CELEX: 21987A0207(05)
Language: sl
Date: 1962-05-14 00:00:00
Title: Protokol k evropskemu sporazumu o izmenjavi reagentov za določanje krvnih skupin

02/Zv. 2              SL                                          Uradni list Evropske unije                                                            253

21987A0207(05)

L 37/33                                                URADNI LIST EVROPSKIH SKUPNOSTI                                                              2.7.1987

                                                  PROTOKOL K EVROPSKEMU SPORAZUMU
                                     O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN

                                                                   SPLOŠNE DOLOČBE

1.   Specifičnost                                                                          rdečih krvnih celic. Titer je recipročna vrednost števila, ki
                                                                                           predstavlja največje razredčenje reagenta, pri katerem nastopi
     Reagenti za določanje krvnih skupin (1) morajo reagirati z
                                                                                           reakcija. Pri izračunu razredčitve ne upoštevamo volumna
     vsemi testiranimi krvnimi vzorci, ki vsebujejo antigen, ustre-
                                                                                           suspenzije krvnih celic v skupnem volumnu.
     zen protitelesu ali drugi snovi, navedeni na etiketi.
     Kadar se reagent uporablja skladno z metodo, ki jo priporoča                          Pri reagentih anti-A, anti-B kot tudi drugih, ki so za uporabo
     proizvajalec, ne sme biti znakov za nobenega od naslednjih                            na stekleni ploščici, avidnost izrazimo s časom, ki je potre-
     dejavnikov ali pojavov:                                                               ben za aglutinacijo na stekleni ploščici.
     a)    hemolitične lastnosti,
     b)    protitelesa ali druge snovi poleg navedenih na etiketi,
     c)    bakterijske produkte, ki bi lahko povzročili lažno
           pozitivne ali lažno negativne reakcije,
     d)    psevdoaglutinacijo s tvorjenjem rolojev,                                3.      Mednarodni standardi in mednarodne enote
     e)    prozonske pojave.                                                               Mednarodne standarde je določila Svetovna zdravstvena
                                                                                           organizacija za reagente anti-A in anti-B ter nekompletne rea-
                                                                                           gente anti-D za določanje krvnih skupin; v postopku določa-
                                                                                           nja so še standardi za reagente za določanje krvnih skupin
2.   Jakost
                                                                                           drugih specifičnosti. Mednarodni standardni pripravek po
     Titer reagenta merimo z zaporednimi dvakratnimi                                       definiciji vsebuje določeno število mednarodnih enot na mg
     razredčitvami reagenta, ki ga preverjamo v ustreznem                                  ali ml; ta definicija je neodvisna od titrov, ugotovljenih z
     mediju. K vsaki razredčini dodamo enak volumen suspenzije                             dodanimi določenimi suspenzijami rdečih krvnih celi (2).

              (1) Ob sprejemanju te različice protokola in pripadajočih prilog so se predstavniki pogodbenic dogovorili, da v angleškem
                  besedilu sporazuma izraz „blood incompatibilities“ pomeni „blood grouping incompatibilities“.
                  Dogovorjeno je bilo tudi, daje treba izraz „blood-grouping“ z v ezajem v angleškem besedilu sporazuma in protokola
                  razumeti kot „blood grouping“ brez vezaja.
              ( ) Jakost reagentov za določanje krvnih skupin večine specifičnosti je izražena kot aglutinacijski titer, ugotovljen pri serijskem
               2

                  razredčenju reagenta in z dodano suspenzijo rdečih krvnih celic. Titer označuje zadnje razredčenje reagenta v seriji, ki še
                  kaže mikroskopsko vidno aglutinacijo.
                  Jakost reagentov za določanje krvnih skupin, za katere obstajajo mednarodni standardni pripravki (trenutno anti-A in anti-B
                  in nepopoln anti-D), se lahko izrazi v mednarodnih enotah (Glej Bull, World Health Organization 1954, 10, 937, 941 –
                  1950, 3, 301) na podlagi titracije neznanega reagenta v primerjavi z mednarodnim standardom ali državnim
                  podstandardom.
                  Mednarodni standardni pripravki serumov za določanje krvnih skupin so na voljo v ampulah, ki vsebujejo dehidriran
                  človeški serum. Kadar seruma anti-A in anti-B rekonstituiramo na volumen 1 ml, vsebujeta po definiciji 256 mednarodnih
                  enot na ml. Dobiti ju je mogoče brezplačno pri Mednarodnem laboratoriju za biološke standarde pri Svetovni zdravstveni
                  organizaciji, Statens Seruminstitut, Köbenhavn.
                  Naslednja tabela prikazuje primer primerjalne titracije mednarodnega standardnega seruma anti-A (S) in „neznanega“
                  reagenta anti-A (U) z rdečimi krvnimi celicami A1 in rdečimi krvnimi celicami A2B.

