CELEX: 32009D0976
Language: fi
Date: 2009-12-15 00:00:00
Title: Komission päätös, tehty 15 päivänä joulukuuta 2009 , neuvoston direktiivin 64/432/ETY liitteen D muuttamisesta nautojen tarttuvan leukoosin diagnostisten testien osalta (tiedoksiannettu numerolla K(2009) 9951) (ETA:n kannalta merkityksellinen teksti)

18.12.2009   
            
            
               FI
            
            
               Euroopan unionin virallinen lehti
            
            
               L 336/36
            
         
      KOMISSION PÄÄTÖS,
   tehty 15 päivänä joulukuuta 2009,
   neuvoston direktiivin 64/432/ETY liitteen D muuttamisesta nautojen tarttuvan leukoosin diagnostisten testien osalta
   (tiedoksiannettu numerolla K(2009) 9951)
   (ETA:n kannalta merkityksellinen teksti)
   (2009/976/EU)
   EUROOPAN KOMISSIO, joka
   ottaa huomioon Euroopan unionin toiminnasta tehdyn sopimuksen,
   ottaa huomioon eläinten terveyteen liittyvistä ongelmista yhteisön sisäisessä nautaeläinten ja sikojen kaupassa 26 päivänä kesäkuuta 1964 annetun neuvoston direktiivin 64/432/ETY (1) ja erityisesti sen 16 artiklan toisen kohdan,
   sekä katsoo seuraavaa:
   
               (1)
            
            
               Direktiiviä 64/432/ETY sovelletaan unionin sisäiseen nautaeläinten kauppaan, ja sen liitteessä D olevassa II luvussa vahvistetaan nautaeläinten tarttuvan leukoosin määrittämiseksi diagnostiset testit, joita on käytettävä kyseisen taudin valvonnassa ja hävittämisessä, tarkastuksessa ja seurannassa sekä nautaeläinten tarttuvasta leukoosista virallisesti vapaan karjan aseman vahvistamisessa ja ylläpitämisessä sekä unionin sisäisessä nautaeläinten kaupassa vaadittavassa sertifioinnissa.
            
         
               (2)
            
            
               Direktiivin 64/432/ETY liitteessä D olevassa II luvussa säädetään, että nautaeläinten tarttuvan leukoosin määrittäminen tehdään joko agargeeli-immunodiffuusiotutkimuksella (AGID), jossa käytetään EY:n virallista standardiseerumia (EI-seerumia) vastaan standardoitua antigeenia, tai entsyymivälitteisellä immunosorbenttimäärityksellä (ELISA), joka on standardoitu E4-seerumia vastaan. Kumpaakin standardiseerumia toimittaa National Veterinary Institute, Technical University of Denmark.
            
         
               (3)
            
            
               Nautaeläinten tarttuvaa leukoosia käsittelevä Maailman eläintautijärjestön (OIE) saksalainen vertailulaboratorio (Friedrich-Loeffler-Institut) on yhteistyössä OIE:n Yhdistyneessä kuningaskunnassa (Veterinary Laboratories Agency) ja Puolassa (National Veterinary Research Institute) sijaitsevien vertailulaboratorioiden kanssa vastikään kehittänyt nautaeläinten tarttuvaa leukoosia varten uuden standardiseerumin (E05-seerumi), jota laboratoriot ovat testanneet yhteistestissä. E05-seerumi on validoitu EI- ja E4-seerumeita vastaan eri agargeeli-immunodiffuusiotutkimuksilla ja ELISA-testeillä ja sen jälkeen sisällytetty hyväksyttynä OIE:n standardiseerumina OIE:n maaeläinten diagnostisia testejä ja rokotteita koskevan käsikirjan (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals), kuudes painos, 2008, 2.4.11 luvussa olevan B jakson 2 kohtaan. Seerumia on saatavana Saksassa sijaitsevasta nautaeläinten tarttuvaa leukoosia käsittelevästä OIE:n vertailulaboratoriosta.
            
         
               (4)
            
            
               National Veterinary Institute, Technical University of Denmark, on lisäksi ilmoittanut komissiolle, ettei se enää pysty täyttämään velvoitteitaan toimittaa direktiivin 64/432/ETY liitteessä D olevassa II luvussa säädettyjä standardiseerumeja.
            
