Serie Generale n. 135 del 10-6-1988
SUPPLEMENTI ORDINARI
DECRETO DEL PRESIDENTE DELLA REPUBBLICA 17 maggio 1988, n. 192
Attuazione della direttiva CEE n. 84/319, concernente la ricerca delle trichine all'importazione dai Paesi terzi di carni fresche provenienti da animali domestici della specie suina, ai sensi dell'art. 15 della legge 16 aprile 1987, n. 183. (GU Serie Generale n.135 del 10-06-1988 - Suppl. Ordinario n. 50)
Nota: note: Entrata in vigore del decreto: 25/6/1988

IL PRESIDENTE DELLA REPUBBLICA
Visti gli articoli 76 e 87 della Costituzione;
Vista la legge 16 aprile 1987, n. 183, concernente il coordinamento
delle politiche comunitarie riguardanti l'appartenenza dell'Italia
alle Comunità europee e l'adeguamento dell'ordinamento interno agli
atti normativi comunitari;
Vista la direttiva CEE n. 84/319, relativa alla ricerca delle
trichine all'importazione dai Paesi terzi di carni fresche
provenienti da animali domestici della specie suina, indicata
nell'elenco B allegato alla legge 16 aprile 1987, n. 183;
Visto il decreto del Presidente della Repubblica 10 settembre 1982,
n. 889, attuativo della direttiva CEE n. 77/96;
Considerato che in data 23 dicembre 1987, ai termini dell'art. 15
della citata legge 16 aprile 1987, n. 183, che delega il Governo ad
emanare norme attuative delle direttive indicate nel predetto elenco
B, è stato inviato lo schema del presente provvedimento ai
Presidenti della Camera dei deputati e del Senato della Repubblica,
per gli adempimenti ivi previsti;
Vista la deliberazione del Consiglio dei Ministri, adottata nella
riunione del 6 maggio 1988;
Sulla proposta del Ministro per il coordinamento delle politiche
comunitarie, di concerto con i Ministri degli affari esteri, di
grazia e giustizia, del tesoro, dell'agricoltura e delle foreste,
dell'industria, del commercio e dell'artigianato, del commercio con
l'estero e della sanità;
E M A N A
il seguente decreto:
Art. 1.
1. L'allegato E del decreto del Presidente della Repubblica 10
settembre 1982, n. 889, è sostituito dall'allegato E unito al
presente decreto.
Il presente decreto, munito del sigillo dello Stato, sarà inserito
nella Raccolta ufficiale degli atti normativi della Repubblica
italiana. È fatto obbligo a chiunque spetti di osservarlo e di farlo
osservare.
Dato a Roma, addì 17 maggio 1988
COSSIGA
DE MITA, Presidente del Consiglio
dei Ministri
LA PERGOLA, Ministro per il
coordinamento delle politiche
comunitarie
ANDREOTTI, Ministro degli affari
esteri
VASSALLI, Ministro di grazia e
giustizia
AMATO, Ministro del tesoro
MANNINO, Ministro dell'agricoltura
e delle foreste
BATTAGLIA, Ministro dell'indutria,
del commercio e dell'artigianato
RUGGIERO, Ministro del commercio
con l'estero
DONAT CATTIN, Ministro della
sanità
Visto, il Guardasigilli: VASSALLI
Registrato alla Corte dei conti, addì 25 maggio 1988
Atti di Governo, registro n. 74, foglio n. 7

ALLEGATO E
Capitolo I
METODI DI RICERCA DELLE TRICHINE
I. Esame trichinoscopico
A) Attrezzatura.
Trichinoscopio a lampada incandescente con possiblità
d'ingrandimento a 50 e 80-100 volte.
Vetri compressori composti da due lastre di vetro che possono
essere compresse l'una sull'altra, una delle quali è divisa in zone
uguali; forbici curve, pinzetta, un coltello per tagliare i campioni,
piccoli contenitori numerati per il deposito dei campioni, un
contagocce, un bicchierino contenente acido acetico e uno contenente
potassa caustica per chiarificare eventuali calcificazioni o
ammollire la carne disseccata.
B) Prelievo dei campioni.
Quando la carcassa è intera, si prelevi un campione della
dimensione minima di una nocciola da entrambi i pilastri del
diaframma nella zona di transizione tra la parte muscolare e quella
tendinea.
Quando vi è un solo pilastro di diaframma, si deve prelevare un
campione di dimensione doppia. Qualora manchino i due pilastri di
diaframma, devono essere prelevati due campioni aventi circa la
dimensione di un nocciola nella parte del diaframma vicino alle coste
o allo sterno o dai muscoli linguali o dal massetere oppure dai
muscoli addominali.
Per le carni in pezzi: da ciascun pezzo tre campioni di muscoli
scheletrici, contenenti poco grasso, se possibile della dimensione di
una nocciola, e prelevati a dei punti diversi, per quanto possibile
presso alle ossa o ai tendini.
C) Procedura.
Da ciascuno dei campioni di cui sopra, l'analista deve tagliare,
nel caso di carcasse in cui esistono i due pilastri di diaframma, 7,
quindi complessivamente 14, e se esiste un solo pilastro di
diaframma, 14 pezzettini della dimensione di un chicco d'avena da
diverse parti, possibilmente nella zona intermedia tra muscolo e
tendine e comprimerli tra le lastre del vetro compressore in modo che
si possano leggere chiaramente, attraverso i preparati, i consueti
caratteri di stampa. Se la carne dei pezzi da esaminare è secca e
vecchia, i preparati devono essere immersi, prima della compressione,
per 10-20 minuti in una lisciva di potassa caustica diluita con il
volume doppio di acqua.
Se per il prelievo dei campioni, devono essere utilizzati nelle
carcasse la parte del diaframma vicino alle coste o allo sterno, i
muscoli linguali o il massetere oppure i muscoli addominali, da
ciascun campione si devono tagliare 14, e cioè complessivamente 28
pezzettini aventi la dimensione di un chicco d'avena.
Da ciascuno dei campioni prelevati dalle carni in pezzi, il
controllore delle trichine deve sezionare 4 pezzettini della
dimensione di un chicco d'avena, cioè complessivamente 12
pezzettini.
