CELEX: 31985R0718
Language: es
Date: 1985-03-20 00:00:00
Title: Reglamento (CEE) n° 718/85 de la Comisión, de 20 de marzo de 1985, por el que se modifica el Reglamento (CEE) n° 625/78 relativo a las modalidades de almacenamiento público de leche desnatada en polvo

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31985R0718

Reglamento (CEE) n° 718/85 de la Comisión, de 20 de marzo de 1985, por el que se modifica el Reglamento (CEE) n° 625/78 relativo a las modalidades de almacenamiento público de leche desnatada en polvo  

Diario Oficial n° L 078 de 21/03/1985 p. 0014 - 0023 Edición especial en español: Capítulo 03 Tomo 34 p. 0017  Edición especial en portugués: Capítulo 03 Tomo 34 p. 0017  Edición especial en finés : Capítulo 3 Tomo 18 p. 0136  Edición especial sueca: Capítulo 3 Tomo 18 p. 0136 

 REGLAMENTO ( CEE ) N º 718/85 DE LA COMISIÓN    de 20 de marzo de 1985    por el que se modifica el Reglamento ( CEE )   n º 625/78 relativo a las modalidades de almacenamiento   público de leche desnatada en polvo    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica   Europea ,    Visto el Reglamento ( CEE ) n º 804/68 del Consejo , de   27 de junio de 1968 , por el que se establece una   organización común de mercados en el sector de la leche   y de los productos lácteos (1) , modificado en último   lugar por el Reglamento ( CEE ) n º 1557/84 (2) , y , en   particular , el apartado 5 de su artículo 7 ,    Considerando que el Anexo I del Reglamento ( CEE )   n º 625/78 de la Comisión (3) , modificado en último   lugar por el Reglamento ( CEE ) n º 1128/84 (4) , relativo   a la calidad de la leche desnatada en polvo , prevé en la   letra b ) del apartado 2 los métodos de control utilizados   para la investigación de determinados productos ;    Considerando que ha sido puesto a punto un nuevo método   de investigación del suero de leche en polvo para la   determinación de los glicomacropéptidos mediante   cromatografía líquida de alto rendimiento , gracias en   particular al análisis circular realizado por determinados   institutos de investigación y por diversos laboratorios de   control de los Estados miembros ; que dicho método   ofrece ventajas manifiestas , entre ellas , en particular ,   la rapidez de ejecución del análisis habitual de   numerosas muestras por día ; que es conveniente , por   consiguiente , prever la utilización del mismo adaptando   el Reglamento ( CEE ) n º 625/78 ;    Considerando , no obstante , que parece oportuno   establecer un período transitorio y de adaptación de   doce meses , durante el cual los Estados miembros puedan   seguir utilizando el método del ácido siálico libre y   los operadores invocarlo en caso de impugnación de los   resultados del nuevo método de análisis ;    Considerando que las medidas previstas en el presente   Reglamento se ajustan al dictamen del Comité de gestión   de la leche y de los productos lácteos ,    HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO :    Artículo 1    Se modifica el Reglamento ( CEE ) n º 625/78 del modo   siguiente :    1 ) En el Anexo I , se sustituye el segundo guión   de la letra b ) del apartado 2 por el texto siguiente :     « - suero de leche en polvo : determinación   de los glicomacropéptidos mediante cromatografía   líquida de alto rendimiento (2) . No obstante , hasta el   31 de marzo de 1981 , los Estados miembros podrán utilizar   asimismo la determinación por el ácido siálico   libre (3) . Hasta dicha fecha , en caso de impugnación   del interesado , a su solicitud y a su cargo , se   recurrirá a la determinación del ácido siálico   libre . Los resultados así obtenidos serán   determinantes . »    2 ) En el Anexo I , la nota anterior (2) pasa   a ser la nota (3) , y se inserta la nota (2) siguiente :     « (2) El método es el que figura en el Anexo V . »    3 ) Se añade el Anexo del presente Reglamento ,   como Anexo V .    