Генная инженерия

Генная инженерия — непосредственная манипуляция геномом организма с использованием биотехнологий.

Организм, который создан с помощью генной инженерии, считается генетически модифицированным (ГМ), а результатом называют «генетически модифицированный организм» (ГМО). Первый ГМО был бактерией, созданной Гербертом Бойером и Стэнли Коэном в 1973 году. Рудольф Яениш создал первое ГМ-животное, когда он ввел добавил новый ген в мышь в 1974 году. Первая компания, специализирующаяся на генной инженерии Genentech, была основана в 1976 году и

    начала с производства человеческих белков. Генетически спроектированный человеческий инсулин был произведен в 1978 году, а бактерии, производящие инсулин, были коммерциализированы в 1982 году. Генетически модифицированные продукты в питании начали продавать в 1994 году с выпуском помидора Flavr Savr. Flavr Savr был спроектирован так, чтобы иметь более длительный срок хранения, но большинство современных ГМ-культур модифицируются, чтобы повысить устойчивость к насекомым и гербицидам. GloFish, первый ГМО, разработанный как домашнее животное, был продан в США в декабре 2003 года. В 2016 году были проданы лосось, модифицированный гормоном роста.

Это набор технологий, используемых для изменения генетического состава клеток, включая перенос генов внутри и через границы видов для получения улучшенных или новых организмов. Новая ДНК получена либо путем выделения и копирования интересующего генетического материала с использованием методов молекулярного клонирования , либо путем искусственного синтеза ДНК. Конструкция обычно создается и используется для вставки этой ДНК в организм хозяина. Как и вставка генов, этот процесс можно использовать для удаления или «выбивания» генов. Новая ДНК может быть введена случайным образом или нацеленана определенную часть генома.

Также существует информационная база всех генетически модифицированных организмов - http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/default.asp

## Процесс

Создание ГМО является многоступенчатым процессом. Генетические инженеры должны сначала выбрать, какой ген они хотят вставить в организм. Это обусловлено тем, что цель для получающегося организма и построена на более ранних исследованиях. Экраны могут быть проведены для определения потенциальных генов и дальнейших тестов, которые затем используются для определения лучших кандидатов. Разработка микрочипов, транскриптомов и секвенирования генома значительно облегчила поиск подходящих генов. Удача также играет свою роль; Гены, готовые к открытию, были обнаружены после того, как ученые заметили, что бактерия процветает в присутствии гербицида.

### Изоляция генов и клонирование

Следующий шаг - изолировать ген-кандидат. Ячейку, содержащую ген, открывают и ДНК очищают. Ген разделяют с помощью рестрикционных ферментов, чтобы разрезать ДНК на фрагменты или полимеразную цепную реакцию (ПЦР) для амплификации сегмента гена. Эти сегменты затем могут быть извлечены с помощью гель-электрофореза. Если выбранный ген или геном донорского организма хорошо изучен, он уже может быть доступен из генетической библиотеки . Если последовательность ДНК известна, но нет доступных копий гена, ее также можно искусственно синтезировать. После выделения ген лигируют в плазмиду, которая затем вводится в бактерию. Плазмиду реплицируют, когда бактерии делятся, обеспечивая неограниченные копии гена.

Прежде чем ген вставляется в организм-мишень, он должен быть объединен с другими генетическими элементами. Они включают промотор и область терминатора, которые инициируют и заканчивают транскрипцию. Добавляется селективный маркерный ген, который в большинстве случаев обеспечивает устойчивость к антибиотикам, поэтому исследователи могут легко определить, какие клетки были успешно преобразованы. Ген также может быть модифицирован на этом этапе для улучшения экспрессии или эффективности. Эти манипуляции осуществляются с использованием методов рекомбинантной ДНК, таких как рестрикционные переваривания, лигирования и молекулярного клонирования.

