CELEX: 32002R2091
Language: bg
Date: 2002-11-26 00:00:00
Title: Регламент (ЕО) № 2091/2002 на Комисията от 26 ноември 2002 година за изменение на Регламент (ЕО) № 2870/2000 за определяне на референтни методи на Общността за анализ на спиртните напитки

Важна правна забележка

|

32002R2091

Официален вестник n° L 322 , 27/11/2002 стр. 0011 - 0027 специално чешко издание глава 3 том 37 стр. 395  - 411 специално испанско издание глава 3 том 37 стр. 395  - 411 специално унгарско издание глава 3 том 37 стр. 395  - 411 специално литвийско издание глава 3 том 37 стр. 395  - 411 LV.ES глава 3 том 37 стр. 395  - 411 MT.ES глава 3 том 37 стр. 395  - 411 PL.ES глава 3 том 37 стр. 395  - 411 SK.ES глава 3 том 37 стр. 395  - 411 специално словенско издание глава 3 том 37 стр. 395  - 411

		20021126Регламент (ЕО) № 2091/2002 на Комисиятаот 26 ноември 2002 годиназа изменение на Регламент (ЕО) № 2870/2000 за определяне на референтни методи на Общността за анализ на спиртните напиткиКОМИСИЯТА НА ЕВРОПЕЙСКИТЕ ОБЩНОСТИ,като взе предвид Договора за създаване на Европейската общност,като взе предвид Регламент (ЕИО) № 1576/89 на Съвета от 29 май 1989 г. за установяване на общи правила за определянето, описанието и представянето на спиртните напитки [1], изменен с Акта за присъединяване на Австрия, Финландия и Швеция, и по-специално член 4, параграф 8 от него,като има предвид, че:(1) Регламент (ЕО) № 2870/2000 на Комисията от 19 декември 2000 г. за определяне на референтни методи на Общността за анализ на спиртните напитки [2] описва тези методи в приложение.(2) Четири метода на анализ за определянето на трансанетол в анасонови спиртни напитки, глициризинова киселина и chalcone в pastis и яйчен жълтък в яйчен ликьор и ликьор с яйце са утвърдени съгласно международно признати процедури като част от изследователски проект, подпомаган от Комисията.(3) Тези четири метода могат да бъдат признати за референтни методи на Общността и трябва да бъдат добавени в приложението към Регламент (ЕО) № 2870/2000.(4) Мерките, предвидени в настоящия регламент, са в съответствие със становището на Изпълнителния комитет по спиртни напитки,ПРИЕ НАСТОЯЩИЯ РЕГЛАМЕНТ:Член 1Приложението към Регламент (ЕО) № 2870/2000 се изменя, както следва:1. В резюмето на приложението, текстът "(p.m.)" в точки V, VI, VII и IX се заличава.2. Глави V, VI, VII и IX в приложението към настоящия регламент се добавят след глава III.Член 2Настоящият регламент влиза в сила на седмия ден след публикуването му в Официален вестник на Европейските общности.Настоящият регламент е задължителен в своята цялост и се прилага пряко във всички държави-членки.Съставено в Брюксел на 26 ноември 2002 година.За КомисиятаFranz FischlerЧлен на Комисията[1] ОВ L 160, 12.6.1989 г., стр. 1.[2] ОВ L 333, 29.12.2000 г., стр. 20.--------------------------------------------------20021126ПРИЛОЖЕНИЕV. АНЕТОЛ. ГАЗОВО ХРОМАТОГРАФИЧНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ТРАНСАНЕТОЛ В СПИРТНИ НАПИТКИ1. ОбхватТози метод е подходящ за определянето на трансанетол в подправени с анасон спиртни напитки, като се използва капилярна газова хроматография.2. Нормативни препраткиISO 3696: 1987 г. Вода за аналитични лабораторни цели — Спецификации и методи на изследване.3. ПринципКонцентрацията на трансанетол в спирта се определя чрез газова хроматография (ГХ). Същото количество от вътрешен стандарт, т.е. 4-алиланизол (естрагол) в случай, че естраголът не присъства естествено в пробата, се прибавя към пробата за изследване и към трансанетолен разтвор с известна концентрация, които след това се разреждат с 45-процентов етанолов разтвор и се инжектират директно в системата ГХ. За ликьори с високо съдържание на захар е необходима екстракция преди приготвяне на пробата и анализ.4. Реагенти и материалиПо време на анализа трябва да се използват само реагенти с чистота най-малко 98 %. Използва се вода клас най-малко 3, съгласно дефиницията на ISO 3696.Съответните химикали се съхраняват на хладно (при 4 °С), далече от светлина, в алуминиеви контейнери или в тъмни (кехлибарени) стъклени бутилки за реагенти. За предпочитане е запушалките да бъдат поставени с алуминиев печат. Трансанетолът ще трябва да бъде "размразен" от своето кристално състояние преди употреба, но в този случай неговата температура никога не трябва да надвишава 35 °С.4.1. Етанол 96 об. % (CAS 64-17-5)4.2. 1-метокси-4-(1-пропенил) бензол; (трансанетол) (CAS 4180-23-8)4.3. 4-алиланизол, (естрагол) (CAS 140-67-0), предлаган вътрешен стандарт (ВС)4.4. Етанол 45 об. %Прибавят се 560 g дестилирана вода към 378 г етанол 96 об. %.4.5. Приготвяне на стандартни разтвориВсички стандартни разтвори се съхраняват при стайна температура (15 до 35 °С) далече от светлина в ауминиеви контейнери или в тъмни (кехлибарени) стъклени бутилки за реагенти. За предпочитане е запушалките да бъдат поставени с алуминиев печат.Трансанетолът и 4-алиланисолът са практически неразтворими във вода и следователно е необходимо да се разтворят трансанетолът и 4-алиланисолът в 96 % етанол (4.1) преди да се добави 45 % етанол (4.4).