Serie Generale n. 211 del 10-9-2012
SUPPLEMENTI ORDINARI
MINISTERO DELLA SALUTE
MINISTERO DELLA SALUTE
PROVVEDIMENTO 13 luglio 2012
Ordinanza 4 agosto 2011 «Norme sanitarie in materia di encefalomielite equina di tipo West Nile (West Nile Disease) e attivita' di sorveglianza sul territorio nazionale». Modifica Allegato A «Procedure operative di intervento e flussi informativi nell'ambito del Piano di sorveglianza nazionale per l'encefalomielite di tipo West Nile - Anno 2012». (12A09654) (GU Serie Generale n.211 del 10-09-2012 - Suppl. Ordinario n. 184)

IL DIRETTORE GENERALE
della sanità animale e dei farmaci veterinari

Visto il testo unico delle leggi sanitarie approvato con regio
decreto 27 luglio 1934, n. 1265, e successive modifiche;
Visto il regolamento di polizia veterinaria approvato con decreto
del Presidente della Repubblica 8 febbraio 1954, n. 320;
Visto l'art. 32 della legge 23 dicembre 1978, n. 833;
Visto l'art. 117 del decreto legislativo 31 marzo 1998, n. 112 e
successive modificazioni;
Visto il decreto del Presidente della Repubblica 11 febbraio 1994,
n. 243, regolamento recante attuazione della direttiva 90/426/CEE
relativa alle condizioni di polizia sanitaria che disciplinano i
movimenti e le importazioni di equini di provenienza da Paesi terzi,
con le modifiche apportate dalla direttiva 92/36/CEE;
Visto il decreto ministeriale 29 novembre 2007 recante approvazione
del Piano di sorveglianza nazionale per la encefalomielite di tipo
West Nile (West Nile Disease) pubblicato nella Gazzetta Ufficiale
della Repubblica italiana n. 36 del 12 febbraio 2008;
Vista l'ordinanza 4 agosto 2011 recante «Norme sanitarie in materia
di encefalomielite equina di tipo West Nile (West Nile Disease) e
attività di sorveglianza sul territorio nazionale», pubblicata nella
Gazzetta Ufficiale della Repubblica italiana n. 209 dell'8 settembre
2011, in particolare l'art. 2;
Rilevato che sulla base della situazione epidemiologica rilevata
nel corso del 2011 è necessario aggiornare le unità geografiche di
riferimento per ciascuna provincia inclusa sia nell'Area a
circolazione virale (ACV) sia nell'Area di sorveglianza esterna (AS)
nonchè rivedere gli obiettivi del Piano tenuto conto della
diffusione della malattia in aree diverse da quelle già interessate
a partire dal 2008;
Sentito il Centro di Referenza Nazionale per le malattie esotiche
presso l'Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo e del
Molise «G. Caporale»;
Sentite le Regioni e le Province autonome;

Dispone:

1. In conformità a quanto previsto al comma 2, art. 2
dell'Ordinanza 4 agosto 2011, è resa operativa, per l'anno 2012, sul
territorio nazionale l'esecuzione delle «Procedure operative di
intervento e flussi informativi nell'ambito del Piano di sorveglianza
nazionale per la Encefalomielite di tipo West Nile (West Nile
Disease)» di cui all'allegato A del presente dispositivo.
2. In conformità a quanto previsto dal comma 3, art. 2
dell'Ordinanza 4 agosto 2011, l'allegato A dell'ordinanza 4 agosto
2011 è sostituito dall'allegato A al presente dispositivo.
3. Il presente atto è inviato alla Gazzetta Ufficiale della
Repubblica italiana per la sua pubblicazione.
Il presente provvedimento è inviato alla Corte conti per la
registrazione.
Roma, 13 luglio 2012

Il direttore generale: Ferri

Registrato alla Corte dei conti il 27 agosto 2012
Ufficio di controllo sugli atti del MIUR, MIBAC, Min. Salute e Min.
Lavoro, registro n. 12, foglio n. 88

Allegato

WEST NILE DISEASE


Procedure operative di intervento e flussi informativi nell'ambito
del Piano di sorveglianza nazionale per la Encefalomielite di tipo
West Nile (West Nile Disease) 2012

