CELEX: 21987A0207(05)
Language: hr
Date: 1962-05-14 00:00:00
Title: Protokol uz Europski sporazum o razmjeni reagensa za određivanje krvne grupe

02/Sv. 16
            
            
               HR
            
            
               Službeni list Europske unije
            
            
               47
            
         21987A0207(05)
   
               L 037/33
            
            
               SLUŽBENI LIST EUROPSKE UNIJE
            
         PROTOKOL UZ EUROPSKI SPORAZUM
   o razmjeni reagensa za određivanje krvne grupe
   
      OPĆE ODREDBE
   
   
               1.
            
            
               
                  Specifičnost
               
               Reagens za određivanje krvne grupe (1) mora reagirati sa svim uzorcima krvi koji sadrže antigen koji odgovara antitijelu ili nekoj drugoj tvari navedenoj na naljepnici.
               Kada se reagens koristi u skladu s tehnikom koju preporučuje proizvođač, ne smiju se utvrditi niti jedan od sljedećih čimbenika ili pojava:
               
                           (a)
                        
                        
                           hemolitička svojstva;
                        
                     
                           (b)
                        
                        
                           antitijela ili druge tvari osim onih navedenih na naljepnici;
                        
                     
                           (c)
                        
                        
                           bakterijski proizvodi koji mogu uzrokovati lažno pozitivne ili lažno negativne reakcije;
                        
                     
                           (d)
                        
                        
                           pseudoaglutinacije putem rouleaux formacija;
                        
                     
                           (e)
                        
                        
                           prozonski učinak.
                        
                     
         
               2.
            
            
               
                  Potentnost
               
               Titar se mjeri tako da se ispitivani reagens uzastopno dvostruko razrjeđuje u odgovarajućem mediju. Svakom se razrjeđivanju dodaje jednak volumen suspenzije crvenih krvnih stanica. Titar odgovara vrijednosti koja predstavlja najveću razrijeđenost reagensa u kojoj se još uvijek javlja reakcija. Pri izračunavanju razrijeđenosti ne uzima se u obzir volumen suspenzije crvenih krvnih stanica u ukupnom volumenu.
               U slučaju anti-A, anti-B i ostalih reagensa namijenjenih za uporabu na predmetnim stakalcima, avidnost se izražava količinom vremena potrebnom za aglutinaciju na predmetnom stakalcu.
            
         
               3.
            
            
               
                  Međunarodni standardi i internacionalne jedinice
               
               Svjetska zdravstvena organizacija odredila je međunarodne standarde za anti-A i anti-B reagense te nekompletne anti-D reagense za određivanje krvne grupe dok su standardi reagensa za određivanje krvne grupe drugih specifičnosti u postupku utvrđivanja. Po svojoj definiciji, međunarodni standardni pripravak sadrži određeni broj internacionalnih jedinica po miligramu, odnosno mililitru, te je ova definicija neovisna od titara utvrđenih s pojedinačnim pripravcima crvenih krvnih stanica (2).
            
         
               4.
            
            
               
                  Stabilnost i rok valjanosti
               
               Svaki bi reagens, ako se čuva u skladišnim uvjetima po preporuci proizvođača, trebao zadržati nužna svojstva najmanje godinu dana.
               Rok valjanosti reagensa u tekućem obliku naznačen na naljepnici ne može biti dulji od godine dana od datuma posljednjeg zadovoljavajućeg testa potentnosti. Rok valjanosti može biti produljen za daljnja razdoblja od godine dana ponavljanjem testa potentnosti.
               Rok valjanosti reagensa u suhom obliku naznačen na naljepnici mora biti u skladu s testnim nalazom njegove stabilnosti, a odobrava ga državno nadzorno tijelo.
            
         
               5.
            
