Objetivo: Evaluar serológicamente una proteína recombinante de 66 kDa (Er66) de una cepa del virus de la fiebre amarilla aislada en el Perú usando anticuerpos inmunoreactivos. Material y métodos: La proteína Er66 fue expresada in vitro en la bacteria Escherichia coli y enfrentada a títulos de 1/100, 1/50 y 1/25 de anticuerpos monoclonales, y a sueros con anticuerpos IgM e IgG inmunoreactivos contra el virus de la fiebre amarilla mediante ensayos de Western blot (WB). Asimismo, se evaluaron proteínas totales de las cepas de referencia del virus dengue (DEN) y fiebre amarilla como controles de antigenicidad. Resultados: La proteína recombinante Er66 presentó antigenicidad contra títulos de 1/50 y 1/25 de anticuerpo monoclonal (MAB8701); sin embargo, no se observó inmunoreactividad en sueros positivos para fiebre amarilla y dengue. Los ensayos con extractos crudos de la cepa de fiebre amarilla Asibi 17D (PTFA) revelaron que la antigenicidad de las proteínas virales comprendidas entre 60 y 80 kDa fue afectada negativamente a temperaturas desnaturalizantes de 100°C. En cambio, tratamientos con ß-mercaptoetanol sin calor generó un aumento de la antigenicidad de dichas proteínas. Siguiendo este mismo principio, la proteína Er66 fue sometida a tratamientos desnaturalizantes con ß-mercaptoetanol sin incluir calor y fue enfrentada nuevamente a los sueros reactivos. El resultado final reveló que la proteína Er66 generó inmunoreactividad frente a sueros con altos títulos de anticuerpos IgM e IgG para fiebre amarilla mientras que en otras muestras se observó una débil señal. Conclusiones: Los datos obtenidos en este trabajo demuestran que la Er66 pudo ser reconocida por anticuerpos IgM e IgG específicos para fiebre amarilla presentes en sueros de pacientes infectados. Los datos presentados en este artículo sugieren el uso de proteínas recombinantes como posibles candidatas de valor diagnóstico para la FA.

Objective: To assess a 66kDa (Er66) recombinant protein of yellow fever (YF) virus using immunoreactive antibodies. Material and methods: Er66 was expressed in Escherichia coli and then it was challenged against 1/100, 1/50 and 1/25 monoclonal antibodies containing dilutions, and against clinical sera containing specific IgM and IgG antibodies against YF virus using western blot assay. Likewise, total protein content from yellow fever virus and Dengue (DEN) virus were also tested as antigenicity control. Results: Er66 recombinant protein showed antigenicity against 1/50 and 1/25 titers of monoclonal antibodies (MAB8701); however, no immunoreactivity was observed in sera positive for yellow fever and dengue infections. Serological assays with crude extracts of 17D Asibi yellow fever virus strain revealed that antigenicity of 60 - 80 kDa viral proteins was abrogated at 100 °C (denaturizing temperature). In contrast, when total protein was subjected to b-mercaptoethanol treatments without heat, the antigenicity increased. Using this principle, ER66 protein was reduced under b-mercaptoethanol treatment and it was newly challenged to reactive sera. The final result revealed that Er66 generated immunoreactivity in sera with high titers of IgM and IgG antibodies for yellow fever, while other samples showed a weak immunoreactivity signal. Conclusion: This study shows that Er66 was recognized by specific IgM and IgG yellow fever antibodies from clinical samples of infected patients. The data presented in this study suggest the use of recombinant proteins as possible candidates with a diagnostic value for yellow fever.