CELEX: 31972R0618
Language: nl
Date: 1972-03-29
Title: Verordening (EEG) nr. 618/72 van de Commissie van 29 maart 1972 betreffende de kenmerken van olijfolie en van sommige produkten welke olijfolie bevatten

31 . 3 . 72                              Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                          Nr. L 78 /5
                                  VERORDENING (EEG) Nr. 618/72 VAN DE COMMISSIE
                                                        van 29 maart 1972
                 betreffende de kenmerken van olijfolie en van sommige produkten welke olijfolie bevatte^
DE COMMISSIE VAN DE EUROPESE                                       Overwegende dat de in deze verordening vervatte
GEMEENSCHAPPEN ,                                                   maatregelen in overeenstemming zijn met het advies
                                                                   van het Comité van beheer voor oliën en vetten,
Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese
Economische Gemeenschap,
Gelet op Verordening nr. 136/66/EEG van de Raad
                                                                   HEEFT DE VOLGENDE VERORDENING
van 22 september 1966 houdende een gemeenschappe­
                                                                   VASTGESTELD :
lijke ordening der markten in de sector oliën en
vetten (1), laatstelijk gewijzigd bij Verordening (EEG)
nr. 2727/71 (2), en met name op artikel 18, lid 3 ,
                                                                                              Artikel 1
Gelet op Verordening (EEG) nr. 443/72 van de Raad
van 29 februari 1972 betreffende de heffingen op                   1 . Als olijfolie in de zin van onderverdeling A van
olijfolie welke aan een raffinageproces onderworpen                post 15.07 A van het gemeenschappelijk douanetarief
is geweest, alsmede op sommige produkten welke                     wordt enkel aangemerkt de olie uitsluitend afkomstig
olijfolie bevatten (3), en met name op artikel 8 ,                 van de behandeling van olijven, met uitzondering
                                                                   van opnieuw veresterde olijfolie en van alle mengsels
Gelet op Verordening nr. 162/66/EEG van de Raad                    van olijfolie met olie van een andere soort.
van 27 oktober 1966 betreffende het handelsverkeer
in oliën en vetten tussen de Gemeenschap en Grieken­
land (4), en met name op artikel 4, lid 2 , artikel 5,             2. Tot de onderverdelingen A I a) en A I b) van
lid 3 , en artikel 9,                                              post 15.07 van het gemeenschappelijk douanetarief
                                                                   behoren de oliën die de kenmerken vertonen als
                                                                   omschreven in bijlage I.
Overwegende dat de restituties bij uitvoer van olijfolie
naar gelang van de soorten olie op verschillende
niveaus kunnen worden vastgesteld ; dat deze oliën                 3 . Tot de onderverdeling A van post 15.17 van het
daartoe dienen te worden onderscheiden volgens hun                 gemeenschappelijk douanetarief behoren de produk­
scheikundige kenmerken ;                                           ten van post 15.17, andere dan die omschreven in
                                                                   bijlage II .
Overwegende dat in Verordening (EEG) nr. 443/72
verschillende heffingen zijn vastgesteld voor olijfolie
die is verkregen door raffinage van olijfolie verkregen            4. Voor de toekenning van de uitvoerrestitutie
bij de eerste persing en voor olie uit perskoeken en               behoren tot de onderverdelingen A II (a) en A II (b)
andere afvallen van olijven welke aan een raffinage­               van post 15.07 bedoeld in artikel 2 van Verordening
proces onderworpen is geweest ; dat deze oliën moeten              (EEG) nr. 616/72 (5), de oliën die de in bijlage I
worden onderscheiden volgens hun scheikundige                      genoemde kenmerken vertonen.
kenmerken ;
Overwegende dat de douanenomenclatuur zoals                                                    Artikel 2
voortvloeiende uit de toepassing van deze verordening
voorkomt in het gemeenschappelijk douanetarief ;                   In het gemeenschappelijk douanetarief wordt de
                                                                   aanvullende aantekening bij hoofdstuk 15 vervangen
                                                                   door de tekst die voorkomt in bijlage III.
(!)  PB   nr. 172 van 30 . 9 . 1966 , blz . 3025 /66.
( 2) PB   nr. L 282 van 23 . 12 . 1971 , blz . 8 .
(3)  PB   nr. L 54 van 3 . 3 . 1972 , blz . 3 .
( 4) PB   nr. 197 van 29 . 10 . 1966 , blz . 3393 /66 .             ( 5) Zie blz . 1 van dit Publikatieblad.