Запасите от разтвори трябва да бъдат прясно приготвени всяка седмица.4.5.1. Стандартен разтвор АЗапасен разтвор от трансанетол (концентрация: 2 g/l)Претеглят се 40 mg трансанетол (4.2) в 20 ml обемна колба (400 mg в 200 ml и т.н.). Добавя се 96 об. % етанол, допълва се до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.4.5.2. Вътрешен стандартен разтвор БЗапасен разтвор от вътрешен стандарт, т.е. естрагол (концентрация: 2 g/l)Претеглят се 40 mg естрагол (4.3) в 20-милилитрова колба (400 mg в 200 ml и т.н.). Добавя се 96 об. % етанол, допълва се до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.4.5.3. Разтвори, използвани за проверка на линейните показания на детектора за йонизация на пламъка (ДИП)Линейните показания на ДИП трябва да бъдат проверени за анализа, взимайки предвид диапазон от концентрации на трансанетол в спирта от 0 g/l до 2.5 g/l. В процеса на анализиране неизвестните проби на спиртове, които ще се анализират, се разреждат 10 пъти (8.3). За условията на анализа, описан в метода, запасните разтвори, съответстващи на концентрации 0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 и 0.25 g/l на транс-анетол в пробата, която ще се анализира, се приготвят както следва: взима се по 0.5, 1, 1.5, 2 и 2.5 мл запасен разтвор А (4.5.1) и се капва в отделни 20-милилитрови колби; капва се във всяка колба 2 ml от вътрешния стандартен разтвор Б (4.5.2) и се допълва до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.Чистите разтвори (8.4) се използват като 0 g/l разтвор.4.5.4. Стандартен разтвор ВВзимат се 2 ml стандартен разтвор А (4.5.1) и се капва в 20-милилитрова колба, след това се прибавят 2 ml вътрешен стандартен разтвор Б (4.5.2) и се допълва да обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.5. Апаратура и оборудване5.1. Капилярен газов хроматограф, поставен с детектор за йонизация на пламъка (ДИП) и интегратор или друга управляваща данните система, способна да измерва височини или повърхности на максимумите и с автоматичен пробатор, или необходимото оборудване за ръчно инжектиране на проби.5.2. Разделящ/неразделящ инжектор5.3. Капилярна колона, например:Дължина: 50 mВътрешен диаметър: 0.32 mmПлътност на филма: 0.2 μmСтационарна фаза: FFAP — модифициран TPA полиетилен гликол порест полимер с напречни връзки.5.4. Общо лабораторно оборудване: градуирана обемна стъклария, аналитична везна (точност: ± 0.1 mg).6. Хроматографски условияВидът и размерите на колоните и условията на ГХ трябва да бъдат такива, че анетолът и вътрешният стандарт да са отделени един от друг и от всякакви външни вещества. Типичните условия за колоната, дадена за пример в 5.3 са:6.1. Преносим газ: аналитичен хелий6.2. Скорост на потока: 2 ml/min.6.3. Температура на инжектора: 250 °С6.4. Температура на детектора: 250 °С6.5. Температурни условия на пещта: изотермична, 180 °С, период на експлоатация 10 min.6.6. Инжекционен обем: 1 μl, разделяне 1:40.7. ПробиПробите се съхраняват при стайна температура, на тъмно и на хладно.8. Процедура8.1. Наблюдение на пробите за естраголЗа да е сигурно, че естраголът не присъства естествено в пробата, трябва да бъде извършен пълен анализ без да се добавя никакъв вътрешен стандарт. В случай, че естраголът присъства естествено в пробата, трябва да бъде избран друг вътрешен стандарт (напримет ментол).Капват се 2 ml проба в 20-милилитрова колба и се допълва до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.8.2. Приготвяне на неизвестни пробиКапват се 2 ml проба в 20-милилитрова колба, след това се прибавя 2 ml вътрешен стандартен разтвор Б (4.5.2) и се допълва до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.8.3. Бланков разтворКапват се 2 ml вътрешен стандартен разтвор Б (4.5.2) в 20-милилитрова колба и се допълва до обем с 45 об. % етанол (4.4), разбърква се добре.8.4. Линеен тестПреди започване на анализа, линейността на показанията на ДИП се проверява чрез трикратно последователно анализиране на всеки от линейните стандартни разтвори (4.5.3).Интегрираните повърхности или височини на максимумите за всяка инжекция образуват графика на концентрацията на техния базов разтвор в g/l спрямо отношението R за всяка една.R = височина или повърхност на максимума на трансанетола, разделена на височината или повърхността на максимума на естрагола.