CELEX: 21987A0207(02)
Language: hr
Date: 1958-12-15 00:00:00
Title: Protokol uz Europski sporazum o razmjeni ljekovitih tvari ljudskog podrijetla

02/Sv. 16
               
               
                  HR
               
               
                  Službeni list Europske unije
               
               
                  18
               
            21987A0207(02)
      
                  L 037/4
               
               
                  SLUŽBENI LIST EUROPSKE UNIJE
               
            PROTOKOL UZ EUROPSKI SPORAZUM
      o razmjeni ljekovitih tvari ljudskog podrijetla
      DIO I.
      
         OPĆE ODREDBE
      
      A.   OZNAČIVANJE
      Etiketa koja je tiskana na engleskom i francuskom jeziku, a prema odgovarajućem uzorku koji se može naći u prilozima od 2. do 10. Protokola stavlja se na svaki spremnik ili aplikacijski set.
      B.   PAKIRANJE I OTPREMA
      Puna se ljudska krv otprema u spremnicima u kojima se održava temperatura od 4 °C do 6 °C tijekom trajanja prijevoza.
      Taj se uvjet ne zahtjeva za derivate navedene u Protokolu.
      C.   PROIZVODI I UREĐAJ
      Proizvodi i uređaj na koje se poziva u dijelu II. ovog Protokola su sterilni, apirogeni i netoksični.
      Preporučuje se da aplikacijski set kao i otapala koja su potrebna za isušene proizvode budu poslani sa svakom pošiljkom.
      D.   NETOKSIČNOST PLASTIČNE OPREME ZA DAVANJE TRANSFUZIJE KRVI
      Oprema je u skladu s odredbama utvrđenim u Prilogu 11. ovom Protokolu.
      DIO II.
      
         POSEBNE ODREDBE
      
      1.   PUNA LJUDSKA KRV
      Puna ljudska krv je krv koja je izmiješana s odgovarajućim antikoagulansom nakon što je dobivena od zdrave osobe.
      Krv se ne uzima od osobe:
      
                  (a)
               
               
                  za koju se zna da ima, ili je imala sifilis; ili
               
            
                  (b)
               
               
                  čiji rezultati testiranja krvi na sifilis nisu negativni; ili
               
            
                  (c)
               
               
                  za koju se, ako se može utvrditi zdravstvenim pregledom i izučavanjem obiteljske anamneze, ne može sa sigurnošću tvrditi da ne boluje od bolesti prenosive transfuzijom krvi.
               
            Krv se vadi sukladno uzusima asepse, kroz zatvoreni sustav sterilnih cjevčica u sterilni spremnik, u koji je, prije negoli je steriliziran, stavljena antikoagulacijska otopina. Oprema koja se rabi treba biti apirogena. Kada je vađenje dovršeno, spremnik se odmah hermetički zatvara i hladi na 4 °C do 6 °C, te se potom ne otvara sve do neposredne uporabe krvi.
      Krv se sakuplja u kiselu citratnu otopinu koja sadrži dekstrozu. Ne dodaje se nikakav antiseptik ili bakteriostatik. Volumen antikoagulacijske otopine ne smije prelaziti 220 ml po litri pune ljudske krvi, a koncentracija hemoglobina ne smije biti ispod 97 grama po litri.
      
         Krvna grupa
      
      Krvna grupa prema sustavu ABO utvrđuje se ispitivanjem i krvnih stanica i ispitivanjem seruma, a krvna grupa prema Rh faktoru ispitivanjem krvnih stanica, na zasebnom uzorku krvi davatelja. Kad postoji nacionalna norma ili na nacionalnoj razini preporučena tehnika određivanja krvne grupe, tada se koristi ta tehnika.
      Izraz Rh-negativna koristi se samo u slučaju kada su određeni testovi pokazali nepostojanje antigena C, D, Du i E. Sva druga krv treba imati oznaku Rh- pozitivna.
      Krv koja je predmet ovog sporazuma mora se davati samo primateljima koji imaju odgovarajuću krvnu grupu, označenu prema ABO sustavu.
      
         Pohrana
      
      Puna se ljudska krv drži u sterilnom spremniku koji je hermetički zatvoren kako bi se spriječilo zagađenje mirkoorganizmima, te je pohranjena na temperaturi od 4 °C do 6 °C sve dok ne bude potrebna za uporabu, osim tijekom bilo kojeg razdoblja u kojem ju je potrebno ispitati i otpremiti na višim temperaturama, a svako takvo razdoblje ne smije prelaziti 30 minuta nakon čega se krv odmah treba ponovno rashladiti na 4 °C do 6 °C.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava sve informacije koje su prikazane na uzorku etikete (Prilog 2.). Rezus faktor se označava kao „pozitivan” ili „negativan” ili, u skraćenom obliku „POZ” ili „NEG”.
      1.a   KONCENTRAT LJUDSKIH ERITROCITA
      Koncentrat ljudskih eritrocita predstavlja jedinicu pune ljudske krvi iz koje je uklonjen veći dio plazme.
      On sadrži najviše eritrocita iz jedinice iz koje je pripremljen; ostale stanične komponente mogu postojati ili biti djelomično uklonjene.
      Tekući sadržaj koncentrata sastoji se ili od ostataka plazme ili od odgovarajuće izotonične umjetne vodene otopine koja je dodana nakon što je uklonjena plazma. Volumen eritrocita bi trebao sačinjavati između 65 i 75 % ukupnog volumena proizvoda, no ako je koncentracija eritrocita veća, na etiketi se označava približni postotni udio eritrocita u ukupnom volumenu (hematokrit).
      Sve radnje koje su potrebne pri pripremi obavljaju se u aseptičnim uvjetima: odlijevanje (dekantacija) se obavlja korištenjem sterilnog, zatvorenog sustava i samo pritiskom. Ne treba dodavati nikakve antiseptike niti bakteriostatike.
      
         Krvna grupa i pohrana
      
      kao za punu ljudsku krv.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava sve informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 2.a). Rezus faktor se označava kao „pozitivan” ili „negativan” ili, u skraćenom obliku, „POZ” i „NEG”. Ako je dodana umjetna vodena otopina, na etiketi se također navode njezin volumen i sastav.
      2.   ISUŠENA LJUDSKA PLAZMA
      Isušena ljudska plazma se dobiva isušivanjem tekućeg supernatanta, koji se odvaja centrifugiranjem ili sedimentacijom iz određenih količina pune ljudske krvi.
      Tijekom pripremanja ne dodaju se antispetičke ili bakteriostatičke ili druge tvari. Suha ljudska plazma se dobiva liofilizacijom ili bilo kojom drugom metodom koja ne dovodi do denaturacije bjelančevina. Isušeni proizvod odmah će se otopiti u onoj količini vode koja je jednaka volumenu tekućine iz koje je dobivena tvar. Na taj način dobivena koncentracija bjelančevina u otopini ne smije biti manja od 45 grama po litri i ne smije pokazivati vidljivih znakova prisutnosti produkata hemolize. Titar hemaglutinin ne smije biti veći od 1:32.
      
         Isušena ljudska plazma dobivena iz jedne ili dvije donacije krvi
      
      Isključuju se donirane krvi za koje se pokazalo da sadržavaju opasne razine izohemolizina (što se utvrđuje korištenjem uzorka svježeg seruma) ili bilo kakve imunohemaglutinine. Osim ako se plazma ne sjedini u isti spremnik i ne zamrzne u roku od 48 sati nakon uzimanja krvi, testira se sterilnost svake jedinice, i to kultiviranjem uzorka krvi ne manjeg od 10 ml.
      
