Serie Generale n. 250 del 25-10-2000
DECRETI, DELIBERE E ORDINANZE MINISTERIALI
MINISTERO DELLA SANITA'
MINISTERO DELLA SANITA'
DECRETO 4 agosto 2000
Procedure di controllo e relative modalita' di esecuzione del controllo di Stato del vaccino antitifico orale, ceppo Ty21a. (GU Serie Generale n.250 del 25-10-2000)

IL MINISTRO DELLA SANITÀ

Visto il decreto legislativo 29 maggio 1991, n. 178, pubblicato
nella Gazzetta Ufficiale n. 139 del 15 giugno 1991, così come
modificato dal decreto legislativo 18 febbraio 1997, n. 44,
pubblicato nel supplemento ordinario alla Gazzetta Ufficiale n. 54
del 6 marzo 1997 "Attuazione della direttiva 93/39/CEE, che modifica
le direttive 65/65/CEE, 75/318/CEE e 75/319/CEE relative ai
medicinali";
Visto in particolare l'art. 20, comma 5 e comma 6, del predetto
decreto legislativo, con il quale vengono stabilite norme in materia
di controlli di stato sui vaccini vivi e sulle relative procedure
tecniche di esecuzione;
Visto il decreto legislativo 30 giugno 1993, n. 267, pubblicato nel
supplemento ordinario alla Gazzetta Ufficiale n. 18 del 3 agosto 1993
"Riordinamento dell'Istituto superiore di sanita'";
Considerato che l'Istituto superiore di sanità ha espresso con
nota n. 37651/BMM 12 in data 20 marzo 2000 il proprio parere in
merito alla messa a punto delle procedure del controllo del vaccino
antitifico orale, ceppo Ty21a, dettando le relative modalità di
esecuzione;
Visto il parere favorevole espresso in proposito dal Consiglio
superiore di sanità nella seduta del 13 luglio 2000;
Decreta:
Art. 1.
L'Istituto superiore di sanità, ai sensi dell'art. 1, comma 2,
lettera e), del decreto legislativo 30 giugno 1993, n. 267, effettua
i controlli sul vaccino antitifico orale, ceppo Ty21a.

Art. 2.
Le spese del controllo sono a carico del produttore nella misura
prevista dalla normativa vigente.

Art. 3.
Le procedure tecniche per l'esecuzione del controllo di stato sul
predetto vaccino, elaborate dall'Istituto superiore di sanità, sono
allegate al presente decreto e ne costituiscono parte integrante.

Art. 4.
1. Il controllo di Stato non è richiesto per le specialità
medicinali già sottoposte ad analogo controllo da parte delle
autorità sanitarie di uno Stato che faccia parte dell'Unione europea
o con il quale esistano accordi bilaterali.
2. In tal caso per ogni lotto, prima della immissione in commercio,
dovrà essere fornita al Ministero della sanità copia autenticata
del certificato originale di rilascio.

Art. 5.
Il presente decreto sarà pubblicato nella Gazzetta Ufficiale della
Repubblica italiana ed entrerà in vigore dopo il sessantesimo giorno
dalla sua pubblicazione.
Roma, 4 agosto 2000
Il Ministro: Veronesi
Registrato alla Corte dei conti l'8 settembre 2000
Registro n. 2 Sanità, foglio n. 125

