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REGULAMENTO (CEE) Nº 1864/90 DA COMISSÃO

de 29 de Junho de 1990

que altera o Regulamento (CEE) nº 1470/68, relativo à colheita e redução das amostras bem como aos métodos de análise das sementes oleaginosas

A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,

Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Europeia,

Tendo em conta o Regulamento nº 136/66/CEE do Conselho, de 22 de Setembro de 1966, que estabelece a organização comum de mercado no sector das matérias gordas (1), com a última redacção que lhe foi dada pelo Regulamento (CEE) nº 2902/89 (2), e, nomeadamente, o seu artigo 24ºA,

Considerando que a denominação « duplo zero » para as sementes de colza e de nabita depende do seu teor de glucosinatos; que, para determinar esse teor, é conveniente prever o método mais adequado;

Considerando que o Regulamento (CEE) nº 1470/68 da Comissão (3), com a última redacção que lhe foi dada pelo Regulamento (CEE) nº 2435/86 (4), define o método comum para a Comunidade de determinação do teor de glucosinatos das sementes de colza; que, de então para cá, foi aperfeiçoado e testado um método de análise melhor; que é necessário alterar o método comum para a Comunidade de determinação do teor de glucosinatos;

Considerando que as medidas previstas no presente regulamento estão em conformidade com o parecer do Comité de Gestão das Matérias Gordas,

ADOPTOU O PRESENTE REGULAMENTO:

Artigo 1º

O anexo VIII do Regulamento (CEE) nº 1470/68 é substituído pelo anexo do presente regulamento.

Artigo 2º

O presente regulamento entra em vigor na data da sua publicação no Jornal Oficial das Comunidades Europeias.

É aplicável a partir de 1 de Julho de 1990.

O presente regulamento é obrigatório em todos os seus elementos e directamente aplicável em todos os Estados-membros.

Feito em Bruxelas, em 29 de Junho de 1990.

Pela Comissão

Ray MAC SHARRY

Membro da Comissão

(1) JO nº 172 de 30. 9. 1966, p. 3025/66.

(2) JO nº L 280 de 29. 9. 1989, p. 2.

(3) JO nº L 239 de 28. 9. 1968, p. 2.

(4) JO nº L 210 de 1. 8. 1986, p. 55.