                                                    Serum S                 Reagent U                  Serum S                 Reagent U

                  Krvna celica A1                    1:512                    1:128                       256                       64

                  Krvna celica A2B                   1:32                     1:16                        256                     128

                                                      titri                    titri                     enote                    enote
                                                  (ugotovljeni)            (ugotovljeni)             (po definiciji)         (po primerjavi)
 ---pagebreak--- 254                  SL                                    Uradni list Evropske unije                                                  02/Zv. 2

4.    Stabilnost in rok uporabnosti                                             celicami zadostuje za izvedbo testov s pozitivnimi in nega-
                                                                                tivnimi kontrolnimi krvnimi celicami. Volumen ene
                                                                                stekleničke je takšen, da vsebina, če je to potrebno, omogoča
      Vsak reagent mora obdržati zahtevane lastnosti najmanj eno                izvedbo ustreznih testov jakosti, opisanih v tem protokolu.
      leto, kadar je shranjen pod pogoji, ki jih priporoča proizva-
      jalec.
                                                                           8.   Dokumentacija in vzorci

      Rok uporabnosti reagenta v tekoči obliki, kot je označen na
                                                                                Laboratorij, ki proizvaja reagente, hrani pisno dokumentacijo
      etiketi, ni daljši od enega leta od dneva zadnjega preverjanja
                                                                                o vseh fazah proizvodnje in kontrole reagentov za določanje
      njegove jakosti, ki zadosti zahtevam. S ponavljanjem prever-
                                                                                krvnih skupin. Laboratorij hrani ustrezne vzorce vseh izda-
      janja jakosti se rok njegove uporabnosti vsakokrat lahko
                                                                                nih reagentov tako dolgo, da lahko utemeljeno domneva, da
      podaljša za eno leto.
                                                                                serija ni več v uporabi.

      Rok uporabnosti reagentov v dehidrirani obliki, kot je nave-         9.   Klasifikacija reagentov
      den na etiketi, je v skladu z ugotovitvami preizkusov njihove
      stabilnosti in ga potrdijo državni kontrolni organi.
                                                                                Reagenti, ki se uporabljajo za določanje krvnih skupin, lahko
                                                                                vsebujejo učinkovine človeškega, živalskega, rastlinskega (ali
5.    Shranjevanje                                                              mineralnega) izvora, od katerih so nekatere aktivna sestavina,
                                                                                druge pa so dodatki za povečanje aktivnosti ali vzdrževanje
                                                                                stabilnosti reagentov.
      Reagente za določanje krvnih skupin lahko hranimo v teko-
      čem ali v dehidriranem stanju. Dehidrirane reagente hranimo
      v atmosferi inertnega plina ali v vakuumu v steklenički, v                Reagenti so iz tehničnih razlogov razdeljeni v tri kategorije
      kateri so bili dehidrirani in ki je zaprta tako, da se prepreči           glede na izvor svoje aktivne sestavine. To pa ne pomeni, da
      prodiranje vlage. Dehidrirani reagent ne sme izgubiti več kot             reagenti človeškega izvora vsebujejo izključno učinkovine
      0,5 % svoje mase po dodatnem 24-urnem sušenju v prisot-                   človeškega izvora ali da živalski in rastlinski reagenti ne
      nosti fosforjevega pentoksida pri tlaku, ki ne presega                    morejo vsebovati učinkovin človeškega izvora.
      0,02 mm živega srebra.
                                                                           10. Etikete, kontrolni listi in certifikati
      Reagente pripravljamo v aseptičnih pogojih in ne smejo biti
      bakteriološko kontaminirani. Za preprečitev rasti bakterij                Na vsaki končni steklenički je nalepljena etiketa, natisnjena v
      lahko pristojni državni organ odloči, da se reagentu (ali kateri          angleškem in francoskem jeziku, v črni barvi na belem papi-
      koli raztopini, ki je priložena dehidriranim reagentom) doda              rju z naslednjimi podatki:
      antiseptik in/ali antibiotik pod pogojem, da v prisotnosti
      dodane učinkovine reagent še vedno izpolnjuje zahteve glede
      specifičnosti in jakosti.                                                 1.   ime in naslov proizvajalca;

      Serumi človeškega izvora za določanje krvnih skupin morajo                2.   ime reagenta, kot je navedeno v naslovu ustrezne speci-
      vsebovati najmanj 2,5 mg proteinskega dušika na ml teko-                       fikacije;
      čega ali rekonstituiranega seruma.
                                                                                3.   ime in količina antiseptika in/ali antibiotika, če sta pri-
                                                                                     sotna in/ali navedba njune odsotnosti;
      Reagenti v tekočem stanju ali po rekonstituciji morajo biti
      prozorni in ne smejo vsebovati nobene usedline, gela ali
      vidnih delcev.                                                            4.   volumen, ali če je reagent dehidriran, volumen in sestava
                                                                                     tekočine, ki je potrebna za rekonstitucijo;
6.    Obarvanje
                                                                                5.   rok uporabnosti;

