1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 1
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►BREGULAMENTO (CEE) N.o4154/87 DA COMISSÃO
de 22 de Dezembro de 1987
que define os métodos de análise e outras normas de carácter técnico necessárias à aplicação do
Regulamento (CEE) n.o3033/80 do Conselho, relativo ao regime de trocas aplicável a certas
mercadorias resultantes da transformação de produtos agrícolas
(JO L 392 de 31.12.1987, p. 19)
Alterado por:
Jornal Oficial
n.opágina data
►M1Regulamento (CE) n.o203/98 da Comissão de 26 de Janeiro de 1998 L 21 6 28.1.1998
▼B
REGULAMENTO (CEE) N.o4154/87 DA COMISSÃO
de 22 de Dezembro de 1987
que define os métodos de análise e outras normas de carácter
técnico necessárias à aplicação do Regulamento (CEE) n.o3033/80
doConselho,relativo ao regime de trocas aplicável a certas merca-
dorias resultantes da transformação de produtos agrícolas
A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Euro-peia,
Tendo em conta o Regulamento (CEE) n.
o2658/87 do Conselho, de 23
de Julho de 1987, relativo à nomenclatura pautal e estatística e à PautaAduaneira Comum(
1), alterado pelo Regulamento (CEE) n.o3985/
/87(2), e, nomeadamente, o seu artigo 9.o,
Considerando que o Regulamento (CEE) n.o1061/69 da Comissão(3),
com a última redacção que lhe foi dada pelo Regulamento (CEE) n.o
1822/86(4), definiu os métodos de análise para a aplicação do Regula-
mento (CEE) n.o1059/69 do Conselho(5); que o Regulamento (CEE)
n.o1059/69 foi revogado e substituído pelo Regulamento (CEE) n.o
3033/80 do Conselho(6), com a última redacção que lhe foi dada pelo
Regulamento (CEE) n.o3743/87(7);
Considerando que as normas de execução do Regulamento (CEE) n.o
3033/80, no que respeita às importações, foram fixadas pelo Regula-
mento (CEE) n.o3034/80 do Conselho, de 11 de Novembro de 1980,
que fixa as quantidades de produtos de base consideradas como tendoentrado no fabrico de mercadorias abrangidas pelo Regulamento (CEE)n.
o3033/80 alterado pelo Regulamento (CEE) n.o950/68 relativo à
Pauta Aduaneira Comum(8), com a última redacção que lhe foi dada
pelo Regulamento (CEE) n.o4091/87(9);
Considerando que, a fim de ter em conta a evolução científica e técnica
dos métodos de análise e de continuar a assegurar um tratamento
uniforme à importação na Comunidade de mercadorias às quais seaplica o Regulamento (CEE) n.
o3033/80, é necessário revogar e substi-
tuir o Regulamento (CEE) n.o1061/69;
Considerando que as medidas previstas no presente regulamento estão
em conformidade com o parecer do Comité da Nomenclatura,
ADOPTOU O PRESENTE REGULAMENTO:
Artigo 1.o
O presente regulamento define os métodos de análise necessários à
aplicação do Regulamento (CEE) n.o3033/80 (no que respeita às
importações) e do Regulamento (CEE) n.o3034/80, ou, na falta de um
método de análise, a natureza das operações analíticas a seguir ou oprincípio do método a aplicar.
Artigo 2.
o
Em conformidade com as definições constantes do Anexo III do Regu-
lamento (CEE) n.o3034/80, sobre o teor em amido/glicose e o teor em
sacarose/açúcar invertido/isoglucose, e para efeitos de aplicação dos1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 2
(1)J O n .oL 256 de 7. 9. 1987, p. 1.
(2)J O n .oL 376 de 31. 12. 1987, p. 1.
(3)J O n .oL 141 de 12. 6. 1969, p. 24.
(4)J O n .oL 158 de 13. 6. 1986, p. 1.
(5)J O n .oL 141 de 12. 6. 1969, p. 1.
(6)J O n .oL 323 de 29. 11. 1980, p. 1.
(7)J O n .oL 352 de 15. 12. 1987, p. 29.
(8)J O n .oL 323 de 29. 11. 1980, p. 7.
