CELEX: 31984L0319
Language: cs
Date: 1984-06-07 00:00:00
Title: Směrnice Komise ze dne 7. června 1984, kterou se mění přílohy směrnice Rady 77/96/EHS o vyšetření čerstvého masa domácích prasat na trichinely (trichinella spiralis) při jeho dovozu ze třetích zemí

Důležité právní upozornění

|

31984L0319

Úřední věstník L 167 , 27/06/1984 S. 0034 - 0043 Finské zvláštní vydání: Kapitola 3 Svazek 17 S. 0185  Španělské zvláštní vydání: Kapitola 03 Svazek 31 S. 0083  Švédské zvláštní vydání: Kapitola 3 Svazek 17 S. 0185  Portugalské zvláštní vydání Kapitola 03 Svazek 31 S. 0083 

		Směrnice Komiseze dne 7. června 1984,kterou se mění přílohy směrnice Rady 77/96/EHS o vyšetření čerstvého masa domácích prasat na trichinely (trichinella spiralis) při jeho dovozu ze třetích zemí(84/319/EHS)KOMISE EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,s ohledem na Smlouvu o založení Evropského hospodářského společenství,s ohledem na směrnici Rady 77/96/EHS o vyšetření čerstvého masa domácích prasat na trichinely (trichinella spiralis) při jeho dovozu ze třetích zemí [1] naposledy pozměněnou směrnicí 83/91/EHS [2], a zejména na článek 8 uvedené směrnice,vzhledem k tomu, že nedávné studie umožnily vypracovat některé metody pro zjišťování výskytu trichinel ve vepřovém mase; že spolehlivost těchto metod z hlediska ochrany zdraví je rovnocenná spolehlivosti stávajících metod; že by se proto příloha I směrnice 77/96/EHS měla patřičně doplnit;vzhledem k tomu, že pro usnadnění práce při vyšetřování na výskyt trichinel by se mělo třetím zemím a členským státům dovolit, aby si zvolily mezi vyšetřovacími metodami, které jsou k dispozici;vzhledem k tomu, že musí být provedeny určité úpravy v současnosti používaných metod vyšetření na výskyt trichinel a pokud jde o podmínky, které laboratoře zapojené do zjišťování výskytu trichinel, musí splňovat;vzhledem k tomu, že opatření této směrnice jsou v souladu se stanoviskem Stálého veterinárního výboru,PŘIJALA TUTO SMĚRNICI:Článek 1Směrnice 77/96/EHS se mění v souladu s přílohou.Článek 2Členské státy uvedou v účinnost právní a správní předpisy nezbytné pro dosažení souladu s touto směrnicí nejpozději do 1. ledna 1985. Neprodleně o nich uvědomí Komisi.Článek 3Tato směrnice je určena členským státům.V Bruselu dne 7. června 1984.Za KomisiPoul Dalsagerčlen Komise[1] Úř. věst. L 26, 31.1.1977, s. 67.[2] Úř. věst. L 59, 5.3.1983, s. 34.--------------------------------------------------PŘÍLOHAA. Příloha I se mění takto.1. V oddíle II písmenu a):- desátá odrážka se nahrazuje tímto:"stereomikroskop (zvětšení 15 až 40x) s vhodným světelným zdrojem,"- poslední odrážka se nahrazuje tímto:"trávící tekutina s tímto složením:10 g pepsinu (80 μg FIP: Féderation internationale de pharmacie) a 5 ml HCl (nejméně 37 %) doplnit pitnou vodou z vodovodu do jednoho litru."2. Oddíl III se nahrazuje tímto:"III. METODA POUŽÍVAJÍCÍ UMĚLÉ TRÁVENÍ SMĚSNÝCH VZORKŮa) Přístrojové vybavení a chemikálie- nůž a pinzeta pro odběr vzorků,- mlýnek na maso s čelní deskou s otvory o průměru 2 až 3 mm,- Erlenmeyerova baňka o objemu 3 litry s pryžovou nebo vatovou zátkou,- kuželová dělící nálevka o objemu 2000 ml,- obyčejný stojan s podstavcem tvaru A o délce asi 28 cm a tyčí délky 80 cm,- kruh na nálevku o průměru 10 až 11 cm, který