CELEX: 32013R0051
Language: hu
Date: 2013-01-16 00:00:00
Title: A Bizottság 51/2013/EU rendelete ( 2013. január 16. ) a 152/2009/EK rendeletnek a takarmányok hatósági ellenőrzése során az állati eredetű alkotóelemek meghatározására szolgáló analitikai módszerek tekintetében történő módosításáról  EGT-vonatkozású szöveg

23.1.2013   
            
            
               HU
            
            
               Az Európai Unió Hivatalos Lapja
            
            
               L 20/33
            
         
      A BIZOTTSÁG 51/2013/EU RENDELETE
   
   (2013. január 16.)
   a 152/2009/EK rendeletnek a takarmányok hatósági ellenőrzése során az állati eredetű alkotóelemek meghatározására szolgáló analitikai módszerek tekintetében történő módosításáról
   (EGT-vonatkozású szöveg)
   AZ EURÓPAI BIZOTTSÁG,
   tekintettel az Európai Unió működéséről szóló szerződésre,
   tekintettel a takarmány- és élelmiszerjog, valamint az állat-egészségügyi és az állatok kíméletére vonatkozó szabályok követelményeinek történő megfelelés ellenőrzésének biztosítása céljából végrehajtott hatósági ellenőrzésekről szóló, 2004. április 29-i 882/2004/EK európai parlamenti és tanácsi rendeletre (1) és különösen annak 11. cikke (4) bekezdésére,
   mivel:
   
               (1)
            
            
               az egyes fertőző szivacsos agyvelőbántalmak megelőzésére, az ellenük való védekezésre és a felszámolásukra vonatkozó szabályok megállapításáról szóló, 2001. május 22-i 999/2001/EK európai parlamenti és tanácsi rendelet (2) 7. cikkének (1) bekezdése tiltja az emlősökből származó fehérje használatát kérődzők takarmányozására. Ez a tilalom kiterjed a nem kérődző állatokra is, és ezen állatok takarmányozása tekintetében az állati eredetű termékekre korlátozódik, a rendelet IV. mellékletével összhangban.
            
         
               (2)
            
            
               A nem emberi fogyasztásra szánt állati melléktermékekre és a belőlük származó termékekre vonatkozó egészségügyi szabályok megállapításáról és az 1774/2002/EK rendelet hatályon kívül helyezéséről szóló, 2009. október 21-i 1069/2009/EK európai parlamenti és tanácsi rendelet (3) 11. cikkének (1) bekezdése értemében a prémes állatok kivételével tilos az adott fajhoz tartozó szárazföldi állatok takarmányozása az ugyanazon fajhoz tartozó állatok testéből vagy testrészeiből származó feldolgozott állati fehérjével, valamint a tenyésztett hal takarmányozása az ugyanazon fajhoz tartozó tenyésztett hal testéből vagy testrészeiből származó feldolgozott állati fehérjével.
            
         
               (3)
            
            
               A takarmányok hatósági ellenőrzése során alkalmazott mintavételi és vizsgálati módszerek megállapításáról szóló, 2009. január 27-i 152/2009/EK bizottsági rendelet (4) VI. melléklete ismerteti a takarmányok hatósági ellenőrzése során az állati eredetű alkotóelemek meghatározására szolgáló analitikai módszereket. A takarmányban az állati eredetű alkotóelemek meghatározására szolgáló egyetlen eddig validált módszer, a mikroszkópos módszer a takarmányban jelen lévő szárazföldi állatokból és halakból származó alkotóelemek megkülönböztetésére ugyan alkalmas, azonban arra nem, hogy megfelelő pontossággal megállapítsa a takarmányban az állati összetevők mennyiségét, ezért e célra nem alkalmazható.
            
         
               (4)
            
            
               Egy új, az állati eredetű összetevők kimutatását szolgáló, polimeráz láncreakción (PCR) alapuló módszer került validálásra a takarmányokban előforduló állati fehérjéket vizsgáló uniós referencialaboratórium (EURL-AP) által. A tagállamok nemzeti referencialaboratóriumai részvételével készített kivitelezési tanulmány megállapította, hogy az új módszer elegendően megbízható az Unió hivatalos ellenőrzési módszereként történő alkalmazáshoz. Az új módszer az állati fehérje jelenlétének a takarmányban való kimutatása mellett a fehérjék faji eredetének meghatározására is alkalmas. Az új módszer a mikroszkópos módszerrel kombinálva vagy adott esetben helyette alkalmazva rendkívül értékes lenne a 999/2001/EK és az 1069/2009/EK rendeletekben megállapított takarmányozási tilalom megfelelő végrehajtásának ellenőrzéséhez.
            
