduro de   potasio al 10 % ( m/v )    2.5 . Reactivo B , solución acuosa de almidón   al 1 % ( m/v )    2.6 . Reactivo C , ácido clorhídrico al 10 %   ( m/m )    2.7 . Ácido clorhídrico 4 N    3 . APARATOS    3.1 . papel para cromatografía ( Whatman n º 3 y   n º 4 , o equivalente )    3.2 . micropipeta de un µl    3.3 . matraces aforados de 100 ml    3.4 . filtros plegados    3.5 . material habitual para cromatografía   descendente sobre papel    4 . PREPARACIÓN DE LA MUESTRA    4.1 . Productos solubles en agua    Preparar dos soluciones de la muestra   disolviendo 1 y 5 g respectivamente del producto   en 100 ml de agua . Para realizar la cromatografía   sobre papel descrita en el punto 5 , utilizar 1 µl   de cada una de estas dos soluciones .    4.2 . Productos parcialmente solubles en agua    4.2.1 . Pesar 1 y 5 g de la muestra , ponerlos en   suspensión en 50 ml de agua , completar el   volumen hasta 100 ml y mezclar . Filtrar las dos   suspensiones con ayuda de un filtro plegado   ( punto 3.4 ) y utilizar µl de cada uno de los   dos filtrados para realizar la cromatografía sobre   papel descrita en el punto 5 .    4.2.2 . Preparar dos nuevas suspensiones de 1 y 5 g   de la muestra en 50 ml de agua , acidificar con   ácido clorhídrico diluido ( punto 2.7 ) ,   completar el volumen hasta 100 ml con agua y mezclar .   Filtrar las suspensiones con ayuda de un filtro   plegado ( punto 3.4 ) y utilizar 1 µl de cada uno   de los dos filtrados para realizar la cromatografía   sobre papel descrita en el punto 5 .    4.3 . CREMAS    Homogeneizar por separado 5 y 20 g del producto   en 100 ml de agua y utilizar las dispersiones   para realizar la cromatografía sobre papel descrita   en el punto 5 .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . En dos cubetas para cromatografía descendente   sobre papel , poner una cierta cantidad de los   disolventes de desarrollo A ( punto 2.2 ) y   B ( punto 2.3 . ) . Saturar las cubetas con los   vapores de disolvente durante al menos 24 h .    5.2 . En una cinta de papel para cromatografía   ( Whatman n º 3 o equivalente ) de 40 cm de largo   y 20 cm de ancho ( punto 3.1 ) o de otro formato   apropiado , depositar en cada punto de partida 1 µl   de una de las soluciones ( o suspensiones filtradas )   de la muestra y de referencia preparadas en los puntos 4   y 2.1 y hacer que el disolvente se evapore al aire .    5.3 . Colocar la cinta ( punto 5.2 ) en la cubeta llena   del disolvente A ( punto 5.1 . ) y cromatografiar hasta   que el frente del disolvente haya recorrido 35 cm   ( unas 15 h ) .    5.4 . Repetir las operaciones descritas en los   puntos 5.2 y 5.3 con papel para cromatografía   ( Whatman n º 4 o equivalente ) ( punto 3.1 ) y   el disolvente B ( punto 2.3 . ) . Cromatografiar hasta   que el disolvente de desarrollo haya recorrido 35 cm   ( unas 5 h ) .    5.5 . Después del desarrollo , sacar las cintas   de papel de las cubetas y secarlas al aire .    5.6 . Detectar las manchas pulverizando :    5.6.1 . el reactivo A ( punto 2.4 ) e inmediatamente   después el reactivo B ( punto 2.5 ) . En el   cromatograma aparecen en primer lugar las manchas   de persulfatos , seguidas por las del peróxido de   hidrógeno . Marcar estas manchas por medio de un   lápiz .    5.6.2 . el reactivo C ( punto 2.6 . ) sobre los   cromatogramas obtenidos en el punto 5.6.1 . Aparecen   unas manchas de color gris azulado , que indican   la presencia de bromatos .    5.7 . En las condiciones indicadas anteriormente   para los disolventes A ( punto 2.2 . ) y   B ( punto 2.3 . ) , los valores Rf de las soluciones   de referencia ( punto 2.1 . ) son los siguientes :     * Disolvente A ( punto 2.2 . ) * Disolvente B   ( punto 2.3 . ) *    Persulfato de sodio * 0,40 * 0,10 *    Persulfato de potasio * 0,40  0,02 + 0,05 *    Persulfato de amonio * 0,50 * 0,10 + 0,20 *    Bromato de sodio * 0,40 * 0,20 *    Bromato de potasio * 0,40 * 0,10 + 0,20 *    Peróxido de hidrógeno * 0,80 * 0,80 *    B . IDENTIFICACIÓN DEL PERÓXIDO DE BARIO    1 . PRINCIPIO    La presencia de peróxido de bario se evidencia :     - por una parte , por formación del peróxido   de hidrógeno después de la acidificación de   la muestra ( título A , punto 4.2 . ) ,     - por otra parte , por la identificación del   ión bario .    En ausencia de persulfatos ( título A ) : se   añade ácido sulfúrico diluido a una parte de   la solución de muestra ácida ( título B ,   punto 4.1 ) , lo que provoca la formación de un   precipitado blanco de sulfato de bario . La presencia   de ión bario en la solución de muestra   ( punto 4.1 . ) se confirma por cromatografía   sobre papel como se indica en el punto 5 siguiente .    En caso de presencia simultánea de peróxido de   bario y de persulfatos ( título B , punto 4.2 . ) ,   después de fusión alcalina del residuo del   disolvente y disolución en ácido clorhídrico , se   establece la presencia del ión bario por cromatografía   y/o por precipitación al estado de sulfato .    2 . REACTIVOS    2.1 . Metanol    2.2 . Ácido clorhídrico concentrado al 36 %   ( m/m )    2.3 . Ácido clorhídrico 6 N    2.4 . Ácido sulfúrico    2.5 . Rodizonato disódico    2.6 . Cloruro de bario ( BaCl2 H2O )    2.7 . Carbonato de sodio anhidro    2.8 . Solución acuosa de cloruro de bario al   1 % ( m/v )    2.9 . Disolvente de desarrollo , metanol-ácido   clorhídrico concentrado al 36 % - agua ( 80 + 10 + 10 ,   v )    2.10 . Reactivo , solución acuosa de rodizonato   disódico al 0,1 % ( m/v ) ; preparar la solución   justamente antes de su utilización .    3 . APARATOS    3.1 . Micropipeta de 5 µl    3.2 . Crisoles de platino    3.3 . Matraces aforados de 100 ml    3.4 . Papel para cromatografía ( Schleicher   y Schuell 2043 b o equivalente ) . Poner durante   una noche en la cubeta para cromatografía   ( título A , punto 3.5 . ) que contiene el   disolvente ( título B , punto 2.9 . ) y secar .    3.5 . Filtros plegados    3.6 . Material habitual para la cromatografía   ascendente sobre papel    4 . PREPARACIÓN DE LA MUESTRA    4.1 . Productos que no contienen persulfatos    4.1.1 . Homogeneizar o disolver 2 g del producto   en 50 ml de agua y , por medio de ácido clorhídrico   ( título B , punto 2.3 . ) , llevar el pH de la   solución a 1 aproximadamente .    4.1.2 . Trasvasar la solución ( suspensión )   a un matraz aforado de 100 ml . Completar hasta la   señal con agua y mezclar . Utilizar esta solución   para realizar la cromatografía sobre papel   descrita en el punto 5 y para identificar el bario   por precipitación del sulfato .    4.2 . Productos que contienen persulfatos    4.2.1 . Homogeneizar o disolver 2 g del   producto en 100 ml de agua y filtrar .    4.2.2 . Añadir al residuo secado 7 a 10 veces   su peso de carbonato de sodio ( título B ,   punto 2.7 ) mezclar y fundir la mezcla en un crisol   de platino ( título B , punto 3.2 ) durante   una media hora .    4.2.3 . Enfriar a la temperatura ambiente , poner   en suspensión el producto de la fusión en 50 ml   de agua y filtrar ( título B , punto 3.5 ) .    4.2.4 . Disolver en ácido clorhídrico 6 N   ( título B , punto 2.3 . ) y llevar hasta 100 ml   con agua . Utilizar esta solución para realizar   la cromatografía sobre papel descrita en el   punto 5 y para identificar el bario por precipitación   del sulfato .