1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 1
Este documento constitui um instrumento de documentação e não vincula as instituições
►BSEGUNDA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 14 de Maio de 1982
relativa à aproximação das legislações dos Estados-membros respeitantes aos métodos de análise
necessários ao controlo da composição dos produtos cosméticos
(82/434/CEE)
(JO L 185 de 30.6.1982, p. 1)
Alterada por:
Jornal Oficial
n.opágina data
►M1Directiva 90/207/CEE da Comissão de 4 de Abril de 1990 L 108 92 28.4.1990
▼B
SEGUNDA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 14 de Maio de 1982
relativa à aproximação das legislações dos Estados-membros
respeitantes aos métodos de análise necessários ao controlo da
composição dos produtos cosméticos
(82/434/CEE)
A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Euro-
peia,
Tendo em conta a Directiva 76/768/CEE do Conselho, de 27 de Julho
de 1976, relativa à aproximação das legislações dos Estados-membrosrespeitantes aos produtos cosméticos(
1), modificada pela Directiva 79/
/661/CEE(2) e, nomeadamente, o n.o1 do seu artigo 8.o,
Considerando que a Directiva 76/768/CEE prevê controlos oficiais dos
produtos cosméticos que visam verificar se são respeitadas ascondições previstas pelas disposições comunitárias respeitantes à
composição dos produtos cosméticos;
Considerando que é conveniente estabelecer o mais rapidamente
possível todos os métodos de análise necessários e que a primeira fase
para atingir esta finalidade, tendo sido efectuada pela fixação de certos
métodos na Directiva 80/1335/CEE da Comissão(
3), a fixação dos
métodos de identificação dos agentes de oxidação e de doseamento doperóxido de hidrogénio nos produtos capilares, de identificação e dedoseamento semiquantitativo de certos corantes de oxidação nas
tinturas capilares, de identificação e de doseamento dos nitritos, de
identificação e de doseamento do formaldeído livre, de doseamento daresorcina nos champôs e nas loções capilares, de doseamento dometanol em relação ao etanol ou ao 2-propanol, constituem umasegunda fase;
Considerando que as medidas previstas na presente directiva estão
conformes com o parecer do comité para a adaptação ao progressotécnico da Directiva 76/768/CEE,
ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA:
Artigo 1.o
Os Estados-membros tomarão todas as medidas adequadas para que,aquando dos controlos oficiais dos produtos cosméticos:
— a identificação dos agentes de oxidação e doseamento do peróxido
de hidrogénio nos produtos capilares,
— a identificação e o doseamento semiquantitativo de determinados
corantes de oxidação nas tinturas capilares,
— a identificação e o doseamento dos nitritos,
— a identificação e o doseamento do formaldeído livre,
— o doseamento da resorcina nos champôs e nas loções capilares,
— o doseamento do metanol em relação ao etanol ou ao 2-propanol
sejam efectuados segundo os métodos descritos no anexo.
Artigo 2.
o
Os Estados-membros porão em vigor as disposições legislativas, regu-
lamentares ou administrativas necessárias para darem cumprimento àpresente directiva o mais tardar em 31 de Dezembro de 1983. Dessefacto informarão imediatamente a Comissão.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 2
(1)J O n .oL 262 de 27. 9. 1976, p. 169.
(2)J O n .oL 192 de 31. 7. 1979, p. 35.
(3)J O n .oL 383 de 31. 12. 1980, p. 27.
▼B
Artigo 3.o
Os Estados-membros são destinatários da presente directiva.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 3
▼B
ANEXO
I.IDENTIFICAÇÃODOS AGENTES DE OXIDAÇÃO E DOSEAMENTO
DO PERÓXIDO DE HIDROGÉNIO NOS PRODUTOS CAPILARES
OBJECTIVO E CAMPO DE APLIÇÃO
O doseamento iodométrico do peróxido de hidrogénio nos produtos cosméticos é
possível na ausência de qualquer outro agente de oxidação que reaja com os
iodetos para formar o iodo. Antes de empreender o doseamento iodométrico do
peróxido de hidrogénio é, pois, indispensável detectar e identificar outros
agentes de oxidação eventualmente presentes. Esta identificação efectua-se em
duas operações: a primeira dizendo respeito aos persulfatos, bromatos e peró-
xido de hidrogénio, e a segunda ao peróxido de bário.
A. IDENTIFICAÇÃO DOS PERSULFATOS, BROMATOS E DO PERÓXIDO
DE HIDROGÉNIO
1. PRINCÍPIO
O persulfato de sódio, de potássio e de amónio, o bromato de potássio e
de sódio e o peróxido de hidrogénio, quer seja ou não proveniente do
peróxido de bário, são identificados por cromatografia descendente em
papel, com a ajuda de dois eluentes.
2. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
2.1. Soluções aquosas de referência a 0,5 % (m/v) dos compostos seguintes:2.1.1. Persulfato de sódio2.1.2. Persulfato de potássio2.1.3. Persulfato de amónio2.1.4. Bromato de potássio2.1.5. Bromato de sódio2.1.6. Peróxido de hidrogénio2.2. Eluente A, etanol a 80 % (v/v)
2.3. Eluente B, benzeno/metanol/álcool isoamílico/água (34:38:18:10, v)
2.4. Reagente A, solução aquosa de iodeto de potássio a 10 % (m/v)2.5. Reagente B, solução aquosa de amido a 1 % (m/v)2.6. Reagente C, ácido clorídrico a 10 % (m/m)2.7. Ácido clorídrico 4 N.
3. APARELHAGEM
3.1. Papel para cromatografia (Whatman n.
o3en .o4 ou equivalente)
3.2. Micropipeta de um l3.3. Balões aferidos de 100 ml3.4. Filtros de pregas3.5. Material corrente para cromatografia descendente em papel.
4. PREPARAÇÃO DA AMOSTRA
4.1.Produtos solúveis na água
Preparar duas soluções de amostra dissolvendo respectivamente 1 e 5g
do produto em 100 ml de água. Para efectuar a cromatografia sobre
papel descrita no ponto 5, utilizar 1 µl de cada uma destas soluções.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 4
▼B
4.2.Produtos parcialmente solúveis na água
4.2.1. Pesar 1 e 5 g de amostra, suspender em 50 ml de água, completar
100 ml e misturar. Filtrar as duas suspensões por um filtro de pregas
(ponto 3.4) e utilizar 1 µl de cada um dos dois filtrados para efectuar
a cromatografia em papel descrita no ponto 5.
4.2.2. Preparar duas novas suspensões de 1 e 5g de amostra em 50 ml de
água, acidificar com ácido clorídrico diluído (ponto 2.7), completar
100 ml com água e misturar. Filtrar as suspensões por um filtro de
pregas (ponto 3.4) e utilizar 1 µl de cada um dos dois filtrados para
efectuar a cromatografia em papel descrita no ponto 5.
4.3.Cremes
Homogeneizar separadamente 5 e 20 g do produto com 100 ml de água
e utilizar as dispersões para efectuar a cromatografia em papel descrita
no ponto 5.
5. TÉCNICA
5.1. Em duas tinas para cromatografia descendente em papel, colocar uma
certa quantidade de eluentes A (ponto 2.2) e B (ponto 2.3). Saturar as
tinas com vapores dos eluentes durante 24 horas pelo menos.
5.2. Numa tira de papel para cromatografia (Whatman n.o3 ou equivalente)
de 40 cm de comprimento e 20 cm de largura (ponto 3.1) ou doutro
formato adequado, colocar em cada ponto de partida 1 µl de uma das
soluções (ou suspensões filtradas) de amostra e de produto de referência
preparadas de acordo com os pontos 4 e 2.1 e fazer evaporar o solvente
ao ar.
5.3. Colocar a tira (ponto 5.2) na tina cheia do eluente A (ponto 5.1) e
cromatografar até que este tenha percorrido 35 cm (cerca de 15 horas).
5.4. Repetir as operações descritas nos pontos 5.2 e 5.3 com papel para
cromatografia (Whatman n.o4 ou equivalente) (ponto 3.1) e o eluente
B (ponto 2.3). Cromatografar até que este tenha pecorrido 35 cm (cerca
de 5 horas).
5.5. Após desenvolvimento, tirar as tiras de papel das tinas e secá-las ao ar.
5.6. Revelar as manchas pulverizando:
5.6.1. O reagente A (ponto 2.4) e logo a seguir o reagente B (ponto 2.5). As
manchas de persulfatos aparecem em primeiro lugar no cromatograma,
seguidas de manchas de peróxido de hidrogénio. Marcar estas manchas
com um lápis.
5.6.2. O reagente C (ponto 2.6) sobre os cromatogramas obtidos no ponto
5.6.1. Aparecem manchas cinzento azuladas que indicam a presença de
bromatos.
5.7. Nas condições indicadas acima para os eluentes A (ponto 2.2) e B
(ponto 2.3) os valores Rf das soluções de referência (ponto 2.1) são os
seguintes:
Eluente A
(ponto 2.2)Eluente B
(ponto 2.3)
Persulfato de sódio 0,40 0,10
Persulfato de potássio 0,40 0,02 + 0,05Persulfato de amónio 0,50 0,10 + 0,20
Bromato de sódio 0,40 0,20
Bromato de potássio 0,40 0,10 + 0,20Peróxido de hidro-
génio0,80 0,801982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 5
▼B
B. IDENTIFICAÇÃO DO PERÓXIDO DE BÁRIO
1. PRINCÍPO
A presença de peróxido de bário é posta em evidência:
— por um lado por formação do peróxido de hidrogénio após a acidi-
ficação da amostra (Título A, ponto 4.2.),
— por outro lado, por identificação de iões de bário.
Na ausência de persulfatos (Título A): junta-se ácido sulfúrico diluído a
uma parte da solução de amostra ácida (Título B, ponto 4.1.), o que
leva à formação dum precipitado branco de sulfato de bário. A presença
de iões na solução de amostra (ponto 4.1.) é confirmada por cromato-
grafia em papel como referido no ponto 5 mais adiante.
