CELEX: 31996L0045
Language: hu
Date: 1996-07-02 00:00:00
Title: A Bizottság 96/45/EK hetedik irányelve (1996. július 2.) a kozmetikai termékek összetételének ellenőrzéséhez szükséges vizsgálati módszerekrőlEGT vonatkozású szöveg.

Fontos jogi nyilatkozat

|

31996L0045

Hivatalos Lap L 213 , 22/08/1996 o. 0008 - 0015

		A Bizottság 96/45/EK hetedik irányelve(1996. július 2.)a kozmetikai termékek összetételének ellenőrzéséhez szükséges vizsgálati módszerekről(EGT vonatkozású szöveg)AZ EURÓPAI KÖZÖSSÉGEK BIZOTTSÁGA,tekintettel az Európai Közösséget létrehozó szerződésre,tekintettel a legutóbb a 95/34/EK bizottsági irányelvvel [1] módosított, a kozmetikai termékekre vonatkozó tagállami jogszabályok közelítéséről szóló, 1976. július 27-i 76/768/EGK tanácsi irányelvre [2] és különösen annak 8. cikke (1) bekezdésére,mivel a 76/768/EGK irányelv rendelkezik a kozmetikai termékek hivatalos vizsgálatáról azzal a céllal, hogy biztosítsa a kozmetikai termékek összetételére vonatkozó közösségi rendelkezések által előírt feltételeknek betartását;mivel minden szükséges vizsgálati módszert a lehető leggyorsabban meg kell határozni; mivel bizonyos módszereket a 87/143/EGK irányelvvel [3] módosított 80/1335/EGK bizottsági irányelv [4], a 90/207/EGK [5], a 83/514/EGK [6], a 85/490/EGK [7], a 93/73/EGK [8] és a 95/32/EK [9] bizottsági irányelvek által módosított 82/434/EGK irányelv [10] révén már elfogadtak;mivel a kozmetikai termékekben lévő 2-fenoxietanol, 1-fenoxipropán-2-ol, metil-, etil-, propil-, butil- és benzil-4-hidroxibenzoát azonosítása és mennyiségi meghatározása jelenti a hetedik lépést;mivel az ebben az irányelvben megállapított intézkedések összhangban vannak a 76/768/EGK irányelvnek a műszaki fejlődéshez való hozzáigazításával foglalkozó bizottság véleményével,ELFOGADTA EZT AZ IRÁNYELVET:1. cikkA tagállamok megtesznek minden szükséges intézkedést annak biztosítására, hogy a kozmetikai termékek hivatalos vizsgálata során a 2-fenoxietanol, 1-fenoxipropán-2-ol, metil-, etil-, propil-, butil- és benzil-4-hidroxibenzoát azonosítása és mennyiségi meghatározása a mellékletben leírt módszerek szerint történik.2. cikk(1) A tagállamok hatályba léptetik azokat a törvényi, rendeleti és közigazgatási rendelkezéseket, amelyek szükségesek ahhoz, hogy ennek az irányelvnek legkésőbb 1997. szeptember 30-ig megfeleljenek. Erről haladéktalanul tájékoztatják a Bizottságot.(2) Amikor a tagállamok elfogadják ezeket a rendelkezéseket, azokban hivatkozni kell erre az irányelvre, vagy azokhoz hivatalos kihirdetésük alkalmával ilyen hivatkozást kell fűzni. A hivatkozás módját a tagállamok határozzák meg.(3) A tagállamok közlik a Bizottsággal nemzeti joguknak azokat a főbb rendelkezésit, amelyeket az ezen irányelv által szabályozott területen fogadnak el.3. cikkEz az irányelv az Európai Közösségek Hivatalos Lapjában való kihirdetését követő 20. napon lép hatályba.4. cikkEnnek az irányelvnek a tagállamok a címzettjei.Kelt Brüsszelben, 1996. július 2-án.a Bizottság részérőlEmma Boninoa Bizottság tagja[1] HL L 167., 1995.7.18., 19. o.[2] HL L 262., 1976.9.27., 169. o.[3] HL L 57., 1987.2.27., 56. o.[4] HL L 383., 1980.12.31., 27. o.