ALGAS MARINAS Y ADAPTACIÓN DE LA MICROBIOTA

**Transferencia de enzimas activas en carbohidratos** de bacterias marinas a microbiota intestinal japonesa

Hay una variabilidad muy grande de
microbios intestinales, que estos nos ayudan o proveen energía a su vez, están
ausentes en el genoma. Las porfirinasas que son microbios que viven fuera del intestino y se
encuentran en bacterias marinas como la alga roja y son frecuentes en japoneses. Esta alga Marina es muy común en la elaboración de platillos japoneses como el sushi. Porphyra spp es el alga nutricional más importante, por esta alga pudo haber aparecido la ruta para que se creara o apareciera la enzima CAZymes en la microbiota intestinal de los Japoneses. Las algas marinas tienen polisacáridos sulfatados mientras que las algas terrestres no los tienen y son utilizados como fuente de carbono, como se muestra en la imagen 1.0.

   El análisis en GenBank está codificado por genomas bacterianos marinos, que se origina a partir de la bacteria intestinal. Hasta la fecha, la literatura describe seis diferentes cepas de esta especie, todas las cuales fueron

aisladas de la microbiota intestinal de individuos japoneses. El consumo de alimentos con bacterias ambientales asociadas es el mecanismo más probable que promovió esta actualización de CAZyme en el microbio intestinal humano. La fuente de porfirinasas en la nutrición humana es nori. Tradicionalmente, el nori a través de sushi japonés. En consecuencia, el consumo de alimentos con bacterias ambientales asociadas es el mecanismo más probable que promovió esta actualización de CAZyme en el microbio intestinal humano. Para el estudio se extrajeron polisacaridos de algas como Ectocarpus y Porphyra, estas algas son abundantes en la marea baja de Roscoff y calcularon la actividad enzimática y se calculó la cantidad de extremos reductores por las enzimas añadidas con ayuda de una calibración de glucosa, se llevó a cabo una producción de mediano rendimiento y estrategia de expresión.
Las enzimas de Z galactanivorans fueron seleccionadas para expresión recombinante. Dos enzimas (Zg2600 y Zg3628) son multimodulares y consisten en catalíticos módulos añadidos por módulos de unión a carbohidratos (CBM) 30 o módulos de función desconocida a partir de estas enzimas multimodulares solo los módulos catalíticos. Se amplificó por PCR y posteriormente se clonó. Los productos se digirieron con una mezcla de la enzima de restricción / tampón correspondiente. Después de la digestión, los productos de PCR se purificaron de nuevo con un kit de purificación de ADN estándar y finalmente eluido con 25 ml de H2O. La PCR los productos se ligaron con un plásmido derivado de pET15b igualmente digerido (donación de M. Cygler), que además fue desfosforilado. Para la transformación, se utilizaron células de E. coli DH5a químicamente competentes siguiendo procedimientos estándar. La expresión soluble recombinante de las diferentes construcciones fue primero se proyecta en pequeña escala. Los clones obtenidos se transformaron en recombinantes. Para la conservación, los cristales se llevaron al 10% de glicerol en incrementos del 5% en solución de cristalización. Después de resolver las fases por reemplazo molecular, el modelo de construcción y refinamiento se llevo a cabo como se describe para PorA. Para todos conjuntos de datos, el 5% de las observaciones se marcaron como libres y se usaron para monitorear los procedimientos de refinamiento y un resumen para la recolección de datos y el
refinamiento final de la purificación de los oligosacáridos. El material para la purificación de oligosacáridos se obtuvo por incubación a 30 uC de porfirano con 2.6 mg ml21 de PorA en agua. La separación de oligosacáridos fue analizada por fluoróforo-carbohidrato. Las muestras se analizaron en un gel de poliacrilamida al 30% con un gel de apilamiento al 4%. Todas las muestras fueron solubilizadas en D2O e intercambiado dos veces, antes de ser analizado en un espectrómetro de RMN Bruker a 500 MHz. Para los polisacáridos extraídos de algas que se utilizaron como sustratos para ensayos enzimáticos, los espectros de H-RMN se registraron a 70 uC utilizando 64 exploraciones por oligosacáridos. Los espectros de H-RMN se registraron a 25 uC utilizando 16 exploraciones. Se generaron múltiples alineaciones de secuencias.

**Referencia:**

29) Hehemann JH, Correc G, Barbeyron T, Helbert W, Czjzek M, Michel G. Transfer of carbohydrate-active enzymes from marine bacteria to Japanese gut microbiota.Nature 2010;464:908–12.