CELEX: 32009D0976
Language: mt
Date: 2009-12-15 00:00:00
Title: Deċiżjoni tal-Kummissjoni tal- 15 ta’ Diċembru 2009 li temenda l-Anness D tad-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE fir-rigward tat-testijiet dijanjostiċi għal-lewkożi enżootika bovina (notifikata bid-dokument numru C(2009) 9951) (Test b’relevanza għaż-ŻEE)

18.12.2009   
            
            
               MT
            
            
               Il-Ġurnal Uffiċjali tal-Unjoni Ewropea
            
            
               L 336/36
            
         DEĊIŻJONI TAL-KUMMISSJONI
   tal-15 ta’ Diċembru 2009
   li temenda l-Anness D tad-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE fir-rigward tat-testijiet dijanjostiċi għal-lewkożi enżootika bovina
   (notifikata bid-dokument numru C(2009) 9951)
   (Test b’relevanza għaż-ŻEE)
   (2009/976/UE)
   IL-KUMMISSJONI EWROPEA,
   Wara li kkunsidrat it-Trattat dwar il-Funzjonament tal-Unjoni Ewropea,
   Wara li kkunsidrat id-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE tas-26 ta’ Ġunju 1964 dwar il-problemi tas-saħħa tal-annimali li jaffetwaw il-kummerċ ta' annimali bovini u suwini ġewwa l-Komunità (1), u b’mod partikolari l-Artikolu 16 tagħha,
   Billi:
   
               (1)
            
            
               Id-Direttiva 64/432/KEE japplika għall-kummerċ intra-Unjoni fl-annimali bovini u l-Kapitolu II tal-Anness D mehmuż ma' dan jistabbilixxi t-testijiet dijanjostiċi għall-lewkożi enżootika bovina (LEB) li għandhom jintużaw għall-kontroll u l-eradikazzjoni ta’ din il-marda u għas-sorveljanza u l-monitoraġġ, kif ukoll għall-istabbiliment u ż-żamma ta’ status ta’ merħla uffiċjalment ħielsa mil-lewkożi enżootika bovina u ċ-ċertifikazzjoni meħtieġa għall-kummerċ intra-Unjoni fl-annimali bovini.
            
         
               (2)
            
            
               Il-Kapitolu II tal-Anness D għad-Direttiva 64/432/KEE jipprevedi li t-testijiet għal-LEB iridu jitwettqu jew permezz ta’ test bl-agar ġel għal diffużjoni immuni (AGID) bl-użu ta’ antiġenu standardizzat kontra s-serum standard tal-KE uffiċjali (serum EI), assay ta’ immunoassorbiment enzimatiku (ELISA) standardizzat kontra s-serum E4. Iż-żewġ sera standard huma pprovduti min-National Veterinary Institute, Technical University of Denmark.
            
         
               (3)
            
            
               Serum standard LEB ġdid (serum E05) ġie żviluppat riċentement mil-Laboratorju ta’ Referenza għal-Lewkożi Enżootika Bovina fil-Ġermanja (Friedrich-Loeffler-Institute) tal-Organizzazzjoni Dinjija għas-Saħħa tal-Annimali (OIE) b’kooperazzjoni mal-Laboratorji ta’ Referenza OIE fir-Renju Unit (Veterinary Laboratories Agency) u fil-Polonja (National Veterinary Research Institute) wara li ġie ttestjat fi prova interlaboratorja bejn dawn il-laboratorji. Is-serum E05 ġie vvalidat kontra s-sera EI u E4 minn AGID u ELISA differenti u konsegwentement inkluż bħala serum standard OIE akkreditat fit-Taqsima B(2) tal-Kapitolu 2.4.11 tal-Manwal OIE tat-Testijiet Dianjostiċi u l-Vaċċini għall-Annimali Terrestri, is-Sitt Edizzjoni, 2008. Dan is-serum huwa disponibbli mil-Laboratorju ta’ Referenza OIE għal-lewkożi enżootika bovina fil-Ġermanja.
            
         
               (4)
            
            
               Barra minn hekk, in-National Veterinary Institute, Technical University of Denmark informa lill-Kummissjoni li ma jistax ikompli jissodisfa l-obbligi tiegħu għall-provvista tas-sera standard ipprovduti bħalissa fil-Kapitolu II tal-Anness D tad-Direttiva 64/432/KEE.
            
