Serie Generale n. 168 del 20-7-1995
DECRETI, DELIBERE E ORDINANZE MINISTERIALI
MINISTERO DELLA SANITA'
MINISTERO DELLA SANITA'
DECRETO 5 giugno 1995
Controllo di Stato sul vaccino contro la varicella. (GU Serie Generale n.168 del 20-07-1995)

IL DIRETTORE GENERALE
DEL SERVIZIO FARMACEUTICO
Visto il decreto legislativo 29 maggio 1991, n. 178, recante norme
di recepimento delle direttive della Comunità economica europea in
materia di specialità medicinali;
Visto in particolare l'art. 20, comma 5 e 6, del predetto decreto
legislativo, con il quale vengono stabilite norme in materia di Stato
sui vaccini vivi e sulle relative procedure tecniche di esecuzione;
Visto il decreto legislativo 30 giugno 1993, n. 267;
Considerato che l'istituto superiore di sanità ha espresso con
nota n. 037175/VIR12 in data 25 novembre 1994 il proprio favorevole
parere in merito alla messa a punto delle procedure di controllo del
vaccino contro la varicella dettando le relative modalità di
esecuzione;
Visto il parere favorevole espresso in proposito dal Consiglio
superiore di sanità nelle sedute del 1 marzo 1995 e del 10 maggio
1995;
Decreta:
Art. 1.
L'Istituto superiore di sanità - ai sensi dell'art. 1, comma 2,
lettera e), del decreto legislativo 30 giugno 1993, n. 267 - effettua
i controlli sul vaccino contro la varicella. I controlli - ai sensi
dell'art. 20, comma 6, del decreto legislativo 29 maggio 1991, n. 178
- devono essere effettuati entro sessanta giorni dalla ricezione del
campione.

Art. 2.
Le spese del controllo sono a carico del produttore nella misura
prevista dalla normativa vigente.

Art. 3.
Le procedure tecniche per l'esecuzione del controllo
di Stato sul predetto vaccino, elaborate dall'Istituto superiore di
sanità sono allegate al presente decreto e ne costituiscono parte
integrante.
Roma, 5 giugno 1995
Il direttore generale: SCIOTTI
Registrato alla Corte dei conti il 26 giugno 1995
Registro n. 1 Sanità, foglio n. 255

NORME RELATIVE ALLA PRODUZIONE, AL CONTROLLO E ALLA CONSERVAZIONE
DEL VACCINO VIVO, ATTENUATO, CONTRO LA VARICELLA.
Il vaccino vivo contro la varicella è costituito da un preparato
liofilo ottenuto dal ceppo attenuato OKA di Herpes virus varicellae
propagato in colture di cellule diploidi umane. Il vaccino,
ricostituito immediatamente prima dell'uso, con apposito solvente, ha
l'aspetto di un liquido limpido e incolore (se contiene un indicatore
di pH, può apparire opportunamente colorato).
1. PREPARAZIONE.
La produzione del vaccino viene effettuata partendo da un lotto di
semenza virale derivato da un ceppo virale caratterizzato dal punto
di vista biologico e clinico, e da una banca di cellule di un
determinato ceppo cellulare sulla cui origine e successive
manipolazioni deve essere fornita documentazione all'Istituto
superiore di sanità.
Il virus proveniente dalla semenza virale può essere moltiplicato
per ottenere una o più raccolte virali da cui preparare un "bulk"
destinato alla costituzione dei lotti finali.
1.1. Substrato per la moltiplicazione del virus.
Il ceppo cellulare, costituito da cellule diploidi umane, e la
banca di cellule devono essere approvati dall'Istituto superiore di
sanità e devono essere caratterizzati per origine, identità
(isoenzimi, sierologia, fingerprinting degli acidi nucleici)
marcatori genetici (HLA), cariotipo, caratteristiche di crescita,
caratteristiche morfologiche e vitalità durante il congelamento.
