CELEX: 31971L0393
Language: es
Date: 1971-11-18 00:00:00
Title: Segunda Directiva 71/393/CEE de la Comisión, de 18 de noviembre de 1971, por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales

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31971L0393

Segunda Directiva 71/393/CEE de la Comisión, de 18 de noviembre de 1971, por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales  

Diario Oficial n° L 279 de 20/12/1971 p. 0007 - 0018 Edición especial en finés : Capítulo 3 Tomo 4 p. 0049  Edición especial en danés: Serie I Capítulo 1971(III) p. 0858  Edición especial sueca: Capítulo 3 Tomo 4 p. 0049  Edición especial en inglés: Serie I Capítulo 1971(III) p. 0987  Edición especial griega: Capítulo 03 Tomo 7 p. 0084  Edición especial en español: Capítulo 03 Tomo 5 p. 0117  Edición especial en portugués: Capítulo 03 Tomo 5 p. 0117 

 SEGUNDA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 18 de noviembre de 1971    por la que se establecen métodos de análisis   comunitarios para el control oficial de los alimentos   para animales     ( 71/393/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea ,    Vista la Directiva del Consejo , de 20 de julio de 1970 ,   relativa a la introducción de métodos de toma de   muestras , de métodos de análisis comunitarios para el   control oficial de los alimentos para animales (1) , y , en   particular , su artículo 2 ,    Considerando que la Directiva mencionada prevé que los   controles oficiales de los alimentos para animales para   comprobar si se cumplen las condiciones establecidas en   virtud de las disposiciones legales , reglamentarias o   administrativas relativas a la calidad y la composición de   los alimentos para animales deben seguir métodos de   toma de muestras y métodos de análisis comunitarios ;    Considerando que la Directiva n º 71/250/CEE de la   Comisión , de 15 de junio de 1971 (2) , ha establecido ya   determinados métodos de análisis comunitarios ; que ,   habida cuenta del estado de los trabajos efectuados desde   entonces , es conveniente adoptar una segunda serie de   métodos ;    Considerando que las medidas previstas en la presente   Directiva se ajustan al dictamen del Comité permanente   de la alimentación animal ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros dispondrán que los análisis para   los controles oficiales de los alimentos para animales ,   respecto de su contenido en humedad , bases nitrogenadas ,   volátiles , fósforo total y materias grasas brutas se   efectúen de acuerdo con los métodos descritos en el   Anexo de la presente Directiva .    Serán aplicables a los métodos descritos en el Anexo   de la presente Directiva las disposiciones generales que   figuran en la Parte 1 del Anexo ( Introducción ) de la   Primera Directiva n º 71/250/CEE de la Comisión , de   15 de junio de 1971 , por la que se establecen métodos de   análisis comunitarios para el control oficial de los   alimentos para animales .    Artículo 2    Los Estados miembros aplicarán , a más tardar el 1 de   enero de 1973 , las disposiciones legales , reglamentarias o   administrativas necesarias para cumplir las disposiciones   de la presente Directiva . Informarán de ello   inmediatamente a la Comisión .    Artículo 3    Los destinatarios de la presente Directiva serán los   Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 18 de noviembre de 1971 .    Por la Comisión    El Presidente    Franco M. MALFATTI    (1) DO n º L 170 de 3 . 8 . 1970 , p. 2 .    (2) DO n º L 155 de 12 . 7 . 1971 , p. 13 .    ANEXO    1 . DETERMINACIÓN DE LA HUMEDAD    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   humedad de los alimentos para animales . No se refiere   al análisis de los productos lácteos como   alimentos simples de animales , al análisis de las   sustancias minerales y de las mezclas esencialmente   compuestas por sustancias minerales , ni al análisis   de las semillas y frutos oleaginosos definidos en   el Reglamento ( CEE ) n º 136/66/CEE Consejo , de   22 de septiembre de 1966 , por el que se establece   una organización común de mercados en el sector   de las materias grasas (1) .    