         
               (5)
            
            
               L-awtoritajiet kompetenti Ġermanizi u l-Friedrich-Loeffler-Institute qablu li jsiru fornituri tas-serum E05 li konsegwentement se jsir is-serum standard uffiċjali l-ġdid tal-Unjoni Ewropea (UE) għal-LEB.
            
         
               (6)
            
            
               Id-Direttiva 64/432/KEE għandha għalhekk tiġi emendata skont dan.
            
         
               (7)
            
            
               Il-miżuri previsti f’din id-Deċiżjoni huma skont l-opinjoni tal-Kumitat Permanenti għall-Katina Alimentari u s-Saħħa tal-Annimali,
            
         ADOTTAT DIN ID-DEĊIŻJONI:
   Artikolu 1
   It-Taqsima II tal-Anness V mad-Direttiva 64/432/KE hija sostitwita bit-test fl-Anness ma' din id-Deċiżjoni.
   Artikolu 2
   Din id-Deċiżjoni hija indirizzata lill-Istati Membri.
   
      Magħmul fi Brussell, il-15 ta’ Diċembru 2009.
      
         
            Għall-Kummissjoni
         
         Androulla VASSILIOU
         
            Membru tal-Kummissjoni
         
      
   
   
      (1)  ĠU 121, 29.7.1964, p. 1977/64.
   
      ANNESS
      Il-Kapitolu II tal-Anness li jinsab mad-Direttiva 64/432/KEE hija mibdula b’dan li ġej:
      
         “KAPITOLU II
         
            TESTIJIET GĦAL-LEWKOŻI ENŻOOTIKA BOVINA
         
         It-testijiet għal-lewkożi enżootika bovina għandhom jitwettqu permezz ta’ test bl-agar ġel għal diffużjoni immuni (AGID) taħt il-kondizzjonijiet deskritti fit-Taqsimiet A u B jew mill-assay immunosorbenti marbut mal-enżimi (ELISA) taħt il-kondizzjonijiet deskritti fit-Taqsima C. It-test bl-agar ġel għal diffużjoni immuni jista’ jintuża biss biex jiġu ttestjati kampjuni individwali. Jekk ir-riżultati tat-testijiet ikunu s-suġġett ta’ sfida sostanzjata kif jixraq, għandu jsir kontroll addizzjonali permezz ta’ test bl-agar ġel għal diffużjoni immuni.
         L-AGID u l-ELISA għandhom jiġu standardizzati kontra s-serum E05, li se jsir is-serum standard uffiċjali tal-UE, li jrid jiġi pprovdut mill-:
         
                     Friedrich-Loeffler-Institut
                  
               
                     Federal Research Institute for Animal Health
                  
               
                     OIE Reference Laboratory for Enzootic Bovine Leukosis (EBL)
                  
               
                     Südufer 10
                  
               
                     17493 Greifswald — Insel Riems
                  
               
                     Il-Ġermanja.
                  
               A.   Test bl-agar ġel għal diffużjoni immuni għal lewkożi enżootika bovina
         
         
                  
                     1.
                  
                  
                     L-antiġenu li għandu jintuża fit-test għandu jinkludi fih glikoproteini tal-virus tal-lewkożi bovina. L-antiġenu għandu jiġi standardizzat kontra s-serum E05.
                  
               
                  
                     2.
                  
                  
                     L-Istituti tal-Istat, il-laboratorji nazzjonali ta’ referenza jew l-istituti uffiċjali maħtura skont l-Artikolu 6a biex jikkoordinaw l-istandards u l-metodi tad-dijanjosi tat-testijiet għal-lewkożi enżootika bovina għandhom ikunu responsabbli għall-kalibrar tal-antiġenu standard użat fil-laboratorju kontra s-serum E05.
                  
               
                  
                     3.
                  
                  
                     L-antiġeni standard użati fil-laboratorju għandhom jintbagħtu mill-inqas darba fis-sena lill-istituti tal-Istat, il-laboratorji nazzjonali ta’ referenza jew l-istituti uffiċjali indikati skont l-Artikolu 6a, għall-ittestjar kontra s-serum standard E05. Barra minn din l-istandardizzazzjoni, l-antiġenu li jkun qed jintuża jista’ jiġi kkalibrat skont il-metodu deskritt fit-Taqsima B.
                  
               
                  
                     4.
                  
