CELEX: 31973L0046
Language: da
Date: 1972-12-05 00:00:00
Title: Kommissionens fjerde direktiv 73/46/EØF af 5. december 1972 om fastsættelse af fælles analysemetoder til officiel kontrol af dyrefoder

Avis juridique important

|

31973L0046

Kommissionens fjerde direktiv 73/46/EØF af 5. december 1972 om fastsættelse af fælles analysemetoder til officiel kontrol af dyrefoder  

EF-Tidende nr. L 083 af 30/03/1973 s. 0021 - 0034 den finske specialudgave: kapitel 3 bind 5 s. 0115  den græske specialudgave: Kapitel 03 bind 9 s. 0114  den svenske specialudgave: kapitel 3 bind 5 s. 0115  den spanske specialudgave: Kapitel 03 bind 6 s. 0230  den portugisiske specialudgave: Kapitel 03 bind 6 s. 0230 

++++  KOMMISSIONENS FJERDE DIREKTIV  af 5 . december 1972  om fastsaettelse af faelles analysemetoder til officiel kontrol af dyrefoder   ( 73/46/EOEF )  KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE FAELLESSKABER HAR  i henhold til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab ;  i henhold til Raadets direktiv af den 20 . juli 1970 vedroerende indfoerelsen af faelles metoder til udtagelse af proever og til analyse til officiel kontrol af dyrefoder ( 1 ) , aendret ved direktivet nr . 72/275/EEC af den 20 . juli 1972 ( 2 ) , og i saerdeleshed dens paragraf 2 ;  idet den anser , at ovennaevnte direktiv forudsaetter , at den officielle kontrol af dyrefoder - for at sikre sig , at de fastsatte betingelser i henhold til de juridiske , reglementaere eller administrative forskrifter vedroerende dyrefoderets kvalitet og sammensaetning den officielle kontrol af dyrefoder - for at sikre sig , at de fastsatte betingelser i henhold til de juridiske , bliver overholdt - udfoeres ved hjaelp af faelles metoder til udtagelse af proever og til analyse ;  idet den anser , at Kommissionens direktiver nr . 71/250/EEC , nr . 71/393/EEC og nr . 72/199/EEC af den 15 . juni 1971 ( 3 ) , den 18 . november 1971 ( 4 ) og den 27 . april 1972 ( 5 ) , allerede har fastsat en hel del faelles analysemetoder ; at man , med henblik paa den hastighed , arbejdet siden er skredet frem med , boer vedtage en fjerde raekke metoder ;  idet den anser , at de forholdsregler , der er fastlagt i det foreliggende direktiv , er i overensstemmelse med en udtalelse fra Forvaltningskomiteen for dyrefoder ,  UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :  Artikel 1  Medlemslandene foreskriver , at analyserne til officiel kontrol af dyrefoder , hvad angaar de animalske og vegetabilske fedtstoffer og oliers fugtighedsindhold , saavel som foderets indhold af magnesium og raa cellulose , udfoeres efter de metoder , der beskrives i bilag I til det foreliggende direktiv .  De almene bestemmelser , der findes i foerste del  ( indledning ) af bilaget til Kommissionens foerste direktiv nr . 71/250/EEC af den 15 . juni 1971 , gaelder for de metoder , der er beskrevet i bilag I til det foreliggende direktiv .  Artikel 2  Medlemslandene foreskriver , at analyserne til officiel kontrol af dyrefoder , hvad angaar dets indhold af retinol ( A-vitamin ) , thiamin ( aneurin , B1-vitamin ) , ascorbinsyre og dehydroascorbinsyre ( C-vitamin ) , udfoeres efter de metoder , der beskrives i bilag II til det foreliggende direktiv .  De almene bestemmelser , der findes i foerste del  ( indledning ) af bilaget til Kommissionens foerste direktiv nr . 71/250/EEC af den 15 . juni 1971 , med undtagelse af den del , der omhandler forberedelsen af den proeve , der skal analyseres , gaelder for de metoder , der er beskrevet i bilag II til det foreliggende direktiv .  Artikel 3  Medlemslandene gennemfoerer senest den 1 . januar 1974 de fornoedne juridiske , reglementaere eller administrative bestemmelser for at overholde det foreliggende direktivs bestemmelser . De underretter omgaaende Kommissionen derom .  Artikel 4  Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .  Udfaerdiget i Bruxelles , den 5 . december 1972 .  Paa Kommissionens regne  S . L . MANSHOLT  Formand  ( 1 ) EFT nr . L 170 af 3 . 8 . 1970 , s . 2 .  ( 2 ) EFT nr . L 171 af 29 . 7 . 1972 , s . 39 .  ( 3 ) EFT nr . L 155 af 12 . 7 . 1971 , s . 13 .  ( 4 ) EFT nr . L 279 af 20 . 12 . 1971 , s . 7 .  ( 5 ) EFT nr . L 123 af 29 . 5 . 1972 , s . 6 .  BILAG I  1 . FUGTIGHEDSINDHOLDET I DE ANIMALSKE OG VEGETABILSKE FEDTSTOFFER OG OLIER  1 . Formaal og anvendelsesomraade  Denne metode goer det muligt at bestemme de animalske og vegetabilske fedtstoffer og oliers fugtighedsindhold  ( vand og andre flygtige stoffer ) .  2 . Princip  Proeven udtoerres ved 103 * C indtil omfanget ikke mere formindskes . Omfangstabet bestemmes ved afvejning .  3 . Redskaber  3.1 . Fladbundet beholder af korrosionsfast materiale , diameter : 8 til 9 cm , hoejde : ca . 3 cm .  3.2 . Kviksoelvtermometer med forstaerket kugle og udvidelsesrum i den oeverste ende , inddelt i grader fra ca . 80 * C til mindst 110 * C , laengde : ca . 10 cm .  3.3 . Elektrisk kogeplade .  3.4 . Toerreapparat , der indeholder et effektivt udtoerrende produkt .  3.5 . Analysevaegt .  4 . Fremgangsmaade  Afvej , med 1 mg's noejagtighed , ca . 