1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Detta dokument är endast avsett som dokumentationshjälpmedel och institutionerna ansvarar inte för innehållet
►B KOMMISSIONENS FÖRORDNING (EG) nr 1459/98
av den 8 juli 1998
om en referensmetod för bestämning av vanillin i koncentrerat smör, smör eller grädde
(EGT L 193, 9.7.1998, s. 16)
Ändrad genom:
Officiella tidningen
nr sida datum
►M1Kommissionens förordning (EG) nr 175/1999 av den 26 januari 1999 L 20 22 27.1.1999
1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
KOMMISSIONENS FÖRORDNING (EG) nr 1459/98
av den 8 juli 1998
om en referensmetod för bestämning av vanillin i koncentrerat
smör, smör eller grädde
EUROPEISKA GEMENSKAPERNAS KOMMISSION HAR ANTAGIT
DENNA FÖRORDNING
med beaktande av Fördraget om upprättandet av Europeiska gemen-
skapen,
med beaktande av rådets förordning (EEG) nr 804/68 av den 27 juni
1968 om den gemensamma organisationen av marknaden för mjölk ochmjölkprodukter(
1), senast ändrad genom förordning (EG) nr 1587/
96 (2), särskilt artiklarna 6.6 och 12.3 i denna, och
med beaktande av följande:I kommissionens förordning (EG) nr 2571/97 om försäljningen av smör
till sänkta priser och om beviljande av stöd för grädde, smör ochkoncentrerat smör avsett att användas i framställningen av konditori-varor, glass och andra livsmedel(
3), föreskrivs spårning av grädde, smör
och koncentrerat smör under olika förhållanden i syfte att kontrolleraden slutliga användningen av dessa produkter.
På grund av spårningens betydelse för att ordningen skall fungera
korrekt och för att aktörer som deltar i den skall behandlas likvärdigtbör gemensamma metoder införas för att bestämma de spårämnen somanges i förordning (EG) nr 2571/97.
Det är svårt att fastställa sådana referensmetoder för alla spårämnen
samtidigt. Att införa en referensmetod för bestämning av vanillin ikoncentrerat smör, smör eller grädde är ett ytterligare steg i dennariktning.
De åtgärder som föreskrivs i denna förordning är förenliga med
yttrandet från Förvaltningskommittén för mjölk och mjölkprodukter.
HÄRIGENOM FÖRESKRIVS FÖLJANDE.
Artikel 1
Den analysmetod som fastställs i bilagan skall tillämpas som referens-
metod för bestämning av vanillin i koncentrerat smör, smör eller gräddei enlighet med förordning (EG) nr 2571/97.
Koncentrerat smör, smör eller grädde har spårats i överensstämmelse
med artikel 6 i förordning (EG) nr 2571/97 om resultaten överens-stämmer med specifikationerna i punk t 8 i bilagan.
Artikel 2
Denna förordning träder i kraft den tredje dagen efter det att den har
offentliggjorts i Europeiska gemenskapernas officiella tidning .
Den skall tillämpas från och med den 1 september 1998.
Denna förordning är till alla delar bindande och direkt tillämplig i alla
medlemsstater.
(1) EGT L 148, 28.6.1968, s. 13.
(2) EGT L 206, 16.8.1996, s. 21.
(3) EGT L 350, 20.12.1997, s. 3.
1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
BILAGA
Bestämning av vanillininnehåll i koncentrerat smör, smör och grädde med
HPLC
1.Användningsområde
Med denna metod bestäms mängden vanillin i koncentrerat smör, smör
eller grädde.
Den skall tillämpas på prover som erhållits i enlighet med förordning (EG)
nr 2571/97.
2.Princip
En känd mängd av provet extraheras med en blandning av isopropanol/
etanol/acetonitril (1:1:2). Utfällning av största delen fett genom avkylningtill mellan −15 °C och −20 °C, åtföljd av centrifugering.
Efter utspädning med vatten, bestämning av vanillininnehållet med HPLC.
3.Utrustning
Sedvanlig laboratorieutrustning, i synnerhet följande:
3.1 Frys med en temperatur på mellan −15 °C och −20 °C.
3.2 Engångssprutor, 2ml.3.3 Membranmikrofilter med 0,45 µm porstorlek som är resistent mot en
lösning som innehåller 5 % extraktionslösning (4.4).
3.4 Vätskekromatografisystem bestående av en pump (flöde på 1,0 ml/min), en
injektor (20 µl-injektion, automatisk eller manuell), en UV-detektor
(inställd på 306 nm, 0,01 AU fullt utslag), en skrivare eller integrator ochen kolonntermostat inställd på 25 °C.
3.5 Analyskolonn (250 mm × 4,6 mm innerdiameter) packad med Lichrospher
RP 18 (Merck, 5 µm) eller motsvarande.
