COMMISSIE VAN DE EUROPESE GEMEENSCHAPPEN 
«f^iwfiCKSg C0M(93) 698 def. 
Brussel, 7 januari 1994 
'l^'l||*,'.;f'!""'.•••;.•• ,,s,.'::';:i" ;j/!' 
M, 
1. Voorstel voor een 
RICHTLIJN VAN DE RAAD 
tot wijziging en bijwerking van Richtlijn 64/432/EEG 
inzake veterinairrechtelijke vraagstukken op het gebied van 
het intracommunautaire handelsverkeer in runderen en varkens 
(door de Commissie ingediend) 
TOELICHTING 
Recentelijk zijn communautaire voorschriften vastgesteld voor de bestrijding van 
mond- en klauwzeer, exotische ziekten en Afrikaanse varkenspest. Voorschriften 
voor de bestrijding van deze ziekten hoeven bijgevolg niet langer te worden 
opgenomen in Richtlijn 64/432/EEG betreffende het intracommunautaire 
handelsverkeer in levende varkens en runderen. De desbetreffende bepalingen in 
Richtlijn 64/432/EEG mogen bijgevolg worden vervangen door een verwijzing naar de 
betrokken richtlijn. 
In het kader van de voltooiing van de interne markt moet de eis, op grond waarvan 
dieren ten minste de laatste zes maanden vóór elke verplaatsing in een Lid-Staat 
moeten hebben verbleven, worden ingetrokken. Voorts moet de werkingssfeer van de 
richtlijn worden uitgebreid tot kalveren van minder dan 15 dagen en moeten de 
verwijzingen naar de grensposten uit de richtlijn worden gehaald. 
In het kader van de voltooiing van de interne markt moet ook de eis worden 
ingetrokken dat dieren uit landen of gebieden die als vrij van tuberculose, 
brucellose en enzoötische boviene leukose zijn erkend, vóór elke verplaatsing 
moeten worden onderzocht en dat een test op mastitis moet worden verricht bij 
melkkoeien. 
De richtlijn is sedert 1964 meer dan 40 keer gewijzigd en een bijgewerkt is 
bijgevolg aangewezen. Van deze gelegenheid is gebruik gemaakt om de bepalingen 
van de richtlijn te vereenvoudigen en te verduidelijken. 
Dat is het doel van bijgevoegd voorstel. 
Dit voorstel heeft geen financiële consequenties voor de begroting van de 
Gemeenschap. 
•voorstel 
voor een 
Richtlijn van de Raad 
van ... 
tot wijziging en bijwerking van Richtlijn 64/432/EEG 
inzake veterinairrechtelijke vraagstukken op het gebied van het 
intracommunautaire handelsverkeer in runderen en varkens 
DE RAAD VAN DE EUROPESE UNIE, 
Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese Gemeenschap, 
inzonderheid op artikel 43, 
Gezien het voorstel van de Commissie^1), 
Gezien het advies van het Europees Parlement*2), 
Gezien het advies van het Economisch en Sociaal Comité^), 
Overwegende dat aanzienlijke vooruitgang is gemaakt bij de harmonisatie op 
veterinair gebied; dat de Raad met name Richtlijn 90/425/EEG van 26 juni 1990 
inzake veterinaire en zoötechnische controles in het intracommunautaire 
handelsverkeer in bepaalde levende dieren en produkten in het vooruitzicht van de 
totstandbrenging van de interne marktt4), Richtlijn 91/496/EEG van 15 juli 1991 
tot vaststelling van de beginselen voor de organisatie van de veterinaire 
controles voor dieren uit derde landen die in de Gemeenschap worden 
binnengebracht en tot wijziging van de Richtlijnen 89/662/EEG, 90/425/EEG en 
90/675/EEG<5), Richtlijn 85/511/EEG van 18 november 1985 tot vaststelling van 
gemeenschappelijke maatregelen ter bestrijding van mond- en klauwzeer^6) en 
Richtlijn 92/119/EEG van 17 december 1992 tot vaststelling van algemene 
communautaire maatregeien voor de betrijding van bepaalde dierziekten en van 
specifieke maatregelen ten aanzien van de vesiculaire varkensziekte(7) heeft 
vastgesteld; 
(1) PB nr. C ... 
(2) PB nr. C ... 
(3) PB nr. C ... 
(4) PB nr. L 224 van 18.08.1990, blz. 29. 
(5) PB nr. L 268 van 24.09.1991, blz. 56. 
(6) PB nr. L 315 van 26.11.1985, blz. 11. 
(7) PB nr. L 62 van 15.03.1993, blz. 69. 
- 2 -
Overwegende dat bijgevolg Richt I ijn 64/432/EEG van de Raad van 26 juni 1964 
inzake veterinairrechtelijke vraagstukken op het gebied van het 
intracommunautaire handelsverkeer in runderen en varkens*8*, laatstelijk 
gewijzigd bij Richtlijn 92/102/EEG van de Raad van 5 december 1992<9), moet 
worden gewijzigd, met name ten aanzien van de periode waarin dieren in een 
Lid-Staat moeten hebben verbleven voordat zij worden vervoerd, de voorschriften 
voor de handel in dieren die jonger zijn dan 15 dagen, en de voorschriften voor 
de bestrijding van bepaalde ziekten; 
Overwegende dat Richtlijn 64/432/EEG bij verschillende gelegenheden is gewijzigd; 
dat het, verwille van de duidelijkheid, dienstig is over te gaan tot bijwerking 
van die Richt Iijn; 
HEEFT DE VOLGENDE RICHTLIJN VASTGESTELD : 
Artikel 1 
De tekst van Richtlijn 64/432/EEG wordt vervangen door de tekst in de bijlage I 
van deze Richt Iijn. 
Artikel 2 
De Lid-Staten doen de nodige wettelijke en bestuursrechtelijke bepalingen in 
werking treden om uiterlijk op 1 juli 1994 te voldoen aan het bepaalde in deze 
richtlijn. Zij stellen de Commissie daarvan onverwijld in kennis. 
Wanneer de Lid-Staten deze bepalingen aannemen, wordt in die bepalingen naar de 
onderhavige richtlijn verwezen of wordt hiernaar verwezen bij de officiële 
bekendmaking van die bepalingen. De regels voor deze verwijzing worden door de 
Lid-Staten vastgesteld. 
Artikel 3 
Deze richtlijn is gericht tot de Lid-Staten. 
(8) PB nr. 121 van 29.07.1964, blz. 1977/64. 
(9) PB nr. L 355 van 5.12.1992, blz. 32. 
- 3 -
BIJLAGE 
Artikel 1 
Deze richtlijn heeft betrekking op het intracommunautaire handelsverkeer van 
runderen en varkens. 
Artikel 2 
In deze richtlijn wordt verstaan onder : 
a) bedrijf : een bedrijf als omschreven in artikel 2 van Richtlijn 90/425/EEG van 
de Raad: 
b) slachtdieren : 
runderen (inclusief die van de soort Bubal us bubalus) en varkens die zijn 
bestemd om te worden vervoerd naar een slachthuis, dan wel naar een markt 
vanwaar ze nog uitsluitend naar een slachthuis mogen worden gebracht: 
c) fok- en gebruiksdieren : 
andere dan de onder b) bedoelde runderen (met inbegrip van de soort Bubalus 
bubalus) en varkens, met name fokdieren en dieren die zijn bestemd voor de 
melk- en vleesproduktie of om als trekkracht te worden gebruikt; 
d) officieel tuberculosevriJ rundveehouderijbedrijf : 
een rundveehouderijbedrijf dat aan de in bijlage A, I, punten 1. 2 en 3. 
vastgestelde eisen voldoet; 
e) officieel tuberculosevriie Lid-Staat of officieel tuberculosevriJ deel van een 
Lid-Staat : 
een Lid-Staat die of een deel van een Lid-Staat dat aan de in biilaoe A. i. 
punten 4. 5 en 6 vastgestelde eisen voldoet: 
f) officieel brucellosevriJ rundveehouderijbedrijf : 
een rundveehouderijbedrijf dat aan de in bijlage A, II punten 1. 2 en 3. 
vastgestelde eisen voldoet; 
- 4 -
g) officieel brucellosevrii gebied : 
een deel van een Lid-Staat dat aan de in bijlage A. II. punten 7. 8 en 9. 
vastgestelde eisen voldoet: 
h) officieel brucellosevriJe Lid-Staat : 
een Lid-Staat die aan de in bijlage A. II. punten 10. 11 en 12. vast­
gestelde eisen voldoet: 
i) bruceIlosevr i j rundveehouder i Jbedr i Jf : 
een rundveehouderijbedrijf dat aan de in bijlage A, II, punten 4. 5 en 6. 
vastgestelde eisen voldoet; 
j) van enzoötische boviene leukose vrij bedrijf : 
een bedrijf dat aan de in bijlage D, hoofdstuk I. delen A en B. vast­
gestelde eisen voldoet; 
k) van enzoötische boviene leukose vrije Lid-Staat of van enzoötische boviene 
leukose vrij gebied : 
een Lid-Staat die of een gebied dat aan de in bijlage D. hoofdstuk I. delen 
E. F en G. vastgestelde eisen voldoet. 
I) officiële dierenarts 
de door de bevoegde centrale autoriteit van de Lid-Staat aangewezen 
dierenarts. 
Artikel 3 
1. Elke Lid-Staat ziet erop toe dat alleen dieren die aan de bij deze richtlijn 
vastgestelde voorwaarden voldoen, in voorkomend geval, van zijn grondgebied 
naar dat van een andere Lid-Staat worden verzonden. 
2. Voor de in deze richtlijn bedoelde runderen en varkens geldt hetgeen volgt : 
a) bij deze dieren moet door een officiële dierenarts een gezondheidsonderzoek 
en een identiteitscontrole worden verricht en zij mogen geen klinische 
ziektesymptomen vertonen: 
- 5 -
b) zij mogen niet afkomstig zijn van een bedrijf of uit een gebied waarvoor, 
OP grond van de communautaire of de nationale wetgeving, om gezondheids­
redenen verbodsbepalingen van toepassing zijn ten aanzien van de betrokken 
diersoort: 
c) zij moeten worden geïdentificeerd overeenkomstig het bepaalde in 
Richtlijn 90/102/EEG; 
d) het mag niet gaan om dieren die moeten worden geslacht in het kader van een 
nationaal programma voor de uitroeiing van een besmettelijke dierziekte; 
e) zii moeten voldoen aan het bepaalde in artikel 4 en artikel 5. 
Artikel 4 
1. De in deze richtlijn bedoelde runderen en varkens mogen tussen het moment 
waarop zii het bedrijf van herkomst verlaten en dat waarop zij op de plaats 
van bestemming in een andere Lid-Staat aankomen, op geen enkel moment in 
contact komen met evenhoevige dieren die niet aan de voor het intracom­
munautaire handelsverkeer geldende voorwaarden voldoen. 
2. De in deze richtlijn bedoelde runderen en varkens moeten worden vervoerd in 
vervoermiddelen die vooraf zijn gereinigd en ontsmet met een in de Lid-Staat 
van herkomst officieel erkend ontsmettingsmiddel. De vervoermiddelen moeten zo 
zijn gebouwd dat uitwerpselen, urine, strooi sel of voeder tijdens het vervoer 
niet uit het voertuig kunnen lopen of vallen. 
3. De voorschrifte_n_ voor de erkenning van de plaatsen waar ontsmetting mag 
plaatsvinden en de procedures om ervoor te zorgen dat het bepaalde in lid 2 
hierboven wordt nageleefd en om de nodige controles daarop te verrichten, 
worden vastgesteld volgens de procedure van artikel 12. 
- 6 -
Artikel 5 
1. De in deze richtlijn bedoelde runderen en varkens moeten tijdens het vervoer 
naar de plaats van bestemming vergezeld gaan van een gezondheidscertificaat 
volgens het model in bijlage F. Het certificaat bestaat uit een enkel blad en 
moet een volgnummer dragen. Het moet worden opgesteld op de dag waarop het 
gezondheidsonderzoek wordt verricht, in ten minste één van de officiële talen 
van het land van bestemming. Het certificaat is 10 dagen geldig vanaf de datum 
van het gezondheidsonderzoek. Wanneer het gezondheidsonderzoek evenwel 
plaatsvindt nadat de dieren het bedrijf van herkomst hebben verlaten, 
overeenkomstig het bepaalde in lid 2 hieronder, is het certificaat 10 dagen 
geldig vanaf de datum waarop de dieren het bedrijf van herkomst hebben 
ver laten. 
2. Het gezondheidsonderzoek en het afgeven van het gezondheidscertificaat voor 
een zending dieren mogen plaatsvinden op het bedrijf van herkomst of op de 
plaats van inlading. In dit laatste geval moet de officiële dierenarts die het 
certificaat afgeeft, in het bezit zijn gesteld van de nodige bewijsstukken die 
zijn afgegeven door de officiële dierenarts die verantwoordelijk is voor het 
bedrijf van herkomst, hetzij in de vorm van een officieel document met de 
nodige gegevens, hetzij in de vorm van het certificaat volgens het model in 
bijlage F. waarin de delen A en B naar behoren zijn ingevuld en 
gecertificeerd. Het adres van een eventueel tussenstation, bijvoorbeeld een 
erkende markt of een erkende verzamelplaats (deel C) moet ook worden ingevuld 
door de officiële dierenarts die verantwoordelijk is voor het bedrijf van 
herkomst. 
3. De officiële dierenarts die verantwoordelijk is voor het tussenstation, dient 
te certificeren dat de dieren daar zijn aangekomen en dient eventueel ook het 
definitieve intracommunautaire certificaat in te vullen (bijlage F. deel D). 
Wanneer de dieren zonder tussenstation worden vervoerd, moet het definitieve 
intracommunautaire certificaat worden ingevuld door de officiële dierenarts 
die verantwoordelijk is voor het bedrijf van herkomst. 
4. De officiële dierenarts die bijlage F. deel D. invult, dient ervoor te zorgen 
dat de verplaatsing wordt ingevoerd in het netwerk ANIMO. 
5. Tussenstations ten behoeve van het intracommunautaire handelsverkeer, met name 
markten of verzamelplaatsen, moeten aan de volgende voorwaarden voldoen : 
- 7 -
a) zii moeten onder toezicht staan van een officiële dierenarts die erop moet 
toezien dat met name aan het bepaalde in artikel 4. lid 1 en lid 2. wordt 
voidaan en die moet zorgen voor de hierboven bedoelde certificering. De 
taken van de officiële dierenarts kunnen nader worden gespecificeerd aan de 
hand van en volgens de procedure van artikel 12 vast te stellen 
beschikking; 
b) zii moeten gelegen zijn in een gebied ten aanzien waarvan geen 
verbodsbepalingen gelden op grond van de communautaire wetgeving; 
c) zii moeten vóór gebruik worden gereinigd en ontsmet, volgens de instructies 
van de voor de inrichting verantwoordelijke officiële dierenarts: 
d) zii moeten door de Lid-Staat van herkomst als erkende markt of als erkende 
verzamelplaats worden aangewezen. Deze erkenning kan ook worden verleend 
voor een bepaalde diersoort, voor fok- e n gebruiksdieren o f voor 
slachtdieren. De Lid-Staat deelt aan de bevoegde centrale autoriteit van de 
andere Lid-Staten en aan de Commissie mede welke markten en 
verzamelplaatsen zijn erkend. 