La determinación del contenido en humedad de   las semillas y frutos oleaginosos se regula en el   Anexo III del Reglamento ( CEE ) n º 1470/68 de la   Comisión , de 23 de septiembre de 1968 , relativo   a la toma y reducción de muestras a la determinación   del contenido en aceite , en impurezas y en humedad   de las semillas oleaginosas (2) .    2 . Principio    La muestra se somete a desecación en las condiciones   definidas , que varía en función de la naturaleza   del alimento . La pérdida de masa se determina   mediante pesada . Es necesario proceder a una   predesecación cuando se trate alimentos sólidos   que tengan un elevado contenido en humedad .    3 . Equipo    3.1 . Triturador construido de material que no   absorba la humedad , fácil de limpiar , que permita   un triturado rápido y uniforme sin provocar un   recalentamiento sensible , evite al máximo el   contacto con el aire exterior y cumpla los requisitos   indicados en 4.1.1 y 4.1.2 ( por ej. , microtrituradoras   de martillos o de enfriamiento por agua , molinos   de conos desmontables , trituradoras de movimiento   lento o de discos dentados ) .    3.2 . Balanza analítica , precisión 0,5 mg .    3.3 . Recipientes secos de metal inoxidable o de   cristal , provistos de tapadera que garantice un   cierre hermético ; superficie útil que permita   obtener un reparto de la muestra del orden de   0,3 g por cm2 .    3.4 . Estufa isoterma ( más o menos 1 ° C )   de calentamiento eléctrico , que garantice una   regulación rápida de la temperatura y convenientemente   ventilada (3) .    3.5 . Estufa de vacío , de calentamiento eléctrico   regulable , provista de una bomba de aceite y   de un dispositivo para la introducción de aire   caliente deshidratado o de un deshidratante ( por ej. ,   óxido de calcio ) .    3.6 . Desecador de placa de metal o de porcelana ,   gruesa , perforada , que contenga un deshidratante   eficaz .    4 . Método operativo    NB : Las operaciones descritas en este capítulo   deben efectuarse inmediatamente después de la   apertura de los envases que contienen las muestras .    Los análisis deben efectuarse por lo menos por   duplicado .    4.1 . Preparación    4.1.1 . Alimentos excepto los mencionados en 4.1.2   y 4.1.3    Tomar por lo menos 50 g de la muestra . Si fuera   necesario , triturarla o dividirla de forma adecuada   para evitar cualquier variación del contenido   en humedad ( ver 6 ) .    4.1.2 . Cereales y grañones    Tomar por lo menos 50 g de la muestra . Moler en   partículas de forma que por lo menos el 50 %   pase por un tamiz de mallas de 0,5 mm y no queden   más del 10 % sobre el tamiz de mallas redondas   de 1 mm .    4.1.3 . Alimentos líquidos o pastosos , alimentos   constituidos esencialmente por materias grasas    Tomar la muestra y pesar , con precisión de 10 mg ,   25 g aproximadamente de la misma , añadir una   cantidad adecuada de arena anhidra , pesada con   una precisión de 10 mg , y mezclar hasta obtener   un producto homogéneo .    4.2 . Desecación    4.2.1 . Alimentos , excepto los mencionados en   4.2.2 y 4.2.3    Tarar , con una precisión de 0,5 mg , un recipiente   ( 3.3 ) provisto de tapadera . Pesar , con precisión   de 1 mg , en el recipiente tarado 5 g aproximadamente   de la muestra y repartirla uniformemente . Colocar   el recipiente en la estufa previamente calentada   a 103 ° C , con la tapadera levantada . Para   evitar que la temperatura de la estufa descienda   demasiado , introducir el recipiente en un tiempo   mínimo . Dejar secar durante cuatro horas a   partir del momento en que la estufa haya alcanzado   de nuevo la temperatura de 102 ° C . Volver a   colocar la tapadera sobre el recipiente , retirarlo   de la estufa , dejar enfriar durante 30 a 45 minutos   en el desecador ( 3.6 ) y pesar , con precisión   de 1 mg .    En el caso de los alimentos constituidos esencialmente   por materias grasas , efectuar una desecación   complementaria de 30 minutos en la estufa a 103 ° C .   La diferencia entre las dos pesadas no deberá   exceder de 0,1 % de humedad .    4.2.2 . Cereales , harinas , grañones y sémolas    Tarar , con precisión de 0,5 mg , un recipiente   ( 3.3 ) provisto de tapadera . Pesa , con precisión   de 1 mg , en el recipiente tarado 5 g aproximadamente   de la muestra triturada y repartirla uniformemente .   