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La transición de una célula germinal específica a una población de células pluripotentes ocurre rápidamente después de la fertilización. Durante esta transición del desarrollo, el genoma cigotico es en gran parte transcripcionalmente quiescente y sufre una remodelación significativa de la cromatina. En Drosophila, la proteína de unión al ADN Zelda (también conocida como Vielfaltig) es necesaria para esta transición y para la activación transcripcional del genoma cigotico. La cromatina abierta está asociada con loci con Zelda, así como más generalmente con regiones de transcripción activa. Sin embargo, el grado en que Zelda influye en la accesibilidad de la cromatina a través del genoma es en gran medida desconocido. Aquí utilizamos aislamiento asistido por formaldehído de elementos reguladores para determinar el papel de Zelda en las regiones de regulación de la cromatina abierta en el embrión temprano. Demostramos que Zelda es Esta accesibilidad a la cromatina mediada por Zelda facilita el reclutamiento de factores de transcripción y la expresión génica temprana. Por lo tanto, Zelda posee algunas características clave de un factor pionero. Inesperablemente, la cromatina en un subconjunto grande de regiones enlazadas con Zelda permanece abierta incluso en ausencia de Zelda. El motivo de unión de factores GAGA y la unión embrionaria del factor GAGA se enriquecen específicamente en estas regiones. Proponemos que tanto Zelda como el factor GAGA funcionen para especificar sitios de cromatina abierta y juntos faciliten la remodelación del genoma embrionario temprano.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

La transición de una célula germinal específica a una población de células pluripotentes ocurre rápidamente después de la fertilización. Durante esta transición del desarrollo, el genoma cigotico es en gran parte transcripcionalmente quiescente y sufre una remodelación significativa de la cromatina. En Drosophila, la proteína de unión al ADN Zelda (también conocida como Vielfaltig) es necesaria para esta transición y para la activación transcripcional del genoma cigotico. La cromatina abierta está asociada con loci con Zelda, así como más generalmente con regiones de transcripción activa. Sin embargo, el grado en que Zelda influye en la accesibilidad de la cromatina a través del genoma es en gran medida desconocido. Aquí utilizamos aislamiento asistido por formaldehído de elementos reguladores para determinar el papel de Zelda en las regiones de regulación de la cromatina abierta en el embrión temprano. Demostramos que Zelda es Esta accesibilidad a la cromatina mediada por Zelda facilita el reclutamiento de factores de transcripción y la expresión génica temprana. Por lo tanto, Zelda posee algunas características clave de un factor pionero. Inesperablemente, la cromatina en un subconjunto grande de regiones enlazadas con Zelda permanece abierta incluso en ausencia de Zelda. El motivo de unión de factores GAGA y la unión embrionaria del factor GAGA se enriquecen específicamente en estas regiones. Proponemos que tanto Zelda como el factor GAGA funcionen para especificar sitios de cromatina abierta y juntos faciliten la remodelación del genoma embrionario temprano.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Los factores de transcripción pioneros pueden involucrar el ADN nucleosomal, lo que conduce a la remodelación de la cromatina local y al establecimiento de la competencia transcripcional. Sin embargo, el impacto del potenciador primiendo por factores pioneros en el control temporal de la expresión génica y en la memoria mitótica sigue sin estar claro. Aquí empleamos métodos cuantitativos de imagen viva y modelado matemático para probar el efecto del factor pionero Zelda en la dinámica transcripcional y la memoria en embriones de Drosophila. Demostramos que el aumento del número de sitios de unión de Zelda acelera la cinética de la activación transcripcional de núcleos independientemente de su pasado transcripcional. A pesar de sus conocidas actividades pioneras, demostramos que Zelda no permanece visiblemente asociada con cromosomas mitóticos y no es necesaria ni suficiente para fomentar la memoria. Proponemos que Zelda facilite la activación transcripcional mediante la acumulación en microambientes donde podría acelerar la duración de múltiples pasos previos a la iniciación.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Antecedentes: Se demostró que la proteína Zelda desempeña un papel clave en el desarrollo temprano de la drosófila, uniendo a miles de promotores y potenciadores antes de la transición materno-cigótica (MZT), y marcándolas para la activación transcripcional. Recientemente, mostramos que Zelda actúa a través de patrones específicos de cromatina de modificaciones histonas para marcar potenciadores del desarrollo y promotores activos. Intrigantemente, algunos sitios de Zelda todavía mantienen estos patrones de cromatina en embriones de Drosophila carentes de proteína materna de Zelda. Esto sugiere que factores pioneros adicionales como Zelda pueden actuar en embriones de mosca temprana. Resultados: Desarrollamos un método computacional para analizar y refinar el paisaje de cromatina que rodea los picos tempranos de Zelda, utilizando un agrupamiento espectral multicanal. Esto nos permitió caracterizar sus patrones de croma Específicamente, nos centramos en H3K4me1, H3K4me3, H3K18ac, H3K27ac, y H3K27me3 e identificamos tres clases diferentes de firmas de cromatina, emparejando "promotores", "enhancers" y picos Zelda "transitivamente ligados". Luego escaneamos el genoma utilizando estos patrones de cromatina e identificamos loci adicionales sin unión Zelda-que muestran patrones similares de cromatina, resultando con cientos de potenciadores putativos independientes de Zelda. Estas regiones se encontraron enriquecidas con factor GAGA (GAF, Trl) y se encuentran típicamente cerca de genes cigoticos de desarrollo temprano. En general, nuestro análisis sugiere que GAF, junto con Zelda, juega un papel importante en la activación del genoma cigotico. Conclusiones: Como mostramos, nuestro enfoque computacional ofrece un algoritmo eficiente para caracterizar las firmas de cromatina alrededor de algunos loci de interés y permite una identificación genómica de loci adicionales con patrones similares de cromatina.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Las redes reguladoras de genes (GRN) evolucionan como resultado de los procesos coevolucionarios que actúan sobre los factores de transcripción (TFs) y los módulos cis-reguladores que unen. El zinc-dedo TF zelda (zld) es esencial para la transición materno-cigótica (MZT) en Drosophila melanogaster, donde se une directamente a más de mil módulos cis-reguladores para regular la accesibilidad a la cromatina. D. melanogaster muestra un largo tipo de germen de desarrollo embrionario, donde todos los segmentos se generan simultáneamente a lo largo de todo el huevo. Sin embargo, no está claro si zld también está involucrado en el MZT de insectos de gérmino corto (incluyendo los de linajes basales) o en otros procesos biológicos. Aquí mostramos que zld es una innovación del linaje Pancrusta Para comprender mejor la función ancestral de Zld, investigamos a fondo sus funciones en un escarabajo de corto germen, Tribolium castaneum, utilizando biología molecular y enfoques computacionales. Nuestros resultados demuestran roles para zld no sólo durante el MZT, sino también en la segmentación posterior y el diseño de estructuras derivadas de disco imaginal. Además, también demostramos que zld es crítico para la segmentación posterior en el hemipteran Rhodnius prolixus, indicando que esta función es anterior al origen de insectos holometabolosos y posteriormente se perdió en insectos de largo germen. Nuestros resultados revelan nuevos roles de zld en diferentes contextos biológicos y sugieren que los cambios en la expresión de zld (y probablemente otros TFs importantes) son críticos en la evolución de los GRNs de insectos.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

La transición de una célula germinal específica a una población de células pluripotentes ocurre rápidamente después de la fertilización. Durante esta transición del desarrollo, el genoma cigotico es en gran parte transcripcionalmente quiescente y sufre una remodelación significativa de la cromatina. En Drosophila, la proteína de unión al ADN Zelda (también conocida como Vielfaltig) es necesaria para esta transición y para la activación transcripcional del genoma cigotico. La cromatina abierta está asociada con loci con Zelda, así como más generalmente con regiones de transcripción activa. Sin embargo, el grado en que Zelda influye en la accesibilidad de la cromatina a través del genoma es en gran medida desconocido. Aquí utilizamos aislamiento asistido por formaldehído de elementos reguladores para determinar el papel de Zelda en las regiones de regulación de la cromatina abierta en el embrión temprano. Demostramos que Zelda es Esta accesibilidad a la cromatina mediada por Zelda facilita el reclutamiento de factores de transcripción y la expresión génica temprana. Por lo tanto, Zelda posee algunas características clave de un factor pionero. Inesperablemente, la cromatina en un subconjunto grande de regiones enlazadas con Zelda permanece abierta incluso en ausencia de Zelda. El motivo de unión de factores GAGA y la unión embrionaria del factor GAGA se enriquecen específicamente en estas regiones. Proponemos que tanto Zelda como el factor GAGA funcionen para especificar sitios de cromatina abierta y juntos faciliten la remodelación del genoma embrionario temprano.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Los experimentos en Drosophila y Zebrafish han revelado que ZGA depende de factores de transcripción que proporcionan un control a gran escala de la expresión génica mediante la unión directa y específica a las secuencias reguladoras de genes. Zelda (Zld) desempeña un papel similar en el embrión de Drosophila, donde se ha demostrado que controla la acción de las señales de patrón; sin embargo, los mecanismos subyacentes a este efecto siguen siendo poco claros. Un modelo reciente propuso que los sitios de unión de Zld actúen como reguladores cuantitativos de la expresión espacial de genes activados por Dorsal (Dl), el morfogen que marca el eje dorsoventral. Aquí probamos este modelo experimentalmente, utilizando potenciadores de al borde (brk) y gastrulación corta (sog), ambos son activados directamente por Dl, pero en diferentes umbrales de concentración. De acuerdo con el modelo, mostramos que hay una correlación positiva clara entre el número de sitios de unión de Zld y el dominio espacial de la actividad potenciadora. Asimismo, el tiempo de expresión podría ser avanzado o retrasado. Presentamos evidencia de que Zld facilita la unión de Dl al ADN regulador, y que esto está asociado con el aumento de la accesibilidad a la cromatina. Importantemente, el cambio en la accesibilidad a la cromatina está fuertemente correlacionado con el cambio en la unión a Zld, pero no a Dl. Proponemos que la capacidad de los activadores del genoma para facilitar la lectura de la entrada transcripcional es clave para la inducción transcripcional generalizada durante ZGA.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

En esta revisión, discutimos una nueva función de remodelación in situ que es mediada por la proteína de unión a la ubiquitina H2A ZRF1. ZRF1 facilita la remodelación de complejos multiproteínas en la cromatina y se encuentra en el corazón de los procesos de señalización que ocurren en los sitios de daño del ADN y durante la activación transcripcional. En reparación de la excisión de nucleótidos ZRF1 remodela los complejos de ubiquitinas E3 en el sitio de daño. Durante la diferenciación de células madre embrionarias, contribuye a la activación génica mediada por ácido retinoico alterando la composición subunidad del complejo Mediador. Postulamos que ZRF1 opera en conjunto con máquinas de remodelación celular y sugiere que la remodelación in situ podría ser un sello distintivo de muchas vías de señalización asociadas a la cromatina. En conclusión, postulamos que la remodelación in situ de complejos multiproteicos es esencial para la sincronización de los procesos de señalización de la cromatina.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

En esta revisión, discutimos una nueva función de remodelación in situ que es mediada por la proteína de unión a la ubiquitina H2A ZRF1. ZRF1 facilita la remodelación de complejos multiproteínas en la cromatina y se encuentra en el corazón de los procesos de señalización que ocurren en los sitios de daño del ADN y durante la activación transcripcional. En reparación de la excisión de nucleótidos ZRF1 remodela los complejos de ubiquitinas E3 en el sitio de daño. Durante la diferenciación de células madre embrionarias, contribuye a la activación génica mediada por ácido retinoico alterando la composición subunidad del complejo Mediador. Postulamos que ZRF1 opera en conjunto con máquinas de remodelación celular y sugiere que la remodelación in situ podría ser un sello distintivo de muchas vías de señalización asociadas a la cromatina. En conclusión, postulamos que la remodelación in situ de complejos multiproteicos es esencial para la sincronización de los procesos de señalización de la cromatina.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Se cree que el grupo tritórax (trxG) de activadores y el grupo Polycomb (PcG) de represores controlan la expresión de varios reguladores clave del desarrollo cambiando la estructura de la cromatina. Aquí, hemos tratado de diseccionar los requisitos para la activación transcripcional por la proteína Drosophila trxG Zeste, un activador de genes homeóticos que se une al ADN. Las reacciones de transcripción reconstituidas establecieron que el complejo de remodelación de la cromatina de Brahma (BRM) es esencial para la activación dirigida por Zeste en plantillas nucleosomales. Debido a que no es necesario que Zeste se une a la cromatina, el complejo BRM parece actuar después de la unión del promotor por el activador. La purificación del complejo Drosophila BRM reveló una serie de subunidades novedosas. Encontramos que Zeste ata el complejo BRM a través de la unión directa a subunidades específicas, incluyendo proteínas trxG Moira (MOR) y OSA. La cremallera leucina de Zeste media la unión a MOR. Curiosamente, aunque los remodeladores Imitation Switch (ISWI) son potentes factores de espaciamiento nucleosomico, son dispensables para la activación transcripcional por Zeste. Por lo tanto, hay una distinción entre la reestructuración general de cromatina y la coactivación transcripcional por parte de los remodeladores. Estos resultados establecen que diferentes factores de remodelado de cromatina muestran distintas propiedades funcionales y proporcionan nuevas percepciones sobre el mecanismo de su segmentación.

¿El factor de transcripción de zelda es un remodelador de cromatina?

Antecedentes: El alelo de pérdida de función CYP2C19*2 o *3 (LOF) se asocia con una alta reactividad plaquetaria (RPH) en el tratamiento con clopidogrel. Los asiáticos orientales pueden beneficiarse de una dosis menor de prasugrel debido a su respuesta más potente a la inhibición plaquetaria. Se desconoce el impacto de los alelos de LOF en la respuesta farmacodinámica a la semidosis de prasugrel en pacientes con síndrome coronario agudo sin elevación del ST (SCAS-NSTE) sometidos a intervención coronaria percutánea (ICP). Métodos: Setenta pacientes con alelos de LOF fueron asignados a la semidosis de prasugrel (n = 35, carga de 30 mg seguida de 5 mg diarios) o clopidogrel (n = 35, 600 mg de carga seguida de 75 mg diarios). La variable principal fue la tasa de RPH, definida como Unidad de reacción VerifyNow-P2Y12 (PRU) > 235, a las 24 h después de la carga. Resultados: Prasugrel logró una URP menor en comparación con clopidogrel después de la carga (119 [56-175] vs. 245 [189-299]), a las 24 h (34 [8-58] vs. 196 [122-244]), y a los 30 días (134 [98-189] vs. 203 [144-248]). Prasugrel tuvo una tasa de RPH menor después de la carga (5,7% vs. 57,1%, p <0,001), a las 24 h (2,9% vs. 28,6%, p=0,006) y a los 30 días (11,4% vs. 34,3%, p=0,004). Prasugrel tuvo una tasa similar de reactividad plaquetaria óptima a No hubo diferencia significativa en la aparición de mionecrosis periprocedimiento a las 48 h después de la ICP con clopidogrel y prasugrel (22,9% frente a 17,1%, p>0,660). Conclusiones: La dosis media de prasugrel proporcionó una potente inhibición plaquetaria en pacientes con SCAS-NSTE que eran portadores del alelo CYP2C19*2 o *3, con una menor tasa de RPH. La mionecrosis periprocedimiento no fue significativamente diferente en los 2 grupos.

¿Cuál es el efecto de los alelos CYP2C19*2 y CYP2C19*3 sobre la función CYP2C19?

La identificación de las variantes causales en los estudios de secuenciación sigue siendo un reto considerable que puede ser abordado parcialmente por nuevos conocimientos genéticos específicos. Aquí, integramos medidas de lo esencial que es un gen para apoyar la vida, como se infiere de la viabilidad y las pantallas de fenotipado realizadas en ratones knockout por el International Mouse Phenotyping Consortium y las pantallas de esencialidad realizadas en líneas celulares humanas. Proponemos una clasificación genética de especies cruzadas en todo el espectro completo de intolerancia a la pérdida de funcionamiento (FUSIL) y demostramos que los genes en cinco categorías de FUSIL mutuamente excluyentes tienen diferentes propiedades biológicas. En particular, los genes de enfermedades mendelianas, especialmente los asociados con trastornos del desarrollo, están muy sobrerrepresentados entre los genes no esenciales para la supervivencia celular pero necesarios para el desarrollo del organismo.

Describir el espectro completo de intolerancia a la pérdida de funcionamiento (FUSIL)

Por lo general, los péptidos antimicrobianos (AMPs) son péptidos cortos con carga positiva que desempeñan un papel clave en la inmunidad innata, así como en la actividad antimicrobiana. Descubrir nuevos agentes terapéuticos se considera una demanda innegable debido al aumento de las especies microbianas con resistencia a los antibióticos. En esta dirección, la capacidad única de las AMPs para modular las respuestas inmunitarias los destacó como nuevos candidatos a medicamentos en el campo de la microbiología. Pacientes afectados por la leishmaniasis; una enfermedad tropical descuidada, enfrentan serios problemas para su tratamiento, incluyendo la resistencia a los medicamentos comunes, así como la toxicidad y el alto costo de la terapia. Por lo tanto, hay una necesidad de desarrollo de nuevos candidatos a medicamentos para controlar las enfermedades. En el estudio actual, se investigó el efecto antileishmanial de la gelatina y su forma conjugada con ácido laúrico contra dos formas de parásito mayor de Leishmania (L. major). Además, se estudió el efecto citotóxico de estos péptidos en la línea celular THP1 y los glóbulos rojos humanos (RBCs). Además, el mecanismo de acción de los péptidos sobre los promastigotos mayores de L. se evaluó a través de diferentes métodos. Los resultados demostraron que la conjugación del ácido laúrico con Jellein no sólo no tuvo ningún efecto en la elevación de la actividad antimicrobiana, sino que también lo detuvo completamente. Además, Jellein causó una limitación en el número de promastigotos mayores de L. por la formación de poros, así como el cambio del potencial de membrana en lugar de la inducción de la apoptosis o activación de

¿Hay proteínas antimicrobianas en la jalea real?