lze upevnit na stojan,- svorka s plochými čelistmi (23 x 40 mm), kterou lze upevnit na stojan dvojitou spojkou,- sítko (s velikostí oka 177 mikrometrů) o vnějším průměru 11 cm, opatřené sítem z mosazi nebo korozivzdorné oceli,- nálevka s vnitřním průměrem nejméně 12 cm,- skleněné odměrné válce 100 ml,- stereomikroskop (zvětšení 15 až 40x) s vhodným světelným zdrojem nebo trichinoskop s horizontálním stolkem pro kompresor s vhodným světelným zdrojem,- při používání trichinoskopu: používá se vanička na počítání larev, kterou lze popsat takto:vanička na počítání larev je vyroben z akrylátových desek o tloušťce 3 mm takto:i) dno vaničky má mít rozměry 180 x 40 mm a jsou na něm vyznačeny čtverce;ii) boky mají být 230 x 20 mm;iii) čela mají mít rozměry 40 x 20 mm. Dno a čela je třeba vsunout mezi boky tak, že se získá vanička s dvěma krátkými držadly na obou čelech. Horní stranu dna je třeba zvednout o 7 až 9 mm nad základnu rámu, tvořeného boky a čely. Díly je třeba upevnit pro materiál vhodným lepidlem,- několik Petriho misek o průměru 9 cm (používá-li se stereomikroskop), rozdělených na spodní straně na vyšetřovací čtvercové plošky 10 x 10 mm pomocí zahroceného nástroje,- několik desetilitrových nádob použitelných pro dekontaminaci zařízení, jako je ošetření formolem, a pro zbývající natrávenou šťávu v případě pozitivních výsledků,- koncentrovaná kyselina chlorovodíková (37 %),- pepsin o koncentraci: 1: 10000 NF (US National Formulary)odpovídající 1: 12500 BP (British Pharmacopoeia)odpovídající 2000 FIP (Féderation internationale de pharmacie),- několik misek, do kterých vejde asi 50 vzorků asi po 2 g,- váhy vážící s přesností na 0,1 g.b) Odběr vzorků1. V případě celých jatečně opracovaných trupů je nutno vzorek o hmotnosti přibližně 2 g odebrat od šlašitého středu bránice (bráničního pilíře) u přechodu do šlašité části. Pokud brániční pilíře chybí, je třeba vzorek stejné velikosti odebrat z žeberní části bránice u hrudní kosti, ze svalu jazyka nebo žvýkacího svalu, nebo z břišního svalstva.2. Z porcovaného masa je nutné odebrat přibližně dvougramový vzorek kosterního svalstva s malým obsahem tuku, kde to je možné, v blízkosti kostí či šlach.c) Metoda1. i) Kompletní skupiny (100 vzorků najednou)Z každého ze 100 individuálních vzorků z prasat se odebere přibližně jednogramový vzorek. Sjednocený vzorek se společně semele v mlýnku na maso.Mleté maso se vnese do třílitrové Erlenmeyerovy baňky společně se 7 g pepsinu, přibližně 2 litry vodovodní vody zahřáté asi na 40 až 41 oC a 25 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se protřepe, aby se rozpustil pepsin.Hodnota pH roztoku bude přibližně 1,5 až 2.- Pro trávení musí být Erlenmeyerova baňka udržována asi čtyři hodiny na konstantní teplotě 40-41 oC. Obsah baňky je během této doby třeba pravidelně protřepávat, nejméně dvakrát každou hodinu.- Natrávený roztok (výluh) se přefiltruje přes sítko do dvoulitrové kuželové dělící nálevky a ponechá se v klidu dělit nejméně 1 hodinu.- Celkový objem asi 45 ml se vypustí do odměrného válce a rozdělí mezi tři Petriho misky (jejichž dna je třeba rozdělit vyznačením na čtverečky), aby v každé misce bylo 15 ml.- Každá Petriho miska se podrobně prohlédne na larvy trichinel pod stereomikroskopem.