Prima direttiva 71/250/CEE della Commissione, del 15 giugno 1971, che fissa i metodi d'analisi comunitari per controlli ufficiali degli alimenti per gli animali



Gazzetta ufficiale n. L 155 del 12/07/1971 pag. 0013 - 0037

edizione speciale finlandese: capitolo 3 tomo 3 pag. 0213

edizione speciale danese: serie I capitolo 1971(II) pag. 0423

edizione speciale svedese/ capitolo 3 tomo 3 pag. 0213

edizione speciale inglese: serie I capitolo 1971(II) pag. 0480

edizione speciale greca: capitolo 03 tomo 6 pag. 0218

edizione speciale spagnola: capitolo 03 tomo 5 pag. 0003

edizione speciale portoghese: capitolo 03 tomo 5 pag. 0003



++++ ( 1 ) GU n . L 170 del 3 . 8 . 1970 , pag . 2 . PRIMA DIRETTIVA DELLA COMMISSIONE del 15 giugno 1971 che fissa i metodi d'analisi comunitari per controlli ufficiali degli alimenti per gli animali ( 71/250/CEE ) LA COMMISSIONE DELLE COMUNITA EUROPEE , visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea , vista la direttiva del Consiglio , del 20 luglio 1970 , concernente l'intredazione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisi comunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali ( 1 ) , in particolare l'articolo 2 , considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali , per constatare se le condizioni prescritte in virtu delle disposizioni legislative , regolamentari ed amministrative concernenti le qualità e la composizione degli alimenti per gli animali sono rispettate , siano effettuati secondo i metodi di prelevamento di campioni ed i metodi di analisi comunitari ; considerando che e necessario stabilire il più rapidamente possibile tutti i metodi d'analisi necessari e che la fissazione dei metodi di dosaggio di acido cianidrico , di calcio , di carbonati , di ceneri gregge , di ceneri insolubili in acido cloridrico , di cloro dei cloruri , dell'essenza di senapa , di lattosio , di potassio , di sodio , di zuccheri , della teobromina e dell'urea , la degli alcaloidi del lupini e l'attivita ureasica del prodotti della sola costituiscono un primo stadio ; considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono conformi al parere del Comitato permanente degli alimenti per gli animali , HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA : Articolo 1 Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali , per quanto riguarda il loro contenuto in acido , cianidrico , calcio , carbonati , ceneri gregge , ceneri insolubili in acido cloridrico , cloro dei cloruri , essenza di senapa , lattosio , potassio , sodio , zuccheri , teobromina ed urea , la determinazione degli alcaloidi dei lupini e l'attivita ureasica dei prodotti della sola , siano effettuate secondo i metodi descritti nell'allegato della presente direttiva . Articolo 2 Gli Stati membri mettono in vigore , al più tardi il 1 * luglio 1972 , le disposizioni legislative , regolamentari ed amministrative necessarie per uniformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informano immediatamente la Commissione . Articolo 3 Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva . Fatto a Bruxelles , il 15 giugno 1971 . Per la Commissione ll Presidente Franco M . MALFATTI ALLEGATO METODI D'ANALISI DEI COMPONENTI DEI MANGIMI 1 . INTRODUZIONE I metodi d'analisi dei componenti dei mangimi sono applicabili , in linea di massima , a tutti i mangimi semplici e composti . Tuttavia , alcuni mangimi esigono , per la loro particolare composizione , l'uso di metodi speciali . metodi speciali . Questi casi eccezionali sono previste nelle " Osservazioni " incluse nella descrizione dei metodi di determinazione . Quando due o più metodi sono indicati per la determinazione d'uno stesso componente in un alimento , la scelta del metodo da applicare è lasciata , salvo indicazione contraria , al laboratorio di controllo ; tuttavia il metodo utilizzato dovrà essere indicato sul certificato d'analisi . Preparazione del campione da analizzare L'analisi chimica deve necessariamente essere eseguita su un campione omogeneo . D'altra parte certe determinazioni macroscopiche o microscopiche , oltre alla determinazione dell'umidità , debbono poter essere eseguite sul campione nello stato in cui esso pervience al laboratorio . Per tener conto di questa duplice esigenza , si divide il campione in due parti . Una di esse è lasciata nello stato iniziale : l'altra è preparata come sarà appresso indicato in vista dell'analisi chimica . Dividere il campione sia mediante un apparecchio , sia a mano , dopo aver mescolato la totalità del campione su una superficie pulita ed asciutta . In quest'ultimo caso è indicato applicare il metodo dei quartiere che consiste nell'effettuare prelevamenti successivamente in due settori opposti . Per terminare . prelevare , in vista dell'analisi , una porzione dell'ordine di g 100 circa , macinarla e farla passare totalmente in un setaccio , a maglie rotonde , di mm 1 di diametro . Introdurre immediatamente tale campione in un recipiente . essiccato e munito di una chiusura e metica , e chiuderlo . Se il campione e molto umido , e necessario procedere ad una preliminare essiccazione prima della macinazione . al fine di portare il contenuto di umidita ad un valore compreso tra 8 e 12 per cento . A tale essicare il campione ad una temperatura appropriata per il tempo sufficiente . Reattivi ed apparecchiature Nella descrizione dei metodi di analisi sono indicati soltanto gli strumenti è gli apparecchi speciali o quelli che richiedono norme particolari Si è ritenuto superfluo menzionare tutti gli apparecchi e gli utensili necessari che engono impiegati in ogni metodo e che fanno parte del comune corredo dei laboratori . Ogni