CELEX: 31985L0490
Language: ro
Date: 1985-10-11 00:00:00
Title: A Patra Directivă a Comisiei din 11 octombrie 1985 privind apropierea legislației statelor membre cu privire la metodele de analiză necesare pentru controlul compoziției produselor cosmetice

13/Volumul 07
            
            
               RO
            
            
               Jurnalul Ofícial al Uniunii Europene
            
            
               43
            
         31985L0490
   
               L 295/30
            
            
               JURNALUL OFÍCIAL AL UNIUNII EUROPENE
            
            
               
            
         
      A PATRA DIRECTIVĂ A COMISIEI
   
   din 11 octombrie 1985
   privind apropierea legislației statelor membre cu privire la metodele de analiză necesare pentru controlul compoziției produselor cosmetice
   (85/490/CEE)
   COMISIA COMUNITĂȚILOR EUROPENE,
   având în vedere Tratatul de instituire a Comunității Economice Europene,
   având în vedere Directiva 76/768/CEE a Consiliului din 27 iulie 1976 privind apropierea legislației statelor membre cu privire la produsele cosmetice (1), modificată ultima dată de Directiva 85/391/CEE (2), în special articolul 8 alineatul (1),
   întrucât Directiva 76/768/CEE prevede testarea oficială a produselor cosmetice cu scopul constatării îndeplinirii condițiilor stabilite în dispozițiile Comunității privind compoziția produselor cosmetice;
   întrucât toate metodele de analiză necesare trebuie să fie stabilite cât mai repede posibil; întrucât trei etape în atingerea acestui obiectiv au fost deja parcurse prin definirea anumitor metode în Directivele 80/1335/CEE (3), 82/434/CEE (4) și 83/514/CEE (5) ale Comisiei, a patra etapă constă în definirea metodelor de identificare și determinare pentru glicerol 1-(4-aminobenzoat), de determinare a clorbutanolului, de identificare și determinare a chininei, de identificare și determinare a sulfiților anorganici și a sulfiților acizi, de identificare și determinare a cloraților metalelor alcaline și de identificare și determinare a iodatului de sodiu;
   întrucât măsurile prevăzute de prezenta directivă sunt în conformitate cu avizul Comitetului privind adaptarea Directivei 76/768/CEE la progresul tehnic,
   ADOPTĂ PREZENTA DIRECTIVĂ:
   Articolul 1
   Statele membre adoptă măsurile necesare pentru a se asigura că în timpul testării oficiale a produselor cosmetice:
   
               —
            
            
               identificarea și determinarea 1-(4-aminobenzoatului) de glicerină,
            
         
               —
            
            
               determinarea clorbutanolului,
            
         
               —
            
            
               identificarea și determinarea chininei,
            
         
               —
            
            
               identificarea și determinarea sulfiților anorganici și sulfiților acizi,
            
         
               —
            
            
               identificarea și determinarea cloraților metalelor alcaline și
            
         
               —
            
            
               identificarea și determinarea iodatului de sodiu
            
         se efectuează în conformitate cu metodele descrise în anexă.
   Articolul 2
   Statele membre pun în aplicare actele cu putere de lege și actele administrative necesare pentru a se conforma prezentei directive până la 31 decembrie 1986.
   Statele membre informează de îndată Comisia cu privire la aceasta.
   Articolul 3
   Prezenta directivă se adresează statelor membre.
   
      Adoptată la Bruxelles, 11 octombrie 1985.
      
         
            Pentru Comisie
         
         Stanley CLINTON-DAVIS
         
         
            Membru al Comisiei
         
      
   
   
      (1)  JO L 262, 27.9.1976, p. 169.
   
      (2)  JO L 224, 22.8.1985, p. 40.
   
      (3)  JO L 383, 31.12.1980, p. 27.
   
      (4)  JO L 185, 30.6.1982, p. 1.
   
      (5)  JO L 291, 24.10.1983, p. 9.
   ANEXĂ
   IDENTIFICAREA ȘI DETERMINAREA 1-(4-AMINOBENZOATULUI) DE GLICERINĂ
   A.   IDENTIFICARE
   1.   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Prezenta metodă identifică alfa-monogliceril 4-aminobenzoatul [1-(4-aminobenzoatul) de glicerină]. Metoda identifică, de asemenea, 4-aminobenzoatul de etil (benzocaină INN), care poate fi prezent ca impuritate.
   2.   PRINCIPIU
   Identificarea este făcută prin cromatografie în strat subțire pe silicagel cu un indicator fluorescent și identificarea grupului de amine primare libere prin formarea unui colorant diazoic pe placă.
   3.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   3.1.   Amestec solvent: ciclohexan/2-propanol/diclormetan stabilizat, 48/64/9 (v/v/v).
   3.2.   Solvent de developare: eter de petrol (40-60)/benzen/acetonă/soluție de hidroxid de amoniu (NH3 minimum 25 %): 35/35/35/1 (v/v/v/v).
   
               Soluție de developare:
            
            
               
                           (a)
                        
                        
                           azotit de sodiu: 1 g în 100 ml acid clorhidric 1 m (preparat imediat înainte de folosire);
                        
                     
                           (b)
                        
                        
                           2-naftol: 0,2 g în 100 ml hidroxid de potasiu 1 m.
                        