6. Een tussenstation kan ook een officieel erkende markt z i in in een andere 
Lid-Staat dan de Lid-Staat van bestemming. In dat geval moet het certificaat 
volgens het model in bijlage F (inclusief deel D) worden ingevuld door de 
bevoegde officiële dierenarts in de Lid-Staat van herkomst van de dieren. De 
officiële dierenarts die verantwoordelijk is voor de markt dient de bestemming 
van de dieren te certificeren door een tweede certificaat volgens het model in 
bijlage F in te vullen, op de keerzijde daarvan van het volgnummer van het 
originele certificaat aan te brengen en het aan het originele certificaat of 
een kopie daarvan te hechten. 
- 8 
Artikel 6 
1. Fok- en gebruiksdieren moeten, afgezien van het bepaalde in de artikelen 3. 4 
en 5. aan de volgende voorwaarden voldoen : 
- zij moeten de laatste 30 dagen vóór het inladen of, indien zij minder dan 
30 dagen oud zijn, sedert hun geboorte, hebben verbleven op het bedrijf van 
herkomst. De officiële dierenarts dient er zich, aan de hand van de 
officiële identificatie als bedoeld in artikel 3. lid 2. onder c). en de 
officieel geregistreerde gegevens, van te vergewissen dat de dieren aan 
deze voorwaarde voldoen en dat zij bovendien van oorsprong zijn uit de 
Gemeenschap of, met inachtneming van de communautaire veterinairrechtelijke 
voorschriften, uit een derde land zijn ingevoerd ; 
- dieren die uit een derde land worden ingevoerd in een Lid-Staat die niet de 
Lid-Staat van uiteindelijke bestemming i s, moeten zo snel mogelijk naar de 
Lid-Staat van bestemming worden vervoerd, vergezeld van een certificaat dat 
is afgegeven vanop grond van artikel 7 van Richtlijn 91/496/EEG van de 
Raad. Na aankomst op de plaats van be stemming moeten deze dieren, om verder 
te mogen worden vervoerd, yp.ldoen..aan_.het bepaalde in deze richtli jn en met 
name aan de in het eerste streepje vastgestelde eis inzake verblijf. 
2. Fok- en gebruiksrunderen moeten, afgezien van het bepaalde in de artikelen 3. 
4 en 5. aan de volgende voorwaarden voldoen : 
a) zij moeten afkomstig zijn van een officieel tuberculosevrij rundvee­
houderijbedrijf en moeten, wanneer het gaat om dieren die ouder zijn dan 6 
weken, negatief hebben gereageerd op een intradermale tuberculinatie die is 
verricht in de laatste 30 dagen voordat zij het bedrijf van herkomst hebben 
verlaten, overeenkomstig het bepaalde in bijlage B, punt 32, onder d). 
De intradermale tuberculinatie is niet vereist wanneer de dieren afkomstig 
zijn uit een Lid-Staat die of een deel van een Lid-Staat dat als officieel 
tuberculosevr i j is erkend. 
V - 9 -
b) wanneer het gaat om niet-gecastreerde dieren, moeten zij afkomstig zijn van 
een officieel brucellosevrij rundveehouderijbedrijf en moet, wanneer de 
dieren ouder zijn dan 12 maanden, bij een serumagglutinatietest die in de 
laatste 30 dagen voordat zij het beslag van herkomst hebben verlaten, bij 
de dieren is verricht overeenkomstig het bepaalde in bijlage C, deel A, een 
brucellat iter zijn aangetoond van minder dan 30 internationale 
agglutinatie-eenheden per milliliter. 
De serumagglutinatietest is niet vereist wanneer de dieren afkomstig zijn 
uit een Lid-Staat die of een deel van een Lid-Staat dat officieel 
brucellosevr ij is; 
c) zij moeten afkomstig zijn van een van enzoötische boviene leukose vrij 
bedrijf als bedoeld in artikel 2, onder g); 
d) zii mogen tussen het moment waarop zij het bedrijf van herkomst hebben 
verlaten en dat waarop zij op de plaats van bestemming aankomen op geen 
enkele wijze in contact komen met dieren die alleen aan het bepaalde in 
artikel 6. lid 3. voldoen. 
3. Slachtrunderen moeten, afgezien van het bepaalde in de artikelen 3. 4 en 5. 
afkomstig zijn van bedrijven die officieel tuberculosevrij en vrij van 
enzoötische boviene leukose zijn, en bovendien, wanneer het gaat om niet-
gecastreerde runderen, officieel brucellosevriJ. 
Artikel 7 
Slachtdieren die bij aankomst in de Lid-Staat van bestemming onmiddellijk naar 
het slachthuis zijn gebracht, moeten zo spoedig mogelijk worden geslacht met 
inachtneming van de veterinairrechtelijke voorschriften ter zake. 
Slachtdieren die bij aankomst in de Lid-Staat van bestemming naar een markt zijn 
gebracht waarvoor een regeling geldt dat alle dieren na afloop van de markt naar 
een daartoe door de bevoegde centrale autoriteit erkend slachthuis moeten worden 
gebracht, moeten uiterlijk 5 dagen nadat zij op de markt zijn aangekomen, in dat 
slachthuis worden geslacht. 
- 10 -
Artikel 8 
Eenieder die de aanwezigheid van een van de in bijlage E (I) genoemde ziekten 
vermoedt, dient daarvan zo spoedig mogelijk melding te maken bij de bevoegde 
autoriteit en dient, in voorkomend geval, de eigenaar of houder van de dieren 
daarvan in kennis te stellen. 
Elke Lid-Staat stuurt de Commissie uiterlijk op 31 mei van elk Jaar alle gegevens 
over de gevallen van tuberculose, brucellose en enzoötische boviene leukose die 
zich In het afgelopen kalenderjaar op ziln grondgebied hebben voorgedaan, samen 
met de gegevens inzake het aantal bedrijven waaraan ten aanzien van elke ziekte 
een bepaalde status is verleend, en gegevens over de controle- of 
uitroeiingsprogramma's die in elk gebied worden uitgevoerd. Inhoud en vorm van de 
te verstrekken informatie worden vastgesteld door de Commissie. De Commissie legt 
deze gegevens aan de Lid-Staten voor in het kader van het Permanent Veterinair 
Comité en zii kan daarvan met name gebruik maken met betrekking tot de in de 
bijlagen A en D bedoelde beschikkingen. 
Artikel 9 
1. Wanneer een Lid-Staat een bindend nationaal programma voor de bestrijding van 
een van de in bil lage E(11) genoemde besmettelijke ziekten voorstelt voor zijn 
grondgebied of een deel daarvan, kan hij dat programma bij de Commissie 
indienen, met vermelding van : 
- de mate waarin de ziekte zich in de Lid-Staat heeft verspreid, 
- de motivering voor het programma, met name de belangrijkheid van de ziekte 
en de kosten-batenanalyse; 
- het geografische gebied waar het programma zal worden toegepast, 
- de aan de diverse inrichtingen toe te kennen gezondheidsstatus, de normen 
waaraan voor elke status moet worden voldaan, en de toe te passen 
testmethoden; 
- 11 -
- de in het kader van het programma toe te passen controlemethoden, waarvan 
de resultaten ten minste Jaarlijks aan de Commissie moeten worden 
medegedeeld; 
- de maatregeien die moeten worden genomen wanneer een inrichting om welke 
reden ook zijn status verliest; 
- de maatregelen die moeten worden genomen wanneer de op grond van het 
programma te verrichten tests een positief resultaat opleveren. 
2. De Commissie onderzoekt de door de Lid-Staten ingediende programma's. De in 
lid 1 bedoelde programma's kunnen, met inachtneming van de in lid 1 
vastgestelde criteria, worden goedgekeurd volgens de procedure van artikel 12. 
Volgens dezelfde procedure kunnen terzelfder tijd of uiterlijk 3 maanden na de 
goedkeuring van het programma ook de algemene of beperkte aanvullende 
garanties worden vastgesteld die in het intracommunautaire handelsverkeer 
kunnen worden geëist. Deze garanties mogen niet strenger zijn dan die welke de 
Lid-Staat in nationaal verband hanteert. 
3. Het door een Lid-Staat ingediende programma kan worden gewijzigd of aangevuld 
volgens de procedure van artikel 12. Volgens dezelfde procedure kunnen 
wijzigingen of aanvullingen op een eerder goedgekeurd programma of op de 
overeenkomstig lid 2 vastgestelde garanties worden goedgekeurd. 
Artikel 10 
1. Wanneer een Lid-Staat van oordeel is dat hij geheel of gedeeltelijk vrij is 
van een van de in bijlage E(ll) genoemde ziekten, stelt hij de Commissie in 
het bezit van de nodige bewijsstukken; die betreffen met name : 
- de aard van de ziekte en de wijze waarop de ziekte zich op zijn grondgebied 
heeft gemanifesteerd; 
- 12 -
- de resultaten van de tests die in het kader van een bewakingsprogramma zijn 
uitgevoerd op grond van serologisch, microbiologisch, pathologisch of 
epizoötiologisch onderzoek en van de wettelijk verplichte melding van de 
ziekte bij de bevoegde authoriteiten; 
- de looptijd van het bewakingsprogramma; 
- eventueel de periode waarin inenting tegen de ziekte is verboden en het 
geografische gebied waarvoor dat verbod geldt; 
- de voorschriften voor de controle op de afwezigheid van de ziekte. 
2. De Commissie onderzoekt de door de Lid-Staat ingediende bewijsstukken. De 
algemene of beperkte aanvullende garanties die in het intracommunautaire 
handelsverkeer kunnen worden geëist, kunnen worden vastgesteld volgens de 
procedure van artikel 12. Deze garanties mogen niet strenger zijn dan die 
welke de Lid-Staat in nationaal verband hanteert. 
3. De betrokken Lid-Staat stelt de Commissie in kennis van elke wijziging in de 
in lid 1 bedoelde gegevens met betrekking tot de ziekte, met name in verband 
met nieuwe ziekte-uitbraken. De vastgestelde garanties als bedoeld in lid 2, 
kunnen naar aanleiding van de medegedeelde informatie worden gewijzigd of 
ingetrokken volgens de procedure van artikel 12. 
Artikel 11 
De bijlagen bij deze richtlijn kunnen worden gewijzigd volgens de procedure van 
artikel 12. 
Bii wijze van uitzondering op het bepaalde in deze richtlijn kunnen volgens de 
procedure van artikel 12 bijzondere voorwaarden voor de handel in dieren voor 
bijzondere doeleinden, met name voor tentoonstellingen, worden vastgesteld. 
- 13 
Artikel 12 
1. In de gevallen waarin wordt verwezen naar de in dit artikel omschreven 
procedure, leidt de voorzitter van het bij besluit van de Raad van 
15 oktober 1968 ingestelde Permanent Veterinair Comité, hierna het "comité" 
genoemd, deze procedure, hetzij op eigen initiatief, hetzij op verzoek van een 
Lid-Staat, onverwijld in bij het comité. 
2. In het comité worden de stemmen van de Lid-Staten gewogen overeenkomstig het 
bepaalde in artikel 148, lid 2, van het Verdrag. De voorzitter neemt niet aan 
de stemming deel. 
3. De vertegenwoordiger van de Commissie legt een ontwerp voor van de te nemen 
maatregelen. Het comité brengt over deze maatregelen advies uit binnen een 
termijn die de voorzitter kan vaststellen naar gelang van de urgentie van de 
materie. Het comité spreekt zich uit met een meerderheid van 54 stemmen. 
4. De Commissie stelt de maatregelen vast en legt deze onmiddellijk ten uitvoer 
wanneer zij in overeenstemming zijn met het advies van het comité. Wanneer zij 
hiermee niet in overeenstemming zijn of wanneer het comité geen advies heeft 
uitgebracht, legt de Commissie onverwijld een voorstel voor aan de Raad 
betreffende de te nemen maatregelen. 
De Raad stelt de maatregelen vast met gekwalificeerde meerderheid van stemmen. 
Indien de Raad binnen drie maanden na indiening van het voorstel geen maatregelen 
heeft vastgesteld, stelt de Commissie de voorgestelde maatregelen vast en legt 
zij deze onmiddellijk ten uitvoer. 
Artikel 13 
1. In de gevallen waarin wordt verwezen naar de in dit artikel omschreven 
procedure leidt de voorzitter van het bij besluit van de Raad van 
15 oktober 1968 ingestelde Permanent Veterinair Comité, hierna het "comité" 
genoemd, deze procedure, hetzij op eigen initiatief, hetzij op verzoek van een 
Lid-Staat, onverwijld in bij het comité. 
- 14 -
2. In het comité worden de stemmen van de Lid-Staten gewogen overeenkomstig het 
bepaalde in artikel 148, lid 2, van het Verdrag. De voorzitter neemt niet aan 
de stemming deel. 
3. De vertegenwoordiger van de Commissie dient een ontwerp in van de te nemen 
maatregelen. Het comité brengt over deze maatregelen advies uit binnen een 
termijn van 2 dagen. Het comité spreekt zich uit met een meerderheid van 54 
stemmen. 
4. De Commissie stelt de maatregelen vast en legt deze onmiddellijk ten uitvoer, 
wanneer zij in overeenstemming zijn met het advies van het comité. Wanneer zij 
hiermee niet in overeenstemming zijn of wanneer het comité geen advies heeft 
uitgebracht, legt de Commissie onverwijld een voorstel voor aan de Raad 
betreffende de te nemen maatregelen. 
De Raad stelt de maatregelen vast met gekwalificeerde meerderheid van stemmen. 
Indien de Raad binnen 15 dagen na indiening van het voorstel geen maatregelen 
heeft vastgesteld, stelt de Commissie de voorgestelde maatregelen vast en legt 
zij deze onmiddellijk ten uitvoer. 
Artikel 14 
De voorschriften van Richtlijn 90/425/EEG van de Raad van 26 Juni 1990 inzake 
veterinaire en zoötechnische controles in het intracommunautaire handelsverkeer 
in bepaalde levende dieren en produkten in het vooruitzicht van de 
totstandbrenging van de interne markt, laatstelijk gewijzigd bii 
Richtlijn 92/60/EEG van de Raad van 30 Juni 1992(10>. zijn met name van 
toepassing op de controles bij de oorsprong, de organisatie en de follow-up van 
de door het land van bestemming te verrichten controles en de ten uitvoer te 
leggen vriJwaringsmaatregel en. 