         Isušena ljudska plazma pripremljena iz sjedinjene krvi dobivene iz više od dviju donacija.
      
      Neće se uporabiti sjedinjena krv („poolovi”) za koju se pokaže da sadrži opasne razine imunohemaglutinina ili izohemolizina. Kako bi se izbjegli štetni učinci vezani za produkte rasta bakterija u plazmi, neće se rabiti krv niti iz jedne pojedinačne donacije ako postoji bilo koji dokaz bakterijskog zagađenja, a sterilnost svake sjedinjene krvi testirat će se kultiviranjem uzorka krvi ne manjeg od 10 ml. Kako bi se smanjio rizik od prijenosa serumskog hepatitisa, plazmu treba prirediti iz sjedinjene krvi dobivene iz najviše 12 donacija, ili bilo kojom drugom metodom koja se pokazala usporedivo učinkovitom u smanjivanju spomenutog rizika.
      
         Topivost u vodi
      
      Dodajte onu količinu vode koja je jednaka volumenu tekućine iz koje je uzorak priređen. Tvar se potpuno otopi u roku od 10 minuta na 15 °C do 20 °C.
      
         Identifikacija
      
      Otopite poznatu količinu proizvoda u onom volumenu vode koji je jednak volumenu tekućine iz koje je priređen. Otopina prolazi sljedeće testove:
      
                  i.
               
               
                  Testove taloženja (precipitacije) s posebnim antiserumima, kojima treba pokazati da otopina sadržava samo bjelančevine ljudske plazme;
               
            
                  ii.
               
               
                  1 mililitru proizvoda dodajte odgovarajuću količinu trombina ili kalcijeva klorida. Nastaje koagulacija koja se može ubrzati inkubacijom na 37 °C.
               
            
         Gubitak mase pri sušenju
      
      Pri 24-satnom sušenju s fosfor-pentoksidom, pri tlaku koji ne prelazi 0,02 mm žive, isušena ljudska plazma ne smije izgubiti više od 0,5 % svoje težine.
      
         Sterilnost
      
      Po završenom postupku ponovnog otapanja, konačni proizvod treba biti sterilan kada se ispituje odgovarajućom bakteriološkom metodom.
      
         Pohrana
      
      Isušenu ljudsku plazmu treba držati u dušiku ili vakuumu u sterilnom spremniku koji je hermetički zatvoren, tako da se isključi mogućnost zagađenja mikroorganizmima i, koliko je to moguće, prodora vlage, zaštićenu od svjetla i pohranjenu na temperaturi ispod 20 °C.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 3.).
      3.   LJUDSKI ALBUMIN I FRAKCIJA BJELANČEVINA LJUDSKE PLAZME
      Ljudski albumin i frakcija bjelančevina ljudske plazme su pripravci one komponente bjelančevina koja čini oko 60 % ukupne mase bjelančevina plazme i pune ljudske krvi.
      Metoda pripreme koju će se pritom uporabiti je ona pomoću koje se dobiva materijal koji udovoljava ovdje opisanim zahtjevima. Bez obzira na to je li konačni proizvod u tekućem ili isušenom stanju, pripravak treba nakon dodavanja odgovarajućeg stabilizatora (jednog ili više njih) zagrijavati u tekućem stanju u završnom spremniku na temperaturi od 60 °C ± 0,5 °C tijekom 10 sati, kako bi se inaktivirao agens koji uzrokuje serumski hepatitis. Tijekom pripreme ne dodaje se nikakav antiseptik, niti bakteriostatik.
      U pripravcima ljudskog albumina, najmanje 95 % mase prisutnih bjelančevina čini albumin. U pripravcima frakcije bjelančevina ljudske plazme najmanje 85 % mase bjelančevina čini albumin. U oba pripravka treba postojati više od 10 miligrama imunoglobulina G po gramu proizvoda.
      Kada je konačni proizvod liofiliziran, on treba sadržavati najmanje 950 miligrama bjelančevina po gramu proizvoda.
      Kada se frakciju bjelančevina ljudske plazme priprema kao otopinu, ukupna koncentracija bjelančevina u njoj iznosi između 45 i 50 grama po litri.
      Kada se ljudski albumin priprema kao otopinu, imat će ukupnu koncentraciju bjelančevina od najmanje 45 grama po litri.
      
         Topivost isušenih proizvoda
      
      Dodajte vodu preporučenom volumenu. Isušeni pripravak treba biti potpuno topiv.
      
         Postojanost
      
      Pri usporedbi otopina prije i nakon termičke obrade ne smije se pronaći dokaza značajne denaturacije bjelančevina prisutnih u otopini, a što se ocjenjuje mjerenjem viskoziteta i mutnoće, ultracentrifugiranjem i elektroforezom. Otopina ne sadrži nikakve vidljive čestice nakon zagrijavanja na 57 °C i nakon trešnje u mehaničkom mikseru tijekom šest sati na toj temperaturi.
      
         Identifikacija
      
      
                  i.
               
               
                  Testovima taloženja s određenim antiserumima treba pokazati da oba pripravka sadrže samo bjelančevine ljudske plazme.
               
            
                  ii.
               
               
                  Elektroforezom, uz primjenu tehnike pokretne granice (zone) u prihvatljivim i odgovarajućim uvjetima, treba pokazati da frakcija bjelančevina koja ima pokretljivost istovjetnu onoj albuminske komponente normalne ljudske plazme ne iznosi manje od 95 % mase bjelančevina prisutne u pripravcima ljudskog albumina, odnosno manje od 85 % mase bjelančevina prisutne u pripravcima frakcije bjelančevina ljudske plazme.
               
            
         Sadržaj i koncentracija natrija
      
      Sadržaj natrija u ljudskom albuminu siromašnom solju ne smije prelaziti 0,61 milimola po gramu albumina. U drugim pripravcima ljudskog albumina i frakcije bjelančevina ljudske plazme, koncentracija natrija ne smije prelaziti 0,15 mola po litri otopine ili isušenog pa iznova otopljenog proizvoda.
      
         Koncentracija kalija
      
      Koncentracija kalija u frakciji bjelančevina ljudske plazme ne smije prelaziti 2 milimola po litri otopine ili isušenog pa iznova otopljenog proizvoda.
      
         Kiselost
      
      pH-vrijednost svakog pripravka iznosi 6,8 ± 0,2 kada se mjeri pri temperaturi od 15 °C do 25 °C u otopini razrijeđenoj pomoću otopine koja sadržava 0,15 mola natrijeva klorida po litri, na način da koncentracija bjelančevina u završnom pripravku iznosi 10 grama po litri.
      
         Gubitak mase pri isušivanju
      
      Isušeni pripravci, ako su sušeni s fosfor-pentoksidom, pri tlaku koji tijekom 24 sata ne prelazi 0,02 mm žive, ne smiju izgubiti više od 0,5 % svoje težine.
      
         Sterilnost
      
      Konačni je proizvod sterilan kada se ispituje odgovarajućom bakteriološkom metodom.
      
