CELEX: 21987A0207(05)
Language: ro
Date: 1962-05-14 00:00:00
Title: Protocol la Acordul european privind schimbul de reactivi de determinare a grupelor sanguine

02/Volumul 03
            
            
               RO
            
            
               Jurnalul Ofícial al Uniunii Europene
            
            
               164
            
         21987A0207(05)
   
               L 037/33
            
            
               JURNALUL OFÍCIAL AL UNIUNII EUROPENE
            
            
               
            
         
      PROTOCOL LA ACORDUL EUROPEAN
   
   privind schimbul de reactivi de determinare a grupelor sanguine
   DISPOZIȚII GENERALE
   
               1.
            
            
               
                  Particularități
               
               Un reactiv pentru determinarea grupelor sanguine trebuie să reacționeze cu toate probele de sânge examinate care conțin antigenul omolog al anticorpului sau al celorlalte substanțe menționate pe etichetă.
               Când un reactiv este utilizat conform tehnicii recomandate de producător, nici unul dintre factorii sau fenomenele următoare nu trebuie să apară:
               
                           (a)
                        
                        
                           proprietăți hemolitice;
                        
                     
                           (b)
                        
                        
                           anticorpi sau substanțe diferite de cele menționate pe etichetă;
                        
                     
                           (c)
                        
                        
                           produse bacteriene care ar putea da naștere unor reacții false, pozitive sau negative;
                        
                     
                           (d)
                        
                        
                           pseudo-aglutinare prin formarea de rulouri;
                        
                     
                           (e)
                        
                        
                           fenomenul de inhibiție.
                        
                     
         
               2.
            
            
               
                  Potența
               
               Titrul se determină prin diluții duble succesive ale reactivului examinat într-un mediu corespunzător. La fiecare diluție se adaugă un volum egal dintr-o suspensie de globule roșii. Titrul este reciproca cifrei care reprezintă cea mai puternică diluție în care se poate observa o reacție vizibilă, diluția fiind calculată fără a include în volumul total volumul suspensiei globulare.
               În cazul anti-A și anti-B și al altor reactivi destinați să fie utilizați pe lame, aviditatea este exprimată cu ajutorul timpului necesar pentru aglutinarea pe lamă.
            
         
               3.
            
            
               
                  Standarde internaționale și unități internaționale
               
               Au fost stabilite standardele internaționale de către Organizația Mondială a Sănătății pentru reactivii pentru gruparea sanguină anti-A și anti-B, și anti-D incomplet și sunt în studiu pentru reactivii pentru gruparea sanguină cu alte specificități. O preparație standard internațională conține, prin definiție, un anumit număr de unități internaționale pe mg sau ml și această definiție este independentă de titrele observate pe anumite globule roșii (1).
            
         
               4.
            
            
               
                  Stabilitatea și data expirării
               
               Stocat în condițiile recomandate de producător, fiecare reactiv ar trebui să își păstreze calitățile necesare cel puțin un an.
               Pentru reactivii în stare lichidă, data expirării indicată pe etichetă nu trebuie să depășească un an de la data ultimului control satisfăcător al activității. Data expirării poate fi prelungită pe perioade de un an în urma unor noi controale.
               În ceea ce privește reactivii în stare deshidratată, data expirării indicată pe etichetă va depinde de rezultatele probelor de stabilitate și va trebui să fie aprobată de autoritățile naționale de control.
            
         
               5.
            
            
               
                  Conservarea
               
               Reactivii pentru gruparea sanguină pot fi păstrați în stare lichidă sau deshidratată. Reactivii deshidratați trebuie să fie conservați într-o atmosferă de gaz inert sau sub vid într-un recipient de sticlă sigilat în așa fel încât să nu permită pătrunderea umidității. Un reactiv deshidratat din nou în prezența anhidridei fosforice la o presiune care să nu depășească 0,02 mm coloană de mercur în 24 de ore nu pierde mai mult de 0,5 % din greutatea sa.
               Reactivii trebuie să fie preparați luându-se precauțiile de asepsie necesare și trebuie să fie feriți de orice contaminare bacteriologică. Pentru a evita proliferarea bacteriilor, autoritatea națională competentă poate decide că trebuie să se adauge reactivului (sau oricărui solvent furnizat cu reactivii deshidratați) un antiseptic și/sau un antibiotic, cu condiția ca, în prezența substanței adăugate, reactivul să corespundă întotdeauna condițiilor de particularitate și de activitate.
               Serurile de origine umană pentru gruparea sanguină trebuie să conțină cel puțin 2,5 mg de azot proteic pe ml de ser lichid sau reconstituit.
               Reactivii, fie în stare lichidă, fie după reconstituire, trebuie să fie transparenți și să nu conțină nici sedimente, nici gel, nici particule vizibile.
            
