1522年、6歳の時に16歳年上の従兄である神聖ローマ皇帝カール5世と婚約したが、再び破談となった。
1522年，她被安排与22岁的表哥，神圣罗马帝国的查理五世缔结婚约，唯数年后，查理五世与一位葡萄牙公主结婚，与玛丽的婚事因而告吹。