         
               (5)
            
            
               A 152/2009/EK rendelet VI. mellékletét ennek megfelelően módosítani kell.
            
         
               (6)
            
            
               Az e rendeletben előírt intézkedések összhangban vannak az Élelmiszerlánc- és Állategészségügyi Állandó Bizottság véleményével, és sem az Európai Parlament, sem a Tanács nem ellenezte őket,
            
         ELFOGADTA EZT A RENDELETET:
   1. cikk
   A 152/2009/EK rendelet VI. melléklete helyébe az e rendelet mellékletében található szöveg lép.
   2. cikk
   Ez a rendelet az Európai Unió Hivatalos Lapjában való kihirdetését követő huszadik napon lép hatályba.
   
      Ez a rendelet teljes egészében kötelező és közvetlenül alkalmazandó valamennyi tagállamban.
      Kelt Brüsszelben, 2013. január 16-án.
      
         
            a Bizottság részéről
         
         
            az elnök
         
         José Manuel BARROSO
         
      
   
   
      (1)  HL L 165., 2004.4.30., 1. o.
   
      (2)  HL L 147., 2001.5.31., 1. o.
   
      (3)  HL L 300., 2009.11.14., 1. o.
   
      (4)  HL L 54., 2009.2.26., 1. o.
   
      MELLÉKLET
      
         
            „VI. MELLÉKLET
            
               A TAKARMÁNYOK HATÓSÁGI ELLENŐRZÉSE SORÁN AZ ÁLLATI EREDETŰ ALKOTÓELEMEK MEGHATÁROZÁSÁRA SZOLGÁLÓ ANALITIKAI MÓDSZEREK
            
            1.   CÉL ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLET
            E melléklet rendelkezéseinek értelmében a takarmányban lévő állati eredetű alkotóelemeket fénymikroszkóppal vagy polimeráz láncreakcióval (PCR) kell meghatározni.
            A két módszer lehetővé teszi az állati fehérje jelenlétének kimutatását a takarmány-alapanyagokban és az összetett takarmányokban. Azonban ezekkel a módszerekkel az említett összetevők mennyiségét a takarmány-alapanyagokban és az összetett takarmányokban nem lehet meghatározni. A kimutatási határérték mindkét módszer esetén 0,1 m/m%.
            A PCR-módszerrel lehetséges a takarmány-alapanyagokban és az összetett takarmányokban jelen lévő állati fehérje rendszertani csoportjának meghatározása.
            Ezek a módszerek alkalmazandók a 999/2001/EK rendelet 7. cikkének (1) bekezdésében és IV. mellékletében, valamint az 1069/2009/EK rendelet 11. cikkének (1) bekezdésében megállapított tilalmak betartásának ellenőrzéséhez.
            A vizsgált takarmány típusától függően a takarmányokban előforduló állati fehérjéket vizsgáló uniós referencialaboratórium (EURL-AP) által meghatározott és a laboratórium honlapján (1) közzétett szabványműveleti eljárásoknak (SOP) megfelelően ezek a módszerek külön-külön vagy egymással kombinálva egy műveleti eljáráson belül is alkalmazhatók.
            2.   MÓDSZEREK
            2.1.   Fénymikroszkóp
            
            2.1.1.   A módszer alapelve
            
            Az elemzésre küldött takarmány-alapanyagokban és összetett takarmányokban jelen lévő állati eredetű alkotóelemek a típusos, mikroszkóppal felismerhető jellegzetességek alapján azonosíthatók (pl. izomrostok és egyéb húsrészek, porc, csontok, szaru, szőr, sörte, vér, tollak, tojáshéjak, halcsontok, pikkelyek).
            2.1.2.   Reagensek és eszközök
            
