CELEX: 21987A0207(05)
Language: pt
Date: 1962-05-14 00:00:00
Title: Protocolo ao Acordo Europeu relativo ao Intercâmbio de Reagentes para a Determinação de Grupos Sanguíneos

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21987A0207(05)

Protocolo ao Acordo Europeu relativo ao Intercâmbio de Reagentes para a Determinação de Grupos Sanguíneos  

Jornal Oficial nº L 037 de 07/02/1987 p. 0033 - 0043 Edição especial finlandesa: Capítulo 11 Fascículo 11 p. 0378  Edição especial sueca: Capítulo 11 Fascículo 11 p. 0378 

PROTOCOLO AO ACORDO EUROPEU relativo ao intercâmbio de reagentes para a determinação de grupos sanguíneos  DISPOSIÇÕES GERAIS    1. Especificidade  Qualquer reagente para a determinação de grupos sanguíneos deve reagir com todas as amostras de sangue examinadas que contenham o antígeno homólogo do anticorpo ou das outras substâncias referidas no rótulo.  Sempre que um reagente for utilizado em conformidade com a técnica recomendada pelo produtor, não se deve manifestar qualquer dos factores ou fenómenos seguintes:    a) Propriedades hemolíticas;       b) Anticorpos ou substâncias distintas das referidas no rótulo;       c) Produtos bacterianos susceptíveis de dar origem a falsas reacções, positivas ou negativas;       d) Pseudo-aglutinação com formação de rolos;       e) Fenómenos de prozona.           2. Potência  O título é medido através de diluições por sucessivos desdobramentos do reagente em estudo, num meio adequado. A cada diluição é adicionado um volume igual de uma suspensão de glóbulos vermelhos. O título é o recíproco do valor da diluição mais forte na qual se pode observar uma reacção, sendo a diluição determinada sem incluir no volume total o volume da suspensão globular.  No caso do anti-A, anti-B e outros reagentes destinados à utilização sobre lâminas, a avidez é expressa pelo tempo necessário à aglutinação sobre lâmina.    3. Padrões internacionais e unidades internacionais  A Organização Mundial de Saúde estabeleceu padrões internacionais para os reagentes para determinação de grupos sanguíneos anti-A, anti-B e anti-D incompleto, e outros estão em estudo para os reagentes para determinação de grupos sanguíneos com outras especificidades. Por definição, uma preparação-padrão internacional contém um determinado número de unidades internacionais por mg ou ml, independentemente dos títulos observados em relação a glóbulos vermelhos especiais  (1).  (1)A actividade dos reagentes para determinação de grupos sanguíneos da maioria das especificidades é expressa pelo título de aglutinação verificado, numa série de diluições, sobre uma suspensão de glóbulos vermelhos. O título indica a diluição do reagente empregue na primeira mistura que origine aglutinação (visível ao microscópio). A actividade dos reagentes para determinação de grupos sanguíneos, em relação aos quais existem padrões internacionais (anti-A, anti-B e anti-D incompleto, no momento actual) pode ser expressa em unidades internacionais (Vide Bull, Wld. Hlth. Org. (OMS) 1954, 10, 937, 941. 1950, 3, 301.), com base numa titulação do reagente desconhecido em comparação com a preparação-padrão internacional ou com um subpadrão nacional. Os padrões internacionais dos soros para determinação de grupos sanguíneos são distribuídos em ampolas que contêm soro humano dessecado. Acrescentados até se obter o volume de 1 ml, os soros anti-A e anti-B contêm, por definição, 256 U. I. por ml. Estas unidades são fornecidas gratuitamente pelo Laboratório Internacional dos padrões biológicos da OMS, Stratens Serum-Institut, Copenhaga. O seguinte quadro mostra um exemplo de titulação comparativa entre o soro-padrão internacional anti-A (S) e um reagente anti-A «desconhecido» (U) com glóbulos vermelhos A1 e glóbulos vermelhos A2B. >PIC FILE= "T0045101">     4. Estabilidade e validade  Qualquer reagente armazenado nas condições recomendadas pelo fabricante deve conservar, pelo menos durante um ano, as qualidades requeridas.  No que se refere aos reagentes no estado líquido, a validade indicada no rótulo não deve ser posterior a mais de um ano, a contar da data do último controlo satisfatório da actividade. No seguimento de novos controlos a validade pode ser prorrogada por períodos de um ano.  