CELEX: 31999L0076
Language: pt
Date: 1999-07-23 00:00:00
Title: Directiva 1999/76/CE da Comissão de 23 de Julho de 1999 que estabelece métodos de análise comunitários para a determinação da lasalocido de sódio em alimentos para animais (Texto relevante para efeitos do EEE)

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31999L0076

Directiva 1999/76/CE da Comissão de 23 de Julho de 1999 que estabelece métodos de análise comunitários para a determinação da lasalocido de sódio em alimentos para animais (Texto relevante para efeitos do EEE)  

Jornal Oficial nº L 207 de 06/08/1999 p. 0013 - 0017

DIRECTIVA 1999/76/CE DA COMISSÃOde 23 de Julho de 1999que estabelece métodos de análise comunitários para a determinação da lasalocido de sódio em alimentos para animais(Texto relevante para efeitos do EEE)A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Europeia,Tendo em conta a Directiva 70/373/CEE do Conselho, de 20 de Julho de 1970, relativa à introdução de modos de colheita de amostras e de métodos de análise comunitários para o controlo oficial dos alimentos para animais(1), com a última redacção que lhe foi dada pelo Acto de Adesão da Áustria, da Finlândia e da Suécia, e, nomeadamente, o seu artigo 2.o,(1) Considerando que a Directiva 70/373/CEE prevê que os controlos oficiais dos alimentos para animais, destinados a verificar a observância das condições estabelecidas em conformidade com as disposições legislativas, regulamentares ou administrativas no que respeita à qualidade e composição dos alimentos para animais, sejam efectuados de acordo com métodos comunitários de recolha de amostras de análise;(2) Considerando que a Directiva 70/524/CEE do Conselho, de 23 de Novembro de 1970, relativa aos aditivos na alimentação para animais(2), com a última redacção que lhe foi dada pelo Regulamento (CE) n.o 866/1999 da Comissão(3), estabelece a indicação obrigatória na rotulagem do teor de lasalocido de sódio, sempre que a referida substância seja incorporada em pré-misturas ou alimentos para animais;(3) Considerando que devem estabelecer-se métodos de análise comunitários para a determinação das referidas substâncias;(4) Considerando que as medidas previstas na presente directiva são conformes ao parecer do Comité Permanente dos Alimentos para Animais,ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA:Artigo 1.oOs Estados-Membros zelarão por que as análises efectuadas com vista ao controlo oficial do teor de lasalocido de sódio nos alimentos para animais e pré-misturas o sejam por aplicação dos métodos descritos no anexo da presente directiva.Artigo 2.oOs Estados-Membros porão em vigor, o mais tardar em 31 de Janeiro de 2000, as disposições legislativas, regulamentares e administrativas necessárias para dar cumprimento à presente directiva. Do facto informarão imediatamente a Comissão.Os Estados-Membros aplicarão essas disposições a partir de 1 de Fevereiro de 2000.Quando os Estados-Membros adoptarem tais disposições, estas devem incluir uma referência à presente directiva ou ser acompanhadas dessa referência aquando da sua publicação oficial. As modalidades dessa referência serão adoptadas pelos Estados-Membros.Artigo 3.oA presente directiva entra em vigor no vigésimo dia seguinte ao da sua publicação no Jornal Oficial das Comunidades Europeias.Artigo 4.oOs Estados-Membros são os destinatários da presente directiva.Feito em Bruxelas, em 23 de Julho de 1999.Pela ComissãoFranz FISCHLERMembro da Comissão(1) JO L 170 de 3.8.1970, p. 2.(2) JO L 270 de 14.12.1970, p. 1.(3) JO L 108 de 27.4.1999, p. 20.ANEXODETERMINAÇÃO DA LASALOCIDO DE SÓDIOSal sódico de um ácido monocarboxílico poli-eterificado produzido por Streptomyces lasaliensis1. Objectivo e domínio de aplicaçãoO método destina-se à determinação da lasalocido de sódio em alimentos para animais e pré-misturas. O limite de detecção é de 5 mg/kg; o limite de determinação de 30 mg/kg.2. PrincípioA lasalocido de sódio é extraída da amostra com metanol acidificado e determinada por cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) de fase reversa, com um detector espectrofluorimétrico.3. Reagentes3.1. Di-hidrogenofosfato potássico (KH2P04)3.2. Ácido ortofosfórico, w = 85 %3.3. Solução de ácido ortofosfórico, σ = 20 %Diluir 23,5 ml de ácido ortofosfórico (3.2) para 100 ml, com água.3.4. 