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . En una cubeta para cromatografía ascendente   sobre papel , poner una determinada cantidad   de disolvente ( título B , punto 2.9 . ) y   saturar la cubeta durante al menos 15 h .    5.2 . Sobre una hoja de papel para cromatografía ,   previamente tratada como se ha indicado ( título B ,   punto 3.4 . ) depositar respectivamente en tres puntos   de partida 5 µl de cada una de las soluciones   preparadas ( título B , punto 4.1.2 . ) y   ( título B , punto 4.2.4 . ) y de la solución   de referencia ( título B , punto 2.8 . ) .    5.3 . Hacer evaporar el disolvente al aire y   cromatografiar verticalmente hasta que el disolvente   de desarrollo haya recorrido 30 cm .    5.4 . Sacar el cromatograma de la cubeta y   secarlo al aire .    5.5 . Hacer que aparezcan las manchas en el   cromatograma pulverizándolo con el reactivo   ( título B , punto 2.10 . ) .    En presencia de bario , aparecen manchas rojas de   Rf 0,10 aproximadamente .    C . DETERMINACIÓN DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO    1 . PRINCIPIO    La determinación yodométrica del peróxido de   hidrógeno se basa en la reacción siguiente :    H2O2 + 2H + + 21 - * I2 + 2H2O    Se trata de una reacción lenta , pero que   puede ser acelerada añadiéndole molibdato   amónico . El yodo formado , determinado por   procedimientos titulométricos mediante una   solución de tiosulfato de sodio , permite   calcular el contenido de peróxido de hidrógeno .    2 . DEFINICIÓN    El contenido de la muestra en peróxido de   hidrógeno determinado por este método se   expresa en porcentaje de masa del producto .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Ácido sulfúrico 2 N    3.2 . Yoduro de potasio    3.3 . Molibdato amónico    3.4 . Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N    3.5 . Solución de yoduro de potasio al 10 %   ( m/v ) . Preparar la solución extemporaneamente    3.6 . Solución de molibdato amónico al 20 %   ( m/v )    3.7 . Solución de almidón al 1 % ( m/v )    4 . APARATOS    4.1 . Vasos de vidrio de 100 ml    4.2 . Bureta de 50 ml    4.3 . Matraces aforados de 250 ml    4.4 . Probetas graduadas de 25 y 100 ml    4.5 . Pipetas aforadas de 10 ml    4.6 . Matraces cónicos de 250 ml    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . En un vaso de 100 ml , pesar una cantidad   gramos ( m ) del producto equivalente a 0,6 g   aproximadamente de peróxido de hidrógeno ;   trasvasarlos cuantitativamente a un matraz aforado   a 250 ml con ayuda de una pequeña cantidad de agua ,   completar hasta la señal con agua y mezclar .    5.2 . Con una pipeta echar 10 ml de la solución de   muestra ( punto 5.1 . ) a un matraz cónico de 250 ml   ( punto 4.6 . ) y añadir sucesivamente 100 ml de   ácido sulfúrico 2 N ( punto 3.1 . ) , 20 ml de   yoduro de potasio ( punto 3.5 . ) y tres gotas de   solución de molibdato amónico ( punto 3.6 . ) .    5.3 . Titular inmediatamente el yodo formado con   ayuda de la solución de tiosulfato de sodio 0,1 N   ( punto 3.4 ) y , justamente antes de alcanzar el   punto de equivalencia , añadir algunos ml de solución   de almidón como indicador . Anotar la cantidad   en ml de tiosulfato de sodio 0,1 N utilizada ( V ) .    5.4 . Según el procedimiento indicado en los   puntos 5.2 . y 5.3 . , efectuar una determinación en   blanco , sustituyendo los 10 ml de solución de   muestra por 10 ml de agua . Anotar la cantidad en ml de   tiosulfato de sodio 0,1 N utilizada ( Vo ) .    6 . CALCULO    Calcular el contenido de peróxido de hidrógeno   en el producto , en porcentaje de masa ( % m/m ) ,   mediante la fórmula :     % de peróxido de hidrógeno =   ( ( V - Vo ) × 1,7008 × 250 × 100 ) /   ( m × 10 × 1000 )     % de peróxido de hidrógeno =   ( ( V - Vo ) × 4,252 ) /m    donde :    m = cantidad en g de producto examinado   ( punto 5.1 . ) ,    Vo = cantidad en ml de solución de tiosulfato 0,1 N   utilizada en la determinación en blanco   ( punto 5.4 . ) ,    V = cantidad en ml de solución de tiosulfato 0,1 N   utilizada en la titulación de la solución de muestra   ( punto 5.3 . ) .    7 . REPETIBILIDAD (1)    Para un contenido de peróxido de hidrógeno   del orden del 6 % ( m/m ) , la diferencia entre los   resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas   sobre la misma muestra , no debe superar el 0,2 % .    (1) Según la norma ISO 5725 .    II . IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN SEMICUANTITATIVA   DE DETERMINADOS COLORANTES DE OXIDACION EN LOS   TINTES PARA EL CABELLO    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACION    Este método permite la identificación y la   determinación semicuantitativa de las sustancias   siguientes en los tintes para el cabello en forma   de crema y de líquido :    Denominación de la sustancia * Símbolo *    diaminobencenos * *    1-2 diaminobenceno ( o. fenilendiamina ) * ( OPD ) *    1-3 diaminobenceno ( m. fenilendiamina ) * ( MPD ) *    1-4 diaminobenceno ( p. fenilendiamina ) * ( PPD ) *    diaminotoluenos * *    3-4 diaminotolueno ( o. toluilendiamina ) * ( OTD ) *    2-4 diaminotolueno ( m. toluilendiamina ) * ( MTD ) *    2-5 diaminotolueno ( p. toluilendiamina ) * ( PTD ) *    diaminofenoles * *    2-4 diaminofenol * ( DAP ) *    hidroquinona * *    1-4 dihidroxibenceno * ( H ) *    a-naftol * ( aN ) *    Pirogalol * *    1-2-3 trihidroxibenceno * ( P ) *    Resorcina * *    1-3 dihidroxibenceno * ( R ) *    2 . PRINCIPIO    Los colorantes de oxidación se extraen , a un   pH de 10 , de los tintes en forma de crema o de   líquido con etanol de 96 ° y se identifican   por cromatografía en capa fina monodimensional   ( punto 5 ) y/o bidimensional ( punto 6 )    A fin de efectuar la determinación semicuantitativa   de las sustancias se compara la imagen cromatográfica   de las muestras obtenida mediante cuatro sistemas   de desarrollo con la de las soluciones de productos   de referencia cromatografiadas .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Etanol absoluto    3.2 . Acetona    3.3 . Etanol de 96 ° ( v/v )    3.4 . Amoníaco al 25 % ( d (20,4) + 0,91 )    3.5 . L ( + ) ácido ascórbico    3.6 . Cloroformo    3.7 . Ciclohexano    3.8 . Nitrógeno técnico    3.9 . Tolueno    3.10 . Benceno    3.11 . Butanol 1    3.12 . Butanol 2    3.13 . Ácido hipofosforoso al 50 %    3.14 . Reactivo diazoico : se podrá utilizar bien :     - el 4-nitro-1-bencendiazonio salificado y   estabilizado por el ión clorobenceno sulfonato ,   por ejemplo ( rojo 2 JN de francolor o equivalente ) ,   bien     - 2-cloro-4-nitro-1-bencendiazonio salificado   y estabilizado por el ión naftalenbenzoato , por   ejemplo ( NNCD Reagent - Ref. n º 74150 de FLUKA   o equivalente ) .    3.15 . Nitrato de plata    3.16 . p-dimetilaminobenzaldehído    3.17 . 2-5-dimetilfenol    3.18 . Cloruro férrico 6 H2O    3.19 . Ácido clorhídrico sl 10 % ( m/v )    3.20 . Sustancias de referencia    Las sustancias de referencia son las indicadas   en el Título 1 « Objeto y campo de aplicación » .    En el caso de compuestos aminados , la sustancia   de referencia debe estar constituída exclusivamente   por la forma clorhidrato ( mono o di ) o por   la forma de base .    3.21 . Soluciones de referencia al 0,5 % ( m/v )    Preparar una solución al 0,5 % ( m/v ) de   cada una de las sustancias de referencia ( punto 3.20 ) .    