ResumoDesoxinivalenol-3-glicosideo (D3G) e uma micotoxina modificada, formada pelo metabolismo de algumas plantas atraves da conjugacao do desoxinivalenol (DON) com a glicose. Os efeitos toxicos do D3G na saude humana e animal ainda estao sendo estudados e o desenvolvimento de metodologias praticas e confiaveis para sua determinacao em alimentos, especialmente em cereais, e de grande importancia. No presente estudo, uma metodologia para determinacao simultanea de D3G, DON e tambem nivalenol (NIV) em graos de trigo, utilizando purificacao do extrato por coluna de imunoafinidade (IA), separacao em coluna C18 e deteccao por absorcao ultravioleta (UV) foi otimizada e validada intralaboratorialmente. Os resultados demonstraram adequados valores de recuperacao de D3G da coluna IA e de amostras adicionadas do padrao. Os valores de repetibilidade, linearidade, limites de deteccao e quantificacao (LQ) tambem foram adequados para a determinacao das tres micotoxinas. A faixa de aplicacao do metodo variou de 47,1 ate 1000 g/Kg para D3G e de 31,3 ate 1000 g/Kg para o DON e NIV, com recuperacoes variando de 90,8% ate 115,5%. Atraves da metodologia validada, alta incidencia de D3G (41,2%, todas amostras < LQ) foi verifica em amostras comerciais de graos de trigo e farinha de trigo integral (n =17). Em 100% das amostras positivas para D3G tambem foi detectado DON, indicando ocorrencia simultanea dessas micotoxinas. Os niveis de DON variaram de 29,1 ate 325,8 g/Kg e NIV foi detectada apenas em 29,5% das amostras, com niveis variando de <LQ ate 140,6 g/Kg). Esse trabalho apresenta o primeiro metodo otimizado para determinacao simultanea de NIV, D3G e DON atraves de Cromatografia Liquida de Alta Eficiencia com Detector de Arranjo de Diodos (CLAE-DAD) publicado ate o momento.Palavras-chave: Cereais. Micotoxina modificada. Tricotecenos. D3G. DON. Validacao de metodologia.Trabalho completo disponivel como: Simultaneous Determination of Deoxynivalenol, Deoxynivalenol-3-Glucoside and Nivalenol in Wheat Grains by HPLC-PDA with Immunoaffinity Column Cleanup. Food Analytical Methods: DOI 10.1007/s12161-016-0450-5 The consumption of wheat bran, whole-wheat grains and other whole-wheat products has grown in recent years in Brazil. These foods are considered more nutritious than the refined ones and have been associated with a reduced risk of some major chronic diseases. On the other hand, other research, carried out in Brazil, has found different groups of fungi toxins, called mycotoxins, contaminating these wheat products. Among these mycotoxins, are the aflatoxins, a group of genotoxic and carcinogenic compounds produced by Aspergillus spp. This study aimed to determine the levels of aflatoxins B1, B2, G1 and G2 in samples of whole-wheat grains and derivatives, intended for human consumption, marketed in the metropolitan region of Rio de Janeiro, Brazil. One hundred and eight samples of whole-wheat grains (n=35), wheat bran (n=32), whole-wheat flour (n=26) and refined wheat flour (n=15) marketed in hypermarkets, supermarkets and health food stores were analyzed by High Performance Liquid Chromatography with fluorescence detection (HPLC-FL). Thirty-three samples (30.6%) were positive for at least one aflatoxin and the B1 form had the highest prevalence in the samples. The overall average was 0.69 g/kg and the contamination was the highest in the grain samples, followed by bran, whole-flour and refined flour. Just one sample showed total aflatoxins levels