- Používají-li se vaničky pro počítání larev, uvedených 45 ml se rozdělí mezi dvě počítací vaničky a prozkoumá se pod trichinoskopem.Larvy se jeví jako identifikovatelné organismy v usazenině a často, je-li voda vlažná, lze pozorovat jejich svinování do spirály a rozvinování.- Natrávené roztoky (výluhy) je třeba vyšetřit okamžitě, jakmile jsou k dispozici. Vyšetření nesmí být za žádných okolností odloženo na následující den.Jsou-li výluhy zakalené nebo nejsou-li vyšetřeny do 30 minut po přípravě, je třeba je vyčiřit takto: konečný vzorek 45 ml se nalije do odměrného válce a ponechá 10 minut stát. Na konci této doby se odsátím odebere 30 ml tekutiny nad sedimentem a zbylých 15 ml se doplní na 45 ml vodovodní vodou. Po dalším desetiminutovém stání se znovu odsaje horních 30 ml a zbylých 15 ml se převede do Petriho misky nebo počítací vaničky k vyšetření. Odměrný válec je třeba vymýt 10 ml vodovodní vody a tato prací voda se přidá k vzorku v Petriho misce nebo vaničce pro počítání larev k vyšetření.ii) Skupiny s méně než 100 vzorkyK celkové skupině 100 vzorků lze přidat až 15 jednotlivých vzorků a vyšetřovat je společně. Jestliže se vyšetřuje více než 15 a méně než 100 vzorků, je třeba v příslušném poměru zmenšit objem natrávené tekutiny (výluhu).2. V případě pozitivních nebo dubiózních výsledků po vyšetření směsného vzorku je třeba odebrat další 20 gramový vzorek z každého prasete podle písmene b) výše. Tyto dvacetigramové vzorky (vždy) z pěti prasat je třeba spojit a vyšetřit shora uvedeným způsobem. Tak se vyšetří vzorky z 20 skupin po pěti prasatech. Jestliže se ve společném vzorku z pěti prasat zjistí trichinely, je třeba z každého z těchto pěti prasat odebrat další 20 gramový vzorek a každý z nich vyšetřit odděleně shora popsaným způsobem."3. Doplňují se nové oddíly IV, V a VI, které znějí:"IV. METODA TRÁVENÍ SMĚSNÉHO VZORKU POMOCÍ MECHANICKÉHO ZAŘÍZENÍ A SEDIMENTAČNÍ TECHNIKYa) Přístrojové vybavení a chemikálie- nůž a nebo nůžky pro odběr vzorků,- misky s vyznačením 50 čtverečků, z nichž každý může pojmout vzorky asi 2 gramů masa,- laboratorní míchačka (homogenizátor) Stomacher, model 3500 Thermo,- plastové vaky vhodné pro míchačku Stomacher,- kuželové dělící nálevky o objemu 2000 ml, s výhodou opatřené teflonovými bezpečnostními zátkami,- stojany, kruhy a svorky,- sítka (s velikostí oka 177 mikrometrů) o vnějším průměru 11 cm, opatřené sítem korozivzdorné oceli,- nálevky s vnitřním průměrem nejméně 12 cm pro podporu sítek,- skleněné odměrné válce 100 ml,- dávkovač o obsahu 25 ml,- kádinky o objemu 3 litry,- lžíce nebo míchací tyčinka pro míchání natrávené tekutiny v kádince,- plastová injekční stříkačka s hadičkou na odsávání,- lžičková odměrka na 6 gramů,- teploměr s přesností měření ± 0, 5 oC v rozmezí 0 oC až 100 oC,- vibrátor, např. elektrický holící strojek se sejmutou hlavou,- časové spínací relé spínající v minutových intervalech,- trichinoskop s horizontálním stolkem nebo stereomikroskop s vhodným světelným zdrojem,- při používání trichinoskopu: používá se vanička na počítání larev; vanička na počítání larev je vyrobena z akrylátových desek o tloušťce 3 mm takto:i) dno vaničky má mít rozměry 180 × 40 mm a jsou na něm vyznačeny čtverce;ii) boky mají být 230 × 20 mm;iii) čela mají mít rozměry 40 × 20 mm. Dno a čela je třeba vsunout mezi