1. - INTRODUZIONE
Le procedure operative di intervento e i flussi informativi
descritti nel presente documento per l'anno 2012 sono adottate
nell'ambito del Piano di sorveglianza per la West Nile Disease (WND)
e, come per gli anni precedenti, hanno il fine di individuare il più
precocemente possibile la circolazione del virus West Nile (WNV) sia
nelle aree dove già si è avuta nel passato sia nelle restanti parti
del territorio nazionale.
Obiettivi.
1. Individuare precocemente la circolazione del WNV sul
territorio nazionale.
2. Verificare la circolazione virale nelle popolazioni di equidi
presenti sul territorio per individuare precocemente il passaggio del
virus dagli uccelli ai mammiferi.
3. Identificare il periodo a rischio per la trasmissione
vettoriale.
2. - CRITERI GENERALI PER LA SORVEGLIANZA DELLA WND
La sorveglianza nei confronti della WND si basa sulle seguenti
componenti:
1. Sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti a specie
bersaglio. In caso di mancato raggiungimento del 50% delle attività
previste, è possibile, in alternativa, attuare la sorveglianza su
allevamenti avicoli rurali o all'aperto o tramite il posizionamento
di gruppi di polli sentinella,
2. sorveglianza negli equidi,
3. sorveglianza entomologica,
4. sorveglianza sulla mortalità negli uccelli selvatici,
5. sorveglianza dell'avifauna migratoria.
Le modalità di attuazione delle diverse componenti differiscono
a seconda della situazione epidemiologica riscontrata.
Sono individuate 3 aree geografiche distinte:
A. area con circolazione virale (ACV) (Figura 1), il territorio
che è stato interessato dalla circolazione del WNV nel corso dei due
anni precedenti. L'elenco dei territori inclusi nell'ACV è riportato
in allegato I;
B. area di sorveglianza esterna alla ACV (AE), il territorio
dei Comuni compresi in un raggio di 20 km intorno ai casi
verificatisi nelle zone più esterne dell'ACV. Per le Regioni Emilia
Romagna, Veneto, Lazio, Umbria e Toscana (limitatamente all'area in
Provincia di Arezzo) è stato incluso nell'AE anche il territorio dei
comuni precedentemente inclusi in ACV e non interessati dalla
circolazione virale nel corso dei due anni precedenti (Figura 1).
Nelle Regioni Sardegna, Friuli Venezia Giulia l'AE comprende tutto il
territorio regionale non incluso nell'ACV. L'elenco dei territori
inclusi nell'AE è riportato in allegato II;
C. resto del territorio nazionale (aree a rischio - AR) (Figura
1):
ABRUZZO: Foce del fiume Vomano 42°39' N - 14°02' E
CAMPANIA: Serre Persano 40°33' N - 15°08 E
MARCHE: Sentina 43°28' N - 13°38' E
PIEMONTE: Garzaia di Marengo 44°49' N - 8°40' E
SICILIA: Oasi del Simeto 37°19 N - 14°55' E
TOSCANA: Padule di Fucecchio 43°49' N - 10°47' E
L'elenco dei Comuni inclusi nelle AR è riportato nell'allegato
III.
In Tabella 1 è riportata una sintesi delle attività previste
per ciascuna area.
3. - AREA CON CIRCOLAZIONE VIRALE (ACV)
Obiettivi della sorveglianza in ACV.
L'obiettivo principale delle azioni di sorveglianza da svolgere
in ACV è l'identificazione del periodo a rischio per la trasmissione
vettoriale, al fine di poter porre in essere tutte le misure
necessarie a ridurre il rischio d'infezione per l'uomo.
Inoltre, la comparsa del lineage II del WNV in alcune aree del
Veneto e del Friuli Venezia Giulia rende necessario, soprattutto in
queste aree, massimizzare le attività di sorveglianza virologica sui
vettori al fine di verificare e monitorare la possibile circolazione
congiunta dei due lineage.
3.1. Unità geografica di riferimento
Al fine di standardizzare opportunamente le attività di
sorveglianza nell'ambito dell'area, si considera come unità
geografica di riferimento il territorio avente una superficie
complessiva di circa 1200-1600 km². In tal modo, per le aree incluse
nell'ACV di ciascuna Provincia è possibile definire il numero di
unità geografiche di riferimento che essa include (Tabella 2). Ne
consegue che, ad esempio, se nel territorio incluso nell'ACV di una
Provincia il numero di unità geografiche da esso rappresentato è
pari a 0.5, il numero di unità campionarie previste dal presente
documento nell'ambito delle diverse azioni di sorveglianza per
ciascuna unità geografica di riferimento dovrà essere ridotto alla
metà (esempio: numero di siti di cattura entomologica = 2, numero di
siti di cattura effettivamente da attivare sul territorio incluso
nell'ACV della Provincia = 1), mentre, al contrario se il numero di
unità geografiche da esso rappresentato è pari a 1.5, il numero di
unità campionarie previste per ciascuna unità geografica di
riferimento dovrà essere aumentato della metà (esempio: numero di
siti cattura entomologica = 2, numero di siti di cattura
effettivamente da attivare sul territorio incluso nell'ACV della
Provincia = 3).
3.2. Sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti a specie
bersaglio
Per specie bersaglio si intende quel gruppo di specie recettive
al virus che, dal punto di vista gestionale, sono sottoposte a
controlli di popolazione in larga parte del loro areale di
distribuzione.
Appartengono alle specie bersaglio:
Gazza (Pica pica),
Cornacchia grigia (Corvus corone cornix),
Ghiandaia (Garrulus glandarius).
La sorveglianza ornitologica nelle ACV può essere effettuata su
richiesta delle Regioni, qualora si intenda verificare la possibile
assenza di circolazione virale nell'area.
Laddove sia dimostrata l'assenza di circolazione virale per due
anni consecutivi, l'area potrà essere rimossa da quelle comprese
nelle ACV.
Qualora le Regioni intendano verificare la possibile assenza di
circolazione virale, tali specie dovranno essere sottoposte a
campionamento. A tal fine le Autorità Competenti (Province, Enti
Parchi ecc.) potranno chiedere all'Istituto Superiore per la Ricerca
e la Protezione Ambientale (ISPRA) l'approvazione di specifici piani
di cattura qualora non previsti dalle normali attività di gestione
delle specie. Dovranno essere campionati almeno 100 esemplari per
unità geografica di riferimento durante il periodo Marzo-Novembre.
L'IZS competente invia idonei campioni di organo (cuore,
cervello, rene e milza) al Centro di Referenza Nazionale per le
Malattie Esotiche (CESME) per la diagnosi di WND. Per ogni specie
prelevata dovrà essere compilata una scheda W02 di accompagnamento.