6-Metil-2-heptilamina (1,5-dimetil-hexilamina), w = 99 %3.5. Metanol para HPLC3.6. Ácido clorídrico, p20 = 1,19 g/ml3.7. Solução-tampão de fosfatos, c = 0,01 mol/lDissolver 1,36 g de KH2PO4 (3.1) em 500 ml de água (3.11); adicionar 3,5 ml de ácido ortofosfórico (3.2) e 10,0 ml de 6-metil-2-heptilamina (3.4). Ajustar o pH para 4,0 com solução de ácido ortofosfórico (3.3) e diluir para 1000 ml com água (3.11).3.8. Metanol acidificadoTransferir 5,0 ml de ácido clorídrico (3.6) para um balão graduado de 1000 ml, completar até ao traço com metanol (3.5) e agitar. A solução deve ser preparada imediatamente antes da utilização.3.9. Fase móvel para HPLC: solução-tampão de fosfatos-metanol 5 + 95 (v/v).Misturar 5 ml de solução-tampão de fosfatos (3.7) com 95 ml de metanol (3.5).3.10. Lasalocido de sódio-padrão de pureza garantida (C34H53O8Na, sal sódico de um ácido monocarboxílico poli-eterificado produzido por Streptomyces lasaliensis), E763.3.10.1. Solução-padrão de reserva, 500 μg/ml, de lasalocido de sódioNum balão aferido de 100 ml, pesar, com uma aproximação de 0,1 mg, 50 mg de lasalocido de sódio (3.10) e dissolver em metanol acidificado (3.8). Completar o volume até ao traço com o mesmo solvente e homogeneizar. A solução deve ser preparada imediatamente antes da utilização.3.10.2. Solução-padrão intermédia, 50 μg/ml, de lasalocido de sódioPipetar 10,0 ml da solução-padrão de reserva (3.10.1) para um balão aferido de 100 ml, completar o volume até ao traço com metanol acidificado (3.8) e homogeneizar. A solução deve ser preparada imediatamente antes da utilização.3.10.3. Soluções de calibraçãoTransferir 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 e 10,0 ml da solução-padrão intermédia (3.10.2) para uma série de balões aferidos de 50 ml. Completar o volume com metanol acidificado (3.8) até ao traço e homogeneizar. As soluções obtidas contêm 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 e 10,0 μg de lasalocido de sódio por ml, respectivamente, e são preparadas imediatamente antes da utilização.3.11. Água para HPLC4. Equipamento4.1. Banho ultra-sons.4.2. Filtros de membrana de 0,45 μm4.3. Equipamento de HPLC com sistema de injecção com capacidade de injecção de volumes de 20 μl.4.3.1. Coluna para cromatografia líquida com 125 mm x 4 mm e enchimento de fase reversa C18 com granulometria de 5 μm, ou equivalente.4.3.2. Espectrofluorímetro com possibilidade de ajustamento dos comprimentos de onda de emissão e de excitação.5. Procedimento5.1. Generalidades5.1.1. Alimento para animais brancoNa determinação da recuperação (5.1.2), analisa-se um alimento para animais branco, para comprovar a ausência de lasalocido de sódio e de substâncias interferentes. O alimento para animais branco deve ser de tipo similar ao da amostra e não deve ser detectada lasalocido de sódio ou substâncias interferentes.5.1.2. Determinação da recuperaçãoPara determinar a recuperação, procede-se à análise de um alimento para animais branco ao qual terá sido adicionada uma quantidade de lasalocido de sódio semelhante à presente na amostra. Para obter uma concentração de 100 mg/kg no branco, transferir 10,0 ml da solução-padrão de reserva (3.10.1) para um erlenmeyer de 250 ml e concentrar por evaporação até cerca de 0,5 ml. Adicionar 50 g do alimento para animais branco, misturar bem e deixar em repouso durante 10 minutos, misturando de novo várias vezes antes de proceder à extracção (5.2).Caso não se disponha de um alimento para animais branco de tipo similar ao da amostra (ver 5.1.1), pode determinar-se a recuperação pelo método da adição de padrão. Nesse caso, adiciona-se à amostra a analisar uma quantidade de lasalocido de sódio semelhante à que já se encontra presente e analisa-se a amostra assim obtida juntamente com a amostra sem adição. A recuperação é calculada por subtracção.5.2. Extracção5.2.1. Alimentos para animaisNum erlenmeyer de 250 ml, pesar, com uma aproximação de 0,01 g, 5 a 10 g de amostra e adicionar, com uma pipeta, 100,0 ml de metanol acidificado (3.8). Tapar o erlenmeyer, homogeneizar e colocar no banho de ultra-sons (4.1) a cerca de 40 °C, durante 20 minutos. Retirar o erlenmeyer do banho e arrefecer à temperatura ambiente. Deixar repousar durante cerca de 1 h, até à deposição das matérias em suspensão, e filtrar uma alíquota com um filtro de membrana de 0,45 μm (4.2) para um recipiente adequado. Efectuar em seguida a determinação por HPLC (5.3).5.2.2. Pré-misturasNum erlenmeyer de 250 ml, pesar, com uma aproximação de 0,001 g, cerca de 2 g da pré-mistura e adicionar 100,0 ml de metanol acidificado (3.8), homogeneizando por