 ---pagebreak--- Nr, L 78 /6                    Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                 31.3.72
                     Artikel 3                           7 november 1966 met betrekking tot de onderscheiding
                                                         van verschillende soorten olijfolie welke aan een
Deze verordening treedt in werking op 1 april 1972.       raffinageproces onderworpen zijn geweest (x) wordt
Verordening nr. 177/66/EEG van de Commissie van          ingetrokken.
            Deze verordening is verbindend in al haar onderdelen en is rechtstreeks toepasselijk in
            elke Lid-Staat.
            Gedaan te Brussel, 29 maart 1972 .
                                                                              Voor de Commissie
                                                                                   De Voorzitter
                                                                               S. L. MANSHOLT
                                                           i1) PB nr. 203 van 8 . 11 . 1966 , blz. 3491 /66.
 ---pagebreak--- 31.3.72                          Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                    Nr. L 78 /7
                                                         BIJLAGE I
                   Kenmerken van olijfolie, behorende tot onderverdelingen A I a), AI b), A II (a)
                                                en A II (b ) van post 15.07
         1 . Tot onderverdeling A I a ) van post 15.07 behoort olijfolie met de volgende kenmerken :
              a) een gehalte aan vrije vetzuren, berekend als oliezuur, van ten hoogste 3 % ;
              b) een   specifieke extinctiecoëfficiënt K270 (de extinctie van een oplossing van 1 gram olie in
                  100  ml iso-octaan (2,2,4-trimethylpentaan) door een laag van 1 cm bij een golflengte van
                  270  nm) hoger dan 0,25 en niet hoger dan 1,10 en, na behandeling van het monster over
                  een  kolom van geactiveerd aluminiumoxyde, hoger dan 0,11 ;
              c) een variatie van de specifieke extinctiecoëfficiënt in de nabijheid van 270 nm, hoger dan
                 0,01 , en niet hoger dan 0,16.
         ^       Deze variatie wordt gedefinieerd door de formule :
                                        A K — Km — 0,5 ( Km — 4 + Km H- 4)
                 waarin
                                        Km    de specifieke extinctiecoëfficiënt bij de golflengte van het
                                              maximum van de absorptiecurve in de nabijheid van 270 nm
                                              is en
                            Km — 4 en K m + 4 de specifieke extinctiecoëfficiënten bij de golflengten van respec­
                                              tievelijk 4 nm korter en 4 nm langer dan die van Km zijn ;
             d) afwezigheid van een positieve reactie op residu-olie.
        2 . Tot onderverdeling A I b ) van post 15.07 behoort olijfolie die :
             a) hetzij de kenmerken heeft als bedoeld onder punt 1 , sub a) tot en met c), en een positieve
                 reactie vertoont op residu-olie ;
             b) hetzij de kenmerken heeft als bedoeld onder punt 1 , sub a), en een specifieke extinctie­
                 coëfficiënt K270 die hoger is dan 1,10 maar niet hoger dan 2,00, alsmede een variatie van
                 de specifieke extinctiecoëfficiënt in de nabijheid van 270 nm niet groter dan 0,20.
        3 . Tot onderverdeling A II ( a ) van post 15.07 behoort olijfolie met de volgende kenmerken :
             a) een specifieke extinctiecoëfficiënt K270, na behandeling van het monster over een kolom
                 van geactiveerd aluminiumoxyde , niet hoger dan 0,11 .
                 Bij uitzondering kunnen sommige oliën met hoge zuurgraad na behandeling over een
                 kolom van geactiveerd aluminiumoxyde een specifieke extinctiecoëfficiënt hebben die hoger
                 is dan 0,11 . In dat geval moeten zij na neutralisering en ontkleuring in het laboratorium
                 de in punt 1 genoemde kenmerken vertonen ;
             b) een variatie van de specifieke extinctiecoëfficiënt in de nabijheid van 270 nm niet hoger
                 dan 0,01 ;
             c) afwezigheid van een positieve reactie op residu-olie,
        4. Tot onderverdeling A II ( b) van post 15.07 behoort olijfolie met de volgende kenmerken :
             a ) een gehalte aan vrije vetzuren , berekend als oliezuur, hoger dan 3 % en
             b) een positieve reactie op residu-olie, of wel, na neutralisering en ontkleuring in het labora­
                 torium , de in punt: 2, sub b ), genoemde kenmerken .