            
               
                  Čuvanje
               
               Reagensi za određivanje krvne grupe mogu se čuvati u tekućem ili suhom obliku. Suhi reagensi čuvaju se u atmosferi inertnog plina ili vakuumu, u staklenom spremniku u kojem su bili isušeni i koji se zatvaraju kako bi se izbjeglo prodiranje vlage. Isušeni reagens ne smije izgubiti više od 0,5 % težine kada se testira dodatnim isušivanjem od 24 h u prisutnosti fosforovog pentoksida pod pritiskom koji ne premašuje 0,02 mm živog srebra.
               Reagensi se pripremaju pod aseptičnim mjerama predostrožnosti i ne smiju biti bakteriološki kontaminirani. Kako bi spriječili razvoj bakterija, nadležni državni organi mogu odlučiti da se reagensu (ili nekoj drugoj otopini s isušenim reagensom) dodaju antiseptik i/ili antibiotik, pod uvjetom da u prisutnosti dodane tvari reagens još uvijek ispunjava uvjete specifičnosti i potentnosti.
               Serumi ljudskog podrijetla za određivanje krvne grupe moraju sadržavati najmanje 2,5 mg proteinskog dušika na 1 ml tekućine ili rekonstituiranog seruma.
               Reagensi u tekućem obliku ili nakon što su rekonstituirani moraju biti prozirni i ne smiju sadržavati nikakav sediment, gel ili vidljive čestice.
            
         
               6.
            
            
               
                  Boja
               
               Reagensi za određivanje krvne grupe za međunarodnu razmjenu ne bi smjeli biti umjetno obojeni, barem dok se ne donose međunarodni sporazum o jedinstvenom sustavu. Nikakva obojena tvar ne smije se utjecati na testiranu reakciju.
            
         
               7.
            
            
               
                  Izdavanje i volumen
               
               Reagensi za određivanje krvne grupe dijele se na takav način i u takvom volumenu da je jedan spremnik reagensa, osim za testiranje na nepoznatim krvnim stanicama, dovoljan i za kontrolno testiranje na poznatim pozitivnim i negativnim krvnim stanicama. Volumen u jednom spremniku takva je da se njegov sadržaj, bude li potrebno, može uporabiti za provedbu odgovarajućih testova potentnosti opisanih u ovom protokolu.
            
         
               8.
            
            
               
                  Dokumentacija i uzorci
               
               Laboratorij koji proizvodi reagense pohranjuje pisanu dokumentaciju o svim fazama proizvodnje i kontrole reagensa za određivanje krvne grupe. Laboratorij zadržava odgovarajuće uzorke svih izdanih reagensa dok se ne utvrdi da se ta serija više ne koristi.
            
         
               9.
            
            
               
                  Klasifikacija reagensa
               
               Reagensi za određivanje krvne grupe mogu sadržavati tvari ljudskog, životinjskog, biljnog (ili mineralnog) podrijetla, od kojih su neke aktivni sastojci, a druge pomoćne tvari za snažnije djelovanje, odnosno očuvanje stabilnosti reagensa.
               Ovi su reagensi, iz tehničkih razloga, podijeljeni u tri kategorije ovisno o podrijetlu svojeg aktivnog sastojka. To ne znači da reagensi ljudskog podrijetla sadrže isključivo tvari ljudskog podrijetla ili da reagensi životinjskog ili biljnog podrijetla ne mogu sadržavati tvari ljudskog podrijetla.
            
         
               10.
            
            
               
                  Naljepnice, kontrolni listići i potvrde
               
               Naljepnica na engleskom ili francuskom jeziku s crnim slovima na bijelom papiru, lijepi se na svaki sekundarni spremnik i sadrži sljedeće podatke;
               
                           1.
                        
                        
                           naziv i adresu proizvođača;
                        
                     
                           2.
                        
                        
                           naziv reagensa kako je naveden u zaglavlju odgovarajuće specifikacije;
                        
                     
                           3.
                        
                        
                           naziv i količinu antiseptika i/ili antibiotika, ako je prisutan, odnosno naznaku da ga nema;
                        
                     
                           4.
                        
                        
                           volumen ili, ako je reagens u suhom obliku, volumen i sastav tekućine potrebne za rekonstituciju;
                        
                     
                           5.
                        
                        
                           rok valjanosti;
                        
                     
                           6.
                        
                        
                           broj serije.
                        
                     Osim toga, ova naljepnica ili naljepnica na kartonu u kojem se nalazi nekoliko sekundarnih spremnika ili uputa priložena spremniku sadrže sljedeće podatke:
               
                           1.
                        
                        
                           puni naziv i adresu proizvođača;
                        
                     
                           2.
                        
                        
                           naziv reagensa kako je naveden u zaglavlju odgovarajuće specifikacije;
                        
                     
                           3.
                        