3.6 Förkolonn (ca 20 m m×3m m innerdiameter), torrpackad med Perisorb RP
18 (30−40 µm) eller motsvarande.
4.Reagenser
Alla använda reagenser skall vara av godkänd analytisk kvalitet.
4.1 Isopropanol4.2 Etanol 96 % (v/v)4.3 Acetonitril4.4 Extraktionslösning
Blanda isopropanol (4.1), etanol (4.2) och acetonitril (4.3) i förhållandet
1:1:2 (v/v).
4.5 Vanillin (4-hydroxi-3-metoxibensaldehyd)4.5.1 Vanillin-stamlösning (=500 µg/ml)
Väg med 0,1 mg noggrannhet upp ca 50 mg (CM mg) vanillin (4.5) i en
100 ml mätkolv, tillsätt 25 ml extraktionslösning (4.4) och späd till märketmed vatten.
4.5.2 Vanillin-standardlösning (=10 µg/ml)
Överför med pipett 5,00 ml vanillin-stamlösning (4.5.1) till en mätkolv på
250 ml och späd till märket med vatten.
4.6 Metanol, HPLC-kvalitet4.7 Isättika4.8 Vatten av HPLC-kvalitet4.9 HPLC rörlig fas
Blanda 300 ml metanol (4.6), ca 500 ml vatten (4.8) och 20,0 ml isättika
(4.7) i en mätkolv på 1 000 ml och späd till märket med vatten (4.8).Filtrera genom 0,45 µm filter.
1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
5.Utförande
5.1 Provberedning5.1.1 Smör
Värm provet tills det börjar smälta. Undvik lokal överhettning över 40 °C.
När provet blir tillräckligt plastiskt skall det homogeniseras genom skak-ning. Rör om smöret i 15 s. innan ett prov tas. Väg up p 5 g (SM g) smör
på 1 mg när och överför det till en mätkolv på 100 ml.
5.1.2 Koncentrerat smör
Omedelbart före provtagningen placeras behållaren med koncentrerat smör
i en ugn med 40−50 °C värme tills det har smält fullständigt. Blanda provet
genom att snurra eller röra. Undvik att luftbubblor bildas på grund avalltför häftig omrörning. Väg up p 4 g (SM g) koncentrerat smör på 1 mg
när och överför det till en 100 ml mätkolv.
5.1.3 Grädde
Värm upp provet i ett vattenbad eller en inkubator med temperatur på
35−40 °C. Fördela fettet homogent genom att snurra och, om nödvändigt,
röra. Kyl ned provet snabbt till 20 ± 2 °C. Provet bör se homogent ut,
annars bör förfarandet upprepas. Väg upp 10 g (SM g) grädde på 1 mg näroch överför det till en 100 ml mätkolv.
5.2 Beredning av provlösningen
Tillsätt ca 75 ml extraktionslösning (4.4) till provmängden (5.1.1, 5.1.2
eller 5.1.3), rör om eller skaka kraftligt under 15 minuter och späd tillmärket med extraktionslösning (4.4). Överför ca 10 ml av detta extrakt tillett provrör som försetts med en propp. Placera provröret i frysen (3.1) ochlåt det stå ca 30 minuter. Centrifugera det kalla extraktet 5 min vid ca2 000 varv/min och häll upp omedelbart. Låt den upphällda lösningensvalna till rumstemperatur. Överför med pipett 5,00 ml upphälld lösningtill en 100 ml mätkolv och späd till märket med vatten. Filtrera en alikvotgenom ett membranmikrofilter (3.3). Filtratet är färdigt för bestämninggenom HPLC.
5.3 Kalibrering
Överför med pipett 5,00 ml av vanillin-standardlösningen (4.5.2) till en
100 ml mätkolv. Tillsätt 5,0 ml extraktionslösning (4.4) och späd tillmärket med vatten. Denna lösning innehåller 0,5 µg/ml vanillin.
5.4 Bestämning med HPLC
Låt kromatografisystemet stabiliseras under ca 30 min. Injicera standard-
lösningen (5.3). Upprepa detta tills skillnaden i toppyta eller topphöjdmellan två på varandra följande injektioner är mindre än 2 %. Vid ovan-nämnda betingelser är retentionstiden för vanillin ca 9 min. Analyserastandardlösningen (5.3) i duplikat genom att injicera 20 µl. Injicera 20 µl
av provlösningarna (5.2). Bestäm ytan eller höjden på den erhållna vanil-lintoppen. Upprepa injektionen av standardlösningen (5.3) i duplikat efter10 injektioner av provlösningar (5.2).
6.Beräkning av resultaten
Beräkna den genomsnittliga toppytan (eller topphöjden) (AC) av de vanil-
lintoppar som härrör från de duplikatinjektioner som omger varje serie avprovlösningar (totalt 4 ytor).
Beräkna responsfaktorn (R):
R = AC/CM
där CM är vanillinmassan i mg (4.5.1).
