CELEX: 31992D0608
Language: nl
Date: 1992-11-14 00:00:00
Title: 92/608/EEG: Beschikking van de Raad van 14 november 1992 tot vaststelling van bepaalde analyse- en testmethoden voor warmtebehandelde melk voor rechtstreekse menselijke consumptie

Avis juridique important

|

31992D0608

92/608/EEG: Beschikking van de Raad van 14 november 1992 tot vaststelling van bepaalde analyse- en testmethoden voor warmtebehandelde melk voor rechtstreekse menselijke consumptie  

Publicatieblad Nr. L 407 van 31/12/1992 blz. 0029 - 0046 Bijzondere uitgave in het Fins: Hoofdstuk 3 Deel 47 blz. 0164  Bijzondere uitgave in het Zweeds: Hoofdstuk 3 Deel 47 blz. 0164 

BESCHIKKING VAN DE RAAD van 14 november 1992 tot vaststelling van bepaalde  analyse- en testmethoden voor warmtebehandelde melk voor rechtstreekse menselijke consumptie  (92/608/EEG)DE RAAD VAN DE EUROPESE GEMEENSCHAPPEN, Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese Economische Gemeenschap, Gelet op Richtlijn 85/397/EEG van de Raad van 5 augustus 1985 inzake hygiënische en  veterinairrechtelijke problemen bij het intracommunautaire handelsverkeer in warmtebehandelde melk  (1), inzonderheid op artikel 11, lid 6, Gezien het voorstel van de Commissie, Overwegende dat volgens artikel 11, lid 6, van Richtlijn 85/397/EEG de Raad de uitvoeringswijze van  de in lid 2 van dat zelfde artikel bedoelde controle vaststelt; dat deze controle die door de  inrichtingen moet worden uitgevoerd onder supervisie, verantwoordelijkheid en periodieke controle  van de officiële instantie, dient te waarborgen dat de in de Richtlijn 85/397/EEG vervatte normen,  en met name die van artikel 3, punt A, onder 3, worden nageleefd; Overwegende dat bij de vaststelling van de voorschriften inzake de controle ook de methoden voor de  uitvoering ervan moeten worden bepaald; Overwegende dat, wat warmtebehandelde melk voor rechtstreekse menselijke consumptie betreft, de  methoden moeten worden vastgesteld voor de bepaling van het droge-stofgehalte, het vetgehalte, het  gehalte aan vetvrije droge stof, het totale stikstofgehalte, het eiwitgehalte en de volumieke  massa; Overwegende dat, om technische redenen, in een eerste fase referentiemethoden moeten worden  vastgesteld voor de analyses en tests die moeten waarborgen dat de in artikel 3, punt A, onder 3,  van Richtlijn 85/397/EEG vervatte normen worden nageleefd; dat met name moet worden voortgegaan met  het onderzoek over de toepassing van routinemethoden voor analyses en tests; dat de bevoegde  instanties, in afwachting van de resultaten van dat onderzoek, ervoor moeten zorgen dat zodanige  routinemethoden worden toegepast dat aan de bedoelde normen wordt voldaan; Overwegende dat, met het oog op een uniforme interpretatie van de resultaten, tegelijk met genoemde  methoden analyseprocédés en betrouwbaarheidscriteria moeten worden vastgesteld, HEEFT DE VOLGENDE BESCHIKKING VASTGESTELD: Artikel 1De methoden voor de analyses en de tests voor warmtebehandelde melk  voor rechtstreekse menselijke consumptie betreffen: - bepaling van het droge-stofgehalte, - bepaling van het vetgehalte, - bepaling van het gehalte aan vetvrije droge stof, - bepaling van het totale stikstofgehalte, - bepaling van het eiwitgehalte, - bepaling van de volumieke massa. Artikel 2De toepassing van de referentiemethoden voor de analyses en tests en de  betrouwbaarheidscriteria en het verzamelen van monsters moet geschieden overeenkomstig de in  bijlage I neergelegde regels. Artikel 3De in artikel 1 genoemde methoden zijn beschreven in bijlage II. Artikel 4Deze beschikking is gericht tot de Lid-Staten. Gedaan te Brussel, 14 november 1992. Voor de RaadDe VoorzitterJ. GUMMER(1) PB nr. L 226 van 24. 8. 1985, blz. 13.  Richtlijn laatstelijk gewijzigd bij Richtlijn 89/662/EEG (PB nr. L 395 van 30. 12. 1989, blz. 13).  BIJLAGE I I. ALGEMENE BEPALINGEN 1. INLEIDINGDit hoofdstuk bevat algemene bepalingen  ten aanzien van reagentia, apparatuur, weergave van de resultaten, precisie en onderzoekverslagen.  De bevoegde instanties van de Lid-Staten en de controlelaboratoria die de bemonstering en het  onderzoek van melk moeten uitvoeren, moeten deze algemene bepalingen naleven. 2. REAGENTIA2.1. Water2.1.1. Waar sprake is van water voor oplossen, verdunnen of spoelen moet  gedistilleerd water, gedeïoniseerd water of gedemineraliseerd water van ten minste gelijke  zuiverheid worden gebruikt, tenzij anders is aangegeven. 2.1.2. Waar sprake is van "oplossing" of "verdunning" (zonder nadere aanduiding), wordt "oplossing  in water" of "verdunning met water" bedoeld. 2.2. ChemicaliënAlle gebruikte chemicaliën dienen van erkende analysekwaliteit te zijn, tenzij  anders aangegeven. 3. APPARATUUR3.1. Lijst van apparatuurDe bij de verschillende referentiemethoden opgegeven lijst  van apparatuur bevat alleen apparatuur voor een bijzonder gebruiksdoel en apparatuur volgens een  bijzondere specificatie. 3.2. Analytische balansMet "analytische balans" wordt een balans bedoeld waarop tot 0,1 mg kan  worden gewogen. 4. WEERGAVE VAN RESULTATEN4.1. ResultatenTenzij anders wordt vermeld, dienen de in het  analyserapport (6) weergegeven resultaten het rekenkundig gemiddelde te zijn van twee bepalingen  waarbij wordt voldaan aan het voor die bepaling vastgelegde herhaalbaarheidscriterium (5.1.1). Als  niet aan het herhaalbaarheidscriterium wordt voldaan, moet het onderzoek zo mogelijk worden  herhaald of moet het resultaat ongeldig worden verklaard. 4.2. Berekening van percentageHet resultaat dient te worden berekend als een massapercentage van  het monster, tenzij anders vermeld. 5. CRITERIA VOOR DE BETROUWBAARHEID: HERHAALBAARHEID EN REPRODUCEERBAARHEID5.1. De bij elke  methode opgenomen criteria voor de betrouwbaarheid zijn als volgt vastgelegd: 5.1.1. Herhaalbaarheid (r) is de waarde waarbeneden het absolute verschil ligt tussen de resultaten  die met dezelfde methode onder dezelfde omstandigheden (dezelfde medewerker, dezelfde apparatuur,  hetzelfde laboratorium, en kort na elkaar) zijn verkregen bij twee enkelvoudige bepalingen  uitgevoerd met identiek monstermateriaal. 5.1.2. Reproduceerbaarheid (R) is de waarde waarbeneden het absolute verschil ligt tussen de  resultaten die met dezelfde methode onder verschillende omstandigheden (verschillende medewerkers,  verschillende apparatuur, verschillende laboratoria en/of op verschillende tijdstippen) zijn  verkregen bij twee enkelvoudige bepalingen uitgevoerd met identiek monstermateriaal. 5.1.3. Tenzij anders wordt vermeld voor elke toegepaste methode, geven de eisen voor  herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid het 95  %-betrouwbaarheidsinterval weer zoals vastgelegd in  ISO 5725 tweede uitgave, 1986. 5.1.4. De noodzakelijke onderzoekingen en studies moeten worden gepland en uitgevoerd  overeenkomstig internationale voorschriften. 