CELEX: 21987A0207(02)
Language: ro
Date: 1958-12-15 00:00:00
Title: Protocol la Acordul european privind schimbul de substanțe terapeutice de origine umană

02/Volumul 03
            
            
               RO
            
            
               Jurnalul Ofícial al Uniunii Europene
            
            
               135
            
         21987A0207(02)
   
               L 037/4
            
            
               JURNALUL OFÍCIAL AL UNIUNII EUROPENE
            
            
               
            
         
      PROTOCOL LA ACORDUL EUROPEAN
   
   privind schimbul de substanțe terapeutice de origine umană
   PARTEA I
   CONDIȚII GENERALE
   A.   ETICHETAREA
   Fiecare recipient sau accesoriu este prevăzut, înainte de expediere, cu o etichetă în limbile engleză și franceză, conform modelului corespunzător din anexele 2-10 la prezentul protocol.
   B.   AMBALAREA ȘI TRANSPORTUL
   Sângele uman integral este întotdeauna transportat într-un ambalaj care va menține o temperatură între 4°-6°C pe toată perioada transportului.
   Această condiție nu este obligatorie pentru derivații incluși în protocol.
   C.   PRODUSELE ȘI ACCESORIILE
   Produsele și accesoriile menționate în a doua parte a prezentului protocol vor fi sterile, apirogene și netoxice.
   Este recomandat ca accesoriile necesare administrării, precum și solvenții pentru produsele uscate să fie adăugați la pachetele livrate.
   D.   INOCUITATEA APARATURII PENTRU TRANSFUZIE SANGUINĂ DIN MATERIAL PLASTIC
   Aparatura trebuie să fie conformă cu dispozițiile prevăzute în anexa 11 la prezentul protocol.
   PARTEA II
   CONDIȚII SPECIALE
   1.   SÂNGE UMAN INTEGRAL
   Sângele uman integral este sângele care a fost combinat cu un anticoagulant adecvat după prelevarea de la un subiect uman normal.
   Sângele nu se prelevează de la un subiect:
   
               (a)
            
            
               despre care se știe că suferă sau a suferit de sifilis sau de hepatită sau
            
         
               (b)
            
            
               ale cărui teste sanguine de infecție cu sifilis nu au ieșit negative sau
            
         
               (c)
            
            
               care nu este indemn de o boală transmisibilă prin transfuzie sanguină, în măsura în care aceasta poate fi verificată printr-un simplu examen medical și prin studierea antecedentelor sale.
            
         Sângele se prelevează aseptic, printr-un dispozitiv tubular închis și steril, într-un recipient steril în care a fost introdusă soluția anticoagulantă înainte de sterilizare. Materialul utilizat trebuie să fie apirogen. La încheierea prelevării, flaconul se închide imediat și se răcește la temperatura de 4°-6°C. Flaconul nu se mai deschide până în momentul administrării.
   Sângele se prelevează pe o soluție de citrat acid care conține glucoză. Nu trebuie să se adauge nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică. Volumul soluției anticoagulante nu trebuie să depășească 220 de mililitri pe litru de sânge uman integral, iar concentrația de hemoglobină nu trebuie să fie mai mică de 97 de grame pe litru.
   Grupa sanguină
   Grupa sanguină din sistemul AB0 trebuie să fi fost determinată prin examinarea globulelor și a serului, iar grupa din sistemul Rhesus (Rh), prin examinarea globulelor, utilizându-se o probă separată de sânge a donatorului. Atunci când există o tehnică la nivel național pentru clasificarea pe grupe sanguine, standardizată sau recomandată, aceasta trebuie utilizată.
   Termenul Rh negativ trebuie utilizat numai atunci când probele specifice au arătat absența antigenilor C, D, Duși E. Toate celelalte tipuri de sânge trebuie etichetate ca Rh pozitiv.
   Sângele schimbat conform prezentului acord nu va fi transfuzat decât subiecților care aparțin grupei AB0 corespunzătoare.
   Conservarea
   Sângele uman integral se păstrează în recipientul steril sigilat, astfel încât să fie ferit de microorganisme, și se conservă la o temperatură de 4°-6°C până la administrare, cu excepția perioadelor necesare pentru examinare și transport la o temperatură mai ridicată, fără ca aceste perioade să depășească 30 de minute, după care sângele trebuie imediat să fie răcit la temperatura de 4°-6°C.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile indicate pe eticheta-model (anexa 2). Grupul Rh trebuie să fie menționat prin „pozitiv” sau „negativ”, sau prescurtat, „POZ” sau „NEG”.
   1a.   CONCENTRATE DE GLOBULE ROȘII UMANE
   Concentratul de globule roșii umane este o unitate de sânge uman integral din care a fost extrasă cea mai mare parte a plasmei.
   Acesta conține toate globulele roșii ale unității din care s-a preparat; celelalte elemente celulare pot fi prezente sau pot să fi fost îndepărtate parțial.
   Conținutul lichid al concentratului este constituit fie din plasma reziduală, fie dintr-o soluție apoasă artificială izotonică corespunzătoare adăugată după extragerea plasmei. Volumul ocupat de globulele roșii ar trebui să fie cuprins între 65-75 % din volumul total al produsului, dar, în acest caz de concentrație mai ridicată a globulelor roșii, procentul aproximativ de hematii în volum (hematocrit) trebuie să fie menționat pe etichetă.
   Utilizările necesare pentru preparare trebuie să se efectueze aseptic. Decantările trebuie să fie efectuate în circuit steril și totdeauna prin compresie. Nu trebuie să se adauge nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică.
   Grupa sanguină și conservarea
   sunt aceleași ca pentru sângele uman integral.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile indicate pe eticheta model (anexa 2a). Grupul Rh trebuie să fie menționat prin „Pozitiv” sau „Negativ” sau, prescurtat, prin „POZ” sau „NEG”. Dacă a fost adăugată o soluție apoasă artificială, eticheta trebuie să indice în plus și volumul său, și compoziția.
   2.   PLASMA UMANĂ DESICATĂ
   Plasma umană desicată se prepară prin desicarea lichidului supernatant obținut prin centrifugarea sau sedimentarea sângelui uman integral.
   În cursul preparării nu trebuie să se adauge nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică sau de altă natură. Plasma umană desicată se obține prin liofilizare sau prin orice altă metodă care evită denaturarea proteinelor. Produsul desicat trebuie să fie ușor solubil într-o cantitate de apă egală cu volumul lichidului din care a fost preparat. Soluția astfel obținută nu trebuie să conțină mai puțin de 45 de grame de proteine pe litru și nu trebuie să prezinte nici un semn vizibil al existenței unor produse de hemoliză. Titrul hemaglutininelor nu trebuie să depășească 1: 32.
   Plasma umană desicată preparată de la una sau două prelevări de sânge
   Se vor exclude prelevările despre care se știe că conțin un procent periculos de izohemolizine (determinat prin utilizarea unei probe de ser proaspăt) sau o hemaglutinină imună. Cu excepția situației în care plasma este amestecată și congelată în 48 de ore după prelevarea sângelui, sterilitatea fiecărei unități trebuie verificată prin cultura a cel puțin 10 mililitri.
   Plasma umană desicată preparată prin amestecul de la mai mult de două prelevări
   Se exclud amestecurile care conțin procente periculoase de hemaglutinine imune sau de izohemolizine. Pentru a se evita efectele nocive ale produselor de creștere bacteriană din plasmă, nu se va utiliza nici o prelevare individuală dacă prezintă semne de contaminare bacteriană, iar sterilitatea fiecărui amestec va fi controlată cu ajutorul unor culturi de cel puțin 10 mililitri. Pentru a reduce riscul transmiterii hepatitei B, plasma trebuie să fie preparată din amestecuri care nu conțin mai mult de 12 prelevări sau prin orice altă metodă despre care se știe că diminuează acest risc în mod comparabil.
   Solubilitatea în apă
   Se adaugă o cantitate de apă egală cu volumul lichid din care s-a preparat proba; substanța se dizolvă complet în 10 minute la o temperatură de 15°-20°C.
   Identificarea
   Se dizolvă o cantitate dată din produs în volumul de apă egal cu volumul lichidului din care a fost preparat; soluția este supusă următoarelor teste:
   