         Pohrana
      
      Suhi ljudski albumin treba držati u dušiku ili vakuumu u sterilnom spremniku koji je hermetički zatvoren, tako da se spriječi zagađenje mikroorganizmima i, koliko je to moguće, prodor vlage, te zaštićen od svjetla i pohranjen na temperaturi ispod 20 °C.
      Otopine ljudskog albumina i frakcije bjelančevina ljudske plazme trebaju se čuvati u sterilnim spremnicima koji su hermetički zatvoreni, tako se spriječi moguće zagađenje mikroogranizmima, zaštićene od svjetla i pohranjene na temperaturi od 4 °C do 6 °C.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava informacije navedene na odgovarajućem modelu etikete (Prilog 4.). Datum pripreme otopina je datum termičke obrade u završnom spremniku.
      4.   NORMALNI LJUDSKI IMUNOGLOBULIN
      Normalni ljudski imunoglobulin je pripravak bjelančevina plazme dobiven iz pune ljudske krvi, koji sadržava protutijela koja postoje u zdravih odraslih osoba. On se dobiva iz sjedinjene tekuće ljudske plazme dobivene od najmanje 1 000 davatelja.
      Pri pripravljanju treba uporabiti metodu kojom se dobiva materijal koji udovoljava ovdje propisanim zahtjevima i koja sprečava prijenos serumskog hepatitisa putem konačnog proizvoda. Osim toga, metoda pripreme mora biti takva da protutijela sadržana u ishodnom materijalu budu u konačnom proizvodu koncentrirana u odgovarajućoj količini. Da je postupak pripravljanja svakog pojedinog konačnog proizvoda bio zadovoljavajući u tom smislu potvrđuje se određivanjem titra protutijela u ishodnom materijalu i konačnom proizvodu, stvorenih na barem jedan virus i jedan bakterijski toksin. Pri odabiru vrste protutijela čiji će se titar odrediti, prednost se daje onima za određivanje čijeg titra postoje etablirane metode.
      Tijekom pripravljanja ne dodaje se nikakav antiseptik niti bakteriostatik. Konačnom se pripravku mogu dodati odgovarajući konzervans i stabilizator, kako bi ga se održalo bakteriološki sterilnim i stabilnim.
      Konačni proizvod dolazi u opticaj kao otopina u kojoj je koncentracija imunoglobulina između 100 i 170 grama po litri.
      
         Identifikacija
      
      
                  i.
               
               
                  Testovima taloženja s posebnim antiserumima treba pokazati da pripravak sadrži samo bjelančevine ljudske plazme;
               
            
                  ii.
               
               
                  Elektroforezom, uz primjenu tehnike pokretne granice (zone) u prihvatljivim i odgovarajućim uvjetima, najmanje 90 % mase bjelančevina ima pokretljivost istovjetnu onoj gama-komponente globulina zdrave ljudske plazme.
               
            
         Postojanost
      
      Prije i nakon zagrijavanja konačne otopine na 37 °C, tijekom sedam dana ne smije biti vidljivih dokaza taloženja ili zamućenja. Također je uputno provesti testove metodom ultracentrifugiranja, da bi se utvrdio opseg razgradnje proizvoda na komponente manje molekularne težine. Treba koristiti onu metodu koju je odobrilo nacionalno tijelo nadležno za kontrolu.
      
         Kiselost
      
      pH konačne otopine iznosi 6,8 ± 0,4 kada se mjeri na temperaturi od 15 °C do 25 °C u otopini koja je pomoću otopine koja sadržava 0,15 mola natrijevog klorida po litri razrijeđene na način da koncentracija bjelančevina u njoj iznosi 10 grama po litri.
      
         Sterilnost
      
      Konačni proizvod je sterilan kada se ispituje odgovarajućom bakteriološkom metodom.
      
         Pohrana
      
      Otopinu ljudskog imunoglobulina treba držati u sterilnom spremniku koji je hermetički zatvoren radi sprečavanja zagađenja mikroorganizmima, zaštićenu od svjetla i pohranjenu na temperaturi od 4 °C do 6 °C.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 5.). Datum pripreme je datum punjenja završnog spremnika.
      5.   SPECIFIČNI LJUDSKI IMUNOGLOBULINI
      Specifični ljudski imunoglobulini sadržavaju protutijela protiv točno određenih virusnih ili bakterijskih agensa. Oni se stoga mogu pripremati iz sjedinjene krvi dobivene iz ograničenog broja donacija.
      Ovim uzusima podliježu sljedeći specifični ljudski imunoglobulini:
      
                  —
               
               
                  ljudski imunoglobulin antitetanus,
               
            
                  —
               
               
                  ljudski imunoglobulin anti-vakcinija.
               
            Moguće je razviti i druge specifične imunoglobuline, a ako postoji odgovarajuća međunarodna norma, treba ih testirati sukladno toj normi i njihovoj aktivnosti izraženoj u međunarodnim jedinicama.
      Ljudski imunoglobulin anti-vakcinija treba sadržavati najmanje 500 IU protutijela na vakciniju po ml, kao što je to određeno testom neutralizacije na korio-alantoničnim membranama ili na kulturi tkiva. Ljudski imunoglobulin antitetanus treba sadržavati najmanje 50 IU tetanus antitoksina po ml, kao što je to određeno testom neutralizacije provedenim na životinjama.
      Specifični ljudski imunoglobulini moraju također udovoljiti zahtjevima koji su opisani u odjeljku 4., „Normalni ljudski imunoglobulin”.
      Ovisno o sadržaju protutijela, koncentracija imunoglobulina u konačnoj otopini može varirati između 100 i 170 g po litri.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava sve informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 5.). Povrh toga, etiketa sadržava aktivnost izraženu u međunarodnim jedinicama prema odgovarajućoj Međunarodnoj normi ili Međunarodnom referentnom pripravku.
      6.   ISUŠENI LJUDSKI FIBRINOGEN
      Isušeni ljudski fibrinogen je isušeni pripravak koji sadržava topivi sastojak tekuće ljudske plazme koji se, nakon dodavanja trombina, pretvara u fibrin. Metoda pripreme koju valja uporabiti mora biti takva da se njome dobije materijal koji udovoljava ovdje propisanim zahtjevima i kojom se rizik od prijenosa serumskog hepatitisa svodi na najmanju moguću mjeru. Sjedinjena plazma koja se rabi pri pripremi fibrinogena trebala bi potjecati iz što je moguće manjeg broja donacija.
      Tijekom pripreme ne dodaje se nikakav antiseptik niti bakteriostatik. Konačni proizvod se liofilizira.
      
         Topivost
      
      Dodajte vodu preporučenom volumenu. Isušeni pripravak treba biti sasvim topiv. Tijekom 60 minuta nakon ponovnog otapanja proizvoda ne smije doći do taloženja.
      
         Identifikacija
      
      
                  i.
               
               
                  Testovima taloženja s posebnim antiserumima treba pokazati da proizvod sadržava isključivo bjelančevine ljudske plazme.
               
            
                  ii.
               
               
                  Proizvod koji je neposredno ponovno otopljen ima svojstvo zgrušavanja nakon dodavanja trombina. Kada se trombin doda otopini humanog fibrinogena koncentracije jednake onoj u svježoj normalnoj plazmi, zgrušavanje nastaje u najviše dvostrukom vremenu u odnosu na ono potrebno da nakon dodavanja trombina nastupi zgrušavanje u svježoj normalnoj plazmi.
               
            
                  iii.
               
               
                  Bjelančevina podložna grušanju. Najmanje 50 % ukupne količine bjelančevina nakon dodavanja trombina podliježe grušanju.
               
            
         Gubitak mase nakon isušivanja
      
      Pripravci koji se 24 sata suše fosfor-pentoksidom pri tlaku koji ne prelazi 0,02 mm žive ne smiju izgubiti više od 0,3 % svoje težine.
      
         Sterilnost
      
      Konačni proizvod je nakon ponovnog otapanja sterilan kada se ispituje odgovarajućom bakteriološkom metodom.
      
         Pohrana
      
      Ljudski fibrinogen drži se u dušiku ili vakuumu u sterilnom spremniku koji je hermetički zatvoren da se spriječi zagađenje mikroorganizmima i, u mjeri u kojoj je to moguće, prodor vlage, zaštićen od svjetla i pohranjen na preporučenoj temperaturi.
      
