CELEX: 51991PC0304
Language: es
Date: 1991-07-30
Title: PROPUESTA DE REGLAMENTO ( CEE ) DEL CONSEJO POR EL QUE SE ESTABLECEN MEDIDAS COMUNITARIAS PARA LA LUCHA CONTRA LA INFLUENZA AVIAR

COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS
                                  C0M(91) 304 final
                                  Bruselas, 30 de julio de 1991
                        Propuesta de
                REGLAMENTO (CEE) DEL CONSEJO
      por el que se establecen medidas comunitarias para
              la lucha contra la influenza aviar
                (presentada por la Comisión)
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                                EXPOSICIÓN DE MOTIVOS
La influenza aviar de gran patogenicidad es una enfermedad contagiosa y grave de
las aves de corral, producida por un virus que puede presentar grandes variaciones
tanto en la patogenicidad como en ios signos clínicos que provoca en las aves
vulnerables. Esta enfermedad está extendida por todo el mundo, y el virus lo
pueden transmitir las aves migratorias, en particular ciertas aves acuáticas.
En ei articulo 19 de la Directiva 90/539/CEE del Consejo, de 15 de octubre de
1990, relativa a las condiciones de policía sanitaria que regulan los intercambios
intracomunitarios y las importaciones de aves de corral y de huevos para incubar
procedentes de países terceros^), se contempla la adopción de normas de control
para luchar contra la influenza aviar, antes del 1 de julio de 1991.
Las medidas propuestas tienen como objetivo erradicar la influenza aviar e impedir
su propagación, en caso de que se presenten brotes, lo que se alcanzará mediante
la "eliminación", utilizando o no vacunas, y mediante el control escrupuloso del
movimiento de las aves de corral, sus productos derivados, los vehículos y
cualquier otro material capaz de transmitir el virus de dicha enfermedad. Estas
medidas deben aplicarse tan pronto como se sospeche la presencia de la influenza
aviar, de modo que se actúe inmediata y eficazmente.
Para asegurar tales actuaciones, la presente propuesta consta de una serie de
obligaciones que deben cumplir los Estados miembros entre las que se incluyen:
    organizar una investigación que permita confirmar o descartar la presencia de
     la influenza aviar, cuando se sospeche o detecte una infección en las aves de
    corral ;
    someter a vigilancia las explotaciones y prohibir los movimientos hacia o
    desde las mismas durante el periodo de vigilancia, cuando se sospeche la
    presencia de la influenza aviar;
    sacrificar y destruir las aves infectadas cuando se haya confirmado la
    influenza aviar;
(1) DO np_ L 303 de 31.10.1990, p. 6.
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realizar una minuciosa investigación epizootiológica cuando se sospeche y
confirme la influenza aviar;
establecer zonas de protección (3 km) y zonas de vigilancia (10 km) alrededor
de las explotaciones infectadas;
crear laboratorios que aporten la asistencia técnica necesaria para la
correcta aplicación de las medidas de control de la enfermedad;
informar a la Comisión sobre los programas de vacunación;
preparar un plan de alerta.
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                                  Propuesta"'
                                         de
                            Reglamento (CEE) del Consejo
                   por el que se establecen medidas comunitarias
                      para la lucha contra la influenza aviar
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y, en particular,
su articulo 43,
Vista la propuesta de la Comisión,
Visto el dictamen del Parlamento Europeo,
Visto el dictamen del Comité Económico y Social,
Considerando que el sector de las aves de corral figura en el Anexo II del
Tratado; que la comercialización de aves de corral constituye una importante
fuente de ingresos de la población agraria;
Considerando que, si se presentan brotes de influenza aviar de gran patogenicidad,
enfermedad producida por un virus de la influenza de características especiales y
que en lo sucesivo se denominará influenza aviar, es necesario establecer a escala
comunitaria medidas de lucha contra la misma con objeto de garantizar el
desarrollo nacional del sector de las aves de corral y de contribuir a la
protección de la salud animal en la Comunidad;
Considerando que los brotes de influenza aviar pueden adquirir rápidamente un
carácter epizoótico y provocar una mortalidad y unas perturbaciones tales que
comprometan seriamente la rentabilidad de las explotaciones avícolas en su
conjunto;
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          •
Considerando que es necesario tomar medidas en cuanto existan indicios de esta
enfermedad de manera que, si se confirma, sea posible adoptar inmediatamente
medidas eficaces de lucha contra la misma;
Considerando que, tan pronto como se declare un brote de esta enfermedad, es
necesario impedir su propagación controlando de modo estricto el transporte de
animales y la utilización de productos que puedan estar contaminados y, en su
caso, recurriendo a la vacunación;
Considerando que el diagnóstico de la enfermedad debe efectuarse bajo los
auspicios de los laboratorios responsables, que deberán estar coordinados por un
laboratorio comunitario de referencia;
Considerando que las medidas comunitarias de lucha contra la influenza aviar
constituyen la base para el mantenimiento de un nivel uniforme de salud animal;
Considerando que es conveniente encomendar a la Comisión la tarea de adoptar las
disposiciones de aplicación necesarias,
HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO:
                                    Articulo 1
1.   El presente Reglamento establece las medidas comunitarias para la lucha
     contra la influenza aviar aplicables en caso de que esta enfermedad se
     declare en aves de corral, sin perjuicio de las disposiciones comunitarias
     que regulan el comercio intracomunítar¡o.
2.   El presente Reglamento no se aplicará en caso de que se detecte la influenza
     aviar en otras aves. Sin embargo, los Estados miembros deberán informar a la
     Comisión de las medidas que hayan adoptado.
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                                      Articulo 2
1.   A efectos del presente Reglamento, se utilizarán como proceda las
     definiciones del articulo 2 de la Directiva 90/539/CEE del Consejo relativa a
      las condiciones de policía sanitaria que regulan los intercambios
     Intracomunitarios y las importaciones de aves de corral y de huevos para
     incubar procedentes de países terceros*1).
2.   Además, se entenderá por:
     a)   "ave de corral infectada":
               toda ave de corral en la que un examen de laboratorio haya permitido
               comprobar oficialmente la influenza aviar tal como se define en el
               Anexo I, o
               tratándose de un segundo brote o de brotes subsiguientes, toda ave
               de corral en la que se hayan encontrado signos clínicos o lesiones
               post mortem propios de la influenza aviar;
     b)   "ave de corral sospechosa de estar infectada": toda ave de corral con
          signos clínicos o lesiones post mortem tales que se pueda sospechar
          justificadamente la presencia de la influenza aviar o en la que se haya
          comprobado la presencia del subtipo H5 o H7 del virus de la influenza A;
     c)   "ave de corral sospechosa de estar contaminada": toda ave de corral que
          haya podido estar, directa o indirectamente, en contacto con ei virus de
          la influenza aviar o con el subtipo H5 o H7 del virus de la influenza A;
     d)   "autoridad competente": autoridad veterinaria designada al efecto por la
          administración nacional del pals de que se trate, ante la cual será
          directamente responsable en la materia regulada por el presente
          Reglamento y a través de la cual transmitirá la información obtenida;
     e)   "veterinario oficial": el veterinario designado por la autoridad
          competente del Estado miembro en cuestión.