(9)J O n .oL 382 de 31. 12. 1987, p. 27.
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Anexos II e III desse mesmo regulamento, são utilizados as fórmulas,
procedimentos e métodos seguintes:
1.Teor de amido/glicose:
(expresso em amido 100 %, no estado seco, em relação à merca-
doria tal como se apresenta)
a) (Z − F) × 0,9,
quando o teor de glicose for superior ou igual ao de frutose; ou
b) (Z − G) × 0,9,
quando o teor de glicose for inferior ao de frutose,
onde:
Z = teor de glicose determinado pelo método descrito no
Anexo I do presente regulamento;
F = teor de frutose determinado por HPLC (cromatografia
líquida de alta eficácia);
G = teor de glicose determinado por HPLC.
No ponto 1, alínea a), caso se declare a presença de um hidrolisato
de lactose e/ou forem demonstradas quantidades de lactose e degalactose, um teor de glicose equivalente ao de galactose (determi-nado por HPLC), será deduzido do teor de glicose (Z) antes de se
efectuar qualquer cálculo.
2.Teor de sacarose/açúcar invertido/isoglicose:
(expresso em sacarose, em relação à mercadoria tal como se apre-
senta)
a) S + (2F) × 0,95,
quando o teor de glicose for superior ou igual ao de frutose;
b) S + (G + F) × 0,95,
quando o teor de glicose for inferior ao de frutose,
onde:
S = Teor de sacarose determinado por HPLC (cromatografia
líquida de alta eficácia);
F = Teor de frutose determinado por HPLC;
G = Teor de glicose determinado por HPLC.
Quando se declara a presença de um hidrosilato de lactose e/ou
forem demonstradas quantidades de lactose e de galactose, um teor
de glicose equivalente ao de galactose (determinado por HPLC),
será deduzido do teor de glicose (G) antes de se efectuar qualquercálculo.
3.Teor em matérias gordas provenientes do leite:
a) Sem prejuízo do disposto na alínea b) supra,o teor, em peso, de
matéria gorda proveniente do leite da mercadoria tal como se
apresenta é determinado pela extracção com éter de petróleoprecedida pela hidrólise com ácido clorídrico;
b) Se, na composição da mercadoria, se declaram, para além da
matéria gorda proveniente do leite, outras matérias gordas dife-rentes das provenientes do leite, aplicar-se-á o procedimentoseguinte:
— o teor, em peso, em percentagem de matéria gorda (total) da
mercadoria tal como se apresenta, é determinado tal comoreferido na alínea a) supra,
— para a determinação das matérias gordas provenientes do leite
é aplicado um método que utiliza a extracção com éter depetróleo, procedido por hidrólise pelo ácido clorídrico e
seguido por cromatografia em fase gasosa dos estéres
metílicos dos ácidos gordos. Sempre que a presença damatéria gorda proveniente do leite seja demonstrada, a suapercentagem calcula-se multiplicando a percentagem de buti-rato de metilo por 25, sendo o valor assim obtidomultiplicado pelo teor total, em peso, em percentagem de1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 3
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▼M1
matéria gorda da mercadoria tal como se apresenta e dividido
por cem.
4.Teor em proteínas do leite:
a) Sem prejuízo do disposto na alínea b) supra, o teor em proteínas
do leite da mercadoria tal como se apresenta é calculado multi-
plicando o teor de nitrogénio (determinado pelo método
Kjeldahl) pelo factor 6,38;
b) Se na composição da mercadoria se declaram, para além da
matéria gorda proveniente do leite, outras componentes quecontenham proteínas diferentes das proteínas do leite:
— o teor de nitrogénio total é determinado pelo método Kjel-
dahl,
— o teor em proteínas do leite é calculado como definido na
alínea a) supra, subtraindo do teor em nitrogénio total aoteor em nitrogénio correspondente às proteínas, com exclusãodas do leite.
Artigo 3.
o
Para efeitos de aplicação do Anexo I do Regulamento (CEE) n.o3034/
/80, são utilizados os métodos e/ou procedimentos seguintes:
1. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
0403 10 51 a 0403 10 59, 0403 1091 a 0403 1099, 0403 9071 a
0403 90 79 e 0403 9091 a 0403 90 99 da Nomenclatura Combinada,
a determinação do teor, em peso, das matérias gordas provenientesdo leite é efectuada de acordo com o método descrito no n.
o.3 ,d o
artigo 2.o.
2. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
1704 10 11 a 1704 10 19 e 1905 2010 a 1905 2090 da Nomencla-
tura Combinada, a determinação de sacarose, incluindo o açúcarinvertido calculado em sacarose, é efectuado de acordo com ométodo HPLC (açúcar invertido calculado em sacarose, significa asoma aritmética dos teores em glicose e frutose em partes iguais,
multiplicado por 0,95).
3. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
1806 10 10 a 1806 1090 da Nomenclatura Combinada, a determi-nação de sacarose/açúcar invertido/isoglicose é efectuada de acordocom as fórmulas, método e procedimentos definidos no n.
o2d o
artigo 2
4. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
3505 20 10 a 3505 2090 da Nomenclatura Combinada, a determi-nação de amido ou fécula, de dextrinas ou de outros amidos ou
féculas modificadas é efectuada de acordo com o método definido
no Anexo II.
5. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
3809 10 10 a 3809 1090 da Nomenclatura Combinada, a determi-nação de matérias amiláceas é efectuada de acordo com o método
definido no Anexo II.
6. Para a classificação dos produtos inscritos nas subposições
1901 90 11 e 1901 9019 da Nomenclatura Combinada, a distinçãoentre as duas subposições faz-se com base na determinação doextracto seco efectuado por secagem à temperatura de 103 ºC ± 2 ºC
até obter o peso constante.
7. Para a classificação de produtos das subposições 1902 19 10 e
1902 19 90 da Nomenclatura Combinada, a presença de farinhas esêmolas de trigo mole nas massas alimentícias é pesquisada de
acordo com o método definido no Anexo III.
8. O teor em manitol e em D-glucitol (sorbitol) das subposições
2905 44 11 a 2905 44 99 e 3823 6011 a 3823 6099 da Nomencla-tura Combinada, é determinada segundo um método baseado nacromatografia líquida de alta eficácia (HPLC).1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 4
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Artigo 4.o
1. É elaborado um boletim de análise.
2. O boletim de análise deve conter, nomeadamente:— todas as indicações relativas à identificação da amostra,
— o método utilizado e a referência exacta do texto jurídico respec-
tivo, ou, se for caso disso, a referência a um métodopormenorizado que retome a natureza das operações analíticas a
seguir ou o princípio de um método a aplicar, indicados no presente
regulamento,
— os elementos susceptíveis de terem influenciado os resultados,
— os resultados da análise e sua expressão tendo em conta o método
utilizado e as exigências dos serviços aduaneiros ou de gestão que
requereram a análise.
Artigo 5.
o
O Regulamento (CEE) n.o1061/69 é revogado.
Artigo 6.o
O presente regulamento entra em vigor em 1 de Janeiro de 1988.
O presente regulamento é obrigatório em todos os seus elementos e
directamente aplicável em todos os Estados-Membros.1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 5
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ANEXO I
DETERMINAÇÃODO TEOR EM PESO DE AMIDO, SEUS PRODUTOS
DE DEGRADAÇÃOINCLUINDOA GLICOSE
1.Objecto e domínio de aplicação
a) O método permite determinar o teor, em peso, de amido ou fécula, e
seus produtos de degradação incluindo a glicose, abaixo mencionado
«amido».
b) O teor em peso de «amido» é igual ao valor E conforme se calcula no
ponto 6.
2.Princípio
A amostra desagrega-se com hidróxido de sódio e o amido cindido em
unidades de glucose com a amiloglicosidase. O doseamento da glicose é
efectuado por via enzimática.
3.Reagentes
(Utilizar água bidestilada.)
3.1. Solução de hidróxido de sódio 0,5 N (0,5 mol/l).
3.2. Ácido acético (glacial) a 96 %, pelo menos.
3.3. Solução de amiloglucosidase:
imediatamente antes do emprego, dissolver cerca de 10 mg de amiloglu-
cosidase (EC 3.2.1.3) (6 U/mg) em 1 ml de água(1).
