CELEX: 31980L0891
Language: es
Date: 1980-07-25 00:00:00
Title: Directiva 80/891/CEE de la Comisión, de 25 de julio de 1980, relativa al método de análisis comunitario para la determinación del contenido en ácido en los aceites y grasas destinados como tales a la alimentación humana, y en los productos alimenticios que contengan aceites o grasas añadidas

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31980L0891

Directiva 80/891/CEE de la Comisión, de 25 de julio de 1980, relativa al método de análisis comunitario para la determinación del contenido en ácido en los aceites y grasas destinados como tales a la alimentación humana, y en los productos alimenticios que contengan aceites o grasas añadidas  

Diario Oficial n° L 254 de 27/09/1980 p. 0035 - 0041 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 11 p. 0008  Edición especial griega: Capítulo 13 Tomo 11 p. 0007  Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 11 p. 0008  Edición especial en español: Capítulo 13 Tomo 11 p. 0076  Edición especial en portugués: Capítulo 13 Tomo 11 p. 0076 

 DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 25 de julio de 1980    relativa al método de análisis comunitario para   la determinación del contenido en ácido en los aceites   y grasas destinados como tales a la alimentación humana ,   y en los productos alimenticios que contengan aceites   o grasas añadidas     ( 80/891/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica   Europea ,    Vista la Directiva 76/621/CEE del Consejo , de 20 de   julio de 1976 , relativa a la fijación del nivel máximo   de ácido erúcico en los aceites y grasas destinados como   tales a la alimentación humana , y en los productos   alimenticios que contengan aceites o grasas añadidas (1)   y , en particular , su artículo 3 ,    Considerando que el artículo 2 de la Directiva   76/621/CEE establece que , a partir del 1 ° de julio   de 1979 , el contenido en ácido erúcico de los productos   a que se refiere al artículo 1 de la Directiva citada ,   calculado sobre su contenido total de ácidos grasos en   la fase grasa , no podrá ser superior al 5 % ;    Considerando que el artículo 3 de la Directiva   76/721/CEE establece que el contenido en ácido erúcico   debe ser controlado por un método de análisis   comunitario ;    Considerando que el Reglamento ( CEE ) n º 1470/68   de la Comisión , de 23 de septiembre de 1968 , relativo   a la toma y reducción de muestras a la determinación   de la proporción de aceite , de impurezas y de humedad   de los granos oleaginosos (2) , contempla en su Anexo VI ,   establecido por el Reglamento ( CEE ) n º 72/77 (3) , un   método de análisis para la determinación del contenido   ácido erúcico en los granos de colza y de nabina ;   que conviene utilizar dicho método como método de   preselección ;    Considerando que en las condiciones normales de análisis   de los aceites y grasas por cromatografía de gases de los   ácidos grasos que entren en su composición , no es   posible distinguir entre el ácido erúcico y otros   isomeros del ácido docosenoico , como el ácido   cetoleico ;    Considerando que es necesario determinar los niveles de   ácido erúcico en los aceites , las grasas y los productos   alimenticios a los que se hayan añadido aceites o grasas   que puedan contener ácido cetoleico , y otros isomeros del   ácido docosenoico ;    Considerando que no es preciso determinar el nivel de   ácido erúcico en los aceites , las grasas y los productos   alimenticios a los que se haya añadido aceites o grasas   cuyo análisis preliminar revele que la proporción total   de ácidos docosenoicos o de ácidos cisdocosenoicos no es   superior al 5 % ;    Considerando que , en espera de la introducción de un   método más exacto de análisis para la determinación   del ácido erúcico , el presente método de análisis   se considera de momento como el más apropiado ;    Considerando que las medidas previstas en la presente   Directiva se atienen al dictamen del Comité permanente de   productos alimenticios ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros exigirán que los análisis   necesarios para la determinación del contenido en ácido   erúcico de los productos mencionados en el artículo 1 de   la Directiva 76/621/CEE se efectúen de conformidad con el   artículo 2 .    