CELEX: 31978L0633
Language: da
Date: 1978-06-15 00:00:00
Title: Kommissionens ottende direktiv 78/633/EØF af 15. juni 1978 om fastsættelse af fællesskabsanalysemetoder til den officielle kontrol med foderstoffer

Avis juridique important

|

31978L0633

Kommissionens ottende direktiv 78/633/EØF af 15. juni 1978 om fastsættelse af fællesskabsanalysemetoder til den officielle kontrol med foderstoffer  

EF-Tidende nr. L 206 af 29/07/1978 s. 0043 - 0055 den finske specialudgave: kapitel 3 bind 10 s. 0071  den græske specialudgave: Kapitel 03 bind 22 s. 0067  den svenske specialudgave: kapitel 3 bind 10 s. 0071  den spanske specialudgave: Kapitel 03 bind 14 s. 0230  den portugisiske specialudgave: Kapitel 03 bind 14 s. 0230 

++++  KOMMISSIONENS OTTENDE DIREKTIV  af 15 . juni 1978  om fastsaettelse af faellesskabsanalysemetoder til den officielle kontrol med foderstoffer   ( 78/633/EOEF )  KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE FAELLESSKABER HAR -  under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab .  under henvisning til Raadets direktiv 70/373/EOEF af 20 . juli 1970 om indfoerelse af faellesskabsproeveudtagningsmaader og -analysemetoder for saa vidt angaar den officielle kontrol med foderstoffer ( 1 ) , senest aendret ved tiltraedelsesakten , saerlig artikel 2 , og  ud fra foelgende betragtninger :  Ved naevnte direktiv er det fastsat , at den officielle kontrol med foderstoffer til konstatering af , om de betingelser , der er fastsat paa grundlag af administrativt eller ved lov fastsatte bestemmelser om foderstoffernes beskaffenhed og sammensaetning , er opfyldt , foretages efter faellesskabsproeveudtagningsmaader og -analysemetoder ;  der er allerede ved Kommissionens direktiver 71/250/EOEF af 15 . juni 1971 ( 2 ) , 71/393/EOEF af 18 . november 1971 ( 3 ) , 72/199/EOEF af 27 . april 1972 ( 4 ) , 73/46/EOEF af 5 . december 1972 ( 5 ) 74/203/EOEF af 25 . marts 1974 ( 6 ) , 75/84/EOEF af 20 . december 1974 ( 7 ) og 76/372/EOEF af 1 . marts 1976 ( 8 ) fastsat en raekke faellesskabsanalysemetoder ; i betragtning af den hastighed , hvormed arbejdet siden da er skredet frem , boer der fastsaettes en ottende serie af metoder ;  de i dette direktiv fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse med udtalelse fra Den staaende Foderstofkomité -  UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :  Artikel 1  1 . Medlemsstaterne foreskriver , at analyserne i forbindelse med den officielle kontrol af foderstoffer for saa vidt angaar deres indhold af zink-bacitracin , flavophospholipol , jern , kobber , mangan og zink skal foretages efter de metoder , der er beskrevet i bilaget til dette direktiv .  2 . De almindelige bestemmelser i foerste del  " Indledning " af bilaget til foerste direktiv 71/250/EOEF , finder med undtagelse af den del , der vedroerer tilberedelsen af analyseproeven , anvendelse paa de metoder , der er beskrevet i bilaget til dette direktiv .  Artikel 2  Medlemsstaterne saetter den 1 . januar 1979 de noedvendige administrativt eller ved lov fastsatte bestemmelser i kraft for at efterkomme bestemmelserne i dette direktiv . De underretter straks Kommissionen herom .  Artikel 3  Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .  Udfaerdiget i Bruxelles , den 15 . juni 1978 .  Paa Kommissionens vegne  Finn GUNDELACH  Naestformand  ( 1 ) EFT nr . L 170 af 3 . 8 . 1970 , s . 2 .  ( 2 ) EFT nr . L 155 af 12 . 7 . 1971 , s . 13 .  ( 3 ) EFT nr . L 279 af 20 . 12 . 1971 , s . 7 .  ( 4 ) EFT nr . L 123 af 29 . 5 . 1972 , s . 6 .  ( 5 ) EFT nr . L 83 af 30 . 3 . 1973 , s . 21 .  ( 6 ) EFT nr . L 108 af 22 . 4 . 1974 , s . 7 .  ( 7 ) EFT nr . L 32 af 5 . 2 . 1975 , s . 26 .  ( 8 ) EFT nr . L 102 af 15 . 4 . 1976 , s . 8 .  BILAG  1 . BESTEMMELSE AF ZINK-BACITRACIN - VED DIFFUSION PAA AGARPLADER  1 . FORMAAL OG ANVENDELSESOMRAADE  Metoden anvendes til bestemmelse af zink-bacitracin i foderstoffer , koncentrater og forblandinger . Undergraensen for bestemmelse er 5 mg/kg ( 5 ppm ) (*) . Metoden er ikke anvendelig ved tilstedevaerelse af stoffer , der kan forstyrre analysen , navnlig store maengder kobber eller askorbinsyre .  2 . PRINCIP  Proeven ekstraheres ved pH 2 med en blanding af methanol/vand/saltsyre . Ekstraktet indstilles paa pH 6,5 , koncentreres ( om noedvendigt ) og oploeses . Dets antibiotiske styrke bestemmes ved at maale diffusionen af zink-bacitracin i et agarsubstrat podet med Micrococcus luteus ( syn . M . flavus ) . Diffusionen fremtraeder som haemning af mikroorganismens vaekst i zoner . Diameteren af disse zoner anses for at have en retlinjet sammenhaeng med logaritmen til den antibiotiske styrke for de anvendte antibiotiske koncentrationer .  3 . TESTORGANISME : MIRCROCOCCUS LUTEUS ATCC 10240  3.1 . Opbevaring af stamkulturen  Micrococcus luteus podes paa skraaagar med naeringssubstrat ( 4.1 ) , og inkuberes i 24 timer ved 30 - 37 * C . Kulturen opbevares i koeleskab ved ca . 