6. VERSLAG VAN HET ONDERZOEKHet verslag van het onderzoek dient de gebruikte analysemethode en de  verkregen resultaten te vermelden. Ter aanvulling dienen details opgegeven te worden van de  toegepaste werkwijze, voorzover deze in de analysemethode niet zijn vastgelegd of naar keuze zijn,  evenals andere omstandigheden die de verkregen resultaten hebben kunnen beïnvloeden. Het verslag  van het onderzoek moet alle noodzakelijke informatie bevatten voor volledige identificatie van het  monster. II. BEMONSTERING VAN WARMTEBEHANDELDE MELK 1. ONTWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit hoofdstuk  beschrijft de referentiemethode voor de bemonstering en het transport en de opslag van monsters van  warmtebehandelde melk. 2. ALGEMEENDe bemonstering van warmtebehandelde melk in tanks moet worden uitgevoerd door een  bekwaam medewerker die een geschikte opleiding heeft gehad alvorens melk te gaan bemonsteren. Indien dat nodig wordt geacht, instrueren de bevoegde autoriteiten of instrueert het  onderzoeklaboratorium het betreffende personeel over bemonstering en bemonsteringstechnieken, om er  zo voor te zorgen dat het monster representatief is voor en overeenkomt met de hele partij. Indien dat nodig wordt geacht, instrueren de bevoegde autoriteiten of instrueert het  onderzoeklaboratorium het bemonsteringspersoneel over de aanduidingen die op het monster moeten  worden aangebracht om de identiteit daarvan ondubbelzinnig vast te leggen. 3. BEMONSTERINGSAPPARATUUR3.1. AlgemeenBemonsteringsapparatuur dient te zijn vervaardigd uit  roestvrij staal, of uit ander geschikt materiaal van voldoende sterkte en dient van een constructie  te zijn die geschikt is voor het gestelde doel (menging, bemonstering, enz.). Dompellichamen en  roerders voor het mengen van vloeistoffen in tanks moeten een voldoende groot oppervlak hebben voor  een juiste menging van het produkt, maar mogen niet leiden tot het ontstaan van ranzigheid. Lepels  moeten een stevige steel hebben die lang genoeg is om op elke diepte in een tank een monster te  kunnen nemen. Het volume van de lepel mag niet minder zijn dan 50 ml. Monsterpotten en deksels moeten van glas, geschikte metalen of kunststoffen zijn. De materialen waaruit de bemonsteringsapparatuur (inclusief monsterpotten en deksels) is  vervaardigd, mogen in het monster geen enkele verandering veroorzaken die de resultaten van het  onderzoek kan beïnvloeden. Alle oppervlakken moeten schoon en droog, glad en vrij van krassen zijn,  hoeken moeten afgerond zijn. 4. BEMONSTERINGSTECHNIEK4.1. AlgemeenOngeacht de uit te voeren onderzoekingen, dient de melk vóór  de bemonstering handmatig of mechanisch grondig te worden gemengd. Het monster moet direct na menging worden genomen als de melk nog in beweging is. Het monstervolume moet toereikend zijn voor het onderzoek. Het volume van de gebruikte  monsterpotten moet zodanig zijn dat ze door het monster bijna geheel worden gevuld, zodat een goede  menging van het monster vóór het onderzoek mogelijk blijft, maar vetafscheiding tijdens het  transport wordt vermeden. 4.2. Bemonstering4.2.1. Bemonstering van een over meerdere recipiënten verdeelde partijWanneer de  te bemonsteren hoeveelheid melk zich in meer dan één recipiënt bevindt, neem dan uit elk recipiënt  een representatieve hoeveelheid en noteer de hoeveelheid melk waar elk monster bijhoort. Meng  gedeelten van deze representatieve hoeveelheden in een onderlinge verhouding die overeenkomt met de  verhouding tussen de hoeveelheden per recipiënt waaruit elk monster werd genomen, tenzij de  monsters uit elk recipiënt apart moeten worden onderzocht. Neem na menging één of meer monsters van  deze proportioneel samengestelde mengmonsters. 4.2.2. Bemonstering van grote recipiënten - tanks voor opslag, spoor- en wegtransport4.2.2.1. Meng  de melk goed vóór de bemonstering. Mechanisch roeren wordt aanbevolen om de inhoud van grote recipiënten of tanks voor opslag, spoor-  of wegtransport te mengen (4.2.2.2). De mate van menging moet aangepast worden aan de periode waarin de melk heeft stilgestaan.  Aangetoond moet worden dat de in een bepaalde situatie toegepaste mengmethode voldoende efficiënt  is voor de analyse die moet worden uitgevoerd; de mengefficiency is van bijzondere invloed op de  overeenstemming tussen analyseresultaten van monsters die genomen zijn ofwel uit verschillende  delen van de partijen ofwel met tussenpozen bij het legen van de tank. Een methode om melk te  mengen, kan als efficiënt worden beschouwd als het verschil tussen de vetgehaltes van twee onder  deze omstandigheden genomen monsters kleiner is dan 0,1  %. In een grote tank met bodemafvoer kan zich, zelfs na menging, bij het afvoerpunt een kleine  hoeveelheid melk bevinden die niet representatief is voor de hele inhoud. Daarom moeten monsters  bij voorkeur door een mangat worden genomen. Als uit de afvoer monsters worden genomen, moet ervoor  worden gezorgd dat de monsters representatief zijn voor de gehele inhoud door eerst voldoende melk  te laten weglopen. 4.2.2.2. Het mengen van de inhoud van grote recipiënten of van tanks voor opslag, spoor- of  wegtransport kan worden verkregen: - door een in de tank ingebouwd roerwerk, aangedreven door een elektromotor; - door een schroef of andere roerder, aangedreven door een elektromotor en geplaatst op het mangat,  waarbij de roerder in de melk hangt; - in het geval van spoor- of wegtransporttanks door de melk met de pompen voor het legen van de  tanks te recirculeren via een slang in het mangat; - met zuivere gefiltreerde perslucht. In dit geval moeten luchtdruk en volume minimaal zijn om het  ontstaan van ranzigheid te voorkomen. 4.3. Bemonstering van warmtebehandelde melk in kleinverpakking voor directe consumptieMonsters van  warmtebehandelde melk in kleinverpakking voor directe consumptie dienen uit volledige gesloten  verpakkingseenheden te bestaan. Zo mogelijk moeten in de melkinrichting de monsters uit de  verpakkingsmachine of uit de gekoelde opslagruimte worden opgenomen, zo spoedig mogelijk na  behandeling. Voor gepasteuriseerde melk moeten monsters worden genomen van melk die op de dag van  de bemonstering is gepasteuriseerd. Voor elke soort warmtebehandelde melk (gepasteuriseerd, UHT en gesteriliseerd) worden aantallen  monsters genomen overeenkomstig de uit te voeren onderzoekingen en de voorschriften van het  onderzoeklaboratorium of een andere bevoegde instantie. 5. IDENTIFICATIE VAN HET MONSTERHet monster moet worden voorzien van een identificatiecode opdat  het gemakkelijk kan worden geïdentificeerd; de code moet worden aangebracht volgens voorschriften  van het onderzoeklaboratorium of de bevoegde instantie, zodat daarmee de identiteit van het monster  wordt vastgelegd. 