1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Dit document vormt slechts een documentatiehulpmiddel en versch ĳnt buiten de verantwoordel ĳkheid van de instellingen
►B VERORDENING (EG) Nr.1459/98 VAN DE COMMISSIE
van 8 juli 1998
tot vaststelling van een referentiemethode voor de bepaling van het vanillinegehalte in botercon-
centraat, boter of room
(PB L 193 van 9.7.1998, blz. 16)
Gewĳzigd b ĳ:
Publicatieblad
nr. blz. datum
►M1Verordening (EG) nr. 175/1999 van de Commissie van 26 januari 1999 L20 22 27.1.1999
1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
VERORDENING (EG) Nr.1459/98 VAN DE COMMISSIE
van 8 juli 1998
tot vaststelling van een referentiemethode voor de bepaling van het
vanillinegehalte in boterconcentraat, boter of room
DE COMMISSIE VAN DE EUROPESE GEMEENSCHAPPEN,
Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese Gemeenschap,
GeletopVerordening(EEG)nr.804/68vandeRaadvan27juni1968
houdende een gemeenschappel ĳke ordening der markten in de sector
melk en zuivelproducten(1), laatstel ĳk gew ĳzigd b ĳVerordening (EG)
nr. 1587/96(2), en met name op artikel 6, lid 6, en artikel 12, lid 3,
Overwegende dat in Verordening (EG) nr. 2571/97 van de Commissie
betreffendedeverkoopvanbotertegenverlaagdepr ĳsendetoekenning
van steun voor room, boter en boterconcentraat voor de vervaardigingvan banketbakkerswerk, consumptie- ĳs en andere voedingsmiddelen(
3)
is bepaald dat in sommige omstandigheden verklikstoffen aan room,boterofboterconcentraatmoetenwordentoegevoegdomtewaarborgendat deze producten volgens de voorschriften worden gebruikt;
Overwegende dat, gezien het belang van de toevoeging van verklik-
stoffen voor een goed functioneren van de regeling en om te waar-borgen dat de bedr ĳven die van die regeling gebruik maken gel ĳk
behandeldworden,hetdienstigisgemeenschappel ĳkemethodenvastte
stellenvoordebepalingvanhetgehaltevandeinVerordening(EG)nr.2571/97 bedoelde verklikstoffen;
Overwegendedathetmoeil ĳkisdergel ĳkereferentiemethodenvooralle
verklikstoffentegel ĳkvasttestellen;datvaststellingvaneenreferentie-
methode voor de bepaling van het vanillinegehalte in boterconcentraat,boter of room, een stap in deze richting is;
Overwegendedatdeindezeverordeningvervattemaatregeleninover-
eenstemmingz ĳnmethetadviesvanhetComitévanbeheervoormelk
en zuivelproducten,
HEEFT DE VOLGENDE VERORDENING VASTGESTELD:
Artikel 1
De in de b ĳlage beschreven analysemethode wordt toegepast als refe-
rentiemethode voor de bepaling van het vanillinegehalte van botercon-centraat,boterofroominhetkadervanVerordening(EG)nr.2571/97.
Boterconcentraat, boter of room worden geacht te voldoen aan het
bepaalde in artikel 6 van Verordening (EG) nr. 2571/97 inzake detoevoegingvanverklikstoffen,alsderesultatenvandeanalyseinover-eenstemming z ĳn met punt 8 van de b ĳlage b ĳdeze verordening.
Artikel 2
Deze verordening treedt in werking op de derde dag volgende op die
vanhaarbekendmakinginhet PublicatiebladvandeEuropeseGemeen-
schappen.
Zĳis van toepassing met ingang van 1 september 1998.
Dezeverordeningisverbindendinalhaaronderdelenenisrechtstreeks
toepassel ĳk in elke lidstaat.
(1) PB L 148 van 28. 6. 1968, blz. 13.
(2) PB L 206 van 16. 8. 1996, blz. 21.
(3) PB L 350 van 20. 12. 1997, blz. 3.
1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
BĲLAGE
Bepaling van het vanillinegehalte in boterconcentraat, boter of room met
behulp van hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC)
1.Doel en toepassingsgebied
In deze methode wordt een werkw ĳze beschreven voor de kwantitatieve
bepaling van vanilline in boterconcentraat, boter of room.
