CELEX: 31967L0427
Language: es
Date: 1967-06-27 00:00:00
Title: Directiva 67/427/CEE del Consejo, de 27 de junio de 1967, relativa a la utilización de ciertos agentes conservadores para el tratamiento en superficie de los agrios y a las medidas de control cualitativo y cuantitativo de los agentes conservadores aplicados en y sobre los agrios

Avis juridique important

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31967L0427

Directiva 67/427/CEE del Consejo, de 27 de junio de 1967, relativa a la utilización de ciertos agentes conservadores para el tratamiento en superficie de los agrios y a las medidas de control cualitativo y cuantitativo de los agentes conservadores aplicados en y sobre los agrios  

Diario Oficial n° 148 de 11/07/1967 p. 0001 - 0009 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 1 p. 0090  Edición especial en danés: Serie I Capítulo 1967 p. 0154  Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 1 p. 0090  Edición especial en inglés: Serie I Capítulo 1967 p. 0169  - 0177 Edición especial griega: Capítulo 03 Tomo 2 p. 0120  Edición especial en español: Capítulo 13 Tomo 1 p. 0039  Edición especial en portugués: Capítulo 13 Tomo 1 p. 0039 

 DIRECTIVA DEL CONSEJO    de 27 de junio de 1967    relativa a la utilización de ciertos   agentes conservadores para el tratamiento en   superficie de los agrios y a las   medidas de control cualitativo y cuantitativo   de los agentes conservadores aplicados en y   sobre los agrios     ( 67/427/CEE )    EL CONSEJO DE LA COMUNIDAD ECONÓMICA EUROPEA ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea y , en particular , su artículo 100 ,    Vista la propuesta de la Comisión ,    Visto el dictamen del Parlamento Europeo (1) ,    Visto el dictamen del Comité Económico   y Social (2) ,    Considerando que , según el artículo 5 de la   Directiva del Consejo , de 5 de noviembre de 1963 ,   relativa a la aproximación de las legislaciones de los   Estados miembros sobre los agentes conservadores que   pueden utilizarse en los productos destinados   al consumo humano (3) , modificada en último   lugar por la Directiva del Consejo de 14 de   diciembre de 1966 (4) , los Estados miembros podrán   mantener hasta el 30 de junio de 1967 las   disposiciones de las legislaciones nacionales relativas   al tratamiento en superficie de los agrios con bifenilo   ( difenilo ) , ortofenilfeno y ortofenilfenato de   sodio ;    Considerando que la utilización de tales sustancias para   el tratamiento en superficie de los agrios no constituye   un peligro para la salud si la dosis residual por   kilogramo de frutas enteras no sobrepasa los   70 miligramos de bifenilo y los 12 miligramos de   ortofenilfenol y de ortofenilfenato de sodio ,   expresados en ortofenilfenol ;    Considerando que , por otra parte , es   conveniente indicar el tratamiento que se ha efectuado   de una forma apropiada en todas las fases de   comercialización ;    Considerando que la autorización en el ámbito   comunitario de las tres sustancias consideradas supone   igualmente establecer una serie de reglas comunes   para controlar oficialmente los agrios tratados ;    Considerando que la aplicación por parte de los   Estados miembros de las disposiciones de la presente   Directiva sólo puede realizarse después de un   período de transición ; y que es conveniente ,   por tanto , mantener hasta el final de dicho   período las disposiciones de las legislaciones nacionales   relativas al tratamiento en superficie de los agrios   con los tres agentes conservadores considerados ;    Considerando que no es conveniente imponer a un   Estado miembro la obligación de autorizar la   utilización de un agente conservador en los productos   alimenticios producidos y consumidos en su propio   territorio cuando no existe una necesidad   tecnológica que justifique tal utilización ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Queda