In aggiunta agli organi sopra menzionati è possibile inviare al
CESME campioni di sangue/siero prelevati da tali specie di uccelli.
Per ogni specie prelevata dovrà essere compilata una scheda W02 di
accompagnamento.
Nel caso in cui ci fossero difficoltà a mettere in atto le
attività di cui al presente paragrafo, è possibile, in aggiunta
fare campionamenti su allevamenti rurali e all'aperto (vedi capitolo
4.3.1) o con il posizionamento di gruppi di animali sentinella (vedi
capitolo 4.3.2).
3.3. Sorveglianza entomologica
La sorveglianza entomologica ha l'obiettivo di identificare il
periodo nel corso del quale debbono essere poste in atto tutte le
misure atte a ridurre il rischio di contrarre l'infezione da parte
dell'uomo mediante la:
definizione del periodo a rischio per la trasmissione
vettoriale, mediante lo studio della dinamica dell'abbondanza dei
vettori,
definizione delle specie di zanzare responsabili della
trasmissione virale nel ciclo enzootico,
definizione delle specie di zanzare responsabili della
trasmissione virale agli equidi,
valutazione dell'overwintering delle zanzare e del virus nelle
specie di zanzare,
valutazione della precocità del rilievo del virus nelle
zanzare.
La sorveglianza entomologica è effettuata in almeno 2 aziende
per ciascuna unità geografica di riferimento.
La valutazione dell'overwintering e le catture invernali sono
importanti per definire la dinamica stagionale delle popolazioni di
culicidi nelle varie aree coinvolte. Ciò è fondamentale per
indirizzare la frequenza e la stagionalità dei controlli preventivi
su donatori di sangue e organi nel corso dell'anno nelle varie zone
d'Italia.
Le aziende scelte devono avere le seguenti caratteristiche:
aziende nelle quali nel corso dei precedenti anni sono stati
riscontrati casi clinici o sieroconversioni negli animali sentinella
o positività nei culicidi,
aziende situate in prossimità di aree umide e con un'elevata
concentrazione di avifauna selvatica.
Presso le aziende prescelte vengono installate:
1 trappola di tipo CO2-CDC,
1 trappola del tipo gravid trap,
1 trappola del tipo BG sentinel.
Le catture sono effettuate con cadenza mensile nel periodo da
luglio a febbraio dell'anno successivo, mentre da marzo a giugno
compresi saranno effettuate con cadenza quindicinale. La gravid trap
e la BG sentinel devono essere attive per due giorni e due notti
consecutive e le catture sono ritirate al termine delle due giornate.
La CO2-CDC deve essere attiva per due notti (dal crepuscolo alla
mattina successiva) di seguito e le catture sono ritirate al termine
di ogni notte di cattura.
Contestualmente alle catture eseguite con le trappole, devono
essere effettuate in ogni azienda catture di zanzare adulte tramite
aspirazione nei ricoveri degli animali.
Le azioni di sorveglianza entomologica dovranno essere
intensificate anche attraverso la rete degli Istituti Zooprofilattici
Sperimentali e mediante il coinvolgimento delle strutture che a
livello locale già si occupano in alcune Regioni del monitoraggio e
controllo della fauna culicidica.
I campioni dovranno essere inviati al CESME ed accompagnati dalla
scheda W05 pre-compilata nella parte anagrafica qualora si tratti di
aziende zootecniche (vedi le indicazioni contenute nel capitolo 9 del
presente documento).
3.4. Sorveglianza dell'avifauna selvatica delle specie migratorie
Durante il periodo delle migrazioni, uccelli migratori viremici
possono essere responsabili dell'introduzione del virus nelle aree di
sosta o in quelle di nidificazione. Le aree dove si vengono a
concentrare maggiormente questi animali sono le zone umide situate
lungo le rotte migratorie.
Per poter mettere in evidenza l'arrivo di uccelli viremici e
l'eventuale instaurarsi del ciclo silvestre, è utile predisporre un
sistema di controllo per individuare precocemente l'introduzione del
virus.
Le Regioni, pertanto, che intendano attivare la sorveglianza
sull'avifauna migratoria devono seguire le indicazioni di seguito
riportate.
Il programma di monitoraggio sull'avifauna selvatica prevede tre
campionamenti annuali da effettuare:
il primo durante il passo primaverile (marzo-aprile),
il secondo alla fine di agosto,
il terzo fra la metà e la fine di settembre.
Le catture di uccelli selvatici devono essere effettuate da
personale addestrato allo scopo (inanellatori) provvisto di patentino
di inanellamento di categoria A ed un veterinario debitamente
addestrato ad effettuare prelievi di sangue negli uccelli selvatici,
in collaborazione con gli agenti di Polizia Provinciale, gli Agenti
del C.F.S., l'Istituto Superiore per la Protezione e la Ricerca
Ambientale, il Ce.R.M.A.S. e le autorità locali.
Le specie da sottoporre a monitoraggio devono includere sia
passeriformi sia non passeriformi.
Il campione di sangue può essere prelevato da punti di repere
differenti: negli animali di piccole dimensioni (da piccoli
passeriformi fino a piccoli limicoli) il prelievo è consigliabile
dalla vena giugulare; per animali di maggiori dimensioni il prelievo
può essere fatto dalla vena brachiale dell'ala o dalla vena
metatarsale della zampa. La quantità di siero prelevabile è legata,
ovviamente, al peso dell'animale.
I campioni prelevati dovranno essere conservati alla temperatura
di +4° C ed inviati al CESME per gli esami di laboratorio. Si
raccomanda di inviare i campioni in idonee condizioni di
conservazione e nel più breve tempo possibile a causa della
esiguità del campione; per ogni specie di uccello prelevata va
compilata una scheda W06 di accompagnamento. I campioni inviati
dovranno essere accompagnati dalla scheda W06 debitamente compilata.
4. - AREA DI SORVEGLIANZA ESTERNA
Obiettivi della sorveglianza in AE.
Gli obiettivi delle azioni di sorveglianza in AE sono:
individuare precocemente la circolazione del virus sul
territorio nazionale,
verificare la circolazione virale nelle popolazioni di equidi e
nell'uomo,
verificare la persistenza e la possibile endemizzazione
dell'infezione anche al fine di salvaguardare la salute pubblica.
4.1. Unità geografica di riferimento
Al fine di standardizzare opportunamente le attività di
sorveglianza nell'ambito dell'area, si considera come unità
geografica di riferimento il territorio di uno o più Comuni e avente