La jalea real (RJ) es una secreción blanco amarillenta y ácida de glándulas hipofaríngeas y mandibulares de abejas enfermeras utilizadas para alimentar larvas jóvenes trabajadoras durante los tres primeros días y toda la vida de las abejas reinas. RJ es uno de los productos naturales más apreciados y valorados que se ha utilizado principalmente en medicinas tradicionales, alimentos saludables y cosméticos durante mucho tiempo en diferentes partes del mundo. También es el producto de abejas más estudiado, destinado a desentrañar sus bioactividades, tales como antimicrobianos, antioxidantes, antienvejecimiento, inmunomoduladores, y la acción tónica general contra animales de laboratorio, organismos microbianos, animales de granja y ensayos clínicos. Se utiliza comúnmente para complementar diversas enfermedades, incluyendo cáncer, diabetes, enfermedad cardiovascular y enfermedad de Alzheimer. Aquí, destacamos los recientes avances de la investigación sobre los principales compuestos bioactivos de RJ, tales como proteínas, péptidos, ácidos grasos y fenólicos, para una comprensión integral de las respuestas bioquímicas, biológicas y farmacéuticas a la promoción de la salud humana y los beneficios de la vida.Esto es potencialmente importante para obtener una visión novedosa de las propiedades biológicas y farmacéuticas de RJ.

¿Hay proteínas antimicrobianas en la jalea real?

Los insectos poseen sistemas de defensa biológica que pueden combatir eficazmente la invasión de microorganismos y virus externos, apoyando así su supervivencia en diversos ambientes. Los péptidos antimicrobianos (AMPs) representan un arma de acción rápida contra patógenos invasores, incluyendo varias cepas bacterianas o fúngicas. Un péptido antimicrobiano de 37 residuos, papiliocina, derivado de la mariposa cola golondrina Papilio xuthus larvae, mostró actividades antimicrobianas significativas contra varias cepas bacterianas y fúngicas patógenas humanas. En este estudio, desarrollamos un nuevo péptido antimicrobiano, PAJE (RWKIFKKPFKISHIHL-NH2), que es un péptido híbrido preparado mediante la combinación de residuos de 1-7 aminoácidos (RWKIFKK-NH2) de papiliocina y 1-8 aminoácidos (PFKISHIHL-NH2) de gelatina-1 para alterar la longitud, distribución de la carga, carga neta, volumen, anfipaticidad y mejorar las interacciones bacterianas. Este nuevo péptido mostró una mayor hidrofobia y carga neta positiva para unirse eficazmente a la membrana cargada negativamente. PAJE demostró actividad antimicrobiana contra bacterias tanto gramnegativas como grampositivas, con muy baja toxicidad para las células eucariotas y un proceso de síntesis económico.

¿Hay proteínas antimicrobianas en la jalea real?

Objetivos: Analizar la fracción proteica no glucosilada de miel Melipona beecheii para la actividad antimicrobiana frente a Escherichia coli O157:H7. Métodos y resultados: Se separaron las proteínas de miel M. beecheii según su grado de glicosilación mediante cromatografía de la afinidad A de Concanavalina. El extracto proteico total y sus fracciones fueron analizados por electroforesis 1D y 2D. También se determinaron las actividades antimicrobianas y antihemolíticas del extracto proteico total y la fracción no glucosilada. Además, se evaluó el efecto de esta fracción no glucosilada para la expresión de los genes patógenos Stx1, Stx2, EAE y HlyA. La miel de Melipona beechei contiene al menos 24 proteínas con pesos moleculares que oscilan entre 7·6 y 95 kDa y puntos isoeléctricos entre 3 y 10, tres proteínas de las 24 son no glucosiladas. La fracción no glucosilada tenía un MIC90 de 1·128 μg ml-1, y esta fracción inhibió la actividad hemolítica del patógeno, así como redujo la expresión de Stx1, Stx2 y HlyA. La proteína MbF1-2 de la fracción no glucosilada fue secuenciada e identificada como un homólogo de la proteína de gelatina real de Melipona cuadrifasciata. Conclusiones: La fracción de proteína no glucosilada de M. beecheii contribuye grandemente a la actividad antibacteriana y se compone de al menos tres proteínas, de las cuales MbF1-2 proporcionó más del 50% de Significado e impacto del estudio: El estudio mostró una actividad antimicrobiana significativa de varias proteínas presentes en la miel de M. beecheii. Curiosamente, la fracción proteica no glucosilada demostró actividad antihemolítica y afectó adversamente la expresión de genes de virulencia en Escherichia coli O157:H7; estas proteínas tienen el potencial de ser utilizadas en el desarrollo de agentes terapéuticos contra esta bacteria.

¿Hay proteínas antimicrobianas en la jalea real?

El proyecto del genoma humano (HGP) comenzó en 1990 con un tiempo de finalización proyectado de 15 años. En ese período, el proyecto espera completar la secuenciación del genoma humano total, desarrollar mapas genéticos para asignar genes a regiones específicas en cromosomas, identificar genes asociados con enfermedades, y desarrollar nuevas tecnologías para promover la investigación genética y las pruebas clínicas. El proyecto también tiene la intención de investigar cuestiones éticas, sociales y legales, así como para proporcionar educación sobre genética a los profesionales y al público. El HGP ha visto muchos logros todavía tiene mucho que descubrir antes de terminar. Este artículo intenta revisar el HGP y discutir su importancia y diversos temas éticos en genética.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

El Proyecto Genoma Humano (HGP) fue iniciado en 1990 y completado en 2003. Su objetivo era secuenciar todo el genoma humano. Aunque representó un avance en la comprensión del genoma humano y su complejidad, muchas preguntas quedaron sin respuesta. Otros proyectos fueron lanzados con el fin de desentrañar los misterios de nuestro genoma, incluyendo la ENCyclopedia of DNA Elements (ENCODE). Esta revisión tiene como objetivo analizar la evolución de los conocimientos científicos relacionados con los proyectos HGP y ENCODE. Los datos fueron recuperados de artículos científicos publicados en 1990-2014, un período que comprende el desarrollo y los 10 años posteriores a la finalización del HGP. El hecho de que sólo 20.000 genes son proteínas y codificaciones ARN es uno de los resultados más sorprendentes del HGP. Surgió un nuevo concepto sobre la organización del genoma. El proyecto ENCODE se inició en 2003 y se centró en mapear los elementos funcionales del genoma Por lo tanto, se determinó que una gran parte de las regiones de codificación no proteica son funcionales. Finalmente, surgió una visión más sofisticada de la estructura de la cromatina. Se ha reformulado el funcionamiento mecánico del genoma, revelando una imagen mucho más compleja. Además, hay que revisar una concepción génica del organismo. Han surgido varias críticas contra los enfoques del proyecto ENCODE, planteando la cuestión de si las regiones no conservadas pero bioquímicamente activas son realmente funcionales. Así, los proyectos HGP y ENCODE lograron un gran mapa del genoma humano, pero los datos generados aún requieren un análisis más profundo. © 2016 by The International Union of Biochemistry and Molecular Biology, 44:215-223, 2016.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

La información obtenida del Proyecto Genoma Humano, iniciado en 1990 y orientado a su finalización en 2005, influirá tanto en la atención de la salud como en la práctica de enfermería, revisará sustancialmente nuestra comprensión de la susceptibilidad y causalidad de la enfermedad, desarrollará pruebas genéticas adicionales y explorará terapias genéticas, con implicaciones tanto para la investigación en enfermería como para la práctica de enfermería, repasando el establecimiento del Proyecto Genoma Humano, reportando el progreso actual del proyecto e identificando algunas implicaciones del proyecto para la atención de la salud en general y específicamente para la enfermería.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

El Proyecto Genoma Humano (HGP) fue iniciado en 1990 y completado en 2003. Su objetivo era secuenciar todo el genoma humano. Aunque representó un avance en la comprensión del genoma humano y su complejidad, muchas preguntas quedaron sin respuesta. Otros proyectos fueron lanzados con el fin de desentrañar los misterios de nuestro genoma, incluyendo la ENCyclopedia of DNA Elements (ENCODE). Esta revisión tiene como objetivo analizar la evolución de los conocimientos científicos relacionados con los proyectos HGP y ENCODE. Los datos fueron recuperados de artículos científicos publicados en 1990-2014, un período que comprende el desarrollo y los 10 años posteriores a la finalización del HGP. El hecho de que sólo 20.000 genes son proteínas y codificaciones ARN es uno de los resultados más sorprendentes del HGP. Surgió un nuevo concepto sobre la organización del genoma. El proyecto ENCODE se inició en 2003 y se centró en mapear los elementos funcionales del genoma Por lo tanto, se determinó que una gran parte de las regiones de codificación no proteica son funcionales. Finalmente, surgió una visión más sofisticada de la estructura de la cromatina. Se ha reformulado el funcionamiento mecánico del genoma, revelando una imagen mucho más compleja. Además, hay que revisar una concepción génica del organismo. Han surgido varias críticas contra los enfoques del proyecto ENCODE, planteando la cuestión de si las regiones no conservadas pero bioquímicamente activas son realmente funcionales. Así, los proyectos HGP y ENCODE lograron un gran mapa del genoma humano, pero los datos generados aún requieren un análisis más profundo. © 2016 by The International Union of Biochemistry and Molecular Biology, 44:215-223, 2016.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

Durante el siglo pasado, nuestra comprensión del diagnóstico y tratamiento del cáncer se ha basado en un enfoque monogénico, y como consecuencia de ello, nuestro conocimiento de los fundamentos genéticos clínicos del cáncer es incompleto. Desde la finalización del genoma humano en 2003, nos ha llevado al descubrimiento de objetivos terapéuticos, lo que nos ha permitido extraer el genoma utilizando herramientas proteogenómicas de vanguardia. Han surgido varios objetivos nuevos y prometedores para el cáncer del proyecto del genoma para el diagnóstico, la terapéutica y los marcadores pronósticos, que se utilizan para monitorear la respuesta al tratamiento del cáncer. La naturaleza heterogénea del cáncer ha impedido el progreso en la comprensión de los mecanismos subyacentes que conducen a un crecimiento celular anormal. Desde el inicio del Atlas del Genoma del Cáncer (TCGA) y los proyectos del consorcio internacional del Genoma, se han logrado enormes progresos en la secuenciación del genoma y se ha completado un número inmenso de genomas del cáncer, y este enfoque ha transformado nuestra comprensión Mediante el empleo de tecnologías genómicas y proteómicas, se está generando una inmensa cantidad de datos genómicos sobre tumores clínicos, lo que ha transformado el panorama del cáncer y tiene el potencial de transformar el diagnóstico y el pronóstico del cáncer. Se necesita una visión molecular completa del panorama del cáncer para comprender los mecanismos subyacentes de la iniciación del cáncer a fin de mejorar el diagnóstico y el pronóstico, lo que en última instancia conducirá a un tratamiento personalizado. Curiosamente, el análisis del proteoma del cáncer también nos ha permitido identificar biomarcadores para monitorear fármacos y resistencia a la radiación en pacientes sometidos a tratamiento del cáncer. Las tecnologías de alto rendimiento, como el proteoma completo, el epigenoma, la interacción proteína-proteína y los datos farmacogenómicos, son indispensables para obtener el genoma y el proteoma del cáncer y estos enfoques han generado estudios universales multidimensionales de datos de genes y proteínas (OMICS) que tienen el potencial de facilitar la medicina de precisión. Sin embargo, debido a los lentos avances en las tecnologías computacionales, la traducción de datos de omics grandes en sus aspectos clínicos ha sido lenta. En esta revisión, se ha tratado de describir el papel de las tecnologías genómicas y proteómicas de alto rendimiento en la identificación de un panel de biomarcadores que podrían utilizarse para el diagnóstico y pronóstico tempranos del cáncer.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

Desde la finalización del Proyecto Genoma Humano en 2003 y el anuncio de la Iniciativa Medicina de Precisión por parte del presidente estadounidense Barack Obama en enero de 2015, los seres humanos han completado inicialmente los "tres pasos" de "genómica a la biología, genómica a la salud, así como genómica a la sociedad". Como nueva interdisciplina, la emergencia y el desarrollo de la medicina de precisión se han basado en el apoyo y la promoción de la ciencia biológica, la medicina básica, la medicina clínica, la epidemiología, la estadística, la sociología y la ciencia de la información, etc. Mientras tanto, la epidemiología molecular se considera el poder central para promover la medicina de precisión como una disciplina transversal de epidemiología y biología molecular.Este artículo se basa en las características y el progreso de la investigación de la medicina y epidemiología molecular respectivamente, centrándose en la contribución y la importancia de la epidemiología molecular a la medicina de precisión

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

La información obtenida del Proyecto Genoma Humano, iniciado en 1990 y orientado a su finalización en 2005, influirá tanto en la atención de la salud como en la práctica de enfermería, revisará sustancialmente nuestra comprensión de la susceptibilidad y causalidad de la enfermedad, desarrollará pruebas genéticas adicionales y explorará terapias genéticas, con implicaciones tanto para la investigación en enfermería como para la práctica de enfermería, repasando el establecimiento del Proyecto Genoma Humano, reportando el progreso actual del proyecto e identificando algunas implicaciones del proyecto para la atención de la salud en general y específicamente para la enfermería.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

El proyecto del genoma humano fue lanzado oficialmente en 1990. Este programa comenzó con una fase de mapeo que llevó al desarrollo de un mapa genético, un mapa físico basado en grandes fragmentos de ADN y, más recientemente, un mapa de genes. Desde 1996, el programa se ha ido desplazando progresivamente a secuenciación masiva. Se ha producido una aceleración espectacular durante los últimos 12 meses y aproximadamente el 90% de la secuencia está disponible en la actualidad en un formato de borrador. Esto pronto será seguido por una versión más completa y por la terminación progresiva de cada uno de los 24 cromosomas, algunos de los cuales ya están en un estado "acabado". Es de esperar que la secuencia del genoma, que se puede utilizar para identificar eficientemente genes involucrados en fenotipos mendelianos y que conducirán a una mejor comprensión del proceso de evolución, también nos permita abordar otras cuestiones, como las que implican herencia multifactorial.

¿Cuáles son los años de iniciación y finalización del proyecto Genoma Humano?

