CELEX: 31971L0250
Language: es
Date: 1971-06-15 00:00:00
Title: Primera Directiva 71/250/CEE de la Comisión, de 15 de junio de 1971, por la que se determinan métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales

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31971L0250

Primera Directiva 71/250/CEE de la Comisión, de 15 de junio de 1971, por la que se determinan métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales  

Diario Oficial n° L 155 de 12/07/1971 p. 0013 - 0037 Edición especial en finés : Capítulo 3 Tomo 3 p. 0213  Edición especial en danés: Serie I Capítulo 1971(II) p. 0423  Edición especial sueca: Capítulo 3 Tomo 3 p. 0213  Edición especial en inglés: Serie I Capítulo 1971(II) p. 0480  Edición especial griega: Capítulo 03 Tomo 6 p. 0218  Edición especial en español: Capítulo 03 Tomo 5 p. 0003  Edición especial en portugués: Capítulo 03 Tomo 5 p. 0003 

 PRIMERA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 15 de junio de 1971    por la que se determinan métodos de análisis   comunitarios para el control oficial de los alimentos   para animales     ( 71/250/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica   Europea ,    Vista la Directiva del Consejo de 20 de julio de 1970   relativa a la introducción de métodos de toma   de muestras y de análisis comunitarios para el control   oficial de los alimentos para animales (1) y , en   particular , su artículo 2 ,    Considerando que la Directiva antes mencionada prevé   que los controles oficiales de los alimentos para   animales dirigidos a comprobar si se respetan las   condiciones establecidas en virtud de las disposiciones   legales , reglamentarias y administrativas relativas a la   calidad y la composición de los alimentos mencionados   se efectuarán según métodos de toma de muestras   y de análisis comunitarios ;    Considerando que es conveniente establecer lo antes   posible todos los métodos de análisis necesarios ,   y que una primera etapa está constituida por el   establecimiento de los métodos de determinación del   ácido cianhídrico , del calcio , de los carbonatos ,   de las cenizas brutas , de las cenizas insolubles en HCl ,   del cloro de los cloruros , de la esencia de mostaza , de   la lactosa , del potasio , del sodio , de los azúcares ,   de la teobromina , y de la urea , así como de los   métodos de determinación de los alcaloides de los   altramuces y de la actividad ureásica de los productos   de la soja ;    Considerando que las medidas previstas en la presente   Directiva se ajustan al dictamen del Comité permanente   de la alimentación animal ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros dispondrán que los análisis   para los controles oficiales de los alimentos para animales ,   en lo que se refiere a sus contenidos en ácido   cianhídrico , calcio , carbonato , cenizas brutas ,   cenizas insolubles en HCl , cloro de cloruros , esencia   de mostaza , lactosa , potasio , sodio , azúcares ,   teobromina y urea , así como a la determinación de los   alcaloides de los altramuces y de la actividad ureásica   de los productos de soja , se efectúen según los   métodos descritos en el Anexo de la presente Directiva .    Artículo 2    Los Estados miembros aplicarán , a más tardar , el   1 de julio de 1972 , las disposiciones legales ,   reglamentarias o administrativas necesarias para cumplir   las disposiciones de la presente Directiva . Informarán   de ello inmediatamente a la Comisión .    Artículo 3    Los destinatarios de la presente Directiva serán   los Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 15 de junio de 1971 .    Por la Comisión    El Presidente    Franco M. MALFATTI    (1) DO n º L 170 de 3 . 8 . 1970 , p. 2 .    ANEXO    MÉTODO DE ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES DE LOS   ALIMENTOS PARA ANIMALES    1 . INTRODUCCIÓN    Los métodos de análisis de los componentes de los   alimentos para animales son aplicables , en general , a   todos los piensos simples y compuestos . No obstante ,   determinados alimentos requieren , debido a particularidades   inherentes a su composición , modalidades analíticas   propias . Estos casos se prevén en « observaciones »   en la descripción de los métodos .    Cuando estén indicados dos o más alimentos para la   determinación de un mismo componente de un alimento ,   la elección del método aplicable , salvo indicación   en contrario , corresponderá al laboratorio de control ;   no obstante , se indicará en el boletín de análisis   el método empleado .    Preparación de la muesta para análisis    El análisis químico debe hacerse necesariamente sobre   una muestra homogénea . Por el contrario , ciertas   determinaciones macroscópicas o microscópicas , así   como la determinación de la humedad , deben hacerse   sobre la muestra en el estado en que se encuentre al   llegar al laboratorio . Para tener en cuenta esta   doble exigencia , se dividirá la muestra en dos partes .   Una de ellas será cortada en el estado en que se   encuentra ; la otra se preparará para el análisis   químico del modo que se indica seguidamente .    Dividir la muestra con ayuda de un aparato mecánico   o manualmente , después de haber mezclado cuidadosamente   la totalidad en una superficie limpia y seca . En el   último caso , es conveniente aplicar el método   de los cuartos , que consiste en tomar sucesivamente   muestras en dos sectores opuestos . Por último , tomar   para el análisis una porción de 100 g aproximadamente   y triturar , si es preciso , para que la totalidad   pase por un tamiz de malla redonda de 1 mm de   diámetro . Introducir inmediatamente esta muestra en un   recipiente seco provisto de cierre hermético al aire ,   y tapar .    Si la muestra está muy húmeda , hay que proceder   a una predesecación , para que el grado de humedad   se sitúe en un valor comprendido entre el 8 y el   12 % . Con este fin , desecar la muestra a una temperatura   adecuada en el tiempo preciso .    Reactivos y aparatos    En la descripción de los métodos de análisis   únicamente se indican los instrumentos o aparatos   especiales o que exigen normas especiales . Se considera   superfluo mencionar todos los aparatos o utensilios   que forman parte de la instrumentación corriente de   los laboratorios de control .    Por lo demás , cuando se haga referencia a agua para   las diluciones o lavados , se entenderá siempre que   se trata de agua destilada . Análogamente , cuando   se haga referencia a una solución , sin más   indicaciones , se entenderá que se trata de una   solución en agua destilada .    Expresión de los resultados    El resultado que se mencionará en el boletín de   análisis será el valor medio obtenido a partir de dos   determinaciones por lo menos . Salvo disposición en   contrario , se expresará en porcentaje de la muestra   original , tal como haya llegado al laboratorio . El   resultado no debe incluir más cifras significativas que   lo que permita la precisión del método de análisis .    2 . DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO CIANHÍDRICO    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en ácido   cianhídrico libre y combinado en forma de glucósidos   de la alimentación animal y , en particular , de los   productos de semillas de lino , de harina de mandioca   y de determinadas especies de judías .    2 . Principio    La muestra se suspende en el agua . El ácido   cianhídrico se libera bajo la acción de fermentos ,   se arrastra por destilación al vapor de agua y se recoge   en un volumen determinado de solución de nitrato de plata   acidificada . El cianuro de plata se separa por filtrado   y el exceso de nitrato de plata se valora mediante   una solución de tioacinato al amonio .    3 . Reactivos    3.1 . Suspensión de almendras dulces : triturar   20 almendras dulces limpiadas en 100 ml de agua a una   temperatura de 37 a 40 ° C . Comprobar la ausencia de   ácido cianhídrico sobre 10 ml de la suspensión ,   con ayuda de un papel picro-sódico o efectuando una   prueba en blanco como se indica en 5 en el último   apartado .    3.2 . Solución al 10 % ( p/v ) de acetato de   sodio , neutro a la fenolftaleína .    3.3 . Emulsión de antiespuma ( silicona , por   ejemplo ) .    3.4 . Acido nítrico , d : 1,40 .    3.5 . Solución de nitrato de plata : 0,02 N .    3.6 . Solución de tiocianato de amonio : 0,02 N .    3.7 . Solución saturada de sulfato de amonio férrico .    3.8 . Amoniaco , d : 0,958 .    4 . Equipo    4.1 . Estufa provista de un termostato regulado   a 38 ° C .    4.2 . Aparato de destilación por producción al vapor   de agua provisto de un refrigerante con alargadera   curvada .    4.3 . Matraces de fondo plano de 100 ml de tapón   esmerilado .    4.4 . Baño de aceite .    4.5 . Bureta graduada a 1/20 ml .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión de 5 mg , 20 g de la muestra ,   introducirlos en un matraz de 1 l de fondo plano y   añadir 50 ml de agua y 10 ml de suspensión de   almendras dulces ( 3.1 ) . Tapar el matraz y mantenerlo   durante dieciséis horas en la estufa a 38 ° C .   Refrigerar a continuación a la temperatura ambiente y   añadir 80 ml de agua , 10 ml de solución de acetato de   sodio ( 3.2 ) y una gota de emulsión antiespuma ( 3.3 ) .    Conectar el matraz al aparato de destilación al vapor   y situarlo en un baño de aceite previamente llevado   a una temperatura ligeramente superior a 100 ° C .   