Artikel 15 
D@ze richtlijn is gericht tot de Lid-Staten. 
(10) PB nr. L 268 van 24.09.1992, blz. 75. 
BIJLAGE A 
I. OFFICIEEL TUBERCULOSEVRIJE RUNDVEEHOUDERIJBEDRIJVEN 
1. Een rundveehouderijbedrijf is officieel tuberculosevr»i : 
a) indien alle dieren vrij zijn van klinische symptomen van tuberculose; 
b) indien alle dieren die ouder zijn dan zes weken, negatief hebben gereageerd 
OP ten minste twee officiële intradermale tuberculinaties die overeen­
komstig het bepaalde in bijlage B zijn verricht, waarbij de eerste test 
moet zijn verricht zes maanden nadat een eventuele besmetting op het 
bedrijf is uitgeroeid en de tweede zes maanden later, of waarbij, wanneer 
het gaat om een bedrijf dat uitsluitend bestaat uit dieren die afkomstig 
zijn uit officieel tuberculosevriJe bedrijven, de eerste test moet zijn 
verricht ten minste 60 dagen nadat de dieren zijn bijeengebracht, zonder 
dat een tweede test vereist is; 
c) indien, nadat de eerste, onder b) hierboven bedoelde test, is verricht, 
geen enkel rund dat ouder is dan zes weken, op het bedrijf is binnen­
gebracht, tenzij het negatief heeft gereageerd op een intradermale tuber­
cul inat ie die is uitgevoerd en geëvalueerd overeenkomstig het bepaalde in 
bijlage B en die is verricht hetzij in de laatste 30 dagen vóór, hetzij 
binnen 30 dagen na de datum waarop het dier op het bedrijf is binnen­
gebracht . 
Deze test is niet vereist wanneer in de Lid-Staat het percentage met 
tuberculose besmette rundveehouderijbedrijven minder dan 0.2% bedraagt en 
wanneer het dier afkomstig is uit een officieel tuberculosevriJ bedrijf. 
2. Een rundveehouderiJbedriIf behoudt de status van officieel tuberculosevriI 
bedri if : 
a) zolang aan de in punt 1. onder a) en c). vastgestelde voorwaarden wordt 
voldaan; 
_«16~ 
b) indien alle dieren die OP het bedrijf worden binnengebracht, afkomstig zijn 
van officieel tuberculosevriie bedrijven; 
c) indien bij alle dieren op het bedrijf, met uitzondering van kalveren van 
minder dan zes weken die OP het bedrijf ziJn geboren, om het Jaar als 
routinetest een tuberculinatie wordt uitgevoerd overeenkomstig het bepaalde 
in b 8 JI age B. 
Wanneer voor alle rundveehouderijbedrijven in een Lid-Staat of een deel van 
een Lid-Staat evenwei officiële maatregelen voor de bestrijding van 
tuberculose gelden, kan de Commissie, volgens de procedure van artikel 12. 
de frequentie van de routinetests ais volgt wijzigen : 
indien in de laatste twee controleperioden van telkens één Jaar gemiddeld 
niet meer dan 1 % van de rundveehouderijbedrijven met tuberculose besmet 
was, mogen de routinetests voortaan om de twee Jaar worden verricht: 
indien in de laatste twee controleperioden van telkens twee Jaar gemiddeld 
niet meer dan 0.2 % van de rundveehouderijbedrijven met tuberculose besmet 
was, mogen de routinetests voortaan om de drie Jaar worden verricht: 
indien in de laatste twee controleperioden van telkens drie Jaar gemiddeld 
niet meer dan 0.1 % van de rundveehouderijbedrijven met tuberculose besmet 
was, mogen de routinetests voortaan om de vier iaar worden verricht en/of 
mag de leeftijd van de te onderzoeken dieren worden verhoogd tot 24 
maanden. 
De Commissie kan, volgens de procedure van artikel 13. ook besluiten de 
frequentie van de routinetubercuiinaties te verhogen, indien blijkt dat de 
ziekte uitbreiding heeft genomen. 
3. De status van officieel tuberculosevriI rundveehouder Mbedrijf wordt 
geschorst : 
a) indien niet aan de in punt 2 hierboven vastgestelde voorwaarden wordt 
voldaan: 
b) indien een dier geacht wordt positief te hebben gereageerd OP een 
routinetubercuiinatie. of indien een geval van tuberculose is geconstateerd 
bij de routinekeuring na het slachten. 
-A*-
In dat geval blijft de status geschorst totdat alle resterende dieren die 
ouder zi in dan zes weken, negatief hebben gereageerd op ten minste twee 
officiële intradermale tuberculinaties die overeenkomstig bijlage B zijn 
verricht, de eerste ten minste twee maanden nadat het betrokken dier uit 
het bedrijf is verwijderd en de tweede ten minste 42 dagen na de eerste. 
Wanneer evenwel de in punt 2. onder c). hierboven omschreven routinetest OP 
het bedrijf niet tijdig is verricht, wordt de status van het bedrijf niet 
geschorst OP voorwaarde dat de test alsnog wordt verricht binnen 60 dagen 
na de oorspronkelijk daarvoor vastgestelde datum, en dat de daaropvolgende 
tests worden verricht volgens het oorspronkelijke tijdschema: 
c) indien OP het bedrijf dieren aanwezig zijn met een twijfelachtige status 
als omschreven in bijlage B. punt 32. In dat geval blijft de status van 
het bedrijf geschorst totdat duidelijkheid is verkregen omtrent de status 
van de dieren. 
4. Een Lid-Staat of een deel van een Lid-Staat kan officieel tuberculosevrii 
worden verklaard volgens de procedure van artikel 12. Indien aan de volgende 
voorwaarden wordt voldaan : 
a) in de laatste zes Jaar is OP geen enkel moment meer dan 0.01 % van de 
rundveehouderijbedrijven besmet geweest en sedert 10 Jaar is ten minste 
99.9 X van de bedrijven officieel tuberculosevrii: 
b) aan de hand van een identificatiesysteem kan voor elk rund het bedrijf van 
herkomst en dat van doorgang worden bepaald: 
c) bii aile geslachte runderen moet door een officiële dierenarts een keuring 
na het slachten worden verricht: 
d) in alle gevallen waarin besmetting met tuberculose wordt vermoed, dient een 
grondig onderzoek te worden ingesteld, in het kader waarvan alle bedrijven 
van herkomst of van doorgang worden opgespoord en onderzocht en de nodige 
laboratoriumtests worden verricht. Zolang dat onderzoek aan de gang is 
wordt de officieel tuberculosevriJe status van het bedrijf van herkomst of 
van doorgang geschorst totdat OP basis van het klinisch onderzoek, de 
laboratoriumtests en/of de tuberculinaties besmetting met runder tuberculose 
kan worden uitgesloten. 
-Xtf-
5. De Lid-Staat of het deel van een Lid-Staat blijft officieei tuberculosevrN : 
a) zolang aan de in punt 4. onder a) tot en met d). vastgestelde voorwaarden 
wordt voldaan: 
b) indien, wanneer een geval van tuberculose wordt bevestigd, de officieei 
tuberculosevriJe status van het bedrijf van herkomst en van doorgang wordt 
ingetrokken: 
c) indien de officieei tuberculosevriJe status van bedrijven waar tuberculose 
is bevestigd, ingetrokken blijft totdat : 
- alle dieren die als besmet worden beschouwd, zijn geslacht: 
- het bedrijf en alle gereedschap zijn ontsmet; 
- alle resterende runderen die ouder zijn dan zes weken, negatief hebben 
gereageerd OP ten minste twee officiële intradermale tuberculinaties die 
overeenkomstig bijlage B zijn verricht, de eerste ten minste zes maanden 
nadat de besmette dieren zijn verwijderd, de tweede zes maanden na de 
eerste. 
6. Indien blijkt dat zich een belangrijke wijziging heeft voorgedaan in de 
situatie ten aanzien van tuberculose in een Lid-Staat die of een deel van een 
Lid-Staat dat als officieei tuberculosevriJ is erkend, kan de Commissie 
volgens de procedure van artikel 13 de status schorsen of intrekken, en eisen 
dat routinetubercuiinaties worden verricht volgens een van de in punt 2. onder 
c). hierboven vastgestelde schema's. 
~A*i-
II. OFFICIEEL BRUCELLOSEVRIJE EN BRUCELLOSEVRIJE RUNDVEEHOUDERIJBEDRIJVEN 
In het kader van bijlage A.ll wordt onder "runderen" verstaan, al ie runderen 
behalve mannelijke dieren die ziJn gecastreerd voordat zU vier maanden oud 
waren. 
1. Een rundveehouderilbedrlif is officleel brucellosevrii : 
a) indien OP het bedrijf geen runderen aanwezig zijn die tegen brucellose ziJn 
Ingeënt, tenzij het vrouwelijke dieren betreft die ten minste drie Jaar 
geleden zi in ingeënt; 
b) indien alle runderen sedert ten minste zes maanden vrij ziJn van klinische 
symptomen van brucellose; 
c) indien alle runderen die ouder ziJn dan 12 maanden, negatief hebben 
gereageerd OP de tests die volgens een van de onderstaande schema's zijn 
uitgevoerd overeenkomstig bijlage C : 
i) twee serumagglutinatietests met een tussenpoos van ten minste drie en 
ten hoogste twaalf maanden; 
i i) drie ringtests met een tussenpoos van telkens drie maanden, ten minste 
zes weken later gevolgd door een serumagglutinatietest: 
i i i) twee gebufferde brucella-antIgeentests met een tussenpoos van ten 
minste drie en ten hoogste twaalf maanden: 
iv) twee micro-agglutinatietests met een tussenpoos van ten minste drie en 
ten hoogste twaalf maanden. 
2. Een rundveehouderiibedriJf behoudt zün officieel brucellosevriie status : 
a) indien de tests die jaarlijks volgens een van de onderstaande schema's 
worden uitgevoerd overeenkomstig bijlage C. een negatief resultaat hebben 
opgeleverd : 
i) drie ringtests met een tussenpoos van ten minste drie maanden; 
-%o-
i i) drie Elisa's met meikmonster. met een tussenpoos van ten minste drie 
maanden: 
i i i) twee ringtests met een tussenpoos van ten minste drie maanden, ten 
minste zes maanden later gevolgd door een serologische test; 
iv) twee Elisa's met meikmonster. met een tussenpoos van ten minste drie 
maanden, ten minste zes weken later gevolgd door een serologische 
test: 
v) twee serologische tests met een tussenpoos van ten minste drie en ten 
hoogste zes maanden. 
Voor een Lid-Staat die of een deel van een Lid-Staat dat niet officieei 
brucellosevriJ is maar waar voor alle rundveehouderijbedrijven officiële 
maatregelen voor de bestrijding van brucellose gelden, kan de Commissie 
volgens de procedure van artikel 12 de frequentie van de routinetests als 
volgt wiJzigen : 
- wanneer ten hoogste 1% van de rundveehouderijbedrijven besmet is. 
behoeven Jaarlijks slechts twee ringtests of twee Elisa's met meikmonster 
te worden verricht met een tussenpoos van ten minste drie maanden, of één 
serologische test; 
- wanneer ten minste 99.8X van de rundveehouderijbedrijven sedert ten 
minste vier Jaar als officieel brucellosevriJ is erkend, mag het interval 
tussen twee controles worden verlengd tot twee Jaar en moet in het kader 
van de controles gebruik worden gemaakt van een van de serologische tests 
als bedoeld in punt 13. onder a); 
b) indien alle runderen die OP het bedrijf worden binnengebracht, afkomstig 
z i in van officieel brucellosevriJe bedrijven en. wanneer het gaat om 
runderen die ouder zijn dan twaalf maanden, bij een serumagglutinatIetest 
overeenkomstig bijlage C die in de laatste dertig dagen vóór het 
binnenbrengen OP het bedrijf is verricht, een brucelI at iter van minder dan 
30 internationale agglutinatie-eenheden per milliliter hebben vertoond. 
-.XA-
De in bijlage C. deel A. beschreven serumagglutinatietest is evenwel niet 
vereist in een Lid-Staat of een gedeelte van een Lid-Staat waar in de 
laatste twee jaar nooit meer dan 0.2X van de rundveehouderijbedrijven met 
brucellose besmet is geweest, en wanneer het dier afkomstig Is uit een 
officieel brucellosevriJ rundveehouderiIbedriIf in die Lid-Staat of het 
gedeelte daarvan, en tijdens het vervoer niet in contact is geweest met 
dieren van een lagere status. 
O in afwijking van het bepaalde in punt 2. onder b). mogen van een 
brucellosevrij rundveehouderijbedrijf afkomstige runderen toch OP een 
officieel brucellosevriJ rundveehouderijbedrijf worden binnengebracht 
indien zij ten minste 18 maanden oud ziJn en indien een eventuele 
vaccinatie tegen brucellose ten minste 1 Jaar eerder is verricht. 
Dergelijke dieren moeten in de laatste 30 dagen voordat zii OP het bedrijf 
zijn binnengebracht, een brucellat iter van minder dan 30 internationale 
agglutinatle-eenheden per milliliter hebben vertoond, en zij moeten 
negatief hebben gereageerd op een complementbindingsreactie: beide tests 
moeten ziin uitgevoerd overeenkomstig bijlage C. 
Wanneer evenwel een van een brucellosevriJ rundveehouderijbedrijf afkomstig 
rund onder de hierboven aangegeven omstandigheden wordt binnengebracht OP 
een officieei brucellosevriJ rundveehouderijbedrijf, wordt dit laatste 
bedrijf gedurende twee Jaar na de datum waarop het dier is binnengebracht, 
als brucellosevriJ beschouwd. 
3. De status van officieel brucellosevriI bedrijf wordt geschorst of ingetrok-
KfiD. : 
a) indien niet meer aan de in de punten 1 en 2 hierboven vastgestelde voor­
waarden wordt voldaan of 
b) indien OP basis van laboratoriumtests of op klinische gronden wordt vermoed 
dat een of meer runderen met brucellose ziJn besmet. 
Indien een of meer runderen op een officieel brucellosevriJ bedrijf ervan 
worden verdacht met brucellose te zijn besmet, kan de status van het bedrijf 
worden geschorst, en dus niet ingetrokken, indien het dier of de dieren 
onmiddellijk worden gedestrueerd of geïsoleerd. 
-*2~ 
Wanneer het dier is gedestrueerd. mag de schorsing worden ingetrokken indien 
alle runderen op het bedrijf die ouder zijn dan 12 maanden, bij twee 
serumagglutinatietests. die overeenkomstig bijlage C zijn verricht, een titer 
van minder dan 30 internationale agglutinatie-eenheden per milliliter hebben 
vertoond. De eerste test moet worden uitgevoerd ten minste 30 dagen nadat het 
dier is verwijderd, de tweede ten minste 60 dagen later. 
