CELEX: 21987A0207(05)
Language: fi
Date: 1962-05-14 00:00:00
Title: Eurooppalaisen sopimuksen pöytäkirja veriryhmien määrittelyreagenssien vaihdosta

Avis juridique important

|

21987A0207(05)

Eurooppalaisen sopimuksen pöytäkirja veriryhmien määrittelyreagenssien vaihdosta  

Virallinen lehti nro L 037 , 07/02/1987 s. 0033 - 0043 Suomenk. erityispainos Alue 11 Nide 11 s. 0378  Ruotsink. erityispainos Alue 11 Nide 11 s. 0378 

EUROOPPALAISEN SOPIMUKSEN PÖYTÄKIRJA veriryhmien määrittelyreagenssien vaihdosta YLEISET MÄÄRÄYKSET1. SpesifisyysVeriryhmien määrittelyreagenssin on reagoitava kaikkiin tutkittuihin verinäytteisiin, jotka sisältävät nimilapussa mainittua vasta-ainetta tai muita aineita vastaavaa antigeeniä.Kun reagenssiä käytetään tuottajan suositteleman menetelmän mukaisesti, mitään seuraavista ilmiöistä ei saa esiintyä:a) hemolyyttisiä ominaisuuksia;b) muita kuin nimilapussa mainittuja vasta-aineita tai muita aineita;c) bakteerituotteita, jotka saattavat aiheuttaa vääriä positiivisia tai negatiivisia reaktioita;d) veren valehyytymistä punasolujen raharivimuodostuksin;e) protsoni-ilmiötä.2. TehoTiitteri mitataan tekemällä peräkkäisiä kaksinkertaisia laimennoksia reagenssista sopivassa ympäristössä. Jokaiseen laimennokseen lisätään yhtä suuri tilavuus punasolujen suspensiota. Tiitteriä vastaa luku, joka on sama kuin vahvimman laimennoksen, jossa voi havaita näkyvän reaktion, kun laimennos lasketaan huomioon ottamatta solususpension tilavuutta kokonaistilavuudessa.Anti-A, anti-B ja muilla levyillä käytettäviksi tarkoitetuilla reagensseillä sidosvoima ilmaistaan levylle hyytymiseen tarvittavan ajan avulla.3. Kansainväliset standardit ja kansainväliset yksikötMaailman terveysjärjestö on laatinut kansainvälisiä standardeja anti-A-, anti-B- ja epätäydellisen anti-D veriryhmien määrittelyreagensseille ja tutkimuksia tehdään muista spesifisistä veriryhmien määrittelyreagensseistä. Kansainvälinen standardivalmiste sisältää, määritelmän mukaan, tietyn määrän kansainvälisiä yksiköitä milligrammaa tai millilitraa kohden ja tämä määritelmä on riippumaton tiettyjen punasolujen havaituista tiittereistä(1).4. Pysyvyys ja viimeinen käyttöpäiväVarastoituna tuottajan suosituksen mukaisissa olosuhteissa pitäisi reagenssien säilyttää vaaditut ominaisuudet vähintään vuoden ajan.Nestemäisten reagenssien osalta nimilapussa ilmoitettu viimeinen käyttöpäivä ei saa olla myöhempi kuin vuosi viimeisen tyydyttävän tehokkuuskokeen päivästä. Viimeistä käyttöpäivää voidaan siirtää aina vuodella kerrallaan uusien tehokkuuskokeiden seurauksena.Kuivattujen reagenssien osalta nimilapussa ilmoitettu viimeinen käyttöpäivä riippuu pysyvyyskokeiden tuloksesta ja kansallisten tarkastusviranomaisten on hyväksyttävä tämä päivä.5. SäilyttäminenVeriryhmien määrittelyreagenssejä voidaan säilyttää nestemäisinä tai kuivattuina. Kuivatut reagenssit on laitettava inerttiin kaasukehään tai tyhjiöön siten sinetöityyn lasiastiaan, että kosteus suljetaan pois. Fosforianhydridin läsnäollessa, enintään 0,02 elohopeamillimetrin paineessa 24 tunnin ajan uudelleenkuivattu reagenssi saa menettää enintään 0,5 % painostaan.Reagenssit on valmistettava puhtausvarotoimenpiteitä noudattaen, eivätkä ne saa saada bakteeritartuntoja. Bakteerien lisääntymisen estämiseksi toimivaltainen kansallinen viranomainen voi päättää, että on suotavaa lisätä reagenssiin (tai kaikkiin muihin kuivatuista reagensseistä valmistettuihin liuottimiin) antiseptistä ainetta ja/tai antibioottia, sillä edellytyksellä, että reagenssi täyttää edelleen lisätyn aineen läsnäollessa spesifisyys- ja tehokkuusvaatimukset.Veriryhmien määritykseen tarkoitettujen