כאשר, formula_43 ו-formula_44 הם זמני החיים של התורם בנוכחות ובהיעדר המקבל בהתאמה. עקב נוכחות המקבל, זמן החיים של התורם מתקצר ולכן יעילות ה-FRET, formula_26, תמיד תהיה קטנה או שווה ל-1. מדידות אלו משמשות בדימות מיקרוסקופי מבוסס זמן חיים פלואורסצנטי (FLIM ).
מדידת קיטוב פלואורסצנטי.
השיטה מתבססת על היחס הקיים בין זמן החיים של התורם לבין הקיטוב - כאשר הקיטוב עולה זמן החיים מתקצר.
ע"פ נוסחת פרין, היחס בין הקיטוב הפלואורוסצנטי formula_46 לבין זמן החיים הפלואורסצנטי formula_47 מבוטא בצורה הבאה:
formula_48
כאשר formula_49 הוא הנפח המולרי של הפלואורפור המסתובב, formula_50 הוא קבוע הגזים, formula_51 היא הטמפרטורה ו-formula_52 היא צמיגות התווך. formula_53 מוגדר כזמן קורלציה סיבובי,formula_54. formula_55 הוא הקיטוב האינהרנטי כאשר formula_56.
זמן החיים של התורם בהיעדר המקבל:
formula_57
זמן החיים של התורם בנוכחות המקבל:
formula_58
כאשר, formula_59 ו-formula_60 הן רמות הקיטוב של התורם בנוכחות ובהיעדר המקבל בהתאמה.
בנוסף, יעילות ה-FRET, formula_26, נמדדת על ידי זמן החיים הפלואורסצנטי בצורה הבאה:
formula_42
לכן, ניתן למדוד ישירות את יעילות ה-FRET באמצעות הקיטוב הפלאורסצנטי:
formula_63
רגישות פליטה.
השיטה מתבססת על מדידת השינויים בעוצמת הפליטה של המקבל. כאשר התורם והמקבל קרובים האחד לשני (1–10 ננומטר), בשל האינטראקציה של שתי המולקולות, פליטת המקבל תגדל עקב כוח פנים מולקולרי שיוצר ה-FRET בין התורם למקבל .
כדי לנטר שינויי מבנה בחלבון, חלבון היעד מסומן עם תורם ומקבל בשני אתרי גן. כאשר החלבון מסתובב או מתעקל, נוצר שינוי במרחק או באוריינטציה בין התורם למקבל ומכאן שינוי ביעילות ה-FRET. אם אינטראקציה מולקולרית או שינוי מבנה חלבון תלויים בקשר ליגנד, ניתן להשתמש בטכניקת FRET כיישום של גלאי פלואורסצנטי לזיהוי ליגנד.
ליבון אופטי.
השיטה מתבססת על מדידת שיעורי קצב הליבון האופטי (Photobleaching ) של התורם, בהיעדר ובנוכחות המקבל. מאירים באורך גל שיגרום לעירור התורם אך לא המקבל על דגימות עם וללא המקבל ומנטרים את פלואורסצנטיית התורם (פליטת אור באורך גל הפלואורסצנטי) לאורך זמן. ההפרדה מהמקבל נעשית בדרך כלל על ידי מסנן מעביר פס אופטי. סקלת הזמן של הליבון האופטי מבוטאת על ידי הפלואורסצנציה המתקבלת עבור כל דגימה:
formula_64
כאשר, formula_65 הוא קבוע זמן דעיכת הליבון האופטי והוא תלוי בנוכחותו או העדרו של המקבל. מאחר שהליבון האופטי עולה בקנה אחד עם איבטול (inactivation) קבוע של פלואורפורים מעוררים, מעבר האנרגיה בתהודה בין הפלואורפור התורם המעורר לפלואורפור המקבל, מונע את הליבון האופטי של אותו תורם ולכן יעילות FRET גבוהה מובילה לזמן דעיכת ליבון אופטי ארוך יותר:
formula_66כאשר, formula_65 ו-formula_68 הם זמני דעיכת ליבון אופטי של התורם בהיעדר ובנוכחות המקבל בהתאמה. נוסחה זו הפוכה לנוסחת היחס בין זמני החיים הפלאורסצנטיים של התורם בהיעדר ובנוכחות המקבל.
לטכניקה זו אשר הוצגה לראשונה בשנת 1989 יש מספר יתרונות:
פלואורופורים המשמשים ל-FRET.
זוגות CFP-YFP.
