Validacao de metodos laboratoriais aplicadas a analises com marcadores microssatelites1Tiago Silva Oliveira et. alhttp://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1806-66902010000200016&lng=pt&nrm=isoA troca de informacao sobre biodiversidade e a utilizacao de recursos geneticos podem ser melhor realizadas se os laboratorios que geram as informacoes puderem demonstrar que seus resultados sao confiaveis atraves de metodologias adequadas de validacao.A validacao de metodologias desenvolvidas em laboratorios e efetuada apos selecao, desenvolvimento e otimizacao dos metodos (SWARTZ; KRULL, 1997), sendo destacada pelas normas internacionais, nacionais e sistema de qualidade, como um procedimento importante para a obtencao de resultados confiaveis ao uso pretendido.Com o objetivo de definir criterios que sirvam para demonstrar a confiabilidade de resultados em laboratorios onde se trabalha com marcadores de DNA, foram realizados pequenos experimentos que permitam uma diagnose dos erros associados as metodologias utilizadas para gerar marcadores microssatelites. O erro relacionado a quantificacao de DNA por comparacao com quantidades padrao, em gel de agarose, foi relacionado a robustez da reacao em cadeia da polimerase. Estimaram-se tambem os erros associados as estimativas do tamanho de DNA em eletroforese em poliacrilamida.Para extracao de DNA de folhas, foram coletadas amostras de 50 a 100 mg de folhas jovens de algodoeiros, e procedeu-se basicamente da mesma maneira que Menezes et al. (2008). O tecido foliar foi colocado em microtubos de capacidade de 1,5mL e submergidas em nitrogenio liquido. A maceracao foi feita com pistilos adaptados aos microtubos, na presenca de nitrogenio liquido.A adequacao de modelos de regressao utilizados para o calculo do numero de pares de bases de moleculas de DNA foi feita em eletroforese de geis de poliacrilamida. Mediram-se as bandas fornecidas por um marcador de peso molecular de 50; 100; 150; 200; 250; 300 e 350, em milimetros, em 3 diferentes cubas, com 6 repeticoes para cada cuba. Os valores foram utilizados para calculo do numero de pares de base de acordo com dois diferentes metodos: i) um modelo de regressao em que o tamanho do DNA, em numero de pares de base, e igual ao inverso da mobilidade, em milimetros (SURZYCKI, 2000). ii) Um modelo de regressao de melhor ajuste escolhido pelo programa Table Curve 2D (STACON, 2010).A porcentagem de acerto caiu com o aumento da quantidade de DNA, sendo 40; 57 e 20%, respectivamente, para 150; 200 e 250 ng de DNA. Assim, para diminuir os erros associados a quantificacao de DNA pode-se sugerir a repeticao da quantificacao do DNA quando este for quantificado como maior que 100 ng.As estimativas do numero de pares de bases de cada banda do marcador de peso molecular apos a analise de regressao de melhor ajuste, para cada caso, fornecida pelo programa TableCurve 2, estao apresentadas na Tabela 4.A precisao da quantificacao de DNA varia com a quantidade de DNA mensurada. Corinthians e eleito o clube mais valioso das Americas e prova que o crime compensaSe alguem declamar a velha e batida frase o crime nao compensa, de de ombros. Afinal, a marca Corinthians vale R$ 1, 3 bilhao. Todos os trambiques com arbitros, com a CBF, com a MSI, com o Kassab e com o Lula transformaram o Timao na marca mais valiosa