CELEX: 32022R0893
Language: nl
Date: 2022-06-07 00:00:00
Title: Uitvoeringsverordening (EU) 2022/893 van de Commissie van 7 juni 2022 tot wijziging van bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 tot vaststelling van analysemethoden voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren in het kader van de officiële controle van diervoeders (Voor de EER relevante tekst)

8.6.2022   
               
               
                  NL
               
               
                  Publicatieblad van de Europese Unie
               
               
                  L 155/24
               
            
         UITVOERINGSVERORDENING (EU) 2022/893 VAN DE COMMISSIE
         van 7 juni 2022
         tot wijziging van bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 tot vaststelling van analysemethoden voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren in het kader van de officiële controle van diervoeders
         (Voor de EER relevante tekst)
         DE EUROPESE COMMISSIE,
         Gezien het Verdrag betreffende de werking van de Europese Unie,
         Gezien Verordening (EU) 2017/625 van het Europees Parlement en de Raad van 15 maart 2017 betreffende officiële controles en andere officiële activiteiten die worden uitgevoerd om de toepassing van de levensmiddelen- en diervoederwetgeving en van de voorschriften inzake diergezondheid, dierenwelzijn, plantgezondheid en gewasbeschermingsmiddelen te waarborgen, tot wijziging van de Verordeningen (EG) nr. 999/2001, (EG) nr. 396/2005, (EG) nr. 1069/2009, (EG) nr. 1107/2009, (EU) nr. 1151/2012, (EU) nr. 652/2014, (EU) 2016/429 en (EU) 2016/2031 van het Europees Parlement en de Raad, de Verordeningen (EG) nr. 1/2005 en (EG) nr. 1099/2009 van de Raad en de Richtlijnen 98/58/EG, 1999/74/EG, 2007/43/EG, 2008/119/EG en 2008/120/EG van de Raad, en tot intrekking van de Verordeningen (EG) nr. 854/2004 en (EG) nr. 882/2004 van het Europees Parlement en de Raad, de Richtlijnen 89/608/EEG, 89/662/EEG, 90/425/EEG, 91/496/EEG, 96/23/EG, 96/93/EG en 97/78/EG van de Raad en Besluit 92/438/EEG van de Raad (verordening officiële controles) (1), en met name artikel 34, lid 6, eerste alinea, punt a),
         Overwegende hetgeen volgt:
         
                     (1)
                  
                  
                     Verordening (EG) nr. 152/2009 (2) van de Commissie stelt testmethoden vast ter ondersteuning van officiële controles met het oog op de handhaving van het verbod op het gebruik van verwerkte dierlijke eiwitten in diervoeders voor voedselproducerende dieren. Dit omvat analysemethoden voor de bepaling van bestanddelen van dierlijke oorsprong voor de officiële controle van diervoeders, die worden beschreven in bijlage VI bij die verordening en uitgevoerd met behulp van lichtmicroscopie of polymerasekettingreactie (PCR).
                  
               
                     (2)
                  
                  
                     Het gebruik van van gekweekte insecten afkomstige verwerkte dierlijke eiwitten is bij Verordening (EU) 2017/893 van de Commissie (3) toegestaan in het voeder voor aquacultuurdieren en bij Verordening (EU) 2021/1372 van de Commissie (4) in diervoeders voor varkens en pluimvee, maar is krachtens Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad (5) nog steeds verboden in bepaalde diervoeders, met name in diervoeders voor herkauwers.
                  
               
                     (3)
                  
                  
                     Het referentielaboratorium van de Europese Unie voor dierlijke eiwitten in diervoeders heeft een speciaal protocol ontwikkeld en gevalideerd, dat een tweevoudige sedimentatiestap omvat en waarmee van ongewervelde landdieren, met inbegrip van insecten, afkomstige deeltjes kunnen worden aangetoond in aan laboratoriumtests onderworpen voedermiddelen, mengvoeders en voormengsels. Dat protocol met die aanvullende stap moet worden gebruikt in het kader van officiële controles om na te gaan of het verbod op het gebruik van verwerkte dierlijke eiwitten van insecten in bepaalde diervoeders voor voedselproducerende dieren correct wordt gehandhaafd.
                  
               
                     (4)
                  
                  
                     De beschrijving van de lichtmicroscopie-methode in bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 moet daarom worden aangepast om in het protocol een tweevoudige sedimentatiestap op te nemen voor de voorbereiding van monsters die moeten worden getest om aan te tonen of zij bestanddelen van ongewervelde landdieren bevatten.
                  
               
                     (5)
                  
                  
                     Bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 moet bijgevolg dienovereenkomstig worden gewijzigd.
                  
               
                     (6)
                  
                  
                     De in deze verordening vervatte maatregelen zijn in overeenstemming met het advies van het Permanent Comité voor planten, dieren, levensmiddelen en diervoeders,
                  
               HEEFT DE VOLGENDE VERORDENING VASTGESTELD:
         
            Artikel 1
            Bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 wordt gewijzigd overeenkomstig de bijlage bij deze verordening.
         