Artículo 2    1 . Deberán determinarse , a título de preselección :    a ) el contenido total en ácidos grasos docosenoicos de   los productos mencionados en el artículo 1 por el método   descrito en el Anexo VI del Reglamento ( CEE )   n º 1470/68 ;    b ) el contenido total en ácidos grasos cis-docosenoicos   de los productos mencionados en el artículo 1 por el   método descrito en el Anexo VI del Reglamento ( CEE )   n º 1470/68 , utilizando la cromatografía de gases en   tales condiciones que los isomeros cis y trans de los   ácidos docosenoicos sean separados ; fases estacionarias   adecuadas para ello serán por ejemplo el   « cianopropilpolisiloxano » o los cristales líquidos .    2 . Si el contenido total :    a ) en ácidos grasos docosenoicos , determinado con   arreglo a la letra a ) del apartado 1 , o    b ) en ácidos grasos cis-docosenoicos , determinado con   arreglo a la letra b ) del apartado 1    de los productos mencionados en el artículo 1 ,   calculado sobre su contenido total de ácidos grasos en   la fase grasa , no fuera superior al 5 % , no se exigirá   ninguna otra determinación : En caso contrario , el   contenido en ácido erúcico se determinará por el   método descrito en el Anexo de la presente Directiva .    Artículo 3    Los Estados miembros aplicarán las disposiciones   legales , reglamentarias y administrativas necesarias para   cumplir a la presente Directiva a más tardar el 1 de   febrero de 1982 , e informarán inmediatamente de ello   a la Comisión .    Artículo 4    Los destinatarios de la presente Directiva serán los   Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 25 de julio de 1980 .    Por la Comisión    Étienne DAVIGNON    Miembro de la Comisión    (1) DO n º L 202 de 28 . 7 . 1976 , p. 35 .    (2) DO n º L 239 de 28 . 9 . 1968 , p. 2 .    (3) DO n º L 12 de 15 . 1 . 1977 , p. 11 .    ANEXO    DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN ÁCIDO ERÚDICO   EN LOS ACEITES Y GRASAS DESTINADAS COMO TALES A LA   ALIMENTACIÓN HUMANA , Y EN LOS PRODUCTOS ALIMENTICIOS   QUE CONTENGAN ACEITES O GRASAS AÑADIDAS    I . INTRODUCCIÓN    1 . PREPARACIÓN DE LA MUESTRA    1.1 . Generalidades    El peso de la muestra presentada al laboratorio   para su análisis deberá ser normalmente de 50 g ,   a menos que sea necesario una cantidad mayor .    1.2 . Preparación de la muestra    La muestra deberá ser homogeneizada antes del   análisis .    1.3 . Conservación    La muestra así preparada deberá conservarse   siempre en un recipiente hermético .    2 . REACTIVOS    2.1 . Agua    2.1.1 . Cuando se haga mención al agua para   soluciones , disoluciones y lavados , se tratará   siempre de agua destilada o de agua desmineralizada   de pureza equivalente .    2.1.2 . Cuando se haga mención a una « solución »   o una « disolución » , sin indicación de otros   reactivos , se tratará de una solución o disolución   acuosa .    2.2 . Productos químicos    Todos los reactivos deberán ser de calidad analítica ,   salvo disposición en contrario .    3 . EQUIPO    3.1 . Lista de aparatos    En la lista de material se incluirán únicamente   aquellos aparatos de uso especializado y con especificaciones   particulares .    3.2 . Balanza analítica    Por balanza analítica se entenderá una balanza   con una precisión mínima de 0,1 mg .    4 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    4.1 . Resultados    El resultado que se indicará en el informe del   análisis será el valor medio obtenido , como   mínimo , a partir de dos determinaciones cuya   repetibilidad sea satisfactoria .    4.2 . Cálculo del porcentaje    Salvo disposición especial , los resultados se   expresarán en porcentaje ( m/m ) de los ácidos grasos   totales en la muestra en el estado en que ésta hubiese   llegado al laboratorio .    4.3 . Número de cifras significativas    El resultado no deberá incluir más cifras   significativas de las que permita la precisión del   método .    II . DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO ERÚCICO    1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN DE MÉTODO    El método permitirá determinar el contenido en   ácido erúcico de :    a ) los aceites y las grasas que contengan ácido   cetoleico ( un isómero cis del ácido docosenoico que   se encuentra en los aceites de pescado )    b ) los aceites y las grasas hidrogenadas que   contengan isómeros cis y trans del ácido docosenoico .    2 . DEFINICIÓN    Contenido en ácido erúcico : el contenido en   ácido erúcico determinado por el método indicado   a continuación .    3 . PRINCIPIO    Separación de los ésteres metílicos de los   ácidos grasos por cromatografía a baja temperatura   sobre capa fina tratada con nitrato de plata y   determinación cuantitativa de los ésteres así   separados por cromatografía de gases .    4 . REACTIVOS    4.1 . Ester dietílico recién destilado ,   sin peróxido .    4.2 . n-Hexano .    4.3 . Gel de sílice G , para cromatografía   sobre capa fina .    4.4 . Gel de sílice para cromatografía sobre columna .    4.5 . Solución de nitrato de plata a 200 g/l .   Disolver 24 g de nitrato de plata en agua y llevar el   volumen a 120 ml con agua .    4.6 . Solución de erucato de metilo a 5 mg/ml .   Disolver 50 mg de erucato de metilo en algunos ml de   n-Hexano y llevar el volumen a 10 ml con n-Hexano .    4.7 . Solución patrón interno de tetracosaonato   de metilo a 0,25 mg/ml . Disolver 25 mg de tetracosaonato   de metilo en algunos ml de n-Hexano ( como en el   número 4.6 ) y llevar el volumen a 100 ml con n-Hexano .    4.8 . Disolvente de desarrollo : tolueno y n-Hexano   en la proporción 90 a 10 ( v/v ) .    4.9 . Solución de 2,7 diclorofluoresceno a 0,5 g/1 .   Disolver calentando y agitando 50 mg de 2,7   diclorofluoresceno en 100 ml de una solución acuosa   que contenga un 50 % de metanol .    5 . EQUIPO    5.1 . Aparato de cromatografía sobre capa fina   que incluya en particular :    5.1.1 . una unidad de congelación capaz de mantener   la cubeta de desarrollo y su contenido a una temperatura   entre - 20 ° - 25 ° C ;    5.1.2 . placas de vidrio de 200 mm × 200 mm ;    5.1.3 . una lámpara de rayos ultravioleta ;    5.1.4 . columnas de vidrio de 200 mm de largo y   cuyo diámetro interior sea de 10 mm , provistas de   filtros de lana de vidrio o de vidrio calcinado , o   bien pequeños embudos provistos de filtros de vidrio   calcinado ;    5.1.5 . un aplicador para depositar las soluciones   en forma de banda estrecha o de línea sobre placas TLC .    5.2 . Aparato de cromatografía de gases acoplado   a un integrador electrónico , tal como se describe   en la Sección III del Anexo VI del Reglamento ( CEE )   n º 72/77 .    6 . MODO DE OPERAR    6.1 . Preparación de los ésteres metílicos de   ácidos grasos    Tomar una muestra de unos 400 mg de la grasa o del   aceite que deba analizarse y preparar una solución   que contenga entre 20 y 50 mg/ml de ésteres metílicos   de ácidos grasos en n-Hexano , siguiendo el método   expuesto en el número 3 de la Sección II del Anexo   del Reglamento ( CEE ) n º 72/77 .    6.2 . Cromatografía sobre capa fina    6.2.1 . Preparación de las placas    Colocar 60 g de gel de sílice ( número 4.3 )   en un matraz con fondo redondo de una capacidad de 50 ml .   Añadir 120 ml de solución de nitrato de plata   ( número 4.5 ) y agitar durante un minuto para obtener   una pasta completamente homogénea . Extender ésta   de la manera habitual sobre las placas y ajustar el   espesor de la capa a 0,5 mm . Dicha cantidad de pasta   será suficiente para la preparación de 5 placas de   200 mm × 200 mm . Secar parcialmente las placas al   aire ( preferentemente en la obscuridad durante 30 minutos )   y a continuación secarlas completamente y activarlas   en un horno a 100 ° C durante 2h 30 . Las placas deberán   utilizarse en cuanto sea posible tras la fase de   activación , o bien guardarse cuidadosamente en un   armario al abrigo de la luz y reactivándolas antes   de volverlas a utilizar . Antes de hacer uso de ellas ,   trazar surcos a través del substrato a 10 mm de los   lados y de la parte superior de cada placa , a fin   de disminuir los efectos marginales durante el desarrollo .   