Pesar 50 mg ± 1 mg de sustancia de referencia   en un matraz aforado de 10 ml .    Añadir 5 ml de etanol de 96 ° ( punto 3.3 ) .    Añadir 250 mg de ácido ascórbico ( punto 3.5 ) .    Alcalinizar mediante la solución amoniacal   ( punto 3.4 ) hasta un pH aparente de 10 .    Completar hasta 10 ml con etanol de 96 ° y mezclar .    Observaciones    Las soluciones pueden conservarse durante una   semana en un sitio fresco , protegidas de la luz .    En ciertos casos , cuando se añade ácido   ascórbico y amoníaco , puede producirse un   precipitado . En este caso , conviene dejar que   se decante antes de proceder a la toma de muestras .    3.22 . Disolvente de desarrollo    3.22.1 . Acetona-cloroformo-tolueno : 35-25-40 6 ( v/v )    3.22.2 . Cloroformo-ciclohexano-etanol absoluto-amoníaco   al 25 % 80-10-10-1 ( v/v )    3.22.3 . Benceno-butanol secundario-agua :   50-25-25 ( v/v ) . Agitar bien la mezcla y tomar   la fase superior después de la decantación   a la temperatura del laboratorio ( entre 20 y   25 ° C ) .    3.22.4 . Butanol I-cloroformo y reactivo   M : 7-70-23 ( v/v ) . Dejar decantar cuidadosamente   a 20-25 ° y tomar la fase inferior .    Preparación del reactivo M    NH4OH al 25 % ( v/v ) ( punto 3.4 ) * 24 volúmenes *    Acido hipofosforoso al 50 % ( punto 3.13 ) *   1 volúmen *    H2O * 75 volúmenes *    Observación    Los disolventes de desarrollo que contienen   amoníaco deben agitarse bien inmediatamente   antes de su empleo .    3.23 . Reveladores    3.23.1 . Reactivo diazoico    Preparar una solución acuosa al 5 % ( m/v )   del reactivo ( punto 3.14 ) elegido . Esta solución   debe prepararse en el momento de su empleo .    3.23.2 . Reactivo de Ehrlich    Disolver 2 g de p-dimetilaminobenzaldehído   ( punto 3.16 ) en 100 ml de ácido clorhídrico   al 10 % ( m/v ) acuoso ( punto 3.19 ) .    3.23.3 . 2-5 Dimetilfenol-cloruro férrico 6 H2O    Solución 1 :    disolver 1 g de dimetilfenol ( punto 3.17 ) en   100 ml de etanol de 96 ° ( punto 3.3 ) .    Solución 2 :    disolver 4 g de cloruro férrico 6 H2O ( punto 3.18 )   en 100 ml de etanol de 96 ° ( punto 3.3 ) .    En el momento del revelado se pulveriza separadamente   en primer lugar la solución 1 , y después   la solución 2 .    3.23.4 . Nitrato de plata amoniacal    A una solución acuosa al 5 % ( m/v ) de   nitrato de plata ( punto 3.15 ) añadir amoníaco   al 25 % ( punto 3.4 ) hasta la disolución del   precipitado . Este reactivo se preparará en el   momento de su utilización . No conservarlo .    4 . APARATOS    4.1 . Equipo de laboratorio para cromatografía   en capa fina .   4.1.1 . Recipiente de plástico o de vidrio   que permita mantener la placa cromatográfica   bajo nitrógeno durante el depósito y hasta   el desarrollo . Esta precaución es necesaria por   la gran oxidabilidad de determinados colorantes . 4.1.2 . Jeringa de 10 µl , graduada de 0,2   en 0,2 µl con una aguja de sección recta o   mejor « repeating dispenser » , 50 µl ,   montado sobre soporte , a fin de poder colocar   la placa bajo nitrógeno .    4.1.3 . Capas finas de sílice listas para el   empleo , espesor 0,25 mm , formato 20 × 20 cm   ( Macherey y Nagel Silice G-HR o equivalente ) .    4.2 . Centrífuga de 4000 r.p.m.    4.3 . Tubos de centrífuga de 10 ml cerrados   por tapón de rosca .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Tratamiento de las muestras    Al abrir el tubo , eliminar los 2 ó 3 primeros   cm de crema .    En un tubo de centrifugar ( punto 4.3 ) ,   previamente purgado con nitrógeno , introducir :     - 300 mg de ácido ascórbico ,     - 3 g de crema ó 3 g de líquido homogeneizado .    Añadir unas gotas de amoníaco ( punto 3.4 )   si el pH es inferior a 10 y completar hasta 10 ml   con etanol de 96 ° ( punto 3.3 ) .    Homogeneizar bajo nitrógeno , tapar , y centrifugar   después a 4000 r.p.m. durante 10 min.    Utilizar la solución sobrenadante .    5.2 . Cromatografía    5.2.1 . Depósito    Depositar bajo nitrógeno , en una placa de   sílice ( punto 4.1.3 ) y en 9 puntos de partida ,   1 µl de cada una de las 11 soluciones de referencia .   Estas soluciones de referencia se distribuyen así :    1 * 2 * 3 * 4 * 5 * 6 * 7 * 8 * 9 *    R * P * H * PPD * DAP * PTD * OPD * OTD * MPD *    MTD * aN * * * * * * * *    Por otra parte , depositar en los puntos décimo   y undécimo 2 µl de las soluciones de muestra   obtenidas en el punto 5.1 .    Conservar la placa bajo nitrógeno hasta el   momento en que sea cromatografiada .    5.2.2 . Desarrollo    Introducir la placa en una cubeta previamente   purgada con nitrógeno , saturada con uno de los   disolventes adecuados ( puntos 3.22 ) y dejar   desarrollar a la temperatura ambiente ( 20 °   a 25 ° ) y en la oscuridad hasta que el frente   del disolvente haya recorrido unos 15 cm desde   la línea de partida :    Sacar la placa y secarla bajo nitrógeno a la   temperatura ambiente .    5.2.3 . Revelado    Pulverizar inmediatamente la placa con uno de los   4 reveladores citados en el punto 3.23 .    5.2.4 . Identificación    Se comparan los Rf y las coloraciones obtenidas   para la muestra con las de las sustancias de   referencia depositadas . El cuadro I da , a título   indicativo , los Rf y las coloraciones obtenidos   para cada sustancia de referencia en función del   disolvente de desarrollo y de los reveladores .    En caso de identificación dudosa se puede a   veces obtener una confirmación añadiendo a la   muestra la sustancia de referencia correspondiente .    5.2.5 . Determinación semicuantitativa    Comparar visualmente la intensidad de las manchas   correspondientes a cada sustancia identificada   en el punto 5.2.4 con una gama patrón de   concentración conocida y apropiada obtenida a   partir de la sustancia de referencia correspondiente .    Cuando la concentración del componente de la   muestra es demasiado elevada , diluir la solución   que hay que depositar y proceder a una nueva   determinación .    CUADRO 1    Valores Rf y coloraciones obtenidas inmediatamente   después del revelado    Productos de referencia ( 3.20 ) * Disolventes   de desarrollo * Reveladores *     * Rf * Coloraciones *     * 3.22.1 * 3.22.2 * 3.22.3 * 3.22.4 * Reactivo   de diazoico ( 3.22.1 ) * Reactivo de Ehrlich   ( 3.23.2 ) * Reactivo de dimetilfenolcloruro férrico   ( 3.23.3 ) * Reactivo de nitrato de plata ( 3.23.4 ) *    OPD * 0,62 * 0,60 * 0,30 * 0,57 * Marrón claro *   - * - * Marrón claro *    MPD * 0,40 * 0,60 * 0,47 * 0,48 * Marrón   violáceo (*) * Amarillo * Marrón claro *   Marrón claro *    PPD * 0,20 * 0,50 * 0,30 * 0,48 * Marrón *   Rojo vivo (*) * Violáceo * Gris *    OTP * 0,60 * 0,60 * 0,53 * 0,60 * Marrón (*) *   Anaranjado claro * Marrón claro * Marrón grisáceo *    MTP * 0,40 * 0,67 * 0,45 * 0,60 * Marrón   rojizo (*) * Amarillo * Marrón * Negro *    PTD * 0,33 * 0,65 * 0,37 * 0,70 * Marrón *   Anaranjado * Violáceo (*) * Gris *    DAP * 0,07 * - * 0 * 0,05 * Marrón (*) *   Anaranjado * Violáceo * Marrón *    H * 0,50 * 0,35 * 0,80 * 0,20 * - * Anaranjado *   Violáceo * Negro (*) *    aN * 0,90 * 0,80 * 0,90 * 0,75 * Anaranjado   marrón * - * Violáceo * Negro *    P * 0,37 * - * 0,67 * 0,05 * Marrón * Violáceo *   Marrón muy claro * Marrón (*) *    R * 0,50 * 0,37 * 0,80 * 0,17 * Anaranjado (*) *   Violáceo * Marrón muy claro * Marrón claro *    Notas :    1 . La OPD se revela débilmente , por lo que   el disolvente ( punto 3.22.3 ) debe ser utilizado   para separarlo netamente de la OTD .    