Wanneer het dier is geïsoleerd, mag het weer op het bedrijf worden 
binnengebracht en kan het bedrijf ziJn vorige status opnieuw verkrijgen, 
indien het dier een serumagglutinatiet iter vertoont van minder dan 30 inter­
nationale agglutinâtie-eenheden per milliliter en negatief heeft gereageerd OP 
een complementbindingsreactie; beide tests moeten zijn uitgevoerd overeen­
komst ia biilage C. 
Wanneer, OP basis van laboratoriumtests of epizoötiologisch onderzoek, op een 
bedrijf besmetting met brucella is bevestigd, kan dat bedrijf zijn vorige 
status slechts terugkrijgen nadat alle runderen die drachtig waren op het 
moment waarop brucellose is uitgebroken, negatief hebben gereageerd OP 
bovengenoemde tests, waarbij de laatste test moet zijn verricht ten minste 21 
dagen na het kalven. 
4. Een rundveehouder!Jbedrijf is brucellosevrIJ Indien het voldoet aan de in 
punt 1. onder a). b) en c). vastgestelde voorwaarden, met dien verstande dat : 
i) vrouwelijke runderen mogen worden ingeënt : 
- vóórdat zij zes maanden oud zijn, met een levend vaccin OP basis van 
stam 19 of met een ander vaccin dat volgens de procedure van artikel 12 
is erkend, of 
- vóórdat zij 15 maanden oud zijn, met gedood 45/20 vaccin waaraan een 
adjuvans is toegevoegd en dat officieel is gecontroleerd en erkend: 
i i ) runderen die Jonger zijn dan 30 maanden en die met het levend vaccin OP 
basis van stam 19 zijn ingeënt, bij een serumagglut inat ietest een titer 
van meer dan 30 internationale agglutinatie-eenheden per milliliter doch 
minder dan 80 internationale agglutinatie-eenheden per milliliter mogen 
vertonen, op voorwaarde dat zij bij de complementbindingsreactie een 
titer vertonen van minder dan 30 EEG-eenheden wanneer het gaat om 
vrouwelijke dieren die minder dan 12 maanden tevoren ziJn ingeënt, of van 
minder dan 20 EEG-eenheden in alle andere gevailen. 
-a.*-
i i i) afgezien van de in punt 1. onder c). genoemde tests, bovendien moet, om 
als brucellosevriJ bedrijf te worden erkend, worden voldaan aan de tests 
die volgens de onderstaande schema's zijn uitgevoerd overeenkomstig het 
bepaalde in bi liage C : 
a. twee gebufferde brucella-antigeentests die met een tussenpoos van ten 
minste drie en ten hoogste twaalf maanden worden verricht. 
b. twee micro-agglutinatietests die met een tussenpoos van ten minste 
drie en ten hoogste twaalf maanden worden verricht. 
5. Een rundveehouder i ibedr i Jf behoudt zi Jn brucellosevrI ie status : 
i) indien het bedrijf negatief heeft gereageerd OP de tests die volgens een 
van de in lid 2. onder a). hierboven vastgestelde schema's ziJn 
uitgevoerd; 
i i ) indien de runderen die OP het bedrijf worden binnengebracht, voldoen aan 
de in punt 2. onder b). hierboven vastgestelde eisen of 
- komen van brucellosevriJe bedrijven en. wanneer het gaat om runderen 
die ouder zijn dan 12 maanden, in de laatste 30 dagen voordat zll OP 
het bedrijf zijn binnengebracht, bij een serumagglutinatietest een 
titer van minder dan 30 internationale agglutinatie-eenheden per 
milliliter hebben vertoond en bij een complementbIndingsreactie 
negatief hebben gereageerd (beide tests moeten ziJn verricht 
overeenkomstig bijlage C). of 
- komen van brucellosevriJe bedrijven. Jonger zi in dan 30 maanden en. als 
zii met een levend vaccin op basis van stam 19 ziJn ingeënt, bij een 
serumagglutinatietest een titer van minder dan 80 internationale 
agglutinatie-eenheden per ml vertonen, op voorwaarde dat zii. bij een 
complementbindingsreactie. een titer vertonen van minder dan 30 EEG-
eenheden wanneer het gaat om vrouwelijke dieren die minder dan 12 
maanden geleden ziJn ingeënt, of minder dan 20 EEG-eenheden in alle 
andere gevallen. 
-4V-
6. De bruceilosevrlie status van een bedrijf wordt geschorst of ingetrokken : 
a) indien niet meer aan de in de punten 4 en 5 hierboven vastgestelde 
voorwaarden wordt voldaan, of 
b) indien OP basis van laboratoriumtests of OP klinische gronden wordt vermoed 
dat een of meer runderen die ouder zijn dan 30 maanden, met bruceilose z i in 
besmet. 
Indien een of meer runderen, ouder dan 30 maanden, OP een brucei losevr i J 
bedrijf ervan worden verdacht met bruceilose te zijn besmet, kan de status van 
het bedrijf worden geschorst, en dus niet ingetrokken, indien het dier of de 
dieren onmiddellijk worden gedestrueerd of geïsoleerd. 
Wanneer het dier is gedestrueerd. mag de schorsing worden ingetrokken indien 
alle runderen op het bedrijf die ouder zijn dan 12 maanden, bij twee 
serumagglutinatietests die overeenkomstig bijlage C ziJn verricht, een titer 
van minder dan 30 internationale agglutinatie-eenheden per ml hebben vertoond. 
De eerste test moet worden uitgevoerd ten minste 30 dagen nadat het dier is 
verwijderd, de tweede ten minste 60 dagen later. 
Wanneer het dier is geïsoleerd, mag het weer op het bedrijf worden 
binnengebracht en kan het bedrijf zijn vorige status opnieuw verkrijgen, 
indien het dier bij een serumagglut inat ietest een titer van minder dan 30 
internationale agglutinatie-eenheden per ml heeft vertoond en negatief heeft 
gereageerd op een complementbindingsreactie; beide tests moeten zijn 
uitgevoerd overeenkomstig bijlage C. 
Wanneer op basis van laboratoriumtests of epizoötiologisch onderzoek, op een 
bedrijf besmetting met brucella is bevestigd, kan dat bedrijf zijn vorige 
status slechts terugkrijgen nadat alle runderen die drachtig waren OP het 
ogenblik waarop de ziekte is uitgebroken, negatief hebben gereageerd op 
bovengenoemde tests, waarbij de laatste test moet zijn verricht ten minste 21 
dagen na het kalven. 
-*q-
7. Een gedeelte van een Lid-Staat kan volgens de procedure van artikel 12 
officieel brucel losevr I i worden verklaard indien het aâQ de_ volgende 
voorwaarden voldoet : 
a) ten minste in de laatste drie laar is geen enkel geval van abortus ten 
gevolge van brucellose geconstateerd en sedert 10 Jaar is ten minste 99.8% 
van alle bedrijven officieei brucellosevrii; 
b) aan de hand van een Identificatiesysteem kan voor elk rund het bedrijf van 
herkomst en dat van doorgang worden bepaald. 
8. Onverminderd het bepaalde in punt 9 hieronder behoudt een officieel 
brucellosevriJ gebied z i in status indien aile runderen die ouder zijn dan 24 
maanden, om de drie Jaar hetzij twee ringtests hetzij één serologische test 
ondergaan. Indien een van die tests een positief resultaat oplevert. Is het 
bepaalde in punt 6 van toepassing. 
9. Een officieei brucellosevriJ gebied dient elk geval van brucellose te meiden 
bil de Commissie. De Commissie kan volgens de procedure van artikel 13 
voorstellen de status te schorsen of in te trekken en eisen dat de 
routinetests OP brucellose worden verricht volgens een van de in punt 2 
hierboven aangegeven schema's. 
10. fej3 Liti-Staat kiD volgens dg procedure van artikel 12 officieel 
brucellosevrII worden verklaard indien aan de volgende voorwaarden wordt 
voldaan : 
a) in de laatste drie iaar is geen enkel geval van abortus ten gevolge van 
brucellose geconstateerd en sedert 10 Jaar is ten minste 99.8% van de 
bedr iIven of f i c i eeI bruce11osevr i J: 
b) aan de hand van een identificatiesysteem kan voor elk rund het bedrijf van 
herkomst en dat van doorgang worden bepaald. 
-ir-
11. Een officieei brucellosevriIe Lid-Staat behoudt ziin status : 
- indien, telkens wanneer wordt vermoed dat een rund met brucellose is 
besmet, daarvan aangifte wordt gedaan bij de bevoegde autoriteit, en het 
betrokken dier officieel OP brucellose wordt onderzocht, met name aan de 
hand van ten minste twee serologische tests, een complementbindingsreactie. 
en. in geval van abortus, een microbiologisch onderzoek van de nodige 
monsters: 
- indien, zolang het vermoeden bestaat, d.i. totdat bij de in het eerste 
streepje bedoelde tests een negatief resultaat is verkregen, de officieel 
brucellosevriJe status van het bedrijf van herkomst of van doorgang van het 
verdachte rund wordt geschorst: 
- in geval van een positief resultaat is het bepaalde in punt 6 hierboven van 
toepassing. 
12. Een officieel brucellosevriJe Lid-Staat meldt elk geval van brucellose bij de 
Commissie. De Commissie kan volgens de procedure van artikel 13 voorste Men 
de status te schorsen of in te trekken en eisen dat de routinetests OP 
brucellose worden uitgevoerd volgens één van de in punt 2 hierboven 
vastgestelde schema's. 
13. a) In het kader van bijlage A.M. wordt onder serologische test verstaan: een 
serumagglutinatietest. een gebufferde brucella-antigeentest. een comole-
mentbindingsreactie. een plasma-agglutinatietest. een plasmaringtest. een 
micro-agglutinatietest of een ELISA met individueel bloedmonster, als 
omschreven in bijlage C. 
b) Wanneer de ringtests worden verricht met melk uit meiktanks. wordt het in 
deze bijlage vastgestelde aantal tests verdubbeld en wordt de tussenpoos 
tussen de tests gehalveerd. 
BIJLAGE B 
(Normen voor de fabricage en het gebruik van aviaire en boviene tuberculinen) 
1. De officieel gecontroleerde tuberculinaties worden verricht met PPD- of 
HCSM-tuberculinen. 
2. Voor de controle van boviene PPD- en HCSM-tubercuiinen worden fabricagenormen 
opgesteld in communautaire eenheden voor tuberculine (CTU), aan de hand van 
biologische toetsing aan de adequate EEG-standaard voor tuberculine. 
3. Voor de controle van aviaire tuberculinen worden fabricagenormen opgesteld in 
internationale eenheden, aan de hand van biologische toetsing aan de 
EEG-standaard voor aviaire PPD-tuberculine. 
4. De EEG-standaard voor boviene PPD-tuberculine is die, geleverd door het 
Centraal Diergeneeskundig Instituut, afdeling Rotterdam, Nederland. 
5. De EEG-standaard voor boviene HCSM-tuberculine is die, geleverd door het 
Institut Pasteur, Parijs, Frankrijk. 
6. De EEG-standaard voor aviaire tuberculine is die, geleverd door het Central 
Veterinary Laboratory, Weybridge, Surrey, Engeland. 
7. Boviene tuberculinen worden gekweekt met een van de onderstaande stammen van 
mycobacterium bovis : 
a) AN5, 
b) Vallee. 
8. Aviaire tuberculinen worden gekweekt met een van de onderstaande stammen van 
mycobacterium avium : 
a) D4ER, 
b) TB56. 
-ly-
9. De ph van de tuberculinen ligt tussen 6,5 en 7,5. 
10. Voor antibacteriële bewaarmiddel en of voor andere stoffen die eventueel aan 
een tuberculine kunnen worden toegevoegd, wordt ten genoegen van de officiële 
instelling die met de officiële controle van de tuberculine wordt belast, 
aangetoond dat zij noch de veiligheid, noch de doeltreffendheid van het 
produkt aantasten. 
De hoogst toegelaten concentraties voor fenol en glycerol zijn : 
a) fenol : 0,5% m/v; 
b) glycerol : 10% v/v. 
11. Mits de tuberculinen beschut tegen licht en bij een temperatuur tussen 2'C en 
8'C worden bewaard, mogen ze, te rekenen vanaf de datum waarop zij voor het 
laatst met goed gevolg op hun werkzaamheid zijn getest, gedurende de volgende 
perioden worden gebruikt : 
a) vloeibare PPD-tuberculinen : twee Jaar, 
gelyofIIiseerde PPD-tuberculInen : acht Jaar, 
b) HCSM-tuberculinen, verdund : twee jaar. 
12. De onderstaande officiële instellingen worden met de officiële controle van 
de tuberculinen in hun land belast: 
a) Duitsland : Paul-Ehrlich Institut, Frankfurt/Main; 
b) België : Instituut voor Hygiëne en Epidemiologie, J. Wytsmanstraat 14, B-
1050 Brussel ; 
c) Frankrijk : Laboratoire national des médicaments vétérinaires, Fougères; 
d) Groothertogdom Luxemburg : Instelling van het land van herkomst; 
e) Italië : Istituto superiore di sanita, Roma; 
f) Nederland : Centraal Diergeneeskundig Instituut, afdeling Rotterdam; 
g) Denemarken : Statens Veterinaere Serumlaboratorium, KcJbenhavn V; 
h) Ierland : Instelling van het land van herkomst; 
i) Verenigd Koninkrijk : Central Veterinary Laboratory, Weybridge, Surrey; 
j) Griekenland : KTnviarpiKÓ IVOTITOÓTOV AOIUWÔÛV Koi napaomkóv NOOHMÓTÜV. 
lepà o6óc 75, A8iWai 301. 
k) Spanje : Laboratório de Sanidad y Produceión Animal de Granada; 
I) Portugal : Laboratório Nacional de Investigaçâo Veterinâria - Lisboa. 
13. De officiële controle wordt uitgevoerd op elke batch flesjes met 
gebruiksklare tuberculine. 
14. De tuberculinen worden gecontroleerd met behulp van biologische en chemische 
methoden. 
15. De tuberculinen moeten steriel zijn. De tests op steriliteit worden 
uitgevoerd overeenkomstig de bepalingen van de Europese Farmacopee. 
16. Een controle op de afwezigheid van toxische of irriterende eigenschappen 
wordt uitgevoerd overeenkomstig de bepalingen van de Europese Farmacopee. 
17. De tuberculinen worden chemisch geanalyseerd om het gehalte aan glycerol 
en/of fenol, en het gehalte aan een eventueel ander bewaarmiddel te bepalen. 
18. Een test waaruit moet blijken dat de tubercul ine niet gevoelig maakt, wordt 
uitgevoerd overeenkomstig de bepalingen van de Europese Farmacopee. 