4 * C og ompodes hver 14 . dag paa skraaagar .  3.2 . Fremstilling af bakteriesuspension ( a )  Vaeksten fra et skraaagarglas ( 3.1 ) opslaemmes med 2 - 3 ml natriumchloridoploesning ( 4.3 ) . Denne opslaemning anvendes til podning af 250 ml naeringssubstrat  ( 4.1 ) i en Roux-kolbe og inkuberes i 18 - 20 timer ved 30 - 37 * C . Vaeksten opslaemmes i 25 ml natriumchloridoploesning ( 4.3 ) og omrystes . Suspensionen fortyndes til 1/10 med natriumchloridoploesning ( 4.3 ) . Lystransmissionen i suspensionen skal vaere ca . 75 % over for natriumchloridoploesning ( 4.3 ) maalt ved 650 mm i en 1 cm-celle .  4 . NAERINGSSUBSTRATER OG REAGENSER  4.1 . Naeringssubstrat ( a )  Koedpepton * 6,0 g *  Tryptone * 4,0 g *  Gaerekstrakt * 3,0 g *  Koedekstrakt * 1,5 g *  Glukose * 1,0 g *  Agar * 15,0 g *  Vand * 1 000 ml *  pH 6,5 - 6,6 ( efter sterilisering ) .  4.2 . Testsubstrat ( b )  Tryptone * 10,0 g *  Gaerekstrakt * 3,0 g *  Koedekstrakt * 1,5 g *  Glukose * 1,0 g *  Agar * 20,0 g *  Tween 80 * 1 ml *  Vand * 1 000 ml *  pH 6,5 ( efter sterilisering ) .  4.3 . Natriumchloridoploesning 0,8 % ( w/v ) : 8 natriumchlorid p.a . oploeses i vand og fortyndes til 1 000 ml ; steriliseres .  4.4 . Blanding af ren methanol/vand/saltyre p.a . d : 1,18 - 1,19 ) : 80/17 , 5/2 ( v/v/v ) .  4.5 . Fosfatstoedpude , pH 6,5 :  Kaliumhydrogenfosfat K2HPO4 p.a . * 22,15 g *  kaliumdihydrogenfosfat KH2PO4 p.a . * 27,85 g *  Vand ad * 1 000 ml *  4.6 . Saltsyre p.a . , d : 1,18 - 1,19  4.7 . Saltsyre p.a . 0,1 N  4.8 . Natriumhydroxid 1N oploesning p.a .  4.9 . Bromkresolpurpuroploesning 0,04 % ( w/v ) : 0,1 g bromkresolpurpur oploeses i 18,5 ml 0,01 N natriumhydroxidoploesning . Fortyndes til 250 ml med vand og rystes .  4.10 . Standardpraeparat : zink-bacitracin af kendt styrke ( i IE ) .  5 . STANDARDOPLOESNINGER  Standard zink-bacitracin ( 4.10 ) svarende til 1050 IE  ( ifoelge angiven styrke ) afvejes . 5 ml 0,1 N saltsyre  ( 4.7 ) tilsaettes . Efter 15 minutters henstand tilsaettes 30 ml vand , pH indstilles paa 4,5 med fosfatstoedpude pH 6,5 ( 4.5 ) ( ca . 4 ml ) , vand tilsaettes ad 50 ml og der rystes kraftigt ( 1 ml = 21 IE ) .  Af denne oploesning fremstilles ved gentagne fortyndinger med fosfatstoedpude pH 6,5 ( 4.5 ) foelgende oploesninger :  s8 0,42 IE/ml  s4 0,21 IE/ml  s2 0,105 IE/ml  s1 0,0525 IE/ml  6 . FREMSTILLING AF EKSTRAKTET  6.1 . Ekstraktion  6.1.1 . Koncentrater , forblandinger og mineralfoder  2,0 - 5,0 g af proeven afvejes , 30 ml af blandingen  ( 4.4 ) tilsaettes og der rystes let . Kontrollér at pH er ca . 2 Efter rystning i 10 minutter tilsaettes 30 ml fosfatstoedpude pH 6,5 ( 4.5 ) , rystes i 15 minutter . Fortynd med fosfatstoedpude ( 4.5 ) for at opnaa et forventet zink-bacitracinindhold paa 0,42 IE/ml ( = u8 ) .  6.1.2 . Proteinkoncentrater  10,0 g af proeven afvejes og 50 ml blanding ( 4.4 ) tilsaettes , hvorefter der rystes let . Kontroller at pH er ca . 2 . Rystes i 10 minutter , hvorefter 50 ml fosfatstoedpude pH 6.5 ( 4.5 ) tilsaettes , rystes i 15 minutter . Fortyndes med fosfatstoedpude ( 4.5 ) indtil forventet indhold af zink-bacitracin paa 0,42 IE/ml  ( = u8 ) .  6.1.3 . Andet foder  10,0 g af proeven afvejes ( 20,0 g zink-bacitracinindholdet forventes at vaere 5 mg/kg ) , 25 ml blanding ( 4.4 ) tilsaettes og det homogeniseres i ca . 10 minutter . 25 ml fosfatstoedpude pH 6,5 ( 4.5 ) tilsaettes , rystes i 15 minutter og centrifugeres . 20 ml af supernatanten indstilles paa pH 6,5 med 1 N natriumhydroxidoploesning ( 4.8 ) med bromkresolpurpur som indikator . Inddampes til ca . 4 ml i en rotationsfordamper ved hoejst 35 * C . Inddampningsresten fortyndes med vand indtil et forventet zink-bacitracin indhold paa 0,42 IE/ml ( = u8 ) .  6.2 . Testoploesninger  Af oploesning u8 fremstilles oploesning u4 ( forventet indhold : 0,21 IE/ml ) u2 ( forventet indhold : 0,105 IE/ml ) og u1 ( forventet indhold : 0,0525 IE/ml ) ved successiv fortynding ( 1 + 1 ) med fosfatstoedpude ( 4.5 ) .  7 . TESTMETODE  7.1 . Podning af testsubstratet  Testsubstratet ( 4.2 ) podes med bakteriesuspensionen  ( 3.2 ) ved ca . 50 * C . Paa plader med testsubstratet  ( 4.2 ) bestemmes forud den maengde bakteriesuspension , der giver de stoerste og tydeligste haemningszoner med de forskellige koncentrationer af zink-bacitracin .  7.2 . Fremstilling af pladerne  Testen udfoeres paa plader med diffusion i agar af de fire koncentrationer af standardoploesningen ( s8 , s4 , s2 og s1 ) og de fire koncentrationer af testoploesningen ( u8 , u4 , u2 , og u1 ) . Disse fire koncentrationer af ekstrakt og standard skal noedvendigvis alle findes paa hver plade . Der boer derfor vaelges plader , der er store nok til at rumme mindst otte huller i agarsubstratet med en diameter paa 10 - 13 mm og mindst 30 mm mellem hullernes centrum . Testen kan udfoeres paa plader , der bestaar af en glasplade med en aluminium - eller plastring ovenpaa , 200 mm i diameter og 20 mm hoej .  