         
               6.
            
            
               
                  Culoarea
               
               Este de preferat ca reactivii pentru gruparea sanguină destinați unui schimb internațional să nu fie colorați artificial, cel puțin nu înainte ca un acord internațional să accepte un sistem uniform. Orice substanță colorantă adăugată trebuie să fie fără efect asupra reacțiilor specifice.
            
         
               7.
            
            
               
                  Distribuție și volum
               
               Reactivii de determinare a grupelor sanguine trebuie să fie distribuiți în așa fel și în astfel de volume, încât reactivul conținut într-un recipient să fie suficient pentru executarea testelor cu globulele martori pozitive și negative și, în plus, a testelor cu globulele necunoscute. Volumul conținut în fiecare recipient trebuie să fie astfel încât, dacă este cazul, să se poată face testele de activitate descrise în prezentul protocol.
            
         
               8.
            
            
               
                  Registrele și eșantioanele
               
               Laboratorul producător va trebui să înscrie în registrele sale toate etapele de producție și de control al reactivilor pentru gruparea sanguină. Eșantioane adecvate ale tuturor reactivilor distribuiți trebuie conservate de către acest laborator până când este posibil ca lotul să nu mai fie folosit.
            
         
               9.
            
            
               
                  Clasificarea reactivilor
               
               Reactivii care se pot utiliza pentru determinarea grupelor sanguine pot să conțină substanțe de origine umană, animală, vegetală (sau minerală), unele constituind principiul activ, altele aditivii necesari pentru întărirea activității lor sau păstrarea stabilității lor.
               Din motive tehnice, acești reactivi au fost grupați în trei capitole după originea constituentului lor activ. Aceasta nu înseamnă că reactivii de origine umană conțin exclusiv produse de origine umană sau că reactivii animali sau vegetali nu pot să conțină substanțe de origine umană.
            
         
               10.
            
            
               
                  Etichetarea, prospectul și certificatul
               
               O etichetă în limbile engleză și franceză tipărită negru pe alb va fi fixată pe fiecare recipient final și va purta următoarele indicații:
               
                           1.
                        
                        
                           numele și adresa unității producătoare;
                        
                     
                           2.
                        
                        
                           numele reactivului, așa cum este indicat în titlul specificațiilor corespunzătoare;
                        
                     
                           3.
                        
                        
                           numele și cantitatea antisepticului și/sau antibioticului – dacă este cazul – sau indicarea absenței acestuia;
                        
                     
                           4.
                        
                        
                           volumul sau, dacă reactivul este deshidratat, volumul și compoziția lichidului necesar pentru reconstituirea sa;
                        
                     
                           5.
                        
                        
                           data expirării;
                        
                     
                           6.
                        
                        
                           numărul lotului.
                        
                     În plus, această etichetă sau eticheta pachetului conținând mai multe recipiente finale sau prospectul care însoțește recipientele va purta următoarele indicații:
               
                           1.
                        
                        
                           numele și adresa unității producătoare;
                        
                     
                           2.
                        
                        
                           numele reactivului, așa cum este indicat în titlul specificațiilor corespunzătoare;
                        
                     
                           3.
                        
                        
                           volumul sau, dacă reactivul este deshidratat, volumul și compoziția lichidului necesar pentru reconstituirea sa;
                        
                     
                           4.
                        
                        
                           data ultimului control de activitate;
                        
                     
                           5.
                        
                        
                           data expirării (dacă este cazul);
                        
                     
                           6.
                        
                        
                           numărul lotului;
                        
                     
                           7.
                        
                        
                           descrierea potrivită a modului de folosire preconizat de către producător;
                        
                     
                           8.
                        
                        
                           condiții de stocare a flacoanelor nedeschise și precauții de luat după desigilare;
                        
                     
                           9.
                        
                        
                           compoziția exactă, inclusiv (dacă este cazul) antisepticul și/sau antibioticul;
                        
                     
                           10.
                        