Destilar de 200 a 300 ml de líquido haciendo pasar en   el matraz una poderosa corriente de vapor y calentando   suavemente el baño de aceite . Recoger el   destilado en un erlenmeyer situado al resguardo de la luz   y que contenga 50 ml exactamente de solución de nitrato   de plata 0,02 N ( 3.5 ) y 1 ml de ácido nítrico ( 3.4 ) .   Prestar atención para que la alargadera del refrigerante   se sumerja en la solución de nitrato de plata .    Trasvasar el contenido del erlenmeyer a un matraz   aforado de 500 ml , completar el volumen con agua ,   agitar y filtrar . Tomar 250 ml del filtrado , añadir 1 ml   aproximadamente de solución de sulfato de amonio   férrico ( 3.7 ) y valorar en retroceso el exceso de   nitrato de plata por la solución de tiocianato de   amonio 0,02 N ( 3.6 ) suministrada por la bureta graduada   a 1/20 ml .    Efectuar en el caso en que fuera necesario un ensayo   en blanco aplicando el mismo método operatorio a 10 ml   de suspensión de almendras blandas ( 3.1 ) , a falta   de muestra para analizar .    6 . Cálculo de los resultados    Si la prueba en blanco indica un consumo de la solución   de nitrato de plata 0,02 N , sustraer este valor del   volumen consumido por el destilado de la muestra .    1 ml de AgNO30,02 N corresponde a 0,54 mg de HCN .   Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    Si la muestra contiene una cantidad importante de   sulfuros ( judías , por ej. ) , se forma un precipitado   negro de sulfuro de plata que se filtra con el sedimento   de cianuro de plata . La formación de este precipitado   entraña una pérdida de solución de nitrato de   plata 0,02 N cuyo volumen debe sustraerse del volumen   tomado en consideración para el cálculo del   contenido en HCN . Con tal fin , proceder como se indica   a continuación .    Tratar el sedimento sobre el filtro por 50 ml de   amoniaco ( 3.8 ) para disolver el cianuro de plata . Lavar   el residuo mediante amoniaco diluido y proceder a la   determinación de su contenido en plata . Convertir   el valor obtenido en ml de solución de nitrato de   plata 0,02 N .    El contenido en HCN de la muestra puede determinarse   igualmente mediante titulación del filtrado amoniacal   acidificado por el ácido nítrico .    3 . DETERMINACIÓN DEL CALCIO    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en calcio   total de los alimentos para animales .    2 . Principio    La muestra se incinera , las cenizas se tratan con   ácido clorhídrico y el calcio se precipita en forma   de oxalato de calcio . Después de disolver el   precipitado en el ácido sulfúrico , el ácido   oxálico formado se titula mediante una solución de   permanganato de potasio .    3 . Reactivos    3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,14 .    3.2 . Ácido nítrico p.a. , d : 1,40 .    3.3 . Ácido sulfúrico p.a. , d : 1,13 .    3.4 . Amoniaco p.a. , d : 0,98 .    3.5 . Solución saturada en frío de oxalato de   amonio p.a.    3.6 . Solución al 30 % ( p/v ) de ácido cítrico p.a.    3.7 . Solución al 5 % ( p/v ) de cloruro de amonio p.a.    3.8 . Solución al 0,04 % ( p/v ) de verde de   bromocresol .    3.9 . Solución de permanganato de potasio 0,1 N .    4 . Equipo    4.1 . Horno eléctrico , de circulación de aire   y termostato .    4.2 . Crisoles de incineración de platino , cuarzo   o porcelana .    4.3 . Crisoles filtrantes de cristal , porosidad G4 .    5 . Método operatorio    Pasar , con precisión de 1 mg , aproximadamente 5 g   de la muestra ( o más si fuera necesario ) , calcinarlos   a 550 ° C y trasvasar las cenizas a un vaso de 250 ml .   Añadir 40 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , 6 ml   de agua y algunas gotas de ácido nítrico ( 3.2 ) .   Llevar a ebullición y mantenerla durante treinta minutos .   Refrigerar , trasvasar la solución a un matraz aforado   de 280 ml . Lavar , completar el volumen hasta   enrasar con el indicador de nivel con agua , homogeneizar   y filtrar .    Tomar con una pipeta , según el contenido supuesto   en calcio , una cantidad alícuota que contenga de 10   a 40 mg de calcio e introducir en un vaso de 250 ml .   Añadir 1 ml de solución de ácido cítrico ( 3.6 )   y 5 ml de solución de cloruro de amonio ( 3.7 ) .   Completar el volumen a 100 ml aproximadamente mediante   agua . Llevar a ebullición , añadir de 8 a 10 gotas   de solución de verda de bromocresol ( 3.8 ) y   30 ml de solución caliente de oxalato de amonio ( 3.5 ) .   Si aparece un precipitado , disolverlo mediante adición   de algunas gotas de ácido clorhídrico ( 3.1 )    Neutralizar a continuación muy lentamente mediante   amoniaco ( 3.4 ) , agitando constantemente , hasta la   obtención de un pH del orden de 4,4 a 4,6 ( virado del   indicador ) . Colocar el vaso en un baño de agua   hirviendo , mantenerlo durante treinta minutos para   dejar reposar el precipitado que se haya formado .   Retirar el vaso del baño de agua . Dejar reposar durante   una hora y filtrar en un crisol filtrante G4 .    Lavar el vaso y el crisol con agua hasta eliminar   el exceso de oxalato de amonio ( la ausencia de cloruro   en las aguas de lavado indica que el lavado ha sido   suficiente ) .    Disolver el precipitado sobre el filtro mediante 50 ml   de ácido sulfúrico ( 3.3 ) caliente . Lavar el crisol   con agua caliente y llevar el filtrado a 100 ml   aproximadamente . Llevar la temperatura a 70-80 ° C   y titular gota a gota mediante la solución de permanganato   de potasio ( 3.9 ) hasta la obtención de una coloración   rosa persistente durante un minuto .    6 . Cálculo de los resultados    1 ml de permanganato de potasio 0,1 N corresponde a   2,004 mg de calcio . Expresar el resultado obtenido   en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    7.1 . Para los contenidos muy bajos en calcio , proceder   como se indica a continuación . Filtrar el precipitado   de oxalato de calcio sobre un papel filtro sin cenizas .   Después de lavarlo , secar el filtro y calcinarlo a   550 ° C en un crisol de platino . Recoger el residuo   mediante algunas gotas de ácido sulfúrico ( 3.3 ) ,   evaporar en seco , calcinar de nuevo a 550 ° C y   pesar . Si p representa el peso de sulfato de calcio   obtenido , el contenido en calcio de la cantidad   alícuota tomada = p por 0,2944 .    7.2 . Si la muestra está constituida únicamente   por materias minerales , proceder a la disolución   mediante ácido clorhídrico sin previa incineración .   Para los productos tales como los fosfatos   aluminocálcicos , difíciles de disolver en los   ácidos , proceder como se indica a una fusión alcalina   antes de la disolución . Mezclar íntimamente en un   crisol de platino la toma de muestra , con una mezcla de   aproximadamente 5 veces su peso , a partes iguales , de   carbonato de potasio y carbonato de sodio . Calentar   con precaución hasta la fusión completa de la mezcla .   Después de enfriar , disolver mediante ácido   clorhídrico .    7.3 . Si el contenido en magnesio de la muestra es   elevado , proceder a una segunda precipitación del   oxalato de calcio .    4 . DETERMINACIÓN DE LOS CARBONATOS    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar los carbonatos ,   convencionalmente expresados en carbonato cálcico , en   los alimentos para animales . En determinados casos , sin   embargo ( carbonato de hierro , por ejemplo ) , es   necesario emplear un método particular .    2 . Principio    Los carbonatos se descomponen por el ácido   clorhídrico ; el gas carbónico liberado se recoge   en un tubo graduado y su volumen se compara al liberado ,   en las mismas condiciones , por una cantidad conocida de   carbonato cálcico p.a.    3 . Reactivos    3.1 . Ácido clorhídrico , d : 1,10 .    3.2 . Carbonato cálcico p.a.    3.3 . Ácido sulfúrico 0,1 N aproximadamente , coloreado   por rojo de metilo .    4 . Equipo    Aparato según Scheibler-Dietrich ( v. esquema ) o   aparato similar .    5 . Método operativo    Según el contenido en carbonatos de la muestra , pesar   una toma de muestra tal como se indica a continuación :    0,5 g para los productos que contengan del 50 a   100 % de carbonatos , expresados en carbonato cálcico ;    1 g para los productos que contengan del 10 a 50 % de   carbonatos , expresados en carbonato cálcico ;    2 g a 3 g para el resto de los productos .    Introducir la toma de muestra en el frasco especial   ( 4 ) del aparato , provisto de un pequeño tubo de   material irrompible con 10 ml de ácido clorhídrido   ( 3.1 ) , y conectar el frasco al aparato . Girar el   grifo de tres vías ( 5 ) de forma que el tubo ( 1 )   comunique con el exterior . Con ayuda de un tubo móvil   ( 2 ) , con ácido sulfúrico coloreado en su interior   ( 3.3 ) y conectado al tubo graduado ( 1 ) , llevar el   nivel del líquido a la graduación cero . Girar el   grifo ( 5 ) , de forma que se pongan en comunicación   los tubos ( 1 ) y ( 2 ) , y comprobar el nivel cero .    Dejar correr lentamente el ácido clorhídrico ( 3.1 )   sobre la toma de muestra inclinando el frasco ( 4 ) .   Igualar la presión bajando el tubo ( 2 ) . Agitar el   frasco ( 4 ) hasta que cese el desprendimiento de gas   carbónico .    Restablecer la presión llevando el líquido al   mismo nivel en los tubos ( 1 ) y ( 2 ) . Hacer la   lectura después de algunos minutos , cuando el volumen   gaseoso se haya hecho constante .    