### Вставка в геном хозяина

Существует ряд методов, позволяющих вставить ген в геном хозяина. Некоторые бактерии могут естественным образом захватывать чужую ДНК . Эта способность может быть индуцирована другими бактериями через стресс (например, тепловой или электрический шок), что увеличивает проницаемость клеточной мембраны ДНК;Поглощенная ДНК может либо интегрироваться с геномом, либо существовать как внехромосомная ДНК . ДНК обычно вводится в клетки животных с использованием микроинъекции, где ее можно вводить через ядерную оболочку клетки непосредственно в ядро или с помощью вирусных векторов.

В растениях ДНК обычно вводят, используя *Agrobacterium* -mediated recombination, используя последовательность Т-ДНК*Agrobacterium* s, которая позволяет естественную вставку генетического материала в растительные клетки.  Другим методом является биолистика, где частицы золота или вольфрама покрыты ДНК, а затем расстреляны в молодые растительные клетки или эмбрионы растений. Другим способом трансформации клеток растений и животных является электропорация . Это включает в себя подверженность клетки воздействию электрического шока, которая может сделать клеточную мембрану проницаемой для плазмидной ДНК. Из-за повреждения клеток и ДНК эффективность трансформации биолистики и электропорации ниже, чем агробактериальное опосредованное преобразование и микроинъекция.

Поскольку только одна клетка трансформируется генетическим материалом, организм должен быть регенерирован из этой отдельной клетки. Поскольку бактерии состоят из одной клетки и воспроизводят клональную регенерацию, не является необходимым. В растениях это достигается за счет использования тканевой культуры . У животных необходимо убедиться, что вставленная ДНК присутствует в эмбриональных стволовых клетках . Выбираемые маркеры используются для легкой дифференциации преобразованных из нетрансформированных ячеек. Эти маркеры обычно присутствуют в трансгенном организме, хотя был разработан ряд стратегий, которые могут удалить селектируемый маркер из зрелого трансгенного растения.

Дальнейшее тестирование с использованием ПЦР, южной гибридизации и секвенирования ДНК проводится для подтверждения того, что организм содержит новый ген. Эти тесты также могут подтвердить хромосомное расположение и количество копий вставленного гена. Наличие гена не гарантирует, что оно будет выражено на соответствующих уровнях в ткани-мишени, поэтому также используются методы, которые ищут и измеряют генные продукты (РНК и белок). К ним относятся северная гибридизация, количественная ОТ-ПЦР, Вестерн-блоттинг, иммунофлюоресценция, ИФА и фенотипическийанализ. Все потомства первого поколения будут гетерозиготными для вставленного гена и должны быть соединены вместе для получения гомозиготного животного. Для стабильной трансформации ген должен быть передан потомству в менделевской схеме наследования, поэтому также изучаются потомство организма.

Как сообщается в статье *Nature Biotechnology* РНК-шпилька подавляет нуклеарную активность в тех местах, где нет правильного соотношения.

## Практическое применение

### Совершенствование растений и животных

Ученые из Массачусетского технологического института сделали так, чтобы растения стали светящимися с помощью фермента светлячков, называемого люциферазой. У насекомых она связывана с другим химическим веществом - люциферином, вызывающим реакцию, излучающую свет. Учёные поняли, что эти белки можно встроить и в растения, предположив, что в будущем такие растения смогут освещать целые комнаты, что в свою очередь, по их задумке, может позволить в будущем сэкономить электричество

В конце двадцатого века, в 90-ые годы, учёные смогли изменить геном риса(добавив ген SUB1), сделав его устойчивым к длительному пребыванию в воде.

В Южном Китае учёные вырастили зелёных светящихся свиней. Смысл эксперимента заключался в доказательстве факта успешного и более быстрого(в 4 раза) переноса способом флуоресцентного протеина из ДНК медузы в организм животного.

Светящийся в темноте ягненок Симен(трава) был подготовлен учеными из Стамбульского университета в сотрудничестве с Гавайским университетом в медицинской школе Mānoa (UHM).

Проект во главе с доктором Сема Бирлером включал инъекцию трех материнских овец

флуоресцентным белком в метод трансгенеза, который был разработан исследователями в Гавайской школе медицины Джона А. Бернса (JABSOM).

