שלושה חודשים לאחר מכן הלך ג'ון מרשל הרלן השני לעולמו כתוצאה מגידול בעמוד השדרה. הוא נטמן בבית הקברות של כנסיית עמנואל בווסטון שבקונטיקט. הנשיא ריצ'רד ניקסון שקל למנות במקומו את השופטת מילדרד לילי מבית המשפט לערעורים של קליפורניה. לילי הייתה אמורה להיות המועמדת האישה הראשונה לבית המשפט העליון. בכל אופן, בסופו של דבר החליט ניקסון שלא למנות את לילי לתפקיד לאחר שלשכת עורכי הדין של ארצות הברית מצאה אותה בלתי כשירה. בסופו של דבר מינה ניקסון את ויליאם רנקוויסט (לימים נשיא בית המשפט העליון) ומינויו אושר על ידי הסנאט.
על אף חוות דעת המיעוט הרבות שלו, תואר הרלן כאחד השופטים המשפיעים ביותר בבית המשפט העליון במאה ה-20. ב-1960 הוא נבחר כחבר האקדמיה האמריקאית לאמנויות ולמדעים.
להאמין (שיר של דולי ופן ועידן רייכל)
להאמין הוא סינגל של צמד היוצרים הישראלי דולי ופן, ביחד עם המוזיקאי הישראלי עידן רייכל, שיצא לאור ב-20 ביולי 2021, כסינגל הרביעי מתוך אלבום האולפן השני של הצמד, "חלק ב'".
רקע.
השיר הוא שיתוף הפעולה השני של דולי ופן ורייכל, לאחר שהשלושה יצרו יחד את שירו של רייכל משנת 2018, "עכשיו נשארנו שנינו". על השיר סיפרו דולי ופן:
ביקורות.
מבקר המוזיקה יוסי חרסונסקי העניק לשיר ארבעה כוכבי זהב מתוך חמישה, וציין כי "המוזיקה עגמומית, יש בה קרני שמש שמסתתרות מאחורי ענן, לא ממש מבשרות על האור הגדול שיגיע", וחשב כי נשמע ש"ההשראה לכך היא עידן רייכל. אף על פי שבקרדיטים דולי ופן הם מלחיני השיר – הוא נשמע לגמרי רייכלי בסולם, במנגינה הנוגה היפה, בטון המלנכולי. ממש הידמות בינם ובינו". בפרוגי תואר השיר כ"שילוב מדהים" בין הצמד לרייכל.
הר אנטיכאסיה
אנטיכסיה (ביוונית: Αντιχάσια) הוא רכס הרים מיוער בצפון היחידות האזוריות טריקאלה ולאריסה בתסליה, יוון. הוא חלק מהגבעות המזרחיות של רכס פינדוס. הנקודה הגבוהה ביותר בגובה 1,424 מ', בחלקם המזרחי של ההרים. סלעי מטאורה ליד קלמפקה נחשבים לחלק מאנטיכאסיה.
אנטיכאסיה משתרעת מעמק נהר מורגקני במערב ועד עמק נהר טיטריסיוס במזרח. שניהם יובלים של נהר פיניוס, הזורם דרומית-מערבית ודרומית להרים. אורכו כ 45 ק"מ ממזרח למערב. טווחי ההרים הקרובים ביותר הם חסיה לצפון מערב Kamvounia לכיוון צפון-מזרח. מישור תסאליה העצום שנמצא מדרום.
רכס ההרים נתן את שמו ליחידה העירונית אנטיכאסיה ביחידה האזורית לריסה המערבית. יישובים נוספים בהרים ובקרבתם הם קלמפקה (דרום-מערב), ורדיקוזה (מזרח) וקוניסקוס (צפון). כבישים: הכביש הלאומי היווני 6 / E92 (איגומניצה - יואנינה - טריקאלה - לריסה) עובר דרומית להרים, וכביש הלאומי היווני 15 (קלמבקה - גרוונה - סיאטיסטה) עובר ממערב להם.
פרימאז
DNA פרימאז (באנגלית: DNA primase) הוא אנזים המעורב בשכפול של DNA והוא סוג של פולימראז רנ"א (באנגלית: RNA polymerase). מזרז את הסינתזה של קטע RNA קצר (או DNA בחלק מהאורגניזמים) הנקרא פריימר משלים לתבנית ssDNA (DNA חד-גדילי). לאחר התארכות זו, פיסת ה- RNA מוסרת על ידי אקסונוקלאז 5' ל־3' ומוחלפת מחדש עם DNA.
פעילות.
