1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 1
Dit document vormt slechts een documentatiehulpmiddel en verschijnt buiten de verantwoordelijkheid van de instellingen
►B RICHTLIJN VAN DE RAAD
van 21 december 1976
inzake het opsporen van trichinen bij de invoer van vers vlees van varkens, huisdieren, uit derde
landen
(77/96/EEG)
(PB L 26 van 31.1.1977, blz. 67)
Gewijzigd bij:
Publicatieblad
nr. blz. datum
►M1 Richtlijn 81/476/EEG van de Raad van 24 juni 1981 L 186 20 8.7.1981
►M2 Richtlijn 83/91/EEG van de Raad van 7 februari 1983 L 59 34 5.3.1983
►M3 Richtlijn 84/319/EEG van de Commissie van 7 juni 1984 L 167 34 27.6.1984
►M4 Verordening (EEG) nr. 3768/85 van de Raad van 20 december 1985 L 362 8 31.12.1985
►M5 Richtlijn 89/321/EEG van de Commissie van 27 april 1989 L 133 33 17.5.1989
►M6 Richtlijn 94/59/EG van de Commissie van 2 december 1994 L 315 18 8.12.1994
►M7 Verordening (EG) nr. 807/2003 van de Raad van 14 april 2003 L 122 36 16.5.2003
Gewijzigd bij:
►A1 Toetredingsakte van Griekenland L 291 17 19.11.1979
►A2 Toetredingsakte van Oostenrijk, Finland en Zweden C 241 21 29.8.1994
(aangepast door Besluit 95/1/EG, Euratom, EGKS van de Raad) L 1 1 1.1.1995
►A3 Akte betreffende de toetredingsvoorwaarden voor de Tsjechische Repu-
bliek, de Republiek Estland, de Republiek Cyprus, de RepubliekLetland, de Republiek Litouwen, de Republiek Hongarije, de Republiek
Malta, de Republiek Polen, de Republiek Slovenië en de Slowaakse
Republiek en de aanpassing van de Verdragen waarop de EuropeseUnie is gegrondL 236 33 23.9.2003
▼B
RICHTLIJN VAN DE RAAD
van 21 december 1976
inzake het opsporen van trichinen bij de invoer van vers vlees van
varkens, huisdieren, uit derde landen
(77/96/EEG)
DE RAAD VAN DE EUROPESE GEMEENSCHAPPEN,
Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese Economische
Gemeenschap,
Gelet op Richtlijn 72/462/EEG van de Raad van 12 december 1972
inzake gezondheidsvraagstukken en veterinairrechtelijke vraagstukken
bij de invoer van runderen en varkens en van vers vlees uit derde
landen (1), laatstelijk gewijzigd bij Richtlijn 75/379/EEG (2), inzonder-
heid op artikel 21,
Gezien het voorstel van de Commissie,Overwegende dat de Raad in artikel 21 van Richtlijn 72/462/EEG heeft
bepaald dat er een methode en de noodzakelijke modaliteiten zullenworden vastgesteld voor het onderzoek van vers vlees van varkens optrichinen;
Overwegende dat de toepassing van Richtlijn 72/462/EEG niet de
verwachte resultaten zal opleveren zolang er tussen de Lid-Staten
verschillen bestaan met betrekking tot de waarborgen die worden geëistinzake het opsporen van trichinen bij de invoer van vers vlees uit derdelanden; dat het bijgevolg noodzakelijk is een communautaire regelingin te stellen op dit gebied;
Overwegende dat het verse varkensvlees ter bescherming van de
gezondheid van de verbruiker systematisch moet worden onderworpen
aan een onderzoek volgens erkende doeltreffende methoden, zulks ten
einde het vlees waarin trichinen voorkomen te elimineren;
Overwegende dat het onderzoek, wanneer het wordt verricht in het
derde land van verzending, moet plaatsvinden in slachthuizen dievoldoen aan bepaalde voorwaarden en die met name een onderzoekla-boratorium hebben dat voorzien is van het benodigdeonderzoekmateriaal;
Overwegende dat, om vlees dat is onderzocht te kunnen onderscheiden
van vlees dat niet is onderzocht, een bijzonder merkteken moet worden
aangebracht op vlees dat met negatief resultaat aan het onderzoek isonderworpen;
Overwegende dat via een procedure waarbij een nauwe en doeltref-
fende samenwerking tot stand wordt gebracht tussen de Commissie ende Lid-Staten moet worden beoordeeld of het wenselijk is aan inrich-tingen in derde landen toestemming te geven tot het verrichten van dit
onderzoek of tot het bewerken van het onderzochte vlees, en dat ook de
technische voorschriften, die met name betrekking hebben op de onder-zoekmethoden, de eisen ten aanzien van de onderzoeklaboratoria, en dewijze waarop het onderzochte vlees moet worden gemerkt, volgensdezelfde procedure moeten worden aangepast naar gelang van de tech-
nische ontwikkeling en de opgedane ervaring;
Overwegende dat het wenselijk is om de Lid-Staten de mogelijkheid te
bieden vers vlees dat geen onderzoek op trichinen in het land vanverzending heeft ondergaan, toe te laten mits dit vlees hetzij in hetland van verzending, hetzij in de Lid-Staat van bestemming, aan eenkoudebehandeling wordt onderworpen waardoor wordt gewaarborgddat eventueel aanwezige trichinen worden geïnactiveerd; dat deze
behandeling evenwel dient te geschieden volgens bepaalde duidelijk
omschreven voorschriften in inrichtingen die voldoen aan bepaaldevoorwaarden,1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 2
(1) PB nr. L 302 van 31. 12. 1972, blz. 28.
(2) PB nr. L 172 van 3. 7. 1975, blz. 17.
▼B
HEEFT DE VOLGENDE RICHTLIJN VASTGESTELD:
Artikel 1
In deze richtlijn worden de definities overgenomen van Richtlijn 72/
462/EEG.
Voorts wordt verstaan onder:
a) vers vlees: vers vlees van varkens die als huisdieren worden
gehouden;
b) onderzoek: het onderzoek op de aanwezigheid van trichinen in vers
vlees.
Artikel 2
1. Uit derde landen afkomstig vers vlees waarin skeletspieren
(dwarsgestreept spierweefsel) aanwezig zijn, dient, om tot het intra-communautaire handelsverkeer te kunnen worden toegelaten, teworden onderworpen aan een onderzoek onder toezicht en verantwoor-delijkheid van een officiële dierenarts.
2. Het onderzoek moet worden uitgevoerd volgens één van de in
bijlage I vermelde methoden en wel op het gehele dier of, bij gebreke
daarvan, op alle halve geslachte dieren, voorvoeten, achtervoeten ofdelen van geslachte dieren, bestemd om in de Gemeenschap te wordeningevoerd.
3. Het onderzoek moet worden uitgevoerd in een overeenkomstig
artikel 4 van Richtlijn 72/462/EEG erkend slachthuis in het land van
verzending, dat voor het uitvoeren van dit onderzoek overeenkomstighet bepaalde in artikel 4 van de onderhavige richtlijn is toegelaten.
4. Het onderzoek dient te zijn uitgevoerd vóór het aanbrengen van
het keurmerk als bedoeld in bijlage B, hoofdstuk X van Richtlijn 72/
462/EEG.
5. Indien het onderzoek niet kan worden uitgevoerd in het land van
verzending, kan de Lid-Staat van bestemming de invoer van vers vleestoestaan op voorwaarde dat het onderzoek wordt verricht tijdens de inartikel 24, lid 2, van Richtlijn 72/462/EEG voorgeschreven keuring in
een in artikel 27, lid 1, sub b), van de richtlijn bedoelde controlepost
op zijn grondgebied.
6. a) Indien het resultaat van het onderzoek negatief is, moet het verse
vlees onmiddellijk nadat het onderzoek is beëindigd, overeen-komstig het bepaalde in bijlage III worden gemerkt.
b) Voor het merken met een inktstempel dient een kleurstof te
worden gebruikt als bedoeld in artikel 17, lid 3, van Richtlijn72/462/EEG.
Artikel 3
1. In afwijking van artikel 2 kan de Lid-Staat van bestemming
besluiten dat vers vlees van herkomst uit bepaalde derde landen ofdelen van die landen, niet hoeft te worden onderworpen aan een onder-zoek onder de voorwaarde dat het een koudebehandelingovereenkomstig bijlage IV ondergaat.
2. Deze behandeling vindt plaats in een inrichting als bedoeld in
artikel 4, lid 1, gelegen op het grondgebied van het derde land vanverzending.
De officiële dierenarts moet in het in artikel 22, lid 3, van Richtlijn 72/
462/EEG bedoelde vleeskeuringscertificaat dat het vlees vergezelt,
vermelden dat de koudebehandeling in het derde land van verzending
heeft plaatsgevonden.
3. Indien de koudebehandeling niet in het derde land van verzending
plaatsvindt, moet zij plaatshebben in een controlepost als bedoeld inartikel 2, lid 5.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 3
▼B
De officiële dierenarts moet in het in artikel 25 van Richtlijn 72/462/
EEG bedoelde certificaat dat het vlees vergezelt, vermelden dat dekoudebehandeling in de Lid-Staat heeft plaatsgevonden.