אחד הזוגות הנפוצים עבור שימוש ביולוגי ב-FRET הוא חלבון פלואורסצנטי כחול-ירקרק ((cyan fluorescent protein (CFP) - חלבון פלואורסצנטי צהוב ((yellow fluorescent protein (YFP). תיוג עם צבענים פלואורסצנטיים אורגניים דורש טיהור, תגובה כימית, זריקה תוך-תאית אל החלבון המארח. לעומת זאת, וריאנטי GFP יכולים להיצמד לחלבון המארח באמצעות הנדסה גנטית. בנוסף, היתוך בין CFP ל-YFP הנקשר באמעות רצף פרוטאז בקיע, יכול לשמש כתבחין ביקוע.
אחת המגבלות של FRET היא שנדרשת תאורה חיצונית על מנת ליזום את מעבר האנרגיה. תאורה זו יכולה ליצור רעש רקע כתוצאה מעירור ישיר של המקבל או לגרום לליבון אופטי מלא של התורם/המקבל.
כדי למנוע תופעות לוואי אלו, פותחה טכניקה דומה הנקראת מעבר אנרגיה בתהודה ביולומינסנצית או בקיצור BRET. הטכניקה זו משתמשת בלוציפראז ביולומיסנצטי (בדרך כלל בלוציפראז ממושבת צורבים) במקום ה- CFP כדי לייצר פליטת פוטון ראשונית תואמת YFP.
עם זאת, BRET מוגבלת על ידי הדרישה לייצר לפחות היתוך אחד בין חלבון מקודד לבין הלוציפראז, אם כי כמה יישומים של FRET ניתן ליישם עם פלואורפורים מצומדי נוגדנים.
HOMO-FRET.
באופן כללי, FRET, מוגדר עבור מצבים שבהם התורם והמקבל הם חלבונים (או פלואורפורים) מסוג שונה. על אף זאת, במערכות ביולוגיות רבות, נדרשים החוקרים לבחון אינטראקציה בין 2 חלבונים מאותו סוג או אינטראקציה בין חלבון לבין עצמו (למשל, אם החלבון יוצר או פורש חלק משרשרת פולימרית של חלבונים) או עבור שאלות כמותיות אחרות בתאים ביולוגיים.
במקרים אלו, לא ניתן למדוד FRET על ידי הבדלים ספקטרליים שכן הן לתורם והן למקבל יש אותם ספקטרומי בליעה ופליטה. אף על פי כן, ניתן למדוד את הקיטוב המשתנה בין בליעה של אור לפליטה של אור על ידי שיטה הנקראת דימות אנאיזוטרופיות FRET (באנגלית: FRET anisotropy imaging).רמת האנאיזוטרופיה מהווה מדד לכמות אירועי ה-FRET שקרו.
שימושים.
בכימיה ובביולוגיה, FRET משמש ככלי למדידת מרחק ולזיהוי אינטראקציות מולקולריות:
בנוסף, FRET ו-BRET הם כלים נפוצים במחקר של קינטיקה אנזימטית ומנועים מולקולריים.
בספקטרוסקופיה, חלק מטכניקות הריווי הדיכוי הפלואורסצנטי (Quenching) מתבססות על FRET.
בטבע, ניתן למצוא מנגנון העברת אנרגיה דמוי-FRET בתהליך הפוטוסינתזה, בו מערר הפוטון את התורם והאנרגיה מועברת למקבל וממנו הלאה למקבל הבא ולבא אחריו למקבל עד שלבסוף מגיעים למרכז התגובה, שם נתרמים אלקטרונים הלאה. שימוש נוסף בטבע נעשה בהגנת שוניות מקרינת UV.
שיטות אחרות.
מנגנון שונה אך קשור הוא מעבר אלקטרון דקסטר (Dexter electron transfer).
שיטה חלופית לזיהוי אינטראקציית חלבון-חלבון היא השלמה פלואורסצנטית ביומולקולרית (Bimolecular fluorescence complementation או בקיצור BiFC) שבו שני חלקים של חלבון פלואורסצנטי מותכים עם חלבונים אחרים. כאשר שני חלקים אלה נפגשים, הם יוצרים פלואורפור בזמן של דקות או שעות.
מלקולם פורסיית'
מלקולם פורסיית' (באנגלית: Malcolm Forsyth 8 בדצמבר 1936 - 5 ביולי 2011) היה נגן טרומבון ומלחין דרום אפריקאי-קנדי. בתו היא הצ'לנית אמנדה פורסיית', אשתו של הכנר והמנצח הישראלי פנחס צוקרמן, מי שהייתה הצ'לנית הראשית של תזמורת המרכז הלאומי לאמנויות של קנדה.