(1) DO nfi L 303 de 31.10.1990, p. 6.
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                                     Artículo 3
Toda sospecha de influenza aviar deberá ser notificada inmediatamente a la
autoridad competente.
                                     Articulo 4
1.   Cuando en una explotación haya aves de corral sospechosas de estar infectadas
     o contaminadas por la influenza aviar, el veterinario oficial deberá realizar
     inmediatamente una investigación para confirmar o descartar la presencia de
     esta enfermedad; la investigación deberá incluir tomas de muestras adecuadas
     para analizarlas en el laboratorio.
2.   En cuanto se le notifique la sospecha de infección, la autoridad competente
     pondrá la explotación bajo vigilancia oficial y ordenará, en particular:
     a)  la realización de un censo de todas las aves de corral de la explotación
         en el que se precise, por categorías, el número de aves de corral
         muertas, cuántas presentan síntomas clínicos y cuántas no. Este censo
         deberá mantenerse al día y presentarse cuando se solicite, y podrá
         controlarse en cada visita;
     b)  la reclusión de todas las aves de corral de la explotación dentro de sus
         locales habituales o de cualquier otro lugar en el que queden aisladas,
         sin ningún contacto con otras aves;
     c)  la prohibición tanto de la entrada de aves de corral en la explotación
         como de la salida de las que se encuentren en ésta;
     d)  la prohibición de todo movimiento
              de personas, animales o vehículos cuyo destino u origen sea la
              explotación,
              de carne o canales de aves de corral, piensos, material, desechos,
              cama de paja o cualquier otro elemento procedente de la explotación
              capaz de transmitir la influenza aviar,
         salvo autorización expedida por el veterinario oficial;
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   e)   la prohibición de la salida de la explotación de huevos que no estén
       destinados al consumo y que no hayan sido desinfectados a satisfacción
       del veterinario oficial;
   f)   la utilización de medios de desinfección apropiados en las entradas y
       salidas de la explotación y de los edificios en que se hallen las aves de
       corral;
   g)  una investigación epizootiológica con arreglo a lo dispuesto en el
       articulo 7.
3. Hasta que entren en vigor las medidas oficiales contempladas en el apartado
   2, el propietario o avicultor de toda explotación en la que se sospeche la
   presencia de la enfermedad adoptará todas las medidas apropiadas que
   garanticen el cumplimiento de las disposiciones contempladas en dicho
   apartado, en particular las de las letras b ) , c ) , d) y e ) .
4. La autoridad competente podrá hacer extensivas las medidas previstas en el
   apartado 2 a otras explotaciones cuando su ubicación, configuración o los
   contactos con la explotación en que se sospeche la existencia de la
   enfermedad permitan sospechar una posible contaminación.
5. Las medidas contempladas en los apartados 2, 3 y 4 dejarán de aplicarse
   únicamente cuando el veterinario oficial descarte cualquier sospecha de
   influenza aviar.
                                   Artículo 5
1. En cuanto se confirme oficialmente que en una explotación se ha declarado la
   influenza aviar, la autoridad competente, además de las medidas enumeradas en
   el apartado 2 del articulo 4, ordenará que se lleven a cabo inmediatamente
   las siguientes operaciones:
   a)  el sacrificio inmediato de todas las aves de corral que se hallen en la
       explotación y la destrucción de las aves de corral muertas o sacrificadas
       y de todos los huevos. Estas operaciones se efectuarán de manera que se
       limite al máximo el riesgo de propagación de la enfermedad;
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b)   la destrucción o el tratamiento de todas las materias o desechos, como
    piensos, camas o estiércol, que puedan estar contaminados. Ei tratamiento
    deberá realizarse ateniéndose a las instrucciones del veterinario oficial
    y deberá garantizar la destrucción total del virus de la influenza aviar;
c)  en lo posible, la búsqueda y destrucción de la carne de las aves de
    corral que hayan sido sacrificadas durante el supuesto periodo de
     incubación de la enfermedad;
d)   la búsqueda y destrucción de los huevos para incubar puestos durante el
    supuesto periodo de incubación que hayan salido de la explotación;   en
    cualquier caso la sumisión a vigilancia oficial de las aves de corral que
    hayan nacido de esos huevos; en lo posible, la búsqueda y destrucción de
     los huevos destinados al consumo puestos durante el supuesto período de
    incubación que hayan salido de la explotación;
e)  después de haberse llevado a cabo las operaciones indicadas en la letra
    a), la limpieza y desinfección, con arreglo a lo dispuesto en el artículo
    11, de los edificios en que vivan las aves de corral y de sus
    alrededores, de los vehículos de transporte y de todo el material que
    pueda estar contaminado;
f)  después de realizar las operaciones indicadas en la letra e ) , la
    interposición de un periodo mínimo de veintiún días antes de volver a
    introducir aves de corral en la explotación;
g)  la realización de una investigación epizootiológica con arreglo a lo
    dispuesto en el artículo 7.
La autoridad competente podrá aplicar las medidas previstas en el apartado 1
a otras explotaciones cuando su ubicación, su configuración o los contactos
con la explotación infectada permitan sospechar una posible contaminación.
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                                   Artículo 6
1. Cuando las explotaciones estén formadas por dos o más manadas independientes,
    la autoridad competente podrá eximir de las medidas enunciadas en la letra a)
   del apartado 1 del articulo 5 a las manadas sanas de una explotación
   infectada, siempre que el veterinario oficial haya confirmado que las
   operaciones que se realicen en ella reúnen unas características tales que
   hacen que las manadas permanezcan completamente independientes desde el punto
   de vista de su alojamiento, mantenimiento y alimentación, de modo que no hay
   peligro de que el virus se contagie de una manada a otra.
2. De conformidad con el procedimiento del articulo 21, la Comisión fijará los
   criterios por los que se regirá la exención mencionada en el apartado 1.
                                   Art i cu I o 7
1. La investigación epizootiológica estudiará los siguientes aspectos:
        periodo de la posible presencia de la influenza aviar en la explotación;
        posible origen de la enfermedad en la explotación y localización de las
        demás explotaciones en las que se encuentren aves de corral que hayan
        podido infectarse o contaminarse a partir del mismo foco;
        movimientos de personas, aves de corral u otros animales, vehículos,
        huevos, carne, canales y cualquier utensilio o materia que haya podido
        transmitir el virus de la influenza aviar a la explotación afectada o
        propagarlo a partir de ella.
