CELEX: 32008D0984
Language: mt
Date: 2008-12-10 00:00:00
Title: 2008/984/KE: Deċiżjoni tal-Kummissjoni tal- 10 ta' Diċembru 2008 li temenda l-Anness C għad-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE u d-Deċiżjoni 2004/226/KE fir-rigward ta’ testijiet dijanjostiċi għal bruċellożi bovina (notifikata taħt id-dokument numru C(2008) 7642) (Test b’relevanza għaż-ŻEE)

31.12.2008   
            
            
               MT
            
            
               Il-Ġurnal Uffiċjali ta’ l-Unjoni Ewropea
            
            
               L 352/38
            
         DEĊIŻJONI TAL-KUMMISSJONI
   tal-10 ta' Diċembru 2008
   li temenda l-Anness C għad-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE u d-Deċiżjoni 2004/226/KE fir-rigward ta’ testijiet dijanjostiċi għal bruċellożi bovina
   (notifikata taħt id-dokument numru C(2008) 7642)
   (Test b’relevanza għaż-ŻEE)
   (2008/984/KE)
   IL-KUMMISSJONI TAL-KOMUNITAJIET EWROPEJ,
   Wara li kkunsidrat it-Trattat li jistabbilixxi l-Komunitajiet Ewropej,
   Wara li kkunsidrat id-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE tas-26 ta’ Ġunju 1964 dwar il-problemi tas-saħħa tal-annimali li jaffetwaw il-kummerċ ta’ annimali bovini u suwini ġewwa l-Komunità (1), u b’mod partikolari l-Artikolu 6(2)(b) u t-tieni subparagrafu tal-Artikolu 16(1) tiegħu,
   Billi:
   
               (1)
            
            
               L-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE jistabbilixxi l-metodi dijanjostiċi għall-bruċellożi bovina li għandhom jintużaw għall-kontroll u l-qerda ta’ din il-marda u għas-sorveljanza u l-monitoraġġ, kif ukoll għall-istabbiliment u ż-żamma ta’ status ta’ merħla uffiċjalment ħielsa mill-bruċellożi u ċ-ċertifikazzjoni meħtieġa għall-kummerċ intra-Komunitarju fl-annimali bovini.
            
         
               (2)
            
            
               Id-Deċiżjoni tal-Kummissjoni 2004/226/KE tal-4 ta’ Marzu 2004 li tapprova t-testijiet għas-sejbien tal-antikorpi kontra l-bruċellożi bovina fi ħdan il-qafas tad-Direttiva tal-Kunsill 64/432/KEE (2) tapprova ċerti testijiet għall-bruċellożi bovina li jistgħu jintużaw bħala alternattiva għat-test obbligatorju ta’ agglutinazzjoni tas-serum (SAT) għaċ-ċertifikazzjoni ta’ annimali bovini skont l-Artikolu 6(2)(b) tad-Direttiva 64/432/KEE.
            
         
               (3)
            
            
               L-analiżi bi fluworexxenza polarizzata (FPA) huwa test dijanjostiku ġdid li ġie inkluż bħala test preskritt għall-kummerċ internazzjonali fil-Kapitolu 2.4.3 (il-bruċellożi bovina) tal-Manwal ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008 tal-Organizzazzjoni Dinjija tas-Saħħa tal-Annimali (OIE).
            
         
               (4)
            
            
               Il-Kummissjoni talbet lill-Awtorità Ewropea għas-Sigurtà fl-Ikel (EFSA) biex tagħti opinjoni xjentifika dwar kemm hu xieraq il-FPA għall-inklużjoni fl-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE.
            
         
               (5)
            
            
               Barra minn hekk, il-Kummissjoni talbet lill-EFSA biex tevalwa kemm hu xieraq il-FPA u t-testijiet imniżżla fl-Artikolu 1 tad-Deċiżjoni 2004/226/KE għall-għan ta’ ċertifikazzjoni ta’ annimali bovini għall-kummerċ intra-Komunitarju.
            