      Reagenti za določanje krvnih skupin za mednarodno izmen-
      javo naj ne bodo, če je le mogoče, umetno obarvani, vsaj                  6.   številka serije.
      dokler ni dosežen mednarodni dogovor o enotnem sistemu.
      Kakršen koli dodatek barvila ne sme motiti specifične reak-
                                                                                Ta etiketa ali etiketa na kartonski škatli, v kateri je več posa-
      cije.
                                                                                meznih stekleničk, ali kontrolni list, ki je priložen
                                                                                stekleničkam, vsebuje naslednje podatke:
7.    Odmerjanje in volumen
                                                                                1.   polno ime in naslov proizvajalca;
      Reagente za določanje krvnih skupin pripravimo in
      razdelimo tako in v takih volumnih, da reagent v eni                      2.   ime reagenta, kot je navedeno v naslovu ustrezne speci-
      steklenički poleg izvedbe testov z neznanimi krvnimi                           fikacije;
 ---pagebreak--- 02/Zv. 2                SL                                 Uradni list Evropske unije                                                     255

    3.     volumen, ali če je reagent dehidriran,volumen in sestava            8.   pogoji hranjenja neodprtih ampul in varnostni ukrepi, ki
           tekočine, ki je potrebna za rekonstitucijo;                              jih je treba upoštevati po odprtju ampul;

    4.     datum zadnjega preverjanja jakosti;                                 9.   natančna sestava, vključno z navedbo antiseptika in/ali
                                                                                    antibiotika, če sta dodana;
    5.     rok uporabnosti (če obstaja);
                                                                               10. izjava o tem, ali izdelek vsebuje snovi človeškega izvora
                                                                                   ali ne.
    6.     številka serije;
                                                                               Vsaki pošiljki je priložen certifikat, kot je navedeno v členu 4
    7.     ustrezen opis načina uporabe, ki ga priporoča proizva-              Sporazuma in v Prilogi k temu protokolu. Vzorca etikete in
           jalec;                                                              kontrolnega lista sta priložena temu protokolu.

                                                             POSEBNE DOLOČBE

                                  A. SERUMI ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN ČLOVEŠKEGA IZVORA

   (a) SERUMI ČLOVEŠKEGA IZVORA ZA DOLOČANJE KRV-                                   (ii) Serum anti-B za določanje krvnih skupin
       NIH SKUPIN AB0                                                                    (humani)

                                                                                        Serum anti-B pridobivamo iz krvi izbranih oseb sku-
         (i) Serum anti-A za določanje krvnih skupin
                                                                                        pine A, ki so bile imunizirane ali ne z rdečimi krvnimi
             (humani)
                                                                                        celicami skupine B ali s specifično učinkovino sku-
                                                                                        pine B. Serum anti-B aglutinira človeške rdeče krvne
               Serum anti-A pridobivamo iz krvi izbranih oseb sku-                      celice, ki vsebujejo antigen B, to je krvne celice krv-
               pine B, ki so bile imunizirane ali ne z rdečimi krvnimi                  nih skupin B in AB, ne aglutinira pa človeških rdečih
               celicami skupine A ali s specifično učinkovino sku-                      krvnih celic, ki ne vsebujejo antigena B, to je krvnih
               pine A. Serum anti-A aglutinira človeške rdeče krvne                     skupin 0 in A.
               celice, ki vsebujejo antigen A, to je krvne celice krv-
               nih skupin A in AB, vključno s podskupinami A1,
               A2, A1B in A2B, ne aglutinira pa človeških rdečih                        Jakost
               krvnih celic, ki ne vsebujejo antigena A, to je krvnih                   Titracija
               celic krvnih skupin 0 in B.
                                                                                        Serum anti-B titriramo in dodamo suspenzijo krvnih
                                                                                        celic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,
               Jakost                                                                   vendar nerazredčenim mednarodnim standardnim
                                                                                        pripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-
               Titracija                                                                pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom.
                                                                                        Jakost seruma je najmanj 64 mednarodnih enot na
                                                                                        ml.
               Serum anti-A titriramo ločeno za suspenzije krvnih
               celic A1, A2 in A2B vzporedno z rekonstituiranim,
               vendar nerazredčenim mednarodnim standardnim                             Določanje avidnosti
               pripravkom seruma anti-A za določanje krvnih sku-
               pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom.                           Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo z
               Jakost seruma je v vsakem primeru najmanj 64 med-                        enakim volumnom suspenzije celic skupine B z
               narodnih enot na ml.                                                     volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se mora
                                                                                        aglutinacija pojaviti v največ dvakratnem času, ki je
                                                                                        potreben za izvedbo enakega testa na
               Določanje avidnosti                                                      rekonstituiranem, vendar nerazredčenem mednarod-
                                                                                        nem standardnem pripravku seruma anti-B za dolo-
               Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo z                        čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom z
               enakim volumnom suspenzije celic A1, A2 in A2B z                         enakovredno avidnostjo.
               volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se mora
               aglutinacija pojaviti v največ dvakratnem času, ki je                (iii) Serum anti-A + anti-B (skupina 0) za določanje
               potreben za izvedbo enakega testa na                                       krvnih skupin (humani)
               rekonstituiranem, vendar nerazredčenem mednarod-
               nem standardnem pripravku seruma anti-A za dolo-                         Serum anti-A + anti-B (skupina 0) pridobivamo iz
               čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom z                       krvi izbranih oseb skupine 0, ki so bile imunizirane
               enakovredno avidnostjo.                                                  ali ne z rdečimi krvnimi celicami skupine A in
 ---pagebreak--- 256            SL                                 Uradni list Evropske unije                                                 02/Zv. 2

