Serie Generale n. 143 del 19-6-1992
DECRETI, DELIBERE E ORDINANZE MINISTERIALI
MINISTERO DELLA SANITA'
MINISTERO DELLA SANITA'
DECRETO 15 giugno 1992
Autorizzazione all'impresa Pfizer italiana S.p.a. a mettere in commercio la preparazione enzimatica, denominata Chy-Max, ottenuta da microrganismi geneticamente modificati da impiegare nella coagulazione del latte destinato alla produzione di formaggi. (GU Serie Generale n.143 del 19-06-1992)

IL MINISTRO DELLA SANITÀ
Vista la domanda, presentata il 20 giugno 1988 e pervenuta il 14
luglio 1988, della impresa Pfizer italiana S.p.a., con sede in
Latina, s.s. 156, km 50, diretta ad ottenere il rilascio
dell'autorizzazione alla immissione in commercio delle preparazioni,
in forma liquida o in polvere, dell'enzima chimosina denominate Chy-
Max, da impiegare nella coagulazione del latte destinato alla
produzione di formaggi;
Visto il parere del Consiglio superiore di sanità reso
nell'adunanza del 25 febbraio 1991;
Visto l'art. 2 del decreto ministeriale 2 dicembre 1991, n. 446,
relativo alle modalità per il rilascio delle autorizzazioni
all'impiego delle preparazioni dell'enzima chimosina ottenute da
microrganismi geneticamente modificati nella coagulazione del latte
destinato alla produzione di formaggi;
Rilevato che le preparazioni dell'enzima chimosina denominate Chy-
Max:
provengono da ceppi di microrganismi non patogeni e non tossigeni
di Escherichia coli K12;
presentano nella forma liquida un titolo non inferiore a 1:10.000;
sono differenziabili dalle preparazioni commerciali di caglio
animale mediante l'applicazione della metodica di analisi di cui alla
nota trasmessa dall'Istituto superiore di sanità in data 17 aprile
1992;
non contengono nella forma liquida sostanze conservative
antimicrobiche del tipo ed in quantità superiori a quelle previste
per il caglio o presame dal decreto ministeriale 31 marzo 1965 e sue
successive modificazioni ed integrazioni;
sono al momento autorizzate alla commercializzazione nello Stato
di produzione (USA), nonchè in alcuni Paesi CEE (Regno Unito, Eire,
Belgio);
Vista la sussistenza dei requisiti prescritti dal citato decreto
ministeriale 2 dicembre 1991, n. 446;
Decreta:
1. È autorizzata l'immissione in commercio, previa importazione
nel territorio italiano delle preparazioni, in forma liquida oppure
in polvere, dell'enzima chimosina denominate Chy-Max, ottenute da
microrganismi geneticamente modificati appartenenti al ceppo
Escherichia coli K12, prodotte dall'impresa Pfizer Inc. - Speciality
Chemicals Group nello stabilimento sito in Milwakee WI (USA).
2. Le preparazioni di cui al precedente p. 1 possono essere
impiegate esclusivamente nella coagulazione del latte destinato alla
produzione di formaggi diversi da quelli disciplinati dalla legge 10
aprile 1954, n. 125, e successivi decreti di applicazione.
3. Le preparazioni dell'enzima Chy-Max oltre a soddisfare i
requisiti di cui al comma 1 dell'art. 2 del decreto ministeriale 2
dicembre 1991, n. 446, devono possedere i seguenti requisiti di
purezza:
Coliformi: inferiori a 12 MPN/g o ml;
Salmonelle: assenti in 25 g o ml;
Metalli pesanti: non più di 10 ppm.
4. Sulle confezioni dell'enzima Chy-Max devono essere riportate le
indicazioni prescritte dall'art. 2, comma 3 del decreto ministeriale
2 dicembre 1991, n. 446.
5. L'impresa Pfizer Italiana S.p.a. è tenuta a dare comunicazione
al Ministero della sanità, per il tramite dell'autorità sanitaria
competente per territorio, di eventuali variazioni intervenute nella
ragione sociale e dei requisiti prescritti per le preparazioni di
chimosina previste dal presente decreto.
6. I laboratori dei servizi di igiene pubblica del Servizio
sanitario nazionale realizzano, con il coordinamento dell'Istituto
superiore di sanità, un apposito programma di vigilanza per la
verifica delle condizioni prescritte dall'art. 2, comma 1, lettera c)
del decreto ministeriale 2 dicembre 1991, n. 446, mediante
applicazione del metodo analitico riportato in allegato nonchè di
quelle del presente decreto e trasmettono i risultati degli
accertamenti effettuati al Ministero della sanità - Direzione
generale igiene alimenti e nutrizione, entro il 31 dicembre di ogni
anno.
Il presente decreto sarà pubblicato nella Gazzetta Ufficiale della
Repubblica italiana.
Roma, 15 giugno 1992
Il Ministro: DE LORENZO

ALLEGATO
METODO PER LA DIFFERENZIAZIONE DELLA CHIMOSINA
MICROBICA - DNA RICOMBINANTE DAL CAGLIO ANIMALE
Scopo.
Il metodo consente di differenziare la chimosina microbica dal
caglio animale (vitello, bovino, misto).
Principio del metodo.
La chimosina di origine microbica viene differenziata dal caglio
animale mediante separazione su colonna cromatografica HPLC ad
esclusione molecolare (size exclusion) e rivelazione
spettrofotometrica UV.
Attrezzature.
Cromatografo liquido HPLC
Rivelatore UV
Colonna "size exclusion" del tipo SE-250 Zorbax (4 m, 150 A, pH
3-9), per macromolecole da 4000-400.000 daltons.
Reattivi.
Acqua per HPLC
Soluzione di Na2HPO4pH7
Condizioni cromatografiche.
Eluizione isocratica
Flusso eluente 1 ml/min
Temperatura della colonna 25 C
Rivelazione a lunghezza d'onda di 225 nm
Preparazione del campione.
I campioni liquidi vengono filtrati su filtro da 0,45 um ed
iniettati in colonna per la separazione cromatografica e successiva
rivelazione.
I campioni solidi vengono disciolti nell'eluente, filtrati su
filtro da 0,45 um ed iniettati in colonna.
Risultati e discussione.
La chimosina microbica - DNA ricombinante presenta un
cromatogramma caratterizzato dalla presenza di un picco
cromatografico principale associato ad altre frazioni, presenti in
quantità non significative, mentre nel caglio sono evidenziabili,
oltre al picco cromatografico della chimosina animale, altri picchi
più o meno risolti dalla chimosina, di pari o maggiore intensità,
relativi alle altre macromolecole presenti nel caglio animale
(pepsine ecc.).
La metodica consente pertanto di differenziare la chimosina
microbica - DNA ricombinante dal caglio animale.