CELEX: 31991D0479
Language: da
Date: 1991-07-29 00:00:00
Title: 91/479/EØF: Kommissionens beslutning af 29. juli 1991 om dyresundhedsmæssige bestemmelser og udstedelse af sundhedscertifikat for indførsel af tyresæd fra USA

Avis juridique important

|

31991D0479

91/479/EØF: Kommissionens beslutning af 29. juli 1991 om dyresundhedsmæssige bestemmelser og udstedelse af sundhedscertifikat for indførsel af tyresæd fra USA  

EF-Tidende nr. L 258 af 16/09/1991 s. 0001 - 0017

KOMMISSIONENS  BESLUTNING af 29. juli 1991 om dyresundhedsmaessige bestemmelser og udstedelse af sundhedscertifikat  for indfoersel af tyresaed fra USA (91/479/EOEF)KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE  FAELLESSKABER HAR - under henvisning til Traktaten om Oprettelse af Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab, under henvisning til Raadets direktiv 88/407/EOEF af 14. juni 1988 om fastsaettelse af de  veterinaerpolitimaessige krav i forbindelse med handelen inden for Faellesskabet med frosset tyresaed  og indfoersel heraf (1), senest aendret ved direktiv 90/425/EOEF (2), saerlig artikel 10 og 11, og ud fra foelgende betragtninger: USA er opfoert paa den ved Kommissionens beslutning 90/14/EOEF af 20. december 1989 om opstilling af  en liste over tredjelande, hvorfra medlemsstaterne tillader indfoersel af frosset tyresaed (3); den dyresundhedsmaessige situation i USA synes at vaere god og kontrolleret af velstrukturerede og  organiserede veterinaermyndigheder, isaer hvad angaar sygdomme der kan overfoeres gennem saed; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har bekraeftet, at USA i de sidste tolv maaneder har vaeret  fri for kvaegpest, mund- og klovesyge og oksens ondartede lungesyge, og at der i denne periode ikke  er vaccineret mod disse sygdomme; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har forpligtet sig til inden for 24 timer via telex eller  telefax over for Kommissionen for De Europaeiske Faellesskaber og medlemsstaterne at bekraefte enhver  forekomst af en af de ovennaevnte sygdomme eller af bluetongue eller epizootisk haemoragisk sygdom og  at give meddelelse om enhver aendring i vaccinationspolitikken i forbindelse med disse sygdomme og -  inden for en rimelig frist - om ethvert forslag til aendring af USA's regler for indfoersel af husdyr  eller saed eller embryoner fra saadanne dyr; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har med hensyn til kvaegtuberkulose og -brucellose givet  dyresundhedsmaessige garantier, som svarer til de i Faellesskabet gaeldende; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har forpligtet sig til at foere officielt tilsyn med  udstedelsen af certifikater i forbindelse med denne beslutning og at sikre, at alle relevante  certifikater, afvigelser og resultater af laboratorieundersoegelser, som udstedelsen af certifikater  kan vaere baseret paa, er officielt registreret i mindst tolv maaneder efter afsendelsen af den saed,  de vedroerer; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har forpligtet sig til officielt at godkende tyrestationer  til udfoersel af saed til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab som fastsat i artikel 9 i direktiv  88/407/EOEF; de ansvarlige veterinaermyndigheder i USA har forpligtet sig til for hver enkelt officielt godkendt  tyrestation at fastslaa og omgaaende meddele Kommissionen for De Europaeiske Faellesskaber den dato,  hvor al aktivitet hos de Culicoides-arter, der kan overfoere bluetongue eller epizootisk haemoragisk  sygdom, ophoerer, og den dato, hvor saadanne Culocoides-arter atter bliver aktive; de dyresundhedsmaessige bestemmelser og udstedelsen af sundhedscertifikat maa tilpasses den  dyresundhedsmaessige situation i det paagaeldende tredjeland; de i denne beslutning fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse med udtalelse fra Den  Staaende Veterinaerkomité - VEDTAGET FOELGENDE BESLUTNING: Artikel 1 1. Indtil den 31. december 1992 kan medlemsstaterne give tilladelse til indfoersel fra USA af saed  fra tyre, som ikke har reageret negativt paa proever for bluetongue eller proeven for epizootisk  haemoragisk sygdom som foreskrevet i bilag I A, men tilladelsen skal gives i henhold til bilag II A  og II B, og det skal sikres, at saeden ikke kommer til at indgaa i handelen mellem medlemsstaterne.  Kommissionen tager inden ovennaevnte dato dette stykke op til revision. 2. Medlemsstaterne tillader indfoersel fra USA af tyresaed, som opfylder betingelserne i certifikatet  i bilag I A og eventuelt certifikatet i bilag I B. Artikel 2 Denne beslutning er rettet til medlemsstaterne. Udfaerdiget i Bruxelles, den 29. juli 1991. Paa Kommissionens vegne Ray MAC SHARRY Medlem af Kommissionen (1) EFT nr. L 194 af 22. 7. 1988, s. 10.  (2) EFT nr. L 224 af 18. 8. 1990, s. 29.  (3) EFT nr. L 8 af 11. 1. 1990, s. 71.   BILAG I A SUNDHEDSCERTIFIKAT for indfoersel af tyresaed fra USA Certifikat nr.: . Afsendelsesland: USA Ansvarlig myndighed: United States Department of Agriculture - APHIS I. Identifikation af saeden: >TABELPOSITION>II. Saedens oprindelse: > TABELPOSITION>III. Saedens destination: >TABELPOSITION>IV.  