天正10年（1582年）6月2日の本能寺の変の際には、信長と共に備中高松城を包囲する羽柴秀吉への援軍に向かうべく京都の妙覚寺（この寺には信長もたびたび滞在していた）に滞在しており、信長の宿所である本能寺を明智光秀が強襲した事を知ると本能寺へ救援に向かうが、信長自害の知らせを受け、光秀を迎え撃つべく異母弟の津田源三郎（織田源三郎信房）、側近・斎藤利治、京都所司代・村井貞勝らと共に儲君（皇太子）・誠仁親王の居宅である二条新御所（御所の一つ）に移動、信忠は誠仁親王を脱出させると、手回りのわずかな軍兵とともに篭城し、善戦を見せた。
在天正10年（1582年）6月2日的本能寺之变中，与信长一同前往支援包围备中高松城的羽柴秀吉途中，于京都的妙觉寺（信长以前都有许多次在此寺中逗留）留宿，在得知信长的宿所本能寺被明智光秀突袭后，亲自前往救援本能寺，不过在知道信长自杀的消息后，为了迎击光秀而与异母弟津田源三郎（织田源三郎信房）、侧近斋藤利治、京都所司代村井贞胜等人一同移动至皇太子诚仁亲王的居宅二条新御所（御所之一），信忠让诚仁亲王逃出，与少量军兵一同笼城。