               (i)
            
            
               testele de precipitare cu antiseruri specifice arată că aceasta conține numai proteine plasmatice umane;
            
         
               (ii)
            
            
               la 1 mililitru se adaugă o cantitate corespunzătoare de trombină sau de clorură de calciu; se produce coagularea, care poate fi accelerată prin incubare la 37 °C.
            
         Pierderea de masă prin desicare
   Desicarea plasmei umane uscate, în prezența anhidridei fosforice la o presiune care nu depășește 0,02 mm coloană de mercur în 24 de ore, nu trebuie să provoace o pierdere de greutate mai mare de 0,5 %.
   Sterilitatea
   Produsul final, după reconstituire, trebuie să fie steril, dacă este examinat printr-o metodă bacteriologică corespunzătoare.
   Conservarea
   Plasma umană desicată trebuie să fie introdusă în atmosferă de azot sau în vid, într-un flacon steril sigilat, astfel încât să se excludă orice microorganism și, în măsura posibilităților, umiditatea; flaconul se protejează de lumină și se conservă la o temperatură sub 20 °C.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile indicate în eticheta model (anexa 3).
   3.   ALBUMINA UMANĂ ȘI SOLUȚIILE STABILE DE PROTEINE PLASMATICE UMANE
   Albumina umană și soluțiile stabile de proteine plasmatice umane sunt preparate din proteină care reprezintă aproximativ 60 % din masa de proteine totală din plasma sângelui uman integral.
   Metoda de preparare este astfel încât produsul final să îndeplinească condițiile descrise în continuare. Pentru ca produsul final să fie lichid sau uscat, preparatul, după adăugarea unui stabilizator corespunzător, trebuie să fi fost încălzit, în stare lichidă și în recipientul final, la 60 °C ± 0,5 °C timp de 10 ore, pentru a dezactiva agentul cauzator de hepatită B. Pe durata preparării nu trebuie să se adauge nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică.
   La preparațiile din albumină umană, cel puțin 95 % din masa de proteine trebuie să fie constituită din albumină. În soluțiile stabile de proteine plasmatice umane, cel puțin 85 % din masa de proteine trebuie să fie constituită din albumină. Cele două forme de preparații nu trebuie să conțină peste 10 miligrame de imunoglobulină G pe gram de produs.
   Dacă produsul final este liofilizat, acesta trebuie să conțină cel puțin 950 de miligrame de proteine pe gram de produs.
   Soluțiile stabile de proteine plasmatice umane trebuie să aibă o concentrație între 45 și 50 de grame de proteine totale pe litru.
   Dacă albumina umană se prepară în soluție, ea trebuie să aibă o concentrație de cel puțin 45 de grame de proteine totale pe litru.
   Solubilitatea produsului uscat
   Complet solubil după adăugarea cantității de apă indicate.
   Stabilitatea
   Măsurările comparative de viscozitate și turbiditate, precum și ultracentrifugarea și electroforeza, efectuate pe soluții înainte și după încălzire, nu trebuie să prezinte nici un indiciu de denaturare a proteinelor dizolvate. După încălzire la 57 °C și agitare mecanică timp de șase ore la această temperatură, soluția trebuie să fie complet lipsită de particule vizibile.
   Identificarea
   
               (i)
            
            
               Testele de precipitare cu ajutorul antiserurilor specifice indică faptul că cele două produse conțin numai proteine plasmatice umane.
            
         
               (ii)
            
            
               Electroforeza, practicată în migrare liberă în condiții acceptabile și adecvate, arată că fracțiunea proteinelor care au mobilitatea compusului albuminic al plasmei umane normale este de cel puțin 95 % din masă pentru preparațiile de albumină umană sau de cel puțin 85 % pentru soluțiile stabile de proteine plasmatice umane.
            
         Conținutul și concentrația de sodiu
   Conținutul de sodiu al albuminei umane săracă în sare nu trebuie să depășească 0,61 milimoli de sodiu pe gram de albumină. În celelalte preparații de albumină umană și în soluțiile stabile de proteine plasmatice umane, concentrația de sodiu nu trebuie să depășească 0,15 moli pe litru de soluție sau de produs uscat reconstituit.
   Concentrația de potasiu
   Concentrația de potasiu nu trebuie să depășească, la albumina umană și la soluțiile stabile de proteine plasmatice umane, 2 milimoli pe litru de soluție sau de produs uscat reconstituit.
   Aciditatea
   Măsurat la o temperatură de 15-25 °C într-o soluție diluată la o concentrație de 10 grame de proteine și 0,15 moli de clorură de sodiu pe litru, pH-ul celor două preparații trebuie să fie de 6,8 ± 0,2.
   Pierderea de masă prin desicare
   Dacă este vorba de o preparație uscată, desicarea în prezența anhidridei fosforice la o presiune care să nu depășească 0,02 mm coloană de mercur, timp de 24 de ore, nu trebuie să provoace o pierdere de greutate mai mare de 0,5 %.
   Sterilitatea
   Produsul final trebuie să fie steril când este examinat printr-o tehnică bacteriologică corespunzătoare.
   Conservarea
   Albumina umană uscată trebuie să fie introdusă în atmosferă de azot sau în vid într-un recipient steril sigilat, astfel încât să se excludă microorganismele și umiditatea; se protejează de lumină și se conservă la o temperatură sub 20 °C.
   Soluțiile de albumină umană și soluțiile stabile de proteine plasmatice umane trebuie să se păstreze în recipiente sterile, astfel încât să se excludă microorganismele. Acestea se protejează de lumină și se păstrează la o temperatură între 4°-6°C.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să furnizeze toate informațiile cerute pe eticheta model (anexa 4). Pentru soluții, data de preparare este data încălzirii în recipientul final.
   4.   IMUNOGLOBULINA UMANĂ NORMALĂ
   Imunoglobulina umană normală este un preparat din proteine plasmatice care provin din sângele uman integral și care conțin anticorpi de adulți normali. Ea se obține dintr-un amestec de plasmă lichidă de la cel puțin 1 000 de donatori.
   Procedeul de preparare trebuie să fie astfel încât produsul să îndeplinească condițiile prevăzute în continuare și produsul final să nu transmită hepatita B. În plus, metoda de preparare trebuie să fie astfel încât anticorpii conținuți în produsul inițial să fie concentrați într-o cantitate adecvată în produsul final. Procedeul utilizat trebuie considerat ca fiind satisfăcător în această privință pentru fiecare preparat, prin titrarea anticorpilor corespunzători cel puțin unui virus și unei toxine bacteriene în produsul inițial și în produsul final. Se vor alege anticorpi pentru care există metode de titrare verificate.
   Pe parcursul preparării nu se va adăuga nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică; pentru a menține sterilitatea bacteriană și stabilitatea produsului final, se poate adăuga un agent de conservare și un stabilizator adecvați.
   Produsul final este livrat sub formă de soluție a cărei concentrație de imunoglobulină trebuie să fie între 100-170 grame pe litru.
   Identificarea
   