20 g af den homogeniserede proeve i den toerre og afvejede beholder ( 3.1 ) , hvori termometeret ( 3.2 ) er anbragt . Opvarm den paa kogepladen ( 3.3 ) ved stadig omroering med termometeret , saa den naar en temperatur paa 90 * C i loebet af ca . 7 minutter .  Daemp varmen efter den hyppighed , med hvilken boblerne stiger op fra beholderens bund . Temperaturen maa ikke overstige 105 * C . Bliv ved med at roere og skrabe bunden indtil der ikke er flere bobler .  For at vaere sikker paa , at fugtigheden er fuldkommen forsvundet , gentag opvarmningen til 103 * C ( oere ) mere eller mindre 2 * flere gange , med afkoeling til 93 * C mellem de paa hinanden foelgende opvarminger . Lad derefter beholderen koele af i toerreapparatet ( 3.4 ) indtil stuetemperatur og afvej . Gentag denne operation indtil vaegttabet mellem to afvejninger ikke overstiger 2 mg .  NB Hvis proevens volumen forhoejes efter gentagne opvarmninger , skyldes det iltning af fedtstoffet . I saa tilfaelde udregnes resultatet af den afvejning , der er blevet foretaget umiddelbart inden denne forhoejelse af volumen .  5 . Udregning af resultaterne  Proevens fugtighedsindhold i procent opnaas ved formlen :   ( M1 - M2 ) * 100/M0  i hvilken :  M0 = proevens masse , i gram ,  M1 = beholder og indholds masse , i gram , inden opvarmningen ,  M2 = beholder og indholds masse , i gram , efter opvarmingen .  Resultater paa under 0,05 % opfoeres som " mindre end 0,05 % " .  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele forsoeg med den samme proeve maa ikke overstige 0,05 % i absolut vaerdi .  2 . MAGNESIUMINDHOLD   - ved spektrophotometri af atomabsorberingen -  1 . Formaal og anvendelsesomraade  Denne metode goer det muligt at bestemme magnesiumindholdet i dyrefoder . Den er i saerdeleshed god til at bestemme et magnesiumindhold paa under 5 % .  2 . Princip  Proeven braendes til aske og oploeses i fortyndet saltsyre . Hvis den ikke indeholder nogen organiske stoffer , oploeses den direkte i den fortyndede saltsyre . Oploesningen fortyndes , og magnesiumindholdet bestemmes ved spektr * photometri af atomabsorberingen ved 285,2 nm , ved sammenligning med standardoploesninger .  3 . Reagenser  3.1 . Saltsyre p.a . , oploesning : 1,16 .  3.2 . Saltsyre p.a . , oploesning : 1,19 .  3.3 . Magnesium , i baand - eller traadform , eller magnesiumsulfat MgSO4 * 7H2O p.a . , vakuumtoerret ved stuetemperatur .  3.4 . Oploesning af strontiumsalt ( klorid eller nitrat ) med 2,5 % ( p/v ) strontium ( = 76,08 g SrCl2 * 6 H2O p.a./1 eller 60,38 g Sr ( NO3)2 p.a./1 ) .  3.5 . Standardmagnesiumoploesning : afvej , med 1 mg's noejagtighed , 1 g magnesium ( 3.3 ) , der foerst omhyggeligt er befriet for sin oxydhinde , eller en tilsvarende maengde magnesiumsulfat ( 3.3 ) , anbring det i en kolbe med et rumindhold paa 1 000 ml , haeld 80 ml saltsyre ( 3.1 ) i , lad det oploese sig og haeld vand i indtil 1 000 ml . 1 ml af denne oploesning indeholder 1 000 mg magnesium .  4 . Redskaber  4.1 . Forbraendingsdigel af platin , kvarts eller porcelaen .  4.2 . Elektrisk muffelovn med termostat .  4.3 . Atomabsorberingsspektrophotometer .  5 . Fremgangsmaade  5.1 . Oploesning  5.1.1 . Foder , der bestaar udelukkende af mineralske stoffer  Afvej , med 1 mg's noejagtighed , 5 g af proeven og anbring dem i en kolbe med et rumindhold paa 500 ml sammen med 250 til 300 ml vand . Haeld 40 ml saltsyre ( 3.1 ) i , bring vaesken til kogepunktet og lad den smaakoge i 30 min . Lad den afkoeles , haeld vand paa til kolben er fuld , bland omhyggeligt og filtrér gennem et toert , foldet filter ned i en toer beholder . Smid de foerste 30 ml af filtratet vaek .  I tilfaelde af , at der forefindes kiseljord , behandles 5 g af proeven med en tilstraekkelig maengde  ( 15 til 30 ml ) saltsyre ( 3.2 ) og udtoerres over vandbad . Fortsaet som angivet i 5.1.2 , fra og med den tredje fase .  5.1.2 . Foder , der for stoerstedelen bestaar af mineralske stoffer  Afvej , med 1 mg's noejagtighed , 5 g af proeven i en forbraendingsdigel og braend dem ved 550 * i en muffelovn , indtil de bliver til aske uden den mindste kulpartikel . For at fjerne kiseljorden , blandes asken med en tilstraekkelig maengde ( 15 til 30 ml ) saltsyre ( 3.2 ) og udtoerres over vandbad . Udtoer den derefter i en time i toerreovn ved 105 * . Opbland resten med 10 ml saltsyre ( 3.1 ) og haeld den ved hjaelp af varmt vand over i en kolbe med et rumindhold paa 500 ml . Bringes til kogepunktet , lad afkoele og fyld kolben op med vand . Bland omhyggeligt og filtrér gennem et toert , foldet filter ned i en toer beholder . Smid de foerste 30 ml af filtratet vaek .  5.1.3 . Foder , der for stoerstedelen bestaar af organiske stoffer  Afvej , med 1 mg's noejagtighed , 5 g af proeven i en forbraendingsdigel og braend dem ved 550 * i en muffelovn , indtil de bliver til aske uden den mindste kulpartikel . Opbland asken med 5 ml saltsyre ( 3.2 ) , udtoer over vandbad og udtoer den derefter i en time i toerreovn ved 105 * for at goere kiseljorden uoploeselig . Bland resten med 5 ml saltsyre ( 3.1 ) og haeld den ved hjaelp af varmt vand over i en kolbe med et rumfang paa * l , bring til kogepunktet , lad afkoeles og fyld kolben op med vand . Bland omhyggeligt og filtrér gennem et toert foldet filter ned i en toer beholder . Smid de foerste 30 ml af filtratet vaek .  