1998R1459 — PT — 03.02.1999 — 001.001 — 1
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►B REGULAMENTO (CE) N.o1459/98 DA COMISSÃO
de 8 de Julho de 1998
que estabelece um método de referência para a determinação do teor de vanilina na manteiga
concentrada, na manteiga ou na nata
(JO L 193 de 9.7.1998, p. 16)
Alterado por:
Jornal Oficial
n.opágina data
►M1Regulamento (CE) n.o175/1999 da Comissão de 26 de Janeiro de 1999 L20 22 27.1.1999
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REGULAMENTO (CE) N.o1459/98 DA COMISSÃO
de 8 de Julho de 1998
que estabelece um método de referência para a determinação do
teor de vanilina na manteiga concentrada, na manteiga ou na nata
A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo emconta o Tratado que institui a Com unidade Europeia,
TendoemcontaoRegulamento(CEE)n.o804/68doConselho,de27
deJunhode1968,queestabeleceaorganizaçãocomumdemercadonosectordoleiteedosprodutoslácteos(
1),comaúltimaredacçãoquelhe
foidadapeloRegulamento(CE)n.o1587/96(2),e,nomeadamente,on.o
6 do seu artigo 6.oeon .o3 do seu artigo 12.o
ConsiderandoqueoRegulamento(CE)n.o2571/97daComissão,de15
deDezembrode1997,relativoàvendaapreçoreduzidodemanteigaeàconcessãodeumaajudaànata,àmanteigaeàmanteigaconcentradadestinadasaofabricodeprodutosdepastelaria,degeladosalimentaresede outros produtos alimentares(
3) prevê a marcação da nata, da
manteiga e da manteiga concentrada em determinadas circunstâncias,para garantir a correcta utilização final destes produtos;
Considerando que, atendendo à importância da marcação para o bom
funcionamento do regime, e de modo a garantir a igualdade de trata-mento dos operadores que nele participam, é conveniente estabelecermétodos comuns para a determinação dos marcadores referidos noRegulamento (CE) n.
o2571/97;
Considerandoqueédifícilestabeleceremsimultâneométodosderefe-
rência para todos os marcadores; que o facto de se estabelecer ummétodo de referência para a determinação do teor de vanilina namanteigaconcentrada,namanteigaenanataconstituiumpassonessesentido;
Considerando que as medidas previstas no presente regulamento estão
emconform idade como parecer do Com ité de Gestão do Leite e dosProdutos Lácteos,
ADOPTOU O PRESENTE REGULAMENTO:
Artigo 1.o
Ométododereferênciaaaplicarnadeterminaçãodoteordevanilinanamanteiga,namanteigaconcentradaenanatanoâmbitodoRegulamento(CE) n.
o2571/97éométodo de análise descrito no anexo.
A manteiga, a manteiga concentrada e a nata terão sido marcadas em
conformidadecomoartigo6.odoRegulamento(CE)n.o2571/97seos
resultados obtidos satisfizeremo especificado no ponto 8 do anexo.
Artigo 2.o
O presente regulamento entra em vigor no terceiro dia seguinte ao da
sua publicação no Jornal Oficial das Comunidades Europeias .
É aplicável a partir de 1 de Junho de 1998.
O presente regulamento é obrigatório em todos os seus elementos e
directamente aplicável em todos os Estados-membros.
(1) JO L 148 de 28. 6. 1968, p. 13.
(2) JO L 206 de 16. 8. 1996, p. 21.
(3) JO L 350 de 20. 12. 1997, p. 3.
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ANEXO
Determinação do teor de vanilina na manteiga concentrada, na manteiga ou
na nata por cromatografia líquida de alta eficiência
1.Objectivo e campo de aplicação
Este método descreve um processo de determinação quantitativa do teor
de vanilina na manteiga concentrada, na manteiga ou na nata.
É aplicável às amostras recebidas no âmbito do Regulamento (CE) n.o
2571/97.
