1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 1
Este documento constitui um instrumento de documentação e não vincula as instituições
►BSEGUNDA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 18 de Novembro de 1971
que fixa os métodos de análise comunitários para o controlo oficial dos alimentos para animais
(71/393/CEE)
(JO L 279 de 20.12.1971, p. 7)
Alterada por:
Jornal Oficial
n.opágina data
►M1Directiva 73/47/CEE da Comissão de 5 de Dezembro de 1972 L 83 35 30.3.1973
►M2Directiva 81/680/CEE da Comissão de 30 de Julho de 1981 L 246 32 29.8.1981
►M3Directiva 84/4/CEE da Comissão de 20 de Dezembro de 1983 L 15 28 18.1.1984
►M4Directiva 98/64/CE da Comissão de 3 de Setembro de 1998 L 257 14 19.9.1998
▼B
SEGUNDA DIRECTIVADA COMISSÃO
de 18 de Novembro de 1971
que fixa os métodos de análise comunitários para o controlo oficial
dos alimentos para animais
(71/393/CEE)
A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Euro-
peia,
Tendo em conta a Directiva do Conselho, de 20 de Julho de 1970, rela-
tiva à introdução de modos de colheita de amostras e de métodos de
análise comunitários, para o controlo oficial dos alimentos paraanimais(
1) e, nomeadamente, o seu artigo 2.o,
Considerando que a Directiva acima referida prevê que, para verificar
se são respeitadas as condições prescritas por força das disposiçõeslegislativas, regulamentares ou administrativas respeitantes à qualidadee composição dos alimentos para animais, os controlos oficiais dos
elementos para animais sejam efectuados segundo os modos de colheita
de amostras e os métodos de análise comunitários;
Considerando que a Directiva n.
o71/250/CEE de Comissão, de 15 de
Junho de 1971(2), fixou já um certo número de métodos de análise
comunitários; que, tendo em conta o avanço dos trabalhos efectuadosdesde então, convém adoptar uma segunda série de métodos;
Considerando que as medidas previstas na presente directiva estão em
conformidade com o parecer do Comité Permanente dos Alimentos
para Animais,
ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA:
Artigo 1.o
Os Estados-membros determinam que as análises para os controlosoficiais dos alimentos para animais no que diz respeito aos respectivosconteúdos de humidade, bases azotadas voláteis, fósforo total e maté-rias gordas brutas, sejam efectuadas segundo os métodos descritos noanexo da presente directiva.
Artigo 2.o
Os Estados-membros porão em vigor, em 1 de Janeiro de 1973 o maistardar, as disposições legislativas, regulamentares ou administrativasnecessárias para darem cumprimento às disposições da presente direc-tiva. Deste facto informarão imediatamente a Comissão.
Artigo 3.
o
Os Estados-membros são destinatários da presente directiva.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 2
(1)J O n .oL 170 de 3. 8. 1970, p. 2.
(2)J O n .oL 155 de 12. 7. 1971, p. 13.▼M2
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ANEXO
1.DOSAGEM DE HUMIDADE
1.Objecto e domínio de aplicação
Este método permite determinar o teor de humidade dos alimentos para
animais. ►M1Não diz respeito à análise dos produtos lácteos, enquanto
alimentos simples para animais, à análise das substâncias minerais e das
misturas essencialmente compostas por substâncias minerais, à análise das
gorduras e dos óleos animais e vegetais, assim como à análise das sementes
e frutos oleaginosos definidos no Regulamento n.o136/66/CEE do Conselho,
de 22 de Setembro de 1966, que estabelece uma orgnização comum de
mercado no sector das matérias gordas(1).◄
A determinação do teor de humidade das sementes e frutos oleaginoses é
descrita no Anexo II do Regulamento (CEE) n.o1470/68 da Comissão, de
23 de Setembro de 1968, relativo à toma e redução das amostras, assim
como à determinação do teor de óleo, de impurezas e de humidade das
sementes oleaginosas(2).
2.Princípio
A amostra é dessecada em condições definidas que variam em função da
natureza do alimento. A perda de massa é determinada por pesagem. É
necessário proceder a uma pré-dessecação sempre que se trate de alimentos
sólidos com um elevado teor de humidade.
3.Instrumentos
3.1. Triturador construído num material que não absorva a humidade, fácil
de limpar e que permita uma trituração rápida e uniforme sem provocar
aquecimento sensível, que evite o mais possível o contacto com o ar
exterior, e que satisfaça as exigências indicadas em (4.1.1.) e 4.1.2.)
