1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 1
Este documento constitui um instrumento de documentação e não vincula as instituições
►BPRIMEIRA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 15 de Junho de 1971
que fixa os métodos de análise comunitários para o controlo oficial dos alimentos para animais
(71/250/CEE)
(JO L 155 de 12.7.1971, p. 13)
Alterada por:
Jornal Oficial
n.opágina data
►M1Directiva 81/680/CEE da Comissão de 30 de Julho de 1981 L 246 32 29.8.1981
►M2Directiva 98/54/CE da Comissão de 16 de Julho de 1998 L 208 49 24.7.1998
►M3Directiva 1999/27/CE da Comissão de 20 de Abril de 1999 L 118 36 6.5.1999
▼B
PRIMEIRA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 15 de Junho de 1971
que fixa os métodos de análise comunitários para o controlo oficial
dos alimentos para animais
(71/250/CEE)
A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Euro-
peia,
Tendo em conta a Directiva do Conselho de 20 de Julho de 1970, rela-
tiva à introdução de modos de recolha de amostras e métodos deanálise comunitários para o controlo oficial os alimentos paraanimais(
1) e, nomeadamente, o seu artigo 2.o,
Considerando que a directiva acima referida prevê que o controlo
oficial dos alimentos para animais destinado a verificar se as condiçõesfixadas mediante disposições legislativas, regulamentares e administra-tivas aplicáveis à qualidade e composição dos alimentos para animais
são respeitadas e seguidas em função dos modos de recolha de amos-
tras e métodos de análise comunitários;
Considerando que importa definir o mais rápidamente possivel os
necessários métodos de análise, estabelecendo para o efeito comoprimeira etapa a fixação dos métodos de doseamento do ácido ciamí-drico, cálcio, carbonatos, cinzas brutas, cinzas insoluveis em HCl,cloro, cloretos, essência de mostarda, lactose, potássio, sódio, açúcares,teobromina e ureia, a determinação dos alcalóides de lupin contidos nas
diversas formas de tremoço e a actividade ureásica nos produtos à base
de soja;
Considerando que as medidas previstas na presente directiva estão
conformes com o parecer do Comité Permanente dos Alimentos para
Animais,
ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA:
Artigo 1.o
Os Estados-membros deverão estipular que, quando destinadas aocontrolo oficial dos alimentos para animais, as análises do respectivoteor de ácido ciamídrico, cálcio, carbonatos, cinzas brutas, cinzas inso-lúveis em HCl, cloro, cloretos, ►
M3 ◄lactose, potássio,
sódio, açúcares, ►M3 ◄bem como a determinação
►M2 ◄da actividade ureásica dos produtos à base de
soja deverão ser efectuadas de harmonia com as técnicas descritas noanexo à presente directiva.
As disposições gerais constantes da 1
aparte do anexo serão aplicáveis
nos métodos de análise adoptados de harmonia com a Directiva 70/373/
/CEE do Conselho.
Artigo 2.o
Os Estados-membros porão em vigor, antes de 1 de Julho de 1972,
todas as disposições legislativas, regulamentares ou administrativasnecessárias a dar cumprimento ao disposto na presente directiva. Destefacto informarão imediatamente a Comissão.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 2
(1)J O n .oL 170 de 3. 8. 1970, p. 2.▼M1
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Artigo 3.o
Os Estados-membros são destinatários da presente directiva.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 3
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ANEXO
MÉTODOS DE ANÁLISE DOS COMPONENTES DOS ALIMENTOS
PARA ANIMAIS
1. DISPOSIÇÕES GERAIS RELATIVAS AOS MÉTODOS DE ANÁLISE DE
ALIMENTOS PARA ANIMAIS
A. PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS PARA ANÁLISE
1.Finalidade
As técnicas abaixo descritas destinam-se à preparação para análise das
amostras finais remetidas aos laboratórios de controlo, uma vez recolhidas
consoante o disposto na primeira Directiva 76/371/CEE da Comissão, de 1
de Março de 1876, que fixa os modos da recolha de amostras comunitários
para o controlo oficial dos alimentos para animais(1).
A preparação destas amostras deverá permitir que as amostras de ensaio
previstas pelos métodos de análise sejam homogéneas e representativas
das amostras finais.
2.Precauções a tomar
Efectuar todas as operações de maneira a evitar tanto quanto possível a
contaminação da amostra ou a alteração da sua composição. Efectuar todas
as triturações, misturas e peneiramentos o mais rapidamente possível,
evitando ao máximo expor a amostra ao ar e à luz. Evitar a utilização de
moínhos ou trituradores susceptíveis de aquecer demasiado a amostra, reco-
mendando-se a trituração manual para os alimentos particularmente
sensíveis ao calor. Deverá ainda ter-se o máximo cuidado em verificar
que o material não seja uma fonte de contaminação pelos oligoelementos.
Caso a amostra não possa ser preparada sem que se dê uma sensível
variação no seu teor em humidade, determinar este teor, antes e depois da
precipitação, pelo método estabelecido na 1.aparte do anexo à segunda
Directiva 71/393/CEE da Comissão, de 18 de Novembro de 1971, que
fixa os métodos de análise comunitários para o controlo oficial dos
alimentos para animais(2), com a redacção que lhe foi dada pela Directiva
73/47/CEE da Comissão, de 5 de Dezembro de 1972(3).
3.Método
Misturar intimamente a amostra final, mecanicamente ou à mão, e dividi-la
em duas porções iguais (utilizando, se possíel, o método dos quartos).
Conservar uma das porções num recipiente adequado, limpo, seco e de
fecho hermético, e preparer a outra porção, ou pelo menos 100 g represen-
tativos da mesma, como seguidamente se indica:
3.1.Alimentos que possam ser moídos tal como se encontrem
Salvo indicação específica na rubrica «métodos de análise», peneirar a tota-
lidade da amostra numa peneira de malha quadrada de 1 mm de lado (de
harmonia com a recomendação ISO R565) depois de triturada, se
necessário. Evitar toda a trituração supérflua.
Misturar a amostra peneirada e recolhê-la para um recipiente adequado,
limpo, seco e de fecho hermético. Voltar a misturá-la imediatamente antes
de recolher a amostra de ensaio.
3.2.Alimentos que possam ser moídos após secagem
Salvo indicação específica na rubrica «métodos de análise», secar a
amostra de maneira a baixar o seu teor de humidade par 8—12 %, utili-
zando o processo indicado no ponto (4.3) do método de doseamento da
humidade referido no ponto (2.). Proceder em seguida como indicado no
ponto (3.1.).1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 4
(1)J O n .oL 102 de 15. 4. 1976, p. 1.
(2)J O n .oL 279 de 20. 12. 1971, p. 7.
(3)J O n .oL 83 de 30. 3. 1973, p. 35.▼M1
▼M1
3.3.Alimentos líquidos ou semi-líquidos
Recolher a amostra para um recipiente adequado, limpo, seco e de fecho
hermético. Misturar intimamente, imediatamente antes de colher a amostra
de ensaio.
3.4.Outros alimentos
Caso a amostra não possa ser preparada por qualquer dos processos acima
indicados, utilizar outro processo de preparação apropriado que permita a
obtenção de amostras de ensaio homogéneas e representativas das amostras
finais.
4.Conservação das amostras
Conservar as amostras a uma temperatura que não altere a sua composição.
Utilizar recipientes de vidro castanho para as amostras destinadas a análise
das vitaminas ou de substâncias particularmente sensíveis à luz.
B. DISPOSIÇÕES RELATIVAS AOS REAGENTES E MATERIAL REQUE-
RIDOS PELOS MÉTODOS DE ANÁLISE
1. Salvo indicação específica na rubrica «métodos de análise», todos os
reagentes deverão ser de qualidade «para análise» (p.a.). Para a análise
dos oligoelementos, a pureza dos reagentes deverá ser controlada mediante
um ensaio em branco. Consoante o resultado obtido, poderá ou não vir a
ser necessária a sua purificação suplementar.
2. Todas as operações de dissolução, diluição e lavagem mencionadas nos
métodos de análise relativamente às quais não sejam fornecidas indicações
quanto à natureza do dissolvente ou diluente a utilizar implicarão que se
deverá utilizar água, em regra desmineralizada ou destilada. Em certos
casos especiais, indicados nos métodos de análise, essa água deverá ser
submetida a processos de purificação específicos.
