CELEX: 51990EC2676
Language: fr
Date: 2006-12-11
Title: Projet de règlement (CE) n° …/… de la Commission du […] déterminant des méthodes d'analyse communautaires applicables dans le secteur du vin (Version codifiée)

FR
|[pic]                     |COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES                                                                           |

                                        Bruxelles, le
                                        C

                                                                    Projet de

                                                      RÈGLEMENT (CE) N° …/… DE LA COMMISSION

                                                                      du […]

                               déterminant des méthodes d'analyse communautaires applicables dans le secteur du vin

                                                                (Version codifiée)

                                            ê 2676/90 (adapté)

                                                                    Projet de

                                                      RÈGLEMENT (CE) N° …/… DE LA COMMISSION

                                                                      du […]

                               déterminant des méthodes d'analyse communautaires applicables dans le secteur du vin

                                                    (Texte présentant de l’intérêt pour l’EEE)

LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,

vu le traité instituant la Communauté européenne,

vu le règlement (CE) no  Ö 1493/1999 Õ du Conseil, du Ö 17 mai 1999 Õ, portant organisation commune du marché vitivinicole[1], et  notamment  son
article Ö 46, paragraphe 3 Õ ,

considérant ce qui suit:

                                            ê 

   1) Le règlement (CE) n° 2676/90 de la Commission, du 17 septembre 1990, déterminant des méthodes d'analyse communautaires applicables dans  le
      secteur du vin[2] a été modifié à plusieurs reprises[3] et de façon substantielle. Il convient, dans un souci de clarté et de  rationalité,
      de procéder à la codification dudit règlement.

                                            ê 2676/90 considérant 1 (adapté)

   2) L'article Ö 46, Õ paragraphe 3 Ö , premier alinéa, Õ du règlement  (CE)  no   Ö 1493/1999 Õ  prescrit  l'adoption  des  méthodes  d'analyse
      permettant d'établir la composition des produits Ö relevant dudit Õ règlement et les règles permettant d'établir si ces produits  ont  fait
      l'objet de traitements en violation des pratiques œnologiques autorisées.

                                            ê 2676/90 considérant 2

   3) Pour autant que la Communauté n'a pas encore établi les limites chiffrées des éléments présents caractérisant  l'utilisation  de  certaines
      pratiques œnologiques et des tableaux permettant la comparaison des données analytiques, il y  a  lieu  d'autoriser  les  États  membres  à
      déterminer les limites.

                                            ê 2676/90 considérant 3 (adapté)

   4) L' Ö annexe VI, point J.1.a), Õ du règlement (CE) no  Ö 1493/1999 Õ prévoit un examen analytique portant au minimum  sur  les  valeurs  des
      éléments caractéristiques du v.q.p.r.d. en cause, qui figurent parmi ceux énumérés Ö au point J.3 de ladite Õannexe .

                                            ê 2676/90 considérant 4 (adapté)

   5) La surveillance des indications figurant sur les documents relatifs aux produits  en  cause  rend  nécessaire  l'  Ö emploi Õ  de  méthodes
      d'analyse uniformes assurant l'obtention de données précises et comparables. En conséquence, ces méthodes doivent  être  obligatoires  pour
      toute transaction commerciale et toute opération de contrôle et aux possibilités limitées du commerce, il  convient  d'admettre  un  nombre
      limité de procédés usuels permettant une détermination rapide et suffisamment sûre des éléments recherchés.

                                            ê 2676/90 considérant 5

   6) Il est utile de retenir comme méthodes, dans la mesure du possible,  celles  bénéficiant  d'une  reconnaissance  générale  telles  que  les
      méthodes développées dans le cadre de la Convention internationale pour l'unification des méthodes d'analyse et l'appréciation des vins  de
      1954 publiées par l'Office international de la vigne et du vin dans le Recueil des méthodes internationales d'analyse des vins.

                                            ê 2676/90 considérant 6 (adapté)

                                            ê 2676/90 considérant 7 (adapté)

   7) Pour assurer la comparabilité des résultats obtenus en application des méthodes d'analyse visées  à  l'article  Ö 46,  paragraphe  3, Õ  du
      règlement (CE) no  Ö 1493/1999 Õ, il convient de se référer, en ce qui concerne la répétabilité et la reproductibilité  de  ces  résultats,
      aux définitions établies par l'Office international de la vigne et du vin.

                                            ê 2676/90 considérant 8 (adapté)

   8) Afin de tenir compte du progrès scientifique d'une part et de l'équipement technique des laboratoires officiels d'autre part et dans le but
      de rendre le travail de ces laboratoires plus efficace et plus rentable, il y a lieu  de  permettre  l'application  de  méthodes  d'analyse
      automatisées sous certaines conditions. Il importe de préciser qu'en cas de litige les  méthodes  automatisées  ne  peuvent  remplacer  les
      méthodes de référence et les méthodes usuelles.

                                            ê 2676/90 considérant 9 (adapté)

   9) Les résultats d'un mesurage de la densité par la méthode automatisée basée sur le principe d'un résonateur de flexion sont,  quant  à  leur
      exactitude, leur répétabilité et leur reproductibilité, au moins égaux aux résultats obtenus par  les  méthodes  figurant  au  point  1  de
      l'annexe I du présent règlement pour mesurer la masse volumique ou la densité relative. Il est donc indiqué, en vertu de l'article  Ö 46, Õ
      paragraphe 3 Ö , quatrième alinéa, Õ du règlement (CE) no   Ö 1493/1999 Õ,  de  considérer  cette  méthode  automatisée  comme  équivalente
      auxdites méthodes figurant dans l'annexe I du présent règlement.

                                            ê 2676/90 considérant 10 (adapté)

                                            ê 2676/90 considérant 11

  10) Les mesures prévues au présent règlement sont conformes à l'avis du comité de gestion des vins,

                                            ê 2676/90 (adapté)

A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:

                                                                 Article premier

1. Les méthodes d'analyse communautaires applicables dans le secteur du vin permettant, à  l'occasion  des  transactions  commerciales  et  toute
opération de contrôle Ö , d'établir ce qui suit sont celles figurant à l'annexe I Õ :

a)     la composition des produits visés à l'article Ö 1er, paragraphe 2, Õ du règlement (CE) no  Ö 1493/1999 Õ ;

b)     si ces produits ont fait l'objet de traitements en violation des pratiques œnologiques autorisées.

                                            ê 2676/90

2. Pour les matières pour lesquelles des méthodes de référence et des méthodes usuelles sont fixées, les résultats obtenus par l'application  des
méthodes de référence prévalent.

                                                                    Article 2

1. Pour l'application du présent règlement:

a)    la répétabilité représente la valeur au-dessous de laquelle est située, avec une probabilité spécifiée, la valeur absolue de la  différence
       de deux résultats individuels obtenus à partir de mesures effectuées dans les  mêmes  conditions  (même  opérateur,  même  appareil,  même
       laboratoire, et un court intervalle de temps);

b)    la reproductibilité représente la valeur au-dessous de laquelle est située, avec  une  probabilité  spécifiée,  la  valeur  absolue  de  la
       différence de deux résultats individuels obtenus dans des conditions différentes (opérateurs différents, appareillages  différents,  et/ou
       laboratoires différents, et/ou époques différentes).

2. Le terme «résultat individuel» est la valeur obtenue lorsqu'on applique, une fois et complètement, la méthode d'essai normalisée sur  un  seul
échantillon. En l'absence d'indication, la probabilité est de 95 %.

Article 3

Des méthodes d'analyses automatisées sont admises, sous la responsabilité du directeur  de  laboratoire  à  la  condition  que  l'exactitude,  la
répétabilité et la reproductibilité des résultats soient au moins équivalentes à  celles  des  résultats  obtenus  par  les  méthodes  d'analyses
figurant à l'annexe I.

En cas de litige, les méthodes figurant à l'annexe I ne peuvent pas être remplacées par les méthodes automatisées.

                                            ê 2676/90

                                                                    Article 4

Lorsqu'il est fait mention d'eau pour les solutions, les dilutions ou les lavages, il s'agit d'eau distillée ou d'eau déminéralisée de pureté  au
moins équivalente. Tous les produits chimiques doivent être de qualité analytique sauf spécifications contraires.

                                                                    Article 5

                                            ê 2676/90 (adapté)

                                            ê 

Le règlement (CEE) no 2676/90 est abrogé.

Les références faites au règlement abrogé s'entendent comme faites au présent règlement et  sont  à  lire  selon  le  tableau  de  correspondance
figurant à l'annexe III .

                                            ê 2676/90 (adapté)

                                                                    Article 6

Le présent règlement entre en vigueur le Ö vingtième Õ jour Ö suivant celui Õ de sa publication au Journal officiel de Ö l’Union Õ européenne.

                                            ê 2676/90

Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directement applicable dans tout État membre.

Fait à Bruxelles, le […]

      Par la Commission
      […]
      Membre de la Commission

                                            ê 2676/90

                                                                     ANNEXE I

1.    MASSE VOLUMIQUE À 20 °C ET DENSITÉ RELATIVE À 20 °C

1.    DÉFINITIONS

      La masse volumique est le quotient de la masse d'un certain volume de vin ou de moût à 20 °C par ce volume. Elle s'exprime en  grammes  par
       millilitre et son symbole est ρ20 °C.

      La densité relative à 20 °C ou densité 20 °C/20 °C est le rapport exprimé en nombre décimal, de la masse d'un certain volume de vin  ou  de
       moût à 20 °C à la masse du même volume d'eau à la même température. Son symbole est d20 °C20 °C.

2.    PRINCIPE DES MÉTHODES

      La masse volumique et la densité relative à 20 °C sont déterminées sur l'échantillon pour essai:

      soit par pycnométrie: méthode de référence,

      soit par aréométrie ou densimétrie par la balance hydrostatique: méthodes usuelles.

      Remarque

      Pour les déterminations très précises, la masse volumique doit être corrigée de l'action du dioxyde de soufre.

|ρ20 °C     |=     |ρ′20 °C − 0,0006 · S                                                        |
|ρ20 °C     |=     |masse volumique corrigée                                                    |
|ρ′20 °C    |=     |masse volumique observée                                                    |
|S          |=     |dioxyde de soufre total en g/l                                              |

3.    TRAITEMENT PRÉALABLE DE L'ÉCHANTILLON

      Si le vin ou le moût contient des quantités notables de dioxyde de carbone, en chasser la plus grande quantité par agitation de  250 ml  de
       vin dans un flacon de 1 000 ml, ou par filtration sous pression réduite sur 2 g de coton placé dans une allonge.

4.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

4.1.  Appareillage

      Matériel courant de laboratoire, et notamment:

4.1.1.      Pycnomètre[4], en verre pyrex de 100 ml de capacité environ avec un thermomètre mobile à rodage émeri gradué par dixième de degré  de
       10 à 30 °C. Ce thermomètre doit être contrôlé (figure 1).

                                                                      [pic]

                                                                     Figure 1

                                                          Pycnomètre et son flacon tare

      Ce pycnomètre comporte un tube latéral de 25 mm de longueur, de 1 mm au plus de diamètre intérieur, terminé par une partie  conique  rodée.
       Ce tube latéral peut être coiffé par un «bouchon récepteur» constitué par un tube conique rodé, terminé par une partie effilée. Ce bouchon
       sert de chambre de dilatation.

      Les deux rodages de l'appareil doivent être faits avec un très grand soin.

4.1.2.      Flacon tare de même volume extérieur (à moins de 1 ml près) que le pycnomètre et de masse égale à la masse du pycnomètre  plein  d'un
       liquide de densité 1,01 [solution à 2 pour 100 (m/v) de chlorure de sodium].

      Enceinte calorifugée s'adaptant exactement au corps du pycnomètre.

4.1.3.      Balance à deux plateaux de portée 300 g au moins, sensible au dixième de milligramme

      ou

      balance monoplateau de portée 200 g au moins, sensible au dixième de milligramme.

4.2. Étalonnage du pycnomètre

      L'étalonnage du pycnomètre comporte la détermination des caractéristiques suivantes:

         – tare à vide,

         – volume à 20 °C,

         – masse en eau à 20 °C.

4.2.1.      Utilisation d'une balance à deux plateaux

      Le flacon tare étant placé sur le plateau de gauche de la balance et le pycnomètre propre et sec muni de son  «bouchon  récepteur»  sur  le
       plateau droit, réaliser l'équilibre en plaçant à côté du pycnomètre des masses marquées: soit p grammes.

      Remplir avec soin le pycnomètre avec de l'eau distillée à la température ambiante, mettre en place le  thermomètre;  essuyer  soigneusement
       le pycnomètre et le placer dans l'enceinte calorifugée; agiter par retournement jusqu'à ce que la température lue sur le thermomètre  soit
       constante. Affleurer exactement au bord supérieur du tube latéral.  Essuyer  ce  tube  latéral,  placer  le  bouchon  récepteur;  lire  la
       température t °C avec soin et la corriger éventuellement de l'inexactitude de l'échelle du thermomètre. Peser le pycnomètre  plein  d'eau,
       soit p′ la masse en grammes qui réalise l'équilibre.

      Calculs[5]

      Tare du pycnomètre vide:

      Tare à vide = p + m

       m    =     masse d'air contenue dans le pycnomètre

       m    =     0,0012 (p − p′).

      Volume à 20 °C:

      V20 °C = (p + m − p′) · Ft

       Ft   =     facteur relevé dans la table I pour la température t °C

      V20 °C doit être connu à ± 0,001 ml près.

      Masse en eau à 20 °C:

      M20 °C = V20 °C · 0,998203

|0,998203         |=     |masse volumique de l'eau à 20 °C.                    |

4.2.2.      Utilisation d'une balance monoplateau

      Déterminer:

         – la masse du pycnomètre propre et sec: P

                                            ê 2676/90 (adapté)

         – la masse du pycnomètre plein d'eau à t °C: P1 en suivant les indications décrites Ö au point Õ 4.2.1

                                            ê 2676/90

         – la masse du flacon tare T0

      Calculs[6]

      Tare du pycnomètre vide:

      Tare à vide: P − m

       m    =     masse d'air contenue dans le pycnomètre

       m    =     0,0012 (P1 − P)

      Volume à 20 °C:

      V20 °C = [P1 − (P − m)] · Ft

       Ft   =     facteur relevé dans la table I pour la température t °C.

      Le volume à 20 °C doit être connu à ± 0,001 ml près.

      Masse en eau à 20 °C:

      M20 °C = V20 °C · 0,998203

|0,998203         |=   |masse volumique de l'eau à 20 °C                   |

4.3.  Technique d'une mesure[7]

4.3.1.      Utilisation d'une balance à deux plateaux

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Peser le pycnomètre plein de l'échantillon préparé pour essais ( Ö point Õ 3) en suivant les indications décrites Ö au point Õ 4.2.1.

                                            ê 2676/90

      Soit p″ la masse en grammes qui réalise l'équilibre à t °C.

      Masse du liquide contenu dans le pycnomètre = p + m − p″

      Masse volumique apparente à t °C:

      ρt °C = ((p + m − p″)/(V20 °C))

      Calculer la masse volumique à 20 °C à l'aide d'une des tables de correction ci-après, suivant la nature du liquide étudié: vin  sec  (table
       II), moût naturel ou concentré (table III), vin doux (table IV).

      On exprime la densité 20 °C/20 °C du vin en divisant la masse volumique à 20 °C par 0,998203.

4.3.2.      Utilisation d'une balance monoplateau[8]

      Peser le flacon tare, soit T1 sa masse

      Calculer dT = T1 − To

      Masse du pycnomètre vide au moment de la mesure = P − m + dT

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Peser le pycnomètre plein de l'échantillon préparé pour essais ( Ö point Õ 3) en suivant les indications décrites Ö au point Õ 4.2.1.  Soit
       P2 sa masse à t °C.

                                            ê 2676/90

      Masse du liquide contenu dans le pycnomètre à t °C = P2 − (P − m + dT)

      Masse volumique apparente à t °C:

      ρt °C = ((P2 − (P − m + dT))/(V20 °C))

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Calculer la masse volumique à 20 °C du liquide étudié: vin sec, moût naturel et concentré, vin doux, comme  il  est  indiqué  Ö au  point Õ
       4.3.1.

                                            ê 2676/90

      La densité 20 °C/20 °C est obtenue en divisant la masse volumique à 20 °C par 0,998203.

4.3.3.      Répétabilité sur la masse volumique:

      pour les vins secs et moelleux: r = 0,00010

      pour les vins doux: r = 0,00018

4.3.4.      Reproductibilité sur la masse volumique:

      pour les vins secs et moelleux: R = 0,00037

      pour les vins doux: R = 0,00045

5. MÉTHODES USUELLES

5.1. Aréométrie

5.1.1. Appareillage

5.1.1.1. Aréomètre

       Les aréomètres doivent répondre aux prescriptions de l'ISO en ce qui concerne leurs dimensions et leurs graduations.

       Ils doivent avoir une carène cylindrique, une tige de section circulaire de 3 mm de diamètre au moins. Pour les  vins  secs,  ils  doivent
           être gradués de 0,983 à 1,003 par millième et cinquième de millième. Chaque millième doit être séparé par 5 mm au moins  du  millième
           suivant. Pour la mesure de la densité des vins désalcoolisés, des vins doux et des moûts,  il  sera  fait  usage  d'un  jeu  de  cinq
           aréomètres gradués de 1,000 1,030; 1,030 1,060; 1,060 1,090; 1,090 1,120;  1,120  1,150.  Ces  appareils  seront  gradués  en  masses
           volumiques à 20 °C par millième et demi-millième au moins, chaque millième étant séparé par 3 mm au moins du millième suivant.

       Ces aréomètres doivent être gradués de manière à être lus au «sommet du ménisque». L'indication de la graduation en masse volumique  à  20
           °C ou en densité relative à 20 °C et de la lecture au niveau du sommet du ménisque sera portée soit sur l'échelle graduée,  soit  sur
           une bande de papier incluse dans la carène.

       Ces appareils doivent être contrôlés par un service officiel.

5.1.1.2. Thermomètre contrôlé gradué par demi degré Celsius au moins.

5.1.1.3. Éprouvette cylindrique de 36 mm de diamètre intérieur et de 320 mm de hauteur, tenue verticalement grâce à un support à vis calantes.

5.1.2. Mode opératoire

       Technique d'une mesure

       Dans l'éprouvette 5.1.1.3, placer 250 ml d'échantillon préparé pour  essais  (3),  introduire  l'aréomètre  et  le  thermomètre.  Lire  le
           thermomètre une minute après avoir agité pour réaliser l'équilibre de température. Retirer le thermomètre et lire la masse  volumique
           apparente à t °C sur la tige de l'aréomètre après une minute de repos.

       Corriger la masse volumique apparente lue à t °C de l'action de la température à l'aide de tables qui s'appliquent aux cas des  vins  secs
           (table V), des moûts (table VI) et des vins contenant du sucre (table VII).

       La densité 20 °C/20 °C est obtenue en divisant la masse volumique à 20 °C par 0,998203.

5.2. Densimétrie par la balance hydrostatique

5.2.1. Appareillage

       Balance hydrostatique

       Balance hydrostatique, de portée maximale s'élevant au moins à 100 g, sensible à 1/10e de mg.

       Sous chaque plateau est fixé un flotteur en verre pyrex d'un volume d'au moins 20 ml. Ces deux flotteurs identiques sont supendus  par  un
           fil de diamètre inférieur ou égal à 0,1 mm.

       Le flotteur suspendu sous le plateau de droite doit pouvoir être introduit dans une éprouvette cylindrique comportant un repère de niveau.
           Cette éprouvette doit avoir un diamètre intérieur supérieur d'au moins 6 mm à celui du flotteur. Ce dernier doit pouvoir être contenu
           entièrement dans le volume de l'éprouvette situé au-dessous du repère, la surface du liquide à mesurer ne devant être  traversée  que
           par le fil de suspension. La température du liquide contenu dans l'éprouvette est mesurée par  un  thermomètre  gradué  par  1/5e  de
           degré.

       Une balance hydrostatique monoplateau peut également être utilisée.

5.2.2. Mode opératoire

5.2.2.1. Étalonnage d'une balance hydrostatique

       Les deux flotteurs étant dans l'air, établir l'équilibre en plaçant sur le plateau de droite les masses marquées p.

       Remplir l'éprouvette d'eau pure jusqu'au repère, lire la température t °C après agitation et repos de 2 ou 3 minutes.Rétablir  l'équilibre
           à l'aide des masses marquées placées sur le plateau de droite soit p2 ces masses.

       Volume du flotteur à 20 °C:V20 °C = (p2 p) (F + 0,0012)F = facteur donné par la table I pour la température t °C.

       p et V20 sont les caractéristiques du flotteur.

5.2.2.2. Technique d'une mesure

       Le flotteur de droite est plongé dans l'éprouvette remplie de vin (ou de moût) jusqu'au repère. Lire la température t °C  du  vin  (ou  du
           moût), soient:

       p" les masses marquées rétablissant l'équilibre

       r t °C, masse volumique apparente:Ramener cette masse volumique à 20 °C par l'emploi d'une des tables II, III ou IV.

6.    EXEMPLE DU CALCUL DE LA MASSE VOLUMIQUE À 20 °C ET DE LA DENSITÉ 20 °C/20 °C (MÉTHODE DE RÉFÉRENCE)

6.1.  Pycnométrie sur balance à deux plateaux

6.1.1.      Établissement des constantes du pycnomètre

       1.   Pesée du pycnomètre propre et sec:

|Tare      |=   |pycnomètre + p             |
|p         |=   |104,9454 g                 |

       2.   Pesée du pycnomètre plein d'eau à la température t °C:

|Tare      |=   |pycnomètre + eau + p′                     |
|p′        |=   |1,2396 g pour t = 20,5 °C                 |

       3.   Calcul de la masse d'air contenue dans le pycnomètre:

           m     =     0,0012 (p − p′)

           m     =     0,0012 (104,9454 − 1,2396)

           m     =     0,1244 g

       4.   Caractéristiques à retenir:

            Tare du pycnomètre vide, p + m:

|p + m       |=     |104,9454 + 0,1244              |
|p + m       |=     |105,0698 g                     |

            Volume à 20 °C = (p + m − p′) · Ft °C

|F20,50 °C    |=     |1,001900                                         |
|V20 °C       |=     |(105,0698 − 1,2396) · 1,001900                   |
|V20 °C       |=     |104,0275 ml                                      |

            Masse en eau à 20 °C = V20 °C · 0,998203

            M20 °C = 103,8405 g

6.1.2.      Détermination de la masse volumique à 20° C et de la densité 20° C/20° C d'un vin sec

      p″ = 1,2622 à 17,80 °C

      ρ17,80 °C = ((105,0698 − 1,2622)/(104,0275))

      ρ 17,80 °C = 0,99788 g/ml

      La table II permet de calculer ρ20 °C à partir de p t°C à l'aide de la relation: ρ20 °C = ρt °C ± ((c)/(1000))

      Pour t: 17,80 °C et pour un titre alcoométrique de 11 % vol., on trouve c = 0,54

      ρ20 °C = 0,99788 − ((0,54)/(1000))

      ρ20 °C = 0,99734 g/ml

      d20 °C20 °C = ((0,99734)/(0,998203)) = 0,99913

6.2.  Pycnomètrie sur balance monoplateau

6.2.1.      Établissement des constantes du pycnomètre

       1.   Pesée du pycnomètre propre et sec:

            P = 67,7913 g

       2.   Pesée du pycnomètre plein d'eau à la température t °C:

            P1 = 169,2715 à 21,65 °C

       3.   Calcul de la masse d'air contenue dans le pycnomètre:

           m     =     0,0012 (P1 − P)

           m     =     0,0012 · 101,4802

           m     =     0,1218 g

       4.   Caractéristiques à retenir:

            Tare du pycnomètre vide, P − m:

|P − m       |=     |67,7913 − 0,1218               |
|P − m       |=     |67,6695 g                      |

            Volume à 20 °C = [P1 − (P − m)] Ft °C

|F21,65 °C    |=   |1,002140                                           |
|V20 °C       |=   |(169,2715 − 67,6695) · 1,002140                    |
|V20 °C       |=   |101,8194 ml                                        |

            Masse en eau à 20 °C = V20 °C · 0,998203

            M20 °C = 101,6364 g

            Masse du flacon tare: To

            To = 171,9160 g

6.2.2.      Détermination de la masse volumique à 20° C et de la densité 20° C/20° C d'un vin sec

      T1 = 171,9178 g

      dT = 171,9178 − 171,9160 = 0,0018 g

      P − m + dT = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g

      P2 = 169,2799 à 18 °C

      ρ18 °C = ((169,2799 − 67,6713)/(101,8194))

      ρ18 °C = 0,99793 g/ml

      La table II permet de calculer ρ 20 °C à partir de ρ t °C à l'aide de la relation: ρ20 °C = ρt °C ± ((c)/(1 000))

      Pour t = 18 °C et un titre alcoométrique de 11 % vol., on trouve c = 0,49

      ρ20 °C = 0,99793 − ((0,49)/(1 000))

      ρ20 °C = 0,99744 g/ml

      d20 °C20 °C = ((0,99744)/(0,998203)) = 0,99923

                                                                     TABLE I

                                                                    Facteurs F

   par lesquels il faut multiplier la masse de l'eau contenue dans le pycnomètre en pyrex à t °, pour calculer le volume du pycnomètre à 20 °C

|t °C                               |F                                           |
|                                   |+ si t° est supérieur à 20 °C               |

|                   |     |Titres alcoométriques                                                                                                                                                                                    |
|                                 |                                          |
|                                 |+ si t° est supérieur à 20 °C             |

|                   |       |Masses volumiques                                                                                                                                                                               |
|                                 |                                          |
|                                 |+ si t° est supérieur à 20 °C             |

|                   |      |Vins de 13 % vol.                                                   |Vins de 15 % vol.                                                   |Vins de 17 % vol.                                                   |
|                   |      |Masses volumiques                                                   |Masses volumiques                                                   |Masses volumiques                                                   |
|                   |            |1,000                                                                                        |1,020                                                                                        |
|                   |            |Masses volumiques                                                                            |Masses volumiques                                                                            |
|                                 |                                              |
|                                 |+ si t° est supérieur à 20 °C                 |

|                   |      |Titres alcoométriques                                                                                                                                                                                    |
|                                   |                                            |
|                                   |+ si t° est supérieur à 20 °C               |

|                   |       |Masses volumiques                                                                                                                                                                               |
|                                 |                                            |
|                                 |+ si t° est supérieur à 20 °C               |

|                   |      |Vins de 13 % vol.                                                   |Vins de 15 % vol.                                                   |Vins de 17 % vol.                                                   |
|                   |      |Masses volumiques                                                   |Masses volumiques                                                   |Masses volumiques                                                   |
|                   |            |1,000                                                                                        |1,020                                                                                        |
|                   |            |Masses volumiques                                                                            |Masses volumiques                                                                            |
|             |                                                                                                                            |
|             |5          |10         |15         |20         |30         |40         |50         |60         |70         |75         |
|             |Soustraire                                                                                                                  |
|15           |0,25       |0,27       |0,31       |0,31       |0,34       |0,35       |0,36       |0,37       |0,36       |0,36       |
|16           |0,21       |0,23       |0,27       |0,27       |0,29       |0,31       |0,31       |0,32       |0,31       |0,23       |
|17           |0,16       |0,18       |0,20       |0,20       |0,22       |0,23       |0,23       |0,23       |0,20       |0,17       |
|18           |0,11       |0,12       |0,14       |0,15       |0,16       |0,16       |0,15       |0,12       |0,12       |0,09       |
|19           |0,06       |0,07       |0,08       |0,08       |0,08       |0,09       |0,09       |0,08       |0,07       |0,05       |
|             |Additionner                                                                                                                 |
|21           |0,06       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |0,07       |
|22           |0,12       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |0,14       |
|23           |0,18       |0,20       |0,20       |0,21       |0,21       |0,21       |0,21       |0,22       |0,22       |0,22       |
|24           |0,24       |0,26       |0,26       |0,27       |0,28       |0,28       |0,28       |0,28       |0,29       |0,29       |
|25           |0,30       |0,32       |0,32       |0,34       |0,36       |0,36       |0,36       |0,36       |0,36       |0,37       |

Les variations de la température par rapport à 20° C ne doivent pas dépasser ± 5° C.

                                                                     TABLE II

  Table donnant la teneur en sucres[9] des moûts et des moûts concentrés en grammes par litre et en grammes par kilogramme, déterminée au moyen
 d'un réfractomètre gradué, soit en pourcentage en masse de saccharose à 20 °C, soit en indice de réfraction à 20 °C. La masse volumique à 20 °C
                                                              est également donnée.

|Saccharose                 |Indice de réfraction à   |Masse volumique à 20 °C|Sucres en        |Sucres en        |Titre alcoométr.        |
|% (m/m)                    |20 °C                    |                       |g/l              |g/kg             |% vol. 20 °C            |
|10.0                       |1.34781                  |1.0390                 |82.3             |79.2             |4,89                    |
|10.1                       |1.34798                  |1.0394                 |83.4             |80.2             |4,95                    |
|10.2                       |1.34814                  |1.0398                 |84.5             |81.3             |5,02                    |
|10.3                       |1.34830                  |1.0402                 |85.6             |82.2             |5,09                    |
|10.4                       |1.34845                  |1.0406                 |86.6             |83.2             |5,14                    |
|10.5                       |1.34860                  |1.0410                 |87.6             |84.1             |5,20                    |
|10.6                       |1.34875                  |1.0414                 |88.6             |85.1             |5,26                    |
|10.7                       |1.34890                  |1.0419                 |89.7             |86.1             |5,33                    |
|10.8                       |1.34906                  |1.0423                 |90.8             |87.1             |5,39                    |
|10.9                       |1.34921                  |1.0427                 |91.8             |88.1             |5,45                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|11.0                       |1.34936                  |1.0431                 |92.9             |89.1             |5,52                    |
|11.1                       |1.34952                  |1.0435                 |94.0             |90.0             |5,58                    |
|11.2                       |1.34968                  |1.0439                 |95.0             |91.0             |5,64                    |
|11.3                       |1.34984                  |1.0443                 |96.1             |92.0             |5,71                    |
|11.4                       |1.34999                  |1.0447                 |97.1             |92.9             |5,77                    |
|11.5                       |1.35015                  |1.0452                 |98.2             |94.0             |5,83                    |
|11.6                       |1.35031                  |1.0456                 |99.3             |95.0             |5,90                    |
|11.7                       |1.35046                  |1.0460                 |100.3            |95.9             |5,96                    |
|11.8                       |1.35062                  |1.0464                 |101.4            |96.9             |6,02                    |
|11.9                       |1.35077                  |1.0468                 |102.5            |97.9             |6,09                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|12.0                       |1.35092                  |1.0473                 |103.6            |98.9             |6,15                    |
|12.1                       |1.35108                  |1.0477                 |104.7            |99.9             |6,22                    |
|12.2                       |1.35124                  |1.0481                 |105.7            |100.8            |6,28                    |
|12.3                       |1.35140                  |1.0485                 |106.8            |101.9            |6,35                    |
|12.4                       |1.35156                  |1.0489                 |107.9            |102.9            |6,41                    |
|12.5                       |1.35172                  |1.0494                 |109.0            |103.8            |6,47                    |
|12.6                       |1.35187                  |1.0498                 |110.0            |104.8            |6,53                    |
|12.7                       |1.35203                  |1.0502                 |111.1            |105.8            |6,60                    |
|12.8                       |1.35219                  |1.0506                 |112.2            |106.8            |6,66                    |
|12.9                       |1.35234                  |1.0510                 |113.2            |107.8            |6,73                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|13.0                       |1.35249                  |1.0514                 |114.3            |108.7            |6,79                    |
|13.1                       |1.35266                  |1.0519                 |115.4            |109.7            |6,86                    |
|13.2                       |1.35282                  |1.0523                 |116.5            |110.7            |6,92                    |
|13.3                       |1.35298                  |1.0527                 |117.6            |111.7            |6,99                    |
|13.4                       |1.35313                  |1.0531                 |118.6            |112.6            |7,05                    |
|13.5                       |1.35329                  |1.0536                 |119.7            |113.6            |7,11                    |
|13.6                       |1.35345                  |1.0540                 |120.8            |114.6            |7,18                    |
|13.7                       |1.35360                  |1.0544                 |121.8            |115.6            |7,24                    |
|13.8                       |1.35376                  |1.0548                 |122.9            |116.5            |7,30                    |
|13.9                       |1.35391                  |1.0552                 |124.0            |117.5            |7,37                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|14.0                       |1.35407                  |1.0557                 |125.1            |118.5            |7,43                    |
|14.1                       |1.35424                  |1.0561                 |126.2            |119.5            |7,50                    |
|14.2                       |1.35440                  |1.0565                 |127.3            |120.5            |7,56                    |
|14.3                       |1.35456                  |1.0569                 |128.4            |121.5            |7,63                    |
|14.4                       |1.35472                  |1.0574                 |129.5            |122.5            |7,69                    |
|14.5                       |1.35488                  |1.0578                 |130.6            |123.4            |7,76                    |
|14.6                       |1.35503                  |1.0582                 |131.6            |124.4            |7,82                    |
|14.7                       |1.35519                  |1.0586                 |132.7            |125.4            |7,88                    |
|14.8                       |1.35535                  |1.0591                 |133.8            |126.3            |7,95                    |
|14.9                       |1.35551                  |1.0595                 |134.9            |127.3            |8,01                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|15.0                       |1.35567                  |1.0599                 |136.0            |128.3            |8,08                    |
|15.1                       |1.35583                  |1.0603                 |137.1            |129.3            |8,15                    |
|15.2                       |1.35599                  |1.0608                 |138.2            |130.3            |8,21                    |
|15.3                       |1.35615                  |1.0612                 |139.3            |131.3            |8,27                    |
|15.4                       |1.35631                  |1.0616                 |140.4            |132.3            |8,34                    |
|15.5                       |1.35648                  |1.0621                 |141.5            |133.2            |8,41                    |
|15.6                       |1.35664                  |1.0625                 |142.6            |134.2            |8,47                    |
|15.7                       |1.35680                  |1.0629                 |143.7            |135.2            |8,54                    |
|15.8                       |1.35696                  |1.0633                 |144.8            |136.2            |8,60                    |
|15.9                       |1.35712                  |1.0638                 |145.9            |137.2            |8,67                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|16.0                       |1.35728                  |1.0642                 |147.0            |138.1            |8,73                    |
|16.1                       |1.35744                  |1.0646                 |148.1            |139.1            |8,80                    |
|16.2                       |1.35760                  |1.0651                 |149.2            |140.1            |8,86                    |
|16.3                       |1.35776                  |1.0655                 |150.3            |141.1            |8,93                    |
|16.4                       |1.35793                  |1.0660                 |151.5            |142.1            |9,00                    |
|16.5                       |1.35809                  |1.0664                 |152.6            |143.1            |9,06                    |
|16.6                       |1.35825                  |1.0668                 |153.7            |144.1            |9,13                    |
|16.7                       |1.35842                  |1.0672                 |154.8            |145.0            |9,20                    |
|16.8                       |1.35858                  |1.0677                 |155.9            |146.0            |9,26                    |
|16.9                       |1.35874                  |1.0681                 |157.0            |147.0            |9,33                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|17.0                       |1.35890                  |1.0685                 |158.1            |148.0            |9,39                    |
|17.1                       |1.35907                  |1.0690                 |159.3            |149.0            |9,46                    |
|17.2                       |1.35923                  |1.0694                 |160.4            |150.0            |9,53                    |
|17.3                       |1.35939                  |1.0699                 |161.5            |151.0            |9,59                    |
|17.4                       |1.35955                  |1.0703                 |162.6            |151.9            |9,66                    |
|17.5                       |1.35972                  |1.0707                 |163.7            |152.9            |9,73                    |
|17.6                       |1.35988                  |1.0711                 |164.8            |153.9            |9,79                    |
|17.7                       |1.36004                  |1.0716                 |165.9            |154.8            |9,86                    |
|17.8                       |1.36020                  |1.0720                 |167.0            |155.8            |9,92                    |
|17.9                       |1.36036                  |1.0724                 |168.1            |156.8            |9,99                    |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|18.0                       |1.36053                  |1.0729                 |169.3            |157.8            |10,06                   |
|18.1                       |1.36070                  |1.0733                 |170.4            |158.8            |10,12                   |
|18.2                       |1.36086                  |1.0738                 |171.5            |159.7            |10,19                   |
|18.3                       |1.36102                  |1.0742                 |172.6            |160.7            |10,25                   |
|18.4                       |1.36119                  |1.0746                 |173.7            |161.6            |10,32                   |
|18.5                       |1.36136                  |1.0751                 |174.9            |162.6            |10,39                   |
|18.6                       |1.36152                  |1.0755                 |176.0            |163.6            |10,46                   |
|18.7                       |1.36169                  |1.0760                 |177.2            |164.6            |10,53                   |
|18.8                       |1.36185                  |1.0764                 |178.3            |165.6            |10,59                   |
|18.9                       |1.36201                  |1.0768                 |179.4            |166.6            |10,66                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|19.0                       |1.36217                  |1.0773                 |180.5            |167.6            |10,72                   |
|19.1                       |1.36234                  |1.0777                 |181.7            |168.6            |10,80                   |
|19.2                       |1.36251                  |1.0782                 |182.8            |169.5            |10,86                   |
|19.3                       |1.36267                  |1.0786                 |183.9            |170.5            |10,93                   |
|19.4                       |1.36284                  |1.0791                 |185.1            |171.5            |11,00                   |
|19.5                       |1.36301                  |1.0795                 |186.3            |172.5            |11,07                   |
|19.6                       |1.36318                  |1.0800                 |187.4            |173.5            |11,13                   |
|19.7                       |1.36335                  |1.0804                 |188.6            |174.5            |11,21                   |
|19.8                       |1.36351                  |1.0809                 |189.7            |175.5            |11,27                   |
|19.9                       |1.36367                  |1.0813                 |190.8            |176.5            |11,34                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|20.0                       |1.36383                  |1.0817                 |191.9            |177.4            |11,40                   |
|20.1                       |1.36400                  |1.0822                 |193.1            |178.4            |11,47                   |
|20.2                       |1.36417                  |1.0826                 |194.2            |179.4            |11,54                   |
|20.3                       |1.36434                  |1.0831                 |195.3            |180.4            |11,60                   |
|20.4                       |1.36451                  |1.0835                 |196.5            |181.4            |11,67                   |
|20.5                       |1.36468                  |1.0840                 |197.7            |182.3            |11,75                   |
|20.6                       |1.36484                  |1.0844                 |198.8            |183.3            |11,81                   |
|20.7                       |1.36501                  |1.0849                 |200.0            |184.3            |11,88                   |
|20.8                       |1.36518                  |1.0853                 |201.1            |185.3            |11,96                   |
|20.9                       |1.36534                  |1.0857                 |202.2            |186.2            |12,01                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|21.0                       |1.36550                  |1.0862                 |203.3            |187.2            |12,08                   |
|21.1                       |1.36568                  |1.0866                 |204.5            |188.2            |12,15                   |
|21.2                       |1.36585                  |1.0871                 |205.7            |189.2            |12,22                   |
|21.3                       |1.36601                  |1.0875                 |206.8            |190.2            |12,29                   |
|21.4                       |1.36618                  |1.0880                 |207.9            |191.1            |12,35                   |
|21.5                       |1.36635                  |1.0884                 |209.1            |192.1            |12,42                   |
|21.6                       |1.36652                  |1.0889                 |210.3            |193.1            |12,49                   |
|21.7                       |1.36669                  |1.0893                 |211.4            |194.1            |12,56                   |
|21.8                       |1.36685                  |1.0897                 |212.5            |195.0            |12,63                   |
|21.9                       |1.36702                  |1.0902                 |213.6            |196.0            |12,69                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|22.0                       |1.36719                  |1.0906                 |214.8            |196.9            |12,76                   |
|22.1                       |1.36736                  |1.0911                 |216.0            |198.0            |12,83                   |
|22.2                       |1.36753                  |1.0916                 |217.2            |199.0            |12,90                   |
|22.3                       |1.36770                  |1.0920                 |218.3            |199.9            |12,97                   |
|22.4                       |1.36787                  |1.0925                 |219.5            |200.9            |13,04                   |
|22.5                       |1.36804                  |1.0929                 |220.6            |201.8            |13,11                   |
|22.6                       |1.36820                  |1.0933                 |221.7            |202.8            |13,17                   |
|22.7                       |1.36837                  |1.0938                 |222.9            |203.8            |13,24                   |
|22.8                       |1.36854                  |1.0943                 |224.1            |204.8            |13,31                   |
|22.9                       |1.36871                  |1.0947                 |225.2            |205.8            |13,38                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|23.0                       |1.36888                  |1.0952                 |226.4            |206.7            |13,45                   |
|23.1                       |1.36905                  |1.0956                 |227.6            |207.7            |13,52                   |
|23.2                       |1.36922                  |1.0961                 |228.7            |208.7            |13,59                   |
|23.3                       |1.36939                  |1.0965                 |229.9            |209.7            |13,66                   |
|23.4                       |1.36956                  |1.0970                 |231.1            |210.7            |13,73                   |
|23.5                       |1.36973                  |1.0975                 |232.3            |211.6            |13,80                   |
|23.6                       |1.36991                  |1.0979                 |233.4            |212.6            |13,87                   |
|23.7                       |1.37008                  |1.0984                 |234.6            |213.6            |13,94                   |
|23.8                       |1.37025                  |1.0988                 |235.8            |214.6            |14,01                   |
|23.9                       |1.37042                  |1.0993                 |237.0            |215.6            |14,08                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|24.0                       |1.37059                  |1.0998                 |238.2            |216.6            |14,15                   |
|24.1                       |1.37076                  |1.1007                 |239.3            |217.4            |14,22                   |
|24.2                       |1.37093                  |1.1011                 |240.3            |218.2            |14,28                   |
|24.3                       |1.37110                  |1.1016                 |241.6            |219.4            |14,35                   |
|24.4                       |1.37128                  |1.1022                 |243.0            |220.5            |14,44                   |
|24.5                       |1.37145                  |1.1026                 |244.0            |221.3            |14,50                   |
|24.6                       |1.37162                  |1.1030                 |245.0            |222.1            |14,56                   |
|24.7                       |1.37180                  |1.1035                 |246.4            |223.2            |14,64                   |
|24.8                       |1.37197                  |1.1041                 |247.7            |224.4            |14,72                   |
|24.9                       |1.37214                  |1.1045                 |248.7            |225.2            |14,78                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|25.0                       |1.37232                  |1.1049                 |249.7            |226.0            |14,84                   |
|25.1                       |1.37249                  |1.1053                 |250.7            |226.8            |14,90                   |
|25.2                       |1.37266                  |1.1057                 |251.7            |227.6            |14,96                   |
|25.3                       |1.37283                  |1.1062                 |253.0            |228.7            |15,03                   |
|25.4                       |1.37300                  |1.1068                 |254.4            |229.9            |15,11                   |
|25.5                       |1.37317                  |1.1072                 |255.4            |230.7            |15,17                   |
|25.6                       |1.37335                  |1.1076                 |256.4            |231.5            |15,23                   |
|25.7                       |1.37353                  |1.1081                 |257.8            |232.6            |15,32                   |
|25.8                       |1.37370                  |1.1087                 |259.1            |233.7            |15,39                   |
|25.9                       |1.37387                  |1.1091                 |260.1            |234.5            |15,45                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|26.0                       |1.37405                  |1.1095                 |261.1            |235.3            |15,51                   |
|26.1                       |1.37423                  |1.1100                 |262.5            |236.4            |15,60                   |
|26.2                       |1.37440                  |1.1106                 |263.8            |237.5            |15,67                   |
|26.3                       |1.37457                  |1.1110                 |264.8            |238.3            |15,73                   |
|26.4                       |1.37475                  |1.1114                 |265.8            |239.2            |15,79                   |
|26.5                       |1.37493                  |1.1119                 |267.2            |240.3            |15,88                   |
|26.6                       |1.37510                  |1.1125                 |268.5            |241.4            |15,95                   |
|26.7                       |1.37528                  |1.1129                 |269.5            |242.2            |16,01                   |
|26.8                       |1.37545                  |1.1133                 |270.5            |243.0            |16,07                   |
|26.9                       |1.37562                  |1.1138                 |271.8            |244.1            |16,15                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|27.0                       |1.37580                  |1.1144                 |273.2            |245.2            |16,23                   |
|27.1                       |1.37598                  |1.1148                 |274.2            |246.0            |16,29                   |
|27.2                       |1.37615                  |1.1152                 |275.2            |246.8            |16,35                   |
|27.3                       |1.37632                  |1.1157                 |276.5            |247.9            |16,43                   |
|27.4                       |1.37650                  |1.1163                 |277.9            |249.0            |16,51                   |
|27.5                       |1.37667                  |1.1167                 |278.9            |249.8            |16,57                   |
|27.6                       |1.37685                  |1.1171                 |279.9            |250.6            |16,63                   |
|27.7                       |1.37703                  |1.1176                 |281.3            |251.6            |16,71                   |
|27.8                       |1.37721                  |1.1182                 |282.6            |252.7            |16,79                   |
|27.9                       |1.37739                  |1.1186                 |283.6            |253.5            |16,85                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|28.0                       |1.37757                  |1.1190                 |284.6            |254.3            |16,91                   |
|28.1                       |1.37775                  |1.1195                 |286.0            |255.4            |16,99                   |
|28.2                       |1.37793                  |1.1201                 |287.3            |256.5            |17,07                   |
|28.3                       |1.37810                  |1.1205                 |288.3            |257.3            |17,13                   |
|28.4                       |1.37828                  |1.1209                 |289.3            |258.1            |17,19                   |
|28.5                       |1.37846                  |1.1214                 |290.7            |259.2            |17,27                   |
|28.6                       |1.37863                  |1.1220                 |292.0            |260.3            |17,35                   |
|28.7                       |1.37881                  |1.1224                 |293.0            |261.0            |17,41                   |
|28.8                       |1.37899                  |1.1228                 |294.0            |261.8            |17,47                   |
|28.9                       |1.37917                  |1.1233                 |295.3            |262.9            |17,55                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|29.0                       |1.37935                  |1.1239                 |296.7            |264.0            |17,63                   |
|29.1                       |1.37953                  |1.1244                 |298.1            |265.1            |17,71                   |
|29.2                       |1.37971                  |1.1250                 |299.4            |266.1            |17,79                   |
|29.3                       |1.37988                  |1.1254                 |300.4            |266.9            |17,85                   |
|29.4                       |1.38006                  |1.1258                 |301.4            |267.7            |17,91                   |
|29.5                       |1.38024                  |1.1263                 |302.8            |268.8            |17,99                   |
|29.6                       |1.38042                  |1.1269                 |304.1            |269.9            |18,07                   |
|29.7                       |1.38060                  |1.1273                 |305.1            |270.6            |18,13                   |
|29.8                       |1.38078                  |1.1277                 |306.1            |271.4            |18,19                   |
|29.9                       |1.38096                  |1.1282                 |307.4            |272.5            |18,26                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|30.0                       |1.38114                  |1.1288                 |308.8            |273.6            |18,35                   |
|30.1                       |1.38132                  |1.1293                 |310.0            |274.5            |18,42                   |
|30.2                       |1.38150                  |1.1298                 |311.2            |275.5            |18,49                   |
|30.3                       |1.38168                  |1.1302                 |312.4            |276.4            |18,56                   |
|30.4                       |1.38186                  |1.1307                 |313.6            |277.3            |18,63                   |
|30.5                       |1.38204                  |1.1312                 |314.8            |278.3            |18,70                   |
|30.6                       |1.38222                  |1.1317                 |316.0            |279.2            |18,77                   |
|30.7                       |1.38240                  |1.1322                 |317.2            |280.2            |18,85                   |
|30.8                       |1.38258                  |1.1327                 |318.4            |281.1            |18,92                   |
|30.9                       |1.38276                  |1.1332                 |319.6            |282.0            |18,99                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|31.0                       |1.38294                  |1.1336                 |320.8            |283.0            |19,06                   |
|31.1                       |1.38312                  |1.1341                 |322.0            |283.9            |19,13                   |
|31.2                       |1.38330                  |1.1346                 |323.2            |284.9            |19,20                   |
|31.3                       |1.38349                  |1.1351                 |324.4            |285.8            |19,27                   |
|31.4                       |1.38367                  |1.1356                 |325.6            |286.8            |19,35                   |
|31.5                       |1.38385                  |1.1361                 |326.8            |287.7            |19,42                   |
|31.6                       |1.38403                  |1.1366                 |328.1            |288.6            |19,49                   |
|31.7                       |1.38421                  |1.1371                 |329.3            |289.6            |19,56                   |
|31.8                       |1.38440                  |1.1376                 |330.5            |290.5            |19,64                   |
|31.9                       |1.38458                  |1.1380                 |331.7            |291.5            |19,71                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|32.0                       |1.38476                  |1.1385                 |332.9            |292.4            |19,78                   |
|32.1                       |1.38494                  |1.1391                 |334.2            |293.4            |19,86                   |
|32.2                       |1.38513                  |1.1396                 |335.5            |294.4            |19,93                   |
|32.3                       |1.38531                  |1.1401                 |336.7            |295.4            |20,00                   |
|32.4                       |1.38550                  |1.1406                 |338.0            |296.4            |20,08                   |
|32.5                       |1.38568                  |1.1411                 |339.3            |297.3            |20,16                   |
|32.6                       |1.38586                  |1.1416                 |340.6            |298.3            |20,24                   |
|32.7                       |1.38605                  |1.1422                 |341.9            |299.3            |20,31                   |
|32.8                       |1.38623                  |1.1427                 |343.1            |300.3            |20,38                   |
|32.9                       |1.38642                  |1.1432                 |344.4            |301.3            |20,46                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|33.0                       |1.38660                  |1.1437                 |345.7            |302.3            |20,54                   |
|33.1                       |1.38678                  |1.1442                 |346.9            |303.2            |20,61                   |
|33.2                       |1.38697                  |1.1447                 |348.1            |304.1            |20,68                   |
|33.3                       |1.38715                  |1.1452                 |349.3            |305.0            |20,75                   |
|33.4                       |1.38734                  |1.1457                 |350.5            |305.9            |20,82                   |
|33.5                       |1.38753                  |1.1461                 |351.7            |306.9            |20,90                   |
|33.6                       |1.38771                  |1.1466                 |352.9            |307.8            |20,97                   |
|33.7                       |1.38790                  |1.1471                 |354.1            |308.7            |21,04                   |
|33.8                       |1.38808                  |1.1476                 |355.3            |309.6            |21,11                   |
|33.9                       |1.38827                  |1.1481                 |356.5            |310.5            |21,18                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|34.0                       |1.38845                  |1.1486                 |357.7            |311.4            |21,25                   |
|34.1                       |1.38864                  |1.1491                 |359.0            |312.4            |21,33                   |
|34.2                       |1.38882                  |1.1496                 |360.3            |313.4            |21,41                   |
|34.3                       |1.38901                  |1.1501                 |361.5            |314.3            |21,48                   |
|34.4                       |1.38919                  |1.1506                 |362.8            |315.3            |21,55                   |
|34.5                       |1.38938                  |1.1512                 |364.1            |316.3            |21,63                   |
|34.6                       |1.38957                  |1.1517                 |365.4            |317.3            |21,71                   |
|34.7                       |1.38975                  |1.1522                 |366.7            |318.2            |21,79                   |
|34.8                       |1.38994                  |1.1527                 |367.9            |319.2            |21,86                   |
|34.9                       |1.39012                  |1.1532                 |369.2            |320.2            |21,94                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|35.0                       |1.39031                  |1.1537                 |370.5            |321.1            |22,01                   |
|35.1                       |1.39050                  |1.1543                 |371.8            |322.1            |22,09                   |
|35.2                       |1.39069                  |1.1548                 |373.0            |323.0            |22,16                   |
|35.3                       |1.39087                  |1.1553                 |374.3            |324.0            |22,24                   |
|35.4                       |1.39106                  |1.1558                 |375.6            |325.0            |22,32                   |
|35.5                       |1.39125                  |1.1563                 |376.9            |325.9            |22,39                   |
|35.6                       |1.39144                  |1.1568                 |378.1            |326.9            |22,45                   |
|35.7                       |1.39163                  |1.1573                 |379.4            |327.8            |22,54                   |
|35.8                       |1.39181                  |1.1579                 |380.7            |328.8            |22,62                   |
|35.9                       |1.39200                  |1.1584                 |381.9            |329.7            |22,69                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|36.0                       |1.39219                  |1.1589                 |383.2            |330.7            |22,77                   |
|36.1                       |1.39238                  |1.1594                 |384.5            |331.6            |22,85                   |
|36.2                       |1.39257                  |1.1599                 |385.8            |332.6            |22,92                   |
|36.3                       |1.39276                  |1.1604                 |387.0            |333.5            |22,99                   |
|36.4                       |1.39295                  |1.1610                 |388.3            |334.5            |23,07                   |
|36.5                       |1.39314                  |1.1615                 |389.6            |335.4            |23,15                   |
|36.6                       |1.39332                  |1.1620                 |390.9            |336.4            |23,22                   |
|36.7                       |1.39351                  |1.1625                 |392.2            |337.3            |23,30                   |
|36.8                       |1.39370                  |1.1630                 |393.4            |338.3            |23,37                   |
|36.9                       |1.39389                  |1.1635                 |394.7            |339.2            |23,45                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|37.0                       |1.39408                  |1.1641                 |396.0            |340.2            |23,53                   |
|37.1                       |1.39427                  |1.1646                 |397.3            |341.1            |23,60                   |
|37.2                       |1.39446                  |1.1651                 |398.6            |342.1            |23,68                   |
|37.3                       |1.39465                  |1.1656                 |399.8            |343.0            |23,75                   |
|37.4                       |1.39484                  |1.1661                 |401.1            |344.0            |23,83                   |
|37.5                       |1.39504                  |1.1666                 |402.4            |344.9            |23,91                   |
|37.6                       |1.39523                  |1.1672                 |403.7            |345.9            |23,99                   |
|37.7                       |1.39542                  |1.1677                 |405.0            |346.8            |24,06                   |
|37.8                       |1.39561                  |1.1682                 |406.2            |347.7            |24,13                   |
|37.9                       |1.39580                  |1.1687                 |407.5            |348.7            |24,21                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|38.0                       |1.39599                  |1.1692                 |408.8            |349.6            |24,29                   |
|38.1                       |1.39618                  |1.1698                 |410.1            |350.6            |24,37                   |
|38.2                       |1.39637                  |1.1703                 |411.3            |351.5            |24,44                   |
|38.3                       |1.39657                  |1.1708                 |412.6            |352.4            |24,51                   |
|38.4                       |1.39676                  |1.1713                 |413.9            |353.4            |24,59                   |
|38.5                       |1.39695                  |1.1718                 |415.2            |354.3            |24,67                   |
|38.6                       |1.39714                  |1.1723                 |416.4            |355.2            |24,74                   |
|38.7                       |1.39733                  |1.1728                 |417.7            |356.1            |24,82                   |
|38.8                       |1.39753                  |1.1733                 |419.0            |357.1            |24,90                   |
|38.9                       |1.39772                  |1.1739                 |420.2            |358.0            |24,97                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|39.0                       |1.39791                  |1.1744                 |421.5            |358.9            |25,04                   |
|39.1                       |1.39810                  |1.1749                 |422.8            |359.8            |25,12                   |
|39.2                       |1.39830                  |1.1754                 |424.1            |360.8            |25,20                   |
|39.3                       |1.39849                  |1.1759                 |425.3            |361.7            |25,27                   |
|39.4                       |1.39869                  |1.1764                 |426.6            |362.6            |25,35                   |
|39.5                       |1.39888                  |1.1770                 |427.9            |363.6            |25,42                   |
|39.6                       |1.39907                  |1.1775                 |429.2            |364.5            |25,50                   |
|39.7                       |1.39927                  |1.1780                 |430.5            |365.4            |25,58                   |
|39.8                       |1.39946                  |1.1785                 |431.7            |366.3            |25,65                   |
|39.9                       |1.39966                  |1.1790                 |433.0            |367.3            |25,73                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|40.0                       |1.39985                  |1.1796                 |434.3            |368.2            |25,80                   |
|40.1                       |1.40004                  |1.1801                 |435.6            |369.2            |25,88                   |
|40.2                       |1.40024                  |1.1806                 |437.0            |370.1            |25,96                   |
|40.3                       |1.40043                  |1.1812                 |438.3            |371.1            |26,04                   |
|40.4                       |1.40063                  |1.1817                 |439.7            |372.1            |26,12                   |
|40.5                       |1.40083                  |1.1823                 |441.0            |373.0            |26,20                   |
|40.6                       |1.40102                  |1.1828                 |442.3            |374.0            |26,28                   |
|40.7                       |1.40122                  |1.1833                 |443.7            |374.9            |26,36                   |
|40.8                       |1.40141                  |1.1839                 |445.0            |375.9            |26,44                   |
|40.9                       |1.40161                  |1.1844                 |446.4            |376.9            |26,52                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|41.0                       |1.40180                  |1.1850                 |447.7            |377.8            |26,60                   |
|41.1                       |1.40200                  |1.1855                 |449.0            |378.7            |26,68                   |
|41.2                       |1.40219                  |1.1860                 |450.2            |379.6            |26,75                   |
|41.3                       |1.40239                  |1.1865                 |451.5            |380.5            |26,83                   |
|41.4                       |1.40259                  |1.1870                 |452.8            |381.4            |26,90                   |
|41.5                       |1.40279                  |1.1875                 |454.1            |382.3            |26,98                   |
|41.6                       |1.40298                  |1.1881                 |455.3            |383.2            |27,05                   |
|41.7                       |1.40318                  |1.1886                 |456.6            |384.2            |27,13                   |
|41.8                       |1.40338                  |1.1891                 |457.9            |385.1            |27,21                   |
|41.9                       |1.40357                  |1.1896                 |459.1            |386.0            |27,28                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|42.0                       |1.40377                  |1.1901                 |460.4            |386.9            |27,35                   |
|42.1                       |1.40397                  |1.1907                 |461.7            |387.8            |27,43                   |
|42.2                       |1.40417                  |1.1912                 |463.1            |388.8            |27,52                   |
|42.3                       |1.40436                  |1.1917                 |464.4            |389.7            |27,59                   |
|42.4                       |1.40456                  |1.1923                 |465.8            |390.7            |27,68                   |
|42.5                       |1.40476                  |1.1928                 |467.2            |391.6            |27,76                   |
|42.6                       |1.40496                  |1.1934                 |468.5            |392.6            |27,84                   |
|42.7                       |1.40516                  |1.1939                 |469.9            |393.5            |27,92                   |
|42.8                       |1.40535                  |1.1945                 |471.2            |394.5            |28,00                   |
|42.9                       |1.40555                  |1.1950                 |472.6            |395.4            |28,08                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|43.0                       |1.40575                  |1.1956                 |473.9            |396.4            |28,16                   |
|43.1                       |1.40595                  |1.1961                 |475.2            |397.3            |28,23                   |
|43.2                       |1.40615                  |1.1967                 |476.6            |398.3            |28,32                   |
|43.3                       |1.40635                  |1.1972                 |477.9            |399.2            |28,40                   |
|43.4                       |1.40655                  |1.1977                 |479.3            |400.1            |28,48                   |
|43.5                       |1.40675                  |1.1983                 |480.6            |401.1            |28,56                   |
|43.6                       |1.40695                  |1.1988                 |481.9            |402.0            |28,63                   |
|43.7                       |1.40715                  |1.1994                 |483.3            |402.9            |28,72                   |
|43.8                       |1.40735                  |1.1999                 |484.6            |403.9            |28,79                   |
|43.9                       |1.40755                  |1.2005                 |486.0            |404.8            |28,88                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|44.0                       |1.40775                  |1.2010                 |487.3            |405.7            |28,95                   |
|44.1                       |1.40795                  |1.2015                 |488.6            |406.7            |29,03                   |
|44.2                       |1.40815                  |1.2021                 |490.0            |407.6            |29,11                   |
|44.3                       |1.40836                  |1.2026                 |491.3            |408.5            |29,19                   |
|44.4                       |1.40856                  |1.2032                 |492.7            |409.5            |29,27                   |
|44.5                       |1.40876                  |1.2037                 |494.0            |410.4            |29,35                   |
|44.6                       |1.40896                  |1.2042                 |495.3            |411.3            |29,43                   |
|44.7                       |1.40916                  |1.2048                 |496.7            |412.3            |29,51                   |
|44.8                       |1.40937                  |1.2053                 |498.0            |413.2            |29,59                   |
|44.9                       |1.40957                  |1.2059                 |499.4            |414.1            |29,67                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|45.0                       |1.40977                  |1.2064                 |500.7            |415.0            |29,75                   |
|45.1                       |1.40997                  |1.2070                 |502.1            |416.0            |29,83                   |
|45.2                       |1.41018                  |1.2076                 |503.5            |417.0            |29,92                   |
|45.3                       |1.41038                  |1.2081                 |504.9            |417.9            |30,00                   |
|45.4                       |1.41058                  |1.2087                 |506.3            |418.9            |30,08                   |
|45.5                       |1.41079                  |1.2093                 |507.8            |419.9            |30,17                   |
|45.6                       |1.41099                  |1.2098                 |509.2            |420.9            |30,25                   |
|45.7                       |1.41119                  |1.2104                 |510.6            |421.8            |30,34                   |
|45.8                       |1.41139                  |1.2110                 |512.0            |422.8            |30,42                   |
|45.9                       |1.41160                  |1.2115                 |513.4            |423.7            |30,50                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|46.0                       |1.41180                  |1.2121                 |514.8            |424.7            |30,59                   |
|46.1                       |1.41200                  |1.2127                 |516.1            |425.6            |30,66                   |
|46.2                       |1.41221                  |1.2132                 |517.5            |426.5            |30,75                   |
|46.3                       |1.41241                  |1.2137                 |518.8            |427.5            |30,82                   |
|46.4                       |1.41262                  |1.2143                 |520.2            |428.4            |30,91                   |
|46.5                       |1.41282                  |1.2148                 |521.5            |429.3            |30,99                   |
|46.6                       |1.41302                  |1.2154                 |522.8            |430.2            |31,06                   |
|46.7                       |1.41323                  |1.2159                 |524.2            |431.1            |31,15                   |
|46.8                       |1.41343                  |1.2165                 |525.5            |432.0            |31,22                   |
|46.9                       |1.41364                  |1.2170                 |526.9            |432.9            |31,31                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|47.0                       |1.41384                  |1.2175                 |528.2            |433.8            |31,38                   |
|47.1                       |1.41405                  |1.2181                 |529.6            |434.8            |31,47                   |
|47.2                       |1.41425                  |1.2187                 |531.0            |435.7            |31,55                   |
|47.3                       |1.41446                  |1.2192                 |532.4            |436.7            |31,63                   |
|47.4                       |1.41466                  |1.2198                 |533.8            |437.6            |31,72                   |
|47.5                       |1.41487                  |1.2204                 |535.3            |438.6            |31,81                   |
|47.6                       |1.41508                  |1.2210                 |536.7            |439.5            |31,89                   |
|47.7                       |1.41528                  |1.2215                 |538.1            |440.5            |31,97                   |
|47.8                       |1.41549                  |1.2221                 |539.5            |441.4            |32,05                   |
|47.9                       |1.41569                  |1.2227                 |540.9            |442.4            |32,14                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|48.0                       |1.41590                  |1.2232                 |542.3            |443.3            |32,22                   |
|48.1                       |1.41611                  |1.2238                 |543.6            |444.2            |32,30                   |
|48.2                       |1.41632                  |1.2243                 |545.0            |445.1            |32,38                   |
|48.3                       |1.41652                  |1.2249                 |546.3            |446.0            |32,46                   |
|48.4                       |1.41673                  |1.2254                 |547.7            |446.9            |32,59                   |
|48.5                       |1.41694                  |1.2260                 |549.1            |447.8            |32,63                   |
|48.6                       |1.41715                  |1.2265                 |550.4            |448.7            |32,70                   |
|48.7                       |1.41736                  |1.2271                 |551.8            |449.7            |32,79                   |
|48.8                       |1.41756                  |1.2276                 |553.1            |450.6            |32,86                   |
|48.9                       |1.41777                  |1.2282                 |554.5            |451.4            |32,95                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|49.0                       |1.41798                  |1.2287                 |555.8            |452.3            |33,02                   |
|49.1                       |1.41819                  |1.2293                 |557.2            |453.3            |33,11                   |
|49.2                       |1.41840                  |1.2298                 |558.6            |454.2            |33,19                   |
|49.3                       |1.41861                  |1.2304                 |560.0            |455.1            |33,27                   |
|49.4                       |1.41882                  |1.2310                 |561.4            |456.1            |33,36                   |
|49.5                       |1.41903                  |1.2315                 |562.8            |457.0            |33,44                   |
|49.6                       |1.41924                  |1.2321                 |564.2            |457.9            |33,52                   |
|49.7                       |1.41945                  |1.2327                 |565.6            |458.8            |33,61                   |
|49.8                       |1.41966                  |1.2332                 |567.0            |459.8            |33,69                   |
|49.9                       |1.41987                  |1.2338                 |568.4            |460.7            |33,77                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|50.0                       |1.42008                  |1.2344                 |569.8            |461.6            |33,86                   |
|50.1                       |1.42029                  |1.2349                 |571.2            |462.5            |33,94                   |
|50.2                       |1.42050                  |1.2355                 |572.6            |463.5            |34,02                   |
|50.3                       |1.42071                  |1.2361                 |574.0            |464.4            |34,10                   |
|50.4                       |1.42092                  |1.2366                 |575.4            |465.3            |34,19                   |
|50.5                       |1.42114                  |1.2372                 |576.9            |466.2            |34,28                   |
|50.6                       |1.42135                  |1.2378                 |578.3            |467.2            |34,36                   |
|50.7                       |1.42156                  |1.2384                 |579.7            |468.1            |34,44                   |
|50.8                       |1.42177                  |1.2389                 |581.1            |469.0            |34,53                   |
|50.9                       |1.42198                  |1.2395                 |582.5            |469.9            |34,61                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|51.0                       |1.42219                  |1.2401                 |583.9            |470.9            |34,69                   |
|51.1                       |1.42240                  |1.2407                 |585.4            |471.8            |34,78                   |
|51.2                       |1.42261                  |1.2413                 |586.9            |472.8            |34,87                   |
|51.3                       |1.42283                  |1.2419                 |588.3            |473.8            |34,95                   |
|51.4                       |1.42304                  |1.2425                 |589.8            |474.7            |35,04                   |
|51.5                       |1.42325                  |1.2431                 |591.3            |475.7            |35,13                   |
|51.6                       |1.42346                  |1.2437                 |592.8            |476.6            |35,22                   |
|51.7                       |1.42367                  |1.2443                 |594.3            |477.6            |35,31                   |
|51.8                       |1.42389                  |1.2449                 |595.7            |478.6            |35,39                   |
|51.9                       |1.42410                  |1.2455                 |597.2            |479.5            |35,48                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|52.0                       |1.42431                  |1.2461                 |598.7            |480.5            |35,57                   |
|52.1                       |1.42452                  |1.2466                 |600.1            |481.4            |35,65                   |
|52.2                       |1.42474                  |1.2472                 |601.5            |482.3            |35,74                   |
|52.3                       |1.42495                  |1.2478                 |602.9            |483.2            |35,82                   |
|52.4                       |1.42517                  |1.2483                 |604.3            |484.1            |35,91                   |
|52.5                       |1.42538                  |1.2489                 |605.8            |485.0            |35,99                   |
|52.6                       |1.42559                  |1.2495                 |607.2            |485.9            |36,08                   |
|52.7                       |1.42581                  |1.2500                 |608.6            |486.8            |36,16                   |
|52.8                       |1.42602                  |1.2506                 |610.0            |487.7            |36,24                   |
|52.9                       |1.42624                  |1.2512                 |611.4            |488.6            |36,33                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|53.0                       |1.42645                  |1.2518                 |612.8            |489.6            |36,41                   |
|53.1                       |1.42666                  |1.2524                 |614.3            |490.5            |36,50                   |
|53.2                       |1.42686                  |1.2530                 |615.8            |491.4            |36,59                   |
|53.3                       |1.42707                  |1.2536                 |617.2            |492.4            |36,67                   |
|53.4                       |1.42727                  |1.2542                 |618.7            |493.3            |36,76                   |
|53.5                       |1.42748                  |1.2548                 |620.2            |494.3            |36,85                   |
|53.6                       |1.42769                  |1.2554                 |621.7            |495.2            |36,94                   |
|53.7                       |1.42789                  |1.2560                 |623.2            |496.2            |37,03                   |
|53.8                       |1.42810                  |1.2566                 |624.6            |497.1            |37,11                   |
|53.9                       |1.42830                  |1.2571                 |626.1            |498.0            |37,20                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|54.0                       |1.42851                  |1.2577                 |627.6            |499.0            |37,29                   |
|54.1                       |1.42874                  |1.2583                 |629.0            |499.9            |37,37                   |
|54.2                       |1.42897                  |1.2589                 |630.4            |500.8            |37,45                   |
|54.3                       |1.42919                  |1.2595                 |631.8            |501.7            |37,54                   |
|54.4                       |1.42942                  |1.2600                 |633.2            |502.6            |37,62                   |
|54.5                       |1.42965                  |1.2606                 |634.7            |503.5            |37,71                   |
|54.6                       |1.42988                  |1.2612                 |636.1            |504.3            |37,79                   |
|54.7                       |1.43011                  |1.2617                 |637.5            |505.2            |37,88                   |
|54.8                       |1.43033                  |1.2623                 |638.9            |506.1            |37,96                   |
|54.9                       |1.43056                  |1.2629                 |640.3            |507.0            |38,04                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|55.0                       |1.43079                  |1.2635                 |641.7            |507.9            |38,11                   |
|55.1                       |1.43101                  |1.2640                 |643.2            |508.8            |38,22                   |
|55.2                       |1.43123                  |1.2646                 |644.6            |509.7            |38,30                   |
|55.3                       |1.43145                  |1.2652                 |646.1            |510.7            |38,39                   |
|55.4                       |1.43167                  |1.2658                 |647.6            |511.6            |38,48                   |
|55.5                       |1.43189                  |1.2664                 |649.1            |512.5            |38,57                   |
|55.6                       |1.43210                  |1.2670                 |650.5            |513.4            |38,65                   |
|55.7                       |1.43232                  |1.2676                 |652.0            |514.3            |38,74                   |
|55.8                       |1.43254                  |1.2682                 |653.5            |515.3            |38,83                   |
|55.9                       |1.43276                  |1.2688                 |654.9            |516.2            |38,91                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|56.0                       |1.43298                  |1.2694                 |656.4            |517.1            |39,00                   |
|56.1                       |1.43320                  |1.2700                 |657.9            |518.0            |39,09                   |
|56.2                       |1.43342                  |1.2706                 |659.4            |518.9            |39,18                   |
|56.3                       |1.43364                  |1.2712                 |660.8            |519.9            |39,26                   |
|56.4                       |1.43386                  |1.2718                 |662.3            |520.8            |39,35                   |
|56.5                       |1.43409                  |1.2724                 |663.8            |521.7            |39,44                   |
|56.6                       |1.43431                  |1.2730                 |665.3            |522.6            |39,53                   |
|56.7                       |1.43453                  |1.2736                 |666.8            |523.5            |39,62                   |
|56.8                       |1.43475                  |1.2742                 |668.2            |524.4            |39,70                   |
|56.9                       |1.43497                  |1.2748                 |669.7            |525.4            |39,79                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|57.0                       |1.43519                  |1.2754                 |671.2            |526.3            |39,88                   |
|57.1                       |1.43541                  |1.2760                 |672.7            |527.2            |39,97                   |
|57.2                       |1.43563                  |1.2766                 |674.3            |528.2            |40,06                   |
|57.3                       |1.43586                  |1.2773                 |675.8            |529.1            |40,15                   |
|57.4                       |1.43608                  |1.2779                 |677.4            |530.1            |40,25                   |
|57.5                       |1.43630                  |1.2785                 |678.9            |531.0            |40,34                   |
|57.6                       |1.43652                  |1.2791                 |680.4            |532.0            |40,43                   |
|57.7                       |1.43674                  |1.2797                 |682.0            |532.9            |40,52                   |
|57.8                       |1.43697                  |1.2804                 |683.5            |533.8            |40,61                   |
|57.9                       |1.43719                  |1.2810                 |685.1            |534.8            |40,70                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|58.0                       |1.43741                  |1.2816                 |686.6            |535.7            |40,80                   |
|58.1                       |1.43763                  |1.2822                 |688.1            |536.6            |40,88                   |
|58.2                       |1.43786                  |1.2828                 |689.6            |537.5            |40,97                   |
|58.3                       |1.43808                  |1.2834                 |691.0            |538.4            |41,06                   |
|58.4                       |1.43831                  |1.2840                 |692.5            |539.3            |41,14                   |
|58.5                       |1.43854                  |1.2846                 |694.0            |540.2            |41,23                   |
|58.6                       |1.43876                  |1.2852                 |695.5            |541.1            |41,32                   |
|58.7                       |1.43899                  |1.2858                 |697.0            |542.0            |41,41                   |
|58.8                       |1.43921                  |1.2864                 |698.4            |542.9            |41,50                   |
|58.9                       |1.43944                  |1.2870                 |699.9            |543.8            |41,58                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|59.0                       |1.43966                  |1.2876                 |701.4            |544.7            |41,67                   |
|59.1                       |1.43989                  |1.2882                 |702.9            |545.7            |41,76                   |
|59.2                       |1.44011                  |1.2888                 |704.5            |546.6            |41,86                   |
|59.3                       |1.44034                  |1.2895                 |706.0            |547.5            |41,95                   |
|59.4                       |1.44056                  |1.2901                 |707.6            |548.5            |42,04                   |
|59.5                       |1.44079                  |1.2907                 |709.1            |549.4            |42,13                   |
|59.6                       |1.44102                  |1.2913                 |710.6            |550.3            |42,22                   |
|59.7                       |1.44124                  |1.2920                 |712.2            |551.2            |42,32                   |
|59.8                       |1.44147                  |1.2926                 |713.7            |552.2            |42,41                   |
|59.9                       |1.44169                  |1.2932                 |715.3            |553.1            |42,50                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|60.0                       |1.44192                  |1.2938                 |716.8            |554.0            |42,59                   |
|60.1                       |1.44215                  |1.2944                 |718.3            |554.9            |42,68                   |
|60.2                       |1.44237                  |1.2950                 |719.8            |555.8            |42,77                   |
|60.3                       |1.44260                  |1.2956                 |721.2            |556.7            |42,85                   |
|60.4                       |1.44283                  |1.2962                 |722.7            |557.6            |42,94                   |
|60.5                       |1.44306                  |1.2968                 |724.2            |558.4            |43,03                   |
|60.6                       |1.44328                  |1.2974                 |725.7            |559.3            |43,12                   |
|60.7                       |1.44351                  |1.2980                 |727.2            |560.2            |43,21                   |
|60.8                       |1.44374                  |1.2986                 |728.6            |561.1            |43,29                   |
|60.9                       |1.44396                  |1.2992                 |730.1            |562.0            |43,38                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|61.0                       |1.44419                  |1.2998                 |731.6            |562.8            |43,47                   |
|61.1                       |1.44442                  |1.3004                 |733.1            |563.8            |43,56                   |
|61.2                       |1.44465                  |1.3011                 |734.7            |564.7            |43,65                   |
|61.3                       |1.44488                  |1.3017                 |736.2            |565.6            |43,74                   |
|61.4                       |1.44511                  |1.3023                 |737.8            |566.5            |43,84                   |
|61.5                       |1.44533                  |1.3030                 |739.4            |567.4            |43,93                   |
|61.6                       |1.44556                  |1.3036                 |740.9            |568.4            |44,02                   |
|61.7                       |1.44579                  |1.3042                 |742.5            |569.3            |44,12                   |
|61.8                       |1.44602                  |1.3048                 |744.0            |570.2            |44,21                   |
|61.9                       |1.44625                  |1.3055                 |745.6            |571.1            |44,30                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|62.0                       |1.44648                  |1.3061                 |747.1            |572.0            |44,39                   |
|62.1                       |1.44671                  |1.3067                 |748.6            |572.9            |44,48                   |
|62.2                       |1.44694                  |1.3073                 |750.2            |573.8            |44,57                   |
|62.3                       |1.44717                  |1.3080                 |751.7            |574.7            |44,66                   |
|62.4                       |1.44740                  |1.3086                 |753.3            |575.6            |44,76                   |
|62.5                       |1.44764                  |1.3092                 |754.8            |576.5            |44,85                   |
|62.6                       |1.44787                  |1.3098                 |756.3            |577.4            |44,94                   |
|62.7                       |1.44810                  |1.3104                 |757.9            |578.3            |45,03                   |
|62.8                       |1.44833                  |1.3111                 |759.4            |579.2            |45,12                   |
|62.9                       |1.44856                  |1.3117                 |761.0            |580.1            |45,21                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|63.0                       |1.44879                  |1.3123                 |762.5            |581.0            |45,31                   |
|63.1                       |1.44902                  |1.3130                 |764.1            |582.0            |45,40                   |
|63.2                       |1.44926                  |1.3136                 |765.7            |582.9            |45,49                   |
|63.3                       |1.44949                  |1.3143                 |767.3            |583.8            |45,59                   |
|63.4                       |1.44972                  |1.3149                 |768.9            |584.8            |45,69                   |
|63.5                       |1.44996                  |1.3156                 |770.6            |585.7            |45,79                   |
|63.6                       |1.45019                  |1.3162                 |772.2            |586.6            |45,88                   |
|63.7                       |1.45042                  |1.3169                 |773.8            |587.6            |45,98                   |
|63.8                       |1.45065                  |1.3175                 |775.4            |588.5            |46,07                   |
|63.9                       |1.45089                  |1.3182                 |777.0            |589.4            |46,17                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|64.0                       |1.45112                  |1.3188                 |778.6            |590.4            |46,26                   |
|64.1                       |1.45135                  |1.3195                 |780.1            |591.3            |46,35                   |
|64.2                       |1.45159                  |1.3201                 |781.7            |592.1            |46,45                   |
|64.3                       |1.45183                  |1.3207                 |783.2            |593.0            |46,53                   |
|64.4                       |1.45206                  |1.3213                 |784.8            |593.9            |46,63                   |
|64.5                       |1.45230                  |1.3219                 |786.3            |594.8            |46,72                   |
|64.6                       |1.45253                  |1.3226                 |787.8            |595.7            |46,81                   |
|64.7                       |1.45276                  |1.3232                 |789.4            |596.6            |46,90                   |
|64.8                       |1.45300                  |1.3238                 |790.9            |597.5            |46,99                   |
|64.9                       |1.45324                  |1.3244                 |792.5            |598.3            |47,09                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|65.0                       |1.45347                  |1.3251                 |794.0            |599.2            |47,18                   |
|65.1                       |1.45371                  |1.3257                 |795.6            |600.1            |47,27                   |
|65.2                       |1.45394                  |1.3264                 |797.2            |601.1            |47,37                   |
|65.3                       |1.45418                  |1.3270                 |798.8            |602.0            |47,46                   |
|65.4                       |1.45441                  |1.3277                 |800.4            |602.9            |47,56                   |
|65.5                       |1.45465                  |1.3283                 |802.1            |603.8            |47,66                   |
|65.6                       |1.45489                  |1.3290                 |803.7            |604.7            |47,75                   |
|65.7                       |1.45512                  |1.3296                 |805.3            |605.6            |47,85                   |
|65.8                       |1.45536                  |1.3303                 |806.9            |606.6            |47,94                   |
|65.9                       |1.45559                  |1.3309                 |808.5            |607.5            |48,04                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|66.0                       |1.45583                  |1.3316                 |810.1            |608.4            |48,13                   |
|66.1                       |1.45607                  |1.3322                 |811.6            |609.3            |48,22                   |
|66.2                       |1.45630                  |1.3328                 |813.2            |610.1            |48,32                   |
|66.3                       |1.45654                  |1.3335                 |814.8            |611.0            |48,41                   |
|66.4                       |1.45678                  |1.3341                 |816.3            |611.9            |48,50                   |
|66.5                       |1.45702                  |1.3347                 |817.9            |612.8            |48,60                   |
|66.6                       |1.45725                  |1.3353                 |819.4            |613.6            |48,69                   |
|66.7                       |1.45749                  |1.3360                 |820.9            |614.5            |48,77                   |
|66.8                       |1.45773                  |1.3366                 |822.5            |615.4            |48,87                   |
|66.9                       |1.45796                  |1.3372                 |824.1            |616.2            |48,97                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|67.0                       |1.45820                  |1.3378                 |825.6            |617.1            |49,05                   |
|67.1                       |1.45844                  |1.3385                 |827.2            |618.0            |49,15                   |
|67.2                       |1.45868                  |1.3391                 |828.8            |618.9            |49,24                   |
|67.3                       |1.45892                  |1.3398                 |830.4            |619.8            |49,34                   |
|67.4                       |1.45916                  |1.3404                 |832.0            |620.7            |49,43                   |
|67.5                       |1.45940                  |1.3411                 |833.7            |621.6            |49,53                   |
|67.6                       |1.45964                  |1.3418                 |835.3            |622.5            |49,63                   |
|67.7                       |1.45988                  |1.3424                 |836.9            |623.4            |49,73                   |
|67.8                       |1.46012                  |1.3431                 |838.5            |624.3            |49,82                   |
|67.9                       |1.46036                  |1.3437                 |840.1            |625.2            |49,92                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|68.0                       |1.46060                  |1.3444                 |841.7            |626.1            |50,01                   |
|68.1                       |1.46084                  |1.3450                 |843.4            |627.0            |50,11                   |
|68.2                       |1.46108                  |1.3457                 |845.1            |628.0            |50,21                   |
|68.3                       |1.46132                  |1.3464                 |846.7            |628.9            |50,31                   |
|68.4                       |1.46156                  |1.3471                 |848.4            |629.8            |50,41                   |
|68.5                       |1.46181                  |1.3478                 |850.1            |630.8            |50,51                   |
|68.6                       |1.46205                  |1.3484                 |851.8            |631.7            |50,61                   |
|68.7                       |1.46229                  |1.3491                 |853.5            |632.6            |50,71                   |
|68.8                       |1.46253                  |1.3498                 |855.1            |633.5            |50,81                   |
|68.9                       |1.46277                  |1.3505                 |856.8            |634.5            |50,91                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|69.0                       |1.46301                  |1.3512                 |858.5            |635.4            |51,01                   |
|69.1                       |1.46325                  |1.3518                 |860.1            |636.3            |51,10                   |
|69.2                       |1.46350                  |1.3525                 |861.7            |637.2            |51,20                   |
|69.3                       |1.46374                  |1.3531                 |863.3            |638.0            |51,29                   |
|69.4                       |1.46398                  |1.3538                 |864.9            |638.9            |51,39                   |
|69.5                       |1.46423                  |1.3544                 |866.6            |639.8            |51,49                   |
|69.6                       |1.46447                  |1.3551                 |868.2            |640.7            |51,58                   |
|69.7                       |1.46471                  |1.3557                 |869.8            |641.6            |51,68                   |
|69.8                       |1.46495                  |1.3564                 |871.4            |642.4            |51,78                   |
|69.9                       |1.46520                  |1.3570                 |873.0            |643.3            |51,87                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|70.0                       |1.46544                  |1.3577                 |874.6            |644.2            |51,97                   |
|70.1                       |1.46568                  |1.3583                 |876.2            |645.1            |52,06                   |
|70.2                       |1.46593                  |1.3590                 |877.8            |645.9            |52,15                   |
|70.3                       |1.46618                  |1.3596                 |879.4            |646.8            |52,25                   |
|70.4                       |1.46642                  |1.3603                 |881.0            |647.7            |52,35                   |
|70.5                       |1.46667                  |1.3609                 |882.7            |648.6            |52,45                   |
|70.6                       |1.46691                  |1.3616                 |884.3            |649.4            |52,54                   |
|70.7                       |1.46715                  |1.2622                 |885.9            |650.3            |52,64                   |
|70.8                       |1.46740                  |1.3629                 |887.5            |651.2            |52,73                   |
|70.9                       |1.46765                  |1.3635                 |889.1            |652.1            |52,83                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|71.0                       |1.46789                  |1.3642                 |890.7            |652.9            |52,92                   |
|71.1                       |1.46814                  |1.3649                 |892.4            |653.8            |53,02                   |
|71.2                       |1.46838                  |1.3655                 |894.1            |654.7            |53,12                   |
|71.3                       |1.46863                  |1.3662                 |895.7            |655.6            |53,22                   |
|71.4                       |1.46888                  |1.3669                 |897.4            |656.5            |53,32                   |
|71.5                       |1.46913                  |1.3676                 |899.1            |657.4            |53,42                   |
|71.6                       |1.46937                  |1.3683                 |900.8            |658.3            |53,52                   |
|71.7                       |1.46962                  |1.3689                 |902.5            |659.2            |53,62                   |
|71.8                       |1.46987                  |1.3696                 |904.1            |660.1            |53,72                   |
|71.9                       |1.47011                  |1.3703                 |905.8            |661.0            |53,82                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|72.0                       |1.47036                  |1.3710                 |907.5            |661.9            |53,92                   |
|72.1                       |1.47061                  |1.3717                 |909.2            |662.8            |54,02                   |
|72.2                       |1.47086                  |1.3723                 |910.8            |663.7            |54,12                   |
|72.3                       |1.47110                  |1.3730                 |912.5            |664.6            |54,22                   |
|72.4                       |1.47135                  |1.3737                 |914.2            |665.5            |54,32                   |
|72.5                       |1.47160                  |1.3744                 |915.9            |666.4            |54,42                   |
|72.6                       |1.47185                  |1.3750                 |917.5            |667.3            |54,51                   |
|72.7                       |1.47210                  |1.3757                 |919.2            |668.2            |54,62                   |
|72.8                       |1.47234                  |1.3764                 |920.9            |669.0            |54,72                   |
|72.9                       |1.47259                  |1.3771                 |922.5            |669.9            |54,81                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|73.0                       |1.47284                  |1.3777                 |924.2            |670.8            |54,91                   |
|73.1                       |1.47309                  |1.3784                 |925.9            |671.7            |55,01                   |
|73.2                       |1.47334                  |1.3791                 |927.6            |672.6            |55,11                   |
|73.3                       |1.47359                  |1.3798                 |929.2            |673.5            |55,21                   |
|73.4                       |1.47384                  |1.3804                 |930.9            |674.4            |55,31                   |
|73.5                       |1.47409                  |1.3811                 |932.6            |675.2            |55,41                   |
|73.6                       |1.47434                  |1.3818                 |934.3            |676.1            |55,51                   |
|73.7                       |1.47459                  |1.3825                 |936.0            |677.0            |55,61                   |
|73.8                       |1.47484                  |1.3832                 |937.6            |677.9            |55,71                   |
|73.9                       |1.47509                  |1.3838                 |939.3            |678.8            |55,81                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|74.0                       |1.47534                  |1.3845                 |941.0            |679.7            |55,91                   |
|74.1                       |1.47559                  |1.3852                 |942.7            |680.5            |56,01                   |
|74.2                       |1.47584                  |1.3859                 |944.4            |681.4            |56,11                   |
|74.3                       |1.47609                  |1.3866                 |946.0            |682.3            |56,21                   |
|74.4                       |1.47634                  |1.3872                 |947.7            |683.2            |56,31                   |
|74.5                       |1.47660                  |1.3879                 |949.4            |684.0            |56,41                   |
|74.6                       |1.47685                  |1.3886                 |951.1            |684.9            |56,51                   |
|74.7                       |1.47710                  |1.3893                 |952.8            |685.8            |56,61                   |
|74.8                       |1.47735                  |1.3900                 |954.4            |686.7            |56,71                   |
|74.9                       |1.47760                  |1.3906                 |956.1            |687.5            |56,81                   |