Halten (mg/kg) av vanillin (C) i provet ges av:
C=AS × 20 × 0,96
S M×R
där
AS = toppyta för provets vanillintopp
▼M1
SM = provets mass a i g (5.1.1, 5.1.2 eller 5.1.3).
Om analysen görs för att bestämma mängden vanillin i grädde
skall koncentrationen av spårämne uttryckas som mg spårämne/kgmjölkfett. Detta görs genom att multiplicera C med 100/f, där f ärprocentandeln fett i grädden (m/m).
1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼B
20 = faktor som tar hänsyn till utspädningarna av standardlösningen och
provet
0,96 = korrigeringsfaktor för fetthalten i första utspädningen av provet
OBS:
I stället för toppyta kan topphöjd andvändas (se 8.3)
7.Metodens noggrannhet
7.1 Repeterbarhet (r)
Skillnaden mellan resultaten från två bestämningar som med kortast
möjliga mellanrum utförts av en person som använder samma utrustningpå identiskt provmaterial får inte vara större än 16 mg/kg.
7.2 Reproducerbarhet (R)
Skillnaden mellan resultaten från två bestämningar som utförts i olika
laboratorier med hjälp av olika utrustning på identiskt provmaterial får intevara större än 27 mg/kg.
8.Toleransgränser
8.1 Tre prover måste tas från den spårade produkten för att homogeniteten
skall kunna kontrolleras.
8.2 Spårämne som erhållits antingen från vanilj eller från syntetisk vanillin.
▼
M1
8.2.1 250 gram 4-hydroxi-3-metoxibensaldehyd iblandas per ton koncentrerat
smör eller smör. Vid spårning i grädde skall 250 gram iblandas per ton mjölkfett.
8.2.2 Analysresultaten av de tre produktproverna skall användas för att kontrol-
lera renhetsgraden och homogeniteten av spårämnets iblandning och detlägsta resultatet skall jämföras med följande gränser (med ett konventio-nellt konfidensintervall på 95 % [CrD95]):
— 221,0 mg/kg (95 % den minsta tillåtna iblandningen),
— 159,0 mg/kg (70 % av den minsta tilllåtna iblandningen).
Koncentrationen av spårämne i det prov som ger det lägsta resultatet
jämförs med en interpolering mellan 221,0 mg/kg och 159,0 mg/kg.
▼
B
8.3 Spårämne som erhållits enbart från vaniljbönor eller fullständiga extrakt
därav.
▼M1
8.3.1 100 gram 4-hydroxi-3-metoxibensaldehyd iblandas per ton koncentrerat
smör eller smör. Vid spårning i grädde skall 100 gram iblandas per tonmjölkfett.
8.3.2 Analysresultaten av de tre produktproverna skall användas för att kontrol-
lera renhetsgraden och homogeniteten av spårämnets iblandning och detlägsta resultatet skall jämföras med följande gränser (med ett konventio-nellt konfidensintervall på 95 % [CrD95]):
— 79,0 mg/kg (95 % av den minsta tillåtna iblandningen).
— 54,0 mg/kg (70 % av den minsta tillåtna iblandningen).
Koncentrationen av spårämne i det prov som ger det lägsta resultatet
jämförs med en interpolering mellan 79,0 mg/kg och 54,0 mg/kg.
▼
B
9.Anmärkningar
9.1 Repeterbarheten r är det värde under vilket den absoluta skillnaden mellan
två individuella provresultat som har erhållits med samma metod på iden-tiskt provmaterial under samma förhållanden (samma apparatur, sammalaboratorium och ett kort tidsintervall) kan förväntas ligga inom en angivensannolikhet. I frånvaro av andra indikationer är sannolikheten 95 %.
9.2 Reproducerbarheten R är det värde under vilket den absoluta skillnaden
mellan två individuella provresultat som har erhållits med samma metodpå identiskt provmaterial under olika förhållanden (olika personer, olikaapparatur, olika laboratorier och/eller olika tidsintervall) kan förväntasligga inom en angiven sannolikhet. I frånvaro av andra indikationer ärsannolikheten 95 %.
1998R1459 — SV — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
9.3 Utbytet av tillsatt vanillin vid en nivå av 250 mg/kg smörolja varierar
mellan 97,0 och 103,8. Den påträffade genomsnittshalten var 99,9 % meden standardavvikelse på 2,7 %.
9.4 Standardlösningen innehåller 5 % extraktionslösning för att kompensera
för den toppbreddning som orsakas av närvaro av 5 % av extraktionslös-ningen i proven. Detta möjliggör kvantifiering med hjälp av topphöjden.
9.5 Analysen bygger på en linjär kalibreringskurva med en nollskärningspunkt.
Genom användning av lämpliga utspädningar av standardlösningen (4.5.2)bör linjariteten kontrolleras första gången analysen utförs och sedan regel-bundet och efter byten eller reparationer av HPLC-utrustningen.