una superficie complessiva di circa 1200-1600 km². In tal modo, per
le aree incluse nell'area di sorveglianza esterna di ciascuna
Provincia è possibile definire il numero di unità geografiche di
riferimento che essa include (Tabella 5). Per il calcolo del numero
di unità campionarie per il territorio incluso nell'area di
sorveglianza di ciascuna Provincia, ci si comporta come nel caso
dell'ACV (vedi capitolo 3.1 del presente documento).
4.2. Sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti a specie
bersaglio
La sorveglianza sulle specie di uccelli stanziali a appartenenti
a specie bersaglio avviene con le stesse modalità previste per l'ACV
nel capitolo 3.2. Tale tipo di attività, a differenza di quanto
previsto per l'ACV, non è da considerare facoltativa.
Nelle aree dove la sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti
a specie bersaglio non può essere attivata o si prevede che non
sarà in grado di raggiungere almeno il 50% dei controlli previsti,
occorre effettuare le attività previste in allevamenti avicoli
rurali e all'aperto (vedi capitolo 4.3.1) o, in alternativa, quelle
conseguenti al posizionamento di gruppi di animali sentinella (vedi
capitolo 4.3.2).
4.3. Sorveglianza nelle specie avicole
4.3.1. Sorveglianza in allevamenti avicoli rurali e all'aperto
Nelle aree dove la sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti
a specie bersaglio non può essere attivata o si prevede che non
sarà in grado di raggiungere almeno il 50% dei controlli previsti,
è possibile, in alternativa, controllare sierologicamente un
campione rappresentativo di allevamenti avicoli rurali o all'aperto,
inclusi gli allevamenti di selvaggina da penna.
Nella scelta delle aziende da campionare verranno privilegiati
gli allevamenti in possesso delle seguenti caratteristiche:
prossimità ad aree umide o comunque dove si registra
un'elevata concentrazione di avifauna selvatica, sia stanziale che di
passo,
allevamenti all'aperto,
allevamenti di selvaggina, aziende faunistico-venatorie e
agri-faunistiche.
Sulla base del numero delle aziende presenti nel territorio
incluso nell'AE di ciascuna provincia, il numero di allevamenti da
campionare è riportato in Tabella 3.
All'interno di ciascuno allevamento verranno sottoposti a
prelievo un numero di animali di età inferiore ai 6 mesi, come
riportato in Tabella 4.
Le attività di campionamento iniziano a marzo e terminano entro
la fine di novembre. I prelievi possono essere effettuati
contestualmente a quelli del piano di monitoraggio dell'influenza
aviaria.
Gli operatori, devono prelevare per ciascun animale 2 campioni di
sangue da porre in 2 provette: una senza anticoagulante e una con
EDTA (1) (minimo 2 ml di sangue per provetta da conservare a
temperatura di +4 °C).
I campioni, inviati al CESME, dovranno essere accompagnati dalla
scheda W01 già pre-compilata nella parte anagrafica (vedi le
indicazioni contenute nel capitolo 9 del presente documento).
Si considera positivo un animale che abbia dato esito positivo ad
un esame sierologico e/o virologico specifico per il virus della West
Nile.
In caso di positività ai test diagnostici di laboratorio, il
CESME comunica subito i risultati alla Direzione Generale della
Sanità Animale e del Farmaco Veterinario, al servizio veterinario
della Regione competente ed all'IZS che ne aveva fatto richiesta.
4.3.2. Sorveglianza attraverso il posizionamento di gruppi di animali
sentinella
Nelle aree dove la sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti
a specie bersaglio non può essere attivata o si prevede che non
sarà in grado di raggiungere almeno il 50% dei controlli previsti,
è possibile, in alternativa, utilizzare esemplari in gabbia di
specie avicole (polli o galline a fine carriera). Per ciascuna unità
geografica di riferimento devono essere selezionati 4 siti di
sorveglianza, dove posizionare, per ciascuno di essi, almeno 30
esemplari suddivisi in due gruppi di 15 animali ciascuno; è
preferibile, ove possibile, posizionare le sentinelle all'interno di
aziende zootecniche operanti nell'area di studio e poste
preferibilmente entro circa 800 m dalle aree di concentrazione
dell'avifauna e/o di zone umide (raccolte d'acqua dolce o salmastra
di qualunque tipo). Le sentinelle al primo prelievo devono risultare
negative nei confronti del virus della WND.
A partire dal 15 marzo e fino al 30 ottobre, devono essere
effettuati prelievi di sangue ogni 15 giorni, alternando i prelievi
sui due sottogruppi.
Gli operatori devono prelevare per ciascun animale 2 campioni di
sangue da porre in 2 provette: una senza anticoagulante e una con
EDTA (minimo 2 ml di sangue per provetta da conservare a temperatura
di +4 °C). I campioni inviati dovranno essere accompagnati dalla
scheda W01 pre-compilata nella parte anagrafica (vedi le indicazioni
contenute nel capitolo 9 del presente documento).
In caso di positività ai test diagnostici di laboratorio, il
CESME comunica subito i risultati alla Direzione Generale della
Sanità Animale e del Farmaco Veterinario, ai servizi veterinari
regionali della Regione ed all'IZS che ne aveva fatto richiesta.
4.4. Sorveglianza negli equidi
Considerata la difficoltà di trovare animali sieronegativi da
sottoporre a controllo come animali sentinella, le Regioni, di
concerto con il Ministero della salute e il CESME, possono attivare
un piano di controlli a campione sui sieri di equidi prelevati per
altri motivi (Anemia Infettiva equina, Morbo coitale maligno) volti
ad evidenziare fenomeni precoci d'infezione (evidenza sierologica di
anticorpi precoci [IgM] verso il WNV).
In tal caso dovranno essere campionati almeno 60 capi ogni 400
km² (utilizzando la ripartizione territoriale in celle utilizzata per
la sorveglianza della bluetongue).
Tali campioni dovranno essere inviati al CESME, per le opportune
indagini, accompagnati dalla scheda W03 pre-compilata nella parte
anagrafica scegliendo Motivo del prelievo [6]: «controllo a campione»
(vedi le indicazioni contenute nel capitolo 9 del presente
documento).
In caso di positività ai test diagnostici di laboratorio, il
CESME comunica subito alla Direzione Generale della Sanità Animale e
del Farmaco Veterinario, al servizio veterinario della Regione
competente ed al richiedente. In caso di positività verranno
