CELEX: 31981R2188
Language: es
Date: 1981-07-28 00:00:00
Title: Reglamento (CEE) n° 2188/81 de la Comisión, de 28 de julio de 1981, por el que se modifica el Reglamento (CEE) n° 625/78 relativo a las modalidades del almacenamiento público de la leche desnatada en polvo

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31981R2188

Reglamento (CEE) n° 2188/81 de la Comisión, de 28 de julio de 1981, por el que se modifica el Reglamento (CEE) n° 625/78 relativo a las modalidades del almacenamiento público de la leche desnatada en polvo  

Diario Oficial n° L 213 de 01/08/1981 p. 0001 - 0006 Edición especial en español: Capítulo 03 Tomo 23 p. 0012  Edición especial en portugués: Capítulo 03 Tomo 23 p. 0012  Edición especial en finés : Capítulo 3 Tomo 13 p. 0199  Edición especial sueca: Capítulo 3 Tomo 13 p. 0199 

 REGLAMENTO ( CEE ) N º 2188/81 DE LA COMISIÓN    de 28 de julio de 1981    por el que se modifica el Reglamento ( CEE )   n º 625/78 relativo a las modalidades del almacenamiento   público de la leche desnatada en polvo    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica   Europea ,    Visto el Reglamento ( CEE ) n º 804/68 del Consejo , de   27 de junio de 1968 , sobre organización común de   mercado en el sector de la leche y de los productos   lácteos (1) , modificado en último lugar por el Acto   de adhesión de Grecia , y , en particular , el apartado 5   de su artículo 7 ,    Considerando que , en el Anexo I del Reglamento ( CEE )   n º 625/78 de la Comisión (2) , modificado en último   lugar por el Reglamento ( CEE ) n º 2937/80 (3) , por el   que se definen las condiciones de calidad a las que debe   responder la leche desnatada en polvo para ser ofertada a   la intervención , figuran en particular determinadas   prescripciones relativas a los procedimientos de análisis   para la detección del suero de leche mediante la   determinación de determinados componentes en la leche   desnatada en polvo ; que la nota 2 de dicho Anexo ha previsto   la determinación de valores límites comunitarios que   deben tenerse en cuenta para los mencionados componentes ,   después de un determinado período de experimentación   en los Estados miembros ;    Considerando que en el momento presente resulta posible   establecer , a nivel comunitario , un método de análisis   que permita la determinación del suero de leche en polvo   en la leche desnatada en polvo por medio de la   determinación del ácido siálico libre ; que , sin   embargo , no resulta conveniente hacer obligatorio dicho   método hasta después de que transcurra un determinado   período de tiempo destinado a familiarizar a los   organismos de control y a los operadores con este   procedimiento analítico ;    Considerando que las medidas previstas en el presente   Reglamento concuerdan con el dictamen del Comité de   gestión de la leche y de los productos lácteos ,    HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO :    Artículo 1    1 . El Anexo del Reglamento ( CEE ) n º 625/78 se   modificará como sigue :    a ) en el punto 2 letra b ) , el texto del segundo   guión se sustituirá por el texto siguiente :     « - suero de leche :    determinación del ácido siálico libre (2) y/o del   complejo cisteinacistina en la medida en que una   de las tres pruebas obligatorias , por lo menos , a   saber , la de los glucomacropéptidos del suero de   leche ( determinados por una prueba simplificada ) ,   la de los lactatos o las de las cenizas , sea   superior al 3 % , a 150 mg/100 g y al 8 %   respectivamente » ;    b ) el texto de la nota 2 se sustituirá por el texto   siguiente :     « (2) En lo referente a la presencia del suero de leche   en polvo mediante la determinación del ácido   siálico libre , el método de análisis aplicable a   partir del 1 de enero de 1982 será el que se determina   en el Anexo IV . »    2 . El Anexo del presente Reglamento se añadirá como   Anexo IV al Reglamento ( CEE ) n º 625/78 .    