boky tak, že se získá vanička s dvěma krátkými držadly na obou čelech. Horní stranu dna je třeba zvednout o 7 až 9 mm nad základnu rámu, tvořeného boky a čely. Díly je třeba upevnit pro materiál vhodným lepidlem,- několik Petriho misek o průměru 9 cm (používá-li se stereomikroskop), rozdělených na spodní straně na vyšetřovací čtvercové plošky 10 × 10 mm pomocí zahroceného nástroje,- 17,5 % roztok kyseliny chlorovodíkové,- pepsin o koncentraci: 1: 10000 NF (US National Formulary)odpovídající 1: 12500 BP (British Pharmacopoeia)odpovídající 2000 FIP (Féderation internationale de pharmacie),- několik desetilitrových nádob použitelných pro dekontaminaci zařízení, jako je ošetření formolem, a pro zbývající natrávenou šťávu v případě pozitivních výsledků,- váhy vážící s přesností na 0,1 g.b) Odběr vzorků1. V případě celých jatečně opracovaných trupů je nutno vzorek o hmotnosti přibližně 2 g odebrat od bráničního pilíře u přechodu do šlašité části. Pokud brániční pilíře chybí, je třeba vzorek stejné velikosti odebrat z žeberní části bránice u hrudní kosti, ze svalu jazyka nebo žvýkacího svalu nebo břišního svalstva.2. Z porcovaného masa je nutné odebrat přibližně dvougramový vzorek kosterního svalstva s malým obsahem tuku, kde to je možné, v blízkosti kostí či šlach.c) Metoda1. Postup tráveníi) Kompletní skupiny (100 vzorků najednou)- Laboratorní míchačku Stomacher 3500 je třeba vybavit dvojitým plastovým vakem a regulaci teploty nastavit na 40 až 41 oC.- Do vnitřního plastového vaku se nalije jeden a půl litru vody, předehřáté na 32 až 35 oC a voda se zahřeje na 40 až 41 oC.- K vodě v míchačce se přidá 25 ml 17,5 % kyseliny chlorovodíkové.- Potom se přidá 100 vzorků po (přibližně) 1 gramu (za teploty 25 až 30 oC), odebraných podle písmene b) výše z každého z individuálních vzorků.- Nakonec se přidá 6 g pepsinu. Toto pořadí přidávání je třeba přísně dodržet, aby se předešlo rozkladu pepsinu.- Obsah vaku se nechá v míchačce Stomacher rozmělňovat 25 minut.- Plastový vak se pak z přístroje vyjme a natrávená tekutina se přefiltruje přes sítko do třílitrové kádinky.- Plastový vak se vymyje asi 100 ml vody, která se pak použije pro promytí sítka a nakonec se přidá k filtrátu do kádinky.K celkové skupině 100 vzorků lze připojit až 15 jednotlivých vzorků a vyšetřit je společně s těmito vzorky.ii) Menší skupiny než 100 vzorků- Laboratorní míchačku Stomacher 3500 je třeba vybavit dvojitým plastovým vakem a regulaci teploty nastavit na 40 až 41 oC.- Trávící tekutina se připraví smíšením asi jednoho a půl litru vody a 25 ml 17,5 % kyseliny chlorovodíkové. Přidá se 6 g pepsinu a celá směs se promíchá při teplotě 40 — 41 oC. Toto pořadí přidávání je třeba přísně dodržet, aby se předešlo rozkladu pepsinu.- Z trávící tekutiny se odměří objem odpovídající 15 ml na gram vzorku (např. na 30 vzorků je potřebných 30 x 15 ml, neboli 450 ml) a přenese se do vnitřního z obou plastových vaků společně se vzorky masa velikosti asi 1 g (při 25 až 30 oC), odebranými z každého z individuálních vzorků podle odstavce b) shora.- Do vnějšího vaku se přidá voda o teplotě asi 41 oC tak, aby celkový objem v obou vacích činil jedena půl litru.- Obsah vaku se potom nechá v míchačce Stomacher rozmělňovat 25 minut.