Serie Generale n. 32 del 8-2-1995
DECRETI, DELIBERE E ORDINANZE MINISTERIALI
MINISTERO DELLA SANITA'
MINISTERO DELLA SANITA'
DECRETO 28 novembre 1994
Attuazione della direttiva 94/40/CE della Commissione, recante modifica alla direttiva 87/153 del Consiglio che fissa le linee direttrici per la valutazione degli additivi nell'alimentazione degli animali. (GU Serie Generale n.32 del 08-02-1995)

IL MINISTRO DELLA SANITÀ
Vista la legge 15 febbraio 1963, n. 281, modificata dalla legge 8
marzo 1968, n. 399, e dal decreto del Presidente della Repubblica 31
marzo 1988, n. 152, concernenti la disciplina della preparazione e
del commercio dei mangimi;
Visto il decreto del Presidente della Repubblica 1 marzo 1992, n.
228, con il quale è stata recepita anche la direttiva 87/153/CEE del
Consiglio relativa alle linee direttrici per la valutazione degli
additivi nell'alimentazione degli animali;
Vista la direttiva 94/40/CE della Commissione, che stabilisce le
nuove linee direttrici per la valutazione degli additivi
nell'alimentazione degli animali, completandole con i criteri di
valutazione per l'esame delle domande di ammissione degli enzimi e
dei microrganismi come additivi e modificando, quindi, la direttiva
87/153/CEE;
Ritenuto necessario adeguare la vigente normativa nazionale alle
disposizioni contenute nella suindicata direttiva comunitaria,
nell'ambito dell'adeguamento al progresso delle conoscenze
scientifiche e tecniche;
Visto l'art. 20 della legge 16 aprile 1987, n. 183;
Visto l'art. 6, sub u), della legge 23 dicembre 1978, n. 833,
concernente le funzioni amministrative riservate allo Stato in
materia sanitaria;
Vista la legge 14 gennaio 1994, n. 20, contenente disposizioni in
materia di giurisdizione e controllo della Corte dei conti;
Decreta:
Art. 1.
L'allegato IV del decreto del Presidente della Repubblica 1 marzo
1992, n. 228, è modificato conformemente all'allegato al presente
decreto.
Il presente decreto è inviato alla Corte dei conti per il
controllo preventivo di legittimità ed entra in vigore il giorno
successivo a quello della sua pubblicazione nella Gazzetta Ufficiale
della Repubblica italiana.
Roma, 28 novembre 1994
Il Ministro: COSTA
Registrato alla Corte dei conti il 10 gennaio 1995
Registro n. 1 Sanità, foglio n. 4

ALLEGATO
LINEE DIRETTRICI PER LA VALUTAZIONE DEGLI ADDITIVI
NELL'ALIMENTAZIONE DEGLI ANIMALI
CONSIDERAZIONI GENERALI
Le presenti linee direttrici rappresentano una guida per la
costituzione dei fascicoli concernenti le sostanze potenzialmente
ammissibili come additivi negli alimenti per animali. Tali fascicoli
devono permettere di valutare gli additivi in base alle conoscenze
del momento e di accertare che essi rispondano ai principi
fondamentali cui è subordinata la loro ammissione, a norma
dell'articolo 7, paragrafo 2, della direttiva 70/524/CEE.
Tutti gli studi indicati in questo documento concernente le linee
direttrici e, del caso, anche informazioni supplementari potranno
essere richiesti. In linea di massima, dovranno essere forniti i
risultati degli studi intesi a stabilire l'identità, le condizioni
di impiego, le proprietà fisico-chimiche, i metodi di controllo e
l'efficacia dell'additivo nonchè il suo metabolismo e i suoi effetti
biologici e tossicologici sulle specie bersaglio. Se l'additivo è
destinato a una particolare categoria di animali appartenenti a una
data specie, gli studi devono essere effettuati su questa categoria
bersaglio. Gli studi necessari alla valutazione dei rischi per la
salute umana e per l'ambiente dipenderanno essenzialmente dalla
natura dell'additivo e dalle circostanze del suo impiego. Sotto
questo profilo, non preverrà alcuna regola rigorosa.
Non sarà sempre necessario sottoporre gli additivi destinati
esclusivamente agli alimenti per animali domestici ad un complesso di
prove tanto complete sulla tossicità cronica, sulle proprietà
mutagene e cancerogene quanto quelle imposte per gli additivi
destinati all'alimentazione degli animali da reddito, da cui vengono
ottenuti prodotti destinati al consumo umano. Per determinare la
tossicità cronica sono generalmente sufficienti studi della durata
di un anno effettuati su due specie bersaglio oppure su una specie
bersaglio e il ratto. In genere si può fare a meno di procedere a
studi sulle proprietà mutagene e cancerogene quando non vi sia
alcuna indicazione di mutazioni, in base alla composizione chimica,
alle esperienze nell'utilizzazione o altro. Si può soprassedere
alla determinazione dei residui nel caso degli animali familiari.
È di fondamentale importanza conoscere il metabolismo dell'additivo
nell'organismo degli animali da reddito nonchè i residui e la
relativa biodisponibilità. Questa conoscenza deve consentire di
stabilire in special modo la portata degli studi tossicologici da
effettuare su animali da laboratorio al fine di valutare gli
eventuali rischi per il consumatore. Questa valutazione non potrà in
alcun caso basarsi su dati limitati all'azione diretta dell'additivo
sull'animale da laboratorio. Questi non permetterebbero di ottenere
alcuna informazione specifica sugli effetti reali residui del
metabolismo nelle specie alle quali è destinato l'additivo.
Qualsiasi domanda di autorizzazione di un additivo o di un nuovo
impiego di un additivo dovrà essere accompagnata da un fascicolo nel
quale devono figurare relazioni perticolareggiate, presentate
nell'ordine e secondo la numerazione proposta nelle presenti linee
direttrici. La mancanza nel fascicolo di uno qualsiasi degli esami
previsti dovrà essere motivata. Le pubblicazioni citate a titolo di
riferimento saranno allegate al fascicolo. Le relazioni concernenti
le sperimentazioni devono includere il programma, il numero di
riferimento, la data dell'inzio e della fine della sperimentazione,
la descrizione particolareggiata delle prove, i loro risultati e
effetti nonchè il nome, l'indirizzo e la firma del responsabile
dello studio. Ogni partita di alimenti utilizzati negli studi
sperimentali deve essere analizzata con un metodo adeguato per
rilevarne la concentrazione di principi attivi e deve essere
presentata una relazione contenente i relativi risultati. La
relazione deve inoltre indicare i singoli dosaggi determinati in
ciascuno studio sperimentale, le date corrispondenti, il nome,
l'indirizzo e la firma della persona responsabile dei controlli.
