CELEX: 31984L0425
Language: bg
Date: 1984-07-25 00:00:00
Title: Десета директива на Комисията от 25 юли 1984 година относно установяване на общностни методи за анализ за целите на официалния контрол на храните за животни

Важна правна забележка

|

31984L0425

Официален вестник n° L 238 , 06/09/1984 стр. 0034 - 0038 специално финландско издание: глава 3 том 18 стр. 0038  специално испанско издание: глава 03 том 32 стр. 0085  специално шведско издание: глава 3 том 18 стр. 0038  специално португалско издание глава 03 том 32 стр. 0085  специално чешко издание глава 03 том 06 стр. 111  - 115 специално испанско издание глава 03 том 06 стр. 111  - 115 специално унгарско издание глава 03 том 06 стр. 111  - 115 специално литвийско издание глава 03 том 06 стр. 111  - 115 LV.ES глава 03 том 06 стр. 111  - 115 MT.ES глава 03 том 06 стр. 111  - 115 PL.ES глава 03 том 06 стр. 111  - 115 SK.ES глава 03 том 06 стр. 111  - 115 специално словенско издание глава 03 том 06 стр. 111  - 115

		19840725Десета директива на Комисиятаот 25 юли 1984 годинаотносно установяване на общностни методи за анализ за целите на официалния контрол на храните за животни(84/425/ЕИО)КОМИСИЯТА НА ЕВРОПЕЙСКИТЕ ОБЩНОСТИ,като взе предвид Договора за създаване на Европейката икономическа общност,като взе предвид Директива 70/373/ЕИО на Съвета от 20 юли 1970 г. относно въвеждането на общностни методи за вземане на проби и анализ за целите на официалния контрол на храните за животни [1], последно изменена с Акта за присъединяване на Гърция, и по-специално член 2 от нея,като има предвид, че посочената директива изисква официалният контрол на храните за животни с цел проверка на съответствието с изискванията, предвидени със законов, подзаконов или административен акт, по отношение на качеството им и състава да се извършва въз основа на общностни методи за вземане на проби и анализ;като има предвид, че Директиви 71/250/ЕИО [2], 73/46/ЕИО [3], 74/203/ЕИО [4], 75/84/ЕИО [5], 76/372/ЕИО [6] на Комисията, последно изменени с Директива 81/680/ЕИО [7], и Директиви 71/393/ЕИО [8], 72/199/ЕИО [9], 78/633/ЕИО [10], последно изменени с Директива 84/4/ЕИО [11], и Директива 81/715/ЕИО [12], вече са предвидили редица общностни методи за анализ; като има предвид, че с оглед напредъка в работата е препоръчително да се приеме нов метод;като има предвид, че мерките, предвидени в настоящата директива, са в съответствие със становището на Постоянния комитет по храните за животни,ПРИЕ НАСТОЯЩАТА ДИРЕКТИВА:Член 1Държавите-членки изискват анализът за целите на официалния контрол на храните за животни по отношение съдържанието на спирамицин в тях да се извършва съгласно описания в приложението метод.Член 2Държавите-членки въвеждат в сила законовите, подзаконовите и административните разпоредби, необходими за да се съобразят с настоящата директива, най-късно до 30 юни 1985 г. и незабавно уведомяват Комисията за това.Член 3Адресати на настоящата директива са държавите-членки.Съставено в Брюксел на 25 юли 1984 година.За КомисиятаPoul DalsagerЧлен на Комисията[1] ОВ L 170, 3.8.1970 г., стр. 2.[2] ОВ L 155, 12 7.1971 г., стр. 13.[3] ОВ L 83, 30.3.1973 г., стр. 21.[4] ОВ L 108, 22.4.1974 г., стр. 7.[5] ОВ L 32, 5.2.1975 г., стр. 26.[6] ОВ L 102, 15.4.1976 г., стр. 8.[7] ОВ L 246, 29.8.1981 г., стр. 32.