Artículo 2    El presente Reglamento entrará en vigor el tercer día   siguiente al de su publicación en el Diario Oficial de las   Comunidades Europeas .    El presente Reglamento será obligatorio en todos sus   elementos y directamente aplicable en cada Estado miembro .    Hecho en Bruselas , el 20 de marzo de 1985 .    Por la Comisión    Frans ANDRIESSEN    Vicepresidente    (1) DO n º L 148 de 28 . 6 . 1968 , p. 13 .    (2) DO n º L 150 de 6 . 6 . 1984 , p. 6 .    (3) DO n º L 84 de 31 . 3 . 1978 , p. 19 .    (4) DO n º L 109 de 26 . 4 . 1984 , p. 9 .    ANEXO     « ANEXO V    INVESTIGACIÓN DEL SUERO DE LECHE EN POLVO EN   LA LECHE DESNATADA EN POLVO DESTINADA AL ALMACENAMIENTO   PÚBLICO MEDIANTE DETERMINACIÓN DE LOS   GLICOMACROPÉPTIDOS POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA   DE ALTO RENDIMIENTO ( CLHP )    1 . Objeto y ámbito de aplicación    Este método permite poner de manifiesto la   presencia de suero de leche en polvo en la leche   desnatada en polvo destinada al almacenamiento público   mediante determinación de los glicomacropéptidos .    2 . Referencias    Norma FIL 50 A : 1980 - Leche y productos lácteos -   Guía de las técnicas de muestreo .    3 . Definición    Contenido en glicomacropéptidos de la leche   desnatada en polvo : contenido en sustancias determinado   según el método descrito a continuación y   expresado en porcentaje en peso .    4 . Principio     - Reconstitución de la leche desnatada en polvo ,   eliminación de las materias grasas y de las   proteínas con ácido tricloroacético , y   centrifugación ,     - determinación de la cantidad de glicomacropéptidos   ( GMP ) presentes en el sobrenadante por cromatografía   líquida de alto rendimiento ( CLHP ) ,     - evaluación del resultado obtenido en relación   con muestras testigos constituidas por leche desnatada   en polvo exentas o con adición de un porcentaje   conocido de suero de leche en polvo .    5 . Reactivos    Todos los reactivos serán de calidad analítica   reconocida . El agua utilizada será agua destilada o   de pureza por lo menos equivalente .    5.1 . Solución de ácido tricloroacético    Disolver 240 g de ácido tricloroacético   ( Cl3CCOOH ) en el agua y completar hasta 1 000 ml .    5.2 . Solución eluyente pH 6,0    Disolver 1,74 g de fosfato dipotásico ( K2HPO4 ) ,   12,37 g de fosfato monopotásico ( KH2PO4 ) y   21,41 g de sulfato de sodio ( Na2SO4 ) en 700 ml   de agua aproximadamente .    Ajustar , si es necesario , a pH 6,0 con ayuda   de una solución de ácido fosfórico o de   hidróxido de potasio .    Completar hasta 1 000 ml con agua y homogeneizar .    Filtrar la solución eluyente , antes de su   utilización , sobre una membrana filtrante de 0,45 µm   de diámetro de poro .    5.3 . Solución de lavado y de conservación   de las columnas    Mezclar un volumen de acetonitrilo ( CH3CN ) en   nueve volúmenes de agua . Filtrar la mezcla ,   antes de su utilización , sobre una membrana   filtrante de 0,45 µm de diámetro de poro .    Nota : Puede utilizarse cualquier otra solución   de lavado que tenga un efecto bactericida y que no   altere la eficacia de resolución de las columnas .    5.4 . Muestras testigos    5.4.1 . Leche desnatada en polvo que responda   a las exigencias del Reglamento ( CEE ) n º 625/78 ,   o sea [ 0 ] .    5.4.2 . La misma leche en polvo adulterada con 5 %   ( m/m ) por suero de leche en polvo de composición   media , o sea [ 5 ] .    6 . Aparatos    6.1 . Balanza analítica .    6.2 . Centrifugadora que pueda alcanzar una fuerza   centrífuga de 2 200 g y provista de tubos para   centrifugar cerrados de una capacidad de 25 ml   aproximadamente .    6.3 . Agitador mecánico .    6.4 . Agitador magnético .    6.5 . Embudos de vidrio de 7 cm de diámetro   aproximadamente .    6.6 . Papeles de filtro , de filtración media ,   de 12,5 cm de diámetro aproximadamente .    