iyonunun CO2’e nükleofilik saldırısı gerçekleşmektedir. İkinci basamakta (Reaksiyon 3) ise çinkoya bağlı su molekülünün iyonlaşması ve protonun uzaklaştırılmasıyla aktif bölgenin tekrar oluşturulması olayları gerçekleşmektedir.

Zn-OH + CO --> Zn + HCO Reaksiyon 2

Zn + HO --> H + Zn-OH Reaksiyon 3

Bu mekanizmada Reaksiyon 3 safhasının gerçekleşmesinde, protonun dış çözücü ortamına aktarılması için enzimin aktif bölgesindeki bir amino asit birimi proton taşıyıcı birim (PTB) olarak rol oynamaktadır. PTB aldığı protonu ortamdaki tampon (B) moleküllerine aktarmaktadır (Reaksiyon 4 ve 5).

PTB + Zn-HO --> Zn-OH + PTB-H Reaksiyon 4

PTB-H + B --> PTB + B-H Reaksiyon 5
Karbonik anhidraz II’nin katalizlediği enzimatik mekanizmada hız belirleyici basamak protonun aktif bölgeden uzaklaştırılması safhasıdır. Bu edenle aktif bölgedeki proton taşıma kapasitesine sahip amino asit birimleri aktivitede önemlidirler 
Aktivitede çinkonun dördüncü ligand pozisyonuna yakın bölgede bir hidrojen bağı alıcısının olması önemlidir.

Karbonik anhidraz enzimi birçok fizyolojik olayda rol almaktadır. Bunlar arasında en önemlileri şöyle sıralanabilir:

1) Asit-baz dengesi

2) Kardiovasküler tonusun düzenlenmesi

3) Sindirim

4) Hücre bölümleri arasındaki iyon değişimi

5) Değişik enzimatik reaksiyonlar için gerekli bikarbonatın sağlanması

Enzim, hidrataz aktivitesi yanında esteraz aktivitesine de sahiptir, ancak fizyolojik açıdan hidrataz aktivitesi önemlidir. Bu sayede organizmanın asit – baz dengesinin düzenlenmesinde önemli rol üstlenir. Bu dengenin bozulduğu durumlarda, örneğin göz içi tansiyonunda, karbonik anhidraz enzim aktivitesine müdahale sıklıkla uygulanan bir tedavi yöntemidir. Bu açıdan karbonik anhidraz inhibitörleri klinik olarak önemli bileşiklerdir.

Karbonik anhidraz izoenzimlerinin biyolojik numunelerden izole edilmesinde, saflaştırılmasında ve karakterizasyonunda birçok kromatografik ve elektroforetik yöntem uygulanmıştır. Karbonik anhidrazın farklı izoformlarının farklı canlılardan ve dokulardan kromatografik ayrılmasında, uygulanan yöntemde farklılık arz etmektedir.

Karbonik anhidrazın memeli türlerinden izolasyonunda kaynak ve izoenzime göre farklı yöntem uygulanmaktadır. Üzerinde en fazla çalışma yapılmış olan izoenzimler sitoplazmik karbonik anhidraz I ve karbonik anhidraz II dir. Bu iki izoenzimin en kolay elde edilebilir kaynağı eritrositlerdir. Yapılan çalışmalarda eritrositlerde fazla miktarda bulunan hemoglobin, kloroform – etanol çöktürmesi, amonyum sülfat çöktürmesi ya da ısı ile denatürasyon yöntemleriyle uzaklaştırılabilmiştir. Bunların yanında üç-faz ayrışma yöntemide bir alternatif olmuştur. Bu yöntemde amonyum sülfat gibi bir tuz tert-butanol – su – protein karışımına ilave edilmiş ve böylece hemoglobin ve miyoglobin denatüre edilerek ayrılabilmiştir. Daha sonra amonyum sülfatın %90 doygunluğa ulaştırılmasıyla kalan proteinler jelimsi orta fazda toplanmıştır. Bu fazda karbonik anhidrazın yanında katalaz ve süperoksit dismütaz da bulunur.
Karbonik anhidraz I ve II’nin izolasyonunda en çok kullanılan yöntem afinite kromatografisidir. İlk defa 1970 lerde uygulanmaya başlamış olan bu yöntemle sonraları karbonik anhidraz I ve II izoenzimleri başarılı bir şekilde birbirinden ayrılabilmiştir. Bu yöntemlerde destek maddesi olan jele enzimin güçlü bir şekilde bağlandığı inhibitörleri takılmakta ve enzimin bu moleküller aracılığıyla kolonda tutulması sağlanmaktadır. Bu anlamda en çok kullanılan inhibitör de sülfanilamiddir.