De methode is van toepassing op de monsters die worden ontvangen op
grond van Verordening (EG) nr. 2571/97.
2.Principe
Extractie van een bekende hoeveelheid monster met een mengsel van
isopropanol/ethanol/acetonitrile (1:1:2). Neerslaan van het grootstegedeeltevanhetvetdoorafkoelentussen−15 °Cen−20 °C,gevolgddoor
centrifugeren.
Na verdunnen met water, bepaling van het vanillinegehalte met behulp
van hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC).
3.Apparatuur
Gebruikel ĳke laboratoriumapparatuur en in het b ĳzonder:
3.1. Diepvriezer met een temperatuurbereik van −15 °C tot −20 °C.
3.2. Wegwerpinjectiespuiten van 2 ml.3.3. Membraanmicrofilters met een poriëngrootte van 0,45 µm en bestand
tegen een oplossing met 5% extractie-oplossing (4.4).
3.4. Vloeistofchromatografiesysteem, bestaande uit een pomp (stroomsnelheid
1,0 ml/min.), een injector (20 µl injectie, automatisch of manueel), een
UV-detector (ingesteld op 306 nm, 0,01 AU full scale), recorder ofintegrator, en een kolomthermostaat ingesteld op 25 °C.
3.5. Analysekolom (250 mm × 4,6 mm I.D.), gepakt met LiChrospher RP 18
(Merck, 5 µm) of equivalent.
3.6. Voorkolom(ong.20m m×3mmI.D.),drooggepaktmetPerisorbRP18
(30-40 µm) of equivalent.
4.Reagentia
Alle gebruikte reagentia moeten p.a. z ĳn.
4.1. Isopropanol4.2. Ethanol 96% (v/v)4.3. Acetonitrile4.4. Extractieoplossing
Meng isopropanol (4.1), ethanol (4.2) en acetonitrile (4.3) in de verhou-
ding 1:1:2 (V/V).
4.5. Vanilline (4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde)4.5.1. Stockoplossing vanilline (=500 µg/ml)
Weegtotop0,1mgnauwkeurigongeveer50mg(CMmg)vanilline(4.5)
afineenmaatkolfvan100ml;voeg25mlextractieoplossing(4.4)toeenvul aan met water.
4.5.2. Standaardoplossing vanilline (=10 µg/ml)
Pipetteer 5,00 ml van de stockoplossing vanilline (4.5.1) in een maatkolf
van 250 ml en vul aan met water.
4.6. Methanol, HPLC-kwaliteit4.7. Ĳsazĳn
4.8. Water, HPLC-kwaliteit4.9. HPLC-loopvloeistof
Meng 300 ml methanol (4.6), ongeveer 500 ml water (4.8) en 20,0 ml
azĳnzuur(4.7)ineenmaatkolfvan1000mlenvulaanmetwater(4.8).
Filtreer door een filter van 0,45 µm.
1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
5.Werkw ĳze
5.1.Bereiding van het testmonster
5.1.1. Boter
Verwarm het monster totdat dit begint te smelten. Verm ĳd plaatsel ĳke
oververhitting boven 40 °C. Homogeniseer het monster door het te
schudden, wanneer het zacht genoeg is. Roer de boter 15 s en neemdaarnaeentestmonster.Weegtotop1mgnauwkeurigongeveer5g(SMg) boter af in een maatkolf van 100 ml.
5.1.2. Boterconcentraat
Plaatsdirectvoordemonsternemingdeverpakkingmethetboterconcen-
traat in een oven b ĳ40-50 °C totdat het product volledig gesmolten is.
Menghetmonsterdoorzwenkenofroeren,maarvoorkomdatluchtbellenontstaan doordat te hard wordt geroerd. Weeg tot op 1 mg nauwkeurigongeveer 4 g (SM g) boterconcentraat af in een maatkolf van 100 ml.
5.1.3. Room
Verwarm het monster in een waterbad of broedstoof b ĳeen temperatuur
van35-40 °C.Verdeelhetvethomogeendoorzwenkenen,indiennodig,
doorroeren.Koelhetmonstersnelaftot20±2 °C.Hetmonstermoeter
homogeen uitzien, anders moet de werkw ĳze worden herhaald. Weeg tot
op1mgnauwkeurigongeveer10g(SMg)roomafineenmaatkolfvan100 ml.