Colocar el recipiente en la estufa previamente   calentada a 130 ° C , con la tapadera levantada .   Para evitar que la temperatura de la estufa descienda   demasiado , introducir el recipiente en un tiempo   mínimo . Dejar secar durante dos horas a partir   del momento en que la estufa haya alcanzado de   nuevo la temperatura de 130 ° C . Volver a colocar   la tapadera sobre el recipiente , retirarlo de la   estufa , dejar enfriar de 30 a 45 minutos en el   desecador ( 3.6 ) y pesar con una precisión de 1 mg .    4.2.3 . Piensos compuestos con un contenido mayor   del 4 % de sacarosa o de lactosa : alimentos simples   tales como algarrobos , productos de cereales   hidrolizados , gérmenes de malta , peladuras de   remolacha , solubles de pescado , azúcares ;   piensos compuestos con un contenido mayor del 25 %   de sales minerales que contengan agua de cristalización    Tarar , con precisión de 0,5 mg , un recipiente   ( 3.3 ) provisto de tapadera . Pesar , con precisión   de 1 mg , en el recipiente tarado 5 g aproximadamente   de la muestra y repartirla uniformemente . Colocar   el recipiente en la estufa de vacío ( 3.5 )   previamente calentada a una temperatura de 80 a   85 ° C , con la tapadera levantada . Para evitar   que la temperatura de la estufa descienda en   exceso , introducir el recipiente en un tiempo mínimo .    Llevar la presión a 100 Torrs y dejar secar a   dicha presión durante cuatro horas , bien bajo   una corriente de aire seco y caliente , bien mediante   la utilización de un deshidratante ( 300 g   aproximadamente para 20 muestras ) . En este último   caso , interrumpir la conexión con la bomba de   vacío cuando se haya alcanzado la presión   establecida . Contar la duración del secado a   partir del momento en que la estufa haya alcanzado   de nuevo la temperatura de 80 a 85 ° C . A   continuación , y con precaución , restablecer   la presión atmosférica en la estufa . Abrir   la estufa , cubrir inmediatamente el recipiente con   su tapadera , retirar el recipiente de la estufa ,   dejar enfriar durante 30 a 45 minutos en el desecador   ( 3.6 ) y pesar con precisión de 1 mg . Proceder   a una desecación complementaria de 30 minutos   en la estufa de vacío a la temperatura de 80 a   85 ° C y pesar de nuevo . La diferencia entre   las dos pesadas no deberá exceder del 0,1 % de humedad .    4.3 . Predesecación    4.3.1 . Alimentos , excepto los mencionados en 4.3.2    Los alimentos sólidos , de contenido en humedad   elevado y que por tanto hacen difícil el triturado ,   deben predesecarse tal como se indica a continuación .   Pesar , con precisión de 10 mg , 50 g de la muestra   no triturada ( si fuere necesario , puede efectuarse   una división elemental , en el caso de alimentos   comprimidos o aglomerados ) en un recipiente   apropiado ( por ejemplo , placa de aluminio de   20 por 12 cm con un borde de 0,5 cm ) . Dejar secar   en una estufa a temperatura de 60 a 70 ° C ,   hasta que el contenido en humedad se reduzca a   un valor comprendido entre el 8 y el 12 % . Retirar   de la estufa , dejar enfriar al descubierto en   el laboratorio durante una hora y pesar con una precisión   de 10 mg . Triturar inmediatamente después ,   tal como se indica en 4.1.1 y efectuar la desecación   como se indica en 4.2.1 o en 4.2.3 , según la   naturaleza del alimento .    4.3.2 . Cereales    Las semillas con un índice de humedad inferior   al 17 % deben predesecarse tal como se indica a   continuación :    Pesar , con precisión de 10 mg , 50 g de la   semilla sin moler en un recipiente adecuado ( por   ejemplo , placa de aluminio de 20 por 12 cm con un   borde de 0,5 cm ) . Dejar secar en una estufa durante   5 a 7 minutos a una temperatura de 130 ° C .   Retirar de la estufa , dejar enfriar al descubierto   en el laboratorio durante dos horas y pesar con   precisión de 10 mg . Moler inmediatamente después ,   tal como se indica en 4.1.2 y efectuar la desecación   como se indica en 4.2.2 .    5 . Cálculo de los resultados    El contenido en humedad , en porcentaje de   muestra , se calcula con las fórmulas siguientes :    5.1 . Desecación sin predesecación     ( E - m ) · 100/E    donde :    E = masa inicial , en gramos , de la muestra ,    m = masa , en gramos , de la muestra seca .    