qual volta si fa riferimento all'acqua per preparare le diluzioni , effettuare lavaggi , si tratta sempre di acqua distillata e quando si fa riferimento alla soluzione di un reattivo , senza altra indicazione , si tratta sempre di una soluzione in acqua distillata . Espressione dei risultati ll risultato indicato sul certificato d'analisi è la media ottenuta da lameno due determinazioni . Salvo disposizioni particolari viene espresso in per cento del campione consenta la precisione del metodo di analisi . originale cosi come pervenuto al laboratorio . ll risultato non deve comportate più cifre significative di quanto ne consenta la precisione del meetodo di analisi . DETERMINAZIONE DELL'ACCIDO CIANIDRICO 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette la determinazione dell'acido cianidrico libero o dell'acido cianidrico combinato sotto forma di glucosidi , nei mangimi e , particolarmente , nei prodotti provenienti dai semi di lino , farina di manioca e da alcune specie di fagioli . 2 . Principio ll campione viene posto in sospensione acqua . L'acido cianidrico viene liberato dall'azione dei fermenti . L'acido cianidrico libero , trascinato dal vapore d'acqua , viene raccolto in un sufficiente volume di una soluzione di nitrato d'argento acidificata . Il cianuro d'argento viene separato per filtrazione e l'eccesso di nitrato d'argento viene titolato mediante una soluzione di tiocianato d'ammonio . 3 . Reattivi 3.1 . Sospensione di mandorle dolci : macinare 20 mandorle dolci mondate con ml 100 di acqua da 37 a 40 * C . Verificare su ml 10 di tale sospensione l'assenza di acido cianidrico , per mezzo di una cartina al pierato sodico o effettuando un saggio in bianco come indicato al punto 5 . ultimo paragrafo . 3.2 . Soluzione al 10 p v d'acetato di sodio , neutra alla fenoftaleina 3.3 . Antischiuma p . e silicone 3.4 . Acido nitrico , d . 1,40 3.5 . Soluzione di nitrato d'argento 0,02 N 3.6 . Soluzione di tiocianato d'ammonio 0,02 N 3.7 . Soluzione satura di solfato ferrico ammonico 3.8 . Ammoniaca , d . 0,958 . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Sufa munita di termostato regolato a 38 C 4.2 . Apparecchio di distillazione in corrente di vapore d'acqua , munito di un refrigerante con un tubo di rallungo curvato 4.3 . Palloni a fondo piatto da ml 1000 a tappo smerigliato 4.4 . Bagno d'olio 4.5 . Burette graduate a ml 1/20 . 5 . Modo di operare Mettere in un pallone a fondo piatto da ml 1000 , g 20 del campione , pesati con l'approssimazione di mg 5 , con ml 50 di acqua e ml 10 di sospensione di mandorle dolci ( 3.1 ) . Tappare il pallone e mantenerlo per 16 ore nella stufa a 38 * C , Raffreddare alla temperatura ambiente ed aggiungere ml 80 di acqua , ml 10 di acqua , di soluzione d'acetato di sodio ( 3.2 ) ed una goccia di antischiuma ( 3.3 ) . Collegare il pallone all'apprecchio di distillazione a corrente di vapore e porlo in un bagno d'olio preventivamente portato ad una temperatura leggermente superiore a 100 * C . Distillare ml 200 a 300 di liquido , facendo passare nel pallone una forte corrente di vapore , scaldando lentamente il bagno d'olio . Raccogliere il distillato in un erlenmeyer porlo al ripato dalla luce e contenente ml 50 essati di soluzione di nirrato d'argento 0,02 N ( 3.5 ) e ml l d'acido nitrico ( 3.4 ) . Effettuare , eventualmente , una prova in bianco , impiegando lo stesso modo d'operare , su una quantità di ml 10 di sospensione di mandorle dolci ( 3.1 ) in assenza del campione da analizzare . 6 . Calcolo dei risultati Se nel saggio in bianco ci è stato un consumo di soluzione di nitrato d'argento 0,02 N , sottrarre questa quantità dal volume impiegato per il distillato del campione . 1 ml di AgNO3 0 , 02 N corrisponde a mg 0 54 di HCN . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni Se il campione contiene una notevole quantità di solfuri ( p.e . nei fagioli ) si forma un precipitato nero di solfuro d'argento che è filtrato con il deposito di cianuro d'argento . La formazione di tale precipitato trascina una perdita della soluzione di nitrato d'argento 0,02 N il cui volume deve essere detratto dal volume preso in considerazione per il calcolo del contenuto in HCN . A tale scopo procedere come appresso indicato : Trattare il deposito rimasto sul filtro con ml 50 di ammoniaca ( 3.8 ) per sciogliere il cianuro d'argento . Lavare il residuo con ammoniaca diluita e procedere alla determinazione del suo contenuto in argento . Convertire il valore ottenuto in ml di soluzione di nitrato d'argento 0,02 N . Il contenuto di acido cianidrico puo essere egualmente determinato per titolazione del filtrato ammoniacale , acidificato con acido nitrico . 3 . DETERMINAZIONE DEL CALCIO 1 . Scopo e campo di applicazione Determinazione del contenuto di calcio cotale negli alimenti per gli animali . 2 . Principio Il campione viene incenerito , le ceneri sono trattate con acido cloridrico ed il calcio viene precipitato sotto forma di ossalato di calcio . Dopo soluzione del precipitato in acido solforico , l'acido ossalico formatosi è titolato mediante una soluzione di permanganato di potassio . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico p.a . , d : 1,14 3.2 . Acido nitrico p.a . , d : 1,40 3.3 . Acido solforico p.a . , d : 1,13 3.4 . Ammonica p.a . , d : 0,98 3.5 . Soluzione satura a freddo d'ossalato d'ammonio p.a . 3.6 . Soluzione al 30 % ( p/v ) d'acido citrico p.a . 3.7 . Soluzione al 5 % ( p/v ) di cloruro d'ammonio p.a . 3.8 . Soluzione allo 0 , 04 % ( p/v ) di verde di bromocresolo 3.9 . Soluzione di permanganato di potassio 0,1 N 4 . Apparecchiatura 4.1 . Forno elettrico a muffola , a circolazione d'aria , munito di termostato 4.2 . Crogioli da incenerimento in platino , quarzo o porcellana 4.3 . Crogiali filtranti in vetro di porosità G4 . 