            2.1.2.1.   Reagensek
            2.1.2.1.1.   Koncentráló anyagok
            2.1.2.1.1.1.   Tetraklór-etilén (fajsúly: 1,62)
            2.1.2.1.2.   Színezékek
            2.1.2.1.2.1.   Alizarinvörös-oldat (fel kell oldani 2,5 ml 1 M-os sósavat 100 ml vízben, majd hozzá kell adni ehhez az oldathoz 200 mg alizarinvöröset)
            2.1.2.1.3.   Beágyazó közegek
            2.1.2.1.3.1.   Lúg (NaOH 2,5 % w/v vagy KOH 2,5 %w/v)
            2.1.2.1.3.2.   Glicerin (tömény, viszkozitás: 1 490 cP)
            2.1.2.1.3.3.   Norland ® Optical Adhesive 65 (viszkozitás: 1 200 cP) vagy ezzel egyenértékű tulajdonságokkal rendelkező, tartós tárgylemez-előkészítésre alkalmas gyanta
            2.1.2.1.4.   Színező tulajdonsággal rendelkező beágyazó közegek
            2.1.2.1.4.1.   Lugololdat (fel kell oldani 2 g kálium-jodidot 100 ml vízben, majd hozzáadni 1 g jódot sűrű rázogatás közben)
            2.1.2.1.4.2.   Cisztin reagens (2 g ólom-acetát, 10 g NaOH/100 ml víz)
            2.1.2.1.4.3.   Fehling reagens (felhasználás előtt az A és B törzsoldatból vett egyenlő egységekből (1/1) készül. A oldat: fel kell oldani 6,9 g réz(II)-szulfát-pentahidrátot 100 ml vízben. B oldat: fel kell oldani 34,6 g kálium-nátrium-tartarát-tetrahidrátot és 12 g NaOH-t 100 ml vízben)
            2.1.2.1.4.4.   Tetrametilbenzidin/Hidrogén-peroxid. (fel kell oldani 1 g 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidint (TMB) 100 ml jégecetben és 150 ml vízben. Felhasználás előtt össze kell keverni négy rész TMB-oldatot és egy rész 3 %-os hidrogén-peroxidot.
            2.1.2.1.5.   Öblítő reagensek
            2.1.2.1.5.1.   Etanol ≥ 96 % (technikai minőségű)
            2.1.2.1.5.2.   Aceton (technikai minőségű)
            2.1.2.1.6.   Fehérítő reagens
            2.1.2.1.6.1.   Kereskedelmi nátriumhipoklorit-oldat (9–14 % aktív klór)
            2.1.2.2.   Felszerelés
            2.1.2.2.1.   0,001 g pontosságú analitikai mérleg.
            2.1.2.2.2.   Örlőeszközök: daráló vagy mozsár
            2.1.2.2.3.   0,25 mm-es és 1 mm-es lyukátmérőjű négyzethálós szita
            2.1.2.2.4.   250 ml űrtartalmú kúpos üveg elválasztótölcsér, a tölcsér kúpos végén teflon vagy csiszolt üveg elzárócsappal. Az elzárócsap nyitási átmérője ≥ 4 mm. Alternatív megoldásként kúpos aljú főzőpohár is használható, amennyiben a laboratórium bizonyítja, hogy a kimutatási szintek megegyeznek a kúpos üveg elválasztótölcsér alkalmazásával elért kimutatási szintekkel.
            
               Elválasztótölcsér
            
            
               
            2.1.2.2.5.   Sztereomikroszkóp, legalább 6,5–40-szeresig terjedő nagyítású
            2.1.2.2.6.   Összetett mikroszkóp legalább 100–400-szorosig terjedő nagyítású, áteső fényű világos látótérrel. Kiegészítésként polarizált fény és differenciál-interferenciakontraszt is alkalmazható
            2.1.2.2.7.   Szabványos laboratóriumi üvegedények
            2.1.2.2.8.   Felszerelés tárgylemez előkészítéséhez: klasszikus mikroszkóp-tárgylemezek, vésett tárgylemezek, fedőlemezek (20x20 mm), csipeszek, finom spatula
            2.1.3.   Mintavételezés és minta-előkészítés
            