Il ceppo cellulare, deve risultare adatto alla crescita virale. Le
cellule devono risultare, in saggi effettuati in vivo, esenti da
contaminanti virali avventizi e libere da eterotrasplantabilità. Le
colture cellulari devono, inoltre, corrispondere ai requisiti di
sterilità batterica e micotica e di assenza di micoplasmi. Anche i
liquidi di coltura delle cellule devono essere saggiati, per definire
l'assenza di agenti contaminanti avventizi. Tutti i saggi
sopradescritti devono essere svolti in conformità alla Farmacopea
ufficiale italiana.
Deve essere fornita documentazione comprovante che il siero fetale
bovino, usato come fattore di crescita delle colture cellulari,
corrisponda ai requisiti di sterilità batterica e micotica e di
assenza di micoplasmi e di virus bovini.
1.2. Lotto di semenza virale.
La sospensione di semenza virale, impiegata nella produzione, deve
provenire dal ceppo OKA del virus della varicella, la sua origine e i
successivi passaggi devono essere documentati.
Il virus non dovrà in nessun caso aver subito passaggi in linee
continue di cellule e dovrà trovarsi ad un numero di passaggio tale
che il prodotto finito non debba mai superare il 38. I lotti di
semenza virale devono essere propagati nello stesso tipo di cellule
utilizzate per la produzione del vaccino finale. I lotti di semenza
virale devono essere conservati a temperatura inferiore a XX 20 C se
sono liofilizzati o inferiore a XX 60 C se non lo sono. La
moltiplicazione del virus deve effettuarsi con le dovute precauzioni
di asepsi in cellule umane diploidi approvate per l'impiego nella
produzione dei vaccini. Soltanto i lotti di semenza virale che
risultino controllati con risultati soddisfacenti per quanto riguarda
l'identità l'assenza di agenti contaminanti avventizi e la
neurovirulenza possono essere utilizzati per la produzione del virus.
Tutti i saggi sopraindicati devono essere svolti in modo conforme
alle norme della Farmacopea ufficiale italiana. In particolare,
l'assenza di agenti contaminanti avventizi deve essere valutata "in
vivo" in topini adulti e neonati e in cavie, e "in vitro" su colture
cellulari e con gli appropriati tests di sterilità batterica e
fungina, di assenza di micobatteri e di assenza di micoplasmi.
1.3. Moltiplicazione e raccolta del virus.
Il virus proveniente dal lotto di semenza virale può essere
propagato per ottenere delle singole raccolte virali da utilizzare
per la preparazione della raccolta finale (bulk). Ogni singola
raccolta di virus deve essere sottoposta a controllo.
Possono essere considerate singole raccolte di sospensione virale
una o più raccolte mescolate, derivanti dalla stessa produzione di
cellule.
Il siero di origine animale, usato come fattore di crescita delle
colture cellulari, deve essere stato approvato. Non può essere
utilizzato siero di origine umana. Il siero stesso e la tripsina,
usati nella preparazione, devono risultare esenti da agenti
contaminanti avventizi. L'indicatore di pH (rosso fenolo) e gli
antibiotici consentiti devono essere utilizzati alla concentrazione
minima efficace. Il 5% (e non meno di 50 ml) delle colture cellulari
utilizzate deve essere conservato come coltura cellulare di controllo
non infettata e deve risultare conforme alle norme relative alla
presenza di agenti estranei indicate nella Farmacopea ufficiale
italiana.
Le cellule infettate provenienti da una stessa raccolta devono
essere lavate, staccate dalla superficie del supporto e mescolate. La
sospensione cellulare deve essere lisata tramite trattamento con
ultrasuoni.
Sulle singole raccolte di sospensione virale, prima della
chiarificazione, dovranno essere effettuate le seguenti, prove:
Identità. La prova di identità dovrà essere effettuata con un
saggio di siero neutralizzazione su colture cellulari, per mezzo di
anticorpi specifici, secondo le norme della Farmacopea ufficiale
italiana.
Assenza di agenti contaminanti avventizi, con le stesse modalità
già descrittte al punto 1.2.