               (i)
            
            
               Testele de precipitare cu antiseruri specifice arată că produsul conține numai proteine plasmatice umane.
            
         
               (ii)
            
            
               Electroforeza, utilizată în migrare liberă în condiții acceptabile și adecvate, trebuie să arate că cel puțin 90 % din masa proteinelor au mobilitatea compusului gamma al globulinelor plasmei umane normale.
            
         Stabilitatea
   În soluția finală nu trebuie să existe nici un semn vizibil de precipitare sau de turbiditate înainte și după încălzire la 37 °C timp de 7 zile. Este recomandat, de asemenea, să se facă controale de ultracentrifugare pentru determinarea gradului de degradare a produsului în compuși de greutate moleculară mai mică. Metoda utilizată trebuie să se aleagă dintre cele care au aprobarea autorității naționale de control.
   Aciditatea
   PH-ul soluției finale, măsurat la o temperatură cuprinsă de 15-25 °C după diluare la o concentrație de 10 grame de proteine pe litru într-o soluție de 0,15 moli clorură de sodiu pe litru, trebuie să fie de 6,8 ± 0,4.
   Sterilitatea
   Produsul final trebuie să fie steril când este examinat conform unei metode bacteriologice corespunzătoare.
   Conservarea
   Soluțiile de imunoglobulină umană se vor păstra într-un recipient steril sigilat pentru a se exclude microorganismele, ferit de lumină și la o temperatură de 4-6 °C.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile indicate pe eticheta model (anexa 5). Data de preparare corespunde celei de introducere în recipientul final.
   5.   IMUNOGLOBULINELE UMANE SPECIFICE
   Imunoglobulinele umane specifice includ anticorpi care corespund unor agenți virali sau bacterieni determinați. De aceea, aceste produse vor fi preparate dintr-un amestec de la un număr limitat de prelevări.
   Aceste cerințe se aplică următoarelor imunoglobuline umane specifice:
   
               —
            
            
               imunoglobulină umană antitetanos;
            
         
               —
            
            
               imunoglobulină umană antivaccin.
            
         Se pot prepara și alte imunoglobuline umane specifice; dacă există o normă internațională, acestea vor fi controlate în funcție de această normă, iar activitatea lor va trebui exprimată în unități internaționale.
   Imunoglobulina umană antivaccin trebuie să conțină cel puțin 500 UI pe ml de anticorpi antivaccin determinați printr-o probă de neutralizare asupra membranei corio-alantoide sau asupra unei culturi de țesuturi. Imunoglobulina umană antitetanică trebuie să conțină cel puțin 50 UI pe ml de antitoxină tetanică determinată printr-o probă de neutralizare la animal.
   Imunoglobulinele umane specifice trebuie în plus să îndeplinească cerințele descrise la punctul 4, imunoglobulina umană normală.
   În funcție de procentul de anticorpi, concentrația de imonoglobulină a soluției finale va varia între 100-170 grame pe litru.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile indicate pe eticheta model (anexa 5). În plus, eticheta va trebui să indice activitatea exprimată în unități internaționale în aceiași termeni ca pentru etalonul internațional sau preparația internațională de referință adecvată.
   6.   FIBRINOGEN UMAN USCAT
   Fibrinogenul uman uscat este o preparație uscată care include constituentul solubil al plasmei umane lichide, care, după adăugarea de trombină, se transformă în fibrină. Metoda de preparare utilizată trebuie să fie în așa fel încât produsul final să îndeplinească condițiile prezentate în continuare și să reducă riscul de transmitere a hepatitei B. Amestecurile de plasmă utilizate la prepararea fibrinogenului trebuie să provină de la cât mai puține prelevări posibil.
   Pe parcursul preparării nu se va adăuga nici o substanță antiseptică sau bacteriostatică. Produsul final trebuie să fie liofilizat.
   Solubilitatea
   Produsul uscat trebuie să fie complet solubil după adăugarea cantității de apă prevăzute. Nu trebuie să apară nici un precipitat în cele 60 de minute după reconstituire.
   Identificarea
   
               (i)
            
            
               Probele de precipitare cu ajutorul antiserurilor specifice trebuie să indice că produsul conține numai proteine plasmatice umane.
            
         
               (ii)
            
            
               Produsul care tocmai a fost reconstituit are proprietatea de a se coagula prin adăugarea de trombină. După adăugarea trombinei la o soluție de fibrinogen uman a cărui concentrație a fost adusă la cea a plasmei normale proaspete, coagularea trebuie să apară într-un interval care să nu depășească dublul timpului de coagulare a plasmei normale proaspete după adăugarea de trombină.
            
         
               (iii)
            
            
               Proteină coagulabilă. Nu mai puțin de 50 % din masa de proteine totală trebuie să fie coagulabilă prin trombină.
            
