UITVOERINGSBESLUIT (EU) 2015/1554 VAN DE COMMISSIE

van 11 september 2015

tot vaststelling van bepalingen ter uitvoering van Richtlijn 2006/88/EG wat betreft voorschriften voor bewaking en diagnosemethoden

(Kennisgeving geschied onder nummer C(2015) 6188)

(Voor de EER relevante tekst)

DE EUROPESE COMMISSIE,

Gezien het Verdrag betreffende de werking van de Europese Unie,

Gezien Richtlijn 2006/88/EG van de Raad van 24 oktober 2006 betreffende veterinairrechtelijke voorschriften voor aquacultuurdieren en de producten daarvan en betreffende de preventie en bestrijding van bepaalde ziekten bij waterdieren (1), en met name artikel 49, lid 3, artikel 50, lid 4, artikel 57, onder b), en artikel 61, lid 3,

Overwegende hetgeen volgt:

Bij Richtlijn 2006/88/EG zijn minimale preventieve maatregelen vastgesteld voor de bewaking en de vroegtijdige opsporing bij waterdieren van de in de lijst van bijlage IV bij die richtlijn opgenomen ziekten (hierna „in de lijst opgenomen ziekten” genoemd), alsmede de bestrijdingsmaatregelen die bij een verdenking of het uitbreken van een in de lijst opgenomen ziekte moeten worden toegepast. Bij die richtlijn zijn tevens de voorschriften vastgesteld voor het verkrijgen van de ziektevrije status voor lidstaten of voor gebieden of compartimenten daarvan.

De uitroeiing van de in de lijst opgenomen ziekten en het verkrijgen van de ziektevrije status voor een lidstaat, gebied of compartiment moeten in de hele Unie op dezelfde beginselen worden gebaseerd en dezelfde wetenschappelijke aanpak volgen. Om die reden is het nodig op het niveau van de Unie specifieke voorschriften voor uitroeiings- en bewakingsprogramma's vast te stellen, alsmede de voor het verkrijgen van de ziektevrije status voor het gehele grondgebied van een lidstaat of voor een gebied of compartiment daarvan door de lidstaten te gebruiken bemonsterings- en diagnosemethoden.

De te verrichten laboratoriumonderzoeken in het geval van de verdenking of bevestiging van de aanwezigheid van in de lijst opgenomen ziekten moeten op het niveau van de Unie gelijk zijn en volgens dezelfde wetenschappelijke normen en protocollen worden verricht. Overeenkomstig Richtlijn 2006/88/EG is het nodig de door de daarvoor door de bevoegde autoriteit van de lidstaat aangewezen laboratoria te gebruiken specifieke diagnosemethoden en -procedures vast te stellen.

In de door de Wereldorganisatie voor diergezondheid (OIE) aangenomen Gezondheidscode voor waterdieren van de OIE (hierna „Gezondheidscode voor waterdieren” genoemd) worden normen vastgesteld voor verbetering van de gezondheid van waterdieren en van het welzijn van kweekvis overal ter wereld, waaronder ook normen voor een veilige internationale handel in waterdieren en producten daarvan. In een aantal hoofdstukken van de Gezondheidscode voor waterdieren zijn aanbevelingen opgenomen betreffende het gebruik van bepaalde diagnostische tests. Dergelijke door de OIE vastgestelde tests zijn in het Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals (Handboek inzake normen voor diagnostische tests voor waterdieren, hierna „Handboek voor waterdieren” genoemd) opgenomen. Om ervoor te zorgen dat de voorschriften van de Unie met betrekking tot de diagnose van ziekten bij waterdieren in overeenstemming zijn met internationale normen, moet bij de vaststelling van de in dit besluit vervatte regels rekening worden gehouden met de normen en aanbevelingen van de Gezondheidscode voor waterdieren.

In dit verband bevat het Handboek voor waterdieren een opsomming van meerdere ten behoeve van laboratoriumonderzoeken te gebruiken tests en procedures. Met het oog op een op het niveau van de Unie geüniformeerde wetenschappelijke basis voor de diagnose van de in de lijst opgenomen ziekten is het nodig een keuze te maken tussen de door de OIE aanbevolen diagnostische tests en diagnoseprocedures en aan te geven welke tests verplicht moeten zijn voor laboratoriumonderzoek in het kader van de uitvoering van bewakingsprogramma's en om de verdenking van de aanwezigheid van de in de lijst opgenomen ziekten te weerleggen dan wel de aanwezigheid ervan te bevestigen. Aangezien er in bepaalde gevallen ook behoefte zal zijn aan de beschikbaarheid van alternatieve methoden en procedures, moeten dergelijke alternatieve methoden worden beschreven en moet enige wetenschappelijke toelichting worden gegeven over wanneer en hoe zij zouden kunnen worden toegepast. Dit is met name nodig voor de meer gedetailleerde diagnoseprocedures.

Teneinde nauwkeurige en reproduceerbare diagnostische resultaten te verkrijgen, is het van belang dat de te gebruiken gedetailleerde procedures en protocollen worden gevalideerd overeenkomstig de in bijlage VI, deel I, bij Richtlijn 2006/88/EG bedoelde relevante kwaliteitsnormen. Voor veel van de in dit besluit opgenomen diagnosemethoden vormt het gebruik van commerciële testkits een noodzakelijk onderdeel van de diagnoseprotocollen en die testkits zijn door de referentielaboratoria van de Europese Unie met behulp van erkende tests voor de desbetreffende ziekten gevalideerd. In het belang van de rechtszekerheid moet in dit besluit naar de handelsbenamingen van die gevalideerde commerciële testkits worden verwezen.

Het kan voor bepaalde lidstaten moeilijk zijn met betrekking tot een of meer van de in de lijst opgenomen ziekten de ziektevrije status te verkrijgen voor het gehele grondgebied van die lidstaat of voor een gebied of compartiment daarvan. In dergelijke situaties kan de lidstaat wellicht afzien van het (opnieuw) verkrijgen van de ziektevrije status voor die in de lijst opgenomen ziekten. De minimale bestrijdingsmaatregelen die moeten worden toegepast in gevallen waarin de betrokken lidstaat afziet van het (opnieuw) verkrijgen van de ziektevrije status, moeten op het niveau van de Unie gelijk zijn en aan dezelfde criteria voldoen. Overeenkomstig Richtlijn 2006/88/EG is het derhalve nodig gedetailleerde regels voor de inperking van die in de lijst opgenomen ziekten alsmede minimale voorschriften voor de opheffing van die inperkingsmaatregelen vast te stellen.

Bij Beschikking 2001/183/EG van de Commissie (2) zijn de voorschriften vastgesteld met betrekking tot bemonsteringsschema's en diagnosemethoden voor de opsporing en bevestiging van de in de lijst opgenomen ziekten infectieuze hematopoëtische necrose en virale hemorragische septikemie. Bij Beschikking 2003/466/EG van de Commissie (3) zijn de voorschriften vastgesteld met betrekking tot bemonsteringsschema's en diagnosemethoden voor de opsporing van infectieuze zalmanemie, evenals criteria voor de indeling in gebieden en het officiële toezicht naar aanleiding van verdenking of bevestiging van de aanwezigheid van die ziekte. Bij Beschikking 2002/878/EG van de Commissie (4) zijn de voorschriften vastgesteld met betrekking tot bemonsteringsschema's en diagnosemethoden voor de opsporing en bevestiging van de in de lijst opgenomen ziekten bonamiose en marteiliose bij weekdieren. Met het oog op de bijwerking van de voorschriften, moeten die drie beschikkingen worden vervangen door dit besluit. De Beschikkingen 2001/183/EG, 2002/878/EG en 2003/466/EG moeten derhalve worden ingetrokken.

De in dit besluit vervatte maatregelen zijn in overeenstemming met het advies van het Permanent Comité voor planten, dieren, levensmiddelen en diervoeders,

HEEFT HET VOLGENDE BESLUIT VASTGESTELD:

Artikel 1

Onderwerp

Bij dit besluit worden regels vastgesteld voor:

de door de lidstaten toe te passen bewaking, bufferzones, bemonsterings- en diagnosemethoden in verband met de ziektestatus van die lidstaten of gebieden of compartimenten daarvan ten aanzien van de in de lijst van deel II van bijlage IV bij Besluit 2006/88/EG opgenomen niet-exotische ziekten bij waterdieren (hierna de „in de lijst opgenomen ziekten” genoemd);

de te gebruiken diagnosemethoden voor laboratoriumonderzoeken in het geval van verdenking of bevestiging van de aanwezigheid van in de lijst opgenomen ziekten; alsmede

de minimale bestrijdingsmaatregelen die moeten worden genomen in geval van verdenking of bevestiging van een in de lijst opgenomen ziekte in lidstaten, gebieden of compartimenten die niet vrij verklaard zijn van die in de lijst opgenomen ziekte.

Artikel 2

Definities

Voor de toepassing van dit besluit wordt verstaan onder:

a) „virale hemorragische septikemie” (VHS): een ziekte die wordt veroorzaakt door het virale-hemorragische-septikemievirus (VHSV), ook bekend als het Egtved-virus, een virus van het geslacht Novirhabdovirus uit de familie Rhabdoviridae;

b) „infectieuze hematopoëtische necrose” (IHN): een ziekte die wordt veroorzaakt door het infectieuze-hematopoëtische-necrosevirus (IHNV), een virus van het geslacht Novirhabdovirus uit de familie Rhabdoviridae;

c) „koiherpesvirusziekte” (KHVD): een ziekte die wordt veroorzaakt door het koiherpesvirus (KHV) uit de familie Alloherpesviridae. De wetenschappelijke benaming is cyprinide herpesvirus 3 (CyHV-3);

d) „infectieuze zalmanemie” (ISA): een ziekte die wordt veroorzaakt door besmetting met zalmanemievirus (ISAV) met HPR-deletie (deletie in de hypervariabele regio), een virus van het geslacht Isavirus uit de familie Orthomyxoviridae;

e) „besmetting met Marteilia refringens”: een ziekte die wordt veroorzaakt door een besmetting met Marteilia refringens, een protozo van het taxon Paramyxida;

f) „besmetting met Bonamia ostreae”: een ziekte die wordt veroorzaakt door een besmetting met Bonamia ostreae, een protozo van het taxon Haplosporea;

g) „wittevlekkenziekte” (WSD): een ziekte (white spot disease) die wordt veroorzaakt door het wittevlekkensyndroomvirus (white spot syndrome virus, WSSV), een dubbelstrengs DNA-virus van het geslacht Whispovirus uit de familie Nimaviridae.

