CELEX: 32007R0702
Language: sk
Date: 2007-06-21 00:00:00
Title: Nariadenie Komisie (ES) č. 702/2007 z  21. júna 2007 , ktorým sa mení a dopĺňa nariadenie (EHS) č. 2568/91 o charakteristikách olivového oleja a oleja z olivových zvyškov a o príslušných analytických metódach

22.6.2007   
            
            
               SK
            
            
               Úradný vestník Európskej únie
            
            
               L 161/11
            
         
      NARIADENIE KOMISIE (ES) č. 702/2007
   z 21. júna 2007,
   ktorým sa mení a dopĺňa nariadenie (EHS) č. 2568/91 o charakteristikách olivového oleja a oleja z olivových zvyškov a o príslušných analytických metódach
   KOMISIA EURÓPSKYCH SPOLOČENSTIEV,
   so zreteľom na Zmluvu o založení Európskeho spoločenstva,
   so zreteľom na nariadenie Rady (ES) č. 865/2004 z 29. apríla 2004 o spoločnej organizácii trhu s olivovým olejom a stolovými olivami, ktorým sa mení a dopĺňa nariadenie (EHS) č. 827/68 (1), a najmä na jeho článok 5 ods. 3,
   keďže:
   
               (1)
            
            
               Nariadením Komisie (EHS) č. 2568/91 (2) sa definujú fyzikálne a chemické vlastnosti olivových olejov a olejov z olivových výliskov a metódy hodnotenia týchto vlastností. Tieto metódy, ako aj medzné hodnoty pre vlastnosti olejov treba aktualizovať so zreteľom na názor chemických odborníkov a v súlade s prácami vykonanými v rámci Medzinárodnej rady pre olivový olej.
            
         
               (2)
            
            
               Chemickí odborníci usúdili predovšetkým, že kvantitatívne stanovenie percentuálneho obsahu 2-glyceril monopalmitátu je na detekciu esterifikovaných olejov presnejšie. Zníženie medznej hodnoty pre stigmastadién v panenských olivových olejoch umožňuje tiež lepšie rozlíšenie panenských a rafinovaných olivových olejov.
            
         
               (3)
            
            
               Uplatňovanie tohto nariadenia je vhodné posunúť až na 1. januára 2008 s cieľom umožniť určité obdobie na prispôsobenie sa novým predpisom a zavedenie potrebných prostriedkov na ich uplatnenie a zároveň so zámerom vyhnúť sa narušeniu obchodných transakcií. Z rovnakých dôvodov je potrebné ustanoviť, aby sa olivové oleje a oleje z olivových výliskov, ktoré boli v súlade s právnymi predpismi vyrobené a označené štítkami v Spoločenstve alebo dovezené do Spoločenstva a prepustené do voľného obehu pred uvedeným dátumom, mohli uvádzať na trh až do vyčerpania zásob.
            
         
               (4)
            
            
               Opatrenia stanovené v tomto nariadení sú v súlade so stanoviskom Riadiaceho výboru pre olivový olej a stolové olivy,
            
         PRIJALA TOTO NARIADENIE:
   Článok 1
   Nariadenie (EHS) č. 2568/91 sa mení a dopĺňa takto:
   
               1.
            
            
               V článku 2 ods. 1 sa šiesta zarážka nahrádza takto:
               
                           „—
                        
                        
                           na stanovenie percentuálneho obsahu 2-glyceril monopalmitátu metóda uvedená v prílohe VII,“.
                        
                     
         
               2.
            
            
               Prílohy sa menia a dopĺňajú v súlade s prílohou k tomuto nariadeniu.
            
         Článok 2
   Toto nariadenie nadobúda účinnosť tretím dňom po jeho uverejnení v Úradnom vestníku Európskej únie.
   Toto nariadenie sa uplatňuje od 1. januára 2008.
   Výrobky, ktoré boli v súlade s právnymi predpismi vyrobené a označené štítkami v Spoločenstve alebo dovezené do Spoločenstva a prepustené do voľného obehu pred 1. januárom 2008, sa však môžu uvádzať na trh až do vyčerpania zásob.
   
      Toto nariadenie je záväzné v celom rozsahu a priamo uplatniteľné vo všetkých členských štátoch.
      V Bruseli 21. júna 2007
      
         
            Za Komisiu
         
         Mariann FISCHER BOEL
         
         
            členka Komisie
         
      
   
   
      (1)  Ú. v. EÚ L 161, 30.4.2004, s. 97.
   
      (2)  Ú. v. ES L 248, 5.9.1991, s. 1. Nariadenie naposledy zmenené a doplnené nariadením (ES) č. 1989/2003 (Ú. v. EÚ L 295, 13.11.2003, s. 57).
   
      PRÍLOHA
      Prílohy k nariadeniu (EHS) č. 2568/91 sa menia a dopĺňajú takto:
      
                  1.
               
               
                  Obsah sa mení a dopĺňa takto:
                  
                              a)
                           
                           
                              názov prílohy II sa nahrádza týmto názvom:
                              „Stanovenie voľných mastných kyselín, studená metóda“;
                           
                        
                              b)
                           
                           
                              názov prílohy VII sa nahrádza týmto názvom:
                              „Stanovenie percentuálneho obsahu 2-glyceril monopalmitátu“.
                           
                        
            
                  2.
               
               
                  Príloha I sa nahrádza týmto textom:
                  
                     „PRÍLOHA I
                     VLASTNOSTI OLIVOVÝCH OLEJOV
                     Poznámky:
                     
                                 a)
                              
                              
                                 Výsledky analýz sa uvádzajú s rovnakým počtom desatinných miest, aký je určený pre jednotlivé vlastnosti.
                                 Číslica na poslednom desatinnom mieste sa zaokrúhli smerom nahor, ak je nasledujúca číslica väčšia ako 4.
                              
                           
                                 b)
                              
                              
                                 Ak aspoň jedna charakteristika nezodpovedá určeným hodnotám, je to dostačujúci dôvod na zaradenie olivového oleja do inej kategórie alebo na jeho označenie za nevyhovujúci z hľadiska čistoty.
                              