Allegato

PROCEDURE TECNICHE PER L'ESECUZIONE DEL CONTROLLO DI STATO DEL
VACCINO ANTITIFICO ORALE, CEPPO Ty21a

1. Introduzione.
L'esecuzione del controllo di stato dei farmaci immunologici
viene effettuato in conformità all'art. 4.3 della direttiva
89/342/CEE e secondo le linee guida delle procedure amministrative
europee per l'esecuzione del controllo di stato ufficiale (Batch
Release) che devono essere seguite dalle autorità competenti.
La monografia 1055 del 1997 della Farmacopea europea è rilevante
per questo prodotto.
2. Campioni da inviare e saggi da effettuare dal laboratorio di
controllo (Istituto superiore di sanita').
Almeno 100 dosi umane singole dovranno essere inviate per l'esame
all'Istituto superiore di sanità.
L'Istituto effettua i seguenti saggi:
identità e stabilità;
contaminazione batterica e fungina;
conta delle colonie secondo quanto descritto nella sezione 7.
3. Presentazione del protocollo.
Devono essere forniti dettagli appropriati che dimostrino la
conformità all'autorizzazione all'immissione in commercio e alla
monografia della Farmacopea europea. Sono richiesti i risultati
("conforme" o "non conforme" non è sufficiente). Devono essere
inclusi dettagli sufficienti per calcolare di nuovo i valori del
saggio. Devono essere anche incluse le specifiche e le date per ogni
saggio oltre ai risultati dei saggi di qualificazione sui materiali
di riferimento per ogni nuovo materiale di riferimento interno.
Il protocollo per ogni specifico prodotto può differire
leggermente da questo modello ma deve documentare tutti i dettagli
rilevanti specificati dall'autorizzazione all'immissione in commercio
e dalla Farmacopea europea.
4. Definizione.
Il vaccino antitifico vivo, orale, ceppo Ty21a è una
preparazione crioessiccata di Salmonella typhi ceppo Ty21a vivo,
coltivato in un mezzo appropriato. Se il vaccino è presentato sotto
forma di capsule, esso deve soddisfare la rilevante monografia della
Farmacopea europea.
5. Produzione.
La caratteristica principale del ceppo è la mancanza dell'enzima
uridina-difosfato-galattoso-4-epimerasi accompagnata da una riduzione
che va dal 50% al 90% delle attività galattopermeasica,
galattochinasica e di quella galattoso-1-fosfatouridyl-transferasica.
Indipendentemente dalle condizioni di coltura, il ceppo non contiene
l'antigene Vi. Il ceppo presenta una reazione di agglutinazione con
un siero anti-0:9 solo se è stato coltivato con un terreno
contenente galattosio. Il ceppo contiene l'antigene flagellare H:d e
non produce idrogeno solforato se coltivato su terreno Kligler.
Il ceppo non è virulento per il topo. Quando il ceppo Ty21a è
coltivato su un terreno contenente 1% di galattosio, si verifica la
lisi delle cellule batteriche.
5.1. Lotti di semenza.
La produzione del vaccino viene effettuata secondo un sistema di
lotti di semenza (primario e di lavoro). I lotti di semenza di lavoro
sono preparati da un'unica subcoltura del lotto di semenza primario.
Il vaccino finale rappresenta al massimo quattro subcolture
realizzate a partire dal vaccino originario, sul quale sono stati
effettuati gli esami di laboratorio e i saggi clinici che hanno
dimostrato la conformità del ceppo. Solo un lotto di semenza
primario che soddisfi i saggi descritti qui di seguito può essere
utilizzato per la preparazione dei lotti di semenza di lavoro.
5.1.1. Metabolismo del galattosio.
In un dosaggio spettrofotometrico il ceppo Ty21a, paragonato al
ceppo Ty2, non presenta attività
uridino-difosfato-galattoso-4-epimerasica a livello citoplasmatico.
5.1.2. Biosintesi del lipopolisaccaride.
I lipopolisaccaridi sono estratti con fenolo a caldo e poi
analizzati con cromatografia d'esclusione. Il ceppo Ty21a coltivato
su un terreno senza galattosio presenta solamente il
lipopolisaccaride del tipo R ("rugoso").
5.1.3. Caratteristiche sierologiche.
Il ceppo Ty21a coltivato su un terreno sintetico senza galattosio
non presenta reazione di agglutinazione con un siero specifico
anti-0:9. Indipendentemente dalle condizioni di coltura, il ceppo
Ty21a non presenta reazione di agglutinazione con un siero anti-Vi.
Il ceppo Ty21a presenta una reazione di agglutinazione con un siero
anti-H:d flagellare.
5.1.4. Marcatori biochimici.
Il ceppo Ty21a non produce idrogeno solforato su terreno di
Kligler, e questo è ciò che lo differenzia dagli altri ceppi di S.
typhi galattoso-epimerasi negativi.
5.1.5. Crescita.
Le cellule del ceppo Ty21a vanno incontro a lisi se coltivate su
un terreno contenente 1% di galattosio.
5.2. Coltura e raccolta.
I batteri provenienti dal lotto di semenza di lavoro vengono
fatti crescere in una prima coltura e quindi una subcoltura viene
effettuata prima della crescita su un terreno appropriato contenente