                  
                     Ir-reaġenti tat-testijiet għandhom jikkonsistu minn:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 antiġenu: l-antiġenu għandu jkun fih il-glikoproteini speċifiċi tal-virus tal-lewkożi enżootika bovina li ġie standardizzat kontra s-serum E05;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 is-serum tat-test;
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 serum pożittiv ta’ kontroll magħruf;
                              
                           
                                 (d)
                              
                              
                                 ġel agar:
                                 
                                             —
                                          
                                          
                                             0,8 % agar,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             8,5 % NaCl,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             0,05 M Tris-buffer pH 7,2,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             15 ml ta’ dan l-agar għandu jiġi introdott f’petri dish b’dijametru ta’ 85 mm, li jirriżulta f’fond ta’ 2,6 mm ta’ agar.
                                          
                                       
                           
               
                  
                     5.
                  
                  
                     Mudell tat-test ta’ seba’ fondijiet mingħajr kontenut niedi għandu jinqata’ fl-agar mal-qiegħ tal-platt; il-mudell għandu jikkonsisti f’fond ċentrali wieħed u sitt fondijiet f’ċirku madwaru.
                     Dijametru ta’ fond ċentrali: 4 mm
                     Dijametru ta’ fondijiet periferiċi: 6 mm
                     Distanza bejn il-fondijiet ċentrali u dawk periferiċi: 3 mm
                  
               
                  
                     6.
                  
                  
                     Il-fond ċentrali ghandu jimtela bl-antiġenu standard. Il-fondijiet ċentrali 1 u 4 deskritti fil-B.3 huma mimlija bis-serum pożittiv magħruf; il-fondijiet 2, 3, 5 u 6 bis-sera tat-test. Il-fondijiet għandhom jimtlew sakemm il-meniscus jisparixxi.
                  
               
                  
                     7.
                  
                  
                     Dan jirriżulta fil-kisba tal-kwantitajiet li ġejjin:
                     
                                 —
                              
                              
                                 antiġenu: 32 μl,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 serum tal-kontroll: 73 μl,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 serum tat-test: 73 μl.
                              
                           
               
                  
                     8.
                  
                  
                     L-inkubazzjoni għandha tkun ta’ 72 siegħa f’temperatura normali tal-kamra (20 sa 27 °C) f’ kamra umda magħluqa.
                  
               
                  
                     9.
                  
                  
                     It-test jista’ jinqara f’24 u 48 siegħa iżda ma jistax jinkiseb riżultat qabel 72 siegħa:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 serum tat-test ikun pożitiv jekk jifforma linja ta’ preċipitazzjoni speċifika mal-antiġenu tal-virus tal-lewkożi bovina (VLB) u jifforma linja kompluta ta’ identitá mas-serum tal-kontroll;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 serum tat-test huwa negattiv jekk ma jifformax linja speċifika ta’ preċipitazzjoni mal-antiġenu VLB u ma jgħawwiġx il-linja tas-serum ta’ kontroll;
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 ir-reazzjoni ma tistax tiġi kkunsidrata konklużiva jekk hija:
                                 
                                             (i)
                                          
                                          
                                             tgħawweġ il-linja tas-serum ta’ kontroll lejn l-antiġenu VLB mingħajr ma tifforma linja ta’ preċipitazzjoni viżibbli mal-antiġenu; jew
                                          
                                       
                                             (ii)
                                          
                                          
                                             jekk ma tkunx tista tinqara la bħala negattiva u lanqas bħala pożittiva.
                                          
                                       
                           F’reazzjonijiet inkonklużivi t-test jista’ jiġi ripetut u jiġi utilizzat serum ikkonċentrat.
                  
               
                  
                     10.
                  
                  
                     Kull konfigurazzjoni jew mudell ieħor ta’ fond jista’ jiġi utilizzat sakemm is-serum E05 diluwit 1:10 f’serum negattiv jista’ jiġi intraċċat bħala pożittiv.
                  
               B.   Metodu għall-istandardizzazzjoni tal-antiġenu
         
         
                  
                     1.
                  