-«-
19. De werkzaamheid van de tuberculinen wordt bepaald aan de hand van biologische 
methoden. Deze methoden worden gebruikt voor HCSM- en PPD-tuberculinen. Zij 
zijn gebaseerd op vergelijking van de te toetsen tuberculinen met 
standaardtuberculinen. 
20. Het proteïnegehalte van PPD-tuberculine wordt geraamd volgens de methode van 
Kjeldahl. Het stikstofgehalte wordt omgerekend in het tuberculoproteïne-
gehalte door vermenigvuldiging met een factor 6,25. 
21. De EEG-standaard voor boviene PPD heeft een werkzaamheid van 50.000 
communautaire tuberculine-eenheden (CTU) per mg PPD en wordt verdeeld in 
ampullen met 5 ml tuberculine. 
22. De EEG-standaard voor boviene PPD heeft een werkzaamheid van 50.000 
communautaire tuberculine-eenheden (CTU) per mg PPD en wordt verdeeld in 
gelyof i I iseerde vorm in ampullen met 1,8 mg PPD; d.w.z. dat 0,00002 mg PPD 
een werkzaamheid heeft van één communautaire tuberculine-eenheid. 
23. De EEG-standaard voor aviaire PPD heeft een werkzaamheid van 50.000 
internationale eenheden (IE) per mg droog materiaal van het gezuiverde 
proteïnederivaat en wordt verdeeld in gelyofiIiseerde vorm in ampullen met 
10 mg PPD plus 26,3 mg zouten, d.w.z. dat 0,0000726 mg van de standaard een 
werkzaamheid heeft van één internationale eenheid. 
24. De tuberculines die door de fabrikanten worden aangeboden om door de in punt 
12 genoemde officiële instellingen te worden gecontroleerd, moeten op hun 
werkzaamheid zijn gecontroleerd aan de hand van biologische toetsing tegen de 
adeguate standaarden die zijn vermeld in de punten 2 en 3. 
25. a) controle van de werkzaamheid bij cavia's 
Hiervoor worden albinocavia's gebruikt met een gewicht tussen 400 en 600 
g. De dieren moeten in goede gezondheid verkeren wanneer de tuberculine 
wordt ingespoten. Per proef worden ten minste acht cavia's gebruikt. De 
proef wordt ten minste één maand na de sensibiIizering verricht. 
-•\c-
aa) Voor het toetsen van boviene tuberculinen worden de cavia's met een 
van de volgende methoden gesensibiliseerd : 
1. Injectie van door verhitting gedood Mycobacterium bovis van de stam 
AN5 in olie-adjuvans; 
2. Injectie van levend Mycobacterium bovis van de stam AN5 in een 
fysiologische zoutoploss ing; 
3. Injectie van BCG-vaccin. 
bb) Voor het toetsen van aviaire tuberculinen worden de cavia's 
gesensibiliseerd door injectie van 2 mg door verhitting gedode 
tuberkelbaciIlen van het aviaire type, gesuspendeerd in 0,5 ml 
steriele vloeibare paraffine, of door injectie van levende 
tuberkelbaciIlen van het aviaire type in fysiologische oplossing. 
Hierbij wordt gebruik gemaakt van de aviaire stam D4. 
cc) Elke te controleren tuberculine wordt getoetst aan de adeguate 
standaardtuberculine door middel van een intradermale injectie bij 
groepen naar behoren gesensibiliseerde cavia's. 
Bij elke cavia wordt het haar op de beide flanken weggeschoren. De 
toetsing wordt als volgt uitgevoerd : de reacties die worden opgewekt door 
een serie intracutane injecties met doses van ten hoogste 0,2 ml 
standaardtuberculine, gedilueerd in een isotone gebufferde zoutoplossing 
die 0,0005% Tween 80 bevat, worden vergeleken met de reacties die worden 
opgewekt door een overeenkomstige serie injecties met de te toetsen 
tuberculine. De verdunningen worden bereid volgens een meetkundige reeks, 
en worden bij de cavia's geïnjecteerd op een aselect gekozen Latijns 
vierkant (vier punten op elke zijde van een achtpuntstoets). De diameter 
van de reacties op elke inject iep laats wordt na 24 tot 28 uur gemeten en 
genoteerd. 
Voor elk te toetsen tuberculinemonster wordt aan de hand van statistische 
methoden een raming gemaakt van de relatieve werkzaamheid ten opzichte van 
de adeguate standaard en de betrouwbaarheidsgrenzen; hierbij worden de 
diameters van de reactiezwellingen en de logaritmen van de doses als 
metameters gebruikt. De te toetsen boviene tuberculine heeft een 
aanvaardbare werkzaamheid als de geraamde werkzaamheid bij runderen 2000 
communautaire tuberculine-eenheden (ongeveer 25%) per dosis garandeert. 
-*A-
De werkzaamheid van elke te toetsen tuberculine wordt naar gelang van het 
geval uitgedrukt in communautaire tuberculine-eenheden of in inter­
nationale eenheden per ml. 
b) controle van de werkzaamheid bij runderen 
Periodieke toetsing van de werkzaamheid van boviene tuberculines mag 
plaatsvinden bij natuurlijk of kunstmatig met tuberculose besmette 
runderen. Deze toetsing van de werkzaamheid bij groepen met tuberculose 
besmette runderen vindt plaats door de betrokken tuberculine, aan de hand 
van een vier- of zespuntstoets te toetsen aan de adequate standaard, 
waarbij de werkzaamheid van de tuberculine wordt geraamd aan de hand van 
statistische methoden, zoals bij de toets met cavia's. 
26. Ten aanzien van de etikettering van containers en verpakkingen met 
tuberculine gelden de volgende eisen : 
Op het etiket op de containers en het etiket op de verpakking worden de 
volgende gegevens vermeld : 
- de naam van het preparaat, 
- voor vloeibare preparaten, het totale volume in de container, 
- het aantal communautaire of internationale eenheden per ml of per mg, 
- de naam van de fabrikant, 
- het nummer van de batch, 
- de aard en de hoeveelheid van de vloeistof die nodig is om gelyofiIiseerde 
preparaten te reconstitueren. 
Op het etiket op de container of het etiket op de verpakking worden de 
volgende gegevens vermeld : 
- de vervaldatum, 
- de opslagvoorschriften, 
- de naam van de eventueel toegevoegde stoffen, en indien mogelijk de 
verhouding waarin deze zijn toegevoegd, 
- de stam van de bacil waaruit de tuberculine is bereid. 
» 
27. Volgens de procedure van artikel 12 aangewezen communautaire laboratoria 
worden belast met aanvullend onderzoek van de tuberculinen die in de Lid-
Staten normaal worden gebruikt, om te garanderen dat de werkzaamheid van elk 
van deze tuberculinen beantwoordt aan de overeenkomstige communautaire stan­
daardtubercul ine. Dit onderzoek wordt uitgevoerd bij met tuberculose besmette 
runderen, bij op afdoende wijze gesensibiliseerde cavia's en met adeguate 
chemische tests. 
-&t-
28. Als officiële intradermale tuberculinetests worden erkend : 
a) de enkelvoudige intradermale test : bij deze test volstaat een enkele 
injectie met boviene tuberculine; 
b) de intradermale vergelijkende test : bij deze test moeten gelijktijdig een 
injectie met aviaire tuberculine en een injectie met boviene tuberculine 
worden toegediend. 
29. De geïnjecteerde dosis tuberculine mag niet lager zijn dan : 
1. 2.000 CTU boviene tuberculine; 
2. 2.000 I.E. aviaire tuberculine. 
Het volume van een injectiedosis mag niet meer bedragen dan 0,2 ml. 
30. Bij de tuberculinetests wordt de tuberculine geïnjecteerd in de nekhuid. De 
injectieplaatsen liggen op de grens tussen het voorste en het middelste derde 
van de nek. Wanneer bij hetzelfde dier zowel aviaire als boviene tuberculine 
wordt geïnjecteerd, ligt de injectieplaats voor de aviaire tuberculine 
ongeveer 10 cm van de kruin van de nek en die voor de boviene tubercul ine 
ongeveer 12,5 cm lager op een lijn die ongeveer evenwijdig loopt met de 
schouderlijn; er mag ook .Jlnjecteerd worden aan weerszijden van de nek; bij 
jonge dieren, waarbij geen plaats is om de injectiepunten op één zijde van de 
nek voldoende van elkaar te scheiden, wordt één injectie gegeven aan elke 
zijde van de nek op dezelfde plaats, namelijk in het midden van het middelste 
derde van de nek. 
31. Bij het uitvoeren van de tuberculinaties en het interpreteren van de reacties 
wordt als volgt te werk gegaan : 
a) Werkwijze : 
De injectieplaatsen worden geschoren en gereinigd. Binnen elke geschoren 
zone wordt tussen duim en wijsvinger een huidplooi genomen, waarvan de 
dikte wordt gemeten met een krompasser; het resultaat wordt genoteerd. 
Een korte steriele naald, met de schuine kant naar buiten, waaraan een 
gegradueerde, met tuberculine gevulde spuit, is bevestigd, wordt schuin in 
de diepste 
--*•*-
hu id lagen ingebracht. Dan wordt de dosis tuberculine geïnjecteerd. Bij een 
correcte injectie kan aan elke kant van de injectieplaats een kleine 
zwelling, ter grootte van een erwt, worden gepalpeerd. De dikte van de 
huidplooi op elke injectieplaats wordt na 72 uur opnieuw gemeten en 
genoteerd. 
b) Interpretatie van de reacties : 
De interpretatie van de reacties dient te steunen op klinische observaties 
en op de genoteerde verdikkingen van de huidplooi op de injectieplaatsen, 
72 uur na injectie van de tuberculine. 
ba) Negatieve reactie : wanneer slechts een beperkte zwelling wordt 
geconstateerd, met een toename van de dikte van de huidplooi met 
maximaal 2 mm, zonder klinische verschijnselen, zoals diffuus of 
extensief oedeem, exudatie, necrose, pijn of ontsteking van de 
lymfevaten in die omgeving en van de lymfeknopen. 
bb) Twijfelachtige reactie : wanneer geen klinische verschijnselen als 
genoemd onder ba) worden geconstateerd en de verdikking van de huidplooi 
meer dan 2 doch minder dan 4 mm bedraagt. 
bc) Positieve reactie : wanneer klinische verschijnselen als genoemd in ba) 
worden geconstateerd of als de verdikking van de huidplooi op de 
injectieplaats ten minste 4 mm bedraagt. 
32. De officiële intradermale tuberculinaties worden als volgt geïnterpreteerd : 
a) de enkelvoudige intradermale test : 
positief : een positieve boviene reactie als omschreven in punt 31, onder 
bc); 
twijfelachtig : een twijfelachtige reactie als omschreven in punt 31, 
onder bb); 
negatief : een negatieve boviene reactie als omschreven in punt 31, onder 
ba). 
•3ll-
Dieren waarbij de reactie op de enkelvoudige intradermale test 
twijfelachtig is, dienen ten minste 42 dagen later opnieuw een 
tuberculinatie te ondergaan. 
Dieren die niet negatief reageren op deze tweede test worden geacht 
positief te hebben gereageerd op de test. 
Dieren die positief reageren op de enkelvoudige intradermale test, mogen 
aan een intradermale vergelijkende test worden onderworpen. 
b) de intradermale vergelijkende test om te bepalen of een bedrijf officieei 
tuberculosevrij is en blijft : 
positief : een positieve boviene reactie die meer dan 4 mm groter is dan 
de aviaire reactie, of klinische symptomen; 
twijfelachtig : een positieve of twijfelachtige boviene reactie die 1 tot 
4 mm groter is dan de aviaire reactie, en geen klinische symptomen; 
negatief : een negatieve boviene reactie, of een positieve of twijfel­
achtige boviene reactie, die evenwel gelijk is aan of kleiner is dan een 
positieve of twijfelachtige aviaire reactie, in beide gevallen zonder 
klinische symptomen. 
Dieren die twijfelachtig reageren op de intradermale vergelijkende test, 
dienen ten minste 42 dagen later een nieuwe test te ondergaan. Van dieren 
die niet negatief reageren op deze tweede test, wordt aangenomen dat zij 
positief hebben gereageerd op de test. 
c) De officieel tuberculosevriJe status van een bedrijf kan worden geschorst 
en dieren van dat bedrijf mogen niet in het intracommunautaire handels­
verkeer worden gebracht, totdat uitsluitsel is verkregen over de status 
van de volgende dieren .-
1. Dieren die geacht worden twijfelachtig te hebben gereageerd op de 
enkelvoudige intradermale tuberculinetest; 
-ir-
2. Dieren die geacht worden positief te hebben gereageerd op de 
enkelvoudige intradermale tuberculinetest, maar die wachten op een 
nieuwe intradermale vergelijkende test; 
3. Dieren die geacht worden twijfelachtig te hebben gereageerd op de 
intradermale vergelijkende test. 
d) Wanneer dieren krachtens de communautaire wetgeving een intradermale test 
moeten ondergaan voordat ze mogen worden vervoerd, wordt de test zo 
geïnterpreteerd dat dieren met een verdikking van de huidplooi van meer 
dan 2 mm of dieren met klinische symptomen niet in het Intracommunautaire 
handelsverkeer mogen worden gebracht. 
BIJLAGE C 
BRUCELLOSE 
A. Serumagglutinatietest 
1. De substandaard van het brucelloseserurn (referentieserum) komt overeen met 
het standaardserum dat is bereid in het Central Veterinary Laboratory, 
Weybridge, Surrey, England. 
De ampul bevat 1.000 internationale agglutinatie-eenheden, verkregen door 
lyofIIisering van 1 ml bovien serum. 
2. Het referentieserum wordt betrokken bij het BundesgesundheItsamt te 
Berlijn. 
3. Het gehalte aan brucella-agglutininen van een serum wordt uitgedrukt in 
internationale eenheden (I.E.) per ml (bijvoorbeeld serum x - 80 
I.E./m I). 
4. Het aflezen van de langzame serumagglutinatie in reageerbuisjes geschiedt 
bij 50% of 75% agglutinât ie, waarbij het gebruikte antigeen onder identieke 
omstandigheden is getitreerd tegen het referentieserum. 
5. Het aggI utinatievermogen van de verschillende anti genen ten opzichte van 
het referentieserum ligt binnen de volgende grenzen : 
- in geval van aflezing bij 50% : tussen 1/600 en 1/1000, 
- in geval van aflezing bij 75% : tussen 1/500 en 1/750. 
6. Het antigeen voor de serumagglutinatie in reageerbuisjes (langzame methode) 
wordt bereid met de stam Weybridge nr. 99 of USDA 1119, of een anc e a tam 
met een overeenkomstige gevoeligheid. 