L'esame trichinoscopico deve svolgersi in modo che ciascun
preparato si possa esaminare lentamente e accuratamente. Se, nel
corso dell'analisi al trichinoscopio, si rilevano posti sospetti la
cui natura non può essere accertata, pure con il massimo
ingrandimento del trichinoscopio, bisogna procedere ad un esame al
microscopio.
L'esame al microscopio deve essere effettuato in modo che ciascun
preparato possa essere esaminato lentamente e accuratamente con un
ingrandimento di 30-40 volte.
In caso di dubbio, l'esame va proseguito con altri campioni e
preparati, se necessario, con ingrandimenti più forti, finchè si
ottiene lo schiarimento. Per l'esame trichinoscopico occorrono almeno
tre minuti.
Nell'utilizzazione dei campioni sostitutivi prelevati dalla parte
del diaframma vicina alle coste o allo sterno, dai muscoli linguali o
da massetere oppure dai muscoli addominali, l'esame trichinoscopico
deve durare almeno sei minuti.
Il tempo minimo fissato per l'esame non comprende il tempo
necessario per il prelievo dei campioni e l'approntamento dei
preparati.
L'analista non potrà esaminare al trichinoscopio generalmente
più di 840 pezzettini al giorno, eccezionalmente può arrivare a
1050.
II. Metodo della digestione artificiale
A) Attrezzatura e materiale.
1) Coltello per il prelievo dei campioni.
2) Piccoli recipienti chiudibili numerati per la conservazione
dei campioni, se del caso sino alla ripetizione dell'esame.
3) Stufa.
4) Imbuto di vetro da 2-3 litri con sostegno e tubo di gomma di
raccordo, pinze per staccare il tubo di raccordo.
5) Setaccio di plastica (diametro circa 18 cm, ampiezza delle
maglie circa 1 mm).
6) Garza.
7) Tubo a punta saldata.
8) Vaschetta.
9) Tritacarne.
10) Stereomicroscopio (da 15 a 40 ingrandimenti) con adeguata
illuminazione.
11) Il liquido di digestione ha la seguente composizione: 10 g di
pepsina (80 u/g FIP: Federation internationale de pharmacie), 5 ml di
HCL (almeno 37%), riempire con acqua corrente a 1 l.
B) Prelievo dei campioni.
1) Per le carcasse intere, prelevare un campione di almeno 20 g da
un pilastro di diaframma nella zona di transizione tra la parte
muscolare e la parte tendinea; qualora non esistano pilastri di
diaframma prelevare un campione della stessa dimensione dalla parte
di diaframma vicina alle coste o allo sterno o dalla lingua o dal
massetere oppure dai muscoli addominali.
2) Per le carni in pezzi: prelevare un campione d'almeno 20 g dai
muscoli scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile
vicino alle ossa o ai tendini.
C) Metodo.
Per l'esame di un campione collettivo prelevato da dieci suini, da
ciascun singolo campione (20 g) viene preso un campione di 10 g. I
rimanenti 10 g sono conservati per un eventuale esame isolato.
Dieci campioni di 10 g ciascuno vengono riuniti per un esame
collettivo, tritati in un tritacarne (diametro dei fori del disco
pari a 2 mm) e messi, senza premere, nel setaccio munito di una
garza. Il setaccio è sospeso in un imbuto collegato con un tubo di
gomma a punta saldata; l'imbuto è riempito con il liquido di
digestione fino alla copertura completa del materiale di analisi. Il
rapporto materiale di esame/liquido di digestione deve essere di
circa 1:20-1:30.
Dopo un'incubazione di 18-20 ore alla temperatura di 37-39 °C, il
tubo aguzzo viene staccato. Eliminare con cura il liquido a galla che
si trova nel tubo e raccogliere in una capsula il sedimento che è
accuratamente risciacquato. Individuare le trichine con uno
stereomicroscopio con ingrandimento di 20-40 volte.
In caso di esito positivo o incerto dell'esame di un campione
collettivo, si devono analizzare uno alla volta i corrispondenti
singoli campioni rimasti, con l'aggiunta di altri 20 g prelevati su
ciascun suino, o, nel caso in cui si tratta di carni in pezzi, con
l'aggiunta di altri 20 g prevalenti su ciascuno dei pezzi,
conformemente al capoverso B) sopracitato.
III. Metodo della digestione artificiale
su un insieme di prelievi
A) Attrezzatura e reattivi.
1) Coltello e pinzette per il prelievo dei campioni.
2) Tritacarne con fori del diametro di 2-3 mm.
3) Matraccio "Erlenmeyer" da 3000 ml, con tappo di gomma o ovatta.
4) Un imbuto separatore conico della capacità di 2000 ml.
5) Un supporto ordinario con base ad A, della lunghezza di circa
28 cm. e barra di 80 cm.
6) Un anello del diametro di circa 10-11 cm, da fissare al
supporto.
7) Una morsa a testa piana (23 x 40 mm), da fissare al supporto
mediante doppio attacco.
8) Un setaccio (ampiezza della maglia: 177 micron) con diametro
esterno di 11 cm, munito di reticella in ottone o in acciaio
inossidabile.
9) Un imbuto di diametro interno non inferiore a 12 cm.
10) Cilindri graduali da 100 ml.
11) Un stereomicroscopio (ingrandimento 15-40 volte) dotato di
adeguata illuminazione o un trichinoscopio con tavola orizzontale per
il compressore dotato di adeguata illuminazione.
12) Qualora venga impiegato il trichinoscopio: vaschetta per il
conteggio delle larve. Essa deve essere ricavata da piastre in
acrilico dello spessore di 3 mm con le seguenti caratteristiche:
a) il fondo della vaschetta: 180 x 40 mm suddiviso in quadri,
b) lati: 230 x 20 mm,
c) estremita': 40 x 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inseriti fra i due lati in
modo da formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità. Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-9
mm sul livello di base del quadro formato dalle estremità e dai
lati. Le varie parti vanno fissate con un adesivo adatto al
materiale.
13) Un certo numero di scatole di Petri del diametro di 9 cm
(qualora si impieghi lo stereomicroscopio) con quadrettatura da 10 x
10 mm sul fondo, tracciata con uno strumento appuntito.
