CELEX: 31991D0479
Language: el
Date: 1991-07-29 00:00:00
Title: 91/479/ΕΟΚ: Απόφαση της Επιτροπής της 29ης Ιουλίου 1991 όσον αφορά τους όρους υγειονομικού ελέγχου και την κτηνιατρική πιστοποίηση για την εισαγωγή κατεψυγμένου σπέρματος βοοειδών από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Avis juridique important

|

31991D0479

91/479/ΕΟΚ: Απόφαση της Επιτροπής της 29ης Ιουλίου 1991 όσον αφορά τους όρους υγειονομικού ελέγχου και την κτηνιατρική πιστοποίηση για την εισαγωγή κατεψυγμένου σπέρματος βοοειδών από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής  

Επίσημη Εφημερίδα αριθ. L 258 της 16/09/1991 σ. 0001 - 0017

ΑΠΟΦΑΣΗ ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ της 29ης Ιουλίου 1991 όσον αφορά  τους όρους υγειονομικού ελέγχου και την κτηνιατρική πιστοποίηση για την εισαγωγή κατεψυγμένου  σπέρματος βοοειδών από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής (91/479/ΕΟΚ)Η ΕΠΙΤΡΟΠΗ  ΤΩΝ ΕΥΡΩΠΑΪΚΩΝ ΚΟΙΝΟΤΗΤΩΝ, Έχοντας υπόψη: τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Οικονομικής Κοινότητας, την οδηγία 88/407/ΕΟΚ του Συμβουλίου της 14ης Ιουνίου 1988 για τον καθορισμό των απαιτήσεων  υγειονομικού ελέγχου που ισχύουν στις ενδοκοινοτικές συναλλαγές και στις εισαγωγές κατεψυγμένου  σπέρματος βοοειδών (1), όπως τροποποιήθηκε τελευταία από την οδηγία 90/425/ΕΟΚ (2), και ιδίως τα  άρθρα 10 και 11, Εκτιμώντας: ότι οι Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής περιλαμβάνονται στον καταρτισθέντα, με την απόφαση 90/14/ΕΟΚ  της Επιτροπής (3), κατάλογο των τρίτων χωρών από τις οποίες τα κράτη μέλη επιτρέπουν την εισαγωγή  σπέρματος βοοειδών G ότι η υγειονομική κατάσταση των ζώων στις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής εμφανίζεται να είναι  ικανοποιητική και ελεγχόμενη από καλά δομημένες και οργανωμένες κτηνιατρικές υπηρεσίες όσον αφορά  τις ασθένειες που είναι δυνατόν να μεταδοθούν μέσω του σπέρματος G ότι οι αρμόδιες κτηνιατρικές αρχές των Ηνωμένων Πολιτειών της Αμερικής έχουν διαβεβαιώσει ότι η εν  λόγω χώρα είναι επί δώδεκα τουλάχιστον μήνες απαλλαγμένη από την πανώλη των βοοειδών, τον αφθώδη  πυρετό και τη μεταδοτι κή πλευροπνευμονία των βοοειδών και ότι κανένας εμβολιασμός δεν έχει  διεξαχθεί κατά των ασθενειών αυτών στη διάρκεια αυτής της περιόδου G ότι οι αρχές αυτές έχουν αναλάβει την υποχρέωση να κοινοποιούν στην Επιτροπή και στα κράτη μέλη, με  τέλεξ ή τηλεαντίγραφο και εντός 24 ωρών, την επιβεβαίωση κρούσματος οποιασδήποτε από τις  προαναφερθείσες ασθένειες ή γαγγραινώδους κόρυζας ή ενζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας καθώς και  κάθε οποιαδήποτε αλλαγή στην πολιτική εμβολιασμού κατά των εν λόγω ασθενειών, ή, μετά την παρέλευση  ορισμένης προθεσμίας, τις τυχόν προτεινόμενες τροποποιήσεις των κανόνων εισαγωγής στις Ηνωμένες  Πολιτείες σχετικά με τα ζώα εκτροφής ή το σπέρμα ή τα έμβρυα των εν λόγω ζώων G ότι οι εν λόγω αρμόδιες κτηνιατρικές αρχές έχουν παράσχει, στον κτηνιατρικό τομέα, σχετικά με τη  φυματίωση και τη βρουκέλλωση των βοοειδών, εγγυήσεις που είναι ισοδύναμες με εκείνες που παρέχονται  στην Κοινότητα G ότι οι ίδιες αρχές έχουν αναλάβει την υποχρέωση να επιβλέπουν επίσημα την έκδοση των πιστοποιητικών  που προβλέπονται στην παρούσα απόφαση και να εξασφαλίζουν ότι όλα τα σχετικά πιστοποιητικά, οι  παρεκκλίσεις και τα εργαστηριακά ευρήματα στα οποία ενδέχεται να έχει βασιστεί η πιστοποίηση, να  φυλάσσονται σε επίσημο φάκελο επί δώδεκα τουλάχιστον μήνες από την ημερομηνία αποστολής του  σπέρματος που αφορούν G ότι οι αρχές αυτές έχουν αναλάβει την επίσημη έγκριση των κέντρων συλλογής σπέρματος για την  εξαγωγή σπέρματος βοοειδών στην Κοινότητα, όπως απαιτείται από το άρθρο 9 της οδηγίας 88/407/ΕΟΚ G ότι οι ίδιες αρχές έχουν αναλάβει να καθορίζουν και να γνωστοποιούν χωρίς καθυστέρηση στην Επιτροπή  την ημερομηνία κατά την οποία, ανάλογα με κάθε εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος, παύει κάθε  δραστηριότητα αυτών των ειδών Cullcoides ικανών να μεταδώσουν τη γαγγραινώδη κόρυζα ή την  επιζωοτική αιμορραγική ασθένεια, καθώς και την ημερομηνία κατά την οποία η δραστηριότητα τέτοιων  ειδών Cullcoides αρχίζει πάλι G ότι οι όροι υγιεινής των ζώων και η κτηνιατρική πιστοποίηση πρέπει να προσαρμοστούν σύμφωνα με την  υγειονομική κατάσταση των ζώων που επικρατεί στην ενδιαφερόμενη τρίτη χώρα G ότι τα μέτρα που προβλέπονται στην παρούσα απόφαση είναι σύμφωνα με τη γνώμη της Μόνιμης  Κτηνιατρικής Επιτροπής, ΕΞΕΔΩΣΕ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΑΠΟΦΑΣΗ: Άρθρο 1 1.  Μέχρι τις 31 Δεκεμβρίου 1992, τα κράτη μέλη είναι δυνατόν να επιτρέπουν την εισαγωγή από τις  Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής, σπέρματος βοοειδών που έχει συλλεχθεί από ταύρους στους οποίους  ήταν αρνητικό το αποτέλεσμα της δοκιμασίας για ανίχνευση της γαγγραινώδους κόρυζας ή της  επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας που περιγράφονται στο παράρτημα Ι Α σύμφωνα με τις διατάξεις των  παραρτημάτων ΙΙ Α και ΙΙ Β και διασφαλίζουν ότι το εν λόγω σπέρμα δεν διατίθεται στο ενδοκοινοτικό  εμπόριο. Η Επιτροπή αναθεωρεί τις διατάξεις της παρούσας παραγράφου μέχρι την προαναφερθείσα  ημερομηνία. 2.  Τα κράτη μέλη επιτρέπουν την εισαγωγή από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής, σπέρματος  βοοειδών που πληροί τους όρους που αναφέρονται στο πιστοποιητικό του παραρτήματος Ι Α και, κατά  περίπτωση, στο πιστοποιητικό του παραρτήματος Ι Β. Άρθρο 2 Η παρούσα απόφαση απευθύνεται στα κράτη μέλη. Βρυξέλλες, 29 Ιουλίου 1991. Για την Επιτροπή Ray MAC SHARRY Mιlow thw Epitrop´hw (1) ΕΕ αριθ. L 194, της 22. 7. 1988, σ. 10.  (2) ΕΕ αριθ. L 224, της 18. 8. 1990, σ. 29.  (3) ΕΕ αριθ. L 8, της 11. 1. 1990, σ. 71.   ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ Ι Α ΥΓΕΙΟΝΟΜΙΚΟ ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΤΙΚΟ για την εισαγωγή σπέρματος βοοειδών από τις  Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής Πιστοποιητικό αριθ.: . Χώρα συλλογής: Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής Αρμόδια αρχή: υπουργείο Γεωργίας των Ηνωμένων Πολιτειών - APHIS Ι. Ταυτοποίηση του σπέρματος: >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ>ΙΙ. Προέλευση του  σπέρματος: >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ>ΙΙΙ. Προορισμός του σπέρματος: >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ> IV. Πληροφορίες όσον αφορά τον υγειονομικό τομέα: Ο υπογεγραμμένος  ομοσπονδιακός κτηνίατρος βεβαιώνω ότι: 1. Οι Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής είναι απαλλαγμένες, κατά την περίοδο που αρχίζει τουλάχιστον  δώδεκα μήνες πριν από την πρώτη συλλογή του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω και τελειώνει 30  ημέρες μετά την τελική συλλογή τέτοιου σμέρματος, απο πανώλη των κατοικιδίων (πανώλη βοοειδών). 2. Το εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος στο οποίο το ανωτέρω περιγραφόμενο σπέρμα συλλέχθηκε: α) έχει εγκριθεί, με βάση το γεγονός ότι πληροί όλες τις διατάξεις της παρούσας παραγράφου, από την  ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή των Ηνωμένων Πολιτειών της Αμερικής για την εξαγωγή σπέρματος  βοοειδών στην Ευρωπαϊκής Κοινότητα G β) βρίσκεται στο κέντρο ενός κύκλου ακτίνας 50 χλμ. μέσα στον οποίο, κατά μία περίοδο που αρχίζει  τουλάχιστον τρεις μήνες πριν από την πρώτη συλλογή του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω και  τελειώνει 30 ημέρες μετά την τελική συλλογή τέτοιου σπέρματος, δεν υπήρχε κανένα κρούσμα αφθώδους  πυρετού, μεταδοτικής πλευροπνευμονίας βοοειδών ή φλυκταινώδους στοματίτιδας G γ) είναι απαλλαγμένο, κατά την περίοδο που αρχίζει τουλάχιστον τρεις μηνες πριν από την πρώτη  συλλογή του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω και τελειώνει 30 ημέρες μετά την τελική συλλογή  τέτοιου σπέρματος, από ασθένεια του αφθώδους πυρετού και βρουκέλλωση G δ) είναι απηλλαγμένο, κατά τη διάρκεια της περιόδου που αρχίζει τουλάχιστον 30 ημέρες πριν από την  πρώτη συλλογή του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω και τελειώνει 30 ημέρες μετά την τελική  συλλογή τετοιου σπέρματος, από λύσσα, άνθρακα, φυματίωση, ενζωοτική λεύκωση των βοοειδών, ή  οποιαδήποτε ένδειξη μόλυνσης με Trichomonas foetus, Campy-lobacter foetus, Leptospira canicola,  Leptospira pomona, Leptospira grippotyphosa, Lept rospira hardjo ή Leptrospira icterohaemorrhagica  G ε) επιθεωρείται από ομοσπονδιακό κτηνίατρο τουλάχιστον δύο φορές το χρόνο οπότε εξετάζονται και  αξιολογούνται όλα τα ζητήματα που σχετίζονται με τους όρους που δηλώνονται στο παρόν πιστοποιητικό  G στ) είναι υπό τη μόνιμη εποπτεία ενός κτηνίατρου του κέντρου κατά τρόπο αυτό επιθεωρείται, έτσι  ώστε: i) τα ζώα γίνονται δεκτά μόνο με τη σαφή άδεια του κτηνίατρου του κέντρου, ενώ όλες οι μετακινήσεις  των ζώων, από και προς το κέντρο, καταγράφονται, ii) διατηρείται αρχείο για τη φυλή, την ημερομηνία γέννησης, την ταυτότητα και το ιστορικό υγείας  κάθε βοοειδούς στο κέντρο και για όλες τις δοκιμασίες διάγνωσης και τα αποτελέσματα τους, όλες τις  θεραπευτικές αγωγές και όλους τους εμβολιασμούς που διεξάγονται σε ζώα του κέντρου, iii) απαγορεύεται η είσοδος μη εξουσιοδοτημένων προσώπων και απαιτείται η συμμόρφωση των  εξουσιοδοτημένων επισκεπτών, με τους όρους που έχουν καθορισθεί από τον κτηνίατρο του κέντρου, iv) προσλαμβάνεται μόνο τεχνικά ικανό προσωπικό, κατάλληλα εκπαιδευμένο σε διαδικασίες απολύμανσης  και υγιειονομικές τεχνικές σχετικές με τον έλεγχο της διάδοσης ασθενειών. G ζ) περιέχει μόνο βοοειδή ενώ τα άλλα κατοικίδια ζώα τα εντελώς απαραίτητα για την κανονική  λειτουργία του κέντρου, μπορεί να γίνουν δεκτά εφόσον δεν παρουσιάζουν κανένα κίνδυνο μόλυνσης για  τα βοοειδή και πληρούν τους όρους που έχουν καθορισθεί από τον κτηνίατρο του κέντρου G η) είναι κατά τέτοιο τρόπο δομημένο ώστε: i) διαθέτει χώρους διαβίωσης ζώων φυσικά απομονωμένους από τις αίθουσες επεξεργασίας και διατήρησης  σπέρματος, οι οποίες είναι φυσικά απομονωμένες μεταξύ τους, ii) διαθέτει μονάδα απομόνωσης για τα ασθενή ζώα, iii) διαθέτει μονάδα συλλογής σπέρματος η οποία έχει χωριστή αίθουσα για τον καθαρισμό και την  απολύμανση ή την αποστείρωση του εξοπλισμού, iv) διαθέτει αίθουσα επεξεργασίας του σπέρματος και αίθουσα συλλογής σπέρματος (που δεν χρειάζεται  να βρίσκονται στο ίδιο μέρος), v) προλαμβάνεται η επαφή με κατοικίδια του εξωτερικού χώρου, vi) ολόκληρο το κέντρο μπορεί αμέσως να καθαριστεί και να απολυμανθεί, υπό τον όρο ότι, εφόσον οι ανωτέρω όροι πληρούνται, ένα εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος  μπορεί να μοιράζεται μια τοποθεσία με ένα ή περισσότερα άλλα κέντρα συλλογής σπέρματος. 3. Οι ταύροι που υπάρχουν στο εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος κατά την περιόδο συλλογής και  διατήρησης του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω: α) ήταν στο εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος από, και συνεχώς έκτοτε, την 1η Ιανουαρίου 1990,  και έχουν υποστεί από την άφιξή τους όλες τις δοκιμασίες που περιγράφονται στο στοιχείο δ)  κατωτέρω, με τα αποτελέσματα που προβλέπονται, ή β) μεταφέρθηκαν από εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος χωρίς να έρθουν σε επαφή με ζώα κατωτέρας  υγειονομικής κατάστασης και, όπου ήταν, εφαρμόσιμο, με μεταφορικό μέσο που καθαρίστηκε και  απολυμάνθηκε πλήρως πριν τη χρήση ή γ) έγιναν δεκτά, με την ευθύνη του κτηνίατρου του κέντρου και χωρίς να εμφανίζουν κλινικά  συμπτώματα ασθένειας, i) έχοντας προέλθει από αγέλες που είχαν αξιολογηθεί σαν απαλλαγμένες φυματίωσης από την  ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή ή βρίσκονταν σε περιοχές αξιολογηθείσες σαν απαλλαγμένες φυματίωσης  όπως προσδιορίστηκαν από την ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή και χωρίς να έχουν παραμείνει καθόλου σε  αγέλες κατώτερου καθεστώτος, ii) έχοντας προέλθει από αγέλες που είχαν πιστοποιηθεί σαν απηλλαγμένες βρουκέλλωσης από την  ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή ή βρισκόντουσαν σε περιοχές κλάσης απηλλαγμένης βρουκέλλωσης ή κλάσης  Α όπως προσδιορίστηκαν από την ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή και χωρίς να έχουν παραμείνει καθόλου  σε αγέλες κατώτερης υγειονομικής κατάστασης, iii) έχοντας: - προέλθει από αγέλες απηλλαγμένες επί τουλάχιστον τρία χρόνια από κάθε σύμπτωμα ενζωοτικής  λεύκωσης βοοειδών, ή - γεννηθεί από αγελάδες που υπεβλήθησαν, εντός 