7. De voedingsbodems voor het door kweken van de stam in het laboratorium en 
voor de produktie van antigeen mogen de dissociatie van brucellakiemen (s 
min r) niet bevorderen; bij voorkeur wordt gebruik gemaakt van voedings­
bodems op basis van aardappelen. 
-3?-
8. De bacterie-emulsie wordt gevormd in een fysiologische oplossing (NaCI 
8,5%»), waaraan 0,5% fenol is toegevoegd. Formaline mag niet worden 
gebruikt. 
9. De hierna genoemde officiële instellingen worden belast met de officiële 
controle van de anti genen : 
a) Duitsland : Bundesgesundheitsamt, Berlin; 
b) België : Nationaal Instituut voor Diergeneeskundig Onderzoek, Brussel; 
c) Frankrijk : Laboratoire central de recherches vétérinaires, Al fort; 
d) Groothertogdom Luxemburg : Instelling van het land van herkomst; 
e) Italië : Istituto superiore di sanita, Roma; 
f) Nederland : Centraal Diergeneeskundig Instituut, Afdeling Rotterdam; 
g) Denemarken : Statens Veterinaere Serumlaboratorium, Kóbenhavn V.; 
h) Ierland : Veterinary Research Laboratory, Department of Agriculture and 
Food, Dub lin; 
i) Verenigd Koninkrijk : 
- Groot-Brittannië the Central Veterinary Laboratory, Weybridge, 
Surrey, England, 
- Noord-1 er land : Veterinary Research Laboratory, Stormont, Belfast. 
j) Griekenland : KTHVICITPIKÓ IVOTITOÓTOV Aoiuwoóv KOI riapaoiTiKC&v 
NOOHMÓTWV. lepâ oôoç 75, A8ft>ai 301. 
k) Spanje : Centro Nacional de Bruce los Is de Murcia; 
I) Portugal : Laboratório Nacional de Investigaçâo Veterinâria, Lisboa. 
10. De anti genen mogen geconcentreerd worden geleverd, op voorwaarde dat op het 
etiket van de fles de vereiste verdunningsgraad is aangegeven. 
--**-
11. Voor een serumagglut inat ie worden ten minste drie verdunningen voor elk 
serum aangelegd. Verdacht serum wordt zo verdund dat de aan de 
besmettingsgrens liggende reactie in het middelste reageerbuisje wordt 
afgelezen. Bij een positieve reactie in dit buisje bevat het verdachte 
serum dus ten minste 30 I.E. per ml. 
B. CompIementbindinosreactie 
1. De substandaard van het serum (referentieserum) is dezelfde als onder A.1 van 
deze bijlage. Behalve de internationale agglutinâtie-eenheden bevat 1 ml van 
het gelyofiIiseerde boviene serum ook 1.000 compIementbindende sensibiIisatie-
eenheden. Deze sensibiIisatie-eenheden worden EEG-sensibiIisatie-eenheden 
(E.S.E.) genoemd. 
2. Het referentieserum wordt betrokken bij het Bundesgesundheitsamt te Berlijn. 
3. Het gehalte aan complementbindende anti lichamen in een serum wordt uitgedrukt 
in EEG-sensibiIisatie-eenheden (E.S.E.) (bijvoorbeeld serum x - 60 
E.S.E./mI). 
4. Een serum dat 20 of meer E.S.E. per ml bevat (dit komt overeen met een 
uitwerking van 20%- van die van het referentieserum) wordt als positief 
beschouwd. 
5. De sera worden als volgt geïnactiveerd : 
a) runderserum : 56 à 60'C gedurende 30-50 minuten; 
b) varkensserum : 60'C gedurende 30-50 minuten. 
6. Het antigeen wordt bereid met de stam Weybridge nr. 99 of USDA 1119. Het 
antigeen bestaat uit een bacteriesuspensie in een fysiologische oplossing van 
0,85% of in een veronal-bufferoplossing. 
7. Voor de reactie wordt een complementdosis gebruikt die groter is dan de 
minimumdosis voor een volledige hémolyse. 
-\1~ 
8. Bij de uitvoering van de complementbindingsreactie worden telkens de volgende 
controles verr icht : 
a) controle van het anti-complementeffect van het serum; 
b) controle van het antigeen; 
c) controle van de gesensibiliseerde rode bloedlichaampjes; 
d) controle van het complement; 
e) controle, met behulp van een positief serum, van de gevoeligheid bij het 
begin van de reactie; 
f) controle, met behulp van een negatief serum, van de specificiteit van de 
react ie. 
9. Het toezicht op en de officiële controle van de referentiesera en antigenen 
worden uitgeoefend door de in deel A, punt 9, van deze bijlage genoemde 
instel Iingen. 
10. De antigenen mogen geconcentreerd worden geleverd, op voorwaarde dat op het 
etiket van de fles de vereiste verdunningsgraad is aangegeven. 
C. Ringtest 
1. De ringtest wordt uitgevoerd op de inhoud van elke melkbus of op de inhoud 
van elke melktank op het bedrijf. 
2. Het te gebruiken referentie-antigeen is afkomstig uit een van de in deel A, 
punt 9, onder a) tot en met J), genoemde instellingen. De antigenen worden 
bij voorkeur gestandaardiseerd overeenkomstig de aanbevelingen van de 
WHO/FAO. 
3. Het antigeen mag slechts worden gemerkt met hematoxyline of tetrazolium; 
bij voorkeur wordt hematoxyline gebruikt. 
4. Indien geen conserveermiddel wordt gebruikt, wordt de test uitgevoerd 
tussen 18 en 24 uur na de monsterneming. Indien de melk niet binnen 24 uur 
na de bemonstering wordt onderzocht, wordt een conserveermiddel toegevoegd, 
-H©-
namelijk formaline of kwikchloride; in dat geval wordt de test verricht 
binnen 14 dagen na de bemonstering. Aan het meikmonster mag formaline 
worden toegevoegd tot een concentratie van ten hoogste 0,2% en in dat geval 
bedraagt de verhouding tussen de hoeveelheid melk en de formaline-oploss ing 
ten minste 10 : 1. In de plaats van formaline mag ook een kwikchloride-
oplossing worden gebruikt tot een concentratie van ten hoogste 0,2% en in 
dat geval bedraagt de verhouding tussen de hoeveelheid melk en de 
hoeveelheid kwikchloride-oplossing 10 : 1. 
5. De reactie wordt uitgevoerd volgens een van de volgende methoden : 
- op een melkkolom met een hoogte van ten minste 25 mm en op een 
hoeveelheid melk van 1 ml waaraan 0,03 ml van een gestandaardiseerd 
gekleurd antigeen is toegevoegd; 
- op een melkkolom met een hoogte van ten minste 25 mm en op een 
hoeveelheid melk van 1 ml waaraan 0,05 ml van een gestandaardiseerd 
gekleurd antigeen is toegevoegd; 
- op een hoeveelheid melk van 8 ml, waaraan 0,08 ml van een 
gestandaardiseerd gekleurd antigeen is toegevoegd; 
- op een melkkolom met een hoogte van ten minste 25 mm en op een 
hoeveelheid melk van 2 ml, waaraan 0,05 ml van een gestandaardiseerd 
gekleurd antigeen is toegevoegd; 
6. Het mengsel van melk en antigeen wordt gedurende ten minste 45 en ten 
hoogste 60 minuten geïncubeerd bij een temperatuur van 37'C. De reactie 
wordt beoordeeld binnen 15 minuten nadat het mengsel uit de broedstoof is 
verwi jderd. 
7. De reactie wordt volgens de onderstaande criteria beoordeeld : 
a) negatieve reactie : gekleurde melk, kleurloze room; 
b) positieve reactie : melk en room op gelijke wijze gekleurd of kleurloze 
melk en gekleurde room. 
-Ç.H-
D. Brucella-anti geen bufferproef 
De brucella-antigeen bufferproef kan worden uitgevoerd volgens een van de 
volgende methoden : 
a. Manuele test 
1. Als referentieserum wordt gebruik gemaakt van het tweede internationale 
anti-brucella abortusstandaardserum, dat wordt betrokken bij het Central 
Veterinary Laboratory, Weybridge, Surrey, England. 
2. Het antigeen wordt bereid zonder rekening te houden met de cel concentrât ie, 
maar de gevoeligheid van het antigeen wordt zodanig genormaliseerd ten 
opzichte van het tweede internationale anti-brucella abortusstandaardserum, 
dat het antigeen een positieve reactie veroorzaakt bij een serumverdunning 
van 1:47,5 en een negatieve reactie bij een verdunning 1:55. 
3. Het antigeen wordt in suspensie gebracht in verdunningsmiddel voor 
gebufferd brucel la-ant i geen met een pH van 3,65 ± 0,5, en mag gemerkt zijn 
met Bengaals rood. 
4. Het antigeen wordt bereid met de stam Weybridge nr. 19 of USDA 1119 of een 
andere stam met een overeenkomstige gevoeligheid. 
5. De voedingsbodems voor het doorkweken van de stam in het laboratorium en 
voor de produktie van antigeen mogen de dissociatie van brucellakiemen (s -
r) niet bevorderen; bij voorkeur wordt gebruik gemaakt van voedingsbodems 
op basis van aardappelen of van continu-kweekmethoden. 
6. Het antigeen wordt getoetst tegen acht gevriesdroogde sera, waarvan geweten 
is dat zij positief, respectievelijk negatief zijn. 
7. Het officiële toezicht op en controle van het referentieserum en het 
antigeen worden verricht door de in Bijlage C, deel A, punt 9, genoemde 
officiële instellingen. 
8. Het antigeen wordt gebruiksklaar geleverd. 
-HU 
9. De brucella-anti geen bufferproef wordt op de volgende wijze uitgevoerd : 
a) plaats een druppel (0,03 ml) antigeen naast een druppel (0,03 ml) serum 
op een witte plaat; 
b) vermeng met een agitator, eerst in rechte lijn en daarna in een cirkel 
met een diameter van 10 à 12 mm; 
c) schud de plaat gedurende vier minuten heen en weer (ongeveer 30 
bewegingen per minuut); 
d) lees af bij goede verlichting; bij afwezigheid van agglutinatie is de 
proef negatief; iedere graad van agglutinatie wordt als positief 
beschouwd, tenzij er sprake is van overmatig drogen rond de randen. 
b. Geautomatiseerde methode 
De geautomatiseerde methode moet ten minste even gevoelig en nauwkeurig 
zijn als de manuele methode. 
E. Plasmar ingtest 
A. Bereiding van het plasma 
Het proefbuisje met het door toevoeging van EDTA onstolbaar gemaakte bloed 
wordt gedurende drie minuten bij 3.000 omwentelingen per minuut 
gecentrifugeerd en vervolgens gedurende 12 à 24 uur bij 37*c bewaard. 
B. Evaluatie 
0,2 ml gestabiliseerd plasma wordt in een buisje gebracht met 1 ml rauwe 
melk. Na vermenging wordt een druppel (0,05 ml) ABR-antigeen toegevoegd, 
waarna de inhoud van het proefbuisje weer wordt vermengd. Het antigeen 
wordt gestandaardiseerd ten opzichte van een referentieantigeen dat wordt 
betrokken bij de in deel A, punt 9, onder a), genoemde instelling. 
wH>-
Na incubatie gedurende 45 minuten bij 37*C wordt het resultaat van de proef 
binnen 15 minuten afgelezen. Het resultaat is positief ais de ring even sterk 
als of sterker dan de melkkolom gekleurd is. 
F. Plasma-agglutinatie 
Het overeenkomstig E, onder a), bereide plasma kan onmiddellijk na het 
centrifugeren, zonder thermische stabilisering, worden gebruikt. 0,05 ml 
plasma wordt met 1 ml antigeen vermengd voor de 50% serumagglutinatie, wat 
overeenkomt met een verdunning van 1:20 voor de serumagglutinatieproef. 
Aflezing vindt plaats na 18 tot 24 uur incubatie bij 37*C. Ten minste 50% 
agglutinatie geldt als positief. 
G. Micro-aggiutinat ietest 
1. Verdunningen worden aangelegd met een fysiologische zoutoplossing van 0,85% 
waaraan 0,5% fenol is toegevoegd. 
2. Het antigeen wordt bereid overeenkomstig het bepaalde in bijlage C, deel A, 
punten 6, 7 en 8, en wordt getitreerd overeenkomstig het bepaalde in 
bijlage C, deel A, punt 5. Op het moment waarop het antigeen wordt 
gebruikt, wordt safranine 0 toegevoegd tot een concentratie van 0,02% 
(eindverdunning). 
3. Het referentieserum is hetzelfde als dat bedoeld in bijlage C, deel A, 
punt 1. 
4. Het referentieserum wordt betrokken bij het Bundesgesundheitsamt te 
BerIijn. 
5. De micro-agglutinatietest wordt uitgevoerd op plaatjes, voorzien van putjes 
met een kegelvormige bodem en met een inhoud van 0,250 ml. De test wordt 
als volgt uitgevoerd : 
a) voor verdunning van het serum : 0,050 ml van het te testen serum wordt 
toegevoegd aan elk putje met 0,075 ml verdunningsmiddel. Het mengsel 
wordt gedurende 30 seconden geschud. 
-H* 
- 'i 
b) geleidelijke verdunning van het serum : per serum worden ten minste drie 
verdunningen aangelegd. Daartoe wordt uit de voorverdunningen (1:2,5) 
0,025 ml van elk serum genomen en overgebracht op een plaatje met 0,025 
ml verdunningsmiddel. Zo wordt de eerste verdunning op de waarde 1:5 
gebracht en worden volgende verdunningen verdubbeld. 
c) toevoeging van antigeen : in elk putje met de verschillende verdunningen 
van het te onderzoeken serum wordt 0,025 ml antigeen gebracht. Na 
gedurende 30 seconden te zijn geschud, worden de plaatjes met hun deksel 
afgesloten en worden zij gedurende 20 à 24 uur in een vochtige atmosfeer 
bij 37*C bewaard. 
d) aflezen van de resultaten de bezinking van het antigeen wordt 
geëvalueerd door de bodem van het putje te onderzoeken zoals die wordt 
gereflecteerd in een daarboven geplaatste holle spiegel. Bij een 
negatieve reactie vormt het antigeen een bezinksel in de vorm van een 
compacte knop met duidelijke zijkanten en met een intense rode kleur. 
Bij een positieve reactie daarentegen ontstaat een diffuse roze sluier 
die op uniforme wijze is verdeeld. De mate van agglutinatie wordt 
bepaald door vergelijking met de controles van het antigeen die 0, 25, 
50, 75 en 100% agglutinatie aangeven. De titer van elk serum wordt 
uitgedrukt in internationale agglutinatie-eenheden per ml. in de test 
worden controles opgenomen met een negatief serum en een positief serum 
dat zodanig is verdund dat het 30 internationale agglutinatie-eenheden 
per ml bevat. 