Sundhedserklaering: Undertegnede embedsdyrlaege attesterer, 1) at USA i en periode begyndende mindst tolv maaneder inden foerste opsamling af den ovenfor  beskrevne saed og sluttende 30 dage efter sidste opsamling af denne saed har vaeret fri for kvaegpest, 2) at den godkendte tyrestation, hvor den ovenfor beskrevne saed er opsamlet: a) er blevet godkendt af USA's statsveterinaermyndighed til udfoersel af saed til Det Europaeiske  Faellesskab, fordi den opfylder alle betingelserne i dette punkt b) er beliggende i centrum af et omraade med en radius paa 50 km, hvor der i en periode begyndende  mindst tre maaneder inden foerste opsamling af den ovenfor beskrevne saed og sluttende tredive dage  efter sidste opsamling af denne saed, ikke er forekommet tilfaelde af mund- og klovesyge, oksens  ondartede lungesyge eller vesikulaer stomatitis c) i en periode begyndende mindst tre maaneder inden foerste opsamling af den ovenfor beskrevne saed  og sluttende 30 dage efter sidste opsamling af denne saed har vaeret fri for mund- og klovesyge og  brucellose d) i en periode begyndende mindst 30 dage inden foerste opsamling af den ovenfor beskrevne saed og  sluttende 30 dage efter sidste opsamling af denne saed har vaeret fri for rabies, miltbrand,  tuberkulose, enzootisk kvaegleukose og symptomer paa smitte med Trichomonas foetus, Campylobacter  foetus, Leptospira canicola, Leptospira pomona, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo og  Leptospira icterohaemorrhagica e) kontrolleres af en statsdyrlaege mindst to gange om aaret, hvor alle forhold, der vedroerer  betingelserne i dette certifikat, tages under overvejelse og verificeres f) er under permanent tilsyn af en stationsdyrlaege, og at tilsynet foregaar saaledes, i) at dyr kun maa indsaettes med udtrykkelig tilladelse fra tyrestationens dyrlaege og enhver  indsaettelse og fjernelse af dyr registreres ii) at der foeres et register over race, foedselsdato, identifikation og sygdomshistorie for alle  kreaturer paa tyrestationen og over alle diagnostiske undersoegelser og resultaterne deraf, alle  behandlinger og alle vaccinationer af dyrene paa stedet iii) at uautoriserede personer formenes adgang og autoriserede besoegende skal opfylde de  betingelser, som tyrestationens dyrlaege har fastsat iv) at der kun beskaeftiges personale med teknisk kompetence og den fornoedne oplaering i  desinfektions- og hygiejnemetoder til bekaempelse af sygdomsspredning g) kun holder kvaeg, idet dog andre husdyr, der er strengt noedvendige for tyrestationens normale  drift, kan indsaettes, hvis de ikke udgoer nogen smittefare for dyr af kvaegrace og opfylder de  betingelser, der er fastsat af tyrestationens dyrlaege h) er opfoert saaledes, i) at den har staldfaciliteter, som er fysisk adskilt fra lokalerne til behandling og opbevaring af  saeden, og at disse er fysisk adskilt fra hinanden ii) at den har isolationsfaciliteter til syge dyr iii) at den har saedopsamlingsfaciliteter med et saerskilt lokale til rengoering og desinfektion eller  sterilisering af udstyr iv) at den har et saedbehandlingsrum og et saedopbevarinsgrum (som ikke noedvendigvis behoever at  befinde sig paa samme sted) v) at kontakt med husdyr udenfor forhindres vi) at hele tyrestationen nemt kan rengoeres og desinficeres i hvilket tilfaelde en godkendt tyrestation kan vaere beliggende samme sted som et eller flere andre  tyrestationer 3) at tyrene paa den godkendte tyrestation i den periode, hvor den ovenfor beskrevne saed opsamles og  opbevares: a) har befundet sig paa den godkendte tyrestation den 1. januar 1990 og uafbrudt siden da og efter  deres ankomst har vaeret underkastet alle de nedenfor i litra d) omhandlede proever med de  foreskrevne resultater, eller b) er overfoert fra en godkendt tyrestation uden at komme i kontakt med dyr med en lavere  sundhedsstatus og i givet fald i et transportmiddel, som er blevet rengjort og desinficeret inden  brug, eller c) er indsat med tilladelse fra tyrestationens dyrlaege og ikke viser kliniske tegn paa sygdom, og at i) de stammer fra en besaetning, der er erklaeret fri for tuberkulose af statsveterinaermyndigheden,  eller har befundet sig i tuberkulosefri omraader som defineret af statsveterinaermyndigheden og ikke  paa noget tidspunkt har vaeret holdt i besaetninger med lavere status ii) de stammer fra en besaetning, som er erklaeret fri for brucellose af statsveterinaermyndigheden,  eller har befundet sig i brucellosefri omraader eller omraader i klasse A som defineret af  statsveterinaermyndigheden og ikke paa noget tidspunkt har vaeret holdt i besaetninger med lavere  status iii) - de stammer fra besaetninger, hvor der i de sidste tre aar ikke har vaeret symptomer paa  enzootisk kvaegleukose, eller - er foedt af koeer, som inden for 30 dage forud for deres soenners indsaettelse i  isolationsfaciliteterne har vaeret underkastet en serologisk proeve for enzootisk kvaegleukose efter  metoden i bilag G til Raadets direktiv 64/432/EOEF med negativt resultat, eller - inden for 30 dage forud for