         Označivanje
      
      Etiketa na spremniku sadržava sve informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 6.). Datum pripreme je datum njegova stavljanja u konačnu otopinu prije liofilizacije.
      7.   ISUŠENI ILI ZAMRZNUTI LJUDSKI ČIMBENIK ZGRUŠAVANJA VIII
      I.   Zahtjevi koji se odnose na davatelje
      
      Davatelji moraju biti zdravi i, posebno, ne bolovati od neke prenosive bolesti, u skladu s kriterijima usvojenim za isušenu ljudsku plazmu.
      II.   Zahtjevi vezani za pripravke
      
      
         Sterilnost i netoksičnost
      
      Konačni proizvod treba biti sterilan i apirogen. Kada se krioprecipitacija obavlja u plastičnim vrećicama, proizvod ne smije sadržavati organsku otopinu ili neke druge strane tvari koje su prisutne u smjesi za zamrzavanje. Prolaz tih proizvoda kroz stjenke plastične vrećice može se spriječiti na način da se tijekom cijelog razdoblja uranjanja vrećica stavi u drugu nepropusnu vrećicu. Opasnost od trganja plastične vrećice tijekom pohrane u smrznutom stanju može se spriječiti na način da se svaka vrećica drži u zaštitnoj kutiji.
      
         Eritrociti, leukociti i trombociti
      
      Centrifugiranje treba biti takvo da nakon uzimanja krvi eliminira nastale krvne elemente što brže i što potpunije.
      
         Topivost
      
      Dodavanje naznačene količine odgovarajućeg otapala treba rezultirati potpunim otapanjem isušenog proizvoda za manje od 30 minuta na 37 °C. Male i lako razdvojive nakupine fibrinogena mogu zaostati.
      
         Postojanost
      
      Pripravak koji je konzerviran na 20 °C ne smije pokazivati nikakav znak taloženja tijekom tri sata nakon što je bio otopljen.
      
         Djelovanje
      
      Iznova otopljeni pripravak mora sadržavati naznačenu minimalnu količinu čimbenika VIII, pri čemu aktivnost jedne jedinice mora odgovarati aktivnosti 1 ml prosječne normalne svježe plazme, utvrđenoj metodom koju je odobrilo nadležno nacionalno tijelo.
      Odsustvo nepravilnih protutijela i, ako je pripravak namijenjen bolesnicima bilo koje krvne grupe ABO sustava, titar anti-A i anti-B protutijela koji ne prelazi 32.
      
         Identifikacija
      
      Testovima taloženja s posebnim antiserumima valja pokazati da proizvod sadržava samo bjelančevine ljudske plazme.
      
         Gubitak mase nakon isušivanja
      
      Liofilizirani pripravci kada su osušeni na fosfor-pentoksidu, pri tlaku koji ne prelazi 0,02 mm žive, tijekom 24 sata ne smiju izgubiti više od 1,5 % svoje težine.
      
         Pohrana
      
      Ljudski čimbenik VIII. se pohranjuje u duboko smrznutom stanju na temperaturi ispod -30 °C, a u liofiliziranom stanju na temperaturi ispod 5 °C, zaštićen od svjetla. Isušeni se pripravak čuva u dušiku ili in vacuo, u sterilnoj bočici koja je zatvorena tako da sprečava ulazak svih mikroorganizama i, koliko je to moguće, prodor bilo koje vrste vlage. Pohrana u smrznutom stanju ne smije trajati dulje od šest mjeseci, a u isušenom stanju dulje od godine dana, osim ako se ponovno ne testira je li pripravak zadržao minimalnu propisanu aktivnost.
      III.   Označivanje
      
      Etiketa na pripravku sadržava sve informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 7.).
      8.   ISUŠENI LJUDSKI ČIMBENIK KOAGULACIJE IX
      I.   Zahtjevi koji se odnose na davatelje
      
      Davatelji moraju biti zdravi i, posebno, ne bolovati ni od kakve prenosive bolesti u skladu s kriterijima usvojenim za isušenu ljudsku plazmu.
      II.   Zahtjevi koji se odnose na koncentrat
      
      
         Sterilnost i netoksičnost
      
      Konačan proizvod koji je testiran odgovarajućim metodama treba biti sterilan, apirogen i bez nepoželjnih vazodepresivnih ili respiratornih učinaka. Testiranje odsutnosti vazodepresivnih učinaka treba izvršiti na psu ili mački.
      
         Topivost
      
      Pri temperaturi od 37 °C, dodavanje naznačene količine otapala treba u 10 minuta rezultirati potpunim otapanjem pripravka.
      
         Aktivnost tromboplastina i odsutnost slobodnog trombina
      
      Vrijeme rekalcifikacije normalne plazme, mjereno na 37 °C u uzorcima iznova otopljenog proizvoda jednakog volumena, a različitih razrjeđenja, ne smije biti kraće od 40 sekundi. Iznova otopljeni uzorci proizvoda u koje je dodan jednaki volumen fibrinogena (3 g/l) ne smije koagulirati tijekom šest sati na 37 °C.
      
         Djelovanje
      
      Iznova otopljeni pripravak treba sadržavati naznačenu minimalnu količinu čimbenika IX, pri čemu aktivnost jedne jedinice mora odgovarati aktivnosti 1 ml prosječne normalne svježe plazme, utvrđenoj metodom koju je odobrilo nadležno nacionalno tijelo.
      
         Polučeni terapijski učinak i stabilnost in vivo
      Metoda pripremanja treba biti takva da brzo intravenozno ubrizgavanje doze od 50 jedinica po kg tjelesne mase, uz uporabu nekoliko serija materijala danih nekolicini bolesnika, uzrokuje u roku od 15 minuta, uz odsutnost posebnog inhibitora i u bazalnim uvjetima, prosječan porast od najmanje 300 jedinica po litri plazme, koji zaostaje i nakon 24 sata, uz prosječan porast od najmanje 60 jedinica po litri plazme.
      
         Identifikacija
      
      Testovima taloženja s posebnim antiserumima valja pokazati da proizvod sadržava samo bjelančevine ljudske plazme.
      
         Gubitak mase nakon isušivanja
      
      Kada se suši nad fosfor-pentoksidom, uz tlak koji ne prelazi 0,02 mm žive tijekom 24 sata, proizvod ne smije izgubiti više od 1,5 % svoje težine.
      
         Pohrana
      
      Isušeni pripravci moraju se pohraniti na temperaturi ispod 5 °C. Rok pohrane ne smije biti dulji od dvije godine, osim ako se aktivnost pripravka iznova ne testira.
      III.   Označivanje
      
      Naljepnica na pripravku sadržava sve informacije koje su navedene na uzorku etikete (Prilog 8.).
      PRILOG I. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      POTVRDA
      (Članak 4.)
      NE SMIJE SE ODVAJATI OD POŠILJKE
      
                  …
                  (Mjesto)
               
               
                  … 19 …
                  Datum)
               
            
         
      
                  Broj ambalaža
               
               
                  Dolje potpisani potvrđuje da je niže navedena pošiljka
               
            
                  …
               
               
                  …
               
            
                  …
               
               
                  …
               
            
                  Oznaka
               
               
                  za čiju je pripremu odgovorno …
               
            
                  …
               
               
                  …
               
            
                  …
               
               
                  …
               
            
                  Serijski broj
               
               
                  jedno od tijela na koje se upućuje u članku 6. Sporazuma, u skladu sa specifikacijama Protokola uz Sporazum i može se odmah isporučiti primatelju.
               