      skupine B ali s specifičnima učinkovinama skupine A                      suspenzije celic Ax (Ay ali Ao) z volumensko frakcijo
      in skupine B. Serum anti-A + anti-B (skupina 0)                          od 0,05 do 0,1, se aglutinacija pojavi v največ 5
      aglutinira človeške rdeče krvne celice, ki vsebujejo                     minutah pri temperaturi od 18 °C do 25 °C.
      antigene A ali B ali oboje, to je krvne celice skupine
      A vključno s podskupinama A1 in A2, skupine B in
      skupine AB vključno s podskupinama A1B in A2B,                  (b) SERUMI ČLOVEŠKEGA IZVORA ZA DOLOČANJE KRV-
      ne aglutinira pa človeških rdečih krvnih celic, ki ne               NIH SKUPIN Rh
      vsebujejo antigenov A ali B, to je krvnih celic skupine
      0. Aglutinira človeške rdeče krvne celice, ki vsebujejo             Serumi anti-Rh za določanje krvnih skupin, kakršna koli
      antigen Ax (Ay ali Ao) (ki jih serum anti-A, pridob-                že je njihova specifičnost, so dveh vrst, ki se razlikujeta v
      ljen iz krvi krvodajalcev skupine B, običajno ne                    pogojih, pod katerimi dosežemo aglutinacijo
      aglutinira).                                                        homolognih krvnih celic. Določeni serumi, splošno znani
                                                                          kot „kompletni“, aglutinirajo krvne celice, suspendirane v
                                                                          fiziološki raztopini. Pri drugih, splošno znanih kot
                                                                          „nekompletni“, lahko dosežemo aglutinacijo le v prisot-
      Jakost                                                              nosti določenih koloidov, kot je goveji albumin, ali s
                                                                          pomočjo drugih posebnih metod. Serume je treba
                                                                          uporabljati pod pogoji, kot jih podrobno navaja
      Titracija
                                                                          laboratorij, ki je serume pripravil.

      Serum anti-A + anti-B (skupina 0) titriramo ločeno                  Nekateri „nekompletni“ serumi aglutinirajo tudi
      za suspenziji krvnih celic A1 in A2 vzporedno z                     homologne rdeče krvne celice, shranjene v njihovem
      rekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-                    lastnem serumu ali v plazmi na steklenih ploščicah.
      nim standardnim pripravkom seruma anti-A za
      določanje krvnih skupin ali z enakovrednim
      standardnim pripravkom. Titriramo ga tudi s                         Ko bodo mednarodni standardni pripravki na voljo, bo
      suspenzijo krvnih celic skupine B vzporedno z                       morda treba revidirati naslednje zahteve glede jakosti
      rekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-                    serumov za določanje krvnih skupin Rh.
      nim standardnim pripravkom seruma anti-B za dolo-
      čanje krvnih skupin ali z enakovrednim standardnim
      pripravkom.                                                         (i) Serum anti-D (anti-Rh0) za določanje krvnih
                                                                              skupin (humani)

      Jakost seruma je v vseh primerih najmanj 64 med-                         Serum anti-D pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,
      narodnih enot na ml.                                                     imuniziranih z antigenom D sistema Rh. Reagira s
                                                                               človeškimi rdečimi krvnimi celicami, ki vsebujejo
                                                                               antigen D, ne reagirajo pa z rdečimi krvnimi celi-
      Nerazredčeni serum anti-A + anti-B (skupina 0) za                        cami, ki ne vsebujejo antigena D.
      določanje krvnih skupin prav tako omogoča ugotav-
      ljanje aglutinacije rdečih krvnih celic skupine Ax (Ay
      ali Ao).                                                                 Jakost