6.7 . Dispositivo de filtración de vidrio provisto   de membrana filtrante de 0,45 µm de diámetro de poro .    6.8 . Pipeta graduada que permita entregar 10 ml ,   según ISO 648 , clase A , o ISO/R 835 .    6.9 . Baño de agua con termostato regulado   a 25 más menos 0,5 ° C .    6.10 . Equipo de cromatografía líquida de alto   rendimiento que comprenda :    6.10.1 . bomba ,    6.10.2 . inyector , manual o automático , de   15 a 30 um de capacidad ,    6.10.3 . dos columnas en serie TSK 2 000 SW ( 30 cm   de longitud , diámetro interior de 0,75 cm ) y/o   columnas de eficacia equivalente y una precolumna   previa ( 3 cm × 0,3 cm ) rellena de I 125 ó de   un material de eficacia equivalente ,    6.10.4 . horno de columna con termostato regulado   a 35 más menos 1 ° C ,    6.10.5 . detector por luz ultravioleta de longitud   de onda variable , que permita efectuar mediciones   de 205 nm de una sensibilidad de 0,008 A ,    6.10.6 . integrador que pueda integrar de valle   en valle    Nota : Se puede trabajar con columnas , mantenidas   a temperatura ambiente , pero su poder de resolución   es ligeramente menor . En este caso , las variaciones   de temperatura durante una misma serie de análisis   deberán ser inferiores a más menos 5 ° C .    7 . Muestreo    7.1 . Véase la norma 50 A : 1980 .    7.2 . Conservar la muestra de modo que no pueda   producirse deterioro ni modificación de composición .    8 . Modo operatorio .    8.1 . Preparación de la muestra para ensayo .    Trasvasar la leche en polvo a un recipiente de   capacidad aproximadamente doble del volumen del   polvo , provisto de tapadera hermética al aire .   Cerrar el recipiente inmediatamente .    Mezclar bien la leche en polvo por sucesivas   inversiones del recipiente .    8.2 . Toma de ensayo    Pesar 2 000 más menos 0,001 g de muestra para   ensayo en un tubo de centrifugar ( 6.2 ) .    8.3 . Eliminación de las materias grasas y   de las proteínas    8.3.1 . Añadir 20,0 g de agua tibia ( 50 ° C )   a la toma de ensayo . Disolver el polvo agitando   durante 5 minutos con ayuda del agitador ( 6.3 ) .   Llevar la temperatura del tubo hasta 25 ° C .    8.3.2 . Añadir en 2 minutos , 10,0 ml de la   solución de ácido tricloroacético ( 5.1 )   bajo agitación magnética ( 6.4 ) . Poner el tubo   en el baño de agua ( 6.9 ) y mantenerlo allí   60 minutos .    8.3.3 . Centrifugar ( 6.2 ) 2 200 g durante 10 minutos .   O filtrar sobre papel ( 6.6 ) , desechar los 5 primeros   milímetros de filtrado .    8.4 . Determinación cromatográfica    8.4.1 . Inyectar de 15 a 30 mm medidos exactamente ,   de sobrenadante o de filtrado ( 8.3.3 ) , en el   aparato de cromatografía líquida de alto rendimiento   ( 6.10 ) con un caudal de 1,0 ml de solución   eluyente ( 5.2 ) por minuto .    Nota :    1 . Mantener la solución eluyente ( 5.2 ) a   85 ° C durante todo el análisis cromatográfico   con el fin de conservar el eluyente desgasificado y de   evitar toda proliferación bacteriana . Es aceptable   cualquier precaución que tenga un efecto similar .    2 . En cada interrupción , lavar las columnas con   agua . No dejarlas nunca bajo la solución eluyente   ( 5.2 ) .    Antes de toda interrupción superior a 24 horas ,   lavar las columnas con agua y después lavarlas con   la solución ( 5.3 ) durante por 10 menos 3 horas   con un caudal de 0,2 ml por minuto .    8.4.2 . Los resultados del análisis cromatográfico   de la muestra para ensayo [ E ] se obtienen en forma   de un cromatograma en el que cada pico se identifica   por su tiempo de retención RT , es decir :    pico II : segundo pico del cromatograma en el que el   RT es de 12,5 minutos aproximadamente ,    pico III : tercer pico del cromatograma , correspondiente   a los GMP , cuyo RT es de 15,5 más menos 1,0 minutos ,    pico IV : cuarto pico del cromatograma cuyo RT   es de 17,5 minutos aproximadamente .    La calidad de las columnas puede influir en los   tiempos de retención de los diferentes picos .    