         
               (6)
            
            
               Fil-11 ta’ Diċembru 2006, il-Bord dwar is-saħħa u l-benessri tal-annimali adotta opinjoni xjentifika dwar il-metodi dijanjostiċi tal-bruċellożi għall-bovini (3), li fiha kkonkluda li, għajr għas-SAT, it-testijiet dijanjostiċi għall-bruċellożi bovina, inklużi fl-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE huma xierqa li jibqgħu bħala testijiet standard għall-għan ta’ ċertifikazzjoni tal-annimali bovini individwali għall-kummerċ intra-Komunitarju.
            
         
               (7)
            
            
               Madankollu, billi s-SAT huwa t-test ta’ qabel ma jkunu mċaqilqa l-annimali għall-kummerċ tal-merħliet preskritt direttament fl-Artikolu 6(2)(b) tad-Direttiva 64/432/KEE, għandha tkun disponibbli speċifikazzjoni teknika fl-Anness C għal dik id-Direttiva.
            
         
               (8)
            
            
               Barra minn hekk, l-opinjoni xjentifika tal-11 ta’ Diċembru 2006 ikkonkludiet li s-sensittività u l-ispeċifiċità tal-FPA huma komparabbli għal dawk tat-testijiet inklużi fl-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE u nstab ukoll li huma xierqa għal inklużjoni f’dak l-Anness bħala test standard għal dijanjożi tal-bruċellożi f’annimali bħal dawn għal kummerċ intra-Komunitarju.
            
         
               (9)
            
            
               Il-metodi ta’ reazzjoni katina tal-polimerażi li ġew żviluppati dan l-aħħar kif deskritti fit-Taqsima 1(d) tal-Kapitolu 2.4.3 tal-Manwal ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008 tal-OIE jipprovdu mezzi addizzjonali ta’ sejbien u identifikazzjoni ta’ Brucella spp. u għaldaqstant għandhom jiġu inklużi fl-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE.
            
         
               (10)
            
            
               L-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE u d-Deċiżjoni 2004/226/KE għandhom għalhekk jiġu emendati skont dan.
            
         
               (11)
            
            
               Il-miżuri stipulati f’din id-Deċiżjoni huma skont l-opinjoni tal-Kumitat Permanenti għall-Katina Alimentari u s-Saħħa tal-Annimali,
            
         ADOTTAT DIN ID-DEĊIŻJONI:
   Artikolu 1
   L-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE qed jinbidel bit-test fl-Anness għal din id-Deċiżjoni.
   Artikolu 2
   L-Artikolu 1 tad-Deċiżjoni 2004/226/KE qed jinbidel b’dan li ġej:
   
      “Artikolu 1
      It-test tal-fissazzjoni kumplimentari, it-test tal-antiġeni tal-Brucella newtralizzat (it-test rose Bengal (RBT)), it-testijiet tal-ELISA u l-analiżi bi fluworexxenza polarizzata (FPA) imwettqa skont l-Anness C għad-Direttiva 64/432/KEE huma b’dan approvati għal għanijiet ta’ ċertifikazzjoni.”
   
   Artikolu 3
   Din id-Deċiżjoni hija indirizzata lill-Istati Membri.
   
      Magħmula fi Brussell, 10 ta’ Diċembru 2008.
      
         
            Għall-Kummissjoni
         
         Androulla VASSILIOU
         
            Membru tal-Kummissjoni
         
      
   
   
      (1)  ĠU 121, 29.7.1964, p. 1977/64.
   
      (2)  ĠU L 68, 6.3.2004, p. 36.
   
      (3)  http://www.efsa.europa.eu/EFSA/efsa_locale-1178620753812_1178620772731.htm
   
      ANNESS
      
                  1.
               
               
                  L-Anness C għad- Direttiva 64/432/KEE qed jinbidel b’dan li ġej:
                  