No caso de presença simultânea de peróxido de bário e de persulfatos
(Título B, ponto 4.2.) após fusão alcalina do produto insolúvel e disso-
lução no ácido clorídrico, estabelece-se a presença de ião de bário por
cromatografia e/ou por precipitação no estado de sulfato.
2. REAGENTES
2.1. Metanol
2.2. Ácido clorídrico concentrado a 36 % (m/m)
2.3. Ácido clorídrico 6 N2.4. Ácido sulfúrico 4 N2.5. Rodizonato dissódico
2.6. Cloreto de bário (Ba Cl
22H2O)
2.7. Carbonato de sódio anidro2.8. Solução aquosa de cloreto de bário a 1 % (m/v)2.9. Eluente, metanol/ácido clorídrico concentrado a 36 %/água (80:10:10,
V)
2.10. Reagente, solução aquosa de rodizonato dissódico a 0,1 % (m/v);
preparar a solução imediatamente antes da utilização.
3. APARELHAGEM
3.1. Micropipeta de 5 µl
3.2. Cadinhos de platina3.3. Balões aferidos de 100 ml3.4. Papel para cromatografia (Schleicher e Schüll 2043 b ou equivalente).
Colocar durante uma noite na tina para cromatografia (Título A, ponto
3.5.), contendo o eluente (Título B, ponto 2.9.) e secar
3.5. Filtros de pregas
3.6. Material corrente para a cromatografia ascendente em papel
4. PREPARAÇÃO DA AMOSTRA
4.1.Produtos que não contenham persulfatos
4.1.1. Homogeneizar ou dissolver 2 g do produto em 50 ml de água e, por
meio de ácido clorídrico (Título B, ponto 2.3.) levar o pH da solução
a 1 aproximadamente.
4.1.2. Transferir a solução (suspensão) para balão aferido de 100 ml.
Completar o volume com água e misturar. Utilizar esta solução para
efectuar a cromatografia em papel descrita no ponto 5 e para identificar
o bário por precipitação do sulfato.
4.2.Produtos que contenham persulfatos
4.2.1. Homogeneizar ou dissolver 2 g do produto em 100 ml de água e filtrar.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 6
▼B
4.2.2. Adicionar ao resíduo seco 7 a 10 vezes o seu peso de carbonato de
sódio (Título B, ponto 2.7.), misturar e dissolver a mistura num cadinho
de platina (Título B, ponto 3.2.) durante cerca de meia hora.
4.2.3. Arrefecer à temperatura ambiente, suspender em 50 ml de água o
produto da fusão e filtrar (Título B, ponto 3.5.).
4.2.4. Dissolver no ácido clorídrico 6 N (Título B, ponto 2.3.) e completar
100 ml com água. Utilizar esta solução para efectuar a cromatografia
em papel descrita no ponto 5 e para identificar o bário por precipatação
do sulfato.
5. TÉCNICA
5.1. Numa tina para cromatografia ascendente em papel, colocar uma certa
quantidade de eluente (Título B, ponto 2.9.) e saturar a tina durante 15
horas, pelo menos.
5.2. Numa folha de papel para cromatografia, anteriormente tratada como
acima indicado (Título B, ponto 3.4.), aplicar respectivamente, em três
pontos, 5 µl de cada uma das soluções preparadas (Título B, ponto
4.1.2.) e (Título B, ponto 4.2.4.) e da solução de referência (Título B,
ponto 2.8.).
5.3. Evaporar o solvente ao ar e cromatografar até que o eluente tenha
percorrido 30 cm.
5.4. Tirar o papel da tina e secá-lo ao ar.
5.5. Revelar as manchas no cromatograma pulverizando com o reagente
(Título B, ponto 2.10.).
Em presença do bário, aparecem manchas vermelhas com Rf 0,10 apro-
ximadamente.
C. DOSEAMENTO DO PERÓXIDO DE HIDROGÉNIO
1. PRINCÍPIO
O doseamento iodométrico do peróxido de hidrogénio baseia-se na
reacção seguinte:
H2O2+2 H++2 1−→I2+2 H2O
Trata-se duma reacção lenta, mas é possível acelerá-la, adicionando
molibdato de amónio. O iodo formado, doseado por processos titrimé-
tricos com uma solução de tiossulfato de sódio, permite calcular o teor
em peróxido de hidrogénio.
2. DEFINIÇÃO
O teor da amostra em peróxido de hidrogénio determinado segundo este
método é expresso em percentagem do produto (m/m).
3. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
3.1. Ácido sulfúrico 2 N
3.2. Iodeto de potássio3.3. Molibdato de amónio
3.4. Solução de tiossulfato de sódio 0,1 N
3.5. Solução de iodeto de potássio a 10 % (m/v). Preparar a solução imedia-
tamente antes de usar.
3.6. Solução de molibdato de amónio a 20 % (m/v)
3.7. Solução de amido a 1 % (m/v)
4. APARELHAGEM
4.1. Copos de vidro de 100 ml1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 7
▼B
4.2. Bureta de 50ml
4.3. Balões aferidos de 250 ml4.4. Provetas graduadas de 25 e 100 ml
4.5. Pipetas aferidas de 10 ml
4.6. Matrases de 250 ml
5. TÉCNICA
5.1. Num copo de 100 ml, pesar uma quantidade (em gramas) do produto,
equivalente a 0,6 g aproximadamente de peróxido de hidrogénio; trans-
ferir quantitativamente para um balão aferido de 250 ml com a ajuda
duma pequena quantidade de água, completar o volume com água e
misturar.
5.2. Pipetar 10 ml da solução da amostra (ponto 5.1.) para um balão de
250 ml (ponto 4.6) e adicionar sucessivamente 100 ml de ácido sulfú-
rico 2 N (ponto 3.1.), 20 ml de solução de iodeto de potássio (ponto
3.5.) e três gotas de solução de amónio (ponto 3.6).
5.3. Titular imediatamente o iodo formado com a solução de tiossulfato de
sódio 0,1 N (ponto 3.4.) e, na proximidade do ponto de equivalência,
juntar alguns ml de solução de amido como indicador. Anotar em ml a
quantidade de tiossulfato de sódio 0,1 N utilizada (V).
5.4. Conforme o processo indicado nos pontos 5.2 e 5.3, efectuar um ensaio
em branco, substituindo os 10 ml da solução da amostra por 10 ml de
água. Anotar em ml a quantidade de tiossulfato de sódio 0,1 N utilizada
(Vo).
6. CÁLCULO
Calcular o teor do produto em peróxido de hidrogénio, em percentagem
de massa (% m/m), pela fórmula:
% de per´ oxido de hidrog´ enio¼
V/C0Vo ðÞ /C2 1;7008 /C2250/C2100
m/C210/C21000
% de per´ oxido de hidrog´ enio¼V/C0Vo ðÞ /C2 4;252
m
em que:
m = a quantidade em g de produto examinado (ponto 5.1.),
Vo = a quantidade em ml de solução de tiossulfato 0,1 N consumida
no ensaio em branco (ponto 5.4.),
V = a quantidade em ml de solução de tiossulfato 0,1 N consumida
no doseamento da solução de amostra (ponto 5.3.).
7. REPRODUTIBILIDADE(1)
Para um teor em peróxido de hidrogénio da ordem de 6 % (m/m), a
diferença entre os resultados de 2 doseamentos paralelos, efectuados
na mesma amostra, não deve ultrapassar 0,2 %.
II.IDENTIFICAÇÃO E DOSEAMENTO SEMIQUANTITATIVO DE
CERTOS CORANTESDE OXIDAÇÃO NAS TINTURASCAPILARES
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
Este método permite a identificação e o doseamento semiquantitativo
das substâncias seguintes nas tinturas capilares sob forma de creme e
de líquido:1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 8
(1) Segundo a norma ISO 5725.
▼B
Denominação das substâncias Símbolo
diaminobenzenos
1,2-diaminobenzeno (o.-fenilenodiamina) (OPD)
1,3-diaminobenzeno (m.-fenilenodiamina) (MPD)
1,4-diaminobenzeno (p.-fenilenodiamina) (PPD)
diaminotoluenos
3,4-diaminotolueno (o.-toluilonodiamina) (OTD)
2,4-diaminotolueno (m.-toluilonodiamina) (MTD)
2,5-diaminotolueno (p.-toluilonodiamina) (PTD)
diaminofenóis
2,4-diaminofenol (DAP)
hidroquinona
1,4-dihidroxibenzeno (H)
α-naftol (αN)
Pirogalhol
1,2,3-trihidroxibenzeno (P)
Resorcina
1,3-dihidroxibenzeno (R)
2. PRINCÍPIO
Os corantes de oxidação são extraídos a pH 10 das tinturas, na forma de
creme ou de líquido, com a ajuda de etanol a 96º e identificados por
cromatografia em camada fina monodimensional (ponto 5) e/ou bidi-
mensional (ponto 6).
A fim de efectuar o doseamento semiquantitativo das substâncias,
comparam-se os cromatogramas das amostras, obtidos com a ajuda de
quatro sistemas de desenvolvimento, com o das soluções dos produtos
de referência cromatografados.
3. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
3.1. Etanol absoluto
3.2. Acetona
3.3. Etanol 96º (v/v)
3.4. Amoníaco a 25 % (d420= 0,91)
3.5. Ácido ascórbico L (+)
3.6. Clorofórmio
3.7. Cicloexano
3.8. Azoto normal
3.9. Tolueno3.10. Benzeno
3.11. 1-Butanol
3.12. 2-Butanol
3.13. Ácido hipofosforoso a 50 %
3.14. Reagente diazóico: poder-se-á utilizar ou:
— clorobenzenossulfonato de 4-nitro-1-benzenodiazónio (sob a forma
de sal estabilizado) como por exemplo vermelho 2 jN de Francolor,1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 9
▼B
— naftaleno benzoato de 2-cloro-4-nitro-1-benzenodiazónio (sob a
forma de sal estabilizado) como por exemplo reagente NNCD —
Ref. n.o74150 de FLUKA
3.15. Nitrato de prata3.16. p-dimetilaminobenzaldeído3.17. 2,5-dimetilfenol3.18. Cloreto férrico hexaidratado3.19. Ácido clorídrico a 10 % (m/v)
3.20.Substâncias de referência
As substâncias de referência são as indicadas no Título I «Objectivo e
campo de aplicação».
No caso de compostos aminados, a substância de referência deve ser
constituída exclusivamente pelo cloridrato (mono ou di) ou pela própria
base.
3.21.Soluções de referência a 0,5 % (m/v)
Preparar uma solução a 0,5 % (m/v) de cada uma das substâncias de
referência (ponto 3.20).
Pesar 50 mg ± 1 mg de substância de referência num balão aferido de
10 ml.
Juntar 5 ml de etanol a 96 % (ponto 3.3.).Juntar 250 mg de ácido ascórbico (ponto 3.5.).Alcalinizar com a ajuda da solução amoniacal (ponto 3.4.) até pH
10,
aparente.
Completar 10 ml com etanol a 96 % e misturar.Notas
As soluções podem ser conservadas durante uma semana, num local
fresco, ao abrigo da luz.
Em certos casos, a quando da adição do ácido ascórbico e do amoníaco,
pode produzir-se um precipitado. Convém então deixar depositar antes
de efectuar a tomada de ensaio.
3.22.Eluente
3.22.1. Acetona/clorofórmio/tolueno: 35:25:40 (v/v)3.22.2. Clorofórmio/ciclohexano/etanol absoluto/amoníaco a 25 % 80:10:10:1
(v/v)
3.22.3. Benzeno/butanol secundário/água: 50:25:25 (v/v). Agitar bem a mistura
e tomar a fase superior após decantação à temperatura do laboratório
(entre 20 e 25º C).
3.22.4. 1-Butanol/clorofórmio e reagente M: 7:70:23 (v/v). Deixar decantar
cuidadosamente à temperatura ambiente 20-25º C e tomar a fase infe-
rior.
Preparação do reagente M
Solução de amónio a 25 % (v/v) (ponto 3.4.) 24 volumesÁcido hipofosforoso a 50 % (ponto 3.13.) 1 volume
Água 75 volumes
Nota
Os eluentes que contêm amoníaco devem ser bem agitados, imediata-
mente antes da utilização.
3.23.Reveladores
3.23.1. Reagente diazóico
Preparar uma solução aquosa a 5 % (m/v) do reagente (ponto 3.14.)
escolhido. Esta solução deve ser preparada no momento da utilização.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 10
▼B
3.23.2. Reagente de Ehrlich
Dissolver 2 g de p-dimetilaminobenzaldeído (ponto 3.16.) em 100 ml
de ácido clorídrico aquoso a 10 % (m/v) (ponto 3.19.).
3.23.3. 2.5-dimetilfenol/cloreto férrico hexaidratado
Solução 1:
dissolver 1 g de dimetilfenol (ponto 3.17.) em 100 ml de etanol a 96º
(ponto 3.3.).
Solução 2:
dissolver 4 g de cloreto férrico hexaidratado (ponto 3.18.) em 100 ml de
etanol a 96º (ponto 3.3.).
Aquando da revelação pulveriza-se, separadamente, em primeiro lugar a
solução 1 e depois a solução 2.
3.23.4. Nitrato de prata amoniacal
A uma solução aquosa a 5 % (m/v.) de nitrato de prata (ponto 3.15.)
juntar amoníaco a 25 % (ponto 3.4.) até à dissolução do precipitado.
Este reagente será preparado no momento da sua utilização. Não
conservar.
4. APARELHAGEM
4.1. Equipamento de laboratório para cromatografia em camada delgada.
4.1.1. Recipiente em plástico ou em vidro permitindo manter a placa de
cromatografia em atmosfera de azoto durante a aplicação e até ao
desenvolvimento. Esta precaução é necessária, em virtude da grande
oxidabilidade de certos corantes.
4.1.2. Seringa de 10 µl, graduada de 0,2 em 0,2 µl com uma agulha de secção
chata ou, melhor, um «repeating dispenser» de 50 µl, montado num
sistema que permita manter a placa em atmosfera de azoto.
4.1.3. Placas de sílica «pre-coated», com a espessura de 0,25 mm e as dimen-
sões de 20 × 20 cm
(Macherey e Nagel Sílica G-HR ou equivalente.
4.2. Centrífuga permitindo 4000 rotações/minuto.
4.3. Tubos de centrífuga de 10 ml, fechados.
5. TÉCNICA:5.1.Tratamento das amostras
Ao abrir o tubo, eliminar os 2 ou 3 primeiros cm de creme.
Num tubo de centrífuga (ponto 4.3.), previamente purgado com azoto,
introduzir:
— 300 mg de ácido ascórbico,
— 3 g de creme ou 3 g de líquido homogeneizado.
Juntar algumas gotas de amoníaco (ponto 3.4.) se o pH for inferior a 10
e completar 10 ml com etanol 96º (ponto 3.3.).
Homogeneizar em atmosfera de azoto, tapar, e centrifugar a 4 000
rotações/minuto durante 10 minutos.
Utilizar a solução sobrenadante.
5.2.Cromatografia
5.2.1. Aplicação
Aplicar em atmosfera de azoto, sobre uma placa de sílica (ponto 4.1.3.)
e em 9 pontos separados, 1 µl de cada uma das soluções de referência.
Estas soluções de referência são referenciadas da seguinte forma:
123456789
R P H PPD DAP PTD OPD OTD MPD
MTD αN1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 11
▼B
Por outro lado, colocar sobre cada um dos décimo e décimo-primeiro
pontos 2 µl das soluções das amostras obtidas no ponto 5.1.
Conservar a placa em atmosfera de azoto até ao momento em que a
mesma fôr cromatografada.
5.2.2. Desenvolvimento
Introduzir a placa numa tina previamente purgada com azoto, saturada
com um dos 4 eluentes adequados (ponto 3.22.) e deixar desenvolver à
temperatura ambiente (20 a 25º) e na obscuridade no percurso de 15 cm.
Tirar a placa e secá-la em atmosfera de azoto à temperatura ambiente.
5.2.3. Revelação
Pulverizar imediatamente a placa com um dos 4 reveladores referidos
no ponto 3.23.
5.2.4. Identificação
Comparam-se os Rf e as colorações obtidas com a amostra com as das
substâncias de referência aplicadas. O quadro I dá a título informativo,
os valores de Rf e as colorações obtidas para cada substância de
referência, em função do eluente e dos reveladores.
Em caso de identificação duvidosa pode obter-se, por vezes, uma
confirmação, juntando à amostra a substância de referência correspon-
dente.
5.2.5. Doseamento semi-quantitativo
Comparar visualmente a intensidade das manchas correspondentes a
cada substância identificada no ponto 5.2.4. com uma gama padrão de
concentrações conhecidas e adequadas, obtidas a partir da substância de
referência correspondente.
Quando a concentração do componente da amostra é demasiado alta,
diluir a solução a aplicar e efectuar um novo doseamento.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 12
QUADRO 1
Valores de Rf e colorações obtidas imediatamente após a revelação
Produtos de
referência
(3.20)Eluentes Reveladores
Rf Colorações
3.22.1. 3.22.2. 3.22.3. 3.22.4.Reagente diazóico
(3.23.1.)Reagente de Ehrlich
(3.23.2.)Reagente de dimetil-
fenol cloreto férrico
(3.23.3.)Reagente de nitrato de
prata
(3.23.4.)
OPD 0,62 0,60 0,30 0,57 Castanho fraco — — Castanho fraco
MPD 0,40 0,60 0,47 0,48 Castanho violáceo
(*)Amarelo Castanho fraco Castanho fraco
PPD 0,20 0,50 0,30 0,48 Castanho Vermelho vivo (*) Violeta Cinzento
OTD 0,60 0,60 0,53 0,60 Castanho (*) Laranja fraco Castanho fraco Castanho acinentado
MTD 0,40 0,67 0,45 0,60 Castanho averme-
lhado (*)Amarelo Castanho Negro
PTD 0,33 0,65 0,37 0,70 Castanho Alaranjado Violeta (*) Cinzento
DAP 0,07 — 0 0,05 Castanho (*) Alaranjado Violeta Castanho
H 0,50 0,35 0,80 0,20 — Alaranjado Violeta Negro (*)
αN 0,90 0,80 0,90 0,75 Castanho alaran-
jado— Violeta (*) Negro
P 0,37 — 0,67 0,05 Castanho Violeta muito
fracoCastanho muito
fracoCastanho (*)
R 0,50 0,37 0,80 0,17 Alaranjado (*) Violeta fraco Castanho muito
fracoCastanho fraco
Notas: 1. Se o OPD é fracamente revelado, deve utilizar-se o eluente (ponto 3.22.3.) para o separar nitidamente do OTD.
2. (*) indica a melhor revelação.▼B1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 13
▼B
6. ANÁLISE POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA FINA BIDI-
MENSIONAL
A cromatografia em camada fina bidimensional aqui descrita necessita
de recurso aos reagentes seguintes:
6.1.Substâncias e soluções de referência
6.1.1. β-naftol ( β-N).
6.1.2. 2-aminofenol (OAP).6.1.3. 3-aminofenol (MAP).6.1.4. 4-aminofenol (PAP).6.1.5. 2-nitro- p-fenilenediamina (2 NPPD).
6.1.6. 4-nitro- o-fenilenediamina (4 NOPD).
