CELEX: 32001D0183
Language: mt
Date: 2001-02-22 00:00:00
Title: Id-Deċiżjoni tal-Kummissjoni tat-22 ta’ Frar 2001 li tistabbilixxi l-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konfermazzjoni ta’ xi mard tal-ħut u li tħassar id-Deċiżjoni 92/532/KEE (notifikata taħt dokument numru C(2001) 426)Test b’ rilevanza għaż-ŻEE

Avviż Legali Importanti

|

32001D0183

Id-Deċiżjoni tal-Kummissjoni tat-22 ta’ Frar 2001 li tistabbilixxi l-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konfermazzjoni ta’ xi mard tal-ħut u li tħassar id-Deċiżjoni 92/532/KEE (notifikata taħt dokument numru C(2001) 426)Test b’ rilevanza għaż-ŻEE  

Official Journal L 067 , 09/03/2001 P. 0065 - 0076 CS.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 ET.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 HU.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 LT.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 LV.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 MT.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 PL.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 SK.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420 SL.ES Chapter 3 Volume 31 P. 409  - 420

		Id-Deċiżjoni tal-Kummissjonitat-22 ta’ Frar 2001li tistabbilixxi l-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konfermazzjoni ta’ xi mard tal-ħut u li tħassar id-Deċiżjoni 92/532/KEE(notifikata taħt dokument numru C(2001) 426)(Test b’ rilevanza għaż-ŻEE)(2001/183/KE)IL-KUMMISSJONI TAL-KOMUNITAJIET EWROPEJ,Filwaqt li kunsidrat it-Trattat li jistabbilixxi il-Komunità Ewropea,Filwaqt li kunsidrat id-Direttiva tal-Kunsill 91/67/KEE tat-28 ta’ Jannar 1991 dwar il-kundizzjonijiet dwar saħħa ta’ l-annimali li jirregolaw it-tqegħid fuq is-suq ta’ annimali u prodotti akkwakulturi [1], kif l-aħħar emendata bid-Direttiva 98/45/KE [2], u partikolarment l-Artikolu 15 tagħha,Billi:(1) Il-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konferma ta’ xi mard tal-ħut ġew stabbiliti fid-Deċiżjoni tal-Kummissjoni 92/532/KEE [3], kif emendata bid-Deċiżjoni tal-Kummissjoni 96/240/KE [4].(2) Minn żmien l-adozzjoni tad-Deċiżjoni 92/532/KEE, saru żviluppi ġodda prattiċi u xjentifiċi, u ġiet emendata d-Direttiva 91/67/KEE. Dan jeħtieġ li l-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi jiġu aġġornati.(3) Tali aġġornar tirrelata għall-eżaminazzjoni u l-identifikazzjoni ta’ viruses li jikkawżaw settiċemja virali emorraġika (SVE) u nekrożi ematopejċi infettużi (NEI) u tibdiliet skond l-aħħar emendi tad-Direttiva 91/67/KEE.(4) Il-laboratorju Komunitarji referenti għall-mard tal-ħut stabbilit bid-Direttiva tal-Kunsill 93/53/KEE [5], ġie kkonsultat.(5) Il-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konferma ta’ xi mard tal-ħut introdotti bid-Deċiżjoni 92/532/KEE għandhom jitħassru għall-iskopijiet tal-kjarezza(6) Il-miżuri provduti f’ din id-Deċiżjoni huma skond l-opinjoni tal-Kumitat Veterinarju Permanenti,ADOTTAT DIN ID-DEĊIŻJONI:Artikolu 1Il-pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konferma ta’ settiċemja virali emorraġika (SVE) u nekrożi ematopejċi infettużi (NEI) huma stabbiliti fl-Anness.Artikolu 2Din id-Deċiżjoni tħassar id-Deċiżjoni 92/532/KEE.Artikolu 3Din id-Deċiżjoni hija indirizzata lill-Istati Membri.Magħmula f’ Brussel, fit-22 ta’ Frar 2001.Għall-KummissjoniDavid ByrneMembru tal-Kummissjoni[1] ĠU L 46, tad-19.2.1991, p. 1.[2] ĠU L 189, tat-3.7.1998, p. 12.[3] ĠU L 337, tal-21.11.1992, p. 18.[4] ĠU L 79, tad-29.3.1996, p. 19.[5] ĠU L 175, tad-19.7.1993, p. 23.--------------------------------------------------L-ANNESSIL-PJANIJIET DWAR KAMPJUNAR U L-METODI DJANJOSTIĊI GĦALL-ISKOPERTA U L-KONFERMA TA’ SETTIĊEMJA VIRALI EMORRAĠIKA (SVE) U NEKROŻI EMATOPEJĊI INFETTUŻI (NEI)L-INTRODUZZJONIDan l-Anness(a) jipprovdi għal gwidi u ħtiġiet minimi dwar pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għall-iskoperta u l-konferma tal-preżenza ta’ settiċemja virali emorraġika (SVE) u nekrożi ematopejċi infettużi (NEI);(b) jintegra d-dispożizzjonijiet ta’ l-Annessi B u C tad-Direttiva 91/67/KEE għall-approvazzjoni ta’ u l-mantenuzzjoni ta’ l-istat ta’ żoni u rziezet f’ żoni mhux approvati;(ċ) iwaqqaf dispożizzjonijiet li jimmiraw lejn djanjosi tajba ta’ SVE u NEI u lejn l-għarfien uffiċjali ta’ l-istat ta’ żoni u ta’ rziezet fiż-żoni mhux approvati skond l-Artikoli 5 u 6 tad-Direttiva 91/67/KEE;(d) huwa dirett lejn kemm l-awtoritajiet responsabbli għall-kontroll ta’ SVE u NEI u l-ħaddiema fil-laboratorju li jwettqu t-testijiet rigward lejn il-mard. Għalhekk, jitqiegħed l-enfasi fuq il-proċeduri tal-kampjunar, il-prinċipji u l-applikazzjonijiet ta’ testijiet tal-laboratorji u l-istima tar-riżultati tagħhom, kif ukoll dwar tekniċi dettaljati tal-laboratorju. Iżda fejn xieraq il-laboratjorji jistgħu japplikaw modifiki għat-testijiet deskritti f’ dan l-Anness jew jużaw testijiet differenti, sa fejn tista’ tintwera l-istess sensitivita’ u speċifiċita’.L-I Parti tinkludi pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għas-sorveljanza ta’ SVE u NEI sabiex jiġi akkwistat u mantnut stat ta’ żona jew razzett f’ żona mhux approvata.It-II Parti tiddeskrivi l-proċeduri djanjostiċi għall-konferma