modificada como sigue la Directiva del   Consejo de 5 de noviembre de 1963 , relativa a la   aproximación de las legislaciones de los Estados   miembros sobre los agentes conservadores que pueden   utilizarse en los productos destinados al consumo humano :    1 . En el apartado 2 del artículo 2 , la segunda   frase se sustituirá por el texto siguiente :     « No obstante , la legislación de un Estado   miembro sólo podrá excluir totalmente la utilización   de uno de los agentes conservadores enumerados en el   Anexo cuando no exista ninguna necesidad tecnológica   para utilizarlo en los productos alimenticios producidos   y consumidos en su propio territorio . »    2 . Se añadirán los siguientes agentes conservadores   a los enumerados en la sección I del Anexo :    Numeración de la CEE * Denominación *   Condiciones de empleo *    E 230 * Bifenilo ( Difenilo ) * a ) Exclusivamente   para el tratamiento en superficie de los agrios *     * * b ) En el momento de comercializar los   agrios *     * * i ) la tasa residual por kg de agrios   ( frutos enteros ) no deberá sobrepasar : *     * * para el bifenilo : 70 mg y para el   ortofenilfenol y el ortofenilfenato de sodio ,   tomados juntos o por separado , expresados   en ortofenilfenol : 12 mg *     * * ii ) el tratamiento deberá indicarse : *     * * - en el comercio al por mayor , en las   facturas y en una cara exterior de los embalajes ,   con la mención : « Conservado mediante ... »   seguida del nombre de las sustancias utilizadas *     * * - en el comercio al por menor , con una   indicación visible que asegure de forma   inequívoca la información del consumidor *    E 231 * Ortofenilfenol * a ) Exclusivamente para   el tratamiento en superficie de los agrios *     * * b ) En el momento de comercializar los   agrios *     * * i ) la tasa residual por kg de agrios   ( frutos enteros ) no deberá sobrepasar : *     * * para el bifenilo : 70 mg y para el ortofenilfenol   y el ortofenilfenato de sodio , tomados juntos   o por separado , expresados en ortofenilfenol : 12 mg *     * * ii ) el tratamiento deberá indicarse : *     * * - en el comercio al por mayor , en las   facturas y en una cara exterior de los embalajes ,   con la mención : « Conservado mediante ... »   seguida del nombre de las sustancias utilizadas *     * * - en el comercio al por menor , con una   indicación visible que asegure de   forma inequívoca la información del consumidor *    E 232 * Ortofenilfenato de sodio * a ) Exclusivamente   para el tratamiento en superficie de los agrios *     * * b ) En el momento de comercializar los agrios *     * * i ) la tasa residual por kg de agrios   ( frutos enteros ) no deberá sobrepasar : *     * * para el bifenilo : 70 mg y para el   ortofenilfenol y el ortofenilfenato de sodio , tomados   juntos o por separado , expresados en ortofenilfenol :   12 mg *     * * ii ) el tratamiento deberá indicarse : *     * * - en el comercio al por mayor , en las   facturas y en una cara exterior de los   embalajes , con la mención : « Conservado   mediante ... » seguida del nombre de las   sustancias utilizadas *     * * - en el comercio al por menor , con una   indicación visible que asegure de forma inequívoca   la información del consumidor *    3 . Queda suprimido el párrafo b ) del   artículo 5 .    Artículo 2    Los Estados miembros tomarán todas las medidas   útiles para que la toma de muestras y los análisis   cualitativo y cuantitativo del bifenilo , el   ortofenilfenol y el ortofenilfenato de sodio   se lleven a cabo de conformidad con las   disposiciones de los Anexos I , II , III y IV de la   presente Directiva .    Artículo 3    1 . Los Estados miembros adoptarán las medidas   necesarias para cumplir la presente Directiva a más   tardar el 1 de julio de 1968 e informarán de ello   inmediatamente a la Comisión .    