CELEX: 31985L0490
Language: es
Date: 1985-10-11 00:00:00
Title: Cuarta Directiva 85/490/CEE de la Comisión, de 11 de octubre de 1985, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros en materia de métodos de análisis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos

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31985L0490

Cuarta Directiva 85/490/CEE de la Comisión, de 11 de octubre de 1985, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros en materia de métodos de análisis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos  

Diario Oficial n° L 295 de 07/11/1985 p. 0030 - 0045 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 14 p. 0192  Edición especial en español: Capítulo 15 Tomo 6 p. 0115  Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 14 p. 0192  Edición especial en portugués: Capítulo 15 Tomo 6 p. 0115 

 CUARTA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 11 de octubre de 1985    relativa a la aproximación de las legislaciones   de los Estados miembros en materia de métodos   de análsis necesarios para el control de la   composición de los productos cosméticos     ( 85/490/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea ,    Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo , de 27 de   julio de 1976 , relativa a la aproximación de las   legislaciones de los Estados miembros en materia de   productos cosméticos (1) , cuya última   modificación la constituye la Directiva   85/391/CEE (2) y , en particular , el apartado 1   de su artículo 8 ,    Considerando que la Directiva 76/768/CEE prevé   controles oficiales de los productos cosméticos para   comprobar el cumplimiento de las condiciones previstas por   las disposiciones comunitarias relativas a la composición   de los productos cosméticos ;    Considerando que es conveniente establecer lo antes   posible todos los métodos de análisis necesarios y que ,   una vez realizadas tres etapas para alcanzar dicho fin   mediante la fijación de determinados métodos en las   Directivas 80/1335/CEE (3) , 82/434/CEE (4) , y   83/514/CEE (5) de la Comisión , la cuarta etapa debe   consistir en la fijación de los métodos   de identificación y determinación cuantitativa   del clorobutanol de glicerol , de determinación   cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato ) de   glicerol , de determinación cuantitativa del   clorobutanol , de identificación y determinación   cuantitativa de la quinina , de identificación   y determinación cuantitativa de los   bisulfitos inorgánicos , de identificación y   determinación cuantitativa de los cloratos de   metales alcalinos , de identificación y determinación   cuantitativa del yodato sódico ;    Considerando que las medidas previstas en la presente   Directiva se atienen al dictamen del Comité para la   adaptación al progreso técnico de la Directiva   76/768/CEE ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros adoptarán todas las medidas   necesarias para que , en los controles oficiales de   productos cosméticos :     - la identificación y determinación cuantitativa del   1-(4-aminobenzoato) de glicerol ,     - la determinación cuantitativa del clorobutanol ,     - la identificación y determinación cuantitativa de   la quinina ,     - la identificación y determinación cuantitativa de   los sulfitos y bisulfitos inorgánicos ,     - la identificación y determinación cuantitativa de   los cloratos de metales alcalinos , y     - la identificación y determinación cuantitativa   del yodato de sodio    se realicen según los métodos descritos en el Anexo .    Artículo 2    Los Estados miembros aplicarán las disposiciones   legales , reglamentarias o administrativas necesarias para   cumplir la presente Directiva , a más tardar el 31 de   diciembre de 1986 , e informarán de ello inmediatamente   a la Comisión .    Artículo 3    Los destinatarios de la presente Directiva serán los   Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 11 de octubre de 1985 .    Por la Comisión    Stanley CLINTON DAVIS    Miembro de la Comisión    (1) DO n º L 262 de 27 . 9 . 1976 , p. 169 .    (2) DO n º L 224 de 22 . 8 . 1985 , p. 40 .    (3) DO n º L 383 de 31 . 12 . 1980 , p. 27 .    (4) DO n º L 185 de 30 . 6 . 1982 , p. 1 .    (5) DO n º L 291 de 24 . 10 . 1983 , p. 9 .    ANEXO    IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA   DEL 1-(4-AMINOBENZOATO) DE GLICEROL    A . IDENTIFICACIÓN    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    Este método sirve para poner de manifiesto   la presencia del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol o   4-aminobenzoato de a-monoglicerilo . También permite   identificar el 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína   DCI ) , eventualmente presente como impureza .    2 . PRINCIPIO    La identificación se realiza por cromatografía   en capa fina de gel de sílice con indicador   fluorescente y revelado de la función amina   primaria libre por formación en la placa de un   colorante diazoico .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Mezcla disolvente :   ciclohexano/isopropanol/diclorometano estabilizado :   48/64/9 ( v/v/v ) .    3.2 . Disolvente de desarrollo : éter de   petróleo ( 40-60 ) /benceno/acetona/solución   de hidróxido amónico ( mínimo 25 % de   NH3 ) : 35/35/35/1 ( v/v/v/v ) .    3.3 . Revelador :    solución a ) : nitrito sódico : 1 g en 100 ml   de ClH 1 M , preparado justo antes de usar ;    solución b ) : 2-naftol : 0,2 g en 100 ml de   KOH 1 M    3.4 . Soluciones patrón :     - 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo : 0,050 g en   100 ml de la mezcla disolvente ( 3.1 ) .     - 4-aminobenzoato de etilo : 0,050 g en 100 ml   de la mezcla disolvente ( 3.1 ) .    3.5 . Placas de gel de sílice 60 F254 , de   0,25 mm de espesor y 200 · 200 mm de tamaño .    4 . EQUIPO    4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina .    4.2 . Baño de ultrasonidos .    4.3 . Filtro Millipore FH 0,5 m o equivalente .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Preparación de la muestra    Pesar 1,5 g de muestra en un matraz aforado de   10 ml con tapón esmerilado . Completar hasta 10 ml   con la mezcla disolvente ( 3:1 ) . Tapar y dejar   durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño de   ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro   Millipore ( 4.3 ) . Utilizar el filtrado para la   cromatografía .    5.2 . Cromatografía en capa fina    Depositar sobre la placa ( 3.5 ) 10 l del   filtrado ( 5.1 ) y 10 l de cada solución   patrón ( 3.4 ) . Desarrollar el cromatrograma hasta   una altura de 15 cm en una cubeta previamente saturada   con el disolvente ( 3.2 ) . Dejar secar a temperatura   ambiente .    5.3 . Revelado    5.3.1 . Observar la placa con luz ultravioleta de   254 nm .    5.3.2 . Sobre la placa perfectamente seca ,   pulverizar la solución ( 3.3 a ) . Dejar secar   a temperatura ambiente durante 1 minuto y   pulverizar inmediatamente la solución ( 3.3 b ) .    Secar la placa en estufa de 60 ° C . Las   manchas aparecen de color naranja con los siguientes   R f : 4-aminobenzoato de -monoglicerilo : 0,07 ;   4-aminobenzoato de etilo : 0,55 .    B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    Este método sirve para la determinación   cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol   ( 4-aminobenzoato de -monoglicerilo ) . También   permite la determinación cuantitativa del   4-aminobenzoato de etilo . Es adecuado para la   determinación como máximo de 5 % ( m/m ) de   4-aminobenzoato de -monoglicerilo y de 1 % ( m/m )   de 4-aminobenzoato de etilo .    2 . DEFINICIÓN    El contenido en 4-aminobenzoato de -monoglicerilo   y en 4-aminobenzoatode etilo , determinado por   este método , se expresa como porcentaje en masa   ( % m/m ) del producto .    3 . PRINCIPIO    El producto problema se pone en suspensión en   metanol , y tras el tratamiento adecuado de la muestra ,   se realiza la determinación por cromatografía   líquida de alta presión ( HPLC ) .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad   analítica y , en particular , adecuados para   HPLC .    4.1 . Metanol .    4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio   KH2 PO4 .    4.3 . Diacetato de cinc Zn(CH3COO)2 · 2H2O .    4.4 . Ácido acético d (20,4) = 1,05 .    4.5 . Hexacianoferrato de tetrapotasio :   K4FE(CN)6) · 3H2O .    4.6 . 4-hidroxibenzoato de etilo .    4.7 . 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo .    4.8 . 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína ) .    4.9 . Solución tampón ( 0,02 M ) : disolver   2,72 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio   ( 4.2 ) en 1 l de agua .    4.10 . Eluyente : solución tampón   ( 4.9 ) /metanol ( 4.1 ) : 61/39 ( v/v ) . La   composición de esta fase móvil puede modificarse   de forma que el factor de resolución R sea igual   o superior a 1,5 :    R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )    donde :    R1 y R2 = tiempos de retención , expresados   en minutos , de dos picos ,    W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los   mismos picos a media altura ,    d' = velocidad del papel mm/minuto .    4.11 . Solución madre de 4-aminobenzoato   de a-monoglicerilo : pesar con precisión unos   40 mg de 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo en   un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de   metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca   de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar .    4.12 . Solución madre de 4-aminobenzoato de etilo :   pesar con precisión unos 40 mg de 4-aminobenzoato   de etilo en un matraz aforado de 100 ml . Disolver   en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la   marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y   mezclar .    4.13 . Solución del patrón interno : pesar   con precisión unos 50 mg de 4-hidroxibenzoato de   etilo ( 4.6 ) en un matraz aforado de 100 ml .   Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta   la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y   mezclar .    4.14 . Soluciones patrón : preparar cuatro soluciones   patrón por disolución en 100 ml de eluyente   ( 4.10 ) , según el cuadro siguiente :    Solución * 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo *   4-aminobenzoato de etilo * 4-hidroxibenzoato de etilo *     * ml ( 4.11 ) * µg/ml (*) * ml ( 4.12 ) *   µg/ml (*) * ml ( 4.13 ) * µg/ml (*) *    I * 2 * 8 * 2 * 8 * 10 * 50 *    II * 4 * 16 * 3 * 12 * 10 * 50 *    III * 6 * 24 * 4 * 16 * 10 * 50 *    IV * 10 * 40 * 5 * 20 * 10 * 50 *    (*) Estos valores se dan a título indicativo   y corresponden a una pesada exacta de las soluciones   4.11 , 4.12 y 4.13 .    N.B. Estas soluciones pueden prepararse de forma   diferente .    4.15 . Solución de Carrez I : disolver 26,5 g de   hexacianoferrato de tetrapotasio ( 4.5 ) en agua y   completar hasta 250 ml .    4.16 . Solución de Carrez II : disolver   54,9 g de diacetato de cinc ( 4.3 ) y 7,5 ml de   ácido acético ( 4.4 ) en agua y completar hasta   250 ml .    