1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 1
Dit document vormt slechts een documentatiehulpmiddel en versch ĳnt buiten de verantwoordel ĳkheid van de instellingen
►B VERORDENING (EEG) Nr.3942/92 VAN DE COMMISSIE
van 22 december 1992
houdende vaststelling van een referentiemethode voor de bepaling van sitosterol en stigmasterol in
boterolie
(PB L 399 van 31.12.1992, blz. 29)
Gewĳzigd b ĳ:
Publicatieblad
nr. blz. datum
►M1Verordening (EEG) nr. 2539/93 van de Commissie van 15 september
1993 L233 1 16.9.1993
►M2Verordening (EG) nr. 175/1999 van de Commissie van 26 januari 1999 L20 22 27.1.1999
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 2
▼B
VERORDENING (EEG) Nr.3942/92 VAN DE COMMISSIE
van 22 december 1992
houdende vaststelling van een referentiemethode voor de bepaling
van sitosterol en stigmasterol in boterolie
DE COMMISSIE VAN DE EUROPESE GEMEENSCHAPPEN,
Gelet op het Verdrag tot oprichting van de Europese EconomischeGemeenschap,
Gelet op Verordening (EEG) nr. 804/68 van de Raad van 27 juni 1968
houdende een gemeenschappelijke ordening der markten in de sectormelk en zuivelprodukten(
1), laatstelijk gewijzigd bij Verordening
(EEG) nr. 2071/92(2), met name op artikel 6,
Overwegende dat overeenkomstig Verordening (EEG) nr. 3143/85 van
de Commissie(3), laatstelijk gewijzigd bij Verordening (EEG) nr. 1264/
92(4), met name de artikelen 5 en 6, aan boterolie verklikstoffen
moeten worden toegevoegd en de boterolie met verklikstoffen aancontrole moet worden onderworpen;
OverwegendedatovereenkomstigVerordening(EEG)nr.570/88vande
Commissie(
5), laatstelijk gewijzigd bij Verordening (EEG) nr. 124/
92(6), met name de artikelen 3 en 6, aan boterolie verklikstoffen
kunnen worden toegevoegd en de produkten met verklikstoffen aancontrole moeten worden onderworpen;
OverwegendedatovereenkomstigVerordening(EEG)nr.429/90vande
Commissie(
7), laatstelijk gewijzigd bij Verordening (EEG) nr. 1264/92,
met name de artikelen 10 en 11, aan boterolie verklikstoffen moetenworden toegevoegd en de boterolie met verklikstoffen aan controlemoet worden onderworpen;
Overwegende dat strikte naleving van de bepalingen voor het gebruik
van verklikstoffen in boterolie essentieel is om frauduleus gebruik vangesubsidieerde boter te voorkomen;
Overwegende dat het, gezien het belang van verklikstoffen voor een
goede werking van de regelingen, nodig is gemeenschappelijke in dehele Gemeenschap op dezelfde wijze toe te passen methoden vast testellenvoorhetopsporenvanallevoordezeregelingenvereisteverklik-stoffen; dat dit met name een gelijke behandeling zou waarborgen vanalle bedrijven die gebruik maken van deze regelingen en een einde zoumaken aan ongelijke concurrentievoorwaarden die thans het gevolgkunnen zijn van verschillende analysemethoden;
Overwegendedathetmoeilijkisdergelijkereferentiemethodenvooralle
verklikstoffen tegelijk vast te stellen; dat de vaststelling van een refe-rentiemethode voor de bepaling van stigmasterol en sitosterol inbotervet een eerste stap in die richting is;
Overwegende dat de in deze verordening vervatte maatregelen in over-
eenstemming zijn met het advies van het Comité van beheer voor melken zuivelprodukten,
(1) PB nr. L 148 van 28. 6. 1968, blz. 13.
(2) PB nr. L 215 van 30. 7. 1992, blz. 64.
(3) PB nr. L 298 van 12. 11. 1985, blz. 9.
(4) PB nr. L 135 van 19. 5. 1992, blz. 5.
(5) PB nr. L 55 van 1. 3. 1988, blz. 31.
(6) PB nr. L 14 van 21. 1. 1992, blz. 28.
(7) PB nr. L 45 van 21. 2. 1990, blz. 8.