         
            Artikel 2
            Deze verordening treedt in werking op de twintigste dag na die van de bekendmaking ervan in het Publicatieblad van de Europese Unie.
         
         
            Deze verordening is verbindend in al haar onderdelen en is rechtstreeks toepasselijk in elke lidstaat.
            Gedaan te Brussel, 7 juni 2022.
            
               
                  Voor de Commissie
               
               
                  De voorzitter
               
               Ursula VON DER LEYEN
            
         
         
            (1)  PB L 95 van 7.4.2017, blz. 1.
         
            (2)  Verordening (EG) nr. 152/2009 van de Commissie van 27 januari 2009 tot vaststelling van de bemonsterings- en analysemethoden voor de officiële controle van diervoeders (PB L 54 van 26.2.2009, blz. 1).
         
            (3)  Verordening (EU) 2017/893 van de Commissie van 24 mei 2017 tot wijziging van de bijlagen I en IV bij Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad, en van de bijlagen X, XIV en XV bij Verordening (EU) nr. 142/2011 van de Commissie wat de bepalingen inzake verwerkte dierlijke eiwitten betreft (PB L 138 van 25.5.2017, blz. 92).
         
            (4)  Verordening (EU) 2021/1372 van de Commissie van 17 augustus 2021 tot wijziging van bijlage IV bij Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad wat betreft het verbod op het vervoederen van dierlijke eiwitten aan andere niet-herkauwende landbouwhuisdieren dan pelsdieren (PB L 295 van 18.8.2021, blz. 1).
         
            (5)  Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad van 22 mei 2001 houdende vaststelling van voorschriften inzake preventie, bestrijding en uitroeiing van bepaalde overdraagbare spongiforme encefalopathieën (PB L 147 van 31.5.2001, blz. 1).
      
      
         
            BIJLAGE
            Bijlage VI bij Verordening (EG) nr. 152/2009 wordt als volgt gewijzigd:
            
                        1)
                     
                     
                        Punt 1 wordt vervangen door:
                        “1.   Doel en toepassingsgebied
                        De bepaling van bestanddelen van dierlijke oorsprong in diervoeders wordt uitgevoerd met behulp van lichtmicroscopie of de polymerasekettingreactie (PCR) overeenkomstig de bepalingen van deze bijlage.
                        Met deze twee methoden kunnen bestanddelen van dierlijke oorsprong in voormengsels, voedermiddelen en mengvoeders worden aangetoond. Het gehalte aan die bestanddelen in voormengsels, voedermiddelen en mengvoeders kan met deze methoden echter niet worden berekend. Beide methoden hebben een aantoonbaarheidsgrens van minder dan 0,1 % (m/m).
                        Met de PCR-methode kan worden bepaald tot welke taxonomische groep de bestanddelen van dierlijke oorsprong in voormengsels, voedermiddelen en mengvoeders behoren.
                        Deze methoden gelden voor de controle op de toepassing van de verbodsbepalingen van artikel 7, lid 1, van Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad (*), van bijlage IV bij die verordening en van artikel 11, lid 1, van Verordening (EG) nr. 1069/2009 van het Europees Parlement en de Raad (**).
                        Afhankelijk van het soort diervoeder dat wordt onderzocht kunnen deze methoden afzonderlijk of in combinatie in één protocol worden gebruikt overeenkomstig de standaardwerkvoorschriften die door het EU-referentielaboratorium voor dierlijke eiwitten in diervoeders (EURL-AP) zijn vastgesteld en te vinden zijn op de website van dat laboratorium (***).
                        
                           (*)  Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad van 22 mei 2001 houdende vaststelling van voorschriften inzake preventie, bestrijding en uitroeiing van bepaalde overdraagbare spongiforme encefalopathieën (PB L 147 van 31.5.2001, blz. 1)."
                        
                        
                           (**)  Verordening (EG) nr. 1069/2009 van het Europees Parlement en de Raad van 21 oktober 2009 tot vaststelling van gezondheidsvoorschriften inzake niet voor menselijke consumptie bestemde dierlijke bijproducten en afgeleide producten en tot intrekking van Verordening (EG) nr. 1774/2002 (verordening dierlijke bijproducten) (PB L 300 van 14.11.2009, blz. 1)."
                        
                        
                           (***)  https://www.eurl.craw.eu/legal-sources-and-sops/method-of-reference-and-sops/”."
                        