                     
         3.4.   Soluții standard:
   alfa-monogliceril 4-aminobenzoat: 0,05 în 100 ml solvent 3.1 amestecat;
   4-aminobenzoat de etil: 0,05 în 100 ml solvent 3.1 amestecat.
   3.5.   Plăci cu silicagel 60 F254, 0,25 mm grosime, 200 mm x 200 mm.
   4.   APARATURĂ
   4.1.   Aparatură uzuală pentru cromatografie în strat subțire.
   4.2.   Vibrator ultrasonic.
   4.3.   Filtru Millipore FH 0,5 μm ori echivalent.
   5.   PROCEDURĂ
   5.1.   Pregătirea probei
   Se cântăresc 1,5 g produs de analizat într-un balon cotat de 10 ml cu dop. Se aduce la semn cu solvent (3.1). Se închide și se lasă pentru o oră la temperatura camerei într-un vibrator ultrasonic (4.2). Se filtrează printr-un filtru Millipore (4,3) și se folosește filtratul pentru determinarea cromatografică.
   5.2.   Cromatografie în strat subțire
   Se pun pe placă (3.5) 10 μl soluție de probă (5.1) și câte 10 ml din fiecare soluție standard (3.4).
   Se developează cromatograma până la o înălțime de 150 mm într-un tanc saturat în prealabil cu solvent 3.2. Se lasă placa să se usuce la temperatură ambiantă.
   5.3.   Developare
   5.3.1.   Se observă placa sub lumină UV la 254 nm.
   5.3.2.   Se pulverizează placa uscată complet cu soluție 3.3 (a).
   Se lasă să se usuce la temperatura camerei timp de 1 minut și imediat se pulverizează cu soluție 3.3.(b).
   Se usucă placa într-un cuptor la 60 °C. Petele ce apar au o culoare portocalie. Alfa-monogliceril 4-aminobenzoat: RF 0.07; etil 4-aminobenzonat: RF 0,55.
   B.   DETERMINARE
   1.   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Prezenta metodă determină alfa monogliceril 4-aminobenzoatul. Metoda determină, de asemenea, 4-aminobezoatulul de etil. Ea nu poate determina mai mult de 5 % (m/m) alfa 4-aminobenzoat de monogliceril și 1 % (m/m) 4-aminobenzoat de etil.
   2.   DEFINIȚIE
   Conținutul de alfa-4-aminobenzoat de glicerină și 4-aminobenzoat de etil măsurat prin această metodă este exprimat în procente masice (% m/m) de produs.
   3.   PRINCIPIU
   Produsul analizat este suspendat în metanol și, după un tratament adecvat al probei, este determinat prin cromatografie de lichid de înaltă performanță (HPLC).
   4.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică și, atunci când este cazul, adecvați pentru HPLC.
   4.1.   Metanol.
   4.2.   Ortofosfat diacid de potasiu (KH2PO4).
   4.3.   Diacetat de zinc (Zn (CH3COO)2•2H2O).
   4.4.   Acid acetic (d= 1,05).
   4.5.   Hexacianoferat de tetrapotasiu (K4(Fe(CN)6)•3H2O).
   4.6.   4-hidroxibenzoat de etil.
   4.7.   Alfa-4-aminobenzoat de monogliceril.
   4.8.   4-aminobenzoat de etil.
   4.9.   Soluție tampon de fosfat (0,02 m): se dizolvă 2,72 g ortofosfat diacid de potasiu (4.2) într-un litru de apă.
   4.10.   Eluent: soluție tampon de fosfat (4,9)/metanol (4.1) 61/39 (v/v).
   Compoziția fazei mobile poate fi schimbată cu scopul de a obține un factor de rezoluție R ≥ 1,5.
   
      
   unde:
   
               R1 și R2
               
            
            
               =
            
            
               timpi de retenție ai vârfurilor, în minute,
            
         
               W1 și W2
               
            
            
               =
            
            
               lățimea vârfurilor la jumătatea înălțimii, în milimetri,
            
         
               d'
            
            
               =
            
            
               viteza graficului, în milimetri pe minut.
            
         4.11.   Soluție stoc de alfa-4-aminobenzoat de monogliceril: într-un balon cotat de 100 ml se cântăresc cu precizie aproximativ 40 mg alfa-4-aminobenzoat de monogliceril. Se dizolvă în 40 ml metanol (4.1). Se aduce la semn cu soluție tampon (4.9) și se amestecă.
   4.12.   Soluție stoc de 4-aminobenzoat de etil: într-un balon cotat de 100 ml se cântăresc cu precizie 40 mg 4-aminobenzoat de etil. Se dizolvă în 40 ml metanol (4.1). Se aduce la semn cu soluție tampon (4.9) și se amestecă.
   4.13.   Soluție de standard intern: într-un balon cotat de 100 ml se cântăresc cu precizie 50 mg 4-hidroxibenzoat de etil. Se dizolvă în 40 ml metanol (4.1). Se aduce la semn cu soluție tampon (4.9) și se amestecă.
   Soluții standard: se prepară patru soluții standard prin dizolvarea în 100 ml eluent, (4.10) conform tabelului de mai jos:
   
      
   
               Soluție standard
            
            
               Alfa-4-aminobenzoat de monogliceril
            
            
               4-aminobenzoat de etil
            
            
               Etil 4-hidroxibenzoat
            
         
               μg/ml (1)
               
            
            
               ml (4.11)
            
            
               μg/ml (1)
               
            
            
               ml (4.12)
            
            
               μg/ml (1)
               
            
            
               ml (4.13)
            