                        
                           volumen ili, ako je reagens u suhom obliku, volumen i sastav tekućine potrebne za rekonstituciju;
                        
                     
                           4.
                        
                        
                           datum posljednjega testa potentnosti;
                        
                     
                           5.
                        
                        
                           rok valjanosti (ako postoji);
                        
                     
                           6.
                        
                        
                           broj serije;
                        
                     
                           7.
                        
                        
                           odgovarajući opis načina uporabe koju preporučuje proizvođač.
                        
                     
                           8.
                        
                        
                           Uvjete skladištenja neotvorenih ampula i mjere predostrožnosti koje se moraju poduzeti nakon otvaranja;
                        
                     
                           9.
                        
                        
                           Točan sastav, uključujući antiseptik i/ili antibiotik, ako je prisutan;
                        
                     
                           10.
                        
                        
                           Izjavu o tome sadrži li proizvod materijal ljudskog podrijetla ili ne.
                        
                     Svaka pošiljka sadrži potvrdu predviđenu člankom 4. Sporazuma i Prilogom ovom Protokolu. Primjeri naljepnica i kontrolnih listića priloženi su ovom protokolu.
            
         
      POSEBNE ODREDBE
   
   A.   SERUMI LJUDSKOG PODRIJETLA ZA ODREĐIVANJE KRVNE GRUPE
   
               (a)
            
            
               SERUMI LJUDSKOG PODRIJETLA ZA ODREĐIVANJE KRVNE GRUPE AB0
               
                           i.
                        
                        
                           
                              Anti-A serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-A serum dobiva se iz krvi odabranih osoba krvne grupe B, koje jesu ili nisu bile imunizirane crvenim krvnim stanicama grupe A ili posebnom tvari grupe A. Anti-A serum aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen A, tj. krvne stanice krvnih grupa A i AB, uključujući podgrupe A1, A2, A1B i A2B, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen A, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i B.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-A serum titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupa A1, A2 i A2B, usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom. Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-A serum na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica A1, A2 i A2B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
                           ii.
                        
                        
                           
                              Anti-B serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-B serum dobiva se iz krvi odabranih osoba krvne grupe A, koje jesu ili nisu bile imunizirane crvenim krvnim stanicama grupe B ili posebnom tvari grupe B. Serum anti-B aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa B i AB, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i A.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-B serum titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupe B, usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom. Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-B serum na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
                           iii.
                        
                        
                           
                              Anti-A + anti-B (grupa 0) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-A + anti-B (grupa 0) serum dobiva se iz krvi odabranih osoba krvne grupe 0, koje jesu ili nisu bile imunizirane crvenim krvnim stanicama grupe A i B ili posebnim tvarima grupe A i B. Anti-A + anti-B (grupa 0) serum aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže aglutinogene A i/ili B, tj. krvne stanice krvne grupe A uključujući podgrupe A1 i A2, krvne grupe B te krvne grupe AB uključujući podgrupe A1B i A2B, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže aglutinogene A ili B, tj. one grupe 0. Aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen Ax (Ay ili Ao, koje, u pravilu, ne aglutinira anti-A serum dobiven od davatelja krvne grupe B).
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-A + anti-B (grupa 0) serum titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupe A1 i A2, usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim standardnim pripravkom.
                           Također se titrira za suspenzije krvnih stanica grupe B usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim standardnim pripravkom.
                           Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Nerazrijeđeni anti-A + anti-B (grupa 0) serum za određivanje krvne grupe također će pokazati lako uočljivu aglutinaciju krvnih stanica krvne grupe Ax (Ay ili Ao).
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-A + anti-B (grupa 0) serum na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica A1 i A2 volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti. Kada se anti-A + anti-B (grupa) serum na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti. Kada se anti-A + anti-B (grupa 0) serum na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica Ax (Ay ili Ao) volumenske frakcijom od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu od najviše pet minuta na temperaturi od 18 do 25 °C.
                        