Pladerne paahaeldes substrat ( 4.2 ) , der er podet som angivet i 7.1 , saa der opnaas et 2 mm tykt lag ( 50 ml til en plade paa 200 mm i diameter ) . Pladerne anbringes vandret til stoerkning , huller udstanses , og noejagtige maengder af test - og standardoploesning anbringes i hullerne ( mellem 0,10 og 0,15 ml pr . hul , afhaengig af diameteren ) . Hver koncentration skal anbringes mindst 4 gange , saaledes at hver bestemmelse er baseret paa en aflaesning af 32 haemningszoner .  7.3 . Inkubering  Pladerne inkuberes i 16 - 18 timer ved ca . 30 * C .  8 . BEDOEMMELSE  Haemningszonernes diameter maales til naermeste 0,1 mm . Middeldiameteren for hver koncentration afsaettes paa semilogaritmisk papir , saaledes at de viser logaritmen til koncentrationen over for haemningszonernes diameter . Der indtegnes den " bedst tilpassede " rette linie for henholdsvis standardoploesningen og ekstraktet , f.eks . som vist nedenfor .  Det " bedst tilpassede punkt " " ( estimeret optimum ) for den laveste vaerdi for standardoploesningen ( SL ) bestemmes ved hjaelp af formlen :   ( a ) SL = ( 7s1 + 4s2 + s4 - 2s8 ) /10  Det " bedst tilpassede punkt " ( estimeret optimum ) for den hoejeste vaerdi for standardoploesningen ( SH ) bestemmes ved hjaelp af formlen :   ( b ) SH = ( 7s8 + 4s4 + s2 - s1 ) /10  Paa tilsvarende maade beregnes det " bedst tilpassede punkt " for den laveste vaerdi for ekstraktet ( UL ) og den hoejeste vaerdi for ekstraktet ( UH ) ved at erstatte s1 , s2 , s4 og s8 med u1 , u2 , u4 og u8 i ovennaevnte formler .  De beregnede SL - og SH-vaerdier indtegnes paa samme millimeterpapir og forbindes til " bedst tilpassede linie " for standardoploesningen . UL - og UH-vaerdierne indtegnes paa tilsvarende maade og forbindes til " bedst tilpassede linie " for ekstraktet .  Hvis der ikke er stoffer til stede , som forstyrrer analysen vil linierne vaere parallelle . Til praktiske formaal kan linierne betragtes som parallele , hvis vaerdien  ( SH - SL ) og ( UH - UL ) ikke varierer mere fra middelvaerdien end 10 % .  Saafremt linierne viser sig ikke at vaere parallelle , kan u1 og s1 , eller u8 og s8 udelades , og SL , SH , UL og UH beregnes ved hjaelp af den alternative formel , for at opnaa de alternative " bedst tilpassede linier " :   ( a' ) SL = ( 5s1 + 2s2 - s4 ) /6 eller  ( 5s2 + 2s4 - s8 ) /6   ( b' ) SH = ( 5s4 + 2s2 - s1 ) /6 eller  ( 5s8 + 2s4 - s2 ) /6  og tilsvarende for UL og UH . Det kontrolleres om de alternative " bedst tilpassede linier " er parallelle som ovenfor . Det noteres i den endelige rapport at resultatet er beregnet ud fra tre koncentrationer .  Hvis linierne kan betragtes som parallelle beregnes logaritmen til den relative styrke ( log . A ) ved hjaelp af én af foelgende formler .  For 4 koncentrationer   ( c ) log . A = ( u1 + u2 + u4 + u8 - s1 - s2 - s4 - s8 ) gange 0,602 / ( U4 + U8 + S4 + S8 - U1 - U2 - S1 - S2 )  For 3 koncentrationer   ( d ) log . A = ( u1 + u2 + u4 - s1 - s2 - s4 ) gange 0,401 / ( u4 + s4 - u1 - s1 )  eller   ( d' ) log . A = ( u2 + u4 + u8 - s2 - s4 - s8 ) gange 0,401 / ( u8 + S8 - u2 - s2 )  Faktisk styrke = formodet styrke gange relativ styrke .  Hvis linierne ikke kan betragtes som parallelle gentages bestemmelsen . Hvis der stadig ikke opnaas parallelisme beregnes logaritmen til den relative styrke ( log . A ) ved hjaelp af formel ( c ) . Det opnaaede resultat skal imidlertid anses for omtrentligt og dette bemaerkes i den endelige rapport .  9 . REPETERBARHED  Forskellen mellem resultaterne af to bestemmelser , udfoert paa samme proeve af samme analytiker , boer ikke overstige :  20 % i forhold til den hoejeste vaerdi for indhold af zink-bacitracin paa 5 til 25 mg/kg ,  5 mg/kg i absolut vaerdi for indhold stoerre end 25 og op til 50 mg/kg .  10 % i forhold til den hoejeste vaerdi for indhold paa over 50 mg/kg .  2 . BESTEMMELSE AF FLAVOPHOSPHOLIPOL - VED DIFFUSION PAA AGARPLADER  1 . FORMAAL OG ANVENDELSESOMRAADE  Metoden anvendes til bestemmelse af flavophospholipol i foderstoffer , koncentrater og forblandinger . Undergraensen for bestemmelse er 1 mg/kg ( 1 ppm ) .  2 . PRINCIP  Proeven ekstraheres med fortyndet methanol ved opvarmning under tilbagesvaling . Efter centrifugering oprenses ekstraktet ( om noedvendig ) ved behandling med ionbytter og fortyndes . Dets antibiotiske styrke bestemmes ved at maale diffusionen af flavophospholipol i et agarsubstrat podet med Staphylococcus aureus . Diffusionen fremtraeder som haemning af mikroorganismens vaekst i zoner . Diameteren af disse zoner anses for at have en retlinjet sammenhaeng med logaritmen til den antibiotiske styrke for de anvendte antibiotiske koncentrationer .  3 . MIKROORGANISME : STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC 6538 P  3.1 . Opbevaring af stamkulturen  Staphylococcus aureus podes paa skraaagar med naeringssubstrat ( 4.1 ) og inkuberes i 24 timer ved 37 * C . Kulturen opbevares i koeleskab ved ca . 