CELEX: 31992L0095
Language: bg
Date: 1992-11-09 00:00:00
Title: Директива 92/95/ЕИО на Комисията от 9 ноември 1992 година за изменение на приложението към Седма директива 76/372/ЕИО относно установяване на общностни методи за анализ за целите на официалния контрол на храните за животни

Важна правна забележка

|

31992L0095

Официален вестник n° L 327 , 13/11/1992 стр. 0054 - 0062 специално финландско издание: глава 3 том 45 стр. 0182  специално шведско издание: глава 3 том 45 стр. 0182  специално чешко издание глава 3 том 46 стр. 3  - 11 специално испанско издание глава 3 том 46 стр. 3  - 11 специално унгарско издание глава 3 том 46 стр. 3  - 11 специално литвийско издание глава 3 том 46 стр. 3  - 11 LV.ES глава 3 том 46 стр. 3  - 11 MT.ES глава 3 том 46 стр. 3  - 11 PL.ES глава 3 том 46 стр. 3  - 11 SK.ES глава 3 том 46 стр. 3  - 11 специално словенско издание глава 3 том 46 стр. 3  - 11

		19921109Директива 92/95/ЕИО на Комисиятаот 9 ноември 1992 годиназа изменение на приложението към Седма директива 76/372/ЕИО относно установяване на общностни методи за анализ за целите на официалния контрол на храните за животниКОМИСИЯТА НА ЕВРОПЕЙСКИТЕ ОБЩНОСТИ,като взе предвид Договора за създаване на Европейската икономическа общност,като взе предвид Директива 70/373/ЕИО на Съвета от 20 юли 1970 г. относно въвеждането на общностни методи за вземане на проби и анализ за целите на официалния контрол на храните за животни [1], последно изменена с Актовете за присъединяване на Испания и Португалия, и по-специално член 2 от нея,като има предвид, че Седма директива 76/372/ЕИО на Комисията от 1 март 1976 г., за въвеждане в Общността на методи за анализ за целите на официалния контрол на храните за животни [2], изменена с Директива 81/680/ЕИО [3], описва методите, които трябва да се използват при определянето на афлатоксин В1;като има предвид, че съществуват основания за адаптиране на методите в светлината на напредъка в научното и техническо познание; като има предвид, че е целесъобразно по-конкретно да се разполага с метод за контрол на много ниските количества афлатоксин, фиксирани от Директива 74/63/ЕИО на Съвета от 17 декември 1973 г. за определяне на максимално допустимите количества нежелани вещества и продукти при храненето на животни [4] последно изменена с Директива 91/132/ЕИО [5];като има предвид, че също така е целесъобразно да се разполага с метод за определяне на афлатоксин В1 при наличието на пречещи вещества, като например пулп от цитрусови плодове;като има предвид, че мерките, предвидени в настоящата директива, са в съответствие със становището на Постоянния комитет по храните за животни,ПРИЕ НАСТОЯЩАТА ДИРЕКТИВА:Член 1Приложението към Директива 76/372/ЕИО се изменя в съответствие с приложението към настоящата директива.Член 2Държавите-членки въвеждат в сила не по-късно от 1 октомври 1993 г. законовите, подзаконовите и административните разпоредби, необходими, за да се съобразят с настоящата директива. Те незабавно информират Комисията за това.Когато държавите-членки приемат тези разпоредби, в тях се съдържа позоваване на настоящата директива или то се извършва при официалното им публикуване. Условията и редът на позоваване се определят от държавите-членки.Член 3Адресати на настоящата директива са държавите-членки.Съставено в Брюксел на 9 ноември 1992 година.За КомисиятаRay Mac SharryЧлен на Комисията[1] ОВ L 170, 3.8.1970 г., стр. 2.[2] ОВ L 102, 15.4.1976 г., стр. 8.[3] ОВ L 246, 29.8.1981 г., стр. 32.[4] ОВ L 38, 11.2.1974 г., стр. 31.[5] ОВ L 66, 13.3.1991 г., стр. 16.