                                                  ANALYSEMETHODE
        I.   BEHANDELING VAN HET MONSTER OVER EEN KOLOM VAN GEACTIVEERD
             ALUMINIUMOXYDE
             1 . 30 g basisch aluminiumoxyde, verkregen volgens de in paragraaf 2 beschreven wijze, in
                 een chromatografiekolom brengen van ongeveer 35 mm doorsnede en 450 mm lengte en
                 die voorzien is van een afvoerbuis met een doorsnede van ongeveer 10 mm .
 ---pagebreak--- Nr. L 78/8                          Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                  31.3.72
                    Het aluminiumoxyde-samendrukken door de kolom in vertikale stand herhaaldelijk en
                    zachtjes te laten vallen op een houten oppervlak. In de aldus voorbereide kolom 100 ml
                    van een oplossing van 10 % olie in hexaan gieten. Het eluaat opvangen en het oplosmiddel
                    onder vacuüm verdampen bij een temperatuur beneden 25 °C. Van de aldus verkregen olie
                    moet de specifieke extinctiecoëfficiënt bij 270 nm onmiddellijk bepaald worden.
                2 . Men verkriigt basisch aluminiumoxyde met een werkzaamheid van Brockmann I (0 %
                    water) wanneer men basisch aluminiumoxyde (voor de chromatografie) met korrelgrootte
                    tussen 30 (jim en 130 µm (gemiddeld 80 [i.m) gedurende 3 uur op 380-400 °C verhit .
                    Ten einde basisch aluminiumoxyde met een werkzaamheid van Brockmann tussen II tot
                    III te verkrijgen, voegt men aan 100 g hiervan 5 ml gedestilleerd water toe. Herhaaldelijk
                    schudden en gedurende een nacht in een hermetisch gesloten vat laten staan.
                    Controle van de werkzaamheid van aluminiumoxyde :
                    30 g basisch aluminiumoxyde (verkregen op de hierboven beschreven wijze) in een chroma­
                    tografiekolom brengen van ongeveer 35 mm doorsnede en 450 mm lengte ; onder de in de
                    methode genoemde voorwaarden hierdoor een mengsel laten lopen, bestaande uit 95 %
                    olijfolie verkregen bij de eerste persing met een specifieke extinctiecoëfficiënt K27o lager
                    dan 0,18 en 5% aardnotenolie, die tijdens de raffinage is behandeld met bleekaarde, met
                    een specifieke extinctiecoëfficiënt K270 van ten minste 4. Bij een specifieke extinctiecoëffi­
                    ciënt van het mengsel van hoger dan 0,11 is het aluminiumoxyde bruikbaar. Indien over
                    dit aluminiumoxyde geen elutie van geconjugeerde trienen heeft plaatsgevonden, moet een
                    meer gehydrateerd aluminiumoxyde gebruikt worden, maar dan moet eerst worden nage­
                    gaan of dit aan de eisen van de vorige proef voldoet.
           II . REACTIE OP RESIDU-OLIE
                1 . Apparatuur :
                    — kolf van 100 ml, voorzien van terugvloeikoeler ;
                    — pipet van 5 ml met schaalverdeling in tienden ;
                    — verwarmingstoestel waarmede de kolf op een temperatuur van ongeveer 80 °C kan
                         worden gebracht ;
                    — thermometer van 15 tot 60 °C .
                2. Reagentia :
                    — oplossing van kaliumhydroxyde in water en alcohol (42,5 g KOH opgelost in 72 ml
                         gedestilleerd water, vervolgens aangevuld tot 500 ml met ethylalcohol van 95 % ) ;
                    — ethylalcohol 70 % ;
                    — oplossing van 1 volumedeel azijnzuur in 2 volumedelen water en wel zo dat 1,5 ml pre­
                         cies 5 ml van de oplossing van kaliumhydroxyde in water en alcohol in aanwezigheid
                         van fenolftaleïen neutraliseren .
                3 . Voorbereiding van het monster :
                     Het water wordt uit de olie verwijderd door afschenken en filtreren over fïltreerpapier
                     bij een temperatuur die iets hoger ligt dan het smeltpunt van sommige vastgeworden be­
                     standdelen die zich eventueel uit de vloeibare olie hebben afgescheiden .
                4 . Werkwijze :
                     In de kolf ongeveer 1 ml olie brengen die is behandeld als aangegeven in punt 3 , en 5 ml
                     van de oplossing van kaliumhydroxyde in water en alcohol toevoegen. De terugvloeikoeler
                     aanbrengen en gedurende 10 minuten laten koken en bij tussenpozen schudden . Laten af­
                     koelen tot kamertemperatuur. Toevoegen 1,5 ml van de oplossing van azijnzuur in water,
                     alsmede 50 ml van de oplossing van ethylalcohol die vooraf is verwarmd tot 50 °C . Mengen
                     door roeren, de thermometer inbrengen en laten afkoelen ; het uiterlijk van de oplossing
                     waarnemen zodra deze een temperatuur van 45 °C bereikt. Indien zich een vlokkig neerslag
                     vormt bij een temperatuur boven 40 °C, is de reactie positief.