5.2 . Desecación con predesecación     [ ( M' - m ) M/M' + E - M ] · 100/E = 100   ( 1 - Mm/EM' )    donde :    E = masa inicial , en gramos , de la muestra ,    M = masa , en gramos de la muestra después   de la predesecación ,    M' = masa , en gramos , de la muestra después   de triturada o molida ,    m = masa , en gramos , de la muestra seca .    5.3 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos   determinaciones paralelas efectuadas sobre una   misma muestra no deberá exceder del 0,2 % de humedad .    6 . Observación    Cuando resulte necesario efectuar una trituración   y ésta implique una variación del contenido en   humedad del producto , los resultados del análisis   relativo a los componentes del alimento deben   convertirse con arreglo al contenido en humedad de   la muestra inicial .    2 . DETERMINACIÓN DE LAS BASES NITROGENADAS VOLÁTILES    A . POR MICRODIFUSIÓN    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   bases nitrogenadas volátiles , expresadas en   amoníaco de los alimentos para animales .    2 . Principio    La muestra se extrae con agua , la solución se   defeca y se filtra . Las bases nitrogenadas volátiles   se desplazan con una solución de carbonato de   potasio por microdifusión , se recogen en una   solución de ácido bórico y se trituran con   ácido sulfúrico .    3 . Reactivos    3.1 . Solución al 20 % ( p/v ) de ácido   tricloracético .    3.2 . Indicador : disolver 33 mg de verde de   bromocresol y 65 mg de rojo de metilo en 100 ml   de etanol al 95-96 % ( v/v ) .    3.3 . Solución de ácido bórico : en un   matraz aforado de 1 l , disolver 10 g de ácido   bórico p.a. en 200 ml de etanol al 95-96 % ( v/v )   y 700 ml de agua . Añadir 10 ml de indicador ( 3.2 ) .   Mezclar y ajustar si fuera necesario la coloración   de la solución al rojo claro por adición de   una solución de hidróxido de sodio . 1 ml de   esta solución permite fijar como máximo 300 mg   de NH3 .    3.4 . Solución saturada de carbonato de potasio :   disolver 100 g de carbonato de potasio p.a. en   100 ml de agua en ebullición . Dejar enfriar   y filtrar .    3.5 . Ácido sulfúrico 0,02 N .    4 . Equipo    4.1 . Mezclador ( balancín ) : de aproximadamente   35 a 40 revoluciones por minuto .    4.2 . Celulas de Conway ( v. esquema ) , de vidrio   o de material plástico .    4.3 . Microburetas , graduadas a 1/100 ml .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión de 1 mg , 10 g de la muestra   e introducirlos en un matraz aforado de 200 ml con   100 ml de agua . Mezclar durante 30 minutos en el   balancín . Añadir 50 ml de solución ácida   tricloroacética ( 3.1 ) , completar al volumen   con agua , agitar con fuerza y filtrar sobre un   filtro de pliegues .    Introducir con la pipeta en la parte central de   la célula de Conway 1 ml de solución de   ácido bórico ( 3.3 ) y en la corona de la   célula 1 ml del filtrado de la muestra . Cubrir   parcialmente con ayuda de una tapadera engrasada .   Dejar caer rápidamente en la corona 1 ml de solución   saturada de carbonato de potasio ( 3.4 ) y cerrar   la tapadera herméticamente . Remover con precaución   la célula proporcionándole un movimiento de   rotación al plano horizontal , con objeto de   garantizar la mezcla de los dos reactivos . Dejar   incubar bien durante cuatro horas por lo menos a   la temperatura ambiente , bien durante una hora   a 40 ° C .    Titular las bases volátiles en la solución   de ácido bórico con ácido sulfúrico 0,02 N   ( 3.5 ) empleando una microcubeta ( 4.3 ) .    Efectuar una prueba en blanco aplicando el mismo   método operatorio , sin la muestra que deba analizarse .    6 . Cálculo de los resultados    1 ml de H2SO4 0,02 N corresponde a 0,34 mg de   amoníaco .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos   determinaciones paralelas efectuadas sobre una misma   muestra no debe exceder :    del 10 % en valor relativo para los contenidos en   amoníaco inferiores al 1,0 % ; 0,1 en valor absoluto   para los contenidos en amoníaco iguales o superiores   al 1,0 % .    