Los genomas eucariotas se agrupan en una estructura tridimensional en el núcleo. Los métodos actuales para estudiar la estructura del genoma se basan en la ligadura de proximidad. Sin embargo, este enfoque puede no detectar estructuras conocidas, como las interacciones con los cuerpos nucleares, porque estas regiones del ADN pueden estar demasiado alejadas para ligar directamente. Por lo tanto, nuestra comprensión general de la organización del genoma sigue siendo incompleta. Aquí, desarrollamos el reconocimiento de las interacciones de grupos divididos por extensión de etiquetas (SPRITE), un método que permite la detección de interacciones de orden superior en todo el genoma dentro del núcleo. Utilizando SPRITE, recapitulamos estructuras conocidas identificadas por ligadura de proximidad e identificamos interacciones adicionales que ocurren a través de distancias más grandes, incluyendo dos núcleos de interacciones intercromosomales que están dispuestos alrededor del nucleolo y las especículas nucleares. Nuestros resultados generan un modelo global en el que los cuerpos nucleares actúan como centros inter-cromosómicos que conforman el empaquetado global del ADN en el núcleo.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Desde la caracterización de Jacob y Monod del papel de los elementos del ADN en el control genético, se ha reconocido que la organización lineal de la estructura del genoma es importante para la regulación de la transcripción génica y, por lo tanto, la manifestación de los fenotipos. De manera similar, se ha supuesto desde hace mucho tiempo que la organización espacial (en tres dimensiones que evolucionan a través del tiempo), como parte del epigenoma, hace una contribución significativa a la transición genotipo-fenotipo. La aparente simplicidad de estas metodologías-cruce cromatina, digerir, diluir, ligar, detectar interacciones-cree la complejidad de los datos y las consideraciones que deben tenerse en cuenta para asegurar la generación y la interpretación precisa de datos confiables. Aquí discutimos la naturaleza probabilística de estas metodologías y cómo esto contribuye a sus limitaciones endógenas.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Las interacciones de cromatina de largo alcance juegan un papel crítico en la organización del genoma y regulación de la transcripción. Ahora reportamos el análisis de la cromatina mediada por transposas (Trac-looping) para la detección simultánea de las interacciones de cromatina de genoma a escala múltiple entre los elementos regulatorios y la accesibilidad a la cromatina. Con esta técnica, se inserta un enlace bivalente de oligonucleótidos entre dos regiones interactuantes de tal manera que las interacciones de cromatina se capturan sin fragmentación previa de cromatina y ligadura basada en proximidad.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

La organización espacial de los genomas se basa en su compartimentación jerárquica en dominios topológicos. Hay evidencia creciente de que los genomas bacterianos se organizan en dominios aislados similares a los dominios topológicamente asociados (TADs) detectados en células eucariotas. Las tecnologías de captura de conformación de cromosomas (3C) se utilizan para analizar la proximidad del ADN in vivo basado en la ligadura de segmentos de ADN distal cruzados por proteínas puente. Combinando 3C y secuenciación de alto rendimiento, el método Hi-C revela interacciones de todo el genoma dentro de dominios topológicos y la estructura del genoma global en su conjunto. Este capítulo proporciona directrices detalladas para la preparación de bibliotecas de secuencia de Hi-C para bacterias.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

El empaquetado del ADN dentro de un núcleo muestra una estructura compleja estabilizada por una serie de factores ligados al ADN. Tanto la distribución de estos factores como los contactos entre las diferentes ubicaciones genómicas del ADN se pueden medir ahora en una escala de todo el genoma. Esto ha avanzado el desarrollo de modelos dirigidos a predecir la conformación del ADN dado sólo las ubicaciones de factores ligados-el problema de plegado de la cromatina. Aquí presentamos un modelo de máxima entropía que es capaz de predecir una representación de la estructura en un mapa de contacto dada una secuencia de factores ligados. Los efectos no locales debidos a la secuencia vecina alrededor de los sitios de contacto se encuentran importantes para hacer predicciones precisas. Por último, mostramos que el modelo se puede utilizar para inferir una secuencia de factores ligados dada sólo una medición de la estructura. Esto abre la posibilidad de predecir eficientemente las regiones secuenciales que pueden desempeñar un papel en la generación de diferencias estructurales específicas

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Antecedentes: Varios métodos experimentales desarrollados recientemente, cada uno una extensión del ensayo de captura de conformación de cromatina (3C), han permitido el perfilar a lo largo del genoma los contactos de cromatina entre pares de loci genómicos en 3D. Especialmente en eucariotas complejos, los datos generados por estos métodos, junto con otros conjuntos de datos de todo el genoma, demostraron que el plegado de cromatina no aleatorio se correlaciona fuertemente con procesos celulares como la expresión génica y la replicación de ADN. Resultados: Describimos un ensayo de arquitectura genómica, 3C múltiples atado (TM3C), que mapea los contactos de cromatina a lo ancho del genoma a través de un protocolo simple de digestión enzimática de restricción y religación de fragmentos sobre cuentas de gel de agarosa seguido de secuenciación de extremo pareado. Además de identificar contactos entre pares de loci, TM3C Utilizamos TM3C para evaluar las arquitecturas del genoma de dos líneas celulares humanas: KBM7, una línea celular de leucemia crónica casi haploide, y NHEK, una línea celular de queratinocitos epidérmicos epidérmicos humanos diploide normal. Confirmamos que los mapas de frecuencia de contacto producidos por TM3C muestran características de los conjuntos de datos de arquitectura del genoma existentes, incluyendo el escalado esperado de probabilidades de contacto con distancia genómica, compartimentos cromosómicos de escala megabase y dominios topológicos de escala submegabase. También confirmamos que TM3C captura varios contactos de tipo de célula conocidos, cambios de ploidy y translocaciones, como la formación de cromosomas de Filadelfia (Ph+) en KBM7. Confirmamos un subconjunto de los contactos triples que involucran la región de control de impresión IGF2-H Nuestro análisis genómico de los contactos pares y triples demuestra su preferencia por vincular regiones de cromatina abierta entre sí y por vincular regiones con un mayor número de sitios hipersensibles de la DNASa (DHSs) entre sí. Para las células KBM7 casi haploides, inferimos modelos 3D del genoma entero que exhiben agrupamiento de cromosomas pequeños entre sí y cromosomas grandes entre sí, de acuerdo con estudios previos de las arquitecturas genómicas de otras líneas celulares humanas. Conclusión: TM3C es un protocolo simple para determinar la arquitectura genómica y se puede utilizar para identificar contactos simultáneos entre tres o cuatro loci. La aplicación de TM3C a una línea celular humana casi haploides reveló características a gran escala de la organización cromosómica y contactos de cromatina multidireccionales que vinculan preferentemente regiones de cromatina abierta.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

La organización del genoma en el núcleo y las interacciones de los genes con sus elementos reguladores son características clave del control transcripcional y su alteración puede causar enfermedad. Aquí informamos de un método de todo el genoma, cartografía de la arquitectura del genoma (GAM), para medir contactos de cromatina y otras características de la topología de cromatina tridimensional sobre la base de secuenciar ADN de una gran colección de secciones nucleares delgadas. Aplicamos GAM a células madre embrionarias de ratón e identificamos enriquecimiento para interacciones específicas entre genes activos y potenciadores a través de distancias genómicas muy grandes utilizando un modelo matemático llamado SLICE (inferencia estadística de co-segregación). GAM también revela una abundancia de contactos de tres vías a través del genoma, especialmente entre regiones que son altamente transcritas o contienen super-enhancers, proporcionando un nivel de visión de la arquitectura del genoma que, debido a las limitaciones técnicas de las tecnologías Además, GAM destaca el papel de los contactos específicos de expresión genética en la organización del genoma en los núcleos de mamíferos.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Determinar cómo se posicionan y doblan los cromosomas dentro del núcleo es fundamental para entender el papel de la topología de la cromatina en la regulación génica. Hay varios métodos disponibles para estudiar la arquitectura cromosómica, cada uno con diferentes fortalezas y limitaciones. Los enfoques de imagen establecidos y las técnicas de captura de la conformación cromosómica basadas en ligadura (3C) (como el ADN-FISH y Hi-C, respectivamente) han revelado la existencia de territorios cromosómicos, puntos de referencia nucleares funcionales (como las espinillas de empalme y la lámina nuclear) y dominios de asociación topológica.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Los genomas eucariotas se agrupan en una estructura tridimensional en el núcleo. Los métodos actuales para estudiar la estructura del genoma se basan en la ligadura de proximidad. Sin embargo, este enfoque puede no detectar estructuras conocidas, como las interacciones con los cuerpos nucleares, porque estas regiones del ADN pueden estar demasiado alejadas para ligar directamente. Por lo tanto, nuestra comprensión general de la organización del genoma sigue siendo incompleta. Aquí, desarrollamos el reconocimiento de las interacciones de grupos divididos por extensión de etiquetas (SPRITE), un método que permite la detección de interacciones de orden superior en todo el genoma dentro del núcleo. Utilizando SPRITE, recapitulamos estructuras conocidas identificadas por ligadura de proximidad e identificamos interacciones adicionales que ocurren a través de distancias más grandes, incluyendo dos núcleos de interacciones intercromosomales que están dispuestos alrededor del nucleolo y las especículas nucleares. Nuestros resultados generan un modelo global en el que los cuerpos nucleares actúan como centros inter-cromosómicos que conforman el empaquetado global del ADN en el núcleo.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

Los genomas eucariotas se agrupan en una estructura tridimensional en el núcleo. Los métodos actuales para estudiar la estructura del genoma se basan en la ligadura de proximidad. Sin embargo, este enfoque puede no detectar estructuras conocidas, como las interacciones con los cuerpos nucleares, porque estas regiones del ADN pueden estar demasiado alejadas para ligar directamente. Por lo tanto, nuestra comprensión general de la organización del genoma sigue siendo incompleta. Aquí, desarrollamos el reconocimiento de las interacciones de grupos divididos por extensión de etiquetas (SPRITE), un método que permite la detección de interacciones de orden superior en todo el genoma dentro del núcleo. Utilizando SPRITE, recapitulamos estructuras conocidas identificadas por ligadura de proximidad e identificamos interacciones adicionales que ocurren a través de distancias más grandes, incluyendo dos núcleos de interacciones intercromosomales que están dispuestos alrededor del nucleolo y las especículas nucleares. Nuestros resultados generan un modelo global en el que los cuerpos nucleares actúan como centros inter-cromosómicos que conforman el empaquetado global del ADN en el núcleo.

¿Qué métodos infieren la estructura del genoma 3D sin ligadura de proximidad?

El carcinoma apocrino invasivo puro es un tipo raro de cáncer primario de mama, que constituye el ~1% de todos los cánceres de mama. Como la mayoría de los carcinomas apocrinos invasivos puros son triplemente negativos, la falta de terapias dirigidas para el cáncer de mama triple negativo ha fomentado los esfuerzos para descubrir objetivos moleculares viables en estos tumores. En este estudio, analizamos las características clínicas y el perfil genómico integral de 18 pacientes con carcinomas apocrinos trinegativos puros (TNAC) utilizando un ensayo de panel de 324 genes (FoundationOne CDx). La edad media de estos pacientes fue de 55,5 años, y la tasa de estado postmenopáusico fue del 77,8%. En total, 83,3% de los pacientes fueron diagnosticados con grado histológico II, y 16,7% fueron diagnosticados con grado III. La mayoría de los pacientes presentaron un estadio temprano de metástasis tumoral-nodo (TNM) (I: 38,9%; II: 50,0%; III: 11,1%), el índice medio de Ki-67 fue de 9,7%, y el porcentaje de positividad PD-L1 fue de 11,7%; con una mediana de seguimiento de 76,5 meses, murió un paciente y dos experimentaron metástasis a distancia; hubo 61 alteraciones genómicas clínicamente relevantes entre los 18 TNAC puros, y la carga media de mutación tumoral (TMB) fue de 3 Mut/Mb. Los genes alterados de mayor rango fueron PIK3CA (72,2%), PTEN (33,3%) y TP53 (27,8%), se encontraron cuatro mutaciones nuevas en la PTEN y un reordenamiento reactivable que involucraba FGFR2-TACC2 que no había sido reportado antes en cáncer de mama. En total, el 88,9%, el 50%, el 44,4% y el 16,7% de los TNAC tuvieron al menos una alteración genómica clínicamente relevante en los genes implicados en el PI3K/mTOR, el ciclo celular, el RAS/RAF/MEK y las vías relacionadas con los receptores del factor de crecimiento, respectivamente. Todos los pacientes tuvieron al menos una alteración genómica clínicamente relevante y el 94,4% tuvieron al menos una alteración activable. Según nuestro conocimiento, este estudio es la cohorte de secuenciación genómica más grande de TNAC puros. La incorporación de perfiles genómicos integrales en los TNAC podría arrojar luz sobre las posibles oportunidades terapéuticas para los fármacos dirigidos y los inhibidores inmunes.

¿Cuántos genes son analizados por la FundaciónUn diagnóstico de acompañante?

Introducción. La recaída en el osteosarcoma tiene un pronóstico pobre, con una supervivencia inferior al 25% a los 5 años. Se describe la experiencia de la Sociedad Francesa de Oncología Pediátrica (SFCE) con dosis altas de tiotepa (HD) y trasplante autólogo de células madre (ASCT) en 45 niños con osteosarcoma recidivante. Pacientes y métodos. Entre 1992 y 2004, 53 pacientes recibieron tiotepa HD (900 mg/m(2)) seguida de TACS en 6 centros. Ocho pacientes fueron excluidos del análisis y revisamos retrospectivamente los patrones clínicos radiológicos y anatomopatológicos de los 45 pacientes restantes. Resultados. Dieciséis niñas y 29 niños (mediana de edad, 15,9 años) recibieron tiotepa HD después de la progresión inicial de la enfermedad metastásica (2), primera recaída (26%) y segunda o tercera recaída (17). Se reportan 12 respuestas parciales radiológicas y 9 de 31 respuestas Treinta y dos pacientes experimentaron nuevas recaídas, y 13 continuaron en remisión completa después de la resección quirúrgica de la enfermedad residual. La supervivencia global a tres años fue de 40%, y la supervivencia libre de progresión a 3 años fue de 24%. El retraso de la recaída (+/- 2 años desde el diagnóstico) fue un factor pronóstico (P = 0,011). No se produjo ningún evento adverso grave tóxico agudo. Conclusión. El uso de tiotepa HD y ATCA es factible en pacientes con osteosarcoma recidiva. Se está llevando a cabo un estudio aleatorizado para el osteosarcoma recurrente entre la quimioterapia de rescate estándar y la tiotepa de dosis alta con rescate de células madre.

¿Se puede recomendar la tiotepa para el tratamiento del osteosarcoma?

La investigación sobre la patología y el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer a menudo se ha centrado en las proteínas de presenilina. Estas proteínas proporcionan la actividad catalítica clave del complejo de γ-secretasa en la escisión de la proteína precursora de amiloide-β y la deposición resultante del enredo amiloide. En los últimos 25 años, la exploración de nuevos fármacos para controlar esta actividad proteolítica aberrante aún no ha identificado tratamientos eficaces para la enfermedad. En la búsqueda de otros mecanismos de patología de presenilina, varios estudios han demostrado que las proteínas de presenilina mamífero también actúan en un papel no proteolítico como un andamio para colocalizar proteínas clave de señalización. Es probable que este papel represente una función ancestral de presenilina, como se ha descrito en especies genéticamente distantes, incluyendo animales no mamíferos, plantas, y una simple ameba eucariota Dictyostelio que divergió del linaje humano hace más de mil millones de años. Aquí, revisamos el papel del andamio no catalítico de la presenilina, desde modelos mamíferos hasta otros modelos biomédicos, e incluimos ideas recientes usando Dictyostelio, para sugerir que este papel puede proporcionar una función evolutiva temprana de las proteínas presenilinas.

¿Qué se sabe sobre la actividad proteolítica aberrante en la enfermedad?

El síndrome de Sjögren es una enfermedad reumática en la que las glándulas salivales y lagrimales son el blanco principal de una reacción autoinmune patológica. Estudios previos en ratones indicaron que la organogénesis retardada y la fisiología celular aberrante seguida por un aumento en la apoptosis celular acinar preceden a la inflamación focal crónica en las glándulas salivales y la manifestación de secreción de glándula exocrina alterada.En un estudio reciente de Wildenberg y colegas, los autores reportan la actividad proteolítica aberrante en las glándulas salivales de ratones diabéticos no obesos y la generación de un fragmento de 17 kDa específico de órgano único de la quimioquina y la molécula de adhesión fractalkine.

¿Qué se sabe sobre la actividad proteolítica aberrante en la enfermedad?

Los hallazgos recientes de la clínica y del laboratorio han transformado la forma en que las proteasasas y sus inhibidores se perciben en la capa más externa de la piel, la epidermis. Ahora parece que una red proteolítica integrada opera dentro de la epidermis, que comprende más de 30 enzimas que llevan a cabo una creciente lista de funciones esenciales. Igualmente, la regulación o ejecución de procesos mediados por proteasa está emergiendo como un contribuyente clave a diversas patologías de la piel humana, y en los últimos años el número de enfermedades atribuibles a la actividad proteolítica aberrante se ha más que duplicado. Aquí, examinamos las diferentes funciones de las proteasasas en la homeostasis epidérmica (desde las enzimas de procesamiento hasta las moléculas de señalización) y exploramos el espectro de trastornos raros y comunes de la piel humana donde las vías proteolíticas son disreguladas.

¿Qué se sabe sobre la actividad proteolítica aberrante en la enfermedad?

Introducción: En el modelo de ratón no-obese diabético (NOD) del síndrome de Sjögren, la infiltración linfocítica es precedida por una acumulación de células dendríticas en las glándulas submandibulares (SMGs). Los ratones NOD también exhiben una mayor frecuencia de interacciones maduras con el receptor de fractalina (CX3C quimioquina [CX3CR]1) que expresan monocitos, que se consideran precursores de las células dendríticas tisulares. Para desentrañar aún más el papel que desempeña la fractalina-CX3CR1 en la inflamación de la glándula salival, estudiamos la expresión de la fractalina en las SMGs NOD. Métodos: Estudiamos la expresión proteica mediante análisis de manchas occidentales de lisatos de tejido entero. La actividad de proteasa se midió en tejidos de glándula salival La capacidad digestiva de las enzimas se determinó por incubación in vitro de enzimas recombinantes y de fraccalkina, seguida de tinción de proteínas y de Western blot. Resultados: Fraccalkina fue detectada en glándulas salivales tanto de NOD como de ratones de control a todas las edades. El análisis de Western blot mostró escisión de fraccalkina con edad creciente, que fue más pronunciada en ratones NOD. Esta escisión resultó en una disminución en la forma de 31 kDa de la proteína, y la generación de una banda de aproximadamente 19 kDa. Además, en animales de NOD mayores de 15 semanas, se observó la presencia de un único fragmento de aproximadamente 17 kDa. Esta escisión fue específica de los órganos, ya que no se produjo en el cerebro o páncreas. Se detectó un aumento de la actividad de gelatinasa y alfa-secretasa en NOD SMG y contribuyó a Debido a que los productos de escote aberrante pueden inducir autoinmunidad, estudiamos la presencia de autoanticuerpos contra la fractalkina. De hecho, ratones NOD exhibieron significativamente más anticuerpos contra la fractalkina que controlaron animales. Conclusión: Estos datos indican que la actividad proteolítica aberrante en el NOD SMG resulta en un aumento del escote de fractalkina y la generación de un fragmento de fractalkina único. Este escote específico puede contribuir a la autoinmunidad.