Получава се линейна графика.8.5. ОпределянеИнжектира се бланковият разтвор (8.3), след това стандартен разтвор В (4.5.4), последван от един от линейните стандарти (4.5.3), който ще служи като проба за качествен контрол (тя може да бъде избрана като се има предвид вероятната концентрация на трансанетол в неизвестната), след това пет неизвестни (8.2); вкарва се линейна (за контрол на качеството) проба след всеки пет неизвестни проби, за да се осигури аналитична стабилност.9. Изчисляване на коефициента на отговорИзмерват се както повърхностите на максимум (като се използва интегратор или друга система за данни) или височините на максимума (ръчна интеграция) за трансанетол, така и вътрешни стандартни максимуми.9.1. Изчисляване на коефициента на отговор (RF)Коефициентът на отговор се изчислява по следния начин:RFi =(Ci/повърхност или височинаi)*(повърхност или височинаis/Cis)където:Ci  е концентрацията на трансанетол в стандартния разтвор А (4.5.1)Cis  е концентрацията на вътрешен стандарт в стандартния разтвор Б (4.5.2)oбластi  е повърхността (или височината) на максимума на трансанетолаoбластis  е повърхността (или височината) на максимума на вътрешния стандартRFi се изчислява от петте проби на разтвора В (4.5.4).9.2. Анализ на тестовите разтвори за линейни показанияИнжектира се тестов разтвор за линейни показания (4.5.3)9.2. Анализ на пробатаИнжектира се неизвестен пробен разтвор (8.2).10. Изчисляване на резултатиФормулата за изчисляване на концентрацията на трансанетола е следната:ci = Cis * (повърхност или височинаi/повърхност или височинаis)*RFiкъдето:ci  е неизвестната концентрация на трансанетолCis  е концентрацията на вътрешния стандарт в неизвестната (4.5.2)повърхност или височинаi  е повърхността или височината на максимума на трансанетолаповърхност или височинаis  е повърхността или височината на максимума на вътрешния стандартRFi  е коефициентът на отговор (изчислен както в 9.1)Концентрацията на трансанетол се изразява в грамове на литър, до един десетичен знак.11. Осигуряване на качество и контролХроматограмите трябва да бъдат такива, че анетолът и вътрешният стандарт да сa отделени един от друг и от всякакви външни вещества. Стойността на RFi се изчислява от резултатите за петте инжекции на разтвор В (4.5.4). В случай, че коефициентът на изменение (CV % = (стандартно отклонение/средно)*100) е в рамките на плюс или минус 1 %, средната стойност на RFi е приемлива.Посоченото по-горе изчисление се използва за изчисляване на концентрацията на трансанетол в пробата, избрана за контрол на качеството от линейните контролни разтвори (4.5.3).В случай, че изчислените средни резултати от анализ на линейния разтвор, избран за проба за вътрешен контрол на качеството (ВКК) са в рамките на плюс или минус 2,5 % от тяхната теоретична стойност, тогава резултатите за неизвестните проби могат да се приемат.12. Обработка на спиртна проба, съдържаща голямо количество захар и на ликьорна проба преди ГХ анализИзвличане на алкохол от спиртна напитка, съдържаща голямо количество захар, за да може да се определи концентрацията на трансанетол, като се използва капилярна газова хроматография.12.1. ПринципВзима се кратна на ликьоровата проба и към нея се прибавя вътрешния стандарт, при концентрация, близка до тази на аналита (трансанетола) в ликьора. Към това се прибавя натриев фосфат додекахидрат и амониев сулфат без кристализационна вода. Получената смес се разбива добре и се охлажда до получаване на два пласта и горният алкохолен пласт се отстранява. Аликвотна част от този алкохолен пласт се взима и се разрежда с 45 % етанолов разтвор (4.4) (Забележка: на този етап не се добавя вътрешен стандарт, тъй като вече е бил добавен). Полученият разтвор се анализира в газова хроматография.12.2. Реагенти и материалиПо време на екстракцията се използват само реагенти с чистота по-голяма от 99 %.12.2.1. Амониев сулфат, едноводен, (CAS 7783-20-2).12.2.2. Натриев фосфат, двуосновен, додекахидрат, (CAS 10039-32-4).12.3. Апаратура и оборудванеКонусообразни колби, разделителни колби, хладилник.12.4. Процедура12.4.1. Наблюдение на пробата за естраголЗа да се осигури естраголът да не присъства естествено в пробата, пълна екстракция (12.6.2) и анализ трябва да бъдат извършени без прибавянето на никакъв вътрешен стандарт. В случай, че естраголът присъства естествено в пробата, трябва да бъде избран друг вътрешен стандарт.12.4.2. ЕкстракцияКапват се 5 ml от 96 % етанол (4.1) в конусообразна колба, добавят се 50 mg вътрешен стандарт (4.3) и се прибавят 50 ml от пробата. Прибавят се 12 g амониев сулфат, едноводен (12.2.1) и 8.6 g двуосновен натриев фосфат, додекахидрат (12.2.2). Конусообразната колба се запушва.Колбата се разклаща в продължение най-малко на 30 минути. Може да се използва механично устройство за разклащане, но не и покрита с тефлон магнитна разбъркваща пръчка, тъй като тефлонът ще абсорбира част от аналита. Трябва да се отбележи, че прибавените соли няма да се разтворят напълно.Запушената колба се поставя в хладилник (Т < 5 °С) най-малко за два часа.След този период трябва да има два различни течни слоя и твърда утайка. Алкохолният слой трябва да бъде чист; в случай, че не е, се поставя отново в хладилника докато се отдели чист.В случай, че алкохолният пласт е чист, внимателно се взима аликвотна част (т.е. 10 ml), без да се нарушава водният пласт, поставя се в кехлибарен съд и плътно се затваря.12.4.3. Приготвяне на извлечената проба за анализОставя се екстрактът (12.4.2) да достигне стайна температура.