Inoltre, alle relazioni dev'essere allegato un certificato, redatto
dai laboratori che hanno effettuato gli esperimenti, in cui sia
specificato che le prove sono state condotte secondo i principi di
buona prassi di laboratorio, conformemente alle disposizioni della
direttiva 87/18/CEE del Consiglio, del 18 dicembre 1986, concernente
il ravvicinamento delle disposizioni legislative, regolamentari ed
amministrative relative al'applicazione dei principi di buone prassi
di laboratorio e al controllo della loro applicazione per le prove
sulle sostanze chimiche(1).
Per la determinazione delle proprietà fisico-chimiche,
tossicologiche ed ecotossicologiche dovranno essere utilizzati i
metodi stabiliti dalla direttiva 67/548/CEE del Consiglio, del 27
giugno 1967, concernente il ravvicinamento delle disposizioni
legislative, regolamentari ed amministrative relative alla
classificazione, all'imballaggio e all'etichettatura delle sostanze
(2), modificata da ultimo dalla direttiva 93/105/CE della Commissione
(3), o altri metodi internazionalmente riconosciuti negli ambienti
scientifici. L'impiego di altri metodi dovrà essere giustificato.
______________
(1) GU n. L 15 del 17.1.1987, pag. 29.
(2) GU n. L 196 del 16.8.1967, pag. 1.
(3) GU n. L 294 del 30.11.1993, pag. 21.
In ogni fascicolo figurerà un riassunto adeguato. Ai fascicoli
concernenti gli antibiotici, i coccidiostatici e le altre sostanze
medicamentose, i fattori di crescita, i microorganismi e/o i
preparati enzimatici, sarà inoltre necessario allegare una
monografia conforme al modello che figura nel capitolo V e tale da
consentire di identificare e caratterizzare l'additivo considerato,
in conformità delle disposizioni di cui all'articolo 8, paragrafo 1,
della direttiva 70/524/CEE.
In queste linee direttrici, il termine "additivo" si riferisce ai
principi attivi o alle preparazioni contenenti principi attivi, nello
stato in cui questi ultimi saranno incorporati nelle premiscele e
negli alimenti per animali. Un principio attivo può essere
costituito da una sostanza chimicamente specificata, da un
microorganismo o da un preparato enzimatico.
Per "sostanze chimicamente specificate" si intendono qui sostanze
chimiche di cui è stata concordata la denominazione chimica secondo
la nomenclatura IUPAC.
Qualsiasi modifica del procedimento di frabbricazione, della
composizione di un additivo, delle condizioni e dei settori d'impiego
del medesimo dovrà essere notificata con sollecitudine alla
Commissione dallo Stato membro che le ha presentato il fascicolo.
Potrà inoltre essere richiesta la presentazione di un'opportuna
documentazione per una nuova valutazione. Queste condizioni dovranno
essere rispettate in special modo per i prodotti ricavati da
microorganismi di cui sia stato modificato il patrimonio genetico o
da mutanti naturali.
SOMMARIO
CAPITOLO I: Riepilogo dei dati del fascicolo
CAPITOLO II: Identità, caratteristiche e condizioni d'impiego
dell'additivo - Metodi di controllo
CAPITOLO III: Studi sull'efficacia dell'additivo
1. Studi concernenti il miglioramento delle
caratteristiche degli alimenti per animali
2. Studi concernenti gli effetti sulla produzione
animale
3. Studi sulla qualità dei prodotti di origine
animale
CAPITOLO IV: Studi concernenti la sicurezza dell'impiego
dell'additivo
1. Studi sulle specie bersaglio
1.1. Studi tossicologici dell'additivo
1.2. Studi microbiologici dell'additivo
1.3. Studi del metabolismo e dei residui
2. Studi dei residui escreti
3. Studi su animali da laboratorio
CAPITOLO V: Modello di monografia
CAPITOLO I
RIEPILOGO DEI DATI DEL FASCICOLO
CAPITOLO II
IDENTITÀ, CARATTERISTICHE E CONDIZIONI D'IMPIEGO DELL'ADDITIVO -
METODI DI CONTROLLO
1. Identità dell'additivo
1.1. Denominazioni commerciali previste per la commercializzazione.
1.2. Tipo di additivo in base all'azione principale.
1.3. Composizione qualitativa e quantitativa (principio attivo,
altri componenti, impurita').
1.4. Stato fisico, dimensione delle particelle.
1.5. Procedimento di fabbricazione. Eventuali trattamenti
specifici.
N.B. Se il principio attivo è costituito da una miscela di
vari componenti attivi ciascuno dei quali chiaramente
definibili, occorre descrivere separatamente i principali
componenti e indicare le loro proporzioni nella miscela.
2. Specificazioni concernenti il principio attivo
2.1. Per le sostanze chimicamente specificate: denominazione
generica, denominazione chimica secondo la nomenclatura IUPAC,
altre denominazioni generiche ed abbreviazioni internazionali.
Numero CAS (Chemical Abstracts Service Number).
Per i microorganismi: denominazione o descrizione tassonomica
secondo i codici internazionali di nomenclatura. Possono
essere utilizzati anche altri manuali di sistematica
riconosciuti internazionalmente (1).
Per i preparati enzimatici: denominazione secondo le
principali attività enzimatiche come descritte dalle
nomenclature IUB/IUPAC e dai numeri EINECS/CAS.
2.2. Formula grezza e formula di struttura, peso molecolare. Se si
tratta di prodotti di fermentazione, composizione qualitativa
e quantitativa e dei principali elementi.