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 3
▼B
HEEFT DE VOLGENDE VERORDENING VASTGESTELD:
Artikel 1
▼M1
De voor het bepalen van het stigmasterolgehalte van boterolie alsbedoeld in artikel 6 van Verordening (EEG) nr. 3143/85, artikel 6 van►
M2Verordening (EG) nr. 2571/97 ◄en artikel 11 van Verordening
(EEG) nr. 429/90, en van het β-sitosterolgehalte van boterolie als
bedoeld in artikel 6 van ►M2Verordening (EG) nr. 2571/97 ◄te
hanteren referentieanalysemethode is aangegeven in de b ĳlage b ĳdeze
verordening.
▼B
De toevoeging van verklikstoffen aan boterolie is op correcte wijzegebeurd,indiendeverkregenresultateninovereenstemmingzijnmetdeonder punt 8 van deze bijlage gespecificeerde eisen.
Artikel 2
Deze verordening treedt in werking op de derde dag volgende op die
vanhaarbekendmakinginhet Publicatieblad van de Europese Gemeen-
schappen.
Zij is van toepassing met ingang van 1 februari 1993.
Deze verordening is verbindend in al haar onderdelen en is rechtstreeks
toepasselijk in elke Lid-Staat.
1992R3942 —NL— 03.02.1999 — 002.001 — 4
▼B
BIJLAGE
BEPALING VAN SITOSTEROL OF STIGMASTEROL IN BOTEROLIE
MET BEHULP VAN CAPILLAIRE GASCHROMATOGRAFIE
1. DOEL EN TOEPASSINGSGEBIED
In deze methode wordt een werkwijze beschreven voor de kwantitatieve
bepaling van sitosterol of stigmasterol in boterolie. Onder sitosterolwordt verstaan de totale hoeveelheid β-sitosterol en 22-dihydro- β-sitost-
erol; overige sitosterolen gelden als te verwaarlozen. De methode is vantoepassingopmonstersdiekrachtensdeVerordeningen(EEG)nr.3143/85, (EEG) nr. 570/88 en (EEG) nr. 429/90 worden ontvangen.
2. PRINCIPE
De boterolie wordt verzeept met ethanolische kaliumhydroxide-oplos-
sing, waarna de onverzeepbare bestanddelen worden geëxtraheerd metdiethylether.
De sterolen worden omgezet in trimethylsilylethers en met behulp van
capillaire gaschromatografie kwantitatief bepaald, waarbij betulinol alsinterne standaard wordt gebruikt.
3. APPARATUUR
3.1. Kolf, 150ml, voorzien van een refluxkoeler met slijpstukken.3.2. Scheitrechters, 500ml.3.3. Kolven, 250ml.3.4. Tegendrukscheitrechters, 250ml, of soortgelijke apparatuur voor het
opvangen van gebruikte diethylether.
3.5. Glazen kolom, 350mm×20mm, met een filterplaat van gesinterd glas.3.6. Waterbad of verwarmingsmantel.3.7. Reactieflesjes, 2ml.3.8. Gaschromatograaf, geschikt voor het werken met een capillaire kolom,
bestaande uit:
3.8.1. een oven waarmee de kolommen op de gewenste temperatuur kunnen
worden gehouden met een nauwkeurigheid van ±1 °C;
3.8.2. een injector met regelbare temperatuur;3.8.3. een vlamionisatiedetector met elektronische versterker;3.8.4. Elektronische rekenapparatuur (integrator), geschikt voor gebruik met
een elektronische versterker (3.8.3).
3.9. Een fused-silica capillaire kolom, inwendig gecoat met BP1 of equiva-
lent met een uniforme dikte van 0,25 µm; met deze kolom moet reso-
lutievandetrimethylsilyl-derivatenvanlanosterolensitosterolmogelijkzijn; hiervoor kan een BP1-kolom met een lengte van 12m en eeninwendige diameter van 0,2mm worden gebruikt.
3.10. Injectiespuit, van ten hoogste 1 µl, geschikt voor de injector (3.8.2).
4. REAGENTIA
Alle reagentia moeten p.a. zijn. Het gebruikte water dient gedestilleerd
water of water van gelijkwaardige zuiverheid te zijn.