5 . Modo di operare Pesare , con la precisione di mg 1 , g 5 circa di campione ( o più se necessario ) , calcinarli a 550 * C e trasferire le ceneri in un becher da ml 250 . Aggiungere ml 40 di acido cloridrico ( 3.1 ) , ml 60 di acqua ed alcune gocce di acido nitrico ( 3.2 ) . Portare all'ebollizione e mantenerla per 30 minuti . Raffreddare , trasferire quantitativamente la la soluzione in un pallone tarato di ml 250 . Lavare il becher , completare il volume con acqua , mescolare e filtrare . Prelevare con la pipetta , secondo il contenuto presunto di calcio , una quantità aliquota contenente da mg 10 a 40 di calcio ed introdurla in un becher da ml 250 . Aggiungere ml 1 di soluzione di acido citrico ( 3.6 ) e ml 5 di soluzione di cloruro d'ammonio ( 3.7 ) . Completare a circa ml 100 con acqua . Portare all'ebollizione , aggiungere da 8 a 10 gocce di soluzione di verde di bromocresolo ( 3.8 ) e ml 30 di soluzione calda di ossalato d'ammonio ( 3.5 ) . Se compare un precipitato , ridiscioglierlo mediante l'aggiunta di alcune gocce di acido cloridrico ( 3.1 ) . Neutralizzare in seguito molto lentamente con ammoniaca ( 3.4 ) , agitando continuamente , fino ad ottenere un pH dell'ordine da 4,4 a 4,6 ( viraggio dell'indicatore ) . Porre il becher in un bagno d'acqua bollente e mantenervelo per 30 minuti per lasciare depositare il precipitato formatosi . Ritirare il becher dal bagno d'acqua . Lasciare riposare un'ora e filtrare su un crogiolo filtrante G . Lavare il becher ed il crogiolo con acqua , fino all'eliminazione dell'eccesso di ossalato d'ammonio . ( L'assenza di cloruri nelle acque di lavaggio indica l'efficacia di quest'ultimo ) . Disciogliere il precipitato su un filtro con ml 50 di acido solforico ( 3.3 ) caldo . Lavare il crogiolo con acqua calda e portare il filtrato a ml 100 circa . Portare la temperatura da 70 a 80 * C e titolare , goccia a goccia , con la soluzione di permanganato di potassio ( 3.9 ) sino ad ottenere una colorazione rosa persistente per 1 minuto . 6 . Calcolo dei risultati 1 ml di permanganato di potassio 0,1 N corrisponde a mg 2,004 di calcio . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . Per le piccolissime quantità in calcio , procedere come indicato qui appresso : Filtrare il precipitato di ossalato di calcio su un filtro di carta senza ceneri . Dopo lavaggio , essiccare il filtro e calcinarlo a 550 * C in un crogiolo di platino . Riprendere il residuo con alcune gocce di acido solforico ( 3.3 ) , evaporare a secco , calcinare di nuovo a 550 * C e pesare . Sia p il peso di solfato di calcio ottenuto , il contenuto in calcio della parte aliquota prelevata p X 0,2944 . 7.2 . Se il campione è costitulto soltanto da sostanze minerali , eseguire la sua dissoluzione con acido cloridrico , senza preventivo incenerimento . Per i prodotti , come i fosfati alluminocalcici , difficilmente solubili negli acidi , procedere ad una fusione alcalina prima della dissoluzione . A tale scopo mescolare intimamente , in un crogiolo di platino , il quantitativo di prodotto su cui si opera , con circa 5 volte il suo peso di una miscela , a parti uguali , di carbonato di potassio e di carbonato di sodio . Riscaldare con precauzione fino a fusione completa della mescolanza . Dopo raffreddamento , disciogliere mediante acido cloridrico . 7.3 . Se il contenuto in magnesio del campione è elevato , procedere ad una seconda precipitazione dell'ossalato di calcio . 4 . DETERMINAZIONE DEI CARBONATI 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette la determinazione dei carbonati , convenzionalmente espressi in carbonato di calcio , nella maggior parte degli alimenti per gli animali . In alcuni casi ( ad esempio carbonato di ferro ) bisogna impiegare un metodo particolare . 2 . Principio I carbonati sono decomposti dall'acido cloridrico : l'anidride carbonica liberata viene raccolta in un tubo graduato ed il suo volume è comparato a quello sprigionato , nelle medesime condizioni , da una quantità nota di carbonato di calcio p . a . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico , d : 1,10 3.2 . Carbonato di calcio p.a . 3.3 . Acido solforico 0,1 N circa , colorato con rosso di metile . 4 . Apparecchiatura Apparecchio di Scheibler - Dietrich ( v . schema ) o apparecchio equivalente . 5 . Modo di operare Secondo il contenuto in carbonati del campione , pesare una quantità di prodotto come appresso indicato : g 0,5 per i prodotti contenenti da 50 a 100 % di carbonati , espressi in carbonato di calcio ; g 1 per i prodotti contenenti da 10 a 50 % di carbonati , espressi in carbonato di calcio ; g da 2 a 3 in tutti gli altri casi . Introdurre la quantità di sostanza da analizzare nello speciale recipiente ( 4 ) dell'apparecchio , provvisto di un piccolo tubo in materiale infrangibile , contenente ml 10 di acido cloridrico ( 3.1 ) , e raccordare il recipiente all'apparecchio . Girare il rubinetto a tre vie ( 5 ) , in modo che il tubo ( 1 ) comunichi con l'esterno . Per mezzo del tubo mobile ( 2 ) , che è riempito di acido solforico colorato ( 3.3 ) ed è collegato al tubo graduato ( 1 ) , portare il livello del liquido alla graduazione zero . Girare il rubinetto ( 5 ) in modo da far comunicare i tubi ( 1 ) e ( 2 ) e verificare se il livello è a zero . Versare lentamente l'acido cloridrico ( 3.1 ) sulla sostanza inclinando il recipiente ( 4 ) . Pareggiare la pressione abbassando il tubo ( 2 ) . Agitare il recipiente ( 4 ) fino alla cessazione completa dello sviluppo dell'anidride carbonica . Ristabilire la pressione riportando il liquido allo stesso livello nei tubi ( 1 ) e ( 2 ) . Eseguire la lettura dopo qualche minuto quando il volume gassoso è divenuto costante . Effettuare nelle stesse condizioni un saggio comparativo su g 0,5 di carbonato di calcio ( 3.2 ) . 