Per i microorganismi: nome e luogo della raccolta delle
colture (una delle quali possibilmente nella CE), luogo e
numero di deposito del ceppo, modificazione genetica e tutte e
le proprietà atte alla sua identificazione. Inoltre: origine,
opportune caratteristiche morfologiche e fisiologiche, fasi di
sviluppo, eventuali fattori rilevanti per la sua attività
biologica (come additivo) ed altri elementi genetici di
identificazione. Numero di colonie formanti unità (CFU) per
grammo.
Per i preparati enzimatici: origine biologica (nel caso di
origine microbica: nome e luogo della raccolta delle colture,
una delle quali possibilmente nella CE, in cui è depositata
la fonte microbica e il numero di deposito della stessa, la
modificazione genetica e tutte le proprietà ette alla sua
identificazione, ivi incluso il supporto genetico), attività
nei confronti dei pertinenti substrati del modello
chimicamente puro, altre caratteristiche fisico-chimiche.
2.3. Grado di purezza
Composizione qualitativa e quantitativa delle impurità.
Per i microorganismi: stabilità genetica e purezza dei ceppi
coltivati.
Per i preparati enzimatici:
- purezza, mediante controllo del livello dei microorganismi
contaminanti, metalli pesanti, assenza di tossine derivate
dell'organismo d'origine (micotossine), evidenziati con
metodo adeguato;
- assenza di attività antimicrobica a livello della
concentrazione negli alimenti determinata secondo un metodo
adeguato;
- composizione dei componenti non enzimatici (soprattutto i
solidi organici totali, TOS) (2).
2.4. Proprietà specifiche
Per le sostanze chimicamente specificate: proprietà
elettrostatiche, punto di fusione, punto di ebollizione,
temperatura di decomposizione, densità, tensione di vapore,
solubilità nell'acqua e nei solventi organici, spettri di
massa e di assorbimento e altre proprietà fisiche pertinenti.
______________
(1) Ad esempio: Bergey's "Manual of Systematic Bacteriology", The
Yeats, a taxonomic study" di Lodder e Kreger van Rij; "Ainsworth
and Bisby's Dictionary of the Fungi" di Hawksworth, Sutton e
Ainsworth; "The Genus Aspergillus" di Raper e Fennell.
(2) TOS (%) = 100 - (% di ceneri + % di acqua + % di diluenti e/o
additivi e ingredienti).
Per i microorganismi: proprietà specifiche per quanto
riguarda l'identificazione e l'impiego proposto (ad esempio,
forma vegetativa o trasformata in spore, CFU/g).
Per i preparati enzimatici: valori di pH ottimali, temperature
ottimali e altre proprietà pertinenti.
2.5. Procedimenti di fabbricazione e di purificazione; terreni
utilizzati
Variazione della composizione dei lotti nel corso della
produzione.
3. Proprietà fisico-chimiche, tecnologiche e biologiche
dell'additivo
3.1. Stabilità (per i microorganismi: perdita di attività
biologica, ad esempio vatalita') rispetto alle condizioni
ambientali (luce, temperature pH, umidità e ossigeno). Durata
di conservazione.
3.2. Stabilità (per i microorganismi: perdita di attività
biologica, ad esempio vitalita') durante la preparazione le
premiscele e di alimenti; in particolare, stabilità rispetto
al calore, alla pressione e all'umidità. Eventuali prodotti
di decomposizione.
3.3. Stabilità (per i microorganismi: perdita di attività
biologica, ad esempio vitalita') durante la conservazione
delle premiscele e degli alimenti. Durata di conservazione.
Per i preparati enzimatici: particolari sulla presenza
imprevista di prodotti di reazioni formatisi o per reazione
enzimatica o per reazione chimica del preparato enzimatico con
costituenti dei mangimi oppure per degradazione della
preparazione enzimatica durante la conservazione del mangime.
3.4. Altre proprietà fisico-chimiche, tecnologiche o biologiche
quali, ad esempio, attitudine all'omogeneizzazione nelle
premiscele e negli alimenti, proprietà circa la formazione di
polveri nonchè, per quanto riguarda i microorganismi e/o i
preparati enzimatici, valutazione della resistenza e
degradazione o perdita di attività biologica nel tubo
digerente o da parte di sistemi di simulazione in vitro.
3.5. Incompatibilità o interazioni fisico-chimiche o biologiche
(ad esempio, con alimenti, con altri additivi autorizzati o
con prodotti medicinali).
4. Condizioni di impiego dell'additivo
4.1. Impieghi proposti nell'alimentazione animale (specie o
categoria animale, tipo di alimento per animali, periodi di
utilizzazione e di sospensione della somministrazione, ecc.).
4.2. Controindicazioni.
4.3. Dosaggio proposto nelle premiscele e negli alimenti espresso
in:
- percentuale ponderale del principio attivo per le premiscele
e in mg/kg per gli alimenti, nel caso di sostanze
chimicamente specificate,
- adeguate unità di attività biologica come, ad esempio, CFU
per grammo di prodotto per i microorganismi oppure in
adeguate unità di attività per preparati enzimatici.
4.4. Altri impieghi noti del principio attivo o del preparato (ad
esempio, nei prodotti alimentari, in medicina umana o
veterinaria, in agricoltura e nell'industria). Per ogni
impiego occorre indicare le denominazioni commerciali, le
indicazioni e le controindicazioni del prodotto.
4.5. Se necessario, misure di prevenzione dei rischi e mezzi di
protezione durante la fabbricazione e la manipolazione.
5. Metodi di controllo.
5.1. Descrizione dei metodi utilizzati per stabilire i criteri
enunciati ai punti 1.3, 2.3, 2.4, 2.5, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, e
4.3.
5.2. Descrizione dei metodi di analisi qualitativa e quantitativa
per il controllo ordinario dell'additivo nelle premiscele e
negli alimenti.
5.3. Descrizione dei metodi di analisi qualitativa e quantitativa
per l'individuazione dei residui degli additivi nei prodotti
di origine animale.
N.B. La descrizione di questi metodi e i risultati saranno
accompagnati da indicazioni sui tassi di recupero, sulla
specificità, sulla sensibilità, sui limiti di
rivelabilità, sulle eventuali interferenze, sulla
riproducibilità e sui metodi di prelievo dei campioni.
Dovranno inoltre essere indicati i campioni di
riferimento del preparato e del principio attivo.