Preparar uma solução a 0,5 % (m/v) de cada uma das substâncias de
referência suplementares como indicado no ponto 3.2.1.
6.2.Eluente
6.2.1. Acetato de etil-ciclohexano-amoníaco a 25 % (65-35-0,5, v).
6.3.Revelador
Colocar um recipiente em vidro numa tina de desenvolvimento para
cromatografia em camada fina, introduzir cerca de 2 g de iodo cristali-
zado e fechar a tina.
6.4.Cromatografia
6.4.1. Traçar como se indica na figura 1, duas linhas sobre a camada de adsor-
vente duma placa para cromatografia em camada fina (ponto 4.1.3.).
6.4.2. Colocar, em atmosfera de azoto, no ponto de partida 1 (figura 1) 1 a 4 µl
de extracto (ponto 5.1.). A quantidade depende da intensidade das
manchas obtidas no cromatograma (ponto 5.2.).
6.4.3. Aplicar, divididos entre os pontos 2 e 3 (figura 1), os corantes de
oxidação identificados (ou supostamente identificados) no ponto 5.2.
Distância entre os pontos de aplicação: 1,5 cm. Aplicar 2 µl de cada
uma das soluções de referência, com a excepção do DAP, do qual é
necessário colocar 6 µl. Conduzir a operação em atmosfera de azoto.
6.4.4. Recomeçar a operação descrita no ponto 6.4.3. para os pontos de
partida 4 e 5 (figura 1) e conservar a placa, em atmosfera de azoto até
à cromatografia.
6.4.5. Purgar uma tina de cromatografia, com azoto e introduzir uma quanti-
dade adequada de eluente (ponto 3.22.2.). Colocar a placa (ponto 6.4.4.)
na tina, e cromatografar na primeira direcção de eluição (figura 1) na
obscuridade. Cromatografar no percurso de, pelo menos, 13 cm.
6.4.6. Retirar a placa da tina e colocá-la na tina (ponto 4.1.) purgada com
azoto, para evaporar os restos de eluente (durante, pelo menos, 60
minutos).
6.4.7. Introduzir, com uma proveta graduada, uma quantidade adequada de
eluente (ponto 6.2.1.) numa tina purgada com azoto, colocar a placa
rodada e 90º relativamente à primeira direcção de eluição (ponto
6.4.6.) na tina e cromatografar na segunda direcção na obscuridade até
que o eluente tenha atingido a linha traçada na camada adsorvente.
Tirar a placa e evaporar o eluente ao ar.
6.4.8. Na tina do cromatógrafo, expôr a placa durante 10 minutos, aos vapores
de iodo (ponto 6.3.) e interpretar o cromatograma bidimensional com a
ajuda das substâncias de referência cromatografadas ao mesmo tempo
(quadro II).
Nota:
Para obter uma coloração máxima das manchas, deixar o cromatograma
ao ar durante meia-hora após a revelação.
6.4.9. A presença dos corantes de oxidação encontrados no ponto 6.4.8. pode
ser confirmada de modo indubitável, recomeçando as operações
descritas nos pontos 6.4.1. a 6.4.8., inclusive, admitindo a adição no
ponto de partida 1, além da quantidade de extracto prescrita no ponto1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 14
▼B
6.4.2., de 1 µl das substâncias de referência identificadas no ponto
6.4.8.
Se não for encontrada qualquer outra mancha, a primitiva interpretação
do cromatograma é exacta.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 15
▼B
QUADRO II
Côr das substâncias de referência após cromatografia e revelação pelos
vapores de iodo
Substâncias de
referênciaCôr após revelação pelos vapores de iodo
R Beje
P Castanho
α-N Violeta
β-N Castanho claro
H Violeta acastanhado
MPD Amarelo acastanhado
PPD Violeta acastanhado
MTD Castanho escuro
PTD Amarelo acastanhado
DAP Castanho escuroAOP Laranja
MAP Amarelo acastanhado
PAP Violeta acastanhado
2-NPPD Castanho
4-NOPD Laranja
Figura 1
1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 16
▼B
III.IDENTIFICAÇÃOE DOSEAMENTO DOS NITRITOS
A. IDENTIFICAÇÃO
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
Este método é conveniente para a identificação dos nitritos nos
produtos cosméticos.
Aplica-se em particular aos cremes, aos produtos pastosos e aos dentí-
fricos.
2. PRINCÍPIO
A caracterização dos nitritos faz-se com a ajuda da fenil-hidrazona de
2-aminobenzaldeído.
3. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
3.1. Ácido sulfúrico diluído: diluir 2 ml de ácido sulfúrico concentrado
(d420= 1,84) em 11 ml de água destilada.
3.2. Ácido clorídrico diluído: diluir 1 ml de ácido clorídrico concentrado
(d420= 1,19) em 11 ml de água destilada.
3.3. Metanol3.4. Solução de fenil-hidrazona de 2-aminobenzaldeído (reagente «nitrina»
R) em metanol.
Pesar 2 g de Nitrina R e introduzi-los em balão aferido de 100 ml.
Juntar, gota a gota, 4 ml de ácido clorídrico diluído (ponto 3.2.) e
agitar. Completar o volume com metanol e misturar até que a solução
esteja completamente límpida. Conservar a solução num frasco de vidro
castanho (ponto 4.3.).
4. APARELHAGEM
4.1. Copos de 50 ml.4.2. Balão aferido de 100 ml.4.3. Frasco de vidro castanho de 125 ml.4.4. Placa de vidro com 10 × 10 cm.4.5. Espátula de material sintético.
4.6. Papel de filtro com 10 × 10 cm.
5. TÉCNICA
5.1. Estender uniformemente uma parte da amostra a examinar sobre a placa
de vidro (ponto 4.4.), procurando que a espessura da camada não ultra-
passe 1 cm.
5.2. Mergulhar uma folha de papel filtro (ponto 4.6.) em água destilada e
colocá-la sobre a amostra, aplicando-a convenientemente com a ajuda
da espátula (ponto 4.5.).
5.3. Esperar cerca de 1 minuto e colocar no meio do papel de filtro:
— 2 gotas de ácido sulfúrico diluído (ponto 3.1.), seguidamente
— 2 gotas da solução de Nitrina R (ponto 3.4.).
5.4. Passados 5 a 10 segundos, retirar o papel de filtro e examiná-lo à luz do
dia. Uma coloração vermelho — violeta indica a presença de nitritos.
Quando o teor em nitritos é pouco elevado, a coloração violeta passa
para amarela em 5 a 15 segundos. Esta viragem não se verifica senão
passados um a dois minutos em presença de quantidades mais significa-
tivas de nitritos.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 17
▼B
6. NOTA
A intensidade da coloração violeta, bem como a duração da passagem
para o amarelo pode dar uma indicação do teor em nitritos da amostra.
B. DOSEAMENTO
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
O método indicado seguidamente é adaptado ao doseamento dos nitritos
nos produtos cosméticos.
2. DEFINIÇÃO
O teor da amostra em nitritos, determinado por este método, é expresso
em percentagem da massa de nitrito de sódio.
3. PRINCÍPIO
Após diluição e clarificação da amostra, efectua-se uma reacção colori-
métrica com a N ( α-naftil-etilenodiamina) e a intensidade da coloração
obtida é determinada em 538 nm.
4. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
4.1. Reagentes de clarificação (estes reagentes não podem ser utilizados
mais de uma semana após a sua preparação).
4.1.1. Reagentes I (Carrez I): dissolver 106 g de cianoferrato (II) de potássio
K4Fe (CN)6·3 H2O em água destilada e completar 1 000 ml.
4.1.2. Reagente II (Carrez II): dissolver 219,5 g de acetato de zinco Zn
(CH3COO)2·2 H2O e 30 ml de ácido acético glacial em água destilada
e completar 1 000 ml.
4.2. Solução de nitrito de sódio: num balão aferido de 1 000 ml, dissolver
0,500 g de nitrito de sódio em água destilada e completar o volume.
Diluir 10,0 ml desta solução — mãe a 500 ml. 1 ml desta última
solução = 10 µg de Na NO2.
4.3. Solução de hidróxido de sódio N.4.4. Solução a 0,2 % de cloridrato de sulfanilamida: dissolver 2 g de sulfa-
nilamida em 800 ml de água quente. Arrefecer e juntar 100 ml de HClconcentrado, agitando. Completar 1 000 ml.
4.5. Ácido clorídrico 5 N.4.6. Reagente de N-( α-naftilo): esta solução deverá ser preparada no próprio
dia da sua utilização.
Dissolver 0,1 g de dicloridrato de N-1-naftiletilenodiamina em água e
completar a 100 ml.
5. APELHAGEM
5.1. Balança analítica.5.2. Balões aferidos de 100, 250, 500 e 1 000 ml.
5.3. Pipetas aferidas.
5.4. Provetas de 100 ml.5.5. Filtro de pregas isento de nitritos, de 15 cm de diâmetro.
5.6. Banho-maria.
5.7. Espectrofotómetro com tinas de 1 cm de percurso óptico.5.8. Potenciómetro.5.9. Microbureta de 10 ml.
5.10. Copo de 50 ml.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 18
▼B
6. TÉCNICA
6.1. Pesar com uma precisão de cerca de 0,1 mg, 0,5 g (m) de amostra
homogeneizada e introduzi-los num copo de 250 ml. Diluir até um
volume de cerca de 150 ml com água destilada quente. Colocar o
copo, durante meia-hora num banho-maria a 80º C, agitando de vez
em quando.
6.2. Arrefecer à temperatura ambiente e juntar sucessivamente, agitando
sempre, 2 ml do reagente de Carrez I (ponto 4.1.1.) e 2 ml do reagente
Carrez II (ponto 4.1.2.).
6.3. Ajustar o pH a 8,3 no potenciómetro, com uma solução de hidróxido de
sódio N. Transferir quantitativamente para um balão aferido de 250 ml
e completar o volume com água destilada.