4 * C og ompodes en gang om maaneden paa skraaagar .  3.2 . Fremstilling af bakteriesuspension ( a )  To skraaagarglas med testorganismen ( 3.1 ) ompodes en gang om ugen , inkuberes i 24 timer ved 37 * C og opbevares i koeleskab ved 4 * C . 24 timer foer styrkebestemmelsen podes bakterien over paa to til fire skraaagarglas med naeringssubstrat ( 4.1 ) . Glassene inkuberes i 16 - 18 timer ved 37 * C . Vaeksten suspenderes i natriumchloridoploesning ( 4.3 ) . Lystransmissionen i supensionen skal vaere ca . 40 % over for natriumchloridoploesning ( 4.3 ) maalt ved 578 nm i en l cl-celle .  4 . NAERINGSSUBSTRATER OG REAGENSER  4.1 . Naeringssubstrat ( c )  Koedpepton * 6,0 g *  Tryptone * 4,0 g *  Gaerekstrakt * 3,0 g *  Koedekstrakt * 1,5 g *  Glukose * 1,0 g *  Agar * 15,0 g *  Vand * 1 000 ml   pH 6,5 ( efter sterilisering ) .  4.2 . Testsubstrat  4.2.1 . Bundlag ( d )  Koedpepton * 6,0 g *  Gaerekstrakt * 3,0 g *  Koedekstrakt * 1,5 g *  Agar * 10,0 g *  Vand * 1 000 ml *  pH 6,5 ( efter sterilisering )  4.2.2 . Daeklag  Som 4.1 , med tilsaetning af 2,0 g silicone antifoam emulsion ( e ) .  4.3 . Natriumchloridoploesning 0,4 % ( w/v ) : 4 g natriumchlorid p.a . oploeses i vand og fortyndes til 1 000 ml ; steriliseres .  4.4 . Methanol , ren .  4.5 . Methanol 50 % ( v/v ) : 500 ml methanol ( 4.4 . ) fortyndes med 500 ml vand .  4.6 . Methanol 80 % ( v/v ) : 800 ml methanol ( 4.4 . ) fortyndes med 200 ml vand .  4.7 . Tris ( hydroxymethyl ) aminomethan p.a .  4.8 . Kaliumchlorid i methanoloploesning 1,5 % ( w/v ) : 1,5 g kaliumchlorid p.a . oploeses i 20 ml vand , methanol ( 4.4 ) tilsaettes ad 100 ml .  4.9 . Kationbytter : Dowex 50 WX 8 , 20 - 50 mesh , Na form ( kat . Serva nr . 41 600 ) eller tilsvarende .  4.10 . Anionbytter : Dowex 1X2 , 50 - 100 mesh , Cl form  ( kat . Serva nr . 41 010 ) eller tilsvarende . Opbevares foer brugen i 12 - 24 timer i 80 % methanol ( 4.6 ) .  4.11 . Glasuld  4.12 . pH-indikatorpapir ( pH 6,6 - 8,1 ) .  4.13 . Askorbinsyre .  4.14 . Standardpraeparat : flavophospholipol af kendt styrke .  5 . APPARATUR  5.1 . Glasroer til chromatografi , indre diameter : 9 mm , laengde : 150 - 200 mm , udstyret med stophane i den indsnaevrede del forneden og slib ( for tilslutning til skilletragten ( 5.2 ) foroven .  5.2 . Skilletragt 250 ml , udstyret med stophane og slib .  5.3 . 250 ml Erlenmeyer kolbe med slib .  5.4 . Tilbageloebskoeler med slib .  6 . STANDARDOPLOESNINGER  En noejagtig afvejet maengde af standardpraeparatet  ( 4.14 ) oploeses i 50 % methanol ( 4.5 . ) og fortyndes saaledes at der fremkommer en stamoploesning indeholdende 100m g flavophospholipol pr . ml . Opbevaret i tilproppede flasker ved 4 * C vil denne oploesning vaere holdbar i indtil 2 maaneder .  Af denne stamoploesning fremstilles ved successiv fortynding med 50 % methanol ( 4.5 ) foelgende oploesninger :  s8 0,2 mg/ml  s4 0,1 mg/ml  s2 0,05 mg/ml  s1 0,025 mg/ml  7 . FREMSTILLING AF EKSTRAKTET  7.1 . Ekstraktion  7.1.1 . Koncentrater , forblandinger og mineralfoder  2,0 til 5,0 g af proeven afvejes , og 150 mg askorbinsyre  ( 4.13 ) tilsaettes . Proeven homogeniseres med 150 ml 50 % methanol ( 4.5 ) i en Erlenmeyer kolbe ( 5.3 ) og indstilles paa pH 8,1 - 8,2 med ca . 400 mg tris  ( hydroxymethyl ) aminomethan ( 4.7 ) . pH kontrolleres med indikatorpapir ( 4.12 ) . Efter henstand i 15 minutter korrigeres pH atter til 8,1 - 8,2 med tris ( hydroxymethyl ) aminomethan ( 4.7 ) . Der koges i 10 minutter med tilbagesvaling ( 5.4 ) under konstant omroering . Efter afkoeling centrifugeres blandingen og ekstraktet dekanteres .  7.1.2 . Andet foder  5,0 til 30,0 g af proeven med et indhold af mindst 30 mg flavophospholipol afvejes . Proeven homogenieseres med 150 ml 50 % methanol ( 4.5 ) i en Erlenmeyer kolbe ( 5.3 ) hvorefter pH indstilles paa 8,1 - 8,2 med ca . 400 mg tris  ( hydroxymethyl ) aminomethan ( 4.7 ) . pH kontrolleres med indikatorpapir ( 4.12 ) . Efter henstand i 15 minutter korrigeres pH paa ny til 8,1 - 8,2 med tris ( hydroxymethyl ) aminomethan ( 4.7 ) . Der koges i 10 minutter med tilbagesvaling ( 5.4 ) under konstant omroering . Efter afkoeling centrifugeres blandingen og ekstraktet dekanteres .  7.2 Oprensning ( dette kan udelades for koncentrater , forblandinger og mineralfoder )  110 ml af ekstraktet blandes med 11 g af kationbytteren  ( 4.9 ) , koges i et minut med tilbagesvaling ( 5.4 ) under konstant omroering . Kationbytteren skilles fra ved centrifugering eller filtrering . 100 ml ekstrakt blandes med 150 ml methanol ( 4.4 ) og oploesningen lagres i 12 - 15 timer ved 4 * C . Den fremkomne udfaeldning filtreres fra i kold tilstand .  