CELEX: 31996L0045
Language: bg
Date: 1996-07-02 00:00:00
Title: Седма директива 96/45/ЕО на Комисията от 2 юли 1996 година относно методите за анализи, необходими за контрола върху състава на козметични продуктиТекст от значение за ЕИП.

Важна правна забележка

|

31996L0045

Официален вестник n° L 213 , 22/08/1996 стр. 0008 - 0015 специално чешко издание глава 13 том 017 стр. 142  - 149 специално испанско издание глава 13 том 017 стр. 142  - 149 специално унгарско издание глава 13 том 017 стр. 142  - 149 специално литвийско издание глава 13 том 017 стр. 142  - 149 LV.ES глава 13 том 017 стр. 142  - 149 MT.ES глава 13 том 017 стр. 142  - 149 PL.ES глава 13 том 017 стр. 142  - 149 SK.ES глава 13 том 017 стр. 142  - 149 специално словенско издание глава 13 том 017 стр. 142  - 149

		19960702Седма директива 96/45/ЕО на Комисиятаот 2 юли 1996 годинаотносно методите за анализи, необходими за контрола върху състава на козметични продукти(текст от значение за ЕИП)КОМИСИЯТА НА ЕВРОПЕЙСКИТЕ ОБЩНОСТИ,като взе предвид Договора за създаване на Европейската общност,като взе предвид Директива 76/768/ЕИО на Съвета от 27 юли 1976 г. за сближаване на законодателствата на държавите-членки в областта на козметичните продукти [1], последно изменена с Директива 95/34/ЕО на Комисията [2], и по-специално член 8, параграф 1 от нея,като има предвид, че Директива 76/768/ЕИО на Комисията предвижда официални проверки на козметичните продукти с цел да се установи спазването на условията, предвидени в разпоредбите на Общността относно състава на козметични продукти;като има предвид, че следва да се установят възможно най-бързо всички необходими методи за анализ; като има предвид, че някои методи вече са приети с Директива 80/1335/ЕИО на Комисията [3], изменена с Директиви 87/143/EИО [4], 82/434/EИО [5], изменена с Директива 90/207/EИО [6] и с Директиви на Комисията 83/514/EИО [7], 85/490/EИО [8], 93/73/EИО [9] и 95/32/EО [10];като има предвид, че идентификацията и дозировката в козметични продукти на 2-феноксиетанол, 1-феноксипропан-2-ол, метил-, етил-, пропил-, бутил- и бензил 4-хидроксибензоат представлява седма стъпка;като има предвид, че мерките, предвидени в настоящата директива, са в съответствие със становището на Комитета за адаптиране към техническия прогрес на Директива 76/768/ЕИО,ПРИЕ НАСТОЯЩАТА ДИРЕКТИВА:Член 1Държавите-членки приемат всички необходими мерки, за да гарантират, че по време на официалните проверки на козметични продукти, идентификацията и дозировката на 2-феноксиетанол, 1-феноксипропан-2-ол, метил-, етил-, пропил-, бутил- и бензил 4-хидроксибензоат се извършват съгласно описаните в приложението методи.Член 21. Държавите-членки въвеждат в сила необходимите законови, подзаконови и административни разпоредби, за да се съобразят с настоящата директива, най-късно до 30 септември 1997 г. Те незабавно уведомяват Комисията за това.2. Когато държавите-членки приемат тези разпоредби, в тях се съдържа позоваване на настоящата директива или те се придружават от такова позоваване по време на официалното им публикуване. Начинът на това позоваване се определя от държавите-членки.3. Държавите-членки съобщават на Комисията текстовете на основните разпоредби от националните си законодателства, които те приемат в областта, уредена с настоящата директива.Член 3Настоящата директива влиза в сила на двадесетия ден след публикуването ѝ в Официален вестник на Европейските общности.Член 4Адресати на настоящата директива са държавите-членки.