6.4. Misturar e filtrar por filtro de pregas (ponto 5.5.).6.5. Pipetar uma quantidade conveniente (V ml) do filtrado límpido, não
ultrapassando 25 ml, para um balão aferido de 100 ml; diluir com
água destilada até 60 ml.
6.6. Misturar, adicionar 10,0 ml de cloridrato de sulfanilamida (ponto 4.4.),
e depois 6,0 ml de ácido clorídrico 5 N (ponto 4.5.). Misturar e deixar
repousar durante 5 minutos. Juntar 2,0 ml do reagente N-(-naftil) (ponto
4.6.), misturar e deixar repousar durante 3 minutos. Completar 100 ml e
misturar.
6.7. Preparar um ensaio em branco, repetindo as operações efectuadas nos
pontos 6.5. e 6.6. sem adição do reagente N(-1-naftilo) (ponto 4.6.).
6.8. Determinar (ponto 5.7.) a densidade óptica em 538 nm da solução da
amostra (ponto 6.6.) em relação à solução correspondente ao ensaio
em branco (ponto 6.7.).
6.9. Ler na curva de aferição (ponto 6.10.) o teor em nitrito de sódio, em µg
por 100 ml de solução (ml) correspondente à densidade óptica determi-
nada com a amostra (ponto 6.8.).
6.10. Curva de aferição. Preparar com a ajuda da solução de nitrito de sódio
(ponto 4.2.) uma curva de aferição na gama de 0-20-40-60-80-100 µg
de nitrito de sódio por 100 ml.
7. CÁLCULO
Calcular o teor em nitrito de sódio da amostra, em percentagem, pela
fórmula seguinte:
% NaNO
2¼250
V/C2m1/C210/C06/C2100
m¼m1
V/C2m/C240
em que:
m = a massa em g da amostra submetida à análise (ponto 6.1),
m1= o teor em nitrito de sódio em microgramas, determinado de
acordo com as indicações do ponto 6.9.,
V = o número de ml de filtrado utilizados para a determinação
(ponto 6.5.)
8. REPRODUTIBILIDADE(1)
Para um teor em nitrito de sódio de 0,2 %, a diferença entre os resul-
tados de 2 doseamentos paralelos, efectuados sobre a mesma amostra,
não deve ultrapassar 0,005 %.
IV.IDENTIFICAÇÃOE DOSAGEM DO FORMALDEÍDO LIVRE
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
O método compreende uma identificação e duas dosagens consoante
estejam ou não presentes libertadores de formaldeído. É aplicável a
todos os produtos cosméticos.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 19
(1) Segundo a norma ISO 5725.▼M1
▼M1
1.1.Identificação
1.2.Dosagem global por colorimetria com acetilacetona
Este método aplica-se quando o formaldeído é utilizado isolado ou com
outros conservantes não libertadores de formaldeído.
Em caso contrário, e se o resultado ultrapassar a concentração máxima
autorizada no produto acabado, utiliza-se o método de confirmação
seguinte.
1.3.Dosagem em presença de libertadores de formaldeído
No método precedente, durante a derivação os libertadores de formal-
deído são clivados e conduzem a resultados demasiado elevados
(formaldeído livre e combinado).
É imperioso separar o formaldeído livre por cromatografia líquida.
2. DEFINIÇÃO
O teor da amostra em formaldeído livre determinado por este método é
expresso em percentagem da massa de formaldeído.
3. IDENTIFICAÇÃO3.1.Princípio
O formaldeído livre e combinado, em meio sulfúrico, confere uma colo-
ração rosa ou malva em presença do reagente de Schiff.
3.2.Reagentes
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica e a água desmine-
ralizada.
3.2.1. Fucsina
3.2.2. Sulfito de sódio heptahidratado (7H
2O)
3.2.3. Ácido clorídrico concentrado (d=1,19)3.2.4. Ácido sulfúrico 1 M, aproximadamente
3.2.5. Reagente de Schiff
Num copo, pesar 100 mg de fucsina (ponto 3.2.1) e dissolver em 75 ml
de água a 80 ºC. Após arrefecimento, acrescentar 2,5 g de sulfito de
sódio (ponto 3.2.2) e 1,5 ml de ácido clorídrico (ponto 3.2.3).
Completar até 100 ml.
Duração de conservação: duas semanas.
3.3.Técnica
3.3.1. Num copo de 10 ml introduzir cerca de 2 g de amostra.3.3.2. Juntar duas gotas de H
2SO4(ponto 3.2.4) e 2 ml de reagente de Schiff
(ponto 3.2.5). Este reagente deve estar rigorosamente incolor no
momento da utilização.
Agitar e deixar em contacto cinco minutos.
3.3.3. Se em cinco minutos se observar uma coloração rosa ou malva, a quan-
tidade de formaldeído presente é superior a 0,01 %. Efectuar, então, a
dosagem do formaldeído livre e combinado segundo o ponto 4 e, se
necessário, o ponto 5.
4. DOSAGEM GLOBAL POR COLORIMETRIA COM ACETILACE-
TONA
4.1.Princípio
O formaldeído reage com a acetilacetona em presença do acetato de
amónio para formar a 3-5-diacetil-1-4-dihidrolutidina. Esta é extraída
com 1-butanol. A absorvência do extracto é determinada a 410 nm.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 20
▼M1
4.2.Reagentes
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica e a água desmine-
ralizada.
4.2.1. Acetato de amónio anidro
4.2.2. Ácido acético concentrado d4
20= 1,05
4.2.3. Acetilacetona recentemente destilada a pressão reduzida (25 mm Hg
25º) e que não deve apresentar qualquer absorção a 410 nm
4.2.4. 1-Butanol4.2.5. Ácido clorídrico 1 M
4.2.6. Ácido clorídrico 0,1 M, aproximadamente
4.2.7. Hidróxido de sódio 1 M4.2.8. Cozimento de amido recentemente preparado de acordo com a Farma-
copeia Europeia, 2a edição, 1980, parte I-VII-1-1. (1 g/50 ml de água)
4.2.9. Formaldeído a 37 %-40 %
4.2.10 Solução titulada de iodo 0,05 M
4.2.11. Solução titulada de tiossulfato de sódio 0,1 M
4.2.12 Reagentes de acetilacetona
Num balão aferido de 1 000 ml dissolver:
— 150 g de acetato de amónio (ponto 4.2.1),
— 2 ml de acetilacetona (ponto 4.2.3),— 3 ml de ácido acético (ponto 4.2.2).
Completar até 1 000 ml com água (pH da solução: 6,4 aproximada-
mente).
Este reagente deve ser preparado na altura.
4.2.13. Reagente (ponto 4.2.12) sem acetilacetona
4.2.14 Formaldeído padrão: solução-mãe
Num balão aferido de 1 000 ml, introduzir 5 g de formaldeído (ponto
4.2.9) e completar com água até 1 000 ml.
Determinação do título da solução-mãe:Tomar 10,00 ml, adicionar 25,00 ml de solução titulada de iodo (ponto
4.2.10) e 10 ml de solução de hidróxido de sódio (ponto 4.2.7).
Deixar repousar durante cinco minutos.
Acidificar com 11 ml de HCL (ponto 4.2.5) e dosear o iodo em excesso
com uma solução titulada de tiossulfato de sódio (ponto 4.2.11), em
presença de cozimento de amido como indicador.
1 ml de solução de iodo (ponto 4.2.10) consumida correspondente a
1,5 mg de formaldeído.
4.2.15. Formaldeído padrão: solução diluída
Efectuar sucessivamente uma diluição de 1/20 e depois uma diluição de
1/100 de solução-mãe em água.
1 ml desta solução contém cerca de 1 µg de formaldeído.
Calcular o seu teor exacto.
4.3.Aparelhos e utensílios
4.3.1. Material corrente de laboratório
4.3.2. Filtro «separador de fase», ref. Whatman 1 PS (ou equivalente)4.3.3. Centrifugadora
4.3.4. Banho-maria regulado a 60 ºC
4.3.5. Espectrofotómetro4.3.6. Tinas de vidro de 1 cm de percurso óptico1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 21
▼M1
4.4.Técnica
4.4.1. Solução-amostra
Num balão aferido de 100 ml, pesar cerca de 0,001 g de massa da
amostra de ensaio (em g), correspondente a uma quantidade pressuposta
de cerca de 150 µg de formaldeído.
Completar até 100 ml com água e misturar (solução S).
Verificar se o pH é próximo de 6, senão efectuar a diluição na solução
de ácido clorídrico (ponto 4.2.6).
Num balão de Erlenmeyer de 50 ml juntar:
— 10,00 ml de solução S,
— 5,00 ml de reagente de acetilacetona (ponto 4.2.12) e água, até um
volume de 30 ml.
4.4.2. Solução-testemunha
A interferência eventual de uma coloração de fundo na amostra de
ensaio é eliminada da seguinte forma:
Num Erlenmeyer de 50 ml juntar:
— 10,00 ml de solução S,
— 5,00 ml de reagente (ponto 4.2.13) e água até um volume de 30 ml.
4.4.3. Ensaio em branco
Num Erlenmeyer de 50 ml juntar:5,0 ml de reagente de acetilacetona (ponto 4.2.12) e água, até um
volume de 30 ml.
4.4.4. Dosagem
4.4.4.1. Agitar as misturas preparadas nos pontos 4.4.1, 4.4.2 e 4.4.3. Mergulhar
os balões em banho-maria a 60 ºC, durante exactamente dez minutos.
Arrefecer durante dois minutos num banho de água gelada.
4.4.4.2 Transferir para uma ampola de decantação de 50 ml contendo exacta-
mente 10 ml de 1-butanol (ponto 4.2.4). Lavar com 3 a 5 ml de água.
Agitar fortemente a mistura durante trinta segundos exactos. Deixar
decantar.