                           
                                 c)
                              
                              
                                 Kvalitatívne vlastnosti olejov označené hviezdičkou (*) znamenajú, že:
                                 
                                             —
                                          
                                          
                                             v prípade lampantového olivového oleja sa príslušné medzné hodnoty nemusia dodržať súčasne,
                                          
                                       
                                             —
                                          
                                          
                                             v prípade panenských olivových olejov je nedodržanie aspoň jednej z týchto medzných hodnôt dôvodom na zmenu kategórie pri zachovaní zaradenia v kategórii panenských olivových olejov.
                                          
                                       
                           
                                 d)
                              
                              
                                 Kvalitatívne vlastnosti olivových olejov označené dvoma hviezdičkami (**) znamenajú, že pre všetky olivové oleje z olivových výliskov sa príslušné medzné hodnoty nemusia dodržať súčasne.“
                              
                           
                                 Kategória
                              
                              
                                 Acidita/Kyslosť
                                 (%) (*)
                              
                              
                                 Peroxidové číslo
                                 mEq O2/kg (*)
                              
                              
                                 Vosky
                                 mg/kg (**)
                              
                              
                                 2-glyceril monopalmitát
                                 (%)
                              
                              
                                 Stigmastadién
                                 mg/kg (1)
                                 
                              
                              
                                 Rozdiel ECN42 HPLC – ECN42
                                 Teoretický výpočet
                              
                              
                                 K232 (*)
                              
                              
                                 K270 (*)
                              
                              
                                 Delta-K (*)
                              
                              
                                 Organoleptické hodnotenie
                                 Medián defektoru (Md) (*)
                              
                              
                                 Organoleptické hodnotenie
                                 Medián ovocnosti (Mf) (*)
                              
                           
                                 
                                             1.
                                          
                                          
                                             Extra panenský olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,8
                              
                              
                                 ≤ 20
                              
                              
                                 ≤ 250
                              
                              
                                 ≤ 0,9 ak je % kyseliny palmitovej celkom ≤ 14 %
                                 ≤ 1,0 ak je % kyseliny palmitovej celkom > 14 %
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 2,50
                              
                              
                                 ≤ 0,22
                              
                              
                                 ≤ 0,01
                              
                              
                                 Md = 0
                              
                              
                                 Mf > 0
                              
                           
                                 
                                             2.
                                          
                                          
                                             Panenský olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 2,0
                              
                              
                                 ≤ 20
                              
                              
                                 ≤ 250
                              
                              
                                 ≤ 0,9 ak je % kyseliny palmitovej celkom ≤ 14 %
                                 ≤ 1,0 ak je % kyseliny palmitovej celkom > 14 %
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 2,60
                              
                              
                                 ≤ 0,25
                              
                              
                                 ≤ 0,01
                              
                              
                                 Md ≤ 2,5
                              
                              
                                 Mf > 0
                              
                           
                                 
                                             3.
                                          
                                          
                                             Lampantový olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 > 2,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 300 (3)
                                 
                              
                              
                                 ≤ 0,9 ak je % kyseliny palmitovej celkom ≤ 14 %
                                 ≤ 1,1 ak je % kyseliny palmitovej celkom > 14 %
                              
                              
                                 ≤ 0,50
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 Md > 2,5 (2)
                                 
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             4.
                                          
                                          
                                             Rafinovaný olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 5
                              
                              
                                 ≤ 350
                              
                              
                                 ≤ 0,9 ak je % kyseliny palmitovej celkom ≤ 14 %
                                 ≤ 1,1 ak je % kyseliny palmitovej celkom > 14 %
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 1,10
                              
                              
                                 ≤ 0,16
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             5.
                                          
                                          
                                             Olivový olej – zložený z rafinovaných olivových olejov a panenských olivových olejov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 15
                              
                              
                                 ≤ 350
                              
                              
                                 ≤ 0,9 ak je % kyseliny palmitovej celkom ≤ 14 %
                                 ≤ 1,0 ak je % kyseliny palmitovej celkom > 14 %
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,90
                              
                              
                                 ≤ 0,15
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             6.
                                          
                                          
                                             Surový olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 > 350 (4)
                                 
                              
                              
                                 ≤ 1,4
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             7.
                                          
                                          
                                             Rafinovaný olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 5
                              
                              
                                 > 350
                              
                              
                                 ≤ 1,4
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 2,00
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                                 
                                             8.
                                          
                                          
                                             Olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 15
                              
                              
                                 > 350
                              
                              
                                 ≤ 1,2
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≤ 1,70
                              
                              
                                 ≤ 0,18
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 —
                              
                           
                        
                     
                                 Kategória
                              
                              
                                 Obsah kyselín (5)
                                 
                              
                              
                                 Súhrn transizomérov kyseliny olejovej
                                 (%)
                              
                              
                                 Súhrn transizomérov kyselín linolovej + linolenovej
                                 (%)
                              
                              
                                 Zloženie sterolov
                              
                              
                                 Steroly celkom
                                 (mg/kg)
                              
                              
                                 Erytrodiol a uvaol
                                 (%) (**)
                              
                           
                                 Myristová
                                 (%)
                              
                              
                                 Linolenová
                                 (%)
                              
                              
                                 Arachidová
                                 (%)
                              
                              
                                 Eikozánová
                                 (%)
                              
                              
                                 Behénová
                                 (%)
                              
                              
                                 Lignocerová
                                 (%)
                              
                              
                                 Cholesterol
                                 (%)
                              
                              
                                 Brassikasterol
                                 (%)
                              
                              
                                 Kampesterol
                                 (%)
                              
                              
                                 Stigmasterol
                                 (%)
                              
                              
                                 Betasitosterol
                                 (%) (6)
                                 
                              
                              
                                 Delta-7-stigmastenol
                                 (%)
                              
                           
                                 
                                             1.
                                          
                                          
                                             Extra panenský olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             2.
                                          
                                          
                                             Panenský olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             3.
                                          
                                          
                                             Lampantový olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5 (7)
                                 
                              
                           
                                 
                                             4.
                                          
                                          
                                             Rafinovaný olivový olej
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,30
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             5.
                                          
                                          
                                             Zmiešaný olivový olej – zložený z rafinovaných olivových olejov a panenských olivových olejov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,30
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,1
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 000
                              
                              
                                 ≤ 4,5
                              
                           
                                 
                                             6.
                                          
                                          
                                             Surový olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,20
                              
                              
                                 ≤ 0,10
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 —
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 2 500
                              
                              
                                 > 4,5 (8)
                                 
                              
                           
                                 
                                             7.
                                          
                                          
                                             Rafinovaný olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,40
                              
                              
                                 ≤ 0,35
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 800
                              
                              
                                 > 4,5
                              
                           
                                 
                                             8.
                                          
                                          
                                             Olej z olivových výliskov
                                          
                                       
                              
                                 ≤ 0,05
                              
                              
                                 ≤ 1,0
                              
                              
                                 ≤ 0,6
                              
                              
                                 ≤ 0,4
                              
                              
                                 ≤ 0,3
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 0,40
                              
                              
                                 ≤ 0,35
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≤ 0,2
                              
                              
                                 ≤ 4,0
                              
                              
                                 < kamp.
                              