4.17 . Lichrosorb Merck RP-18 , o equivalente ,   con tamaño medio de partícula de 5 µm .    5 . EQUIPO    5.1 . Material normal de laboratorio .    5.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta   de longitud de onda variable y cámara termostática   a 45 ° C .    5.3 . Columna de acero inoxidable : 250 mm de   longitud , 4,6 mm de diámetro interior . La columna   está rellena de Lichrosorb RP-18 ( 4.17 ) .    5.4 . Baño de ultrasonidos .    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Preparación de la muestra    6.1.1 . Pesar con precisión alrededor de 1 g de   muestra en un vaso de 100 ml y añadir 10 ml   de metanol ( 4.1 ) .    6.1.2 . Poner el vaso durante 20 minutos en un   baño de ultrasonidos ( 5.4 ) . Pasar cuantitativamente   la suspensión así obtenida a un matraz aforado   de 100 ml con 75 ml de eluyente ( 4.10 ) como   máximo . Añadir sucesivamente 1 ml de   solución de Carrez I ( 4.15 ) y 1 ml de   solución de Carrez II ( 4.16 ) , mezclando   después de cada operación . Completar hasta   la marca de enrase con el eluyente ( 4.10 ) , mezclar   de nuevo y filtrar por filtro de pliegues .    6.1.3 . Utilizando una pipeta , pasar , a un   matraz aforado de 50 ml , 3,0 ml del filtrado   obtenido en 6.1.2 y 5,0 ml de la solución del   patrón interno ( 4.13 ) . Completar hasta la marca   de enrase con el eluyente ( 4.10 ) y mezclar . Utilizar   la solución así obtenida para proceder al   análisis cromatográfico descrito en el punto 6.2 .    6.2 . Cromatografía    6.2.1 . Ajustar el flujo de la fase móvil   ( 4.10 ) a 1,2 ml/min y la temperatura de la   columna a 45 ° C .    6.2.2 . Ajustar el detector ( 5.2 ) a 274 nm .    6.2.3 . Utilizando una microjeringa , inyectar   al menos dos veces 20 µl de solución ( 6.1.3 ) en   el cromatógrafo y medir las áreas de los picos .    6.3 . Curva de calibración    6.3.1 . Inyectar 20 µl de cada una de las   soluciones patrón ( 4.14 ) y medir las áreas de los   picos .    6.3.2 . Para cada concentración , calcular la   relación entre el área del pico del   4-aminobenzoato de a-monoglicerilo y el área del   pico del patrón interno . Trazar la curva de   calibración representando esta relación en   ordenadas y la relación de masas correspondientes   en abscias .    6.3.3 . Proceder de la misma forma con el   4-aminobenzoato de etilo .    7 . CÁLCULO    7.1 . De la curva de calibración obtenida   en 6.3 leer las relaciones de masas ( RP1 , RP2 )   correspondientes a las relaciones entre las áreas de   los picos calculados en el punto 6.2.3 , donde :    RP1 = masa del 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo/masa   del 4-hidroxibenzoato de etilo ,    RP2 = masa del 4-aminobenzoato de etilo/masa   del 4-hidroxibenzoato de etilo .    7.2 . A partir de las relaciones de masa así   obtenidas , calcular el contenido en 4-aminobenzoato   de a-monoglicerilo y en 4-aminobenzoato de etilo ,   como porcentaje en masa ( % m/m ) , utilizando   las fórmulas siguientes :    g % ( m/m ) 4-aminobenzoato de   a-monoglicerilo = RP1 × q/6 p    g % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de   etilo = RP2 × q/6 p    donde :    q = cantidad en mg de 4-hidroxibenzoato de etilo   ( patrón interno ) pesada en el punto 4.13 ,    p = cantidad en g de muestra pesada en el punto 6.1.1 .    8 . REPRODUCIBILIDAD (1)    8.1 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de   a-monoglicerilo del 5 % ( m/m ) , la diferencia entre   los resultados de dos determinaciones paralelas   realizadas con la misma muestra no debe pasar   del 0,25 % .    8.2 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de etilo   del 1 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de   dos determinaciones paralelas realizadas con la misma   muestra no debe pasar del 0,10 % .    9 . OBSERVACIONES    9.1 . Antes de proceder al análisis propiamente dicho ,   conviene determinar si la muestra no contiene ningún   compuesto capaz de coincidir con el pico del patrón   interno ( 4-aminobenzoato de etilo ) en el   cromatograma .    9.2 . Para comprobar la ausencia de posibles   interferencias , repetir la determinación cambiando   en ± 10 % la proporción de metanol en la   fase móvil .    DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL CLOROBUTANOL    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    Este método es adecuado para la determinación   cuantitativa del clorobutanol hasta la concentración   máxima del 0,5 % ( m/m ) en todos los productos   cosméticos , excepto en aerosoles .    2 . DEFINICIÓN    El contenido en clorobutanol determinado por este   método se expresa como porcentaje en masa   ( % m/m ) del producto .    3 . PRINCIPIO    Tras el tratamiento adecuado del producto problema ,   la determinación se realiza por cromatografía   de gases utilizando 2,2,2-tricloroetanol como   patrón interno .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    4.1 . Clorobutanol ( 1,1,1-tricloro-2-metilpropano-2-ol ) .    4.2 . 2,2,2-tricloroetanol .    4.3 . Etanol absoluto .    4.4 . Solución patrón de clorobutanol : 0,025 g   en 100 ml de etanol ( 4.3 ) , ( m/r ) .    4.5 . Solución del patrón interno de   2,2,2-tricloroetanol : 0,004 g en 100 ml de etanol   ( 4.3 ) , ( m/r ) .    5 . EQUIPO    5.1 . Material normal de laboratorio .    5.2 . Cromatógrafo de gases con detector de captura   de electrones 63Ni .    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Preparación de la muestra    Pesar con precisión de 0,1 g a 0,3 g de muestra ( p g )   en un matraz aforado de 100 ml , disolver en etanol   ( 4.3 ) , añadir 1 ml de la solución del patrón   interno ( 4.5 ) y completar hasta la marca de enrase   con etanol ( 4.3 ) .    