ta’ SVE u NEI fil-każ ta’ suspett.It-III Parti twaqqaf il-kriterji u l-gwidi għal program uffiċjali għall-spezzjonijiet sanitarji, dokumentazzjoni ta’ liberta’ minn SVE u/jew NEI storika.Ir-IV Parti tagħti rakkmandazzjonijiet dwar il-proċeduri għat-titrazzjoni tal-virus ta’ SVE u NEI biex tiġi verifikata s-suxxettibilita’ tal-kulturi taċ-ċelloli għall-infezzjoni.Akronimi u taqsiriet huma elenkati fil-V Parti.I PARTI Il-Pjanijiet dwar kampjunar u l-metodi djanjostiċi għas-sorveljanza ta’ SVE u NEI sabiex jiġi akkwistat u mantnut l-istat approvat ta’ żona jew razzett f’ żona mhux approvataI. L-Spezzjonijiet u l-kampjunar1. Dispożizzjonijiet ġenerali dwar spezzjonijiet sanitarji kliniċi, ġbir u għażla ta’ kampjuni għas-sorveljanza ta’ żoni jew irziezet f’ żoni mhux approvati sabiex jiġi akkwistat u mantnut l-istat approvat għal SVE u NEI.L-spezzjonijiet sanitarji kliniċi u l-kampjunar taċ-ċelloli tal-ħut u/jew fluwidu ovarjan li għandhom jitwettqu f’ żoni jew f’ irziezet li huma f’ żoni mhux approvati sabiex jiġi akkwistat jew mantnut l-istat approvat għal SVE u/jew NEi skond l-Annessi B u C tad-Direttiva 91/67/KEE huma mqassra f’ Tabelli 1A, 1B u 1C. Aktar dettalji jinsabu fil-Partijiet 1.1.2 sa 1.1.4. Tabelli 1A u 1B m’ għandhomx jgħoddu għal irziezet ġodda u rziezet li jibdew l-attivitajiet tagħhom mill-ġdid bil-ħut, bajd jew gamete minn żona approvata jew razzett approvat f’ żona mhux approvata, sakemm jikkonformaw mar-ħtiġiet stabbiliti fid-Direttiva 91/67/KEE, l-Anness C, Parti I.A.6(a) jew I.A.6(b) jew II.A.3(a) jew II.A.3 (b).L-spezzjonijiet sanitarji kliniċi għandhom jitwettqu matul it-terminu minn Ottubru sa Ġunju jew kull meta t-temperatura ta’ l-ilma huwa inqas minn 14 °C. Meta l-irziezet li għandhom jiġu ispezzjonati darbtejn fis-sena, l-intervalli bejn l-spezzjonijet għandhom ikunu għall-inqas ta’ erba’ xhur. L-unitajiet ta’ produzzjoni kollha (vaski, tankijiet, gaġġeġ, eċċ) għandhom jiġu ispezzjonati għall-preżenza ta’ ħut mejtin, jew li ma jġibux ruħhom b’ mod mhux normali. Għandha tingħata attenzjoni partikolari għal post għall-ħruġ ta’ l-ilma fejn il-ħut ġeneralment jakkumulaw mal-kurrent ta’ l-ilma.Il-ħut li għandhom jiġu kkampjunatu għandhom jingħażlu kif ġej.- Jekk mhux preżenti t-troti, ħut biss ta’ din l-ispeċie għandhom jingħażlu għall-kampjunar. Jekk mhux preżenti t-troti, l-kampjun għandu jittieħed minn ħut tal-ispeċie kollha preżenti kulmeta l-ispeċie huma suxxettibbli għal SVE u/jew NEI (kif elenkati fl-Anness A tad-Direttiva 91/67/KEE). L-ispeċie għandhom rappreżentati proporzjonalment fil-kampjun.Jekk aktar minn għajn wieħed jiġi utiliżżat għall-produzzjoni tal-ħut, ħut li jirrappreżenta l-għejun kollha ta’ l-ilma għandhom jiġu inkluż għall-kampjunar.- Jekk huma preżenti ħut dgħajfa, li ma jġibux ruħhom b’mod normali jew mejtin friski (mhux dekomponuti), għandhom jingħażlu primarjament dawn il-ħut.- Jekk mhux preżenti dawn il-ħut, il-ħut magħżul għandu jinkludi ħut li jidher normali u b’ saħħtu miġbur b’ tali mod li kull parti tar-razzett kif ukoll il-klassijiet tas-snin kollha huma rappreżentati b’ mod proporzjonat f’ dan il-kampjun.2. Dispożizzjonijiet speċifiċi, inkluż il-ġbir tal-kampjuni, għas-sorveljanza ta’ żoni jew irziezet f’ żoni mhux approvati sabiex jiġi akkwistat jew mantnut stat approvat għall-SVE u/jew NEI1. Żona jew razzett f’ żona mhux approvata li titqiegħed taħt is-sorveljanza tas-servizzi uffiċjali tista’ takkwista stat approvat għall-SVE u/jew NEI soġġett jew għal:(a) Mudell "A" - programm ta’ sorveljanza ta’ sentejnWara għall-inqas sentejn ta’ nuqqas ta’ sinjali kliniċi jew oħrajn ta’ SVE u/jew NEI, l-irziezet kollha fiż-żona jew kwalunkwe razzett f’ żona mhux approvata li għandhom jiġu approvati għandhom jiġu ispezzjonati sanitarjament darbtejn fis-sena għal sentejn. Matul dawn is-sentejn ta’ kontroll, li jippreċedu l-akkwistar ta’ stat approvat, in-nuqqas ta’ sinjali kliniċi jew oħrajn ta’ SVE jew NEI għandhom ikunu tkomplew u l-kampjuni għandhom jinġabru għall-eżaminazzjoni skond it-Tabella IA. Oltre, il-kampjuni għandhom jingħażlu, jiġu preparati u eżaminati kif deskritt fil-Partijiet I.I sa I.IV u l-eżaminazzjonijiet laboratorji għandhom ikunu pproduċew riżultati negativi għal SVE u/jew NEI; jew(b) Mudell "B" - program ta’ sorveljanza ta’ sentejn b’ daqs ta’ kampjun imnaqqasWara program uffiċjali ta’ spezzjonijiet sanitarji li jiddokumenta l-liberta’ storika minn SVE u/jew NEI għall-inqas għal erba’ snin, l-irziezet kollha fiż-żona jew kwalunkwe razzett f’ żona mhux approvata li għandhom jiġu approvati għandhom jiġu ispezzjonati sanitarjament darbtejn fis-sena għal sentejn. Matul dawn is-sentenj ta’ kontroll, li jippreċedu l-akkwistar ta’ stat approvat, in-nuqqas ta’ sinjali kliniċi jew oħrajn ta’ SVE jew NEI għandhom ikunu tkomplew u l-kampjuni għandhom jinġabru għall-eżaminazzjoni skond it-Tabella 1B. Oltre, il-kampjuni għandhom jingħażlu, jiġu preparati u eżaminati kif deskritt fil-Partijiet I.I sa I.IV u l-eżaminazzjonijiet laboratorji għandhom ikunu pproduċew riżultati negativi għal SVE u/jew NEI. Sabiex programm ta’ spezzjonijiet sanitarji jingħaraf mis-servizzi uffiċjali għad-dokumentazzjoni dwar libera’ rigward SVE u/jew NEI, għandu jilħaq il-kriterji u l-gwidi stabbiliti fit-III Parti.2. Dispożizzjonijiet speċjali għall-approvazzjoni ta’ l-irziezet ġodda u rziezet li jibdew l-attivitajiet tagħhom mill-ġdid bil-ħut, bajd jew gamete minn żona approvata jew razzett approvat f’ żona mhix approvataIrziezet ġodda u rziezet li jibdew l-attivitajiet tagħhom mill-ġdid bil-ħut, bajd jew gamete minn żona approvata jew razzett approvat f’ żona mhux approvata jistgħu jakkwistaw stat skond ir-ħtiġiet stabbiliti fid-Direttiva 91/67/EEC, l-Anness C, I.A.6a/b or II.A.3.a/b. Għalhekk id-dispożizzjonijiet dwar kampjunar fil-Mudelli A u B fuq (Partijiet 1.1.2.1.a u 1.1.21b) m’ għandhomx jgħoddu għal tali rziezet.3. Programm ta’ sorveljanza għall-mantenuzzjoni ta’ stat approvat għal SVE u/jew NEI Sabiex jinżamm l-istat ta’ żona jew razzett f’ żona mhux approvata għall-SVEu/jew NEI, għandhom isiru spezzjonijiet u kampjunar għall-eżaminazzjoni skond it-Tabella 1C. Il-kampjuni għandhom jintgħażlu, jiġu ppreparati u eżaminati kif deskritt fil-Partijiet I.I sa I.IV u l-eżaminazzjonijiet laboratorji għandhom ikunu negative dwar l-aġenti ta’ SVE u/jew NEI.3. Preparament u bgħit tal-kampjuni mill-ħutQabel il-bgħit jew trasferiment lil-laboratorju il-biċċiet ta’ organi li ser jiġu eżaminati għandhom jitneħħew mill-ħut b’għodda ta’ dissezzjoni sterili u jiġu trasferiti għal tubi tal-plastik sterili li fihom meżż ta’ transport, i.e., meżż ta’ kultura taċ-ċelloli b’ 10 % serum tal-għoġla u antibjotiċi. Il-kombinazzjoni ta’ 200 fil-peniċillina, 200mg strettomiċina u 200 mg kanamiċina għal kull millilitru (m1) jista’ jiġi rakkmandat, iżda jistgħu jintużaw ukoll antibjotiċi oħrajn ta’ effikaċja pprovata. Il-materjal taċ-ċelloli li għandu jiġi eżaminat huwa l-milsa, l-kliewi ta’ wara, u oltre, jew il-qalb jew l-enċefalon. F’xi każijiet, għandu jiġi eżaminat il-fluwidu ovarjan (Tabelli IA sa C)Il-fluwidu ovarjan jew il-biċċiet ta’ organi minn massimu ta’ 10 ħutiet (Tabelli 1A sa C) jista’ jinġabar f’ tubu wieħed sterili li fih għall-inqas 4ml meżż ta’ transport u jirrappreżenta kampjun wieħed tal-grupp. Iċ-ċellola f’ kull kampjun għandha tiżen minimu ta’ 0,5 gramma (g).It-tubi għandhom jitqiegħdu f’ kontenituri insulati (bħal kaxxi tal-polistirena bil-ħitan ħoxnin) flimkien ma’ biżżejjed silġ jew blokkijiet tal-friża biex jiġi aċċertat it-tkessiħ tal-kampjun matul it-trasportazzjoni lejn il-laboratjoru. L-iffriżar għandu jiġi evitat. It-temperatura ta’ kampjun matul it-tranżitu m’ għandha qatt teċċedi 10 °C u s-silġ għad irid ikun preżenti fil-kaxxa tat-trasport ma’ l-irċevuta jew waħda jew aktar mill-blokkijiet għad trid tkun parzjalment jew totalment iffriżata.L-eżaminazzjoni viroloġika għandha tinbeda mill-aktar fis possibbli u mhux aktar tard minn 48 siegħa wara l-kollezzjoni tal-kampjuni. F’ każijiet eċċezzjonali [1] l-eżaminazzjoni viroloġika tista’ tinbeda mhux aktar tard minn 72 siegħa wara l-ġbir tal-materjal, sakemm il-materjal li għandu jiġi eżaminat huwa mħares mill-mezz tat-trasport u il-ħtiġiet tat-temperatura matul it-trasportazzjoni jistgħu jintlaħqu (Parti 1.1.3, paragrafu 3).Jista’ jintbagħat ħut sħiħ lil-laboratorju jekk il-ħtiġiet tat-temperatura matul it-trasportazzjoni jistgħu jintlaħqu. Ħut sħiħ jista’ jitgeżwer f’ karta b’ kapaċita’ assorbenti u fl-aħħar jintbagħat f’ basket tal-plastik, imkessaħ kif imsemmi. Il-ħut ħaj jista’ jintbagħat ukoll.L-imballaġġ u t-tabellar kollu għandu jsir skond ir-regolamenti preżenti tat-trasport nazzjonali u internazzjonali kif xieraq.4. Ġbir ta’ materjal djanjostiku supplementariSkond il-ftehim mal-laboratorju djanjostiku involut, jistgħu jinġabru ċelloli oħrajn tal-ħut ukoll u jiġu preparati għal eżaminazzjonijiet supplementari.II. 11. Il-Preparament ta’ kampjuni għal eżaminazzjoni viroloġika1. L-Iffriżar f’ każijiet eċċezzjonaliFejn iqumu diffikultajiet prattiċi (eż., kundizzjonijiet ta’ temp ħażin, jiem li ma jinħadmux, problemi bil-laboratorju, eċċ.) li jrendu impossibbli l-inokulazzjoni taċ-ċelloli f’ 48 siegħa wara l-ġbir tal-kampjuni taċ-ċelloli huwa aċċettabbli li l-eżempji taċ-ċelloli jiġu ffriżati f’ meżż ta’ kultura taċ-ċelloli f’ temperatura ta’ - 20 °C jew inqas u li ssir eżaminazzjoni viroloġika f’ 14-il jum. Iċ-ċelloli, pero’, għandhom jiġu friżati u mdewba biss darba qabel l-eżaminazzjoni. Għandhom jinżammu reġistri bid-dettalji dwar ir-raġuni għal kull iffriżar ta’ kampjuni taċ-ċelloli (bħal maltemp, il-linji taċ-ċelloli mietu, eċċ)2. L-Omoġenizzazzjoni ta’ l-organiFil-laboratorju iċ-ċelloli fit-tubi għandhom jiġu omoġenizzati kompletament (jew b’ stomacher, blender jew mortar u pestle b’ ramel sterili) u wara jiġu sospiżi fil-meżż tat-trasport oriġinali.Jekk kampjun ikkonsista f’ħuta sħiħa ta’ inqas minn 4 cm, dawn għandhom jiġu kkapuljati b’ imqass sterili jew scalpel wara t-tneħħija tal-ġisem wara l-fetħa taż-żaqq. Jekk kampjun ikkonsista f’ħuta sħiħa ta’ bejn 4cm u 6cm, il-vixxri inklużi l-kliewi għandhom jinġabru. Jekk kampjun ikkonsista f’ħuta sħiħa ta’ aktar minn 6cm, għandhom jinġabru eżempji ta’ ċelloli kif deskritt fil-Parti 1.1.3. L-eżempji taċ-ċelloli għandom jiġu kapuljati b’ imqass sterili jew scalpel u jiġu omoġenizzati