2.Resumo do processo
Extracção de uma quantidade conhecida de amostra com uma mistura
1:1:2deisopropanol,etanoleacetonitrilo.Precipitaçãodamaiorpartedamatéria gorda por arrefecimento a uma temperatura compreendida entre−15 °Ce−20 °C,seguidodecentrifugação.Diluiçãocomáguaedetermi-
nação do teor de vanilina por cromatografia líquida de alta eficiência(HPLC).
3.Aparelhos e utensílios
Material corrente de laboratório e, especificamente:
3.1. Frigoríficocapazdemanterumatemperaturacompreendidaentre−15 °C
e −20 °C;
3.2. Seringas descartáveis de 2 ml de capacidade;3.3. Microfiltros de membrana com poros de 0,45 µm, resistentes a uma
solução com5% de solução de extracção (4.4);
3.4. Sistema de cromatografia líquida constituído por uma bomba (caudal de
1,0ml/minuto),uminjector(injecçãoautomáticaoumanualde20 µl),um
detectordeUV(reguladopara306nm,com0,01UAparatodaaescala),umregistador ou integrador e umterm óstato de coluna regulado para25°C;
3.5. Colunaanalítica(250mm×4,6mmdediâmetrointerno)comenchimento
LiChrospher RP 18 (Merck, 5 µm) ou equivalente;
3.6. Pré-coluna (cerca de 20 mm × 3 mm de diâmetro interno) com enchi-
mento a seco de Perisorb RP 18 (30-40 µm) ou equivalente.
4.Reagentes
Os reagentes serão todos de qualidade analítica reconhecida.
4.1. Isopropanol4.2. Etanol a 96% (v/v)4.3. Acetonitrilo4.4. Solução de extracção
Mistura1:1:2(v/v)deisopropanol(4.1),etanol(4.2)eacetonitrilo(4.3).
4.5. Vanilina (4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído)4.5.1. Solução de reserva de vanilina (500 µg/ml)
Pesar com a precisão de 0,1 mg aproximadamente 50 mg (CM mg) de
vanilina(4.5)numbalãoaferidode100ml;adicionar25mldesoluçãodeextracção (4.4) e completar o volume com água.
4.5.2. Solução-padrão de vanilina (10 µg/ml)
Pipetar 5,00 ml de solução de reserva de vanilina (4.5.1) para um balão
aferido de 250 ml e completar o volume com água.
4.6. Metanol para HPLC4.7. Ácido acético glacial4.8. Água para HPLC4.9. Eluente para cromatografia líquida de alta eficiência
Misturar300mlmetanol(4.6),aproximadamente500mldeágua(4.8)e
20,0mldeácidoacético(4.7)numbalãoaferidode1000mlecompletaro volum e comágua (4.8). Filtrar comumfiltro de 0,45 µm.
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5.Técnica
5.1.Preparação da toma para análise
5.1.1. Manteiga
Aquecer a amostra até ter início a fusão, evitando sobreaquecimentos
locaisacimade40 °C.Quandoaamostraestiversuficientementeplástica,
proceder à sua homogeneização sacudindo o recipiente. Remexer amanteiga durante 15 s antes de recolher uma toma para análise. Pesar,comaprecisãode1mg,aproximadament e5g(SMg)demanteiganum
balão aferido de 100 ml.
5.1.2. Manteiga concentrada
Imediatamenteantesdarecolhadatomaparaanálise,colocarorecipiente
comamantegiaconcentradanumaestufareguladapara40-50 °Catéfusão
completa.Misturaraamostra,utilizandoumsistemadevórticeoureme-xendomoderadamente,paraevitaraformaçãodebolhasdear.Pesar,coma precisão de 1 mg, aproximadament e 4 g (SM g) de manteiga concen-
trada numbalão aferido de 100 m l.