3. Tendo em conta que os laboratórios de controlo possuem já um equipa-
mento corrente específico, o método de análise indica apenas o material
especial ou os instrumentos e aparelhos que devam responder a determi-
nadas condições. Este material deverá estar bem limpo, particularmente
para todas as determinações de quantidades de substância ínfimas.
C. APLICAÇÃO DOS MÉTODOS DE ANÁLISE E EXPRESSÃO DOS
RESULTADOS
1. Em geral, estabelece-se apenas um método de análise para cada uma das
substâncias a determinar nos alimentos para animais. Sempre que mais de
um método seja fornecido, o boletim de análise deverá mencionar qual
deles foi utilizado pelo laboratório de controlo.
2. O resultado indicado no boletim de análise será o valor médio obtido a
partir de pelo menos duas determinações de boa reprodutibilidade, efec-
tuadas com amostras de ensaio distintas.
Este resultado, que deverá ser expresso em conformidade com as indi-
cações dadas no método de análise e conter o devido número de
algarismos representativos, poderá, caso necessário, ser corrigido em
função do teor de humidade apresentado pela amostra final antes da sua
preparação para análise.
2. DOSEAMENTO DO ÁCIDO CIANÍDRICO
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de ácido cianídrico, livre e combinado
sob a forma de glicósidos, em alimentos para animais, sobretudo produtos à
base de sementes de linho, farinha de mandioca e certas espécies de feijão.
2.Princípio
Suspende-se a amostra em água. Liberta-se o ácido cianídrico pela acção de
fermentos, faz-se o respectivo transporte por destilação em vapor de água, e
recolhe-se seguidamente para um volume determinado de solução de nitrato
de prata acídificado. A separação do cianeto de prata faz-se por filtração,
sendo a titulação do excesso de nitrato de prata feita mediante uma solução
de tiocianeto de amónio.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 5
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3.Reagentes
3.1. Suspensão de amêndoa doce: moer 20 amêndoas doces, descascadas, em
100 ml de água de 37 a 40 ºC. Verificar a ausência de ácido cianídrico,
em 10 ml da suspensão, com papel ficro-sodado ou efectuando um
ensaio em branco tal como se indica no último parágrafo do ponto 5;
3.2. Solução a 10 % (p/v) de acetato de sódio, que não reaja à fenolftalina;3.3. Emulsão não espumificante (silica, por ex.);
3.4. Acido nítrico, d: 1,40;
3.5. Solução de nitrato de prata: 0,02 N;
3.6. Solução de tiocianeto de amónio: 0,02 N;
3.7. Solução saturada de fosfatos de amónio férrico;
3.8. Amoníaco, d: 0,958.
4.Material
4.1. Estufa com termostato, regulado para 38 ºC;
4.2. Aparelho de destilação por arrastamento em vapor de água, com tubo de
refrigeração curvo;
4.3. Matrases de fundo, chato e obturador esmerilado, de 1 000 ml;
4.4. Banho de óleo;
4.5. Bureta graduada a 1/20 ml.
5.Método
Pesar com uma precisão de 5 mg aproximadamente 20 g de amostra, intro-
duzi-la num matrás de 1 l com fundo chato plano e adicionar 50 ml de água
e 10 ml de suspensão de amêndoa doce (3.1). Rolhar o matrás e mantê-lo
durante dezasseis horas em estufa, a 38 ºC. Deixar arrefecer em seguida, até
ficar à temperatura ambiente, e adicionar 80 ml de água, 10 ml de solução de
acetato de sódio (3.2) e uma gota de emulsão anti-espumificante (3.3).
Ligar o matrás ao aparelho de destilação a vapor e colocá-lo num banho de
óleo previamente aquecido até uma temperatura ligeiramente superior a
100 ºC. Destilar 200 a 300 ml de líquido, fazendo passar no matrás uma forte
corrente de vapor e aquecendo lentamente o banho de óleo. Recolher o desti-
lado para um erlenmeyer colocado ao abrigo da luz e contendo exactamente
50 ml da solução de nitrato de prata 0,02 N (3.5) e 1 ml de ácido nítrico
(3.4) certificar-se de que o tubo de refrigeração mergulha na solução de
nitrato de prata.
Passar o conteúdo do erlenmeyer para um balão graduado de 500 ml,
completar o volume com água, agitar e filtrar. Recolher 250 ml de filtrado,
adicionar cerca de 1 ml de solução de sulfato férrico de amónio (3.7) e voltar
a titular o excesso do nitrato de prata, para o efeito nele deitando a solução
de tiocianeto de amónio 0,02 N (3.6) com a bureta graduada.
Efectuar eventualmente um ensaio, em branco utilizando o mesmo método
com 10 ml de suspensão de amêndoa doce (3.1) sem a amostra.
6.Cálculo dos resultados
Se o ensaio em branco revelar que houve consumo de solução do nitrato de
prata 0,02 N, haverá que subtrair este valor ao volume gasto pelo destilado
de amostra.
Um ml de solução AgNO
30,02 N corresponde a 0,54 mg de HCN. Exprimir o
resultado em percentagem relativa à amostra.
7.Observação
Se a amostra contiver uma quantidade considerável de sulfuretos (feijão, por
ex.) formar-se-á um precepitado negro de sulfureto de prata que ficará
contido no depósito de cianeto de prata após a filtração. A formação desse
precipitado implica uma perda da solução de nitrato de prata 0,02 N, cujo
volume deverá ser subtraído do volume considerado para o cálculo do teor
de HCN. Para esse efeito, proceder do seguinte modo:
Tratar o depósito retido no filtro com 50 ml de amoníaco (3.8) para dissolver
o cianeto de prata. Lavar o resíduo com amoníaco diluído e determinar o teor
de prata. Converter o valor obtido em ml de solução de nitrato de prata
0,02 N.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 6
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O teor de HCL da amostra poderá igualmente ser determinada por titulação
do filtrado amoniacal acidificado com ácido nítrico.
3. DOSEAMENTO DO CÁLCIO
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor total de cálcio em alimentos para
animais.
2.Princípio
Incinera-se a amostra, tratam-se as cinzas com ácido clorídrico e efectua-se a
precipitação do cálcio sob a forma de oxalato. Depois de diluir o precipitado
em ácido sulfurico, titula-se o ácido oxálico formado com uma solução de
permaganato de potássio.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico p.a., d: 1,14;
3.2. Ácido nítrico p.a., d: 1,40;
3.3. Ácido sulfúrico p.a., d: 1,13;
3.4. Amoníaco p.a., d: 0,98;
3.5. Solução saturada a frio de oxalato de amónio p.a.;3.6. Solução a 30 % (p/v) de ácido cítrico p.a.;
3.7. Solução a 5 % (p/v) de cloreto de amónio p.a.;
3.8. Solução a 0,04 % (p/v) de verde de bromocresol;3.9. Solução de permaganato de potássio 0,1 N.
4.Material
4.1. Mufla eléctrica com circulação de ar e termostato;
4.2. Cadinhos para incineração, de platina, quartzo ou porcelana;
4.3. Cadinhos filtrantes de vidro com G
4de porosidade.
5.Método
Pesar, com um grau de precisão de 1 mg, cerca de 5 g de amostra (ou mais,
se necessário), calciná-la a 550 ºC e passar as cinzas para um copo de 250 ml.
Adicionar 40 ml de ácido clorídrico (3.1), 60 ml de água e algumas gotas de
ácido nítrico (3.2). Ferver durante trinta minutos. Deixar arrefecer e passar a
solução para um balão graduado de 250 ml. Lavar, adicionar água até
perfazer o volume indicado pela marca do balão, homogeneizar e filtrar.
Em função do teor teórico de cálcio retirar com uma pipeta uma quantidade
alíquota contendo de 10 a 40 mg de cálcio e introduzi-la num copo de preci-
pitação de 250 ml. Juntar 1 ml de solução de ácido cítrico (3.6) e 5 ml de
solução de cloreto de amónio (3.7). Completar o volume para cerca de
100 ml, com água; ferver e juntar 8 a 10 gotas de verde de bromocresol
(3.8) e 30 ml de solução quente de oxalato de amónio (3.5). Se se formar
precepitado, dissovê-lo por adicção de algumas gotas de ácido clorídrico
(3.1).
Neutralizá-lo em seguida muito lentamente, com amoníaco (3.4), agitando
sempre até à obtenção dum pH da ordem dos 4,4 a 4,6 (viragem do indi-
cador). Colocar o copo num banho de água a ferver durante trinta minutos,
para deixar depositar o precepitado formado. Retirar o copo do banho de
água, deixar repousar uma hora e filtrar num cadinho filtrante G4.