                  
                     Is-soluzzjonijiet u l-materjali meħtieġa:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 40 ml ta’ 1,6 % agarose f’ 0,05 M Tris/HCl buffer, pH 7,2 b’ 8,5 % NaCl;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 15 ml ta’ serum tal-lewkożi bovina, li għandu antikorp biss ta’ glikoproteini tal-virus tal-lewkożi bovini, ddiluwit 1:10 f’ 0,05 M Tris/HCI buffer, pH 7,2 b’ 8,5 % NaCl;
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 15 ml ta’ serum tal-lewkożi bovina, li għandu antikorp biss għall-glikoproteini tal-virus tal-lewkożi bovina, ddiluwit 1:5 f’ 0,05 M Tris/HCI buffer, pH 7,2 b’ 8,5 % NaCl;
                              
                           
                                 (d)
                              
                              
                                 erba’ kontenituri petri tal-plastik b’dijametru ta’ 85 mm;
                              
                           
                                 (e)
                              
                              
                                 punch b’ dijametru ta’ 4 sa 6 mm;
                              
                           
                                 (f)
                              
                              
                                 antiġenu ta’ referenza;
                              
                           
                                 (g)
                              
                              
                                 l-antiġenu li għandu jiġi standardizzat;
                              
                           
                                 (h)
                              
                              
                                 banju tal-ilma (56 °C).
                              
                           
               
                  
                     2.
                  
                  
                     Il-Proċedura:
                     Ħoll l-agarose (1,6 %) fit-Tris/HCI buffer billi ssaħħan b’attenzjoni sa temperatura ta’ 100 °C. Qiegħed f’banju tal-ilma b’56 °C għal madwar siegħa. Barra minn hekk, qiegħed id-diluwizzjonijiet tas-serum tal-lewkożi bovina f’banju ta’ l-ilma b’temperatura ta’ 56 °C.
                     Issa ħallat 15 ml tal-56 °C tas-soluzzjoni agarose mal-15 ml tas-serum tal-lewkożi bovina (1:10), ħawwad malajr u ferra 15 ml f’kull wieħed miż-żewġ kontenituri petri. Erġa’ rrepeti din il-proċedura bis-serum tal-lewkożi bovina ddiluwit 1:5,
                     Meta jibbies l-agarose, isiru t-toqob fih kif ġej:
                     
                                 
                                    
                              
                              
                                 
                                    
                              
                           
                                 
                                    
                              
                              
                                 
                                    
                              
                           
               
                  
                     3.
                  
                  
                     Iż-żieda tal-antigen
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 kontenituri petri 1 u 3:
                                 
                                             (i)
                                          
                                          
                                             il-fond A - antiġenu ta’ referenza mhux diluwit,
                                          
                                       
                                             (ii)
                                          
                                          
                                             il-fond B - 1:2 antigenu ta’ referenza diluwit,
                                          
                                       
                                             (iii)
                                          
                                          
                                             il-fondijiet Ċ u E - antiġenu ta’ referenza,
                                          
                                       
                                             (iv)
                                          
                                          
                                             il-fond D - antiġenu tat-test mhux diluwit.
                                          
                                       
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 kontenituri petri 2 u 4:
                                 
                                             (i)
                                          
                                          
                                             il-fond A - antiġenu tat-test mhux diluwit,
                                          
                                       
                                             (ii)
                                          
                                          
                                             il-fond B - 1:2 antiġenu tat-test diluwit,
                                          
                                       
                                             (iii)
                                          
                                          
                                             il-fond C - 1:4 antiġenu tat-test diluwit,
                                          
                                       
                                             (iv)
                                          
                                          
                                             il-fond D - 1:8 antiġenu tat-test diluwit.
                                          
                                       
                           
               
                  
                     4.
                  
                  
                     Istruzzjonijiet Addizzjonali:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 l-esperiment jitwettaq b’żewġ diluwizzjonijiet tas-serum (1:5 u 1:10) sabiex tinkiseb l-aħjar preċipitazzjoni;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 jekk id-dijametru tal-preċipitazzjoni huwa żgħir wisq biż-żewġ diluwizzjonijiet, allura s-serum għandu jiġi diluwit iktar;
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 jekk id-dijametru tal-preċipitazzjoni fiż-żewġ diluwizzjonijiet huwa kbir wisq u bla saħħa, allura għandu jintagħżel is-serum l-aktar baxx;
                              
                           
                                 (d)
                              
                              
                                 il-konċentrazzjoni finali tal-agarose għandha tkun 0,8 %; dik tas-sera 5 u 10 % rispettivament;
                              
                           
                                 (e)
                              
                              
                                 ipprepara d-dijametri mkejla bis-sistema koordinata li ġejja. Id-diluwizzjoni tal-antiġenu li għandha tiġi ttestjata bl-istess djametru bħall-antiġenu ta’ referenza hija d-diluwizzjoni tal-operazzjoni.
                              
