embrionario, dirige o deposito de elastina na formacao da fibra elastica, e que a fibrilina 1 teria um papel posterior na manutencao da integridade e no suporte dessas fibras.Figura 5: Populacao da linhagem germinativa das quimeras pelas celulas ES. Animais quimericos cruzados com femeas CD-1 (pelagem branca) deram origem a uma ninhada de animais de pelagem agouti. Isso indica que a linhagem germinativa das quimeras foi populada pelas celulas ES e, assim, o genotipo dessas celulas foi transmitido a proleLinhagem mgR:O segundo alelo Fbn1 mutante (mgR) foi criado atraves da insercao do gene neo entre os exons 18 e 19 (Pereira et al., 1999) (Figura 7). Apesar dessa insercao nao causar nenhuma perda de sequencia do gene Fbn1, ela leva a uma reducao de 5 vezes na expressao do alelo mutado. Assim, o alelo mgR consiste emuma mutacao hipomorfica que produz 20% de moleculas de fibrilina- 1 normais. Como esperado, animais heterzigotos mgR/+ sao normais. Em contraste, camundongos homozigotos mgR/mgR desenvolvem cifose severa e morrem abruptamente de falha do sistema cardiovascular ate os tres meses de idade. Esses animais mutantes tambem apresentam hernia de diafragma e ossos alongados, similar a pacientes com SMF. A analise histopatologica dos animais mgR/mgR revelou uma participacao importante da resposta inflamatoria na progressao das manifestacoes vasculares da mutacao (Pereira et al., 1999). Assim, esses estudos sugerem que a inibicao dessa resposta em individuos com a SMF pode retardar as manifestacoes da doenca no sistema cardiovascular.Figura 7: Mutacoes no gene Fbn1 geradas por recombinacao homologa em celulas ES. A proteina fibrilina esta esquematizada. Regioes em cinza correspondem aquelas modificadas nos alelos mutantes. Exons 1, 17 a 28 do gene selvagem (Fbn1wt) estao representados. O alelo mgD consiste na substituicao dos exons 18 a 24 pela cassete de expressao neo, o que leva a producao de monomeros de fibrilina com uma delecao interna, porem em baixa quantidade. O alelo mgR e uma insercao dessa cassete no intron 18 do gene Fbn1, resultando na baixa expressao de fibrilina normal a partir desse alelo. O aleloFbn10 e um alelo nulo do gene Fbn1. Nele, parte do exon 1, incluido o codon de inicio de traducao (ATG) e a sequencia codificadora do peptideo sinal, foi substituida pelo gene reporter da fosfatase alcalina humana (hFA) e a cassete de expressao neo. O gene hFA fica colocado sob controle do promotor do gene Fbn1 (seta)Fbn10:Finalmente, uma terceira mutacao no gene Fbn1 foi gerada em nosso laboratorio nas celulas ES USP-1: um alelo nulo (Fbn10) (Figura 7). Para isso, o vetor de recombinacao homologa foi construido de maneira que promovesse uma substituicao de parte do exon 1 do gene Fbn1 pelo gene reporter da fosfatase alcalina e pela cassete de expressao neo. Espera-se que a delecao do codon de iniciacao de traducao e da sequencia codificante do peptideo sinal, presentes no exon 1, ira inviabilizar a traducao correta da fibrilina-1. Alem disso, a presenca do gene reporter da fosfatase alcalina sob controle do promotor endogeno do gene Fbn1 facilitara a analise da expressao temporal e espacial desse gene em animais heterozigotos.Perspectivas: Nos ultimos 10 anos,