         
               I
            
            
               8
            
            
               2
            
            
               8
            
            
               2
            
            
               50
            
            
               10
            
         
               II
            
            
               16
            
            
               4
            
            
               12
            
            
               3
            
            
               50
            
            
               10
            
         
               III
            
            
               24
            
            
               6
            
            
               16
            
            
               4
            
            
               50
            
            
               10
            
         
               IV
            
            
               40
            
            
               10
            
            
               20
            
            
               5
            
            
               50
            
            
               10
            
         4.15.   Soluție Carrez I: se dizolvă 26,5 g hexacianoferat de tetrapotasiu (4.5) în apă și se aduce la volum de 250 ml.
   4.16.   Soluție Carrez II: se dizolvă 54,9 g diacetat de zinc (4.3) și 7,5 ml acid acetic (4.4) în apă și se aduce la volum de 250 ml.
   4.17.   Merck Lichrosorb RP-18, sau echivalent, cu dimensiunea medie a particulelor de 5 μm.
   5.   APARATURĂ
   5.1.   Echipament de laborator obișnuit.
   5.2.   Echipament pentru cromatografie de înaltă performanță cu detector UV cu lungime de undă variabilă și cameră termostatată setată la 45 °C.
   5.3.   Coloană de oțel inoxidabil: lungime 250 mm, diametru interior 4,6 mm; umplutură Lichrosorb RP–18 (4.17).
   5.4.   Baie ultrasonică.
   6.   PROCEDURĂ
   6.1.   Pregătirea probei
   6.1.1.   Se cântărește cu precizie 1 g de probă într-un pahar de 100 ml și se adaugă 10 ml metanol (4.1).
   6.1.2.   Se pune paharul în baia ultrasonică (5.4) timp 20 de minute pentru a se obține o suspensie. Se transferă cantitativ suspensia astfel obținută într-un balon cotat de 100 ml cu nu mai mult de 75 ml de eluant (4.10).
   Se adăugă succesiv 1 ml soluție Carrez I (4.15) și 1 ml soluție Carrez II (4.16) și se amestecă după fiecare adăugare. Se aduce la semn cu eluant (4.10), se amestecă din nou și se filtrează printr-o hârtie de filtru cutată.
   6.1.3.   Se transferă cu o pipetă 3,0 ml din filtratul obținut la 6.1.2 și 5,0 ml soluție de standard intern (4.13) într-un balon cotat de 50 ml. Se aduce la semn cu eluant (4.10) și se amestecă. Soluția astfel obținută se folosește pentru realizarea analizei cromatografice descrise la 6.2.
   6.2.   Cromatografie
   6.2.1.   Se reglează debitul fazei mobile (4.10) la 1,2 ml/min și se reglează temperatura coloanei la 45 °C.
   6.2.2.   Se reglează detectorul (5.2) la 274 nm.
   6.2.3.   Cu o microseringă se injectează în cromatograf cel puțin de două ori 20 μl de soluție (6.1.3) și se măsoară aria vârfului.
   6.3.   Curba de etalonare
   6.3.1.   Se injectează 20 μl din fiecare dintre soluțiile standard (4.1.4) și se măsoară aria vârfului.
   6.3.2.   Pentru fiecare concentrație se calculează raportul dintre ariile vârfurilor pentru alfa-4-aminobenzoat de monogliceril și ariile vârfurilor pentru standardul intern. Se trasează acest raport pe abscisă, iar pe ordonată raportul maselor corespunzătoare.
   6.3.3.   Se procedează în același mod pentru 4-hidroxibenzoatul de etil.
   7.   CALCUL
   7.1.   Din curba de etalonare obținută la 6.3 se citesc raporturile de mase (RP1, RP2) corespunzătoare raporturilor dintre ariile vârfurilor calculate la 6.2.3, unde:
   RP1= masă alfa-4-aminobenzoat de monogliceril/masă 4-hidroxibenzoat de etil,
   RP2= masă 4-aminobenzoat de etil/masă 4-hidroxibenzoat etil.
   7.2.   Din raporturile de mase obținute în acest mod se calculează conținutul de alfa-4-aminobenzoat de monogliceril și, respectiv, 4-aminobenzoat de etil, ca procente masice (% m/m), cu ajutorul formulelor:
   
                
            
            
               RP % (m/m) alfa-4-aminobenzoat de monogliceril =
            
         
                
            
            
               RP % (m/m) 4-aminobenzoat de etil =
            
         
                
            
            
               q = cantitatea de 4-hidroxibenzoat de etil (standard intern) cântărită, în miligrame, la 4.12,
            
         
                
            
            
               P = cantitatea de probă, în grame, cântărită la 6.1.1.
            
         8.   REPETABILITATE (2)
   
   8.1.   Pentru un conținut de 5 % (m/m) de alfa-4-aminobenzoat de monogliceril, diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,25 %.
   8.2.   Pentru un conținut de 1 % (m/m) 4-aminobenzoat de etil, diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,10 %.
   9.   NOTĂ
   9.1.   Înainte de efectuarea unei analize, se verifică dacă proba conține substanțe care s-ar putea suprapune în cromatogramă peste vârful standardului intern (4-aminobenzoat de etil).
   9.2.   Pentru a verifica absența oricărei interferențe, se repetă determinarea prin schimbarea proporției de metanol în faza mobilă cu relativ 10 %.
   DETERMINAREA CLORBUTANOLULUI
   1.   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Prezenta metodă este adecvată pentru determinarea clorbutanolului (INN) la o concentrație maximă de 0,5 % (m/m) în orice produs cosmetic, cu excepția aerosolilor.
   2.   DEFINIȚIE
   Conținutul de clorbutanol măsurat prin această metodă este exprimat în procente masice % (m/m) de produs.
   3.   PRINCIPIU
   După un tratament adecvat al produsului de analizat, determinarea este realizată prin cromatografie de gaz folosind ca standard intern 2,2,2-tricloretanol.
   4.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   4.1.   Clorbutanol (1,1,1-triclor-2-metilpropan-2-ol).
   4.2.   2,2,2-tricloretanol.
   4.3.   Etanol absolut.
   4.4.   Soluție standard de clorbutanol: 0,025 g în 100 ml etanol (4.3) (m/v).
   4.5.   Soluție standard de 2,2,2-tricloretanol: 4 mg în 100 ml etanol (4.3) (m/v).
   5.   APARATURĂ
   5.1.   Echipament uzual de laborator.
   5.2.   Cromatograf de gaz cu detector cu electroni, Ni 63.
   6.   PROCEDURĂ
   6.1.   Pregătirea probei
   Se cântăresc cu precizie între 0,1 și 0,3 g („p” g) de probă. Se trec într-un balon cotat de 100 ml. Se dizolvă în etanol (4.3), se adaugă 1 ml soluție de standard intern (4.5) și se aduce la semn cu etanol (4.3).
   6.2.   Condiții pentru cromatografia de gaz
   6.2.1.   Condițiile de operare trebuie să realizeze un factor de rezoluție R ≥ 1,5.
   
      
   unde:
   
               R1 și R2
               
            
            
               =
            
            
               timpi de retenție ai vârfurilor, în minute,
            
         
               W1 și W2
               
            
            
               =
            
            
               lățimea vârfurilor la jumătatea înălțimii, în milimetri,
            
         
               d′
            
            
               =
            
            
               viteza graficului, în milimetri pe minut.
            