Artículo 2    El presente Reglamento entrará en vigor el tercer día   siguiente al de su publicación en el Diario Oficial de las   Comunidades Europeas .    El presente Reglamento será obligatorio en todos sus   elementos y directamente aplicable en cada Estado miembro .    Hecho en Bruselas , el 28 de julio de 1981 .    Por la Comisión    El Presidente    Gaston THORN    (1) DO n º L 148 de 28 . 6 . 1968 , p. 13 .    (2) DO n º L 84 de 31 . 3 . 1978 , p. 19 .    (3) DO n º L 305 de 14 . 11 . 1980 , p. 13 .    ANEXO     « ANEXO IV    PRESENCIA DEL SUERO DE LECHE EN POLVO EN LA LECHE   DESNATADA EN POLVO DESTINADA AL ALMACENAMIENTO   PÚBLICO MEDIANTE LA DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO   SIÁLICO LIBRE    1 . Objeto y ámbito de aplicación    Este método permite la determinación del suero   de leche en polvo en la leche desnatada en polvo   destinada al almacenamiento público .    2 . Principio del método    En el momento de la coagulación de la leche   bajo la acción del cuajo , son liberados   glucomacropéptidos de la caseina con un alto contenido   en ácido siálico . La determinación del ácido   siálico ( ácido N-acetilneuramínico ) permite   establecer la presencia eventual de suero de leche en   polvo en la leche desnatada en polvo . Después de la   reconstitución de la leche , los glucomacropéptidos   que contienen el ácido siálico son precipitados   por el ácido fosfotúngstico a partir de un   filtrado tricloroacético al 12 % . El ácido   siálico liberado por hidrólisis ácida forma , con   el resorcinol , un complejo coloreado medio por   espectrofotometría a 580 nm .    3 . Reactivos    Todos los reactivos deben ser de una pureza analítica .   El agua debe ser destilada o desionizada .    3.1 . Solución de ácido tricloroacético ( TCA )    Disolver 240 g de ácido tricloroacético en agua   y completar a 1 000 ml .    3.2 . Solución de ácido fosfotúngstico    Disolver 20 g de ácido fosfotúngstico en agua   y completar a 100 ml .    3.3 . Etanol del 95 % ( v/v )    3.4 . Solución de ácido sulfúrico aproximadamente   0,1 N    Diluir 28,1 ml de ácido sulfúrico concentrado   ( 95 % de H2SO4 ) en agua y completar a 1 000 ml para   obtener una solución de ácido sulfúrico 1 N .   Diluir 100 ml de ácido sulfúrico 1 N en agua   y completar a 1 000 ml para obtener una solución   de ácido sulfúrico 0,1 N .    3.5 . Tampón acetato , pH 4,8    Disolver 19,7 g de acetato de sodio anhidro en agua ,   añadir 9 ml de ácido acético glacial y completar   a 1 000 ml con agua . Comprobar y ajustar eventualmente   el pH .    3.6 . Solución de sulfato de cobre 0,1 M    Disolver 2,497 g de sulfato de cobre ( CuSO4 ·   5H2O ) en agua y completar a 100 ml .    3.7 . Solución de resorcina al 2 %    Disolver 2 g de resorcina en agua y completar a 100 ml .   Esta solución puede conservarse 4 meses a 5-8 ° C    3.8 . Reactivo al resorcinol    Mezclar 10 ml de solución de resorcina ( 3.7 ) ,   80 ml de ácido clorhídrico concentrado ( d20 ° C =   1,19 g/l ) y 0,25 ml de solución de sulfato de   cobre ( 3.6 ) y completar a 100 ml con agua . Preparar   esta solución el día de su utilización .    3.9 . Alcohol isoamílico    3.10 . Solución de ácido N-acetilneuramínico   ( ácido siálico )    Disolver 20 mg de ácido N-acetilneuramínico   en agua y completar a 100 ml . Esta solución no puede   conservarse más de una semana a + 4 ° C .    4 . Material    4.1 . Balanza analítica .    