Mutasyon teknikleriyle hazırlanan inaktif karbonik anhidraz II’nin izolasyonunda inhibitörlerle bağlanmanın olmadığı durumlarda alternatif yöntemler uygulanmıştır. Önce %40 doygunlukta amonyum sülfat ile diğer safsızlıklar uzaklaştırılmış sonra %90 amonyum sülfat doygunluğunda insan karbonik anhidraz II çöktürülmüştür. Diyalizi takiben DEAE-Sephacel kolonundan geçirme ve sonra S-Sepharose ile kromatografi uygulanarak enzim %98 saflıkta elde edilmiştir. Bir grup araştırmacı da mutant enzim izolasyonunda S-Sepharose ile anyon değişimini, sonra fenil-Sepharose ile hidrofobik etkileşim kromatografisini ve son olarak da Sephacryl S-100 ile jel filtrasyonunu kullanmışlardır. 
Karbonik anhidraz III’ün afinite kromatografisinde kullanılan inhibitörlere bağlanmasının çok zayıf olmasından dolayı bu izoenzim önceleri farklı yöntemlerle izole edilmiştir. Sonraları bu izoenzimin p-aminobenzen sülfonamide yeteri derecede bağlandığı gösterilmiş ve bu inhibitör kullanılarak enzim afinite kromatografisi ile izole edilebilmiştir. Benzer şekilde membrana bağlı bir izoform olan karbonik anhidraz IV’te p-aminobenzen sülfonamid afinite kromatografisiyle izole edilmiştir.

Mitokondriyel bir enzim olan karbonik anhidraz V izolasyonunda, mitokondrilerin bütün sitosolik bileşenlerden ayrılmasını takiben dondurucuda bekletilip santrifüjlenmesi ve elde edilen tamamen çözünür durumdaki mitokondriyel matriks, p-aminobenzen sülfonamidin CM Biogel A’ya takılmasıyla hazırlanmış jelin bulunduğu kolondan geçirilmiştir. Daha sonra enzim sodyum azidür (NaN) ile elue edilerek başarılı bir şekilde izole edilmiştir.

Salgılanan bir enzim olan karbonik anhidraz VI, inhibitörlerle karbonik anhidraz II’ye benzer şekilde etkileşmektedir ve bu nedenle afinite kromatografisi izolasyon amacıyla rahatlıkla kullanılabilmiştir.

Memeli izoenzimlerinin haricinde diğer karbonik anhidraz izoformları da özellikle p-aminobenzen sülfonamid kullanılarak afinite kromatografisiyle izole edilebilmektedir. Bu izoenzimlerin izolasyonunda birçok farklı yöntem de uygulanmıştır. Bunlar arasında Sephadex G-75 ile jel-permeasyon kromatografisi, CM-selüloz katyon değişimi kromatografisi, DEAE Sephadex A-50 anyon değişimi kromatografisi, DEAE-selüloz kromatografisi, DEAE-hidroksilapatit kromatografisi sayılabilir. Bu yöntemler tek başlarına değil genellikle birkaç tanesi ardışık olarak uygulanmıştır. Bu yöntemlerin uygulandığı çalışmalarda istenmeyen proteinlerden kurtulmak için birinci basamakta etanol-kloroform çöktürmesi sıklıkla uygulanmaktadır.

İzole edilen karbonik anhidraz izoenzimlerin tanınmasında ve saflığının kontrolünde elektroforetik yöntemler uygulanmaktadır. Çalışmanın amacına uygun olarak sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ve normal (SDS’siz) PAGE en çok tercih edilen yöntemlerdir. SDS-PAGE’de enzim denatüre olduğu için enzimin doğal formda olması gerektiği çalışmalarda tercih edilmez. SDS-PAGE indirgeyen ve indirgemeyen tarzda iki şekilde uygulanabilmektedir. Bu da indirgenmenin olmasının istenmediği durumlarda önemli bir özelliktir.
Karbonik anhidraz izoenzimlerinin karakterizasyonunda ayrıca diğer bazı yöntemler de mevcuttur. En çok kullanılanlar izoelektrik odaklama ve afinite elektroforezidir (10). İzoelektrik odaklama enzimler üzerinde meydana gelebilecek ikincil modifikasyonların tespitinde önemli bir araçtır. Bu yöntem ayrıca S-tiyollenmenin belirlenmesinde başarılı bir şekilde kullanılmıştır (11). Afinite kromatografisinin elektroforezle birleştirilerek uygulandığı afinite elektroforezi ise daha çok inhibitörlerle yapılan kinetiğin ve denge sabitlerinin incelendiği çalışmalarda tercih edilmektedir . Bu yöntemlerde inhibitör jele tutturularak elektroforez uygulanmakta ve alınan yola göre bağlanma sabitleri belirlenmektedir. Bu yöntemde jel ile inhibitör arasında en az 20 A’luk bir uzatıcı kolun bulunmasının maksimum bağlanma için gerekli olduğu bilinmektedir.