         Pierderea de masă prin desicare
   Desicarea în prezența anhidridei fosforice la o presiune care să nu depășească 0,02 mm coloană de mercur în 24 de ore nu trebuie să provoace o pierdere în greutate mai mare de 0,5 %.
   Sterilitatea
   Produsul final după reconstituire trebuie să fie steril când este examinat printr-o metodă bacteriologică adecvată.
   Conservarea
   Fibrinogenul uman se introduce în atmosferă de azot sau în vid, într-un recipient steril, sigilat, pentru a se exclude microorganismele și, pe cât posibil, umiditatea; se protejează de lumină și se păstrează la temperatura recomandată.
   Etichetarea
   Eticheta recipientului trebuie să prezinte toate informațiile cerute în eticheta model (anexa 6). Data preparării este data dizolvării finale înaintea liofilizării.
   7.   FACTORUL VIII DE COAGULARE UMAN CONGELAT SAU USCAT
   I.   Condițiile pentru donatori
   Donatorul trebuie să fie într-o stare bună de sănătate și, în special, să nu aibă nici o boală transmisibilă conform criteriilor adoptate pentru plasma umană uscată.
   II.   Condițiile privind preparațiile
   Sterilitatea și atoxicitatea
   Produsul final trebuie să fie steril și apirogen. În caz de crioprecipitare în sac de plastic, produsul nu poate conține solvenți organici sau alte substanțe străine prezente în amestecul de refrigerare; se va preveni trecerea acestor produse prin peretele sacului de plastic introducându-l într-un al doilea înveliș impermeabil pe perioada imersiunii. Riscurile de rupere pe perioada conservării în stare congelată în sac de plastic vor fi reduse prin așezarea fiecărui sac într-un recipient protector.
   Hematiile, leucocitele și trombocitele
   Condițiile de centrifugare vor fi astfel încât elementele figurate ale sângelui să fie eliminate cât mai devreme și complet posibil după prelevare.
   Solubilitatea
   Adăugarea cantității indicate din solventul adecvat trebuie să ducă la dizolvarea completă a produsului uscat în mai puțin de 30 de minute la 37 °C. Pot persista mici resturi de fibrinogen ușor disociabile.
   Stabilitatea
   Preparația conservată la 20 °C nu poate prezenta nici un semn de precipitare timp de trei ore după dizolvare.
   Activitatea
   Preparația reconstituită va aduce cantitatea minimă de factor VIII indicată, o unitate corespunzătoare activității unui mililitru de plasmă proaspătă normală medie, activitate măsurată printr-o metodă aprobată de autoritatea națională competentă.
   Absența anticorpilor nespecifici și, dacă preparația este destinată unor pacienți de indiferent ce grupă AB0, titrul anticorpilor anti-A și anti-B mai mic de 32.
   Identificarea
   Probele de precipitare cu antiseruri specifice indică faptul că produsul conține numai proteine plasmatice umane.
   Pierderea din masă prin desicare
   Dacă produsul final este liofilizat, desicarea în prezența anhidridei fosforice la o presiune care să nu depășească 0,02 mm coloană de mercur în 24 de ore nu trebuie să provoace o pierdere de greutate mai mare de 1,5 %.
   Conservarea
   Factorul VIII uman trebuie conservat la o temperatură mai mică de -30 °C pentru preparația congelată, mai mică de 5 °C pentru preparația liofilizată și ferită de lumină. Preparația uscată trebuie păstrată într-o atmosferă de azot sau în vid, într-un flacon steril, închis pentru a se exclude microorganismele și, pe cât posibil, umiditatea. Perioada de conservare nu trebuie să depășească șase luni în stare congelată, un an în stare uscată, cu excepția cazurilor în care s-a făcut din nou dovada activității minime cerute.
   III.   Etichetarea
   Eticheta preparației trebuie să prezinte toate informațiile indicate în eticheta model (anexa 7).
   8.   FACTORUL IX DE COAGULARE UMAN USCAT
   I.   Condițiile pentru donatori
   Donatorul trebuie să fie într-o stare bună de sănătate și, în special, să nu aibă nici o boală transmisibilă conform criteriilor adoptate pentru plasma umană uscată.
   II.   Condițiile pentru concentrat
   Sterilitatea și atoxicitatea
   Produsul final testat conform metodelor adecvate trebuie să fie steril, apirogen și fără efect respiratoriu nedorit. Absența efectului vasodepresiv se va testa la câine sau la pisică.
   Solubilitatea
   Adăugarea cantității de solvent indicate trebuie să ducă la o dizolvare completă în 10 minute la 37 °C.
   Activitatea tromboplastinică și absența trombinei libere
   Timpul de recalcifiere a unei plasme normale măsurat la 37 °C în prezența unui volum egal de diverse diluții ale produsului reconstituit nu poate fi mai mic de 40 de secunde. Produsul reconstituit și completat cu un volum egal de fibrinogen (3 g/l) nu se poate coagula timp de 6 ore la 37 °C.
   Activitatea
   Preparația reconstituită va aduce cantitatea minimă indicată de factor IX, o unitate corespunzând activității unui mililitru de plasmă proaspătă normală medie, activitate măsurată printr-o metodă aprobată de autoritatea națională competentă.
   Randamentul și stabilitatea in vivo
   
   Metoda de preparare trebuie să fie astfel încât administrarea intravenoasă rapidă a unei doze de 50 de unități pe kilogram de greutate corporală, din mai multe loturi de produs de la mai mulți subiecți, determinat în absența inhibitorului specific și în condiții de bază, va cauza o creștere medie după 15 minute de cel puțin 300 de unități pe litru de plasmă și persistența după 24 de ore a unei creșteri medii de cel puțin 60 de unități pe litru de plasmă.
   Identificarea
   Testele de precipitare pe antiseruri specifice indică faptul că produsul conține numai proteine plasmatice umane.
   Pierderea de masă prin desicare
   Desicarea în prezența anhidridei fosforice sub o presiune care nu depășește 0,02 mm coloană de mercur pe o perioadă de 24 de ore nu trebuie să provoace o pierdere de greutate mai mare de 1,5 %.
   Conservare
   Preparațiile trebuie să fie conservate uscate la o temperatură sub 5 °C. Perioada de conservare nu trebuie să depășească 2 ani, cu excepția cazului în care s-a făcut încă o dată dovada activității preparației.
   III.   Etichetarea
   Eticheta preparației trebuie să prezinte toate informațiile indicate în eticheta model (anexa 8).
   ANEXA 1 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
      CERTIFICAT
   
   
      (Articolul 4)
   A NU SE SEPARA DE EXPEDIȚIE
   
               …
               (locul)
            
            
               …19 …
               (data)
            
         
      
   
               Numărul de colete
            
            
               Subsemnatul declar că livrarea precizată pe margine
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               Denumirea
            
            
               preparată sub răspunderea …
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               …
            
            
               …
            
         
               Nr. lot
            
            
               organism menționat în articolul 6 din acord, este în conformitate cu specificațiile protocolului la acord și poate fi livrat imediat destinatarului
            
         
               (numele și locul) …
            
         
               …
            
         
               
                           …
                           (ștampila)
                        
                        
                           …
                           (semnătura)
                        
                        
                           …
                           (funcția)
                        
                     
         ANEXA 2 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Sânge uman integral: …
            
         
               3.
            
            
               Numărul de referință: …
            
         
               4.
            
            
               Grupa sanguină: …
            
         
               5.
            
            
               Grupa Rh: …
            
         
               6.
            
            
               
                           … ml
                        
                        
                           soluție anticoagulantă
                        
                     
                           … g
                        
                        
                           (glucoză/l)
                        
                     
                           … mol
                        
                        
                           citrat disodic/l
                        
                     
                           … ml
                        
                        
                           de sânge
                        
                     
         
               7.
            