(por exemplo, microtrituradores de martelos ou com arrefecimento por
água, moinhos de cones desmontáveis, trituradores de movimento lento
ou de discos dentados).
3.2. Balança analítica, com uma precisão de 0,5 mg.
3.3. Recipientes secos de metal inoxidável ou de vidro, munidos de uma
tampa hermética; superfície útil que permita obter uma repartição da
amostra da ordem de 0,5 g por cm2.
3.4. Estufa isotérmica (± 1 ºC) de aquecimento eléctrico, com uma regulação
rápida da temperatura e convenientemente ventilada(3).
3.5. Estufa a vácuo, com aquecimento eléctrico regulável, munida de uma
bomba de óleo e, quer de um dispositivo de introdução de ar quente
desidratado, quer de um desidratante por ex., óxido de cálcio).
Exsicador com placa de metal ou de porcelana espessa, perfurada,
contendo um desidratante eficaz.
4.Modo operatório
NB: As operações descritas neste capítulo devem ser efectuadas imediata-
mente após a abertura das embalagens que contêm as amostras.
As análises devem ser efectuadas pelo menos em duplicado.
4.1.Preparação
4.1.1. Alimentos com excepção dos mencionados em (4.1.2.) e (4.1.3.)
Recolher pelo menos 50 g da amostra. Se for necessário, triturar
ou dividir de maneira apropriada para evitar qualquer variação do
teor de humidade (ver 6).1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 3
(1)J O n .o172 de 30. 9. 1966, p. 3025/66.
(2)J O n .oL 239 de 28. 9. 1968, p. 2.
(3) Para dessecação dos cereais, assim como das farinhas e sêmolas grossas e finas, a
estufa deve ter uma capacidade calorífica tal que, regulada previamente à temperatura
de 131 ºC, possa atingir de novo esta temperatura menos de 45 minutos após a colo-cação do número máximo de amostras a secar simultaneamente. A estufa deverá aindater uma ventilação tal que, secando durante 2 horas todas as amostras de trigo mole quepode conter, os resultados apresentem uma diferença inferior a 0,15 % relativamente
aos resultados obtidos após quatro horas de dessecação.
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4.1.2. Cereais e sêmolas grossas
Recolher pelo menos 50 g da amostra. Moer em partículas, das
quais pelo menos 50 % passem por uma peneira de malhas de
0,5 mm e não deixem mais de 10 % de resíduos sobre outro crivo
de malhas redondas de 1 mm.
4.1.3. Alimentos líquidos ou pastosos, alimentos constituídos essencial-
mente de matérias gordas
Recolher e pesar, com uma aproximação de 10 mg, cerca de 25 g
da amostra, adicionar-lhe uma quantidade apropriada de areia
anidra, com uma aproximação de 10 mg misturar até à obtenção
de um produto homogéneo.
4.2.Dessecação
4.2.1. Alimentos com excepção dos mencionados em (4.2.2.) e (4.2.3.)
Tarar, com uma aproximação de 0,5 g, um recipiente (3.3.) com a
tampa. Pesar dentro dele, com uma aproximação de 1 mg, cerca
de 5 g da amostra, repartindo-a uniformemente. Colocar o recipi-
ente na estufa previamente aquecida a 103 ºC, com a tampa
tirada. Para evitar que a temperatura da estufa baixe muito, intro-
duzir o recipiente num tempo mínimo. Deixar secar durante
quatro horas, a partir do momento em que a estufa tiver atingido
de novo à temperatura de 103 ºC. Colocar a tampa sobre o reci-
piente, retirar este da estufa, deixar arrefecer durante 30 a 45
minutos no exsicador (3.6.) e pesar com uma aproximação de
1 mg. No caso de alimentos constituídos essencialmente de maté-
rias gordas, efectuar uma dessecação suplementar de 30 minutos
na estufa a 103 ºC. A diferença entre as duas pesagens não deve
exceder 0,1 % de humidade.
