CELEX: 31979L1067
Language: es
Date: 1979-11-13 00:00:00
Title: Primera Directiva 79/1067/CEE de la Comisión, de 13 de noviembre de 1979, sobre fijación de los métodos de análisis comunitarios para el control de determinados tipos de leche conservada parcial o totalmente deshidratada destinados a la alimentación humana

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31979L1067

Primera Directiva 79/1067/CEE de la Comisión, de 13 de noviembre de 1979, sobre fijación de los métodos de análisis comunitarios para el control de determinados tipos de leche conservada parcial o totalmente deshidratada destinados a la alimentación humana  

Diario Oficial n° L 327 de 24/12/1979 p. 0029 - 0052 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 10 p. 0150  Edición especial griega: Capítulo 13 Tomo 9 p. 0056  Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 10 p. 0150  Edición especial en español: Capítulo 13 Tomo 10 p. 0264  Edición especial en portugués: Capítulo 13 Tomo 10 p. 0264 

 PRIMERA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 13 de noviembre de 1979    sobre fijación de los métodos de análisis   comunitarios para el control de determinados tipos de   leche conservada parcial o totalmente deshidratada   destinados a la alimentación humana     ( 79/1067/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica   Europea ,    Vista la Directiva 76/118/CEE del Consejo , de 18 de   diciembre de 1985 , relativa a la aproximación de las   legislaciones de los Estados miembros sobre determinados   tipos de leche conservada parcial o totalmente   deshidratada destinados a la alimentación humana (1) ,   en particular , su artículo 11 ,    Considerando que el artículo 11 de la Directiva   76/118/CEE establece que la composición de   determinados tipos de leche conservada parcial o   totalmente deshidratada debe ser controlada por   métodos de análisis comunitarios ;    Considerando que es aconsejable adoptar una primera serie   de métodos cuyo estudio ha sido concluido ;    Considerando que las medidas establecidas en la   presente Directiva se ajustan al dictamen emitido por el   Comité permanente de productos alimenticios ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros tomarán todas las medidas   oportunas para que los análisis necesarios para el control   de los criterios que figuran en el Anexo I se lleven a cabo   con arreglo a los métodos descritos en el Anexo II .    Artículo 2    En caso de que se indique la existencia de métodos   alternativos para efectuar una misma determinación , el   análisis de la muestra podrá realizarse mediante   cualquiera de dichos métodos . En el acta de la prueba   a que se refiere el Anexo II deberá señalarse el   método empleado .    Artículo 3    Los Estados miembros aplicarán las disposiciones   legales , reglamentarias y administrativas necesarias para   cumplir la presente Directiva en un plazo de dieciocho meses   a partir de su notificación , e informará de ello   inmediatamente a la Comisión .    Artículo 4    Los destinatarios de la presente Directiva serán los   Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 13 de noviembre de 1979 .    Por la Comisión    Étienne DAVIGNON    Miembro de la Comisión    (1) DO n º L 24 de 30 . 1 . 1976 , p. 49 .    ANEXO I    ÁMBITO DE APLICACIÓN DE LOS PRIMEROS   MÉTODOS DE ANÁLISIS COMUNITARIOS DE APLICACIÓN   EN LA DIRECTIVA SOBRE DETERMINADOS TIPOS DE LECHE   CONSERVADA PARCIAL O TOTALMENTE DESHIDRATADA    I . Disposiciones generales    II . Determinación de la cantidad de materia seca     - leche evaporada rica en materia grasa   [ según el método 1 ( Anexo II ) ] ,     - leche evaporada [ según el método 1   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada evaporada [ según el   método 1 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada evaporada [ según el   método 1 ( Anexo II ) ] ,     - leche condensada [ según el método 1   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada condensada [ según   el método 1 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada condensada [ según el   método 1 ( Anexo II ) ] ,    III . Determinación del contenido en humedad     - leche en polvo rica en materia grasa   [ según el método 2 ( Anexo II ) ] ,     - leche en polvo [ según el método 2   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada en polvo [ según el   método 2 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada en polvo [ según el   método 2 ( Anexo II ) ] .    IV . Determinación de la materia grasa     - leche evaporada rica en materia grasa   [ según el método 3 ( Anexo II ) ] ,     - leche evaporada [ según el método 3   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada evaporada [ según el   método 3 ( Anexo II ) ] ,     - leche evaporada [ según el método 3   ( Anexo II ) ] ,     - leche condensada [ según el método 3   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada condensada [ según   el método 3 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada condensada [ según el   método 3 ( Anexo II ) ] ,     - leche en polvo rica en materia grasa   [ según el método 4 ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada en polvo [ según el   método 4 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada en polvo [ según el   método ( Anexo II ) ] .    V . Determinación de la sacarosa     - leche condensada [ según el método 5   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada condensada [ según el   método 5 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada condensada [ según el   método 5 ( Anexo II ) ] .    VI . Determinación del ácido láctico y de los   lactatos     - leche en polvo rica en materia grasa [ según   el método 6 ( Anexo II ) ] ,     - leche en polvo [ según el método 6   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada en polvo [ según el   método 6 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada en polvo [ según el   método 6 ( Anexo II ) ] .    VII . Determinación de la actividad de la fosfatasa     - leche en polvo rica en materia grasa   [ según el método 7 u 8 ( Anexo II ) ] ,     - leche en polvo [ según el método 7 u 8   ( Anexo II ) ] ,     - leche semidesnatada en polvo [ según el   método 7 u 8 ( Anexo II ) ] ,     - leche desnatada en polvo [ según   el método 7 u 8 ( Anexo II ) ] .    ANEXO II    MÉTODOS DE ANÁLISIS RELATIVOS A LA COMPOSICIÓN   DE DETERMINADOS TIPOS DE LECHE CONSERVADA PARCIAL O   TOTALMENTE DESHIDRATADA DESTINADOS AL CONSUMO HUMANO    DISPOSICIONES GENERALES    1 . PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA EL ANÁLISIS   QUÍMICO    1.1 Leche evaporada rica en materia grasa    Leche evaporada    Leche semidesnatada evaporada    Leche desnatada evaporada    Agitar el bote cerrado dándole la vuelta .   Abrir el bote y transvasar la leche lentamente a un   segundo recipiente que pueda cerrarse   herméticamente , mezclándola mediante   sucesivos transvases ; asegúrese de que todos los   restos de grasa y de leche adheridos al caso y al   fondo del bote se han mezclado con la muestra .   Cierre el recipiente . Si el contenido no   apareciera homogéneo , póngalo a calentar al   baño maría a 40 ° C . Agitar vigorosamente   cada 15 minutos . Dos horas más tarde , saque el   recipiente del baño maría y deje que se enfríe   a temperatura ambiente . Levante la tapa y mezcle   cuidadosamente el contenido con la ayuda de una   cuchara o de una espátula ( si la grasa se ha   desemulsionado , no es conveniente proceder al   análisis de la muestra ) . Consérvese en lugar fresco .    1.2 Leche condensada    Leche semidesnatada condensada    Leche desnatada condensada    Botes :    Caliente el bote cerrado al baño maría   de 30 a 40 ° C durante unos 30 minutos . Abra   el bote y mezcle cuidadosamente su contenido con una   espátula o con una cuchara , efectuando movimientos   ascendentes , descendentes y circulares , con el   fin de obtener una íntima mezcla de las capas   superiores e inferiores con el conjunto del contenido .   Asegúrese de que los restos de leche adheridos   al casco y al fondo del bote se han mezclado   con la muestra . Siempre que sea posible ,   transvase el contenido a un segundo recipiente dotado   de un sistema de cierre estanco . Cierre el   recipiente y consérvelo en lugar fresco .    Tubos :    Corte el fondo y transvase el contenido a un   recipiente dotado de un sistema de cierre estanco .   Después corte el tubo en el sentido de su   longitud , despegue todas las materias adheridas al   interior del tubo y mézclelas cuidadosamente con   el resto del contenido . Conserve el recipiente en   lugar fresco .    1.3 Leche en polvo rica en materia grasa    Leche en polvo    Leche semidesnatada en polvo    Leche desnatada en polvo    Transvase la leche en polvo a un recipiente   limpio y seco ( con cierre estanco ) con una   capacidad equivalente al doble del volumen del   polvo . Cierre inmediatamente el recipiente y mezcle   íntimamente la leche en polvo agitándolo y   dándole vueltas sucesivamente . Durante la   preparación de la muestra se ha de evitar ,   siempre que sea posible , exponer la leche en polvo   al aire atmosférico , para reducir al mínimo   la absorción de agua .    2 . REACTIVOS    2.1 Agua    2.1.1 Cuando se utilice el agua para soluciones ,   disoluciones o lavados , se ha de utilizar agua   destilada , agua desmineralizada o agua de una pureza   al menos equivalente .    2.1.2 Cuando utilicemos el término « solución »   o « disolución » sin otra indicación ,   nos referiremos a solución en el agua o   disolución en el agua .    2.2 Productos químicos    Todos los productos químicos utilizados   han de ser de calidad analítica reconocida ,   salvo especificaciones especiales .    3 . EQUIPO    3.1 Lista de aparatos    Las listas de aparatos sólo contienen los   artículos de uso especializado y los artículos de   especificación especial .    