2 . (*) indica el mejor revelado .    6 . EXAMEN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA BIDIMENSIONAL    La cromatografía en capa fina bidimensional   que se describe aquí , necesita el uso de los   reactivos siguientes :    6.1 . Sustancias y soluciones de referencia    6.1.1 . Beta-naftol ( ss-N )    6.1.2 . 2-aminofenol ( OAP )    6.1.3 . 3-aminofenol ( MAP )    6.1.4 . 4-aminofenol ( PAP )    6.1.5 . 2-nitro-p-fenilendiamina ( 2 NPPD )    6.1.6 . 4-nitro-o-fenilendiamina ( 4 NOPD )    Preparar una solución al 0,5 % ( m/v ) de   cada una de las sustancias de referencia suplementarias   como se indica en el punto 3.2.1 .    6.2 . Disolvente de desarrollo    6.2.1 . Acetato de etilo-ciclohexano-amoníaco   al 25 % ( 65-35-0,5 , v )    6.3 . Revelador    Colocar un recipiente de vidrio en una cubeta   de desarrollo para cromatografía en capa fina ,   introducir en el recipiente unos 2 g de yodo   cristalizado y tapar la cubeta .    6.4 . Cromatografía    6.4.1 . Trazar como se indica en la figura 1 , dos   líneas en la capa absorbente de una placa para   cromatografía en capa fina ( punto 4.1.3 ) .    6.4.2 . Depositar bajo nitrógeno en el punto de   partida 1 ( figura 1 ) de 1 a 4 µl de extracto   ( punto 5.1 ) . La cantidad depende de la intensidad   de las manchas obtenidas en el cromatograma ( punto 5.2 ) .    6.4.3 . Depositar , distribuidos entre los puntos 2 y 3   ( figura 1 ) , los colorantes de oxidación identificados   ( o supuestamente identificados ) en el punto 5.2 .   Distancia entre los puntos : 1,5 cm . Depositar 2 µl   de cada una de las soluciones de referencia , con la   excepción del DAP , del que es necesario depositar   6 µl . Realizar la operación bajo nitrógeno .    6.4.4 . Volver a empezar la operación descrita en   el punto 6.4.3 para los puntos de partida 4 y 5   ( figura 1 ) y conservar la placa bajo nitrógeno   hasta la cromatografía .    6.4.5 . Purgar con nitrógeno una cubeta para   cromatografía e introducir una cantidad adecuada de   disolvente de desarrollo ( punto 3.22.2 ) . Colocar   la placa ( punto 6.4.4 ) en la cubeta y cromatografiar   en la primera dirección de elución ( figura 1 )   en la oscuridad . Cromatografiar hasta que el frente   del disolvente haya recorrido al menos 13 cm .    6.4.6 . Sacar la placa de la cubeta y colocarla en   la cubeta ( punto 4.1 ) purgada con nitrógeno para   evaporar los restos de disolvente ( durante un mínimo   de 60 min. )    6.4.7 . Introducir con una probeta graduada una   cantidad adecuada de disolvente ( punto 6.2.1 ) en una   cubeta purgada con nitrógeno , colocar la placa   girada 90 ° respecto a la primera dirección de   elución ( punto 6.4.6 ) en la cubeta y cromatografiar   en la segunda dirección en la oscuridad hasta que el   frente del disolvente haya alcanzado la línea trazada   en la capa absorbente . Retirar la placa de la cubeta   y evaporar el disolvente al aire .    6.4.8 . Exponer la placa durante 10 min en la cubeta   de cromatografiar a los vapores de yodo ( punto 6.3 )   e interpretar el cromatograma bidimensional mediante   las referencias cromatografiadas al mismo tiempo   ( cuadro II ) .    Observación    Para obtener una coloración máxima de las manchas ,   dejar el cromatograma al aire durante media hora   después del revelado .    6.4.9 . La presencia de los colorantes de oxidación   encontrados en el punto 6.4.8 puede confirmarse sin   posibilidad de error repitiendo las manipulaciones   descritas en los puntos 6.4.1 a 6.4.8 incluídos ,   cuidando de añadir en el punto de partida 1 , además   de la cantidad de extracto prescrita en el punto 6.4.2 ,   1 µl de las sustancias de referencia identificadas   en el punto 6-4-8 .    Si no se encuentra ninguna otra mancha , la   interpretación del cromatograma primitivo es exacta .    CUADRO II    Color de las sustancias de referencia después de   la cromatografía y del revelado con vapores de yodo    Sustancias de referencia * Color después del revelado   con vapores de yodo *    R * Beige *    P * Marrón *    alfa-N * Violáceo *    beta-N * Marrón claro *    H * Violáceo marrón *    MPD * Amarillo marrón *    PPD * Violáceo marrón *    MTD * Marrón oscuro *    PTD * Amarillo marrón *    DAP * Marrón oscuro *    AOP * Anaranjado *    MAP * Amarillo marrón *    PAP * Violáceo marrón *    2-NPPD * Marrón *    4-NOPD * Anaranjado *    Figura 1 : ver D.O.    III . IDENTIFICACION Y DETERMINACION DE LOS NITRITOS    A . IDENTIFICACION    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACION    Este método es conveniente para la identificación   de los nitritos en los productos cosméticos .    Es aplicable en particular a las cremas , a los productos   en pasta y a los dentífricos .    2 . PRINCIPIO    La caracterización de los nitritos se realiza   mediante la 2-aminobenzaldehido fenil-hidrazona .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Acido sulfúrico diluído : diluir 2 ml de   ácido sulfúrico concentrado ( d (20,4) = 1,84 )   en 11 ml de agua destilada .    3.2 . Acido clorhídrico diluido : diluir 1 ml de   ácido clorhídrico concentrado ( d (20,4) = 1,19 )   en 11 ml de agua destilada .    3.3 . Metanol    3.4 . Solución de 2-aminobenzaldehido-fenil-hidrazon   ( reactivo nitrina R ) en metanol .    Pesar 2 g de Nitrina R e introducirlos en un matraz   aforado de 100 ml . Añadir gota a gota 4 ml de   ácido clorhídrico diluido ( punto 3.2 ) y agitar .   Completar con metanol y mezclar hasta que la solución   quede totalmente límpida . Conservar la solución   en un frasco de vidrio topacio ( punto 4.3 ) .    4 . APARATOS    4.1 . Vasos de 50 ml    4.2 . Matraz aforado de 100 ml    4.3 . Frasco de vidrio topacio de 125 ml    4.4 . Plaquita de vidrio de 10 × 10 cm    4.5 . Espátula de materia sintética    4.6 . Papel de filtro de 10 × 10 cm    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Extender uniformemente una parte de la muestra   que vaya a examinarse sobre la placa de vidrio   ( punto 4.4 . ) Cuidar de que el espesor de la capa   no supere 1 cm .    5.2 . Empapar en agua destilada una hoja de papel de   filtro ( punto 4.6 ) y depositar sobre la muestra   aplicándola convenientemente con la espátula   ( punto 4.5 ) .    5.3 . Esperar alrededor de 1 min y echar en el centro   del papel de filtro :     - 2 gotas de ácido sulfúrico diluido ( punto 3.1 )   y luego     - 2 gotas de la solución de nitrina ( punto 3.4 )    5.4 . Después de 5 a 10 s , retirar el papel de   filtro y examinarlo a la luz del día . Una   coloración rojo violácea indica la presencia de   nitritos .    Cuando el contenido de nitritos es poco elevado ,   la coloración violácea vira al amarillo en 5 a 15 s .   Este viraje sólo ocurre al cabo de uno o dos minutos ,   en presencia de cantidades más importantes de nitritos .    6 . OBSERVACION    La intensidad de la coloración violácea , así   como la duración del viraje a amarillo , puede dar   una indicación del contenido del nitrito de la muestra .    B . DETERMINACIÓN    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    El método indicado a continuación está adaptado   a la determinación de los nitritos en los productos   cosméticos .    