Съставено в Брюксел на 2 юли 1996 година.За КомисиятаEmma BoninoЧлен на Комисията[1] ОВ L 262, 27.9.1976 г., стр. 169.[2] ОВ L 167, 18.7.1995 г., стр. 19.[3] ОВ L 383, 31.12.1980 г., стр. 27.[4] ОВ L 57, 27.2.1987 г., стр. 56.[5] ОВ L 185, 30.6.1982 г., стр. 1.[6] ОВ L 108, 28.4.1990 г., стр. 92.[7] ОВ L 291, 24.10.1983 г., стр. 9.[8] ОВ L 295, 7.11.1985 г., стр. 30.[9] ОВ L 231, 14.9.1993 г., стр. 34.[10] ОВ L 178, 28.7.1995 г., стр. 20.--------------------------------------------------19960702ПРИЛОЖЕНИЕИДЕНТИФИКАЦИЯ И ДОЗИРОВКА НА 2-ФЕНОКСИЕТАНОЛ, 1-ФЕНОКСИПРОПАН-2-ОЛ, МЕТИЛ, ЕТИЛ, ПРОПИЛ, БУТИЛ И БЕНЗИЛ 4-ХИДРОКСИБЕНЗОАТ В КОЗМЕТИЧНИТЕ ПРОДУКТИA. ИДЕНТИФИКАЦИЯ1. Предмет и приложно полеТози метод описва TCХ процедура, която, в комбинация с описания в точка Б метод на анализ, позволява идентификацията на 2-феноксиетанол, 1-феноксипропан-2-ол, метил 4-хидроксибензоат, етил 4-хидроксибензоат, пропил 4-хидроксибензоат, бутил 4-хидроксибензоат и бензил 4-хидроксибензоат в козметични продукти.2. Принцип.Консервантите се екстрахират с ацетон от подкислената козметична проба. След филтриране, ацетоновият разтвор се смесва с вода, а в алкална среда мастните киселини се утаяват под формата на калциеви соли. Алкалната смес ацетон/вода се екстрахира с диетилов етер, за да се отстранят липофилните вещества. След подкисляване, консервантите се екстрахират с диетилов етер. Една аликвотна част от екстракта на диетилов етер се поставя върху тънкослойна плака с покритие от силикагел. След проявяване на плаката, получената хроматограма се наблюдава под ултравиолетови светлина и се визуализира с помощта на реактив на Millon.3. Реактиви.3.1. Общи положения.Всички реактиви, които се използват, трябва да бъдат с аналитична чистота. Водата трябва да бъде дестилирана вода или вода най-малко със същата чистота.3.2. Ацетон3.3. Диетилов етер3.4. н-Пентан3.5. Метанол3.6. Оцетна киселина, на кристали3.7. Разтвор на солна киселина, c(HCl) = 4 mol/l3.8. Разтвор на калиев хидроокис, c(KOH) = 4 mol/l3.9. Калциев хлорид дихидрат (CaCl2·2H2O).3.10. Проявяващ реактив: реактив на MillonРеактивът на Millon (Живачен (II) нитрат) е готов разтвор, който се продава в търговската мрежа (Fluka 69820).3.11. 2-Феноксиетанол3.12. 1-Феноксипропан-2-ол3.13. Метил 4-хидроксибензоат (метилпарааминобензоена киселина)3.14. Етил 4-хидроксибензоат (етилпарааминобензоена киселина)3.15. н-Пропил 4-хидроксибензоат (пропилпарааминобензоена киселина)3.16. н-Бутил 4-хидроксибензоат (бутилпарааминобензоена киселина)3.17. Бензил 4-хидроксибензоат (бензилпарааминобензоена киселина)3.18. Еталонни разтвориПригответе 0,1 % (m/V) разтвори на всяка от еталонните субстанции 3.11, 3.12, 3.13, 3.14, 3.15, 3.16 и 3.17 в метанол.3.19. Проявяващ разтворителСмесват се 88 обема от н-пентан (3.4) с 12 обема оцетна киселина на кристали (3.6).4. Апаратура.Обичайно лабораторно оборудване, и:4.1. Водна баня с възможност за поддържане на температура 60 °C4.2. Резервоар за проявяване (но необлицован с филтърна хартия)4.3. Източник на ултравиолетова светлина, 254 nm4.4. Тънкослойни плаки, 20 cm × 20 cm, предварително покрити с 0,25 mm силикагел 60F254, със зона на концентрация (Merck № 11798, Darmstadt, или еквивалентен)4.5. Сушилня с възможност за поддържане на температура до 105 °C4.6. Сешоар за коса с горещ въздух4.7. Вълнен валяк за боядисване, дължина приблизително 10 cm, външен диаметър приблизително 3,5 cm. Дебелината на вълнения слой трябва да бъде от 2 до 3 mm. Вълната се подрязва, ако е необходимо.