alih universitas teknologi nanyang
alih universitas nasional singapura
keterkaitan dengan ilmu hayati "skala-molekul" lainnya
para peneliti biologi molekular menggunakan teknik-teknik khusus yang khas biologi molekular (lihat subbab teknik di bagian lain artikel), namun kini semakin memadukan teknik-teknik tersebut dengan teknik dan gagasan-gagasan dari genetika dan biokimia.
tidak terdapat lagi garis tegas yang memisahkan disiplin-disiplin ilmu ini seperti sebelumnya.
secara umum keterkaitan bidang-bidang tersebut dapat digambarkan sebagai berikut:
biokimia  telaah zat-zat kimia dan proses-proses vital yang berlangsung pada makhluk hidup.
genetika  telaah atas efek perbedaan genetik pada makhluk hidup (misalnya telaah mengenai mutan).
biologi molekular  telaah dalam skala molekul atas proses replikasi, transkripsi, dan translasi bahan genetik
semakin banyak bidang biologi lainnya yang memfokuskan diri pada molekul, baik secara langsung mempelajari interaksi molekular dalam bidang mereka sendiri seperti pada biologi sel dan biologi perkembangan, maupun secara tidak langsung (misalnya dengan menggunakan teknik biologi molekular untuk menyimpulkan ciri-ciri historis populasi atau spesies) seperti pada genetika populasi dan filogenetika.
teknik biologi molekular
salah satu teknik dasar biologi molekular adalah kloning ekspresi, yang digunakan misalnya untuk mempelajari fungsi protein.
pada teknik ini, potongan dna penyandi protein yang diinginkan ditransplantasikan ke suatu plasmid (dna sirkuler yang biasanya ditemukan pada bakteri; dalam teknik ini, plasmid disebut sebagai vektor ekspresi).
plasmid yang telah mengandung potongan dna yang diinginkan tersebut kemudian dapat disisipkan ke dalam sel bakteri atau sel hewan.
penyisipan dna ke dalam sel bakteri disebut transformasi, dan dapat dilakukan dengan berbagai metode, seperti elektroporasi, mikroinjeksi, dan secara kimia.
penyisipan dna ke dalam sel eukaryota, misalnya sel hewan, disebut sebagai transfeksi, dan teknik transfeksi yang dapat dilakukan termasuk transfeksi kalsium fosfat, transfeksi liposom, dan dengan reagen komersial.
dna dapat pula dimasukkan ke dalam sel dengan menggunakan virus (disebut transduksi viral).
setelah penyisipan ke dalam sel, protein yang disandi oleh potongan dna tadi dapat diekspresikan oleh sel bersangkutan.
berbagai jenis cara dapat digunakan untuk membantu ekspresi tersebut agar protein bersangkutan didapatkan dalam jumlah besar, misalnya inducible promoter dan specific cell-signaling factor.
protein dalam jumlah besar tersebut kemudian dapat diekstrak dari sel bakteri atau eukaryota tadi.
polymerase chain reaction (pcr)
pcr memanfaatkan enzim dna polimerase yang secara alami memang berperan dalam perbanyakan dna pada proses replikasi.
namun, tidak seperti pada organisme hidup, proses pcr hanya dapat menyalin fragmen pendek dna, biasanya sampai dengan 10 kb (kb=kilo base pairs=1.000 pasang basa).
fragmen tersebut dapat berupa suatu gen tunggal, atau hanya bagian dari suatu gen.
proses pcr untuk memperbanyak dna melibatkan serangkaian siklus temperatur yang berulang dan masing-masing siklus terdiri atas tiga tahapan.
tahapan yang pertama adalah denaturasi cetakan dna (dna template) pada temperatur 94-96 c, yaitu pemisahan utas ganda dna menjadi dua utas tunggal.
sesudah itu, dilakukan penurunan temperatur pada tahap kedua sampai 45-60 c yang memungkinkan terjadinya penempelan (annealing) atau hibridisasi antara oligonukleotida primer dengan utas tunggal cetakan dna. primer merupakan oligonukelotida utas tunggal yang sekuens-nya dirancang komplementer dengan ujung fragmen dna yang ingin disalin; primer menentukan awal dan akhir daerah yang hendak disalin.