indsaettelsen i de officielt godkendte isolationsfaciliteter eller  efter at vaere blevet to aar, alt efter hvilken begivenhed der indtraeffer sidst, har vaeret  underkastet en serologisk proeve for enzootisk kvaegleukose efter metoden i bilag G til Raadets  direktiv 64/432/EOEF med negativt resultat iv) de inden for 30 dage forud for indsaettelsen i de officielt godkendte isolationsfaciliteter har  vaeret underkastet foelgende proever med negativt resultat i hvert enkelt tilfaelde: - en United States Department of Agriculture (USDA) tuberkulinproeve i kaudalfolden - en USDA serologisk standardreagensglasproeve for brucellose, der er negativ med under 30  internationale agglutinationsenheder pr. ml, og en komplementbindingsproeve med en brucellatiter paa  under 20 EOEF-enheder pr. ml (20 ICFT-enheder) - en serologisk proeve for enzootisk kvaegleukose efter metoden i bilag G til Raadets direktiv  64/432/EOEF - en serumneutralisationsproeve eller ELISA-proeve for rhinotracheitis infectiosa  bovis/vulvovaginitis infectiosa pustulosa bovis virus - en virusisolationsproeve for bovin virusdiarré af blodproever i modtagelige cellekulturer med  efterfoelgende fluorescens-antistofproeve eller immunoperoxidaseproeve; hvis tyrene paa  indsaettelsèstidspunktet endnu ikke er seks maaneder gamle, udsaettes proeven, indtil de har naaet denne  alder og foelgende proever med negativt resultat i hvert enkelt tilfaelde, undtagen hvor dette certifikat  gaelder for saed, der er opsamlet og afskibet foer den 1. januar 1993, og hvor den importerende  medlemsstat skriftligt har erklaeret, at den anvender betingelserne i artikel 1, stk. 1, i  Kommissionens beslutning 91/479/EOEF: - en blokerende ELISA-proeve for bluetongue ved hjaelp af et gruppespecifikt monoklonalt antistof  efter metoden i bilag IV A til Kommissionens beslutning 91/479/EOEF - en agar-gel-immunodiffusionsproeve for alle serotyper af epizootisk haemoragisk sygdom, der  forekommer i USA, efter metoden i bilag IV B til Kommissionens beslutning 91/479/EOEF idet alle eller nogle af de ovennaevnte proever kan vaere foretaget, mens dyrene var i de officielt  godkendte isolationsfaciliteter, under forudsaetning af, at isolationsperioden paa tredive dage for  de andre tyre i isolationsfaciliteterne, hvis resultatet af en proeve, der i henhold til dette  certifikat skal give et negativt resultat, har vaeret andet end negativt, foerst betragtes som  paabegyndt, naar det paagaeldende dyr er blevet fjernet fra faciliteterne og faciliteternes  tuberkulose- eller brucellosestatus eventuelt er blevet genetableret, v) de, efter at de i nr. iv) beskrevne prae-isolationsproever er afsluttet, i en periode paa mindst 30  dage har vaeret anbragt i officielt godkendte isolationsfaciliteter, som paa tidspunktet for deres  indsaettelse har vaeret beliggende i centrum af et omraade med en radius paa 10 km, hvor der ikke er  forekommet noget tilfaelde af mund- og klovesyge, kvaegpest, oksens ondartede lungesyge eller  vesikulaer stomatitis, og som i mindst tre maaneder har vaeret fri for mund- og klovesyge og  brucellose og i mindst 30 dage for rabies, miltbrand, tuberkulose og enzootisk kvaegleukose, og hvor  de har vaeret underkastet foelgende proever med negativt resultat i hvert enkelt tilfaelde: - en USDA serologisk standardreagensglasproeve for brucellose, der er negativ med under 30  internationale agglutinationsenheder pr. ml, og en komplementbindingsproeve med en brucellatiter paa  under 20 EOEF-enheder pr. ml (20 ICFT-enheder) - enten en immuno-fluorescensantistofproeve eller en dyrkningsproeve for Campylobacter  foetus-infektion paa en proeve af forhudsmaterialet eller en skylning af den kunstige skede - en mikroskopisk undersoegelse og en dyrkningsproeve for Trichomonas foetus-infektion paa en proeve af  forhudsmaterialet eller en skylning af den kunstige skede - en serumneutralisationsproeve eller ELISA-proeve til paavisning af rhinotracheitis infectiosa  bovis/vulvovaginitis infectiosa pustulosa bovis virus forudsat at isolationsperioden paa 30 dage, hvis resultatet af en proeve har vaeret andet end  negativt, for de oevrige dyr foerst er blevet betragtet som paabegyndt, naar det paagaeldende dyr er  blevet fjernet fra faciliteterne og faciliteternes brucellosestatus eventuelt er blevet  genetableret og hvor de er blevet behandlet mod leptospirose ved indsproejtning af streptomycin eller  dihydrostreptomycin eller en blanding heraf (25 mg pr. kg levende vaegt) to gange med et interval paa  14 dage d) de mindst en gang om aaret har vaeret underkastet foelgende proever med negativt resultat i hvert  enkelt tilfaelde: i) en USDA tuberkulinproeve i kaudalfolden ii) en USDA serologisk standardreagensglasproeve for brucellose, der er negativ med under 30  internationale agglutinationsenheder pr. ml, og en komplementbindingsproeve med en brucellatiter paa  under 20 EOEF-enheder pr. ml (20 ICFT-enheder) iii) en serologisk proeve for enzootisk kvaegleukose efter metoden i bilag G til direktiv 64/432/EOEF iv) en serumneutralisationsproeve eller ELISA-proeve for rhinotracheitis infectiosa  bovis/vulvovaginits infectiosa pustulosa bovis, idet der, naar det gaelder saed opsamlet inden den 31.  