                     
                  
                        2)
                     
                     
                        Punt 2.1 wordt vervangen door:
                        “2.1.   Lichtmicroscopie
                        
                        2.1.1.   Beginsel
                        
                        De bestanddelen van dierlijke oorsprong die kunnen worden aangetroffen in voormengsels, voedermiddelen en mengvoeders die ter analyse worden aangeboden, worden geïdentificeerd op basis van typische microscopisch identificeerbare kenmerken zoals spierweefsel en andere vleesdeeltjes, kraakbeen, bot, hoorn, haar, cuticulaire fragmenten van ongewervelde dieren, tracheale structuren van insecten, bloedproducten, melkdeeltjes, lactosekristallen, veren, eierschalen, visgraten en schubben.
                        Microscopisch onderzoek wordt uitgevoerd na voorbereiding van de monsters door sedimentatie.
                        Op de monsters wordt als volgt een sedimentatiestap uitgevoerd:
                        
                                    a)
                                 
                                 
                                    voor het aantonen van andere bestanddelen van dierlijke oorsprong dan van ongewervelde landdieren, een enkelvoudige sedimentatiestap met tetrachlooretheen zoals beschreven in punt 2.1.3.4.3;
                                 
                              
                                    b)
                                 
                                 
                                    voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren, een tweevoudige sedimentatiestap met petroleumether/tetrachlooretheen, zoals beschreven in punt 2.1.3.4.4.
                                 
                              2.1.2.   Reagentia en uitrusting
                        
                        2.1.2.1.   Reagentia
                        2.1.2.1.1.   Sedimentatievloeistof
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Tetrachlooretheen (dichtheid 1,62).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Petroleumether (PE), kookpunt 40-60 °C (dichtheid 0,65).
                                 
                              2.1.2.1.2.   Kleurstof
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Alizarineroodoplossing (verdun 2,5 ml zoutzuur 1 M in 100 ml water en voeg hieraan 200 mg alizarinerood toe).
                                 
                              2.1.2.1.3.   Insluitmiddelen
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Loog (NaOH 2,5 % m/V of KOH 2,5 % m/V).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Glycerol (onverdund, viscositeit 1 490 cP) of een insluitmiddel met gelijkwaardige eigenschappen voor het maken van niet-permanente preparaten.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Norland Optical Adhesive 65® (viscositeit 1 200 cP) of een hars met gelijkwaardige eigenschappen voor het maken van permanente preparaten.
                                 
                              2.1.2.1.4.   Als insluitmiddel te gebruiken kleurstoffen
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Lugoloplossing (los 2 g kaliumjodide op in 100 ml water en voeg onder geregeld schudden 1 g jood toe).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Cystinereagens (2 g loodacetaat, 10 g NaOH/100 ml water).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Fehlingsreagens (vóór gebruik bereid uit gelijke delen (1:1) van twee voorraadoplossingen A en B: oplossing A (los 6,9 g koper(II)sulfaat-pentahydraat op in 100 ml water); oplossing B (los 34,6 g kaliumnatriumtartraat-tetrahydraat en 12 g NaOH op in 100 ml water).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Tetramethylbenzidine/waterstofperoxide (los 1 g 3,3”,5,5’-tetramethylbenzidine (TMB) op in 100 ml ijsazijn en 150 ml water. Meng voor gebruik vier delen van deze TMB-oplossing met één deel 3 %-ige waterstofperoxide).
                                 
                              2.1.2.1.5.   Wasvloeistoffen
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Ethanol ≥ 96 % (technisch zuiver).
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Aceton (technisch zuiver).
                                 
                              2.1.2.1.6.   Bleekmiddel
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Natriumhypochlorietoplossing, in handelskwaliteit (9-14 % actief chloor).
                                 
                              2.1.2.2.   Uitrusting
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    Analytische balans, nauwkeurigheid 0,001 g.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Verkleiningsapparatuur: mes of rotormolen. Bij gebruik van een rotormolen zijn mazen van ≤ 0,5 mm verboden.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Zeven met vierkante mazen van 0,25 mm en 1 mm maaswijdte. Behalve bij het voorzeven van het monster mag de diameter van de zeven niet groter zijn dan 10 cm om verlies van materialen te voorkomen. IJking van de zeven is niet vereist.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Conische glazen scheitrechter, inhoud 250 ml, van onderen voorzien van een kraan van teflon of geslepen glas, uitloopdiameter ≥ 4 mm. Uitsluitend voor enkelvoudige sedimentatie met tetrachlooretheen mag in plaats hiervan een imhoffglas worden gebruikt, mits het laboratorium heeft aangetoond dat hiermee gelijkwaardige detectieniveaus kunnen worden behaald als met de scheitrechter.
                                    
                                       
                                    
                                       Scheitrechter
                                    
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Stereomicroscoop, eindvergroting minimaal 6,5×-40×.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Samengestelde microscoop, eindvergroting minimaal 100×-400×, doorvallend licht, helderveld. Daarnaast mag van gepolariseerd licht en differentieel interferentiecontrast gebruik worden gemaakt.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Gebruikelijk laboratoriumglaswerk.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Uitrusting voor het maken van preparaten: standaard-objectglaasjes, holle objectglaasjes, dekglaasjes (20 × 20 mm), pincet, smalle spatel.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Laboratoriumoven.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Centrifuge.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    Filterpapier: kwalitatieve cellulosefilter (poriëngrootte 4-11 μm).
                                 
