一部の顕微鏡（主に共焦点顕微鏡）では、自家蛍光のほとんどを除外するために加えた蛍光マーカーと内因性分子の励起状態の異なる寿命を利用することができる。
在一些显微镜（主要是共聚焦显微镜）中，可以利用添加的荧光标记物和内源分子的激发态的不同寿命以排除大多数自体荧光。