- Plastový vak se pak z přístroje vyjme a natrávená tekutina se přefiltruje přes sítko do třílitrové kádinky.- Plastový vak se vymyje asi 100 ml vody, která se pak použije pro promytí sítka a nakonec se přidá k filtrátu do kádinky.2. Získání larev sedimentací- K natrávené tekutině se přidá led (300 až 400 g ledu ve formě vloček, šupin nebo drti) tak, že se její objem doplní asi na 2 litry. Směsí se míchá tak dlouho, dokud led neroztaje.V případě menších skupin (vzorků, viz odst. 1 bod ii)), je třeba množství ledu příslušně snížit.- Vychlazená natrávená tekutina se převede do dvoulitrové dělící nálevky, opatřené vibrátorem, uchyceným ve vnější svorce.- Směs se ponechá 30 minut sedimentovat, přičemž se na dělící nálevku působí přerušovaně vibrátorem (každou druhou minutu na dobu jedné minuty).- Po 30 minutách se rychle odpustí 60 ml vzorek sedimentu do odměrného válce o objemu 100 ml. (Po použití se nálevka vypláchne detergentem.)- Tento 60 ml vzorek se ponechá nejméně 10 minut odstát. Po této době je třeba odsát tekutinu nad sedimentem a ponechat objem asi 15 ml, který se vyšetří na přítomnost larev.- Pro odsátí se použije injekční stříkačka na jedno použití, opatřena plastovou trubičkou.Je třeba, aby trubička měla takovou délku, že v odměrném válci zůstane 15 ml tekutiny, když se příruba injekční stříkačky opře o okraj válce.- Zbývajících 15 ml se přelije do vaničky na počítání larev nebo dvou Petriho misek a vyšetří pod trichinoskopem nebo, v druhém případě, pod stereomikroskopem.- Výsledné tekutiny (výluhy) je třeba vyšetřit okamžitě, jakmile jsou připravené. Vyšetření nesmí být za žádných okolností odložena na druhý den.Jsou-li výluhy zakalené nebo nejsou-li vyšetřeny do 30 minut po přípravě, je třeba je vyčiřit takto: konečný vzorek 45 ml se nalije do odměrného válce a ponechá 10 minut stát. Na konci této doby se odsátím odebere 30 ml tekutiny nad sedimentem a zbylých 15 ml se doplní na 45 ml vodovodní vodou. Po dalším desetiminutovém stání se znovu odsaje horních 30 ml a zbylých 15 ml se převede do Petriho misky nebo počítací vaničky k vyšetření. Odměrný válec je třeba vymýt 10 ml vodovodní vody a tato prací voda se přidá k vzorku v Petriho misce nebo vaničce pro počítání larev k vyšetření.3. V případě pozitivních nebo dubiózních výsledků po vyšetření směsného vzorku je třeba odebrat další 20 gramový vzorek z každého prasete podle písmene b) výše. Tyto dvacetigramové vzorky (vždy) z pěti prasat je třeba spojit a vyšetřit shora uvedeným způsobem. Tak se vyšetří vzorky z 20 skupin po pěti prasatech. Jestliže se ve společném vzorku z pěti prasat zjistí výskyt trichinel, je třeba z každého z těchto pěti prasat odebrat další 20 gramový vzorek a každý z nich vyšetřit odděleně shora popsaným způsobem.V. METODA TRÁVENÍ SMĚSNÉHO VZORKU POMOCÍ MECHANICKÉHO ZAŘÍZENÍ A TECHNIKY "IZOLACE NA FILTRU"a) Přístrojové vybavení a chemikálieVybavení a chemikálie uvedené u metody IV písmene a).Shora uvedené vybavení je třeba doplnit tímto:- Gelmanovou nálevkou o objemu 1 l, doplněná držákem filtru (o průměru 45 mm),- filtračním kotoučky; tyto filtrační kotoučky se skládají z:kruhového sítka z korozivzdorné oceli o průměru 45 mm a. s. velikostí otvorů 35 mikrometrů,dvou pryžových kroužků z 1 mm tlusté pryže (o vnějším průměru 45 mm a vnitřním průměru 35 mm),kruhové sítko se