            
                  …
               
               
                  (Naziv i mjesto) …
               
            
                  …
               
            
                  
                     
                                    …
                                    (Pečat)
                                 
                                 
                                    …
                                    (Potpis)
                                 
                                 
                                    …
                                    (Titula)
                                 
                              
               
            PRILOG 2. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Puna ljudska krv: …
               
            
                  3.
               
               
                  Referentni broj (Poziv na broj): …
               
            
                  4.
               
               
                  Krvna grupa: …
               
            
                  5.
               
               
                  Rh faktor: …
               
            
                  6.
               
               
                  
                              … ml
                           
                           
                              antikoagulacijska otopina
                           
                        
                              … g
                           
                           
                              (glukoza/1)
                           
                        
                              … mol
                           
                           
                              dinatrijev citrat/l
                           
                        
                              … ml
                           
                           
                              krv
                           
                        
            
                  7.
               
               
                  
                              Titar izohemolizina
                           
                           
                              (utvrđen)
                           
                        
                              (nije utvrđen)
                           
                        
            
                  8.
               
               
                  Datum uzimanja: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  9.
               
               
                  Pohraniti na 4 °C do 6 °C.
               
            
                  10.
               
               
                  Ne smije se rabiti ako postoji bilo kakav vidljiv znak propadanja (hemolize).
               
            PRILOG 2.a PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Koncentrat ljudskih eritrocita: …
               
            
                  3.
               
               
                  Referentni broj (poziv na broj): …
               
            
                  4.
               
               
                  Krvna grupa: …
                  …
               
            
                  5.
               
               
                  Rh faktor: …
               
            
                  6.
               
               
                  … ml pripremljeno iz … ml krvi.
               
            
                  7.
               
               
                  Volumen i sastav primijenjenog antikoagulansa: …
               
            
                  8.
               
               
                  Datum uzimanja: …
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  9.
               
               
                  Pohraniti na 2 °C do 6 °C.
               
            
                  10.
               
               
                  
                              Dodana umjetna vodena otopina volumen: …
                           
                           
                              sastav: …
                           
                        
            PRILOG 3. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Isušena ljudska plazma: …
               
            
                  3.
               
               
                  Referentni broj (poziv na broj): …
               
            
                  4.
               
               
                  Iznova otopiti u … ml sterilne, apirogene, destilirane vode.
               
            
                  5.
               
               
                  Iznova otopljena plazma sadržava:
                  
                              … g
                           
                           
                              glukoze/l
                           
                        
                              … mola
                           
                           
                              dinatrijeva citrata/l
                           
                        
                              … g/l
                           
                           
                              koncentracija bjelančevina (najmanja)
                           
                        
            
                  6.
               
               
                  Broj pojedinačnih donacija u sjedinjenoj krvi: …
               
            
                  7.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  8.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi ispod 20 °C.
               
            
                  9.
               
               
                  Koristiti odmah nakon ponovnog otapanja.
               
            PRILOG 4. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača:…
               
            
                  2.
               
               
                  Isušeni ljudski albumin: …
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  Albumin: …g
                  
                              Stabilizator:…
                           
                           
                              priroda … g/l
                           
                           
                              (u iznova načinjenoj otopini)
                           
                        
                     
                  
                              Natrij: … mmol/g
                           
                           
                              (albumin)
                           
                        
            
                  5.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  6.
               
               
                  Iznova otopljeno u … ml sterilne, apirogene destilirane vode.
               
            
                  7.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi ispod 20 °C.
               
            
                  8.
               
               
                  Koristiti odmah nakon ponovnog otapanja.
               
            PRILOG 4. (nastavak 1.)
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Otopina ljudskog albumina: … ml
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  Albumin: … g/l
                  
                              Stabilizator:
                           
                           
                              priroda: …,… g/l
                           
                        
                     
                  
                              Natrij: … mmol/g
                           
                           
                              (albumin)
                           
                        
            
                  5.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  6.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi od 4 °C do 6 °C.
               
            
                  7.
               
               
                  Ne smije se koristiti osim ako nije bistra i bez ikakvih taloga.
               
            PRILOG 4. (nastavak 2.)
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Frakcija bjelančevina plazme: … ml
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  Albumin:… g/l
                  
                              Stabilizator:
                           
                           
                              priroda …,… g/l
                           
                        
                     
                  
                              Natrij: …mmol/g
                           
                        
            
                  5.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  6.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi od 4 °C do 6 °C.
               
            
                  7.
               
               
                  Ne smije se koristiti osim ako nije bistra i bez ikakvih taloga.
               
            PRILOG 5. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Normalni ljudski imunoglobulin: …
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  
                              Ukupne bjelančevine:
                           
                           
                              … g/l
                           
                        
                              Ostali dodani materijali:
                           
                           
                              priroda …, … g/l
                           
                        
                     
                  
                              Ukupni volumen:
                           
                           
                              … ml
                           
                        
            
                  5.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  6.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi od 4 °C do 6 °C.
               
            
                  7.
               
               
                  Nije namijenjeno za intravenoznu injekcijsku primjenu.
               
            PRILOG 6. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Isušeni ljudski fibrinogen: …
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  
                              Bjelančevina podložna zgrušavanju:
                           
                           
                              … g
                           
                        
                              Ostali dodani materijali:
                           
                           
                              priroda …, … g/l
                           
                           
                              iznova načinjene otopine.
                           
                        
            
                  5.
               
               
                  Datum pripreme: …
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  6.
               
               
                  Iznova otopljeno u … ml sterilne, apirogene destilirane vode.
               
            
                  7.
               
               
                  
                              Broj pojedinačnih donacija u sjedinjenoj krvi:
                           
                           
                              …
                           
                        
            
                  8.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi ispod 20 °C.
               
            
                  9.
               
               
                  Koristiti odmah nakon ponovnog otapanja.
               
            PRILOG 7. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  
                              Zamrznuti ljudski čimbenik zgrušavanja VIII,
                           
                           
                              ili
                           
                        
                              Isušeni ljudski čimbenik zgrušavanja VIII
                           
                           
                               
                           
                        Metoda pripreme: …
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj …
               
            
                  4.
               
               
                  Minimalna količina čimbenika VIII, ukupna količina bjelančevina, priroda i količina bilo koje dodane tvari: …
               
            
                  5.
               
               
                  Priroda i volumen otapala: …
               
            
                  6.
               
               
                  Broj davatelja po seriji: …
               
            
                  7.
               
               
                  Titar hemaglutinina nije veći od 1:32 ili krvna grupa ABO
               
            
                  8.
               
               
                  Datum pripreme: …
               
            
                  9.
               
               
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  10.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla i smrznuto na temperaturi ispod –30 °C ili u isušenom stanju na temperaturi ispod 5 °C.
               
            
                  11.
               
               
                  Nakon ponovnog otapanja proizvoda, ubrizgati intravenozno, i to odmah, ili najkasnije tri sata nakon pohrane na 20 °C.
               
            PRILOG 8. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
                  …
               
            
                  2.
               
               
                  Isušeni ljudski čimbenik zgrušavanja IX: …
                  Ostali prisutni čimbenici zgrušavanja: …
                  Metoda pripreme: …
               
            
                  3.
               
               
                  Serijski broj: …
               
            
                  4.
               
               
                  Minimalna količina čimbenika IX, ukupna količina bjelančevina, priroda i količina bilo koje dodane tvari: …
               
            
                  5.
               
               
                  Priroda i volumen otapala: …
               
            
                  6.
               
               
                  Broj davatelja po seriji: …
               
            
                  7.
               