El integrado ( 6.10.6 ) calcula automáticamente la   superficie A de cada pico , o sea :    A II : superficie del pico II    A III : superficie del pico III ,    A IV : superficie del pico IV .    Con el fin de detectar las anomalías eventuales   debidas ya sea a un mal funcionamiento del aparato   o de las columnas , ya sea por el origen y naturaleza   de la muestra analizada , es necesario observar el   aspecto de cada cromatograma antes de efectuar cualquier   interpretación cuantitativa .    En caso de duda , repetir el análisis .    8.5 . Calibrado    8.5.1 . Aplicar exactamente a las muestras testigos   ( 5.4 ) el modo operatorio descrito desde el punto 8.2   al punto 8.4.2 .    Utilizar soluciones recientemente preparadas pues los   GMP se degrada en medio tricoloracético al 8 % .   En efecto , su contenido disminuye aproximadamente 0,2 %   por hora a 30 ° C .    8.5.2 . Antes de proceder a cualquier determinación   cromatográfica de las muestras , acondicionar las   columnas mediante inyecciones repetidas de la   solución ( 8.5.1 ) de la muestra testigo ( 5.4.2 )   hasta que la superficie y el tiempo de retención del   pico correspondiente a los CMP sean constantes .    8.5.3 . Determinar los coeficientes de respuesta R   inyectando el mismo volumen de filtrados ( 8.5.1 )   que el utilizado para las muestras .    9 . Expresión de los resultados    9.1 . Modo de cálculo y fórmulas    9.1.1 . Cálculo de los coeficientes de respuesta R :    Pico II : R II = 100/A II [ 0 ]    Pico IV : R IV = 100/A IV [ 0 ]    donde :    R II y R IV     = respectivamente los coeficientes    de respuesta de los picos II y IV ,    A II [ 0 ] y A IV [ 0 ]     = respectivamente las superficies de los picos II y   IV de la muestra testigo [ 0 ] obtenidas en el   punto 8.5.3    Pico III : R III = W/ ( A III [ 0 ] - A III [ 0 ] )    donde :    R III = el coeficiente de respuesta del pico III ,    A III [ 0 ] y A III [ 5 ] = respectivamente   las superficies del pico III en las muestras testigos   [ 0 ] y [ 5 ] obtenidas en el punto 8.5.3. ,    W = la cantidad de suero de leche presente en la   muestra testigo [ 5 ] , o sea 5 ,    9.1.2 . Cálculo de la superficie relativa de   los picos de la muestra [ E ]    S II [ E ] = R II × A II [ E ]    S III [ E ] = R III × A III [ E ]    S IV [ E ] = R IV × A IV [ E ]    donde :    S II [ E ] , S III [ E ] , S IV [ E ]   = respectivamente las superficies relativas de los   picos II , III y IV de la muestra [ E ] ,    A II [ E ] , A III [ E ] , A IV [ E ] =   respectivamente las superficies de los picos II , III y   IV de la muestra [ E ] obtenidas en el punto 8.4.2 ,    R II , R III , R IV = los coeficientes de respuesta   calculados en el punto 9.1.1.    9.1.3 . Cálculo del tiempo de retención relativo   del pico III de la muestra [ E ] :    RRT III [ E ] = RT III [ E ]/RT III [ 5 ]    donde :    RRT III [ E ] = el tiempo de retención relativo   del pico III de la muestra [ E ] ,    RT III [ E ] = el tiempo de retención del   pico III de la muestra [ E ] obtenido en el punto   8.4.2 ,    RT III [ 5 ] = el tiempo de retención del pico III   de la muestra testigo [ 5 ] obtenido en el   punto 8.5.3 .    9.1.4 . Por la experimentación , se ha demostrado   que existe una relación lineal entre el tipo de   retención relativo del pico III es decir RRT III [ E ]   y el porcentaje de suero de leche en polvo añadido   hasta el 10 % .     - con un contenido < 5 % el RRT III [ E ]   es > 1,000 ,     - con un contenido * 5 % el RRT III [ E ]   es * 1,000 .    La incertidumbre admitida para los valores de RRT III   es de más menos 0,002 .    Normalmente , el valor de RRT III [ 0 ] es poco   diferente de 1,034 . Según el estado de las columnas ,   este valor puede aproximarse a 1,000 , pero siempre   ha de ser superior a 1,000 .    