Lavar o copo e o cadinho em água até à eliminação do excesso de oxalato de
amónio (a ausência do cloreto na água da lavagem indica que a esta foi sufi-
ciente).
Dissolver o precipitado depositado no filtro com 50 ml de ácido sulfúrico
(3.3) quente. Lavar o cadinho em água quente reduzir o volume do filtrado
para cerca de 100 ml. Elevar a temperatura a 70-80 ºC e titular gota a gota
por meio de solução de permaganato de potássio (3.9) até à obtenção duma
coloração rosada que persista durante 1 minuto.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 7
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6.Cálculo dos resultados
Um ml de permaganato de potássio 0,1 N corresponde a 2,004 mg de cálcio.
Exprimir o resultado obtido em percentagem relativa à amostra.
7.Observações
7.1. Para teores de cálcio muito baixos, proceder do seguinte modo: filtrar o
precipitado de oxalato de cálcio com papel de filtro sem cinzas. Depois
de lavado, secar o filtro e calciná-lo a 550 ºC num cadinho de platina.
Recolher o resíduo com algumas gotas de ácido sulfúrico (3.3), evaporar
a seco, tornar a calcinar a 550 ºC e pesar. Se «p» representar o peso de
sulfato de cálcio obtido, o teor de cálcio da quantidade alíquota reco-
lhida = p × 0,2944.
7.2. Se a amostra for constituída unicamente por substâncias minerais,
proceder à sua dissolução com ácido clorídrico sem incineração prévia.
Para substâncias de difícil dissolução em ácido, como os fosfatos alumi-
nocálcicos, proceder, antes da dissolução a uma difusão alcalina com se
segue: misturar num cadinho de platina a amostra de ensaio e uma
mistura de partes iguais e peso sensivelmente quintuplo da amostra, de
carbonato de potássio e carbonato de sódio. Aquecer com precaução até
à fusão completa da mistura, deixar arrefecer e dissolvê-la com ácido
clorídrico.
7.3. Se o teor de magnésio da amostra for elevado, tornar a precipitar o
oxalato de cálcio.
4. DOSEAMENTO DOS CARBONATOS
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite dosear os carbonatos, convencionalmente expressos sob
a forma de carbonato de cálcio, na maior parte dos alimentos para animais.
No entanto, para certos casos, (carbonato de ferro, por exemplo) é necessário
utilizar uma técnica especial.
2.Princípio
Decompõe-se os carbonatos com ácido clorídrico e recolhe-se o anidrido
carbónico que se liberta da reacção para um tubo graduado, comparando-se
o seu volume com o do anidrido carbónico que se libertar, nas mesmas
condições, a partir de uma quantidade conhecida de carbonato de cálcio p.a.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico, d: 1,10;3.2. Carbonato de cálcio p.a.;3.3. Ácido sulfúrico cerca de 0,1 N, corado com vermelho de metil.
4.Material
Aparelho de Scheibler-Dietrich (v. esquema) ou aparelho equivalente.
5.Método
Segundo o teor de carbonatos da amostra, pesar uma pequena quantidade
para ensaio como a seguir se indica:
0,5 g para os produtos com 50 a 100 % de carbonatos, expressos sob a
forma de carbonato de cálcio;
1 g para os produtos com 10 a 50 % de carbonatos, expressos sob a
forma de carbonato de cálcio;
2 g a 3 g para os outros produtos.
Introduzir a amostra de ensaio num frasco especial (4) equipado com um
pequeno tubo de matéria inquebrável, contendo 10 ml de ácido clorídrico
(3.1), e ligar o frasco ao aparelho. Rodar a torneira de três vias (5) de
maneira a que o tubo (1) comunique com o exterior. Com o tubo móvel (2)
cheio de ácido sulfúrico corado (3.3) e ligado ao tubo graduado (1), aceitar o
nível de líquido para a graduação zero. Rodar a torneira (5) de maneira a
estabelecer a comunicação entre os tubos (1) e (2) e certificar-se de que o
nível está em zero.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 8
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Deixar cair lentamente o ácido clorídrico (3.1) sobre a amostra de ensaio,
inclinando o frasco (4). Nivelar a pressão, baixando o tubo (2). Agitar o
frasco (4) até à cessação completa da libertação de anidrido carbónico.
Tornar a nivelar a pressão colocando o líquido ao mesmo nível em ambos os
tubos (1) e (2). Esperar alguns minutos que o volume do gás se colabilize,
fazendo então a leitura.
Efectuar nas mesmas condições um ensaio comparativo com 0,5 g de carbo-
nato de cálcio (3.2).
6.Cálculo dos resultados
O teor de carbonatos, expresso em g de carbonato de cálcio por cada 100 g
de amostra, é-nos dado pela seguinte fracção:
V/C2100
T/C22P
em que:
V = ml de CO2libertados pela amostra de ensaio.
T = ml de CO2libertados por 0,5 g de CaCO3p.a.
P = peso, em gramas, da amostra de ensaio.
7.Observações
7.1. Sempre que a amostra de ensaio pesar mais de 2 g, introduzir 15 ml de
água destilada no frasco (4) e misturar, previamente ao ensaio. Utilizar o
mesmo volume de água para o ensaio comparativo.
7.2. Caso o aparelho utilizado trabalhe com volumes diferentes dos de Schei-
bler-Dietrich, será necessário modificar em função dos mesmos a
quantidade de amostra de ensaio e substância de comparação, assim
como o cálculo dos resultados.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 9
▼B
APARELHO DE SCHEIBLER-DIETRICH PARA DOSEAMENTO DO CO2
(Medidas em mm)
5. DOSEAMENTO DAS CINZAS BRUTAS
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de cinzas brutas em alimentos para
animais.
2.Princípio
Incinera-se amostra a 550 ºC e pesa-se o resíduo.
3.Reagentes
Solução a 20 % (p/v) de nitrato de amónio.
4.Material
4.1. Placa aquecedora.4.2. Mufla eléctrica com termostato.
4.3. Cadinhos de platina ou liga de platina e ouro para incineração (10 % Pt,
90 % Au), rectangulares (60 × 40 × 25 mm) ou circulares (diâmetros: 60
a 75 mm, altura: 20 a 25 mm).1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 10
▼B
5.Método
Pesar, com uma precisão de ± 1 mg, cerca de 5 g de amostra (2,5 g para os
produtos com tendência para aumentar de volume) num cadinho para incine-
ração previamente calcinado e tarado. Colocar o cadinho na placa aquecedora
e aquecer progressivamente até à carbonização da matéria. Introduzir o
cadinho na mufla, regulada para 550 ºC ± 5 ºC. Manter esta temperatura até
à obtenção de cinzas brancas, de cor cinzenta clara ou avermelhada, e sem
partículas de carvão visíveis. Colocar o cadinho num secador, deixar arre-
fecer e pesar imediatamente.
6.Cálculo dos resultados
Calcular o peso do resíduo subtraíndo-lhe o peso da tara.Exprimir o resultado em termos de percentagem relativa à amostra.
7.Observações
7.1. As cinzas de substâncias de difícil incineração devem ser submetidas a
uma primeira incineração de pelo menos três horas e arrefecidas, adicio-
nando-se-lhes algumas gotas de solução de nitrato de amónimo a 20 %
com extremo cuidado, para evitar a dispersão ou a colagem das cinzas).
Prosseguir com a calcinação, após secagem em estufa.
Repetir eventualmente a operação até à incineração total.
7.2. Para as substâncias que resistam ao tratamento indicado em (7.1),
proceder do modo seguinte: Depois de uma incineração de três horas,
recolher as cinzas em água quente e filtrá-la num pequeno filtro sem
cinzas. Incinerar o filtro e o seu conteúdo no primeiro cadinho. Passar
o filtrado para um cadinho frio, evaporar a seco, incinerar e pesar.
7.3. No caso dos «óleos e gorduras» verificar o peso exacto de uma amostra
de ensaio de cerca de 25 g num cadinho com a necessária capacidade.
Carbonizar, inflamando a substância com uma torcida de papel de filtro
sem cinzas. Terminada a combustão, humedecer com o mínimo de água
possivel. Secar e incinerar como indicado em 5.