december 1992, og hvis den ansvarlige myndighed i indfoerselsmedlemsstaten har afgivet skriftlig  erklaering herom, kan godkendes saed fra tyre, der har reageret positivt paa en af disse proever, under  forudsaetning af at en virusisolering og/eller podningsproeve for ovennaevnte sygdomskompleks er  foretage paa denne saed med negativt resultat; i sidstnaevnte tilfaelde er proeven foretaget paa ........  (laboratorium) den ........ (dato) v) enten en immuno-fluorescensantistofproeve eller en dyrkningsproeve for Campylobacter  foetus-infektion paa en proeve af forhudsmateriale eller en skylning af den kunstige skede, idet der  dog ikke kraeves en saadan proeve for dyr, som ikke anvendes til saedproduktion, forudsat at proeven  foretages, foer saedproduktionen genoptages vi) en serologisk proeve for canicola, pomona, grippotyphosa, hardjo og icterohaemorrhagica  serotyper af Leptospira, og mindst to gange om aaret foelgende proever med negativt resultat i hver enkelt tilfaelde, undtagen  hvor dette certifikat gaelder for saed, der er opsamlet og afskibet foer den 1. januar 1993, og hvor  den importerende medlemsstats veterinaermyndighed skriftligt har erklaeret, at den anvender  betingelserne i artikel 1, stk. 1, i Kommissionens beslutning 91/479/EOEF - en blokerende ELISA-proeve for bluetongue ved hjaelp af et gruppespecifikt monoklonalt antistof  efter metoden i bilag IV A til Kommissionens beslutning 91/479/EOEF - en agar-gel-immunodiffusionsproeve for alle serotyper af epizootisk haemoragisk sygdom, der  forekommer i USA, efter metoden i bilag IV B til Kommissionens beslutning 91/479/EOEF idet alle de ovennaevnte proever (bortset fra tuberkulinproeven) er foretaget paa et laboratorium, der  er godkendt til formaalet af statsveterinaermyndigheden i USA, 4) at den ovenfor beskrevne saed - er klassificeret som vaerende fri for bluetongue i henhold til definitionen i bilag II A til  Kommissionens beslutning 91/479/EOEF, saerlig punkt 5 (*), eller - er klassificeret som proevet for bluetongue i henhold til definitionen i bilag II B til  Kommissionens beslutning 91/479/EOEF, saerlig punkt 2, og hvor den importerende medlemsstats  veterinaermyndighed skriftligt har erklaeret, at den anvender betingelserne i artikel 1, stk. 1, i  Kommissionens beslutning 91/479/EOEF (*) (*) Det ikke gaeldende overstreges og a) er opsamlet uden brug af elektroejakulations- eller elektrostimuleringsmetoder paa en godkendt  tyrestation fra tyre i) som til stadighed har befundet sig paa USA's omraade i en periode begyndende seks maaneder inden  foerste opsamling af den ovenfor beskrevne saed og sluttende paa dagen for dens afsendelse ii) som, medmindre andet fremgaar af en skriftlig fravigelse i henhold til punkt 3, d), iv) ovenfor  eller artikel 1, stk. 1, i Kommissionens beslutning 91/479/EOEF, ikke har reageret positivt paa nogen  af proeverne, som omhandles i dette certifikat iii) som ikke har vaeret anvendt til naturlig bedaekning under opholdet paa den godkendte tyrestation iv) som har vaeret holdt paa den godkendte tyrestation i en sammenhaengende periode paa mindst 30 dage  umiddelbart forud for saedopsamlingen v) som ikke har udvist kliniske tegn paa sygdom paa det paagaeldende tidspunkt b) er behandlet paa en godkendt tyrestation i) hvor der under opsamlingen af den ovenfor beskrevne saed ikke er foretaget behandling af anden  saed end saed fra tyre paa godkendte tyrestationer eller saed fra tyre med samme sundhedsstatus som  tyre paa godkendte tyrestationer under forudsaetning af at behandlingen i sidstnaevnte tilfaelde har  fundet sted med saerskilt udstyr og paa andre tidspunkter end behandlingen af saed fra godkendte  tyrestationer og at behandlingsfaciliteterne er blevet grundigt rengjort og desinficeret inden  genanvendelse til behandling af saed fra tyre paa godkendte tyrestationer ii) der iagttager der strengeste hygiejnekrav, idet alle redskaber og alt udstyr, der kommer i  kontakt med donortyrene eller med saeden, desinficeres eller steriliseres grundigt inden brug iii) der benytter tilsaetningsstoffer, fortyndingsmidler eller fyldstoffer, hvori eventuelle  animalske produkter stammer fra kilder, som ikke frembyder nogen dyresundhedsmaessig fare, eller som  er blevet behandlet, foer de er anvendt, saaledes at faren undgaas c) er beskyttet ved tilsaetning af foelgende antibiotika i de maengder, der har vaeret paakraevet for at  frembringe de anfoerte koncentrationer i den endelige fortyndede saed:  mindst: - 500 IE streptomycin pr. ml - 500 IE penicillin pr. ml - 150 ìg lincomycin pr. ml - 300 ìg spectinomycin pr. ml og straks derefter holdt ved en temperatur paa mindst 5° C (41° F) i mindst 45 minutter eller mindst: - 50 ìg tylosin pr. ml - 250 ìg gentamycin pr. ml - 150 ìg lincomycin pr. ml - 300 ìg spectinomycin pr. ml idet kontakten mellem antibiotikumet og den ufortyndede saed er holdt i mindst tre minutter ved  samme temperatur som blandingstemperaturen, og den ikke-glycerolholdige