            2.1.3.1.   Mintavétel
            Az I. mellékletben megállapított rendelkezések szerint vett reprezentatív mintát kell használni.
            2.1.3.2.   Óvintézkedések
            A laboratóriumban a keresztszennyeződés elkerülése érdekében a többször használatos eszközöket használat előtt gondosan meg kell tisztítani. Az elválasztótölcsért tisztítás előtt részekre kell szedni. Az elválasztótölcsért és az üvegedényeket először kézzel el kell mosni, és ezt követően mosogatógépben tisztítani. A szitákat erősszálú műszálas kefével kell megtisztítani. Zsíros anyag (például halliszt) átszitálását követően acetonnal és sűrített levegővel javasolt a szitákon végső tisztítást végezni.
            2.1.3.3.   Zsírtól vagy olajtól eltérő minták előkészítése
            2.1.3.3.1.   Mintaszárítás: a 14 %-nál magasabb nedvességtartalmú mintákat kezelés előtt ki kell szárítani.
            2.1.3.3.2.   Minta előszitálása: a pelletált takarmányokat és magvakat ajánlatos 1 mm-es lyukátmérőjű szitán előszitálni, majd a két kapott frakciót külön mintaként előkészíteni és elemezni.
            2.1.3.3.3.   Részminta-vételezés és őrlés: A mintából legalább 50 g részmintát kell venni elemzés céljára, majd leőrölni.
            2.1.3.3.4.   Üledék kivonása és előkészítése: a 10 g tömegű (0,01 g pontossággal bemért) őrölt részmintát elválasztó tölcsérbe vagy kúpos aljú főzőpohárba kell helyezni, és legalább 50 ml tetraklór-etilént hozzáadni. Hallisztből vagy egyéb tiszta állati termékből, ásványi alkotóelemből vagy olyan előkeverékekből, amelyek 10 %-nál nagyobb mennyiségű üledéket képeznek, 3 g-nál nagyobb mennyiség nem kerülhet a tölcsérbe.A keveréket legalább 30 mp-ig erőteljesen kell rázni, majd óvatosan hozzáadni legalább 50 ml tetraklór-etilént a tölcsér belső falának leöblítésével, a rátapadt részecskék eltávolítása érdekében. A kapott keveréket legalább öt percig állni kell hagyni, mielőtt az elzárócsap megnyitásával az üledéket leválasztjuk.
            Kúpos aljú főzőpohár használatakor a keveréket legalább 15 mp-ig erőteljesen fel kell keverni, majd legalább 10 ml tiszta tetraklór-etilénnel óvatosan leöblíteni a pohár belső faláról az odatapadt részecskéket. A keveréket legalább 3 percig állni kell hagyni, majd további 15 mp-ig keverni és legalább 10 ml tiszta tetraklór-etilénnel óvatosan leöblíteni a pohár belső faláról az odatapadt részecskéket. Az így kapott keveréket legalább 5 percig állni kell hagyni, majd a folyadékfrakciót eltávolítani és óvatos dekantálással kiönteni úgy, hogy az összes üledék megmaradjon.
            Az üledéket ki kell szárítani, és ezt követően (0,001 g) pontossággal lemérni. Ha az üledék több mint 5 %-át 0,50 mm-nél nagyobb részecskék alkotják, 0,25 mm lyukátmérőjű szitán át kell szitálni és az így kapott két frakciót vizsgálni.
            2.1.3.3.5.   A flotátum kivonása és előkészítése: az üledék fentiek szerinti módszerrel történő kinyerése után két fázis marad vissza az elválasztó tölcsérben: a tetraklór-etilénből álló folyadék és a felülúszó anyagból álló szilárd halmazállapotú anyag. A szilárd fázist (a flotátumot) a tetraklór-etilénnek az elzárócsapon keresztüli kiengedésével kell kinyerni a tölcsérből. Az elválasztótölcsér megfordításával a flotátumot egy nagy Petri-csészébe kell önteni, majd füstelszívó süvegben levegős szárítással megszárítani. Ha a flotátum több mint 5 %-át 0,50 mm-nél nagyobb részecskék alkotják, 0,25 mm lyukátmérőjű szitán át kell szitálni és az így kapott két frakciót vizsgálni.
            2.1.3.3.6.   A nyersanyag előkészítése: az őrölt részmintából legalább 5 g-ot kell előkészíteni. Ha az anyag több mint 5 %-át 0,50 mm-nél nagyobb részecskék alkotják, 0,25 mm lyukátmérőjű szitán át kell szitálni és az így kapott két frakciót vizsgálni.
            2.1.3.4.   Zsírt vagy olajat tartalmazó minták előkészítése
            A következő módszer alkalmazható a zsírt vagy olajat tartalmazó minták előkészítéséhez:
            