7 . Observación    Si el contenido en amoníaco de la muestra fuere   superior al 0,6 % diluir el filtrado inicial .    (1) DO n º 172 de 30 . 9 . 1966 , p. 3025/66 .    (2) DO n º L 239 de 28 . 9 . 1968 , p. 2 .    (3) Para la desecación de los cereales y de las   harinas , grañones y sémolas , la estufa debe   tener una capacidad calorífica tal que , regulada   previamente a una temperatura de 13 ° C , puede   alcanzar de nuevo dicha temperatura en menos de   45 minutos después de la colocación del número   máximo de muestras que deban secarse simultáneamente .   Debe tener una ventilación tal que , secando   durante dos horas , todas las muestras de trigo   blando que pueda contener , los resultados presenten   una diferencia inferior al 0,15 % con respecto a   los resultados obtenidos después de cuatro horas de   secado .    CÉLULA DE CONWAY : Vease D.O.    B . POR DESTILACIÓN    1 . Objetivo y ámbito aplicación    El método permite determinar el contenido de   bases nitrogenadas volátiles , expresadas en   amoníaco , de las harinas de pescado que no   contengan prácticamente urea . Únicamente es   aplicable para contenidos en amoníaco inferiores   al 0,25 % .    2 . Principio    La muestra se extrae con agua , la solución se   defeca y se filtra . Las bases nitrogenadas volátiles   se desplazan mediante ebullición por adición de óxido   de magnesio y se recogen en una cantidad determinada   de ácido sulfúrico cuyo exceso se titula con   una solución de hidróxido de sodio .    3 . Reactivos    3.1 . solución al 20 % ( p/v ) de ácido   tricloracético .    3.2 . Oxido de magnesio p.a.    3.3 . Emulsión de antiespuma ( por ej. : silicona ) .    3.4 . Acido sulfúrico 0,1 N .    3.5 . Solución de hidróxido de sodio 0,1 N .    3.6 . Solución al 0,3 % ( p/v ) de rojo de metilo   en el etanol al 95-96 % ( v/v ) .    4 . Equipo    4.1 . Mezclador ( balancín ) : de 35 a 40 revoluciones   por minuto aproximadamente .    4.2 . Aparato de destilación del tipo Kjeldahl .    5 . Modo operatorio    Pesar , con precisión de 1 mg , 10 g , de la   muestra e introducirlos con 100 ml de agua en un matraz   aforado de 200 ml . Mezclar durante 30 minutos en el   balancín . Añadir 50 ml de solución de ácido   tricloracético ( 3.1 ) , completar el volumen con   agua , agitar con fuerza y filtrar sobre un filtro de   pliegues .    Tomar una cantidad de filtrado límpida en   función del contenido supuesto en bases nitrogenadas   volátiles ( 100 ml son convenientes , en general ) .   Diluir en 200 ml y añadir 2 g de óxido de   magnesio ( 3.2 ) y algunas gotas de emulsión   antiespuma ( 3.3 ) . La solución debe ser alcalina   en el papel de tornasol ; si no lo es , añadir   óxido de magnesio ( 3.2 ) . Destilar 150 ml   aproximadamente de la solución en un aparato del   tipo Kjeldahl y recoger el destilado en un   erlenmeyer que contenga un volumen exactamente medido   ( 25 a 50 ml ) de ácido sulfúrico 0,1 N ( 3.4 ) .   Durante la destilación , evitar un recalentamiento   de las paredes . Llevar la solución sulfúrica a   ebullición durante 2 minutos , enfriar y titular el   exceso de ácido sulfúrico con la solución de   hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.5 ) en presencia del   indicador al rojo de metilo ( 3.6 ) .    Efectuar un ensayo en blanco aplicando el mismo   método operatorio , sin la muestra que debe   analizarse .    6 . Cálculo de los resultados    1 ml de H2SO4 0,1 N corresponde a 1,7 mg de amoníaco .    Expresar el resultado en porcentaje de muestra .    Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos   determinaciones paralelas efectuadas sobre una misma   muestra no debe exceder , en valor relativo , del 10 %   de amoníaco .    3 . DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO TOTAL    Método fotométrico    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   fósforo total de los alimentos para animales .   Está indicado , en particular , para el análisis   de los productos pobres en fósforo . En determinados   casos ( productos ricos en fósforo ) , puede   aplicarse un método gravimétrico .    2 . Principio    La muestra se mineraliza , bien por vía seca   ( para los alimentos orgánicos ) , bien por vía   húmeda ( para los compuestos minerales y los   alimentos líquidos ) y se pone en solución ácida .   