                     “ANNESS C
                     BRUĊELLOŻI
                     1.   IDENTIFIKAZZJONI TAL-AĠENT
                     Id-dimostrazzjoni permezz ta’ tbajja’ aċidu-reżistenti jew immunospeċifiċi ta’ organiżmi bil-morfoloġija tal-Brucella fil-materjal tal-abort, fit-tnixxijat vaġinali jew fil-ħalib tagħti evidenza preżuntiva ta’ bruċellożi, speċjalment jekk tkun sostnuta minn testijiet seroloġiċi. Il-metodi ta’ reazzjoni katina tal-polimerażi (PCR) jipprovdu mezzi addizzjonali ta’ sejbien.
                     Fejn ikun possibbli, il-Brucella spp. għandha tiġi iżolata billi jintużaw mezzi komuni jew selettivi skont il-kultura minn tnixxijat uterini, feti abortiti, tnixxijat tal-glandola mammarja jew tessuti magħżula, bħal glandoli limfatiċi u organi riproduttivi maskili u femminili.
                     Wara l-iżolament, l-ispeċi u l-bijovarjanti għandhom jiġu identifikati mil-lisi faġika u/jew testijiet ta’ metaboliżmu ossidativ, kriterji kulturali, bijokimiċi u seroloġiċi. Il-PCR tista’ tipprovdi kemm metodu komplementari kif ukoll dak bijotipiku bbażati fuq sekwenzi ġenomiċi speċifiċi.
                     It-tekniki u l-mezzi użati, l-istandardizzazzjoni u l-interpretazzjoni tagħhom tar-riżultati għandhom jikkonformaw ma’ dak speċifikat fil-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008, il-Kapitolu 2.4.3. (bruċellożi bovina), il-Kapitolu 2.7.2 (bruċellożi kaprina u ovina) u l-Kapitolu 2.8.5 (bruċellożi tal-ħnieżer).
                     2.   TESTIJIET IMMUNOLOĠIĊI
                     2.1.   Standards
                     2.1.1.   Ir-razza Nru 99 ta’ Weybridge jew ir-razza 1119-3 tal-USDA tal-bijovarjanti 1 tal-Brucella abortus għandhom jintużaw għall-preparazzjoni tal-antiġeni kollha użati fit-test rose Bengal (RBT), fit-test ta’ agglutinazzjoni tas-serum (SAT), fit-test tal-fissazzjoni kumplimentari (CFT) u fit-test taċ-ċirku fuq il-ħalib (MRT).
                     2.1.2.   Is-serum standard ta’ referenza għat-testijiet RBT, SAT, CFT u MRT għandu jkun is-serum standard ta’ referenza (OIEISS) qabel imsejjaħ it-tieni serum internazzjonali standard anti-Brucella abortus tal-WHO (ISAbS).
                     2.1.3.   Is-sjeri ta’ referenza standard għal analiżijiet ta’ immunoassorbiment enzimatiċi (ELISAs) għandhom ikunu:
                     
                                 —
                              
                              
                                 l-OIEISS,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA pożittiv b’mod dgħajjef tal-OIE (OIEELISAWPSS),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA pożittiv b’mod qawwi tal-OIE (OIEELISASPSS),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA negattiv tal-OIE (OIEELISANSS).
                              
                           2.1.4.   Is-sjeri ta’ referenza standard għal analiżijiet bi fluworexxenza polarizzata (FPAs) għandhom ikunu:
                     
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA pożittiv b’mod dgħajjef tal-OIE (OIEELISAWPSS),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA pożittiv b’mod qawwi tal-OIE (OIEELISASPSS),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 is-serum standard ELISA negattiv tal-OIE (OIEELISANSS).
                              
                           2.1.5.   Is-sjeri standard imniżżla fil-punti 2.1.3 u 2.1.4 huma disponibbli mil-laboratorju ta’ referenza Komunitarju għall-bruċellożi jew mill-Veterinary Laboratories Agency (VLA), Weybridge, ir-Renju Unit.
                     2.1.6.   L-OIEISS, l-OIEELISAWPSS„ l-OIEELISASPSS u l-OIEELISANSS huma standards primarji internazzjonali li minnhom l-istandards nazzjonali ta’ referenza sekondarji tas-sjeri (‘standards ta’ ħidma’) għandhom jiġu stabbiliti għal kull test imsemmi fil-punt 2.1.1 f’kull Stat Membru.
                     2.2.   Analiżijiet ta’ immuno-assorbiment enzimatiċi (ELISAs) jew analiżijiet oħra ta’ agglutinazzjoni għas-sejbien ta’ bruċellożi bovina fis-serum jew fil-ħalib.
                     2.2.1.   Materjali u reaġenti
                     It-teknika użata u l-interpretazzjoni tar-riżultati għandhom ikunu ġew validati skont il-prinċipji stabbiliti fil-Kapitolu 1.1.4 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008, u għandha tinkludi għall-inqas studji djanjostiċi u tal-laboratorju.
                     2.2.2.   Standardizzazzjoni tat-test
                     2.2.2.1.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test għal kampjuni individwali tas-serum:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 predilwizzjoni ta’ 1/150 (1) tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/2 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISASPSS magħmula b’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) għandha tagħti reazzjoni pożittiva;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 predilwizzjoni ta’ 1/600 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/8 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/64 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) għandha tagħti reazzjoni negattiva;
                              
                           
                                 (ċ)
                              
                              
                                 l-OIEELISANSS għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva.
                              