Artikel 3

Minimale voorschriften voor uitroeiings- en bewakingsprogramma's

De lidstaten zorgen ervoor dat de regels van bijlage I betreffende bewakings- en uitroeiingsprogramma's, bufferzones, bemonsterings- en diagnosemethoden, alsmede de specifieke methoden en gedetailleerde procedures van bijlage II worden nageleefd bij de verlening, intrekking of herinvoering van de ziektevrije status voor een lidstaat of voor een gebied of compartiment daarvan ten aanzien van een of meer van de in de lijst opgenomen ziekten.

Artikel 4

Minimale voorschriften voor diagnosemethoden en specifieke voorschriften

De lidstaten zorgen ervoor dat de bestrijdingsmethoden van bijlage I en de specifieke diagnosemethoden en gedetailleerde procedures van bijlage II worden nageleefd bij de uitvoering van laboratoriumonderzoeken om de aanwezigheid van een in de lijst opgenomen ziekte te bevestigen dan wel uit te sluiten.

Artikel 5

Minimale bestrijdingsmaatregelen voor de inperking van in de lijst opgenomen ziekten en minimale voorschriften voor de opheffing van inperkingsmaatregelen in lidstaten, gebieden of compartimenten die niet vrij verklaard zijn van in de lijst opgenomen ziekten

De lidstaten zorgen ervoor dat de minimale bestrijdingsmaatregelen en minimale voorschriften voor de opheffing van inperkingsmaatregelen van bijlage I worden nageleefd bij de tenuitvoerlegging van bestrijdingsmaatregelen en de opheffing van inperkingsmaatregelen voor een of meer in de lijst opgenomen ziekten in lidstaten of gebieden of compartimenten daarvan die niet vrij verklaard zijn van die in de lijst opgenomen ziekten.

Artikel 6

Intrekkingen

De Beschikkingen 2001/183/EG, 2002/878/EG en 2003/466/EG worden ingetrokken.

Artikel 7

Toepassingsdatum

Dit besluit is van toepassing met ingang van 1 april 2016.

Artikel 8

Adressaten

Dit besluit is gericht tot de lidstaten.

(1) PB L 328 van 24.11.2006, blz. 14.

(2) Beschikking 2001/183/EG van de Commissie van 22 februari 2001 tot vaststelling van de bemonsteringsschema's en de diagnostische methoden voor de opsporing en bevestiging van bepaalde visziekten en tot intrekking van Beschikking 92/532/EEG (PB L 67 van 9.3.2001, blz. 65).

(3) Beschikking 2003/466/EG van de Commissie van 13 juni 2003 tot vaststelling van de criteria voor de indeling in gebieden en het officiële toezicht naar aanleiding van de vermoedelijke of de bevestigde aanwezigheid van infectieuze zalmanemie (ISA) (PB L 156 van 25.6.2003, blz. 61).

(4) Beschikking 2002/878/EG van de Commissie van 6 november 2002 tot vaststelling van de bemonsteringsschema's en de diagnostische methoden voor de opsporing en de bevestiging van bonamiose (Bonamia ostreae) en marteiliose (Marteilia refringens) bij weekdieren (PB L 305 van 7.11.2002, blz. 57).

(14) De monsters moeten worden verzameld en onderzocht gedurende twee jaarlijkse testperioden van elk één maand (namelijk in het voor- en in het najaar) of, in voorkomend geval, op basis van praktische overwegingen.

(12) De monsters moeten worden verzameld, opgeslagen en onderzocht gedurende twee jaarlijkse testperioden van elk één maand (namelijk in het voor- en in het najaar) of, in voorkomend geval, op basis van praktische overwegingen.

Bewakingsprogramma's voor lidstaten, gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van WSD, zoals bedoeld in punt I.3

het officiële onderzoek omvat ten minste één gezondheidsinspectie en één bemonstering van 10 schaaldieren indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op besmetting met WSD worden waargenomen, of van 150 schaaldieren indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen; De monsters worden getest overeenkomstig de in punt II.2 vermelde diagnosemethode (tweestaps PCR);

indien tweestaps PCR een positief resultaat oplevert, moet dit worden bevestigd door het amplicon te sequencen alvorens de eerste controlemaatregelen, zoals bedoeld in artikel 28 van Richtlijn 2006/88/EG, worden uitgevoerd, en wel, voor zover mogelijk, onder praktijkomstandigheden door het aantonen van pathognomonische symptomen van WSD in die geselecteerde gevoelige gastheren met behulp van histologie en transmissie-elektronenmicroscopie.

De te gebruiken diagnosemethode voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van WSD, overeenkomstig de gedetailleerde methoden en procedures van bijlage II, deel 6, is tweestaps PCR.

Monsters van de epidermis van het integument, uitgeprepareerd dan wel aanwezig in de looppoten, zwempoten, monddelen of kieuwen van het proefdier worden vóór het prepareren van monsters voor tweestaps PCR gefixeerd in 95 % ethanol.

alle officieel met WSD besmet verklaarde kwekerijen en alle andere stilgelegde/overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette schaaldieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van WSD;

aan de voorwaarden van punt I.2.2.1, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van WSSV in de kwekerij en haar omgeving;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van WSD, kan een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, mits:

In lidstaten, gebieden of compartimenten waar het aantal kwekerijen beperkt is en gerichte bewaking bij die kwekerijen onvoldoende epidemiologische gegevens oplevert, moeten de bewakingsprogramma's voor het behouden van de ziektevrije status overeenkomstig punt I.1 geselecteerde bemonsteringspunten omvatten.

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, ondergaan alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, gezondheidsinspecties en bemonstering overeenkomstig tabel 6.B van punt II, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij voor insleep van WSD.

de kwekerij met WSD is voorzien van nieuw uitgezette schaaldieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van WSD.

Een continentaal compartiment dat één enkele kwekerij omvat met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van WSD, waarvan de gezondheidsstatus ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de omringende natuurlijke wateren en waarvan de status van categorie I is ingetrokken overeenkomstig artikel 53, lid 3 van die richtlijn, kan onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie I verkrijgen zodra de bevoegde autoriteit heeft bevestigd dat aan de volgende voorwaarden is voldaan:

alle kwekerijen in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, en, indien gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, alle overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij die richtlijn geselecteerde bemonsteringspunten, moeten vervolgens ten minste aan het bewakingsprogramma van punt I.2.1 worden onderworpen.

nieuw uitgezette schaaldieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van WSD; of

De bevoegde autoriteit kan besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang die stillegging moet duren;

één gezondheidsinspectie; in de kwekerijen waar de in punt i) bedoelde tests negatieve resultaten hebben opgeleverd, worden voortaan één keer per maand gezondheidsinspecties uitgevoerd gedurende het seizoen waarin de watertemperatuur waarschijnlijk haar hoogste jaarlijkse waarden bereikt, totdat het beschermingsgebied is ingetrokken overeenkomstig punt I.2.2.1, onder c);

de bemonstering voor het testen van 10 schaaldieren indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op besmetting met WSD worden waargenomen, of van 150 schaaldieren indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen; en

alle kwekerijen binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met WSD besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste uit de volgende onderdelen bestaat:

in mariene gebieden: een gebied rondom het beschermingsgebied, bestaande uit elkaar overlappende intergetijdengebieden; of een gebied rondom het beschermingsgebied, vallend binnen een cirkel met een straal van 10 km vanaf het middelpunt van het beschermingsgebied; of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald; of

in zoet water: het gehele stroomgebied van de officieel met WSD besmet verklaarde kwekerij; de bevoegde autoriteit kan het beschermingsgebied beperken tot delen van het stroomgebied, mits de preventie van de verspreiding van WSD niet in het gedrang komt;

in mariene en estuariumgebieden: het gebied dat valt binnen een cirkel met een straal die ten minste de breedte van één intergetijdengebied of, als dit meer is, ten minste 5 km bedraagt, gecentreerd op de officieel met WSD besmet verklaarde kwekerij, of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald; of

Het beperkingsgebied moet per geval zijn vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van WSD onder gekweekte en wilde schaaldieren, zoals: aantal, percentage en verdeling van gestorven schaaldieren in de met WSD besmette kwekerij; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen; contactkwekerijen; de in de kwekerijen aanwezige soorten; de in de door de ziekte getroffen en de naburige kwekerijen toegepaste kweekpraktijken; hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de minimale bestrijdingsmaatregelen van hoofdstuk V, afdeling 4, van Richtlijn 2006/88/EG zijn effectief toegepast en in de nabijheid van de officieel met WSD besmet verklaarde kwekerij(en) is een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van WSD kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen in de lidstaat, het gebieden of het compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste aan het volgende uitroeiingsprogramma zijn onderworpen:

zij is voorzien van nieuw uitgezette schaaldieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van WSD.

zij een continentale kwekerij is met een gezondheidsstatus ten aanzien van WSD die overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de gezondheidsstatus van de omringende natuurlijke wateren ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte;

Indien tijdens de uitvoering van het onder a) bedoelde bewakingsprogramma besmetting met WSSV is bevestigd in een in dat bewakingsprogramma opgenomen kwekerij, en de gezondheidsstatus van categorie II daarvan derhalve is ingetrokken, kan die kwekerij onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie II verkrijgen en doorgaan met de uitvoering van het bewakingsprogramma om de ziektevrije status te verkrijgen zonder eerst een uitroeiingsprogramma zoals beschreven in punt I.2.2 uit te voeren, mits:

De kwekerijen of bemonsteringspunten zijn aan gezondheidsinspecties onderworpen en bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 6.A van punt II;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus ten aanzien van WSD van categorie III, overeenkomstig bijlage III, deel B, bij Richtlijn 2006/88/EG, kan een gezondheidsstatus ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte van categorie I behalen, indien alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartimenten waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, voldoen aan de relevante voorschriften van bijlage V bij die richtlijn en al die kwekerijen en, indien voorgeschreven volgens bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij die richtlijn, alle overeenkomstig dat punt geselecteerde bemonsteringspunten onder natuurlijke populaties aan het volgende bewakingsprogramma met een looptijd van twee jaar zijn onderworpen, dat gezondheidsinspecties en bemonstering voor testdoeleinden omvat.

als zwakke of stervende schaaldieren aanwezig zijn, worden bij voorkeur die schaaldieren geselecteerd. Indien dergelijke schaaldieren niet aanwezig zijn, dan moeten de verschillende groottecohorten, dat wil zeggen juvenielen en volwassen dieren, van de geselecteerde gevoelige soorten evenredig in het monster zijn vertegenwoordigd.