Взимат се 2 ml от алкохолния пласт на извлечената проба с умерена температура и се капват в 20-милилитрова колба, допълва се до обем с 45 % етанол (4.4), разбърква се добре.12.5. ОпределянеСледва се процедурата, описана в 8.5.12.6. Изчисляване на резултатиЗа изчисляване на резултатите се използва следната формула:C=**RFКъдето:mis  е масата на вътрешния стандарт (4.3), който е взет (12.4.2) (в милиграми)V  е обемът на неизвестна проба (50 ml)RFi  е коефициентът на отговор (9.1)повърхностi  е повърхността на максимум на трансанетолповърхностis  е повърхността на максимум на вътрешен стандартРезултатите се изразяват в грамове на литър, до един десетичен знак.12.7. Качествен контрол и сигурностСледва се процедурата, описана в точка 11 по-горе.13. Характеристики на работа на метода (точност)Статистически резултати от вътрешнолабораторен тест:следващите таблици дават стойностите за анетола.Следващите данни са получени от международно изучаване на работата на метода, направено съобразно международно съгласувани процедури.Година на вътрешнолабораторния тест | 1998 |Брой на лабораториите | 16 |Брой на пробите | 10 |Аналит | анетол |Pastis:Проби | А | Б | В | Г | Д | Е |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 15 | 15 | 15 | 13 | 16 | 16 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | 1 | 1 | 1 | 3 | — | — |Брой на приетите резултати | 30 | 30 | 30 | 26 | 16 | 16 |Средна стойност g/l | 1,477 | 1,955 | 1,940 | 1,833 | 1,741 | 1,754 |Стандартно отклонение на повтаряемост (Sr) g/l | 0,022 | 0,033 | 0,034 | 0,017 | — | — |Относително стандартно отклонение на повторяемост (RSDr) (%) | 1,5 | 1,7 | 1,8 | 0,9 | — | — |Лимит на повторяемост (r) g/l | 0,062 | 0,093 | 0,096 | 0,047 | — | — |Стандартно отклонение на възпроизвеждане (SR) g/l | 0,034 | 0,045 | 0,063 | 0,037 | 0,058 | 0,042 |Относително стандартно отклонение на възпроизвеждане (RSDR) (%) | 2,3 | 2,3 | 3,2 | 2,0 | 3,3 | 2,4 |Лимит на възпроизвеждане (R) g/l | 0,094 | 0,125 | 0,176 | 0,103 | 0,163 | 0,119 |Видове проби:А  pastis, еднакви дубликатиБ  pastis, еднакви дубликатиВ  pastis, еднакви дубликатиГ  pastis, еднакви дубликатиД  pastis, единични дубликатиЕ  pastis, единични дубликатиДруги спиртни напитки с анасон:Проби | Ж | З | И | Й |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 16 | 14 | 14 | 14 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | — | 2 | 1 | 1 |Брой на приетите резултати | 32 | 28 | 28 | 28 |Средна стойност g/l | 0,778 0,530 (*) | 1,742 | 0,351 | 0,599 |Стандартно отклонение на повторяемост (Sr) g/l | 0,020 | 0,012 | 0,013 | 0,014 |Относително стандартно отклонение на повторяемост (RSDr) (%) | 3,1 | 0,7 | 3,8 | 2,3 |Лимит на повторяемост (r) g/l | 0,056 | 0,033 | 0,038 | 0,038 |Стандартно отклонение на възпроизвеждане (SR) g/l | 0,031 | 0,029 | 0,021 | 0,030 |Относително стандартно отклонение на възпроизвеждане (RSDR) (%) | 4,8 | 1,6 | 5,9 | 5,0 |Лимит на възпроизвеждане (R) g/l | 0,088 | 0,080 | 0,058 | 0,084 |Видове проби:Ж  ouzo, нива на разделяне (*)З  anis, еднакви дубликатиИ  ликьор с анасон, дубликатиЙ  ликьор с анасон, дубликати.VI. ГЛИЦИРИЗИНОВА КИСЕЛИНА. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ГЛИЦИРИЗИНОВА КИСЕЛИНА ЧРЕЗ ВИСОКОЕФЕКТИВНА ТЕЧНА ХРОМАТОГРАФИЯ1. ОбхватТози метод е подходящ за определянето на глицеризиновата киселина в спиртни напитки с анасон, като се използва високоефективна течна хроматография (ВЕТХ). Съгласно Регламент (ЕИО) № 1576/89 всеки подправен с анасон спирт, който се нарича "pastis", трябва да съдържа от 0,05 до 0,5 g глицеризинова киселина на литър.2. Нормативни препраткиISO 3696: 1987 г. Вода за аналитични лабораторни цели — Спецификации и методи на изследване.3. ПринципКонцентрацията на глицеризинова киселина се определя като се използва високоефективна течна хроматография (ВЕТХ) с UV детекция. Стандартен разтвор и пробата за тестване се филтрират и се инжектират поотделно директно в системата ВЕТХ.4. Реагенти и материалиПо време на анализа се използват само реагенти от степен ВЕТХ, чист етанол и вода от степен 3, както е дефинирано от ISO 3696.4.1. Етанол 96 об. % (CAS 64-17-5).4.2. Амониев глициризинат, C42H62O16.NH3 (глициризинова киселина амониева сол)(Mol. Wt.: 839,98)(CAS 53956-04-0): чистота най-малко 90 %(Mol. Wt.: глицеризинова киселина 822,94).4.3. Оцетна киселина на кристали, CH3COOH, (CAS 64-19-7).4.4. Метанол, CH3OH (CAS 67-56-1).4.5. Етанол 50 об. %За 1000 ml при 20 °С:- 96 об. % етанол (4.1): 521 ml- вода (2.0): 511 ml.4.6. Приготвяне на ВЕТХ разтвори за отстраняване на вещества4.6.1. Разтворител за отстраняване А (пример)80 части (от обема) вода (2.0)20 части (от обема) оцетна киселина (4.3).Разтворителят за отстраняване се обезгазява за пет минути.