En prop af glasuld ( 4.11 ) anbringes i den nedre ende af et glasroer ( 5.1 ) , 5 ml anionbytter ( 4.10 ) haeldes i roeret og soejlen udvaskes med 100 ml 80 % methanol  ( 4.6 ) . Ved hjaelp af tragten ( 5.2 ) overfoeres mindst 100 ml koncentrat , som forventes at indeholde 16m g flavophospholipol ( 200 ml til 30 g proeve af foder med 1 ppm ) til soejlen . Om noedvendigt fortyndes filtrated med 80 % methanol ( 4.6 ) foer overfoersel til soejlen for at opnaa et forventet flavophospholindhold paa 16mgpr . 100 ml . Tilpas vaeketilfoerslen til ca . 2 ml/minut . Den udstroemmende vaeske kasseres . Derefter udvaskes kolonnen med 50 ml 80 % methanol ( 4.6 ) og den udstroemmende vaeske kasseres .  Flavophospholipol elueres med en methanolisk kaliumchloridoploesning ( 4.8 ) idet tilledningen holdes paa omkring 2 ml pr . minut . 50 ml af eluatet opsamles i et maaleglas , 30 ml vand tilsaettes og der blandes . Oploesningen forventes at have et flavophospholipolindhold paa 0,2mgpr . ml ( = u8 ) .  7.3 Testoploesninger  Om noedvendigt ( dvs . naar oprensning er undladt ) fortyndes den i 7.1.1 fremstillede ekstrakt med 50 % methanol ( 4.5 ) med henblik paa at opnaa et forventet indhold af flavophospholipol paa 0,2 mg pr . ml ( = u8 ) .  Af oploesning u8 fremstilles oploesning u4 ( forventet indhold : 0,1m g/ml , u2 ( forventet indhold : 0,05m g/ml ) og u1 ( forventet indhold : 0,025m g/ml ) ved hjaelp af successive fortyndinger ( 1 + 1 ) med 50 % methanol ( 4.5 ) .  8 . TESTUDFOERELSE  8.1 . Podning af testsubstratet  Testsubstratet ( 4.2.2 ) podes med bakteriesuspensionen  ( 3.2 ) ved ca . 50 * C . Ved forudgaaende forsoeg paa plader med testsubstrat ( 4.2.2 ) bestemmes den maengde bakteriesuspension , der er noedvendig for at give de stoerste og tydeligste haemningszoner med de forskellige koncentrationer af flavophospholipol ( ca . 30 ml pr . liter ) .  8.2 Fremstilling af pladerne  Testen udfoeres paa plader med diffusion i agar af de fire koncentrationer af standardoploesning ( s8 , s4 , s2 og s1 ) og de fire koncentrationer af testoploesning ( u8 , u4 , u2 og u1 ) . Disse fire koncentrationer af ekstrakt og standard skal noedvendigvis alle fire findes paa hver plade . Der boer derfor vaelges plader , der er store nok til at rumme mindst 8 huller i agarsubstratet med en diameter paa 10 - 13 mm og mindst 30 mm mellem hullernes centrum . Testen kan udfoeres paa plader , der bestaar af en glasplade med en aluminium - eller plastring over , der er 200 mm i diameter og 20 mm hoej .  Pladerne paahaeldes substrat ( 4.2.1 ) til et 1,5 mm tykt lag ( 45 ml for en plade paa 200 mm i diameter ) . Pladerne anbringes vandret til stoerkning . Herefter paahaeldes daeklaget ( 4.2.2 ) , der er podet som anfoert under punkt 8.1 , saaledes at der opnaas et 1 mm tykt lag  ( 30 ml for en plade paa 200 mm i diameter ) . Pladerne anbringes atter vandret til stoerkning , hullerne udstanses og noejagtige maengder af test - og standardoploesningerne anbringes i hullerne ( mellem 0,10 og 0,15 ml pr . hul , afhaengig af diameteren ) .  Hver koncentration skal anbringes mindst fire gange , saaledes at hver bestemmelse er baseret paa en aflaesning af 32 haemningszoner .  8.3 Inkubering  Pladerne inkuberes i 16 - 18 timer ved 28 - 30 * C .  9 . BEDOEMMELSE  Haemningszonernes diameter maales til naermeste 0,1 mm . Middeldiametrene for hver koncentration afsaettes paa semilogaritmisk papir , saaledes at de viser logaritmen til koncentrationerne over for haemningszonernes diameter . Der indtegnes den " bedst tilpassede " rette linie for henholdsvis standardoploesningen og ekstraktet f.eks . som vist nedenfor .  Det " bedst tilpassede punkt " ( estimeret optimum ) for den laveste vaerdi for standardoploesningen ( SL ) bestemmes ved hjaelp af formlen :   ( a ) SL = ( 7s1 + 4s2 + s4 - 2s8 ) /10  Det " bedst tilpassede punkt " ( estimeret optimum ) for den hoejeste vaerdi for standardoploesningen ( SH ) bestemmes ved hjaelp af formlen :   ( b ) SH = ( 7s8 + 4s4 + s2 - s1 ) /10  Paa tilsvarende maade beregnes " det bedst tilpassede punkt " for den laveste vaerdi for ekstraktet ( UL ) og den hoejeste vaerdi for ekstraktet ( UH ) ved at erstatte s1 , s2 , s4 og s8 med u1 , u2 , u4 og u8 i ovennaevnte formler .  De beregnede SL - og SH-vaerdier indtegnes paa samme millimeterpapir og forbindes til " bedst tilpassede rette linie " for standardoploesningen . UL - og UH-vaerdierne indtegnes paa tilsvarende maade og forbindes til " bedst tilpassede rette linie " for ekstraktet .  Hvis der ikke er stoffer tilstede , som forstyrrer analysen , vil linierne vaere parallelle , hvis vaerdien  ( SH - SL ) og ( UH - UL ) ikke varierer mere fra middelvaerdien end 10 % .  Saafremt linierne viser sig ikke at vaere parallelle , kan enten u1 og s1 eller u8 og s8 udelades og SL , SH , UL og UH beregnes ved hjaelp af den alternative formel for at opnaa de alternative " bedst tilpassede linier " :   ( a' ) SL = ( 5s1 + 2s2 - s4 ) /6 eller  ( 5s2 + 2s4 - s8 ) /6   ( b' ) SL = ( 5s4 + 2s2 - s1 ) /6 eller  ( 5s8 + 2s4 - s2 ) /6  og tilsvarende for UL og UH . Det kontrolleres om de alternative " bedst tilpassede linier " er parallelle som ovenfor . Det noteres i den endelige rapport , at resultatet er beregnet ud fra tre koncentrationer .  