                     
         
               (b)
            
            
               SERUMI LJUDSKOG PODRIJETLA ZA ODREĐIVANJE Rh FENOTIPA
               Anti-Rh serumi za određivanje krvne grupe, bez obzira na njihovu specifičnost, dolaze u dva oblika, ovisno o uvjetima pod kojima se postiže aglutinacija homolognih krvnih stanica. Određeni serumi, poznati kao „kompletni”, aglutiniraju krvne stanice suspendirane u fiziološkoj otopini. Kod ostalih seruma, poznatih kao „nekompletni”, aglutinacija se može postići samo u prisutnosti određenih koloida kao što su goveđi albumin ili nekim drugim posebnim metodama. Serume treba rabiti u uvjetima koje je odredio laboratorij koji ih je pripremio.
               Neki „nekompletni” serumi također će na predmetnim stakalcima aglutinirati homologne crvene krvne stanice suspendirane u vlastitom serumu ili u plazmi.
               Niže navedeni zahtjevi vezani uz potentnost seruma za određivanje Rh revidirat će se čim budu dostupni međunarodni standardni pripravci.
               
                           i.
                        
                        
                           
                              Anti-D (anti-Rho) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-D serum dobiva se iz krvi jedne ili više osoba imuniziranih antigenom D ili antigenom sustava Rh. Anti-D serum reagira s ljudskim crvenim krvnim stanicama koje sadrže antigen D, ali ne reagira s ljudskim crvenim krvnim stanicama koje ne sadrže antigen D.
                           Potentnost
                           Titracija
                           „Kompletni” anti-D serumi imaju titar od najmanje 1:32 s obzirom na CcDee stanice u otopini koja sadrži 9 grama natrijeva klorida po litri.
                           „Nekompletan” anti-D serum titrira se u odnosu na CcDee krvne stanice, usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom nekompletnog anti-D seruma (anti- Rho) ili jednakovrijednim referentnim pripravkom. Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 32 internacionalne jedinice. Osim reakcije sa svim crvenim krvnim stanicama koje sadrže antigen D, serum bi također trebao reagirati, koliko je to moguće, s krvnim stanicama koje sadrže antigen Du.
                           Određivanje avidnosti
                           Anti-D serumi namijenjeni za Diamondov i Abelsonin test trebaju nakon miješanja na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom 40-50 %-ne suspenzije krvnih stanica CcDee pri temperaturi od oko 40 °C pokazati vidljivu aglutinaciju unutar 30 sekundi te bi aglutinacija trebala biti dovršena unutar 120 sekundi.
                        
                     
                           ii.
                        
                        
                           
                              Anti-C (anti-Rh’) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-C serum dobiva se iz krvi jedne ili više osoba imuniziranih aglutinogenom C Rh sustava. Anti-C serum aglutinira suspenzije ljudskih crvenih krvnih stanica koje sadrže antigen C, ali ne i suspenzije ljudskih crvenih krvnih stanica koje ne sadrže antigen C. U ovom se slučaju smatra da antigen C sadrži antigen Cw.
                           Većina dijagnostičkih anti-C seruma sadrži „kompletan” anti-C s „nekompletnim” anti-D serumom. Navedeni serumi su specifični za antigen C samo kad su stanice podvrgnute testu suspendirane u otopini 9 grama natrijeva klorida po litri.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-C serumi („kompletni” ili „nekompletni”) trebaju imati titar od najmanje 1:8 s obzirom na krvne stanice Ccddee.
                           Određivanje avidnosti
                           Anti-C serumi namijenjeni za Diamondov i Abelsonin test (koji ne smiju sadržavati nikakav oblik anti-D seruma) trebaju nakon miješanja na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica Ccddee volumenske frakcije od 0,4 do 0,5 pri temperaturi od oko 40 °C, pokazati vidljivu aglutinaciju unutar 30 sekundi te bi aglutinacija trebala biti dovršena unutar 120 sekundi.
                        
                     
                           iii.
                        
                        
                           
                              Anti-E (anti-Rh”) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-E serum dobiva se iz krvi jedne ili više osoba imuniziranih antigenom E Rh sustava. Anti-E serum reagira s ljudskim crvenim krvnim stanicama koje sadrže antigen E.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-E serumi („kompletni” ili „nekompletni”) trebaju imati titar od najmanje 1:8 s obzirom na krvne stanice Ccddee.
                           Određivanje avidnosti
                           Anti-E serumi namijenjeni za Diamondov i Abelsonin test (koji ne smiju sadržavati nikakav oblik anti-D seruma) trebaju nakon miješanja na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica Ccddee volumenske frakcije od 0,4 do 0,5 pri temperaturi od oko 40 °C pokazati vidljivu aglutinaciju unutar 30 sekundi te bi aglutinacija trebala biti dovršena unutar 120 sekundi.
                        