                                                                    TABLE III

 Table donnant la teneur en sucre[10] des moûts concentrés rectifiés en grammes par litre et en grammes par kilogramme, déterminée au moyen d'un
  réfractomètre gradué, soit en pourcentage en masse de saccharose à 20 °C, soit en indice de réfraction à 20 °C. La masse volumique à 20 °C est
                                                                également donnée.

|Saccharose                 |Indice de réfraction à   |Masse volumique à 20 °C|Sucres en        |Sucres en        |Titre alcoométr.        |
|% (m/m)                    |20 °C                    |                       |g/l              |g/kg             |% vol. 20 °C            |
|50.0                       |1.42008                  |1.2342                 |627.6            |508.5            |37,28                   |
|50.1                       |1.42029                  |1.2348                 |629.3            |509.6            |37,38                   |
|50.2                       |1.42050                  |1.2355                 |630.9            |510.6            |37,48                   |
|50.3                       |1.42071                  |1.2362                 |632.4            |511.6            |37,56                   |
|50.4                       |1.42092                  |1.2367                 |634.1            |512.7            |37,66                   |
|50.5                       |1.42113                  |1.2374                 |635.7            |513.7            |37,76                   |
|50.6                       |1.42135                  |1.2381                 |637.3            |514.7            |37,85                   |
|50.7                       |1.42156                  |1.2386                 |638.7            |515.7            |37,94                   |
|50.8                       |1.42177                  |1.2391                 |640.4            |516.8            |38,04                   |
|50.9                       |1.42198                  |1.2396                 |641.9            |517.8            |38,13                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|51.0                       |1.42219                  |1.2401                 |643.4            |518.8            |38,22                   |
|51.1                       |1.42240                  |1.2406                 |645.0            |519.9            |38,31                   |
|51.2                       |1.42261                  |1.2411                 |646.5            |520.9            |38,40                   |
|51.3                       |1.42282                  |1.2416                 |648.1            |522.0            |38,50                   |
|51.4                       |1.42304                  |1.2421                 |649.6            |523.0            |38,59                   |
|51.5                       |1.42325                  |1.2427                 |651.2            |524.0            |38,68                   |
|51.6                       |1.42347                  |1.2434                 |652.9            |525.1            |38,78                   |
|51.7                       |1.42368                  |1.2441                 |654.5            |526.1            |38,88                   |
|51.8                       |1.42389                  |1.2447                 |656.1            |527.1            |38,97                   |
|51.9                       |1.42410                  |1.2454                 |657.8            |528.2            |39,07                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|52.0                       |1.42432                  |1.2461                 |659.4            |529.2            |39,17                   |
|52.1                       |1.42453                  |1.2466                 |661.0            |530.2            |39,26                   |
|52.2                       |1.42475                  |1.2470                 |662.5            |531.3            |39,35                   |
|52.3                       |1.42496                  |1.2475                 |664.1            |532.3            |39,45                   |
|52.4                       |1.42517                  |1.2480                 |665.6            |533.3            |39,54                   |
|52.5                       |1.42538                  |1.2486                 |667.2            |534.4            |39,63                   |
|52.6                       |1.42560                  |1.2493                 |668.9            |535.4            |39,73                   |
|52.7                       |1.42581                  |1.2500                 |670.5            |536.4            |39,83                   |
|52.8                       |1.42603                  |1.2506                 |672.2            |537.5            |39,93                   |
|52.9                       |1.42624                  |1.2513                 |673.8            |538.5            |40,02                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|53.0                       |1.42645                  |1.2520                 |675.5            |539.5            |40,12                   |
|53.1                       |1.42667                  |1.2525                 |677.1            |540.6            |40,22                   |
|53.2                       |1.42689                  |1.2530                 |678.5            |541.5            |40,30                   |
|53.3                       |1.42711                  |1.2535                 |680.2            |542.6            |40,40                   |
|53.4                       |1.42733                  |1.2540                 |681.8            |543.7            |40,50                   |
|53.5                       |1.42754                  |1.2546                 |683.4            |544.7            |40,59                   |
|53.6                       |1.42776                  |1.2553                 |685.1            |545.8            |40,69                   |
|53.7                       |1.42797                  |1.2560                 |686.7            |546.7            |40,79                   |
|53.8                       |1.42819                  |1.2566                 |688.4            |547.8            |40,89                   |
|53.9                       |1.42840                  |1.2573                 |690.1            |548.9            |40,99                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|54.0                       |1.42861                  |1.2580                 |691.7            |549.8            |41,09                   |
|54.1                       |1.42884                  |1.2585                 |693.3            |550.9            |41,18                   |
|54.2                       |1.42906                  |1.2590                 |694.9            |551.9            |41,28                   |
|54.3                       |1.42927                  |1.2595                 |696.5            |553.0            |41,37                   |
|54.4                       |1.42949                  |1.2600                 |698.1            |554.0            |41,47                   |
|54.5                       |1.42971                  |1.2606                 |699.7            |555.1            |41,56                   |
|54.6                       |1.42993                  |1.2613                 |701.4            |556.1            |41,66                   |
|54.7                       |1.43014                  |1.2620                 |703.1            |557.1            |41,76                   |
|54.8                       |1.43036                  |1.2625                 |704.7            |558.2            |41,86                   |
|54.9                       |1.43058                  |1.2630                 |706.2            |559.1            |41,95                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|55.0                       |1.43079                  |1.2635                 |707.8            |560.2            |42,04                   |
|55.1                       |1.43102                  |1.2639                 |709.4            |561.3            |42,14                   |
|55.2                       |1.43124                  |1.2645                 |711.0            |562.3            |42,23                   |
|55.3                       |1.43146                  |1.2652                 |712.7            |563.3            |42,33                   |
|55.4                       |1.43168                  |1.2659                 |714.4            |564.3            |42,44                   |
|55.5                       |1.43189                  |1.2665                 |716.1            |565.4            |42,54                   |
|55.6                       |1.43211                  |1.2672                 |717.8            |566.4            |42,64                   |
|55.7                       |1.43233                  |1.2679                 |719.5            |567.5            |42,74                   |
|55.8                       |1.43255                  |1.2685                 |721.1            |568.5            |42,83                   |
|55.9                       |1.43277                  |1.2692                 |722.8            |569.5            |42,93                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|56.0                       |1.43298                  |1.2699                 |724.5            |570.5            |43,04                   |
|56.1                       |1.43321                  |1.2703                 |726.1            |571.6            |43,13                   |
|56.2                       |1.43343                  |1.2708                 |727.7            |572.6            |43,23                   |
|56.3                       |1.43365                  |1.2713                 |729.3            |573.7            |43,32                   |
|56.4                       |1.43387                  |1.2718                 |730.9            |574.7            |43,42                   |
|56.5                       |1.43409                  |1.2724                 |732.6            |575.8            |43,52                   |
|56.6                       |1.43431                  |1.2731                 |734.3            |576.8            |43,62                   |
|56.7                       |1.43454                  |1.2738                 |736.0            |577.8            |43,72                   |
|56.8                       |1.43476                  |1.2744                 |737.6            |578.8            |43,81                   |
|56.9                       |1.43498                  |1.2751                 |739.4            |579.9            |43,92                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|57.0                       |1.43519                  |1.2758                 |741.1            |580.9            |44,02                   |
|57.1                       |1.43542                  |1.2763                 |742.8            |582.0            |44,12                   |
|57.2                       |1.43564                  |1.2768                 |744.4            |583.0            |44,22                   |
|57.3                       |1.43586                  |1.2773                 |745.9            |584.0            |44,31                   |
|57.4                       |1.43609                  |1.2778                 |747.6            |585.1            |44,41                   |
|57.5                       |1.43631                  |1.2784                 |749.3            |586.1            |44,51                   |
|57.6                       |1.43653                  |1.2791                 |751.0            |587.1            |44,61                   |
|57.7                       |1.43675                  |1.2798                 |752.7            |588.1            |44,71                   |
|57.8                       |1.43698                  |1.2804                 |754.4            |589.2            |44,81                   |
|57.9                       |1.43720                  |1.2810                 |756.1            |590.2            |44,91                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|58.0                       |1.43741                  |1.2818                 |757.8            |591.2            |45,01                   |
|58.1                       |1.43764                  |1.2822                 |759.5            |592.3            |45,11                   |
|58.2                       |1.43784                  |1.2827                 |761.1            |593.4            |45,21                   |
|58.3                       |1.43809                  |1.2832                 |762.6            |594.3            |45,30                   |
|58.4                       |1.43832                  |1.2837                 |764.3            |595.4            |45,40                   |
|58.5                       |1.43854                  |1.2843                 |766.0            |596.4            |45,50                   |
|58.6                       |1.43877                  |1.2850                 |767.8            |597.5            |45,61                   |
|58.7                       |1.43899                  |1.2857                 |769.5            |598.5            |45,71                   |
|58.8                       |1.43922                  |1.2863                 |771.1            |599.5            |45,80                   |
|58.9                       |1.43944                  |1.2869                 |772.9            |600.6            |45,91                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|59.0                       |1.43966                  |1.2876                 |774.6            |601.6            |46,01                   |
|59.1                       |1.43988                  |1.2882                 |776.3            |602.6            |46,11                   |
|59.2                       |1.44011                  |1.2889                 |778.1            |603.7            |46,22                   |
|59.3                       |1.44034                  |1.2896                 |779.8            |604.7            |46,32                   |
|59.4                       |1.44057                  |1.2902                 |781.6            |605.8            |46,43                   |
|59.5                       |1.44079                  |1.2909                 |783.3            |606.8            |46,53                   |
|59.6                       |1.44102                  |1.2916                 |785.2            |607.9            |46,64                   |
|59.7                       |1.44124                  |1.2921                 |786.8            |608.9            |46,74                   |
|59.8                       |1.44147                  |1.2926                 |788.4            |609.9            |46,83                   |
|59.9                       |1.44169                  |1.2931                 |790.0            |610.9            |46,93                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|60.0                       |1.44192                  |1.2936                 |791.7            |612.0            |47,03                   |
|60.1                       |1.44215                  |1.2942                 |793.3            |613.0            |47,12                   |
|60.2                       |1.44238                  |1.2949                 |795.2            |614.1            |47,23                   |
|60.3                       |1.44260                  |1.2956                 |796.9            |615.1            |47,34                   |
|60.4                       |1.44283                  |1.2962                 |798.6            |616.1            |47,44                   |
|60.5                       |1.44305                  |1.2969                 |800.5            |617.2            |47,55                   |
|60.6                       |1.44328                  |1.2976                 |802.2            |618.2            |47,65                   |
|60.7                       |1.44351                  |1.2981                 |803.9            |619.3            |47,75                   |
|60.8                       |1.44374                  |1.2986                 |805.5            |620.3            |47,85                   |
|60.9                       |1.44397                  |1.2991                 |807.1            |621.3            |47,94                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|61.0                       |1.44419                  |1.2996                 |808.7            |622.3            |48,04                   |
|61.1                       |1.44442                  |1.3002                 |810.5            |623.4            |48,14                   |
|61.2                       |1.44465                  |1.3009                 |812.3            |624.4            |48,25                   |
|61.3                       |1.44488                  |1.3016                 |814.2            |625.5            |48,36                   |
|61.4                       |1.44511                  |1.3022                 |815.8            |626.5            |48,46                   |
|61.5                       |1.44534                  |1.3029                 |817.7            |627.6            |48,57                   |
|61.6                       |1.44557                  |1.3036                 |819.4            |628.6            |48,67                   |
|61.7                       |1.44580                  |1.3042                 |821.3            |629.7            |48,79                   |
|61.8                       |1.44603                  |1.3049                 |823.0            |630.7            |48,89                   |
|61.9                       |1.44626                  |1.3056                 |824.8            |631.7            |48,99                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|62.0                       |1.44648                  |1.3062                 |826.6            |632.8            |49,10                   |
|62.1                       |1.44672                  |1.3068                 |828.3            |633.8            |49,20                   |
|62.2                       |1.44695                  |1.3075                 |830.0            |634.8            |49,30                   |
|62.3                       |1.44718                  |1.3080                 |831.8            |635.9            |49,40                   |
|62.4                       |1.44741                  |1.3085                 |833.4            |636.9            |49,50                   |
|62.5                       |1.44764                  |1.3090                 |835.1            |638.0            |49,60                   |
|62.6                       |1.44787                  |1.3095                 |836.8            |639.0            |49,71                   |
|62.7                       |1.44810                  |1.3101                 |838.5            |640.0            |49,81                   |
|62.8                       |1.44833                  |1.3108                 |840.2            |641.0            |49,91                   |
|62.9                       |1.44856                  |1.3115                 |842.1            |642.1            |50,02                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|63.0                       |1.44879                  |1.3121                 |843.8            |643.1            |50,12                   |
|63.1                       |1.44902                  |1.3128                 |845.7            |644.2            |50,23                   |
|63.2                       |1.44926                  |1.3135                 |847.5            |645.2            |50,34                   |
|63.3                       |1.44949                  |1.3141                 |849.3            |646.3            |50,45                   |
|63.4                       |1.44972                  |1.3148                 |851.1            |647.3            |50,56                   |
|63.5                       |1.44995                  |1.3155                 |853.0            |648.4            |50,67                   |
|63.6                       |1.45019                  |1.3161                 |854.7            |649.4            |50,77                   |
|63.7                       |1.45042                  |1.3168                 |856.5            |650.4            |50,88                   |
|63.8                       |1.45065                  |1.3175                 |858.4            |651.5            |50,99                   |
|63.9                       |1.45088                  |1.3180                 |860.0            |652.5            |51,08                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|64.0                       |1.45112                  |1.3185                 |861.6            |653.5            |51,18                   |
|64.1                       |1.45135                  |1.3190                 |863.4            |654.6            |51,29                   |
|64.2                       |1.45158                  |1.3195                 |865.1            |655.6            |51,39                   |
|64.3                       |1.45181                  |1.3201                 |866.9            |656.7            |51,49                   |
|64.4                       |1.45205                  |1.3208                 |868.7            |657.7            |51,60                   |
|64.5                       |1.45228                  |1.3215                 |870.6            |658.8            |51,71                   |
|64.6                       |1.45252                  |1.3221                 |872.3            |659.8            |51,81                   |
|64.7                       |1.45275                  |1.3228                 |874.1            |660.8            |51,92                   |
|64.8                       |1.45299                  |1.3235                 |876.0            |661.9            |52,03                   |
|64.9                       |1.45322                  |1.3241                 |877.8            |662.9            |52,14                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|65.0                       |1.45347                  |1.3248                 |879.7            |664.0            |52,25                   |
|65.1                       |1.45369                  |1.3255                 |881.5            |665.0            |52,36                   |
|65.2                       |1.45393                  |1.3261                 |883.2            |666.0            |52,46                   |
|65.3                       |1.45416                  |1.3268                 |885.0            |667.0            |52,57                   |
|65.4                       |1.45440                  |1.3275                 |886.9            |668.1            |52,68                   |
|65.5                       |1.45463                  |1.3281                 |888.8            |669.2            |52,79                   |
|65.6                       |1.45487                  |1.3288                 |890.6            |670.2            |52,90                   |
|65.7                       |1.45510                  |1.3295                 |892.4            |671.2            |53,01                   |
|65.8                       |1.45534                  |1.3301                 |894.2            |672.3            |53,12                   |
|65.9                       |1.45557                  |1.3308                 |896.0            |673.3            |53,22                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|66.0                       |1.45583                  |1.3315                 |898.0            |674.4            |53,34                   |
|66.1                       |1.45605                  |1.3320                 |899.6            |675.4            |53,44                   |
|66.2                       |1.45629                  |1.3325                 |901.3            |676.4            |53,54                   |
|66.3                       |1.45652                  |1.3330                 |903.1            |677.5            |53,64                   |
|66.4                       |1.45676                  |1.3335                 |904.8            |678.5            |53,75                   |
|66.5                       |1.45700                  |1.3341                 |906.7            |679.6            |53,86                   |
|66.6                       |1.45724                  |1.3348                 |908.5            |680.6            |53,96                   |
|66.7                       |1.45747                  |1.3355                 |910.4            |681.7            |54,08                   |
|66.8                       |1.45771                  |1.3361                 |912.2            |682.7            |54,18                   |
|66.9                       |1.45795                  |1.3367                 |913.9            |683.7            |54,29                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|67.0                       |1.45820                  |1.3374                 |915.9            |684.8            |54,40                   |
|67.1                       |1.45843                  |1.3380                 |917.6            |685.8            |54,51                   |
|67.2                       |1.45867                  |1.3387                 |919.6            |686.9            |54,62                   |
|67.3                       |1.45890                  |1.3395                 |921.4            |687.9            |54,73                   |
|67.4                       |1.45914                  |1.3400                 |923.1            |688.9            |54,83                   |
|67.5                       |1.45938                  |1.3407                 |925.1            |690.0            |54,95                   |
|67.6                       |1.45962                  |1.3415                 |927.0            |691.0            |55,06                   |
|67.7                       |1.45986                  |1.3420                 |928.8            |692.1            |55,17                   |
|67.8                       |1.46010                  |1.3427                 |930.6            |693.1            |55,28                   |
|67.9                       |1.46034                  |1.3434                 |932.6            |694.2            |55,40                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|68.0                       |1.46060                  |1.3440                 |934.4            |695.2            |55,50                   |
|68.1                       |1.46082                  |1.3447                 |936.2            |696.2            |55,61                   |
|68.2                       |1.46106                  |1.3454                 |938.0            |697.2            |55,72                   |
|68.3                       |1.46130                  |1.3460                 |939.9            |698.3            |55,83                   |
|68.4                       |1.46154                  |1.3466                 |941.8            |699.4            |55,94                   |
|68.5                       |1.46178                  |1.3473                 |943.7            |700.4            |56,06                   |
|68.6                       |1.46202                  |1.3479                 |945.4            |701.4            |56,16                   |
|68.7                       |1.46226                  |1.3486                 |947.4            |702.5            |56,28                   |
|68.8                       |1.46251                  |1.3493                 |949.2            |703.5            |56,38                   |
|68.9                       |1.46275                  |1.3499                 |951.1            |704.6            |56,50                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|69.0                       |1.46301                  |1.3506                 |953.0            |705.6            |56,61                   |
|69.1                       |1.46323                  |1.3513                 |954.8            |706.6            |56,72                   |
|69.2                       |1.46347                  |1.3519                 |956.7            |707.7            |56,83                   |
|69.3                       |1.46371                  |1.3526                 |958.6            |708.7            |56,94                   |
|69.4                       |1.46396                  |1.3533                 |960.6            |709.8            |57,06                   |
|69.5                       |1.46420                  |1.3539                 |962.4            |710.8            |57,17                   |
|69.6                       |1.46444                  |1.3546                 |964.3            |711.9            |57,28                   |
|69.7                       |1.46468                  |1.3553                 |966.2            |712.9            |57,39                   |
|69.8                       |1.46493                  |1.3560                 |968.2            |714.0            |57,51                   |
|69.9                       |1.46517                  |1.3566                 |970.0            |715.0            |57,62                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|70.0                       |1.46544                  |1.3573                 |971.8            |716.0            |57,72                   |
|70.1                       |1.46565                  |1.3579                 |973.8            |717.1            |57,84                   |
|70.2                       |1.46590                  |1.3586                 |975.6            |718.1            |57,95                   |
|70.3                       |1.46614                  |1.3593                 |977.6            |719.2            |58,07                   |
|70.4                       |1.46639                  |1.3599                 |979.4            |720.2            |58,18                   |
|70.5                       |1.46663                  |1.3606                 |981.3            |721.2            |58,29                   |
|70.6                       |1.46688                  |1.3613                 |983.3            |722.3            |58,41                   |
|70.7                       |1.46712                  |1.3619                 |985.2            |723.4            |58,52                   |
|70.8                       |1.46737                  |1.3626                 |987.1            |724.4            |58,63                   |
|70.9                       |1.46761                  |1.3633                 |988.9            |725.4            |58,74                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|71.0                       |1.46789                  |1.3639                 |990.9            |726.5            |58,86                   |
|71.1                       |1.46810                  |1.3646                 |992.8            |727.5            |58,97                   |
|71.2                       |1.46835                  |1.3653                 |994.8            |728.6            |59,09                   |
|71.3                       |1.46859                  |1.3659                 |996.6            |729.6            |59,20                   |
|71.4                       |1.46884                  |1.3665                 |998.5            |730.7            |59,31                   |
|71.5                       |1.46908                  |1.3672                 |1000.4           |731.7            |59,42                   |
|71.6                       |1.46933                  |1.3678                 |1002.2           |732.7            |59,53                   |
|71.7                       |1.46957                  |1.3685                 |1004.2           |733.8            |59,65                   |
|71.8                       |1.46982                  |1.3692                 |1006.1           |734.8            |59,76                   |
|71.9                       |1.47007                  |1.3698                 |1008.0           |735.9            |59,88                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|72.0                       |1.47036                  |1.3705                 |1009.9           |736.9            |59,99                   |
|72.1                       |1.47056                  |1.3712                 |1012.0           |738.0            |60,11                   |
|72.2                       |1.47081                  |1.3718                 |1013.8           |739.0            |60,22                   |
|72.3                       |1.47106                  |1.3725                 |1015.7           |740.0            |60,33                   |
|72.4                       |1.47131                  |1.3732                 |1017.7           |741.1            |60,45                   |
|72.5                       |1.47155                  |1.3738                 |1019.5           |742.1            |60,56                   |
|72.6                       |1.47180                  |1.3745                 |1021.5           |743.2            |60,68                   |
|72.7                       |1.47205                  |1.3752                 |1023.4           |744.2            |60,79                   |
|72.8                       |1.47230                  |1.3758                 |1025.4           |745.3            |60,91                   |
|72.9                       |1.47254                  |1.3765                 |1027.3           |746.3            |61,02                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|73.0                       |1.47284                  |1.3772                 |1029.3           |747.4            |61,14                   |
|73.1                       |1.47304                  |1.3778                 |1031.2           |748.4            |61,25                   |
|73.2                       |1.47329                  |1.3785                 |1033.2           |749.5            |61,37                   |
|73.3                       |1.47354                  |1.3792                 |1035.1           |750.5            |61,48                   |
|73.4                       |1.47379                  |1.3798                 |1037.1           |751.6            |61,60                   |
|73.5                       |1.47404                  |1.3805                 |1039.0           |752.6            |61,72                   |
|73.6                       |1.47429                  |1.3812                 |1040.9           |753.6            |61,83                   |
|73.7                       |1.47454                  |1.3818                 |1042.8           |754.7            |61,94                   |
|73.8                       |1.47479                  |1.3825                 |1044.8           |755.7            |62,06                   |
|73.9                       |1.47504                  |1.3832                 |1046.8           |756.8            |62,18                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|74.0                       |1.47534                  |1.3838                 |1048.6           |757.8            |62,28                   |
|74.1                       |1.47554                  |1.3845                 |1050.7           |758.9            |62,41                   |
|74.2                       |1.47579                  |1.3852                 |1052.6           |759.9            |62,52                   |
|74.3                       |1.47604                  |1.3858                 |1054.6           |761.0            |62,64                   |
|74.4                       |1.47629                  |1.3865                 |1056.5           |762.0            |62,76                   |
|74.5                       |1.47654                  |1.3871                 |1058.5           |763.1            |62,87                   |
|74.6                       |1.47679                  |1.3878                 |1060.4           |764.1            |62,99                   |
|74.7                       |1.47704                  |1.3885                 |1062.3           |765.1            |63,10                   |
|74.8                       |1.47730                  |1.3892                 |1064.4           |766.2            |63,23                   |
|74.9                       |1.47755                  |1.3898                 |1066.3           |767.2            |63,33                   |
|                           |                         |                       |                 |                 |                        |
|75.0                       |1.47785                  |1.3905                 |1068.3           |768.3            |63,46                   |

3.    TITRE ALCOOMÉTRIQUE VOLUMIQUE

1.    DÉFINITION

      Le titre alcoométrique volumique est égal au nombre de litres d'éthanol contenu dans 100  litres  de  vin,  ces  volumes  étant  tous  deux
       mesurés à la température de 20 °C. Son symbole est «% vol».

      Remarque:

      Les homologues de l'éthanol, ainsi que l'éthanol et les homologues de l'éthanol engagés dans des esters éthyliques  sont  compris  dans  le
       titre alcoométrique, car ils se retrouvent dans le distillat.

2.    PRINCIPE DES MÉTHODES

2.1.  Distillation du vin alcalinisé par une suspension d'hydroxyde de calcium. Détermination du titre alcoométrique sur le distillat.

                                            ê 355/2005 Art. 1, pt 1

2.2. Méthodes de référence:

     – détermination du titre alcoométrique du distillat par pycnométrie;

     – détermination du titre alcoométrique des vins à l’aide de la balance hydrostatique;

     – détermination du titre alcoométrique des vins par densimétrie électronique utilisant un résonateur de flexion.

                                            ê 2676/90

2.3.  Méthodes usuelles

2.3.1.      Détermination du titre alcoométrique du distillat par aréométrie

2.3.2.      Détermination du titre alcoométrique du distillat par réfractométrie

      Nota:

      Pour exprimer le titre alcoométrique à partir de la masse volumique du distillat, utiliser les tables pratiques I,  II,  III  données  dans
       l'annexe II à ce chapitre. Elles ont été calculées à partir de la table alcoométrique internationale publiée en  1972  par  l'Organisation
       internationale de métrologie légale (OIML) dans sa recommandation no 22 et adoptée par l'OIV (assemblée générale de 1974).

      Dans la tableau I  est  donnée  l'équation  générale  reliant  le  titre  alcoométrique  volumique  et  la  masse  volumique  des  mélanges
       hydroalcooliques en fonction de la température.

3.    OBTENTION DU DISTILLAT

3.1.  Appareillage

3.1.1.      Appareil de distillation comportant:

         – un ballon d'un litre de capacité, à rodage normalisé,

         – une colonne rectificatrice de 20 cm de hauteur environ ou tout dispositif destiné à empêcher le primage,

         – une source de chaleur: toute pyrogénation des matières extractives doit être évitée par un dispositif approprié,

         – un réfrigérant terminé par un tube effilé conduisant le distillat dans le fond de  la  fiole  jaugée  réceptrice  contenant  quelques
           millilitres d'eau.

3.1.2.      Appareil à entraînement par la vapeur d'eau comportant:

       1)   un générateur de vapeur d'eau;

       2)   un barboteur;

       3)   une colonne rectificatrice;

       4)   un réfrigérant.

      Tout modèle d'appareil à distillation ou tout appareil à entraînement à la vapeur d'eau peut être utilisé à condition de répondre  au  test
       suivant: distiller 5 fois successives un mélange hydroalcoolique titrant 10 % vol. Le distillat doit présenter un titre alcoométrique d'au
       moins 9,9 % vol. après la cinquième distillation, c'est-à-dire qu'il ne doit pas se produire de perte d'alcool supérieure à 0,02 % vol. au
       cours d'une distillation.

3.2.  Réactifs

3.2.1.      Suspension d'hydroxyde de calcium 2 M

      Obtenue en versant avec précaution 1 l d'eau chaude (60 à 70 °C) sur 120 g de chaux vive CaO.

3.3.  Préparation de l'échantillon

      Les vins jeunes ou mousseux sont préalablement débarrassés de la plus grande quantité de leur dioxyde de carbone par  agitation  de  250  à
       300 ml de vin dans un flacon de 500 ml.

3.4   Mode opératoire

      Prélever à l'aide d'une fiole jaugée un volume de vin de 200 ml. Noter la température du vin.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Le verser dans le ballon de l'appareil à distiller ou dans le barboteur de l'appareil à entraînement à la vapeur  d'eau.  Rincer  la  fiole
       jaugée à quatre reprises avec 5 ml d'eau que l'on ajoute dans le ballon ou dans le barboteur.  Ajouter  10 ml  d'hydroxyde  de  calcium  (
       Ö point Õ 3.2.1) et quelques fragments d'une matière poreuse inerte (pierre ponce) dans le cas de la distillation.

                                            ê 2676/90

      Recueillir le distillat dans la fiole jaugée de 200 ml qui a servi à mesurer le vin.

      Recueillir un volume égal aux trois quarts environ du volume initial dans le cas de la distillation et recueillir 198-199 ml  de  distillat
       dans le cas de l'entraînement à la vapeur d'eau. Compléter à 200 ml avec  de  l'eau  distillée,  le  distillat  étant  à  une  température
       identique à la température initiale à ± 2 °C près.

      Mélanger avec précaution, par un mouvement circulaire.

      Remarque:

      Dans le cas de vins particulièrement chargés en ions ammoniacaux, redistiller éventuellement le distillat dans les conditions décrites  ci-
       dessus en remplaçant la suspension d'hydroxyde de calcium par 1 ml d'acide sulfurique à 10 pour 100 (v/v).

                                            ê 355/2005 Art. 1, pt 2 et Annexe

4.    MÉTHODES DE RÉFÉRENCE

4.A.  Détermination du titre alcoométrique du distillat par pycnométrie.

                                            ê 2676/90

4.A.1.      Appareillage

4.A.1.1.    Utiliser le pycnomètre étalonné comme il est indiqué au chapitre «Masse volumique».

4.A.2 Mode opératoire

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Procéder à la détermination de la masse volumique apparente à t °C du distillat ( Ö point Õ 3.4) comme il est indiqué au chapitre 1  «Masse
       volumique» Ö aux points Õ 4.3.1 et 4.3.2; soit ρt cette masse volumique.

                                            ê 2676/90

4.A.3.      Expression des résultats

4.A.3.1.    Mode de calcul

      Exprimer le titre alcoométrique à 20 °C au moyen de la table I. Sur la  table,  chercher  sur  la  ligne  horizontale  correspondant  à  la
       température T (exprimée en nombre entier), immédiatement inférieure à t °C, la plus petite masse volumique supérieure à  ρt.  Utiliser  la
       différence tabulaire lue au-dessous de cette masse volumique pour calculer la masse volumique ρ à cette température T.

      Sur la ligne de cette température T chercher la masse volumique ρ' immédiatement supérieure à ρ et calculer la différence  entre  ces  deux
       masses volumiques ρ et ρ'. Cette différence est divisée par la différence tabulaire lue à la droite de la masse volumique ρ′. Le  quotient
       donne la partie décimale du titre alcoométrique, tandis que la partie entière de ce titre est  indiquée  au  sommet  de  la  colonne  dans
       laquelle se trouve la masse volumique ρ'.

      Un exemple de calcul du titre alcoométrique est donné dans l'annexe I à ce chapitre.

      Remarque:

      Cette correction de température a été mise sur programme et peut être éventuellement effectuée automatiquement.

4.A.3.2.    Répétabilité (r)

      r = 0,10 % vol

4.A.3.3.    Reproductibilité (R)

      R = 0,19 % vol

                                            ê 355/2005 Art. 1, pt 2 et Annexe

4.B.  Détermination du titre alcoométrique des vins à l'aide de la balance hydrostatique

                                            ê 128/2004 art. 1, pt. 2

4.B.1 MÉTHODE DE MESURE

4.B.1.1.    Introduction

      Le titre alcoométrique volumique (TAV) des vins doit être mesuré avant leur commercialisation  notamment  pour  la  conformité  aux  règles
       d'étiquetage.

      Le titre alcoométrique volumique est égal au nombre de litres d'éthanol contenus dans 100 litres  de  vin,  ces  volumes  étant  tous  deux
       mesurés à la température de 20 °C. Son symbole est «% vol».

4.B.1.2.    Objet et domaine d'application

      La méthode de mesure décrite est la densimétrie utilisant une balance hydrostatique.

      En référence aux dispositions réglementaires en vigueur, la température d'essai est arrêtée à 20 °C.

4.B.1.3.    Principe et définitions

      Le principe de la méthode consiste premièrement à distiller le vin de volume à volume. La méthode  de  distillation  est  décrite  dans  le
       présent chapitre. Cette distillation permet d'éliminer les substances non volatiles. Les homologues de l'éthanol, ainsi que  l'éthanol  et
       les homologues de l'éthanol engagés dans les esters, sont compris dans le titre alcoométrique, car ils se retrouvent dans le distillat.

      Dans un deuxième temps on mesure la masse volumique du distillat obtenu. La masse volumique d'un  liquide  à  une  température  donnée  est
       égale au quotient de sa masse sur son volume: ρ = m/V, pour un vin elle s'exprime en g/ml.

      Le titre alcoométrique des vins peut être mesuré par densimétrie sur balance hydrostatique suivant le  principe  d'Archimède  selon  lequel
       tout corps plongé dans un fluide subit une poussée verticale, dirigée de bas en haut, égale au poids du fluide déplacé.

4.B.1.4.    Réactifs

      Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, n'utiliser que des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau  de  classe  3  au
       minimum, répondant à la définition de la norme ISO 3696:1987.

4.B.1.4.1.  Solution de lavage du flotteur (hydroxyde de sodium, 30 % p/v).

      Pour préparer une solution de 100 ml, peser 30 g d'hydroxyde de sodium et porter au volume à l'aide d'éthanol à 96 % en volume.

4.B.1.5.    Appareillage et matériel

      Appareillage courant de laboratoire et notamment:

4.B.1.5.1.  Balance hydrostatique mono plateau d'une sensibilité de 1 mg.

4.B.1.5.2.  Flotteur d'un volume d'au moins 20 ml, spécialement adapté à la balance, suspendu par un  fil  d'un  diamètre  inférieur  ou  égal  à
       0,1 mm.

4.B.1.5.3.  Éprouvette cylindrique comportant un repère de niveau. Le flotteur doit pouvoir occuper entièrement le volume de  l'éprouvette  situé
       au-dessous du repère; la surface du liquide ne peut être traversée que par le fil de suspension. L'éprouvette cylindrique  doit  avoir  un
       diamètre intérieur supérieur d'au moins 6 mm à celui du flotteur.

4.B.1.5.4.  Thermomètre (ou sonde de mesure de la température) gradué en degrés et dixièmes de degré, de 10 à 40 °C, étalonné à ± 0,05 °C près.

4.B.1.5.5.  Poids étalonnés par un organisme de certification reconnu.

4.B.1.6.    Mode opératoire

      Entre chaque mesure, le flotteur et l'éprouvette doivent être nettoyés à l'eau distillée, essuyés avec un papier  de  laboratoire  doux  ne
       perdant pas ses fibres et rincés avec la solution dont la masse volumique est à déterminer. Les mesures doivent être  effectuées  dès  que
       l'appareil a atteint sa stabilité afin de limiter les pertes d'alcool par évaporation.

4.B.1.6.1.  Étalonnage de la balance

      Bien que les balances soient généralement pourvues d'un système d'étalonnage interne, la balance hydrostatique doit pouvoir être  étalonnée
       avec des poids contrôlés par un organisme de certification officiel.

4.B.1.6.2.  Étalonnage du flotteur

4.B.1.6.2.1.     Remplir l'éprouvette cylindrique jusqu'au repère avec de l'eau bidistillée (ou d'une pureté équivalente, par  exemple  de  l'eau
       microfiltrée d'une conductivité de 18,2 MΩ/cm), dont la température sera comprise entre 15 et 25 °C,  mais  se  situera  de  préférence  à
       20 °C.

4.B.1.6.2.2.     Plonger le flotteur et le thermomètre dans le liquide, agiter, lire  la  masse  volumique  du  liquide  sur  l'appareil  et,  si
       nécessaire, corriger cette lecture pour qu'elle soit égale à celle de l'eau à la température de la mesure.

4.B.1.6.3.  Contrôle à l'aide d'une solution hydro alcoolique

4.B.1.6.3.1.     Remplir l'éprouvette cylindrique jusqu'au repère avec un mélange hydro alcoolique de  titre  connu,  dont  la  température  sera
       comprise entre 15 et 25 °C, mais se situera de préférence à 20 °C.

4.B.1.6.3.2.     Plonger le flotteur et le thermomètre dans le liquide, agiter, lire la masse volumique du liquide sur l'appareil  (ou  le  titre
       alcoométrique si ce dernier le permet). Le titre alcoométrique ainsi établi doit être égal au titre alcoométrique précédemment déterminé.

      Remarque:

      Cette solution de titre alcoométrique connu peut également remplacer l'eau bidistillée pour l'étalonnage du flotteur.

4.B.1.6.4.  Mesure de la masse volumique d'un distillat (ou de son titre alcoométrique si l'appareillage le permet)

4.B.1.6.4.1.     Verser l'échantillon pour essai dans l'éprouvette cylindrique jusqu'au repère de niveau.

4.B.1.6.4.2.     Plonger le flotteur et le thermomètre dans le liquide, agiter, lire la masse volumique du liquide sur l'appareil  (ou  le  titre
       alcoométrique si ce dernier le permet). Noter la température si la masse volumique est mesurée à t °C ρt.

4.B.1.6.4.3.     Corriger ρt à l'aide de la table des masses volumiques ρt des mélanges hydro alcooliques (table II de  l'annexe  II  du  présent
       chapitre).

4.B.1.6.5.  Nettoyage du flotteur et de l'éprouvette cylindrique

4.B.1.6.5.1.     Plonger le flotteur dans la solution de lavage versée dans l'éprouvette.

4.B.1.6.5.2.     Laisser tremper une heure en tournant le flotteur régulièrement.

4.B.1.6.5.3.     Rincer abondamment à l'eau du robinet, puis à l'eau distillée.

4.B.1.6.5.4.     Essuyer avec un papier de laboratoire doux ne perdant pas ses fibres.

      Réaliser ces opérations lors de la première utilisation du flotteur, puis régulièrement dès que nécessaire.

4.B.1.6.6.  Résultat

      À l'aide de la masse volumique ρ20, calculer le titre alcoométrique volumique réel en utilisant la  table  indiquant  la  valeur  du  titre
       alcoométrique volumique (% vol) à 20 °C en fonction de la masse volumique à 20 °C des mélanges hydro alcooliques. Il s'agit  de  la  table
       internationale alcoométrique adoptée par l'Organisation internationale de métrologie légale dans sa recommandation no 22.

4.B.2.      COMPARAISON DES MESURES EFFECTUÉES À L'AIDE DE LA BALANCE HYDROSTATIQUE AVEC CELLES OBTENUES PAR DENSIMÉTRIE ÉLECTRONIQUE

      À partir d'échantillons dont le titre alcoométrique est compris entre 4 % vol et 18 % vol, il a été procédé à la mesure de la  répétabilité
       et de la reproductibilité après un essai inter laboratoire. Il s'agit d'une comparaison des mesures du titre alcoométrique  de  différents
       échantillons par la balance hydrostatique et par le densimètre électronique, incluant les valeurs de répétabilité et  de  reproductibilité
       dérivées des essais d'intercomparaison pluriannuels effectués sur une grande échelle.

4.B.2.1.    Échantillons:

      Il s'agit de vins de différentes densités et titres alcoométriques préparés mensuellement à une échelle industrielle, tirés d'un  stock  de
       bouteilles conservées dans des conditions normales, et fournis de manière anonyme aux laboratoires.

4.B.2.2.    Laboratoires:

      Laboratoires participant aux essais mensuels organisés par Unione Italiana Vini (Verona, Italy) d'après la  réglementation  ISO  5725  (UNI
       9225) et le «International Protocol of Proficiency test for chemical analysis laboratories» établi par  l'  AOAC,  l'ISO  et  l'IUPAC,  et
       d'après les lignes directrices ISO 43 and ILAC G13. Un rapport annuel est fourni par la société citée à tous les participants.

4.B.2.3.    Appareils:

4.B.2.3.1.  Une balance hydrostatique électronique (dont la précision permet de donner la 5e décimale de la densité)  et  éventuellement  équipée
       d'un appareil de traitement de données.