Забележка: В случай, че водата, която се използва, не е била микрофилтрирана, е препоръчително да се филтрира приготвеният разтворител за отстраняване чрез филтър за органични разтворители с размер на порите по-малък или равен на 0.45 μm.4.6.2. Разтворител за отстраняване БМетанол (4.4).4.7. Приготвяне на стандартни разтвориВсички стандартни разтвори трябва да бъдат прясно приготвени след два месеца.4.7.1. Референтен разтвор ВПретеглят се с точност до 0,1 mg, 25 mg амониев глицеризинат (4.2) в 100-милилитрова колба. Прибавя се малко 50 об. % етанол и се разтваря амониевият глицеризинат. След като се е разтворил, се допълва до отбелязаното с 50 об. % етанол (4.5).Филтрира се през филтър за органични разтворители.4.7.2. Стандартни разтвори, които се използват за проверка на линейността на показанията на инструментитеЗапасен разтвор 1,0 g/l се приготвя чрез претегляне с точност до 0,1 mg на 100 mg амониев глицеризинат в 100-милилитрова колба. Прибавя се малко 50 об. % етанол (4.5) и се разтваря амониевият глицеризинат. След като се е разтворил, се допълва до отбелязаното с 50 об. % етанол (4.5).Най-малко четири други разтвора, съответстващи на 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 g/l амониев глицеризинат се приготвят като се капнат съответно 5 ml, 10 ml, 25 ml и 50 ml от запасния разтвор 1,0 g/l в отделни 100-милилитрови колби. След това се допълва до отбелязаното с 50 об. % етанол (4.5) и се разбърква добре.Всички разтвори се филтрират през филтър за органични разтворители.5. Апаратура и оборудване5.1. Система за отделяне5.1.1. Високоефективен течен хроматограф.5.1.2. Изпомпваща система, позволяваща да се достигне и поддържа постоянна или програмирана скорост на потока с голяма точност.5.1.3. Система за UV спектрофотометрична детекция: да бъде поставена на 254 nm.5.1.4. Система за обезгазяване на разтворителя.5.2. Изчислителен интегратор или записващо устройство, работата на което е съвместима с останалата част на системата.5.3. Колона (пример):Материал: неръждаема стомана или стъклоВътрешен диаметър: от 4 до 5 mmДължина: от 100 до 250 mmСтационарна фаза: силицев двуокис с напречни връзки с (за предпочитане сферична) октадецил функционална група (C18), максимален размер на частиците: 5 μm.5.4. Лабораторно оборудване5.4.1. Аналитична везна с точност 0,1 mg5.4.2. Стъклария с обем А-клас5.4.3. Микромембранна филтрация за малки обеми.6. Хроматографски условия6.1. Характеристики на разтвора за отстраняване на абсорбираните вещества: (пример)- скорост на потока: 1 ml/min,- разтворител А = 30 %,- разтворител Б = 70 %.6.2. Детекция:- UV = 254 nm7. Процедура7.1. Приготвяне на спиртната пробаДа се филтрира при необходимост чрез филтър за органични разтворители (диаметър на порите: 0.45 μm).7.2. ОпределянеСлед като се установят хроматографичните условия,- се инжектират 20 μl референтен разтвор В (4.7.1.),- се инжектират 20 μl от пробния разтвор,- сравняват се двете хроматограми. Определят се максимумите на глицеризиновата киселина от тяхното време на задържане. Измерват се техните повърхности (или височини) и се изчислява концентрацията в g/l до втория десетичен знак, като се използва следното равенство:c = c ×h × P × 823H × 100 × 840Където:с  е концентрацията в грамове за литър на глицеризиновата киселина в спирта, който се анализираС  е концентрацията в грамове за литър на амониевия глицеризинат в референтния разтворh  е повърхността (или височината) на максимума на глицеризиновата киселина на спирта, който се анализираH  е повърхността (или височината) на максимума на глицеризиновата киселина на референтния разтворP  е чистотата на референтния амониев глицеризинат (в %)823  е масата на един мол глицеризинова киселина840  е масата на един мол амониев глицеризинат8. Характеристики на работа на метода (точност)Статистически резултати от вътрешнолабораторния тест:стойностите за глицеризиновата киселина са дадени в следната таблица.Следните данни са получени от международно изследване на действието на метода, извършено в съответствие с международно съгласувани процедури.Година на вътрешнолабораторния тест | 1998 |Брой на лабораториите | 16 |Брой на пробите | 5 |Аналит | глициризинова киселина |Проби | А | Б | В | Г | Д |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 13 | 14 | 15 | 16 | 16 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | 3 | 2 | 1 | — | — |Брой на приетите резултати | 26 | 28 | 30 | 32 | 32 |Средна стойност g/l | 0,046 | 0,092 (*) 0,099 | 0,089 | 0,249 | 0,493 |Стандартно отклонение на повторяемост (Sr) g/l | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,002 | 0,003 |Относително стандартно отклонение на повторяемост (RSDr) (%) | 1,5 | 1,3 | 0,7 | 1,0 | 0,6 |Лимит на повторяемост (r) g/l | 0,002 | 0,004 | 0,002 | 0,007 | 0,009 |Стандартно отклонение на възпроизвеждане (SR) g/l | 0,004 | 0,007 | 0,004 | 0,006 | 0,013 |Относително стандартно отклонение на възпроизвеждане (RSDR) (%) | 8,6 | 7,2 | 4,0 | 2,5 | 2,7 |Лимит на възпроизвеждане (R) g/l | 0,011 | 0,019 | 0,010 | 0,018 | 0,037 |Видове проби:А  pastis, еднакви дубликатиБ  pastis, нива на разцепване (*)В  pastis, еднакви дубликатиГ  pastis, еднакви дубликатиД  pastis, еднакви дубликатиVII. ХАЛКОНИ. ВИСОКОЕФЕКТИВЕН МЕТОД НА ТЕЧНА ХРОМАТОГРАФИЯ ЗА УСТАНОВЯВАНЕ НАЛИЧИЕТО НА ХАЛКОНИ В PASTIS1. ОбхватТози метод е подходящ за определяне на наличието или отсъствието на халкони в напитки, подправени с анасон. Халконите са естествени оцветители от рода на флавона, които се съдържат в корена на сладника (Glycyrrhiza glabra).