14) Alcuni recipienti da 10 litri, da usare per la
decontaminazione con un trattamento quale la formalina
dell'apparecchiatura, e per il restante succo digestivo nei casi di
reperto positivo.
15) Acido cloridrico concentrato (37%).
16) Pepsina della forza di 1:10.000 NF (US National Formulary)
corrispondente a: 1:12.500 BP (British Pharmacopoea) corrispondente
a: 2.000 FIP (Federation Internationale de Pharmacie).
17) Una quantità di vassoi che possano raccogliere 50 campioni da
circa 2 g ciascuno.
18) Una bilancia che abbia un grado di precisione pari a 0,1 g.
B) Prelievo dei campioni.
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da
un pilastro di diaframma nella zona di transizione tra la parte
muscolare e la parte tendinea; qualora non esistano pilastri di
diaframma, prelevare un campione della stessa dimensione dalla parte
di diaframma vicina alle coste o allo sterno o dalla lingua o dal
massetere oppure dai muscoli addominali.
2. Per le carni in pezzi prelevare un campione di circa 2 g dai
muscoli scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile
vicino alle ossa o ai tendini.
C) Metodo.
1-a) Serie completa di campioni (100 campioni per volta).
Si asporta circa 1 g da ciascuno dei 100 campioni prelevati dai
suini. Il campione collettivo è tritato nel tritacarne.
La carne tritata viene introdotta nel matraccio "Erlenmeyer" da 3
l, unitamente a 7 g di pepsina, circa 2 litri di acqua corrente, a
temperatura tra i 40 e 41 °C circa, nonchè 25 ml di acido cloridrico
concentrato. Si agita la miscela per dissolvere la pepsina.
Il pH soluzione sarà di circa 1,5-2.
Per la digestione, il matraccio "Erlenmeyer" è posto in
incubazione a 40-41 °C per circa 4 ore. Il matraccio viene agitato
regolarmente durante questo tempo almeno due volte all'ora.
La soluzione digerita è filtrata attraverso il setaccio in un
imbuto conico separatore da 2 litri, indi lasciato in riposo sul
supporto per almeno un'ora.
Si spillano circa 45 ml in un cilindro graduato, distribuendoli
poi uniformemente, in ragione di 15 ml per scatola, in tre scatole di
Petri il cui fondo è suddiviso in quadri.
Ogni scatola di Petri è accuratamente esaminata allo
stereomicroscopio per vedere se sono presenti larve di trichina.
Se è fatto uso di vaschette di conteggio delle larve, i 45 ml
vengono distribuiti in due di tali vaschette e quindi esaminati al
trichinoscopio.
Nel deposito, le larve si presentano come organismi arrotolati,
simili a molle di orologio. Esse sono facilmente individuabili e
spesso, quando l'acqua è tiepida, svolgono e riavvolgono la loro
"spirale".
I liquidi di digestione devono essere esaminati non appena sono
pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al giorno
seguente.
Qualora i liquidi di digestione non siano chiari o non vengano
esaminati entro 30 minuti dalla loro preparazione, si procede alla
loro chiarificazione come segue. Il campione finale di 45 ml viene
versato nel cilindro graduato e lasciato riposare per dieci minuti.
Trascorso questo tempo, si prelevano mediante aspirazione 30 ml del
liquido supernatante e ai 15 ml rimanenti viene aggiunta acqua di
rubinetto fino ad ottenere un volume totale di 45 ml. Dopo un
ulteriore periodo di riposo di 10 minuti, vengono nuovamente
prelevati mediante aspirazione 30 ml del liquido supernatante e i
restanti 15 ml vengono versati in una scatola di Petri o in una
vaschetta per il conteggio delle larve per essere esaminati. Lavare
il cilindro graduato con 10 ml di acqua di rubinetto; aggiungere il
liquido ottenuto al campione nella scatola di Petri o nella vaschetta
per il conteggio delle larve ed esaminare.
b) Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni).
Ad una serie completa di 100 campioni si possono aggiungere fino a
15 campioni singoli, da esaminare insieme agli altri. Se il numero di
campioni da esaminare è superiore a 15 e inferiore a 100, il liquido
di digestione deve essere ridotto proporzionalmente.
2) Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un
risultato positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un
ulteriore campione di 20 g secondo il procedimento di cui al
precedente punto b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini
vengono riuniti in un campione globale ed esaminati seguendo il
metodo sopra descritto. In tal modo verranno esaminati campioni
provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Qualora venga individuata
la presenza di trichine in uno dei campioni globali costituiti dai
prelievi su cinque suini, si devono prelevare ulteriori campioni di
20 g da ciascuno dei suini del gruppo ed esaminarli separatamente
seguendo il metodo di cui sopra.
IV. Metodo della digestione artificiale assistita meccanicamente
su un insieme di prelievi - Tecnica della sedimentazione
A) Apparecchiature e reattivi.
1. Coltello o forbici per il prelievo dei campioni.
2. Vassoi contrassegnati con 50 quadrati, ognuno dei quali sia
capace di contenere campioni dell'ordine di 2 g di carne.
3. Miscelatore di laboratorio Stomacher Thermo 3.500.
4. Sacchetti di plastica adatti al miscelatore di laboratorio
Stomacher 3.500.
5. Imbuti separatori conici da 2 l, preferibilmente con tappo di
sicurezza in teflon.
6. Sostegni, anelli e morsetti.
7. Setacci (ampiezza della maglia 177 micron), del diametro
esterno di 11 cm, in retina in acciaio inossidabile.
8. Imbuto con diametro interno non inferiore a 12 cm, per
sostenere i setacci.
9. Cilindri graduati da 100 ml.
10. Distributori da 25 ml.
11. Becher della capacità di 3 l.
12. Cucchiaio o verghetta in vetro per agitare il fluido contenuto
nel becher.
13. Siringa in plastica e tubo per l'aspirazione.
14. Cucchiaio misuratore da 6 g.
15. Termometro (precisione (Più o Meno) 0,5 °C) per temperature
comprese fra 1 e 100 °C.
16. Vibratore (ad esempio: un rasoio elettrico privato delle
testine).