Em relação aos reagentes no estado dessecado, a validade indicada no rótulo depende do resultado dos exames de estabilidade e deverá ser efectuada pelas autoridades de controlo nacionais.    5. Conservação  Os reagentes para determinação de grupos sanguíneos podem ser conservados no estado líquido ou dessecado. Os reagentes dessecados devem ser colocados numa atmosfera de gás inerte ou sob vácuo, dentro de um recipiente em vidro, vedado de forma a que a humidade seja eliminada. Um reagente que seja de novo dessecado em presença de anidrido fosfórico a uma pressão que não exceda 0,02 mm de mercúrio, durante 24 horas, não perde mais do que 0,5 % do seu peso.  Os reagentes devem ser preparados com cuidados de assepsia e não devem estar contaminados por bactérias. Para evitar a proliferação de bactérias, a autoridade nacional competente pode decidir se é conveniente adicionar ao reagente (ou a qualquer dissolvente que seja fornecido juntamente com os reagentes dessecados) um anti-séptico e/ou um antibiótico, desde que, em presença da substância adicionada, o reagente continue a corresponder às normas de especificidade e de actividade.  Os soros de origem humana para determinação de grupos sanguíneos devem conter, pelo menos, 2,5 mg de azoto proteínico por ml de soro líquido ou reconstituído.  Os reagentes, quer no estado líquido, quer após reconstituição, devem ser transparentes e não devem conter sedimentos, gel ou partículas visíveis.    6. Coloração  É desejável que os reagentes para determinação de grupos sanguíneos, destinados a intercâmbio internacional, não sejam corados artificialmente, pelo menos até que um acordo internacional estabeleça um sistema uniforme. Qualquer substância corante que seja adicionada deverá não produzir efeitos sobre as reacções específicas.    7. Distribuição e volume  Os reagentes para determinação de grupos sanguíneos devem ser distribuídos de uma forma e com tal volume que o reagente contido num recipiente seja suficiente para a execução de testes com glóbulos-testemunho positivos e negativos, para além dos testes com glóbulos desconhecidos. Cada recipiente deve conter um volume tal que se possa proceder, se for caso disso, aos testes de actividade descritos no presente Protocolo.    8. Registos e amostras  O laboratório produtor deverá anotar nos seus registos todas as fases de produção e controlo dos reagentes para determinação de grupos sanguíneos. Devem ser conservadas em poder do laboratório amostras adequadas de todos os reagentes distribuídos, até ser provável que o lote já não esteja em uso.    9. Classificação dos reagentes  Os reagentes utilizáveis para determinação de grupos sanguíneos podem incluir substâncias de origem humana, animal, vegetal (ou mineral), sendo umas o princípio activo e outras o complemento necessário ao reforço da sua actividade ou à manutenção da sua estabilidade.  Devido a razões técnicas, estes reagentes foram agrupados em três categorias, consoante a origem do seu constituinte activo. Este facto não significa que os reagentes de origem humana contenham apenas produtos de origem humana ou que os reagentes animais ou vegetais não possam conter substâncias de origem humana.    10. Rotulagem, literatura inclusa e certificado  Será aposto em cada recipiente definitivo um rótulo, em francês e inglês, impresso a preto e branco, com as seguinte indicações:    1. Nome e endereço do estabelecimento produtor;       2. Nome do reagente, tal como está indicado no título das especificações correspondentes;       3. Nome e quantidade do anti-séptico e/ou antibiótico, se for caso disso, ou indicação da ausência destes;       4. Volume ou, caso o reagente seja dessecado, volume e composição do líquido necessário à sua reconstituição;       5. Data de termo da validade;       6. Número do lote.  Além disso, este rótulo ou o rótulo da embalagem que contenha vários recipientes definitivos, ou a literatura que acompanha os recipientes, conterá as seguintes indicações:      1. Nome e endereço do estabelecimento produtor;           2. Nome do reagente tal como está indicado no título das correspondentes especificações;            3. Volume ou, caso o reagente seja dessecado, volume e composição do líquido necessário à sua reconstituição;           4. Data do último controlo de actividade;           5. Data de termo da validade (se for caso disso);           6. Número do lote;         7. Descrição adequada do modo de utilização recomendada pelo produtor;       8. Condições de armazenagem das ampolas por abrir e precauções a tomar após a sua abertura;       9. Composição exacta incluindo, se for caso disso, o anti-séptico e/ou o antibiótico;       10. Indicação da presença ou da ausência de qualquer produto de origem humana.  