4.2 . Agitador magnético , barras magnéticas   revestidas de teflón de 2 cm de largo .    4.3 . pHmetro .    4.4 . Centrifugadora que permita alcanzar una   fuerza centrífuga de 3 000 g .    4.5 . Tubos para centrifugar de una capacidad aproximada   de 75 ml .    4.6 . Baño de agua con termostato regulable   a 80 ° C .    4.7 . Baño de agua hirviendo .    4.8 . Filtros de 125 mm de diámetro ( Schleicher   y Schuell n º 589 (2) , tipo « Weissband » o   de calidad equivalente ) .    4.9 . Embudos de vidrio , de un diámetro   aproximado de 7 cm .    4.10 . Copas de vidrio de 100 y 150 ml .    4.11 . Matraces graduados de 50 , 100 y 1 000 ml .    4.12 . Tubos de ensayo de tapón roscado de una   capacidad de 10 ml .    4.13 . Espectrofotómetro .    4.14 . Cubetas de vidrio para espectrofotómetro   ( 4.13 ) , trayecto óptico 10 mm .    4.15 . Pipetas graduadas de 1 , 2 , 5 , 10 , 20 ,   25 y 50 ml .    4.16 . Varillas de vidrio .    4.17 . Estufa con termostato a 35 ° C .    5 . Preparación de la muestra    La muestra , después de homogeneizada , será   examinada según las indicaciones previstas en los   puntos 6 y siguientes .    6 . Modo de operar    6.1 . Aislamiento del ácido siálico libre .    6.1.1 . Pesar 5 ± 0,005 g de leche desnatada en   polvo en una copa de vidrio de 150 ml .    Añadir 50 ml de agua . Mezclar bien por   agitación magnética ( 4.2 ) hasta la completa   disolución .    Añadir lentamente , siguiendo la agitación ,   50 ml de la solución de ácido tricloroacético   ( 3.1 ) .    Dejar reposar 30 minutos ( a temperatura ambiente ) .    6.1.2 . Agitar y después filtrar inmediatamente   ( 4.8 ) .    6.1.3 . Introducir en un tubo para centrifugar ( 4.5 )   50 ml de filtrado tomados en los 60 minutos siguientes   al comienzo de la filtración .    Añadir 1 ml de ácido fosfotúngstico ( 3.2 ) .   Homogeneizar por agitación y dejar reposar 10 minutos   a temperatura ambiente . Centrifugar a 3 000 g   durante 10 minutos .    6.1.4 . Eliminar el sobrenadante . Lavar 2 veces   el sedimento con 5 ml de etanol ( 3.3 ) teniendo cuidado   de ponerlo en suspensión con ayuda de un agitador   magnético o de una varilla de vidrio ( 4.16 ) .   ( En este último caso , introducir 2 ml de etanol   para la puesta en suspensión y enjuagar la varilla   con ayuda de los 3 ml de etanol restantes ) . Centrifugar   cada vez a 3 000 g durante 10 minutos .    Dejar secar el sedimento así obtenido durante una   noche a temperatura ambiente o durante 90 minutos   a 35 ° C .    6.1.5 . Añadir 4 ml de ácido sulfúrico 0,1 N   ( 3.4 ) al sedimento seco y agitar para ponerlo en   suspensión .    Tapar los tubos para centrifugar y colocarlos durante   40 minutos en un baño de agua a 80 ° C agitándolos   de vez en cuando para asegurar una buena dispersión .   Enfriar a temperatura ambiente y añadir 4 ml de tampón   acetato ( 3.5 ) . Mezclar cuidadosamente .    6.1.6 . Centrifugar 10 minutos a 3 000 g . La   determinación del ácido siálico o ácido   N-acetilneuramínico se efectúa en el sobrenadante .    6.2 . Determinación espectrofotométrica del   ácido siálico libre .    6.2.1 . Introducir 2 ml de sobrenadante en un tubo   de ensayo ( 4.12 ) y añadir 2 ml de reactivo al   resorcinol ( 3.8 ) .    6.2.2 . Tapar los tubos , mezclar cuidadosamente el   contenido , colocar los tubos durante 15 minutos   exactos en un baño de agua a 100 ° C ( 4.7 ) .    Enfriar a temperatura ambiente , bajo chorro de agua .    6.2.3 . Añadir 5 ml de alcohol isoamílico ( 3.9 ) ,   tapar y mezclar cuidadosamente el contenido agitando   enérgicamente los tubos y después colocarlos 15 minutos   en un baño de agua helada .    6.2.4 . Centrifugar a 1 000 g durante 2 minutos para   separar debidamente las dos fases .    