                           2.2.2.2.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test tat-taħlit ta’ kampjuni tas-serum:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 predilwizzjoni ta’ 1/150 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/2 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) u dilwita mill-ġdid ma’ seri negattivi għal numru ta’ drabi daqs dak tal-kampjuni li jagħmlu t-taħlita għandha tagħti reazzjoni pożittiva;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 l-OIEELISANSS għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva;
                              
                           
                                 (ċ)
                              
                              
                                 it-test għandu jkun adegwat biex isib evidenza ta’ infezzjoni f’annimal wieħed mill-grupp ta’ annimali, li l-kampjuni tagħhom tas-serum kienu ġew imħallta.
                              
                           2.2.2.3.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test għal ħalib imħallat jew ta’ xorrox:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 predilwizzjoni ta’ 1/1 000 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/125 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) u dilwita mill-ġdid għal 1/10 f’ħalib negattiv għandha tagħti reazzjoni pożittiva;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 l-OIEELISANSS dilwita għal 1/10 f’ħalib negattiv għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva;
                              
                           
                                 (ċ)
                              
                              
                                 it-test għandu jkun adegwat biex isib l-infezzjoni f’annimal wieħed mill-grupp ta’ annimali, li l-kampjuni tal-ħalib u tax-xorrox tagħhom ikunu ġew imħallta.
                              
                           2.2.3.   Kundizzjonijiet għall-użu tal-ELISAs għad-dijanjożi tal-bruċellożi bovina:
                     2.2.3.1.   Fl-użu tal-kundizzjonijiet ta’ kalibrazzjoni għall-ELISAs stabbiliti fil-punti 2.2.2.1 u 2.2.2.2 fuq il-kampjuni tas-serum, is-sensittivita’ dijanjostika tal-ELISA għandha tkun daqs jew akbar mir-RBT jew CFT filwaqt li titqies is-sitwazzjoni epidemjoloġika li fiha tiġi użata.
                     2.2.3.2.   Fl-użu tal-kundizzjonijiet ta’ kalibrazzjoni għall-ELISA stabbiliti fil-punt 2.2.2.3 fuq it-taħlita ta’ kampjuni tal-ħalib, is-sensittivita’ dijanjostika tal-ELISA għandha tkun daqs jew akbar mill-MRT filwaqt li titiqies mhux biss is-sitwazzjoni epidemjoloġika iżda wkoll is-sistemi ta’ trobbija medji u estremi mistennija.
                     2.2.3.3.   Meta l-ELISAs jintużaw għall-għanijiet ta’ ċertifikazzjoni skont l-Artikolu 6(1) jew għall-istabbiliment jew iż-żamma tal-istatus ta’ merħla skont l-Anness A(II)(10), it-taħlit tal-kampjuni tas-serum għandu jsir b’tali mod li r-riżultati tat-test ikunu jistgħu jiġu bla dubju relatati mal-annimali individwali inklużi fit-taħlita. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq il-kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.
                     2.2.3.4.   L-ELISAs jistgħu jintużaw fuq kampjun ta’ ħalib meħud mill-ħalib miġbur minn razzett b’għall-inqas 30 % tal-baqar tal-ħalib ikollhom il-ħalib. Jekk jintuża dan il-metodu, għandhom jittieħdu miżuri biex jiġi żgurat li l-kampjuni meħuda għall-eżaminazzjoni jistgħu jiġu mingħajr dubju relatati mal-annimali individwali li minnhom ikun oriġina l-ħalib. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.
                     2.3.   Test ta’ fissazzjoni kumplimentari (CFT)
                     2.3.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)) jew f’ilqugħ veronali. L-antiġeni jistgħu jitwasslu fl-istat konċentrat sakemm il-fattur ta’ dilwizzjoni li għandu jintuża jiġi indikat fuq it-tikketta tal-flixkun. L-antiġenu għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.
                     2.3.2.   Is-seri għandhom jiġu inattivati kif ġej:
                     
                                 —
                              
                              
                                 serum tal-bovini: 56 sa 60 °C għal 30 sa 50 minuta,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 serum tal-ħnieżer: 60 °C għal 30 sa 50 minuta.
                              