agitação. Colocar o erlenmeyer no banho de ultra-sons (4.1), a cerca de 40 °C, durante 20 minutos. Retirar o erlenmeyer do banho e arrefecer à temperatura ambiente. Diluir áté ao traço com metanol acidificado (3.8) e agitar. Deixar repousar durante cerca de 1 h, até à deposição das matérias em suspensão, e filtrar uma alíquota com um filtro de membrana de 0,45 μm (4.2). Diluir um volume adequado do filtrado com metanol acidificado (3.8), de modo a obter uma solução de ensaio com cerca de 4 μg/ml de lasalocido de sódio. Efectuar em seguida a determinação por HPLC (5.3).5.3. Determinação por HPLC5.3.1. ParâmetrosAs condições a seguir especificadas são-no a título indicativo. Poderão escolher-se outras condições, desde que produzam resultados equivalentes.>POSIÇÃO NUMA TABELA>Para verificar a estabilidade do sistema cromatográfico, injectar várias vezes a solução de calibração (3.10.3) com 4,0 μg/ml até se obterem alturas (ou áreas) de pico e tempos de retenção constantes.5.3.2. Curva de calibraçãoInjectar várias vezes cada solução de calibração (3.10.3) e determinar a altura ou área média dos picos para cada concentração. Traçar uma curva de calibração, representando em ordenadas as alturas ou áreas médias dos picos das soluções de calibração e em abcissas as concentrações correspondentes em μg/ml.5.3.3. Solução da amostraInjectar várias vezes volumes dos extractos da amostra obtidos em 5.2.1 e 5.2.2, idênticos ao volume utilizado para as soluções de calibração e determinar a altura ou área média dos picos da lasalocido de sódio.6. Cálculo dos resultadosA partir da altura ou área média dos picos obtidos por injecção da solução da amostra (5.3.3), determinar a concentração de lasalocido de sódio em μg/ml com base na curva de calibração.6.1. Alimentos para animaisO teor de lasalocido de sódio, w, da amostra, expresso em mg/kg, é dado pela seguinte fórmula:>REFERÊNCIA A UM GRÁFICO>em que:ß= concentração de lasalocido de sódio, em μg/ml, do extracto da amostra (5.2.1)V1= volume, em ml, do extracto, de acordo com 5.2.1 (isto é, 100 ml)m= massa, em g, da toma analisada.6.2. Pré-misturasO teor de lasalocido de sódio, w, da amostra, expresso em mg/kg, é dado pela seguinte fórmula:>REFERÊNCIA A UM GRÁFICO>em que:ß= concentração de lasalocido de sódio, em μg/ml, do extracto da amostra (5.2.2)V2= volume, em ml, do extracto, de acordo com 5.2.2 (isto é, 250 ml)f= factor de diluição, de acordo com 5.2.2m= massa, em g, da toma analisada.7. Validação dos resultados7.1. IdentidadeOs métodos baseados na espectrofluorimetria são objecto de menos interferências que os métodos que utilizam um detector de ultravioletas. A identidade do analito pode ser confirmada por co-cromatografia.7.1.1. Co-cromatografiaAdiciona-se uma quantidade apropriada da solução de calibração (3.10.3) a um extracto da amostra (5.2.1 ou 5.2.2). A quantidade de lasalocido de sódio adicionada deve ser semelhante à existente no extracto da amostra.Daí deve resultar unicamente um aumento da altura do pico da lasalocido de sódio, contabilizadas a quantidade adicionada e a diluição do extracto. A largura do pico a meia altura não poderá diferir mais de 10 % da largura inicial do pico da lasalocido de sódio do extracto da amostra sem adição.7.2. RepetibilidadeA diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas para a mesma amostra não deve exceder:- para teores de lasalocido de sódio compreendidos entre 30 mg/kg e 100 mg/kg: 15 % do maior dos valores,- para teores de lasalocido de sódio compreendidos entre 100 mg/kg e 200 mg/kg: 15 mg/kg,- para teores de lasalocido de sódio superiores a 200 mg/kg: 7,5 % do maior dos valores.7.3. RecuperaçãoUtilizando uma amostra (branco) de alimento para animais adicionada, a recuperação deve ser pelo menos de 80 %. Utilizando amostras de pré-misturas adicionadas, a recuperação deve ser pelo menos de 90 %.8. Resultados de um teste interlaboratorialApresentam-se no quadro seguinte(1) os resultados das análises efectuadas a duas pré-misturas (amostras 1 e 2) e cinco alimentos para animais (amostras 3 a 7) no âmbito de um teste interlaboratorial com 12 laboratórios. Para cada amostra, efectuaram-se análises em duplicado.>POSIÇÃO NUMA TABELA>em que:L: número de laboratórios.n: número de valores singelos.Sr: desvio-padrão da repetibilidade.SRR: desvio-padrão da reprodutibilidade.CVr: coeficiente de variação da repetibilidade, %.CVR: coeficiente de variação da reprodutibilidade, %.(1) Analyst, 1995, 120, 2175-2180.