[8] ОВ L 279, 20.12.1971 г., стр. 7.[9] ОВ L 123, 29.5 1972 г., стр. 6.[10] ОВ L 206, 29.7.1978 г., стр. 43.[11] ОВ L 15, 18.1.1984 г., стр. 28.[12] ОВ L 257, 10.9.1981 г., стр. 38.--------------------------------------------------19840725ПРИЛОЖЕНИЕОПРЕДЕЛЯНЕ СЪДЪРЖАНИЕТО НА СПИРАМИЦИН ЧРЕЗ ДИФУЗИЯ В ХРАНИТЕЛНА СРЕДА АГАР-АГАР1. Цел и обхватМетодът се използва за определяне съдържанието на спирамицин в храните за животни и предварително приготвените смеси. Долната граница на определяне е 1 mg/kg (1ррm) [1].2. ПринципПробата се извлича със смес на метанол/фосфат-бикарбонатен буфер при рН 8. Извлекът се декантира или центрофугира и разрежда. Неговата антибиотична активност се определя чрез измерване на дифузията на спирамицин в агар-агар среда, изкуствено заразена в Micrococcus luteus. Дифузията се показва чрез формиране на зони на инхибиране на микроорганизмите. Приема се, че диаметърът на тези зони е правопропорционален на логаритъма на антибиотичната концентрация в обхвата на използваните антибиотични концентрации.3. Микроорганизъм: Microсоccus luteus АТСС 9341 (NCTC 834, NCIB 8553)3.1. Поддържане на изходна култураВ тръби, съдържащи културална хранителна среда (4.1), се посява Micrococcus luteus и се слага в инкубатор за 24 часа при 30 °С. Културата се съхранява в хладилник при около 4 °С. Слага се отново в инкубатор на всеки 2 седмици.3.2. Приготвяне на бактериалната суспензия [2]Взема се продуктът на свежа хранителна среда агар-агар (3.1) с 2 до 3 ml разтвор на натриев хлорид (4.3). Тази суспензия се използва, за да се посее в 250 ml културална среда (4.1), съдържаща се в Roux колба и се поставя в инкубатор за 18—20 часа при 30 °С Полученото се слага в 25 ml разтвор на натриев хлорид (4.3) и се разбърква. Суспензията се разрежда до 1/10 с разтвор на натриев хлорид (4.3). Прозрачността на суспензията трябва да бъде около 75 %, измерена при 650 nm в клетка 1 cm, спрямо разтвор на натриев хлорид (4.3). Тази суспензия може да се съхранява една седмица при около 4 °С.4. Културална среда и реактиви4.1. Културална среда [3]Месен пептон | 6,0 g |Триптон | 4,0 g |Екстракт от дрожди | 3,0 g |Месен екстракт | 1,5 g |Глюкоза | 1,0 g |Агар-агар | 10,0 до 20,0 g |Вода | 1000 ml |рН 6,5 до 6,6 (след стерилизация). | |4.2. Културална среда за извършване на анализа [3]Триптон | 5,0 g |Екстракт от дрожди | 4,0 g |Месен екстракт | 3,0 g |Агар-агар | 10,0 до 20,0 g |Вода | 1000 ml |рН 8,0 (след стерилизация) | |4.3. Разтвор на натриев хлорид 0,8 % (w/v).Разтварят се 8 g натриев хлорид във вода и се разрежда до 1000 ml; стерилизира се.4.4. Фосфатно-бикарбонатен буфер рН 8,0Двукалиев водороден фосфат К2НРO4 | 16,7 g |Калиев двуводороден фосфат КН2РO4 | 0,5 g |Натриев водороден карбонат NaHCO3, | 20,0 g |Вода до | 1000 ml |4.5. Смес на метанолов фосфатно-бикарбонатен буфер (4.4)50/50 (v/v).4.6. Стандартна субстанцияСпирамицин с известна активност (в IU).5. Стандартни разтвориРазтваря се точно претеглено количество стандартна субстанция (4.6) в сместа (4.5) и се разтваря със същата смес, за да се получи изходен разтвор, съдържащ 1000 IU спирамицин на 1 ml. Съхраняван в запушена колба при 4 °С, този разтвор е стабилен до 5 дни.