--------------------------------------------------19921109ПРИЛОЖЕНИЕI. В част А, "Метод за еднодименсионална тънкослойна хроматография" текстът в точка 1 "Цел и обхват" се заменя със следния текст:"1. Цел и обхватМетодът позволява определяне на количеството афлатоксин В1 в изходни материали и прости храни за животни. Този метод е неприложим в присъствието на пулп от цитрусови плодове. Долната граница на определение е 0,01 mg/kg (10 ppb)В присъствието на пречещи субстанции е необходимо да се повтори анализа при използване на метод Б (високопроизводителна течна хроматография)"II. В част Б "Метод на двудименсионална тънкослойна хроматография" текстът се заменя както следва:"Б. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА АФЛАТОКСИН В1. МЕТОД НА ВИСОКОПРОИЗВОДИТЕЛНА ТЕЧНА ХРОМАТОГРАФИЯ1. Цел и обхват.Това е метод за определяне на афлатоксин В1 в храни за животни, включително такива, съдържащи пулп от цитрусови плодове. Долната граница на определение е 0,001 mg/kg (1 ppb).2. Принцип.Пробата се екстрахира с хлороформ. Екстрактът се филтрува и аликвотна част се пречиства върху Флорисилова гилза, последвана от С18 гилза. Окончателното разделяне и определяне се постига чрез високопроизводителна течна хроматография (ВПТХ), като се използва С18 колона с обратна фаза, последвана от следколонно дериватизиране с йод във вода и определяне на флуоресценцията.Забележка:Микотоксините са изключително токсични субстанции. Манипулациите трябва да се извършват в специална камина. Специални предпазни мерки трябва да бъдат взети в случаите, когато токсините са под формата на сухо вещество поради тяхната електростатичност, в резултат на което съществува тенденция от разпръскването им в работната среда.3. Реактиви3.1. Хлороформ, стабилизиран с 0,5 до 1,0 % етанол от масата. Виж изследване 10.2.3.2. ВПТХ степен на метанола, престация на 3.6.3.3. Ацетон.3.4. ВПТХ степен на ацетонитрил.3.5. Елюиращи разтворители: подгответе един ден преди употреба или чрез ултразвук добавете въздух в разтворителя.3.5.1. Смес от ацетон (3.3) и вода, 98 + 2 (v + v)3.5.2. Смес от вода и метанол (3.2), 80 + 20 (v + v)3.5.3. Смес от вода и ацетон (3.3), 85 + 15 (v + v)3.6. Мобилна фаза за ВПТХСмес от вода, метанол (3.2) и ацетонитрил (3.4), 130 + 70 + 40 (v + v + v).Забележка: Съставът на разтвора в мобилна фаза може да се нуждае от допълване, в зависимост от характеристиките на използваната колона за ВПТХ.3.7. Наситен йоден разтвор: добавете 2 g йод към 400 ml вода. Бъркайте в продължение на най-малко 90 min. и прецедете през мембранен филтър (4.15). Защитете наситения разтвор от светлина, за да предотвратите фоторазпадането.3.8. Разредена киселина на Целит 545 или еквивалент.3.9. Флуросилова гилза (Waters SEP-PAK) или еквивалент.3.10. С18 гилза (Waters SEP-PAK) или еквивалент.3.11. Инертен газ, например азот.3.12. Афлатоксин В1, стандартен разтвор в хлороформ, концентрация 10 µg/ml. Проверете концентрацията на разтвора, както средва: определете абсорбиращия обхват на разтвора между 330 и 370 nm чрез спектрофотометър (4.23). Измерете абсорбацията (А) при максимум около 363 nm. Изчислете концентрацията на Афлатоксин В1 в микрограма на милилитър от разтвора чрез формулата:Концентрация== 13,991 × A3.12.1. Афлатоксин В1 изходен стандартен разтвор в хлороформ.Прехвърлете количествено 2,5 ml стандартен разтвор на афлатоксин В1 (3.12) в 50 ml мерителна колба и допълнете до марката с хлороформ (3.1). Съхранявайте този разтвор на студено (4 °С) и тъмно, добре запушен и завит в алуминиево фолио.3.13. Калибриращи разтвори афлатоксин В1 за ВПТХ.Забележка: използвайте измита в киселина стъклария за приготвянето на тези разтвори (вж. 4, апаратура).3.13.1. Калибриращ разтвор 4 ng/ml.