4.4.4.3. Filtrar a fase butanólica por filtro «separador de fase» (ponto 4.3.2)
para as tinas do espectrofotómetro. Pode também recorrer-se a uma
centrifugação (3 000 rotações/minuto durante cinco minutos).
4.4.4.4. Determinar a absorvência A
1a 410 nm do extracto da solução-amostra
obtida no ponto 4.4.1 em relação ao extracto da solução testemunha
(ponto 4.4.2).
4.4.4.5. Da mesma forma, determinar a absorvência A2do extracto de ensaio
em branco obtido no ponto 4.4.3 em relação a 1-butanol.
NB:Todas estas operações devem ser executadas num período de vinte
e cinco minutos a partir do momento em que o balão é colocado
em banho-maria a 60 ºC.
4.4.5. Curva de calibração
4.4.5.1. Num Erlenmeyer de 50 ml juntar:
— 5,00 ml de solução-padrão diluída (ponto 4.2.15),
— 5,00 ml de reagente de acetilacetona (ponto 4.2.12) e água, até um
volume final de 30 ml.
4.4.5.2. Continuar segundo as indicações (ponto 4.4.4) e determinar a
absorvência em relação ao 1-butanol (ponto 4.2.4).
4.4.5.3. Repetir o processo com 10, 15, 20 e 25 ml de solução-padrão diluída
(ponto 4.2.15).
4.4.5.4. Para obter o valor do ponto 0 (correspondente à coloração dos
reagentes) proceder como no ponto 4.4.4.5.
4.4.5.5. Construir a curva de calibração após subtracção do valor do ponto 0 de
cada uma das absorvências obtidas nos pontos 4.4.5.1 e 4.4.5.3. A lei de
Beer aplica-se até 30 µg de formaldeído.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 22
▼M1
4.5.Cálculos
4.5.1. Subtrair A2de A1e ler sobre a curva de calibração (ponto 4.4.5.5) a
quantidade C expressa em microgramas de formaldeído contido na
solução do ponto 4.4.1.
4.5.2. O teor em formaldeído da amostra (% m/m) é calculado segundo a
fórmula:
formalde ´ıdo % ¼C
103/C1m
m = massa em g da toma da ensaio.
4.6.Repetibilidade (1)
Para um teor em formaldeído de 0,2 %, a diferença entre os resultados
de duas dosagens paralelas efectuadas na mesma amostra não deve
ultrapassar 0,005 % para a dosagem colorimétrica com acetilacetona.
Se a dosagem do formaldeído livre conduzir a resultados superiores aos
previstos na Directiva 76/768/CEE, a saber:
a) Compreendidos entre 0,05 % e 0,2 % em produto não etiquetado,
b) Superiores a 0,2 % em produto etiquetado ou não,
é obrigatório proceder segundo o método descrito no ponto 5.
5. DOSAGEM EM PRESENÇA DE LIBERTADORES DE FORMAL-
DEÍDO
5.1.Princípio
O formaldeído separado é transformado em derivado lutidínico amarelo
por reacção em linha com a acetilacetona num reactor pós-coluna. O
derivado formado é doseado por absorvência a 420 nm.
5.2Reagentes
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica e a água desmine-
ralizada.
5.2.1. Água de qualidade HPLC5.2.2. Acetato de amónio anidro5.2.3. Ácido acético d
4
20= 1,05
5.2.4. Acetilacetona (conservada a 4 ºC)
5.2.5. Fosfato dissódico anidro
5.2.6. Ácido ortofosfórico a 85 % (d = 1,7)5.2.7. Metanol5.2.8. Diclorometano
5.2.9. Formaldeído a 37 %-40 %
5.2.10. Hidróxido de sódio 1 M5.2.11. Ácido clorídrico 1 M5.2.12. Ácido clorídrico 0,002 M5.2.13. Cozimento de amido recentemente preparado de acordo com a Farma-
copeia Europeia
5.2.14. Solução titulada de iodo 0,05 M5.2.15. Solução titulada de tiossulfato de sódio 0,1 M
5.2.16. Fase móvel
Solução aquosa de fosfato dissódico (ponto 5.2.5) 0,006 M ajustado a
um pH 2,1 com ácido ortofosfórico (ponto 5.2.6).1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 23
(1) Segundo a norma ISO 5725.
▼M1
5.2.17. Reagente pós-coluna
Dissolver num balão aferido de 1 000 ml:
— 62,5 g de acetato de amónio (ponto 5.2.2),
— 7,5 ml de ácido acético (ponto 5.2.3),— 5 ml de acetilacetona (ponto 5.2.4).
Completar até 1 000 ml com água (ponto 5.2.1).
Manter o reagente ao abrigo da luz.
Conservação: máximo de três dias a 25 ºC.
Não deve verificar-se alteração da cor.
5.2.18. Formaldeído padrão: solução-mãe
Num balão aferido de 1 000 ml introduzir 10 g de formaldeído (ponto
5.2.9) e completar com água até 1 000 ml.
Determinação do título da solução-mãe:Tomar 5,00 ml, adicionar 25,00 ml da solução titulada de iodo (ponto
5.2.14) e 10 ml de solução de hidróxido de sódio (ponto 5.2.10).
Deixar repousar durante cinco minutos.
Acidificar com 11,00 ml de HCL (ponto 5.2.11) e dosear o iodo em
excesso com uma solução titulada de tiossulfato de sódio (ponto
5.2.15), em presença de cozimento de amido (ponto 5.2.13) como indi-
cador.
1 ml de solução de iodo (ponto 5.2.14) consumida corresponde a 1,5 mg
de formaldeído.
5.2.19. Formaldeído padrão: solução diluída
Efectuar uma diluição a 1/100 da solução-mãe na fase móvel (ponto
5.2.16). 1 ml desta solução contém cerca de 37 µg de formaldeído;
calcular o seu teor exacto.
5.3.Aparelhos
5.3.1. Material corrente de laboratório
5.3.2. Uma bomba HPLC sem pulsações
5.3.3. Uma bomba de baixa pressão sem pulsações para o reagente (ou uma
segunda bomba HPLC com as mesmas características da primeira)
5.3.4. Uma válvula de injecção munida de uma ansa de 10 µl
5.3.5. Reactor pós-coluna com os seguintes elementos:
um balão de três tubuladuras de 1 l,
+ um aquecedor de balões de 1 l+ duas colunas Vigreux com um mínimo de dez discos (refrigerante a
ar),
+ um tubo inox (para permuta térmica) 1,6 mm — Ø int. 0,23 mm
C = 400 mm,
+ tubo teflon 1,6 mm — Ø int. 0,30 mm C = 5 m (Tricotin) (vêr
apêndice 1),
+ um «T» sem volume morto (Valco ou equivalente),
+ três junções «Union» sem volume mortoou:um módulo pós-coluna do tipo Applied Biosystems PCRS 520 ou
equivalente, munido de um reactor de 1 ml.
5.3.6. Membrana filtrante 0,45 µ5.3.7. Cartucho SEP PAK
RC18(ou equivalente)
5.3.8. Colunas prontas para uso:
— Bischoff hypersil RP 18 (tipo NC ref. C 25.46 1805)
(5 µ — C = 250 mm — Ø int. = 4,6 mm)
— ou Dupont, Zorbax ODS
(5 µ — C = 250 mm — Ø int. = 4,6 mm)
— ou Phase SEP, sphérisorb ODS 2
(5µ — C = 250 mm — Ø int. = 4,0 mm)1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 24
▼M1
5.3.9. Pré-coluna
Bischoff K1Hypersil RP 18 (ref. K1 G 6301 1805) ou equivalente 5µ
—C=1 0m m )
5.3.10. A coluna e a pré-coluna são ligadas por um sistema Ecotube (ref. A
15020508 Bischoff) ou equivalente
5.3.11. Efectuar a montagem (ponto 5.3.5) segundo o esquema do apêndice 2.
As ligações a seguir à válvula de injecção devem ser o mais curtas
possível.
Neste caso, o tubo inox colocado entre a saída do reactor e a entrada do
detector tem por objectivo arrefecer a mistura antes da detecção. A
temperatura dentro do detector não é conhecida mas é constante.
5.3.12. Detector de UV visível5.3.13. Registador5.3.14. Centrifugadora5.3.15. Banho de ultra-sons5.3.16. Vibrador (tipo Vortex ou equivalente)
5.4.Técnica
5.4.1. Curva de calibração
Obtém-se medindo a altura dos picos em função da concentração.
As soluções-padrão obtêm-se por diluição da solução diluída de formal-
deído padrão (ponto 5.2.19) na fase móvel (ponto 5.2.16):
— 1,00 ml de solução-padrão (ponto 5.2.19) diluída a 20,00 ml →
cerca de 185 µg/100 ml,
— 2,00 ml de solução-padrão (ponto 5.2.19) diluída a 20,00 ml →
cerca de 370 µg/100 ml,
— 5,00 ml de solução-padrão (ponto 5.2.19) diluída a 25,00 ml →
cerca de 740 µg/100 ml,
— 5,00 ml de solução-podrão (ponto 5.2.19) diluída a 20,00 ml →
cerca de 925 µg/100 ml.
As soluções-padrão são guardadas durante uma hora à temperatura do
laboratório e devem ser preparadas na altura.
A linearidade da curva de calibração é adequada para concentrações de
1,00 a 15,00 µg/ml.
5.4.2. Preparação de amostras5.4.2.1. Emulsões (cremes, bases, eyeliners)
Num frasco fechado de 100 ml, pesar cerca de 0,001 g de massa (m) de
amostra em ensaio (em g), correspondente a uma quantidade pressu-
posta de cerca de 100 µg de formaldeído.
Juntar 20 ml de diclorometro (ponto 5.2.8) e 20,00 ml de ácido clorí-
drico (ponto 5.2.12).
