CELEX: 31984L0425
Language: es
Date: 1984-07-25 00:00:00
Title: Décima Directiva 84/425/CEE de la Comisión, de 25 de julio de 1984, por la que se fijan métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales

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31984L0425

Décima Directiva 84/425/CEE de la Comisión, de 25 de julio de 1984, por la que se fijan métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales  

Diario Oficial n° L 238 de 06/09/1984 p. 0034 - 0038 Edición especial en finés : Capítulo 3 Tomo 18 p. 0038  Edición especial en español: Capítulo 03 Tomo 32 p. 0085  Edición especial sueca: Capítulo 3 Tomo 18 p. 0038  Edición especial en portugués: Capítulo 03 Tomo 32 p. 0085 

 DÉCIMA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN    de 25 de julio de 1984    por la que se fijan métodos de análisis comunitarios   para el control oficial de los alimentos para animales     ( 84/425/CEE )    LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,    Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad   Económica Europea ,    Vista la Directiva 70/373/CEE del Consejo de 20 de   julio de 1970 relativa a la introducción de modos de   toma de muestras y de métodos de análisis comunitarios   para el control oficial de los alimentos para animales   (1) , modificada en último lugar por el Acta de adhesión   de Grecia , y , en particular , su artículo 2 ,    Considerando que la Directiva citada prevé que los   controles oficiales de los alimentos para animales   destinados a comprobar que se respetan las condiciones   establecidas en virtud de las disposiciones legales ,   reglamentarias o administrativas relativas a la calidad   y a la composición de los alimentos para animales se   efectuarán según los modos de toma de muestras   y los métodos de análisis comunitarios ;    Considerando que las Directivas 71/250/CEE (2) ,   73/46/CEE (3) , 74/203/CEE (4) , 75/84/CEE (5) ,   76/372/CEE (6) de la Comisión , modificadas en   último lugar por la Directiva 91/680/CEE (7) , las   Directivas 71/393/CEE (8) , 72/199/CEE (9) , 78/633/CEE   (10) , modificadas en último lugar por la   Directiva 84/4/CEE (11) , así como por la   Directiva 81/715/CEE (12) , han fijado ya determinados   métodos de análisis comunitarios ; que , teniendo en   cuenta el estado de los trabajos efectuados desde   entonces , es conveniente adoptar un nuevo método ;    Considerando que las medidas previstas en la presente   Directiva se ajustan al dictamen del Comité permanente   de la alimentación animal ,    HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :    Artículo 1    Los Estados miembros dispondrán que los análisis   previstos para los controles oficiales de los alimentos   para animales , en lo que se refiere a su contenido en   espiramicina , se efectúen según el método descrito   en el Anexo .    Artículo 2    Los Estados miembros aplicarán las disposiciones   legales , reglamentarias y administrativas necesarias para   cumplir las disposiciones de la presente Directiva a más   tardar el 30 de junio de 1985 , e informarán de ello a   la Comisión .    Artículo 3    Los destinatarios de la presente Directiva serán   los Estados miembros .    Hecho en Bruselas , el 25 de julio de 1984 .    Por la Comisión    Poul DALSAGER    Miembro de la Comisión    (1) DO n º L 170 de 3 . 8 . 1970 , p. 2 .    (2) DO n º L 155 de 12 . 7 . 1971 , p. 13 .    (3) DO n º L 83 de 30 . 3 . 1973 , p. 21 .    (4) DO n º L 108 de 22 . 4 . 1974 , p. 7 .    (5) DO n º L 32 de 5 . 2 . 1975 , p. 26 .    (6) DO n º L 102 de 15 . 4 . 1976 , p. 8 .    (7) DO n º L 246 de 29 . 8 . 1981 , p. 32 .    (8) DO n º L 279 de 20 . 12 . 1971 , p. 7 .    (9) DO n º L 123 de 29 . 5 . 