2 . DEFINICIÓN    El contenido de nitrito de la muestra , determinado   por este método , se expresa en porcentaje de la   masa de nitrito de sodio .    3 . PRINCIPIO    Después de dilución y clarificación de la   muestra , se realiza una reacción colorimétrica   con N(alfa-naftil-etilendiamina) y la intensidad de   la coloración obtenida se mide a 538 nm .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    4.1 . Reactivos de clarificación ( estos reactivos   no pueden ser utilizados más de una semana después   de su preparación ) .    4.1.1 . Reactivo I ( Carrez I ) : disolver 106 g de   ferrocianuro de potasio K4Fe (CN)6 3H2O en agua destilada   y completar hasta 1000 ml .    4.1.2 . Reactivo II ( Carrez II ) disolver 219,5 g   de acetato de cinc Zn(CH3COO)2 2H2O y 30 ml de   ácido acético glacial en agua destilada y completar   hasta 1000 ml .    4.2 . Solución de nitrito de sodio : en un matraz   aforado de 1000 ml , disolver en agua destilada 0,500 g   de nitrito de sodio y completar hasta la señal .   Diluir 10,0 ml de esta solución madre hasta 500 ml .   1 ml de esta última solución = 10µg de NaNo2 .    4.3 . Solución de hidróxido de sodio normal .    4.4 . Solución al 0,2 % de clorhidrato de sulfanilamida :   disolver 2 g de sulfanilamida en 800 ml de agua   calentando . Enfriar y añadir 100 ml de HCI   concentrado y agitando . Completar hasta 1000 ml .    4.5 . Acido clorhídrico 5 N .    4.6 . Reactivo al N-(alfa-naftil) : esta solución   se preparará el mismo día de su utilización .    Disolver 0,1 g de diclorhidrato de N - ( alfa-naftil   etilendiamina ) en agua y completar hasta 100 ml .    5 . APARATOS    5.1 . Balanza analítica    5.2 . Matraces aforados de 100 , 250 , 500 y 1000 ml    5.3 . Pipetas aforadas    5.4 . Probetas de 100 ml    5.5 . Filtro plegado exento de nitrito , de 15 cm   de diámetro    5.6 . Baño de María    5.7 . Espectrofotómetro con cubetas de 1 cm   de trayecto óptico    5.8 . Medidor de pH    5.9 . Microbureta de 10 ml    5.10 . Vaso de 50 ml    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Pesar con una precisión de 0,1 mg   aproximadamente 0,5 g ( m ) de la muestra homogeneizada   e introducirlos en un vaso de 250 ml . Diluir hasta   un volumen de aproximadamente 150 ml con agua destilada   caliente . Colocar el vaso durante media hora en   baño de María a 80 ° C y agitar de forma   intermitente .    6.2 . Enfriar a la temperatura ambiente y añadir   sucesivamente sin dejar de agitar , 2 ml del reactivo   de Carraz I ( punto 4.1.1 ) y 2 ml del reactivo de   Carrez II ( punto 4.1.2 ) .    6.3 . Ajustar el pH a 8,3 en el medidor de pH , con   una solución N de hidróxido de sodio . Trasvasar   cuantitativamente a un matraz aforado de 250 ml y   completar hasta la señal con agua destilada .    6.4 . Mezclar y filtrar en filtro plegado ( punto 5.5 ) .    6.5 . Con una pipeta echar una cantidad adecuada   ( V ml ) del filtrado claro que no supere los 25 ml   en una matraz aforado de 100 ml ; diluir con agua   destilada hasta 60 ml .    6.6 . Mezclar , añadir 10,0 ml de clorhidrato de   sulfanilamida ( punto 4.4 ) y después 6,0 ml de   ácido clorhídrico 5 N ( punto 4.5 ) . Mezclar y   dejar reposar durante 5 min . Añadir 2,0 ml del   reactivo N - ( alfa-naftil ) ( punto 4.6 ) , mezclar   y dejar reposar durante 3 min . Completar hasta 100 ml   y mezclar .    6.7 . Preparar una prueba en blanco repitiendo las   operaciones efectuadas en los puntos 6.5 y 6.6 sin   añadir el reactivo N ( alfa-naftil ) ( punto 4.6 ) .    6.8 . Medir ( punto 5.7 ) la densidad óptica a 538 nm   de la solución de la muestra ( punto 6.6 ) en   relación con la prueba en blanco ( punto 6.7 ) .    6.9 . Leer en la curva patrón ( punto 6.10 ) el   contenido de nitrito de sodio en µg por 100 ml   de solución ( m1 ) correspondiente a la densidad   óptica encontrada para la muestra ( punto 6.8 ) .    6.10 . Curva patrón . Preparar con ayuda de la   solución de nitrito de sodio ( punto 4.2 ) una curva   patrón en la gama de 0-20-40-60-80-100 µg de   nitrito de sodio por 100 ml .    7 . CALCULO    Calcular el contenido de nitrito de sodio de la   muestra en porcentaje de la masa mediante la fórmula   siguiente :     % NaNO2 = 20 250/V × m1 × 10 -6 × 100/m =   m1/ ( V × m × 40 )    en donde :    m = masa en g de la muestra sometida al   análisis ( punto 6.1 ) ,    m1 = contenido de nitrito de sodio en   microgramos determinado de acuerdo con las indicaciones   del punto 6.9 ,    V = número de ml de filtrado utilizado para   la medida ( punto 6.5 ) .    8 . REPETIBILIDAD (1)    Para un contenido de nitrito de sodio del 0,2 % ,   la diferencia entre los resultados de 2 determinaciones   paralelas efectuadas sobre la misma muestra ,   no debe superar el 0,005 % .    IV . IDENTIFICACION Y DETERMINACION DEL FORMALDEHIDO   LIBRE    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACION    El método describe la identificación y la   determinación del formaldehído libre .    Se aplica a todos los productos cosméticos e   incluye tres partes :    1.1 . identificación ,    1.2 . determinación por colorimetría con   acetilacetona :    este método no se aplica cuando el   formaldehído está combinado , o polimerizado   en el caso de los donadores de formol .    Si el resultado supera la concentración   máxima autorizada en el producto acabado , se   utiliza el siguiente método ,    1.3 . determinación con bisulfito :    evita que se tenga en cuenta el formaldehído   combinado o polimerizado en el caso de los donadores   de formol .    No obstante , se determinan algunas combinaciones   inestables ( por ejemplo , la hexametileno   tetramina ) . Además , en presencia de   solución tampón , la medición de la   alcalinidad es difícil .    2 . DEFINICION    El contenido de la muestra en formaldehído   libre , determinado de acuerdo con este método ,   se expresa en porcentaje de la masa de formaldehído .    3 . PRINCIPIO    3.1 . Parte I    El formaldehído en medio sulfúrico de una   coloración rosa o malva en presencia del   reactivo de Schiff .    3.2 . Parte II    El formaldehído reacciona con la acetilacetona   en presencia de acetato de amonio para formar   la 3-5-diacetil-1-4-dihidrolutidina . Esta se   extrae con el butanol-I . La densidad   óptica del extracto se mide a 410 nm .    3.3 . Parte III    El formaldehído reacciona con el sulfito en medio   ácido a 0 ° C para formar un compuesto   de adición . Los protones sobrantes son titulados   con hidróxido de sodio . Los protones consumidos   constituyen la base de cálculo para determinar la   cantidad de formaldehído . Un ensayo en blanco   sin sulfito permite medir la alcalinidad o acidez   del medio .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    4.1 . Acido acético concentrado    4.2 . Acetato de amonio anhidro    4.3 . Butanol-I    4.4 . Acido sulfúrico aproximadamente 2 N    4.5 . Solución de sulfito de sodio 0,1 M   recién preparada    4.6 . Reactivo de Schiff    En un vaso , pesar 100 mg de fucsina ;   disolverlos en 75 ml de agua a 80 ° C .   Después de enfriar , añadir 2,5 g de sulfito   de sodio hidratado con 7 H2O y 1,5 ml de   ácido clorhídrico concentrado ( d (20,4) = 1,19 ) .   Completar hasta 100 ml ( tiempo de conservación ;   dos semanas ) .    