Efectuar en las mismas condiciones una prueba de   comparación sobre 0,5 g de carbonato cálcico ( 3.2 ) .    6 . Cálculo de los resultados    El contenido en g de carbonatos , expresados en carbonato   cálcico , por cada cien de muestra vendrá dado por la   relación :    V por 100 / T por 2 P    en el que :    V = ml de CO2 desprendidos por la toma de muestra .    T = ml de CO2 desprendidos por 0,5 g de CaCO3 p.a.    P = peso de la toma de muestra en g .    7 . Observaciones    7.1 . Cuando la muestra sea superior a 2 kg ,   introducir previamente 15 ml de agua destilada en el   frasco ( 4 ) y mezclar antes de comenzar la prueba .   Emplear el mismo volumen de agua para la mezcla de   comparación .    7.2 . Si se emplea un aparato de un volumen diferente   del de Scheibler-Dietrich , será necesario adaptar   a dicho aparato la muestra y la sustancia de comparación   así como el cálculo de los resultados .    APARATO SEGÚN SCHEIBLER-DIETRICH PARA DETERMINAR EL   CO2 : Véase D.O.    5 . DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS BRUTAS    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   cenizas brutas de los alimentos para animales .    2 . Principio    La muestra se incinera a 550 ° C ; el residuo se pesa .    3 . Reactivos    Solución al 20 % ( p/v ) de nitrato de amonio .    4 . Equipo    4.1 . Placa calorífera .    4.2 . Horno eléctrico , con termostato .    4.3 . Crisoles de incineración de platino   o de aleación de platino y oro ( 10 % Pt ,   90 % An ) , rectangulares ( 60 por 40 por   25 mm ) o redondos ( diámetro : 60 a 75 mm , altura :   20 a 25 mm ) .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g aproximadamente   de la muestra ( 2,5 g para los productos que tengan   tendencia a hincharse ) en un crisol de incineración   previamente calcinado y tarado . Situar el crisol sobre la   placa carolífera y calentar progresivamente hasta la   carbonización de la materia . Introducir el crisol   en el horno regulado a 550 ° C más o menos 5 ° C .   Mantener a dicha temperatura hasta obtener cenizas   blancas , gris claro o rojizas , aparentemente desprovistas   de partículas carbonosas . Situar el crisol en un   desecador , dejar refrigerar y pesar inmediatamente .    6 . Cálculo de los resultados    Calcular el peso del resíduo deduciendo la tara .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    7.1 . Las cenizas de las materias   difíciles de quemar deben someterse a una primera   incineración de tres horas al menos , refrigerarse   y añadir algunas gotas de una solución al 20 % de nitrato   de amonio ( prudentemente , para evitar la dispersión   o pegadura de las cenizas ) . Continuar la calcinación   después de desecar la estufa .    Repetir si fuera necesario la operación hasta   la completa incineración .    7.2 . Para las materias que resistan el tratamiento   indicado en 7.1 , operar como se indica a continuación .   Después de una incineración de tres horas ,   recoger las cenizas mediante agua caliente y filtrar   sobre un pequeño filtro sin cenizas . Incinerar   el filtro y su contenido en el crisol inicial . Llevar el   filtrado al crisol refrigerado , evaporar en seco ,   incinerar y pesar .    7.3 . En el caso de aceites y grasas , pesar   con exactitud una toma de muestra del orden de 25 g en   un crisol de capacidad apropiada . Carbonizar   inflamando la materia por medio de una mezcla de   papel filtro sin cenizas . Después de la combustión ,   humedecer mediante el mínimo necesario de agua .   Secar e incinerar como se indica en 5 .    6 . DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS INSOLUBLES   EN EL ÁCIDO CLORHÍDRICO    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido   en materias minerales insolubles en el ácido   clorhídrico de los alimentos para animales . Se   preven dos procedimientos en función de la   naturaleza de la muestra .    1.1 . Procedimiento A : aplicable a los alimentos   orgánicos simples y a la mayor parte de los piensos   compuestos completos ;    1.2 . Procedimiento B : aplicable a los compuestos   y mezclas minerales , así como a los piensos   compuestos completos cuyo contenido en insoluble   clorhídrico , determinado según el procedimiento A ,   sea superior al 1 % .    2 . Principio    2.1 . Procedimiento A : se incinera la muestra ,   se tratan las cenizas por ebullición mediante el   ácido clorhídrico y el residuo insoluble se filtra   y se pesa .    2.2 . Procedimiento B : la mezcla se trata mediante   ácido clorhídrico . La solución se filtra , el   residuo se incinera y las cenizas obtenidas se tratan   como el procedimiento A .    3 . Reactivos    3.1 . Acido clorhídrico 3 N .    3.2 . Solución al 20 % ( p/v ) de ácido   tricloracético .    3.3 . Solución al 1 % ( p/v ) de ácido   tricloracético .    4 . Equipo    4.1 . Placa calorífera .    4.2 . Horno eléctrico , con termostato .    4.3 . Crisoles de incineración de platino o de   aleación de platino y oro ( 10 % Pt , 90 % Au ) ,   rectangulares ( 60 por 40 por 25 mm ) o redondos   ( diámetro : 60 a 75 mm , altura : 20 a 25 mm ) .    5 . Método operatorio    5.1 . Procedimiento A    Incinerar la toma de muestra según el   método operatorio descrito para la determinación   de las cenizas brutas . Se podrán emplear igualmente   las cenizas obtenidas al efectuar dicha determinación .    Introducir las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml   de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) . Llevar el   líquido con prudencia a ebullición suave y   mantener ésta durante quince minutos . Filtrar   la solución caliente sobre un papel de filtro   sin cenizas y lavar el residuo con agua caliente   hasta la desaparición de reacción ácida . Secar   el filtro que contiene al residuo e incinerar en   un crisol tarado a una temperatura de 550 ° C como   mínimo y de 700 ° C como máximo . Refrigerar   en desecador y pesar .    5.2 . Procedimiento B    Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g de la   muestra e introducirlos en un vaso de 250 a 400 ml .   Añadir sucesivamente 25 ml de agua y 25 ml de   ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) , mezclar y   esperar el final de la efervescencia . Añadir   50 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) .   Esperar al final de un posible desprendimiento   de gases , colocar a continuación el vaso en un   baño de agua hirviendo y mantenerlo allí   durante treinta minutos o más , si fuera necesario ,   con el fin de hidrolizar completamente el almidón   que pueda estar presente .    Filtrar en caliente sobre filtro sin cenizas y lavar   el filtro mediante 50 ml de agua caliente   ( v. observación 7 ) . Colocar el filtro que   contiene el residuo en un crisol de incineración ,   secar e incinerar a una temperatura de 550 ° C como   mínimo y 700 ° C como máximo . Introducir   a continuación las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml   mediante 75 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) ;   continuar tal como se indica en 5.1 , párrafo segundo .    6 . Cálculo de los resultados    Calcular el peso del residuo deduciendo   la tara . Expresar el resultado en porcentaje de la   muestra .    7 . Observaciones    Si la filtración se mostrara difícil , volver   a comenzar la determinación sustituyendo los 50 ml   de ácido clorhídrico 3 N por 50 ml de ácido   tricloracético al 20 % ( 3.2 ) y lavando el filtro   con ayuda de una solución caliente de ácido   tricloracético al 1 % ( 3.3 ) .    7 . DETERMINACIÓN DEL CLORO DE LOS CLORUROS    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el cloro de los   cloruros solubles en el agua , expresado convencionalmente   en cloruro de sodio . Es aplicable a los alimentos   para animales en conjunto .    2 . Principio    Los cloruros se disuelven en agua . Si el producto   contiene materias orgánicas , se procede a una   defecación . La solución se acidifica ligeramente   mediante el ácido nítrico y los cloruros se precipitan   en forma de cloruro de plata con ayuda de una solución   de nitrato de plata . El exceso de nitrato de plata se   titula mediante una solución de tiocianato de amonio ,   según el método de Volhard .    3 . Reactivos    3.1 . Solución de tiocianato de amonio 0,1 N .    3.2 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .    3.3 . Solución saturada de sulfato de amonio   férrico .    3.4 . Ácido nítrico , d : 1,38 .    3.5 . Eter dietílico p.a .    3.6 . Acetona p.a .    3.7 . Solución de Carrez I : disolver en   agua 24 g de acetato de zinc , Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g   de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .    3.8 . Solución de Carrez II : disolver en agua   10,6 g de ferrocianuro de potasio K4(Fe (CN)6) · 3 H2O .   Completar a 100 ml con agua .    3.9 . Carbón activo p.a. exento de cloruros   y no absorbente .    4 . Equipo    Mezclador ( balancín ) : de aproximadamente   35 a 40 revoluciones por minuto .    5 . Método operatorio    5.1 . Preparación de la solución    Según la naturaleza de la muestra , preparar   una solución como se indica en 5.1.1 . , 5.1.2 . o 5.1.3 .    Efectuar en paralelo una prueba en blanco   exenta de muestra para analizar .    