                              2.1.3.   Bemonstering en monstervoorbereiding
                        
                        2.1.3.1.   Bemonstering
                        Er wordt uitgegaan van een representatief monster dat is genomen overeenkomstig bijlage I.
                        2.1.3.1.1.   Drogen
                        Monsters met een hoger vochtgehalte dan 14 % worden vóór behandeling overeenkomstig bijlage III gedroogd.
                        2.1.3.1.2.   Voorzeven
                        Om informatie te verzamelen over mogelijke milieuverontreiniging van het diervoeder, wordt aanbevolen om diervoeder in pellets en pitten voor te zeven met 1 mm maaswijdte en beide fracties als afzonderlijke monsters voor te bereiden, te analyseren en er verslag van uit te brengen.
                        2.1.3.2.   Voorzorgsmaatregelen
                        Om kruisverontreiniging in het laboratorium te vermijden, moet alle herbruikbare uitrusting vóór gebruik zorgvuldig gereinigd worden. De scheitrechter moet voor het reinigen uit elkaar worden genomen. De onderdelen van de scheitrechter en het glaswerk worden eerst met de hand en vervolgens machinaal gewassen. De zeven moeten worden gereinigd met een borstel met harde, synthetische haren. Na het zeven van vettig materiaal zoals vismeel wordt aangeraden de zeven tot slot nog met aceton en perslucht te reinigen.
                        2.1.3.3.   Voorbereiding van monsters van oliën of vetten
                        Het volgende protocol moet worden gevolgd voor de voorbereiding van monsters van vetten:
                        
                                    —
                                 
                                 
                                    verwarm vast vet in een oven tot het gesmolten is;
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    pipetteer 40 ml vet of olie van het onderste gedeelte van het monster in een centrifugebuis;
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    centrifugeer het monster gedurende 10 min bij 4 000 omwentelingen per minuut.
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    als het vet na centrifugeren vast is, verwarm het dan in een oven tot het gesmolten is;
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    centrifugeer nogmaals gedurende 5 min bij 4 000 omwentelingen per minuut;
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    breng de helft van de gedecanteerde onzuiverheden met een lepel of spatel over op een objectglaasje voor microscopisch onderzoek. Als insluitmiddel wordt glycerol aanbevolen;
                                 
                              
                                    —
                                 
                                 
                                    de resterende onzuiverheden worden gebruikt voor sedimentatie zoals beschreven in punt 2.1.3.4.3, eerste streepje.
                                 
                              Hetzelfde protocol, met uitzondering van het eerste en het vierde streepje, wordt toegepast voor de bereiding van monsters bestaande uit oliën.
                        2.1.3.4.   Voorbereiding van monsters, met uitzondering van monsters van oliën of vetten
                        
                                 
                                    2.1.3.4.1.
                                 
                                 
                                    Nemen van deelmonsters en malen: van het monster wordt een deelmonster voor analyse genomen van ten minste 50 g, dat wordt gemalen.
                                 
                              
                                 
                                    2.1.3.4.2.
                                 
                                 
                                    Bereiding van het ruwe materiaal: er wordt ten minste 5 g van het gemalen deelmonster bereid. Het materiaal wordt met een maaswijdte van 0,25 mm gezeefd en de twee resulterende fracties worden onderzocht.
                                 
                              
                                 
                                    2.1.3.4.3.
                                 