2. A fin de coordinar todas las medidas necesarias para erradicar la influenza
   aviar lo más rápidamente posible y con objeto de realizar la investigación
   epizootiológica, se creará un centro de crisis.
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   Las disposiciones generales sobre los centros de crisis nacionales y
   comunitarios se establecen en el Reglamento (CEE) no. ../... del Consejo.
                                  Artículo 8
1. Cuando el veterinario oficial disponga de indicios de contaminación de aves
   de corral de una explotación debida a movimientos de personas, animales o
   vehículos o a cualquier otra circunstancia, las explotaciones afectadas se
   someterán a control oficial con arreglo a lo dispuesto en el apartado 2.
2. El control oficial tendrá como finalidad detectar inmediatamente cualquier
   indicio de influenza aviar, llevar a cabo el censo de las aves de corral,
   controlar sus movimientos y, en su caso, aplicar las medidas establecidas en
   ei apartado 3.
3. Cuando una explotación esté sometida al control oficial establecido en las
   disposiciones del apartado 2, la autoridad competente prohibirá la salida de
   las aves de corral de la explotación cuando no sea para su transporte directo
   a un matadero bajo control oficial para su sacrificio inmediato. Antes de que
   pueda autorizarse tal salida, el veterinario oficial deberá haber efectuado
   un examen clínico de todas las aves de corral que demuestre que la
   explotación está libre de influenza aviar. Las restricciones de movimientos
   antes mencionadas se aplicarán durante un periodo de veintiún días a partir
   de la última fecha en que pueda haberse producido la contaminación; en
   cualquier caso, estas restricciones se aplicarán durante un periodo mínimo de
   siete días.
4. Cuando considere que las condiciones lo permiten, la autoridad competente
   podrá limitar la aplicación de las medidas establecidas en el presente
   articulo a una parte de la explotación y a las aves de corral que se hallen
   en ésta, siempre que hayan sido alojadas, mantenidas y alimentadas de forma
   totalmente separada y por diferente personal.
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                                   Articulo 9
1. Cuando el diagnóstico de la influenza aviar se haya confirmado oficialmente,
   la autoridad competente delimitará, alrededor de la explotación infectada,
   una zona compuesta por una zona de protección de un radio mínimo de 3 km y
   una zona de vigilancia de un radío mínimo de 10 km. Para la delimitación de
   estas zonas deberán tenerse en cuenta las barreras naturales y las
   características epizootiológícas del brote.
2. En la zona de protección se aplicarán las siguientes medidas:
   a)   localización de todas las explotaciones de la zona con aves de corral;
   b)  visitas periódicas a todas las explotaciones con aves de corral, con
       exámenes clínicos de éstas y, en su caso, toma de muestras para su examen
       en laboratorio; se llevará un registro de visitas y resultados de los
       exámenes;
   c)  mantenimiento de todas las aves de corral en su alojamiento habitual o en
       cualquier otro lugar que permita aislarlas;
   d)  utilización de sistemas de desinfección apropiados en las entradas y
       salidas de las explotaciones;
   e)  control de los desplazamientos dentro de la zona de las personas que
       manipulen aves de corral, sus canales y huevos, asi como de los vehículos
       utilizados para su transporte; en general, se prohibirá el transporte de
       las aves, exceptuando el tránsito por las carreteras y lineas férreas más
       importantes;
   f)  prohibición de sacar aves de corral y huevos para incubar de la
       explotación en que se encuentren, salvo que la autoridad competente haya
       autorizado el transporte:
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          i)   de aves para su sacrificio inmediato, preferentemente a un matadero
               situado en la zona infectada, o, de no ser posible, a uno situado
               fuera de ésta y designado por la autoridad competente. La carne
               resultante deberá llevar la marca sanitaria especial establecida en
               el apartado 1 del articulo 6 del Reglamento (CEE) ne   .../... del
               Consejo sobre las condiciones de policía sanitaria a las que deben
               ajustarse ios intercambios intracomunitarios y las importaciones de
               carnes frescas de aves de corral y de aves de caza de cria
               procedentes de terceros países (1) ;
          i i)  de pollitos de un día de edad o de pollitas maduras para la puesta a
               una explotación situada dentro de la zona infectada y que no tenga
               otras aves de corral. Esta explotación estará sometida al control
               oficial establecido en el apartado 2 del artículo 8;
          i i i) de huevos para incubar bien a una incubadora situada dentro de la
               zona de protección o, si está fuera de ella, a una incubadora
               designada por la autoridad competente; los huevos y sus envases
               deberán desinfectarse antes de ser enviados.
         Los desplazamientos indicados en los puntos i), i i) y i i i) deberán ser
         realizados directamente bajo control oficial y únicamente se autorizarán
         después de que el veterinario oficial haya efectuado una inspección
         sanitaria de la explotación. Los medios de transporte empleados deberán
         limpiarse y desinfectarse antes y después de su utilización;
     g)  prohibición de retirar o esparcir sin autorización el estiércol de las
         aves de corral o sus camas de paja;
     h)  prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
         concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves.
3.   Las medidas aplicadas en la zona de protección se mantendrán al menos durante
     veintiún días después de que se hayan efectuado en la explotación infectada
     las operaciones preliminares de limpieza y desinfección con arreglo a lo
     dispuesto en el articulo 11. Cuando se levanten esas medidas, la zona de
     protección pasará a formar parte de la zona de vigilancia.
(1) C0M(89) 507 final.
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4.  En la zona de vigilancia se aplicarán las siguientes medidas:
   a)    localización de todas las explotaciones de la zona con aves de corral;
   b)   control de los desplazamientos de las aves de corral y de los huevos para
        incubar dentro de la zona;
   c)   prohibición de sacar aves de corral fuera de la zona durante los quince
        primeros días, excepto para enviarlas directamente a un matadero situado
        fuera de la zona de vigilancia y designado por la autoridad competente,
        en cuyo caso la carne de estas aves deberá llevar la marca sanitaria
        especial establecida en el articulo 6 del Reglamento (CEE) no. .../... del
        Consejo sobre las condiciones de policía sanitaria a las que deben
        ajustarse los intercambios intracomunitarios y las importaciones de
        carnes frescas de aves de corral y de aves de caza de cria procedentes de
        terceros países;
   d)   prohibición de sacar huevos para incubar fuera de la zona de vigilancia,
        salvo que se envíen a un local designado por la autoridad competente.
       Antes de ser enviados, los huevos y sus envases deberán ser
        desinfectados;
   e)  prohibición de sacar estiércol de aves de corral o sus camas de paja
        fuera de la zona;
   f)  prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
       concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves;
   g)  sin perjuicio de las disposiciones contempladas en las letras b) y c),
       prohibición de transportar aves de corral, exceptuando el tránsito por
        las carreteras y lineas férreas más importantes.
