na maioria das vezes, acondicionado em meios de transporte, foi coletado material ceruminoso ou purulento, do conduto auditivo de 342 animais e enviados ao nosso laboratorio em Campo Grande, Rio de Janeiro (Labovet). Estes materiais apresentavam os mais diversos aspectos: incolor, marrom claro, marrom escuro, vermelho (com sangue), purulento, inodoro, com odor putrido etc. Todos os materiais, apos terem sido coletados, foram transportados sob refrigeracao, e levados imediatamente por meio de transporte motorizado.Citologia - Previamente ao cultivo, foi realizada uma citologia de cada material coletado, preparando-se um esfregaco atraves de um movimento rotatorio feito com o swab sobre uma lamina de microscopia, previamente descontaminada na chama do bico de Bunsen. A coloracao foi feita pelo metodo de Gram e a contagem de leveduras foi realizada em aumento de 1000 x, determinando-se o numero medio em um total de 10 campos diferentes.Cultivo Considerando que a principal exigencia nutricional da Malassezia esta relacionada a dependencia de acidos graxos, diversos procedimentos podem ser empregados para cultiva-la, sendo o principal o emprego de meios de cultura adicionados de oleos vegetais (canola, soja, milho, girassol, oliva) para que se consiga bons crescimentos de todas as sete especies. M. pachydermatis que e lipofilica, mas nao lipodependente, pode ser cultivada nos meios de uso comum em micologia, como o meio de Sabouraud, acrescido de antibioticos como o cloranfenicol (Fig. 3). Neste meio, M. pachydermatis apresenta colonias redondas, convexas, foscas, de cor creme-amarelada e textura friavel; o crescimento otimo se da a temperatura de 37C em 48 a 72 horas. Podem ainda ser observadas colonias com dois diferentes fenotipos no que diz respeito ao diametro (grandes ou pequenas), ambas contendo celulas com as mesmas caracteristicas microscopicas.Para o cultivo de bacterias, cada swab foi mergulhado em 1 ml de solucao salina esteril, seguindo-se agitacao forte, para se obter uma suspensao com o material presente no algodao do swab. Com uma alca de platina, uma gota desta suspensao foi semeada em placas de agar sangue, incubando-se em estufa a 37o C por 24 a 48 horas.Fig. 3 - Cultivo de M. pachydermatis em meio de Sabouraud acrescido de oleo vegetalIdentificacao das bacterias A identificacao dos isolados baseou-se nas caracteristicas coloniais, morfologia microscopica (coloracao de Gram), motilidade e em testes bioquimicos. Para o genero Staphylococcus foram empregados os testes de hemolise, catalase, fermentacao do manitol, prova da coagulase e DNAse. Para os Gram negativos foram empregados os Enterokits B e C, constituidos dos seguintes testes: fermentacao de lactose, adonitol, provas de indol, H2S, urease, hidrolise da gelatina, utilizacao de citrato, desaminacao do triptofano, descarboxilacao da lisina, ornitina.RESULTADOS E DISCUSSAONo diagnostico das otites externas, as analises citologicas, muito importantes na definicao da etiologia, devem ser feitas com muito cuidado porque, em cerca de 35% dos materiais oriundos de animais sem historia clinica de otite, podem ser encontradas leveduras com caracteristicas morfologicas de M. pachyderrnatis. Por isso, houve necessidade de estabeler parametros que indicassem um estado de normalidade ou de um processo patologico em que houvesse o envolvimento da Malassezia. Tendencias atuais indicam que M. pachyderrnatis podera ser considerada como agente etiologico de otites externas