30 ημερών πριν την είσοδο των υιών τους στη μονάδα  απομόνωσης, σε ορολογικό έλεγχο για ενζωοτική λεύκωση των βοοειδών, σύμφωνα με τη διαδικασία του  παραρτήματος Z της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ του Συμβουλίου, με αρνητικό αποτέλεσμα, ή - έχουν υποβληθεί - εντός 30 ημερών από την είσοδό τους στην επίσημα εγκεκριμένη εγκατάσταση  απομόνωσης ή αφού έχουν φτάσει σε ηλικία δύο ετών, λαμβανομένης υπόψη της μεγαλύτερης προθεσμίας  που αντιστοιχεί σε μια από τις προαναφερθείσες περιπτώσεις - σε ορολογική δοκιμασία για την  ανίχνευση της ενζωτικής λεύκωσης των βοοειδών με αρνητικό αποτέλεσμα, iv) έχοντας υποβληθεί, μέσα σε 30 ημέρες πριν την είσοδο στην εγκεκριμένη μονάδα απομόνωσης, στις  ακόλουθες δοκιμασίες με αρνητικό αποτέλεσμα σε κάθε περίπτωση: - ουραίο φυματινισμό του υπουργείου Γεωργίας των Ηνωμένων Πολιτειών της Αμερικής (USDA), - τυποποιημένο ορολογικό σε σωλήνα έλεγχο του USDA για βρουκέλλωση που είναι αρνητικός σε λιγότερες  από 30 ΔΜ συγκόλλησης ανά χιλιοστόλιτρο και συμπληρωματική δοκιμασία ακινητοποίησης που δείχνει μια  μέτρηση βρουκέλλας μικρότερη από 20 μονάδες ΕΟΚ ανά χιλιοστόλιτρο (20 μονάδες ICFT), - ορολογική δοκιμασία για ενζωτική λεύκωση βοοειδών, σύμφωνα με τη διαδικασία που καθορίστηκε στο  παράρτημα Z της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ, - δοκιμή αδρανοποίησης ή δοκιμή ELISA για μολυσματική ρινο-τραχεΐτιδα βοοειδών/μολυσματική  φλυκταινώδη αιδοιο-κολπίτιδα, - δοκιμή απομόνωσης ιού για τη μολυσματική διάρροια των βοοειδών σε δείγματα αίματος σε  ευπρόσβλητες κυτταροκαλλιέργειες διαδοχικά εκτεθειμένες σε δοκιμή φθοριζώντων αντισωμάτων ή μια  δοκιμή ανοσοπεροξειδάσης, εφόσον, αν κατά την είσοδό του κάποιος ταύρος ήταν νεώτερος από έξι  μήνες, ο έλεγχος μετατέθηκε μέχρις ότου το ζώο έφτασε στην ηλικία αυτή, καθώς και στις ακόλουθες δοκιμασίες με αρνητικό αποτέλεσμα σε κάθε περίπτωση, εκτός της περίπτωσης  που το παρόν πιστοποιητικό αφορά σπέρμα που έχει συλλεχθεί και μεταφερθεί μέχρι την 1η Ιανουαρίου  1993 και εφόσον το κράτος μέλος εισαγωγής έχει γνωστοποιήσει γραπτώς ότι εφαρμόζει τους όρους της  παραγράφου 1 του άρθρου 1 της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής: - δοκιμασία αναστολής ELISA για γαγγραινώδη κόρυζα, χρησιμοποιώντας ένα κατά ομάδα ειδικό  μονοκλωνικό αντίσωμα, σύμφωνα με τη διαδικασία του παραρτήματος IVA της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της  Επιτροπής, - δοκιμή ανοσοδιάχυσης σε άγαρ για όλους τους ορότυπους της ενζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας στις  Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής, η οποία διεξάγεται σύμφωνα με τη διαδικασία του παραρτήματος IVB  της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής, με την εξασφάλιση ότι όλες ή κάποιες από τις ανωτέρω δοκιμασίες μπορεί να πραγματοποιήθηκαν όταν τα  ζώα ευρίσκονταν στην επίσημα εγκεκριμένη μονάδα απομόνωσης, εφόσον, αν το αποτέλεσμα κάποιας  δοκιμασίας για την οποία απαιτείται για το εν λόγω πιστοποιητικό, αρνητικό αποτέλεσμα, ήταν άλλο  από αρνητικό, η περίοδος απομόνωσης των 30 ημερών για τους άλλους ταύρους στη μονάδα απομόνωσης δεν  θεωρήθηκε να έχει αρχίσει παρά αφού το συγκεκριμένο ζώο απομακρύνθηκε από τη μονάδα και,  ενδεχομένως, αποκαταστάσθηκε το καθεστώς φυματίωσης ή βρουκέλλωσης της μονάδας, v) έχοντας διανύσει, μετά από την ολοκλήρωση των περιγραφόμενων στο σημείο IV) δοκιμασιών προ της  απομόνωσης, μια περίοδο τουλάχιστον 30 ημερών σε μια επίσημα εγκεκριμένη μονάδα απομόνωσης η οποία,  κατά την ημερομηνία εισόδου τους, βρισκόταν στο κέντρο ενός κύκλου ακτίνας 10 χλμ. στον οποίο δεν  υπήρχε κανένα κρούσμα αφθώδους πυρετού, πανώλους κατοικιδίων (πανώλης βοοειδών), μεταδοτικής  πλευροπνευμονίας βοοειδών ή φλυκταινώδους στοματίτιδας, ενώ το κέντρο θα πρέπει να είναι  απαλλαγμένο επί τουλάχιστον τρεις μήνες από την ασθένεια του αφθώδους πυρετού και τη βρουκέλλωση  και επί τουλάχιστον 30 ημέρες από λύσσα, άνθρακα, φυματίωση και ενζωοτική λεύκωση βοοειδών και το  οποίο να υποβλήθηκε στους ακόλουθους ελέγχους με αρνητικό αποτέλεσμα σε κάθε περίπτωση: - μια τυποποιημένη ορολογική δοκιμασία σωλήνος του USDA για βρουκέλλωση ο οποίος είναι αρνητικός σε  λιγότερο από 30 ΔΜ συγκόλλησης ανά χιλιοστόλιτρο και ένα συμπληρωματικό έλεγχο ακινητοποίησης  εμφανίζοντας μέτρηση βρουκέλλας χαμηλότερη από 20 μονάδες ΕΟΚ ανά χιλιοστόλιτρο (20 μονάδεσ ICFT). - είτε μια δοκιμή ανοσοφθορισμού ή μια δοκιμή καλλιέργειας για Campylobacter foetus σε δείγμα  επιδερμικού υλικού ή εκπλύματα τεχνητού κόλπου, - μια μικροσκοπική εξέταση και μια δοκιμή καλλιέργειας για Trichomonas foetus σε δείγμα επιδερμικών  εκπλυμάτων, - μία δοκιμή ουδετεροποίησης ορού ή δοκιμή ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ιό της  μολυσματικής ρινο-τραχεΐτιδας/μολυσματικής φλυκταινώδους αιδοιο-κολπίτιδας, εφόσον το αποτέλεσμα κάποιου ελέγχου ήταν άλλο από αρνητικό η περίοδος απομόνωσης των 30 ημερών για  τα λοιπά ζώα δεν θεωρήθηκε ότι έχει αρχίσει παρά αφού του συγκεκριμένο ζώο απομακρύνθηκε από τη  μονάδα, και έχει αποκατασταθεί η σχετική με τη βρουκέλλωση υγειονομική κατάσταση της μονάδας, και κατά την οποία υποβλήθηκαν σε αγωγή κατά της λεπτοσπείρωσης με ένεση κατά δύο ξεχωριστές  δόσεις, σε διάστημα 14 ημερών, ή στρεπτομυκίνης ή διυδροστρεπτομυκίνης, ή ένα μείγμα αυτών, σε  αναλογία 25 mg ανά kg ζώντος βάρους G δ) υποβλήθηκαν τουλάχιστον μια φορά το χρόνο στις ακόλουθες δοκιμασίες με αρνητικό αποτέλεσμα σε  κάθε περίπτωση: i) ουραίο φυματινισμό του USDA, ii) τυποποιημένο ορολογικό σε σωλήνα έλεγχο του USDA που είναι αρνητικός σε λιγότερο από 30 ΔΜ  συγκόλλησης ανά χιλιοστόλιτρο και συμπληρωματική δοκιμασία ακινητοποίησης εμφανίζοντας μια μέτρηση  βρουκέλλας χαμηλότερη από 20 μονάδες ΕΟΚ ανά χιλιοστόλιτρο (20 μονάδες ICTF), iii) ορολογική δοκιμασία για ενζωοτική λεύκωση βοοειδών εκτελεσθέντα σύμφωνα με τη διαδικασία που  καθορίζεται στο παράρτημα Z της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ, iv) δοκιμή αδρανοποίησης ορού ή δοκιμή ELISA για μολυσματική ρινο-τραχεΐτιδα των  βοοειδών/μολυσματική φλυκταινώδη αιδοιο-κολπίτιδα, εφόσον, σε σχέση με σπέρμα αν έχει συλλεχθεί  πριν τις 31 Δεκεμβρίου 1992 και