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Titolo: Estrazione del DNA

Scusate, ho fatto una esperienza a scuola di cui non ho capito molto.
L'esperienza era Estrazione del DNA. Abbiamo estratto il DNA attraverso un
procedimento alquanto lungo, da cellule vegetali di una cipolla. Il
risultato č stata una soluzione che abbiamo analizzato allo
spettrofotometro. E' stato la prima volta che abbiamo usato questo
spettrofotometro, ed i nostri prof non ci hanno spiegato molto. E' proprio
quasta parte che non ho capito bene. Noi abbiamo analizzato sulle lunghezze
d'onda 260 e 280, ma non sono sicuro di avere capito il perchč. Mi pare che
280 sia la lunghezza d'onda delle proteine, ma 260 di cosa? Quindi,
teoricamente, se trovassimo molte proteine significherebbe che veramente
abbiamo trovato il DNA in quanto nel DNA sono presenti gli istoni? E' piů o
meno cosě la faccenda? A questo punto ci hanno dettato dei calcoli da are,
non molto chiari:
lettura spettrofotometrica*50mg/ml*reciproco diluizione=concentrazione
con questa espressione dovremmo calcolarci la concentrazione del DNA?
E poi ci hanno spiegato del rapporto di estinzione. Potreste dirmi come si
calcola ed a cosa serve?
Grazie e scusate la lunghezza del messaggio. Ogni aiuto č ben accetto.
Luca Carlon

 ha scritto nel messaggio
news:2wHi8.15901$tC3.4...@twister1.libero.it...

A 260 c'č il picco d assorbimento delle basi azotate.
Si legge anche a 280 xché se il rapporto Assorbanza 260/Assorbanza a 280 č
minore di 2-1,8 č segno che non si č purificato (separato) bene il DNA dalle
proteine.
Il calcolo da fare č Concentrazione DNA nel tuo campione (espressa come
ug/uL)=Assorbanza a 260nm (sottratto il bianco di riferimento, cioč quanto
legge il tampone in cui leggi senza l'aggiunta del tuo campione di acido
nucleico)*50/uL di campione che hai messo in cuvetta.
Ora č + chiaro? Fammi sapere.
Stefano
gifa...@tin.it
http://web.tiscalinet.it/gifalone
ICQ 110419911

 Ora è + chiaro? Fammi sapere.
Ora mi è molto più chiara questa parte. Grazie infinite. Mi pare di aver
capito.
Luca Carlon

 capito.
d nulla. se hai bisogno d altre info chiedi pure.
bye


 d nulla. se hai bisogno d altre info chiedi pure.
Approfitto della tua gentilezza per farti un'altra domanda. Io come rapporto
di estinzione ho trovato 0.013/0.021 = 0.61. Ciň significa che come
risultato fa abbastanza schifo; o sbaglio?
Io, come appunti ho scritto:
Se il rapporto č vicino ad 1.8 significa che č maggiore il DNA se č piů
vicino a 2.2 significa che č maggiore la contaminazione da RNA. Ho
sbagliato? Perň assrobanza a 280 ho 0.021, quindi superiore a 260, e visto
che a 280 ci sono le proteine, dovrei aver trovato piů DNA per la presenza
delle proteine istoniche. Sto sbagliando tutto?
E' verosimile come valore per la concentrazione un valore di
65microgrammi/ml?
0.013*50*100=65
Grazie e scusate il disturbo.
Luca Carlon

 0.013*50*100=65
0.61 come A260/A280 è molto basso come rapporto.
A 280nm non leggono solo gli istoni ma TUTTE le proteine quindi il tuo
risultato t dice solo che nel tuo campione hai poco d acidi nucleici e molte
proteine.
Oppure potresti avere una contaminazione da qualche specie che assorbe a 280
(come alcuni composti fenolici). In cosa stai leggendo? TE, H2O, altro?
65ug/mL è una concentrazione verosimile ma non è molto attendibile quando
hai un DNA molto contaminato da proteine.
Fammi sapere.
CIAO!
