na interface entre os dominios A2 e A3. A mutacao S109P, descrita pela primeira vez neste trabalho, esta localizada no dominio A1, nos residuos 108-124, o qual pode conter um sitio de Ca2+. Modificado de Gorziza et al. 2013.Figura 2. O efeito da mutacao L2297R sobre o potencial eletrostatico do FVIII. Na esquerda, esta representada a molecula do FVIII, com seu dominio C2 em vermelho. Na direita, acima, esta a proteina selvagem L2297 e abaixo, os residuos mutados estao representados. Note que na estrutura mutada ha uma area pronunciada de cargas carregadas positivamente, ausente na estrutura selvagem. Azul, positivo; vermelho, negativo; branco, cargas neutras. Os valores das cargas calculadas variam entre -5 kT (vermelho) e +5 kT (azul). Modificado de Gorziza et al., 2013. Foram encontradas nos pacientes graves: uma grande delecao, novepequenas delecoes, cinco pequenas insercoes, oito mutacoes de sentido trocado eseis mutacoes sem sentido, das quais treze sao recorrentes e dezesseis saonovas mutacoes, nao descritas no banco de dados online HAMSTeRS [4]. Entreoutras mutacoes de efeito evidente, foram encontradas duas mutacoes (D542G e S109P)que podem interferir em sitios de ligacao ao calcio, uma mutacao (P2205R) quepode ser prejudicial a interacao entre o FVIII e o fator de von Willebrand(FvW) e uma mutacao (L2297R), que altera a superficie eletrostatica daproteina. Todas essas interacoes sao fundamentais para que a proteina do FVIIItenha atividade normal. As Figuras 1 e 2 ilustram essas mutacoes. Nos pacientes leves, foram encontradas 27 mutacoes de sentido trocado,uma pequena delecao, duas pequenas duplicacoes e tres mutacoes em sitios deprocessamento de RNA, sendo que nove dessas mutacoes nao eram descritas emoutras populacoes no banco de dados HAMSTeRS. As ferramentas de bioinformaticativeram grande importancia para ilustrar o possivel efeito dessas mutacoes naproteina. Todas as mutacoes de sentido trocado estao representadas na Figura3, que mostra a posicao e a diferenca entre os residuos mutantes e selvagens daproteina. Figura 3. Localizacao das novas mutacoes de sentido trocado na proteina FVIII. Mutacoes ilustradas em vermelho ocorrem em pacientes moderados e as ilustradas em verde em pacientes leves. A cadeia lateral dos aminoacidos selvagens esta ampliada e as dos residuos mutantes esta representada ao lado ou abaixo. Esferas amarelas representam ions calcio e esferas vermelhas ions cobre. Modificado de Rosset et al., 2013. A mutacao p.Val266Met, esta proxima a um sitio de ligacao ao cobre,fundamental para a estabilidade da proteina. Essa mutacao foi predita pelossoftwares preditores do efeito de mutacoes causadoras de doenca. Outra mutacaoprovavelmente causadora de doenca encontrada foi a p.Gly304Val, localizadaproxima a um sitio de ligacao ao fator X, fundamental para a atividade decoagulacao (Figura 3). A mutacao p.Met567Lys provoca uma mudanca de carganessa posicao, podendo causar repulsao entre os residuos vizinhos, como mostraa Figura 4. Figura 4. Na esquerda, esta representada a molecula do FVIII ativada, com seu dominio A2 em vermelho. Na direita, acima, a representacao da superficie eletrostatica do dominio com o aminoacido Met567, selvagem. Abaixo a representacao da superficie eletrostatica do dominio com o residuo mutante, Lys567. Proximo ao residuo mutado ha uma grande area com cargas positivas, ausente na estrutura selvagem. Azul, positivo; vermelho, negativo; branco, cargas