17. Relais capace di inserire e disinserire la corrente a
intervalli di un minuto.
18. Trichinoscopio con tavolo orizzontale o stereomicroscopio, con
adeguata illuminazione.
19. Qualora venga impiegato il trichinoscopio: vaschetta per il
conteggio delle larve.
Essa deve essere ricavata da piastre in acrilico dello spessore di
3 mm con le seguenti caratteristiche:
a) fondo della vaschetta: 180 x 40 mm, suddiviso in quadri,
b) lati 230 x 20 mm,
c) estremita': 40 x 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inseriti fra i lati, in
modo da formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità. Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-9
mm sul livello di base del quadrato formato dalle estremità e dai
lati. Le varie parti vanno fissate con un adesivo adatto al
materiale.
20. Qualora si impieghi lo stereomicroscopio: un certo numero di
scatole di Petri da 9 cm di diametro, con quadrettatura da 10 x 10 mm
sul fondo, tracciata con uno strumento appuntito.
21. Acido cloridrico al 17,5%.
22. Pepsina, della forza di 1:10.000 NF (US National Formulary)
corrispondente a: 1:12.500 BP (British Pharmacopoea)
corrispondente a: 2.000 FIP (Federation internationale de
pharmacie).
23. Alcuni recipienti da 10 l, da impiegare per la
decontaminazione con un trattamento quale la formalina
dell'apparecchiatura, e per il rimanente succo digestivo nei casi di
risultato positivo.
24. Bilancia della precisione di 0,1 g.
B) Prelievo dei campioni.
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da
un pilastro di diaframma nella zona di transizione fra la parte
muscolare e la parte tendinea. Qualora non esistano pilastri di
diaframma, prelevare un campione della stessa dimensione dalla parte
di diaframma vicina alle coste od allo sterno o dal massetere o dai
muscoli addominali.
2. Per le carni in pezzi: prelevare un campione di circa 2 g dai
muscoli scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile
vicino alle ossa od ai tendini.
C) Metodo.
1) Procedimento di digestione.
a) Serie completa di campioni (100 campioni per volta):
1. adattare un doppio sacchetto di plastica al miscelatore di
laboratorio Stomacher 3.500 e regolare la temperatura su 40-41 °C;
2. versare nel sacchetto interno di plastica 1,5 litri di acqua a
32 °C, e portarla alla temperatura di 40-41 °C;
3. aggiungere all'acqua contenuta nello Stomacher 25 ml di acido
cloridrico al 17,5%;
4. aggiungere 100 campioni da 1 g circa alla temperatura di 25-30
°C, prelevati da ciascuno dei campioni singoli secondo le indicazioni
del punto b);
5. aggiungere infine 6 grammi di pepsina. L'ordine delle aggiunte
deve essere rispettato rigorosamente per evitare la decomposizione
della pepsina;
6. azionare lo Stomacher lasciando pestare il contenuto del
sacchetto per 25 minuti;
7. togliere il sacchetto di plastica dallo Stomacher e filtrare il
liquido di digestione attraverso il setaccio, raccogliendo il liquido
in un becher da 3 litri;
8. lavare il sacchetto di plastica con 100 ml circa d'acqua, da
impiegare poi per risciacquare il setaccio e da aggiungere infine al
filtrato contenuto nel becher.
Ad una serie completa di 100 campioni si possono aggiungere fino a
15 campioni singoli, da esaminare insieme agli altri.
b) Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni):
1. adattare un doppio sacchetto di plastica al miscelatore di
laboratorio Stomacher 3.500 e regolare la temperatura su 40-41 °C;
2. preparare il liquido di digestione miscelando circa un litro e
mezzo d'acqua con 25 ml di acido cloridrico all'1,5%.
Aggiungere poi 6 g di pepsina e mescolare il tutto, alla
temperatura di 40-41 °C. L'ordine di queste aggiunte deve essere
rispettato rigorosamente per evitare la decomposizione della pepsina;
3. prelevare un volume di liquido di digestione corrispondente a
15 ml per grammo di campione (per 30 campioni, ad esempio, il volume
sarà 30 x 15 = 450 ml) e trasferirlo nel più interno dei due
sacchetti di plastica insieme ai campioni di carne da 1 grammo circa
(a 25-30 °C) prelevati da ciascuno dei campioni singoli secondo le
indicazioni del punto b);
4. versare nel sacchetto esterno acqua alla temperatura di 41 °C
circa, fino ad un volume totale di un litro e mezzo nei due
sacchetti;
5. azionare lo Stomacher lasciando pestare il contenuto del
sacchetto per 25 minuti;
6. togliere il sacchetto di plastica dallo Stomacher e filtrare il
liquido di digestione attraverso il setaccio, raccogliendo il liquido
in un becher da 3 litri;
7. lavare il sacchetto di plastica con 100 ml circa d'acqua, da
impiegare poi per sciacquare il setaccio e da aggiungere al filtrato
contenuto nel becher.
2) Isolamento delle larve per sedimentazione.
a) Aggiungere al liquido di digestione da 300 a 400 grammi di
ghiaccio in fiocchi, scaglie o frammenti, fino a un volume totale di
2 litri circa. Agitare poi il liquido di digestione fino a fusione
del ghiaccio. Nel caso delle serie incomplete (vedi punto 1 ii), la
qualità di ghiaccio deve essere ridotta di conseguenza;
b) trasferire il liquido di digestione così refrigerato in un
imbuto separatore da 2 litri, provvisto di un vibratore su un
morsetto addizionale;
c) lasciare sedimentare per 30 minuti nell'imbuto separatore,
che deve essere fatto vibrare ad intermittenza, cioè alternando, ad
esempio, un minuto di vibrazione con un minuto di pausa;
d) dopo 30 minuti, far defluire rapidamente 60 ml del sedimento
in un cilindro graduato da 100 ml (l'imbuto deve essere risciacquato
con soluzione detergente dopo l'impiego);
e) dopo aver lasciato riposare i 60 ml di campione per almeno 10
minuti, eliminare il supernatante fino ad un volume residuo di 15 ml,
aspirando con una siringa a perdere fino a lasciare un volume di 15
ml nel quale sarà ricercata la presenza delle larve;
f) per l'aspirazione si può impiegare una siringa a perdere
provvista di tubo di plastica. La lunghezza del tubo deve essere tale
che nel cilindro di misura rimangano 15 ml di liquido mentre le
flange della siringa poggiano sul bordo del cilindro stesso;
g) versare i 15 ml restanti in una vaschetta per il conteggio
delle larve o in due scatole di Petri, ed esaminare al trichinoscopio
od allo stereomicroscopio;
h) i liquidi di digestione devono essere esaminati non appena
sono pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al
giorno seguente.