               
                  Datum pripreme: …
               
            
                  8.
               
               
                  Rok valjanosti: …
               
            
                  9.
               
               
                  Pohraniti zaštićeno od svjetla, na temperaturi ispod 5 °C.
               
            
                  10.
               
               
                  Nakon ponovnog otapanja proizvoda, ubrizgati odmah intravenozno.
               
            PRILOG 9. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Sterilna apirogena destilirana voda:
                  
                              Za ponovno otapanje
                           
                           
                              isušene ljudske plazme
                              isušenog ljudskog albumina
                              isušenog ljudskog fibrinogena
                              ili isušenih čimbenika zgrušavanja VIII i IX.
                           
                        
            
                  3.
               
               
                  
                              Količina:
                           
                           
                              … ml
                           
                        
            PRILOG 10. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      
                  1.
               
               
                  Naziv i adresa proizvođača: …
               
            
                  2.
               
               
                  Aplikacijski set
                  Aplikacijski set za davanje pune ljudske krvi, iznova otopljene isušene ljudske plazme, ljudskog albumina, frakcije bjelančevina ljudske plazme, ljudskog fibrinogena ili isušenog ili zamrznutog ljudskog čimbenika zgrušavanja VIII, ili isušenog ljudskog čimbenika zgrušavanja IX.
               
            PRILOG II. PROTOKOLU
      VIJEĆE EUROPE
      EUROPSKI SPORAZUM O RAZMJENI LJEKOVITIH TVARI LJUDSKOG PODRIJETLA
      NETOKSIČNOST PLASTIČNE OPREME ZA DAVANJE TRANSFUZIJE KRVI
      1.   KEMIJSKI TESTOVI
      Testovi su namijenjeni provjeri plastične opreme za davanje transfuzije krvi. Ova se oprema sastoji od dvije glavne kategorije:
      
                  1.
               
               
                  plastičnih spremnika za skupljanje, odvajanje i pohranu krvi i krvnih proizvoda;
               
            
                  2.
               
               
                  plastičnih setova za uzimanje i davanje krvi.
               
            Testovi se obavljaju na materijalima koji su prethodno bili sterilizirani metodom koju treba koristiti za definitivnu sterilizaciju opreme. Ti materijali uključuju:
      
                  1.
               
               
                  vrste plastike koje se koriste za izradu spremnika;
               
            
                  2.
               
               
                  cjevčice koje se koriste u spremnicima; i
               
            
                  3.
               
               
                  setove za uzimanje i davanje krvi.
               
            Testove kojima se provjeravaju spremnici treba obaviti prije nego se spremnike napuni antikoagulacijskom otopinom. No, ako se testovi provode na spremnicima koji su ispunjeni antikoagulacijskom otopinom, testovi kojima se određuju granične vrijednosti, navedeni u odjeljku III., kojima je prethodno podvrgnuta sama antikoagulacijska otopina, uzimaju se u obzir pri vrednovanju rezultata testiranja spremnika.
      Od proizvođača opreme za davanje transfuzije se zahtjeva da odgovarajućim tijelima nadležnim za zdravstvo podastre detaljne podatke o sastavu plastičnog materijala ili plastičnih materijala i ostalih materijala koje rabi pri izradi opreme, porijeklu komponenata uporabljenog (uporabljenih) materijala i podatke o metodama njihove proizvodnje (ili alternativno, referentne brojeve kemijskih spojeva), pojedinosti o izradi opreme, prirodi svakog dodatka i adheziva dodanog proizvodu tijekom procesa proizvodnje, te metodi sterilizacije. Nije dopuštena nikakva izmjena bilo čega gore navedenog bez prethodnog predočenja i odobrenja odgovarajućih tijela nadležnih za zdravstvo.
      Svaka serija sirovine koja se rabi u izradi opreme označena je serijskim brojem koji proizvođač opreme bilježi zajedno s identifikacijskim brojevima svih serija opreme za transfuziju koju je od te sirovine izradio, kao i rezultatima svih testova relevantnih za te serije.
      Treba poduzeti svaku moguću mjeru predostrožnosti radi smanjenja opasnosti od slučajnog onečišćenja u svakoj fazi procesa proizvodnje.
      A.   Priprema iscrpka i kontrolnog uzorka („slijepe probe”)
      
      
                  (a)
               
               
                  Za ukupan test kao što je opisan dolje potrebno je 1 250 cm2 plastike (ukupna površina, obje strane plastičnog uzorka u obliku ploče s površinom od 625 cm2). Uzorak, bez ikakvog tiska ili etikete, treba razrezati u dva dijela koji nemaju više od 10 cm2.
                  Za cjevčice duljine (L) u centimetrima računa se slijedeće:
                  kada je:
                  D1– unutarnji promjer u cm,
                  D2– vanjski promjer u cm.
                  Cjevčice treba razrezati po duljini na dijelove koji imaju približno 10 cm. Za ekstrakciju se koristi 10 ml vode za 50cm2 površine.
               
            
                  (b)
               
               
                  U spremnik od borosilikatnog stakla treba staviti komadiće plastičnog filma ili cjevčice s 250 ml apirogene destilirane vode koja je dobivena iz destilatora sa staklenim kondenzacijskim površinama i cjevčicama za skupljanje (1). Otvor spremnika je pokriven laboratorijskom čašom, nakon čega se spremnik zagrijava 30 minuta u zasićenoj vodenoj pari na 110 °C (autoklaviranjem) i tada se brzo hladi na sobnu temperaturu, a volumen se prilagođava na 250 ml pomoću apirogene destilirane vode. Nije važno jesu li plastični uzorci skloni neznatnoj međusobnoj adheziji.
                  Plastični materijal koji je osjetljiv na toplinu umjesto zagrijavanja u autoklavu može se zagrijavati na 70 °C tijekom 72 sata.
                  „Slijepa proba” priprema se na odgovarajući način uz izostavljanje plastike.
               
            B.   Testiranje iscrpka
      
      1.   Tvar podložna oksidaciji
      
      Ekstraktu od 20 ml u Erlenmayerovoj tikvici iz borosilikatnog stakla dodati 20 ml od 2 milimola otopine kalijevog permanganata po litri i 1,0 ml 1-molarne sumporne kiseline po litri, te mješavinu prokuhati tri minute. Otopinu brzo ohladiti i dodati 0,1 g kalijevog jodida te pet kapi škrobne otopine. Titrirati otopinom koja sadrži 10 milimola natrijevog tiosulfata po litri. Istodobno izvršiti titraciju „slijepe probe”. Razlika u volumenu tiosulfata koji se koristi u te dvije titracije ne prelazi 2,00 ml otopine koja sadrži 10 milimola natrijevog tiosulfata po litri.
      2.   Klorid
      
      Iscrpak je u skladu s odgovarajućom graničnom vrijednošću za kloride dobivenom testom određivanja granične vrijednosti, koja ne premašuje 11,2 μmola klorida po litri.
      3.   Amonijak
      
      Iscrpak je u skladu s odgovarajućom graničnom vrijednošću za amonijak dobivenom testom određivanja granične vrijednosti, koja ne premašuje 120 μmola NH3 po litri.
      4.   Fosforna kiselina – fosfat
      
      Iscrpak je u skladu s graničnom vrijednošću dobivenom testom određivanja granične vrijednosti za fosfat.
      