         
               (5)
            
            
               Saksan toimivaltaiset viranomaiset ja Friedrich-Loeffler-Institut ovat lupautuneet toimittamaan E05-seerumia, josta tulee uusi Euroopan unionin virallinen seerumi nautaeläinten tarttuvaa leukoosia varten.
            
         
               (6)
            
            
               Sen vuoksi direktiiviä 64/432/ETY olisi muutettava.
            
         
               (7)
            
            
               Tässä päätöksessä säädetyt toimenpiteet ovat elintarvikeketjua ja eläinten terveyttä käsittelevän pysyvän komitean lausunnon mukaiset,
            
         ON HYVÄKSYNYT TÄMÄN PÄÄTÖKSEN:
   1 artikla
   Korvataan direktiivin 64/432/ETY liitteessä D oleva II luku tämän päätöksen liitteellä.
   2 artikla
   Tämä päätös on osoitettu kaikille jäsenvaltioille.
   
      Tehty Brysselissä 15 päivänä joulukuuta 2009.
      
         
            Komission puolesta
         
         Androulla VASSILIOU
         
         
            Komission jäsen
         
      
   
   
      (1)  EYVL 121, 29.7.1964, s. 1977/64.
   
      LIITE
      Korvataan direktiivin 64/432/ETY liitteessä D oleva II luku seuraavasti:
      
         ”II   LUKU
         
            NAUTAELÄINTEN TARTTUVAA LEUKOOSIA KOSKEVAT TUTKIMUKSET
         
         Nautaeläinten tarttuvaa leukoosia koskevat tutkimukset suoritetaan immunodiffuusiotutkimuksella (AGID) A ja B jaksossa esitetyissä olosuhteissa tai entsyymivälitteisellä immunosorbenttimäärityksellä (ELISA) C jaksossa esitetyissä olosuhteissa. Agargeeli-immunodiffuusiomenetelmää voidaan käyttää ainoastaan yksittäisten näytteiden testaamiseen. Jos tutkimustulokset ovat asiallisin perustein kiistanalaisia, suoritetaan uusi tarkistus agargeeli-immunodiffuusiotutkimuksella.
         AGID- ja ELISA-tutkimukset on standardoitava käyttäen E05-seerumia, joka on EU:n virallinen standardiseerumi ja jota toimittaa
         
                     Friedrich-Loeffler-Institut
                  
               
                     Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit
                  
               
                     OIE Referenzlabor für Enzootische Bovine Leukose (EBL)
                  
               
                     Südufer 10
                  
               
                     17493 Greifswald — Insel Riems
                  
               
                     Saksa.
                  
               A.   Agargeeli-immunodiffuusiotutkimus nautaeläinten tarttuvan leukoosin määrittämiseksi
         
         
                     1.
                  
                  
                     Tutkimuksessa käytettävän antigeenin on sisällettävä nautaleukoosiviruksen glykoproteiinia. Antigeeni on standardoitava E05-seerumia vastaan.
                  
               
                     2.
                  
                  
                     Laboratorion antigeenikäyttöstandardien kalibrointi E05-seerumia vastaan on annettava tehtäväksi valtion laitoksille, kansallisille vertailulaboratorioille tai virallisille laitoksille, jotka on 6 a artiklan mukaisesti nimetty koordinoimaan naudan tarttuvan leukoosin diagnosointistandardeja ja -menetelmiä.
                  
               
                     3.
                  
                  
                     Laboratoriossa käytetyt standardiantigeenit on toimitettava vähintään kerran vuodessa 6 a artiklan mukaisesti nimetyille valtion laitoksille, kansallisille vertailulaboratorioille tai virallisille laitoksille testattavaksi E05-seerumia vastaan. Tällaisen standardoinnin lisäksi voidaan käytettävä antigeeni kalibroida B jaksossa esitetyn menetelmän mukaisesti.
                  
               
                     4.
                  