6. BEWARING, TRANSPORT EN OPSLAG VAN MONSTERSHet onderzoeklaboratorium stelt voorschriften op voor  de bewaring (chemische stoffen, temperatuur), het transport en de opslag van melkmonsters, alsmede  voor de tijd tussen de bemonstering van de melk en de analyse van het melkmonster; het  onderzoeklaboratorium houdt daarbij rekening met het soort melk en de toe te passen analysemethode.  De voorschriften worden in overleg met de bevoegde nationale instantie vastgesteld. In de voorschriften moeten de volgende punten worden verwerkt: - tijdens transport en opslag moeten voorzorgen worden genomen om blootstelling aan besmettelijke  geuren en direct zonlicht te voorkomen. Als de monsterpot lichtdoorlatend is, moet deze op een  donkere plaats worden bewaard.  BIJLAGE II I. BEPALING VAN HET DROGE-STOFGEHALTE1. ONDERWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit  hoofdstuk beschrijft de referentiemethode voor de bepaling van het droge-stofgehalte van melk. 2. DEFINITIEDroge-stofgehalte: de massa die overblijft na de vastgelegde droogprocedure en die  wordt uitgedrukt als een massapercentage. 3. PRINCIPEVerdamping van het water uit een te onderzoeken hoeveelheid analysemonster bij een  temperatur van 102±2 oC in een droogstoof. 4. APPARATUUR EN GLASWERKGebruikelijke laboratoriumuitrusting, en in het bijzonder: 4.1. Analytische balans4.2. Exsiccator, voorzien van een werkzaam droogmiddel (bijvoorbeeld pas  gedroogde silicagel met een vochtindicator). 4.3. Droogstoof met ventilatie, thermostatisch geregeld op 102±2 oC in de gehele te gebruiken  ruimte. 4.4. Vlakke schalen, hoogte 20 tot 25 mm, diameter 50 tot 75 mm, van geschikt materiaal, voorzien  van goed passende, makkelijk te verwijderen deksels. 4.5. Kokend-waterbad4.6. Homogeniseerapparaat5. VOORBEHANDELING VAN HET MONSTERBreng het monster  melk op een temperatuur van 20 tot 25 oC. Meng grondig om een homogene verdeling van het vet door  het monster te verzekeren. Niet te heftig roeren om te voorkomen dat de melk gaat schuimen of dat  het vet zich afscheidt. Als het moeilijk blijkt om de roomlaag te dispergeren, warm dan langzaam op  tot 35 á 40 oC en zorg door zorgvuldig mengen dat de room die aan de monsterpot kleeft ook wordt  verdeeld. Koel het monster snel tot 20 à 25 oC. Indien gewenst kan een homogeniseerapparaat worden gebruikt om het vet te dispergeren. Er kunnen geen goede resultaten worden verwacht als het monster afgescheiden vloeibaar vet bevat of  als er zichtbare afgescheiden witte deeltjes met onregelmatige vorm aan de wand van de monsterpot  voorkomen. 6. WERKWIJZE6.1. Voorbehandeling van de schaalVerwarm een schaal (4.4) met het deksel ernaast in  de stoof (4.3), geregeld op 102±2 oC, gedurende ten minste 30 minuten. Plaats het deksel op de  schaal en breng deze direct over in de exsiccator (4.2) laat tot kamertemperatuur afkoelen (d.w.z.  gedurende ten minste 30 minuten) en weeg op 0,1 mg nauwkeurig. 6.2. Te onderzoeken hoeveelheidWeeg onmiddellijk op 0,1 mg nauwkeurig 3 tot 5 g van het  voorbehandelde monster (5.) af in de voorbehandelde schaal 6.1). 6.3. Bepaling6.3.1. Droog de schaal vooraf gedurende 30 minuten door deze op het kokend waterbad  (4.5) te verhitten. 6.3.2. Verhit de schaal met het deksel ernaast gedurende 2 uur in de stoof (4.3), geregeld op 102±2  oC. Plaats vervolgens het deksel op de schaal en haal deze uit de stoof. 6.3.3. Laat in de exsiccator (4.2) afkoelen tot kamertemperatuur (d.w.z. gedurende ten minste 30  minuten) en weeg op 0,1 mg nauwkeurig. 6.3.4. Verhit de schaal weer met het deksel ernaast in de stoof gedurende 1 uur. Plaats vervolgens  het deksel op de schaal en haal deze uit de stoof. Laat gedurende 30 minuten afkoelen in de  exsiccator en weeg tot op 0,1 mg nauwkeurig. 6.3.5. Herhaal de in 6.3.3 beschreven handelingen tot het verschil in massa tussen twee  opeenvolgende wegingen niet meer dan 0,5 mg is. Noteer de laagste massa. 7. WEERGAVE VAN DE RESULTATEN7.1. Berekening en formuleBereken het droge-stofgehalte in  massaprocenten met behulp van de formule:  D =m2     m0m1     m0 × 100waarinD   =   het droge-stofgehalte in g per 100 g, m0 =   de massa in grammen van schaal plus deksel (zie 6.1), m1 =   de massa in grammen van schaal plus deksel en de onderzochte hoeveelheid monster (zie 6.2), m2 =   de massa in grammen van schaal plus deksel, en te onderzoeken hoeveelheid monster na drogen  (zie 6.3.5). Rond de verkregen waarden af tot op 0,01 massaprocent nauwkeurig. 7.2. Precisie7.2.1. Herhaalbaarheid (r): 0,10 g droge stof per 100 g produkt. 7.2.2. Reproduceerbaarheid (R): 0,20 g droge stof per 100 g produkt. II. BEPALING VAN HET VETGEHALTE 1. ONDERWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit hoofdstuk beschrijft de  referentiemethode voor de bepaling van het vetgehalte van rauwe melk en van volle melk,  gedeeltelijk afgeroomde melk en afgeroomde melk. 2. DEFINITIEVetgehalte van de melk: al de bestanddelen die met de beschreven methode worden  bepaald. Zij worden als een massapercentage uitgedrukt. 3. PRINCIPEEen ammoniak- en ethanolhoudende oplossing van een te onderzoeken hoeveelheid monster  wordt geëxtraheerd met diethylether en petroleumether, de oplosmiddelen worden door distillatie of  verdamping verwijderd, en de massa van het geëxtraheerde, in petroleumether oplosbare materiaal  wordt bepaald. (De werkwijze staat bekend als de Roese-Gottlieb-methode.)4. REAGENTIAAlle  reagentia dienen van erkende analysekwaliteit te zijn en mogen geen merkbaar residu achterlaten bij  een blancoproef. Om de kwaliteit van de reagentia te testen, wordt een bepaling uitgevoerd volgens 6.3. Gebruik een  gewogen lege fles, beker of metalen schaal (5.8), voorbehandeld volgens 6.4, als tarra (om te  kunnen corrigeren voor het effect van wijzigingen in de atmosferische omstandigheden op de uitkomst  van de weging). Als het residu, gecorrigeerd voor de schijnbare verandering in de massa van de  tarra, groter is dan 2,5 mg, bepaal dan het residu van de oplosmiddelen afzonderlijk door  verdamping van respectievelijk 100 ml diethylether (4.4) en 100 ml petroleumether (4.5). Gebruik  ook in dit geval een tarra. Als het residu groter is dan 2,5 mg, zuiver dan het oplosmiddel door  distillatie of vervang het oplosmiddel. 4.1. Ammoniakoplossing, met ongeveer 25  % (m/m) NH3. Een meer geconcentreerde ammoniakoplossing  mag ook worden gebruik (6.5.1 en A.1.5.1). 4.2. Ethanol, ten minste 94  % (v/v). Met methanol gedenatureerde ethanol mag gebruikt worden, mits  vaststaat dat het resultaat van de bepaling niet wordt beïnvloed. 4.3. Congo- of cresolroodoplossingLos 1 g congorood of cresolrood op in water en verdun tot 100  ml. Opmerking: Het gebruik van deze oplossing, waardoor de grens tussen oplosmiddel en waterlaag beter  zichtbaar is, is facultatief (vgl. 6.5.2). Andere waterige oplossingen van kleurstoffen mogen  worden gebruikt, mits zij het resultaat van de bepaling niet beïnvloeden. 4.4. Diethylether, vrij van peroxide en met niet meer dan 2 mg/kg anti-oxidanten, die voldoet aan  de eisen bij de blancoproef (6.3). 