                           2.3.3.   Sabiex issir ir-reazzjoni ġenwina fil-proċedura tat-test, għandha tintuża doża kumplimentari ogħla mill-minimu meħtieġ għal emoliżi totali.
                     2.3.4.   Sabiex isir it-test ta’ fissazzjoni kumplimentari, il-kontrolli li ġejjin għandhom isiru kull darba:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 kontroll tal-effett antikumplimentari tas-serum;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 kontroll tal-antiġenu;
                              
                           
                                 (ċ)
                              
                              
                                 kontroll taċ-ċelluli ħomor tad-demm issensibilizzati;
                              
                           
                                 (d)
                              
                              
                                 kontroll tal-komplement;
                              
                           
                                 (e)
                              
                              
                                 kontroll bl-użu ta’ serum pożittiv ta’ sensittività fil-bidu tar-reazzjoni;
                              
                           
                                 (f)
                              
                              
                                 kontroll tal-ispeċifiċità tar-reazzjoni bl-użu ta’ serum negattiv.
                              
                           2.3.5.   Kalkolu tar-riżultati
                     L-OIEISS fih 1 000 unità internazzjonali ta’ CFT (ICFTU) għal kull ml. Jekk l-OIEISS jiġi ttestjat b’metodu partikolari r-riżultat jingħata bħala titrazzjoni (jiġifieri l-ogħla dilwizzjoni diretta tal-OIEISS li tagħti 50 % ta’ emoliżi, TOIEISS). Ir-riżultat tat-test għall-kampjun tas-serum mogħti bħala titrazzjoni (TTESTSERUM) għandu jiġi espress f’ICFTU għal kull ml. Biex tiġi konvertita l-espressjoni ta’ titrazzjoni f’ICFTU, il-fattur (F) meħtieġ għall-konverżjoni ta’ titrazzjoni tal-kampjun tas-serum mhux magħruf (TTESTSERUM) ittestjat b’dak il-metodu fl-espressjoni ICFTU jista’ jinstab mill-formula:
                     F = 1 000 × 1/TOIEISS
                     
                     u l-kontenut ta’ unitajiet internazzjonali ta’ CFT għal kull ml ta’ kampjun ta’ serum (ICFTUTESTSERUM) mill-formula:
                     ICFTUTESTSERUM = F × TTESTSERUM
                     
                     2.3.6.   Interpretazzjoni tar-riżultati
                     Serum li jkun fih 20 ICFTU jew aktar għal kull ml jitqies bħala pożittiv.
                     2.4.   Test taċ-ċirku fuq il-ħalib (MRT)
                     2.4.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)) imtebba’ b’ematossilina. L-antiġenu għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.
                     2.4.2.   Is-sensittività tal-antiġenu għandha tiġi standardizzata b’rabta mal-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi reazzjoni pożittiva f’dilwizzjoni ta’ 1/500 tal-OIEISS fil-ħalib negattiv, waqt li dilwizzjoni ta’ 1/1 000 għandha tkun negattiva.
                     2.4.3.   It-test taċ-ċirku għandu jsir fuq kampjuni li jirrappreżentaw il-kontenuti ta’ kull mastella tal-ħalib jew il-kontenut ta’ kull tank kbir mir-razzett.
                     2.4.4.   Il-kampjuni tal-ħalib ma’ għandhomx ikunu ġew iffriżati, imsaħħna jew suġġetti għal ċaqliq qawwi.
                     2.4.5.   Ir-reazzjoni għandha titwettaq bl-użu ta’ wieħed mill-metodi li ġejjin:
                     
                                 —
                              
                              
                                 fuq kolonna ta’ ħalib ta’ mill-inqas 25 mm għoli u volum ta’ ħalib ta’ 1 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda jew 0.03 ml jew 0.05 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 fuq kolonna ta’ ħalib ta’ mill-inqas 25 mm għoli u volum ta’ ħalib ta’ 2 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda 0.05 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 fuq volum ta’ ħalib ta’ 8 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda 0.08 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati.
                              
