centro catalitico, que foi posteriormente confirmado utilizando mutacoes dirigidas, que consistem em modificar certos nucleotideos dentro da cadeia. Uma outra sequencia do intron permite o reconhecimento preciso do sitio de corte ao nivel da juncao intron-exon. A exemplo das reacoes enzimaticas classicas, a reacao de splicing e reversivel, podendo os introns excisados reintegrar RNAs em sitios especificos. Essa reversibilidade e responsavel, certamente, pela difusao dos introns entre os genes. E preciso mencionar que nem todos os introns do grupo I sao capazes de autoprocessamento. Em relacao a alguns, a reacao e necessariamente catalisada por proteinas. Mesmo no caso de auto-catalise, sabe-se que as proteinas, de certa forma, facilitam realmente a reacao, pois essa e cerca de 50 vezes mais rapida in vivo que in vitro.Os introns, como descritos aqui, nao se constituem verdadeiras enzimas, visto que a reacao de splicing e um rearranjo intramolecular, quer dizer ela envolve um unico RNA, que age sobre ele mesmo, ao contrario das enzimas classicas que catalisam a reacao de reagentes estranhos. Ha ainda a considerar que nas condicoes mencionadas, eles nao podem agir sucessivamente sobre varios RNAs. Na epoca da descoberta dos RNAs cataliticos, surgiu a transcricao in vitro, uma metodologia que permite a sintese de novas moleculas de RNA. Essa tecnica permitiu dissecar e testar a atividade de RNAs cataliticos modificados. O resultado mais importante nesse dominio foi a obtencao de introns que se comportavam como verdadeiras enzimas, capazes de agir sobre outras moleculas de RNA sem ser eles mesmos modificados e serem recuperados apos o processo. Isso fez nascer realmente o conceito de ribozima. Alguns anos mais tarde, Jennifer Doudna e colaboradores, do hospital geral de Massachusetts, mostraram que um intron da Tetrahymena modificado pode se comportar como uma RNA polimerase, uma enzima proteica capaz de alongar uma molecula de RNA.Cabe neste momento uma questao: verdadeiras enzimas RNA encontram-se nas celulas ou elas sao apenas frutos de manipulacoes geneticas no laboratorio? A resposta a essa questao surgiu a partir de estudos de uma enzima, a ribonuclease P (RNase P), que se encontra nas celulas de procariotos e de eucariotos e e responsavel pela maturacao do RNA transportador (RNAt). Sabe-se que os precursores do RNAt (pre RNAt) apresentam uma sequencia variavel na sua extremidade 5, que deve ser cortada para dar lugar a uma molecula funcional, capaz de assumir seu papel na sintese proteica. A funcao da RNase P, nesse processo de maturacao, e catalisar a reacao de corte dessa sequencia variavel. Essa enzima e atipica pelo fato de ser constituida de duas subunidades, sendo uma de natureza proteica (pequena proteina de massa molecular de 20.000 daltons) e a outra e uma molecula de RNA, de 377 nucleotideos. Admitia-se que a atividade catalitica da RNase P era dividida entre a subunidade nucleica e a subunidade proteica, esta assumindo uma atividade enzimatica e o RNA um papel estrutural. Em 1983, o grupo de Sydney Altman da Universidade de Yale, em Connecticut, em colaboracao com a equipe de Norman Pace, em Denver, observaram que em certas condicoes in vitro, o RNA dessas enzimas era capaz de