Artikel 4
1. Toelating van een slachthuis tot het verrichten van het onderzoek,
toelating van een uitsnijderij tot het uitsnijden of uitbenen van vers
vlees dat aan dit onderzoek onderworpen is geweest en toelating vaneen inrichting tot het uitvoeren van de in artikel 3 bedoelde koudebe-handeling, geschieden volgens de procedure van artikel 9. Behalve metde in artikel 4 van Richtlijn 72/462/EEG genoemde eisen wordt reke-ning gehouden met de waarborgen die worden geboden voor de
naleving van de bepalingen van deze richtlijn, en, voor wat de slacht-
huizen betreft:
a) met de aanwezigheid van de lokalen en de apparatuur nodig voor
het verrichten van het onderzoek,
b) met de vakbekwaamheid van het personeel dat met dit onderzoek is
belast.
Toelating van een slachthuis of een uitsnijderij kan slechts geschieden
indien de bevoegde autoriteiten van het derde land officieel hebbenverklaard dat dit slachthuis of deze uitsnijderij kan voldoen aan de inartikel 5 en in bijlage III gestelde voorwaarden, en dat het slachthuisbovendien beschikt over een laboratorium dat in overeenstemming is
met bijlage II, hoofdstuk I, en dat kan voldoen aan het bepaalde in de
andere hoofdstukken van bijlage II en aan de bepalingen van bijlage I.
Toelating van een inrichting tot het verrichten van de koudebehande-
ling kan slechts geschieden indien de bevoegde autoriteiten van hetderde land officieel hebben verklaard dat deze inrichting kan voldoenaan de in bijlage IV gestelde voorwaarden.
2. In de lijst of lijsten, bedoeld in lid 4 van artikel 4 van Richtlijn
72/462/EEG wordt bij de namen van de inrichtingen die in de zin van
lid 1 zijn toegelaten, een speciale aanduiding aangebracht.
Artikel 5
1. In slachthuizen die overeenkomstig artikel 4 zijn toegelaten,
moeten varkens waarvan het vlees bestemd is voor de Gemeenschapworden geslacht in andere lokalen of, bij gebreke daarvan, op anderetijdstippen dan varkens waarvan het vlees niet bestemd is voor deGemeenschap, tenzij het vlees van deze varkens op dezelfde wijze aan
een onderzoek wordt onderworpen.
2. Het uitsnijden of uitbenen van vlees dat met negatief resultaat aan
een onderzoek onderworpen is geweest en dat bestemd is voor deGemeenschap, moet plaatsvinden in overeenkomstig artikel 4 toege-laten uitsnijderijen.
In deze uitsnijderijen moet dit vlees in andere lokalen, of bij gebreke
daarvan, op andere tijdstippen worden uitgesneden of uitgebeend dan
vlees dat niet bestemd is voor de Gemeenschap, tenzij het vlees van
deze varkens op dezelfde wijze aan een onderzoek onderworpen isgeweest.
Artikel 6
Bij de controles in derde landen, voorzien in artikel 5 van Richtlijn 72/
462/EEG, moet eveneens worden nagegaan of de bepalingen van deonderhavige richtlijn worden toegepast.
Artikel 7
De Lid-Staten stellen de lijst op van de in artikel 2, lid 5, bedoelde
controleposten waar
— het onderzoek
— de in artikel 3 bedoelde koudebehandeling1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 4
▼B
kan worden uitgevoerd en delen deze lijst aan de Commissie mede.
Zij zien erop toe dat deze posten beschikken over de nodige voorzie-
ningen om de betrokken werkzaamheden te kunnen uitvoeren.
Artikel 8
Ten einde rekening te houden met de ontwikkeling van de technologie
kan volgens de procedure van artikel 9 worden besloten de bijlagen van
deze richtlijn aan te passen of aan te vullen; daarbij dient ervoor teworden gewaakt dat het niveau van de bestaande gezondheidswaar-borgen gehandhaafd blijft.
Artikel 9
1. De Commissie wordt bijgestaan door het bij artikel 58 van Veror-
dening (EG) nr. 178/2002 (
1) ingestelde Permanent Comité voor de
voedselketen en de diergezondheid.
2. Wanneer naar dit artikel wordt verwezen, zijn de artikelen 5 en 7
van Besluit 1999/468/EG (2) van toepassing.
De in artikel 5, lid 6, van Besluit 1999/468/EG bedoelde termijn wordt
vastgesteld op drie maanden.
3. Het comité stelt zijn reglement van orde vast.
Artikel 11
De Lid-Staten stellen uiterlijk op 1 januari 1979 de nodige wettelijke
en bestuursrechtelijke bepalingen in werking om aan deze richtlijn te
voldoen. Zij stellen de Commissie daarvan onmiddellijk in kennis.
Artikel 12
Deze richtlijn is gericht tot de Lid-Staten.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 5
(1) PB L 31 van 1.2.2002, blz. 1.
(2) PB L 184 van 17.7.1999, blz. 23.▼M2
▼M7
▼M1
▼B
▼B
BIJLAGE 1
METHODES VOOR HET OPSPOREN VAN TRICHINEN
I. TRICHINOSCOPISCH ONDERZOEK
a)Apparatuur
Gloeilamptrichinoscoop met 50-voudige, alsmede 80-100-voudige
vergroting.
Compressorium (persglazen) bestaande uit twee tegen elkaar aandruk-
bare glazen plaatjes, waarvan er een in gelijke vlakken is verdeeld,
een klein krom schaartje, een pincet, een mes voor het uitsnijden van
de monsters, genummerde kleine recipiënten om de monsters in op te
vangen, een druppelpipet, een glaasje met azijnzuur en een glaasje met
kaliloog voor het helder maken van eventuele verkalkingen, respectie-
velijk week maken van ingedroogd vlees.
b)Monsterneming
Bij complete dieren telkens een monster nemen van ten minste de
grootte van een hazelnoot uit beide middenrifpijlers bij de overgang
van het spiergedeelte naar het peesgedeelte. Is slechts één middenrif-
pijler voorhanden, dan moet hieruit een monster worden genomen van
tweemaal de grootte van een hazelnoot. Bij het ontbreken van beide
middenrifpijlers moeten twee monsters ongeveer ter grootte van een
hazelnoot worden genomen uit het rib- of borstbeengedeelte van het
middenrif, uit de tong- of kauwspieren of uit de buikspieren.
Voor stukken vlees: van ieder stuk, drie monsters van skeletspieren die
weinig vet bevatten, van ten minste de grootte van een hazelnoot en
genomen op verschillende plaatsen, zoveel mogelijk in de nabijheid
van de beenderen of van de pezen.
c)Werkwijze
Van elk van de hierboven beschreven monsters van de complete dieren
moet de trichinekeurder, wanneer beide middenrifpijlers voorhanden
zijn, zeven stukjes uitsnijden ter grootte van een haverkorrel, dus 14
stukjes in totaal, en wanneer slechts één middenrifpijler voorhanden is,
veertien stukjes, op verschillende plaatsen en indien mogelijk bij de
overgang van spier naar pees, en tussen de glazen plaatjes van het
compressorium zo plat drukken dat gewone drukletters gemakkelijk
door het preparaat kunnen worden gelezen. Indien het vlees van de te
onderzoeken stukken droog en oud is, moeten de preparaten vóór het
platdrukken gedurende 10 tot 20 minuten worden geweekt in kaliloog
dat met ongeveer een dubbele hoeveelheid water is verdund.
Indien bij complete dieren monsters worden genomen uit het rib- of
borstbeengedeelte van het middenrif, uit de tong- of kauwspieren of
uit de buikspieren, moeten van elk monster 14 stukjes ter grootte van
een haverkorrel worden gesneden, dus 28 stukjes in totaal.
Van ieder van de monsters die werden afgenomen van stukken vlees
moet de trichinekeurder 4 stukjes ter grootte van een haverkorrel
afsnijden, dus 12 stukjes in totaal.
Het onderzoek met de trichinoscoop dient zó te geschieden dat elk
preparaat langzaam en zorgvuldig wordt onderzocht. Indien bij het
trichinoscopisch onderzoek verdachte plaatsen worden gevonden
waarvan de aard ook met de sterkste vergroting van de trichinoscoop
niet met zekerheid kan worden vastgesteld, moet een controleonderzoek
met behulp van de microscoop worden verricht.
Het microscopisch onderzoek dient zo te geschieden dat ieder preparaat
bij 30- tot 40- voudige vergroting langzaam en zorgvuldig wordt onder-
zocht.
In geval van twijfel moet het onderzoek met andere monsters en prepa-
raten, indien nodig met behulp van sterkere vergrotingen, worden
voortgezet, tot de gewenste gegevens zijn verkregen. Het trichinosco-
pisch onderzoek dient ten minste drie minuten te duren.
Wanneer gebruik wordt gemaakt van vervangingsmonsters uit het rib-
of borstbeengedeelte van het middenrif, uit de tong- of kauwspieren of
uit de buikspieren, dient het trichinoscopisch onderzoek ten minste zes
minuten te duren.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 6
▼B
In de vastgestelde minimumtijd voor het onderzoek is niet de tijd
begrepen die nodig is voor het afnemen van de monsters en voor het
maken van de preparaten.