[5] HL L 108., 1990.4.28., 92. o.[6] HL L 291., 1983.10.24., 9. o.[7] HL L 295., 1985.11.7., 30. o.[8] HL L 231., 1993.9.14., 34. o.[9] HL L 178., 1995.7.28., 20. o.[10] HL L 185., 1982.6.30., 1. o.--------------------------------------------------MELLÉKLET2-FENOXIETANOL, 1-FENOXIPROPÁN-2-OL, METIL-, ETIL-, PROPIL-, BUTIL- ÉS BENZIL-4-HIDROXIBENZOÁT AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA KOZMETIKAI TERMÉKEKBENA. AZONOSÍTÁS1. Cél és alkalmazási területEz a módszer egy vékonyréteg-kromatográfiás (TLC) eljárást határoz meg, amely a B. szakaszban leírt meghatározási módszerrel együttesen lehetővé teszi 2-fenoxietanol, 1-fenoxipropán-2-ol, metil-, etil-, propil-, butil- és benzil-4-hidroxibenzoát azonosítását a kozmetikai termékekben.2. AlapelvA tartósítószereket acetonnal vonjuk ki a megsavanyított vizsgálati mintából. Szűrés után az acetonos oldatot vízzel elegyítjük, és lúgos közegben a zsírsavakat kalciumsóik formájában csapadékként leválasztjuk. A lúgos aceton/víz elegyet dietil-éterrel kivonjuk a lipofil anyagok eltávolítása céljából. Savanyítás után a tartósítószereket dietil-éterrel kivonjuk. A dietil-éteres kivonat egy részét szilikagéllel bevont vékonyréteg lemezre cseppentjük. A lemez előhívása után a kapott kromatogramot UV fény alatt vizsgáljuk meg, és a foltokat Millon reagenssel tesszük láthatóvá.3. Reagensek3.1. Általános részMinden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. A felhasznált víznek desztillált víznek vagy legalább ezzel egyenértékű tisztaságú víznek kell lennie.3.2. Aceton3.3. Dietil-éter3.4. n-pentán3.5. Metil-alkohol3.6. Ecetsav (Jégecet)3.7. Sósav oldat, c(HCl) = 4 mol/l3.8. Kálium-hidroxid oldat, c(KOH) = 4 mol/l3.9. Kalcium-klorid dihidrát (CaCl2.2H2O)3.10. Detektáló szer: Millon reagensA Millon reagens (higany(II)-nitrát egy készen, a kereskedelemben beszerezhető oldat (69820 Fluka).3.11. 2-Fenoxietanol3.12. 1-Fenoxipropán-2-ol3.13. Metil 4-hidroxibenzoát (metilparaben)3.14. Etil 4-hidroxibenzoát (etilparaben)3.15. n-Propil 4-hidroxibenzoát (propilparaben)3.16. n-Butil 4-hidroxibenzoát (butilparaben)3.17. Benzil 4-hidroxibenzoát (benzilparaben)3.18. Referencia-oldatokKészítsünk 0,1 %-os (m/v) oldatokat mindegyik referencia-oldatból (3.11., 3.12., 3.13., 3.14., 3.15., 3.16. és 3.17.) metanollal.3.19. ElőhívószerElegyítsünk 88 térfogatrész n-pentánt (3.4.) 12 térfogatrész ecetsavat jégecet) (3.6.).4. EszközökSzokásos laboratóriumi berendezés, és:4.1. 60 °C hőmérséklet tartására alkalmas vízfürdő4.2. Előhívó kád (szűrőpapír bevonat nélkül)4.3. Ultraibolya fényforrás, 254 nm4.4. Vékonyréteg lemezek, 20 x 20 cm, 0,25 mm 60F254 szilikagéllel bevonva, koncentráló zónával (Merck 11798, Darmstadt, vagy ezzel egyenértékű)4.5. Maximum 105 °C hőmérséklet tartására alkalmas szárítószekrény4.6. Meleglevegős hajszárító4.7. Gyapjú festőhenger, hossza kb. 10 cm, külső átmérője kb. 3,5 cm. A gyapjúréteg vastagsága 2-3 mm. Nyírjuk le a gyapjút, ha szükséges.Lásd az 5.2. alatti megjegyzést.4.8. 