CELEX: 31977L0312
Language: es
Date: 1977-03-29 00:00:00
Title: Directiva 77/312/CEE del Consejo, de 29 de marzo de 1977, sobre la vigilancia biológica de la población contra el peligro del saturnismo

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31977L0312

Directiva 77/312/CEE del Consejo, de 29 de marzo de 1977, sobre la vigilancia biológica de la población contra el peligro del saturnismo  

Diario Oficial n° L 105 de 28/04/1977 p. 0010 - 0017 Edición especial en finés : Capítulo 15 Tomo 2 p. 0063  Edición especial griega: Capítulo 05 Tomo 2 p. 0174  Edición especial sueca: Capítulo 15 Tomo 2 p. 0063  Edición especial en español: Capítulo 05 Tomo 2 p. 0125  Edición especial en portugués: Capítulo 05 Tomo 2 p. 0125 

 DIRECTIVA DEL CONSEJO    de 29 de marzo de 1977    sobre la vigilancia biológica de la población   contra el peligro del saturnismo     ( 77/312/CEE )     EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea y , en particular , su artículo 235 ,    vista la propuesta de la Comisión ,    visto el dictamen del Parlamento Europeo (1) ,    visto el dictamen del Comité Económico y Social (2) ,    considerando que una de las tareas esenciales de la   Comunidad Económica Europea consiste en promover un   desarrollo armónico de las actividades económicas en   el conjunto de la Comunidad y una expansión continua y   equilibrada , objetivos que no pueden concebirse con   independencia de la lucha contra la contaminación y los   agentes nocivos , ni sin la mejora de la calidad de la   vida y la protección del entorno ;    considerando que las diversas utilizaciones del plomo   originan actualmente la contaminación saturnina de   numerosas áreas del entorno ;    considerando que las múltiples fuentes difusoras de   plomo presentes en el entorno hacen difícil la   determinación de la exposición global de un   individuo a este contaminante y , en consecuencia , que la   protección de la salud del hombre requiere un control   tan estricto como sea posible de la impregnación   saturnina global del individuo ;    considerando que es preciso poner en obra una   vigilancia biológica de la población contra el   riesgo del saturnismo , y evaluar los resultados de esta   vigilancia con el fin de elaborar , llegado el caso ,   nuevas propuestas ;    considerando que hace falta definir las normas   técnicas y los niveles de referencia biológica para   realizar esta vigilancia ;    considerando que la determinación de la plombemia   constituye actualmente el mejor medio de evaluar la   dosis de plomo absorbida recientemente por un   individuo como consecuencia de su exposición al plomo   presente en el entorno , y que la actividad enzimática   de la dehidratasa del ácido deltaaminolevulehico   ( ALAD ) puede servir de análisis indicativo o   complementario para la determinación de la exposición   al plomo ;    considerando que el programa de acción de las   Comunidades europeas en materia de medio ambiente (3)   prevé la coordinación de los programas nacionales   encaminados a mejorar la calidad de vida , así como   una acción prioritaria en cuanto al plomo ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros tomarán las medidas necesarias   para aplicar un procedimiento común de vigilancia   biológica con el objeto de evaluar la exposición   de la población al peligro del saturnismo fuera de los   lugares de trabajo .    Artículo 2    Este procedimiento común , cuya aplicación se   limitará a cuatro años , se basa en la medición   de la plombemia .    A modo de análisis indicativo o complementario , podrá   utilizarse también la medición del ALAD con arreglo   a las normas especificadas en los Anexos II y III .    Artículo 3    1 . Las condiciones en que se efectuará esta vigilancia   biológica estarán determinadas por :     - las modalidades de muestreo y de análisis ,     - la frecuencia del muestreo .    2 . Las extracciones de sangre destinadas al muestreo   se practicarán en voluntarios .    Artículo 4    El muestreo se realizará sobre :     - grupos de 100 personas , por lo menos , en las   regiones urbanas de más de 0,5 millones de habitantes ,     - grupos de 100 personas , por lo menos , en la medida   en que esta cifra pueda alcanzarse , elegidas entre las   poblaciones expuestas a fuentes significativas de   contaminación por plomo ,     - grupos críticos determinados por las   autoridades competentes de los Estados miembros .    