                        —
                     
                     
                        ha a zsír szilárd, addig kell melegíteni sütőben, amíg folyékonnyá nem válik,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        át kell pipettázni 40 ml zsírt vagy olajat a minta aljáról egy centrifugacsőbe,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        centrifugáljuk tíz percig 4 000-es percenkénti fordulatszámon,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        ha a zsír a centrifugálás után szilárd, addig kell melegíteni sütőben, amíg folyékonnyá nem válik,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        ismételjük meg a centrifugálást öt percig 4 000 percenkénti fordulatszámon,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        a leülepedett szennyeződések felét egy kiskanállal vagy egy spatulával tegyük át egy mikroszkóp-tárgylemezre vizsgálat céljából, beágyazószerként a glicerin használata javasolt,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        a fennmaradó szennyeződéseket a 2.1.3.3. pontnak megfelelően az üledék előkészítésére kell használni.
                     
                  2.1.3.5.   Színezékek használata
            Az állati eredetű alkotóelemek helyes meghatározásának megkönnyítése érdekében, az EURL-AP által kiadott és a honlapján is elérhető útmutatókkal összhangban a laboratóriumi munkatárs használhat színezékeket a minta előkészítése során.
            Az üledék alizarinvörös-oldattal történő festésekor az alábbi eljárás alkalmazandó:
            
                        —
                     
                     
                        a szárított üledéket üvegkémcsőbe kell tölteni, és kétszer kb. 5 ml etanollal átöblíteni (minden alkalommal 30 mp-ig Vortex keverőt kell használni, az oldószert másfél percig hagyni leülepedni, majd leönteni),
                     
                  
                        —
                     
                     
                        az üledéket legalább 1 ml nátrium-hipoklorit oldat hozzáadásával fehéríteni kell. A folyamatnak 10 perc reakcióidőt kell biztosítani. A kémcsövet megtöltjük vízzel, az üledéket 2–3 percig hagyjuk leülepedni, és a vizet és a szuszpendált részecskéket óvatosan leöntjük,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        az üledéket még kétszer kb. 10 ml vízzel le kell öblíteni (30 mp-ig Vortex keverőt kell használni, hagyni leülepedni, és a vizet minden alkalommal leönteni),
                     
                  
                        —
                     
                     
                        hozzá kell adni 2–10 csepp alizarinvörös-oldatot, majd Vortex keverővel összekeverni. A reakció 30 mp-ig tarthat, és a színezett üledéket kétszer kb. 5 ml etanollal, majd egyszer acetonnal át kell öblíteni (minden alkalommal 30 mp-ig Vortex 30 keverőt kell használni, az oldószert kb. egy percig hagyni leülepedni, majd leönteni),
                     
                  
                        —
                     
                     
                        a színezett üledéket ki kell szárítani.
                     
                  2.1.4.   Mikroszkópos vizsgálat
            
            2.1.4.1.   Tárgylemez-előkészítés
            Az üledékből és a laboratóriumi munkatárs választásától függően a flotátumból vagy a nyersanyagból tárgylemezen preparátumot készítünk. Amennyiben szitát használtunk a minta előkészítése során, mindkét így kapott frakciót (finom és durva) preparálni kell. A frakcióból a tárgylemezre terített vizsgálati mennyiségeknek az egész frakcióra nézve reprezentatívaknak kell lenniük.
            Elegendő mennyiségű tárgylemezt kell előkészíteni annak érdekében, hogy a 2.1.4.2. pontban ismertetett vizsgálati eljárást teljes egészében végre lehessen hajtani.
            A tárgylemezeket az EURL-AP által meghatározott és a honlapján közzétett szabványműveleti eljárásokat követve a megfelelő beágyazószerrel kell beágyazni. A tárgylemezeket fedőlemezekkel le kell fedni.
            2.1.4.2.   Megfigyelési eljárás állati részecskék kimutatására takarmány-alapanyagokban és összetett takarmányokban
            A preparált tárgylemezt az összetett takarmányokra és a nem kizárólag hallisztből (1. ábra) vagy a kizárólag hallisztből álló (2. ábra) takarmány-alapanyagokra vonatkozóan előírt megfigyelési eljárással összhangban kell megvizsgálni.
            Az üledék és a laboratóriumi munkatárs döntésétől függően a flotátum vagy a nyersanyag mikroszkópos vizsgálatát összetett mikroszkóppal kell elvégezni. A durva frakciók megfigyelésekor az összetett mikroszkóp mellett sztereomikroszkóp is használható. Minden tárgylemezt többféle nagyítással kell teljes egészében megvizsgálni.
            A megfigyelési eljárás minden szakaszában szigorúan be kell tartani a tárgylemezek megfigyelésre előírt minimális számát, kivéve, ha a frakció teljes mérete nem teszi lehetővé a megadott szám teljesítését. Meghatározásonként legfeljebb 6 tárgylemezt kell megvizsgálni.
            A részecskék tulajdonságainak és eredetének meghatározását megkönnyítendő a laboratóriumi munkatárs alkalmazhat segédeszközöket, például döntéstámogató rendszereket, képkönyvtárakat és referenciamintákat.
            