fraktion af  fortyndingsmidlet er holdt paa en temperatur paa mindst 5° C (41° F) i mindst to timer d) er anbragt i individuelle containere (straa), der alle er maerket med opsamlingsdato, donortyrens  race og identitet og oplysninger om den godkendte tyrestation, idet disse angivelser eller en del  af dem kan vaere maerket i kode, hvis den ansvarlige myndighed i indfoerselsmedlemsstaten har faaet  overladt en komplet noegle til denne kode, og under forudsaetning af at der er fuld overensstemmelse  mellem maerkningen af hvert enkelt straa og identifikationen i dette certifikat e) er opbevaret i containere, som er blevet grundigt rengjort og desinficeret eller steriliseret  inden brug, med anvendelse af koelemedier, som ikke tidligere er blevet anvendt til andre produkter  af animalsk oprindelse, paa den godkendte tyrestation under tilsyn af tyrestationens dyrlaege i en  periode paa mindst 30 dage inden afsendelsen f) ikke er udfoert efter datoen for en positiv proeve paa tyre paa tyrestationen, bortset fra en proeve  for bluetongue, eller epizootisk haemoragisk sygdom som omhandlet i artikel 1, stk. 1, i  Kommissionens beslutning 91/479/EOEF, og en proeve for rhinotracheitis infectiosa bovis/vulvovaginits  infectiosa pustulosa bovis som omhandlet i en skriftlig fravigelse i henhold til punkt 3, d), iv),  ovenfor, og inden tyrestationens sundhedsstatus er blevet genetableret g) afsendt i containere, som er blevet grundigt rengjort og desinficeret eller steriliseret inden  brug, med anvendelse af koelemedier, som ikke tidligere er blevet anvendt til andre produkter af  animalsk oprindelse, og som er blevet forseglet under statsdyrlaegens tilsyn forud for afsendelsen  fra den godkendte tyrestation >TABELPOSITION>  BILAG I B SUPPLERENDE CERTIFIKAT for overfoersel af saed fra en container til en anden med  henblik paa afskibning fra USA til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab Undertegnede embedsdyrlaege  attesterer at den saed, som nedenstaaende certifikater og segl henviser til, paa en godkendt  tyrestation og under direkte tilsyn af undertegnede er blevet overfoert fra de containere, som den  blev modtaget i med ubrudt forsegling til den container, som den skal sendes i til Det Europaeiske  OEkonomiske Faellesskab. >TABELPOSITION> BILAG II A Procedure for klassificering som bluetongue-fri af tyresaed bestemt til  udfoersel fra USA til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab 1. Alt kvaeg paa den godkendte tyrestation  skal inden indsaettelsen og derefter med seks maaneders mellemrum underkastes en blokerende  ELISA-proeve for antistoffer med bluetongue-virus og en AGID-proeve for antistoffer med alle stammer  af epizootisk haemoragisk sygdomsvirus, som vides at forekomme i USA, i henhold til protokollerne i  bilag IV A og B. 2. En tyr, der har reageret negativt paa de seneste proever som omtalt punkt 1, betegnes ved  anvendelsen af denne beslutning som bluetongue seronegativ, medmindre eller indtil tyrens blod  eller saed giver et positivt resultat af en af de proever, der omtales i dette bilag eller i bilag  III. 3. Den vektorfri periode i sammenhaeng med en godkendt tyrestation defineres ved anvendelsen af  denne beslutning som en periode begyndende 21 dage efter den dato, der fastlaegges af United States  Department of Agriculture og straks meddeles ledelsen af den godkendt tyrestation og Kommissionen  for De Europaeiske Faellesskaber, og hvor al aktivitet hos de Culicoides-arter, der kan overfoere  bluetongue- eller epizootisk haemoragisk sygdomsvirus, ophoerer i det omraade, hvor tyrestationen er  beliggende, og sluttende 21 dage efter den dato, der fastlaegges og meddeles paa samme maade, og hvor  saadanne Culicoides-arter bliver aktive. 4. En saedopsamlingsperiode i forbindelse med opsamlingen af saed til udfoersel til Faellesskabet  defineres ved anvendelsen af denne beslutning som en periode paa hoejst tre uger, hvori denne saed  opsamles. Hvis den faktiske periode, hvori denne saed opsamles, er laengere end tre uger, opdeles  denne i to eller flere opsamlingsperioder, som hver er paa hoejst tre uger og som hver behandles som  en saerskilt opsamlingsperiode hvad angaar anvendelsen af de proever og procedurer, der vedroerer  bluetongue og epizootisk haemoragisk sygdom som omtalt i denne beslutning. 5. Saed, der kan henfoeres til en af de nedenstaaende kategorier, klassificeres som fri for bluetongue  ved udfoersel af saeden til Det Europaeiske Faellesskab: a) saed, der er opsamlet i den vektorfri periode fra en bluetongue seronegativ tyr, naar en blodproeve  paa den paagaeldende tyr, der er taget 21 dage efter saedopsamlingsperiodens afslutning, med negativt  resultat er blevet underkastet en ELISA-proeve for antistoffer mod bluetongue-virus og en AGID-proeve  for antistoffer mod alle serotyper af epizootisk haemoragisk sygdomsvirus, der vides at forekomme i  USA, i henhold til protokollerne i bilag IV A og B b) saed, der opsamles uden for den vektorfri saeson, fra en bluetongue seronegativ tyr, naar en  blodproeve paa den paagaeldende tyr, der er taget 21 dage efter saedopsamlingsperiodens afslutning, med  negativt resultat er blevet underkastet en ELISA-proeve for antistoffer mod bluetongue-virus og en  AGID-proeve for antistoffer mod alle serotyper af epizootisk haemoragisk sygdom, der vides at  forekomme i USA, i henhold til protokollerne i bilag IV A og B, og naar blodproever, der er taget paa  tyren paa de datoer, hvor den til udfoersel bestemte saed er blevet underkastet  virusisolationsproceduren i bilag III med negativt resultat.  