4.7 . Reactivo de acetilacetona    En un matraz aforado de 1000 ml , disolver :    150 g de acetato de amonio ,    2 ml de acetilacetona recientemente destilada   a presión reducida y que no debe presentar   ninguna absorción a 410 nm ,    3 ml de ácido acético concentrado .    Completar hasta 1 000 ml con agua ( pH de   la solución aproximadamente 6,4 ) .    Este reactivo debe estar recien preparado .    4.8 . Solución titulada de ácido sulfúrico   0,1 N    4.9 . Solución titulada de hidróxido de sodio   0,1 N    4.10 . Solución titulada de yodo 0,1 N    4.11 . Solución titulada de tiosulfato de sodio   0,1 N    4.12 . Formaldehído patrón : solución madre    En un matraz aforado de 1 000 ml , introducir 5 g   de formaldehído con un título del 37 al 40 % y   completar hasta 1 000 ml .    Determinación del título de la solución madre .    Extraer 10,00 ml , añadir 25,00 ml de solución   titulada de yodo 0,1 N y 10 ml de solución de   hidróxido de sodio N .    Dejar reposar durante 5 min .    Acidificar con 11 ml de HC1 N y determinar el yodo   en exceso con una solución titulada de tiosulfato   de sodio 0,1 N en presencia de engrudo de almidón   como indicador .    1 ml de solución como de yodo 0,1 N consumida ,   corresponde a 1,5 mg de formaldehído .    4.13 . Formaldehído patrón : solución diluida    Realizar sucesivamente una dilución a 1/20   y después una dilución a 1/100 de la solución   madre en agua desmineralizada .    1 ml de esta solución contiene aproximadamente   1 µg de formaldehído .    Calcular su contenido exacto .    4.14 . Solución de timolftaleina    0,1 g por 100 ml de etanol al 50 % v/v .    4.15 . Reactivo ( punto 4.7 ) sin acetilacetona    5 . APARATOS    5.1 . Material habitual de laboratorio    5.2 . Filtro « separador de fases »   ref. Whatman 1 PS ( o equivalente )    5.3 . Centrífuga    5.4 . Espectrofotómetro    5.5 . Cubetas de vidrio de 1 cm de recorrido   óptico    5.6 . Potenciógrafo    5.7 . Electrodos vidrio/calomelano ( se   recomienda utilizar electrodos especiales para   baja temperatura ) .    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Identificación    6.1.1 . En un vaso de 10 ml introducir aproximadamente   2 g de muestra .    6.1.2 . Añadir 2 gotas de H2 SO4 2N ( punto 4.4 )   y 2 ml de reactivo de Schiff ( punto 4.6 ) .   ( Este reactivo debe estar rigurosamente incoloro en   el momento de su empleo ) . Agitar , dejar en   contacto durante 5 min .    6.1.3 . Si en un plazo de 5 min se observa una   coloración rosa o malva , la cantidad de   formaldehído presente es superior al 0,01 % .   Proceder luego a la determinación siguiendo el   procedimiento del punto 6.2 y , si es necesario ,   el del punto 6.3 .    6.2 . Determinación colorimétrica con   acetilacetona    6.2.1 . Solución de muestra    6.2.1.1 . En un matraz aforado de 100 ml ,   pesar con una precisión de 0,001 g aproximadamente ,   una masa de muestra para ensayo ( en g ) correspondiente   a una cantidad supuesta de formaldehído de   unos 150 µg .    6.2.1.2 . Completar hasta 100 ml con agua y   mezclar ( solución S ) .    6.2.1.3 . En un matraz cónico de 50 ml añadir :    10,00 ml de solución S ,   5,00 ml de reactivo de acetilacetona ( punto 4.7 ) y   agua desmineralizada para obtener un volumen   de 30 ml .    6.2.2 . Solución testigo    La interferencia eventual de una coloración   de fondo en la muestra para ensayo se elimina de   la manera siguiente :    en un matraz cónico de 50 ml añadir :    10,0 ml de solución S ,    5,0 ml del reactivo ( punto 4.15 ) y   agua desmineralizada para obtener un volumen de 30 ml .    6.2.3 . Ensayo en blanco    En un matraz cónico de 50 ml añadir :    5,0 ml de reactivo de acetilacetona ( punto 4.7 ) y   agua desmineralizada para obtener un volumen de 30 ml .    6.2.4 . Determinación    6.2.4.1 . Agitar las mezclas preparadas en los   puntos 6.2.1.3 , 6.2.2 y 6.2.3 .    Sumergir los matraces cónicos en un baño de   María a 60 ° C durante 10 min. exactamente .    Enfriar durante 2 min. en un baño de agua helada .    6.2.4.2 . Trasvasar a una ampolla de decantación   de 50 ml que contenga 10 ml de butanol-I ( punto 4.3 ) .   Enjuagar con 3 a 5 ml de agua .    Agitar enérgicamente la mezcla durante 30 s   exactamente . Dejar decantar .    6.2.4.3 . Filtrar en filtro « separador de   fases » ( punto 5.2 ) en las cubetas de medida .    Se puede realizar también una centrifugación   ( 5 000 r.p.m. durante 5 min ) .    6.2.4.4 . Medir la densidad óptica A1 a 410 nm   del extracto de la solución de muestra obtenida   en el punto 6.2.1.3 contra el extracto de la solución   testigo del punto 6.2.2 .    6.2.4.5 . De la misma manera , medir el   extracto del ensayo en blanco obtenido en el   punto 6.2.3 contra butanol-I ( A2 ) .    NB : Todas estas operaciones deben ejecutarse   en un plazo de 25 min a partir del momento en   que el matraz cónico se coloca en el baño de   María a 60 ° C .    6.2.5 . Curva patrón    6.2.5.1 . En un matraz cónico de 50 ml introducir :    5,00 ml de solución patrón diluida   ( punto 4.13 ) ,    5,00 ml de reactivo de acetilacetona ( punto 4.7 ) y   agua desmineralizada para obtener un volumen final   de 30 ml .    6.2.5.2 . Continuar según las indicaciones del   punto 6.2.4.5 . y medir la densidad óptica con   relación al butanol-I ( punto 4.3 ) .    6.2.5.3 . Repetir el proceso con 10 , 15 , 20 , 25 ml   de solución patrón diluida ( punto 4.13 )    6.2.5.4 . Para obtener el valor del punto O   ( que corresponde a la coloración de los   reactivos ) proceder como en el punto 6.2.4.5 .    6.2.5.5 . Construir la curva patrón después de   restar el valor del punto O de cada una de las   densidades ópticas obtenidas en los puntos 6.2.5.1   y 6.2.5.3 .    La ley de Beer se respeta hasta 30 µg de   formaldehído .    6.3 . Determinación con bisulfito    6.3.1 . Toma de ensayo    6.3.1.1 . Para el ensayo :    en un vaso tarado , pesar con una precisión de   0,001 g , una masa de muestra ( gramos m )   correspondiente a una cantidad supuesta de   formaldehído comprendida entre 3 y 20 mg .    6.3.1.2 . Para el ensayo testigo :    en un vaso tarado pesar con una precisión de   0,001 g , una cantidad equivalente de la muestra   ( gramos m' ) .    6.3.2 . Determinación    6.3.2.1 . Colocar 50,00 ml de Na2SO3 0,1 M ( punto 4.5 )   en un vaso de 100 ml y añadir 10,00 ml de H2SO4   0,1 N ( punto 4.8 ) . Agitar .    6.3.2.2 . Sumergir el vaso en una mezcla de hielo y   sal a fin de llevar la temperatura de la solución   del punto 6.3.2.1 a + 2 ° C . Introducir   cuantitativamente la toma en ensayo m ( punto 6.3.1.1 ) .    6.3.2.3 . Titular rápidamente por potenciometría   con NaOH 0,1 N ( punto 4.9 ) agitando continuamente   y manteniendo la temperatura entre + 2 y + 4 ° C   ( la zona de neutralización se sitúa entre los   pH 9 y 11 ) .    Sea V1 el volúmen de NaOH 0,1 N ( punto 4.9 )   utilizado .    6.3.3 . Ensayo en blanco    Titular la solución del punto 6.3.2.1 en las   condiciones descritas en el punto 6.3.2 . Sea V2 el   volúmen de NaOH 0,1 N ( punto 4.9 ) utilizado .    6.3.4 . Ensayo testigo    Determinar la acidez o la alcalinidad de la muestra   por titulación potenciométrica con NaOH 0,1 N   ( punto 4.9 ) o H2SO4 0,1 N ( punto 4.8 ) en la toma   de ensayo m' ( punto 6.3.1.2 ) .    