4.5. Petroleumether, met een kooktraject tussen 30 en 60 oC. 4.6. Gemengd oplosmiddel, kort voor gebruik bereid door gelijke volumina diethylether (4.4) en  petroleumether (4.5) te mengen. 5. APPARATUUR EN GLASWERKWaarschuwing: Daar de bepaling wordt uitgevoerd met vluchtige brandbare  oplosmiddelen, moet alle te gebruiken elektrische apparatuur voldoen aan de wetgeving met  betrekking tot het gebruik van dergelijke oplosmiddelen. Gebruikelijke laboratoriumapparatuur, en in het bijzonder: 5.1. Analytische balans5.2. Centrifuge, waarin op de vetextractiekolven of -buizen (5.6) door een  toerental van 500 tot 600 omwentelingen per minuut een versnelling kan worden uitgeoefend van 80  tot 90 g aan het ondereind van die kolven of buizen. Opmerking:  Het gebruik van een centrifuge is facultatief (6.5.5). 5.3. Distillatie- of verdampingsapparatuur, om de oplosmiddelen en de ethanol uit de kolven te  kunnen afdistilleren of te kunnen verdampen uit bekers en schalen (6.5.12 en 6.5.15) bij een  temperatuur lager dan 100 oC. 5.4. Stoof, elektrisch verwarmd, met geheel geopende ventilatie-openingen, die kunnen worden  geregeld op een temperatuur van 102±2 oC in de te gebruiken ruimte. De stoof moet voorzien zijn van  een passende thermometer. 5.5. Waterbad, waarin een temperatuur van 35-40 oC kan worden gehandhaafd. 5.6. Vetextractiebuizen volgens MojonnierOpmerking: Het is ook mogelijk vetextractiebuizen met  sifon- of wasflesinzetten te gebruiken, maar de werkwijze is dan anders en wordt in het aanhangsel  nader omschreven. De extractiebuizen dienen voorzien te zijn van ingeslepen glazen stoppen of kurken van goede  kwaliteit of andere stoppen die niet door de te gebruiken reagentia worden aangetast. Kurken moeten  na extractie met diethylether (4.4) gedurende minstens 15 minuten in water van 60 oC of meer worden  gelegd, en daarna in water afgekoeld, zodat ze bij gebruik verzadigd zijn. 5.7. Rek, voor de vetextractiebuizen (5.6). 5.8. Wasfles, geschikt voor gebruik met het gemengde oplosmiddel (4.6). Er mag geen plasticfles  worden gebruikt. 5.9. Vetrecipiënten, bijvoorbeeld platbodemkolven, of erlenmeyers met een inhoud van 125-250 ml, of  metalen schalen. Bij gebruik van metalen schalen heeft roestvrij staal de voorkeur, met vlakke  bodem, liefst met een tuit, en een diameter van 80 tot 100 mm en een hoogte van ongeveer 50 mm. 5.10. Kooksteentjes, vetvrij, van een niet-poreus porselein of siliciumcarbide of glasparels  (facultatief in het geval van metalen schalen). 5.11. Maatcilinders, met 5 en 25 ml inhoud. 5.12. Pipetten, met maatverdeling, van 10 ml inhoud. 5.13. Tang, van metaal, voor het vasthouden van kolven, bekers of schalen. 6. WERKWIJZEOpmerking:  De alternatieve werkwijze met vetextractiebuizen met sifon- of  wasflesinzetten (zie de opmerking bij 5.6) wordt beschreven in het aanhangsel. 6.1. Voorbehandeling van het monsterBreng de temperatuur van het laboratoriummonster gedurende 15  minuten op ongeveer 35-40 oC, zonodig op een waterbad. Meng het monster goed, maar voorzichtig,  door de monsterfles herhaaldelijk om te keren zonder dat schuimen of verafscheiding optreedt, en  koel snel af tot ongeveer 20 oC. 6.2. Te onderzoeken hoeveelheidMeng het monster (6.1) door de fles 3 of 4 keer voorzichtig om te  keren en weeg onmiddellijk op 1 mg nauwkeurig 10 tot 11 gram van het monster af, via een directe  weging of een verschilweging, in één van de extractiebuizen (5.6). De te onderzoeken hoeveelheid moet zo volledig mogelijk in het onderste gedeelte van de  extractiebuis worden gebracht. 6.3. BlancobepalingVoer tegelijk met de bepaling een blancobepaling uit volgens dezelfde werkwijze  en met dezelfde reagentia, waarbij de te onderzoeken hoeveelheid monster vervangen wordt door 10  tot 11 ml water. De schijnbare verandering in de massa van de vetrecipiënt mag na correctie voor de schijnbare  massa-verandering van de controlerecipiënt niet groter zijn dan 2,5 mg. 6.4. Voorbehandeling van de vetrecipiëntDroog een recipiënt (5.9) en tegelijk een paar  kooksteentjes (5.10) om het zachte koken tijdens de daarna volgende verwijdering van oplosmiddel te  bevorderen, gedurende 1 uur in de stoof (5.4). Laat de recipiënt afkoelen (niet in de exsiccator,  maar wel in een stofvrije omgeving) tot de temperatuur van de weegkamer (glazen recipiënten ten  minste 1 uur, metalen schalen ten minste 0,5 uur). Gebruik, om temperatuurveranderingen te  vermijden, een tang om de recipiënt op de balans te plaatsen en weeg op 1 mg nauwkeurig. 6.5. Bepaling6.5.1. Voeg 2 ml van de ammoniakoplossing (4.1) toe of een equivalent volume van een  meer geconcentreerde ammoniak-oplossing en meng grondig met de te onderzoeken hoeveelheid in het  onderste gedeelte van de extractiebuis. Voer na toevoeging van de ammoniak de bepaling zonder  onderbreking uit. 6.5.2. Voeg 10 ml ethanol (4.2) toe en meng grondig, maar voorzichtig, door de inhoud van de  extractiebuis tussen het onderste en middelste deel van de extractiebuis heen en weer te laten  vloeien; zorg ervoor dat de vloeistof niet te dicht bij de hals van de extractiebuis komt. Voeg  desgewenst 2 druppels van de congo- of cresolroodoplossing toe (4.3). 6.5.3. Voeg 25 ml diethylether (4.4) toe, sluit de extractiebuis met een met water verzadigde kurk  of een met water bevochtigde stop (5.6) en schud gedurende 1 minuut de extractiebuis krachtig, maar  niet overmatig (zodat geen stabiele emulsie ontstaat), met de extractiebuis horizontaal en met het  bolvormige deel omhoog. Laat regelmatig de vloeistof van het middelste deel in het bolvormige deel  lopen. Koel de extractiebuis zonodig onder stromend water, verwijder dan zorgvuldig de kurk of stop  en spoel deze en de hals van de extractiebuis met een weinig van het gemengde oplosmiddel (4.6),  waarbij de wasfles (5.8) wordt gebruikt om de spoelvloeistof in de extractiebuis te laten lopen. 6.5.4. Voeg 25 ml petroleumether (4.5) toe, sluit de extractiebuis met de opnieuw (door dompelen in  water) bevochtigde kurk of stop, en schud de extractiebuis gedurende 30 seconden voorzichtig op de  in punt 6.5.3 beschreven manier. 6.5.5. Centrifugeer de gesloten extractiebuis gedurende 1 tot 5 minuten met 500 tot 600  omwentelingen per minuut (5.2). Laat, als geen centrifuge (zie 5.2) beschikbaar is, de gesloten  extractiebuis gedurende ten minste 30 minuten in het rek (5.7) staan tot de bovenste laag helder is  en duidelijk afgescheiden van de waterlaag. Koel de extractiebuis zonodig onder stromend water. 6.5.6. Verwijder de kurk of stop zorgvuldig en spoel deze en de binnenzijde van de hals van de  extractiebuis met een weinig gemengd oplosmiddel (4.6) zó, dat de spoelvloeistof in de  extractiebuis loopt. Als het scheidingsvlak tussen de vloeistoffen lager ligt dan de basis van het smalle deel van de  extractiebuis, voeg dan voorzichtig water langs de kant van de extratiebuis toe om het  scheidingsvlak iets boven dat niveau te brengen, dit om het decanteren van het oplosmiddel te  vergemakkelijken. 