9.2 . Cálculo del porcentaje de suero de leche   en polvo presente en la muestra , es decir :    W = S III [ E ] - [ 1,3 + ( S III [ 0 ] -   0,9 ) ]    donde :    W = el porcentaje m/m de suero de leche en polvo   presente en la muestra [ E ] ,    S III [ E ] = la superficie relativa del pico III   de la muestra para ensayo [ E ] obtenida en el   punto 9.1.2 ,    1,3 = la superficie relativa media del pico III ,   expresada en g por 100 g de suero de leche en polvo   determinado en las leches desnatadas en polvo no   adulteradas de origen diverso . Esta cifra se ha   obtenido experimentalmente ,    S III [ 0 ] = la superficie relativa del pico III   que es igual a R III × A III [ 0 ] . Estos   valores se obtienen respectivamente en los puntos 9.1.1 y   8.5.3 ,     ( S III [ 0 ] - 0,9 ) = la correción que   hay que efectuar en la superficie relativa media 1,3   cuando el valor S III [ 0 ] se aparta en 0,9 .   Experimentalmente , la superficie relativa media del   pico III de la muestra testigo [ 0 ] es de 0,9 .    9.3 . Precisión del método    9.3.1 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinados   efectuadas simultáneamente o en un corto intervalo   de tiempo por el mismo analista que utilice los mismos   aparatos , con la misma toma de muestra , no debe   sobrepasar el 0,2 % m/m .    9.3.2 Reproducibilidad    La diferencia entre dos resultados individuales e   independientes obtenidos en dos laboratorios diferentes ,   con la misma toma de muestra , no debe sobrepasar   el 0,4 % m/m .    9.4 . Interpretación    9.4.1 . Concluir en la ausencia de suero de leche   si la superficie relativa del pico III , S III [ E ]   expresado en g de suero de leche en polvo por 100 g   es * 2,0 + ( S III [ 0 ] - 0,9 )    donde :    2,0 = el valor máximo admitido para la superficie   relativa del pico III en que se tiene en cuenta   la superficie relativa del pico III , es decir 1,3 ,   de la incertidumbre debida a las variaciones de   composición de las leches desnatadas en polvo y de   la reproducibilidad del método ( 9.3.2 ) ,     ( S III [ 0 ] - 0,9 ) = la correción que se   debe efectuar cuando el valor S III [ 0 ]   es diferente de 0,9 ( véase el punto 9.2 ) .    9.4.2 . Si la superficie relativa del pico III ,   S III [ E ] es * 2,0 y cuando la superficie   relativa del pico II , S III [ E ] , es * 135 o   la del pico IV , S III [ E ] , es * 135 , determinar   el contenido en proteínas .    9.4.2.1 . El contenido en proteínas es < 37 g para   100 g : la muestra analizada ha sido probablemente   fabricada partiendo de leche de mala calidad   bacteriológica . No puede llegarse a ninguna conclusión   relativa a la presencia eventual de suero de leche . La   resolución de los picos II , III y IV debe   no obstante ser tan definida como para las muestras   testigos y el tiempo de retención relativo del   pico III S III [ O ] .    9.4.2.2 . - El contenido de proteínas es * 37 g   para 100 g :     - si las superficies relativas de los picos II , III y IV   de la muestra [ E ] están dentro de los límites   admitidos ( trazo discontinuo ; estos valores indicados   en los gráficos 1 al 6 del Anexo han sido establecidos   según análisis estadísticos de los datos   experimentales ) no puedo establecerse la presencia   de suero de leche en polvo ;     - en caso de que sólo la superficie relativa   del pico III esté fuera de los límites superiores   en los gráficos 2 , 3 y 6 , la conclusión es :   presencia de suero de leche .    El contenido de suero de leche en polvo se calcula   deduciendo de S III [ E ] ( calculado según   9.1.2. ) , el valor medio del pico III se manifiesta en   el gráfico 2 ( trazo continuo ) en función del   contenido de proteínas de la muestra [ E ] .    El valor de RRT III [ E ] debe estar de acuerdo   con el contenido de suero de leche en polvo   determinado ;     - en todos los demás casos , no debe deducirse   ninguna conclusión sobre la presencia eventual de suero   de leche en polvo .    Figuras : Ver D.O.