                        
                           indicarea prezenței sau absenței oricărui produs de origine umană.
                        
                     Fiecare transport trebuie să fie însoțit de un certificat conform cu dispozițiile articolului 4 din acord și prevăzute în anexa la prezentul protocol. Exemple de etichete și de prospect sunt anexate la prezentul protocol.
            
         DISPOZIȚII SPECIALE
   A.   REACTIVI DE ORIGINE UMANĂ DE DETERMINARE A GRUPELOR SANGUINE
   
               (a)
            
            
               SERURI DE ORIGINE UMANĂ PENTRU GRUPAREA SANGUINĂ AB0
               
                           (i)
                        
                        
                           
                              Ser anti-A pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-A provine din sângele persoanelor din grupa B selecționate, imunizate sau nu cu globule roșii din grupa A sau cu substanțe specifice din grupa A. Serul anti-A aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenii A, adică acelea din grupele A și AB, inclusiv subgrupele A1, A2, A1B și A2B, și nu afectează globulele roșii umane lipsite de antigenii A, adică acelea din grupele 0 și B.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser anti-A trebuie să fie titrat în mod separat pe suspensii de globule A1, A2 și A2B, în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată cu ser pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparație echivalentă de referință. Potența serului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După un amestec pe o lamă de ser anti-A cu un volum egal dintr-o suspensie de globule A1, A2 și A2B dintr-o fracție volumică la 0,05-0,1, aglutinarea fiecărei suspensii trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale (reconstituite, dar nediluate) de ser pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparație standard de aceeași aviditate.
                        
                     
                           (ii)
                        
                        
                           
                              Serul anti-B pentru gruparea sanguină (uman)
                           
                           Serul anti-B provine din sângele persoanelor din grupa A selecționate, imunizate sau nu cu globule roșii din grupa B sau cu substanțe specifice din grupa B. Serul anti-B aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenii B, adică pe cele din grupele B și AB, și nu afectează globulele roșii umane lipsite de antigenul B, adică pe cele din grupele 0 și A.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser anti-B trebuie să fie titrat pe o suspensie de globule B în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată a serului pentru gruparea sanguină anti-B sau cu o preparație echivalentă de referință. Potența serului nu trebuie să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După un amestec pe o lamă de ser anti-B cu un volum egal dintr-o suspensie de globule B dintr-o fracție volumică la 0,05-0,1, aglutinarea trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale (reconstituite, dar nediluate) de ser pentru gruparea sanguină anti-B sau cu ajutorul unei preparații standard de aceeași aviditate.
                        
                     
                           (iii)
                        
                        
                           
                              Serul anti-A plus anti-B (grupa 0) pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-A plus anti-B (grupa 0) provine din sângele persoanelor din grupa 0 selecționate, imunizate sau nu cu globule roșii A și B sau cu substanțe specifice din grupele A și B. Serul anti-A plus anti-B (grupa 0) aglutinează globulele roșii umane care conțin aglutinogenii A sau B sau aglutinogenii A și B, adică cele din grupa A, inclusiv subgrupele A1 și A2, cele din grupa B și cele din grupa AB, inclusiv subgrupele A1B și A2B, și nu afectează globulele roșii umane lipsite de aglutinogenele A sau B, adică cele din grupa 0. Aglutinează globulele roșii umane conținând antigenul Ax (Ay sau Ao) (care nu sunt în general aglutinate de serul anti-A provenind din sângele donatorilor din grupa B).
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser anti-A plus anti-B (grupa 0) trebuie să fie titrat în mod separat pe suspensii de globule A1 și A2, în paralel cu preparația standard internațională pentru gruparea sanguină anti-A reconstituită, dar nediluată sau cu o preparație echivalentă de referință. Trebuie să fie titrat de asemenea pe o suspensie de globule B în paralel cu preparația standard internațională de ser pentru gruparea sanguină anti-B reconstituită, dar nediluată, sau cu o preparație echivalentă de referință.
                           Potența serului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Serul anti-A plus anti-B (grupa 0) pentru gruparea sanguină nediluată trebuie, de asemenea, să producă o aglutinare ușor de observat a globulelor din grupa Ax (Ay sau Ao).
                           Determinarea avidității
                           După un amestec pe o lamă de ser anti-A și anti-B (grupa 0) cu un volum egal dintr-o suspensie de globule A1 și A2 dintr-o fracție volumică de 0,05-0,1, aglutinarea fiecărei suspensii trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale (reconstituite, dar nediluate) de ser pentru gruparea sanguină anti-A sau cu ajutorul unei preparații standard de aceeași aviditate. După amestecul pe o lamă a serului anti-A plus anti-B (grupa 0) cu un volum egal dintr-o suspensie de globule B dintr-o fracție volumică de 0,05-0,1, aglutinarea trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale, reconstituite dar nediluate, de ser pentru gruparea sanguină anti-B sau cu ajutorul unei preparații standard de aceeași aviditate. Când un ser anti-A plus anti-B (grupa 0) este amestecat, pe o lamă, cu un volum egal dintr-o suspensie de globule Ax (Ay sau Ao) dintr-o fracție volumică de 0,05-0,1, aglutinarea trebuie să apară în mai puțin de 5 minute la o temperatură cuprinsă între 18 și 25 °C.
                        