6 . Calcolo dei risultati Il contenuto in g di carbonati , espressi in carbonato di calcio , per cento grammi del campione , è dato dal rapporto : V . 100/T . 2P nel quale V = ml di CO2 liberati dalla quantità di sostanza sottoposta all'analisi T = ml di CO2 liberati da g 0,5 di CaCO3 p.a . P = peso in g della sostanza sottoposta ad analisi . 7 . Osservazioni 7.1 . Quando la quantità di sostanza sottoposta all'analisi è superiore a g 2 , introdurre preventivamente ml 15 di acqua distillata nel recipiente ( 4 ) e mescolare prima di cominciare il saggio . Impiegare i medesimo volume d'acqua per il saggio comparativo . 7.2 . Quando si utilizza un apprecchio di volume diverso da quello di Scheibler-Dietrich , apportare le conseguenti variazioni alla quantità di sostanza su cui si opera , alla quantità di carbonato di calcio nel saggio-tipo ed ai calcoli dei risultati . 5 . DETERMINAZIONE DELLE CENERI GREZZE 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il tenore di ceneri grezze negli alimenti per gli animali . 2 . Principio Il campione è incenerito alla temperatura di 550 * C ; il residuo viene pesato . 3 . Reattivi Soluzione al 20 % ( p/v ) di nitrato d'ammonio . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Piastra riscaldante 4.2 . Forno a muffola elettrico , munito di termostato 4.3 . Crogioli da incenerimento in platino o in lega di platino e oro ( 10 % di Pt , 90 % di Au ) , rettangolari ( mm 60 x 40 x 25 ) o circolari ( diametro di mm da 60 a 75 , altezza di mm da 20 a 25 ) . 5 . Modo di operare Pesare con l'approssimazione di mg 1 g 5 circa ( o g 2,5 per i prodotti aventi tendenza a regonfiare ) del campione in un crogiolo , per incenerimento preventivamente calcinato e tarato . Porre il crogiolo sopra la piastra ricaldante elettrica e scaldare progressivamente fino a carbonizzazione della sostanza . Introdurre il crogiolo in un forno a muffola regolato a 550 * C pio meno 5 * C . Mantenere a tale temperatura fino ad ottenere ceneri bianche , grigie chiare o rossastre , apparentemente esenti di particelle carboniose . Porre il erogiolo in un essiccatore , lasciare raffreddare e pesare immediatamente . 6 . Calcolo dei risultati Calcolare il peso del residuo deducendone la tara . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . Incenerire i prodotti di difficile incenerimento dopo una prima incenerazione di almeno 3 ore , raffreddare e addizionare alcune gocce di una soluzione al 20 % di nitrato d'ammonio ( prudentemente , per evitare la proiezione e l'aggregazione delle ceneri ) . Proseguire la calcinazione dopo essiccazione nella stufa . Ripetere eventualmente l'operazione fino ad incenerimento completo . 7.2 . Per i prodotti che resistono al trattamento indicato in 7.1 . operare come segue ; dopo un incenerimento di 3 ore riprendere le ceneri con acqua distillata calda e filtrare su un piccolo filtro senza ceneri . Incenerire il filtro ed il suo contenuto nello stesso crogiolo . Aggiungere il filtrato nel crogiolo raffreddato , portare a secco , incenerire e pesare . 7.3 . Nel caso degli oli e dei grassi , pesare esattamente una quantità di prodotto dell'ordine di g 25 in un crogiolo di capacità appropriata . Carbonizzare accendedo il prodotto per mezzo di una miccia di carta da filtro senza ceneri . Dopo combustione , umettare con la quantità minima necessaria d'acqua . Essicere ed incenerire come indicato in 5 . 6 . DETERMINAZIONE DELLE CENERI INSOLUBILI IN ACIDO CLORIDRICO 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette determinare il contenuto in sostanze minerali insolubili in acido cloridrico negli alimenti per gli animali . Due metodi sono previsti in dipendenza della natura del campione . 1.1 . Metodo A : applicabile agli alimenti semplici di origine organica ed alla maggior parte degli alimenti composti ; 1.2 . Metodo B : applicabile ai composti ed alle miscele minerali oltre che agli alimenti composti il cui contenuto di insolubile in acido cloridrico , determinato secondo il metodo A , è risultato superiore all'1 % . 2 . Principio 2.1 . Metodo A : il campione è incenerito è le ceneri sono trattate all'ebollizione con acido cloridrico e il residuo insolubile viene filtrato e pesato . 2.2 . Metodo B : il campione è trattato con acido cloridrico . La soluzione è filtrata , il residuo è incenerito e le ceneri ottenute vengono trattate come nel metodo A . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico 3 N . 3.2 . Soluzione al 20 % ( p/v ) di acido tricloroacetico 3.3 . Soluzione all'1 % ( p/v ) di acido tricloroacetico 4 . Apparecchiatura 4.1 . Piastra riscaldante 4.2 . Forno elettrico a muffola , munito di termostato 4.3 . Crogioli da incenerimento in platino o in lega di platino e oro ( 10 % di Pt , 90 % di Au ) , rettangolari ( 60 x 40 x 25 mm ) o rotondi ( diametro : da 60 a 75 mm , altezza : da 20 a 25 mm ) . 5 . Modo di operare 5.1 . Metodo A Incenerire la sostanza da analizzare secondo il modo di operare descritto per la determinazione delle ceneri grezze . Si possono egualmente utilizzare le ceneri ottenute in questa determinazione . Trasferire le ceneri in un becher da ml 250 a 400 , mediante ml 75 d'acido cloridrico 3 N ( 3.1 ) . Portare con precauzione a lenta ebollizione che viene mantenuta per 15 minuti . Filtrare la soluzione calda'su un filtro di carta senza ceneri e lavare il residuo con acqua calda sino a scomparsa della reazione acida . Essiccare il filtro contenente il residuo ed incenerire in un crogiolo tarato a temperatura di almeno 550 * C e non superiore a 700 * C . Raffreddare in essiccatore e pesare . 