La solución de trata con el reactivo vanado-molíbdico .   La densidad óptica de la solución amarilla así   formada se mide en el espectrofotómetro de 430 nm .    3 . Reactivos    3.1 . Cabarnato de calcio p.a.    3.2 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,1   ( 6 N aproximadamente ) .    3.3 . Ácido nítrico p.a. , d : 1,045 .    3.4 . Ácido nítrico p.a. , d : 1,38 a 1,42 .    3.5 . Ácido sulfúrico p.a. , d : 1,84 .    3.6 . Reactivo vanado-molíbdico : mezclar 200 ml de   solución de heptamolibdato de amonio ( 3.6.1 ) ,   200 ml de solución de monovanadato de amonio ( 3.6.2 )   y 134 ml de ácido nítrico ( 3.4 ) en un matraz   aforado de 1 l . Completar el volumen con agua .    3.6.1 . Solución de heptamolibdato de amonio :   Disolver en agua caliente 100 g de heptamolibdato   de amonio p.a. ( NH4 ) 6Mo7 O24 · 4 H2O . Añadir   10 ml de amoníaco ( d : 0,91 ) y completar hasta   1 l con agua .    3.6.2 . Solución de monovanadato de amonio :   Disolver en 400 ml de agua caliente 2,35 g de monovanadato   de amonio p.a. NH4VO3 . Añadir lentamente y   agitándolo al mismo tiempo 20 ml de ácido nítrico   diluido ( 7 ml de HNO3 ( 3.4 ) + 13 ml de H2O ) y   completar a 1 l con agua .    3.7 . Solución patrón de 1 mg de fósforo por   ml : Disolver en el agua 4,387 g de dihidrogenofosfato de   potasio p.a. KH2PO4 . Completar hasta 1 l con agua .    4 . Equipo    4.1 . Crisoles de incineración , de cuarzo o   porcelana .    4.2 . Horno para barro eléctrico , provisto de un   termostato regulado a 550 ° C .    4.3 . Matraz de Kjeldahl , 250 ml .    4.4 . Matraces aforados y pipetas de precisión .    4.5 . Espectrofotómetro .    4.6 . Tubos de ensayo , diámetro : 16 mm   aproximadamente , de esmerilado normalizado 14,5 ;   capacidad : 25 a 30 ml .    5 . Método operatorio    5.1 . Preparación de la solución    Según la naturaleza de la muestra , preparar una   solución como se indica en 5.1.1 o 5.1.2 .    5.1.1 . Caso general    Pesar , con precisión de 1 mg , 1 g o más de la   muestra . Introducir la muestra en un matraz de   Kjeldahl , añadir 20 ml de ácido sulfúrico   ( 3.5 ) , agitar para impregnar completamente la   materia de ácido y evitar que ésta se adhiera a   las paredes del matraz , calentar y mantener   durante 10 minutos en ebullición . Dejar enfriar   ligeramente , añadir 2 ml de ácido nítrico   ( 3.4 ) , calentar suavemente , dejar enfriar   ligeramente , añadir de nuevo un poco de ácido   nítrico ( 3.4 ) y llevar a ebullición , añadir   un poco de agua , transvasar el líquido a un matraz   aforado de 500 ml enjuagando el matraz con agua   caliente . Dejar enfriar , completar el volumen con   agua , homogeneizar y filtrar .    5.1.2 . Muestras que contengan materias orgánicas   y que estén exentas de dihidrogenofosfatos de calcio y   de magnesio    Pesar , con una precisión de 1 mg , 2,5 g   aproximadamente de la muestra en un crisol de   incineración . Mezclar íntimamente la muestra   con 1 g de carbonato de calcio ( 3.1 ) . Calcinar   en el horno a 550 ° C más o menos 5 ° C hasta   obtener cenizas blancas o grises ( una pequeña   cantidad de carbón no crea molestias ) .    Transvasar las cenizas a un vaso de 250 ml . Añadir   20 ml de agua y de ácido clorhídrico ( 3.2 )   hasta que cese la efervescencia . Añadir a   continuación 10 ml de ácido clorhídrico ( 3.2 )   en exceso . Llevar el vaso sobre un baño de arena   y evaporar en seco para insolubilizar la sílice .   Recuperar el residuo con 10 ml de ácido nítrico   ( 3.3 ) y llevar a ebullición durante 5 minutos   sobre el baño de arena , sin evaporar en seco .   Transvasar el líquido a un matraz aforado de   500 ml enjuagando el vaso varias veces con agua   caliente . Dejar enfriar , completar el volumen   con agua , homogeneizar y filtrar .    5.2 . Desarrollo de la coloración y medida de la   densidad óptica    Diluir una parte alícuota del filtrado obtenido   en 5.1.1 o 5.1.2 para obtener una concentración en   fósforo que alcance como máximo 40 mg/ml .   