Оставете мерителната колба с изходния разтвор (3.12.1) да се затопли до стайна температура в алуминиевото фолио (няколко часа). Прехвърлете 400 µl от изходния разтвор (200 ng афлатоксин В1) в мерителна колба с обем 50 ml и изпарявайте разтвора до достигане на състояние на инертен газ (3.11).Разтворете получения остатък в приблизително 20 ml вода (ацетонова смес (3.5.3), допълнете с вода/ацетонова смес до марката и разбъркайте добре.3.13.2. Калибриращ разтвор 3 ng/ml.Прехвърлете количествено 7,5 ml от калибриращия разтвор (3.13.1) в мерителна колба с обем 10 ml, допълнете до марката с вода/ацетонова смес (3.5.3) и разбъркайте добре.3.13.3. Калибриращ разтвор 2 ng/ml.Прехвърлете количествено 25 ml от калибриращия разтвор (3.13.1) в мерителна колба с обем 50 ml, допълнете до марката с вода/ацетонова смес (3.5.3) и разбъркайте добре.Този разтвор се използва също като стандартен еталон, който се използва за стандратно впръскване при ВПТХ (5.5).3.13.4. Калибриращ разтвор 1 ng/ml.Прехвърлете количествено 2,5 ml от калибриращия разтвор (3.13.1) в мерителна колба с обем 10 ml, допълнете до марката с вода/ацетонова смес (3.5.3) и разбъркайте добре.3.14. Ампула, съдържаща смес от концентрации на афлатоксини В1, B2, G1 и G2, приблизително 1, 0,5, 1 и 0,5 µg/ml, съответно в 1 ml хлороформ.3.14.1. Разтвор за хроматографски тест.Прехвърлете съдържанието на ампулата (3.14) в запушена със стъклена запушалка епруветка или в стъкленица, запушена с винтова капачка Прехвърлете 40 µl от този разтвор в запушената със стъклена запушалка епруветка (измита с киселина) (4.22). Изпарете хлороформа до струя от инертен газ (3.11) и разтворете отново в 10 ml вода/ацетонова смес (3.5.3).3.15. Реактиви за потвърждаващ тест (6).3.15.1. Наситен разтвор на натриев хлорид.3.15.2. Гранулиран безводен разтвор на натриев сулфат.4. АпаратураПредупреждение: Използването на неизмита с киселина стъклария за водни разтвори на афлатоксини може да предизвика загуби. По-специално внимание следва да се обърне на новата стъклария и стъкларията за еднократна употреба, като автоматично вземащи проба ампули и Пастьорови пипети. Поради това лабораторна стъклария, влизаща в контакт с водни разтвори на афлатоксини следва да бъде накисната в разредена киселина (например сярна киселина = 2 мол/л) за няколко часа, след това да се изплакне добре с дестилирана вода, за да се премахнат всички остатъци то киселина (например три пъти, проверка с лакмус за рН). В практиката тази обработка е необходима за облодънните колби (4.4), мерителните колби, градуирани епруветки, стъкленици или епруветки, използвани за калибрирани разтвори и крайни екстракти (по-специално, стъкленици за автодегустация) и Пастьорови пипети, ако се използват за прехвърляне на калибрирани разтвори или екстракти.4.1. Мелница-миксер4.2. Сито с размер на отворите 1,0 mm, (ISO R 565).4.3. Механичен шейкър (механичен апарат за бълникане).4.4. Ротационен вакуум изпарител, оборудван с облодънна колба с обем от 150 до 250 ml.4.5. Висококачествен течен хроматограф, впръсквател с извод, удобен за впръскване на 250 ml. Виж инструкциите на производителя за частично или пълно съответствие на извода.4.6. Аналитична колона за ВПТХ: 3 µm или 5µm С18 уплътнител.4.7. Помпа без пулсации за подаване на йодния следколонен реагент4.8. Valco нулев мъртъв обем Тее, неръждаема стомана (1/16″ × 0,75 mm).4.9. Реакционен змиевик; тефлон или неръждаема стомана. Установено е, че размери от 3000 × 0,5 mm до 5000 × 0,5 mm са в подходяща комбинация с 5 µm или 3 µm ВПТХ колони.4.10. Термостатично регулирана водна баня, достигаща до 60 °C, с възможност за температурно регулиране по-добро от 0,1 °C.4.11. Флуоресциращ детектор, който се