5. Las medidas aplicadas en la zona de vigilancia se mantendrán al menos durante
   treinta días después de haberse realizado en la explotación infectada las
   operaciones preliminares de limpieza y desinfección con arreglo a lo
   dispuesto en el artículo 11.
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                                     Articulo 10
 1.   La autoridad competente establecerá las normas que le permitan seguir los
      desplazamientos de huevos y de aves de corral.
2.    A petición de la autoridad competente, el propietario o el avicultor deberá
      facilitarle los datos sobre las entradas y salidas de su explotación de aves
      y huevos.
3.    Toda persona que se dedique al transporte o al comercio de aves de corral y
      de huevos deberá poder informar a la autoridad competente sobre los
      desplazamientos de aves y huevos que haya transportado o comercializado y
      aportar documentación detallada al respecto.
                                     Articulo 11
1.    Los desinfectantes que se vayan a utilizar así como su concentración deberán
      estar autorizados por la autoridad competente.
2.    Las operaciones de limpieza y desinfección deberán efectuarse bajo la
      supervisión oficial y con arreglo a las instrucciones del veterinario
      oficial.
                                     Articulo 12
Las tomas de muestras y los análisis de laboratorio que se efectúen para detectar
el virus de la influenza aviar deberán realizarse con arreglo a las disposiciones
de I Anexo I.
                                     Artículo 13
1.    Los Estados miembros designarán:
      a)  uno o varios laboratorios nacionales, que se mantendrán dotados de las
          instalaciones y el personal especializado necesarios, para realizar la
          evaluación de la patogenicidad de los virus de la influenza que se hayan
          aislado (Capitulo 7 del Anexo I) y la identificación de los subtipos H5 o
          H7 del virus de la influenza A;
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     b)   uno o varios laboratorios nacionales encargados de controlar los
          reactivos utilizados por los laboratorios regionales;
     c)   uno o varios institutos o laboratorios nacionales en los cuales las
          vacunas autorizadas puedan ser controladas para verificar su conformidad
          con las especificaciones contempladas en la autorización de
          comercialización.
2.   Los laboratorios nacionales enumerados en el Anexo II se encargarán de la
     coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico, el uso de reactivos
     y el control de vacunas.
3.   Los laboratorios nacionales a los que hace referencia el apartado 2 se
     encargarán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico
     establecidos en cada laboratorio de diagnóstico de la influenza aviar en el
     Estado miembro. A tal fin:
     a)   podrán proporcionar a los laboratorios regionales reactivos para el
          diagnóstico;
     b)   controlarán la calidad de todos los reactivos de diagnóstico utilizados
          en ese Estado miembro;
     c)   organizarán periódicamente pruebas comparativas;
     d)   mantendrán aislados virus de la influenza aviar recogidos de casos
          confirmados en ese Estado miembro;
     e)   confirmarán los resultados positivos obtenidos en los laboratorios de
          diagnóstico regionales.
4.   Habrá una conexión entre los laboratorios nacionales enumerados en el Anexo
     Il y el laboratorio comunitario de referencia mencionado en el articulo 14.
                                     Artículo 14
En el Anexo III figura el laboratorio comunitario de referencia para la influenza
aviar. Sus competencias y obligaciones se establecerán con arreglo al
procedimiento contemplado en el artículo 21, en la medida en que no estén
regulados ya por el articulo 28 de la Directiva 90/424/CEE del Consejo*1)
relativa a determinados gastos del sector veterinario.
(1) DO no. L 224 de 18.8.1990, p. 19.
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                                     Articulo 15
1. La vacunación contra la influenza aviar con vacunas autorizadas por la
   autoridad competente podrá realizarse únicamente como complemento de las
   medidas de control que se adopten cuando se declare la enfermedad.
2. La Comisión, en colaboración con el Estado miembro afectado, tomará la
   decisión de realizar la vacunación como complemento de las medidas de
   control, de conformidad con el procedimiento establecido en el articulo 21.
   Tal decisión atenderá principalmente a los siguientes elementos.
       la concentración de aves de corral en la zona afectada;
       las características y composición de la vacuna utilizada;
       los procedimientos de supervisión de la     distribución, el almacenamiento
       y la utilización de las vacunas;
       las especies y categorías de aves de corral que vayan a ser vacunadas;
       las zonas en que se vaya a efectuar la vacunación.
3. Cuando, de acuerdo con las disposiciones del apartado 2, un Estado miembro
   esté autorizado para recurrir a la vacunación de emergencia en una parte
   limitada de su territorio, el estatuto del resto del territorio no se verá
   afectado, siempre que se apliquen las normas de inmovilización de los
   animales vacunados durante un periodo de tres meses a partir del final de las
   operaciones de vacunación.
                                     Articulo 16
1. Cuando, en una determinada región, una epizootia de influenza aviar presente
   un carácter excepcionalmente grave y una tendencia a propagarse, el Estado
   miembro afectado deberá:
       declarar "zona de alto riesgo sanitario" una zona delimitada
       terri tor la I mente que abarque como mínimo todas las zonas de protección y
       vigilancia que se encuentren dentro de la zona en cuestión;
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       aplicar las medidas establecidas en el apartado 3 del articulo 9 en la
        "zona de alto riesgo sanitario";
       prohibir la salida de toda ave de corral viva y todo huevo para incubar
       de la "zona de alto riesgo sanitario";
        Informar a la Comisión y a los demás Estados miembros a través del Comité
       Veterinario Permanente sobre la situación de la enfermedad y las medidas
       de control aplicadas.
2. Los limites de la "zona de alto riesgo sanitario" podrán modificarse
   eliminando progresivamente las zonas de vigilancia. Las disposiciones del
   apartado 1 dejarán de aplicarse cuando se   haya suprimido la última zona de
   vigiI ancla.
3. En caso de que persista la situación alarmante, las medidas que deba adoptar
   el Estado miembro afectado, en particular la determinación de la "zona de
   alto riesgo sanitario" y la aplicación de las disposiciones del articulo 17,
   deberán decidirse con arreglo al procedimiento establecido en el artículo 21.
                                  Artículo 17
1. Cada Estado miembro preparará un plan de alerta en el que se especifiquen las
   medidas que deberán aplicarse a escala nacional en caso de que se registren
   brotes de influenza aviar.
   Este plan deberá permitir el acceso a las instalaciones, equipo, personal y
   cualquier otro material adecuado necesario para la rápida y eficaz
   erradicación del brote. Cada Estado miembro hará figurar en el plan de manera
   precisa sus cálculos en cuanto a las vacunas necesarias en caso de vacunación
   de emergencia.