Over het algemeen mag een keurder niet meer dan 840 stukjes per dag
met de trichinoscoop onderzoeken; bij uitzondering mag dit getal tot
1 050 worden verhoogd.
II. DIGESTIEMETHODE
a)Apparatuur en materiaal
— Mes voor monsterneming.
— Kleine afsluitbare genummerde bakjes voor het bewaren der
monsters, eventueel tot een hernieuwd onderzoek.
— Incubator.— Glazen trechter met een inhoud van 2 à 3 liter, met staander en
gummi verbindingsslang, klemmen voor het afklemmen van de
verbindingsslang.
— Plastic zeef (doorsnede ca. 18 cm, maaswijdte ongeveer 1 mm).
— Verbandgaas.— Centrifugebuisje met spits uiteinde.
— Blokschaaltje.
— Vleesmolen.
— strereomicroscoop (vergroting 15 tot 40 maal) met geschikte licht-
bron.
— digestievloeistof met de volgende samenstelling: 10 g pepsine (80 e/
g FIP: Fédération Internationale de Pharmacie), 5 ml HCl (ten
minste 37 %), met leidingwater tot 1 liter aanvullen.
b)Monsterneming
1. Bij complete dieren een monster van ten minste 20 g uit een
middenrifpijler nemen aan de overgang van het spiergedeelte naar
het peesgedeelte; indien geen middenrifpijler voorhanden is, een
monster van dezelfde grootte uit het rib- of borstbeengedeelte van
het middenrif, uit de tong- of kauwspieren of uit de buikspieren
nemen.
2. Voor de stukken vlees een monster van ten minste 20 g afnemen van
de skeletspieren die weinig vet bevatten, zoveel mogelijk in de
nabijheid van de beenderen of van de pezen.
c)Methode
Voor het onderzoek van een verzamelmonster van tien varkens wordt
uit ieder monster (20 g) een monster van 10 g getrokken. De overige
10 g worden bewaard voor een afzonderlijk onderzoek indien dit nood-
zakelijk zou zijn.
De tien monsters van elk 10 g worden tot één monster samengevoegd,
in de vleesmolen (diameter van de gaatjes 2 mm) gemalen en in losse
korrels in de van een laag verbandgaas voorziene zeef geplaatst.
Vervolgens wordt de zeef opgehangen in een trechter die door een
stuk gummislang is verbonden met een centrifugebuisje met spits
uiteinde; de trechter wordt met de digestievloeistof gevuld tot het analy-
semateriaal geheel bedekt is. De verhouding analysemateriaal/
verteringsvloeistof moet ongeveer 1:20 à 1:30 bedragen.
Na incubatie gedurende 18 à 20 uur bij 37 ºC à 39 ºC wordt het centri-
fugebuisje losgemaakt. De bovendrijvende vloeistof in dit buisje wordt
zorgvuldig verwijderd en het sediment wordt op een schaaltje opge-
vangen en zorgvuldig gespoeld. De aanwezigheid van trichinen wordt
nagegaan met behulp van de stereomicroscoop bij 20- à 40-voudige
vergroting.
Bij een positieve of twijfelachtige uitkomst van het onderzoek van een
verzamelmonster dienen de overblijvende monsters, aangevuld met 20 g
van ieder varken of, indien het gaat om stukken vlees, met 20 g van
ieder stuk, genomen overeenkomstig punt b), afzonderlijk te worden
onderzocht.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 7
▼M3
▼B
▼M3
III. VERZAMELDIGESTIEMETHODE
a)Apparatuur en reagentia
— Mes en pincetten voor de monsterneming.
— Vleesmolen met openingen met diameter tussen 2 en 3 mm.— Een erlenmeyerkolf met stop van rubber of watten (van 3 liter).— Een konische scheitrechter met een inhoud van 2 000 ml.
— Een normale A-standaard met een lengte van ongeveer 28 cm en
een staaf van 80 cm.
— Een ring van ongeveer 10-11 cm doorsnede die aan de standaard
kan worden bevestigd.
— Een Péanse tang (23 × 40 mm) die aan de standaard met een
dubbele bevestiging kan worden vastgemaakt.
— Een zeef (maaswijdte 177 micron) met een buitendiameter van
11 cm voorzien van gaas van brons of roestvrij staal.
— Een trechter met een binnendiameter van niet minder dan 12 cm.
— Glazen maatcylinder, 100 ml.
— Een stereomicroscoop (vergroting × 15 — 40) met een geschikte
lichtbron of een trichinoscoop met horizontale tafel voor het
compressorium met een geschikte lichtbron.
— Wanneer gebruik wordt gemaakt van een trichinoscoop, een schaal
voor het tellen van de larven die als volgt kan worden omschreven:
De schaal is op de volgende wijze geconstrueerd van 3 mm dikke
acrylplaat:
i) de bodem van de schaal meet 180 × 40 mm, met een onderver-
deling in vierkanten,
ii) de lange opstaande zijden meten 230 × 20 mm,
iii) de korte opstaande zijden meten 40 × 20 mm; de bodem en de
korte zijden worden tussen de lange zijden bevestigd waardoor
een bak ontstaat met aan beide einden twee kleine handgrepen;
de bovenkant van de bodem ligt 7 tot 9 mm boven de onderrand
van de opstaande zijden; de onderdelen worden met een bij het
materiaal passend middel aan elkaar gelijmd.
— Een aantal petrischalen van 9 cm doorsnede (bij gebruik van een
stereomicroscoop) waarop op de onderzijden met een scherp voor-
werp een onderverdeling in vierkanten van 10 × 10 mm is
aangebracht.
— Een aantal 10 liter bakken voor de desinfectie (zoals met formol)
van de apparatuur en de digestievloeistoffen bij positief resultaat.
— Geconcentreerd (37 %) zoutzuur.— Pepsine, gehalte 1: 10 000 NF (US National Formulary),
overeenkomend met 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea), overeen-
komend met 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie).
— Een aantal schalen voor 50 monsters van ongeveer 2 g vlees.— Een balans, nauwkeurig op 0,1 g.
b)Monsterneming
1. Bij complete dieren een monster van ongeveer 2 g uit een midden-
rifpijler nemen aan de overgang van het spiergedeelte naar het
peesgedeelte; indien geen middenrifpijler voorhanden is, een monster
van dezelfde grootte uit het rib- of borstbeengedeelte van het
middenrif, uit de tong- of kauwspieren of uit de buikspieren nemen.
2. Voor de stukken vlees een monster van ongeveer 2 g afnemen van
de skeletspieren die weinig vet bevatten, zoveel mogelijk in de
nabijheid van de beenderen of van de pezen.
c)Werkwijze
1. i) Complete series (100 monsters tegelijk)
Van alle 100 monsters van de varkens wordt een monster van
ongeveer 1 g genomen.
Het verzamelmonster wordt één keer in de vleesmolen vermalen.Het vermalen vlees wordt overgebracht in de erlenmeyerkolf (3
liter) te zamen met 7 g pepsine, ongeveer 2 liter water met een
temperatuur van 40-41 ºC en 25 ml geconcentreerd zoutzuur.
Het mengsel wordt geschud om de pepsine op te lossen.
De pH van de oplossing moet liggen tussen 1,5 en 2.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 8
▼M3
— Met het oog op de digestie wordt de erlenmeyerkolf geïncu-
beerd bij 40-41ºC gedurende ongeveer 4 uur. De kolf wordt
tijdens de incubatie regelmatig geschud, ten minste 2 maal
per uur.
— De ontsloten oplossing wordt gefiltreerd over een zeef in de
konische scheitrechter van 2 liter en gedurende ten minste
een uur ongemoeid gelaten in de standaard.
— Een hoeveelheid van ongeveer 45 ml wordt afgetapt in een
maatcylinder en in drie gelijke hoeveelheden van 15 ml
verdeeld over drie petrischalen waarvan de bodem is inge-
deeld in vierkantjes.
— Elke petrischaal wordt nauwkeurig onder de steriomicroscoop
onderzocht op trichinelarven.
— Wanneer gebruik wordt gemaakt van schotels voor het tellen
van de larven worden de 45 ml over twee van die schotels
verdeeld en onder de trichinoscoop onderzocht.
De larven in de neerslag liggen opgerold en vertonen het
beeld van een horlogeveer. Zij zijn gemakkelijk identificeer-
baar en maken in lauwwarm water meestal op- en
afrolbewegingen.
— De verteerde monsters moeten worden afgelezen zodra deze
gereed zijn. Het onderzoek mag onder geen voorwaarde
worden uitgesteld tot de volgende dag.
Indien de monsters niet helder zijn of niet binnen 30 minuten na
de bereiding worden afgelezen, worden ze als volgt geklaard. Het
uiteindelijke monster van 45 ml wordt overgebracht in een maat-
cylinder en daarin 10 minuten met rust gelaten. Daarna wordt
30 ml van de bovenstaande vloeistof door afzuigen verwijderd
en wordt de overblijvende 15 ml met leidingwater aangevuld tot
45 ml. Na nog eens 10 minuten bezinken wordt weer 30 ml van
de bovenstaande vloeistof door afzuigen verwijderd en wordt de
overblijvende 15 ml voor onderzoek in een petrischaal gegoten of
in een schaal voor het tellen van de larven. De maatcylinder
wordt nagespoeld met 10 ml leidingwater en deze spoelingen
worden vervolgens gevoegd bij de inhoud van de petrischaal of
van de schaal voor het tellen van de larven.
ii)Kleinere series (minder dan 100 monsters)
Maximaal 15 afzonderlijke monsters kunnen bij andere monsters
worden gevoegd tot een totaal van 100 en tegelijk daarmee
worden onderzocht. Indien meer dan 15 monsters en minder dan
100 monsters worden onderzocht, dient de digestievloeistof
proportioneel verminderd.