4.B.2.3.2.  Un densimètre électronique éventuellement équipé d'un passeur automatique d'échantillons.

4.B.2.4.    Analyses

      D'après les règles de validation des méthodes d'analyse, chaque échantillon est analysé deux fois consécutives  pour  la  détermination  du
       titre alcoométrique.

4.B.2.5.    Résultats

      Le tableau 1 montre les résultats de mesure obtenus par les laboratoires utilisant une balance hydrostatique.

      Le tableau 2 montre les résultats obtenus par les laboratoires utilisant un densimètre électronique.

4.B.2.6.    Evaluations des résultats

4.B.2.6.1.  Les résultats des essais ont été examinés pour mettre  en  évidence  l'erreur  systématique  individuelle  (p < 0,025)  en  utilisant
       successivement les tests de Cochran et de Grubbs, selon les procédures décrites dans le «Protocol international for  the  Design,  Conduct
       and Interpretation of Method-Performance Studies».

4.B.2.6.2.  Répétabilité (r) et reproductibilité (R)

      Les calculs de répétabilité (r) et reproductibilité (R) définies par le protocole  ont  été  effectués  sur  les  résultats  restant  après
       élimination des valeurs aberrantes. Lors de l'évaluation d'une nouvelle méthode,  il  est  fréquent  qu'il  n'existe  pas  de  méthode  de
       référence validée ou de méthode statutaire pour comparer les critères de précision; donc pour comparer les données de  précision  obtenues
       lors des essais collaboratifs on se réfère à des niveaux de précision «estimés». Ces niveaux «estimés» sont calculés  d'après  la  formule
       d'Horwitz. La comparaison des résultats d'essais et les niveaux prévus indique si la méthode  est  suffisamment  précise  pour  le  niveau
       d'analyte mesuré. La valeur prédite d'Horwitz est calculée par la formule d'Horwitz

      RSDR = 2(1-0,5 logC)

      où C = concentration mesurée d'analyte exprimée en décimales (e.g. 1 g/100 g = 0,01).

      La valeur Horrat donne une comparaison de la précision actuelle déterminée avec la précision prédite  par  la  formule  d'Horwitz  pour  la
       méthode et au niveau particulier de concentration de l'analyte; elle est calculée comme suit:

      HoR = RSDR(mesuré)/RSDR(Horwitz)

4.B.2.6.3.  Précision interlaboratoires

      Une valeur Horrat de 1 indique normalement une précision inter laboratoires satisfaisante, alors  qu'une  valeur  supérieure  à  2  indique
       normalement une précision non satisfaisante, i.e. une précision trop variable pour des raisons analytiques ou quand la  variation  obtenue
       est plus élevée que celle estimée pour la méthode employée.  Hor  est  aussi  calculé  et  utilisé  pour  déterminer  la  précision  intra
       laboratoire en utilisant l' approximation suivante:

      RSDr(Horwitz) = 0,66 RSDR(Horwitz) (ce qui suppose l'approximation suivante: r = 0,66 R)

      Le tableau 3 montre les différences entre les mesures obtenues par les laboratoires utilisant le densimètre électronique et ceux  utilisant
       la balance hydrostatique. En dehors de l'échantillon 2000/3 qui a un titre alcoométrique très faible et pour lequel  les  deux  techniques
       montrent une faible reproductibilité, une bonne concordance est observée pour les autres échantillons.

4.B.2.6.4.  Paramètres de fidélité

      Le tableau 4 montre la moyenne générale des paramètres de fidélité calculée à partir de tous les  essais  mensuels  qui  se  sont  déroulés
       entre janvier 1999 et mai 2001.

      En particulier:

      Répétabilité (r) = 0,074 (% vol) pour la balance hydrostatique et 0,061 (% vol) pour la densimétrie électronique

      Reproductibilité (R) = 0,229 (% vol) pour la balance hydrostatique et 0,174 (% vol) pour la densimétrie électronique.

4.B.2.7.    Conclusion

      Les résultats concernant la détermination du titre alcoométrique d'une large gamme de vins montrent que  les  mesures  effectuées  avec  la
       balance hydrostatique sont concordantes avec celles effectuées par densimétrie électronique utilisant un résonateur de flexion et que  les
       valeurs des paramètres de validation sont proches pour les deux méthodes.

                                                              Légende des tableaux:

|— Moyenne                          |moyenne des données utilisée dans les analyses statistiques                             |
|— N                                |nombre total des groupes de données soumis                                              |
|— Nc                               |nombre de résultats exclus des analyses statistiques pour raison de non-conformité      |
|— Valeurs aberrantes               |nombre de résultats exclus des analyses statistiques après la détermination des valeurs |
|                                   |aberrantes par les tests de Cochran ou Grubbs                                           |
|— n1                               |nombre de résultats utilisés dans les analyses statistiques                             |
|— R                                |limite de répétabilité                                                                  |
|— Sr                               |écart type de répétabilité                                                              |
|— RSDr                             |écart type relatif de répétabilité (Sr × 100/Moyenne)                                   |
|— Hor                              |la valeur HORRAT pour la répétabilité est le RSD observé divisé par la valeur RSDr      |
|                                   |estimée par la formule de Horwitz utilisant l'approximation r = 0,66R                   |
|— R                                |limite de reproductibilité                                                              |
|— sR                               |écart type de reproductibilité                                                          |
|— HoR                              |la valeur HORRAT de reproductibilité est la valeur de RSDR observée divisé par le RSDR  |
|                                   |calculé à partir de HoR = RSDR(mesuré)/RSDR                                             |

                                                      Tableau 1: Balance hydrostatique (HB)

|                                                                                                                                                                                                        |Moyenne            |
|Écart type sur la différence                                                                                                                                                                            |0,036              |
|(*) L'essai 2000/3 n'est pas pris en compte.                                                                                                                                                                               |

                                                        Tableau 4: Paramètres de fidélité

|                                                     |Balance hydrostatique               |Densimétrie électronique                  |
|n1                                                   |441                                 |557                                       |
|variance relative de répétabilité                    |0,309                               |0,267                                     |
|R                                                    |0,074                               |0,061                                     |
|Sr                                                   |0,026                               |0,022                                     |
|variance relative de reproductibilité                |2,948                               |2,150                                     |
|R                                                    |0,229                               |0,174                                     |
|sR                                                   |0,082                               |0,062                                     |

                                            ê 355/2005 Art. 1, pt 2 et Annexe

4.C. Détermination du titre alcoométrique volumique des vins par densimétrie électronique utilisant un résonateur de flexion

4.C.1.      Méthode de mesure

4.C.1.1. Titre et introduction

      Le titre alcoométrique volumique (TAV) des vins doit être mesuré avant leur  commercialisation  notamment  pour  se  conformer  aux  règles
       d’étiquetage.

      Le titre alcoométrique volumique est défini au paragraphe 1 du présent chapitre.

4.C.1.2. Objet et domaine d’application

      La méthode de mesure décrite est la densimétrie électronique utilisant un résonateur de flexion.

      En référence aux dispositions réglementaires en vigueur, la température d’essai est arrêtée à 20°C.

4.C.1.3. Principe et définitions

      Le principe de la méthode consiste premièrement à distiller le vin  de  volume  à  volume.  La  méthode  de  distillation  est  décrite  au
       paragraphe 3 du présent chapitre. Cette distillation permet d’éliminer les substances non volatiles. Les homologues  de  l’éthanol,  ainsi
       que l’éthanol et les homologues de l’éthanol engagés dans les esters, sont compris dans le titre alcoométrique, car ils se retrouvent dans
       le distillat.

      Dans un deuxième temps on mesure la masse volumique du distillat obtenu. La masse volumique d’un  liquide  à  une  température  donnée  est
       égale au quotient de sa masse sur son volume:

      ρ = m / V, pour un vin, elle s’exprime en g/ml.

      Pour une solution hydroalcoolique telle qu’un distillat, en connaissant la température, des tables permettent de faire correspondre  à  une
       masse volumique un titre alcoométrique. Ce titre alcoométrique correspond à celui du vin (distillation de volume à volume).

      Dans la présente méthode, la masse volumique du distillat est mesurée par densimétrie électronique utilisant un résonateur de  flexion.  Le
       principe consiste à mesurer la période d’oscillation d’un tube contenant l’échantillon soumis à une excitation électromagnétique. La masse
       volumique est alors calculée, elle est liée à la période d’oscillation par la formule suivante:

                                                             [pic]((((((((((((((((1)

            ρ = masse volumique de l’échantillon

            T = période de vibration induite

            M = masse du tube vide

            C = constante de rappel

            V = volume de l’échantillon en vibration.

      Cette relation est de la forme, ρ = A T2 – B (2) ; il existe donc une relation linéaire entre la masse volumique et la  période  élevée  au
       carré. Les constantes A et B sont spécifiques de chaque oscillateur et sont estimées en mesurant la période de fluides de masse  volumique
       connue.

4.C.1.4. Réactifs et produits

4.C.1.4.1 Fluides de référence

      Deux fluides de référence servent à ajuster le densimètre. Les masses volumiques des fluides  de  référence  doivent  encadrer  celles  des
       distillats à mesurer. Un écart de masse volumique entre les fluides de référence supérieur à  0,01000  g/ml  est  recommandé.  Leur  masse
       volumique doit être connue avec une incertitude inférieure à +/- 0,00005 g/ml, pour une température de 20,00 +/- 0,05°C.

      Pour la mesure du TAV des vins par densimètre électronique les fluides de référence sont:

         – l’air sec (non pollué),

         – l’eau de classe 3 au minimum, répondant à la définition de la norme ISO 3696 :1987,

         – des solutions hydroalcooliques de masse volumique de référence,

         – des solutions raccordées aux étalons nationaux de viscosité inférieure à 2 mm2/s.

4.C.1.4.2 Produits de nettoyage et de séchage

         – détergents, acides,

         – solvants organiques : éthanol 96% vol., acétone pur.

4.C.1.5. Appareillage

4.C.1.5.1 Densimètre électronique à résonateur de flexion

      Le densimètre électronique comporte les éléments suivants :

         – une cellule de mesure comportant le tube de mesure et une enceinte thermostatée,

         – un système de mise en oscillation du tube et de mesure de la période d’oscillation,

         – une horloge,

         – un afficheur numérique et éventuellement un calculateur.

      Le densimètre est placé sur un support parfaitement stable et est isolé de toutes vibrations.

4.C.1.5.2 Contrôle de la température de la cellule de mesure

      Le tube de mesure est situé dans une enceinte thermostatée. La stabilité de la température doit être meilleure que +/- 0,02°C.

      Lorsque le densimètre le permet, il est nécessaire de contrôler la température de la cellule de mesure  car  celle-ci  influence  fortement
       les résultats des déterminations. La masse volumique d’une solution hydro alcoolique de TAV 10 % vol est de 0,98471  g/ml  à  20°C  et  de
       0,98447 g/ml à 21°C soit un écart de 0,00024 g/ml.

      La température d’essai est arrêtée à 20°C. La mesure de température au niveau de la cellule est réalisée avec un thermomètre de  résolution
       de moins de 0,01°C et raccordé aux étalons nationaux. Il doit garantir une mesure de température d’incertitude inférieure à +/- 0,07°C.

4.C.1.5.3 Calibration de l’appareil

      L’appareil doit être calibré avant sa première utilisation, puis tous les six mois  ou  si  la  vérification  ne  donne  pas  satisfaction.
       L’objectif est d’utiliser deux fluides de référence pour calculer les constantes A et B [voir relation (2)]. Pour la réalisation  pratique
       de la calibration se référer au mode d’emploi de l’appareil. En principe cette calibration est effectuée avec de l’air sec  (tenir  compte
       de la pression atmosphérique) et de l’eau très pure (bi distillée et/ou micro filtrée de résistivité très élevée > 18 M().

4.C.1.5.4 Vérification de la calibration

      Pour vérifier la calibration on mesure la masse volumique de fluides de référence.

      Chaque jour, une vérification de la masse volumique de l’air est réalisée. Un écart entre la masse volumique théorique  et  celle  observée
       supérieur à 0,00008 g/ml peut indiquer que le tube est encrassé. Il faut alors le nettoyer. Après nettoyage on vérifie à nouveau la  masse
       volumique de l’air, si cette vérification n’est pas concluante il faut ajuster l’appareil.

      On vérifie également la masse volumique de l’eau, si l’écart entre la masse volumique théorique et celle observée est supérieure à  0,00008
       g/ml, on ajuste l’appareil.

      Si la vérification de la température de la cellule est difficile il est possible de vérifier directement la masse volumique d’une  solution
       hydroalcoolique de TAV comparable à ceux des distillats analysés.

4.C.1.5.5 Contrôle

      Lorsque la différence entre la masse volumique théorique d'une solution de référence (connue avec une incertitude de +/- 0,00005  g/ml)  et
       la mesure est supérieure à 0,00008 g/ml il faut vérifier la température de la cellule.

4.C.1.6. Echantillonnage et préparation des échantillons

(voir point 3 «Obtention du distillat» du présent chapitre)

4.C.1.7. Mode opératoire

      Après obtention du distillat, on mesure sa masse volumique ou son TAV par densimétrie.

      L’opérateur s’assure de la stabilité de la température de la cellule de mesure. Le distillat dans la cellule  du  densimètre  ne  doit  pas
       contenir de bulles d’air et doit être homogène. Si l’on dispose d’un système d’éclairage qui  permet  de  vérifier  l’absence  de  bulles,
       l’éteindre rapidement après la vérification car la chaleur générée par la lampe influe sur la température de mesure.

      Si l’appareil ne donne que la période on calcule la masse volumique grâce aux constantes A et B (cf.  1.3).  Si  l’appareil  ne  donne  pas
       directement le TAV, connaissant la masse volumique on obtient ce TAV à l’aide des tables.

4.C.1.8 Expression des résultats

      Le titre alcoométrique volumique du vin est celui obtenu pour le distillat. Il est exprimé en “ % vol”.

      Si les conditions de température ne sont pas respectées, il est nécessaire de réaliser une correction pour l’exprimer à 20°C.  Le  résultat
       est donné avec deux décimales.

4.C.1.9 Remarques

      Le volume introduit  dans  la  cellule  doit  être  suffisamment  important  afin  d’éviter  une  éventuelle  contamination  provoquée  par
       l’échantillon précédent. Il est donc nécessaire de réaliser au moins deux déterminations. Si celles-ci ne donnent pas des résultats inclus
       dans la limite de répétabilité, une troisième détermination est nécessaire. Généralement les résultats des deux  dernières  déterminations
       sont homogènes et on élimine la première valeur.

4.C.1.10 Fidélité

      Pour des échantillons de TAV compris entre 4 et 18 % vol.

|Répétabilité (r)                     |=          |0,067 (% vol.),                                  |
|Reproductibilité (R)                 |=          |0,0454 + 0,0105 x TAV.                           |

4.C.2 Essai interlaboratoires. Fidélité et exactitude sur ajout

      Les caractéristiques de performance de la méthode qui sont indiquées au point  1.10  proviennent  d’un  essai  inter  laboratoires  réalisé
       conformément aux procédures établies au niveau international, sur 6 échantillons et par 11 laboratoires .

      Tous les détails et les calculs de répétabilité et de reproductibilité effectués dans cet  essai  sont  décrits  dans  le  chapitre  ‘TITRE
       ALCOOMETRIQUE VOLUMIQUE ’(point 4.B.2) du Recueil International des Méthodes d’Analyses de l’Organisation Internationale de la Vigne et du
       Vin – (édition 2004).

                                            ê 2676/90

5. MÉTHODES USUELLES

5.1. Aréométrie

5.1.1. Appareillage

5.1.1.1. Alcoomètre

       L'alcoomètre doit répondre aux spécifications pour les appareils de la classe I ou  de  la  classe  II  définies  dans  la  recommandation
           internationale no 44 «Alcoomètres et aréomètres pour l'alcool» de l'OIML.

5.1.1.2. Thermomètre gradué en degrés et 1/10e de degré de 0 à 40 °C, vérifié au 1/20e de degré près.

5.1.1.3. Éprouvette cylindrique de 36 mm de diamètre et 320 mm de hauteur tenue verticalement grâce à  un  support  à  vis  calantes.5.1.2.  Mode
       opératoire

       Verser le distillat (3.4) dans l'éprouvette  cylindrique.  Tenir  cette  éprouvette  bien  verticalement.  Introduire  le  thermomètre  et
           l'alcoomètre. La lecture du thermomètre est faite 1 minute après avoir agité pour réaliser l'égalité de température de  l'éprouvette,
           du thermomètre, de l'alcoomètre et du distillat. Retirer le thermomètre et lire le titre alcoométrique apparent  après  1  minute  de
           repos. Faire au moins trois lectures en s'aidant d'une loupe. Le titre apparent mesuré  à  t  °C  sera  corrigé  de  l'action  de  la
           température à l'aide de la table II.

       Il faut que la température du liquide soit peu différente de la température ambiante (5 °C de différence au plus).

6.    EXEMPLE DE CALCUL DU TITRE ALCOOMÉTRIQUE D'UN VIN

6.1.  Pycnométrie sur balance à deux plateaux

                                            ê 2676/90 (adapté)

6.1.1.      Les constantes du pycnomètre ont été déterminées et calculées comme il  est  indiqué  au  chapitre  1  «Masse  volumique  et  densité
       relative» Ö au point 6.1.1 Õ.

                                            ê 2676/90

6.1.2.      Pesée du pycnomètre plein de distillat

|                                                              |                    |Exemple numérique                     |
|Tare = pycnomètre + distillat à t °C + p″                     |t °C                |= 18,90 °C                            |
|                                                              |t °C corrigé        |= 18,70 °C                            |
|                                                              |p″                  |= 2,8074 g                            |

|p + m − p″ = masse du distillat à t °C                         |105,0698 − 2,8074 = 102,2624 g                              |

      Masse volumique apparente à t °C

|ρt = ((p + m − p″)/(volume du pycnomètre à 20 °C))            |ρ18,70 °C = ((102,2624)/(104,0229)) = 0,983076              |

6.1.3.      Calcul du titre alcoométrique

|Se reporter à la table des masses volumiques          |Sur la ligne 18 ° de la table des masses volumiques apparentes, la  |
|apparentes des mélanges hydroalcooliques à différentes|plus petite masse supérieure à la masse observée 0,983076 est       |
|températures, comme il est indiqué plus haut          |0,98398, dans la colonne 11 %                                       |
|                                                      |La masse volumique à 18 ° est:                                      |
|                                                      |(98307,6 + 0,7 × 22) 10−5 = 0,98323                                 |
|                                                      |0,98398 − 0,98323 = 0,00075                                         |
|                                                      |La partie décimale du degré alcoolique est 75/114 = 0,65            |
|                                                      |Le titre alcoométrique est: 11,65 % vol.                            |

6.2.  Pycnométrie sur balance monoplateau

                                            ê 2676/90 (adapté)

6.2.1 Les constantes du pycnomètre ont été déterminées et calculées au chapitre 1 «Masse volumique et densité relative» Ö au point Õ 6.2.1.

                                            ê 2676/90

6.2.2.      Pesée du pycnomètre plein de distillat

|Poids du flacon tare au moment de la détermination (en         |T1     |= 171,9178                                            |
|grammes):                                                      |       |                                                      |
|Pycnomètre plein de distillat à 20,50 °C (en grammes):         |P2     |= 167,8438                                            |
|Variation de la poussée de l'air:                              |dT     |= 171,9178 − 171,9160                                 |
|                                                               |       |= + 0,0018                                            |
|Masse du distillat à 20,50 °C:                                 |Lt     |= 167,8438 − (67,6695 + 0,0018)                       |
|                                                               |       |= 100,1725                                            |
|Masse volumique apparente du distillat:                        |ρ20,50 °C = ((100,1725)/(101,8194)) = 0,983825               |

6.2.3.      Calcul du titre alcoométrique

|Se reporter à la table des masses volumiques       |Sur la ligne 20 ° de la table des masses volumiques apparentes, la plus|
|apparentes des mélanges hydroalcooliques à         |petite masse supérieure à la masse observée 0,983825 est 0,98471, dans |
|différentes températures, comme il est indiqué plus|la colonne 10 %.                                                       |
|haut                                               |                                                                       |
|                                                   |La masse volumique à 20 °C est:                                        |
|                                                   |(98382,5 + 0,50 × 24) 10−5 = 0,983945                                  |
|                                                   |0,98471 − 0,983945 = 0,000765                                          |
|                                                   |La partie décimale du titre alcoom'trique est 76,5/119 = 0,64          |
|                                                   |Le titre alcoométrique est: 10,64 % vol.                               |

FORMULE PERMETTANT DE CALCULER LES TABLES ALCOOMÉTRIQUES DES MÉLANGES D'ALCOOL ÉTHYLIQUE ET D'EAU

La masse volumique «ρ», exprimée en kilogrammes par mètre cube (kg/m3) d'un mélange d'alcool éthylique et d'eau à la température t,  exprimée  en
degrés Celsius, est donnée par la formule suivante en fonction:

     – du titre massique p exprimé par un nombre décimal[11],

     – de la température t exprimée en degrés Celsius (E. I. P. T. 68),

     – des coefficients numériques ci-après:

La formule est valable pour les températures comprises entre −20 °C et +40 °C.

                                                                      [pic]

                                                      Coefficients numériques de la formule

|k     |Ak                                        |                                        |Bk                                          |
|      |kg/m3                                     |                                        |                                            |
|1     |9,982 012 300 · 102                       |                                        |− 2,061 851 3 · 10−1 kg/(m3 · °C)           |
|2     |− 1,929 769 495 · 102                     |                                        |− 5,268 254 2 · 10−3 kg/(m3 · °C2)          |
|3     |3,891 238 958 · 102                       |                                        |3,613 001 3 · 10−5 kg/(m3 · °C3)            |
|4     |− 1,668 103 923 · 103                     |                                        |− 3,895 770 2 · 10−7 kg/(m3 · °C4)          |
|5     |1,352 215 441 · 104                       |                                        |7,169 354 0 · 10−9 kg/(m3 · °C5)            |
|6     |− 8,829 278 388 · 104                     |                                        |− 9,973 923 1 · 10−11 kg/(m3 · °C6)         |
|7     |3,062 874 042 · 105                       |                                        |                                            |
|8     |− 6,138 381 234 · 105                     |                                        |                                            |
|9     |7,470 172 998 · 105                       |                                        |                                            |
|10    |− 5,478 461 354 · 105                     |                                        |                                            |
|11    |2,234 460 334 · 105                       |                                        |                                            |
|12    |− 3,903 285 426 · 104                     |                                        |                                            |

|k     |C1,k                                      |                                          |C2,k                                      |
|      |kg/(m3 · °C)                              |                                          |kg/(m3 · °C2)                             |
|1     |1,693 443 461 530 087 · 10−1              |                                          |− 1,193 013 005 057 010 · 10−2            |
|2     |− 1,046 914 743 455 169 · 101             |                                          |2,517 399 633 803 461 · 10−1              |
|3     |7,196 353 469 546 523 · 101               |                                          |− 2,170 575 700 536 993                   |
|4     |− 7,047 478 054 272 792 · 102             |                                          |1,353 034 988 843 029 · 101               |
|5     |3,924 090 430 035 045 · 103               |                                          |− 5,029 988 758 547 014 · 101             |
|6     |− 1,210 164 659 068 747 · 104             |                                          |1,096 355 666 577 570 · 102               |
|7     |2,248 646 550 400 788 · 104               |                                          |− 1,422 753 946 421 155 · 102             |
|8     |− 2,605 562 982 188 164 · 104             |                                          |1,080 435 942 856 230 · 102               |
|9     |1,852 373 922 069 467 · 104               |                                          |− 4,414 153 236 817 392 · 101             |
|10    |− 7,420 201 433 430 137 · 103             |                                          |7,442 971 530 188 783                     |
|11    |1,285 617 841 998 974 · 103               |                                          |                                          |

|k     |C3,k                                      |C4,k                                      |C5,k                                      |
|      |kg/(m3 · °C3)                             |kg/(m3 · °C4)                             |kg/(m3 · °C5)                             |
|1     |− 6,802 995 733 503 803 · 10−4            |4,075 376 675 622 027 · 10−6              |− 2,788 074 354 782 409 · 10−8            |
|2     |1,876 837 790 289 664 · 10−2              |− 8,763 058 573 471 110 · 10−6            |1,345 612 883 493 354 · 10−8              |
|3     |− 2,002 561 813 734 156 · 10−1            |6,515 031 360 099 368 · 10−6              |                                          |
|4     |1,022 992 966 719 220                     |− 1,515 784 836 987 210 · 10−6            |                                          |
|5     |− 2,895 696 483 903 638                   |                                          |                                          |
|6     |4,810 060 584 300 675                     |                                          |                                          |
|7     |− 4,672 147 440 794 683                   |                                          |                                          |
|8     |2,458 043 105 903 461                     |                                          |                                          |
|9     |− 5,411 227 621 436 812 · 10−1            |                                          |                                          |

                                                                     TABLE I

                                                    TITRE ALCOOMÉTRIQUE INTERNATIONAL À 20 °C

                            Table des masses volumiques apparentes des mélanges hydroalcooliques — Pycnomètre en pyrex

                                            Masses volumiques à t °, corrigées de la poussée de l'air

|t°      |Titre alcoométrique volumique en %                                                                                                                                                                                |
|        |0                                                                                                                                                                                                                 |
|        |0                                                                                                                                                                                                                 |
|        |10                                                                                                                                                                                                                |
|        |10                                                                                                                                                                                                                |
|        |20                                                                                                                                                                                                                |
|               |20                                                                                                                                                                                                         |
|               |0                                                                                                                                                                                                          |
|               |0                                                                                                                                                                                                          |
|               |14                                                                                                                                                                                                         |
|        |14                                                                                                                                                                                                                |
|        |0                                                                                                                                                                                                                 |
|        |0                                                                                                                                                                                                                 |
|        |10                                                                                                                                                                                                                |
|        |10                                                                                                                                                                                                                |
|        |20                                                                                                                                                                                                                |
|                    |20                                                                                                                  |
|                    |0                                                                                                                   |
|1,00                    |0                   |2,6                     |5,1                  |7,7                    |10,3                 |
|1                       |0,3                 |4                       |1,0                  |7                      |1,8                  |
|2                       |0,5                 |5                       |1,3                  |8                      |2,1                  |
|3                       |0,8                 |6                       |1,6                  |9                      |2,3                  |

5.    SUCRES RÉDUCTEURS

1.    DÉFINITION

      Les sucres réducteurs sont constitués par l'ensemble des sucres à fonction cétonique ou aldéhydique dosés par leur  action  réductrice  sur
       la solution cupro-alcaline.

2.    PRINCIPES DES MÉTHODES

2.1.  Défécation

2.1.1.      Méthode de référence: passage du vin neutralisé et désalcoolisé sur une colonne échangeuse d'anions sous forme acétate où ses  anions
       sont échangés par les ions acétiques, suivi de la défécation par l'acétate neutre de plomb.

2.1.2.      Méthodes usuelles: le vin est traité par l'un des réactifs suivants:

2.1.2.1.    Acétate neutre de plomb

2.1.2.2.    Hexacyanoferrate (II) de zinc

2.2.  Dosage

2.2.1.      Méthode unique: après avoir fait réagir le vin ou le moût déféqué sur une quantité déterminée  de  solution  cupro-alcaline,  l'excès
       d'ions cuivriques est dosé par iodométrie.

3.    DÉFÉCATION

      Le liquide dans lequel les sucres seront dosés doit présenter une teneur en sucres comprise entre 0,5 et 5 g/l.

      Si le vin est sec, il faut éviter de le diluer pendant la défécation; s'il est doux, il faut le diluer tout en le défécant,  de  manière  à
       amener la teneur en sucres entre ces limites, suivant le tableau ci-dessous.

|Dénomination                  |Teneur en sucres, en grammes  |Masse volumique comprise entre|Dilution à prévoir (%)        |
|                              |par litre, comprise entre     |                              |                              |
|Moûts et mistelles            |> 125                         |> 1,038                       |1                             |
|Vins doux vinés ou non        |25 et 125                     |1,005 et 1,038                |4                             |
|Vins moelleux                 |5 et 25                       |0,997 et 1,005                |20                            |
|Vins secs                     |< 5                           |< 0,997                       |pas de dilution               |

3.1.  Méthode de référence

3.1.1.      Réactifs

3.1.1.1.    Solution d'acide chlorhydrique (HCl), 1 M

3.1.1.2.    Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), 1 M

3.1.1.3.    Solution d'acide acétique (CH3 COOH), 4 M

3.1.1.4.    Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), 2 M

3.1.1.5.    Résine échangeuse d'anions [type Dowex 3 (20-50 mesh) ou résine équivalente].

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Préparation de la colonne de résine échangeuse d'anions. Au fond de la burette, placer un petit tampon  de  laine  de  verre  et  15 ml  de
       résine échangeuse d'anions ( Ö point Õ 3.1.1.5).

      Lors de la mise en service de la résine, faire subir à la résine deux cycles complets de régénération avec passages alternés de solution  M
       d'acide chlorhydrique (Ö point Õ 3.1.1.1) et d'hydroxyde de  sodium  (Ö point Õ  3.1.1.2).  Après  rinçage  avec  50 ml  d'eau  distillée,
       transvaser la résine dans un vase cylindrique, ajouter 50 ml d'une solution M d'acide acétique (Ö point Õ 3.1.1.3)  et  agiter  pendant  5
       minutes. Remplir à nouveau la burette et faire passer à travers la colonne 100 ml de solution M d'acide acétique (Ö point Õ 3.1.1.3).  (Il
       est préférable d'avoir un stock de la résine conservée dans un flacon rempli avec cette solution 4 M d'acide acétique). Laver  la  colonne
       avec de l'eau distillée jusqu'à ce que l'effluent soit neutre.

                                            ê 2676/90

      Régénération de la résine. Faire passer 150 ml d'une solution 2 M d'hydroxyde de sodium pour éliminer les acides et une  grande  partie  de
       la matière colorante fixée sur la résine. Rincer par 100 ml d'eau, faire passer 100 ml de solution 4 M d'acide acétique. Laver la  colonne
       jusqu'à ce que l'effluent soit neutre.

3.1.1.6.    Solution d'acétate neutre de plomb (approximativement saturée):

|Acétate neutre de plomb Pb (CH3 COO)2, 3 H2O                                         |250 g         |
|Eau très chaude q.s.p.                                                               |500 ml        |

      Agiter jusqu'à dissolution.

3.1.1.7.    Carbonate de calcium, Ca CO3

3.1.2.      Mode opératoire

3.1.2.1.    Vins secs

                                            ê 2676/90 (adapté)

      50 ml de vin placés dans un vase cylindrique de 10 à 12 cm de diamètre environ et additionné de ½ (n−0,5) ml d'une solution  M  d'hydroxyde
       de sodium (Ö point Õ 3.1.1.2) (n étant le volume d'une solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium utilisé pour le dosage de l'acidité totale sur
       10 ml de vin) sont évaporés sur un bain d'eau bouillante en envoyant un jet d'air chaud jusqu'à ce que le  liquide  soit  réduit  à  20 ml
       environ.

      Faire écouler ce liquide à travers une colonne de résine échangeuse d'anions sous forme  acétate  (Ö point Õ  3.1.1.5)  à  raison  de  3 ml
       toutes les 2 minutes. Recueillir l'effluent dans une fiole jaugée de 100 ml. Laver six fois  le  vase  et  la  colonne  avec  10 ml  d'eau
       distillée, ajouter en agitant 2,5 ml de solution saturée d'acétate  de  plomb  (Ö point Õ  3.1.1.6)  et  0,5 g  de  carbonate  de  calcium
       (Ö point Õ 3.1.1.7), agiter à plusieurs reprises et abandonner au moins 15 minutes; porter au trait de jauge avec de l'eau. Filtrer.

                                            ê 2676/90

      1 ml de ce filtrat correspond à 0,5 ml de vin.

3.1.2.2.    Moûts, mistelles, vins doux et vins moelleux

      Les dilutions ci-dessous sont données à titre indicatif.

       1)   Moûts et mistelles

            Diluer à 10 pour 100 le liquide à analyser, prélever 10 ml de cette dilution.

       2)   Vins doux, vinés ou non, dont la masse  volumique  est  comprise  entre  1,005  et  1,038.  Prélever  20 ml  de  liquide  à  analyser
           préalablement dilué à 20 pour 100.

       3)   Vins moelleux, dont la masse volumique est comprise entre 0,997 et 1,005. Prélever 20 ml de vin non dilué.

            Faire écouler le volume de vin ou de moût indiqué ci-dessus à travers une colonne d'échangeur d'anions sous forme acétate à raison de
           3 ml toutes les 2 minutes. Recueillir l'effluent dans une fiole jaugée de 100 ml, rincer la colonne avec de l'eau  jusqu'à  obtention
           de 90 ml environ d'effluent. Ajouter 0,5 g de carbonate de calcium, 1 ml d'acétate de plomb en solution saturée; agiter et laisser au
           repos pendant 15 minutes au moins en agitant de temps en temps; porter au trait de jauge avec de l'eau. Filtrer.

            En cas:

           1)    1 ml de filtrat correspond à 0,01 ml de moût ou de mistelle;

           2)    1 ml de filtrat correspond à 0,04 ml de vin doux;

           3)    1 ml de filtrat correspond à 0,20 ml de vin moelleux.

3.2. Méthodes usuelles

3.2.1. Défécation à l'acétate neutre de plomb

3.2.1.1. Réactifs

       Solution d'acétate neutre de plomb (approximativement saturée) (voir 3.1.1.6).Carbonate de calcium.

3.2.1.2. Mode opératoire

3.2.1.2.1. Vins secs

       50 ml de vin sont placés dans une fiole jaugée de 100 ml; ajouter ½ (n-0,5) ml de solution M d'hydroxyde de sodium (3.1.1.2), n  étant  le
           volume de solution 0,1 M utilisé pour doser l'acidité totale de 10 ml de vin. Ajouter en agitant 2,5 ml de solution saturée d'acétate
           de plomb (3.1.1.6) et 0,5 g de carbonate de calcium (3.1.1.7), agiter à plusieurs reprises et abandonner au moins 15 minutes;  porter
           au trait de jauge avec de l'eau. Filtrer.1 ml de filtrat correspond à 0,5 ml de vin.

3.2.1.2.2. Moûts, mistelles, vins doux et vins moelleux

       Dans une fiole jaugée de 100 ml, placer un volume de vin (ou de moûts ou de  mistelles)  ainsi  défini,  les  dilutions  ci-dessous  étant
           données à titre indicatifs:

       1) Moûts et mistellesDiluer à 10 pour 100 le liquide à analyser, prélever 10 ml de cette dilution.

       2) Vins doux, vinés on non, dont la masse volumique est comprise entre 1,005 et 1,038. Prélever 20 ml de liquide à analyser  préalablement
           dilué à 20 pour 100.

       3) Vins moelleux, dont la masse volumique est comprise entre 0,997 et 1,005. Prélever 20 ml de vin non dilué.Ajouter 0,5 g de carbonate de
           calcium, 60 ml d'eau environ et 0,5 ou 1 ou 2 ml d'acétate de plomb en solution saturée;  agiter  et  laisser  au  repos  pendant  15
           minutes au moins en agitant de temps en temps. Porter au trait de jauge avec de l'eau. Filtrer.

       En cas:1) 1 ml de filtrat correspond à 0,01 ml de moût ou de mistelle;2) 1 ml de filtrat correspond à 0,04 ml  de  vin  doux;3)  1  ml  de
           filtrat correspond à 0,20 ml de vin moelleux.3.2.2. Défécation par l'hexacyanoferrate (II) de zinc

       Ce procédé de défécation ne devra être utilisé que pour les vins blancs, les vins doux peu colorés et les moûts.

3.2.2.1. Réactifs

3.2.2.1.1. Solution I d'hexacyanoferrate (II) de potassium

       Hexacyanoferrate (II) de potassium [K4 Fe (CN)6, 3H2O] 150 g

       Eau q.s.p. 1000 ml

3.2.2.1.2. Solution II de sulfate de zincSulfate de zinc (Zn SO4, 7 H2O) 300 g

       Eau q.s.p. 1000 ml3.2.2.2. Mode opératoire

       Dans une fiole jaugée de 100 ml, placer un volume de vin (ou de moût ou de mistelle) ainsi défini, les dilutions ci-dessous étant  données
           à titre indicatif:

       1) Moûts et mistellesDiluer à 10 pour 100 le liquide à analyser, prélever 10 ml de cette dilution.

       2) Vins doux, vinés ou non, dont la masse volumique est comprise entre 1,005 et 1,038. Prélever 20 ml de liquide à analyser  préalablement
           dilué à 20 pour 100.

       3) Vins moelleux, dont la masse volumique est comprise entre 0,997 et 1,005. Prélever 20 ml de vin non dilué.

       4) Vins secsPrélever 50 ml de vin non dilué.Ajouter 5 ml de solution I d'hexacyanoferrate  (II)  de  potassium  (3.2.2.1.1)  et  5  ml  de
           solution II de sulfate de zinc (3.2.2.1.2). Mélanger. Porter au trait de jauge avec de l'eau. Attendre 10 minutes Filtrer.

       En cas:1) 1 ml de filtrat correspond à 0,01 ml de moût ou de mistelle;2) 1 ml de filtrat correspond à 0,04 ml  de  vin  doux;3)  1  ml  de
           filtrat correspond à 0,20 ml de vin moelleux;4) 1 ml de filtrat correspond à 0,50 ml de vin sec.

4.    DOSAGE

4.1.  Réactifs

4.1.1.      Solution cupro-alcaline

|Sulfate de cuivre pur (CuSO4, 5 H2O)                                              |25          |g        |
|Acide citrique (C6 H8 O7, H2O)                                                    |50          |g        |
|Carbonate de sodium cristallisé (Na2 CO3, 10 H2O)                                 |388         |g        |
|Eau q.s.p.                                                                        |1000        |ml       |

      Dissoudre le sulfate de cuivre dans 100 ml d'eau, l'acide citrique dans 300 ml d'eau et le carbonate de sodium  dans  300  à  400 ml  d'eau
       chaude. Mélanger la solution d'acide citrique et la solution de carbonate de sodium. Ajouter ensuite la solution de sulfate de  cuivre  et
       porter au litre.

4.1.2.      Solution d'iodure de potassium à 30 pour 100

|Iodure de potassium (KI)                                                           |30          |g       |
|Eau q.s.p.                                                                         |100         |ml      |

      Conserver en flacon de verre teinté.

4.1.3.      Acide sulfurique à 25 pour 100

|Acide sulfurique pur (H2SO4) ρ20 = 1,84 g/ml                                       |25          |g       |
|Eau q.s.p.                                                                         |100         |ml      |

      Verser l'acide dans l'eau, laisser refroidir et porter à 100 ml.

4.1.4.      Empois d'amidon à 5 g/l

      Délayer 5 g d'amidon dans 500 ml d'eau environ. Porter à ébullition en agitant et maintenir l'ébullition pendant 10 minutes. Ajouter  200 g
       de chlorure de sodium (NaCl). Porter à 1 l après refroidissement.

         – Thiosulfate de sodium solution 0,1 M

         – Solution de sucre interverti à 5 g/l:

            solution à utiliser pour vérifier la technique du dosage.

      Dans une fiole jaugée de 200 ml, placer

|Saccharose pur (C12H22O11)                                                         |4,75      |g         |
|Eau, environ                                                                       |100       |ml        |
|Acide chlorhydrique pur (HCl) ρ 20 = 1,16 − 1,19 g/ml)                             |5         |ml        |

      Plonger la fiole dans un bain d'eau à 60 °C pendant un temps suffisant pour que la température de la solution atteigne  50 °C,  température
       que l'on maintient durant 15 minutes. Abandonner ensuite la fiole au  refroidissement  spontané  durant  30  minutes  puis  refroidir  par
       immersion dans un bain d'eau froide. Transvaser dans une fiole jaugée de 1 l. Porter au litre. Cette solution se conserve bien  durant  un
       mois. Au moment de l'emploi neutraliser la  prise  d'essai  (cette  solution  est  approximativement  0,06 M  acide),  avec  une  solution
       d'hydroxyde de sodium.

4.2.  Mode opératoire

      Dans une fiole conique de 300 ml, placer 25 ml de solution cupro-alcaline, 15 ml d'eau et 10 ml de solution de  défécation.  Ce  volume  de
       solution sucrée ne doit pas contenir plus de 60 mg de sucre interverti.

      Ajouter quelques grains de pierre ponce. Adapter à la fiole un réfrigérant à reflux et porter à l'ébullition qui doit être  atteinte  en  2
       minutes. Maintenir l'ébullition pendant 10 minutes exactement.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Refroidir immédiatement sous un courant d'eau froide. Après refroidissement complet, ajouter 10 ml de solution d'iodure de potassium  à  30
       pour 100 (Ö point Õ 4.1.2), 25 ml d'acide sulfurique à 25 pour 100 (Ö point Õ 4.1.3) et 2 ml d'empois d'amidon (Ö point Õ 4.1.4).

      Titrer par la solution 0,1 M de thiosulfate de sodium ( Ö point Õ 4.1.5). Soit n le nombre de millilitres utilisés.

                                            ê 2676/90

      Par ailleurs, effectuer un dosage témoin dans lequel 10 ml d'eau distillée remplacent les 10 ml de solution sucrée. Soit n′  le  volume  de
       thiosulfate employé.

4.3.  Expression des résultats

4.3.1.      Calculs

      La quantité de sucre, exprimée en sucre interverti, contenue dans la prise d'essai, est donnée dans le  tableau  ci-après  en  fonction  du
       nombre n′ − n de millilitres de thiosulfate utilisés.

      Exprimer la teneur du vin en grammes de sucre interverti par litre avec une décimale en tenant compte des dilutions effectuées au cours  de
       la défécation et du volume de la prise d'essai.

4.3.2.      Répétabilité

       r    =     0,015 xj

       xi   =     concentration du sucre interverti en grammes par litre d'échantillon

4.3.3.      Reproductibilité

       R    =     0,058 xi

       xi   =     concentration du sucre interverti en grammes par litre d'échantillon

|Tableau de correspondance entre le volume de solution 0,1 M de thiosulfate de sodium:                                                  |
|(n′ − n) ml, et la quantité de sucres réducteurs en milligrammes                                                                       |
|Na2S2O3                 |Sucres réducteurs       |Diff.           |Na2S2O3                 |Sucres réducteurs         |Diff.            |
|(ml 0,1 M)              |(en milligrammes)       |                |(ml 0,1 M)              |(en milligrammes)         |                 |
|1                       |2,4                     |2,4             |13                      |33,0                      |2,7              |
|2                       |4,8                     |2,4             |14                      |35,7                      |2,8              |
|3                       |7,2                     |2,5             |15                      |38,5                      |2,8              |
|4                       |9,7                     |2,5             |16                      |41,3                      |2,9              |
|5                       |12,2                    |2,5             |17                      |44,2                      |2,9              |
|6                       |14,7                    |2,6             |18                      |47,2                      |2,9              |
|7                       |17,2                    |2,6             |19                      |50,0                      |3,0              |
|8                       |19,8                    |2,6             |20                      |53,0                      |3,0              |
|9                       |22,4                    |2,6             |21                      |56,0                      |3,1              |
|10                      |25,0                    |2,6             |22                      |59,1                      |3,1              |
|11                      |27,6                    |2,7             |23                      |62,2                      |                 |
|12                      |30,3                    |2,7             |                        |                          |                 |

6.    SACCHAROSE

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

      I. Méthode de recherche qualitative par chromatographie sur couche mince. Le saccharose est séparé des autres  sucres  par  chromatographie
       sur couche mince de cellulose et révélé par le réactif urée-acide chlorhydrique à l'étuve à 105 °C.

      II. Méthode de recherche et de dosage par chromatographie liquide haute performance.  Le  saccharose  est  séparé  sur  colonne  de  silice
       greffée alkylamine et détecté par réfractométrie. La quantification se fait par rapport  à  un  étalon  externe  analysé  dans  les  mêmes
       conditions.

      Remarques:

      L'authenticité d'un moût ou d'un vin peut être contrôlée en  appliquant  méthode  par  RMN  du  deutérium  décrite  pour  la  détection  de
       l'enrichissement des moûts, des moûts concentrés rectifiés et des vins.

      Pour la recherche et le dosage du saccharose la chromatographie en phase gazeuse décrite au  chapitre  42  point  f)  peut  également  être
       utilisée.

2.    MÉTHODE DE RECHERCHE QUALITATIVE PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

2.1.  Matériel

2.1.1.      Plaques pour chromatographie recouvertes d'une couche mince de cellulose

2.1.2.      Cuve à chromatographie

2.1.3.      Seringue micrométrique ou micropipette

2.1.4.      Étuve réglable à 105 °C ± 2 °C

2.2.  Réactifs

2.2.1.      Charbon décolorant

2.2.2.      Phase mobile: chlorure de méthylène — acide acétique (ρ 20 = 1,05 g/ml) — éthanol — méthanol-eau (50: 25: 9: 6: 10).

2.2.3.      Révélateur

|Urée                                                              |5         |g        |
|Acide chlorhydrique 2 M                                           |20        |ml       |
|Éthanol                                                           |100       |ml       |

2.2.4.      Solution de référence

|Glucose                                                          |35        |g         |
|Fructose                                                         |35        |g         |
|Saccharose                                                       |0,5       |g         |
|Eau q.s.p.                                                       |1000      |ml        |

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

      Lorsque le moût ou le vin est fortement coloré, le décolorer en le traitant par du charbon actif.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans le cas du moût concentré rectifié, utiliser la solution dont la teneur en sucres est de 25 pour 100 (m/m) (25°  Brix)  préparée  comme
       il est indiqué au chapitre «Détermination du pH», Ö au point Õ 4.1.2, et la diluer au quart en portant 25 ml à 100 ml dans un ballon jaugé
       avec de l'eau.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Obtention du chromatogramme

      À 2,5 cm du bord inférieur de la plaque déposer:

         – 10 µl de l'échantillon,

         – 10 µl de la solution de référence.

      Placer la plaque dans la cuve pour chromatographie saturée par les vapeurs de la phase mobile et laisser migrer le liquide jusqu'à 1 cm  du
       bord supérieur. Retirer la plaque et la sécher sous un courant d'air chaud. Répéter deux fois la  migration  en  séchant  chaque  fois  la
       plaque. Pulvériser uniformément la plaque avec 15 ml de révélateur et la maintenir à l'étuve à 105 °C pendant 5 minutes.

2.4.  Résultats

      Le saccharose et le fructose apparaissent sous forme de taches de couleur bleu foncé  sur  un  fond  blanc;  le  glucose  donne  une  tache
       verdâtre moins intense.

3.    MÉTHODE DE RECHERCHE ET DE DOSAGE PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE

      Les conditions chromatographiques ne sont données qu'à titre indicatif.

3.1.  Appareils

3.1.1.      Chromatographe en phase liquide haute performance équipé

       1)   d'un injecteur à boucle de 10 µl;

       2)   d'un détecteur, réfractomètre différentiel ou réfractomètre interféromètre;

       3)   d'une colonne de silice greffée alkylamine (25 mm de longueur et 4 mm de diamètre interne);

       4)   d'une précolonne remplie de la même phase;

       5)   d'un dispositif d'isolation ou de thermostatisation (30 °C) de l'ensemble précolonne-colonne;

       6)   d'un enregistreur, éventuellement, d'un intégrateur;

       7)   débit de la phase mobile: 1 ml/min.

3.1.2.      Dispositif de filtration sur membrane (0,45 µm)

3.2.  Réactifs

3.2.1.      Eau bidistillée

3.2.2.      Acétonitrile (CH3 CN) de qualité HPLC

3.2.3.      Phase mobile: acétonitrile-eau, préalablement filtrés sur membrane (0,45 µm), (80 — 20, v/v).

      Cette phase mobile doit être dégazée avant utilisation.

3.2.4.      Solution de référence: solution aqueuse de saccharose à 1,2 g/l. La filtrer sur membrane (0,45 µm).

3.3.  Mode opératoire

3.3.1.      Préparation de l'échantillon

         – Cas des vins et des moûts.

            Filtrer sur membrane (0,45 µm).

         – Cas des moûts concentrés rectifiés.

                                            ê 2676/90 (adapté)

            Utiliser la solution obtenue en diluant le moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v) comme il  est  indiqué  au  chapitre  «Acidité
           totale» Ö au point Õ 5.1.2 et la filtrer sur membrane (0,45 µm).

                                            ê 2676/90

3.3.2.      Détermination chromatographique

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Injecter successivement dans le chromatographe 10 µl de la solution de référence et 10 µl  de  l'échantillon  préparé  comme  indiqué  Ö au
       point Õ 3.3.1. Répéter ces injections dans le même ordre.

                                            ê 2676/90

      Enregistrer le chromatogramme.

      Le temps de rétention du saccharose est voisin de 10 minutes.

3.4.  Calculs

      Utiliser pour le calcul la moyenne des deux réponses pour la solution de référence et pour l'échantillon.

3.4.1.      Cas des vins et des moûts

      Calculer la teneur en grammes par litre.

3.4.2.      Cas des moûts concentrés rectifiés

      Soit C g/l, la teneur en saccharose de la solution de moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v).

      Teneur en saccharose en grammes par kilogramme de moût concentré rectifié: 2,5 · C

3.5.  Expression des résultats

      La teneur en saccharose des vins, des moûts et des moûts concentrés rectifiés est exprimée en grammes par  litre  (vins  et  moûts)  et  en
       grammes par kilogramme (moûts concentrés rectifiés) avec une décimale.

7.    GLUCOSE ET FRUCTOSE

1.    DÉFINITION

      Le glucose et le fructose peuvent être dosés individuellement  par  une  méthode  enzymatique,  en  vue  seulement  du  calcul  du  rapport
       glucose/fructose.

2.    PRINCIPE

      Le glucose et le fructose sont  phosphorylés  par  l'adénosine-triphosphate  (ATP)  au  cours  d'une  réaction  enzymatique  catalysée  par
       l'hexokinase (HK) et donnent du glucose-6-phosphate (G6P) et du fructose-6-phosphate (F6P):

      glucose + ATP[pic]G6P + ADP

      fructose + ATP[pic]F6P + ADP

      Dans un premier temps le glucose-6-phosphate est oxydé en gluconate-6-phosphate par le  nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate  (NADP)
       en présence de l'enzyme glucose-6-phosphate-déshydrogénase (G6PDH). La  quantité  de  nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate  réduite
       (NADPH) qui prend naissance correspond à la quantité de glucose-6-phosphate et donc à celle de glucose.

      G6P + NADP+[pic]Gluconate-6-phosphate + NADPH + H+

      C'est le nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate réduit qui est dosé d'après son absorption à 340 nm.

      Lorsque cette réaction est terminée, le fructose-6-phosphate est transformé sous l'action de la phosphoglucose-isomérase (PGI) en  glucose-
       6-phosphate

      F6P[pic]G6P

      Le glucose-6-phosphate réagit à nouveau avec le nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate pour  donner  du  gluconate-6-phosphate  et  du
       nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate réduit; celui-ci sera dosé.

3.    APPAREIL

         – Spectrophotomètre permettant d'effectuer la mesure à 340 nm, maximum d'absorption du NADPH. S'agissant de mesures  absolues  (pas  de
           gamme d'étalonnage, mais référence au coefficient d'extinction du NADPH), les échelles des longueurs d'onde  et  des  absorbances  de
           l'appareil doivent être contrôlées.

            À défaut, utiliser un spectrophotomètre à spectre discontinu permettant d'effectuer les mesures à 334 nm ou à 365 nm.

         – Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves à usage unique.

         – Pipettes pour test enzymatique de 0,02 — 0,05 — 0,1 — 0,2 ml.

4.    RÉACTIFS

4.1.  Solution 1: tampon (triéthanolamine 0,3 M; pH = 7,6; 4 10−3M en Mg2+): 11,2 g de chlorhydrate de triéthanolamine (C2H5)3N,  HCl)  et  0,2 g
       de Mg SO4, 7 H2O sont dissous dans 150 ml d'eau bidistillée, ajouter environ 4 ml de  solution  5 M  d'hydroxyde  de  sodium  (NaOH)  pour
       obtenir un pH égal à 7,6 et porter à 200 ml.

      Cette solution tampon peut se conserver 4 semaines à + 4° C.

4.2.  Solution 2: solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate (environ  11,5  10−3-M):  50 mg  de  nicotinamide-adénine-dinucléotide-
       phosphate disodique sont dissous dans 5 ml d'eau bidistillée.

      La solution se conserve à + 4° C durant 4 semaines.

4.3.   Solution  3:  solution  d'adénosine-5′-triphosphate  (environ  81  10−3M):  250 mg   d'adénosine-5′-triphosphate   disodique   et   250 mg
       d'hydrogénocarbonate de sodium Na H CO3 sont dissous dans 5 ml d'eau bidistillée.

      Cette solution se conserve pendant 4 semaines à + 4° C.

4.4.  Solution 4: Hexokinase/glucose-6-phosphate-déshydrogénase: mélanger 0,5 ml d'hexokinase (2 mg de protéine/ml soit 280 U/ml)  et  0,5 ml  de
       glucose-6-phosphate-déshydrogénase (1 mg de protéine par ml).

      La solution se conserve un an à + 4° C.

4.5.  Solution 5: Phosphoglucose-isomérase (2 mg de protéine par ml soit 700 U/ml). La suspension est utilisée sans dilution.

      La solution se conserve un an à + 4° C.

      Remarque:

      L'ensemble des réactifs nécessaires pour ce dosage est commercialisé.

5.    MODE OPÉRATOIRE

5.1.  Préparation de l'échantillon

      En fonction de la quantité estimée de glucose + fructose par litre, effectuer les dilutions suivantes:

|Mesure à 340 et 334 nm                    |365 nm              |Dilution avec l'eau              |Facteur F de dilution              |
|Jusqu'à 0,4 g/l                           |0,8 g/l             |—                                |—                                  |
|Jusqu'à 4,0 g/l                           |8,0 g/l             |1 + 9                            |10                                 |
|Jusqu'à 10,0 g/l                          |20,0 g/l            |1 + 24                           |25                                 |
|Jusqu'à 20,0 g/l                          |40,0 g/l            |1 + 49                           |50                                 |
|Jusqu'à 40,0 g/l                          |80,0 g/l            |1 + 99                           |100                                |
|Au-dessus de 40,0 g/l                     |80,0 g/l            |1 + 999                          |1000                               |

5.2.  Dosage

      Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, effectuer les mesures par rapport à l'air  (pas  de  cuve  dans  le  trajet
       optique) ou par rapport à l'eau.

      Température 20 à 25° C.

      Dans 2 cuves de 1 cm de trajet optique, introduire:

|                                                                 |Témoin          |Dosage         |
|Solution 1 (4.1) (ramenée à 20° C)                               |2,50 ml         |2,50 ml        |
|Solution 2 (4.2)                                                 |0,10 ml         |0,10 ml        |
|Solution 3 (4.3)                                                 |0,10 ml         |0,10 ml        |
|Échantillon à doser                                              |                |0,20 ml        |
|Eau bidistillée                                                  |0,20 ml         |               |

      Mélanger et après environ 3 minutes lire l'absorbance des solutions (A1). Déclencher la réaction en ajoutant:

|Solution 4 (4.4)                                                 |0,02 ml        |0,02 ml        |

      Mélanger; attendre 15 minutes; effectuer la mesure de l'absorbance et vérifier l'arrêt de la réaction après 2 minutes (A2).

      Ajouter immédiatement:

|Solution 5 (4.5)                                                 |0,02 ml        |0,02 ml        |

      Mélanger; effectuer la lecture au bout de 10 minutes; vérifier l'arrêt de la réaction après 2 minutes (A3).

      Déterminer les différences d'absorbance:

      A2 − A1 correspondant au glucose.

      A3 − A2 correspondant au fructose.

      Pour le témoin et le dosage.

      Déduire la différence d'absorbance du témoin (Δ AT) de celle du dosage (Δ AD) et établir:

      pour le glucose: Δ AG = Δ AD − Δ AT

      pour le fructose: Δ AF = Δ AD − Δ AT

      Remarque:

      Le temps nécessaire à l'action des enzymes peut varier d'un lot  à  l'autre.  Il  n'est  donné  ci-dessus  qu'à  titre  indicatif.  Il  est
       recommandé de le déterminer pour chaque lot.

5.3.  Expression des résultats

5.3.1.      Calcul

      La formule générale pour le calcul des concentrations est la suivante: C = ((V · PM)/(ε · d · v · 1000)) Δ A (g/l)

       V    =     volume du test (ml)

       v    =     volume de l'échantillon (ml)

       PM   =     masse moléculaire de la substance à doser

       d    =     trajet optique de la cuve (cm)

       Σ    =     coefficient d'absorption du NADPH à 340 nm = 6,3 (mmole.−1l · cm−1)

       V    =     2,92 ml pour le dosage du glucose

       V    =     2,94 ml pour le dosage du fructose

       v    =     0,20 ml

       PM   =     180

       d    =     1.

      On obtient:

      pour le glucose: Cg/l = 0,417 · Δ AG

      pour le fructose: Cg/l = 0,420 · Δ AF

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur F.

      Remarque:

      Si les mesures ont été faites aux longueurs d'onde 334 ou 365 nm, on obtient:

         – mesure à 334 nm: Σ = 6,2 (mmole−1 · l · cm−1)

            pour le glucose: Cg/l = 0,425 · Δ AG

            pour le fructose: Cg/l = 0,428 · Δ AF

         – mesure à 365 nm: Σ = 3,4 (mmole−1 · l · cm−1)

            pour le glucose: Cg/l = 0,773 · Δ AG

            pour le fructose: Cg/l = 0,778 · Δ AF

5.3.2.      Répétabilité (r)

       r    =     0,056 xi

5.3.3.      Reproductibilité (R)

       R    =     0,12 + 0,076 xi

       xi   =     teneur en glucose ou fructose en grammes par litre.

8.    DÉTECTION DE L'ENRICHISSEMENT DES MOÛTS DE RAISINS, DES MOÛTS DE RAISINS CONCENTRÉS, DES MOÛTS DE RAISINS CONCENTRÉS RECTIFIÉS ET DES  VINS
       PAR APPLICATION DE LA RÉSONANCE MAGNÉTIQUE NUCLÉAIRE DU DEUTÉRIUM

1.    DÉFINITION

      Les atomes de deutérium contenus dans les sucres et dans l'eau d'un moût de raisin vont  être  redistribués  après  fermentation  dans  les
       molécules I, II, III et IV du vin:

|CH2D CH2 OH               |CH3 CHD OH              |
|I                         |II                      |
|CH3 CH2 OD                |HOD                     |
|III                       |IV                      |

      L'addition de sucres exogènes (chaptalisation) avant la fermentation du moût se répercutera sur la redistribution du deutérium.

      Par comparaison avec les valeurs des paramètres relatifs à un vin témoin naturel de la même région, l'enrichissement avec un sucre  exogène
       se traduira par les variations suivantes:

|Paramètres                                    |(D/H)I            |(D/H)II           |(D/H)WQ           |R                 |
|Naturel                                       |[pic]             |[pic]             |[pic]             |[pic]             |
|Enrichi                                       |                  |                  |                  |                  |
|sucre de betterave                            |[pic]             |[pic]             |[pic]             |[pic]             |
|sucre de canne                                |[pic]             |[pic]             |[pic]             |[pic]             |
|sucre de maïs                                 |                  |                  |                  |                  |

|(D/H)I :           |rapport isotopique associé à la molécule I                                                             |
|(D/H)II :          |rapport isotopique associé à la molécule II                                                            |
|(D/H)WQ :          |rapport isotopique de l'eau du vin.                                                                    |

       R    =     2(D/H)II/(D/H)I, exprime la distribution relative du deutérium dans les molécules I et II; R est directement  mesuré  à  partir
                des intensités h des signaux et alors R = 3hII/hI.

      (D/H)I caractérise principalement l'espèce végétale qui a synthétisé le sucre et dans une mesure moindre la géographie du lieu  de  récolte
       (nature de l'eau utilisée au cours de la photosynthèse).

      (D/H)II représente la climatologie du lieu de production des raisins (nature de l'eau de pluie et conditions météorologiques) et  dans  une
       mesure moindre, la concentration en sucre du moût initial.

      (D/H)WQ représente la climatologie du lieu de production et la richesse en sucre du moût initial.

2.    PRINCIPE

      La détermination des paramètres définis ci-dessus [R, (D/H)I, (D/H)II], est effectuée par RMN du deutérium sur l'éthanol extrait du vin  ou
       des produits de fermentation du moût, du moût concentré, du moût  concentré  rectifié  obtenus  dans  des  conditions  données.  Elle  est
       éventuellement complétée par la détermination du rapport isotopique de l'eau extraite du vin, (D/H)WQ et par la détermination  du  rapport
       isotopique 13C/12C de l'éthanol.

3.    PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON POUR L'ANALYSE

3.1.  Extraction de l'éthanol et de l'eau du vin

      Remarque: Tout dispositif d'extraction de l'éthanol peut être utilisé à la condition qu'il permette de récupérer  entre  98  et  98,5 %  de
       l'alcool du vin en un distillat qui titre entre 92 et 93 % mas. (95 % vol.)

3.1.1.      Matériel et réactifs

         – Dispositif pour extraction de l'éthanol (figure 1) comportant:

              – chauffe-ballon électrique avec régulateur de tension,

              – ballon à rodage de 1 litre,

              – colonne Cadiot à bande tournante (mobile en téflon),

              – fioles coniques à rodage de 125 ml,

              – flacons à bouchon plastique de 125 et 60 ml.

         – Réactifs pour le dosage de l'eau selon la technique de Karl Fischer (par exemple Merck 9241 et 9243).

3.1.2.      Mode opératoire

3.1.2.1.    Déterminer le titre alcoométrique du vin à mieux que 0,05 % vol. près. Soit tv.

3.1.2.2.    Extraction de l'éthanol

      Introduire une prise d'essai homogène de 500 ml de vin de titre alcoométrique tv dans le ballon de l'appareil à distiller avec un  taux  de
       reflux constant voisin de 0,9. Mettre en place une fiole conique  rodée  de  125 ml  préalablement  tarée,  pour  recevoir  le  distillat.
       Recueillir le liquide bouillant entre 78,0 et 78,2° C, soit environ 40  à  60 ml.  Quand  la  température  dépasse  78,5°  C,  arrêter  le
       prélèvement pendant 5 minutes.

      Quand la température est revenue à 78° C, prélever à nouveau le distillat jusqu'à 78,5° C et répéter cette  opération  jusqu'à  ce  que  la
       température après arrêt du prélèvement et fonctionnement en circuit fermé ne redescende plus. La  distillation  complète  dure  environ  5
       heures. Cette façon de procéder permet de récupérer entre 98 et 98,5 % de l'alcool total du vin en un distillat qui titre entre 92 et 93 %
       mas. (95 % vol.), titre pour lequel les conditions RMN décrites au paragraphe 4 ont été établies.

      L'éthanol récupéré est pesé.

      Une prise d'essai homogène de 60 ml des queues de distillation est conservée dans un flacon de  60 ml  et  représente  l'eau  du  vin.  Son
       rapport isotopique sera éventuellement déterminé.

      Remarque:

      Si on dispose d'un spectromètre équipé d'une sonde de 10 mm (voir  paragraphe  4),  une  prise  d'essai  homogène  de  300 ml  de  vin  est
       suffisante.

3.1.2.3.    Détermination du titre alcoométrique de l'alcool extrait

      Sur une prise d'essai voisine de 0,5 ml d'alcool, de masse p exactement connue, la teneur en eau est déterminée  par  la  méthode  de  Karl
       Fischer, soit p′g.