6.2 . Condiciones de la cromatografía de gases    6.2.1 . Las condiciones deben ser tales que el factor   de resolución R de la columna sea igual o superior a 1,5 :    R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )    donde :    R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en   minutos , de dos picos ,    W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos   picos a media altura ,    d' = velocidad del papel en mm/mn .    6.2.2 . Como ejemplo , las siguientes condiciones   proporcionan el resultado deseado :    Columna * I * II *    Naturaleza * Vidrio * Acero inoxidable *    Longitud * 1,80 m * 3 m *    Diámetro * 3 mm * 3 mm *    Fase estacionaria * 10 % Carbomax 20 M TPA   sobre Gaschrom Q 80-100 mesh * 5 % OV 17 sobre   Chromosorb WAW DMCS 80-100 mesh *    Acondicionamiento * 2 a 3 días a 190 ° C * *    Temperaturas : * * *     - inyectar * 200 ° C * 150 ° C *     - columna * 150 ° C * 100 ° C *     - detector * 200 ° C * 150 ° C *    Gas de arrastre * Nitrógeno * Argón/metano   ( 95/5 v/v ) *    Flujo * 35 ml/mm * 32 ml/mn *    6.3 . Curva de calibración    En 5 matraces aforados de 100 ml , añadir a 1 ml   de la solución del patrón interno ( 4.5 )   respectivamente 0,20 , 0,30 , 0,40 , 0,50 , 0,60 ml   de la solución ( 4.4 ) y completar hasta 100 ml   con etanol ( 4.3 ) . Inyectar 1 µl de cada una de   estas soluciones en el cromatógrafo en las condiciones   descritas en el punto 6.2.2 y trazar la curva de   calibración representado en abscisas la relación   de las masas clorobutanol 2,2,2-tricloroetanol y   en ordenadas la relación de las superficies   correspondientes .    6.4 . Inyectar 1 µl de la solución obtenida   en 6.1 y proceder en las condiciones descritas   en el punto 6.2.2 .    7 . CÁLCULO    7.1 . Calcular , a partir de la curva de calibración   ( 6.3 ) , la cantidad " a " expresada en µg de   clorobutanos de la solución ( 6.1 ) .    7.2 . El contenido en clorobutanol de la muestra   ( % m/m ) se calcula según la fórmula :     % de clorobutanol ( m/m ) =   ( a × 10 2 ) / ( p × 10 6 ) = a/ ( p × 10 4 )    8 . REPRODUCIBILIDAD (1)    Para un contenido en clorobutanol del 0,5 % ( m/m ) ,   la diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas efectuadas con la misma muestra no debe   pasar del 0,01 % .    Nota    Si el resultado es igual o superior a la concentración   máxima autorizada , es conveniente comprobar la   ausencia de interferencias .    IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE   LA QUININA    A . IDENTIFICACIÓN    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    Este método sirve para poner de manifiesto la   presencia de quinina en los champúes y lociones   capilares .    2 . PRINCIPIO    La identificación se realiza por cromatografía   en capa fina de gel de sílice y revelado de la   fluorescencia azul de la quinina en medio ácido   a 360 nm .    Para confirmar , se puede suprimir esta fluorescencia   por medio de vapores de bromo y hacer aparecer una   fluorescencia amarillenta con vapores de amoníaco .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Placas de gel de sílice de 0,25 mm de espesor ,   sin indicador de fluorescencia , de 200 × 200 mm de   tamaño .    3.2 . Disolvente de desarrollo : tolueno/éter   dietílico/diclorometano/dietilamina :   20/20/20/8 ( v/v/v/v ) .    3.3 . Metanol .    3.4 . Ácido sulfúrico 96 % ( d (20,4) = 1,84 ) .    3.5 . Éter dietílico .    3.6 . Reactivo revelador : añadir con precaución   5 ml de ácido sulfúrico ( 3.4 ) a 95 ml de   éter dietílico ( 3.5 ) en un recipiente refrigerado .    3.7 . Bromo .    3.8 . Amoníaco al 28 % ( d (20,4) = 0,90 ) .    3.9 . Quinina anhidra .    3.10 . Solución patrón : pesar con precisión   unos 100 mg de quinina anhidra ( 3.9 ) y disolverlos   con metanol ( 3.3 ) en un matraz aforado de 100 ml ,   completando hasta la marca de enrase .    4 . EQUIPO    4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina .    4.2 . Baño de ultrasonidos .    4.3 . Filtros Millipore FH 0,5 µm , o equivalentes ,   con equipo de filtración adecuado .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Preparación de la muestra    Pesar con precisión una cantidad de muestra que   pueda contener unos 100 mg de quinina en un matraz   aforado de 100 ml , disolver y completar hasta la   marca de enrase con metanol ( 3.3 ) . Tapar y dejar   durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño   de ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro ( 4.3 )   y utilizar este filtrado para la cromatografía .    5.2 . Cromatografía en capa fina    Depositar sobre la placa de gel de sílice ( 3.1 )   1,0 µl de la solución patrón ( 3.10 ) y 1,0 µl de la   solución problema ( 5.1 ) . Desarrollar   el cromatograma hasta una altura de 15 cm   en una cubeta previamente saturada con los vapores   del disolvente ( 3.2 ) .    5.3 . Revelado    5.3.1 . Secar la placa a temperatura ambiente .    5.3.2 . Pulverizar el reactivo ( 3.6 ) .    5.3.3 . Dejar secar la placa durante 1 hora a   temperatura ambiente .    5.3.4 . Observar la placa con luz ultravioleta   a 360 nm . La quinina aparece en forma de mancha   fluorescente de color azul intenso .    Como ejemplo , la tabla siguiente reproduce los Rf   de los principales alcaloides de la quina , desarrollados   con el disolvente ( 3.2 ) .    