3.2 Balanza analítica    El término « balanza analítica » hace   referencia a una balanza capaz de pesar con una   precisión mínima de 0,1 mg .    4 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    4.1 Cálculo del porcentaje    Salvo especificación en contra , el resultado   se calculará en porcentaje de la masa de la prueba   analizada en el laboratorio .    4.2 Número de cifras significativas    Los resultados no contendrán un número de   cifras significativas superior al justificado por la   precisión del método de análisis utilizado .    5 . REDACCIÓN DEL ACTA DE LA PRUEBA    En el acta de la prueba se indicará el   método de análisis utilizado así como los   resultados obtenidos . Además , ha de mencionar   todos los detalles del procedimiento , no   especificados en el método de análisis o   facultativos , así como las condiciones susceptibles   de haber influenciado el resultado obtenido .    El acta de la prueba deberá suministrar todas   las informaciones necesarias para la identificación   completa de la muestra .    MÉTODO 1 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO   EN MATERIA SECA     ( Cámara calefactora a 99 ° C )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar el contenido   en materia seca de los siguientes tipos de leche :     - leche evaporada rica en materia grasa ,     - leche evaporada ,     - leche semidesnatada evaporada ,     - leche desnatada evaporada ,     - leche condensada ,     - leche semidesnatada condensada ,     - leche desnatada condensada .    2 . DEFINICIÓN    Materia seca de la leche evaporada o de la leche   condensada : materia seca determinada por el   método especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    Una cantidad conocida de la muestra se diluye   con agua , luego se mezcla con arena y se deseca   a una temperatura de 99 ± 1 ° C . La masa obtenida   tras desecación constituye la masa de materia seca .   La materia seca se expresa en porcentaje de la masa   de la muestra .    4 . REACTIVOS    Arena de cuarzo o arena de mar ( tamaño de   los granos : 0,18 - 05 mm , tratada con ácido   clorhídrico , pasada a través de un tamiz   de 500 micras y retenida por un tamiz de   180 micras ) . Ha de corresponder al test de control   que se indica a continuación :    Calentar unos 25 g de arena durante 2 horas en   la cámara calefactora ( punto 5.3 ) , tal como se   indica en los puntos 6.1 a 6.3 . Añadir 5 ml.   de agua , calentar de nuevo en la cámara   calefactora durante 2 horas , enfriar y volver   a pesarlos . La diferencia entre los dos pesajes no   ha de ser superior a 0,5 mg .    Llegado el caso , tratar la arena durante 3 días   con ácido clorhídrico al 25 % ; mezclar de vez   en cuando . Lavarla con agua hasta que desaparezca   la reacción ácida o hasta que el agua del   lavado esté exenta de cloruro . Secarla   a 160 ° C y repetir el test tal como indicado   anteriormente .    5 . EQUIPO    5.1 Balanza analítica    5.2 Cápsulas metálicas , preferentemente   de niquel , de aluminio o de acero inoxidable .   Las cápsulas han de estar dotadas de tapaderas que   se adapten perfectamente pero que puedan ser   fácilmente levantadas . Las dimensiones más   idóneas son : diámetro de 60 a 80 mm ,   profundidad de unos 25 mm .    5.3 . Cámaras calefactoras de desecación   a presión atmosférica , bien ventiladas y   controladas por termostato , con la temperatura   regulada a 99 ± 1 ° C . Es muy importante que   la temperatura del conjunto de la cámara calefactora   sea uniforme .    5.4 Aparato desecador equipado de un indicador   higrométrico , lleno de gel de sílice   activado recientemente o de un desecante equivalente .    5.5 Cortas barritas de vidrio , una de cuyas   extremidades será plana y de una longitud   similar a las dimensiones interiores de las cápsulas   metálicas ( punto 5.2 ) .    5.6 Baño de agua hirviendo .    6 . MODO DE OPERACIÓN    6.1 Coloque en la cápsula ( punto 5.2 ) unos   25 g. de arena ( punto 4 ) y una corta barrita   de vidrio ( punto 5.5 ) .    6.2 Caliente la cápsula , la tapadera y el   contenido , con la tapadera levantada , durante 2 horas   en la cámara calefactora ( punto 5.3 ) .    6.3 Coloque de nuevo la tapadera en la   cápsula y pase ésta al aparato desecador   ( punto 5.4 ) . Deje enfriar a temperatura   ambiente y pese con una precisión mínima de   0,1 mg. ( Mo ) .    6.4 Inclinando la tapadera , amontone la arena en   un lado de la cápsula . Introduzca en el espacio   libre que queda aproximadamente 1,5 g de la muestra si   se trata de leche condensada azucarada y 3,0 g si   se trata de leche condensada no azucarada .   Vuelva a colocar la tapadera y pese con una   precisión mínima de 0,1 mg ( M1 ) .    6.5 Retire la tapadera , añada 5 ml de agua   y mezcle los líquidos con la barrita de vidrio   ( punto 5.5 ) , luego la arena y la parte líquida .   Deje la barrita en la mezcla .    6.6 Coloque la cápsula en el baño de agua   hirviendo ( punto 5.6 ) hasta que el agua se evapore   ( generalmente unos 20 minutos ) . Remueva la mezcla   de vez en cuando con la barrita para que la   masa se airee bien y no se aglutine tras la   desecación . Coloque la barrita en el interior de   la cápsula .    6.7 Coloque la cápsula y la tapadera durante   1 h 30 en la cámara calefactora .    6.8 Vuelva a poner la tapadera , transfiera   la cápsula al aparato desecador y déjela   que se enfríe allí hasta alcanzar la   temperatura ambiente ; pese con una precisión   mínima de 0,1 mg .    6.9 Destapar la cápsula y calentarla , junto   con su tapadera , durante 1 hora en la   cámara calefactora .    6.10 Repita la operación del punto 6.8 .    6.11 Repita las operaciones descritas en los   puntos 6.9 y 6.8 hasta que entre dos pesajes   sucesivos la diferencia no sea superior a   0,5 mg o que aumente la masa . En este último   caso , emplee el pesaje con la masa más   baja que se obtuvo en los cálculos ( punto 7.1 ) .   Asegúrese de que el peso final anotado sea M2g .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    El contenido en materia seca , expresado en porcentaje   de la masa de muestra , se indica según la fórmula :     ( M1 - M2 ) / ( M1 - M0 ) × 100    en donde :    M0 = masa , en gramos , de la cápsula , de su   tapadera y de la arena , tras la operación del   punto 6.3 .    M1 = masa , en gramos , de la tapa , de la cápsula ,   de la arena y de la muestra tras la operación del   punto 6.4 .    M2 = masa , en gramos , de la tapadera , de la cápsula ,   de la arena y de la muestra desecada , tras la operación   del punto 6.11 .    7.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas , efectuadas simultáneamente o inmediatamente   una después de otra según el mismo análisis de   la misma muestra y en las mismas condiciones , no ha   de exceder 0,2 g de materia seca por 100 g de producto .    8 . CáLCULO DEL CONTENIDO EN MATERIAS SÓLIDAS   TOTALES Y DEL CONTENIDO EN MATERIAS SÓLIDAS NO GRASAS   EN LA LECHE    8.1 . El contenido en materia sólida total de los   distintos tipos de leche condensada viene dado por :     - el contenido en materia seca total ( obtenido   según el método 1 ( anexo II ) ) ,     - el contenido en sacarosa ( obtenido según el   método 5 ( anexo II ) ) .    8.2 . El contenido en materia sólida no grasa   de los distintos tipos de leche evaporada viene dado por :     - el contenido en materia seca total ( obtenido según   el método 1 ( anexo II ) ) ,     - el contenido en sacarosa ( obtenido según el   método 5 ( anexo II ) ) ,     - el contenido en materia grasa ( obtenido según   el método 3 ( anexo II ) ) .    8.3 . El contenido en materia sólida no grasa de   los distintos tipos de leche evaporada viene dado por :     - el contenido en materia seca total ( obtenido   según el método 1 ( anexo II ) ) ,     - el contenido en materia grasa ( obtenido según   el método 3 ( anexo II ) ) .    MÉTODO 2 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN HUMEDAD     ( Cámara calefactora a 102 ° C )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar la pérdida de   masa durante el proceso de desecado de los tipos de   leche citados a continuación :     - leche en polvo rica en materia grasa ,     - leche en polvo ,     - leche semidesnatada en polvo ,     - leche desnatada en polvo .    2 . DEFINICIÓN    Contenido en humedad : pérdida de masa durante   el proceso de desecado determinado por el método   especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    La masa residual de la parte de prueba se determina   tras desecado a presión atmosférica en una cámara   calefactora a 102 ± 1 ° C hasta obtención de   una masa constante . La pérdida de masa se calcula   en porcentaje de la masa de muestra .    4 . EQUIPO    4.4.1 . Balanza analítica    4.2 . Cápsulas , de preferencia de cristal , de   niquel , de aluminio o de acero inoxidable . Las   cápsulas han de estar dotadas de tapaderas que se   adapten perfectamente pero que pueden ser fácilmente   levantadas . Las dimensiones más idóneas son :   diámetro de 60 a 80 mm , profundidad de unos 25 mm .    4.3 . Cámara calefactora a presión atmosférica ,   bien ventiladas y controladas por termostato , con la   temperatura regulada a 102 ± 1 ° C . Es muy importante   que la temperatura del conjunto de la cámara calefactora   sea uniforme .    4.4 . Aparato desecador equipado de un indicador   higrométrico , lleno de gel de sílice activado   recientemente o de un desecante equivalente .    5 . MODO DE OPERACIÓN    5.1 . Quite la tapadera de la cápsula ( punto 4.2 )   y coloque tapadera y cápsula en la cámara calefactora   ( punto 4.3 ) durante 1 hora .    5.2 . Vuelva a poner la tapadera , transfiera la   cápsula al aparato desecador ( punto 4.4 ) y deje que   se enfríe allí hasta alcanzar la temperatura ambiente ;   pese con una precisión de 0,1 mg ( M0 ) .    