kif deskritt fuq u jiġu sospiżi fil-meżż tat-trasport.Proporzjon finali bejn materjal taċ-ċelloli u trasport għandu jiġi aġġustat fil-laboratorju għal 1:10.3. Iċ-Ċentrifugazzjoni ta’ omoġenatL-omoġenat huwa ċentrifugat f’ ċentrifuga mkessħa ta’ 2 °C sa 5 °C f’ 2000 sa 4000 x g għal 15-il minuta u jinġabar is-supernatant u jiġi ttratat jew għal erba’ sigħat f’ 15 °C jew mal-lejl f’4 °C bl-antibjotiċi, eż., gentamiċina 1 mg/ml jista’ jkun utli f’ dan l-istadju.Jekk il-bgħit tal-kampjun ikun sar f’ meżż ta’ trasport (i.e. b’ esponiment għall-antibjotiċi) it-trattament tas-supernatant bl-antibjotiċi jista’ jitħalla barra.It-trattament bl-antibjotiċi jimmira li jikkontrolla l-kontaminazzjoni batterjali fil-kampjuni u jrendi l-filtrazzjoni mill-filtri għamla ta’ membrane mhux neċessarji.Jekk is-supernatant miġbur jinħażen f’ temperature ta’ -80 °C f’ 48 siegħa wara l-kampjunar jista’ jerġa’ jintuża darba biss għal eżaminazzjoni viroloġika.(’) F’ każijiet eċċezzjonali, eż fejn il-ħut jinġabar f’ żoni remoti ħafna bla ebda possibilita’ ta’ posta kuljum.Fejn ikun hemm diffikultajiet prattiċi (eż, ma jaħdimx l-inkubatur, problemi bil-kulturi taċ-ċelloli eċċ) li jrendu impossibbli l-inokulazzjoni taċ-ċelloli f’ 48 siegħa wara l-ġbir tal-kampjuni taċ-ċelloli,huwa aċċettabbli li l-eżempji taċ-ċelloli jiġu ffriżati f’ meżż ta’ kultura taċ-ċelloli f’ temperatura ta’ - 80 °C jewinqas li ssir eżaminazzjoni viroloġika f’ 14-il jum/Qabel l-inokulazzjoni taċ-ċelloli is-supernatant jitħallat ma’ partijiet indaqs ta’ grupp imħallat b’ mod xieraq ta’ antisera mas-serotipi indieni tal-virus NPI u jiġi inkuvbat b’ dan għal minimu ta’ siegħa f’ temperature ta’15 °C jew massimu ta’ 18-il siegħa f’ temperature ta’ 4 °C. It-titru tal-antiserum għandu jkun għall-inqas 1/2000 f’ test ta’ newtralizzazzjoni tal-plakka ta’ 50 %.It-trattament ta’ l-inokuli kollha bl-antiserum għall-virus NPI (virus li f’xi partijiet ta’ l-Ewropa jokkorri fil-50 % tal-kampjunu tal-ħut) jimmira li jipprevjeni ECP minħabba l-virus NPI milli jiżviluppa fil-kulturi taċ-ċelel inokulati kollha. Dan inaqqas id-dewmien ta’ l-eżaminazzjonijiet viroloġiċi kif ukoll in-numru ta’ każijiet li fihom l-okkorrenza ta’ ECP ikollha titqies bħala potenzjalment indikativa ta’ SVEV jew NĦIV.Meta l-kampjuni jiġu minn unitajiet ta’ produzzjoni meqjusa liberi minn NPI, it-trattament ta’ l-inokuli bl-antiserum għall-virus NPI jista’ jitħalla barra.III. L-Eżaminazzjoni viroloġika1. Il-Kulturi taċ-ċelloli u meżżiBF-2 jew RTG-2 u ċelloli jew EPC jew FHM jitkabbru sa 20 % għal 30 °C f’ meżż xieraq, eż, Eagle’s MEM (jew modifiki tiegħu b’ supplement ta’ 10 % serum fetali bovina u antibjotiċi f’ konċentrazzjonijiet standard.Meta ċ-ċelloli jiġu kkoltivati fi fliexken magħluqa, huwa rakkmandat li l-meżż jitnaddaf bil-bikarbonat. Il-meżż użat għall-koltivazzjoni taċ-ċelloli f’ unitajiet miftuħa jista’ jintnaddaf b’Tris-HC1 (23 mM) u Na-bicarbonate (6 mM). Il-pH għandu jkun 7,6 ± 0,2.Il-kulturi taċ-ċelloli li għandhom jintużaw għall-inokulazzjoni b’materja taċ-ċelloli għandhom ikunu żgħażagħ (4 sa 48 siegħa) u jikbru attivament (mhux konfluwenti) meta jiġu innokulati.2. L-IInnokulazzjoni tal-kulturi taċ-ċelloliSospenzjoni ta’ l-organi ttrattata bl-antibjotiċi tiġi innokulata fil-kulturi taċ-ċelloli f’ żewġ taħlitiet, i.e., l-ewwel taħlita u oltre, taħlita tagħha ta’ 1:10, li tirriżulta f’ taħlitiet finali ta’ materjal taċ-ċelloli f’ meżż ta’ kultura taċ-ċelloli ta’ 1:100 u 1:1000 rispettivament, (sabiex tiġi prevenuta interferenza omologa). Għall-inqas żewġ linji taċ-ċelloli għandhom jiġu innokulati. (Ara Parti I. 111.1) Il-proporzjoni bejn id-daqs ta’ l-inoculum u l-volum tal-meżż tal-kultura taċ-ċelloli għandha tkun madwar 1:10.Għal kull taħlita u kull linja ta’ ċelloli, minimu ta’ xi 2 cm2 arja taċ-ċelloli, li tikkorrispondi għal kontenitur f’ tavla waħda b’ 24 kontenitur tal-kultura taċ-ċelloli. L-użu ta’ tavli tal-kultura taċ-ċelloli hija rakkmandata, iżda unitajiet oħrajn b’ arja simili jew akbar biex jikbru huma aċċettabbli wkoll.3. L-Inkubazzjoni ta’ kulturi taċ-ċelloliKulturi taċ-ċelloli innokulati jiġu inkubati f’ temperature ta’ 15 °C għal 7 sa 10 jiem. Jekk il-kulur tal-meżż tal-kultura taċ-ċelloli jinbidel minn aħmar għal isfar, li jindikat aċidifikazzjoni, għandu jsir aġġustament tal-pH b’ taħlita ta’ bikarbonat sterili jew sustanzi ekwivalenti sabiex tiġi aċċertata s-suxxettibilita’ taċ-ċelloli għall-infezzjoni virali.Għall-inqas kull sitt xhur jew jekk hija suspettata suxxettibilita’ taċ-ċelloli mnaqqsa, titrazzjoni ta’ stokkijiet iffriżati ta’ SVEV u NĦIV isseħħ sabiex tiġi vverifikata s-suxxettibilita’ tal-kulturi taċ-ċelloli għall-infezzjoni. Proċedura ta’ rakkmandazzjoni hija ppreżentata fil-Parti IV.4. Il-MikroskopijaKulturi taċ-ċelloli inokulati għandhom jiġu ispezzjonati regolarment (għall-inqas tliet darbiet fil-ġimgħa) għall-okkorrenza ta’ ECP bi tkabbir ta’ 40 sa 150 darba. Jekk tiġi osservata ECP ovvja, il-proċeduri ta’ identifikazzjoni tal-virus skond il-Parti I.IV għandhom jinbdew minnufih.5. Is-SubkultivazzjoniJekk ma żviluppat l-ebda ECP wara l-inkubazzjoni primarja għal 7 sa 10 ijiem issir subkultivazzjoni għal kulturi