2 . Hasta la fecha del 1 de julio de 1968 , los   Estados miembros podrán mantener las disposiciones   de las legislaciones nacionales relativas al   tratamiento en superficie de los agrios con   bifenilo , ortofenilfenol y ortofenilfenato de sodio .    Artículo 4    Los destinatarios de la presente Directiva   serán los Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 27 de junio de 1967 .    Por el Consejo    El Presidente    R. VAN ELSLANDE    (1) DO n º 63 de 3 . 4 . 1967 , p. 990/67 .    (2) DO n º 64 de 5 . 4 . 1967 , p. 1005/67 .    (3) DO n º 12 de 27 . 1 . 1964 , p. 161/64 .    (4) DO n º 233 de 20 . 12 . 1966 , p. 3947/66 .    ANEXO I    MODALIDADES DE TOMA DE MUESTRAS DE AGRIOS   PARA EL CONTROL DE LOS AGENTES CONSERVADORES    A . Toma de muestras    I . Las tomas se efectuarán según   los métodos científicos que permitan asegurar   la obtención de muestras representativas del lote   que se ha de controlar .    II . Las muestras deberán cumplir por lo   menos los siguientes requisitos :    1 . Mercancías con embalaje ( cajas ,   cartones y recipientes similares )    Número de recipientes en el lote * Hasta 20 *   De 21 a 500 * De 501 a 1 000 * Más de 1 000 *    Número mínimo de recipientes que se   han de tomar * 1 * 2 * 3 * 4 *    Masa en kg de frutas que se ha de   tomar por recipiente * 2 * 2 * 2 * 2 *    2 . Mercancías a granel    Masa del lote en kg * Hasta 20 * De 21 a 500 *   Más de 500 *    Masa que se ha de tomar en kg * 2 * 4 * 8 *    III . Se entiende por lote : una partida   de entrega que presente las mismas características ,   tales como la variedad , el grado de madurez ,   el tipo de embalaje .    B . Acondicionamiento y envío de las muestras    1 . Las muestras se introducirán en   recipientes herméticos ;    2 . Los recipientes se precintarán ;    3 . Las muestras acondicionadas de este modo   se enviarán lo más rápidamente posible   a los laboratorios de control .    ANEXO II    DETERMINACIÓN DE LOS RESIDUOS DE BIFENILO ,   ORTOFENILFENOL Y ORTOFENILFENATO DE SODIO EN LAS   CORTEZAS DE AGRIOS    1 . Objeto y campo de aplicación    El método que se describe a continuación   permite comprobar la presencia de residuos   de bifenilo , ortofenilfenol ( OPP ) u   ortofenilfenato de sodio en las cortezas de   agrios . Su límite de sensibilidad es , en   valor absoluto , del orden de 5 µg para   el bifenilo y de 1 µg para el OPP o el   ortofenilfenato de sodio , lo que equivale respectivamente   a 5 mg de bifenilo ( 5 ppm ) y 1 mg de OPP ( 1 ppm ) en las   cortezas de 1 kg de agrios .    El tratamiento de los agrios con los productos   mencionados más arriba ocasiona la presencia   de residuos , localizados en su mayoría en las   cortezas de las frutas . El análisis cuantitativo   de dichos residuos en los frutos enteros sólo   será , pues , necesario cuando se descubra su presencia   en las cortezas .    2 . Principio    Las cortezas se extraen por medio del   diclorometano en medio ácido . El extracto   se concentra y se cromatografía en capa   fina sobre gel de sílice . La presencia de   bifenilo , ortofenilfeno y ortofenilfenato de   sodio se evidencia mediante fluorescencia y reacciones   de coloración .    3 . Reactivos    ciclohexano p. a. ,    diclorometano p. a. ,    ácido clorhídrico al 25 % ( p/v ) ,    gel de sílice GF 254 Merck o equivalente ,    solución acetónica de 2,4,7-trinitrofluorenona   ( Fluka , B. D. H. o equivalente ) al 0,5 % ( TNF ) ,    solución etanólica de 2,6-dibromo-benzoquinona-4-   clorimida al 0,1 % ( duración máxima de conservación :   una semana en el refrigerador ) ,    solución concentrada de amoniaco , d : 0,9 ,    solución patrón de fifenilo puro al 1 %   en el ciclohexano ,    solución patrón de ortofenilfenol puro   al 1 % en el ciclohexano .    