H. Enzyme-linked immunosorbent assay (El Isa) voor het opsporen van runder-
brucellose 
1. De volgende materialen en reagentia worden gebruikt : 
a) microtiterplaten, cuvettes of ander vast dragermateriaal; 
b) het antigeen wordt met of zonder behulp van polyklonale of monoklonale 
anti lichamen op de vaste drager gefixeerd; 
c) de te testen lichaamsvloeistof; 
d) een overeenkomstig positief en negatief controleserum; 
e) een conjugaat; 
f) een op het gebruikte enzym afgestemd substraat; 
g) eventueel een remmingsoplossing; 
h) oplossingen voor de verdunning van de te onderzoeken monsters, de 
bereiding van de reagentia en het spoelen van de vaste dragers; 
i) een aan het gebruikte substraat aangepast afleessysteem. 
2. Standaardisatie en gevoeligheid van de testmethode : 
1. tankmelkmonsters worden als negatief aangemerkt wanneer de reactie 
kleiner is dan 50% van de reactie bij een verdunning 1:10.000 van het 
tweede internationale brucellosestandaardserum, aangelegd in negatieve 
melk; 
2. individuele serummonsters worden als negatief aangemerkt wanneer de 
reactie kleiner is dan 10% van de reactie bij een verdunning 1:200 van 
het tweede internationale brucellosestandaardserum, aangelegd in 
zoutoploss ing of in een andere verdunning die is erkend volgens de 
procedure van artikel 12 na advies van het Wetenschappelijk Veterinair 
Comité. 
De Elisa-normen voor brucel«ose zijn vastgesteld in bijlage C, deel A, punt 
1 en punt 2 (te gebruiken in de op het etiket aangegeven verdunningen). 
3. Voorwaarden voor het gebruik van de Elisa bij runderbrucellose 
De Elisa mag worden gebruikt bij een melk- of meIkweimonster dat is genomen 
van de melk die is verzameld op een bedrijf met ten minste 30% melkkoeien 
in de lactatieperiode. 
Indien gebruik wordt gemaakt van deze methode, moet ervoor worden gezorgd 
dat een verband kan worden gelegd tussen de genomen monsters en de dieren 
waarvan de onderzochte melk of het onderzochte serum afkomstig is. 
BIJLAGE D 
HOOFDSTUK I 
BEDRIJVEN. LID-STATEN OF GEBIEDEN DIE VRIJ ZIJN VAN ENZOÖTISCHE BOVIENE LEUKOSE 
A. Een bedrijf is vrii van enzoötische boviene leukose : 
i) indien in de laatste twee jaar op dat bedrijf geen enkel geval van enzo­
ötische boviene leukose is aangetoond of bevestigd op klinische gronden 
of op basis van de uitkomsten van een laboratoriumonderzoek, en 
ii) indien alle dieren op het bedrijf die ouder zijn dan 24 maanden, in de 
laatste 12 maanden negatief hebben gereageerd op twee tests die over­
eenkomstig deze bijlage met een tussenpoos van ten minste 4 maanden zijn 
verricht, of 
i i i) indien het voldoet aan het bepaalde onder i) hierboven en gelegen is in 
een Lid-Staat die of een gebied dat vrij is van enzoötische boviene 
leukose. 
B. Een individueel bedrijf behoudt zijn status als vrij van enzoötische boviene 
leukose : 
') zolang aan het bepaalde in deel A. onder i). wordt voldaan: 
ii) indien op het bedrijf alleen dieren worden binnengebracht die afkomstig 
zijn van een bedrijf dat vrij is van enzoötische boviene leukose; 
i i i ) indien alle dieren OP het bedrijf die ouder zijn dan 24 maanden, nog 
steeds negatief reageren OP een test die volgens het bepaalde in 
hoofdstuk II met een tussenpoos van drie Jaar wordt verricht. 
C De status ais bedrijf dat vrij is van enzoötische boviene leukose, wordt 
geschorst indien niet aan de in deel B vastgestelde voorwaarden wordt voldaan. 
D. De status blijft geschorst totdat aan de volgende eisen wordt voldaan : 
1. Wanneer een enkel dier op een bedrijf dat vrij is van enzoötische boviene 
leukose, positief heeft gereageerd op een van de in hoofdstuk II genoemde 
tests : 
-Hfc-
i) moeten het dier dat positief heeft gereageerd en, wanneer het een koe 
betreft, het eventuele kalf daarvan, van het bedrijf zijn verwijderd 
om onder toezicht van de veterinaire autoriteiten te worden geslacht; 
ii) moeten de overblijvende dieren negatief hebben gereageerd op een 
serologische test die overeenkomstig hoofdstuk II ten minste drie 
maanden na verwijdering van het laatste positieve dier en het 
eventuele nageslacht daarvan, is verricht; 
iii) moet een epizoötio logisch onderzoek worden ingesteld en moeten voor de 
bedrijven die uit epizoötiologische oogpunt met het besmette bedrijf 
in verband kunnen worden gebracht, de onder ii) bedoelde maatregelen 
worden genomen. 
De bevoegde autoriteit kan evenwel een uitzondering toestaan op de 
verplichting tot het slachten van het kalf van een besmette koe, wanneer 
het kalf onmiddellijk na het kalveren van zijn moeder is gescheiden. In dat 
geval moet het kalf aan de in punt 2, onder iii), hieronder vastgestelde 
eisen voldoen. 
2. Wanneer meer dan één dier van een bedrijf dat vrij is van enzoötische 
boviene leukose, positief heeft gereageerd of wanneer de besmetting op een 
bedrijf is bevestigd : 
i) moeten de dieren die positief hebben gereageerd, en, wanneer het 
koeien betreft, de kalveren daarvan, van het bedrijf worden verwijderd 
om onder toezicht van de veterinaire autoriteiten te worden geslacht; 
ii) moeten alle dieren die ouder zijn dan 24 maanden, negatief reageren op 
twee tests die overeenkomstig hoofdstuk II met een tussenpoos van ten 
minste 4 en ten hoogste 12 maanden worden verricht; 
iii) moeten alle andere dieren, na identificatie, op het bedrijf blijven 
totdat zij ouder zijn dan 24 maanden en negatief hebben gereageerd op 
de onder ii) hierboven bedoelde tests; 
iv) moet een epizoötiologisch onderzoek worden ingesteld en moeten voor 
alle bedrijven die uit epizoötiologisch oogpunt met het besmette 
bedrijf in verband kunnen worden gebracht, de onder ii) hierboven 
vastgestelde maatregelen worden toegepast. 
-H*-
De bevoegde autoriteit kan evenwel een uitzondering toestaan op de 
verplichting tot het slachten van het kalf van een besmette koe, wanneer 
het kalf onmiddellijk na het kalveren van zijn moeder is gescheiden. In 
dat geval moet het kalf aan de in punt 2, onder iii), vastgestelde eisen 
voI doen. 
3. Indien de status als bedrijf dat vrij is van enzoötische boviene leukose om 
een andere reden is geschorst, moeten alle OP het bedrijf aanwezige dieren 
die ouder zijn dan 24 maanden, negatief reageren op een serologische test 
die wordt uitgevoerd overeenkomstig hoofdstuk II. 
E. Volgens de procedure van artikel 12 kan de Commissie voorstellen een Lid-Staat 
of een gebied van een Lid-Staat als vrij van enzoötische boviene leukose te 
erkennen : 
a) indien ten minste 99,8% van de rundveehouderijbedrijven vrij zijn van 
enzoötische boviene leukose als bedoeld in deel A hierboven of, 
b) indien in de laatste drie jaar in de Lid-Staat of het gebied geen enkel 
geval van enzoötische boviene leukose is bevestigd en 
wanneer het gaat om een Lid-Staat, in de laatste 24 maanden bij ten minste 
10% van alle bedrijven, aselect gekozen, alle dieren die ouder zijn dan 24 
maanden, negatief hebben gereageerd op een test overeenkomstig hoofdstuk 
I I, of 
wanneer het gaat om een gebied van een Lid-Staat, alle dieren die ouder 
zijn dan 24 maanden, negatief hebben gereageerd op een test overeenkomstig 
hoofdstuk I I . 
F- Een Lid-Staat of een gebied van een Lid-Staat behoudt de status als vrij van 
enzoötische boviene leukose : 
i) indien ieder jaar hetzij op basis van een aselect monster met een 
betrouwbaarheid van 99% is geconstateerd dat minder dan 0,2% van de 
bedrijven besmet is, hetzij ten minste 20% van alle runderen die ouder 
zijn dan twee Jaar, is onderzocht en negatief heeft gereageerd op een 
test die is uitgevoerd overeenkomstig hoofdstuk II, 
of 
-kS-
ii) indien ten minste in de laatste drie jaar in de Lid-Staat of het gebied 
ten hoogste één geval van enzoötische boviene leukose is geconstateerd 
per 10.000 bedrijven; in dat geval kan volgens de procedure van artikel 
12 worden besloten tot stopzetting van de routinematige serologische 
tests, op voorwaarde dat : 
- alle runderen die op het grondgebied van de Lid-Staat of dat gebied 
worden geslacht, na het slachten worden gekeurd door een officiële 
dierenarts die, ingeval hij een gezwel constateert, telkens een 
laboratoriumonderzoek aanvraagt, en 
- de Lid-Staat melding maakt van elk geval van enzoötische boviene 
leukose in het gebied waarvoor de beslissing van de Commissie geldt. 
De Commissie kan volgens de procedure van artikel 12 voorstellen de 
beslissing tot stopzetting van de routinematige serologische tests te 
schorsen of in te trekken; en 
- alle runderen die positief reageren op een immunodiffusietest, worden 
geslacht en voor het bedrijf beperkende maatregelen blijven gelden 
totdat het op grond van bijlage D, hoofdstuk I, deel D, zijn status 
weer heeft verworven. 
G. i ) De status van een Lid-Staat of een gebied van een Lid-Staat als vrij van 
enzoötische boviene leukose wordt geschorst, volgens de procedure van 
artikel 12. indien enzoötische boviene leukose wordt geconstateerd en 
bevestigd bij meer dan 0.2% van de bedrijven in het gebied of in de Lid-
Staat. 
i i) De status als vrij van enzoötische boviene leukose kan weer worden 
toegekend volgens de procedure van artikel 12 : 
a. indien, afgezien van de in deel D, punt 1 en punt 2, hierboven 
vastgestelde maatregelen, ten minste 20% van de overige bedrijven in het 
gebied of in de Lid-Staat, aselect gekozen, binnen 12 maanden een van de 
in hoofdstuk II vastgestelde tests heeft ondergaan; 
b. indien uit de resultaten van deze tests met een betrouwbaarheid van 99% 
blijkt dat minder dan 0.2% van de bedrijven besmet is. 
BIJLAGE D 
HOOFDSTUK I I 
TESTS VOOR HET OPSPOREN VAN ENZOÖTISCHE BOVIENE LEUKOSE 
Voor de opsporing van enzoötische boviene leukose wordt gebruik gemaakt van de 
immunodiffusietest overeenkomstig het bepaalde in de delen A en B hieronder, of 
van de enzyme-1 inked immunosorbent assay (Elisa) overeenkomstig het bepaalde in 
deel C hieronder. De immunodiffusiemethode mag alleen worden gebruikt voor indi­
viduele tests. Indien de testresultaten op een naar behoren gemotiveerde wijze 
worden betwist, wordt een aanvullende controle verricht met behulp van de 
immunodiffusietest. 
A. Aoar-gel-immunodif fusietest op enzoötische boviene leukose 
1. Het bij deze test te gebruiken antigeen moet de glycoproteïnen van het 
runderleukosevirus bevatten. Het antigeen moet gestandaardiseerd zijn ten 
opzichte van een standaardserum (E.I.-serum) dat wordt betrokken bij het 
Statens Veterinaere Serum laboratorium, Bülovsvej 27, 1870 Ktfbenhavn V. 
2. De hieronder vermelde officiële instellingen moeten worden belast met het 
standaardiseren van het eigen standaardantigeen ten opzichte van het 
officiële EEG-standaardserum (E.I.-serum) dat wordt betrokken bij het 
Statens Veterinaere Serum laboratorium te Kopenhagen : 
a) Duitsland Bundesforschungsanstalt für Viruskrankheiten der Tiere, 
Tüb i ngen; 
b) België : Nationaal Instituut voor Diergeneeskundig Onderzoek, Brussel; 
c) Frankrijk : Laboratoire national de pathologie bovine, Lyon; 
d) Groothertogdom Luxemburg : -
-So-
e) Italië : istituto Zooprofilattico Sper intenta(e, Perugia; 
f) Nederland : Centraal Diergeneeskundig Instituut, Afdeling Rotterdam; 
g) Denemarken t Statens Veterinaere Serum laboratorium, Ktöbenhavn V. 
h) Ierland : Veterinary Research Laboratory, Abbotstown, Dublin; 
i) Verenigd Koninkrijk : 
1. Groot-Brittannië : The Central Veterinary Laboratory, Weybridge, 
Eng I and; 
2. Noord-Ier land : The Veterinary Research Laboratory. Stormont, 
Belfast; 
j) Spanje : Subdirección general de sanidad animal. Laboratório de San 1 dad 
y Produceión Animal ALGETE (Madrid); 
k) Portugal : Laboratório Nacional de Investigacao veterInâria, Lisboa. 
I) Griekenland : — 
3. Ten minste eenmaal per Jaar dienen de standaardanti genen die in het 
laboratorium worden gebruikt, te worden voorgelegd aan de hierboven in punt 
2 vermelde EEG-referentie laborator ia om er opnieuw ten opzichte van het 
officiële EEG-standaardserum te worden getoetst. Bovendien kan het 
gebruikte antigeen ook worden gestandaardiseerd volgens de onder B 
beschreven methode. 
4. Voor de uitvoering van deze test zijn de volgende reagentia vereist : 
a) antigeen : het antigeen moet glycoproteTnen bevatten die specifiek zijn 
voor het virus van enzoötische boviene leukose dat is gestandaardiseerd 
ten opzichte van het officiële EEG-serum; 
b) het testserum; 
c) een controleserum waarvan bekend is dat het positief is; 
d) agar-gel 
0,8% agar, 
8,5% NaCI, 
0,05 M Tris-bufferoploss ing pH 7,2. 
15 ml agar moet in een petrischaal met een diameter van 85 mm worden 
overgebracht, zodat het laagje agar een dikte heeft van 2,6 mm. 
5. In de agar moeten zeven vochtvrije putjes worden gemaakt tot op de bodem 
van het schaaltje, en wel zodanig dat één putje in het midden ligt en de 
zes overige in de cirkel er omheen. 
Diameter van het centrale putje : 4 mm. 
Diameter van de perifere putjes : 6 mm. 
Afstand tussen het centrale en de perifere putjes : 3 mm. 