1972 , p. 6 .    (10) DO n º L 206 de 29 . 7 . 1978 , p. 43 .    (11) DO n º L 15 de 18 . 1 . 1984 , p. 28 .    (12) DO n º L 257 de 10 . 9 . 1981 , p. 38 .    ANEXO    DETERMINACIÓN DE LA ESPIRAMICINA POR DIFUSIÓN EN   MEDIO DE GELOSA    1 . Objeto y ámbito de aplicación    El método permite determinar la espiramicina en los   alimentos y en las premezclas . El límite inferior de la   determinación es de 1 mg/kg ( 1 ppm ) (1) .    2 . Principio    La muestra se somete a una extracción por una mezcla   de metanol y de tampón fosfato-bicarbonato a pH 8 .   El extracto se decanta o centrifuga , y después se   diluye . La actividad antibiótica del extracto   se determina midiendo la difusión de la espiramicina   en un medio de gelosa , sembrado con Micrococcus luteus .   La difusión se manifiesta por la formación de zonas de   inhibición del microorganismo . El diámetro de   dichas zonas se considera directamente proporcional al   logaritmo de la concentración en antibiótico para la   gama de concentraciones utilizadas .    3 . Microorganismo : Micrococcus luteus ATCC 9341   ( NCTC 8340 , NCIB 8553 )    3.1 . Mantenimiento de la cepa    Sembrar el medio de cultivo ( 4.1 ) , en tubos   inclinados , con Micrococcus luteus . Incubar   durante 24 horas a 30 ° C , conservar en refrigerador   a 4 ° C aproximadamente y renovar la siembra cada   15 días .    3.2 . Preparación de la suspensión bacteriana (a)    Recoger los gérmenes en un tubo de gelosa ( 3.1 )   de preparación reciente , con ayuda de 2 a 3 ml de   solución de cloruro de sodio ( 4.3 ) . Sembrar con esta   suspensión 250 ml del medio de cultivo ( 4.1 ) en   un matraz de Roux e incubar durante 18 a 20 horas a   30 ° C . Recoger los gérmenes en 25 ml de solución   de cloruro de sodio ( 4.3 ) y homogeneizar . Diluir la   suspensión hasta 1/10 con ayuda de la solución de   cloruro de sodio ( 4.3 ) . La transmisión luminosa de   la suspensión , medida a 650 nm bajo un espesor de 1 cm   por comparación con la solución de cloruro de sodio   ( 4.3 ) , deberá ser de 75 % aproximadamente . Esta   suspensión podrá conservarse una semana a 4 ° C   aproximadamente .    4 . Medios de cultivo y reactivos    4.1 . Medio de mantenimiento de la cepa (b)    Peptona de carne 6,0 g    Triptona 4,0 g    Extracto de levadura 3,0 g    Extracto de carne 1,5 g    Glucosa 1,0 g    Gelosa 10,0 a 20,0 g    Agua 1 000 ml    pH 6.5-6.6 ( después de la esterilización ) .    4.2 . Medio de base de la determinación (b)    Triptona 5,0 g    Extracto de levadura 4,0 g    Extracto de carne 3,0 g    Gelosa 10,0 a 20,0 g    Agua 1 000 ml    pH 8,0 ( después de la esterilización ) .    4.3 . Solución a 0,8 % ( p/v ) de cloruro de sodio    Disolver en agua 8 g de cloruro de sodio , diluir en   1 000 ml y esterilizar .    4.4 . Tampón fosfato-bicarbonato , pH 8,0    Hidrogenofosfato de potasio , K2HPO4 16,7 g    Dihidrogenofosfato de potasio , KH2PO4 0,5 g    Carbonato ácido de sodio , NaHCO3 20,0 g    Agua hasta 1 000 ml    4.5 . Mezcla de metanol y de tampón fosfato-bicarbonato   ( 4.4 )    50/50 ( v/v ) .    4.6 . Sustancia patrón    Espiramicina de actividad conocida ( en UI ) .    5 . Soluciones patrón    Disolver una cantidad exactamente pesada de la sustancia   patrón ( 4.6 ) en la mezcla ( 4.5 ) y diluir con   la misma mezcla para obtener una solución madre a   1 000 UI de espiramicina/ml . Conservada en frasco   con tapón esmerilado a 4 ° C , esta solución es   estable durante 5 días .    Preparar , a partir de esta solución y por diluciones   sucesivas con ayuda de la mezcla ( 4.5 ) , las   soluciones siguientes :    S8 1 UI/ml    S4 0,5 UI/ml    S2 0,25 UI/ml    S1 0,125 UI/ml    6 . Preparación del extracto y de las soluciones    6.1 . Extracción    Pesar una cantidad de muestra de 20,0 g para los   alimentos ; de 1,0 a 20,0 g para las premezclas .   