намагнетизира при 365 nm и излъчване с дължина на вълната от 435 nm. (За филтриращ инструмент: излъчвана дължина на вълната > 400 nm). Ще бъде възможно засичането на най-малко 0,05 ng афлатоксин В1. Може да се окаже подходящо и упражняване на противоналягане (например ограничител, тефлонова намотка или намотка от неръждаема стомана, свързана с изхода на детектора), за ограничаване на въздушните мехурчета във входната клетка.4.12. Записващо лентово устройство.4.13. Електронен интегратор (по избор).4.14. Нагъната филтърна хартия с диаметър: 24 cm, Macherey-Nagel 617 1/4 или еквивалент4.15. Мембранен филтър с размер на отворите 0,45 µm, Millipore HAWP 04700 или еквивалент.4.16. Конична колба със стъклена запушалка с обем 500 ml.4.17. Стъклена колона (вътрешен диаметър приблизително 1 cm, дължина приблизително 30 cm), оборудвана с накрайник Luer.4.18. Спирателен кран за ограничаване достъпа на хлороформ на Luer (например Bio-Rad 7328017, Analytichem A1 6078, J.T. Baker 4514 или еквивалент).4.19. Химически резистентна спринцовка, 10 ml свръзка Luer.4.20. Помпа, подходяща за ВПТХ впръскване от 250 µl (виж 4.5.).4.21. 100 µl микропомпа за подготовка на калибриращи разтвори (проверете дали точността е в рамките на 2 % при претегляне).4.22. 10 ml калибровани епруветки със стъклени запушалки.4.23. Спектрофотометър, подходящ за извършване на измервания в ултравиолетовата област на спектъра.4.24. Оборудване за потвърждаващ тест (6).4.24.1. Изплакната в киселина 100 ml разделителна фуния с тефлонов спирателен кран.4.24.2. Загряващ блок, 40 до 50 °C.5. Процедура5.1. Подготовка на пробата.Смелете пробата така че тя да преминава през ситото (4.2).5.2. Количество за теста.Претеглете 50 g от приготвената проба за теста в конична колба (4.16).5.3. Извличане.Добавете 25 g целит (3.8), 250 ml хлороформ (3.1) и 25 ml вода към количеството, подготвено за теста (5.2). Запушете колбата и разклащайте в продължение на 30 минути в механичен шейкър (4.3). Филтрирайте през нагъната филтърна хартия (4.14). Вземете 50 ml от филтрата. Ако е необходимо, вземете аликвотно количество от филтрата и разредете до 50 ml с хлороформ така че концентрацията на афлатоксин В1 да не е по-голяма от 4 ng/ml.5.4. Пречистване (процедурата следва да се извърши без съществени прекъсвания).Предупреждение:- защитете лабораторията, където се извършват анализите, съответно от дневна светлина. Това може да се постигне ефективно чрез използване на:i) Ултравиолетово абсорбиращо фолио върху прозорци в комбинация с убита светлина (не директна слънчева светлина);ii) Завеси или транспаранти в комбинация с изкуствена светлина (флуоросцентни лампи са приемливи).- Афлатоксин, съдържащ разтвори, следва да бъде предпазен от светлина дотолкова, доколкото е възможно (пазете на тъмно, използвайте алуминиево фолио).5.4.1. Флорисил SEP-PAK пречистване5.4.1.1. Подготовка на системата колона-гилза.Закрепете спирателния кран (4.18) към по-късия край на Флорисиловата гилза (3.9) (виж фигура 1). Промийте гилзата и продължете, като вземете 10 ml хлороформ (3.1) и прекарайте 8 ml чрез спирателния кран бързо през гилзата, като използвате спринцовка (4.19). Закрепете по-дългия край на гилзата към стъклена колона (4.17) и прекарайте останалите 2 ml хлороформ през гилзата в колоната. Затворете спирателния кран. Отстранете спринцовката.5.4.1.2. ПречистванеДобавете филтрата, събран в 5.3 в системата колона-гилза и подсушете чрез утаяване. Изплакнете с 5 ml хлороформ (3.1), след това с 20 ml етанол (3.2). Почистете елюатите. По време на тези действия се уверете, че системата колона-гилза не изсъхва.