                           
                        
                  
               C.   Assay immunosorbenti marbuta mal-Enżimi (ELISA) għall-intraċċar tal-lewkożi enżootika bovina
         
         
                  
                     1.
                  
                  
                     Il-materjal u r-reagenti li għandhom jintużaw huma kif ġej:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 microplates ta’ fażi solida, cuvettes jew kwalunkwe fażi solida oħra;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 l-antiġenu huwa ffissat mal-fażi solida bl-għajnuna jew mingħajra ta’ antikorpi poliklonali jew monoklonali sabiex jinqabdu. Jekk l-antiġenu jkun miksi direttament mal-fażi solida, il-kampjuni kollha tat-test li jagħtu reazzjonijiet pożittivi għandhom jerġgħu jiġu ttestjati kontra l-antiġenu ta’ kontroll. L-antiġenu ta’ kontroll għandu jkun identiku għall-antiġenu bl-eċċezzjoni li dawk l-antiġeni VLB huma assenti. Jekk antikorpi li jinqabdu huma miksija b’fażi solida, l-antikorpi m’għandhomx jirreaġixxu għal antiġeni li mhumiex antiġeni VLB;
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 il-likwidu bijoloġiku li għandu jiġi ttestjat;
                              
                           
                                 (d)
                              
                              
                                 kontroll korrispondenti pożittiv u negattiv;
                              
                           
                                 (e)
                              
                              
                                 akkoppjat;
                              
                           
                                 (f)
                              
                              
                                 substrat addattat għall-enżima użata;
                              
                           
                                 (g)
                              
                              
                                 soluzzjoni ta’ waqfien, jekk meħtieġ;
                              
                           
                                 (h)
                              
                              
                                 soluzzjonijiet għad-diluwizzjoni tal-kampjuni tat-test għall-preparazzjonijiet tar-riaġenti u għall-ħasil;
                              
                           
                                 (i)
                              
                              
                                 sistema ta’ qari li hija xierqa għas-substrat użat.
                              
                           
               
                  
                     2.
                  
                  
                     L-istandardizzazzjoni u s-sensittività tat-test
                     Is-sensittività tal-ELISA għandha tkun ta’ tali livell li s-serum E5 jimmarka pożittiv meta jiġi diluwit 10 darbiet (kampjuni ta’ serum) jew 250 darba (kampjuni tal-ħalib) aktar mid-diluwizzjoni miksuba minn kampjuni individwali meta dawn jiddaħħlu f’ġabriet ta’ kampjuni. F’assays fejn kampjuni (serum u ħalib) huma ttestjati individwalment is-serum E4 diluwit 1 sa 10 (f’serum negattiv) jew 1 sa 250 (f’ħalib negattiv) għandu jimmarka pożittiv meta ttestjat fl-istess diluwizzjoni tal-assay kif użat għall-kampjuni tat-test individwali. L-istituti uffiċjali elenkati f’A.2 ikunu responsabbli għall-kontroll tal-kwalità tal-metodu ELISA, u partikolarment sabiex jiġi determinat, għal kull lott ta’ produzzjoni, in-numru ta’ kampjuni li għandu jinġabar fuq il-bażi tal-għadd miksub għas-serum E4.
                  
               
                  
                     3.
                  
                  
                     Kondizzjonijiet għall-użu tat-test Elisa għal-lewkożi enżootika bovina.
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 L-ELISA jistgħu jintużaw fil-kampjuni tas-serum u tal-ħalib.
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 Meta l-ELISA jiġu użati għall-fini ta’ ċertifikazzjoni skont l-Artikolu 6(2)(c) jew għall-istabbiliment jew iż-żamma tal-istatus tal-merħla skont l-Anness D(I), il-ġabra tal-kampjuni tas-serum għandu jsir b’mod illi r-riżultati tat-test ikunu jistgħu jiġu relatati bla ebda dubju ta’ xejn mal-annimali individwali inklużi fit-taħlita. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq il-kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.
                              
                           
                                 (c)
                              
                              
                                 Meta l-ELISA jintużaw fuq kampjun ta’ ħalib miġbur mill-ħalib bulk (jiġifieri li mhux fil-ġarar) dan il-kampjun għandu jittieħed mill-ħalib miġbur minn merħla li għallinqas ikun hemm 30 % minn merħla tal-baqar qegħdin jeħilbu. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq il-kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.”