しかし、2000年代に入り、子会社の京王バス（現・京王バス東）が2003年7月18日に阪急バスと共同で新宿駅西口-大阪梅田線を、同年12月には神姫バスと共同で新宿駅西口-三ノ宮駅-姫路駅線を相次いで開業、2006年3月31日には、京王電鉄バスが新宿駅西口-仙台駅-石巻駅間の夜行路線を開業し、夜行バスは再開の兆しを見せている。
2000年代，子公司京王巴士（现京王巴士东）在2003年7月18日与阪急巴士（日语：阪急バス）共同营运新宿站西口-大阪梅田（日语：阪急三番街）线，同年12月与神姬巴士（日语：神姫バス）共同营运新宿站西口-三宫站姬路站线，2006年3月31日，京王电铁巴士开始营运新宿站西口-仙台站-石卷站间的夜行路线。