5.3 . Coloque en la cápsula unos 2 g de muestra de   leche seca , ponga la tapadera sobre la cápsula y   proceda rápidamente pesar la cápsula equipada de   su tapadera con una precisión de 0,1 mg ( M1 ) .    5.4 . Retire la tapadera y coloque cápsula y tapadera   durante 2 horas en la cámara calefactora .    5.5 . Ponga de nuevo la tapadera , transfiera la   cápsula tapada al aparato desecador y deje que se   enfríe allí hasta alcanzar la temperatura ambiente ;   pese rápidamente con una precisión de 0,1 mg .    5.6 . Destape la cápsula y caliéntela , junto con   su tapadera , durante 1 hora en la cámara calefactora .    5.7 . Repita la operación del punto 5.5 .    5.8 . Repita las operaciones de los puntos 5.6 y   5.5 hasta que los sucesivos pesajes no difieran en más   de 0,5 mg o que la masa aumente . En este último caso ,   emplee el pesaje con la masa más baja que obtuvo en   los cálculos ( punto 6.1 ) . Asegúrese de que el   peso final anotado sea M2g .    6 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    6.1 . Modo de cálculo    Calcule la pérdida de masa de la muestra durante   el proceso de desecado , expresada en porcentaje de   la masa , utilizando la fórmula :     ( M1 - M2 ) / ( M1 - M0 ) × 100    en donde :    M0 = masa , en gramos , de la cápsula y de su   tapadera , tras la operación del punto 5.2 .    M1 = masa , en gramos , de la cápsula , de su   tapadera y de la muestra , tras la operación del   punto 5.3 .    M2 = masa , en gramos , de la cápsula , de la   tapadera y de la muestra final , tras la operación   del punto 5.5 .    6.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   paralelas , efectuadas simultáneamente o inmediatamente   una después de la otra según el mismo análisis   de la misma muestra y en las mismas condiciones , no   ha de exceder 0,1 g de agua por 100 g de producto .    MÉTODO 3 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN   MATERIA GRASA ( MÉTODO ROESE-GOTTLIEB )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar el contenido en   materia grasa de los siguientes tipos de leche :     - leche evaporada rica en materia grasa ,     - leche evaporada ,     - leche semidesnatada evaporada ,     - leche desnatada evaporada ,     - leche condensada ,     - leche semidesnatada condensada ,     - leche desnatada condensada .    2 . DEFINICIÓN    Contenido en materia grasa de los distintos tipos   de leche evaporada o de leche condensada : el contenido   en materia grasa determinado por el método especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    El contenido en materia grasa se determina por   extracción de la materia grasa de una solución   amoniacal-alcohólica de la muestra con ayuda de   óxido dietílico y de éter de petróleo , evaporación   de los disolventes , pesaje de los residuos y cálculo   en porcentaje de la muestra , según el método   Roese-Gottlieb .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos han de conformarse con las   condiciones requeridas en la prueba simulada ( punto 6.1 ) .   Llegado el caso , podrá destilarse de nuevo los   reactivos en presencia de 1 g de grasa de mantequilla   por 100 ml de disolvente .    4.1 . Solución de amoniaco , más o menos 25 %   ( m/m ) de NH3 ( densidad a 20 ° C , unos 0,91 g/ml )   o una solución más concentrada de una concentración   conocida .    4.2 . Etanol a 96 ± 2 % ( v/v ) o , en su ausencia ,   etanol desnaturalizado con metanol , etilmetilcetona   o éter de petróleo .    4.3 . Óxido dietílico , exento de peróxidos .    Nota 1    Para asegurarse de que el óxido dietílico está   exento de peróxidos , añadir a 10 ml de óxido   contenidos en una pequeña probeta con tapón , de   vidrio , enjuagada previamente con un poco de óxido   dietílico 1 ml , de una solución con un 10 % de   yoduro de potasio , recientemente preparada . Agitar   y dejar reposar durante 1 minuto . No ha de aparecer   coloración amarilla alguna en ninguna de las dos capas .    Nota 2    El óxido dietílico puede ser mantenido exento   de peróxidos adicionando una hoja de cinc húmeda   previamente sumergida durante 1 minuto en una solución   ácida diluida de sulfato de cobre y posteriormente   lavada con agua . Para 1 litro de óxido dietílico ,   utilizar unos 8 000 mm² de hoja de cinc , cortada   en bandas suficientemente largas para llegar a la mitad   del recipiente como mínimo .    4.4 Éter de petróleo , destilante entre 30 y 60 ° C .    4.5 . Mezcla de disolventes , preparada inmediatamente   antes de su empleo mediante la mezcla de igual volumen   de óxido dietílico ( punto 4.3 ) y de éter de   petróleo ( punto 4.4 ) . ( Se puede sustituir la   mezcla de disolventes , siempre que sea indicado , por   el óxido dietílico o por el éter de petróleo . ) .    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica    5.2 . Tubos o frascos de extracción apropiados ,   dotados de tapones de vidrio esmerilado , o de otro   tipo de cierre insensible a la acción de los disolventes   empleados .    5.3 . Frascos de fondo plano y pared delgada ,   de 150 a 250 ml de capacidad .    5.4 . Cámara calefactora de desecado a presión   atmosférica , bien ventilada , controlada por termostato   ( temperatura a 102 ± 1 ° C ) .    5.5 . Gránulos destinados a facilitar la ebullición ,   exentos de materia grasa , no porosos , no desmenuzables ,   como por ejemplo perlas de vidrio o trocitos de carburo   de silicio ( el empleo de estos gránulos es facultativo ;   ver al respecto el punto 6.2.1 ) .    5.6 . Sifón correspondiente a los tubos de extracción .    5.7 . Centrifugadora .    6 . MODO DE OPERACIÓN    6.1 . Prueba simulada    Al tiempo que efectúa la determinación de la materia   grasa de la muestra , efectué una prueba simulada   con 10 ml de agua utilizando el mismo tipo de aparato   de etracción , los mismos reactivos en las mismas   proporciones y el mismo modo de operación que el   descrito a continuación , salvo el punto 6.2.2 .   Si el valor de la prueba simulada es superior a 0,5 mg ,   habrá que verificar los reactivos y el o los reactivos   impuros habrán de ser purificados o sustituidos .    6.2 . Dosificación    6.2.1 . Seque el frasco ( punto 5.3 ) ( eventualmente   después de haber depositado los materiales ) ( punto 5.5 )   facilitando una ebullición moderada durate la   evaporación de los disolventes ) en la cámara   calefactora ( punto 5.4 ) durante una media hora a   1 hora . Deje enfriar el frasco hasta que adquiera la   temperatura de la sala de las balanzas y pese el frasco   ya enfriado , con una precisión de 0,1 mg .    6.2.2 . Agite la muestra preparada de 5 g y pese   inmediatamente después con una precisión de 1 mg ,   directamente o por diferencia , 4 g de leche evaporada   o 2 a 2,5 g de leche condensada en el aparato de   extracción ( punto 5.2 ) . Añada agua hasta un   volumen de 10,5 ml y agite suavemente calentando al   mismo tiempo ligeramente ( 40 a 50 ° C ) hasta la   total dispersión del producto . La muestra ha de   estar totalmente dispersada ya que en caso contrario   habrá que repetir la determinación .    6.2.3 . Añada 1,5 ml de la solución de amoníaco   ( 25 % ) ( punto 4.1 ) o un volumen correspondiente   de una solución más concentrada y mezclar   convenientemente .    6.2.4 . Añada 10 ml de etanol ( punto 4.2 ) y   mezcle los líquidos suavemente , pero totalmente ,   en el aparato de extracción que se mantuvo abierto .    6.2.5 . Añada 25 ml de óxido dietílico   ( punto 4.3 ) . Enfríe si es necesario el aparato   bajo el agua corriente . Cierre el aparato , agítelo   enérgicamente y déle la vuelta en varias ocasiones   durante 1 minuto .    6.2.6 . Retire el tapón con precaución y añada   25 ml de éter de petróleo ( punto 4.4 ) utilizando   los primeros mililitros para enjuagar el tapón y el   interior del cuello del aparato y dejando que se deslicen   los líquidos de enjuague al interior del aparato .   Cierre el aparato volviendo a colocar el tapón ,   agite y dé vueltas al aparato en varias ocasiones   durante 30 segundos . Si no se prevé centrifugado   durante la operación indicada en el punto 6.2.7 ,   no lo agite demasiado enérgicamente .    6.2.7 . Deje reposar el aparato hasta que la capa   líquida superior se vuelva nítida y se separe   claramente de la fase acuosa . Se puede realizar   también la separación con ayuda de una centrifugadora   adecuada . ( punto 5.7 )    Nota    Si se utiliza un centrifugadora cuyo motor no es   trifásico , pueden producirse chispas y por ello   habrá que estar atento para evitar una explosión   o un incendio como consecuencia de la presencia de   vapores de éter ( en caso de ruptura de un tubo ,   por ejemplo ) .    6.2.8 . Retire el tapón y enjuáguelo , así   como el interior del cuello del aparato , con unos   mililitros de la mezcla de disolventes ( punto 4.5 )   y deje que los líquidos del enjuague se deslicen al   interior del aparato . Transvase con mucho cuidado ,   lo más que pueda , la capa superior al frasco   ( punto 6.2.1 ) mediante decantación o con ayuda   de un sifón ( punto 5.6 ) .    Nota    Si el transvase no se realiza con ayuda de un sifón ,   puede ser que necesitemos añadir un poco de agua   para realzar la separación de las dos capas con el   fin de facilitar la decantación .   6.2.9 . Enjuague el interior y el exterior del cuello   del aparato o la punta y la parte inferior del sifón   con unos mililitros de la mezcla de disolventes . Deje   que los líquidos del enjuague del exterior del aparato   se deslicen al interior del frasco y que los del interior   del cuello y del sifón se deslicen al interior del aparato   de extracción .    6.2.10 . Proceda a una segunda extracción repitiendo   las operaciones descritas en los puntos 6.2.5 a 6.2.9   incluido , pero utilizando únicamente 15 ml de óxido   dietílico y 15 ml de éter de petróleo .    