6. DOSEAMENTO DE CINZAS INSOLUVEIS EM ÁCIDO CLORÍDRICO
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de matérias minerais insolúveis em
ácido clorídrico existentes em alimentos para animais. Podem utilizar-se
dois precessos, em função do tipo de amostra:
1.1.Processo A:
Aplicável aos alimentos orgânicos simples e à maior parte dos alimentos
compostos.
1.2.Processo B:
Aplicável aos compostos e misturas minerais, assim como aos alimentos
compostos cujo teor de substâncias minerais insolúveis em ácido clorí-
drico, e determinado segundo o método A, seja superior a 1 %.
2.Princípio
2.1.Processo A:
Incinera-se a amostra, tratam-se as cinzas por fervura em ácido clorí-
drico, filtra-se o resíduo insolúvel e pesa-se.
2.2.Processo B:
Trata-se a amostra com ácido clorídrico. Filtra-se a .solução, incinera-se
o resíduo e tratam-se as cinzas assim obtidas como no Processo A.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico 3 N;3.2. Solucão de ácido tricloracético 20 % (p/v);3.3. Solução de ácido tricloracétrico a 1 % (p/v).
4.Material
4.1. Placa aquecedora;1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 11
▼B
4.2. Mufla eléctrica com termostato;
4.3. Cadinhos de platina ou liga de platina e ouro (10 % Pt, 90 % Au) para
incineração, rectangulares (60 × 40 × 25 mm) ou circulares (diâmetro:
60 a 75 mm, altura: 20 a 25 mm).
5.Método
5.1.Processo A
Incinerar a amostra de ensaio segundo o método indicado para o dosea-
mento das cinzas brutas. Podem igualmente utilizar-se as cinzas obtidas
com esse doseamento.
Introduzir as cinzas num copo de 250 a 400 ml com 75 ml de ácido
clorídrico 3 N (3.1). Levar cuidadosamente o líquido a uma ebulição
fraca mantendo-a durante quinze minutos. Filtrar a solução quente com
papel de filtro sem cinzas e lavar o resíduo com água quente até desa-
parecer a reacção ácida. Secar o filtro que contém o resíduo e incinerá-
-lo, num cadinho tarado, a uma temperatura de 550 ºC (min.) a 700 ºC
(máx.). Arrefecer no secador e pesar.
5.2.Processo B
Pesar 5 g de amostra com uma precisão de ± 1 mg e introduzi-la num
copo de 250 a 400 ml. Juntar sucessivamente 25 ml de água e 25 ml de
ácido clorídrico 3 N (3.1), misturar e deixar que acabe a efervescência.
Juntar ainda 50 ml de ácido clorídrico 3 N (3.1). Caso se verifique liber-
tação de gás, aguardar que este cesse completamente, colocar em
seguida o copo em banho-maria e ferver durante trinta minutos ou
mais, se necessário, para hidrolizar completamente o amido eventual-
mente presente.
Filtrar a quente com um filtro sem cinzas e lavar o filtro com 50 ml de
água quente (ver observação 7). Colocar o filtro com o resíduo num
cadinho para incineração, secar e incinerar a uma temperatura de
550 ºC (mín.) a 700 ºC (máx.). Introduzir em seguida as cinzas num
copo de 250 a 400 ml com 75 ml de ácido clorídrico 3 N (3.1); prosse-
guir como indicado no segundo parágrafo do ponto (5.1).
6.Cálculo dos resultados
Calcular o peso do resíduo subtraíndo-lhe o peso da tara.Exprimir o resultado em percentagem relativa à amostra.
7.Observação
Se a filtração for difícil, repetir o doseamento substituindo os 50 ml do ácido
clorídrico 3 N por 50 ml de ácido tricloracético a 20 % (3.2), lavando o filtro
com uma solução quente de ácido tricloracético a 1 % (3.3).
7. DOSEAMENTO DO CLORO DOS CLORETOS
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite dosear o cloro dos cloretos solúveis em água, conven-
cionalmente expressos sob a forma de cloreto de sódio, e é aplicável a
todos os alimentos para animais.
2.Princípio
Dissolvem-se os cloretos em água. Se o produto contiver matérias orgânicas
procede-se à sua clarificação. Acidifica-se ligeiramente a solucão com ácido
nítrico, para precipitar os cloretos sob a forma de cloreto de prata com uma
solução de nitrato de prata. Titula-se excesso de nitrato de prata com uma
solução de tiocianato de prata com uma solução de tiocinato de amónio
segundo o método de Volhard.
3.Reagentes
3.1. Solução de tiocianato de amónio 0,1 N.3.2. Solução de nitrato de prata 0,1 N.3.3. Solução saturada de sulfato férrico de amónio.3.4. Ácido nítrico, d: 1,38.3.5. Éter dietílico p.a.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 12
▼B
3.6. Acetona p.a.
3.7. Solução de Carrez I: dissolver em água 24 g de acetato de zinco, ZN
(CH3COO)2·2H2O e 3 g de ácido acético glacial. Completar com
água um volume de 100 ml.
3.8. Solução de Carrez II: dissolver 10,6 g de ferrocianeto de potássio K4[Fe
(CN)6]·3H2O em água completando um volume de 100 ml.
3.9. Carvão activado p.a., isento de cloretos e não adsorvente.
4.Material
Misturador basculante: cerca de 35 a 40 r.p.m.
5.Método
5.1.Preparação da solução
Conforme o tipo de amostra, preparar uma solução como se indica em
(5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3).
Efectuar ao mesmo tempo sem a amostra um «ensaio em branco».5.1.1. Amostras sem matéria orgânica
Pesar, a uma precisão de ± 1 mg, uma amostra de ensaio (não
mais de 10 g), que não contenha mais de 3 g de cloro sob a
forma de cloretos, e introduzi-la num frasco calibrado de 500 ml
com 400 ml de água a cerca de 20 ºC. Misturar durante trinta
minutos no misturador, completar o volume, homogeneizar e
filtrar.
5.1.2. Amostras com matérias orgânicas, à excepção dos produtos
mencionados em (5.1.3).
Pesar, com uma precisão de ± 1 mg, cerca de 5 g de amostra e
introduzi-la com 1 g de carvão activado num frasco graduado de
500 ml. Juntar 400 ml de água a cerca de 20 ºC e 5 ml de solução
de Carrez I (3.7), agitar e juntar em seguida 5 ml de solução
Carrez II (3.8). Misturar durante trinta minutos no misturador,
completar o volume, homogeneizar e filtrar.
5.1.3. Alimentos cozidos, bagaços e farinha de linhaça, produtos ricos
em farinha de linhaça e outros produtos ricos em mucilagens ou
substâncias coloidais (amido dextrinado, por exemplo)
Preparar a solução como se indica em (5.1.2) mas sem filtrar.
Decantar e, (se necessário, centrifugar), recolher 100 ml do
líquido sobrenadante e introduzi-lo num balão calibrado de200 ml. Misturar com acetona (3.6), completando o volume,
homogeneizar e filtrar.
5.2.Titulação
Com uma pipeta introduzir num erlenmeyer 25 a 100 ml de filtrado
(conforme o teor teórico de cloro) obtido em (5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3) a
porção alíquota não deverá conter mais de 150 mg de cloro (Cl). Se
for necessário diluir com água, para obter pelo menos 50 ml de filtrado,
juntar 5 ml de ácido nítrico (3.4), 29 ml de solução saturada de sulfato
férrico de amónio (3.3) e duas gotas de solução de tiocianato de amónio
(3.1), que se deitam com uma bureta cheia até à marca zero. Em
seguida, juntar-lhe a solução de nitrato de prata (3.2) com uma bureta
até obter um excesso de 5 ml. Juntar 5 ml de éter dietílico (3.5) e agitar
fortemente para ligar o precipitado.
Titular o excesso de nitrato de prata com a solução de tiocianato de
amónio (3.1) até a viragem para vermelho acastanhado se manter
durante um minuto.
6.Cálculo dos resultados
A quantidade de cloro (p), expressa sob a forma de cloreto de sódio, presente
no volume de filtrado recolhido para a titulação é calculada mediante a
fórmula seguinte:
p = 5,845 (V
1−V2)m g
em que: V1= ml de solução de nitrato de prata 0,1 N adicionado
V2= ml de solução de tiocianato de amónio 0,1 N utilizados para
a titulação.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 13
▼B
Se o ensaio em branco revelar que houve consumo de solução de nitrato de
de prata 0,1 N, subtrair o valor da quantidade consumida ao volume (V1−
V2).