Cada uma das remessas deverá ser acompanhada por um certificado, em conformidade com as disposições do artigo 4° do Acordo e do anexo do presente Protocolo. Juntam-se ao presente Protocolo modelos de rótulo e de literatura.   DISPOSIÇÕES ESPECIAIS   A. REAGENTES DE ORIGEM HUMANA PARA DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS     a) SOROS DE ORIGEM HUMANA PARA DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS AB0      i) Soro anti-A para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-A é proveniente do sangue de pessoas seleccionadas do grupo B, imunizados ou não por glóbulos vermelhos do grupo A ou por substâncias específicas do grupo A. O soro anti-A aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham os antígenos A, ou seja, os dos grupos A e AB incluindo os subgrupos A1, A2, A1B e A2B, e não afecta os glóbulos vermelhos humanos isentos de antígenos A, ou seja, os dos grupos 0 e B.  Actividade:  Titulação:  Um soro anti-A deve ser titulado em separado, sobre suspensões de glóbulos A1, A2 e A2B, paralelamente à preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-A para determinação de grupos sanguíneos ou a uma preparação equivalente de referência. A actividade do soro não deve, em nenhum caso, ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez:  Após mistura sobre lâmina do soro anti-A com igual volume de uma suspensão de glóbulos A1, A2 e A2B de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação de cada uma das suspensões deve aparecer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional (reconstituída mas não diluída) de soro anti-A para determinação de grupos sanguíneos ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.           ii) Soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-B é proveniente do sangue de pessoas seleccionadas do grupo A, imunizadas ou não por glóbulos vermelhos do grupo B ou por substâncias específicas do grupo B. O soro anti-B aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham os antígenos B, isto é, os dos grupos B e AB, e não afecta os glóbulos vermelhos humanos isentos dos antígenos B, ou seja, os dos grupos 0 e A.  Actividade:  Titulação  Um soro anti-B deve ser titulado sobre uma suspensão de glóbulos B, paralelamente à preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos ou a uma preparação equivalente de referência. A actividade do soro não deve ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez  Após mistura sobre lâmina de soro anti-B com igual volume de uma suspensão de glóbulos B, de uma fracção de volume de 0,05-0,1 a aglutinação deve ocorrer antes do dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.           iii) Soro anti-A mais anti-B (grupo 0) para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-A mais anti-B (grupo 0) é proveniente do sangue de pessoas seleccionadas do  grupo 0, imunizadas ou não por glóbulos vermelhos A e B ou por substâncias específicas dos grupos A e B. O soro anti-A mais anti-B (grupo 0) aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham aglutinógenos A ou B, ou os aglutinógenos A e B, isto é, os do grupo A incluindo os subgrupos A1 e A2, os do grupo B e os do grupo AB, incluindo os subgrupos A1B e A2B, e não afecta os glóbulos vermelhos humanos isentos de aglutinógenos A ou B, isto é, os do grupo 0. Aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contêm o antígeno Ax (Ay ou Ao) (os quais não são, de um modo geral, aglutinados pelo soro anti-A proveniente do sangue de dadores do grupo B).  Actividade:  Titulação  Um soro anti-A mais anti-B (grupo 0) deve ser titulado em separado sobre suspensões de glóbulos A1 e A2, paralelamente à preparação-padrão internacional de soro anti-A para determinação de grupos sanguíneos, reconstituída mas não diluída, ou a uma preparação equivalente de referência. Deve ser titulado igualmente sobre uma suspensão de glóbulos B, paralelamente à preparação-padrão internacional de soro para determinação de grupos sanguíneos anti-B reconstituída mas não diluída, ou a uma preparação equivalente de referência.  