ihmisperäisten seerumien on sisällettävä vähintään 2,5 mg proteiinityppeä nestemäistä tai ennalleen palautettua seerumimillilitraa kohden.Nestemäisten tai ennalleen palautettujen reagenssien on oltava läpinäkyviä, eivätkä ne saa sisältää sakkautumia, geelejä eivätkä näkyviä hiukkasia.6. VärjääminenOn suotavaa, etteivät kansainväliseen vaihtoon tarkoitetut veriryhmien määrittelyreagenssit ole keinotekoisesti värjättyjä, ainakaan kunnes kansainvälinen sopimus sallii yhtenäisen järjestelmän. Mikään lisätty väriaine ei saa vaikuttaa spesifisiin reaktioihin.7. Jakelu ja tilavuusVeriryhmien määrittelyreagenssit on jaeltava sellaisin tilavuuksin, että astian sisältämä reagenssi riittää testien tekemiseen positiivisilla ja negatiivisilla vertailusoluilla tuntemattomien solujen lisäksi. Jokaisen astian tilavuuden on sallittava tarvittaessa tässä pöytäkirjassa kuvailtujen tehokkuuskokeiden suorittaminen.8. Luettelot ja näytteetTuotantolaboratorion on pidettävä kirjaa kaikista tuotantovaiheista ja veriryhmien määrittelyreagenssien testauksesta. Laboratorion on säilytettävä riittävät näytteet kaikista jaetuista reagensseistä, kunnes voidaan kohtuudella olettaa, ettei tavaraerää enää käytetä.9. Reagenssien luokitteluVeriryhmien määrittelyssä käytettävät reagenssit voivat sisältää ihmis-, eläin-, kasvi- (tai kivennäis-)peräisiä aineita, jolloin toiset muodostavat aktiivisen ainesosan ja toiset ovat aktiivisuuden vahvistamiseen tai pysyvyyden ylläpitämiseen tarvittavia lisäaineita.Nämä reagenssit on jaoteltu teknisistä syistä kolmeen luokkaan aktiivisen ainesosansa perusteella. Tämä ei tarkoita sitä, että ihmisperäiset reagenssit sisältäisivät ainoastaan ihmisperäisiä tuotteita, tai etteivät eläin- tai kasvireagenssit voisi sisältää ihmisperäisiä tuotteita.10. Nimilaput, ilmoitus ja todistusMustalla valkoiselle painettu englannin- ja ranskankielinen nimilappu kiinnitetään jokaiseen valmiiseen astiaan ja se sisältää seuraavat tiedot:1) tuotantolaitoksen nimi ja osoite;2) reagenssin nimi sellaisena kuin se ilmoitetaan vastaavan eritelmän otsikossa;3) antiseptisen aineen ja/tai tarvittaessa antibiootin nimi ja määrä tai ilmoitus sen puuttumisesta;4) tilavuus tai kuivatun reagenssin osalta tilavuus ja ennalleen palauttamisessa tarvittavan nesteen koostumus;5) viimeinen käyttöpäivä;6) erän numero.Kyseinen nimilappu tai useita valmiita astioita sisältävän kollin mukana oleva nimilappu sisältää lisäksi seuraavat tiedot:1) tuotantolaitoksen nimi ja osoite;2) reagenssin nimi sellaisena kuin se ilmoitetaan vastaavan eritelmän otsikossa;3) tilavuus tai kuivatun reagenssin osalta tilavuus ja ennalleen palauttamisessa tarvittavan nesteen koostumus;4) viimeisen tehokkuuskokeen päivämäärä;5) viimeinen käyttöpäivä (tarvittaessa);6) erän numero;7) tuottajan suositteleman käyttötavan asianmukainen kuvaus;8) avaamattomien ampullien varastointiedellytykset ja avaamisen jälkeen huomioonotettavat varotoimenpiteet;9) tarkka koostumus, myös (tarvittaessa) antiseptinen aine ja/tai antibiootti;10) ilmoitus kaikkien ihmisperäisten tuotteiden esiintymisestä tai puuttumisesta.Jokaisen lähetyksen mukana on oltava todistus sopimuksen 4 artiklan sekä tämän pöytäkirjan liitteen määräysten mukaisesti. Tämän pöytäkirjan liitteenä on nimilappu- ja ilmoitusmalleja.ERITYISMÄÄRÄYKSIÄA. IHMISALKUPERÄISET VERIRYHMIEN MÄÄRITTELYREAGENSSITa) IHMISALKUPERÄISET SEERUMIT AB0-VERIRYHMIEN MÄÄRITTELEMISEKSI(i) (ihmisperäinen) anti-A-seerumi veriryhmän määritykseenAnti-A-seerumi on peräisin verestä valituilta B-ryhmän henkilöiltä, jotka on immunisoitu tai joita ei ole immunisoitu A-ryhmän punasoluilla tai Aryhmän tietyillä aineilla. Anti-A-seerumi