Елюирайте афлатоксин В1 с 40 ml ацетоново-водна смес (3.5.1) и приберете всичкия елюат в облодънната колба на ротационния изпарител (4.4). Сгъстявайте елюата в ротационния изпарител при 40 °C до 50 °C, докато спре да се отделя ацетон. (Забележка: приблизително 0,5 ml от течността остава в колбата в този случай. Експерименти показват, че по-нататъшно изпаряване не е безопасно и че когато остане 0,5 ml от течността, няма значително количество ацетон. Остатъците от ацетон могат да доведат до загуби на афлатоксин В1 при С18 гилзата). Добавете 1 ml метанол (3.2), завъртете колбата, за да се отложи афлатоксин В1 по стените на колбата, добавете 4 ml вода и разбъркайте. Разглобете и отстранете гилзата. Изплакнете стъклената колона с вода и продължете с С18 пречистването.5.4.2. C18 SEP-PAK пречистване5.4.2.1. Приготвяне на системата колона-гилза.Закрепете спирателния кран (4.18) към по-късия край на С18 гилзата (3.10) (виж фигура 1). Заредете гилзата и отстранете всичкия въздух, като прокарате 10 ml метанол (3.2) посредством спирателния кран бързо през гилзата със спринцовка (4.19) (Въздушните балончета в гилзата са видими като светли петна върху останалия сивкав фон). Вземете 10 ml вода и прекарайте 8 ml през гилзата (Избягвайте внасянето на въздух в гилзата при преминаването от метанол към вода). Закрепете по-дългия край на гилзата към стъклена колона (4.17) и прекарайте останалите 2 ml вода през гилзата в колоната. Затворете спирателния кран. Отстранете спринцовката.5.4.2.2. ПречистванеПрехвърлете събрания при 5.4.1.2 екстракт количествено в стъклената колона (4.17), изплакнете колбата двукратно с 5 ml вода/метанолова смес (3.5.2) и подсушете чрез утаяване. По време на тези действия се уверете, че системата колона-гилза не изсъхва. (Когато се появяват въздушни мехурчета в конструкцията близо до гилзата, спрете притока и запушете върха на стъклената колона, за да отстраните въздушните балончета. След това продължете). Елюирайте с 25 ml вода/метанолова смес. Отстранете елюата. Елюирайте афлатоксина В1 с 50 ml вода/ацетонова смес (3.5.3) и съберете целия елюат в мерителна колба с обем 50 ml. Допълнете до марката с вода и разбъркайте: полученият тестов разтвор се използва за хроматограия (5.5).Предупреждение: Филтрирането на окончателния екстракт преди ВПТХ обикновено не е необходимо. Ако се приеме, че е необходимо, целулозните филтри не бива да бъдат използвани, тъй като те могат да доведат до загуби на афлатоксин В1. Тефлонови филтри са приемливи.5.5. Високопроизводителна течна хроматограия(Виж фигура 2 за оборудването). Осигурете достатъчно време за осигуряване на условия и стабилизиране на инструментите.Забележка 1:Дебитът, даван за мобилната фаза и след-колонния реактив са само като указание. Те може да не се регулират в зависимост от характеристиките на ВПТХ колоната.Забележка 2:Индикаторът, характеризиращ афлатоксин В1, зависи от температурата, следователно следва да се извърши компенсиране за дрейфа (виж фигура 3). Чрез инжектиране на определено количество афлатоксин В1, еталонен разтвор (3.13.3), на редовни интервали (например всяко трето инжектиране), пиковите стойности на афлатоксин В1 между тези еталонни разтвори могат да бъдат коригирани, като се използват средни стойности, чрез които се осигурява така че разликата между характеристиките на последователните еталонни разтвори е много малка (< 10 %). Следователно инжектиранията трябва да се извършват без прекъсвания. Ако е необходимо прекъсване, последното инжектиране преди прекъсването и първото инжектиране след прекъсването трябва да бъдат еталонни (3.13.3). Тъй като калибриращата крива е линеарна и преминава през началото, количествата афлатоксин В1 в мострите на екстрактите