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2.   Los criterios que deberán aplicarse para la elaboración de los planes de
     alerta serán los que se establecen en la Decisión   91/42/CEE  de la
                1
     Comisión* ), de 8 de enero de 1991, por la que se establecen los criterios
     que se deberán aplicar cuando se elaboren los planes de alerta para
     controlar la fiebre aftosa, en aplicación de lo dispuesto en el articulo 5
     de la Directiva 90/423/CEE del Consejo, que se aplicarán mutatis mutandis .
     Con arreglo al articulo 21, la Comisión podrá modificar o completar dichos
     criterios habida cuenta de las características especificas de la influenza
     aviar.
3.   Los planes elaborados con arreglo a los criterios a los que se refiere el
     apartado 2 serán sometidos a la Comisión, a más tardar doce meses después de
      la entrada en vigor del presente Reglamento.
4.   La Comisión   examinará los planes para determinar si permiten alcanzar el
     objetivo perseguido y sugerirá a los Estados miembros cualquier modificación
     que sea necesario introducir, en particular para que resulten compatibles
     con los de los demás Estados miembros.
     La Comisión aprobará los planes, modificados si fuera necesario, con arreglo
     ai procedimiento establecido en el articulo 21.
     Posteriormente, con arreglo al mismo procedimiento, podrán modificarse o
     ampliarse según lo aconseje la evolución de la situación.
                                     Articulo 18
En la medida en que sea necesario para garantizar la aplicación uniforme del
presente Reglamento, los veterinarios especializados de la Comisión podrán
realizar inspecciones sobre el terreno en colaboración con las autoridades del
Estado miembro de que se trate. La Comisión comunicará a los Estados miembros los
resultados de la investigación.
(1) DO nfi L  23 de 29.1.1991, p. 29,
 ---pagebreak---                                         - 17 -
Los Estados miembros en cuyo territorio se esté realizando una inspección
facilitarán la necesaria asistencia a los expertos para el desempeño de sus
funciones.
Las disposiciones generales de aplicación del presente articulo se determinarán
con arreglo al procedimiento establecido en el articulo 21.
                                     Articulo 19
En la Decisión 90/424/CEE del Consejo, relativa a determinados gastos en el sector
veterinario, se fijan las normas que regulan la participación financiera de   la
Comunidad en las medidas resultantes de la aplicación del presente Reglamento.
                                     Articulo 20
Los Anexos del presente Reglamento podrán ser modificados por la Comisión, con
arreglo al procedimiento establecido en el articulo 21, en particular para
adaptarlos a la evolución de los procedimientos de diagnóstico.
                                     Articulo 21
1.   La Comisión estará asistida por el Comité Veterinario Permanente, creado
     mediante la Decisión 68/361/CEE*1)CEE, en adelante denominado "el Comité".
2.   Cuando se recurra al procedimiento definido en el presente articulo, se
     aplicarán las siguientes disposiciones.
     El representante de la Comisión someterá al Comité un proyecto de las medidas
     que deban adoptarse. El Comité emitirá su dictamen sobre dicho proyecto en un
     plazo que el presidente podrá fijar en función de la urgencia del asunto,
     procediendo, en su caso, a una votación.
     El dictamen se incluirá en el acta; además, cada Estado miembro tendrá
     derecho a solicitar que su posición conste en acta.
(1) DO nfi L 255 de 18.10.1968, p. 23.
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     La Comisión tendrá en cuenta, en la mayor medida posible, el dictamen emitido
     por el Comité y le informará del modo en que lo haya tenido en cuenta.
                                    Articulo 22
El presente Reglamento entrará en vigor el 1 de julio de 1991.
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y directamente
aplicable en cada Estado miembro.
Hecho en Bruselas,                                 Por el Consejo
 ---pagebreak---                                           -1?-
                                         ANEXQ t
                          PROCEDÍ MiENTOS PARA LA CONFIRMACIÓN
                   Y DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE LA INFLUENZA AVIAR
Los siguientes procedimientos de aislamiento y caracterización de los virus de la
 influenza aviar han de considerarse como directrices y constituyen los requisitos
mínimos que deben aplicarse en el diagnóstico de dicha enfermedad.
A los efectos de los procedimientos de diagnóstico para la confirmación y el
diagnóstico diferencial de la influenza aviar, se empleará la siguiente
definición:
Por "influenza aviar" se entiende una infección de las aves de corral producida
por cualquier virus de la influenza aviar A cuyo indice de patogenicidad
intravenosa sea superior a 1,2 en pollitos de seis semanas de edad, o cualquier
infección provocada por virus del subtipo H5 o H7 de la influenza A cuya
secuenciación de nucleótidos haya demostrado la presencia de múltiples aminoácidos
básicos en el punto de corte de la hemagiuti nina.
              CAPÍTULO 1: Toma de muestras v tratamiento de las mismas
1. Muestras
     Hisopos de cloaca (o materias fecales) e hisopos traqueales de aves enfermas;
     materias fecales o contenido intestinal, tejido cerebral, tráquea, pulmones,
     hígado, bazo y otros órganos manifiestamente afectados procedentes de aves
     recién fallee i das.
2.   Tratamiento de las muestras
     Aunque los órganos y los tejidos arriba mencionados pueden mezclarse, las
     materias fecales deberán tratarse por separado. Se sumergirán completamente
     los hisopos en una cantidad suficiente de medio con antibióticos. A su vez,
     las muestras de materias fecales y de órganos deberán homogène i zarse (en un
     mezclador cerrado o utilizando un mortero y arena esterilizada) en un medio
     con antibióticos para convertirlas en suspensiones en ese medio al 10-20% p/v.
     Posteriormente, esas suspensiones se dejarán a temperatura ambiente durante
     dos horas aproximadamente (o durante más tiempo a una temperatura de 4*C) y se
     clarificarán por centrifugación (p. ej., de 800 a 1.000 g durante 10 minutos).
 ---pagebreak---                                         - 20-
3.   Medio con antibióticos
     Diferentes laboratorios han utilizado distintos medios con antibióticos,
     obteniendo buenos resultados. En cada pais, los laboratorios nacionales podrán
     asesorar al respecto. Para las muestras de materias fecales es necesaria una
     fuerte concentración de antibióticos; una mezcla típica es la siguiente:
     10.000 unidades/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina, 0,25 mg/ml de
     gentamicina y 5.000 unidades/ml de micostatina en una solución salina
     amortiguadora de fosfato. Estos niveles pueden reducirse hasta cinco veces
     cuando se trabaje con tejidos e hisopos traqueales. Para evitar el crecimiento
     de Chlamydia, pueden añadirse 50 mg/ml de oxitetracicli na. Al elaborar el
     medio, es imprescindible comprobar el pH después de añadir los antibióticos y
     corregirlo hasta que fluctúe entre 7,0 y 7,4.