όπου η αρμόδια αρχή του εισάγοντος κράτους μέλους έχει έτσι γραπτά  υποδείξει, το σπέρμα ταύρων θετικών σε οποιαδήποτε από αυτές τις δοκιμές μπορεί να γίνει δεκτό  εφόσον μια δοκιμή απομόνωσης ιού ή επιμόλυνσης ζώου για το ανωτέρω σύμπλεγμα ασθενειών έχει  εκτελεσθεί στο εν λόγω σπέρμα με αρνητικό αποτέλεσμα, στην τελευταία αυτή περίπτωση η δοκιμή να  έχει πραγματοποιηθεί στο .............. στο .............. εργαστήριο G v) είτε δοκιμή ανοσωφθορισμού ή δοκιμή καλλιέργειας για Campylobacter foetus σε ένα δείγμα  επιδερμικού υλικού ή εκπλύματα τεχνητών κόλπων, ενώ δεν απαιτείται η σχετική δοκιμή στην περίπτωση  ζώων που δεν χρησιμοποιούνται για την παραγωγή σπέρματος, υπό τον όρο ότι η εν λόγω δοκιμή  διεξάγεται πριν από την επανάληψη της παραγωγής σπέρματος, vi) ένας ορολογικός έλεγχος για τους ορότυπους canicola, pomona, grippotyphosa, hardjo και  icterohaemorragica της Lertospira, καθώς και, τουλάχιστον δύο φορές το χρόνο, στις ακόλουθες δοκιμασίες με αρνητικό αποτέλεσμα σε κάθε  περίπτωση, εκτός της περίπτωσης που το παρόν πιστοποιητικό αφορά σπέρμα που έχει συλλεχθεί και  μεταφερθεί μέχρι την 1η Ιανουαρίου 1993 και εφόσον η κτηνιατρική αρχή του κράτους μέλους εισαγωγής  έχει δηλώσει γραπτώς ότι εφαρμόζει τις διατάξεις της παραγράφου 1 της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της  Επιτροπής: i) δοκιμασία αναστολής ELISA για την ανίχνευση της γαγγραινώδους κόρυζας, χρησιμοποιώντας ένα κατά  ομάδα ειδικό μονοκλωνικό αντίσωμα, σύμφωνα με τη διαδικασία του παραρτήματος IVA της απόφασης  91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής, ii) δοκιμασία ανοσοδιάχυσης σε άγαρ για όλους τους ορότυπους της ενζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας  που υπάρχουν στις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής, σύμφωνα με τη διαδικασία του παραρτήματος IVB  της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής, ότι οι ανωτέρω έλεχγοι (με εξαίρεση το φυματινισμό) να έχουν εκτελεστεί σε εργαστήριο εγκεκριμένο  για το σκοπό αυτό από την ομοσπονδιακή κτηνιατρική αρχή των Ηνωμένων Πολιτειών της Αμερικής. 4. Το σπέρμα που περιγράφεται ανωτέρω: - ταξινομείται ως απαλλαγμένο γαγγραινώδους κόρυζας σύμφωνα με τον ορισμό του παραρτήματος 2Α της  απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής, και ιδίως της παραγράφου 5 (*), ή - θεωρείται ότι έχει υποστεί έλεγχο για γαγγραινώδη κόρυζα, σύμφωνα με τον ορισμό τους παραρτήματος  2Β της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής και ιδίως της παραγράφου 2 και εφόσον η κτηνιατρική αρχή  του κράτους μέλους εισαγωγής έχει δηλώσει γραπτώς ότι εφαρμόζει τους όρους της παραγράφου 1 του  άρθρου 1 της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής (*), (*) Διαγράψτε ό,τι δεν χρειάζεται. και έχει: α) συλλεχθεί, χωρίς τη χρήση τεχνικών ηλεκτρικής εκσπερμάτωσης ή ηλεκτρικής διέργεσης, από ταύρους  σε εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος: i) οι οποίοι βρίσκονται συνεχώς στην επικράτεια των Ηνωμένων Πολιτειών της Αμερικής για περίοδο που  αρχίζει τουλάχιστον έξι μήνες πριν την πρώτη συλλογή του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω και  τελειώνει κατά την ημερομηνία της μεταφοράς του, ii) οι οποίοι, διαφορετικά από ό,τι προβλέπεται σε γραπτή παρέκκλιση, όπως, περιγράφεται στο σημείο  3 στοιχείο δ iv) ανωτέρω, ή στο άρθρο 1 παράγραφος 1 της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της Επιτροπής, δεν  έχουν παρουσιάσει θετικό αποτέλεσμα σε οποιανδήποτε από τις δοκιμασίες που αναφέρονται στο παρόν  πιστοποιητικό, iii) οι οποίοι δεν χρησιμοποιήθηκαν, κατά τη διάρκεια παρομονής τους στο εγκεκριμένο κέντρο  συλλογής σπέρματος, για φυσική εργασία, iv) οι οποίοι παρέμειναν στο εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος για μια συνεχή περίοδο  τουλάχιστον 30 ημερών αμέσως πριν από τη συλλογή του σπέρματος, v) οι οποίοι δεν παρουσίασαν κανένα κλινικό σύμπτωμα ασθένειας G β) υποστεί επεξεργασία σε εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος: i) στο οποίο, κατά τη διάρκεια της συλλογής του σπέρματος που περιγράφεται ανωτέρω, κανένα άλλο  σπέρμα δεν έτυχε επεξεργασίας εκτός από σπέρμα ταύρων στα εγκεκριμένα κέντρα ή σπέρμα ταύρων της  ίδιας υγειονομικής κατάστασης με ταύρους των εγκεκριμένων κέντρων, εφόσον στην τελευταία περίπτωση,  η εν λόγω επεξεργασία έλαβε μέρος με ξεχωριστό εξοπλισμό και σε διαφορετικούς χρόνους σε σχέση με  την επεξεργασία σπέρματος από εγκεκριμένα κέντρα και η μονάδα επεξεργασίας ήταν εντελώς καθαρισμένη  και απολυμασμένη πριν να ξαναχρησιμοποιηθεί για την επεξεργασία σπέρματος ταύρων στα εγκεκριμένα  κέντρα, ii) με όρους αυστηρότατης υγιεινής, όλα τα εργαλεία και ο εξοπλισμός που έρχονται σε επαφή με τους  δωρητές ταύρους να έχουν σωστά απολυμανθεί ή αποστειρωθεί, με κατάλληλο τρόπο, πριν τη χρήση, iii) χρησιμοποιώντας προσθετικά, αραιωτικά ή άλλους τροποποιητές στους οποίους κάθε προϊόν ζωικής  προέλευσης έχει ληφθεί από πηγές που δεν παρουσιάζουν κίνδυνο για την υγεία ή οι οποίοι δεν έχουν  υποστεί επεξεργασία προ της χρήσεως έτσι ώστε να προλαμβάνονται οι εν λόγω κίνδυνοι για την υγεία G γ) προστατεύθηκε με την προσθήκη των ακόλουθων αντιβιοτικών στις προσότητες που ήταν απαραίτητες  για να παραχθούν οι ενδεικνυόμενες συγκεντρώσεις στο τελικό αραιωμένο σπέρμα: όχι λιγότερο από: - 500 ΔΜ ανά ml στρεπτομυκίνη, - 500 ΔΜ ανά ml πενικιλλίνη, - 150 mg ανά ml λινκομυκίνη, - 300 mg ανά ml σπεκτινομυκίνη, και αμέσως μετά διατηρήθηκε σε θερμοκρασία όχι μικρότερη από 5 °C (41 °F) για περίοδο όχι μικρότερη  από 45 λεπτά ή όχι λιγότερο από: - 50 mg ανά ml τυλοσίνη, - 250 mg ανά ml γενταμυκίνη, - 150 mg ανά ml λινκομυκίνη, - 300 mg ανά ml σπεκτινομυκίνη, με την επαφή μεταξύ του αντιβιοτικού και του μη αραιωμένου σπέρματος διατηρούμενη επί τρία λεπτά  τουλάχιστον στη θερμοκρασία στην οποία αναμείχθηκαν και το σπέρμα και το μη-γλυκερινικό τμήμα του  αραιωτικού να διατηρούνται σε μία θερμοκρασία όχι μικρότερη από 5 ° C (41 °F) επί δύο ώρες  τουλάχιστον G δ) τοποθετήθηκε σε ατομικά δοχεία (τριχοειδείς σωλήνες) έκαστος των οποίων φέρει ενδείξεις με την  ημερομηνία συλλογής, τη φυλή και την ταυτότητα του δωρητή ταύρου και την ταυτότητα του