vloží mezi oba pryžové kroužky a vlepí se mezi ně dvousložkovým lepidlem, slučitelným s oběma materiály;- odsávací Erlenmeyerovou baňkou o objemu 3 litry s postranní trubicí na odsávání,- filtrační vývěvou,- plastovými váčky o objemu nejméně 80 ml,- zařízením na zatavování plastikových sáčků,- renilázou o koncentraci 1:150000 Soxhletových jednotek na gram.b) Odběr vzorkůViz metodu IV písmeno b).c) Metoda1. Postup tráveníi) Kompletní skupiny (100 vzorků najednou)Viz metodu IV písmeno c) odst. 1 bod i).ii) Menší skupiny než 100 vzorkůViz metodu IV c) odst. 1 bod ii).2. Získání larev filtrací- K natrávené tekutině se přidá led (300 až 400 g ledu ve formě vloček, šupin nebo drti) tak, že se její objem doplní asi na 2 litry.V případě menších skupin (vzorků) je třeba množství ledu příslušně snížit.- Směsí se míchá tak dlouho, dokud led neroztaje. Vychlazená natrávená tekutina se pak ponechá nejméně tři minuty v klidu, aby se larvy svinuly.- Na odsávací baňku připojenou na vývěvu se připojí Gelmanova nálevka s držákem filtru a filtračním kotoučkem.- Natrávená tekutina se pak nalije do Gelmanovy nálevky a přefiltruje. Ke konci filtrace lze průchod natrávené tekutiny filtrem urychlit pomocí odsávání vývěvou. Jakmile je filtr téměř suchý, tj. když v nálevce zbývá jen asi 2 až 5 ml tekutiny, je třeba odsávání ukončit.- Po přefiltrování veškeré natrávené tekutiny se vyjme filtrační kotouček a vloží se do plastového váčku o objemu 80 ml spolu s 15 až 20 ml roztoku renilázy. Tento roztok renilázy se získá přidáním 2 g renilázy do 100 ml vodovodní vody.- Plastový váček se dvakrát zataví a vloží do míchačky Stomacher mezi vnější a vnitřní vak.- Obsah se ve Stomacheru nechá rozmělňovat po dobu tří minut, bez ohledu na to, zda se zpracovává kompletní nebo nekompletní skupina.- Po třech minutách se plastový váček s filtračnímn kotoučkem a roztokem renilázy vyjme ze Stomacheru a otevře nůžkami. Kapalný obsah se nalije do vaničky na počítání larev nebo na Petriho misku. Váček se vymyje 5 až 10 ml vody, která se pak přidá do vaničky pro vyšetření trichinoskopem nebo do Petriho misky pro vyšetření pod stereomikroskopem.- Výsledné tekutiny (výluhy) je třeba vyšetřit okamžitě, jakmile jsou připravené. Vyšetření nesmí být za žádných okolností odložena na druhý den.Poznámka:Filtrační kotoučky se nemají nikdy použít, nejsou-li dokonale čisté. Nečisté kotoučky se nikdy nemají nechat vyschnout.Filtrační kotoučky lze vyčistit ponecháním v roztoku renilázy přes noc. Před použitím je třeba je vyprat v čerstvém roztoku renilázy pomocí Stomacheru.3. V případě pozitivních nebo dubiózních výsledků po vyšetření směsného vzorku je třeba odebrat další 20 gramový vzorek z každého prasete podle písmene b) výše. Tyto dvacetigramové vzorky (vždy) z pěti prasat je třeba spojit a vyšetřit shora uvedeným způsobem. Tak se vyšetří vzorky z 20 skupin po pěti prasatech. Jestliže se ve společném vzorku z pěti prasat zjistí výskyt trichinel, je třeba z každého z těchto pěti prasat odebrat další 20 gramový vzorek a každý z nich vyšetřit odděleně shora popsaným způsobem.VI. METODA S MAGNETICKÝM MÍCHADLEM PRO TRÁVENÍ SMĚSNÝCH VZORKŮa) Přístrojové vybavení a chemikálie- nůž a pinzeta pro odříznutí vzorků,- misky s vyznačením 50 čtverečků, z nichž každý může pojmout vzorky