                     
                           iv.
                        
                        
                           
                              Anti-D + C (anti-Rhorh’) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           
                           Anti-D + E (anti-Rhorh”) serum za određivanje krvne grupe (ljudski)
                           Specifični anti-D + C i anti-D + E serumi mogu se dobiti izravno iz krvi imuniziranih pojedinaca ili se mogu pripremiti miješanjem anti-D seruma s anti-C ili anti-E serumom. U serumu obaju antitijela moraju istodobno biti aktivna pod uvjetima reakcije koje je odredio proizvođač. Svaki serum mora reagirati sa svim vrstama crvenih krvnih stanica koje bi reagirale s jednim od dvaju sastavnih antitijela te kada se radi o anti-D + C serumu ne smije reagirati s crvenim krvnim stanicama koje ne sadrže antigen C ili D, odnosno kada se radi o anti-D + E serumu koje ne sadrže antigen D ili E. Titri ne smiju biti manji od onih navedenih za sastavna antitijela, ali kod anti-D + C seruma (koji je učestala kombinacija u serumu imuniziranih osoba) poželjno je da titar anti-C seruma ne bude manji od 1:32, a kod anti-D + E seruma poželjno da titar anti-E seruma ne bude manji od 1:8. Kada je serum namijenjen za Diamondov i Abelsonin test na predmetnim stakalcima, vrijeme aglutinacije za sve reaktivne vrste crvenih krvnih stanica ne smije biti manje od onog navedenog za sastavna antitijela.
                        
                     
         B.   REAGENSI KOJI NISU LJUDSKOG PODRIJETLA
   
               (a)
            
            
               SERUMI ŽIVOTINJSKOG PODRIJETLA
               
                           i.
                        
                        
                           
                              Anti-A serum za određivanje krvne grupe (životinjski)
                           
                           Anti-A serum dobiva se iz krvi životinja koje jesu ili nisu bile imunizirane crvenim krvnim stanicama grupe A ili posebnom tvari grupe A. Anti-A serum aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen A, tj. krvne stanice krvnih grupa A i AB, uključujući podgrupe A1, A2, A1B i A2B, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen A, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i B.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-A serum titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupa A1, A2 i A2B usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom (3).Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-A serum pomiješa na predmetnom stakalcu pomiješa s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica A1, A2 i A2B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
                           ii.
                        
                        
                           
                              Anti-B serum za određivanje krvne grupe (životinjski)
                           
                           Anti-B serum dobiva se iz krvi životinja koje jesu ili nisu bile imunizirane crvenim krvnim stanicama grupe B ili posebnom tvari grupe B. Anti-B serum aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa B i AB, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i A.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-B serum titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupe B usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom (3). Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-B serum pomiješa na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
                           iii.
                        
                        
                           
                              Antihumani globulinski serum (životinjski)
                               (4)
                           
                           Antihumani globulinski serum za uporabu u serologiji krvnih grupa mora sadržavati aglutinirajuća antitijela protiv IgG globulina i aglutinirajuća antitijela protiv faktora komplementa. Dobiva se iz krvi životinja imuniziranih injekcijom ljudskog serumskog proteina. Mora aglutinirati sa svim ljudskim crvenim krvnim stanicama obloženim ljudskim IgG i/ili faktorima komplementa. U uvjetima koje je odredio proizvođač ne aglutinira s neobloženim ljudskim crvenim krvnim stanicama bez obzira na grupu kojoj pripadaju.
                           Specifičnost
                           Specifičnost antihumanoga globulinskog seruma za uporabu u serologiji krvnih grupa mora se testirati na ljudskim crvenim krvnim stanicama obloženim raznim antitijelima tj. crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim na ljudska nekompletna antitijela anti-D, anti-K ili anti-Fya, na crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim na nekompletna antitijela anti-Lea koja vežu komplement u prisutnosti svježeg ljudskog seruma te na crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim na takozvana „nekompletna hladna antitijela” i s teniranim crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim na ljudski IgG te, konačno, na 10 različitih uzoraka neobloženih crvenih ljudskih stanica s antigenima A ili B, odnosno bez njih.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Antihumani globulinski serum, u izvornom obliku ili razrijeđen prema preporuci na naljepnici, snažno aglutinira ljudske crvene krvne stanice obložene ljudskim nekompletnim anti-D serumom, koji ima titar 1:4 (ili manji) u odnosu na D- pozitivne krvne stanice, kada se titracija provodi metodom nadomještanja albuminom. U jednako razrijeđenom serumu aglutinira K-pozitivne ljudske crvene krvne stanice senzibilizirane na odabrana slaba anti-K antitijela te Fya pozitivne crvene krvne stanice senzibilizirane na odabrana slaba anti-Fya antitijela.
                           Također će, u jednakom ili različitom razrjeđenju, kako je navedeno na naljepnici, aglutinirati ljudske crvene krvne stanice senzibilizirane na slaba nekompletna anti-Lea antitijela koja vežu komplement u prisutnosti svježeg seruma.
                           Za kliničku uporabu poželjno je da se sve vrste gore navedenih nekompletnih antitijela mogu otkriti s pomoću jedne otopine antihumanoga globulinskog seruma.
                        