6.2.11 . Efectúe una tercera extracción procediendo   tal como se indica en el punto 6.2.10 , pero sin realizar   el enjuague final ( punto 6.2.9 )    Nota    En el caso de la leche desnatada evaporada y de   la leche desnatada condensada , no es necesario efectuar   esta tercera extracción .    6.2.12 . Elimine con cuidado por evaporación o   destilación el máximo de disolvente ( incluido el   etanol ) . Si el frasco fuera de pequeña capacidad ,   habrá que eliminar un poco de disolvente de la manera   anteriormente indicada tras cada extracción .    6.2.13 . Cuando ya no exista olor alguno de disolvente ,   caliente el frasco , acostado , durante 1 hora , en la   cámara calefactora .    6.2.14 . Retire el frasco de la cámara calefactora ,   déjelo enfriar hasta que adquiera la temperatura   de la sala de las balanzas y pese con precisión de   0,1 mg .    6.2.15 . Repita las operaciones de los puntos 6.2.13   y 6.2.14 calentando por períodos de 30 a 60 minutos   hasta que dos pesajes sucesivos sólo difieran en   menos de 0,5 mg o que aumente la masa . En este último   caso , emplee el pesaje más bajo que obtuvo en los   cálculos ( punto 7.1 ) . Asegúrese de que el peso   final anotado sea M1g .    6.2.16 . Añada 15 a 25 ml de éter de petróleo   para verificar si la materia extraída es totalmente   soluble . Caliente ligeramente y agite el disolvente   mediante un movimiento circular hasta que se disuelva   toda la materia grasa .    6.2.16.1 . Si la materia extraída es totalmente   soluble en éter de petróleo , la masa de materia   grasa es la diferencia entre el pesaje del punto 6.2.1   y el pesaje del punto 6.2.15 .    6.2.16.2 . Si aparecieran materias insolubles o   siempre en caso de duda , extraiga completamente la   materia grasa contenida en los frascos mediante repetidos   lavados con éter de petróleo caliente , dejando que   la materia no disuelta se deposite antes de cada   decantación . Enjuague tres veces el exterior del   cuello del frasco . Caliente el frasco , acostado ,   durante 1 hora en la cámara calefactora y déjelo   que se enfríe tal como se indicó anteriormente   ( punto 6.2.1 ) hasta que adquiera la temperatura de   la sala de las balanzas ; pese con una precisión de   0,1 mg . La masa de la materia grasa es la diferencia   entre el pesaje del punto 6.2.15 y este pesaje final .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    La masa expresada en gramos de la materia grasa   extraída viene dada por la siguiente fórmula :     ( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )    y el contenido en materia grasa de la muestra ,   expresado en porcentaje , por la fórmula :     ( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 ) /S × 100    en donde :    M1 = masa , en gramos , del frasco M conteniendo la   materia grasa tras la operación del punto 6.2.15 .    M2 = masa , en gramos , del frasco M tras la operación   del punto 6.2.1 o , en el caso de que aparezcan materias   insolubles o en caso de duda , tras la operación   del punto 6.2.16.2 .    B1 = masa , en gramos , del frasco B de la prueba   simulada tras la operación el punto 6.2.15 .    B2 = masa , en gramos , del frasco B , tras la   operación del punto 6.2.1 o , en el caso de que   aparezcan materias insolubles o en caso de duda , tras   la operación del punto 6.2.16.2 .    S = masa , en gramos , de la toma de prueba utilizada .    7.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   efectuadas simultáneamente o inmediatamente una después   de la otra por el mismo analista sobre la misma muestra   y en las mismas condiciones , no ha de exceder 0,05 g   de materia grasa por 100 g de producto .    MÉTODO 4 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO   EN MATERIA GRASA ( MÉTODO ROESE-GOTTLIEB )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar el contenido   en materia grasa de las siguientes leches :     - leche en polvo rica en materia grasa ,     - leche en polvo ,     - leche semidesnatada en polvo ,     - leche desnatada en polvo .    2 . DEFINICIÓN    El contenido en materia grasa de los distintos   tipos de leche en polvo es el contenido en materia   grasa determinado por el método especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    El contenido en materia grasa se determina   por extracción de la materia grasa de una solución   amoniacal-alcohólica de la muestra con ayuda   de óxido dietílico y de éter de petróleo ,   evaporación de los disolventes , pesaje de los   residuos y cálculo en porcentaje de la masa   de la muestra , según el principio del método   de Roese-Gottlieb .    4 . REACTIVOS    Todos los reactivos han de conformarse con las   condiciones requeridas en la prueba simulada ( punto 6.1 ) .   Llegado el caso , podrá destilarse de nuevo los   reactivos en presencia de 1 g de grasa de mantequilla   por 100 ml de disolvente .    4.1 . Solución de amoníaco , más o menos   25 % ( m/m ) de NH3 ( densidad a 20 ° C , unos   0,91 g/ml ) una solución más concentrada de una   concentración conocida .    4.2 . Etanol , a 96 ± 2 % ( v/v ) o , en su   ausencia , etanol desnaturalizado con metanol ,   etilmetilcetona o éter de petróleo .    4.3 . Óxido dietílico , exento de peróxidos .    Nota 1    Para asegurarse de que el óxido dietílico está   exento de peróxidos , añadir a 10 ml de óxido   contenidos en una pequeña probeta con tapón ,   de vidrio , enjuagada previamente con un poco de   óxido dietílico , 1 ml de una solución con   un 10 % de yoduro de potasio , recientemente preparada .   Agitar y dejar reposar durante 1 minuto . No ha de   aparecer coloración amarilla alguna en ninguna de   las dos capas .    Nota 2    El óxido dietílico puede , ser mantenido   exento de peróxidos adicionando una hoja de cinc   húmeda previamente sumergida durante 1 minuto   en una solución ácida diluida de sulfato de cobre y   posteriormente lavada con agua . Para 1 litro de   óxido dietílico , utilizar unos 8 000 mm² de   hoja de cinc , cortada en bandas suficientemente largas   para llegar a la mitad del recipiente como mínimo .     4.4 . Éter de petróleo , destilante entre   30 y 60 ° C .    4.5 . Mezcla de disolventes , preparada inmediatamente   antes de su empleo mediante la mezcla de igual   volumen de óxido dietílico ( punto 4.3 ) y de   éter de petróleo ( punto 4.4 ) . ( Se puede sustituir   la mezcla de disolventes , siempre que sea indicado ,   por el óxido dietílico o por el éter de   petróleo . )    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica    5.2 . Tubos o frascos de extracción apropiados ,   dotados de tapones de vidrio esmerilado , o de otro   tipo de cierre insensible a la acción de los   disolventes empleados .    5.3 . Frascos de fondo plano y pared delgada ,   de 150 a 250 ml de capacidad .    5.4 . Cámara calefactora de desecado a presión   atmosférica , bien ventilada , controlada por   termostato ( temperatura a 102 ± 1 ° C ) .    5.5 . Gránulos destinados a facilitar la   ebullición , exentos de materia grasa , no porosos ,   no desmenuzables , como por ejemplo perlas de vidrio   o trocitos de carburo de silicio ( el empleo de   estos gránulos es facultativo ; ver al respecto   el punto 6.2.1 ) .    5.6 . Baño de agua a 60 - 70 ° C .    5.7 . Sifón correspondiente a los tubos de   extracción .    5.8 . Centrifugadora .    6 . MODO DE OPERACIÓN    6.1 . Prueba simulada    Al tiempo que efectúa la determinación   de la materia grasa de la muestra , efectúe una prueba   simulada con 10 ml de agua utilizando el mismo tipo   de aparato de extracción , los mismos reactivos   en las mismas proporciones y el mismo modo de operación   que el descrito a continuación , salvo el   punto 6.2.2 . Si el valor de la prueba simulada   es superior a 0,5 mg , habrá que verificar los   reactivos y el o los reactivos impuros habrán   de ser purificados o sustituidos .    6.2 . Dosificación    6.2.1 . Seque el frasco ( punto 5.3 ) ( eventualmente   después de haber depositado los materiales ( punto 5.5 )   facilitando una ebullición moderada durante la   evaporación de los disolventes ) en la cámara   calefactora ( punto 5.4 ) durante una media hora a   1 hora . Deje enfriar el frasco hasta que adquiera   la temperatura de la sala de las balanzas y pese el   frasco ya enfriado , con una precisión de 0,1 mg .    6.2.2 . En el aparato de extracción ( punto 5.2 )   pese con una precisión de 1 mg , bien directamente ,   bien por diferencia , aproximadamente 1 g de leche   en polvo o 1,5 g de leche semidesnatada en polvo o de   leche desnatada en polvo . Añada 10 ml de agua y   agite hasta la total dispersión de la leche ( en   algunas muestras habrá que proceder a calentarlas ) .    6.2.3 . Añada 1,5 ml de la solución de   amoníaco ( 25 % ) ( punto 4.1 ) o un volumen   correspondiente de una solución más concentrada   y calentar al baño de agua ( punto 5.6 ) durante   15 minutos , de 60 a 70 ° C , agitando de vez en   cuando . Posteriormente enfriarlo , por ejemplo   mediante agua corriente .    6.2.4 . Añada 10 ml de etanol ( punto 4.2 )   y mezcle los líquidos suavemente , pero totalmente ,   en el aparato de extracción que se mantuvo abierto .    6.2.5 . Añada 25 ml de óxido dietílico   ( punto 4.3 ) . Enfríe , si es necesario , el aparato   bajo el agua corriente . Cierre el aparato , agítelo   enérgicamente y déle la vuelta en varias ocasiones   durante 1 minuto .    6.2.6 . Retire el tapón con precaución y añada   25 ml de éter de petróleo ( punto 4.4 ) utilizando   los primeros mililitros para enjuagar el tapón   y el interior del cuello del aparato y dejando   que se deslicen los líquidos en enjuague al   interior del aparato . Cierre el aparato volviendo   a colocar el tapón , agite y dé vueltas   al aparato en varias ocasiones durante 30 segundos .   Si no se prevé centrifugado durante la operación   indicada en el punto 6.2.7 , no lo agite demasiado   enérgicamente .    