4.2.2. Cereais, farinhas sêmolas grossas
Tarar, com uma aproximação de 0,5 g, um recipiente (3.3.) com a
tampa. Pesar dentro dele, com uma aproximação de 1 mg, cerca
de 5 g da amostra, repartindo-a uniformemente. Colocar o recipi-
ente na estufa previamente aquecida a 130 ºC, com a tampa
tirada. Para evitar que a temperatura da estufa desça demais intro-
duzir o recipiente num tempo mínimo. Deixar secar durante duas
horas, a partir do momento em que a estufa tiver atingido de
novo a temperatura de 130 ºC. Colocar a tampa no recipiente,
retirar este da estufa, deixar arrefecer 30 a 45 minutos no exsi-
cador (3.6.) e pesar com uma aproximação de 1 mg.
4.2.3. Alimentos compostos contendo mais de 4 % de sacarose ou de
lactose: alimentos simples tais como alfarroba, produtos cereais
hidrolisados, germes de malte, rodelas de beterrabas, solutos de
peixe e açucares; alimentos compostos com mais de 25 % de sais
minerais contendo água de cristalização
Tarar, com uma aproximação de 0,5 g, um recipiente (3.3.) com a
tampa. Pesar dentro dele, com uma aproximação de 1 mg, cerca
de 5 g da amostra repartindo-a uniformemente. Colocar o recipi-
ente na estufa de vácuo (3.5.) previamente aquecida à
temperatura de 80 a 85 ºC, com a tampa tirada. Para evitar que
a temperatura da estufa não desça demais, introduzir o recipientenum tempo mínimo.
Elevar a pressão a 100 Torr e deixar secar a esta pressão durante
quatro horas, quer sob uma corrente de ar seco e quente, quer por
meio de um desidratante (cerca de 300 g para 20 amostras). Neste
último caso, cortar a ligação com a bomba de vácuo quando se
atingir a pressão prescrita. Contar a duração da secagem a partir
do momento em que a estufa tiver atingido de novo a temperatura
de 80 a 85 ºC. Levar em seguida com precaução a estufa até à
pressão atmosférica. Abrir a estufa, cobrir imediatamente o reci-
piente com a tampa, retirá-lo da estufa, deixar arrefecer durante
30 a 45 minutos no exsicador (3.6.) e pesar com uma aproxi-
mação de 1 mg. Proceder a uma secagem complementar de 30
minutos na estufa a vácuo à temperatura de 80 a 85 ºC e pesar
novamente. A diferença entre as duas pesagens não deve exceder
0,1 % de humidade.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 4
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4.3.Pré-dessecação
4.3.1. Alimentos, com excepção dos mencionados em (4.3.2.)
Os alimentos sólidos cujo teor de humidade é elevado e torna a
trituração difícil, devem ser pré-dessecados como se segue:
Pesar, com uma aproximação de 10 mg, 50 g de amostra não
triturada (pode efectuar-se uma divisão grosseira, se necessário,
no caso dos alimentos comprimidos ou aglomerados) num recipi-
ente apropriado (por exemplo, numa placa de alumínio de
20 × 12 cm com um bordo de 0,5 cm. Deixar secar numa estufa
à temperatura de 60 a 70 ºC até que o teor de humidade seja
baixado até um valor entre 8 el 12 %. Retirar da estufa, deixar
arrefecer a descoberto no laboratório durante 1 hora, e pesar
com uma aproximação de 10 mg. Triturar imediatamente, como
indicado em (4.1.1.) e efectuar a dessecação como indicado em
(4.2.1.) ou (4.2.3.) segundo a natureza do alimento.
4.3.2. Cereais
As sementes com uma taxa de humidade superior a 17 % devem
ser pré-dessecadas como se segue:
Pesar, com uma aproximação de 10 mg, 50 g de sementes não
moídas num recipiente apropriado (por exemplo, numa placa de
alumínio de 20 × 12 cm com bordo de 0,5 cm). Deixar secar
numa estufa durante 5 a 7 minutos, à temperatura de 130 ºC.
Retirar da estufa, deixar arrefecer a descoberto no laboratório
durante duas horas e pesar, com uma aproximação de 10 mg.
Moer imediatamente, como indicado em (4.1.2.) e efectuar a
dessecação, como indicado em (4.2.2.).
5.Cálculo dos resultados
O teor de humidade, em percentagem da amostra, é dado pelas seguintes
fórmulas:
5.1.Dessecação sem pré-dessecação
E/C0m ðÞ /C1100
E
em que:
E = massa inicial da amostra, em gramas,
m = massa da amostra dessecada em gramas.
5.2.Dessecação com pré-dessecação
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
em que:
E = massa inicial da amostra, em gramas,
M = massa da amostra, depois da pré-dessecação, em gramas,M′= massa da amostra depois da trituração ou moedura, em gramas,
m = massa da amostra seca, em gramas.