                     
         
               (b)
            
            
               SERURI DE ORIGINE UMANĂ PENTRU GRUPAREA SANGUINĂ Rh
               Serurile pentru gruparea sanguină Rh, oricare ar fi specificitatea lor, pot fi de două varietăți care diferă prin condițiile în care o aglutinare de globule omoloage este efectuată. Anumite seruri, denumite „complete”, aglutinează globulele în mediu salin. Altele, denumite „incomplete”, sunt capabile doar să provoace o aglutinare în prezența anumitor coloide, precum albumina bovină, sau cu ajutorul altor tehnici corespunzătoare. Serurile trebuie să fie utilizate în condițiile precizate de laboratorul care le prepară.
               Unele seruri „incomplete” aglutinează, de asemenea, pe lamă globulele roșii omoloage în suspensie în propriul lor ser sau plasmă.
               Condițiile următoare cu privire la potența serurilor pentru gruparea Rh vor putea fi revizuite când preparațiile standard internaționale vor fi disponibile.
               
                           (i)
                        
                        
                           
                              Serul anti-D (anti-Rho)pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-D provine din sângele uneia sau mai multor persoane imunizate de antigenul D al sistemului Rh. Acesta reacționează cu suspensii de globule roșii umane conținând antigenul D, dar nu cu cele din globule roșii umane lipsite de antigenul D.
                           Potența
                           Titrarea
                           Serurile anti-D „complete” nu trebuie să aibă un titru mai mic de 32 pe globulele CcDee în suspensie în mediu salin (de 9 gr NaCl pe litru).
                           Serurile anti-D „incomplete” trebuie să fie titrate pe globulele CcDee în paralel cu preparația standard internațională de anti-D (anti-Rho) incomplet reconstituită, dar nediluată sau cu o preparație de referință echivalentă. Potența serului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 32 de unități internaționale pe ml. Serurile trebuie să reacționeze cu toate globulele conținând antigenul D și, în plus, pe cât posibil, cu globulele conținând antigenul Du.
                           Determinarea avidității
                           Serurile anti-D destinate utilizării în testul pe lamă Diamond și Abelson ar trebui, după amestecul pe lamă cu un volum egal dintr-o suspensie de globule CcDee dintr-o fracție volumică de 0,4-0,5 la aproximativ 40 °C, să producă o aglutinare în mai puțin de 30 de secunde și aglutinarea ar trebui să fie completă în mai puțin de 120 de secunde.
                        
                     
                           (ii)
                        
                        
                           
                              Serul anti-C (anti-Rh′) pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-C provine din sângele uneia sau mai multor persoane imunizate cu antigenul C al sistemului Rh. Reacționează cu suspensii de globule roșii umane conținând antigenul C, dar nu cu cele din globule roșii umane lipsite de antigenul C. Antigenul C este considerat ca incluzând antigenul Cw.
                           Majoritatea serurilor anti-C cu uz diagnostical conțin un anticorp anti-C „complet” precum și un anticorp anti-D „incomplet”. Aceste seruri nu sunt deci specifice pentru antigenul C decât dacă globulele roșii care se vor testa sunt în suspensie într-o soluție de 9 gr Na Cl pe litru.
                           Potența
                           Titrarea
                           Serurile anti-C („complete” sau „incomplete”) nu ar trebui să aibă un titru mai mic de 8 pe globule CcDee.
                           Determinarea avidității
                           Serurile anti-C destinate să fie utilizate în testul pe lamă Diamond și Abelson (și care nu trebuie să conțină nici o formă de anti-D) ar trebui, după amestecul pe lamă cu un volum egal dintr-o suspensie de globule CcDee dintr-o fracție volumică de 0,4-0,5 la aproximativ 40 °C să producă o aglutinare vizibilă în mai puțin de 30 de secunde, și aglutinarea trebuie să fie completă în mai puțin de 120 de secunde.
                        