Вижте забележката в точка 5.24.8. 50 милилитрови стъклени епруветки с винтова капачка4.9. Електрическа нагревателна плоча, с термостатичен температурен контролер. Температурно регулиране: около 80 °C. Горещата плоча се покрива с алуминиева плоча 20 cm × 20 cm и дебелина около 6 mm, за да се получи равномерно разпределение на топлината.5. Процедура.5.1. Приготвяне на пробатаОколо 1 g проба се поставя в 50 милилитрова стъклена епруветка с винтова капачка (4.8). Прибавят се 4 капки разтвор на солна киселина (3.7) и 40 мл ацетон.За изцяло основни козметични продукти, като например тоалетен сапун, трябва да се добавят 20 капки разтвор от солна киселина. Затворете тубата, внимателно подгрейте на температура около 60 °C, за да се улесни екстракцията на консерванта в ацетоновата фаза и се разклаща енергично в продължение на 1 минута.Измерва се pH на разтвора с pH-индикаторна хартия и pH на разтвора се регулира на стойност ≤ 3 при разтвор на солна киселина. Отново се разклаща енергично в продължение на 1 минута.Разтворът се оставя да изстине до стайна температура и се филтрира през филтърна хартия в конична колба. 20 ml от филтрата се прехвърлят в 200 милилитрова конична колба, прибавят се 60 ml вода и се смесват. pH на сместа се регулира приблизително до 10 с калиев хидроокис (3.8), като се използва pH-индикаторна хартия.Прибавя се 1 g калциев хлорид дихидрат (3.9) и се разклаща енергично. Разтворът се филтрира през филтърна хартия в 250 милилитрова сепарираща фуния, съдържаща 75 ml диетилов етер и се разклаща енергично в продължение на 1 минута. Изчаква се фазите да се разделят и водният слой се събира в 200 милилитрова конична колба. pH на разтвора се регулира приблизително до 2 с разтвор на солна киселина, като се използва pH-индикаторна хартия. След това се прибавят 10 ml диетилов етер и се разклаща енергично в продължение на 1 минута. Изчаква се фазите да се разделят и приблизително 2 ml от слоя диетилов етер се прехвърлят в 5 милилитрово шишенце за проба.5.2. Тънкослойна хроматография (TСХ)TCХ плаката (4.4) се поставя върху подгрятата алуминиева плоча (точка 4.9). Нанасят се по 10 μl от стандартните разтвори (точка 3.18) и по 100 μl от разтвора(ите) на пробата (точка 5.1) върху стартовата линия на концентрационната зона на TCХ плаката.При необходимост, може да се използва въздушна струя, за да се улесни изпаряването на разтворителя. TCХ плаката се отделя от подгряващата плоча и се оставя да се охлади до стайна температура. 100 ml от проявяващия разтворител (точка 3.19) се прехвърлят в проявяващия резервоар (точка 4.2).TCХ плаката се поставя веднага в ненаситената камера и се проявява при стайна температура докато фронта на разтворителя достигне до 15 cm от стартовата линия. Плаката се изважда от проявяващата вана и се суши чрез струя горещ въздух или с помощта на сешоар за коса с горещ въздух.Плаката се наблюдава под ултравиолетова светлина (точка 4.3) и местата на петната се отбелязват. Плаката се нагрява за 30 минути в сушилнята (точка 4.5) при 100 °C, за да отстрани излишната оцетна киселина. Консервантите се проявяват върху хроматограмата с реактива на Millon (точка 3.10), като се потапя валяка за боя (точка 4.7) в реактива и след това се търкаля върху TCХ-плаката докато тя се навлажни равномерно.Забележка: Петната могат да се проявят и като внимателно се капне капка от реактива на Millon върху всяко от петната, отбелязани под ултравиолетова светлина.