eseguite le attività riportate nel Punto 8.2 del documento. Per le
definizioni di sospetto e di conferma si rimanda all'art. 1 dell'O.M.
4 agosto 2011 e successive modifiche.
Per quanto riguarda la sorveglianza clinica su casi sospetti di
encefalite si rimanda a quanto riportato nel capitolo 6 del presente
documento.
4.5. Sorveglianza entomologica
La sorveglianza entomologica nelle AE ha l'obiettivo principale
di valutare l'overwintering delle zanzare e la precocità del rilievo
del virus nelle specie di zanzare, qualora si verificasse la
circolazione del virus in tali zone. Ai fini della valutazione del
rischio, può essere svolta, in aggiunta alle attività sopra
esplicitate, anche quella relativa alla valutazione della densità
delle zanzare, con adattamenti locali da concertare di volta in volta
con il CESME, informandone il Ministero.
Contestualmente alle catture eseguite con le trappole, devono
essere effettuate in ogni azienda catture di zanzare adulte tramite
aspirazione nei ricoveri degli animali.
La sorveglianza entomologica è effettuata in 2 aziende per
ciascuna unità geografica di riferimento, in cui sia attiva la
sorveglianza sierologica sugli equini.
Presso le aziende prescelte saranno installate:
1 trappola di tipo CO2-CDC,
1 trappola del tipo BG sentinel.
Le catture sono effettuate con cadenza mensile nel corso di tutto
l'anno e seguendo le modalità descritte per l'ACV (vedi capitolo 3.2
del presente documento).
5. - AREE A RISCHIO
Gli obiettivi delle azioni di sorveglianza in AR sono:
individuare precocemente la circolazione del virus sul
territorio nazionale,
verificare la circolazione virale nelle popolazioni di equidi e
nell'uomo.
5.1. Unità geografica di riferimento
Nel caso delle aree di studio presenti sul territorio nazionale
ed elencate in Allegato III, al fine di semplificare l'esecuzione
delle attività di sorveglianza, si considera come unità geografica
di riferimento il territorio di ciascuna area di studio.
5.2. Sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti a specie
bersaglio
La sorveglianza sulle specie di uccelli stanziali appartenenti a
specie bersaglio avviene con le stesse modalità previste per l'ACV
nel capitolo 3.2. Tale tipo di attività, a differenza di quanto
previsto per l'ACV, non è da considerare facoltativa.
5.3. Sorveglianza nelle specie avicole
Il campionamento negli allevamenti avicoli rurali o all'aperto o,
in alternativa, la sorveglianza tramite il posizionamento di gruppi
di animali sentinella di specie aviarie è effettuata con le stesse
modalità descritte per l'AE (vedi capitolo 4.3 del presente
documento).
5.4. Sorveglianza negli equidi
La sorveglianza negli equidi è effettuata con le seguenti
modalita':
1. entro il 31 marzo di ciascun anno i Servizi Veterinari
dell'Aziende USL competenti selezionano 28 equidi per ciascuna unità
geografica di riferimento su cui effettuare il controllo sierologico
(animali sentinella);
2. I capi sentinella dovranno essere scelti nelle aziende in
modo tale da essere il più possibile rappresentativi dell'intero
territorio sotto sorveglianza.
Poichè l'obiettivo principale è di individuare l'inizio della
circolazione virale negli equidi per determinare il passaggio del
virus dagli uccelli ai mammiferi ed il rischio per l'uomo, è
opportuno utilizzare equidi stanziali (per i quali non si prevede
movimentazione durante il periodo dei controlli) oppure equidi per i
quali sia possibile escludere qualunque contatto precedente con il
virus (puledri di età &lt; = 6 mesi).
Le attività di campionamento iniziano ad aprile e terminano a
settembre; nel corso di tale periodo gli equidi vengono prelevati 3
volte, la prima all'inizio del periodo (aprile-maggio), la seconda
volta nell'ultima settimana di agosto, ed una terza nell'ultima
settimana di settembre. I prelievi possono essere effettuati
contestualmente a quelli del piano di sorveglianza nazionale
dell'anemia infettiva equina (O.M. 8 agosto 2010).
I prelievi devono essere effettuati sempre sugli stessi equidi. I
campioni inviati al CESME dovranno essere accompagnati dalla scheda
W03 pre-compilata nella parte anagrafica scegliendo Motivo del
prelievo [2]: «equidi sentinella» (vedi le indicazioni contenute nel
capitolo 9 del presente documento).
5.5. Sorveglianza entomologica
La sorveglianza nelle aree a rischio ha come obiettivo quello di
definire la composizione della fauna culicidica in tali aree.
Per ciascuna area di studio deve essere selezionata 1 azienda
sentinella, che può essere sia un'azienda equina sia un allevamento
avicolo all'aperto; l'azienda deve essere situata in prossimità di
zone umide e/o con un'elevata concentrazione di avifauna selvatica.
Presso l'azienda prescelta verranno installate:
1 trappola di tipo CO2-CDC,
1 trappola del tipo BG sentinel.
Le catture vengono effettuate con le stesse modalità descritte
per la zona ACV, una volta al mese a partire dalla fine di marzo fino
alla fine di ottobre. I campioni devono essere inviati al CESME
accompagnati dalla scheda W05. Per tutte le attività di cattura
entomologica descritte per le 3 diverse Aree, visionare l'Allegato V
esplicativo: «Modalità di cattura/gestione del campione
entomologico».
5.6. Sorveglianza dell'avifauna selvatica delle specie migratorie
La sorveglianza sulle specie di uccelli migratori avviene con le
stesse modalità previste per l'ACV nel capitolo 3.3.
6. - SORVEGLIANZA CLINICA NEGLI EQUIDI
La sorveglianza clinica negli Equidi si attua su tutto il
territorio nazionale. Tutti i casi di sintomatologia nervosa negli
Equidi devono essere notificati e sottoposti ad indagini approfondite
per escludere o confermare la WND, indipendentemente dall'area
geografica dove questi si manifestano.
Sintomi tipici della malattia negli equidi sono i seguenti:
movimenti in circolo,
debolezza arti posteriori,
incapacità a mantenere la stazione quadrupedale,
paralisi/paresi agli arti,
fascicolazioni muscolari,
deficit propriocettivi,
cecità,
ptosi labbro inferiore o paresi/paralisi dei muscoli labiali o
facciali,
digrignamento dei denti.
Nel caso di sospetta sintomatologia neurologica in Equidi, il
servizio veterinario dell'Azienda USL competente per territorio
provvede a darne immediata comunicazione alla Direzione Generale