in riviersystemen en meren worden een of meer van de volgende soorten geselecteerd: Pacifastacus leniusculus, Astacus leptodactylus, Austropotamobius pallipes of Orconectes limosus. Indien die soorten niet aanwezig zijn, moet het monster representatief zijn voor andere aanwezige gevoelige soorten van de orde Decapoda; Gezien de brede verscheidenheid van gevoelige gastheren kunnen de gastheren worden geselecteerd uit geslachten of families van de orde Decapoda waarvan de gevoeligheid experimenteel of op natuurlijke wijze is aangetoond;

in mariene en estuariumgebieden worden een of meer van de volgende soorten geselecteerd: Carcinus maenas, Cancer pagurus, Eriocheir sinensis, Liocarcinus depurator, Liocarcinus puber, Crangon crangon, Homarus gammarus, Palaemon adspersus of peneïdegarnalensoorten, te weten Penaeus japonicus, Penaeus kerathurus, Penaeus semisulcatus. Indien die soorten niet aanwezig zijn, moet het monster representatief zijn voor andere aanwezige gevoelige soorten van de orde Decapoda (tienpotigen); Gezien de brede verscheidenheid van gevoelige gastheren kunnen de gastheren worden geselecteerd uit geslachten of families van de orde Decapoda waarvan de gevoeligheid experimenteel of op natuurlijke wijze is aangetoond;

Indien overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, worden het aantal en de geografische spreiding van de bemonsteringspunten zo bepaald dat een redelijke dekking van de lidstaat, het gebied of het compartiment wordt behaald. De bemonsteringspunten moeten ook representatief zijn voor de verschillende ecosystemen waarin de natuurlijke populaties van gevoelige soorten voorkomen, te weten mariene, estuarium- en riviersystemen en meren.

als zwakke of stervende schaaldieren in de productie-eenheden aanwezig zijn, worden bij voorkeur die schaaldieren geselecteerd. Indien dergelijke schaaldieren niet aanwezig zijn, dan moeten de verschillende groottecohorten, dat wil zeggen juvenielen en adulten, van de geselecteerde gevoelige soorten evenredig in het monster zijn vertegenwoordigd;

Bewakingsprogramma's voor lidstaten, gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van Bonamia ostreae, zoals bedoeld in punt I.3

Bewakingsprogramma voor lidstaten, gebieden of compartimenten voor de in punt I.2.1 bedoelde controleperiode voorafgaande aan het verkrijgen van de ziektevrije status ten aanzien van Bonamia ostreae

de aanwezigheid van Bonamia ostreae wordt als bevestigd beschouwd bij een positief resultaat op basis van histopathologie, imprints (afdrukken) van weefsel of in-situhybridisatie, in combinatie met een positief resultaat op basis van door sequencing aangevulde PCR, overeenkomstig de erkende methoden en procedures van bijlage II, deel 5;

het officiële onderzoek omvat ten minste één bemonstering van 30 weekdieren van gevoelige soorten, indien de verdenking op een mortaliteitsverslag berust of, indien dit niet het geval is, van 150 weekdieren van gevoelige soorten na aanvang van de periode waarin Bonamia ostreae wordt overgebracht. Wanneer die periode niet bekend is, begint de bemonstering in de winter of het vroege voorjaar. De monsters worden getest met behulp van de in punt i) vermelde diagnosemethoden, overeenkomstig de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 5, punt I:

De te gebruiken diagnosemethode voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van besmetting met Bonamia ostreae zijn histopathologie, imprints (afdrukken) van weefsel, of PCR. Bij de toepassing van deze diagnosemethoden worden de desbetreffende gedetailleerde methoden en procedures van bijlage II, deel 5, gevolgd.

gedurende de periode van twee jaar na de voltooiing van de onder a), b) en c) bedoelde maatregelen besmetting met Bonamia ostreae niet is bevestigd en tijdens deze periode gerezen verdenkingen overeenkomstig de procedures van punt II.3 zijn weerlegd.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen of weekdierkweekgebieden en alle andere stilgelegde/overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen of weekdierkweekgebieden binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette weekdieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van besmetting met Bonamia ostreae;

aan de voorwaarden van punt I.2.2, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van Bonamia ostreae in de kwekerij en haar omgeving;

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, worden alle kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, onderworpen aan gezondheidsinspecties en bemonsterd overeenkomstig tabel 5.B van punt II van dit deel, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij of het weekdierkweekgebied voor insleep van besmetting met Bonamia ostreae.

alle kwekerijen en weekdierkweekgebieden in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, moeten vervolgens aan het bewakingsprogramma van punt I.2 worden onderworpen.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen of weekdierkweekgebieden en alle andere stilgelegde kwekerijen of weekdierkweekgebieden binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden worden voorzien van nieuw uitgezette weekdieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I) ten aanzien van besmetting met Bonamia ostreae. Het uitzetten van de weekdieren vindt pas plaats wanneer alle officieel besmet verklaarde kwekerijen zijn leeggemaakt, gereinigd, ontsmet en stilgelegd overeenkomstig punt I.2.2, onder c);

De bevoegde autoriteit kan naargelang het geval besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang de stillegging moet duren;

alle kwekerijen en weekdierkweekgebieden binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met Bonamia ostreae besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste de bemonstering voor het testen van 150 weekdieren van gevoelige soorten na aanvang van de periode waarin Bonamia ostreae wordt overgebracht. Wanneer die periode niet bekend is, begint de bemonstering in de winter of het vroege voorjaar;

in de onmiddellijke omgeving van een officieel met Bonamia ostreae besmet verklaard(e) kwekerij of weekdierkweekgebied wordt een beschermingsgebied ingesteld, dat overeenkomt met een gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald;

Het beperkingsgebied wordt per geval vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van die in de lijst opgenomen ziekte, zoals: aantal, percentage, leeftijd en verdeling van gestorven weekdieren in de (het) met Bonamia ostreae besmette kwekerij of weekdierkweekgebied, met inbegrip van wilde weekdieren; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen of weekdierkweekgebieden, met inbegrip van wilde weekdieren; de nabijheid van verwerkingsinrichtingen, contactkwekerijen of weekdierkweekgebieden; de in de kwekerijen of weekdierkweekgebieden aanwezige soorten, in het bijzonder gevoelige soorten en vectorsoorten; in de door de ziekte getroffen en naburige bedrijven of kweekgebieden van weekdieren toegepaste kweekpraktijken; hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de minimale bestrijdingsmaatregelen van hoofdstuk V, afdeling 3, van Richtlijn 2006/88/EG zijn effectief toegepast en met name is in de nabijheid van de (het) officieel met Bonamia ostreae besmet verklaarde kwekerij(en) of weekdierkweekgebied(en) een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebieden of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van Bonamia ostreae kan opnieuw een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de lidstaat, het gebied of het compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste aan het volgende uitroeiingsprogramma zijn onderworpen:

De uitroeiing van Bonamia ostreae wordt in de meeste gevallen als onmogelijk beschouwd, maar in het geval de lidstaat dit wel haalbaar acht, is het volgende model voor een uitroeiingsprogramma van toepassing.

indien Ostrea edulis, afkomstig uit een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie I, in het monster moeten worden opgenomen, moeten zij niet later dan in het najaar net vóór de periode waarin het bewakingsprogramma wordt uitgevoerd, in de kwekerij of het weekdierkweekgebied zijn binnengebracht.

de kwekerijen en weekdierkweekgebieden waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, zijn aan gezondheidsinspecties onderworpen en bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 5.A van dit deel;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van Bonamia ostreae kan opnieuw een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste zijn onderworpen aan het volgende bewakingsprogramma, dat gezondheidsinspecties en bemonstering voor testdoeleinden omvat:

bij de bemonstering in weekdierkweekgebieden worden weekdieren van een voldoende aantal bemonsteringspunten in het monster opgenomen. De voornaamste factoren waarmee rekening moet worden gehouden bij de selectie van die bemonsteringspunten zijn: punten waar Bonamia ostreae eerder is geconstateerd, dichtheid van de bestanden, waterstromen, de aanwezigheid van gevoelige soorten, de aanwezigheid van vectorsoorten, bathymetrische kenmerken en beheerpraktijken. De bemonstering omvat ook natuurlijke gronden binnen de kweekgebieden of aangrenzend daaraan.

bij de bemonstering van kwekerijen waar meer dan één waterbron voor de productie van weekdieren wordt gebruikt, worden weekdieren die alle waterbronnen vertegenwoordigen in het monster opgenomen, zodat alle delen van het bedrijf evenredig in het monster vertegenwoordigd zijn;

als zwakke, openstaande of pas gestorven, maar nog niet in staat van ontbinding verkerende weekdieren aanwezig zijn, worden bij voorkeur die weekdieren geselecteerd. Indien dergelijke weekdieren niet aanwezig zijn, moet de selectie de oudste gezonde weekdieren omvatten;

Indien Ostrea edulis aanwezig is, bestaat het monster volledig uit die oestersoort. Indien Ostrea edulis niet aanwezig is, moet het monster representatief zijn voor alle andere aanwezige gevoelige soorten;

De gezondheidsinspecties en, in voorkomend geval, de bemonstering van productie-eenheden worden uitgevoerd in de periode van het jaar waarvan bekend is dat de prevalentie van Bonamia ostreae in de lidstaat, het gebied of het compartiment maximaal is. Indien dergelijke gegevens niet beschikbaar zijn, wordt de bemonstering in de winter of in het vroege voorjaar uitgevoerd.

Bewakingsprogramma's voor lidstaten, gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van Marteilia refringens, zoals bedoeld in punt I.3

Bewakingsprogramma voor lidstaten, gebieden of compartimenten voor de in punt I.2.1 bedoelde controleperiode voorafgaande aan het verkrijgen van de ziektevrije status ten aanzien van Marteilia refringens

de aanwezigheid van Marteilia refringens wordt als bevestigd beschouwd bij een positief resultaat op basis van histopathologie, imprints (afdrukken) van weefsel of in-situhybridisatie, in combinatie met een positief resultaat op basis van door sequencing aangevulde PCR;

het officiële onderzoek omvat ten minste één bemonstering van 30 weekdieren van gevoelige soorten, indien de verdenking op een mortaliteitsverslag berust of, indien dit niet het geval is, van 150 weekdieren van gevoelige soorten na aanvang van de periode waarin Marteilia refringens wordt overgebracht. Wanneer die periode niet bekend is, begint de bemonstering in de periode nadat de watertemperatuur de grens van 17 °C heeft overschreden;

De te gebruiken diagnosemethoden voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens, overeenkomstig de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 4, zijn histopathologie, imprints (afdrukken) van weefsel, of PCR.

gedurende de periode van twee jaar na de voltooiing van de onder a), b) en c) bedoelde maatregelen besmetting met Marteilia refringens niet is bevestigd en tijdens deze periode gerezen verdenkingen overeenkomstig de procedures van punt II.3 zijn weerlegd.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen of weekdierkweekgebieden en alle andere stilgelegde/overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen of weekdierkweekgebieden binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette weekdieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens;

aan de voorwaarden van punt I.2.2, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van Marteilia refringens in de kwekerij en haar omgeving;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens, kan een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, mits:

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, worden alle kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, onderworpen aan gezondheidsinspecties en bemonsterd overeenkomstig tabel 4.B van punt II, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij of het weekdierkweekgebied voor insleep van Marteilia refringens.

alle kwekerijen en weekdierkweekgebieden in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, worden vervolgens aan het bewakingsprogramma van punt I.2.1 van dit deel onderworpen.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen of weekdierkweekgebieden en alle andere stilgelegde kwekerijen of weekdierkweekgebieden binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden worden voorzien van nieuw uitgezette weekdieren afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I) ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens.