                  
                     Kokeeseen käytettyjen reagenssien koostumus on seuraava:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 antigeeni: antigeenin on sisällettävä nautaeläinten tarttuvan leukoosiviruksen spesifistä glykoproteiinia, joka on standardoitu E05-seerumia vastaan;
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 tutkittava seerumi;
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 tunnettu positiivinen kontrolliseerumi;
                              
                           
                                 d)
                              
                              
                                 agargeeli:
                                 
                                             —
                                          
                                          
                                             0,8 % agar,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             8,5 % NaCl,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             0,05 M Tris-puskuri, pH 7,2,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             15 ml tätä agaria on vietävä 85 mm:n läpimittaiselle petrimaljalle, jolloin agarin paksuudeksi saadaan 2,6 mm.
                                          
                                       
                           
               
                     5.
                  
                  
                     Agariin leikataan seitsemästä kosteutta sisältämättömästä kuopasta muodostuva, maljan pohjaan asti ulottuva testikuvio, jossa on yksi keskikuoppa ja kuusi sitä renkaana ympäröivää kuoppaa.
                     Keskikuopan läpimitta: 4 mm
                     Laitakuoppien läpimitta: 6 mm
                     Keskikuopan ja laitakuoppien etäisyys: 3 mm
                  
               
                     6.
                  
                  
                     Keskikuoppa täytetään kalibrointiantigeenilla. Laitakuopat 1 ja 4 (ks. B.3) täytetään tunnetulla positiivisella seerumilla ja kuopat 2, 3, 5 ja 6 testiseerumeilla. Kuopat täytetään siten, että meniskus peittyy.
                  
               
                     7.
                  
                  
                     Tästä saadaan seuraavat määrät:
                     
                                 —
                              
                              
                                 antigeeni: 32 μl,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 kontrolliseerumi: 73 μl,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 tutkittava seerumi: 73 μl.
                              
                           
               
                     8.
                  
                  
                     Inkuboidaan 72 tuntia huoneenlämmössä (20–27 °C) suljetussa kosteassa kammiossa.
                  
               
                     9.
                  
                  
                     Tutkimuksen tulos voidaan lukea 24 ja 48 tunnin jälkeen, mutta lopullinen tulos vasta 72 tunnin kuluttua.
                     
                                 a)
                              
                              
                                 Tutkittava seerumi on positiivinen, jos se muodostaa määrätyn saostumaviivan BLV-antigeenin kanssa sekä täysin samanlaisen viivan kontrolliseerumin kanssa.
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 Tutkittava seerumi on negatiivinen, ellei se muodosta määrättyä saostumaviivaa BLV-antigeenin kanssa eikä taivuta kontrolliseerumin viivaa.
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 Reaktiota ei voida pitää varmana, jos se
                                 
                                             i)
                                          
                                          
                                             taivuttaa kontrolliseerumin viivaa BLV-antigeenikuoppaa kohti muodostamatta näkyvää saostumaviivaa antigeenin kanssa; tai
                                          
                                       
                                             ii)
                                          
                                          
                                             jos sitä ei voida lukea negatiiviseksi eikä positiiviseksi.
                                          
                                       
                           Epävarmojen tutkimustulosten tapauksessa voidaan tutkimus toistaa ja käyttää väkevöityä seerumia.
                  
               
                     10.
                  
                  
                     Muita muodostelmia tai kuoppakuvioita voidaan käyttää sikäli kuin suhteessa 1:10 negatiiviseen seerumiin laimennettu E05-seerumi voidaan tunnistaa positiiviseksi.
                  
               B.   Antigeenin standardointimenetelmä
         
         
                     1.
                  
                  
                     Tarvittavat liuokset ja materiaalit:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 40 ml 1,6-prosenttista agaroosia, joka on valmistettu 0,05-prosenttiseen M Tris-HCl-puskuriin (pH 7,2), jossa on 8,5 prosenttia NaCl:ää;
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 15 ml nautaleukoosiseerumia, jossa on vasta-ainetta ainoastaan nautaleukoosiviruksen glykoproteiineja vastaan ja joka on laimennettu suhteessa 1:10 puskuriliuokseen, jonka koostumus on 0,05 M Tris/HCl, pH 7,2 ja 8,5 % NaCl;
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 15 ml nautaleukoosiseerumia, jossa on vasta-ainetta ainoastaan nautaleukoosiviruksen glykoproteiineja vastaan ja joka on laimennettu suhteessa 1:5 puskuriliuokseen, jonka koostumus on 0,05 M Tris/HCl, pH 7,2 ja 8,5 % NaCl;
                              