2. Bij een positieve of twijfelachtige uitkomst van een verzamelmonster
wordt overeenkomstig sub b) van elk varken nog eens een monster
van 20 g genomen. De monsters van 20 g van 5 varkens worden
bijeengebracht en volgens de hierboven beschreven werkwijze
onderzocht. Op deze wijze worden monsters van 20 groepen van 5
varkens onderzocht. Wanneer in een groepsmonster van 5 varkens
trichinen worden aangetoond, worden van de afzonderlijke varkens
in de groep nog eens monsters van 20 g genomen en worden deze
vervolgens volgens de hierboven beschreven werkwijze afzonderlijk
onderzocht.
IV. VERZAMELDIGESTIEMETHODE MET MECHANISCHE HULPMID-
DELEN/SEDIMENTATIE-TECHNIEK
a)Apparatuur en reagentia
— Mes of schaar voor de monsterneming.
— Schalen met een indeling in 50 vierkanten waarop steeds ongeveer
2 g vlees past.
— Stomacher Lab-blender 3500 Thermo model.— Kunststofzakken voor de Stomacher Lab-blender.
— Kegelvormige scheitrechter, inhoud 2 liter, bij voorkeur met teflon
veiligheidsstop.
— Statieven, ringen en klemmen.
— Zeven, roestvrij staal, maaswijdte 177 micron, uitwendige doorsnede
11 cm.
— Trechters, inwendige doorsnede ten minste 12 cm, als steun voor de
zeven.
— Glazen maatcylinders, 100 ml.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 9
▼M3
— Dispenser, 25 ml.
— Bekerglazen, 3 l.— Lepel of glazen staaf voor het roeren van de digestievloeistof.
— Kunststofspuit en -slang voor het opzuigen van vloeistof.
— Maatlepel voor 6 g.
— Thermometer, nauwkeurig ± 0,5 ºC in het meetgebied 1-100 ºC.
— Trilapparaat, bij voorbeeld een elektrisch scheerapparaat waarvan de
kop is verwijderd.
— Relais dat om de minuut aan- en uitschakelt.— Trichinoscoop met horizontale tafel of stereomicroscoop met een
geschikte lichtbron.
— Schaal voor het tellen van de larven (bij gebruik van de trichino-
scoop).
De schaal is op de volgende wijze gemaakt van 3 mm dikke acryl-
plaat:
i) de bodem van de schaal meet 180 × 40 mm, met een onderver-
deling in vierkanten,
ii) de lange opstaande zijden meten 230 × 20 mm,
iii) de korte opstaande zijden meten 40 × 20 mm. De bodem en de
korte zijden worden tussen de langere zijden bevestigd waar-
door een bak ontstaat met aan beide einden twee kleine
handgrepen. De bovenkant van de bodem bevindt zich 7 tot
9 mm boven de onderrand van de opstaande zijden. De onder-
delen worden met een bij het materiaal passend middel aan
elkaar gelijmd.
— Een aantal petrischalen van 9 doorsnee (bij gebruik van de stereo-
microscoop) waarop op de onderzijde met een scherp voorwerp
een onderverdeling in vierkanten van 10 mm is aangebracht.
— Zoutzuur, 17,5 %.
— Pepsine, gehalte 1: 10 000 NF (US National Formulary),
overeenkomend met 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea),
overeenkomend met 2 000 FIP (Fédération Internationale de Phar-
macie).
— Een aantal 10 l bakken voor de desinfectie (zoals formol) van de
apparatuur en van de overblijvende digestievloeistof bij positief
resultaat.
— Balans, nauwkeurig op 0,1 g.
b)Monsterneming
1. Bij complete karkassen een monster van ongeveer 2 g uit een
middenrifpijler nemen aan de overgang van het spiergedeelte naar
het peesgedeelte; indien geen middenrifpijler voorhanden is, een
monster van dezelfde grootte uit het rib- of borstbeengedeelte van
het middenrif of uit de kauwspieren of buikspieren nemen.
2. Voor stukken vlees een monster van ongeveer 2g nemen van de
skeletspieren die weinig vet bevatten, zoveel mogelijk in de nabij-
heid van de beenderen of de pezen.
c)Werkwijze
1.Digestieprocedure
i)Complete series (100 monsters tegelijk)
— De Stomacher Lab-blender 3 500 wordt voorzien van een
dubbele kunststofzak en de temperatuurregelaar wordt inge-
steld op 40-41 ºC.
— In de binnenste kunststofzak wordt anderhalve liter water van
32-35 ºC gegoten en het water wordt dan verder verwarmd tot
40-41 ºC.
— Aan het water in de Stomacher wordt 25 ml 17,5 % zoutzuur
toegevoegd.
— Vervolgens worden 100 monsters van ieder ongeveer 1 g (25-
30 ºC), die overeenkomstig sub b) zijn genomen van de
afzonderlijke monsters, toegevoegd.
— Tenslotte wordt 6 g pepsine toegevoegd. Aan deze volgorde
van toevoeging moet strikt de hand worden gehouden, ten
einde ontleding van de pepsine te voorkomen.
— De inhoud van de zak wordt 25 minuten lang in de Stoma-
cher fijngestampt.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 10
▼M3
— Daarna wordt de kunststofzak uit de Stomacher gehaald en de
digestievloeistof door een zeef in een bekerglas van 3 l gefil-
treerd.
— De kunststofzak wordt gewassen met ongeveer 100 ml water,
waarmee vervolgens de zeef wordt nagespoeld en die ten
slotte bij het filtraat in het bekerglas wordt gevoegd.
Maximaal 15 afzonderlijke monsters kunnen bij andere monsters
worden gevoegd tot een totaal van 100 en tegelijk daarmee
worden onderzocht.
ii)Kleinere series (minder dan 100 monsters)
— De Stomach Lab-blender 3500 wordt voorzien van een
dubbele kunststofzak en de temperatuurregeling wordt inge-
steld op 40-41 ºC.
— Digestievloeistof wordt bereid door menging van ongeveer
anderhalve liter water, 25 ml 17,5 % zoutzuur en 6 g pepsine
bij 40-41 ºC. De pepsine moet beslist als laatste worden
toegevoegd ten einde ontleding hiervan te voorkomen.
— Van de digestievloeistof wordt een volume dat overeenkomt
met 15 ml per g monster afgemeten (bij voorbeeld voor 30
monsters dus 30 × 15 ml = 450 ml) en overgebracht in de
binnenste van de twee kunststofzakken; hieraan worden tege-
lijk de vleesmonsters van ongeveer 1 g (25-30 ºC) die
overeenkomstig sub b) van elk der afzonderlijke monsters
zijn genomen, toegevoegd.
— In de buitenste zak wordt water met een temperatuur van
ongeveer 41 ºC gegoten tot een totaal volume in de twee
zakken van 1,5 liter.
— Vervolgens wordt de inhoud van de binnenste zak 25 minuten
lang met de Stomacher fijngemalen.
— De kunststofzak wordt vervolgens uit de Stomacher gehaald
en de digestievloeistof wordt door de zeef in een bekerglas
van 3 l gefiltreerd.
— De kunststofzak wordt gewassen met ongeveer 100 ml water,
waarmee vervolgens de zeef wordt nagespoeld en die ten
slotte bij het filtraat in het bekerglas wordt gevoegd.
2.Isolatie van larven door middel van sedimentatie
— Aan de digestievloeistof wordt zoveel ijs (300-400 g, blokjes of
schilfers) toegevoegd tot het totaal volume ongeveer 2 liter is.
Het mengsel wordt zolang geroerd tot het ijs is gesmolten. Bij
kleinere series (zie punt 1. ii) dient overeenkomstig minder ijs
te worden gebruikt.
— De gekoelde digestievloeistof wordt overgebracht in een schei-
trechter van 2 l die voorzien is van een trilapparaat in een
afzonderlijke klem.
— De inhoud van de scheitrechter wordt 30 minuten aan sedimen-
tatie onderworpen, waarbij 1 minuut trillen steeds wordt
afgewisseld met 1 minuut rust.
— Na 30 minuten wordt 60 ml van het sediment snel afgetapt in een
100 ml maatcylinder (na gebruik wordt de trechter gespoeld met
een reinigingsmiddel).
— Na 10 minuten bezinken wordt van het monster van 60 ml zoveel
van de bovenstaande vloeistof afgezogen tot 15 ml overblijft die
wordt onderzocht op de aanwezigheid van larven.
— Vóór het afzuigen kan een kunststof wegwerpspuit worden
gebruikt, die is voorzien van een kunststofslang van een zoda-
nige lengte dat wanneer de flensen van de spuit op de rand van
de cylinder rusten nog 15 ml in de maatcylinder overblijft.