                     
                           (iii)
                        
                        
                           
                              Serul anti-E (anti-Rh″) pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-E provine din sângele uneia sau mai multor persoane imunizate cu antigenul E al sistemului Rh. Reacționează cu suspensii de globule roșii umane conținând antigenul E, dar nu cu globule roșii umane lipsite de antigenul E.
                           Potența
                           Titrarea
                           Serurile anti-E („complete” sau „incomplete”) nu ar trebui să aibă un titru mai mic de 8 pe globulele CcDee.
                           Determinarea avidității
                           Serurile anti-E destinate utilizării pe lamă Diamond și Abelson (și care nu trebuie să conțină nici o formă de anti-D) ar trebui, după amestecul pe lamă cu un volum egal dintr-o suspensie de globule ccddEe dintr-o fracție volumică de 0,4-0,5, la aproximativ 40 °C, să producă o aglutinare vizibilă în mai puțin de 30 de secunde, și aglutinarea ar trebui să fie completă în mai puțin de 120 de secunde.
                        
                     
                           (iv)
                        
                        
                           
                              Serul anti-D plus C (anti-Rhorh′) pentru gruparea sanguină (umană)
                           
                           Serul anti-D plus E (anti-Rhorh″) pentru gruparea sanguină (umană)
                           Serurile de specificitate anti-D plus C sau anti-D plus E pot fi obținute direct din sângele persoanelor imunizate sau pot fi preparate amestecând un ser anti-D cu un ser anti-C sau anti-E. Într-un ser dat, cei doi anticorpi trebuie să fie simultan activi în condițiile de reacție specificate de producător. Fiecare ser trebuie să reacționeze cu toate tipurile de globule roșii care ar reacționa cu unul sau altul din anticorpii care le compun și nu trebuie să reacționeze cu globulele roșii care nu posedă aglutinogenul C sau aglutinogenul D și care nu posedă antigenul D în cazul anti-D plus E. Titrele nu ar trebui să fie mai mici decât cele care sunt necesare pentru anticorpii care îi compun, dar în cazul anti-D plus C (combinație frecventă în serul persoanelor imunizate), este de dorit ca titrul lui anti-C să nu fie mai mic de 32, și în cazul anti-D plus E, este de dorit ca titrul lui anti-E să nu fie mai mic de 8. Dacă un ser este destinat utilizării în testul pe lamă Diamond și Abelson, timpii de aglutinare pentru toate tipurile de globule roșii reactive nu trebuie să fie mai mici decât cei care sunt necesari pentru fiecare constituent de anticorpi.
                        
                     
         B.   REACTIVI DE ORIGINE NON-UMANĂ
   
               (a)
            
            
               SERURI DE ORIGINE ANIMALĂ
               
                           (i)
                        
                        
                           
                              Reactiv anti-A pentru gruparea sanguină (animală)
                           
                           Serul anti-A provine din sângele animalelor imunizate sau nu cu globule roșii din grupa A sau cu substanțe specifice din grupa A. Serul anti-A aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenii A, adică pe acelea din grupele A și AB, inclusiv subgrupele A1, A2, A1B și A2B, și nu aglutinează globulele roșii umane lipsite de antigenii A, adică acelea din grupele 0 și B.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser anti-A trebuie să fie titrat în mod separat pe suspensii de globule A1, A2 și A2B, în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată a serului pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparație echivalentă de referință (2). Potența serului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După amestecarea pe o lamă a serului anti-A cu un volum egal dintr-o suspensie de globule A1, A2 și A2B dintr-o fracție volumică de 0,05-0,1, aglutinarea fiecărei suspensii trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale reconstituite, dar nediluate de ser pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparație standard de aceeași aviditate.
                        