Используя активный метод трансгенеза, основанный медицинскими исследователями из Университета Гавайи Маноа, ученые из Турции произвели светящихся зеленых кролики. Это первый раз, когда метод UH использовался для производства кроликов.

Трансгенные кролики родились в Стамбульском университете. При нормальном освещении они выглядят так же, как их пушистые, белые братья-кролики. Но при отсутствии света пара трансгенных кроликов сияет ярким оттенком зеленого.

Светящийся эффект является результатом флуоресцентного белка из ДНК медузы, который был введен в эмбрион материнского кролика в лаборатории.

Цель эксперимента заключалась в том, чтобы показать, что генетические манипуляции с техникой Университета Гавайи эффективно работают у кроликов. Общая цель состоит в том, чтобы ввести полезный ген в самки кроликов, а затем собрать белок, произведенный в молоке, произведенном самками-кроликами. Этот подход может привести к новым и конкурентно эффективным способам производства лекарств, сказал д-р Моисяди.

Успех заключался в сотрудничестве между двумя университетами в Турции и Институтом исследований биогенеза UHM (IBR) в Медицинской школе Джона А. Бернса (JABSOM).

Новости о светящихся тварях были вскоре написаны. Из серьезного научного освещения на BBC и MSNBC, в британский Comedy Central смешной подход к трансгенным кроликам, упоминания о всемирной сети в течение первых двух недель выпусков новостей UHMED превысили три миллиона, причем более 60 000 просмотров видео UHMED размещение видео на Vimeo.

Учёные модифицировали водоросли *Acutodesmus dimorphus.* Такие водоросли проверили в лабораториях, но в полевых условиях им запрещали в связи "возможности побега таких водорослей". В водорослях были добавлены следующие свойства: повышенное количество жиров и зелёное свечение при ультрафиолете(чтобы в случае побега их можно было обнаружить). И после долгих переговоров учёным разрешили проверить эти водоросли.

Учёные с помощью генной инженерии смогли выяснить как изменить вкус и запах помидоров, выведенных селекционерами для того, чтобы можно было все плоды довезти в таком же виде

Были генетически модифицированы рыбки данио-рерио с целью сделать их светящимися. Новых рыбок назвали GloFish (glow - «сияющий», «свечение» и fish – «рыба»). В их ДНК встроены фрагменты ДНК медуз и красных кораллов. Те которые имеют фрагменты ДНК медуз обладают зелёным цветом, а с фрагментами ДНК обладают красным цветом. Являются первыми генетически модифицированныыми домашними питомцами.

Russet Burbank - это сорт картофеля с темно-коричневой кожей, который является наиболее широко распространенным картофелем в Северной Америке. Имеет белую, сухую и мучнистую мякоть, и хорошо подходит для выпечки, затирания и картофеля фри. Это распространенный и популярный картофель.

Была выведена генетически модифицированная соя благодаря введению ДНК с использованием методов генной инженерии. В 1998 году Monsanto выпустила на рынок США первую генетически модифицированную сою. В 2014 году во всем мире было посажено 90,7 млн. Гектаров ГМ-сои, что составляет 82% от общей площади возделывания сои.

Учёные, которые клонировали овцу Долли, создадут кур, устойчивых к гриппу, с помощью технологии CRISSR.

#### Генная инженерия и старость

Внедрение гена теломеразы TERT, нокаут GHRKO, нарушение в генах, кодирующих рецепторы к ИФР-1, сверх экспрессия FGF21, нокаут AC5, удаление RIP3(работает через аутофагию), редактирование гена PCSK9(понижение вероятности сердечно-сосудистых заболеваний), сверхэкспрессия Klotho, нокаут RAGE, сверхэкспрессия BubR1, сверхэкспрессия MTH1 — мутации, позволяющие продлевать жизнь животным до 30%.

В сентябре 2015 года Элизабет Пэрриш, директор фармацевтической компании BioViva, первой в мире решила генно модифицировать, чтобы продлить жизнь. С помощью специального вируса она активировала в организме фермент теломеразу. Он известен тем, что делает клетки человека бессмертными.