                              
                                 ≥ 93,0
                              
                              
                                 ≤ 0,5
                              
                              
                                 ≥ 1 600
                              
                              
                                 > 4,5
                              
                           
               
            
                  3.
               
               
                  Dodatok 1 sa mení a dopĺňa takto:
                  
                              a)
                           
                           
                              prvá zarážka sa nahrádza týmto textom:
                              
                                          
                                                      „—
                                                   
                                                   
                                                      Acidita/kyslosť
                                                   
                                                
                                       
                                          príloha II
                                       
                                       
                                          Stanovenie voľných mastných kyselín, studená metóda“,
                                       
                                    
                        
                              b)
                           
                           
                              trinásta zarážka sa nahrádza týmto textom:
                              
                                          
                                                      „—
                                                   
                                                   
                                                      Mastné kyseliny nasýtené v pozícii 2
                                                   
                                                
                                       
                                          príloha VII
                                       
                                       
                                          Stanovenie percentuálneho obsahu 2-glyceril monopalmitátu“.
                                       
                                    
                        
            
                  4.
               
               
                  Nadpis prílohy II sa nahrádza takto:
               
            
                  5.
               
               
                  Príloha IV sa nahrádza týmto textom:„
                     PRÍLOHA IV
                     STANOVENIE OBSAHU VOSKOV POMOCOU KAPILÁRNEJ PLYNOVEJ CHROMATOGRAFIE
                     1.   PREDMET
                     Táto metóda opisuje postup stanovenia obsahu voskov v olivových olejoch. Vosky sa separujú v závislosti od počtu atómov uhlíka. Môže sa používať najmä na rozlíšenie medzi olivovým olejom získaným lisovaním a olejom získaným extrakciou (olej z výliskov).
                     2.   PRINCÍP
                     Pridanie vhodného vnútorného štandardu k tuku alebo oleju, potom frakcionácia chromatografiou na kolóne s hydratovaným silikagélom. Získanie frakcie eluovanej pri testovacích podmienkach ako prvej (ktorej polarita je nižšia ako polarita frakcie triglyceridov), potom priama analýza kapilárnou plynovou chromatografiou.
                     3.   MATERIÁL
                     3.1.   25 ml Erlenmeyerova banka.
                     3.2.   Sklená kolóna na plynovú chromatografiu, s vnútorným priemerom 15,0 mm, výškou 30 až 40 cm a vybavená kohútikom.
                     3.3.   Plynový chromatograf vhodný na fungovanie s kapilárnou kolónou, vybavený systémom na priame zavádzanie do kolóny s týmito zložkami:
                     3.3.1.   Termostatická komora pre kolóny, vybavená teplotným programátorom.
                     3.3.2.   Studený injektor na priame zavedenie do kolóny.
                     3.3.3.   Plameňovoionizačný detektor a prevodník-zosilňovač.
                     3.3.4.   Zapisovač-integrátor schopný pracovať s prevodníkom-zosilňovačom (3.3.3), rýchlosť odozvy nižšia ako 1 sekunda, s meniteľnou rýchlosťou posunu papiera. (Takisto je možné používať informatizované systémy, ktoré sú založené na získaní údajov z plynovej chromatografie prostredníctvom osobného počítača).
                     3.3.5.   Kapilárna kolóna sklená alebo silikagélová, s dĺžkou 8 až 12 metrov, vnútorným priemerom 0,25 až 0,32 mm, z vnútornej strany pokrytá kvapalnou fázou, s rovnomernou hrúbkou 0,10 – 0,30 μm. (Kvapalné fázy vhodné na použitie, v obchodnej sieti ako typ SE52 alebo SE54).
                     3.4.   Mikrostriekačka s kapacitou 10 μl na priamy nástrek do kolóny, vybavená cementovanou ihlou.
                     3.5.   Elektrický vibrátor.
                     3.6.   Rotačná odparka.
                     3.7.   Mufľová pec.
                     3.8.   Analytické váhy s garantovanou presnosťou merania na ± 0,1 mg.
                     3.9.   Bežné laboratórne sklené pomôcky.
                     4.   CHEMICKÉ ČINIDLÁ
                     4.1.   Silikagél s granulometriou medzi 60 a 200 μm.
                     Silikagél vložte do pece aspoň na štyri hodiny pri teplote 500 °C. Po vychladnutí pridajte 2 % vody vzhľadom na množstvo odobraného silikagélu. Dobre pretrepte, aby sa hmota homogenizovala. Najmenej 12 hodín pred použitím uchovávajte v tme.
                     4.2.   n-hexán na chromatografiu.
                     4.3.   Etyléter na chromatografiu.
                     4.4.   n-heptán na chromatografiu.
                     4.5.   Štandardný roztok laurylarašidátu, 0,1 % (hm/obj) v hexáne (vnútorný štandard). [Je tiež možné použiť palmityl-palmitát (hexadecyl-palmitát) alebo myristyl-stearát (teradecyl-oktadekanoát)].
                     4.5.1.   Sudán 1 (1-fenyl-azo-2-naftol).
                     
                     4.6.   Nosný plyn: vodík alebo čisté hélium na plynovú chromatografiu.
                     4.7.   Pomocné plyny:
                     
                                 —
                              
                              
                                 čistý vodík na plynovoú chromatografiu,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 čistý vzduch na plynovú chromatografiu.
                              