                                 
                                    Enkelvoudige sedimentatie met tetrachlooretheen voor het aantonen van andere bestanddelen van dierlijke oorsprong dan van ongewervelde landdieren.
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                Afscheiding en bereiding van het sediment:
                                                breng 10 g van het gemalen deelmonster (tot op 0,01 g nauwkeurig afgewogen) in de scheitrechter of het imhoffglas en voeg 50 ml tetrachlooretheen toe. In het geval van vismeel of andere puur dierlijke producten, minerale ingrediënten of voormengsels die meer dan 10 % sediment opleveren, wordt maximaal 3 g in de scheitrechter gebracht. Schud het mengsel gedurende minimaal 30 s krachtig, en voeg daarna voorzichtig 50 ml tetrachlooretheen toe langs de binnenwand van de trechter om de aangehechte deeltjes weg te spoelen. Laat het resulterende mengsel ten minste 5 min staan en scheid vervolgens het sediment af door de kraan te openen.
                                                Bij gebruik van een imhoffglas wordt het mengsel gedurende ten minste 15 s krachtig geroerd waarna eventuele deeltjes aan de binnenwand van het glas zorgvuldig worden weggespoeld met ten minste 10 ml zuiver tetrachlooretheen. Laat het mengsel vervolgens 3 min staan en roer daarna opnieuw gedurende 15 s, waarna eventuele deeltjes tegen de binnenwand van het glas zorgvuldig worden weggespoeld met ten minste 10 ml zuiver tetrachlooretheen. Laat het resulterende mengsel ten minste 5 min staan en schenk de vloeibare fractie daarna voorzichtig af zonder dat het sediment meekomt.
                                                Het sediment wordt verzameld op een filtreerpapier dat in een trechter wordt geplaatst om het resterende tetrachlooretheen te scheiden terwijl vetafzetting in het sediment wordt vermeden. Het sediment wordt gedroogd. Vervolgens wordt aanbevolen het sediment (tot op 0,001 g nauwkeurig) te wegen om de sedimentatiestap te controleren. Ten slotte wordt het sediment met een maaswijdte van 0,25 mm gezeefd en worden de twee resulterende fracties onderzocht, tenzij zeven niet nodig wordt geacht.
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                Afscheiding en bereiding van het flotaat:
                                                na afscheiding van het sediment zoals hierboven beschreven moeten in de scheitrechter twee fasen achtergebleven zijn: een vloeibare fase bestaande uit tetrachlooretheen en een vaste fase van drijvend materiaal. Deze vaste fase is het flotaat en wordt verkregen door de kraan van de scheitrechter te openen en het tetrachlooretheen volledig te laten uitlopen. Vervolgens wordt de scheitrechter omgekeerd, waarna het flotaat in een grote petrischaal wordt gebracht en in een zuurkast wordt gedroogd. Het materiaal wordt met een maaswijdte van 0,25 mm gezeefd en de twee resulterende fracties worden onderzocht.
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                Gebruik van kleurstoffen:
                                                om de bestanddelen van dierlijke oorsprong gemakkelijker correct te kunnen identificeren kan de analist bij de voorbereiding van de monsters kleurstoffen gebruiken volgens de richtsnoeren van het EURL-AP, die op de website van dat laboratorium te vinden zijn.
                                                Bij gebruik van alizarineroodoplossing voor kleuring van het sediment geldt het volgende protocol:
                                                
                                                            —
                                                         
                                                         
                                                            breng het gedroogde sediment over in een glazen reageerbuis en spoel tweemaal met ongeveer 5 ml ethanol (beide keren 30 s vortexen, ongeveer 1 min 30 s laten bezinken en de vloeistof afschenken);
                                                         
                                                      
                                                            —
                                                         
                                                         
                                                            bleek het sediment door toevoeging van ten minste 1 ml natriumhypochlorietoplossing. Laat gedurende 10 min reageren. Vul de reageerbuis met water, laat het sediment 2-3 min bezinken en schenk het water en de gesuspendeerde deeltjes voorzichtig af;
                                                         
                                                      
                                                            —
                                                         
                                                         
                                                            spoel het sediment vervolgens tweemaal met ongeveer 10 ml water (beide keren 30 s vortexen, laten bezinken en het water afschenken);
                                                         
                                                      
                                                            —
                                                         
                                                         
                                                            voeg 2-10 druppels alizarineroodoplossing toe en vortex het mengsel. Laat 30 s reageren en spoel het gekleurde sediment tweemaal met ongeveer 5 ml ethanol en vervolgens eenmaal met aceton (beide keren 30 s vortexen, ongeveer 1 min laten bezinken en de vloeistof afschenken);
                                                         
                                                      
                                                            —
                                                         
                                                         
                                                            droog het gekleurde sediment.
                                                         
                                                      
                                          
                              
                                 
                                    2.1.3.4.4.
                                 
                                 
                                    Tweevoudige sedimentatie met petroleumether/tetrachlooretheen voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren.
                                    Alle stappen moeten worden uitgevoerd in een conische glazen scheitrechter van 250 ml, zoals beschreven in punt 2.1.2.2, vierde streepje.
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                breng 10 g van het gemalen deelmonster (tot op 0,01 g nauwkeurig afgewogen) in de scheitrechter en onderwerp dit eerst aan een enkelvoudige sedimentatie met tetrachlooretheen zoals beschreven in punt 2.1.3.4.3, met inbegrip van het afscheiden van het sediment op een filtreerpapier dat in een trechter wordt geplaatst. Dit sediment kan worden gebruikt als het volgens punt 2.1.3.4.3 verkregen sediment.
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                Breng de kleine hoeveelheid tetrachlooretheen die samen met het sediment wordt afgescheiden, in een maatcilinder over. Vul, door de afsluitkraan van de scheitrechter te openen, de maatcilinder verder, totdat 30 ml tetrachlooretheen is verkregen. Sluit de afsluitkraan zodra deze hoeveelheid is bereikt.
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                Deze opgevangen hoeveelheid tetrachlooretheen wordt vervangen door een volume van 30 ml petroleumether, kookpunt 40-60 °C, aan de scheidingstrechter toe te voegen. Meng de inhoud van de scheitrechter grondig om een mengsel van 30 % petroleumether/70 % tetrachlooretheen (met een dichtheid van ongeveer 1,26 g/cm3) te verkrijgen. Laat het materiaal gedurende 10 min rusten. Er worden twee nieuwe fracties gevormd: een tweede sediment en een uiteindelijk flotaat (< 1,26 g/cm3). Het tweede sediment wordt in een petrischaal (of een filtreerpapier dat in een trechter wordt geplaatst) opgevangen door de afsluitkraan te openen totdat slechts een kleine hoeveelheid van het mengsel van oplosmiddelen en het uiteindelijke flotaat in de scheitrechter zijn achtergebleven. De resterende vloeistof en het uiteindelijke flotaat worden afzonderlijk opgevangen op een filtreerpapier dat in een trechter wordt geplaatst. Spoel de binnenwand van de scheitrechter af met petroleumether om al het materiaal van het uiteindelijke flotaat op te vangen. Laat het uiteindelijke flotaat drogen. Het uiteindelijke flotaat wordt met een maaswijdte van 0,25 mm gezeefd en de twee resulterende fracties worden onderzocht met het oog op het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren, tenzij zeven niet nodig wordt geacht.
                                             