5.1.1 . Muestras exentas de materia orgánica    Pesar , con precisión de 1 mg , una toma   de muestra ( no más de 10 g ) , que no contenga   más de 3 g de cloro en forma de cloruros e introducirla   en un frasco aforado de 500 ml con 400 ml de   agua a 20 ° C aproximadamente . Mezclar durante   treinta minutos en el balancín , completar al   volumen , homogeneizar y filtrar .    5.1.2 . Muestras que contengan materias orgánicas ,   excepto los productos mencionados en 5.1.3    Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g aproximadamente   de la muestra e introducirlos con 1 g de carbón   activo en un frasco aforado de 500 ml . Añadir   400 ml de agua a 20 ° C aproximadamente y 5 ml de   solución de Carrez I ( 3.7 ) , agitar y añadir   a continuación 5 ml de solución de Carrez II ( 3.8 ) .   Mezclar durante treinta minutos en el balancín ,   completar al volumen , homogeneizar y filtrar .    5.1.3 . Alimentos cocidos , torta y harina   de lino , productos ricos en harina de lino y el resto   de los productos ricos en mucílagos o en substancias   coloidales ( por ejemplo , almidón dextrinado )    Prepara la solución como se indica en 5.1.2 .   pero no filtrar . Decantar ( si fuera necesario ,   centrifugar ) , tomar 100 ml del líquido sobrenadante   e introducirlos en un matraz aforado de 200 ml .   Mezclar con acetona , ( 3.6 ) y completar el   volumen con dicho disolvente , homogeneizar y filtrar .    5.2 . Titulación    Introducir mediante la pipeta en un erlenmeyer   de 25 a 100 ml del filtrado ( según el contenido   supuesto en cloro ) obtenido en 5.1.1 . , 5.1.2 . ó 5.1.3 .   La porción alícuota no debe contener más de   150 mg de cloro ( Cl ) . Diluir , si fuera necesario ,   a 50 ml como mínimo con el agua , añadir 5 ml   de ácido nítrico ( 3,4 ) , 20 ml de solución   saturada de sulfato de amonio férrico ( 3.3 ) y dos   gotas de solución de triocianato de amonio ( 3.1 )   suministradas mediante una bureta llena hasta la marca   de aforo cero . Suministrar a continuación mediante   una bureta la solución de nitrato de plata ( 3.2 ) de   forma que se pueda obtener un exceso de 5 ml . Añadir   5 ml de éter dietílico ( 3.5 ) y agitar fuertemente   para concentrar el precipitado .    Titular el exceso de nitrato de plata mediante la   solución de tiocianato de amonio ( 3.1 ) hasta que   el virado al ocre persista durante un minuto .    6 . Cálculo de los resultados    La cantidad de cloro ( p ) , expresada en cloruro   de sodio , presente en el volumen de filtrado tomado   para la titulación viene dada por la fórmula siguiente :    p = 5,845 ( V1 - V2 ) mg    donde :    V1 = ml de solución de nitrato de plata 0,1   añadidos    V2 = ml de solución de tiocianato de amonio   0,1 N empleados al efectuar la titulación .    Si la prueba en blanco indica un consumo de   solución de nitrato de plata 0,1 N , restar   dicho valor del volumen ( V1 - V2 ) .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    7.1 . La titulación podrá igualmente efectuarse   mediante potenciometria ;    7.2 . Para los productos muy ricos en materias   grasas , proceder a un desengrasado previo mediante   el éter dietílico o el éter de petroleo ;    7.3 . Para las harinas de pescado , la titulación   puede efectuarse mediante el método de Mohr .    8 . DETERMINACIÓN DE LA ESENCIA DE MOSTAZA    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   esencia de mostaza arrastable por el vapor de   agua , expresado en isotiocianato de alilo , de la   torta de las especies Brassica y Sinapis y de los   piensos completos compuestos que la contienen .    2 . Principio    La muestra se pone en suspensión en agua . Las   esencias de mostaza se liberan bajo la acción de   fermentos , se arrastran por destilación en presencia   de etanol y se recogen en el amoniaco diluido . La   solución se trata en caliente con un volumen   determinado de solución de nitrato de plata ,   refrigerado y filtrado . El exceso de nitrato de plata   se titula mediante una solución de tiocianato de   amonio .    3 . Reactivos    3.1 . Mostaza blanca ( Sinapis alba ) .    3.2 . Etanol , del 95 al 96 % ( v/v ) .    3.3 . Emulsión de antiespuma ( silicona , por ejemplo ) .    3.4 . Amoniaco , d : 0,958 .    3.5 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .    3.6 . Solución de tiocianato de amonio 0,1 N .    3.7 . Ácido nítrico , d : 1,40 .    3.8 . Solución saturada de sulfato de amonio férrico .    4 . Equipo    4.1 . Matraces de 500 ml , de fondo plano y tapón   esmerilado .    4.2 . Aparato de destilar provisto de un refrigerante   y de un dispositivo que permita evitar el arrastre de   gotitas .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión en 1 mg , 10 g de la muestra ,   introducirlos en un matraz de 500 ml de fondo   plano y añadir 2 g de mostaza blanca triturada   finamente ( fuente de fermento ) ( 3.1 ) y 200 ml de   agua a 20 ° C . Tapar el matraz y mantenerlo   durante dos horas aproximadamente a 20 ° C   agitándolo frecuentemente . Añadir a continuación   40 ml de etanol ( 3.2 ) y una gota de emulsión   antiespuma ( 3.3 ) . Destilar 150 ml aproximadamente   y recoger el destilado en un matraz aforado de 250 ml   que contenga 20 ml de amoniaco ( 3.4 ) prestando   atención para que la extremidad del refrigerante   se sumerja en el líquido . Añadir a la solución   amoniacal 50 ml de solución de nitrato de plata 0,1 N   ( 3.5 ) ( o más si fuera necesario ) , coronar el matraz   aforado con un pequeño embudo y calentar la mezcla   durante una hora en un baño de agua hirviendo .   Dejar enfriar , completar al volumen con agua ,   agitar y filtrar . Tomar 100 ml del filtrado límpido ,   añadir 5 ml de ácido nítrico ( 3.7 ) y 5 ml   aproximadamente de solución de sulfato de amonio   férrico ( 3.8 ) . Titular en retroceso el exceso   de nitrato de plata por la solución de tiocianato de   amonio 0,1 N ( 3.6 ) .    Efectuar una prueba en blanco aplicando el   mismo método operatorio a 2 g de mostaza blanca triturada   finamente , a falta de la mezcla por analizar .    6 . Cálculo de los resultados    Sustraer el volumen de solución de nitrato   de plata 0,1 N consumido en la prueba en blanco del   consumido por la solución de la muestra . El   valor obtenido da el número de ml de solución   de nitrato de plata 0,1 N consumidos por la esencia   de mostaza de la toma de muestra . 1 ml de AgNO3 0,1 N   corresponde a 4,956 mg de isotiocianato de alilo . Expresar   el resultado en porcentaje de la muestra .    9 . DETERMINACIÓN DE LA LACTOSA    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido   en lactosa de los alimentos constituidos en más del   0,5 % por este elemento .    2 . Principio    Los azúcares se disuelven en el agua . La   solución se somete a la fermentación por la   levadura Saccharomycers cerevisiae , que deja   intacta la lactosa . Previa defecación de la filtración ,   el contenido en lactosa del filtrado se determina   por el método Luff-Schoorl .    3 . Reactivos    3.1 . Suspensión de Saccharomycers cerevisiae :   Poner en suspensión 25 g de levadura fresca en 100 ml   de agua . La suspensión se conserva una semana   como máximo en el refrigerador .   3.2 . Solución Carrez I :    Disolver en agua 24 g de acetato de cinc Zn(CH3COO)2   · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial .   Completar a 100 ml con agua .    3.3 . Solución de Carrez II : Disolver en agua   10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 ( Fe ( CN6 ) ) ·   3 H2O . Completar a 100 ml con agua .    3.4 . Reactivo según Luff-Schoorl :    Verter , agitando siempre con prudencia , la   solución de ácido cítrico ( 3.4.2 ) en la   solución de carbonato de sodio ( 3.4.3 ) . Añadir   a continuación la solución de sulfato de cobre   ( 3.4.1 ) y completar a 1 l con agua . Dejar   reposar una noche y filtrar . Controlar la   normalidad del reactivo así obtenido ( Cu 0,1 N ;   Na2 CO3 2 N ) . El pH de la solución deberá   ser 9,4 aproximadamente .    3.4.1 . Solución de sulfato de cobre : Disolver   25 g de sulfato de cobre p.a. Cu SO4 · 5 H2O , exento   de hierro , en 100 ml de agua .    3.4.2 . Solución de ácido cítrico :    Disolver 50 g de ácido cítrico p.a. C6H8O7   · H2O en 50 ml de agua .    3.4.3 . Solución de carbonato de sodio : Disolver   143,8 g de carbonato de sodio anhidro p.a. en 300 ml   aproximadamente de agua caliente . Dejar enfriar .    3.5 . Granulados de piedra pómez hervidos   en el ácido clorhídrico , lavados en el   agua y secados .    3.6 . Solución al 30 % ( p/v ) de yoduro de   potasio .    3.7 . Ácido sulfúrico 6 N .    3.8 . Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N .    3.9 . Solución de almidón : Añadir una   mezcla de 5 g de almidón soluble en 30 ml de   agua a 1 l de agua hirviendo . Hacer hervir durante   tres minutos , dejar enfriar , añadir si fuera necesario   10 mg de yoduro mercúrico como agente conservador .    4 . Equipo    Baño de agua provisto de un termostato ,   regulado de 38 a 40 ° C .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión de 1 g , 1 g de la muestra   e introducir esta toma de muestra en un matraz aforado .   Añadir de 25 a 30 ml de agua . Colocar el matraz   durante treinta minutos en un baño de agua   hirviendo y refrigerar a continuación a 35 ° C   aproximadamente . Añadir 5 ml de suspensión de   levadura ( 3.1 ) y homogeneizar . Dejar reposar   el matraz durante dos horas en un baño de agua , a la   temperatura de 38 a 40 ° C . Refrigerar a   continuación hasta 20 ° C aproximadamente .    