50 ml-es üvegcső csavaros kupakkal.4.9. Elektromos fűtőlap termosztátos hőmérséklet-szabályozóval. Hőmérséklet-beállítás: kb. 80 °C. A fűtőlapot fedjük le egy 20 x 20 cm-es, kb. 6 mm vastagságú alumínium lemezzel, az egyenletes hőeloszlás érdekében.5. Eljárás5.1. MintaelőkészítésMérjünk be hozzávetőlegesen 1 g mintát egy 50 ml-es csavaros tetejű üvegcsőbe (4.8.). Adjunk hozzá négy csepp sósavat (3.7.) és 40 ml acetont.Erősen lúgos termékeknél, mint amilyen a pipereszappan, 20 csepp sósav oldatot kell adagolni. Zárjuk le a csövet, melegítsük fel az elegyet kb. 60 °C-ra, hogy elősegítsük a tartósítószerek kivonását az acetonos fázisba, majd rázzuk erősen egy percig.Mérjük meg az oldat pH-ját pH-indikátorpapírral, és állítsuk be < 3 értékre sósav oldattal. Ismét erősen rázzuk egy percig.Hűtsük le az oldatot szobahőmérsékletre, és szűrjük át egy szűrőpapíron egy Erlenmeyer lombikba. Töltsünk 20 ml szűrletet egy 200 ml-es Erlenmeyer lombikba, adjunk hozzá 60 ml vizet és keverjük meg. Állítsuk be a pH-t körülbelül 10-es értékre kálium-hidroxiddal (3.8.) úgy, hogy a pH mérésére indikátorpapírt használunk.Adjunk hozzá 1 g kalcium-klorid-dihidrátot (3.9.) és rázzuk fel erősen. Szűrőpapíron szűrjük át egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikba, amely 75 ml dietil-étert tartalmaz, és rázzuk erősen egy percig. Hagyjuk szétválni a fázisokat, és a vizes réteget gyűjtsük össze egy 200 ml-es Erlenmeyer lombikba. Indikátorpapír segítségével állítsuk be a vizes oldat pH-ját hozzávetőlegesen 2-re sósav oldattal. Ezt követően adjunk hozzá 10 ml dietil-étert, és rázzuk erősen egy percig. Hagyjuk szétválni a fázisokat, és a dietil-éteres rétegből 2 ml-t töltsük át egy 5 ml-es mintatartó ampullába.5.2. Vékonyréteg kromatográfia (TLC)Tegyünk egy TLC lemezt (4.4.) a megmelegített alumínium lapra (4.9.). Minden referencia oldatból (3.18.) kb. 10 μl-t, a mintaoldatból (5.1.) pedig 100 μl-t vigyünk fel a TLC lemez koncentrációs zónájának alapvonalára.Ha szükséges, használhatunk légáramot az oldószer párolgásának elősegítésére. Vegyük le a TLC lemezt a melegítőlapról, és hagyjuk lehűlni szobahőmérsékletre. Töltsünk 100 ml előhívó oldószert (3.19.) egy előhívó kádba (4.2.).Tegyük a TLC lemezt azonnal a telítetlen kádba, és szobahőmérsékleten végezzük el az előhívást addig, amíg az oldószerfront mintegy 15 cm-re eltávolodik az alapvonaltól. Vegyük ki a lemezt az előhívókádból, és szárítsuk meg meleg levegőáramban egy meleglevegős hajszárító segítségével.Vizsgáljuk meg a lemezt UV fény (4.3.) alatt, és jelöljük be a foltok helyét. Melegítsük a lemezt 30 percig egy szárítószekrényben (4.5.) 100 °C -on a felesleges ecetsav eltávolítása érdekében. A tartósítószereket Millon reagenssel (3.10.) tegyük láthatóvá a kromatogramon úgy, hogy a festőhengert (4.7.) belemerítjük a reagensbe, és addig görgetjük a TLC lemezen, ameddig az egyenletesen benedvesedik.Megjegyzés:Vagylagosan a foltok úgy is láthatóvá tehetők, hogy egy csepp Millon reagenst viszünk fel minden, UV fény alatt kijelölt foltra.A 4-hidroxibenzoesav észterek piros foltokként, míg az 2-fenoxipropanol és az 1 fenoxipropán-2-ol sárga foltokként jelennek meg. Megjegyezzük ugyanakkor, hogy maga a 4-hidroxibenzoesav, amely a mintában tartósítószerként vagy a parabének bomlástermékeként jelen lehet, ugyancsak vörös