се определят директно чрез съотношението им с най-близките стандарти.5.5.1. ВПТХ помпени инсталацииПригответе ВПТХ помпата (4.5) така че да предизвиква струя от 0,5 или 0,3 мл/мин за 5 µm или 3 µm ВПТХ колона (4.6), използвана респективно в мобилната фаза (3.6).5.5.2. Следколонни помпени инсталацииПригответе помпата (4.7) така че да предизвиква струя от 0,2 до 0,4 ml/min наситен йоден воден разтвор (3.7). Като приблизително ръководство: Струи от приблизително 0,4 или 0,2 ml/min са препоръчителни в комбинация със струи от 0,5 и 0,3 ml/min при съответната мобилна фаза (3.6).5.5.3. Флуоресцентен детекторПригответе флуоресцентния детектор (4.11) за намагнетизиране = 365 nm и излъчване = 435 nm (филтриращ инструмент; > 400 nm). Регулирайте детектора така че да получава от писеца за 1 ng афлатоксин В1 приблизително 80 % от пълната скала на пречупване.5.5.4. ВпръсквателЗа всички разтвори инжектирайте количество от 250 µl, като следвате инструкциите на производителя на впръсквателя.5.5.5. Проверка на хроматографското разлаганеИнжектирайте хроматографския пробен разтвор (3.14.1). Падините трябва да са по-малко от 5 % от сумата на пиковите височини на съседните пикове.5.5.6. Проверете стабилността на системата.Преди всяка серия анализи инжектирайте съответно еталонен разтвор (3.13.3) до постигане на стабилни пикови площи (Забележка: Пиковите характеристики за афлатоксин В1 между две последователни инжектирания не трябва да се различават с повече от 6 %). Продължете незабавно с проверката на линейността (5.5.7).5.5.7. Проверка на линейността.Инжектирайте афлатоксин В1 калибриращи разтвори (3.13.1 до 3.13.4). На всяко трето инжектиране използвайте еталонен разтвор (3.13.3), за да коригирате дрейфа в характеристиката (Забележка: Пиковите характеристики за този еталонен разтвор не трябва да се различават с повече от 10 % на 90 min). Коригирайте дрейфа в съответствие с формулата в 7. Калибриращата графика трябва да бъде линеарна и да минава през началото, в рамките на две стандартни грешки от Y-еталона. Получените стойности не бива да се различават с повече от 3 % от номиналната стойност. Ако тези изисквания са изпълнени, продължете без прекъсване. Ако не, открийте и коригирайте източниците на проблеми преди да продължите.5.5.8. Инжектиране на пробен екстрактИнжектирайте пречистения пробен екстракт (5.4.2.2). След всеки два пробни екстракта повторете инжектирането с еталонен разтвор (3.13.3), с следната последователност: еталонен разтвор, екстракт, екстракт, еталонен разтвор, екстракт, екстракт, еталонен разтвор и т.н.6. Потвърждаващ тест6.1. По-нататъшна обработка на екстракта (5.4.2.2)Добавете 5 ml разтвор на натриев хлорид (3.15.1) към окончателния екстракт, получен при 5.4.2.2. Извличайте три пъти, всеки път по 2 ml хлороформ (3.1) за една минута в разделяща фуния (4.24.1). Изсипете комбинирания екстракт от хлороформ върху приблизително 1 g натриев сулфат (3.15.2) в епруветка с обем 10 ml. Малка фуния (диаметър: 4 cm) може да се използва заедно с парче медицински памук за уплътняване, покрит с приблизително 1 g натриев сулфат.Напоете пласта от натриев сулфат с няколко ml хлороформ и поставете полученото вещество в същата епруветка. Изпарявайте екстракта от хлороформ до изсушаване в същата епруветка, като използвате загряващ блок (4.24.2) и разтворете отново в 1 ml хлороформ.6.2. Подготовка за вторична и тънкослойна хроматография.