5.3.Reprodutibilidade
A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efec-
tuadas na mesma amostra não deve ultrapassar 0,2 % de humidade.
6.Observações
Se for necessário uma trituração e dela resultar uma variação do teor de
humidade do produto, os resultados da análise que dizem respeito aos
componentes do alimento devem ser convertidos de acordo com o teor de
humidade da amostra inicial.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 5
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2.DOSEAMENTO DASBASES AZOTADASVOLÁTEIS
A. POR MICRODIFUSÃO
1.Objecto e domínio de aplicação
O método permite determinar o teor de bases azotadas voláteis, expressas em
amoníaco, dos alimentos para animais.
2.Princípio
A amostra é extraída com água e a solução é clarificada e filtrada. As bases
azotadas voláteis são extraídas por microdifusão, por meio de uma solução de
carbonato de potássio, recolhidas numa solução de ácido bórico e tituladas
com ácido sulfúrico.
3.Reagentes
3.1. Solução a 20 % (p/v) de ácido tricloroacético.
3.2. Indicador: dissolver 33 mg de verde de bromocresol e 65 mg de
vermelho de metilo em 100 ml de etanol a 95-96 % (v/v).
3.3. Solução de ácido bórico: num balão aferido de 1 litro, dissolver 10 g de
ácido bórico p.a. em 200 ml de etanol a 95-96 % (v/v) e 700 ml de
água. Juntar 10 ml de indicador (3.2.). Misturar e, se necessário, ajustar
a coloração da solução a vermelho claro, por adição de uma solução de
hidróxido de sódio. 1 ml desta solução permite fixar, no máximo, 300 µg
de NH3.
3.4. Solução saturada de carbonato de potássio: dissolver 100 g de carbonato
de potássio p.a. em 100 ml de água em ebulição. Deixar arrefecer e
filtrar.
3.5. Ácido sulfúrico 0,02 N.
4.Instrumentos
4.1. Misturador basculante: cerca de 35 a 40 rotações por minuto.
4.2. Células de Conway (v. esquema) e de vidro ou matéria plástica.
4.3. Microburetas, graduadas em 1/100 ml.
5.Modo operatório
Pesar, com uma aproximação de 1 mg, 10 g de amostra e introduzir num
balão aferido de 200 ml com 100 ml de água. Misturar durante 30 minutos
no misturador basculante. Adicionar 50 ml de solução de ácido tricloroacé-
tico (3.1.), completar o volume com água, agitar vigorosamente e filtar num
filtro de pregas.
Introduzir com a pipeta, na parte central da célula de Conway, 1 ml de
solução de ácido bórico (3.3.) e na parte periférica, 1 ml do filtrado da
amostra. Cobrir parcialmente com a tampa com silicone. Introduzir rapida-
mente na parte periférica 1 ml de solução saturada de carbonato de potássio
(3.4.) e fechar hermeticamente a tampa. Agitar suavemente a célula dando-
-lhe um movimento de rotação num plano horizontal, para misturar os dois
reagentes. Deixar incubar durante quatro horas, pelo menos, à temperatura
ambiente, ou, então, durante 1 hora a 40 ºC.
Titular as bases voláteis na solução de ácido bórico por meio de ácido sulfú-
rico 0,02 N (3.5.), utilizando uma microbureta (4.3.).
Efectuar um ensaio em branco utilizando o mesmo método na ausência de
amostra a analisar.
6.Cálculo dos resultados
1m ld eH2SO40,02 N corresponde a 0,34 mg de amoníaco.
Exprimir o resultado em percentagem da amostra.
Reprodutibilidade
A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas
com a mesma amostra, não deve ultrapassar:
10 % em valor relativo, para os teores de amoníaco inferiores a 1,0 %;1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 6
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0,1 em valor absoluto para os teores de amoníaco iguais ou superiores a
1,0 %.
7.Observações
Se o teor de amoníaco da amostra for superior a 0,6 %, diluir o filtrado
inicial.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 7
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CÉLULA DE CONWAY
Escala 1/1
1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 8
▼B
B. POR DESTILAÇÃO
1.Objecto e domínio de aplicação
Este método permite determinar o teor de bases azotadas voláteis
expressas em amoníaco das farinhas de peixe que praticamente não
contêm ureia. Só pode ser utilizado para os teores de amoníaco inferiores
a 0,25 %.