4.1. Ethanol, minimaal 95% zuiver.4.2. Kaliumhydroxide, oplossing van 60%. Los 600g kaliumhydroxide
(minimaal 85%) op in water en vul met water aan tot 1 liter.
4.3. Betulinol, minimaal 99% zuiver.4.3.1. Interne standaard: oplossingen van betulinol in diethylether (4.4).4.3.1.1. de concentratie van de betulinol-oplossing voor de bepaling van sitost-
erol moet 1,0mg/ml zijn.
4.3.1.2. de concentratie van de betulinol-oplossing voor de bepaling van stig-
masterol moet 0,4mg/ml zijn.
1992R3942 —NL— 03.02.1999 — 002.001 — 5
▼B
4.4. Diethylether, p.a. (peroxide- en restvrij).
4.5. Natriumsulfaat, watervrij, 2 uur gedroogd bij 102 °C.
4.6. Silyleringsreagens, b.v. TRI-SIL (verkrijgbaar bij Pierce Chemical Co,
Cat. nr. 49001) of gelijkwaardig. (WAARSCHUWING: TRI-SIL isontvlambaar,toxisch,bijtendenmogelijkerwijscarcinogeen.Hetlabora-toriumpersoneel moet op de hoogte zijn van de veiligheidsvoorschriftenvoor de TRI-SIL en de nodige voorzorgsmaatregelen nemen.)
4.7. Lanosterol.4.8. Sitosterol, bekende zuiverheid (P) minimaal 90%.
Opmerking 1: Dezuiverheidvanhetvoordeijkinggebruiktestandaard-
materiaal moet volgens de interne normalisatiemethode worden bepaald.Neem aan dat alle in het monster aanwezige sterolen in het chromato-gram voorkomen, dat het totale piekoppervlak overeenkomt met 100%van de sterol-bestanddelen en dat de detector voor alle sterolen dezelfderespons geeft. Controleer of het systeem op het bij de analyse gebruikteconcentratiebereik lineair is.
4.8.1. Sitosterol-standaardoplossing: bereid een oplossing die, tot op
0,001mg/ml nauwkeurig, ongeveer 0,5mg/ml (W
1) sitosterol (4.8) in
diethylether (4.4) bevat.
4.9. Stigmasterol, bekende zuiverheid (P) minimaal 90%.4.9.1. Stigmasterol-standaardoplossing: bereid een oplossing die, tot op
0,001mg/ml nauwkeurig, ongeveer 0,2mg/ml (W
1) stigmasterol (4.9) in
diethylether (4.4) bevat.
4.10. Mengsel voor controle van de resolutie: bereid een oplossing die
0,05mg/ml lanosterol (4.7) en 0,5mg/ml sitosterol (4.8) in diethylether(4.4) bevat.
5. WERKWIJZE
5.1. Bereiding van de standaardoplossingen voor chromatografie: de interne
standaardoplossing (4.3.1) moet op hetzelfde moment aan de desbetref-fende standaardoplossing met sterolen en aan het verzeepte monster(5.2.2) worden toegevoegd.
5.1.1. Standaardoplossing sitosterol voor chromatografie: breng 1ml van de
standaardoplossing sitosterol (4.8.1) in elk van twee reactieflesjes (3.7)en verdamp de diethylether met een stikstofstroom. Voeg 1ml internestandaardoplossing (4.3.1.1) toe en verdamp de diethylether met eenstikstofstroom.
5.1.2. Standaardoplossing stigmaterol voor chromatografie: breng 1ml van de
standaardoplossing stigmasterol (4.9.1) in elk van de twee reactieflesjes(3.7) en verdamp de diethylether met een stikstofstroom. Voeg 1mlinterne standaardoplossing (4.3.1.2) toe en verdamp de diethylether meteen stikstofstroom.
5.2. Bereiding van de onverzeepbare bestanddelen.5.2.1. Weegtotop1mgnauwkeurigongeveer1gboterolie(W
2)afineenkolf
van 150ml (3.1). Voeg 50ml ethanol (4.1) en 10ml kaliumhydroxide-oplossing (4.2) toe. Bevestig de refluxkoeler, verwarm tot ongeveer75°C en handhaaf deze temperatuur gedurende 30minuten. Verwijder
de koeler en laat de kolf afkoelen tot kamertemperatuur.