בחיידקים (באנגלית:Bacteria), הפרימאז נקשר להליקאז ה- DNA ויוצר קומפלקס הנקרא פרימוזום (באנגלית:Primosome). הפרימאז מופעל על ידי הליקאז, ואז הוא מסנתז פריימר RNA קצר באורך של כ־11 ± 1 נוקליאוטידים, אליו ניתן להוסיף נוקליאוטידים חדשים באמצעות DNA פולימראז. פרימאזות ארכיאליות ואאוקריוטות הן חלבונים הטרודימריים עם יחידת בקרה אחת גדולה ויחידה קטליטית אחת קטנה.
מקטעי ה- RNA מסונתזים תחילה על ידי פרימאז ואז מוארכים על ידי DNA פולימראז. ואז ה- DNA פולימראז יוצר קומפלקס חלבון עם שתי יחידות משנה פרימאזות ליצירת קומפלקס אלפא של פולימרז ופרימראז (באנגלית:alpha DNA Polymerase primase complex) הפרימאז הוא אחד הפולימראזים המועדים לטעויות ואיטיות ביותר. פרימאזות באורגניזמים כגון E.coli מסנתזות סביב 2000 עד 3000 פריימרים בקצב של פריימר אחד לשנייה. פרימאז משמש גם כמנגנון עצירה כדי למנוע מהגדיל המוביל להתקדם יתר על המידה מהגדיל בפיגור על ידי עצירת התקדמות מזלג השכפול. השלב הקובע בקצב בפרימאז הוא כאשר נוצר הקשר הפוספודיאסטר הראשון בין שתי מולקולות של RNA.
מנגנוני השכפול נבדלים בין חיידקים ווירוסים שונים כאשר הפרימאז מתחבר קוולנטית להליקאז בנגיפים כמו חיידק T7. בנגיפים כמו נגיף הרפס סימפלקס (HSV-1), פרימאז יכול ליצור קומפלקסים עם ההליקאז. באותם נגיפים קומפלקס הפרימאזה-הליקאז משמש כדי לפתוח את ה- dsDNA (גדילי כפול) ומסנתז את הכגיל המתעכב באמצעות פריימרים של RNA. רוב הפריימרים המסונתזים על ידי פרימאז הם באורך של שניים עד שלושה נוקלאוטידים.
סוגים של פרימאזות.
ישנם שני סוגים עיקריים של פרימאזות: DnaG שנמצא ברוב החיידקים, ו- AEP קיצור של Archaeo-Eukaryote Primase מייצג משפחת על של פרימאזות שנמצאות במחלקות של ארכאיות ואיקריוטות. בעוד שפרימאזות חיידקיות (מסוג DnaG) מורכבות מיחידת חלבון אחת (מונומר) ומסנתזות פריימרים של רנ"א, פרימאזות AEP מורכבות בדרך כלל משתי יחידות פרימאז שונות (הטרודימר) ומסנתזות פריימרים דו-חלקיים עם מרכיבי ה- RNA וה- DNA. אף על פי שהן דומות מבחינה תפקודית, שתי משפחות העל הראשוניות התפתחו עצמאית זו מזו.
מבנה הקריסטל של הפרימאז ב- E. coli עם ליבה המכילה חלבון DnaG נקבע בשנת 2000. מתחם ה- DnaG וה- primase הוא בצורת קשיו ומכיל שלושה תת-תחומים. תת-הדומיין המרכזי יוצר קפל טופרים (באנגלית: toprim fold) שעשוי מתערובת חמישה יריעות בטא ושישה סלילי אלפא. קיפול הטופרים משמש לאינזימים רגולטורים ומחייבים מתכות. הפרימאז משתמש בתחום פוספוטרנספר לתאום העברה של מתכות, מה שמבדיל אותו מפולימראזות אחרות. יחידות המשנה הצדדיות מכילות מסוף NH2 ו- COOH העשוי מסלילי אלפא ויריעות בטא. מסוף NH2 מקיים אינטראקציה עם אתר קישור המכיל אבץ ואזור מסוף COOH אשר מתקשר עם DnaB-ID.
הקפל של טופרים נמצא גם בטופואיזומרז ובפרימזה / הליקאז של המיטוכרונדריה. כמה פריזאות דמויי DnaG (דמויות חיידקים) נמצאו בגנום ארכיאלי.