Exprimir o resultado em percentagem relativa à amostra.
7.Observações
7.1. A titulação pode igualmente fazer-se por potenciometria;7.2. Para os produtos muito ricos em matérias gordas, proceder a um desen-
gorduramento prévio com éter dietílico ou éter de petróleo;
7.3. Para as farinhas de peixe, a titulação pode ser efectuada pelo método de
Mohr.
9. DOSEAMENTO DA LACTOSE
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de lactose em alimentos que a conte-
nham em mais de 0,5 %.
2.Princípio
Dissolvem-se os açúcares em água. Submete-se a solução a uma fermentação
por levedura «Saccharomyces cerevisiae», que não modifica a lactose. Após
clarificação e filtração, determina-se o teor de lactose do filtrado pelo método
Luff-Schoorl.
3.Reagentes
3.1. Suspensão de «Saccharomyces cerenisiae»: Suspender 25 g de levedura
fresca em 100 ml de água. O tempo máximo de conservação desta
suspensão em frigorífico é de uma semana.
3.2. Solução de Carrez I:
Dissolver em água 24 g de acetato de zinco Zn(CH3COO)2·2H2Oe3g
de ácido acético glacial. Completar um volume de 100 ml com água.
3.3 Solução de Carrez II: Dissolver em água 10,5 g de ferrocianeto de
potássio K4[Fe (CN6)] · 3 H2O. Completar um volume de 100 ml com
água.
3.4. Reagente de Luff-Schoorl:
Deitar a solução de ácido cítrico (3.4.2) na de carbonato de sódio
(3.4.3), agitando com precaução. Adicionar em seguida a solução de
sulfato de cobre (3.4.1) e completar o volume com água até prefazer
1 l. Deixar repousar uma noite e filtrar. Controlar a normalidade do
reagente assim obtido (Cu 0,1 N; Na2CO32 N). O pH da solução deverá
ser de cerca de 9,4.
3.4.1. Solução de sulfato de cobre: dissolver em água 25 g de sulfato de
cobre p.a. Cu SO4·5H2O, isento de ferro.
3.4.2. Solução de ácido cítrico: dissolver em 50 ml de água 50 g de
ácido cítrico p.a. C6H8O7·H2O.
3.4.3. Solução de carbonato de sódio: dissolver 143,8 g de carbonato de
sódio anidro p.a. em cerca de 300 ml de água quente. Deixar
arrefecer.
3.5. Pedra-pomes granulada, fervida em ácido clorídrico, lavada com água e
seca.
3.6. Solução a 30 % (p/v) de iodeto de potássio.3.7. Ácido sulfúrico 6 N.3.8. Solução de tiosulfato de sódio 0,1 N.3.9. Solução de amido: juntar uma mistura de 5 g de amido solúvel e 30 mg
de água a 1 l de água a ferver. Ferver durante três minutos, deixar arre-
fecer e, caso necessário, juntar como conservante 10 mg de iodeto de
mercúrio.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 14
▼M3
▼B
▼B
4.Material
Tina de banho-maria, com termostato regulado para 38 a 40 ºC.
5.Método
Pesar, com uma pressão de ± 1 mg, 1 g de amostra e introduzi-la num balão
graduado de 100 ml. Juntar 25 a 30 ml de água, colocar o balão durante
trinta minutos em banho-maria a ferver, deixando arrefecer em seguida até
cerca de 35 ºC. Juntar 5 ml da suspensão de levedura (3.1) e homogeneizar.
Deixar repousar o balão durante 2 horas em banho-maria à temperatura de 38
a 40 ºC e deixar arrefecer em seguida até cerca de 20 ºC.
Juntar 2,5 ml de solução Carrez I (3.2) e agitar durante 30 segundos;
adicionar seguidamente 2,5 ml de solução Carrez II (3.3), agitando nova-
mente durante trinta segundos. Completar o volume com água até 100 ml,
misturar e filtrar. Com uma pipeta, recolher uma quantidade de filtrado não
superior a 25 ml que contenha lactose, de preferência entre 40 e 80 mg, e
introduzi-lo num erlenmeyer de 300 ml. Se necessário, completar o volume
até 25 ml, com água.
Efectuar segundo o mesmo processo um ensaio em branco com 5 ml de
suspensão de levedura (3.1).
Determinar método de Luff-Schoorl o teor de lactose pelo que se segue:
juntar a 25 ml exactos de reagente de Luff-Schoorl (3.4) dois grânulos de
pedra pomes (3.5). Aquecer, agitando manualmente sobre uma chama aberta
de altura média e levar o líquido à ebulição em cerca de dois minutos.
Colocar imediatamente o erlenmeyer sobre uma rede metálica de aqueci-
mento com uma placa de amianto que tenha uma abertura de cerca de 6 cm
de diâmetro e cuja chama se tenha acendido previamente. Regular a chama
de maneira a só aquecer o fundo do erlenmeyer. Ligar em seguida um refri-
gerador de refluxo ao erlenmeyer. A partir desse instante, deixar ferver
durante exactamente dez minutos. Arrefecer imediatamente em água fria
durante cerca de cinco minutos e titular com se segue:
Juntar 10 ml de solução de iodeto de potássio (3.6) e, imediatamente depois e
com cuidado (dado o risco de formação de espuma abundante), adicionar
25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.7). Titular seguidamente com a solução de
tiosulfato de sódio 0,1 N (3.8) até ao aparecimento de uma coloração amare-
lada, acrescentar o indicador de amido (3.9) e terminar a titulação.
Efectuar a mesma titulação, sem ebulição, numa mistura exactamente medida
de 25 ml de reagente de Luff-Schoorl (3.4) e 25 ml de água, após ter juntado
ao reagente 10 ml de solução de iodeto de potássio (3.6) e 25 ml de ácido
sulfúrico 6 N (3.7).
6.Cálculo dos resultados
Utilizando a tabela, determinar a quantidade de lactose, em mg, correspon-
dente à diferença entre os resultados de duas titulações, expressos em ml de
tiosulfato de sódio 0,1 N.
Exprimir o resultado em percentagens, relativas à amostra, de partes de
lactose anidra.
7.Observações
Para os produtos que contenham mais de 40 % de açúcares fermentáveis,
utilizar mais de 5 ml de suspensão de levedura (3.1).
Tabela dos valores de quantidadesde açúcar para 25 ml de reagente de Luff-Schoorl
ml de Na2S2O30,1 N, dois minutos de aquecimento, 10 minutos de ebulição
Na2S2O30,1 NGlucose, frutose, açúcares
invertidos
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferença mg diferença mg diferença ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 81971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 15
▼B
Na2S2O30,1 NGlucose, frutose, açúcares
invertidos
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferença mg diferença mg diferença ml
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 11
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 1314 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 1617 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 3,1 88,0 94,6 23
10. DOSEAMENTO DO POTÁSSIO
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de potássio em alimentos para
animais.
2.Princípio
Incinera-se e dissolvem-se as cinzas em ácido clorídrico. Determina-se o teor
de potássio da solução por fotometria de chama na presença de cloreto de
césio e nitrato de alumínio. A adição destas substâncias elimina, em larga
medida, a interferência de elementos perturbadores.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico p.a., d: 1,12.3.2. Cloreto de césio, p.a.3.3. Nitrato de alumínio Al (NO
3)3·9H2O, quimicamente puro.
3.4. Cloreto de potássio p.a. anidro.3.5. Solução-tampão: dissolver em água, 1,907 g de clorete de potássio (3.4),
juntando 5 ml de ácido clorídrico (3.1), completar o volume com água
até obter 1 l e homogeneizar. Conservar em frascos de plástico.
3.6. Solução-padrão de potássio: dissolver em água 1,907 g de cloreto de
potássio (3.4), juntando 5 ml de ácido clorídrico (3.1), completar o
volume com água até 1 l, e homogeneizar. Conservar em frascos de
plástico. Cada ml desta solução contém 1,00 mg de potássio.
4.Material
4.1. Cadinhos para incineração de platina, quartzo ou porcelana, eventual-
mente com tampa.