De bevoegde autoriteit kan naargelang het geval besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang de stillegging moet duren;

veertien maanden voor kwekerijen en weekdierkweekgebieden met onbeperkte verbindingen met de omliggende wateren, indien de besmette weekdieren van gevoelige soorten en de weekdieren van gevoelige soorten met epidemiologische verbanden met de (het) besmette kwekerij of weekdierkweekgebied niet zijn geoogst of verwijderd vóór de periode van het jaar waarvan bekend is dat de prevalentie van Marteilia refringens maximaal is, of wanneer die gegevens niet beschikbaar zijn, indien de weekdieren van gevoelige soorten niet zijn geoogst of verwijderd vóór de periode waarin de watertemperatuur de grens van 17 °C zal overschrijden.

twee maanden voor kwekerijen en weekdierkweekgebieden met onbeperkte verbindingen met de omliggende wateren, mits de besmette weekdieren van gevoelige soorten en de weekdieren van gevoelige soorten met epidemiologische verbanden met de (het) besmette kwekerij of weekdierkweekgebied zijn geoogst of verwijderd vóór de periode van het jaar waarvan bekend is dat de prevalentie van Marteilia refringens maximaal is, of wanneer die periode niet bekend is, vóór de periode waarin de watertemperatuur de grens van 17 °C zal overschrijden;

alle kwekerijen en weekdierkweekgebieden binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met Marteilia refringens besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste de bemonstering voor het testen van 150 weekdieren na aanvang van de periode waarin Marteilia refringens wordt overgebracht. Wanneer die periode niet bekend is, begint de bemonstering in de periode nadat de watertemperatuur de grens van 17 °C heeft overschreden;

in de onmiddellijke omgeving van een officieel met Marteilia refringens besmet verklaard(e) kwekerij of weekdierkweekgebied wordt een beschermingsgebied ingesteld, dat overeenkomt met een gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald;

Het beperkingsgebied wordt per geval vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van Marteilia refringens, zoals: aantal, percentage en verdeling van gestorven weekdieren in de (het) met Marteilia refringens besmette kwekerij of weekdierkweekgebied, met inbegrip van wilde weekdieren; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen of weekdierkweekgebieden, met inbegrip van wilde weekdieren; de nabijheid van verwerkingsinrichtingen, contactkwekerijen of weekdierkweekgebieden; de in de kwekerijen of weekdierkweekgebieden aanwezige soorten, in het bijzonder gevoelige soorten en vectorsoorten; de in de door de ziekte getroffen en de naburige kwekerijen of weekdierkweekgebieden toegepaste kweekpraktijken; de hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de maatregelen van hoofdstuk V, afdeling 3, van Richtlijn 2006/88/EG zijn effectief toegepast en met name is in de nabijheid van de (het) officieel met Marteilia refringens besmet verklaarde kwekerij(en) of weekdierkweekgebied(en) een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebieden of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen of weekdierkweekgebieden in die lidstaat, dat gebied of dat compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste aan het volgende uitroeiingsprogramma zijn onderworpen:

De uitroeiing van Marteilia refringens wordt in de meeste gevallen als onmogelijk beschouwd, maar in het geval de lidstaat dit wel haalbaar acht, is het volgende model voor een uitroeiingsprogramma van toepassing.

indien Ostrea edulis, Mytilus edulis of Mytilus galloprovincialis, afkomstig uit een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie I, in het monster moeten worden opgenomen, moeten zij niet later dan in het voorjaar net vóór de periode waarin het bewakingsprogramma wordt uitgevoerd, in de kwekerij of het weekdierkweekgebied zijn binnengebracht.

de kwekerijen of weekdierkweekgebieden zijn aan gezondheidsinspecties onderworpen en bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 4.A van punt II;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van besmetting met Marteilia refringens kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen of weekdierkweekgebieden in de lidstaat, het gebied of het compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste zijn onderworpen aan het volgende bewakingsprogramma, dat gezondheidsinspecties en bemonstering voor testdoeleinden omvat:

bij de bemonstering in weekdierkweekgebieden worden weekdieren van een voldoende aantal bemonsteringspunten in het monster opgenomen, zodat alle delen van het weekdierkweekgebied evenredig in het monster vertegenwoordigd zijn. De voornaamste factoren waarmee rekening moet worden gehouden bij de selectie van deze bemonsteringspunten zijn: bemonsteringspunten waar Marteilia refringens eerder is geconstateerd, dichtheid van de bestanden, waterstromen, aanwezigheid van gevoelige soorten, aanwezigheid van vectorsoorten, bathymetrische kenmerken en beheerpraktijken. De bemonstering omvat ook natuurlijke gronden.

bij de bemonstering van weekdierkwekerijen waar meer dan één waterbron voor de productie van weekdieren wordt gebruikt, worden weekdieren die alle waterbronnen vertegenwoordigen in het monster opgenomen, zodat alle delen van het bedrijf evenredig in het monster vertegenwoordigd zijn;

als zwakke, openstaande of pas gestorven, maar nog niet in staat van ontbinding verkerende weekdieren in de productie-eenheden aanwezig zijn, worden bij voorkeur die weekdieren geselecteerd. Indien dergelijke weekdieren niet aanwezig zijn, moet de selectie de oudste gezonde weekdieren omvatten;

indien Ostrea spp. en Mytilus spp. in de productie-eenheden of in het productiegebied aanwezig zijn, worden beide geslachten bemonsterd, waarbij de monsters dezelfde grootte hebben. Indien slechts één van deze geslachten aanwezig is, wordt dit geslacht bemonsterd. Indien noch het geslacht Ostrea, noch het geslacht Mytilus aanwezig zijn, moet het monster representatief zijn voor alle andere aanwezige gevoelige soorten;

De gezondheidsinspecties en, in voorkomend geval, de bemonstering voor laboratoriumonderzoek worden uitgevoerd in de periode van het jaar waarvan bekend is dat de prevalentie van de parasiet in de lidstaat, het gebied of het compartiment maximaal is. Indien dergelijke gegevens niet beschikbaar zijn, wordt de bemonstering onmiddellijk nadat de watertemperatuur de grens van 17 °C heeft overschreden, uitgevoerd.

Bewakingsprogramma's voor gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van ISA, zoals bedoeld in punt I.3 (15)

isoleren en identificeren van ISAV in celcultuur van ten minste één monster van om het even welke vis uit de kwekerij;

aantonen van ISAV met behulp van RT-qPCR, met inbegrip van het sequencen van het HE-gen om HPR-deletie te verifiëren, en aantonen van ISAV in weefselpreparaten met behulp van specifieke antilichamen tegen ISAV (te weten IHC op gefixeerde coupes of IFAT op imprints (afdrukken) van weefsel,

in het geval RT-qPCR een positief resultaat voor ISAV met HPR-deletie oplevert, worden aanvullende monsters getest alvorens de eerste controlemaatregelen, zoals bedoeld in artikel 28 van Richtlijn 2006/88/EG, worden uitgevoerd. Een verdenking van besmetting met ISA wordt aan de hand van de volgende criteria bevestigd met behulp van de methoden en procedures van bijlage II, deel 3:

het officiële onderzoek, dat ten minste één gezondheidsinspectie en één bemonstering van 10 stervende vissen omvat indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op ISA worden waargenomen. Indien geen klinische of postmortale symptomen die wijzen op ISA worden waargenomen, wordt de gezondheidsinspectie gevolgd door een gerichte bemonstering van ten minste 30 stervende vissen of zojuist gestorven, in normale staat verkerende vissen overeenkomstig punt I.1. De monsters worden getest overeenkomstig de onder b) vermelde diagnosemethoden;

isoleren en identificeren van ISAV in celcultuur van ten minste één monster van om het even welke vis uit de kwekerij.

onderzoek in weefselpreparaten met behulp van specifieke antilichamen tegen ISAV (te weten IHC op gefixeerde coupes of IFAT op imprints (afdrukken) van weefsel; of

In het geval RT-qPCR een positief resultaat oplevert, worden aanvullende monsters getest alvorens de eerste controlemaatregelen, zoals bedoeld in artikel 28 van Richtlijn 2006/88/EG, worden uitgevoerd.

De te gebruiken diagnosemethode voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van ISA overeenkomstig de punten I.2 en I.3 is RT-qPCR, gevolgd door het sequencen van positieve monsters overeenkomstig de gedetailleerde methoden en procedures van bijlage II, deel 3.

gedurende de periode van twee jaar na de voltooiing van de onder a), b) en c) bedoelde maatregelen de aanwezigheid van ISAV met HPR-deletie niet is bevestigd en tijdens deze periode gerezen verdenkingen overeenkomstig de procedures van punt II.3 zijn weerlegd.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen en alle andere stilgelegde of overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van ISA;

aan de voorwaarden van punt I.2.2.1, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van ISAV in de kwekerij en haar omgeving;

I.4. Specifieke voorschriften voor het verkrijgen van een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van ISAV met HPR-deletie in lidstaten, gebieden of compartimenten die voorheen over een gezondheidsstatus van categorie V beschikten

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, worden alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, onderworpen aan gezondheidsinspecties en bemonsterd overeenkomstig tabel 3.B (11) van punt II van dit deel, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij voor insleep van ISA.

zij is voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van ISA.

Een continentaal compartiment dat één enkele kwekerij omvat met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van ISA, waarvan de gezondheidsstatus overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de omringende natuurlijke wateren en waarvan de gezondheidsstatus van categorie I is ingetrokken overeenkomstig artikel 53, lid 3 van die richtlijn, kan deze onmiddellijk opnieuw verkrijgen zodra de bevoegde autoriteit heeft bevestigd dat aan de volgende voorwaarden is voldaan:

I.2.2.2. Voorschriften voor het opnieuw verkrijgen van de ziektevrije status voor continentale compartimenten die één enkele kwekerij omvatten waarvan eerder was verklaard dat deze een gezondheidsstatus van categorie I had

alle kwekerijen in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, en, indien gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, alle overeenkomstig punt I.1 geselecteerde bemonsteringspunten, worden vervolgens aan het bewakingsprogramma van punt I.2.1 onderworpen.

alle kwekerijen die officieel met ISAV met HPR-deletie besmet zijn verklaard of waar de aanwezigheid van ISA is bevestigd, alsmede alle andere stilgelegde kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden, worden voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten van categorie I) ten aanzien van ISA.