5.2 . Metodo B Pesare con l'approssimazione di mg 1 g 5 di campione ed introdurli in un becher da ml 250 a 400 . Aggiungere successivamente ml 25 d'acqua e ml 25 d'acido cloridrico 3 N ( 3.1 ) , agitare sino alla cessazione della effervescenza . Aggiungere ancora ml 50 d'acido cloridrico 3 N ( 3.1 ) . Attendere la fine di nuova effervescenza e porre il becher in un bagno di acqua bollente e tenervelo per la durata di 30 minuti o più , se necessario , al fine d'idrolizzare compaletamente l'amido eventualmente presente . Filtrare a caldo su di un filtro senza ceneri e lavare il filtro mediante ml 50 d'acqua calda . Porre il residuo ed il filtro in una capsula da incenerimento ( vedi osservazione 7 ) . Porre il filtro contenente il residuo in un crogiolo da incenerimento , essiccare ed incenerire a temperatura non inferiore a 550 * C e non superiore a 700 * C . Portare infine le ceneri in un becher della capacità di ml 250 a 400 mediante ml 75 d'acido cloridrico 3 N ( 3.1 ) e continuare come descritto in 5.1 secondo paragrafo . 6 . Calcolo dei risultati Calcolare il peso del residuo deducendone la tara . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazione Se la filtrazione si compie difficilmente , ricominciare la determinazione sostituendo i ml 50 di acido cloridrico 3 N con ml 50 d'acido tricloroacetico al 20 % ( 3.2 ) lavando il filtro mediante una soluzione calda di acido tricloroacetico all'1 % ( 3.3 ) . 7 . DETERMINAZIONE DEL CLORO DEI CLORURI 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il cloro dei cloruri solubili in acqua , convenzionalmente espresso in cloruro di sodio . Esso è applicabile a tutti gli alimenti per gli animali . 2 . Principio I cloruri vengono disciolti in acqua . Se il prodotto contiene sostanze organiche , si procede ad una chiarificazione . La soluzione è leggermente acidificata con acido nitrico ed i cloruri vengono precipitati sotto forma di cloruro d'argento a mezzo di una soluzione di nitrato d'argento . L'eccesso di nitrato d'argento è titolato mediante una soluzione di solfocianuro d'ammonio , secondo il metodo Volhard . 3 . Reattivi 3.1 . Soluzione titolata di solfocianuro d'ammonio 0,1N 3.2 . Soluzione titolata di nitrato d'argento 0,1N 3.3 . Soluzione satura di solfato doppio ferrico ammonico 3.4 . Acido nitrico , d : 1 , 38 3.5 . Etere dietilico p.a . 3.6 . Acetone p.a . 3.7 . Soluzione di Carrez I : disciogliere in acqua g 24,0 d'acetato di zinco , Zn ( CH3COO )2 2 H2O e g 3 di acido acetico glaciale . Portare a ml 100 con acqua . 3.8 . Soluzione di Carrez II : disciogliere in acqua g 10,6 di ferrocianuro di potassio K4 ( FE ( CN )6 ) 3 H2O e portare a ml 100 con acqua . 3.9 . Carbone attivo p.a . , esente da cloruri e non assorbente cloro . 4 . Apparecchiatura Miscelatore rotativo a capovolgimento : da circa 35 a 40 giri al minuto . 5 . Modo di operare 5.1 . Preparazione della soluzione Secondo la natura del campione preparare una soluzione come indicato in 5.1.1 , 5.1.2 . o 5.1.3 . Effettuare , per paragone , un saggio in bianco , esente di campione da analizzare . 5.1.1 . Campioni esenti da sostanze organiche Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo del campione ( non più di g 10 ) e non contenente più di g 3 di cloro sotto forma di cloruri ed introdurlo in un matraccio tarato da ml 500 con ml 400 di acqua a 20 * C circa . Mescolare per 30 minuti col miscelatore rotativo , portare a volume , mescolare e filtrate . 5.1.2 . Campioni contenenti materie organiche , ad eccezione dei prodotti riportati in 5.1.3 Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo di campione di circa g 5 ed introdurlo con un grammo di carbone attivo in un mattracio tarato da ml 500 . Aggiungere ml 400 di acqua a circa 20 * C ml 5 di soluzione di Carrez 1 ( 3.7 ) , agitare ed aggiungere ml 5 di soluzione di Carrez II ( 3.8 ) . Agitare per 30 minuti con l'agitatore rotativo , portare a volume , mescolare e filtrare . 5.1.3 . Alimenti cotti , panelli e farina di lino , prodotti ricchi di farina di lino ed altri prodotti ricchi di mucillaggini o di sostanze colloidali ( per esempio amido destrinizzato ) Preparate la soluzione come indicato in 5.1.2 ma senza filtrare . Dopo decantazione ( se necessario centrifugare ) prelevare ml 100 della parte superiore della soluzione e porli in un pallone tarato da ml 200 , mescolare con acetone ( 3.6 ) e portare a volume con acetone , agitare filtrare . 5.2 . Titolazione Porre in un Erlenmeyer , con la pipetta , da ml 25 a 100 del filtrato ( secondo il contenuto presunto in cloro ) ottenuto secondo 5.1.1 , 5.1.2 o 5.1.3 . La parte aliquota non deve contenere più di mg 150 di cloro ( CI ) . Diluire , se necessario , con acqua distillata fino ad almeno ml 50 , aggiungere ml 5 di acido nitrico ( 3.4 ) , ml 20 di soluzione di solfato doppio ferrico ammonico ( 3.3 ) e 2 gocce di soluzione di solfocianuro di ammonio ( 3.1 ) proveniente dalla buretta riempita a questo scopo fino al tratto zero . Far gocciolare in seguito da una buretta la soluzione di nitrato d'argento ( 3.2 ) fino ad averne un eccesso di ml 5 . Aggiungere ml 5 di etere dietilico ( 3.5 ) ed agitare fortemente per far coagulare il precipitato . Titolare l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di solfocianuro d'ammonio ( 3.1 ) fino a viraggio rosso-bruno , persistente per 1 minuto . 