¿Qué se sabe sobre la actividad proteolítica aberrante en la enfermedad?

La evaluación del daño al ADN primario es una manera de identificar agentes genotóxicos potenciales y para ello el ensayo Comet se ha utilizado, durante las últimas décadas, para monitorear las rupturas del ADN en células individuales. Se han hecho varios intentos de modificar los diferentes pasos del protocolo in vitro para el ensayo Comet con el fin de mejorar su sensibilidad. Sin embargo, hasta donde sabemos, nadie ha tratado de reemplazar la solución de electroforesis tradicional basada en NaOH (pH > 13), por otro tipo de solución. En el presente artículo, utilizando células TK-6 expuestas a diferentes concentraciones de H2O2 o radiación ionizante, presentamos pruebas que muestran claramente que una solución de electroforesis basada en LiOH de bajo rendimiento a pH 12.5, y un procedimiento de lisis más suave, mejoraron significativamente tanto la velocidad como la sensibilidad del ensayo. El nuevo enfoque, que llamamos el cometa Flash, se basa en un tampón de lisis a pH 8,5, un tiempo de desbobinado de 2,5 minutos en una solución LiOH sin EDTA a pH 12.5, y un tiempo de electroforesis de 1 minuto a 150 V (5 V/cm) utilizando la misma solución.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

La fototerapia (PT) es la forma más utilizada de tratamiento para la hiperbilirrubinemia no conjugada. Una posible consecuencia dañina del PT es de naturaleza genética. Altos niveles de bilirrubina pueden conducir a daño oxidativo en los recién nacidos: las reacciones fotoquímicas pueden producir fotoproductos tóxicos, probablemente peróxidos. Para investigar esta hipótesis más a fondo en condiciones in vivo, la frecuencia de rotura de hebras de ADN se examinó mediante el ensayo de cometas en linfocitos periféricos de recién nacidos ictéricos sometidos al tratamiento de PT, y se determinaron los niveles de catalasa, una enzima antioxidante. Se analizaron 20 neonatos hiperbilirrubinémicos no hemolíticos antes del PT (grupo «antes del PT») y justo antes de terminar el PT (grupo «después del PT») y se compararon las puntuaciones de los cometas de estos pacientes con los de 20 neonatos sanos de término que tenían niveles de bilirrubina en el rango fisiológico. Las puntuaciones de los cometas (longitud de la cola, momento de la cola y %ADN en la cola) del grupo «antes de la fototerapia» fueron 23,5 +/- 16,3, 7,41 (0,97-40,7), 33,0 +/- 12.1, respectivamente y las puntuaciones de después del grupo fototerapéutico fueron 3,2 +/- 1,8, 0,29 (0,3-3.2), 10,7 +/- 3,7, respectivamente. Las puntuaciones de los cometas del grupo control fueron 3,0 Los puntajes de cometas y las actividades de catalasa plasmática en recién nacidos hiperbilirrubinémicos fueron significativamente mayores antes de la fototerapia, comparados con los valores después de la fototerapia y en los grupos de control (p < 0,001).No hubo diferencia estadística entre el grupo "después de la fototerapia" y los controles (p > 0,05).Estos resultados indican que el alto nivel sérico de bilirrubina tiene efectos genotóxicos, como se desprende de la alta tasa de rupturas de hebras de ADN en recién nacidos icundizados.Además, el PT no causa un aumento en la oxidación del ADN ni induce los efectos genotóxicos de la bilirrubina.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

Hasta el desarrollo de métodos de electroforesis de gel celular único en la década de 1980, la medición de rupturas de ADN inducidas por radiación en células individuales se limitó a la detección de roturas de micronúcleos o cromosomas que midieron los efectos combinados de la exposición y la reparación. El desarrollo de métodos para medir el grado de migración del ADN desde células individuales permitió la detección de rupturas de ADN inducidas por radiación inicial presentes en cada célula. Como las células no necesitan ser radiomarcadas, hubo nuevas oportunidades de análisis de efectos de radiación en células de prácticamente cualquier tejido, siempre que se pudiera preparar una suspensión celular única. El ensayo del cometa (como se nombró posteriormente) fue capaz de medir, por primera vez, la fracción de células radiobiológicas hipoxicas en tumores de ratón y humanos. Se utilizó para determinar que la tasa de repetición de rupturas de ADN era relativamente homogénea dentro de una población de células irradiadas. Debido a que las células individuales fueron analizadas, las células fuertemente dañadas o apoptóticas podrían ser identificadas y eliminadas del análisis para determinar las tasas "verdaderas" de ruptura del hilo de ADN.Otros ejemplos de aplicaciones del ensayo de cometas en la investigación radiobiológica incluyen el análisis de las diferencias inter-individuales en respuesta a la radiación, el efecto de los agentes modificadores de la hipoxia en la fracción hipoxica tumoral, el papel de la posición del ciclo celular durante la inducción de ruptura del ADN y la reunificación, los efectos no-objetivos en las células transeúntes y los efectos de partículas cargadas en los patrones de fragmentación del ADN.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

Para comprender mejor los mecanismos detrás de la técnica, hemos estudiado el comportamiento del ADN bajo diferentes condiciones de electroforesis en células de mamíferos expuestas a radiación gamma. Las colas de cometa obtenidas después de la electroforesis neutra parecen consistir en bucles de ADN que se unen a las estructuras del núcleo, ya que el ADN no puede moverse en la segunda dirección después de la electroforesis bidimensional. Cuando el ADN está marcado por un pulso corto, la microautoradiografía revela que toda la etiqueta aparece en la cabeza de los cometas cuando se aplica la electroforesis neutra. Después de la incubación de la persecución, la etiqueta se mueve hacia las colas. Esto da más apoyo a la visión de que los bucles de ADN están fijos a alguna estructura en el núcleo donde también tiene lugar la síntesis de ADN. Por lo tanto, parece que las colas de cometas alcalinos consisten en fragmentos de ADN libre. Además, se discuten los efectos de la concentración alcalina y el cloruro de sodio durante la desenrollado y la electroforesis. A lo largo del estudio, se ha utilizado un protocolo para el secado y fijación de los cometas.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

La ventaja del uso del tabaco (Nicotiana tabacum var. xanthi) es la capacidad de analizar y comparar en las mismas plantas en condiciones de tratamiento idénticas tanto el daño agudo inducido del ADN en las células somáticas medido por el ensayo Comet como el rendimiento de mutaciones somáticas de hojas inducidas. La irradiación gamma de las plántulas de tabaco indujo un aumento dependiente de la dosis en las mutaciones somáticas de 0,5 (control) a 240 por hoja (10Gy). El aumento del rendimiento de mutaciones somáticas fue altamente correlacionado (r = 0,996) con el aumento del daño del ADN medido por el ensayo Comet inmediatamente después de la irradiación. Con el aumento de la dosis de irradiación gamma, los valores medios del momento de la cola (+/- S.E.) aumentaron significativamente de 1,08 +/- 0,10 (control) a 20,26 Núcleos aislados de las hojas 24h después de la irradiación expresaron valores del momento de la cola que no eran significativamente diferentes del control (2,08 +/- 0,11). Así se observó una reparación completa del daño del ADN inducido por la irradiación gamma y medible por el ensayo Comet, mientras que el rendimiento de mutaciones somáticas aumentó en relación con la dosis de radiación. Se presentan datos sobre la cinética de la reparación del ADN y del daño del ADN inducido por la radiación gamma en núcleos aislados de tabaco, y en núcleos aislados de hojas y raíces irradiadas.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

La ventaja del uso del tabaco (Nicotiana tabacum var. xanthi) es la capacidad de analizar y comparar en las mismas plantas en condiciones de tratamiento idénticas tanto el daño agudo inducido del ADN en las células somáticas medido por el ensayo Comet como el rendimiento de mutaciones somáticas de hojas inducidas. La irradiación gamma de las plántulas de tabaco indujo un aumento dependiente de la dosis en las mutaciones somáticas de 0,5 (control) a 240 por hoja (10Gy). El aumento del rendimiento de mutaciones somáticas fue altamente correlacionado (r = 0,996) con el aumento del daño del ADN medido por el ensayo Comet inmediatamente después de la irradiación. Con el aumento de la dosis de irradiación gamma, los valores medios del momento de la cola (+/- S.E.) aumentaron significativamente de 1,08 +/- 0,10 (control) a 20,26 Núcleos aislados de las hojas 24h después de la irradiación expresaron valores del momento de la cola que no eran significativamente diferentes del control (2,08 +/- 0,11). Así se observó una reparación completa del daño del ADN inducido por la irradiación gamma y medible por el ensayo Comet, mientras que el rendimiento de mutaciones somáticas aumentó en relación con la dosis de radiación. Se presentan datos sobre la cinética de la reparación del ADN y del daño del ADN inducido por la radiación gamma en núcleos aislados de tabaco, y en núcleos aislados de hojas y raíces irradiadas.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

En situaciones accidentales, grandes cantidades de elementos radiactivos se liberan en el medio ambiente y la radiación emitida por estos radionucleidos puede afectar negativamente tanto al hombre como a la biota no humana. El presente estudio tiene por objeto: a) conocer el efecto genotóxico de la radiación gamma en la fauna acuática empleando dos especies de bivalvos seleccionados, b) evaluar el posible uso del "ensayo de cometas" para detectar daños genéticos en los hemocitos de bivalvos como biomarcador para la biovigilancia ambiental y c) comparar la sensibilidad relativa de dos especies de bivalvos, a saber, Paphia malabarica y Meretrix casta a la radiación gamma. Los ensayos de cometas fueron optimizados y validados utilizando diferentes concentraciones (18, 32 y 56 mg/L) de metilmetanosulfonato (EMS), un agente genotóxico de referencia de acción directa, al que los bivalvos fueron expuestos durante varias veces (24, 48 y 72 h). Los bivalvos fueron irradiados (exposición aguda única) con 5 dosis diferentes (viz 2, 4, 6, 8 y 10 Gy) de radiación gamma y sus efectos genotóxicos sobre los hemocitos fueron estudiados utilizando el ensayo de cometas. La hemolinfa fue recolectada del músculo adductor a las 24, 48 y 72 h de ambos bivalvos expuestos e irradiados por EMS y el ensayo de cometas se llevó a cabo mediante protocolo estándar. Se observó un aumento significativo del daño del ADN, como lo indica un aumento del porcentaje de daño del ADN de la cola a diferentes concentraciones de SME y a todas las dosis de radiación gamma en comparación con los controles de ambas especies bivalvas, lo que mostró un aumento dosis-dependiente del daño genético inducido en los bivalvos por el SME así como por la radiación gamma. Además, el daño más alto del ADN se observó a las 24 horas. El daño disminuyó gradualmente con el tiempo, es decir, fue menor a las 48 y 72 horas que a las 24 horas después de la irradiación en ambas especies de bivalvos. Esto puede indicar la reparación del ADN dañado y/o la pérdida de células muy dañadas a medida que avanzaba el tiempo posterior a la irradiación. El presente estudio revela que la radiación gamma induce rupturas de una sola hebra en el ADN medida por el ensayo del cometa alcalino en los bivalvos Este estudio indica además que M. casta y P. malabarica exhiben una sensibilidad casi idéntica a la radiación gamma medida por daño al ADN.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

En situaciones accidentales, grandes cantidades de elementos radiactivos se liberan en el medio ambiente y la radiación emitida por estos radionucleidos puede afectar negativamente tanto al hombre como a la biota no humana. El presente estudio tiene por objeto: a) conocer el efecto genotóxico de la radiación gamma en la fauna acuática empleando dos especies de bivalvos seleccionados, b) evaluar el posible uso del "ensayo de cometas" para detectar daños genéticos en los hemocitos de bivalvos como biomarcador para la biovigilancia ambiental y c) comparar la sensibilidad relativa de dos especies de bivalvos, a saber, Paphia malabarica y Meretrix casta a la radiación gamma. Los ensayos de cometas fueron optimizados y validados utilizando diferentes concentraciones (18, 32 y 56 mg/L) de metilmetanosulfonato (EMS), un agente genotóxico de referencia de acción directa, al que los bivalvos fueron expuestos durante varias veces (24, 48 y 72 h). Los bivalvos fueron irradiados (exposición aguda única) con 5 dosis diferentes (viz 2, 4, 6, 8 y 10 Gy) de radiación gamma y sus efectos genotóxicos sobre los hemocitos fueron estudiados utilizando el ensayo de cometas. La hemolinfa fue recolectada del músculo adductor a las 24, 48 y 72 h de ambos bivalvos expuestos e irradiados por EMS y el ensayo de cometas se llevó a cabo mediante protocolo estándar. Se observó un aumento significativo del daño del ADN, como lo indica un aumento del porcentaje de daño del ADN de la cola a diferentes concentraciones de SME y a todas las dosis de radiación gamma en comparación con los controles de ambas especies bivalvas, lo que mostró un aumento dosis-dependiente del daño genético inducido en los bivalvos por el SME así como por la radiación gamma. Además, el daño más alto del ADN se observó a las 24 horas. El daño disminuyó gradualmente con el tiempo, es decir, fue menor a las 48 y 72 horas que a las 24 horas después de la irradiación en ambas especies de bivalvos. Esto puede indicar la reparación del ADN dañado y/o la pérdida de células muy dañadas a medida que avanzaba el tiempo posterior a la irradiación. El presente estudio revela que la radiación gamma induce rupturas de una sola hebra en el ADN medida por el ensayo del cometa alcalino en los bivalvos Este estudio indica además que M. casta y P. malabarica exhiben una sensibilidad casi idéntica a la radiación gamma medida por daño al ADN.

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El ensayo de electroforesis en gel de una célula (SCGE), más conocido como ensayo de cometas, debido a la apariencia de las células "como cometas", se desarrolló originalmente como una técnica para medir la presencia de rupturas de una cadena de ADN. El ensayo se realiza en células individuales incrustadas en agar y colocadas en un campo eléctrico a pH alcalino, de modo que fragmentos de ADN de una cadena cargada negativamente se mueven a través del gel hacia el ánodo cargado positivamente. El ADN no dañado se mueve relativamente lentamente, formando la cabeza del cometa, mientras que el ADN fragmentado debido a la presencia de roturas de una cadena, se mueve más rápidamente dando la apariencia de la cola. La extensión de la migración del ADN es una medida del daño del ADN presente. El ensayo de cometas neutros se ha utilizado para roturas de doble cadena de ADN, mientras que se han descrito también técnicas que utilizan enzimas de reparación de ADN para cortar adductos específicos, UvrABC para aductos inducidos por radiación ultravioleta. Aquí se describe una versión modificada del ensayo de cometas para la medición de enlaces cruzados entre cadenas (ICLs). Entre los agentes cruzados entre cadenas se incluyen los agentes quimioterapéuticos mitomicina C y cis-platino, psoralen plus UVA light (PUVA) utilizados para tratar trastornos de la piel hiperproliferativos y diepoxibutano, un metabolito del 1,3-butadieno utilizado en procesos industriales y un contaminante ambiental. Los ICL son una forma potente y citotóxica de daño del ADN, ya que previenen la separación de las hebras de ADN, impidiendo así la replicación del ADN. A medida que los LCI previenen la separación de las hebras de ADN, su presencia resulta en menos migración de ADN en el ensayo de cometas. Para medir con éxito los LCI, es necesario incorporar un paso que induce rupturas de una hebra (usando una dosis definida de radiación ionizante) que permite que el ADN cruzado migre.

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En situaciones accidentales, grandes cantidades de elementos radiactivos se liberan en el medio ambiente y la radiación emitida por estos radionucleidos puede afectar negativamente tanto al hombre como a la biota no humana. El presente estudio tiene por objeto: a) conocer el efecto genotóxico de la radiación gamma en la fauna acuática empleando dos especies de bivalvos seleccionados, b) evaluar el posible uso del "ensayo de cometas" para detectar daños genéticos en los hemocitos de bivalvos como biomarcador para la biovigilancia ambiental y c) comparar la sensibilidad relativa de dos especies de bivalvos, a saber, Paphia malabarica y Meretrix casta a la radiación gamma. Los ensayos de cometas fueron optimizados y validados utilizando diferentes concentraciones (18, 32 y 56 mg/L) de metilmetanosulfonato (EMS), un agente genotóxico de referencia de acción directa, al que los bivalvos fueron expuestos durante varias veces (24, 48 y 72 h). Los bivalvos fueron irradiados (exposición aguda única) con 5 dosis diferentes (viz 2, 4, 6, 8 y 10 Gy) de radiación gamma y sus efectos genotóxicos sobre los hemocitos fueron estudiados utilizando el ensayo de cometas. La hemolinfa fue recolectada del músculo adductor a las 24, 48 y 72 h de ambos bivalvos expuestos e irradiados por EMS y el ensayo de cometas se llevó a cabo mediante protocolo estándar. Se observó un aumento significativo del daño del ADN, como lo indica un aumento del porcentaje de daño del ADN de la cola a diferentes concentraciones de SME y a todas las dosis de radiación gamma en comparación con los controles de ambas especies bivalvas, lo que mostró un aumento dosis-dependiente del daño genético inducido en los bivalvos por el SME así como por la radiación gamma. Además, el daño más alto del ADN se observó a las 24 horas. El daño disminuyó gradualmente con el tiempo, es decir, fue menor a las 48 y 72 horas que a las 24 horas después de la irradiación en ambas especies de bivalvos. Esto puede indicar la reparación del ADN dañado y/o la pérdida de células muy dañadas a medida que avanzaba el tiempo posterior a la irradiación. El presente estudio revela que la radiación gamma induce rupturas de una sola hebra en el ADN medida por el ensayo del cometa alcalino en los bivalvos Este estudio indica además que M. casta y P. malabarica exhiben una sensibilidad casi idéntica a la radiación gamma medida por daño al ADN.

