decada de 1970 e culminou na criacao de legislacoes adequadas de seguranca em diversos paises. (p.52) A ideia de usar os proprios virus como veiculos para transportar e introduzir genes em um paciente, promovendo a cura de doencas, e de uma simplicidade extraordinaria e abre enormes perspectivas para a saude humana. (p.53) O desenvolvimento de novos vetores geneticos tem buscado superar os problemas encontrados nos trabalhos iniciais de terapia genica. O vetor ideal deve ser de facil producao, nao deve gerar resposta imunologica ao virus ou ao transgene pelo paciente, deve promover a expressao do transgene de modo eficiente e por longo tempo, alem de, se possivel, ter especificidade no tecido alvo. Os principais vetores testados ate o momento tem sido os derivados de adenovirus e retrovirus, sendo que ambos apresentam varias limitacoes.(p.54) Pelo menos em um caso o resultado foi dramatico: em 1999, a aplicacao de grandes quantidades de adenovirus recombinantes provocou a morte de um jovem paciente, gerando enorme controversia sobre o uso de terapia genica em seres humanos. (p.54) Sistemas de transferencia genica independentes de virus tem sido desenvolvidos como alternativas aos problemas causados pelos virus recombinantes. Em uma dessas abordagens, o transgene, na forma de DNA livre, e aplicado diretamente no paciente. Essas vacinas de DNA sao compostas pela clonagem do gene de um antigeno proveniente de um patogeno, em um plasmideo bacteriano. (p.54) No caso das vacinas de DNA, no entanto, descobriu-se que algumas delas, alem de despertar uma resposta imune que protege o individuo contra uma infeccao futura (prevencao), podem tambem atenuar a sintomatologia de uma infeccao em andamento, atuando como uma vacina terapeutica. Um exemplo e a acao que uma vacina de DNA, composta por um antigeno da bacteria que causa a tuberculose, tem ao combater a infeccao ativa em camundongos. Como se trata da transferencia de um gene novo para um tecido causando beneficio terapeutico, e mais uma estrategia de terapia genica que esta prestes a ser testada em seres humanos, e com grande possibilidade de sucesso.(p.54) De uma forma generica, as etapas envolvidas em um experimento de terapia genica sao: o isolamento do gene, a construcao de um vetor, a transferencia para celulas no tecido-alvo, e a producao da proteina codificada e expressa pelo gene terapeutico nessas celulas.(p.55) Para introducao de genes em organismos atraves de terapia genica, duas estrategias basicas podem ser utilizadas: in vivo e ex vivo. Na estrategia in vivo, vetores eficientes (como os adenovirus) podem levar o transgene diretamente ao orgao-alvo adequado (como o figado) por aplicacao direta no organismo (como a injecao endovenosa), levando a eficiente expressao do transgene. A estrategia ex vivobaseia-se na modificacao de celulas (como pela infeccao por um vetor retroviral) de um tecido-alvo (como os linfocitos), retiradas de um paciente e cultivadas in vitro(p.55) Doencas geneticas adquiridas durante a vida, como o cancer, doencas do coracao e infeccoes virais (Aids, por exemplo), no entanto, tambem sao alvos para protocolos de terapia genica. A ideia nesses casos e basicamente introduzir genes que possam interferir no metabolismo da celula cancerosa, bloquear a replicacao viral ou simplesmente