agglutinoi ihmisperäiset A-antigeenejä sisältävät punasolut eli A- ja AB-ryhmien punasolut, myös alaryhmien A1, A2, A1B ja A2B punasolut, eikä vaikuta ihmisperäisiin punasoluihin, jotka eivät sisällä A-antigeenejä eli ryhmien 0 ja B punasoluihin.TehoTitrausAnti-A-seerumi on titrattava erikseen solujen A1, A2 ja A2B suspensioilla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu, mutta laimentamaton anti-A-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste. Seerumin tehon on joka tapauksessa oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-A-seerumia on sekoitettu levyllä yhtä suureen määrään A1, A2 ja A2B-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinoiduttava alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa (ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla) kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-A-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman standardivalmisteella.(ii) (ihmisperäinen) anti-B-seerumi veriryhmän määritykseenAnti-B-seerumi on peräisin verestä valituilta A-ryhmän henkilöiltä, jotka on immunisoitu tai joita ei ole immunisoitu B-ryhmän punasoluilla tai B-ryhmän tietyillä aineilla. Anti-B-seerumi agglutinoi ihmisperäiset B-antigeeniä sisältävät punasolut eli ryhmien B ja AB punasolut, eikä vaikuta ihmisperäisiin punasoluihin, jotka eivät sisällä B-antigeeniä eli ryhmien 0 ja A punasoluihin.TehoTitrausAnti-B-seerumi on titrattava B-solujen suspensiolla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu, mutta laimentamaton anti-B-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste. Seerumin tehon on oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-B-seerumia on sekoitettu levyllä yhtä suureen määrään anti-Bsolujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinoiduttava alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa (ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla) kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-B-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella.(iii) (ihmisperäinen) anti-A plus anti-B (0-ryhmä)-seerumi veriryhmän määritykseenSeerumi anti-A plus anti-B (0-ryhmä) on peräisin verestä valikoiduilta 0-ryhmän henkilöiltä, jotka on immunisoitu tai joita ei ole immunisoitu A- ja B-punasoluilla tai A- ja B-ryhmien tietyillä aineilla. Seerumi anti-A plus anti-B (0-ryhmä) agglutinoi ihmisperäiset A- tai B-agglutinogeenejä tai A- ja B-agglutinogeenejä sisältävät punasolut eli A-ryhmän, myös alaryhmien A1 ja A2, B-ryhmän, AB-ryhmän, myös alaryhmien A1B ja A2B agglutinogeenit, eikä vaikuta ihmisperäisiin punasoluihin, jotka eivät sisällä A-tai B-agglutinogeeniä eli 0-ryhmään. Seerumi agglutinoi ihmisperäiset Ax- (Ay- tai A0-) antigeeniä sisältävät punasolut (joita ei yleensä agglutinoi B-ryhmän luovuttajien verestä peräisin oleva anti-A-seerumi).TehoTitrausSeerumi anti-A plus anti-B (ryhmä 0) on titrattava erikseen A1- ja A2-solujen suspensioilla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-Aryhmän standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste. Se on myös titrattava B-solujen suspensiolla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-B-ryhmän standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste.Seerumin tehon on joka tapauksessa oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Laimentamattoman veriryhmien määritykseen tarkoitetun seerumin anti-A plus anti-B (ryhmä 0) on myös tuotettava ryhmän Ax (Ay tai A0) soluilla helposti erotettavissa oleva agglutinaatio.Sidosvoiman määritelmäKun anti-A plus anti-B-seerumia (ryhmä 0) on sekoitettu levyllä yhtä suureen määrään A1 ja