Añadir 2,5 ml de solución de Carrez I ( 3.2 ) y   agitar durante treinta segundos ; añadir a continuación   2,5 ml de solución de Carrez II ( 3.3 ) y agitar de   nuevo durante treinta segundos . Completar a 100 ml   con agua mezclar y filtrar . Tomar con la pipeta una   cantidad de filtrado que no exceda de 25 ml y que   contenga con preferencia de 40 a 80 mg de lactosa e   introducir ésta en un erlenmeyer de 300 ml . Si   fuera necesario , completar a 25 ml con agua .    Proceder de la misma manera a un ensayo en blanco en   5 ml de suspensión de levadura ( 3.1 ) .    Determinar tal como se indica el contenido en lactosa   según Luff-Schoorl . Añadir 25 ml exáctamente   del reactivo según Luff-Schoorl ( 3.4 ) y dos   granulados de piedra pómez ( 3.5 ) . Calentar ,   agitando manualmente , sobre una llama libre de   media altura y llevar el líquido a ebullición   durante dos minutos aproximadamente . Colocar   inmediatamente el erlenmeyer sobre una tela   metálica provista de una pantalla de amianto con   un agujero de 6 cm de diámetro aproximadamente ,   bajo la que se ha encendido previamente una llama .   Esta se regula de forma que sólo se caliente el   fondo del erlenmeyer . Adaptar a continuación un   refrigerante a reflujo sobre el erlenmeyer . A partir   de este momento , hacer hervir durante diez minutos   exáctamente . Refrigerar inmediatamente en agua   fría y , después de aproximadamente cinco minutos ,   titular tal como se indica :    Añadir 10 ml de solución de yoduro de potasio   ( 3.6 ) e inmediatamente después , y con prudencia   ( debido al riesgo de formación de espuma abundante ) ,   25 ml de ácido sulfúrico 6 N ( 3.7 ) . Titular   a continuación con la solución de tiosulfato de   sodio 0,1 N ( 3.8 ) hasta la aparición de una   coloración amarilla clara , añadir el indicador   al almidón ( 3.9 ) y concluir la titulación .    Efectuar la misma titulación sobre una mezcla   medida con exactitud de 25 ml de reactivo según   Luff-Schoorl ( 3.4 ) y 25 ml de agua , después de   haber añadido 10 ml de solución de yoduro   de potasio ( 3.6 ) y 25 ml de ácido sulfúrico   6 N ( 3.7 ) , sin llevar a ebullición .    6 . Cálculo de los resultados    Establecer mediante la tabla aneja la cantidad de   lactosa en mg que corresponda a la diferencia entre los   resultados de las dos titulaciones , expresados en ml   de tiosulfato de sodio 0,1 N .    Expresar los resultados en partes de lactosa   anhidro por cada cien de la muestra .    7 . Observaciones    Para los productos que contengan más del 40 por   ciento de los azúcares fermentados , emplear más   de 5 ml de suspensión de levadura ( 3.1 )    Tabla de valores para 25 ml de reactivo según   Luff-Schoorl    ml de Na2S2O3 0,1 N , dos minutos de calentamiento ,   diez de ebullición    Na2S2O3 0,1 N * Glucosa , fructosa , azúcares   invertidos C6H12O6 * Lactosa C12H22O11 * Maltosa   C12H22O11 * Na2S2O3 0,1 N *    ml * mg * diferencia * mg * diferencia * mg *   diferencia * ml *    1 * 2,4 * 2,4 * 3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 *    2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 *    3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 *    4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 *    5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 *    6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 *    7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 *    8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 *    9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 *    10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 *    11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 *    12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 * 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 *    13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 *    14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 *    15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 *    16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 *    17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 *    18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 *    19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 *    20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 *    21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 *    22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 *    23 * 62,2 * 3,1 * 88,0 * * 94,6 * * 23 *    10 . DETERMINACIÓN DEL POTASIO    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   potasio de los alimentos para animales    2 . Principio    La muestra se incinera y las cenizas se ponen en   solución en ácido clorhídrico . El contenido en   potasio de la solución se determina por fotometría   de llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato   de aluminio . La adición de dichas substancias   elimina , en una amplia medida , la interferencia de   elementos perturbadores .    3 . Reactivos    3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,12 .    3.2 . Cloruro de cesio p.a.    3.3 . Nitrato de aluminio Al (NO3)3 · 9 H2O ,   químicamente puro .    3.4 . Cloruro de potasio p.a. , anhidro .    3.5 . Solución tampón : disolver en el agua 50 g   de cloruro de cesio ( 3.2 ) y 250 g de nitrato de   aluminio ( 3.3 ) , completar a 1 l con agua y   homogeneizar . Conservar en frascos de material   plástico .    3.6 . Solución patrón de potasio : disolver en el   agua 1,907 g de cloruro de potasio ( 3.4 ) ,   añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) ,   completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar   en frascos de material plástico . 1 ml de   dicha solución contiene 1,00 mg de potasio .    4 . Equipo    4.1 . Crisoles de incineración de platino , cuarzo   o porcelana , en su caso provistos de tapaderas .    4.2 . Horno eléctrico , con termostato .    4.3 . Fotómatro de llama .    5 . Método operatorio    5.1 . Análisis de la muestra    Pesar , como norma general , con precisión de 10 mg ,   10 g de la muestra , en un crisol de incineración   e incinerar la substancia a 450 ° C durante   tres horas . Después de refrigerar , transvasar   cuantitativamente el residuo de incineración con   la ayuda de 250 a 300 ml de agua , y después de 50 ml   de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , a un matraz   aforado de 500 ml . Después de cesar el posible   desprendimiento de gas carbónico , calentar la   solución y mantenerla durante dos horas a una   temperatura cercana a los 90 ° C , agitando de vez   en cuando . Dejar refrigerar a la temperatura ambiente ,   anrasar , agitar y filtrar . Introducir en un matraz   aforado de 100 ml una parte alícuota de filtrado   que contenga como máximo 1,0 mg de potasio ,   añadir 10,0 ml de solución tampón ( 3.5 ) ,   enrasar con agua y homogeneizar . En presencia de   más altos contenidos en potasio , diluir la   solución por analizar en proporciones adecuadas ,   antes de la adición de la solución tampón .   El cuadro siguiente se da a título indicativo para   una toma de muestras de 10 g aproximadamente .    Contenido supuesto de la muestra en potasio   ( % K ) * Factor de dilución * Parte alícuota   en ml de la solución *    hasta 0,1 * - * 50 *    0,1 a 0,5 * - * 10 *    0,5 a 1,0 * - * 5 *    1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 *    5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 *    10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 *    Efectuar la medición por fotometría de llama a   la longitud de onda de 768 nm . Calcular el   resultado con ayuda de la curva de calibrado .    5.2 . Curva de calibrado    Introducir 10 ml exactamente de la solución de   calibrado ( 3.6 ) en un matraz aforado de 250 ml ,   enrasar con agua y homogeneizar . Introducir en matraces   aforados de 100 ml exáctamente 5 , 10 , 15 , 20 y   25 ml de dicha solución , que corresponden   respectivamente a cantidades de potasio de 0,2 , 0,4 ,   0,6 , 0,8 y 1,0 mg . Completar la serie por un   matraz testigo exento de solución de calibrado .   Añadir en cada matraz 10,0 ml de solución tampón   ( 3.5 ) , enrasar con agua y homogeneizar . Efectuar   las medidas como se indica en 5.1 . El trazado de la   curva de calibrado es en general lineal hasta una   concentración en potasio de 1 mg en 100 ml de   solución .    6 . Cálculo de los resultados    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    La adición de solución tampón ( 3.5 ) para   eliminar la interferencia de elementos perturbadores no   es siempre necesaria .    11 . DETERMINACIÓN DEL SODIO    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en sodio   de los alimentos para animales .    2 . Principio    La muestra se incinera y las cenizas se ponen en   solución en el ácido clorhídrico . El contenido en   sodio de la solución se determina por fotometría de   llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de   aluminio . La adición de estas substancias elimina ,   en una amplia medida , la interferencia de elementos   perturbadores .    3 . Reactivos    3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,12 .    3.2 . Cloruro de cesio , p.a.    3.3 . Nitrato de aluminio Al (NO3)3 · 9 H2O ,   químicamente puro .    3.4 . Cloruro de sodio p.a. , anhidro .    