                     Bij afwezigheid van een duidelijk merkbaar vlokkig neerslag, de vloeistof gedurende ten
                     minste 24 uur en zo nodig gedurende 48 uur op kamertemperatuur houden, die moet lig­
                     gen tussen 20 en 22 °C. De oplossing nogmaals controleren : de vorming van een vlokkig
                     neerslag dat in de vloeistof zweeft toont eveneens aan dat de reactie positief is.
 ---pagebreak--- 31.3.72                         Publikatieblad van dc Europese Gemeenschappen                               Nr. L 78/9
        III. NEUTRALISERING EN ONTKLEURING VAN OLIJFOLIE IN HET LABORATORIUM
             A. Neutralisering van de olijfolie
                1 . Apparatuur
                    —  hoog bekerglas van 300 ml ;
                    —  laboratoriumcentrifuge met buisjes van 100 ml ;
                    —  bekerglas van 250 ml ;
                    —  kolven van 100 ml ;
                    — scheitrechter van 1 liter .
                2   Reagentia
                    —  oplossing van 12% natriumhydroxyde in water ;
                    —  oplossing van 1 % fenolftaleïen in ethanol ;
                    —  hexaan, p. a.
                    —  isopropvlalcohol, p. a .
                3 . Werkwijze
                    a) Oliën met een gehalte aan vrije vetzuren beneden 30 % , berekend als oliezuur.
                       In een hoog bekerglas van 300 ml, 50 g ruwe olie brengen en in een waterbad ver­
                       warmen tot 65 °C. Onder langzaam roeren een zodanige hoeveelheid natrium­
                       hydroxydeoplossing ( 12% ) toevoegen als overeenkomt met het gehalte aan vrije
                       vetzuren van de olie, met een overmaat van 5 % . Blijven roeren gedurende 5 minu­
                       ten en de temperatuur op 65 °C houden.
                       Alles overbrengen in centrifuge buisjes van 100 ml en de zeeppasta afcentrifugeren.
                       De geklaarde olie afgieten in een bekerglas van 250 ml en wassen met 50—60 ml
                       kokend gedestilleerd water, en de waterlaag verwijderen met behulp van een hevel .
                       Het wassen herhalen tot alle overblijvende sporen van zeep zijn verdwenen (tot de
                       fenolftaleïen niet meer rose kleurt). De olie afcentrifugeren om de kleine resten
                       water om verwijderen .
                    b) Oliën met een gehalte aan vrije vetzuren boven 30% , berekend als oliezuur
                       In een scheitrechter van 1 liter 50 g ruwe olie brengen, 200 ml hexaan, 100 ml
                       isopropvlalcohol en een zodanige hoeveelheid natriumhydroxydeoplossing ( 12% )
                       als overeenkomt met het gehalte aan vrije vetzuren van de olie, met een overmaat
                       van 0,3 % . Flink roeren gedurende een minuut, 100 ml gedestilleerd water toevoegen,
                       nogmaals roeren en laten staan . Na scheiding van de lagen de zeephoudende onder­
                       laag laten wegvloeien. Tussen de twee lagen (olie boven en waterige laag onder)
                       ontstaat vaak een tussenlaag, bestaande uit slijmige en niet oplosbare stoffen, die
                       eveneens moet worden verwijderd. Vervolgens de hexaanoplossing van neutrale
                       olie wassen met porties van 50—60 ml van een oplossing van een volumedeel iso­
                       propylalcohol in een volumedeel gedestilleerd water tot de fenolftaleïen geen rose
                       kleuring meer geeft.
                       Vervolgens het hexaan volledig verwijderen door destillatie onder vacuüm (b.v.
                       door middel van een roterende verdamper).
             B. Ontkleuring van de geneutraliseerde olie
                1 . Apparatuur
                    — kolf van 250 ml met drie ingeslepen halzen voor het inbrengen van :
                       a) een thermometer ingedeeld in °C en geschikt voor aflezingen tot 90 °C ;
                       b ) een mechanische roerder met een toerental van 250—300 omw/min en voorzien
                           van een inrichting voor bedrijf onder vacuüm ;
                       c) een aansluiting voor de vacuümpomp
                    — vacuümpomp, in staat een resterende druk te geven van 15—30 mbar, en voorzien
                       van   een  manometer .