De bevoegde autoriteit kan besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang de stillegging van die kwekerijen moet duren;

alle kwekerijen die officieel met ISAV met HPR-deletie besmet zijn verklaard of waar de aanwezigheid van ISA is bevestigd, worden leeggemaakt, gereinigd, ontsmet, en gedurende ten minste drie maanden stilgelegd; De beschermings- en toezichtsgebieden kunnen worden opgeheven wanneer alle kwekerijen in het beschermingsgebied zijn leeggemaakt, gereinigd en ontsmet en er vervolgens gedurende ten minste zes weken een gelijktijdige stillegging heeft plaatsgevonden.

één gezondheidsinspectie; in de kwekerijen waar de in punt i) bedoelde tests negatieve resultaten hebben opgeleverd, worden voortaan één keer per maand gezondheidsinspecties uitgevoerd, totdat het beschermingsgebied wordt ingetrokken overeenkomstig punt I.2.2.1, onder c);

de bemonstering voor het testen van ten minste 10 stervende vissen indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op ISA worden waargenomen, of van ten minste 30 vissen indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen;

alle kwekerijen binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met ISA besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste uit de volgende onderdelen bestaat:

in in het binnenland gelegen gebieden: een uitgebreid gebied buiten het ingestelde beschermingsgebied;

in kustgebieden: een gebied rondom het beschermingsgebied, bestaande uit elkaar overlappende intergetijdengebieden; of een gebied rondom het beschermingsgebied, vallend binnen een cirkel met een straal van 10 km vanaf het middelpunt van het beschermingsgebied; of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald; of

in in het binnenland gelegen gebieden: het gehele stroomgebied van de officieel met ISA besmet verklaarde kwekerij; de bevoegde autoriteit kan het gebied beperken tot delen van het stroomgebied, mits de preventie van de verspreiding van ISA niet in het gedrang komt;

in kustgebieden: een gebied dat valt binnen een cirkel met een straal die ten minste de breedte van één intergetijdengebied of, als dit meer is, ten minste 5 km bedraagt, gecentreerd op de officieel met ISA besmet verklaarde kwekerij, of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald;

Het beperkingsgebied moet per geval zijn vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van ISA onder kweekvis of wilde vis, zoals: aantal, percentage en verdeling van gestorven vissen in de kwekerij of de kwekerij die is besmet met ISAV met HPR-deletie of waar de aanwezigheid van ISA is bevestigd; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen; de nabijheid van slachthuizen; contactkwekerijen; de in de kwekerijen aanwezige soorten; de in de door de ziekte getroffen en de naburige kwekerijen toegepaste kweekpraktijken; de hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de minimale bestrijdingsmaatregelen van hoofdstuk V, afdeling 3, van Richtlijn 2006/88/EG zijn effectief toegepast en met name is in de nabijheid van de kwekerij(en) die officieel met ISAV met HPR-deletie besmet zijn verklaard of waar ISA is bevestigd, een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van ISA kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, zijn onderworpen aan een uitroeiingsprogramma dat voldoet aan de bepalingen onder a) tot en met e) hieronder:

indien tijdens de uitvoering van het bewakingsprogramma ISA is bevestigd in een in dat bewakingsprogramma opgenomen kwekerij, en de gezondheidsstatus van categorie II daarvan derhalve is ingetrokken, moet een uitroeiingsprogramma overeenkomstig punt I.2.2 zijn uitgevoerd.

de kwekerijen of bemonsteringspunten zijn aan gezondheidsinspecties onderworpen en bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 3.A van punt II;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus ten aanzien van ISA van categorie III, overeenkomstig bijlage III, deel B, bij Richtlijn 2006/88/EG, kan een gezondheidsstatus ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte van categorie I behalen, indien alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartimenten waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, voldoen aan de relevante voorschriften van bijlage V bij die richtlijn en al die kwekerijen en, indien voorgeschreven volgens bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij die richtlijn, alle overeenkomstig dat punt geselecteerde bemonsteringspunten onder natuurlijke populaties aan het volgende bewakingsprogramma zijn onderworpen:

indien Atlantische zalm een van de gevoelige soorten op de locatie is, krijgen monsters van Atlantische zalm voorrang. Indien er geen Atlantische zalm in de viskwekerij aanwezig is, moeten andere gevoelige soorten worden bemonsterd;

alleen stervende of pas gestorven, maar nog niet in staat van ontbinding verkerende vissen worden geselecteerd; met name vissen die anemie, bloedingen of andere klinische symptomen vertonen die wijzen op doorbloedingsstoornissen, worden bij voorrang verzameld;

Indien overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, worden het aantal en de geografische spreiding van de bemonsteringspunten zo bepaald dat een redelijke dekking van de lidstaat, het gebied of het compartiment wordt behaald. De bemonsteringspunten moeten ook representatief zijn voor de verschillende ecosystemen waarin de natuurlijke populaties van gevoelige soorten voorkomen.

Indien gezondheidsinspecties en bemonstering van kwekerijen overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij Richtlijn 2006/88/EG meer dan één keer per jaar moeten worden uitgevoerd, duren de intervallen tussen de gezondheidsinspecties of de bemonsteringen zo lang mogelijk.

Bewakingsprogramma's voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van KHVD van lidstaten, gebieden of compartimenten waar het aantal kwekerijen beperkt is en gerichte bewaking bij deze kwekerijen onvoldoende epidemiologische gegevens oplevert, zoals bedoeld in punt I.3

Bewakingsprogramma's voor gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van KHVD, zoals bedoeld in punt I.3

het officiële onderzoek omvat ten minste één gezondheidsinspectie en één bemonstering van 10 vissen indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op besmetting met KHV worden waargenomen, of van 30 vissen indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen; De monsters worden getest met behulp van de onder b) vermelde diagnosemethode, overeenkomstig de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 2, punt II;

De diagnosemethode voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van KHVD is realtime-PCR (qPCR), overeenkomstig de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 2, punt II.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen en alle andere stilgelegde/overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van KHVD;

aan de voorwaarden van punt I.2.2.1, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de betrokken kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van KHV in de kwekerij en haar omgeving;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van KHVD, kan een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, mits:

I.4. Specifieke voorschriften voor de opheffing van de inperkingsmaatregelen overeenkomstig artikel 39 van Richtlijn 2006/88/EG voor het verkrijgen van een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van KHVD in lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie V

Die bemonsteringspunten worden volgens het beginsel van een roterende steekproef (50 % van de bemonsteringspunten per jaar) geïnspecteerd en bemonsterd. De bemonstering wordt uitgevoerd overeenkomstig tabel 2.C van punt III. De monsters worden geselecteerd, voorbewerkt en onderzocht zoals beschreven in punt II en de laboratoriumonderzoeken moeten negatieve resultaten ten aanzien van de aanwezigheid van de verwekker van KHVD opleveren.

In lidstaten, gebieden of compartimenten waar het aantal kwekerijen beperkt is en gerichte bewaking bij deze kwekerijen onvoldoende epidemiologische gegevens oplevert, moeten de bewakingsprogramma's voor het behouden van de ziektevrije status overeenkomstig punt I.1 geselecteerde bemonsteringspunten omvatten.

De frequentie van de gezondheidsinspecties voor compartimenten van categorie I ten aanzien van KHVD die in continentale gebieden liggen en die een of meer kwekerijen omvatten waarvan de gezondheidsstatus ten aanzien van KHVD overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 2, bij Richtlijn 2006/88/EG afhangt van de gezondheidsstatus van de omringende natuurlijke wateren ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte, moet overeenstemmen met het in tabel 2.C vermelde aantal voor een hoog risiconiveau.

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, worden alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, onderworpen aan gezondheidsinspecties en bemonsterd overeenkomstig tabel 2.B van punt III van dit deel, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij voor insleep van KHV.

de kwekerij is voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I of uit compartimenten met een goedgekeurd bewakingsprogramma voor KHVD (gezondheidsstatus van categorie II).

Een continentaal compartiment dat één enkele kwekerij omvat met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van KHVD, waarvan de gezondheidsstatus ten aanzien van KHVD overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de omringende natuurlijke wateren en waarvan de status van categorie I is ingetrokken overeenkomstig artikel 53, lid 3 van die richtlijn, kan onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van KHVD verkrijgen zodra de bevoegde autoriteit heeft bevestigd dat aan de volgende voorwaarden is voldaan:

alle kwekerijen in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, en, indien gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, alle overeenkomstig punt I.1 geselecteerde bemonsteringspunten, moeten vervolgens ten minste aan het bewakingsprogramma van punt I.2.1 zijn onderworpen.

nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van KHVD; of

De bevoegde autoriteit kan besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang de stillegging moet duren;

één gezondheidsinspectie; in de kwekerijen waar de in punt III.2 bedoelde tests negatieve resultaten hebben opgeleverd, worden voortaan één keer per maand gedurende het seizoen waarin de watertemperatuur waarschijnlijk > 15 °C bedraagt, gezondheidsinspecties uitgevoerd, totdat het beschermingsgebied wordt ingetrokken overeenkomstig punt I.2.2.1, onder c);

de bemonstering voor het testen van 10 vissen indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op KHVD worden waargenomen, of van 30 vissen indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen;

alle kwekerijen binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met KHV besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste uit de volgende onderdelen bestaat:

in de onmiddellijke omgeving van een officieel met KHV besmet verklaarde kwekerij wordt een beschermingsgebied ingesteld, dat overeenkomt met het gehele stroomgebied van de officieel met KHV besmet verklaarde kwekerij; de bevoegde autoriteit kan het gebied beperken tot delen van het stroomgebied, mits de preventie van de verspreiding van KHVD niet in het gedrang komt;

Het beperkingsgebied moet per geval zijn vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van KHVD onder kweekvis en wilde vis, zoals: aantal, percentage en verdeling van gestorven vissen in de met KHV besmette kwekerij; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen; de nabijheid van slachthuizen; contactkwekerijen; de in de kwekerijen aanwezige soorten; de in de door de ziekte getroffen en de naburige kwekerijen toegepaste kweekpraktijken; de hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de minimale bestrijdingsmaatregelen van hoofdstuk V, afdeling 4, van Richtlijn 2006/88/EG zijn effectief toegepast en in de nabijheid van de officieel met KHV besmet verklaarde kwekerij(en) is een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van KHVD kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte verkrijgen, indien alle kwekerijen in die lidstaat, dat gebied of dat compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, ten minste aan het volgende uitroeiingsprogramma zijn onderworpen:

zij is voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van KHVD.