En cada Estado miembro y a lo largo de cada campaña ,   se efectuarán al menos 50 análisis por cada   millón de habitantes .    Artículo 5    El muestreo de los grupos mencionados en el artículo 4   se efectuará a lo largo de dos campañas , por lo   menos , en cada zona estudiada , durante la aplicación   del programa , separadas por un intervalo de   veinticuatro meses como mínimo . En la segunda   campaña no se examinará necesariamente a los mismos   individuos que en la primera campaña .    Artículo 6    Para evaluar los resultados de la vigilancia biológica   y adoptar , si hace falta , las medidas previstas en el   artículo 8 , las tasas de plombemia siguientes , fijadas   teniendo en cuenta las relaciones dosis-efecto que   figuran en el Anexo I , serán simultáneamente   consideradas como niveles de referencia :     - 20 microgramos de plomo por 100 mililitros de   sangre , como máximo , para el 50 % del grupo de   población examinado ,     - 30 microgramos de plomo por 100 mililitros de   sangre , como máximo , para el 90 % del grupo de   población examinado ,     - 35 microgramos de plomo por 100 mililitros de   sangre , como máximo , para el 98 % del grupo   de población examinado .    Artículo 7    Para la determinación de la plombemia :     - los Estados miembros comunicarán a la Comisión   los nombres de los laboratorios que participen en el   programa de vigilancia biológica y los métodos de   análisis utilizados ;     - la Comisión , en colaboración con los Estados   miembros , organizará programas de intercomparación ,   en los que participarán los laboratorios anteriormente   mencionados ;     - la Comisión , en colaboración con los Estados   miembros , estudiará los resultados de estos programas   con el fin de mejorar la comparabilidad de los métodos   de análisis .    Artículo 8    Cuando el resultado de los análisis acuse uno o varios   rebasamientos de los niveles de referencia indicados en   el artículo 6 , los Estados miembros :     - comprobarán la validez de los resultados ,     - buscarán las fuentes de exposición que provocan   esos rebasamientos ; esta acción afectará igualmente   a todos los individuos que tengan una plombemia   superior a 35 microgramos por 100 mililitros ,     - tomarán las medidas apropiadas , según el   criterio de sus autoridades nacionales competentes .    Artículo 9    1 . Los Estados miembros designarán , dentro de los   seis meses siguientes a la notificación de la presente   Directiva , la autoridad nacional competente , que   comunicará a la Comisión :     - los datos relativos a la vigilancia biológica de los   grupos de población mencionados en el artículo 4 ,   incluyendo indicaciones sobre los métodos de   análisis , los grupos de población examinados y las   zonas en que las muestras se han tomado ; estos datos   deberán ofrecer toda garantía en lo que atañe al   respeto del anonimato de las personas examinadas ;   las modalidades y la forma de transmisión de estos   datos serán fijadas por común acuerdo entre la   Comisión y los Estados miembros ,     - las informaciones sobre las causas o los factores   que presumiblemente ocasionan el rebasamiento de los   niveles de referencia indicados en el artículo 6 .    2 . La autoridad nacional competente notificará ,   además , a la Comisión las medidas adoptadas en virtud   del tercer guión del artículo 8 .    Artículo 10    La Comisión reunirá por lo menos dos veces al año   a los representantes de los gobiernos de los Estados   miembros , con el objeto , principalmente de :     - garantizar la ejecución armonizada de la   vigilancia biológica y en particular de las disposiciones   contenidas en los artículos 4 y 5 ,     - velar por la comparabilidad de los análisis   efectuados ,     - examinar las informaciones y facilitar el intercambio   de informaciones entre los Estados miembros sobre   los resultados obtenidos por la vigilancia biológica ,   así como sobre las medidas adoptadas en virtud del   artículo 8 .    