                     
         
               (b)
            
            
               REAGENSI BILJNOG PODRIJETLA ZA ODREĐIVANJE KRVNE GRUPE
               
                           i.
                        
                        
                           
                              Anti-A reagens za određivanje krvne grupe (biljni)
                           
                           Anti-A reagens priprema se ekstrakcijom iz sjemenki ili drugih dijelova odgovarajuće biljke, čemu po potrebi slijedi pročišćavanje. Anti-A reagens aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigene A, tj. krvne stanice krvnih grupa A i AB, uključujući podgrupe A1, A2, A1B i A2B, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen A, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i B.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-A reagens titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupa A1, A2 i A2B usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom seruma anti-A za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom (1).
                           Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-A reagens pomiješa na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica A1, A2 i A2B volumenske frakcije od 0, 05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-A seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
                           ii.
                        
                        
                           
                              Anti-B reagens za određivanje krvne grupe (biljni)
                           
                           Anti-B reagens priprema se ekstrakcijom iz odgovarajućeg dijela biljke čemu po potrebi slijedi pročišćavanje. Anti-B reagens aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa B i AB, a ne aglutinira ljudske crvene krvne stanice koje ne sadrže antigen B, tj. krvne stanice krvnih grupa 0 i A.
                           Potentnost
                           Titracija
                           Anti-B reagens titrira se odvojeno za suspenzije krvnih stanica grupe B usporedno s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili jednakovrijednim referentnim pripravkom (5) Potentnost seruma ni u jednom slučaju nije manja od 64 internacionalne jedinice po ml.
                           Određivanje avidnosti
                           Kada se anti-B reagens pomiješa na predmetnom stakalcu s jednakim volumenom suspenzije krvnih stanica B volumenske frakcije od 0,05 do 0,1, do prve aglutinacije svake suspenzije mora doći u vremenu koje nije dulje od dvostrukog vremena potrebnog da se isti test napravi s rekonstituiranim, ali nerazrijeđenim međunarodnim standardnim pripravkom anti-B seruma za određivanje krvne grupe ili s referentnim standardnom jednake avidnosti.
                        
                     
         
      (1)  U vrijeme odobrenja aktualne verzije Protokola i njegovih priloga, predstavnici ugovornih strana sporazumjeli su se da se pod izrazom „krvne nekompatibilnosti”, koji se spominje u engleskoj verziji teksta, podrazumijeva „nekompatibilnost u određivanju krvne grupe”.
   Također je dogovoreno da se u engleskoj verziji Sporazuma i Protokola izraz „blood-grouping” s crticom piše „blood grouping” bez crtice.
   