3.5 . Solución tampón : disolver en el   agua 50 g de cloruro de cesio ( 3.2 ) y 250 g de   nitrato de aluminio ( 3.3 ) , completar a 1 l con   agua y homogeneizar . Conservar en frascos de material   plástico .    3.6 . Solución de calibrado de sodio . Disolver   en el agua 2,542 g de cloruro de sodio ( 3.4 )   añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) ,   completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar   en frascos de material plástico . 1 ml de dicha   solución contiene 1,00 mg de sodio .    4 . Equipo    4.1 . Crisoles de incineración de platino ,   cuarzo o porcelana , en su caso provistos de   tapaderas .    4.2 . Horno eléctrico , con termostato .    4.3 . Fotómetro de llama .    5 . Método operatorio    5.1 . Análisis de la muestra    Pesar , como norma general , 10 g de la muestra   con precisión de 10 mg en un crisol de incineración   de incinerar la substancia a 450 ° C durante   tres horas . Evitar el recalentamiento ( inflamación ) .   Previo enfriamiento , transvasar cuantitativamente   el residuo de incineración con ayuda de 250 a   300 ml de agua , y después con 50 ml de ácido   clorhídrico ( 3.1 ) , a un matraz aforado de 500 ml .    Después de haber cesado el posible desprendimiento   de gas carbónico , calentar la solución y mantenerla   durante dos horas a una temperatura cercana a   90 ° C , agitando de vez en cuando . Dejar refrigerar   a la temperatura ambiente , enrasar con agua agitar   y filtrar . Introducir en un matraz aforado de 100 ml   la parte alícuota del filtrado que contenga como   máximo 1,0 mg de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar   con agua y homogeneizar . En presencia de contenidos   más altos en sodio , diluir la solución que deba   analizarse en proporciones adecuadas , antes   de la adición de la solución tampón . La tabla   siguiente se da a título informativo para una toma   de muestras de 10 g aproximadamente    Contenido supuesto de la muestra en solución   ( % Na ) * Factor de dilución * Parte alícuota en   ml de la solución *    hasta 0,1 * - * 50 *    0,1 a 0,5 * - * 10 *    0,5 a 1,0 * - * 5 *    1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 *    5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 *    10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 *    Efectuar la medición mediante fotometría de llama   a una longitud de onda de 589 mm .    Calcular el resultado de calibrado .    5.2 . Curva de calibrado    Introducir 10 ml exáctamente de la solución   patrón ( 3.6 ) en un matraz aforado de 250 ml ,   enrasar con agua y homogeneizar . Introducir en matraces   aforados de 100 ml exáctamente 5 , 10 , 15 , 20 y   25 ml de dicha solución que corresponda respectivamente   a unas cantidades de sodio de 0,2 , 0,4 , 0,6 , 0,8   y 1,0 mg . Completar la serie mediante un matraz testigo   exento de solución patrón . Añadir en cada   matraz 10,0 ml de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar   con agua y homogeneizar . Efectuar las mediciones   como se indica en 5.1 . El trazado de la curva de   muestro es en general lineal hasta una concentración   en sodio de 1 mg en 100 ml de solución .    6 . Cálculo de resultados    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    7.1 . Para los productos cuyo contenido en sodio sea   superior al 4 % , es preferible incinerar la substancia   durante dos horas en un crisol provisto de una tapadera .   Después de proceder a un enfriamiento , añadir agua ,   poner el residuo en suspensión con la ayuda de   un hilo de platino , secar e incinerar de nuevo durante   dos horas en el crisol provisto de su tapadera .    7.2 . Si la muestra está constituida únicamente   por materiales minerales , proceder a la disolución ,   sin previa incineración .    12 . DETERMINACIÓN DE LOS AZÚCARES    1 . Objetivos y ámbito de aplicación    El método permite determinar los azúcares   reductores y los azúcares totales previa inversión ,   expresados en glucosa o , en su caso en sacarosa , por   conversión con ayuda del factor 0,95 . Este   método es aplicable a los piensos completos   compuestos . Se prevén modalidades especiales para   otros alimentos . En su caso , procede determinar   por separado la lactosa y tenerlo en cuenta al calcular   los resultados .    2 . Principio    Los azúcares se disuelven en etanol diluido ; la   solución se defeca mediante los reactivos de   Carrez I y II . Tras la eliminación del etanol , se   efectúan las determinaciones antes y después de la   inversión , según el método de Luff-Schoorl .    3 . Reactivos    3.1 . Etanol al 40 % ( v/v ) , d : 0,948 a 20 ° C ,   llevado al punto de virado de la fenolftaleína .    3.2 . Solución de Carrez I :    Disolver en agua 24 g de acetato de cinc   Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial .   Completar a 100 ml con agua .    2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a   100 ml con agua .    3.3 . Solución de Carrez II : Disolver en agua   10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 [ Fe(CN6) ]   3 H2O . Completar a 100 ml con agua .    3.4 . Solución al 0,1 % ( p/v ) de naranja de metilo .    3.5 . Acido clorhídrico 4 N .    3.6 . Acido clorhídrico 0,1 N .    3.7 . Solución de hidróxido de sodio 0,1 N .    3.8 . Reactivo según Luff-Schoorl :    Verter , agitando siempre con prudencia , la   solución de ácido cítrico ( 3.8.2 ) en la   solución de carbonato de sodio ( 3.8.3 ) . Añadir   a continuación la solución de sulfato de cobre   ( 3.8.1 ) y completar a 1 l con agua . Dejar reposar   una noche y filtrar . Controlar la normalidad del   reactivo obtenido de esta forma Cu 0,1 N :   Na2CO32N ) . El pH de la solución debe ser de 9,4   aproximadamente .    3.8.1 . Solución de sulfato de cobre : disolver 25 g   de sulfato de cobre p.a. , Cu SO4 · 5 H2O ,   exento de hierro , en 100 ml de agua .    3.8.2 . Solución de ácido cítrico : disolver   50 g de ácido cítrico p.a. C6H8O7 · H2O ,   en 50 ml de agua .    3.8.3 . Solución de carbonato de sodio :   disolver 143,8 g de carbonato de sodio anhidro p.a. en   300 ml aproximadamente de agua caliente . Dejar   enfriar .    3.9 . Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N .    3.10 . Solución de almidón : Añadir una mezcla   de 5 g de almidón soluble en 30 ml de agua a 1 l de   agua hirviendo . Hacer hervir durante tres minutos ,   dejar enfriar , añadir en su caso 10 mg de yoduro   mercúrico como agente conservador .    3.11 . Ácido sulfúrico 6 N .    3.12 . Solución al 30 % ( p/v ) de yoduro de   potasio .    3.13 . Granulados de piedra pómez hervidos   en el ácido clorhídrico , lavados con agua y secados .    3.14 . Isopentanol .    4 . Equipo    Mezclador ( balancín ) : aproximadamente de   35 a 40 revoluciones por minuto .    5 . Método operatorio    5.1 . Puesta en solución    Pesar , con precisión de 1 mg , 2,5 g de la   muestra , e introducirlos en un matraz aforado de   250 ml . Añadir 200 ml de etanol ( 3.1 )   y mezclar durante una hora en el balancín .   Añadir 5 ml de solución de Carrez ( 3.3 ) y   agitar de nuevo durante un minuto . Llevar al volumen   con etanol ( 3.1 ) , homogeneizar y filtrar . Tomar   200 ml del filtrado y evaporar alrededor de la mitad   del volumen , con el fin de eliminar la mayor parte   del etanol . Transvasar cuantitativamente el   residuo de evaporación , con la ayuda de agua   caliente , a un matraz aforado de 200 ml ,   refrigerar , llevar el volumen con agua ,   homogeneizar y filtrar si fuera necesario . Dicha   solución se empleará para la determinación de   los azúcares reductores y , previa inversión ,   para la determinación de los azúcares totales .    5.2 . Determinación de los azúcares reductores    Tomar por medio de la pipeta una cantidad de   solución que no exceda de 25 ml y que contenga menos   de 60 mg de azúcares reductores , expresados en   glucosa . Si fuere necesario , completar a 25 ml con   agua destilada y determinar el contenido en   azúcares reductores según Luff-Schoorl . El   resultado se expresará en glucosa por ciento .    5.3 . Determinación de los azúcares totales   tras inversión    Tomar por medio de la pipeta 50 ml de solución   y llevarlos en un matraz aforado de 100 ml . Añadir   algunas gotas de solución de naranja de metilo ( 3.4 )   después , agitando siempre con prudencia , de   ácido clorhídrico 4 N ( 3.5 ) hasta virado claro   al rojo . Añadir 15 ml de ácido clorhídrico   0,1 N ( 3.6 ) , sumergir el matraz en un baño de   agua en fuerte ebullición y mantenerlo allí   durante treinta minutos . Refrigerar rápidamente   a 20 ° C aproximadamente y añadir 15 ml de   solución de hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.7 ) .   Completar a 100 ml con agua y homogeneizar . Tomar   una cantidad que no exceda de 25 ml y que contenga menos   de 60 mg de azúcares reductores , expresados en   glucosa . Si fuera necesario , completar a 25 ml con   agua destilada y determinar el contenido en   azúcares reductores según Luff-Schoorl . El   resultado se expresa en glucosa por ciento o , en   su caso , en sacarosa , multiplicando por el factor 0,95 .    5.4 . Titulación según Luff-Schoorl    Tomar por medio de la pipeta 25 ml del reactivo   según Luff-Schoorl ( 3.8 ) y llevarlos a un   Erlenmeyer de 300 ml ; añadir 25 ml , medidos con   exactitud , de la solución defecada de azúcares .   