               1   ábra
            
            
               Megfigyelési eljárás állati részecskék kimutatására összetett takarmányokban és nem hallisztből álló takarmány-alapanyagokban
            
            
               
            
               2   ábra
            
            
               Megfigyelési eljárás állati részecskék kimutatására hallisztben
            
            
               
            2.1.4.3.   Meghatározások száma
            Ha az 1. vagy 2. ábra szerinti megfigyelési eljárásnak megfelelően végzett első meghatározás nem mutatta ki egy adott (szárazföldi állatokból vagy halból származó) állati részecske jelenlétét, további meghatározásra nincs szükség, és az elemzés eredményét a 2.1.5.1. pont szerinti terminológiát alkalmazva jelenteni kell.
            Ha az 1. vagy 2. ábra szerinti megfigyelési eljárásnak megfelelően végzett első meghatározás egy adott (szárazföldi állatokból vagy halból származó) állati részecskéből 1–5-ig terjedő mennyiséget mutat ki, egy második meghatározást kell végezni egy újabb, 50 g-os részmintán. Ha a második meghatározás egy adott állati részecskéből 1–5-ig terjedő mennyiséget mutatott ki, az elemzés eredményét jelenteni kell a 2.1.5.2. pont szerinti terminológia alkalmazásával, ellenkező esetben még egy harmadik meghatározást is el kell végezni egy újabb, 50 g-os részmintán. Ugyanakkor, ha az első és a második meghatározás egy adott állati részecskéből 15-nél többet mutatott ki, nincs szükség további meghatározásra, és az elemzés eredményét közvetlenül jelenteni kell a 2.1.5.3. pont szerinti terminológia alapján. Ha a harmadik meghatározás egy adott állati részecskéből 15-nél többet mutatott ki, az elemzés eredményéről jelentést kell készíteni a 2.1.5.3. pontban szereplő terminológia szerint. Egyéb esetben az elemzés eredményét jelenteni kell a 2.1.5.2. pontban meghatározott terminológia alapján.
            Ha az 1. vagy 2. ábra szerinti megfigyelési eljárásnak megfelelően végzett első meghatározás egy adott (szárazföldi állatokból vagy halból származó) állati részecskéből 5-nél többet mutatott ki, az elemzés eredményéről jelentést kell készíteni a 2.1.5.3. pontban meghatározott terminológiát használva.
            2.1.5.   Az eredmények közlése
            
            A laboratórium az eredmények jelentésekor megadja a vizsgált anyagok típusát (üledék, flotátum, nyersanyag) és az elvégzett meghatározások számát.
            A laboratóriumi jelentésnek tartalmaznia kell legalább a szárazföldi állatokból és a halból származó alkotóelemek jelenlétére vonatkozó információt.
            A különböző eseteket a következő módon kell jelenteni:
            2.1.5.1.   A meghatározás nem mutatott ki adott állati részecskét:
            
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján, szárazföldi állatokból származó részecske nem volt kimutatható,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján, halból származó alkotóelem nem volt kimutatható,
                     
                  2.1.5.2.   A meghatározás egy adott állati részecskéből átlagosan 1–5-öt mutatott ki:
            
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján meghatározásonként átlagosan legfeljebb 5, szárazföldi állatokból származó részecske volt kimutatható. Az alábbi részecskék kerültek azonosításra: … [csont, porc, izom, szőr, szaru…] Az állati részecskéknek a mikroszkópos módszer kimutatási határértéke alatti jelenléte miatt a téves pozitív eredmény nem zárható ki.
                     