Hvis linierne kan betragtes som parallelle beregnes logaritmen til den relative styrke ( log . A ) ved hjaelp af en af foelgende formler .  For 4 koncentrationer   ( c ) log . A = ( u1 + u2 + u4 + u8 - s1 - s2 - s4 - s8 ) gange 0,602 / ( U4 + U8 + S4 + S8 - U1 - U2 - S1 - S2 )  For 3 koncentrationer   ( d ) log . A = ( u1 + u2 + u4 - s1 - s2 - s4 ) gange 0,401 / ( u4 + s4 - u1 - s1 )  eller   ( d' ) log . A = ( u2 + u4 + u8 - s2 - s4 - s8 ) gange 0,401 / ( u8 + s8 - u2 - s2 )  Faktisk styrke = formodet styrke gange relativ styrke  Hvis linierne ikke kan betragtes som parallelle gentages bestemmelsen . Hvis der stadig ikke opnaas parallelisme beregnes logaritmen til den relative styrke ( log . A ) ved hjaelp af formel ( c ) . Det opnaaede resultat skal imidlertid anses for omtrentligt og dette bemaerkes i den endelige rapport .  10 . REPETERBARHED  Forskellen mellem resultaterne af to bestemmelser , udfoert paa samme proeve af samme analytiker , boer ikke overstige :  0,5 mg/kg i absolut vaerdi for et indhold af flavophospholipol fra 1 til 2 mg/kg ,  25 % i forhold til den hoejeste vaerdi for indhold der er stoerre end 2 og op til 10 mg/kg ,  20 % i forhold til den hoejeste vaerdi for indhold der er stoerre end 10 og op til 25 mg/kg ,  5 mg/kg i absolut vaerdi for indhold stoerre end 25 og op til 50 mg/kg , 10 % i forhold til den hoejeste vaerdi for indhold over 50 mg/kg .  3 . BESTEMMELSE AF MIKROMINERALERNE JERN , KOBBER , MANGAN OG ZINK  1 . FORMAAL OG ANVENDELSESOMRAADE  Metoden goer det muligt at bestemme mikromineralerne jern , kobber , mangan og zink i foderstoffer . De nedre graenser for bestemmelsen er :  jern ( Fe ) 20 mg/kg  kobber ( Cu ) 10 mg/kg  mangan ( Mn ) 20 mg/kg  zink ( Zn ) 20 mg/kg  2 . PRINCIP  Proeven oploeses i saltsyre , efter at eventuelt organisk materiale er destrueret . Jern , kobber , mangan og zink bestemmes efter en passende fortynding ved anvendelse af atomabsorptionsspektrofotometri .  3 . REAGENSER  Indledning  Ved fremstillingen af reagenser og analyseoploesninger anvendes vand , som ikke indeholder de kationer , der skal bestemmes . Vandet renses enten ved en dobbelt destillation af vandet i et borsilikat - eller kvartsdestillationsapparat eller gennem dobbelt behandling paa ionbytter .  Kemikalierne skal mindst vaere analysekvalitet ( p.a ) . Fravaer af de mineraler , som skal bestemmes , kontrolleres ved blindbestemmelse . Om noedvendigt skal kemikalierne yderligere renses .  I stedet for stamoploesninger , som beskrevet nedenfor , kan kommercielle stamoploesninger anvendes paa betingelse af de kontrolleres foer brug .  3.1 . Saltsyre p.a . , d = 1,19  3.2 . 6 N saltsyre p.a .  3.3 . 0,5 N saltsyre p.a .  3.4 . Flussyre 38 - 40 % ( v/v ) med et jernindhold paa mindre end 1 mg / Fe/l og med en inddampningsrest paa mindre end 10 mg ( som sulfat ) /1 .  3.5 . Svovlsyre p.a . , d = 1,84 .  3.6 . Hydrogenperoxid p.a . , ca . 100 vol . ilt 30 vaegtprocent ) .  3.7 . Jernstamoploesning I ( 1000 mg Fe/ml ) fremstilles som foelger :  oploes 1 g jerntraad p.a . i 200 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) , tilsaet 16 ml hydrogenperoxid ( 3.6 ) og fyld op til 1 l med vand .  3.7.1 . Jernstamoploesning II ( 100 mg Fe/ml ) fremstilles ved fortynding af stamoploesning ( 3.7 ) 1 + 9 med vand .3.8 . Kobberstamoploesning I ( 1000 mg Cu/ml ) fremstilles som foelger : oploes 1 g kobber i pulverform ( p.a . ) i 25 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) , tilsaet 5 ml hydrogenperoxid  ( 3.6 ) og fyld op til 1 l med vand .  3.8.1 . Kobberstamoploesning II ( 10 mg Cu/ml ) fremstilles ved fortynding af stamoploesning ( 3.8 ) 1 + 9 med vand og fortynd derefter den opnaaede oploesning 1 + 9 med vand .  3.9 . Manganoploesning I ( 1000 mg Mn/ml fremstilles som foelger : oploes 1 g mangan i pulver ( p.a . ) i 25 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) og fyld op til 1 l med vand .  3.9.1 . Manganoploesning II ( 10 mg Mn/ml ) fremstilles ved fortynding af stamoploesning ( 3.9 ) 1 + 9 med vand og fortynd derefter den opnaaede oploesning 1 + 9 med vand .  3.10 . Zinkstamoploesning I ( 1000 mg Zn/ml ) fremstilles som foelger : oploes 1 g zink i baand eller bladform  ( p.a . ) i 25 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) og fyld op til 1 l med vand .  3.10.1 . Zinkstamoploesning II ( 10 mg Zn/ml ) fremstilles ved fortynding af stamoploesning ( 3.10 ) 1 + 9 med vand og fortynd derefter den opnaaede oploesning 1 + 9 med vand .  3.11 . Lanthankloridoploesning fremstilles som foelger : oploes 12 g lanthanoxid i 150 ml vand , tilsaet 100 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) og fyld op til 1 l med vand .  4 . APPARATUR  4.1 . Muffelovn med temperaturregulering og pyrometer .  