                                          
                              2.1.4.   Microscopisch onderzoek
                        
                        2.1.4.1.   Bereiding van de preparaten
                        Er worden microscopische preparaten vervaardigd van het sediment en, naar keuze van de analist, van het flotaat of het ruwe materiaal. In voorkomend geval worden, uitsluitend voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren, ook preparaten vervaardigd van het overeenkomstig punt 2.1.3.4.4 verkregen uiteindelijke flotaat. De twee resulterende fracties (de fijne en de grove) worden bereid. De op de objectglaasjes aangebrachte analysemonsters moeten representatief zijn voor de hele fractie.
                        Het aantal vervaardigde preparaten moet voldoende zijn om het volledige onderzoekprotocol van punt 2.1.4.2 uit te voeren.
                        De preparaten worden ingesloten met geschikt insluitmiddel overeenkomstig de standaardwerkvoorschriften van het EURL-AP, die te vinden zijn op de website van dat laboratorium. De preparaten worden met dekglaasjes afgedekt.
                        2.1.4.2.   Stroomschema voor microscopische detectie van deeltjes van dierlijke oorsprong in mengvoeders, voedermiddelen en voormengsels
                        De microscopische preparaten worden bekeken volgens de stroomschema’s in de diagrammen 1 en 2.
                        Het microscopisch onderzoek wordt uitgevoerd met de samengestelde microscoop op het sediment en, naar keuze van de analist, op hetzij het flotaat hetzij het ruwe materiaal. Daarnaast wordt, met het oog op het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren, ook het overeenkomstig punt 2.1.3.4.4 verkregen uiteindelijke flotaat bekeken volgens diagram 3. Voor de grove fracties kan behalve de samengestelde microscoop ook de stereomicroscoop worden gebruikt. Elk preparaat wordt in zijn geheel bij diverse vergrotingen onderzocht. Het gebruik van de stroomschema’s wordt gedetailleerd beschreven in de standaardwerkvoorschriften van het EURL-AP, die te vinden zijn op de website van dat laboratorium.
                        Het minimumaantal preparaten dat in elke stap van het stroomschema moet worden onderzocht, moet strikt worden aangehouden, tenzij de fractie te klein is om het voorgeschreven aantal preparaten te maken, bijvoorbeeld wanneer geen sediment aanwezig is. Per bepaling worden maximaal zes preparaten gebruikt voor het bepalen van het aantal deeltjes.
                        Wanneer van het flotaat of het ruwe materiaal extra preparaten worden vervaardigd met specifiekere insluitmiddelen met kleurwerking, zoals beschreven in punt 2.1.2.1.4, voor de verdere karakterisering van structuren (bv. veren, haren, spieren of bloeddeeltjes) die zijn aangetroffen op met andere insluitmiddelen vervaardigde preparaten, zoals beschreven in punt 2.1.2.1.3, wordt het aantal deeltjes geteld op basis van niet meer dan zes preparaten per bepaling, met inbegrip van de extra preparaten met een specifieker insluitmiddel. Voor het aantonen van andere typen (gewervelde landdieren en vissen) worden de voor het aantonen van bestanddelen van ongewervelde landdieren vervaardigde extra preparaten van het overeenkomstig punt 2.1.3.4.4 verkregen uiteindelijke flotaat, niet in aanmerking genomen.
                        Om de aard en oorsprong van de deeltjes gemakkelijker te kunnen vaststellen mag de analist gebruikmaken van hulpmiddelen als beslissingsondersteunende systemen, beeldbanken en referentiemonsters.
                        