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Antecedentes: En la radioterapia clínica, la mayoría de los pacientes toleran la dosis aplicada sin efectos secundarios moderados o nulos; sin embargo, entre el 5 y el 10% de todos los individuos muestran un aumento de reacciones agudas y/o tardías; se investigan los sistemas de pruebas in vitro para su idoneidad para fines predictivos; este artículo intenta una correlación entre la inducción y reparación del daño al ADN medido en el ensayo de cometas y la reacción clínica observada para evaluar la idoneidad del ensayo de cometas para predecir la sensibilidad a la radiación; los pacientes y métodos: Fibroblastos cutáneos de 30 pacientes con reacciones medias tisulares o efectos secundarios agudos y/o tardíos aumentados y las líneas celulares de 4 individuos con la enfermedad hereditaria ataxia telangiectasia (AT) fueron irradiados in vitro; la inducción y reparación del daño al ADN se midió en diferentes momentos tras la irradiación en el ensayo de cometas ( Estos resultados fueron comparados con las reacciones clínicas agudas y tardías clasificadas según el sistema de clasificación RTOG. Resultados: El daño del ADN inducido por la radiación disminuyó con el tiempo reflejando la reparación del ADN. Las células de los individuos AT mostraron una inducción de daño elevada y una capacidad de reparación reducida en comparación con los pacientes con reacciones tisulares medias. Los fibroblastos de pacientes con efectos secundarios agudos y tardíos aumentados mostraron una reparación del ADN más lenta. Además de la conocida falta de control del ciclo celular, nuestros resultados indican que las células AT muestran una capacidad de reparación reducida del ADN. Conclusiones: El ensayo del cometa parece ser capaz de detectar algunos tipos de sensibilidad a la radiación individual incrementada.

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El cromo hexavalente (Cr[VI]) es un producto de desecho industrial común, un contaminante ambiental y un cancerígeno humano reconocido. Tras la captación celular, Cr[VI] puede causar daño al ADN, sin embargo, los mecanismos por los cuales las células de mamíferos responden al daño provocado por el ADN de Cr siguen siendo diluidos. Utilizando electroforesis en gel de una sola célula (por ejemplo, Comet Assay) y microscopía de inmunofluoresencia para detectar la presencia de focos gamma-H2AX, encontramos que Cr[VI] induce roturas de doble cadena de ADN similares a la radiación ionizante (IR). También demostramos que la ataxia telangiectasia mutada (ATM) se activa en respuesta a Cr[VI] y la exposición a Cr[VI] desencadena una parada en fase S dependiente de ATM. Además, documentamos que se requiere ATM para la fosforilación del mantenimiento estructural de la proteína cromosómica 1 (SMC1). Finalmente, encontramos que la fosforilación dependiente de ATM de SMC1 es necesaria para facilitar la parada del ciclo celular de fase S en respuesta a la exposición a Cr[VI]. Colectivamente, estos resultados indican que la vía ATM-SMC1 juega un papel crítico en la respuesta celular a Cr[VI].

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La ventaja del uso del tabaco (Nicotiana tabacum var. xanthi) es la capacidad de analizar y comparar en las mismas plantas en condiciones de tratamiento idénticas tanto el daño agudo inducido del ADN en las células somáticas medido por el ensayo Comet como el rendimiento de mutaciones somáticas de hojas inducidas. La irradiación gamma de las plántulas de tabaco indujo un aumento dependiente de la dosis en las mutaciones somáticas de 0,5 (control) a 240 por hoja (10Gy). El aumento del rendimiento de mutaciones somáticas fue altamente correlacionado (r = 0,996) con el aumento del daño del ADN medido por el ensayo Comet inmediatamente después de la irradiación. Con el aumento de la dosis de irradiación gamma, los valores medios del momento de la cola (+/- S.E.) aumentaron significativamente de 1,08 +/- 0,10 (control) a 20,26 Núcleos aislados de las hojas 24h después de la irradiación expresaron valores del momento de la cola que no eran significativamente diferentes del control (2,08 +/- 0,11). Así se observó una reparación completa del daño del ADN inducido por la irradiación gamma y medible por el ensayo Comet, mientras que el rendimiento de mutaciones somáticas aumentó en relación con la dosis de radiación. Se presentan datos sobre la cinética de la reparación del ADN y del daño del ADN inducido por la radiación gamma en núcleos aislados de tabaco, y en núcleos aislados de hojas y raíces irradiadas.

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La ventaja del uso del tabaco (Nicotiana tabacum var. xanthi) es la capacidad de analizar y comparar en las mismas plantas en condiciones de tratamiento idénticas tanto el daño agudo inducido del ADN en las células somáticas medido por el ensayo Comet como el rendimiento de mutaciones somáticas de hojas inducidas. La irradiación gamma de las plántulas de tabaco indujo un aumento dependiente de la dosis en las mutaciones somáticas de 0,5 (control) a 240 por hoja (10Gy). El aumento del rendimiento de mutaciones somáticas fue altamente correlacionado (r = 0,996) con el aumento del daño del ADN medido por el ensayo Comet inmediatamente después de la irradiación. Con el aumento de la dosis de irradiación gamma, los valores medios del momento de la cola (+/- S.E.) aumentaron significativamente de 1,08 +/- 0,10 (control) a 20,26 Núcleos aislados de las hojas 24h después de la irradiación expresaron valores del momento de la cola que no eran significativamente diferentes del control (2,08 +/- 0,11). Así se observó una reparación completa del daño del ADN inducido por la irradiación gamma y medible por el ensayo Comet, mientras que el rendimiento de mutaciones somáticas aumentó en relación con la dosis de radiación. Se presentan datos sobre la cinética de la reparación del ADN y del daño del ADN inducido por la radiación gamma en núcleos aislados de tabaco, y en núcleos aislados de hojas y raíces irradiadas.

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La genotoxicidad y la mutagenicidad del formaldehído (FA) han sido bien caracterizadas durante los últimos años. Además de su conocida actividad directa perjudicial del ADN y mutagénica en células suficientemente expuestas, la FA a bajas concentraciones también podría potenciar los efectos mutagénicos y carcinógenos de otros mutágenos ambientales interfiriendo con la reparación de lesiones del ADN inducidas por estos mutágenos. Para evaluar más a fondo los posibles efectos comutagénicos de la FA, exponemos las células pulmonares humanas A549 a la FA en combinación con varios mutágenos y medimos la inducción y eliminación del daño del ADN por el ensayo de cometas y la producción de mutaciones cromosómicas mediante el ensayo de micronúcleos de bloque de citocinesis (ensayo CBMN). Los mutágenos analizados fueron radiación ionizante (IR), (±)-anti-B[a]P-7,8-dihidrodiol-9,10-epóxido (BPDE), N-nitroso-N-metilurea (metil nitrosourea; MNU) y metilmetanosulfonato (MMS). FA (10-75μM) no aumentó la actividad genotóxica y mutagénica de estos mutágenos bajo las condiciones de ensayo aplicadas. FA sola y en combinación con MNU o MMS no afectó a la expresión (nivel de ARNm) del gen de la O(6)-metilguanina-DNA metiltransferasa (MGMT) en células A549. Los resultados de estos experimentos no apoyan la suposición de que las bajas concentraciones de FA podrían interferir con la reparación del daño del ADN inducido por otros mutágenos.

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En el curso de un estudio combinado de 2 años de toxicidad crónica-carcinogenicidad realizado de acuerdo con la Directriz de ensayo 453 de la Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos (OCDE) de la OCDE, se evaluó la genotoxicidad sistémica (células sanguíneas) de dos nanomateriales representativos de la OCDE, CeO2 NM-212 y BaSO4 a los 3 ó 6 meses de exposición por inhalación a ratas. Se analizaron los efectos del ADN en los leucocitos utilizando el ensayo alcalino de Comet, las mutaciones genéticas y las aberraciones cromosómicas en eritrocitos utilizando el ensayo citométrico de mutación genética Pig-a y el ensayo micronúcleo (aplicando tanto la evaluación microscópica como la citométrica de flujo), respectivamente. Dado que el CeO2 nanotamaño no produjo efectos en los pulmones a concentraciones de 5mg/m3 (cargas de 0,5mg/lung) en el estudio de determinación de rango anterior, mientras que el BaSO4 nanotamaño no produjo ningún efecto, las ratas hembras fueron expuestas a concentraciones de aerosoles de 0,1 a 3mg/m3 CeO2 o 50mg/m3 BaSO4 nanomateriales (6h/día; 5 días/semana; exposición de todo el cuerpo). La sangre de animales tratados con aire limpio sirvió como control negativo, mientras que las muestras de sangre de ratas tratadas por vía oral con tres dosis de 20mg/kg de peso corporal etilnitrosourea a intervalos de 24h se utilizaron como controles positivos. Por el contrario, la exposición por inhalación de nanomateriales CeO2 o BaSO4 a 3 y 6 meses no produjo hallazgos significativos en ninguna de las pruebas de genotoxicidad. Los resultados demuestran que la exposición subcrónica a diferentes dosis bajas de CeO2 o a una dosis alta de nanomateriales BaSO4 no induce genotoxicidad en el sistema hematopoyético de ratas a niveles de ADN, gen o cromosoma.

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La prueba de gel monocelular (ensayo de SCG o de cometas) es un método rápido y sensible para medir el daño y la reparación del ADN en células individuales. Se ha demostrado que una amplia variedad de mutágenos causan alteraciones del ADN detectables con el ensayo de cometas, pero todavía no está claro si existe una relación entre los efectos del ADN y la inducción de mutaciones. Por lo tanto, estamos investigando en un sistema de cultivo celular con células humanas (MRC5CV1) la inducción del daño del ADN por mutágenos ambientales y la formación de mutaciones en el gen HPRT. En el presente estudio investigamos el benzo[a]pireno (BP), un hidrocarburo aromático policíclico mutagénico y carcinógeno, y su metabolito reactivo (+)-antibenzo[a]pireno-7,8-diol 9, 10-óxido ((+)-anti-BPDE La mezcla de BP activada por S9 y el mutageno de acción directa (+)-anti-BPDE causaron un aumento de la migración del ADN relacionada con la concentración en el ensayo de cometas. Los experimentos de postincubación indicaron que los efectos inducidos del ADN son eliminados por la reparación del ADN dentro de las 24 h. El tratamiento con BP causó un fuerte efecto genotóxico en el ensayo de cometas, pero sólo tuvo un efecto marginal en la frecuencia de mutaciones genéticas. Cuando las células fueron tratadas con BP en presencia de sulfato de cadmio, se observó un claro aumento de la genotoxicidad mientras que el efecto sobre las mutaciones fue inalterado. Nuestros resultados indican que las alteraciones del ADN detectadas con el ensayo de cometas no necesariamente se relacionan con la mutagenesis. La ausencia de una relación estrecha entre la migración del ADN en el ensayo de cometas y la muta

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La inducción de la mutación en células directamente expuestas se considera actualmente como el componente principal del riesgo genético de radiación ionizante para los seres humanos. Sin embargo, los datos recientes sobre los aumentos transgeneracionales en las tasas de mutación en la progenie de padres irradiados indican que el riesgo genético podría ser mayor de lo previsto anteriormente. Aquí, hemos analizado los cambios transgeneracionales en las tasas de mutación y daño del ADN en la línea germinal y los tejidos somáticos de los descendientes de primera generación no expuestos de ratones machos irradiados con CBA/Ca y BALB/c. Las tasas de mutación en un locus de ADN simple tándem expandido y un gen codificante de proteínas (hprt) fueron significativamente elevadas tanto en la línea germinal (esperma) como en los tejidos somáticos de todos los descendientes de machos irradiados. Los cambios transgeneracionales en las tasas de mutación se atribuyeron a la presencia de un subconjunto persistente de lesiones de ADN endógeno (brechas de doble y de una sola cadena), medida por la forma fosforilada de la histona H2AX (gamma-H2AX) y ensayos alcalinos de cometas. Esta desestabilización transgeneracional notable del genoma F(1) puede tener implicaciones importantes para la etiología del cáncer y las estimaciones de riesgo genético.

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El ensayo de electroforesis unicelular (comet) es un método establecido para medir las roturas de filamentos inducidas por la radiación en el ADN. El grado de daño se cuantifica en las células individuales mediante la evaluación de la intensidad y distribución de un colorante de unión al ADN fluorescente mediante el software de análisis de imágenes. Utilizando el sistema Kinetic Imaging Komet3, se demuestra que el fluorocromo SYBR Green I mejora la resolución y sensibilidad del ensayo de cometas, especialmente para medir las roturas de doble filamentos inducidas por la radiación.

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El ensayo COMET es reconocido como un método rápido y sensible en la cuantificación del daño del ADN inducido por la radiación. Investigamos la influencia distorsionante de factores endógenos, inherentes al ensayo en la base (nivel celular único) y medidas de resultado primario (nivel experimental/deslizante), como el momento de cola de oliva (OTM) y el porcentaje de ADN en la cola (%tail-DNA). De 2003 a 2008, realizamos el ensayo en linfocitos aislados de las muestras sanguíneas de 355 pacientes con cáncer de pulmón, 170 controles y 610 familiares, así como un solo individuo de referencia, repetido 170 veces. En total, se han incluido los datos de 10.016 experimentos individuales que contienen alrededor de 1.750.000 células. Esta es la primera vez que la variabilidad endógena del ensayo COMET ha sido validada sistemáticamente en un conjunto de datos tan grande durante un período de 5 años. Suponiendo que la muestra de referencia refleja el ruido blanco específico del ensayo, estimamos una proporción del 7-95% de la variabilidad de las medidas de resultado debido a la variación del ensayo (ruido blanco) dependiendo del parámetro, el nivel de exposición y el grupo de estudio. La proporción de ruido blanco fue mayor para el daño de radiación inicial. Los factores endógenos específicos considerados atribuyen al 14,8% de la variabilidad total en las mediciones de resultado primario del OTM y al 6,9% del % de ADN-cola. El OTM resulta ser un parámetro sensible para detectar variación, pero también es más susceptible a la perturbación causada por factores endógenos que el % de ADN-cola. Para reducir la variabilidad experimental en los ensayos COMET, recomendamos un protocolo de operación altamente estandarizado, así como inspeccionar y/o ajustar las medidas de resultado primario según los factores endógenos antes de calcular las medidas de resultado secundario, por ejemplo, la capacidad de reparación del Una muestra de referencia humana (HR) también es útil para inspeccionar la homogeneidad en la progresión temporal de las investigaciones de larga duración, pero no para calibrar las mediciones de resultados primarios.

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Se probó la idoneidad del ensayo de cometas para identificar el daño de ADN inducido por neutrones de energía variable, para lo cual se utilizaron neutrones monoenergéticos del acelerador de investigación radiobiológica de la Universidad de Hiroshima (HIRRAC) para inducir el daño de ADN en linfocitos de sangre periférica humana irradiados. El nivel de daño se calculó como el momento de cola para diferentes dosis (0,125-1 Gy) y se comparó con los efectos resultantes de la irradiación con (60) Co gamma. Las células irradiadas de neutrones exhibieron colas de cometas más largas consistentes en pequeños trozos de ADN roto en contraste con las colas estriadas generadas por (60) Co gamma. La eficacia biológica máxima se produjo en 0,37 y 0,57 MeV; un aumento o disminución adicional de la energía de neutrones llevó a un valor reducido de RBE. Los valores de ERB, medidos por el ensayo de cometas, fueron 6.3, 5.4, 4.7, 4.3, 2.6 y 1.7 para 0,37, 0.57, 0.79, 0,186, 1 y 2.3 neutrones de MeV. Se discute el menor valor de ERB obtenido por el ensayo de cometas en comparación con el de otros puntos finales biológicos. Este estudio reporta la utilidad del ensayo de cometas alcalinos para identificar el daño al ADN inducido por neutrones del mismo factor de ponderación de la radiación. El ensayo de cometas es una herramienta potencial para el uso en terapia de neutrones, así como un método para la detección rápida de muestras de individuos expuestos accidentalmente a la radiación.

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La ventaja del uso del tabaco (Nicotiana tabacum var. xanthi) es la capacidad de analizar y comparar en las mismas plantas en condiciones de tratamiento idénticas tanto el daño agudo inducido del ADN en las células somáticas medido por el ensayo Comet como el rendimiento de mutaciones somáticas de hojas inducidas. La irradiación gamma de las plántulas de tabaco indujo un aumento dependiente de la dosis en las mutaciones somáticas de 0,5 (control) a 240 por hoja (10Gy). El aumento del rendimiento de mutaciones somáticas fue altamente correlacionado (r = 0,996) con el aumento del daño del ADN medido por el ensayo Comet inmediatamente después de la irradiación. Con el aumento de la dosis de irradiación gamma, los valores medios del momento de la cola (+/- S.E.) aumentaron significativamente de 1,08 +/- 0,10 (control) a 20,26 Núcleos aislados de las hojas 24h después de la irradiación expresaron valores del momento de la cola que no eran significativamente diferentes del control (2,08 +/- 0,11). Así se observó una reparación completa del daño del ADN inducido por la irradiación gamma y medible por el ensayo Comet, mientras que el rendimiento de mutaciones somáticas aumentó en relación con la dosis de radiación. Se presentan datos sobre la cinética de la reparación del ADN y del daño del ADN inducido por la radiación gamma en núcleos aislados de tabaco, y en núcleos aislados de hojas y raíces irradiadas.