Misturar utilizando o vibrador (ponto 5.3.16) e por ultra-sons (ponto
5.3.15).
Separar as duas fases por centrifugação (3 000 rotações/minuto durante
dois minutos). À parte, lavar um cartucho (ponto 5.3.7) com 2 ml de
metanol (ponto 5.2.7) e condicioná-lo com 5 ml de água (ponto 5.2.1).
Fazer passar 4 ml da fase aquosa do extracto através do cartucho condi-
cionado, eliminar os primeiros 2 ml e recuperar a fracção seguinte.
5.4.2.2. Loções e champôs
Num frasco fechado de 100 ml pesar cerca de 0,001 g de massa (m) de
amostra em ensaio (em g) correspondente a uma quantidade pressuposta
de cerca de 500 µg de formaldeído.
Completar até 100 ml com a fase móvel (ponto 5.2.16).A solução é filtrada através da membrana filtrante (ponto 5.3.6) e injec-
tada ou passada através de uma cartucho (ponto 5.3.7) condicionado
como no ponto 5.4.2.1.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 25
▼M1
Todas as soluções devem ser injectadas extemporaneamente.
5.4.3. Condições cromatográficas:
— débito da fase móvel: 1 ml/mn,
— débito do reagente: 0,5 ml/mn,— débito total à saída do detector: 1,5 ml/mn,— volume injectado: 10 µl,— temperatura de eluição: nas suparações difíceis, a coluna é imersa
num banho de gelo em fusão: aguardar que as temperaturas se equi-
librem (quinze a vinte minutos),
— temperatura de reacção pós-coluna: 100 ºC,
— detecção: 420 nm.
NB:O conjunto do sistema cromatográfico e pós-coluna deve ser
lavado com água (ponto 5.2.1) depois da utilização. No caso de
uma interrupção superior a dois dias, esta lavagem deve ser
seguida de uma lavagem com metanol. Antes de recondicionar o
sistema passá-lo por água para evitar recristalizações.
5.5.Cálculos
Emulsões (ponto 5.4.2.1):
Teor em formaldeído % (m/m):
C/C110/C06/C1100
5m¼C/C110/C04
5/C1m
Loções e champôs (ponto 5.4.2.2):
Teor em formaldeído:
C/C110/C06/C1100
m¼C/C110/C04
m
em que:
m = massa em g da amostra submetida a análise,
C = concentração em µg/100 ml de formaldeído lida na curva de cali-
bração (ponto 5.4.1).
5.6.Repetibilidade (1)
Para um teor em formaldeído de 0,05 %, a diferença entre os resultados
de duas dosagens paralelas efectuadas com a mesma amostra não deve
ultrapassar 0,001 %.
Para um teor em formaldeído de 0,2 %, a diferença entre os resultados
de duas dosagens paralelas efectuadas com a mesma amostra não deve
ultrapassar 0,005 %.
V.DOSEAMENTODERESORCINOLNOSCHAMPÔSENASLOÇÕES
CAPILARES
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
Este método descreve o doseamento de resorcinol nos champôs e loções
capilares por cromatografia em fase gasosa.
Aplica-se a concentrações de 0,1 a 2,0 % do produto.
2. DEFINIÇÃO
O teor em resorcinol determinado por este método é expresso em
percentagem de resorcinol.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 26
(1) Segundo a norma ISO 5725.▼B
▼B
3. PRINCÍPIO
A resorcina e o 3,5-diidroxitolueno, utilizado como padrão interno, são
isolados da amostra por cromatografia em camada fina. Isolam-se os
dois compostos destacando o suporte e extraindo com metanol. Os
resíduos são em seguida secos, sililados e doseados por cromatografia
em fase gasosa.
4. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica:
4.1. Ácido clorídrico a 25 % (m/m).4.2. Metanol.4.3. Etanol a 96 % (v/v).4.4. Placas de sílica em suporte plástico ou de alumínio, com indicador fluo-
rescente, prontas para utilizar e desactivadas.
Proceder da forma seguinte: vaporizar com água as placas de sílica até
que se tornem brilhantes. Secá-las à temperatura ambiente durante 1 a 3
horas.
NB:Se as placas não forem desactivadas, pode haver perdas de resor-
cinol por adsorção irreversível sobre a sílica.
4.5. Eluente: acetona/clorofórmio/ácido acético (20:75:5 v).4.6. Solução padrão de resorcinol; dissolver 400 mg de resorcinol em 100 ml
de etanol a 96 % (1 ml corresponde a 4 000 µg de resorcinol).
4.7. Solução do padrão interno; dissolver 400 mg de 3,5-diidroxitolueno
(DHT) em 100 ml de etanol a 96 % (1 ml corresponde a 4 000 µg de
DHT).
4.8. Mistura padrão: misturar 10 ml de solução do ponto 4.6. e 10 ml de
solução do ponto 4.7. num balão aferido de 100 ml, completar o
volume com etanol a 96 % e misturar (1 ml corresponde a 400 µg de
resorcina e 400 µg de DHT).
4.9. Reagentes de sililação4.9.1. N, O-bis-(trimetilsilil)trifluoracetamida (BSTFA).
4.9.2. Hexametildissilazano (HMDS).
4.9.3. Trimetilclorossilano (TMCS).
5. APARELHAGEM
5.1. Equipamento corrente de cromatografia em camada fina e em fase
gasosa.
5.2. Material de vidro de laboratório.
6. TÉCNICA
6.1.Preparação da amostra
6.1.1. Pesar com precisão num copo de 150 ml uma tomada de ensaio do
produto (m gramas) contendo cerca de 20 a 50 mg de resorcinol.
6.1.2. Acidificar com ácido clorídrico (ponto 4.1.) (cerca de 2 a 4 ml). Juntar
10 ml (40 mg de DHT) de padrão interno (ponto 4.7.) e misturar.
Transferir para um balão aferido de 100 ml com a ajuda de etanol.
Completar o volume com etanol (ponto 4.3.) e misturar).
6.1.3. Aplicar 250 µl da solução do ponto 6.1.2. numa placa de sílica desacti-
vada (ponto 4.4.), sobre uma linha contínua com cerca de 8 cm de
comprimento. Tomar cuidado para obter uma tira tão delgada quanto
possível.
6.1.4. Colocar, separadamente e da mesma maneira (ponto 6.1.3.), na mesma
placa, 250 µl de mistura padrão (ponto 4.8).
6.1.5. Sobre a linha de partida, aplicar 2 gotas de 5 µl da cada solução dos
pontos 4.6 e 4.7 para facilitar a localização após o desenvolvimento da
placa.
6.1.6. Numa tina não saturada, desenvolver a placa com o eluente (ponto 4.5.)
até que tenha percorrido 12 cm depois da linha de partida (45 minutos).1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 27
▼B
Secar a placa ao ar e localizar a zona resorcinol/DHT com luz UV de
254 nm. Os dois compostos têm aproximadamente o mesmo valor de
Rf.
Destacar as tiras assim marcadas e juntar o adsorvente de cada uma
num matrás de 10 ml.
6.1.7. Extrair o adsorvente que contém a amostra e o que contém a mistura
padrão da maneira seguinte:
Juntar 2 ml de metanol (ponto 4.2.) e extrair durante 1 hora, agitando
continuamente. Filtrar a mistura e repetir a extracção, durante 15
minutos, com 2 ml de metanol (ponto 4.2.).
6.1.8. Evaporar o diluente da totalidade dos extractos, colocando-os durante
uma noite num exsicador, a pressão reduzida, com um dessecante
adequado. Não evaporar com calor.
6.1.9. Sililar os resíduos (ponto 6.1.8.) como indicado ou em 6.1.9.1. ou no
ponto 6.1.9.2.
6.1.9.1. Juntar 200 µl de BSTFA (ponto 4.9.1.) e deixar a mistura num recipi-
ente fechado à temperatura ambiente durante 12 horas.
6.1.9.2. Juntar sucessivamente 200 µl de HMDS (ponto 4.9.2.) e 100 µl de
TMCS (ponto 4.9.3.) e aquecer a mistura durante 30 minutos a 60º C
num recipiente fechado. Arrefecer.
6.2.Cromatografia em fase gasosa
6.2.1. Técnica:
A fase estacionária deve dar um grau de resolução igual ou superior a
1,5:
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
em que:
R1eR2= tempo de retenção expresso em minutos de 2 picos,
W1eW2= largura dos mesmos picos a meia-altura,
d′ = Velocidade do papel em mm/minuto.
As condições operatórias seguintes permitem obter bom resultado:
coluna: aço inoxidável,
comprimento: 200 cm
diâmetro: 3 ( ⅛″)
enchimento: 10 % OV 17 em cromossorbe WAW 100
— 120 mesh.
detector de ionização de chama
Temperaturas:
coluna: 185º C (isotérmico)injector: 250º C
detector: 250º C
gaz de arrastamento: azoto,débito: 45 ml/min
Para a regulação do débito de hidrogénio e do ar seguir as
instruções do fabricante.
6.2.2 Injectar 1 a 3 µl das soluções obtidas no ponto 6.1.9. Fazer 5 injecções
para cada solução. Medir a área dos picos de modo preciso e calcular a
relação das áreas:
S = área do pico de resorcina/área do pico do DHT.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 28
▼B
7. CÁLCULO
A concentração em resorcina da amostra, expressa em percentagem, (%
m/m) é dada por:
% resorcionol ¼4
M/C2S amostra
S mistura padr ˜ao
em que:
M = tomada de ensaio em gramas (ponto 6.1.1.)
S amostra = relação média obtida para os picos da solução
amostra,
S mistura padrão = relação média obtida para os picos da mistura
padrão segundo o ponto 6.2.2.
8. REPRODUTIBILIDADE(1)
Para um teor em resorcina de 0,5 % a diferença entre os resultados de 2
doseamentos paralelos realizados com a mesma amostra não deve ultra-
passar 0,025 %.