                                                                      [pic]

                                                Figure 1 — Dispositif pour extraction de l'éthanol

      Le titre massique de l'éthanol est donné par

       tmD  =     ((p − p′)/(p)) × 100

3.2.  Fermentation des moûts, des moûts concentrés et des moûts concentrés rectifiés

3.2.1.      Matériel et réactifs

         – Acide tartrique.

         – Bacto Yeast Nitrogen, Base without amino acids DIFCO.

         – Levures sèches actives (Saccharomyces cerevisiae).

      Si l'on connaît le rapport isotopique de l'eau du moût, on peut réactiver les levures préalablement à l'ensemencement pendant  15  minutes,
       dans le minimum d'eau tiède (1 g dans 50 ml) non distillée, de rapport isotopique voisin de celui de l'eau du moût.

      Lorsqu'on ne connaît pas le rapport isotopique de l'eau du moût, il est préférable de l'ensemencer directement.

      La quantité de levures sèches à mettre en œuvre est de l'ordre de 1 g soit environ 1010 cellules pour 1 l de moût.

      Récipient pour la fermentation d'une capacité de 1,5 l muni d'un dispositif permettant d'opérer à l'abri  de  l'air  et  de  condenser  les
       vapeurs d'alcool car aucune perte d'éthanol pendant la fermentation ne doit être tolérée. Le taux de conversion des sucres fermentescibles
       en éthanol doit être supérieur à 98 %.

3.2.2.      Mode opératoire

3.2.2.1.    Cas des moûts

         – Moûts frais

            Placer 1 l de moût, dont la concentration en sucres fermentescibles a été déterminée préalablement, dans le récipient prévu  pour  la
           fermentation. Ajouter 1 g de levures sèches préalablement réactivées. Mettre en place le dispositif permettant d'opérer à  l'abri  de
           l'air. Conduire la fermentation à une température voisine de 20 °C jusqu'à  épuisement  des  sucres.  Après  détermination  du  titre
           alcoométrique du produit de la fermentation et calcul du taux de conversion des sucres en alcool, le liquide fermenté est  centrifugé
           et soumis à la distillation pour extraire l'éthanol.

         – Moûts mutés au dioxyde de soufre

            Désulfiter un volume de moût un peu supérieur à 1 l (1,2 l) par barbotage d'un courant d'azote dans le moût porté au bain-marie à 70-
           80 °C sous reflux jusqu'à ce que la teneur en dioxyde de soufre total soit inférieure à  200 mg/l.  Veiller  à  ne  provoquer  aucune
           concentration du moût par évaporation de l'eau en utilisant un réfrigérant efficace.

            Placer 1 l de moût désulfité dans le récipient pour fermentation et continuer comme il est indiqué pour les moûts frais.

            Remarque:

            Si l'on a utilisé du métabisulfite de potassium pour sulfiter le moût, il est nécessaire d'additionner ce dernier d'acide  sulfurique
           préalablement au désulfitage à raison de 0,25 ml d'acide sulfurique concentré (ρ20 = 1,84 g/ml) par gramme de  métabisulfite  utilisé
           par litre de moût.

3.2.2.2.    Cas des moûts concentrés

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans le récipient pour fermentation, placer un volume V ml de moût concentré contenant une quantité connue de  sucres,  voisine  de  170 g.
       Compléter le volume à 1 l avec (1 000 − V) ml d'eau de même rapport isotopique que l'eau du moût naturel témoin.  Ensemencer  ainsi  qu'il
       est indiqué Ö au point Õ 3.2.1. Ajouter 3 g de Bacto Yeast Nitrogen Base without amino  acids  DIFCO.  Homogénéiser  et  poursuivre  comme
       précédemment.

                                            ê 2676/90

3.2.2.3.    Cas du moût de raisins concentré rectifié

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Procéder comme il est décrit Ö au point Õ 3.2.2.2 en complétant au volume de 1 l avec (1 000 − V) ml d'eau de même rapport  isotopique  que
       l'eau du moût naturel témoin dans lequel 3 g d'acide tartrique auront été dissous.

                                            ê 2676/90

      Remarque:

      Réserver un volume de 50 ml d'échantillon de moût ou de moût désulfité ou de moût concentré  ou  de  moût  concentré  rectifié  en  vue  de
       l'extraction éventuelle de l'eau et de la détermination de son rapport isotopique (D/H)WQ.

      L'extraction de l'eau des moûts pourra se faire très simplement par distillation azéotropique au toluène.

3.3.  Préparation de l'échantillon d'alcool pour la mesure RMN

3.3.1.      Réactifs

      N,N-tétraméthylurée (TMU); utiliser un échantillon de TMU de référence de rapport isotopique D/H donné et contrôlé.  Cet  échantillon  peut
       être fourni par:

            Direction générale «Science, recherche et développement»

            Bureau communautaire de référence

            Rue de la Loi 200

            B-1049 Bruxelles

3.3.2.      Mode opératoire

         – Sonde RMN de 15 mm de diamètre:

                                            ê 2676/90 (adapté)

            Dans un flacon préalablement taré, prélever 7 ml d'alcool obtenu Ö comme indiqué au point Õ 3.1.2 et le peser à 0,1 mg près, soit mA;
           introduire ensuite 3 ml du standard interne (TMU) et peser à 0,1 mg près, soit mst. Homogénéiser le mélange par agitation.

                                            ê 2676/90

         – Sonde RMN de 10 mm de diamètre:

            3,2 ml d'alcool et 1,3 ml de TMU suffisent.

            Selon les types de spectromètre et de sonde utilisés (voir paragraphe 4), ajouter une quantité suffisante  d'hexafluorobenzène  comme
           substance de stabilisation champ-fréquence (lock).

|Spectromètre                                        |Sonde                                                                  |
|                                                    |10 mm                              |15 mm                              |
|7,05 T                                              |150 µl                             |200 µl                             |
|9,4 T                                               |35 µl                              |50 µl                              |

3.4.  Préparation de l'échantillon d'eau pour la mesure RMN, en vue de la détermination éventuelle de son rapport isotopique

3.4.1.      Réactifs

      N,N-tétraméthylurée (TMU): voir 3.3.1.

3.4.2.      Mode opératoire

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un flacon taré, introduire 3 ml d'eau obtenue Ö comme indiqué au point Õ 3.1.2 ou Ö au point Õ 3.2  (remarque);  les  peser  à  0,1 mg
       près, soit m′E; ajouter ensuite 4 ml du standard interne (TMU) et les peser à 0,1 mg près, soit m′st. Homogénéiser par agitation.

                                            ê 2676/90

      Remarque:

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Si le laboratoire dispose d'un spectromètre de masse de rapports isotopiques cette mesure pourra être effectuée  sur  cet  instrument  pour
       alléger la charge du spectromètre RMN. Il est en effet nécessaire d'étalonner le rapport TIV ( Ö point Õ 5.2) pour chaque  série  de  vins
       étudiée.

                                            ê 2676/90

4.    ENREGISTREMENT DES SPECTRES RMN 2H DE L'ALCOOL ET DE L'EAU

      Détermination des paramètres isotopiques.

4.1   Matériel

         – Spectromètre RMN muni d'une sonde spécifique «deutérium» accordée à la fréquence o caractéristique, du champ Bo  (par  exemple,  pour
           Bo = 7,05 T, o = 46,05 MHz et pour Bo = 9,4 T, o = 61,4 MHz), possédant  un  canal  de  découplage  du  proton  B2  et  un  canal  de
           stabilisation champ-fréquence (lock) à la fréquence du fluor. Larésolution, mesurée sur le spectre,  transformé  sans  multiplication
           exponentielle (c'est-à-dire LB = 0) (figure 2b) et exprimée par la largeur à mi-hauteur des signaux méthyle et méthylène de l'éthanol
           et du signal méthyle du TMU, doit être inférieure à 0,5 Hz.

            La sensibilité mesurée avec un facteur de multiplication exponentielle LB égal à 2 (figure 2a) doit être supérieure ou  égale  à  150
           pour le signal méthyle de l'éthanol titrant 95 % vol. (93,5 % mas.) Dans ces conditions, l'intervalle de confiance sur la  mesure  de
           la hauteur du signal, calculé pour une probabilité de 97,5 % (test à 1 aile) et 10 répétitions du spectre, est de 0,35 %.

         – Changeur automatique d'échantillons (éventuellement).

         – Logiciel de traitement des données.

         – Tubes échantillons de 15 mm ou de 10 mm selon les performances du spectromètre.

4.2.  Réglages du spectromètre et vérifications

4.2.1.      Réglages

      Procéder aux réglages habituels d'homogénéité et de sensibilité selon les indications du constructeur.

4.2.2.      Vérification de la validité des réglages

      Utiliser des éthanols de référence, désignés par les lettres C (éthanol de canne à sucre), V (éthanol de vin) et B (éthanol de  betterave),
       présentant une teneur isotopique différente mais précisément étalonnés. Ils signifient C: alcool de canne à sucre ou de maïs; V: alcool de
       vin et B: alcool de betterave. Ces échantillons sont fournis par le Bureau communautaire de référence.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      En suivant le mode opératoire décrit Ö au point Õ 4.3, déterminer les valeurs isotopiques de ces alcools en notant Cmes, Vmes,  Bmes  (voir
       Ö point Õ 5.3).

      Les comparer aux valeurs de référence correspondantes, désignées en notant en indice supérieur Cst, Bst, Vst (voir Ö point Õ 5.3).

                                                                      [pic]

                                            ê 2676/90

                                                                    Figure 2a

                                          Spectre RMN 2H d'un éthanol de vin avec une référence interne

                                                            (TMU: N,N-tétraméthylurée)

                                                                      [pic]

                                                                    Figure 2b

      Spectre 2H de l'éthanol réalisé dans les mêmes conditions que celles de la figure 2a, mais sans multiplication exponentielle (LB = 0)

      L'écart-type de répétabilité obtenu sur la moyenne de 10 répétitions de chaque spectre doit être inférieur à  0,01  sur  le  rapport  R  et
       inférieur à 0,3 ppm sur (D/H)I et sur (D/H)II.

      Les valeurs moyennes obtenues pour les différents paramètres isotopiques [R, (D/H)I,  (D/H)II]  doivent  se  situer  dans  l'écart-type  de
       répétabilité correspondant, donné, pour ces paramètres pour les trois alcools de référence, par  le  Bureau  communautaire  de  référence.
       Sinon reprendre les réglages.

4.3   Conditions d'acquisition des spectres RMN

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer l'échantillon d'alcool préparé Ö comme indiqué au point Õ 3.3 (ou l'échantillon d'eau, préparé Ö comme indiqué au point Õ 3.4)  dans
       un tube de 15 ou de 10 mm et l'introduire dans la sonde.

                                            ê 2676/90

      Les conditions d'acquisition des spectres RMN sont les suivantes:

         – La température de la sonde (par exemple 302 K) doit être constante.

         – Temps d'acquisition de 6,8 s au moins pour 1200 Hz de largeur spectrale (Mémoire 16 K), c'est-à-dire environ  20 ppm  à  61.4 MHz  ou
           27 ppm à 46.1 MHz.

         – Impulsion: 90°.

         – Régler le délai à l'acquisition; sa valeur doit être du même ordre de grandeur que le temps d'échantillonnage (dwell time).

         – Détection en quadrature: fixer l' «offset» 01 entre les signaux — OD et — CHD pour l'éthanol et entre les signaux  HOD  et  TMU  pour
           l'eau.

         – Déterminer la valeur de l'offset de découplage 02 à partir du spectre protonique mesuré par la  bobine  de  découplage  sur  le  même
           tube. Un bon découplage est obtenu quand 02 est situé au milieu de l'intervalle de fréquence existant entre les groupes CH3- et -CH2-
           . Utiliser le mode de découplage par large bande.

      Effectuer pour chaque spectre un nombre NS d'accumulations suffisant pour obtenir le rapport signal-sur-bruit donné en  paragraphe  4-1  et
       répéter NE = 10 fois cette série de NS accumulations. Les valeurs de NS dépendent des types de spectromètre et  de  sonde  utilisés  (voir
       paragraphe 4) et on choisira par exemple:

|Spectromètre                                    |Sonde                                                                    |
|                                                |10 mm                               |15 mm                               |
|7,05 T                                          |NS = 304                            |NS = 200                            |
|9,04 T                                          |NS = 200                            |NS = 128                            |

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Cas de l'éthanol

      Pour chacun des 10 spectres (voir spectre RMN de l'éthanol, figure 2a), déterminer:

         – R = 3 ((hII)/(hI)) = 3 · ((hauteur du signal II (CH3 CHD OH))/(hauteur du signal I (CH2D CH2OH)))

         – (D/H)I = 1,5866 · TI · ((mst)/(mA)) · (((D/H)st)/(tmD))

         – (D/H)II = 2,3799 · TII · ((mst)/(mA)) · (((D/H)st)/(tmD))

      avec

         – TI = ((hauteur du signal I (CH2D CH2 OH))/(hauteur du signal du standard interne (TMU)))

         – TII = ((hauteur du signal II (CH3T CHD OH))/(hauteur du signal du standard interne (TMU)))

                                            ê 2676/90 (adapté)

         – CH3CHDOH mst et mA voir Ö point Õ 3.3.2.

         – tmD voir Ö point Õ 3.1.2.3.

                                            ê 2676/90

         – (D/H)st = rapport isotopique du standard interne (TMU) indiqué sur le flacon fourni par le Bureau communautaire de référence.

      L'utilisation des hauteurs de signaux au lieu des surfaces mesurables avec moins de précision suppose des largeurs de raies  à  mi-hauteurs
       égales ce qui est une approximation raisonnable (figure 2b).

5.2.  Cas de l'eau

      Quand le rapport isotopique de l'eau est déterminé par RMN, à partir du mélange eau-TMU, on utilise la relation suivante:

         – (D/H)WQ = 0,9306 · TIV · ((m′st)/(m′E)) · (D/H)st

      avec

         – TIV = ((Surface du signal (HOD) de l'eau extraite du vin)/(Surface du signal du standard interne (TMU)))

                                            ê 2676/90 (adapté)

         – m′st et m′E voir Ö point Õ 3.4.2.

                                            ê 2676/90

         – (D/H)st = rapport isotopique du standard interne (TMU) indiqué sur le flacon fourni par le Bureau communautaire de référence (BCR).

5.3.  Pour chacun des paramètres isotopiques, calculer la moyenne des 10 déterminations et l'intervalle de confiance.

      Un logiciel optionnel (par exemple RMN-FINS) adaptable sur le calculateur du spectromètre permet d'effectuer ces calculs en ligne.

      Remarque:

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Si, après le réglage du spectromètre, il y a  un  écart  systématique  entre  les  valeurs  moyennes  obtenues  pour  les  caractéristiques
       isotopiques des alcools de référence ( Ö point Õ 4.2.2) et les valeurs indiquées par le Bureau communautaire de référence, à  l'écart-type
       près, on pourra appliquer la correction suivante pour retrouver la vraie valeur d'un échantillon X quelconque.

                                            ê 2676/90

      L'interpolation sera effectuée en prenant les valeurs des échantillons de référence qui encadrent celle de l'échantillon X.

      Soit (D/H)iXmes la valeur mesurée et (D/H)iXcorr la valeur corrigée, on a:

      (D/H)iXcorr = (D/H)iBst + α [(D/H)iXmes − (D/H)iBmes]

      avec α = (((D/H)iVst − (D/H)iBst)/((D/H)iVmes − (D/H)iBmes))

      Exemple:

      Échantillons de référence fournis et étalonnés par le Bureau communautaire de référence:

      (D/H)IVst = 102,0 ppm (D/H)IBst = 91,95 ppm

      Échantillons de référence mesurés par le laboratoire:

      (D/H)IVmes = 102,8 ppm (D/H)IBmes = 93,0 ppm

      Échantillon suspect non corrigé:

      (D/H)IXmes = 100,2 ppm

      On calcule α = 1,0255 et (D/H)IXcorr = 99,3 ppm

6.    INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

      Comparer la valeur RX obtenue pour le rapport R de l'échantillon suspect aux rapports obtenus pour les vins  témoins.  Si  RX  s'écarte  de
       plus de 2 écarts-type de la valeur moyenne RT obtenue pour les vins témoins, il y a présomption d'adultération.

6.1.  Enrichissement par du sucre de betterave ou du sucre de canne ou du glucose de maïs

6.1.1.      Cas de vins

      RX supérieur à RT: présomption d'addition de sucre de betterave.

      RX inférieur à RT: présomption d'addition de sucre de canne ou de sucre de maïs.

      Noter que (D/H) IIX et (D/H)WQX sont augmentés.

      Examiner (D/H) IX. Il y a présomption de:

         – Enrichissement au sucre de betterave:

            (D/H)IX de l'échantillon suspect est inférieur à (D/H)IT, valeur moyenne obtenue avec les échantillons témoins, de plus de  1  écart-
           type.

         – Enrichissement au sucre de canne ou au sucre de maïs:

            (D/H)IX es supérieur à (D/H)IT, de plus de 1 écart-type.

         – Calcul de l'enrichissement, E, exprimé en % vol. d'éthanol:

              – Cas d'un enrichissement au sucre de betterave:

            E % vol. = tV(((D/H)IT − (D/H)IX)/((D/H)IT − (D/H)IB))

            (D/H)IB − rapport isotopique pour le site I de l'alcool de betterave: (D/H)IB = 92.5[13].

                tV     =     titre alcoométrique du vin analysé (X)

              – Cas d'un enrichissement au sucre de canne ou de maïs:

|E % vol.       |=   |tV(((D/H)IX− (D/H)IT)/((D/H)IC− (D/H)IT))                                             |
|(D/H)IC        |=   |rapport isotopique pour le site I de l'alcool de canne à sucre ou de maïs: (D/H)IC    |
|               |    |= 110.5[14].                                                                          |

                tV     =     titre alcoométrique du vin analysé (X).

6.1.2.      Cas des moûts, des moûts concentrés et des moûts concentrés rectifiés

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Les valeurs des paramètres isotopiques de l'alcool extrait comme indiqué Ö au point Õ 3.1 du produit fermenté  obtenu  (3.2)  à  partir  du
       moût, du moût, concentré et du moût concentré rectifié sont examinés selon les prescriptions données Ö au point Õ  6  «Interprétation  des
       résultats», point 6.1.1, comparativement à l'alcool extrait du produit de fermentation des moûts naturels témoins.

                                            ê 2676/90

      L'enrichissement, E % vol., exprime le volume d'alcool apporté au produit fermenté. Connaissant la dilution éventuelle effectuée  avant  la
       fermentation (moûts concentrés et moûts concentrés rectifiés), en admettant que 16,83 g de sucre donnent 1 % vol.  d'alcool,  calculer  la
       quantité en masse de sucre ajouté par litre de moût, de moût concentré ou de moût concentré rectifié.

6.2.  Enrichissement par un mélange de sucre de betterave et de sucre de canne ou de glucose de maïs

      Les rapports isotopiques (D/H)I et R sont moins modifiés que dans le cas de l'enrichissement avec 1 seul type de sucre.

      (D/H)II est augmenté ainsi que (D/H)WQ.

      La confirmation de ces additions peut être faite par la détermination du rapport 13C/12C de l'éthanol par spectrométrie masse;  ce  rapport
       est augmenté dans ce cas.

9.    CENDRES

1.    DÉFINITION

      On appelle cendres l'ensemble des produits de l'incinération du résidu d'évaporation du vin, conduite de façon à obtenir  la  totalité  des
       cations (ammonium exclu) sous forme de carbonates et autres sels minéraux anhydres.

2.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Incinération de l'extrait du vin conduite entre 500 °C et 550 °C jusqu'à combustion complète du carbone.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Bain d'eau à 100 °C.

3.2.  Balance sensible au 1/10e de milligramme.

3.3.  Plaque chauffante ou évaporateur à infra-rouge.

3.4.  Four électrique à régulation de température.

3.5.  Dessiccateur.

3.6.  Capsule de platine de 70 mm de diamètre et de 25 mm de hauteur à fond plat.

4.    MODE OPÉRATOIRE

      Placer 20 ml de vin dans la capsule de platine préalablement tarée (Po g). Évaporer sur bain d'eau à 100 °C,  chauffer  le  résidu  sur  la
       plaque chauffante à 200 °C ou sous l'évaporateur à infra-rouge jusqu'à carbonisation. Lorsque le résidu n'émet plus de vapeur,  placer  la
       capsule dans le four électrique porté à 525 °C ± 25 °C. Après 15 minutes de carbonisation, retirer la capsule du four, ajouter 5 ml  d'eau
       distillée que l'on évapore ensuite sur le bain d'eau ou sous l'évaporateur à infra-rouge et  chauffer  à  nouveau  à  525 °C  pendant  une
       dizaine de minutes.

      Si la combustion des particules carbonées n'est pas totale, recommencer les opérations de lavage des  particules  carbonées,  d'évaporation
       de l'eau et d'incinération.

      Pour les vins riches en sucres,  il  est  commode  d'ajouter  à  l'extrait  quelques  gouttes  d'huile  végétale  pure  avant  la  première
       incinération, pour empêcher le débordement du contenu.

      Après refroidissement dans le dessicateur, la capsule est pesée, soit P1 g.

      Le poids de cendres correspondant à la prise d'essai (20 ml) est: p = (P1 − Po) g.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      Mode de calcul

      Le poids P des cendres exprimé en grammes par litre avec 2 décimales sera: P = 50 · p

10.   ALCALINITÉ DES CENDRES

1.    DÉFINITION

      On appelle alcalinité des cendres la somme des cations, autres que l'ammonium, combinés aux acides organiques du vin.

2.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Titrimétrie en présence de méthylorange sur les cendres solubilisées à chaud par un excès connu d'acide titré.

3.    RÉACTIFS ET MATÉRIEL

3.1.  Solution 0,05 M d'acide sulfurique (H2SO4)

3.2.  Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (NaOH)

3.3.  Solution de méthylorange à 0,1 g pour 100 ml dans l'eau distillée

3.4.  Bain d'eau à 100 °C.

4.    MODE OPÉRATOIRE

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans la capsule de platine contenant les cendres de 20 ml de vin ajouter 10 ml de solution 0,05 M d'acide sulfurique (3.1); la  placer  sur
       un bain d'eau à 100 °C pendant 15 minutes environ, en écrasant le résidu avec une baguette de verre pour activer la  dissolution.  Ajouter
       ensuite II gouttes de solution de méthylorange et titrer l'excès d'acide  sulfurique  par  la  solution  0,1 M  d'hydroxyde  de  sodium  (
       Ö point Õ 3.2) jusqu'à virage au jaune de l'indicateur.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      Mode de calcul

      L'alcalinité des cendres exprimée en milliéquivalents par litre, avec 1 décimale sera:

      A = 5 (10−n)

       n    =     nombre de millilitres d'hydroxyde de sodium 0,1 M.

11.   CHLORURES

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Les chlorures sont dosés directement dans le vin par potentiométrie en utilisant l'électrode Ag/AgCl.

2.    APPAREILLAGE

2.1.  pH mètre millivoltmètre gradué au moins de 2 en 2 mV.

2.2.  Agitateur magnétique.

2.3.  Électrode Ag/AgCl, avec une solution saturée de nitrate de potassium comme électrolyte.

2.4.  Microburette graduée au 1/100e de ml.

2.5.  Chronomètre.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Solution étalon de chlorures; 2,1027 g de chlorure de potassium, KCl (max. 0,005 % Br), desséchés avant l'emploi  par  conservation  durant
       quelques jours dans un dessiccateur, sont dissous dans de l'eau distillée; porter au litre: 1 ml de cette solution contient 1 mg de Cl−.

3.2.  Solution titrée de nitrate d'argent: 4,7912 g de nitrate d'argent, AgNO3, pour analyse, sont dissous et portés au litre dans  une  solution
       alcoolique à 10 pour 100 (v/v): 1 ml de cette solution correspond à 1 mg de Cl−.

3.3.  Acide nitrique pur au moins à 65 pour 100 (ρ20 = 1,40 g/ml).

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  5,0 ml de solution étalon de chlorures sont introduits dans un vase cylindrique de 150 ml placé  sur  un  agitateur  magnétique,  dilués  à
       100 ml environ avec de l'eau distillée et acidifiés avec 1,0 ml d'acide nitrique à 65 pour 100 au minimum. Après plongée  de  l'électrode,
       titrer en ajoutant à la microburette la solution titrée de nitrate d'argent, l'agitation étant  modérée.  Les  additions  effectuées  sont
       d'abord de 1,00 ml pour les quatre premiers millilitres, lire les valeurs en millivolts correspondantes. Puis ajouter  les  2 ml  suivants
       par fractions de 0,20 ml. Enfin reprendre les additions par fractions de 1 ml jusqu'à ce qu'on ait versé  10 ml  au  total.  Après  chaque
       addition attendre environ 30 secondes avant d'effectuer la lecture des millivolts correspondants.  Porter  les  valeurs  obtenues  sur  un
       papier millimétré, en fonction des millilitres de solution titrée correspondants et déterminer le potentiel du point équivalent d'après le
       point singulier de la courbe obtenue.

4.2.  5 ml de la solution étalon de chlorures sont introduits dans un vase cylindrique de 150 ml ainsi que 95 ml d'eau distillée et 1 ml  d'acide
       nitrique à 65 pour 100 au minimum. Plonger l'électrode et titrer en agitant jusqu'à obtention du  potentiel  du  point  équivalent.  Cette
       détermination est répétée jusqu'à ce que l'on ait obtenu une bonne concordance des résultats. Il faut effectuer ce contrôle  avant  chaque
       série de dosages de chlorures dans les échantillons.

                                            ê 2676/90 (adapté)

4.3.  50 ml de vin à analyser sont introduits dans un vase cylindrique de 150 ml. Ajouter 50 ml d'eau distillée et 1 ml  d'acide  nitrique  à  au
       moins 65 pour 100 et titrer suivant le procédé indiqué Ö au point Õ 4.2.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Calculs

      Si n représente le nombre de millilitres de solution titrée de nitrate d'argent, la teneur en chlorure du liquide étudié est:

|20 × n                |exprimée en milligrammes de Cl par litre;                                                            |
|0,5633 × n            |exprimée en milliéquivalents par litre;                                                              |
|32,9 × n              |exprimée en milligrammes de chlorure de sodium par litre.                                            |

5.2.  Répétabilité (r)

       r    =     1,2 mg de Cl par litre

       r    =     0,03 mé/l

       r    =     2,0 mg NaCl/l.

5.3.  Reproductibilité (R)

       R    =     4,1 mg de Cl par litre

       R    =     0,12 mé/l

       R    =     6,8 mg NaCl/l.

6.    Remarque: Dosage très précis

      On se réfère à la courbe de titration complète obtenue au cours du dosage du liquide étudié par la solution de nitrate d'argent.

       a)   Placer 50 ml de vin à analyser dans un vase cylindrique de 150 ml. Ajouter 50 ml d'eau distillée et 1 ml d'acide nitrique à au  moins
           65 pour 100. Titrer au moyen de la solution de nitrate d'argent, en procédant à des additions de 0,5 ml pour lesquelles on relève  le
           potentiel en millivolts correspondant. Déduire de ce  premier  titrage  le  volume  approximatif  de  solution  de  nitrate  d'argent
           nécessaire.

       b)   Recommencer le dosage dans les mêmes conditions. Procéder tout d'abord à des additions de 0,5 ml de solution titrante jusqu'à ce  que
           le volume versé soit inférieur de 1,5 à 2 ml au volume déterminé en a). Procéder alors à  des  additions  de  0,2 ml;  continuer  les
           affusions au-delà du point équivalent approximativement repéré, d'une manière symétrique, par addition de 0,2 ml, puis de 0,5 ml.

      Le point final du dosage et le volume de solution de nitrate d'argent exactement consommé est obtenu:

         – soit en traçant la courbe et en déterminant le point équivalent;

         – soit par le calcul:

                                                     V = V′ + Δ Vi ((ΔΔ E1)/(ΔΔ E1 + ΔΔ E2))

            avec

|V           |=   |volume de solution titrée au point équivalent;                                                   |
|V′          |=   |volume de solution titrée avant le plus grand saut de potentiel.                                 |
|Δ Vi        |=   |volume constant des fractions de solution titrée ajouté, soit 0,2 ml;                            |
|ΔΔ E1       |=   |différence de potentiel seconde avant la plus grande variation du potentiel;                     |
|ΔΔ E2       |=   |différence de potentiel seconde après la plus grande variation du potentiel.                     |

      Exemple:

|Volume de solution titrée de AgNO3   |Potentiel E en mV           |Différence Δ E              |Différence seconde ΔΔ E     |
|0                                    |204                         |                            |                            |
|                                     |                            |4                           |                            |
|0,2                                  |208                         |                            |0                           |
|                                     |                            |4                           |                            |
|0,4                                  |212                         |                            |2                           |
|                                     |                            |6                           |                            |
|0,6                                  |218                         |                            |0                           |
|                                     |                            |6                           |                            |
|0,8                                  |224                         |                            |0                           |
|                                     |                            |6                           |                            |
|1,0                                  |230                         |                            |2                           |
|                                     |                            |8                           |                            |
|1,2                                  |238                         |                            |4                           |
|                                     |                            |12                          |                            |
|1,4                                  |250                         |                            |10                          |
|                                     |                            |22                          |                            |
|1,6                                  |272                         |                            |22                          |
|                                     |                            |44                          |                            |
|1,8                                  |316                         |                            |10                          |
|                                     |                            |34                          |                            |
|2,0                                  |350                         |                            |8                           |
|                                     |                            |26                          |                            |
|2,2                                  |376                         |                            |6                           |
|                                     |                            |20                          |                            |
|2,4                                  |396                         |                            |                            |

      Dans cet exemple, le point final du titrage se situe entre 1,6 et 1,8 ml: car c'est dans cet intervalle qu'apparaît le plus grand  saut  de
       potentiel (Δ E = 44 mV). Le volume de solution titrée de nitrate d'argent consommé pour doser les chlorures dans la prise d'essai est: V =
       1,6 + 0,2 ((22)/(22 + 10)) = 1,74 ml.

12.   SULFATES

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de référence

      Précipitation du sulfate de baryum et pesée. Le phosphate de baryum précipité dans les mêmes  conditions  est  éliminé  par  un  lavage  du
       précipité à l'acide chlorhydrique.

      Dans le cas des moûts ou des vins riches en dioxyde de soufre, un désulfitage préalable par ébullition à l'abri de l'air est prescrit.

1.2.  Méthode rapide d'essai

      Classement des vins en plusieurs catégories par une méthode dite des limites, basée sur la précipitation du  sulfate  de  baryum  à  l'aide
       d'une solution titrée d'ion baryum.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Acide chlorhydrique en solution 2 M.

2.1.2.      Chlorure de baryum en solution à 200 g/l de BaCl2, 2H2O.

2.2.  Mode opératoire

2.2.1.      Cas général

      Introduire dans un tube à centrifugation de 50 ml, 40 ml d'échantillon à analyser; ajouter  2 ml  d'acide  chlorhydrique  2 M  et  2 ml  de
       solution de chlorure de baryum à 200 g/l; agiter avec une baguette de verre; rincer la baguette avec un peu d'eau distillée et  abandonner
       au repos pendant 5 minutes. Centrifuger pendant 5 minutes, puis décanter avec précaution le liquide surnageant.

      Laver ensuite le précipité de sulfate de baryum en procédant de la façon suivante: ajouter  10 ml  d'acide  chlorhydrique  2 M,  mettre  le
       précipité en suspension et centrifuger pendant 5 minutes. Séparer avec précaution le liquide surnageant. Répéter deux fois  le  lavage  du
       précipité dans les mêmes conditions avec 15 ml d'eau distillée chaque fois.

      Transvaser quantitativement en rinçant, avec de l'eau distillée, le précipité dans une capsule de platine tarée et la placer  sur  un  bain
       d'eau à 100 °C jusqu'à évaporation à sec. Le précipité desséché est calciné plusieurs fois brièvement sur flamme  jusqu'à  obtention  d'un
       résidu blanc. Laisser refroidir dans un dessicateur et peser.

      Soit m la masse en milligrammes de sulfate de baryum obtenue.

2.2.2.      Cas particulier: moûts sulfités et vin à teneur élevée en dioxyde de soufre

      Procéder au préalable à l'élimination du dioxyde de soufre.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une fiole conique de 500 ml, munie d'une ampoule à robinet et d'un  tube  de  dégagement,  introduire  25 ml  d'eau  et  1 ml  d'acide
       chlorhydrique pur (ρ20 = 1,15 — 1,18 g/ml). Faire bouillir cette solution pour chasser l'air et introduire 100 ml de vin par  l'ampoule  à
       robinet, tout en maintenant l'ébullition. Poursuivre l'ébullition jusqu'à ce que le volume de liquide contenu dans la fiole  conique  soit
       réduit à environ 75 ml et le transvaser quantitativement, après refroidissement dans une fiole jaugée de 100 ml.  Compléter  au  trait  de
       jauge avec de l'eau. Procéder au dosage des sulfates sur une prise d'essai de 40 ml, comme il est indiqué Ö au point Õ 2.2.1.

                                            ê 2676/90

2.3.  Expression des résultats

2.3.1.      Calculs

      La teneur en sulfates, exprimée en milligrammes par litre de sulfate de potassium, K2SO4, est:

      18,67 × m

      La teneur du moût ou du vin en sulfates est exprimée en milligrammes par litre de sulfate de potassium, sans décimale.

2.3.2.      Répétabilité

      jusqu'à 1 000 mg/l: r = 27 mg/l

      environ 1 500 mg/l: r = 41 mg/l

2.3.3.      Reproductibilité

      jusqu'à 1 000 mg/l: R = 51 mg/l

      environ 1 500 mg/l: R = 81 mg/l

13.   ACIDITÉ TOTALE

1.    DÉFINITION

      L'acidité totale est la somme des acidités titrables lorsqu'on amène le pH à 7 par addition d'une solution alcaline titrée.

      Le dioxyde de carbone n'est pas compris dans l'acidité totale.

2.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Titrage potentiométrique ou titrage en présence de bleu de bromothymol comme indicateur de fin de réaction par comparaison à un  étalon  de
       coloration.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Solution tampon pH 7,0:

      Phosphate monopotassique KH2PO4: 107,3 g

      Solution M d'hydroxyde de sodium (NaOH): 500 ml

      Eau q.s.p.: 1 000 ml.

      Les solutions tampons de référence du commerce peuvent également être utilisées.

3.2.  Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (NaOH).

3.3.  Solution de bleu de bromothymol à 4 g/l.

|Bleu de bromothymol (C27H28Br2O5S) …………..                                   |4          |g        |
|Alcool neutre 96 % vol. ………………………….                                         |200        |ml       |
|Après solubilisation ajouter:                                               |           |         |
|Eau sans CO2 ……………………………………..                                               |200        |ml       |
|Solution M d'hydroxyde de sodium                                            |           |         |
|q.s.p. coloration bleu-vert (pH 7) ………………...                                |7,5        |ml       |
|Eau q.s.p. …………………………………………                                                 |1000       |ml       |

4.    APPAREILLAGE

4.1.  Trompe à vide à eau.

4.2.  Fiole à vide de 500 ml.

4.3.  Potentiomètre à échelle étalonnée en unités pH et électrodes. L'électrode de verre doit être conservée dans  l'eau  distillée.  L'électrode
       au calomel-chlorure de potassium saturé doit être conservée dans une solution saturée de chlorure de potassium. Une électrode combinée est
       le plus souvent employée, la conserver dans l'eau distillée.

4.4.  Vases cylindriques de 50 ml de capacité (cas des vins) et de 100 ml de capacité (cas des moûts concentrés rectifiés).

5.    MODE OPÉRATOIRE

5.1.  Préparation de l'échantillon

5.1.1.      Cas des vins

      Élimination du dioxyde de carbone. Placer environ 50 ml de vin dans une fiole à vide, agiter et en même temps faire le vide au moyen de  la
       trompe à vide à eau. L'agitation doit durer 1 à 2 minutes.

5.1.2.      Cas des moûts concentrés rectifiés

      Introduire 200 g de moût concentré rectifié  exactement  pesé  dans  un  ballon  jaugé  de  500 ml.  Compléter  au  trait  avec  de  l'eau.
       Homogénéiser.

5.2.  Titrage potentiométrique

5.2.1.      Étalonnage du pH mètre

      L'étalonnage du pH mètre s'effectue à 20 °C en suivant les indications données pour l'appareil utilisé avec la solution tampon de  pH  7,00
       à 20 °C.

5.2.2.      Technique d'une mesure

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un vase cylindrique (Ö point Õ 4.4) placer un volume d'échantillon, préparé comme indiqué Ö au point Õ 5.1, égal à 10 ml dans  le  cas
       du vin et à 50 ml dans le cas du moût concentré rectifié. Ajouter 10 ml environ d'eau distillée et verser à la burette la  solution  0,1 M
       d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 3.2) jusqu'à ce que le pH soit égal à 7 à 20 °C. L'addition de liqueur alcaline doit être faite lentement
       et la solution constamment agitée. Soit n le nombre de millilitres de NaOH 0,1 M versés.

                                            ê 2676/90

5.3.  Titrage avec indicateur (bleu de bromothymol)

5.3.1.      Essai préalable: établissement de l'étalon de coloration

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un vase cylindrique (Ö point Õ 4.4), placer 25 ml d'eau distillée bouillie, 1 ml de solution de bleu de  bromothymol  (Ö point Õ  3.3)
       et un volume préparé comme indiqué Ö au point Õ 5.1 égal à 10 ml dans le cas du vin et à 50 ml dans le cas  du  moût  concentré  rectifié.
       Ajouter la solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 3.2) jusqu'à obtention d'une coloration bleu-vert. Ajouter 5 ml de la  solution
       tampon pH 7 (3.1).

                                            ê 2676/90

5.3.2.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un vase cylindrique (Ö point Õ 4.4), placer 30 ml d'eau distillée bouillie, 1 ml de solution de bleu de bromothymol  (Ö point Õ  3.3),
       un volume d'échantillon préparé comme indiqué Ö au point Õ 5.1 égal à 10 ml dans le cas du vin et à 50 ml dans le cas  du  moût  concentré
       rectifié. Ajouter la solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 3.2) jusqu'à obtention d'une coloration identique à celle  obtenue  à
       l'essai préalable (Ö point Õ 5.3.1). Soit n le nombre de millilitres de solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M versés.

                                            ê 2676/90

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

6.1.  Mode de calcul

6.1.1.      Cas des vins

      L'acidité totale exprimée en milliéquivalents par litre sera:

      A = 10 n

      Elle est donnée avec 1 décimale.

      L'acidité totale exprimée en grammes d'acide tartrique par litre sera:

      A′ = 0,075 · A

      Elle est donnée avec 1 décimale.

6.1.2.      Cas des moûts concentrés rectifiés

         – Acidité totale exprimée en milliéquivalents par kilogramme de moût concentré rectifié: a = 5 · n

         – Acidité totale exprimée en milliéquivalents par kilogramme de sucres totaux:

            A = ((500 · n)/(P))

           P     =     teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux.

            Elle est exprimée avec 1 décimale.

6.2.  Répétabilité (r) pour le titrage avec indicateur

       r    =     0,9 me/l

       r    =     0,07 g d'acide tartrique/l

      pour les vins blancs, rosés et rouges.

6.3.  Reproductibilité (R) pour le titrage avec indicateur (5.3)

      Pour les vins blancs et rosés:

       R    =     3,6 me/l

       R    =     0,3 g d'acide tartrique/l.

      Pour les vins rouges:

       R    =     5,1 me/l

       R    =     0,4 g d'acide tartrique/l.

14.   ACIDITÉ VOLATILE

1.    DÉFINITION

      L'acidité volatile est constituée par les acides appartenant à la série acétique qui se trouvent dans le vin à l'état  libre  et  à  l'état
       salifié.

2.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Titrage des acides volatiles séparés du vin par entraînement à la vapeur d'eau et rectification des vapeurs.

      Le vin est au préalable débarrassé du dioxyde de carbone.

      L'acidité du dioxyde de soufre libre et du dioxyde de soufre combiné distillés dans ces conditions doit être  retranchée  de  l'acidité  du
       distillat.

      L'acidité de l'acide sorbique éventuellement ajouté au vin doit également être retranchée.

      Remarque:

      L'acide salicylique utilisé dans certains pays pour stabiliser les vins préalablement à l'analyse se retrouve en partie dans le  distillat.
       Il est nécessaire de le doser et de le défalquer de l'acidité. La méthode de dosage est donnée au paragraphe 7 de ce chapitre.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Acide tartrique cristallisé (C4H6O6)

3.2.  Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (NaOH)

3.3.  Solution de phénolphtaléine à 1 pour 100 dans l'alcool à 96 % vol. neutre

3.4.  Acide chlorhydrique (ρ20 = 1,18 à 1,19 g/ml) dilué 1/4 (v/v)

3.5.  Solution 0,005 M d'iode (I2)

3.6.  Iodure de potassium cristallisé (Kl)

3.7.  Empois d'amidon à 5 g/l:

      Délayer 5 g d'amidon dans 500 ml d'eau environ. Porter à ébullition en agitant et maintenir l'ébullition pendant 10 minutes; ajouter  200 g
       de chlorure de sodium. Porter au litre après refroidissement.

3.8.  Solution saturée de borate de sodium (Na2B4O7, 10 H2O), soit environ 55 g/l à 20° C.

4.    APPAREILLAGE

4.1.  Appareil à entraînement à la vapeur d'eau composé:

       1)   d'un générateur de vapeur d'eau; la vapeur d'eau produite doit être exempte de dioxyde de carbone;

       2)   d'un barboteur;

       3)   d'une colonne rectificatrice;

       4)   d'un réfrigérant.

            Cet appareil doit répondre aux trois essais suivants:

                                            ê 2676/90 (adapté)

           a)    placer dans le barboteur 20 ml d'eau bouillie; recueillir 250 ml de distillat et les additionner de 0,1 ml  de  solution  0,1 M
                d'hydroxyde de sodium ( Ö point Õ 3.2) et II gouttes de la solution de phénolphtaléine (Ö point Õ 3.3); la coloration  rose  doit
                être stable pendant au moins 10 secondes (vapeur d'eau exempte de dioxyde de carbone).

           b)    Placer dans le barboteur 20 ml d'une solution 0,1 M d'acide acétique. Recueillir 250 ml de distillat. Titrer avec  la  solution
                0,1 M d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 3.2). Le volume versé doit  être  au  moins  égal  à  19,9 ml.  (Acide  acétique  entraîné
                ≥ 99,5 %).

           c)    Placer dans le barboteur 20 ml d'une solution M d'acide lactique. Recueillir 250 ml de distillat et titrer  l'acidité  avec  la
                solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 3.2).

                                            ê 2676/90

            Le volume versé doit être inférieur ou égal à 1,0 ml (Acide lactique distillé ≤ 0,5 %).

            Tout appareil ou toute technique qui satisfait à ces essais constitue un appareil ou une technique officielle internationale.

4.2.  Trompe à vide d'eau.

4.3.  Fiole à vide.

5.    MODE OPÉRATOIRE

5.1.  Préparation de l'échantillon: élimination du dioxyde de carbone.

      Placer environ 50 ml de vin dans une fiole à vide; agiter et en même temps faire le vide au moyen de la trompe à  vide  d'eau.  L'agitation
       doit durer 1 à 2 minutes.

5.2.  Entraînement à la vapeur d'eau.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer 20 ml de vin décarboniqué comme indiqué Ö au point Õ 5.1 dans le barboteur.  Ajouter  0,5 g  environ  d'acide  tartrique  (Ö point Õ
       3.1). Recueillir au moins 250 ml de distillat.

                                            ê 2676/90

5.3.  Titrage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Titrer par la solution 0,1 M d'hydroxyde ( Ö point Õ 3.2) de sodium en présence de II gouttes de  solution  de  phénolphtaléine  (Ö point Õ
       3.3), soit n ml le volume versé.

      Ajouter IV gouttes d'acide chlorhydrique dilué 1/4 (3.4),  2 ml  d'empois  d'amidon  (Ö point Õ  3.7)  et  quelques  cristaux  d'iodure  de
       potassium (Ö point Õ 3.6). Titrer le dioxyde de soufre libre par la solution 0,005 M d'iode (Ö point Õ 3.5). Soit n′ ml le volume versé.

      Ajouter la solution saturée de borate de sodium (Ö point Õ 3.8) jusqu'à réapparition de la coloration rose. Titrer  le  dioxyde  de  soufre
       combiné par la solution 0,005 M d'iode (Ö point Õ 3.5). Soit n“ ml le volume versé.

                                            ê 2676/90

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

6.1.  Mode de calcul

      L'acidité volatile exprimée en milliéquivalents par litre avec 1 décimale sera:

      A = 5 (n − 0,1 n′ − 0,05 n″)

      L'acidité volatile exprimée en grammes d'acide acétique par litre avec 2 décimales sera:

      0,300 (n − 0,1 n′ − 0,05 n″)

6.2.  Répétabilité (r)

       r    =     0,7 me/l

       r    =     0,04 g d'acide acétique/l.

6.3.  Reproductibilité (R)

       R    =     1,3 me/l

       R    =     0,08 g d'acide acétique/l.

6.4.  Cas d'un vin additionné d'acide sorbique

      L'acide sorbique étant entraînable à la vapeur d'eau à 96 % pour un volume de distillat de 250 ml, son  acidité  doit  être  retranchée  de
       l'acidité volatile, sachant que 100 mg d'acide sorbique correspondent à une  acidité  de  0,89  milliéquivalent,  ou  de  0,053 g  d'acide
       acétique et connaissant la teneur en acide sorbique (mg/l) déterminée par ailleurs.

7.    DOSAGE DE L'ACIDE SALICYLIQUE ENTRAÎNÉ DANS LE DISTILLAT DE L'ACIDITÉ VOLATILE

7.1.  Principe

      Après le dosage de l'acidité volatile et la correction du dioxyde de soufre,  la  présence  d'acide  salicylique  est  caractérisée,  après
       acidification, par la coloration violette qui apparaît après addition d'un sel de fer III.

      Le dosage de l'acide salicylique entraîné dans le distillat avec l'acidité volatile est effectué sur un deuxième distillat de  volume  égal
       à celui sur lequel a été effectué le dosage de l'acidité volatile. Dans ce  distillat,  l'acide  salicylique  est  dosé  par  une  méthode
       colorimétrique de comparaison. Il est défalqué de l'acidité du distillat de l'acidité volatile.

7.2.  Réactifs

7.2.1.      Acide chlorhydrique (HCl) (ρ20 = 1,18 à 1,19 g/ml).

7.2.2.      Thiosulfate de sodium (Na2 S2 O3, 5 H2O) 0,1 M.

7.2.3.      Solution de sulfate de fer LI et d'ammonium [Fe2 (SO4)3, (NH4)2 SO4 · 24 H2O] à 10 p. 100 (m/v).

7.2.4.      Solution de salicylate de sodium 0,01 M. Solution contenant 1,60 g/l de salicylate de sodium (Na C7 H5 O3).

7.3.  Mode opératoire

7.3.1.      Caractérisation de l'acide salicylique dans le distillat de l'acidité volatile.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Immédiatement après le dosage de l'acidité volatile et la correction du dioxyde de soufre libre et combiné ajouter dans  la  fiole  conique
       0,5 ml d'acide chlorhydrique (Ö point Õ 7.2.1), 3 ml de la solution 0,1 M de thiosulfate  de  sodium  (Ö point Õ  7.2.2)  et  1 ml  de  la
       solution de sulfate de fer III et d'ammonium (Ö point Õ 7.2.3).

                                            ê 2676/90

      En présence d'acide salicylique, une coloration violette apparaît.

7.3.2.      Dosage de l'acide salicylique

      Sur la fiole conique précédente, indiquer par un trait repère le volume du distillat. Vider et rincer la fiole.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Soumettre à l'entraînement à la vapeur d'eau une nouvelle prise d'essai de 20 ml de vin et recueillir le distillat dans  la  fiole  conique
       jusqu'au trait repère. Ajouter 0,3 ml d'acide chlorhydrique pur ( Ö point Õ 7.2.1) et 1 ml de  la  solution  de  sulfate  de  fer  III  et
       d'ammonium (Ö point Õ 7.2.3). Le contenu de la fiole conique se colore en violet.

      Dans une fiole conique identique à celle portant le trait repère, placer de l'eau distillée jusqu'au même niveau que  celui  du  distillat.
       Ajouter 0,3 ml d'acide chlorhydrique pur (Ö point Õ 7.2.1), 1 ml de solution de sulfate de fer III et d'ammonium (Ö point Õ 7.2.3). Verser
       à la burette la solution de salicylate de sodium 0,01 M (Ö point Õ 7.2.4) jusqu'à obtention d'une coloration violette  de  même  intensité
       que celle de la fiole conique contenant le distillat de vin.

                                            ê 2676/90

      soit n′′′, le nombre de millilitres versés.

7.4.  Correction de l'acidité volatile

      Retrancher le volume 0,1 ·n′′′ du volume n ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M utilisé pour titrer l'acidité du  distillat  lors  du
       dosage de l'acidité volatile.

15.   ACIDITÉ FIXE

1.    PRINCIPE

      L'acidité fixe est déterminée par la différence entre l'acidité totale el l'acidité volatile.

2.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      L'acidité fixe est exprimée:

         – en milliéquivalents par litre,

         – en grammes d'acide tartrique par litre.

16.   ACIDE TARTRIQUE

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de référence

      L'acide tartrique, précipité sous forme de racémate de calcium, est dosé  pondéralement.  Ce  dosage  peut  être  complété  par  un  dosage
       volumétrique de comparaison. Les conditions de précipitation: pH, volume total mis en œuvre, concentration  des  ions  précipitants,  sont
       telles que la précipitation du racémate de calcium est totale tandis que le D (−)tartrate de calcium demeure en solution.

      Lorsque le vin a été additionné d'acide métatartrique, qui rend la précipitation du racémate de  calcium  incomplète,  il  devra  subir  un
       traitement préalable d'hydrolyse.

1.2.  Méthode usuelle

      L'acide tartrique, isolé à l'aide d'une colonne échangeuse d'anions, est dosé colorimétriquement dans l'éluat grâce à la  coloration  rouge
       qu'il donne avec l'acide vanadique. Cet éluat contient aussi les acides lactique et malique qui ne sont pas gênants.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Méthode pondérale

2.1.1.      Réactifs

2.1.1.1.    Solution d'acétate de calcium contenant 10 g/l de calcium:

|Carbonate de calcium: Ca CO3 ………………………………                                                   |25                 |g            |
|Acide acétique (CH3 COOH) (ρ20 = 1,05 g/ml) ……………..                                         |40                 |ml           |
|Eau q.s.p. …………………………………………………….                                                            |1                  |l            |

2.1.1.2.    Racémate de calcium cristallisé: CaC4O6H4, 4H2O:

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un vase cylindrique de 400 ml, introduire 20 ml d'une solution d'acide L(+) tartrique à 5 g/l, 20 ml d'une solution de  D(−)  tartrate
       d'ammonium à 6,126 g/l et 6 ml de la solution d'acétate de calcium à 10 g/l de calcium ( Ö point Õ 2.1.1.1).

                                            ê 2676/90

      Laisser précipiter pendant 2 heures. Recueillir le précipité sur un creuset filtrant de porosité no 4, le laver à  3  reprises  avec  30 ml
       environ d'eau distillée. Sécher à l'étuve à 70 °C jusqu'à poids constant. Avec les quantités de réactif mises en œuvre, on obtient environ
       340 mg de racémate de calcium cristallisé.

      Conserver en flacon bouché.

2.1.1.3.    Liqueur de précipitation (pH 4,75):

|Acide D(−) tartrique ……………………………………………..                                                                    |122 mg           |
|Hydroxyde d'ammonium (ρ20 = 0,97 g/ml) dilué à 25 % (v/v) …                                                 |0,3 ml           |
|Solution d'acétate de calcium à 10 g de calcium par litre ………                                               |8,8 ml           |
|Eau q.s.p. …………………………………………………………...                                                                        |1 000 ml         |

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre l'acide D(−) tartrique et ajouter l'hydroxyde d'ammonium;  porter  le  volume  à  900 ml  environ;  ajouter  8,8 ml  de  solution
       d'acétate de calcium ( Ö point Õ 2.1.1.1) et après mélange ajuster le pH à 4,75 avec l'acide acétique. Porter au litre.

                                            ê 2676/90

      Le racémate de calcium étant légèrement soluble dans cette liqueur, il convient d'y introduire 5 mg de racémate de calcium  par  litre,  de
       soumettre à l'agitation pendant 12 heures et de filtrer.

2.1.2.      Mode opératoire

2.1.2.1.    Cas des vins non additionnés d'acide métatartrique

      Dans un vase cylindrique de 600 ml, placer 500 ml de liqueur de précipitation et 10 ml de vin. Mélanger  et  amorcer  la  précipitation  en
       frottant les parois du vase avec l'extrémité d'une baguette de verre. Laisser précipiter pendant 12 heures (1 nuit).

      Filtrer sur creuset filtrant de porosité no 4, taré et disposé sur une fiole à vide propre, en entraînant le précipité. Rincer le  vase  où
       s'est effectuée la précipitation avec le filtrat et entraîner les dernières particules de précipité.

      Sécher à l'étuve à 70 °C jusqu'à poids constant. Peser: soit p le poids de racémate  de  calcium  CaC4O6H4  cristallisé  avec  4  molécules
       d'eau.

2.1.2.2.    Cas des vins additionnés d'acide métatartrique

      Lorsqu'on a affaire à un vin additionné d'acide métatartrique ou que l'on soupçonne cette addition, procéder à  l'hydrolyse  de  cet  acide
       dans les conditions suivantes.

      Dans une fiole conique de 50 ml, placer 10 ml de vin et 0,4 ml d'acide acétique pur (CH3 COOH, ρ20 = 1,05 g/ml). Fermer  la  fiole  par  un
       bouchon muni d'un crachoir et porter à ébullition pendant 30 minutes. Après refroidissement, transvaser le liquide contenu dans  la  fiole
       conique dans un vase cylindrique; rincer la fiole 2 fois par 5 ml d'eau et continuer comme il est indiqué  dans  le  mode  opératoire  ci-
       dessus.

      L'acide métatartrique est compté comme acide tartrique dans le résultat du dosage.

2.1.3.      Expression des résultats

      Une molécule de racémate de calcium correspond à une demi-molécule d'acide L(+) tartrique du vin.

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin, exprimée en milliéquivalents est égale à: 384,5 p.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin, exprimée en grammes d'acide tartrique, est égale à: 28,84 p.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin, exprimée en grammes de tartrate acide de potassium, est égale à: 36,15 p.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

2.2.  Dosage volumétrique de comparaison

2.2.1.      Réactifs

2.2.1.1.    Acide chlorhydrique (HCI) (ρ20 = 1,18 à 1,19 g/ml) dilué au 1/5 (v/v).

2.2.1.2.    Solution d'EDTA 0,05 M:

|EDTA (sel disodique bihydraté de l'acide éthylènediaminetétracétique (C10H14N2O8Na2, 2H2O)                  |18,61 g         |
|…………………………………………………                                                                                         |                |
|Eau distillée q.s.p. ……………………………………………………….                                                                 |1 000 ml        |

      2.2.1.3. Solution d'hydroxyde de sodium à 40 % (m/v):

|Hydroxyde de sodium (NaOH) ………………………………………….                                                                |40 g             |
|Eau distillée q.s.p. ……………………………………………………….                                                                 |100 ml           |

      2.2.1.4. Indicateur compléxométrique à l'acide calcone-carbonique: 1 % (m/m)

|Acide calcone carbonique ou acide 2-hydroxy-4-sulfo-1-naphtylazo-3-naphtoëque (C21H14N2O7S, 3H2O)           |1 g              |
|………………………………………                                                                                             |                 |
|Sulfate de sodium anhydre (Na2SO4) ……………………………………                                                           |100 g            |

2.2.2.      Mode opératoire

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Après pesée, replacer le creuset contenant le précipité de racémate de calcium sur la fiole à vide et dissoudre  le  précipité  avec  10 ml
       d'acide chlorhydrique dilué ( Ö point Õ 2.2.1.1). Laver le creuset filtrant avec 50 ml d'eau distillée.

      Ajouter 5 ml de solution d'hydroxyde de sodium 40 % (Ö point Õ 2.2.1.3) et 30 mg  environ  d'indicateur  (Ö point Õ  2.2.1.4).  Titrer  par
       l'EDTA 0,05 M (Ö point Õ 2.2.1.2). Soit n le nombre de millilitres versés.

                                            ê 2676/90

2.2.3.      Expression des résultats

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin, exprimée en milliéquivalents est égale à: 5 n.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin, exprimée en grammes d'acide tartrique est égale à: 0,375 n.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

      La quantité d'acide tartrique par litre de vin exprimée en grammes de tartrate acide de potassium est égale à: 0,470 n.

      Elle est donnée avec 1 décimale.

3. MÉTHODE USUELLE

3.1. Réactifs

3.1.1. Pour le traitement préliminaire du vin.

3.1.1.1. Acide acétique CH3 COOH (r20 = 1,05 g/ml) dilué à 30 pour 100 (v/v).

3.1.1.2.Échangeur d'anions de forte basicité (par exemple: échangeur d'anions  III  de  Merck  20-50  mesh)  sous  forme  acétate.  Préparer  une
       suspension de l'échangeur (100 g environ) dans 200 ml d'acide acétique dilué à 30 pour 100 (3.1.1.1). Laisser en contact durant  au  moins
       24 heures avant utilisation. Conserver l'échangeur dans l'acide acétique dilué à 30 pour 100 pour des dosages ultérieurs.

3.1.1.3. Acide acétique CH3COOH (r20 = 1,05 g/ml) dilué à 0,5 pour 100 (v/v).

3.1.1.4. Solution de sulfate de sodium à 7,1 g pour 100 ml (0,5 M).

       Dissoudre 71 g de sulfate de sodium (Na2SO4) anhydre  dans  de  l'eau  distillée  et  ajuster  au  volume  de  1  000  ml  avec  de  l'eau
           distillée.3.1.2.Pour le dosage de l'acide tartrique

3.1.2.1. Solution d'acétate de sodium (Na CH3COO) à 27 pour 100 (m/v).

       Dissoudre 270 g d'acétate de sodium anhydre, Na CH3 COO, dans de l'eau distillée et ajuster au volume de 1 000 ml.

3.1.2.2. Réactif vanadique.

       Dissoudre 10 g de métavanadate d'ammonium (NH4 VO3), dans 150 ml de solution d'hydroxyde de sodium M (3.1.2.10). Transvaser cette solution
           dans une fiole jaugée de 500 ml, ajouter 200 ml de la solution d'acétate de sodium à 27 pour 100 (3.1.2.1). Porter à 500 ml  avec  de
           l'eau distillée.

3.1.2.3. Solution de H2 SO4 1 M.

3.1.2.4. Solution de H2 SO4 0,5 M.

3.1.2.5. Solution de H2 SO4 0,05 M.

3.1.2.6. Solution d'acide périodique 0,05 M.

       Dans uns fiole jaugée de 1 000 ml, introduire 10,696 g de periodate de sodium, Na IO4,  50  ml  d'acide  sulfurique  0,5  M  (3.1.2.4)  et
           compléter à 1 000 ml avec de l'eau distillée.

3.1.2.7. Solution de glycérol à 10 pour 100 (m/v).

       Dans une fiole jaugée de 100 ml, placer 10 g de glycérol C3H8O3; compléter à 100 ml avec de l'eau distillée.

3.1.2.8. Solution de sulfate de sodium à 7,1, g pour 100 ml (voir en 3.1.1.4).

3.1.2.9. Solution d'acide tartrique à 1 g/l.

       Dans une fiole jaugée de 500 ml, introduire 0,5 g d'acide tartrique, 6,66 ml de solution d'hydroxyde de sodium M (3.1.2.10) et compléter à
           500 ml avec la solution de sulfate de sodium à 7,1 pour 100 (3.1.1.4).

3.1.2.10. Solution d'hydroxyde de sodium, NaOH, 1 M.

3.2. Appareillage

3.2.1. Colonne de verre de 300 mm environ de longueur et de 10-11 mm de diamètre intérieur munie d'un robinet.

3.2.2. Spectrophotomètre permettant les mesures d'absorbance à la longueur d'onde de 490 nm, avec cuves de 10 mm de trajet optique.

3.3. Mode opératoire

3.3.1. Préparation de la colonne d'échangeur d'ions

       Placer dans la colonne de verre au-dessus du robinet (3.2.1), un tampon de coton de verre. Imprégner ce tampon avec  de  l'eau  distillée.
           Verser dans la colonne 10 ml de la suspension de l'échangeur d'ions en phase acétate (3.1.1.2). Laisser décanter. Placer un tampon de
           coton de verre à la surface de l'échangeur déposé (de manière à éviter au cours des lavages ultérieurs la  remise  en  suspension  de
           l'échangeur).

       L'échangeur ne doit servir que pour une seule opération.3.3.2. Isolement des acides organiques

       Le robinet étant ouvert, laisser la solution d'acide acétique s'écouler jusqu'à environ 2-3 mm au-dessus du tampon de coton de verre placé
           au-dessus de l'échangeur.

       Ajouter 10 ml de solution d'acide acétique à 0,5 pour 100 (3.1.1.3), puis laisser  écouler  le  liquide  jusqu'au  même  niveau  que  dans
           l'opération précédente. Répéter encore 4 fois cette opération de lavage.

       Après le dernier lavage, le robinet étant fermé, verser sur l'échangeur 10 ml de vin ou de moût. Laisser écouler le vin  goutte  à  goutte
           (débit moyen 1 goutte par seconde) et arrêter l'écoulement juste au-dessus de l'échangeur. Ajouter à nouveau dans la colonne 10 ml de
           solution d'acide acétique à 0,5 pour 100 (3.1.1.3), laisser écouler à la même vitesse que  dans  l'opération  précédente  et  répéter
           l'opération de lavage à 7 reprises avec 10 ml d'eau à chaque opération. Au dernier lavage, fermer le robinet dès  que  le  niveau  du
           liquide se trouve un peu au-dessus du tampon de coton de verre supérieur.

       Éluer les acides fixés sur l'échangeur à l'aide de la solution de sulfate de sodium à 7,1 pour 100 (3.1.1.4); recueillir l'éluat dans  une
           fiole jaugée de 100 ml jusqu'à ajustage au trait repère.

3.3.3. Dosage de l'acide tartrique

3.3.3.1. Cas des vins non additionnés d'acide métatartrique

       Dans 2 fioles coniques, a et b, introduire 20 ml d'éluat.

       La fiolea sert au dosage, la fiole b, dans laquelle l'acide tartrique est détruit par l'acide périodique, constitue le témoin.

       Introduire dans la fiole a:- 2 ml de H2 SO4 M (3.1.2.3),- 5 ml de H2 SO4 0,05 M (3.1.2.5),- 1 ml de glycérol à 10 p. 100 (3.1.2.7).

       Introduire dans la fioleb:- 2 ml de H2 SO4 M (3.1.2.3),- 5 ml de solution d'acide périodique 0,05 M (3.1.2.6).

       Attendre 15 minutes; ajouter: 1 ml de solution de glycérol à 10p. 100 (3.1.2.7) pour détruire l'excès d'acide périodique

       Attendre 2 minutes.

       Verser alors en agitant, d'abord dans la fiole b, puis aussitôt après dans la fiole a, 5 ml de  réactif  vanadique  (3.1.2.2).  Déclencher
           immédiatement un chronomètre et placer le contenu des fioles a et b dans les cuves du spectrophotomètre.  Au  bout  de  90  secondes,
           mesurer l'absorbance à 490 nm du liquide provenant de la fiole a (dosage) par rapport au témoin (fiole b).