            
               
                           Titru de izohemolizine
                        
                        
                           (determinat)
                        
                     
                           (nedeterminat)
                        
                     
         
               8.
            
            
               Data prelevării: …
               Data expirării: …
            
         
               
                  9.
               
            
            
               
                  A se păstra la o temperatură între 4-6 °C.
               
            
         
               
                  10.
               
            
            
               
                  A nu se utiliza în cazul unui semn vizibil de alterare.
               
            
         ANEXA 2a LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Concentrat de globule roșii umane …
            
         
               3.
            
            
               Numărul de referință: …
            
         
               4.
            
            
               Grupa sanguină: …
               …
            
         
               5.
            
            
               Grupa Rh: …
            
         
               6.
            
            
               … ml preparat din … ml de sânge
            
         
               7.
            
            
               Volumul și compoziția anticoagulantului folosit: …
            
         
               8.
            
            
               Data prelevării: …
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               9.
            
            
               A se păstra la o temperatură între 2-6 °C
            
         
               10.
            
            
               
                           Soluție apoasă artificială adăugată volum: …
                        
                        
                           compoziție: …
                        
                     
         ANEXA 3 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Plasmă umană uscată: …
            
         
               3.
            
            
               Numărul de referință: …
            
         
               4.
            
            
               Se reconstituie cu … ml apă distilată, sterilă și apirogenă
            
         
               5.
            
            
               Plasma reconstituită conține:
               
                           … g
                        
                        
                           glucoză/l
                        
                     
                           … mol
                        
                        
                           citrat disodic/l
                        
                     
                           … g/l
                        
                        
                           concentrație de proteine (cel puțin)
                        
                     
         
               6.
            
            
               Numărul de prelevări individuale în amestec: …
            
         
               7.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               
                  8.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric, la o temperatură sub 20 °C.
               
            
         
               
                  9.
               
            
            
               
                  A se utiliza imediat după reconstituire.
               
            
         ANEXA 4 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Albumină umană uscată …
            
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               
                           Albumină:
                        
                        
                           … g
                        
                     
                           Stabilizator: …
                        
                        
                           natura … g/l
                        
                        
                           (în soluție reconstituită)
                        
                     
                  
               
                           Sodiu … mmol/g
                        
                        
                           (de albumină)
                        
                     
         
               5.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               6.
            
            
               Se reconstituie cu … ml de apă distilată, sterilă și apirogenă
            
         
               
                  7.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric, la o temperatură sub 20 °C.
               
            
         
               
                  8.
               
            
            
               
                  A se injecta imediat după reconstituire.
               
            
         ANEXA 4 (continuare 1)
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               
                           Soluție de albumină umană
                        
                        
                           … ml
                        
                     
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               
                           Albumină:
                        
                        
                           … g/l
                        
                     
                           Stabilizator:
                        
                        
                           natura: …, … g/l
                        
                     
                  
               
                           Sodiu: … mmol/g
                        
                        
                           (de albumină)
                        
                     
         
               5.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               
                  6.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric și la o temperatură între 4-6 °C.
               
            
         
               
                  7.
               
            
            
               
                  A se injecta numai dacă lichidul este limpede și fără depuneri.
               
            
         ANEXA 4 (continuare 2)
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               
                           Soluție stabilă de proteine plasmatice umane:
                        
                        
                           … ml
                        
                     
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               
                           Albumină:
                        
                        
                           … g/l
                        
                     
                           Stabilizator:
                        
                        
                           natura …, … g/l
                        
                     
                  
               
                           Sodiu: …
                        
                        
                           mmol/g
                        
                     
         
               5.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               
                  6.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric și la o temperatură între 4-6 °C.
               
            
         
               
                  7.
               
            
            
               
                  A se injecta numai dacă lichidul este limpede și fără depuneri.
               
            
         ANEXA 5 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Imunoglobulină umană normală …
            
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               
                           Total proteine:
                        
                        
                           … g/l
                        
                     
                           Alte substanțe adăugate:
                        
                        
                           natura: …, … g/l
                        
                     
                  
               
                           Volum total:
                        
                        
                           … ml
                        
                     
         
               5.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               
                  6.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric și la o temperatură între 4-6 °C.
               
            
         
               
                  7.
               
            
            
               
                  A nu se injecta intravenos.
               
            
         ANEXA 6 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Fibrinogen uman uscat…
            
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               
                           Proteină coagulabilă:
                        
                        
                           … g
                        
                     
                           Alte substanțe adăugate:
                        
                        
                           natura: … …g/l
                        
                        
                           din soluția reconstituită
                        
                     
         
               5.
            
            
               Data preparării: …
               Data expirării: …
            
         
               6.
            
            
               Se reconstituie cu … ml de apă distilată, sterilă și apirogenă.
            
         
               7.
            
            
               
                           Numărul prelevărilor individuale în amestec:
                        
                        
                           …
                        
                     
         
               
                  8.
               
            
            
               
                  A se păstra la întuneric și la o temperatură sub 20 °C.
               
            
         
               
                  9.
               
            
            
               
                  A se injecta imediat după reconstituire.
               
            
         ANEXA 7 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               
                           Factorul VIII de coagulare uman congelat
                        
                        
                           sau
                        
                     
                           Factorul VIII de coagulare uman deshidratat
                        
                        
                            
                        
                     Metoda de preparare:. …
            
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               Cantitatea minimă de factor VIII, cantitatea de proteine totale, natura și cantitatea oricărei substanțe adăugate: …
            
         
               5.
            
            
               Natura și volumul solventului: …
            
         
               6.
            
            
               Numărul de donatori pe lot: …
            
         
               
                  7.
               
            
            
               
                  Titrul hemaglutininelor nu mai mare de 1: 32 sau grupa sanguină AB0
               
            
         
               8.
            
            
               Data preparării: …
            
         
               9.
            
            
               Data expirării: …
            
         
               
                  10.
               
            
            
               
                  A se feri de lumină și a se păstra congelat la o temperatură sub – 30 °C sau deshidratat la o temperatură sub 5 °C.
               
            
         
               
                  11.
               
            
            
               
                  După reconstituirea produsului, a se injecta intravenos, imediat sau cel târziu după 3 ore de conservare la 20 °C.
               
            
         ANEXA 8 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
               …
            
         
               2.
            
            
               Factorul IX de coagulare uman uscat: …
               Alți factori de coalugare prezenți: …
               Metoda de preparare: …
            
         
               3.
            
            
               Numărul lotului: …
            
         
               4.
            
            
               Cantitatea minimă de factor IX, cantitatea de proteine totale, natura și cantitatea oricărei substanțe adăugate: …
            
         
               5.
            
            
               Natura și volumul solventului: …
            
         
               6.
            
            
               Numărul de donatori pe lot: …
            
         
               7.
            
            
               Data preparării: …
            
         
               8.
            
