El objetivo del estudio fue determinar el porcentaje de viabilidad en espermatozoides epididimarios de alpaca, antes y después del proceso de criopreservación, mediante citometría de flujo. Se recolectaron 46 testículos de alpaca de un camal de Pasco, Perú y se utilizaron 41 de ellos con motilidad espermática >30% y concentración espermática >50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides fueron recuperados de la cola del epidídimo con 1 ml de dilutor a base de leche descremada. separándose en dos alícuotas para evaluar la viabilidad antes y después del proceso de criopreservación. El dilutor fue retirado mediante lavados por centrifugación con PBS, los pellets fueron resuspendidos en 100 µl de PBS, agregándose 0.5 µl de SYBR-14 (100 nM) y 0.5 µl de ioduro de propidio - PI (12 µM) incubándose por 10 min a 38 °C. La evaluación de viabilidad espermática se realizó mediante citometría de flujo con analizador de imágenes, utilizando un láser de excitación de 488 nm y la fluorescencia emitida por el SYBR-14 y el PI fueron detectados por los canales Ch02 (505-560 nm) y Ch05 (642-740 nm), respectivamente. Los espermatozoides viables con membrana intacta emitieron fluorescencia verde (SYBR-14) y los espermatozoides no viables con membrana dañada emitieron fluorescencia roja (PI). La viabilidad antes del proceso de criopreservación (48.97 ± 11.47%) fue mayor (p<0.05) que después del proceso de criopreservación (32.30 ± 9.57%). La correlación entre viabilidad y motilidad espermática fue r=0.6737. Se concluye que el proceso de criopreservación disminuye significativamente la viabilidad en espermatozoides epididimarios de alpaca, estando este parámetro relacionado con la motilidad.

The aim of this study was to determine the percentage of viability in alpaca epididymal spermatozoa before and after the cryopreservation process by flow cytometry. A total of 46 alpaca testes were collected from a slaughterhouse in Pasco, Peru and 41 of them were used with sperm motility >30% and sperm concentration >50x106 sperm/ml. Spermatozoa were recovered from the tail of the epididymis with 1 ml of skimmed milk-based extender, separating into two aliquots to evaluate viability before and after the cryopreservation process. The extender was removed by washing by centrifugation with PBS, the pellets were resuspended in 100 µl of PBS, adding 0.5 µl of SYBR-14 (100 nM) and 0.5 µl of propidium iodide PI (12 µM), and incubated for 10 min at 38 °C. The evaluation of sperm viability was performed by flow cytometry with image analyzer, using an excitation laser of 488 nm and the fluorescence emitted by SYBR-14 and PI were detected by channels Ch02 (505-560 nm) and Ch05 (642-740 nm), respectively. Viable spermatozoa with intact membrane emitted green fluorescence (SYBR-14) and non-viable sperm with damaged membrane emitted red fluorescence (PI). The viability before the cryopreservation process (48.97 ± 11.47%) was higher (p<0.05) than after the cryopreservation process (32.30 ± 9.57%). The correlation between viability and sperm motility was r=0.6737. It is concluded that the cryopreservation process significantly reduces the viability in alpaca epididymal spermatozoa, and viability is related to sperm motility