o flavonoides e os padroes de acidos fenolicos, juntamente com a metodologia de analise empregues no presente estudo, foi possivel delimitar as regioes do cromatograma foram os picos relacionados com os flavonoides e acidos fenolicos aparecer. Os picos associados com tempos de retencao compreendidos entre 0 e 10 min correspondem a compostos de maior polaridade, uma vez que o eluente utilizado durante o inicio da analise de HPLC tem uma natureza polar. A medida que o tempo dos aumentos de corrida cromatografica, a polaridade do solvente diminui e, portanto, os picos que aparecem no cromatograma correspondendo a moleculas menos polares. E importante ter em conta que a fase estacionaria utilizada para estas analises foi uma coluna C18. O funcionamento comeca com 30% de metanol e esta percentagem aumentou ao longo do tempo de execucao de 60 minutos, chegando a 80% ate ao final da analise.Assim, considerando que este gradiente de solvente, os compostos mais polares foram libertados a partir da coluna apos tempos de retencao mais curtos, enquanto que os compostos menos polares foram correlacionados com os tempos de retencao mais longos. Segundo Ferreres et ai. [ 13 ], a adopcao desta tecnica, os picos que aparecem entre os tempos de retencao de 20 e 45 min sao provavelmente os picos relacionados aos flavonoides e acidos fenolicos. A este respeito, a figura 1 ilustra as regioes do cromatograma e polaridades correspondentes para uma amostra de mel usada neste estudo.Figura 1. cromatograma de HPLC para a amostra de mel que mostra a regiao do monitoramento de picos correspondentes flavonoides (340 nm).Considerando-se que um detector de HPLC-UV tipo foi utilizado, pode-se afirmar que os componentes detectados tem grupos cromoforos. Estes componentes podem ser derivados a partir de acidos fenolicos ou flavonoides. No entanto, outros metodos de analise especificos precisam ser empregues a fim de revelar as estruturas quimicas das diferentes amostras de mel.As condicoes de operacao de HPLC utilizando um gradiente de metanol-agua tem sido amplamente aplicada por diversos investigadores, permitindo a separacao de picos de boa qualidade no cromatograma [ 1 , 24 ]. No entanto, outros solventes podem ser adotadas de acordo com a complexidade especifica de cada tipo de mel.Muitos pesquisadores com o objetivo de identificar os compostos fenolicos em mel usaram solventes aquosos com baixo pH, geralmente preparado com acido formico ou acetico [ 7 , 24 ]. De acordo com Michalkiewicz et ai.[ 25 ], este procedimento e usado devido a natureza acidica da maioria dos compostos fenolicos, o que significa que uma fase movel de acido e necessaria para uma separacao satisfatoria dos picos, juntamente com uma reducao do tempo de retencao dentro da coluna. Por outro lado, Bogdanov [ 22 ] afirmado que este metodo e usado principalmente em HPLC executa esse objectivo de identificar os acidos fenolicos alem de flavonoides. No presente estudo, a agua foi utilizada sem a adicao de acidos e de separacao satisfatoria dos picos foi obtida na regiao do cromatograma de interesse, onde os flavonoides aparecer (Figura 2 ).Figura 2. perfil fenolica de amostras de mel. (A) cromatograma HPLC a 340 nm