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La versión alcalina del ensayo de electroforesis en gel de una célula (comet) se utiliza ampliamente para evaluar el daño del ADN a nivel de célula individual. El método alcalino estándar del ensayo de cometas implica la desproteinización de células incrustadas en gel de agarosa utilizando un tampón de lisis alto de detergente por sal, seguido por la desnaturalización del ADN y la electroforesis utilizando un álcali fuerte a pH>13 [N.P. Singh, M.T. McCoy, R.R. Tice, E.L. Schneider, Una técnica sencilla para la cuantificación de bajos niveles de daño del ADN en células individuales, Exp. Cell. Res. 175 (1988) 184-191]. Sin embargo, un informe reciente mostró que un fuerte tratamiento alcalino resulta en la desproteinización simultánea de las células y la desnaturalización del ADN genómico [P. Sestili, C. Martinelli, V. Stocchi, The fast halo assay: an method improved to quantificate genomic DNA heaven breakage at the unicell-level, Mutat. Res. 607 (2006) 205-214]. Este estudio se llevó a cabo para comprobar si la fuerte desproteinización alcalina de las células podría reemplazar el paso de lisis alta sal-detergente utilizado en el método estándar del ensayo del cometa alcalino. Los linfocitos de sangre periférica de 3 individuos sanos fueron irradiados con rayos gamma a dosis que varían entre 0 y 10 Gy. Después de la irradiación, el ensayo del cometa se En el método modificado, las células incrustadas de agarosa fueron tratadas con un fuerte alcalino (0,3M NaOH, 0,02 M Trizma y 1mM EDTA, pH>13) durante 20 minutos para permitir la desproteinización de las células y la desnaturalización del ADN, seguida de electroforesis utilizando la misma solución alcalina para obtener cometas. Daño del ADN expresado en términos de longitud de cola del cometa, porcentaje de ADN en cola del cometa y momento de cola obtenido por el método alcalino estándar y el método modificado. En ambos métodos, el daño del ADN mostró una buena correlación con la dosis de rayos gamma. Los resultados indican una sensibilidad satisfactoria del método modificado en la detección del daño del ADN inducido por radiación en los linfocitos de sangre periférica humana.

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Las líneas celulares linfoblastoides (LCL) con una mutación heterocigota en el gen de susceptibilidad al cáncer de mama BRCA1 se han utilizado repetidamente para dilucidar las consecuencias biológicas de tal mutación con respecto a la sensibilidad a la radiación y la deficiencia de reparación del ADN. Nuestros resultados anteriores indicaron que LCL con una mutación BRCA1 generalmente no muestran la misma sensibilidad al mutágeno cromosómico en la prueba de micronúcleos que los linfocitos con la misma mutación BRCA1. Para estudiar más a fondo la radiosensibilidad del LCL con una mutación BRCA1, ahora realizamos investigaciones comparativas con el ensayo de cometas alcalinos (pH 13) y neutros (pH 8.3) y electroforesis de gel de campo pulsado (PFGE). Estas pruebas se utilizan comúnmente para determinar la capacidad de reparación de roturas de doble filamento de ADN (D Se investigaron seis LCL (tres establecidos de mujeres con mutación BRCA1 heterocigota y tres de controles sanos). Se realizó la inducción (2 y 5 Gy) de daño al ADN inducido por rayos gamma y su reparación (durante 60 min después de la irradiación) con el ensayo de cometas alcalinos y neutros. Se realizaron experimentos comparativos con PFGE determinando la inducción del ADN-DSB por irradiación gamma 10-50 Gy y su reparación durante 6 h. No hubo diferencia significativa entre LCL con y sin mutación BRCA1 en ninguno de estos experimentos. Por lo tanto, utilizando estos métodos, no se encontró indicación alguna para una reparación tardía del ADN-DSB en LCL con mutación BRCA1; sin embargo, estos resultados no excluyen generalmente la deficiencia de reparación del ADN-DSB en estas líneas celulares porque los métodos aplicados tienen sensibilidad limitada y sólo miden la velocidad pero no la fidelidad del proceso de

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El ensayo de electroforesis en gel monocelular alcalina (SCGE o Comet) parece ser una herramienta prometedora para medir el daño del ADN a nivel celular individual en estudios tanto in vitro como in vivo. Para proporcionar más datos sobre la posible aplicabilidad de este ensayo en estudios de biovigilancia humana, hemos evaluado el daño genético eventual inducido por la exposición terapéutica a 131I, midiendo la longitud del cometa y la cantidad de daño del ADN en leucocitos sanguíneos periféricos de un grupo de 28 pacientes con cáncer de tiroides que recibieron 131I yoduro de sodio por administración oral. Las muestras de sangre se tomaron justo antes del tratamiento y 1 semana después de él. De los resultados obtenidos después del tratamiento con radio yodo, se observa un pequeño aumento en la longitud del cometa y en el grado de daño del ADN; sin embargo, este aumento no es estadísticamente significativo debido a la variabilidad interindividual y las respuestas variables antes y Teniendo en cuenta nuestros estudios anteriores que muestran aumentos significativos en la frecuencia de daño citogenético (cuando se mide como micronuclei) en pacientes tratados con dosis relativamente bajas de 131I, los resultados obtenidos en el presente trabajo mediante el ensayo Comet podrían indicar que 1 semana después de la exposición ya se han reparado la mayoría de las lesiones de ADN inducidas por yodo radioactivo, que se pueden detectar con este ensayo.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

El ensayo de electroforesis en gel monocelular alcalina (SCGE o Comet) parece ser una herramienta prometedora para medir el daño del ADN a nivel celular individual en estudios tanto in vitro como in vivo. Para proporcionar más datos sobre la posible aplicabilidad de este ensayo en estudios de biovigilancia humana, hemos evaluado el daño genético eventual inducido por la exposición terapéutica a 131I, midiendo la longitud del cometa y la cantidad de daño del ADN en leucocitos sanguíneos periféricos de un grupo de 28 pacientes con cáncer de tiroides que recibieron 131I yoduro de sodio por administración oral. Las muestras de sangre se tomaron justo antes del tratamiento y 1 semana después de él. De los resultados obtenidos después del tratamiento con radio yodo, se observa un pequeño aumento en la longitud del cometa y en el grado de daño del ADN; sin embargo, este aumento no es estadísticamente significativo debido a la variabilidad interindividual y las respuestas variables antes y Teniendo en cuenta nuestros estudios anteriores que muestran aumentos significativos en la frecuencia de daño citogenético (cuando se mide como micronuclei) en pacientes tratados con dosis relativamente bajas de 131I, los resultados obtenidos en el presente trabajo mediante el ensayo Comet podrían indicar que 1 semana después de la exposición ya se han reparado la mayoría de las lesiones de ADN inducidas por yodo radioactivo, que se pueden detectar con este ensayo.

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

Los datos recientes in vivo e in vitro de pacientes analizados para la susceptibilidad genética a la radiación durante la terapia del cáncer han mostrado que los cambios estructurales en los cromosomas son prevalentes tanto en los pacientes tratados como en sus familiares inmediatos. Como los cambios estructurales en los cromosomas con frecuencia conducen a la activación de protooncogenes y la eliminación de genes tumor-supresores, representan mecanismos importantes para el inicio de procesos de reparación del ADN y tumorigenesis. Con la excepción de síndromes genéticos raros como AT (Ataxia telangiectasia) o NBS (Síndrome de Breakage de Nijmegen), se desconocen los antecedentes para la herencia de la susceptibilidad genética a la radiación. Recientemente, se ha establecido una pantalla genética a gran escala de mutantes de ratón dentro del Proyecto Alemán Genoma Humano (Hrabè de Angelis y Balling 1998). El objetivo de este ENU (ENU: etilnitrosourea) mutagenesis es la generación de ratones mutantes que servirán como modelos animales para las enfermedades humanas y la susceptibilidad genética. Para aprovechar plenamente el potencial de una pantalla genética de esta magnitud, en la que se va a realizar la exploración de genes responsables de la inestabilidad genómica y la sensibilidad a la radiación, es necesario establecer un sistema de ensayo simple que sea susceptible de automatización. Por lo tanto, estamos utilizando la electroforesis de gel de una célula (ensayo de cometa) para detectar mutantes de ratón que muestran una susceptibilidad genética a la radiación ionizante. Hemos establecido los parámetros de análisis en el ensayo de cometas que actualmente se utilizan para detectar mutantes de ratón sensibles a la radiación y para controlar la varianza dentro de la población de ratón en la pantalla de ENU. El ensayo se puede utilizar para aislar genes que son responsables de la

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

Los datos recientes in vivo e in vitro de pacientes analizados para la susceptibilidad genética a la radiación durante la terapia del cáncer han mostrado que los cambios estructurales en los cromosomas son prevalentes tanto en los pacientes tratados como en sus familiares inmediatos. Como los cambios estructurales en los cromosomas con frecuencia conducen a la activación de protooncogenes y la eliminación de genes tumor-supresores, representan mecanismos importantes para el inicio de procesos de reparación del ADN y tumorigenesis. Con la excepción de síndromes genéticos raros como AT (Ataxia telangiectasia) o NBS (Síndrome de Breakage de Nijmegen), se desconocen los antecedentes para la herencia de la susceptibilidad genética a la radiación. Recientemente, se ha establecido una pantalla genética a gran escala de mutantes de ratón dentro del Proyecto Alemán Genoma Humano (Hrabè de Angelis y Balling 1998). El objetivo de este ENU (ENU: etilnitrosourea) mutagenesis es la generación de ratones mutantes que servirán como modelos animales para las enfermedades humanas y la susceptibilidad genética. Para aprovechar plenamente el potencial de una pantalla genética de esta magnitud, en la que se va a realizar la exploración de genes responsables de la inestabilidad genómica y la sensibilidad a la radiación, es necesario establecer un sistema de ensayo simple que sea susceptible de automatización. Por lo tanto, estamos utilizando la electroforesis de gel de una célula (ensayo de cometa) para detectar mutantes de ratón que muestran una susceptibilidad genética a la radiación ionizante. Hemos establecido los parámetros de análisis en el ensayo de cometas que actualmente se utilizan para detectar mutantes de ratón sensibles a la radiación y para controlar la varianza dentro de la población de ratón en la pantalla de ENU. El ensayo se puede utilizar para aislar genes que son responsables de la

¿Un ensayo de cometas mide mutaciones inducidas por radiación?

El panorama potenciador de las células madre pluripotentes es objeto de una extensa reorganización durante el desarrollo temprano de los mamíferos. Sin embargo, las funciones y mecanismos detrás de dicha reorganización no son claros. Aquí, mostramos que el factor de transcripción GRHL2 es necesario y suficiente para activar un subconjunto epitelial de potenciadores como células madre embrionarias ingenuas (ESCs) transición a células epiblastadas formativas (EpiLCs). Sorprendentemente, muchos genes objetivo GRHL2 no cambian en expresión durante la transición ESC-EpiLC. En cambio, los potenciadores que regulan estos genes en los ESCs disminuyen en actividad en los EpiLCs mientras que los potenciadores alternativos dependientes de GRHL2 se activan para mantener la transcripción. Por lo tanto, GRHL2 asume el control sobre un subconjunto de la red ingenua a través del cambio Estos datos evocan un modelo en el que la red de pluripotencia ingenua se divide en redes pequeñas e independientes reguladas por factores de transcripción específicos de EPLC, primiendo así células para la especificación del linaje.

¿Qué es la pluripotencia formativa?

En el blastocisto de ratón, las células de epiblasto son recién formadas poco antes de la implantación. Poseen una plasticidad de desarrollo única, llamada pluripotencia ingenua. Para que el desarrollo avance, este estado ingenua debe ser subsumido por diferenciación multilínea dentro de 72 h después de la implantación. La diferenciación in vitro de células madre embrionarias ingenuas (ESCs) cultivadas en condiciones controladas proporciona un sistema tratable para diseccionar y entender el proceso de salida de la pluripotencia ingenua y entrar en especificación de linaje. La explotación de este sistema en pantallas recientes de RNAi y mutagenesis ha descubierto múltiples factores y módulos nuevos que impulsan o facilitan la progresión fuera del estado ingenua. Cabe destacar que estos estudios muestran que la red de factores de transcripción que gobierna el estado ingenua se desmantela rápidamente antes de la regulación ascendente de marcadores de Aquí, se resumen estos hallazgos y se propone una hoja de ruta para las transiciones estatales en la diferenciación ESC que refleja la dinámica ordenada de progresión epiblasto en el embrión.

¿Qué es la pluripotencia formativa?

La pluripotencia denota la capacidad flexible de las células individuales para dar lugar a todos los linajes somáticos y típicamente también a la línea germinal. Las células del ratón ES y las células madre derivadas del epiblasto después de la implantación (EpiSC) son sistemas de cultivo de células pluripotentes ampliamente utilizados. Estos dos tipos de células madre in vitro tienen características divergentes. Se consideran representativos de diferentes etapas de desarrollo, que se distinguen por el uso de los términos "naïve" y "primed". Una descripción binaria es una simplificación excesiva, sin embargo. Aquí, discutimos una etapa intermedia de pluripotencia que llamamos "formativa".

¿Qué es la pluripotencia formativa?

Las observaciones de la expresión génica fluctuante y la heterogeneidad fenotípica in vitro han fomentado una concepción de la pluripotencia como un estado intrínsecamente metaestable y precario. Sin embargo, en el embrión y en ambientes de cultivo definidos las propiedades de las células pluripotentes cambian en una secuencia ordenada. Se han descrito previamente dos fases de la pluripotencia, llamadas naïve y primo. En este artículo de la Hipótesis, se propone la existencia de una tercera fase, llamada pluripotencia formativa, como parte de un continuum de desarrollo entre las fases naïve y primo. Se supone que la fase formativa permite la ejecución de la pluripotencia, lo que implica la remodelación de las redes transcripcionales, epigenéticas, de señalización y metabólicas para constituir la competencia multilínea y la capacidad de respuesta a las señales de especificación.

¿Qué es la pluripotencia formativa?

Objetivos: La evaluación precisa del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) en cáncer de mama es crítica. Métodos: hibridación in situ de fluorescencia HER2 (FISH) e inmunohistoquímica (IHC) se realizaron en 52 casos utilizando un kit aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) de EE.UU. (HercepTest, kit FDA) y un test desarrollado en laboratorio (LDT) con el anticuerpo HercepTest y un tintero automatizado Leica Bond. Resultados: Por FISH, 22 fueron positivos, 29 negativos y uno equívoco. De los 22 casos positivos de FISH HER2, cinco fueron negativos por el kit FDA y ninguno por LDT. Los cinco casos discrepant se volvieron a evaluar utilizando el mismo kit FDA en otro laboratorio certificado por Enmiendas de Mejora de Laboratorio Clínica, y los cinco Ninguno de los 29 casos negativos de HER2 FISH fue positivo por el kit de la FDA o LDT. La tasa global de concordancia IHC-FISH fue de 90,4% para el kit de la FDA y 100% para el LDT. Conclusiones: El kit de la FDA puede perder algunos casos positivos de HER2. La LDT tiene una mayor sensibilidad y una tasa de concordancia más alta con los resultados de FISH.

¿Ha recibido la aprobación de la FDA el diagnóstico de HercepTest?

Debido a la complejidad del alfabeto de aminoácidos (AA), la rica modificación post-translacional y la diversa localización subcelular de las proteínas, pocas herramientas versátiles están disponibles para la identificación y visualización efectivas de los motivos proteicos. Además, varios alfabetos AA reducidos basados en propiedades fisicoquímicas, estructurales o funcionales han sido valiosos en el estudio de alineación de proteínas, plegado, predicción de estructuras y evolución. Sin embargo, no hay herramientas para aplicar alfabetos AA reducidos a la identificación y visualización de motivos estadísticamente significativos. Para llenar este vacío, desarrollamos un paquete DagLogo de R/Bioconductor, que tiene varias ventajas sobre las herramientas existentes. En primer lugar, dagLogo permite varios formatos para conjuntos de entradas y ofrece opciones integrales para construir modelos de fondo óptimos. Implementa diferentes alfabetos AA reducidos al grupo AA de propiedades similares. Además, dagLogo ofrece soluciones estadísticas y visuales para el análisis diferencial de AA (o grupo AA) del uso de conjuntos de datos grandes y pequeños.Los estudios de casos mostraron que dagLogo puede identificar y visualizar mejor los patrones de secuencia de proteínas conservadas de diferentes tipos de entradas y puede revelar potencialmente los patrones biológicos que podrían faltar a otros generadores de logotipo.

¿Qué paquete R/Bioconductor se ha desarrollado para visualizar el uso de grupos de aminoácidos diferenciales en proteómica?