            
               Data expirării: …
            
         
               
                  9.
               
            
            
               
                  A se feri de lumină și a se păstra la o temperatură sub 5 °C.
               
            
         
               
                  10.
               
            
            
               
                  După reconstituirea produsului, a se injecta intravenos, imediat.
               
            
         ANEXA 9 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Apă distilată, sterilă și apirogenă
               
                           Pentru reconstituirea
                        
                        
                           plasmei umane deshidratate
                           albuminei umane deshidratate
                           fibrinogenului uman deshidratat
                           factorilor de coagulare umani deshidratați VIII și IX
                        
                     
         
               3.
            
            
               
                           Cantitate:
                        
                        
                           … ml
                        
                     
         ANEXA 10 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
               1.
            
            
               Numele și adresa producătorului: …
            
         
               2.
            
            
               Dispozitivul de injectare
               Dispozitiv pentru administrarea sângelui uman integral, a plasmei umane deshidratate reconstituite, a albuminei umane, a soluțiilor stabile de proteine plasmatice umane, a fibrinogenului uman sau a factorului VIII de coagulare uman congelat sau deshidratat sau a factorului IX de coagulare uman deshidratat.
            
         ANEXA 11 LA PROTOCOL
   CONSILIUL EUROPEI
   ACORDUL EUROPEAN PRIVIND SCHIMBUL DE SUBSTANȚE TERAPEUTICE DE ORIGINE UMANĂ
   
      INOCUITATEA APARATURII DE TRANSFUZIE SANGUINĂ DIN MATERIAL PLASTIC
   
   I.   TESTE CHIMICE
   Testele urmează să se efectueze pe aparatura de transfuzie sanguină din material plastic. Această aparatură se compune din două categorii principale de elemente:
   
               1.
            
            
               recipiente din material plastic destinate colectării, separării și conservării sângelui și a produselor sanguine;
            
         
               2.
            
            
               echipament din material plastic pentru prelevarea și administrarea sângelui.
            
         Materialul va fi supus unor testări după ce a fost sterilizat conform metodei care se va utiliza pentru sterilizarea definitivă a aparatului. Acest material va cuprinde:
   
               1.
            
            
               materialul plastic utilizat pentru fabricarea recipientelor;
            
         
               2.
            
            
               tuburile care se găsesc în recipiente;
            
         
               3.
            
            
               echipamentul de prelevare și de administrare a sângelui.
            
         Recipientele trebuie să fie supuse testelor înainte de a fi umplute cu soluție anticoagulantă. Totuși, dacă testele se efectuează pe recipiente care au fost umplute cu soluție anticoagulantă, testele-limită pe însăși soluția anticoagulantă, prevăzute în capitolul III, trebuie să fie luate în considerare la evaluarea rezultatelor testelor la care a fost supus recipientul.
   Fabricantul aparaturii de transfuzie este obligat să dezvăluie autorităților sanitare competente formula detaliată a materialului sau materialelor plastice și a oricărei alte substanțe utilizate pentru fabricarea aparaturii, precum și să indice originea compușilor care intră în fabricarea materialului sau a materialelor, metoda lor de fabricație (sau, în absența acestora, numerele de referință compuse), metodele detaliate de fabricare a aparaturii, natura oricărui aditiv și adeziv utilizat în cursul producției, precum și modul de sterilizare. Nici o modificare nu poate fi adusă datelor menționate anterior, dacă aceasta nu a fost comunicată în prealabil autorității sanitare competente și aprobată de aceasta.
   Fiecare lot de materie primă utilizată pentru fabricarea aparaturii se identifică printr-un număr care este consemnat de către fabricant, în același timp cu numerele de identificare ale tuturor loturilor de aparatură de transfuzie fabricată din această materie primă și rezultatele tuturor analizelor la care acestea au fost supuse.
   Trebuie luate toate măsurile de precauție posibile pentru diminuarea riscurilor de contaminare accidentală în fiecare stadiu de fabricare.
   A.   Prepararea extractului și a substanței martor
   
               (a)
            
            
               Pentru efectuarea unui test complet, așa cum este în continuare, se utilizează 1 250 cm2 de material plastic (suprafața totală a celor două fețe ale unei probe formate dintr-o foaie de material plastic a cărei față măsoară fiecare 625 cm2). Proba care nu are nici o indicație scrisă sau etichetă trebuie tăiată în bucăți de maximum 10 cm2.
               Lungimea (L) în cm a tuburilor se calculează după cum urmează:
               unde:
               D1= diametrul interior în cm,
               D2= diametrul exterior în cm.
               Tuburile trebuie să fie tăiate în sensul lungimii, în tronsoane de aproximativ 10 cm. Pentru extract se utilizează 10 ml de apă la 50 cm2.
            
         
               (b)
            
            
               Bucățile de peliculă sau de tub din material plastic trebuie să fie introduse într-un recipient de sticlă pe bază de borosilicat cu 250 mililitri de apă distilată apirogenă provenită dintr-un alambic eficient prevăzut cu suprafețe de condensare și tuburi de captare din sticlă (1). Deschizătura recipientului este acoperită cu un pahar de laborator întors, iar recipientul este apoi reîncălzit în vapori saturați la 110 °C timp de 30 de minute (în autoclavă) și răcit rapid la temperatura camerei, apoi volumul este adus la 250 mililitri prin adăugarea de apă distilată apirogenă. Nu este nevoie să se țină seama de o eventuală ușoară aderență între eșantioanele de material plastic.
               În loc să fie încălzite într-o autoclavă, materialele plastice sensibile la căldură pot fi încălzite la 70 °C timp de 72 de ore.
               O soluție-martor corespunzătoare se prepară fără materiale plastice.
            