A actividade do soro não deve, em nenhum caso, ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  O soro anti-A mais anti-B (grupo 0) para determinação de grupos sanguíneos, não diluído, deve igualmente produzir uma aglutinação facilmente detectável dos glóbulos do grupo Ax (Ay ou Ao).  Determinação da avidez:  Após mistura sobre lâmina de soro anti-A mais anti-B (grupo 0) com igual volume de uma suspensão de glóbulos A1 e A2 de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação de cada suspensão deve ocorrer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro para determinação dos grupos sanguíneos anti-A ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez. Após mistura sobre lâmina de soro anti-A mais anti-B (grupo 0) com igual volume de uma suspensão de glóbulos B de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação deve ocorrer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.  Sempre que um soro anti-A mais anti-B (grupo 0) é misturado sobre lâmina com igual volume de uma suspensão de glóbulos Ax (Ay ou Ao) de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação deve ocorrer em menos de cinco minutos, a uma temperatura compreendida entre 18 °C e 25 °C.                  b) SOROS DE ORIGEM HUMANA PARA DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS Rh  Os soros para determinação de grupos sanguíneos Rh, independentemente da sua especificidade, podem ser de duas variedades, diferindo nas condições em que é efectuada uma aglutinação de glóbulos homólogos. Determinados soros, ditos «completos», aglutinam os glóbulos em meio salino. Outros, ditos «incompletos», só são capazes de provocar uma aglutinação na presença de determinados colóides, tais como a albumina bovina ou por meio de outras técnicas adequadas. Os soros devem ser utilizados nas condições especificadas pelo laboratório que os prepara.  Alguns soros «incompletos» aglutinam também sobre lâmina os glóbulos vermelhos homólogos em suspensão no seu próprio soro ou plasma.  As condições seguintes, relativas à potência dos soros Rh para determinação dos grupos sanguíneos, poderão ser revistas quando as preparações-padrão internacionais estiverem disponíveis.      i) Soro anti-D (anti-Rho) para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-D é proveniente do sangue de uma ou várias pessoas imunizadas pelo antígeno D do sistema Rh. Reage com suspensões de glóbulos vermelhos humanos que contenham o antígeno D, mas não com as de glóbulos vermelhos humanos isentos do antígeno D.  Actividade:  Titulação  Os soros anti-D «completos» não devem ter um título inferior a 32 sobre os glóbulos CcDee em suspensão em meio salino (de 9 gramas NaCl por litro).  Os soros anti-D «incompletos» devem ser titulados sobre os glóbulos CcDee paralelamente à preparação-padrão internacional de anti-D (anti-Rho) incompleto, reconstituída mas não diluída, ou a uma preparação equivalente de referência. A actividade do soro não deve, em nenhum caso, ser inferior a 32 unidades internacionais por ml. Os soros devem reagir com todos os glóbulos que contenham o antígeno D e até, tanto quanto possível, com glóbulos que contenham o antígeno Du.  Determinação da avidez  Os soros anti-D destinados a serem utilizados no teste sobre lâmina de Diamond e Abelson  devem, após mistura sobre lâmina com um volume igual de uma suspensão de glóbulos CcDee de uma fracção de volume de 0,4-0,5, a cerca de 40 °C, produzir uma aglutinação em menos de 30 segundos e a aglutinação deve estar completa em menos de 120 segundos.           ii) Soro anti-C (anti-Rh') para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-C é proveniente do sangue de uma ou várias pessoas imunizadas pelo antígeno C do sistema Rh. Reage com suspensões de glóbulos vermelhos humanos que contenham o antígeno C, mas não com as dos glóbulos vermelhos humanos isentos do antígeno C. O antígeno C é concebido como incluindo o antígeno Cw.  A maior parte dos soros anti-C para uso diagnóstico contém um anticorpo anti-C «completo» bem como um anticorpo anti-D «incompleto». Estes soros só são, portanto, específicos para o antígeno C se os glóbulos vermelhos a testar estiverem em suspensão numa solução de 9 gramas NaCl por litro.  