Alcaloides * Rf *    Quinina * 0,20 *    Quinidina * 0,29 *    Cinconina * 0,33 *    Cinconidina * 0,27 *    Hidroquinidina * 0,17 *    5.3.5 . Para confirmar la identificación de   la quinina , se expone la placa durante alrededor de   1 hora a los vapores de bromo ( 3.7 ) ; la fluorescencia   desaparece . Al exponer a continuación la misma   placa a los vapores de amoníaco ( 3.8 ) , las   manchas reaparecen con una coloración parda y ,   si se vuelve a examinar la placa con luz ultravioleta   a 360 nm , se observa fluorescencia amarillenta .    Límite de detección : 0,1 µg de quinina .    B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA    1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    Este método sirve para la determinación   cuantitativa de la quinina en los champúes y   lociones capilares . Es adecuado para   la determinación de las concentraciones   máximas permitidas de 0,5 % ( m/m ) en los champúes   y de 0,2 % ( m/m ) en las lociones .    2 . DEFINICIÓN    El contenido en quinina determinado por este método   se expresa como porcentaje en masa ( % m/m )   del producto .    3 . PRINCIPIO    Tras el tratamiento adecuado del producto problema   se realiza la determinación cuantitativa por   cromatografía líquida de alta presión ( CLHP ) .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica   y , en particular , adecuados para HPLC .    4.1 . Acetonitrilo .    4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( KH2PO4 ) .    4.3 . Ácido ortofosfórico al 85 %   ( d (20,4) = 1,7 ) .    4.4 . Bromuro de tetrametilamonio .    4.5 . Quinina anhidra .    4.6 . Metanol .    4.7 . Solución de ácido ortofosfórico 0,1 M :   disolver 11,53 g de ácido ortofosfórico ( 4.3 )   en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar   hasta la marca de enrase .    4.8 . Solución de dihidrógeno-ortofosfato   de potasio 0,1 M : disolver 13,6 g de   dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 4.2 ) en   agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta   la marca de enrase .    4.9 . Solución de bromuro de tetrametilamonio 0,1 M :   disolver 15,40 g de bromuro de tetrametilamonio ( 4.4 )   en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar   hasta la marca de enrase .    4.10 . Eluyente : ácido ortofosfórico   0,1 M ( 4.7 ) /dihidrógeno-ortofosfato de sodio   0,1 M ( 4.8 ) /bromuro de tetrametilamonio   0,1 M ( 4.9 ) /agua/acetonitrilo ( 4.1 ) :   10/50/100/340/90 ( v/v/v/v/v ) .   La composición de la fase móvil puede modificarse   de forma que el factor de resolución R sea igualo   superior a 1,5 :    R = ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )    donde :    R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en   minutos , de dos picos ,    W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos   picos a media altura ,    d' = velocidad del papel en mm/min .    4.11 . Sílice tratada con octadecilsilano , de   granulometría 10 µm .    4.12 . Soluciones patrón : en una serie de   matraces aforados de 100 ml , pesar respectivamente   con precisión 5,0 , 10,0 , y 20 mg de quinina anhidra   ( 4.5 ) . Ajustar con metanol ( 4.6 ) y agitar   hasta disolución de la quinina . Filtrar cada   solución por filtro ( 5.5 ) de 0,5 µm .    5 . EQUIPO    5.1 . Material normal de laboratorio .    5.2 . Baño de ultrasonidos .    5.3 . Cromatógrado de HPLC con detector ultravioleta   de longitud de onda variable .    5.4 . Columna de acero inoxidable de 25 cm de   longitud y 4,6 mm de diámetro interior , rellena con   sílice ( 4.11 ) .    5.5 . Filtros Millipore FH 0/5 µm , o equivalentes ,   con equipo de filtración adecuado .    6 . PROCEDIMIENTO    6.1 . Preparación de la muestra    Pesar con precisión en un matraz aforado de   100 ml una cantidad de muestra que corresponda a unos   10 mg de quinina anhidra . Añadir 20 ml de   metanol ( 4.6 ) y poner el matraz durante   20 minutos en el baño de ultrasonidos ( 5.2 ) .   Completar hasta la marca de enrase con metanol ( 4.6 . ) .   Mezclar la solución y filtrar una parte alícuota   por el filtro ( 5.5 ) .    6.2 . Condiciones de la cromatografía     - Flujo de la fase móvil ( 4.10 ) : 1,0 ml/min .     - Longitud de onda del detector : 332 nm .     - Volumen inyectado : 10,0 µl de solución   filtrada ( 6.1 ) .     - Medida del área del pico .    6.3 . Curva de calibración    Introducir al menos tres veces 10,0 µl de cada   una de las soluciones patrón ( 4.12 ) .   Medir el área del pico y calcular su valor medio   para cada concentración .    Trazar la curva de calibración y comprobar que es   una línea recta .    7 . CÁLCULO    7.1 . A partir de la curva de calibración ( 6.3 ) ,   calcular la cantidad de quinina anhidra , expresada   en µg , contenida en el volumen inyectado .    7.2 . La concentración de quinina anhidra en la   muestra , como porcentaje en masa , se obtiene   por la fórmula siguiente :     % ( m/m ) de quinina anhidra = B/A    donde    B = cantidad en µg de quinina anhidra contenida   en los µl de la solución filtrada ( 6.1 ) ,    A = masa de la muestra ( 6.1 ) expresada en g .    8 . REPRODUCIBILIDAD (1)    Para un contenido en quinina anhidra del orden   del 0,5 % ( m/m ) , la diferencia entre los   resultados de dos determinaciones paralelas   realizadas con la misma muestra no debe pasar   del 0,02 % .    Para un contenido en quinina anhidra del orden del 0,2 %   ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de   dos determinaciones paralelas realizadas con la misma   muestra no debe pasar del 0,01 % .    IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE   SULFITOS Y BISULFITOS INORGÁNICOS    OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    El método describe la identificación y determinación   cuantitativa de los sulfitos y bisulfitos inorgánicos   en productos cosméticos . Sólo puede aplicarse   a productos que tengan una fase acuosa o alcohólica   y para concentraciones de hasta el 0,2 % de dióxido de   azufre .    A . IDENTIFICACIÓN    1 . PRINCIPIO    La muestra se calienta con ácido clorhídrico ,   y el dióxido de azufre liberado se identifica por   su olor o con ayuda de un papel indicador .    2 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    2.1 . Acido clorhídrico ( 4M ) .    2.2 . Papel indicador de yodato de potasio con   almidón , u otro papel indicador apropiado .    3 . EQUIPO    3.1 . Material normal de laboratorio .    3.2 . Matraz de 25 ml con condensador corto de reflujo .    4 . PROCEDIMIENTO    4.1 . Poner en el matraz ( 3.2 ) unos 2,5 g de   muestra y 10 ml de ácido clorhídrico ( 2.1 ) .    4.2 . Mezclar y llevar a ebullición .    4.3 . Detectar el dióxido de azufre por el   olor o por medio del papel indicador ( 2.2 ) .    B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA    1 . DEFINICIÓN    El contenido de la muestra en sulfito o bisulfito ,   determinado según este método , se expresa como   porcentaje en masa de dióxido de azufre .    2 . PRINCIPIO    Tras acidificar la muestra , el dióxido de azufre   liberado se destila y se recoge en una solución de   peróxido de hidrógeno . El ácido sulfúrico   formado se valora con una solución patrón de   hidróxido sódico .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Peróxido de hidrógeno al 0,2 % ( m/v ) .   Este reactivo debe prepararse cada día .    3.2 . Acido ortofosfórico ( d 25/4 = 1,75 ) .    3.3 . Metanol .    3.4 . Solución patrón de hidróxido sódico 0,01 M .    3.5 . Nitrógeno .    3.6 . Indicador : mezcla 1:1 ( v/v ) de rojo   de metilo al 0,03 % ( m/v ) en etanol y de azul de metileno   al 0,05 % ( m/v ) en etanol . Filtrar la solución .    4 . EQUIPO    4.1 . Material normal de laboratorio .    4.2 . Destilador ( ver esquema ) .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Pesar con precisión unos 2,5 g de muestra en   el matraz de destilación A ( ver esquema ) .    5.2 . Añadir 60 ml de agua y 50 ml de etanol ( 3.3 )   y mezclar .    5.3 . Poner 10 ml de peróxido de hidrógeno ( 3.1 ) ,   60 ml de agua y algunas gotas de indicador ( 3.6 ) en el   recipiente D destinado a recoger el destilado ( ver   esquema ) . Añadir algunas gotas de hidróxido sódico   ( 3.4 ) hasta que el indicador vire al verde .    5.4 . Proceder de la misma forma con el frasco   lavador E ( ver esquema ) .    5.5 . Montar el destilador y ajustar el flujo de   nitrógeno ( 3.5 ) a unas 60 burbujas por minuto .    5.6 . Introducir por el embudo 15 ml de ácido   ortofosfórico ( 3.2 ) en el matraz de destilación A .    5.7 . Llevar rápidamente a ebullición y dejar   hervir suavemente durante 30 minutos .    5.8 . Desconectar el recipiente D que contiene el   destilado . Enjuagar el tubo y , a   continuación , valorar con la solución de   hidróxido sódico ( 3.4 ) hasta que el indicador   ( 3.6 ) vire al verde .    6 . CÁLCULO    Calcular el contenido en sulfito o bisulfito de   la muestra como porcentaje en masa con ayuda   de la fórmula siguiente :     % ( m/m ) de dióxido de azufre = 3,2 MV/m    donde :    M = concentración molar de la solución de   hidróxido sódico ( 3.4 ) ,    V = volumen en ml de hidróxido sódico ( 3.4 )   necesarios para la valoración ( 5.8 ) ,    m = masa en g de la muestra ( 5.1 ) .    7 . REPRODUCIBILIDAD (2)    Para un contenido en dióxido de azufre del 0,2 %   ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos   determinaciones paralelas realizadas con la misma   muestra no debe pasar del 0,006 % .    Destilador de dióxido de azufre según Tanner :   ver D.O.    IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA   DE CLORATOS DE METALES ALCALINOS    OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    El método describe la identificación y determinación   cuantitativa de los cloratos en los dentríficos y   otros productos cosméticos .    A . IDENTIFICACIÓN    1 . PRINCIPIO    Los cloratos se separan de los otros halatos por   cromatografía en capa fina y se detectan por la   formación de yodo producida por la oxidación   del yoduro de potasio .    2 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de   clorato , bromato y yodato de potasio al 0,2 % ( m/v ) ,   recién preparados .    2.2 . Disolvente de desarrollo : solución de   amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol :   60/130/30 ( v/v/v ) .    2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al 5 %   ( m/v ) .    2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) .    2.5 . Ácido clorhídrico M .    2.6 . Placas de cromatografía en capa fina , ya   preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm   de espesor .    3 . EQUIPO    Material normal de laboratorio para cromatografía   en capa fina .    4 . PROCEDIMIENTO    4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de   1 g de muestra , filtrar y diluir hasta unos 25 ml .    4.2 . Depositar sobre la placa ( 2.6 ) 2 µl   de la solución ( 4.1 ) y 2 µl de cada una de   las tres soluciones patrón ( 2.1 ) .    4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar   por cromatografía ascendente sobre tres cuartos ,   aproximadamente , de la longitud de la placa con   ayuda del disolvente ( 2.2 ) .    