       Si l'éluat est trop riche en acide tartrique et que l'absorbance soit trop élevée, diluer l'éluat avec la solution de sulfate de sodium  à
           7,1 pour 100 et procéder à la mesure sur la solution diluée.3.3.3.2. Cas des vins additionnés d'acide métatartrique

       Lorsqu'on a affaire à un vin additionné d'acide métatartrique ou que l'on soupçonne cette addition, procéder à l'hydrolyse  de  cet  acide
           comme il est indiqué pour la méthode de référence.

       Après refroidissement, le contenu de la fiole conique est versé au sommet de la colonne d'échangeur, ainsi que les eaux de rinçage (2 fois
           5 ml). Continuer comme il est indiqué ci-dessus.

       L'acide métatartrique est compté comme acide tartrique dans le résultat du dosage.3.3.4. Établissement de la courbe d'étalonnage

       Introduire 10, 20, 30, 40 et 50 ml de la solution d'acide tartrique à 1 g/l (3.1.2.9) dans des fioles jaugées de 100 ml et compléter à 100
           ml avec la solution de sulfate de sodium à 7,1 pour 100 ml (3.1.1.4). Les concentrations de ces solutions correspondent à des  éluats
           obtenus à partir de vins contenant 1, 2, 3, 4 et 5 g d'acide tartrique par litre.

       Dans 2 fioles coniques, a et b,introduire 20 ml de ces solutions et continuer comme il est indiqué ci-dessus pour l'éluat de vin.

       La représentation graphique des absorbances de ces solutions en fonction de la teneur en acide tartrique  est  une  droite  qui  s'incurve
           légèrement vers le point zéro. Préciser, si nécessaire, cette partie de la courbe en soumettant à la mesure des  solutions  de  titre
           exactement connu inférieur à 1,0 g/l.3.3.5. Expression des résultats

       Reporter l'absorbance mesurée pour l'éluat sur la courbe d'étalonnage pour obtenir la teneur du vin en  acide  tartrique  en  grammes  par
           litre.

       Cette teneur est exprimée avec 1 décimale.

17.   ACIDE CITRIQUE

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      L'acide citrique est transformé en oxaloacétate et acétate dans une réaction catalysée par la citrate-lyase (CL):

      citrate [pic] oxaloacétate + acétate

      En présence de la malate-deshydrogénase (MDH) et de la lactatedeshydrogénase (LDH), l'oxaloacétate et son  dérivé  de  décarboxylation,  le
       pyruvate, sont réduits en L-malate et en L-lactate par le nicotinamide-adénine-dinucléotide réduit (NADH):

      Oxaloacétate + NADH + H+ [pic] L-malate + NAD+

      Pyruvate + NADH + H+ [pic] L-lactate + NAD+

      La quantité de NADH oxydé en NAD+ dans ces réactions est proportionnelle au citrate  présent.  L'oxydation  du  NADH  est  mesurée  par  la
       diminution de son absorbance à la longueur d'onde 340 nm.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Tampon pH 7,8

      (glycylglycine 0,51 M; pH = 7,8; Zn2+: 0,6 × 10− 3M):

      dissoudre 7,13 g de glycylglycine dans environ 70 ml d'eau bidistillée.

      Ajuster le pH à 7,8 avec environ 13 ml de solution d'hydroxyde de sodium 5 M; ajouter 10 ml de solution de chlorure de zinc ZnCl2, à  80 mg
       dans 100 ml et porter à 100 ml avec de l'eau bidistillée.

      La solution reste stable pendant au moins 4 semaines à + 4 °C.

2.2.  Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide réduit (NADH), environ 6.10− 3 M, dissoudre 30 mg de NADH et 60 mg de NaHCO3 avec 6 ml  d'eau
       bidistillée.

2.3.  Solution de malate deshydrogénase/lactate deshydrogénase, (MDH/LDH) (0,5 mg MDH/ml; 2,5 mg LDH/ml): on fait un mélange de 0,1 ml MDH  (5 mg
       MDH/ml), 0,4 ml de solution de sulfate d'ammonium (3,2 M) et 0,5 ml LDH (5 mg/ml). Cette suspension est stable pendant au moins  un  an  à
       + 4 °C.

2.4.  Citrate-lyase CL (5 mg de protéine/ml). Dissoudre 168 mg de lyophilisat dans 1 ml d'eau glacée. La solution est  stable  pendant  au  moins
       une semaine à + 4 °C et pendant au moins 4 semaines sous forme congelée.

      Il est recommandé de procéder, préalablement au dosage, à la vérification de l'activité de l'enzyme.

2.5.  Polyvinylpolypyrolidone (PVPP)

      Remarque:  L'ensemble des réactifs nécessaires pour ce dosage est commercialisé.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Spectrophotomètre permettant d'effectuer les mesures à 340 nm, maximum d'absorption du NADH.

      À défaut, photomètre à spectre discontinu permettant d'effectuer les  mesures  à  334 nm  ou  à  365 nm.  S'agissant  de  mesures  absolues
       d'absorbance (pas de gamme d'étalonnage, mais référence au coefficient d'extinction du NADH), les échelles des  longueurs  d'onde  et  des
       absorbances de l'appareil doivent être contrôlées.

3.2.  Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves à usage unique.

3.3.  Micropipettes permettant de prélever des volumes allant de 0,02 à 2 ml.

4.    PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON

      Le dosage du citrate s'effectue généralement directement sur le vin sans décoloration préalable  et  sans  dilution,  à  condition  que  la
       teneur en acide citrique soit inférieure à 400 mg/l. Sinon, procéder à la dilution du vin de manière que la concentration  en  citrate  se
       situe entre 20 et 400 mg/l (quantité de citrate dans la prise d'essai comprise entre 5 µg et 80 µg).

      Dans le case de vin rouge riche en composés phénoliques, il est recommandé de le traiter au préalable par la PVPP:

      mettre en suspension dans l'eau 0,2 g environ de PVPP, laisser reposer 15 minutes. Filtrer sur filtre plissé.

      À 10 ml de vin placé dans une fiole conique de 50 ml, ajouter la PVPP humide prélevée à la spatule sur le filtre.  Agiter  pendant  2  à  3
       minutes. Filtrer.

5.    MODE OPÉRATOIRE

      Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm, l'absorbance  zéro
       étant réglée par rapport à l'air (pas de cuve sur le trajet optique). Dans les cuves de 1 cm d'épaisseur, introduire:

|                                                    |Témoin          |Dosage          |
|Solution 2.1                                        |1,00 ml         |1,00 ml         |
|Solution 2.2                                        |0,10 ml         |0,10 ml         |
|Échantillon                                         |—               |0,20 ml         |
|Eau bidistillée                                     |2,00 ml         |1,80 ml         |
|Solution 2.3                                        |0,02 ml         |0,02 ml         |

      Mélanger; après environ 5 minutes, lire les absorbances des solutions témoin et dosage (A1).

      Ajouter:

|Solution 2.4                                        |0,02 ml         |0,02 ml        |

      Mélanger; attendre la fin de la réaction (environ 5 minutes) et lire les absorbances des solutions témoin et dosage (A2).

      Déterminer les différences d'absorbances (A1−A2) du témoin et du dosage.

      Déduire la différence d'absorbances du témoin de la différence d'absorbances du dosage:

       Δ A  =     Δ A D − Δ AT

      Remarque:  Le temps nécessaire à l'action des enzymes peut varier d'un lot à l'autre. Il n'est donné ci-dessus  qu'à  titre  indicatif.  Il
       est recommandé de le déterminer pour chaque lot.

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      La teneur en acide citrique est donnée, en milligrammes par litre (mg/l) sans décimale.

6.1.  Mode de calcul

      La concentration en milligrammes par litre est donnée par la formule générale:

       C    =     ((V · PM)/(ε · d · v)) · Δ A

       V    =     volume du test en millilitres (ici 3,14 ml)

       v    =     volume de l'échantillon en millilitres (ici 0,2 ml)

       P.M  =     masse moléculaire de la substance à doser (ici, acide citrique anhydre = 192,1)

       d    =     trajet optique de la cuve en centimètres (ici 1 cm)

       ε    =     coefficient d'absorption du NADH; à 340 nm,

       ε    =     6,3 mmole− 1 × l × cm− 1.

      On obtient:

       C    =     479 × ΔA

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur de dilution.

       Remarque:  à 334 nm: C = 488 × Δ A (ε = 6,2 mmole− 1 × l × cm− 1)

      à 365 nm: C = 887 × Δ A (ε = 3,4 mmole− 1 × l × cm− 1)

6.2.  Répétabilité (r)

      Teneur en acide citrique inférieure à 400 mg/l: r = 14 mg/l.

      Teneur en acide citrique supérieure à 400 mg/l: r = 28 mg/l.

6.3.  Reproductibilité (R)

      Teneur en acide citrique inférieure à 400 mg/l: R = 39 mg/l.

      Teneur en acide citrique supérieure à 400 mg/l: R = 65 mg/l.

18.   ACIDE LACTIQUE

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de référence

      En présence de nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD) l'acide lactique total (L-lactate et D-lactate)  est  oxydé  en  pyruvate  dans  une
       réaction catalysée par la L-lactate déshydrogénase (L-LDH) et la D-lactate déshydrogénase (D-LDH).

      L'équilibre de la réaction est en faveur du lactate. L'élimination du pyruvate du milieu réactionnel déplace  l'équilibre  de  la  réaction
       dans le sens de la formation de pyruvate.

      En présence de L-glutamate, le pyruvate est transformé en L-alanine, réaction catalysée par la glutamate-pyruvate-transaminase (GPT)

       (1)  L-lactate + NAD+ [pic] pyruvate + NADH + H+

       (2)  D-lactate + NAD+ [pic] pyruvate + NADH + H+

       (3)  Pyruvate + L-glutamate [pic] L-alanine + α cétoglutarate

      La formation de NADH, mesurée par l'augmentation de l'absorbance à la longueur d'onde de 340 nm,  est  proportionnelle  à  la  quantité  de
       lactate présente.

      Remarque:  L'acide L-lactique peut être déterminé individuellement par application des réactions (1) et (3).

      L'acide D-lactique peut être déterminé individuellement par application des réactions (2) et (3).

1.2.  Méthode usuelle

      L'acide lactique, séparé sur colonne de résine échangeuse d'anions, est oxydé en éthanal et dosé par colorimétrie après  réaction  avec  le
       nitroprussiate et la pipéridine.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Solution tampon pH 10 (glycylglycine 0,6 mole/l; L-glutamate 0,1 mole/l).

      Dissoudre 4,75 g de glycylglycine, 0,88 g d'acide L-glutamique dans environ 50 ml d'eau bidistillée; ajuster  le  pH  à  10  avec  quelques
       millilitres de solution d'hydroxyde de sodium 10 M et porter à 60 ml avec de l'eau bidistillée.

      La solution reste stable pendant au moins 12 semaines à + 4 °C.

2.1.2.      Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD) environ 40 × 10−3 M; dissoudre 900 mg de NAD dans  30 ml  d'eau  bidistillée.  La
       solution reste stable pendant au moins 4 semaines à + 4 °C.

2.1.3.      Suspension de glutamate-pyruvate-transaminase (GPT) à 20 mg/ml. La suspension est stable pendant au moins un an à + 4 °C.

2.1.4.      Suspension de L-lactate-déshydrogénase (L-LDH) à 5 mg/ml. La suspension est stable pendant au moins un an à + 4 °C.

2.1.5.      Suspension de D-lactate-déshydrogénase (D-LDH) à 5 mg/ml. La suspension est stable pendant au moins un an à + 4 °C.

      Il est recommandé de procéder, préalablement au dosage, à la vérification de l'activité de l'enzyme.

       Remarque:  L'ensemble des réactifs nécessaires pour le dosage est commercialisé.

2.2.  Appareillage

2.2.1.      Spectrophotomètre permettant d'effectuer les mesures à 340 nm, maximum d'absorption du NADH.

      À défaut, photomètre à spectre discontinu permettant d'effectuer les mesures à 334 nm ou à 365 nm.

      S'agissant de mesures absolues d'absorbance (pas de gamme d'étalonnage, mais référence au coefficient d'extinction du NADH),  les  échelles
       des longueurs d'onde et des absorbances de l'appareil doivent être contrôlées.

2.2.2.      Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves à usage unique.

2.2.3.      Micropipettes permettant de prélever des volumes compris entre 0,02 et 2 ml.

2.3.  Préparation de l'échantillon

      Éviter de toucher avec les doigts la partie de la verrerie qui entre en contact avec le milieu réactionnel, ceci  pouvant  être  une  cause
       d'apport d'acide L-lactique qui fausserait le résultat.

      Le dosage du lactate s'effectue généralement directement sur le vin sans décoloration préalable et sans dilution  si  la  concentration  en
       acide lactique est inférieure à 100 mg/l. Si la concentration du vin en acide lactique est comprise entre:

      100 mg/l et 1 g/l diluer 1/10e avec de l'eau bidistillée;

      1 g/l et 2,5 g/l diluer 1/25e avec de l'eau bidistillée;

      2,5 g/l et 5 g/l diluer 1/50e avec de l'eau bidistillée.

2.4.  Mode opératoire

2.4.1.      Dosage de l'acide lactique total

      La solution tampon doit être ramenée à 20-25 °C avant de procéder au dosage.

      Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet  optique,
       l'absorbance zéro étant réglée par rapport à l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport à l'eau.

      Dans les cuves de 1 cm de trajet optique introduire:

|                                          |Témoin              |Dosage           |
|Solution 2.1.1                            |1,00 ml             |1,00 ml          |
|Solution 2.1.2                            |0,20 ml             |0,20 ml          |
|Eau bidistillée                           |1,00 ml             |0,80 ml          |
|Suspension 2.1.3                          |0,02 ml             |0,02 ml          |
|Échantillon                               |-                   |0,20 ml          |

      Mélanger à l'aide d'un agitateur de verre ou d'une baguette de matière synthétique à bout aplati; après  environ  5  minutes,  mesurer  les
       absorbances des solutions témoin et dosage (A1).

      Ajouter 0,02 ml de solution 2.1.4 et 0,05 ml de solution 2.1.5, homogénéiser, attendre la fin  de  la  réaction  (environ  30  minutes)  et
       mesurer les absorbances des solutions témoin et dosage (A2).

      Déterminer les différences d'absorbances (A2−A1) du témoin et du dosage.

      Déduire la différence d'absorbances du témoin de la différence d'absorbance du dosage.

       Δ A  =     Δ AD − Δ AT

2.4.2 Dosage de l'acide L-lactique et de l'acide D-lactique

      Le dosage de l'acide L-lactique et D-lactique peut être réalisé individuellement en appliquant le  mode  opératoire  indiqué  pour  l'acide
       lactique total, mais en opérant ainsi après avoir déterminé A1:

      Ajouter 0,02 ml de solution 2.1.4, homogénéiser, attendre la fin de la réaction  (environ  20  minutes)  et  mesurer  les  absorbances  des
       solutions témoin et dosage (A2).

      Ajouter 0,05 ml de solution 2.1.5, homogénéiser, attendre la fin de la réaction  (environ  30  minutes)  et  mesurer  les  absorbances  des
       solutions témoin et dosage (A3).

      Déterminer les différences d'absorbances (A2−A1) pour l'acide L-lactique et (A3−A2) pour l'acide D-lactique dans le cas du témoin  et  dans
       le cas du dosage.

      Déduire la différence d'absorbance du témoin de la différence d'absorbance du dosage

       Δ A  =     Δ AD − Δ AT

      Remarque:  Le temps nécessaire à l'action des enzymes peut varier d'un lot à l'autre. Il n'est donné ci-dessus  qu'à  titre  indicatif.  Il
       est recommandé de le déterminer pour chaque lot. Lorsqu'on dose l'acide L-lactique seul, le temps d'incubation après  addition  de  la  L-
       lactate déshydrogénase peut être ramené à 10 minutes.

2.5.  Expression des résultats

      La concentration en acide lactique est donnée en grammes par litre (g/l) avec 1 décimale.

2.5.1.      Mode de calcul

      La concentration en grammes par litre est calculée par la formule générale:

       C    =     ((V · PM)/(ε · d · v · 1000)) · Δ A

       V    =     volume du test en millilitres (V = 2,24 ml pour l'acide L-lactique, V = 2,29 ml pour l'acide  D-lactique  et  l'acide  lactique
                total)

       v    =     volume de l'échantillon en millilitres (ici 0,2 ml)

       PM   =     masse moléculaire de la substance à doser (ici acide DL-lactique = 90,08)

       d    =     trajet optique de la cuve en centimètres (ici 1 cm)

       ε    =     coefficient d'absorption du NADH à 340 nm

                ε =    6,3 (mmole− 1 × l × cm− 1)

2.5.1.1.    Acide lactique total et acide D-lactique

       C    =     0,164 × Δ A

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur de dilution.

      Remarque:

      Mesure à 334 nm: C = 0,167 × Δ A (ε = 6,2 mmole− 1 × l × cm− 1)

      Mesure à 365 nm: C = 0,303 × Δ A (ε = 3,4 mmole− 1 × l × cm− 1)

2.5.1.2.    Acide L-lactique

       C    =     0,160 × Δ A

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur de dilution.

      Remarque:

      Mesure à 334 nm: C = 0,163 × Δ A (ε = 6,2 mmole− 1 × l × cm− 1)

      Mesure à 365 nm: C = 0,297 × Δ A (ε = 3,4 mmole− 1 × l × cm− 1)

2.5.2.      Répétabilité (r)

       r    =     0,02 + 0,07 xi g/l

       xi   =     concentration en acide lactique de l'échantillon en grammes par litre

2.5.3.      Reproductibilité (R)

       R    =     0,05 + 0,125 xi g/l

       xi   =     concentration en acide lactique de l'échantillon en grammes par litre

                                            ê 2676/90

19.   ACIDE L-MALIQUE

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      En présence de nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD) l'acide L-malique (L-malate) est oxydé en oxaloacétate dans une  réaction  catalysée
       par la L-malate-deshydrogénase (L-MDH).

      L'équilibre de la réaction est en faveur du malate. L'élimination  de  l'oxaloacétate  du  milieu  réactionnel  délace  l'équilibre  de  la
       réaction dans le sens de la formation d'oxaloacétate. En présence de L-glutamate, l'oxaloacétate est transformé en  L-aspartate,  réaction
       catalysée par la glutamate-oxaloacétate-transaminase (GOT).

       (1)  L-malate + NAD+.[pic] oxaloacétate + NADH + H+

       (2)  Oxaloacétate + L-glutamate [pic] L-aspartate + α − cétoglutarate

      La formation de NADH, mesurée par l'augmentation de l'absorbance à la longueur d'onde de 340 nm, est proportionnelle à la  quantité  de  L-
       malate présente.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Tampon pH 10

      (Glycylglycine 0,60 M, L-glutamate 0,1 M)

      Dissoudre 4,75 g de glycylglycine et 0,88 g d'acide L-glutamique dans environ 50 ml d'eau bidistillée; ajuster le  pH  à  10  avec  environ
       4,6 ml de solution d'hydroxyde de sodium 10 M et porter à 60 ml avec de l'eau bidistillée.

      La solution reste stable pendant au moins 12 semaines + 4 °C.

2.2.  Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD), environ 47 × 10− 3 M: dissoudre  420 mg  de  NAD  dans  12 ml  d'eau  bidistillée.  La
       solution reste stable pendant au moins 4 semaines à + 4 °C.

2.3.  Suspension de glutamate-oxaloacétate-transaminase (GOT) à 2 mg/ml. La suspension est stable pendant au moins un an à + 4 °C.

2.4.  Solution de L-malate-deshydrogénase (L-MDH) à 5 mg/ml. La solution est stable pendant au moins un an à + 4 °C.

       Remarque:  L'ensemble des réactifs nécessaires pour le dosage est commercialisé.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Spectrophotomètre permettant d'effectuer les mesures à 340 nm, maximum d'absorption du NADH.

      À défaut, photomètre à spectre discontinu permettant d'effectuer les mesures à 334 nm ou à 365 nm.

      S'agissant de mesures absolues d'absorbance (pas de gamme d'étalonnage, mais référence au coefficient d'extinction du NADH),  les  échelles
       des longueurs d'onde et des absorbances de l'appareil doivent être contrôlées.

3.2.  Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves à usage unique.

3.3.  Micropipettes permettant de prélever des volumes compris entre 0,01 et 2 ml.

4.    PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON

      Le dosage du L-malate s'effectue généralement directement sur le vin sans décoloration préalable et  sans  dilution,  à  condition  que  la
       teneur en acide L-malique soit inférieure à 350 mg/l (mesures à 365 nm). Sinon, procéder à la dilution du vin avec de l'eau bidistillée de
       sorte que la concentration en L-malate se situe entre 30 et 350 mg/l (quantité de L-malate dans la  prise  d'essai  comprise  entre  3  et
       35 µg).

      Si la concentration en malate du vin est inférieure à 30 mg/l le volume de la prise d'essai peut être augmenté jusqu'à 1 ml.  Dans  ce  cas
       le volume de l'eau à ajouter est réduit afin que les volumes totaux soient les mêmes dans les deux cuves.

5.    MODE OPÉRATOIRE

      Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet  optique,
       l'absorbance zéro étant réglée par rapport à l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport à l'eau.

      Dans les cuves de 1 cm de trajet optique introduire:

|                                        |Témoin              |Dosage             |
|Solution 2.1                            |1,00 ml             |1,00 ml            |
|Solution 2.2                            |0,20 ml             |0,20 ml            |
|Eau bidistillée                         |1,00 ml             |0,90 ml            |
|Suspension 2.3                          |0,01 ml             |0,01 ml            |
|Échantillon                             |-                   |0,10 ml            |

      Mélanger; après environ 3 minutes, mesurer les absorbances des solutions témoin et dosage (A1).

      Ajouter:

|Solution 2.4                            |0,01 ml             |0,01 ml             |

      Mélanger; attendre la fin de la réaction (environ 5 à 10 minutes) et mesurer les absorbances des solutions témoin et dosage (A2).

      Déterminer les différences d'absorbances (A2−A1) du témoin et du dosage.

      Déduire la différence d'absorbances du témoin de la différence d'absorbances du dosage.

       Δ A  =     Δ AD − Δ AT

      Remarque:  Le temps nécessaire à l'action des enzymes peut varier d'un lot à l'autre. Il n'est donné ci-dessus  qu'à  titre  indicatif.  Il
       est recommandé de le déterminer pour chaque lot.

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      La concentration en acide L-malique est donnée en grammes par litre (g/l) avec 1 décimale.

6.1.  Mode de calcul

      La concentration en grammes par litre est calculée par la formule générale:

       C    =     ((V · PM)/(ε · d · v · 1000)) · Δ A

       V    =     volume du test en millilitres (ici 2,22 ml)

       v    =     volume de l'échantillon en millilitres (ici 0,1 ml)

       PM   =     masse moléculaire de la substance à doser (ici acide L-malique = 134,09)

       d    =     trajet optique de la cuve en cm (ici 1 cm)

       ε    =     coefficient d'absorption du NADH, à 340 nm ε = 6,3 mmole − 1 × 1 × cm − 1

      On obtient pour le L-malate:

       C    =     ,473 × Δ A g/l

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur de dilution.

|Remarque:                                                |                                  |
|mesure à 334 nm                                          |C = 0,482 × Δ A                   |
|mesure à 365 nm                                          |C = 0,876 × Δ A                   |

6.2.  Répétabilité (r)

       R    =     0,03 + 0,034 xi

       xi   =     concentration en acide malique de l'échantillon en grammes par litre

6.3.  Reproductibilité (R)

       R    =     0,05 + 0,071 xi

       xi   =     concentration en acide malique de l'échantillon en grammes par litre

                                            ê 761/1999 Art. 1, pt 1 et Annexe I

20.   ACIDE D-MALIQUE

      Dosage par méthode enzymatique

1.    PRINCIPE

      En présence de D-malate-deshydrogénase (D-MDH), l'acide D-malique (D-malate)  est  oxydé  en  oxalo-acétate  par  le  nicotinamide-adénine-
       dinucléotide (NAD). L'oxalo-acétate formé est transformé en pyruvate et dioxyde de carbone.

      D-malate + NAD+ [pic] pyruvate + CO2 + NADH + H+

      La formation de NADH, mesurée par l'augmentation de l'absorbance à la longueur d'onde de 334, 340  ou  365 nm,  est  proportionnelle  à  la
       quantité de D-malate présente.

2.    RÉACTIFS

      Les réactifs permettant environ 30 déterminations sont présentés dans le commerce en coffret comprenant:

       a)   Flacon 1 contenant environ 30 ml de solution de tampon Hepes [acide N-(2-hydroxyéthyl) pipérazine-N'-2-éthane sulfonique] pH = 9,0 et
           stabilisateurs;

       b)   Flacon 2 contenant environ 210 mg de lyophilisat de NAD;

       c)   Flacon 3 (au nombre de trois), contenant le lyophilisat de D-MDH, titrant environ 8 unités.

      Préparation des solutions

       1.   Utiliser le contenu du flacon 1 sans dilution. Amener la solution à 20-25 °C avant l'emploi.

       2.   Dissoudre le contenu du flacon 2 dans 4 ml d'eau bidistillée.

       3.   Dissoudre le contenu d'un des flacons 3 dans 0,6 ml d'eau bidistillée. Amener la solution à 20-25 °C avant l'emploi.

      Stabilité des solutions

      Le contenu du flacon 1 se conserve au moins un an à + 4 °C; la solution 2 se conserve environ 3 semaines à + 4 °C et 2 mois  à  −20 °C;  la
       solution 3 se conserve 5 jours à + 4 °C.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Spectrophotomètre permettant d'effectuer les mesures à 340 nm, maximum d'absorption du NADH. À  défaut,  photomètre  à  spectre  discontinu
       permettant d'effectuer les mesures à 334 nm et 365 nm. S'agissant de mesures  absolues  d'absorbance  (pas  de  gamme  d'étalonnage,  mais
       référence au coefficient d'extinction du NADH), les  échelles  des  longueurs  d'onde  et  des  absorbantes  de  l'appareil  doivent  être
       contrôlées.

3.2.  Cuves de 1 cm de trajet optique en verre ou cuves à usage unique.

3.3.  Micropipettes permettant de prélever des volumes compris entre 0,01 et 2 ml.

4.    PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON

      Le dosage du D-malate s'effectue généralement directement sur le vin sans décoloration préalable.

      La quantité de D-malate dans la cuve devant étre comprise entre 2 μg et 50 μg, il convient de  diluer  le  vin  de  telle  manière  que  la
       concentration en malate soit comprise entre 0,02 et 0,5 g/l ou 0,02 et 0,3 g/l (selon l'appareillage utilisé).

      Tableau de dilution:

|Quantité estimée de D-malate/litre                   |Dilution avec de l'eau      |Facteur de dilution F             |
|Mesure à:                                            |                            |                                  |
|340 ou 334 nm             |365 nm                    |                            |                                  |
|< 0,3 g                   |< 0,5 g                   |—                           |1                                 |
|0,3 - 3,0 g               |0,5 - 5,0 g               |1 + 9                       |10                                |

5.    MODE OPÉRATOIRE

      Le spectrophotomètre étant réglé sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet  optique,
       l'absorbance zéro étant réglée par rapport à l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport à l'eau.

      Dans les cuves de 1 cm de trajet optique, introduire:

|                                        |Témoin                |Essai              |
|Solution 1                              |1,00 ml               |1,00 ml            |
|Solution 2                              |0,10 ml               |0,10 ml            |
|Eau bidistillée                         |1,80 ml               |1,70 ml            |
|Échantillon                             |—                     |0,10 ml            |

      Mélanger. Après environ six minutes, mesurer les absorbances des solutions témoin et essai (A1).

      Ajouter:

|                                        |Témoin                |Essai              |
|Solution 3                              |0,05 ml               |0,05 ml            |

      Mélanger; attendre la fin de la réaction (environ 20 minutes) et mesurer les absorbances des solutions témoin et d'essai (A2).

      Déterminer les différences d'absorbances (A2 − A1) du témoin (ΔAT) et de l'essai (ΔAE). Déduire la différence d'absorbance du témoin de  la
       différence d'absorbance de l'essai: ΔA = ΔAE − ΔAT.

      Remarque:  Le temps nécessaire à l'action des enzymes peut varier d'un lot à l'autre. Il n'est donné ci-dessus  qu'à  titre  indicatif.  Il
       est recommandé de le déterminer pour chaque lot.

      L'acide D-malique réagit vite. Une activité supplémentaire de l'enzyme  transforme  aussi  l'acide  L-tartrique  même  si  la  vitesse  est
       beaucoup moins rapide. C'est la raison pour laquelle il y a une faible réaction parasite qu'il est possible de corriger par  extrapolation
       (voir appendice A).

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      La concentration en milligrammes par litre est calculée par la formule générale:

       C    =     (V × PM)/(ε × d × ν) × ΔA

       V    =     volume du test en ml (ici 2,95 ml)

       v    =     volume de l'échantillon en ml (ici 0,1 ml)

       PM   =     masse moléculaire de la substance à doser (ici acide D-malique = 134,09)

       d    =     trajet optique de la cuve en cm (ici 1 cm)

       ε    =     coefficient d'absorption du NADH:

                à 340 nm     =     6,3 (1 mmol−1 cm−1)

                à 365 nm     =     3,4 (1 mmol−1 cm−1)

                à 334 nm     =     6,18 (1 mmol−1 cm−1).

      Si une dilution a été effectuée lors de la préparation de l'échantillon, multiplier le résultat par le facteur de dilution.

      La concentration en acide D-malique est donnée en milligrammes par litre (mg/l) sans décimale.

7.    FIDÉLITÉ

      Les détails de l'essai interlaboratoire portant sur la fidélité de la méthode sont résumés dans l'appendice  B.  Les  valeurs  dérivées  de
       l'essai interlaboratoire peuvent ne pas être applicables aux gammes de concentration en analyte et aux matrices autres que celles  données
       en appendice B.

7.1   Répétabilité

      La différence absolue entre deux résultats individuels obtenus sur une matière identique soumise à essai, par  un  opérateur  utilisant  le
       même appareillage, dans l'intervalle de temps le plus court, ne dépassera pas la valeur de répétabilité r dans plus de 5 % des cas.

      La valeur est: r = 11 mg/l.

7.2.  Reproductibilité

      La différence absolue entre deux résultats individuels obtenus sur une  matière  identique  soumise  à  essai  dans  deux  laboratoires  ne
       dépassera pas la valeur de reproductibilité R dans plus de 5 % des cas.

      La valeur est: r = 20 mg/l.

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 1 et Annexe I

8.    DOSAGE DE L'ACIDE D-MALIQUE [D(+)-MALIQUE], DANS LES VINS POUR DES FAIBLES TENEURS

8.1.  Domaine d'application

      La méthode décrite est appliquée au dosage, par voie enzymatique, de l'acide D-malique des vins avec des teneurs inférieures à 50 mg/l.

8.2.  Principe

      Le principe de la méthode est décrit au point 1. La formation de NADH, mesurée par l'augmentation de l'absorbance à la longueur  d'onde  de
       340 nm, est proportionnelle à la quantité de D-malate présente, après l'introduction dans la cuve de  mesure  d'une  quantité  d'acide  D-
       malique équivalente à 50 mg/l.

8.3.  Réactifs

      Solution d'acide D-malique à 0,199 g/l, en supplément des réactifs indiqués au point 2.

8.4.  Appareillage

      L'appareillage est indiqué au point 3.

8.5.  Préparation de l'échantillon

      La préparation de l'échantillon est indiquée au point 4.

8.6.  Mode opératoire

      Le mode opératoire est indiqué au point 5, mais avec l'introduction dans la cuve de mesure d'une quantité d'acide D-malique  équivalente  à
       50 mg/l (introduction de 0,025 ml d'une solution d'acide D-malique à 0,199 g/l, en  substitution  du  volume  équivalent  de  l'eau);  les
       valeurs obtenues sont diminuées de 50 mg/l.

8.7.  Validation interne

      Le tableau suivant résume le dossier de validation interne de la méthode de dosage de  l'acide  D-malique  après  adjonction  préalable  de
       50 mg/l de cet isomère.

|Gamme de travail                      |0 mg à 70 mg d'acide D-malique par litre                                            |
|                                      |Dans ces limites, la méthode est linéaire, avec un coefficient de corrélation entre |
|                                      |0,990 et 0,994                                                                      |
|Limite de quantification              |24,4 mg/l                                                                           |
|Limite de détection                   |8,3 mg/l                                                                            |
|Sensibilité                           |0,0015 abs/mg/l                                                                     |
|Taux de récupération                  |87,5 à 115,0 % pour les vins blancs et 75 à 105 % pour les vins rouges              |
|Répétabilité                          |= 12,4 mg/l pour les vins blancs (selon la méthode OIV, = 12,5 mg/l)                |
|                                      |= 12,6 mg/l pour les vins rouges (selon la méthode OIV, = 12,7 mg/l)                |
|Coefficient de variation              |4,2 % à 7,6 % (vins blancs et vins rouges)                                          |
|Variabilité intralaboratoire          |CV = 7,4 % (s = 4,4 mg/l; moyenne = 59,3 mg/l)                                      |

                                            ê 2676/90

21.   ACIDE MALIQUE TOTAL

      MÉTHODE USUELLE

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      L'acide malique isolé à l'aide d'une colonne de résine échangeuse d'anions est dosé colorimétriquement dans l'éluat grâce à  la  coloration
       jaune qu'il donne sous l'action de l'acide sulfurique à 96 pour 100 et de l'acide chromotropique. Les substances  contenues  dans  l'éluat
       interfèrent dans cette réaction. Mais ces substances réagissent, contrairement à l'acide malique, avec l'acide sulfurique à 86 pour 100 et
       l'acide chromotropique. Pour éliminer cette interférence, il suffit donc de soustraire de l'absorbance obtenue après réaction avec l'acide
       chromotropique et l'acide sulfurique à 96 pour 100, l'absorbance obtenue après réaction avec l'acide chromotropique et l'acide  sulfurique
       à 86 pour 100.

2.    APPAREILLAGE

2.1.  Colonne de verre de 250 mm environ de longueur et de 35 mm de diamètre intérieur, munie d'un robinet.

2.2.  Colonne de verre de 300 mm environ de longueur et de 10-11 mm de diamètre intérieur, munie d'un robinet.

2.3.  Bain d'eau à 100 °C.

2.4.  Spectrophotomètre permettant les mesures d'absorbance à la longueur d'onde de 420 nm avec cuves de 10 mm de trajet optique.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Échangeur d'anions de forte basicité (par exemple Merck III).

3.2.  Hydroxyde de sodium à 5 pour 100 (m/v).

3.3.  Acide acétique à 30 pour 100 (m/v).

3.4.  Acide acétique à 0,5 pour 100 (m/v).

3.5.  Solution de sulfate de sodium (Na2SO4) à 10 pour 100 (m/v).

3.6.  Acide sulfurique concentré à 95-97 % (m/m).

3.7.  Acide sulfurique à 86 pour 100 (m/m).

3.8.  Solution d'acide chromotropique à 5 pour 100 (m/v).

      À préparer extemporanément avant chaque dosage en dissolvant 500 mg de chromotropate de sodium  (C10H6Na2O8S2,  2  H2O)  dans  10 ml  d'eau
       distillée.

3.9.  Solution d'acide DL-malique à 0,5 g/l.

                                            ê 761/1999 Art. 1, pt 1 et Annexe I (adapté)

      Dissoudre 250 mg/l d'acide malique (C4H6O5) dans une quantité suffisante de solution de sulfate de sodium à 10 pour 100  (  Ö point Õ  3.5)
       pour avoir 500 ml.

                                            ê 2676/90

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échangeur d'ions

      Placer dans la colonne de verre 35 × 250 mm au-dessus du robinet un tampon de coton de verre  imprégné  d'eau  distillée.  Verser  dans  la
       colonne de l'échangeur d'ions mis en suspension dans l'eau de manière à avoir un espace libre d'environ 50 mm au-dessus de la  surface  de
       l'échangeur d'ions. Après rinçage avec 1 000 ml d'eau distillée, remplir la colonne avec la solution d'hydroxyde de sodium à 5  pour  100,
       laisser écouler le liquide jusqu'à environ 2-3 mm au-dessus de la surface de l'échangeur d'ions, répéter encore 2 fois cette opération  et
       laisser en contact durant 1 heure. Laver la colonne avec 1 000 ml d'eau distillée. Ensuite remplir la colonne  avec  la  solution  d'acide
       acétique à 30 pour 100, laisser écouler le liquide jusqu'à environ 2-3 mm au-dessus de la surface de  l'échangeur  d'ions,  répéter  cette
       opération 2 fois et laisser en contact durant au moins 24 heures  avant  l'emploi.  Conserver  ensuite  l'échangeur  d'ions  dans  l'acide
       acétique à 30 pour 100 pour les dosages ultérieurs.

4.2.  Préparation de la colonne d'échangeur d'ions

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer dans la colonne de verre 11 × 300 mm au-dessus du robinet un tampon de coton de verre. Verser dans la  colonne  l'échangeur  d'ions,
       préparé comme décrit Ö au point Õ 4.1, sur une hauteur de 10 cm. Le robinet étant ouvert, laisser la solution d'acide acétique à  30  pour
       100 s'écouler jusqu'à environ 2-3 mm au-dessus de la surface de l'échangeur. Laver l'échangeur avec 50 ml de la solution d'acide  acétique
       à 0,5 pour 100.

                                            ê 2676/90

4.3.  Isolement de l'acide DL-malique

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Verser sur l'échangeur préparé comme décrit Ö au point Õ 4.2 10 ml de vin ou de moût. Laisser écouler le vin goutte à goutte (débit  moyen:
       une goutte par seconde) jusqu'à environ 2-3 mm au-dessus de la surface de l'échangeur d'ions. Laver la colonne d'abord avec environ  50 ml
       de la solution d'acide acétique à 0,5 pour 100 et puis avec environ 50 ml d'eau distillée; laisser  écouler  ces  liquides  avec  la  même
       vitesse que le vin.

                                            ê 2676/90

      Éluer les acides fixés sur l'échangeur d'ions à l'aide de la solution de sulfate de sodium à 10 pour 100  avec  la  même  vitesse  que  les
       opérations précédentes (1 goutte par seconde), recueillir l'éluat dans une fiole jaugée de 100 ml jusqu'à ajustage au trait de jauge.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      On peut régénérer l'échangeur comme décrit Ö au point Õ 4.1.

                                            ê 2676/90

4.4.  Dosage de l'acide malique

      Prendre deux tubes à large ouverture de 30 ml, bouchés à l'émeri, «A» et «B». Introduire dans chaque tube 1,0 ml d'éluat et  1,0 ml  de  la
       solution d'acide chromotropique à 5 pour 100. Ajouter dans le tube «A» 10,0 ml d'acide sulfurique à 86 pour 100 (témoin) et dans  le  tube
       «B» 10,0 ml d'acide sulfurique à 96 pour 100 (mesure). Boucher et agiter pour obtenir une homogénéité parfaite sans  mouiller  le  rodage.
       Plonger les tubes pendant 10 minutes exactement dans un bain d'eau porté préalablement à une vive ébullition. Refroidir les tubes à  20 °C
       à l'obscurité. Exactement 90 minutes après le début du refroidissement, mesurer l'absorbance du tube «B» par rapport au témoin (tube  «A»)
       à la longueur d'onde 420 nm dans les cuves de 10 mm de trajet optique.

4.5.  Établissement de la courbe d'étalonnage

      Prélever 5 - 10 - 15 et 20 ml de la solution d'acide malique à 0,5 g/l et les introduire dans des fioles jaugées de 50 ml; porter au  trait
       de jauge avec la solution de sulfate de sodium à 10 pour 100.

      Les solutions ainsi obtenues correspondent à des éluats obtenus à partir de vins contenant 0,5 - 1,0 - 1,5 et 2,0 g d'acide DL-malique  par
       litre.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Continuer comme il est indiqué Ö au point Õ 4.4.

                                            ê 2676/90

      Les valeurs de l'absorbance obtenues avec ces  solutions-étalos  reportées  en  fonction  des  teneurs  en  acide  malique  correspondantes
       s'alignent sur une droite passant par l'origine.

      Étant donné que l'intensité de la coloration dépend beaucoup de la concentration de l'acide sulfurique, il est nécessaire  de  vérifier  la
       courbe d'étalonnage pour au moins 1 point lors de chaque série de  mesures  pour  mettre  en  évidence  un  changement  éventuel  dans  la
       concentration de l'acide sulfurique.

5     EXPRESSION DES RÉSULTATS

      Reporter l'absorbance mesurée pour l'éluat sur la courbe d'étalonnage pour obtenir la teneur en acide  DL-malique  en  grammes  par  litre.
       Cette teneur est exprimée avec 1 décimale.

      Répétabilité (r)

|teneur < 2 g/l: r         |=       |0,1 g/l          |
|teneur > 2 g/l: r         |=       |0,2 g/l.         |

      Reproductibilité (R)

       R    =     0,3 g/l.

22.   ACIDE SORBIQUE

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de dosage par spectrophotométrie d'absorption dans l'ultra-violet

      L'acide sorbique (acide hexadiène — 2,4 oïque trans, trans) extrait par entraînement à la vapeur d'eau est dosé dans le  distillat  du  vin
       par spectrophotométrie d'absorption dans l'ultra-violet. Les substances interférant sur la mesure d'absorption  dans  l'ultra-violet  sont
       éliminées par évaporation à sec de la prise d'essai du distillat légèrement alcalinisée par  une  solution  d'hydroxyde  de  calcium.  Les
       teneurs inférieures à 20 mg/l doivent être confirmées par la caractérisation par chromatographie en couche mince (sensibilité: 1 mg/l).

1.2.  Méthode de dosage par chromatographie gazeuse

      L'acide sorbique extrait dans l'éther éthylique est dosé par chromatographie en phase gazeuse en présence d'un étalon interne.

1.3.  Méthode de recherche de traces par chromatographie sur couche mince

      L'acide sorbique extrait dans l'éther éthylique est séparé par chromatographie sur couche mince  et  sa  concentration  est  évaluée  semi-
       quantitativement.

2.    MÉTHODE DE DOSAGE PAR SPECTROPHOTOMÉTRIE D'ABSORPTION DANS L'ULTRA-VIOLET

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Acide tartrique, C4H6O6 cristallisé.

2.1.2.      Solution d'hydroxyde de calcium, Ca (OH)2 environ 0,02 M.

2.1.3.      Solution de référence d'acide sorbique à 20 mg par litre.

      Dissoudre 20 mg d'acide sorbique, C6H8O2 dans 2 ml environ de solution 0,1 M d'hydroxyde  de  sodium.  Verser  dans  une  fiole  jaugée  de
       1 000 ml, ajuster au trait repère avec de l'eau. On peut également dissoudre 26,8 mg de  sorbate  de  potassium,  C6H7KO2  dans  l'eau  et
       compléter à 1 000 ml avec de l'eau.

2.2.  Appareillage

2.2.1.      Appareil d'entraînement par la vapeur d'eau (voir «Acidité volatile»).

2.2.2.      Bain d'eau à 100 °C.

2.2.3.      Spectrophotomètre permettant des mesures à la longueur d'onde de 256 nm avec cuves en quartz de 1 cm de trajet optique.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Distillation

      Placer dans le barboteur de l'appareil d'entraînement par la vapeur d'eau 10 ml  de  vin,  ajouter  1  à  2 g  d'acide  tartrique  (2.1.1).
       Recueillir 250 ml de distillat.

2.3.2.      Courbe d'étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Préparer par dilutions avec l'eau à partir de la solution de référence ( Ö point Õ 2.1.3) quatre solutions  de  référence  diluées  titrant
       respectivement 0,5 - 1 - 2,5 et 5 mg d'acide sorbique par litre; mesurer à l'aide du spectrophotomètre  leurs  absorbances  respectives  à
       256 nm par rapport à l'eau distillée. Tracer la courbe des variations de l'absorbance en fonction des  concentrations  des  solutions.  La
       variation est linéaire.

                                            ê 2676/90

2.3.3.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une capsule de 55 mm de diamètre placer 5 ml de distillat, ajouter 1 ml  de  solution  d'hydroxyde  de  calcium  (  Ö point Õ  2.1.2).
       Évaporer à sec sur bain d'eau bouillante.

      Reprendre le résidu par quelques millilitres d'eau distillée, entraîner quantitativement dans une fiole  jaugée  de  20 ml  et  ajuster  au
       trait repère avec les eaux de rinçage. Mesurer l'absorbance à 256 nm à l'aide du spectrophotomètre comparativement à une  solution  témoin
       obtenue par dilution à 20 ml avec de l'eau de 1 ml de solution d'hydroxyde de calcium ( Ö point Õ 2.1.2).

                                            ê 2676/90

      Porter la valeur de l'absorbance mesurée sur la droite d'étalonnage, en déduire la concentration C de la solution en acide sorbique.

      Remarque:  Dans la pratique courante, cette évaporation à sec peut  être  négligée.  Opérer  directement  la  mesure  d'absorbance  sur  le
       distillat dilué au 1/4 par rapport à l'eau distillée.

2.4.  Expression des résultats

2.4.1.      Mode de calcul

      La concentration en acide sorbique du vin exprimée en milligrammes par litre est égale à:

      100 × C

      C = concentration en acide sorbique de la solution analysée par spectrophotométrie, exprimée en milligrammes par litre.

3.    MÉTHODE DE DOSAGE PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE

3.1.  Réactifs

3.1.1.      Éther éthylique, (C2H5)2O distillé au moment de l'utilisation.

3.1.2.      Solution de l'étalon interne: solution d'acide undécanoïque, C11H22O2 dans l'éthanol à 95 pour 100 (vol.) titrant 1 g par litre.

3.1.3.      Solution aqueuse d'acide sulfurique, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml) dilué 1/3 (v/v).

3.2.  Appareillage

3.2.1.      Chromatographe en phase gazeuse équipé d'un détecteur à ionisation de flamme et d'une colonne  en  acier  inoxydable  (4 m  × 1/8  de
       pouce) préalablement traitée par le diméthyldichlorosilane et garnie de phase stationnaire, constituée par un mélange de  diéthylèneglycol
       succinate (5 %) et d'acide phosphorique (1 %) (DEGS- H3 PO4) ou par un mélange de diéthylèneglycol adipate (7 %) et  d'acide  phosphorique
       (1 %) (DEGA — H3 PO4) fixé sur Gaschrom Q 80 — 100 mesh.

      Pour le traitement au diméthyldichlorosilane (DMDCS), faire passer dans la colonne une solution titrant 2 à 3 g de DMDCS dans  le  toluène.
       Laver immédiatement la colonne avec du méthanol; faire passer un courant d'azote, puis de l'hexane et à nouveau  un  courant  d'azote.  La
       remplir ensuite.

      Conditions opératoires:

      Température du four: 175 °C.

      Température de l'injecteur et du détecteur: 230 °C.

      Gaz vecteur: azote (débit 20 ml/min.).

3.2.2.      Microseringue de 10 microlitres de capacité graduée par 0,1 microlitre.

      Remarque:  D'autres types de colonnes peuvent également permettre une bonne séparation,  notamment  la  colonne  capillaire  (par  exemple,
       FFAP).

      Le mode opératoire décrit ci-dessous est donné à titre d'exemple.

3.3.  Mode opératoire

3.3.1.      Préparation de l'échantillon à analyser

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un tube de verre de 40 ml environ de capacité et muni d'un bouchon rodé introduire 20 ml de vin, ajouter 2 ml de solution de  l'étalon
       interne ( Ö point Õ 3.1.2) et 1 ml de solution diluée d'acide sulfurique (Ö point Õ 3.1.3).

      Après agitation par retournements successifs, ajouter au contenu du tube  10 ml  d'éther  éthylique  (Ö point Õ  3.1.1).  Extraire  l'acide
       sorbique dans la phase organique par agitation du tube durant 5 minutes. Laisser décanter.

                                            ê 2676/90

3.3.2.      Préparation de la solution de référence

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner un vin dont le chromatogramme de l'extrait à l'éther ne présente aucun  pic  au  niveau  de  l'élution  de  l'acide  sorbique;
       surcharger ce vin en acide sorbique à la concentration de 100 mg par litre. Traiter 20 ml de l'échantillon ainsi  préparé  selon  le  mode
       opératoire décrit Ö au point Õ 3.3.1.

                                            ê 2676/90

3.3.3.      Chromatographie

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Injecter successivement dans le chromatographe à l'aide d'une microseringue 2 µl de la phase éthérée obtenue  Ö comme  indiqué  au  point Õ
       3.3.2 et 2 µl de la phase éthérée obtenue Ö comme indiqué au point Õ 3.3.1.

                                            ê 2676/90

      Enregistrer les chromatogrammes respectifs; vérifier l'identité des temps de rétention  respectifs  de  l'acide  sorbique  et  de  l'étalon
       interne. Mesurer la hauteur (ou la surface) de chacun des pics enregistrés.

3.4.  Expression des résultats

3.4.1.      Mode de calcul

      La concentration en acide sorbique du vin analysé, exprimée en milligrammes par litre, est égale à:

      100 · ((h)/(H)) · ((l)/(i))

       H    =     hauteur du pic de l'acide sorbique dans la solution de référence

       h    =     hauteur du pic de l'acide sorbique dans l'échantillon à analyser

       l    =     hauteur du pic de l'étalon interne dans la solution de référence

       i    =     hauteur du pic de l'étalon interne dans l'échantillon à analyser

      Note: La concentration en acide sorbique peut être déterminée de la même manière à partir des mesures de la surface des pics respectifs.

4.    MÉTHODE DE RECHERCHE DE TRACES D'ACIDE SORBIQUE PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

4.1.  Réactifs

4.1.1.      Éther éthylique, (C2H5)2O.

4.1.2.      Solution aqueuse d'acide sulfurique, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml) dilué 1/3 (v/v).

4.1.3.      Solution de référence d'acide sorbique dans un mélange hydroéthanolique à 10 % d'éthanol (vol.) environ titrant 20 mg par litre.

4.1.4.      Phase mobile: hexane — pentane — acide acétique (20:20:3)

      (C6H14 — C5H12 — CH3COOH, ρ20 = 1,05 g/ml).

4.2.  Appareillage

4.2.1.      Plaques pour chromatographie sur couche mince prêtes à l'emploi, 20 × 20 cm recouvertes de  gel  de  polyamide  (épaisseur:  0,15 mm)
       additionné d'un indicateur de fluorescence.

4.2.2.      Cuve pour chromatographie sur couche mince.

4.2.3.      Micropipette ou microseringue permettant de délivrer des volumes de 5 microlitres à ± 0,1 microlitre près.

4.2.4.      Lampe à rayonnement ultra-violet (254 nm).

4.3.  Mode opératoire

4.3.1.      Préparation de l'échantillon à analyser

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un tube en verre de 25 ml environ de capacité et muni d'un bouchon rodé, placer  10 ml  de  vin,  ajouter  1 ml  de  solution  d'acide
       sulfurique dilué ( Ö point Õ 4.1.2) et 5 ml d'éther éthylique (Ö point Õ 4.1.1). Agiter par retournements successifs. Laisser décanter.

                                            ê 2676/90

4.3.2.      Préparation des solutions diluées de référence

      Par dilution à partir de la solution 4.1.3 préparer cinq solutions diluées de référence titrant respectivement 2 - 4  -  6  -  8  et  10 mg
       d'acide sorbique par litre.

4.3.3.      Chromatographie

                                            ê 2676/90 (adapté)

      À 2 cm du bord inférieur de la plaque, déposer à l'aide d'une microseringue ou d'une micropipette 5 µl de  phase  éthérée  obtenue  Ö comme
       indiqué au point Õ 4.3.1 et 5 µl de chacune des solutions diluées de référence (Ö point Õ 4.3.2), les dépôts étant distants de 2 cm.

      Placer la phase mobile (Ö point Õ 4.1.4) dans la cuve pour chromatographie sur une hauteur de 0,5 cm environ et laisser l'atmosphère de  la
       cuve se saturer des vapeurs des solvants. Placer la plaque dans la cuve. Laisser développer le chromatogramme sur 12 à 15 cm (la durée  de
       développement est de 30 minutes environ). Sécher la plaque sous un courant d'air froid.  Examiner  le  chromatogramme  sous  une  lampe  à
       rayonnement ultra-violet à 254 nm.

                                            ê 2676/90

      Les taches relatives à l'acide sorbique apparaissent en violet sombre sur le fond jaune fluorescent de la plaque.

4.4.  Expression des résultats

      La comparaison de l'intensité du spot de l'échantillon à  analyser  et  des  spots  des  solutions  de  référence  permet  d'évaluer  semi-
       quantitativement la concentration en acide sorbique entre 2 et 10 mg par litre. Une concentration égale  à  1 mg  par  litre  pourra  être
       déterminée avec un dépôt de 10 µl de solution de l'échantillon à analyser.

      Des concentrations supérieures à 10 mg par litre pourront être déterminées avec un volume de dépôt de la solution à  analyser  inférieur  à
       5 µl (mesuré à l'aide d'une microseringue).

23.   ACIDE L-ASCORBIQUE

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

      Les méthodes proposées permettent de doser l'acide L-ascorbique et l'acide déhydroascorbique présents dans les vins ou les moûts.

1.1.  Méthode de référence (fluorimétrique)

      L'acide L-ascorbique est oxydé par action du charbon actif en acide déhydroascorbique. Ceci forme un composé fluorescent par réaction  avec
       l'orthophénylènediamine (O.P.D.A.). Un essai témoin en présence d'acide  borique  permet  de  déterminer  la  fluorescence  parasite  (par
       formation d'un complexe acide borique — acide déhydroascorbique) et de la déduire du dosage fluorimétrique.

1.2.  Méthode usuelle (colorimétrique)

      L'acide L-ascorbique est oxydé par l'iode en acide déhydroascorbique. Ce composé est précipité par la  2,4  dinitrophénylhydrazine  en  bis
       (2,4 — dinitrophénylhydrazone). Après séparation par chromatographie sur couche mince et solubilisation en  milieu  acétique,  ce  composé
       coloré en rouge est dosé par spectrophotométrie à 500 nm.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE (MÉTHODE FLUORIMÉTRIQUE)

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Solution de dihydrochlorure d'ortho-phénylènediamine (C6H10Cl2N2), à 0,02 g pour 100 ml, préparée extemporanément.

2.1.2.      Solution d'acétate de sodium trihydraté (CH3COONa 3H2O), à 500 g/l.

2.1.3.      Solution mixte d'acide borique et d'acétate de sodium

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre 3 g d'acide borique (H3BO3), dans 100 ml de solution d'acétate de sodium ( Ö point Õ 2.1.2). Cette solution  doit  être  préparée
       extemporanément.

                                            ê 2676/90

2.1.4.      Solution d'acide acétique cristallisable CH3COOH, (ρ20 = 1,05 g/ml) dilué à 56 pour 100 (v/v) de pH voisin de 1,2.

2.1.5.      Solution de référence d'acide L-ascorbique à 1 g par litre

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre au moment de l'emploi 50 mg d'acide L-ascorbique (C6H8O6), préalablement déshydraté dans un dessiccateur à l'abri de la  lumière,
       dans 50 ml de solution d'acide acétique ( Ö point Õ 2.1.4).

                                            ê 2676/90

2.1.6.      Charbon actif très pur pour analyses[15]

      Placer dans une fiole conique de 2 l de capacité 100 g de charbon actif, ajouter 500 ml d'une solution d'acide  chlorhydrique  (HCl),  (ρ20
       = 1,19 g/ml) à 10 pour 100 (v/v). Porter à l'ébullition, filtrer sur filtre en verre fritté de porosité 3.  Recueillir  le  charbon  ainsi
       traité dans une fiole conique de 2 l de capacité, ajouter 1 l d'eau, agiter et filtrer sur filtre de verre fritté de porosité  3.  Répéter
       deux fois cette opération. Plaçer le résidu dans une étuve réglée à 115 ± 5 °C pendant 12 heures (une nuit par exemple).

2.2.  Appareillage

2.2.1.      Fluorimètre. Utiliser un spectrofluorimètre équipé d'une lampe à spectre continu en se plaçant à la puissance minimale de  la  lampe.
       Les longueurs d'onde d'excitation et d'émission optimales pour  l'essai  seront  déterminées  préalablement  et  dépendent  de  l'appareil
       utilisé. À titre indicatif la longueur d'onde d'excitation se situe au voisinage de 350 nm, la longueur d'onde d'émission au voisinage  de
       430 nm.

      Cuves de 1 cm de trajet optique.

2.2.2.      Filtre en verre fritté de porosité 3.

2.2.3.      Tubes à essai (diamètre ≈ 10 mm).

2.2.4.      Agitateur pour tubes à essai.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon de vin ou de moût

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever un volume de vin ou de moût et le diluer à 100 ml dans une fiole jaugée avec la solution  d'acide  acétique  à  56 %  (  Ö point Õ
       2.1.4) afin d'obtenir une solution dont la concentration en acide L-ascorbique soit comprise  entre  0  et  60 mg/litre.  Homogénéiser  le
       contenu de la fiole jaugée par agitation. Ajouter 2 g de charbon actif (Ö point Õ 2.1.6) et  laisser  en  contact  durant  15  minutes  en
       agitant de temps en temps. Filtrer sur papier filtre ordinaire en éliminant les premiers millilitres de filtrat.

      Dans deux fioles jaugées de 100 ml introduire 5 ml de filtrat et, respectivement, 5 ml de solution mixte d'acide borique  et  d'acétate  de
       sodium (Ö point Õ 2.1.3) (témoin) et 5 ml de solution d'acétate de sodium (Ö point Õ 2.1.2) (solution mesure). Laisser en  contact  durant
       15 minutes en agitant de temps en temps, compléter à 100 ml avec de l'eau distillée.

      Prélever 2 ml du contenu de chacune des fioles, ajouter 5 ml de solution d'ortho-phénylènediamine (Ö point Õ  2.1.1),  agiter;  laisser  la
       réaction se développer durant 30 minutes à l'obscurité, puis effectuer la mesure au spectrofluorimètre.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Courbe d'étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans trois fioles jaugées de 100 ml placer respectivement 2, 4, 6 ml de solution de référence  d'acide  L-ascorbique  (  Ö point Õ  2.1.5),
       compléter à 100 ml avec la solution d'acide acétique (Ö point Õ 2.1.4), homogénéiser par agitation. Les solutions de  référence  préparées
       contiennent respectivement 2 - 4 - 6 mg/100 ml.

      Ajouter 2 g de charbon actif (Ö point Õ 2.1.6) dans chacune des fioles et laisser en contact durant 15  minutes  en  agitant  de  temps  en
       temps. Filtrer sur papier filtre ordinaire en éliminant les premiers millilitres. Introduire respectivement 5 ml de  chacun  des  filtrats
       recueillis dans trois fioles jaugées de 100 ml (première série), répéter l'opération dans une deuxième  série  de  trois  fioles  jaugées.
       Ajouter dans chacune des fioles de la première série (correspondant à l'essai témoin) 5 ml de solution mixte d'acide borique et  d'acétate
       de sodium (Ö point Õ 2.1.3) et dans chacune des fioles de la deuxième série 5 ml de solution d'acétate de sodium (Ö point Õ 2.1.2).

      Laisser en contact durant 15 minutes en agitant de temps en temps, compléter à 100 ml avec de l'eau distillée. Prélever 2 ml du contenu  de
       chacune des fioles, ajouter 5 ml de solution d'orthophénylènediamine (Ö point Õ 2.1.1), agiter, laisser la réaction se  développer  durant
       30 minutes à l'obscurité, puis effectuer la mesure au spectrofluorimètre.

                                            ê 2676/90

2.3.3.      Détermination fluorimétrique

      Régler pour chaque solution de la courbe d'étalonnage et pour la solution du dosage le zéro de l'échelle des  mesures  sur  l'essai  témoin
       correspondant. Effectuer ensuite la mesure de l'intensité de la fluorescence pour chaque solution de la  gamme  d'étalonnage  et  pour  le
       dosage.

      Tracer la courbe d'étalonnage; elle doit être linéaire et passer par l'origine. Reporter sur cette droite la valeur relative au  dosage  et
       déduire la teneur C en acide L-ascorbique + acide déhydroascorbique de la solution analysée.

2.3.4.      Expression des résultats

      La concentration du vin en acide L-ascorbique + acide déhydroascorbique exprimée en milligrammes par litre sera:

      C · F

       F    =     facteur de dilution

                                            ê 2676/90

24.   pH

1.    PRINCIPE

      Mesure de la différence de potentiel entre deux électrodes plongées dans le liquide étudié. L'une des électrodes a  un  potentiel  qui  est
       une fonction définie du pH du liquide, l'autre a un potentiel fixe et connu et constitue l'électrode de référence.

2.    APPAREILS

2.1.  pH mètre étalonné en unités pH permettant des mesures à 0,05 unité près au moins.

2.2.  Électrodes:

2.2.1.      Électrode de verre, à conserver dans l'eau distillée.

2.2.2.      Électrode de référence au calomel-chlorure de potassium saturé, à conserver dans une solution saturée de chlorure de potassium.

2.2.3.      Ou électrode combinée à conserver dans l'eau distillée.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Solutions tampons:

3.1.1.      Solution saturée de tartrate acide de potassium. Solution contenant au moins 5,7 g/l de tartrate  acide  de  potassium  (C4H5KO6),  à
       20 °C. Cette solution peut se conserver 2 mois en présence de 0,1 g de thymol pour 200 ml).

|pH        |3,57 à 20 °C                 |
|          |3,56 à 25 °C                 |
|          |3,55 à 30 °C                 |

3.1.2.      Solution 0,05 M de phtalate acide de potassium. Solution contenant 10,211 g/l de phtalate acide  de  potassium  (C8H5KO4),  à  20 °C.
       (Durée maximale de conservation: 2 mois).

|pH        |3,999 à 15 °C                |
|          |4,003 à 20 °C                |
|          |4,008 à 25 °C                |
|          |4,015 à 30 °C                |

3.1.3.      Solution contenant:

|Phosphate monopotassique, KH2 PO4 …                           |3,402       |g                  |
|Phosphate dipotassique, K2 H PO4 …                            |4,354       |g                  |
|Eau q.s.p. …                                                  |1           |l                  |

      (Durée maximale de conservation: 2 mois)

|pH        |6,90 à 15 °C                 |
|          |6,88 à 20°C                  |
|          |6,86 à 25 °C                 |
|          |6,85 à 30 °C                 |

      Remarque: Les solutions tampons de référence du commerce peuvent également être utilisées.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1   Préparation de l'échantillon à analyser

4.1.1.      Cas du moût et du vin

      Opérer directement sur le moût ou le vin.

4.1.2.      Cas du moût concentré rectifié

      Diluer le moût concentré rectifié avec de l'eau pour obtenir une concentration de 25 ± 0,5 pour 100 (m/m) en sucres totaux (25 ° Brix).

      Si P est la teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux du moût concentré rectifié, peser une masse égale à

      ((2 500)/(P))

      et compléter à 100 g avec de l'eau. L'eau utilisée doit avoir une conductivité inférieure à 2 microsiemens par centimètre.

4.2   Mise au zéro de l'appareil

      La mise au zéro s'effectue avant toute mesure, en suivant les indications données pour l'appareil utilisé.

4.3.  Étalonnage du pH mètre

      L'étalonnage s'effectue à 20 °C en suivant les indications données pour l'appareil utilisé avec les solutions tampons de pH 6,88 et 3,57  à
       20 °C.

      Utiliser la solution tampon de pH 4,00 à 20 °C pour contrôler le calibrage de l'échelle.