Concentrazione virale. Il saggio per valutare la concentrazione
virale ha la finalità di mostrare le regolarità della produzione e
di determinare la diluzione da utilizzare nella preparazione del
lotto finale e dovrà essere svolto secondo le norme della Farmacopea
ufficiale italiana.
1.4. Lotto di preparazione (bulk) finale.
Il "bulk" finale di preparazione virale può essere costituito da
una miscela di "singole raccolte" purchè queste risultino
soddisfacenti ai controlli di identità, assenza di microrganismi
contaminanti e concentrazione virale sopradescritti. Il preparato
deve essere chiarificato per eliminare ogni detrito cellulare e può
essere addizionato di un appropriato stabilizzante e diluito in modo
conveniente.
La sospensione virale, dopo chiarificazione, deve presentare
requisisti soddisfacenti per quanto concerne: assenza di cellule
residue, assenza di microrganismi contaminanti, determinazione del
contenuto di siero albumina bovina (BSA).
Controllo di assenza di cellule residue. Il saggio deve essere
svolto in conformità alla Farmacopea ufficiale italiana.
Controllo di assenza di microrganismi contaminanti (saggio di
sterilità batterica e micotica). Il saggio deve essere svolto in
conformità alla Farmacopea ufficiale italiana.
Determinazione del contenuto di BSA. Deve essere conforme alle
indicazioni della Farmacopea ufficiale italiana.
1.5. Lotto finale.
Il preparato virale finale (bulk) deve essere aliquotato
asetticamente in recipienti sterili a chiusura ermetica e
liofilizzato fino a che il contenuto di acqua, che non deve essere
superiore al 3%, sia tale da consentire una buona stabilità del
vaccino.
Al termine della liofilizzazione il recipiente deve essere chiuso
ermeticamente.
Sul prodotto finito ed infialato devono essere fatti i seguenti
controlli:
Identità. Il vaccino ricostituito in modo appropriato, mescolato
con anticorpi specifici contro Herpesvirus Varicellae, non deve
essere in grado di infettare colture cellulari suscettibili.
Titolo virale. Deve essere valutato con un saggio di titolazione
su almeno 10 colture cellulari per ogni diluizione in ragione di 4.
Il titolo virale va comparato con quello di un preparato di
riferimento appropriato. In ogni caso la concentrazione di virus non
deve risultare inferiore a 2 x 10(Elevato al Cubo) UFP per dose.
Innocuità. ll vaccino deve soddisfare i requisiti di tossicità
abnorme in conformità con le norme della Farmacopea ufficiale
italiana.
Sterilità. Il vaccino ricostituito deve soddisfare i requisiti
di sterilità batterica e micotica conformi alle regole della
Farmacopea ufficiale italiana.
Contenuto di albumina serica. L'albumina serica, di qualsiasi
origine, eventualmente aggiunta, deve essere conforme alle
indicazioni della Farmacopea ufficiale italiana e, in ogni caso, non
deve superare la concentrazione di 5 (Micron(g/dose.
Contenuto di acqua. Non deve essere superiore al 3%.
Prova di stabilità. Il più basso limite consentito dal titolo
del virus nel vaccino durante e dopo il periodo di incubazione a 37
C per sette giorni è di 2 x 10(Elevato al Cubo) UFP per dose.
Presenza di tracce di antibiotico. Il contenuto di antibiotico
residuo deve essere misurato secondo le indicazioni della Farmacopea
ufficiale italiana e deve essere riportato sull'etichetta.
2. CONSERVAZIONE E DATA DI SCADENZA.
Le fiale contenenti il vaccino liofilo devono essere conservate al
riparo dalla luce ad una temperatura inferiore a XX 20 C. Conservato
in tali condizioni, "senza essere mai rimosso" sia pure
temporaneamente, il vaccino conserva la validità per tre anni a
partire dall'ultima soddisfacente determinazione del titolo eseguita
o stabilita dall'autorità sanitaria nazionale di controllo.