4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar el   disolvente ( unas 2 horas ) .    4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de yoduro de   potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .    4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de   almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .    4.7 . Pulverizar sobre la placa ácido clorhídrico   ( 2.5 ) .    5 . LECTURA    En presencia de clorato aparece una mancha azul   ( eventualmente parda ) después de una media hora .    Los valores de Rf son los siguientes :    Halato * Rf *    Yodato * 0 - 0,2 *    Bromato * 0,5 - 0,6 *    Clorato * 0,7 - 0,8 *    Los bromatos y yodatos reaccionan inmediatamente .   Hay que cuidar de no confundir las manchas de   bromatos y de cloratos .    B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA    1 . DEFINICIÓN    El contenido de la muestra en clorato determinado   según este método se expresa como porcentaje en masa   de clorato .    2 . PRINCIPIO    El clorato se reduce con polvo de cinc en medio ácido .   El cloruro formado se valora por potenciometría con   nitrato de plata . Una determinación similar previa a   la reducción permite revelar la presencia eventual   de haluros .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    3.1 . Ácido acético al 80 % ( m/m ) .    3.2 . Cinc en polvo    3.3 . Solución patrón de nitrato de plata 0,1 M .    4 . EQUIPO    4.1 . Material normal de laboratorio .    4.2 . Potenciómetro equipado con electrodo indicador   de plata .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Preparación de la muestra    Pesar con precisión una cantidad ( m ) de unos 2 g en   un tubo de centrífuga . Añadir unos 15 ml de ácido   acético ( 3.1 ) y mezclar cuidadosamente . Esperar   30 minutos y centrifugar durante 15 minutos a   2 000 rev/min . Decantar el sobrenadante en un matraz   aforado de 50 ml . Repetir dos veces la centrifugación   añadiendo 15 ml de ácido acético ( 3.1 ) al   sedimento . Reunir las soluciones en el mismo matraz   aforado y completar hasta la marca de enrase con   ácido acético ( 3.1 ) .    5.2 . Reducción del clorato    Tomar 20 ml de la solución ( 5.1 ) y añadir 0,6 g   de cinc en polvo ( 3.2 ) . Llevar a ebullición en un   matraz con condensador de reflujo . Después de   30 minutos de ebullición , dejar enfriar y filtrar .   Enjuagar el matraz con agua y lavar con ella el filtro .   Mezclar el filtrado y el agua del enjuague .    5.3 . Determinación del cloruro    Valorar la solución ( 5.2 ) con nitrato de plata ( 3.3 )   utilizando el potenciómetro ( 4.2 ) . Valorar de la   misma forma 20 ml de la solución ( 5.1 ) con   nitrato de plata ( 3.3 ) .    Si el producto contiene derivados de bromo o de yodo   que puedan liberar bromuros o yoduros tras la   reducción , la curva de valoración presentará   varios puntos de inflexión . En este caso , el volumen   de la solución patrón ( 3.3 ) que corresponde   al cloruro viene dado por la diferencia entre los   volúmenes correspondientes al último y al   penúltimo punto de inflexión .    6 . CÁLCULO    El contenido de la muestra en clorato se calcula por   la fórmula :     % ( m/m ) de clorato = ( 20,9 ( V - V' ) M ) /m    donde :    V = volumen en ml de la solución de nitrato de plata   ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.2 ) ,    V' = volumen en ml de la solución de nitrato de plata   ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.1 ) ,    M = molaridad de la solución de nitrato de plata   ( 3.3 ) ,    m = masa en g de la muestra ( 85.1 ) .    7 . REPRODUCIBILIDAD (1)    Para un contenido en clorato del 3 al 5 % ( m/m ) , la   diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar   del 0,07 % ( m/m ) .    IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL   YODO SÓDICO    OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN    El método sirve para la identificación y la   determinación cuantitativa del yodato sódico en   productos cosméticos que se eliminan inmediatamente   después de usarse .    A . IDENTIFICACIÓN    1 . PRINCIPIO    El yodato sódico se separa de los otros halatos por   cromatografía en capa fina y se identifica por la   oxidación del yoduro a yodo .    2 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .    2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de   clorato , bromato y yodato de potasio al 0,01 % ( m/v ) ,   recién preparadas .    2.2 . Disolvente de desarrollo : solución   de amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol :   60/130/30 ( v/v/v ) .    2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al   5 % ( m/v ) .    2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) .    2.5 . Ácido clorhídrico M .    3 . EQUIPO    3.1 . Placas de cromatografía en capa fina , ya   preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm de   espesor .    3.2 . Material normal de laboratorio para   cromatografía en capa fina .    4 . PROCEDIMIENTO    4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de 1 g de   muestra , filtrar y diluir hasta unos 10 ml .    4.2 . Depositar 2 µl de esta solución sobre la   línea de base de la placa ( 3.1 ) , así como   2 µl de cada una de las tres soluciones   patrón ( 2.1 ) .    4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar por   cromatografía ascendente sobre tres cuartos ,   aproximadamente , de la longitud de la placa con ayuda   del disolvente ( 2.2 ) .    4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar   el disolvente a temperatura ambiente unas 2 horas .    