         B.   Test pe extract
   1.   Materiile oxidabile
   La 20 ml de extract conținut într-un balon Erlenmeyer de sticlă pe bază de borosilicat, se adaugă 20 ml de soluție de 2 milimoli de permanganat de potasiu pe litru și 1,0 ml de acid sulfuric de 1 mol pe litru, iar acest amestec se pune la fiert timp de 3 minute. Se răcește soluția rapid și se adaugă 100 mg de iodură de potasiu și 5 picături de soluție de amidon. Se titrează printr-o soluție de 10 milimoli de tiosulfat de sodiu pe litru, efectuându-se o titrare paralelă cu soluția-martor. Diferența între cantitatea de tiosulfat utilizată în cele două titrări nu depășește 2,00 ml dintr-o soluție de 10 milimoli tiosulfat de sodiu pe litru.
   2.   Clorura
   Extractul corespunde unui test limită adecvat pentru clorurile corespunzătoare pentru maximum 11,2 μmoli de clorură pe litru.
   3.   Amoniacul
   Extractul corespunde unui test limită acceptabil pentru amoniac corespunzător pentru maximum 120 μmoli de NH3 pe litru.
   4.   Acidul fosforic - fosfatul
   Extractul corespunde testului limită al fosfaților.
   Test limită de fosfați
   Se evaporă 25 ml din extractul aproape uscat într-un balon Kjeldahl, se răcește reziduul, se adaugă 2 picături de acid sulfuric și 1 ml de acid nitric, se încălzește amestecul până la degajarea de vapori albi și se răcește. Se adaugă o picătură de acid percloric și se încălzește ușor timp de o jumătate de oră. Se răcește reziduul și se adaugă apă pentru a obține 25 ml. Se pun într-un alt vas 10 ml de soluție într-un balon de titrare de 25 ml, se adaugă 8 ml de soluție de molibdat de amoniu – acid sulfuric și 2 ml dintr-o soluție de o concentrație de 100 grame de acid ascorbic pe litru recent preparat. Se încălzește în bain-marie la 50 °C timp de 30 de minute, se răcește amestecul la 25 ml. Colorarea verde sau albastră a soluției nu este mai intensă decât cea obținută prin tratarea a 25 ml din soluția-martor în același mod.
   5.   Reacția
   10 ml de extract nu capătă o culoare roșie prin adăugarea a două picături de soluție de fenolftaleină și nu necesită mai mult de 0,4 ml de soluție de 10 milimoli de hidroxid de sodiu pe litru pentru a-i da o culoare roșie. După eliminarea acestei colorări prin adăugarea a 0,8 ml de soluție de 10 milimoli de acid clorhidric pe litru, adăugarea a 5 picături de soluție de roșu de metil dă o colorare roșie sau roșu-portocalie.
   6.   Reziduul la evaporare
   Se evaporă 100 ml de extract uscat în bain-marie și se usucă la 105 °C până la o greutate constantă. Reziduul nu cântărește mai mult de 5,0 mg.
   7.   Transparența și culoarea
   Extractul, observat printr-o grosime de 5 cm, este transparent și incolor dacă se compară cu soluția-martor.
   8.   Gustul și mirosul
   În comparație cu soluția-martor, extractul este inodor și fără gust.
   9.   Elementele speciale
   Extractul corespunde testelor limită adecvate pentru:
   
               (i)
            
            
               oricare din următoarele elemente: arsenic, crom, cupru, plumb, siliciu, argint și cositor, corespunzător la 1,0 μg/g;
            
         
               (ii)
            
            
               cadmiu corespunzător la 0,1 μg/g.
            
         10.   Reziduul la incinerare
   1,0 g din materialele plastice, incinerate până la o greutate constantă, nu trebuie să lase reziduul să depășească 1 mg.
   11.   Metalele grele
   Se dizolvă reziduul la incinerare într-o cantitate minimă de soluție de 2 moli de acid clorhidric pe litru, încălzindu-l dacă este cazul. Se efectuează un test limită adecvat pentru metale grele. Materialul plastic corespunde unei limite care nu depășește 5 micrograme pe gram, calculată ca Pb.
   II.   ANALIZE BIOLOGICE
   
               1.
            
            
               Căutarea unui exces de toxicitate se va efectua la analiza inițială a formulelor materialelor plastice destinate fabricării baloanelor și dispozitivelor de prelevare și de injectare, cu ajutorul extractului A, și pentru fiecare nou lot de materiale din formula probată, cu ajutorul extractului B, conform procedurii prevăzute în farmacopeea națională sau orice altă metodă aprobată de autoritatea națională de control. (Compoziția extractelor A și B este indicată în nota de mai jos.)
            
         
               2.
            
            
               Controlul apirogenității se va efectua la analiza inițială a formulelor materialelor plastice destinate fabricării baloanelor și dispozitivelor de prelevare și injectare, cu ajutorul extractului A, și pentru fiecare nou lot de materiale din formula probată, cu ajutorul extractului C, și la controlul curent al baloanelor și al dispozitivelor de prelevare și de injectare cu ajutorul extractului C, conform procedurii prescrise în farmacopeea națională sau orice altă metodă aprobată de autoritatea națională de control.
               Incidența controalelor de apirogenitate, cu ajutorul extractului C, va fi stabilită de autoritatea națională de control. (Compoziția extractelor A și C este indicată în nota de mai jos.)
            
         
               3.
            
            
               Analiza efectelor hemolitice într-un sistem tamponat se va efectua la analiza inițială a formulelor materialelor plastice destinate fabricării recipientelor și a echipamentului pentru prelevare și administrare de sânge și va privi fiecare lot nou de material care corespunde formulelor aprobate, cu ajutorul extractului expus la punctul I.A de mai sus. (Pentru metoda și limitele acceptabile, a se vedea apendicele la prezenta anexă.)
            
         
               4.
            
            
               Un test de supraviețuire in vivo a globulelor roșii se va efectua la analiza inițială a formulelor materialelor plastice destinate fabricării flacoanelor pentru sânge. Dacă se aduce vreo modificare formulei convenite, testul se repetă. (A se vedea metodele propuse și limitele acceptabile din apendicele la prezenta anexă.)
            
         Notă
   
      Extractul A:
   
   Se adaugă la extractul descris la punctul I.A de mai sus clorură de sodiu apirogenă până la obținerea finală a unei concentrații de 9 grame de clorură de sodiu pe litru.
   
      Extractul B:
   Aparatul de transfuzie: se umple un aparat de transfuzie, cât se poate de mult, cu o soluție sterilă și apirogenă de 9 grame de clorură de sodiu pe litru, i se fixează extremitățile și se scufundă complet aparatul astfel umplut timp de o oră în apă menținută la 85 °C. Se recuperează conținutul din aparat.
   Recipientul din material plastic: dacă recipientul este umplut cu o soluție anticoagulantă, este preferabil să se golească și să se clătească de două ori cu 250 ml de apă distilată sterilă și apirogenă la o temperatură de 20 °C. Se umple recipientul cu 100 ml de soluție sterilă și apirogenă de 9,0 grame de clorură de sodiu pe litru, se închide cu grijă și se scufundă timp de o oră în poziție orizontală în apa menținută la 85 °C. Se recuperează conținutul din recipient.
   
      Extractul C:
   
   Aparatul de transfuzie: se trec 40 ml de soluție de clorură de sodiu sterilă și apirogenă de o concentrație de 9,0 grame pe litru, la temperatura ambiantă, prin cel puțin 10 aparate de transfuzie, cu o frecvență de circa 10 ml per minut, și se adună efluentul. Se analizează soluția astfel obținută.
   Recipientul din material plastic: se golește recipientul. Se trec 100 ml de soluție sterilă și apirogenă de 9,0 grame de clorură de sodiu pe litru la temperatura ambiantă prin tuburile de captare a cel puțin patru recipiente din material plastic, se lasă să stea în recipiente timp de 10 minute și se adună efluentul prin evacuare prin tuburile de transfer.
   Recipientul din material plastic conține un anticoagulant (a se vedea punctul III).
   III.   PREVEDERI PRIVIND SOLUȚIA ANTICOAGULANTĂ CONȚINUTĂ ÎN RECIPIENTELE DIN MATERIAL PLASTIC
   Fiecare recipient trebuie să conțină cantitatea de soluție anticoagulantă specificată pe etichetă pentru volumul de sânge de prelevat; formula acestei soluții trebuie să fie cea indicată pe etichetă pentru acest volum de sânge.
   Soluția anticoagulantă și/sau produsele care intră în compoziția sa trebuie să corespundă cerințelor farmacopeei naționale a țării interesate.
   Soluția anticoagulantă trebuie să îndeplinească cerințele farmacopeei naționale a țării interesate în ceea ce privește limitele pentru metale grele, lipsa materiilor solide, inocuitate și apirogenitate.
   