                           5.   POSTUP
                     5.1.   Príprava chromatografickej kolóny
                     Suspenzujte 15 g silikagélu (4.1) v n-hexáne (4.2) a zaveďte do kolóny (3.2). Spontánne usadzovanie dokončite pomocou elektrickej trepačky (3.5) s cieľom dosiahnuť homogénnejšiu chromatografickú vrstvu. Perkolujte 30 ml n-hexánu s cieľom eliminovať všetky prípadné nečistoty. Presne odvážte pomocou váh (3.8). Vložte 500 mg vzorky do 25 ml Erlenmeyerovej banky (3.1), pridajte primerané množstvo vnútorného štandardu (4.5) vzhľadom na predpokladaný obsah voskov. Napríklad: v prípade olivového oleja pridajte 0,1 mg laurylarašidátu a v prípade oleja z olivových výliskov 0,25 až 0,5 mg. Takto pripravenú vzorku preneste do chromatografickej kolóny s pomocou dvoch 2 ml dielov n-hexánu (4.2).
                     Napustite rozpúšťadlo až do výšky 1 mm nad hornú úroveň absorbentu, potom perkolujte ďalších 70 ml n-hexánu, aby sa eliminovali prirodzene prítomné n-alkány. Začnite chromatografickú elúciu zozbieraním 180 ml zmesi n-hexánu/etyléteru v pomere 99 : 1 pri zachovaní prietoku približne 15 kvapiek každých 10 sekúnd. Elúcia vzorky sa má uskutočniť pri okolitej teplote 22 °C ± 4 °C.
                     Poznámky:
                     
                                 —
                              
                              
                                 Zmes n-hexánu/etyléteru (99 : 1) sa musí pripravovať denne.
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Na umožnenie vizuálnej kontroly správnej elúcie voskov je možné pridať do vzorky roztoku 100 μl 1 %-ného sudánu v elučnej zmesi. Farbivo má retenciu na rozhraní voskov a triglyceridov, preto keď zafarbenie dosiahne dno chromatografickej kolóny, je potrebné elúciu zastaviť, lebo všetky vosky boli eluované.
                              
                           Takto získanú frakciu sušte v rotačnej odparke (3.6) až do takmer úplnej eliminácie rozpúšťadla. Posledné 2 ml rozpúšťadla eliminujte pomocou slabého prúdu azotu; potom pridajte 2 – 4 ml n-heptánu.
                     5.2.   Analýza plynovou chromatografiou
                     5.2.1.   Predbežné úkony
                     Namontujte kolónu do plynového chromatografu (3.3), pričom vstupný port sa pripojí k systému na kolóne a výstupný port k detektoru. Skontrolujte bežným spôsobom prístrojové vybavenie na plynovú chromatografiu (činnosť uzavretých plynových obvodov, účinnosť detektora a zapisovača atď.).
                     Pokiaľ sa kolóna používa po prvý raz, je potrebné ju kondicionovať. Zaveďte do kolóny mierny prietok plynu, potom zapnite prístroj na plynovú chromatografiu. Postupne zahrievajte, až kým sa približne po 4 hodinách dosiahne teplota 350 °C. Túto teplotu udržiavajte najmenej počas dvoch hodín, potom prístroj nastavte na prevádzkové podmienky [nastavte prietok plynu, zapáľte plamienok, pripojte k elektrickému zapisovaču (3.3.4), nastavte teplotu komory pre kolónu, nastavte detektor atď.]. Zaznamenajte signál pri citlivosti najmenej dvakrát vyššej, ako sa vyžaduje na vykonanie analýzy. Základná čiara musí byť lineárna, nesmie obsahovať píky akéhokoľvek druhu a nesmie vykazovať žiadnu odchýlku.
                     Negatívna priamočiara odchýlka ukazuje, že kolóna je nesprávne pripojená; pozitívna odchýlka znamená, že kolóna nebola dostatočne kondicionovaná.
                     5.2.2.   Voľba prevádzkových podmienok
                     Prevádzkové podmienky, ktoré treba pozorovať, sú spravidla tieto:
                     
                                 —
                              
                              
                                 teplota kolóny:
                                 
                                              
                                          
                                          
                                             20 °C/minúta
                                          
                                          
                                              
                                          
                                          
                                             5 °C/minúta
                                          
                                          
                                              
                                          
                                          
                                             20 °C/minúta
                                          
                                          
                                              
                                          
                                       
                                             na začiatku 80 °C
                                             (1′)
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             240 °C
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             325 °C
                                             (6′)
                                          
                                          
                                             →
                                          
                                          
                                             340 °C
                                             (10′)
                                          
                                       
                           
                                 —
                              
                              
                                 teplota detektora: 350 °C,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 množstvo vstreknutej látky: 1 μl roztoku (2 – 4 ml) n-heptánu,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 nosný plyn: hélium alebo vodík s optimálnou lineárnou rýchlosťou pre zvolený plyn (pozri dodatok),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 citlivosť prístroja: taká, aby zodpovedala nižšie uvedeným podmienkam:
                              
                           Uvedené podmienky môžu byť upravené v závislosti od vlastností kolóny a prístroja na plynovú chromatografiu tak, aby sa dosiahla separácia všetkých voskov, postačujúce rozlíšenie píkov (pozri obrázok) a retenčný čas vnútorného štandardu C32 bol 18 ± 3 minúty. Najreprezentatívnejší pík vosku by mal dosahovať aspoň 60 % rozsahu stupnice.
                     Parametre integrácie píkov sa stanovia takým spôsobom, aby sa dosiahlo správne vyhodnotenie príslušných plôch píkov.
                     