                                                                               Titracija

      Določanje avidnosti
                                                                               „Kompletni“ serumi anti-D imajo titer najmanj 32 s
                                                                               celicami CcDee, suspendiranimi v raztopini, ki
      Kadar serum anti-A + anti- B (skupina 0) na stekleni                     vsebuje 9 gramov natrijevega klorida na liter.
      ploščici zmešamo z enakima volumnoma suspenzij
      celic A1 in A2 z volumensko frakcijo od 0,05 do
      0,1, se aglutinacija pojavi v največ dvakratnem času,                    „Nekompletni“ serum anti-D titriramo in dodamo
      ki je potreben za izvedbo enakega testa na                               krvne celice CcDee vzporedno z rekonstituiranim,
      rekonstituiranem, vendar nerazredčenem mednarod-                         toda nerazredčenim mednarodnim standardnim pri-
      nem standardnem pripravku seruma anti-A za dolo-                         pravkom nekompletnega anti-D (anti-Rh0) ali z ena-
      čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom z                       kovrednim referenčnim pripravkom. Njegova jakost
      enakovredno avidnostjo. Kadar serum anti-A + anti-                       je najmanj 32 mednarodnih enot. Poleg reagiranja z
      B (skupina 0) na stekleni ploščici zmešamo z enakim                      vsemi rdečimi krvnimi celicami, ki vsebujejo antigen
      volumnom suspenzije celic B (skupina 0) z                                D, mora serum, kolikor je to mogoče, reagirati s
      volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija                      krvnimi celicami, ki vsebujejo antigen Du.
      pojavi v največ dvakratnem času, ki je potreben za
      izvedbo enakega testa na rekonstituiranem, vendar
      nerazredčenem         mednarodnem        standardnem                     Določanje avidnosti
      pripravku seruma anti-B za določanje krvnih skupin
      ali z referenčnim standardom z enakovredno                               Serumi anti-D, ki so namenjeni uporabi v
      avidnostjo. Kadar serum anti-A + anti-B (skupina 0)                      Diamondovem in Abelsonovem testu na stekleni
      na stekleni ploščici zmešamo z enakim volumnom                           ploščici, potem ko smo jih pri približno 40 °C na
 ---pagebreak--- 02/Zv. 2            SL                                  Uradni list Evropske unije                                                     257

           stekleni ploščici zmešali z enakim volumnom                               človeškimi rdečimi krvnimi celicami, ki vsebujejo
           40-50 % suspenzije krvnih celic CcDee, pokažejo                           antigen E.
           vidno aglutinacijo v 30 sekundah, aglutinacija pa
           mora biti končana v 120 sekundah.

                                                                                     Jakost

       (ii) Serumi anti-C (anti-Rh′) za določanje krvnih
            skupin (humani)                                                          Titracija

           Serum anti-C pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,                        Serumi anti-E („kompletni“ ali „nekompletni“)
           imuniziranih z antigenom C sistema Rh. Aglutinira                         morajo imeti titer najmanj 8 s krvnimi celicami
           suspenzije človeških rdečih krvnih celic, ki vsebujejo                    ccddEe.
           antigen C, ne aglutinirajo pa rdečih krvnih celic, ki ne
           vsebujejo antigena C. V tej zvezi se za antigen C šteje,
           da vključuje antigen Cw.
                                                                                     Določanje avidnosti

           Večina diagnostičnih serumov anti-C vsebuje
           „kompletne“ anti-C skupaj z „nekompletnimi“ anti-D.
           Navedeni serumi so zato specifični za antigen C le,                       Serumi anti-E, ki so namenjeni uporabi v
           kadar so celice, ki jih preverjamo, suspendirane v                        Diamondovem in Abelsonovem testu na stekleni
           raztopini, ki vsebuje 9 g/l natrijevega klorida.                          ploščici (in ki ne smejo vsebovati nobene oblike anti-
                                                                                     D), morajo pokazati, potem ko smo jih pri približno
                                                                                     40 °C na stekleni ploščici zmešali z enakim volum-
                                                                                     nom suspenzije krvnih celic ccddEe z volumensko
                                                                                     frakcijo od 0,4 do 0,5, vidno aglutinacijo v 30 sekun-
           Jakost                                                                    dah, aglutinacija pa mora biti končana v 120 sekun-
                                                                                     dah.

           Titracija
                                                                                (iv) Serum anti-D + C (anti-Rh0rh′) za določanje krv-
                                                                                     nih skupin (humani)

           Serumi anti-C („kompletni“ ali „nekompletni“)
           morajo imeti titer najmanj 8 s krvnimi celicami
           Ccddee.                                                                   Serum anti-D + E (anti-Rh0rh′) za določanje krv-
                                                                                     nih skupin (humani)

           Določanje avidnosti
                                                                                     Serume specifičnosti anti-D + C in specifičnosti anti-
                                                                                     D + E pridobivamo neposredno iz krvi imuniziranih
                                                                                     posameznikov, lahko pa jih pripravimo z mešanjem
           Serumi anti-C, ki so namenjeni uporabi v                                  seruma anti-D s serumom anti-C ali anti-E. V danem
           Diamondovem in Abelsonovem testu na stekleni                              serumu morajo biti oboja protitelesa aktivna hkrati
           ploščici (in ki ne smejo vsebovati nobene oblike anti-                    pod pogoji reakcije, ki jih podrobno navaja proizva-
           D), morajo pokazati, potem ko smo jih pri približno                       jalec. Vsak serum mora reagirati z vsemi vrstami rde-
           40 °C na stekleni ploščici zmešali z enakim volum-                        čih krvnih celic, ki bi reagirale z enimi ali drugimi
           nom suspenzije celic Ccddee z volumensko frakcijo                         vsebovanimi protitelesi, ne smejo pa reagirati z rde-
           od 0,4 do 0,5, vidno aglutinacijo v 30 sekundah,                          čimi krvnimi celicami, ki ne vsebujejo niti antigena C
           aglutinacija pa mora biti končana v 120 sekundah.                         ali D v primeru anti-D + C niti antigena D ali E v pri-
                                                                                     meru anti-D + E. Titri morajo biti najmanj taki, kot
                                                                                     so navedeni za posamezna protitelesa, toda v pri-
                                                                                     meru anti-D + C (ki je pogosta kombinacija v serumu
       (iii) Serum anti-E (anti-rh′) za določanje krvnih sku-                        imuniziranih oseb) je zaželeno, da je titer anti-C
             pin (humani)                                                            najmanj 32, in v primeru anti-D + E je zaželeno, da
                                                                                     je titer anti-E najmanj 8. Kadar je serum namenjen
                                                                                     uporabi v Diamondovem in Abelsonovem testu na
                                                                                     stekleni ploščici, morajo biti časi aglutinacije za vse
           Serum anti-E pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,                        reaktivne vrste rdečih krvnih celic najmanj taki, kot
           imuniziranih z antigenom E sistema Rh. Reagira s                          so navedeni za posamezna protitelesa.
 ---pagebreak--- 258                   SL                                    Uradni list Evropske unije                                                      02/Zv. 2