— De overblijvende 15 ml wordt in een schaal voor het tellen van
larven of in twee petrischalen gegoten en met een trichinoscoop
dan wel met een stereomicroscoop onderzocht.
— De verteerde monsters moeten worden afgelezen zodra deze
gereed zijn. Het onderzoek mag onder geen voorwaarde worden
uitgesteld tot de volgende dag.
Indien de monsters niet helder zijn of niet binnen 30 minuten na
de bereiding worden afgelezen, worden ze als volgt geklaard. Het
uiteindelijke monster van 60 ml wordt overgebracht in een maat-
cylinder en daarin 10 minuten met rust gelaten. Daarna wordt
45 ml van de bovenstaande vloeistof door afzuigen verwijderd
en wordt de overblijvende 15 ml met leidingwater aangevuld tot
45 ml. Na nog eens 10 minuten bezinken wordt weer 30 ml van
de bovenstaande vloeistof door afzuigen verwijderd en wordt de1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 11
▼M3
overblijvende 15 ml voor onderzoek in een petrischaal gegoten
of in een schaal voor het tellen van de larven. De maatcylinder
wordt nagespoeld met 10 ml leidingwater en deze spoelingen
worden vervolgens gevoegd bij de inhoud van de petrischaal of
van de schaal voor het tellen van de larven.
3. Bij een postieve of twijfelachtige uitkomst van een verzamelmonster
wordt overeenkomstig sub b), van elk varken nog eens een monster
van 20 g genomen. De monsters van 20 g van 5 varkens worden
bijeengebracht en volgens de hierboven beschreven werkwijze
onderzocht. Op deze wijze worden monsters van 20 groepen van 5
varkens onderzocht. Wanneer in een groepsmonster van 5 varkens
trichinen worden aangetoond, worden van de afzonderlijke varkens
in de groep nog eens monsters van 20 g genomen en worden deze
vervolgens volgens de hierboven beschreven werkwijze afzonderlijk
onderzocht.
V. VERZAMELDIGESTIEMETHODE MET MECHANISCHE HULPMID-
DELEN / „ISOLATIE OP FILTER” — TECHNIEK
a)Apparatuur en reagentia
De apparatuur en reagentia aangegeven sub a) van werkwijze IV en
daarnaast:
— Gelmantrechter van 1 liter met filterhouder (doorsnede 45 mm).
— Filterschijven. Deze bestaan uit ronde roestvrijstalen gaas met
openingen van 35 micron; de middellijn van de schijf is 45 mm,
en twee ringen van 1 mm dik rubber. De uitwendige diameter is
45 mm en de inwendige diameter 38 mm. Het gaas wordt met een
geschikte tweecomponentenlijm tussen de twee ruberringen beves-
tigd.
— Erlenmeyerkolf met een afzuigopening aan de zijkant.— Filtreerpomp.
— Kunststofzakken met een inhoud van ten minste 80 ml.
— Apparaat voor het verzegelen van de kunststofzakken.— Rennilase, 1: 150 000 Soxhlet-eenheden per g.
b)Monsterneming
Zie sub b) van werkwijze IV.
c)Werkwijze
1.Digestieprocedure
i)Complete series (100 monsters tegelijk)
Zie sub c), punt 1. i), van werkwijze IV.
ii)Kleinere series (minder dan 100 monsters)
Zie sub c), punt 1. ii), van werkwijze IV.
2.Isolatie van larven door filtratie
— Aan de digestievloeistof wordt zoveel ijs (300-400 g, blokjes of
schilfers) toegevoegd, dat het totale volume op ongeveer 2 liter
komt.
Bij kleinere series wordt evenredig minder ijs genomen.
— Het mengsel wordt vervolgens geroerd totdat het ijs is
gesmolten. De gekoelde digestievloeistof laat men ten minste 3
minuten staan zodat de larven zich kunnen oprollen.
— Het Gelman-filter met daarin de filterhouder en filterschijf wordt
geplaatst op de erlenmeyerkolf, die wordt aangesloten op een
afzuigpomp.
— De digestievloeistof wordt in de Gelmantrechter gegoten en
gefiltreerd. Na enige tijd kan het filtratieproces worden versneld
door met de afzuigpomp af te zuigen. Het afzuigen moet worden
stopgezet voordat het filter droog loopt, dit wil zeggen wanneer
zich nog 2 tot 5 ml vloeistof in de trechter bevindt.
— Wanneer alle digestievloeistof is gefiltreerd wordt de filterschijf
in een kunststofzak van 80 ml gebracht en wordt daaraan 15-
20 ml rennilase-oplossing toegevoegd. De rennilase-oplossing
wordt bereid door 2 g rennilase op te lossen in 100 ml leiding-
water.
— De kunststofzak wordt tweemaal verzegeld en in de Stomacher
tussen de binnenste en buitenste zak geplaatst.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 12
▼M3
— De inhoud wordt gedurende 3 minuten fijngestampt in een
Stomacher, bij voorbeeld wanneer deze een complete of incom-
plete serie behandelt.
— Na 3 minuten wordt de kunststofzak met filterschijf en rennilase-
oplossing uit de Stomacher genomen en met een schaar geopend.
De vloeibare inhoud wordt in een schaal voor het tellen van
larven of in petrischalen gegoten. De zak wordt gewassen met 5
— 10 ml water dat vervolgens aan de overige vloeistof wordt
toegevoegd in de schaal voor het tellen van larven bij onderzoek
met de trichinoscoop of in een petrischaal bij onderzoek met de
stereomicroscoop.
— De verteerde monsters moeten worden afgelezen zodra deze
gereed zijn. Het onderzoek mag onder geen voorwaarde worden
uitgesteld tot de volgende dag.
Opmerking:
Geen filterschijven gebruiken die niet helemaal schoon zijn.
Schijven die niet schoon zijn nooit laten drogen. Filterschijven
kunnen worden gereinigd door ze de hele nacht in een rennilase-
oplossing te laten staan. Vóór gebruik de schijven in de Stomacher
spoelen met verse rennilase-oplossing.
3. Bij een positieve of twijfelachtige uitkomst van een verzamelmonster
wordt overeenkomstig sub b) van elk varken nog eens een monster
van 20 g genomen. De monsters van 20 g van 5 varkens worden
bijeengebracht en volgens de hierboven beschreven werkwijze
onderzocht. Op deze wijze worden monsters van 20 groepen van 5
varkens onderzocht. Wanneer in een groepsmonster van 5 varkens
trichinen worden aangetoond worden van de afzonderlijke varkens
in de groep nog eens monsters van 20 g genomen en worden deze
vervolgens volgens de hierboven beschreven werkwijze afzonderlijk
onderzocht.
VI. VERZAMELDIGESTIEMETHODE MET MECHANISCHE HULPMID-
DELEN / MAGNEETROERMETHODE
a)Apparatuur en reagentia
— Mes en pincetten voor de monsterneming.
— Schalen met een indeling in 50 vierkanten waarop steeds ongeveer
2 g vlees past.
— Een Moulinette-hakker.
— Magneetroerders met een van een temperatuurregelaar voorziene
verwarmingsplaat en met teflon beklede roerstaafjes van ongeveer
5 cm lang.
— Kegelvormige scheitrechters, inhoud 2 l.
— Standaarden, ringen en klemmen.— Zeven, maaswijdte 177 micron, buitendiameter 11 cm met roestvrij-
stalen gaas.
— Trechters met een inwendige doorsnede van ten minste 12 cm,
waarin de zeef past.
— Bekerglas, 3 l.
— Maatcylinder van 50 ml of centrifugebuizen.
— Trichinoscoop met horizontale tafel of stereomicroscoop met een
geschikte lichtbron.
— Schaal voor het tellen van larven (bij gebruik van de trichinoscoop).
De schaal is op de volgende wijze gemaakt van 3 mm dikke acryl-
plaat:
i) de bodem van de schaal meet 180 × 140 mm, met een onderver-
deling in vierkanten,
ii) de lange opstaande zijden meten 230 × 20 mm,
iii) de korte opstaande zijden meten 40 × 20 mm. De bodem en de
korte zijden worden tussen de langere zijden bevestigd waar-
door een bak ontstaat met aan beide einden twee kleine
handgrepen. De bovenkant van de bodem bevindt zich 7 tot
9 mm boven de onderrand van de opstaande zijden. De onder-
delen worden met een bij het materiaal passend middel aan
elkaar gelijmd.
— Enige petrischalen, doorsnede 9 cm (bij gebruik van de stereomicro-
scoop), waarop op de onderzijde met een scherp voorwerp een
onderverdeling in vierkanten van 10 mm is aangebracht.
— Aluminiumfolie.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 13
▼M3
— 25 % zoutzuur.
— Pepsine, gehalte 1: 10 000 NF (US National Formulary), overeenko-
mend met 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea), overeenkomend
met 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie).
— Leidingwater, 46 — 48 ºC.— Een aantal 10 liter bakken voor de desinfectiebehandeling met
formol van de apparatuur en voor de overblijvende digestievloeistof
bij positief resultaat.