Естерите на 4-хидроксибензоената киселина се появяват като червени петна, а на 2-феноксиетанол и 1-феноксипропан-2-ол като жълти петна. Самата 4-хидроксибензоена киселина, която може да се открие в пробите като консервант или като продукт от разпадането на парааминобензоените киселини, също ще се появи като червено петно. Виж точки 7.3 и 7.4.6. Идентификация.Изчислява се стойността Rf за всяко петно. Сравняват се петната, получени от пробния разтвор с тези от стандартните разтвори по отношение на техните Rf-стойности, тяхното поведение под въздействието на ултравиолетовите лъчи и цвета им след проявяване. Оттам се правят предварителни заключения идентичността на консервантите.При наличието на парааминобензоени киселини, трябва да се проведе процедурата на високоефективна течна хроматография (ВЕТХ), описана в точка Б. Комбинират се резултатите тънкослойната хроматография и от ВЕТХ за потвърждаване на присъствието на 2-феноксиетанол, 1-фенооксипропан-2-ол и парааминобензоените киселини.7. Забележки.7.1. Поради токсичността на реактива на Millon, този реактив се прилага чрез една от описаните процедури. Пръскането не се препоръчва.7.2. Други съединения, съдържащи хидроксилни групи, може също да се оцветят с реактива на Millon. Таблица с цветовете и Rf-стойностите, получени за различни консерванти с помощта на TCХ-процедурата е публикувана в: N. de Kruijf, M. A. H. Rijk, L. A. Pranato-Soetardhi и A. Schouten (1987): Determination of preservatives in cosmetic products I: Thin-layer chromatographic procedure for the identification of preservatives in cosmetic products (J. Chomatography 410, 395-411). (Определяне на консерванти в козметични продукти I: Тънкослойна хроматографска процедура за идентификация на консерванти в козметични продукти).7.3. Rf-стойностите, дадени в таблицата по-долу са индикация за стойностите, които могат да се получат:Съединение | hRf | Цвят |4-хидроксибензоена киселина | 11 | червен |метилпарааминобензоена киселина | 12 | червен |етилпарааминобензоена киселина | 17 | червен |пропилпарааминобензоена киселина | 21 | червен |бутилпарааминобензоена киселина | 26 | червен |бензилпарааминобензоена киселина | 16 | червен |2-Феноксиетанол | 29 | жълт |1-Феноксипропан-2-ол | 50 | жълт |7.4. За 4-хидроксибензоената киселина и за метилпарааминобензоената киселина или за бензилпарааминобензоената киселина и етилпарааминобензоената киселина не се получава никакво разделяне. Идентификацията на тези съединения може да бъде потвърдена чрез използването на ВЕТХ-метода, описан в точка Б и сравняване на получените от проби времена на задържане с тези от стандартни разтвори.Б. ОПРЕДЕЛЯНЕ1. Предмет и приложно полеТози метод описва дозировката на 2-феноксиетанол, 1-феноксипропан-2-ол, метил 4-хидроксибензоат, етил 4-хидроксибензоат, пропил 4-хидроксибензоат, бутил 4-хидроксибензоат и бензил 4-хидроксибензоат в козметични продукти.2. ДефиницияКоличествата консерванти, определени чрез настоящия метод, са изразяват като процент от масата.3. ПринципПробата се подкислява чрез добавяне на сярна киселина и след това се суспендира в смес от етанол и вода. След леко загряване на сместа за втечняване на липидната фаза, за да се улесни количествената екстракция, сместа се филтрира.Консервантите във филтрата се определят чрез обратнофазова ВЕТХ с помощта на изопропил 4-4-хидроксибензоат като вътрешен стандарт.4. Реактиви4.1. Общи положенияВсички реактиви трябва да имат аналитична чистота и да са подходящи за ВЕТХ по целесъобразност. Водата трябва да бъде дестилирана вода или вода най-малко със същата чистота.4.2. Етанол, абсолютен4.3. 