                  Illetve, adott esetben:
            
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján meghatározásonként átlagosan legfeljebb 5, halból származó részecske volt kimutatható. Az alábbi részecskék kerültek azonosításra: … [halcsont, halpikkely, porc, izom, hallókő (otolith), kopoltyú…] A halból származó részecskéknek a mikroszkópos módszer kimutatási határértéke alatti jelenléte miatt a téves pozitív eredmény nem zárható ki.
                     
                  Előszitált minta esetén a laboratóriumi jelentés tartalmazza, hogy mely frakcióban (átszitált frakció, pelletált frakció vagy magvak) mutattak ki ezidáig állati részecskéket, mivel a kizárólag az átszitált frakcióban kimutatott állati részecskék jelenléte környezeti szennyezésre utalhat.
            2.1.5.3.   A meghatározás egy adott állati részecskéből átlagosan 5-nél többet mutatott ki
            
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján meghatározásonként nem volt kimutatható 5-nél több szárazföldi állatokból származó részecske. Az alábbi részecskéket azonosították: … [csont, porc, izom, szőr, szaru…]
                     
                  Illetve, adott esetben:
            
                        —
                     
                     
                        a beküldött mintában fénymikroszkópos vizsgálat alapján meghatározásonként 5-nél több, halból származó részecskét mutattak ki. Az alábbi részecskéket azonosították: … [halcsont, halpikkely, porc, izom, hallókő (otolith), kopoltyú…]
                     
                  A minta előszitálása esetén a laboratóriumi jelentés tartalmazza, hogy melyik frakcióban (átszitált frakció, pelletált frakció vagy magvak) mutattak ki ezidáig állati részecskéket, mivel a kizárólag az átszitált frakcióban kimutatott állati részecskék jelenléte környezeti szennyezésre utalhat.
            2.2.   PCR
            
            2.2.1.   A módszer alapelve
            
            A takarmány-alapanyagokban vagy az összetett takarmányokban előforduló állati eredetű dezoxiribonukleinsav- (DNS-) fragmentumok jelenlétét a PCR-módszerrel végzett genetikai amplifikációs technika révén mutatják ki, meghatározott fajspecifikus DNS-szakaszok kiválasztásával
            A PCR-módszer első lépése a DNS-extrakció. Az így kapott DNS-kivonat egy amplifikációs eljárással alkalmassá válik a vizsgálandó állatfaj jelenlétének kimutatására.
            2.2.2.   Reagensek és eszközök
            
            2.2.2.1.   Reagensek
            2.2.2.1.1.   Reagensek a DNS-extrakció szakaszában
            Kizárólag az EURL-AP által jóváhagyott és a honlapján közzétett reagensek használhatók.
            2.2.2.1.2.   Reagensek a génamplifikáció szakaszában
            2.2.2.1.2.1.   Primerek és próbák
            Kizárólag az EURL-AP által validált oligonukleotid szekvenciákat tartalmazó primerek és próbák használhatók (2).
            2.2.2.1.2.2.   Master Mix
            Kizárólag olyan Master Mix oldatok használhatóak, amelyek nem tartalmaznak állati eredetű DNS komponenseket, melyek hibás mérési eredményhez vezetnek (3).
            2.2.2.1.2.3.   Dekontaminációs reagens
            2.2.2.1.2.3.1.   Sósavoldat (0,1 N)
            2.2.2.1.2.3.2.   Nátriumhipoklorit-oldat, 0,15 % aktív klór
            2.2.2.1.2.3.3.   Nem korrozív reagensek nagy értékű eszközök, például analitikai mérlegek fertőtlenítéséhez (pl. az MP Biomedicals által gyártott DNA EraseTM)
            2.2.2.2.   Felszerelés
            2.2.2.2.1.   0,001 g pontosságú analitikai mérleg
            2.2.2.2.2.   Örlőeszközök
            2.2.2.2.3.   Valós idejű PCR-t lehetővé tevő termocykler
            2.2.2.2.4.   Mikrocentrifuga mikrofugacsövekhez
            2.2.2.2.5.   1 μl–1 000 μl pipettázására alkalmas mikropipetta-készlet
            2.2.2.2.6.   Standard molekuláris biológiai műanyag edények, mikrofugacsövek, szűrős műanyag hegy mikropipettához, lemezek a termocyklerhez
            2.2.2.2.7.   Fagyasztószekrény a minták és reagensek tárolására
            2.2.3.   Mintavételezés és minta-előkészítés
            