#### Совершенствование человека

В 2015 году исследователи из Китая впервые отредактировали ДНК эмбриона человека. х. Для редактирования ДНК человеческих эмбрионов ученые из Китая использовали относительно молодой метод CRISPR/Cas9.

Китайский ученый Цзянькуй Хэ генно-модифицировал эмбрионов-близнецов, сделав их устойчивым к ВИЧ благодаря гену CCR5. О своих успехам он решил рассказать в интервью журнала Associated Press.

По состоянию на 21 января 2019 года власти КНР подтвердили существование детей, которые были генно-модифицированы и ещё одну беременность.

### Применение генной инженерии в медицине

Генная терапия — это доставка конструкций на основе нуклеиновых кислот. Обычно применяется для лечения генетических заболеваний.

CRISPR (/ ˈkrɪspər /) (сгруппированные регулярно пересекающиеся короткие палиндромные повторы) представляет собой семейство последовательностей ДНК, обнаруженных в геномах прокариотических организмов, таких как бактерии и археи. Эти последовательности получены из фрагментов ДНК вирусов, которые ранее инфицировали прокариот, и используются для обнаружения и уничтожения ДНК от подобных вирусов во время последующих инфекций. Следовательно, эти последовательности играют ключевую роль в системе противовирусной защиты прокариот.

В начале 2013 года была опубликована статья, в которой говорится о исследовании, доказывающем, что CRISPR можно использовать на человека и мыши.

Учёные проводили эксперимент на генной терапии над человеком, пытаясь излечить болезнь Хантера. Болезнь пошла на спад, но фермент, который должен был увеличиться, так и остался в том же количестве.

Американские учёные вылечили двух самцов саймири посредством вставки искусственных вирусов с геном длинноволнового опсина. Благодаря этому эксперименту учёные узнали, что для трихроматичного зрения не нужно перестраивать нервную систему, можно лишь воспользоваться генной терапией.

### Применение в научных исследованиях

* Локализация исследуемого белка. Один из способов сделать это - замена нормального гена на слитый с геном, который создаёт зеленый флуоресцентный белок (GFP), что позволит легко визуализировать продукты генетической модификации. Хотя это полезная техника, манипуляция может разрушить функцию гена, создавая вторичные эффекты и, возможно, ставя под сомнение результаты эксперимента. В настоящее время разрабатываются более сложные методы, которые позволяют отслеживать белковые продукты без ослабления их функции, такие как добавление небольших последовательностей, которые будут служить в качестве связующих мотивов к моноклональным антителам.
* Эксперименты с влиянием генетических мутаций, например, в эксперименте с нокаутом гена, в котором организм проектируется так, чтобы не хватало активности одного или нескольких генов. В простой нокаут копия желаемого гена была изменена, чтобы сделать его нефункциональным. Эмбриональные стволовые клетки включают измененный ген, который заменяет уже существующую функциональную копию. Эти стволовые клетки вводятся в бластоцисты, которые имплантируются суррогатным матерям. Это позволяет экспериментатору анализировать дефекты, вызванные этой мутацией, и тем самым определять роль конкретных генов.