VI.DOSEAMENTO DO METANOL EM RELAÇÃO AO ETANOL OU
AO 2-PROPANOL
1. OBJECTIVO E CAMPO DE APLICAÇÃO
Este método descreve o doseamento do metanol por cromatografia em
fase gasosa em todos os tipos de produtos cosméticos (incluindo os
aerosóis). Aplica-se a concentrações relativas de 0 a 10 %.
2. DEFINIÇÃO
O teor em metanol determinado segundo este método é expresso em
percentagem de metanol em relação com a massa de etanol ou de 2-
-propanol.
3. PRINCÍPIO
O doseamento é efectuado por cromatografia em fase gasosa.
4. REAGENTES
Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica.
4.1. Metanol4.2. Etanol absoluto
4.3. 2-Propanol
4.4. Clorofórmio, lavado com água para eliminar os álcoois.
5. APARELHAGEM
5.1. Cromatógrafo de fase gasosa com detector catarométrico (para as amos-
tras de produtos em aerosóis).
Cromatógrafo de fase gasosa com detector de ionização de chama (para
as amostras de outros produtos).
5.2. Balões aferidos de 100 ml.
5.3. Pipetas aferidas (2 ml, 20 ml, O-1 ml)5.4. Microseringas de 0 a 100 µl e de 0 a 5 µl.
Somente para as amostras de produtos em aerosóis, seringa especial
para gaz, com válvula móvel (figura 5 do método de amostragem)(
2).1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 29
(1) Segundo a norma ISO 5725.
(2)J O N .oL 383 de 31. 12. 1980, p. 27.
▼B
6. TÉCNICA
6.1.Preparação das amostras
6.1.1. Os produtos em aerosóis são tratados como indicado no capítulo II do
anexo da Directiva da Comissão 80/1335/CEE de 22 de Dezembro
1980(1), e depois analisados por cromatografia em fase gasosa nas
condições prescritas no ponto 6.2.1.
6.1.2. Os outros produtos, tratados como indicado no capítulo II acima refe-
rido, são diluídos em água até uma concentração de 1 a 2 % de etanol
ou de 2-propanol, e depois analisados por cromatografia em fase gasosa
nas condições prescritas no pontos 6.2.2.
6.2.Condições de cromatografia em fase gasosa.
6.2.1. Para as amostras de produtos em aerosóis.6.2.1.1. Utilizar-se-á uma coluna cheia com 10 % de Hallcomid M 18 sobre
cromossorbe W AW 100-120 mesh e um detector catarométrico.
6.2.1.2. A fase estacionária deve dar um grau de resolução igual ou superior a
1,5:
R¼2
d0R2/C0d0R1
W1þW2
em que:
R1eR2= tempo de retenção, expresso em minutos, de 2 picos,
W1eW2= largura dos mesmos picos a meia-altura,
d′ = velocidade do papel em mm/minuto.
6.2.1.3. As condições seguintes permitem obter bons resultados:
Tipos de coluna: aço inoxidável
comprimento: 3,5 mdiâmetro: 3 mm
corrente do detector cataro-
métrico:150 mA
Gaz de arrastamento: Hélio — pressão: 2,5 bars;
Caudal: 45 ml/minuto
Temperaturas
Injector: 150º C
Detector: 150º C
Coluna: 65º C
6.2.2. Para as amostras de outros produtos
6.2.2.1. Utilizar-se-á uma coluna cheia com cromossorbe 105 ou com porapak
QS e um detector de ionização de chama.
6.2.2.2. A fase estacionária deve dar um grau de resolução igual ou superior a
1,5:
R¼2
d0R2/C0d0R1
W1þW2
em que:
R1eR2= tempos de retenção, expressos em minutos, de 2 picos,
W1eW2= largura dos mesmos picos a meia-altura,
d′ = velocidade do papel em mm/minuto
6.2.2.3. As condições seguintes permitem obter bons resultados:1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 30
(1)J O N .oL 383 de 31. 12. 1980, p. 27.
▼B
Tipo de coluna: aço inoxidável
comprimento: 2 m
diâmetro: 3 mm
electrómetro: sensibilidade de 8.10−10A
gaz de arrastamento: azoto - pressão: 2,1 bars; caudal:
40 ml/minuto
auxiliar: hidrogénio - pressão: 1,5 bar;
caudal: 20 ml/minuto
Temperaturas:
Injector: 150º CDetector: 230º C
Coluna: 120º C ou 130º C
7. CURVAS PADRÕES
7.1. Nas condições prescritas no ponto 6.2.1 (coluna Hallcomid M 18),
utilizar as misturas padrões definidas seguidamente. Preparar estas
misturas por medição volumétrica, mas determinar a quantidade exacta
libertada, pesando imediatamente após cada adição.
Concentração relativa
% m/mmetanol
mlEtanol
ml
(ou 2-
-propanol)Clorofórmio até un
volume de
aproximadamente 2,5 % 0,5 20 100 ml
aproximadamente 5,0 % 1,0 20 100 ml
aproximadamente 7,5 % 1,5 20 100 ml
aproximadamente 10,0 % 2,0 20 100 ml
Injectar 2 a 3 µl no cromatógrafo segundo as modalidades prescritas no
ponto 6.2.1.
Calcular a relação das áreas dos picos (metanol/etanol) ou (metanol/2-
-propanol) de cada mistura. Traçar a curva padrão utilizando:
como eixo dos X: a percentagem de metanol em relação ao etanol ou ao
2-propanol
como eixo dos Y: a relação das áreas dos picos (metanol/etanol) ou
(metanol/2-propanol).
7.2. Nas condições prescritas no ponto 6.2.2 (Porapak QS ou Cromossorbe
105) utilizar as misturas padrões definidas seguidamente. Preparar estas
misturas por medida volumétrica, mas determinar a quantidade exacta
libertada, pesando imediatamente após cada adição.
Concentração relativa
% m/mMetanol
µlEtanol
ml
(ou 2-
-propanol)Água até um volume
de
aproximadamente 2,5 % 50 2 100 ml
aproximadamente 5,0 % 100 2 100 ml
aproximadamente 7,5 % 150 2 100 ml
aproximadamente 10,0 % 200 2 100 ml
Injectar 2 a 3 µl no cromatógrafo segundo as modalidades prescritas no
ponto 6.2.2.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 31
▼B
Calcular a relação das áreas dos picos (metanol/etanol) ou (metanol/2-
-propanol) de cada mistura. Traçar a curva padrão utilizando:
como eixo dos X: a percentagem de metanol em relação ao etanol ou ao
2-propanol,
como eixo dos Y: a relação das áreas dos picos (metanol/etanol) ou
(metanol/2-propanol).
7.3. Nos dois casos a curva de calibração deve ser uma recta.
8. REPRODUTIBILIDADE(1)
Para teores em metanol de 5 % em relação ao etanol ou ao 2-propanol,
a diferença entre os resultados de 2 doseamentos paralelos efectuados
sobre a mesma amostra não deve ultrapassar 0,25 %.1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 32
(1) Segundo a norma ISO 5725.
▼M1
Apêndice 1
CONSTRUÇÃODE UM TRICOTIN
ACESSÓRIOS UTILIZADOS PARA A CONSTRUÇÃO DO TRICOTIN:
— um cilindro de madeira:
diâmetro externo de 5 cm; no meio do cilindro é feito um furo de 1,5 cm.
Pregam-se quatro puas de aço de forma a ficarem equidistantes (ver o
esquema do cilindro nas figuras 1 e 2). Distância entre duas puas: 1,8 cm.
Distância entre uma pua e o furo central: 0,5 cm,
— uma haste rígida (de tipo agulha de crochet) , para fazer as laçadas a partir
do tubo Teflon,
— tubo Teflon 1,6 mm — Ø int. 0,3 mm; comprimento: cinco metros.
FUNCIONAMENTO DO TRICOTIN
Para fazer funcionar o Tricotin é necessário enfiar o tubo Teflon de cima para
baixo através do tubo central do cilindro (deixando sair pela face inferior cerca
de 10 cm de tubo, o que permitirá puxar ligeiramente o cordão que vai sendo
confeccionado) e enrolar o tubo à volta de cada uma das quatro puas para efec-
tuar a primeira volta (ver figura 3).
A entrada e a saída do Tricotin são providas de casquilhos e parafusos de
pressão: é necessário ter cuidado para não esmagar o Teflon durante o engaste.
A partir da segunda volta fazer passar o tubo pelo exterior de cada pua, para em
seguida formar uma laçada da seguinte forma:
— fazer passar o tubo da volta inferior sobre o tubo da volta superior com a
ajuda da haste rígida (ver figura 4).
Este trabalho deve ser repetido para cada uma das puas, respeitando a ordem 1,
2, 3 e 4, até se obterem os cinco metros ou o comprimento desejado.
Deixar cerca de 10 cm de tubo para fechar o cordão. Passar o tubo por dentro de
cada uma das quatro laçadas e puxar ligeiramente, fechando assim o cordão.
NB:Existem no mercado Tricotins fabricados para as reacções pós-coluna
(Supelco).1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 33
▼M1
Esquema do cilindro
1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 34
▼M1
Apêndice 2
1 = Bomba HPLC (5.3.2)
2 = Válvula de injecção (5.3.4)
3 = Coluna com pré-coluna4 = Bomba do reagente
5 = T sem volume morto
5′= T (Vortex)
6-6′= Junção «Union» sem volume morto
7 = Tricotin
7′= Reactor
8 = Balão de três tubuladuras com água a ferver9 = Aquecedor de balões
10 = Refrigerante
11 = Tubo inox de troca térmica11′= Dispositivo de troca térmica
12 = Detector de UV visível
13 = Módulo pós-coluna PCRS 520
5.3.5.
5.3.6.
1982L0434 — PT — 10.04.1990 — 001.001 — 35