asi 2 gramů masa,- míchačka (mixér) Moulinette,- magnetické míchačky s termostatem regulovanou topnou ploténkou a teflonem povlečenými míchacími tyčinkami o délce asi 5 cm,- kuželové dělící nálevky o objemu 2 litry,- stojany, kruhy a svorky,- sítka s velikostí oka 177 mikrometrů o vnějším průměru 11 cm, opatřená sítem z korozivzdorné oceli,- nálevky s vnitřním průměrem nejméně 12 cm pro uložení sítek,- kádinka o objemu 3 litry,- skleněné odměrné válce o objemu přibližně 50 ml nebo kyvety do odstředivky,- trichinoskop s horizontálním stolkem nebo stereomikroskop s vhodným světelným zdrojem,- vanička na počítání larev (při používání trichinoskopu): vanička na počítání larev je vyrobena z akrylátových desek o tloušťce 3 mm takto:i) dno vaničky má mít rozměry 180 × 40 mm a jsou na něm vyznačeny čtverce;ii) boky mají být 230 × 20 mm;iii) čela mají mít rozměry 40 × 20 mm. Dno a čela je třeba vsunout mezi boky tak, že se získá vanička s dvěma krátkými držadly na obou čelech. Horní stranu dna je třeba zvednout o 7 až 9 mm nad základnu rámu, tvořeného boky a čely. Díly je třeba upevnit pro materiál vhodným lepidlem,- několik Petriho misek o průměru 9 cm (používá-li se stereomikroskop), rozdělených na spodní straně na vyšetřovací čtvercové plošky 10 × 10 mm pomocí zahroceného nástroje,- hliníková folie,- 25 % kyselina chlorovodíková,- pepsin o koncentraci: 1: 10000 NF (US National Formulary)odpovídající 1: 12500 BP (British Pharmacopoeia)odpovídající 2000 FIP (Féderation internationale de pharmacie),- vodovodní voda zahřátá na 46 až 48 oC,- několik desetilitrových nádob použitelných pro dekontaminaci zařízení, jako je ošetření formolem, a pro zbývající natrávenou šťávu v případě pozitivních výsledků,- váhy vážící s přesností na 0,1 g.b) Odběr vzorků1. V případě celých jatečně opracovaných trupů je nutno vzorek o hmotnosti přibližně 2 g odebrat od šlašitého středu bránice (bráničního pilíře) u přechodu do šlašité části. Pokud brániční pilíře chybí, je třeba vzorek stejné velikosti odebrat z žeberní části bránice u hrudní kosti, ze svalu jazyka nebo žvýkacího svalu nebo břišního svalstva.2. Z porcovaného masa je nutné odebrat přibližně dvougramový vzorek kosterního svalstva s malým obsahem tuku, kde to je možné, v blízkosti kostí či šlach.c) Metoda1. i) Kompletní skupiny (100 vzorků najednou)- 100 vzorků, každý přibližně velikosti 1 g, odebraných z každého z individuálních vzorků podle odst. b), se naseká v míchačce (mixéru) Moulinette. Míchačka se spouští tři až čtyřikrát, pokaždé asi na jednu sekundu.- Nasekané maso se vnese do 3 litrové kádinky a postříká se 10 g pepsinu. Přibližně 2 litry vodovodní vody zahřáté asi na 40 až 41 oC se spolu 16 ml nalije do kádinky.- Sekací hlava míchačky Moulinette se opakovaně ponoří do trávené tekutiny v kádince, aby se odstranilo všechno na ní dosud ulpělé maso.- Do kádinky se vhodí magnetická míchací tyčinka a kádinka se zakryje hliníkovou folií.- Kádinka se uloží na předehřátou ploténku magnetické míchačky a zahájí se míchání. Před zahájením míchání je třeba míchačku nastavit tak, aby po celou dobu provozu udržovala konstantní teplotu 44 až 46 oC. Během míchání se má natrávená tekutina otáčet v dostatečně vysokých otáčkách, aby vytvářela hluboký vír, ale nestříkala ven.