Artículo 11    Sobre la base de las informaciones recogidas en virtud   del artículo 9 , la Comisión elaborará , en   colaboración con las autoridades nacionales competentes :     - una memoria anual de conjunto sobre la ejecución   de este programa , que será remitida a los Estados   miembros , así como al Consejo y al Parlamento   Europeo ,     - un informe general al término de este programa que   sirva de fundamento para la eventual preparación de   nuevas propuestas en las que también se tendrían en   cuenta los progresos conseguidos en los conocimientos   científicos y técnicos .    Artículo 12    Los Estados miembros adoptarán las medidas   necesarias para ajustarse a la presente Directiva dentro   de un plazo de doce meses , contado a partir de su   notificación e informarán de ello inmediatamente   a la Comisión .    Artículo 13    Los destinatarios de la presente Directiva serán   los Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 29 de marzo de 1977 .    Por el Consejo    El Presidente    T. BENN    (1) DO n º C 28 de 9 . 2 . 1976 , p. 31 .    (2) DO n º C 50 de 4 . 3 . 1976 , p. 9 .    (3) DO n º C 112 de 20 . 12 . 1973 , p. 3 .    ANEXO I    RELACIÓN DOSIS-EFECTO    Las tasas de plombemia tomadas en consideración   para estimar los resultados de la vigilancia biológica   se desprenden del análisis de los datos científicos   referentes a los diversos efectos tóxicos del plomo .   Este análisis que toma en cuenta las variaciones   normales de los valores biológicos de la población   permite establecer relaciones quasi cuantitativas entre   dosis y efecto . La relación dosis-efecto que sigue   sirve de base de referencia para la puesta en marcha   de la presente Directiva :    Un decrecimiento de la actividad ALAD en los   glóbulos rojos , como consecuencia de la exposición   al plomo , mientras no dé lugar a una alteración   en la hematopoiesis , puede ser aceptada para la   población . En lo que se refiere a las plombemias   inferiores a 15 - 20 µg/100 ml , se considera en   la actualidad que el decrecimiento de la   actividad ALAD no provoca alteraciones en la   hematopoiesis .    El aumento de las protoporfirinas eritrocitarias   ( PPE ) en la sangre es señal de una interferencia con   la utilización del hierro , que inhibe de este modo   la síntesis del hema . El aumento de los PPE interviene   para tasas de plombemia superiores a 20 - 30 µg/100 ml .   Un aumento de los PPE puede ser debido sin embargo   a otras causas .    La interferencia con la síntesis del glutatión   sólo puede ser tolerada para una pequeña fracción   de la población y solamente si es débil y no produce   otras manifestaciones subclínicas . Esta interferencia   inaceptable con la síntesis del glutatión no tiene   lugar siempre que la tasa de plombemia sea inferior a   30 µg/100 ml .    El aumento significativo de la excreción urinaria   del ácido delta-aminolevulínico ( ALAU ) es síntoma   de alteraciones importantes del metabolismo de las   porfirinas y , por tanto , de salud débil . El   aumento estadísticamente significativo del ALAU se   manifiesta sólo para tasas de piombemia superiores a   35 µg/100 ml .    ANEXO II    CORRESPONDENCIA ENTRE TASAS DE PLOMBEMIA Y ACTIVIDAD   ENZIMÁTICA    Con arreglo al artículo 2 de la presente Directiva ,   la correspondencia entre la tasa de plombemia y la   actividad enzimática del ALAD , medida según el   método europeo estandardizado ( Anexo 3 ) , es la   siguiente :    Plombemia ( µg/100 ml sangre ) * ALAD   ( unidades/litro ) *    35 * 20 *    30 * 25 *    20 * 35 *    Mientras los valores medidos del ALAD sean superiores   de forma significativa a los límites indicados más   arriba para las diferentes fracciones de población ,   no es necesario realizar nuevas mediciones de tasas   de plombemia a modo de confirmación .    ANEXO III    PRESCRIPCIONES TÉCNICAS REFERENTES A LA   DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ALAD    Método europeo estandardizado para la   determinación de la actividad de la deshidratasis   del ácido delta-aminolevúlnico    El principio del método adoptado para determinar   la actividad de la dehidratasis del ácido   delta-aminolevúlnico es bien conocido . Se basa   en la incubación del enzima con un exceso de sustrato   de ácido delta-aminolevúlnico . El porfobilinógeno   formado tras un tiempo determinado es mezclado con el   reactivo de Ehrlich modificado y el color conseguido   se mide mediante un fotómetro contra un blanco . La   cantidad de porfobilinógeno producido es indicativa   de la actividad del ALAD .    