Newsgroup: it.scienza.biologia
Titolo: Sicurezza in Laboratorio per i prioni

Dunque, io lavoro in un lab di neurogenetica, vorrei sapere per sangui
sospetti (premesso che tutti i sangui sono infetti fino a prova
contraria) quali sono le norme di sicurezza. Voglio dire le norme che 
di solito si usano sono valide per i virus, ora con i prioni come la
mettiamo?
Ad esempio noi facciamo estrazione senza usare fenolo cloroformio che
forse denaturerebbero queste proteine (non lo so), la proteinasi K non
dovrebbe danneggiare il prione ecc...Alla fine temo di estrarre DNA e
prioni insieme anzichè solo DNA.
Quindi bisogna lavorare sotto  cappa, con mescherina autoclavando a 130°
la vetreria? 
Qualcuno mi sà aggiornare sulle norme di sicurezza? (Suppongo che vadano
estese a tutti i campioni visto che gli affetti di solito non sanno di 
esserlo).
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Fabio Di Benedetto- Italy- Udine
Studente Tecnico di Laboratorio Biomedico
Fab...@katamail.com
http://digilander.iol.it/fobia/FabioDiBenedetto.html
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 ha scritto nel messaggio
news:3A75ABD9...@katamail.com...


 > --spesso nel newsgroup si trovano interlocutori pignoli riguardo
l'ortografia e la grammatica.. ma non vi passa per l'anticamera del cervello
che spesso digitando sulla tastiera è possibile sbagliare... mica siamo
all'accademia della crusca ;-)
pignoloni


 pignoloni
A parte che questo non ha sbagliato per caso (sangui sospetti).
Inoltre nessuno č pignolo (spesso sbaglio anche io e forse di piů), ma
da quello che ha detto risulta una disinformazione di fondo di cui non
č colpa sua... sulla sicurezza non si scherza, al giorno d'oggi ci
sono di mezzo problemi di natura penale.  Lo sai che una che si č
presa l'HIV spruzzandosi il sangue negli occhi ha fatto e ottenuto
richiesta di danni perun miliardo (senza contare il processo penale
per il primario) perchč non c'erano in Laboratorio cartelli che
avvisavani di usare gli occhiali protettivi?
davide
--
www.fleming-research.it

 
www.fleming-research.it
-- 


Ho pensato che forse era meglio mandare una versione depurata del
messaggio, visto il contesto...:)
Dunque, io di solito dissemino i miei messaggi di errori per la fretta,
ma a parte questo nel caso specifico il termine "sangui" è dovuto ad un
uso gergale delle parole che si fa in LAb, tipo "paperi" al posto di
papers, mi scuso per chi non lo avesse capito, comunque sangue è
difettivo.
Inoltre le norme di sicurezza tradizionali le conosco so anche che si
deve usare materiale usa e getta, e so anche quante e quali sono le
mancanze nel rispetto delle norme di sicurezza che ci sono nel mio lab,
ora, visto che qui, a quanto pare, c'è qualcuno che lavora in un Lab
accreditato iso 9000 che ne direbbe di rispondere alla domanda che ho
posto? 
Alla luce dei problemi che potrebbero porre i prioni c'è qualche nuova
precauzione da prendere (Ad esempio le autopsie delle persone morte per
malattie trasmesse con prioni non si possono fare in tutte le sale
autoptiche, bisogna farle in particolari sale autoptiche, da questa
constatazione nasce la mia domanda) in LAb.?
Poi come ho detto facendo l'estrazione per Solting out (non si scrive
proprio così, ma ora non ho voglia di andare a controllare, mi
perdonerete spero;) si usano NaCl. Proteinasi K ,tamponi, solventi, es
alla fine alcool con il risultato che probabilmente alla fine si ottiene
DNA e prioni allegramente insieme, il che non è bello, non so se
capite...
Quindi, per favore, sfogate pure le vostre frustrazioni ortografiche, ma
rispondete anche .
P.S.Davide, non per essere pignolo ;),  ma quando ti riferisci alle
persone non è molto garbato usare appellativi tipo "questo", sebbene i
tuoi intenti educativi siano vagamente apprezzabili