2.Princípio
A amostra é extraída com água, a solução é clarificada e filtrada. As bases
azotadas voláteis extraídas, em ebulição, por adição de óxido de magnésio
e recolhidas numa quantidade de determinada de ácido sulfúrico cujo
excesso é titulado por meio de uma solução de hidróxido de sódio.
3.Reagentes
3.1. Solução a 20 % (p/v) de ácido tricloroacético.
3.2. Óxido de magnesio p.a.3.3. Emulsão de antiespuma (silicone por ex.).
3.4. Ácido sulfúrico 0,1 N.
3.5. Solucão de hidróxido de sodio 0,1 N.
3.6. Solucão a 0,3 % (p/v) de vermelho de metilo em etanol a 95-96 %
(v/v).
4.Instrumentos
4.1. Misturador basculante: cerca de 35 a 40 rotações por minuto.4.2. Aparelho de destilação do tipo Kjeldahl.
5.Método
Pesar, com uma aproximação de 1 mg, 10 g da amostra e introduzir, com
100 ml de água, num balão aferido de 200 ml. Misturar durante 30
minutos no misturador basculante. Adicionar 50 ml de solução de ácido
tricloroacético (3.1), completar o volume com água, agitar vigorosamente
e filtrar num filtro de pregas.
Recolher uma quantidade do filtrado límpido em função da concentração
teórica de bases azotadas voláteis (geralmente 100 ml). Diluir para 200 ml
e adicionar 2 g de óxido de magnésio (3.2.) e algumas gotas de emulsão
anti-espuma (3.3.). O PH da solução deve ser alcalino quando verificado
com papel tornesol; se não o for, adicionar mais óxido de magnésio (3.2.).
Destilar cerca de 150 ml da solução num aparelho do tipo Kjeldahl, e
recolher o destilado num erlenmeyr contendo um volume, exactamente
medio (25 a 50 ml), de ácido sulfúrico 0,1 N (3.4.). Durante a destilação
evitar um sobreaquecimento das paredes. Deixar ferver a solução sulfúrica
durante dois minutos, arrefecer, e titular o excesso de ácido sulfúrico por
meio de uma solução de hidróxido de sódio 0,1 N (3.5.), em presença do
indicador vermelho de metilo (3.6.).
Efectuar um ensaio em branco aplicando o mesmo método, na ausência
de amostra a analisar.
6.Cálculo dos resultados
1m ld eH
2SO40,1 N corresponde a 1,7 mg de amoníaco.
Exprimir o resultado em percentagem da amostra.
Reprodutibilidade
A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas
na mesma amostra não deve ultrapassar, em valor relativo, 10 % de
amoníaco.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 9
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3.DOSEAMENTO DO FÓSFORO TOTAL
Método fotométrico
1.Objecto e domínio de aplicação
Este método permite determinar o teor de fósforo total dos alimentos para
animais. É particularmente indicado para a análise de produtos pobres em
fósforo. Nalguns casos (produtos ricos em fósforo), pode ser aplicado um
método gravimétrico.
2.Princípio
A amostra é mineralizada, quer por via seca (para os alimentos argânicos)
quer por via húmida (para os compostos minerais e os alimentos líquidos) e
posta em solução ácida. A solução é tratada pelo reagente vanadomolíbdico.
A densidade óptica da solução amarela assim formada é medida em espectro-
fotómetro a 430 nm.
3.Reagentes
3.1. Carbonato de cálcio p.a.3.2. Ácido clorídrico p.a., d: 1,1 (cerca de 6 N).3.3. Ácido azótico p.a., d: 1,045.3.4. Ácido azótico p.a., d: 1,38 a 1,42.3.5. Ácido sulfúrico p.a., d: 1,84.3.6. Reagente vanadomolíbdico: misturar 200 ml de solução de heptamolib-
dato de amónio (3.6.1.), 200 ml de solução de monovanadato de amónio
(3.6.2.) e 134 ml de ácido azótico (3.4.) num balão aferido de 1 litro.
Completar o volume com água.
3.6.1. Solução de heptamolíbdato de amónio: dissolver em água quente
100 g de heptamolibdato de amónio p.a. (NH
4) 6Mo7O24·4H2O.
Intar 10 ml de amoníaco (d: 0,91) e completar para 1 l com água.
3.6.2. Solução de monovanadato de amonio: dissolver em 400 ml de
água quente, 2,35 g de monovanadato de amónio p.a. NH4VO3.