                     
                           (ii)
                        
                        
                           
                              Serul anti-B pentru gruparea sanguină (animală)
                           
                           Serul anti-B provine din sângele animalelor imunizate sau nu cu globule roșii din grupa B sau cu substanțe specifice din grupa B. Serul anti-B aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenii B, adică pe cele din grupele B și AB, și nu aglutinează globulele roșii umane lipsite de antigenii B, adică pe cele din grupele 0 și A.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser anti-B trebuie să fie titrat pe o suspensie de globule B, în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată a serului pentru gruparea sanguină anti-B sau cu o preparație echivalentă de referință (2). Potența serului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După amestecarea pe o lamă a serului anti-B cu un volum egal dintr-o suspensie de globule B dintr-o fracție volumică la 0,05-0,1, aglutinarea trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale reconstituite, dar nediluate de ser pentru gruparea sanguină anti-B sau cu ajutorul unei preparații standard de aceeași aviditate.
                        
                     
                           (iii)
                        
                        
                           
                              Serul antiglobuline umane (animal)
                               (3)
                           
                           Serul antiglobuline umane pentru utilizarea în serologia grupelor sanguine trebuie să conțină anticorpi aglutinanți anti-IgG și anticorpi aglutinanți contra factorilor de complement. Provine din sângele animalelor imunizate prin injecție cu proteine serice umane. Trebuie să aglutineze toate globulele roșii umane acoperite de IgG uman și/sau de factorii de complement. Folosit conform instrucțiunilor producătorului, nu aglutinează globulele roșii umane neacoperite, indiferent de grupa sanguină de care acestea aparțin.
                           Particularități
                           Particularitățile unui ser antiglobuline umane pentru utilizarea în serologia grupelor sanguine trebuie să fie controlate cu globule roșii umane sensibilizate cu o varietate de anticorpi: globulele roșii sensibilizate de anticorpi umani incompleți anti-D, anti-K și anti-Fya, globule roșii sensibilizate de anticorpi incompleți fixând complementul anti-Lea în prezența serului uman proaspăt, globule roșii sensibilizate de anticorpi incompleți de tip rece, globule roșii la cald acoperite de IgG uman și, în final, 10 eșantioane diferite de globule roșii umane neacoperite conținând antigenii A și B, respectiv lipsite de antigenii A și B.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un ser antiglobuline umane trebuie, așa cum este livrat sau după diluare conform indicațiilor de pe etichetă, să aglutineze puternic globulele roșii umane sensibilizate cu anticorpi incompleți anti-D de origine umană al căror titru este egal cu 4 (sau mai mic), când este titrat pe globulele roșii D pozitive prin metoda „albumin replacement”. În cadrul aceleiași diluări, trebuie să aglutineze globulele roșii umane K pozitive, sensibilizate cu anticorpi anti-K slabi, selecționați, și globulele roșii Fya pozitive sensibilizate cu anticorpi anti-Fya slabi, selecționați în acest scop.
                           Trebuie, de asemenea, în cadrul aceleiași diluări sau într-o altă diluare (dacă acest lucru este menționat pe etichetă), să aglutineze globulele roșii umane sensibilizate cu anticorpi incompleți, fixând complementul anti-Lea în prezența serului uman proaspăt.
                           Pentru uzul clinic obișnuit, este de dorit ca sensibilizarea cu toate tipurile de anticorpi incompleți menționați anterior să fie observabilă printr-o singură diluare a serului anti-globuline umane.
                        
                     
         
               (b)
            
            
               REACTIVI DE ORIGINE VEGETALĂ
               
                           (i)
                        
                        
                           
                              Reactiv anti-A pentru grupare sanguină (vegetal)
                           
                           Reactivul anti-A este extras din semințe sau din orice altă parte a unei plante adecvate pentru o astfel de utilizare și supus apoi, dacă este cazul, unui proces de purificare. Reactivul anti-A aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenii A, adică pe cele din grupele A și AB, inclusiv subgrupele A1, A2, A1B și A2B, și nu aglutinează globulele roșii umane lipsite de antigenii A, adică pe cele din grupele 0 și B.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un reactiv anti-A trebuie să fie titrat în mod separat pe suspensiile de globule A1, A2 și A2B, în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată a serului pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparație echivalentă de referință (2).
                           Potența reactivului nu trebuie în nici un caz să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După un amestec pe o lamă de reactiv anti-A cu un volum egal dintr-o suspensie de globule A1, A2 și A2B dintr-o fracție volumică de 0,05-0,1, aglutinarea fiecărei suspensii trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu mijlocul preparatului etalon internațional reconstituit, dar nediluat de reactiv pentru gruparea sanguină anti-A sau cu o preparat etalon de aceeași aviditate.
                        