BILAG II B Procedure for klassificering som bluetongue-testet af tyresaed bestemt til  udfoersel fra USA til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab 1. Definitionerne i bilag II A finder  anvendelse. 2. Saed, der falder ind under en af de kategorier, som beskrives nedenfor, klassificeres som  bluetongue-tested med henblik paa udfoersel af den til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab: a) saed, der er opsamlet i den vektorfri periode fra en tyr, som ikke er bluetongue seronegativ, naar  en sammenligning af en blodproeve, der er taget i begyndelsen af den vektorfri periode, og en  blodproeve, der er taget 21 dage efter saedopsamlingsperiodens afslutning, ikke viser tegn paa  serokonversion eller paa en firedobbelt eller stoerre stigning i maengden af serumneutraliserende  antistoffer mod nogen af de serotyper bluetongue-virus eller enzootiske haemoragisk sygdomsvirus,  der vides at forekomme i USA, og naar blodproever, der er taget paa tyren paa datoerne for opsamlingen  af den saed, der er bestemt til udfoersel til Faellesskabet, er blevet underkastet  virusisolationsproceduren i bilag III med negativt resultat b) saed, der er opsamlet paa en hvilken som helst tid paa aaret fra en tyr, som ikke er seronegativ,  naar en sammenligning af en blodproeve, der er taget i begyndelsen af den vektorfri periode, og en  blodproeve, der er taget 21 dage efter afslutningen af samme periode, ikke viser tegn paa  serokonversion eller paa en firedobbelt eller stoerre stigning i maengden af serumneutraliserende  antistoffer mod nogen af de serotyper bluetongue-virus eller enzootisk haemoragisk sygdomsvirus, der  vides at forekomme i USA, og naar blodproever, der er taget paa tyren paa datoerne for opsamlingen af  den saed, der er bestemt til udfoersel, er blevet underkastet virusisolationsproceduren i bilag III  med negativt resultat. 3. Der skal udstedes separate certifikater for bluetongue-testet saed og saed defineret som  bluetongue-fri i henhold til bilag II A.  BILAG III Procedure for virusisolation til paavisning af bluetongue-virus i blod i  forbindelse med udfoersel af tyresaed fra USA til Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab 1. Der tages  en blodproeve paa tyren de dage, hvor opsamlingen af saed til udfoersel finder sted (normalt to gange  om ugen), og den indsproejtes subkutant og intradermalt i et faar, som ved en blokerende ELISA-proeve  inden den foerste indsproejtning er fundet seronegativ senest 48 timer efter opsamlingen. 2. Der tages blodproever paa faaret til virusisolation to gange om ugen i tre uger begyndende paa  datoen for den foerste indsproejtning som omtalt i punkt 1. 3. Blodproever fra tyren og faaret indsproejtes senest 48 timer efter opsamlingen i mindst seks  hoenseaeg, der indeholder elleve dage gamle embryoner. 4. Hvis ingen embryoner doer, eller hvis embryoner doer inden for to dage efter indsproejtningen uden  specifikke laesioner, betragtes proeven som negativ efter syv dage. 5. Materiale fra embryoner, der doer inden for to til syv dage, indsproejtes i hoenseaeg, der  indeholder elleve dage gamle embryoner, og der anvendes mindst seks aeg for hvert doedt embryon. 6. Hvis indsproejtningen af materiale fra et doedt embryon foraarsager en embryondoedelighed paa 50 %  eller mere, betragtes proeven som positiv. Viruset eller viraene serotypebestemmes, efter at de er  overfoert til cellekultur, til bekraeftelse af tilstedevaerelsen af bluetongue-virus. 7. Der tages serum fra tyren to gange om ugen og fra faaret en gang om ugen i tre uger, og det  underkastes den blokerende ELISA, der er beskrevet i bilag IV A, en serumneutralisationsproeve for  antistoffer med bluetongue-virus, AGID-proeven, der er beskrevet i bilag IV B, og en  serumneutralisationsproeve for antistoffer mod epizootisk haemoragisk sygdomsvirus. 8. Faaret underkastes atter en blokerende ELISA 21 dage efter den sidste indsproejtning af blod fra  tyren. 9. Serokonversion eller en firedobbelt eller stoerre stigning i maengden af antistoftiter hos enten  tyr eller faar er tegn paa igangvaerende eller nylig stedfunden infektion, og proeven betragtes som  postiv. 10. Den serologiske proeve foretages paa alle proever under ét ved opsamlingsperiodens afslutning. 11. Saed frigives foerst til udfoersel, naar alle proever er afsluttet med negativt resultat.  