4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de   yoduro de potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos   5 minutos .    4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de   almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .    4.7 . Pulverizar finalmente el ácido clorhídrico   ( 2.5 ) .    5 . LECTURA    En presencia de yodato aparece inmediatamente una   mancha azul ( también puede ser parda o hacerse parda   con el tiempo ) , con el valor de R f aproximadamente   entre 0 y 0,2 .    Los bromatos reaccionan inmediatamente , con   valores de R f de 0,5 a 0,6 , y los cloratos reaccionan   después de unos 30 minutos , con valores   de R f de 0,7 a 0,8 .    B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA    1 . DEFINICIÓN    El contenido de la muestra en yodato sódico   determinado por este método se expresa como porcentaje   en masa de yodato sódico .    2 . PRINCIPIO    El yodato sódico se disuelve en agua y se determina   por cromatografía líquida de alta presión   ( HPLC ) , utilizando una columna de fase inversa C18   y otra columna de intercambio amónico , dispuestas en   serie .    3 . REACTIVOS    Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y ,   en particular , adecuados para HPLC .    3.1 . Ácido clorhídrico , 4M .    3.2 . Solución acuosa de sulfito sódico al   5 % ( m/v ) .    3.3 . Solución madre de yodato sódico : 50 mg de   yodato sódico en 100 ml de agua .    3.4 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio .    3.5 . Ortofosfato disódico dihidratado .    3.6 . Fase móvil para la HPLC : disolver 3,88 g de   dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 3.4 ) y 1,19 g de   ortofosfato disódico dihidratado ( 3.5 ) en 1l de   agua .    El pH de la solución obtenida es 6,2 .    3.7 . Papel indicador universal , pH 1-11 .    4 . EQUIPO    Material normal de laboratorio    4.1 . Filtro de papel de 110 mm de diámetro ,   Schleicher y Schuell n º 575 o equivalente .    4.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta   de longitud de onda variable .    4.3 . Dos columnas dispuestas en serie , cada una de   120 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior ; la   primera columna rellena con Nucleosil ( R ) 5C18 o   equivalente , y la segunda con Vydac , TM-301-SB o   equivalente .    5 . PROCEDIMIENTO    5.1 . Preparación de la muestra    5.1.1 . Muestras fluidas ( champúes )    Pesar con precisión alrededor de 1,0 g de muestra   en un matraz aforado de 10 ml con tapón esmerilado .   Completar con agua hasta la marca de enrase y mezclar .   En caso necesario filtrar la solución . Determinar   la cantidad de yodato en la solución por HPLC   siguiendo el punto 5.2 .    5.1.2 . Muestras sólidas ( jabón )    Dividir finalmente una parte de la muestra y pesar   con precisión alrededor de 1,0 g en una probeta   graduada de 100 ml un tapón esmerilado . Completar   con agua hasta 50 ml y agitar enérgicamente durante   1 minuto . Centrifugar y filtrar a través de un   filtro de papel ( 4.1 ) o bien dejar reposar la mezcla   durante una noche al menos , agitar enérgicamente la   solución gelatinosa y filtrarla por un filtro de   papel ( 4.1 ) .    Determinar el yodato en el filtrado por HPLC siguiendo   el punto 5.2 .    5.2 . Cromatografía    Flujo : 1 ml/min .    Longitud de onda del detector : 210 nm .    Volumen inyectado : 10 µl .    Medida : área del pico .    5.3 . Calibración    Pipetear respectivamente 1,0 , 2,0 , 5,0 , 10,0 y 20,0 ml   de la solución madre de yodato sódico ( 3.3 ) en   matraces aforados de 50 ml , completar hasta la marca   de enrase con agua y agitar . Las soluciones así   obtenidas contienen respectivamente 0,01 , 0,02 , 0,05 ,   0,10 y 0,20 mg de yodato sódico por ml . Inyectar   10 µl de cada solución patrón en el cromatográfo   ( 4.2 ) . Determinar el área del pico del yodato y trazar   la curva de calibración relacionando el área del pico del   yodato con la concentración de yodato sódico .    6 . CÁLCULO    Calcular el contenido en yodato sódico como porcentaje   en masa según la fórmula :     % ( m/m ) de yodato sódico = V c/10 m    donde :    m = masa de la muestra ( 5.1 ) , expresada en g ,    V = volumen total , expresado en ml , de la solución   de la muestra obtenida según el punto 5.1 ,    c = concentración de yodato sódico , expresada   en mg/ml , obtenida a partir de la curva de   calibración .    7 . REPRODUCIBILIDAD (1)    Para un contenido en yodato sódico del 0,1 % ( m/m ) ,   la diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar   del 0,002 % .    8 . CONFIRMACIÓN    8.1 . Principio    En una disolución acidificada de un producto   cosmético , el yodato ( IO3 - ) se reduce a   yoduro ( I - ) por la acción del sulfito y la   solución obtenida se examina por HPLC . Si hay algún   pico con un tiempo de retención que corresponde al   tiempo de retención del yodato y desaparece después   de tratar con sulfito , el pico original puede   considerarse de yodato con la mayor probabilidad .    8.2 . Procedimiento    Pipetear en un matraz Erlenmeyer 5 ml de la solución   problema obtenida en el punto 5.1 . Ajustar el pH de la   solución a un valor inferior o igual a 3 utilizando   ácido clorhídrico ( 3.1 ) y papel indicador   universal ( 3.7 ) . Añadir tres gotas de la solución   de sulfito sódico ( 3.2 ) y agitar . Inyectar   10 µl de la solución en el cromatógrafo ( 4.2 ) .   Comparar el cromatograma con el obtenido de la forma   descrita en el punto 5 para la misma muestra .    (1) Según la norma ISO 5725 .