                                               B.   REAGENTI, KI NISO ČLOVEŠKEGA IZVORA

      (a) SERUMI ŽIVALSKEGA IZVORA                                                        Jakost

        (i) Serum anti-A za določanje krvnih skupin (žival-                               Titracija
            ski)
                                                                                          Serum anti-B titriramo in dodamo suspenzijo krvnih
                                                                                          celic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,
             Serum anti-A pridobivamo iz krvi živali, ki so bile                          vendar nerazredčenim mednarodnim standardnim
             imunizirane ali ne z rdečimi krvnimi celicami sku-                           pripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-
             pine A ali s specifičnimi učinkovinami skupine A.                            pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (1).
             Serum anti-A aglutinira človeške rdeče krvne celice,                         Jakost seruma je najmanj 64 mednarodnih enot na
             ki vsebujejo antigen A, to je krvne celice krvnih sku-                       ml.
             pin A in AB, vključno s podskupinami A1, A2, A1B
             in A2B, ne aglutinira pa človeških rdečih krvnih celic,
             ki ne vsebujejo antigena A, to je krvnih celic krvnih
             skupin 0 in B.                                                               Določanje avidnosti

                                                                                          Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo z
             Jakost
                                                                                          enakim volumnom suspenzije krvnih celic skupine B
                                                                                          z volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija
             Titracija                                                                    posamezne suspenzije pojavi v najmanj dvakratnem
                                                                                          času, ki je potreben za izvedbo enakega testa na
             Serum anti-A titriramo ločeno za suspenzije rdečih                           rekonstituiranem, vendar nerazredčenem mednarod-
             krvnih celic A1, A2 in A2B vzporedno z                                       nem standardnem pripravku seruma anti-B za dolo-
             rekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-                             čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom z
             nim standardnim pripravkom seruma anti-A za                                  enakovredno avidnostjo.
             določanje krvnih skupin ali z enakovrednim refe-
             renčnim pripravkom (1). Jakost seruma je v vsakem
             primeru najmanj 64 mednarodnih enot na ml.
                                                                                     (iii) Antiglobulinski serumi (živalski) (2)

             Določanje avidnosti                                                          Antiglobulinski serum za uporabo v serologiji krv-
                                                                                          nih skupin mora vsebovati aglutinacijska protitelesa
                                                                                          proti globulinom IgG in aglutinacijska protitelesa
             Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo z                            proti faktorjem komplementa. Pridobivamo ga iz
             enakim volumnom suspenzije celic A1, A2 in A2B z                             krvi živali, imuniziranih z injekcijo humanega
             volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija                          serumskega proteina. Aglutinirati mora vse človeške
             posamezne suspenzije v vsakem primeru pojavi v                               rdeče krvne celice, prekrite s humanim IgG in/ali
             največ dvakratnem času, ki je potreben za izvedbo                            faktorji komplementa. V pogojih, ki jih podrobno
             enakega testa na rekonstituiranem, vendar                                    navaja izdelovalec, ne aglutinira neprekritih člove-
             nerazredčenem     mednarodnem         standardnem                            ških rdečih krvnih celic katere koli skupine.
             pripravku seruma anti-A za določanje krvnih skupin
             ali z referenčnim standardom z enakovredno
             avidnostjo.
                                                                                          Specifičnost

        (ii) Serum anti-B za določanje krvnih skupin (žival-                              Specifičnost antiglobulinskega seruma za uporabo v
             ski)                                                                         serologiji krvnih skupin mora biti testirana s člove-
             Serum anti-B pridobivamo iz krvi živali, ki so bile                          škimi rdečimi krvnimi celicami, prekritimi z
             imunizirane ali ne z rdečimi krvnimi celicami sku-                           raznolikimi protitelesi, to je rdečimi krvnimi celi-
             pine B ali s specifičnimi učinkovinami skupine B.                            cami, senzibiliziranimi s človeškimi nekompletnimi
             Serum anti-B aglutinira človeške rdeče krvne celice,                         protitelesi anti-D, anti-K in anti-Fya, rdečimi krvnimi
             ki vsebujejo antigen B, to je krvne celice krvnih sku-                       celicami, senzibiliziranimi z nekompletnimi
             pin B in AB, ne aglutinira pa človeških rdečih krvnih                        protitelesi anti-Lea, ki vežejo komplement v prisot-
             celic, ki ne vsebujejo antigena B, to je krvnih skupin                       nosti svežega humanega seruma, in rdečimi krvnimi
             0 in A.                                                                      celicami, senzibiliziranimi s tako imenovanimi