Allora, se ti ho trattato un po' male è perchè hai detto alcune cose
senza senso, sarà il gergo, come dici... comunque: ok il prione è
presente nel cervello, midollo, occhi.  Nel sangue ancora non è stato
trovato, inoltre nell'estrazione di DNA con sAlting out ci sono
diverse proteine che potrebbero non essere completamente digerite,
come pure grassi e altro.  Questo problema è stato molto trattato ad
esempio nel caso di estrazioni "veloci" da escreato.  Purtroppo se non
si fa una estrazione classica fenolo-cloroformio (vedi Magnatis et
al.) la presenza di sostanze inibenti può esserci.  Una soluzione può
essere usare una amplificatore quantitativo come quello che sta per
commercializzare qualche ditta (Clonit) che fa una specie di prova di
inibizione dopo l'amplificazione.  Oppure altro sistema (ad esempio
adottato da noi quando facevamo analisi su liquidi amniotici) è quello
di fare una prova di inibizione amplificando contemporaneamente un
microsatellite.
Ritornando al prione, a riguardo della sua pericolosità, se nel
Laboratorio si usa tutto usa e getta e non c'è contatto con il sangue
non dovrebbero esserci grossi rischi.   Il problema è più grave per i
ferri chirurgici e se eventualmente ci fosse una fuoriuscita di sangue
o materiale potenzialmente infetto.  Il trattamento con Glutaraldeide
(Aldexid) per il tempo necessario, non garantisce la riuscita di
distruzione del prione, tant'è che si sono fatti studi solo con l'uso
di ipoclorito di sodio (CANDEGGINA) che pare inattivasse i prioni.
Allego qualche articolo.  Ne puoi trovare e ordinare nei siti che vedi
partendo dalla pagina links del mio sito:
http://www.fleming-research.it/frame_links.htm
 .  Concludendo però
quello che nessuno dice è che l'autoclave non è sicura, per cui
pensiamo ai dentisti....  sebbene il sangue non sembra essere fonte di
rischio, potrebbe darsi che sia meglio usare anche dei trattamenti
preliminari dei ferri con ipoclorito, poi l'autoclave.
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      Vet Rec 1995 Dec 9;137(24):605-10
Inactivation of the bovine spongiform encephalopathy agent by
rendering procedures.
Taylor DM, Woodgate SL, Atkinson MJ
Neuropathogenesis Unit, Institute for Animal Health, Edinburgh.
Bovine brain infected with the bovine spongiform encephalopathy (BSE)
agent was used to spike material processed in pilot scale facsimiles
of 12 rendering processes which are used within the European Union,
and three which are not. The raw materials for experimental rendering
represented those used in practice, and consisted of appropriate
proportions of BSE-infected brain tissue, bovine or porcine intestine,
and bovine bone. Meat and bone meal, and tallow were produced from the
rendered tissues. Suspensions of all the meat and bone meal samples
were assayed in inbred mice for BSE infectivity, and two of the tallow
fractions were tested similarly. Four of the 15 processes produced
meat and bone meal with detectable BSE infectivity. Neither of the
tallow samples had detectable infectivity.
PMID: 8746849, UI: 96358738
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____________
       Arch Virol 1994;139(3-4):313-26
Decontamination studies with the agents of bovine spongiform
encephalopathy and scrapie.
Taylor DM, Fraser H, McConnell I, Brown DA, Brown KL, Lamza KA, Smith
GR
BBSRC & MRC Neuropathogenesis Unit, Institute for Animal Health,
Edinburgh, U.K.
Macerates of bovine brain infected with bovine spongiform
encephalopathy (BSE) agent, and rodent brain infected with the 263K or
ME7 strains of scrapie agent, were subjected to porous-load
autoclaving at temperatures between 134 and 138 degrees C for < or =
60 min. Bioassay in rodents showed that none of the regimens produced
complete inactivation. Homogenates of BSE-infected bovine brain were
exposed for < or = 120 min to solutions of sodium hypochlorite or
sodium dichloroisocyanurate containing < or = 16,500 ppm available
chlorine. There was no detectable survival of infectivity after the
hypochlorite treatments but none of the dichloroisocyanurate solutions
produced complete inactivation. Homogenates of BSE-infected bovine
brain, and rodent brain infected with the 263K and ME7 strains of
scrapie agent, were exposed for < or = 120 min to 1M or 2M sodium
hydroxide but no procedure produced complete inactivation of all
agents tested.
PMID: 7832638, UI: 95134088
____________________________________________________________________
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www.fleming-research.it

Grazie mille!
-- 
