BIJLAGE III

Bemonstering en tests zoals bedoeld in de artikelen 4 en 7

1. De bemonstering en tests voor officiële detectieonderzoeken, zoals bedoeld in artikel 4, leden 1 en 2, worden als volgt verricht: Voor de bemonstering wordt een grondmonster gebruikt met een standaardvolume van ten minste 1 500 ml grond/ha, dat wordt samengesteld uit ten minste 100 boormonsters/ha, bij voorkeur in een rechthoekig raster met vakken van minimaal 5 m breed en maximaal 20 m lang tussen de bemonsteringspunten, dat de hele productielocatie omvat. Het volledige monster wordt gebruikt voor verder onderzoek, d.w.z. extractie van cysten, identificatie van de soort en, in voorkomend geval, bepaling van het pathotype of de virulentiegroep. Voor de tests wordt gebruikgemaakt van de volgende methoden om het gespecificeerde plaagorganisme te extraheren, die in de desbetreffende gevalideerde en internationaal erkende diagnostische protocollen worden beschreven: a) voor extractie, methoden op basis van de Fenwick-kan, de Schuiling-centrifuge, de Seinhorst-kan of de Kort-kan; b) voor detectie en identificatie, een van de volgende methoden: i) isolatie van Globodera-cysten uit het geëxtraheerde materiaal op basis van de morfologie van de cysten, gevolgd door identificatie van de soort op basis van de morfologie van individuele cysten en juvenielen, in combinatie met de conventionele PCR op basis van Bulman & Marshall 1997 (1) (in geval van twijfel over de aanwezigheid van G. tabacum kan daarnaast ook de conventionele PCR op basis van Skantar et al. 2007 (2) worden verricht); ii) isolatie van Globodera-cysten uit het geëxtraheerde materiaal op basis van de morfologie van de cysten, gevolgd door identificatie van de soort op basis van de morfologie van individuele cysten en juvenielen, in combinatie met de real-time-PCR op basis van Gamel et al. 2017 (3); iii) isolatie van cysten uit het geëxtraheerde materiaal, gevolgd door identificatie van de soort door middel van de real-time-PCR op basis van Gamel et al. 2017 (3).

2. De bemonstering voor officiële monitoringonderzoeken, zoals bedoeld in artikel 7, wordt verricht volgens een van de volgende methoden: a) de in punt 1, bedoelde bemonstering, gebruikmakend van een grondmonster met een volume van ten minste 400 ml grond/ha; b) een gerichte bemonstering van ten minste 400 ml grond na visueel onderzoek van wortels met zichtbare symptomen, of c) een bemonstering van ten minste 400 ml grond die na het oogsten aan de aardappelen hangt, mits de productielocatie waarop de aardappelen geteeld zijn, traceerbaar is. De tests voor officiële monitoringonderzoeken, zoals bedoeld in artikel 7, worden verricht overeenkomstig punt 1.

3. In afwijking van punt 1 mag het standaardvolume van het monster in de volgende gevallen worden verlaagd tot minimaal 400 ml grond/ha: a) er is schriftelijk bewijs dat er op de productielocatie gedurende de laatste zes jaar vóór het officiële detectieonderzoek geen aardappelen of in de lijst in bijlage I, punt 1, opgenomen planten zijn geteeld of aanwezig waren; b) bij de laatste twee opeenvolgende officiële detectieonderzoeken zijn geen specimens van het gespecificeerde plaagorganisme aangetroffen in monsters van 1 500 ml grond/ha en na het eerste officiële detectieonderzoek zijn uitsluitend aardappelen of in de lijst in bijlage I, punt 1, opgenomen planten geteeld waarvoor een officieel detectieonderzoek overeenkomstig artikel 4, lid 1, is vereist; c) bij het laatste officiële detectieonderzoek zijn geen specimens van het gespecificeerde plaagorganisme, noch cysten van het gespecificeerde plaagorganisme zonder levende inhoud aangetroffen, mits hierbij een monster van ten minste 1 500 ml grond/ha is genomen en mits er sinds dat laatste officiële detectieonderzoek op de productielocatie uitsluitend aardappelen of in de lijst in bijlage I, punt 1, opgenomen planten zijn geteeld waarvoor een officieel detectieonderzoek overeenkomstig artikel 4, lid 1, is vereist.

4. Voor percelen groter dan respectievelijk 8 ha en 4 ha mag het bemonsteringsvolume in de volgende gevallen worden verlaagd: a) bij de standaardbemonstering in de zin van punt 1 worden de eerste 8 ha bemonsterd volgens het daarin vermelde volume, maar geldt voor elke volgende hectare een verlaagd bemonsteringsvolume van ten minste 400 ml grond/ha; b) bij bemonstering met verlaagd volume in de zin van punt 3 worden de eerste 4 ha bemonsterd volgens het daarin vermelde volume, maar geldt voor elke volgende hectare een verlaagd bemonsteringsvolume van ten minste 200 ml grond/ha.

5. Zolang de gespecificeerde plaagorganismen niet op de desbetreffende productielocatie zijn aangetroffen, mag het verlaagde monstervolume zoals bedoeld in de punten 3 en 4 ook bij de volgende officiële detectieonderzoeken zoals bedoeld in artikel 3, lid 1, worden aangehouden.

6. Het standaardvolume van het grondmonster mag worden verlaagd tot minimaal 200 ml grond/ha, mits de productielocatie gelegen is in een gebied dat vrij is verklaard van het gespecificeerde plaagorganisme en dat is aangewezen en wordt onderhouden en gecontroleerd overeenkomstig de desbetreffende internationale normen voor fytosanitaire maatregelen (ISPM No 4) (4).

7. Het volume van het grondmonster bedraagt in alle gevallen ten minste 200 ml grond per productielocatie.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997). Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR). New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 25, 123-129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology 39(2), 133-144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017). Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii. Nematology 19 (7): 789-804.

(4) ISPM 4. 1995. Requirements for the establishment of pest free areas. Rome, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/