6.5.7. Houd de extractiebuis aan het onderste, bolvormige deel vast en decanteer zorgvuldig zoveel  mogelijk van de bovenste vloeilaag in de voorbehandelde vetrecipiënt (6.4) met daarin enkele  kooksteentjes (5.10) in het geval van kolven (facultatief bij metalen schalen), en vermijd  decanteren van enig deel van de waterlaag. 6.5.8. Spoel de buitenzijde van de hals van de extractiebuis met een weinig gemengd oplosmiddel  (4.6), vang de spoelvloeistof in de vetrecipiënt op en zorg ervoor dat het gemengde oplosmiddel  niet over de buitenkant van de extractiebuis loopt. Desgewenst kan het oplosmiddel of een deel daarvan uit de recipiënt worden verwijderd door  distillatie of verdamping zoals in punt 6.5.12 beschreven. 6.5.9. Voeg 5 ml ethanol (4.2) toe aan de inhoud van de extractiebuis en spoel daarbij de  binnenzijde van de hals van de buis af, en meng zoals in punt 6.5.2 beschreven. 6.5.10. Voor een tweede extractie uit door de in de punten 6.5.3 tot en met 6.5.8 beschreven  handelingen te herhalen, maar gebruik slechts 15 ml diethylether (4.4) en 15 ml petroleumether  (4.5); gebruik de ether om de binnenzijde van de hals van de extractiebuis af de spoelen. Breng  zonodig het scheidingsvlak tot het midden van de vernauwing van de buis om het laatste oplosmiddel  zo volledig mogelijk te kunnen decanteren. 6.5.11. Voer een derde extractie uit door nogmaals de in 6.5.3 tot en met 6.5.8 beschreven  handelingen te herhalen, maar gebruik slechts 15 ml diethylether (4.4) en 15 ml petroleumether  (4.5); gebruik de ether om de binnenzijde van de hals van de extractiebuis af te spoelen. Breng  zonodig het scheidingsvlak tot het midden van de vernauwing van de buis om het laatste oplosmiddel  zo volledig mogelijk te kunnen decanteren. De derde extractie kan bij afgeroomde melk achterwege blijven6.5.12. Verwijder de oplosmiddelen  (inclusief ethanol) zo volledig mogelijk uit de kolf door distillatie, of uit de beker of schaal  door verdamping (5.3), en spoel vóór aanvang van de distillatie de binnenkant van de hals van de  buis met een weinig gemengd oplosmiddel (4.6). 6.5.13. Verhit de vetrecipiënt (plaats, indien het een vetkolf betreft, de recipiënt op zijn zijde  om oplosmiddeldamp te laten ontsnappen) 1 uur in de stoof. Haal de vetrecipiënt uit de stoof. Laat  afkoelen (niet in een exsiccator, maar wel in een stofvrije omgeving) tot de temperatuur van de  weegkamer (glazen recipiënten ten minste 1 uur, metalen schalen ten minste 0,5 uur) en weeg op 0,1  mg nauwkeurig. Veeg de recipiënt niet vlak voor de weging af. Plaats, met name om temperatuurveranderingen te  vermijden, de recipiënt met een tang op de balans. 6.5.14. Herhaal de in punt 6.5.13 beschreven handelingen tot de massa van de vetrecipiënt tussen  twee opeenvolgende wegingen ten hoogste 0,5 mg toe- of afneemt. Noteer de laagste waargenomen massa  als de massa van vetrecipiënt en geëxtraheerd materiaal. 6.5.15. Voeg 25 ml petroleumether toe aan de vetrecipiënt om na te gaan of het geëxtraheerde  materiaal geheel oplosbaar is. Verwarm zachtjes en zwenk het oplosmiddel totdat alle vet is  opgelost. Als het geëxtraheerde materiaal geheel oplosbaar is in petroleumether, stel dan de massa van het  vet vast als het verschil tussen de uiteindelijke massa van de vetrecipiënt met geëxtraheerd  materiaal (6.5.14) en de oorspronkelijke massa ervan (6.4). 6.5.16. Als het geëxtraheerde materiaal niet geheel oplosbaar is in de petroleumether, of bij  twijfel, extraheer dan het vet volledig uit de recipiënt door herhaald wassen met warme  petroleumether. Laat elk spoor van onoplosbaar materiaal bezinken en decanteer de petroleumether zorgvuldig zonder  enig onoplosbaar materiaal mee af te gieten. Herhaal deze handeling nog 3 keer, en spoel daarbij  met petroleumether de binnenkant van de bovenrand van de recipiënt. Spoel ten slotte de bovenzijde van de recipiënt aan de buitenkant met gemengd oplosmiddel zonder  dat het oplosmiddel over de buitenkant van de recipiënt verspreid wordt. Verwijder de  petroleumetherdamp uit de recipiënt door die 1 uur in de stoof te verhitten, laat afkoelen en weeg  op de in de punten 6.5.13 en 6.5.14 beschreven wijze. Stel de massa vet vast als het verschil tussen de in punt 6.5.14 bepaalde massa en de hier bepaalde  massa. 7. WEERGAVE VAN RESULTATEN7.1. Berekening en formuleBereken het vetgehalte als een  massapercentage volgens:  V =(m1     m2)     (m3     m4)m0 × 100waarinV  =   vetgehalte, m0 =   de massa in gram van de onderzochte hoeveelheid monster (6.2), m1 =   de massa in gram van de vetrecipiënt met geëxtraheerd materiaal, zoals in punt 6.5.14  bepaald, m2 =   de massa in gram van de voorbehandelde vetrecipiënt of, in het geval van onopgelost  materiaal, van de vetrecipiënt met onoplosbaar residu, zoals in punt 6.5.16 bepaald, m3 =   de massa in gram van de bij de blancobepaling gebruikte vetrecipiënt (6.4) met het eventueel  geëxtraheerde materiaal, zoals in punt 6.5.14 bepaald, m4 =   de massa in gram van de voorbehandelde vetrecipiënt (zie 6.4) die bij de blancobepaling  (6.3) is gebruikt of, in het geval van onopgelost materiaal, van het vetverzamelvat met onoplosbaar  residu, zoals in punt 6.5.16 bepaald. Rapporteer het resultaat tot op 0,01  % nauwkeurig. 7.2. Precisie7.2.1. Herhaalbaarheid (r): - voor volle melk en gedeeltelijk afgeroomde melk: 0,02 g vet per 100 g produkt, - voor afgeroomde melk: 0,01 g vet per 100 g produkt. 7.2.2. Reproduceerbaarheid (R): - voor volle melk: 0,04 g vet per 100 g produkt, - voor gedeeltelijk afgeroomde melk: 0,03 g vet per 100 g produkt, - voor afgeroomde melk: 0,025 g vet per 100 g produkt. III. BEPALING VAN HET TOTAALGEHALTE AAN VETVRIJE DROGE STOF 1. ONDERWERP EN  TOEPASSINGSGEBIEDDit hoofdstuk beschrijft de referentiemethode voor de bepaling van het  totaalgehalte aan vetvrije droge stof in warmtebehandelde melk. 2. DEFINITIE EN BEREKENINGHet totaalgehalte aan vetvrije droge stof moet als massapercentage  worden uitgedrukt. Het totaalgehalte aan vetvrije droge stof is: het totaalgehalte aan droge stof (hoofdstuk I)  verminderd met het vetgehalte (hoofdstuk II). IV. BEPALING VAN HET TOTALE STIKSTOFGEHALTE IN MELK 1. ONDERWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit  hoofdstuk beschrijft de referentiemethode voor de bepaling van het totale stikstofgehalte van rauwe  melk en van volle melk, gedeeltelijk afgeroomde melk en afgeroomde melk. 2. DEFINITIEHet stikstofgehalte van melk: het stikstofgehalte in massaprocenten uitgedrukt, en  bepaald volgens de beschreven Kjeldahl-methode. 