5.2.Bereiding van de testoplossing
Voeg ongeveer 75 ml extractieoplossing (4.4) toe aan testmonster (5.1.1,
5.1.2 of 5.1.3). Roer of schud ongeveer 15 min. krachtig en vul aan metextractieoplossing(4.4).Brengongeveer10mlvanditextractoverineenreageerbuis,dieafgeslotenwordtmeteenstop.Plaatsdereageerbuisindediepvriezer (3.1) en wacht ongeveer 30 min.. Centrifugeer het koudeextract 5 min. b ĳongeveer 2000 opm en giet onmidddell ĳk af. Laat de
afgegoten oplossing op kamertemperatuur komen. Pipetteer 5,00 ml vandeafgegotenoplossingineenmaatkolfvan100mlenvulaanmetwater.Filtreer een fractie door een membraanmicrofilter (3.3). Het filtraat isgereed voor de bepaling met behulp van HPLC.
5.3.Kalibrering
Pipetteer5,00mlvandestandaardoplossingvanilline(4.5.2)ineenmaat-
kolf van 100 ml. Voeg 5,0 ml extractieoplossing (4.4) toe en vul tot demerkstreep aan met water. Deze oplossing bevat 0,5 µg/ml vanilline.
5.4.Bepaling met behulp van HPLC
Laat het chromatografische systeem ongeveer 30 min stabiliseren. Injec-
teerdestandaardoplossing(5.3).Herhaaldittotdathetverschilinpiekop-pervlakteofpiekhoogtetussentweeopeenvolgendeinjectieskleinerisdan2%. Onder de beschreven omstandigheden bedraagt de retentiet ĳd van
vanillineongeveer9min.Analyseerdestandaardoplossing(5.3)induplodoor injectie van 20 µl. Injecteer 20 µl van de testoplossingen (5.2).
Bepaal de oppervlakte of de hoogte van de vanillinepiek. Herhaal deduplobepaling van de standaardoplossing (5.3) na tien injecties van detestoplossingen (5.2).
6.Berekening van de resultaten
Bereken de gemiddelde oppervlakte (of de gemiddelde hoogte) (AC) van
devanillinepiekendiehorenb ĳdeduplo-injectiesvandestandaardoplos-
singen(5.3)vóórennaiederereekstestoplossingen(vieroppervlakkenofpiekhoogtes in totaal).
Bereken de responsfactor (R):
R=AC/CM
waarin CM gel ĳkstaat met de massa van de vanilline in mg (4.5.1).
Hetgehalte(mg/kg)vanvanilline(C)inhettestmonsterwordtverkregen
door:
C=AS×20×0,96
SM×R
waarinAS = de piekoppervlakte van de vanillinepiek van het testmonster;
▼
M1
SM = massa van het testmonster in g (5.1.1, 5.1.2 of 5.1.3).
1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼M1
Bĳanalyse van vanilline in room wordt de concentratie van de
verklikstofuitgedruktinmg/verklikstof/kgmelkvet.HiertoewordtCvermenigvuldigdmet100/f.fishetvetgehaltevanderoominprocenten (m/m)
▼
B
20 = defactordiegebaseerdisopdeverdunningenvandestandaarden
het testmonster;
0,96 = decorrectiefactorvoorhetvetgehalteindeeersteverdunningvan
het testmonster.
Opmerking:
In plaats van de piekoppervlakken kunnen piekhoogtes worden gebruikt
(zie 8.3).
7.Nauwkeurigheid van de methode
7.1. Herhaalbaarheid (r)
Het verschil tussen de resultaten van twee bepalingen die binnen een zo
kort mogel ĳke tĳd door dezelfde persoon met dezelfde apparatuur z ĳn
uitgevoerd op identiek monstermateriaal, mag niet groter z ĳn dan 16
mg/kg.
7.2. Reproduceerbaarheid (R)
Hetverschiltussenderesultatenvantweebepalingendiedoorpersonenin
verschillende laboratoria met verschillende apparatuur z ĳn uitgevoerd op
identiek monstermateriaal, mag niet groter z ĳn dan 27 mg/kg.
8.Tolerantiegrenzen
8.1. Voor de controle op de homogene verdeling van de verklikstof in het
productmoetendriemonstersvanhetgemerkteproductwordengenomen.