taċ-ċelloli friski bl-użu ta’ arja taċ-ċelloli simili għal dik tal-kultura primarja.Aliquots ta’ meżż (supernatant) mill-kulturi/kontenituri kollha li jikkonsistu fil-kultura primarja jinġabru skond il-linja ta’ ċelloli 7 sa 10 ijiem wara l-inokulazzjoni. Il-ġabriet imbagħad jiġu inokulati f’ kulturi taċ-ċelloli omoġeni mhux imħallta u mħallta 1:10 (li jirriżultaw f’ soluzzjonijiet finali ta’ 1:10 u 1:100 rispettivament, tas-supernatant) kif deskritt fil-Parti 1.1112. Alternativament, aliquots ta’ 10 % kultura taċ-ċelloli friska li jikkonsistwixxu l-kultura primarja huwa inokulat direttament f’ kontenitur b’ kultura taċ-ċelloli friska (subkultivazzjoni minn kontenitur għall-ieħor). L-inokulazzjoni tista’ tiġi preċeduta mill-preinkubazzjoni tat-taħlitiet bl-antiserum għall- virus NPI f’ taħlita xieraq kif deskritt fil-Parti 1.11.3.Il-kulturi innokulati huma mbagħad inkubati għal 7 sa 10 ijiem f’ 15 °C b’ osservazzjoni bħal fil-Parti 1 111.4.Jekk isseħħ ECP tossika fl-ewwel tlitt ijiem ta’ inkubazzjoni, is-subkultivazzjoni tista’ ssir f’ dak l-stadju iżda ċ-ċelloli għandhom imbagħad jiġu inkubati għal sebat ijiem u jerġgħu jiġu subkultivati b’ inkubazzjoni ta’ sebat ijiem oħra. Meta tiżviluppa ECP tossika wara tlitt ijiem, iċ-ċelloli jistgħu jitgħaddew darba u jiġu innokulati biex jiġi akkwistat it-total ta’ 14-il jum mill-innokulazzjoni primarja. M’ għandu jkun hemm l-ebda evidenza ta’ tossiċita’ fl-aħħar sebat ijiem ta’ inkubazzjoni.Jekk isseħħ kontaminazzjoni batterjali minkejja t-trattament bl-antibjotiċi, is-subkultivazzjoni għandhat tiġi preċeduta minn ċentrifugazzjoni ta’ 2000 sa 1000 x g għal 15 sa 30 min f’ 2 to 5 °C, u/jew filtrazzjoni tas-supernatant minn filtru ta’ 0,45 wm (membrane li ftit jorbot proteini). Oltre dan, il-proċeduri ta’ subkultivazzjoni huma l-istess bħal għal ECP tossika.IV. L-Identifikazzjoni tal-virus1. It-Testijiet għall-identifikazzjoni tal-virusJekk ġiet osservata evidenza ta’ ECP f’ kultura taċ-ċelloli, jinġabar meżż (supernatant) u jiġi eżaminat b’ waħda jew aktar minn dawn it-tekniċi: newtralizzazzjoni, IF, ELISA. Jekk it-testijiet ma permettewx identifikazzjoni definittiva tal-virus f’ temp ta’ ġimgħa, is-supernatant għandu jintbagħat lil laboratorju nazzjonali ta’ referenza jew għal laboratorju ta’referenza tal-UE għal mard tal-ħut identifikazzjoni immedjata.2. In-NewtralizzazzjoniNeħħi ċ-ċelloli mis-supernatant miġbur biċ-ċentrifugazzjoni (2000 sa 4000 x g) jew filtrazzjoni tal-membrane (0,45 wm) b’ membrane li ftit jorbot proteini u ħallat lis-supernatant 1:100 u 1:10 000 f’ meżż ta’ kultura taċ-ċelloli.Aliquots taż-żewġ taħlitiet ta’ supernatant jitħalltu u jiġu inkubati għal 60 minuta f’ temperatura ta’ 15 °C b’ partijiet indaqs tar-reaġenti segwenti separatament:- serum li fih antikorpi speċifiċi għal gruppi kontra SVEV f’ taħlita 1:50 (vol:vol) [2]- serum li fih antikorpi speċifiċi għal gruppi kontra NĦIV f’ taħlita 1:50 (vol:vol) [3]- ġabriet ta’ antisera kontra s-serotipi indiġeni ta’ IPNV f’ taħlita 1:50 (vol:vol) [4]- meżż waħdu (kontroll pożittiv)Minn kull taħlita ta’ supernatant-serum tal-virus għall inqas żewġ kulturi taċ-ċelloli jiġu innokulati b’ 5- pl kull wieħed u mbagħad jiġu inkubati f temperature ta’ 15 °C. Jiġi verifikat l-iżvilupp ta’ ECP kif deskritt fil-Parti 1 111.4.Xi strains ta’ SVEV ma jirreaġixxux f’ testijiet ta’ newtralizzazzjoni. Tali iżolati għandhom jiġu identifikati b’ IF jew ELISA.Testijiet ta’ newtralizzazzjoni oħrajn b’ effikaċja ppruvata jistgħu jintużaw alternattivament.3. L-IFBiex jiġi identifikat kull iżolat tal-virus, għall-inqas tmien ħġiġiet jew ekwivalent jinżergħu b’ ċelloli ta’ densita’ li twassal għal madwar 60 % sa 90 % konfluwenza wara 24 siegħa ta’ koltivazzjoni. Ċelloli EPC huma rakkmandati għal dan l-iskop minħabba l-aderenza qawwija tagħhom ma’ uċuħ tal-ħġieġ iżda linji oħrajn ta’ ċelloli bħal BF-2, RTG-2 jew FHM jistgħu jintużaw ukoll.Meta ċ-ċelloli ssedimentaw mal-wiċċ tal-ħġieġ (xi siegħa wara ż-żriegħ) jew meta l-kulturi inkubaw għal sa 24 siegħa, il-virus li għandu jiġi identifikat jiġi inokulat. Jiġu inkokulati erba; kulturi f’ proporzjon ta’ volum għal volum ta’ 1:10, u erba’ kulturi f’ proporzjon ta’ 1:1000. Dawn imbagħad jiġu inkubati f’ temperatura ta’ 15 °C għal 20 sa 30 siegħa.Wara l-inkubazzjoni, il-kulturi jitlaħalħu darbtejn f’ Eagle’s MEM bla serum, iffissat f’ aċeton 80 % kiesaħ silġ u mbagħad imtebba’ permezz ta’ TAFI ta’ żewġ saffi. L-ewwel saff reaġent jikkonsisti f’ antikorpi poliklonali jew monoklonali ta’ kwalita’ riferenti. It-tieni saff reaġenti huwa antiserum konjugat b’ Florokrom ma’ l-immunoglobulin użat fl-ewwel saff. Għal kull wieħed mill-antisera ttestjat għall-inqas kultura waħda b’ inokulazzjoni b’ doża qawwija u oħra b’ inokulazzjoni b’ doża baxxa għandhom jittebbgħu.Għandhom jiġu inklużi fit-test kontrolli tajbin negative jew pożittivi. Florokromi bħal FIX jew TRITC huma rakkmandati.Għamel il-kultura mtebba’ b’ salina gliċerola. Eżamina taħt dawl ultravjola inċidenti (UV). Uża lentijiet 10 x jew 12 x u lentijiet ta’ x 25 u x 40 oġġettivi b’ aperture numeriċi > 0,7 u > 1,3, rispettivament.Din it-teknika IF tingħata bħala eżempju. Xi tekniċi oħrajn IF (rigward kulturi taċ-ċelloli, fissazzjoni u antikorpi ta’ kwalita’ riferenti ta; effikaċja ppruvata jistgħu jintużaw alternativament.