4.2. Mufla eléctrica com termostato.4.3. Fotómetro de chama.
5.Método
5.1.Análise da amostra
Em regra, pesar 10 g de amostra, com uma precisão de ± 10 mg, num
cadinho para incineração e incinerá-la a 450 ºC durante três horas. Após
o arrefecimento, passar quantitativamente o resíduo de incineração com
250 a 300 ml de água seguida de 50 ml de ácido clorídrico (3.1) para
balão graduado de 500 ml. Quando cessar a eventual libertação do
anidrido carbónico, aquecer a solução e mantê-la durante duas horas a
uma temperatura próxima dos 90 ºC, agitando de vez em quando. Deixar
arrefecer até à temperatura ambiente, acrescentar água até atingir a1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 16
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marca do balão, agitar e filtrar. Introduzir num balão graduado de 100 ml
uma parte alíquota do filtrado contendo no máximo 1,0 mg de potássio,
juntar 10,0 ml de solução-tampão (3.5), acrescentar água até atingir a
marca e homogeneizar. Na presença de teores de potássio superiores,
diluir, nas devidas proporções, a solução a analisar antes da adição da
solução-tampão. A tabela seguinte fornece, a título indicativo, os valores
correspondentes a uma amostra de ensaio de cerca de 10 g.
Teor teórico de potássio (% K) da
amostraFactor da diluição Parte alíquota em ml de solução
Até a 0,1 — 50
0,1 a 0,5 — 100,5 a 1,0 — 51,0 a 5,0 1: 10 10
5,0 a 10,0 1: 10 5
10,0 a 20,0 1: 20 5
Efectuar a medição por fotometria de chama, ao comprimento de onda
de 768 nm.
Calcular o resultado utilizando o gráfico padrão.
5.2.Gráfico Padrão
Intoduzir 10 ml exactos de solução-padrão (3.6) num balão graduado de
250 ml acrescentar água até à marca e homogeneizar. Introduzir respec-
tivamente 5, 10, 15, 20 e 25 ml da solução, que correspondem a 0,2, 0,4,
0,6, 0,8 e 1,0 mg de potássio, em balões graduados. Completar a série
com um balão de referência, sem solução-padrão. Deitar em cada balão
10,0 ml de solução-tampão (3.5), acrescentar água até à marca e homo-
geneizar. Efectuar as medições como indicado em (5.1). O gráfico-
-padrão mantém-se em geral linear até uma concentração de potássio de
1 mg em 100 ml de solução.
6.Cálculo dos resultados
Exprimir os resultados em percentagens relativas à amostra.
7.Observações
Nem sempre é necessária a adição de solução-tampão (3.5) para impedir a
interferência de elementos perturbadores.
11. DOSEAMENTO DO SÓDIO
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de sódio dos alimentos para animais.
2.Princípio
Incinera-se a amostra e dissolvem-se as cinzas em ácido clorídrico. Deter-
mina-se o teor de sódio da solução por fotometria de chama na presença de
cloreto de césio e nitrato de alumínio. A adição destas substâncias elimina
em larga medida a interferência de elementos perturbadores.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico p.a., d: 1,12.
3.2. Cloreto de césio, p.a.
3.3. Nitrato de alumínio Al (NO
3)3·9H2O, quimicamente puro.
3.4. Cloreto de sódio p.a. anidro.
3.5. Solução-tampão: dissolver em água 50 g de cloreto de sésio (3.2) e 250 g
de nitrato de alumínio (3.3), completar o volume até 1 l, com água ehomogeneizar. Conservar em frascos de plástico.
3.6. Solução-padrão de sódio: dissolver em água 2,542 g de cloreto de sódio
(3.4) juntando-lhe 5 ml de ácido clorídrico (3.1), completar o volume até
a 1 l, com água e homogeniezar. Conservar em frascos de plástico. Cada
ml desta solução contém 1,00 mg de sódio.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 17
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4.Material
4.1. Cadinhos para incineração, de platina, quartzo ou porcelana, eventual-
mente com tampa.
4.2. Mufla eléctrica com termostato.4.3. Fotómetro de chama.
5.Método
5.1.Análise da amostra
Em regra, pesar 10 g de amostra com uma precisão de ± 10 mg num
cadinho para incineração e incinerar a 450 ºC durante três horas. Evitar
o sobreaquecimento (inflamação). Uma vez arrefecido, passar quantati-
vamente o resíduo da incineração, com 250 a 300 ml de água e em
seguida 50 ml de ácido clorídrico (3.1) para um balão graduado de
500 ml. Quanto cessar a eventual libertaçãode anidrido carbónico,
aquecer a solução e mantê-la durante duas horas a uma temperatura
próxima dos 90 ºC, agitando de vez em quando. Deixar arrefecer até à
temperatura ambiente, juntar água até à marca, agitar e filtrar. Introduzir
num balão graduado de 100 ml uma parte alíquota de filtrado contendo
no máximo 1,0 mg de sódio, juntar-lhe 10,0 ml de solução-tampão (3.5),
juntar água até à marca e homogeneizar. Na presença de fortes teores de
sódio, diluir nas devidas proporções a solução a analisar, antes de lhe
adicionar a solução-tampão. A tabela seguinte fornece valores, a título
indicativo, para uma amostra de ensaio de cerca de 10 g.
Teor teórico de Sódio (% Na) na
amostraFactor de diluição Parte alíquota em ml de solução
Até a 0,1 — 50
0,1 a 0,5 — 100,5 a 1,0 — 5
1,0 a 5,0 1: 10 10
5,0 a 10,0 1: 10 5
10,0 a 20,0 1: 20 5
Efectuar a medição por fotometria de chama ao comprimento de onda
de 589 nm.
Calcular o resultado com o gráfico-padrão.
5.2.Gráfico-padrão
Introduzir 10 ml exactos de solução-padrão (3.6) num balão graduado
com água e homogeneizar. Introduzir respectivamente, 5, 10, 15, 20 e
25 ml exactos desta solução, que correspondem a quantidades de sódio
de 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mg em balões graduados. Completar a série
com um balão de referência sem solução padrão. Deitar em cada balão
10,0 ml de solução-padrão (3.5), juntar água até à marca e homoge-
neizar. Efectuar as medições como indicado em (5.1). O gráfico-padrão
mantém-se em geral linear até uma concentração de sódio de 1 mg para
100 ml de solução.
6.Cálculo dos resultados
Exprimir o resultado em percentagens relativas à amostra.
7.Observações
7.1. Para os productos cuyo teor de sódio seja superior a 4 % é preferivel
incinerar a amostra durante duas horas num cadinho com tampa. Deixar
arrefecer, juntar água, suspender o resíduo utilizando um fio de platina,
secar e tornar a incinerar duas horas com o cadinho tapado.
7.2. Se a amostra for constituída unicamente por substâncias minerais,
proceder à dissolução sem incineração prévia.
12. DOSEAMENTO DOS AÇÚCARES
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite dosear os açúcares redutores e os açúcares totais após
inversão, expressos sob a forma de glucose ou eventualmente sob a forma
de sacarose, utilizando 0,95 como factor de conversão. Este doseamento é1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 18
▼B
também aplicável aos alimentos compostos. Existem técnicas especiais para
outros alimentos. Se for necessário, poderá dosear-se separadamente a
lactose, não sem ter em conta o respectivo valor no cálculo dos resultados.
2.Princípio
Dissolvem-se os açúcares em etanol diluido e clarifica-se a solução com
reagentes de Carrez I e II. Uma vez eliminado o etanol, efectuam-se os dose-
amentos, antes e depois da inversão, aplicando o método de Luff-Schoorl.
3.Reagentes
3.1. Etanol a 40 % (v/v), d: 0,948 a 20 ºC, ajustado para o ponto de
viragem da fenolftaleína.
3.2. Solução de Carrez I:
Dissolver em água 24 g de acetato de zinco Zn (CH3COO)2·2H2Oe
3 g de ácido acético glacial, juntar água até completar um volume de
100 ml.
3.3. Solução de Carrez II: dissolver em água 10,6 g de ferrocianeto de
potássio K4[Fe(CN6)] · 3 H2O; Juntar água até completar um volume
de 100 ml.
3.4. Solução a 0,1 por cento (p/v) de laranja de metil;3.5. Ácido clorídrico 4 N;3.6. Ácido clorídrico 0,1 N;
3.7. Solução de hidróxido de sódio 0,1 N;
3.8. Reagentes de Luff-Schoorl:
Deitar, agitando lentamente, a solução de ácido cítrico (3.8.2) na
solução de carbonato de sódio (3.8.3). Juntar em seguida a solução de
sulfato de cobre (3.8.1) e completar o volume com água até obter 1 l.