Per i microorganismi, indicare i metodi di rivelazione, di
conteggio e di identificazione nonchè i marcatori.
CAPITOLO III
STUDI SULL'EFFICACIA DELL'ADDITIVO
1. Studi concernenti il miglioramento delle caratteristiche degli
alimenti per animali
Questi studi riguardano gli additivi tecnologici come gli
antiossidanti, i conservativi, leganti, gli emulsionanti, gli
stabilizzanti e i gelificanti, ecc. destinati a migliorare o a
stabilizzare le caratteristiche delle premiscele e dei
mangimi. Certi microorganismi e/o preparati enzimatici
possono essere considerati additivi tecnologici se essi
migliorano importanti caratteristiche alimentari.
Occorre dimostrare l'efficacia dell'additivo mediante criteri
opportuni nelle condizioni d'impiego previste, in confronto a
mangimi senza additivi ed, eventualmente, a mangimi contenenti
additivi tecnologici di efficacia nota.
Per ogni studio occorrerà indicare la natura esatta dei
principi attivi, dei preparati, delle premiscele e dei mangimi
esaminati, il numero di riferimento dei lotti, la
concentrazione dei principi attivi nelle premiscele e nei
mangimi, le condizioni delle prove (ad esempio, temperatura ed
umidita') nonchè le date e la durata delle prove, gli effetti
contrari e negativi riscontrati nel corso delle prove.
2. Studi concernenti gli effetti sulla produzione animale
Questi studi riguardano gli additivi zootecnici che hanno
effetti sulla produzione animale. Gli studi indicati qui di
seguito, ivi inclusi quelli sul rapporto dose/risposta,
dovranno essere effettuati su ciascuna specie bersaglio
facendo una comparazione con gruppi di animali di riferimento
ed eventualmente con gruppi di animali alimentati con prodotti
contenenti additivi di efficacia nota.
Se il principio attivo è una miscela di componenti attivi,
occorre motivare la presenza di ciascun componente.
2.1. Per i coccidiostatici e le altre sostanze medicamentose è di
primaria importanza porre in evidenza gli effetti specifici e,
in particolare, le proprietà profilattiche (ad esempio, la
morbilità, il conteggio delle oocisti e il quadro delle
lesioni). Inoltre possono essere aggiunte informazioni
concernenti gli effetti sull'efficacia alimentare, sulla
crescita degli animali nonchè sulla quantità
commercializzabile e sulla qualità della produzione animale.
2.2. Per altri additivi zootecnici (ivi inclusi, se del caso, i
microorganismi e/o i preparati enzimatici) occorre fornire
informazioni circa gli effetti sull'efficacia nutrizionale,
sulla crescita degli animali, sulle caratteristiche e sulla
resa dei prodotti animali, sul benessere degli animali e su
altri parametri che hanno un'influenza positiva sulla
produzione animale.
2.3. Condizioni sperimentali
Descrivere dettagliatamente e singolarmente le prove
effettuate e i relativi risultati ottenuti. Riportare la
valutazione statistica e i metodi impiegati. Fornire inoltre
le seguenti informazioni:
2.3.1. specie, razza, età e sesso degli animali e metodo di
identificazione dei medesimi;
2.3.2. numero di gruppi sottoposti a prova e dei gruppi di
riferimento; numero di animali di ciascun gruppo; per entrambi
i sessi dovrà essere scelto un numero statisticamente
sufficiente di animali;
2.3.3. concentrazione del principio attivo (e delle eventuali
sostanze utilizzate per comparazione) nei mangimi, ottenuta
mediante analisi di controllo, con l'adeguato metodo
riconosciuto; numero di riferimento dei lotti; composizione
nutrizionale della razione giornaliera in termini qualitativi
e quantitativi;
2.3.4. luogo di ciascuna prova; stato sanitario degli animali,
condizioni fisiologiche, di alimentazione e di allevamento
secondo le pratiche in uso nella Comunità; controllo
dell'alimentazione e misure prese per evitare la
contaminazione dei gruppi di riferimento durante gli
esperimenti (soprattutto, per quanto riguarda i
microorganismi, tramite contaminazione crociata degli alimenti
dovuta a microorganismi);
2.3.5. date e durata esatta delle prove; date e natura degli esami
effettuati;
2.3.6. effetti contrari e altri inconvenienti verificatisi nel corso
delle prove ed il momento della loro comparsa.
3. Studi sulla qualità dei prodotti di origine animale
Studi delle proprietà organolettiche, nutrizionali, igieniche
e tecnologiche dei prodotti ottenuti da animali alimentati con
mangimi contenenti l'additivo.
CAPITOLO IV
STUDI CONCERNENTI LA SICUREZZA DELL'IMPIEGO DELL'ADDITIVO
Gli studi elencati in questo capitolo sono destinati a valutare:
- la sicurezza dell'impiego dell'additivo per le specie bersaglio;
- i rischi di inalazione o da altro contatto con mucose, occhi o
pelle per le persone che dovranno manipolare l'additivo tal quale o
incorporato nelle premiscele o negli alimenti;
- i rischi per il consumatore che possono derivare dal consumo di
prodotti alimentari contenenti residui dell'additivo o suoi
metaboliti;
- i rischi di inquinamento dell'ambiente o di persistenza in esso
dovuti all'additivo stesso o ai prodotti da esso derivati ed
escreti dagli animali;
- gli eventuali rischi per le specie non bersaglio.
Questi studi saranno obbligatori in tutto o in parte, in funzione
della natura dell'additivo e delle condizioni d'impiego proposte.
Di norma, i microorganismi e/o i preparati enzimatici devono essere o
essere ottenuti da microorganismi non patogeni e non tossigeni per le
specie bersaglio e/o per l'uomo nelle condizioni previste di
utilizzazione.
Nel caso di microorganismi e/o preparati enzimatici devono essere
eseguiti test adeguati sulla sicurezza oppure dev'essere presentata
una documentazione soddisfacente sulle precauzioni che vengono prese
ai fini della sicurezza. Per i microorganismi dev'essere eseguita
almeno una prova di tolleranza sulle specie bersaglio.