4.4.  Mesure

      Plonger l'électrode dans l'échantillon analysé dont la température doit être comprise entre 20 et 25 °C et aussi  proche  que  possible  de
       20 °C. Lire directement sur l'échelle la valeur du pH.

      Effectuer au moins deux déterminations sur le même échantillon.

      Prendre comme résultat la moyenne arithmétique des deux déterminations.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      Le pH du moût, du vin ou de la solution à 25 pour 100 (m/m) (25 ° Brix) du moût concentré rectifié est exprimé avec 2 décimales.

25.   DIOXYDE DE SOUFRE

1.    DÉFINITIONS

      On appelle dioxyde de soufre, le dioxyde de soufre présent dans le moût ou le vin sous les formes suivantes: H2SO3, H SO3 dont  l'équilibre
       est fonction du pH et de la température:

      H2SO3. [pic] H+ + HSO3−

      H2SO3 représente le dioxyde de soufre moléculaire.

      On appelle dioxyde de soufre total l'ensemble des différentes formes de dioxyde de soufre présentes dans le vin à l'état libre  ou  combiné
       à ses constituants.

2.    DIOXYDE DE SOUFRE LIBRE ET TOTAL

2.1.  Principe des méthodes

2.1.1.      Méthode de référence

2.1.1.1.    Cas des vins et des moûts

      Le dioxyde de soufre est entraîné par un courant d'air ou d'azote; il est fixé et oxydé par barbotage dans une solution  diluée  et  neutre
       de peroxyde d'hydrogène. L'acide sulfurique formé est dosé par une solution titrée d'hydroxyde de sodium. Le dioxyde de soufre  libre  est
       extrait du vin par entraînement à froid (10 °C).

      Le dioxyde de soufre total est extrait du vin par entraînement à chaud (100 °C environ).

2.1.1.2.    Cas des moûts concentrés rectifiés

      Le dioxyde de soufre total est extrait par entraînement à chaud (100 °C environ) du moût concentré rectifié préalablement dilué.

2.1.2.      Méthode rapide d'essai (cas des vins et des moûts)

      Le dioxyde de soufre libre est dosé par titrage iodométrique direct.

      Le dioxyde de soufre combiné est dosé, à la suite, par titrage iodométrique après hydrolyse alcaline. Ajouté au dioxyde  de  soufre  libre,
       il permet d'obtenir le dioxyde de soufre total.

2.2.  Méthode de référence

2.2.1.      Appareillage

2.2.1.1.    L'appareil utilisé doit être conforme au schéma ci-dessous, principalement en ce qui concerne le réfrigérant.

                                                                      [pic]

                                                                     Figure 1

        Les dimensions sont indiquées en millimètres. Les diamètres internes des 4 tubes concentriques qui constituent le réfrigérant sont: 45,
                                                                 34, 27 et 10 mm

      Le tube d'amenée des gaz dans le barboteur B est terminé par une petite sphère  de  1 cm  de  diamètre  comportant  sur  son  grand  cercle
       horizontal 20 trous de 0,2 mm de diamètre. On peut également le terminer par une plaque de verre fritté assurant la formation  d'un  grand
       nombre de très petites bulles réalisant un bon contact des phases gazeuse et liquide.

      Le débit gazeux qui doit parcourir l'appareil doit être de 40 l/h environ. Le flacon placé à la droite de l'appareil est destiné à  limiter
       de 20 à 30 cm d'eau la dépression produite par la trompe à eau. Pour pouvoir régler cette dépression de manière que le débit soit correct,
       il y a avantage à placer un débitmètre à tube semi-capillaire entre le barboteur et le flacon.

2.2.1.2.    Microburette.

2.2.2.      Réactifs

2.2.2.1.    Acide phosphorique à 85 pour 100 (H3PO4) (ρ20 = 1,71 g/ml).

2.2.2.2.    Solution de peroxyde d'hydrogène à 9,1 g d'H2O2/l (3 volumes).

2.2.2.3.    Réactif indicateur:

|rouge de méthyle …                                                     |100 mg         |
|bleu de méthylène …                                                    |50 mg          |
|alcool à 50 % vol. …                                                   |100 ml         |

2.2.2.4.    Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), 0,01 M.

2.2.3.      Mode opératoire

2.2.3.1.    Dosage du dioxyde de soufre libre

      Le vin doit être maintenu à 20 °C en flacon plein et bouché pendant 2 jours avant le dosage.

                                            ê 2676/90 (adapté)

         – Dans le barboteur B, placer 2 à 3 ml de solution de peroxyde d'hydrogène ( Ö point Õ 2.2.2.2) Il gouttes  de  réactif  indicateur  et
           neutraliser la solution de peroxyde d'hydrogène par la  solution  0,01 M  d'hydroxyde  de  sodium  (Ö point Õ  2.2.2.4).  Adapter  ce
           barboteur à l'appareil.

         – Dans le ballon A de 250 ml de l'appareil à entraînement, introduire 50 ml d'échantillon  et  15 ml  d'acide  phosphorique  (Ö point Õ
           2.2.2.1). Mettre en place le ballon.

         –      Faire ensuite barboter l'air (ou l'azote) pendant  15  minutes.  Le  dioxyde  de  soufre  libre  entraîné  est  oxydé  en  acide
           sulfurique. Retirer le barboteur de l'appareil et titrer l'acide formé par  la  solution  d'hydroxyde  de  sodium  0,01 M  (Ö point Õ
           2.2.2.4). Soit n le nombre de millilitres versés.

                                            ê 2676/90

2.2.3.2.    Expression des résultats

      Le dioxyde de soufre libre est exprimé en milligrammes par litre (mg/l) sans décimale.

2.2.3.2.1. Calcul

      Dioxyde de soufre libre en milligrammes par litre: 6,4 n.

2.2.3.3.    Dosage du dioxyde de soufre total

                                            ê 2676/90 (adapté)

2.2.3.3.1. Dans le cas des moûts concentrés rectifiés, utiliser la solution obtenue en diluant l'échantillon à  analyser  à  40  pour  100  (m/v)
       comme il est indiqué au chapitre «Acidité totale» Ö au point Õ 5.1.2. Dans le ballon A de 250 ml de l'appareil à entraînement,  introduire
       50 ml de cette solution et 5 ml d'acide phosphorique (Ö point Õ 2.2.2.1). Mettre en place le ballon.

                                            ê 2676/90

2.2.3.3.2. Cas des vins et des moûts

      Teneur présumée de l'échantillon ≤ 50 mg/l SO2 total.  Dans  le  ballon  A  de  250 ml  de  l'appareil  à  entraînement,  introduire  50 ml
       d'échantillon et 15 ml d'acide phosphorique (2.2.2.1). Mettre en place le ballon.

                                            ê 2676/90 (adapté)
                                            è1 69/96 Art. 1

       è1  ç

2.2.3.3.3. Teneur présumée de l'échantillon ≥ 50 mg/l de SO2 total. Dans le ballon A de 100 ml de l'appareil  à  entraînement,  introduire  20 ml
       d'échantillon et 5 ml d'acide phosphorique (Ö point Õ 2.2.2.1). Mettre en place le ballon.

      Placer dans le barboteur B 2 à 3 ml de solution de peroxyde d'hydrogène (Ö point Õ 2.2.2.2), la neutraliser comme précédemment,  porter  le
       vin contenu dans le ballon A à l'ébullition au moyen d'une petite flamme de 4 à 5 cm de haut  qui  doit  lécher  directement  le  fond  du
       ballon. Ne pas placer sous le ballon une toile métallique, mais le poser sur un disque percé d'un trou de  30 mm  de  diamètre.  On  évite
       ainsi la pyrogénation des matières extractives du vin sur les parois du ballon.

      Maintenir l'ébullition pendant le passage du courant d'air (ou d'azote). En 15 minutes, le dioxyde  de  soufre  total  a  été  entraîné  et
       oxydé. Doser l'acide sulfurique formé par la solution 0,01 M d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 2.2.2.4).

                                            ê 2676/90

      Soit n le nombre de millilitres versés.

2.2.3.4.    Expression des résultats

      Le dioxyde de soufre total est exprimé en milligrammes par litre (mg/l) respectivement en milligrammes par  kilogramme  (mg/kg)  de  sucres
       totaux sans décimale.

2.2.3.4.1. Calcul

         – Cas des vins et des moûts

            Dioxyde de soufre total en milligrammes par litre.

              – Échantillons pauvres en dioxyde de soufre (prise d'essai 50 ml):

            6,4 · n

              – Autres échantillons (prise d'essai 20 ml):

            16 · n

         – Cas des moûts concentrés rectifiés

                                            ê 2676/90 (adapté)

            Dioxyde de soufre en milligrammes par kilo de sucres totaux (prise d'essai 50 ml d'échantillon préparé) ( Ö point Õ 2.2.3.3.1):

                                            ê 2676/90

            ((1600 · n)/(P))

           P     =     teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux

2.2.3.4.2. Répétabilité (r)

      Teneur < 50 mg/l (prise d'essai de 50 ml), r = 1 mg/l

      Teneur > 50 mg/l (prise d'essai de 20 ml), r = 6 mg/l

2.2.3.4.3. Reproductibilité (R)

      Teneur < 50 mg/l (prise d'essai de 50 ml), R = 9 mg/l

      Teneur > 50 mg/l (prise d'essai de 20 ml), R = 15 mg/l

2.3. Méthode rapide d'essai

2.3.1. Réactifs

2.3.1.1. EDTA (Complexon III): sel disodique de l'acide éthylène diamine tétracétique (C10H14N2Na2O8, 2H2O).

2.3.1.2. Solution 4 M d'hydroxyde de sodium NaOH (160 g/l).

2.3.1.3. Acide sulfurique H2SO4 (r20 = 1,84 g/ml, solution au 1/10e (v/v).

2.3.1.4. Empois d'amidon solution à 5 g/l.

       Délayer 5 g d'amidon dans 500 ml d'eau environ. Porter à ébullition en agitant et maintenir l'ébullition pendant 10 minutes; ajouter 200 g
           de chlorure de sodium (NaCl). Porter au litre après refroidissement.

2.3.1.5. Solution 0,025 M d'iode (I2).2.3.2. Matériel

2.3.2.1. Fioles coniques de 500 ml.

2.3.2.2. Burette.

2.3.2.3. Pipettes de 1, 2, 5 et 50 ml.2.3.3. Mode opératoire

2.3.3.1. Dioxyde de soufre libre

       Dans une fiole conique de 500 ml, placer:- 50 ml de vin- 5 ml d'empois d'amidon (2.3.1.4)- 30 mg de EDTA (2.3.1.1)- 3 ml de H2SO4 au 1/10e
           (v/v) (2.3.1.3)

       Titrer immédiatement par l'iode 0,025 M (2.3.1.5) jusqu'à ce que la coloration bleue persiste nettement durant 10 à 15 secondes. Soit n ml
           le volume d'iode utilisé.2.3.3.2. Dioxyde de soufre combiné

       Ajouter 8 ml de solution 4 M d'hydroxyde de sodium (2.3.1.2), agiter une seule fois et laisser 5 minutes en contact. Verser d'un seul coup
           et en agitant énergiquement le contenu d'un petit vase cylindrique dans lequel 10 ml d'acide sulfurique au  1/10e  (2.3.1.3)  avaient
           été placés. Titrer immédiatement par l'iode 0,025 M, (2.3.1.5). Soit n' le volume d'iode employé.

       Ajouter 20 ml de solution 4 M d'hydroxyde de sodium (2.3.1.2), laisser en contact 5 minutes après avoir agité une seule fois. Diluer  avec
           200 ml d'eau aussi froide que possible.

       En agitant énergiquement, verser d'un seul coup 30 ml d'acide sulfurique au 1/10e (2.3.1.3)  préalablement  placés  dans  une  éprouvette.
           Titrer par l'iode 0,025 M (2.3.1.5) le dioxyde de soufre libéré. Soit n" le volume d'iode employé.2.3.4. Expression des résultats

2.3.4.1. Calcul

       Dioxyde de soufre libre en milligrammes par litre : 32 n

       Dioxyde de soufre total en milligrammes par litre : 32 (n + n2 + n").

       Remarques:1. Pour les vins rouges pauvres en SO2 il y a intérêt à employer de l'iode  plus  dilué  que  0,025  M,  par  exemple  :  0,01M.
           Remplacer le coefficient 32 par 12,8 dans les formules ci-dessus.2. Pour les vins rouges, il y a avantage  à  éclairer  le  vin  par-
           dessous avec un faisceau de lumière jaune obtenue à l'aide d'une ampoule électrique  ordinaire  et  d'une  solution  de  chromate  de
           potassium ou à l'aide d'une lampe à vapeur de sodium. Il faut se placer dans une chambre noire et observer la  transparence  du  vin,
           qui devient opaque dès que le virage de l'empois est atteint.3. Lorsque la quantité de dioxyde de soufre trouvée avoisine ou  dépasse
           la limite légale, il convient de doser le dioxyde de soufre total par  la  méthode  de  référence.4.  Lorsqu'on  attache  un  intérêt
           particulier au dosage du dioxyde de soufre, il sera conventionnellement déterminé sur un  échantillon  maintenu  pendant  2  jours  à
           l'abri de l'air à la température de 20 °C avant l'analyse: celle-ci sera également exécutée à cette température.5.  Étant  donné  que
           certaines substances sont oxydées par l'iode en milieu acide, il est nécessaire -  pour  des  dosages  plus  précis  -  d'évaluer  la
           quantité d'iode ainsi utilisée. Pour cela, il faut combiner le dioxyde de soufre libre par un excès d'éthanal ou de  propanal,  avant
           d'effectuer le titrage par l'iode. À 50 ml de vin placés dans une fiole conique de 300 ml, ajouter 5 ml de solution d'éthanal  (C2H4O
           à 7 g/l) ou 5 ml d'une solution de propanal (C3H6O) à 10 g/l.Boucher et laisser au repos 30 minutes au moins. Ajouter  3  ml  d'acide
           sulfurique au 1/10e (2.3.1.3) et de l'iode 0,025 M (2.3.1.5) en quantité suffisante pour faire virer l'empois d'amidon.  Soit  n4  le
           volume d'iode employé. Il doit être retranché de n (dioxyde de soufre libre) et de n + n2 +  n"  (dioxyde  de  soufre  total).n4  est
           généralement faible: 0,2 à 0,3 ml d'iode 0,025 M. Si le vin a été additionné d'acide ascorbique, n4 est beaucoup  plus  élevé  et  on
           peut, au moins approximativement, mesurer la quantité de ce produit par la valeur de n4 sachant que 1 ml d'iode 0,025 M oxyde 4,4  mg
           d'acide ascorbique. Par la mesure de n4, on peut ainsi déceler sans difficultés les vins qui ont été additionnés  d'acide  ascorbique
           en quantité supérieure à 20 mg/l et qui ne s'est pas transformé en produits d'oxydation.

                                                                    TABLEAU 1

                                                   Valeurs de la constante thermodynamique pkT

|Alcool % en volume                    |Température °C                                                                     |
|                                      |20              |25              |30              |35              |40              |
|0                                     |1,798           |2,000           |2,219           |2,334           |2,493           |
|5                                     |1,897           |2,098           |2,299           |2,397           |2,527           |
|10                                    |1,997           |2,198           |2,394           |2,488           |2,606           |
|15                                    |2,099           |2,301           |2,503           |2,607           |2,728           |
|20                                    |2,203           |2,406           |2,628           |2,754           |2,895           |

                                                                    TABLEAU 2

                                                  Valeurs de la constante mixte pkM (I = 0,038)

|Alcool % en volume                    |Température °C                                                                     |
|                                      |20              |25              |30              |35              |40              |
|0                                     |1,723           |1,925           |2,143           |2,257           |2,416           |
|5                                     |1,819           |2,020           |2,220           |2,317           |2,446           |
|10                                    |1,916           |2,116           |2,311           |2,405           |2,522           |
|15                                    |2,014           |2,216           |2,417           |2,520           |2,640           |
|20                                    |2,114           |2,317           |2,538           |2,663           |2,803           |

                                                                    TABLEAU 3

                                     Dioxyde de soufre moléculaire en pourcentage du dioxyde de soufre libre

                                                                   (I = 0,038)

|pH            |T = 20 °C                                                                                                   |
|              |Alcool % en volume                                                                                          |
|              |0                    |5                    |10                   |15                   |20                   |
|2,8           |7,73                 |9,46                 |11,55                |14,07                |17,09                |
|2,9           |6,24                 |7,66                 |9,40                 |11,51                |14,07                |
|3,0           |5,02                 |6,18                 |7,61                 |9,36                 |11,51                |
|3,1           |4,03                 |4,98                 |6,14                 |7,58                 |9,36                 |
|3,2           |3,22                 |3,99                 |4,94                 |6,12                 |7,58                 |
|3,3           |2,58                 |3,20                 |3,98                 |4,92                 |6,12                 |
|3,4           |2,06                 |2,56                 |3,18                 |3,95                 |4,92                 |
|3,5           |1,64                 |2,04                 |2,54                 |3,16                 |3,95                 |
|3,6           |1,31                 |1,63                 |2,03                 |2,53                 |3,16                 |
|3,7           |1,04                 |1,30                 |1,62                 |2,02                 |2,53                 |
|3,8           |0,83                 |1,03                 |1,29                 |1,61                 |2,02                 |
|T = 25 °C                                                                                                                 |
|2,8           |11,47                |14,23                |17,15                |20,67                |24,75                |
|2,9           |9,58                 |11,65                |14,12                |17,15                |22,71                |
|3,0           |7,76                 |9,48                 |11,55                |14,12                |17,18                |
|3,1           |6,27                 |7,68                 |9,40                 |11,55                |14,15                |
|3,2           |5,04                 |6,20                 |7,61                 |9,40                 |11,58                |
|3,3           |4,05                 |4,99                 |6,14                 |7,61                 |9,42                 |
|3,4           |3,24                 |4,00                 |4,94                 |6,14                 |7,63                 |
|3,5           |2,60                 |3,20                 |3,97                 |4,94                 |6,16                 |
|3,6           |2,07                 |2,56                 |3,18                 |3,97                 |4,55                 |
|3,7           |1,65                 |2,05                 |2,54                 |3,18                 |3,98                 |
|3,8           |1,32                 |1,63                 |2,03                 |2,54                 |3,18                 |
|T = 30 °C                                                                                                                 |
|2,8           |18,05                |20,83                |24,49                |29,28                |35,36                |
|2,9           |14,89                |17,28                |20,48                |24,75                |30,29                |
|3,0           |12,20                |14,23                |16,98                |20,71                |25,66                |
|3,1           |9,94                 |11,65                |13,98                |17,18                |21,52                |
|3,2           |8,06                 |9,48                 |11,44                |14,15                |17,88                |
|3,3           |6,51                 |7,68                 |9,30                 |11,58                |14,75                |
|3,4           |5,24                 |6,20                 |7,53                 |9,42                 |12,08                |
|3,5           |4,21                 |4,99                 |6,08                 |7,63                 |9,84                 |
|3,6           |3,37                 |4,00                 |4,89                 |6,16                 |7,98                 |
|3,7           |2,69                 |3,21                 |3,92                 |4,95                 |6,44                 |
|3,8           |2,16                 |2,56                 |3,14                 |3,98                 |5,19                 |
|T = 35 °C                                                                                                                 |
|2,8           |22,27                |24,75                |28,71                |34,42                |42,18                |
|2,9           |18,53                |20,71                |24,24                |29,42                |36,69                |
|3,0           |15,31                |17,18                |20,26                |24,88                |31,52                |
|3,1           |12,55                |14,15                |16,79                |20,83                |26,77                |
|3,2           |10,24                |11,58                |13,82                |17,28                |22,51                |
|3,3           |8,31                 |9,42                 |11,30                |14,23                |18,74                |
|3,4           |6,71                 |7,63                 |9,19                 |11,65                |15,49                |
|3,5           |5,44                 |6,16                 |7,44                 |9,48                 |12,71                |
|3,6           |4,34                 |4,95                 |6,00                 |7,68                 |10,36                |
|3,7           |3,48                 |3,98                 |4,88                 |6,20                 |8,41                 |
|3,8           |2,78                 |3,18                 |3,87                 |4,99                 |6,80                 |
|T = 40 °C                                                                                                                 |
|2,8           |29,23                |30,68                |34,52                |40,89                |50,14                |
|2,9           |24,70                |26,01                |29,52                |35,47                |44,74                |
|3,0           |20,67                |21,83                |24,96                |30,39                |38,85                |
|3,1           |17,15                |18,16                |20,90                |25,75                |33,54                |
|3,2           |14,12                |14,98                |17,35                |21,60                |28,62                |
|3,3           |11,55                |12,28                |14,29                |17,96                |24,15                |
|3,4           |9,40                 |10,00                |11,70                |14,81                |20,19                |
|3,5           |7,61                 |8,11                 |9,52                 |12,13                |16,73                |
|3,6           |6,14                 |6,56                 |7,71                 |9,88                 |13,77                |
|3,7           |4,94                 |5,28                 |6,22                 |8,01                 |11,25                |
|3,8           |3,97                 |4,24                 |5,01                 |6,47                 |9,15                 |

26.   SODIUM

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de référence: spectrophotométrie d'absorption atomique

      Le sodium est dosé directement dans le vin par spectrophotométrie d'absorption atomique après addition d'un tampon spectral de chlorure  de
       césium pour éviter l'ionisation du sodium.

1.2.  Méthode usuelle: photométrie de flamme

      Le sodium est dosé directement dans le vin dilué au moins 1/10e par photométrie de flamme.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Solution de sodium à 1 g par litre

      Utiliser une solution standard de sodium du commerce à 1 g/l. Cette solution peut être  préparée  en  dissolvant  2,542 g  de  chlorure  de
       sodium NaCl, desséché, dans de l'eau distillée et en ajustant le volume à 1 litre.

      Conserver cette solution dans un flacon en polyéthylène.

2.1.2.      Solution modèle

|Acide citrique C6H8O7, H2O …                       |3,5          |g            |
|Saccharose C12H22O11 …                             |1,5          |g            |
|Glycérol C3H8O3 …                                  |5,0          |g            |
|Chlorure de calcium anhydre Ca Cl2 …               |50           |mg           |
|Chlorure de magnésium anhydre Mg Cl2 …             |50           |mg           |
|Alcool absolu C2H5OH …                             |50           |ml           |
|Eau q.s.p. …                                       |500          |ml           |

2.1.3.      Solution de chlorure de césium à 5 pour 100 en césium

      Dissoudre 6,330 g de chlorure de césium, Cs Cl, dans 100 ml d'eau distillée.

2.2.  Appareils

2.2.1.      Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

2.2.2.      Lampe à cathode creuse au sodium.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever 2,5 ml de vin, les placer dans une fiole jaugée de 50 ml, ajouter 1 ml de la solution de chlorure de césium ( Ö point Õ 2.1.3)  et
       amener au trait repère avec de l'eau distillée.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une série de fioles jaugées de 100 ml introduire 5,0 ml de solution modèle, placer 0 - 2,5 - 5 - 7,5 - 10 ml de la solution de  sodium
       à 1 g/l ( Ö point Õ 2.1.1) préalablement diluée 1/100, ajouter dans toutes les fioles 2 ml de la solution de chlorure de césium (Ö point Õ
       2.1.3) et ajuster le volume à 100 ml avec de l'eau distillée.

                                            ê 2676/90

      Les solutions étalons préparées titrent respectivement 0 - 0,25 - 0,50 - 0,75 - 1,00 mg de sodium par litre et contiennent  1 g  de  césium
       par litre. Ces solutions seront conservées dans des flacons en polyéthylène.

2.3.3.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 589,0 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec la solution modèle contenant 1 g de  césium  par
       litre ( Ö point Õ 2.3.2). Aspirer directement le vin dilué dans le brûleur du spectrophotomètre puis successivement les solutions  étalons
       (Ö point Õ 2.3.2). Relever les absorbances. Effectuer les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

2.4.  Expression des résultats

2.4.1.      Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en sodium des solutions étalons.

      Reporter la valeur moyenne des absorbances obtenues pour l'échantillon sur cette courbe et déterminer  la  concentration  C  en  sodium  en
       milligrammes par litre.

      La concentration en sodium exprimée en milligrammes par litre de vin sans décimale sera:

      20 · C

2.4.2.      Répétabilité (r)

       r    =     1 + 0,024 xi mg/l

       xi   =     concentration en sodium de l'échantillon en mg/l.

2.4.3.      Reproductibilité (R)

       R    =     2,5 + 0,05 xi mg/l

       xi   =     concentration en sodium de l'échantillon en mg/l.

3. Méthode usuelle

3.1. Réactifs

3.1.1. Solution étalon de sodium à 20 mg par litre

       Alcool absolu (C2H5OH) 10 mlAcide citrique (C6H8O7, H2O) 700 mgSaccharose (C12H22O11) 300 mgGlycérol (C3H8O3)1  000  mgTartrate  acide  de
           potassium (C4H5KO6) 481,3 mgChlorure de calcium anhydre (Ca Cl2) 10 mgChlorure de magnésium anhydre (Mg Cl2) 10 mgChlorure de  sodium
           desséché (NaCl) 50,84 mgEau q.s.p. 1 l

3.1.2. Solution de dilution

       Alcool absolu (C2H5OH) 10 mlAcide citrique (C6H8O7, H2O) 700 mgSaccharose (C12H22O11) 300 mgGlycérol (C3H8O3)1  000  mgTartrate  acide  de
           potassium (C4H5KO6) 481,3 mgChlorure de calcium anhydre (Ca Cl2) 10 mgChlorure de magnésium anhydre (Mg Cl2) 10 mgEau q.s.p. 1 l

       Pour préparer les solutions 3.1.1 et 3.1.2, dissoudre le tartrate acide de potassium dans 500 ml  environ  d'eau  distillée  très  chaude,
           mélanger la solution aux autres constituants préalablement dissous dans 400 ml d'eau distillée et ajuster à 1 litre.

       Ces solutions additionnées de 2 gouttes d'isothiocyanate d'allyle seront conservées dans des flacons en polyéthylène.

3.2. Appareil

3.2.1. Photomètre de flamme alimenté par un mélange air-butane.

3.3. Mode opératoire

3.3.1. Étalonnage

       Dans cinq fioles jaugées de 100 ml, placer 5 - 10 - 15 - 20 - 25 ml de la solution de sodium à 20 mg/l (3.1.1) et compléter à 100 ml  avec
           la solution de dilution (3.1.2). On obtient ainsi des solutions contenant respectivement 1 - 2 - 3 - 4 - 5 mg de sodium par litre.

3.3.2. Dosage

       Effectuer les mesures à 589,0 nm. Régler le 100 % de transmission avec  de  l'eau  distillée.  Aspirer  directement  dans  le  brûleur  du
           photomètre, successivement les solutions-étalons (3.3.1), puis le vin  dilué  au  1/10e  avec  de  l'eau  distillée  et  relever  les
           pourcentages de transmission. Si cela est nécessaire, diluer le vin déjà dilué au 1/10e avec la solution de dilution (3.1.2).

3.4. Expression des résultats

3.4.1. Mode de calcul

       Tracer la courbe des variations du pourcentage de transmission en fonction de la concentration en sodium des solutions  étalons.  Reporter
           la transmission obtenue pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et relever la concentration C en sodium. La concentration en
           milligrammes de sodium par litre sans décimale sera:C · FF = Facteur de dilution.

3.4.2. Répétabilité (r)

       (Sauf vins de liqueur) : r = 1,4 mg/lVins de liqueur r = 2,0 mg/l.3.4.3. Reproductibilité (R)

       R = 4,7 + 0,08 xi mg/l.xi = concentration en sodium de l'échantillon en mg/l.

27.   POTASSIUM

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode de référence

      Le potassium est dosé directement dans le vin dilué par spectrophotométrie d'absorption atomique après addition  d'un  tampon  spectral  de
       chlorure de césium pour éviter l'ionisation du potassium.

1.2.  Méthode usuelle

      Le potassium est dosé directement dans le vin dilué par photométrie de flamme.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Solution de potassium à 1 g par litre

      Utiliser une solution standard de potassium du commerce à 1 g/l. Cette solution peut être préparée en dissolvant 4,813 g de tartrate  acide
       de potassium (C4H5KO6) dans de l'eau distillée et en ajustant le volume à 1 litre.

2.1.2.      Solution modèle

|Acide citrique (C6H8O7, H2O) …                                       |3,5         |g           |
|Saccharose (C12H22O11) …                                             |1,5         |g           |
|Glycérol (C3H8O3) …                                                  |5,0         |g           |
|Chlorure de calcium anhydre (Ca Cl2) …                               |50          |mg          |
|Chlorure de magnésium anhydre (Mg Cl2) …                             |50          |mg          |
|Alcool absolu (C2H5OH) …                                             |50          |ml          |
|Eau q.s.p. …                                                         |500         |ml          |

2.1.3.      Solution de chlorure de césium à 5 pour 100 en césium

      Dissoudre 6,330 g de chlorure de césium (Cs Cl) dans 100 ml d'eau distillée.

2.2.  Appareils

2.2.1.      Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

2.2.2.      Lampe à cathode creuse au potassium.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever 2,5 ml de vin (préalablement dilué 1/10e), les placer dans une fiole jaugée de 50 ml, ajouter 1 ml de la solution de  chlorure  de
       césium ( Ö point Õ 2.1.3) et amener au trait de jauge avec de l'eau distillée.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une série de fioles jaugées de 100 ml, introduire 5 ml de solution modèle ( Ö point Õ 2.1.2) placer 0 - 2,0 - 4,0 - 6,0  -  8,0 ml  de
       la solution de potassium à 1 g par litre (Ö point Õ 2.1.1) (préalablement diluée au 1/10e), ajouter dans toutes  les  fioles  2 ml  de  la
       solution de chlorure de césium (Ö point Õ 2.1.3), ajuster le volume à 100 ml avec de  l'eau  distillée.  Les  solutions-étalons  préparées
       titrent respectivement 0 - 2 - 4 - 6 - 8 mg de potassium par litre et contiennent 1 g de césium par litre. Ces solutions seront conservées
       dans des flacons en polyéthylène.

                                            ê 2676/90

2.3.3.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 769,9 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec la solution modèle contenant 1 g de  césium  par
       litre ( Ö point Õ 2.3.2). Aspirer directement le vin dilué (Ö point Õ 2.3.1) dans le brûleur du spectrophotomètre puis successivement  les
       solutions étalons (Ö point Õ 2.3.2); relever les absorbances. Effecteur les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

2.4.  Expression des résultats

2.4.1.      Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en potassium des solutions-étalons.

      Reporter la valeur moyenne des absorbances obtenues pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et déterminer la  concentration  C  en
       potassium en milligrammes par litre.

      La concentration en potassium exprimée en milligrammes par litre de vin, sans décimale, sera: F · C

       F    =     facteur de dilution (ici 200).

2.4.2.      Répétabilité (r)

       r    =     35 mg/l.

2.4.3.      Reproductibilité (R)

       R    =     66 mg/l.

2.4.4.      Autres expressions des résultats

         – en milliéquivalents par litre: 0,0256 · F · C

         – en tartrate acide de potassium en milligrammes par litre

            4,813 · F · C.

3. MÉTHODE USUELLE: SPECTROPHOTOMÉTRIE DE FLAMME

3.1. Réactifs

3.1.1. Solution de référence à 100 mg de potassium par litre

       Alcool absolu (C2H5OH) 10 mlAcide citrique (C6H8O7, H2O) 700 mgSaccharose (C12H22O11) 300 mgGlycérol (C3H8O3)1 000  mgChlorure  de  sodium
           (NaCl) 50,8 mgChlorure de calcium anhydre (Ca Cl2) 10 mgChlorure de magnésium anhydre (Mg  Cl2)  10  mgTartrate  acide  de  potassium
           desseché (C4H5KO6) 481,3 mgEau q.s.p.1 000 ml

       Dissoudre le tartrate acide de potassium dans environ 500 ml d'eau distillée très chaude, mélanger la  solution  aux  autres  constituants
           préalablement dissous dans 400 ml d'eau distillée et ajuster à 1 litre.3.1.2. Solution de dilution

       Alcool absolu (C2H5OH) 10 mlAcide citrique (C6H8O7, H2O) 700 mgSaccharose (C12H22O11) 300 mgGlycérol (C3H8O3)1 000  mgChlorure  de  sodium
           (NaCl) 50,8 mgChlorure de calcium anhydre (Ca Cl2) 10 mgChlorure de magnésium anhydre (Mg Cl2)  10  mgAcide  tartrique  (C4H6O6)  383
           mgEau q.s.p.1 000 ml

       Ces solutions, additionnées de 2 gouttes d'isothiocyanate d'allyle seront conservées dans des flacons en polyéthylène.

3.2. Appareils

3.2.1. Photomètre à flamme alimenté par un mélange air-butane.

3.3. Mode opératoire

3.3.1. Étalonnage

       Dans quatre fioles jaugées de 100 ml, placer 25 - 50 - 75 - 100 ml de la solution de référence (3.1.1) et  compléter  à  100  ml  avec  la
           solution de dilution (3.1.2). On obtient ainsi des solutions contenant respectivement 25 - 50 - 75 - 100 mg par litre de potassium.

3.3.2. Dosage

       Effectuer les mesures à 766 nm. Régler le 100 % de  transmission  avec  de  l'eau  distillée.  Aspirer  directement  dans  le  brûleur  du
           photomètre, successivement les solutions-étalons (3.3.1), puis le vin  dilué  au  1/10e  avec  de  l'eau  distillée  et  relever  les
           pourcentages de transmission. Si cela est nécessaire, diluer à nouveau le vin déjà dilué au  1/10e,  avec  la  solution  de  dilution
           (3.1.2).

3.4. Expression des résultats

3.4.1. Mode de calcul

       Tracer la courbe de variation des pourcentages de transmission en  fonction  de  la  concentration  en  potassium  des  solutions-étalons.
           Reporter la transmission obtenue pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et déterminer la concentration C en potassium.

       La concentration en milligrammes de potassium par litre sans décimale sera:C · FF = facteur de dilution.3.4.2.Répétabilité (r)

       r = 17 mg/l.3.4.3. Reproductibilité (R)

       R = 66 mg/l.3.4.4. Autres expressions des résultats:

       - en milliéquivalents par litre: 0,0256 · F · C- en tartrate acide de potassium en milligrammes par litre: 4,813 · F · C.

28.   MAGNÉSIUM

1.    PRINCIPE

      Le magnésium est dosé directement dans le vin convenablement dilué par spectrophotométrie d'absorption atomique.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Solution étalon concentrée de magnésium titrant 1 g par litre

      Utiliser une solution standard de magnésium du commerce, à 1 g/l. Cette solution peut être préparée en dissolvant 8,3646 g de  chlorure  de
       magnésium (MgCl2, 6 H2O) dans de l'eau distillée et en ajustant le volume à 1 litre.

2.2.  Solution étalon diluée de magnésium titrant 5 mg par litre

      Remarque:  Conserver les solutions-étalons de magnésium dans des flacons en polyéthylène.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

3.2.  Lampe à cathode creuse au magnésium.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

      Diluer le vin au 1/100e avec de l'eau distillée.

4.2.  Étalonnage

      Dans une série de fioles jaugées de 100 ml, placer 5 - 10 - 15 et 20 ml de la solution 2.2 et compléter à 100 ml avec de  l'eau  distillée.
       Les solutions préparées titrent respectivement 0,25 - 0,50 - 0,75 - 1 mg de magnésium par litre. Ces solutions seront conservées dans  des
       flacons en polyéthylène.

4.3.  Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 285 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec de l'eau distillée.  Aspirer  directement  le  vin
       dilué dans le brûleur du spectrophotomètre, puis successivement les solutions-étalons préparées Ö comme indiqué au point Õ 4.2.

                                            ê 2676/90

      Relever les absorbances; effectuer les déterminations en double.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en magnésium des solutions-étalons.

      Reporter la valeur moyenne des absorbances obtenues pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et déterminer la  concentration  en  C
       en magnésium.

      La concentration en magnésium exprimée en milligrammes par litre de vin sans décimale sera:

      100 · C.

5.2.  Répétabilité (r)

       r    =     3 mg/l.

5.3.  Reproductibilité (R)

       R    =     8 mg/l.

29.   CALCIUM

1.    PRINCIPE

      Le calcium est dosé directement dans le vin convenablement dilué par spectrophotométrie d'absorption atomique, après addition  d'un  tampon
       spectral.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Solution étalon de calcium titrant 1 g par litre

      Utiliser une solution standard de calcium du commerce, à 1 g/l. Cette solution peut être préparée  en  dissolvant  2,5 g  de  carbonate  de
       calcium (Ca CO3), dans la quantité suffisante de HCl dilué au 1/10e (v/v) pour obtenir sa dissolution et en ajustant le volume à  1  litre
       avec de l'eau distillée.

2.2.  Solution étalon diluée de calcium titrant 50 mg par litre

      Remarque:  Conserver les solutions-étalons de calcium dans des flacons en polyéthylène.

2.3.  Solution de chlorure de lanthane à 50 g/l en lanthane

      Dissoudre 13,369 g de chlorure de lanthane (La Cl3, 7 H2O), dans de l'eau distillée; ajouter 1 ml de HCl dilué 1/10  (v/v)  et  ajuster  le
       volume à 100 ml.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

3.2.  Lampe à cathode creuse au calcium.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

      Dans une fiole jaugée de 20 ml, placer 1 ml de vin, 2 ml de solution 2.3 et amener au trait de jauge avec de l'eau distillée. Le vin  dilué
       au 1/20e titre 5 g de lanthane par litre.

      Remarque:  Pour les vins doux, la concentration de 5 g de lanthane par litre est suffisante à condition que la dilution amène la teneur  en
       sucres à moins de 2,5 g par litre. Pour des concentrations supérieures en sucres, il est nécessaire de porter à 10 g par litre  la  teneur
       en lanthane.

4.2.  Étalonnage

      Dans cinq fioles jaugées de 100 ml placer 0 - 5 - 10 - 15 et 20 ml de la solution 2.2, ajouter dans toutes les fioles 10 ml de la  solution
       2.3 et ajuster le volume à 100 ml avec de l'eau distillée. Les solutions-étalons préparées titrent respectivement 0 - 2,5 -  5  -  7,5  et
       10 mg de calcium par litre et contiennent 5 g de lanthane par litre. Ces solutions seront conservées dans des flacons en polyéthylène.

4.3.  Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 422,7 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec la solution contenant 5 g de lanthane par  litre
       (Ö point Õ 4.2). Aspirer directement le vin dilué  dans  le  brûleur  du  spectrophotomètre,  puis  successivement  les  solutions-étalons
       préparées Ö comme indiqué au point Õ 4.2. Relever les absorbances. Effectuer les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en calcium des solutions-étalons.

      Reporter la valeur moyenne des absorbances obtenues pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et déterminer sa  concentration  C  en
       calcium. La concentration en calcium exprimé en milligrammes par litre de vin sans décimale sera:

      20 · C

5.2.  Répétabilité (r)

|Teneur < 60 mg/l: r              |=       |2,7 mg/l       |
|Teneur > 60 mg/l: r              |=       |4 mg/l.        |

5.3.  Reproductibilité (R)

       R    =     0,114 x i − 0,5

       x i  =     concentration en mg/l de l'échantillon.

30.   FER

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

      MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

      Après dilution convenable du vin et élimination de l'alcool, le fer est dosé directement par spectrophotométrie d'absorption atomique.

      MÉTHODE USUELLE

      Après minéralisation du vin par le perhydrol, le fer qui se trouve à l'état de fer III est réduit à l'état de fer II est dosé  grâce  à  la
       coloration rouge qu'il donne avec l'orthophénanthroline.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Solution étalon concentrée de fer III titrant 1 g par litre.

      Utiliser une solution standard du commerce à 1 g/l. Cette solution peut être préparée en dissolvant 8,6341 g  de  sulfate  de  fer  III  et
       d'ammonium (FeNH4(SO4)2, 12H2O) dans de l'eau distillée légèrement acidifiée par de l'acide chlorhydrique M et en ajustant le volume  à  1
       litre.

2.1.2.      Solution étalon diluée de fer titrant 100 milligrammes par litre.

2.2.  Appareillage

2.2.1.      Évaporateur rotatif avec bain d'eau thermostaté.

2.2.2.      Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

2.2.3.      Lampe à cathode creuse en fer.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

      Éliminer l'alcool du vin par concentration du volume de l'échantillon au demi à l'aide d'un  évaporateur  rotatif  (50-60 °C).  Ramener  au
       volume initial avec de l'eau distillée.

      Effectuer si nécessaire une dilution préalablement au dosage.

2.3.2.      Étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans cinq fioles jaugées de 100 ml, placer 1 - 2 - 3 - 4 - 5 ml de la solution de fer à 100 milligrammes par  litre  (Ö point Õ  2.1.2)  et
       compléter à 100 ml avec de l'eau distillée. Les solutions préparées titrent respectivement 1 - 2 - 3 - 4 - 5 mg de fer par litre.

                                            ê 2676/90

      Ces solutions seront conservées dans des flacons en polyéthylène.

2.3.3.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 248,3 nm. Régler le zéro de  l'échelle  des  absorbances  avec  de  l'eau  distillée.  Aspirer  directement
       l'échantillon dilué dans le brûleur du spectrophotomètre puis successivement les solutions-étalons préparées Ö comme  indiqué  au  point Õ
       2.3.2. Relever les absorbances. Effectuer les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

2.4.  Expression des résultats

2.4.1.      Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en fer des solutions-étalons. Reporter la valeur  moyenne  de
       l'absorbance obtenue pour l'échantillon de vin dilué sur cette courbe et déterminer la concentration en fer C.

      La concentration en fer exprimée en milligrammes par litre de vin avec 1 décimale sera:

      C · F

       F    =     facteur de dilution.

3. MÉTHODE USUELLE

3.1. Réactifs

3.1.1. Solution de peroxyde d'hydrogène (H2O2) à 30 pour 100 (m/g) exempt de fer.

3.1.2. Solution d'acide chlorhydrique, exempt de fer, 1 M.

3.1.3. Hydroxyde d'ammonium, NH4OH (r20 = 0,92 g/ml).

3.1.4. Pierre ponce traitée par l'acide chlorhydrique au 1/2 bouillant et lavée avec de l'eau distillée.

3.1.5. Solution d'hydroquinone (C6H6O2) à 2,5 pour 100, acidifiée par 1 ml d'acide sulfurique pur (r20 = 1,84 g/ml)  pour  100  ml  de  solution.
       Cette solution est conservée dans un flacon jaune au réfrigérateur et remplacée dès apparition du moindre brunissement.

3.1.6. Solution de sulfite de sodium (NA2SO3) à 20 pour 100 préparée à partir du sulfite neutre et anhydre.

3.1.7. Solution d'orthophénantroline (C12H8N2, H2O) à 0,5 pour 100 dans l'alcool à 96 % vol.

3.1.8. Solution d'acétate d'ammonium (CH3 COONH4) à 20 pour 100 (m/v).

3.1.9. Solution de fer III à 1 g de fer par litre. Utiliser une solution standard du commerce. Cette solution peut être  préparée  en  dissolvant
       8,6341 g de sulfate de fer et d'ammonium (NH4Fe(SO4)2, 12H2O) dans 100 ml de solution 1M d'acide chlorhydrique (3.1.2) et en  ajustant  le
       volume à 1 litre avec la solution 1M d'acide chlorhydrique (3.1.2).

3.1.10 Solution étalon diluée de fer à 100 milligrammes par litre.

3.2. Appareillage

3.2.1. Fiole ovoïde de Kjeldahl de 100 ml.

3.2.2. Spectrophotomètre permettant d'effectuer des mesures à la longueur d'onde de 508 nm.

3.3. Mode opératoire

3.3.1. Minéralisation

3.3.1.1. Vin dont la teneur en sucres est inférieure à 50 g/l

       Dans la fiole de Kjeldahl introduire 25 ml de vin, 10 ml de solution de peroxyde d'hydrogène (3.1.1) et quelques grains  de  pierre  ponce
           (3.1.4). Concentrer le liquide jusqu'à un volume de 2 à 3 ml.

       Après refroidissement, ajouter au résidu obtenu, sans mouiller les parois  du  ballon,  de  l'hydroxyde  d'ammonium  (3.1.3)  en  quantité
           nécessaire pour alcaliniser le milieu et précipiter les hydroxydes.

       Après refroidissement, additionner le liquide alcalin de solution 1M d'acide chlorhydrique (3.1.2) en quantité nécessaire  pour  dissoudre
           le précipité des hydroxydes et transvaser la solution obtenue dans une fiole jaugée de 100 ml. Après rinçage de la fiole de  Kjeldahl
           avec la solution M d'acide chlorhydrique (3.1.2), ajuster le volume à 100 ml à l'aide de la même solution.3.3.1.2. Moûts et vins dont
           la teneur en sucres est supérieure à 50 g/l

3.3.1.2.1. Teneur en sucres comprise entre 50 et 200 g/l:la prise d'essai de 25 ml de moût ou de vin  est  traitée  par  20  ml  de  solution  de
       peroxyde d'hydrogène (3.1.1).Continuer comme il est décrit en 3.3.1.1.

3.3.1.2.2. Teneur en sucres supérieure à 200 g/l:les échantillons de moût ou de vin doivent être préalablement dilués au 1/2 ou même  au  1/4  et
       traités selon le mode opératoire 3.3.1.2.1.3.3.2. Essai à blanc

       Effectuer un essai à blanc avec de l'eau distillée en employant le même volume de solution  de  peroxyde  d'hydrogène  (3.1.1)  que  celui
           utilisé pour la minéralisation et en suivant le protocole expérimental décrit en 3.3.1.1.3.3.3. Dosage

       Prélever 20 ml de la solution chlorhydrique du produit de minéralisation de l'échantillon (3.3.1.1) et 20 ml de la solution  chlorhydrique
           «essai à blanc» (3.3.2) et les introduire dans deux fioles jaugées de  50  ml.  Ajouter  dans  chaque  fiole  2  ml  de  la  solution
           d'hydroquinone (3.1.5), 2 ml de la solution de sulfite (3.1.6) et 1 ml de la solution d'orthophénanthroline (3.1.7). Laisser au repos
           pendant 15 minutes pour favoriser la réduction du Fe III en Fe II. Ajouter 10 ml de la solution d'acétate d'ammonium (3.1.8), ajuster
           le volume à 50 ml avec de l'eau distillée et agiter les deux fioles jaugées. Mesurer l'absorbance à 508 nm de la solution à doser  en
           réglant le zéro de l'échelle des absorbances avec la solution provenant de l'essai à blanc.

3.3.4. Étalonnage

       Dans quatre fioles jaugées de 50 ml, placer 0,5 - 1 - 1,5 - 2 ml de la solution à 100 mg de fer par litre (3.1.10), 20 ml d'eau distillée;
           continuer selon le mode opératoire décrit en 3.3.3. Ces solutions correspondent respectivement à 50 - 100 - 150 - 200 microgrammes de
           fer dans la prise d'essai.

3.4. Expression des résultats

3.4.1. Mode de calcul

       Tracer la courbe des variations de l'absorbance en fonction de la concentration  en  fer  des  solutions  étalons.  Reporter  l'absorbance
           obtenue pour la solution à examiner et déterminer la concentration en fer C contenue dans la prise  d'essai  de  20  ml  de  solution
           chlorhydrique de minéralisation, c'est-à-dire dans 5 ml d'échantillon à analyser.

       La concentration en fer exprimée en milligrammes par litre de vin avec 1 décimale sera:200 · C.

       Si le vin (ou le moût) a été dilué, la concentration en fer exprimée en milligrammes par litre de vin avec 1 décimale sera:200 · C · F.F =
           facteur de dilution.

31.   CUIVRE

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Emploi de la spectrophotométrie d'absorption atomique.

2.    APPAREILS

2.1.  Capsule de platine.

2.2.  Spectrophotomètre d'absorption atomique.

2.3.  Lampe à cathode creuse au cuivre.

2.4.  Gaz d'alimentation: air/acétylène ou protoxyde d'azote/acétylène.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Cuivre métal.

3.2.  Acide nitrique concentré 65 % (HNO3, ρ20 = 1,38 g/ml).

3.3.  Acide nitrique dilué 1/2 (v/v).

3.4.  Solution de cuivre à 1 g/l

      Utiliser une solution standard de cuivre du commerce, a 1 g/l. Cette solution peut être préparée en pesant 1,000 g de cuivre  métal  et  en
       transférant quantitativement dans une fiole jaugée de 1 000 ml. Ajouter de l'acide nitrique  dilué  1/2  (3.3),  en  quantité  strictement
       suffisante pour dissoudre le métal, ajouter 10 ml d'acide nitrique concentré (3.2), porter au trait repère avec de l'eau bidistillée.

3.5.  Solution de cuivre à 100 mg/l

      Prélever 10 ml de la solution 3.4 et les placer dans une fiole jaugée de 100 ml en complétant le volume avec de l'eau bidistillée.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon et dosage du cuivre

      Si nécessaire préparer une dilution appropriée avec de l'eau bidistillée.

4.2.  Étalonnage

      Prélever 0,5 - 1 - 2 ml de solution 3.5 (100 mg de cuivre par litre), les placer dans des fioles jaugées de 100 ml en complétant le  volume
       avec de l'eau bidistillée; les solutions obtenues contiennent respectivement 0,5 - 1 - 2 mg/l de cuivre.

4.3.  Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 324,8 nm. Régler le zéro de l'échelle des  absorbances  avec  de  l'eau  bidistillée.  Aspirer  directement
       l'échantillon dilué dans le brûleur du spectrophotomètre puis successivement les solutions-étalons préparées Ö comme  indiqué  au  point Õ
       4.2. Relever les absorbances. Effectuer les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en cuivre des solutions-étalons.

      Reporter l'absorbance lue pour l'échantillon du vin dilué sur la courbe d'étalonnage et relever la concentration C en mg/l.

      Si F est le facteur de dilution, la teneur du vin en cuivre en milligrammes par litre est: F · C. Elle est donnée avec 2 décimales.

      Remarques:

       a)   Les solutions pour l'établissement de la courbe d'étalonnage et les dilutions de l'échantillon doivent  toutefois  être  choisies  en
           fonction de la sensibilité de l'appareil utilisé et de la concentration en cuivre présente dans l'échantillon.

                                            ê 2676/90 (adapté)

       b)   Pour des concentrations très faibles en cuivre dans l'échantillon, le mode opératoire est le  suivant:  placer  100 ml  d'échantillon
           dans une capsule de platine, évaporer au bain d'eau à 100 °C jusqu'à consistance sirupeuse, ajouter goutte à  goutte  2,5 ml  d'acide
           nitrique concentré ( Ö point Õ 3.2) en cherchant à recouvrir tout le fond de la capsule. Procéder avec précaution à l'incinération du
           résidu sur une plaque chauffante électrique ou bien sur une petite flamme; introduire ensuite la capsule dans un four à moufle  réglé
           à 500 °C ± 25 °C, la laisser pendant environ une heure. Après refroidissement,  humecter  les  cendres  avec  1 ml  d'acide  nitrique
           concentré (Ö point Õ 3.2) en les écrasant avec une petite baguette de verre, évaporer et  incinérer  à  nouveau  comme  précédemment.
           Porter à nouveau la capsule dans le four pendant 15 minutes; répéter  au  moins  trois  fois  ce  traitement  avec  l'acide  nitrique
           concentré. Solubiliser les cendres en ajoutant dans la capsule  1 ml  d'acide  nitrique  concentré  (Ö point Õ  3.2)  et  2 ml  d'eau
           bidistillée; transvaser dans une fiole jaugée de 10 ml. Laver la  capsule  trois  fois  avec  2 ml  chaque  fois  d'eau  bidistillée,
           compléter au trait repère avec de l'eau bidistillée.

                                            ê 2676/90

32.   CADMIUM

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Le cadmium est dosé directement dans le vin par spectrophotométrie d'absorption atomique sans flamme.

2.    APPAREILLAGE

      Toute la verrerie doit être lavée au préalable avec de l'acide nitrique concentré chaud (70-80 °C) et rincée à l'eau bidistillée.

2.1.   Spectrophotomètre  d'absorption  atomique  équipé  d'un  four  graphite,  d'un  correcteur  de  bruit  de  fond   et   d'un   enregistreur
       multipotentiométrique.

2.2.  Lampe à cathode creuse au cadmium.

2.3.  Micropipettes de 5 µl munies d'embouts spéciaux pour mesures d'absorption atomique.

3.    RÉACTIFS

      L'eau utilisée doit être de l'eau bidistillée dans un appareil en verre borosilicaté ou de l'eau de pureté équivalente. Tous  les  réactifs
       doivent être de pureté analytique reconnue, et en particulier être exempts de cadmium.

3.1.  Acide phosphorique à 85 pour 100 (ρ20 = 1,71 g/ml).

3.2.  Solution d'acide phosphorique obtenue par dilution de 8 ml d'acide phosphorique à 100 ml avec de l'eau.

3.3.  Solution 0,02 M de sel disodique de l'acide éthylénediamine tétracétique (EDTA).

3.4.  Solution tampon pH 9 obtenue par dissolution dans une fiole jaugée de 100 ml de 5,4 g de  chlorure  d'ammonium  dans  quelques  millilitres
       d'eau, addition de 35 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium (ρ20 = 0,92 g/ml) diluée à 25 % (v/v) et ajustage  au  trait  repère  avec  de
       l'eau.

3.5.  Noir ériochrome T: dilution solide à 1 % (m/m) dans du chlorure de sodium.

3.6.  Sulfate de cadmium (3CdSO4, 8H2O)

      Le titre du sulfate de cadmium doit être vérifié selon le mode opératoire suivant:

      Peser exactement 102,6 mg de l'échantillon de sulfate de cadmium, entraîner quantitativement  dans  un  vase  cylindrique  avec  de  l'eau,
       agiter jusqu'à dissolution; ajouter 5 ml de solution tampon pH 9, 20 mg environ de noir ériochrome T.  Titrer  à  l'aide  de  la  solution
       d'EDTA jusqu'à virage de l'indicateur au bleu.

      Le volume d'EDTA versé doit être égal à 20 ml. Si le volume est peu différent, corriger en conséquence  la  prise  d'essai  de  sulfate  de
       cadmium pesée utilisée pour la préparation de la solution de référence.

3.7.  Solution de référence de cadmium à 1 g par litre

      Utiliser une solution standard du commerce. Cette solution peut être obtenue par dissolution de 2,2820 g de  sulfate  de  cadmium  dans  de
       l'eau et ajustage du volume à 1 litre. Conserver la solution dans un flacon de verre borosilicaté à bouchon rodé.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

      Diluer le vin au 1/2 (v/v) avec la solution d'acide phosphorique.

4.2.  Préparation des solutions de la gamme d'étalonnage

      À partir de la solution de référence de cadmium, préparer par dilutions successives des solutions titrant respectivement 2,5 - 5 - 10 -  15
       microgrammes de cadmium par litre.

4.3.  Détermination

4.3.1.      Programme du four (proposé à titre indicatif)

      Séchage à 100 °C pendant 30 secondes.

      Minéralisation à 900 °C pendant 20 secondes.

      Atomisation à 2 250 °C pendant 2 à 3 secondes.

      Débit d'azote (gaz de balayage): 6 litres par minute.

      Remarque:  En fin d'opération, montée de température jusqu'à 2 700 °C pour purger le four.

4.3.2.      Mesures d'absorption atomique

      Sélectionner la longueur d'onde 228,8 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec de l'eau bidistillée. Injecter dans le  four,  à
       l'aide d'une micropipette, trois fois 5 µl de chacune des solutions de la  gamme  d'étalonnage  et  de  la  solution  de  l'échantillon  à
       analyser. Enregistrer les absorbances mesurées. Calculer la valeur moyenne de l'absorbance à  partir  des  résultats  relatifs  aux  trois
       injections.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe des variations de l'absorbance en fonction des concentrations en cadmium  des  solutions  de  la  gamme  d'étalonnage.  La
       variation est linéaire. Reporter la valeur moyenne de l'absorbance de la solution de l'échantillon sur la droite d'étalonnage, en  déduire
       la concentration C en cadmium. La concentration en cadmium exprimée en microgrammes par litre de vin est égale à:

      2 C

33.   ARGENT

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Emploi de la spectrophotométrie d'absorption atomique précédée de la minéralisation de l'échantillon.

2.    APPAREILLAGE

2.1.  Capsule de platine.

2.2.  Bain d'eau thermostaté à 100 °C.

2.3.  Four régulé à 500-525 °C.

2.4.  Spectrophotomètre d'absorption atomique.

2.5.  Lampe à cathode creuse à l'argent.

2.6.  Gaz d'alimentation: air, acétylène.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Nitrate d'argent (AgNO3).

3.2.  Acide nitrique concentré 65 % (HNO3, ρ20 = 1,38 g/ml).

3.3.  Acide nitrique dilué 1/10 (v/v).

3.4.  Solution d'argent à 1 g/l

      Utiliser une solution standard d'argent du commerce.

      Cette solution peut être préparée en dissolvant 1,575 g de nitrate d'agent dans l'acide nitrique dilué et en ajustant le volume à  1 000 ml
       avec l'acide nitrique dilué.

3.5.  Solution d'argent à 10 mg/l

      10 ml de solution 3.4 sont dilués à 1 000 ml avec l'acide nitrique dilué.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer 20 ml d'échantillon dans une capsule de platine, évaporer à sec sur bain  d'eau  à  100 °C  bouillant.  Incinérer  au  four  jusqu'à
       cendres blanches à 500-525 °C. Reprendre les cendres avec 1 ml d'acide nitrique concentré ( Ö point Õ  3.2),  évaporer  au  bain  d'eau  à
       100 °C, répéter l'addition de 1 ml d'acide nitrique (Ö point Õ 3.2) et l'évaporation. Ajouter 5 ml d'acide nitrique dilué (Ö point Õ  3.3)
       et chauffer légèrement jusqu'à dissolution.

                                            ê 2676/90

4.2.  Étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une série de fioles jaugées de 100 ml, placer 2 - 4 - 6 - 8 - 10 et 20 ml de solution 3.5 à 10 mg d'argent  par  litre  et  porter  au
       trait repère avec l'acide nitrique dilué (Ö point Õ 3.3). Ces solutions contiennent 0,20 - 0,40 - 0,60 - 0,80 - 1,0 et 2,0 mg/l d'argent.

                                            ê 2676/90

4.3.  Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Sélectionner la longueur d'onde 328,1 nm. Régler le zéro de l'échelle des  absorbances  avec  l'acide  nitrique  dilué  (  Ö point Õ  3.3).
       Aspirer directement le liquide obtenu selon Ö le point Õ 4.1 dans le brûleur du  spectrophotomètre,  puis  successivement  les  solutions-
       étalons. Relever les absorbances. Effectuer les déterminations en double.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en argent des solutions-étalons.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Reporter l'absorbance lue pour le liquide obtenu selon Ö le point Õ 4.1 sur la courbe d'étalonnage et relever la concentration C en mg/l.

                                            ê 2676/90

      La teneur du vin en argent, exprimée en milligrammes par litre est:

      0,25 C. Elle est donnée avec 2 décimales.

      Remarque:  Les solutions de référence pour l'établissement de la courbe d'étalonnage, la  quantité  d'échantillon  prélevée  et  le  volume
       final de liquide peuvent être modifiés en fonction de la sensibilité de l'appareil utilisé.

34.   ZINC

1.    PRINCIPE

      Le zinc est dosé directement dans le vin désalcoolisé par spectrophotométrie d'absorption atomique.

2.    RÉACTIFS

      L'eau utilisée doit être de l'eau bidistillée dans un appareil en verre borosilicaté ou de l'eau de pureté équivalente.

2.1.  Solution étalon de zinc à 1 g par litre.

      Utiliser une solution standard de zinc du commerce. Cette solution peut être préparée en dissolvant 4,3975 g de sulfate de zinc (Zn SO4,  7
       H2O) dans de l'eau et en ajustant le volume à 1 litre.

2.2.  Solution étalon diluée de zinc titrant 100 milligrammes par litre.

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Évaporateur rotatif avec bain d'eau thermostaté.

3.2.  Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûleur alimenté par de l'air et de l'acétylène.

3.3.  Lampe à cathode creuse en zinc.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

      Éliminer l'alcool du vin par concentration au 1/2 de 100 ml de vin placés dans un évaporateur rotatif (température: 50-60 °C),  ramener  au
       volume initial de 100 ml avec de l'eau bidistillée.

4.2.  Étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans quatre fioles jaugées de 100 ml, placer 0,5 - 1 - 1,5 - 2 ml de la solution de zinc à 100 mg/l ( Ö point Õ 2.2) et  ajuster  au  trait
       de jauge avec de l'eau bidistillée. Les solutions étalons correspondent respectivement à 0,5 - 1 - 1,5 et 2 mg de zinc par litre.

                                            ê 2676/90

4.3.  Dosage

      Sélectionner la longueur d'onde 213,9 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec de l'eau  bidistillée.  Aspirer  directement  le
       vin dans le brûleur du spectrophotomètre, puis successivement les solutions étalons. Relever les absorbances. Effectuer les déterminations
       en double.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Mode de calcul

      Tracer la courbe de variation de l'absorbance en fonction de la concentration en zinc des solutions étalons.  Reporter  la  valeur  moyenne
       des absorbances obtenues pour le vin et déterminer la concentration en zinc en milligrammes par litre de vin, avec 1 décimale.

35.   PLOMB

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      Le plomb est dosé directement dans le vin par spectrophotométrie d'absorption atomique sans flamme.

2.    APPAREILLAGE

      Toute la verrerie doit être lavée au préalable avec de l'acide nitrique concentré chaud (70-80 °C) et rincée à l'eau bidistillée.

2.1.  Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un four graphite,  d'un  correcteur  d'absorption  non  spécifique  et  d'un  enregistreur
       multipotentiométrique.

2.2.  Lampe à cathode creuse au plomb.

2.3.  Micropipettes de 5 µl munies d'embouts spéciaux pour mesures d'absorption atomique.

3.    RÉACTIFS

      Tous les réactifs doivent être de pureté analytique reconnue et, en particulier, être exempts de plomb. L'eau utilisée doit être  de  l'eau
       bidistillée dans un appareil en verre borosilicaté ou de l'eau de pureté équivalente.

3.1.  Acide phosphorique à 85 pour 100 (ρ20 = 1,71 g/ml).

3.2.  Solution d'acide phosphorique obtenue par dilution de 8 ml d'acide phosphorique à 100 ml avec de l'eau.

3.3.  Acide nitrique (ρ20 = 1,38 g/ml).

3.4.  Solution de plomb à 1 g par litre.

      Utiliser une solution standard du commerce. Cette solution peut être obtenue par dissolution de 1,600 g de nitrate de plomb  II,  Pb(NO3)2,
       dans de l'acide nitrique dilué à 1 % (v/v) et ajustage du volume à 1 litre. Conserver la solution dans un flacon de verre  borosilicaté  à
       bouchon rodé.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Diluer le vin au 1/2 ou au 1/3 avec la solution d'acide phosphorique ( Ö point Õ 3.2) selon la concentration présumée en plomb.

                                            ê 2676/90

4.2.  Préparation des solutions de la gamme d'étalonnage

      À partir de la solution de référence de plomb, préparer  par  dilutions  successives  avec  de  l'eau  bidistillée  des  solutions  titrant
       respectivement 25 - 50 - 100 - 150 microgrammes de plomb par litre.

4.3.  Détermination

4.3.1.      Programme du four (proposé à titre indicatif)

      Séchage à 100 °C pendant 30 secondes.

      Minéralisation à 900 °C pendant 20 secondes.

      Atomisation à 2 250 °C pendant 2 à 3 secondes

      Débit d'azote (gaz de balayage): 6 litres par minute.

      Remarque: En fin d'opération, montée de température jusqu'à 2 700 °C pour purger le four.