4 . Equipo    Mezclador ,    matraz de 250 ml de cuello esmerilado ,   provisto de refrigerante de reflujo ,    evaporador de presión reducida ,    micropipetas ,    aparato de cromatografía en capa fina   con placas de 20 × 20 cm ,    Lámpara U.V. ( 254 nm ) : debe tener una   intensidad que permita percibir una mancha de 5 g de   bifenilo ,    pulverizador de reactivos ,    estufa .    5 . Procedimiento    a ) Preparación de la muestra y extracción    Se parten en dos los frutos que constituyen   la totalidad de la muestra tomada para el control .   Se reserva una mitad de cada fruto para el análisis   cuantitativo de los residuos de bifenilo y/o   de ortofenilfenol . Se extraen de las otras mitades   fragmentos de corteza para obtener una muestra   de unos 80 g . Dichos fragmentos se cortan en pedazos ,   se trituran en el mezclador y se introducen   en el matraz de 250 ml ; se añade 1 ml de ácido   clorhídrico al 25 % y 100 ml de diclorometano .   La mezcla se calienta a reflujo durante 10 minutos .   Después de enfriar y enjuagar el refrigerante   con unos 5 ml de diclorometano , se filtra sobre   papel plisado . Se lleva la solución al   evaporador y se le añaden algunas piedras porosas .   Se concentra la solución a presión reducida   a la temperatura de 50 ° C , hasta obtener un   volumen final de unos 10 ml . Si se usa un   evaporador rotativo , debe mantenerse el matraz   en posición fija , para evitar que se pierda   bifenilo al formarse una película del producto   en la pared superior del matraz .    b ) Cromatografía    Se introducen en un mezclador 30 g de gel   de sílice y 60 ml de agua . Se mezcla durante   un minuto , se vierte a continuación la mezcla   sobre 5 placas cromatográficas y se extiende para   formar una capa de unos 0,250 mm de espesor . Las placas   recubiertas de este modo se someten durante 15 minutos a una   corriente de aire caliente , y a continuación se   introducen en una estufa donde se mantienen durante   30 minutos a 110 ° C .    Después de enfriarse , se divide cada   placa en bandas de 2 cm de anchura , por medio   de trazos paralelos que penetren en el recubrimiento   hasta la superficie de la placa . Se depositan   sobre cada banda , a unos 1,5 cm del borde y   en una serie de gotas yuxtapuestas , 50 µl del   extracto que se analiza . Una banda como mínimo   se reserva para los patrones , constituidos por un   depósito de 1 µl ( es decir , 10 mg ) de las   soluciones patrón de bifenilo y ortofenilfenol .    Las placas cromatográficas se revelan   con ayuda de una mezcla de ciclohexano y de   diclorometano ( 25 : 95 ) en las cubetas cuyo   interior ha sido previamente tapizado con papel filtro .    c ) Defección e identificación    La presencia de bifenilo y de ortofenilfenol   se señala por la aparición de manchas luminosas U.V.   ( 254 nm ) . Al haberse transformado en ortofenilfenol   en el momento de la extracción en medio ácido , la   presencia de ortofenilfenato de sodio no se   diferencia de la del ortofenilfenol . La identificación   de los productos se efectuará de la forma siguiente :    i ) el bifenilo produce una mancha amarilla a la luz   del día , al ser pulverizado con la solución de TNF ;    ii ) el ortofenilfenol produce una mancha   azul al ser pulverizado con la solución de   2,6-dibromo-benzoquinona-4-clorimida , y hacérsele   pasar después rápidamente por una corriente   de aire caliente y exponérsele a una atmósfera   saturada de amoniaco .    ANEXO III    ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LOS RESIDUOS   DE BIFENILO EN LOS AGRIOS    1 . Objeto y campo de aplicación    El método que se describe a continuación   permite valorar los residuos de bifenilo en los   agrios ( frutos enteros ) . El margen de error   de los resultados es de ± 10 % para los contenidos   en bifenilo superiores a 10 mg por kg de frutos   ( 10 ppm ) .    2 . Principio    Después de la destilación en medio ácido   y de la extracción por medio de ciclohexano , el   extracto se cromatografía en capa fina sobre gel   de sílice . Se revela el cromatograma y el bifenilo   se elúe y se determina espectrofotométricamente a   248 nm .    