Per gli enzimi ottenuti da parti commestibili di animali o di piante
non sono necessarie normalmente prove tossicologiche; per certe parti
che generalmente non vengono considerate come rientranti di norma
nella dieta, possono essere necessarie prove tossicologiche.
Se il principio attivo è chimicamente specificato la conoscenza del
suo metabolismo nelle varie specie bersaglio nonchè della
composizione e della biodisponibilità dei suoi residui tissutali
sarà di fondamentale importanza per definire la portata degli studi
sugli animali da laboratorio che sono necessari per valutare i rischi
per il consumatore. Inoltre, la conoscenza della composizione e delle
proprietà fisico-chimiche e biologiche dei prodotti escreti
provenienti dall'additivo sarà indispensabile per stabilire
l'entità e l'estensione degli studi destinati a valutare i rischi di
inquinamento o di persistenza nell'ambiente.
1. Studi sulle specie bersaglio
1.1. Studi tossicologici dell'additivo.
Prove di tolleranza.
Studio degli effetti biologici, tossicologici, macro e
microscopici. Determinazione del margine di sicurezza fra la
dose massima proposta e la dose che provoca effetti contrari.
Qualora sia dimostrato che quest'ultima supera ampiamente la
dose massima proposta, si potrà indicare un valore minimo o
approssimativo del margine di sicurezza.
1.2. Studi microbiologici dell'additivo
1.2.1. Se il principio attivo è chimicamente specificato e presenta
attività antimicrobica al livello delle concentrazioni
utilizzate negli alimenti, occorre presentare studi dello
spettro d'azione antibatterica dell'additivo tramite
accertamento della concentrazione minima di inibizione (MIC)
in specie batteriche patogene e non patogene Gram-negative e
Gram-positive.
1.2.2. Studi della resistenza crociata ad antibiotici terapeutici
tramite accertamento della concentrazione minima di inibizione
in mutanti prodotti in vitro che presentano resistenza
cromosomica all'additivo.
Nel caso di microorganismi resistenti ad antibiotici
terapeutici, deve essere specificato il supporto genetico di
tale resistenza.
1.2.3. Studi volti ad accertare se l'additivo è in grado di
selezionare fattori di resistenza. Questi studi vanno svolti
in condizioni naturali sulle specie animali cui l'additivo è
in primo luogo destinato. Va inoltre accertato se i fattori di
resistenza eventualmente rilevati hanno una resistenza
multipla e se sono trasmissibili.
1.2.4. Studi volti a determinare l'effetto dell'additivo:
- sulla microflora del tratto digestivo;
- sulla colonizzazione del tratto digestivo, qualora sia un
microorganismo o una miscela di più ceppi di
microorganismi;
- sul riassorbimento o sull'escrezione di microorganismi
patogeni, qualora il principio attivo presenti attività
antimicrobica.
1.2.5. Se il principio attivo presenta un'azione antimicrobica, studi
sul campo volti a controllare la percentuale di batteri
resistenti all'additivo. Questi studi vanno svolti ad
intervalli abbastanza lunghi, prima, durante e dopo (un mese)
la somministrazione dell'additivo.
1.2.6. Se il principio attivo è un microorganismo, occorre
determinare se è resistente ad antibiotici.
1.2.7. Se il principio attivo (ad esempio preparati enzimatici) è
ottenuto da microorganismi occorre determinare il livello
dell'organismo produttore vitale.
1.2.8. Se l'additivo è costituito da o contiene un microorganismo
geneticamente modificato ai sensi dell'articolo 2, punti 1) e
2), della direttiva 90/220/CEE, occorre presentare quanto
segue:
- copia di ogni consenso scritto delle autorità competenti per
l'emissione deliberata nell'ambiente di organismi
geneticamente modificati per scopi di ricerca e sviluppo,
conformemente all'articolo 6, paragrafo 4, della direttiva
90/220/CEE, unitamente alla sintesi della notifica di cui
all'articolo 9 della suddetta direttiva, conforme al modello
di cui alla decisione 91/596/CEE del Consiglio (1);
- il fascicolo tecnico completo contenente le informazioni di
cui all'allegato II della direttiva 90/220/CEE integrate, se
del caso, con dati che tengono conto della diversità dei
luoghi di utilizzazione dell'additivo ed informazioni sui
risultati ottenuti da emissioni per scopi di ricerca e
sviluppo sugli ecosistemi su cui potrebbe influire
l'utilizzazione dell'additivo nonchè una valutazione dei
rischi per la salute umana, degli animali e per l'ambiente
connessi con gli OGM contenuti nel prodotto, ivi incluse
informazioni, ottenute dalla fase di ricerca e sviluppo,
sull'impatto dell'emissione per la salute umana e per
l'ambiente;
- le condizioni di commercializzazione dell'additivo, ivi
incluse le condizioni specifiche di utilizzazione e di
manipolazione, nonchè la proposta di etichettatura e di
imballaggio che deve essere quanto meno conforme ai
requisiti di cui all'allegato III della direttiva
90/220/CEE.
Se in base ad emissioni notificate ai sensi della parte B della
direttiva 90/220/CEE o a motivi scientifici validi il
responsabile del fascicolo ritiene che l'immissione sul
mercato o l'utilizzazione dell'additivo non presenti rischi
per la salute umana, degli animali e per l'ambiente, egli può
proporre di derogare ad uno o più dei requisiti dell'allegato
III, parte B.
Devono essere incluse informazioni sui dati o sui risultati di
emissioni dello stesso OGM o della stessa combinazione di OGM
notificate precedentemente o contestualmente e/o effettuate
dal responsabile del fascicolo all'interno o al di fuori della
Comunità.
Possono essere inoltre riportati dati o risultati relativi a
notifiche presentate da altra persona purchè quest'ultima ne
abbia data autorizzazione scritta.
1.3. Studi del metabolismo e dei residui (2) (3) (qualora il
principio attivo sia chimicamente specificato)
1.3.1. Studio del metabolismo:
- bilancio metabolico: tasso ed entità di assorbimento e di
eliminazione del principio attivo;
- identificazione delle vie metaboliche e dei principali
metaboliti;
- distribuzione ed escrezione (biliare, urinaria, fecale) dei
metaboliti;
- se del caso, incidenza della microflora intestinale o
ruminale, del ciclo enteroepatico, della cecotrofia sul
metabolismo.