                         CAPITULO  2: Aislamiento del virus
Aislamiento del virus en huevos embrionados de aves de corral
Deberán inocularse dosis de 0,1 a 0,2 mi del liquido sobrenadante clarificado
dentro de la cavidad aiantoidea de al menos 4 huevos embrionados que hayan sido
incubados de 8 a 10 di as. Es preferible que los huevos procedan de una manada
exenta de patógenos específicos, aunque, si ello no fuera posible, podrán
utilizarse huevos de una manada exenta de anticuerpos del virus de la influenza
aviar. Los huevos inoculados deberán mantenerse a 37°C y se examinarán al trasluz
diariamente. Los huevos que contengan embriones muertos o moribundos serán
refrigerados a 4*C a medida que se vayan comprobando. Los demás lo serán a la
misma temperatura 6 días después de la inoculación. Los fluidos alantoideos o
amni óticos se someterán además a la prueba de hemaglutinación. Si ésta resultase
negativa, deberá repetirse el procedimiento anterior utilizando fluido alantoideo
o amni ótico como inoculo.
Cuando la hemaglutinación sea positiva, deberá descartarse la posible presencia de
bacterias mediante la realización de un cultivo. Si se confirma la presencia de
bacterias, podrán filtrarse los fluidos con un filtro de membrana de 450 nm,
añadirse más antibióticos e inocularse en huevos embrionados como    ya se explicó
anteriormente.
 ---pagebreak---                                          ^¿4-
                          CAPÍTULO 3; Diagnóstico diferencial
1. Diferenciación preliminar
   Teniendo en cuenta que es fundamental que se adopten medidas para limitar la
   propagación del virus lo antes posible, cada laboratorio regional deberá estar
   en condiciones de detectar cualquier virus hemaglutinante aislado, tales como
    los del subtipo H5 o H7 de la influenza, además de los de la enfermedad de
   Newcastle. Los fluidos hemaglutinantes deberán someterse a las pruebas de
    inhibición de la hemagluti nación descritas en los capítulos 5 y 6. Una
    inhibición positiva, es decir de 2 4 o más, con antisuero poli clona I
   especifico para los subtipos H5 o H7 de la influenza A (con un titulo de al
   menos 2 9 ) , se considerará una identificación preliminar suficiente para
   imponer medidas provisionales de control.
2. Confirmación de la identificación
   Dado que hay 13 subtipos de hemagluti ni na y 9 subtipos de neuraminidasa del
   virus de la influenza y que en cada uno de ellos se presentan variaciones, no
   es viable ni rentable que cada laboratorio nacional tenga antisueros que
   posibiliten una caracterización antígénica completa del virus de la influenza.
   No obstante, cada laboratorio nacional deberá:
   i)   confirmar que el microorganismo es un virus de la influenza A utilizando
        una prueba de inmunodifusión doble para detectar el antigeno de grupo,
        efectuada de acuerdo con el Capitulo 9 del presente Anexo (si asi lo
        prefieren, los laboratorios nacionales podrán emplear técnicas de
        ínmunofluorescencia o ELISA para la detección de los antigenos de grupo);
   i i) determinar sí el virus aislado es o no del subtipo H5 o H7;
 ---pagebreak---                                          -    Il-
   ill) realizar pruebas del indice de patogenicidad intravenosa en pollitos de
        seis semanas de edad, efectuadas de acuerdo con el Capitulo 7 del presente
        Anexo. Un indice de patogenicidad intravenosa superior a 1,2 es la señal
        de que hay virus y de que es necesario aplicar a fondo las medidas de
        control (seria útil que los laboratorios nacionales realizasen también
        pruebas de determinación de la capacidad del virus para producir placas en
        cultivos de células, efectuadas de acuerdo con el Capitulo 8 ) .
    Los laboratorios nacionales deberán enviar inmediatamente todo el material de
    la influenza aviar y de ios subtipos H5 o H7 al laboratorio comunitario de
    referencia para su caracterización total.
3.  Tipificación v caracterización adicional del material
    Los laboratorios nacionales enviarán al laboratorio comunitario de referencia
    todos los virus hemaglutinantes y éste, en consonancia con las funciones y
    cometidos que le han sido asignados, someterá esos virus a estudios
    antigénicos y genéticos adicionales para llegar a un mejor conocimiento de la
    epizootio log I a de la enfermedad o enfermedades en la Comunidad Europea.
    Además de esos cometidos, el laboratorio comunitario de referencia llevará a
    cabo una tipificación antigénica completa de todos los virus de la influenza
    que haya recibido. En cuanto a los virus H5 o H7 cuyos indices de
    patogenicidad intravenosa no sean superiores a 1,2, deberá realizarse también
    la secuenciación de nucleótidos del gen de hemagluti ni na para determinar si
    hay abundancia o no de aminoácidos básicos en el punto de corte de la protelna
    de hemagluti ni na.
 ---pagebreak---                                          ~n-
                CAPITULQ 4: Pruebas serolóoicas para la detección de
                     anticuerpos del virus de la Influenza aviar
 1. Tratándose de programas de erradicación en los que el subtipo H del virus ya
    se conoce, el control serológico para poner de manifiesto la infección puede
    llevarse a cabo mediante pruebas de inhibición de la hemagluti nación
    realizadas de acuerdo con los Capítulos 5 y 6, o utilizando el virus homólogo
    como anti geno.
    Si el subtipo de hemagluti ni na no se conoce, la prueba de que la infección es
    producida por virus de la influenza A podrá obtenerse detectando anticuerpos
    dirigidos a los antigenos especifieos de grupo. Con ese fin podrá emplearse
    una prueba de inmunodifusión doble (tal como se describe en el Capitulo 9 del
    presente Anexo) o una prueba ELISA (ésta presenta el inconveniente de la
    especificidad del hospedador de la prueba ya que depende de la detección de
    las inmunogIobuI i ñas del hospedador). Las aves acuáticas raras veces dan
    resultados positivos al practicarse pruebas de inmunodifusión doble y, a menos
    que se conozca el subtipo, es probable que tales aves sólo puedan examinarse
    para comprobar la presencia de anticuerpos contra los subtipos H5 y H7.
2.  a)  Muestras
        Deberán tomarse muestras de sangre de todas las aves cuando la manada esté
        compuesta de menos de 20 animales y muestras de 20 aves cuando la manada
        sea mayor. (De este modo, la probabilidad de detectar al menos un suero
        positivo será >99% si el 25% o más de la manada es positivo,
         independientemente del tamaño de ésta). Deberá dejarse que la sangre se
        coagule y se extraerá el suero para la prueba.
    b)  Examen de los anticuerpos
        Se probará la capacidad de las muestras individuales de suero para inhibir
        el antlgeno hemaglutinante del virus de la influenza aviar en pruebas
        estándar de inhibición de la hemaglutinación efectuadas de acuerdo con el
        capitulo 6.