tahap yang terakhir adalah tahap ekstensi atau elongasi (elongation), yaitu pemanjangan primer menjadi suatu utas dna baru oleh enzim dna polimerase.
temperatur pada tahap ini bergantung pada jenis dna polimerase yang digunakan.
pada akhirnya, satu siklus pcr akan menggandakan jumlah molekul cetakan dna atau dna target, sebab setiap utas baru yang disintesis akan berperan sebagai cetakan pada siklus selanjutnya.
gel yang digunakan biasanya merupakan polimer bertautan silang (crosslinked) yang porositasnya dapat diatur sesuai dengan kebutuhan.
untuk memisahkan protein atau asam nukleat berukuran kecil (dna, rna, atau oligonukleotida), gel yang digunakan biasanya merupakan gel poliakrilamida, dibuat dengan konsentrasi berbeda-beda antara akrilamida dan zat yang memungkinkan pertautan silang (cross-linker), menghasilkan jaringan poliakrilamida dengan ukuran rongga berbeda-beda.
untuk memisahkan asam nukleat yang lebih besar (lebih besar dari beberapa ratus basa), gel yang digunakan adalah agarosa (dari ekstrak rumput laut) yang sudah dimurnikan.
dalam proses elektroforesis, sampel molekul ditempatkan ke dalam sumur (well) pada gel yang ditempatkan di dalam larutan penyangga, dan listrik dialirkan kepadanya.
molekul-molekul sampel tersebut akan bergerak di dalam matriks gel ke arah salah satu kutub listrik sesuai dengan muatannya.
dalam hal asam nukleat, arah pergerakan adalah menuju elektrode positif, disebabkan oleh muatan negatif alami pada rangka gula-fosfat yang dimilikinya.
untuk menjaga agar laju perpindahan asam nukleat benar-benar hanya berdasarkan ukuran (yaitu panjangnya), zat seperti natrium hidroksida atau formamida digunakan untuk menjaga agar asam nukleat berbentuk lurus.
sementara itu, protein didenaturasi dengan deterjen (misalnya natrium dodesil sulfat, sds) untuk membuat protein tersebut berbentuk lurus dan bermuatan negatif.
setelah proses elektroforesis selesai, dilakukan proses pewarnaan (staining) agar molekul sampel yang telah terpisah dapat dilihat.
etidium bromida, perak, atau pewarna "biru coomassie" (coomassie blue) dapat digunakan untuk keperluan ini.
jika molekul sampel berpendar dalam sinar ultraviolet (misalnya setelah "diwarnai" dengan etidium bromida), gel difoto di bawah sinar ultraviolet.
jika molekul sampel mengandung atom radioaktif, autoradiogram gel tersebut dibuat.
pita-pita (band) pada lajur-lajur (lane) yang berbeda pada gel akan tampak setelah proses pewarnaan; satu lajur merupakan arah pergerakan sampel dari "sumur" gel.
pita-pita yang berjarak sama dari sumur gel pada akhir elektroforesis mengandung molekul-molekul yang bergerak di dalam gel selama elektroforesis dengan kecepatan yang sama, yang biasanya berarti bahwa molekul-molekul tersebut berukuran sama.
"marka" atau penanda (marker) yang merupakan campuran molekul dengan ukuran berbeda-beda dapat digunakan untuk menentukan ukuran molekul dalam pita sampel dengan meng-elektroforesis marka tersebut pada lajur di gel yang paralel dengan sampel.
pita-pita pada lajur marka tersebut dapat dibandingkan dengan pita sampel untuk menentukan ukurannya.
jarak pita dari sumur gel berbanding terbalik terhadap logaritma ukuran molekul.
biologi sel (struktur dan komponen sel)
struktur dna dan kromosom
biosintesis protein (transkripsi dari dna ke rna, translasi dari rna ke protein)