BILAG IV A Protokol for en blokerende eller kompetitiv enzym-kaede-immunitet-maaling med  anvendelse af et gruppespecifikt monoklonalt antistof til paavisning af antistoffer mod  bluetongue-virus DEN KOMPETITIVE ELISA TIL PAAVISNING AF BLUETONGUE MED ANVENDELSE AF MONOKLONALT  ANTISTOF 3-17-A3 Den kompetitive ELISA med anvendelse af monoklonalt antistof 3-17-A3 kan paavise antistoffer mod  alle kendte serotyper af bluetongue-virus (BTV). Proeveprincippet er, at reaktionen mellem BTV-antigen og et gruppespecifikt monoklonalt antistof  (3-17-A3) afbrydes ved tilsaetning af fortyndinger af proeveserum. Tilstedevaerende antistoffer mod  BTV i proeveserumet blokerer reaktionsevnen hos det monoklonale antistof (Mas) og resulterer i en  formindskelse af den forventede farveudvikling ved tilsaetning af enzymsubstrat. Materialer og reagenser: 1. Fladbundede mikrotiterplader. 2. Antigen: tilberedes som beskrevet nedenfor. 3. Blokerende buffer: 5 % (w/v) »Marvel« toerret maelkepulver, 0,1 % (v/v) Tween-20 (leveres som  polyoxyethylensorbitanmonolauratsirup) i phosphatbufferet saltoploesning (PBS). 4. Monoklonalt antistof: 3-17-A3 (leveres som hybridom cellekultur supernatant), opbevaret ved  20°  C eller frysetoerret, fortyndet i forholdet 1:50 med blokerende buffer inden brug, rettet mod det  gruppespecifikke polypeptid p7. 5. Konjugat: kanin-antimuseglobulin (adsorberet og elueret), konjugeret med peberrodsperoxidase og  opbevaret i moerke ved 4° C. 6. Substrat og kromogen: 0,2 g ortophenylendiamin (OPD) oploest i en buffer bestaaende af 2,553 g  citronsyre og 4,574 g dinatriumhydrogenortophosphat tilsat destilleret vand op til 500 ml, opdelt i  25 ml alikvoter og opbevaret i moerke ved  20° C med tilsaetning af 12ìl/ml hydrogenperoxid (3 % w/v)  umiddelbart inden brug. OPD omgaas med forsigtighed - Brug gummihandsker - Mistanke om mutagen. 7. 1 Molar svovlsyre: 26,6 ml syre blandet i 473,4 ml destilleret vand. Husk - bland altid syre i vand, aldrig vand i syre. 8. Orbitalryster (sonikator). 9. ELISA-pladelaeser (proeven kan aflaeses visuelt). Proeveformat >TABELPOSITION>Proevekontrol Blindproevekontrol Raekke 1 (A - H) er en blindproevekontrol bestaaende af BTV-antigen og konjugat. Den kan anvendes som  blindproeve for ELISA-laeseren. Mas-kontrol Raekke 2 (A - H) er den monoklonale antistofkontrol og bestaar af BTV-antigen, monoklonalt antistof  og konjugat. Den udgoer en negativ kontrol. Middelvaerdien af absorbansaflaesningerne af denne  kontrolraekke repraesenterer 0 % haemning. Positiv kontrol Raekke 3 (A - H) er den positive kontrol. Den bestaar af BTV-antigen, BTV-positive  antiserumfortyndinger, Mas og konjugat. Den tjener som indikator for, at proeven fungerer  ordentligt, og der boer opnaas samstemmende haemningsniveauer fra proeve til proeve. Proevesera I ovenstaaende proeveformat kan der afproeves 18 sera fortyndet i forholdet 1:2, 1:4, 1:8 og 1:16.  Dette vil vise noget om antistoftiteret i proeveserumet. Fortyndingsraekken kan gaa laengere, saaledes  at titrene for serumfortynding naar slutpunktet. Som et alternativ kan sera, naar det gaelder  serologiske undersoegelser i stor skala, proeves i en enkelt fortynding (1:4) eller to fortyndinger  (1:2 og 1:4) som en hurtig screeningtest. Procedure 1. BTV-antigen fortyndes til praetitreret fortynding i PBS, der sonikeres et oejeblik for at sprede  akkumuleret virus (hvis der ikke findes nogen sonikator, pippeteres der kraftigt), og der tilfoeres  50 ìl til alle huller i ELISA-pladen. Der bankes paa pladens sider for at sprede antigenet. 2. Der inkuberes ved 37° C i 60 minutter i en orbitalryster. Pladerne vaskes tre gange ved  overskylning og toemning af hullerne med usterilt PBS, og de trykkes af med klatpapir. 3. Der tilsaettes 50 ìl blokerende buffer pr. hul. Proevesera og positivt serum haeldes i de relevante  huller, og der fortyndes hen over pladen ved hjaelp af en multikanalpipette. Sera maa ikke tilsaettes  blankproevekontrollen eller Mas-kontrollen. 4. Straks efter tilsaetningen af proeveseraene fortyndes Mas i blokerende buffer (for at praetitrere  fortyndingen), og der haeldes 50 ìl i alle pladens huller, undtagen naar det gaelder  blindproevekontrollen. 5. Der inkuberes ved 37° C i 60 minutter i en sonikator. Der vaskes tre gange med PBS og trykkes af  med klatpapir. 6. Kanin-antimusekoncentrat fortyndes til 1:5 000 i blokerende buffer, og der haeldes 50 ìl i alle  pladens huller. 7. Der inkuberes ved 37° C i 60 minutter i en sonikator. Der vaskes tre gange med PBS og trykkes af  med klatpapir. 8. OPD optoes, og umiddelbart inden brug tilsaettes hver 25 ml OPD 12 ìl 30 % hydrogenperoxid. 50 ìl  haeldes i alle pladens huller. Man lader farven udvikle sig i ca. 10 minutter og standser reaktionen  med 1 M svovlsyre (50 ìl pr. hul.). Farven skal udvikle sig i Mas-kontrolhullerne og i de huller,  der ikke indeholder sera med antistof mod BTV. 9. Hullerne undersoeges og registreres enten visuelt eller ved hjaelp af en spektrofotometrisk  laeser. Analyse af resultater Middel-OD-aflaesningen beregnes ud fra Mas-kontrollerne. Dette repraesenterer haemningsvaerdien paa 0 %.  