                        Poznámka: Vzhľadom na vysokú konečnú teplotu sa pripúšťa kladná odchýlka, ktorá nesmie prekročiť 10 % rozsahu stupnice.
                     5.3.   Vykonanie analýzy
                     Naberte 1 μl roztoku pomocou 10 μl mikrostriekačky; natiahnite piestik dozadu, až kým ihla nebude prázdna. Ihlu zaveďte do injekčného systému a po uplynutí jednej až dvoch sekúnd rýchlo vstreknite; po uplynutí asi piatich sekúnd ihlu pomaly vytiahnite.
                     Záznam nechajte prebiehať dovtedy, až kým neprebehne úplná elúcia voskov.
                     Základná čiara musí vždy zodpovedať požadovaným podmienkam.
                     5.4.   Identifikácia píkov
                     Jednotlivé píky identifikujte z retenčných časov a porovnaním so zmesami voskov so známymi retenčnými časmi, analyzovanými pri rovnakých podmienkach.
                     Na obrázku je znázornený chromatogram voskov panenského olivového oleja.
                     5.5.   Kvantitatívne hodnotenie
                     Integrátorom vypočítajte plochy píkov interného štandardu a alifatických esterov od C40 do C46.
                     Vypočítajte obsah voskov každého esteru v mg/kg tuku podľa príslušného vzorca:
                     
                        
                     kde:
                     
                                 Ax
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 plocha píku každého esteru v milimetroch štvorcových;
                              
                           
                                 As
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 plocha píku vnútorného štandardu v milimetroch štvorcových,
                              
                           
                                 ms
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 množstvo pridaného vnútorného štandardu v miligramoch;
                              
                           
                                 m
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 množstvo vzorky odobratej na stanovenie v gramoch.
                              
                           6.   VYJADRENIE VÝSLEDKOV
                     Uveďte celkové obsahy jednotlivých voskov od C40 do C46 v mg/kg tuku (ppm).
                     
                        Poznámka: Zložky, ktoré treba kvantifikovať, sa stanovujú vzhľadom na susediace píky esterov s počtom uhlíkov medzi C40 a C46 podľa príkladu chromatogramu voskov olivového oleja znázorneného na nasledujúcom obrázku. Ak sa ester C46 ukáže dvojmo, odporúča sa analyzovať na jeho identifikáciu frakciu voskov oleja z olivových výliskov, v ktorom je pík esteru C46 ľahko identifikovateľný, pretože výrazne prevažuje.
                     Výsledky sa uvádzajú na jedno desatinné miesto.
                     
                        Obrázok
                     
                     Chromatogram voskov istého olivového oleja (9)
                     
                     
                        
                  
                  
                     Dodatok
                     Stanovenie lineárnej rýchlosti plynu
                     Vstreknite do prístroja na plynovú chromatografiu nastaveného na bežné prevádzkové podmienky 1 až 3 μl metánu (alebo propánu). Odmerajte čas, ktorý potrebuje plyn na prechod cez kolónu od momentu jeho zavedenia až dovtedy, kým sa neobjaví pík (tM).
                     Lineárna rýchlosť v cm/sek je daná vzorcom L/tM, pričom L je dĺžka kolóny v cm a tM je čas nameraný v sekundách.
                  “;
            
                  6.
               
               
                  Príloha VII sa nahrádza týmto textom:
                  