Actividade:  Titulação  Os soros anti-C («completos» ou «incompletos») não devem ter um título inferior a 8 sobre os glóbulos Ccddee.  Determinação de avidez  Os soros anti-C destinados a serem utilizados no teste sobre lâmina de Diamond e Abelson (e que não devem conter nenhuma forma de anti-D) devem, após mistura sobre lâmina com um igual volume de uma suspensão de glóbulos Ccddee de uma fracção de volume de 0,4-0,5, a cerca de 40 °C, produzir uma aglutinação visível em menos de 30 segundos, que deve estar completa em menos de 120 segundos.           iii) Soro anti-E (anti-rh") para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  O soro anti-E é proveniente do sangue de uma ou várias pessoas imunizadas pelo antígeno E do sistema Rh. Reage com suspensões de glóbulos vermelhos humanos que contenham o antígeno E, mas não com glóbulos vermelhos isentos do antígeno E.  Actividade:  Titulação  Os soros anti-E («completos» e «incompletos») não devem ter um título inferior a 8 sobre os glóbulos ccddEe.  Determinação da avidez  Os soros anti-E destinados a utilização no teste sobre lâmina de Diamond e Abelson (e que não devem conter nenhuma forma de anti-D) devem, após mistura sobre lâmina com igual volume de uma suspensão de glóbulos ccddEe de uma fração de volume de 0,4-0,5, a cerca de 40 °C, produzir uma aglutinação que deve estar completa em menos de 120 segundos.           iv) Soro anti-D mais C (Anti-Rhorh') para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  Soro anti-D mais E (Anti-Rhorh") para determinação de grupos sanguíneos (humanos)  Os soros de especificidade anti-D mais C ou anti-D mais E podem ser obtidos directamente do sangue de pessoas imunizadas ou podem ser preparados ao misturar um soro anti-D com um soro anti-C ou anti-E. Num dado soro, os dois anticorpos devem ser simultaneamente activos nas condições de reacção especificadas pelo produtor. Cada um dos soros deve reagir com todos os tipos de glóbulos vermelhos que reagiriam com um ou o outro dos anticorpos que os compõem e não deve reagir com os glóbulos vermelhos que não possuam o aglutinógeno C ou o aglutinógeno D e que não possuam o antígeno D no caso do anti-D mais E. Os títulos não devem ser inferiores aos que são requeridos para os anticorpos que os compõem, mas no caso do anti-D mais C (combinação frequente no soro das pessoas imunizadas), é desejável que o título do anti-C não seja inferior a 32 e, no caso do anti-D mais E, é desejável que o título do anti-E não seja inferior a 8. Se um soro se destina a ser utilizado no teste sobre lâmina de Diamond e Abelson, os tempos de aglutinação para todos os tipos de glóbulos vermelhos que reagem não devem ser inferiores aos necessários para cada constituinte de anticorpo.                     B. REAGENTES DE ORIGEM NÃO HUMANA     a) SOROS DE ORIGEM ANIMAL      i) Reagente anti-A para determinação de grupos sanguíneos (animais)  O soro anti-A é proveniente de animais imunizados ou não por glóbulos vermelhos do grupo A ou por substâncias específicas do grupo A. O soro anti-A aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham os antígenos A, isto é, os dos grupos A e AB, incluindo os subgrupos A1, A2, A1B e A2B, e não aglutina os glóbulos vermelhos humanos isentos dos antígéneos A, ou seja, os dos grupos 0 e B.  Actividade  Titulação  Um soro anti-A deve ser titulado separadamente sobre suspensões de glóbulos A1, A2 e A2B, paralelamente à preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, do soro para a determinação de grupos sanguíneos anti-A ou a uma preparação equivalente de referência (1). A actividade do soro não deve, em nenhum caso, ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez  Após mistura sobre lâmina do soro anti-A com igual volume de uma suspensão de glóbulos A1, A2 e A2B de uma fracção de volume de 0,05- 0,1, a aglutinação de cada suspensão deve ocorrer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro para determinação de grupos sanguíneos anti-A ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.           ii) Soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos (animais)  O soro anti-B é proveniente do sangue de animais imunizados ou não pelo glóbulos vermelhos do grupo B ou por substâncias específicas do grupo B. O soro anti-B aglutina os glóbulos vermelhos humanos isentos do antígéneo B ou seja, os dos grupos A e AB, e não aglutina os glóbulos vermelhos humanos desprovidos do antigénio B, ou seja, os dos grupos 0 e A.  