5.2.2. Voeg 1,0ml interne standaardoplossing toe (4.3.1.1 als sitosterol wordt
bepaald of 4.3.1.2 als stigmasterol wordt bepaald). Meng zorgvuldig enbreng de inhoud van de kolf kwantitatief over in een scheitrechter van500ml (3.2), waarna de kolf achtereenvolgens wordt gewassen met50mlwateren250mldiethylether(4.4)Schuddescheitrechterkrachtiggedurende 2minuten en wacht tot de fasen gescheiden zijn. Laat dewaterige onderlaag weglopen en was de etherlaag door viermaal teschudden met 100ml water.
Opmerking 2: Om emulsievorming te voorkomen moet het wassen met
water de eerste twee maal voorzichtig gebeuren (tienmaal omkeren). Dederdemaalkangedurende30secondenkrachtigwordengeschud.Indiener een emulsie ontstaat, kan deze worden afgebroken door 5-10mlethanol toe te voegen. Indien ethanol wordt toegevoegd, moet er nogeens tweemaal krachtig met water worden gewassen.
5.2.3. Laat de heldere zeepvrije etherlaag door een glazen kolom (3.5) met
30g watervrij natriumsulfaat (4.5) lopen. Vang de ether op in een kolfvan 250ml (3.3). Voeg een kooksteentje toe en damp de oplossing
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 6
▼B
vrijwei droog op een waterbad of met een verwarmingsmantel. Zorg er
daarbij voor dat het verdampte oplosmiddel wordt opgevangen.
Opmerking 3: Als de vloeistof bij een te hoge temperatuur volledig
wordt ingedampt, is het mogelijk dat er ook sterolen verloren gaan.
5.3. Bereiding van de trimethylsilylethers5.3.1. Breng de in de kolf resterende etheroplossing over in een reactieflesje
van 2ml (3.7) met 2ml diethylether en verdamp de ether met eenstikstofstroom. Was de kolf tweemaal als volgt: breng 2ml diethyletherin de kolf, breng deze over naar het reactieflesje en verdamp de ethermet stikstof.
5.3.2. Silyleerhetmonsterdoor1mlTRI-SIL(4.6)toetevoegen.Sluithetvat
af en schud krachtig om de sterolen op te lossen. Verwarm, als desterolen niet volledig oplossen, tot 65-70 °C. Laat de oplossing gedu-
rende ten minste 5minuten staan alvorens deze in de gaschromatograafte injecteren. Silyleer de standaarden (5.1.1 of 5.1.2) en het mengsel omde resolutie te controleren (4.10) op dezelfde manier als de monsters.
Opmerking 4: Het silyleren moet in een watervrije omgeving gebeuren.
Wanneer betulinol onvolledig is gesilyleerd, verschijnt er vlak bij debetulinol-piek een tweede piek.Het silyleringsproces wordt gestoorddoor de aawezigheid van ethanol in de oplossing, die een gevolg kanzijn van onvoldoende wassen na de extractie. Indien dit probleemaanhoudt,wasdannadeextractieeenvijfdemaal,waarbijgedurende30seconden krachtig wordt geschud.
5.4. Gaschromatografie5.4.1. Keuze van de werkomstandigheden:
Volg voor de instelling van de gaschromatograaf de instructies van de
fabrikant op.
Voor de werkomstandigheden gelden de volgende richtlijnen:
—kolomtemperatuur: 265 °C
—injectortemperatuur: 280 °C
—detectortemperatuur: 300 °C
—stroomsnelheiddraaggas: 0,6ml/minuut—waterstofdruk: 84kPa—luchtdruk: 155kPasplitverhouding:van10:1tot50:1;desplitverhoudingmoetvolgens
deinstructiesvandefabrikantwordengeoptimaliseerdenvervolgensmoetwordengecontroleerdofderesponsvandedetectorophetgebruikteconcentratiebereiklineairis.
Opmerking 5: Het is vooral belangrijk dat de liner van de injector
regelmatig wordt schoongemaakt.
— geïnjecteerde hoeveelheid: 1 µl TMSE-oplossing
Laat het systeem equilibreren en begin niet met de analyse voordat de
respons voldoende stabiel is.