4.3.2.      Mesures

      Sélectionner la longueur d'onde 217 nm. Régler le zéro de l'échelle des absorbances avec  de  l'eau  bidistillée.  Injecter  dans  le  four
       programmé, à l'aide d'une micropipette, 3 fois 5 µl de chacune des solutions de la gamme d'étalonnage et de la solution de l'échantillon à
       analyser. Enregistrer les absorbances mesurées. Calculer la valeur  moyenne  de  l'absorbance  à  partir  des  résultats  relatifs  aux  3
       injections.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

5.1.  Calcul

      Tracer la courbe des variations de l'absorbance en fonction des concentrations  en  plomb  des  solutions  de  la  gamme  d'étalonnage.  La
       variation est linéaire. Reporter la valeur moyenne de l'absorbance de la solution de l'échantillon sur la droite d'étalonnage, en  déduire
       la concentration C en plomb. La concentration en plomb exprimée en microgrammes par litre de vin est égale à:

      C × F

       F    =     facteur de dilution.

36.   FLUORURES

1.    PRINCIPE

      La teneur en fluorures du vin, additionné d'une solution tampon, est déterminée à l'aide d'une électrode spécifique à membrane  solide.  Le
       potentiel mesuré est proportionnel au logarithme de l'activité des ions fluorures dans le milieu étudié conformément à la relation:

      E = Eo ± S log aF

       E    =     potentiel de l'électrode ionique spécifique mesuré par rapport à l'électrode de référence dans le milieu étudié

       Eo   =     potentiel-étalon de la cellule de mesure

       S    =     pente de l'électrode ionique spécifique (facteur de Nernst). À 25 °C la pente théorique est égale à 59,2 mV

       aF   =     activité des ions fluorures dans la solution étudiée

2.    APPAREILLAGE

2.1.  Électrode à membrane cristalline spécifique de l'ion fluor.

2.2.  Électrode de référence (Calomel ou Ag/AgCl).

2.3.  Millivoltmètre (pH mètre avec une graduation en millivolts étalée), précision 0,1 mV.

2.4.  Agitateur magnétique avec plaque isolante pour protéger la solution analysée de la chaleur  du  moteur.  Cylindre  agitateur  recouvert  de
       plastique (polyéthylène ou matériau équivalent).

2.5.  Béchers en plastique, de 30 ou de 50 ml, et flacons de plastique (polyéthylène ou matériau équivalent).

2.6.  Pipettes de précision (pipettes graduées en microlitres ou toutes autres pipettes équivalentes).

3.    RÉACTIFS

3.1.  Solution-mère de fluorure à 1 g/l.

      Utiliser une solution standard du commerce à 1 g/l. Cette solution peut être préparée en dissolvant 2,210 g de fluorure de sodium (séché  3
       à 4 heures à 105 °C) dans l'eau distillée. Porter au trait de jauge de 1 000 ml avec de l'eau distillée. La solution est conservée dans un
       flacon de plastique.

3.2.  Des solutions étalons de fluorure de concentration appropriée sont préparées par dilution de la solution-mère avec de  l'eau  distillée  et
       conservées dans des flacons de plastique. Les solutions étalons dont la teneur en fluorure est de l'ordre du mg/l doivent  être  préparées
       extemporanément.

3.3.  Solution tampon pH 5,5.

      10 g d'acide cyclohexane-diamine (1,2)-tétracétique (CDTA) sont additionnés d'eau (50 ml environ); ajouter une solution contenant  58 g  de
       chlorure de sodium et 29,4 g de citrate trisodique dans 700 ml d'eau distillée. Le CDTA est dissous en ajoutant une  solution  d'hydroxyde
       de sodium à 32 pour 100 (m/v) (environ 6 ml).

      Ajouter enfin 57 ml d'acide acétique (ρ20 = 1,05 g/ml) et amener le pH à 5,5 avec la solution d'hydroxyde de sodium à 32 pour 100  (environ
       45 ml). Laisser refroidir et porter au litre avec de l'eau distillée.

4.    MODE OPÉRATOIRE

      Remarque préliminaire:

      Il faut prendre garde à ce que toutes les solutions conservent durant la mesure une température de 25 ± 1 °C. (Un écart de ± 1 °C  provoque
       une modification d'environ ± 0,2 mV.)

4.1.  Méthode directe

      Dans un bécher de plastique introduire un volume défini de vin et un égal volume de solution tampon.

      La solution est agitée d'une façon égale et modérée. Lorsque l'appareil  indicateur  est  stable  (la  stabilité  est  obtenue  lorsque  le
       potentiel varie au maximum de 0,2-0,3 mV/3 minutes), lire la valeur du potentiel en mV.

4.2   Méthode des ajouts connus

      Sans interrompre l'agitation, le milieu étudié est additionné à l'aide d'une pipette de précision d'un volume connu de solution  étalon  de
       fluorure. Lorsque l'appareil indicateur est stable, lire la valeur du potentiel en mV.

      Choisir la concentration de la solution étalon ajoutée de la façon suivante:

       a)   doubler ou tripler la concentration en fluorure du milieu étudié;

       b)   le volume du milieu étudié doit rester pratiquement constant

            (augmentation du volume ≤ 1 %).

            La condition b) simplifie les calculs (voir 5).

      La concentration approximative du milieu étudié est lue sur une droite d'étalonnage qui est tracée en coordonnées semi-logarithmiques  avec
       des solutions étalons titrant 0,1 - 0,2 - 0,5 - 1,0 - 2,0 mg/l de fluorures.

      Remarque: Si la  concentration  approximative  du  milieu  étudié  dépasse  le  domaine  de  concentration  des  solutions-étalons,  diluer
       l'échantillon.

      Exemple:

      Soit 0,25 mg/l F−, la teneur approximative du milieu étudié (volume 20 ml); la concentration doit être  majorée  de  0,25 mg/l.  Pour  cela
       ajouter par exemple à la solution, avec la pipette de précision appropriée, 0,20 ml (= 1 %) d'une solution-étalon contenant 25 mg/l F−  ou
       0,050 ml d'une solution-étalon à 100 mg/l F−.

5.    CALCULS

      La teneur en fluorures du milieu étudié, exprimée en milligrammes par litre, s'obtient à l'aide de la formule suivante:

       CF   =     ((Va × Ca)/(Vo)) × ((1)/((antilog ΔE/S) − 1))

       CF   =     concentration en fluorure du milieu étudié (mg/l)

       Ca   =     concentration du fluorure ajouté (mg/l) dans le milieu étudié (Va)

       Vo   =     volume initial du milieu étudié avant la surcharge (ml)

       Va   =     volume de la solution surchargée (ml)

                                            ê 2676/90 (adapté)

       ΔE   =     différence entre les potentiels E1 et E2 obtenus Ö comme indiqué aux points Õ 4.1 et 4.2 (mV)

                                            ê 2676/90

       S    =     pente de l'électrode dans la solution étudiée

      Si Va est très voisin de Vo (voir 4.2), la formule se simplifie et devient:

       CF   =     Ca × ((1)/((antilog ΔE/S) − 1))

      La valeur obtenue doit être multipliée par le facteur de dilution provenant de l'addition du tampon.

37.   DIOXYDE DE CARBONE

                                            ê 1293/2005 Art. 1 et Annexe, pt 1) a) i)

1.    PRINCIPE DES LA MÉTHODE

                                            ê 2676/90

      Méthode de référence

1.1.  Cas des vins tranquilles (surpression de CO2 ≤ 0,5 · 105 Pa)[16]

      Le volume de vin prélevé sur l'échantillon amené au voisinage de 0 °C est versé dans un excès suffisant de solution titrée  d'hydroxyde  de
       sodium pour avoir un pH de 10-11. On titre avec une solution acide en présence d'anhydrase carbonique. La teneur en dioxyde de carbone est
       déduite du volume versé pour passer de pH 8,6 (forme carbonate acide) à 4,0 (acide carbonique). Un titrage témoin effectué dans les  mêmes
       conditions sur le vin décarboniqué permet de tenir compte du volume de solution d'hydroxyde de sodium consommé par les acides du vin.

1.2.  Cas des vins pétillants et des vins mousseux

      L'échantillon de vin à analyser est amené au voisinage de son point de congélation. Après soutirage d'un certain volume  destiné  à  servir
       de témoin après décarbonication, on alcalinise le reste de la bouteille pour fixer tout le CO2 sous forme de Na2CO3.  On  titre  avec  une
       solution acide en présence d'anhydrase carbonique. La teneur en dioxyde de carbone est déduite du volume de  solution  acide  versée  pour
       passer de pH 8,6 (forme carbonate acide) à pH 4,0 (acide carbonique). Un titrage témoin effectué dans les  mêmes  conditions  sur  le  vin
       décarboniqué permet de tenir compte du volume de solution d'hydroxyde de sodium consommé par les acides du vin.

2.    MÉTHODE DE RÉFÉRENCE

2.1.  Cas des vins tranquilles (surpression de dioxyde de carbone ≤ 0,5 · 105 Pa).

2.1.1.      Appareillage

2.1.1.1.    Agitateur magnétique.

2.1.1.2.    pH mètre.

2.1.2.      Réactifs

2.1.2.1.    Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), 0,1 M.

2.1.2.2.    Solution d'acide sulfurique (H2SO4), 0,05 M.

2.1.2.3.    Solution d'anhydrase carbonique à 1 gramme par litre.

2.1.3.      Mode opératoire

      Refroidir l'échantillon de vin aux environs de 0 °C ainsi que la pipette de 10 ml servant à son prélèvement.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever dans un vase cylindrique de 100 ml, 25 ml de solution d'hydroxyde de sodium ( Ö point Õ 2.1.2.1); ajouter 2  gouttes  de  solution
       aqueuse d'anhydrase carbonique (Ö point Õ 2.1.2.3). Y introduire 10 ml de vin au moyen de la pipette refroidie à 0 °C.

                                            ê 2676/90

      Placer le vase cylindrique sur l'agitateur magnétique, mettre en place l'électrode et le barreau magnétique et  procéder  à  une  agitation
       modérée.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Lorsque le liquide est revenu à la température ambiante, verser par affusion lente la solution  d'acide  sulfurique  (  Ö point Õ  2.1.2.2)
       jusqu'à pH 8,6.

      Continuer les affusions d'acide sulfurique (Ö point Õ 2.1.2.2) jusqu'à pH 4,0. Soit n ml le volume utilisé entre pH 8,6 et 4,0.

                                            ê 2676/90

      Procéder par ailleurs à l'élimination du CO2 sur 50 ml environ de l'échantillon de vin par  agitation  sous  vide  pendant  3  minutes,  en
       réchauffant la fiole dans un bain d'eau à 25 °C environ.

      Appliquer sur 10 ml de vin décarboniqué le mode opératoire ci-dessus: soit n′ ml le volume utilisé.

2.1.4.      Expression des résultats

      1 ml de solution titrée d'hydroxyde de sodium 0,1 M correspond à 4,4 mg de CO2.

      La quantité de CO2 en grammes par litre de vin est donnée

      0,44 (n − n′)

      Elle est exprimée avec 2 décimales.

      Remarque: Dans le cas des vins peu chargés en CO2 (CO2 < 1 g/l), l'addition d'anhydrase carbonique  pour  catalyser  l'hydratation  du  CO2
       n'est pas nécessaire.

2.2.  Cas des vins pétillants et des vins mousseux

2.2.1.      Appareillage

2.2.1.1.    Agitateur magnétique.

2.2.1.2.    pH mètre.

2.2.2.      Réactifs

2.2.2.1.    Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH), à 50 pour 100 (m/m).

2.2.2.2.    Solution d'acide sulfurique (H2SO4), 0,05 M.

2.2.2.3.    Solution d'anhydrase carbonique à 1 gramme par litre.

2.2.3.      Mode opératoire

      Sur la bouteille de vin à analyser, tracer un repère au niveau du remplissage et la refroidir jusqu'à début de congélation.

      Laisser la bouteille se réchauffer légèrement, tout en l'agitant, jusqu'à disparition des cristaux de glace.

      Déboucher rapidement et mettre de côté, dans une éprouvette graduée, 45 à 50 ml de vin qui serviront au dosage témoin. Le volume  exact  de
       ce prélèvement, v ml, sera déterminé par lecture sur l'éprouvette après son retour à la température ambiante.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Ajouter, sitôt le prélèvement effectué, 20 ml de solution d'hydroxyde de sodium ( Ö point Õ 2.2.2.1) dans la bouteille pour une  contenance
       de 750 ml.

                                            ê 2676/90

      Attendre que le vin soit revenu à la température ambiante.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer dans un vase cylindrique de 100 ml, 30 ml d'eau distillée bouillie et 2 gouttes de la solution d'anhydrase  carbonique  (  Ö point Õ
       2.2.2.3). Y ajouter 10 ml de vin alcalinisé.

                                            ê 2676/90

      Placer le vase sur l'agitation magnétique, mettre en place l'électrode et le barreau magnétique et procéder à une agitation modérée.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Verser par affusion lente la solution d'acide sulfurique ( Ö point Õ 2.2.2.2) jusqu'à pH 8,6.

      Continuer les affusions d'acide sulfurique (Ö point Õ 2.2.2.2) jusqu'à pH 4,0. Soit n ml le volume utilisé entre pH 8,6 et 4,0.

      Procéder par ailleurs à l'élimination du CO2 sur les v ml de vin, mis à côté pour le dosage témoin,  par  agitation  sous  vide  pendant  3
       minutes, en réchauffant la fiole dans un bain d'eau à 25 °C environ. Prélever  10 ml  de  vin  décarboniqué  dans  30 ml  d'eau  distillée
       bouillie, ajouter 2 à 3 gouttes de solution d'hydroxyde de sodium (Ö point Õ 2.2.2.1) pour amener le pH à 10-11. Apliquer ensuite le  mode
       opératoire ci-dessus. Soit n′ ml, le volume d'acide sulfurique 0,05 M versé.

                                            ê 2676/90

2.2.4.      Expression des résultats

      1 ml de solution d'acide sulfurique 0,05 M correspond à 4,4 mg de CO2.

      Vider la bouteille de son vin alcalinisé et déterminer à 1 ml près le volume initial du vin en la remplissant avec de l'eau jusqu'au  trait
       de repère, soit V ml.

      La quantité de CO2 en grammes par litre de vin est donnée par:

      0,44(n − n′) · ((V − v + 20)/(V − v))

      Elle est exprimée avec 2 décimales.

                                            ê 1293/2005 Art. 1 et Annexe, pt 1) b)

2.3.  Calcul de la surpression théorique

                                            ê 2676/90

      La surpression à 20 °C, Paph20, exprimée en pascals, est donnée par la formule:

      Paph20 = ((Q)/(1,951 × 10−5(0,86 − 0,01 A)(1 − 0,00144 S))) − Patm

      avec:

|Q:          |teneur en grammes de CO2 par litre de vin                                                                     |
|A:          |                                                                                                              |
|S:          |                                                                                                              |
|Patm:       |                                                                                                              |
|            |titre alcoométrique du vin à 20 °C                                                                            |
|            |teneur en sucres du vin en grammes par litre                                                                  |
|            |pression atmosphérique, exprimée en pascals                                                                   |

                                                                    TABLEAU 1

                Rapport de la surpression Paph20 d'un vin pétillant ou mousseux à 20 °C à la surpression Papht à une température t

|0                  |1,85                              |13                                |1,24                           |
|1                  |1,80                              |14                                |1,20                           |
|2                  |1,74                              |15                                |1,16                           |
|3                  |1,68                              |16                                |1,13                           |
|4                  |1,64                              |17                                |1,09                           |
|5                  |1,59                              |18                                |1,06                           |
|6                  |1,54                              |19                                |1,03                           |
|7                  |1,50                              |20                                |1,00                           |
|8                  |1,45                              |21                                |0,97                           |
|9                  |1,40                              |22                                |0,95                           |
|10                 |1,36                              |23                                |0,93                           |
|11                 |1,32                              |24                                |0,91                           |
|12                 |1,28                              |25                                |0,88                           |

                                            ê 1293/2005 Art. 1 et Annexe, pt 2

38.    MESURE DE LA SURPRESSION DES VINS MOUSSEUX ET PETILLANTS

1.    PRINCIPE

Après stabilisation thermique et agitation de la bouteille, la surpression est mesurée à l’aide d’un aphromètre (jauge  de  pression).  Elle  est
exprimée en Pascals (Pa) (méthode de type I). La méthode est également applicable aux vins mousseux gazéifiés et aux vins pétillants gazéifiés.

2.    APPAREILLAGE

L’appareil permettant la mesure de la surpression dans les bouteilles de vins mousseux et pétillants s’appelle  un  aphromètre.  Il  se  présente
différemment suivant le bouchage de la bouteille (capsule métallique, capsule couronne, bouchon liège ou plastique).

2.1.  Pour les bouteilles munies d’une capsule

Il est constitué de trois parties (figure 1):

     – la partie supérieure (ou vis porte-aiguille) est composée du manomètre, d’une bague de serrage manuel, d’une vis  sans  fin  qui  coulisse
       dans la partie moyenne, et d’une aiguille qui traverse la capsule. L’aiguille possède un  trou  latéral  qui  communique  la  pression  au
       manomètre. Un joint assure l’étanchéité de l’ensemble sur la capsule de la bouteille;

     – la partie moyenne (ou écrou) sert à centrer la partie supérieure. Elle  se  visse  dans  la  partie  inférieure  de  manière  à  maintenir
       fortement l’ensemble sur la bouteille;

     – la partie inférieure (ou étrier) est munie d’un ergot qui se glisse sous la bague de la bouteille, de manière  à  retenir  l’ensemble.  Il
       existe des bagues adaptées à chaque type de bouteille.

2.2.  Pour les bouteilles munies d’un bouchon

Il est constitué de deux parties (figure 2):

     – La partie supérieure est identique à l’appareil précédent; toutefois, l’aiguille est plus longue. Cette  dernière  est  formée  d’un  long
       tube creux au bout duquel est placée une pointe qui aidera à traverser le bouchon. Cette pointe est amovible, elle tombe dans le  vin  une
       fois le bouchon traversé;

     – la partie inférieure est formée par l’écrou et d’une base venant reposer sur le bouchon. Celle-ci est  munie  de  quatre  vis  de  serrage
       servant à maintenir l’ensemble sur le bouchon.

                                 [pic]figure 2 : Aphromètre pour bouchons     figure 1 : Aphromètre pour capsules

Remarques concernant les manomètres équipant ces deux types d’appareil:

     – ils peuvent être soit mécaniques à tube de Bourdon, soit numériques à capteur piézoélectrique. Dans le premier cas,  le  tube  de  Bourdon
       sera obligatoirement en acier inoxydable;

     – ils sont gradués en pascals (abréviation Pa). Pour les vins mousseux, il est plus pratique d’utiliser  le  105  pascals  (105  Pa)  ou  le
       kilopascal (kPa) comme unité;

     – ils peuvent être de différentes classes. La classe d'un manomètre est la précision de la lecture par rapport à la pleine échelle  exprimée
       en pourcentage (ex. : manomètre 1000 kPa classe 1 signifie pression d'utilisation maximale 1000 kPa, lecture à ± 10 kPa). La classe 1  est
       recommandée pour des mesures précises.

3.    MODE OPERATOIRE

La mesure doit s’effectuer sur des bouteilles dont la température est stabilisée depuis au moins 24 heures. Après avoir  percé  la  couronne,  le
bouchon de liège ou de plastique, la bouteille doit alors être fortement agitée jusqu'à pression constante, pour effectuer la lecture.

3.1.  Cas des bouteilles capsulées

Glisser l’ergot de l’étrier sous la bague de la bouteille. Visser l’écrou jusqu’à ce que l’ensemble  soit  serré  sur  la  bouteille.  La  partie
supérieure est alors vissée dans l’écrou. Pour éviter des pertes de gaz le percement de la capsule doit s’effectuer le plus rapidement  possible,
pour amener le joint au contact de la capsule. La bouteille doit être ensuite fortement agitée  jusqu’à  pression  constante  pour  effectuer  la
lecture.

3.2.  Cas des bouteilles bouchées

Mettre une pointe en place au bout de l’aiguille. Positionner l’ensemble du montage sur le bouchon. Serrer les quatre vis sur le bouchon.  Visser
la partie supérieure (l’aiguille traverse alors le bouchon). La pointe doit tomber dans la bouteille pour que la pression puisse  se  transmettre
au manomètre. Effectuer la lecture après agitation de la bouteille jusqu’à pression constante. Récupérer la pointe après lecture.

4.    EXPRESSION DES RESULTATS

La surpression à 20 °C (Paph20) est exprimée en pascals (Pa) ou en kilopascals (kPa).  Elle  doit  être  en  concordance  avec  la  précision  du
manomètre (par exemple: 6,3 105 Pa ou 630 kPa et non 6,33 105 Pa ou 633 kPa pour un manomètre 1000 kPa pleine échelle, de classe 1).

Quand la température de mesure est différente de 20 °C, il convient  d'apporter  une  correction  en  multipliant  la  pression  mesurée  par  le
coefficient approprié (voir tableau 1).

                                                                    TABLEAU 1

                Rapport de la surpression Paph20 d'un vin pétillant ou mousseux à 20 °C à la surpression Papht à une température t

|°C                           |                             |°C                           |                             |
|0                            |1,85                         |13                           |1,24                         |
|1                            |1,80                         |14                           |1,20                         |
|2                            |1,74                         |15                           |1,16                         |
|3                            |1,68                         |16                           |1,13                         |
|4                            |1,64                         |17                           |1,09                         |
|5                            |1,59                         |18                           |1,06                         |
|6                            |1,54                         |19                           |1,03                         |
|7                            |1,50                         |20                           |1,00                         |
|8                            |1,45                         |21                           |0,97                         |
|9                            |1,40                         |22                           |0,95                         |
|10                           |1,36                         |23                           |0,93                         |
|11                           |1,32                         |24                           |0,91                         |
|12                           |1,28                         |25                           |0,88                         |

5.    CONTRÔLE DES RESULTATS

Méthode de détermination directe de paramètres physiques (méthode critère de type I)

Vérification des aphromètres

Les aphromètres doivent être vérifiés régulièrement (au moins une fois par an).

La vérification se fait à l'aide d'un banc d'étalonnage. Il permet de comparer le manomètre à tester à  un  manomètre  de  référence,  de  classe
supérieure, raccordé aux étalons nationaux, monté en parallèle. Le contrôle est utilisé pour  confronter  les  valeurs  indiquées  par  les  deux
appareils pour des pressions croissantes puis décroissantes. S'il y a une différence entre les deux, une vis de réglage  permet  d'effectuer  les
corrections nécessaires.

Les laboratoires et les organismes autorisés  sont  tous  équipés  de  tels  bancs  d'étalonnage;  ils  sont  également  disponibles  auprès  des
constructeurs de manomètres.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II

39.   DÉRIVÉS CYANÉS

(Attention: Respecter les consignes de sécurité pour les manipulations des produits chimiques, pour la chloramine T, la pyridine, le  cyanure  de
potassium, l'acide chlorhydrique et l'acide phosphorique. Se débarrasser des produits utilisés de manière appropriée compatible avec  les  règles
et les règlements écologiques applicables. Précaution avec l'acide cyanhydrique libéré lors de la distillation du vin acidifié).

1.    PRINCIPE

      L'acide cyanhydrique libre et total du vin est libéré par hydrolyse acide et séparé par distillation. Après réaction avec la  chloramine  T
       et la pyridine, le dialdéhyde glutaconique formé est dosé par colorimétrie grâce à la coloration bleue qu'il donne avec l'acide  diméthyl-
       1,3 barbiturique.

2.    APPAREILLAGE

2.1.  Appareil de distillation

      Utiliser l'appareil de distillation décrit pour la détermination du titre alcoométrique volumique du vin.

2.2.  Ballon de 500 ml à rodage normalisé.

2.3.  Bain d'eau; thermostaté à 20 °C.

2.4.  Spectrophotomètre permettant les mesures d'absorbance à la longueur d'onde de 590 nm.

2.5.  Cuves de verre ou cuves à usage unique de 20 mm de trajet optique.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Acide phosphorique (H3PO4) à 25 % (m/v)

3.2.  Solution de chloramine T(C7H7 ClNNa O2S, 3H2O) 3 % (m/v)

3.3.  Solution d'acide 1,3-diméthylbarbiturique: dissoudre 3,658 g de l'acide 1,3-diméthylbarbiturique (C6H8N2O3) dans 15 ml de pyridine et  3 ml
       d'acide chlorhydrique (ρ20 = 1,19 g/ml) et compléter à 50 ml avec de l'eau distillée.

3.4.  Cyanure de potassium (KCN)

3.5.  Solution d'iodure de potassium (KI) 10 % (m/v)

3.6.  Solution de nitrate d'argent (AgNO3), 0,1 M

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1   Distillation

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans le ballon de 500 ml ( Ö point Õ 2.2) placer 25 ml de vin,  50 ml  d'eau  distillée,  1 ml  d'acide  phosphorique  (Ö point Õ  3.1)  et
       quelques perles de verre. Mettre immédiatement en place le ballon sur l'appareil à distiller. Amener  le  distillat  au  moyen  d'un  tube
       effilé dans une fiole jaugée de 50 ml contenant 10 ml d'eau. La fiole jaugée est immergée dans de l'eau  glacée.  Recueillir  30-35 ml  de
       distillat (soit environ 45 ml de liquide total dans la fiole jaugée).

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II

      Laver le tube effilé du réfrigérant avec quelques millilitres d'eau distillée, porter à 20 °C le distillat et  amener  au  trait  de  jauge
       avec de l'eau distillée.

4.2.  Mesure

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer 25 ml de distillat dans une fiole conique de 50 ml munie d'un bouchon rodé, ajouter 1 ml de solution de  chloramine  T  (  Ö point Õ
       3.2) et boucher hermétiquement. Après 60 secondes exactement ajouter 3 ml de solution d'acide diméthyl-1,3 barbiturique  (Ö point Õ  3.3),
       boucher hermétiquement et laisser au repos pendant 10 minutes. Ensuite mesurer l'absorbance par rapport au témoin (25 ml  d'eau  distillée
       au lieu de 25 ml de distillat) à la longueur d'onde 590 nm dans les cuves de 20 mm de trajet optique.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II

5.    ÉTABLISSEMENT DE LA COURBE D'ÉTALONNAGE

5.1.  Titrage argentimétrique du cyanure de potassium

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II (adapté)

      Dans une fiole jaugée de 300 ml dissoudre environ 0,2 g de KCN ( Ö point Õ 3.4)  exactement  pesé  dans  100 ml  d'eau  distillée.  Ajouter
       0,2 ml de solution d'iodure de potassium (Ö point Õ 3.5) et titrer avec la solution de nitrate d'argent  0,1  M  (Ö point Õ  3.6)  jusqu'à
       obtention d'une coloration jaunâtre stable.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II

      1 ml de solution 0,1 M de nitrate d'argent correspondant à 13,2 mg de KCN, calculer le titre de l'échantillon de KCN.

5.2.  Courbe d'étalon

5.2.1.      Préparation des solutions étalons

      Connaissant le titre déterminé selon 5.1 du KCN, préparer une solution étalon contenant 30 mg/l  d'acide  cyanhydrique  (30 mg  HCN≈72,3 mg
       KCN). Diluer cette solution au 1/10.

      Introduire 1,0- 2,0- 3,0- 4,0- et 5,0 ml de la solution étalon diluée dans des fioles jaugées de 100 ml et amener au trait  de  jauge  avec
       de l'eau distillée. Les solutions préparées titrent respectivement 30-60-90-120 et 150 μg/l d'acide cyanhydrique.

5.2.2.      Dosage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever 25 ml des solutions ainsi obtenues et continuer comme il est indiqué ci-dessus Ö aux points Õ 4.1 et 4.2.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 2 et annexe II

      Les valeurs obtenues  pour  les  absorbances  avec  ces  solutions  étalons  reportées  en  fonction  des  teneurs  en  acide  cyanhydrique
       correspondantes, s'alignent sur une droite passant par l'origine.

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      L'acide cyanhydrique est exprimé en microgrammes par litre (μg/l) sans décimale.

6.1.  Calcul

      Lire la teneur en acide cyanhydrique sur la courbe d'étalonnage. Si une dilution a été effectuée, multiplier le résultat par le facteur  de
       dilution.

      Répétabilité (r) et reproductibilité (R)

|Vin blanc        |=     |r = 3,1 μg/l soit environ 6 % · xi                                                      |
|                 |      |R = 12 μg/l soit environ 25 % · xi                                                      |
|Vin rouge        |=     |r = 6,4 μg/l soit environ 8 % · xi                                                      |
|                 |      |R = 23 μg/l soit environ 29 % · xi                                                      |

       xi   =     concentration moyenne de HCN dans le vin

       xi   =     48,4 μg/l pour le vin blanc

       xi   =     80,5 μg/l pour le vin rouge.

                                            ê 2676/90

40.   ISOTHIOCYANATE D'ALLYLE

1.    PRINCIPE DE LA MÉTHODE

      L'isothyocyanate  d'allyle,  éventuellement  présent  dans  le  vin,  récupéré  par  distillation,  est  identifié  par  une  technique  de
       chromatographie en phase gazeuse.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Éthanol absolu.

2.2.  Solution standard: solution dans l'alcool absolu d'isothiocyanate d'allyle contenant 15 mg/l de principe actif.

2.3.  Mélange réfrigérant constitué d'éthanol et de neige carbonique (température −60 °C).

3.    APPAREILS

3.1.  Appareil de distillation par entraînement par courant d'azote selon la figure.

3.2.  Enveloppe chauffante thermo-réglable.

3.3.  Débitmètre.

3.4.  Chromatographe en phase gazeuse avec détecteur à spectromètre de flamme muni d'un filtre sélectif pour les composés  soufrés  (λ  = 394 nm)
       ou tout autre détecteur adapté à cette mesure.

3.5.  Colonne de chromatographie en acier inoxydable, diamètre intérieur 3 mm, longueur 3 m; remplie de Carbowax 20 M à 10 % sur chromosorb  WHP,
       80 - 100 mesh.

3.6.  Microseringue de 10 µl.

4.    MODE OPÉRATOIRE

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Prélever 2 l de vin et les placer dans le ballon de distillation. Introduire quelques millilitres d'éthanol ( Ö point Õ 2.1) dans les  deux
       tubes de récupération jusqu'à complète immersion de la partie poreuse pour la dispersion gazeuse. Refroidir extérieurement les deux  tubes
       avec le mélange réfrigérant. Relier le ballon aux tubes récepteurs et commencer à envoyer dans l'appareil un courant d'azote d'environ 3 l
       à l'heure. Réchauffer le vin à 80 °C en réglant la température de l'enceinte chauffante de façon convenable et récupérer au total 45-50 ml
       de distillat.

                                            ê 2676/90

      Stabiliser le chromatographe; les conditions opératoires suivantes sont conseillées:

         – température de l'injecteur: 200 °C,

         – température de la colonne: 130 °C,

         – gaz vecteur hélium à un débit de 20 ml par minute.

      Injecter à l'aide de la microseringue une quantité de solution standard telle que le pic correspondant à l'isothiocyanate  d'allyle  puisse
       être facilement identifié sur le chromatogramme.

      Injecter de même une partie aliquote de distillat et contrôler la correspondance du temps de rétention de l'isothiocyanate d'allyle  et  du
       pic obtenu.

      Dans les conditions indiquées pour l'essai, aucun composé naturel du vin ne donne d'interférence correspondant au temps de rétention de  la
       substance recherchée.

                                                  Appareil de distillation sous courant d'azote

                                                                      [pic]

       41.  CARACTÉRISTIQUES CHROMATIQUES

1.    CAS DES VINS ET DES MOÛTS

1.1.  Définitions

      On appelle caractéristiques chromatiques d'un vin sa luminosité et sa chromaticité.

      La luminosité correspond à la transmittance. Elle varie en raison inverse de l'intensité colorante du vin.

      La chromaticité correspond à la longueur d'onde dominante (qui caractérise la nuance) et à la pureté.

      Conventionnellement et pour des raisons de commodité, les caractéristiques  chromatiques  des  vins  rouges  et  rosés  sont  énoncées  par
       l'intensité colorante et la nuance, suivant un procédé adopté comme méthode usuelle.

1.2.  Principe des méthodes

1.2.1.      Méthode de référence

      Méthode spectrophotométrique qui permet le calcul  des  valeurs  tristimulaires  et  des  coefficients  trichromatiques  nécessaires  à  la
       spécification de la couleur dans les termes de la Commission internationale de l'éclairage (CIE).

1.2.2.      Méthode usuelle (applicable aux vins rouges et rosés)

      Méthode spectrophotométrique selon laquelle les caractéristiques chromatiques sont exprimées conventionnellement comme ci-dessous:

      L'intensité est donnée par la somme des absorbances sous 1 cm de trajet optique pour les radiations de longueurs d'onde égales à  420,  520
       et 620 nm.

      La nuance est exprimée par le rapport de l'absorbance à 420 nm à l'absorbance à 520 nm.

1.3.  Méthode de référence

1.3.1.      Appareillage

1.3.1.1.    Spectrophotomètre permettant d'effectuer les mesures entre 300 et 700 nm.

1.3.1.2.    Cuves en verre, disponibles par paires, de trajet optique, b, égal à 0,1 - 0,2 - 0,5 - 1 - 2 et 4 cm.

1.3.2.      Mode opératoire

1.3.2.1.    Préparation de l'échantillon

      Si le vin est trouble, il doit être clarifié par centrifugation.

      Les vins jeunes ou mousseux doivent être débarrassés de la plus grande quantité de leur dioxyde de carbone par agitation sous vide.

1.3.2.2.    Mesures

      Le trajet optique, b, des cuves utilisées doit être choisi de telle manière que l'absorbance mesurée soit comprise entre 0,3 et 0,7.

      À titre indicatif, il est conseillé d'utiliser des cuves de 2 cm (ou 4 cm) de trajet optique pour les  vins  blancs,  1 cm  pour  les  vins
       rosés et 0,1 cm (ou 0,2 cm) pour les vins rouges.

      Effectuer les mesures spectrophotométriques en utilisant comme liquide de référence l'eau distillée placée dans une  cuve  de  même  trajet
       optique, b, pour régler le zéro de l'échelle des absorbances aux longueurs d'onde 445, 495, 550 et 625 nm.

      Relever, pour le trajet optique b, les quatre absorbances obtenues pour le vin, soit A445, A495, A550, A625 (avec 3 décimales).

1.3.3.      Calculs

      En reportant les valeurs des absorbances pour b cm de trajet optique sur la table I, relever  les  transmittances  (T  %)  correspondantes,
       soit: T445, T495, T550, T625.

         – Calculer les valeurs tristimulaires X, Y et Z, exprimées en fractions décimales:

           X     =     0,42 × T625 + 0,35 × T550 + 0,21 × T445

           Y     =     0,20 × T625 + 0,63 × T550 + 0,17 × T495

           Z     =     0,24 × T495 + 0,94 × T445

         – Calculer les coordonnées de la couleur x et y:

|x = (X)/(X + Y + Z)                                           |y = (Y)/(X + Y + Z)                                  |

1.3.4.      Expression des résultats

1.3.4.1.    La luminosité relative est donnée par la valeur de Y exprimée en pourcentage. (Pour le noir Y % = 0, pour l'incolore Y % = 100).

1.3.4.2.    La chromaticité est exprimée par la longueur d'onde dominante et la pureté.

      Leur détermination fait appel au diagramme de chromaticité, délimité par le spectrum locus, donné sur la figure 1. Il porte le point 0  qui
       correspond à la source de lumière blanche utilisée, représentée par l'illuminant standard C de coordonnées xo  = 0,3101  et  yo  = 0,3163,
       représentant la lumière du jour moyennement clair.

         – Longueur d'onde dominante

            Placer sur le diagramme le point C de coordonnées x et y. Lorsque le point C est à l'extérieur du triangle AOB, tracer la droite  qui
           joint le point O au point C et la prolonger; elle coupe le spectrum locus  en  un  point  S  qui  correspond  à  la  longueur  d'onde
           dominante.

            Lorsque le point C est à l'intérieur du triangle AOB, tracer la droite de C vers O; elle coupe le spectrum  locus  en  un  point  qui
           correspond à la longueur d'onde de la couleur complémentaire du vin. Cette longueur d'onde est exprimée par sa valeur  suivie  de  la
           lettre C.

         – Pureté

            Lorsque le point C est extérieur au triangle AOB, la pureté est exprimée en pourcentage par le rapport:

            100 · ((distance du point C au point O)/(distance du point O au point S))

            Lorsque le point C est à l'intérieur du triangle AOC, la pureté est exprimée en pourcentage par le rapport:

            100 · ((distance du point C au point O[17])/(distance du point O au point P))

            Le point P étant le point où la droite OC coupe la ligne des pourpres.

            La pureté est également donnée directement par les diagrammes de chromaticité connaissant x et y (figures 2, 3, 4, 5 et 6).

1.3.4.3.    Résultats

      La luminosité, la chromaticité (exprimée par la longueur d'onde dominante) et la pureté définissent complètement la couleur d'un vin.

      Elles doivent être indiquées sur le bulletin d'analyse avec la valeur du trajet optique sous lequel les mesures ont été effectuées.

4. MÉTHODE USUELLE

1.4.1. Appareillage

1.4.1.1. Spectrophotomètre permettant des mesures entre 300 et 700 nm.

1.4.1.2. Cuves de verre disponibles par paires, de trajet optique, b, égal à 0,1 - 0,2 - 0,5 et 1 cm.

1.4.2. Traitement préalable de l'échantillon

       Si le vin est trouble, le clarifier par centrifugation.

       Les vins jeunes ou mousseux doivent être débarrassés de la plus grande quantité de leur dioxyde de carbone par agitation sous vide.

1.4.3. Mode opératoire

       Le trajet optique, b, de la cuve de mesure doit être choisi de manière que l'absorbance A soit comprise entre 0,3 et 0,7.

       Effectuer les mesures spectrophotométriques en utilisant comme liquide de référence l'eau distillée placée dans une cuve  de  même  trajet
           optique, b, pour régler le zéro de l'échelle d'absorbances de l'appareil aux longueurs d'onde 420, 520 et 620 nm.

1.4.4. Expression des résultats

1.4.4.1. Calculs

       Calculer les absorbances pour 1 cm de trajet optique pour les 3 longueurs d'onde en  divisant  par  b,  exprimé  en  cm,  les  absorbances
           relevées, soit A420, A520 et A620.

       L'intensité est conventionnellement donnée par:I = A420 + A520 + A620Elle est exprimée avec 3 décimales.

       La nuance est conventionnellement donnée par:Elle est donnée avec 3 décimales.

                                                                    TABLEAU I

                                              Transformation des absorbances en transmittances (T %)

      Mode d'utilisation:

      Lire le premier chiffre décimal de la valeur de l'absorbance dans la colonne verticale 1 et  le  deuxième  chiffre  décimal  sur  la  ligne
       horizontale 2.

      Relever le chiffre situé à leur intersection. Pour obtenir la transmittance, ce chiffre devra être divisé par  10  si  l'absorbance  a  une
       valeur inférieure à 1, par 100 si elle est comprise entre 1 et 2, par 1 000 si elle est comprise entre 2 et 3.

      Remarque:

      Le chiffre porté en haut et à droite de chaque case permet de tenir compte par interpolation du troisième chiffre décimal de la  valeur  de
       l'absorbance.

|                        |0            |1           |2           |3         |
|T %                     |33,9 %       |3,4 %       |0,3 %       |0 %       |

      Les transmittances T % seront exprimées à 0,1 % près.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 1

                              Diagramme de la chromaticité représentant le locus de toutes les couleurs du spectre.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 2

                               Diagramme de la chromaticité pour les vins rouges francs et les vins rouges tuilés.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 3

                               Diagramme de la chromaticité pour les vins rouges francs et les vins rouges tuilés.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 4

                              Diagramme de la chromaticité pour les vins rouges francs et les vins rouges pourpres.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 5

                              Diagramme de la chromaticité pour les vins rouges francs et les vins rouges pourpres.

                                                                      [pic]

                                                                     FIGURE 6

                              Diagramme de la chromaticité pour les vins rouges tuilés et les vins rouges pourpres.

       2.   CAS DES MOÛTS CONCENTRÉS RECTIFIÉS

2.1.  Principe

      Mesure de l'absorbance, à 425 nm sous 1 cm d'épaisseur, du moût concentré rectifié dont la concentration en sucres a été ramenée à 25  pour
       100 (m/m) (25 ° Brix).

2.2.  Appareils

2.2.1.      Spectrophotomètre permettant des mesures entre 300 et 700 nm.

2.2.2.      Cuves de verre, de trajet optique égal à 1 cm.

2.2.3.      Filtre à membrane de porosité 0,45 µm.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution dont le titre en sucres est de 25 pour 100 (m/m) (25 ° Brix) préparée comme il est  indiqué  au  chapitre  «pH»,  Ö au
       point Õ 4.1.2. La filtrer sur un filtre à membrane de porosité 0,45 µm.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Détermination de l'absorbance

      Régler l'absorbance zéro pour la longueur d'onde 425 nm sur une cuve de 1 cm de trajet optique contenant de l'eau distillée.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Relever l'absorbance A à cette longueur d'onde, de la solution à 25 pour 100 de sucres (25 °  Brix)  obtenue  Ö comme  indiqué  au  point Õ
       2.3.1, placée dans une cuve de 1 cm de trajet optique.

                                            ê 2676/90

2.4.  Expression des résultats

      L'absorbance à 425 nm du moût concentré rectifié en solution à 25 pour 100 (m/m) de sucres (25 ° Brix) est exprimée avec 2 décimales.

42.   INDICE DE FOLIN-CIOCALTEU

1.    DÉFINITION

      L'indice de Folin-Ciocalteu est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après.

2.    PRINCIPE

      L'ensemble des composés phénoliques du vin est oxydé par le réactif de Folin-Ciocalteu. Ce dernier est constitué  par  un  mélange  d'acide
       phosphotungstique (H3PW12O40) et d'acide phosphomolybdique (H3PMo12O40) qui est réduit,  lors  de  l'oxydation  des  phénols,  en  mélange
       d'oxydes bleus de tungstène (W8O23) et de molybdène (Mo8O23).

      La coloration bleue produite possède une absorption maximum  aux  environs  de  750 nm.  Elle  est  proportionnelle  au  taux  de  composés
       phénoliques.

3.    RÉACTIFS

      Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté équivalente.

3.1.  Réactif de Folin-Ciocalteu

      Ce réactif est disponible dans le commerce prêt à l'emploi. Il peut être préparé de  la  façon  suivante:  100 g  de  tungstate  de  sodium
       (Na2WO4, 2H2O) et 25 g de molybdate de sodium (Na2MoO4, 2H2O) sont dissous dans 700 ml d'eau distillée; ajouter 50 ml d'acide phosphorique
       à 85 % (ρ20 = 1,71 g/ml), 100 ml d'acide chlorhydrique concentré (ρ20 = 1,19 g/ml). Porter à l'ébullition sous reflux  durant  10  heures,
       ajouter ensuite 150 g de sulfate de lithium (Li2SO4, H2O), quelques gouttes de brome et porter à nouveau à l'ébullition durant 15 minutes.
       Refroidir et compléter à 1 litre avec de l'eau distillée.

3.2.  Carbonate de sodium (Na2CO3) anhydre en solution à 20 % (m/v).

4.    APPAREILLAGE

      Matériel courant de laboratoire, et notamment:

4.1.  Fioles jaugées de 100 ml.

4.2.  Spectrophotomètre permettant de travailler à 750 nm.

5.    MODE OPÉRATOIRE

5.1.  Cas des vins rouges

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans une fiole jaugée de 100 ml ( Ö point Õ 4.1), introduire en respectant l'ordre suivant:

                                            ê 2676/90

|1     |ml de vin dilué au 1/5e                                                                |
|50    |ml d'eau distillée                                                                     |
|5     |ml de réactif de Folin-Ciocalteu (3.1)                                                 |
|20    |ml de solution de carbonate de sodium (3.2)                                            |

      Porter à 100 ml avec de l'eau distillée.

      Agiter pour homogénéiser. Attendre 30 minutes pour avoir une stabilisation de la réaction. Déterminer l'absorbance à 750 nm sous  1 cm  par
       rapport à un témoin préparé avec de l'eau distillée à la place du vin.

      Si l'absorbance lue n'est pas voisine de 0,3, il convient de modifier la dilution du vin.

5.2.  Cas des vins blancs

      Opérer dans les mêmes conditions, sur 1 ml de vin non dilué.

5.3.  Cas des moûts concentrés rectifiés

5.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution dont la teneur en sucres est de 25 pour 100 (m/m) (25° Brix) préparée comme il est  indiqué  au  chapitre  «pH»,  Ö au
       point Õ 4.1.2.

                                            ê 2676/90

5.3.2.      Mesure

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Opérer comme il est décrit dans le cas des vins rouges ( Ö point Õ 5.1)  sur  5 ml  d'échantillon  préparé  selon  Ö le  point Õ  5.3.1  en
       mesurant l'absorbance par rapport à un témoin préparé avec 5 ml d'une solution de sucre interverti à 25 pour 100 (m/m).

                                            ê 2676/90

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

6.1.  Mode de calcul

      Le résultat est exprimé sous forme d'un indice obtenu en multipliant l'absorbance par 100 dans le cas des vins rouges dilués  au  1/5e  (ou
       par le facteur correspondant à la dilution employée) et par 20 dans le cas des vins blancs. Dans le cas des  moûts  concentrés  rectifiés,
       l'absorbance est multipliée par 16.

6.2.  Répétabilité

      La différence entre les résultats de 2 déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le  même  analyste  ne
       doit pas être supérieure à 1.

      Une bonne répétabilité des  résultats  est  liée  à  l'utilisation  d'un  appareillage  (fioles  jaugées  et  cuves  du  spectrophotomètre)
       rigoureusement propre.

43.   MÉTHODES D'ANALYSE PARTICULIÈRES POUR MOÛTS DE RAISINS CONCENTRÉS RECTIFIÉS

a)    CATIONS TOTAUX

1.    PRINCIPE

      La prise d'essai est traitée par un échangeur de cations fortement acide. Les cations sont échangés contre H+. Ils  sont  exprimés  par  la
       différence entre l'acidité totale de l'effluent et celle de la prise d'essai.

2.    APPAREILLAGE

2.1.  Colonne de verre de 300 mm environ de longueur et de 10-11 mm de diamètre intérieur, munie d'un robinet.

2.2.  pH-mètre gradué au moins en dixièmes d'unités pH.

2.3.  Électrodes:

         – électrode de verre, à conserver dans l'eau distillée,

         – électrode de référence au calomel-chlorure de potassium saturé, à conserver dans une solution saturée de chlorure de potassium,

         – ou électrode combinée à conserver dans l'eau distillée.

3.    RÉACTIFS

3.1.  Échangeur de cations fortement acide, en forme H+. Préalablement à son emploi, faire gonfler la résine par immersion dans de l'eau  pendant
       une nuit.

3.2.  Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium.

3.3.  Papier indicateur de pH.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution obtenue en diluant le moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v) comme il est indiqué au  chapitre  «Acidité  totale»
       Ö au point Õ 5.1.2.

                                            ê 2676/90

4.2.  Préparation de la colonne d'échangeur d'ions

      Introduire dans la colonne environ 10 ml d'échangeur d'ions préalablement gonflé en forme H+; rincer la colonne  avec  de  l'eau  distillée
       jusqu'à élimination de l'acidité que l'on contrôle avec le papier indicateur.

4.3.  Échange d'ions

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Faire passer à travers la colonne 100 ml de la solution de moût concentré rectifié, préparée comme indiqué Ö au point Õ 4.1, à raison de  1
       goutte par seconde. Recueillir l'effluent dans un vase cylindrique. Rincer la colonne avec 50 ml  d'eau  distillée.  Titrer  l'acidité  de
       l'effluent (y compris l'eau de rinçage) par la solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium jusqu'à ce que le pH soit égal à 7 à 20 °C. L'addition
       de liqueur alcaline doit être faite lentement et la solution constamment agitée. Soit n ml le volume  de  solution  0,1 M  d'hydroxyde  de
       sodium versé.

                                            ê 2676/90

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      Les cations totaux sont exprimés en milliéquivalents par kilogramme de sucres totaux avec 1 décimale.

5.1.  Calculs

         – Acidité de l'effluent exprimée en milliéquivalents par kilogramme de moût concentré rectifié:

           E     =     2,5 · n.

                                            ê 2676/90 (adapté)

         – Acidité totale du moût concentré rectifié en milliéquivalents par kilogramme (voir «Acidité totale» Ö au point Õ 6.1.2): a.

                                            ê 2676/90

         – Cations totaux en milliéquivalents par kilogramme de sucres totaux:

            ((2,5 n − a)/(P)) · 100

           P     =     teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux.

b)    CONDUCTIVITÉ

1.    PRINCIPE

      Mesure de la conductivité électrique d'une colonne de liquide, délimitée par deux électrodes de platine maintenues parallèles,  constituant
       l'une des branches d'un point de Wheatstone.

      La conductivité varie avec la température. Elle est exprimée à 20 °C.

2.    APPAREIL

2.1.  Conductimètre permettant des mesures de conductivité dans un domaine compris entre 1 et 1 000 microsiemens par cm.

2.2.  Bain d'eau permettant d'amener la température des échantillons à analyser à environ 20 °C (20 ± 2 °C).

3.    RÉACTIFS

3.1.  Eau déminéralisée de conductivité spécifique inférieure à 2 microsiemens par cm à 20 °C.

3.2.  Solution de chlorure de potassium de référence.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre 0,581 g de chlorure de potassium, KCl, préalablement séché jusqu'à masse constante à la température  de  105 °C,  dans  de  l'eau
       déminéralisée ( Ö point Õ 3.1). Compléter à 1 litre avec de l'eau déminéralisée (Ö point Õ 3.1). Cette  solution  a  une  conductivité  de
       1 000 microsiemens par cm à 20 °C. Sa durée de conservation est limitée à 3 mois.

                                            ê 2676/90

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Préparation de l'échantillon à analyser

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution dont la teneur en sucres totaux est de 25 pour 100 (m/m) (25° Brix) comme il est indiqué  au  chapitre  «Détermination
       du pH», Ö au point Õ 4.1.2.

                                            ê 2676/90

4.2.  Détermination de la conductivité

      Amener l'échantillon à analyser à 20 °C par immersion dans un bain d'eau. Contrôler la température à 0,1 °C près.

      Rincer deux fois la cellule de mesure du conductimètre avec la solution à examiner.

      Mesurer la conductivité exprimée en microsiemens par centimètre.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

      La conductivité est exprimée en microsiemens par centimètre (Scm−1) à 20 °C, sans décimale, pour la solution  à  25  pour  100  (m/m)  (25°
       Brix) du moût concentré rectifié.

5.1.  Calculs

      Si l'appareil n'est pas pourvu d'un compensateur de température,  corriger  la  conductivité  mesurée  au  moyen  de  la  table  I.  Si  la
       température est inférieure à 20 °C, ajouter la correction; si la température est supérieure à 20 °C, soustraire la correction.

                                                                     TABLE I

                             Corrections de conductivité pour températures différentes de 20 °C en microsiemens cm−1

|Conductivité         |Températures                                                                                          |
|                                                                                                                           |

c)    HYDROXYMÉTHYLFURFURAL

1.    PRINCIPE DES MÉTHODES

1.1.  Méthode colorimétrique

      Les aldéhydes dérivés du furanne, dont le principal est l'hydroxyméthylfurfural, réagissent avec l'acide barbiturique et  la  paratoluidine
       pour donner un composé rouge qui est dosé par colorimétrie à 550 nm.

1.2.  Méthode par chromatographie liquide haute performance

      Séparation sur colonne en phase inversée et détermination à 280 nm.

2.    MÉTHODE COLORIMÉTRIQUE

2.1.  Appareils

2.1.1.      Spectrophotomètre permettant des mesures entre 300 et 700 nm.

2.1.2.      Cuves de verre, de trajet optique égal à 1 cm.

2.2.  Réactifs

2.2.1.      Acide barbiturique en solution à 0,5 pour 100 (m/v)

      Dissoudre 500 mg d'acide barbiturique, C4O3N2H4, dans de l'eau distillée en chauffant légèrement sur bain d'eau à 100 °C; porter  à  100 ml
       avec de l'eau distillée. La solution se conserve environ 1 semaine.

2.2.2.      Paratoluidine en solution à 10 pour 100 (m/v)

      10 g de paratoluidine, C6H4(CH3) NH2 sont placés dans une fiole jaugée de  100 ml;  ajouter  50 ml  d'isopropanol,  CH3CH(OH)CH3  et  10 ml
       d'acide acétique glacial, CH3COOH (ρ20 = 1,05 g/ml); compléter à 100 ml avec de l'isopropanol. Cette solution doit  être  renouvelée  tous
       les jours.

2.2.3.      Éthanal (CH3CHO) en solution aqueuse à 1 pour 100 (m/v)

      À préparer extemporanément.

2.2.4.      Hydroxyméthylfurfural, C6O3H6 en solution aqueuse à 1 g/l

      Préparer par dilutions successives des solutions titrant 5 - 10 - 20 - 30 et 40 mg/l. La solution à 1 g/l et  ses  dilutions  doivent  être
       fraîchement préparées.

2.3.  Mode opératoire

2.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution obtenue en diluant le moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v) comme il est indiqué au  chapitre  «Acidité  totale»
       Ö au point Õ 5.1.2. Opérer le dosage sur 2 ml de cette solution.

                                            ê 2676/90

2.3.2.      Dosage colorimétrique

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans 2 flacons a et b de 25 ml bouchés à l'émeri, placer 2 ml d'échantillon préparé comme il est indiqué Ö au point Õ  2.3.1.  Placer  dans
       chaque flacon 5 ml de solution de paratoluidine (Ö point Õ 2.2.2); mélanger. Ajouter dans le flacon b (Témoin) 1 ml  d'eau  distillée,  et
       dans le flacon a (Mesure) 1 ml de solution d'acide barbiturique (Ö point Õ 2.2.1). Agiter pour homogénéiser.  Transvaser  le  contenu  des
       flacons dans les cuves de 1 cm de trajet optique du spectrophotomètre. Le zéro de l'échelle des absorbances étant réglé sur le contenu  du
       flacon b pour la longueur d'onde 550 nm, suivre la variation de l'absorbance du contenu du flacon a; relever sa valeur maximale A qui  est
       atteinte entre 2 et 5 minutes.

                                            ê 2676/90

      Les échantillons dont la teneur en hydroxyméthylfurfural est supérieure à 30 mg/l doivent être dilués avant l'analyse.

2.3.3.      Établissement de la courbe d'étalonnage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans 2 flacons a et b de 25 ml, placer 2 ml de chacune des solutions d'hydroxyméthylfurfural à 5 - 10 - 20 - 30 et 40 mg/l (2.2.4)  et  les
       traiter comme il a été décrit Ö au point Õ 2.3.2.

                                            ê 2676/90

      La représentation graphique des absorbances en fonction des teneurs en milligrammes  par  litre  en  hydroxyméthylfurfural  des  solutions-
       étalons est une droite passant par l'origine.

2.4.  Expression des résultats

      La teneur en hydroxyméthylfurfural des moûts concentrés rectifiés est exprimée en milligrammes par kilogramme de sucres totaux.

2.4.1.      Mode de calcul

      La teneur C mg/l en hydroxyméthylfurfural de l'échantillon à analyser est obtenue en reportant sur la courbe  d'étalonnage  l'absorbance  A
       déterminée sur cet échantillon.

      Teneur en hydroxyméthylfurfural en milligrammes par kilogramme de sucres totaux:

      250 · ((C)/(P))

       P    =     teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux du moût concentré rectifié.

3.    MÉTHODE PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE

3.1.  Appareils

3.1.1.      Chromatographie en phase liquide haute performance équipée:

         – d'un injecteur à boucle de 5 ou 10 µl,

         – d'un détecteur, spectrophotomètre permettant des mesures à 280 nm,

         – d'une colonne de silice greffée octadécyl (par exemple: Bondapak C18 — Corasil, Waters Ass.),

         – d'un enregistreur, éventuellement d'un intégrateur.

      Débit de la phase mobile: 1,5 ml/minute.

3.1.2.      Dispositif de filtration sur membrane (0,45 µm)

3.2.  Réactifs

3.2.1.      Eau bidistillée.

3.2.2.      Méthanol, CH3OH distillé ou de qualité HPLC.

3.2.3.      Acide acétique, CH3COOH (ρ20 = 1,05 g/ml).

                                            ê 2676/90 (adapté)

3.2.4.      Phase mobile: eau-méthanol ( Ö point Õ 3.2.2) acide acétique (Ö point Õ 3.2.3) préalablement filtrés sur membrane (0,45 µm), (40 —  9
       — 1 v/v).

                                            ê 2676/90

      Cette phase mobile doit être préparée chaque jour et dégazée avant utilisation.

3.2.5.      Solution de référence d'hydroxyméthylfurfural à 25 mg/l (m/v).

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Placer, dans une fiole jaugée de 100 ml, 25 mg exactement pesés d'hydroxyméthylfurfural, C6H3O6 et compléter au volume avec du  méthanol  (
       Ö point Õ 3.2.2). Diluer cette solution au 1/10e avec du méthanol (Ö point Õ 3.2.2) et la filtrer sur membrane (0,45 µm).

                                            ê 2676/90

      Cette solution, placée au réfrigérateur en flacon de verre brun, hermétiquement fermé, se conserve 2 à 3 mois.

3.3.  Mode opératoire

3.3.1.      Préparation de l'échantillon

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Utiliser la solution obtenue en diluant le moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v) comme il est indiqué au  chapitre  «Acidité  totale»
       Ö au point Õ 5.1.2 et la filtrer sur membrane (0,45 µm).

                                            ê 2676/90

3.3.2.      Détermination chromatographique

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Injecter dans le chromatographe 5 (ou 10) µl de l'échantillon préparé comme indiqué Ö au point Õ 3.3.1 et 5  (ou  10)  µl  de  solution  de
       référence d'hydroxyméthylfurfural (Ö point Õ 3.2.5). Enregistrer le chromatogramme.

                                            ê 2676/90

      Le temps de rétention de l'hydroxyméthylfurfural est voisin de 6 — 7 minutes.

3.4.  Expression des résultats

      La teneur en hydroxyméthylfurfural des moûts concentrés rectifiés est exprimée en milligrammes par kilogramme de sucres totaux.

3.4.1.      Mode de calcul

      Soit C mg/l, la teneur en hydroxyméthylfurfural de la solution de moût concentré rectifié à 40 pour 100 (m/v).

      Teneur en hydroxyméthylfurfural en milligrammes par kilogramme de sucres totaux:

      ((250 · C)/(P))

       P    =     teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux du moût concentré rectifié.

d)    MÉTAUX LOURDS

1.    PRINCIPES

I.    Méthode rapide d'évaluation des métaux lourds

      Les métaux lourds sont mis en évidence dans le moût concentré rectifié convenablement dilué par la coloration que  donne  la  formation  de
       sulfures. Ils sont évalués comparativement à une solution-étalon de plomb correspondant à la teneur maximale admissible.

II.   Détermination de la teneur en plomb par spectrophotométrie d'absorption atomique

      Le chélate que donne le plomb avec le pyrrolidinedithiocarbamate  d'ammonium  est  extrait  par  la  méthylisobutylcétone  dont  on  mesure
       l'absorbance à 283,3 nm. La teneur en plomb est déterminée par la méthode des surcharges.

2.    MÉTHODE RAPIDE D'ÉVALUATION DES MÉTAUX LOURDS

2.1.  Réactifs

2.1.1.      Acide chlorhydrique dilué à 70 pour 100 (m/v)

      Prélever 70 g d'acide chlorhydrique (HCl), (ρ20 = 1,16 — 1,19 g/ml) et compléter à 100 ml avec de l'eau.

2.1.2.      Acide chlorhydrique dilué à 20 pour 100 (m/v)

      Prélever 20 g d'acide chlorhydrique (HCl), (ρ20 = 1,16 — 1,19 g/ml) et compléter à 100 ml avec de l'eau.

2.1.3.      Ammoniaque diluée

      Prélever 14 g d'ammoniaque (NH3), (ρ20 = 0,931 — 0,934 g/ml) et compléter à 100 ml avec de l'eau.

2.1.4.      Solution tampon pH 3,5

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre 25 g d'acétate d'ammonium (CH3COONH4), dans 25 ml d'eau et ajouter 38 ml d'acide chlorhydrique dilué ( Ö point Õ 2.1.1).  Ajuster
       le pH si nécessaire avec de l'acide chlorhydrique dilué (Ö point Õ 2.1.2) ou de l'ammoniaque  diluée  (Ö point Õ  2.1.3)  et  compléter  à
       100 ml avec de l'eau.

                                            ê 2676/90

2.1.5.      Solution de thioacétamide, (C2H5NS), à 4 pour 100 (m/v)

2.1.6.      Solution de glycérol (C3H8O3), à 85 pour 100 (m/v)

      (n D20 °C = 1,449 — 1,455).

2.1.7.      Réactif au thioacétamide

                                            ê 2676/90 (adapté)

      À 0,2 ml de solution de thioacétamide ( Ö point Õ 2.1.5), ajouter 1 ml d'un mélange de 5 ml d'eau, 15 ml d'hydroxyde de sodium en  solution
       1 M et 20 ml de glycérol (Ö point Õ 2.1.6). Chauffer au bain d'eau à 100° C pendant 20 secondes. Préparer extemporanément.

                                            ê 2676/90

2.1.8.      Solution de plomb à 0,002 g/l

      Préparer une solution à 1 g/l de plomb en dissolvant dans de l'eau 0,400 g de nitrate de plomb, Pb (NO3)2 et compléter  à  250 ml  avec  de
       l'eau. Diluer cette solution au moment de l'emploi à 2 pour 1 000 (v/v) avec de l'eau pour obtenir la solution à 0,002 g/l.

2.2.  Mode opératoire

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre une prise d'essai de 10 g de moût concentré rectifié dans 10 ml d'eau. Ajouter  2 ml  de  solution  tampon  pH  3,5  (  Ö point Õ
       2.1.4); mélanger. Ajouter 1,2 ml de réactif au thioacétamide (Ö point Õ 2.1.7). Mélanger immédiatement. Préparer le témoin dans les  mêmes
       conditions en utilisant 10 ml de solution à 0,002 g/l de plomb (Ö point Õ 2.1.8).

                                            ê 2676/90

      Après 2 minutes, la coloration brune éventuelle de la solution de moût concentré rectifié ne doit  pas  être  plus  intense  que  celle  du
       témoin.

2.3.  Calculs

      L'essai témoin, dans les conditions opératoires, correspond à une teneur maximale admissible de métaux lourds exprimés en plomb de  2 mg/kg
       de moût concentré rectifié.

3.    DÉTERMINATION DE LA TENEUR EN PLOMB PAR SPECTROPHOTOMÉTRIE D'ABSORPTION ATOMIQUE

3.1.  Appareils

3.1.1.      Spectrophotomètre d'absorption atomique équipé d'un brûler alimenté par de l'air et de l'acétylène.

3.1.2.      Lampe à cathode creuse au plomb.

3.2.  Réactifs

3.2.1.      Acide acétique dilué.

      Prélever 12 g d'acide acétique glacial (ρ20 = 1,05 g/ml) et compléter à 100 ml avec de l'eau.

3.2.2.      Solution de pyrrolidinedithiocarbamate d'ammonium C5H12N2S2, à 1 pour 100 (m/v).

3.2.3.      Méthylisobutylcétone, (CH3)2 CHCH2COCH3.

3.2.4.      Solution de plomb à 0,010 g/l de plomb.

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Diluer à 1 pour 100 (v/v) la solution de plomb à 1 g/l ( Ö point Õ 2.1.8).