                     
                           (ii)
                        
                        
                           
                              Reactivul anti-B pentru gruparea sanguină (vegetal)
                           
                           Reactivul anti-B este extras din partea corespunzătoare a unei plante adecvate pentru o astfel de utilizare și supus apoi, dacă este cazul, unui proces de purificare. Reactivul anti-B aglutinează globulele roșii umane care conțin antigenul B, adică pe cele din grupele B și AB, și nu aglutinează globulele roșii umane lipsite de antigenul B, adică pe cele din grupele 0 și A.
                           Potența
                           Titrarea
                           Un reactiv anti-B trebuie să fie titrat pe o suspensie de globule B în paralel cu preparația standard internațională reconstituită, dar nediluată a serului pentru gruparea sanguină anti-B sau cu o preparație echivalentă de referință (2). Potența reactivului nu trebuie să fie mai mică de 64 de unități internaționale pe ml.
                           Determinarea avidității
                           După amestecarea pe o lamă a serului anti-B cu un volum egal dintr-o suspensie de globule B dintr-o fracție volumică la 0,05-0,1, aglutinarea trebuie să apară înaintea timpului dublu necesar pentru aglutinare în aceleași condiții, obținută cu ajutorul preparației standard internaționale reconstituite, dar nediluate de ser pentru gruparea sanguină anti-B sau cu ajutorul unei preparații standard de aceeași aviditate.
                        
                     
         
      (1)  Activitatea reactivilor de grupare sanguină pentru majoritatea particularităților este exprimată prin titrul aglutinării observat într-o serie de diluții pe o suspensie de globule roșii. Titrul indică diluarea reactivului utilizat în ultimul amestec care are loc în aglutinare (vizibil la microscop).
   Potența reactivilor pentru gruparea sanguină pentru care există etaloane internaționale (anti-A și anti-B, și anti-D incomplet, la ora actuală) poate fi exprimată în unități internaționale [a se vedea Bull, Wld. Hlth. Org. (OMS) 1954, 10, 937, 941-1950, 3, 30] pe baza unei titrări a unui reactiv necunoscut comparat cu preparatul standard internațional sau cu un substandard național.
   Standardele internaționale de seruri de grupare sanguină sunt distribuite în flacoane conținând ser uman deshidratat. Aduse la volumul de 1 ml, serurile anti-A și anti-B conțin prin definiție 256 U.I./ml. Acestea sunt furnizate gratuit de Laboratorul internațional de standarde biologice al OMS, Statens Seruminstitut, Copenhaga.
   Tabelul următor arată un exemplu de titrare comparativă a unui ser standard internațional anti-A(S) și a unui reactiv anti-A „necunoscut” (U) cu globule roșii A1 și globule roșii A2B.
   
                
            
            
               Ser S
            
            
               Reactiv U
            
            
               Ser S
            
            
               Reactiv U
            
         
               globule A1
               
            
            
               1:
            
            
               512
            
            
               1:
            
            
               128
            
            
               256
            
            
               64
            
         
               globule A2B
            
            
               1:
            
            
               32
            
            
               1:
            
            
               16
            
            
               256
            
            
               128
            
         
                
            
            
               titruri (observate)
            
            
               titruri (observate)
            
            
               unități (conform definiției)
            
            
               unități (conform comparației)
            
         
      (2)  Preparația standard internațională este de origine umană: preparația standard echivalentă care se va folosi, dacă este cazul, poate fi de origine umană sau de origine animală.
   
      (3)  Coombs, R. R. A., Mourant, A. E. and Race, R. R. (1965), Lancet, ii, 15
   Coombs, R. R. A., Mourant, A. E. and Race, R. R. (1945), Brit. J. exp. Path., 26, 255.
   EXEMPLE DE ETICHETĂ
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE REACTIVI DE DETERMINARE A GRUPELOR SANGUINE
   
               
                  a)
               
            
            
               
                  
                     ser lichid
                  
               
               
                           
                              1.
                           
                        
                        
                           
                              Laboratorul X, Amsterdam
                           
                        
                     
                           
                              2.
                           
                        
                        
                           
                              Ser anti-A (uman)
                           
                        
                     
                           
                              3.
                           