(’) Jew kif speċifikat mil-laboratorju referent rigward il-possibbli ċitotossiċità ta’ l-antisera.4. L-ELISAKontenituri f’ platti mikrotitri huma miksija mal-lejl b’ taħlitiet rakkmandat ta’ immunoglobulin purifikat ishma żgħar ta’ antikorpi ta’ kwalita’ ta’referenza.Wara tlaħliħ tal- kontenituri b’ buffer PBS-Tween-20, il-virus li għandu jiġi identifikat jiżdied mal-kontenituri f’ stadji ta’ taħlit ta’ tnejn jew erbgħa u permess li jirreaġixxi mal-antikorp li jiksi għal 60 minuta f’ temperatura ta’ 37 °C. Wara tlaħliħ b’ buffer PBS-Tween-20, l-antikorpi biotinilati ta’ speċifiċita’ li tikkorrespondi għal dik ta’ l-antikorpi li jiksu jiżdiedu u jiġu permessi li jirreaġixxu għal 60 minuta f’ temperatura ta’ 20 °C. Wara tlaħliħa oħra bħal fuq, streptavidin konjugata b’ HRP jiżdied u jiġi permess li jirraġixxi għal siegħa f’ temperature ta’ 20 °C. Wara l-aħħar tlaħliħa, tiġi viżwalizzata enzyme imwaħħla bl-użu ta’ substrati xierqa ta’ ELISA (OPD jew oħrajn).Il-verżjoni ta’ ELISA msemmija fuq ibbażat fuq biotina-avidina jingħata bħala eżempju. Jistgħu jintużaw verżjonijiet oħrajn ta’ ELISA b’ effikaċja pruvata minflok.TABELLA 1ASkema ta' spezzjoni u kampjunar għal żoni u għal irziezet f' żoni mhux approvati għat-terminu ta' kontroll ta' sentejn li jippreċedi l-akkwist ta' stat approvat għal SVE u NEI(skond id-Direttiva 91/67/KEE, l-Annessi B u C u d-dispożizzjonijiet fl-I Parti ta' dan l-Anness)Massimu ta' ħut f' kull vaska: 10[5] [6] [7] [8]| Numru ta' ispezzjonijiet kliniċi fis-sena | Numru ta' eżaminazzjonijiet laboratorji fis-sena | [5]Eżaminazzjoni laboratorja għall-preżenza ta' virus |Numru ta' ħut li qed jikber (Materjal ta' organi) | Numru ta' ħut żgħir (Fluwidu ovarjan) |Żoni u rziezet kontinentali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 120 (l-ewwel spezzjoni) [6] 150 (it-tieni spezzjoni) | 30 (l-ewwel spezzjoni) [7] 0 (it-tieni spezzjoni) |(b)Irziezet bil-ħut żgħir biss | 2 | 1 | 0 | 150 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) [7] |(ċ)Irziezet bla ħut żgħir | 2 | 2 | 150 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) | 0 |Żoni u rziezet kostali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 120 (l-ewwel spezzjoni) 150 (it-tieni spezzjoni) | 30 (l-ewwel spezzjoni) [7] 0 (it-tieni spezzjoni) |(b)Irziezet salmonidi bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 30 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) [8] | 0 |(ċ)Irziezet mhux salmonidi bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 150 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) | 0 |TABELLA I.BSkema ta' spezzjoni u kampjunar għal żoni u għal irziezet f'żoni mhux approvati għat-terminu ta' kontroll ta' sentejn li jippreċedi l-akkwist ta' stat approvat għal SVE u NEI f' żoni u rziezet f' żoni mhux approvati bi storja uffiċjalment magħrufa iddokumentata ta' libertà minn dan il-mard(skond id-Direttiva 91/67/KEE, l-Annessi B u C u d-dispożizzjonijiet fl-I u t-III Partijiet ta' dan l-Anness)Numru massimu ta' ħut f' kull vaska: 10[9] [10] [11]| Numru ta' ispezzjonijiet kliniċi fis-sena | Numru ta' eżaminazzjonijiet laboratorji fis-sena | Eżaminazzjoni laboratorja għall-preżenza ta' virus |Numru ta' ħut li qed jikber (Materjal ta' organi) | Numru ta' ħut żgħir (Fluwidu ovarjan) |Żoni u rziezet kontinentali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 0 (l-ewwel spezzjoni) [5] 30 (it-tieni spezzjoni) | 30 (l-ewwel spezzjoni) [6] 0 (it-tieni spezzjoni) |(b)reine Brutanlagen | 2 | 1 | 0 | 30 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni [6] |(ċ)Irziezet bla ħut żgħir | 2 | 2 | 30 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) | 0 |Żoni u rziezet kostali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 0 (l-ewwel spezzjoni) 30 (it-tieni spezzjoni) | 30 (l-ewwel spezzjoni) [6] 0 (it-tieni spezzjoni) |(b)Irziezet salmonidi bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 30 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) [7] | 0 |(ċ)Irziezet mhux salmonidi bil-ħut żgħir | 2 | 2 | 30 (l-ewwel u t-tieni spezzjonijiet) | 0 |TABELLA 1CSkema ta' ispezzjoni u kampjunar għal żoni u għal irziezet f'żoni mhux sabiex jinżamm l-istat approvat għal SVE u NEI(skond id-Direttiva 91/67/KEE, l-Annessi B u C u d-dispożizzjonijiet fl-I Parti ta' dan l-Anness)umru massimu ta' ħut f' kull vaska: 10[12] [13] [14]| Numru ta' ispezzjonijiet kliniċi fis-sena | [5]Numru ta' ħut fil-grupp tal-kampjun għall-eżaminazzjoni laboratorja |Numru ta' ħut li qed jikber (Materjal ta' organi) | Numru ta' ħut żgħir (Fluwidu ovarjan) |Żoni u rziezet kontinentali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 20 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni) I | 10 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni) [6] |(b)Irziezet bil-ħut żgħir biss | 2 | 0 | 30 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni) [6] |ċ)Irziezet bla ħut żgħir | 2 | 30 | 0 |Żoni u rziezet kostali(a)Irziezet bil-ħut żgħir | 2 | 20 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni) | 10 (l-ewwel