La vincristina liposomal está diseñada para reducir la neurotoxicidad y aumentar la intensidad de la dosis, y ha sido aprobada como terapia de rescate en leucemia linfoblástica aguda recidiva/refractaria (LLA). Nuestro objetivo era evaluar la tasa de respuesta, toxicidades y el resultado de adultos con LLA recién diagnosticada que recibieron vincristina liposomal, en lugar de vincristina regular en combinación con quimioterapia intensiva (Hyper-CMAD). En un estudio de fase 2 de un solo centro, los pacientes ≥18 años con LLA de células B recién diagnosticadas fueron elegibles para recibir hiper-CMAD alternando con metotrexato de dosis altas y citarabina. Rituximab se administró en LLA positiva CD20. Se añadieron inhibidores de la tirosina cinasa (imatinib o dasatinib) en el cromosoma Filadelfia positivo (Ph-positivo) Se incluyeron 31 pacientes, mediana de seguimiento de 59 meses (0,3-70). Trece pacientes (42%) tenían LLA CD20 positiva y 21 (68%) LLA Ph positiva. Treinta (97%) lograron remisión completa (CR). Los 26 pacientes con cariotipo anormal alcanzaron respuesta citogenética completa (RCyC) y 27/30 (90%) alcanzaron estado negativo de enfermedad residual mínima por citometría de flujo multicolor. De los 20 pacientes con LLA Ph positiva evaluable, la respuesta molecular mayor (RMM) se alcanzó en 19 pacientes (95%); la respuesta molecular completa (RMC) en 14 (70%); la neuropatía periférica de grado 3/4 se observó en cinco (16%) con neuropatía periférica de grado completo en 21 (68%). Con una mediana de seguimiento de 59 meses, 21 (68%) pacientes están vivos. Las tasas de RC a 5 años y supervivencia fueron del 73% y 61%, respectivamente. Diez (32%) pacientes fallecieron: uno, sepsis en C1D10; cuatro, desconocido; uno, complicaciones post-trasplante; cuatro, recaída. La hiper-CMAD con vincristina liposomal es segura y demostró altas tasas de respuesta y supervivencia en la LLA recién diagnosticada.

Dasatinib y Blinatumomab se utilizan para el tratamiento de qué enfermedad?

La mejora de los resultados de supervivencia en la leucemia linfoblástica aguda de células B adultas (LLA-B) sigue siendo un desafío clínico. La enfermedad recidiva tiene un pronóstico pobre a pesar del uso de inhibidores de la tirosina cinasa (TKIs) para los casos de cromosoma Filadelfia positivo (LLA-Ph+) y los enfoques inmunoterapéuticos, incluyendo células T del receptor de antígenos blinatumomab y quimérico. La focalización de las vías de supervivencia de células aberrantes con inhibidores selectivos de pequeña molécula BH3-miméticos de BCL-2 (venetoclax, S55746), BCL-XL (A1331852) o MCL1 (S63845) es una opción terapéutica emergente. La combinación demostró mayor eficacia que los quimioterapéuticos estándar y los TKIs en muestras primarias de LLA-B adultos con LLA-PH+, LLA-PH, y otros LLA-B. Además, la inhibición combinada de BCL-2 o MCL1 con dasatinib mostró una muerte potente en los casos primarios de LLA-B Ph+, pero la combinación mimética-BH3 apareció superior in vitro en una variedad de muestras de LLA-PH. En los modelos PDX, BCL-2 y MCL1 combinadas dirigidas a la LLA erradicada de casos de LLA-PH+B, aunque se observó lisis tumoral fatal en algunos casos de alta carga tumoral. Concluimos que un enfoque mimético-BH3 es altamente efectivo en diversos modelos de LLA-B humanos de alto riesgo y justifica la evaluación en ensayos clínicos que incorporan precauciones de

Dasatinib y Blinatumomab se utilizan para el tratamiento de qué enfermedad?

Un ensayo en fase II muestra que un régimen libre de quimioterapia de dasatinib y blinatumomab produce respuestas moleculares en pacientes con leucemia linfoblástica aguda cromosómica de Filadelfia.El estudio encontró que el 60% de los pacientes tenían respuestas moleculares después de dos ciclos de blinatumomab y el 71% tenían respuestas moleculares después de cinco ciclos.

Dasatinib y Blinatumomab se utilizan para el tratamiento de qué enfermedad?

Un ensayo en fase II muestra que un régimen libre de quimioterapia de dasatinib y blinatumomab produce respuestas moleculares en pacientes con leucemia linfoblástica aguda cromosómica de Filadelfia.El estudio encontró que el 60% de los pacientes tenían respuestas moleculares después de dos ciclos de blinatumomab y el 71% tenían respuestas moleculares después de cinco ciclos.

Dasatinib y Blinatumomab se utilizan para el tratamiento de qué enfermedad?

El inhibidor de BCR-ABL imatinib revolucionó el tratamiento de la leucemia mieloide crónica (LMC). Sin embargo, la resistencia e intolerancia a imatinib han surgido como problemas clínicos sustanciales. Los mecanismos subyacentes a la resistencia son multifactoriales y pueden incluir mutaciones en el dominio de la cinasa de BCR-ABL, aumento de la producción de BCR-ABL o activación de vías independientes de BCR-ABL. Dos inhibidores de BCR-ABL de segunda línea están ahora aprobados para el tratamiento de pacientes con resistencia o intolerancia a imatinib. Dasatinib es un inhibidor dual de BCR-ABL/Src-familia cinasa (SFK) aprobado para pacientes con LMC resistente a imatinib e intolerante en cualquier fase y LLA Ph+. Nilotinib, un análogo de imatinib, está aprobado para el tratamiento de pacientes resistentes a ima Ambos agentes han mostrado una actividad clínica significativa en pacientes con LMC resistente a imatinib o intolerante, y su aprobación representa un avance importante en las opciones de tratamiento disponibles. La elección del tratamiento más apropiado después de la insuficiencia de imatinib puede ser crítica para lograr el mejor pronóstico posible a largo plazo. La presencia de ciertas características de la enfermedad (por ejemplo, mutaciones específicas de BCR-ABL) o comorbilidades del paciente puede facilitar un tratamiento más eficaz. En esta revisión, se discuten mecanismos de resistencia a imatinib y datos preclínicos y clínicos con dasatinib y nilotinib que pueden tener un uso potencial para guiar las decisiones de tratamiento de segunda línea.

Dasatinib y Blinatumomab se utilizan para el tratamiento de qué enfermedad?

Antecedentes: La fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK) es una enzima metabólica en la vía de la gluconeogénesis, donde cataliza la conversión reversible de oxaloacetato (OAA) a fosfoenolpiruvato (PEP) y CO2. Los sustratos de Escherichia coli PEPCK son OAA y MgATP, con Mn2+ actuando como cofactor. El análisis de las estructuras de PEPCK ha revelado residuos de aminoácidos involucrados en la coordinación de sustratos/cofactores durante la catálisis. Métodos: Los residuos clave involucrados en la coordinación de los diferentes sustratos y cofactores unidos a E. coli PEPCK fueron mutados. Se utilizaron enzimas mutantes purificadas para ensayos cinéticos. La estructura de algunas enzimas mutantes se determinó mediante cristalografía de rayos X. Resultados: Mutación de residuos D269 y H232, que forman parte de la esfera de coordinación de Mn2+, redujo el kcat en 14 veces, y aumentó significativamente los valores de Km para Mn2+ y OAA. Mutación de K254 un residuo clave en el motivo del bucle P que interactúa con MgATP, elevó significativamente el valor Km para MgATP y redujo el kcat. R65 y R333 son residuos clave que interactúan con OAA. Las mutaciones R65Q y R333Q aumentaron significativamente el valor Km para OAA y redujo el kcat respectivamente. Conclusiones: Nuestros resultados muestran que la mutación de residuos involucrados en la coordinación de OAA, MgATP y Mn2+ reducen significativamente la actividad de PEPCK. K254 juega un papel importante en la transferencia de fosforilo, mientras que R333 está involucrado tanto en la descarboxilación de OAA como en la transferencia de fosforilo por E. coli PEPCK. Significado general: En organismos más altos, incluyendo humanos, PEPCK ayuda a regular los niveles de glucosa en sangre, por lo que PEPCK es un posible objetivo farmacológico para pacientes con diabetes mellitus no dependiente de insulina.

¿Es la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa 1 (PCK1) la enzima limitante de la gluconeogénesis?

La escisión proteolítica del dominio Fibronectina tipo III 5 (FNDC5) genera irisina soluble. Inicialmente se describe como producida principalmente en el músculo durante el ejercicio físico, la irisina media la termogénesis del tejido adiposo y también regula el metabolismo de carbohidratos y lípidos. El objetivo de este estudio fue evaluar la expresión hepática del FNDC5 y su papel en los hepatocitos en Hígado Graso No Alcohólico (NAFL). Aquí se reporta que la expresión hepática del FNDC5 aumentó con esteatosis hepática y lesión hepática sin afectar el nivel sistémico de irisina en los modelos de ratón de NAFLD (HFD y MCDD) y en pacientes obesos. La producción local de Fndc5 en hepatocitos fue influenciada por el estrés genotóxico y las vías dependientes de p53. La regulación descendente de FNDC5 en células humanas de HepG2 y en hepatocitos primarios de ratón aumentó la expresión de PEPCK, una enzima clave involucrada en la gluconeogénesis asociada con una disminución en la expresión de genes maestros involucrados en la síntesis de VLDL (CIDEB y APOB). Estas alteraciones en células FNDC5 silenciadas dieron lugar a un aumento de la esteatosis y la resistencia a la insulina en respuesta al ácido oleico y N-acetilglucosamina, respectivamente. La regulación descendente de Fndc5 también sensibilizó los hepatocitos primarios a la apoptosis en respuesta a TNFα, que se ha asociado con la disminución del flujo hepatoprotector autofágico. En conclusión, nuestros datos humanos y experimentales sugieren fuertemente que la expresión hepática de FNDC5 aumentó con esteatosis hepática y su regulación en los hepatocitos podría amortiguar el desarrollo de NAFLD al regular negativamente la esteatogénesis y la muerte de hepatocitos.

¿Es la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa 1 (PCK1) la enzima limitante de la gluconeogénesis?

La gluconeogénesis, el proceso inverso de la glicólisis, es un mecanismo favorable en condiciones de privación de glucosa. Pck1 es una enzima gluconeógena limitante de la tasa, donde su deficiencia o mutación contribuye a situaciones clínicas graves como la hipoglucemia neonatal y la insuficiencia hepática. Un informe reciente confirma que Pck1 es un objetivo para la degradación proteasómica a través de su residuo prolina en la posición penúltima, reconocida por Gid4 E3 ligasa, pero con una falta de detalles estructurales informativos. En este estudio, delineamos el motivo de secuencia localizada, degron, que interactúa específicamente con la ligasa Gid4 y desentraña el modo de unión de Pck1 a la ligasa Gid4 mediante el acoplamiento molecular y la dinámica molecular. El péptido/proteína acoplado servidor web HPEPDOCK junto con simulaciones moleculares dinámicas se aplican para demostrar el modo de unión e interacciones de un tipo salvaje Pck1 (SPSK) y mutante (K4V) con la estructura recientemente resuelta de la ligasa Gid4. Los resultados revelan un modo de unión distinto del péptido mutado en comparación con el tipo salvaje a pesar de tener afinidades de unión comparables a Gid4. Además, el péptido de cuatro residuos se encuentra insuficiente para la unión Gid4, mientras que el péptido de siete residuos es suficiente para la unión a Gid4. Los aminoácidos S134, K135, y N137 en el bucle L1 (entre β1 y β2) del Gid4 son esenciales para la estabilización del péptido de siete residuos en el sitio de unión de la liga La presencia de Val4 en lugar de Lys4 rompe los lazos H que se forman entre Lys4 y Gid4 en el péptido de tipo salvaje, haciendo que el péptido propenso a unirse con el otro lado del bolsillo de unión (lazo L4 de Gid4). La dinámica del bucle Gid4 L3 se ve afectada dramáticamente una vez que se introduce el péptido mutante K4V Pck1. Esto abre la puerta para explorar los efectos de mutación en el modo de unión y suavizar el camino a la degradación de proteínas objetivo por inhibidores competitivos y no competitivos del diseño.

¿Es la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa 1 (PCK1) la enzima limitante de la gluconeogénesis?

El 3-O-[(E)-4-(4-cianofenil)-2-oxobut-3-en-1-il] kaempferol es un nuevo compuesto de plomo para descubrir fármacos antidiabéticos y anti-obesidad. El presente estudio reportó el salto del andamio del compuesto de plomo para obtener un nuevo derivado isoxazol, C45, que ha mejorado el consumo de glucosa en el nivel nanomolar (EC50 = 0,8 nM) en células HepG2 resistentes a la insulina (IR). El borrado occidental mostró que C45 mejoró notablemente la fosforilación de AMPK (proteína cinasa activada por AMP) y redujo los niveles de las enzimas clave de la gluconeogénesis PEPCK (fosfoenolpiruvato carboxikinasa) y G6Pase (glucosa 6-fosfatasa) en células HepG2. El mecanismo molecular potencial de C45 puede ser la activación de las vías AMPK/PEPCK/G6Pase. Concluimos que C45 podría ser un valioso candidato para descubrir fármacos antidiabéticos.

¿Es la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa 1 (PCK1) la enzima limitante de la gluconeogénesis?