1.3.2. Studi analitici dei residui: composizione qualitativa e
quantitativa dei residui (principio attivo, metaboliti) nei
vari prodotti animali all'equilibrio metabolico e in
condizioni pratiche di impiego dell'additivo.
_____________
(1) GU n. L 322 del 23.11.1991, pag. 1.
(2) Gli studi di cui ai punti 1.3.1, 1.3.3 e 1.3.4 verranno eseguiti
utilizzando molecole marcate o applicando altri metodi adeguati;
in ogni caso, occorrerà motivare la scelta del metodo applicato.
La marcatura deve essere adeguata all'obiettivo perseguito.
(3) Se il principio attivo è ottenuto per fermentazione, questi
studi devono essere estesi alle sostanze connesse ottenute dal
processo di produzione.
1.3.3. Studio cinetico dei residui (dopo somministrazione ripetuta
dell'additivo nelle condizioni d'impiego proposte):
persistenza del principio attivo e dei principali metaboliti
nei vari organi e tessuti dopo sospensione della
somministrazione dell'alimento contenente l'additivo.
1.3.4. Studio della biodisponibilità dei residui nei prodotti di
origine animale (cfr. 3.7).
1.3.5. Metodi di controllo: descrizione dei metodi di determinazione
qualitativa e quantitativa utilizzati negli studi di cui ai
punti da 1.3.1 a 1.3.4 con indicazione del tasso di recupero,
della specificità e dei limiti di rivelazione. I metodi di
analisi dei residui devono essere sufficientemente sensibili
per consentire di rivelare i residui a livelli
tossicologicamente trascurabili.
2. Studio sui residui escreti (qualora il principio attivo sia
chimicamente specificato)
2.1. Natura e concentrazione dei residui derivati dall'additivo
(principio attivo, metaboliti) negli escrementi.
2.2. Persistenza (emivita) e cinetica dell'eliminazione di questi
residui nei liquami, nei letami e nelle lettiere.
2.3. Effetti sulla metanogenesi.
2.4. Degradazione, persistenza (emivita) e cinetica
dell'eliminazione nei suoli (tipi di suoli differenti).
2.5. Effetti sulla fauna del suolo e sui processi microbici di
trasformazione (ad esempio, decomposizione dei residui
vegetali e animali).
2.6. Effetti sui vegetali terrestri (germinazione delle sementi,
crescita delle piante e assorbimento da parte delle piante).
Questi studi vanno effettuati in serra e all'aperto su varie
specie vegetali.
2.7. Solubilità e stabilità nell'acqua dei prodotti derivati
dall'additivo (principio attivo, metaboliti).
2.8. Effetti sulla vita acquatica
2.8.1. Effetti sulla flora (ad esempio Chlorella).
2.8.2. Tossicità sugli invertebrati (ad esempio, Daphnia magna).
2.8.3. Tossicità sui pesci (almeno due specie selvatiche fra quelle
presenti nel territorio della Comunita').
3. Studi su animali da laboratorio
Questi studi dovranno essere effettuati sul principio attivo e
sui suoi principali metaboliti o prodotti se questi sono pure
presenti nei prodotti alimentari di origine animale e se sono
biodisponibili. Per quanto possibile, si dovrà cercare di
scegliere animali da laboratorio che prevedibilmente
digeriscono e metabolizzano l'additivo in modo analogo
all'uomo e alle specie bersaglio.
Occorrerà fornire una descrizione esauriente delle prove
effettuate precisando le specie e i ceppi degli animali
utilizzati, le dimensioni ed il numero dei gruppi sottoposti
alla sperimentazione e dei gruppi di controllo, le dosi
somministrate, la composizione del regime alimentare e i
risultati delle analisi degli alimenti, le condizioni di
allevamento, la durata esatta delle prove, le date
dell'esecuzione delle varie prove e la mortalità. Dovranno
essere descritti in modo particolareggiato gli eventi
macroscopici patologici ed istopatologici osservati in tutti
gli animali sottoposti alle prove nonchè il momento
dell'apparizione di tutte le lesioni patologiche. Tutti i
risultati dovranno essere illustrati in modo dettagliato ed
essere accompagnati da una valutazione statistica.
3.1. Tossicità acuta (non pertinente per i microorganismi)
3.1.1. Dovranno essere effettuati studi sulla tossicità acuta per
via orale su due specie animali, una delle quali dovrà essere
preferibilmente il ratto. La dose massima non dovrebbe
superare 2 000 mg/kg di peso corporeo. Saranno riferiti gli
esiti di osservazioni particolareggiate sugli effetti
biologici nel corso di un periodo di almeno due settimane dopo
l'ingestione. Questi studi non riguardano i preparati
enzimatici.
3.1.2. Saranno effettuati studi sulla tossicità acuta per inalazione
e sul potere irritante per la cute e, se necessario, per le
mucose nonchè sul potenziale allergogeno procedendo a prove
adeguate che consentano di valutare gli eventuali rischi
connessi con la manipolazione dell'additivo.
3.2. Carattere mutageno
3.2.1. Qualora il principio attivo sia chimicamente specificato.
Per identificare i principi attivi o i loro metaboliti o
prodotti con proprietà mutagene si dovranno effettuare prove
combinaae e selettive di mutagenesi basate su differenti punti
genetici terminali. Queste prove dovranno essere effettuate
per l'attivazione metabolica in presenza e in assenza di un
preparato microsomico di mammiferi.
Si raccomanda di procedere alla seguente serie di prove:
a) test di mutazione genetica in un sistema procariota,
b) test di mutazione genetica in un sistema eucariota in vitro
o prova del recessivo letale collegato al sesso nella
Drosophila melanogaster,
c) test di aberrazione cromosomica in vitro e in vivo.
La serie di prove indicate più sopra non implica tuttavia che
altre prove, in particolare prove in vivo, siano inadeguate o
che altre prove ancora siano accettabili in via alternativa.
Dovranno comunque essere indicati i motivi della scelta di una
determinata prova. Le prove dovranno essere effettuate
conformemente alle procedure comprovate e consolidate. A
seconda dei risultati ottenuti e tenuto conto dello spettro di
tossicità della sostanza nonchè del suo uso previsto,
potranno essere oppurtuni altri ulteriori esami.