Jean Charles Athanase Peltier

Jean Charles Athanase Peltier (d. 22 Şubat 1785 Ham, Somme Fransa) - ö. 27 Ekim 1845 Paris, Fransa) Fransız fizikçi.

Peltier, iki farklı metal arasındaki termoelektrik etkiyi keşfetti. Bu keşif şu an Peltier Etkisi veya Peltier–Seebeck Etkisi olarak adlandırılmıştır. Peltier etkisinden, daha çok soğutucularda kullanılan sistemlerde faydalanılmaktadır.





2000 Yaz Olimpiyatları'nda tenis - Çift kadınlar

2000 Yaz Olimpiyatları tenis çift bayanlar müsabakaları 20 Eylül - 27 Eylül tarihleri arasında "Tennis Centre, Sydney Olympic Park" oynanmıştır.





Safety Last!

Safety Last!, 1923 yapımı bir Harold Lloyd filmidir.

Safety Last, sessiz film döneminin en ünlü sahnelerinden birini içerir. Bu ünlü sahnede Harold Lloyd, bir gökdelenin dış cephesinde bulunan büyük bir saatin onun ağırlığı ile kırılmak üzere olan yelkovanına tutunmuş haldedir ve aşağıda akan şehir trafiğinin üzerinde boşlukta sallanmaktadır. Film, çekildiği dönemde büyük bir başarı kazanmış ve Harold Lloyd'u erken dönem sinema tarihindeki başlıca figürlerden biri haline getirmiştir. 1923 yapımı "Safety Last!" bugün bile en başarılı komedi filmlerinden biri sayılmakta ve ilgiyle izlenmektedir.

1993 yılında Kongre Kütüphanesi tarafından "kültürel, tarihi ve estetik olarak önemli" filmler arasına seçilerek ABD Ulusal Film Arşivi'nde muhafaza edilmesine karar verilmiştir.





Sokullupınar

Sokullupınar. Niğde'nin Demirkazık köyünde yer alan bir kamp yeridir. Dağcıların Aladağlar'a tırmanırkenki ilk kamp yerlerinden birisi olup, yaz kış su durumu uygundur. Zirvelere yakın olması nedeniyle tercih edilir.




2004 Yaz Olimpiyatları'nda tenis - Tek erkekler

2004 Yaz Olimpiyatları tenis tek erkekler müsabakaları Atina'daki Olimpik Tenis Merkezi'nde yapıldı.

2004 Yaz Olimpiyatları Tek Erkekler finalinde Şilili Nicolás Massú, Amerika'lı Mardy Fish'i 6-3, 3-6, 2-6, 6-3, 6-4 skorlarla yenerek altın madalyanın sahibi oldu.





2008 Formula 1 sezonu

2008 Formula Bir Sezonu, 62. FIA Formula Bir Dünya Şampiyonası sezonu. 16 Mart 2008 tarihinde başlayıp, 2 Kasım 2008 tarihinde sonlamış olan sezonda, 18 yarış düzenlenmiştir. 2008 sezonunda ABD'de herhangi bir GP düzenlenmemiş, bununla birlikte ilk kez gece yarışı olan Singapur GP'si yapılmıştır. 2007 sezonuna kadar Avrupa GP'si için kullanılan Nürburgring Pisti yerine 2008 sezonunda Avrupa GP'si Valencia Street Circuit isimli pistte gerçekleştirmiştir.

→ Sürücü yarışı tamamlayamadı ancak %90'ını geçtiği için sıralamaya dahil oldu.

† Sürücü Grand Prix'i bitirmemiş olsa da, yarışın %90'ından fazlasını tamaml