A boca dos tubos de ensaio deve ser aquecida depois de retirada e antes da colocacao da tampa. A tampa nunca deve ser colocada sobre a bancada, sendo retirada e mantida segura pelo dedo minimo da mao direita durante a inoculacao;q Evitar introduzir a alca quente dentro da amostra, porque isso pode causar a contaminacao do ambiente pela formacao de aerossois e a morte dos microrganismos que se encontram na amostra devido ao intenso calor desprendido pela alca. A)TECNICA DE SEMEADURA EM MEIO LIQUIDO:q Flambar a alca e deixar esfriar;q Retirar a tampa (de rosca ou tampao de algodao) do tubo e retirar com a lca uma porcao de amostra;q Fechar o tubo que contem a amostra;q Retirar a tampa do tubo que vai ser inoculadoq Introduzir a alca ate aproximadamente 14 de profundidade do meio;q Fechar o tubo.B) TECNICA DE SEMEADURA EM MEIO SOLIDO EM TUBO (AGAR INCLINADO):q Flambar a alca e deixar esfriar;q Retirar a tampa (de rosca ou tampao de algodao) do tubo e retirar com a alca uma porcao de amostra;q Repor a tampa no tubo que contem a amostra;q Retirar a tampa do tubo que vai ser inoculado;q Introduzir a alca ate a base da superficie do meio inclinado, passando-a ao longo da sua superficie em movimentos de zig-zag;q Fechar o tubo.C) TECNICA DE SEMEADURA DE MEIO SOLIDO EM PLACA (ESGOTAMENTO): Esta tecnica e usada fundamentalmente para se obter (isolar) culturas puras de amostras que contenham microbiota mista, sendo igualmente util para o estudo da morfologia colonial. A superficie do agar nas placas deve ser lisa e umida, porem sem umidade excessiva, uma vez que isso poderia ocasionar um crescimento confluente. A tecnica de esgotamento em placa consiste em depositar sobre um ponto da superficie do meio uma aliquota do material e depois espalha-lo em dois ou tres setores, com o auxilio de alca bacteriologica, sem recarrega-la, de modo a obter quantidades progressivamente menores do material, e assim formando colonias perfeitamente isoladas. O sucesso da semeadura esta em:u Grande numero de estriasu Nao perfurar o meiou Nao voltar a alca pela parte ja estriadau Pegar pequena quantidade de material para semear. UNIDADE 2: Meios de cultura para bacterias Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial (in vitro) dos microrganismos. Estes meios fornecem principios nutritivos indispensaveis ao seu crescimento. Qualquer meio de cultura devera sempre apresentar: uma fonte de carbono organico, uma fonte de nitrogenio organico, sais minerais, vitaminas, agua, tensao osmotica adequada e pH adequado. Podemos classificar os meios de cultura em diversos tipos de acordo com a:1 Composicao quimicaSinteticos: sao meios quimicamente definidosComplexos: sao quimicamente indefinidos; constituidos por substancias provenientes da natureza2 FuncaoEnriquecidos: sao meios solidos ou liquidos, adicionados de um ou mais constituintes para permitir o crescimento de bacterias mais exigentes (ex.: Agar Sangue).Enriquecimento: sao meios liquidos que inibem o crescimento de certas especies bacterianas e estimulam o crescimento de outras.Seletivo-indicador: sao meios solidos que inibem o desenvolvimento de certas especies bacterianas e permitem o desenvolvimento de outras, dando informacoes sobre as especies que estao sendo cultivadas (ex.: Agar Manitol Salgado, Agar E.M.B).Manutencao: sao