            2.2.3.1.   Mintavétel
            Az azonosításra az I. mellékletben megállapított rendelkezések szerint vett reprezentatív mintát kell használni.
            2.2.3.2.   Minta-előkészítés
            A DNS-extrakcióra szolgáló laboratóriumi minták készítése során figyelembe kell venni a II. mellékletben meghatározott követelményeket. A mintából elemzés céljára legalább 50 g részmintát kell venni, majd megőrölni.
            Az ISO 24276 szabványban meghatározottak értelmében a minta-előkészítést más helyiségben kell elvégezni, mint a DNS-extrakciót és a génamplifikációt.
            Két, egyenként legalább 100 mg vizsgálati mennyiséget kell előkészíteni.
            2.2.4.   DNS-extrakció
            
            A DNS-extrakciót minden egyes elkészített vizsgálati mintán az EURL-AP által meghatározott és a honlapján közzétett szabványműveleti eljárásokat (SOP) alkalmazva kell elvégezni.
            Az ISO 24276 szabvány értelmében minden extrakciós sorozathoz két extrakciós kontrollt kell készíteni:
            
                        —
                     
                     
                        egy extrakciós vakpróbát,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        egy pozitív DNS-extrakciós kontrollt.
                     
                  2.2.5.   Genetikai amplifikáció
            
            A genetikai amplifikációt a meghatározni kívánt egyes fajokra vonatkozóan validált módszerek alkalmazásával kell végezni. Ezeket a módszereketaz EURL-AP által meghatározott és a honlapján közzétett szabványműveleti eljárások állapítják meg. Az inhibíció felmérése érdekében a DNS-kivonatokat legalább két különböző hígításban szükséges vizsgálni.
            Az ISO 24276 szabvány értelmében minden célállatfajra vonatkozóan két amplifikációs kontrollt kell előkészíteni:
            
                        —
                     
                     
                        egy pozitív DNS-kontrollt minden lemezhez vagy PCR vizsgálati sorozathoz,
                     
                  
                        —
                     
                     
                        egy nontemplát kontrollt (más néven templátmentes kontrollt) minden lemezhez vagy PCR vizsgálati sorozathoz
                     
                  2.2.6.   Az eredmények értékelése és közlése
            
            – A laboratóriumnak az eredmények közlésekor meg kell jelölnie legalább a felhasznált vizsgálati minta súlyát, az alkalmazott kivonási technikát, az elvégzett meghatározások számát és a módszer kimutatási határértékét.
            Ha negatív templátmentes kontroll mellett a pozitív DNS-extrakciós kontroll és a pozitív DNS-kontroll nem ad pozitív eredményt a vizsgált célra vonatkozóan, az eredményeket nem kell értékelni és közölni.
            Ha a két párhuzamos vizsgálat eredménye nem egyezik, legalább a génamplifikációs lépést meg kell ismételni. Amennyiben a laboratórium azt feltételezi, hogy az ellentmondások a DNS-kivonatokból adódnak, az eredmények értékelését megelőzően újabb DNS-extrakciót, majd ezt követően génamplifikációt kell végezni.
            Az EURL-AP által meghatározott és a honlapján közzétett szabványműveleti eljárások (SOP) értelmében az eredmények végső közlésének két páthuzamos mérés együttes értékelésén kell alapulnia.
            2.2.6.1.   Negatív eredmény
            A negatív eredményt a következők szerint kell közölni:
            A vizsgálatra beküldött mintában nem volt kimutatható X-ből származó DNS (X alatt a vizsgálat által megcélzott állatfaj vagy fajcsoport értendő).
            2.2.6.2.   Pozitív eredmény
            A pozitív eredményt a következők szerint kell közölni:
            A vizsgálatra beküldött mintában X-ből származó DNS volt kimutatható (X alatt a vizsgálat által megcélzott állatfaj vagy fajcsoport értendő).”
         
      
      
         (1)  http://eurl.craw.eu/
      
         (2)  Az EURL-AP honlapján megtalálható a vizsgálat által megcélzott állatfajokhoz használandó primerek és próbák jegyzéke.
      
         (3)  A célnak megfelelő Master Mix oldatok megtalálhatók az EURL-AP honlapján.