3.4. Tampão trietanolamina:
dissolver 14,0 g de cloridrato de trietanolamina, cloreto de [tris(2-hidro-
xietil)amónio] e 0,25 g de sulfato de magnésio (MgSO47H2O) em 80 ml
de água, adicionar-lhe cerca de 5 ml de solução de hidróxido de sódio 5
N (5 mol/l) e ajustar o pH a 7,6 por meio de uma solução de hidróxido de
sódio 1 N (1 mol/l).
Perfazer 100 ml com água. Este tampão conserva-se durante, pelo menos,
quatro semanas a 4 ºC.
3.5. Solução de NADP (Nicotinamide Adenine Dinicleotide phosfate, sal
dissódico): dissolver 60 mg de NADP em 6 ml de água. Esta solução
conserva-se durante, pelo menos, quatro semanas a 4 ºC.
3.6. Solução de ATP (Adenosine 5š-triphosphate, sal dissódico):
dissolver 300 mg de ATP. 3H2O e 300 mg de hidrogenocarbonato de
sódio (NaHCO3) em 6 ml de água. Esta solução conserva-se durante,
pelo menos, quatro semanas a 4 ºC.
3.7. Suspensão HK/G6P-DH (Hexokinase-EC 2.7.1.1) e de glucose-6-fosfato
desidrogenase (EC 1.1.1.49):
colocar em suspensão 280 U HK e 140 U G6P-DH em 1 ml de solução
de sulfato de amónio (C = 3,2 mol/l). Esta suspensão conserva-se durante,
pelo menos, um ano a 4 ºC.
4.Aparelhagem
4.1. Agitador magnético com banho-maria a 60 ºC.
4.2. Barras magnetizadas.
4.3. Espectrofotómetro U. V. equipado com cubas de 1 cm.
4.4. Pipetas para a análise enzimática.1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 6
(1) Em que U é unidade internacional da actividade enzimática.
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5.Metodologia
5.1.Desagregar por meio de hidróxido de sódio e hidrólise enzimática de
amido/glicose
5.1.1. Segundo o teor esperado de «amido», escolher as seguintes pesagens (o
teor de «amido» não deve exceder 0,4 g por pesagem):
Teor esperado de
«amido» do produtoem
g/100 gPesagem aproximati-
vaem g (P)Volume do balão cali-
bradoem mlFactor de diluiçãoaté ao
litro(f)
> 70 0,35-0,4 500 2
20-70 max. 0,5 500 2
5-20 max. 1 250 4
< 5 max. 2 200 5
5.1.2. Pesar (com uma precisão de 0,1 mg) a amostra.
5.1.3. Adicionar ao resíduo 50 ml de solução de hidróxido de sódio 0,5 N (3.1.)
e manter sobagitação constante durante 30 minutos em b anho-maria com
agitador magnético (4.1.) a 60 ºC.
5.1.4. Ajustar o pH a 4,6-4,8 com alguns ml de ácido acético concentrado (3.2.).
5.1.5. Colocar em banho-maria com agitador magnético (4.1.) a 60 ºC,
adicionar 1,0 ml de solução da enzima (3.3.) e deixar actuar durante 30
minutos, sobagitação.
5.1.6. Após arrefecimento, transferir quantitativamente para o balão calibrado
(5.1.1.) e perfazer até à marca com água.
5.1.7. Se necessário, filtrar através de um filtro plissado (ver observação n.o. 1).
5.2.Doseamento da glicose
5.2.1. A solução de ensaio deve conter 100-1000 mg de glucose por litro, o que
corresponde a um ∆Ε340que se situa entre 0,1-1,0.
A solução de ensaio diluída numa proporção de 1 + 30 com água não
deve apresentar, a 340 nm, uma absorvência que ultrapasse 0,4 (medida
em relação ao ar).
5.2.2. Levar o tampão (3.4.) à temperatura ambiente (20 ºC).
5.2.3. A temperatura dos reagentes e da amostra deve ser de 20 ºC a 25 ºC.5.2.4. Medir a absorvência a 340 nm em relação ao ar (sem cuba no trajecto
óptico de referência).