jew it-tieni spezzjoni) [6] |(b)Irziezet bla ħut żgħir | 1 | 30 [7] | 0 |IT-II PARTI Proċeduri djanjostjiċi għall-konferma ta’ SVE u NEI f’ ġrajjiet suspettatiGħandha ssir teknika waħda jew aktar minn dawn għad-djanjosi ta’ SVE u NEI:- A. iżolazzoni tal-virus konvenzjonali b’ identifikazzjoni seroloġika sussegwenti tal-virus- B. iżolazzoni tal-virus b’ identifikazzjoni seroloġika simultanja,- C. tekniċi djanjostiċi oħrajn (TAFI, ELISA).Il-konferma ta’ l-ewwel każ ta’ SVE u/jew NEI f’ irziezet f’ żoni approvati m’ għandhiex tkun ibbażata fuq il-metodu C waħda. Għandu jintuża wkoll jew il-metodu A jew il-metodu B.Il-materjal maħsub għal eżaminazzjoni viroloġika jista’ f’ xi każijiet jeħtieġ li jiġi akkumpanjat minn materjal supplementari għal eżaminazzjoni batterjoloġika, parasitoloġika, ħistoloġika jew oħrajn biex tiġi permessa djanjosi differenzjali.A. Iżolazzoni tal-virus konvenzjonali b’ identifikazzjoni seroloġika sussegwenti tal-virusI.1. 1.1. Għażla tal-kampjuniTa’ l-inqas 10 ħut li juru sinjali tipiċi tal-virus SVE jew NEI iridu jingħażlu għal eżamiI.2. 1.2. Preparament u bgħit tal-kampjuni mill-ħutKif stabbilit fil-Parti 1.1.3I.3. 1.3. Ġbir ta’ materjal djanjostiku supplementariKif stabbilit fil-Parti 1.1.4II. 11. Preparament ta’ kampjuni għall-eżaminazzjoni viroloġikaKif stabbilit fil-Parti 1.11III. Eżaminazzjoni viroloġikaKif stabbilit fil-Parti 1 111IV. Identifikazzjoni tal-virusKif stabbilit fil-Parti LIVB. Iżolazzoni tal-virus b’identifikazzjoni seroloġika simultanjaI.1. Għażla tal-kampjuniKif stabbilit fil-Parti II.A.I.1I.2. 1.2. Preparament u bgħit tal-kampjuni mill-ħutKif stabbilit fil-Parti 1.1.3I.3. 1.3. Ġbir ta’ materjal djanjostiku supplementariKif stabbilit fil-Parti 1.1.4II.1. 11.1. Omoġenizzazzjoni ta’ l-organiKif stabbilit fil-Parti 1.11.2II.2. 11.2. Ċentrifugazzjoni ta’ l-omoġenatL-omoġenat huwa ċentrifugat f’ ċentrifuga mkessħa għal 2 °C sa 5 °C għal 2000 sa 4000 x g għal 15-il minuta u jinġabar is-supernatant u jiġi trattat għal erba’ sigħat f’ temperatura ta’ 15 °C bl-antibjotiċi, eż ġentamiċina f’ 1 mg/ml, jew iffiltrata mill-membrane (0,45 wm) minn membrane li ftit jorbot proteini.II.3. 11.3. Trattament tas-supernatant b’ antisera djanjostiċiIs-sospensjoni ta’ organi trattat bl-antibjotiċi jew iffiltrat mill-membrane jitħallat 1:10 u 1:1000 f’ meżż ta’ kultura taċ-ċelloli u jitħalltu aliquots u jiġu inkubati għal 60 minuta f’ temperatura ta’ 15 °C b’ partijiet indaqs tar-reaġenti elenkati fil-Parti LIV.2.III.1. 111.1. Kulturi taċ-ċelloli u mezziKif stabbilit fil-Parti 1 111.1III.2. 111.2. Innokulazzjoni tal-kulturi taċ-ċelloliMinn kull taħlita tas-serum tal-virus (ippreparata kif stabbilit fil-Parti II.B.11.3) jiġu inokulati għall-inqas żewġ kulturi taċ-ċelloli b’ 50 ul kull wieħed.III.3. 111.3. Inkubazzjoni tal-kulturi taċ-ċelloliKif stabbilit fil-Parti 1 111.1III.4. 111.4. MikroskopijaIl-kulturi taċ-ċelloli inokulati huma spezzjonati kuljum għall-okkorrenza ta’ ECP bi tkabbir ta’ 40 sa 150 darba. Jekk ECP tiġi prevenuta minn wieħed mill-antisera użati, il-virus jista’ jitqies li ġie identifikat f’ dan is-sens.Jekk ma tiġix prevenuta ECP b’ xi antisera, għandhom isiru proċeduri ta’ identifikazzjoni tal-virus skond il-Parti I.IV.III.5. 111.5. SubkultivazzjoniJekk ma seħħet l-ebda ECP wara 7 sa 10 ijiem għandha ssir subkultivazzjoni minn kulturi inokulati bis-supernatant u bil-meżż (Parti II.B.11.3) skond il-Parti 1 111.5.C. Tekniċi djanjostiċi oħrajnIs-supernatant ippreparat kif deskritt fil-Parti 1.11.2 jista’ jiġi sottomess għal TAFI jew ELISA skond il-PArti LIV.3 jew il-Parti LIVA rispettivament. Dawn it-tekniċi rapidi għandhom jiġu supplimentati b’ eżaminazzjoni viroloġika jew skond A jew skond B fi żmien 48 siegġa mill-kampjunar, jekk:(a) ikun hemm riżultat negattiv; jew(b) ikun hemm riżultat pożittiv b’ materjal li jirrappreżenta l-ewwel każ ta; NEI jew SVE f’ żona approvata.Il-materjal taċ-ċelloli jista’ jiġi soġġettat għal tekniċi djanjostiċi oħrajn bħal RT-PCR, IF fuq taqsimiet iffriżati, immunoħistokimika fuq materjal taċ-ċelloli iffissat bil-formalina. Dawn it-tekniċi għandhom dejjem jiġu akkumpanjati minn inokulazzjoni ta’ materjal taċ-ċelloli mhux iffissata fuq kulturi taċ-ċelloli.III PARTI Storja dokumentata ta’ liberta’ minn SVE u/jew NEI f’żoni jew irziezet li huma f’żoni mhux approvatiGwidi u kriterji għal programm uffiċjali ta’ spezzjoni sanitarja1. Programm uffiċjali ta’ spezzjoni sanitarja tista’ tiġi inizzata biss jew:- wara progamm ta’ eradikazzjoni uffiċjalment magħruf għal SVEV u/jew NĦIV inkluż it-tneħħija tal-ħut kollha fil-razzett, tindif, diżinfettar, u fallowing qabel stukkjar mill-ġdid bil-ħut minn irziezet approvati, jew- fuq irziezet bl-ebda storja ta’ infezzjoni minn SVEV jew NĦIV.2. Il-programm ta’ spezzjonijiet sanitarji għandu jkun ibbażat kemm fuq spezzjonijiet kliniċi kif ukoll eżaminazzjonijiet laboratorji.3. Il-programm għandu jinkludi żewġ spezzjonijiet kliniċi annwali skond il-gwidi li jinsabu fl-I Parti.4. Għall-inqas waħda mill-spezzjonijiet imwettqa kull sena, għandhom jinġabru 30 kampjun taċ-ċelloli tal-ħut u/jew fluwidu ovarjan minn kull razzett. Il-kampjuni għandhom jintgħażlu, jiġu ppreparati