Deixar repousar uma noite e filtrar. Verificar a normalidade do
reagente assim obtido (Cu 0,1 N; Na
2CO32 N). O pH da solução
deverá ser cerca de 9,4.
3.8.1. Solução de sulfato de cobre: dissolver 25 g de sulfato de cobre
p.a., CuSO4·5H2O, isento de ferro, em 100 ml de água.
3.8.2. Solução de ácido cítrico: dissolver 50 g de ácido cítrico p.a.
C6H8O7·H2O, em 50 ml de água.
3.8.3. Solução de carbonato de sódio: dissolver 143,8 g de carbonato
de sódio anidro p.a. em cerca de 300 ml de água quente. Deixar
arrefecer.
3.9. Solução de tiossulfato de sódio 0,1 N.3.10. Solução de amido: juntar uma mistura de 5 g de amido solúvel e 30 ml
de água a 1 l de água a ferver. Ferver durante três minutos, deixar arre-
fecer e juntar eventualmente 10 mg de iodeto de mercúrio como
conservante.
3.11. Ácido sulfúrico 6 N.3.12. Solução a 30 % (p/v) de iodeto de potássio.
3.13. Pedra pomes granulada fervida em ácido clorídrico, lavada com água e
seca.
3.14. Isopentanol.
4.Material
Misturador (basculante): cerca de 35 a 40 rotações por minuto.
5.Método
5.1.Solução
Pesar 2,5 g da amostra, com uma precisão de cerca de 1 mg, e introduzi-
-la num balão graduado de 250 ml. Juntar 200 ml de etanol (3.1) e
misturar durante uma hora no misturador. Juntar 5 ml de solução de
Carrez I (3.2) e agitar durante 1 minuto. Juntar em seguida 5 ml de
solução de Carrez II (3.3) e tornar a agitar, durante 1 minuto. Completar
o volume com etanol (3.1), homogeneizar e filtrar. Recolher 200 ml de
filtrado e evaporá-lo até cerca de metade do volume para lhe extrair a1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 19
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maior parte do etanol. Passar quantativamente o resíduo da evaporação
com água quente para um balão graduado de 200 ml, deixar arrefecer,
completar o volume com água, homogeneizar e, se necessário, filtrar.
Esta será a solução utilizada para o doseamento dos açúcares e, após
inversão, para o doseamento dos açúcares totais.
5.2.Doseamento dos açúcares redutores
Com uma pipeta, recolher uma quantidade de solução, não superior a
25 ml, que contenha menos de 60 mg de açúcares redutores, expressos
sob a forma de glucose. Se necessário, completar o volume com água
destilada para obter 25 ml e determinar o teor de açúcar redutores pelo
método de Luff-Schoorl. O resultado é expresso em percentagem de
glucose.
5.3.Doseamento dos açúcares totais após a inversão
Com a pipeta, recolher 50 ml de solução e deitá-la num balão graduado
de 100 ml. Juntar algumas gotas de solução de laranja de metil (3.4) e
em seguida ácido clorídrico 4 N (3.5) lentamente e mexendo sempre, até
que haja uma viragem nítida para vermelho. Juntar 15 ml de ácido clorí-
drico 0,1 N (3.6) e mergulhar o balão durante 30 minutos em água
fervendo abundantemente. Arrefecer rapidamente até cerca de 20 ºC e
juntar 15 ml de solução de hidróxido de sódio 0,1 N (3.7). Completar
o volume com água até 100 ml e homogeneizar. Recolher uma quanti-
dade não superior a 25 ml e que contenha menos de 60 mg de açúcares
redutores expressos em glucose. Se necessário, completar o volume com
água destilada até obter 25 ml e determinar o teor de açúcares pelo
método de Luff-Schoorl. O resultado deverá ser expresso em percen-
tagem de glucose, ou eventualmente sacarose, multiplicando pelo factor
0,95.
5.4.Titulação pelo método de Luff-Schoorl
Recolher com uma pipeta 25 ml de reagente de Luff-Schoorl (3.8) e
deitá-lo num erlenmeyer de 300 mg; juntar 25 ml exactos da solução
de açúcares já clarificada. Juntar dois pedaços de pedra-pomes granulada
(3.13), aquecer, agitando manualmente sobre uma chama aberta, de
altura média e levar o líquido à ebulição em cerca de dois minutos.
Colocar imediatamente o erlenmeyer sobre uma placa de aquecimento
metálica com uma cobertura de amianto de abertura de cerca de 6 cm
de diâmetro, sob o qual terá sido previamente acendida uma chama,
regulada por forma a aquecer apenas o fundo do erlenmeyer. Ligar em
seguida um refrigerador do refluxo ao erlenmeyer. A partir deste
instante ferver durante exactamente 10 minutos. Arrefecer imediata-
mente em água fria durante cerca de cinco minutos e titular como segue:
Juntar 10 ml de solução de iodeto de potássio (3.12) e logo a seguir
25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.11), muito cautelosamente (em virtude
do risco de formação de espuma abundante). Titular em seguida, utili-
zando a solução de tiosulfato de sódio 0,1 N (3.9) até ao aparecimento
de coloração amarelada, juntar o indicador de amido (3.10) e acabar a
titulação.
Efectuar a mesma titulação com uma mistura de 25 ml exactos de
reagente de Luff-Schoorl (3.8) e 25 ml de água, a que se juntam 10 ml
de solução de iodeto de potássio (3.12) e 25 ml de ácido sulfúrico 6 N
(3.11), sem levar à ebulição.
6.Cálculo dos resultados
Calcular por meio da tabela a quantidade de glucose, expressa em mg,
correspondente à diferença entre os valores de duas titulações, expressos em
ml de tiossulfato de sódio 0,1 N.
Exprimir o resultado em percentagens relativas à amostra.
7.Técnicas especiais
7.1. No caso de alimentos muito ricos em melaço ou pouco homogéneos,
pesar uma amostra de 20 g e introduzi-la com 500 ml de água num
balão graduado de 1 l. Misturar durante 1 hora no misturador. Clarificar
com reagentes de Carrez I (3.2) e II (3.3) tal como se descreve em (5.1),
mas utilizando uma quantidade 4 vezes superior de cada reagente.
Completar o volume até à marca com etanol a 80 % (v/v).
Homogeneizar e filtrar. Eliminar o etanol como se descreve em (5.1).
Na falta de amido de trinizado, completar o volume até à marca com
água destilada.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 20
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7.2. No caso dos melaços e dos alimentos simples ricos em açúcares e prati-
camente isentos de amido (alfarroba, cascas secas de beterraba, etc.),
pesar 5 g de amostra e introduzi-la num balão graduado de 250 ml,
juntar 200 ml de água destilada e misturar durante 1 hora ou mais, se
necessário, no misturador. Clarificar em seguida com reagentes de
Carrez I (3.2) e II (3.3) tal como se descreve em (5.1). Completar o
volume com água, homogeneizar e filtrar. Para dosear os açúcares totais;
proceder como descrito em (5.3).
8.Observações
8.1. Para evitar a formação de espuma, recomenda-se a adição de cerca de
1 ml de isopentanol (3.14), sem considerar o respectivo volume antes
da ebulição com o reagente de Luff-Schoorl.
8.2. O teor de sacarose expresso em percentagem será igual à diferença entre
o teor de açúcares totais após a inversão expressos em glucose e o teor
de açúcares redutores (igualmente expressos em glucose), multiplicada
por 0,95.
8.3. Para determinar o teor de açúcares redutores, à exclusão da lactose,
podem utilizar-se dois processos:
8.3.1. Para um cálculo aproximado, multiplica-se o teor de lactose
obtido por doseamento separado por 0,675 e subtrai-se do teor
de açúcares redutores o resultado obtido.
8.3.2. Para o cálculo exacto dos açúcares redutores, à exclusão da
lactose é necessário utilizar a mesma amostra de ensaio nas duas
determinações finais, efectuando-se uma análise com parte da
solução obtida em (5.1) e outra com parte da solução que se
utiliza no método de doseamento da lactose (após a fermentação
das outras espécies de açúcares seguida de clarificação).
Em ambos os casos a quantidade de açúcar presente determina-se pelo
método de Luff-Schoorl e o respectivo cálculo faz-se em mg de glucose,
subtraindo um valor do outro e exprimindo o resultado em termos
percentuais relativamente à amostra.
Exemplo
Os volumes recolhidos correspondem ambos, em cada um dos dosea-
mentos a uma amostra de ensaio de 250 mg.