3. PRINCIPEEen afgewogen hoeveelheid van het monster melk wordt gedestrueerd met geconcentreerd  zwavelzuur en kaliumsulfaat, en voorts met koper(II)sulfaat als katalysator om de stikstof in de  organische verbindingen om te zetten in ammoniumsulfaat. De ammoniak wordt door toevoeging van een  natriumhydroxide-oplossing vrijgemaakt en dan gedistilleerd en in een boorzuuroplossing  geabsorbeerd. Deze wordt met een zure oplossing getitreerd. 4. REAGENTIA4.1. Kaliumsulfaat (K2SO4)4.2. Kopersulfaatoplossing. Los 5,0 gram  koper(II)sulfaatpentahydraat (CuSO4   7  5  H2O) op in water en verdun tot 100 ml (bij 20 oC) in  een maatkolf. 4.3. Zwavelzuur, ten minste 98,0  % (m/m), (H2SO4). 4.4. Natriumhydroxide-oplossing, 47  % (m/m), 704 g NaOH/l (20 oC). Opmerking: Er kan een minder geconcentreerde natriumhydroxide-oplossing worden gebruikt,  bijvoorbeeld: 40  % (m/m), 572 g/l, 20 oC of 30  % (m/m), 399 g/l, 20 oC. 4.5. Boorzuuroplossing. Los 40 g boorzuur (H3BO3) op in 1 liter warm water, laat afkoelen, en  bewaar deze oplossing in een borosilicaat-glazen fles. 4.6. Indicatoroplossing. Los 0,01 g methylrood, 0,02 g broomthymolblauw en 0,06 g broomcresolgroen  op in 100 ml ethanol. Bewaar de oplossing in een bruine glazen fles op een koele donkere plaats. 4.7. Gestelde zure titreervloeistofc (1/2 H2SO4) of c (HCL) = 0,1 mol/l, gesteld op 0,0001 mol/l  nauwkeurig. 4.8. Stikstofvrije saccharose4.9. Ammoniumzout, zuiver, in de vorm van ammoniumoxalaat (NH4)2C2O4    7  H2O of ammoniumsulfaat (NH4)2SO4. 4.10. Tryptofaan (C11H12N2O2), fenacetine (C10H7CH2CONH2) of lysine-monohydrochloride(C6H14N2O2    7  HCL of lysine-di-hydrochloride C6H14N2O2   7  2HCl). Opmerking: De zuiverheid van de reagentia in 4.9 en 4.10 moet van betere kwaliteit zijn dan  "analysekwaliteit". Indien beschikbaar, moet een gecertificeerde ammoniumzoutoplossing (4.9) worden  gebruikt. 5. APPARATUUR EN GLASWERKGebruikelijke laboratoriumuitrusting, in het bijzonder: 5.1. Kjeldahlkolven, van 500 ml. 5.2. Geschikte kooksteentjes, bijvoorbeeld glasparels met een diameter van ongeveer 5 mm,  Hengar-korrels of puimsteen. 5.3 Buret of automatische pipet, voor het doseren van 1,0 ml. 5.4. Maatcilinders met schaalverdeling, van glas, met een volume van 50, 100 en 250 ml. 5.5. Destructie-apparaat, in schuine stand (ongeveer 45 oC), met elektrische verwarming of  gasbranders waarmee de kolven niet boven het vloeistofoppervlak worden verhit en dat voorzien is  van een dampafzuigsysteem. 5.6. Distillatie-apparaat, van borosilicaatglas, waaraan een Kjeldahlkolf (5.1) kan worden  bevestigd, bestaande uit een goed werkende spatbol bevestigd aan een goed werkende koeler met een  rechte binnenbuis, waarvan de uitstroomopening aan de onderzijde zit; de verbindingsslangen en  stop(pen), bij voorkeur van neopreenrubber, dienen goed te sluiten. 5.7. Pipet of automatische pipet, voor het doseren van 0,10 ml. 5.8. Erlenmeyers, van 500 ml en met een maatstreep op 200 ml. 5.9. Buret van 50 ml, met een maatverdeling van 0,1 ml, en een maximale fout van ±0,05 ml. 5.10. Vergrootglas, om de buret af te lezen (5.9). 5.11. pH-meter5.12. Automatische buret6. WERKWIJZE6.1. Doe in de Kjeldahlkolf (5.1)  kooksteentjes (5.2) (b.v. 3 glas-parels), 15 g kaliumsulfaat (4.1), 1,0 ml kopersulfaatoplossing  (4.2), ongeveer 5 g melkmonster (tot op 0,001 g nauwkeurig afgewogen) en 25 ml zwavelzuur (4.3).  Gebruik het zuur om alle kopersulfaatoplossing, kaliumsulfaat of melk van de hals van de kolf naar  beneden te spoelen, en meng de inhoud van de kolf zachtjes. Opmerking: Gebruik als de melk meer dan 5,0  % (m/m) vet bevat 30 ml H2HO4 (4.3) voor de destructie  in plaats van 25 ml, omdat organisch materiaal bij koken zwavelzuur verbruikt. Dit dient ook bij de  blancobepaling te gebeuren. 6.2. Verwarm elke Kjeldahlkolf op het destructie-apparaat (5.5), in het begin langzaam zodat al het  zwarte schuim in de bol blijft. Laat heftig koken wanneer het aanvankelijke schuimen is opgehouden  en ruimschoots witte dampen ontstaan (zure damp zal halverwege de hals van de kolf condenseren) tot  er geen zwarte deeltjes over zijn en de vloeistof helder en licht blauwgroen van kleur is. Laat dan  ten minste 1,5 uur zachtjes doorkoken. Let op de volgende eisen: a) De vloeistof moet helder worden binnen 1 uur en de totale destructie moet langer duren dan 2,5  uur. Als meer dan 1 uur nodig is om de vloeistof helder te krijgen, dient de totale destructietijd  dienovereenkomstig verlengd te worden. b) Het toegevoegde kaliumsulfaat bevordert de destructie door het verhogen van het kookpunt van het  mengsel. Als het restvolume H2SO4 aan het einde van de destructieperiode minder is dan ongeveer 15  ml kan stikstof verloren zijn gegaan door extreme verhitting. Verhit bij verwarming met gas de kolf  op een plaat warmte-isolerend materiaal met een ronde opening die zo groot is dat de vrije vlam  slechts dat deel van de kolf raakt, dat beneden het vloeistofoppervlak ligt (5.5). c) Als in de hals van de kolf zwarte deeltjes komen die niet in de bol terugspoelen door het zuur  dat in het begin van de periode met heftig koken terugstroomt (wat door ronddraaien van de kolf kan  worden vergemakkelijkt), laat de kolf dan voldoende afkoelen en was voorzichtig met zo min mogelijk  water. Zet de destructie op de boven beschreven wijze voort. 6.3. Voeg 300 ml water toe (zie opmerking) aan elke afgekoelde Kjeldahlkolf en spoel daarmee de  hals van de kolf zorgvuldig; meng de inhoud grondig om de kristallen die zijn ontstaan op te  lossen. Voeg wat kooksteentjes toe (5.2) om gelijkmatig te laten koken. Voeg dan aan elke kolf 70  ml natriumhydroxide-oplossing (4.4) toe (zie opmerking), en doe dit door langzaam gieten langs de  hals van de schuingehouden kolf om onderin de bol een laag te vormen; zorg dat de bovenzijde van de  hals niet door de hydroxide-oplossing wordt bevochtigd. Opmerking: Het is noodzakelijk dat het volume aan water en natriumhydroxide-oplossing in totaal 370  ml bedraagt, omdat dan ongeveer 150 ml distillaat kan worden opgevangen net voordat onregelmatig  koken (stoten) gaat optreden (6.4). Als een groter equivalent volume van een minder geconcentreerde  natriumhydroxide-oplossing dan 47  % (m/m) is toegevoegd, moet dus het volume water  dienovereenkomstig worden verkleind. Als bijvoorbeeld 85 ml 40  % (m/m) of 125 ml 30  % (m/m)  natriumhydroxide-oplossing wordt toegevoegd, moet het volume water 285 ml respectievelijk 245 ml  bedragen. 6.4. Bevestig elke Kjeldahlkolf onmiddellijk aan een distillatie-apparaat (5.6). Zorg ervoor dat  het uiteinde van de afvoerbuis van de koeler zich onder het oppervlak bevindt van de 50 ml  boorzuuroplossing (4.5) met 0,20 ml (5-6 druppels) indicatoroplossing (4.6) in de erlenmeyer (5.8).  