5.2 . Opmaaling af atomsabsorberingen  Tilbered , ved fortynding med vand af standardoploesningen  ( 3.5 ) , mindst 5 referenceoploesninger med stigende koncentration , valgt med henblik paa spektrophotometerets optimumsmaalezone . Bland 10 ml strontiumsaltoploesning  ( 3.4 ) i hver af oploesningerne og fyld op med vand indtil 100 ml .  Fortynd med vand en aliquot del af det i 5.1.1 , 5.1.2 eller 5.1.3 opnaaede filtrat , saa man opnaar en magnesiumkoncentration , der ligger inden for referenceoploesningers koncentrationsgraenser . Denne oploesnings saltsyrekoncentration maa ikke overstige 0,4 N . Ibland 10 ml strontiumsaltoploesning ( 3.4 ) og fyld derefter vand paa indtil 100 ml .  Opmaal absorberingen hos den oploesning , hvis magnesiumindhold skal bestemmes , og hos referenceoploesningerne ved en boelgelaengde paa 285,2 nm .  6 . Udregning af resultaterne  Udregn proevens magnesiumindhold ved sammenligning med referenceoploesningerne . Resultatet udtrykkes i procentdele af proeven .  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele forsoeg med den samme proeve maa ikke overstige 5 % i relativ vaerdi .  3 . INDHOLD AF RAA CELLULOSE  1 . Formaal og anvendelsesomraade  Denne metode goer det muligt at bestemme indholdet ; dyrefoder af de organiske stoffer , der ikke indeholder fedtstof og er uoploeselige i sure og alkaliske oploesninger , og som almindeligvis betegnes som raa cellulose .  2 . Princip  Proeven , der eventuelt er affedtet , behandles med kogende svovlsyreoploesninger og kaliumhydroxydoploesninger med bestemte koncentrationer . Resten adskilles ved filtrering paa asbest , vaskes , toerres , afvejes og forkulles ved 900 * . Vaegttabet ved forkulningen svarer til proevens indhold af raa cellulose .  3 . Reagenser  3.1 . Svovlsyre 0,26 N .  3.2 . Behandlet asbest : Bland Goodchdigelasbest med ca . 5 gange dens vaegt af fortyndet saltsyre ( 1 del saltsyre , d : 1,19 + 3 dele vand ) . Kog blandingen ca . 45 min . , lad den afkoeles , filtrer den over en Buechner-tragt . Vask resten , foerst med vand , indtil saltsyren forsvinder med vaskevandet , siden med acetone ( 3.6 ) . Toer asbesten i en toerreovn og forkul den i 2 timer ved 900 * . Lad den afkoeles og opbevar den i en tilproppet flaske . Denne behandlede asbest kan anvendes flere gange . Den skal svare til forskrifterne i 5.1 om forsoeg uden forsoegsmateriale .  3.3 . Skumdraebende emulsion ( f.eks . silikone )  3.4 . Kaliumhydroxydoploesning 0,23 N .  3.5 . Saltsyre 0,5 N .  3.6 . Ren acetone .  3.7 . Ren diaethylaeter .  4 . Redskaber  4.1 . Beholdere paa mindst 600 ml med afmaerkninger ved 200 ml .  4.2 . Porcelaensskiver , diameter : ca . 80 mm , tykkelse : ca . 4 mm , med ca . 32 huller , der er ca . 4 mm i diameter .  4.3 . Vakuumflasker paa ca . 2 l med gummiprop , med afmaerkning ved 800 ml og udstyret med en glastragt , der er 120 mm i diameter .  4.4 . Filterplader , diameter : ca . 40 mm , tykkelse : ca . 4 mm , med skraa kant der svarer til tragtens munding ( 4.3 ) , med ca . 16 huller , der er ca . 4 mm i diameter og daekket med et metalgitter , hvis masker har en side paa ca . 1 mm . Pladerne og metalgitrene skal vaere syre - og alkalibestandige .  4.5 . Forbraendingsdigler af platin eller kvarts .  4.6 . Elektrisk muffelovn med termostat .  4.7 . Toerreapparat .  4.8 . Asbestfilter : 2,0 asbest ( 3.2 ) opslemmes i 100 ml vand .  Filtrér i vakummflaske paa en filterplade daekket af et metalgitter ( 4.4 ) og anbragt i flaskens tragt ( 4.3 ) . Opsaml filtratet og filtrér det paa ny paa det samme filter . Fjern filtratet .  5 . Fremgangsmaade  Afvej 3 g af proeven , med 1 mg's noejagtighed , og 2 g behandlet asbest ( 3.2 ) i en beholder ( 4.1 ) , ibland 200 ml svovlsyre ( 3.1 ) og et par draaber skumdraebende emulsion ( 3.3 ) . Bring hastigt til kogepunktet og lad det koge i praecis 30 min . For at bevare et konstant volumen , tildaek beholderen med et afkoelingsapparat , saa som en rundbundet kolbe paa 500 ml udsat for vandafkoeling . Afbryd kogningen ved at iblande ca . 50 ml koldt vand og filtrér omgaaende i vakuumflaske paa et asbestfilter , der er tilberedt som i 4.8 .  Vask resten med 5 omgange à ca . 100 ml meget varmt vand saa der opnaas et endeligt filtratvolumen paa 800 ml . Overfoer resten til beholderen ( 4.1 ) , der forinden er blevet udstyret med en porcelaensskive ( 4.2 ) , der skal goere kogningen regelmaessig . Ibland 200 ml kaliumhydroxydoploesning ( 3.4 ) , bring det hastigt til kogepunktet og lad det koge i praecis 30 min . Ibland ca . 50 ml koldt vand og filtrér omgaaende i en vakuumflaske paa et nyt asbestfilter , der er tilberedt som i 4.8 . Vask resten med meget varmt vand indtil vaskevandet er neutralt ( forsoeg med lakmuspapir ) og derefter tre gange med acetone ( 3.6 ) ( ialt ca . 100 ml acetone ) .  Overfoer resten til en forbraendingsdigel ( 4.5 ) , adskil det om noedvendigt og toer det i en toerreovn ved 130 * indtil konstant vaegt .  Lad afkoele i toerreapparat og vej det hastigt . Anbring derefter digelen i muffelovnen ( 4.6 ) og lad forkulle i 30 min . ved 900 * . Lad det afkoeles i toerreapparat og vej det hurtigt .  