                        
                        
                           
                              N3Na 0,1 %
                           
                        
                     
                           
                              4.
                           
                        
                        
                           
                              5 ml
                           
                        
                     
                           
                              5.
                           
                        
                        
                           
                              7 septembrie 1965
                           
                        
                     
                           
                              6.
                           
                        
                        
                           
                              Nr. 1 2 3 4
                           
                        
                     
         
               
                  b)
               
            
            
               
                  
                     ser deshidratat
                  
               
               
                           
                              1.
                           
                        
                        
                           
                              Laboratorul X, Amsterdam
                           
                        
                     
                           
                              2.
                           
                        
                        
                           
                              Ser anti-B (animal)
                           
                        
                     
                           
                              3.
                           
                        
                        
                           
                              Mersalat 0,1 %
                           
                        
                     
                           
                              4.
                           
                        
                        
                           
                              Se reconstituie cu 5 ml apă distilată
                           
                        
                     
                           
                              5.
                           
                        
                        
                           
                              31 decembrie 1968
                           
                        
                     
                           
                              6.
                           
                        
                        
                           
                              Nr. 4 3 2 1
                           
                        
                     
         EXEMPLU DE PROSPECT
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE REACTIVI PENTRU DETERMINAREA GRUPELOR SANGUINE
   
               1.
            
            
               
                           Laboratorul central de transfuzii sanguine,
                        
                     
                           1 Main street, Metropolis,
                        
                     
                           Westland.
                        
                     
         
               2.
            
            
               Ser anti-E (anti-Rh″) (uman).
            
         
               3.
            
            
               10 ml.
            
         
               4.
            
            
               Data ultimului control de activitate: 30 mai 1961.
            
         
               5.
            
            
               Data expirării: 30 mai 1962.
            
         
               6.
            
            
               Nr. 5432.
            
         
               7.
            
            
               Globulele roșii care vor fi examinate trebuie spălate o dată sau de mai multe ori cu o soluție salină de 9 gr/l. O suspensie de globule roșii de o fracție volumică de aproximativ 0,03 este pregătită apoi, amestecând un volum sau o picătură de bază globulară cu 30 de volume sau picături de soluție salină izotonică. După un timp, datorită obișnuinței, concentrația unei suspensii poate fi evaluată satisfăcător cu ochiul liber.
               O picătură mică de ser se depune într-un tub de hemoliză (6 mm x 30 mm) cu ajutorul unei pipete Pasteur. Se adaugă apoi o picătură mică de suspensie de globule roșii. (După un timp, datorită obișnuinței, se poate realiza o economie considerabilă distribuind serul și suspensia globulară cu ajutorul pipetelor gradate în μl). Conținutul tubului este amestecat și incubat două ore la 37 °C. Conținutul tubului este transportat și etalat cu precauție pe o lamă de microscop. Dacă aglutinarea nu este clar vizibilă cu ochiul liber, lama este examinată cu microscopul pentru a stabili dacă aglutinarea s-a produs și pentru a determina intensitatea acesteia.
            
         
               8.
            
            
               A se păstra la o temperatură mai mică sau egală cu – 20 °C. Dacă produsul nu este utilizat în ziua desigilării, se vor adăuga 0,1 ml dintr-o soluție de N3Na la concentrația de 100 g/l.
            
         
               9.
            
            
               Serul uman anti-E („anti-Rh”): 5ml; albumina bovină la 300 g/l: 5 ml.
            
         
               10.
            
            
               Acest reactiv conține o substanță de origine umană.
            
         ANEXA LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE REACTIVI PENTRU DETERMINAREA GRUPELOR SANGUINE
   
      CERTIFICAT
   
   
      (Articolul 4)
   
   
      A NU SE SEPARA DE TRANSPORT
   
   
                
            
            
               
                           …
                           (loc)
                        
                        
                           …19…
                           (data)
                        
                     
         
               Numărul de pachete
            
            
               Subsemnatul declar că trimiterea specificată în margine
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               Desemnare
            
            
               preparată sub responsabilitatea …
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               Nr. loturilor
            
            
               organismul prevăzut la articolul 6 din acord, este în conformitate cu specificațiile protocolului la acord și poate fi livrat imediat destinatarului
            
         
               …
            
            
               (numele și locul) …
            
         
                
            
            
               …
            
         
                
            
            
               …
               (ștampila)
            
            
               …
               (semnătura)
            
            
               …
               (funcția)