incluindo osteogenesis imperfecta (Bonadio et al., 1990), atraves da insercao de um alelo mutado -transgene - no genoma do camundongo. No entanto, esse metodo apresenta algumas limitacoes. Por causa do sitio aleatorio de integracao do transgene, este podera nao estar sob o controle de todos os elementos em cis que controlam a expressao do gene endogeno. Assim, a expressao temporal e espacial do transgene nao seguira o padrao de expressao do gene endogeno. Alem disso, a introducao de um terceiro alelo - o transgene mutante - cria uma situacao artificial no que diz respeito a proporcao entre os transcritos normais e os mutantes. Enquanto uma pessoa com uma doenca genetica dominante possui um alelo normal e um mutado, o camundongo transgenico possuira dois alelos endogenos normais e diversas copias do alelo mutante (transgene). Essa proporcao pode ser critica em doencas suscetiveis a efeitos de dosagem genica.Figura 2: Recombinacao homologa. Exons estao representados por retangulos, introns por linhas azuis. O vetor de recombinacao homologa possui duas regioes de homologia ao gene alvo (homol. 5. e 3.). O pareamento dessas regioes com as regioes homologas do locus endogeno permite que duas recombinacoes reciprocas levem a substituicao de um exon (cinza) pela cassete de expressao neo. A deteccao do evento de recombinacao homologa e feita por Southernblot de DNA genomico das colonias de celulas ES. Uma sonda externa a regiao de homologia (barra verde) e utilizada em DNA digerido com a enzima de restricao EcoRI (E). A substituicao do exon por neo introduz um sitio de EcoRI no locus, gerando uma banda menor referente ao alelo mutado. Uma colonia recombinante e detectada (*)Manipulacao do genoma do camundongo atraves de celulas ES:Recentemente, a combinacao do cultivo de celulas ES e da recombinacao homologa resultou na criacao de um metodo alternativo e mais preciso para manipular o genoma do camundongo.As celulas ES podem ser modificadas geneticamente, em cultura, atraves da recombinacao homologa, processo que promove a substituicao do alelo normal de um gene especifico pela versao mutada do mesmo gene, construida no laboratorio (Figura 2). Dessa forma, sao obtidas linhagens de celulas ES geneticamente modificadas. Essas sao agregadas a morulas de camundongos in vitro e, assim, incorporadas ao embriao (Figura3). Os camundongos resultantes serao quimeras formadas de celulas do embriao recipiente e das celulas ES recombinantes. Se essas ultimas colonizarem a linhagem germinativa dos animais quimericos, a mutacao sera entao transmitida as novas geracoes de camundongos (Figura 4). A capacidade de modificar regioes especificas do genoma do camundongo por recombinacao homologa permite a criacao em potencial de camundongos com qualquer genotipo desejado.O vetor mais comumente usado para recombinacao homologa e o chamado vetor de substituicao de sequencia, que contem o gene de resistencia a neomicina (neo) flanqueado por sequencias homologas ao gene alvo (Capecchi,1989) (Figura 2). Atraves de dois eventos de recombinacao reciprocos, esse tipo de vetor media a substituicao das sequencias endogenas de DNA pelas sequencias exogenas contidas no vetor (Figura 2). Assim, sao criadas mutacoes em loci especificos do genoma do camundongo. Mutacao condicional -sistema CRE-loxP: Outro tipo de vetor desenvolvido ainda mais recentemente utiliza