                2. Werkwijze
                    In de driehalzige kolf ca. 100 g van de geneutraliseerde olijfolie afwegen. De thermo­
                    meter en de roerder aanbrengen ; aansluiten op de vacuümpomp en onder roeren ver­
 ---pagebreak--- Nr. L 78 / 10             Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                          31 . 3 . 72
              warmen tot 90 C , steeds onder roeren op deze temperatuur houden totdat de te ana­
              lyseren olie volledig watervrij is (ongeveer 30 minuten ).
              De vacuümpomp afzetten en 2 tot 3 g geactiveerde bleekaarde toevoegen. Het vacuüm
              opnieuw tot stand brengen tot een resterende druk van 15—30 mbar en steeds bij een
              temperatuur van 90 °C gedurende 30 minuten roeren bij 250 omw/min .
              Vervolgens warm filtreren in een oven met thermostaat (50—60 °C).
 ---pagebreak--- 31.3.72                          Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                             Nr.L 78/ 11
                                                      BIJLAGE II
                              Tot onderverdeling A van post 15.17 behorende produkten
         Tot onderverdeling A van post 15.17 behoren niet :
         a ) afvallen, afkomstig van de bewerking van vetstoffen, die olie bevatten waarvan het joodgetal,
              bepaald volgens Wijs zonder katalysator, kleiner is dan 70 of groter dan 100,
         b) afvallen, afkomstig van de bewerking van vetstoffen , die olie bevatten met een joodgetal
              tussen 70 en 100, maar waarbij het oppervlak van de piek die overeenkomt met het reten­
              tievolume van bêta-sitosterol, bepaald als aangegeven in het hierna volgende voorschrift,
              minder beslaat dan 93 % van het totale oppervlak van de sterolpieken .
                         ANALYSE VAN DE STEROLFR ACTIE VAN DE                 VETSTOFFEN
        Gaschromatografische analyse van de sterolen afgescheiden door middel van dunne-laagchro­
        matografie uit het onverzeepbaar dat voorzichtig in een waterbad werd gedroogd.
        Apparatuur :
        1 . Apparatuur voor de dunne-laagchromatografie, in het bijzonder omvattende vier glasplaten
             van 20 X 20 X 0,4 cm en twee van 20 X 5 X 0,4 cm en een microspuit van 0,1 ml ;
        2. bekerglas van 50 ml ;
        3 . fïlterkroezen poreusheid 3 , van 15 mm doorsnede ;
        4 . kolf van 100 ml ;
        5 . centrifugebuisje van 10 ml met conische bodem en ingeslepen stop ;
        6. pipetten van 1 ml met schaalverdeling ;
        7. gaschromatograaf voorzien van een vlamionisatiedetector, zilveren of glazen injectiesysteem
             of systeem voor directe injectie op de kolom, en een registreerapparaat ;
        8 . gaschromatografïsche kolom van glas of roestvrij staal, „U" of spiraalvormig met een lengte
             van 1 tot 2 m en een binnendiameter van 3 tot 4 mm — 2 tot 4 % stationaire fase van silicon­
             rubber (methyltype), stabiel tot ten minste 300 °C, op gecalcineerde met zuur gewassen en
             gesilaniseerde diatomeeënaarde met korrelgrootte 80/ 100 of 100/ 120 mesh ;
        9 . microspuit waarmede hoeveelheden tot 5 of 10 j.tl kunnen worden geïnjecteerd .
        Opmerking : Omdat sommige soorten roestvrijstaal foutieve resultaten kunnen veroorzaken door
                        ontleding van de sterolen , wordt glas aanbevolen .
        Reagentia :
        1 . chloroform voor de chromatografie ;
        2. benzeen voor de chromatografie ;
        3 , silicagel ( bijv. Kieselgel G ) ;
        4 . vergelijkingsoplossing voor de dunne-laagchromatografie, bestaande uit een oplossing van
             5 % cholesterol in chloroform ;
        5 . aceten voor de chromatografie ;
        6. een oplossing in absolute ethylalcohol van 0,1 % natriumzout van 2', 7'-dichloorfluoresceïne ;
        7. oplossing voor de gevoeligheidsproef : 1 mg cholesterol in 1 ml n-pentaan ;
        8 . oplossing voor de proef op de scheiding van de pieken :
             0,9 mg fytosterolen van raapolie en 0,1 mg cholesterol in 1 ml n-pentaan . De sterolen moeten
             vers bereid zijn, zoals omschreven onder „Werkwijze" sub A.