От този изходен разтвор се приготвят чрез последователно разреждане със сместа (4.5) следните разтвори:S8 | 1 | IU/ml |S4 | 0,5 | IU/ml |S2 | 0,25 | IU/ml |S1 | 0,125 | IU/ml |6. Приготвяне на екстракта и разтворите за извършване на анализ6.1. ИзвличанеПретегля се проба от 20 g при храни за животни и от 1 до 20 g при предварително приготвени смеси. Добавят се 100 ml от сместа (4.5) и се разтръсква в продължение на 30 min. Центрофугира се или се декантира и плаващият по повърхността слой се разрежда с разтвора (4.5), за да се получи очаквано съдържание на спирамицин от 1 IU/ml (= U8).За очаквани нива на спирамицин, по-ниски от 2,5 mg/kg храна за животни, извличането се извършва, както следва: претеглят се 20 g проба; добавят се 100 ml от сместа (4.5) и се разтръсква в продължение на 30 min; центрофугира се в продължение на няколко min, вземат се 50 ml от плаващия на повърхността разтвор и се изпаряват до около 4 ml при намалено налягане в ротационен изпарител при температура, непревишаваща 40 °С. Остатъкът се разрежда със сместа (4.5), за да се получи очаквано съдържание на спирамицин от 1 IU/ml (= U8).6.2. Разтвори за извършване на анализОт разтвор U8 се приготвят разтвори U4 (очаквано съдържание: 0,5 IU/ml), U2 (очаквано съдържание: 0,25 IU/ml) и U1 (очаквано съдържание: 0,125 IU/ml) чрез последователно разреждане (1 + 1) със сместа (4.5).7. Процедура на извършване на анализа7.1. Посяване на средата за изпитванеВ средата за изпитване (4.2) се посява бактериалната суспензия (3.2) при около 50 °С. Чрез предварителни опити в петрита със среда за изпитване (4.2) се определя количеството на бактериалната суспензия, необходимо за да се получат най-големите и най-ясни зони на инхибиране с различна концентрация на спирамицин.7.2. Подготовка на петритатаДифузията през агар-агар се извършва в петрита с четирите концентрации на стандартния разтвор (S8, S4, S2 и S1) и четирите концентрации на анализирания разтвор (U8, U4, U2 и U1). Тези четири концентрации на екстракта и стандарта трябва задължително да се поставят във всяко петри. В тази връзка се избират петрита, достатъчно големи, за да позволят в средата агар-агар да се направят поне 8 отвора с диаметър от 10 до 13 mm и не по-малко от 30 mm между центровете. Тестът трябва да се извърши в петрита, състоящи се от лист стъкло, покрит с алуминиев или пластмасов пръстен, поставен отгоре, с вътрешен диаметър 200 mm и височина 20 mm.В петритата се излива част от средата (4.2), посята както в 7.1, за да се получи слой, дебел около 2 mm (60 ml за петри с диаметър 200 mm). Оставя се да се изравни, пробиват се дупките и в тях се обозначават точно премерени обеми от разтворите за анализиране и стандартните разтвори (между 0,10 и 0,15 ml на дупка в зависимост от диаметъра). Всяка концентрация се полага поне 4 пъти, така че на всяко определяне да подлежат на оценка 32 зони на инхибиране.7.3. Поставяне в инкубаторПетритата се поставят в инкубатор за 16—18 часа при температура 30 ± 2 °С.8. ОценяванеИзмерва се диаметърът на зоните на инхибиране с точност до 0,1 mm. Отбелязват се средноаритметичните стойности на измерванията за всяка концентрация върху милиметрова хартия, показваща логаритъма на концентрациите във връзка с диаметрите на зоните на инхибиране. Начертават се линиите на най-добро съответствие на стандартния разтвор и екстракта.