                           
                                 d)
                              
                              
                                 neljä muovista petrimaljaa, joiden läpimitta on 85 mm;
                              
                           
                                 e)
                              
                              
                                 lävistin, jonka läpimitta on 4–6 mm;
                              
                           
                                 f)
                              
                              
                                 vertailuantigeeni;
                              
                           
                                 g)
                              
                              
                                 standardoitava antigeeni;
                              
                           
                                 h)
                              
                              
                                 vesihaude (56 °C).
                              
                           
               
                     2.
                  
                  
                     Menettely:
                     Liuotetaan agaroosi (1,6 %) Tris/HCl-puskuriin lämmittämällä se varovasti 100 °C:seen. Seisotetaan sitä 56 °C:n vesihauteessa noin tunnin ajan. Pidetään myös nautaleukoosiseerumilaimennoksia 56 °C:n vesihauteessa.
                     Tämän jälkeen sekoitetaan keskenään 15 ml 56 °C:n agaroosiliuosta ja 15 ml nautaleukoosiseerumia (1:10), ravistetaan nopeasti ja kaadetaan kahteen petrimaljaan 15 ml maljaa kohden. Toistetaan nämä toimenpiteet nautaleukoosiseerumilla, joka on laimennettu suhteessa 1:5.
                     Kun agaroosi on jähmettynyt, siihen tehdään aukot seuraavasti:
                     
                                 
                                    
                              
                              
                                 
                                    
                              
                           
                                 
                                    
                              
                              
                                 
                                    
                              
                           
               
                     3.
                  
                  
                     Antigeenin lisäys:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 petrimaljat 1 ja 3:
                                 
                                             i)
                                          
                                          
                                             kuoppa A – laimentamaton vertailuantigeeni;
                                          
                                       
                                             ii)
                                          
                                          
                                             kuoppa B – suhteessa 1:2 laimennettu vertailuantigeeni;
                                          
                                       
                                             iii)
                                          
                                          
                                             kuopat C ja E – vertailuantigeeni;
                                          
                                       
                                             iv)
                                          
                                          
                                             kuoppa D – laimentamaton tutkittava antigeeni;
                                          
                                       
                           
                                 b)
                              
                              
                                 petrimaljat 2 ja 4:
                                 
                                             i)
                                          
                                          
                                             kuoppa A – laimentamaton tutkittava antigeeni;
                                          
                                       
                                             ii)
                                          
                                          
                                             kuoppa B – suhteessa 1:2 laimennettu tutkittava antigeeni;
                                          
                                       
                                             iii)
                                          
                                          
                                             kuoppa C – suhteessa 1:4 laimennettu tutkittava antigeeni;
                                          
                                       
                                             iv)
                                          
                                          
                                             kuoppa D – suhteessa 1:8 laimennettu tutkittava antigeeni.
                                          
                                       
                           
               
                     4.
                  
                  
                     Lisäohjeet:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 Koe on suoritettava kahdella seerumilaimennoksella (1:5 ja 1:10) optimaalisen saostumisen saavuttamiseksi.
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 Jos saostuman läpimitta on liian pieni molemmilla laimennoksilla, on seerumia laimennettava enemmän.
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 Jos saostuman läpimitta molemmissa laimennoksissa on liian suuri ja heikosti näkyvä, on valittava alempi seerumitaso.
                              
                           
                                 d)
                              
                              
                                 Agaroosin lopullisen pitoisuuden on oltava 0,8 % ja seerumien vastaavasti 5 % ja 10 %.
                              
                           
                                 e)
                              
                              
                                 Laaditaan kuvaaja mitatuista läpimitoista seuraavassa esitettävässä koordinaatistossa. Käyttölaimennos on se tutkittavan antigeenin laimennos, jolla saadaan sama läpimitta kuin vertailuantigeenia käyttämällä.
                              
                           
                        
                  
               C.   Entsyymivälitteinen immunosorbenttimääritys (ELISA) nautaeläinten tarttuvan leukoosin määrittämiseksi
         
         
                     1.
                  