2-Феноксиетанол4.4. 1-Феноксипропан-2-ол4.5. Метил 4-хидроксибензоат (метилпарааминобензоена киселина)4.6. Етил 4-хидроксибензоат (етилпарааминобензоена киселина4.7. н-Пропил 4-хидроксибензоат (пропилпарааминобензоена киселина)4.8. Изопропил 4-хидроксибензоат (изопропилпарааминобензоена киселина)4.9. н-Бутил 4-хидроксибензоат (бутилпарааминобензоена киселина4.10. Бензил 4-хидроксибензоат (бензилпарааминобензоена киселина)4.11. Тетрахидрофуран4.12. Метанол4.13. Ацетонитрил4.14. Разтвор на сярна киселина c(H2SO4) = 2 mol/l4.15. Смес етанол/водаСмесват се 9 обема етанол (точка 4.2) и 1 обем вода.4.16. Разтвор на вътрешен стандартПретеглят се с точност около 0,25 g. изопропилпарааминобензоена киселина (точка 4.8), прехвърлят се в 500 милилитрова конична колба, разтваря се и се долива със смес етанол/вода (точка 4.15).4.17. Подвижна фаза: смес тетрахидрофуран/вода/метанол/ацетонитрил.Смесват се 5 обема тетрахидрофуран, 60 обема вода, 10 обема метанол и 25 обема ацетонитрил.4.18. Стабилизиращ разтворВнимателно се претеглят около 0,2 g 2-Феноксиетанол, 0,2 г 1-Феноксипропан-2-ол, 0,05 g. метилпарааминобензоена киселина, 0,05 g. етилпарааминобензоена киселина, 0,05 g. пропилпарааминобензоена киселина, 0,05 g. бутилпарааминобензоена киселина и 0,025 g бензилпарааминобензоена киселина в 100 милилитрова пикнометър, разтворете и допълнете обема със смес етанол/вода.Разтворите остават стабилни до една седмица при съхраняване в хладилник.4.19. Стандартни разтвори на консервантитеОт изходния разтвор (точка 4.18) се прехвърлят съответно 20,00 ml, 10,00 ml, 5,00 ml, 2,00 ml и 1,00 ml в 50 милилитрови пикнометри. Във всеки пикнометър се прибавят по 10,00 ml разтвор на вътрешния стандарт (точкa 4.16) и 1,0 ml разтвор на сярна киселина (точка 4.14) и се долива до марката със смес етанол/вода. Тези разтвори трябва да бъдат непосредствено преди употреба.5. АпаратураСтандартно лабораторно оборудване, и:5.1. Водна баня с възможност за поддържане на температура 60 °C ± 1 °C.5.2. Хроматограф за високоефективна течна хроматография с УВ детектор, дължина на вълната 280 nm.5.3. Аналитична колона:Неръждаема стомана, 25 cm × 4,6 mm вътрешен диаметър (или 12,5 cm × 4,6 mm вътрешен диаметър) облицована с Nucleosil 5C18 или еквивалент (виж точка 10.1)5.4. 100 милилитрови стъклени епруветки с винтова капачка5.5. Стружки карборунд, размер 2 до 4 mm, или еквивалент6. Процедура6.1. Приготвяне на пробата6.1.1. Приготвяне на пробата без добавяне на вътрешен стандартПретегля се с точност около 1 g от пробата в 100 милилитрова стъклена епруветка с винтова капачка. В епруветката се вкарва с пипета 1,0 ml разтвор на сярна киселина (точка 4.14) и 50,0 ml смес етанол/вода (точка 4.15). Прибавя около 1 g стружки карборунд (точка 5.5), епруветката се затваря и се разклаща енергично до получаване на хомогенна суспензия. Разклаща се най-малко една минута. Епруветката се поставя за 5 минути във водна баня (точка 5.1) при 60 °C ± 1 °C, за да се улесни екстракцията на консервантите в етаноловата фаза.Епруветката се охлажда незабавно под струя студена вода и екстракта се поставя в хладилник за един час. Екстрактът се филтрира с филтърна хартия. Около 2 ml от филтрата се прехвърлят в 5 милилитрова стъкленица за проба. Екстрактите се съхраняват в хладилник и ВЕТХ определянето трябва да се извърши до 24 часа.6.1.2. Приготвяне на пробата с добавяне на вътрешен стандарт.