                           Diagram 1
                        
                        
                           Stroomschema na enkelvoudige sedimentatie met tetrachlooretheen voor het opsporen van andere dan van ongewervelde landdieren afkomstige deeltjes van dierlijke oorsprong in mengvoeders, voedermiddelen en voormengsels, eerste bepaling
                        
                        
                           
                        
                           Diagram 2
                        
                        
                           Stroomschema na enkelvoudige sedimentatie met tetrachlooretheen voor het opsporen van andere dan van ongewervelde landdieren afkomstige deeltjes van dierlijke oorsprong in mengvoeders, voedermiddelen en voormengsels, tweede bepaling
                        
                        
                           
                        
                           Diagram 3
                        
                        
                           Stroomschema na tweevoudige sedimentatie met petroleumether/tetrachlooretheen voor het opsporen van bestanddelen van ongewervelde landdieren in mengvoeders, voedermiddelen en voormengsels
                        
                        
                           
                        2.1.4.3.   Aantal bepalingen
                        De bepalingen worden uitgevoerd op verschillende deelmonsters van elk 50 g.
                        Als in de eerste bepaling overeenkomstig het stroomschema van diagram 1, of in voorkomend geval van diagram 3, geen deeltjes van dierlijke oorsprong worden aangetoond, is geen verdere bepaling nodig en wordt het analyseresultaat uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.1.
                        Als in de eerste bepaling overeenkomstig het stroomschema van diagram 1 een of meer deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type (gewerveld landdieren of vissen) worden aangetoond, en het type van de aangetroffen deeltjes de aangegeven inhoud van het monster bevestigt, is een tweede bepaling niet nodig. Als het aantal deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type die in deze eerste bepalingen zijn aangetoond, groter is dan 5, wordt het analyseresultaat gerapporteerd per diercategorie en uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.3. Is dit niet het geval, dan wordt het analyseresultaat gerapporteerd per diercategorie en uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.2.
                        Als in de eerste bepaling overeenkomstig het stroomschema van diagram 3 meer dan 5 deeltjes van ongewervelde landdieren worden aangetoond, is geen tweede bepaling nodig en wordt het analyseresultaat uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.3 voor dit type.
                        In alle andere gevallen, ook wanneer geen inhoudverklaring aan het laboratorium is verstrekt, wordt een tweede bepaling uitgevoerd met een nieuw deelmonster. Als na de tweede bepaling overeenkomstig het stroomschema van diagram 2, of in voorkomend geval van diagram 3, het totale aantal deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type die in de drie bepalingen samen zijn aangetoond, groter is dan 10, wordt het analyseresultaat gerapporteerd per diercategorie en uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.3. Is dit niet het geval, dan wordt het analyseresultaat gerapporteerd per diercategorie en uitgedrukt zoals aangegeven in punt 2.1.5.2.
                        2.1.5.   Weergave van de resultaten
                        
                        Bij de rapportage van de resultaten geeft het laboratorium aan op welk materiaal de analyse is uitgevoerd (sediment, flotaat, uiteindelijk flotaat of ruw materiaal). Bij de rapportage moet duidelijk worden aangegeven hoeveel bepalingen zijn uitgevoerd en of het zeven van de fracties voorafgaand aan het voorbereiden van het preparaat, overeenkomstig punt 2.1.3.4.3, eerste streepje, derde alinea, of punt 2.1.3.4.4, derde streepje al dan niet is uitgevoerd.
                        Het laboratoriumverslag bevat ten minste informatie over de aanwezigheid van bestanddelen afkomstig van gewervelde landdieren en van vissen.
                        De verschillende situaties worden gerapporteerd zoals hieronder aangegeven.
                        
                                 
                                    2.1.5.1.
                                 
                                 
                                    Er zijn geen deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type aangetoond:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster geen deeltjes afkomstig van gewervelde landdieren aangetoond.”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster geen deeltjes afkomstig van vissen aangetoond.”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster geen deeltjes afkomstig van ongewervelde landdieren aangetoond.”.
                                             
                                          
                              
                                 
                                    2.1.5.2.
                                 
                                 
                                    Er zijn minimaal 1 en maximaal 5 deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type aangetoond indien slechts één bepaling is uitgevoerd, of er zijn minimaal 1 en maximaal 10 deeltjes van dierlijke oorsprong van een bepaald type aangetoond in geval van twee bepalingen (het aantal aangetoonde deeltjes ligt onder de beslissingsgrens die is vastgesteld in de standaardwerkvoorschriften van het EURL-AP en te vinden is op de website van dat laboratorium):
                                    indien slechts één bepaling is uitgevoerd:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster niet meer dan 5 deeltjes afkomstig van gewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [bot, kraakbeen, spier, haar, hoorn, overig (gelieve te specificeren)]. Deze geringe aanwezigheid ligt onder de beslissingsgrens die voor deze microscopische methode is vastgesteld.”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster niet meer dan 5 deeltjes afkomstig van vissen aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [graat, schub, kraakbeen, spier, otoliet, kieuw, overig (gelieve te specificeren)]. Deze geringe aanwezigheid ligt onder de beslissingsgrens die voor deze microscopische methode is vastgesteld.”;
                                             