(1) Mednarodni standardni pripravek je človeškega izvora; enakovreden       (2) Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. in Race, R.R. (1945), Lancet, iii 5
    referenčni pripravek, če ga uporabljamo, je lahko človeškega izvora         Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. in Race, R.R. (1945), Brit. J. exp. Path,
    ali pa ne.                                                                  26, 255.
 ---pagebreak--- 02/Zv. 2            SL                                Uradni list Evropske unije                                                        259

           „nekompletnimi hladnimi protitelesi“, in s taniranimi                   pripravkom seruma anti-A za določanje krvnih sku-
           rdečimi krvnimi celicami, senzibiliziranimi s                           pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (1).
           humanim IgG, in končno, z 10 različnimi vzorci
           neprekritih človeških rdečih krvnih celic z antigeni A                  Jakost seruma je v vsakem primeru najmanj 64 med-
           in B ali brez.                                                          narodnih enot na ml.

                                                                                   Določanje avidnosti
           Jakost
                                                                                   Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo z
           Titracija                                                               enakim volumnom suspenzije celic A1, A2 in A2B z
                                                                                   volumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija
           Antiglobulinski serum, kot ga dostavljajo dobavitelji,
                                                                                   posamezne suspenzije pojavi v največ dvakratnem
           ali v razredčini, ki je priporočena na etiketi, močno
                                                                                   času, ki je potreben za izvedbo enakega testa na
           aglutinira človeške rdeče krvne celice, prekrite s
                                                                                   rekonstituiranem, vendar nerazredčenem mednarod-
           humanim nekompletnim serumom anti-D, ki ima
                                                                                   nem standardnem pripravku seruma anti-A za dolo-
           titer 4 (ali manj), z D-pozitivnimi krvnimi celicami,
                                                                                   čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom z
           ko titracijo izvajamo z metodo nadomeščanja z albu-
                                                                                   enakovredno avidnostjo.
           minom. Pri enaki razredčitvi aglutinira K-pozitivne
           človeške rdeče krvne celice, senzibilizirane z izbra-
           nimi šibkimi protitelesi anti-K, in Fya pozitivne člo-             (ii) Reagent anti-B za določanje krvnih skupin (ras-
           veške rdeče krvne celice, senzibilizirane z izbranimi                   tlinski)
           šibkimi protitelesi anti-Fya.                                           Reagent anti-B pripravljamo iz izvlečkov semen ali
                                                                                   drugih delov ustrezne rastline, čemur sledi, če je
           Prav tako pri enaki ali različni razredčitvi, kot je
                                                                                   potrebno, čiščenje. Reagent anti-B aglutinira člove-
           navedeno na etiketi, aglutinira človeške rdeče krvne
                                                                                   ške rdeče krvne celice, ki vsebujejo antigen B, to je
           celice, senzibilizirane s šibkimi nekompletnimi
                                                                                   krvne celice krvnih skupin B in AB, ne aglutinira pa
           protitelesi anti-Lea, ki vežejo komplement v prisot-
                                                                                   človeških rdečih krvnih celic, ki ne vsebujejo
           nosti svežega seruma.
                                                                                   antigena B, to je krvnih celic krvnih skupin 0 in A.
           Za klinično uporabo je zaželeno, da je prekritost z
           vsemi vrstami nekompletnih protiteles, navedenih
                                                                                   Jakost
           zgoraj, mogoče odkriti z enkratno razredčino
           antiglobulinskega seruma.                                               Titracija
                                                                                   Reagent anti-B titriramo in dodamo suspenzijo krv-
   (b) REAGENTI ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN RAS-                                    nih celic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,
       TLINSKEGA IZVORA                                                            vendar nerazredčenim mednarodnim standardnim
                                                                                   pripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-
       (i) Reagent anti-A za določanje krvnih skupin (ras-                         pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (1).
           tlinski)                                                                Jakost seruma je v vsakem primeru najmanj 64 med-
                                                                                   narodnih enot na ml.
           Reagent anti-A pripravljamo iz izvlečkov semen ali
           drugih delov ustrezne rastline, čemur sledi, če je
           potrebno, čiščenje. Reagent anti-A aglutinira člove-                    Določanje avidnosti
           ške rdeče krvne celice, ki vsebujejo antigen A, to je
           krvne celice krvnih skupin A in AB, vključno s                          Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo z
           podskupinami A1, A2, A1B in A2B, ne aglutinira pa                       enakim volumnom suspenzije celic B z volumensko
           človeških rdečih krvnih celic, ki ne vsebujejo                          frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija pojavi v naj-
           antigena A, to je krvnih celic krvnih skupin 0 in B.                    več dvakratnem času, ki je potreben za izvedbo ena-
                                                                                   kega     testa   na    rekonstituiranem,      vendar
                                                                                   nerazredčenem       mednarodnem         standardnem
           Jakost                                                                  pripravku seruma anti-B za določanje krvnih skupin
                                                                                   ali z referenčnim standardom z enakovredno
           Titracija                                                               avidnostjo.