Actividade  Titulação  Um soro anti-B deve ser titulado sobre uma suspensão de glóbulos B paralelamente à preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro para determinação de grupos sanguíneos anti-B ou a uma preparação equivalente de referência (1). A actividade do soro não deve ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez  Após mistura sobre lâmina do soro anti-B com um igual volume de uma suspensão de glóbulos vermelhos B de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação deve ocorrer antes do dobro do tempo necessário para a aglutinação obtida, nas mesmas condições, por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos um de uma preparação-padrão com a mesma avidez.           iii) Soro antiglobulinas humanas (animal) (2)  O soro antiglobulinas humanas para a utilização na serologia dos grupos sanguíneos deve conter anticorpos aglutinantes anti-IgG e anticorpos aglutinantes contra factores do complemento. Este soro é proveniente do sangue de animais imunizados por injecção de proteínas séricas humanas. Deve aglutinar todos os glóbulos vermelhos humanos revestidos de IgG humana e/ou de factores do complemento. Utilizado em conformidade com as indicações do fabricante, não aglutina glóbulos vermelhos humanos não revestidos, independentemente do grupo sanguíneo a que pertençam.  Especificidade  A especificidade de um soro antiglobulinas humanas para a utilização na serologia de grupos sanguíneos deve ser controlada com glóbulos vermelhos humanos sensibilizados por uma variedade de anticorpos : glóbulos vermelhos sensibilizados por anticorpos humanos incompletos anti-D, anti-K e anti-Fya, glóbulos vermelhos sensibilizados por anticorpos incompletos que determinem o complemento anti-Lea em presença de soro humano  (1) A «preparação-padrão internacional» é de origem humana ; a preparação-padrão equivalente que se utilizará, caso necessário, poderá ser de origem humana ou de origem animal. (2)Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1965), Lancet, ii, 15. Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Brit. J. exp. Path., 26, 255.  recente, glóbulos vermelhos sensibilizados por anticorpos incompletos do tipo frio, glóbulos vermelhos curtidos, revestidos de IgG humana e, por último, 10 amostras diferentes de glóbulos vermelhos humanos não revestidos, que contenham os antígenos A e B ou isentos dos antigénios A e B.  Actividade  Titulação  Um soro antiglobulinas humanas deve, ao ser fornecido ou após diluição segundo as indicações constantes do rótulo, aglutinar fortemente os glóbulos vermelhos sensibilizados por anticorpos incompletos anti-D de origem humana, cujo título é igual (ou inferior) a 4, sempre que é titulado sobre glóbulos vermelhos D positivos pelo método albumin replacement. Na mesma diluição, ele deve aglutinar os glóbulos vermelhos humanos K positivos sensibilizados por anticorpos anti-K fracos seleccionados e os glóbulos vermelhos Fya fracos por anticorpos anti-Fya fracos seleccionados para este fim.  Deve também, na mesma diluição ou numa diluição diferente (se tal estiver especificado no rótulo), aglutinar os glóbulos vermelhos humanos sensibilizados por anticorpos incompletos que fixem o complemento anti-Lea em presença de soro humano recente.  Para uso clínico corrente, é desejável que a sensibilização por todos os tipos de anticorpos incompletos acima mencionados seja detectável com uma única diluição do soro antiglobulinas humanas.                  b) REAGENTES DE ORIGEM VEGETAL      i) Reagente anti-A para determinação de grupos sanguíneos (vegetais)  O reagente anti-A é extraído das sementes ou de qualquer outra parte de uma planta própria para este fim e, em seguida, submetido, se necessário, a um processo de purificação. O reagente anti-A aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham os antigénios A, ou seja, os dos grupos A e AB, incluindo os subgrupos A1, A2, A1B e A2B, e não aglutina os glóbulos vermelhos humanos isentos dos antigénios A, isto é, os dos grupos 0 e B.  Actividade  Titulação  Um reagente anti-A deve ser titulado separadamente sobre suspensões de glóbulos A1, A2 e A2B paralelamente à preparação-padrão internacional reconstituída mas não diluída, de soro para determinação de grupos sanguíneos anti-A, ou a uma preparação equivalente de referência  (1).  