DIAGNOSTICO DE DOENCAS GENETICAS: METODOS DE RASTREAMENTOUma ampla variacao de tecnicas sao utilizadas para a identificacao de doencas geneticas. Todos os metodos tem vantagens e desvantagens e requerem consideravel habilidade e experiencia para serem realizados. Nao existe uma padronizacao ou preferencia geral por um metodo, mas os laboratorios devem ser conhecedores das limitacoes e sensibilidade dos metodos por eles usados.A apresentacao a seguir e uma sintese das diferentes estrategias, baseadas na analise do DNA, utilizadas para o diagnostico de doencas geneticas.Doencas Geneticas: Padroes de Heranca Simples ou ComplexoAutossomicas Recessivas - os genes estao presentes nos autossomas e os individuos afetados tem duas copias do gene mutante. Ex: Fibrose Cistica. Autossomicas Dominantes - os genes tambem estao nos autossomas, mas basta uma copia do gene mutante para causar a doenca. Ex: Doenca de Huntington. Ligadas ao Cromossomo X - os genes agem como mutacoes dominantes no sexo masculino. Ex: Distrofia muscular de Duchenne. Poligenicas ou Multifatoriais- resultam de mutacoes em genes diferentes ou surgem da interacao de fatores ambientais com multiplos genes. Ex: Doencas cardiacas coronarias, cancer e esquizofrenia.Aconselhamento GeneticoO aconselhamento genetico e o conjunto de informacoes dado a familia com relacao ao risco de recorrencia , prognostico e possiveis tratamentos de uma determinada doenca genetica.Testes Geneticos Citogenetico DNA Metabolico Metodos de Analise do DNA (Diagnostico Molecular)As tecnicas mais comuns de diagnostico molecular sao: amplificacao enzimatica do DNA (PCR) digestao da fita de DNA genomico ou produto de PCR com enzimas de restricao separacao eletroforetica do DNA ou do produto de PCR hibridacao do DNA ou fragmentos de PCR com sondas oligonucleotidicas.Aplicacoes da PCR1. A PCR permite a rapida amplificacao de um gene especifico ou de um exon de um determinado gene como a primeira etapa para rastreamento de mutacoes nao caracterizadas: PCR para amplificacoes de exons especificos do DNA genomico RT-PCR para analise de transcritos 2. A PCR permite a rapida genotipagem de marcadores polimorficos:Como uma alternativa de RFLP pelo desenho de primers flanqueadores de sitio de restricao polimorfico, permitindo a amplificacao da regiao do polimorfismo e digestao do produto da PCR com a enzima de restricao sitio especifica. Pelo desenho de primers de sequencias que flanqueiam repeticoes em tandem ou seja Short tandem repeat polymorphisms (STRs), conhecidas como microssatelites, que sao sequencias curtas de 1-4 nucleotideos de comprimento, que se repetem diversas vezes em tandem e que geralmente sao caracterizadas por muitos alelos.3. A PCR pode ser usada para ensaio de mutacoes conhecidas A discriminacao alelica pelo tamanho: pequenas delecoes ou insersoes em alelos que podem ser detectadas por PCR, por exemplo, delecoes no alelo mais comum que causa a fibrose cistica (DF508) A suscetiblidade a enzima de restricao: mutacoes que mudam um sitio de restricao podem ser detectadas como descrito anteriormente, pela digestao do produto de PCR com a enzima de restricao especifica4. PCR alelo-especifico (teste de ARMS) Mutacoes conhecidas podem ser identificadas pelo desenho de tres primers, um especifico para o alelo mutante, o outro especifico para o alelo selvagem e o terceiro e especifico da regiao flanqueadora (conservada) do exon e que sera o primer que vai encaminhar