della Sanità Animale e del Farmaco Veterinario ed al servizio
veterinario della Regione. Il servizio veterinario dell'Azienda USL
provvede altresì ad informare l'Istituto Zooprofilattico
Sperimentale competente per territorio e il CESME, e ad eseguire
prelievi di sangue sugli equidi che manifestano sintomatologia
clinica riferibile a WND. I campioni di sangue sono inviati
all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale di competenza con la
relativa scheda W03 - scegliendo come Motivo del prelievo [1]:
«equidi con sintomi clinici» - per il successivo inoltro al CESME.
Qualora il sospetto riguardi animali deceduti o soppressi in
seguito a sindrome neurologica, il servizio veterinario dell'Azienda
USL competente per territorio, in collaborazione con l'Istituto
Zooprofilattico Sperimentale competente per territorio effettua
l'esame anatomo-patologico ed il prelievo del cervello e del midollo
spinale, del cuore e della milza che devono essere inviati
immediatamente al CESME, in quantità idonea, perfettamente
confezionati e conservati, accompagnati dalla scheda W03 - Motivo del
prelievo [5]: «controllo su equidi deceduti/abbattuti» - debitamente
compilata.
In caso di positività ai test diagnostici di laboratorio, il
CESME comunica i risultati alla Direzione Generale della Sanità
Animale e del Farmaco Veterinario, ed al servizio veterinario della
Regione competente ed al richiedente.
In caso di positività confermata dagli esami di laboratorio
eseguiti dal CESME, il servizio veterinario dell'Azienda USL
provvederà ad eseguire prelievi di sangue sugli equidi presenti in
azienda con una numerosità campionaria riportata nella Tabella 4. I
campioni di sangue sono inviati all'Istituto Zooprofilattico
Sperimentale di competenza con la relativa scheda W03 - scegliendo
come Motivo del prelievo [4]: «controllo su equidi presenti nella
stessa azienda in cui si trova il caso confermato» - per il
successivo inoltro al CESME.
Per ciascun animale devono essere prelevati due campioni di
sangue da porre in due provette: una senza anticoagulante ed una con
EDTA (almeno 8 ml di sangue per provetta da conservare a temperatura
di +4 °C).
7. - SORVEGLIANZA SULLA MORTALITÀ NEGLI UCCELLI SELVATICI
La sorveglianza passiva sull'avifauna selvatica si effettua su
tutto il territorio nazionale e dovrà essere intensificata durante
il periodo di attività degli insetti vettori. La sorveglianza
passiva ha come scopo principiale l'individuazione precoce della
circolazione virale.
Ogni individuo trovato morto ed appartenete alle specie: Merlo
(Turdus merula), Storno (Sturnus vulgaris), Taccola (Corvus
monedula), Gazza (Pica pica), Ghiandaia (Garrulus glandarius),
Cornacchia grigia (Corvus corone cornix) e Tortora dal collare
orientale (Streptopelia decaocto) dovrà essere obbligatoriamente
raccolto ed inviato all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale
competente per territorio che, una volta effettuato l'esame
anatomo-patologico, invia i campioni di organo (cuore, cervello, rene
e milza) al CESME per la ricerca del virus. I campioni devono essere
inviati secondo le raccomandazioni indicate nella Circolare n. 3
dell'8 maggio 2003 e accompagnati dalle scheda W02 debitamente
compilata. Per ogni specie di uccello prelevata va compilata una
distinta scheda W02 di accompagnamento. Analogamente si dovrà
procedere in tutti gli episodi di mortalità anomala o di aumento
dell'incidenza della mortalità nell'avifauna selvatica segnalati per
ogni altra specie nelle aree di presenza e durante il periodo di
attività dei vettori.
8. - MISURE DA ADOTTARE IN CASO DI POSITIVITÀ
8.1. Positività in allevamenti avicoli rurali e all'aperto o in
gruppi di animali sentinella delle specie aviarie
In caso di positività confermate in soggetti di allevamenti
avicoli rurali o all'aperto, oppure in animali sentinella delle
specie aviarie, il servizio veterinario dell'Azienda USL, ricevuta la
comunicazione della conferma di positività, provvede ad abbattere
gli animali positivi ed ad inviarli, accompagnati dalla scheda W01,
all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale competente per territorio,
che provvede ad eseguire gli esami anatomo-patologici su tutti i
soggetti pervenuti e ad inviare subito al CESME i campioni di rene,
cuore, milza e cervello di tutti gli animali, contestualmente a copia
della scheda W01 (vedi le indicazioni contenute nel capitolo 9 del
presente documento).
Qualora la positività sia confermata anche dagli esami
virologici o di ricerca del genoma virale (PCR) negli organi, e nel
casi ci si trovi in aree diverse dalle ACV, il servizio veterinario
dell'Azienda USL competente per territorio provvede a:
effettuare catture esaustive dei culicidi presenti
nell'azienda,
sottoporre a prelievo di sangue e siero un numero
rappresentativo di animali presenti nell'azienda avicola,
sottoporre a prelievo un campione di equidi presenti nel raggio
di 4 km dall'allevamento avicolo o gruppo di animali sentinella con
esiti positivi. Il campione di animali da prelevare è calcolato
sulla base della Tabella 4. I campioni di sangue sono inviati
all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale di competenza con la
relativa scheda W03 - Motivo del prelievo [3]: «controllo a campione
su equidi stanziali presenti nelle aziende a 4 Km rispetto al
focolaio» - per il successivo inoltro al CESME.
8.2. Sieroconversione in equidi sentinella, positività diagnostica o
conferma di sospetto clinico
In caso di sieroconversione in equidi sentinella, di positività
diagnostica confermata (IgM e/o SN) o qualora un sospetto clinico sia
confermato dagli esami di laboratorio, il servizio veterinario
dell'Azienda USL, ricevuta la comunicazione della conferma di
positività, provvede a:
sottoporre a visita clinica tutti gli equidi presenti in
azienda,
effettuare un prelievo di sangue e siero in tutti gli equidi
presenti in azienda ed inviarlo al CESME. I campioni di sangue sono
inviati all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale di competenza con
la relativa scheda W03 - Motivo del prelievo [4]: «controllo su
equidi presenti nella stessa azienda in cui si trova il caso
confermato» - per il successivo inoltro al CESME;
effettuare catture esaustive dei culicidi presenti