6. Het centrale putje moet worden gevuld met het standaardantigeen, de 
perifere putjes 1 en 4 (zie schema) met positief serum en de putjes 2, 3, 5 
en 6 met testserum. De putjes moeten worden gevuld totdat de meniscus 
verdwi Jnt. 
60 
so i 
O 
O 02 
O 3 
o 
4 
-CU 
7. Dit resulteert in onderstaande hoeveelheden reagentia : 
Antigeen : 32 microliter. 
Controleserum : 73 microliter. 
Testserum : 73 microliter. 
8. Gedurende 72 uur bij kamertemperatuur (20-27'O incuberen in een gesloten 
vochtige kamer. 
9. Aflezing van de test is reeds mogelijk 24 en 48 uur na het begin van de 
incubatie, maar het definitieve resultaat wordt pas na 72 uur verkregen : 
a) een testserum is positief indien het een specifieke précipitât ielijn 
vormt met het B.L.V.-ant igeen en een volledig identieke lijn met het 
controleserum; 
b) een testserum is negatief indien het geen specifieke lijn vormt met het 
B.L.V.-antigeen en indien het de lijn van het controleserum niet buigt; 
c) de reactie wordt geacht geen uitsluitsel te geven indien : 
i) de lijn van het controleserum wel in de richting van het B.L.V.-
antigeen wordt gebogen maar het testserum toch geen duidelijke 
précipitât ielijn vormt met het antigeen 
of 
ii) de reactie niet duidelijk positief of negatief is. 
Indien de reactie geen uitsluitsel geeft kan de test worden overgedaan, 
eventueel met geconcentreerd serum. 
10• De putjes mogen volgens een ander patroon worden aangebracht, op 
voorwaarde dat het E4-serum in de verdunning 1:10 (in negatief serum) een 
positieve reactie te zien geeft. 
B. Methode voor standaardisatie van het antigeen 
Uitrusting en materiaal : 
1. 40 ml agar (1,6%) in 0,05 M Tris/HCI-bufferoplossing, pH 7,2 met 8,5% NaCI; 
2. 15 ml runderleukoseserum met alleen anti lichamen die gericht zijn tegen de 
glycoproteïnen van het runderleukosevirus, verdunning 1:10 in 0,05 M 
Tris/HCI-bufferoplossing, pH 7,2 met 8,5% NaCI; 
3. 15 ml runderleukoseserum met alleen anti lichamen die gericht zijn tegen de 
glycoproteïnen van het runderleukosevirus, verdunning 1:5 in 0,05 M 
Tris/HCI-buffferoplossing, pH 7,2 met 8,5% NaCI; 
4. vier plastic petrischaaltJes met een diameter van 85 mm; 
5. een buisje met een diameter van 4-6 mm; 
6. een referentie-antigeen; 
7. het te standaardiseren antigeen; 
8. een waterbad (56'C). 
Procedure : 
De agar (1,6%) oplossen in de Tris/HCI-buffervloeistof door het mengsel 
voorzichtig te verwarmen tot 100'C. Daarna gedurende één uur in het waterbad 
(56*C) plaatsen. Ook het verdunde runderleukoseserum in het waterbad (56"C) 
plaatsen. 
Vervolgens 15 ml van de agaroplossing (56*C) vermengen met de 15 ml runder-
leukoseserum (1:10), snel schudden en het mengsel in twee petrischaaltjes 
gieten, 15 ml in elk schaaltje. 
Deze procedure herhalen met het runderleukoseserum in de verdunning 1:5. 
Wanneer de agar hard is geworden, dienen daarin met het buisje putjes te 
worden gemaakt volgens onderstaand schema : 
-*v 
Petrischaal nr. I 
serum 1:10 Petrischaal nr. 2 
scrum 1:10 
Petrischaal nr. 3 
serum 1:5 Petrischaal nr. 4 
scrum 1:5 
Toevoeging van antigeen : 
I. PetrischaaltJes 1 + 3 
A - onverdund referentie-antigeen 
B - referentie-antigeen in de verdunning 1:2 
C + E - referentie-antigeen 
D - onverdund te standaardiseren antigeen 
II. Petrischaaltjes 2+4 
A - onverdund te standaardiseren antigeen 
B - te standaardiseren antigeen in de verdunning 1:2 
C - te standaardiseren antigeen in de verdunning 1:4 
D » te standaardiseren antigeen in de verdunning 1:8 
-SS ^ 
Aanvullende aanwijzingen : 
1. Met het oog op een optimale précipitât ie moet de test worden uitgevoerd met 
twee verschillende verdunningen van het serum (1:5 en 1:10). 
2. Indien de précipitâtiediameter met beide verdunningen te klein is, moet het 
serum verder worden verdund. 
3. Indien de précipitâtiediameter met beide verdunningen te groot is en te 
onduidelijk, moet een minder sterke verdunning van het serum worden genomen. 
4. De uiteindelijke concentratie van de agar bedraagt 0,8%, die van de sera 5 
respectieve I ijk 10%. 
5. De gemeten diameters dienen op bijgevoegd coördinatenstelsel te worden geplot. 
De verdunning van het te standaardiseren antigeen die dezelfde diameter heeft 
Diameter 
mm x 
13 -
12 -
11 -
10 
9 -
8 -
7 -
6 
5 -
4 — 
3 -
2 
i H 
i, A i* Z ï5 îii h? r 
1:1 1:2 1:4 i:g 
Verdunning antigeen 
-s*-
C. Enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) voor het opsporen van enzoötische 
boviene leukose 
1. De volgende materialen en reagentia moeten worden gebruikt : 
a) microtiterplaten, cuvettes of ander vast dragermateriaal; 
b) het antigeen wordt met of zonder behulp van polyklonale of monoklonale 
anti lichamen op de vaste drager gefixeerd. Indien directe coat ing van 
de vaste drager met het antigeen wordt toegepast, moeten alle positief 
reagerende monsters opnieuw worden getoetst aan het controIe-antigeen. 
Het controIe-antigeen moet identiek zijn aan het gebruikte antigeen, 
behalve wanneer wordt gewerkt met antigeen van het boviene-leukosevirus. 
Indien coating van de vaste drager met anti lichamen wordt toegepast, 
mogen de anti lichamen alleen reageren met de anti genen van het boviene-
leukosevirus en niet met andere anti genen; 
c) de te testen lichaamsvloeistof; 
d) een overeenkomstig positief en negatief controleserum; 
e) een conjugaat; 
f) een op het gebruikte enzym afgestemd substraat; 
g) eventueel een remmingsoplossing; 
h) oplossingen voor de verdunning van de te onderzoeken monsters, de 
bereiding van reagentia en het spoelen van de vaste dragers; 
i) een aan het gebruikte substraat aangepast afleessysteem. 
-«•¥-
2. Standaardisatie en gevoeligheid van de testmethode : 
De gebruikte Elisa moet zo gevoelig zijn dat E4-serum een positieve reactie 
te zien geeft wanneer het (voor serummonsters) 10 keer of (voor 
melkmonsters) 250 keer sterker is verdund dan de verdunning die met 
gegroepeerde individuele monsters wordt verkregen. Indien een testmethode 
wordt toegepast waarbij monsters (serum- en melkmonsters) individueel 
worden onderzocht, moet het E4-serum in de verdunning 1:10 (in negatief 
serum) of 1:250 (in negatieve melk) een positieve reactie te zien geven, 
wanneer het in eenzelfde verdunningsgraad wordt onderzocht als de 
individuele monsters. De in deel A, punt 2, genoemde officiële instellingen 
zijn verantwoordelijk voor de kwaliteitscontrole van de Elisa en zij moeten 
met name voor elke produktiebatch bepalen hoeveel monsters, naar gelang van 
het voor het E4-serum verkregen gehalte, moeten worden gegroepeerd. 
Het E4-serum moet worden betrokken bij het Nationaal Veterinair 
Laboratorium in Kopenhagen. 
3. Voorwaarden voor het gebruik van de Elisa bij EBL 
De Elisa mag worden gebruikt bij een melk- of meIkweimonster dat is genomen 
van de melk die is verzameld op een bedrijf met ten minste 30% melkkoeien 
in de lactat ieper iode. 
Indien gebruik wordt gemaakt van deze methode, moeten maatregelen worden 
getroffen om een verband te kunnen leggen tussen de genomen monsters en de 
dieren waarvan de onderzochte melk of het onderzochte serum afkomstig is. 
BIJLAGE E (I) 
a) Runderziekten : 
- Rabies. 
- Tuberculose. 
- Brucellose. 
- Besmettelijke boviene Pleuropneumonie. 
- Enzoötische boviene leukose. 
b) Varkensziekten 
- Rabies. 
- Brucellose 
BIJLAGE E (il) 
Ziekte van Auieszky 
Infectieuze boviene rhinotracheitis 
Besmetting met Brucella suis 
CERTIFICAAT NR SOORT runderen/varkens slachtdleren/fokdieren/gebruiksdleren 
LID-STAAT van herkomst 
A. BEDRIJF VAN HERKOMST 
Naam 
Referent ienummer 
Het bedrijf van herkomst is : 
officieel tuberculosevrij Ja/nee 
officieel brucellosevriJ Ja/nee 
brucellosevrIJ Ja/nee 
leukosevrij Ja/nee 
DATUM VAN VERTREK 
Handtekening 
B. IDENTIFICATIE VAN HET DIER 
Ras type leeftijd GEBIED VAN HERKOMST 
Adres 
De hieronder genoemde dieren zijn 
onderzocht overeenkomstig Richtlijn 
64/432/EEG als VOlgt : 
DATUM TEST 
tuberculinatie Ja/niet vereist 
SAT brucellose Ja/niet vereist 
test op leukose Ja/niet vereist 
Officiële dierenarts, bedrijf van 
herkomst 
totaal aantal dieren 
officiële identificatie 
C. ERKENDE MARKT 
Ligging 
Adres LAADPLAATS/VERZAMELPLAATS 
Ligging 
Adres 
datum referentienummer 
Handteken i ng/stempeI 
D. GEADRESSEERDE 
Adres datum referent ienummer 
de aanvullende garanties ten aanzien van 
voor ... (Beschikking .../EEG van de Commissie) INTRACOMMUNAUTAIRE HANDEL 
Transportmiddel 
Identificatie 
Na grondig onderzoek verklaart onder­
getekende dat 1) alle desbetreffende 
bepalingen van Richtlijn 64/432/EEG 
van de Raad zijn nagekomen, 
2) de voorgenomen verplaatsing is 
geregistreerd op ANIMO, 
3) de hierboven genoemde dieren voldoen aan 
(ziekte) voor ... (soort/type) bestemd 
datum gezondheidsonderzoek 
dit certificaat is geldig tot handtekening 
Naam in hoofdletters datum 
>>>>>>>>>>>D» >D» >fi» >0I >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> 03 
(((((((((tQiitditoofiiottaDiofiiaAoofliooooaooQtciaooaioooaoooo 
ro ro ro -* O 
co ro -* (Û 00 NIO)0) 0) 
co ro ro O) O) O) O) O) O) ui ^Xk-^cocowwcoojrorororororororororororo-* 
ro ro ro ro -* -* 
a o 
CD 
a a> ct> a 
CD 
> > > 
TT 7e 7T 
CD CD CD 
ro ro ro 
co ro -^ > > 
7T A" 
CD CD 
-* CD 
O > I > > -i I -i -i 
ft \ ft ft 
7* \ 7* 7* 
CD I CD CD 
CO CO 
ro CO 
-*> a o> 0> «-• CD 
w * CD 
• CD "i 
CD </> 
CD Q. f 
CD CD CD 
CO CO CO 
ft ft r* 
CD -1 -1 
CD CD 
X3 "O 
CD CD coro-»rororororo 
*->. ^+. *~S *S /""N 
CD a o or DJ — ?T' rr <Q -* CD Q.O or oi 
CD 
CO 
CO CD 
CO 
CO > I 
-I I 
r* I 
— I 
fT I 
CD I 
— I 
CO 
ro >>i >>>>>>>>> 
7C7C! 7r7r7ï7c7*7*r>K7<?7c 
CD CD I CDCDCDCDCDCDCDCDCD 
coco cococococororororo 
roro üiroNM-*^'>'-N^ • • — ft co -•» CD > > > I > 
-i -i -x i -i 
r* r* r* I #-* 
7C 7C 7T I 7T 
CD CD CD CD 
ro ro ro ro -»• 
a> o. o o-
<Q -»» CD O* 01 3 
CÛ 
o 
•or 
3D 
O 
3" 
o> 
.&. 
•U 
CO 
ro 
m m CD O 
O z o o 
30 o > z 
> 
CD m 03 
f-
> 
ff> 
m i 
o 
I 
-6 A-
Bijwerking Richtlijn J 
Artikel 12.4, eerste alinea ! 
Art ike I 12.4, tweede alinea ! 
Artikel 12.4, derde alinea ! 
Artikel 13.1. I 
Artikel 13.2. - ! 
Artikel 13.3. j 
Artikel 13.4, eerste alinea I 
Artikel 13.4, tweede alinea I 
Artikel 14 I 
Artikel 15 I 
Bi jI age A i 
BiJI age B.1. - B.26. I 
Bi JI age B.27. I 
BiJlage B.28 - B.31. ! 
Bi JI age B.32. ! 
Bi Jlage C.A. I 
BiJlage C.B. j 
BiJlage C.C. I 
B i j 1 age CD. ! 
Bi Jlage C.E. ! 
Bijlage C.F. ! 
Bi Jlage C.G. j 
BiJlage C.H. I 
Bi jlage D.I. I 
BiJlage D.I I.A.1. - D.I I.A.9. j 
Bijlage D.I I.A.10. J 
Bijlage D.I I.B. | 
Bijlage D.I I.C. ! 
Bi jlage E.I. I 
Bi jlage E.I I. I 
B i JI age F. I Richtlijn 64/432/EEG 
Artikel 12.4, eerste alinea 
Artikel 12.4, tweede alinea 
Artikel 13.1. 
Artikel 13.2. 
Artikel 13.3. 
Artikel 13.4, eerste alinea 
Artikel 14 
Artikel 16 
Bijlage B.1. - B.26 
Bijlage B.27. 
Bijlage B.28. - B.31. 
BiJ lage B.32. 
Bi J lage CA. 
Bi j lage C.B. 
Bi J lage CC 
Bi J lage CD. 
Bij lage CE. 
Bi j lage CF. 
Bi J lage CG. 
Bij lage G. 1 1 .C 
Bi jlage G.I. 
Bijlage G.I I.A.1. - G.I I.A.9. 
Bi Jlage G.I I.B. 
B i JI age G.I I.C 
y' - &Î. -
ISSN 0254-1513 
r/Mm) 698 def. 
DOCUMENTEN 
NL io 03 
Catalogusnummer : CB-CO-93-750-NL-C 
• i ISBN 92-77-63144-9 
Bureau voor officiële publikaties der Europese Gemeenschappen 
Lr2985 Luxemburg