         Test određivanja granične vrijednosti za fosfat
      
      Ishlapiti 25 ml iscrpka gotovo do isušenja u Kjeldahlovoj tikvici, ohladiti ostatak, dodati dvije kapi sumporne kiseline i 1 ml nitratne kiseline, zagrijati mješavinu sve dok se ne zadimi, tada ohladiti. Dodati jednu kap perklorne kiseline i lagano zagrijavati pola sata. Ohladiti ostatak i dodati vode do razine od 25 ml. Prenijeti 10 ml otopine u bocu za titraciju od 25 ml, dodati 8 ml otopine amonijeva molibdata i sumporne kiseline i 2 ml svježe pripremljene otopine askorbinske kiseline koncentracije od 100 g/l. Zagrijavati na vodenoj kupki na 50 °C tijekom 30 minuta, ohladiti i razrijediti mješavinu na 25 ml. Zelena ili plava boja otopine nije intenzivnija od one dobivene istovjetnim tretiranjem 25 ml „slijepe probe”.
      5.   Kiselost i alkaličnost
      
      10 ml iscrpka nije obojeno crvenom bojom nakon dodatka dviju kapi otopine fenolftaleina i potrebno je najviše 0,4 ml otopine koja sadrži 10 milimola natrijeve lužine po litri kako bi se dobila crvena boja. Nakon uklanjanja boje dodavanjem 0,08 ml otopine koja sadrži 10 milimola klorovodične kiseline po litri, dodatak od pet kapi otopine metil-crvene boje stvara crveno ili narančasto-crveno obojenje.
      6.   Ostatak nakon ishlapljivanja
      
      Ishlapiti 100 ml iscrpka do isušivanja nad vodenom kupkom i sušiti na 105 °C dok težina ne postane konstantna. Ostatak teži najviše 5,0 mg.
      7.   Bistrina i boja
      
      Kada se iscrpak promatra u sloju od 5 cm, on je, u usporedbi sa „slijepom probom”, bistar i bezbojan.
      8.   Okus i miris
      
      U usporedbi sa „slijepom probom”, iscrpak nema niti mirisa ni okusa.
      9.   Posebni elementi
      
      Iscrpak je u skladu s odgovarajućim graničnim vrijednostima dobivenim testovima određivanja graničnih vrijednosti za:
      
                  i.
               
               
                  bilo koji od sljedećih elemenata: arsen, krom, bakar, olovo, silikon, srebro i kositar, koje iznose 1 μg/g;
               
            
                  ii.
               
               
                  kadmij, koja iznosi 0,1 μg/g.
               
            10.   Ostatak nakon izgaranja
      
      1,0 g plastičnog materijala kojeg se izgara do konstantne težine, ostavlja najviše 1 mg ostatka.
      11.   Teški metali
      
      Otopiti ostatak, preostao nakon izgaranja, u minimalnoj količini otopine 2-molarne klorovodične kiseline po litri, zagrijavajući ako je potrebno. Provesti odgovarajući granični test za teške metale. Plastični materijal je u skladu s graničnom vrijednošću koja ne prelazi 5 mikrograma po gramu, izračunatoj kao za Pb (olovo).
      II.   BIOLOŠKI TESTOVI
      
                  1.
               
               
                  Test za nedopuštenu toksičnost obavlja se pri početnoj ocjeni formulacija plastike namijenjenih izradi spremnika i setova za uzimanje i davanje materijala, uz primjenu iscrpka A, i na svakoj novoj seriji materijala odobrenih formulacija, uz primjenu iscrpka B, postupkom koji je naveden u nacionalnim farmakopejama ili nekom drugom metodom koju je odobrilo nacionalno tijelo nadležno za kontrolu. (Iscrpci A i B su definirani u bilješci dolje).
               
            
                  2.
               
               
                  Test na apirogenost obavlja se pri početnoj ocjeni formulacija plastike namijenjenih izradi spremnika i setova za uzimanje i davanje materijala, uz primjenu iscrpka A, i na svakoj novoj seriji materijala odobrene formulacije, uz primjenu iscrpka A, te pri rutinskoj kontroli spremnika i setova za uzimanje i davanje materijala, uz uporabu iscrpka C, i to postupkom koji je naveden u nacionalnoj farmakopeji ili nekom drugom metodom koju je odobrilo nacionalno tijelo zaduženo za kontrolu.
                  O vremenskoj učestalosti testiranja na prisutnost pirogena uz primjenu iscrpka C odlučuje nacionalno tijelo nadležno za kontrolu. (Iscrpci A i C su definirani u napomeni dolje).
               
            
                  3.
               
               
                  Testiranje postojanja hemolitičkih učinaka u puferskim sustavima obavlja se pri početnoj ocjeni formulacija plastike koje su namijenjene izradi spremnika i setova za uzimanje i davanje materijala i na svakoj novoj seriji materijala odobrenih formulacija uz primjenu ekstrakta opisanog u stavku 1.A gore. (Testnu metodu i prihvatljivu graničnu vrijednost vidjeti u Dodatku ovom Prilogu).
               
            
                  4.
               
               
                  Testiranje sposobnosti preživljavanja eritrocita u in vivo uvjetima obavlja se pri početnoj ocjeni formulacija plastike namijenjenih izradi spremnika za krv. Ako se na dogovorenoj formulaciji načini bilo kakva promjena, test se ponavlja. (Testne metode koje se savjetuje primijeniti u ovu svrhu, i prihvatljivu graničnu vrijednost, vidjeti u Dodatku ovom Prilogu).
               
            
         Napomena:
      
      
         Iscrpak A
      
      priprema se dodavanjem apirogenog natrijevog klorida iscrpku opisanom u I.A gore, do konačne koncentracije od 9 grama po litri.
      
         Iscrpak B:
      
      Set za davanje transfuzije. Napuniti set za transfuziju što je moguće većom količinom sterilne apirogene otopine koja sadržava 9 grama natrijevog klorida po litri, dobro zatvoriti štipaljkom krajeve i potpuno uroniti napunjeni set na jedan sat u vodu čija se temperatura održava na 85 °C.
      Plastični spremnik. Ako je spremnik napunjen antikoagulacijskom otopinom, treba ga isprazniti i dva puta isprati sa po 250 mililitara sterilne apirogene destilirane vode na temperaturi od 20 °C. Spremnik napuniti sa 100 mililitara sterilne apirogene otopine koja sadržava 9 grama natrijevog klorida po litri, dobro ga zatvoriti i uroniti na jedan sat u vodoravnom položaju u vodu čija se temperatura održava na 85 °C. Skupiti sadržaj spremnika.
      
         Iscrpak C:
      
      Set za davanje transfuzije. Propustiti 40 ml sterilne apirogene otopine natrijevog klorida u koncentraciji od 9 grama po litri, na sobnoj temperaturi, kroz najmanje 10 setova za davanje transfuzije, brzinom od približno 10 ml u minuti, i skupiti istekle sadržaje. Testirati dobivenu otopinu.
      Plastični spremnik. Prazan. Propustiti 100 ml sterilne apirogene otopine natrijevog klorida u koncentraciji od 9,0 grama po litri, na sobnoj temperaturi, kroz cjevčice za sakupljanje najmanje četiriju plastičnih spremnika, ostaviti otopinu u spremnicima 10 minuta i skupiti istekle sadržaje propuštajući ih kroz prijenosne cijevi. Testirati dobivenu otopinu.
      Plastični spremnik ispunjen antikoagulansom (vidjeti odjeljak III.).
      III.   ZAHTJEVI VEZANI ZA ANTIKOAGULACIJSKU OTOPINU U PLASTIČNIM SPREMNICIMA
      Svaki spremnik sadrži onu količinu i formulaciju antikoagulacijske otopine koja je naznačena na etiketi kao potrebna za onu količinu krvi koju treba sakupiti u spremnik.
      Antikoagulacijska otopina i/ili sastojci uporabljeni za njenu pripremu trebaju udovoljavati zahtjevima nacionalne farmakopeje određene zemlje.
      Antikoagulacijska otopina treba udovoljavati zahtjevima nacionalne farmakopeje u određenoj zemlji u pogledu graničnih vrijednosti teških metala, odsustva čestičnih zamućenja, netoksičnosti i apirogenosti.
      