                           2.4.6.   It-taħlita tal-ħalib u l-antiġeni għandha tiġi inkubata f’37 °C għal 60 minuta, flimkien mal-istandards ta’ ħidma pożittivi u negattivi. Inkubazzjoni sussegwenti ta’ 16 sa 24 siegħa f’4 °C iżżid is-sensittività tat-test.
                     2.4.7.   Interpretazzjoni tar-riżultati:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 reazzjoni pożittiva: ħalib ikkulurit, krema bla kulur;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 reazzjoni pożittiva:
                                 
                                             —
                                          
                                          
                                             ħalib u krema kkuluriti b’mod identiku, jew
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             ħalib bla kulur u krema kkulurita.
                                          
                                       
                           2.5.   Test tal-antiġeni tal-Brucella newtralizzat (it-test Rose Bengal (RBT))
                     2.5.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’dilwit tal-antiġeni tal-Brucella newtralizzat b’pH ta’ 3.65 ± 0.05, imtebba’ bl-użu tal-kolorant tar-rose Bengal. L-antiġenu għandu jitwassal lest għall-użu u għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.
                     2.5.2.   L-antiġenu għandu jiġi ppreparat mingħajr referenza għall-konċentrazzjoni taċ-ċelluli, iżda s-sensittività tiegħu għandha tiġi standardizzata skont l-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi reazzjoni pożittiva b’dilwizzjoni tas-serum ta’ 1/45 u reazzjoni negattiva b’dilwizzjoni ta’ 1/55.
                     2.5.3.   Ir-RBT għandu jitwettaq bil-mod li ġej:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 serum (20-30 μl) huwa mħallat ma’ volum ekwivalenti ta’ antiġenu fuq maduma bajda jew platt tal-iżmalt biex tiġi prodotta żona ta’ madwar 2 cm bħala dijametru. It-taħlita tiġi mħallta bil-mod għal erba’ minuti f’temperatura tal-ambjent, u mbagħad osservata f’dawl tajjeb għall-agglutinazzjoni;
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 jista’ jintuża metodu awtomatizzat iżda għandu jkun sensittiv u preċiż għall-anqas daqs il-metodu manwali.
                              
                           2.5.4.   Interpretazzjoni tar-riżultati
                     Kull reazzjoni viżibbli għandha titqies li hija pożittiva, sakemm ma jkunx hemm nixfa żejda mat-trufijiet.
                     L-istandards ta’ ħidma pożittivi u negattivi għandhom jiġu inklużi f’kull serje ta’ testijiet.
                     2.6.   Test ta’ agglutinazzjoni tas-serum (SAT)
                     2.6.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)).
                     Formaldeide ma għandux jintuża.
                     L-antiġeni jistgħu jitwasslu fl-istat konċentrat sakemm il-fattur ta’ dilwizzjoni li għandu jintuża jiġi indikat fuq it-tikketta tal-flixkun.
                     Jista’ jiżdied l-EDTA mas-sospensjoni tal-antiġeni ma’ 5 mM tad-dilwizzjoni finali tat-test biex jitnaqqas il-livell ta’ pożittivi foloz fit-test ta’ agglutinazzjoni tas-serum. Sussegwentement il-pH ta’ 7.2 għandu jiġi aġġustat mill-ġdid fis-sospensjoni tal-antiġenu.
                     2.6.2.   L-OIEISS fih 1 000 unità internazzjonali ta’ agglutinazzjoni.
                     2.6.3.   L-antiġenu għandu jiġi ppreparat mingħajr referenza għall-konċentrazzjoni taċ-ċelluli, iżda s-sensittività tiegħu għandha tiġi standardizzata b’rabta mal-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi jew 50 % ta’ agglutinazzjoni b’dilwizzjoni finali tas-serum ta’ 1/600 sa 1/1 000 jew 75 % ta’ agglutinazzjoni b’dilwizzjoni finali tas-serum ta’ 1/500 sa 1/750.
                     Għandu mnejn ikun rakkomandabbli wkoll li titqabbel ir-reattività ta’ gruppi ta’ antiġeni ġodda ma’ dik ta’ gruppi standardizzati minn qabel billi jintuża pakket ta’ seri definiti.
                     2.6.4.   It-test għandu jsir jew f’tubi jew f’mikropjastri. It-taħlita tal-antiġenu u d-dilwizzjonijiet tas-serum għandha tiġi inkubata għal 16 sa 24 siegħa f’37 °C.
                     Għall-inqas tliet dilwizzjonijiet għandhom jiġu ppreparati għal kull serum. Id-dilwizzjonijiet ta’ serum sospett għandhom isiru b’tali mod li l-qari tar-reazzjoni fil-limitu ta’ pożittività jsir fit-tubu medjan (jew fir-reċipejnt medjan jekk jintuża l-metodu tal-mikropjastri).
                     2.6.5.   Interpretazzjoni tar-riżultati:
                     Il-grad ta’ agglutinazzjoni tal-Brucella f’serum għandu jiġi espress f’IU għal kull ml.
                     Serum li jkun fih 30 IU jew iktar għal kull ml jitqies bħala pożittiv.
                     2.7.   L-analiżi bi fluworexxenza polarizzata (FPA)
                     2.7.1.   Il-FPA jista’ jsir f’tubi tal-ħġieġ jew f’format ta’ pjastri ta’ 96 reċipjent. It-teknika użata, l-istandardizzazzjoni u l-interpretazzjoni tagħha tar-riżultati għandhom jikkonformaw ma’ dik speċifikata fil-Kapitolu 2.4.3 (bruċellożi bovina) tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.
                     2.7.2.   Standardizzazzjoni tat-test
                     Il-FPA għandu jiġi standardizzat sabiex:
                     