3 . Reactivos    Ácido sulfúrico concentrado ,    emulsión antiespuma a base de silicona ,    ciclohexano p.a. ,    hexano p.a. ,    etanol p.a. ,    sulfato de sodio anhidro ,    gel de sílice GF 254 Merck o equivalente ,    solución patrón de bifenilo al 1 % en el   ciclohexano : diluir con ciclohexano para   obtener las tres soluciones siguientes :   ( a ) 0,6 µ g µl ; ( b ) 1 µ g/µl ;   ( c ) 1,4 µ gµl    4 . Equipo    Mezclador de 1 l ,    matraz de destilación de 2 l con separador del   tipo Clevenger (1) modificado y refrigerante de reflujo ,    matraz aforado de 10 ml ,    micropipetas de 50 µl ,    aparato de cromatografía en capa fina con   placas de 20 × 20 cm ,    estufa ,    centrifugadora con tubos cónicos de 15 ml ,    espectrofotómetro U.V.    5 . Procedimiento    a ) Preparación de la muestra y extracción    Se parten en dos los frutos que constituyen   la totalidad de la muestra tomada para el control .   Se reserva una mitad de cada fruto para la   investigación de los residuos de bifenilo , de OPP   o de ortofenilfenato de sodio . Las otras mitades se   juntan , se pican en un molinillo o se trituran hasta   obtener una mezcla homogénea . Se extraen de ella   por lo menos dos submuestras de 200 g sobre las   que se efectúa el análisis según el método   que se indica a continuación . Se introduce cada   submuestra en un mezclador con 100 ml de agua y   se tritura a poca velocidad durante algunos   segundos . Se añade una cantidad de agua   tal que el volumen de la mezcla alcance los ¾ del   contenido del mezclador . Se tritura a continuación   a gran velocidad durante 5 minutos . La pasta que   se obtiene se trasvasa al matraz de destilación   de 2 l . Se enjuaga el mezclador con agua y se   añade al contenido del matraz el agua del   enjuague . ( La cantidad total de agua que se   utilizará para el triturado y el enjuague será   de 1 l ) . Se añaden a la mezcla 2 ml de   ácido sulfúrico , 1 ml de emulsión antiespuma   y algunas piedras porosas . Se ajustan el separador   y el refrigerante al matraz . Se introduce agua   destilada en el separador , hasta que el nivel del   agua sobrepase claramente la ramificación   inferior del tubo lateral de retorno , y a continuación   7 ml de ciclohexano . Se destila durante unas dos horas .   Se recoge a continuación el contenido del separador   en el matraz aforado de 10 ml , se enjuaga el   separador con unos 1,5 ml de ciclohexano , se   añade la solución de enjuague al contenido   del matraz y se enrasa con ciclohexano . Se introduce ,   por último , un poco de sulfato de sodio anhidro y   se agita .    b ) Cromatografía    Se introducen en un mezclador 30 g de gel de   sílice y 60 ml de agua . Se mezcla durante un   minuto , a continuación se vierte la mezcla   sobre 5 placas cromatográficas y se extiende   para formar una capa de unos 0,250 mm de   espesor . Las placas recubiertas de este modo se   someten durante 15 minutos a una corriente de aire   caliente y a continuación se introducen en una   estufa donde se mantienen durante 30 minutos   a 110 ° C . Después de enfriarse , se divide   cada placa en 4 bandas de 4,5 cm de anchura , por   medio de trazos paralelos que penetren en el   recubrimiento hasta la superficie de la placa . Se   deposita sobre una de las bandas , a unos 1,5 cm del   borde de la placa y en series de gotas   yuxtapuestas , 50 µl del extracto que se ha de   analizar y , sobre cada una de las otras tres bandas ,   50 µl de las soluciones patrón ( a ) , ( b ) y   ( c ) , que corresponden respectivamente a dosis de   bifenilo de 30 , 50 y 70 µg .    Cuando se efectúen análisis en serie , podrá   omitirse el depositar sobre cada placa las   soluciones patrón , y remitirse , por lo que respecta   a la curva de contraste , a la media de los valores   obtenidos a partir de 5 placas como mínimo , con   las mismas dosis patrón .    