Introducir 10 ml de dicha solución en un tubo de   ensayo ( 4.6 ) y añadir 10 ml del reactivo   vanadomolíbdico ( 3.6 ) . Homogeneizar y dejar   reposar 10 minutos por lo menos a una temperatura   de 20 ° C . Medir la densidad óptica mediante el   espectrofotómetro a 430 mm por comparación con una   solución obtenida por adición de 10 ml del   reactivo vanadomolíbdico ( 3.6 ) en 10 ml de agua .    5.3 . Curva de calibrado    Preparar a partir de la solución de calibrado ( 3.7 )   soluciones que contengan respectivamente 5 , 10 ,   20 , 30 y 40 mg de fósforo por ml . Tomar 10 ml de   cada una de dichas soluciones y añadir 10 ml del   reactivo vanadomolíbdico ( 3.6 ) . Homogeneizar y   dejar reposar 10 minutos por lo menos a una   temperatura de 20 ° C . Medir las densidades   ópticas en las condiciones indicadas en 5.2 .    Trazar la curva de calibrado llevando a la ordenada   los valores de la densidad óptica y a la abscisa   las cantidades correspondientes de fósforo . La   curva es lineal para las concentraciones comprendidas   entre 0 y 40 mg/ml .    6 . Cálculo de los resultados    Determinar la cantidad de fósforo de la toma de   muestra refiriéndose a la curva de calibrado .    Expresar el resultado en porcentaje de muestra .    Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de las determinaciones   paralelas efectuadas sobre una misma muestra no debe   exceder del :    3 % en valor relativo para los contenidos en   fósforo inferiores al 5 % ;    0,15 en valor absoluto para los contenidos en fósforo   iguales o superiores al 5 % .    4 . DETERMINACIÓN DE LAS MATERIAS GRASAS BRUTAS    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   materias grasas brutas de los alimentos para animales .   No se refiere al análisis de las semillas y frutos   oleaginosos definidos en el Reglamento 136/66/CEE del   Consejo , de 22 de septiembre de 1966 . La determinación   del contenido en aceite de dichos productos está   regulada en el Anexo V del Reglamento ( CEE )   n º 1470/68 de la Comisión , de 23 de septiembre   de 1968 .    Se prevén dos procedimientos , en función de la   naturaleza del alimento .    1.1 . Procedimiento A ( extracto etéreo ) : aplicado   a todos los alimentos salvo a los mencionados en 1.2 .    1.2 . Procedimiento B : aplicado a los alimentos cuyas   materias grasas no puedan ser extraidas totalmente   por el éter dietílico sin hidrólisis previa , a   los alimentos de oxígeno animal , gluten , pulpas de   patata desecadas , residuos desecados de cervecería   y de la destilería , levaduras desecadas , desechos de   galletería , de pan y alimentos cocidos , productos   lácteos y alimentos que contengan una elevada   proporción de los mismos ( al menos en 40 % ) y a los   piensos compuestos enriquecidos en grasas .    2 . Principio    2.1 . Procedimiento A : Las materias grasas se   extraen con éter dietílico . El disolvente se elimina   y el residuo se seca y se pesa .    2.2 . Procedimiento B : La muestra se hidroliza en   frío mediante ácido clorhídrico . La solución   se enfría y se filtra . El residuo , lavado y secado ,   se somete a la extracción con éter dietílico   según el procedimiento A .    3 . Reactivos    3.1 . Éter dietílico , anhidro , d : 0,720 ,   34,5 ° C prácticamente exento de paróxidos .    3.2 . Sulfato de sodio , p.a. , anhidro .    3.3 . Ácido clorhídrico 3 N .    3.4 . Adyuvante de filtración , por ej. tierra de   diatomeas , Hiflo-supercel .    3.5 . Tetracloruro de carbono p.a.    4 . Equipo    4.1 . Extractor según Soxhlet o aparato equivalente .    4.2 . Aparato de calentamiento a temperatura regulable ,   anti-deflagrante .    4.3 . Estufa de desecación por vacío ( menos de   100 Torrs ) .    5 . Método operatorio    5.1 . Procedimiento A ( ver observación 7.1 )    Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g de la muestra y   mezclarlos con 2 a 3 g ( o más , si fuere necesario )   de sulfato de sodio anhidro ( 3.2 ) . Introducir   la mezcla en un cartucho de extracción exento de   materias grasas y recubrir con un tampón de   algodón desgrasado . ( La mezcla puede hacerse , si   llega el caso , en el cartucho . )    Colocar el cartucho en un extractor ( 4.1 ) y extraer   durante seis horas mediante el éter dietílico   ( 3.1 ) . Si se emplea un extractor de Soxhlet , regular   el calentamiento para obtener 15 sifonados por   lo menos por hora . Recoger el extracto etéreo en   un matraz seco , provisto de algunos fragmentos   de piedra póme (1) y tarado .    