Absorbansaflaesninger af proeveseraene udtrykkes i procent haemningsvaerdier ved hjaelp af foelgende  formel: Procent haemningsvaerdi = 100    OD ved tilstedevaerelse af proeveserumOD ved fravaer af proeveserum ×  100. Haemningsvaerdier paa over 40 % ved en serumfortynding paa 1:4 betragtes som positive. Visuel aflaesning  er mulig, da 40 % haemning er den laveste vaerdi, der let kan ses med det blotte oeje. Tilberedning af BTV ELISA-antigen 1. 10 roux sammenflydende BHK-21 celler vaskes tre gange med serumfrit Eagle's medium, og der  inficeres med bluetongue-virus serotype 1 i serumfrit Eagle's medium. 2. Der inkuberes ved 37° C og undersoeges daglig for cytopatisk effekt (cpe). 3. Naar der kan konstateres cpe i 80-90 % af cellelaget i hver roux, indsamles viruset ved, at  eventuelle celler, der stadig sidder paa glasset, rystes af. 4. Der centrifugeres ved 2 000-3 000 rpm for at sammenpresse cellerne. 5. Supernatanten fjernes, og cellerne genopslaemmes i ca. 30 ml PBS, som indeholder 1 % »Sarkosyl«  og 2 ml phenolmetylsulfonylfluorid (lysisbuffer). Dette kan bevirke, at cellerne danner en gel, og  der kan tilsaettes mere lysisbuffer for at reducere denne effekt. Anmaerkning: Phenylmetylsulfonylfluorid er skadeligt - behandles med stoerste forsigtighed. 6. Cellerne spraenges i 60 sekunder ved hjaelp af en ultralydsonde med en amplitude paa 30 micron. 7. Der centrifugeres ved 10 000 rpm i ti minutter. 8. Supernatanten opbevares ved +4° C, og den resterende cellemasse genopslaemmes i 10-20 ml  lysisbuffer. 9. Der sonikeres og foretages en klaring, idet supernatanten opbevares paa hvert stadium, i alt tre  gange. 10. Supernatanterne samles og centrifugeres ved 24 000 rpm i 120 minutter ved +4° C paa en 5 ml pude  bestaaende af 40 % sacharose (w/v i PBS) ved hjaelp af 30 ml Beckman centrifugeglas og en SW 28  rotor. 11. Supernatanten fjernes, glassene toemmes helt, og massen genopslaemmes i PBS ved hjaelp af  sonikering. Antigenet opbevares i alikvoter ved  70° C. Titrering af BTV ELISA-antigen Bluetongue ELISA-antigen titreres ved hjaelp af den indirekte ELISA. Tofoldfortyndinger af antigen  titreres over for en konstant fortynding (1:50) af monoklonalt antistof 3-17-A3. Protokollen er som  foelger: Procedure: 1. BTV antigen fortyndes i PBS over mikrotiterpladen i en todobbelt fortyndingsraekke (50 ìl/hul)  ved hjaelp af en multikanalpipette. 2. Der inkuberes en time ved 37° C i en orbitalryster. 3. Pladerne vaskes tre gange med PBS. 4. Der tilsaettes hvert hul i mikrotiterpladen 50 ìl monoklonalt antistof 3-17-A3 (fortyndet 1:50). 5. Der inkuberes en time ved 37° C i en orbitalryster. 6. Pladerne vaskes tre gange med PBS. 7. Der tilsaettes hvert hul i mikrotiterpladen 50 ìl kanin-antimuseglobulin konjugeret med  peberrodsperoxidase fortyndet til en praetitreret optimal koncentration. 8. Der inkuberes en time ved 37° C i en sonikator. 9. Der tilsaettes substrat og chromogen som tidligere beskrevet. Reaktionen standses efter ti  minutter ved tilsaetning af 1 Molar svovlsyre (50 ìl/hul). I den kompetitive proeve skal det monoklonale antistof vaere i overskud, og der vaelges derfor en  fortynding af antigen, som ligger paa titreringskurven (ikke paa den flade del), hvilket giver ca.  0,8 OD efter ti minutter.  BILAG IV B Protokol for en agar-gel-immunodiffusionsproeve til paavisning af antistoffer  mod epizootisk haemoragisk sygdom Agar-gel-immunodiffusionsproeven foretages efter foelgende  protokol: Materialer og reagenser Antigen: Antigen, der bundfaeldes, tilberedes i et cellekultursystem, der taaler den hurtige formering af  den/de paagaeldende serotype/r epizootisk haemoragisk sygdomsvirus. BHK eller Vero-celler anbefales.  Antigen forekommer i supernatantvaesken, naar virusets vaekst er ophoert, men kraever en koncentration  paa 50 til 100 gange for at vaere effektivt. Dette kan opnaas ved hjaelp af enhver standardprocedure  for proteinkoncentrering. Virus i antigenet kan inaktiveres ved tilsaetning af 0,3 % (v/v)  betapropiolakton. Kendt positivt kontrolserum: Ved hjaelp af det internationale referenceserum og antigen fremstilles et nationalt standardserum,  der standardiseres i det optimale forhold som for det internationale referenceserum, frysetoerres og  anvendes som det kendte kontrolserum i hver enkelt proeve. Proeveserum Procedure: 1 % agarose tilberedt i borat eller natriumbarbitolbuffer, pH 8,5 til 9,0 haeldes i en petriskaal op  til mindst 3,0 mm. Der skaeres et proevemoenster paa syv fugtfri huller paa hver 5,0 mm diameter i agaren. Moenstret bestaar  af et centerhul og seks huller, der er anbragt rundt om det i en cirkel med en radius paa 3 mm. >START GRAFIK>1 6    2 × 5    3 4>SLUT GRAFIK> Centerhullet fyldes med standardantigenet. De ydre huller 2, 4 og 6 fyldes med kendt positivt serum  og hul 1, 3 og 5 fyldes med proevesera. Systemet inkuberes i indtil 72 timer ved stuetemperatur i et lukket fugtigt kammer. Fortolkning: Et proeveserum er positivt, hvis det danner en specifik bundfaeldninglinje med antigenet og danner en  ubrudt identitetslinje med kontrolserumet. Et proeveserum er negativt, hvis det ikke danner en  specifik linje med antigenet og det ikke krummer kontrolserumets linje. Petriskaale boer undersoeges  mod en moerk baggrund ved indirekte belysning.