zij is een continentale kwekerij met een gezondheidsstatus ten aanzien van KHVD die overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de gezondheidsstatus van populaties van waterdieren in de omringende natuurlijke wateren ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekte;

indien tijdens de uitvoering van het onder a) bedoelde vierjarige bewakingsprogramma besmetting met KHV is bevestigd in een in dat bewakingsprogramma opgenomen kwekerij, en de gezondheidsstatus van categorie II daarvan derhalve is ingetrokken, kan die kwekerij onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie II verkrijgen en doorgaan met de uitvoering van het bewakingsprogramma om de ziektevrije status te verkrijgen zonder eerst een uitroeiingsprogramma zoals beschreven in punt I.2.2 uit te voeren, mits die kwekerij aan de volgende voorwaarden voldoet:

de kwekerijen of bemonsteringspunten moeten aan gezondheidsinspecties zijn onderworpen en zijn bemonsterd gedurende een periode van ten minste vier opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 2.B van punt III.

de kwekerijen of bemonsteringspunten moeten aan gezondheidsinspecties zijn onderworpen en zijn bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 2.A van punt III.

een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus ten aanzien van KHVD van categorie III kan een gezondheidsstatus van categorie I behalen, indien alle kwekerijen in die lidstaat, dat gebied of dat compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, voldoen aan de voorschriften voor de ziektevrije status van bijlage V bij die richtlijn en al die kwekerijen en, indien voorgeschreven volgens deel I, punt 2, tweede alinea, van die bijlage, alle overeenkomstig dat deel geselecteerde bemonsteringspunten onder natuurlijke populaties aan een van de volgende bewakingsprogramma's zijn onderworpen:

wanneer zwakke vissen, vissen met abnormaal gedrag of pas gestorven, maar nog niet in staat van ontbinding verkerende vissen aanwezig zijn, moeten deze vissen worden geselecteerd;

Indien kwekerijen of natuurlijke populaties meer dan één keer per jaar aan gezondheidsinspecties of bemonsteringen moeten worden onderworpen, duren de intervallen tussen de gezondheidsinspecties of de bemonsteringen gedurende het seizoen waarin de watertemperatuur waarschijnlijk haar hoogste jaarlijkse waarden bereikt zonder de bovengrens van 28 °C te overschrijden, zo lang mogelijk.

het verzamelen van monsters tijdens de oogst of tijdens andere handelingen die in het kader van normale beheerpraktijken met de vis worden uitgevoerd. Indien mogelijk worden de monsters tussen 24 en 72 uur na dergelijke beheerpraktijken verzameld, teneinde de kans op opsporing van KHV te vergroten.

het verzamelen van een subpopulatie ten tijde van het overbrengen van de vis van de winter- naar de zomervijvers en het houden van de vis in hetzelfde waterlichaam als de zomervijver totdat aan de minimumtemperatuurvereisten is voldaan, of

Gerichte bewaking berust op regelmatige monitoring van gebieden met gevoelige soorten. De monitoring van de locaties vindt plaats wanneer de watertemperaturen een niveau hebben bereikt dat gunstig is voor de ontwikkeling van de ziekte (> 15 °C), en ten vroegste twee weken vanaf de datum waarop deze temperaturen zijn bereikt. Alle op de locatie aangetroffen zieke vissen of vissen die abnormaal gedrag vertonen, worden bemonsterd en getest.

Indien overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, worden het aantal en de geografische spreiding van de bemonsteringspunten zo bepaald dat een redelijke dekking van de lidstaat, het gebied of het compartiment wordt behaald. De bemonsteringspunten moeten ook representatief zijn voor de verschillende ecosystemen waarin de natuurlijke populaties van gevoelige soorten voorkomen, te weten riviersystemen en meren.

Bewakingsprogramma's voor gebieden of compartimenten voor het behouden van de ziektevrije status ten aanzien van VHS of IHN, zoals bedoeld in punt I.3

Bewakingsprogramma met een beperkte steekproefomvang voor de in punt I.2.1, onder a), i), bedoelde vierjarige controleperiode voorafgaande aan het verkrijgen van de ziektevrije status ten aanzien van VHS of IHN

Bewakingsprogramma voor gebieden en compartimenten voor de in punt I.2.1, onder a), i), bedoelde tweejarige controleperiode voorafgaande aan het verkrijgen van de ziektevrije status ten aanzien van VHS of IHN

de aanwezigheid van VHS wordt als bevestigd beschouwd indien een of meer van die diagnosemethoden een positief resultaat voor VHSV opleveren. De aanwezigheid van IHN wordt als bevestigd beschouwd indien een of meer van die diagnosemethoden een positief resultaat voor IHNV opleveren. De bevestiging van een eerste geval van of VHS of IHN in lidstaten, gebieden of compartimenten die voordien niet besmet waren, vindt plaats op basis van conventionele virusisolatie in celculturen of RT-qPCR;

conventionele virusisolatie in celculturen, gevolgd door immunochemische of moleculaire identificatie van het virus;

de kwekerij waarop de verdenking betrekking heeft wordt onderworpen aan ten minste één gezondheidsinspectie en één bemonstering van 10 vissen indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op besmetting met VHS en/of IHN worden waargenomen, of van ten minste 30 vissen indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen; De monsters worden getest met behulp van een of meer van de in de punten i) en ii) vermelde diagnosemethoden, overeenkomstig de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 1, punt II:

virusisolatie in celculturen, gevolgd door identificatie met behulp van de enzymgekoppelde immuunadsorbent-techniek (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), de indirecte immunofluorescentietest (indirect fluorescent antibody test, IFAT), de virusneutralisatietest of de realtime-reverse-transcriptase-polymerasekettingreactie (real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-qPCR); ofwel

De diagnosemethode voor het verkrijgen of behouden van de ziektevrije status ten aanzien van VHS en/of IHN, overeenkomstig de erkende diagnosemethoden en -procedures van bijlage II, deel 1, punt I, is ofwel

In het geval van klein broed kunnen hele vissen die minder dan 4 cm lang zijn, nadat het stuk achter de anus is verwijderd, met een steriele schaar of scalpel in kleine stukken worden geknipt. Als het monster bestaat uit hele vissen met een lichaamslengte tussen 4 en 6 cm, worden de ingewanden inclusief de nieren verzameld.

Het te onderzoeken weefselmateriaal is afkomstig van milt, kopnier, en van hart of hersenen. Bij de bemonstering van ouderdieren kan ook ovariële vloeistof of zaadvocht worden onderzocht.

alle officieel besmet verklaarde kwekerijen en alle andere stilgelegde/overeenkomstig het onder a) bepaalde aan alternatieve maatregelen onderworpen kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zijn voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I, II of III ten aanzien van VHS en/of IHN;

aan de voorwaarden van punt I.2.2.1, onder a), b) en c), is voldaan. Indien stillegging technisch niet mogelijk is, worden de betrokken kwekerijen onderworpen aan een alternatieve maatregel die een bijna gelijkwaardige waarborg biedt voor de uitroeiing van IHNV en/of VHSV in de kwekerij en haar omgeving;

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van VHS en/of IHN, kan een gezondheidsstatus van categorie III ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekten verkrijgen, mits:

De ziektevrije status blijft slechts behouden zolang het testen van alle monsters met behulp van de diagnosemethoden van punt II.2 negatieve resultaten oplevert voor VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten, en elke verdenking van VHS en/of IHN overeenkomstig de diagnosemethoden van punt II.3 is weerlegd.

Bij vaststelling van de frequentie van de gezondheidsinspecties voor compartimenten die een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van VHS en/of IHN hebben, die in continentale gebieden liggen en waarvan de gezondheidsstatus ten aanzien van VHS of IHN overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 2, bij Richtlijn 2006/88/EG afhangt van de gezondheidsstatus van de populaties van waterdieren in omringende natuurlijke wateren, wordt het risico op insleep van VHS en/of IHN groot geacht.

Indien overeenkomstig artikel 52 van Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking vereist is om een gezondheidsstatus van categorie I te behouden, worden alle kwekerijen in de lidstaat, het gebied of het compartiment in kwestie waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, onderworpen aan gezondheidsinspecties en wordt vis bemonsterd overeenkomstig tabel 1.C van punt II van dit deel, rekening houdend met het risiconiveau van de kwekerij voor insleep van VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten.

de kwekerij waarvan officieel is bevestigd dat zij met VHS en/of IHN besmet is, is voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van VHS en/of IHN.

de kwekerij waarvan officieel is bevestigd dat zij met VHS en/of IHN besmet is, moet zijn leeggemaakt, gereinigd, ontsmet en stilgelegd. de stillegging duurt ten minste zes weken;

Een continentaal compartiment dat één enkele kwekerij omvat die eerder vrij was verklaard van VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten, waarvan de gezondheidsstatus ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekten overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de omringende natuurlijke wateren en waarvan de gezondheidsstatus van categorie I is ingetrokken overeenkomstig artikel 53, lid 3 van die richtlijn, kan onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie II verkrijgen zodra de bevoegde autoriteit heeft bevestigd dat aan de volgende voorwaarden is voldaan:

alle kwekerijen in de (het) onder het uitroeiingsprogramma vallende lidstaat, gebied of compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, en, indien gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, alle overeenkomstig punt I.1 geselecteerde bemonsteringspunten, worden vervolgens aan het bewakingsprogramma van punt I.2.1 onderworpen.

alle officieel met VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten besmet verklaarde kwekerijen en alle andere stilgelegde kwekerijen binnen de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden zoals bedoeld onder c), worden voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met de ziektevrije gezondheidsstatus (categorie I) ten aanzien van VHS en/of IHN.