Udfoer et forsoeg uden forsoegsmateriale ved at benytte samme fremgangsmaade til behandlet asbest ( 3.2 ) , uden proeve . Vaegttabet ved forkullingen af de 6 g asbest maa ikke overstige 10 mg .  6 . Udregning af resultaterne  Proevens indhold af raa cellulose i procent opnaas ved formlen :   ( a - b ) * 100/3  i hvilken :  a = vaegttab ved forkulling , ved bestemmelse af celluloseindholdet  b = vaegttab ved forkulling , ved forsoeg uden forsoegsmateriale  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele forsoeg med den samme proeve maa ikke overstige :  0,3 i absolut vaerdi for indhold af raa cellulose under 10 %  3 % i relativ vaerdi for indhold af raa cellulose paa mindst 10 % .  7 . Bemaerkninger  7.1 . Foder , der indeholder mere end 10 % fedtstof , skal affedtes inden analysen med diaethylaeter . Anbring proeven ( 3 g , der er afvejet med 1 mg's noejagtighed ) paa et asbestfilter ( 4.8 ) . Overhaeld den 3 gange med ca . 50 ml diaethylaeter ( 3.7 ) og filtrér hver gang i vakuumflaske med stor omhu . Overfoer den affedtede proeve og asbesten til en beholder ( 4.1 ) og fortsaet analysen som angivet i 5 .  7.2 . Foder , der indeholder fedtstof , der ikke direkte kan uddrages , skal affedtes som angivet i 7.1 og desuden underkastes en ny affedtning efter afvaskning af de re * er , der bliver tilovers efter syreangrebet .  Denne afvaskning finder sted ved tre acetonebade  ( 3.6 ) ( ialt 100 ml ) , derefter 3 gange 50 ml diaethylaeter ( 3.7 ) . Overfoer derpaa resten til en beholder ( 4.1 ) og forsaet analysen som angivet i 5 , andet afsnit ( behandling med kaliumhydroxydoploesning ) .  7.3 . I tilfaelde af , at foderet har et stort kalkindhold ( over 2 % kalk ) , anbringes proeven ( 3 g afvejet med 1 mg's noejagtighed ) i en beholder ( 4.1 ) sammen med 100 ml saltsyre 0,5 N ( 3.5 ) . Lad blandingen hvile i 5 min . , filtrér omgaaende og afvask den med koldt vand . Anvendt t * at lette filtréringen de 2,0 g asbest , der er bestemt til kogningen med svovlsyren . Hvis filtréringen er vanskelig , fortyndes opslemningen med acetone . Fortsaet derefter som angivet i 5 .  BILAG II  1 . RETINOLINDHOLD ( A-VITAMIN )  Formaal og anvendelsesomraade  Denne metode goer det muligt at bestemme retinolindholdet ( A-vitamin ) i foder , koncentrater og forblandinger . Den laveste graense for bestemmelsen af indholdet ligger paa 10 000 UI/kg for de staerkt pigmenterede naeringsmidler og paa 4 000 UI/kg for de andre produkter ( 1 ) . Produkterne fordeles i to grupper , alt efter deres formodede retinolindhold :  Gruppe A : indhold paa under 200 000 UI/kg  Gruppe B : indhold paa mindst 200 000 UI/kg .  2 . Princip  Proeven hydrolyseres ved opvarmning ved hjaelp af en kaliumhydroxydoploesning i aethylalkohol med et iltskyende middel eller i kvaelstofatmosfaere . Blandingen udsaettes for ekstrahering ved 1,2 diklorathan . Ekstraktet inddampes og udtoerres og opblandes med petroleumsaeter . Oploesningen kromatograferes paa aluminiumoxydsoejle ( for produkterne i gruppe B er kromatografien kun noedvendig i saerlige tilfaelde ) . Retinolindholdet bestemmes ved spektrophotometri ved 610 nm efter udvikling af et farvet molekylekompleks ifoelge Carr-Price-reaktionen , for produkterne i gruppe A ; ved spektrophotometri i den ultraviolette lampe ved 325 nm for produkterne i gruppe B .  3 . Reagenser  a ) anvendt til analyse af produkterne i gruppe A og B  3.1 . AEthylalkohol , 96 % ( v/v )  3.2 . Natriumascorbatoploesning p.a . , 10 % ( p/v ) , eller  3.3 . Renset kvaelstof  3.4 . Kaliumhydroxydoploesning p.a . , 50 % ( p/v )  3.5 . Kaliumhydroxydoploesning 1 N  3.6 . Kaliumhydroxydoploesning , 0,5 N  3.7 . 1,2-dikloraethan p.a .  3.8 . Petroleumsaeter , ren , kogepunkt 30-50 * . Rens den om noedvendigt som foelger . Omryst 1 000 ml petroleumsaeter med doser paa 20 ml af koncentreret svovlsyre indtil syren forbliver farveloes . Fjern syren og vask aeteren foerst med 500 ml vand , derpaa med to gange 250 ml af en 10 % oploesning af natriumhydroxyd og tre gange 500 ml vand . Fjern vandlaget , toer aeteren i en time paa aktivt kul og vandfrit natriulsulfat , filtrér og distillér .  3.9 . Aluminiumoxyd , standardiseret ved Brockmann-metoden : Forkul i 8 timer ved 750 * , lad afkoele i toerreapparat og opbevar i brun glasflaske med slebet prop . Inden anvendelsen til kromatografi fugtes den paa foelgende maade : anbring 10 g aluminiumoxyd og 0,7 ml vand i en brun glasflaske , tilprop den hermetisk , opvarm den i 5 min . i vandbad ved stadig omrystning . Lad afkoele ved omrystning . Afproev det saaledes behandlede aluminiumoxyds aktivitet ved at analysere ifoelge 5.3 og 5.4 en kendt maengde standard-retinol ( 3.17 ) .  3.10 . Basisk aluminiumoxyd , aktivitetsgrad I .  3.11 . Ren diaethylaeter . Fjern peroxyderne og alle spor af vand ved kromatografi over en basisk aluminiumoxydsoejle  ( 3.10 ) ( 25 g aluminiumoxyd til 250 ml diaethylaeter ) .  3.12 . Petroleumsaeteroploesning ( 3.8 ) , 4 , 8 , 12 , 16 og 20 % ( v/v ) diaethylaeter ( 3.11 ) .  3.13 . Natriumsulfidoploesning , 0,5 molekyle-gram i 70 % glycerin ( v/v ) fremstillet af natriumsulfid p.a .  