      (2)  Potentnost reagensa za određivanje krvne grupe izražava se kao aglutinacijski titar dobiven nizom razrjeđivanja u odnosu na suspenziju crvenih krvnih stanica. Titar označava razrijeđenost reagensa u zadnjoj mješavini iz niza kod koje je aglutinacija još uvijek mikroskopski vidljiva.
   Potentnost reagensa za određivanje krvne grupe za koje postoje međunarodni standardni pripravci (trenutačno anti-A i anti-B te nepotpuni anti-D) mogu biti izraženi u internacionalnim jedinicama (vidjeti Bull, Wld. Hlth. Org., 1954., 10, 937, 941-1950, 3, 301) na temelju titra nepoznatog reagensa u usporedbi s međunarodnim standardom ili nacionalnim podstandardom.
   Međunarodni standardni pripravci za određivanje krvne grupe u serumu izdaju se u ampulama koje sadrže liofilizirani ljudski serum. Rekonstituirani u volumenu od 1 ml, anti-A i anti-B serumi po definiciji sadrže 256 internacionalnih jedinica po ml. Mogu se besplatno dobiti od Međunarodnog laboratorija za biološke standarde SZO-a, u Statens Seruminstitutu u Kopenhagenu.
   Sljedeća tablica daje primjer usporednog titriranja međunarodnog standarda anti-A seruma (S) i „nepoznatog” anti-A reagensa (U) u usporedbi s A1 crvenim krvnim stanicama i A2B crvenim krvnim stanicama.
   
                
            
            
               Serum S
            
            
               Reagens U
            
            
               Serum S
            
            
               Reagens U
            
         
               A1 krvne stanice
            
            
               1: 512
            
            
               1: 128
            
            
               256
            
            
               64
            
         
               A2B krvne stanice
            
            
               1: 32
            
            
               1: 16
            
            
               256
            
            
               128
            
         
                
            
            
               Titri
               (utvrđeni)
            
            
               Titri
               (utvrđeni)
            
            
               Jedinice
               (po definiciji)
            
            
               Jedinice
               (prema usporedbi)
            
         
      (3)  Međunarodni standardni pripravak je ljudskog podrijetla; rabi li se jednakovrijedni referentni pripravak, on može biti ljudskog ili neljudskog podrijetla.
   
      (4)  Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. i Race, R.R. (1945.), Lancet, iii 5. Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. i Race, R.R. (1945.), Brit. J. exp. Path, 26, 255.
   
      (5)  Međunarodni standardni pripravak je ljudskog podrijetla; rabi li se jednakovrijedni referentni pripravak, on može biti ljudskog ili neljudskog podrijetla.
   EXEMPLES D'ÉTIQUETTE
   EXAMPLES OF LABEL
   CONSEIL DE L'EUROPE
   COUNCIL OF EUROPE
   ACCORD EUROPÉEN RELATIF A L'ÉCHANGE DES RÉACTIFS POUR LA DETERMINATION DES GROUPES SANGUINS
   EUROPEAN AGREEMENT ON THE EXCHANGE OF BLOOD-GROUPING REAGENTS
   a)   serum liquide
   
   
               1.
            
            
               Laboratoire X, Amsterdam
            
         
               2.
            
            
               Serum anti-A (humain)
            
         
               3.
            
            
               N3 Na 0,1 %
            
         
               4.
            
            
               5 ml
            
         
               5.
            
            7 septembre 1965
         
               6.
            
            
               No 1 2 3 4
            
         b)   sérum desséché
   
   
               1.
            
            
               Laboratoire X, Amsterdam
            
         
               2.
            
            
               Sérum anti-B (animal)
            
         
               3.
            
            
               Mersalate 0,1 %
            
         
               4.
            
            
               Reconstituer avec 5 ml d'eau distillée
            
         
               5.
            
            31 décembre 1968
         
               6.
            
            
               No 4 3 2 1
            
         (a)   fluid serum
   
   
               1.
            
            
               … Laboratory, Amsterdam
            
         
               2.
            
            
               Anti-A serum (human)
            
         
               3.
            
            
               Sodium azide 0,1 %
            
         
               4.
            
            
               5 ml
            
         
               5.
            
            7 September 1965
         
               6.
            
            
               No 1 2 3 4
            
         (b)   dried serum
   
   
               1.
            
            
               … Laboratory, Amsterdam
            
         
               2.
            
            
               Anti-B serum (animal)
            
         
               3.
            
            
               Mersalate 0,1 %
            
         
               4.
            
            
               To be reconstituted with 5 ml of distilled water
            
         
               5.
            
            31 December 1968
         
               6.
            
            
               No 4 3 2 1
            
         EXEMPLE DE NOTICE
   CONSEIL DE L'EUROPE
   ACCORD EUROPÉEN RELATIF À L'ÉCHANGE DES RÉACTIFS POUR LA DÉTERMINATION DES GROUPES SANGUINS
   
               1.
            
            
               Laboratoire central de transfusion sanguine, 1 Main Street, Metropolis, Westland.
            
         
               2.
            