A2-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinoiduttava alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa (ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla) kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-A-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella. Kun anti-A plus anti-B-seerumia (ryhmä 0) on sekoitettu levyllä yhtä suureen määrään B-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinoiduttava alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa (ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla) kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-B-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella. Kun anti-A plus anti-B-seerumia (ryhmä 0) sekoitetaan levyllä yhtä suureen määrään solujen Ax (Ay tai A0) suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on agglutinaation tapahduttava alle viidessä minuutissa 18-25 °C lämpötilassa.b) IHMISPERÄISET SEERUMIT RH-VERIRYHMIEN MÄÄRITYKSEENSeerumeita Rh-veriryhmien määritykseen on kahta lajia, jotka eroavat toisistaan spesifisyydestään riippumatta samanlaisten verisolujen agglutinaatiotapahtuman olosuhteiltaan. Eräät seerumit, joita kutsutaan "täydellisiksi", agglutinoivat verisolut suolaliuoksessa. Toiset seerumit, joita kutsutaan "epätäydellisiksi", pystyvät aiheuttamaan agglutinaation ainoastaan tiettyjen kolloidien, kuten nautaeläinten albumiinin avulla tai muilla sopivilla menetelmillä. Seerumeita on käytettävä niiden tuotantolaboratorion määrittelemillä edellytyksillä.Eräät "epätäydelliset" seerumit hyydyttävät myös levyllä samankaltaisia punasoluja suspensiona niiden omassa seerumissa tai plasmassa.Seuraavia Rh-ryhmien määritykseen tarkoitettujen seerumien tehoon liittyviä edellytyksiä voidaan tarkistaa, kun kansainväliset standardivalmisteet ovat saatavilla.(i) (ihmisperäinen) anti-D-(anti-Rh0-)seerumi veriryhmien määritykseenAnti-D-seerumi on peräisin verestä yhdeltä tai useammalta Rh-järjestelmän D-antigeenillä immunisoidulta henkilöltä. Seerumi reagoi D-antigeeniä sisältävien ihmisperäisten punasolujen suspensioiden kanssa, muttei ihmisperäisten D-antigeeniä sisältämättömien punasolujen suspensioiden kanssa.TehoTitraus"Täydellisten" anti-D-seerumeiden tiitterin on oltava vähintään 32 CcDee-soluilla suspensiona suolaliuoksessa (joka sisältää 9 grammaa NaCl litraa kohden)."Epätäydelliset" anti-D-seerumit on titrattava CcDee-soluilla samaan aikaan kuin kansainvälinen ennalleen palautettu, mutta laimentamaton epätäydellinen anti-D-(anti-Rh0)standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste. Seerumin tehon on joka tapauksessa oltava vähintään 32 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden. Seerumeiden on reagoitava kaikkien Dantigeeniä sisältävien verisolujen ja lisäksi mahdollisimman pitkälle Du-antigeeniä sisältävien verisolujen kanssa.Sidosvoiman määrittelyDiamondin ja Abelsonin levykokeeseen tarkoitettujen anti-D-seerumeiden olisi tuotettava agglutinaatio alle 30 sekunnissa ja agglutinaation olisi oltava täydellinen alle 120 sekunnissa, kun seerumeita on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään CcDee-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,4-0,5, noin 40 °C:ssa.