MÉTODO    Efecto de la luz    Recientes experimentos han demostrado que el   porfobilinógeno es sobre todo muy sensible a la   luz . Cualquier análisis debería realizarse en   ausencia total de luz solar directa en el laboratorio   ( y no sólo en el lugar donde se efectúa el   análisis ) .    Primera fase . - Muestras de la sangre y conservación   antes del análisis     - Realizar una toma de sangre de 2 ml de sangre   venosa mediante una jeringa de plástico ( no   estabilizada al plomo ) en presencia de heparina   secada ( < 5 mg ) .     - Preparar inmediatamente cuatro extracciones   de 0,2 ml distribuidas en tubos de plástico   ( no estabilizados al plomo ) y enfriarlas a   4 ° C . El pipetaje se debe efectuar con pipetas   graduadas de tipo Marbourg .     - Si el análisis se realiza en un plazo de   3 horas , el enfriamiento de las extracciones no es   necesario .     - La duración máxima de conservación de las   muestras a 4 ° C es de 24 horas .     - Inmediatamente antes del análisis , hay que   colocar todas las muestras en un baño de agua helada   durante 10 minutos .    Nota : Entre las materias plásticas a considerar ,   podemos citar el polietileno , el polistireno y el   polipropileno . La duración de conservación de   24 horas a 4 ° C resulta de una estimación   prudente . Este período de tiempo basta para   permitir el transporte de la muestra desde el lugar   de la toma de sangre hasta un laboratorio central   para su análisis . De las cuatro extracciones   de sangre , tres deben ser utilizadas para la   determinación del ALAD y una para el test testigo .    Segunda fase . - Determinación de la hematócrita    Esta determinación se debe efectuar :     - al mismo tiempo que la toma de sangre ,     - por un método capilar que utilice dos muestras .    Centrifugación después del cierre de un   extremo a una velocidad de 30 000 revoluciones por   minuto como mínimo ( no menos de 5 minutos ) .    Nota : Esta determinación se debe realizar   preferentemente en el mismo lugar , pero no más de   24 horas después de la toma de sangre . Utilizar   si es posible una centrifugadora microhematócrita .    Tercera fase . - Hemólisis     - Hemolizar tres muestras de sangre que habrán   sido previamente descongeladas con 1,3 ml de agua   destilada ( previamente llevada a 37 ° C ) durante   10 minutos a 37 ° C ± 0,2 ° C .     - Añadir el agua preferentemente con la ayuda   de una pipeta graduada de 2 ml , luego mezclar muy bien .     - Llegado a este estado , no hay que agitar las   muestras .    Nota : Se ha decidido utilizar agua en vez de   Tritón X 100 para la hemólisis . Los experimentos   de hemólisis con el Tritón X 100 llevan a un   frenaje considerable de la actividad del ALAD , que   todavía no ha sido explicado y que podría   corresponder a un artefacto .    Cuarta fase . - Adición de la solución de ALA   a la hemólisis     - Preparar la solución de ALA .     - No debe ser preparada desde más de 5 horas antes .     - Llevar esta solución a los 37 ° C durante al   menos 10 minutos antes de la adición .     - Añadir 1 ml de dicha solución en el hemolisato ,   preferentemente con una pipeta de bola de 1 ml , y   mezclar .    Nota : Un pH de 6,4 se ha tomado en consideración ,   ya que los experimentos han demostrado que a este   valor de pH le corresponde la mejor correlación   entre las actividades del ALAD y las tasas de   plombemia para poblaciones normales . No se trata de   obtener el máximo de actividad ( que se puede lograr   por elevación del pH ) ya que las actividades que   se deben determinar son lo bastante importantes .    Quinta fase . - Preparación del testigo     - 0,2 ml de sangre tratada como para la determinación   del ALAD hasta el momento de la adición de la   solución ALA ; en vez de ésta añadir 1 ml de   solución de HgC1 2-TCA , y luego 1 ml de solución   ALA , y proceder a continuación como para la   determinación del ALAD ( ver más abajo ) .     - Para la adición mencionada anteriormente ,   se utilizarán pipetas de soplado .    Nota : Un testigo sólo se compara con una serie   de tres pruebas para cada muestra de sangre . Si la   densidad óptica para el testigo es muy alta , se   repetirá la operación como control .    Sexta fase . - Incubación     - 60 minutos a 37 ° C ± al baño maría .     - El tiempo de incubación a partir de la adición   de la solución de ALA .    