4.2 . Glasvarer skal vaere af modstandsdygtigt borsilikat , og det anbefales , at apparaturer udelukkende anvendes til bestemmelse af mineraler .  4.3 . Platindigel eller kvartsdigel .  4.4 . Atomabsorptionsspektrofotometer som fylder metodens krav med hensyn til foelsomhed og noejagtighed i det kraevede omraade .  5 . FREMGANGSMAADE  5.1 . Proever indeholdende organisk stof  5.1.1 . Foraskning og oploesning af proeve til analyse ( f )  i ) i ) Afvej med 0,2 mg's noejagtighed , 5 - 10 g af proeven i en kvarts - eller platindigel ( 4.3 . ) ( se bemaerkning b ) , proeven toerres i en ovn ved 105 * C , og digelen anbringes i en kold muffelovn ( 4.1 ) . Ovnen lukkes ( se bemaerkning c ) , og temperaturen oeges gradvis til 450 - 475 * C i loebet af ca . 90 min . Denne temperatur holdes i 4 - 16 timer ( f.eks . natten over ) for at fjerne organisk materiale hvorefter ovnen aabnes til afkoeling ( se bemaerkning d ) .  Asken fugtes med vand og overfoeres til et 250 ml baegerglas . Digelen skylles med i alt ca . 5 ml saltsyre  ( 3.1 ) , der overfoeres langsomt og omhyggeligt til baegerglasset ( en voldsom reaktion kan forekomme paa grund af dannelse af CO2 ) .  Tilsaet saltsyre ( 3.1 ) draabevis under omroering , indtil enhver brusning er ophoert . Inddamp til toerhed under lejlighedsvis omroering med en glasspatel .  Dernaest tilsaettes 15 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) til inddampningsresten efterfulgt af ca . 120 ml vand . Der omroeres med glasspatelen , der forbliver i baegerglasset , som derefter tildaekkes med et urglas . Indholdet bringes til svag kogning og holdes paa kogepunktet , indtil der tilsyneladende ikke oploeses mere aske . Filtrer gennem et askefrit filterpapir i en 250 ml maalekolbe ( se ii ) . Vask baegerglas og filter med 5 ml varm 6 N saltsyre  ( 3.2 ) og 2 gange med kogende vand . Fyld maalekolben op til maerket med vand ( HCl koncentration ca . 0,5 N ) .  ii ) Hvis bundfaldet paa filtret er sort ( kulstof ) , saettes den tilbage i ovnen , og der foraskes igen ved 450 - 475 * C . Denne foraskning , som kun kraever nogle faa timer ( ca . 3 - 5 timer ) , er gennemfoert , naar asken er hvid eller naesten hvid . Oploes asken i ca . 2 ml saltsyre ( 3.1 ) , inddamp til toerhed og tilsaet 5 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) . Opvarm , filtrer oploesningen i maalekolben og fyld op til maerket med vand ( ca . 0,5 N HCl-koncentration ) .  Bemaerkninger :  a ) Ved bestemmelse af mikromineraler er det vigtigt at vaere klar over risikoen for forurening isaer med zink , kobber og jern . Derfor skal det udstyr , som anvendes til forbehandling af proeverne , vaere fri for disse metaller .  For at mindske den almindelige forureningsrisiko arbejdes i en stoevfri atmosfaere med pinligt rent udstyr og omhyggeligt afvaskede glasvarer . Bestemmelsen af zink er saerlig foelsom over for mange typer forurening f.eks . fra glas , reagenser , stoev osv .  b ) Vaegten af den proeve , som skal foraskes , skal beregnes ud fra det omtrentlige forventede indhold af mikromineraler i foderstoffet i relation til det anvendte spektrofotometers foelsomhed . For visse foderstoffer , hvis mikromineralindhold er lavt , kan det vaere noedvendigt at starte med en proeve paa 10 - 20 g og begraense den endelige oploesning til kun 100 ml .  c ) Foraskning skal udfoeres i en lukket ovn uden gennemblaesning med luft eller ilt .  d ) Pyrometerets temperaturudvisning maa ikke overstige 475 * C .  5.1.2 . Spektrofotometrisk bestemmelse  5.1.2.1 . Fremstilling af standardoploesninger  For hver af de grundstoffer , som skal bestemmes , skal der ud fra stamoploesningerne 3.7.1 , 3.8.1 , 3.9.1 og 3.10.1 fremstilles en raekke standardoploesninger ( 100 ml maalekolber ) hver med en HCl koncentration paa ca . 0,5 N og ( ved jern , mangan og zink ) en lanthanklorid koncentration svarende til 0,1 % La ( w/v ) . De valgte koncentrationer for mikromineraler skal ligge inden for det anvendte spektrofotometers foelsomhedsomraade . Eksempelvis er i tabellerne nedenfor angivet sammensaetningen af typiske raekker af standardoploesninger . Afhaengig af Spektrofotometer og dets foelsomhed kan det imidlertid blive noedvendigt at vaelge andre koncentrationer  Jern  mg Fe/ml * 0 * 0,5 * 1 * 2 * 3 * 4 * 5 *  ml stamoploesning II ( 3.7.1 ) * 0 * 0,5 * 1 * 2 * 3 * 4 * 5 *   ( 1 ml = 100 mg Fe ) + Ml 6 N HCl ( 3.2 ) * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 *   + 10 ml lanthankloridoploesning ( 3.11 ) fyld op til 100 ml med vand  Kobber  mg Cu/ml * 0 * 0,1 * 0,2 * 0,4 * 0,6 * 0,8 * 0,1 *  ml stamoploesning II ( 3.8.1 ) * 0 * 1 * 2 * 4 * 6 * 8 * 10 *   ( 1 ml = 10 mg Cu ) + ml 6 N HCl ( 3.2 ) * 8 * 8 * 8 * 8 * 8 * 8 * 8 *  Fyld op til 100 ml med vand  Mangan  mg Mn/ml * 0 * 0,1 * 0,2 * 0,4 * 0,6 * 0,8 * 1,0 *  ml stamoploesning II ( 3.9.1 ) * 0 * 1 * 2 * 4 * 6 * 8 * 10 *   ( 1 