u soġġettati għal eżaminazzjoni laboratorja skond il-Partijiet I, II u IV.5. Il-programm ta’ spezzjonijiet sanitarji għandu jsir għall-inqas għal erba’ snin fl-irziezet kolha fiż-żona jew fir-razzett (f’ żona mhux approvata) li għandhom jiġu approvati.6. Għall-għarfien uffiċjali tal-programm, m’għandu jsir jew jinkixef l-ebda każ ta’ SVE jew NEI (l-ebda infezzjoni klinika jew iżolament tal-virus).IV PARTI Il-Proċedura għat-titrazzjoni biex tiġi verifikata s-suxxettibilita’ tal-kulturi taċ-ċelloli għall-infezzjoniIl-proċeduri rakkmandati għat-titrazzjoni msemmija fil-Parti 1 111.3 jingħataw isfel.Għandhom jintużaw għall-inqas żewġ iżolati ta’ SVEV u iżolat wieħed ta’ NĦIV. L-iżolati għandhom jirrappreżentaw l-akbar grupp ta’ viruses fl-UE, eż, għal SVEV iżolat wieħed patoġeniku mit-troti fl-ilma frisk u iżolat wieħed marin patoġeniku għal rombu u għal NĦIV, strain wieħed patoġeniku tat-troti mill-Ewropa. Għandhom jintużaw iżolati definiti sew mill-Istati Membri. Iżolati referenti huma disponibbli mil-laboratorji ta’ riferenza tal-UE għall-mard tal-ħut.Gruppi ta’ virus f’ numri baxxi ta’ kulturi taċ-ċelloli huma propagate fi fliexken tal-kulturi taċ-ċelloli fuq ċelloli BF-2 jew RTG-2 għal SVEV u fuq ċelloli EPC jew FHM għal NĦIV. Għandu jintuża meżż ta’ kultura taċ-ċelloli b’ għall-inqas 10 % serum. Uża MOI baxx għall-inokulazzjoni (< 1).F’ ECP totali, il-virus jiġi maħsud b’ ċentrifugazzjoni tas-supernatant tal-kultura taċ-ċelloli ta’ 2000 x g għal 15-il minuta, sterilizzat bil-filtri minn filtru tal-membrane 0,45 wm u distribwit f’ kriotubi tabellati. Il-virus jinżamm f’ temperatura ta’ - 80 °C.Ġimgħa wara l-iffriżar, tliet fliexken replikati b’ kull virus jiddewbu taħt ilma kiesaħ u jiġu titrati fuq il-linji rispettivi taċ-ċelloli tagħhom. Għall-inqas kull sitt xhur, jew jekk huwa suspettat li s-suxxetibilita’ ta’ linja taċ-ċelloli naqset, kull iżolat tal-virus jiġi mdewweb jew titrat.Proċeduri ta’ titrazzjoni għandhom jiġu deskritti fid-dettal u l-istess proċeduri jiġu segwiti kull darba.Titrazzjoni b’ taħlita fit-tarf għandu jinkludi għall-inqas sitt repliki f’ kull pass ta’ taħlit. It-titri jiġu mqabbla ma’ titri akkwistati qabel. Jekk it-titri ta’ kwalunkwe mit-tliet iżolati tal-virus taqa’ b’ fattur ta’ żewġ logs jew aktar, imqabbel mat-titru inizzjali, il-linja ta’ ċelloli m’ għadx irid jintuża għal skopijiet ta’ sorveljanza.Jekk jinżammu linji differenti taċ-ċelloli fil-laboratorju kull linja għandha tiġi eżaminata separatament.Għandhom jinżammu reġistri għall-inqas għal 10 sninV PARTI L-Akronimi u t-taqsirietBF-2  Bluegill fry -2 (cell line)ECP  Effett ĊitopatikuLRK  Laboratorju ta’ riferenza Komunitarju tal-mard tal-ħutELISA  Enzyme-linked immunosorbent assayEPC  Epithelioma papulosum cyprini (linja taċ-ċelloli)FHM  Fathead minnow (linja taċ-ċelloli)FITC  Fluorescein isothiocyanateAċtu  Sulfoniku Hepes N-2-hydroxyethylpiperazine-N’-2-ethaneHRP  Perosidatt tal-HorseradishIF  ImmunoflorexxenzaTAFI  Test ta’ antikorpi florexxenti indirettNĦIV  Nekrożi ħematopejka infettuża (virus)NPI  Nekrożi Pankreatika Infettuża (virus)MEM  Mezz essenzjali minimuMOI  Multipliċita’ ta’ infezzjoni (proporzjon ta’ partikli tal-virus infettuż miżjuda ma’ numru magħruf ta’ ċelloli f’ kultura)OPD  Ortho phenylene diaminePBS  Phosphate buffered salineRTG-2  Testikoli tat-troti (linja taċ-ċelloli)RT-PCR  Reversed transcriptase polymerase chain reactionTris-HC1  Tris (hydroxymethyl) aminomethane - HC1TRITC  Tetramethyl-rhodamine-isothiocyanateSVE(V)  Settiċimja virali emorraġika (virus)[1] F' kaæijiet eċċezzjonali, eæ fejn il-ħut jinġabar f' æoni remoti ħafna bla ebda possibilita' ta' posta kuljum.[2] Jew kif speċifikat mil-laboratorju referent rigward il-possibbli ċitotossiċità ta' l-antisera.[3] Jew kif speċifikat mil-laboratorju referent rigward il-possibbli ċitotossiċità ta' l-antisera.[4] Jew kif speċifikat mil-laboratorju referent rigward il-possibbli ċitotossiċità ta' l-antisera.[5] Alternattivament, jista' jintuża kampjun b' daqs imnaqqas kif elenkat fit-Tabella I.B jekk il-ħtiġiet deskritti fit-test tal-Partijiet 11.1, 1.1.2.1.b u III jintlaħqu.[6] Spezzjonijiet kliniċi[7] F' ċirkostanzi eċċezzjonali, jekk huwa impossibbli li jiġi akkwistat fluwidu ovarjan, l-organi jistgħu jiġu kkampjunati minflok.[8] Il-kampjuni għandhom jinġabru mhux qabel tliet ġimgħat wara t-trasferiment tal-ħut minn ilma frisk għal ilma mielaħ.[9] Ispezzjonijiet kliniċi.[10] F' ċirkostanzi eċċezzjonali, jekk huwa impossibbli li jiġi akkwistat fluwidu ovarjan, l-organi jistgħu jiġu kkampjunati minflok.[11] Il-kampjuni għandhom jinġabru mhux qabel tliet ġimgħat wara t-trasferiment tal-ħut minn ilma frisk għal ilma mielaħ.[12] F' żoni approvati l-kapmjuni iridu jinġabru b' rotazzjoni f' 50 % ta' l-irziezet tal-ħut kull sena. Fi rziezet approvati f' żoni mhux approvati il-kampjuni jridu jinġabru kull sena.[13] F' ċirkostanzi eċċezzjonali, jekk huwa impossibbli li jiġi akkwistat fluwidu ovarjan, l-organi jistgħu jiġu akkampjunati minflok.[14] l-kampjuni għandhom jinġabru mhux qabel tliet ġimgħat wara t-trasferiment tal-ħut minn ilma frisk għal ilma mielaħ.--------------------------------------------------