6.2.7 . Deje reposar el aparato hasta que la   capa líquida superior se vuelva nítida y se   separe claramente de la fase acuosa . Se puede   realizar también la separación con ayuda   de una centrifugadora adecuada . ( punto 5.7 )    Nota    Si se utiliza una centrifugadora cuyo motor   no es trifásico , pueden producirse chispas   y por ello habrá que estar atento para evitar   una explosión o un incendio como consecuencia   de la presencia de vapores de éter ( en caso   de ruptura de un tubo , por ejemplo ) .    6.2.8 . Retire el tapón y enjuáguelo , así   como el interior del cuello del aparato , con   unos mililitros de la mezcla de disolventes ( punto 4.5 )   y deje que los líquidos del enjuague se deslicen   al interior del aparato . Transvase con mucho   cuidado , lo más que pueda , la capa superior al   Frasco ( punto 6.2.1 ) mediante decantación   o con ayuda de un sifón ( punto 5.6 ) .    Nota    Si el transvase no se realiza con ayuda de un sifón ,   puede ser que necesitemos añadir un poco de agua   para realzar la separación de las dos capas   con el fin de facilitar la decantación .    6.2.9 . Enjuague el interior y el exterior del cuello   del aparato o la punta y la parte inferior   del Sifón con unos mililitros de la mezcla   de disolventes . Deje que los líquidos del   enjuague del exterior del aparato se deslicen   al interior del frasco y que los del interior   del cuello y del sifón se deslicen al interior   del aparato de extracción .    6.2.10 . Proceda a una segunda extracción   repitiendo las operaciones descritas en los   puntos 6.2.5 a 6.2.9 incluido , pero utilizando   únicamente 15 ml de óxido dietílico y   15 ml de éter de petróleo .    6.2.11 . Efectúe una tercera extracción   procediendo tal como se indica en el punto 6.2.10 ,   pero sin realizar el enjuague final ( punto 6.2.9 )    Nota    En el caso de polvos de leche desnatada , no   es necesario realizar la tercera extracción .    6.2.12 . Elimine con cuidado por evaporación   o destilación el máximo de disolvente ( incluido   el etanol ) . Si el frasco fuera de pequeña capacidad ,   habrá que eliminar un poco de disolvente de la   manera anteriormente indicada tras cada extracción .    6.2.13 . Cuando ya no exista olor alguno de   disolvente , caliente el frasco , acostado , durante   1 hora , en la cámara calefactora .    6.2.14 . Retire el frasco de la cámara calefactora ,   déjelo enfriar hasta que adquiera la temperatura   de la sala de las balanzas y pese con precisión   de 0,1 mg .    6.2.15 . Repita las operaciones de los   puntos 6.2.13 y 6.2.14 calentando por períodos de   30 a 60 minutos hasta que dos pesajes sucesivos   sólo difieran en menos de 0,5 mg o que aumente la   masa . En este último caso emplee el pesaje   más bajo que obtuvo en los cálculos ( punto 7.1 ) .   M1 es la masa obtenida en g .    6.2.16 . Añada 15 a 25 ml de éter de petróleo   para verificar si la matería extraída es totalmente   soluble . Caliente ligeramente y agite el disolvente   mediante un movimiento circular hasta que se disuelva   toda la materia grasa .    6.2.16.1 . Si la materia extraída es totalmente   soluble en éter de petróleo , la masa de materia   grasa es la diferencia entre el pesaje del   punto 6.2.1 y el pesaje del punto 6.2.15 .    6.2.16.2 . Si aparecieran materias insolubles   o siempre en caso de duda , extraiga completamente   la materia grasa contenida en los frascos mediante   repetidos lavados con éter de petróleo caliente ,   dejando que la materia no disuelta se deposite   antes de cada decantación . Enjuague tres veces   el exterior del cuello del frasco . Caliente el   frasco , acostado , durante 1 hora en la cámara   calefactora y déjelo que se enfríe tal como   se indicó anteriormente ( punto 6.2.1 ) hasta que   adquiera la temperatura de la sala de las balanzas ;   pese con una precisión de 0,1 mg . La masa de la   materia grasa es la diferencia entre el pesaje   del punto 6.2.15 y este pesaje final .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    La masa expresada en gramos de la materia grasa   extraída viene dada por la siguiente fórmula :     ( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )    y el contenido en materia grasa de la muestra ,   expresado en porcentaje , por la fórmula :     ( ( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 ) ) /S × 100    en donde :    M1 = masa , en gramos , del frasco M conteniendo   la materia grasa tras la operación del punto 6.2.15 .    M2 = masa , en gramos , del frasco M tras la   operación del punto 6.2.1 o , en el caso de que   aparezcan materias insolubles o en caso de duda ,   tras la operación del punto 6.2.16.2 .    B1 = masa , en gramos , del frasco B de la prueba   simulada tras la operación del punto 6.2.15 .    B2 = masa , en gramos , del frasco B , tras la   operación del punto 6.2.1 o , en el caso de que   aparezcan materias insolubles o en caso de duda ,   tras la operación del punto 6.2.16.2 .    S = masa , en gramos , de la toma de prueba utilizada .    7.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de las   determinaciones efectuadas simultáneamente   o inmediatamente una después de la otra por el   mismo analista sobre la misma muestra y en las   mismas condiciones , no ha de exceder 0,2 g de materia   grasa por 100 g de producto , salvo en el caso   de la leche desnatada en polvo , en donde la   diferencia no ha de exceder 0,1 g de materia grasa por   100 g de producto .    MÉTODO 4 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO   EN SACAROSA ( MÉTODO POLARIMÉTRICO )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar el contenido   en sacarosa de los siguientes tipos de leche :     - leche condensada ,     - leche semidesnatada condensada ,     - leche desnatada condensada .    Las muestras no han de contener azúcar modificado .    2 . DEFINICIÓN    El contenido en sacarosa de los distintos tipos   de leche condensada es el contenido en sacarosa   determinado por el método especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    El método se basa en el principio de la inversión   de Clerget : un tratamiento suave mediante un ácido   hidroliza completamente la sacarosa . La lactosa   y los restantes azúcares no son prácticamente   hidrolizados . El contenido en sacarosa se deduce   del cambio del poder rotatorio de la solución .    Para ello se prepara un líquido filtrado de la   muestra , sin mutarrotación debida a la lactosa ,   tratando la solución con amoníaco , mediante   neutralización y purificación mediante sucesivas   adiciones de soluciones de acetato de cinc y de   hexaferrocianuro de potasio .    En una parte del líquido filtrado , la sacarosa   se hidroliza en condiciones determinadas .    Partiendo de los poderes rotatorios del líquido filtrado   antes y después de la inversión , se calcula   el contenido en sacarosa mediante unas fórmulas .    4 . REACTIVOS    4.1 . Solución de acetato de cinc , M : disolver   21,9 g de acetato de cinc cristalizado Zn   (C2H3O2)2 · 2H2O y 3 ml de ácido acético   glacial en agua y completar hasta 100 ml .    4.2 . Solución de hexaferrocianuro ( II ) de   potasio , 0,25 M : disolver 10,6 g de hexaferrocianuro ( II )   de potasio K4[Fe(CN)6] · 3H2O en agua y   completar hasta 100 ml .    4.3 . Solución de ácido clorhídrico   6,35 ± 0,20 M ( 20 a 22 % ) o 5,0 ± 0,2 M ( 16 a 18 % ) .    4.4 . Solución diluida de amoníaco   2,0 ± 0,2 M ( 3,5 % ) .    4.5 . Solución diluida de ácido acético   2,0 ± 0,2 M ( 12 % ) .    4.6 . Indicador azul de bromotimol , solución   al 1 % ( m/v ) en el etanol .    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica , sensibilidad 10 mg .    5.2 . Tubo de polarímetro de 2 dm de longitud ,   calibrado exactamente .    5.3 . Polarímetro o sacarímetro :    a ) Polarímetro de luz de sodio o de luz verde   de mercurio ( lámpara de vapor de mercurio con   prisma o pantalla Wratten especial n º 77 A ) , que   permita una lectura de una precisión como   mínimo igual a 0,05 grados de ángulo .    b ) Sacarímetro con escala internacional ,   que utilice la luz blanca que pasa a través de un   filtro de 15 mm de solución con un 6 % de bicromato   de potasio o bien luz de sodio y que permita la   lectura con una precisión como mínimo igual   a 0,1 grados de la escala sacarímetrica internacional .    5.4 . Baño de agua a una temperatura de 60 ± 1 ° C .    6 . MODO DE OPERACIÓN    6.1 . Control de método    Con vistas a normalizar el método , los reactivos   y los aparatos , se procederá a un control del   método tal como indicamos a continuación   mediante un doble análisis de una mezcla de 100 g   de leche y 18 g de sacarosa pura o de 110 g de leche   desnatada y 18 g de sacarosa pura que corresponden   a 40 g de leche condensada que contenga un 45 %   de sacarosa . Calcular el contenido en sacarosa   con la ayuda de las fórmulas que se indican   en el punto 7 utilizando la fórmula 1 , para   M , F , P , ( la cantidad de leche pesada y el   contenido en materia grasa y en proteínas de   dicha leche ) y , en la fórmula 2 , para M ,   la cifra de 40 g . La media de los valores   registrados no ha de diferir de dicho valor   ( 45 % ) en más de 0,2 % .    6.2 . Dosificación    6.2.1 . En un recipiente cilíndrico de borde   redondeado de vidrio y de 100 ml , pese exactamente ,   con un margen de error de 10 mg , unos 40 g de la   muestra convenientemente mezclada . Añada 50 ml de   agua caliente ( 80 a 90 ° C ) y mezcle cuidadosamente .    6.2.2 . Transvase cuantitativamente la mezcla   a un matraz graduado de 200 ml , enjuague el recipiente   cilíndrico con sucesivas cantidades de agua a 60 ° C ,   hasta que el volumen total sea de 120 a 150 ml .   Mezcle y deje enfriar a temperatura ambiente .    6.2.3 . Añada 5 ml de la solución de amoníaco   diluida ( punto 4.4 ) . Mezcle de nuevo y deje   reposar durante 15 minutos .    