                                 (a)
                              
                              
                                 l-OIEELISASPSS u l-OIEELISAWPSS jagħtu b’mod konsistenti riżultati pożittivi.
                              
                           
                                 (b)
                              
                              
                                 predilwizzjoni ta’ 1/8 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/64 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) dejjem tagħti reazzjoni negattiva;
                              
                           
                                 (ċ)
                              
                              
                                 l-OIEELISANSS dejjem tagħti reazzjoni negattiva.
                              
                           Dan li ġej għandu jiġi inkluż f’kull grupp ta’ testijiet: serum pożittiv b’mod qawwi, serum pożittiv b’mod dgħajjef, serum ta’ standard ta’ ħidma negattiv (kalibrat mas-Sera Standard ELISA tal-OIE).
                     3.   TESTIJIET KUMPLIMENTARI
                     3.1.   Test tal-bruċellożi fil-ġilda (BST)
                     3.1.1.   Kundizzjonijiet għall-użu tal-BST
                     
                              
                                 (a)
                              
                              
                                 It-test tal-bruċellożi fil-ġilda ma’ għandux jintuża għall-għan ta’ ċertifikazzjoni għall-kummerċ intra-Komunitarju.
                              
                           
                              
                                 (b)
                              
                              
                                 It-test tal-bruċellożi fil-ġilda huwa wieħed mill-aktar testijiet speċifiċi għas-sejbien tal-bruċellożi fl-annimali mhux imlaqqma; madankollu ma għandhiex issir dijanjożi fuq il-bażi ta’ reazzjonijiet intradermali pożittivi biss.
                              
                           
                              
                                 (c)
                              
                              
                                 L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat negattiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definti f’dan l-Anness u li jirreaġixxu b’mod pożittiv għall-BST għandhom jitqiesu bħala infettati jew jiġu ssuspettati li huma infettati.
                              
                           
                              
                                 (d)
                              
                              
                                 L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat pożittiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definiti f’dan l-Anness jistgħu jkunu suġġetti għall-BST biex tiġi sostnuta l-interpretazzjoni tar-riżultati tat-testijiet seroloġiċi; b’mod partikolari fejn f’merħliet bovini uffiċjalment ħielsa mill-bruċellożi jew ħielsa mill-bruċellożi ma tistax tiġi eskluża reazzjoni inkroċjata kontra antikorpi oħra.
                              