Adicionar lentamente, e agitando sempre, 20 ml de ácido azótico
diluído (7 ml de HNO3(3.4.) + 13 ml de H2O) e completar a 1 l
com água.
3.7. Solução-padrão a 1 mg/ml de fósforo: dissolver em água 4,387 g de fósf
de potássio didrogenado p.a. KH2PO4. Completar para 1 l com água.
4.Instrumentos
4.1. Cadinhos de incineração de quartzo ou porcelana.4.2. Mufla eléctrica com termostato regulado a 550 ºC.4.3. Retorta de Kjeldahl, 250 ml.4.4. Balões aferidos e pipetas de precisão.4.5. Espectrofotómetro.4.6. Tubos de ensaio, diâmetro: cerca de 16 mm, de rosca normalizada 14,5;
capacidade: 25 a 30 ml.
5.Modo operatório
5.1.Preparação da solução
Consoante a natureza da amostra, preparar uma solução tal como indi-
cado em (5.1.1. ou 5.1.2.).
5.1.1. Caso geral
Pesar, com uma aproximação de 1 mg, 1 g de amostra. Introduzir
a amostra numa retorta de Kjeldahl, adicionar 20 ml de ácido
sulfúrico (3.5.) agitar para impregnar completamente a matéria
de ácido e evitar que adira às paredes do balão, aquecer e manter
em ebulição durante 10 minutos. Deixar arrefecer ligeiramente,
adicionar 2 ml de ácido azótico (3.4.), aquecer lentamente, deixar
arrefecer ligeiramente, juntar de novo um pouco de ácido azótico
(3.4.) e fazer ferver. Repetir estas operações até à obtenção de
uma solução incolor. Arrefecer, juntar um pouco de água, trans-1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 10
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vasar o líquido num balão aferido de 500 ml, passando a retorta
por água quente. Deixar arrefecer, completar o volume com água,
homogeneizar e filtrar.
5.1.2. Amostras contendo matérias orgânicas e isentas de didrogenofos-
fatos de cálcio e de magnésio
Pesar, com uma aproximação de 1 mg, cerca de 2,5 g de amostra
num cadinho de incineração. Misturar intimamente a amostra a
1 g de carbonato de cálcio (3.1.). Calcinar na mufla a 550 ºC
± 5 ºC até à obtenção de cinzas brancas ou cinzentas (uma
pequena quantidade de carvão não prejudica).
Transvasar as cinzas num copo de precipitação de 250 ml. Juntar
20 ml de água e de ácido clorídrico (3.2.) até que cesse a efer-
vescência. Juntar em seguida 10 ml de ácido clorídrico (3.2.) em
excesso. Colocar o copo num banho de areia e evaporar a seco
para insolubilizar o silício. Retomar o resíduo por meio de 10 ml
de ácido azótico (3.3.) e fazer ferver, durante 5 minutos num
banho de areia, sem evaporar a seco. Transvasar o líquido num
balão aferido de 500 ml lavando o copo de precipitação várias
vezes a água quente. Deixar arrefecer, completar o volume com
água, homogeneizar e filtrar.
5.2.Desenvolvimento da coloração e medição da densidade óptica.
Diluir uma alíquota do filtrado obtido em (5.1.1.) ou (5.1.2.) para obter
uma concentração em fósforo não superior a 40 µg/ml. Introduzir 10 ml
desta solução num tubo de ensaio (4.6.) e adicionar 10 ml do reagente
vanadomolíbdico (3.6.). Homogeneizar e deixar repousar 10 minutos,
pelo menos à temperatura de 20 ºC. Medir a densidade óptica em espec-
trofotómetro a 430 nm por comparação com uma solução obtida por
adição de 10 ml do reagente vanadomolíbdico (3.6.) a 10 ml de água.
5.3.Curva-padrão
Preparar a partir da solução-padrão (3.7.) soluções contendo respectiva-
mente 5, 10, 20, 30 e 40 µg de fósforo por ml. Recolher 10 ml de cada
uma destas soluções e juntar-lhes 10 ml do reagente vanadomolíbdico
(3.6.). Homogeneizar e deixar repousar 10 minutos, pelo menos, à
temperatura de 20 ºC. Medir as densidades ópticas nas condições indi-
cadas em (5.2.).