nell'azienda.
Inoltre, nel caso ci si trovi in aree diverse dalle ACV, il
servizio veterinario dell'Azienda USL competente procede a:
sottoporre a prelievo un campione di equidi presenti nel raggio
di 4 km dall'allevamento di equidi con esiti positivi. Il campione di
animali da prelevare è calcolato sulla base della Tabella 4. I
campioni di sangue sono inviati all'Istituto Zooprofilattico
Sperimentale di competenza con la relativa scheda W03 - Motivo del
prelievo [3]: «controllo a campione su equidi stanziali presenti
nelle aziende a 4 Km rispetto al focolaio» - per il successivo
inoltro al CESME.
8.3. Altre evidenze di circolazione del virus West Nile
Ogni qual volta venga sospettata la circolazione del virus in un
territorio precedentemente non interessato dall'infezione, sulla base
degli esiti degli esami virologici o di ricerca del genoma virale in
culicidi e/o nell'avifauna, il servizio veterinario dell'Azienda USL
competente per territorio provvede a:
sottoporre a visita clinica tutti gli equidi presenti nel
raggio di 4 km dal sito in cui la positività è stata rilevata,
sottoporre a prelievo un campione di equidi presenti nel raggio
di 4 km dal sito in cui la positività è stata rilevata. Il campione
di animali da prelevare è calcolato sulla base della Tabella 4. I
campioni di sangue sono inviati all'Istituto Zooprofilattico
Sperimentale di competenza con la relativa scheda W03 - Motivo del
prelievo [3]: «controllo a campione su equidi stanziali presenti
nelle aziende a 4 Km rispetto al focolaio» - per il successivo
inoltro al CESME.
8.4. Controllo su altri animali
Nel caso di rilievo di circolazione virale nelle aree sottoposte
a sorveglianza, la Direzione Generale della Sanità Animale e del
Farmaco Veterinario, in collaborazione con il CESME ed i servizi
veterinari delle Regioni e delle ASL interessate, potrà caso per
caso, proporre l'esecuzione di controlli aggiuntivi anche su specie
animali diverse da quelle contemplate nei precedenti capitoli.
9. - REGISTRAZIONE DEI DATI E FLUSSI INFORMATIVI
Tutti i campioni prelevati per la diagnosi di WND vengono
analizzati dal CESME.
9.1. Allevamenti avicoli / gruppi di animali sentinella delle specie
aviarie
Per quanto riguarda gli allevamenti avicoli rurali o all'aperto,
questi debbono essere preventivamente registrati presso la BDN, anche
per il tramite del Sistema Informativo Veterinario
(http://sorveglianza.izs.it/emergenze/west_nile/caricamento_dati.htm)
.
Per quanto concerne i gruppi di animali sentinella delle specie
aviarie, nel caso in cui le sentinelle siano posizionate all'interno
di aziende zootecniche, il gruppo verrà identificato dallo stesso
codice aziendale attribuito all'azienda zootecnica ospitante e
registrato in BDN. In caso contrario il gruppo di sentinelle dovrà
comunque essere registrato in BDN come struttura sentinella
assegnandogli un codice aziendale.
A ciascun sottogruppo è attribuito un numero progressivo di
identificazione, da mantenere fisso per tutta la durata dei
controlli. Ogni singolo animale dovrà essere contraddistinto da un
numero univoco (per esempio utilizzando un anello da posizionare alla
zampa), che sarà utilizzato per tutta la durata del campionamento.
I campioni devono essere accompagnati dalla scheda W01
pre-compilata per tutti i dati anagrafici, che potrà essere stampata
dalla BDN anche per il tramite del sistema informativo nazionale.
9.2. Sorveglianza su uccelli stanziali appartenenti a specie
bersaglio
I campioni prelevati da uccelli appartenenti a specie bersaglio
ai sensi dei capitoli 3.2, 4.2 e 5.2 del presente documento devono
essere accompagnati dalla scheda W02 debitamente compilata.
9.3. Sorveglianza tramite equidi sentinella
Le informazioni relative agli allevamenti ed agli equidi
sentinella selezionati debbono essere preventivamente registrati in
BDN utilizzando come codice identificativo il microchip o il
passaporto.
I campioni devono essere accompagnati dalla scheda W03
pre-compilata per tutti i dati anagrafici, che potrà essere stampata
dalla BDN anche per il tramite del sistema informativo nazionale.
9.4. Controlli a campione su sieri di equidi prelevati per altri
motivi
Il Servizio Veterinario dell'ASL consegna i campioni di siero,
prelevati nell'ambito di altri piano di sorveglianza (Anemia
Infettiva, Morbo Coitale Maligno), all'Istituto Zooprofilattico
Sperimentale territorialmente competente che provvede ad inviarli al
CESME. I campioni devono essere accompagnati dalla scheda W03
pre-compilata per tutti i dati anagrafici. Tutti i capi prelevati
devono essere identificati con codice identificativo il microchip o
il passaporto.
9.5. Equidi - sorveglianza sindromica (sindromi neurologiche e equidi
deceduti o soppressi)
Il Servizio Veterinario dell'AUSL preleva, secondo le modalità
descritte nel capitolo 6 del presente documento, i campioni di siero,
sangue e organi nelle aziende equine dove si sono verificati casi
riferibili a WND. I campioni devono essere accompagnati dalla scheda
W03 e consegnati all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale
territorialmente competente che li invia al CESME.
9.6. Insetti
Il Servizio Veterinario dell'AUSL preleva, secondo le modalità
descritte nei capitoli 3.3, 4.5 e 5.5, i campioni di insetti nelle
aziende prescelte. I campioni devono essere accompagnati dalla scheda
W05 e consegnati all'Istituto Zooprofilattico Sperimentale
territorialmente competente che li invia al CESME.
9.7. Altre attività
Le Regioni interessate concordano con il CESME e con la Direzione
Generale della Sanità Animale e del Farmaco Veterinario le modalità
operative per l'attuazione delle seguenti attività di studio:
definizione del ruolo degli uccelli migratori: sorveglianza sugli
uccelli migratori per l'individuazione delle specie responsabili
dell'introduzione e dell'amplificazione del virus della West Nile,
studio entomologico: individuare le specie di zanzare
responsabili della trasmissione del WNV, sia nel ciclo epizootico che
enzootico della malattia, e la loro capacità di overwintering (del
vettore e del virus) nelle aree con circolazione virale,
studio su altre specie vertebrate: valutazione del sistema di
sorveglianza basato su animali sentinella come indicatore della
presenza dell'infezione.