Виж приложението към Директива 76/372/ЕИО на Съвета, Метод А, точка 5.6.2.7. Изчисляване на резултатитеИзчислете съдържанието на афлатоксин В1 (µm/kg), който се съдържа в пробата, като използвате формулата:Съдържание на афлатоксин В1 вμg/kg =m × VV× M ×VfVcкъдето:m = количество афлатоксин В1 в ng, представено чрез В1 пика на пробата, изчислено, както следваm = P пpoбаP st1 + Pst2 × 2 rstP (проба) = пикова площ на афлатоксин В1 за пробатаP(st1) = пикова площ афлатоксин В1, идващ от предходното инжектиране на еталонен разтвор (3.13.3)P (st2) = пикова площ на афлатоксин В1, идващ от следващото инжектиране на еталонен разтвор (3.13.3)r (st) = инжектирано количество афлатоксин В1 в еталонния разтвор (3.13.3) в ngVm = обем на инжектирания пробен екстракт в mlVext = краен обем пробен екстракт в ml, отчитащ всяко направено разреждане (5.3)M = маса на пробата в грамовеVf = обем филтрат, прехвърлен към гилзата Флорисил (5.4.1.2) в mlVc = обем хлороформ, използван за екстрахирането на пробата в ml.Ако процедурата се спазва както в този протокол, формулата се свежда до:афлатоксин В1 съдържание в µg/кg = 20 × m.7.1. Изчисления на резултатите могат също да се извършат чрез измерване на пиковите височини.8. Повторяемост:Виж под 10.1.9. Възпроизводимост:Виж под 10.1.10. Наблюдения10.1. ТочностСъвместно проучване [1], засягащо международното равнище на смесените хранителни добавки даде резултатите за повторяемостта и възпроизводимостта, показани в Таблица 1. Терминът повторяемост (r), използван тук, се определя като най-голямото съотношение, което е незначително при 95 % вероятно ниво за сравнение между две разчитания на една и съща проба в една и съща лаборатория при подобни условия. Терминът възпроизводимост (R) се определя по подобен начин за сравнението между две различни лаборатории. В съответствие с ISO 3534 — 1977, 2.35 [2] и Решение 89/610/ЕИО на Комисията [3], r и R също са показани в таблица 1 в случаите при коефициенти на отклонение.Таблица 1Повторяемост (r) и възпроизводимост (R), изразени като съотношение и съответни коефициенти на отклонение(15 лаборатории)Ниво | r | R | CVr [4] | CVR |(µg/kg) | | | (%) | (%) |8 и 14 | 1,4 | 1,7 | 11 | 18 |10.2. Стабилизация на хлороформ (3.1)Адсорбционните характеристики на Флорисиловата гилза могат да бъдат променени, ако се използват стабилизатори, различни от етанол. Това следва да бъде проверено в съответствие с 10.3, където описаният хлороформ не е в наличност.10.3. ТочностПравилното прилагане на метода се проверява чрез извършване на съвсем същите измервания върху сертифицирани еталонни материали. Ако това не е възможно, прилагането на метода следва да бъде проверено чрез съответни опити, извършени върху подсилени чисти проби. Отклонението от средните нива на действителните стойности, изразени като процент от действителната стойност, не следва да се намират извън границите – 20 до + 10 %.+++++ TIFF +++++Фигура 1: Система колона-гилза+++++ TIFF +++++Фигура 2: Технологична схема на системата за течна хроматография с последваща колона за йодна дериватизация34512128141091113671.Мобилна фаза8.Т-връзка2.Помпа9.Вана с термостатичен контрол3.Инжекционен клапан10.Реакционен змиевик4.Предпазна колона11.Флуоресцентен детектор5.ВПТХ колона за анализ12.Ограничител6.Наситен йоден разтвор13.Отпадък7.Помпа за реактив14.Записващо лентово устройство/интегратор.+++++ TIFF +++++Фигура 3: Компенсация на дрейфа в характеристика на афлатоксин В1 чрез инжектиране на еталонен разтвор (3.13.3) на редовни интервалихарактеристикасредно ниво на съседно еталонни разтворивремееталонен разтворекстрактекстрактеталонен разтворекстракт(или калибриращ)(или калибриращ)(или калибриращ)[1] Egmond, H.P. van, Heisterkamp, S.H. и Paulsch, W.E. (1991). Добавки към храни и примеси 8, 17-29.[2] ISO 3534-1977.[3] ОВ L 351, 2.12.1989 г., стр. 39."[****] CVкоефициент на отклонение--------------------------------------------------