6 . Calcolo dei risultati La quantità di cloro ( p ) espresso in cloruro di sodio , presente nel volume del filtrato prevelato per la titolazione , è data dalla formula seguente : p = mg 5,845 ( V1 _ V2 ) nella quale V1 = ml di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N agguinti V2 = ml di soluzione di solfocianuro di ammonio 0,1 N utilizzati per la titolazione . Qualora il saggio in bianco indica un consumo di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N sottrare questo valore dal volume ( V1 _ V2 ) . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . La titolazione puo ugualmente essere fatta con il metodo potenziometrico ; 7.2 . Per i prodotti molto ricchi in sostanze grasse , procedere ad uno sgrassaggio preliminare con etere dietilico o etere di petrolio ; 7.3 . Per le farine di pesce , le titolazione puo essere effettuata con il metodo di Mohr . 5.1.1 . Campioni esenti da sostanze organiche Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo del campione ( non più di g 10 ) e non contenente più di g 3 cloro sotto forma di cloruri ed introdurlo in un matraccio tarato da ml 500 con ml 400 di acqua a 20 * C circa . Mescolare per 30 minuti col miscelatore rotativo , portare a volume , mescolare e filtrare . 5.1.2 . Campioni contenenti materie organiche , ad eccezione dei prodotti riportati in 5.1.3 Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo di campione di circa g 5 ed introdurlo con un grammo di carbone attivo in un matraccio tarato da ml 500 . Aggiungere ml 400 di acqua a circa 20 * C e ml 5 di soluzione di Carrez I ( 3.7 ) , agitare ed aggiungere ml 5 di soluzione di Carrez II ( 3.8 ) . Agitare per 30 minuti con l'agitatore rotativo , portare a volume , mescolare e filtrare . 5.1.3 . Alimenti cotti , panelli e farina di lino , prodotti ricchi di farina di lino ed altri prodotti ricchi di mucillaggini o di sostanze colloidali ( per esempio amido destrinizzato ) Preparate la soluzione come indicato in 5.1.2 ma senza filtrare . Dopo decantazione ( se necessario centrifugare ) prelevare ml 100 della parte superiore della soluzione e porli in un pallone tarato da ml 200 , mescolare con acetone ( 3.6 ) e portare a volume con acetone , agitare e filtrare . 5.2 . Titolazione Porre in un Erlenmeyer , con la pipetta , da ml 25 a 100 del filtrato ( secondo il contenuto presunto in cloro ) ottenuto secondo 5.1.1 , 5.1.2 o 5.1.3 . La parte aliquota non deve contenere più di mg 150 di cloro ( Cl ) . Diluire , se necessario , con acqua distillata fino ad almeno ml 50 , aggiungere ml 5 di acido nitrico ( 3.4 ) , ml 20 di soluzione di solfato doppio ferrico ammonico ( 3.3 ) e 2 gocce di soluzione di solfocianuro di ammonio ( 3.1 ) proveniente dalla buretta riempita a questo scopo fino al tratto zero . Far gocciolare in seguito da una buretta la soluzione di nitrato d'argento ( 3.2 ) fino ad averne un eccesso di ml 5 . Aggiungere ml 5 di etere dietilico ( 3.5 ) ed agitare fortemente per far coagulare il precipitato . Titolare l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di solfocianuro d'ammonio ( 3.1 ) fino e viraggio rosso-bruno , persistente per 1 minuto . 6 . Calcolo dei risultati La quantità di cloro ( p ) espresso in cloruro di sodio , presente nel volume del filtrato prelevato per la titolazione , è data dalla formula seguente : p = mg 5,845 ( V1 _ V2 ) nella quale V1 = ml di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N aggiunti V2 = ml di soluzione di solfocianuro di ammonio 0 , 1 N utilizzati per la titolazione . Qualora il saggio in bianco indica un consumo di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N sottrarre questo valore dal volume ( V1 _ V2 ) . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . La titolazione puo ugualmente essere fatta con il metodo potenziometrico ; 7.2 . Per i prodotti molto ricchi in " sostanze " grasse , procedere ad uno sgrassaggio preliminare con etere dietilico o etere di petrolio ; 7.3 . Per le farine di pesce , la titolazione puo essere effettuata con il metodo di Mohr . 8 . DETERMINAZIONE DELL'ESSENZA DI SENAPA 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il quantitativo di essenze di senapa , asportabili con il vapore d'acqua , essprese isotiocianato d'allile , dai panelli delle specie Brassica e Sinapis e dagli alimenti composti che le contengono . 2 . Principio In una soluzione acquosa dell'alimento , le essenze di senapa sono liberate per azione dei fermenti , trasportate per distillazione in presenza di etanolo e raccolte nell'ammoniaca diluita . La soluzione è trattata a caldo con un volume determinato in soluzione di nitrato d'argento , raffreddata e filtrata . L'eccesso di nitrato d'argento viene titolato con una soluzione di tiocianato d'ammonio . 3 . Reattivi 3.1 . Senapa bianca ( Sinapis alba ) 3.2 . Etanolo al 95 o 96 % ( v/v ) 3.3 . Emulsione antischiuma ( p.e . silicone ) 3.4 . Ammoniaca , d : 0 , 958 3.5 . Soluzione di nitrato d'argento 0 , 1 N 3.6 . Soluzione di tiocianato d'ammonio 0,1 N 3.7 . Acido nitrico , d : 1 , 40 3.8 . soluzione satura di solfato ferrico ammonico 4 . Apparecchiatura 4.1 . Pallone a fondo piatto , da ml 500 , a tappo smerigliato 4.2 . Apparecchio per distillazione con refrigerante e dispositivo che permette di evitare il trascinamento di goccioline . 