Nota : la activación a 110 ° C durante 1 hora podrá   resultar satisfactoria a condición de que las placas   no estén ennegrecidas .    6.2.2 . Aplicación de los ésteres metílicos    Con ayuda del aplicador ( número 5.1.5 ) , depositar   50 µl de la solución de ésteres metílicos preparada   a partir de la muestra que deba analizarse ( número 6.1 )   sobre una fina línea de unos 50 mm de largo , a   40 mm como mínimo de los lados y a 10 mm de la parte   inferior de la placa . Aplicar de la misma manera   100 µl de una solución que contenga volúmenes   iguales de la solución de ésteres metílicos   ( número 6.1 ) y de la solución de erucato de   metilo ( número 4.6 ) . La aplicación de las soluciones   exigirá un particular cuidado dada la fragilidad   del substrato . Tras la aplicación de los ésteres   metílicos , colocar la parte inferior de la placa   en el éter dietílico hasta que este último suba   a unos 5 mm por encima de la zona de aplicación de   la muestra que deba analizarse . Dicha operación   concentrará los ésteres metílicos en una estrecha   banda . Nota : Si se deseara , podrán aplicarse   sobre la placa , 50 µl de solución de erucato de   metilo ( número 4.6 ) a fin de ayudar a la   identificación de la banda de erucato de metilo tras   desarrollo ( ver figura ) .    6.2.3 . Desarrollo de las placas    Verter una cantidad suficiente de disolvente   ( número 4.8 ) en la cubeta hasta alcanzar una   profundidad de unos 5 mm y colocar la cubeta provista   de su tapadera en un congelador ( número 5.1.1 ) mantenido   aproximadamente a - 25 ° C ( en determinados casos ,   podrá resultar útil proteger las paredes de la cubeta   con algún tipo de revestimiento ) . Transcurridas   2 horas , colocar la placa en la cubeta con precaución   y dejar subir el disolvente hasta que alcance una zona   situada entre la mitad y los dos tercios de la altura   de la placa . Retirar entonces la placa y evaporar   lentamente el disolvente con ayuda de una corriente   de nitrógeno . Volver a colocar la placa en la cubeta   y dejar que el disolvente alcance la parte superior de   la placa . Retirar la placa y secarla de nuevo con la   corriente de nitrógeno , vaporizándola a continuación   con la solución de 2,7 diclorofluoresceno   ( número 4.9 ) .    En el examen con luz ultravioleta se podrá localizar   la banda de erucato de metilo presente en la muestra   por referencia a la banda más intensa de la muestra   a la que se haya añadido el erucato de metilo   ( ver figura ) .    6.2.4 . Separación de las fracciones de ésteres   metílicos    Raspar cuantitativamente la banda de erucato de   metilo procedente de la muestra en un recipiente de   una capacidad de 50 ml . En otro recipiente de 50 ml ,   raspar cuantitativamente el gel de sílice que se encuentre   encima y debajo de la banda de erucato de metilo y que   contenga las demás fracciones de ésteres metílicos   de ácidos grasos . En cada uno de los dos recipientes   verter 1,0 ml de la solución patrón de tetracosaonato   de metilo ( número 4.7 ) y 10 ml de éter dietílico   ( número 4.1 ) . Agitar y transferir separadamente   el contenido de los recipientes a las correspondientes   columnas o embudos ( número 5.1.4 ) que contendrán   aproximadamente 1 g de gel de sílice ( número 4.4 ) .   A continuación , extraer tres o cuatro veces los   ésteres con ayuda de 10 ml de éter dietílico .   Recoger el producto de la filtración en pequeños   matraces . Tras haber evaporado una parte del disolvente   con una débil corriente de nitrógeno , transferir   los ésteres metílicos a tubitos de vidrio con fondo   puntiagudo . Evaporar el resto del disolvente con   nitrógeno de manera que los ésteres metílicos   se concentren en el fondo de los tubos . Disolver los   ésteres metílicos en 25 a 50 µl de hexano   ( número 4.2 ) .    6.3 . Cromatografía de gases    6.3.1 . Seguir el modo de operar descrito en la Sección   III del Anexo VI del Reglamento ( CEE ) n º 72/77 e   inyectar de 1 a 2 µl de las soluciones de ésteres   metílicos obtenidos a partir ( i ) de la fracción   que contenga el erucato de metilo y ( ii ) de las   fracciones que contengan el resto de los ésteres   metílicos de ácidos grasos .    