Traçar a curva-padrão marcando em ordenadas os valores da densidade
óptica e, em abcissas, as quantidades correspondentes de fósforo. A
curva é linear para as concentrações compreendidas entre 0 e 40 µg/ml.
6.Cálculo dos resultados
Determinar a quantidade de fósforo da amostra por referência à curva-padrão.Exprimir o resultado em percentagem da amostra.
Reprodutibilidade
A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas na
mesma amostra não deve ultrapassar:
3 % em valor relativo para os teores de fósforo inferiores a 5 %;0,15 em valor absoluto para os teores de fósforo iguais ou superiores a 5 %.
4.DOSEAMENTO DAS MATÉRIAS GORDAS BRUTAS
1.Objecto e domínio de aplicação
Este método tem por objectivo o doseamento do teor das matérias gordas
brutas dos alimentos para animais. Não diz respeito à análise das sementes
e frutos oleaginosos definidos no Regulamento n.
o136/66/CEE do Conselho,
de 22 de Setembro de 1966.
A utilização dos processos a seguir descritos depende da natureza e compo-
sição do alimento e da razão pela qual a análise é realizada.
1.1.Processo A — Matérias gordas brutas extraíveis directamente
Este método é aplicável a materiais simples de origem vegetal, com
excepção daqueles a que é aplicável o processo B.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 11
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1.2.Processo B — Matérias gordas brutas totais
Este método é aplicável a materiais simples de origem animal e a todos
os alimentos compostos para animais. Deve ser utilizado para todos os
materiais dos quais as matérias gordas não podem ser completamente
extraídas sem hidrólise prévia, como, por exemplo, glúten, leveduras,
proteínas de batata e produtos submetidos a processos como a extrusão,
descamação e aquecimento.
1.3.Interpretação dos resultados
Sempre que pelo processo B for obtido um resultado de valor mais
elevado do que o obtido pelo processo A, o resultado obtido com o
processo B será considerado como o verdadeiro valor.
2.Princípio
2.1.Processo A
A amostra é extraída pelo éter de petróleo. O solvente é destilado e o
resíduo seco e pesado.
2.2.Processo B
A amostra é tratada a quente pelo ácido clorídrico. A mistura é arrefe-
cida e filtrada. Depois de ter sido lavado e seco, o resíduo é submetido a
análise segundo o processo A.
3.Reagentes
3.1. Éter de petróleo, intervalo de ebulição: 40 a 60 ºC. O índice de bromo
deve ser inferior a 1 e o resíduo após evaporação inferior a 2 mg/100 ml.
3.2. Sulfato de sódio, anidro.
3.3. Ácido clorídrico 3 M.
3.4. Adjuvante de filtração, por exemplo, terra de diatomáceas, Hyflo-
-supercel.
4.Aparelhos
4.1. Extractor. Se o dispositivo for munido de um sifão (aparelho Soxhlet), o
débito do refluxo deve ser regulado de maneira a obter cerca de 10
ciclos por hora. Se se tratar de um aparelho sem sifão, o débito do
líquido refluído deve ser de cerca de 10 ml por minuto.
4.2. Filtros de extracção em forma de dedal, isentos de matérias solúveis no
éter de petróleo, com uma porosidade compatível com as exigências do
ponto 4.1.
4.3. Estufa de dessecação, quer pelo vácuo a 75 ºC ± 3 ºC, quer pela pressão
atmosférica a 100 ºC ± 3 ºC.
5.Modo operatório
5.1.Processo A (ver ponto 8.1)
Pesar 5 g de amostra, com a aproximação de 1 mg, introduzi-los num
filtro de extracção (4.2) e cobri-los com um tampão de algodão desen-
gordurado.
Colocar o filtro de extracção num extractor (4.1) e extrair durante 6
horas pelo éter de petróleo (3.1). Recolher o extracto de éter de petróleo
num balão seco, contendo fragmentos de pedra pomes(1) e pesado.
Eliminar o solvente por destilação. Secar o resíduo, colocando o balão
durante uma hora e meia numa estufa de dessecação (4.3). Deixar arre-
fecer num exsicador e pesar. Secar de novo durante 30 minutos para ter
a certeza de que o peso da matéria gorda permanece constante (a perda
de peso entre duas pesagens sucessivas deve ser inferior a 1 mg).1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 12
(1) Substituir os fragmentos de pedra pomes por pérolas de vidro sempre que a matéria
gorda deva ser objecto de exames qualitativos posteriores.