3.2.2. Per i preparati enzimatici ottenuti da microorganismi occorre,
di norma, procedere ai seguenti test:
a) test di mutazione genetica nei batteri,
b) test di aberrazione cromosomica (preferibilmente in vitro).
Se possibile, il test tossicologico dev'essere effettuato su
un lotto ottenuto dal prodotto finale di fermentazione
purificato, prima dell'aggiunta di trasportatori, diluenti, o
altre sostanze.
In generale le prove devono essere effettuate conformemente a
linee direttrici stabilite (1) da parte di istituzioni
internazionali riconosciute, sebbene potrebbero rivelarsi
necessarie alcune variazioni dei protocolli relativi alle
prove standard a causa degli effetti prodotti, a livello
cellulare, dalla natura proteica e/o dalle attività
enzimatiche di certi preparati enzimatici, soprattutto nel
caso di prove in vitro. Tali variazioni potranno essere
accettabili se debitamente motivate.
Il sistema di test è concepito in modo di evidenziare
reazioni tossiche imprecisate ed effetti genotossici.
L'insieme dei dati ottenuti (specificazione delle
caratteristiche generali e questa serie di test) consente di
valutare il prodotto per la presenza di tossine specifiche ben
note e di composti tossici non noti.
Il rapporto tossicologico dovrà essere corredato da una
documentazione soddisfacente secondo cui le prove sono state
eseguite sul materiale che costituisce la base del prodotto
commerciale come indicato nel fascicolo.
3.3 Aspetti farmacocinetici
Qualora il principio attivo sia chimicamente specificato
occorrerà procedere a studi del bilancio metabolico e
all'identificazione dei metaboliti utilizzando molecole
opportunamente marcate o applicando altre tecniche adeguate
dopo somministrazione di dosi singole e multiple del principio
attivo per adeguati periodi di tempo. Gli studi del
metabolismo devono comprendere quelli sugli aspetti
farmacocinetici del principio attivo e dei principali
metaboliti. Per la scelta della specie più adatta su cui
effettuare le ricerche tossicologiche ulteriori si terra conto
delle differenze di metabolizzazione del principio attivo tra
le varie specie.
3.4. Tossicità subcronica
Di norma, queste prove verranno effettuate su due specie
animali, una delle quali sarà preferibilmente il ratto. La
seconda specie potrà essere, in taluni casi, una specie
bersaglio. La sostanza potrà essere somministrata per via
orale e si dovrà inoltre definire il rapporto tra dose e
risposta. La durata della prova su roditori dovrà essere di
almeno novanta giorni.
In alcuni casi saranno auspicabili studi della durata di sei
mesi - due anni su altri animali diversi dai roditori per
stabilire la variazione di sensibilità di specie animali
differenti nei confronti della sostanza.
Questi studi non riguardano i mocroorganismi; nel caso di
preparati enzimatici ottenuti da microorganismi può essere
sufficiente una prova di tossicità per via orale di novanta
giorni su una specie di roditori.
3.5. Tossicità cronica/potere cancerogeno
Gli studi sulla tossicità cronica saranno effettuati su una
specie appartenente all'ordine dei roditori (preferibilmente
il ratto) mentre quelli sul potere cancerogeno saranno
effettuati, di preferenza, su due specie di roditori. La
sostanza sarà somministrata per via orale a differenti
dosaggi. È inoltre possibile procedere ad uno studio
associato sulla tossicità cronica e sul potere cancerogeno
con esposizione in utero. La durata degli esperimenti sarà
almeno di ventiquattro mesi nel ratto e di diciotto mesi nel
topo. Se il test viene proseguito oltre i succitati periodi
minimi, esso sara considerato concluso quando il numero di
animali sopravvissuti di ciascun gruppo. fatta eccezione per
quello cui è stata somministrata la dose piu elevata, sarà
ridotto al 20%.
______________
(1) Quali:
- presentazione di una domanda di valutazione di un additivo
alimentare ai fini della sua autorizzazione, 1989
(ISBN92-826-0135-B)
- relazione del comitato scientifico dell'alimentazione umana
sulle linee direttrici per la valutazione degli additivi
alimentari ai fini della loro sicurezza, 1980. Decima serie
(EUR 6892).
Esami completi clinico-chimici, ematologici e delle urine
saranno effettuati ad intervalli appropriati nel corso del
test. Dovranno inoltre essere effettuati esami completi macro
e microscopici su tutti gli animali morti durante il test e su
quelli sopravvissuti al termine dello stesso.
Questi studi non riguardano i microorganismi e i preparati
enzimatici.
3.6. Tossicità sulla funzione riproduttiva (qualora il principio
attivo sia chimicamente specificato)
Gli studi riguardanti la riproduzione saranno effettuati
preferibilmente sul ratto e si estenderanno su almeno due
generazioni di linea diretta; essi potranno essere associati a
studi di embriotossicità, ivi compresa la teratogenesi.
Dovranno essere osservati e descritti, con particolare
attenzione, tutti i principali parametri concernenti la
fertilità, la gestazione, il parto e i periodi perinatale e
post-natale.
Dovranno essere effettuati studi di teratogenesi sul almeno
due specie adeguate.
3.7. Tossicologia dei metaboliti (qualora il principio attivo sia
chimicamente specificato)
Occorre fornire dati per poter calcolare la concentrazione di
residui, quale base per una valutazione dei rischi per l'uomo.
Devono essere forniti dati di base per il calcolo del periodo
proposto di sospensione della somministrazione. Gli studi
indicati al punto 1.3.4 devono essere effettuati su animali da
laboratorio.
3.8. Altri studi specifici
Potrà essere presentato qualsiasi alto studio specifico che
fornisca informazioni supplementari utili ai fini della
valutazione della sostanza in questione (ad esempio, studi di
biodisponibilità, di neurotossicità o di immunotossicita').
CAPITOLO V
MODELLO DI MONOGRAFIA
1. Identità dell'additivo
1.1. Denominazioni commerciali proposte.
1.2. Tipo di additivo in base alla sua funzione principale.
1.3. Composizione qualitativa e quantitativa (principio attivo,
altri componenti, impurita').