 ---pagebreak---                                          -2k-
         Dado que las opiniones difieren en cuanto a la utilización de 4 u 8
         unidades de hemagluti ni na en la prueba de inhibición de la
         hemagluti nación, y como al parecer ambas dosis son válidas, la elección
         deberla dejarse al arbitrio de los laboratorios nacionales. Téngase en
         cuenta, sin embargo, que del antigeno utilizado dependerá el nivel en el
         que un suero sea considerado positivo: con 4 unidades de hemagluti ni na un
         suero se considerará positivo cuando presente un titulo superior o igual a
         2 4 , mientras que con 8 unidades el titulo deberá ser igual o superior
         a 23.
                       CAPÍTULO 5: Prueba de hemaolutInación (HA)
Reactivos
1)  Solución salina isotónica amortiguadora de fosfato (0,05M) de pH 7,0 a 7,4.
2)  Hématies extraídos de un mínimo de 3 pollitos exentos de patógenos específicos
    (a falta de éstos, podrá utilizarse sangre de aves que hayan estado bajo
    control regular y que estén exentas de anticuerpos del virus de la influenza
    aviar), reunidos y mezclados a partes iguales con solución de AI sever. Antes
    de utilizarlos, los hématies deberán lavarse tres veces en la solución salina
     isotónica amortiguadora de fosfato (SSIAF). Para la prueba, se recomienda una
    suspensión en SSIAF al 1% (hematíes empaquetados v/v).
3)  El laboratorio comunitario de referencia suministrará virus H5 o H7 de bajo
    poder patógeno o recomendará su utilización como antigeno estándar.
Procedimiento
1) Distribuir 0,025 mi de SSIAF en cada uno de los pocilios de una placa de
    microti tu I ación (utilizar pocilios con fondo en V ) .
2)  Introducir 0,025 mi de suspensión de virus (es decir, fluido alantoideo) en el
    primer pocilio.
3)  Utilícese una micropipeta para hacer diluciones del virus a la mitad (de 1:2 a
    1:4096) en toda la placa.
4)  Distribuir otros 0,025 mi de SSIAF en cada pocilio.
5)  Añadir 0,025 mi de una suspensión al 1% de hématies a cada pocilio.
 ---pagebreak---                                            ?>--
6)  Homogène i zar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4°C.
7)   Examinar las placas después de 30 o 40 minutos cuando se hayan sedimentado los
     hematíes de control. El examen se efectuará inclinando la placa y observando
     la presencia o ausencia de un movimiento de los hematíes en forma de lágrima.
    Los pocilios en los que no se haya producido la hemagluti nación deberán
    presentar un movimiento similar al de los pocilios de control que no contengan
    virus.
8)  El titulo de hemagluti nación será la mayor dilución que produzca la
    aglutinación de los hématies. Puede considerarse que tal dilución contiene una
    unidad de hemaglutinación. Otro método más preciso para determinar el titulo
    de hemaglutinación consiste en realizar pruebas de hemaglutinación con virus
    en una gama de diluciones iniciales muy cercanas entre si, p. ej., 1:3, 1:4,
     1:5, 1:6, etc. Este método se recomienda para preparar con gran precisión
    antigenos para las pruebas de inhibición de la hemaglutinación (Capitulo 6 ) .
             CAPÍTULO 6: Prueba de inhibición de la hemaglutinación (IH)
Reactivos
1)  Solución amortiguadora de fosfato (SSIAF).
2)  Fluido alantoideo que contenga el virus, diluido con SSIAF hasta que contenga
    4 u 8 unidades de hemagluti nación por cada 0,025 mi.
3)  Suspensión de hématies de pollito al 1%.
4)  Suero de pollito de control negativo.
5)  Suero de control positivo.
Procedimiento
1)  Distribuir 0,025 mi de SSIAF en cada uno de los pocilios de una placa de
    microtitulación de plástico (utilizar pocilios con fondo en V ) .
2)  Introducir 0,025 mi de suero en el primer pocilio de la placa.
 ---pagebreak---                                          -2é~
3)  Utilizar una micropipeta para hacer diluciones a la mitad del suero en toda la
    placa.
4)  Añadir 0,025 ml de fluido alantoideo diluido que contenga 4 u 8 unidades de
    hemaglutinación.
5)  Homogène i zar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4*C durante al
    menos 60 minutos o dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos como
    m i n i mo.
6)  Añadir 0,025 mi de suspensión de hematíes al 1% a todos los pocilios.
7)  Homogène i zar golpeando ligeramente las placas y refrigerarlas a 4°C.
8)  Examinar las placas después de 30 a 40 minutos cuando se hayan sedimentado los
    hematíes de control. El examen se efectuará inclinando las placas y observando
    la presencia o ausencia de un movimiento en forma de lágrima similar al de los
    pocilios de control que contengan hematíes (0,025 mi) y SSIAF (0,05 mi)
    solamente.
9)  El titulo de inhibición de la hemaglutinación será la mayor dilución del
    antisuero que produzca una inhibición completa de 4 u 8 unidades de virus (en
    todas las pruebas deberá incluirse una titulación de hemaglutinación para
    confirmar la presencia de las unidades de hemaglutinación necesarias).
10) La validez de los resultados dependerá de la obtención de un título de menos
    de 2 3 para 4 unidades de hemaglutinación o de 2 2 para 8 unidades de
    hemaglutinación con el suero de control negativo y de un titulo que esté entre
    el doble y la mitad (un orden de dilución) del titulo conocido del suero de
    control positivo.
                CAPITULO 7: Indice de patogenicidad intravenosa (IPIV)
1.  Diluir a 1 0 ~ 1 fluido alantoideo infeccioso del pase más bajo posible,
    preferentemente del aislamiento inicial y sin selección alguna, en una
    solución salina isotónica esterilizada.
2.  Inyectar por via intravenosa en cada uno de los diez pollitos de seis semanas
    de edad (deberán utilizarse aves libres de patógenos específicos) 0,1 mi de
    virus di luido.
3.  Examinar las aves cada 24 horas durante diez días.
 ---pagebreak---                                         ~n~
4.  Puntuar todas las aves en cada examen: 0 - normal, 1 - enferma, 2 - gravemente
    enferma y 3 - muerta.
5.  Anotar los resultados y calcular el indice del siguiente modo:
     Síntomas clínicos     Días después de la inoculación
                            1 2 3 4 5 6 7 8 9          10      Puntuación    total
     normal                10  2 0 0 0 0 0 0 0          0        12 x 0   -    0
     enferma                0 4 2 0 0 0 0 0 0           0         6 x 1 -      6
     gravemente enferma*    0 2 2 2 0 0 0 0 0           0          6 x 2 - 1 2
     muerta                 0  2  6  8 10 10 10 10 10  10        76 x 3   - 228
                                                                TOTAL     - 246
   El indice será la puntuación media por ave y por observación - 246       2,46
                                                                    100
   * Se trata de un diagnóstico subjetivo que en general se aplicará a las aves
      que presenten más de uno de los síntomas siguientes: problemas
      respiratorios, depresión, diarrea, cianosis en la piel no recubierta o en
      las barbillas, edema en la cara o en la cabeza o signos nerviosos.