(ii) (ihmisperäinen) anti-C (anti-Rh')-seerumi veriryhmien määritykseenAnti-C-seerumi on peräisin verestä yhdeltä tai useammalta Rh-järjestelmän C-antigeenillä immunisoidulta henkilöltä. Seerumi reagoi ihmisperäisiin C-antigeeniä sisältävien punasolujen kanssa, muttei ihmisperäisten C-antigeeniä sisältämättömien punasolujen kanssa. C-antigeenin katsotaan sisältävän Cw-antigeenin.Suurin osa diagnostiseen tarkoitukseen tarkoitetuista anti-C-seerumeista sisältää "täydellistä" anti-C-vasta-ainetta sekä "epätäydellistä" antiD-vastaainetta. Nämä seerumit ovat spesifisiä C-antigeenille ainoastaan, jos testattavat punasolut ovat suspensiona liuoksessa, joka sisältää 9 grammaa NaCl litraa kohden.TehoTitrausAnti-C-seerumeiden ("täydellisten" tai "epätäydellisten") tiittereiden pitäisi olla vähintään 8 Ccddee-soluilla.Sidosvoiman määrittelyDiamondin ja Abelsonin levykokeeseen tarkoitettujen anti-C-seerumeiden (jotka eivät saa sisältää anti-D:tä missään muodossa) olisi tuotettava näkyvä agglutinaatio alle 30 sekunnissa ja agglutinaation olisi oltava täydellinen alle 120 sekunnissa, kun seerumeita on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään Ccddee-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,4-0,5, noin 40 °C:ssa.(iii) (ihmisperäinen) anti-E ("anti-rh")-seerumi veriryhmien määritykseenAnti-E-seerumi on peräisin verestä yhdeltä tai useammalta Rh-järjestelmän E-antigeenillä immunisoidulta henkilöltä. Seerumi reagoi E-antigeeniä sisältävien ihmisperäisten punasolujen suspensioiden kanssa, mutta ei ihmisperäisten E-antigeeniä sisältämättömien punasolujen kanssa.TehoTitrausAnti-E-seerumeiden ("täydellisten" tai "epätäydellisten") tiittereiden pitäisi olla vähintään 8 ccddEe-soluilla.Sidosvoiman määrittelyDiamondin ja Abelsonin levykokeeseen tarkoitettujen anti-E-seerumeiden (jotka eivät saa sisältää anti-D:tä missään muodossa) olisi tuotettava näkyvä agglutinaatio alle 30 sekunnissa ja agglutinaation olisi oltava täydellinen alle 120 sekunnissa, kun seerumeita on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään ccddEe-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,4-0,5, noin 40 °C:ssa.(iv) (ihmisperäinen) anti-D plus C (anti-Rh0rh')-seerumi veriryhmien määritykseen(ihmisperäinen) anti-D plus E (anti-Rh0')-seerumi veriryhmien määritykseenSpesifisten anti-D plus C- tai anti-D plus E-seerumeita on mahdollista saada suoraan immunisoitujen henkilöiden verestä tai niitä voidaan valmistaa sekoittamalla anti-D-seerumia anti-C- tai anti-E-seerumiin. Tietyssä seerumissa näiden kahden vasta-aineen on oltava samanaikaisesti aktiivisia tuottajan määrittelemissä reaktioedellytyksissä. Jokaisen seerumin on reagoitava kaikkien punasolulajien kanssa, jotka reagoisivat niitä muodostavien vasta-aineiden tai vasta-aineen kanssa, eikä seerumi saa reagoida punasoluihin, jotka eivät sisällä C- tai D-agglutinogeeniä ja jotka eivät sisällä D-antigeeniä tapauksessa anti-D plus E. Tiitterien on oltava vähintään niitä muodostavien vasta-aineiden tiittereiden suuruisia, mutta tapauksessa anti-D plus C (yleinen yhdistelmä immunisoitujen henkilöiden seerumissa) on toivottavaa, että anti-C-tiitteri olisi vähintään 32 ja tapauksessa anti-D plus E on toivottavaa, että anti-E-tiitteri olisi vähintään 8. Jos seerumi on tarkoitettu Diamondin ja Abelsonin levytestiin, olisi kaikkien reagoivien punasolulajien agglutinoitumisaikojen oltava vähintään yhtä pitkiä kuin jokaiselle vasta-aineen ainesosalle vaadittu agglutinoitumisaika.B. MUUT KUIN IHMISPERÄISET REAGENSSITa) ELÄINPERÄISET SEERUMIT(i) (eläinperäinen) anti-A-reagenssi veriryhmien määritykseenAnti-A-seerumi on peräisin verestä eläimistä, jotka on immunisoitu tai joita ei ole immunisoitu A-ryhmän punasoluilla tai A-ryhmän tietyille aineille. Anti-A-seerumi agglutinoi ihmisperäiset A-antigeenejä sisältävät punasolut eli A- ja AB-ryhmien, myös alaryhmien A1, A2, A1B ja A2B punasolut, eikä agglutinoi ihmisperäisiä A-antigeeniä sisältämättömiä punasoluja eli ryhmien 0 ja B punasoluja.TehoTitrausAnti-A-seerumi on titrattava erikseen A1-, A2- ja A2B-solujen