b ) anvendt udelukkende til analyse af produkterne i gruppe A  3.14 . Krystalliserende benzol p.a .  3.15 . Kloroform p.a . Fjern aethylalkoholen , fosgenen og sporene af vand ved kromatografi over en basisk aluminiumoxydsoejle ( 3.10 ) ( 50 g aluminiumoxyd til 200 ml kloroform ; de foerste 50 ml af produktet boer kromatograferes én gang til ) .  3.16 . Reagens ifoelge Carr-Price : Omryst ca . 25 g antimontriklorid p.a . ( opbevaret i toerreapparat ) sammen med 100 ml kloroform ( 3.15 ) indtil oploesningen er maettet . En svag antimontrikloridaflejring er ingen hindring . Ibland 2 ml eddikesu * anhydrid p.a . Opbevares i isskab i en brun glasflaske med slebet prop . Holdbarhed : flere uger .  3.17 . Standard-retinol , afproevet ved spektrofotometri .  c ) anvendt udelukkende til analyse af produkterne i gruppe B  3.18 . Isopropanol til kromatografi .  4 . Redskaber  4.1 . Vandbad .  4.2 . Rotationsapparat til vakuumfordampning , med runde kolber med forskelligt rumindhold .  4.3 . Reagensglas til kromatografi ( laengde : 300 mm , indvendig diameter : ca . 13 mm ) .  4.4 . Spektrofotomerer med 10 mm tykke skaale  ( af kvarts til opmaalinger i den ultraviolette lampe ) .  4.5 . Ultraviolet lampe , 365 mm .  5 . Fremgangsmaade  NB : Alle operationer skal foregaa fjernt fra direkte belysning , eventuelt i en installation af brunt glas .  5.1 . Stikproever  Udtag en stikproeve af den fint opdelte proeve , i forhold til det formodede A-vitaminindhold , nemlig :  0,1 til 1,0 g af koncentraterne ( indhold paa over 20 000 UI/g ) ;  3,0 til 5,0 g af forblandingerne ( indhold paa mellem 400 og 20 000 UI/g ) ;  10 til 20 g af de mineralske blandinger ;  30 g af produkterne i gruppe A .  Anbring omgaaende stikproeven i en 500 ml kolbe med slebet prop .  5.2 . Hydrolyse og ekstrahering ( 2 )  Ibland stikproeven i raekkefoelge 40 ml aethylalkohol  ( 3.1 ) , 2 ml natriumascorbatoploesning  ( 3.2 ) ( 3 ) , 10 ml kaliumhydroxydoploesning ( 3.4 ) og 2 ml natriumsulfidoploesning ( 3.13 ) .  Opvarm i 30 min . ved 70-80 * i koeleapparat med omloeb og lad derefter afkoeles under rindende vand . Ibland 50 ml aethylalkohol ( 3.1 ) og 100 ml 1,2-dikloraethan ( 3.7 ) ( opsuget med en pipette ) . Omryst kraftigt og afklar den vaeske , der flyder ovenpaa , i en afklaeringskolbe . Haeld 150 ml kaliumhydroxydoploesning ( 3.5 ) i kolpen , omryst i 10 sekunder og lad hvile indtil faserne adskilles . Opsaml dikloraethanfasen ( den underste fase ) i en afklaringskolbe , ibland 40 ml kaliumhydroxydoploesning  ( 3.6 ) , omryst i 10 sekunder og lad hvile indtil faserne adskilles . Opsaml dikloraethanfasen i en afklaringskolbe og vask 6 til 8 gange med doser paa 40 ml vand indtil alkalien er forsvundet ( forsoeg med phenolphtalien ) . Opsaml dikloraethanfasen og fjern de sidste spor af vand ved hjaelp af strimler af filtrerpapir .  Inddamp og udtoer en aliquot del af oploesningen i vakuumrum over vandbad ved 40 * . Oploes hurtigt resten i 5 ml petroleumsaeter ( 3.8 ) .  For produkterne i gruppe A , kromatografér som angivet i 5.3.1 .  For produkterne i gruppe B , overfoer oploesningen til en kolbe paa 50 ml , fyld op med petroleumsaeter ( 3.8 ) bland omhyggeligt og maal den optiske taethed som angivet i 5.4.2 .  5.3 . Kromatografi  5.3.1 . Produkter i gruppe A  Fyld et reagensglas til kromatografi ( 4.3 ) op til 200 mm med aluminiumoxyd ( 3.9 ) , der foerst er maettet med petroleumsaeter ( 3.8 ) . Haeld den i 5.2 opnaaede oploesning i reagensglasset og ibland omgaaende 20 ml petroleumsaeter ( 3.8 ) . Kromatografér i raekkefoelgen med doser paa 10 ml af petroleumsaeteroploesningerne med 4 , 8 , 12 , 16 og 20 % diaethylaeter ( 3.12 ) i delvis vakuumrum eller under tryk , hvorved gennemloebshastigheden er paa 2 til 3 draaber i sekundet .  Carotinen kromatograferes foerst ( 4 ) . Retinolen kromatograferes som regel af petroleumsaeteroploesningen med 20 % diaethylaeter ( 3.12 ) . Kromatograferingen kontrolleres ved ultraviolet lys ( kort bestraaling af soejlen med en kviksoelvlampe . Retinolens selvlysende stribe adskiller sig tydeligt fra de gule xanthofylstriber , der foelger den . Opsaml den del af produktet , der indeholder retinolen i en erlenmeyer .  5.3.2 . Produkter i gruppe B  Kromatografien skal kun udfoeres hvis de i 5.4.2 opnaaede afmaalinger af den optiske taethed ikke er i overensstemmelse med de i 5.4.2 angivne forskrifter .  Hvis kromatografien skulle vaere noedvendig , anbringes i kromatografisoejlen en aliquot del af den i 5.2 . angivne oploesning i petroleumsaeter , der indeholder ca . 500 UI retinol , og der kromatograferes som angivet i 5.3.1 .  5.4 . Opmaaling af den optiske taethed  5.4.1 . Produkter i gruppe A  Inddamp og udtoer i vakuumrum produktet , der indeholder retinol , som blev opnaaet i 5.3.1 . Oploes resten i 2 ml benzol ( 3.14 ) . Udtag 0,3 ml af denne oploesning og ibland 3 ml af reagensen ifoelge Carr-Price ( 3.16 ) . Der udvikler sig en blaa indfarvning . Opmaal den optiske taethed med et spektrofotometer med 610 nm , praecis 30 sekunder efter reaktionens begyndelse . Bestem retinolindholdet ved sammenligning med en skala , der er opnaaet ved benzoloploesninger med stigende indhold af standard-retinol behandlet med reagensen ifoelge Carr-Price ( 2 til 16 UI standard-A-vitamin ( 3.17 ) pr . 