         (1)  Ako je plastika u dodiru s antikoagulacijskom otopinom, komadiće treba prvo staviti u sličan spremnik s hladnom destiliranom vodom (100 ml) i nekoliko puta protresti. To treba ponoviti jednom.
      Dodatak
      A.   Test na nedopustivu toksičnost
      
      (Vidjeti točku II. 1. Priloga gore): pridržava se granične vrijednosti specificirane u nacionalnoj farmakopeji.
      B.   Test na apirogenost.
      
      (Vidjeti točku II.2. Priloga gore): pridržava se granične vrijednosti specificirane u nacionalnoj farmakopeji.
      C.   Test na postojanje hemolitičkih učinaka u puferskim sustavima.
      
      (Vidjeti točku II. 3. Priloga gore):
      
                  a)
               
               
                  
                     Granična vrijednost:
                  
                  Slana otopina koja je jednaka otopini koja sadržava 5,0 grama NaCl po litri, u mjeri u kojoj se to odnosi na osmotsko djelovanje elektrolita, ne hemolizira više od 10 % uzorka, a postotni udio hemolizirane slane otopine koncentracije od 4,0 grama po litri ne razlikuje se za više od 10 % od onog nastalog uslijed djelovanja odgovarajuće kontrolne otopine.
               
            
                  b)
               
               
                  
                     Metoda:
                  
                  Od primarne temeljne puferske otopine za hemolizu pripremaju se tri otopine: 30 ml temeljne puferske otopine i 10 ml vode (otopina aa), 30 ml temeljne puferske otopine i 20 ml vode (otopine bo), te 15 ml temeljne puferske otopine i 85 ml vode (otopina co).
                  Svakoj se kiveti (1, 2, i 3) dodaje 1,40 ml iscrpka. U kivetu 1 se dodaje 0,10 ml otopine ao, u kivetu 2 0,10 ml otopine bo, a u kivetu 3 0,10 ml otopine co, na taj način dobivajući slane otopine koje su jednake otopinama koje sadržavaju, što se osmotskog djelovanja elektrolita tiče, 5,0 (kiveta 1), 4,0 (kiveta 2) i 1,0 grama NaCl po litri (kiveta 3). Svakoj se kiveti dodaje 20 μl svježe, dobro promiješane heparinizirane ljudske krvi. Kivete se stavljaju u vodenu kupku na 30 °C (± 1 °C) tijekom 40 minuta. Tada se pripremaju tri otopine koje sadržavaju 3,0 ml otopine ao i 12,0 ml vode (otopina α1), 4,0 ml otopine bo i 11,0 ml vode (otopina β1) i 4,75 ml otopine bo i 10,25 ml vode (otopina y1).
                  U prvu se kivetu dodaje 1,50 ml otopine a1, u drugu 1,50 ml otopine b1, a u treću 1,50 ml otopine c1. Kivete se centrifugiraju pet minuta brzinom od 2 000 do 2 500 okretaja u minuti u centrifugi s automatskim izbačajem („swing-out” centrifuga). Istodobno se za svaku od otopina navedenih koncentracija pripremaju kontrolne otopine u kojima se iscrpak zamjenjuje vodom.
                  Mjeri se apsorpcija svjetlosti valne duljine od 540 nm (ekstinkcija) u tekućem sloju. Temeljna puferska otopina rabi se kao „slijepa proba”. Postotni udio hemoliziranog sadržaja u ukupnom uzorku izračunava se prema sljedećoj formuli:
                  pri čemu je
                  E 100 %= ekstinkcija u otopini koja sadržava ekvivalent od 1,0 grama soli po litri,
                  i
                  E exp= ekstinkcija u otopinama koje sadržavaju ekvivalent od 4,0 odnosno 5,0 grama soli po litri
               
            
         Temeljna puferska otopina za hemolizu
      
      90,0 natrijevog klorida, 13,7 g bezvodnog dinatrijevog fosfata i 1,90 g bezvodnog mononatrijevog fosfata otapaju se u destiliranoj vodi dok se ne dosegne količina od 1 000,00 ml otopine.
      D.   Test sposobnosti preživljavanja eritrocita u in vivo uvjetima
      
      (Vidjeti točku II. 4. Priloga gore):
      
                  a)
               
               
                  
                     Granična vrijednost:
                  
                  Od eritrocita iz pune ljudske krvi kojoj je dodan antikoagulans ACD i koja je pohranjena tijekom 21 dana na 4 °C do 6 °C, barem 70 % eritrocita preživljava još 24 sata nakon transfuzije. To se može utvrditi pomoću jedne od metoda predloženih u točki (b) dolje.
               
            
                  b)
               
               
                  
                     Preporučene metode:
                  
                  
                              1.
                           
                           
                              Metoda ISO/TC/76/WGD/3, Dodatak E.
                           
                        
                              2.
                           
                           
                              Asby Technique – Ashby, W. The determination of the length of life of transfused blood corpuscule in man. (Određivanje duljine životnog vijeka transfundiranih krvnih stanica u ljudi).
                              J. Exp. Med. 29: 267-82. 1919.
                              Young, L.E., Platzer, R.F., i Rafferty, J.A. Differential agglutination of human erythrocytes. (Diferencijalna aglutinacija ljudskih eritrocita).
                              J. Lab. Clin. Med. 32: 489-501, 1947.
                           
                        
                              3.
                           
                           
                              The Gibson-Scheitlin method – Gibson, J.G. i Scheitlin, W.A. A method employing radio-active chromium for assaying the viability of human erythrocytes returned to the circulation after refrigerated storage. (Metoda primjene radioaktivnog kroma pri određivanju vijabilnosti ljudskih eritrocita vraćenih u cirkulaciju nakon pohrane na ohlađenom mjestu).
                              J.Lab. Clin. Med. 46: 679-88, 1955.
                           
                        
                              4.
                           
                           
                              The Strumia method – Strumia, M.M., Taylor, L., Sample A. B., Colwell, L.S. i Dugan, A. Uses and limitations of survival studies of erythrocytes tagged with Cr 51. (Primjene i ograničenja studija sposobnosti preživljavanja eritrocita označenih Cr 51.)
                              Krv 10: 429-40, 1955.
                           
                        
                              5.
                           
                           
                              Cr51 – I125 technique – Button, L.N., Gibson, J.G. i Walter, C.W. Simultaneous determination of the volume of red cells and plasma for survival studies of stored blood. (Istodobno određivanje volumena eritrocita i plazme u studiji održanosti aktivnosti pohranjene krvi).
                              Transfuzija 5: 143-48, 1965.
                           
                        
                              6.
                           
                           
                              
                                 Recommended method for radioisotope red cell survival studies. Brit. J. Haemat. 21:241, 1971.
                              (Preporučena metoda studija preživljavanja eritrocita markiranih radioizotopom).
                           
                        
            
         Sastavljeno u Strasbourgu 19. travnja 1982.
         
            Franz ARASEK
            
               Glavni tajnik
            
         
         
            Vjerodostojan ovjereni primjerak jedinog izvornog dokumenta na engleskom i francuskom jeziku pohranjen je u arhivi Vijeća Europe.
            Erik HARREMOES
            
               Direktor pravnih poslova Vijeća Europe