5.1.3. Nata
Aquecraamostranumbanhodeáguaounumaincubadoraàtemperatura
de35-40 °C.Homogeneizaradistribuiçãodematériagorda,utilizandoum
sistema de vórtice e, se necessário, remexendo. Arrefecer rapidamente aamostra até à temperatura de 20±2 °C. A amostra deve apresentar-se
homogénea;casocontrário,repetiroprocesso.Pesar,comaprecisãode1mg,aproximadamente10g(SMg)denatanumbalãoaferidode100ml.
5.2.Preparação da solução a analisar
Juntaraproximadamente75mldesoluçãodeextracção(4.4)àtomapara
análise(5.1.1,5.1.2ou5.1.3),remexerousacudirvigorosamentedurantecerca de 15 minutos e completar o volume com solução de extracção(4.4).Transferiraproximadamente10mldesteextractoparaumtubodeensaiocomtampa.Colocarotubonofrigorífico(3.1)edeixaremrepousocercade30minutos.Centrifugaroextractofriodurante5minutosacercade2000rpmedecantardeimediato.Deixarasoluçãodecantadaarrefeceratéàtemperaturaambiente.Pipetar5,00mldestasoluçãoparaumbalãoaferido de 100 ml e completar o volume com água. Filtrar uma alíquotacomummicrofiltrodemembrana(3.3),apósoqueofiltradoestaráprontopara a determinação por HPLC.
5.3.Calibração
Pipetar 5,00 ml de solução-padrão de vanilina (4.5.2) para um balão
aferidode100ml.Juntar5,0mldesoluçãodeextracção(4.4)ecompletarovolumecomáguaatéaotraçodeaferição.Aconcentraçãodevanilinanesta solução é de 0,5 µg/ml.
5.4.Determinação por HPLC
Estabilizarosistemacromatográficodurantecercade30minutos.Injectar
a solução-padrão (5.3) e repetir o processo até que a diferença entre asáreas ou as alturas dos picos correspondentes a duas injecções consecu-tivassejainferiora2%.Nascondiçõesdescritas,otempoderetençãodavanilinaécercade9minutos.Analisarasolução-padrão(5.3)emdupli-cado, injectando umvolum e de 20 µl. Injectar 20 µl das soluções a
analisar (5.2). Determinar a área ou a altura de cada pico de vanilinaobtido.Repetiroduplicadodasolução-padrão(5.3)após10injecçõesdesoluções a analisar (5.2).
6.Resultados
Calcularaárea(ouaaltura)média(AC)dospicosdavanilinacorrespon-
dentes às injecções emduplicado que delim itamcada lote de soluções aanalisar (quatro áreas no total).
Calcular o factor de resposta (R):
R=AC/CM
e mq u eC Méam assa de vanilina, en mg (4.5.1).
O teor (C), en mg/kg, de vanilina na toma para análise é dado pela
seguinte fórmula:
C=AS×20×0,96
SM×R
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▼B
emque:
AS = éaáreadopicodevanilinacorrespondenteàtomaparaanálise;
▼M1
S M=éam assa da toma para análise, em g (5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3).
Quandoseanalisaavanilinananata,aconcentraçãodemarcador
deveserexpressaemmgdemarcador/kgdegorduraláctea.Parao efeito, multiplica-se C por 100/f, sendo f o teor percentual dagordura da nata (m/m)
▼
B
20 = éofactorquedácontadasdiluiçõesdasolução-padrãoedatoma
para análise;
0,96 = é o factor de correcção decorrente do teor de matéria gorda da
primeira diluição da toma para análise.
Nota:
Emlugar da área dos picos, pode utilizar-se a altura destes (ver 8.3).
7.Precisão do método
7.1. Repetibilidade (r)
Adiferençaentreosresultadosdeduasdeterminaçõesefectuadasnomais
curtointervalodetempopossívelpelomesmoanalistaàmesmaamostracom os mesmos aparelhos não deve exceder 16 mg/kg.
7.2. Reprodutibilidade (R)
Adiferençaentreosresultadosdeduasdeterminaçõesefectuadasàmesma
am ostar por analistas diferentes, emlaboratórios diferentes e comapare-lhos diferentes, não deve exceder 27 mg/kg.