                                          indien twee bepalingen zijn uitgevoerd:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen niet meer dan 10 deeltjes afkomstig van gewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [bot, kraakbeen, spier, haar, hoorn, overig (gelieve te specificeren)]. Deze geringe aanwezigheid ligt onder de beslissingsgrens die voor deze microscopische methode is vastgesteld.”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen niet meer dan 10 deeltjes afkomstig van vissen aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [graat, schub, kraakbeen, spier, otoliet, kieuw, overig (gelieve te specificeren)]. Deze geringe aanwezigheid ligt onder de beslissingsgrens die voor deze microscopische methode is vastgesteld.”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen niet meer dan 10 deeltjes afkomstig van ongewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [cuticulaire fragmenten, monddelen, spieren, tracheale structuren, overig (gelieve te specificeren)]. Deze geringe aanwezigheid ligt onder de beslissingsgrens die voor deze microscopische methode is vastgesteld.”.
                                             
                                          Bovendien:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                als het monster voorgezeefd is, wordt in het laboratoriumverslag vermeld in welke fractie (gezeefde fractie, pellets of pitten) de deeltjes van dierlijke oorsprong zijn aangetoond; worden alleen in de gezeefde fractie deeltjes van dierlijke oorsprong aangetoond, dan kan dat duiden op milieuverontreiniging;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                indien alleen dierlijk materiaal wordt aangetroffen dat niet als gewervelde landdieren of vissen kan worden ingedeeld (bv. spierweefsel), wordt in het verslag vermeld dat alleen dergelijke dierdeeltjes zijn aangetroffen en dat niet kan worden uitgesloten dat zij afkomstig zijn van gewervelde landdieren.
                                             
                                          
                              
                                 
                                    2.1.5.3.
                                 
                                 
                                    Er zijn meer dan 5 deeltjes van een bepaalde type aangetoond indien slechts één bepaling is uitgevoerd, of er zijn meer dan 10 deeltjes van een bepaald type aangetoond in het geval van twee bepalingen:
                                    indien slechts één bepaling is uitgevoerd:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster meer dan 5 deeltjes afkomstig van gewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [bot, kraakbeen, spier, haar, hoorn, overig (gelieve te specificeren)].”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster meer dan 5 deeltjes afkomstig van vissen aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [graat, schub, kraakbeen, spier, otoliet, kieuw, overig (gelieve te specificeren)].”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster meer dan 5 deeltjes afkomstig van ongewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [cuticulaire fragmenten, monddelen, spieren, tracheale structuren, overig (gelieve te specificeren)].”;
                                             
                                          indien twee bepalingen zijn uitgevoerd:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen meer dan 10 deeltjes afkomstig van gewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [bot, kraakbeen, spier, haar, hoorn, overig (gelieve te specificeren)].”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen meer dan 10 deeltjes afkomstig van vissen aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [graat, schub, kraakbeen, spier, otoliet, kieuw, overig (gelieve te specificeren)].”;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                “Voor zover met een lichtmicroscoop kon worden waargenomen, zijn in het onderzochte monster bij de twee bepalingen meer dan 10 deeltjes afkomstig van ongewervelde landdieren aangetoond. De deeltjes werden geïdentificeerd als … [cuticulaire fragmenten, monddelen, spieren, tracheale structuren, overig (gelieve te specificeren)].”.
                                             
                                          Bovendien:
                                    
                                                —
                                             
                                             
                                                als het monster voorgezeefd is, wordt in het laboratoriumverslag vermeld in welke fractie (gezeefde fractie, pellets of pitten) de deeltjes van dierlijke oorsprong zijn aangetoond; worden alleen in de gezeefde fractie deeltjes van dierlijke oorsprong aangetoond, dan kan dat duiden op milieuverontreiniging;
                                             
                                          
                                                —
                                             
                                             
                                                indien alleen dierlijk materiaal wordt aangetroffen dat niet als gewervelde landdieren of vissen kan worden ingedeeld (bv. spierweefsel), wordt in het verslag vermeld dat alleen dergelijke dierdeeltjes zijn aangetroffen en dat niet kan worden uitgesloten dat zij afkomstig zijn van gewervelde landdieren.”.
                                             
                                          
                              
                  
               (*)  Verordening (EG) nr. 999/2001 van het Europees Parlement en de Raad van 22 mei 2001 houdende vaststelling van voorschriften inzake preventie, bestrijding en uitroeiing van bepaalde overdraagbare spongiforme encefalopathieën (PB L 147 van 31.5.2001, blz. 1).
            
               (**)  Verordening (EG) nr. 1069/2009 van het Europees Parlement en de Raad van 21 oktober 2009 tot vaststelling van gezondheidsvoorschriften inzake niet voor menselijke consumptie bestemde dierlijke bijproducten en afgeleide producten en tot intrekking van Verordening (EG) nr. 1774/2002 (verordening dierlijke bijproducten) (PB L 300 van 14.11.2009, blz. 1).
            
               (***)  https://www.eurl.craw.eu/legal-sources-and-sops/method-of-reference-and-sops/”.”