                                            ê 2676/90

3.3.  Mode opératoire

3.3.1.      Solution à examiner

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dissoudre 10 g de moût concentré rectifié dans un mélange à volumes égaux d'acide acétique dilué ( Ö point Õ 3.2.1) et d'eau  et  compléter
       à 100 ml avec ce mélange.

      Ajouter 2 ml de solution de pyrrolidinedithiocarbamate d'ammonium (Ö point Õ 3.2.2) et 10 ml  de  méthylisobutylcétone  (Ö point Õ  3.2.3).
       Agiter à l'abri d'une lumière vive pendant 30 secondes. Laisser séparer les deux couches. Utiliser la couche méthylisobutylcétone.

                                            ê 2676/90

3.3.2.      Solutions de référence

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Préparer 3 solutions de référence contenant en plus des 10 g de moût concentré rectifié, respectivement 1 — 2 et 3 ml  de  la  solution  de
       plomb à 0,010 g/l ( Ö point Õ 3.2.4). Les traiter comme la solution à examiner.

                                            ê 2676/90

3.3.3.      Témoin

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Préparer un témoin en procédant dans les mêmes conditions Ö que celles décrites au point Õ 3.3.1 pour la  solution  à  examiner  mais  sans
       addition de moût concentré rectifié.

                                            ê 2676/90

3.3.4.      Détermination

      Sélectionner la longueur d'onde 283,3 nm.

      Pulvériser dans la flamme la méthylisobutylcétone provenant de l'essai témoin et régler l'absorbance zéro.

      En opérant sur leurs solvants d'extraction respectifs, déterminer les absorbances correspondant à la solution à examiner et  aux  solutions
       de référence.

3.4.  Expression des résultats

      Exprimer la teneur en plomb en milligrammes par kilogramme du moût concentré rectifié avec 1 décimale.

3.4.1.      Calculs

      Tracer la courbe représentant la variation des absorbances en  fonction  de  la  concentration  du  plomb  ajouté  dans  les  solutions  de
       référence, la concentration zéro correspondant à la solution à examiner.

      Extrapoler la droite joignant les points jusqu'à ce qu'elle rencontre l'axe des concentrations du côté négatif. La distance de ce  point  à
       l'origine représente la concentration en plomb de la solution à examiner.

e)    DOSAGE CHIMIQUE DE L'ÉTHANOL

      Cette méthode de dosage est utilisée pour la détermination du titre alcoométrique de liquides faiblement alcooliques tels  que  les  moûts,
       les moûts concentrés, les moûts concentrés rectifiés.

1.    PRINCIPE

      Distillation simple du liquide. Oxydation de l'éthanol du distillat par le dichromate de potassium. Titrage de l'excès dichromate  par  une
       solution de fer II.

2.    APPAREIL

                                            ê 2676/90 (adapté)

2.1.  Utiliser l'appareil de distillation décrit Ö au point Õ 3.2 au chapitre «Titre alcoométrique».

                                            ê 2676/90

3.    RÉACTIFS

3.1.  Solution de dichromate de potassium

      Dissoudre 33,600 g de dichromate de potassium (K2Cr2O7), dans une quantité suffisante d'eau pour faire 1 litre à 20° C.

      Un millilitre de cette solution oxyde 7,8924 mg d'alcool.

3.2.  Solution de sulfate de fer II et d'ammonium

      Dissoudre 135 g de sulfate de fer II et d'ammonium, Fe SO4, (NH4)2SO4, 6 H2O dans une quantité d'eau  suffisante  pour  faire  1  litre  et
       ajouter 20 ml d'acide sulfurique concentré (H2SO4), (ρ20 = 1,84 g/ml).  Cette  solution  correspond  sensiblement  à  son  demi-volume  de
       solution de dichromate lorsqu'elle vient d'être préparée. Elle s'oxyde lentement par la suite.

3.3.  Solution de permanganate de potassium

      Dissoudre 1,088 g de permanganate de potassium, KMnO4, dans une quantité suffisante d'eau pour faire 1 litre.

3.4.  Acide sulfurique dilué 1/2 (v/v)

      À 500 ml d'eau, ajouter peu à peu et en agitant 500 ml d'acide sulfurique (H2SO4) (ρ20 = 1,84 g/ml).

3.5.  Réactif à l'ortho-phénanthroline ferreuse

      Dissoudre 0,695 g de sulfate ferreux, FeSO4, 7 H2O, dans 100 ml d'eau, ajouter 1,485 g de monohydrate d'ortho-phénanthroline C12H8N2,  H2O.
       Chauffer pour favoriser la dissolution. Cette solution, de couleur rouge vif, se conserve très bien.

4.    MODE OPÉRATOIRE

4.1.  Distillation

      Placer dans le ballon de distillation 100 g du moût concentré rectifié et 100 ml d'eau. Recueillir le distillat dans  un  ballon  jaugé  de
       100 ml et porter au trait de jauge avec de l'eau.

4.2.  Oxydation

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Dans un flacon bouché à l'émeri de 300 ml dont le goulot est terminé par une partie évasée, ce qui permet de rincer le goulot sans  pertes,
       placer 20 ml de solution titrée de dichromate de potassium ( Ö point Õ 3.1), 20 ml d'acide sulfurique dilué 1/2 (v/v) (Ö point Õ  3.4)  et
       agiter. Ajouter 20 ml de distillat. Boucher le flacon, agiter et attendre 30 minutes au moins,  en  agitant  de  temps  en  temps  (flacon
       «dosage»).

      Procéder au titrage de la solution de sulfate de fer II et d'ammonium (Ö point Õ 3.2) par rapport à la solution de dichromate de  potassium
       en plaçant dans un flacon identique les mêmes quantités de réactifs mais en remplaçant les 20 ml de distillat par  20 ml  d'eau  distillée
       (flacon «témoin»).

                                            ê 2676/90

4.3.  Titrage

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Ajouter 4 gouttes de réactif à l'ortho-phénanthroline ( Ö point Õ 3.5) au contenu du flacon «dosage». Titrer l'excès  de  dichromate  en  y
       versant la solution de sulfate de fer II (Ö point Õ 3.2) et d'ammonium. Arrêter l'addition de solution ferreuse lorsque le milieu passe du
       bleu-vert au marron.

      Pour préciser le virage, revenir du marron au bleu-vert avec la solution de  permanganate  (Ö point Õ  3.3)  de  potassium.  Retrancher  le
       dixième du volume employé de cette solution, du volume de solution de sulfate de fer II versé. Soit n cette différence.

                                            ê 2676/90

      Procéder de même avec le flacon «témoin». Soit n′ la différence.

5.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

                                            ê 2676/90 (adapté)

      L'éthanol est exprimé en grammes par kilogramme de sucres totaux avec 1 décimale.

                                            ê 2676/90

5.1.  Mode de calcul

      n′ ml de solution ferreuse réduisent 20 ml de solution de dichromate qui oxydent 157,85 mg d'éthanol pur.

      Un millilitre de solution de fer II a même pouvoir réducteur que:

      ((157,85)/(n′)) mg d'éthanol

      n' − n ml de solution de fer II ont même pouvoir réducteur que:

      157,85 · ((n′ − n)/(n′)) mg d'éthanol.

      Èthanol en g/kg de moût concentré rectifié:

      7,892 · ((n′ − n)/(n′))

      Èthanol en g/kg de sucres totaux:

      789,2 · ((n′ − n)/(n′ · P))

|avec P         |=     |teneur pour 100 (m/m) en sucres totaux.                                |

f)    MESO-INOSITOL, SCYLLO-INOSITOL ET SACCHAROSE

1.    PRINCIPE

      Chromatographie en phase gazeuse de dérivés silanisés.

2.    RÉACTIFS

2.1.  Étalon interne: xylitol (solution aqueuse d'environ 10 g/l additionnée d'une pointe de spatule de sodium azide)

2.2.  Bistriméthylsilyltrifluoroacétamide — BSTFA — (C8H18F3NOSi2)

2.3.  Triméthylchlorosilane (C3H9ClSi)

2.4.  Pyridine p.a. (C5H5N)

2.5.  Méso-inositol (C6H12O6)

3.    APPAREILLAGE

3.1.  Chromatographe en phase gazeuse équipé de:

3.2.  Colonne capillaire (par exemple, silice fondue, OV 1, épaisseur du film 0,15 µ, longueur 25 m, diamètre intérieur 0,3 mm).

      Conditions opératoires: gaz vecteur: hydrogène et hélium

         – débit du gaz vecteur: 2 ml/minute environ,

         – température de l'injecteur et du détecteur: 300° C,

         – programmation de température: 1 minute à 160° C, 4° C/minute jusqu'à 260° C, isotherme à 260° C pendant 15 minutes,

         – rapport de dissociation: 1 à 20 environ.

3.3.  Intégrateur.

3.4.  Seringue micrométrique 10 µl.

3.5.  Micropipettes de 50, 100 et 200 µl.

3.6.  Flacons de 2 ml avec un bouchon de téflon.

3.7.  Étuve.

4.    MODE OPÉRATOIRE

                                            ê 2676/90 (adapté)

      Additionner environ 5 g de MCR, pesés exactement dans un matras de 50 ml, de 1 ml de solution-étalon de xylitol ( Ö point Õ 2.1) et  mettre
       à niveau avec de l'eau. Après homogénéisation de l'échantillon, prélever 100 µl de solution à introduire dans un flacon et sécher dans  un
       léger courant d'air, après adjonction éventuelle de 100 µl d'éthanol absolu pour faciliter l'évaporation.

      Dissoudre soigneusement le résidu dans 100 µl de pyridine (Ö point Õ 2.4), ajouter 100 µl de bistriméthylsilytrifluoroacétamide  (Ö point Õ
       2.2) et 10 µl de triméthylchlorosilane (Ö point Õ 2.3), fermer le flacon avec le bouchon de téflon et placer en étuve à 60° C pendant  une
       heure.

                                            ê 2676/90

      Prélever 0,5 µl de liquide clair en injectant, «aiguille vide et chaude», selon le rapport de dissociation susmentionné.

5.    CALCUL DES COEFFICIENTS DE RÉPONSE

5.1.  Préparer une solution contenant:

      60 g/l de glucose, 60 g/l de fructose, 1 g/l de méso-inositol et 1 g/l de saccharose.

      Peser 5 g de cette solution et procéder conformément au point 4. À partir du chromatogramme obtenu, calculer les  coefficients  de  réponse
       du méso-inositol et du saccharose par rapport au xylitol.

      Pour le scyllo-inositol, qui n'est pas disponible dans le commerce et dont le temps de rétention est  compris  entre  le  dernier  pic  des
       formes anomériques du glucose et celui du méso-inositol (voir figure jointe), utiliser le même coefficient de réponse que celui  du  méso-
       inositol.

6.    EXPRESSION DES RÉSULTATS

6.1.  Le méso-inositol et le scyllo-inositol sont exprimés en milligrammes par kilogramme de sucres totaux. Le saccharose est exprimé en  grammes
       par kilogramme de moût.

                                                                      [pic]

                          Figure: Chromatogramme en phase gazeuse du méso-inositol, du scyllo-inositol et du saccharose.

                                            ê 822/97 art. 1 et annexe

44.   DÉTERMINATION DU RAPPORT ISOTOPIQUE 18O/16O DE L'EAU DES VINS

I.    DESCRIPTION DE LA MÉTHODE

1.    Objet de la méthode

      La présente méthode a pour but de mesurer le rapport isotopique 18O/16O d'eaux de différentes origines. Le rapport isotopique 18O/16O  peut
       s'exprimer en déviation δ ‰ par rapport à la valeur du rapport isotopique de la référence internationale V.SMOW:

                                                       δi[‰] = [((Ri)/(RSMOW)) − 1] × 1 000

2.    Principe

      Le rapport isotopique 18O/16O est déterminé par spectrométrie de masse des rapports isotopiques (SMRI) à partir des courants  ioniques  m/z
       46 (12C16O18O) et m/z 44 (12C16O2) produits par le dioxyde de carbone obtenu après échange avec l'eau du vin selon la réaction:

                                                         C16O2 + H218O ↔ C16O18O + H216O

      Le dioxyde de carbone de la phase gazeuse est utilisé pour l'analyse.

3.    Réactifs

         – Dioxyde de carbone pour analyse

         – SMOW (Standard Mean Ocean Water)

         – GISP (Greenland Ice Sheet Precipitation)

         – SLAP (Standard Light Arctic Precipitation)

         – Eau de référence propre au laboratoire soigneusement étalonnée par rapport aux échantillons de référence de  l'Agence  internationale
           de l'énergie atomique à Vienne (AIEA).

4.    Équipement de laboratoire

         – Spectromètre de masse de rapports isotopiques avec une répétabilité interne de 0,05 ‰.

         – Triple collecteur pour enregistrement simultané des ions m/z 44, 45 et 46 ou, à défaut, double collecteur pour  la  mesure  des  ions
           m/z 44 et 46.

         – Système thermostaté (± 0,5 °C) pour réaliser l'équilibration entre le CO2 et l'eau du vin.

         – Pompe à vide pouvant atteindre une pression interne de 0,13 Pa.

         – Fioles pour échantillon ayant un volume de 15 ml et un tube capillaire annexe d'un diamètre intérieur de l'ordre de 0,015 mm.

         – Pipette Eppendorf avec cône en plastique jetable.

5.    Déterminations expérimentales

5.1.  Méthode manuelle

      Mode opératoire de la méthode d'équilibrage

      Introduction de l'échantillon

         – Prendre la pipette Eppendorf à volume fixe de 1,5 ml, adapter un cône et pipetter le liquide à analyser  pour  l'introduire  dans  un
           ballon. Ensuite, disposer de la graisse de silicones autour du col du ballon et adapter le ballon à la vanne en vérifiant que  celle-
           ci est bien fermée.

         – Répéter l'opération pour chaque ballon de la rampe de travail en introduisant l'eau de référence du laboratoire dans un des ballons.

      Dégazage de la rampe

      Les deux rampes sont refroidies à l'azote liquide, puis on purge tout le système jusqu'à 0,1 mm Hg en ouvrant les vannes.

      On referme ensuite les vannes et on laisse l'ensemble se réchauffer. Le cycle de dégazage est répété jusqu'à  ce  qu'il  n'y  ait  plus  de
       variation de pression.

      Équilibrage de l'eau et du CO2

      On refroidit la rampe de travail à − 70 °C (mélange d'azote liquide et d'alcool) pour geler l'eau et on met  l'ensemble  sous  vide.  Après
       stabilisation du vide, on isole la rampe au moyen de la vanne et on purge le système d'introduction du CO2. On  introduit  le  CO2  gazeux
       dans la rampe de travail et, après l'avoir isolée du reste du système, on introduit la rampe dans le bain thermostaté à  25 °C  (± 0,5 °C)
       pendant 12 heures (une nuit). Pour optimiser le temps nécessaire à l'équilibration, il est conseillé de préparer les échantillons  en  fin
       de journée et de laisser l'équilibre s'établir pendant la nuit.

      Transfert du CO2 échangé dans les cellules de mesure

      Un porte-échantillon supportant autant de cellules de mesure que de ballons contenant du CO2 échangé est adapté sur la ligne à vide à  côté
       de la rampe de travail. Les cellules vides sont soigneusement purgées et les gaz échangés contenus dans les  ballons  sont  successivement
       transférés dans les cellules de mesures refroidies à l'azote liquide. On laisse ensuite les cellules de mesure se réchauffer à température
       ambiante.

5.2.  Utilisation d'un appareillage d'échange automatique

      Afin de réaliser l'équilibration, les fioles à échantillons sont remplies avec  2 ml  de  vin  ou  2 ml  d'eau  (référence  de  travail  du
       laboratoire) et refroidies à − 18 °C. Les porte-échantillons contenant les produits gelés sont  adaptés  au  système  d'équilibration  et,
       après avoir réalisé le vide dans le système, le CO2 est introduit sous une pression de 800 hPa.

      L'équilibre est atteint à une température de 22 ± 0,5 °C après une période minimale de cinq heures et sous agitation  modérée.  Puisque  la
       durée d'équilibration dépend de la géométrie de la fiole, la durée optimale doit être déterminée au préalable pour le système utilisé.

      Le CO2 contenu dans les fioles est ensuite transféré dans la chambre d'introduction du spectromètre de masse par un tube capillaire  et  la
       mesure est effectuée selon un protocole propre à chaque type d'appareillage.

6.    Calcul et expression des résultats

      La différence relative δ′ du rapport des intensités des ions m/z 46 et 44 (I46/I44) entre l'échantillon et la référence est exprimée  en  ‰
       au moyen de la relation suivante:

                                  δ′ échantillon = [(((I46/I44) échantillon)/((I46/I44) référence)) − 1] × 1 000

      La teneur en 18O de l'échantillon par rapport à la référence V.SMOW sur l'échelle V.SMOW/SLAP est donnée par la relation:

                                         δ′18O = [(δ′ échantillon − δ′ SMOW)/(δ′ SMOW − δ′ SLAP)] × 55,5

      La valeur acceptée pour l'eau du SLAP est égale à − 55,5 ‰ par rapport  au  V.SMOW.  Le  rapport  isotopique  de  la  référence  doit  être
       déterminé après chaque série de dix mesures sur des échantillons inconnus.

7.    Fidélité

         – La répétabilité (r) est égale à 0,24 ‰.

         – La reproductibilité (R) est égale à 0,50 ‰.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 3 et annexe III

45.   DOSAGE DU CARBAMATE D'ÉTHYLE DANS LES VINS: MÉTHODE DE DÉTECTION SÉLECTIVE PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE/SPECTROMÉTRIE DE MASSE

(Applicable à la détermination du carbamate d'éthyle pour des concentrations comprises entre 10 et 200 μg/l)

(Attention: Respecter les consignes de sécurité pour les manipulations  des  produits  chimiques,  pour  l'éthanol,  l'acétone  et  les  produits
carcinogènes: carbamate d'éthyle et dichlorométhane. Se débarrasser des solvants usés de manière appropriée compatible avec  les  règles  et  les
règlements écologiques applicables).

1.    Principe de la méthode

      Le carbamate de propyle est ajouté à un échantillon comme étalon interne, la solution est diluée avec de  l'eau  et  est  placée  dans  une
       colonne d'extraction en phase solide de 50 ml. Le carbamate d'éthyle et le carbamate de propyle sont élués avec du dichlorométhane.

      L'éluat est concentré à l'aide d'un évaporateur rotatif sous vide. Le concentré est analysé par chromatographie en phase gazeuse  (CG),  la
       détection est effectuée par spectrométrie de masse par fragmentométrie en mode SIM (Selected ion monitoring).

2.    Appareillage et conditions chromatographiques (donnés à titre d'exemple)

       2.1. Chromatogramme en phase gazeuse/spectromètre de masse (CG/SM) et éventuellement un passeur d'échantillons et système de traitement de
           données ou équivalent.

            Colonne capillaire en silice greffée 30 m[18] x 0,25 mm de diamètre interne, 0,25 μm de film de type Carbowax 20M.

            Mode opératoire: injecteur 180 °C, gaz vecteur hélium à 1 ml/min. et à 25 °C, injection selon la méthode «Splitless/split».

            Programme de température: 40 °C pendant 0,75 minute, puis programmation  à  10 °C/minute  jusqu'à  60 °C,  puis  3 °C/minute  jusqu'à
           150 °C[19], aller jusqu'à 220 °C puis maintenir pendant 4,25 minutes à 220 °C. Le temps de rétention spécifique du carbamate d'éthyle
           est de 23 à 27 minutes, celui du carbamate de propyle est de 27 à 31 minutes.

            Chromatographe en phase gazeuse/spectromètre (CG/SM) interface: ligne de transfert 220 °C. Paramètres du spectromètre de masse mis au
           point manuellement avec de la perfluorotributylamine et optimisé pour une sensibilité de masse  plus  basse,  mode  acquisition  SIM,
           délai solvant et temps de commencement de l'acquisition 22 minutes, temps de maintien/ion 100 ms.

       2.2. Évaporateur rotatif sous vide ou système de concentration de type Kuderna Danish.

            (NB:  le taux de récupération du carbamate d'éthyle de l'échantillon test, point 3.7, doit être compris entre 90 et 110 % pendant  le
           processus).

       2.3. Fiole — en forme de poire, 300 ml, col unique à rodage.

       2.4. Tube de concentration — 4 ml, gradué, avec un joint à pellicule de téflon et bouchon.

3.    Réactifs

       3.1. Acétone — qualité LC

            NB: Vérifier chaque lot avant usage par CG/SM concernant l'absence de réponse pour les ions de m/z 62, 74 et 89.

       3.2. Dichlorométhane

            NB: Analyser chaque lot avant usage par CG/SM après concentration 200 fois, concentration pour vérifier l'absence de réponse pour les
           ions de m/z 62, 74 et 89.

       3.3. Éthanol — anhydre

       3.4. Carbamate d'éthyle (CE); solutions standard

           3.4.1.      Solution «mère» — 1,00 mg/ml. Peser 100 mg CE (≥ 99 % pureté) dans une fiole volumétrique de 100 ml  et  diluer  avec  de
                l'acétone.

           3.4.2.      Solution standard de travail — 10,0μg/ml. Transférer 1 ml de la solution «mère» CE dans une fiole volumétrique de  100 ml
                et diluer avec de l'acétone jusqu'au trait de jauge.

       3.5. Carbamate de propyle (CP), solutions standard

           3.5.1.      Solution «mère» — 1,00 mg/ml. Peser 100 mg CP (qualité réactif) dans une fiole volumétrique de 100 ml et diluer  avec  de
                l'acétone jusqu'au trait de jauge.

           3.5.2.      Solution standard de travail 10,0 μg/ml. Transférer 1 ml de la solution «mère» CP dans une fiole volumétrique  de  100 ml
                et diluer avec de l'acétone jusqu'au trait de jauge.

           3.5.3.      Solution standard interne CP — 400 ng/ml. Transférer 4 ml de solution standard de travail CP dans une fiole  volumétrique
                de 100 ml et diluer avec de l'eau jusqu'au trait de jauge.

       3.6. Solutions standard calibrées CE-CP

            Diluer les solutions standard de travail de CE, point 3.4.2, et CP, point 3.5.2, avec du dichlorométhane pour obtenir:

           3.6.1.      (100 ng CE et 400 ng CP)/ml;

           3.6.2.      (200 ng CE et 400 ng CP)/ml;

           3.6.3.      (400 ng CE et 400 ng CP)/ml;

           3.6.4.      (800 ng CE et 400 ng CP)/ml;

           3.6.5.      (1 600 ng CE et 400 ng CP)/ml.

       3.7. Échantillon test — 100 ng CE/ml dans 40 % d'éthanol

            Transférer 1 ml des solutions standard de travail CE, point 3.4.2, dans  une  fiole  volumétrique  de  100 ml  et  diluer  avec  40 %
           d'éthanol jusqu'au trait de jauge.

       3.8. Colonne d'extraction en phase solide — Matériel jetable, pré-emballé avec de la terre de diatomées, capacité 50 ml

                                            ê 761/1999 Art. 1, pt 3 et Annexe III (adapté)

           NB:   Avant analyse, vérifier chaque lot de colonnes d'extraction pour la récupération du CE et CP et l'absence de réponse  pour  les
                ions de m/z 62, 74 et 89. Préparer 100 ng CE/ml d'échantillon test ( Ö point 3.7 Õ ).  Analyser  5,00 ml  de  l'échantillon  test
                comme décrit Ö aux points 4.1, 5 et 6 Õ . La récupération de 90-110 ng  de  CE/ml  est  satisfaisante.  Des  absorbants  dont  le
                diamètre des particules est irrégulier peuvent entraîner des débits très lents qui affectent la récupération du CE et du CP.  Si,
                après plusieurs essais, 90-110 % de la valeur de l'échantillon test n'est pas obtenue, changer la colonne ou utiliser une  courbe
                de calibration de récupération corrigée pour quantifier le CE. Pour obtenir la  courbe  de  calibration  corrigée,  préparer  des
                solutions standard comme décrites Ö au point 3.6 Õ en utilisant 40 % d'éthanol au lieu du dichlorométhane.

            Analyser 1 ml de la solution standard de calibration comme décrit Ö aux points 4, 5 et 6 Õ.

                                            ê 761/1999 art. 1, pt. 3 et annexe III

            Construire une nouvelle courbe d'étalonnage en utilisant le rapport CE/CP des standards extraits.

4.    Préparation de l'échantillon test

      Placer le matériel test dans 2 béchers séparés de 100 ml en utilisant les quantités suivantes:

       4.1. Vins titrant plus de 14 % vol. d'alcool: 5,00 ml ± 0,01 ml.

       4.2. Vins titrant au plus 14 % vol. d'alcool: 20,00 ml ± 0,01 ml.

      Dans chaque bécher, ajouter 1 ml de solution CP d'étalon interne, C e) 3) et de l'eau, afin d'obtenir un volume total de 40 ml (ou 40 g).

5.    Extraction

      Exécuter l'extraction sous la hotte aspirante avec une ventilation adéquate.

      Transférer la préparation réalisée en D dans la colonne d'extraction.

      Rincer le bécher avec 10 ml d'eau et transférer l'eau de rinçage dans la colonne.

      Laisser le liquide s'absorber dans la colonne pendant 4 minutes — Éluer par 2 x 80 ml  de  dichlorométhane.  Recueillir  l'éluat  dans  une
       fiole conique de 300 ml.

      Évaporer l'éluat jusqu'à 2 à 3 ml à l'aide de l'évaporateur rotatif au bain marie à 30 °C. (NB  = ne pas laisser évaporer à sec).

      Transférer le résidu concentré dans un tube gradué de 4 ml, à l'aide d'une pipette Pasteur.

      Rincer la fiole avec 1 ml de dichlorométhane et transférer le liquide de rinçage dans le tube. Concentrer  l'échantillon  à  1 ml  sous  un
       faible courant d'azote.

      Transférer éventuellement le concentré dans une fiole du passeur d'échantillon pour l'analyse CG/SM.

6.    Analyse CG/SM

       6.1. Courbe de calibration

            Injecter 1 μl de chacune des solutions standard d'étalonnage, point 3.6., en CG/SM. Faire le graphique du  rapport  des  aires  CE-CP
           pour la réponse de l'ion de m/z 62 sur l'axe des ordonnées et porter en abcisses la quantité de CE en ng/ml (soit 100, 200, 400, 800,
           1 600 ng/ml).

       6.2. CE quantification

            Injecter 1 μl d'extrait concentré de E dans le système CG/SM et calculer le rapport des aires CE-CP pour l'ion de m/z 62.  Déterminer
           la concentration CE (ng/ml) dans l'extrait, en utilisant la courbe d'étalonnage standard interne. Calculer la concentration  CE  dans
           l'échantillon test (ng/ml) en divisant la quantité de CE (ng) dans l'extrait par le volume de l'échantillon test (ml).

       6.3. Vérification de la pureté du CE

            Déterminer si les réponses pour les ions de m/z 62, 74 et 89 apparaissent au  temps  de  rétention  du  CE.  Ces  réponses  sont  les
           caractéristiques respectivement des principaux fragments (M - C2H2)+ et (M - CH3)+ et de l'ion moléculaire (M). La présence de CE est
           confirmée si les proportions relatives de ces ions ne s'écartent pas de plus  de  20 %  des  proportions  pour  le  standard  en  CE.
           L'extrait peut avoir besoin d'être reconcentré pour obtenir une réponse suffisante pour l'ion de m/z 89.

7.    Analyse collaborative

      Le tableau 1 montre les résultats individuels pour l'échantillon d'entraînement pratique et pour les deux types de vins.

      L'application du test de Cochran a eu pour conséquence l'élimination d'un seul couple  de  résultats,  tant  pour  le  vin  dont  le  titre
       alcoométrique est supérieur à 14 % vol. que pour le vin dont le titre alcoométrique est inférieur ou égal à l4 % vol., chacun venant  d'un
       laboratoire différent.

      La reproductibilité relative tend à décroître avec l'accroissement de la concentration en carbamate d'éthyle.

                 Performance de la méthode pour la détermination du carbonate d'éthyle CE dans les boissons alcooliques par CG/SM

|Échantillon                      |Moyenne de CE trouvé  |Récupération de CE    |Sr          |SR          |RSDr        |RSDR        |
|                                 |(ng/ml)               |ajouté                |            |            |(%)         |(%)         |
|                                 |                      |(%)                   |            |            |            |            |
|Vin de plus de 14 % vol.         |40                    |                      |1,59        |4,77        |4,01        |12,02       |
|                                 |80                    |89                    |3,32        |7,00        |4,14        |8,74        |
|                                 |162                   |90                    |8,20        |11,11       |5,05        |6,84        |
|Vin de moins de 14 % vol.        |11                    |                      |0,43        |2,03        |3,94        |18,47       |
|                                 |25                    |93                    |1,67        |2,67        |6,73        |10,73       |
|                                 |48                    |93                    |1,97        |4,25        |4,10        |8,86        |

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

46.   DÉTERMINATION DU RAPPORT ISOTOPIQUE 13C/12C PAR SPECTROMÉTRIE DE  MASSE  ISOTOPIQUE  DE  L'ÉTHANOL  DU  VIN  OU  DE  L'ÉTHANOL  OBTENU  PAR
       FERMENTATION DES MOÛTS, DES MOÛTS CONCENTRÉS OU DES MOÛTS CONCENTRÉS RECTIFIES

1.    CHAMP D'APPLICATION

      La méthode permet la mesure du rapport isotopique 13C/12C de l'éthanol du vin et de  celui  de  l'éthanol  obtenu  après  fermentation  des
       produits dérivés de la vigne (moût, moût concentré, moût concentré rectifié).

2.    RÉFÉRENCES NORMATIVES

|ISO :                       |5725:1994 «Fidélité des méthodes d'essai — Détermination de la répétabilité et de la            |
|                            |reproductibilité d'une méthode d'essai normalisée par essais interlaboratoires».                |
|V-PDB :                     |Vienna-Pee-Dee Belemnite (RPDB = 0,0112372).                                                    |
|Méthode 8 de l'annexe I du  |«Détection de l'enrichissement des moûts, des moûts concentrés, des moûts concentrés rectifiés  |
|présent règlement :         |et des vins par application de la résonance magnétique nucléaire du deutérium (RMN-FINS)».      |

3.    TERMES ET DÉFINITIONS

|13C/12C :                   |Rapport des isotopes du carbone 13 (13C) et du carbone 12 (12C) pour un échantillon donné.      |
|δ13 C :                     |teneur en carbone 13 (13C) exprimée en parties pour mille (‰).                                  |
|RMN-FINS :                  |Fractionnement isotopique naturel spécifique étudié par résonance magnétique nucléaire.         |
|V-PDB :                     |Vienna-Pee-Dee Belemnite. Le PDB, référence primaire pour la mesure des variations naturelles   |
|                            |des teneurs isotopiques en carbone 13, était un carbonate de calcium provenant d'un rostre de   |
|                            |bélemnite du Crétacé de la formation Pee-Dee de la Caroline du sud (Etats-Unis d'Amérique). Son |
|                            |rapport isotopique 13C/12C ou RPDB est RPDB = 0,0112372. Le PDB est épuisé depuis longtemps,    |
|                            |mais est resté la référence primaire pour exprimer les variations naturelles des teneurs        |
|                            |isotopiques en carbone 13, contre laquelle sont calibrés les matériaux de référence, disponibles|
|                            |à l'Agence internationale de l'énergie atomique (IAEA) à Vienne (Autriche). Les déterminations  |
|                            |isotopiques des abondances naturelles en carbone 13 sont alors exprimées, par convention, par   |
|                            |rapport au V-PDB.                                                                               |
|m/z :                       |Rapport masse sur charge.                                                                       |

4.    PRINCIPE

      Lors de la photosynthèse, l'assimilation du gaz carbonique par les végétaux s'effectue selon deux  principaux  types  de  métabolismes  qui
       sont les métabolismes C3(cycle de Calvin) et C4 (Hatch et Slack). Ces  deux  mécanismes  de  photosynthèse  présentent  un  fractionnement
       isotopique différent. Ainsi, les produits issus des plantes C4, tel que les sucres et l'alcool dérivé  par  fermentation,  présentent  des
       teneurs en carbone 13 plus élevées que celles de leurs homologues provenant des plantes C3. La plupart des végétaux tels que la  vigne  et
       la betterave appartiennent au groupe C3. La canne à sucre et le maïs appartiennent au groupe C4. La mesure de  la  teneur  en  carbone  13
       permet donc la détection et l'évaluation du sucre d'origine C4 (sucre de canne ou isoglucose de  maïs)  ajouté  aux  produits  dérivés  du
       raisin (moûts de raisins, vins, etc.). Les informations combinées de la teneur en carbone 13 avec celles obtenues par RMN-FINS  permettent
       également la quantification de l'addition de mélanges de sucres ou d'alcools d'origine des plantes C3 et C4.

      La teneur en carbone 13 est déterminée sur le gaz carbonique résultant de la combustion  complète  de  l'échantillon.  Les  abondances  des
       principaux isotopomères de masses 44 (12C16O2), 45 (13C16O2 et 12C17O16O)  et  46  (12C16O18O),  résultant  des  différentes  combinaisons
       possibles des isotopes 18O, 17O, 16O, 13C et 12C, sont déterminées à partir des courants ioniques mesurés sur trois collecteurs différents
       d'un spectromètre de masse isotopique. Les contributions des isotopomères 13C17O16O et 12C17O2 peuvent être négligées en  raison  de  leur
       très faible abondance. Le courant ionique pour m/z = 45 est corrigé de la contribution de  12C17O16O  qui  est  calculée  en  fonction  de
       l'intensité du courant mesuré pour m/z = 46 en considérant les abondances relatives de 18O et 17O (correction de  Craig).  La  comparaison
       avec une référence calibrée contre la référence internationale V-PDB permet le calcul de la teneur en carbone 13  sur  l'échelle  relative
       δ13C.

5.    RÉACTIFS

      Les matériaux et les consommables dépendent de l'appareillage (6) utilisé par le laboratoire. Les systèmes généralement utilisés sont  ceux
       fondés sur l'analyseur élémentaire. Celui-ci peut être équipé pour l'introduction d'échantillons  placés  dans  des  capsules  métalliques
       scellées, ou pour l'injection d'échantillons liquides à travers un septum au moyen d'une seringue.

      Selon le type d'instrumentation utilisé, les matériaux de référence, réactifs et consommables suivants peuvent être utilisés:

         – matériaux de référence

         – disponibles auprès de l'IAEA:

|Nom                            |Matériel                              |δ13 C versus V-PDB (9)                    |
|— IAEA-CH-6                    |saccharose                            |- 10,4 ‰                                  |
|— IAEA-CH-7                    |polyéthylène                          |- 31,8 ‰                                  |
|— NBS22                        |huile                                 |- 29,7 ‰                                  |
|— USGS24                       |graphite                              |- 16,1 ‰                                  |

         – disponibles auprès de l'Institut des matériaux et mesures de référence (IRMM) de Geel (B):

|Nom                            |Matériel                                |δ13C versus V-PDB (9)                   |
|— CRM/BCR 656                  |alcool de vin                           |- 26,93 ‰                               |
|— CRM/BCR 657                  |glucose                                 |- 10,75 ‰                               |
|— CRM/BCR 660                  |solution hydroalcoolique (TAV 12 %)     |- 26,72 ‰                               |

         – Échantillon standard de travail ayant un rapport 13C/12C connu calibré contre les matériaux de référence internationaux.

         – La liste indicative de consommables ci-dessous est établie pour les systèmes à flux continu:

              – hélium pour analyse (CAS 07440-59-7),

              – oxygène pour analyse (CAS 07782-44-7),

              – dioxyde de carbone pour analyse, utilisé comme gaz de référence secondaire pour la teneur en carbone 13 (CAS 00124-38-9),

              – réactif d'oxydation pour le four du système de combustion, par exemple oxyde de cuivre (ΙΙ) pour analyse élémentaire  (CAS  1317-
                38-0),

              – desséchant pour éliminer de l'eau produite par la combustion, par exemple anhydrone  pour  analyse  élémentaire  (perchlorate  de
                magnésium) (CAS 10034-81-8) (non  nécessaire  pour  les  appareillages  équipés  avec  un  système  d'élimination  de  l'eau  par
                cryopiégeage ou au moyen d'un capillaire sélectivement perméable).

6.    APPAREILLAGE ET MATÉRIEL

6.1.  Spectromètre de masse de rapport isotopique (SMRI)

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 2 et Annexe II (adapté)

      Spectromètre de masse de rapport isotopique (SMRI), permettant de déterminer la teneur relative de 13C du gaz CO2  en  abondance  naturelle
       avec une précision interne de 0,05 ‰ ou mieux exprimée en valeur relative ( Ö point Õ 9). La précision interne est ici  définie  comme  la
       différence entre deux mesures du même échantillon de CO2. Le spectromètre de masse, destiné à la  mesure  des  rapports  isotopiques,  est
       généralement équipé d'un collecteur triple pour mesurer simultanément les intensités pour m/z = 44, 45 et 46. Le spectromètre de masse  de
       rapport isotopique doit soit être équipé d'un système d'introduction double, pour  mesurer  en  alternance  l'échantillon  inconnu  et  un
       échantillon de référence, soit utiliser un système intégré qui effectue la combustion quantitative des échantillons et sépare  le  dioxyde
       de carbone des autres produits de combustion préalablement à la mesure dans le spectromètre de masse.

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

6.2.  Appareillage de combustion

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 2 et Annexe II (adapté)

      Appareillage de combustion capable de convertir quantitativement l'éthanol en dioxyde de carbone et d'éliminer tous les autres produits  de
       combustion y compris l'eau sans aucun fractionnement isotopique. L'appareillage peut être  soit  un  système  à  flux  continu  intégré  à
       l'instrumentation de spectrométrie de masse ( Ö point Õ 6.2.1), soit un système de combustion autonome (Ö point Õ  6.2.2).  L'appareillage
       doit permettre d'obtenir une précision au moins équivalente à celle indiquée (Ö au point Õ 11.

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

6.2.1.      Systèmes à flux continu

      Ceux-ci sont constitués soit par un analyseur élémentaire, soit par un chromatographe en phase gazeuse équipé d'un  système  de  combustion
       en ligne.

      Pour les systèmes équipés pour l'introduction des échantillons contenus dans des capsules métalliques, le matériel de  laboratoire  suivant
       est utilisé:

         – microseringue ou micropipette volumétrique avec cônes appropriés,

         – balance à échelon de lecture à 1 μg ou mieux,

         – pince pour encapsulage,

         – capsules d'étain pour échantillons liquides,

         – capsules d'étain pour échantillons solides.

       Note:      pour limiter les risques d'évaporation des échantillons d'éthanol, il est possible de placer  dans  les  capsules  un  matériau
           absorbant (par exemple chromosorb W 45-60 mesh) dont on aura vérifié préalablement par une mesure à blanc qu'il ne  comporte  pas  de
           quantité significative de carbone susceptible d'altérer les mesures.

       Lors de l'utilisation d'un analyseur élémentaire équipé d'un injecteur pour liquides ou dans  le  cas  d'un  système  de  préparation  par
       chromatographie-combustion, le matériel de laboratoire suivant est utilisé:

         – seringue pour liquides,

         – flacons équipés d'un système de fermeture étanche et de septa inertes.

      Les matériels de laboratoire indiqués dans les listes ci-dessus  constituent  des  exemples  et  sont  susceptibles  d'être  remplacés  par
       d'autres matériels de performances équivalentes selon le type d'appareillage de combustion et de spectrométrie de  masse  utilisé  par  le
       laboratoire.

6.2.2.      Systèmes autonomes de préparation

      Dans ce cas, les échantillons de dioxyde de carbone résultant de la combustion  des  échantillons  à  analyser  et  de  la  référence  sont
       collectés dans des ampoules qui sont ensuite installées au double système d'entrée du spectromètre  pour  réaliser  l'analyse  isotopique.
       Plusieurs types d'appareillages de combustion décrits dans la littérature sont utilisables:

         – système clos de combustion rempli avec du gaz oxygène circulant,

         – analyseur élémentaire avec flux d'hélium et d'oxygène,

         – ampoule scellée en verre remplie avec de l'oxyde de cuivre (ΙΙ) comme agent d'oxydation.

7.    PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS POUR ESSAI

      L'éthanol doit être extrait à partir du vin avant détermination isotopique. Cette extraction est  effectuée  par  la  distillation  du  vin
       comme décrit au point 3.1 de la méthode no 8 (RMN-FINS).

      Dans le cas du moût de raisins, du moût de raisins concentré et du moût de raisins concentré rectifié, les sucres  doivent  être  fermentés
       en éthanol d'abord comme décrit au point 3.2 de la méthode no 8.

8.    MODE OPÉRATOIRE

      Toutes les étapes préparatoires doivent être effectuées sans aucune  perte  significative  d'éthanol  par  évaporation  qui  changerait  la
       composition isotopique de l'échantillon.

      La description qui suit fait référence aux procédures généralement utilisées pour la combustion des échantillons  d'éthanol  au  moyen  des
       systèmes automatisés de combustion commerciaux. Toute autre méthode, assurant que l'échantillon d'éthanol est quantitativement converti en
       dioxyde de carbone sans aucune perte par évaporation d'éthanol peut convenir pour la préparation du  dioxyde  de  carbone  pour  l'analyse
       isotopique.

      Procédure expérimentale fondée sur l'utilisation d'un analyseur élémentaire:

       a)   mise en capsule des échantillons:

              – utiliser des capsules, une pince et un plateau de préparation propres,

              – prendre une capsule de la dimension appropriée à l'aide de la pince,

              – introduire le volume nécessaire de liquide dans la capsule à l'aide de la micropipette,

|Note:                |3,84 mg d'éthanol absolu ou 4,17 mg de distillat ayant un titre alcoolique de 92 % m/m sont   |
|                     |nécessaires pour obtenir 2 mg de carbone. La quantité appropriée de distillat doit être       |
|                     |calculée de la même manière selon la quantité de carbone nécessaire en fonction de la         |
|                     |sensibilité de l'instrumentation de spectrométrie de masse.                                   |

              – refermer la capsule à l'aide des pinces,

              – chaque capsule doit être fermée de façon absolument étanche. Dans le cas contraire,  elle  doit  être  rejetée  et  une  nouvelle
                capsule doit être repréparée,

              – pour chaque échantillon, préparer deux capsules,

              – placer les capsules à l'endroit approprié sur le plateau du passeur automatique d'échantillon de l'analyseur élémentaire.  Chaque
                capsule doit être soigneusement identifiée par un numéro d'ordre,

              – placer systématiquement des capsules contenant les références de travail au début et à la fin de la série d'échantillons,

              – insérer régulièrement des échantillons de contrôle dans la série d'échantillons;

       b)   contrôle et ajustement de l'instrumentation d'analyse élémentaire et de spectrométrie de masse

              – ajuster la température des fours de l'analyseur élémentaire et les  flux  de  gaz  d'hélium  et  d'oxygène  pour  une  combustion
                optimale de l'échantillon,

              – vérifier l'absence de fuite dans le système d'analyse élémentaire et de spectrométrie de masse  (par  exemple  en  contrôlant  le
                courant ionique pour m/z = 28 correspondant à N2),

              – ajuster le spectromètre de masse pour mesurer les intensités des courants ioniques pour m/z = 44, 45 et 46,

              – vérifier le système à l'aide d'échantillons de contrôle connus avant de commencer les mesures sur les échantillons;

       c)   déroulement d'une série de mesures

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 2 et Annexe II (adapté)

            Les échantillons placés sur le passeur automatique d'échantillons de l'analyseur élémentaire (ou du chromatographe)  sont  introduits
           successivement. Le dioxyde de carbone de chaque combustion d'échantillon est élué vers  le  spectromètre  de  masse  qui  mesure  les
           courants ioniques. L'ordinateur interfacé à l'instrumentation enregistre les intensités des courants ioniques et calcule les  valeurs
           δ pour chaque échantillon ( Ö point Õ 9).

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

9.    CALCUL

      L'objectif de la méthode est de mesurer le rapport isotopique 13C/12C de l'éthanol extrait à  partir  du  vin  ou  à  partir  des  produits
       dérivés du raisin après fermentation. Le rapport isotopique 13C/12C peut être exprimé par sa déviation par  rapport  à  une  référence  de
       travail. La déviation isotopique carbone 13 (δ 13C) est alors calculée sur une échelle delta  pour  mille  (δ/1000)  par  comparaison  des
       résultats obtenus pour l'échantillon à mesurer contre ceux de la référence de travail précédemment calibrée par  rapport  à  la  référence
       primaire internationale (V-PDB). Les valeurs δ 13C sont exprimées par rapport à la référence de travail selon:

      δ13Cech/ref ‰ = 1 000 × (Rech-Rref)/Rref

      où Rech et Rref sont respectivement les rapports isotopiques 13C/12C de l'échantillon et ceux du dioxyde de carbone utilisé  comme  gaz  de
       référence.

      Les valeurs δ 13C sont alors exprimées par rapport au V-PDB selon:

      δ13Cech/V-PDB ‰ = δ13Cech/ref + δ13Cref/V-PDB + (δ13Cech/ref × δ13Cref/V-PDB)/1 000

      où δ13Cref/V-PDB est la déviation isotopique préalablement déterminée pour la référence de travail contre le V-PDB.

      Pendant la mesure en ligne, des petites dérives dues à la variation des conditions instrumentales peuvent être observées. Dans ce cas,  les
       δ 13C des échantillons doivent être corrigés en fonction de la différence de la valeur δ13C mesurée pour l'échantillon standard de travail
       et sa valeur vraie, précédemment calibrée contre le V-PDB par comparaison avec l'un des matériaux de référence international.  Entre  deux
       mesures de l'échantillon standard de travail, la dérive, et donc la correction à appliquer aux résultats des  échantillons,  peuvent  être
       assumées linéaires. L'échantillon standard de travail doit être mesuré en début et en fin de toute série  d'échantillons.  Une  correction
       peut ensuite être calculée pour chaque échantillon au moyen d'une interpolation linéaire.

10.   ASSURANCE QUALITÉ ET CONTRÔLE

      Contrôler que la valeur 13C pour la référence de travail ne diffère pas de plus de 0,5 ‰  de  la  valeur  admise.  En  cas  contraire,  les
       réglages de l'instrumentation du spectromètre devront être contrôlés et éventuellement réajustés.

      Pour chaque échantillon, vérifier que la différence de résultat entre les deux capsules mesurées successivement est inférieure à 0,3 ‰.  Le
       résultat final pour un échantillon donné est alors la valeur moyenne des deux capsules. Si la déviation est  plus  élevée  que  0,3 ‰,  la
       mesure doit être répétée.

      Un contrôle du fonctionnement correct de la mesure peut être fondé sur l'intensité du courant ionique pour m/z = 44 qui  est  proportionnel
       à la quantité de carbone injectée dans l'analyseur élémentaire. Dans les conditions type, l'intensité de ce courant ionique  devrait  être
       pratiquement constante pour les échantillons en analyse. Une déviation significative doit conduire à soupçonner une évaporation  d'éthanol
       (par exemple une capsule imparfaitement scellée) ou bien une instabilité de l'analyseur élémentaire ou du spectromètre de masse.

11.   CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE DE LA MÉTHODE (PRÉCISION)

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 2 et Annexe II (adapté)

      Une première étude collaborative ( Ö point Õ 11.1) a été réalisée sur des distillats comportant  des  alcools  d'origine  vinique,  et  des
       alcools de canne et de betterave ainsi que différents mélanges de ces trois origines. Cette étude n'ayant pas pris en  compte  l'étape  de
       distillation, des informations complémentaires provenant d'autres essais interlaboratoires réalisés sur  des  vins  (Ö point Õ  11.2),  et
       notamment des circuits de tests d'aptitudes (Ö point Õ 11.3), pour les mesures isotopiques, ont également été considérées.  Les  résultats
       démontrent que les différents systèmes de distillation utilisés dans des conditions satisfaisantes, et  en  particulier  ceux  applicables
       pour les mesures RMN-FINS, n'apportent pas de variabilité significative pour les déterminations δ13C de l'éthanol du vin.  Les  paramètres
       de fidélité observés pour les vins sont quasiment identiques à ceux obtenus  lors  de  l'étude  collaborative  (Ö point Õ  11.1)  sur  les
       distillats.

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

11.1. Étude collaborative sur les distillats

|Année de l'essai interlaboratoires :                  |1996                                                               |
|Nombre de laboratoires :                              |20                                                                 |
|Nombre d'échantillons :                               |6 échantillons en double aveugle                                   |
|Analyte :                                             |δ 13C de l'éthanol                                                 |

|Code des échantillons        |Alcool d'origine vinique       |Alcool de betterave               |Alcool de canne           |
|A & G                        |80 %                           |10 %                              |10 %                      |
|B & C                        |90 %                           |10 %                              |0 %                       |
|D & F                        |0 %                            |100 %                             |0 %                       |
|E & I                        |90 %                           |0 %                               |10 %                      |
|H & K                        |100 %                          |0 %                               |0 %                       |
|J & L                        |0 %                            |0 %                               |100 %                     |

|Echantillons                          |A/G          |B/C          |D/F          |E/I          |H/K          |J/L         |
|Nombre de laboratoires retenus après  |19           |18           |17           |19           |19           |19          |
|élimination des résultats aberrants   |             |             |             |             |             |            |
|Nombre de résultats acceptés          |38           |36           |34           |38           |38           |38          |
|Valeur moyenne (δ13C) ‰               |- 25,32      |- 26,75      |- 27,79      |- 25,26      |- 26,63      |- 12,54     |
|Sr2                                   |0,0064       |0,0077       |0,0031       |0,0127       |0,0069       |0,0041      |
|Écart-type de répétabilité (Sr) ‰     |0,08         |0,09         |0,06         |0,11         |0,08         |0,06        |
|Limite de répétabilité r (2,8 × Sr) ‰ |0,22         |0,25         |0,16         |0,32         |0,23         |0,18        |
|SR2                                   |0,0389       |0,0309       |0,0382       |0,0459       |0,0316       |0,0584      |
|Écart-type de reproductibilité (SR) ‰ |0,20         |0,18         |0,20         |0,21         |0,18         |0,24        |
|Limite de reproductibilité R          |0,55         |0,49         |0,55         |0,60         |0,50         |0,68        |
|(2,8 × SR) ‰                          |             |             |             |             |             |            |

11.2. Étude interlaboratoires sur deux vins et un alcool

|Année de l'essai interlaboratoires :  |1996                                                                               |
|Nombre de laboratoires :              |14 pour la distillation des vins dont 7 pour également la mesure δ 13C de l'éthanol|
|                                      |des vins,                                                                          |
|                                      |8 pour la mesure δ 13C de l'échantillon d'alcool                                   |
|Nombre d'échantillons :               |3 (vin blanc TAV 9,3 % vol., vin blanc de TAV 9,6 % vol. et alcool de titre        |
|                                      |alcoométrique 93 % m/m)                                                            |
|Analyte :                             |δ 13C de l'éthanol                                                                 |

|Echantillons                                           |Vin rouge           |Vin blanc           |Alcool                   |
|Nombre de laboratoires                                 |7                   |7                   |8                        |
|Nombre de résultats acceptés                           |7                   |7                   |8                        |
|Valeur moyenne (δ 13C) ‰                               |- 26,20             |- 26,20             |- 25,08                  |
|Variance de reproductibilité SR2                       |0,0525              |0,0740              |0,0962                   |
|Écart-type de reproductibilité (SR) ‰                  |0,23                |0,27                |0,31                     |
|Limite de reproductibilité R (2,8 × SR) ‰              |0,64                |0,76                |0,87                     |

                                            ê 440/2003 Art. 1, pt 2 et Annexe II (adapté)

      Différents systèmes de distillation ont été utilisés par les laboratoires participants. Les  déterminations  isotopiques  δ  13C  réalisées
       dans un seul laboratoire sur l'ensemble des distillats  retournés  par  les  participants  ne  montrent  ni  valeur  aberrante  ni  valeur
       significativement distincte des valeurs moyennes. La variance des résultats (S2 = 0,0059) est comparable aux variances de répétabilité Sr2
       de l'étude collaborative sur les distillats ( Ö point Õ 11.1).

                                            ê 440/2003 art. 1, pt. 2 et annexe II

11.3. Résultats des exercices des circuits d'aptitude aux essais isotopiques

      Depuis décembre 1994, des exercices d'aptitude internationaux pour les déterminations isotopiques sur les vins et  alcools  (distillats  de
       TAV 96 % vol) sont organisés régulièrement. Les résultats permettent aux laboratoires  participants  de  contrôler  la  qualité  de  leurs
       analyses. L'exploitation statistique  des  résultats  permet  d'apprécier  la  variabilité  des  déterminations  dans  des  conditions  de
       reproductibilité et donc d'estimer les paramètres  de  variance  et  de  limite  de  reproductibilité.  Les  résultats  obtenus  pour  les
       déterminations δ 13C de l'éthanol des vins et distillats sont résumés dans le tableau suivant:

|Date                        |Vins                                           |Distillats                                    |
|                            |N       |S R          |S2R          |R         |N       |S R         |S2R          |R         |
|Décembre 1994               |6       |0,210        |0,044        |0,59      |6       |0,151       |0,023        |0,42      |
|Juin 1995                   |8       |0,133        |0,018        |0,37      |8       |0,147       |0,021        |0,41      |
|Décembre 1995               |7       |0,075        |0,006        |0,21      |8       |0,115       |0,013        |0,32      |
|Mars 1996                   |9       |0,249        |0,062        |0,70      |11      |0,278       |0,077        |0,78      |
|Juin 1996                   |8       |0,127        |0,016        |0,36      |8       |0,189       |0,036        |0,53      |
|Septembre 1996              |10      |0,147        |0,022        |0,41      |11      |0,224       |0,050        |0,63      |
|Décembre 1996               |10      |0,330        |0,109        |0,92      |9       |0,057       |0,003        |0,16      |
|Mars 1997                   |10      |0,069        |0,005        |0,19      |8       |0,059       |0,003        |0,16      |
|Juin 1997                   |11      |0,280        |0,079        |0,78      |11      |0,175       |0,031        |0,49      |
|Septembre 1997              |12      |0,237        |0,056        |0,66      |11      |0,203       |0,041        |0,57      |
|Décembre 1997               |11      |0,127        |0,016        |0,36      |12      |0,156       |0,024        |0,44      |
|Mars 1998                   |12      |0,285        |0,081        |0,80      |13      |0,245       |0,060        |0,69      |
|Juin 1998                   |12      |0,182        |0,033        |0,51      |12      |0,263       |0,069        |0,74      |
|Septembre 1998              |11      |0,264        |0,070        |0,74      |12      |0,327       |0,107        |0,91      |
|Moyenne pondérée            |        |0,215        |0,046        |0,60      |        |0,209       |0,044        |0,59      |
|N : nombre de laboratoires participants.                                                                                  |

11.4. Limites de répétabilité et de reproductibilité

      Les données des différents exercices interlaboratoires présentées dans les tableaux précédents permettent donc d'établir pour  la  présente
       méthode, en incluant également l'étape de distillation, les limites de répétabilité et de reproductibilité suivantes:

      Limite de répétabilité r: 0,24

      Limite de reproductibilité R: 0,6.

                                            ê 761/1999 Art. 1, pt 1 et Annexe I

                                                                   APPENDICE A

Comment traiter les réactions parasites

Les réactions parasites sont généralement dues à des réactions secondaires de l'enzyme, à  la  présence  d'autres  enzymes  dans  la  matrice  de
l'échantillon, ou à l'interaction d'un ou plusieurs éléments de la matrice avec un cofacteur de la réaction enzymatique.

Dans la réaction normale, l'absorbance atteint une valeur constante au bout d'un certain temps, généralement entre 10 et  20  minutes,  selon  la
vitesse de la réaction enzymatique spécifique. Cependant, lorsqu'il se produit des réactions secondaires, l'absorbance n'atteint pas  une  valeur
constante, mais augmente régulièrement dans le temps; ce type de processus est couramment appelé «réaction parasite».

Lorsque ce problème se pose, il convient de mesurer l'absorbance de la solution à intervalles réguliers (2 à 5 minutes), après  le  temps  requis
pour que la solution étalon atteigne son absorbance finale. Lorsque l'absorbance augmente régulièrement, procéder à 5 ou 6  mesures,  puis  faire
une extrapolation graphique ou par calcul, pour obtenir l'absorbance qui aurait été celle de la solution  au  moment  où  l'enzyme  final  a  été
ajouté (T0). La différence d'absorbance extrapolée à ce moment (Af − Ai) est utilisée dans le calcul de la concentration du substrat.

                                                                      [pic]

                                                           Figure 1: réaction parasite

                                                                   APPENDICE B

Résultats statistiques de l'essai interlaboratoire:

Année de l'essai interlaboratoire:      1995

Nombre de laboratoires:      8

Nombre d'échantillons: 5 avec addition d'acide D-malique

|Échantillon                                          |A               |B               |C               |D               |E               |
|Nombre de laboratoires retenus après élimination des |7               |8               |7               |8               |7               |
|laboratoires présentant des résultats aberrants      |                |                |                |                |                |
|Nombre de laboratoires ayant des résultats aberrants |1               |—               |1               |—               |1               |
|Nombre de résultats acceptés                         |35              |41              |35              |41              |36              |
|Valeur moyenne (χ—) (mg/l)                           |161,7           |65,9            |33,1            |106,9           |111,0           |
|Écart-type de répétabilité (sr) (mg/l)               |4,53            |4,24            |1,93            |4,36            |4,47            |
|Écart-type relatif à la répétabilité (RSDr) (%)      |2,8             |6,4             |5,8             |4,1             |4,00            |
|Limite de répétabilité (r) (mg/l)                    |12,7            |11,9            |5,4             |12,2            |12,5            |
|Écart-type de reproductibilité (sR) (mg/l)           |9,26            |7,24            |5,89            |6,36            |6,08            |
|Écart-type relatif à la reproductibilité (RSDR) (%)  |5,7             |11              |17,8            |5,9             |5,5             |
|Limite de reproductibilité (R) (mg/l)                |25,9            |20,3            |16,5            |17,8            |17,0            |

Types d'échantillons:

A: vin rouge; B: vin rouge; C: vin blanc; D: vin blanc; E: vin blanc.

                                            é

                                                                    ANNEXE II

                                               Règlement abrogé avec ses modifications successives

|Règlement (CE) n° 2676/90 de la Commission                                    |                                               |
|(JO L 272 du 3.10.1990, p. 1)                                                 |                                               |
|Règlement (CE) no 2348/91 de la Commission                              |uniquement l’article 7                               |
|(JO L 214 du 2.8.1991, p. 39)                                           |                                                     |
|Règlement (CE) no 2645/92 de la Commission                              |                                                     |
|(JO L 266 du 12.9.1992, p. 10)                                          |                                                     |
|Règlement (CE) no 60/95 de la Commission                                |                                                     |
|(JO L 11 du 17.1.1995, p. 19)                                           |                                                     |
|Règlement (CE) no 69/96 de la Commission                                |                                                     |
|(JO L 14 du 19.1.1996, p. 13)                                           |                                                     |
|Règlement (CE) no 822/97 de la Commission                               |                                                     |
|(JO L 117 du 7.5.1997, p. 10)                                           |                                                     |
|Règlement (CE) no 761/1999 de la Commission                             |                                                     |
|(JO L 99 du 14.4.1999, p. 4)                                            |                                                     |
|Règlement (CE) no 1622/2000 de la Commission                            |uniquement l’article 44, paragraphe 2, deuxième      |                                                     |
|(JO L 194 du 31.7.2000, p. 1)                                           |phrase                                               |                                                     |
|Règlement (CE) no 440/2003 de la Commission                             |                                                     |
|(JO L 66 du 11.3.2003, p. 15)                                           |                                                     |
|Règlement (CE) no 128/2004 de la Commission                             |                                                     |
|(JO L 19 du 27.1.2004, p. 3)                                            |                                                     |
|Règlement (CE) no 355/2005 de la Commission                             |                                                     |
|(JO L 56 du 2.3.2005, p. 3)                                             |                                                     |
|Règlement (CE) no 1293/2005 de la Commission                            |                                                     |
|(JO L 205 du 6.8.2005, p. 12)                                           |                                                     |

                                                                  _____________

                                                                    ANNEXE III

                                                            Tableau de correspondance

|Règlement (CEE) n° 2676/90                                           |Présent règlement                                                    |
|Article 1er, paragraphe 1, mots introductifs                         |Article 1er, paragraphe 1, mots introductifs                         |
|Article 1er, paragraphe 1, premier tiret                             |Article 1er, paragraphe 1, point a)                                  |
|Article 1er, paragraphe 1, deuxième tiret                            |Article 1er, paragraphe 1, point b)                                  |
|Article 1er, paragraphe 1, mots finaux                               |Article 1er, paragraphe 1, mots introductifs                         |
|Article 1er, paragraphe 2                                            |Article 1er, paragraphe 2                                            |
|Article 2, premier alinéa                                            |Article 2, paragraphe 1                                              |
|Article 2, deuxième alinéa                                           |Article 2, paragraphe 2                                              |
|Articles 3 et 4                                                      |Articles 3 et 4                                                      |
|Article 5, premier alinéa                                            |Article 5, premier alinéa                                            |
|Article 5, deuxième alinéa                                           |-                                                                    |
|-                                                                    |Article 5, deuxième alinéa                                           |
|Article 6, premier alinéa                                            |Article 6, premier alinéa                                            |
|Article 6, deuxième alinéa                                           |-                                                                    |
|Annexe                                                               |Annexe I                                                             |
|-                                                                    |Annexe II                                                            |
|-                                                                    |Annexe III                                                           |

                                                                  _____________

                                                             -----------------------
[1]   JO L 179 du 14.7.1999, p. 1. Règlement modifié en dernier lieu par le règlement (CE) no 1795/2003 (JO L 262 du 14.10.2003, p. 13).
[2]   JO L 272 du 3.10.1990, p. 1. Règlement modifié en dernier lieu par le règlement (CE) no 1293/2005 (JO L 205 du 6.8.2005, p. 12).
[3]   Voir annexe II.
[4]   Tout pycnomètre de caractéristiques équivalentes peut être employé.
[5]   Un exemple numérique est donné au point 6 du présent chapitre.
[6]   Un exemple numérique est donné au point 6 du présent chapitre.
[7]   Un exemple numérique est donné au point 6 du présent chapitre.
[8]   Un exemple numérique est donné au point 6 du présent chapitre.
[9]   La teneur en sucres est exprimée en sucres intervertis.
[10]  La teneur en sucres est exprimée en sucres intervertis.
[11]  Exemple: pour un titre massique de 12 %: p = 0,12.
[12]  Avant de faire ce calcul, la densité relative (ou la masse volumique) du vin mesurée comme il est indiqué plus haut doit être  corrigée  de
      l'action de l'acidité vrée comme il est indiqué plus haut doit être corrigée de l'action de l'acidité  volatile  suivant  la  formule:dv  =
      d2020 − 0,0000086 a ou ρv = ρ20 − 0,0000086 aa étant la quantité d'acidité volatile en milliéquivalents par litre.
[13]  Ces valeurs sont données dans l'attente de la constitution d'une banque de données communautaire.
[14]  Ces valeurs sont données dans l'attente de la constitution d'une banque de données communautaire.
[15]  Une des appellations commerciales est «norite».
[16]  105 pascal (Pa) = 1 bar.
[17]  Cette distance doit être comptée dans le sens OC.
[18]  Pour certains vins particulièrement riches, il peut s'avérer souhaitable d'utiliser une colonne capillaire de 50 m de long.
[19]  Pour certains vins particulièrement riches, il peut s'avérer souhaitable d'effectuer une programmation de température de 2 °C par minute.