         Ca exemple, următoarele condiții de operare furnizează rezoluția necesară:
   
      
   
               Coloană
            
            
               I
            
            
               II
            
         
               Material
            
            
               Sticlă
            
            
               Oțel inoxidabil
            
         
               Lungime
            
            
               1,80 m
            
            
               3 m
            
         
               Diametru
            
            
               3 mm
            
            
               3 mm
            
         
               Fază staționară
            
            
               10 % Carbolax 20 M TPA pe Gaschrom Q 80-100 ochiuri
            
            
               5 % OV 17 pe Chromosorb WAW DMCS 80-100 ochiuri
            
         
               Condiționare
            
            
               2-3 zile la 190 °C
            
            
                
            
         
               Temperaturi:
            
            
                
            
            
                
            
         
               - injector
            
            
               200 °C
            
            
               150 °C
            
         
               - coloană
            
            
               150 °C
            
            
               100 °C
            
         
               - detector
            
            
               200 °C
            
            
               150 °C
            
         
               Gaz purtător
            
            
               Azot
            
            
               Argon/metan (95/5 v/v)
            
         
               Debit
            
            
               35 ml/min
            
            
               35 ml/min
            
         6.3.   Curbă standard
   Folosind cinci baloane cotate de 100 ml, se adaugă 1 ml soluție standard (4.5) și, respectiv, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5 și 0,6 ml soluție 4.4, se aduce la semn cu etanol (4.3) și se amestecă. Se injectează 1 μl din fiecare din aceste soluții în cromatograf, în conformitate cu condițiile de operare descrise la 6.2.2 și se construiește o curbă de etalonare prin reprezentare pe abscisă a raportului dintre masa de clorbutanol și cea de 2,2,2-tricloretanol, iar pe ordonată a raportului suprafețelor vârfurilor corespondente.
   6.4.   Se injectează 1 μl din soluția obținută la 6.1 și se procedează în conformitate cu condițiile descrise la 6.2.2.
   7.   CALCUL
   7.1.   Se calculează de pe curba standard (6.3) cantitatea „a” exprimată ca μg de clorbutanol, în soluția 6.1.
   7.2.   Conținutul de clorbutanol în probă este calculat folosind următoarea formulă:
   % clorbutanol (m/m) =
   8.   REPETABILITATE (2)
   
   Pentru un conținut de clorbutanol de 0,5 % (m/m), diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,01 %.
   Notă
   Dacă rezultatul este egal cu sau depășește concentrația maxim admisă, este necesară verificarea absenței interferențelor.
   IDENTIFICAREA ȘI DETERMINAREA CHININEI
   A.   IDENTIFICARE
   1.   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Prezenta metodă este destinată detectării prezenței chininei în șampoane și loțiuni pentru păr.
   2.   PRINCIPIU
   Identificarea este realizată prin cromatografie în strat subțire pe silicagel. Detectarea chininei este realizată prin fluorescența albastră a chininei, în condiții acide, la 360 nm.
   Pentru confirmare ulterioară, fluorescența poate fi eliminată prin vapori de brom, iar vaporii de amoniac determină apariția unei fluorescențe gălbui.
   3.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   3.1.   Plăci cu silicagel, fără indicatori fluorescenți, 0,25 mm grosime, 200 mm × 200 mm.
   3.2.   Solvent de developare: toluen/dietileter/diclormetan/dietilamină 20/20/20/8 (v/v/v/v).
   3.3.   Metanol.
   3.4.   Acid sulfuric (96 %; d= 1,84).
   3.5.   Dietileter.
   3.6.   Agent de developare: se adaugă cu grijă 5 ml acid sulfuric (3.4) la 95 ml dietileter (3.5) într-un recipient răcit.
   3.7.   Brom.
   3.8.   Soluție de hidroxid de amoniu (28 %; d= 0,90).
   3.9.   Chinină anhidră.
   3.10.   Soluție standard: se cântăresc cu precizie 100,0 mg chinină anhidră (3.9) într-un balon cotat și se dizolvă în 100 mg metanol (3.3).
   4.   APARATURĂ
   4.1.   Echipament uzual pentru cromotografie în strat subțire.
   4.2.   Baie ultrasonică.
   4.3.   Filtru Millipore, FH 0,5 fm sau echivalent cu echipament de filtrare adecvat.
   5.   PROCEDURĂ
   5.1.   Pregătirea probei
   Într-un balon cotat de 100 ml se cântărește cu precizie o cantitate de probă ce poate conține aproximativ 100 mg chinină, se dizolvă și se aduce la semn cu metanol (3.3).
   Se astupă balonul și se lasă pentru o oră la temperatura camerei într-un vibrator ultrasonic (4.2). Se filtrează (4.3) și se folosește filtratul pentru cromatografie.
   5.2.   Cromatografie în strat subțire
   Se pune 1,0 μl soluție standard (3.10) și 1,0 μl soluție de probă (5.1) pe placa cu silicagel (3.1). Se developează cromatograma pe o distanță de 150 mm folosind solvent 3.2, într-un tanc saturat anterior cu solvent (3.2).
   5.3.   Developare
   5.3.1.   Se usucă placa la temperatura camerei.
   5.3.2.   Se pulverizează cu reactivul 3.6.
   5.3.3.   Se lasă placa la uscat pentru o oră la temperatura camerei.
   5.3.4.   Se observă la lumina unei lămpi UV reglată la o lungime de undă de 360 nm. Chinina apare ca o pată fluorescentă albastru intens.
   Ca exemplu, tabelul de mai jos indică valorile RF ale principalilor alcaloizi derivați din chinină când se developează cu solvent 3.2.
   