           Reagent anti-A titriramo ločeno za suspenzije krvnih       (1) Mednarodni standardni pripravek je človeškega izvora; enakovreden
           celic A1, A2 in A2B vzporedno z rekonstituiranim,              referenčni pripravek, če ga uporabljamo, je lahko človeškega izvora
           vendar nerazredčenim mednarodnim standardnim                   ali pa ne.
 ---pagebreak--- 260   SL                             Uradni list Evropske unije                 02/Zv. 2

                                          VZOREC ETIKETE

                                            SVET EVROPE

           EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN

                    a) Tekoči serum

                       1. … laboratorij, Amsterdam

                       2. Serum anti-A (humani)

                       3. Natrijev azid 0,1 %

                       4. 5 ml

                       5. 7. september 1965

                       6. Št. 1 2 3 4

                    b) Dehidrirani serum

                       1. … laboratorij, Amsterdam

                       2. Serum anti-B (živalski)

                       3. Mersalate 0,1 %

                       4. Rekonstituirati s 5 ml destilirane vode

                       5. 31. december 1968

                       6. Št. 4321
 ---pagebreak--- 02/Zv. 2        SL                                      Uradni list Evropske unije                                               261

                                                      VZOREC KONTROLNEGA LISTA

                                                                SVET EVROPE

                          EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN

           1.    Centralni laboratorij za transfuzijo krvi, 1 Main Street, Metropolis,
                 Westland.

           2.    Serum anti-E (anti-rh") (humani).

           3.    10 ml.

           4.    Datum zadnjega preverjanja aktivnosti: 30. maj 1961.

           5.    Rok uporabnosti: 30. maj 1962.

           6.    Št. 5432.

           7.    Rdeče krvne celice, ki jih preverjamo, je treba enkrat ali večkrat oprati z raztopino 9 g/l NaCl. Pripravimo
                 3-odstotno suspenzijo eritrocitov, tako da zmešamo eno volumensko enoto ali kapljico koncentriranih rdečih
                 krvnih celic s 30 volumenskimi enotami ali kapljicami izotonične raztopine NaCl. Na podlagi izkušenj jakost
                 suspenzije lahko ocenimo po videzu.

                 S Pasteurjevo pipeto kanemo kapljico seruma v precipitinsko epruveto (6 mm x 30 mm) in dodamo enako
                 kapljico suspenzije rdečih krvnih celic. (Na podlagi izkušenj lahko dosežemo znaten prihranek, če serum in
                 celično suspenzijo pipetiramo s pipeto z označenim volumnom 10 ml). Vsebino epruvete premešamo in dve uri
                 inkubiramo pri 37 °C. Vsebino epruvete nato previdno prenesemo na objektno stekelce in jo rahlo razmažemo.
                 Če aglutinacija ni dobro vidna s prostim očesom, preparat pregledamo pod mikroskopom, da ugotovimo
                 prisotnost in stopnjo aglutinacije.

           8.    Hranimo pri Œ20 °C ali nižjih temperaturah. Če bo reagent, ki smo ga odprli, uporabljen naslednji dan, dodamo
                 0,1 ml raztopine, ki vsebuje 100 g/l natrijevega azida.

           9.    Humani serum anti-E („anti-rh“): 5 ml; raztopina, ki vsebuje 300 g/l govejega albumina: 5 ml.

           10. Izdelek vsebuje snovi človeškega izvora.
 ---pagebreak--- 262      SL                                Uradni list Evropske unije                                               02/Zv. 2

                                             PRILOGA K PROTOKOLU

                                                     Svet Evrope

                    EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN

                                                    CERTIFIKAT
                                                        (člen 4)

      NE SME SE LOČITI OD POŠILJKE

                                  …………………………………………                             ……………………………………… 19…
                                                   (kraj)                             (datum)

      Število paketov             Podpisani potrjuje,da je pošiljka, opisana ob robu, …………………………………

      ……………………………                 ……………………………………………………………………………………………

      Oznake                      za katere pripravo je odgovoren ……………………………………………………

      ……………………………                 ……………………………………………………………………………………………

      ……………………………                 ……………………………………………………………………………………………

      številka serije             eden od organov, navedenih v členu 6 Sporazuma, pripravljena skladno s specifi-
                                  kacijami Protokola k Sporazumu in se lahko takoj dostavi prejemniku

      ……………………………                 (ime in kraj)……………………………………………………………………………

                                  ……………………………………………………………………………………………

                                  …………………………                 ……………………………              ………………………………
                                           (žig)                    (podpis)                     (naziv)