В 100 милилитрова стъклена епруветка с винтова капачка се претегля с точност до третия знак след десетичната запетая 1,0 g ± 0,1 g от пробата.С пипета се добавят в епруветката 1,0 ml разтвор на сярна киселина и 40,0 ml смес етанол/вода. Прибавете приблизително 1 g стружки карборунд (точка 5.5) и точно 10,00 ml вътрешен стандартен разтвор. Затворете епруветката и разклатете енергично докато се получи хомогенна суспензия. Разклащайте поне една минута. Епруветката се поставя за 5 минути във водната баня при 60 °C ± 1 °C за улесняване на екстракцията на консервантите в етаноловата фаза.Веднага след това епруветката се охлажда под струя студена вода и екстрактът се поставя в хладилник за един час. Екстрактът се филтрира с помощта на филтърна хартия.Около 2 ml от филтрата се прехвърлят в 5 милилитрова стъкленица за проба (тестов разтвор). Екстрактите се съхраняват в хладилник за един час и се провежда ВЕТХ определяне в рамките на 24 часа.6.2. Високоефективна течна хроматография (ВЕТХ).6.2.1. Хроматографски условия.- подвижна фаза: смес тетрахидрофуран/вода/метанол/ацетонитрил (точка 4.17)- дебит: 1,5 ml/минута- дължина на вълната за откриване: 280 nm6.2.2. Калибриране.Впръскват се по 10 μl от всеки от стандартните разтвори на консерванта (точка 4.19). От така получените хроматограми, се определят съотношенията между височините на пиковете на стандартните разтвори на консерванта и височините на пиковете на разтвора на вътрешен стандарт. За всеки консервант се начертава крива, която да свързва тези съотношения спрямо концентрациите на стандартните разтвори.6.2.3. Дозировка.В хроматографа се впръскват 10 μl от пробния разтвор без вътрешен стандарт (точка 6.1.1) и хроматограмата се записва.Впръскват се 10 μlот стандартния разтвор на консерванта (точка 4.19) и хроматограмата се записва. Получените хроматограми се сравняват.Ако в хроматограмата на екстракта проба (точка 6.1.1) няма нито един пик при същото време на задържане, както изопропилпарааминобензоената киселина (препоръчван вътрешен стандарт), се продължава с впръскване на 10 μl разтвор проба с вътрешен стандарт (точка 6.1.2). Хроматограмата се записва и се измерва височината на пиковете.Ако в хроматограмата на екстракта проба се наблюдава пик с приблизително същото време на задържане както изопропилпарааминобензоената киселина, трябва да се избере друг вътрешен стандарт.Ако един от изследваните консерванти не присъства в хроматограмата на пробата, този консервант може да се използва като алтернативен вътрешен стандарт.Изчисляват се съотношенията на височината на пика на изследваните консерванти спрямо височините на пика на вътрешния стандарт.Уверете се, че за стандартните разтвори, използвани при калибрирането, се е получила линейна зависимост.Уверете се дали получените хроматограми за стандартен разтвор и разтвора на пробата отговарят на следните изисквания:- Разделянето на пиковете на най-лошата разделена двойка трябва да бъде най-малко 0,90. (за дефиниция на пиково разделяне виж фигура 1).+++++ TIFF +++++Фигура 1: Разделяне на пиковетеразделяне на пиковете (p)fp = f/ggАко изискваното разделяне не е постигнато, необходимо е или да се използва по-ефективна колона, или да се нагласи състава на подвижната фаза, докато се постигнат изискванията.- коефициентът на асиметрия As от всички получени пикове ще е в границите от 0,9 до 1,5. (За определение на коефициента на асиметрия на пиковете, виж фигура 2). За да запишете хроматограмата за определяне на коефициента на асиметрия, се препоръчва скорост на графиката най-малко 2 cm/минута.