           CAPITULO 8: Evaluación de la capacidad de formación de placas
1. Normalmente, lo más conveniente es utilizar una serie de diluciones del virus
   a fin de obtener un número adecuado de placas en el cultivo. Bastará con
   diluciones decimales hasta llegar a una concentración de 10~ 7 en SSIAF.
2. Preparar capas monocelulares confluentes de células de embrión de pollito o
   una linea celular apropiada (por ejemplo, la linea de riñon de bovino de
   Madin-Darby) en placas de Petri de 5 cm de diámetro.
3. Introducir 0,2 mi de cada dilución de virus en dos placas de Petri y esperar
   30 minutos para que el virus se absorba.
4. Tras lavar tres veces con SSIAF las células infectadas, se cubrirán con un
   medio apropiado que contenga agar al 1% p/v (también puede añadirse 0,01 mg/ml
   de tripsina). Es importante no añadir suero al medio de recubrimiento.
 ---pagebreak---                                           -Zf~
5.  Tras 72 horas de incubación a 37°C, las placas habrán alcanzado un tamaño
     adecuado. Para observarlas, conviene retirar la capa de agar y teñir la capa
    monocelular con violeta cristal (0,5% p/v) en etanol al 25% (v/v).
6.  Todos los virus incubados con tripsina en el medio producirán placas claras.
    Por el contrario, a falta de tripsina, sólo producirán placas los virus que
    resulten virulentos para los pollitos.
                           CAPITULO 9: Inmunodifusión doble
El método preferido para determinar la presencia del virus de la influenza A
consiste en demostrar la existencia de antígenos de la nucleocápsida o de la
matriz, que se hallan presentes en todos los virus de la influenza A. Tal
demostración se realiza generalmente mediante pruebas de inmunodifusión doble,
para las que se necesitan preparaciones de virus concentrados o extractos de
membranas corioalantoideas infectadas.
Una preparación adecuada de virus concentrados puede conseguirse sencillamente
centrifugando a alta velocidad fluido alantoideo infeccioso y disgregando los
virus con detergente de lauri I sarcos i nato sódico para liberar los antigenos
internos de la nucleocápsida y de la matriz. También puede recurrirse a la
precipitación acida añadiendo CIH 1N al fluido alantoideo infeccioso hasta obtener
un pH final comprendido entre 3,5 y 4,0; se enfria luego durante al menos una hora
a 0°C y se centrifuga a baja velocidad (1.000 g) durante diez minutos. Se puede
retirar el sobrenadante y resuspender el precipitado que contiene los virus en un
volumen mínimo de solución amortiguadora de g Iicinasarcosilo (lauri I sarcos i nato
sódico al 1% ajustado a pH 9,0 con glicina 0,5 M ) . Esta preparación contiene
antigenos de la nucleocápsida y de la matriz.
En 1970, Beard describió la preparación de un producto enriquecido en antigenos de
nucleocápsida a partir de membranas corioalantoideas procedentes de huevos
infectados. Este método comprende los siguientes pasos: retirar las membranas
corioalantoideas de huevos infectados que den positivo a la prueba de
hemagluti ni na, triturar u homogène i zar las membranas, congelar y descongelar tres
veces y centrifugar a continuación a 1.000 g durante diez minutos. Se retira el
precipitado y se trata el sobrenadante con formol al 0,1% para utilizarlo como
antigeno.
 ---pagebreak---                                           ??-
Cualquiera de estos dos antigenos puede utilizarse en las pruebas de
inmunodifusión doble empleando ge I es de agarosa o agar al 1% que contengan un 8,0%
de cloruro sódico en una solución amortiguadora de fosfato 0,1 M de pH 7,2. La
presencia del virus de la influenza A queda confirmada cuando las lineas de
precipitación formadas por el antigeno problema y el antigeno positivo conocido
frente al antisuero positivo conocido se unen para dar una linea de identidad.
 ---pagebreak---              LISTA DE LABORATORIOS NACIONALES PARA LA INFLUENZA AVIAR
 - Bélgica                     Institut National de Recherches
                              Vétérinaires, Groeselenberg 99,
                              B 1180 Bruxelles
 - Dinamarca                  National Veterinary Laboratory,
                              Poultry Disease Division, Hangévej 2
                              DK 8200 Aarhus N.
   República Federal           Institut für Kleintierzucht der
   de Alemania                Bundesforschungsanstalt für Land-
                              wi rtschaft, Braunschwe ig-VôIkenrode,
                              Postfach 280, D 3100 Celle
 - Grecia
:- España
 - Francia                    Centre National d'Etudes Vétérinaires
                              et Alimentation - Laboratoire Central
                              de Recherches Agricoles et Porcines,
                              B.P. 53, 22440 Ploufragan
 - irlanda                    Veterinary Research Laboratory,
                              Abbotstown, Castleknock, Dublin 15
 - Italia                     Istituto Patologie Aviaire, Facoltà
                              di Medicina Veterinaria, Università
                              di Napoli, Via Aniezzo Falcone 394,
                               I 80127 Napoli F Del pi no 1
 - Luxemburgo                  Institut National de Recherches
                              Vétérinaires, Groeselenberg 99,
                              B 1180 Bruxelles
 - Países Bajos               Centraal Diergeneeskundig Instituut,
                              Vestiginig Virologie, Hourtibweg 39,
                              NL 8221 RA Lelystad
;- Portugal                   Laboratorio Nacional de
                              Invest igaçao Veterinaria (LNIV),
                              Estrada de Benfica 701; 1500 Lisboa
 - Reino Unido                Central Veterinary Laboratory, New
                              Haw, Weybridge, GB-Surrey KT15 3NB
 ---pagebreak---                                          3/-
                                 ANEEP Ml
 NOMBRE DEL LABORATORIO COMUNITARIO PE REFERENCIA PARA LA INFLUENZA AYIAR
Central Veterinary Laboratory
New Haw
Weybr i dge
Surrey KT15 3NB
REINO UNIDO
 ---pagebreak---                                                                      ISSN 0257-9545
                                                               COM(91) 304 final
                                                  DOCUMENTOS
ES                                                                              03
                                      N° de catálogo : CB-CO-91-344-ES-C
                                                             ISBN 92-77-74813-3
Oficina de Publicaciones Oficiales de las Comunidades Europeas
L-2985 Luxemburgo