0,3 ml benzol ( 3.14 ) + 3 ml reagens ifoelge Carr-Price ( 3.16 ) ) . Skalaen skal kontrolleres regelmaessigt og med korte mellemrum ved hjaelp af standardproeven og en nylig tilberedt oploesning af reagensen ifoelge Carr-Price .  5.4.2 . Produkter i gruppe B  Udtag en aliquot del af den i 5.2 opnaaede oploesning i petroleumsaeter , der indeholder ca . 200 UI retinol . Inddamp og udtoer i vakuumrum og oploes resten i 25 ml isopropanol ( 3.18 ) . Opmaal den optiske taethed med spektrofotometer ved 325 , 310 og 334 nm . Maksimumsabsorberingen ligger paa 325 nm . Oploesningens retinolindhold udregnes som foelger :  E325 : 18,30 = UI retinol/ml  Forholdet mellem de optiske taetheder  E310 : E325 og E334 : E325  skal imidlertid ligge paa 6 : 7 = 0,857 .  Hvis et af disse forhold afviger meget fra denne vaerdi ( < 0,830 ou > 0,880 ) , skal der forinden opmaalingen af de optiske taetheder foretages en kromatografi efter den i 5.3.2 angivne fremgangsmaade .  Hvis opmaalingen af de optiske taetheder , der foretages efter kromatografien viser at de ovennaevnte forhold endnu afviger meget fra vaerdien 0,857 ( < 0,830 eller  > 0,880 ) , skal bestemmelsen af indholdet foretages efter den fremgangsmaade , der er angivet for produkterne i gruppe A .  6 . Udregning af resultaterne  Udregn proevens retinolindhold med hensyntagen til stikproevens vaegt og til de fortyndelser , der har fundet sted i loebet af analysen . Resultaterne udtrykkes i UI retinol pr . kg .  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele bestemmelser af den samme proeve maa ikke overstige :   - 20 % i relativ vaerdi for retinolindhold under 75 000 UI/kg   - 15 000 UI for indhold mellem 75 000 og 150 000 UI/kg   - 10 % i relativ vaerdi for indhold mellem 150 000 og 250 000 UI/kg   - 25 000 UI for indhold mellem 250 000 og 500 000 UI/kg   - 5 % i relativ vaerdi for indhold over 500 000 UI/kg .  2 . THIAMININDHOLD ( ANEURIN , B1-VITAMIN )  1 . Formaal og anvendelsesomraade  Denne metode goer det muligt at bestemme thiaminindholdet ( aneurin , B1-vitamin ) i foder , koncentrater og forblandinger . Den laveste graense for bestemmelse af indholdet ligger paa 5 ppm .  2 . Princip  Proeven behandles efter opvarmning med fortyndet svovlsyre og hydrolyseres derefter ved hjaelp af enzymer . Den opnaaede oploesning udsaettes for alkalisk oxydering . Den thiokrom , der dannes , extraheres ved hjaelp af isobutanol og bestemmes ved fluorimetri .  3 . Reagenser  3.1 . Standard-thiaminoploesning i forholdet 100 mg/ml : oploes 112,3 mg meget ren Thiaminklorhydrat , der foerst er udtoerret i vakuumrum indtil konstant vaegt , i 1 000 ml svovlsyre 0,2 N ( 3.2 ) . Opbevaret koeligt og moerkt er denne oploesning stabil i en maaned .  3.2 . Svovlsyre 0,2 N .  3.3 . Natriummetabisulfit , Na2S2O5 , ren .  3.4 . Oploesning paa 20 % ( p/v ) af kaliumferricyanid p.a .  3.5 . Oploesning paa 25 % ( p/v ) af kaliumhydroxyd p.a .  3.6 . Oxyderingsblanding : bland 2 ml Kaliumferricyanidoploesning ( 3.4 ) med 48 ml kaliumhydroxydoploesning ( 3.5 ) . Denne blanding kan ikke holde sig mere end 4 timer .  3.7 . Isobutanol p.a .  3.8 . Natriumacetatoploesning 2,5 N .  3.9 . Praeparat der indeholder flere enzymer , saa som protease , fosfatase og amylase ( f.eks . clarase ) .  3.10 . AEthylalkohol paa 96 % ( v/v ) .  4 . Redskaber  4.1 . Vandbad .  4.2 . Centrifuge ( 3 500 omdrejninger/min . ) med reagensglas paa 30 til 50 ml , forsynet med slebne propper .  4.3 . Fluorimeter .  5 . Fremgangsmaade  5.1 . Enzymhydrolyse  Anbring i to kolber , A og B , paa 250 ml identiske maengder af den fint opdelte proeve , der indeholder ca . 100 mg thiamin og 125 ml svovlsyre  ( 3.2 ) . Ibland desuden , kun i kolbe A , 1,0 ml standardoploesning ( 3.1 ) .  Omryst kraftigt , opvarm kolberne paa vandbad i 15 min . ved omrystning fra tid til anden . Lad temperaturen falde til ca . 45 * . Haeld 20 ml natriumacetatoploesning ( 3.8 ) og 0,5 g enzympraeparat ( 3.9 ) i begge kolber , lad hvile i 20 min . ved stuetemperatur . Ibland 20 ml natriumacetatoploesning ( 3.8 ) , fyld op med vand , bland omhyggeligt og filtrér . Opsaml filtraterne A og B efter at have fjernet de foerste 15 ml . Tilbered foelgende oploesninger :  5.1.1 . Proeveoploesning T  Anbring 5 ml af filtrat A og ca . 10 mg natriummetabisulfit  ( 3.3 ) i et centrifugeringsreagensglas ( 4.2 ) . Nedsaenk glasset i 15 min . i kogende vandbad og lad det derefter afkoeles ved stuetemperatur .  5.1.2 . Oploesning A ( standard ) og B ( proeve )  Anbring 5 tal af filtrat A i et centrifugeringsreagensglas  ( 4.2 ) og 5 ml af filtrat B i et andet glas ( 4.2 ) .  5.2 . Oxydering  Ibland oploesningerne T , A og B 5 ml af oxyderingsblandingen ( 3.6 ) og , et minut senere , 10 ml isobutanol ( 3.7 ) . Tilprop glassene og omryst kraftigt i 5 sekunder . Lad dem hvile et minut og centrifugér for at adskille faserne . Udtag fra hvert af glassene 5 ml af isobutanolfasen , der flyder ovenpaa , anbring hver af dem i kolber paa 25 ml , fyld op med aethylalkohol ( 3.10 ) og bland omhyggeligt ( = ekstrakt T , A og B ) .  