- Natrávená tekutina se míchá 30 minut. Na konci se míchání vypne, a natrávená tekutina se přelije přes sítko do sedimentační nálevky.- Výluh se ponechá v klidu v nálevce 30 minut.- Po 30 minutách se rychle odpustí 40 ml vzorek výluhu do odměrného válce nebo odstředivkové kyvety.- Tento 40 ml vzorek se nechá 10 minut odstát a potom se odsaje 30 ml tekutiny nad sedimentem, takže zbude objem 10 ml.- Zbývající vzorek 10 ml usazeniny se přelije do vaničky na počítání larev nebo do Petriho misky.- Potom se válec nebo odstředivková zkumavka vypláchnou asi 10 ml vodovodní vody, která pak musí být přidána ke vzorku ve vaničce na počítání larev nebo v Petriho misce.- Natrávené roztoky (výluhy) je třeba vyšetřit okamžitě, jakmile jsou k dispozici. Vyšetření nesmí být za žádných okolností odloženo na následující den.Nejsou-li výluhy vyšetřeny do 30 minut po přípravě, je třeba je vyčiřit takto: konečný vzorek asi 40 ml se nalije do odměrného válce a ponechá 10 minut stát. Na konci této doby se odsátím odebere 30 ml tekutiny nad sedimentem a zbylých 10 ml se doplní na 40 ml vodovodní vodou. Po dalším desetiminutovém stání se znovu odsaje horních 30 ml a zbylých 10 ml se převede do Petriho misky nebo počítací vaničky k vyšetření. Odměrný válec je třeba vymýt 10 ml vodovodní vody a tato prací voda se přidá k vzorku v Petriho misce nebo vaničce pro počítání larev k vyšetření.Jestliže se ukáže, že je sediment při vyšetření zakalený, je třeba vzorek nalít do odměrného válce a doplnit na 40 ml vodovodní vodou a zopakovat shora uvedený postup.ii) Skupiny s méně než 100 vzorkyK celkové skupině 100 vzorků lze přidat až 15 jednotlivých vzorků a vyšetřovat je společně podle písm. c) odst. 1 bod i). Jestliže se vyšetřuje více než 15, je třeba je vyšetřovat jako kompletní skupinu. Pro skupiny do 50 vzorků lze objem natrávené tekutiny snížit na 1 litr.2. V případě pozitivních nebo dubiózních výsledků po vyšetření směsného vzorku je třeba odebrat další 20 gramový vzorek z každého prasete podle písmene b) výše. Tyto dvacetigramové vzorky (vždy) z pěti prasat je třeba spojit a vyšetřit shora uvedeným způsobem. Tak se vyšetří vzorky z 20 skupin po pěti prasatech. Jestliže se ve společném vzorku z pěti prasat zjistí trichinely, je třeba z každého z těchto pěti prasat odebrat další 20 gramový vzorek a každý z nich vyšetřit odděleně shora popsaným způsobem."B. V příloze II kapitole I se odstavec 1 mění takto:1. Písmeno b) se nahrazuje tímto:"b) patřičně vybavenou uzamykatelnou místností, kterou lze zatemnit, když se provádí vyšetření trichinoskopem;"2. Písmeno f) se zrušuje; dosavadní písmena g), h), i), j), k), l), m) a n) se označují jako f), g), h), i), j), k), l) a m).3. Nové písmeno g) se nahrazuje tímto:"g) umývárnu pro očistu a desinfekci vyšetřovacího vybavení (např. zásobníků na vzorky, kompresorů, nožů a nůžek) s:- vodovzdornou podlahovinou, která je odolná proti hnilobě a snadno se čistí a desinfikuje,- hladkými stěnami, které jsou nejméně do výšky 2 m opatřeny omyvatelným obkladem nebo nátěrem světlé barvy.Toto ustanovení se nemusí použít, používají-li se metody uvedené pod body II, III, IV, V a VI přílohy I za předpokladu, že laboratoře jsou vybaveny velkou vhodně instalovanou a připojenou výlevkou."--------------------------------------------------