A actividade do reagente não deve, em nenhum caso, ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez  Após mistura sobre lâmina de um reagente anti-A com igual volume de uma suspensão do glóbulos A1, A2 e A2B de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação de cada suspensão deve ocorrer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, do soro para determinação de grupos sanguíneos anti-A ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.           ii) Reagente anti-B para determinação de grupos sanguíneos (vegetais)  O reagente anti-B é extraído da parte adequada de uma planta própria para este fim e, em seguida, submetido, caso necessário, a um processo de purificação. O reagente anti-B aglutina os glóbulos vermelhos humanos que contenham o antigénio B, isto é, os dos grupos B e AB, e não aglutina os glóbulos vermelhos humanos isentos de antigénio B, ou seja, os dos grupos 0 e A.  Actividade  Titulação  Um reagente anti-B deve ser titulado sobre uma suspensão de glóbulos B paralelamente à preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, de soro anti-B para determinação de grupos sanguíneos ou a uma preparação equivalente de referência (1). A actividade do reagente não deve ser inferior a 64 unidades internacionais por ml.  Determinação da avidez  Após mistura sobre lâmina de um reagente anti-B com igual volume de uma suspensão de glóbulos B de uma fracção de volume de 0,05-0,1, a aglutinação deve ocorrer antes de decorrido o dobro do tempo necessário para a aglutinação, nas mesmas condições, obtida por meio da preparação-padrão internacional, reconstituída mas não diluída, do soro para determinação de grupos sanguíneos anti-B ou de uma preparação-padrão com a mesma avidez.   (1) A «preparação-padrão internacional» é de origem humana ; a preparação-padrão equivalente que se utilizará, caso necessário, poderá ser de origem humana ou de origem animal.   EXEMPLOS DE RÓTULO CONSELHO DA EUROPA ACORDO EUROPEU RELATIVO AO INTERCÂMBIO DE REAGENTES PARA A DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS >PIC FILE= "T0045102">    EXEMPLO DE LITERATURA INCLUSA CONSELHO DA EUROPA ACORDO EUROPEU RELATIVO AO INTERCÂMBIO DE REAGENTES PARA A DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS     1. Laboratório Central de Transfusão de Sangue, 1 Main Street, Metropolis, Westland.       2. Soro anti-E (anti-rh") (humano).       3. 10 ml.       4. Data do último controlo de actividade : 30 de Maio de 1961.       5. Data de termo da validade : 30 de Maio de 1962.       6. Nº 5432.       7. Os glóbulos vermelhos a examinar devem ser lavados uma ou vários vezes com uma solução salina de 9 g/l. Uma suspensão de glóbulos vermelhos de uma fracção de volume de cerca de 0,03 é, em seguida, preparada, misturando um volume ou uma gota de matéria global com 30 volumes ou gotas de solução salina isotónica. Com um pouco de prática, a concentração de uma suspensão pode ser avaliada de forma satisfatória à vista desarmada.  Uma pequena gota de soro é colocada num tubo de hemólise (6 mm x 30 mm) com o auxílio de uma pipeta Pasteur. Adiciona-se, em seguida, uma pequena gota de suspensão de glóbulos vermelhos. (Com um pouco de prática, pode-se conseguir uma economia considerável distribuindo o soro e a suspensão global com o auxílio de pipetas graduadas em ¶l). O conteúdo do tubo é misturado e colocado em incubação durante duas horas a 37 °C. O conteúdo do tubo é, então, transportado e cuidadosamente espalhado sobre uma lâmina de microscópio. Se a aglutinação não for claramente detectável à vista desarmada, a lâmina é observada ao microscópio para verificar se a aglutinação se produziu e determinar a sua intensidade.       8. Conservar a uma temperatura inferior ou igual a - 20 °C. Se o produto não for utilizado no próprio dia da abertura, adicionar 0,1 ml de uma solução de N3 Na a uma concentração de 100 g/l.       9. Soro humano anti-E («anti-rh») : 5 ml, albumina bovina de 300 g/l : 5 ml.       10. Este reagente contém uma substância de origem humana.       ANEXO AO PROTOCOLO CONSELHO DA EUROPA ACORDO EUROPEU RELATIVO AO INTERCÂMBIO DE REAGENTES PARA A DETERMINAÇÃO DE GRUPOS SANGUÍNEOS  >PIC FILE= "T0045103">