Leitor doRNAse Free (por e-mail):Quando vou fazer a extracao deRNA de musculo de anfibios ha a formacao de uma "goma" que naose desfaz e isso acaba prejudicando o resultado final. Ja tentei aextracao por kit e tradicional, mas nada funciona. Voce ja teve uma experienciacomo essa?Sim, eu ja tive uma experiencia como esta! Ao extrair RNA de musculo de ostra por extracao organica/acida (com o famoso reagente "rosinha" que nao cito o nome para nao fazer propaganda de graca! rs), eu tive exatamente este problema. O pellet obtido era um material gelatinoso e insoluvel, que nao dissolvia em agua por nada.A resposta para este problema eu encontrei no manual do reagente de extracao de RNA. A presenca de material insoluvel pode acontecer com tecidos com alto teor de proteinas, gorduras, polissacarideos ou material extracelular. O musculo e um exemplo destes tecidos "problematicos", pois tem alto teor de polissacarideos e proteinas, como o colageno, que acabam formando o material insoluvel obtido no final da extracao.A solucao indicada no manual e bem simples e funcionou com as minhas amostras de musculo de ostra. Apos homogeneizar o tecido no reagente de extracao, deve-se centrifugar o homogenato obtido (12000xg, 4oC, durante 10 minutos). Apos esta centrifugacao, o material insoluvel em questao estara precipitado. Deve-se, entao, transferir o sobrenadante para um novo tubo e descartar este precipitado. A partir dai, basta dar continuidade ao protocolo recomendado.Na epoca, isso foi o suficiente para resolver o problema. Mas alem desta centrifugacao extra, uma purificacao com cloreto de litio pode ajudar tambem! Eu sou "fa" do cloreto de litio, como ja falei aqui, por que ele precipita RNA, mas nao precipita DNA, proteinas e polissacarideos. E, portanto, remove estes contaminantes da amostra de RNA. Quem quiser saber mais sobre o cloreto de litio, pode dar uma olhada neste link: "The Use of LiCl Precipitation for RNA Purification".--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Enviesuas perguntas na forma de comentarios ou por e-mail (blog.rnase.free @ gmail.com) e suas duvidas poderao dar origem a um post na sessao "Troubleshooting"do RNAse Free. Em 1953, ha exatos 60 anos,Watson e Crick desvendaram a estrutura do DNA e o pareamento de bases e assim abriramcaminho para um mundo de possibilidades na biologia. Hoje, muitas destas possibilidadesse tornaram realidade e ate excecao para a famosa dupla helice de DNA foi encontrada, com a descoberta do DNA quadruplex-G em celulashumanas. Por outro lado, somente no ano passado foi possivel fotografar diretamente a dupla helice do DNA, que ate entao havia sido evidenciada apenaspor metodos indiretos (mas nao pouco precisos!).A esquerda, representacao do DNA quadruplex-G (credito: Thomas Splettstoesser). A direita, primeira foto do DNA dupla helice obtida por microscopia eletronica (credito: Enzo Di Fabrizio) E praticamente impossivel resumirtudo o que foi feito na area da genetica molecular neste periodo, mas algunsnumeros nos mostram a dimensao da producao cientifica nestes 60 anos. No Pubmed,um dos principais bancos de dados para pesquisas bibliograficas na areabiomedica, ha mais de 1,7 milhao de artigos publicados contendo o termo gene.O GenBank, banco de dados de sequencias de DNA, nao para de crescer e atualmentepossui cerca de 1,6 bilhao de sequencias