За да се нарече една подправена с анасон напитка "pastis", тя трябва да съдържа chalcone (Регламент (ЕИО) № 1576/89).2. Нормативни препраткиISO 3696: 1987 г. Вода за аналитични лабораторни цели — Спецификации и методи на изследване.3. ПринципПриготвя се разтвор на референтен екстракт от сладник. Наличието или отсъствието на халкони се определя като се използва високоефективна течна хроматография (ВЕТХ) с UV детекция.4. Реагенти и материалиПо време на анализа се използват само реагенти от степен ВЕТХ. Етанолът трябва да бъде 96 об. %. Само вода със степен 3, както е определено от ISO 3696, трябва да се използва.4.1. Етанол 96 об. % (CAS 64-17-5)4.2. Ацетонирил, СН3CN, (CAS 75-05-8)4.3. Референтно вещество: Glycyrrhiza glabra: сладник, "сладък корен"Грубо смлени корени от сладник (Glycyrrhiza glabra). Средни размери на пръчковидните частици: дължина: от 10 до 15 mm, дебелина: от 1 до 3 mm.4.4. Натриев ацетат, СН3COONa, (CAS 127-09-3)4.5. Оцетна киселина на кристали, CH3COOH, (CAS 64-19-7)4.6. Приготвяне на разтвори4.6.1. Етанол 50 об. %За 1000 ml при 20 °С:- 96 об. % етанол (4.1.): 521 ml,- вода (2.0): 511 ml.4.6.2. Разтворител А: ацетонирилАцетонирил (4.2.) с ВЕТХ аналитична чистота.Обезгазява се.4.6.3. Разтворител Б: 0,1 М буферен разтвор на натриев ацетат, pH 4,66.Претеглят се 8,203 g натриев ацетат (4.4), добавят се 6,005 g кристализирала оцетна киселина (4.5) и се допълва до 1000 ml с вода (2) в обемна колба.5. Приготвяне на референтния екстракт от Glycyrrhiza glabra (4.3)5.1. Претеглят се 10 g смлян корен от сладник (Glycyrrhiza glabra) (4.3) и се поставят в дестилационна колба с обло дъно- добавят се 100 ml 50 об. % етанол (4.6.1),- вари се на водна баня един час,- филтрира се,- филтратът се оставя настрани за по-късна употреба.5.2. Извлича се екстрактът от сладник от филтъра- поставя се в дестилационна колба с обло дъно,- добавят се 100 ml от 50 об. % етанол (4.6.1),- вари се на водна баня един час,- филтрира се. Филтратът се оставя настрани за по-късна употреба.5.3. Екстракцията на корен от сладник трябва да бъде извършена три пъти последователно.5.4. Трите филтрата се смесват.5.5. Изпарява се разтворителят (от 5.4.) върху ротативен изпарител.5.6. Улавя се остатъчният екстракт (от 5.5) със 100 ml 50 об. % етанол (4.6.1).6. Апаратура и оборудване6.1. Сепарационна система.6.1.1. Високоефективен течен хроматограф.6.1.2. Помпена система, която може да достигне и поддържа постоянна или зададена скорост на потока при високо налягане.6.1.3. UV/видима спектрофотометрична детекционна система, която може да бъде поставена на 254 и 370 nm.6.1.4. Система за обезгазяване на разтворителя:6.1.5. Колонна пещ, която може да работи при температура 40 ± 0,1 °С.6.2. Изчислителен интегратор или рекордер, който е съвместим с останалата част на сепарационната система.6.3. КолонаМатериал: неръждаема стомана или стъклоВътрешен диаметър: от 4 до 5 mmПостоянна съставка: кварц с напречни връзки с функционална група (С18), производна на октадецила, размер на частиците: 5 μm най-много (съставка с напречни връзки).6.4. Общо лабораторно оборудване, включително:6.4.1. аналитична везна. (точност: ± 0,1 mg);6.4.2. дестилационна апаратура с хладник на водната баня, включващ например:- 250-милилитрова колба с обло дъно със стандартизирана стъклена поставка,- 30 cm дълъг хладник на водната баня и- източник на топлина (всяка пирогенна реакция, включваща извличащо вещество задължително трябва да бъде избегната чрез използването на подходяща подредба).6.4.3. Ротативна апаратура за изпаряване.6.4.4. Задаване на филтрация (т.е. фуния на Buchner).6.5. Условия на хроматография (пример).6.5.1. Характеристики на отстраняване на абсорбирания материал чрез разтворител А (4.6.2) и Б (4.6.3):- превключва се от 20/80 (v/v) до 50/50 (v/v) градиент за 15 минути,- превключва се от 50/50 (v/v) до 75/25 (v/v) градиент за пет минути,- еднаква мощност при 75/25 (v/v) за пет минути,- стабилизация на колоната между инжекциите,- еднаква мощност при 20/80 (v/v) за пет минути.6.5.2. Скорост на потока: 1 ml/min.6.5.3. Настройка на UV детектора:детекторът трябва да бъде поставен на 370 nm, за да детектира наличието на халкони и след това на 254 nm, за да детектира глицеризинова киселина.