2)

Het volgende deel D wordt toegevoegd: „D. Magneetroerdermethode voor verzameldigestie/„isolatie op filter” en detectie van larven door een latexagglutinatietest Deze methode wordt alleen als gelijkwaardig beschouwd voor de controle van vlees van gedomesticeerde varkens. 1. Apparatuur en reagentia a) Mes of schaar en pincet voor de monsterneming; b) Schalen met een indeling in 50 vierkanten waarop steeds ongeveer 2 g vlees past, of andere hulpmiddelen die gelijkwaardige garanties bieden voor de traceerbaarheid van de monsters; c) Een hakker met een scherp mes. Indien de monsters zwaarder zijn dan 3 g, moet een vleesmolen met openingen van 2-4 mm of een schaar worden gebruikt. In het geval van bevroren vlees of tong (na verwijdering van het vel, dat niet kan worden verteerd) is een vleesmolen nodig en moet een aanzienlijk grotere hoeveelheid monster worden genomen; d) Magneetroerders met een van een temperatuurregelaar voorziene verwarmingsplaat en met teflon beklede roerstaafjes van ongeveer 5 cm lang; e) Bekerglazen, 3 l; f) Zeven, roestvrij staal, maaswijdte 180 micron, uitwendige diameter 11 cm; g) Stalen filtratieapparaat voor filters met 20 μm maaswijdte met een stalen trechter; h) Vacuümpomp; i) Metalen of plastic tanks, inhoud 10-15 l, voor het opvangen van de digestievloeistof; j) Een driedimensionale roterende schudder; k) Aluminiumfolie; l) Zoutzuur 25 %; m) Pepsine, gehalte: 1: 10 000 NF (US National Formulary) overeenkomend met 1: 12 500 BP (British Pharmacopoeia) en 2 000 FIP (International Pharmaceutical Federation), of gestabiliseerde vloeibare pepsine met minimaal 660 eenheden van de Europese Farmacopee/ml; n) Leidingwater, verwarmd tot 46-48 °C; o) Balans, nauwkeurig tot op 0,1 g; p) Pipetten van verschillende maten (1, 10 en 25 ml), micropipetten volgens de instructies van de fabrikant van de latexagglutinatietest en pipethouders; q) Filters van nylon met een maaswijdte van 20 micron met een diameter die op het filtratiesysteem past; r) Plastic of stalen pincet van 10-15 cm; s) Conische monsterflesjes/buisjes van 15 ml; t) Een stamper met een conisch uiteinde van teflon of staal die in de conische monsterflesjes/buisjes past; u) Een thermometer, nauwkeurig tot op 0,5 °C in het meetgebied 1-100 °C; v) Latexagglutinatiekaarten van de Trichin-L antigeentestkit gevalideerd onder code nr. EURLP_D_001/2011; w) Bufferoplossing met conserveermiddel (monsterverdunner) van de Trichin-L antigeentestkit gevalideerd onder code nr. EURLP_D_001/2011; x) Buffer aangevuld met conserveermiddel (negatieve controle) van de Trichin-L antigeentestkit gevalideerd onder code nr. EURLP_D_001/2011; y) Buffer aangevuld met Trichinella spiralis-antigenen en conserveermiddel (positieve controle) van de Trichin-L antigeentestkit gevalideerd onder code nr. EURLP_D_001/2011; z) Buffer met polystyreendeeltjes gecoat met antilichamen aangevuld met conserveermiddel (latexdruppels) van the Trichin-L antigeentestkit gevalideerd onder code nr. EURLP_D_001/2011; aa) Wegwerpstaafjes. 2. Monsterneming Zie hoofdstuk I, punt 2. 3. Werkwijze I. Voor complete pools (100 g monster tegelijk) dient de werkwijze zoals aangegeven onder a) tot en met i) van hoofdstuk I, punt 3, onder I, te worden gevolgd. Daarnaast wordt de volgende procedure toegepast: a) Het filter (nylon, 20 micron maaswijdte) wordt op de filterhouder geplaatst. De stalen conische filtertrechter wordt op de houder bevestigd met het blokkeersysteem en de stalen zeef met een maaswijdte van 180 micron wordt op de trechter geplaatst. De vacuümpomp wordt op de filterhouder en de metalen of plastic tank aangesloten om de digestievloeistof op te vangen. b) Stop met roeren en giet de digestievloeistof door de zeef in de filtertrechter. Spoel het bekerglas met 250 ml gedistilleerd water. De spoelvloeistof dient in het filter gegoten te worden nadat de digestievloeistof is doorgelopen. c) Pak met het pincet het filtratiemembraan op bij de rand. Vouw het (minimaal) in