c ) Revelado de los cromatogramas y elución    Los cromatogramas se revelan sobre una altura de 17 cm   con el hexano en las cubetas cuyo interior ha sido   previamente tapizado con papel filtro . Las placas   se secan al aire libre . Las zonas en las que se   localiza el bifenilo se marcan con luz U.V. a 254 nm , y   se delimitan en rectángulos de superficies   iguales .    Las superficies delimitadas de este modo se   raspan inmediatamente con ayuda de una espátula   en todo el espesor de la capa de soporte . Se   extrae el bifenilo con 10 ml de etanol , durante   10 minutos , agitando varias veces . Se trasvasa   a los tubos de centrifugación y se centrifuga   durante 5 minutos a 2 500 vueltas por minuto .    Se toma de la misma forma una zona patrón   de igual dimensión . Cuando se hagan análisis   en serie , se tomará dicha zona en una banda   virgen de la placa ; en caso de análisis individuales ,   se la tomará en una banda ocupada por un   patrón por debajo de la zona que contiene el bifenilo .    d ) Determinación espectrofotométrica    Se decanta el líquido que sobrenada en las   celdillas del espectrofotómetro y se determina   la extinción a 248 nm , por comparación con un   extracto patrón procedente de una zona cromatográfica   libre de bifenilo .    6 . Cálculo de los resultados    Se traza una curva de contraste tomando como   coordenadas respectivamente las dosis de bifenilo   de 30 , 50 y 70 µg y las extinciones correspondientes ,   determinadas en el espectrofotómetro . La   curva que se obtiene es una línea recta que pasa   por el origen . Este gráfico permite la lectura   directa en ppm de los contenidos en bifenilo   de las muestras , a partir de los valores de extinción   de sus extractos .    (1) Ver figura página 47 .    ANEXO IV    ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LOS RESIDUOS DE   ORTEFENILFENOL Y DE ORTOFENILFENATO DE SODIO EN LOS   AGRIOS    1 . Objeto y campo de aplicación    El método que se describe a continuación permite   analizar cuantitativamente los residuos de   ortofenilfenol ( OPP ) y de ortofenilfenato de sodio   en los agrios ( frutos enteros ) . Los resultados   tienen un margen de error por defecto cuyo valor   medio se sitúa entre el 10 y el 20 % para un   contenido en OPP u ortofenilfenato de sodio del   orden de 12 ppm .    2 . Principio    Después de la destilación en medio ácido   y de la extracción por medio del éter   di-isopentílico , se purifica y se trata el   extracto con una solución de 1-fenil-2 ,   3-dimetil-4-aminopirazolona ( 5 ) ( = 4-aminoantipirina ) .   Se produce una coloración roja cuya intensidad   se mide por espectrofotometría a 510 n .    3 . Reactivos    Acido fostórico al 70 % ,    emulsión antiespuma a base de silicona ,    éter di-isopentíl ic o p. a. ,    ciclohexano purificado : agitar 3 veces con   una solución de hidróxido de sodio al 4 % ,   lavar 3 veces con agua destilada ,    solución de hidróxido de sodio al 4 % ,    solución tampón de pH 10,4 ; introducir en un   matraz aforado de 2 l , 6,64 g de ácido   bórico , 8 g de cloruro de potasio y 93,1 ml   de solución de hidróxido de sodio 1 N ; mezclar   y enrasar con agua destilada ,    reactivo I : disolver 1 g de 1-fenil-2 ,   3-dimetil-4-aminopirazolona ( 5 ) ( = 4-aminoantipirina )   en 100 ml de agua destilada ,    reactivo II : disolver 2 g de ferrocianuro de   potasio en 100 ml de agua destilada . Los reactivos   I y II deberán conservarse en frascos de vidrio   opaco y sólo son estables durante unos 14 días ,    gel de sílice ,    solución patrón : disolver 10 mg de OPP puro   en 1 ml de NaOH 0,1 N ; completar hasta 100 ml con una   solución de borato de sodio 0,2 m ( 1 ml = 100 µg ) .   Para la curva de contraste , diluir a 1 : 10 con la   solución tampón .    