ANEXO

« ANEXO VIII

SEMENTES OLEAGINOSAS - DETERMINAÇÃO DOS GLUCOSINOLATOS

Por cromatografia líquida de alta resolução

1.2 // 1. // ÂMBITO DE APLICAÇÃO // // O presente anexo define o método de determinação de diferentes glucosinolatos em sementes oleaginosas de espécies Brassica, especialmente na colza, por meio da cromatografia líquida de alta resolução. Este método não faz a determinação para os glucosinolatos que são substituídos na molécula de glicose, mas estes compostos têm pouca importância na colza comercial. // 2. // REFERÊNCIAS // // A preparação de amostras para análise deve ser efectuada em conformidade com os respectivos anexos do presente regulamento. Em especial, são importantes os seguintes anexos: // // anexo II - redução das amostras para laboratório em amostras para análise, // // anexo III - determinação do teor em água e substâncias voláteis. // 3. // FUNDAMENTO // // A extracção dos glucosinolatos numa solução de metanol, seguida de purificação e de dessulfatação enzimática em resinas de troca iónica. Determinação através de uma cromatografia líquida de alta resolução em fase inversa, com gradiente de eluição e detecção no ultravioleta. // 4. // REAGENTES // // Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica e a água utilizada deve ser destilada ou ter pelo menos uma pureza equivalente. // 4.1. // Metanol, solução a 70 % (V/V) em água. // 4.2. // Acetato de sódio, solução a 0,02 mol/l, com pH 4,0. // 4.3. // Acetato de sódio, solução a 0,2 mol/l. // 4.4. // Formato de imidazole, solução a 6 mol/l. // // Dissolver 204 g de imidazole em 113 ml de ácido fórmico, num balão volumétrico de 500 ml. Desfazer até 500 ml com água. // 4.5. // Padrão interno // // Utilizar a sinigrina (monoidrato potássico de alilglucosinolato, PM = 415,49) cuja pureza deve ser verificada como indicado no ponto 4.5.3. // 4.5.1. // Solução de sinigrina a 5 mmol/l // // Dissolver 207,7 mg de monoidrato potássico de alilglucosinolato em água, num balão volumétrico de 100 ml, e perfazer até à marca. // 4.5.2. // Solução de sinigrina a 20 mmol/l // // Dissolver 831,0 mg de monoidrato potássico de alilglucosinolato em água, num balão volumétrico de 100 ml, e perfazer até à marca. // // Guardar estas soluções num frigoríico, a aproximadamente 4 °C, se a armazenagem for de curta duração (por exemplo, uma semana), ou num congelador, a -18°C para períodos mais longos. // 4.5.3. // Controlo da pureza da sinigrina // // Utilizar um ou mais dos três testes seguintes: // // - a análise por CLAR, utilizando o presento método, apenas deve originar um pico principal, // // - a análise da sinigrina intacta por CLAR (técnica iões-emparelhamento) apenas deve originar um pico principal, // // - a análise da sinigrina dessulfatada e sililada por cromatografia em fase gasosa apenas deve originar um pico principal. // // Nestes testes, o pico principal deve representar pelo menos 98 % do total das áreas dos picos. // // Confirmar através da determinação da quantidade de glicose libertada após hidrólise com mirosinase (tioglucósido-gluco-hidrólase CE 3.2.3.1). A glicose deve ser medida através de meios enzimáticos, utilizando um equipamento de teste comercial. É necessário ter em conta toda a glicose livre presente, que deve ser determinada sem adição de mirosinase. A concentração molar de glicose medida deve ser pelo menos 98 % da