1.4. Stato fisico, dimensione delle particelle.
1.5. Eventuale trattamento specifico di fabbricazione.
N.B.: Se il principio attivo è una miscela di componenti
attivi, ciascuno di essi deve essere chiaramente
definibile, i principali componenti dovranno essere
descritti separatamente e dovranno essere indicate le
rispettive percentuali nella miscela.
2. Specificazioni concernenti il principio attivo
2.1. Per le sostanze chimicamente specificate: denominazione
generica, denominazione chimica secondo la nomenclatura IUPAC,
altre denominazioni generiche internazionali; abbreviazioni.
Numero CAS (Chemical Abstacts Service Number).
Per i microorganismi: denominazione e descrizione tassonomica
secondo i codici di nomenclatura internazionali. Possono
essere utilizzati anche altri manuali di sistematica
riconosciuti a livello internazionale (1).
Per i preparati enzimatici: denominazione in base alle
principali attività enzimatiche descritte dalle nomenclature
IUB/IUPAC e dai numeri EINECS/CAS.
2.2. Formula grezza e formula di struttura, peso molecolare. Se il
principio attivo è un prodotto di fermentazione, composizione
qualitativa e quantitativa dei principali componenti.
Per i microorganismi: nome e luogo di raccolta delle colture,
una delle quali possibilmente nel territorio della Comunità,
luogo e numero di deposito del ceppo, modificazione genetica e
tutte le proprietà atte alla sua identificazione.
Per i preparati enzimatici: origine biologica (in caso di
origine microbica: nome e luogo di raccolta delle colture, una
delle quali possibilmente raccolta nella CE, luogo di deposito
del ceppo e relativo numero di deposito, modificazione
genetica nonchè tutte le caratteristiche atte alla sua
identificazione), attività nei confronti di pertinenti
substrati modello chimicamente puri e altre caratteristiche
fisico-chimiche.
2.3. Grado di purezza
Composizione qualitativa e quantitativa delle impurità.
Per i microorganismi: stabilità genetica e purezza dei ceppi
coltivati.
Per i preparati enzimatici:
- purezza (mediante controllo del livello dei microorganismi
contaminati, metalli pesanti, assenza di tossine
(micotossine) rilevanti per l'organismo d'origine
evidenziati con metodo adeguato);
______________
(1) Ad esempio Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. "The
Yeasts, a taxonomic study " di Lodder e Kreger van Rij:
"Ainsworth and Bisby's Dictionary of the Fungi" di Hawksworth
Sutton e Aiusworth; "The Henus Aspergillus" di Raper e Fennell.
- assenza di attività antimicrobica a livello della
concentrazione negli alimenti determinata secondo un metodo
adeguato;
- composizione dei componenti non enzimatici (soprattutto i
solidi organici totali TOS).
2.4. Proprietà specifiche
Per le sostanze chimicamente specificati: proprietà
elettrostatiche, punto di fusione, punto di ebollizione,
temperatura di decomposizione, densità, pressione di vapore,
solubilità in acqua in solventi organici, spettri di massa e
di assorbimento ed altre proprietà fisiche pertinenti.
Per i microorganismi: proprietà atte all'identificazione e
impiego proposto (ad esempio, forma vegetativa o trasformata
in spore CFU/g).
Per i preparati enzimatici: valori di pH ottimali, temperature
ottimali e altre proprietà adeguate.
3. Proprietà fisico-chimiche, tecnologiche e biologiche
dell'additivo
3.1. Stabilità (per i mocroorganismi: perdita di attività
biologica, ed esempio vitalita') rispetto alle condizioni
ambientali quali, ad esempio luce, temperatura, pH, umidità e
ossigeno. Durata di conservazione.
3.2. Stabilità (per i mocroorganismi: perdita di attività
biologica, ad esempio vitalita') durante la preparazione di
premiscele e di alimenti, in particolare rispetto al calore,
alla pressione e all'umidità. Eventuali prodotti di
decomposizione.
3.3. Stabilità (per i microorganismi: perdita di attività
biologica, ad esempio vitalita') durante l'immagazzinamento di
premiscele e di alimenti in condizioni determinate. Durata di
conservazione.
3.4. Altre proprietà fisico-chimiche, tecnologiche o biologiche
quali, ad esempio, attitudine all'omogeneizzazione nelle
premiscele e negli alimenti, tendenza alla formazione di
polveri; per i microorganismi e/o preparati enzimatici:
valutazione della resistenza alla degradazione o perdita di
attività biologica nel tubo digerente o da parte di sistemi
di simulazione in vitro.
3.5. Incompatibilità o interazioni fisico-chimiche o biologiche
(ad esempio con alimenti, altri additivi autorizzati o
prodotti medicinali).
4. Metodi di controllo
4.1. Descrizione dei metodi applicati per determinare i criteri di
cui ai punti 1.2, 2.3, 2.4, 3.1, 3.2, 3.3, e 3.4 del presente
capitolo.
4.2. Descrizione dei metodi analitici qualitativi e quantitativi di
determinazione dei residui degli additivi nei prodotti di
origine animale.
4.3. Se i succitati metodi sono stati pubblicati, occorre allegarne
copia con indicazione dei riferimenti bibliografici.
5. Proprietà biologiche dell'additivo
5.1. Per i coccidiostatici ed altre sostanze medicamentose, occorre
precisare i loro effetti profilattici (ad esempio, morbilità,
conteggio delle oocisti e quadro delle lesioni).
5.2. Per gli additivi zootecnici diversi da quelli elencati al
punto 5.1, ivi inclusi, se del caso, i microorganismi e/o i
preparati enzimatici precisazioni circa gli effetti
sull'efficacia nutrizionale, sulla crescita degli animali,
sulle caratteristiche e sulla resa dei prodotti di origine
animale, sul benessere degli animali nonchè altri parametri
con incidenza positiva sulla produzione animale.
5.3. Eventuali controindicazioni o avvertenze, comprese le
incompatibilità biologiche, con indicazioni delle relative
motivazioni.
6. Indicazione della qualità e della quantità dei residui
eventuali rinvenuti nei prodotti di origine animale nelle
condizioni di impiego previsto dell'additivo.
7. Altre caratteristiche per l'identificazione dell'additivo.