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5.2.Processo B
Pesar, com 1 mg de aproximação, 2,5 g da amostra (ver ponto 8.2),
introduzi-los num copo de 400 ml ou num balão volumétrico de 300 ml
e juntar 100 ml de ácido clorídrico 3 M (3.3) e alguns fragmentos de
pedra pomes. Cobrir o copo com um vidro de relógio ou munir o balão
volumétrico de um condensador de refluxo. Deixar ferver suavemente
durante uma hora, à chama fraca ou sobre uma placa de aquecimento.
Evitar que o produto adira às paredes do recipiente.
Arrefecer e adicionar uma quantidade de adjuvante de filtração (3.4)
suficiente para evitar qualquer perda de matéria gorda na filtração.
Filtrar com papel de filtro duplo, humidificado e isento de matérias
gordas. Lavar o resíduo com água fria até à neutralização do filtrado.
Verificar que o filtro não contém matérias gordas. A presença destas
indica que antes da hidrólise deve ser efectuada uma extracção da
amostra pelo éter de petróleo segundo o processo A.
Colocar o papel de filtro duplo contendo o resíduo num vidro de relógio
e secar durante uma hora e meia na estufa a 100 ºC ± 3 ºC.
Introduzir o papel de filtro duplo contendo o resíduo seco num filtro de
extracção (4.2) e cobrir com um tampão de algodão desengordurado.
Colocar o filtro de extracção num extractor (4.1) e prosseguir como
indicado nos segundo e terceiro parágrafos do ponto 5.1.
6.Expressão dos resultados
Exprimir o peso do resíduo em percentagem da amostra.
7.Repetibilidade
A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas na
mesma amostra pelo mesmo analista não deve ultrapassar:
— 0,2 %, em valor absoluto, para teores de matérias gordas brutas inferiores
a5% ,
— 4,0 % do resultado mais elevado para os teores de 5 a 10 %,
— 0,4 % em valor absoluto para teores superiores a 10 %.
8.Observações
8.1. Para produtos de elevado teor de matérias gordas, difíceis de triturar ou
inadequados para a colheita de uma amostra reduzida e homogénea,
proceder como se segue:
Pesar, com a aproximação de 1 mg, 20 g de amostra e misturá-los com
10 g ou mais de sulfato de sódio anidro (3.2). Extraír pelo éter de
petróleo (3.1), como indicado em 5.1. Completar o extracto obtido com
éter de petróleo (3.1) até perfazer 500 ml e misturar. Introduzir 50 ml de
solução num pequeno balão seco, contendo alguns fragmentos de pedra
pomes(1) e pesado. Eliminar o solvente por destilação, secar e prosse-
guir como indicado no último parágrafo do ponto 5.1.
Eliminar o solvente do resíduo de extracção que se encontra no filtro de
extracção, triturar o resíduo até ao calibre de 1 mm, colocá-lo nova-
mente no filtro de extracção (não adicionar sulfato de sódio) e
prosseguir como indicado nos segundo e terceiro parágrafos do ponto
5.1.
O teor de matérias gordas brutas em percentagem da amostra é dado
pela fórmula:
(10 a + b) × 5
em que:a = massa, em gramas, do resíduo da primeira extracção (alíquota do
extracto),
b = massa, em gramas, do resíduo da segunda extracção.
8.2. A amostra de ensaio de produtos pobres em matérias gordas pode ser
elevada a 5 g.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 13
(1) Substituir os fragmentos de pedra pomes por pérolas de vidro sempre que a matéria
gorda deva ser objecto de exames qualitativos posteriores.
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8.3. Os alimentos para animais de companhia com um elevado teor de água
podem ter que ser misturados com sulfato de sódio anidro antes da
hidrólise e extracção como através do processo B.
8.4. No ponto 5.2, pode ser mais eficaz utilizar água quente em vez de fria
para lavar o resíduo após filtração.
8.5. Para alguns alimentos para animais, o tempo de secagem de 1 hora e 30
minutos pode ter que ser aumentado. A secagem excessiva deve ser
evitada pois pode levar a resultados baixos. Pode também ser utilizado
um forno de microndas.
8.6. A pré-extracção pelo processo A antes da hidrólise e a re-extracção pelo
processo B são recomendadas quando o teor de matéria gorda bruta for
superior a 15 %. Em certa medida, isto depende da natureza do alimento
e da matéria gorda do alimento.1971L0393 — PT — 09.10.1998 — 004.001 — 14