5.2.5. Execução segundo o esquema de pipetagem a seguir indicado:
Introduzir nas cubasEnsaio em branco
(ml)Ensaio
(ml)
Tampão (reagente 3.4.) 1,00 1,00
NADP (reagente 3.5.) 0,10 0,10ATP (reagente 3.6.) 0,10 0,10Solução de ensaio (5.1.6. ou
5.1.7.)— 0,10
Água bidestilada 2,00 1,90
Misturar, passados cerca de 3 minutos, medir a absorvência das soluções (E
1). Desencadear a
reacção através da adição de:
HK/G6P-DH (reagente 3.7.) 0,02 0,02Misturar, esperar o fim da reacção (cerca de 15 minutos) e medir a absorvência das soluções
(E
2). Ter em conta eventuais reacções secundárias. Se a reacção não estiver completada após
15 minutos, continuar a ler as absorvências de 5 em 5 minutos até que o aumento da
absorvência seja constante durante 5 minutos e, em seguida, extrapolar a absorvência ao
tempo da adição da suspensão (3.7.) (ver observação n.o2).1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 7
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5.2.6. Para o ensaio em branco e o ensaio, calcular a diferença de absorvência
E2-E1. Subtrair a diferença de absorvência do ensaio em branco da do
ensaio (= ∆Ε):
∆Ε=∆Εensaio−∆Εensaio em branco
A partir desta diferença, obtém-se o teor de glucose da solução de ensaio:
Teor de glucose, em g/l, da solução de ensaio
Gl¼3;22/C2180 ;16
6;3/C21/C20;1/C21000/C2∆Ε340¼0;921/C2∆Ε340
[3,22 = volume da solução a medir (ml); 1 = trajectória da luz no recipi-
ente (cm); 0,1 = volume da solução da amostra (ml); massa molecular da
glucose = 180,16]
5.2.7. Se a medida de absorvência a 340 nm não for possível, a medida pode ser
efectuada no comprimento de onda de 365 nm ou 334 nm. Nesse caso, o
algarismo 6,3 da fórmula Gl acima é substituído pelo algarismo 3,5 ou
6,18, respectivamente.
6.Cálculo do teor em «amido» (E) ou em «Glicose» Z em g/100 g
a) E¼100/C20;9/C2Gl
p/C2f
b)Z¼100/C2Gl
p/C2f
em que:
Gl = glicose, em g/l (5.2.6.),
f = factor de diluição (5.1.1.),
p = pesagem da amostra, em g,
0,9 = factor de conversão da glucose em amido.
Observações:
1. Em caso de se constatar que a solução não pode ser filtrada segundo o ponto
5.1.7, o químico toma as medidas apropriadas.
2. Em caso de se constatar uma inibição das enzimas, aconselha-se o método
das «adições» utilizando-se o amido puro.1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 8
▼B
ANEXO II
DETERMINAÇÃO DO TEOR DE AMIDOS OU FÉCULAS, DEXTRINA
OU OUTROS AMIDOS OU FÉCULAS MODIFICADOS CONTIDOS
NAS MERCADORIAS DAS SUBPOSIÇÕES 35052010 A 35052090 DA
NOMENCLATURA COMBINADA, BEM COMO DAS MATÉRIAS
AMILÁCEAS CONTIDAS NAS MERCADORIAS DAS SUBPOSIÇÕES
38091010 A 38091090 DA NOMENCLATURACOMBINADA
I.Princípio
Por hidrólise ácida, o amido é transformado em açúcares redutores que são
doseados volumetricamente por meio do licor de Fehling.
II.Instrumentose reagentes
1. Balão de cerca de 250 ml;
2. Frasco graduado de 200 ml;3. Bureta graduada de 25 ml;
4. Ácido clorídrico de densidade 1,19;
5. Solução de potassa cáustica;6. Carvão descorante;7. Licor de Fehling;
8. Solução de azul de metileno a 1 %.
III.Modo operatório
Num balão de cerca de 250 ml, introduzir uma amostra correspondente a
uma quantidade de amido de cerca de 1 grama. Juntar 100 ml de água desti-
lada e 2 ml de ácido clorídrico.