Qualora i liquidi di digestione non siano chiari o non vengano
esaminati entro 30 minuti dallo loro preparazione, si procede alla
loro chiarificazione come segue. Il campione finale di 60 ml viene
versato nel cilindro graduato e lasciato riposare per dieci minuti.
Trascorso questo tempo, si prelevano mediante aspirazione 45 ml del
liquido supernatante e ai 15 ml rimanenti viene aggiunta acqua di
rubinetto fino ad ottenere un volume totale di 45 ml. Dopo un
ulteriore periodo di riposo di 10 minuti, vengono nuovamente
prelevati mediante aspirazione 30 ml del liquido supernatante e i
restanti 15 ml vengono versati in una scatola di Petri o una
vaschetta per il conteggio delle larve per esservi esaminati. Lavare
il cilindro graduato con 10 ml di acqua di rubinetto; aggiungere il
liquido ottenuto al campione nella scatola di Petri o nella vaschetta
per il conteggio delle larve ed esaminare.
3) Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un
risultato positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un
ulteriore campione di 20 g secondo il procedimento di cui al
precedente punto b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini
vengono riuniti in un campione globale ed esaminati seguendo il
metodo sopra descritto. In tal modo verranno esaminati campioni
provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Qualora venga individuata
la presenza di trichine in uno dei campioni globali costituiti dai
prelievi su cinque suini, si devono prelevare ulteriori campioni di
20 g da ciascuno dei suini del gruppo ed esaminarli separatamente
seguendo il metodo di cui sopra.
V. Metodo della digestione artificiale assistita meccanicamente su un
insieme di prelievi - Tecnica di isolamento sul filtro
A) Apparecchiature e reattivi.
Come indicato nel metodo IV, punto A).
Ulteriore attrezzatura:
1. 1 imbuto Gelman da un litro, con portafiltro (diamentro del
portafiltro: 45 mm);
2. dischi filtranti, consistenti in:
un reticella circolare di acciaio inossidabile, con maglie
dell'ampiezza di 35 micron. Il diametro della reticella deve essere
di 45 mm;
due anelli di gomma, ricavati da un foglio dello spessore di 1
mm, con diametro esterno di 45 mm e il diametro interno di 38 mm. La
reticella metallica circolare deve essere posta fra i due anelli e
fissata con un adesivo a due componenti adatto al materiale;
3. beuta da 3 litri, con un tubo laterale per l'aspirazione;
4. pompa di filtrazione;
5. sacchetti di plastica da 80 ml almeno;
6. apparecchio termosaldante per i sacchetti di plastica;
7. Rennilasi, 1:150.000 unità Soxhtel per grammo.
B) Raccolta dei campioni:
Vedi metodo IV, punto B).
C) Metodo.
1. Procedimento di digestione.
a) Serie completa (100 campioni per volta):
Vedi metodo IV, punto C) 1.a);
b) Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni):
Vedi metodo IV, punto C) 1.b).
2. Isolamento delle larve per filtrazione.
a) Aggiungere al liquido di digestione da 300 a 400 grammi di
ghiaccio in fiocchi, scaglie o frammenti, fino al volume di 2 litri
circa.
In caso di serie meno numerose, ridurre di conseguenza la
quantità di ghiaccio;
b) agitare il liquido di digestione fino a fusione del ghiaccio;
c) lasciar riposare il liquido di digestione così refrigerato
per almeno 3 minuti, per lasciare alle larve il tempo di avvolgersi a
spirale;
d) montare sulla beuta collegata alla pompa da filtrazione
l'imbuto Gelman, con relativo portafiltro e filtro;
e) versare nell'imbuto Gelman il fluido di digestione e
filtrare. Verso la fine della filtrazione, il passaggio del liquido
di digestione attraverso il filtro può essere aiutato applicando
l'aspirazione mediante la pompa. Sospendere l'aspirazione prima che
il filtro rimanga secco, cioè quando nell'imbuto rimangono 2-5 ml di
liquido;
f) una volta filtrato tutto il liquido di digestione, togliere
il disco filtrante e collocarlo in un sacchetto di plastica da 80 ml
insieme a 15-20 ml di soluzione di rennilasi (2 g di rennilasi in 100
ml di acqua potabile);
g) sigillare due volte il sacchetto di plastica, collocarlo
nello Stomacher per tre minuti, ad esempio mentre esso lavora su una
serie completa o incompleta di campioni;
h) dopo tre minuti, aprire con un paio di forbici il sacchetto
di plastica completo di disco filtrante e soluzione di rennilasi e
versare il liquido in una vaschetta per il conteggio delle larve o in
una scatola di Petri, in vista dell'esame allo stereomicroscopio;
i) i fluidi di digestione devono essere esaminati non appena
sono pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al
giorno seguente.
Nota:
I dischi filtranti non devono essere mai impiegati se non sono
perfettamente puliti.
I dischi sporchi non devono mai essere lasciati essiccare.
I dischi filtranti possono essere puliti lasciandoli per una notte
in una soluzione di rennilasi. Prima dell'impiego, essi devono essere
lavati nello Stomacher in una soluzione di rennilasi.
3. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un
risultato positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un
ulteriore campione di 20 g secondo il procedimento di cui al
precedente punto b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini
vengono riuniti in un campione globale ed esaminati seguendo il
metodo sopra descritto. In tal modo verranno esaminati campioni
provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Qualora venga individuata
la presenza di trichine in uno dei campioni globali costituiti dai
prelievi su cinque suini, si devono prelevare ulteriori campioni di
20 g da ciascuno dei suini del gruppo ed esaminarli separatamente
seguendo il metodo di cui sopra.