        9. oplossing voor de referentieproef : 1 mg fytosterolen van zonnebloemolie in 1 ml n-pentaan,
             vers bereid zoals omschreven onder „Werkwijze" sub A.
 ---pagebreak--- Nr. L 78/ 12                       Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                  31 . 3 . 72
             Bereiding van de platen voor dunne-laagchromatografïe :
             In het uitstrijkapparaat achtereenvolgens een plaat van 20 X 5 X 0,4 cm , vier platen van 20 X 20
              X 0,4 cm en een plaat van 20 X 5 X 0,4 cm aanbrengen .
             In een rondkolf van 500 ml met wijde hals 40 g silicagel en ongeveer 80 ml water brengen . Roeren
             met een glazen staaf , eventueel met een mechanische roerder, tot een homogene suspensie ver­
             kregen is.
             Eventuele gassen verwijderen door gedurende ten minste 1 minuut een vacuüm te trekken met
             behulp van een waterstraalluchtpomp. Daarna de suspensie in het uitstrijkapparaat brengen,
             de dikte instellen op 0,5 mm, en de platen gelijkmatig bedekken.
             De platen gedurende ongeveer 15 minuten in de lucht laten drogen en vervolgens 2 uur in een
             droogstoof bij een temperatuur van 105 °C. De aldus bereide platen in een exsillator onder vacuüm
             bewaren .
                                                        WERKWIJZE
             A. Scheiding van de sterolfractie met behulp van de dunne-laagchromatografie
                 In de ontwikkelbak een mengsel benzeen/aceton 95 : 5 (v/v) brengen tot een hoogte van
                 ongeveer 1 cm ; afdekken met de dekplaat en ten minste 3 uren laten staan om het vloeistof-
                 damp evenwicht zich te laten instellen. Het verdient ook aanbeveling aan de binnenkant
                 van de bak stroken filtreerpapier aan te brengen, die in de elutievloeistof hangen. Hierdoor
                 wordt de looptijd van het front van de vloeistof met ongeveer een derde verkort en verloopt
                 de elutie van de componenten gelijkmatiger.
                 Intussen een 5 % -oplossing van het met petroleumether geëxtraheerde onverzeepbaar in
                 chloroform bereiden. Ongeveer 0,3 ml van deze oplossing met behulp van de microspuit van
                 0,1 ml zodanig op de chromatografieplaat op ongeveer 1,5 cm van de onderrand in ononder­
                 broken en gelijkvormige banden opbrengen, ten einde een zo dun mogelijke startlijn te ver­
                 krijgen.
                 Volgens de gebruikelijke techniek aan een zijde van de plaat enkele fi.1 van de vergelijkings­
                 oplossing met cholesterol opbrengen ter identificering van de Rf waarde van de sterolfractie.
                 De plaat in de als hierboven aangegeven klaar gemaakte ontwikkelbak brengen. De tempera­
                 tuur van de omgeving moet ongeveer 20° C bedragen.
                 Met de dekplaat afdekken en ontwikkelen tot het front van de loopvloeistof zich op ongeveer
                 1 cm van de bovenrand van de plaat bevindt.
                 De plaat uit de ontwikkelbak nemen en de loopvloeistof in een warme luchtstroom laten
                 verdampen .
                 Ontwikkelen door de plaat vervolgens voorzichtig en gelijkmatig met de oplossing in alcohol
                 van het natriumzout van 2', 7' — dichloorfluoresceïne te besproeien . De plaat in ultraviolet
                 licht bekijken en de plaats van de sterolen bepalen aangegeven door de cholesterolvlek,
                 afkomstig van de vergelijkingsoplossing.
                 De sterolband met een metalen spatel afkrabben .
                 Het afgescheiden silicagel in een bekerglas van 50 ml met 15 ml warm chloroform brengen,
                 schudden en al het silicagel kwantitatief overbrengen in de filterkroes en filtreren. Vervolgens
                 het filter driemaal wassen met porties van telkens 15 ml warme chloroform, waarbij alle
                 fikraten in een kolf van 100 ml worden opgevangen .
                 De chloroformoplossing tot 4 a 5 ml indampen en overbrengen in het vooraf getareerde cen­
                 trifugebuisje met ingeslepen stop. Drogen door het oplosmiddel onder zachte verwarming in
                 een stikstofstroom af te dampen ; de aldus verkregen sterolfractie wegen en oplossen in chloro­
                 form .