               Alcaloid
            
            
               RF
               
            
         
               Chinină
            
            
               0,20
            
         
               Chinidină
            
            
               0,29
            
         
               Cinconină
            
            
               0,33
            
         
               Cinconidină
            
            
               0,27
            
         
               Hidrochinidină
            
            
               0,17
            
         5.3.5.   Pentru confirmarea ulterioară a prezenței chininei, placa se expune pentru aproximativ o oră la vapori de brom (3.7). Fluorescența dispare. Când aceeași placă este expusă la vapori de amoniac (3.8), petele reapar cu o culoare maro, iar când placa este examinată din nou sub lumină UV la 360 nm se poate observa o fluorescență gălbuie.
   Limita de detectare: 0,1 mg chinină.
   B.   DETERMINARE
   1.   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Prezenta metodă descrie determinarea chininei. Ea poate fi utilizată pentru a determina concentrația maximă admisă, de 0,5 % (m/m) în șampoane și 0,2 % în loțiuni pentru păr.
   2.   DEFINIȚIE
   Conținutul de chinină determinat prin această metodă este exprimat în procente masice (% m/m) de produs.
   3.   PRINCIPIU
   După un tratament adecvat al produsului de analizat, determinarea este realizată prin cromatografie de lichid de înaltă performanță (HPLC)
   4.   REACTIVI
   Toți reactivi trebuie să fie de puritate analitică și adecvați pentru HPLC.
   4.1.   Acetonitril.
   4.2.   Fosfat diacid de potasiu (KH2PO4).
   4.3.   Acid ortofosforic (85 %; d= 1,7).
   4.4.   Bromură de tetrametilamoniu.
   4.5.   Chinină anhidră.
   4.6.   Metanol.
   4.7.   Soluție de acid ortofosforic (0,1 m): se cântăresc 11,53 g acid ortofosforic (4.3) și se dizolvă în 1 000 ml apă într-un balon cotat.
   4.8.   Soluție de fosfat diacid de potasiu (0,1 m): se cântăresc 13,6 g fosfat diacid de potasiu (4.2) și se dizolvă în 1 000 ml apă într-un balon cotat.
   4.9.   Soluție de bromură de tetrametilamoniu: se dizolvă 15,40 g bromură de tetrametilamoniu în 1 000 ml apă într-un balon cotat.
   4.10.   Eluant: acid ortofosforic (4.7)/fosfat diacid de potasiu (4.8)/bromură de tetrametilamoniu (4.9)/apă/acetonitril (4.1) 10/50/100/340/90 (v/v/v/v/v).
   Compoziția acestei faze mobile poate fi schimbată cu scopul de a obține un factor de rezoluție R ≥ 1,5.
   
      
   unde:
   
               R1 și R2
               
            
            
               =
            
            
               timpii de retenție ai vârfurilor, în minute,
            
         
               W1 și W2
               
            
            
               =
            
            
               lățimea vârfului la jumătatea înălțimii, în milimetri,
            
         
               d′
            
            
               =
            
            
               viteza graficului, în milimetri pe minut.
            
         4.11.   Silice tratată cu octadecilsilan, 10 μm.
   4.12.   Soluții standard: într-un set de baloane cotate se cântăresc cu precizie aproximativ 5,0, 10,0, 15,0 și respectiv 20,0 mg chinină anhidridă (4.5). Se aduce la semn cu metanol (4.6) și se agită conținutul baloanelor până la dizolvarea chininei. Se filtrează fiecare probă printr-un filtru de 0,5 μm.
   5.   APARATURĂ
   5.1.   Echipament de laborator obișnuit.
   5.2.   Baie ultrasonică.
   5.3.   Echipament pentru cromatografie de lichid de înaltă performanță, cu detector cu lungime de undă variabilă.
   5.4.   Coloană: lungime 250 mm; diametru interior 4,6 mm; umplutură silice (4.11).
   5.5.   Filtru Millipore FH 0,5 μm sau echivalent, cu aparatură de filtrare adecvată.
   6.   PROCEDURĂ
   6.1.   Pregătirea probei
   Într-un balon cotat de 100 ml se cântărește cu precizie o cantitate suficientă de produs pentru a conține 10,0 mg chinină anhidră, se adaugă 20 ml metanol (4.6) și se pune balonul într-o baie ultrasonică (5.2) pentru 20 de minute. Se aduce la semn cu metanol (4.6). Se amestecă soluția și apoi se filtrează o porțiune (5.5).
   6.2.   Cromatografie
   Debit: 1,0 ml/min.
   Lungime de undă a detectorului (5.3): 332 nm.
   Volum de injectare: 10 μl din soluția filtrată (6.1).
   Măsurare: suprafața vârfului.
   6.3.   Curbă de etalonare
   Se injectează de cel puțin 3 ori 10,0 μl din fiecare soluție de referință (4.12), se măsoară ariile vârfurilor și se calculează aria medie pentru fiecare concentrație.
   Se realizează curba de etalonare și se verifică dacă este rectilinie.
   7.   CALCUL
   7.1.   Din curba de etalonare (6.3) se determină cantitatea, în μg, de chinină anhidră prezentă în volumul injectat (6.2).
   7.2.   Concentrația de chinină anhidră în probă, ca procent masic (% m/m), este obținută utilizând formula următoare:
   % (m/m) chinină anhidră =
   unde:
   B– este cantitatea, în micrograme, de chinină anhidră determinată în cei 10 μl de soluție filtrată (6.1),
   A– este masa probei, în grame (6.1).
   8.   REPETABILITATE (2)
   