0,001% di galattosio, a 30o C per 13-15 ore. I batteri vengono quindi
raccolti e devono essere privi di contaminazione da parte di altri
microorganismi.
Solo una raccolta unica che soddisfi i saggi di seguito elencati
può essere utilizzata per la preparazione della raccolta
crioessiccata.
5.2.1. Determinazione del pH.
Il pH della coltura deve essere compreso tra 6,8 e 7,5.
5.2.2. Densità ottica.
La densità ottica della coltura misurata a 546 nm deve essere
compresa tra 6,5 e 11,0. Prima di effettuare la misurazione, diluire
la coltura in modo da ottenere una lettura compresa tra 0,1 e 0,5 e
correggere il valore misurato in modo da tenere conto della
diluizione.
5.2.3. Identificazione.
I batteri coltivati su un terreno solido contenente 1% di
galattosio e del blu di bromotimolo formano delle colonie concave di
colore blu pallido che sono trasparenti a causa della lisi delle
cellule. Non si formano colonie gialle (indice di fermentazione del
galattosio).
5.3. Raccolta crioessicata.
La raccolta delle cellule batteriche viene mescolata ad uno
stabilizzante appropriato, in seguito crioessiccata attraverso una
procedura che assicura la sopravvivenza di almeno il 10% dei batteri,
fino a mantenere un tasso di umidità dimostrato favorevole alla
stabilità del vaccino.
Il vaccino non deve contenere alcun conservante antimicrobico.
Solo una raccolta crioessiccata che soddisfi i saggi di seguito
elencati può essere utilizzata per la preparazione del bulk finale.
5.3.1. Identificazione.
I batteri coltivati su un terreno solido contenente 1% di
galattosio e di blu di bromotimolo formano colonie concave di colore
blu pallido che sono trasparenti a causa della lisi cellulare.
Non si formano colonie gialle (indice di fermentazione del
galattosio).
5.3.2. Conta batterica.
Il numero di cellule di S. typhi Ty21a vive non deve essere
inferiore a 1 x 10(elevato a 11) per grammo.
5.3.3. Umidità.
Il tasso di umidità, determinato con semi-microdosaggio, deve
essere compreso fra 1,5% e 4%.
5.4. Bulk finale.
Il bulk finale viene preparato mescolando in condizioni di
sterilità una o più raccolte crioessiccate ad un eccipiente sterile
appropriato.
Solo un bulk finale che soddisfi il saggio indicato di seguito
può essere utilizzato per la preparazione del lotto finale.
5.4.1. Conta batterica.
Il numero di cellule di S. typhi Ty21a vive non è inferiore a
4 x 1010 per grammo.
5.5. Lotto finale.
Il lotto finale è ripartito sterilmente in capsule
gastroresistenti o in recipienti appropriati. Solo un lotto finale
conforme a ciascuno dei saggi descritti in "Identificazione", "Saggi"
e "Conta batterica" può essere rilasciato, a condizione che il
numero dei batteri vivi sia di 4x10(elevato a 9) per campione.
6. Identificazione.
I batteri isolati dal vaccino da esaminare coltivati su un
terreno solido contenente 1% di galattosio e di blu di bromotimolo
formano delle colonie concave di colore blu pallido che sono
trasparenti a causa della lisi delle cellule. Non si formano colonie
gialle (indice di fermentazione del galattosio).
7. Saggi.
7.1. Contaminazione batterica e fungina.
Utilizzare dei terreni selettivi appropriati. Determinare il
numero dei microorganismi vivi totali per conta diretta su terreni
solidi. Il numero dei germi contaminanti non deve superare 100
batteri e 20 funghi per campione. Non devono essere presenti
patogeni, in particolare Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa e Salmonelle diverse dal ceppo Ty2la.
7.2. Umidità.
Il tasso di umidità determinato per semi-microdosaggio sul
contenuto della capsula o del recipiente deve essere compreso tra
1,5% e 4%.
7.3. Conta batterica.
Mescolare il contenuto di almeno 5 campioni in una soluzione
fisiologica a 4o C. Utilizzare per questa operazione un agitatore in
camera fredda e delle biglie di vetro.
Subito dopo il mescolamento ad omogenità diluire la sospensione
in modo appropriato in una soluzione fredda e inoculare su terreno
solido contenente un'infusione di cuore-cervello, incubare a
36+/-1o C per 20-36 h. Ogni campione esaminato deve contenere almeno
2 x 10(elevato a 9) cellule di S. typhi ceppo Ty21a vive.
8. Conservazione.
Vedere la monografia "Vaccini per uso umano".
9. Etichettaggio.
Vedere la monografia "Vaccini per uso umano".
L'etichetta deve indicare:
il numero minimo di batteri vivi per campione;
che il vaccino è solo per uso orale.
10. Certificazione.
Certificazione da parte del responsabile generale per la
produzione e controllo del prodotto: Certifico che il .... (nome del
prodotto) lotto n. .... è stato prodotto e sottoposto ai saggi
richiesti dalle procedure approvate dalle autorità competenti e
soddisfa i requisiti della qualità.
Nome (dattiloscritto) ....
Qualifica ....
Data ....
Firma ....