Sea v' el volúmen de NaOH 0,1 N o de H2SO4 0,1 N   utilizado . v' puede ser igual a O .    6.3.5 . NB :    Es importante respetar estrictamente las condiciones   del procedimiento .    Se puede efectuar la determinación en presencia   de timolftaleina ( punto 4.14 ) como indicador .    7 . CALCULOS    7.1 . Determinación colorimétrica con acetilacetona    7.1.1 . Restar A2 de A1 y leer en la curva patrón   ( punto 6.2.5.5 ) la cantidad C expresada en microgramos   de formaldehído contenida en la solución del   punto 6.2.1.1 .    7.1.2 . El contenido de formaldehído de la muestra   ( % m/m ) se calcula mediante la fórmula :     % de formaldehído = C/ ( 10³ × m )    7.2 . Determinación con bisulfito    Añadir a la masa m el volumen de NaOH 0,1 N y   de H2SO4 0,1 N utilizado en el ensayo testigo   ( punto 6.3.4 ) según la fórmula :   v = ( v' × m ) /m    Para productos neutros V = 0 .    7.2.1 . Caso de un producto ácido :     % HCHO = 0,30 ( V2 - V1 + v ) /m    7.2.2 . Caso de un producto alcalino :     % HCHO = 0,30 ( V2 - V1 - v ) /m    7.3 . Si hay divergencia entre los resultados de los   2 métodos , sólo se tomará en consideración   el resultado menor .    8 . REPETIBILIDAD (2)    Para un contenido en formaldehído del 0,2 % , la   diferencia entre los resultados de 2 determinaciones   paralelas efectuadas sobre la misma muestra no debe   superar el 0,005 % para la determinación   colorimétrica con acetilacetona ni el 0,05 % para la   determinación con bisulfito .    V . DETERMINACION DE LA RESORCINA EN LOS CHAMPUES   Y EN LAS LOCIONES CAPILARES    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACION    Este método describe la determinación de la   resorcina en los champúes y lociones capilares por   cromatografía en fase gaseosa . Se aplica a   concentraciones del 0,1 al 2,0 % de la masa del   producto .    2 . DEFINICION    El contenido en resorcina determinado según   este método se expresa en porcentaje de la masa de   resorcinol .    3 . PRINCIPIO    La resorcina y el 3,5-dihidroxitolueno utilizado como   patrón interno , se aíslan de la muestra por   cromatografía en capa fina . Los dos compuestos se   aíslan mediante raspado de la placa de capa fina   y extracción con metanol . A continuación se secan   los residuos , se sililan y se determinan por   cromatografía en fase gaseosa .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica :    4.1 . Acido clorhídrico al 25 % ( m/m )    4.2 . Metanol    4.3 . Etanol al 96 % ( v/v )    4.4 . Placas de sílice sobre soporte plástico   o aluminio , con indicador fluorescente listas para el   empleo y desactivadas .    Preparar como sigue : vaporizar agua sobre las placas   de sílice hasta que queden brillantes . Secarlas a   temperatura ambiente durante 1 a 3 horas .    NB :    Si las placas no son desactivadas , puede haber   pérdidas de resorcina por absorción irreversible   sobre la sílice .    4.5 . Disolvente de desarrollo : acetona - cloroformo -   ácido acético ( 20 - 75 - 5 v ) .    4.6 . Solución patrón de resorcina ; disolver   400 mg de resorcina en 100 ml de etanol al 96 %   ( 1 ml corresponde a 400 µg de resorcina ) .    4.7 . Solución de patrón interno ; disolver 400 mg   de 3,5-dihidroxitolueno ( DHT ) en 100 ml de etanol   al 96 % ( 1 ml corresponde a 4000 µg de DHT ) :    4.8 . Mezcla patrón : mezclar 10 ml de solución   del punto 4.6 y 10 ml de solución del punto 4.7 en un   matraz aforado de 100 ml , completar hasta volumen   con etanol al 96 % y mezclar ( 1 ml corresponde a   400 µg de resorcina y 400 µg de DHT ) .    4.9 . Reactivos de sililación :    4.9.1 . N , O-bis-(trimetilsilil) trifluoroacetamida   ( BSTFA )    4.9.2 . Hexametildisilazano ( HMDS )    4.9.3 . Trimetilclorosilano ( TMCS )    5 . APARATOS    5.1 . Equipo habitual de cromatografía en capa   fina y en fase gaseosa    5.2 . Instrumental de vidrio de laboratorio    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Preparación de la muestra    6.1.1 . Pesar con precisión en un vaso de 150 ml   una toma de ensayo del producto ( gramos m ) que   contenga de 20 a 50 mg aproximadamente de resorcina .    6.1.2 . Acidificar con ácido clorhídrico ( punto 4.1 )   ( aproximadamente 2 a 4 ml ) . Añadir 10 ml ( 40 mg   de DHT ) de solución interna ( punto 4.7 ) y mezclar .   Trasvasar a un matraz aforado de 100 ml con ayuda de   etanol . Completar hasta volumen con etanol ( punto 4.3 )   y mezclar .    6.1.3 . Depositar 250 µl de la solución del   punto 6.1.2 en una placa de sílice desactivada   ( punto 4.4 ) en una línea continua de aproximadamente   8 cm de longitud . Tratar de conseguir una banda lo   más fina posible .    6.1.4 . Depositar de la misma manera ( punto 6.1.3 ) ,   en la misma placa , 250 µl de mezcla patrón   ( punto 4.8 ) .    6.1.5 . En la línea de partida , depositar 2 puntos   de 5 µl de cada solución de los puntos 4.6 y 4.7   para facilitar la localización después del   revelado de la placa .    6.1.6 . En una cubeta no saturada , desarrollar la   placa con el disolvente de desarrollo ( punto 4.5 )   hasta que haya recorrido 12 cm desde la línea de   partida ( 45 min ) . Secar la placa al aire y   localizar la zona resorcina/DHT bajo luz UV a 254 mm .   Ambos compuestos tienen aproximadamente el mismo valor   de Rf .    Retirar las bandas así localizadas , reunir el   absorbente de cada una de ellas en un matraz de 10 ml .    6.1.7 . Extraer el adsorbente que contiene la muestra   y el que contiene la mezcla patrón de la muestra   siguiente :    Añadir 2 ml de metanol ( punto 4.2 ) y extraer   durante 1 hora agitando de manera contínua . Filtrar   la mezcla y repetir la extracción durante 15 min con   2 ml de metanol ( punto 4.2 ) .    6.1.8 . Evaporar el disolvente de la totalidad de los   extractos colocándolos durante la noche en un desecador   en vacío , lleno de un desecante adecuado . No   evaporar en caliente .    6.1.9 . Sililar los residuos ( punto 6.1.8 ) como   se indica en 6.1.9.1 o en el punto 6.1.9.2 .    6.1.9.1 . Añadir 200 µl de BSTFA ( punto 4.9.1 ) y   dejar la mezcla en un recipiente tapado a temperatura   ambiente , durante 12 horas .    6.1.9.2 . Añadir sucesivamente 200 µl de HMDS   ( punto 4.9.2 ) y 100 µl de TMCS ( punto 4.9.3 ) y   calentar la mezcla durante 30 min a 60 ° C en un   recipiente tapado . Enfriar .    6.2 . Cromatografía en fase gaseosa    6.2.1 . Condiciones para la cromatografía    La fase estacionaria debe dar un grado de resolución   igual o superior a 1,5 .    R = 2 ( d' R2 - d' R1 ) / ( W1 + W2 )    en donde    R1 y R2 = tiempo de retención expresado en min   de 2 picos ,    W1 y W2 = anchura de los mismos picos a media altura ,    d' = velocidad de avance del papel en mm/min .    Las condiciones operativas siguientes , permiten   obtener este resultado :    columna : acero inoxidable ,    longitud : 200 cm ,    diámetro : * 3 ( 1/8'' ) ,    llenado : 10 % OV 17 en chromosorb WAW 100 - 120 mallas .    detector de ionización de llama    temperaturas :    columna : 185 ° C ( isotermo )    inyector : 250 ° C    detector : 250 ° C    gas vector : nitrógeno ,    caudal 45 : ml/min .    para ajustar el caudal de hidrógeno y de aire   seguir las instrucciones del fabricante .    