## Примечания

1. ↑ *Александр Панчин* Обыгрывая бога // Популярная механика. — 2017. — № 3. — С. 32-35. — URL: http://www.popmech.ru/magazine/2017/173-issue/
2. ↑ https://royalsociety.org/topics-policy/projects/gm-plants/how-does-gm-differ-from-conventional-plant-breeding/
3. ↑ http://www.phgfoundation.org/news/1304/
4. ↑ https://books.google.co.nz/books?id=jWJ1CgAAQBAJ&pg=PA242&lpg=PA242&dq=genetic+engineering+screen+to+find+target+genes&source=bl&ots=ExTec5lWP4&sig=9jiW3UGkfeN82RHwW5H5weFHwF4&hl=en&sa=X&ved=0ahUKEwjqkfmup8nTAhXKmpQKHVWMAiQQ6AEIUDAJ#v=onepage&q=genetic%20engineering%20screen%20to%20find%20target%20genes&f=false
5. ↑ http://sitn.hms.harvard.edu/flash/2015/how-to-make-a-gmo/
6. ↑ https://books.google.co.nz/books?id=g1v6WMHVkTgC&printsec=frontcover&dq=Genetic+Engineering:+Principles+and+Methods&hl=en&sa=X&ved=0ahUKEwimxYGunsnTAhWBspQKHThtDYcQ6AEIRTAH#v=onepage&q=Genetic%20Engineering%3A%20Principles%20and%20Methods&f=false
7. ↑ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC232662/
8. ↑ http://www.fao.org/docrep/006/y4955e/y4955e06.htm
9. ↑ Berg, P.; Mertz, J. E. (2010). "Personal Reflections on the Origins and Emergence of Recombinant DNA Technology". *Genetics*. **184** (1): 9–17 PMC 2815933 . PMID 20061565. doi:10.1534/genetics.109.11214
10. ↑ Chen, I; Dubnau, D (2004). "DNA uptake during bacterial transformation". *Nat. Rev. Microbiol*. **2** (3): 241–9. PMID 15083159. doi:10.1038/nrmicro844.
11. ↑ Darbani, Behrooz; Farajnia, Safar; Toorchi, Mahmoud; Zakerbostanabad, Saeed; Noeparvar, Shahin; Stewart, Jr., C. Neal (2010). "DNA-Delivery Methods to Produce Transgenic Plants". Science Alert.
12. ↑ Hohn, Barbara; Levy, Avraham A; Puchta, Holger (2001). "Elimination of selection markers from transgenic plants". *Current Opinion in Biotechnology*. **12** (2): 139–43. PMID 11287227. doi:10.1016/S0958-1669(00)00188-9.
13. ↑ Grizot S, Smith J, Daboussi F, et al. (September 2009). "Efficient targeting of a SCID gene by an engineered single-chain homing endonuclease". *Nucleic Acids Res*. **37** (16): 5405–19. PMC 2760784 . PMID 19584299. doi:10.1093/nar/gkp548.
14. ↑ https://www.nature.com/articles/s41587-019-0095-1
15. ↑ http://news.mit.edu/2017/engineers-create-nanobionic-plants-that-glow-1213
16. ↑ https://www.nature.com/articles/nature04920
17. ↑ http://www.manoa.hawaii.edu/news/article.php?aId=6197
18. ↑ http://jabsom.hawaii.edu/cimen-the-green-sheep-is-born-using-uh-developed-technique-in-istanbul/
19. ↑ http://jabsom.hawaii.edu/glowing-green-rabbits-produced-in-uh-jabsom-collaboration-with-researchers-in-turkey/
20. ↑ https://www.academia.edu/34275571/Acutodesmus\_dimorphus\_A\_Promising\_Alga\_for\_Commercial\_Scale\_Cultivation\_for\_Biofuels\_and\_Biomass
21. ↑ https://elementy.ru/novosti\_nauki/432921/Genetiki\_ponyali\_kak\_vernut\_pomidoram\_vkus\_i\_zapakh\_otnyatye\_selektsionerami
22. ↑ http://www.glofish.com/
23. ↑ https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12230-014-9397-5
24. ↑ Fast Food Nation: The Dark Side of the All-American Meal. Eric Schlosser, Houghton Mifflin Harcourt, 2001
25. ↑ https://www.finecooking.com/ingredient/russet-potatoes
26. ↑ Роллер, Сибел и Сьюзен Харландер (1998). «Современная пищевая биотехнология: обзор ключевых проблем». У Роллера Сибел и Сьюзен Харландер. Генетическая модификация в пищевой промышленности: стратегия улучшения качества продуктов питания. Лондон: Блэки. С. 5–26. DOI: 10.1007 / 978-1-4615-5815-6\_1. ISBN 978-1-4613-7665-1.
27. ↑ http://www.isaaa.org/resources/publications/pocketk/16/
28. ↑ https://www.reuters.com/article/us-health-pandemic-chickens/scientists-make-gene-edited-chickens-in-bid-to-halt-next-pandemic-idUSKCN1PG007
29. ↑ American society for microbiology. "Function of AP-1 in Transcription of the Telomerase Reverse Transcriptase Gene (*TERT*) in Human and Mouse Cells"