Stel de omstandigheden, die afhankelijk van de kenmerken van de
kolom en de gaschromatograaf zijn, zodanig in, dat er chromato-grammen worden verkregen die aan de volgende eisen voldoen:
— de resolutie tussen de sitosterol-piek en de lanosterol-piek moet
afdoende zijn. Bij een gesilyleerd mengsel voor controle op deresolutie (4.10) moet een soortgelijk chromatogram wordenverkregen als in figuur 1 is weergegeven
— voor onderstaande sterolen moet ongeveer de daarbij vermelde rela-
tieve retentietijd worden verkregen:
Cholesterol: 1,0
Stigmasterol: 1,3Sitosterol: 1,5Betulinol: 2,5.
— de retentietijd voor betulinol moet ongeveer 24minuten zijn.
5.4.2. Analyse
1992R3942 —NL— 03.02.1999 — 002.001 — 7
▼B
Injecteer1 µlgesilyleerdestandaardoplossing(stigmasterolofsitosterol)
en stel de kalibratieparameters van de integrator in.
Injecteer 1 µl gesilyleerde standaardoplossing om de responsfactor in
vergelijking met betulinol te bepalen.
Injecteer 1 µl gesilyleerde monsteroplossing en meet de piekopper-
vlakken. Voor en na elke chromatografische reeks moet er 1 µl stan-
daardoplossing worden geïnjecteerd. Als leidraad kan worden gestelddat vóór en na elke reeks van 6 monsteroplossingen, de standaardoplos-sing wordt geïnjecteerd.
Opmerking 6: Bij de integratie van de stigmasterol-piek moet ook het
oppervlakvaneventuelestaarten,zoalsaangegevenbijdepunten1,2en3 in figuur 2b, worden meegerekend.Wanneer de totale hoeveelheidsitosterol wordt bepaald, moet bij de integratie van de sitosterol-piekook het oppervlak van de piek van 22-dihydro- β-sitosterol (stigmas-
tanol), dat vlak na sitosterol elueert, worden meegerekend.
6. BEREKENING VAN DE RESULTATEN
6.1. Bepaal het oppervlak van de sterol-pieken en de betulinol-pieken bij de
standaardoplossingen voor en na een reeks en bereken R
1:
R1=Gemiddeld sterol-piekoppervlak in standaardoplossing
Gemiddeld betulinol-piekoppervlak in standaardoplossing
Bepaal het oppervlak van de sterol-piek (stigmasterol of sitosterol en de
betulinol-piek in de monsteroplossing en bereken R2:
R2=Sterol-piekoppervlak in monsteroplossing
Betulinol-piekoppervlak in monsteroplossing
W1= sterolconcentratievandestandaardindestandaardoplossing4.8.1
of 4.9.1) in mg/ml
W2= gewicht van het monster (5.2.1) in g
P = zuiverheid van de standaard-sterol (4.8 of 4.9)
Sterolgehalte van het monster mg/kg =R2
R1×W1
W2×P×1 0 .
7. NAUWKEURIGHEID VAN DE METHODE
7.1. Herhaalbaarheid7.1.1. Stigmasterol
Het verschil tussen de resultaten van twee bepalingen, binnen een zo
kort mogelijke tijd uitgevoerd door dezelfde persoon met dezelfde appa-ratuur op hetzelfde monster, mag niet groter zijn dan 10,2mg/kg.
7.1.2. Sitosterol
Het verschil tussen de resultaten van twee bepalingen, binnen een zo
kort mogelijke tijd uitgevoerd door dezelfde persoon met dezelfde appa-ratuur op hetzelfde monster, mag niet groter zijn dan 3,6% van hetgemiddelde van de bepalingen.
7.2. Reproduceerbaarheid7.2.1. Stigmasterol
Het verschil tussen de resultaten van twee bepalingen, uitgevoerd door
personen in verschillende laboratoria met verschillende apparatuur ophetzelfde monster, mag niet groter zijn dan 25,3mg/kg.
7.2.2. Sitosterol
Het verschil tussen de resultaten van twee bepalingen, uitgevoerd door
personen in verschillende laboratoria met verschillende apparatuur ophetzelfde monster, mag niet groter zijn dan 8,9% van het gemiddeldevan de bepalingen.