Añadir dos granulados de piedra pómez ( 3.13 ) ,   calentar , agitando manualmente , sobre una llama libre   de altura media y llevar el líquido a   ebullición en dos minutos aproximadamente .   Colocar inmediatamente el erlenmeyer sobre una   tela metálica provista de una pantalla de amianto   con un agujero de 6 cm aproximadamente de   diámetro , bajo cuya tela se ha encendido   previamente una llama . Esta se regula de forma   que sólo se caliente el fondo del erlenmeyer .   Adaptar a continuación un refrigerante de   reflujo sobre el erlenmeyer . A partir de este   momento , hacer hervir durante diez minutos   exáctamente . Refrigerar inmediatamente en agua   fría y , después de aproximadamente cinco minutos ,   titular tal como se indica a continuación :    Añadir 10 ml de solución de yoduro de potasio   ( 3.12 ) e , inmediatamente después y con prudencia   ( debido al riesgo de formación de espuma   abundante ) , 25 ml de ácido sulfúrico   6 N ( 3.11 ) . Titular a continuación por la   solución de tiosulfato de sodio 0,1 N ( 3.9 )   hasta la aparición de una coloración amarilla   clara , añadir el indicador al almidón ( 3.10 )   y concluir la titulación .    Efectuar la misma titulación sobre una mezcla   exáctamente medida de 25 ml de reactivo según   Luff-Schoorl ( 3.8 ) y 25 ml de agua , después   de haber añadido 10 ml de solución de yoduro de   potasio ( 3.12 ) y 25 ml de ácido sulfúrico   6 N ( 3.11 ) sin llevar a ebullición .    6 . Cálculo de los resultados    Establecer con la ayuda de la tabla la cantidad de   glucosa en mg correspondiente a la diferencia entre   los valores de las dos titulaciones , expresados en   ml de tiosulfato de sodio 0,1 N .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Métodos operatorios particulares    7.1 . Para los alimentos muy ricos en melaza y   otros alimentos poco homogéneos , pesar 20 g   e introducirlos en un matraz aforado de 1 l con 500 ml   de agua . Mezclar durante una hora en el balancín .   Defecar por medio de los reactivos de Carrez I   ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) tal como se describe en 5.1 .   empleando , sin embargo , una cantidad 4 veces   más elevada de cada reactivo . Llevar al volumen   con el etanol al 80 % ( v/v ) .    Homogeneizar y filtrar . Eliminar el etanol tal   como se describe en 5.1 . En ausencia de almidón   dextrinado , llevar al volumen con agua destilada .    7.2 . Para las melazas y los alimentos simples , ricos   en azúcares y prácticamente exentos de almidón   ( algarrobos , peladuras desecadas de remolachas ,   etc. ) pesar 5 g introducirlos en un matraz   aforado de 250 ml , añadir 200 ml de agua   destilada y mezclar durante una hora o más ,   si fuera necesario , en el balancín . Defecar   a continuación por medio de los reactivos de   Carrez I ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) , tal como se describe   en 5.1 llevar al volumen con agua , homogeneizar   y filtrar . Para determinar los azúcares totales ,   actuar tal como se describe en 5.3 .    8 . Observaciones    8.1 . Se recomienda añadir aproximadamente 1 ml   de isopentanol ( 3.14 ) ( sin tomar el volumen en   consideración ) antes de la ebullición con el   reactivo de Luff-Schoorl , con el fin de evitar la   formación de espuma .    8.2 . La diferencia entre el contenido en azúcares   totales después de la inversión , expresados   en glucosa , y el contenido en azúcares reductores ,   expresados en glucosa , multiplicada por 0,95 , da el   contenido en sacarosa por ciento .    8.3 . Para determinar el contenido en azúcares   reductores , excluida , la lactosa podrán   adoptarse dos vías :    9.3.1 . Para un cálculo aproximativo , se   multiplica por 0,675 el contenido en lactosa   establecido para una determinación separada y se   resta el resultado obtenido del contenido en azúcares   reductores .    8.3.2 . Para un cálculo preciso de los aceites   reductores , excluida la lactosa , es necesario   partir de la misma toma de muestras para las dos   determinaciones finales . Uno de los análisis se   efectúa sobre una parte en la solución   obtenida en 5.1 . en otro sobre una parte de la   solución obtenida al realizarse la determinación   de la lactosa según el método previsto con tal fin   ( previa fermentación de las otras especies de   azúcares y defecación ) .    En ambos casos , la cantidad de azúcar presente se   determina según el método de Luff-Schoorl y se   calcula en mg de glucosa . Los dos valores se   restan el uno del otro y la diferencia se expresa en   porcentaje de la muestra .    Ejemplo    Los dos valores tomados corresponden , para cada   determinación , a una toma de muestras de   250 mg .    En el primer caso , se consumen 17 ml de solución   de tiosulfato de sodio 0,1 N , lo que corresponde a   44,2 mg de glucosa , en el segundo caso 11 ml , lo que   corresponde a 27,6 mg de glucosa .    La diferencia se eleva a 16,6 mg de glucosa .    El contenido en azúcares reductores ( exceptuando   la lactosa ) , calculado en glucosa es pues de :     ( 4 por 16,6 ) /10 = 6,64 %    Tabla de los valores para 25 ml de reactivo según   Luff-Schoorl    ml de Na2S2O3 0,1 N , dos minutos de calentamiento ,   diez de ebullición .    Na2S3O3 0,1 N * Glucosa , fructosa , azúcares   invertidos C6H12O6 * Lactosa C12H22O11 * Maltosa   C12H22O11 * Na2S2O3 0,1 N *    ml * mg * diferencia * mg * diferencia * mg *   diferencia * ml *    1 * 2,4 * 2,4  3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 *    2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 *    3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 *   4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 *    5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 *    6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 *    7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 *    8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 *    9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 *    10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 *    11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 *    12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 * 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 *    13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 *    14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 *    15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 *    16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 *    17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 *    18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 *    19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 *    20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 *    21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 *    22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 *    23 * 62,2 * * 88,0 * * 94,6 * * 23 *    13 . DETERMINACIÓN DE LA TEOBROMINA    1 . Objetivo y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido en   teobromina de los subproductos de transformación de   granos de cacao .    2 . Principio    La teobromina se extrae mediante el cloroformo .   El extracto se evapora en seco , se pone en solución   agua y se trata por un volumen determinado de solución   de nitrato de plata .    El ácido nítrico liberado se titula por una   solución de hidróxido de sodio .    3 . Reactivos    3.1 . Cloroformo p.a .    3.2 . Amoniaco , d : 0,958 .    3.3 . Sulfato de sodio p.a. , anhídrido .    3.4 . Solución de hidrócido de sodio 0,1 N .    3.5 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .    3.6 . Solución etanólica al 1 % ( p/v ) de rojo de   fenol .    3.7 . Eter dietílico .    4 . Equipo    Matraces de 500 ml de fondo plano y tapón esmerilado .    5 . Método operatorio    Pesar , con precisión de 1 mg , una toma de muestras   de 10 g como máximo , que no contenga más de 80 mg   de teobromina . Introducir la toma en un matraz de   500 ml de fondo plano y tapón esmerilado ,   añadir 270 ml de cloroformo ( 3.1 ) y 10 ml de   amoniaco ( 3.2 ) Tapar el matraz y agitar   enérgicamente durante cinco minutos . Añadir a   continuación 12 g de sulfato de sodio anhidro ( 3.3 ) ,   agitar de nuevo y dejar reposar hasta el día   siguiente . Filtrar en un erlenmeyer de 500 ml y   lavar el residuo con 100 ml de cloroformo ( 3.1 ) .   Destilar el disolvente y eliminar de él los   últimos restos en un baño de agua hirviendo .   volver a tomar el extracto por 50 ml de agua y   llevar a ebullición .    Refrigerar , neutralizar exactamente por la   solución de hidróxido de sodio ( 3.4 )   en presencia de 0,5 ml de solución de rojo de   fenol ( 3.6 ) Añadir a continuación 20 ml   de solución de nitrato de plata ( 3.5 ) .   Titular el ácido nítrico liberado por la   solución de hicróxido de sodio ( 3.4 ) hasta   el virado del indicador ( pH 7,4 ) .    6 . Cálculo de los resultados    1 ml de NaOH 0,1 N corresponde a 18 mg de   teobromina .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    Los productos cuyo contenido en materias grasas   brutas exceda del 8 % deben ser previamente   desgrasados por extracción durante seis horas con   éter de petróleo ( Eb. 40 ° C ) .    14 . DETERMINACIÓN DE LA UREA    1 . Objetivo y campo de aplicación    El método permite determinar el contenido en urea de   los alimentos para animales    2 . Principio    La muestra se pone en suspensión en agua en   presencia de un defecante . La suspensión se filtra .   