Забележка: промяната на дължината на вълната (от 370 nm до 254 nm) трябва да бъде извършена 30 секунди преди началото на максимума на отстраняването на глицrризинова киселина.7. Процедура7.1 Приготвяне на спиртната пробаФилтрира се чрез филтър за органични разтвори (диаметър на порите: 0,45 μm).7.2. Приготвяне на остатъчния екстракт от сладник (5.6)Прави се разтвор едно към десет с 50 об. % етанол (4.6.1) преди анализа.7.3. Определяне7.3.1. Инжектират се 20 μl от приготвения екстракт от сладник (7.2). Анализът се извършва като се използват условията на хроматография, описани по-горе (6.5).7.3.2. Инжектират се 20 μl от пробата (7.1) (спиртна проба, подправена с анасон). Анализът се извършва като се използват условията на хроматография, описани по-горе (6.5).7.3.3. Сравняват се двете хроматограми. Двете хроматограми трябва да бъдат много сходни в халконовата изходна зона (по време на детекцията при 370 nm при условията на анализ, описани по-горе) (виж фиг. 1).8. Хроматограма на характеристиките на pastis+++++ TIFF +++++9. Характеристики на работа на метода (точност)Резултати от вътрешнолабораторния тест:следната таблица представя работата за установяване наличието или отсъствието на халкони в pastis и напитки, подправени с анасон.Следващите данни са получени от международно изследване на работата на метода, направено съобразно международно съгласувани процедури.Година на вътрешнолабораторния тест | 1998 |Брой на лабораториите | 14 |Брой на пробите | 11 |Аналит | халкони |Проби | А | Б | В | Г | Д | Е |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 14 | 14 | 14 | 14 | 14 | 13 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | — | — | — | — | — | 1 [1] |Брой на приетите резултати | 28 | 14 | 14 | 28 | 28 | 26 |Брой на резултатите, показващи наличие на халкони | 28 | 14 | 14 | 0 | 28 | 0 |Брой на резултатите, показващи отсъствие на халкони | 0 | 0 | 0 | 28 | 0 | 26 |Процент на точните резултати (%) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |Проби | Ж | З | И | Й | К |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 14 | 14 | 14 | 14 | 14 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | — | — | — | — | — |Брой на приетите резултати | 28 | 14 | 14 | 28 | 28 |Брой на резултатите, показващи наличие на халкони | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |Брой на резултатите, показващи отсъствие на халкони | 28 | 14 | 14 | 28 | 28 |Процент на точните резултати (%) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |Видове проби:А  pastis, еднакви дубликатиБ  pastis, единична пробаВ  pastis, единична пробаГ  "pastis" (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиД  "pastis" (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиЕ  ликьор, подправен с анасон (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиЖ  ликьор, подправен с анасон (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиЗ  ouzo (несъдържащо халкони), единична пробаИ  ouzo (несъдържащо халкони), единична пробаЙ  anis (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиК  "pastis" (несъдържащ халкони), еднакви дубликатиIX. ЯЙЧЕН ЖЪЛТЪК. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА КОНЦЕНТРАЦИЯТА НА ЯЙЧЕН ЖЪЛТЪК В СПИРТНИ НАПИТКИ — ФОТОМЕТРИЧЕН МЕТОД1. ОбхватТози метод е подходящ за определянето на концентрацията на яйчен жълтък в границите от 40 до 250 g/l в яйчен ликьор и ликьор с яйце.2. Нормативни препраткиISO 3696: 1987 г. Вода за аналитични лабораторни цели — Спецификации и методи на изследване.3. ПринципРазтворимите в етанол фосфорни съединения, открити в яйчен жълтък, са извлечени и анализирани фотометрично като комплекс на фосфора и сол на молибденовата киселина.4. Реагенти и материали4.1. Двойно дестилирана вода4.2. Диатомит4.3. Етанол 96 об. % (CAS 64-17-5)4.4. 15 % разтвор на магнезиев ацетат (CAS 16674-78-5)4.5. 10 % сярна киселина (CAS 7664-93-9)4.6. 1 N сярна киселина.4.7. 0,16 g/l разтвор на калиев дихидроген фосфат (CAS 778-77-0), KH2PO44.8. Реагент за определяне на фосфата:разтварят се 29 g амониева сол на молибденовата киселина (CAS 12054-85-2), (NH4)6Mo7O24.4H2O в 400 ml вода при 50 °C;разтваря се в друг съд 1 g амониев ванадит (CAS 7803-55-6), (NH4VO3 в 300 ml гореща вода, оставя се да изстине, след това се добавят 140 ml концентрирана азотна киселина (CAS 7697-37-2). Охладените разтвори се смесват в 1000-милилитрова колба и се допълват до 1000 ml.5. Апаратура и оборудване5.1. 100 ml конична колба5.2. Ултразвукова вана (или магнитна бъркалка)5.3. 100-милилитрова колба5.4. 20 °С водна баня5.5. Филтър (Whatman № 4 или еквивалентен)5.6. Порцеланов (или платинен) тигел5.7. Вана с вряща вода5.8. Гореща плоча5.9. Муфелна пещ5.10. 50-милилитрова колба5.11. 20-милилитрова колба5.12. Спектрометър, поставен на 420 nm5.13. 1-сантиметрова епруветка.6. ПробиПробите се съхраняват преди анализ при стайна температура.7. Процедура7.1. Приготвяне на пробата7.1.1. Претеглят се 10 g проба в 100-милилитрова конична колба (5.1).7.1.2. Добавят се постепенно 70 ml етанол (4.3) на малки порции, като се разбърква при всяко добавяне и се поставя в ултразвукова вана (5.2) за 15 минути (или сместа се разбърква с магнитна бъркалка (5.2) за 10 минути при стайна температура).7.1.3. Съдържанието на колбата се прехвърля в 100-милилитрова колба (5.3) с измиване на етанола (4.3). Наглася се до калибровъчния знак с етанол (4.3) и колбите се поставят в 20 °С водна баня (5.4). Наглася се до калибровъчния знак на 20 °С.7.1.4. Добавя се малко диатомит (4.2) и се филтрира (5.5), като първите 20 ml се изхвърлят.7.1.5. 