https://mcb.asm.org/content/25/18/8037.short
30. ↑ Oxford academic. "Expression of Key Regulators of Mitochondrial Biogenesis in Growth Hormone Receptor Knockout (GHRKO) Mice is Enhanced but is Not Further Improved by Other Potential Life-Extending Interventions "

https://academic.oup.com/biomedgerontology/article-abstract/66A/10/1062/685073
31. ↑ **IGF**-**1**signaling and **aging (авторы**

Martin Holzenberger, Laurent Kappeler, Carlos De Magalhaes Filho). Журнал Experimental Gerontology

Volume 39, Issues 11–12, November–December 2004, Pages 1761-1764

«Among the different knockdown mutations of IGF-1R that we

produced, the heterozygous knockout IGF-1RC/K, that has

a decrease in the number of IGF-1R to half of the wild type

values, reproduces those daf-2 mutations that most effi-

ciently extend lifespan in C. elegans. Lifespan analysis,

comparing IGF-1RC/K mice with their wild-type littermates,

show that this mutation also significantly increases

lifespan in mice, by 26% (Holzenberger et al., 2003). When

sexes are evaluated separately, IGF-1RC/K females live

33% longer than wild-type females, whereas male mutants

live 16% longer. IGF-1RC/K mice have normal energy

metabolism and nutrient uptake, and a physical activity

identical to that of their wild-type controls.»
32. ↑ Статья "FGF21 activates AMPK signaling: impact on metabolic regulation and the aging process Antero Salminen1 & Anu Kauppinen2 & Kai Kaarniranta3,4" (авторы: Antero Salminen1 & Anu Kauppinen2 & Kai Kaarniranta). Журнал "J Mol Med".

«AMPactivated protein kinase (AMPK) is a tissue energy sensor involved in maintaining the energy balance and tissue integrity. It is known that AMPK signaling generates an energy metabolic profile which displays a remarkable overlap with that of FGF21. There is convincing evidence that endocrine FGF21 signaling activates the AMPK pathway, either directly through FGFR1/β-klotho signaling or indirectly by stimulating the secretion of adiponectin and corticosteroids, which consequently can activate AMPK signaling in their target tissues. By activating AMPK, FGF21 can promote a healthy aging process and thus extend mammalian lifespan. We will examine the signaling mechanisms through which FGF21 can activate the AMPK pathway and then discuss the significance of the close connection between FGF21 and AMPK signaling in the control of metabolic disorders and the aging process.»
33. ↑ Статья "Adenylyl cyclase type 5 in cardiac disease, metabolism, and aging".(авторы: Stephen F. Vatner\*, Misun Park\*, Lin Yan, Grace J. Lee, Lo Lai, Kousaku Iwatsubo, Yoshihiro Ishikawa, Jeffrey Pessin, and). https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3727099/

«Moreover, AC5 knockout results in a 30% increase in a healthy life span, resembling the most widely studied model of longevity, i.e., calorie restriction.»
34. ↑ Статья "GW28-e0891 miR-21 Reduces Hydrogen Peroxide-Induced Apoptosis in c-kit+ Cardiac Stem Cells In Vitro through PTEN/PI3K/Akt Signaling". Авторы: (Bei Shi,1 Yan Wang,1 Wenwen Deng1 1 Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Zunyi Medical College, Zunyi, Guizhou, China). Журнал