             B. Gaschromatografische analyse van sterolen
                 1 . Gaschromatografische omstandigheden
                     Temperatuur van de kolom : 220 tot 250 °C .
                     Temperatuur van het injectiesysteem indien het afzonderlijk wordt verwarmd : 20 tot
                     40 °C boven de temperatuur van de kolom. Stikstofstroom : 30 tot 60 ml/min. De detector
                     uitschakelen en nieuwe kolommen onder deze omstandigheden conditioneren gedurende
 ---pagebreak--- 31.3.72                          Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                   Nr. L 78 / 13
                16 tot 24 uren . De detector aansluiten , de vlam aansteken en de waterstof-, zuurstof- of
               luchtstroom zodanig regelen dat een passende vlamhoogte en gevoeligheid verkregen
                worden. Het registreerapparaat inschakelen en het papier met een passende snelheid laten
               aflopen ; het nulpunt en de verzwakker instellen . Als de basislijn stabiel is , kan het appa­
               raat worden gebruikt .
           2 . Gevoeligbeidsproef
               3 tot 5 ixl van de gevoeligheidstest-oplossing (7) injecteren.
               In het chromatogram mag alleen een cholesterolpiek verschijnen. De verzwakker zodanig
               afstellen dat ongeveer de hele schaal van het registreerapparaat wordt gebruikt.
           3 . Proef op de scheiding van de pieken
               3 tot 5 pd van de oplossing voor de proef op de scheiding van de pieken ( 8 ) injecteren .
               De cholesterol-, brassicasterol-, campesterol - en [ü-sitosterolpieken moeten in het chroma­
               togram verschijnen . De retentieafstanden (afstand van het injecteerpunt tot het punt dat
                de maximale hoogte van de piek aangeeft) van de pieken meten, dcH voor cholesterol,
               dB voor brassicasterol, dc voor campesterol en ds voor (3-sitosterol . Voorts de breedten
               aan de basis van de pieken (afstand tussen de snijpunten met de basislijn van de raak­
               lijnen van de buigpunten op de voorste en achterste zijden van de piek ) meten , WCH voor
               cholesterol en WB voor brassicasterol .
               De scheiding van de pieken , volgens de formule :
                                             PR = 2 (dß — dcH ) / ( WB + WCH )
                moet ten minste gelijk zijn aan 1 .
                De relatieve retentietijden (cholesterol = 1,00) voor brassicasterol , campesterol- en
               3-sitosterol berekenen .
           4 . Referentieproef
               3 tot 5 (i.1 van de referentieoplossing (9) injecteren. De pieken van campesterol , ,3-stigmaste­
               rol, p-sitosterol en 7-stigmastenol moeten in het chromatogram verschijnen . De retentie­
               afstanden van de pieken meten, dc voor campesterol , dsT voor stigmasterol , ds voor
                3-sitosterol en dsT — 7 voor 7-stigmastenol.
                De relatieve retentietijden berekenen ; deze bedragen ongeveer :
                cholesterol                                                   1,00 (ongeveer 15 minuten)
                brassicasterol                                                1,13—1,15
                campesterol                                                   1,32—1,34
                stigmasterol                                                  1,44—1,46
               ,3-sitosterol                                                  1,66—1,68
                A 7-stigmastenol                                              1,88—1,92
           5 . Analyse
               3 tot 5 ul van de te onderzoeken oplossing injecteren en het chromatogram opnemen.
        C. Weergave van de resultaten
           Voor een interpretatie van de samenstelling van de onderzochte sterolfractie mogen geen pieken
           met een andere retentietijd dan de experimenteel bepaalde voor de zes hierboven genoemde
           sterolen in aanmerking genomen worden.
           Het gehalte in procenten 3-sitosterol wordt weergegeven door de volgende formule :
                                            piekoppervlak voor ß-sitosterol          X  100
                                         totaal oppervlak van de zes sterolpieken
 ---pagebreak--- Nr. L 78 / 14                        Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                                  31.3 . 72
                                                            BIJLAGE 111
                                             AANVULLENDE AANTEKENINGEN
              1 . Voor de toepassing van post 15.07 :
                  A. worden door persing verkregen vloeibare of vaste plantaardige oliën aangemerkt als
                     „ ruw", indien zij geen andere behandeling hebben ondergaan dan :
                     — het decanteren gedurende een voor de desbetreffende oliesoort gebruikelijke tijdsduur ;
                     — het centrifugeren of het filtreren, voor zover het scheiden van de olie en de oorspronke­
                         lijk daarin voorkomende vaste bestanddelen alleen is geschied met behulp van een
                         mechanische kracht , zoals met behulp van de zwaartekracht ( bezinken), met behulp
                         van de middelpuntvliedende kracht ( centrifugeren) of door middel van filterpersen of
                         andere persen, derhalve op andere wijze dan door absorptie of dan volgens een andere
                         natuurkundige of scheikundige werkwijze ;
                  B. worden door extractie verkregen vloeibare of vaste plantaardige oliën aangemerkt als
                     „ruw", indien zij niet door hun kleur, geur of smaak en evenmin door hun bij de voor de
                     desbetreffende oliesoorten gebruikelijke analyses blijkende eigenschappen verschillen
                     van door persing verkregen plantaardige oliën en vetten ;
                  C. worden eveneens aangemerkt als „ ruw"; ontslijmde sojaolie en van gossypol ontdane
                     katoenzaadolie .