concentração molar da solução de sinigrina testada. // 4.5.4. // Padrão interno alternativo: glucotropaeolina // // Em determinadas sementes de espécies Brassica ou em sementes de espécies similares (cultivadas ou não), a sinigrina pode estar presente naturalmente. Quando a sinigrina estiver presente naturalmente, um outro padrão interno, a glucotropaeolina (sai potássico de benzilglucosinolato, PM = 447,52), deverá ser utilizado, mas a sua separação dos outros glucosinolatos naturais secundários é por vezes difícil. // // Utilizar a glucotropaeolina da mesma forma que a sinigrina (soluções a 5 e 20 mmol/l), após verificação da sua pureza, em conformidade com o processo descrito no ponto 4.5.3, e verificar se o seu factor de resposta, em comparação com a sinigrina, corresponde ao indicado no ponto 7.2. // 4.6. // Fases móveis // 4.6.1. // Eluente A: água (de qualidade CLAR). // 4.6.2. // Eluente B: acetonitrilo (de qualidade CLAR) em solução em água (de qualidade CLAR) a 20 % (V/V). A concentração pode ser modificada em função das colunas utilizadas. // 4.7. // Resina de troca iónica // 4.7.1. // DEAE Sepharose C1-6B, em suspensão e vendida pronto para utilização // // ou // 4.7.2. // DEAE Sephadex A25, em suspensão preparada do seguinte modo: // // misturar 10 g de resina num excesso de ácido acético a 2 mol/l. Deixar em repouso. Juntar ácido a 2 mol/l até que o volume da suspensão seja igual a duas vezes o volume de material sedimentado. // 4.8. // Sulfatase, tipo H1 (CE 3.1.6.1) Helix pomatia, previamente purificada e sujeita a uma verificação como atrás indicado e depois diluída // 4.8.1. // Preparação das colunas de troca iónica // // Cortar cinco pipetas de Pasteur (5.9) 7 cm acima do gargalo e colocar uma rolha de lã de vidro na extremidade (5.8). Colocar as pipetas verticalmente num suporte e deitar em cada uma uma suspensão de resina de troca iónica DEAE Sepharose C1-6B (4.7.1), de modo a que, uma vez drenada a água, seja obtido um volume de 500 ml de resina. // // Deitar 1 ml de solução de formato de imidazole a 6 mol/l (4.4) em cada pipeta e enxaguar duas vezes com 1 ml de água. // 4.8.2. // Purificação da sulfatase // // Pesar, com uma aproximação de 0,1 mg, 25 mg de Helix pomatia do tipo H1, dissolver em 2,5 ml de água e transferir 500 ml desta solução para cada uma das colunas regeneradas (4.8.1). Lavar cada coluna com 1,5 ml de água, removendo o efluente. Em seguida, adicionar 1,5 ml de uma solução de acetato de sódio a 0,2 mol/l (4.3), recuperar e recolher os eluídos das cinco colunas num tubo de ensaio. // // Concentrar os eluídos por filtração num filtro Milipore PTGC 11K25, até que seja obtido um resíduo de aproximadamente 100 ml (a sulfatase com uma massa molar superior a 5 000 não é removida). Adicionar 2,5 ml de água e concentrar mais uma vez por filtração, até que seja obtido um resíduo de aproximadamente 100 ml. Diluir até 2,5 ml com água e guardar a sulfatase purificada num congelador a -18 °C (em pequenas quantidades, de modo a permitir a descongelação da quantidade necessária para utilização imediata). // 4.8.3. // Teste da actividade da sulfatase // 4.8.3.1. // Preparação de uma solução de sinigrina a 0,15 mmol/l, tamponada a pH 5,8 // // Preparar successivamente as seguintes soluções: // // a) Transferir 1 ml de ácido acético para um balão de 500 ml e perfazer com água até à marca; // // b) Transferir 