6.3.2 . Las superficies de picos proporcionados por   el integrador electrónico serán las siguientes :    i ) a partir del cromatograma de la fracción que   contenga el erucato de metilo :    a ) erucato de metilo [ E ]    b ) patrón interno [ L1 ]    c ) superficies totales de los picos de los ésteres   metílicos con excepción del patrón interno [ EF ] ;    ii ) a partir del cromatograma de la fracción que   contenga el resto de los ésteres metílicos de ácidos   grasos :    a ) superficies totales de los picos , con excepción   del patrón interno [ RF ]    b ) patrón interno [ L2 ] .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Método de cálculo y fórmula    7.1.1 . El contenido de ácido erúcico de la   muestra , expresado como éster metílico en porcentaje   de la proporción de los ésteres metílicos de los   ácidos grasos totales de la muestra , vendrá dado   por la fórmula :    E/ ( L1 ( EF/L1 + RF/L2 ) ) × 100    donde    E , EF , RF , L1 y L2 son las superficies de picos   definidas en el número 6.3.2 . , corregidas si fuera   necesario con ayuda de factores de calibración .   El contenido de erucato de metilo obtenido por la fórmula   anterior es equivalente al nivel de ácido erúcico   expresado en porcentaje del contenido total de ácidos   grasos .    7.1.2 . Si la superficie de los picos fuera expresada   en porcentaje , calcular como sigue los valores EF y RF :    EF = 100 - L1    RF = 100 - L2    7.1.3 . El sistema de cálculo ( número 7.1.1 )   supone que el nivel de ácido tetracosanoico en la   muestra es despreciable . En presencia de cantidades   importantes de dicho ácido , el valor en ácido   tetracosanoico ( L2 ) obtenido por el cromatograma   de las fracciones que contengan los demás ésteres   metílicos de ácidos grasos deberá reducirse a :    L2 - T2    donde    T2 = T0 P2/P0 y    T2 = la superficie del pico del éster metílico   del ácido tetracosanoico procedente de la muestra y   que forma parte de la superficie de pico imputada   al patrón interno en el cromatograma de la fracción   restante de los ésteres metílicos de ácidos grasos .    P2 = la superficie de pico del éster metílico   del ácido palmítico obtenida del cromatograma de   la fracción restante ,    T0 = la superficie de pico del éster metílico   de ácido tetracosanoico obtenida del cromatograma   de los ésteres metílicos de los ácidos grasos   totales determinado por el análisis al que hace   referencia el artículo 2 de la presente Directiva ,    P0 = la superficie de pico del éster metílico   del ácido palmítico obtenido del cromatograma de los   ésteres metílicos los ácidos grasos totales   determinado por el análisis al que hace referencia   el artículo 2 de la presente Directiva .    7.1.4 . Origen de la fórmula    El contenido en ácido graso de la fracción   que contenga el erucato de metilo , expresada en   porcentaje del contenido total de ácidos grasos en   la muestra , vendrá dada por :    EF/L1/ ( EF/L1 + RF/L2 ) × 100 o   EF/L1 ( EF/L1 + RF/L2 ) × 100    El contenido en ácido erúcico de la fracción   que contenga el erucato de metilo vendrá dada por :    E/EF    De donde resulta que el contenido de ácido erúcico   en la muestra , expresado en porcentaje del contenido   total de ácido graso , vendrá dada por :    EF/L1 ( EF/L1 + RF/L2 ) × E/EF × 100 o   E/L1 ( EF/L1 + RF/L2 ) × 100    7.1.5 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas efectuadas simultáneamente en las mismas   condiciones por el mismo analista sobre la misma   muestra no deberá superar , en valor relativo , el   10 % del resultado obtenido y , en valor absoluto ,   0,5 g por 100 g de muestra , tomando el valor más elevado .    FIGURA    Típico ejemplo de cromatograma sobre capa delgada   que muestra la separación de los ésteres metílicos   del ácido erúcico , del ácido cetoleico y de   los isomeros trans del ácido docosenoico : ver D.O.    (1) La fracción indicada como erucato de metilo   contendrá normalmente ésteres metílicos de   otros ácidos monoenoicos , pero deberá estar exenta   de cetoleato de metilo .