פרימאזות של אוקריוטה וארכיאות נוטות להיות דומות יותר זו לזו, מבחינת מבנה ומנגנון, מאשר לפניות חיידקיות. משפחת העל AEP קיצור של - Archaeo-Eukaryote Primase, אשר רוב יחידות המשנה הקטליטיות האוקריוטה וארכיאות שייכות אליהן, הוגדרה לאחרונה כמשפחת פרימאז-פולימראז כהכרה בתפקידים רבים אחרים שמילאו האנזימים במשפחה זו. סיווג זה מדגיש גם את המקורות הרבים של האינזימים המשתיכים ל- AEP; משפחת העל מוכרת כעת כחלק החסר במעבר בין פונקציות RNA ו- DNA.
פרימאזות ארכיאליות ואיקריוטות הן חלבונים הטרודימרים עם יחידת בקרה אחת גדולה (PRIM2 אנושי, p58) ותת יחידת קטליטית קטנה אחת (PRIM1 אנושית, p48 / p49). יחידת המשנה הגדולה מכילה מקבץ 4Fe – 4S (ברזל וגופרית) מקצה ה-N, אשר לעיתים מפוצל בארכיות מסוימות כ- PriX / PriCT. יחידת המשנה הגדולה (יחידת הבקרה) מעורבת בשיפור הפעילות והספציפיות של יחידת המשנה הקטנה. לדוגמה, הסרת החלק המתאים ליחידת המשנה הגדולה בחלבון היתוך PolpTN2 גורמת לאנזים איטי יותר עם פעילות תעתיק הפוך.
פרימאזות רב תכליתיות.
למשפחת ה- AEP של הפרימרז-פולימראזות תכונות מגוונות מעבר לייצור תחליים בלבד. בנוסף להכנת פרימר לפלרמור ה-דנ"א במהלך שכפול, לאנזימים של AEP יכולות להיות פונקציות נוספות בתהליך שכפול הדנ"א, כגון פילמור של דנ"א או רנ"א, , , תיקון DNA לא הומולוגי (באנגלית:NHEJ) ואולי בהפעלה מחדש מזלגות שכפול תקועים. פרימאזות בדרך כלל מסנתזות פריימרים מריבונוקליאוטידים (באנגלית:NTP); עם זאת, לפרימאזות עם יכולות פולימראז יש גם זיקה לדאוקסיריב-נוקלאוטידים (באנגלית:dNTP). פרימאזות עם פונקציונליות טרנספרז סופנית מסוגלים להוסיף נוקלאוטידים לקצה 3 'של גדיל DNA ללא תלות בתבנית ומשמשות לעיתים ליצירת השונות בנוגדנים (רקומבינצית VDJ). אנזימים אחרים המעורבים בשכפול דנ"א, כגון הליקאזות, עשויים גם הם להפגין פעילות פרימאז.
איקריוטים וארכאה.
PrimPol אנושי (ccdc111) בעל פונקציות של פרימאז ופולימראז, כמו פרימאזות ארכיאליות רבות; מציג פעילות טרנספרז סופנית בנוכחות היסוד מנגן; ומשחק תפקיד משמעותי בסינתזת מעבר ובהפעלת מחדש של מזלגות שכפול תקועים. PrimPol מגויסת באופן פעיל לאתרים פגומים באמצעות האינטראקציה שלה עם RPA, חלבון מתאם המאפשר שכפול ותיקון DNA. ל- PrimPol תחום אצבעות אבץ הדומה לזה של כמה פרימאזות נגיפיות, שהוא חיוני לסינתזת מעבר ולפעילות הפרימאז ועשוי לווסת את אורך הפריימר. שלא כמו ברוב הפרימאזות, PrimPol מסוגל באופן ייחודי להתחיל שרשראות DNA עם dNTP.
ל- PriS, יחידת המשנה הקטנה של הפרימאזות הארכאית, יש תפקיד בסינתזת מעבר (TLS) ויכול לעקוף פגמים נפוצים של DNA. ברוב הארכאות חסרות הפולימראזות המתמחות המבצעות TLS אשר נמצאות באאוקריוטים ובחיידקים. PriS לבדו מסנתז באופן מועדף מחרוזות DNA; אך בשילוב עם PriL, מוגברת פעילות יחידת המשנה הגדולה של RNA פולימראז.
ב- ארכאה טרמופילית, ה-פרימאז PriSL, שהוא הטרודימר, יכול לשמש כ- פרימאז, פולימראז וטרנספרז סופי. PriSL נחשב ליזום סינתזת הפריימר עם NTPs ואז הוא עבור להשתמש ב- dNTP. האנזים יכול לפלמר שרשראות רנ"א או דנ"א, כשגדילי הדנ"א מגיעים עד 7000 נוקלאוטידים (7 קילו-בתים). מוצע כי פונקציונליות מרובה זו עשויה להיות מאפיין נפוץ של פרימאזות ארכיאליות.
חיידקים.