              2. A. Als olijfolie in de zin van onderverdeling A van post 15.07 wordt enkel aangemerkt de
                     olie uitsluitend afkomstig van de behandeling van olijven, met uitzondering van opnieuw
                     veresterde olijfolie en van alle mengsels van olijfolie met olie van een andere soort.
                  B. Valt onder onderverdeling A I a) van post 15.07, olijfolie met de volgende kenmerken :
                     a) een gehalte van vrije vetzuren , berekend als oliezuur, van ten hoogste 3 % ;
                     b) een specifieke extinctiecoëfficiënt K270 (de extinctie van een oplossing van 1 gram olie
                         in 100 ml iso-octaan (2,2,4-trimethylpentaan) door een laag van 1 cm bij een golflengte
                         van 270 nm) hoger dan 0,25 en niet hoger dan 1,10 en, na behandeling van het monster
                         over een kolom van geactiveerd aluminiumoxyde, hoger dan 0,11 ;
                     c) een variatie van de specifieke extinctiecoëfficiënt in de nabijheid van 270 nm , hoger
                         dan 0,01 , en niet hoger dan 0,16 .
                         Deze variatie wordt uitgedrukt door de formule :
                                                 À K — Km — 0,5 ( Km — 4 ~b Km + 4)
                         waarin
                         Km                   de specifieke extinctiecoëfficiënt bij de golflengte van het maximum
                                              van de absorptiecurve in de nabijheid van 270 nm is en
                          Km — 4 en Km + 4 de specifieke extinctiecoëfficiënten bij de golflengten van respectie­
                                              velijk 4 nm korter en 4 nm langer dan die van Km zijn,
                     d) afwezigheid van een positieve reactie op residu-olie
                  C. Valt onder onderverdeling A I b) van post 15.07 olijfolie die :
                     a) hetzij de kenmerken heeft als bedoeld onder punt 2 B sub a) t/m c) en een positieve
                          reactie vertoont op residu-olie
                     b) hetzij de kenmerken heeft als bedoeld onder punt 2 B sub a), en een specifieke extinc­
                          tiecoëfficiënt K27o die hoger is dan 1,10 maar niet hoger dan 2,00 , alsmede een variatie
                          van de specifieke extinctiecoëfficiënt in de nabijheid van 270 nm niet groter dan 0,20 .
                  D. "Wordt aangemerkt als „olijfolie verkregen bij de eerste persing" natuurlijke olijfolie welke
                     niet op andere wijze is verkregen dan langs zuiver mechanische weg (persen daaronder
                     begrepen) met uitzondering van alle mengsels met olijfolie die op een andere wijze is
                     verkregen.
 ---pagebreak--- 31 . 3 . 72                        Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen                               Nr . L 78 / 15
            3 . Tot onderverdeling A van post 15.17 behoren niet :
                a) afvallen, afkomstig van de bewerking van vetstoffen, die olie bevatten waarvan het jood­
                    getal, bepaald volgens Wijs zonder katalysator, kleiner is dan 70 of groter dan 100,
                b) afvallen, afkomstig van de bewerking van vetstoffen, die olie bevatten met een joodgetal
                    tussen 70 en 100, maar waarbij het oppervlak van de piek die overeenkomt met het reten­
                    tievolume van bêta-sitosterol , bepaald als aangegeven in bijlage II van de hierna onder
                    Aanvullende Aantekening 4 genoemde verordening minder beslaat dan 93 % van de totale
                    oppervlakten van de sterolpieken .
            4. Voor de vaststelling van de kenmerken van bovengenoemde produkten worden de analy­
                semethoden gebruikt die zijn beschreven respectievelijk in de bijlagen I en II bij Verordening
                ( EEG) nr. 618 /72 .