   Pentru un conținut de chinină anhidră de 0,5 % (m/m), diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,02 %.
   Pentru un conținut de chinină anhidră de 0,2 % (m/m), diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,01 %.
   IDENTIFICAREA ȘI DETERMINAREA SULFIȚILOR ANORGANICI ȘI SULFIȚILOR ACIZI
   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Metoda descrie identificarea și determinarea sulfiților anorganici și sulfiților acizi în produsele cosmetice. Ea este aplicabilă numai produselor care au o fază apoasă sau alcoolică și pentru concentrații de dioxid de sulf de până la 0,2 %.
   A.   IDENTIFICARE
   1.   PRINCIPIU
   Proba este încălzită în acid clorhidric și dioxidul de sulf care se eliberează este identificat prin mirosul său sau prin efectul său asupra hârtiei indicatoare.
   2.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   2.1   Acid clorhidric (4 m).
   2.1.   Hârtie iod-amidonată (iodat de potasiu) ori echivalent.
   3.   APARATURĂ
   3.1.   Echipament de laborator obișnuit.
   3.2.   Vas (25 ml) echipat cu un condensator de reflux scurt.
   4.   PROCEDURĂ
   4.1.   Se pun aproximativ 2,5 g de probă în vas (3.2) împreună cu 10 ml acid clorhdric (2.1).
   4.2.   Se amestecă și se încălzește până la fierbere.
   4.3.   Se testează emisia de dioxid de sulf prin miros sau cu hârtie indicatoare (2.2).
   B.   DETERMINARE
   1.   DEFINIȚIE
   Conținutul de sulfit sau sulfit acid în probă determinat conform acestei metode este exprimat în procente masice de dioxid de sulf.
   2.   PRINCIPIU
   După acidificarea probei, dioxidul de sulf eliberat este distilat într-o soluție de apă oxigenată. Acidul sulfuric format este titrat cu o soluție de hidroxid de sodiu standardizată.
   3.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   3.1.   Apa oxigenată 0,2 % (m/v). A se prepara zilnic.
   3.2.   Acid ortofosforic (= 1,75).
   3.3.   Metanol.
   3.4.   Soluție standardizată de hidroxid de sodiu (0,01 m).
   3.5.   Azot.
   3.6.   Indicator: amestec 1:1 (v/v) de roșu de metil (0,03 % m/v în etanol) și albastru de metilen (0,05 % m/v în etanol). Se filtrează soluția.
   4.   APARATURĂ
   4.1.   Echipament de laborator obișnuit.
   4.2.   Distilator (vezi figura).
   5.   PROCEDURĂ
   5.1.   În balonul de distilare A (vezi figura), se cântăresc cu precizie aproximativ 2,5 g de probă.
   5.2.   Se adaugă 60 ml apă și 50 ml metanol (3.3) și se amestecă.
   5.3.   Se pun 10 ml apă oxigenată (3.1), 60 ml apă și câteva picături de indicator (3.6) în colectorul de distilare D (vezi figura). Se adaugă câteva picături de hidroxid de sodiu (3.4), până la virarea în verde a indicatorului.
   5.4.   Se repetă 5.3 pentru flaconul de spălare E (vezi figura).
   5.5.   Se asamblează aparatul și se reglează debitul de azot (3.5) la aproximativ 60 de bule pe minut.
   5.6.   Se pun 15 ml acid ortofosforic (3.2) din pâlnie în balonul de distilare A.
   5.7.   Se încălzește rapid până la fierbere și apoi se fierbe ușor la foc mic pe o perioadă totală de 30 de minute.
   5.8.   Se detașează colectorul de distilat D. Se clătește tubul și apoi se titrează soluție de hidroxid de sodiu (3.4) până la virarea în verde a indicatorului (3.6).
   6.   CALCUL
   Se calculează conținutul de sulfit sau sulfit acid, în procente masice, cu formula:
   % m/m dioxid de sulf
   unde:
   M= concentrație molară a soluției de hidroxid de sodiu (3.4),
   V= volumul de hidroxid de sodiu (3.4) necesar pentru titrare (5.8), în mililitri,
   m= masa probei (5.1), în grame.
   7.   REPETABILITATE (2)
   
   Pentru un conținut de 0,2 % m/m dioxid de sulf, diferența dintre două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să fie mai mare de 0,006 %.
   Aparatura de distilare a dioxidului de sulf conform Tanner
   Toate dimensiunile sunt în mm.
   
      
   IDENTIFICAREA ȘI DETERMINAREA CLORAȚILOR METALELOR ALCALINE
   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Metoda descrie identificarea și determinarea cloraților în pastele de dinți și alte produse cosmetice.
   A.   IDENTIFICARE
   1.   PRINCIPIU
   Clorații sunt separați de alți compuși halogenați prin cromatografie în strat subțire și identificați prin oxidarea iodurii, cu formare de iod.
   2.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   2.1.   Soluții de referință: soluții apoase de clorat, bromat și iodat de potasiu (0,2 % m/v) proaspăt preparate.
   2.2.   Solvent de developare: soluție de amoniac (28 % m/v) acetonă/butanol (60/130/30 v/v/v).
   2.3.   Iodură de potasiu, soluție apoasă (5 % m/v).
   2.4.   Soluție de amidon (1 la 5 % m/v).
   2.5.   Acid clorhidric (1 m).
   2.6.   Plăci pentru cromatografie în strat subțire cu celuloză, gata preparate (0,25 mm).
   3.   APARATURĂ
   Echipament normal pentru cromatografia în strat subțire.
   4.   PROCEDURĂ
   4.1.   Se extrage aproximativ 1 g de probă cu apă, se filtrează și se diluează la aproximativ 25 ml.
   4.2.   Se pun 2 μl de soluție (4.1) pe placă (2.6), împreună cu porțiuni de 2 μl din fiecare dintre cele trei soluții de referință (2.1).
   4.3.   Se pune placa într-un tanc de developare și se developează prin cromatografie ascendentă cu solvent 2.2 aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii (2.6).
   4.4.   Se scoate placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul (NB: Această etapă poate dura până la 2 ore).
   4.5.   Se pulverizează placa cu iodură de potasiu (2.3) și se lasă la uscat pentru aproximativ 5 minute.
   4.6.   Se pulverizează placa cu soluție de amidon (2.4) și se lasă la uscat pentru aproximativ 5 minute.
   4.7.   Se pulverizează placa cu acid clorhidric (2.5).
   5.   EVALUARE
   Dacă cloratul este prezent, după o jumătate de oră apare o pată albastră (posibil o pată maro), cu o valoare RF de aproximativ 0,7-0,8.
   