(1) Non usare l'eparina come anticoagulante perchè interferisce con
la PCR

Tabelle


Parte di provvedimento in formato grafico

Allegato I


Parte di provvedimento in formato grafico

Allegato II


Parte di provvedimento in formato grafico

Allegato III


Parte di provvedimento in formato grafico

Allegato V

ALLEGATO V - MODALITÀ DI CATTURA / GESTIONE DEL CAMPIONE
ENTOMOLOGICO.

Linee guida per l'effettuazione delle catture entomologiche e
gestione del campione

Modalità di cattura:
CDC light-trap con CO2 :
è composta da un sistema di aspirazione costituito da un tubo
cilindrico alla cui sommità è posta una apertura tale da consentire
l'entrata alle zanzare. Nella parte opposta del tubo c'è una ventola
(per spingere le zanzare dentro la sacca sottostante) azionata da un
motorino elettrico a batterie (4 pile torcia).
È utilizzata per catturare esemplari adulti appartenenti a
differenti specie di Culicidi.
Preferibilmente deve essere posizionata ad 1mt e ½ di altezza, in
prossimità dei ricoveri degli animali presenti in azienda o dove gli
stessi stazionano più frequentemente.
La luce rappresenta l'attrattivo per la cattura delle specie
notturne, la CO2 (che può essere aggiunta alla CDC all'interno di
un thermos da appendere vicino al sito d'ingresso delle zanzare,
sostituendo il tappo con una garza) può essere utilizzata per le
catture notturne in aggiunta alla luce per potenziare il potere
attrattivo della trappola.
La trappola deve essere attivata (dal pomeriggio alla mattina
successiva, per due notti consecutive); le catture vengono ritirate
al termine di ogni notte (2 raccolte distinte).
Gravid trap:
è composta da un sistema di aspirazione (tubo cilindrico
dotato da una parte di ventola e dalla parte opposta di una retina
per la raccolta delle zanzare simile a quello della CDC light-trap)
che poggia su un catino al cui interno vi è dell'acqua stagnante
utilizzata come attrattivo (miscela composta da: acqua, lievito di
birra e fieno, il tutto lasciato a macerare per 1 o 2 giorni).
Viene usata per catturare le femmine gravide (soprattutto del
genere Culex) che, dovendo deporre le uova, si avvicinano all'acqua.
In questo modo è possibile collezionare femmine adulte che hanno
compiuto e digerito almeno un pasto di sangue, e potrebbero albergare
il virus nelle ghiandole salivari. Nel tardo pomeriggio sono
attrattive soprattutto per Culex spp., durante le ore mattutine
possono anche attrarre altre specie come Ochlerotatus spp. e Aedes
spp.
Preferibilmente deve essere posizionata in zone protette da
condizioni ambientali avverse (forte vento, sole diretto o pioggia
diretta) e in vicinanza dei ricoveri degli animali.
In questo caso la trappola deve rimanere attiva per due giorni e
due notti consecutive; le catture vengono ritirate al termine delle
due giornate (1 sola raccolta).
BG sentinel:
Trappola originariamente progettata per catturare la zanzara
responsabile della febbre gialla (Aedes aegypti), ma efficace anche
nei confronti di altre zanzare quali Aedes albopictus (zanzara
tigre).
Deve essere posizionata a terra e preferibilmente in vicinanza
dei ricoveri degli animali.
È dotata di un sistema di aspirazione e normalmente è usata in
combinazione con un attrattivo artificiale che simula il sudore umano
(combinazione di acido lattico, ammoniaca e altre sostanze
organiche). L'attrattivo viene inserito all'interno della trappola,
nell'apposito alloggiamento. La miscela di odori attrattivi che viene
emanata si diffonde nell'ambiente attraverso la garza che copre la
trappola. Al centro della garza si trova un'apertura che permette di
applicare un imbuto nero. In tal modo le zanzare vengono guidate nel
sacchetto di cattura situato sotto l'apertura.
La trappola deve essere attivata per due giorni e due notti
consecutive; le catture vengono ritirate o al termine dei due giorni
(1 unica raccolta).
Aspirazione.
Questo metodo è utilizzato per collezionare femmine adulte
ingorgate (cioè che hanno fatto il pasto di sangue e che cominciano
a digerirlo) all'interno dei siti di riposo (soprattutto lungo le
pareti/soffitti di box, di pollai o di ogni tipo di ricovero animale)
durante le prime ore della mattina.
Si può utilizzare un aspiratore a bocca o elettrico.
L'aspiratore a bocca è costituito essenzialmente da un tubo di
plexiglass di ~ 1,5 cm. Ø e di ~ 40 cm. di lunghezza collegato con un
tubo flessibile di gomma per l'aspirazione; tra i due viene posto
velo di tulle come filtro. Una volta catturate, le zanzare vengono
riposte in un bicchiere di carta/plastica chiuso superiormente con
del tulle fissato con un elastico e sul cui fondo è stato praticato
un foro tale da permettere l'inserimento del tubo dell'aspiratore: il
foro poi si può riempire con cotone o carta per impedire la fuga
delle zanzare.
Raccolte larvali.
Si possono effettuare in azienda e/o in focolai larvali(4) siti
in zone limitrofe all'azienda stessa.
Il campionamento va effettuato mediante un apposito «pescalarve»
standard (in alternativa anche contenitori di plastica, o mestoli)
montati su manici di lunghezza appropriata per prelevare l'acqua con
le larve dal focolaio. In presenza di raccolte d'acqua estese quali
stagni, impaludamenti, canali di bonifica, ecc. gli stadi acquatici
delle zanzare vanno cercati solamente lungo i bordi erbosi o in pozze
isolate dal corpo d'acqua principale. Usualmente solo le larve di 4
stadio (cioè quelle di maggiori dimensioni) sono utili per
l'identificazione di specie.
---
(4) È definito come focolaio larvale qualunque raccolta d'acqua
(naturale o artificiale, temporanea o perenne) nella quale vengano
rinvenute, anche sporadicamente, larve di zanzara (ad es. aree
allagate aperte, aree allagate boschive, stagni o pozze, rigagnoli e
ruscelli, canali d'irrigazione, vasche, abbeveratoi, canalette di
scolo e contenitori di varia natura.).
CATTURE IN CASO DI POSITIVITÀ
In caso di circolazione virale si devono effettuare, il più
rapidamente possibile dalla comunicazione della positività, delle
«catture esaustive» volte sia a determinare la composizione della
fauna Culicidica del posto, sia a ricercare il virus nelle zanzare,
per poter identificare le specie responsabili della trasmissione del
WNV.
Per il raggiungimento di quest'obiettivo si utilizzano le
seguenti tipologie cattura:
CDC light-trap con CO2,
Gravid trap
BG sentinel trap
Aspirazione
Catture larvali
È possibile anche utilizzare altre tipologie di cattura, che
vanno concordate con il CESME (ad esempio trappole ad esca come le
bird-baited traps).
GESTIONE DEL CAMPIONE
Gli adulti, uccisi per congelamento (-20 C° per pochi minuti),
vanno riposti in provette tipo Falcon, tra due strati di cotone
idrofilo non eccessivamente pigiato.
La provetta deve contenere per circa 1/4 del suo volume del gel
di silice o altro disseccante per evitare la formazione di muffe. I
due strati di cotone dovranno esser posti in maniera tale che i
campioni non si muovano durante la spedizione perdendo i caratteri
utili all'identificazione, ma senza che i due strati schiaccino i
campioni stessi.
Le larve prelevate devono essere poste in alcool etilico al 70%
in provette sufficientemente capienti, a chiusura ermetica.
In caso di catture in seguito a positività, le zanzare adulte
devono essere uccise preferibilmente a -80°C, o in alternativa
stordite/uccise a -20°C per pochi minuti, per evitare di uccidere
anche il virus eventualmente presente e compromettere l'isolamento
virale. I campioni devono poi essere conservati ed inviati
refrigerati (+4°C).
I campioni devono essere etichettati (tipo di trappola, luogo e
data) e accompagnati dalla scheda W05. Va utilizzata una scheda W05
per ogni data di cattura. Per data di cattura si intende la data
della mattina in cui si raccolgono gli insetti (es. trappola
BG-Sentinel accesa il 1° gennaio, insetti raccolti il 3 gennaio: data
cattura 3 gennaio).