                     „PRÍLOHA VII
                     STANOVENIE PERCENTUÁLNEHO OBSAHU 2-GLYCERIL MONOPALMITÁTU
                     1.   ÚČEL A OBLASŤ POUŽITIA
                     Touto metódou sa popisuje analytický postup na stanovenie percentuálneho obsahu kyseliny palmitovej v pozícii 2 triglyceridov prostredníctvom hodnotenia 2-glyceril monopalmitátu.
                     Táto metóda je použiteľná na tekuté rastlinné oleje pri temperovanej okolitej teplote (20 °C).
                     2.   PRINCÍP
                     Po príprave sa vzorka oleja podrobí procesu pankreatickej lipázy: čiastočná a špecifická hydrolýza v pozíciách 1 a 3 molekuly triglyceridu vyvolá objavenie sa monoglyceridov v pozícii 2. Percentuálny obsah 2-glyceril monopalmitátu v monoglyceridovej frakcii sa stanovuje po silanizácii kapilárnou plynovou chromatografiou.
                     3.   PRÍSTROJOVÉ VYBAVENIE A BEŽNÝ LABORATÓRNY MATERIÁL
                     3.1.   25 ml Erlenmeyerova banka
                     3.2.   100, 250 a 300 ml kadičky
                     3.3.   Sklená kolóna na chromatografiu, s vnútorným priemerom 21 – 23 mm, dĺžkou 400 mm, vybavená fritovým kotúčom a kohútikom
                     3.4.   Odmerné valce s objemom 10, 50, 100 a 200 ml
                     3.5.   100 a 250 ml banky
                     3.6.   Rotačná odparka
                     3.7.   10 ml centrifugačná skúmavka s kónickým dnom so zábrusovou zátkou
                     3.8.   Odstredivka pre 10 a 100 ml skúmavky
                     3.9.   Termostat s možnosťou udržiavania teploty na 40 °C ± 0,5 °C
                     3.10.   Odmerné pipety s objemom 1 a 2 ml
                     3.11.   1 ml podkožná striekačka
                     3.12.   100 μl mikrostriekačka
                     3.13.   1 000 ml lievik
                     3.14.   Plynový chromatograf pre kapilárne kolóny, vybavený injekčným systémom ‚on column’ za studena na priame zavedenie vzorky do kolóny a pecou umožňujúcou udržiavať nastavenú teplotu s presnosťou na 1 °C
                     3.15.   Studený injektor ‚on column’ na priame zavedenie vzorky do kolóny
                     3.16.   Plameňovoionizačný detektor a elektrometer
                     3.17.   Zapisovač-integrátor prispôsobený elektrometru s rýchlosťou odozvy najviac 1 sekundu a s meniteľnou rýchlosťou posunu papiera
                     3.18.   Kapilárna kolóna sklená alebo silikagélová, s dĺžkou 8 až 12 metrov, vnútorným priemerom 0,25 až 0,32 mm, pokrytá metylpolysiloxánom alebo 5 % fenyl metylpolysiloxánom, s hrúbkou 0,10 – 0,30 μm, použiteľná pri teplote 370 °C
                     3.19.   10 μl mikrostriekačka vybavená cementovou ihlou dlhou aspoň 7,5 cm na priame vstreknutie na kolónu.
                     4.   ČINIDLÁ
                     4.1.   Silikagél s granulometriou medzi 0,063 a 0,200 mm (70/280 mesh) pripravený takto: Silikagél vložte do porcelánovej kapsule, sušte aspoň štyri hodiny v peci pri teplote 160 °C. Nechajte vychladnúť v exsikátore pri temperovanej teplote. Pridajte objem vody, ktorý zodpovedá 5 % hmotnosti silikagélu, takto: odvážte 152 g silikagélu do Erlenmeyerovej banky, pridajte 8 g destilovanej vody, zazátkujte a jemne pretrepte, aby sa voda rovnomerne rozdelila. Pred použitím nechajte aspoň 12 hodín stáť.
                     4.2.   n-hexán (na chromatografiu)
                     4.3.   Izopropanol
                     4.4.   Izopropanol, vodný roztok v objemovom pomere 1/1
                     4.5.   Pankreatická lipáza. Použitá lipáza má mať aktivitu medzi 2,0 a 10 jednotkami lipázy na mg (V obchodnej sieti dostať pankreatické lipázy s aktivitou medzi 2 a 10 jednotkami na mg enzýmu.)
                     4.6.   Tlmiaci roztok tri-hydroxy-metylaminometánu: vodný roztok 1 M upravený až na pH = 8 (kontrolované potenciometrom) pridaním koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (v objemovom pomere 1/1)
                     4.7.   Cholát sodný enzymatickej kvality, 0,1 % vodný roztok (tento roztok sa musí použiť do 15 dní od jeho prípravy)
                     4.8.   Chlorid vápenatý, 22 % vodný roztok
                     4.9.   Dietyléter na chromatografiu
                     4.10.   Vyvíjacie rozpúšťadlo: zmes n-hexánu/dietyléteru (v objemovom pomere 87/13)
                     4.11.   12 % hmotnostných roztoku hydroxidu sodného
                     4.12.   Fenolftaleín, 1 % roztok v etanole
                     4.13.   Nosný plyn: vodík alebo hélium na plynovú chromatografiu
                     4.14.   Pomocné plyny: vodík, minimálne 99 %, zbavený vlhkosti a organických látok – a vzduch rovnakej čistoty na plynovú chromatografiu
                     4.15.   Činidlá na silanizáciu: zmes pyridínu/hexametyldisilazánu, trimetylchlórsilánu v objemovom pomere 9/3/1 (Hotové roztoky dostať v obchodnej sieti. Na silanizáciu sa môžu použiť aj ďalšie činidlá, konkrétne bis-trimetylsilyl trifluóracetamid + 1 % trimetylchlorosilán, zriedené rovnakým objemom bezvodého pyridínu.)
                     4.16.   Referenčné vzorky: čisté monoglyceridy alebo zmesi monoglyceridov so známym percentuálnym zložením podobným vzorke.
                     5.   POSTUP
                     5.1.   Príprava vzorky
                     5.1.1.   Oleje s obsahom voľných kyselín menej ako 3 % sa nemusia pred chromatografiou na silikagélovej kolóne neutralizovať. Oleje s obsahom voľných kyselín viac ako 3 % sa musia neutralizovať v súlade s bodom 5.1.1.1.
                     5.1.1.1.   Do 1 000 ml lievika (3.13) dajte 50 g oleja a 200 ml n-hexánu. Pridajte 100 ml izopropanolu a taký objem roztoku 12 % hydroxidu sodného (4.11), aký zodpovedá obsahu voľných kyselín v oleji s 5 % navýšením. Dôkladne pretrepávajte počas 1 minúty. Pridajte 100 ml destilovanej vody, znova pretrepte a nechajte stáť.
                     Po dekantácii eliminujte spodnú vrstvu obsahujúcu mydlá. Eliminujte prípadné stredné vrstvy (sliz a nerozpustné látky). Premyte hexánový roztok neutralizovaného oleja postupnými dávkami 50 – 60 ml roztoku izopropanolu/vody v objemovom pomere 1/1 (4.4) až do vymiznutia ružového sfarbenia fenolftaleínu.
                     Eliminujte najväčšiu časť hexánu vákuovou destiláciou (napríklad s použitím rotačnej odparky) a preneste olej do 100 ml banky (3.5). Vysúšajte olej vo vákuu až do úplnej eliminácie rozpúšťadla.
                     Po skončení tejto procedúry má byť acidita oleja nižšia ako 0,5 %.
                     5.1.2.   Vložte 1,0 g oleja pripraveného podľa vyššie uvedených indikácií do 25 ml (3.1) Erlenmeyerovej banky a rozpustite v 10 ml vyvíjacej zmesi (4.10). Nechajte roztok postáť aspoň 15 minút pred chromatografiou na silikagélovej kolóne.
                     Ak je roztok zakalený, odstreďte ho, aby boli zabezpečené optimálne podmienky na chromatografiu. (Môžu sa použiť aj už hotové 500 g silikagélové patróny SPE – na extrakciu na tuhých fázach).
                     5.1.3.   Príprava chromatografickej kolóny
                     Nalejte do kolóny (3.3) približne 30 ml vyvíjacieho rozpúšťadla (4.10), pomocou sklenenej tyčinky vložte do spodnej časti kolóny kúsok bavlny; stlačte, aby sa odstránil vzduch.
                     V kadičke pripravte suspenziu z 25 g silikagélu (4.1) v približne 80 ml vyvíjacieho rozpúšťadla a pomocou lievika ju vlejte do kolóny.
                     Skontrolujte, či bol do kolóny zavedený všetok silikagél; premyte vyvíjacím rozpúšťadlom (4.10), otvorte kohútik a nechajte, aby hladina tekutiny dosiahla približne 2 mm nad vrchnou úrovňou silikagélu.
                     5.1.4.   Chromatografia na kolóne
                     Do 25 ml Erlenmeyerovej banky (3.1) odvážte presne 1,0 g vzorky pripravenej podľa bodu 5.1.
                     Rozpustite vzorku v 10 ml vyvíjacieho roztoku (4.10). Nalejte roztok do chromatografickej kolóny pripravenej podľa bodu 5.1.3. Nepohnite povrchom kolóny.
                     Otvorte kohútik a nechajte roztok vzorky tiecť, až kým nedosiahne úroveň silikagélu. Vyvíjajte so 150 ml vyvíjacieho rozpúšťadla. Upravte prietok na 2 ml/min (tak, aby 150 ml pretieklo do kolóny približne za 60 – 70 minút).
                     Odoberte eluát do 250 ml banky, ktorú ste predtým odvážili. Odparte rozpúšťadlo vo vákuu a odstráňte jeho posledné stopy pod prúdom dusíka.
                     Odvážte banku a vypočítajte množstvo získaného extrátu.
                     [V prípade použitia už hotových silikagélových patrónov SPE postupujte takto: zaveďte 1 ml roztoku (5.1.2) do vopred pripravených patrónov s 3 ml n-hexánu.]
                     Po perkolovaní roztoku vyvíjajte so 4 ml n-hexánu/dietyléteru v objemovom pomere 9/1.
                     Odoberte eluát do 10 ml skúmavky a odparujte pod prúdom dusíka až do vysušenia.
                     Suché rezíduum podrobte pankreatickej lipáze (5.2). Základom je overiť zloženie mastných kyselín pred a po prechode patrónom SPE.
                     5.2.   Hydrolýza pankreatickou lipázou
                     5.2.1.   Do centrifugačnej skúmavky odvážte 0,1 g oleja pripraveného podľa bodu 5.1. Pridajte 2 ml tlmiaceho roztoku (4.6), 0,5 ml roztoku cholátu sodného (4.7) a 0,2 ml roztoku chloridu vápenatého, pričom po každom pridaní riadne pretrepte. Uzatvorte skúmavku zábrusovou zátkou a umiestnite ju do termostatu pri teplote 40 ± 0,5 °C.
                     5.2.2.   Pridajte 20 mg lipázy, opatrne pretrepte (tak, aby ste nezmáčali zátku) a dajte skúmavku do termostatu presne na 2 minúty, potom ju vyberte, počas 1 minúty dôkladne pretrepávajte a nechajte vychladnúť.
                     5.2.3.   Pridajte 1 ml dietyléteru, zazátkujte a dôkladne pretrepte, potom odstreďte a pomocou mikrostriekačky preneste éterový roztok do čistej a suchej skúmavky.
                     5.3.   Príprava silanizovaných derivátov a plynová chromatografia
                     5.3.1.   Pomocou mikrostriekačky zaveďte 100 μl roztoku (5.2.3) do 10 ml skúmavky s kónickým dnom.
                     5.3.2.   Eliminujte rozpúšťadlo pod miernym prúdom dusíka, pridajte 200 μl činidla na silanizáciu (4.15), uzavrite skúmavku a nechajte 20 minút odstáť.
                     5.3.3.   Po 20 minútach pridajte 1 až 5 ml n-hexánu (v závislosti od chromatografických podmienok): výsledný roztok je pripravený na plynovú chromatografiu.
                     5.4.   Plynová chromatografia
                     Hlavné operačné podmienky sú tieto:
                     