foltként fog megjelenni. Lásd a 7.3. és 7.4. pontot.6. AzonosításSzámítsuk ki az Rf értéket minden egyes foltra. Hasonlítsuk össze a mintaoldatra kapott foltokat az referencia-oldatokra kapott foltokkal az Rf értékek, az UV sugárzás alatti viselkedésük, és a láthatóvá tett színük szempontjából. Vonjunk le előzetes következtetéseket a tartósítószerek azonosságára vonatkozóan.Ha úgy tűnik, hogy parabének vannak jelen, akkor a B. szakaszban leírt HPLC vizsgálatot kell végrehajtani. Vessük össze a TLC-vel és a nagynyomású folyadék-kromatográfiával (HPLC) kapott eredményeket, hogy megerősítsük a 2-fenoxietanol, az 1-fenoxipropán-2-ol és a parabének jelenlétét.7. Megjegyzések7.1. A Millon reagens mérgező volta miatt ezt a reagenst legjobb a leírt eljárások egyikének megfelelően használni. Permetezése nem ajánlott.7.2. Hidroxil-csoportokat tartalmazó egyéb vegyületek is kelthetnek színt Millon reagenssel. N. de Krujif, M.A.H. Rijk, L.A. Pranato-Soetardhi és A. Schouten (1987): Determination of preservatives in cosmetic products I: Thin-layer chromatographic procedure for the identification of preservatives in cosmetic products (J. Chromatography 410, 395-411.) cikkében számos tartósítószerre vonatkozó színtáblázat és a TLC eljárás a használatával kapott Rf értékekre vonatkozó találhatóak.7.3. A következő táblázatban felsorolt Rf értékek a vizsgálatban kapható értékek jelzésére szolgálnak:Vegyület | hRf | Szín |4-hidroxibenzoesav | 11 | piros |metil-parabén | 12 | piros |etil-parabén | 17 | piros |propil-parabén | 21 | piros |butil-parabén | 26 | piros |benzil-parabén | 16 | piros |2-fenoxietanol | 29 | sárga |1-fenoxipropán-2-ol | 50 | sárga |7.4. A 4-hidroxibenzoesav és metil-parabén vagy a benzil-parabén és etil-parabén esetén nem kapunk szétválást. Ezeknek a vegyületeknek az azonosítását úgy kell megerősíteni, hogy elvégezzük a B. szakaszban leírt HPLC vizsgálatot, és a mintára kapott retenciós időket egybevetjük a referencia-oldatok retenciós időivel.B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS1. Cél és alkalmazási területEz a módszer eljárást határoz meg a 2-fenoxietanol, 1-fenoxipropán-2-ol, metil 4-hidroxibenzoát, etil-4-hidroxibenzoát, propil-4-hidroxibenzoát, butil-4-hidroxibenzoát és benzil-4-hidroxibenzoát kozmetikai termékekben történő meghatározására.2. FogalommeghatározásAz e módszerrel meghatározott tartósítószerek mennyiségét tömegszázalékban fejezzük ki.3. AlapelvA mintát kénsav hozzáadásával megsavanyítjuk, majd pedig etil-alkohol és víz elegyével szuszpendáljuk. Miután gyengén melegítettük a keveréket a lipid fázis megolvasztása és a kvantitatív kivonás elősegítése céljából, a keveréket megszűrjük.A szűrletben lévő tartósítószereket fordított fázisú HPLC-vel határozzuk meg, belső standardként izopropil-4-hidroxibenzoát használjunk.4. Reagensek4.1. Általános részMinden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie, és HPLC-re alkalmasnak ott, ahol erre szükség van. A felhasznált víznek desztillált víznek vagy legalább ezzel megegyező tisztaságú víznek kell lennie.4.2. Abszolút etil-alkohol4.3. 2-fenoxietanol4.4. 