Este estudio prospectivo midió y comparó las características diagnósticas de diversos signos clínicos y maniobras de examen físico para el síndrome del túnel carpiano (TSC), incluyendo la prueba de colapso del rasguño. Se incluyeron en el estudio 88 pacientes adultos que fueron sometidos a pruebas electrofisiológicas prescritas para diagnosticar el STC. Los cirujanos asistentes documentaron síntomas y resultados de maniobras clínicas estándar. La prueba de colapso del rasguño tuvo una sensibilidad del 31%, que fue significativamente menor que la sensibilidad del test de Phalen (67%), la prueba de Durkan (77%), la prueba de Tinel (43%), lax CTS-6 (88%) y lax CTS-6 (54%). La prueba de rasguño tuvo una especificidad significativamente menor que la especificidad de la atrofia del nar (96%) y significativamente mayor que la especificidad del test de Durkan (18%) y lax CTS-6 (13%). La sensibilidad de la prueba de colapso del rasguño no fue superior a otros signos clínicos y maniobras de examen físico para STC, y la especificidad de la prueba de colapso del rasguño fue superior a la de la prueba de Durkan y CTS-6 lax. Otros estudios deben tratar de limitar la influencia de la presentación clínica de un paciente en el rendimiento de la prueba de rasguño y evaluar la fiabilidad inter-evaluadora de la prueba de rasguño.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Propósito: Se ha descrito una maniobra diagnóstica conocida como "prueba de choque de arañazos" (TCS), para ayudar en el diagnóstico de neuropatías compresivas de miembros superiores como el síndrome del túnel carpiano (CTS), existe una amplia variabilidad en los valores de sensibilidad y especificidad reportados hasta la fecha, y la razón de esta discrepancia no está clara.El propósito de este estudio fue evaluar la utilidad del TCS realizado por examinadores ciegos al significado del examen. Métodos: Cuarenta pacientes consecutivos referidos a un solo fisiátrico para la prueba electrodiagnóstica para la evaluación de sospecha de STC fueron incluidos en el estudio. Los pacientes fueron evaluados por examinadores médicos ciegos sin conocimiento del TCS. Los examinadores fueron instruidos sobre la maniobra pero no se les dijo el propósito de la prueba o la significación de una respuesta "positiva" o "negativa". También se realizaron pruebas electrodiagnósticas rutinarias, incluyendo estudios de conducción nerviosa y electromiografía. Resultados: Para los examinadores ciegos, el SCT tuvo una sensibilidad de 0,24, una especificidad de 0,6, un valor predictivo positivo de 0,73, un valor predictivo negativo de 0,15, y la precisión fue del 31%. El SCT realizado por el médico asistente demostró una sensibilidad de 0,28, una especificidad de 0,75, un valor predictivo positivo de 0,81, un valor predictivo negativo de 0,2, y la precisión fue del 37%. Todos los valores previos se presentan con estudios electrodiagnósticos como estándar de referencia para CTS. Hubo desacuerdo entre los examinadores ciegos e inexpertos y el médico asistente en sólo 3 de los 40 pacientes evaluados con el SCT. Conclusiones: El SCT parece tener valores de baja sensibilidad y especificidad en relación a los hallazgos electromiológicos en pacientes con STC cuando son realizados por examinadores cegados al significado de la respuesta de los pacientes, siendo necesario un estudio adicional de esta maniobra para evaluar plenamente su desempeño. Tipo de estudio/nivel de evidencia: Diagnóstico II.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Antecedentes: La prueba de colapso del rasguño (SCT) es una maniobra de examen clínico que ha sido reportada previamente como una prueba confiable y reproducible para diagnosticar el síndrome del túnel carpiano (CTS). El estudio inicial de Cheng et al. en 2008 mostró una prueba simple con alta sensibilidad; sin embargo, los intentos posteriores de reproducir esos hallazgos han resultado en menor precisión; nuestro objetivo fue evaluar el uso del SCT para pacientes con síntomas de dolor, entumecimiento o debilidad en una extremidad superior. Métodos: Cuarenta pacientes fueron referidos al laboratorio electrodiagnóstico (EDX) para la evaluación de una extremidad superior. Un examinador ciego que estaba familiarizado con la maniobra realizó el SCT en los 40 pacientes. Otro médico o técnico realizó el estudio de conducción nerviosa y electromiografía. Resultados: La relación entre el SCT realizado por un examinador ciego y el EDX realizado por examinadores ciegos no fue significativa (P = 0,676) y mostró una sensibilidad de 0,48, especificidad de 0,59, valor predictivo positivo de 0,61 y valor predictivo negativo de 0,45. Conclusión: Con base en este estudio y hallazgos previos de otros autores, se aconsejaría contra el uso del SCT en el CTS para decisiones importantes del paciente-cuidado, como la toma de decisiones quirúrgicas, hasta que se realice una investigación futura. Es posible que el SCT, en combinación con otras maniobras de examen físico, pueda aumentar la precisión diagnóstica y mejorar el manejo del paciente.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Finalidad: Aclarar la sensibilidad, especificidad y confiabilidad más profunda de la prueba de colapso del rasguño para el síndrome del túnel carpiano (TSC) y el síndrome del túnel cubital, utilizando observadores cegados en una población general de pacientes. Métodos: Se reclutaron 92 sujetos de todos los pacientes referidos para estudios electrodiagnósticos para síntomas de extremidades superiores que se consideraban relacionados con una mononeuropatía por atrapamiento. La prueba de colapso del rasguño se realizó dos veces en cada paciente, una vez por el residente y una vez por un técnico de conducción nerviosa. Ambos observadores fueron cegados a todos los aspectos de la presentación del paciente. Se calculó la sensibilidad y especificidad para la prueba de colapso del rasguño dos veces, una vez utilizando resultados de pruebas electrodiagnósticas y una segunda vez utilizando una herramienta clínica validada (el CTS-6) como estándar de referencia. Resultados: Utilizando criterios electrodiagnósticos como estándar de referencia, la prueba de colapso del rasguño tuvo una sensibilidad del 7% y una especificidad del 78% para el STC. Usando criterios clínicos como estándar de referencia, la prueba tuvo una sensibilidad del 15% y una especificidad del 87%. Para el síndrome del túnel cubital, la sensibilidad fue del 10% y la especificidad fue del 90%. Para el residente/técnico 1, kappa fue -0,025 (peor que el azar solo). Para el residente/técnico 2, kappa fue de 0,211 (fuerza justa de acuerdo). Conclusiones: La sensibilidad de la prueba del colapso del rasguño para el STC y el síndrome del túnel cubital fue menor que la encontrada en otros estudios, independientemente de que se usara un estándar de referencia clínico o electrodiagnóstico. La especificidad fue alta. Estos resultados ponen en tela de juicio la sensibilidad y fiabilidad de la prueba de colapso del rasguño para el STC y el síndrome del túnel cubital. Tipo de estudio/nivel de evidencia: Diagnóstico II.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Antecedentes: La prueba de colapso del rasguño (SCT) es una maniobra de examen clínico que ha sido reportada previamente como una prueba confiable y reproducible para diagnosticar el síndrome del túnel carpiano (CTS). El estudio inicial de Cheng et al. en 2008 mostró una prueba simple con alta sensibilidad; sin embargo, los intentos posteriores de reproducir esos hallazgos han resultado en menor precisión; nuestro objetivo fue evaluar el uso del SCT para pacientes con síntomas de dolor, entumecimiento o debilidad en una extremidad superior. Métodos: Cuarenta pacientes fueron referidos al laboratorio electrodiagnóstico (EDX) para la evaluación de una extremidad superior. Un examinador ciego que estaba familiarizado con la maniobra realizó el SCT en los 40 pacientes. Otro médico o técnico realizó el estudio de conducción nerviosa y electromiografía. Resultados: La relación entre el SCT realizado por un examinador ciego y el EDX realizado por examinadores ciegos no fue significativa (P = 0,676) y mostró una sensibilidad de 0,48, especificidad de 0,59, valor predictivo positivo de 0,61 y valor predictivo negativo de 0,45. Conclusión: Con base en este estudio y hallazgos previos de otros autores, se aconsejaría contra el uso del SCT en el CTS para decisiones importantes del paciente-cuidado, como la toma de decisiones quirúrgicas, hasta que se realice una investigación futura. Es posible que el SCT, en combinación con otras maniobras de examen físico, pueda aumentar la precisión diagnóstica y mejorar el manejo del paciente.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

El objetivo de este estudio es demostrar la utilidad de la prueba de colapso del rasguño (TCS) en la localización del punto de compresión máxima en el síndrome del túnel cubital. Entre el 1 de enero de 2004 y el 1 de diciembre de 2005, 64 pacientes adultos con síndrome del túnel cubital fueron evaluados por un solo cirujano. El síndrome del túnel cubital fue diagnosticado con base en síntomas de entumecimiento, hormigueo y/o dolor en la distribución del nervio ulnar o por la presencia de debilidad o pérdida de los músculos intrínsecos de la mano urna-inervados. Todos los diagnósticos fueron confirmados con estudios electrodiagnósticos. Como parte del examen físico, la ECT se realizó a lo largo de tres segmentos subdivididos en la región del túnel cubital. De los 64 pacientes evaluados, 44 presentaron una ECT positiva que fue más profunda o solamente presentó unos pocos centímetros de distal a la epicondilo medial en la región de la banda de Osborne. Posteriormente, todos estos pacientes fueron sometidos a transposición submuscular anterior y se encontró que tenían un punto de compresión apretado en la banda de Osborne correspondiente a su ECT preoperatorio. Este estudio sugiere que la prueba de colapso del rasguño puede ser una técnica de exploración física confiable para localizar el punto de compresión máxima del nervio en pacientes con síndrome del túnel cubital.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

El objetivo de este estudio es demostrar la utilidad de la prueba de colapso del rasguño (TCS) en la localización del punto de compresión máxima en el síndrome del túnel cubital. Entre el 1 de enero de 2004 y el 1 de diciembre de 2005, 64 pacientes adultos con síndrome del túnel cubital fueron evaluados por un solo cirujano. El síndrome del túnel cubital fue diagnosticado con base en síntomas de entumecimiento, hormigueo y/o dolor en la distribución del nervio ulnar o por la presencia de debilidad o pérdida de los músculos intrínsecos de la mano urna-inervados. Todos los diagnósticos fueron confirmados con estudios electrodiagnósticos. Como parte del examen físico, la ECT se realizó a lo largo de tres segmentos subdivididos en la región del túnel cubital. De los 64 pacientes evaluados, 44 presentaron una ECT positiva que fue más profunda o solamente presentó unos pocos centímetros de distal a la epicondilo medial en la región de la banda de Osborne. Posteriormente, todos estos pacientes fueron sometidos a transposición submuscular anterior y se encontró que tenían un punto de compresión apretado en la banda de Osborne correspondiente a su ECT preoperatorio. Este estudio sugiere que la prueba de colapso del rasguño puede ser una técnica de exploración física confiable para localizar el punto de compresión máxima del nervio en pacientes con síndrome del túnel cubital.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

El objetivo de este estudio fue evaluar la utilidad clínica de una nueva prueba, la prueba de colapso del rasguño, para el diagnóstico del síndrome del túnel carpiano y el síndrome del túnel cubital. Métodos: La prueba de colapso del rasguño se comparó prospectivamente con el signo de Tinel y la compresión de flexión/nervo en 169 pacientes y 109 controles. Ciento diecinueve pacientes fueron diagnosticados con el síndrome del túnel carpiano y 70 pacientes fueron diagnosticados con el síndrome del túnel cubital basado en la historia, el examen y la prueba electrodiagnóstica positiva. Para la nueva prueba, el paciente resistió la rotación externa bilateral del hombro con los codos flexionados. El área de sospecha de compresión del nervio fue ligeramente "esquejada", y luego se resistió inmediatamente la rotación externa del hombro. La pérdida momentánea de la resistencia de rotación externa del hombro en el lado afectado fue Resultados: Para el síndrome del túnel carpiano, las sensibilidades fueron del 64%, 32% y 44% para la prueba de colapso del rasguño, la prueba de Tinel y la prueba de flexión/compresión de los codos, respectivamente; para el síndrome del túnel cubital, las sensibilidades fueron del 69%, 54% y 46% para la prueba de colapso del rasguño, la prueba de Tinel y la prueba de flexión/compresión de los codos, respectivamente; la prueba de colapso del rasguño tuvo el valor predictivo negativo más alto (73%) para el síndrome del túnel carpiano; la prueba de Tinel tuvo el valor predictivo negativo más alto (98%) para el síndrome del túnel cubital; la especificidad y los valores predictivos positivos fueron altos para todas las pruebas. La precisión para esta prueba fue del 82% para el síndrome del túnel carpiano y del 89% para el síndrome del túnel cubital.Esta nueva prueba proporciona una útil adición a las maniobras clínicas existentes en el diagnóstico de estos síndromes comunes de compresión nerviosa. Tipo de estudio/nivel de evidencia: Diagnóstico II.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

La utilidad de la prueba de colapso del rasguño se ha demostrado en el examen de pacientes con síndromes de túnel carpiano y cubital y compresiones de los nervios torácicos y peroneales largas. En la clínica de autores, esta prueba menos conocida juega un papel clave en el examen de los nervios periféricos donde la localización de la irritación o lesión del nervio no es plenamente entendida. Utilidad y precisión de las pruebas en pacientes con presentaciones más desafiantes probablemente se correlacionan con la comprensión y experiencia del tester. Este artículo ofrece un esquema claro de todas las etapas del test para mejorar la confiabilidad del interior. Se describen los matices del desempeño de las pruebas, incluyendo una descripción de situaciones donde la prueba de colapso del rasguño se considera inadecuada. Se incluyen cuatro escenarios clínicos donde la prueba de colapso del rasguño puede ser útil.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

La prueba de colapso del rasguño (SCT) es una prueba clínica relativamente nueva en la que un resultado positivo implica neuropatía de atrapamiento del nervio testado. Inicialmente descrita para los síndromes del túnel carpiano y cubital, los autores posteriores la han encontrado útil para la evaluación de la mediana, cúbito, radial, axilar y nervios peroneales comunes.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Antecedentes: La prueba de colapso del rasguño (SCT) es una maniobra de examen clínico que ha sido reportada previamente como una prueba confiable y reproducible para diagnosticar el síndrome del túnel carpiano (CTS). El estudio inicial de Cheng et al. en 2008 mostró una prueba simple con alta sensibilidad; sin embargo, los intentos posteriores de reproducir esos hallazgos han resultado en menor precisión; nuestro objetivo fue evaluar el uso del SCT para pacientes con síntomas de dolor, entumecimiento o debilidad en una extremidad superior. Métodos: Cuarenta pacientes fueron referidos al laboratorio electrodiagnóstico (EDX) para la evaluación de una extremidad superior. Un examinador ciego que estaba familiarizado con la maniobra realizó el SCT en los 40 pacientes. Otro médico o técnico realizó el estudio de conducción nerviosa y electromiografía. Resultados: La relación entre el SCT realizado por un examinador ciego y el EDX realizado por examinadores ciegos no fue significativa (P = 0,676) y mostró una sensibilidad de 0,48, especificidad de 0,59, valor predictivo positivo de 0,61 y valor predictivo negativo de 0,45. Conclusión: Con base en este estudio y hallazgos previos de otros autores, se aconsejaría contra el uso del SCT en el CTS para decisiones importantes del paciente-cuidado, como la toma de decisiones quirúrgicas, hasta que se realice una investigación futura. Es posible que el SCT, en combinación con otras maniobras de examen físico, pueda aumentar la precisión diagnóstica y mejorar el manejo del paciente.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

El objetivo de este estudio es demostrar la utilidad de la prueba de colapso del rasguño (TCS) en la localización del punto de compresión máxima en el síndrome del túnel cubital. Entre el 1 de enero de 2004 y el 1 de diciembre de 2005, 64 pacientes adultos con síndrome del túnel cubital fueron evaluados por un solo cirujano. El síndrome del túnel cubital fue diagnosticado con base en síntomas de entumecimiento, hormigueo y/o dolor en la distribución del nervio ulnar o por la presencia de debilidad o pérdida de los músculos intrínsecos de la mano urna-inervados. Todos los diagnósticos fueron confirmados con estudios electrodiagnósticos. Como parte del examen físico, la ECT se realizó a lo largo de tres segmentos subdivididos en la región del túnel cubital. De los 64 pacientes evaluados, 44 presentaron una ECT positiva que fue más profunda o solamente presentó unos pocos centímetros de distal a la epicondilo medial en la región de la banda de Osborne. Posteriormente, todos estos pacientes fueron sometidos a transposición submuscular anterior y se encontró que tenían un punto de compresión apretado en la banda de Osborne correspondiente a su ECT preoperatorio. Este estudio sugiere que la prueba de colapso del rasguño puede ser una técnica de exploración física confiable para localizar el punto de compresión máxima del nervio en pacientes con síndrome del túnel cubital.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

La utilidad de la prueba de colapso del rasguño se ha demostrado en el examen de pacientes con síndromes de túnel carpiano y cubital y compresiones de los nervios torácicos y peroneales largas. En la clínica de autores, esta prueba menos conocida juega un papel clave en el examen de los nervios periféricos donde la localización de la irritación o lesión del nervio no es plenamente entendida. Utilidad y precisión de las pruebas en pacientes con presentaciones más desafiantes probablemente se correlacionan con la comprensión y experiencia del tester. Este artículo ofrece un esquema claro de todas las etapas del test para mejorar la confiabilidad del interior. Se describen los matices del desempeño de las pruebas, incluyendo una descripción de situaciones donde la prueba de colapso del rasguño se considera inadecuada. Se incluyen cuatro escenarios clínicos donde la prueba de colapso del rasguño puede ser útil.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

La confiabilidad de la prueba del rasguño-colapso para el diagnóstico del síndrome del túnel carpiano (TSC) no ha sido probada por investigadores independientes; este estudio midió la fiabilidad de la prueba del rasguño-colapso comparando al cirujano de la mano tratante con los evaluadores ciegos; se realizó un estudio observacional prospectivo de 41 pacientes con diagnóstico provisional de STC o una combinación de STC y síndrome del túnel cubital y pruebas electrodiagnósticas prescritas; el cirujano de la mano tratante realizó la prueba del rasguño-colapso; a continuación, la prueba fue administrada por uno de los seis observadores, sin tener en cuenta los síntomas del paciente y el diagnóstico realizado por el cirujano de la mano. La sensibilidad de la prueba de arañazos cegados en nuestra muestra fue del 32%. En un pequeño estudio con sesgo de espectro que favoreció el CTS confirmado electrofisiológicamente, la confiabilidad fue menor que la reportada por los inventores de la prueba, pero todavía fue sustancial. Proponemos un estudio más amplio de pacientes con una mayor variedad de resultados de pruebas electrodiagnósticas utilizando menos observadores con más experiencia.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

La prueba de colapso del rasguño (SCT) es una prueba clínica relativamente nueva en la que un resultado positivo implica neuropatía de atrapamiento del nervio testado. Inicialmente descrita para los síndromes del túnel carpiano y cubital, los autores posteriores la han encontrado útil para la evaluación de la mediana, cúbito, radial, axilar y nervios peroneales comunes.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

El diagnóstico de compresión nerviosa se basa en la recolección de pistas diagnósticas a partir de la historia, el examen físico, la imagen y las pruebas diagnósticas. Existen varias pruebas provocativas que ayudan en el diagnóstico de compresión nerviosa. El "Scratch Collapse Test" (SCT) ha surgido como una nueva prueba provocativa para ayudar en la localización de la compresión nerviosa periférica. Este estudio tiene como objetivo realizar una revisión sistemática de la literatura para evaluar los datos sobre la confiabilidad del SCT como prueba diagnóstica de neuropatía de atrapamiento. Se revisaron diez artículos. Cinco artículos tenían suficientes datos numéricos para el análisis, y en estos cinco artículos los valores predictivos positivos y la especificidad fueron altos, es decir, entre 0,71 y 0,99 y 0,6 y 0,99, respectivamente, mientras que otros valores fueron muy variables, es decir, valores predictivos negativos individuales oscilaron entre 0,15 y 0,9 Otro hallazgo importante fue la versatilidad de la prueba en el sentido de que puede ser utilizada para diversos atrapamientos nerviosos y para localizar el nivel exacto de compresión. La literatura sugiere que el SCT tiene potencial para ser utilizado como herramienta de diagnóstico clínico para la neuropatía del atrapamiento. Sin embargo, amplias variaciones en la literatura temprana sugieren que el SCT no debe ser utilizado como una única herramienta diagnóstica sino como un complemento al repertorio diagnóstico del cirujano.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?

Nuestro objetivo fue revisar la utilidad clínica de la prueba de colapso del rasguño (TCS) en el diagnóstico de atrapamiento proximal del nervio mediano en el antebrazo. Se revisaron 18 casos consecutivos, el diagnóstico se basó en los síntomas y signos del paciente, el TCS fue positivo en el antebrazo afectado en todas las evaluaciones clínicas antes de la cirugía y fue negativo en todos después de la liberación del nervio medio, se identificó una razón anatómica para la compresión del nervio en todos los casos en operación, el TCS es una herramienta útil para el diagnóstico de atrapamiento proximal del nervio mediano.

¿Qué condiciones se diagnostican usando la prueba de colapso del rasguño?