Eliminar el éter por destilación y secar a   continuación el residuo de evaporación durante una   hora y media en la estufa de desecación al vacío   ( 4.3 ) a temperatura de 75 ° C . Enfriar en un   desecador y pesar . Efectuar una segunda desecación   durante 30 minutos para asegurarse de que el peso de la   materia grasa se mantiene constante ( la pérdida de   peso debe ser inferior a 1 mg ) .    5.2 . Procedimiento B    Pesar , con precisión de 1 mg , 2,5 g de la muestra   ( ver observación 7.2 ) e introducirlos en un vaso   de 400 ml o en un erlenmeyer de 300 ml . Añadir 100 ml   de ácido clorhídrico 3 N ( 3.3 ) y algunos   fragmentos de piedra pómez . Volver a tapar el vaso   con un cristal de reloj o dotar el erlenmeyer de   un refrigerante de reflujo . Llevar la mezcla a   ebullición suave , con una pequeña llama o una placa   calorífera , y mantenerla durante una hora .   Evitar que el producto se adhiera a las paredes del   recipiente .    Enfriar y añadir una cantidad de adyuvante de   filtración ( 3.4 ) suficiente para evitar cualquier   pérdida de materia grasa al realizar la filtración .   Filtrar sobre un papel de filtro doble humedecido ,   exento de materias grasas . Lavar el residuo con   agua fría hasta que desaparezca la reacción ácida .   Comprobar que el filtrado no contiene materias grasas .   La presencia de éstas en el filtrado indica que   debe efectuarse antes de la hidrólisis una extracción   de la muestra con éter dietílico , según el   procedimiento indicado en 5.1 .    Colocar el papel de filtro doble que contiene el   residuo sobre un cristal de reloj y secar durante una   hora y media en la estufa a la temperatura de   95 a 98 ° C .    Introducir el doble filtro y el residuo seco en el   cartucho de extracción , extraer con éter   dietílico y continuar el método operatorio tal   como se indica en el párrafo segundo del punto 5.1 .    6 . Cálculo de los resultados    Expresar el resultado en porcentaje de muestra .    Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas efectuadas sobre una misma muestra no debe   rebasar el 0,3 % de materia grasa .    7 . Observaciones    7.1 . Para los productos de elevado contenido en   materias grasas , difíciles de triturar o no apropiadas   para la toma de una muestra reducida homogénea ,   proceder como se indica . Pesar , con precisión   de 1 mg , 20 g de la muestra y mezclarlos con 10 g o   más de sulfato de sodio anhidro ( 3.2 ) . Proceder   a la extracción con éter dietílico ( 3.1 )   como se indica en 5.1 . Completar el extracto obtenido   hasta 500 ml con un tetracloruro de carbono ( 3.5 ) y   homogeneizar . Tomar 50 ml de la solución y colocarlos   en un pequeño matraz seco , provisto de algunos   fragmentos de piedra pómez (2) y tarado .   Eliminar el disolvente mediante destilación ,   secar y continuar con el método del producto   5.1 . Eliminar el disolvente del residuo de extracción   que se encuentre en el cartucho y triturar el   residuo con una finura de 1 mm . Colocar de nuevo   el producto en el cartucho de extracción ( no   añadir sulfato de sodio ) , extraer mediante   éter dietílico y continuar con el método operatorio   tal como se indica en los párrafos segundo y tercero   del punto 5.1 .    Calcular el resultado en porcentaje de muestra ,   teniendo en cuenta la parte alícuota empleada al   realizar la primera extracción de acuerdo con la   fórmula siguiente :     ( 10 a + b ) · 5    en la que :    a ) = extracto etéreo en gramos de la parte alícuota ,   tras la primera extracción ,    b ) = extracto etéreo en gramos tras la segunda   extracción .    7.2 . La muestra de los productos pobres en materias   grasas y puede aumentarse a 5 g .    (1) Sustituir los fragmentos de piedra pómez por   partes de cristal cuando la materia grasa deba ser   objeto de exámenes cualitativos posteriores .    (2) Sustituir los fragmentos de piedra pómez por   perlas de cristal cuando la materia grasa debe ser   objeto de exámenes cualitativos ulteriores .