No primeiro caso são gastos 17 ml de solução de tiossulfato de sódio
0,1 N, o que corresponde a 44,2 mg de glucose, e no segundo são gastos
11 ml, o que corresponde a 27,6 mg de glucose.
A diferença é de 16,6 mg de glucose.
O teor de açúcares redutores (excepto lactose), calculado em termos de
glucose, será portanto de:
4/C216;6
10¼6;64 %
Tabela de valores para 25 ml de reagente de Luff-Schoorl
ml de Na2S2O30,1 N, dois minutos de aquecimento e dez minutos de ebulição
Na2S3O30,1 NGlucose, fructose e
açúcares invertidos
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferença mg diferença mg diferença ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 78 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 111971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 21
▼B
Na2S3O30,1 NGlucose, fructose e
açúcares invertidos
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferença mg diferença mg diferença ml
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 1516 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 1617 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 88,0 94,6 23
14. DOSEAMENTO DA UREIA
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta técnica permite determinar o teor de ureia em alimentos para animais.
2.Princípio
Suspende-se a amostra em água juntamente com um produto clarificador e
filtra-se. Determina-se o teor de ureia do filtrado, após a adição de 4-dimeti-
laminobenzaldeído (4-DMAB), medindo a densidade óptica a um
comprimento de onda de 420 mm.
3.Reagentes
3.1. Solução de 4-dimetilaminobenzaldeído: dissolver 1,6 g de 4-DMAB p.a.
em 100 ml de etanol a 96 % e juntar 20 ml de ácido clorídrico p.a. (D:
1,19). O tempo de conservação máximo deste reagente é de duas
semanas.
3.2. Solução de Carrez I:
Dissolver em água 24 g de acetato de zinco Zn (CH3COO)2·2H2Oe
3 mg de ácido acético glacial. Completar o volume com água até obter
100 ml.
3.3. Solução de Carrez II: dissolver em água 10,6 g de ferrocianeto de
potássio K4[Fe(CN)6]·3H2O. Completar o volume com água até obter
100 ml.
3.4. Carvão activado p.a., não adsorvente da ureia (verificar).
3.5. Solução de ureia a 0,1 % (p/v) p.a.
4.Material
4.1. Misturador (basculante): cerca de 35 a 40 rotações por minuto;4.2. Tubos de ensaio: 160 × 16 mm, com tampa esmerilada;
4.3. Espectrofotómetro.
5.Método
5.1.Análise da amostra
Pesar, 2 g de amostra com uma precisão de cerca de 1 mg de introduzi-
-la com um g de carvão activado (3.4) num frasco graduado de 500 mg.
Juntar 400 ml de água e 5 ml respectivamente de solução de Carrez I
(3.2) e de solução de Carrez II (3.3). Misturar durante 30 minutos no
misturador. Completar o volume com água, agitar e filtrar.
Recolher 5 ml de filtrado límpido e incolor e introduzi-lo nos tubos de
ensaio de tampa esmerilada, juntar 5 ml de solução 4-DMAB (3.1) e
misturar. Colocar os tubos em banho-maria a 20 ºC. Decorridos 151971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 22
▼M3
▼B
▼B
minutos, medir a densidade óptica da solução de amostra, com o espec-
trofotómetro ao comprimento de onda de 420 nm, por comparação com
a solução de reagentes feita no ensaio em branco.
5.2.Gráfico-padrão
Recolher volumes de 1, 2, 4, 5, e 10 ml de solução de ureira (3.5), intro-
duzi-la em balões graduados de 100 ml, completando os volumes com
água. Recolher 5 ml de solução de cada um dos balões, e juntar a cada
5 ml respectivamente 5 ml de solução de 4-DMAB, homogeneizar e
medir a densidade óptica, como atrás se indicou, por comparação com
uma solução de referência que contenha 5 ml de 4-DMAB e 5 ml de
água, isenta de ureia. Traçar o gráfico-padrão.
6.Cálculo dos resultados
Determinar, com o gráfico-padrão, a quantidade de ureia da amostra de
ensaio, exprimindo o resultado em percentagem relativamente à amostra.
7.Observações
7.1. Para teores de ureia superiores a 3 %, reduzir o peso da amostra de
ensaio para 1 g, ou diluir a solução inicial, para que o teor de ureia
por cada 500 ml não seja superior a 50 mg.
7.2. Para teores de ureia pouco elevados, aumentar o peso da amostra de
ensaio, sem deixar no entanto que a quantidade de amostra para análise
impeça o filtrado de ficar límpido e incolor.
7.3. Se a amostra contiver compostos azotados simples, tais como ácidos
aminados, é aconselhável efectuar a medição da densidade óptica ao
comprimento de onda de 435 nm.
16. DETERMINAÇÃO DA ACTIVIDADE UREÁSICA NOS DERIVADOS
DE SOJA
1.Finalidade e objecto de aplicação
Esta prova permite determinar a actividade da urease nos derivados de soja e
revela a sua insuficiente cozedura.
2.Princípio
Determina-se a actividade ureásica através da quantidade de azoto amoniacel
que 1 g de produto liberta por minuto em solução de ureia.
3.Reagentes
3.1. Ácido clorídrico 0,1 N;3.2. Solução de hidróxido de sódio 0,1 N;3.3. Solução-tampão de fosfatos 0,05 M contendo, em 1 000 ml, 4,45 g de
fosfato dissódico (Na
2HPO4·2H2O) e 3,40 g de fosfato monopotássico
(KH2PO4).
3.4. Solução tamporada de 30,0 g de ureia por 1 000 ml de solução-tampão
(3.3) com pH 6,9-7,0, preparada de fresco.
4.Material
4.1. Aparelho de titulação potenciométrica (de medição do pH) de grande
precisão (0,02 pH) com misturador magnético.
4.2. Tina de banho-maria com termostato regulado para exactamente 30 ºC.4.3. Tubos de ensaio de 150 × 18 mm, com tampa esmerilada.
5.Método
Moer (num moínho de café, por exemplo) cerca de 10 g de amostra de
maneira a que passe através de uma peneira com uma malha de 0,2 mm.
Num tubo de ensaio de tampa esmerilada pesar, com uma precisão de
± 1 mg, 0,2 g de amostra já moída e juntar 10 ml de solução-tampão de ureia
(3.4). Fechar imediatamente o tubo de agitar vigorosamente. Mergulhar o
tubo durante exactamente 30 minutos em banho-maria, rigorosamente a
30 ºC. Juntar imediatamente 10 ml de ádico clorídrico 0,1 N (3.1), arrefecer1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 23
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rapidamente até 20 ºC e passar quantitativamente o conteúdo do tubo para o
recipiente de titulação,lavando-o por duas vezes com 15 ml de água. Titular
imediata e rapidamente por electrometria com a solução de hidróxido de
sódio 0,1 N (3.2), utilizando um eléctrodo de vidro, até pH 4,7.
Efectuar um ensaio em branco como se segue:Introduzir rápida e sucessivamente num tubo de ensaio de rolha esmerilada
0,2 g de amostra, pesados com uma precisão de ± 1 mg, 10 ml de ácido
clorídrico 0,1 N (3.1) e 10 ml de solução tamporada de ureia (3.4). Arrefecer
imediatamente o tubo mergulhando-o em água gelada e deixá-lo permanecer
aí durante trinta minutos. Passar em seguida o conteúdo do tubo como atrás
se indica para o recipiente de titulação, que se fará até ao pH 4,7, com
solução de hidróxido de sódio 0,1 N (3.2).
6.Cálculo dos resultados
A actividade ureásica calcula-se mediante a seguinte fórmula:
mg N
g min`a3 0º C ¼1;4b/C0a ðÞ
30/C1E
em que: a = ml de solução de hidróxido de sódio 0,1 N gastos pela amostra
de ensaio.
b = ml de solução de hidróxido de sódio 0,1 N gastos no ensaio em
branco.
E = g de amostra de ensaio.
7.Observações
7.1. Aconselha-se este método para uma actividade ureásica a 30 ºC não
superior a 1 mg N/g mín. Para produtos mais activos, o peso da amostra
de ensaio poderá ser reduzido até um mínimo de 50 mg.
7.2. Os produtos cujo teor de matérias gordas brutas ultrapasse 10 % deverão
ser previamente desengorduradas a frio.1971L0250 — PT — 26.05.1999 — 003.001 — 24