VI. Metodo della digestione su un insieme di prelievi ricorrendo
all'agitazione magnetica
A) Apparecchiature e reattivi.
1. Coltelli e pinzette per il prelievo dei campioni.
2. Vassoi contrassegnati con 50 quadrati, capaci di contenere
campioni dell'ordine di 2 g di carne.
3. Sminuzzatori Moulinette.
4. Agitatori con piastra di riscaldamento termostabile e sbarretta
agitatrice ricoperta di teflon della lunghezza di 5 cm circa.
5. Imbuti separatori conici da 2 litri.
6. Sostegni, anelli e morsetti.
7. Setacci (ampiezza della maglia 177 micron) in retina
inossidabile, del diametro esterno di 11 cm.
8. Imbuti con diametro interno non inferiore a 12 cm, per
sostenere i setacci.
9. Becher della capacità di 3 litri.
10. Cilindri graduati da 50 ml o tubi di centrifuga.
11. Trichinoscopio con tavolo orizzontale o stereomicroscopio, con
illuminazione adeguata.
12. Qualora venga impiegato il trichinoscopio, vaschetta per il
conteggio delle larve. Essa deve essere ricavata da piastre in
acrilico dello spessore di 3 mm con le seguenti caratteristiche:
a) fondo della vaschetta: 180 x 40 mm, suddivisa in quadri;
b) lati: 230 x 20 mm;
c) estremita': 40 x 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inserite fra i due lati, in
modo da formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità.
Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-9 mm sul
livello di base del quadro formato dalle estremità e dai lati. Le
varie parti vanno fissate con un adesivo adatto al materiale.
13. Qualora venga impiegato lo stereomicroscopio: un certo numero
di scatole di Petri da 9 cm di diametro con quadrettatura da 10 x 10
mm sul fondo tracciato con uno strumento appuntito.
14. Foglio di alluminio.
15. Acido cloridrico al 25%.
16. Pepsina, della forza di 1:10.000 NF (US National Formulary):
corrispondente a: 1:12.500 BP (British Pharmacopoea);
corrispondente a: 2.000 FIP (Federation international de
pharmacie).
17. Acqua di rubinetto riscaldata alla temperatura di 46-48 °C.
18. Un certo numero di secchi da 10 litri, da impiegare per la
decontaminazione con un trattamento quale la formalina
dell'apparecchiatura, e per il rimanente succo digestivo nei casi di
risultato positivo.
19. Bilancia della precisione di 0,1 g.
B) Prelievo dei campioni.
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da
un pilastro di diaframma nella zona di transizione fra la parte
muscolare e la parte tendinea. Qualora non esistano pilastri di
diaframma, prelevare un campione della stessa dimensione dalla parte
di diaframma vicina alle coste od allo sterno, o dal massetere o dai
muscoli addominali.
2. Per le carni in pezzi: prelevare un campione di circa 2 g dai
muscoli scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile
vicino alle ossa od ai tendini.
C) Metodo.
1. a) Serie completa (100 campioni alla volta).
1. Trattare nello sminuzzatore Moulinette 100 campioni da 1 g
circa, prelevati da ciascuno dei campioni singoli secondo le
indicazioni del punto b). Lo sminuzzatore deve essere azionato 3-4
volte, per un secondo circa ogni volta;
2. trasferire la carne sminuzzata in un becher da 3 litri e
cospargerla con 10 g di pepsina. Versare nel becher 2 litri di acqua
potabile a 46-48 °C, insieme a 16 ml di acido cloridrico;
3. immergere ripetutamente la parte sminuzzante del Moulinette
nel liquido digerente contenuto nel becher, per eliminare il
materiale da esaminare che ancora vi aderisce;
4. introdurre nel becher la sbarretta agitatrice e coprire il
becher con foglio d'alluminio;
5. porre il becher sulla piastra riscaldante dell'agitatore
magnetico, previamente portata a temperatura, e cominciare
l'agitazione. Prima dell'avvio, l'agitatore magnetico deve essere
regolato in modo da mantenere una temperatura costante di 44-46 °C
per tutto il periodo di funzionamento. Durante l'intero processo di
agitazione, il liquido di digestione deve ruotare a velocità
abbastanza elevata da formare un profondo vortice al centro, ma senza
dar luogo a spruzzi;
6. agitare il liquido di digestione per 30 minuti, alla fine dei
quali arrestare l'apparecchio e trasferire il fluido nell'imbuto
separatore per la sedimentazione, filtrandolo attraverso un setaccio;
7. lasciare riposare per 30 minuti il liquido di digestione
nell'imbuto;
8. dopo 30 minuti, spillare rapidamente 40 ml di liquido,
raccogliendolo nel cilindro graduato o nel tubo da centrifuga;
9. Lasciare riposare i 40 ml di liquido per 10 minuti, trascorsi
i quali aspirare il supernatante, lasciando un volume di 10 ml;
10. il campione rimanente di 10 ml di sedimento viene versato in
una vaschetta per il conteggio delle larve o in una scatola di Petri;
11. risciacquare il cilindro graduato o il tubo da centrifuga con
circa 10 ml di acqua potabile, che deve essere aggiunta al campione
nella vaschetta per la conta delle larve o nella scatola di Petri.
Successivamente, esaminare al trichinoscopio o allo
stereomicroscopio.
I liquidi di digestione devono essere esaminati non appena sono
pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al giorno
seguente. Qualora i liquidi di digestione non vengano esaminati entro
30 minuti dalla loro preparazione, si procede alla loro
chiarificazione come segue. Un campione di circa 40 ml viene versato
nel cilindro graduato e lasciato riposare per dieci minuti. Trascorso
questo tempo, si prelevano 30 ml del liquido supernatante lasciando
un volume di 10 ml. A questo volume viene aggiunta açqua di rubinetto
fino ad ottenere un volume tolale di 40 ml. Dopo un ulteriore periodo
di riposo di 10 minuti vengono prelevati 30 ml del liquido
supernatante mediante aspirazione, lasciando un volume di 10 ml al
fine dell'esame in una scalola di Petri o in una vaschetta per il
conteggio delle larve. Lavare il cilindro graduato con 10 ml di acqua
di rubinetto.; il liquido ottenuto deve essere aggiunto al campione
della scatola di Petri o nella vaschetta per il conteggio delle larve
per esservi esaminate.