1-fenoxipropán-2-ol4.5. Metil-4-hidroxibenzoát (metil-parabén)4.6. Etil-4-hidroxibenzoát (etil-parabén)4.7. n-propil-4-hidroxibenzoát (propil-parabén)4.8. Izopropil-4-hidroxibenzoát (izopropil-parabén)4.9. n-butil-4-hidroxibenzoát (butil-parabén)4.10. Benzil-4-hidroxibenzoát (benzilparabén)4.11. Tetrahidrofurán4.12. Metil-alkohol4.13. Acetonitril4.14. Kénsav oldat c(H2SO4) = 2 mol/l4.15. Etil-alkohol/víz elegyKeverjünk össze kilenc térfogatrész etil-alkoholt (4.2.) és egy térfogatrész vizet.4.16. Belső standard oldatNagy pontossággal mérjünk be kb. 0,25 g izopropil-parabént (4.8.), töltsük át egy 500 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel és töltsük fel a jelig etil-alkohol/víz eleggyel (4.15.).4.17. Mozgó fázis: tetrahidrofurán/víz/metil-alkohol/acetonitril elegyKeverjünk össze 5 térfogatrész tetrahidrofuránt, 60 térfogatrész vizet, 10 térfogatrész metil-alkoholt és 25 térfogatrész acetonitrilt.4.18. Tartósítószerek törzsoldataNagy pontossággal mérjünk be kb. 0,2 g 2-fenoxietanolt, 0,2 g 1-fenoxipropán-2-ol-t, 0,05 g metil-parabént, 0,05 g etil-parabént, 0,05 g propil-parabént, 0,05 g butil-parabént és 0,025 g benzil-parabént egy 100 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel és töltsük jelig etil-alkohol/víz eleggyel.Hűtőszekrényben tartva az oldat egy hétig stabil.4.19. Tartósítószerek standard oldataiA törzsoldatból (4.18.) töltsünk át 20,00 ml-t, 10,00 ml-t, 5,00 ml-t, 2,00 ml-t és 1,00 ml-t egy-egy 50 ml-es mérőlombikba. Minden mérőlombikhoz adjunk 10 ml belső standard oldatot (4.16.) és 1,0 ml kénsav oldatot (4.14.), majd töltsük fel a jelig etil-alkohol/víz eleggyel. Ezeket az oldatokat frissen kell készíteni.5. EszközökHagyományos laboratóriumi felszerelés, és még:5.1. 60 ± 1 °C fenntartására alkalmas vízfürdő5.2. Nagynyomású folyadék-kromatográf 280 nm hullámhosszú UV detektorral5.3. Analitikai oszlopRozsdamentes acél, 25 cm x 4,6 mm belső átmérő (vagy 12,5 cm x 4,6 mm belső átmérő), Nucleosil 5C18 vagy ezzel egyenértékű töltettel töltve (lásd a 10.1. pontot)5.4. 100 ml-es üvegcsövek csavaros kupakkal5.5. Forrkő, 2-4 mm méretű vagy ezzel egyenértékű6. Eljárás6.1. Mintaelőkészítés6.1.1. A minta előkészítése belső standard hozzáadása nélkülMérjünk be körülbelül 1 g-nyi mintát egy 100 ml-es csavaros tetejű üvegcsőbe. Pipettázzunk 1,0 ml kénsav oldatot (4.14.) és 50,0 ml etil-alkohol/víz elegyet (4.15.) a csőbe. Adjunk hozzá körülbelül 1 g forrkövet (5.5.), zárjuk le a csövet és rázzuk erősen addig, amíg homogén szuszpenziót nem kapunk. Rázzuk legalább egy percig. Tegyük a csövet öt percre vízfürdőbe (5.1.), és tartsuk 60 ± 1 °C-on a tartósítószerek etil-alkoholos fázisba történő kivonásának elősegítése céljából.Azonnal hűtsük le a csövet hideg vízáramban, és tartsuk a kivonatot hűtőszekrényben egy órán keresztül. Szűrjük le a kivonatot egy szűrőpapíron keresztül. Töltsünk át körülbelül 2 ml kivonatot egy 5 ml-es mintatartó küvettába. Tartsuk a kivonatot hűtőszekrényben, és 24 órán belül végezzük el a HPLC-s meghatározást.6.1.2. A minta előkészítése belső standard hozzáadásávalMérjünk be három tizedes pontossággal 1 ± 0,1 g mintát egy 100 ml-es csavaros tetejű üvegcsőbe.Pipettázzunk 1,0 ml kénsav oldatot és 40,0 