De bevoegde autoriteit kan besluiten het leegmaken, reinigen, ontsmetten en stilleggen van andere kwekerijen in de ingestelde beschermings- en toezichtsgebieden verplicht te stellen. De bevoegde autoriteit stelt op basis van een risicobeoordeling per geval vast hoe lang de stillegging van die kwekerijen moet duren;

één gezondheidsinspectie; in de kwekerijen waar de in punt i) bedoelde tests negatieve resultaten hebben opgeleverd, worden voortaan één keer per maand gedurende de periode waarin de watertemperatuur minder dan 14 °C bedraagt, behalve wanneer visvijvers en netkooien met ijs zijn bedekt, gezondheidsinspecties uitgevoerd, totdat het beschermingsgebied wordt ingetrokken overeenkomstig punt I.2.2.1, onder c);

de bemonstering voor het testen van 10 vissen indien klinische of postmortale symptomen die wijzen op besmetting met VHS en/of IHN worden waargenomen, of van ten minste 30 vissen indien geen klinische of postmortale symptomen worden waargenomen;

alle kwekerijen binnen het beschermingsgebied waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden en die niet officieel met VHS en/of IHN besmet zijn verklaard, worden onderworpen aan een officieel onderzoek dat ten minste uit de volgende onderdelen bestaat:

in in het binnenland gelegen gebieden: een uitgebreid gebied buiten het ingestelde beschermingsgebied;

in kustgebieden: een gebied rondom het beschermingsgebied, bestaande uit elkaar overlappende intergetijdengebieden; of een gebied rondom het beschermingsgebied, vallend binnen een cirkel met een straal van 10 km vanaf het middelpunt van het beschermingsgebied; of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald;

in in het binnenland gelegen gebieden: het gehele stroomgebied van de officieel met VHS en/of IHN besmet verklaarde kwekerij; de bevoegde autoriteit kan het gebied beperken tot delen van het stroomgebied of tot het areaal van de kwekerij, mits de preventie van de verspreiding van VHS en/of IHN niet in het gedrang komt;

in kustgebieden: een gebied dat valt binnen een cirkel met een straal die ten minste de breedte van één intergetijdengebied of, als dit meer is, ten minste 5 km bedraagt, gecentreerd op de officieel met VHS en/of IHN besmet verklaarde kwekerij, of een vergelijkbaar gebied dat op basis van geschikte hydrodynamische of epidemiologische gegevens wordt bepaald;

in de onmiddellijke omgeving van een officieel met VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten besmet verklaarde kwekerij wordt een beschermingsgebied ingesteld, dat overeenkomt met:

Het beperkingsgebied moet per geval zijn vastgesteld, rekening houdend met factoren die van invloed zijn op de risico's van de verspreiding van de in de lijst opgenomen ziekte onder kweekvis en wilde vis, zoals: aantal, percentage en verdeling van gestorven vissen in de met VHS en/of IHN besmette kwekerij; de afstand en dichtheid van naburige kwekerijen; de nabijheid van slachthuizen; contactkwekerijen; in de kwekerijen aanwezige soorten; in de door de ziekte getroffen en de naburige kwekerijen toegepaste kweekpraktijken; de hydrodynamische omstandigheden en andere uit epidemiologisch oogpunt significante factoren.

de minimale bestrijdingsmaatregelen van hoofdstuk V, afdeling 4, van Richtlijn 2006/88/EG moeten effectief zijn toegepast en in de nabijheid van de officieel met VHS of IHN of beide in de lijst opgenomen ziekten besmet verklaarde kwekerij(en) moet een beperkingsgebied zoals bedoeld in artikel 32, onder b), van die richtlijn worden ingesteld, dat een beschermings- en toezichtsgebied omvat.

Een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V ten aanzien van VHS en/of IHN kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekten verkrijgen, mits alle kwekerijen in die lidstaat, dat gebied of dat compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, zijn onderworpen aan een uitroeiingsprogramma dat voldoet aan de bepalingen onder a) tot en met e):

zij is voorzien van nieuw uitgezette vis afkomstig uit lidstaten, gebieden of compartimenten met een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van VHS en/of IHN.

zij is een continentale kwekerij met een gezondheidsstatus ten aanzien van VHS en/of IHN die overeenkomstig bijlage V, deel II, punt 3, bij Richtlijn 2006/88/EG niet afhangt van de gezondheidsstatus van populaties van waterdieren in de omringende natuurlijke wateren ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekten;

indien tijdens de uitvoering van het onder a) bedoelde bewakingsprogramma besmetting met VHS en/of IHN is bevestigd in een in dat bewakingsprogramma opgenomen kwekerij, en de gezondheidsstatus van categorie II voor die kwekerij derhalve is ingetrokken, kan die kwekerij onmiddellijk opnieuw de gezondheidsstatus van categorie II verkrijgen en doorgaan met de uitvoering van het bewakingsprogramma om de ziektevrije status te verkrijgen zonder eerst een uitroeiingsprogramma overeenkomstig punt I.2.2 uit te voeren, mits die kwekerij aan de volgende voorwaarden voldoet:

de kwekerijen of bemonsteringspunten moeten aan gezondheidsinspecties zijn onderworpen en zijn bemonsterd gedurende een periode van ten minste vier opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 1.B van punt II.

de kwekerijen of bemonsteringspunten moeten aan gezondheidsinspecties zijn onderworpen en zijn bemonsterd gedurende een periode van ten minste twee opeenvolgende jaren, zoals vermeld in tabel 1.A van punt II.

een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus ten aanzien van VHS en/of IHN van categorie III, zoals bedoeld in bijlage III, deel B, bij Richtlijn 2006/88/EG, kan een gezondheidsstatus van categorie I ten aanzien van die in de lijst opgenomen ziekten behalen, mits alle kwekerijen in die lidstaat, dat gebied of dat compartiment waar de in de lijst in bijlage IV, deel II, bij die richtlijn opgenomen gevoelige soorten worden gehouden, voldoen aan de voorschriften van bijlage V bij die richtlijn en al die kwekerijen en, indien voorgeschreven volgens bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij die richtlijn, alle overeenkomstig dat deel geselecteerde bemonsteringspunten onder natuurlijke populaties aan een van de volgende bewakingsprogramma's zijn onderworpen:

wanneer zwakke vissen, vissen met abnormaal gedrag of pas gestorven, maar nog niet in staat van ontbinding verkerende vissen aanwezig zijn, worden deze vissen geselecteerd; indien meer dan één waterbron voor de productie van vis wordt gebruikt, worden vissen die alle waterbronnen vertegenwoordigen in het monster opgenomen;

indien regenboogforel aanwezig is, wordt uitsluitend die vissoort voor bemonstering geselecteerd, tenzij andere gevoelige soorten aanwezig zijn die typische symptomen van VHS of IHN vertonen; indien geen regenboogforel aanwezig is, moet het monster representatief zijn voor alle andere aanwezige gevoelige soorten;

indien kwekerijen of natuurlijke populaties meer dan één keer per jaar aan gezondheidsinspecties of bemonsteringen moeten worden onderworpen, duren de intervallen tussen de gezondheidsinspecties en tussen de bemonsteringen zo lang mogelijk en ten minste vier maanden, waarbij rekening wordt gehouden met de onder a) vermelde voorschriften met betrekking tot de temperatuur;

indien overeenkomstig bijlage V, deel I, punt 2, tweede alinea, bij Richtlijn 2006/88/EG gerichte bewaking bij natuurlijke populaties vereist is, worden het aantal en de geografische spreiding van de bemonsteringspunten zo bepaald dat een redelijke dekking van de lidstaat, het gebied of het compartiment wordt behaald. De bemonsteringspunten moeten representatief zijn voor de verschillende ecosystemen waarin natuurlijke populaties van gevoelige soorten voorkomen;

de gezondheidsinspecties en, in voorkomend geval, de bemonstering worden uitgevoerd in de periode van het jaar waarin de watertemperatuur lager is dan 14 °C of wanneer de watertemperatuur waarschijnlijk haar laagste jaarlijkse waarden bereikt;

e) „contactkwekerij”: kwekerij waar waterdieren worden gehouden en waarvoor op enigerlei wijze is aangetoond of de sterke verdenking bestaat dat zij is besmet met besmettelijk materiaal uit een officieel besmet verklaarde kwekerij.

d) „officieel besmet verklaarde kwekerij”: kwekerij waar waterdieren worden gehouden en waar een of meer van de in de lijst opgenomen ziekten door de bevoegde autoriteit zijn bevestigd overeenkomstig artikel 28, onder a), artikel 29 en artikel 57, onder b), van Richtlijn 2006/88/EG.

c) „continentaal gebied”: een duidelijk begrensd geografisch gebied op het continentale deel van een of meer lidstaten, met een homogeen hydrologisch systeem dat bestaat uit delen van het stroomgebied van de bron(nen) tot aan een natuurlijke of kunstmatige barrière die waterdieren belet om van lager gelegen gedeelten van het stroomgebied stroomopwaarts te migreren, uit een volledig stroomgebied van de bron(nen) ervan tot het estuarium, of uit meer dan een stroomgebied, met inbegrip van de estuaria ervan, als gevolg van de verbinding die er in epidemiologisch opzicht via de estuaria tussen de stroomgebieden bestaat.

a) „continentaal compartiment”: een of meer kwekerijen op het continentale deel van een of meer lidstaten, waarvoor een gemeenschappelijk bioveiligheidssysteem geldt en waar een populatie waterdieren met een duidelijk onderscheiden gezondheidsstatus ten aanzien van een specifieke ziekte wordt gehouden;

De voorschriften in deze bijlage hebben betrekking op de volgende in de lijst opgenomen ziekten:

de te treffen inperkingsmaatregelen in het geval van bevestiging van de aanwezigheid van een in de lijst opgenomen ziekte, zoals bedoeld in artikel 39 van Richtlijn 2006/88/EG, en de te treffen maatregelen met het oog op het verkrijgen van een gezondheidsstatus van categorie III voor een lidstaat, gebied of compartiment met een gezondheidsstatus van categorie V.

te gebruiken bemonsterings- en diagnosemethoden voor laboratoriumonderzoeken bij verdenking van dan wel ter bevestiging van de aanwezigheid van de in de lijst van deel II van bijlage IV bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen niet-exotische ziekten (hierna de „in de lijst opgenomen ziekten” genoemd), zoals bepaald in artikel 28, onder a), en artikel 57, onder b), van die richtlijn;

voorschriften voor uitroeiings- en bewakingsprogramma's, zoals bedoeld in artikel 44 van Richtlijn 2006/88/EG, en de te gebruiken bemonsterings- en diagnosemethoden voor het overeenkomstig hoofdstuk VII van die richtlijn ziektevrij verklaren van lidstaten of zones of compartimenten daarvan;

BIJLAGE II

GEDETAILLEERDE DIAGNOSEMETHODEN EN -PROCEDURES

I. Inleiding

Deze bijlage bevat de gedetailleerde procedures voor de diagnosemethoden die moeten worden gebruikt voor het laboratoriumonderzoek in het kader van de uitroeiings- en bewakingsprogramma's zoals bedoeld in bijlage I bij dit besluit, en om een verdenking van de aanwezigheid van de volgende in de lijst van deel II van bijlage IV bij Richtlijn 2006/88/EG opgenomen niet-exotische ziekten (hierna „in de lijst opgenomen ziekten” genoemd) te bevestigen of te weerleggen, overeenkomstig artikel 57, onder b), van die richtlijn:

1. Virale hemorragische septikemie (VHS) Deel 1 2. Infectieuze hematopoëtische necrose (IHN) Deel 1 3. Koiherpesvirusziekte (KHV-ziekte) Deel 2 4. Infectieuze zalmanemie (ISA) Deel 3 5. Besmetting met Marteilia refringens Deel 4 6. Besmetting met Bonamia ostreae Deel 5 7. Wittevlekkenziekte (white spot disease, WSD) Deel 6

II. Definities

Voor de toepassing van deze bijlage wordt verstaan onder „transportmedium”: een celkweekmedium met 10 % kalfsserum en met 200 IE penicilline, 200 μg streptomycine en 200 μg kanamycine per milliliter, of met andere antibiotica waarvan de werkzaamheid is aangetoond.