6.2.2 . Inyectar 1 a 3 µl de las soluciones   obtenidas en el punto 6.1.9 . Realizar 5 inyecciones   para cada solución . Medir la superficie de los picos   de manera precisa y calcular la relación de las   superficies :    S = superficie del pico de resorcina/superficie   del pico del DHT .    7 . CALCULO    La concentración en resorcina de la muestra ,   expresada en porcentaje de masa ( % m/m ) , viene   dada por :     % de resorcina = 4/M × S muestra/S mezcla patrón    donde :    M = toma de ensayo en gramos ( punto 6.1.1 ) ,    S muestra = relación media obtenida para los picos   de la solución muestra ,    S mezcla patrón = relación media obtenida para   los picos de la mezcla patrón según el punto 6.2.2 .    8 . REPETIBILIDAD (3)    Para un contenido de resorcina del 0,5 % la diferencia   entre los resultados de 2 determinaciones paralelas   efectuadas sobre la misma muestra , no debe superar   el 0,025 % .    VI . DETERMINACION DEL METANOL CON RELACION AL ETANOL   O AL PROPANOL-2    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACION    Este método describe la determinación del metanol   por cromatografía en fase gaseosa en todos los tipos   de productos cosméticos ( incluidos los aerosoles ) .   Se aplica a concentraciones relativas del 0 al 10 % .    2 . DEFINICION    El contenido en metanol determinado de acuerdo con   este método se expresa en porcentaje de masa de   metanol con relación a la masa de etanol o de   propanol-2 .    3 . PRINCIPIO    La determinación se efectúa por cromatografía   en fase gaseosa .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    4.1 . Metanol    4.2 . Etanol absoluto    4.3 . Propanol-2    4.4 . Cloroformo , enjuagado con agua para   eliminar los alcoholes    5 . APARATOS    5.1 . Cromatógrafo en fase gaseosa con detector   catarométrico ( para las muestras de productos   en aerosoles ) .    Cromatógrafo en fase gaseosa con detector de   ionización de llama ( para las muestras de   otros productos ) .    5.2 . Matraces aforados de 100 ml    5.3 . Pipetas graduadas ( 2 ml , 20 ml , 0-1 ml )    5.4 . Microjeringas de 0 a 100 µl y 0 a 5 µl    Para las muestras de productos en aerosol solamente ,   jeringa de gas especial con válvula deslizante   ( figura 5 del método de muestreo ) (4)    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Preparación de las muestras    6.1.1 . Los productos en aerosol se tratan como   se indica en el Capítulo II del Anexo de la Directiva   de la Comisión 80/1335/CEE de 22 de diciembre   de 1980 (4) y después se analizan por   cromatografía en fase gaseosa en las condiciones   prescritas en el punto 6.2.1 .    6.1.2 . Los demás productos tratados como   se indica en el Capítulo II antes mencionado   se diluyen en agua hasta una concentración del   1 al 2 % de etanol o de propanol-2 , después   se analizan por cromatografía en fase gaseosa   en las condiciones prescritas en el punto 6.2.2 .    6.2 . Condiciones de la cromatografía en fase   gaseosa    6.2.1 . Para las muestras de productos en aerosol    6.2.1.1 . Se utilizará una columna llena   con un 10 % de Hallcomid M 18 en chromosorb W de   100 - 120 mallas y un detector catarométrico .    6.2.1.2 . La fase estacionaria debe dar un   grado de resolución igual o superior a 1,5 :    R = 2 ( d' R2 - d' R1 ) / ( W1 + W2 )    en donde :    R1 y R2 = tiempo de retención expresado en min de   2 picos ,    W1 y W2 = anchura de los mismos picos a media   altura ,    d' = velocidad de avance del papel en mm/min .    6.2.1.3 . Las condiciones siguientes permiten   obtener estos resultados :    Tipo de columna : acero inoxidable    longitud : 3,5 m    diámetro : 3 mm    Corriente del detector    catarométrico : 150 mA    Gas vector : Helio - presión : 2,5 bares ; caudal :   45 ml/min .    Temperaturas :    inyector : 150 ° C    detector : 150 ° C    columna : 65 ° C    6.2.2 . Para las muestras de otros productos :    6.2.2.1 . Se utilizará una columna llena   de chromosorb 105 o de porapak QS y un   detector de ionización de llama .    6.2.2.2 . La fase estacionaria debe tener un   grado de resolución igual o superior a 1,5 :   R = 2 ( d' R2 - d' R1 ) / ( W1 + W2 )    en donde :    R1 y R2 = tiempo de retención expresado   en min de 2 picos ,    W1 y W2 = anchura de los mismos picos a media   altura ,    d' = velocidad de avance del papel en mm/min .    6.2.2.3 . Las condiciones siguientes permiten obtener   estos resultados    Tipo de columna : acero inoxidable    longitud : 2 m    diámetro : 3 mm    electrómetro : sensibilidad de 8.10 -10 A    gas vector : nitrógeno - presión : 2,1 bares ;   caudal : 40 ml/min    auxiliar : hidrógeno - presión : 1,5 bares ;   caudal : 20 ml/min    Temperaturas :    inyector : 150 ° C    detector : 230 ° C    columna : 120 ° C ó 130 ° C    7 . CURVAS PATRON    7.1 . En las condiciones prescritas en el punto 6.2.1 .   ( columna Hallcomid M 18 ) utilizar las mezclas   patrón que se definen a continuación . Preparar   estas mezclas por medida volumétrica , pero determinar   la cantidad exacta pesando inmediatamente después   de cada adición .    Concentración relativa % m/m * Metanol ml *   Etanol ml ( o propanol-2 ) * Cloroformo hasta   un volumen de *    2,5 % aproximadamente * 0,5 * 20 * 100 ml *    5,0 % aproximadamente * 1,0 * 20 * 100 ml *    7,5 % aproximadamente * 1,5 * 20 * 100 ml *    10,0 % aproximadamente * 2,0 * 20 * 100 ml *    Inyectar de 2 a 3 µl en el cromatógrafo de   acuerdo con las condiciones prescritas en el punto   6.2.1 . Calcular la relación de las superficies   de los picos ( metanol/etanol ) o ( metanol/propanol-2 )   de cada mezcla . Trazar la curva patrón utilizando :    como eje de las abscisas : el porcentaje de metanol   en relación al etanol o al propanol-2 ,    como eje de las ordenadas : la relación de las   superficies de los picos ( metanol/etanol ) o   ( metanol/propanol-2 ) .    7.2 . En las condiciones prescritas en el   punto 6.2.2 ( Porapak QS o Chromosorb 105 )   utilizar las mezclas patrón que se definen a   continuación . Preparar estas mezclas   por medida volumétrica , pero determinar la   cantidad exacta pesando inmediatamente después de   cada adición .    Concentración relativa % m/m * Metanol µl *   Etanol ml ( o propanol-2 ) * Agua hasta un volumen de *    2,5 % aproximadamente * 50 * 2 * 100 ml *    5,0 % aproximadamente * 100 * 2 * 100 ml *    7,5 % aproximadamente * 150 * 2 * 100 ml *    10,0 % aproximadamente * 200 * 2 * 100 ml *    Inyectar 2 a 3 µl en el cromatógrafo de   acuerdo con las condiciones prescritas en el punto 6.2.2 .   Calcular la relación de las superficies de los   picos ( metanol/etanol ) o ( metanol/propanol-2 ) de   cada mezcla . Trazar la curva patrón utilizando :    como eje de las abscisas : el porcentaje de metanol   en relación al etanol o al propanol-2 .    como eje de las ordenadas : la relación de las   superficies de los picos ( metanol/etanol ) o   ( metanol/propanol-2 ) .    7.3 . En ambos casos la curva patrón deberá   ser una recta .    8 . REPETIBILIDAD (5)    Para los contenidos en metanol del 5 % en   relación al etanol o al propanol-2 , la diferencia   entre los resultados de dos determinaciones paralelas   efectuadas sobre la misma muestra no deberá   sobrepasar el 0,25 % .    (1) Según la norma ISO 5725 .    (2) Según la norma ISO 5725 .    (3) Según la norma ISO 5725 .    (4) DO n º L 383 de 31 . 12 . 1980 , p. 27 .    (5) Según la norma ISO 5725 .