εγκεκριμένου  κέντρου συλλογής, εφόσον οι εν λόγω ενδείξεις ή οποιοδήποτε τμήμα αυτών, μπορεί να τίθενται  κωδικοποιημένες και η πλήρης μετάφραση των σχετικών κωδικών να έχει τεθεί στη διάθεση της αρμόδια  αρχής του κράτους μέλους εισαγωγής και εφόσον υπάρχει καθαρή αντιστοιχία μεταξύ του σήματος σε κάθε  τριχοειδή σωλήνα και του χαρακτηρισμού που αναφέρεται στο παρόν πιστοποιητικό G ε) αποθηκεύτηκε, σε δοχεία τα οποία έχουν εντελώς καθαριστεί και απολυμανθεί ή αποστειρωθεί, με τον  κατάλληλο τρόπο, πριν τη χρήση και χρησιμοποιώντας κρυογενικά μέσα τα οποία δεν έχουν προηγουμένως  χρησιμοποιηθεί για κανένα άλλο προϊόν ζωικής προέλευσης, στο εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος  κάτω από την εποπτεία του κτηνίατρου του κέντρου για περίοδο όχι μικρότερη από 30 ημέρες πριν από  τη μεταφορά G στ) δεν εξήχθη, μετά την ημερομηνία διαξεαγωγής δοκιμασίας σε οποιονδήποτε ταύρο στο κέντρο  συλλογής, με θετικό αποτέλεσμα, με εξαίρεση τη δοκιμή για γαγγραινώδη κόρυζα ή για επιζωοτική  αιμορραγική ασθένεια όπως προβλέπεται στην παράγραφο 1 του άρθρου 1 της απόφασης 91/479/ΕΟΚ της  Επιτροπής ή δοκιμή για μολυσματική ρινο-τραχεΐτιδας των βοοειδών/μολυσματική φλυκταινώδη  αιδοιο-κολπίτιδα όπως προβλέπεται σε γραπτή παρέκκλιση σύμφωνα με το σημείο 3 στοιχείο δ) iv)  ανωτέρω, ή πριν από την αποκατάσταση της υγειονομικής κατάστασης του κέντρου G ζ) μεταφέρθηκε σε δοχεία τα οποία έχουν εντελώς καθαριστεί και απολυμανθεί ή αποστειρωθεί, με τον  κατάλληλο τρόπο, πριν από τη χρήση και χρησιμοποιώντας κρυογενικά τα οποία δεν έχουν προηγουμένως  χρησιμοποιηθεί για κανένα άλλο προϊόν ζωικής προέλευσης και τα οποία έχουν σφραγιστεί κάτω από την  εποπτεία του ομοσπονδιακού κτηνίατρου πριν από την αποστολή από το εγκεκριμένο κέντρο συλλογής  σπέρματος. >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ> ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ Ι Β ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΟ ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΤΙΚΟ για τη μεταφορά σπέρματος από έναν περιέκτη  σε άλλον με σκοπό την αποστολή του από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής στην Ευρωπαϊκή  Οικονομική Κοινότητα Ο υπογεγραμμένος ομοσπονδιακός κτηνίατρος, πιστοποιώ ότι: το σπέρμα το οποίο  αφορούν τα πιστοποιητικά και οι σφραγίσεις που αναφέρονται κατωτέρω, μεταφέρθηκαν σε εγκεκριμένο  κέντρο συλλογής σπέρματος και με άμεση επίβλεψη, από τους περιέκτες στους οποίους παρελήφθη, με  άθικτες τις σφραγίσεις, στον περιέκτη μέσα στον οποίο να αποσταλεί στην Ευρωπαϊκή Οικονομική  Κοινότητα. >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ> ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ ΙΙ Α Διαδικασία για την κατάταξη ως απαλλαγμένου γαγγραινώδους κόρυζας  σπέρματος βοοειδών προορισμένου για εξαγωγή από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής στην Ευρωπαϊκή  Οικονομική Κοινότητα 1. Όλα τα βοοειδή στο εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος υποβάλλονται,  εντός 30 ημερών πριν από την είσοδό τους στο κέντρο και στη συνέχεια κάθε έξι μήνες, σε  δοκιμή-ELISA για αντισώματα του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας και σε δοκιμή AGID για αντισώματα  κατά όλων των φυλών του ιού της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας που υπάρχουν στις Ηνωμένες  Πολιτείες της Αμερικής σύμφωνα με τους κανόνες εκτέλεσης που αναφέρονται στο παράρτημα IV. 2. Ένας ταύρος που έδωσε αρνητικό αποτέλεσμα στην πιο πρόσφατη από τις δοκιμασίες που αναφέρονται  στο σημείο 1, προσδιορίζεται για τους σκοπούς της παρούσας απόφασης ως οροαρνητικός για γαγγραινώδη  κόρυζα εκτός ή μέχρις ότου το σπέρμα του ταύρου δώσει θετικό αποτέλεσμα σε οποιαδήποτε από τις  δοκιμασίες που αναφέρονται στο παρόν παράρτημα ή στο παράρτημα ΙΙΙ. 3. Η άνευ φορέων περίοδος, σε ό,τι αφορά ένα εγκεκριμένο κέντρο συλλογής σπέρματος, προσδιορίζεται  για τους σκοπούς της παρούσας απόφασης ως περίοδος που αρχίζει 21 ημέρες μετά την ημερομηνία που  ορίζεται από το υπουργείο γεωργίας των Ηνωμένων Πολιτειών και γνωστοποιείται χωρίς καθυστέρηση στη  διαχείριση του ενδιαφερόμενου εγκεκριμένου κέντρου συλλογής σπέρματος και στην Επιτροπή των  Ευρωπαϊκών Κοινοτήτων, κατά την οποία κάθε δραστηριότητα των ειδών αυτών Cullcoides ικανών να  μεταδώσουν τον ιό της γαγγραινώδους κόρυζας ή της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας σταματά στη  περιοχή στην οποία ευρίσκεται το κέντρο, και λήγει 21 ημέρες πριν από την ημερομηνία, που  προσδιορίζεται και ενημερώνεται παρόμοια, κατά την οποία η δραστηριότητα τέτοιων Cullcoides  ξαναρχίζει. 4. Μια περίοδος συλλογής σπέρματος, σε ό,τι αφορά τη συλλογή σπέρματος για εξαγωγή στην Κοινότητα,  προσδιορίζεται για τις ανάγκες της παρούσας απόφασης ως εάν μία περίοδος όχι μεγαλύτερη από τρεις  εβδομάδες κατά τη διάρκεια της οποίας συλλέγεται το εν λόγω σπέρμα. Εάν ο πραγματικός χρόνος κατά  τον οποίο το εν λόγω σπέρμα συλλέγεται, είναι μεγαλύτερος από τρεις εβδομάδες τότε ο χρόνος αυτός  διαιρείται σε δύο ή περισσότερες περιόδους συλλογής, καμία από τις οποίες δεν είναι μεγαλύτερη από  τρεις εβδομάδες και καθεμία από τις οποίες εκλαμβάνεται ως ξεχωριστή περίοδος συλλογής όσον αφορά  την εφαρμογή των ελέγχων και διαδικασιών των σχετικών με την γαγγραινώδη κόρυζα και την επιζωοτική  αιμορραγική ασθένεια που αναφέρονται στην παρούσα απόφαση. 