"Journal of the American College of Cardiology",

«CONCLUSIONS Our findings show that accumulation of p62 is suffi-

cient to promote RIP1-RIP3-MLKL cascade by triggering the formation

of p62-RIP1, thereby enhancing MI/R induced necroptosis in aged

hearts. These findings confirm the new mode of autophagic

dysfunction promoted necroptosis and provide new views for agingrelated

myocardial vulnerability.»
35. ↑ Статья "Permanent alteration of **PCSK9**with in vivo CRISPR-Cas9 genome **editing". (авторы:** Qiurong Ding , Alanna Strong , Kevin M. Patel , Sze-Ling Ng , Bridget S. Gosis , Stephanie N. Regan , Chad A. Cowan , Daniel J. Rader , and Kiran Musunuru**) Журнал** Am Heart Assoc. https://www.ahajournals.org/doi/full/10.1161/CIRCRESAHA.115.304351 «We initially screened candidate CRISPR guide RNAs targeting sequences in exon 1 and exon 2 of the mouse Pcsk9gene in 3T3-L1 cells. We found that the guide RNA targeting exon 1 displayed ≈50% mutagenesis at the on-target site in Pcsk9, as judged by the Surveyor assay (Figure 1A; Online Figure I). We made an adenovirus coexpressing Cas9 and this guide RNA (CRISPR-Pcsk9), using an adenovirus expressing GFP as a control.»
36. ↑ Статья "Suppression of aging in mice by the hormone Klotho" из журнала *Sciense.*
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?cmd=Link&dbFrom=PubMed&from\_uid=16123266
37. ↑ Техасская медицинская лаборатория SpectraCell. https://www.eurekalert.org/pub\_releases/2016-04/brf-fgt042116.php
38. ↑ Статья Chinese scientists genetically modify human embryos. (авторы: David Cyranoski & Sara Reardon). Журнал Nature.

https://www.nature.com/news/chinese-scientists-genetically-modify-human-embryos-1.17378

«In a world first, Chinese scientists have reported editing the genomes of human embryos. The results are published1 in the online journal *Protein & Cell* and confirm widespread rumours that such experiments had been conducted — rumours that sparked a high-profile debatelast month2,3 about the ethical implications of such work.»
39. ↑ https://nplus1.ru/news/2018/11/26/genetically-edited-babies
40. ↑ https://apnews.com/4997bb7aa36c45449b488e19ac83e86d
41. ↑ http://www.xinhuanet.com/local/2019-01/21/c\_1124020517.htm
42. ↑ Barrangou R (2015). "The roles of CRISPR-Cas systems in adaptive immunity and beyond". *Current Opinion in Immunology*. **32**: 36–41. doi:10.1016/j.coi.2014.12.008. PMID 25574773.
43. ↑ Статья Multiplex genome engineering using **CRISPR**/Cas systems

(авторы: Le Cong1,2,\*, F. Ann Ran1,4,\*, David Cox1,3, Shuailiang Lin1,5, Robert Barretto6, Naomi Habib1, Patrick D. Hsu1,4, Xuebing Wu7, Wenyan Jiang8, Luciano A. Marraffini8, Feng Zhang1,†)

http://science.sciencemag.org/content/339/6121/819

«Functional elucidation of causal genetic variants and elements requires precise genome editing technologies. The type II prokaryotic CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas adaptive immune system has been shown to facilitate RNA-guided site-specific DNA cleavage. We engineered two different type II CRISPR/Cas systems and demonstrate that Cas9 nucleases can be directed by short RNAs to induce precise cleavage at endogenous genomic loci in human and mouse cells.»
44. ↑ https://www.sciencemag.org/news/2018/09/new-gene-editing-treatment-might-help-treat-rare-disorder-hints-first-human-test

Статья "New gene-editing treatment might help treat a rare disorder, hints first human test". Журеал Science.

Автор Jocelyn Kaiser
45. ↑ Katherine Mancuso, William W. Hauswirth, Qiuhong Li, Thomas B. Connor, James A. Kuchenbecker, Matthew C. Mauck, Jay Neitz, Maureen Neitz. Gene therapy for red–green colour blindness in adult primates // *Nature*. Advance online publication 16 September 2009.
46. ↑ 46,0 46,1 Альбертс Б., Джонсон А., Льюис Д., Рафф М., Робертс К., Уолтер П. (2002). «Изучение экспрессии генов и функции».