חיים וקריירה.
פורסיית' נולד בפיטרמריצבורג ולמד בקולג' של מריצבורג בדרום אפריקה. הוא למד נגינה בטרומבון, ניצוח והלחנה באוניברסיטת קייפטאון, וסיים את לימודיו שם בתואר BA במוזיקה בשנת 1963.
פורסיית' ניגן בטרומבון בתזמורת הסימפונית של קייפטאון במהלך לימודיו לתואר מוסמך, שאותו קיבל בשנת 1966, ובהמשך לדוקטורט במוזיקה, שאותו קיבל ב-1969. בשנת 1968 היגר לקנדה והצטרף להתזמורת הסימפונית של אדמונטון, שם ניגן בטרומבון בס במשך 11 שנים. הוא כיהן כפרופסור למוזיקה באוניברסיטת אלברטה במשך 34 שנים. בשנת 1996 התמנה למלחין הבית ובמשרה זו נשאר עד לפרישתו בשנת 2002.
בשנת 1970 חיבר פורסיית את "רישומים מנאטאל" לתאגיד השידור הקנדי. בין יצירותיו האחרות קונצ'רטו לפסנתר ותזמורת (1979), "סאגיטאריוס" (1975), ,Quinquefid" (1976), "אודה אפריקאית (סימפוניה מס' 3)" (1981) ו-Atayoskewin (סוויטה לתזמורת) (1984), שזכתה בפרס ג'ונו ליצירה הקלאסית של השנה לשנת 1987.
מוות.
פורסיית מת ב-5 ביולי 2011, בן 74, מסרטן הלבלב
עונת 2001/2002 בסרייה א'
עונת 2001/2002 בסרייה א' הייתה העונה ה-100 של התחרות שאורגנה על ידי התאחדות הכדורגל האיטלקית ונוהלה על ידי "ליגת הכדורגל" (Lega Calcio). המשחקים החלו ב-26 באוגוסט 2001 והסתיימו ב-5 במאי 2002.
בליגה השתתפו 18 קבוצות. התחרות התקיימה בשיטת ליגה עם משחקי בית ומשחקי חוץ. עבור הניצחון הוענקו שלוש נקודות ונקודה עבור תוצאת תיקו.
טורינו, פיאצ'נצה, קייבו ורונה וונציה היו הקבוצות שעלו מהליגה השנייה.
יובנטוס זכתה באליפות הליגה בפעם ה-26 בתולדות המועדון.
בסיום העונה, ב-25 באוגוסט 2002 נערך משחק של הסופר קאפ האיטלקי בו יובנטוס ניצחה את פארמה 2:1 וזכתה בגביע.
בסיום העונה לסרייה ב' ירדו ורונה, לצ'ה, פיורנטינה וונציה. במקום הקבוצות שירדו לסרייה א' העפילו קומו, מודנה, רג'אנה ואמפולי.
כדורגלנים מצטיינים.
דויד טרזגה (), שחקנה של יובנטוס ודריו הובנר שחקנה של פיאצ'נצה כבשו 24 שערים וזכו בתואר מלך השערים.
התאחדות הכדורגל האיטלקית העניקה פרסים לשחקנים מצטיינים:
מנצח תזמורת צה&quot;ל
רופא וטרינר
גדעון ספיר
אליפות רוסיה בבייסבול
אליפות רוסיה בבייסבול (Чемпионат России по бейсболу) היא תחרות שנתית רוסית של קבוצות בייסבול. נערכת מאז 1992 ומנוהלת על ידי פדרציית הבייסבול הרוסית.
בשנים 1989–1991 נערכה אליפות ברית המועצות בבייסבול. אליפות 1992 הוגדרה כאליפות רוסיה הפתוחה בהשתתפות קבוצות בייסבול מהרפובליקות של ברית המועצות. החל מעונת 1993 משתתפות רק קבוצות רוסיות. החל משנת 2002 האליפות מנוהלת על ידי פדרציית הבייסבול הרוסית.
באוגוסט 2020 נחנך רוס סטאר ארנה, אצטדיון בייסבול במוסקבה המכיל 1,200 מושבים וכל משחקי הטורניר נערכים בו.
היסטוריה.
אליפות רוסיה בבייסבול היא יורשת אליפות ברית המועצות בבייסבול שנערכה מ-6 ביוני ועד 18 בספטמבר 1989 ובה נטלו חלק 24 קבוצות בייסבול מ-19 ערים ומ-8 רפובליקות סובייטיות.