                           3.1.2.   It-test għandu jsir permezz ta’ preparazzjoni standardizzata u definita ta’ allerġen kontra l-bruċellożi li ma jkunx fiha antiġenu ta’ lipopolysaccharide (LPS) lixx, minħabba li dan jista’ joħloq reazzjonijiet infjammatorji mhux speċifiċi jew ifixkel it-testijiet seroloġiċi sussegwenti.
                     Ir-rekwiżiti għall-produzzjoni tal-bruċellina għandhom jikkonformaw mat-Taqsima C1 tal-Kapitolu 2.4.3 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.
                     3.1.3.   Proċedura tat-test
                     3.1.3.1.   Il-volum ta’ 0.1 ml ta’ allerġen kontra l-bruċellożi għandu jiġi injettat fil-ġilda fit-tinja tad-denb, fil-ġilda tal-ġenb, jew fil-ġemb tal-għonq.
                     3.1.3.2.   It-test għandu jinqara wara 48 sa 72 siegħa.
                     3.1.3.3.   Il-ħxuna tal-ġilda fil-punt tal-injezzjoni għandha titkejjel bil-kaliper vernier qabel l-injezzjoni u waqt ir-rieżaminazzjoni.
                     3.1.3.4.   Interpretazzjoni tar-riżultati:
                     
                                  
                              
                              
                                 Ir-reazzjonijiet qawwija jiġu faċilment rikonoxxuti min-nefħa u mill-ebusija lokali.
                              
                           
                                  
                              
                              
                                 Ħxuna tal-ġilda ta’ 1.5 sa 2 mm għandha titqies bħala reazzjoni pożittiva għall-BST.
                              
                           3.2.   Test ta’ immunoassorbiment enzimatiku kompetittiv (cELISA)
                     3.2.1.   Kundizzjonijiet għall-użu ta’ cELISA
                     It-test cELISA ma’ għandux jintuża għall-għan ta’ ċertifikazzjoni tal-kummerċ intra-Komunitarju.
                     L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat pożittiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definiti f’dan l-Anness jistgħu jkunu suġġetti għat-test cELISA biex tiġi sostnuta l-interpretazzjoni tar-riżultati l-oħra tat-testijiet seroloġiċi; b’mod partikolari fejn fil-merħliet bovini uffiċjalment ħielsa mill-bruċellożi jew ħielsa mill-bruċellożi ma tistax tiġi eskluża reazzjoni inkroċjata kontra antikorpi oħra jew biex jiġu eliminati reazzjonijiet dovuti għal antikorpi residwali prodotti f’rispons għat-tilqim b’S19.
                     3.2.2.   Proċedura tat-test
                     It-test għandu jitwettaq skont il-preskrizzjoni fit-Taqsima B(2) tal-Kapitolu 2.4.3 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.”
                  
               
            
                  2.
               
               
                  Istituzzjonijiet statali u laboratorji ta’ referenza nazzjonali
                  “4.1.   Dmirijiet u responsabbiltajiet
                  Laboratorji ta’ referenza nazzjonali maħtura skont l-Artikolu 6a għandhom ikunu responsabbli għal dan li ġej:
                  
                              (a)
                           
                           
                              l-approvazzjoni tar-riżultati tal-istudji ta’ validazzjoni li juru l-affidabilità tal-metodu tat-test użat fl-Istat Membru;
                           
                        
                              (b)
                           
                           
                              l-iffissar tan-numru massimu ta’ kampjuni li għandhom jiġu mħallta fit-tagħmir tal-ELISA użat;
                           
                        
                              (ċ)
                           
                           
                              il-kalibrazzjoni tal-istandards ta’ ħidma kif imsemmija fil-punt 2.1.6;
                           
                        
                              (d)
                           
                           
                              il-kontroll ta’ kwalità tal-gruppi kollha ta’ antiġeni u ta’ tagħmir tal-ELISA użati fl-Istat Membru;
                           
                        
                              (e)
                           
                           
                              li jiġu segwiti r-rakkomandazzjonijiet tal-laboratorju ta’ referenza Komunitarju għall-bruċellożi u li jkun hemm kooperazzjoni miegħu.”
                           
                        
            
         (1)  Għall-għan ta’ dan l-Anness, id-dilwizzjonijiet mogħtija għall-produzzjoni ta’ reaġenti likwidi huma espressi, pereżempju, bħala dilwizzjoni ta1 f’150.