                                 —
                              
                              
                                 teplota injektora (injektor ‚on column’) nižšia ako teplota varu rozpúšťadla (68 °C),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 teplota detektora: 350 °C,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 teplota kolóny: nastavenie teploty pece: 60 °C počas 1 minúty, každú minútu zvýšte o 15 °C až do dosiahnutia 180 °C, potom o 5 °C za minútu až do 340 °C, ďalej udržiavajte 340 °C počas 13 minút,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 nosný plyn: vodík alebo hélium nastavené na lineárnu rýchlosť adekvátnu na dosiahnutie rozlíšenia znázorneného na obrázku 1. Retenčný čas triglyceridu C54 má byť 40 ± 5 minút (pozri obrázok 2). (Vyššie uvedené podmienky postupu sa uvádzajú len orientačne. Každý subjekt ich musí optimalizovať s cieľom dosiahnuť požadované rozlíšenie. Výška píku zodpovedajúca 2-glyceril monopalmitátu musí dosiahnuť aspoň 10 % rozsahu stupnice zapisovača.),
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 Množstvo vstreknutej látky: 0,5 – 1 μl roztoku (5 ml) n-hexánu (5.3.3).
                              
                           5.4.1.   Identifikácia píkov
                     Jednotlivé monoglyceridy sa identifikujú v závislosti od získaných retenčných časov a vzhľadom na tie, ktoré boli získané so štandardami zmesí monoglyceridov analyzovaných pri rovnakých podmienkach.
                     5.4.2.   Kvantitatívne hodnotenie
                     Plocha každého píku sa vypočíta pomocou elektronického integrátora.
                     6.   VYJADRENIE VÝSLEDKOV
                     Percentuálny obsah glyceryl monopalmitátu sa vypočíta na základe vzťahu medzi plochou zodpovedajúceho píku a súčtom plôch píkov všetkých monoglyceridov (pozri obrázok 2) podľa vzorca:
                     glycéryl monopalmitate (%): 
                     kde:
                     
                                 Ax
                                 
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 plocha píku, ktorý zodpovedá glyceril monopalmitátu,
                              
                           
                                 ΣA
                              
                              
                                 =
                              
                              
                                 súčet plôch všetkých píkov, ktoré zodpovedajú monoglyceridom.
                              
                           Výsledok sa uvádza s presnosťou na jedno desatinné miesto.
                     7.   SPRÁVA O ANALÝZE
                     V správe z analýzy sa má konkrétne uviesť:
                     
                                 —
                              
                              
                                 odkaz na túto metódu,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 všetky údaje potrebné na úplnú identifikáciu vzorky,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 výsledok analýzy,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 každé odklonenie sa od tejto metódy, či už vplyvom rozhodnutia dotknutých strán alebo z iného dôvodu,
                              
                           
                                 —
                              
                              
                                 podrobné identifikačné údaje o laboratóriu, dátum uskutočnenia analýzy a podpis zodpovedných za analýzu.
                              
                           
                        Obrázok 1
                     
                     Chromatogram výsledných produktov reakcie silanizácie, ktoré sa získali lipázou na rafinovanom olivovom oleji s pridaním 20 % esterifikovaného oleja (100 %)
                     
                        
                     
                        Obrázok 2
                     
                     
                        Chromatogram:
                     
                     A)   neesterifikovaného olivového oleja, po lipáze; po silanizácii; za týchto podmienok (kapilárna kolóna 8 – 12 m) je vosková frakcia eluovaná v rovnakom čase ako frakcia diglyceridu alebo krátko potom.
                     
                     
                        Po lipáze by obsah triglyceridov nemal prekročiť 15 %.
                     