                  
                     Käytettävät materiaalit ja reagenssit ovat seuraavat:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 kiinteän faasin mikrotiitterilevyt, kyvetit tai muu kiinteä faasi;
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 antigeeni kiinnitetään kiinteään faasiin joko käyttämällä apuna polyklonaalisia tai monoklonaalisia sieppausvasta-aineita tai ilman niiden apua. Jos antigeeni pinnoitetaan suoraan kiinteään faasiin, on kaikki positiivisen tutkimustuloksen antaneet tutkittavat näytteet tutkittava uudelleen kontrolliantigeenia vastaan. Kontrolliantigeenin olisi oltava identtinen tutkittavan antigeenin kanssa, kuitenkin ilman BLV-antigeeneja. Jos kiinteä faasi pinnoitetaan sieppausvasta-aineilla, nämä vasta-aineet eivät saa reagoida muita antigeeneja kuin BLV-antigeeneja vastaan;
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 tutkittava biologinen neste;
                              
                           
                                 d)
                              
                              
                                 vastaavasti positiiviset ja negatiiviset kontrollit;
                              
                           
                                 e)
                              
                              
                                 konjugaatti;
                              
                           
                                 f)
                              
                              
                                 käytettävää entsyymiä vastaava substraatti;
                              
                           
                                 g)
                              
                              
                                 pysäytysliuos tarvittaessa;
                              
                           
                                 h)
                              
                              
                                 liuokset tutkittavien näytteiden laimentamiseksi, reagenssien valmistamiseksi ja pesuihin;
                              
                           
                                 i)
                              
                              
                                 tulosten lukemiseen käytettävä järjestelmä, joka sopii käytettyihin substraatteihin.
                              
                           
               
                     2.
                  
                  
                     Testin standardointi ja herkkyys
                     ELISA-määrityksen herkkyyden on oltava sellaista tasoa, että E05-seerumista saadaan positiivinen tutkimustulos, kun se on laimennettu 10-kertaisesti (seeruminäytteet) tai 250-kertaisesti (maitonäytteet) verrattuna yhdistetyissä näytteissä oleville yksittäisille näytteille saatavaan laimennokseen. Määrityksissä, joissa näytteet (seerumi tai maito) tutkitaan yksittäin, on E05-seerumista, joka on laimennettu suhteessa 1:10 (laimennettu negatiivisella seerumilla) tai suhteessa 1:250 (laimennettu negatiivisella maidolla), saatava positiivinen tutkimustulos, kun se testataan siinä määrityslaimennoksessa, jota käytetään yksittäisille tutkittaville näytteille. Edellä A jakson 2 kohdassa mainitut laitokset vastaavat ELISA-määrityksen laadun tarkastuksesta ja erityisesti kunkin tuotantoerän osalta yhdistettävien näytteiden lukumäärän määrittämisestä E05-seerumille saadun arvon mukaan.
                  
               
                     3.
                  
                  
                     Nautaeläinten tarttuvan luomistaudin määrittämiseen käytettävän ELISA-määrityksen käytön edellytykset
                     
                                 a)
                              
                              
                                 ELISA-määritystä voidaan käyttää vain seerumi- ja maitonäytteiden tutkimiseen.
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 Jos ELISA-testejä käytetään sertifiointitarkoituksiin 6 artiklan 2 kohdan c alakohdan mukaisesti tai karjan tautitilanteen toteamiseen ja ylläpitämiseen liitteessä D olevan I luvun mukaisesti, seerumi- tai maitonäytteet on yhdistettävä siten, että kiistatta tiedetään yhdistettyyn näytteeseen kuuluvat eläimet. Mahdolliset varmentavat testit on tehtävä yksittäisistä eläimistä otetuilla näytteillä.
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 Jos ELISA-testejä käytetään tankkimaitonäytteen tutkimiseen, näyte on otettava sellaisen karjan maidosta, jossa ainakin 30 prosenttia lehmistä on lypsäviä. Mahdolliset varmentavat testit on tehtävä yksittäisistä eläimistä otetuilla seerumi- tai maitonäytteillä.”