1 ml de etilenodiamina para um balão de 500 ml e perfazer com água até à marca; // // c) Misturar 73 ml da solução a) e 40 ml da solução b); // // d) Ajustar a pH 5,8 com as soluções a) ou b). // // Deitar 3 ml da solução de sinigrina a 5 mmol/l (4.5.1) para um balão de 100 ml e perfazer com a solução c) até à marca. // 4.8.3.2. // Teste da actividade // // Uma unidade de actividade é expressa como sendo a produção de um micromole de sinigrina dessulfatada por minuto, a 30 °C e pH 5,8. // // Para o teste, transferir 2 ml de solução de sinigrina tamponada (4.8.3.1) para as células de referência e de medição do espectrómetro (5.3) ajustado a um comprimento de onda de 228 nm, sendo a temperatura das células de 30 °C. No instante t = 0, colocar 50 ml de sulfatase purificada (4.8.2) na célula de medição e ligar o registador. Para o registador quando a absorvência deixa de variar (Ae), traçar a tangente no ponto t = 0 e medir o seu gradiente D A D t . // // A actividade de sulfatase, expressa em unidades de actividade por mililitro de solução de sulfatase, é igual a: 1.2.3.4.5.6.7 // // D A D t // × // V D E // × // 1 000 50 // × 106 1.2 // // em que: 1.2.3 // // D A D t // é o gradiente da tangente no ponto t = 0, em unidades de absorvência por minuto; // // V // é o volume, em litros, do meio de reacção (isto é 2,0510 × 10-3 l); // // D E // é a diferença entre os coeficientes de extinção molar e da sinigrina dessulfatada a 228 nm 1.2.3.4 // // // D E = // D Ae e × c 1.2.3 // // // em que: 1.2.3.4 // // // D Ae // é a diferença entre a absorvência no equilíbrio da sinigrina dessulfatada e a absorvência no instante t = 0 // // // e // é o comprimento da célula, em centímetros (isto é, 1 cm); // // // c // é a concentração da sinigrina dessulfatada no equilíbrio, em moles por litro (isto é, 1.2.3.4.5.6 // // // // c = // 0,15 × 10-3 × 0,95 × 2 2,05 // = 1,39 × 10-4 mol/l). 1.2 // // A produção no equilíbrio da dessulfatação da sinigrina é de 0,95. // // Calcular DE, que deve ser da ordem de 1 500 l.mol-1. cm-1. // // A actividade da sulfatase pode também ser calculada utilizando a seguinte forma simplificada: 1.2.3 // // Actividade = // D A × 5,7 D t × D Ae 1.2 // // A actividade encontrada deve ser superior a 0,5 mmol/m.n ml da solução de sulfatase purificada (4.8.2). // 4.8.4. // Diluição // // Utilizando uma pipeta, transferir 1 ml de sulfatase purificada (4.8.2) para um balão volumétrico de 10 ml, perfazer com água até à marca e misturar. // // Dividir a solução em pequenas quantidades e armazenar a -18 °C. // 5. // APARELHOS E UTENSÍLIOS // // Equipamento habitual de laboratório e, em especial: // 5.1. // Cromatógrafo líquido de alta resolução, para obtenção de um gradiente de eluição e controlo da temperatura da coluna a 30 °C, ligado a um detector UV que permita medições a 229 nm. // 5.2. // Coluna cromatográfica para CLAR, do tipo C18 ou C8, com uma dimensão das partículas 5 mm, ou, por exemplo: 1.2.3 // // Lichrosorb RP 18 5 mm // (150 mm × 4,6 mm) // // Spherisorb ODS2 5 mm // (250 mm × 4-5 mm) // // Novapak C18 4 mm // (150 mm × 4 mm) // // Lichrospher RP8 5 mm // (125 mm × 4 mm) // // Nucleosil C18 5 mm // (200 mm × 4 mm) 1.2 // // A resolução da coluna escolhida deve ser controlada regularmente, utilizando de preferência uma amostra de referência de colza (é aconselhada a utilização de glucosinolatos