Añadir 100 ml de mezcla ( 4.5 ) y agitar durante   30 minutos . Centrifugar o decantar , diluir después la   solución que flota en la superficie con ayuda de la   mezcla ( 4.5 ) para obtener una concentración   supuesta en espiramicina de 1 UI/ml ( = U8 ) .    Para los contenidos en espiramicina inferiores a   2,5 mg/kg de alimento , efectuar la extracción como   sigue . Pesar una cantidad de muestra de 20,0 g . Añadir   100 ml de mezcla ( 4.5 ) , agitar durante 30 minutos ,   centrifugar después durante unos minutos . Tomar 50 ml   de la solución que sobrenada y evaporar hasta   4 ml aproximadamente bajo presión reducida en un   evaporador giratorio a una temperatura que no   sobrepase los 40 ° C . Diluir el residuo con ayuda   de la mezcla ( 4.5 ) , para obtener   una concentración supuesta en espiramicina de   de 1 IU/ml ( = U8 ) .    6.2 . Soluciones del extracto    Partiendo de la solución U8 , preparar por   diluciones sucesivas ( 1 + 1 ) , con ayuda de la mezcla   ( 4.5 ) , las soluciones U4 ( concentración   supuesta : 0,5 UI/ml ) , U2 ( concentración supuesta :   0,25 UI/ml ) y U1 ( concentración supuesta :   0,125 UI/ml ) .    7 . Modalidades de la determinación    7.1 . Inoculación del medio de cultivo    Sembrar a 50 ° C aproximadamente el medio de base   de la determinación ( 4.2 ) con la suspensión   bacteriana ( 3.2 ) . Mediante ensayos preliminares en   placas con el medio ( 4.2 ) , determinar la cantidad   de suspensión bacteriana que permite obtener para las   diferentes concentraciones en espiramicina zonas   de inhibición lo más extensas posibles y que   estén todavía limpias .    7.2 . Preparación de las cajas    La difusión en gelosa se efectúa en unas cajas   con cuatro concentraciones de la solución patrón   ( S8 , S4 , S2 , S1 ) y las cuatro concentraciones del   extracto ( U8 , U4 , U2 , U1 ) . Cada caja debe   recibir necesariamente las cuatro concentraciones del   patrón y del extracto . A este efecto , hay que elegir   las dimensiones de las cajas de forma que se puedan   ahuecar en el medio gelosado por lo menos ocho   cavidades de 10 a 13 mm de diámetro , cuyos centros se   hallen a una distancia de por lo menos 30 mm . Como   cajas , se pueden utilizar placas de vidrio planas ,   coronadas con un anillo de aluminio o de materia   plástica de 200 mm de diámetro y 20 mm de altura .    Introducir en las cajas una cantidad de medio   ( 4.2 ) , sembrado como se indicó en 7.1 , que   permita obtener un lecho de 2 mm aproximadamente de espesor   ( 60 ml para una caja de 200 mm de diámetro ) .   Dejar que se solidifique , ahuecar las cavidades y   depositar volúmenes exactamente medidos de soluciones   del patrón y del extracto ( 0,10 a 0,15 ml por cavidad ,   según el diámetro ) . Realizar por lo menos 4   repeticiones de cada concentración , de modo que cada   determinación sea objeto de una evaluación de 32 zonas   de inhibición .    7.3 . Incubación    Incubar las cajas durante 16 a 18 horas a 30 ° C   ± 2 ° C .    8 . Evaluación    Medir el diámetro de las zonas de inhibición con una   precisión de 0,1 mm . Para cada concentración ,   registrar las medidas medias en papel semilogarítmico   llevando los logaritmos de las concentraciones sobre   los diámetros de las zonas de inhibición . Trazar   las rectas más ajustadas para la solución patrón   y para el extracto procediendo , por ejemplo , como   sigue .    