Levar à ebulição com refluxo durante 3 horas.Transvasar o conteúdo do balão assim como o produto da sua enxaguadura
para um frasco graduado de 200 ml e juntar a isto a solução de potassa
cáustica, até obter uma reacção ligeiramente ácida. Completar o volume de
200 ml com água destilada e filtrar tudo num pouco de carvão descorante.
Deitar em seguida a solução numa bureta graduada e reduzir 10 ml de licor
de Fehling, segundo o método a seguir indicado:
Num balão de fundo chato de cerca de 250 ml, deitar 10 ml de licor de
Fehling (5 ml de solução A e 5 ml de solução B). Agitar até obter uma
solução clara, depois de juntar 40 ml de água destilada, assim como uma
pequena quantidade de quartzo ou de pedra pomes.
Colocar o balão sobre a placa de amianto quadrada com uma abertura
circular de cerca de 6 cm de diâmetro ao meio, assentando sobre uma rede
metálica. Aquecer o balão de maneira a que o líquido comece a ferver ao
fim de cerca de 2 minutos.
Juntar ao líquido em ebulição, com a ajuda de uma bureta, quantidades
sucessivas da solução de açúcar, até que a cor azul de licor de Fehling
mal seja perceptível; juntar então, a título de indicador, 2 ou 3 gotas de
solução de azul de metileno e depois, completar a titulação juntando gota-
-a-gota uma nova quantidade de solução de açúcar até ao desaparecimento
da cor azul do indicador.
Para maior precisão, repetir a titulação nas mesmas condições, juntando no
entanto de uma só vez a quase totalidade da solução de açúcar necessária à
redução do licor de Fehling. Nesta segunda titulação a redução do licor de
Fehling deve operar-se no espaço de tempo de 3 minutos.
Continuar a ebulição durante exactamente dois minutos. Efectuar a titulação
ajustando gota a gota durante o terceiro minuto até ao desparecimento da
cor azul do indicador.
A percentagem, em peso, de amido da amostra é determinada por meio da
seguinte fórmula:
% de amido ¼
T/C2200/C2100
n/C2p/C20;951987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 9
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sendo:
T = A quantidade em gramas de dextrose anidra correspondente a 10
ml de licor de Fehling (5 ml de solução A + 5 ml de solução B).
Este título é de 0,04945 g de dextrose anidra, contendo a solução
A 17,636 g de cobre por litro.
n = O número de ml da solução de açúcar utilizada para a titulação.p = O peso da amostra.
0,95 = A taxa de conservação da dextrose anidra em amido.
IV.Preparação do licor de Fehling
Solução A: Dissolver, num frasco de vidro graduado, em água destilada,
69,278 g de sulfato do cobre cristalizado puro para análises
(CuSO
4·5H2O) isento de ferro e ajustar a solução para o
volume de um litro com água destilada. O título exacto desta
solução deverá ser verificado por meio de uma determinação
quantitativa do cobre.
Solução B: Dissolver, num frasco de vidro graduado, por meio de água
destilada, 100 g de hidróxido de sódio e 346 g de tartarato
duplo de sódio e potássio (sal de Seignette) e ajustar a
solução para o volume de um litro com água destilada.
As duas soluções A e B devem ser misturadas, em volumes iguais, imedia-
tamente antes da sua utilização, 10 ml de licor de Fehling (5 ml de solução
A + 5 ml de solução B) são completamente reduzidos, se se operar nas
condições indicadas em III, por 0,04945 g de dextrose anidra.1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 10
▼B
ANEXO III
PESQUISA DA PRESENÇA DE FARINHA OU DE SÊMOLA DE TRIGO
MOLE NAS MASSASALIMENTÍCIAS
(segundo o método de Young e Gilles, modificado por Bernaerts e Gruner)
I.Princípio
Prepara-se um extracto de amostra das massas alimentícias a analisar utili-
zando-se um solvente não polar.
Este extracto é cromatografado em camada fina de silicagel, de modo a
separar os esteróides presentes em diferentes fracções soba forma de
bandas.
Segundo o número de bandas intensas reveladas, é possível determinar se o
produto examinado é fabricado quer a partir exclusivamente de trigo duro
ou de trigo mole, quer a partir de uma mistura destes dois produtos. É
igualmente possível determinar se se juntaram ovos a estas matériasprimas.