               Compuși halogenați
            
            
               RF
               
            
         
               Iodat
            
            
               0-0,2
            
         
               Bromat
            
            
               0,5-0,6
            
         
               Clorat
            
            
               0,7-0,8
            
         Trebuie remarcat faptul că bromații și iodații dau reacție imediată. Este nevoie de atenție pentru a nu confunda petele de bromați cu petele de clorați.
   B.   DETERMINARE
   1.   DEFINIȚIE
   Conținutul de clorat din probă determinat conform acestei metode este exprimat în procente masice de clorat.
   2.   PRINCIPIU
   Cloratul este redus de pulberea de zinc în condiții acide. Clorura formată este măsurată prin titrare potențiometrică folosind o soluție de nitrat de argint. O determinare similară efectuată înaintea reducerii permite determinarea posibilei prezențe a halogenurilor.
   3.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   3.1.   Acid acetic, 80 % (m/m).
   3.2.   Pulbere de zinc.
   3.3.   Soluție standard de azotat de argint (0,1 m).
   4.   APARATURĂ
   4.1.   Echipament de laborator obișnuit.
   4.2.   Potențiometru echipat cu electrod indicator de argint.
   5.   PROCEDURĂ
   5.1.   Pregătirea probei
   Într-o eprubetă pentru centrifugă se cântărește cu precizie o cantitate „m” de aproximativ 2 g. Se adaugă aproximativ 15 ml acid acetic (3.1) și se amestecă cu grijă. Se așteaptă 30 de minute și se centrifughează 15 minute la 2 000 rot/min. Se transferă soluția supernatantă într-un balon cotat de 50 ml. Se repetă centrifugarea de două ori prin adăugarea a 15 ml acid acetic (3.1) la reziduu. Se colectează soluția conținând clorat în același balon cotat. Se aduce la semn cu acid acetic (3.1).
   5.2.   Reducerea cloratului
   Se iau 20 ml de soluție 5.1 și se adaugă 0,6 g pulbere de zinc (3.2). Se aduce la fierbere într-un balon echipat cu un tub condensator. După 30 de minute de fierbere se răcește și se filtrează. Se clătește balonul cu apă. Se filtrează și se combină filtratul cu apele de clătire.
   5.3.   Determinarea clorurii
   Se titrează 20 ml de soluție 5.2 cu azotat de argint (3.3) prin folosirea potențiometrului (4.2). Se titrează în același mod 20 ml de soluție 5.1 cu azotat de argint (5.3).
   
      NB: Dacă produsul conține derivați de brom sau de iod care pot elibera bromuri sau ioduri după reducere, curba de titrare are mai multe puncte de inflexiune. În acest caz, volumul soluției titrate (3.3) corespunzător clorurii este diferența dintre ultimul și penultimul punct de inflexiune.
   6.   CALCUL
   Conținutul de clorat al probei (% m/m) este calculat cu formula:
   Clorat (ClO3
      -) % m/m =
   unde:
   
               V
            
            
               =
            
            
               volumul, în mililitri, de soluție de azotat de argint (3.3) folosit la titrarea soluției 5.2,
            
         
               V′
            
            
               =
            
            
               volumul, în mililitri, de soluție de azotat de argint (3.3) folosit la titrarea a 20 ml de soluție 5.1,
            
         
               M
            
            
               =
            
            
               molalitatea soluției standard de azotat de argint (3.3),
            
         
               m
            
            
               =
            
            
               masa probei, în grame.
            