4 . Equipo    Molinillo de picar o triturador ,    mezclador ,    matraz de destilación de 1 l con separador del   tipo Clevenger (1) modificado y refrigerante de   reflujo ,    baño de infrarrojos ,    embudo separador de 200 ml ,    probetas graduadas de 25 y 100 ml ,    matraces aforados de 25 y 100 ml ,    pipetas de 1 a 10 ml ,    pipetas aforadas de 0,5 ml ,    expectrofotómetro con celdillas de 5 cm .    5 . Procedimiento    Se parten en dos los frutos que constituyen la   totalidad de la muestra tomada para el control . Se   reserva una mitad de cada fruto para la   investigación de los residuos de bifenilo ,   de OPP o de ortofenilfenato de sodio . Las otras   mitades se juntan , se pican en un molinillo o se trituran   hasta obtener una mezcla homogénea . Se extraen   de ella por lo menos dos submuestras de 250 g   sobre las que se efectúa el análisis según el   procedimiento que se indica a continuación .    Se introduce cada submuestra en un mezclador   con 500 ml de agua y se tritura hasta obtener una   pasta homogénea e impalpable en la que ya   no sean perceptibles las células aceitosas .   Se toma , según el contenido que se suponga   en OPP , de 150 a 300 g de la pasta y se introducen   en el matraz de destilación de 1 l con ayuda de una   cantidad de agua tal que la mezcla alcance   los 500 g en el matraz . Después de añadir 10 ml de   ácido fosfórico al 70 % , algunas piedras   porosas y 0,5 ml de emulsión antiespumante , se   ajustan el separador y el retrigerante sobre   el matraz . Se introducen en el separador 10 ml   de éter di-isopentílico y se calienta lentamente   el matraz en el baño de infrarrojos , evitando   la cocción de la pasta o la formación de   espuma . Se destila durante unas 6 horas . A   continuación se vierte el contenido del separador   en el embudo separador de 200 ml y se enjuage   el separador y el refrigerante con 60 ml de ciclohexano   y después con 60 ml de agua . Se añaden los   líquidos de enjuague al contenido del embudo   separador . Se agita con fuerza y , después de la   separación de las fases , se decanta y se elimina   la fase acuosa .    Para extraer el OPP , se agita 5 veces con fuerza   la fase orgánica , cada vez durante 3 minutos con   10 ml de hidróxido de sodio al 4 % . Las soluciones   alcalinas se reúnen , se neutralizan al pH 9 - 10 con   el ácido fosfórico en presencia de papel de   fenolftaleína , y se completan hasta 100 ml con   agua destilada . Se añade una pizca de gel de   sílice , para clarificar la solución que presente   un ligero disturbio , se agita y se filtra a continuación   sobre un filtro seco de granos finos . Dado que el   máximo de precisión y de exactitud en la   extensión de la coloración se alcanza con   cantidades de OPP comprendidas entre 10 y 70 g , se   toma con ayuda de una pipeta una parte alicuota de   0,5 a 10 ml de solución , teniendo en cuenta   las cantidades de OPP que se debe esperar encontrar .   Se introduce la toma en un matraz aforado de 25 ml , se   añaden 0,5 ml del reactivo I , 10 ml de la solución   tampón , y a continuación 0,5 ml del reactivo II .   Se enrasa con la solución tampón y se agita   enérgicamente .    Después de 5 minutos , se mide en el   espectrofotómetro la extinción de la coloración   roja a 510 nm por comparación con un patrón   libre de extracto . La intensidad de la coloración   no se modificará durante 30 minutos . La   evaluación se efectuará en función de los   valores de la curva de contraste trazada en las   mismas condiciones con la solución patrón de OPP .    6 . Observaciones    Para cada análisis se recomienda efectuar una   doble determinación espectrofotométrica con   volúmenes diferentes del extracto alcalino neutralizado .    Los agrios que no han sido tratados darán   según este método , valores en blanco que   podrán alcanzar 0,5 ppm para las naranjas y 0,8 ppm   para los limones .    CLEVENGER     ( Capítulo 4 del Anexo III ; Capítulo 4 del   Anexo IV ) : ver D.O.    (1) Ver figura página 47 .