+++++ TIFF +++++Фигура 2: Коефициент на асиметрия на пиковетеКоефициентът на асиметрия нa пнкoвете (As)hAs = b/aabh/10- Трябва да се получи стабилна стартова линия.7. Изчисление.Използва се калибровъчната крива (точка 6.2.2) и съотношенията на височините на пиковете на изследваните консерванти спрямо вътрешния стандарт, за да се изчисли концентрацията на консервантите в разтвора проба. Изчислява се съдържанието на 2-феноксиетанол, 1-феноксипропан-2-ол, метил 4-хидроксибензоат, етил 4-хидроксибензоат, пропил 4-хидроксибензоат, бутил 4-хидроксибензоат и бензил 4-хидроксибензоат, wi, като процент спрямо теглото (% m/m) по следната формулата:% w=bi200 × aкъдето:bi = концентрацията (μg/ml) от консервант i в тестовия разтвор, както е разчетен от калибровъчна крива; иa = масата (g) на изпитваната проба.8. Повторяемост [1]Виж точка 10.5.9. Възпроизводимост [1]Виж точка 10.5.10. Забележки10.1. Неподвижна фаза.Поведението на задържане на разтворените вещества при определяне чрез ВЕТХ зависи в голяма степен от вида, качеството и историята на неподвижната фаза. Може да се знае дали една колона е използваема за разделянето на изследваните консерванти, като получените резултати за стандартни разтвори (виж забележки 6.2.3). Освен предложения материал за колона, може да се използват и Hypersil ODS и Zorbax ODS.Може също да се оптимизира съставът на препоръчваната подвижна фаза с цел получаване на желаното разделяне.10.2. Дължина на вълната за откриванеТест за износоустойчивост върху описания метод показа, че една малка промяна в дължината на вълната за откриване може да има значително въздействие върху резултатите на определянето.Следователно, този параметър трябва да се контролира внимателно по време на анализите.10.3. Интерференции.При условията, описани в този метод, сеелюират и много други съединения, като консерванти и козметични добавки, могат да останат неоткрити. Времената на задържане на голяма част от консервантите, упоменати в приложение VI към Директивата на Съвета за козметични продукти, са дадени в: N. de Kruijf, M. A. H. Rijk, L. A. Pranato-Soetardhi and A. Schouten, (1989). Determination of preservatives in cosmetic products II: High performance liquid chromatographic identification (J. Chromatography 469, 317-398) (Определяне на консерванти в козметични продукти II: Идентификация чрез високоефективна течна хроматография).10.4. За подпомагане и пускане на аналитичната колона може да се използва подходяща предпазна колона.10.5. Методът е изпитан от девет съвместно работещи лаборатории. Били са анализирани три проби. Таблицата по-долу дава за всяка от трите проби средните стойности в % m/m (m), повторяемостта (r) и възпроизводимостта (R) за съдържащите се консерванти:Проба | | 2-Фенокси-етанол | 1-Фенокси-пропан-2-ол | Метилпараабен | Етилпарабен | Пропилпарабен | Бутилпарбен | Бензилпарабен |Витаминен крем | m | 1,124 | | 0,250 | 0,0628 | 0,031 | 0,0906 | |r | 0,016 | | 0,018 | 0,0035 | 0,0028 | 0,0044 | |R | 0,176 | | 0,030 | 0,0068 | 0,0111 | 0,0034 | |Бързо попиващ крем | m | 1,196 | | 0,266 | 0,076 | | | |r | 0,040 | | 0,003 | 0,002 | | | |R | 0,147 | | 0,022 | 0,004 | | | |Масажен крем | m | | 0,806 | | | 0,180 | 0,148 | 0,152 |r | | 0,067 | | | 0,034 | 0,013 | 0,015 |R | | 0,112 | | | 0,078 | 0,012 | 0,016 |[1] ISO 5725.--------------------------------------------------