El contenido en urea del filtrado se determina , tras la   adición de 4-dimetilaminobenzaldehido ( 4-DMAB ) ,   por medio de la densidad óptica a la longitud de onda   de 420 mm .    3 . Reactivos    3.1 . Solución de 4-dimetilaminobenzaldehido :   disolver 1,6 g de 4-DMAB p.a. en 100 ml de etanol al   96 % y añadir 10 ml de ácido clorhídrico   p.a. ( D : 1,19 ) . Dicho reactivo se conserva como   máximo durante dos semanas .    3.2 . Solución de Carrez I :    disolver en agua 24 g de acetato de cinc ,   Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético   glacial . Completar a 100 ml con agua .    3.3 . Solución de Carrez II : disolver en   agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 Fe(CN)6 ·   3 H2O . Completar a 100 ml con agua .    3.4 . Carbón activo p.a. , que no absorba la urea   ( que habrá de controlarse )    3.5 . Solución al 0,1 % ( p/v ) de urea p.a .    4 . Equipo    4.1 . Mezclador ( balancín ) : de alrededor de   35 a 40 revoluciones por minuto .    4.2 . Tubos de ensayo : 160 por 16 mm , de tapones   esmerilados . 4.3 . Espectrofotómetro .    5 . Método operatorio   5.1 . Análisis de la muestra    Pesar , con precisión de 1 mg , 2 g de la muestra e   introducirlos con 1 g de carbón activo ( 3.4 ) en un   frasco aforado de 500 ml . Añadir 400 ml de agua y   5 ml de las soluciones de Carrez I ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) .   Mezclar durante treinta minutos en el balancín .   Completar el volumen con agua , agitar y filtrar .    Tomar 5 ml de los filtrados límpidos e incoloros ,   introducirlos en los tubos de ensayo de tapón   esmerilado , añadir 5 ml de solución de 4-DMAB   ( 3.1 ) y mezclar . Colocar los tubos en un baño   de agua a 20 ° C . Tras quince minutos , medir la   densidad óptica de la solución de la muestra al   espedtómetro a 420 mm por comparación con la   solución del ensayo en blanco de los reactivos .    5.2 . Curva de calibrado    Tomar volúmenes de 1 , 2 , 4 , 5 y 10 ml de la   solución de urea ( 3.5 ) , introducirlos en los   matraces esmerilados de 100 ml y completar al   volumen con agua . Tomar 5 ml de cada solución ,   añadir respectivamente 5 ml de solución de   4-DMAB ( 3.1 ) homogeneizar y medir la densidad   óptoca como se indica más arriba por comparación   con una solución testigo que contenga 6 ml de   4-DMAB y 5 ml de agua , exenta de urea . Trazar la   curva de calibrado .    6 . Cálculo de los resultados    Determinar la cantidad de urea de la toma de muestra   en lo que se refiere a la curva de calibrado .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    7 . Observaciones    7.1 . Para los contenidos de urea superiores al   3 % , reducir la muestra de ensayo a 1 g o diluir la   solución inicial para que no haya más de 50 mg   de urea en 500 ml .    7.2 . Para los pequeños contenidos de urea ,   aumentar la muestra de ensayo , si bien el filtrado debe   ser límpido e incoloro .    7.3 . Si la muestra contiene compuestos nitrogenados   simples , tales como aminoácidos , es conveniente   realizar la medida de la densidad óptica a 435 nm .    15 . DETERMINACIÓN DE LOS ALCALOIDES DE LOS   ALTRAMUCES    1 . Objeto y ámbito de aplicación    El método permite determinar el contenido de   alcaloides de las semillas de altramuces .    2 . Principio    Los alcaloides se disuelven en una mezcla de   éter dietílico y cloroformo , y se extraen con   ácido clorhídrico . Los alcaloides se   precipitan con ácido silico-túngstico , el   precipitado se incinera , y se pesa el residuo .    3 . Reactivos    3.1 . Eter dietílico .    3.2 . Cloroformo .    3.3 . Solución de hidróxido de sodio 4 N .    3.4 . Acido clorhídrico 0,3 N .    3.5 . Cloruro de sodio p.a .    3.6 . Solución al 10 % ( p/v ) de ácido   silico-túngstico Si O2 · 12 WO3 · 26 H2O .    4 . Equipo    4.1 . Agitador mecánico .    4.2 . Crisoles de incineración , de platino , cuarzo   o porcelana .    4.3 . Horno eléctrico .    5 . Método operativo    Pesar , con precisión de 5 mg , 15 g de la   muestra e introducirlos en un recipiente de 200 ml   aproximadamente , provisto de tapón esmerilado   ( p. ej. , ampolla de decantar ) . Añadir 100 ml de   éter dietílico ( 3.1 ) y 50 ml de cloroformo   ( 3.2 ) medidos exactamente y enseguida , con   ayuda de una bureta graduada , 10 ml de solución   de hidróxido sódico ( 3.3 . ) . Agitar   vigorosamente para evitar la formación de   aglomerados . Sacudir enseguida varias veces y dejar   reposar hasta el día siguiente . Si el líquido   sobrenadante no está absolutamente límpido ,   añadir algunas gotas de agua . Filtrar la capa de   éter-cloroformo . Recoger 50 ml de filtrado en un   matraz aforado de 50 ml de y transvasarlos   cuantitativamente con ayuda de 50 ml de éter   dietílico ( 3.1 ) en una ampolla de decantar de   150 ml . Extraer 3 veces sucesivamente mediante   20 ml de ácido clorhídrico ( 3.4 ) ; dejar   decantar y recoger 1 extracto ácido después de   cada extracción . Reunir los extractos ácidos   en un vaso de 250 ml y eliminar los últimos residuos de   éter y de cloroformo calentado ligeramente . Añadir 1 g   aproximadamente de cloruro sódico ( 3.5 ) , dejar   enfriar y precipitar los alcaloides con la   solución de ácido silico-túngstico ( 3.6 ) .   Agitar mecánicamente durante treinta minutos .    Dejar reposar durante una noche , filtrar sobre   filtro sin cenizas y lavar el precipitado sucesivamente   con 2 veces 10 ml y 2 veces 5 ml de ácido   clorhídrico ( 3.4 ) .    Colocar el filtro que contiene el precipitado con   un crisol de incineración e incinerar a 900 ° C .   Dejar refrigerar y pesar .    6 . Cálculo de los resultados    El contenido en alcaloides de la toma de muestras   se obtiene multiplicando el peso de las cenizas por el   factor 0,2 .    Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .    16 . DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD UREASICA DE   PRODUCTOS DERIVADOS DE LA SOJA    1 . Objetivo y campo de aplicación    La prueba permite determinar la actividad de   ureasa de los productos derivados de la soja y poner de   manifiesto la cocción insuficiente de dichos   productos .    2 . Principio    La actividad ureásica se determina por la   cantidad de nitrógeno amoniacal liberado por 1 g de   producto en un minuto , a 30 ° C , a partir de una   solución de urea .    3 . Reactivos    3.1 Acido clorhídrico 0,1 N .    3.2 Solución de hidróxido de sodio 0,1 N .    3.3 Solución tampón de fosfatos 0,05 M   conteniendo en 100 ml 4,45 g de fosfato disódico   ( Na2HPO4 · 2 H2O ) y 3,40 g de fosfato   monopotásico ( KH2PO4 ) .    3.4 Solución tamponada de urea , preparada   recientemente , conteniendo 30,0 g de urea por   1 000 ml de solución tampón ( 3.3 ) ;   pH 6,9-7,0 .    4 . Equipo    4.1 Aparato de titulación potenciométrica o   pH-metro muy sensible ( 0,02 pH ) , con agitador   magnético .    4.2 Baño de agua provisto de un termostato   regulado a 30 ° C exactamente .    4.3 Tubos de ensayo : 150 por 18 mm , con tapones   esmerilados .    5 . Método operatorio    Triturar ( en un molino de café , por ejemplo )   10 g aproximadamente de la muestra , de forma que   pase a través de un tamiz de mallas de 0,2 mm .   En un tubo de ensayo de tapón esmerilado , pesar ,   con precisión de 1 mg , 0,2 g de la muestra triturada   y añadir 10 ml de la solución tamponada de   urea ( 3.4 ) . Tapar inmediatamente y agitar   vigorosamente . Llevar el tubo al baño de agua   regulado a 30 ° C exactamente y dejarlo allí   treinta minutos exáctamente . Inmediatamente después ,   añadir 10 ml de ácido clorhídrico 0,1 N ( 3.1 ) ,   refrigerar rápidamente a 20 ° C y transvasar   cuantitativamente el contenido del tubo a un   recipiente de titulación , limpiando dos veces con   5 ml de agua . Titular inmediatamente y con rapidez por   medio de la solución de hidróxido de sodio   0,1 N ( 3.2 ) por electrometría con la ayuda de un   electrodo de cristal , hasta pH 4,7 .    Efectuar una prueba en blanco , operando tal como   se indica .    Introducir rapida y sucesivamente en un tubo de   ensayo de tapón esmerilado una toma de muestras de   0,2 g , pesada con precisión de 1 mg , 10 ml de   ácido clorhídrico 0,1 N ( 3.1 ) y 10 ml de   solución tamponada de urea ( 3.4 ) . Refrigerar   inmediatamente el tubo en agua helada y dejarlo allí   treinta minutos . Transvasar a continuación , en las   condiciones indicadas anteriormente , el contenido del   tubo al recipiente de titulación por medio de la   solución de hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.2 )   hasta pH 4,7 .    6 . Cálculo de los resultados    La actividad ureásica viene dada por la fórmula :    mg N/g min. a 30 ° C = 1,4 ( b - a ) /30 · E    donde    a = ml de solución de hidróxido de sodio   0,1 N consumidos por la toma de muestras .    b = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N   consumidos por la toma de muestras en blanco .    E = toma de muestras en g .    7 . Observaciones    7.1 . El método es conveniente para una actividad   ureásica que pueda alcanzar 1 mg de N/g min a 30 ° C .   Para productos más activos , la toma de muestras puede   reducirse hasta 50 mg .    7.2 . Los productos cuyo contenido en materias grasas   brutas sobrepase el 10 % deben haber sido desgrasados   en frío previamente .