Определя се "най-точно съответстващата" точка за стандартното най-ниско ниво (SL), като се използва формулата:a) SA =10Определя се "най-точно съответстващата" точка за стандартното най-високо ниво (SH), като се използва формулата:б) SM =10По подобен начин се изчисляват и "най-точно съответстващите" точки за най-ниските нива на екстракта (UL) и най-високите нива на екстракта (UH), като във формулите се заменят S1, S2, S4 и S8 с U1, U2, U4 и U8 [4].Изчислените стойности на SL и SH се нанасят на същата милиметрова хартия и се свързват, за да се получи линията на "най-точно съответствие" за стандартния разтвор. По подобен начин се нанасят UL и UH и се свързват, за да се получи линията на "най-точно съответствие" за екстракта.При отсъствие на интерференции линиите трябва да са паралелни. За практически цели линиите могат да се считат паралелни, ако стойностите (SH – SL) и (UH – UL) не се различават с повече от 10 % от тяхната средна аритметична стойност.Ако се окаже, че линиите не са паралелни, u1 и s1 или u8 и s8 могат да се изключат и SL, SH, UL и UH да се изчислят, като се използват алтернативните формули, за да се получат линиите на "най-точно съответствие":a) SA =5s+ 2s– svagy5s+ 2s– s86б) SM =5s+ 2s– svagy5s+ 2s– s26и по-подобен начин за UL и UH. Трябва да бъде удовлетворен същият критерий за успоредност. Фактът, че резултатът е изчислен от три нива, трябва да бъде отбелязан в крайния отчет.Когато линиите се считат за успоредни, се изчислява логаритъмът на относителна активност (log A) посредством една от следните формули в зависимост от това, дали са използвани три или четири нива за оценка на успоредността.За четири нивав) Log A =u+ u+ u+ u– s– s– s– s8 × 0,602u4 + u8 + s4 + s8 – u1 – u2 – s1 – s2За три ниваг) Log A =u+ u+ u– s– s– s4 × 0,401u4 + s4 – u1 – s1илиг′) Log A =u+ u+ u– s– s– s8 × 0,401u8 + s8 – u2 – s2Активността на пробвания екстракт е равна на активността на релевантния стандарт умножена по А:U= S× AАко относителната активност се окаже извън обхвата от 0,5 до 2, анализът се повтаря, като се правят подходящи корекции на концентрациите на екстракта или ако това не е възможно — на стандартните разтвори. Когато относителната активност не може да се доведе в изисквания обхват, всеки получен резултат се счита за приблизителен и това се отбелязва в крайния отчет.Когато линиите не могат да се считат за успоредни, определянето се повтaря. Ако пак не може да се получи успоредност, определянето се счита за незадоволително.Резултатите се изразяват в mg спирамицинова база на kg храна за животни.9. ПовторяемостРазликата между резултатите на две успоредни определяния, направени на същата проба от същия лаборант, не трябва да превишава:- 2 mg/kg в абсолютна стойност — за съдържание на спирамицинова база до 10 g/kg;- 20 % от най-високата стойност — за съдържание от 10 до 25 mg/kg;- 5 mg/kg в абсолютна стойност — за съдържание от 25 до 50 mg/kg;- 10 % от най-високата стойност — за съдържание над 50 mg/kg.[1] 1 mg спирамицинова основа е еквивалентен на 3200 международни единици (UI)[2] Могат да бъдат използвани други методи, в случай че се установи, че при тях се получават сходни бактериални суспензии.[3] Може да се използва културална среда от търговски характер със сходен състав, даваща същите резултати[4] Малките букви s и u указват диаметрите на зоните на инхибиране.--------------------------------------------------