6.2.5 . Introducir aproximadamente 3 ml de la   capa superior ( fase alcohólica ) en una cubeta de   vidrio y medir la extinción a 580 mm por comparación   con la prueba en blanco en los 30 minutos siguientes   a la retirada de los tubos del baño de agua helada .    6.3 . Prueba en blanco .    Preparar una prueba en blanco de conformidad con los   puntos 6.2.1 . a 6.2.5 . utilizando 1 ml de solución   de ácido sulfúrico 0,1 N ( 3.4 ) y 1 ml de tampón   acetato ( 3.5 ) en lugar de 2 ml de filtrado como se   prevé en el punto 6.2.1 .    6.4 . Curva patrón .    6.4.1 . Introducir exactamente 0-2-5-10-20 y 30 ml   de la solución ( 3.10 ) correspondiente a   0-0,4-1-2-4-6 mg de ácido siálico siálico , en   matraces graduados de 50 ml de capacidad , completar a   50 ml con la solución de ácido sulfúrico 0,1 N   ( 3.4 ) y mezclar bien .    6.4.2 . Introducir 1 ml de contenido de cada matraz   graduado en un tubo de ensayo ( 4.12 ) . Añadir 1 ml   de tampón acetato ( 3.5 ) , para obtener una serie   de soluciones testigo conteniendo 0 ( valor cero ) ,   8 , 20 , 40 , 80 , 120 microgramos de ácido siálico .   Una vez bien mezclados , proceder a la determinación   de conformidad con los puntos 6.2.2 a 6.2.5 .    6.4.3 . Para establecer la curva de contraste ,   llevar sobre un gráfico las extinciones obtenidas en   el punto 6.4.2 y las cantidades de ácido siálico   correspondientes en microgramos indicados en el   punto 6.4.2 .    7 . Expresión de los resultados    7.1 . Modo de cálculo    Calcular el contenido en ácido siálico , expresado   en microgramos por gramo , según la fórmula   siguiente :    C · 8/E    en la que C representa la masa de ácido siálico   en microgramos , leída en la curva de contraste   correspondiente a la medida de extinción obtenida   en el punto 6.2.5 y E es la masa de la toma de ensayo   ( 6.1.1 ) en gramos . Expresar el resultado   al microgramo .    7.2 . Fiabilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   efectuadas simultáneamente o rápidamente una   después de otra por el mismo analista no debe exceder   en un 5 % de la media aritmética de los resultados .    8 . Interpretación de los resultados    Este método permite cuantificar la presencia   eventual de suero de leche en la leche desnatada en polvo .    8.1 . Cálculo del valor medio de ácido siálico   libre en microgramos por gramo de muestra , referido a   su contenido en proteínas expresado en porcentaje   ( m/m )    Y = 40 + 3 (X - 34)2    siendo :    40 el contenido medio en ácido siálico en   microgramos por gramo para una leche desnatada en polvo   que contenga al menos un 34 % de proteínas ,    X , por acuerdo , el contenido en proteínas totales ,   determinado según el método Kjeldahl FIL IDF 20 : 1962 .    8.2 . Cálculo del porcentaje de suero de leche   en polvo eventualmente presente     % suero de leche = Z - Y/10    siendo :    Z el contenido en ácido siálico de la muestra   determinado en el punto 7.1 en microgramos por gramo ,    Y el contenido medio en ácido siálico libre   de la muestra calculado en el punto 8.1 ,    10 representa , por convenio , el contenido en   ácido siálico libre expresado en microgramos , de un   gramo de suero de leche en polvo .    8.3 . Debido a los errores inherentes al método   y a las variaciones naturales de composición de la   muestra , se puede llegar a la conclusión definitiva   de ausencia de suero de leche cuando el valor obtenido   en el punto 8.2 sea inferior o igual a 2,0 .    En el caso de un valor superior , la conclusión   sobre la presencia de suero de leche será afirmativa .   La misma se cuantifica según la fórmula dada en el   punto 8.2 . »