         7.   REPETABILITATE (2)
   
   Pentru un conținut de clorat de 3 până la 5 % m/m, diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,07 % m/m.
   IDENTIFICAREA ȘI DETERMINAREA IODATULUI DE SODIU
   OBIECTUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE
   Metoda descrie procedeul de identificare și determinarea limpezirii produselor cosmetice conținând iodat de potasiu.
   A.   IDENTIFICARE
   1.   PRINCIPIU
   Iodatul de sodiu este separat de alți compuși halogenați prin cromatografie în strat subțire și identificat prin oxidarea iodurii cu formare de iod.
   2.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică.
   2.1.   Soluții de referință: soluții apoase de clorat, bromat și iodat de potasiu (0,1 % m/v) proaspăt preparate.
   2.2.   Solvent de developare:
   soluție de amoniac 28 % (m/v)/acetonă/butanol (60/130/30 v/v/v).
   2.3.   Soluție apoasă de iodură de potasiu (5 % m/v).
   2.4.   Soluție de amidon (1 până la 5 % m/v).
   2.5.   Acid clorhidric (1 m).
   3.   APARATURĂ
   Plăci cu celuloză pentru cromatografie în strat subțire (0,25 mm) gata preparate.
   3.1.   Plăci pentru cromatografie în strat subțire cu celuloză, gata preparate (0,25 mm).
   3.2.   Echipament normal pentru cromatografie în strat subțire.
   4.   PROCEDURĂ
   4.1.   Se extrage cu apă aproximativ 1 g de probă, se filtrează și se diluează la aproximativ 10 ml.
   4.2.   Se pun 2 μl din această soluție pe linia de bază a plăcii (3.1), împreună cu porțiuni de 2 μl din fiecare dintre cele trei soluții de referință (2.1).
   4.3.   Se pune placa într-un tanc de developare și se developează cu solvent (2.2) prin cromatografie ascendentă aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii.
   4.4.   Se îndepărtează placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul la temperatura ambiantă (NB: Această etapă poate dura până la două ore.).
   4.5.   Se pulverizează pe placă iodură de potasiu (2.3) și se lasă să se usuce aproximativ 5 minute.
   4.6.   Se pulverizează pe placă soluție de amidon (2.4) și se lasă să se usuce aproximativ 5 minute.
   4.7.   În final, se pulverizează cu acid clorhidric (2.5).
   5.   EVALUARE
   Dacă iodatul este prezent, o pată albastră (culoarea poate fi maro sau poate deveni maro dacă stă) apare imediat, cu o valoare RF de aproximativ 0-0,2.
   Trebuie remarcat că bromații dau reacții imediate la valori RF de aproximativ 0,5-0,6 iar clorații, după aproximativ 30 de minute, la valori RF de 0,7, respectiv 0,8.
   B.   DETERMINARE
   1.   DEFINIȚIE
   Conținutul de iodat de sodiu determinat conform acestei metode este exprimat ca procent masic de iodat de sodiu.
   2.   PRINCIPIU
   Iodatul de sodiu se dizolvă în apă și este determinat prin intermediul cromatografiei de lichid de înaltă performanță, folosind o coloană C18 cu fază inversă și o coloană cu schimbător de anioni înseriate.
   3.   REACTIVI
   Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică și, în special, adecvați cromatografiei de lichid de înaltă performanță (HPLC).
   3.1.   Acid clorhidric (4 m).
   3.2.   Sulfit de sodiu apos, 5 % m/v.
   3.3.   Soluție stoc de iodat de sodiu:
   se prepară o soluție stoc conținând 50 mg iodat de sodiu la 100 ml apă.
   3.4.   Ortofosfat diacid de potasiu.
   3.5.   Ortofosfat acid de disodiu • 2H2O.
   3.6.   Fază mobilă HPLC: se dizolvă 3,88 g ortofosfat diacid de potasiu (3.4) și 1,19 g ortofosfat acid de disodiu • 2 H2O (3.5) într-un litru de apă.
   pH-ul soluției rezultate este 6,2.
   3.7.   Hârtie indicatoare universală, pH 1-11.
   4.   APARATURĂ
   4.1.   Aparatură de laborator obișnuită.
   4.2.   Hârtie de filtru rotundă, diametru 110 mm, Schleicher și Schüll nr. 575 sau echivalentă.
   4.3.   Cromatograf de lichid de înaltă performanță cu detector cu lungime de undă variabilă.
   4.4.   Coloane: lungime 120 mm; diametru interior: 4,6 mm; număr: două conectate în serie; prima coloană – Necleosil® 5 C18 sau echivalent; a doua colană - VydacTM -301-SB sau echivalent.
   5.   PROCEDURĂ
   5.1.   Pregătirea probei
   5.1.1.   Probe fluide (șampoane)
   Se cântărește cu precizie o porțiune de analizat de aproximativ 1,0 g din probă într-un cilindru gradat cu dop de sticlă sau într-un balon cotat.
   Se aduce la semn cu apă și se amestecă.
   Dacă este necesar, se filtrează soluția.
   Se determină iodatul din soluție prin intermediul HPLC, conform descrierii din secțiunea 5.2.
   5.1.2.   Probe solide (săpunuri)
   Se desparte ușor o parte din probă și se măsoară cu precizie într-un cilindru gradat, cu dop de sticlă, o porțiune de analizat de aproximativ 1,0 g. Se umple până la 50 ml cu apă și se agită puternic timp de un minut. Se centrifughează și se filtrează prin hârtie de filtru (4.1) sau se lasă amestecul să stea pentru cel puțin o noapte.
   Se agită bine soluția gelatinoasă și se filtrează printr-o hârtie de filtru (4.1).
   Se determină iodatul din filtrat prin intermediul HPLC, conform descrierii din secțiunea 5.2.
   5.2.   Cromatografie
   Debit:1 ml/min.
   Lungime de undă a detectorului (4.2): 210 nm.
   Volum de injectare: 10 μl.
   Măsurare: aria vârfului.
   5.3.   Etalonare
   În baloane cotate de 50 ml se pun cu pipeta 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, și 20,0 ml soluție stoc de iodat de sodiu (3,3). Se aduce la semn cu apă și se amestecă.
   Soluțiile astfel obținute conțin 0,01, 0,02, 0,05, 0,10, și, respectiv, 0,20 mg iodat de sodiu per mililitru.
   Se injectează o porțiune de 10 μl din fiecare soluție standard de iodat în cromatograful de lichid (4.2) și se obține o cromatogramă. Se determină suprafața vârfului pentru iodat și se trasează o curbă prin relaționarea suprafeței vârfului cu concentrația de iodat de sodiu.
   6.   CALCUL
   Se calculează conținutul de iodat de sodiu, în procente masice (% m/m), folosind formula:
   % (m/m) iodat de sodiu
   unde:
   m= este masa, în grame, a porțiunii de analizat (5.1),
   V= este volumul total al soluției probă, în mililitri, obținut conform descrierii de la 5.1,
   c= este concentrația, în miligrame pe milimetru, de iodat de sodiu, obținută din curba de etalonare (5.3).
   7.   REPETABILIATE (2)
   
   Pentru un conținut de iodat de sodiu de 0,1 % (m/m), diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în paralel pe aceeași probă nu trebuie să depășească 0,002 %.
   8.   CONFIRMARE
   8.1.   Principiu
   Într-o soluție acidificată a unui produs cosmetic, iodatul (IO3
      -) este redus la iod (I-) cu sulfit și soluția rezultată se investighează prin intermediul HPLC. Dacă un vârf având un timp de retenție corespunzător timpului de retenție al iodatului dispare după tratament cu sulfit, vârful original poate fi cel mai probabil atribuit iodatului.
   8.2.   Procedură
   Într-un flacon cotat se pune cu pipeta o porțiune de 5 ml din soluția probă obținută conform descrierii din secțiunea 5.1.
   Se reglează pH-ul soluției la valoarea 3 sau mai mică, cu acid clorhidric (3.1); hârtie indicatoare universală (3.7).
   Se adaugă trei picături de soluție de sulfit de sodiu (3.2) și se amestecă.
   Se injectează o porțiune de 10 μl de soluție în cromatograful de lichid (4.2).
   Se compară această cromatogramă cu cromatograma obținută conform descrierii de la paragraful 5 pentru aceeași probă.
   
      (1)  Aceste valori sunt date ca o indicație și corespund la mase exacte din 4.11, 4.12 și 4.13.
   
      NB: aceste soluții pot fi preparate în moduri diferite.
   
      (2)  ISO 5725.