DEEL 1

GEDETAILLEERDE DIAGNOSEMETHODEN EN -PROCEDURES VOOR DE BEWAKING EN DE BEVESTIGING VAN IHN EN VHS

I. Diagnosemethoden en -procedures voor de bewaking van VHS en IHN

Bij het uitvoeren van bemonstering en laboratoriumonderzoek met het oog op het verkrijgen of behouden van de ziektevrije gezondheidsstatus ten aanzien van IHN of VHS overeenkomstig bijlage I, deel 1, punt I, aan de hand van de in deel 1, punten II.1 en II.2, van die bijlage bedoelde diagnosemethoden, zijn de gedetailleerde diagnosemethoden en -procedures van de punten I.1 tot en met I.6 hieronder van toepassing.

I.1. Voorbewerking en verzending van vismonsters

I.1.1. Weefsels voor virologisch onderzoek op celcultuur

Vóór verzending of overbrenging naar het laboratorium worden bij de vissen met steriele dissectie-instrumenten stukjes weggenomen uit de te onderzoeken organen; deze stukjes moeten in steriele plastic buisjes worden gedaan die zijn gevuld met een transportmedium.

De hoeveelheid vismateriaal die geschikt is voor virologisch onderzoek op celcultuur en met behulp van RT-qPCR hangt af van de grootte van de vis. Dat wil zeggen dat de te bemonsteren weefsels worden gevormd door: de hele vis voor dooierzakbroed (lichaamslengte < 4 cm), ingewanden met inbegrip van nier (4 cm < lichaamslengte < 6 cm) of, voor grotere vissen, nier, milt, hart en/of hersenen, en ovariële vloeistof van ouderdieren ten tijde van het paaien.

Ovariële vloeistof of zaadvocht of stukjes orgaan van maximaal 10 vissen mogen tot één verzamelmonster worden samengevoegd in een steriel buisje waarin zich ten minste 4 ml transportmedium bevindt. Ieder monster bevat ten minste 0,5 g weefsel.

Met het virologisch onderzoek op celcultuur wordt zo snel mogelijk begonnen en in elk geval uiterlijk 48 uur na de bemonstering. In uitzonderlijke gevallen mag uiterlijk 72 uur na de bemonstering met het virologisch onderzoek worden begonnen, op voorwaarde dat het voor onderzoek verzamelde materiaal met een transportmedium is beschermd en dat tijdens het vervoer aan de temperatuurvoorschriften kan worden voldaan.

I.1.2. Monsters voor analyse met behulp van reverse-transcriptase-polymerasekettingreactie (RT-PCR of RT-qPCR)

De vismonsters worden overeenkomstig de procedure van punt I.1.1 genomen met gebruikmaking van een steriel instrument en overgebracht in een steriel plastic buisje waarin zich transportmedium bevindt. Weefsel van 10 vissen mag tot één verzamelmonster worden samengevoegd in een buisje. Bij een kleine hoeveelheid inoculum mag echter weefsel van ten hoogste vijf vissen worden gebruikt. In plaats hiervan mogen monsters worden samengevoegd in RNA-stabilisatiereagentia, bijvoorbeeld 0,2 g weefsel/ml reagens overeenkomstig de aanbevelingen van de fabrikant, hoewel elke vis afzonderlijk moeten worden verwerkt en niet met andere vissen mag worden samengevoegd in de monsters, vanwege de kleine hoeveelheid voor extractie te gebruiken materiaal.

De vis mag ook in zijn geheel naar het laboratorium worden gestuurd.

I.2. Verzending van vismonsters

Buisjes met visweefsels in transportmedium voor celkweek of RT-PCR/RT-qPCR-analyse worden in geïsoleerde recipiënten geplaatst, zoals dikwandige polystyreendozen, samen met voldoende ijs of een alternatief koelmiddel met een vergelijkbaar koelvermogen, zodat de monsters tijdens het vervoer naar het laboratorium koel worden gehouden. Het invriezen van de monsters moet echter worden vermeden. De temperatuur van het monster tijdens het vervoer mag nooit meer dan 10 °C bedragen en bij aankomst moet de transportdoos nog ijs bevatten of moeten een of meer koelelementen nog geheel of gedeeltelijk bevroren zijn.

De vis mag ook in zijn geheel naar het laboratorium worden verzonden indien tijdens het vervoer aan de temperatuurvoorschriften van de eerste alinea kan worden voldaan. Hele vis wordt in absorberend papier gewikkeld en zo in een plastic zak verpakt voor verzending. De vis mag ook levend worden verzonden.

I.3. Verzamelen van aanvullend diagnostisch materiaal

Indien het diagnostisch laboratorium dit toestaat, kan van de vissen ook ander weefselmateriaal worden verzameld en voor aanvullende tests worden voorbewerkt.

I.4. Voorbewerking van monsters voor celcultuuronderzoek en RT-qPCR

I.4.1. Invriezen in uitzonderingsgevallen

Indien het vanwege praktische problemen niet mogelijk is de monsters binnen 48 uur na de verzameling van het visweefsel te verwerken, kan worden aanvaard dat de weefselmonsters bij – 20 °C of lager in transportmedium worden ingevroren en het virologisch onderzoek binnen 14 dagen alsnog wordt uitgevoerd. Het visweefsel mag echter slechts één keer worden ingevroren en ontdooid vóór het onderzoek. Elke keer dat monsters van visweefsel worden ingevroren, worden aantekeningen bijgehouden van de precieze reden hiervoor.

I.4.2. Homogeniseren van de organen

In het laboratorium wordt het visweefsel in de buisjes volledig gehomogeniseerd (met een stomacher, een mixer of een vijzel en stamper met steriel zand) en het homogenaat wordt vervolgens gesuspendeerd in het oorspronkelijke transportmedium.

Als het monster bestaat uit hele vis die minder dan cm lang is, wordt de vis, nadat het stuk achter de anus is verwijderd, met een steriele schaar of scalpel in kleine stukken geknipt. Als het monster bestaat uit hele vis met een lengte tussen 4 en 6 cm, worden de ingewanden inclusief de nieren verzameld. Als het monster bestaat uit hele vis die langer is dan 6 cm, worden de weefselmonsters genomen als omschreven in punt I.1. De weefselmonsters worden met een steriele schaar of scalpel in kleine stukken geknipt die vervolgens worden gehomogeniseerd zoals in de eerste alinea van dit punt beschreven en in het transportmedium worden gesuspendeerd.

De verhouding tussen het weefselmateriaal en het transportmedium wordt in het laboratorium zo bijgesteld dat deze uiteindelijk 1:10 bedraagt.

I.4.3. Centrifugeren van het homogenaat

Het homogenaat wordt gecentrifugeerd in een op 2 tot 5 °C gekoelde centrifuge bij 2 000 tot 4 000 × g gedurende 15 minuten; het supernatans wordt verzameld en kan met antibiotica worden behandeld, hetzij gedurende 4 uur bij 15 °C, hetzij een hele nacht bij 4 tot 8 °C. Als het monster in het transportmedium is vervoerd, hoeft het supernatans niet meer met antibiotica te worden behandeld.

Indien het vanwege praktische problemen (bv. defecte incubator, problemen met celculturen enz.) niet mogelijk is de cellen te inoculeren binnen 48 uur nadat de monsters van het visweefsel zijn genomen, mag het supernatans bij – 80 °C worden ingevroren en mag het virologisch onderzoek alsnog in de daaropvolgende 14 dagen worden verricht.

Indien het verzamelde supernatans binnen 48 uur na de bemonstering wordt opgeslagen bij – 80 °C, mag het nog slechts één keer opnieuw voor virologisch onderzoek worden gebruikt.

Voordat de cellen worden geïnoculeerd, wordt het supernatans gemengd met gelijke delen van een adequate verdunning van een mengsel van antisera tegen inheemse serotypen van het IPN-virus (infectieuze pancreatische necrose); dit mengsel wordt dan geïncubeerd gedurende ten minste één uur bij 15 °C of gedurende ten hoogste 18 uur bij 4 °C. De titer van het antiserum, bepaald met behulp van een 50 %-plaqueneutralisatietest, bedraagt ten minste 1:2 000.

De behandeling van alle inocula met antiserum tegen het IPN-virus heeft tot doel een cytopathologisch effect (CPE) ten gevolge van de ontwikkeling van het IPN-virus in geïnoculeerde celculturen te voorkomen. Door deze behandeling wordt de duur van het virologisch onderzoek ingekort en vermindert het aantal gevallen waarin het ontstaan van een CPE als mogelijke indicator voor de aanwezigheid van VHSV of IHNV zou moeten worden aangemerkt.

Als de monsters afkomstig zijn van productie-eenheden die als vrij van IPN worden beschouwd, is het niet verplicht de inocula met antiserum tegen het IPN-virus te behandelen.

I.4.4. Voorbewerking van monsters voor bewakingsprogramma's op basis van RT-PCR en RT-qPCR

Als de monsters in transportmedium zijn verzameld, wordt de procedure van de punten I.4.2 en I.4.3 gevolgd. Na centrifugering wordt het supernatans verzameld en wordt RNA geëxtraheerd. Indien het vervolgonderzoek niet direct na het centrifugeren wordt uitgevoerd, worden de monsters onmiddellijk ingevroren bij – 20 °C of lager.

Voor de analyse van visweefsel in RNA-stabilisatiereagens moeten de vervolgwerkzaamheden worden uitgevoerd binnen de volgende termijnen, naargelang de temperatuur waarbij de monsters worden bewaard:

bij 37 °C bewaarde monsters: één dag;

bij 25 °C bewaarde monsters: één week;

bij 4 °C bewaarde monsters: één maand;

bij – 20 °C bewaarde monsters: voor onbepaalde tijd

Verzamelmonsters in RNA-stabilisatiereagens worden behandeld als afzonderlijke monsters in RNA-stabilisatiereagens. Voor verz