Schud de inhoud van elke Kjeldahlkolf om grondig te mengen en kook in het begin langzaam om  overmatig schuimen te voorkomen. Laat als 100 tot 125 ml distillaat is opgevangen elke erlenmeyer  zakken tot het uiteinde van de afvoerbuis van de koeler zich ongeveer 40 mm boven het merkteken van  200 ml bevindt. Zet de distillatie voor elke kolf voort totdat onregelmatig koken (stoten) begint  en stop dan onmiddellijk met verhitten. Maak elke Kjeldahlkolf los en spoel het uiteinde van de  afvoerbuis van elke koeler af met wat water, en vang het spoelwater op in de erlenmeyer. Let op de  volgende eisen: a) De distillatiesnelheid moet zo zijn dat ongeveer 150 ml distillaat is opgevangen wanneer de  inhoud onregelmatig begint te koken (stoten); het volume in elke erlenmeyer zal dan ongeveer 200 ml  bedragen. b) De capaciteit van elke koeler dient zodanig te zijn dat de temperatuur van de inhoud van elke  erlenmeyer tijdens de distillatie niet boven 25 oC uitkomt. 6.5. Titreer elk distillaat met de gestelde titreervloeistof (4.7) tot de pH 4,6±0,1 is; gebruik  daarbij een pH-meter en desgewenst een automatische buret. Toevoeging van een indicator maakt het  gemakkelijker om te controleren of de titrering goed verloopt. Lees elke buret op 0,01 ml  nauwkeurig af met behulp van een vergrootglas (5.10) en vermijd parallaxfouten. De titrering kan middels een enkele indicator geschieden. Titreren totdat de kleur van het  distillaat overeenkomt met dat van een kort tevoren toebereide oplossing op basis van 150 ml water  waaraan 50 ml van de boorzuuroplossing van de indicator in een erlenmeyer (5.8) is toegevoegd. 6.6. Voer een blancobepaling uit volgens de punten 6.1 tot en met 6.5, waarbij 5 ml gedistilleerd  water met ongeveer 0,1 g saccharose (4.8) in onderzoek wordt genomen in plaats van het monster  melk. Opmerking: Voor de titrering van het blancodistillaat is slechts een zeer kleine hoeveelheid van de  gestelde titreervloeistof (4.7) nodig. 6.7. Controleer regelmatig de nauwkeurigheid van de werkwijze door twee "recovery"-proeven volgens  de werkwijze overeenkomstig de punten 6.1 tot en met 6.5 uit te voeren. 6.7.1. Controleer of er geen verlies optreedt ten gevolge van overmatige verhitting of mechanische  lekken bij de distillatie door een hoeveelheid van 0,15 g ammoniumoxalaat of -sulfaat (4.9), tot op  0,001 g nauwkeurig afgewogen, en 0,1 g saccharose (4.8) te onderzoeken. Het teruggevonden stikstofpercentage moet tussen 99,0 en 100,0  % liggen. Lagere of hogere resultaten duiden op fouten in de werkwijze en/of een onnauwkeurige waarde voor de  concentratie van de titreervloeistof (4.7). 6.7.2. Controleer of de destructieprocedure voldoende is om alle eiwitstikstof vrij te maken, door  een hoeveelheid van 0,20 g zuiver tryptofaan, 0,35 g fenacetine of 0,20 g lysine-hydrochloride  (4.10) te onderzoeken. Alle stoffen moeten tot op 0,001 g nauwkeurig worden afgewogen. Ten minste  98-99  % van de stikstof moet worden teruggevonden. 7. VEILIGHEIDSMAATREGELENDraag bij het werken met geconcentreerd zwavelzuur en natriumhydroxide en  bij het hanteren van Kjeldahlkolven altijd een laboratoriumjas, veiligheidsbril en zuurbestendige  handschoenen. Laat tijdens de distillatie de Kjeldahlkolven nooit onbewaakt. Stop, vanwege het mogelijke gevaar,  de distillatie onmiddellijk als de kolfinhoud te heftig "opspat". Plaats, als de stroom langer dan  2-3 minuten uitvalt, de opvangkolf zodanig, dat het uiteinde van de koeler boven de vloeistof  hangt. 8. WEERGAVE VAN DE RESULTATEN8.1. Stikstofberekening en formuleBereken het stikstofgehalte (S),  uitgedrukt in grammen stikstof per 100 g produkt, volgens:  S =1,40 (V     VO) cmwaarin: S    =   het stikstofgehalte, V =   het volume in milliliter van de bij de bepaling gebruikte gestelde zure titreervloeistof, VO =   het volume in milliliter van de gestelde zure titreervloeistof bij de blancobepaling, c =   de concentratie in mol per liter van de gestelde zure titreervloeistof (4.7), m =   de massa in gram van de te onderzoeken hoeveelheid. Rond het resultaat af tot op 0,001 g per 100 g. 8.2. Precisie8.2.1. Herhaalbaarheid (r): 0,007 g per 100 g. 8.2.2. Reproduceerbaarheid (R): 0,015 g per 100 g. 9. GEWIJZIGDE WERKWIJZEN9.1. Gebruik een destructieblok met destructiebuizen in plaats van het  destructie-apparaat en de Kjeldahlkolven (5.5 en 5.1). In dit geval dient elke plaats apart te  worden gecontroleerd om mogelijke problemen te kunnen constateren (6.7). 9.2. Het gebruik van stoomdistillatie in plaats van directe verwarming van de kolven (6.4). Wanneer  in het apparaat geen gedistilleerd water mag worden gebruikt, moet erop worden gelet dat het water  geen vluchtige zuren of basische stoffen bevat. 9.3. Een hoeveelheid van 1 g melk (semi-macro Kjeldahlbepaling) kan worden onderzocht in plaats van  5 g (6.1) mits: - de hoeveelheden van de reagentie voor destructie (6.1), H2SO4, CuSO4   7  5 H2O, K2SO4, in  dezelfde verhouding (1/5) worden verminderd, - de totale destructietijd (6.2) wordt verkort tot 75 minuten, - de hoeveelheid natriumhydroxide-oplossing (6.3) in dezelfde verhouding (1/5) wordt verminderd, - een gestelde zure titreevloeistof (4.7) van een lagere concentratie (0,02-0,03 mol/l) wordt  gebruikt. Opmerking: Gebruik van één of meer van deze keuzemogelijkheden is slechts toegestaan als de waarde  voor de herhaalbaarheid (8.2.1) en de resultaten van de beide nauwkeurigheidsproeven (6.7) in  overeenstemming zijn met de in deze methode gestelde eisen. V. BEPALING VAN HET EIWITGEHALTE 1. ONDERWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit hoofdstuk beschrijft de  referentiemethode voor de bepaling van het eiwitgehalte van warmtebehandelde melk (zie artikel 3,  punt A, onder 3, van Richtlijn 85/397/EEG van de Raad). 2. DEFINITIEEiwitgehalte: De waarde die wordt verkregen door het stikstofgehalte, uitgedrukt als  massapercentage en bepaald overeenkomstig de in hoofdstuk IV (3.) beschreven methode, met een  bepaalde factor (2) te vermenigvuldigen. 3. BEREKENINGEiwitgehalte van melk (in massaprocent) = 6,38×  het totale stikstofgehalte van melk  (%). VI. BEPALING VAN DE VOLUMIEKE MASSA 1. ONDERWERP EN TOEPASSINGSGEBIEDDit hoofdstuk beschrijft de  referentiemethode voor de bepaling van de volumieke massa bij 20 oC van volle melk, gedeeltelijk  afgeroomde melk en afgeroomde melk. 2. DEFINITIEDe volumieke massa van melk is de verhouding van de massa van een bepaald volume melk  bij 20 oC ten opzichte van de massa van hetzelfde volume water bij 20 oC. 3. PRINCIPEDe volumieke massa bij 20 oC wordt bepaald met een areometer. 4. APPARATUUR EN GLASWERKGebruikelijke laboratoriumuitrusting en in het bijzonder: 4.1. AreometerDe dichtheidsareometer is een instrument met een glazen drijflichaam dat aan de  onderzijde breed en zwaar is. Aan de bovenkant van het drijflichaam zit in het verlengde van de as  een cilindervormige glazen buis; de bovenkant van de glazen buis is dicht. Het glazen drijflichaam bevat de verzwaring (lood, kwik, e.d.) om de massa van de areometer in te  stellen. De staaf heeft een schaalverdeling van 1,025 tot 1,035 g/ml. De areometer moet volgens een pyknometrische methode worden gecontroleerd met een pyknometer van  ongeveer 100 ml die is voorzien van een precisiethermometer. 