5. Σπέρμα το οποίο εμπίπτει σε οποιαδήποτε των κατωτέρω περιγραφόμενων κατηγοριών ταξινομείται ως  απαλλαγμένο γαγγραινώδους κόρυζας για τους σκοπούς της εξαγωγής του εν λόγω σπέρματος στην  Ευρωπαϊκή Κοινότητα: α) σπέρμα που έχει συλλεχθεί κατά τη διάρκεια της άνευ φορέων περιόδου από ταύρο ορο-αρνητικό για  γαγγραινώδη κόρυζα όταν δείγμα αίματος του συγκεκριμένου ταύρου, που έχει συλλεχθεί 21 ημέρες μετά  το τέλος της περιόδου συλλογής σπέρματος, έχει υποβληθεί, με αρνητικό αποτέλεσμα, σε δοκιμή ELISA  για αντισώματα του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας και σε δοκιμή AGID για αντισώματα κατά όλων των  οροτύπων του ιού της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας που υπάρχουν στις Ηνωμένες Πολιτείες της  Αμερικής σύμφωνα με τα πρωτόκολλα δοκιμής που αναφέρονται στο παράρτημα IV G β) σπέρμα που έχει συλλεχθεί πέραν της άνευ φορέων περιόδου από ταύρο οροαρνητικό για γαγγραινώδη  κόρυζα όταν δείγμα αίματος του συγκεκριμένου ταύρου, το οποίο έχει συλλεχθεί 21 ημέρες μετά το  τέλος της περιόδου συλλογής, έχει υποβληθεί, με αρνητικό αποτέλεσμα, σε δοκιμή ELISA για αντισώματα  του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας κόρυζας και σε δοκιμή AGID για αντισώματα κατά όλων των γνωστών  οροτύπων της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας που απαντώνται στις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής  σύμφωνα με τα πρωτόκολλα δοκιμής που αναφέρονται στο παράρτημα IV και όταν δείγματα αίματος  συλλεχθέντα από τον ταύρο κατά τις ημερομηνίες της συλλογής του σπέρματος που προορίζεται για  εξαγωγή έχουν υποβληθεί, με αρνητικό αποτέλεσμα, στη διαδικασία απομόνωσης ιού που περιγράφεται στο  παράρτημα ΙΙΙ G  ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ II Β Διαδικασία για την κατάταξη του σπέρματος βοοειδών, που προορίζεται για  εξαγωγή από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής στην Ευρωπαϊκή Οικονομική Κοινότητα, στην κατηγορία  του σπέρματος που έχει υποστεί δοκιμή για την ανίχνευση της γαγγραινώδους κόρυζας 1. Εφαρμόζονται  οι ορισμοί του παραρτήματος ΙΙ Α. 2. Το σπέρμα που εμπίπτει σε οποιαδήποτε από τις κατωτέρω κατηγορίες, θεωρείται ότι έχει υποστεί  δοκιμή για την ανίχνευση της γαγγραινώδους κόρυζας με σκοπό την εξαγωγή του στην Ευρωπαϊκή  Κοινότητα: α) σπέρμα που έχει συλλεχθεί κατά τη διάρκεια της άνευ φορέων περιόδου, το οποίο δεν είναι  οροαρνητικό για γαγγραινώδη κόρυζα, εφόσον η σύγκριση δείγματος που έχει συλλεχθεί στην αρχή της  άνευ φορέων περιόδου με δείγμα που έχει συλλεχθεί δεν δείχνει στοιχεία ορομετατροπής ή τετραπλάσια  ή μεγαλύτερη αύξηση στο επίπεδο των αντισωμάτων που αδρανοποιούν τον ορό σε κανέναν από τους  ορότυπους του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας ή του ιού της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας που  απαντώνται στις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής και εφόσον δείγματα αίματος που έχουν συλλεχθεί από  τον ταύρο κατά τις ημερομηνίες συλλογής του σπέρματος που προορίζεται για εξαγωγή στην Κοινότητα,  έχουν υποβληθεί με αρνητικό αποτέλεσμα, στη διαδικασία απομόνωσης ιού, που περιγράφεται στο  παράρτημα ΙΙΙ G β) σπέρμα που έχει συλλεχθεί οποιαδήποτε εποχή του έτους, από ταύρο που δεν είναι οροαρνητικός,  εφόσον μια σύγκριση δείγματος αίματος που έχει συλλεχθεί στην αρχή της περιόδου συλλογής με δείγμα  που έχει συλλεχθεί 21 ημέρες μετά το πέρας της ίδιας περιόδου, δεν παρουσιάζει ενδείξεις  ορομετατροπής ή τετραπλάσια ή μεγαλύτερη αύξηση στο επίπεδο των αντισωμάτων που ουδετεροποιούν τον  ορό σε κανέναν από τους ορότυπους του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας ή του ιού της ενζωοτικής  αιμορραγικής ασθένειας, που απαντώνται στις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής και εφόσον δείγματα  αίματος τα οποία έχουν συλλεχθεί από τον ταύρο κατά τις ημερομηνίες της συλλογής του σπέρματος που  προορίζεται για εξαγωγή, έχουν υποστεί, με αρνητικό αποτέλεσμα, τη διαδικασία απομόνωσης ιού, που  περιγράφεται στο παράρτημα ΙΙΙ. 3. Το σπέρμα που έχει υποστεί δοκιμή για την ανίχνευση της γαγγραινώδους κόρυζας, θα πρέπει να  πιστοποιείται χωριστά από το σπέρμα που έχει χαρακτηριστεί απαλλαγμένο της γαγγραινώδους κόρυζας  σύμφωνα με το παράρτημα ΙΙ Α.  ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ III Διαδικασία απομόνωσης ιού για την ανίχνευση του ιού της γαγγραινώδους  κόρυζας σε αίμα με σκοπό την εξαγωγή σπέρματος βοοειδών από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής  στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα 1. Λαμβάνεται αίμα από τον ταύρο κατά την ημέρα κάθε συλλογής σπέρματος  προοριζόμενου για εξαγωγή (συνήθως δύο φορές την εβδομάδα) και ενοφθαλμίζεται υποδόρια και  ενδοδερμικά σε ένα πρόβατο, προσδιορισμένο με παρεμποδιστιτική δοκιμή ELISA πριν από τον εν λόγω  ενοφθαλμισμό ως οροαρνητικό, μέσα σε 48 ώρες από τη συλλογή. 2. Αίμα για απομόνωση ιού συλλέγεται δύο φορές την εβδομάδα από το πρόβατο και για περίοδο τριών  εβδομάδων αρχίζοντας κατά την ημέρα του πρώτου ενοφθαλμισμού αναφέρεται στο σημείο 1. 3. Αίμα από τον ταύρο και το πρόβατο ενοφθαλμίζεται μέσα σε 48 ώρες από τη συλλογή, σε τουλάχιστον  έξι αβγά ορνίθων τα οποία περιέχουν έμβρυα έντεκα ημερών. 4. Αν δεν υπάρχουν καθόλου θάνατοι εμβρύων ή αν οι θάνατοι εμβρύων συμβούν μέσα σε δύο μέρες από  τον ενοφθαλμισμό χωρίς ειδικές κηλίδες, η δοκιμή θεωρείται αρνητική μετά από επτά ημέρες. 5. Υλικό από οποιοδήποτε έμβρυο που πεθαίνει μεταξύ δύο και επτά ημερών διέρχεται μέσα από αβγά  ορνίθων τα οποία περιέχουν έμβρυα έντεκα ημερών, χρησιμοποιώντας τουλάχιστον έξι αβγά ανά νεκρό  έμβρυο. 6. Αν η διέλευση του υλικού από νεκρό έμβρυο προκαλεί εμβρυακή θνησιμότητα της τάξης του 50 % ή  περισσότερο, η δοκιμή θεωρείται θετική. Ο ιός ή οι ιοί, μετά από κυτταροκαλλιέργεια, εξετάζονται ως  προς τον ορότυπό τους για να επιβεβαιωθεί η ύπαρξη του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας. 7. Λαμβάνεται ορός δύο φορές την εβδομάδα από τον ταύρο και μία φορά την εβδομάδα από το πρόβατο  για περίοδο τριών εβδομάδων και υπόκειται στην παρεμποδιστική ELISA που περιγράφεται στο παράρτημα  IV, δοκιμή ουδετεροποίησης ορού για αντισώματα ιού της γαγγραινώδους κόρυζας, η δοκιμή  ανοσοδιάχυσης σε πήγμα αγαρόζης (AGID) που περιγράφεται στο παράρτημα IV και δοκιμή ουδετεροποίησης  ορού για αντισώματα ιού της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας. 8. Το πρόβατο υποβάλλεται εκ νέου σε παρεμποδιστική δοκιμή ELISA 21 ημέρες μετά τον τελευταίο  ενοφθαλμισμό με αίμα ταύρου. 9. Ορομετατροπή ή τετραπλάσια ή μεγαλύτερη αύξηση του αντισωματικού τίτλου είτε στον ταύρο ή στο  πρόβατο υποδεικνύει τρέχουσα ή πρόσφατη μόλυνση και η δοκιμή θεωρείται θετική. 10. Η ορολογική εξέταση εκτελείται σε όλα τα δείγματα μαζί κατά το τέλος της περιόδου συλλογής. 11. Το σπέρμα δεν επιτρέπεται να εξαχθεί μέχρι ότου ολοκληρωθούν όλοι οι έλεγχοι με αρνητικό  αποτέλεσμα.  ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ IV A Πρωτόκολλο της παρεμποδιστικής ή ανταγωνιστικής ενζυματικής  ανοσοαπορροφητικής μεθόδου δοκιμής χρησιμοποιώντας ένα κατά ομάδα ειδικό μονοκλωνικό αντίσωμα για  την ανίχνευση αντισωμάτων του ιού της γαγγραινώδους κόρυζας Η ΑΝΤΑΓΩΝΙΣΤΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ELISA ΓΙΑ ΤΗ  ΓΑΓΓΡΑΙΝΩΔΗ ΚΟΡΥΖΑ ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΤΟΥ ΜΟΝΟΚΛΩΝΙΚΟΥ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΟΣ 3-17-Α3 Η μέθοδος είναι ικανή να ανιχνεύσει αντισώματα όλων των γνωστών οροτύπων του ιού της κυανής γλώσσας  (BTV). Η αρχή της μεθόδου είναι η διακοπή της αντίδρασης μεταξύ του αντιγόνου του BTV και ενός κατά ομάδα  ειδικού μονοκλωνικού αντισώματος (3-17-Α3) με την προσθήκη αραιωμένων διαλυμάτων δοκιμαστικού ορού.  Τα αντισώματα του BTV που υπάρχουν στο δοκιμαστικό ορό παρεμποδίζουν την ικανότητα αντίδρασης του  μονοκλωνικού αντισώματος (Mab) και προκαλούν μια μείωση στην αναμενόμενη ανάπτυξη χρώματος κατά την  προσθήκη του ενζυματικού υποστρώματος. Μέσα και αντιδραστήρια 1. Τρυβλία μικροτιτλοδότησης επιπέδου πυθμένα. 2. Αντιγόνο: παρασκευαζόμενο όπως περιγράφεται κατωτέρω. 3. Παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα: 5 % (β/ο) αποξηραμένη σκόνη γάλακτος «Marvel», 0,1 % (ο/ο)  Tween-20 (προμηθευόμενο σαν σιρόπι του πολυοξυαιθυλενοσορβιτόνιου του μονο-λαυρικού οξέος) σε PBS. 4. Μονοκλωνικό αντίσωμα: 3-17-Α3 (προμηθευόμενο σαν υπερκείμενο ιστοκαλλιέργειας υβριδώματος)  διατηρημένο στους  20 °C ή λυοφιλιμένο, αραιωμένο κατά 1/50 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα  πριν από τη χρήση, κατευθυνόμενο εναντίον κατά ομάδας ειδικού πολυπεπτιδίου p7. 5. Συζευκτικό: αντιγλοβουλίνη ποντικού από κόνικλο (απορροφηθείσα και εκχυλισθείσα) συνεζευγμένη με  υπεροξειδάση αγριοραπανιού και διατηρούμενη στο σκοτάδι στους 4 °C. 6. Υπόστρωμα και χρωμογόνο: 0,2 gm ορθοφαινυλενοδιαμίνης (OPD) διαλυμένα σε ρυθμιστικό διάλυμα  συνιστώμενο από 2,553 gm κιτρικού οξέος και 4,574 gm δι-υδροορθοφωσφορικού νατρίου συμπληρωμένου  μέχρι τα 500 ml με απεσταγμένο νερό, διαιρεμένου σε δόσεις των 25 ml και διατηρούμενο στο σκοτάδι  στους  20 °C, με 12 μl/25 ml υπεροξειδάσης του υδρογόνου (30 % β/ο) να προστίθενται αμέσως πριν από  τη χρήση. Να χειρίζεσθε προσεκτικά το OPD - Να φορούνται γάντια - πιθανό μεταλλαξιογόνο 7. 1 γραμμομόριο θειικού οξέος: 26,6 ml οξέος προστίθενται σε 473,4 ml απεσταγμένου νερού.  Υπενθύμιση: πάντα προσθήκη οξέος σε νερό, ποτέ νερού σε οξύ. 8. Περιστροφικά παλινδρομούμενος αναδευτήρας. 9. Τρυβλίο ανάγνωσης για Elisa (η δοκιμή μπορεί να αναγνωστεί οπτικά). Σχέδιο δοκιμής >ΘΕΣΗ ΠΗΝΑΚΑ>Πρωτόκολλο δοκιμής Μάρτυρας αναφοράς Η σειρά 1 Α έως Θ είναι ένας μάρτυρας αναφοράς (τυφλός έλεγχος) αποτελούμενος από αντιγόνο BTV και  συζευκτικό. Αυτός μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ουδετεροποιήσει το τρυβλίο ανάγνωσης Elisa. Έλεγχος Mab  Η σειρά 2 Α έως Θ είναι ο έλεγχος του μονοκλωνικού αντισώματος και αποτελείται από αντιγόνο BTV,  μονοκλωνικό αντίσωμα και συζευκτικό. Αυτός αντιπροσωπεύει ένα αρνητικό έλεγχο. Ο μέσος των  αναγνωζόμενων τιμών οπτικής πυκνότητας από αυτή τη σειρά ελέγχου αντιπροσωπεύει το 0 % επίπεδο  παρεμπόδισης. Θετικός έλεγχος Η σειρά 3 Α έως Θ είναι ο θετικός έλεγχος. Αυτός αποτελείται από αντιγόνο BTV, αραιωμένα διαλύματα  θετικού αντιορού, Mab και συζευκτικό. Αυτός συμπεριλαμβάνεται σαν ένας δείκτης ότι η δοκιμή  λειτουργεί κανονικά και ότι παρόμοια επίπεδα παρεμπόδισης πρέπει να παραληφθούν από δοκιμή σε  δοκιμή. Δοκιμαστικός ορός Στο ανωτέρω σχέδιο δοκιμής, 18 οροί μπορούν να εξεταστούν σε λόγους αραίωσης 1/2, 1/4, 1/8 και  1/16. Αυτό θα δώσει κάποια ένδειξη του τίτλου του αντισώματος στο δοκιμαστικό ορό. Το εύρος  αραίωσης μπορεί να επεκταθεί περαιτέρω για να αποκτηθούν τίτλοι αραίωσης ορού τελικού σημείου.  Εναλλακτικά, για ορολογικές μελέτες μεγάλης κλίμακας, ο ορός θα μπορούσε να εξεταστεί σε μία μόνο  (1/4) ή δύο αραιώσεις (1/2 και 1/4) σαν μια γρήγορη μέθοδος διαχωρισμού. Διαδικασία 1. Αραιώνεται αντιγόνο BTV σε προτιτλοδοτημένη συγκέντρωση σε PBS, υπερηχείται σύντομα για να  διασπαρούν συσπειρωμένα σωματίδια ιού (εάν δεν υπάρχει υπερηχητής, γίνεται ζωηρός σιφωνισμός) και  προστίθενται 50μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου Elisa. Οι πλευρές του τρυβλίου κτυπούνται  ελαφρά για να διασκορπιστεί το αντιγόνο. 2. Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Τα τρυβλία πλένονται τρεις  φορές υπερχειλίζοντας και αδειάζοντας τις κοιλότητες με μη αποστειρωμένο PBS και αποστύπονται σε  απορροφητικό χαρτί. 3. Προστίθενται 50 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος ανά κοιλότητα. Προστίθεται  δοκιμαστικός ορός και θετικός ορός στις κατάλληλες κοιλότητες και αραιώνεται κατά μήκος του  τρυβλίου χρησιμοποιώντας ένα σιφώνιο πολλών διαύλων. Δεν προστίθεται ορός στο μάρτυρα αναφοράς ή  τον έλεγχο Mab. 4. Αμέσως μετά την προσθήκη του δοκιμαστικού ορού, αραιώνεται το Mab σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό  διάλυμα (σε προτιτλοδοτημένη αραίωση) και προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου  εκτός από το μάρτυρα αναφοράς. 5. Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Έκπλυση τρεις φορές με PBS και  απόστυψη. 6. Αραίωση συμπυκνώματος αντιποντικού από κόνικλο σε 1/5000 σε ρυθμιστικό διάλυμα παρεμπόδισης και  προσθήκη 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου. 7. Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Έκπλυση τρεις φορές με PBS και  απόστυψη. 