5 . Modo di operare Pesare , con l'approssimazione di mg 1, g 10 di campione ed introdurli in un pallone di ml 500 a fondo piatto , aggiungendo g 2 di senapa bianca finemente macinata ( sorgente di fermento ) ( 3.1 ) e ml 200 d'acqua a 20 * C . Tappare il pallone e mantenerlo per circa 2 ore a 20 * C agitando frequentemente . Aggiungere ml 40 di etanolo ( 3.2 ) ed una goccia d'emulsione antischiuma ( 3.3 ) . Distillare circa ml 150 di liquido e raccogliere il distillato in un pallone tarato , da ml 250 , contenente ml 20 d'ammoniaca ( 3.4 ) facendo attenzione che l'estremità del refrigerante peschi nel liquido . Aggiungere alla soluzione ammoniacale ml 50 di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N ( 3.5 ) . Porre sul pallone tarato un piccolo imbuto e scaldare la miscela per 1 ora su un bagno d'acqua bollente . Lasciar raffreddare , portare al volume con acqua , mescolare e filtrate . Prelevare ml 100 del filtrato limpido , aggiungervi ml 5 d'acido nitrico ( 3.7 ) e ml 5 circa di soluzione di solfato ferrico ammonico ( 3.8 ) . Titolare di ritorno l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di tiocianato d'ammonio 0,1 N ( 3.6 ) . Effetuare un saggio in bianco , con lo stesso modo di operare , impiegando g 2 di senapa bianca finemente macinata e non aggiungendo il campione da analizzare . 6 . Calcolo dei risultati Sottrarre il volume di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N consumato nel saggio in bianco , da quello consumato per la soluzione del campione . Il valore cosi ottenuto dà il numero dei millilitri di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N consumati per l'essenza di senapa della quantità di campione posta in analisi . 1 ml di AgNO3 0,1 N corrisponde a mg 4,956 di icotiocianato d'allile . Esprimere il risultato in per cento del campione . 9 . DETERMINAZIONE DEL LATTOSIO 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto di lattosio negli alimenti che non contengono più di 0.5 % 2 . Principio Gli zuccheri sono sciolti nell'acqua . La soluzione è sottoposta alla fermentazione dal lievito Saccaromyces cerevisiae che lascia intatto il lattosio . Dopo chiarificazione e filtrazione il contenuto in lattosio del filtrato è determinato con il metodo di Luff-Schoorl . 3 . Reattivi 3.1 . Sospensione di Saccaromyces cerevisiae ; porre in sospensione g 25 di lievito fresco in ml 100 di acqua . La sospensione si conserva in frigorifero per una settimana al massimo . 3.2 . Soluzione di Carrez I ; sciogliere nell'acqua g 24 d'acetato di zinco Zn ( CH3COO )2 2 H2O e g 3 d'acido acetico glaciale . Portare a ml 100 con acqua . 3.3 . Soluzione di Carrez II : sciogliere nell'acqua g 10 , 6 di ferrocianuro di potassio K4 } Fe ( CN6 ) aa 3 H2O . Portare a ml 100 co acqua . 3.4 . Reattivo di Luff-Schoorl : Aggiungere , agitando sempre lentamente , la soluzione d'acido citrico ( 3.4.2 ) alla soluzione di carbonato di sodio ( 3.4.3 ) . Aggiungere quindi la soluzione di solfato di rame ( 3.4.1 ) e portare al volume di 1 1 con acqua . Lasciar riposare una notte e filtrare . Controllare la normalità del reattivo cosi ottenuto ( Cu 0 , 1 N ; Na2CO3 2N ) . Il pH della soluzione deve essere di circa 9 , 4 . 3.4.1 . Soluzione di solfato di rame : Sciogliere g 25 di solfato di rame p.a . , CuSO4 5H2O , esente da ferro , in ml 100 d'acqua . 3.4.2 . Soluzione d'acido citrico : Sciogliere g 50 d'acido citrico p.a . , C8H8O7 * H2O , in ml 50 d'acqua . 3.4.3 . Soluzione di carbonato di sodio : Sciogliere g 143 , 8 di carbonato di sodio anidro p.a . in circa ml 300 d'acqua calda . Lasciar raffreddare . 3.5 . Granelli di pietra pomice bolliti nell'acido cloridrico , lavati in acqua ed essiccati . 3.6 . Soluzione al 30 % ( p/v ) di ioduro di potassio 3.7 . Acido Solforico 6 N 3.8 . Soluzione di riosoltaro di sodio 0,1 N 3.9 . Soluzione d'amido : aggiungere una miscela di g 5 d'amido solubile in ml 30 d'acqua a 1 1 d'acqua bollente . Far bollire per 3 minuti , lasciar raffreddare , aggiungere eventualmente mg 10 di ioduro di mercurio , quale agente conservatore . 4 . Apparecchiatura Bagno d'acqua munito di termostato , regolato da 38 a 40 * C . 5 . Modo di operare Pesare , con l'approssimazione di mg 1, g 1 del campione ed introdurlo in un pallone tarato da ml 100 . Aggiungere ml 25 a 30 d'acqua . Porre il pallone per 30 min . in un bagno d'acqua bollente e raffreddare poi a circa 35 * C . Aggiungere ml 5 di sospensione di lievito ( 3.1 ) , mescolare . Lasciar riposare il pallone per 2 ore in un bagno d'acqua alla temperatura da 38 a 40 * C . Raffreddare quindi sino a circa 20 * C . Aggiungere ml 2,5 di soluzione di Carrez I ( 3.2 ) ed agitare per 30 sec . ; aggiungere poi ml 2,5 di soluzione di Carrez II ( 3.3 ) ed agitare nuovamente per 30 sec . Portare a ml 100 con acqua , mescolare e filtrate . Prelevare con la la pipetta un quantitativo di filtrato non eccedente ml 25 e contenente da mg 40 a 80 di lattosio . Se necessario completare a ml 25 con acqua ed introdurla in un matraccio di erlenmeyer da ml 300 . Procedere nello stesso modo ad un saggio in bianco con ml 5 di sospensione di lievito ( 3.1 ) . Determinare come segue il contenuto di lattosio secondo Luff-Schoorl . Aggiungere esattamente ml 25 del reattivo di Luff-Schoorl ( 3.4 ) e due granelli di pietra pomice ( 3.5 ) . Riscaldare agitando a mano su una fiamma libera di media altezza e portare il liquido all'ebollizione in circa 2 min . Porre immediatamente l'erlenmeyer su una tela metalica , provvista di uno schermo di amianto munito di un foro del diametro di circa cm 6 , sulla guale è stata preventivamente accesa una fiamma . Questa è regolata in modo tale che soltanto il fondo dell'erlenmeyer venga riscaldato . Adattare sull'erlenmeyer un refrigerante a riflusso . A decorrere da tale momento far bollire per 10 minuti esatti . Raffreddare immediatamente in acqua fredda e dopo circa 5 min . titolare nel seguente modo : Aggiungere ml 10 di soluzione di ioduro di potassio ( 3.6 ) e , subito dopo , con molta attenzione ( a causa del rischio della formazione si abbondante schiuma ) , ml 25 di acido solforico 6 N ( 3.7 ) . Titolare quindi con la soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N ( 3.8 ) sino all'apparire di una colorazione giallo opaco , aggiungere l'indicatore all'amido ( 3.9 ) e terminare la titolazione . Effettuare la stessa titolazione su di una mescolanza , esattamente misurata , di ml 25 di reattivo di Luff-Schoorl ( 3.4 ) e ml 25 d'acqua dopo aver aggiunto ml 10 di soluzione di ioduro di potassion ( 3.6 ) e ml 25 d'acido solforico 6 N ( 3.7 ) senza portare all'ebollizione . 