— Balans, nauwkeurig op 0,1 g.
b)Monsterneming
1. Bij complete karkassen een monster van ongeveer 2 g uit een
middenrifpijler nemen aan de overgang van het spiergedeelte naar
het peesgedeelte; indien geen middenrifpijler voorhanden is, een
monster van dezelfde grootte uit het rib- of borstbeengedeelte van
het middenrif of uit de kauwspieren of buikspieren nemen.
2. Voor stukken vlees een monster van ongeveer 2 g nemen van de
skeletspieren die weinig vet bevatten, zoveel mogelijk in de nabij-
heid van de beenderen of de pezen.
c)Werkwijze
1. i) Complete series (100 monsters tegelijk)
— 100 monsters van ongeveer 1 g die elk overeenkomstig sub b)
zijn genomen van de afzonderlijke monsters worden in de
Moulinette-hakker gehakt.
De hakker wordt daarbij 3 à 4 maal gedurende steeds 1
seconde in werking gesteld.
— Het fijngehakte vlees wordt overgebracht in een bekerglas
van 3 liter en besprenkeld met 10 g pepsine. Hieraan wordt
2 liter tot 49-48 ºC voorverwarmd leidingwater en 16 ml
zoutzuur toegevoegd.
— Het hakmes van de Moulinette wordt enige malen in de dige-
stievloeistof in het bekerglas gedompeld totdat al het nog
aanhangende vlees is verwijderd.
— Het roerstaafje wordt in het bekerglas geplaatst en het beker-
glas wordt afgedekt met aluminiumfolie.
— Het bekerglas wordt op de voorverwarmde kookplaat van de
magneetroerder geplaatst en de verwarming wordt zo inge-
steld dat een constante temperatuur van 44-46 ºC wordt
gehandhaafd. Vervolgens wordt de roerder aangezet waarbij
de digestievloeistof zo snel moet ronddraaien dat een diepe
kolk zonder spatten ontstaat.
— De digestievloeistof wordt 30 minuten geroerd, daarna wordt
de roerder uitgeschakeld en de digestievloeistof via de zeef in
de bezinkingstrechter gegoten.
— Men laat de digestievloeistof 30 minuten in de trechter staan.— Na 30 minuten wordt 40 ml van de digestievloeistof snel in
de maatcylinder of centrifugebuis afgetapt.
— Het monster van 40 ml laat men staan waarna 30 ml van de
bovenstaande vloeistof wordt afgezogen waarbij een hoeveel-
heid van 10 ml overblijft.
— De overblijvende 10 ml monster van het bezinksel wordst
overgebracht in een schaal voor het tellen van de larven of
in een petrischaal.
— De maatcylinder of centrifugebuis wordt vervolgens nage-
spoeld met ongeveer 10 ml leidingwater die aan het monster
in de schaal voor het tellen van de larven of petrischaal wordt
toegevoegd. Aansluitend wordt het monster respectievelijk
met de trichinoscoop of de stereomicroscoop onderzocht.
— De verteerde monsters moeten worden afgelezen zodra deze
gereed zijn. Het onderzoek mag onder geen voorwaarde
worden uitgesteld tot de volgende dag.
Indien de monsters niet binnen 30 minuten na de bereiding
worden afgelezen, worden ze als volgt geklaard. Het uiteinde-
lijke monster van 40 ml wordt overgebracht in een
maatcylinder en daarin 10 minuten met rust gelaten. Daarna
wordt 30 ml van de bovenstaande vloeistof door afzuigen
verwijderd waarbij een hoeveelheid van 10 ml overblijft.
Deze hoeveelheid wordt met leidingwater aangevuld tot
40 ml. Na nog eens 10 minuten bezinken wordt weer 30 ml1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 14
▼M3
van de bovenstaande vloeistof door afzuigen verwijderd en
wordt de overblijvende 10 ml voor onderzoek in een petri-
schaal of een schaal voor het tellen van de larven gegoten.
De maatcylinder wordt nagespoeld met 10 ml leidingwater
en dit spoelsel wordt vervolgens toegevoegd aan de inhoud
van de petrischaal of aan de schaal voor het tellen van de
larven.
Indien het bezinksel bij het aflezen niet helder is, moet het
monster in een maatcylinder gegoten worden en aangelengd
worden met 40 ml leidingwater. Vervolgens dient de boven-
genoemde procedure gevolgd te worden.
ii)Kleinere series (minder dan 100 monsters)
Indien nodig kunnen tot 15 monsters van 1 g elk, toegevoegd
worden aan een serie van 100 monsters en tegelijk met deze
monsters onderzocht worden volgens de procedure overeenkom-
stig sub c), punt 1. i). Méér dan 15 monsters dienen onderzocht
te worden om als een volledige serie te kunnen beschouwd
worden. Voor series tot 50 monsters mag de digestievloeistof
verminderd worden tot 1 liter.
2. Bij een postitieve of twijfelachtige uitkomst van een verzamelmon-
ster wordt overeenkomstig sub b), van elk varken nog eens een
monster van 20 g genomen. De monsters van 20 g van 5 varkensworden bijeengebracht en volgens de hierboven beschreven werk-
wijze onderzocht. Op deze wijze worden monsters van 20 groepen
van 5 varkens onderzocht. Wanneer in een groepsmonster van 5
varkens trichinen worden aangetoond, worden van de afzonderlijke
varkens in de groep nog eens monsters van 20 g genomen en worden
deze vervolgens volgens de hierboven beschreven werkwijze afzon-
derlijk onderzocht.
VII. AUTOMATISCHE VERZAMELDIGESTIEMETHODE VOOR
MONSTERS TOT 35 GRAM
a)Apparatuur en reagentia
— Mes of schaar voor de monsterneming,
— schalen met een indeling in 50 vierkanten waarop steeds ongeveer
2 g vlees past,
— Trichomatic 35 blender met filtreerset,— zoutzuuroplossing 8,5 % ± 0,5 %,— transparente membraanfilters van polycarbonaat met een doorsnede
van 50 mm en poriën van 14 micron,
— pepsine, gehalte 1: 10 000 NF (US National Formulary),
overeenkomend met 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea),overeenkomend met 2 000 FIP (Fédération Internationale de Phar-
macie),
— weegschaal, nauwkeurig op 0,1 g,— pincetten met platte punt,— een aantal objectglaasjes waarvan de lengte van de zijden ten minste
5 cm bedraagt of een aantal petrischalen met een doorsnede van ten
minste 6 cm, waarop op de onderzijden met een scherp voorwerp
een onderverdeling in vierkanten van 10 × 10 mm is aangebracht,
— (stereo)microscoop met doorvallend licht (vergroting 15 tot 60
maal) of trichinoscoop met horizontale tafel,
— bak voor het opvangen van vloeibare afvalstoffen,
— een aantal bakken van 10 l voor desinfectie (b.v. met een formaline-
oplossing) van de apparatuur en van de overblijvende digestievloei-
stof bij een positief resultaat.
b)Monsterneming
1. Bij hele karkassen wordt een monster van ongeveer 2 g genomen uit
een middenrifpijler op de plaats waar het spiergedeelte overgaat in
het peesgedeelte; indien geen middenrifpijler voorhanden is, wordt
een monster van dezelfde grootte genomen uit het rib- of borstbeen-
gedeelte van het middenrif, uit de kauwspieren of uit de buikspieren.
2. Bij vlees in delen wordt, zoveel mogelijk in de nabijheid van de
beenderen of van de pezen, een weinig vet bevattend monster van
ongeveer 2 g genomen uit de skeletspieren.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 15
▼M5
▼M5
c)Werkwijze
1.Digestieprocedure
— Op de van een filtreerset voorziene blender wordt een afvoer-
slang aangesloten; deze slang wordt naar de afvalbak geleid.
— Zodra de blender in werking wordt gesteld, begint de opwar-
ming.
— Voordat de blender wordt aangezet moet de onderste klep, die
zich onder de reactiekamer bevindt, worden geopend en gesloten.
— Vervolgens worden maximaal 35 monsters van elk ongeveer 1 g
(bij 25-30 ºC) toegevoegd die zijn genomen van de afzonderlijke
monsters als bedoeld onder b). Grotere stukken pees moeten
worden verwijderd om verstopping van het membraanfilter te
voorkomen.
— Een met de blender in verbinding staand vloeistofreservoir wordt
tot aan de rand gevuld met water (± 400 ml).
— Het kleinere, met de blender in verbinding staand vloeistofreser-
voir (± 30 ml) wordt tot aan de rand gevuld met een
zoutzuuroplossing (8,5 %).
— In de filterhouder van de filtreerset wordt onder het groffe filter
een membraanfilter aangebracht.
— Ten slotte wordt ►M6 7g◄ pepsine toegevoegd. Aan deze
volgorde van toevoeging moet strikt de hand worden gehouden
om ontleding van de pepsine te voorkomen.
— De deksels van de reactiekamer en van de vloeistofreservoirs
worden gesloten.
— De gewenste digestietijd wordt ingesteld. Wanneer de monsters
afkomstig zijn van varkens die op een voor deze diersoort
normale leeftijd zijn geslacht, geldt een korte digestietijd (5
minuten), in alle andere gevallen een langere (8 minuten).
— Door de startknop van de blender aan te zetten wordt een
volledig automatisch verlopend proces aan de gang gebracht,
inclusief digestie en daaropvolgende filtratie. Het hele proces
duurt 10 tot 13 minuten en stopt automatisch.