Determinar el punto más apropiado del nivel   más bajo de la solución patrón ( SL ) con ayuda   de la fórmula :     ( a ) SL = ( 7 s1 + 4 s2 + s4 - 2 s8 ) /10    Determinar el punto más apropiado del nivel   más alto de la solución patrón ( SH ) con   ayuda de la fórmula :     ( b ) SH = ( 7 s8 + 4 s4 + s2 - 2 s1 ) /10    Determinar de la misma manera los puntos más   apropiados del extracto para el nivel más bajo   ( UL ) y el nivel más alto ( UH ) sustituyendo s1 ,   s2 , s4 y s8 en las fórmulas antes citadas por   u1 , u2 , u4 y u8 (2) .    Llevar los valores SL y SH a la misma gráfica .   Uniendo los dos puntos se obtiene de recta más   ajustada para la solución patrón . Procediendo del   mismo modo para UL y UH se obtiene la recta más ajustada   para el extracto .    Si no hay interferencia , las rectas serán paralelas .   En la práctica , se las considera paralelas cuando   ( SH - SL ) y ( UH - UL ) no difieren en más de un   10 % de su media .    Si las rectas no son paralelas , se puede eliminar   ya sea u1 y s1 ya sea u8 y s8 . Los valores SL , SH ,   UL y UH que permiten obtener las rectas más ajustadas   se calculan entonces con ayuda de las fórmulas   siguientes :     ( a ) SL = ( 5 s1 + 2 s1 - s4 ) /6 o   ( 5 s1 + 2 s4 - s8 ) /6     ( b ) SH = ( 5 s4 + 2 s2 - s1 ) /6 o   ( 5 s8 + 2 s4 - s2 ) /6    y fórmulas análogas para UL y UH . La utilización   de esta alternativa obliga a que sean respetados los   mismos criterios de paralelismo . La obtención de un   resultado procedente de tres niveles debe mencionarse   en el boletín de análisis .    Cuando las rectas se consideran paralelas , calcular   el logaritmo de la actividad relativa ( log. A )   mediante una de las fórmulas que siguen , según el   número de niveles ( 4 o 3 ) utilizados para la   evaluación del paralelismo .    Para 4 niveles     ( c ) log. A = ( u1 + u2 + u4 + u8 - s1 - s2 - s4 - s8 )   × 0,602/ ( u4 + u8 + s4 + s8 - u1 - u2 - s1 - s2 )    Para 3 niveles     ( d ) log. A = ( ( u1 + u2 + u4 - s1 - s2 - s4 )   × 0,401 ) / ( u4 + s4 - u1 - s1 )    o     ( d ) log. A = ( ( u2 + u4 + u8 - s2 - s4 - s8 ) ×   0,401 ) / ( u8 + s8 - u2 - s2 )    Actividad del extracto de la muestra = actividad   del patrón correspondiente × A :     ( U8 = S8 × A )    Si la actividad relativa se encuentra fuera de la gama   de valores comprendidos entre 0,5 y 2,0 repetir   la determinación procediendo a los ajustes apropiados   de las concentraciones de extracto o , eventualmente ,   de las soluciones patrón . Cuando esta actividad no   pueda trasladarse a la gama de valores requeridos , el   resultado deberá considerarse aproximado y esta   indicación habrá de anotarse en el boletín de   análisis .    Cuando las rectas se consideran paralelas , repetir   la determinación . Si el paralelismo no se alcanza   nunca , la determinación deberá considerarse no   satisfactoria .    Expresar el resultado en mg de espiramicina base por   kg de alimento .    9 . Repetibilidad    Las diferencias de los resultados de dos determinaciones   paralelas efectuadas con la misma muestra por el mismo   analita no debe superar :     - 2 mg/kg en valor absoluto , para los contenidos   en espiramicina base inferiores a 10 mg/kg ;     - el 20 % de resultado más alto para los contenidos   de 10 a 25 mg/kg ;     - 5 mg/kg , en valor absoluto , para los contenidos   de 25 a 50 mg/kg ;     - el 10 % del resultado más alto para los contenidos   superiores a 50 mg/kg .    (1) 1 mg de espiramicina base equivale a 3 200 unidades   internales ( UI ) .    (a) Puede utilizarse otros métodos , en la medida   en que esté demostrado que producen suspensiones   bacterianas análogas .    (b) Puede utilizarse cualquier medio de cultivo   comercial de composición análoga que dé los   mismos resultados .    (2) Las letras minúsculas « s » y « u » se   refieren a los diámetros de las zonas de inhibición .