6.2.4 . Neutralice el amoníaco añadiendo   una cantidad equivalente de la solución diluida   de ácido acético ( punto 4.5 ) . Determine   previamente la cantidad exacta de ml mediante   determinación de la graduación de la solución   de amoníaco diluida utilizando el azúl de bromotimol   como indicador ( punto 4.6 ) . Mezcle a continuación .    6.2.5 . Añada , mezclando suavemente por rotación   del matraz inclinado , 12,5 ml de solución de acetato   de cinc ( punto 4.1 ) .    6.2.6 . De la misma manera que para la solución   de acetato , añada 12,5 ml de solución de   hexaferrocianuro ( II ) de potasio ( punto 4.2 ) .    6.2.7 . Caliente el contenido del matraz hasta   20 ° C y añada agua ( a 20 ° C ) hasta la línea   graduada de 200 ml .    Nota    Hasta el momento , todas las adiciones de agua o   de reactivos se realizarán evitando se formen   burbujas y , por esta misma razón , todas las   mezclas se efectuarán mediante rotación del   matraz en vez de por agitación violenta . Si se   constata la presencia de burbujas antes de llegar   a la rayita de 200 ml , podemos eliminarlas conectando   el matraz con una bomba de vacío e imprimiéndole   un movimiento de rotación .    6.2.8 . Tape el matraz con un tapón seco y   mezcle íntimamente agitándolo enérgicamente .    6.2.9 . Déjelo reposar durante unos minutos ,   luego fíltrelo a través de papel filtrante seco .   Tire los 25 primeros ml del líquido filtrado .    6.2.10 . Polarización directa : determinar   la rotación óptica del líquido filtrado   a 20 ± 1 ° C .    6.2.11 . Inversión : pipetee , en un matraz   graduado de 50 ml , 40 ml del líquido filtrado   obtenido de la manera indicada anteriormente . Añada   6,0 ml de ácido clorhídrico 6,35 M o 7,6 ml   de ácido clorhídrico 5,00 M ( punto 4.3 ) .    Coloque el matraz en un baño de agua a 60 ° C   durante 15 minutos , estando sumergido el matraz   hasta donde empieza su cuello . Mezcle por rotación   durante los 5 primeros minutos durante los   cuales el contenido deberá haber alcanzado   la temperatura del baño . Enfríe hasta 20 ° C   y rellene con agua a 20 ° C ; mezcle y déjelo   reposar durante 1 hora a esta temperatura .    6.2.12 . Polarización tras inversión    Determinar el poder rotatorio de la solución   intervertida a 20 ± 0,2 ° C ( cuando la   temperatura T del líquido contenido en el tubo   de polarización difiera en más de 0,2 ° C   durante la medición , se ha de aplicar la   corrección de temperatura indicada en el punto 7.2 ) .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    Calcule el contenido en sacarosa con ayuda   de las siguientes fórmulas :    1 . V = M/100 ( 1,08 F + 1,55 P )    2 . S = ( D - 1,25 I ) /Q × ( V - v ) /V ×   V/ ( L × M ) %    S = contenido en sacarosa    M = masa de la muestra expresada en g.    F = porcentaje de materia grasa de la muestra    P = porcentaje de proteínas ( N × 6,38 ) de la muestra    V = volumen en ml en el que se diluye la muestra   antes del proceso de filtrado    v = corrección expresada en ml para el volumen   del precipitado formado durante el proceso de purificado    D = lectura polarimétrica directa ( polarización   antes de inversión )    I = lectura polarimétrica tras inversión    L = longitud en dm del tubo del polarímetro    Q = factor de inversión cuyos valores   se indican a continuación .    Notas    a ) Si pesamos exactamente 40 g de leche condensada   y utilizamos un polarímetro de luz de sodio ,   con escala en grados de ángulo y un tubo de   polarímetro de 2 dm de longitud a 20,0 ± 0,1 ° C ,   podemos calcular el contenido en sacarosa de las   leches condensadas normales ( C = 9 ) mediante   la siguiente fórmula :    S = ( D - 1,25 I ) ( 2,833 - 0,00612 F - 0,00878 P )    b ) Si efectuamos la medición de la polarización   tras inversión a temperatura diferente de 20 ° C ,   las cifras que obtengamos habrá que multiplicarlos por :     ( 1 + 0,0037 ( T - 20 ) )    7.2 . Valores del factor de inversión Q    Las fórmulas siguientes dan unos valores precisos   de Q según las diversas fuentes de luz con   correcciones , dado el caso , para la concentración   y la temperatura :    Luz de sodio y polarímetro con escala en   grados de ángulo :    Q = 0,8825 + 0,0006 ( C - 9 ) - 0,0033 ( T - 20 ) .    Luz verde de mercurio y polarímetro con escala   en grados de ángulo :    Q = 1,0392 + 0,0007 ( C - 9 ) - 0,0039 ( T - 20 ) .    Luz blanca con pantalla de bicromato y sacarímetro   con escala sacarimétrica internacional :    Q = 2,549 + 0,0017 ( C - 9 ) - 0,0095 ( T - 20 ) .    En las fórmulas anteriores :    C = porcentaje de azúcares totales en la solución   intervertida , tras la lectura polarimétrica .    T = temperatura de la solución intervertida   durante la lectura con el polarímetro .    Nota 1    El porcentaje de azúcares totales C en la   solución intervertida puede calcularse a partir   de la lectura directa y de la variación posterior   a la inversión según el método habitual ,   utilizando los valores habituales de rotación   específica de la sacarosa , de la lactosa y del   azúcar intervertido .    La corrección 0,0006 ( C - 9 ) etc. sólo   es exacta si C es aproximadamente igual a 9 ;   dado que en el caso de la leche condensada normal C   es aproximadamente 9 , se puede despreciar esta   corrección .    Nota 2    Las variaciones de temperatura de 1 ° C respecto   a 20 ° C influencian ligeramente la lectura directa .   En cambio , en caso de existir variaciones de más   de 0,2 ° C durante la lectura tras inversión ,   será necesario proceder a una corrección . La   corrección - 0,0033 ( T - 20 ) , etc. sólo   es exacta con temperaturas comprendidas entre 18 y   22 ° C .    7.3 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   efectuadas simultáneamente o inmediatamente una   después de la otra por el mismo analista y sobre la   misma muestra y en las mismas condiciones no será   superior a 0,3 g de sacarosa por 100 gramos de leche   condensada .    MÉTODO 6 : DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN ÁCIDO   LÁCTICO Y EN LACTATOS    1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite obtener el contenido en ácido   láctico y en lactatos de los siguientes tipos de leche :     - leche en polvo rica en materia grasa ,     - leche en polvo ,     - leche parcialmente desnatada en polvo ,     - leche desnatada en polvo .    2 . DEFINICIÓN    Contenido en ácido láctico y en lactatos de los   distintos tipos de leche en polvo : el contenido en   ácido láctico y en lactatos determinados por el   método especificado .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    La materia grasa , las proteínas y la lactosa se   eliminan simultáneamente de una solución de la   muestra mediante la adición de sulfato de cobre de   hidróxido de calcio , y posterior filtrado .    El ácido láctico y los lactatos del líquido   filtrado se transforman en acetaldehído por acción   del ácido sulfúrico concentrado en presencia de   sulfato de cobre ( II ) .    El contenido en ácido láctico se determina por   colorimetría utilizando p-hidroxidifenilo .    El contenido en ácido láctico y en lactatos   se expresa en mg de ácido láctico por 100 g de   materias sólidas no lipídicas .    4 . REACTIVOS    4.1 . Solución de sulfato de cobre ( II ) : disuelva   250 g de sulfato de cobre ( II ) ( CuSO4 · 5H2O ) en agua y   diluya a 1 000 ml .    4.2 . Suspensión de hidróxido de calcio .    4.2.1 . Triture 300 g de hidróxido de calcio   [ CA ( OH ) 2 ] en un mortero con agua , utilizando   un total de 900 ml . La suspensión ha de estar   recientemente preparada antes de proceder a su   utilización .    4.2.2 . Triture 300 g de hidróxido de calcio [ Ca   ( OH ) 2 ] en un mortero con agua , utilizando un total de   1 400 . La suspensión ha de estar preparada recientemente   antes de proceder a su utilización .    4.3 . Solución de ácido sulfúrico - sulfato de   cobre ( II ) : añada a 300 ml de ácido sulfúrico   95,5 = 97,0 % ( m/m ) de H2SO4 , 0,5 ml de la solución   de sulfato de cobre ( II ) ( punto 4.1 ) .    4.4 . Solución de p-hidroxidifenilo ( C6H5C6H4OH ) :   disuelva agitando y calentando ligeramente 0,75 g   de p-hidroxidifenilo en 5 ml de una solución acuosa   de hidróxido de sodio que contenga 5 g de NaOH por   100 ml . Diluya hasta 50 ml con agua en un frasco   graduado . Conserve la solución en un frasco de   vidrio ahumado , al abrigo de la luz y en lugar fresco .   No utilice la solución si cambiara el color o   enturbiara . El período máximo de conservación   es de 72 horas .    4.5 . Solución patrón de ácido láctico :   disuelva un poco antes del empleo 0,1067 g de lactato   de litio ( CH3CHOHCOOLi ) en agua y diluya en 1 000 ml   en un frasco graduado . Un ml de esta solución   corresponde a 0,1 mg de ácido láctico .    4.6 . Leche reconstituida patrón : analice previamente   varias muestras de leche en polvo de alta calidad .   Para la preparación de la curva de calibración ,   tome la muestra que tenga el menor contenido en ácido   láctico , menos de 30 mg de ácido láctico por 100 g   de materias sólidas no lipídicas . Siga el modo   de operación descrito en el punto 6.2.1 y en el   6.2.2 indicado a continuación .    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica .    5.2 . Espectrofotómetro que permita la lectura   de una longitud de onda de 570 nm .    5.3 . Baño de agua a 30 ± 2 ° C .    5.4 . Mortero y maja .    5.5 . Papel de filtro ( Schleicher y Schull 595 ,   Whatman 1 o similar ) .    5.6 . Tubos de análisis pírex o similares   ( dimensiones 25 × 150 mm ) .    Nota    Todos los instrumentos de vidrio que se utilicen   han de estar perfectamente limpios y ser utilizados   sólo para esta determinación . Antes del lavado ,   enjuague los instrumentos de cristal que contienen el   precipitado con ácido clorhídrico concentrado .    6 . MODO DE OPERACIÓN    6.1 . Prueba simulada    Efectúe una prueba simulada vertiendo 30 ml de   agua en un tubo graduado de 50 ml y tratándolo tal   como se indica en los puntos 6.2.4 a 6.2.11 incluído .   