— Het deksel van de reactiekamer wordt geopend om te controleren
of de kamer leeg is. Wanneer schuim of resten van de digestie-
vloeistof in de kamer zijn achtergebleven, moet een nieuwe
digestieprocedure worden ingezet overeenkomstig het bepaalde
onder c), punt 4.
2.Isolatie van de larven
— Het membraanfilter wordt uit de filtreerhouder genomen en op
een objectglaasje of een petrischaal gelegd.
— Het membraanfilter wordt met behulp van een microscoop of
trichinoscoop onderzocht.
3.Reiniging van de apparatuur
— Bij een positief resultaat wordt de reactiekamer in de blender
voor/twothirdmet kokend water gevuld. Het bijbehorende vloeistofre-
servoir wordt tot de onderste peilsensor met gewoon
leidingwater gevuld. Vervolgens wordt het automatische reini-
gingsprogramma in werking gezet. De filterhouder en de
overige apparatuur worden gedesinfecteerd (b.v. met een forma-
line-oplossing).
— Aan het eind van de werkdag wordt het vloeistofreservoir van de
blender met water gevuld en wordt het standaardprogramma
uitgevoerd.
4.Gebruik van membraanfilters
Een membraanfilter van polycarbonaat mag ten hoogste vijf keer
worden gebruikt. Het filter moet na elk gebruik worden gedraaid.
Bovendien moet het filter na elk gebruik worden gecontroleerd op
eventuele beschadigingen waardoor het ongeschikt zou zijn om nog
verder te worden gebruikt.
►M6 5.◄Toe te passen methode wanneer het digestieproces niet
helemaal is voltooid en filtratie daarom niet mogelijk is
Na afloop van de automatische digestie zoals beschreven onder c),
punt 1, wordt het deksel van de reactiekamer geopend om na te
gaan of in de reactiekamer schuim of vloeistoffen zijn achterge-1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 16
▼M6
▼M5
▼M5
bleven. Is dit het geval, dan moet de volgende procedure worden
gevolgd:
— De onderste klep van de reactiekamer wordt gesloten.
— De filterhouder wordt uit de blender genomen en het membraan-
filter wordt op een objectglaasje of een petrischaal gelegd.
— Een nieuw membraanfilter wordt in de filterhouder aangebracht
en de filterhouder wordt weer in de blender gebracht.
— Het vloeistofreservoir van de blender wordt tot de onderste peil-
sensor met water gevuld.
— Het automatische reinigingsprogramma wordt in werking gezet.
— Na afloop van het reinigingsprogramma wordt het deksel van de
reactiekamer geopend voor controle op eventuele vloeistofresten.
— Als de kamer leeg is, wordt de filterhouder uit de blender
genomen en wordt het membraanfilter met een pincet op een
objectglaasje of een petrischaal gelegd.
— Beide membraanfilters worden onderzocht overeenkomstig het
bepaalde onder c), punt 2. Als onderzoek van de filters niet
mogelijk is, wordt het gehele onder c), punt 1, omschreven dige-
stieproces overgedaan, met instelling van de langste aangegeven
digestietijd.
►M6 6.◄ Indien het onderzoek van een verzamelmonster een posi-
tieve of twijfelachtige uitkomst oplevert, wordt van elk varken een
nieuw monster van 20 g genomen overeenkomstig het bepaalde
onder b). Elk van deze monsters wordt volgens de hierboven
beschreven procedure afzonderlijk onderzocht.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 17
▼B
BIJLAGE II
HOOFDSTUK I
EISEN WAARAAN DE LABORATORIA VOOR HET OPSPOREN VAN
TRICHINEN MOETEN VOLDOEN
1. De laboratoria voor het opsporen van trichinen moeten gelegen zijn in de
onmiddellijke nabijheid van de lokalen waar de varkens worden geslacht en
moeten ten minste beschikken over:
a) een voldoende ingericht en afsluitbaar lokaal voor het bereiden van de
preparaten; het lokaal moet gladde wanden hebben die tot een hoogte
van twee meter zijn voorzien van een lichte, afwasbare bekleding of
zijn bestreken met lichte afwasbare verf. Voor elke toegepaste onder-
zoekmethode moet een lokaal beschikbaar zijn voor het bereiden van
preparaten;
b) een voldoende ingericht en afsluitbaar lokaal dat kan worden verduisterd
als een onderzoek met de trichinoscoop wordt uitgevoerd;
c) voldoende luchtverversing, en indien nodig een klimaatregelingsinstal-
latie die het mogelijk maakt te bereiken dat de omgevingstemperatuur
niet oploopt boven + 25ºC;
d) voldoende verlichting door daglicht of door kunstlicht waardoor de
kleuren niet worden veranderd; fel zonlicht moet worden vermeden;
e) voldoende voorzieningen voor het reinigen en ontsmetten van de handen
in het lokaal waar de preparaten worden bereid;
►M3 f)◄ eventueel een koelinstallatie voor het bewaren van de vlees-
monsters;
g) een lokaal voor het reinigen en ontsmetten van het bij het onderzoek
gebruikte materiaal (bij voorbeeld bakken voor de monstrs, compressoria,
messen en schaartjes) met:
— een waterdichte, gemakkelijk schoon te houden en te ontsmetten
vloerbekleding die niet vatbaar is voor rotting;
— gladde wanden die tot een hoogte van 2 meter zijn voorzien van een
lichte, afwasbare bekleding, of bestreken met lichte afwasbare verf.
Deze vooziening is niet nodig wanneer de bij de werkwijzen II, III, IV, V
en VI van bijlage I genoemde methoden worden toegepast, mits de labo-
ratoria beschikken over een geschikt aangelegde, grote afvoer;
►M3 h)◄ kleedlokalen, wasgelegenheid, recreatieruimte en toiletten met
waterspoeling;
►M3 i)◄ wasgelegenheid voorzien van koud en warm stromend water,
was- en ontsmettingsmiddelen en wegwerphanddoeken;
►M3 j)◄ waterdichte, corrosiebestendige bakken met een hermetisch
sluitend deksel, die zo zijn uitgevoerd dat onbevoegden er niets uit
kunnen nemen, voor de resten van de monsters;
►M3 k)◄ installaties die in voldoende hoeveelheden koud en warm
drinkwater leveren;
►M3 l)◄ een voorziening voor de afvoer van afvalwater die voldoet aan
de eisen die gelden voor de erkenning van slachthuizen;
►M3 m)◄ geschikte voorzieningen ter bescherming tegen ongewenste
dieren, zoals insecten, knaagdieren, enz.
HOOFDSTUK II
VOORSCHRIFTEN VOOR HET PERSONEEL, DE LOKALEN, HET
GEREEDSCHAP EN DE WERKTUIGEN IN LABORATORIA VOOR
HET OPSPOREN VAN TRICHINEN
2. Een zo volmaakt mogelijke zindelijkheid wordt geëist van personeel, lokalen,
gereedschap en werktuigen.
a) Het personeel dient met name schone werkkleding te dragen en moet
tijdens de werkdag verscheidene malen en telkens vóór het hervatten van
de werkzaamheden zijn handen wassen en ontsmetten;1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 18
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼B
b) in de laboratoria voor het opsporen van trichinen mag geen enkel dier
binnenkomen;
c) gereedschappen en werktuigen die voor het werk worden gebruikt, dienen
in een goede staat van onderhoud en reinheid te worden gehouden. Zij
moeten verscheidene malen per werkdag en aan het einde van de dage-
lijkse werkzaamheden zorgvuldig worden gereinigd en ontsmet.
3. Er mag alleen drinkwater worden gebruikt.
4. Voor de gezondheid van het personeel dat met het nemen van vleesmonsters
voor het onderzoek is belast, gelden de bepalingen van bijlage B, hoofdstuk
IV, punten 11 en 12, van Richtlijn 72/462/EEG.
5. De voor het onderzoek benodigde vleesmonsters moeten onmiddellijk na het
slachten worden genomen en onverwijld worden onderzocht in het laborato-
rium voor het opsporen van trichinen van het slachthuis. Het is verboden dit
onderzoek te verrichten buiten het slachthuis waar de dieren zijn geslacht.
6. Ter voorkoming van vermoeidheid en de gevolgen daarvan moet aan het
controlepersoneel worden toegestaan het werk gedurende korte periodes te
onderbreken.
HOOFDSTUK III
VOORSCHRIFTEN VOOR DE TRICHINOSCOPEN
De uitvoering en het model van de trichinoscopen moeten voldoen aan de
volgende minimumeisen:
1. Gemakkelijk te gebruiken zijn.
2. Sterke verlichting:
— de resultaten van de controle moeten zelfs indien de lokalen niet
volledig verduisterd zijn met zekerheid kunnen worden vastgesteld;
— de lichtbron moet een projectiegloeilamp van 100 W (12 V) zijn.
3. Voldoende vergroting:
— vergroting voor normale werkzaamheden: 50 maal;
— sterkere vergroting, 80 tot 100 maal, voor de juiste beoordeling van
preparaten die met de normale vergroting niet met voldoende zekerheid
kunnen worden beoordeeld.