II.Aparelhagem e reagentes
1. Homogeneizador ou triturador que permita obter uma moedura que
passe através de um peneiro normalizado com uma abertura de malhas
de 0,200 mm.
2. Peneiro normalizado com uma abertura de malhas de 0,200 mm.
3. Evaporador sobpressão reduzida com b anho-maria.
4. Placa de vidro, folha de alumínio ou outro suporte apropriado, de 20
cm × 20 cm, coberto com uma camada fina de silicagel. Se for o
próprio a preparar a camada fina, deverá utilizar silicagel misturada
com cerca de 13 % de gesso que aplicará sobre a placa de vidro em
camada de 0,25 mm com instrumentos adequados e seguindo as
instruções dos fabricantes.
5. Micropipeta que permita medir 20 microlitros.
6. Cuba com tampa adequada para a revelação dos cromatogramas.
7. Vaporizador.
8. Éter de petróleo com o ponto de ebulição então 40 º e 60 º C redesti-
lado antes de usar.
9. Éter etílico anidro para análises.
10. Tetracloreto de carbono para cromatograma redestilado antes de usar.
11. Ácido fosfomolíbdico para análises.
12. Álcool etílico a 94º.
III.Modo operatório
Moer 20 g da amostra a analisar, de forma a que passem na sua totalidade
através do peneiro. Introduzir a amostra moída num balão Erlenmeyer e
cobrir com 150 ml de éter de petróleo. Deixar à temperatura ambiente até
ao dia seguinte. Agitar de vez em quando.
Filtrar em seguida sobre um funil B όchner munido de uma camada de adju-
vante de filtração ou sobre um filtro plissado. Transvasar pouco a pouco a
solução límpida assim obtida para um balão tarado de 100 ml. Evaporar o
solvente sob pressão reduzida, aquecendo o balão em banho-maria de 40 º-
-50 ºC. Depois de evaporação do solvente, continuar a aquecer sobpressão
reduzida durante 10 minutos.
Depois do arrefecimento do balão, determinar o peso do extracto. Diluir o
extracto em éter etílico à razão de 1 ml de éter etílico para 60 mg de
extracto.
Activar as camadas finas levando-as à temperatura de 130 ºC durante 3
horas. Deixar arrefecer num exsicador contendo silicagel as placas que não
são utilizadas imediatamente.
Aplicar sobre uma camada fina, de preferência acabada de activar, 20
microlitros da solução límpida soba forma de uma b anda de largura cons-
tante de 3 cm constituída por gotícolas justapostas. Deixar evaporar o
solvente.
Revelar o cromatograma à temperatura ambiente com o tetracloreto de
carbono utilizando uma câmara cromatográfica interiormente revestida com1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 11
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tiras de papel de filtro embebido em solvente. Cerca de 1 hora depois, o
solvente terá atingido uma altura de 18 cm. Tirar a placa e deixar evaporar
o solvente ao ar. Revelar de novo o cromatograma de maneira a melhor
separar as zonas. Deixar evaporar de novo o solvente ao ar.
Vaporizar a camada fina de silicagel com uma solução de 20 % de ácido
fosfomolíbdico no álcool etílico. A cor da camada deve ser uniformemente
amarela. Revelar as zonas colocando a placa vaporizada durante 5 minutos
a 110 ºC.
IV.Interpretação do cromatograma
Se o cromatograma apresentar uma só banda principal intensa possuindo um
Rf de cerca de 0,4 a 0,5, o trigo utilizado para o fabrico da massa
alimentícia foi trigo duro. Se, pelo contrário, aparecerem duas bandas prin-
cipais de igual intensidade, a matéria prima utilizada foi trigo mole. As
misturas de trigo duro e trigo mole podem ser verificadas calculando a
intensidade relativa das duas bandas.
Se se constata a presença de três bandas (duas bandas à altura das bandas
principais do trigo mole, mais uma banda intermediária), houve adição de
ovos à massa. Neste caso, a matéria prima utilizada foi trigo duro se a
banda superior for menos intensa que a banda intermédia. Pelo contrário,
se a banda superior for mais intensa que a banda intermédia, a matéria
prima utilizada foi trigo mole.1987R4154 — PT — 18.02.1998 — 001.001 — 12