suspensioilla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-A-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste(2). Seerumin tehon on joka tapauksessa oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-A-seerumia on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään solujen A1, A2 ja A2B suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinaation tapahduttava alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää samoissa olosuhteissa aikaansaatuna kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla anti-A-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella.(ii) (eläinperäinen) anti-B-seerumi veriryhmien määritykseenAnti-B-seerumi on peräisin niiden eläinten verestä, jotka on immunisoitu tai joita ei ole immunisoitu B-ryhmän punasoluilla tai B-ryhmän tietyille aineille. Anti-B-seerumi agglutinoi ihmisperäiset punasolut, jotka sisältävät B-antigeeniä eli ryhmien B ja AB punasolut, eikä agglutinoi B-antigeenittömiä ihmisperäisiä punasoluja eli ryhmien 0 ja A punasoluja.TehoTitrausAnti-B-seerumi on titrattava B-solujen suspensiolla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-B-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste(3). Seerumin tehon on oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-B-seerumia on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään B-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on agglutinaation ilmestyttävä alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää samoissa olosuhteissa aikaansaatuna kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla anti-B-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella.(iii) (eläinperäinen) ihmisperäinen antiglobuliiniseerumi(4).Veriryhmien serologiassa käytettävän ihmisperäisen antiglobuliiniseerumin on sisällettävä agglutinoivia anti-IgG-vasta-aineita ja agglutinoivia vastaaineita komplementtitekijöille. Seerumi on peräisin niiden eläimien verestä, jotka on immunisoitu ihmisperäisillä seerumiproteiinipistoksilla. Seerumin on agglutinoitava kaikki punasolut, joiden pinnassa esiintyy ihmisperäistä IgG:tä ja/tai komplementtitekijöitä. Seerumi ei agglutinoi ihmisperäisiä punasoluja, joiden pinnassa ei esiinny näitä aineita punasolujen veriryhmistä riippumatta, kun sitä käytetään valmistajan määräysten mukaisesti.SpesifisyysVeriryhmien serologiassa käytettävän ihmisperäisen antiglobuliiniseerumin spesifisyyttä on valvottava ihmisperäisillä punasoluilla, jotka on herkistetty useilla vasta-aineilla: punasoluilla, jotka on herkistetty ihmisperäisillä epätäydellisillä anti-D-, anti-K- ja anti-Fya-vasta-aineilla, punasoluilla, jotka on herkistetty epätäydellisillä vasta-aineilla, jotka sitovat anti-Lea-komplementin tuoreen ihmisperäisen seerumin läsnäollessa, punasoluilla, jotka on herkistetty "epätäydellisillä kylmillä vasta-aineilla", tanniinilla käsitellyillä punasoluilla, joissa on ihmisperäistä IgG:tä sekä lopuksi 10 erilaisella näytteellä ihmisperäisiä punasoluja, jotka eivät sisällä ihmisperäistä IgG:tä ja sisältäen A- ja B-antigeenejä sekä sisältämättä A- ja B-antigeenejä.TehoTitrausIhmisperäisen antiglobuliiniseerumin on luovuttamistilassaan tai nimilapussa annettujen ohjeiden mukaisesti laimennettuna agglutinoitava voimakkaasti ihmisperäiset punasolut, jotka on herkistetty epätäydellisillä ihmisperäisillä anti-D-vasta-aineilla, joiden tiitteri on (enintään) 4, kun seerumi on titrattu positiivisilla D-punasoluilla "albumin replacement"-menetelmällä. Seerumin on samana laimennoksena agglutinoitava ihmisperäiset K-positiiviset punasolut, jotka on herkistetty heikoilla valikoiduilla anti-K-vasta-aineilla ja Fya-positiiviset punasolut, jotka on herkistetty heikoilla, tähän