8.2. Uit vanille of synthetische vanille vervaardigde verklikstof
▼M1
8.2.1. Het b ĳmengingsgehalte van 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde bedraagt
250 gram per ton boterconcentraat of boter. B ĳtoevoeging van verklik-
stoffen aan room bedraagt het b ĳmengingsgehalte 250 gram per ton
melkvet.
8.2.2. Deuitanalysevanhetproductverkregenresultatenvandedriemonsters
worden gebruikt om het gehalte aan en de homogene toevoeging van deverklikstofteverifieren,enhetlaagsteresultaatwordtvergelekenmetdevolgende waarden (kritisch verschil b ĳeen waarsch ĳnlĳkheid van 95%
(CrD95)):
— 221,0 mg/kg (95% van het minimum-b ĳmengingsgehalte);
— 159,0 mg/kg (70% van het minimum-b ĳmengingsgehalte).
Deconcentratievandeverklikstofinhetmonsterdathetlaagsteresultaat
oplevert, wordt gebruikt in combinatie met interpolatie tussen 221,0mg/kg en 159,0 mg/kg.
▼
B
8.3. Uitsluitend uit vanillepeulen of integrale extracten daarvan vervaardigde
verklikstof:
▼M1
8.3.1. Het b ĳmengingsgehalte van 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde bedraagt
100 gram per ton boterconcentraat of boter. B ĳtoevoeging van verklik-
stoffen aan room bedraagt het b ĳmengingsgehalte 100 gram per ton
melkvet.
8.3.2. Deuitanalysevanhetproductverkregenresultatenvandedriemonsters
worden gebruikt om het gehalte aan en de homogene b ĳmenging van de
verklikstofteverifiëren,enhetlaagsteresultaatwordtvergelekenmetdevolgende waarden (kritisch verschil b ĳeen waarsch ĳnlĳkheid van 95%
(CrD95)):
— 79,0 mg/kg (95% van het minimum-b ĳmengingsgehalte);
— 54,0 mg/kg (70% van het minimum-b ĳmengingsgehalte).
Deconcentratievandeverklikstofinhetmonsterdathetlaagsteresultaat
oplevert,wordtgebruiktincombinatiemetinterpolatietussen79,0mg/kgen 54,0 mg/kg.
1998R1459 — NL — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
9.Opmerkingen
9.1. De herhaalbaarheid r is de waarde waaronder met een gespecificeerde
waarsch ĳnlĳkheid het absolute verschil ligt tussen de resultaten die met
dezelfde methode onder dezelfde omstandigheden (dezelfde apparatuur,hetzelfde laboratorium, en kort na elkaar) z ĳn verkregen b ĳtwee enkel-
voudige bepalingen uitgevoerd met identiek monstermateriaal; tenz ĳ
anders aangegeven, bedraagt die waarsch ĳnlĳkheid 95%.
9.2. De reproduceerbaarheid R is de waarde waaronder met een gespecifi-
ceerdewaarsch ĳnlĳkheidhetabsoluteverschilligttussenderesultatendie
metdezelfdemethodeonderverschillendeomstandigheden(verschillendeuitvoerders, verschillende laboratoria en/of op verschillende t ĳdstippen)
zĳn verkregen b ĳtwee enkelvoudige bepalingen uitgevoerd met identiek
monstermateriaal; tenz ĳanders aangegeven, bedraagt die waarsch ĳnlĳk-
heid 95%.
9.3. De recovery van toegevoegd vanilline b ĳeen gehalte van 250 mg/kg
boterolie varieert van 97,0 tot 103,8%. Het gemiddelde gehalte datgevonden werd, bedroeg 99,9% met een standaardafw ĳking van 2,7%.
9.4. De standaardoplossing bevat 5% extractieoplossing ter compensatie van
depiekverbredingalsgevolgvandeaanwezigheidvan5%vandeextrac-tieoplossing van de testmonsters. Hierdoor is een kwantificering via depiekhoogte mogel ĳk.
9.5. De analyse is gebaseerd op een lineaire ĳklĳn door de oorsprong. Door
gebruikmaking van geschikte verdunningen van de standaardoplossing(4.5.2),moetdeeerstekeerdatdeanalysewordtuitgevoerdenverdermetregelmatigetussenpozenennaveranderingeninofherstelvandeHPLC-apparatuur, de lineariteit worden gecontroleerd.