Si los resultados de la prueba simulada respecto al   agua sobrepasan el equivalente a 20 mg de ácido   láctico por 100 g de materias sólidas no lipídicas ,   habrá que controlar los reactivos y sustituir el ( o los )   reactivo(s) impuro(s) . Trate la prueba simulada   simultáneamente con las muestras .    6.2 . Dosificación    Nota : Evite la contaminación por impurezas , como   por la saliva y la transpiración .    6.2.1 . Determine el contenido en materias sólidas   no lipídicas ( a ) de la muestra restando de 100 el   contenido en materia grasa ( según el método 4 )   y el contenido en humedad ( según el método 2 ) .    6.2.2 . Pese 1 000/ ( ( a ) - 10 ) g de la muestra   con una precisión de 0,1 g . Añada esta cantidad   de muestra a 100 ml de agua y mezcle cuidadosamente .    6.2.3 . Pipetee 5 ml de la solución obtenida en un   tubo graduado de 50 ml y diluya con agua hasta 30 ml .    6.2.4 . Añada lentamente y agitando , 5 ml de la   solución de sulfato de cobre ( punto 4 ) y déjelo   reposar durante 10 minutos .    6.2.5 . Añada lentamente y agitando 5 ml de la   suspensión de hidróxido de calcio ( punto 4.2.1 )   o 10 ml de la suspensión de hidróxido ( punto 4.2.2 ) .    6.2.6 . Diluya en 50 ml con agua , agite vigorosamente ,   déjelo reposar durante 10 minutos y fíltrelo . Tire   las primeras gotas de líquido filtrado .    6.2.7 . Pipetee 1 ml del líquido filtrado en un tubo   de análisis ( punto 5.6 ) .    6.2.8 . Añada al contenido del tubo , sirviéndose   de una bureta o de una pipeta graduada , 6 ml de la   solución de ácido sulfúrico y de sulfato de cobre   ( punto 4.3 ) . Mézclelo .    6.2.9 . Caliente en el baño de agua hirviendo   durante 5 minutos . Enfrie a la temperatura ambiente   bajo agua corriente .    6.2.10 . Añada 2 gotas de reactivo al p-hidroxidifenilo   ( punto 4.4 ) y agite vigorosamente para repartir   uniformemente el reactivo en todo el líquido . Sumerja   todo en el baño de agua a 30 ± 2 ° C y manténgalo   allí durante 15 minutos agitando de vez en cuando .   6.2.11 . Sumerja el tubo en el baño de agua hirviendo   durante 90 segundos . Enfríelo a la temperatura ambiente   bajo agua corriente .    6.2.12 . Mida la densidad óptica con respecto a la   prueba simulada ( punto 6.1 ) tres horas más tarde ,   en la longitud de onda que se indica en el punto 5.2 .    6.2.13 . Si la densidad es superior a la del punto   más alto de la curva de contraste , repita la prueba   utilizando una dilución conveniente del líquido   filtrado obtenido en el punto 6.2.6 .    6.3 . Elaboración de la curva de contraste    6.3.1 . Pipetee 5 ml de la leche reconstituida   ( punto 4.6 ) en cinco cilindros graduados de 50 ml .   Pipetee en estos tubos 0 , 1 , 2 , 3 y 4 ml de la   solución patrón ( punto 4.5 ) , de manera que se   obtenga una gama de contraste correspondiente a 0 , 20 ,   40 , 60 y 80 mg de ácido láctico añadido por   100 g de materias sólidas no lipídicas de polvos   de leche .    6.3.2 . Diluya con agua hasta unos 30 ml y trátelo   como se indica en los puntos 6.2.4 a 6.2.11 incluído .    6.3.3 . Mida las densidades ópticas de los elementos   de la gama del contraste ( punto 6.3.1 ) con respecto a   la prueba simulada ( punto 6.1 ) , en la longitud de   onda que se indica en el punto 5.2 . Traslade dichas   densidades ópticas a un diagrama en función de las   cantidades de ácido láctico indicadas en el   punto 6.3.1 : 0 mg , 20 mg , 40 mg , 60 mg y 80 mg ,   por 100 g de materias sólidas no lipídicas . Trace   la línea recta más adecuada que pase por los puntos   y prepare la curva de contraste desplazando dicha   línea paralelamente a ella misma de manera que pase   por el origen .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    Convierta la densidad óptica medida según el   punto 6.2.12 ó 6.2.13 en mg de ácido láctico por   100 g de materias sólidas no lipídicas de la muestra   remitiéndose a la curva de contraste . Multiplique   este resultado por el factor de disolución en el caso   que el líquido filtrado hubiera sido diluído según   el punto 6.2.13 .    7.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos determinaciones   efectuadas simultáneamente o inmediatamente una   después de otra por el mismo analista y en las mismas   condiciones sobre la misma muestra no podrá ser   superior a 8 mg de ácido láctico por 100 gramos   de materias sólidas no lipídicas en muestras con   un contenido en ácido láctico de hasta 80 mg .   En valores superiores , dicha diferencia no podrá   ser superior al 10 % del valor más bajo .    MÉTODO 7 : DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA   FOSFATASA ( MÉTODO DE SANDERS Y SAGER , MODIFICADO )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    Este método permite determinar la actividad de la   fosfatasa en los siguientes tipos de leche :     - leche en polvo rica en materia grasa ,     - leche en polvo ,     - leche semidesnatadaen polvo ,     - leche desnatada en polvo .   2 . DEFINICIÓN    La actividad de la fosfatasa de la leche en polvo se   mide por la cantidad de fosfatasa alcalina activa   presente . Se expresa por la cantidad de fenol liberado   en µg por ml de leche reconstituida , determinada   por el procedimiento que se indica a continuación .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    La actividad de la fosfatasa de la leche en polvo   se determina por el poder de la fosfatasa de liberar el   fenol del fenilfosfato disódico . La cantidad de fenol   liberado en las condiciones prescritas se determina   mediante una medición espectofotométrica de la   coloración desarrollada gracias al reactivo de Gibbs .    4 . REACTIVOS    4.1 . Solución A    Tampón de borato y de hidróxido de bario :   pH 10,6 ± 0,1 a 20 ° C .    Disolver 25,0 g de hidróxido de bario   [ BA (OH)2 · 8H2O ] en agua y diluir hasta 500 ml .    Disolver 11,0 g de ácido bórico ( H3BO3 ) en agua   y diluir hasta 500 ml .    Calentar las dos soluciones a una temperatura de   50 ° C y mezclar .    Agitar y enfriar la mezcla a la temperatura ambiente .    Ajustar el pH a 10,6 ± 0,1 con la solución de   hidróxido de bario y filtrar .    Conservar la solución en un recipiente bien cerrado .    Antes de utilización , diluir la solución tampón   con la misma cantidad de agua .    4.2 . Solución B    Tampón para el desarrollo del color .    Disolver 6 g de metaborato de sodio ( NaBO2 )   ( o 12,6 g de NaBO2 · 4H2O ) y 20 g de cloruro de   sodio ( NaCl ) en agua y diluir hasta 1 000 ml .    4.3 . Solución C    Substrato en solución tampón .    4.3.1 . Disolver 0,5 g de fenilfosfato disódico   ( Na2C6H3PO4 - 2H2O ) en 4,5 ml de solución B   ( punto 4.2 ) . Añadir dos gotas de solución E   ( punto 4.5 ) y dejar reposar durante 30 minutos .   Extraer el color formado con 2,5 ml de alcohol butílico   ( punto 4.10 ) . Si fuera necesario , repetir la   extracción del color . Tras separación , tirar el   alcohol butílico . Esta solución se puede conservar   algunos días en un refrigerador . Desarrollar y   extraer el color una vez más antes de su empleo :    4.3.2 . Pipetear 1 ml de esta solución en un matraz   graduado de 100 ml y añadir la solución A hasta la   marca . Preparar el substrato en solución tampón   inmediatamente antes de su empleo .    4.4 . Solución D    Precipitante    Disolver 3,0 g de sulfato de cinc ( ZnSO4 · 7H2O ) y   0,6 g de sulfato de cobre II ( CuSO4 · 5H2O ) en   agua hasta alcanzar 100 ml .    4.5 . Solución E    Reactivo de Gibbs .    Disolver 0,040 g de dibromo-2,6 quinona cloro-1,4 ímido   ( O · C6H2Br2 · NCl ) en 10 ml de etanol a 96 % .   Conservar la solución en un frasco de vidrio ahumado   en un refrigerador . Tirar este reactivo cuando cambie   en color .    4.6 . Solución tampón de disolución de la   coloración    Diluir 10 ml de la solución tampón B para el   desarrollo del color ( punto 4.2 ) con agua y completar   hasta 100 ml .    4.7 . Solución de sulfato de cobre    Disolver 0,05 g de sulfato de cobre ( II )   ( CuSO4 · 5H2O ) en agua y completar hasta 100 ml .    4.8 . Solución patrón de fenol    Disolver 0,200 ± 0,001 g de fenol puro en agua y   llegar hasta 100 ml en un matraz graduado . Esta   solución se conserva durante algunos meses en   refrigerador . Diluir 10 ml de esta solución con agua   hasta llegar a 100 ml . Esta solución diluída   contiene 200 µg de fenol por ml y se puede utilizar   para la preparación de soluciones más diluidas .    4.9 . Agua destilada , hervida .    4.10 . Alcohol n-butílico .    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica    5.2 . Baño de agua mantenido por termostato   a 37 ± 1 ° C .    5.3 . Espectrofotómetro que permita la lectura   en longitud de onda de 610 nm .    5.4 . Papel de filtro ( Schleicher y Schull 597 ,   Whatman 42 o similar ) .    5.5 . Baño de agua hirviendo .    5.6 . Hoja de aluminio .    6 . MODO DE OPERACIÓN    Precauciones a tomar    1 . Evitar la exposición directa a la luz del sol .    2 . Limpiar perfectamente todos los instrumentos de   vidrio , tapones y materiales de transvase . Se recomienda   enjuagarlos y hervirlos con agua o tratarlos al vapor .    3 . Evitar el empleo de materias plásticas   ( tapones por ejemplo ) que pudieran contener fenol .    4 . Evitar cuidadosamente la presencia de saliva ,   dado que ésta contiene fosfatasa .    6.1 . Preparación de la muestra    6.1.1 . Disolver 10 g de la muestra , pesados con   una precisión de 0,1 g , en 90 ml de agua . La   temperatura de disolución de los polvos nunca será   superior a 35 ° C .    6.2 . Determinación    6.2.1 . Introducir en cada uno de los dos tubos de   análisis 1 ml de leche reconstituida preparada como   se indica en el punto 6.1.1 .    