7.3. Herkomst van de precisiegegevens
De precisiegegevens zijn vastgesteld op basis van een experiment dat in
1991innegenlaboratoriawerduitgevoerdmetzesmonsters(drieblindeduplo’s) voor stigmasterol en zes monsters (drie blinde duplo’s) voorsitosterol.
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 8
▼B
8. TOLERANTIEGRENZEN
▼M28.1. Om na te gaan of de toevoeging van verklikstoffen aan het product op
correcte w ĳze is gebeurd, moeten van dit product drie monsters worden
genomen.
▼B8.2. Stigmasterol8.2.1. Het bijmengingsgehalte voor stigmasterol bedraagt 150g met een
zuiverheidvantenminste95%pertonboterolie,d.w.z.142,5mg/kg,of170g met een zuiverheid van ten minste 85% per ton boterolie, d.w.z.144,5mg/kg.
▼
M28.2.2. De uit analyse van het product verkregen resultaten van de drie
monsters worden gebruikt om het gehalte aan en de homogene b ĳmen-
ging van de verklikstof te verifieren, en het laagste resultaat wordtvergeleken met de volgende waarden (kritisch verschil b ĳeen waar-
schĳnlĳkheid van 95% (CrD95)):
— 120,0mg/kg(95%vanhetminimum-b ĳmengingsgehaltevoor95%
zuiver stigmasterol);
— 122,0mg/kg(95%vanhetminimum-b ĳmengingsgehaltevoor85%
zuiver stigmasterol);
— 84,0 mg/kg (70% van het minimum-b ĳmengingsgehalte voor 95%
zuiver stigmasterol);
— 86,0 mg/kg (70% van het minimum-b ĳmengingsgehalte voor 85%
zuiver stigmasterol).
De concentratie van de verklikstof in het monster dat het laagste resul-taat oplevert, wordt gebruikt in combinatie met interpolatie tussen 120,0mg/kg en 84,0 mg/kg, respectievel ĳk 122,0 mg/kg en 86,0 mg/kg.
▼
B8.3. Sitosterol8.3.1. Het bijmengingsgehalte voor sitosterol bedraagt 600g ten minste 90%
zuiver sitosterol per ton boterolie, d.w.z. 540mg/kg.
▼
M28.3.2. De uit analyse van het product verkregen resultaten van de drie
monsters worden gebruikt om het gehalte aan en de homogene b ĳmen-
ging van de verklikstof te verifieren, en het laagste resultaat wordtvergeleken met de volgende waarden (kritisch verschil b ĳeen waar-
schĳnlĳkheid van 95% (CrD95)):
— 486,0mg/kg(95%vanhetminimum-b ĳmengingsgehaltevoor90%
zuiver sitosterol);
— 358,0mg/kg(70%vanhetminimum-b ĳmengingsgehaltevoor90%
zuiver sitosterol).
De concentratie van de verklikstof in het monster dat het laagste resul-taat oplevert, wordt gebruikt in combinatie met interpolatie tussen 486,0mg/kg en 358,0 mg/kg.
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 9
▼B
Figuur 1: Chromatogram van het mengsel voor controle van de resolutie
Volledige resolutie, waarbij de recorderpen na de piek van lanosterol
op de basislijn terugkomt alvorens de piek voor sitosterol begint,verdient de voorkeur, maar onvolledige resolutie is aanvaardbaar.

1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 10
▼B
Figuur 2a:
Stigmasterol-standaard

1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 11
▼B
Figuur 2b:
Boterolie (boterconcentraat)-monster, gedenatureerd met stigmasterol
N.B.: Bij integratie van de piek voor stigmasterol moeten ook eventuele staarten,
zoals aangegeven bij de punten 1, 2 en 3, worden meegerekend.
1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 12
▼B
Figuur 3a:
β-sitosterol-standaard

1992R3942 — NL — 03.02.1999 — 002.001 — 13
▼B
Figuur 3b:
Boterolie (boterconcentraat)-monster, gedenatureerd met β-sitosterol
N.B.: β-sitosterol bevat vaak een verontreiniging (stigmastanol) die onmiddellijk
naβ-sitosterolelueert.Wanneerdetotalehoeveelheid β-sitosterolwordtbepaald,
moeten de oppervlakken van deze twee pieken bij elkaar worden opgeteld.