vieren en plaats het in de 15 ml conische buis. d) Het filtratiemembraan wordt met de stamper naar de bodem van de 15 ml conische buis gedrukt en krachtig samengeperst door de stamper, die in het gevouwen filtratiemembraan dient te zijn geplaatst, een aantal malen heen en weer te bewegen overeenkomstig de instructies van de fabrikant. e) De monsterverdunner wordt met een pipet in de 15 ml conische buis toegevoegd en het filtratiemembraan wordt gehomogeniseerd met behulp van de stamper, door achtereenvolgende korte bewegingen heen en weer, waarbij abrupte bewegingen vermeden moeten worden om morsen van de vloeistof te vermijden, overeenkomstig de instructies van de fabrikant. f) De afzonderlijke monsters, de negatieve controle en de positieve controle worden met pipetten op verschillende velden van de agglutinatiekaart gebracht, overeenkomstig de instructies van de fabrikant. g) De latexdruppels worden met pipetten op ieder veld van de agglutinatiekaart toegevoegd, overeenkomstig de instructies van de fabrikant, zonder ze in aanraking te brengen met de monsters en controles. Vervolgens worden op ieder veld de latexdruppels voorzichtig gemengd met een wegwerpstaafje totdat de homogene vloeistof het gehele veld bedekt. h) De agglutinatiekaart wordt op de driedimensionale schudder geplaatst en geschud overeenkomstig de instructies van de fabrikant. i) Na de in de instructies van de fabrikant aangegeven tijd wordt het schudden gestopt en wordt de agglutinatiekaart op een vlak oppervlak gelegd en worden de reactieresultaten afgelezen. Bij een positief monster moeten druppelaggregaten verschijnen. Bij een negatief monster blijft de suspensie homogeen zonder druppelaggregaten. j) Alle uitrusting die in aanraking komt met vlees moet tussen de tests zorgvuldig ontsmet worden door ze enkele seconden lang onder te dompelen in heet water (60-90 °C). Oppervlakken waarop zich nog vleesresten of geïnactiveerde larven bevinden, kunnen schoongemaakt worden met een schone spons en leidingwater. Zodra de procedure beëindigd is, kunnen een paar druppels reinigingsmiddel aan het water toegevoegd worden om de uitrusting te ontvetten. Daarna dienen alle gebruikte voorwerpen een paar maal grondig afgespoeld te worden om alle sporen van het reinigingsmiddel te verwijderen. k) De stamper dient tussen tests zorgvuldig gedecontamineerd te worden door enkele seconden onderdompeling in ten minste 250 ml heet water (60-90 °C). Vleesresten of geïnactiveerde larven die zich eventueel nog op de stamper bevinden, moeten worden verwijderd met een schone spons en leidingwater. Zodra de procedure beëindigd is, kunnen een paar druppels reinigingsmiddel aan het water toegevoegd worden om de stamper te ontvetten. Daarna dient de stamper een paar maal grondig afgespoeld te worden om alle sporen van het reinigingsmiddel te verwijderen. II. Pools van minder dan 100 g zoals bedoeld in hoofdstuk I, punt 3, onder II Voor pools van minder dan 100 g dient de procedure als aangegeven in hoofdstuk I, punt 3, onder II, gevolgd te worden. III. Positieve of twijfelachtige uitslagen Bij een positieve of twijfelachtige latexagglutinatie-uitslag van een verzamelmonster wordt van elk varken nogmaals een monster van 20 g genomen zoals beschreven in hoofdstuk I, punt 2, onder a). De 20 g monsters van vijf varkens worden gepoold en onderzocht volgens de in punt I beschreven methode. Monsters van 20 groepen van vijf varkens dienen te worden onderzocht. Wanneer een positieve latexagglutinatie wordt verkregen van een groep van vijf varkens, worden van alle varkens in de groep nogmaals monsters van 20 g genomen, die elk afzonderlijk volgens een van de in hoofdstuk I beschreven methoden worden onderzocht. Parasietmonsters worden in ethanol 90 % geconserveerd voor de identificatie van de soort in het EU- of nationale referentielaboratorium. Na verzameling van de parasieten moeten positieve vloeistoffen gedecontamineerd worden door ze tot minimaal 60 °C te verhitten.”.