ml = 10 mg Mn ) + ml 6 N HCl ( 3.2 ) * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 *   + 10 ml lanthankloridoploesning ( 3.11 ) og fyld op til 100 ml med vand  Zink  mg Zn/ml * 0 * 0,05 * 0,1 * 0,2 * 0,4 * 0,6 * 0,8 *  ml stamoploesning ( 3.10.1 ) * 0 * 0,5 * 1 * 2 * 4 * 6 * 8 *   ( 1 ml = 10 mg Zn ) + ml 6 N HCl ( 3.2 ) * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 * 7 *   + 10 ml lanthankloridoploesning ( 3.11 ) og fyld op til 100 ml med vand  5.1.2.2 Fremstilling af proeveoploesning til analyse  Til bestemmelse af kobber kan den oploesning , som er fremstillet under 5.1.1 , normalt direkte anvendes . Hvis det er noedvendigt at bringe dens koncentration ind i standardoploesningernes omraade , kan en alikvot del afpitteres i en 100 ml maalekolbe , derefter fyldes op til maerket 0,5 N saltsyre ( 3.3 ) .  Til bestemmelse af jern , mangan og zink afpitteres en alikvot del af den af 5.1.1 fremstillede oploesning i en 100 ml maalekolbe , der tilsaettes 10 ml lanthankloridoploesning ( 3.11 ) , og der fyldes op til maerket med 0,5 N saltsyre ( 3.3 ) .   ( se ogsaa 8 , " Bemaerkning " ) .  5.1.2.3 . Blindbestemmelsen skal indeholde alle trinene under fremgangsmaaden , blot skal proevematerialet udelades . Standardoploesning " 0 " maa ikke anvendes som blind .  5.1.2.4 . Maaling af atomabsorption  Atomabsorptionen for standardoploesningerne og den oploesning som skal analyseres , maales ved anvendelse af en oxiderende luftacetylenflamme ved foelgende boelgelaengder :  Fe 248,3 nm  Cu 324,8 nm  Mn 279,5 nm  Zn 213,8 nm  Hver af maalingerne gentages fire gange .  5.2 . Mineralske foderstoffer  Hvis proeven ikke indeholder organisk materiale , er forudgaaende foraskning unoedvendig . Fremgangsmaaden i 5.1.1 i ) foelges , idet der startes fra afsnit 2 . Fordampning under tilstedevaerelse af flussyre kan udelades .  6 . BEREGNING AF RESULTATER  Ved anvendelse af en kalibreringskurve beregnes koncentrationen af mikromineralet i den oploesning , som skal analyseres , og resultatet udtrykkes i mg mikromineral pr . kg proeve ( ppm ) .  7 . REPETERBARHED  Forskellen mellem resultaterne af de to sideloebende bestemmelser , udfoert paa samme proeve af samme analytiker , boer ikke overstige :   - 5 mg/kg i absolut vaerdi for mikromineralindhold op til 50 mg/kg ;   - 10 % af de hoejeste resultat for mikromineralindhold fra 50 til 100 mg/kg ;   - 10 mg/kg i absolut vaerdi for mikromineralindhold fra 100 til 200 mg/kg ;   - 5 % af det hoejeste resultat for mikromineralindhold over 200 mg/kg .  8 . BEMAERKNING  Tilstedevaerelse af store maengder fosfater kan interfere paa bestemmelsen af jern , mangan og zink . Denne interferens skal korrigeres gennem tilsaetning af en lanthankloridoploesning ( 3.11 ) . Hvis imidlertid vaegtforholdet ( Ca + Mg ) /P 2 i proeven , kan tilsaetning af lanthanklorid ( 3.11 ) til den oploesning , som skal analyseres og til standardoploesningerne , udelades .  (*) 1 mg zink-bacitracin til foderbrugsvarer til 42 internationale enheder ( IE ) .  ( a ) Andre metoder kan anvendes , forudsat at det er bevist , at de giver tilsvarende bakteriesuspension .  ( b ) Ethvert naeringssubstrat af tilsvarende sammensaetning , som er i handelen og som giver de samme resultater , kan anvendes .  ( c ) Ethvert naeringssubstrat af tilsvarende sammensaetning , som er i handelen og som giver de samme resultater , kan anvendes , f.eks . Oxoid Antibiotic Medium 1 ( CM 327 ) med tilsaetning af Oxoid agar nr . 3 ( L 13 ) .  ( d ) Ethvert naeringssubstrat af tilsvarende sammensaetning , som giver de samme resultater , kan anvendes , f.eks . Oxoid Antibiotic Medium 2 ( CM 335 ) med tilsaetning af Oxoid agar nr . 3 ( L 13 ) .  ( e ) F . eks . SE 2 fra Wacker Chemie GmbH , Muenchen .  ( f ) Groentfoder ( frisk eller toerret ) indeholder ofte store maengder vegetabilsk silicium , som kan binde mikromineraler , og derfor maa fjernes . Ved proever af saadanne foderstoffer skal derfor foelgende aendrede fremgangsmaade anvendes . Udfoer det under 5.1.1 i ) beskrevne indtil filtreringen . Vask filterpapiret indeholdende den uoploeselige rest 2 gange med kogende vand og anbring det i en platindigel ( 4.3 ) . Forask i muffelovnen ( 4.1 ) ved en temperatur under 550 * C indtil alt kulstofholdigt materiale fuldstaendig er forsvundet . Afkoel , tilsaet nogle faa draaber vand efterfulgt af 10 - 15 ml flussyre ( 3.4 ) og inddamp til toerhed ved ca . 150 * C . Hvis der stadig er silicium i inddampningsresten , genoploeses denne i nogle faa ml flussyre ( 3.4 ) og inddampes til toerhed . Tilsaet 5 draaber svovlsyre ( 3.5 ) og opvarm , indtil der ikke mere afgives hvide dampe . Efter tilsaetning af 5 ml 6 N saltsyre ( 3.2 ) og ca . 30 ml vand opvarmes oploesningen ; derefter filtreres denne ned i en 250 ml maalekolbe , og der fyldes op til maerket med vand ( HCl koncentration ca . 0,5 N ) . Fortsaet derefter bestemmelsen fra 5.1.3 .