dessulfatados, obtidos de preferência a partir de amostras provenientes do Serviço Comunitário de Referência). Em especial, a coluna não deve degradar a 4-hidroxiglucobrassicina, glucosinolato importante mas relativamente instável. // // As novas colunas devem ser submetidas a um funcionamento preliminar, de modo a obter resultados reprodutíveis. // 5.3. // Espectrómetro de feixe duplo, que possa funcionar no ultravioleta e, se possível, com um controlo da temperatura a 30 °C, equipado de células de quartzo e, possível, de um sistema de registo. // 5.4. // Triturador, por exemplo moinho de café. // 5.5. // Centrifugadora, para tubos de 6 ml, susceptível de obter uma aceleração centrífuga de 5 000 g. // 5.6. // Banho de água quente ou bloco de aquecimento, ajustável a 75 °C. // 5.7. // Tubos de polipropileno, de 6 ml de capacidade. // 5.8. // Lã de vidro. // 5.9. // Pipetas de Pasteur, de 150 mm de comprimento. // 6. // TÉCNICA // 6.1. // Preparação da amostra de ensaio // // Reduzir as amostras laboratoriais a amostras para análise em conformidade com o anexo 11 e proceder à sua trituração no triturador (5.4) durante 20 segundos. Misturar a farinha e triturar de novo durante cinco segundos. // // Se as sementes tiverem um teor de humidade superior a 10 % (m/m), secá-las primeiro utilizando uma corrente de ar a aproximadamente 45 °C. // // Nota: quando são analisadas sementes tratadas, lavá-las antes da trituração com diclorometano. // 6.2. // Determinação do teor de humidade e substâncias voláteis // // Proceder a esta determinação na amostra para análise, em conformidade com o anexo III. // 6.3. // Toma de ensaio // // Preparar dois tubos (5.7) e transferir 200 mg da amostra para análise de sementes oleaginosas, pesadas com uma aproximação de 0,1 mg, para cada um. // 6.4. // Extracção dos glucosinolatos // // Colocar os tubos no banho de água quente ou no bloco de aquecimento (5.6) regulado a 75 °C e deixar durante um minuto. Juntar 2 ml de solução em ebulição de metanol a 70 % (4.1) e adicionar imediatamente: // // - no primeiro tubo A, 200 m de solução de sinigrina a 5 mmol/l (4.5.1), // // - no segundo tubo B, 200 ml de solução de sinigrina a 20 mmol/l (4.5.2). // // Continuar o aquecimento no banho a 75 °C durante 10 minutos, agitando regularmente. Misturar o conteúdo de cada tubo e centrifugar com uma aceleração de 5 000 g durante três minutos. Transferir cada sobrenadante para outro tubo (5.7). // // Juntar 2 ml da solução em ebulição de metanol a 70 % (4.1) a cada sedimento e voltar a aquecer no banho a 75 °C durante 10 minutos, agitando regularmente. Centrifugar durante três minutos e juntar o sobrenadante ao original. Ajustar o volume a aproximadamente 5 ml com água e misturar. // // Este extracto pode ser conservado durante duas semanas, ao abrigo da luz, num congelador a -18 °C. // 6.5. // Preparação das colunas de troca iónica // // Cortar o número necessário de pipetas de Pasteur (5.9), isto é, uma pipeta por amostra, de modo a deixar um volume de 1,2 ml na parte de cima do gargalo e colocar uma rolha de lã de vidro (5.8) no mesmo. Colocar as pipetas verticalmente num suporte. // // Deitar 0,5 ml de suspensão de DEAE Sephadex A 25 (4.7.2) bem misturada em cada coluna e deixar em repouso. // // Lavar as colunas com 2 ml de formato de imidazole a 6 mol/l (4.4) e, em seguida, duas vezes com 1 ml de água.

