しかしDTTは埋没した（溶液にさらされていない）ジスルフィド結合を還元することはできないので、ジスルフィド結合の還元は高温または高濃度の変性剤（6M塩酸グアニジン、8M尿素、1%SDSなど）を加えた変性条件で行うことが多い。
但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的双硫键，这类双硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。