            
               Sérum anti-E (anti-rh ″) (humain).
            
         
               3.
            
            
               10 ml.
            
         
               4.
            
            
               Date du dernier contrôle d'activité: 30 mai 1961.
            
         
               5.
            
            
               Date de péremption: 30 mai 1962.
            
         
               6.
            
            
               No 5432.
            
         
               7.
            
            
               Les globules rouges à examiner doivent être lavés une ou plusieurs fois avec une solution saline de 9 g/l. Une suspension de globules rouges d'une fraction de volume d'environ 0,03 est préparée ensuite en mélangeant un volume ou une goutte de culot globulaire avec 30 volumes ou gouttes de solution saline isotonique. Avec un peu d'habitude, la concentration d'une suspension peut être évaluée de façon satisfaisante à l'oeil nu.
               Une petite goutte de sérum est déposée dans un tube à hémolyse (6 mm x 30 mm) à l'aide d'une pipette Pasteur. On ajoute ensuite une petite goutte de suspension de globules rouges. (Avec un peu d'habitude, on peut réaliser une économie considérable en distribuant le sérum et la suspension globulaire à l'aide de pipettes graduées à μl). Le contenu du tube est mélangé et mis à incuber deux heures à 37°C. Le contenu du tube est alors transporté et étalé avec précaution sur une lame de microscope. Si l'agglutination n'est pas clairement visible à l'œil nu, la lame est examinée au microscope pour établir si l'agglutination s'est produite et déterminer son intensité.
            
         
               8.
            
            
               Conserver à une température inférieure ou égale à – 20°C. Si le produit n'est pas utilisé le jour même de l'ouverture, ajouter 0,1 ml d'une solution de N3Na à concentration de 100 g/l.
            
         
               9.
            
            
               Sérum humain anti-E („anti-rh”): 5 ml,
               Albumine bovine à 300 g/l: 5 ml.
            
         
               10.
            
            
               Ce réactif contient une substance d'origine humaine.
            
         EXAMPLE OF LEAFLET
   COUNCIL OF EUROPE
   EUROPEAN AGREEMENT ON THE EXCHANGE OF BLOOD-GROUPING REAGENTS
   
               1.
            
            
               Central Blood Transfusion Laboratory, 1 Main Street, Metropolis, Westland
            
         
               2.
            
            
               Anti-E (anti-rh ″) serum (human)
            
         
               3.
            
            
               10 ml
            
         
               4.
            
            
               Date du dernier co test: 30th May 1961
            
         
               5.
            
            
               Expiry Date, 30th May 1962
            
         
               6.
            
            
               No. 5432
            
         
               7.
            
            
               The red blood cells to be tested are washed one or more times with a NaCl solution of 9 g/1. An erythrocyte suspension with a volume fraction of approximately 0.03 is prepared by mixing one volume or drop of packed red cells with 30 volumes or drops of isotonic NaCl-solution. With practice the strength of a suspension can be judged adequately by inspection.
               A small drop of serum is delivered into a precipitin tube (6 mm × 30 mm) from a Pasteur pipette, and a similar drop of red corpuscle suspension is added. (With practice considerable economy can be achieved by delivering the serum and cell suspension from pipettes marked at a volume of 10 μl). The contents of the tube are mixed and incubated at 37 o C for two hours. The contents of the tube are then cautiously transferred to a microscope slide and gently spread upon it. Unless agglutination is unmistakable to the unaided eye the slide is examined for the presence and degree of agglutination under the microscope.
            
         
               8.
            
            
               Store at – 20 o C or below. If to be used after day of opening, add 0,1 ml of a solution containing 100 gram sodium azide per litre.
            
         
               9.
            
            
               Human anti-E (“anti-rh”) serum: 5 ml; solution containing 300 gram bovine albumin per litre: 5 ml.
            
         
               10.
            
            
               This product contains material of human origin.
            
         ANNEXE AU PROTOCOLE
   ANNEX TO THE PROTOCOL
   CONSEIL DE L'EUROPE
   COUNCIL OF EUROPE
   ACCORD EUROPÉEN RELATIF À L'ÉCHANGE DES RÉACTIFS POUR LA DÉTERMINATION DE GROUPES SANGUINS
   EUROPEAN AGREEMENT ON THE EXCHANGE OF BLOOD-GROUPING REAGENTS