o DGGE e uma metodologia de rastreamento adequada para mutacoes no proto-oncogene RET.________________________________________________________________________________ 9o - Uso de marcacao nao radiativa para identificacao de grandes rearranjos genicos na deficiencia da 21-hidroxilase Cukier, P. , Bachega, T. A.S.S., Mendonca, B. B, Billerbeck, A.E.C Padronizar a tecnica de Southern blotting usando hibridizacao com material nao radioativo para detectar grandes rearranjos no gene CYP21A2 em uma amostra da populacao brasileira com hiperplasia adrenal congenita. Foram estudados 42 pacientes, 2 dos quais aparentados, totalizando 80 alelos nao relacionados. As amostras de DNA foram obtidas de sangue periferico, digeridas com enzima de restricao Taq I, realizado Southern blotting e hibridizadas com sonda marcada com biotina. O metodo se mostrou eficaz, com resultados similares aos encontrados ao utilizar a metodologia com material radioativo. Foram encontradas 2,5% de delecao do CYP21A2, 8,8% de grandes conversoes, 3,8% de delecao do CYP21A1P e 6,3% de duplicacao do CYP21A1P. Estas frequencias foram similares as encontradas em nosso estudo previo, onde um numero significante de casos foi estudado. Um bom padrao de hibridizacao foi alcancado utilizando menor quantidade de DNA (5mg) e a emissao de sinais foi observada entre 5 minutos e 1 hora de exposicao. Padronizamos uma tecnica de Southern blotting/ hibridizacao com material nao radioativo (biotina) para a pesquisa de grandes rearranjos no gene CYP21A2 com bons resultados. Apesar de ser mais trabalhoso, este metodo e mais rapido, utiliza menores quantidades de DNA e, principalmente, evita problemas com o uso de radioatividade.______________________________________________________________________________ 10o - Teorias biologicas do envelhecimento:do genetico ao estocastico Farinatti, P. T. V. As teorias biologicas do envelhecimento examinam o assunto sob a otica da degeneracao da funcao e estruturados sistemas organicos e celulas. De forma geral, podem ser classificadas em duas categorias: as de natureza genetico - desenvolvimentista e as de natureza estocastica. As primeirasentendem o envelhecimento no contexto de um continuum controlado geneticamente, enquanto as ultimas trabalham com a hipotese de que o processo dependeria, principalmente, do acumulo de agressoes ambientais. Por outro lado, sao frequentes as alusoes ao exercicio fisico como estrategia de intervencao que poderia ter influencias positivas no processo de envelhecimento, retardando algumas das disfuncoes comuns na idade avancada. O presente estudo apresenta os principios gerais de algumas das correntes teoricas mais aceitas, quais sejam: a) teorias com base genetica; b) teorias com base em danos de origem quimica; c) teorias com base no desequilibrio gradual; d)teorias com base em restricao calorica. Sao feitas consideracoes sobre seus pontos consensuais e duvidosos e, quando possivel, analisando a possibilidade de o exercicio influenciar em seu desenvolvimento. Conclui-se que as teorias afeitas a ambas as abordagens carecem de comprovacao definitiva, existindo duvidas sobre sua influencia e as formas pelas quais interagiriam. Igualmente, considerando a natureza dos processos descritos nas diferentes propostas teoricas, o papel do exercicio como estrategia de prevencao do envelhecimento parece, no minimo, incerto.