8. Το OPD αποψύχεται και αμέσως πριν από τη χρήση προστίθενται 12μl 30 % υπεροξειδίου του υδρογόνου  σε κάθε 25 ml OPD. Προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου. Αφήνεται να αναπτυχθεί  το χρώμα επί 10 περίπου λεπτά και η αντίδραση διακόπτεται με 1 Μ θειικού οξέος (50 μl ανά  κοιλότητα). Το χρώμα πρέπει να αναπτυχθεί στις κοιλότητες ελέγχου Mab και σε αυτές τις κοιλότητες  που περιέχουν ορό χωρίς κανένα αντίσωμα του BTV. 9. Εξετάζονται τα τρυβλία και μετρούνται τα αποτελέσματα είτε οπτικά είτε χρησιμοποιώντας  φασματοφωτομετρικό αναγνωστήρα. Ανάλυση αποτελεσμάτων Υπολογίζεται ο μέσος των μετρήσεων OD (απορρόφησης) από τους ελέγχους Mab. Αυτός αντιπροσωπεύει το  0 % επίπεδο παρεμπόδισης. Οι μετρήσεις οπτικής πυκνότητας του δοκιμαστικού ορού εκφράζονται σαν  ποσοστό τιμής παρεμπόδισης χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση: Ποσοστό τιμής παρεμπόδισης = 100    OD με παρουσία δοκιμαστικού ορού  OD με απουσία δοκιμαστικού  ορού Χ 100 Τιμές παρεμπόδισης μεγαλύτερες από 40 % σε μια αραίωση ορού κατά 1/4 θεωρούνται θετικές. Η οπτική  ανάγνωση είναι δυνατή καθώς παρεμπόδιση 40 % είναι η χαμηλότερη τιμή εύκολα διακρινόμενη με γυμνό  μάτι. Παρασκευή αντιγόνου BTV για Elisa  1. Εκπλύονται δέκα σειρές συνενωμένων κυττάρων ΒΗΚ-21 τρεις φορές με μέσο Eagle ελεύθερο ορού και  μολύνονται με ορότυπο 1 του ιού της κυανής γλώσσας με μέσο Eagle ελεύθερο ορού. 2. Επωάζονται στους 37 °C και εξετάζονται καθημερινά για κυττοπαθολογικό σύμπτωμα (κπσ). 3. Όταν το κπσ έχει φανεί στο 80 μέχρι 90 % της κυτταρικής στρώσης κάθε σειράς, ο ιός συλλέγεται με  δόνηση κάθε ακινητοποιημένου κύτταρου από το γυαλί. 4. Φυγοκέντρηση στις 2 000 ή 3 000 rpm προς ιζηματοποίηση των κυττάρων. 5. Το υπερκείμενο απορρίπτεται και τα κύτταρα επαναιωρούνται σε περίπου 30 ml PBS που περιέχει 1 %  «Sarkosyl» και 2 ml φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο (ρυθμιστικό διάλυμα λύσης). Αυτό μπορεί να  κάνει τα κύτταρα να σχηματίζουν ένα πήγμα και περισσότερο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης μπορεί να  προστεθεί για να μειώσει το φαινόμενο αυτό. Προσοχή: το φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο είναι επικίνδυνο - να χρησιμοποιείται με εξαιρετική  προσοχή. 6. Τα κύτταρα αποκόπτονται επί 60 δευτερόλεπτα χρησιμοποιώντας στέλεχος υπερηχητή με πλάτος 30  μικρών. 7. Φυγοκέντρηση στις 10 000 rpm επί δέκα λεπτά. 8. Το υπερκείμενο αποθηκεύεται στους +4 °C και το εναπομείναν κυτταρικό ίζημα επαναιωρείται σε 10  μέχρι 20 ml ρυθμιστικού διαλύματος λύσης. 9. Υπερήχηση και διαύγαση, διατηρώντας το υπερκείμενο σε κάθε στάδιο, τρεις φορές συνολικά. 10. Τα υπερκείμενα συγκεντρώνονται και φυγοκεντρούνται στις 24 000 rpm επί 120 λεπτά στους +4 °C  πάνω από ένα στρώμα 5 ml 40 % σουκρόζης (β/ο σε PBS) χρησιμοποιώντας σωλήνες φυγόκεντρου Beckmann  των 30 ml και κινητήρα SW 38. 11. Το υπερκείμενο απορρίπτεται, οι σωλήνες στεγνώνονται εντελώς και το ίζημα επαναιωρείται σε PBS  με υπερήχηση. Το αντιγόνο διατηρείται σε επιμέρους δόσεις στους 70 °C. Τιτλοδότηση του αντιγόνου BTV για Elisa  Αντιγόνο ιού κυανής γλώσσας για Elisa τιτλοδοτείται με την έμμεση Elisa. Διπλασιαζόμενες αραιώσεις  του αντιγόνου τιτλοδοτούνται εναντίον μιας σταθερής αραίωσης (1/50) του μονοκλωνικού αντισώματος  3-17-Α3. Ο κανόνας εκτέλεσης είναι ο ακόλουθος: Διαδικασία 1. Αραιώνεται αντιγόνο BTV σε PBS κατά μήκος του τρυβλίου μικροτιτλοδότησης σε σειρά  διπλασιαζόμενης αραίωσης (50 μl/κοιλότητα) χρησιμοποιώντας σιφώνιο πολλών διαύλων. 2. Επώαση επί 1 ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. 3. Τα τρυβλία εκπλύονται τρεις φορές με PBS. 4. Προστίθενται 50 μl μονοκλωνικού αντισώματος 3-17-Α3 (αραιωμένου κατά 1/50) σε κάθε κοιλότητα του  τρυβλίου μικροτιτλοδότησης. 5. Επώαση επί 1 ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. 6. Τα τρυβλία εκπλύονται τρεις φορές με PBS. 7. Προστίθενται 50 μl αντιγλοβουλίνης ποντικού από κόνικλο, συζευγμένης με υπεροξειδάση  αγριοραπανιού, αραιωμένη σε μια προτιτλοδοτημένη βέλτιση συγκέντρωση, σε κάθε κοιλότητα του  τρυβλίου μικροτιτλοδότησης. 8. Επώαση επί μία ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. 9. Προστίθεται χρωμογόνο και υπόστρωμα όπως περιγράφηκε προηγούμενα. Η αντίδραση διακόπτεται μετά  από 10 λεπτά με την προσθήκη ενός γραμμομορίου θειικού οξέος (50 μl/κοιλότητα). Κατά την ανταγωνιστική μέθοδο, το μονοκλωνικό αντίσωμα πρέπει να βρίσκεται σε περίσσεια, γι' αυτό  επιλέγεται μια αραίωση του αντιγόνου που βρίσκεται πάνω στην καμπύλη τιτλοδότησης (όχι στην περιοχή  οριζοντιοποίησης) που δίνει περίπου 0,8 OD από 10 λεπτά.  ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ IV Β Πρωτόκολλο ανοσο-διαχυτικής μεθόδου δοκιμής σε πήγμα αγαρόζης για την  ανίχνευση αντισωμάτων της επιζωοτικής αιμορραγικής ασθένειας Η δοκιμή ανοσοδιάχυσης σε πήγμα  αγαρόζης εκτελείται σύμφωνα με τον ακόλουθο κανόνα: Μέσα και αντιδραστήρια Αντιγόνο Παρασκευάζεται κατακαθιζόμενο αντιγόνο σε κάθε σύστημα κυτταροκαλλιέργειας που υποστηρίζει τον ταχύ  πολλαπλασιασμό μιας φυλής αναφοράς του ιού της κυανής γλώσσας. Συνιστώνται κύτταρα Vero ή ΒΗΚ. Το  αντιγόνο υπάρχει στο υπερκείμενο υγρό στο τέλος της καλλιέργειας του ιού, αλλά απαιτείται 50 έως  100πλάσια συγκέντρωση για να είναι αποτελεσματικό. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με κάθε τυποποιημένη  διαδικασία συμπύκνωσης πρωτεΐνης G ιός μέσα στο αντιγόνο μπορεί να αδρανοποιηθεί με την προσθήκη  0,3 % (ο/ο) β-προπιολακτόνης. Γνωστός θετικός ορός αναφοράς Χρησιμοποιώντας τον ορό και αντιγόνο παγκόσμιας αναφοράς, παράγεται ένας ορός εθνικού τύπου,  τυποποιημένος στη βέλτιστη αναλογία έναντι του ορού παγκόσμιας αναφοράς, λυοφιλιμένος και  χρησιμοποιούμενος όπως ο γνωστός ορός αναφοράς σε κάθε δοκιμή. Δοκιμαστικός ορός Διαδικασία: 1 % αγαρόζη παρασκευασμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα βορικού οξέος ή βαρβιτολικού νατρίου, pH 8,5 με  9,0, εκχύεται σε τρυβλίο με ελάχιστο βάθος 3,0 mm. Ένα σχέδιο δοκιμής επτά κοιλοτήτων ελεύθερων υγρασίας, η καθεμία με διάμετρο 5,0 mm, κόβεται μέσα  στο άγαρ. Το σχέδιο αποτελείται από μια κεντρική κοιλότητα και έξι κοιλότητες διευθετημένες γύρω  της σε ένα κύκλο ακτίνας 3 mm. >ΑΡΧΗ ΓΡΑΦΗΚΟΥ>1 6    2 Χ 5    3 4 >ΤΕΛΟΣ ΓΡΑΦΗΚΟΥ> Η κεντρική κοιλότητα πληρούται με το τυποποιημένο αντιγόνο. Οι περιφερειακές κοιλότητες 2, 4 και 6  πληρούνται με γνωστό θετικό ορό, οι κοιλότητες 1, 3 και 5 πληρούνται με δοκιμαστικό ορό. Το σύστημα επωάζεται έως 72 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε κλειστό υγρό θάλαμο. Ερμηνεία Ένας δοκιμαστικός ορός είναι θετικός αν δημιουργεί μια ειδική γραμμή κατακάθισης με το αντιγόνο και  μια πλήρη γραμμή ταυτότητας με τον ορό αναφοράς. Ένας δοκιμαστικός ορός είναι αρνητικός αν δεν  σχηματίζει μια ειδική γραμμή με το αντιγόνο και δεν κάμπτει τη γραμμή του ορού αναφοράς. Τα τρυβλία  πρέπει να εξετάζονται σε σκούρο φόντο και χρησιμοποιώντας έμμεσο φωτισμό.