4. Scheidend vermogen:
— bij iedere vergroting moet het beeld helder en scherp, en de kleurweer-
gave juist zijn.
5. Automatische lichtsterkteregeling:
— bij iedere wijziging van de vergroting moet de helderheid van het beeld
automatisch worden aangepast.
6. Contrastvergroting:
— de condensor moet voorzien zijn van een irisdiafragma waardoor, voor
een grondig onderzoek van moeilijke gevallen, de contrasten kunnen
worden verscherpt;
— het irisdiafragma moet gemakkelijk regelbaar zijn (bij voorbeeld handel
bevestigd op het bedieningspaneel van de trichinoscoop).
7. Gemakkelijk af te stellen:
— snelle afstelling met stelring;
— nauwkeurige afstelling met de bedieningshandel.
8. Regeling van de spanning:
— zodat voor elke situatie de gewenste helderheid wordt bereikt.
9. Verplaatsing van het compressorium in één richting:
— automatische blokkering zodat het compressorium (persglazen) maar in
één richting kan worden verplaatst en niet wordt verschoven als dat niet
gewenst is.
10. De beelden moeten ongehinderd naar het projectievlak worden overge-
bracht.
11. Projectievlak:
— diameter van ten minste 54 cm;
— sterk reflecterend vermogen;1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 19
▼B
— duurzaam;
— demonteerbaar;
— gemakkelijk schoon te houden.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 20
▼B
BIJLAGE III
HET AANBRENGEN VAN HET MERK OP VLEES DAT IS ONDER-
WORPEN AAN HET ONDERZOEK VOOR HET OPSPOREN VAN
TRICHINEN
1. Het keurmerk moet worden aangebracht onder verantwoordelijkheid van de
officiële dierenarts. Hiervoor heeft en bewaart hij:
— de voor het merken van vlees bestemde instrumenten, die hij uitsluitend
op het tijdstip van het merken en voor de hiertoe benodigde tijd aan het
hulppersoneel ter hand mag stellen;
— de in punt 5 genoemde merkplaatjes. Deze merkplaatjes worden op het
ogenblik waarop zij moeten worden aangebracht in het benodigde aantal
aan het hulppersoneel overhandigd.
2. Het aanbrengen van het merk dient te geschieden met een rond stempel met
een diameter van 2,5 cm. Het stempel dient, duidelijk leesbaar, de volgende
aanduidingen te bevatten:
— in het midden, de letter T, in hoofdletter, 1 cm hoog en 0,2 cm breed;
— onder de letter „T” één van de volgende afkortingen: CEE, EEG, EWG,
EØF, EOK, EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK, KEE, of EGS. De
letters dienen 0,4 cm hoog te zijn.
3. Geslachte dieren worden aan de binnenzijde van de dijen overeenkomstig
punt 2 gemerkt met een inkt- of brandstempel.
4. De kop wordt gemerkt met een inkt- of brandstempel dat voldoet aan de
voorschriften van punt 2.
De in uitsnijderijen verkregen delen van volgens de voorschriften gemerkte
geslachte dieren, met uitzondering van de delen die op grond van punt 43
van hoofdstuk X van bijlage B van Richtlijn 72/462/EEG van de Raad niet
worden gemerkt, moeten — voor zover zij niet zijn gemerkt — overeenkom-
stig punt 2 worden gemerkt vóór het aanbrengen van het keurmerk.
Het etiket bedoeld in de tweede alinea van het hierboven bedoelde punt 43
moet voldoen aan de voorschriften van punt 6 hieronder.
5. Het merken kan ook geschieden met behulp van een rond merkplaatje. Dit
plaatje, dat op elk stuk of op elk geslacht dier moet worden bevestigd moet
zodanig zijn vervaardigd dat het geen tweede keer kan worden gebruikt; het
moet van duurzaam materiaal zijn dat voldoet aan de eisen van de hygiëne.
Het merkplaatje dient, duidelijk leesbaar, de volgende aanduidingen te
bevatten:
— in het midden, de letter T, in hoofdletter,
— onder de letter „T” één van de volgende afkortingen: CEE, EEG, EWG,
EØF, EOK, EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK, KEE, of EGS. De
letters dienen 0,2 cm hoog te zijn.
6. Op het etiket dat is bedoeld in punt 44 van hoofdstuk X van bijlage B van de
in punt 4 bedoelde richtlijn moet behalve het keurmerk ook een goed lees-
baar kenteken voorkomen dat overeenkomt met het in punt 2 bedoelde
stempel.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 21
▼A3
▼B
▼A3
▼B
▼B
BIJLAGE IV
KOUDEBEHANDELING
I. Methode 1
1. Vlees dat in bevroren toestand wordt geïmporteerd, moet in die toestand
worden bewaard.
2. De technische inrichting en de koelcapaciteit van de koelkamer moeten
zodanig zijn dat de in sub 6 genoemde temperatuur in alle delen van dekoelkamer en van het vlees zo spoedig mogelijk wordt bereikt en wordt
gehandhaafd.
3. Een isolerende verpakking moet vóór het bevriezen worden verwijderd,
behalve bij vlees dat bij inbreng in de koelkamer reeds de sub 6
genoemde temperatuur heeft bereikt in alle delen.
4. De zendingen moeten in de koelkamer afzonderlijk en achter slot worden
bewaard.
5. Op iedere zending moeten dag en uur zijn aangegeven waarop de zending
in de koelkamer is binnengekomen.
6. De temperatuur in de koelkamer moet ten minste −25 ºC bedragen en
moet thermo-elektrisch met geijkte meetmiddelen worden gemeten en
doorlopend worden geregistreerd. Zij mag niet direct in de koudelucht-
stroom worden gemeten. De meettoestellen moeten achter slot worden
gehouden. De diagrammen moeten van de overeenkomstige nummers
van het register betreffende de invoerkeuring worden voorzien; ook dag
en uur van het begin, resp. het einde van de bevriezing moeten daarop
worden aangegeven; zij moeten een jaar lang worden bewaard.
7. Vlees met een diameter of een dikte van maximaal 25 cm moet ten
minste 240 uren achter elkaar, vlees met een diameter of een dikte van
25 tot 50 cm ten minste 480 uren achter elkaar worden bevroren. Vlees
met een grotere diameter of een grotere dikte mag niet aan dit vriespro-
cédé worden onderworpen. De bevriezingsduur gaat in bij het bereiken
van de sub 6 genoemde temperatuur in de koelkamer.
II. Methode 2
Aan de algemene bepalingen van de punten 1 tot en met 5 van methode 1
moet worden voldaan en de volgende tijd-temperatuurcombinaties moeten
worden toegepast:
1. Vlees met een diameter of een dikte van maximaal 15 cm moet worden
bevroren volgens een van de onderstaande tijd-temperatuurcombinaties:
— 20 dagen bij − 15 ºC
— 10 dagen bij − 23 ºC— 6 dagen bij − 29 ºC.
2. Vlees met een diameter of een dikte tussen 15 en 50 cm moet worden
bevroren volgens een van de onderstaande tijd-temperatuurcombinaties:
— 30 dagen bij − 15 ºC
— 20 dagen bij − 25 ºC— 12 dagen bij − 29 ºC.
De temperatuur in de koelkamer mag nooit hoger zijn dan de gekozen
inactiveringstemperatuur. Hij moet worden gemeten met geijkte thermo-
elektrische meetapparatuur en moet doorlopend worden geregistreerd. Hij
mag niet direct in de koude luchtstroom worden gemeten. De meetappa-
ratuur moet achter slot worden gehouden. Op de diagrammen moeten de
desbetreffende nummers van het register betreffende de keuring bij invoer
worden aangegeven, alsmede de datum en het tijdstip van het begin en
van het einde van de bevriezing; de diagrammen moeten gedurende één
jaar worden bewaard.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 22
▼M6
▼B
▼M6
▼M6
BIJLAGE V
KEURING EN KOUDEBEHANDELING VAN PAARDEVLEES
1.Inspectie
Paardevlees moet worden gekeurd volgens een van de in bijlage I genoemde
digestiemethoden, met de volgende wijzigingen:
— Monsters van ten minste 10 g moeten worden genomen uit de tong- of
kauwspieren. Indien geen tong- of kauwspieren voorhanden zijn, wordt
een monster van dezelfde grootte genomen uit een middenrifpijler aan
de overgang van het spiergedeelte naar het peesgedeelte. De spier moet
vrij zijn van aanhangend weefsel en vet.
— Een monster van 5 g wordt verteerd voor keuring, indien gebruik wordt
gemaakt van een verzameldigestiemethode als omschreven in bijlage I,
punten III tot en met VII. Voor elke vertering mag het totale spiergewicht
dat in onderzoek is genomen, 100 g niet overschrijden voor de methoden
in de punten III, IV, V en VI van bijlage I of 35 g voor de methode in
punt VII van bijlage I.
— Bij een positieve uitkomst wordt een nieuw monster van 10 g genomen
en bewaard om een nieuw onafhankelijk onderzoek te ondergaan.
2.Bevriezing van paardevlees
Om te trichinen door bevriezing te doden, moet het paardevlees een koudebe-
handeling ondergaan volgens een van de in bijlage IV beschreven methoden.1977L0096 — NL — 01.05.2004 — 010.001 — 23