tarkoitukseen valikoiduilla anti-Fya-vasta-aineilla.Seerumin on myös agglutinoitava joko samana tai erilaisena laimennoksena (jos nimilapussa niin määrätään) ihmisperäiset punasolut, jotka on herkistetty epätäydellisillä, Lea-komplementin ihmisperäisen tuoreseerumin läsnäollessa sitovilla vasta-aineilla.Tavanomaista kliinistä käyttöä varten on toivottavaa, että kaikilla edellä mainituilla epätäydellisillä vasta-ainelajeilla herkistäminen olisi havaittavissa yhdellä ainoalla ihmisperäisellä antiglobuliiniseerumilaimennoksella.b) KASVIPERÄISET REAGENSSITi) (kasviperäinen) anti-A-reagenssi veriryhmien määritykseenAnti-A-reagenssi uutetaan tähän tarkoitukseen sopivan kasvin siemenistä tai muista osista, jota seuraa tarvittaessa puhdistus. Anti-A-reagenssi agglutinoi ihmisperäiset A-antigeenejä sisältävät punasolut eli ryhmien A ja AB punasolut, myös alaryhmien A1, A2, A1B ja A2B punasolut eikä agglutinoi ihmisperäisiä A-antigeenittömiä punasoluja eli ryhmien 0 ja B punasoluja.TehoTitrausAnti-A-reagenssi on titrattava erikseen A1-, A2- ja A2B-solujen suspensioilla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-A-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste(5).Reagenssin tehon on joka tapauksessa oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-A-reagenssiä on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään A1, A2 ja A2B-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinaation ilmestyttävä alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-A-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella.(ii) (kasviperäinen) anti-B-reagenssi veriryhmien määritykseenAnti-B-reagenssi uutetaan tähän tarkoitukseen sopivan kasvin asianmukaisesta osasta, jota seuraa tarvittaessa puhdistus. Anti-B-reagenssi agglutinoi ihmisperäiset B-antigeeniä sisältävät punasolut eli ryhmien B ja AB punasolut eikä agglutinoi ihmisperäisiä B-antigeenittömiä punasoluja eli ryhmien 0 ja A punasoluja.TehoTitrausAnti-B-reagenssi on titrattava erikseen B-solujen suspensiolla samaan aikaan kuin kansainvälinen veriryhmien määritykseen tarkoitettu ennalleen palautettu mutta laimentamaton anti-B-seerumin standardivalmiste tai vastaava vertailuvalmiste(6). Reagenssin tehon on oltava vähintään 64 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden.Sidosvoiman määrittelyKun anti-B-reagenssiä on sekoitettu levyllä yhtä suureen tilavuusmäärään B-solujen suspensiota, jonka tilavuusmurto-osa on 0,05-0,1, on jokaisen suspension agglutinaation ilmestyttävä alle kaksinkertaisessa ajassa, jonka agglutinaatio kestää, kun agglutinaatio saadaan aikaan samoissa olosuhteissa ennalleen palautetulla mutta laimentamattomalla kansainvälisellä veriryhmien määritykseen tarkoitetulla anti-B-seerumin standardivalmisteella tai saman sidosvoiman omaavalla standardivalmisteella.(1) Useimpien spesifisten veriryhmien määrittelyreagenssien teko ilmaistaan havaitulla agglutinointitiitterillä, laimentamissarjassa, punasolususpensiosta. Tiitteri ilmaisee käytetyn reagenssin laimennoksen sarjan viimeisessä sekoituksessa, jossa tapahtuu agglutinaatio (näkyy mikroskoopilla).Veriryhmien määrittelyreagenssien, joita varten on olemassa kansainvälisiä standardeja (toistaiseksi anti-A ja anti-B sekä epätäydellinen anti-D) teko voidaan ilmaista kansainvälisinä yksikköinä (ks. Bull, Maailman terveysjärjestö 1954, 10, 937, 941 - 1950, 3, 30) tuntemattoman reagenssin titrauksen perusteella, verrattuna kansainväliseen standardivalmisteeseen tai kansalliseen alistandardiin.Veriryhmitysseerumeiden kansainväliset standardit jaetaan kuivattua ihmisseerumia sisältävissä ampulleissa. Kun se palautetaan 1 millilitran