1.2 // 6.6. // Purificação e dessulfatação // // Adicionar 1 ml do extracto (6.4) à coluna preparada (6.5) sem interferir na superfície de resina a deixar drenar. Juntar duas vezes 1 ml de tampão de acetato de sódio a 0,02 mol/l de pH 4,0 (4.2), deixando drenar de cada vez. // // Colocar 75 ml da solução diluída e purificada de sulfatase (4.8.4). Deixar em repouso durante uma noite à temperatura ambiente. Eluir os glucosinolatos dessulfatados obtidos com, duas vezes, 1 ml de água, deixando drenar entre cada adição. Recolher o eluído num tubo. Misturar bem o eluído a armazenar, ao abrigo da luz, num congelador a -18 °C, caso não seja imediatamente sujeito a cromatografia. // 6.7. // Teste de referência // // Se necessário (ver 7.3), efectuar um teste de referência nas mesmas condições, numa toma de ensaio idêntica, mas eliminando a solução de padrão interno de sinigrina, a fim de detectar e quantificar a eventual sinigrina presente na toma de ensaio. // 6.8. // Cromatografia // 6.8.1. // Equilibração do equipamento // // Taxa de fluxo da fase móvel: depende da natureza da coluna (ver 6.8.2) // // Temperatura da coluna: 30 °C // // Comprimento de onda de detecção: 229 nm // 6.8.2. // Teste e gradiente de eluição // // De acordo com as instruções de funcionamento do equipamento, injectar não mais de 50 ml da solução de glucosinolatos dessulfatados, obtida em 6.6. // // Consoante a coluna utilizada, podem ser adequados diversos gradientes: // // - coluna de Spherisorb RP 18 5 mm (150 mm × 4,6 mm): // // - 100 % de eluente A (4.6.1.) + 0 % de eluente B (4.6.2.) durante um minuto, // // - gradiente de eluição linear em 20 minutos, até à obtenção de 0 % de eluente A e 100 % de eluente B, // // - gradiente de eluição linear em cinco minutos, até à obtenção de 100 % de eluente A e 0 % de eluente B, // // - para equilibrar, 100 % de eluante A e 0 % de eluente B, durante cinco minutos, // // - coluna de Lichrospher RP8 5 m m (125 mm × 4,0 mm): // // - 100 % de eluente A durante dois minutos e 30 segundos, // // - gradiente de eluição linear em 18 minutos, até à obtenção de 0 % de eluente A + 100 % de eluente B, // // - 100 % de eluente B durante cinco minutos, // // - gradiente de eluição linear em dois minutos de 0 % de eluente A + 100 % de eluente B, até à obtenção de 100 % de eluente A e 0 % de eluente B, // // - equilibrar durante cinco minutos. // // Nota: os perfis dos gradientes podem ser alterados com vista a obter separações óptimas consoante as colunas utilizadas. // 6.8.3. // Exame dos cromatogramas. // // Ter em conta apenas os picos com uma área superior a 1 % da soma total das áreas dos picos glucosinolatos. // // A ordem de eluição dos picos com uma coluna do tipo C18 e um gradiente de eluição de 6.8.2 é geralmente a seguinte: // // 1. Glucoiberina dessulfatada // // 2. Progoitrina dessulfatada // // 3. Epiprogoitrina dessulfatada // // 4. Sinigrina dessulfatada // // 5. Glucorafanina dessulfatada // // 6. Gluconapoleiferina dessulfatada // // 7. Glucoalissina dessulfatada // // 8. Gluconapina dessulfatada // // 9. 4-Hidroxiglucobrassicina dessulfatada // // 10. Glucobrassicanapina dessulfatada // // 11. Glucotropaeolina dessulfatada // // 12. Glucobrassicina dessulfatada // // 13. Gluconasturtiina dessulfatada // // 14. 4-Metoxiglucobrassicina dessulfatada // // 15. Neoglucobrassicina dessulfatada // 7. // RESULTADOS // 7.1. // Cálculo do teor de cada glucosinolato // // O teor de cada glucosinolato, expresso em micromoles por grama da totalidade de sementes secas, é igual a: 1.2.3.4 // // área do pico de glucosinolato dessulfatado área do pico de sinigrina dessulfatada // × // quantidade de padrão interno adicionado ao tubo em 6.4 (em m moles) peso da amostra de sementes extraída 1.2.3.4 // // × factor de resposta de glucosinolato dessulfatado (7.2) // × // 100 100 - H 1.2 // // em que: // // H é o tzeor de humidade e de substâncias voláteis, expresso em percentagem em massa, da amostra para análise (6.2). // // Em determinados casos, é necessário expressar os resultados a um nível específico de humidade (presentemente, 9 %). Nesses casos, multiplicar o resultado obtido para a matéria seca por // // 100 - humidade 100 // 7.2. // Factores de resposta // // Os valores dos factores de resposta foram determinados experimentalmente; foram fixados por consenso entre diversos laboratórios que participaram nesses ensaios e podem necessitar, a seu tempo, de uma revisão. // // Glucoiberina dessulfatada 1,07 // // Glucobrassicanapina dessulfatada 1,15 // // Glucorafanina dessulfatada 1,07 // // 4-Hidroxiglucobrassicina dessulfatada 0,28 // // Glucoalissina dessulfatada 1,07 // // Glucobrassicina dessulfatada 0,29 // // Progoitrina dessulfatada 1,09 // // Neoglucobrassicina dessulfatada 0,20 // // Epiprogoitrina dessulfatada 1,09 // // Glucotropaeolina dessulfatada 0,95 // // Sinigrina dessulfatada 1,00 // // Gluconasturtiina dessulfatada 0,95 // // Gluconapina dessulfatada 1,11 // // Gluconapoleiferina dessulfatada 1,00 // // 4-Metoxiglucobrassicina dessulfatada 0,25 // // Outros glucosinolatos dessulfatados 1,00 // 7.3. // Teor total de glucosinolatos // // O teor total de glucosinolatos, expresso em mmoles por grama de matéria seca da amostra, é igual à soma de todos os glucosinolatos cujas áreas de pico sejam superiores a 1 % da soma total das áreas dos picos. // // A utilização de padrões internos de referência com duas concentrações (4.5.1 e 4.5.2) torna possível a determinação da sinigrina contida na amostra ou da presença de um composto desconhecido que co-elua com a sinigrina. // // - Se a diferença entre os resultados do teor total de glucosinolatos das duas repetições estiverem em conformidade com as condições de repetibilidade (8.2), não há contaminação do padrão interno de referência. O resultado é a média aritmética das duas determinações, // // - Se a diferença entre os resultados não estiver em conformidade com as condições de repetibilidade (8.2), repetir a determinação com duas outras amostras para análise e efectuar um ensaio de referência (6.7) sem solução de padrão interno. A área contaminante é deduzida da área de padrão interno, para obter a área real do padrão interno de referência utilizada na fórmula do ponto 7.1. O resultado é a média aritmética dos resultados das duas novas determinações. // 8. // PRECISÃO E EXACTIDÃO // 8.1. // Precisão (repetibilidade e reprodutividade) // // Em 1988, foi organizado um estudo interlaboratorial, numa base internacional, que contou com a participação de 12 laboratórios; cada um destes efectuou duas determinações para cada amostra, tendo sido obtidos os resultados estatísticos indicados no quadro 1 (determinados em conformidade com a norma ISO 5752 « Aplicação estatística - exactidão dos métodos de ensaio - determinação de um método de ensaio normalizado por ensaio interlaboratorial »). // // Quadro 1: Valores de repetibilidade e de reprodutibilidade obtido a partir do estudo interlaboratorial 1.2.3.4.5 // // // // // // Amostras // Colza A // Colza B // Colza C // Colza D // // // // // // Número de laboratórios após eliminação dos resultados díspares // 11 // 11 // 11 // 11 // // // // // // Média // 20,6 // 14,1 // 4,9 // 25,6 // // // // // // Desvios-padrão de repetibilidade típicos // 1,7 // 0,6 // 0,3 // 0,8 // Coeficiente de variação da repetibilidade // 8,5 % // 4,4 % // 6,7 % // 3,3 % // Repetibilidade // 4,9 // 1,7 // 0,9 // 2,4 // // // // // // Desvios-padrão de reprodutibilidade típicos // 3,4 // 2,5 // 1,5 // 2,4 // Coeficiente de variação de reprodutibilidade // 17 % // 18 % // 31 % // 9,4 % // Reprodutibilidade // 9,6 // 7,1 // 1,4 // 6,8 // // // // // 1.2 // 8.1.1. // Repetibilidade // // Aplicando os resultados anteriores (8.1), a diferença entre os valores de duas determinações, efectuadas rapidamente uma após a outra, pelo mesmo analista e utilizando o mesmo equipamento com a mesma amostra de ensaio, não deve exceder 2 mmoles/g para os teores inferiores a 20 mmoles/g e 4 mmoles/g para os teores compreendidos entre 20 e 35 mmoles/g. // 8.1.2. // Reprodutibilidade // // Aplicando os resultados anteriores (8.1), a diferença entre os valores dos resultados finais obtidos por dois laboratórios, utilizando o presente método para a análise da mesma amostra laboratorial, não deve exceder 4 mmoles/g para teores inferiores a 20 mmoles/g e 8 m moles/g para teores compreendidos entre 20 e 35 mmoles/g. // 8.2. // Exactidão // // A utilização correcta do método será verificada efectuando as medidas repetitivas sobre os materiais de referência com teor certificado em glucosinolatos totais de cobrindo a gama de concentração referida. // // Os materiais apropriados de teor certificado podem ser obtidos junto do gabinete comunitário de referência (BCR) da Comissão das Comunidades Europeias. // // O protocolo para comparar os resultados de laboratórios obtidos com os materiais de referência de teor certificado é descrito no parágrafo « instruções para uso » do relatório que acompanha os materiais de referência. // 9. // RELATÓRIO DE ENSAIO // // O relatório de ensaio deve descrever o método utilizado e os resultados obtidos. Deve igualmente mencionar quaisquer pormenores do funcionamento não especificados na norma internacional ou considerados facultativos, bem como quaisquer acontecimentos que possam ter afectado o resultado. // // O relatório de ensaio deve dar todas as informações necessárias para a identificação completa da amostra. »