3. ETICHETTE.
Oltre alle indicazioni di cui alla monografia "Vaccini"
(Farmacopea ufficiale italiana), l'etichetta sul recipiente o
sull'imballagio deve riportare:
il ceppo virale utilizzato per la preparazione del vaccino;
il tipo e l'origine delle cellule utilizzate per la preparazione
del vaccino;
la concentrazione minima di virus;
l'avvertimento che il contatto tra il vaccino e il disinfettante
deve essere evitato;
il periodo entro il quale il vaccino può essere utilizzato dopo
la ricostituzione;
l'avvertimento che il vaccino non può essere somministrato alle
donne in stato di gravidanza.
4. DOCUMENTAZIONE DA INVIARE ALL'ISTITUTO SUPERIORE DI SANITÀ.
4.1. Copia della domanda di cui al punto 5.1.
4.2. Copie dei protocolli di tutte le operazioni di produzione e dei
controlli effettuati sulla serie.
Nella documentazione, debitamente firmata dal direttore tecnico
responsabile, devono essere altresì precisate, in occasione del
controllo di Stato della semenza, la storia e le caratteristiche del
ceppo usato e il numero di passaggi cui il ceppo originale è stato
sottoposto per la preparazione della semenza.
4.3. Copia del verbale di prelevamento dei campioni.
Nel verbale, munito delle firme del direttore tecnico e del medico
capo della struttura sanitaria o di un incaricato, alla presenza del
quale viene eseguito il prelevamento dei campioni, secondo le norme
previste dall'art. 15 del regio decreto 18 giugno 1905, n. 407,
devono figurare, fra gli altri dati, il numero di serie, il numero
complessivo delle dosi costituenti la partita, la data di
preparazione della partita e il numero delle dosi costituenti il
campione destinato all'Istituto superiore di sanità.
4.4. Se trattasi di vaccino di provenienza estera,
i protocolli relativi alla produzione ed ai controlli effettuati,
devono essere vistati dall'autorità sanitaria del paese di origine
del vaccino ed accompagnati da una dichiarazione giurata attestante
che il vaccino giunto in dogana, debitamente contrassegnato da un
numero progressivo di serie, proviene tutto da un'unica partita.
Tutti i documenti devono essere vistati da console italiano per la
circoscrizione ove si produce il vaccino.
4.5. Quietanza
comprovante il versamento a favore dell'Istituto superiore di
sanità, presso la sezione di tesoreria provinciale, della somma di
L. 20.000.000 per la semenza virale; L. 5.000.000 per ogni serie di
sospensione madre; L. 1.500.000 per ogni lotto di prodotto finito; L.
800.000 per la convalida del titolo virale.
4.6 I campioni
da inviare all'Istituto superiore di sanità dovranno essere: 200 ml
di sospensione virale non diluita prima della chiarificazione, 100
fiale del prodotto finito con relativo liquido per la ricostituzione.
5. DOCUMENTAZIONE DA INVIARE AL MINISTERO DELLA SANITÀ - DIREZIONE
GENERALE SERVIZIO FARMACEUTICO.
5.1. Domanda in carta legale
con la quale viene richiesto che il vaccino sia sottoposto a
controllo di Stato, nella quale sia precisato il numero di serie e di
partita del vaccino. Tale domanda, indirizzata al Ministero della
sanità, dovrà essere presentata agli assessorati alla sanità,
regionali delle province autonome di Trento e Bolzano, tramite le
unità sanitarie locali, ove funzionanti. Per la regione Sicilia la
domanda dovrà essere presentata agli uffici dei medici provinciali.
5.2. Eventuale copia del verbale di prelevamento dei campioni di cui
al punto 4.3.
6. VACCINO SOTTOPOSTO A CONTROLLO DI STATO CON ESITO FAVOREVOLE.
In base al risultato favorevole del controllo, comunicato
dall'Istituto superiore di sanità al Ministero della sanità ed
all'autorità sanitaria competente per territorio, quest'ultima
provvederà allo svincolo della serie per la distribuzione giusta le
norme dell'art. 16 e seguenti del regio decreto 18 giugno 1905, n.
407.