Se il sedimento non risulta chiaro all'esame, il campione deve
essere versato in un cilindro graduato e il suo volume portato a 40
ml con l'aggiunta di acqua di rubinetto. Seguire poi il metodo di cui
sopra.
b) Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni).
Qualora necessario, 15 campioni da 1 g ciascuno possono essere
aggiunti ad una serie completa di 100 campioni per essere esaminati
nello stesso tempo secondo il metodo indicato al punto c) 1 i). Se i
campioni sono più di 15, essi devono essere esaminati come una serie
completa. Nel caso di serie che hanno al massimo 50 campioni, il
liquido di digestione può esserere ridotto ad 1 litro.
2. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un
risultato positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un
ulteriore campione di 20 g secondo il procedimento di cui al
precedente punto b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini
vengono riuniti in un campione globale ed esaminati seguendo il
metodo sopra descritto. In tale modo verranno esaminati campioni
provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Qualora venga individuata
la presenza di trichine in uno dei campioni globali costituiti dai
prelievi su cinque suini, si devono prelevare ulteriori campioni di
20 g da ciascuno dei suini del gruppo ed esaminarli separatamente
seguendo il metodo di cui sopra.
Capitolo II
REQUlSITI IMPOSTI AI LABORATORI PER LA RICERCA DELLE TRICHINE
1) I laboratori per la ricerca delle trichine devono trovarsi nella
vicinanza immediata dei locali di macellazione dei suini e disporre
almeno di:
a) un locale adeguatamente attrezzato, che possa essere chiuso a
chiave, destinato al confezionamento dei preparati, con pareti lisce
rivestite o verniciate fino all'altezza di 2 m con materiale lavabile
e chiaro. Si dovrà predisporre un locale di preparazione per ciascun
metodo di esame utilizzato;
b) un locale di ricerca adeguatamente attrezzato, che possa essere
chiuso a chiave e che possa essere oscurato qualora si utilizzi il
trichinoscopio;
c) dispositivi che assicurino un'aerazione adeguata e, se
necessario, un impianto di climatizzazione che permetta di mantenere
costantemente la temperatura ambientale sotto ai + 25 °C;
d) illuminazione naturale o artificiale sufficiente, che non alteri
i colori; va evitata un'irradiazione solare intensa;
e)nel locale di preparazione, impianti sufficienti, per la pulizia
e la disinfezione delle mani;
f) se necessario, un impianto di refrigerazione per la
conservazione dei campioni di carni;
g) un locale per la pulizia e la disinfezione degli strumenti
d'esame (ad esempio contenitori per il deposito dei campioni, vetri
compressori, coltelli e forbici) con:
1) pavimenti in materiali impermeabili e imputrescibili, facili da
pulire e disinfettare;
2) pareti lisce, rivestite o verniciate con materiale lavabile e
chiaro fino all'altezza di almeno 2 m.
Tale disposizione non è applicabile quando vengono utilizzati i
metodi di cui ai punti II, III, IV, V, VI del presente allegato,
purchè i laboratori dispongano di un grande acquaio adeguatamente
piombato;
h) spogliatoi, lavabi e locali di soggiorno nonchè latrine a
sciacquone;
i) lavabi alimentati con acqua corrente calda e fredda, potabile e
provvisti di prodotti per la pulizia e la disinfezione, nonchè di
asciugamani da utilizzare una sola volta;
l) recipienti a tenuta stagna, resistenti alla corrosione, muniti
di coperchio a chiusura ermetica tale da impedire qualsiasi
prelevamento non autorizzato del contenuto, destinati ad accogliere i
resti di campioni;
m) impianti che forniscano in quantità sufficiente acqua potabile
calda e fredda;
n) un dispositivo per l'evacuazione delle acque di scarico che
risponda alle norme previste per il riconoscimento dei macelli;
o) adeguati dispositivi di protezione contro gli animali
indesiderabili (insetti, roditori, eçc.).
Capitolo III
DISPOSIZIONI RELATIVE AL PERSONALE, AI LOCALI, ALLE ATTREZZATURE
ED AGLI STRUMENTI DEI LABORATORI PER LA RICERCA DELLE TRICHINE
2) È sempre richiesta la massima pulizia del personale addetto al
laboratorio, dei locali dell'attrezzatura e degli strumenti:
a) in particolare, il personale deve indossare abiti da lavoro
puliti e deve lavarsi le mani più volte nel corso di una giornata di
lavoro, oltre che ad ogni ripresa del lavoro;
b) nessun animale deve essere ammesso nei laboratori per la ricerca
delle trichine;
c) il materiale e gli strumenti di lavoro devono essere sempre in
ottimo stato di manutenzione e di pulizia; devono essere puliti e
disinfettati con cura più volte nel corso di una giornata di lavoro,
nonchè alla fine della stessa.
3) L'utilizzazione dell'acqua potabile è d'obbligo per tutti gli
usi.
4) Per quanto riguarda lo stato di salute del personale incaricato
del prelievo dei campioni al fine d'esame, si applicano le
disposizioni dell'allegato B, capitolo IV, n. 11 e n. 12, del decreto
del Presidente della Repubblica 10 settembre 1982, n. 889.
5) I campioni di carni necessari per l'esame e prelevati subito
dopo la macellazione devono essere sottoposti immediatamente
all'esame nel laboratorio per la ricerca delle trichine del macello.
È vietato effettuare esami all'esterno del macello nel quale gli
animali sono stati macellati.
6) Per prevenire l'insorgere della stanchezza e le relative
conseguenze, devono essere concessi al personale addetto al controllo
brevi periodi di riposo.
Capitolo IV
DISPOSIZIONI CONCERNENTI I TRICHINOSCOPI
La concezione e il tipo dei trichinoscopi devono soddisfare ai
seguenti requisiti minimi:
l. Semplicità d'impiego
2. Alta luminosita':
a) deve essere possibile ottenere risultati sicuri del controllo
anche in locali non completamente oscurati;
b) quale fonte luminosa si utilizzerà una lampada da proiezione di
100 W (12v.).
3. Ingrandimento sufficiente:
a) normale ingrandimento di lavoro: 50 volte;
b) ingrandimento da 80 a 100 volte per identificare oggetti non
chiaramente identificati con l'ingrandimento normale.