6.2.2 . Calentar uno de los tubos en agua hirviendo   durante 2 minutos . Cubrir el tubo y el baño de agua   ( punto 5.5 ) o , por ejemplo , un recipiente cilíndrico   de borde redondeado , con una hoja de aluminio ( punto 5.6 )   para que todo el tubo se caliente . Enfriar en agua   fría a temperatura ambiente . Este tubo servirá   para la prueba simulada . A partir de este punto ,   tratar los dos tubos de idéntica manera .    6.2.3 . Añadir 10 ml de la solución C ( punto 4.3.2 ) .   Mezclar y colocar los tubos en el baño de agua a   37 ° C ( punto 5.2 ) .    6.2.4 . Incubar durante 60 minutos en el baño de   agua , agitando de vez en cuando .    6.2.5 . Inmediatamente después , meter los tubos en el   baño de agua hirviendo y calentar durante 2 minutos ,   enfriar a temperatura ambiente en agua fría .    6.2.6 . Añadir 1 ml de la solución D ( punto 4.4 ) ,   mezclar y filtrar en un papel de filtro seco ; tirar los   primeros líquidos filtrados hasta obtener un líquido   nítido .    6.2.7 . Introducir 5 ml de cada líquido filtrado   en tubos de análisis , añadir 5 ml de solución B   ( punto 4.2 ) y 0,1 ml de solución E ( punto 4.5 ) .   Mezclar .    6.2.8 . Dejar que se precise el calor a temperatura   ambiente y al abrigo de la luz solar durante 30 minutos .    6.2.9 . Medir la densidad óptica de la solución   de la muestra con respecto a la de la prueba simulada   en la longitud de onda indicada en el punto 5.3 .    6.2.10 . Repetir la determinación si la densidad   óptica de la solución es superior a la de la   solución patrón en 20 µg de fenol preparada   según el punto 7 .    Si dicho límite es sobrepasado , diluir un volumen   conveniente de leche reconstituida , según el punto 6.1.1 ,   con un volumen adecuado de esta leche cuidadosamente   hervida , como se indica en el punto 6.2.2 , para   inactivar la fosfatasa presente .    7 . PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CONTRASTE    7.1 . Pipetear en cuatro matraces de 100 ml ,   1 , 3 , 5 y 10 ml de la solución patrón   diluida según el punto 4.8 y completar hasta   la marca con agua ; estas soluciones contienen   respectivamente 2 , 6 , 10 y 20 µg de fenol por ml .    7.2 . Pipetear 1 ml de cada solución   indicadora ( punto 7.1 ) en los tubos de   análisis para obtener una serie de muestras   conteniendo 0 ( valor cero ) , 2 , 6 , 10 y 20 µg   de fenol . La simulación se obtiene pipeteando 1 ml   de agua .    7.3 . Pipetear sucesivamente en cada tubo   de análisis 1 ml de la solución de sulfato   de cobre ( punto 4.7 ) , 5 ml de solución   tampón coloreada ( punto 4.6 ) , 3 ml de agua   y 0,1 ml de la solución E ( punto 4.5 ) ;   mezclar .    7.4 . Dejar reposar los tubos de análisis a   temperatura ambiente y al abrigo de la luz solar   directa durante 30 minutos .    7.5 . Medir la densidad óptica del contenido   de los tubos con respecto al valor cero , en   la longitud de onda indicada en el punto 5.3 .    7.6 . Establecer la curva de contraste anotando los   valores de las densidades ópticas en función de   las cantidades de fenol en µg tal como están   indicadas en el punto 7.2 .    8 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    8.1 . Modo de cálculo    8.1.1 . Convertir la cifra obtenida en el   punto 6.2.9 en µg de fenol , basándose en la   curva de contraste .    8.1.2 . Calcular la actividad de la fosfatasa   expresada en µg de fenol por ml de leche   reconstituida según la fórmula siguiente :    actividad de la fosfatasa = 2,4 × P    en donde P = cantidad de fenol en µg tras   el punto 8.1.1 .    8.1.3 . Si hubiera sido necesario diluir como   se indicó en el punto 6.2.10 , multiplíquese el   resultado obtenido en el punto 8.1.2 por el   factor de disolución .    8.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos   determinaciones efectuadas simultáneamente o inmediatamente   una después de otra por el mismo analista   sobre la misma muestra y en las mismas   condiciones , no podrá ser superior a 2 µg de   fenol liberado por ml de leche reconstituida .    MÉTODO 8 : DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD   DE LA FOSFATASA ( MÉTODO ASCHAFFENBURG Y MULLEN )    1 . ÁMBITO DE APLICACIÓN    El presente método permite determinar la   actividad de la fosfatasa en los siguientes tipos de   leche :     - leche en polvo rica en materia grasa ,     - leche en polvo ,     - leche semidesnatada en polvo ,     - leche desnatada en polvo .    2 . DEFINICIÓN    La actividad de la fosfatasa de la leche   deshidratada se mide por la cantidad de   fosfatasa alcalina activa presente en el producto .   Se expresa en cantidad de p-nitrofenol liberado   en µg por ml de leche reconstituida , determinada   por el procedimiento que se explica a continuación .    3 . PRINCIPIO DEL MÉTODO    La muestra de leche reconstituida se diluye   en substrato en solución tampón ( pH 10,2 ) y   se incuba durante 2 horas a una temperatura de   37 ° C . Toda cantidad de fosfatasa alcalina   presente en la muestra liberará , en semejantes   condiciones , p-nitrofenol derivado del   p-nitrofenilfosfato disódico , el p-nitrofenol   liberado se mide mediante comparación directa   con cristales de color patrones en un calorímetro   simple de luz reflejada .    4 . REACTIVOS    4.1 . Solución tampón de carbonato de sodio   y de bicarbonato de sodio .    Disolver 3,5 g de carbonato de sodio anhidro y   1,5 g de bicarbonato de sodio en agua y diluir hasta   1 000 ml en un matraz graduado .    4.2 . Substrato en solución tampón    Disolver 1,5 g de p-nitrofenilfosfato disódico   en la solución tampón de carbonato de sodio y de   bicarbonato de sodio ( punto 4.1 ) y diluir hasta   1 000 ml en un matraz graduado .    Esta solución se mantiene estable durante un   mes en el refrigerador ( * 4 ° C ) pero habrá   que efectuar antes un test de control de color en las   soluciones conservadas de esta forma ( ver punto 6 ,   nota 3 ) .    4.3 . Precipitantes .    4.3.1 . Sulfato de cinc .    Disolver 30,0 g de sulfato de cinc ( ZnSO4 ) en   agua y completar hasta 100 ml en un matraz graduado .    4.3.2 . Hexacianoferrato ( II ) de potasio en   solución .    Disolver 17,2 g de hexacianoferrato ( II ) de   potasio trihidratado ( K4Fe(CN)6 · 3H2O ) en agua y   completar hasta 100 ml en un matraz graduado .    5 . EQUIPO    5.1 . Balanza analítica .    5.2 . Baño de agua a 37 ° ± 1 ° C ,   controlado por termostato .    5.3 . Comparador colorimétrico , con disco   especial conteniendo cristales de color patrones   calibrados en µg de p-nitrofenol por ml de leche   y dos células de 25 mm cada una .    6 . MODO DE OPERACIÓN    Precauciones a observar    1 . Tras su utilización , vaciar los tubos ,   enjuagarlos con agua , lavarlos con agua   caliente con un detergente alcalino , enjuagarlos   cuidadosamente luego con agua del grifo caliente y clara .   Finalmente , enjuagarlos con agua ; secarlos antes   de su empleo .    Las pipetas han de enjuagarse a fondo con agua   del grifo clara y fría inmediatamente después   de su utilización ; enjuagarlas con agua y   secarlas antes de su empleo .    2 . Los tapones de los tubos de análisis han de   ser enjuagados cuidadosamente con agua del   grifo caliente inmediatamente después de su   utilización ; posteriormente hay que   hervirlos en agua durante 2 minutos .    3 . El substrato en solución tampón ( punto 4.2 )   se puede conservar estable durante 1 mes , como   mínimo , en el refrigerador a una temperatura   de * 4 ° C . Toda inestabilidad se traduce por una   formación de un color amarillo . Dado que la   prueba siempre se de con respecto a un control del   producto hervido que contiene el mismo substrato   en solución tampón , se recomienda se utilice   únicamente este substrato cuando el color   indique un exceso de 10 µg , efectuándose la   lectura en una célula de 25 mm en el colorímetro   y utilizando agua destilada en la otra célula de   25 mm .    4 . Utilizar una pipeta para cada muestra y evitar   la contaminación por la saliva .    5 . Evitar en todo momento la exposición   directa a la luz solar .    6.1 . Preparación de la muestra    Disolver 10 g de polvos en 90 ml de agua .   La temperatura de disolución no ha de exceder los   35 ° C .    6.2 . Determinación    6.2.1 . Pipetear 15 ml del substrato en solución   tampón ( punto 4.2 ) en un tubo de análisis   limpio y seco , luego 2 ml de la muestra de   leche reconstituida ( punto 6.1 ) a analizar .   Cerrar el tubo con un tampón , mezclar dando   vueltas al tubo y colocarlo en un baño de agua   a 37 ° C ( punto 5.2 ) .    6.2.2 . Colocar simultáneamente en el   baño de agua un tubo de control conteniendo   15 ml de substrato en solución tampón y   2 ml de muestra de leche reconstituida hervida del   mismo tipo que la del análisis .    6.2.3 . Sacar los dos tubos del baño de agua   al cabo de 2 horas , añadir 0,5 ml de   precipitante de sulfato de cinc ( punto 4.3.1 ) ,   poner de nuevo el tapón , agitar vigorosamente y   dejar reposar durante 3 minutos . Añadir 0,5 ml   de precipitante de hexaferrocianuro ( II ) de   potasio ( punto 4.3.2 ) ; mezclar intimamente   y filtrar en papel plegado ( punto 5.4 ) ;   recoger el líquido filtrado nítido en el tubo   de análisis limpio .    6.2.4 . Transvasar el líquido filtrado a una   célula de 25 mm y comparar con respecto al   líquido filtrado de la muestra de control hervida   en el colorímetro , utilizando el disco especial   ( punto 5.3 ) .    7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS    7.1 . Modo de cálculo    La lectura directa obtenida según el   punto 6.2.4 se expresa en µg de p-nitrofenol   por ml de muestra o por ml de muestra de leche   reconstituida .    7.2 . Repetibilidad    La diferencia entre los resultados de dos   determinaciones efectuadas simultáneamente o   inmediatamente una después de otra por el mismo   analista sobre la misma muestra y en las mismas   condiciones , ha de ser inferior a 2 µg de   p-nitrofenol liberado por ml de leche reconstituida .