ml etil-alkohol/víz elegyet a csőbe. Adjunk hozzá körülbelül 1 g forrkövet (5.5.) és pontosan 10,00 ml belső standard oldatot. Zárjuk le a csövet, és rázzuk erősen addig, amíg homogén szuszpenziót nem kapunk. Rázzuk legalább egy percig. Tegyük a csövet öt percre vízfürdőbe (5.1.), és tartsuk 60 ± 1 °C-on a tartósítószerek etil-alkoholos fázisba történő kivonásának elősegítése céljából.Azonnal hűtsük le a csövet hideg vízáramban, és tartsuk a kivonatot hűtőszekrényben egy órán keresztül. Szűrjük le a kivonatot egy szűrőpapíron keresztül.Töltsünk át körülbelül 2 ml kivonatot egy 5 ml-es mintatartó küvettába (vakoldat). Tartsuk a kivonatot hűtőszekrényben, és 24 órán belül végezzük el a HPLC-s meghatározást.6.2. Nagynyomású folyadék-kromatográfia (HPLC)6.2.1. Kromatografálási feltételek:- Mozgó fázis: tetrahidrofurán/víz/metil-alkohol/acetonitril elegy (4.17.)- Áramlási sebesség: 1,5 ml/perc- A detektálás hullámhossza: 280 nm6.2.2. KalibrálásMinden tartósítószer standard oldatából (4.19.) fecskendezzünk 10 μl-t. A kapott kromatogramokból határozzuk meg a vizsgált tartósítószer standard oldat csúcsmagasságának a belső standard csúcsmagasságához viszonyított arányát. Ábrázoljuk görbén az egyes tartósítószerekhez tartozó csúcsmagasságok arányát az egyes standard oldatok koncentrációjának függvényében.6.2.3. Mennyiségi meghatározásFecskendezzünk 10 μl belső standard nélküli mintaoldatot (6.1.1.) a kromatográfba, és vegyük fel a kromatogramot.Fecskendezzünk az egyik tartósítószer standard oldatból (4.19.) 10 μl–t, és vegyük fel a kromatogramot. Hasonlítsuk össze a kapott kromatogramokat.Ha a minta kivonásának (6.1.1.) kromatogramján nincs csúcs nagyjából ugyanannál a retenciós időnél, mint az izopropil-parabének (ajánlott belső standard), akkor azzal folytassuk, hogy fecskendezzünk 10 μl belső standardt tartalmazó minta kivonatot (6.1.2.). Vegyük fel a kromatogramot, és mérjük meg a csúcsmagasságokat.Ha zavaró csúcsot találunk a minta kivonatának kromatogramján ugyanannál a retenciós időnél, mint az izopropil-parabénnél, akkor egy másik megfelelő belső standardot kell választani.Ha a vizsgált tartósítószerek egyike hiányzik a kromatogramról, akkor ez a tartósítószer használható fel belső standardként.Számítsuk ki a vizsgált tartósítószerek csúcsmagasságainak a belső standard csúcsmagasságaihoz viszonyított arányát.Győződjünk meg arról, hogy kalibrálásnál a felhasznált belső standardokra lineáris görbét kaptunk.Győződjünk meg arról, hogy a tartósítószerek standard oldatára és a mintaoldatra kapott kromatogramok kielégítik a következő elvárásokat:- csúcsszétválásánál a leggyengébben szétvált párnak legalább 0,90-nek kell lennie.+++++ TIFF +++++1. ábra: CsúcsszétválásHa a szükséges szétválást nem értük el, akkor vagy egy hatékonyabb oszlopot kell használni, vagy a mozgó fázis összetételét kell addig állítgatni, amíg az elvárásokat kielégíti.- Minden kapott csúcs As aszimmetria faktorának 0,9–1,5 közötti tartományban kell lennie. (A csúcsaszimmetria-faktor definícióját lásd a 2. ábrán). Az aszimmetria-faktor meghatározására szolgáló kromatogram felvételéhez legalább 2 cm/perc papíradagolási sebesség ajánlott.