25 ml от филтрата се прехвърлят в порцеланов (или платинен) тигел (5.6). Филтратът трябва след това да бъде концентриран чрез леко изпаряване във вана с вряща вода (5.7), като се добави 5 ml 15 % разтвор на магнезиев ацетат (4.4).7.1.6. Тигелите се поставят върху гореща плоча (5.8) и се нагряват до изсушаване.7.1.7. Остатъкът се изгаря до пепел, като се нагрява до нажежаване до бяло при 600 °С в муфелна пещ (5.9) докато пепелта стане бяла, най-малко един час и половина, но може да се остави и една нощ.7.1.8. Пепелта се улавя с 10 ml 10 % сярна киселина (4.5) и се прехвърля с измиване с дестилирана вода (4.1) в 50-милилитрова колба (5.10) и се напълва до знака при стайна температура с дестилирана вода (4.1). 5 ml аликвотна част на този разтвор от пепел ще се използва за приготвяне на пробния разтвор на фотометричния анализ на фосфата.7.2. Фотометричен анализ на фосфата7.2.1. Разтвор за сравнение7.2.1.1. Поставят се 10 ml 10 % сярна киселина (4.5) в 50-милилитрова колба (5.10) и се допълва до означението с дестилирана вода (4.1).7.2.1.2. Към 5 мл аликвотна част от този разтвор (7.2.1.1), съдържаща се в 20-милилитрова колба (5.11), се добавя 1 ml 1 N сярна киселина (4.6) и 2 мл от фосфатния реагент (4.8) и се допълва до 20 ml с дестилирана вода (4.1).7.2.1.3. Запушва се с хлабава запушалка, разклаща се и се нагрява във вана с вряща вода (5.7) за 10 минути, след това се охлажда в 20 °С водна баня (5.4) за 20 минути.7.2.1.4. Епруветка 1 cm (5.13) се напълва с този разтвор за сравнение.7.2.2. Пробен разтвор7.2.2.1. Към 5 ml кратен на разтвора от пепел (7.1.8), съдържащ се в 20-милилитрова колба (5.11), се добавя 1 ml 1 N сярна киселина (4.6) и 2 ml от фосфатния реагент (4.8) и се допълва до 20 ml с дестилирана вода (4.1).7.2.2.2. Запушва се с хлабава запушалка, разклаща се и се нагрява във вана с вряща вода (5.7) за 10 минути, след това се охлажда в 20 °С водна баня (5.4) за 20 минути.7.2.2.3. Жълтият разтвор, който се получава, незабавно се анализира спектрофотометрично (5.12) в 1-сантиметрова епруветка (5.13) при 420 nm спрямо разтвора за сравнение (7.2.1.4).7.2.3. Калибрационна крива7.2.3.1. За да се построи калибрационната крива се добавя 2 ml аликвотна част от фосфатния реагент (4.8) към 20-милилитрови колби (5.11), всяка от които съдържа 1 ml от 1 N сярна киселина (4.6) и 0, 2, 4, 6, 8 и 10 ml разтвор на калиев дихидроген фосфат (4.7) съответно и се допълва до означението 20 ml с дестилирана вода (4.1).7.2.3.2. Запушва се с хлабава запушалка, разклаща се и се нагрява във вана с вряща вода (5.7) за 10 минути, след това се охлажда в 20 °С водна баня (5.4) за 20 минути и се анализира спектрофотометрично (5.12) в 1-сантиметрова епруветка (5.13) при 420 nm спрямо разтвора за сравнение (7.2.1.4).7.2.3.3. Построяване на калибрационната крива:разтвор на дихидроген фосфат (ml) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |P2O5 (mg) | 0 | 0,167 | 0,334 | 0,501 | 0,668 | 0,835 |8. Изразяване на резултатиСъдържанието на яйчен жълтък в g/l се изчислява по следната формула:g/l яйчен жълтък = mg PO×където:110  коефициент на конверсия за общо P2O5 в g в 100 g яйчен жълтъкmg P2O5  стойност, установена от калибрационната криваплътност  маса за единица обем (g/ml) на ликьор на яйчна основа при 20 °СЕ  тегло на ликьора на яйчна основа в g40  коефициент на разтваряне за 5 ml аликвотна част на разтвор на пепел.9. Характеристики на работа на метода (точност)Статистически резултати от вътрешнолабораторния тест:следната таблица представя стойностите за яйчен жълтък.Следващите данни са получени от международно изучаване на работата на метода, направено съобразно международно съгласувани процедури.Година на вътрешнолабораторния тест | 1998 |Брой на лабораториите | 24 |Брой на пробите | 5 |Аналит: | яйчен жълтък |Проби | А | Б | В | Г | Д |Брой на лабораториите, ангажирани след отстраняването на отделените слоеве | 19 | 20 | 22 | 20 | 22 |Брой на отделените слоеве (лаборатории) | 3 | 4 | 2 | 4 | 2 |Брой на приетите резултати | 38 | 40 | 44 | 40 | 44 |Средна стойност | 147,3 | 241,1 | 227,4 | 51,9 (*) 72,8 (*) | 191,1 |Стандартно отклонение на повтаряемост (Sr) g/l | 2,44 | 4,24 | 3,93 | 1,83 | 3,25 |Относително стандартно отклонение на повторяемост (RSDr) (%) | 1,7 | 1,8 | 1,8 | 2,9 | 1,7 |Лимит на повторяемост (r) g/l | 6,8 | 11,9 | 11,0 | 5,1 | 9,1 |Стандартно отклонение на възпроизвеждане (SR) g/l | 5,01 | 6,06 | 6,66 | 3,42 | 6,87 |Относително стандартно отклонение на възпроизвеждане (RSDR) (%) | 3,4 | 2,5 | 2,9 | 5,5 | 3,6 |Лимит на възпроизвеждане (R) g/l | 14,0 | 17,0 | 18,7 | 9,6 | 19,2 |Видове проби:А  Advocaat, еднообразни дубликатиБ  Advocaat, еднообразни дубликатиВ  Advocaat, еднообразни дубликатиГ  Advocaat, (разтворен), нива на разцепване (*)Д  Advocaat, еднообразни дубликати[*] Противоречиви резултати между двата дубликата, дължащи се на пробна грешка--------------------------------------------------