5.3 . Opmaaling af fluorescensen  Udfoer opmaalingerne ved den boelgelaengde , ved hvilken fluorimeteret giver et optimalt svar paa thiokromens fluorescens . Bestraal ved ca . 365 nm .  Tilpas instrumentet til nulpunktet ved hjaelp af ekstraktet T . Opmaal ekstrakt A og B's fluorescensintensitet .  6 . Udregning af resultaterne  Thiaminindholdet i mg pr . kg af proeven findes ved formlen :  d * b / ( a - b ) c  i hvilken :  a = ekstrakt A's fluorescensintensitet ( standard ) ,  b = ekstrakt B's fluorescensintensitet ( proeve ) ,c = stikproevens vaegt i g ,  d = maengden af thiamin i mg tilfoejet stikproeven  ( standard ) .  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele bestemmelser af den samme proeve maa ikke overstige :  10 % i relativ vaerdi for indhold under 500 ppm og  5 % i relativ vaerdi for indhold paa mindst 500 ppm .  3 . INDHOLD AF ASCORBINSYRE OG DEHYDROASCORBINSYRE  ( C-VITAMIN )  1 . Formaal og anvendelsesomraade  Metoden goer det muligt at bestemme indholdet af ascorbinsyre og dehydroascorbinsyre ( C-vitamin ) i foder , koncentrater og forblandinger . Den laveste graense for bestemmelse af indholdet ligger paa 5 ppm . Produkterne er opdelt i to grupper , ifoelge deres formodede C-vitaminindhold :  Gruppe A : indhold under 10 g/kg  Gruppe B : indhold paa mindst 10 g/kg .  2 . Princip  Proeven , der er opslemmet i en fortyndet metafosforsyreoploesning , udsaettes for ekstrahering ved hjaelp af kloroform . Vandfasen behandles med en oploesning af 2,6-diklorophenol-indophenol , for at goere ascorbinsyren til dehydroascorbinsyre , og derefter med en oploesning af 2,4-dinitrophenylhydrazin . Den hydrazon , der dannes ekstraheres ved hjaelp af en blanding af aethylacetat , iskold eddikesyre og acetone . Oploesningen kromatograferes over en kiselgelsoejle , produktet inddampes og udtoerres og resten oploeses i fortyndet svovlsyre . Oploesningens optiske taethed maales med fotometer ved 509 nm .  For produkterne i gruppe A udsaettes produktet af kromatografien over soejlen desuden for kromatografi over tyndt lag for at isolere hydrazonen .  3 . Reagenser  3.1 . Standardoploesning med 0,05 % L-ascorbynsyre : oploes 50 mg L-ascorbinsyre p.a . i ca . 20 ml metafosforsyreoploesning ( 3.2 ) og fyld op til 100 ml med vand . Tilberedes umiddelbart inden brugen .  3.2 . Oploesning med 10 % ( p/v ) metafosforsyre : oploes i vand 200 g metafosforsyre p.a . , knust i en morter , og fyld op til 2000 ml med vand . Opbevar ved 4 * C . Forny efter en uges forloeb .  3.3 . Kloroform p.a .  3.4 . Oploesning med 0,5 % ( p/v ) 2,6-diklorophenol-indophenol p.a . Tilberedes umiddelbart inden brugen .  3.5 . Filtreringshjaelpemiddel ( S . og S . n * 121 el . lign . ) .  3.6 . Sur oploesning med 2 % ( p/v ) 2,4-dinitrophenylhydrazin : oploes 2 g 2,4-dinitrophenylhydrazin i 100 ml fortyndet svovlsyre ( 25 ml svovlsyre p.a . , d : 1,84 , fortyndet til 100 ml med vand ) . Denne oploesning kan holde sig en uge , hvis den opbevares koeligt .  3.7 . Kvaelstof eller .  3.8 . Kultveilte .  3.9 . Blanding af aethylacetat p.a./iskold eddikesyre/acetone p.a . : 96/2/2 .  3.10 . Blanding af diklorometan p.a./iskold eddikesyre : 97/3 .  3.11 . Kiselgel , kornstoerrelse : 0,05 til 0,2 mm .  3.12 . Kiselgel H , ifoelge Stahl , til kromatografi over tyndt lag .  3.13 . Fortyndet svovlsyre : anbring 105 ml vand i en kolbe paa 200 ml , fyld op med svovlsyre p.a . , d : 1,84 .  3.14 . Fortynder til kromatografi over tyndt lag : bland 75 ml diathylaeter p.a . , 25 ml aethylacetat p.a . og 4,0 ml eddikesyre , 96 % ( p/v ) p.a . Forny efter 2 til 3 kromatografier .  4 . Redskaber  4.1 . Vandbad , indstillet med ultrathermostat paa 20 * C .  4.2 . Centrifuge ( 3 500 omdr./min . ) med reagensglas paa 40 til 50 ml forsynet med slebne propper .  4.3 . Rotationsapparat til vakuuminddampning , med kolber paa 250 ml .  4.4 . Kromatografireagensglas ( laengde : 100 mm , indvendig diameter : 20 mm ) med presset glasplade ( f.eks . Allihn-glas ) .  4.5 . Spektrofotometer eller colorimeter med filtre , udstyret med 10 mm tykke skaale .  4.6 . Instrumenter til kromatografi over tyndt lag , med kiselgelplader ( 3.12 ) , Tykkelse af laget : 0,5 til 0,6 mm . ( Faerdige plader kan bruges ) . Toer pladerne i 2 1/2 til 3 timer i toerreovn ved 120-130 * C . Lad afkoele og opbevar derefter i toerreapparat mindst 24 timer inden brugen .  4.7 . Toerreapparat , indstillet paa 120-130 * .  5 . Fremgangsmaade  5.1 . Ekstrahering  Anbring i to kolber , A og B paa 250 ml med slobet prop , ens maengder af den fint opdelte proeve , der indeholder ca . 200 mg C-vitamin . Ibland , kun i kolbe A , 0,4 ml standardoploesning ( 3.1 ) og bland omhyggeligt ved omrystning ( standard ) .  Ibland 30 ml kloroform ( 3.3 ) og 25 ml metafosforsyreoploesning ( 3.2 ) paa 4 * C i hver af kolberne . Omryst kort og lad hvile 10 til 15 min . Haeld 25 ml vand i , tilprop kolberne , omryst kraftigt i 10 sekunder og lad hvile 10 til 15 min . i vandbadet ( 4.1 ) . Centrifuger for at adskille vandfasen fra kloroformfasen . Udfoer operationerne samtidig paa vandekstrakterne A ( standard ) og B , som angivet herefter .  