+++++ TIFF +++++2. ábra: Csúcsaszimmetria-faktor- Stabil alapvonalat kell kapnunk.7. SzámításHasználjuk a kalibrációs görbét (6.2.2.) és a vizsgált tartósítószerek csúcsmagasságának a belső standard csúcsmagasságához viszonyított arányait a mintaoldatban lévő tartósítószerek koncentrációjának kiszámításához. Számítsuk ki a minta 2-fenoxietanol, 1-fenoxipropán-2-ol, metil 4-hidroxibenzoát, etil-4-hidroxibenzoát, propil-4-hidroxibenzoát, butil-4-hidroxibenzoát és benzil-4-hidroxibenzoát tartalmát (wi) tömegszázalékban (%m/m) a következő képlet segítségével:%w=b,ahol:b = a vakoldatban lévő i-edik tartósítószer koncentrációja (μg/ml) a kalibrációs görbe alapján, ésa = a vizsgált adag tömege (g).8. Megismételhetőség [1]Lásd a megjegyzések 10.5. pontját.9. Reprodukálhatóság [2]Lásd a megjegyzések 10.5. pontját.10. Megjegyzések10.1. Álló fázisHPLC meghatározásoknál az oldatok retenciós viselkedése erősen függ az álló fázis típusától, márkájától és előéletétől. Azt, hogy egy oszlop használható-e a vizsgált tartósítószerek szétválasztására, a standard oldatokra kapott eredményekből tudjuk megállapítani (lásd a megjegyzések 6.2.3. pontját). A javasolt töltőanyagon kívül a Hypersil ODS és a Zorbax ODS is ugyanúgy használható.Vagylagosan az ajánlott mozgó fázis összetételét lehet optimalizálni az elvárt szétválasztás elérése érdekében.10.2. A detektálás hullámhosszaA leírt módszerrel végzett egyenetlenségi vizsgálat azt mutatta, hogy a detektálás hullámhosszának kismértékű megváltozása jelentős hatással bír a meghatározás eredményeire.Ezért ezt a paramétert az elemzés során igen alaposan kell szabályozni.10.3. Zavaró hatásokAz ebben a módszerben leírt körülmények között sok más vegyület, mint például tartósítószerek és kozmetikai adalékanyagok is kioldódnak. A kozmetikai termékekről szóló tanácsi irányelvhez tartozó VI. mellékletben említett nagyszámú tartósítószer retenciós ideje fel van sorolva N. de Kruijf, M.A.H. Rijk, L.A. Pranato-Soetardhi and Schouten, (1989): Determination of preservatives in cosmetic products II. High-performance liquid chromatographic identification (J. Chromatography 469, 317-398) cikkében.10.4. Az analitikai oszlop védelmére egy megfelelő védőoszlop is használható.10.5. A módszert egy együttműködési kísérlet során vizsgálták, amelyben kilenc laboratórium vett részt. Három mintát vizsgáltak. A következő táblázat mindhárom mintára felsorolja a vizsgált mintákra kapott % m/m átlagokat (m), a megismételhetőségeket (r) és a reprodukálhatóságokat (R):Minta | | 1-Fenoxi-propán-2-ol | Metil-parabén | Etil-parabén | Propil-parabén | Butil-parabén | Benzil-parabén || 2-Fenoxi-etanol |Vitamin krém | m | 1,124 | 0,250 | 0,0628 | 0,031 | 0,0906 || r | 0,016 | | 0,018 | 0,0035 | 0,0028 | 0,0044 | || R | 0,176 | | 0,030 | 0,0068 | 0,0111 | 0,0034 | |Nappali arckrém | m | 1,196 | | 0,266 | 0,076 | | | || r | 0,040 | | 0,003 | 0,002 | | | || R | 0,147 | | 0,022 | 0,004 | | | |Masszázs krém | m | | 0,806 | | | 0,180 | 0,148 | 0,152 || r | | 0,067 | | | 0,034 | 0,013 | 0,015 || R | | 0,112 | | | 0,078 | 0,012 | 0,016 |[1] ISO 5725[2] ISO 5725--------------------------------------------------