                     
                        
                     
                        Chromatogram:
                     
                     B)   esterifikovaného oleja po lipáze; po silanizácii; za týchto podmienok (kapilárna kolóna 8 – 12 m) je vosková frakcia eluovaná v rovnakom čase ako frakcia diglyceridu alebo krátko potom.
                     
                     
                        Po lipáze by obsah triglyceridov nemal prekročiť 15 %.
                     
                     
                        
                     8.   POZNÁMKY
                     
                        Poznámka 1   PRÍPRAVA LIPÁZY
                     V obchodnej sieti sú k dispozícii lipázy s dostatočnou aktivitou. V laboratóriu sa tiež dajú pripraviť takto:
                     5 kg čerstvých pankreasov z ošípaných ochlaďte na 0 °C. Odstráňte tuhý okolitý tuk a spojivové tkanivo a rozomeľte v mlynčeku s lamelami tak, aby ste získali tekutú hmotu. Pretrepávajte túto hmotu 4 až 6 hodín spolu s 2,5 litra bezvodého acetónu a potom odstreďte. Ešte trikrát extrahujte zvyšok s rovnakým objemom bezvodého acetónu, potom ďalších dvakrát so zmesou acetónu/dietyléteru v objemovom pomere (1/1) a dvakrát s dietyléterom.
                     Sušte zvyšok 48 hodín vo vákuu, aby ste získali stabilný prášok, ktorý bude dlhodobo uskladniteľný v chladničke chránený pred vlhkosťou.
                     
                        Poznámka 2   KONTROLA AKTIVITY LIPÁZY
                     Pripravte emulziu olivového oleja takto:
                     Počas 10 minút pretrepávajte v miešači zmes zloženú zo 165 ml roztoku arabskej gumy s koncentráciou 100g/l, 15 g roztlčeného ľadu a 20 ml vopred zneutralizovaného oleja.
                     Postupne zaveďte do 50 ml banky 10 ml tejto emulzie, ďalej 0,3 ml roztoku cholátu sodného s koncentráciou 0,2 g/ml a 20 ml destilovanej vody.
                     Umiestnite banku do termostatu nastaveného na 37 °C; zaveďte elektródy pH-metra a špirálové miešadlo.
                     Pomocou byrety pridávajte po kvapkách roztok hydroxidu sodného 0,1 N, až kým nedosiahnete pH 8,3.
                     Pridajte objem suspenzie prášku lipázy vo vode (0,1 g/ml lipázy). Keď pH-meter ukáže pH 8,3, uveďte chronometer do činnosti a pridávajte po kvapkách roztok hydroxidu sodného takým tempom, aby sa hodnota pH udržiavala na 8,3. Zaznamenajte každú minútu objem spotrebovaného roztoku.
                     Preneste údaje do grafového systému súradníc tak, že os nezávisle premenných (x-ová os) ponesie časové údaje a na osi závisle premenných (y-ová os) uvediete počet mililitrov alkalického roztoku 0,1 N spotrebovaného na udržanie konštantného pH. Mali by ste získať lineárny graf.
                     Aktivita lipázy meraná v jednotkách lipázy na mg sa vypočíta na základe vzorca:
                     
                        
                     kde:
                     
                                 A
                              
                              
                                 je aktivita vyjadrená v jednotkách lipázy/mg
                              
                           
                                 V
                              
                              
                                 je počet mililitrov roztoku hydroxidu sodného 0,1 N za minútu (vypočítané na základe grafu)
                              
                           
                                 N
                              
                              
                                 je molarita roztoku hydroxidu sodného
                              
                           
                                 m
                              
                              
                                 je množstvo testovacej lipázy v mg.
                              
                           Jednotka lipázy je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré uvoľní 10 mikro-ekvivalentov kyseliny za minútu.“
                  
               
            
                  7.
               
               
                  V prílohe X „A“ sa bod 6.2 nahrádza takto:
                  
                              „6.2.
                           
                           
                              Metyl-estery sa pripravia podľa postupu B uvedenom v ďalšej prílohe X „B“. Tuky alebo oleje s obsahom voľných kyselín viac ako 3 % musia byť vopred neutralizované v súlade s bodom 5.1.1 prílohy VII.“
                           
                        
            
         (1)  Súhrn izomérov, ktoré sa (ne-)dajú separovať pomocou kapilárnej kolóny.
      
         (2)  Alebo ak medián defektoru je najviac 2,5 a medián ovocnosti je rovný 0.
      
         (3)  Oleje s obsahom voskov medzi 300 mg/kg a 350 mg/kg sa považujú za lampantový olivový olej, ak je celkový obsah alifatických alkoholov najviac 350 mg/kg alebo ak je percentuálny podiel erytrodiolu a uvaolu najviac 3,5.
      
         (4)  Oleje s obsahom voskov medzi 300 mg/kg a 350 mg/kg sa považujú za surový olej z olivových výliskov, ak je celkový obsah alifatických alkoholov vyšší ako 350 mg/kg a ak je percentuálny podiel erytrodiolu a uvaolu vyšší ako 3,5.
      
         (5)  Obsah ostatných mastných kyselín (%): palmitovej: 7,5 – 20,0; palmitoolejovej: 0,3 – 3,5; heptadekánovej: ≤ 0,3; heptadecénovej: ≤ 0,3; stearovej: 0,5 – 5,0; olejovej: 55,0 – 83,0; linolovej: 3,5 – 21,0.
      
         (6)  Súhrn: Delta-5,23-stigmastadienol+clerosterol+beta-sitosterol+sitostanol+delta-5-avenasterol+delta-5,24-stigmastadienol.
      
         (7)  Oleje s obsahom voskov medzi 300 mg/kg a 350 mg/kg sa považujú za lampantový olivový olej, ak je celkový obsah alifatických alkoholov najviac 350 mg/kg alebo ak je percentuálny podiel erytrodiolu a uvaolu nižší ako alebo rovný 3,5.
      
         (8)  Oleje s obsahom voskov medzi 300 mg/kg a 350 mg/kg sa považujú za surový olej z olivových výliskov, ak je celkový obsah alifatických alkoholov vyšší ako 350 mg/kg a ak je percentuálny podiel erytrodiolu a uvaolu vyšší ako 3,5.
      
         (9)  Po elúcii sterol-esterov sa na chromatografickom zázname nemajú ukázať výrazné píky (triglyceridy).