4. Contrasto:
a qualsiasi ingrandimento si deve avere un'immagine chiara,
precisa, a colori netti.
5. Meccanismo di commutazione:
quando si cambia il rapporto di ingrandimento, la compensazione
della luminosità dello schermo deve avvenire automaticamente.
6. Aumento del contrasto:
a) il sistema di condensatori deve essere provvisto di un
diaframma per la variazione del contrasto che consenta di esaminare
accuratamente anche i campioni più difficili;
b) il diaframma deve essere di facile impiego (ad esempio,
regolabile mediante levetta fissata sul quadro di comando del
trichinoscopio).
7. Agevole messa a fuoco dell'obiettivo:
a) messa a fuoco rapida mediante anello zigrinato;
b) messa a fuoco di precisione mediante levetta.
8. Regolazione della tensione:
per ottenere la luminosità voluta nella situazione specifica.
9. Guida a senso unico del vetro compressore:
un dispositivo automatico di blocco deve assicurare il passaggio
a senso unico del vetro compressore per evitare spostamenti
accidentali.
10. Visibilità della superficie di proiezione.
11. Superficie di proiezione:
a) diametro minimo di 54 cm,
b) alto potere riflettente,
c) durevolezza,
d) smontabilità,
e) facilità di pulizia.
Capitolo V
&gt; BOLLATURA DELLE CARNI CHE HANNO SUBITO L'ESAME
PER LA RICERCA DELLE TRICHINE
1. La bollatura sanitaria deve essere effettuata sotto la
responsabilità del veterinario ufficiale.
A tal fine egli detiene e custodisce:
a) gli strumenti per la bollatura che può consegnare al
personale ausiliario soltanto al momento e per il tempo necessario
per effettuare la bollatura stessa;
b) i bolli metallici di cui al numero 5. Questi bolli metallici
sono consegnati al personale ausiliario al momento in cui sono
utilizzati e in numero corrispondente alle necessità.
2. Il bollo deve essere un timbro di forma rotonda, di 2,5 cm di
diametro. Sul timbro devono figurare le seguenti indicazioni, in
caratteri perfettamente leggibili:
a) verso il centro, la lettera T maiuscola formata da due barre
della lunghezza di 1 cm e della larghezza di 0,2 cm;
b) sotto la lettera T predetta, una delle sigle CEE, EEG, EWG,
E0F o EEC. Le lettere devono avere un'altezza di 0,4 cm.
3. Le carcasse sono bollate con marchio a inchiostro o a fuoco
sulla faccia interna della coscia, in conformità del paragrafo 2.
4. La testa è bollata con un marchio a inchiostro o a fuoco
rispondente alle prescrizioni del paragrafo 2.
I pezzi, esclusi quelli esenti da bollatura sanitaria ai sensi
dell'allegato B, capitolo X, paragrafo 43, della direttiva
72/462/CEE, ottenuti nei laboratori di sezionamento da carcasse
regolarmente bollate, semprechè non rechino alcuna stampigliatura,
devono essere bollati prima dell'applicazione del bollo sanitario, in
conformità del paragrafo 2. L'etichetta di cui al predetto paragrafo
43, secondo comma, deve rispondere ai requisiti del successivo
paragrafo 6.
5. La bollatura può anche essere effettuata mediante bollo
metallico di forma rotonda, non riutilizzabile, da fissare su ciascun
pezzo o ciascuna carcassa; detto bollo deve essere di materiale
resistente e pienamente conforme ai requisiti igienici.
Sul bollo metallico devono figurare le seguenti indicazioni, in
caratteri perfettamente leggibili:
a) verso il centro la lettera T maiuscola,
b) sotto la lettera T predetta, una delle sigle CEE, EEG, EWG,
E0F o EEC.
Le lettere devono avere un'altezza di 0,2 cm.
6. Sull'etichetta di cui all'allegato B, capitolo X, paragrafo 44,
della direttiva di cui al punto 4 deve figurare, oltre al bollo
sanitario, un bollo chiaramente leggibile identico a quello previsto
al paragrafo 2.
Capitolo VI
TRATTAMENTO COL FREDDO
1. La carne portata in frigorifero allo stato congelato va
conservata in queste condizioni.
2. L'attrezzatura tecnica e la sistemazione del locale
refrigeratore debbono essere tali da garantire in tutti i punti del
locale e in tutte le parti della carne la temperatura di cui al punto
6, che deve essere raggiunta nel più breve tempo possibile e
mantenuta costantemente.
3. Gli imballaggi isolanti vanno eliminati prima della
refrigerazione, tranne per la carne che al momento dell'introduzione
nel locale frigorifero ha già raggiunto in tutte le sue parti la
temperatura di cui al punto 6.
4. Le partite di carne vanno mantenute nel locale frigorifero,
separate e sotto chiave.
5. Per ogni partita di carne vanno annotati il giorno e l'ora
dell'introduzione nel locale frigorifero.
6. La temperatura nel locale frigorifero deve essere almeno di
-25°C, deve essere misurata termoelettricamente con apparecchi tarati
e deve essere tenuta sotto registrazione costante. Essa non deve
essere misurata direttamente nella corrente d'aria fredda. Gli
apparecchi di misura vanno tenuti sotto chiave. I diagrammi devono
riportare i numeri corrispondenti del registro delle ispezioni
effettuate all'atto dell'importazione, nonchè il giorno e l'ora
d'inizio e di fine della congelazione, e vanno conservati per un
anno.
7. La carne avente diametro o spessore fino a 25 cm va refrigerata
ininterrottamente per almeno 240 ore, la carne avente diametro o
spessore tra 25 e 50 cm, per almeno 480 ore. La carne avente diametro
o spessore superiore, non può essere sottoposta a questo
procedimento di refrigerazione. La durata di refrigerazione viene
calcolata a partire dal momento in cui il locale frigorifero
raggiunge la temperatura di cui al punto 6.