4.2. Cilinders (glas of roestvrij staal). De minimumafmetingen moeten zijn: - inwendige diameter ongeveer 35 mm, - inwendige hoogte ongeveer 225 mm. 4.3. Waterbad, instelbaar op 20±0,1 oC. 4.4. Waterbad, instelbaar op 40±2 oC. 4.5. Thermometer met schaalverdeling van 0,5 oC. 5. WERKWIJZE5.1. Meng het monster door omkeren om het vet te dispergeren en plaats het in het  waterbad (4.4). Wacht tot het monster een temperatuur van 40 oC heeft bereikt en laat het dan nog  vijf minuten bij deze temperatuur staan. Meng goed door omkeren om ervoor te zorgen dat het vet  homogeen verdeeld is. Koel in het tweede waterbad (4.3) af tot 20 oC. 5.2. Meng het monster goed door voorzichtig omkeren om luchtbellen te vermijden. Giet de melk in de  cilinder (4.2), die schuin wordt gehouden om vorming van schuim of bellen te vermijden. Gebruik  zoveel van het melkmonster dat een gedeelte daarvan over de rand van de cilinder zal lopen als de  areometer (4.1) erin wordt geplaatst. Laat de areometer voorzichtig in de melk zakken en laat hem  vrij drijven als hij zijn evenwichtspositie heeft bereikt. De cilinder moet verticaal zijn  opgesteld. De areometer moet in het midden van de vloeistofkolom zijn geplaatst en mag de rand van  de cilinder niet raken. 5.3. Lees de schaalverdeling aan de bovenkant van de meniscus af, wanneer de areometer in evenwicht  is gekomen. 5.4. Breng de thermometer (4.5) onmiddellijk na aflezing van de areometer in het monster en lees de  temperatuur af met een nauwkeurigheid van 0,50 oC. De temperatuur mag niet meer dan ±2 oC  verschillen van 20 oC. 6. TEMPERATUURCORRECTIE6.1. Als de temperatuur van de melk bij de meting van de volumieke massa  niet exact 20 oC is, moet het verkregen resultaat worden gecorrigeerd door bij de bepaalde  volumieke massa 0,0002 op te tellen voor elke graad Celsius boven 20 oC of 0,0002 af te trekken  voor elke graad Celsius onder 20 oC. Deze correctie is alleen geldig als de temperatuur van het  melkmonster niet meer dan 5 oC verschilt van 20 oC. 7. WEERGAVE VAN DE RESULTATENBereken de volumieke massa van het monster, uitgedrukt in g/ml  afgeroomde melk bij 20 oC, volgens:  1 000   7  vm     MG   7  vm=0,92 vm (1 000     VG)1 000 VG   7  vm0,92920     VG   7   vmwaarin: vm  =   de op de areometer (5.4) in g/l afgelezen volumieke massa van het monser, VG = het vetgehalte van het monster in g/l, 0,92 = de vetdichtheid. 8. PRECISIE8.1. Herhaalbaarheid (r): 0,0003 g/ml. 8.2. Reproduceerbaarheid (R): 0,0015 g/ml. Aanhangsel (bij bijlage II)ALTERNATIEVE WERKWIJZE MET VETEXTRACTIEBUIZEN MET SIFON- OF  WASFLESINZETTEN A.1. WERKWIJZEA.1.1. Voorbehandeling van het monsterZie 6.1. A.1.2. Te onderzoeken hoeveelheidGa te werk als in punt 6.2 beschreven, maar gebruik de  vetextractiebuizen (5.6). De te onderzoeken hoeveelheid moet zo volledig mogelijk in het onderste gedeelte van de  extractiebuis worden gebracht. A.1.3. BlancobepalingZie 6.3. A.1.4. Voorbehandeling van de vetrecipiëntZie 6.4. A.1.5. BepalingA.1.5.1. Voeg 2 ml van de ammoniakoplossing (4.1) toe, of een equivalente hoeveelheid van een meer  geconcentreerde ammoniakoplossing, en meng grondig met de voorbehandelde te onderzoeken hoeveelheid  onderin de buis. Voer na de toevoeging van de ammoniak de bepaling zonder onderbrekingen uit. A.1.5.2. Voeg 10 ml ethanol (4.2) toe en meng grondig, maar voorzichtig, onderin de buis. Voeg desgewenst 2  druppels congorood- of cresolroodoplossing toe (4.3). A.1.5.3. Voeg 25 ml diethylether (4.4) toe, sluit de buis met een met water verzadigde kurk of met een met  water bevochtigde stop (5.6), en schud de buis krachtig, maar niet overmatig (om de vorming van  stabiele emulsies te vermijden), onder herhaald omkeren gedurende 1 minuut. Koel de buis zo nodig  onder stromend water, verwijder dan voorzichtig de kurk of stop, en spoel die en de hals van de  buis af met een weinig gemengd oplosmiddel (4.6) met behulp van de wasfles (5.8) om de  spoelvloeistof in de buis te laten lopen. A.1.5.4. Voeg 25 ml petroleumether (4.5) toe, sluit de buis af met de opnieuw (door dompelen in water)  bevochtigde kurk of stop, en schud de buis gedurende 30 seconden voorzichtig zoals in punt A.1.5.3  beschreven. A.1.5.5. Centrifugeer de gesloten buis gedurende 1 tot 5 minuten met 500 tot 600 omwentelingen per minuut  (5.2). Als geen centrifuge beschikbaar is (zie de opmerking bij 5.2), laat de buis dan gedurende  ten minste 30 minuten in het rek (5.7) staan tot de bovenste laag helder is en duidelijk  afgescheiden van de waterlaag. Koel de buis zo nodig onder stromend water. A.1.5.6. Verwijder de kurk of stop en spoel die en de hals van de buis zo met een weinig gemengd oplosmiddel  af dat de spoelvloeistof in de buis loopt. A.1.5.7. Plaats een sifon- of een wasflesinzet in de buis en duw de lange binnenbuis van de inzet naar  beneden tot de opening ongeveer 3 mm boven het scheidingsvlak tussen de lagen is. De binnenbuis van  de inzet moet evenwijdig aan de as van de extractiebuis lopen. Breng de bovenste laag voorzichtig uit de buis over in de voorbehandelde vetrepiciënt (6.4), met  daarin enkele kooksteentjes (5.10) in het geval van een kolf (facultatief bij metalen schalen), en  vermijd het overbrengen van enig deel van de waterlaag. Spoel de uitstroomopening van de inzet met  een weinig gemengd oplosmiddel, en verzamel de spoelvloeistof in de vetrecipiënt. A.1.5.8. Maak de inzet los uit de hals van de buis, til de inzet iets op en spoel de onderzijde van de lange  binnenbuis met een weinig gemengd oplosmiddel af. Laat de inzet weer in de buis zakken en breng de  spoelvloeistof over in de vetrecipiënt. Spoel de uitstroomopening van de inzet met een weinig gemengd oplosmiddel, en verzamel de  spoelvloeistof in de recipiënt. Desgewenst kan het oplosmiddel of een deel ervan uit de recipiënt  worden verwijderd door distillatie of verdamping zoals in punt 6.5.12 beschreven. Nr. L 407/4631. 12. 92A.1.5.9. Maak de inzet weer los uit de hals, til de inzet iets op en voeg 5 ml ethanol aan de inhoud van de  buis toe, en spoel daarmee de lange binnenbuis van de inzet af; meng zoals in punt A.1.5.2  beschreven. A.1.5.10. Voer een tweede extractie uit door de in de punten A.1.5.3 tot en met A.1.5.8 beschreven  handelingen te herhalen, maar gebruik slechts 15 ml diethylether (4.4) en 15 ml petroleumether  (4.5). Gebruik de ether om de lange binnenbuis van de inzet te spoelen, wanneer na de vorige  extractie de inzet van de buis wordt losgemaakt. A.1.5.11. Voer een derde extractie uit door nogmaals de in A.1.5.3 tot en met A.1.5.8 beschreven handelingen  uit te voeren met 15 ml diethylether en 15 ml petroleumether, en spoel daarbij de lange binnenbuis  van de inzet als in A.1.5.10 beschreven. De derde extractie kan bij afgeroomde melk achterwege blijven. A.1.5.12. Ga verder te werk als in 6.5.12 tot en met 6.5.16.