Nota : El tiempo de incubación de 60 minutos se   ha elegido porque aumenta de forma natural la actividad   del ALAD , puesto que ninguna de las otras fases ha   tenido como efecto el aumentar la actividad de forma   artificial . Algunos experimentos han demostrado que   la relación tiempo de incubación-actividad es   lineal para períodos de tiempo que excedan de   dos horas .    La temperatura de incubación se ha mantenido   a 37 ° C por razones prácticas .    Séptima fase . - Parada de la reacción PBG     - Añadir 1 ml de solución HgCl2-TCA a la   mezcla de incubación , preferentemente con una   pipeta de soplado con bola de 1 ml .    Octava fase . - Centrifugación y filtración     - 30 000 revoluciones por minuto .     - Filtración a través de papel Whatman n º 54   o equivalente ( resistente al ácido ) .    Nota : La centrifugación debe durar alrededor   de 10 minutos .    La fase de filtración ha sido introducida con   el fin de evitar el pipetaje de pequeñas partículas   flotando en la superficie del líquido . Dichas   partículas , según parece , producen una reacción   coloreada con el reactivo de Ehrlich . Varias   pruebas han mostrado que la introducción de la fase   de filtración mejora la reproductibilidad . La   fase de filtración puede , si fuera necesario ,   ser sustituida por una segunda centrifugación .    Novena fase . - Reacción con el reactivo de Ehrlich     - Mezclar 1 ml de líquido que sobrenade con   1 ml de reactivo de Ehrlich modificado mediante   pipetas de bola .     - Mezclar mediante un mezclador de tipo Vortex   para garantizar la homogeneidad .     - Esperar durante 5 minutos a que se haga la   reacción antes de medir la extinción .    Nota : Es importante , para garantizar la   homogeneidad , vigilar que este líquido que sobrenada   filtrado se mezcle íntimamente con el reactivo de   Ehrlich .    Décima fase . - Medición de la extinción     - Se contrastará el espectrofotómetro mediante   una solución de fenolftaleína en un tampón   básico .     - Medición de extinción de la muestra en   relación con el testigo a 555 mm en una célula   de 1 cm ( o de 2 cm si la absorción es muy débil ) .    Undécima fase . - Cálculo de la actividad   enzimática     - La ecuación que permite calcular la actividad   es la siguiente :     ( OD corr. × 35 × 2 × 100 × K ) /   ( Hect % × 60 × 62 ) = µmoles   ALA/mn/ml RBC = U/ml    OD = extinción medida    60 = tiempo de incubación    35 = factor de dilución    62 = coeficiente molar de extinción en cm²/µmol    K = coeficiente de corrección espectrofotométrica    Nota : Las unidades propuestas son conformes a las   recomendaciones referentes a la nomenclatura de las   enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica .    SOLUCIONES    1 . Preparación de una solución ALA    Solución A :    1,78 g de Na2HPO4 · 2H2O disueltos en 100 ml   de agua destilada ( preferentemente por deionización ) .    Solución B :    1,38 g de NaH2PO4 · 1H2O disueltos en 100 ml de   agua destilada .    29 ml de solución A + 71 ml de solución B dan   un tampón de 0,1 M fosfato de Na de pH 6,4 .    Esta fuerza iónica de tampón es necesaria   para impedir cualquier variación del pH en la solución   en reacción .    167,6 mg de ALA-HC1 son disueltos en la   solución B ( ésta debe ser siempre ácida ) ; el   pH está ajustado a 6,4 mediante la solución A . El   volumen es entonces llevado a 100 ml con la solución   tampón 0,1 M fosfato de Na de pH 6,4 . Dicha   preparación da una solución de 0,01 M ALA .    2 . Solución de HgC12-TCA    1,35 g de HgC12 son disueltos en 100 ml de ácido   tricloracético de 10 % .    3 . Solución de reactivo de Ehrlich    Reactivos :    2,5 g de dimetilaminobenzaldeido ( pDMAB ) ,    0,25 g de HbC12 disueltos en 10 ml de ácido   acético glacial ,    ácido perclórico masa específica 1,7 ,    ácido acético glacial .    Preparación :     - Disolver el pDMAB en 50 ml de ácido acético ,   añadir 24,5 ml de ácido perclórico y 4 ml de   solución de HgC12 . Mezclar , enfriar y llevar   a 100 ml con el ácido acético glacial en un   matraz graduado (4) . Conservar en un frasco   oscuro .    Calibración :    Una calibración anual a nivel comunitario deberá   verificarse a través de un laboratorio designado de   común acuerdo por los Estados miembros .    (4) Si una coloración morena aparece en este   estado , el reactivo debe ser rechazado .