tilavuuteen, anti-A- ja anti-B-seerumit sisältävät määritelmän mukaan 256 kansainvälistä yksikköä millilitraa kohden. Seerumeita luovuttaa maksutta Maailman terveysjärjestön biologisten standardien kansainvälinen laboratorio, Statens seruminstitut Kööpenhaminassa. Jäljempänä oleva taulukko antaa esimerkin kansainvälisen standardin anti-A seerumin (S) ja "tuntemattoman" anti-A-reagenssin (U) vertailevasta titrauksesta A1-punasoluilla ja A2B-punasoluilla.Discarding a TABLE>TAULUKON PAIKKA>(2) "Kansainvälinen standardivalmiste" on ihmisperäinen; vastaava standardivalmiste, jota tarvittaessa käytetään, voi olla joko ihmis- tai eläinperäistä.(3) Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1965), Lancet, ii, 15 Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Brit. J. exp. Path., 26, 255(4) "Kansainvälinen standardivalmiste" on ihmisperäinen; vastaava standardivalmiste, jota tarvittaessa käytetään on joko ihmis- tai eläinperäistä.NIMILAPPUMALLEJA EUROOPAN NEUVOSTOEUROOPPALAINEN SOPIMUS VERIRYHMIEN MÄÄRITTELYREAGENSSIEN VAIHDOSTA>KAAVION ALKU>a) Nestemäinen seerumi1. Laboratorio X, Amsterdam2. anti-A-seerumi (ihmisperäinen)3. N3Na 0,1 %4. 5 ml5. 7 päivänä syyskuuta 19656. No 1 2 3 4b) Kuivattu seerumi1. Laboratorio X, Amsterdam2. anti-B-seerumi (eläinperäinen)3. Mersalaattia 0,1 %4. Palautetaan ennalleen 5 ml:lla tislattua vettä5. 31 päivänä joulukuuta 19686. No 4 3 2 1>KAAVION LOOPU>ILMOITUSMALLIEUROOPAN NEUVOSTO EUROOPPALAINEN SOPIMUS VERIRYHMIEN MÄÄRITTELYREAGENSSIEN VAIHDOSTA>KAAVION ALKU>1. Verensiirron keskuslaboratorio2. Anti-E-seerumi ("anti-rh") (ihmisperäinen)3. 10 ml4. Viimeisen tehokkuuskokeen päivä: 30 päivä toukokuuta 19615. Viimeinen käyttöpäivä: 30 päivä toukokuuta 19626. N:o 54327. Tutkittavat punasolut on pestävä yhden tai useamman kerran 9 g/l suolaliuoksella. Sitten valmistetaan punasolujen suspensio, jonka tilavuusmurto-osa on noin 0,03 sekoittamalla tilavuusmitta tai tippa punasolusakkaa 30 tilavuusmittaan tai tippaan isotonista suolaliuosta. Käytännössä suspension pitoisuuden voi arvioida tyydyttävästi paljaalla silmällä.Pieni tippa seerumia laitetaan hemolyysiputkeen (6 mm × 30 mm) Pasteurpipetillä. Sitten lisätään pieni tippa punasolujen suspensiota. (Käytännössä säästetään huomattavasti, jos seerumia ja solususpensiota jaetaan mikrolitraasteikkoisella pipetillä.) Putken sisältö sekoitetaan ja inkuboidaan kaksi tuntia 37 °C:ssa. Sitten sisältö siirretään ja levitetään varovasti mikroskooppilevylle. Jos agglutinaatiota ei ole paljaalla silmällä selkeästi nähtävissä, on levyä tutkittava mikroskoopilla ja selvitettävä, onko agglutinaatiota tapahtunut sekä sen voimakkuus.8. Säilytettävä enintään -20 °C lämpötilassa. Jollei tuotetta käytetä avaamispäivänä, lisätään 0,1 ml N3Na-liuosta, jonka pitoisuus on 100 g/l.9. Ihmisperäistä anti-E ("anti-rh")-seerumia: 5 ml,Nautaeläimen albumiinia 300 g/l sisältävää liuosta: 5 ml.10. Tämä reagenssi sisältää ihmisperäistä ainetta.>KAAVION LOOPU>PÖYTÄKIRJAN LIITE EUROOPAN NEUVOSTO EUROOPPALAINEN SOPIMUS VERIRYHMIEN MÄÄRITTELYREAGENSSIEN VAIHDOSTA TODISTUS (4 artikla)>KAAVION ALKU>EI SAA IRROTTAA LÄHETYKSESTÄ.................... 19..........(paikka)(päiväys)Kollien määräAllekirjoittanut ilmoittaa, että marginaalissa määritelty lähetys ..............................Merkitvalmistettu .......... vastuulla........................................erien numerosopimuksen 6 artiklassa tarkoitettu laitos on sopimuksen pöytäkirjan eritelmien mukainen ja lähetys voidaan toimittaa välittömästi vastaanottajalle..........(nimi ja paikka) ..................................................(leima)(allekirjoitus)(virkanimike)>KAAVION LOOPU>