8.Tolerâncias
8.1. Para verificar a homogeneidade do produto marcado, recolhem-se três
amostras do mesmo.
8.2. Marcador obtido a partir de baunilha ou de vanilina de síntese.
▼
M1
8.2.1. A taxa de incorporação de 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído é de 250
gramasportoneladademanteigaconcentradaoudemanteiga.Seanataestivermarcada,ataxadeincorporaçãoéde250gramasportoneladadegordura láctea.
8.2.2. Os resultados das três amostras obtidas com a análise do produto serão
utilizadosparacomprovaratax aeahomogeneidadedeincorporaçãodo
marcadoreomenordestesresultadosserácomparadocomoslimitesque
seseguem[tendoemcontaadiferençacríticaparaumníveldeprobabili-dade de 95% (CrD95)]:
— 221,0 mg/kg (95% da taxa mínima de incorporação),
— 159,0 mg/kg (70% da taxa mínima de incorporação).
Deve usar-se a concentração de marcador na amostra que apresente o
resultado mais baixo e uma interpolação entre 221,0 mg/kg e 159,0mg/kg.
▼
B
8.3. Marcador obtido exclusivamente a partir de favas de baunilha ou de
extractos integrais destas.
▼M1
8.3.1. A taxa de incorporação de 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído é de 100
gramasportoneladademanteigaconcentradaoudemanteiga.Seanataestivermarcada,ataxadeincorporaçãoéde100gramasportoneladadegordura láctea.
8.3.2. Os resultados das três amostras obtidas com a análise do produto serão
utilizadosparacomprovaratax aeahomogeneidadedeincorporaçãodo
marcadoreomenordestesresultadosserácomparadocomoslimitesque
seseguem[tendoemcontaadiferençacríticaparaumníveldeprobabili-dade de 95% (CrD95)]:
— 79,0 mg/kg (95% da taxa mínima de incorporação),
— 54,0 mg/kg (70% da taxa mínima de incorporação).
Deve usar-se a concentração de marcador na amostra que apresente o
resultadomaisbaixoeumainterpolaçãoentre79,0mg/kge54,0mg/kg.
1998R1459 — PT — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
9.Notas
9.1. Arepetibilidad eréovalorabaixodoqualadiferençaabsolutaentredois
resultados analíticos singelos obtidos por aplicação do mesmo método àmesmaamostranasmesmascondições(mesmosaparelhos,mesmolabora-tório,numcurtointervalodetempo)temumadeterminadaprobabilidadede se situar; na falta de indicação emcontrário, essa probabilidade é de95%.
9.2. AreprodutibilidadeRéovalorabaixodoqualadiferençaabsolutaentre
dois resultados analíticos singelos obtidos por aplicação do mesmométodo à mesma amostra em condições diferentes (analistas diferentes,aparelhos diferentes, laboratórios diferentes e/ou momentos diferentes)temumadeterminadaprobabilidadedesesituar;nafaltadeindicaçãoemcontrário, essa probabilidade é de 95%.
9.3. Para uma taxa de incorporação de 250 mg/kg de buteroil, a taxa de
recuperação de vanilina adicionada varia entre 97,0 e 103,8%. O teormédio determinado foi de 99,9%, com desvio-padrão de 2,7%.
9.4. Asolução-padrãocontém5%desoluçãodeextracçãoparacompensaro
alargamento dos picos provocado pela presença de 5% da solução deextracçãodastomasparaanálise.Talpermitequeseprocedaàquantifi-cação combase na altura dos picos.
9.5. A análise baseia-se numa curva de calibração linear com ordenada na
origemzero. Utilizando para o efeito diluições apropriadas da solução--padrão (4.5.2), deve confirmar-se a linearidade na primeira vez que seefectuemasanálisese,posteriormente,aintervalosregularesedepoisdequalquer modificação ou reparação do equipamento de HPLC.