5.2 . Oxydering  Udtag med en pipette 40 ml af vandoploesningen , der svoemmer ovenpaa ( lettere uklart ) , og som bleve opnaaet i 5.1 ; anbring dem i et reagensglas med slebet prop , ibland 0,5 til 1 ml af oploesningen af 2,6-diklorophenol-indophenol ( 3.4 ) og bland omhyggeligt . En roed infarvning finder sted , der skal vedvare mindst 15 min . Ibland derpaa ca . 300 mg filtreringshjaelpemiddel ( 3.5 ) , omryst og filtrér gennem et toert foldet filter . Filtratet skal ikke noedvendigvis vaere glasklart .  5.3 . Reaktion ved 2,4-dinitrophenylhydrazinen og ekstrahering af hydrazonen  Opsaml med pipetten 10 ml af det i 5.2 opnaaede filtrat , anbring dem i et centrifugeringsreagensglas  ( 4.2 ) , ibland 2 ml 2,4-dinitrophenylhydrazinoploesning  ( 3.6 ) og bland omhyggeligt . Haeld hurtigt en kvaelstofstraale ( 3.7 ) eller kultveiltestraale  ( 3.8 ) ned i glasset , tilprop det og neddyp det i ca . 15 timer ( en nat ) i vandbadet ( 4.1 ) . Ibland derpaa 3 ml vand , 20 ml af blandingen aethylacetat-iskold eddikesyre/acetone ( 3.9 ) og ca . 800 mg filtréringshjaelpemiddel ( 3.5 ) . Tilprop glasset , omryst kraftigt i 30 sekunder og centrifugér . Anbring 15 ml af fasen , der flyder ovenpaa , i en inddampningskolbe og inddamp ved formindsket tryk i rotationsapparatet ( 4.3 ) indtil der opnaas en olieagtig aflejring . Oploes aflejringen i 2 ml af blandingen aethylacetat/iskold eddikesyre/acetone ( 3.9 ) idet der opvarmes til 50 * C , lad afkoele , ibland 10 ml af blandingen diklorometan/iskold eddikesyre ( 3.10 ) og bland omhyggeligt .  5.4 . Kromatografi over soejle  Fyld et kromatografireagensglas ( 4.4 ) op til 30 mm med blandingen diklorometan/iskold eddikesyre ( 3.10 ) . Opslem ( ved kraftig omrystning ) 5 g kiselgel ( 3.11 ) i 30 ml af blandingen diklorometan/iskold eddikesyre  ( 3.10 ) ; haeld opslemningen op i glasset . Lad synke til bunds og pres sammen under svagt kvaelstoftryk  ( 3.7 ) .  Fyld den i 5.3 opnaaede oploesning op i glasset , skyl kolben med en lille smule af blandingen diklorometan/iskold eddikesyre ( 3.10 ) og haeld det op i glasset , fyld derpaa dette op med blandingen  ( 3.10 ) og fortsaet afvaskningen af soejlen med den samme blanding ( 3 til 4 doser paa ca . 5 ml ) indtil produktet er farveloest . Fjern den del af produktet , der er farvet gult .  Kromatografér den roedlige zone oeverst i soejlen med blandingen aethylacetat/iskold eddikesyre/acetone  ( 3.9 ) , opsaml produktet og inddamp og udtoer det .  5.4.1 . For produkterne i gruppe A ( indhold af C-vitamin under 10 g/kg ) , oploes resten i 2,0 ml af blandingen ( aethylacetat/iskold eddikesyre/acetone  ( 3.9 ) og forsaet omgaaende med kromatografien over tyndt lag som angivet i 5.5 .  5.4.2 . For produkterne i gruppe B ( C-vitaminindhold paa mindst 10 g/kg ) , oploes resten i 4,0 ml fortyndet svovlsyre ( 3.13 ) , omryst kraftigt for at oploese den olieagtige afleiring fuldkommen og foretag opmaalingen af den optiske taethed som angivet i 5.6 .  5.5 . Kromatografi over tyndt lag  Udfoer de foelgende operationer to gange . Anbring i form af en streg paa kromatografipladen ( 4.6 ) 0,5 ml af den i 5.4.1 opnaaede oploesning . Fremkald i mindst 20 min . ved hjaelp af kromatografifortynderen  ( 3.14 ) i maettet bad , indtil hydrazonomraadet , der farves lyseroedt , adskiller sig tydeligt . Lad toerre i fri luft . Afgraens den lyseroede zone , skrab denne med en spatel og overfoer pulveret til et kromatografireagensglas ( 4.4 ) .  Kromatografér en gang med 2 ml og to gange med 1,5 ml af blandingen aethylacetat : iskold eddikesyre/acetone ( 3.9 ) . Opsaml produktet i en lille kolbe ( den sidste del skal vaere farveloes ) . Inddamp og udtoer , oploes den oljeagtige aflejring i 4,0 ml fortyndet svovlsyre ( 3.13 ) , omryst kraftigt for at oploese aflejringen fuldkommen og foretag opmaalingen af den optiske taethed .  5.6 . Opmaaling af den optiske taethed  Maal den optiske taethed med fotometer ved 509 nm , 20 til 30 min . efter oploesningen af aflejringen i svovlsyren .Udfoer opmaalingen ved sammenligning med fortyndet svovlsyre ( 3.13 ) .  5.7 . Forsoeg uden forsoegsmateriale  Udfoer dette forsoeg ved benyttelse af samme fremgangsmaade uden proeve .  6 . Udregning af resultaterne  C-vitaminindholdet i g pr . kg af proeven findes ved formlen :   ( c - a ) * 2 / ( b - c ) * 10 d  i hvilken :  a = den optiske taethed af den hvide farve ,  b = standardoploesningens optiske taethed ,  c = proeveoploesningens optiske taethed ,  d = stikproevens vaegt i g .  Gentagelse  Forskellen mellem resultaterne af to parallele bestemmelser af den samme proeve maa ikke overstige :  10 % i relativ vaerdi for C-vitaminindhold under 10 g/kg og  5 % i relativ vaerdi for indhold paa mindst 10 g/kg .  ( 1 ) 1 UI = 0,3 mg retinol .  ( 2 ) For diegivningsfoder og produkter , der har tendens til at klumpe sig sammen eller svulme op , fordobles maengden af reagenser angivet i 5.2 , 1 . og 2 . afsnit .  ( 3 ) Iblanding af natriumascorbat er ikke noedvendig naar hydrolysen udfoeres i kvaelstofatmosfaere .  ( 4 ) Carotinindholdet kan bestemmes ved opmaaling af den optiske taethed ved 450 nm ; E 1 % /1 cm = 2 600 .