      (1)  În cazul materialelor plastice care au fost în contact cu o soluție anticoagulantă, bucățile trebuie să fie introduse întâi într-un recipient asemănător, conținând apă distilată rece (100 ml), care se agită de mai multe ori. Această operație trebuie repetată încă o dată.
   Apendice
   
      ANALIZA BIOLOGICĂ: LIMITE ȘI METODE
      A.   Analiza pentru verificarea unui excedent de toxicitate
      (A se vedea punctul II.1 din anexa de mai sus): limită prevăzută în farmacopeea națională.
      B.   Analiza pentru controlul apirogenității
      (A se vedea punctul II.2 din anexa de mai sus): limită prevăzută în farmacopeea națională.
      C.   Analiza efectelor hemolitice într-un sistem tamponat
      (A se vedea punctul II.3 din anexa de mai sus):
      
                  (a)
               
               
                  
                     Limita:
                  O soluție de 5,0 grame de clorură de sodiu pe litru nu trebuie să dea o valoare de hemoliză mai mare de 10 % și valoarea de hemoliză a unei soluții sărate de 4,0 grame de clorură de sodiu pe litru nu trebuie să difere cu mai mult de 10 % față de valoarea obținută cu soluția-martor corespunzătoare.
               
            
                  (b)
               
               
                  
                     Metoda:
                  Din soluția-mamă tampon pentru hemoliză se prepară trei soluții: 30 ml din soluția-mamă și 10 ml de apă (soluția a
                     0), 30 ml de soluție-mamă și 20 ml de apă (soluția b
                     0) și 15 ml de soluție-mamă și 85 ml de apă (soluția c
                     0).
                  În trei tuburi pentru centrifugare (1, 2 și 3) se adaugă 1,40 ml de extract. În tubul 1 se adaugă 0,10 ml de soluție a
                     0, în tubul 2, 0,10 ml de soluție b
                     0 și în tubul 3, 0,10 ml de soluție c
                     0, se obțin astfel soluții sărate corespunzătoare unei concentrații de 5,0 (tub 1), de 4,0 (tub 2) și de 1,0 grame de clorură de sodiu pe litru (tub 3), în ceea ce privește acțiunea osmotică a electrolitului. Se adaugă în fiecare tub 20 μl de sânge uman de tip EPARINE, proaspăt și bine omogenizat. Tuburile se așază într-o bain-marie la 30 °C (± 1 °C) timp de 40 de minute. Apoi se prepară trei soluții conținând 3,0 ml de a
                     0 și 12,0 ml de apă (soluția α
                     1), 4,0 ml de b
                     0 și 11,0 ml de apă (soluția β
                     1) și 4,75 ml de b
                     0 și 10,25 ml de apă (soluția γ
                     1).
                  În tubul 1, se pun 1,50 ml de a
                     1, în tubul 2, 1,50 ml de b
                     1 și în tubul 3, 1,50 ml de c
                     1. Tuburile sunt apoi centrifugate 5 minute între 2 000 și 2 500 turații pe minut într-o centrifugă swing-out. În același timp, se prepară soluții-martor în care extractul este înlocuit de apă pentru fiecare concentrație. Se măsoară extincția la 540 nm datorată stratului lichid. Ca referință, se utilizează soluția-mamă tampon pură. Valoarea hemolizei în % se calculează prin următoarea formulă:
                  unde:
                  E100 %= extincția pentru o soluție de o concentrație de 1,0 grame de clorură de sodiu pe litru
                  și
                  Eexp= extincția pentru soluții de o concentrație de 4,0 grame și, respectiv, 5,0 grame de clorură de sodiu pe litru.
               
            Soluția-mamă tampon pentru măsurarea ratei de hemoliză:
      90,0 g de clorură de sodiu, 13,7 g de fosfat disodic anhidră și 1,90 g de fosfat monosodic anhidră se dizolvă în apă distilată, al cărei volum se ajustează la 1 000,0 ml.
      D.   Test de rezistență in vivo a globulelor roșii
      (A se vedea punctul II.4 din anexa de mai sus):
      
                  (a)
               
               
                  
                     Limita:
                  Cel puțin 70 % din globulele roșii din sângele uman complet în prezența unei soluții anticoagulante ACD, după o conservare de 21 de zile la 4-6 °C, trebuie să fi rezistat 24 de ore după transfuzie. Aceasta se poate determina după una din metodele propuse la litera (b) de mai jos.
               
            
                  (b)
               
               
                  
                     Metode propuse:
                  
                              1.
                           
                           
                              Metoda ISO/TC/76/WGD/3, App. E.
                           
                        
                              2.
                           
                           
                              Ashby Technique – Ashby, W. The determination of the length of life of transfused blood corpuscules in man.
                              J. Exp. Med. 29: 267–82, 1919.
                              Young, L. E., Platzer, R. F., and Rafferty, J. A. Differential agglutination of human erythrocytes.
                              J. Lab. Clin. Med. 32: 489–501, 1947.
                           
                        
                              3.
                           
                           
                              The Gibson-Scheitlin method – Gibson, J. G. and Scheitlin, W. A. A method employing radio-active chromium for assaying the viability of human erythrocytes returned to the circulation after refrigerated storage.
                              J. Lab. Clin. Med. 46: 679–88, 1955.
                           
                        
                              4.
                           
                           
                              The Strumia method – Strumia, M. M., Taylor, L., Sample A. B., Colwell, L. S. and Dugan, A. Uses and limitations of survival studies of erythrocytes tagged with Cr 51.
                              Blood 10: 429–40, 1955.
                           
                        
                              5.
                           
                           
                              Cr51-I125 technique – Button, L. N., Gibson, J. G. and Walter, C. W. Simultaneous determination of the volume of red cells and plasma for survival studies of stored blood.
                              Transfusion 5: 143–48, 1965.
                           
                        
                              6.
                           
                           
                              Recommended method for radioisotope red cell survival studies Brit. J. Haemat. 21: 241, 1971.
                           
                        
            
         Încheiat la Strasburg, 19 aprilie 1982.
         
            Franz ARASEK
            
            
               Secretar General
            
         
         
            Copie autentificată conformă cu exemplarul original unic în limbile franceză și engleză, depus la Arhivele Consiliului Europei.
            Erik HARREMOES
            
            
               Director pe probleme juridice al Consiliului Europei