6 . Calcolo dei risultati Stabilire , a mezzo della tabella allegata , la quantità di lattosio in mg corrispondente alla differenza dei risultati delle due titolazioni , espressi in ml di tiosolfato di sodio 0,1 N . Esprimere il risultato in per cento delle parti di lattosio anidro del campione . 7 . Osservazione Per i prodotti contenenti più del 40 % di zuccheri fermentescibili , utilizzare più di ml 5 di sospensione di lievito ( 3.1 ) . Tabella per ml 25 del reattivo dopo Luff-Schoorl ml di 0,1 N Na2S2O3 a 2 minuti di riscaldamento , 10 minuti di ebollizione 0,1 N * Glucosio , fruttosio , * Lattosio * Maltosio * 0,1 N Na2S203 * zuccheri invertiti * C12H22O11 * C12H22O11 * Na2S2O3 * C6H12O6 * * * ml * mg * differenza * mg * differenza * mg * differenza * ml 1 * 2,4 * 2,4 * 3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 23 * 62,2 * 3,1 * 88,0 * * 94,6 * * 23 10 . DETERMINAZIONE DEL POTASSIO 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto di potassio degli alimenti per gli animali . 2 . Principio Il campione è incenerito e le ceneri sono portate in soluzione nell'acido cloridrico . Il contenuto di potassio della soluzione è determinato con la fotometria di fiamma , in presenza di cloruro di cesio e di nitrato di alluminio . L'aggiunta di tali sostanze elimina , in gran parte , l'effetto degli elementi perturbatori . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico p.a . , d : 1,12 3.2 . Cloruro di cesio p.a . 3.3 . Nitrato d'alluminio Al ( NO3 )3 9H2O , chimicamente puro 3.4 . Cloruro di potassio p.a . , anidro 3.5 . Soluzione tampone : sciogliere nell'acqua g 50 di cloruro di cesio ( 3.2 ) e g 250 di nitrato d'alluminio ( 3.3 ) , portare ad 1 I con acqua e mescolare . Conservare in bottiglie di materia plastica . 3.6 . Soluzione campione di potassio : sciogliere in acqua g 1,907 di cloruro di potassio ( 3.4 ) aggiungendovi ml 5 d'acido cloridrico ( 3.1 ) , portare ad 1 I con acqua e mescolare . Conservare in bottiglie di materia plastica . ml 1 di questa soluzione contiene mg 1,00 di potassio . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Crogioli da incenerimento in platino , quarzo o porcellana , eventualmente muniti di coperchi 4.2 . Fono elettrico a muffola , munito di termostato 4.3 . Fotometro a fiamma . 5 . Modo di operare 5.1 . Analisi del campione Pesare , generalmente , g 10 di campione , con l'approssimazione di mg 10 , in un crogiolo da incenerimento ed incenerire la sostanza a 450 * C per circa 3 ore . Dopo raffreddamento , trasportare quantitativamente il residuo dell'incenerimento mediante ml 250 a 300 di acqua , poi con ml 50 d'acido cloridrico ( 3.1 ) in un pallone tarato da ml 500 . Dopo la cessazione della eventuale liberazione di anidride carbonica , riscaldare la soluzione a una temperatura vicina a 90 * C e mantenervela per 2 ore mescolando di tanto in tanto . Lasciar raffreddare a temperatura ambiente , portare al segno con acqua , agitare e filtrare . Introdurre in un pallone tarato da ml 100 una parte aliquota del filtrato , contenente al massimo mg 1,0 di potassio , paggiungere ml 10 di soluzione tampone ( 3.5 ) , portare al volume con acqua e mescolare . In presenza di più forti quantitativi di potassio , diluire la soluzione da analizzare in proporzione adeguata prima dell'aggiunta della soluzione tampone . La tabella che segue viene data a titolo indicativo per una quantità di g 10 circa di sostanza posta in analisi . Contenuto presunto di potassio * * Parte aliquota , in ml , della ( % k ) col campione * Fattore di diluizione * soluzione sino a 0,1 * _ * 50 da 0,1 a 0,5 * _ * 10 da 0,5 a 1,0 * _ * 5 da 1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 da 5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 da 10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 Effettuare la misura , con fotometro a fiamma , alla lunghezza d'onda di nm 768 . 768 . Calcolare il risultato mediante la curva di taratura . 5.2 . Curva di taratura Introdurre ml 10 esatti della soluzione campione ( 3.6 ) in un pallone tarato da ml 250 , portare al volume con acqua e mescolare . Introdurre , in palloni tarati da ml 100 , rispettivamente ml 5 , 10 , 15 , 20 e 25 di tale soluzione , esattamente misurati , corrispondenti a quantitativi di potassio di mg 0,2 , 0,4 , 0,6 , 0,8 e 1,0 . Completare la serie con un pallone testimone nel quale non si pone la soluzione campione . Aggiungere ad ogni pallone ml 10,0 di soluzione tampone ( 3.5 ) , portare al volume con acqua e mescolare . Effettuare le misure come indicato in 5.1 . Il tracciato della curva di taratura è , in genere , lineare sino ad una concentrazione di potassio di mg 1 in ml 100 di soluzione . 6 . Calcolo dei risultati Esprimere i risultati in per cento del campione . 7 . Osservazione L'aggiunta della soluzione tampone ( 3.5 ) , per eliminare l'interferenza di elementi perturbatori , non è sempre necessaria . 11 . DETERMINAZIONE DEL SODIO 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto di sodio degli alimenti per gli animali . 2 . Principio Il campione è incenerito e le ceneri sono portate in soluzione nell'acido cloridrico . Il contenuto in sodio della soluzione è determinato con la fotometria di fiamma in presenza di cloruro di cesio e di nitrato di alluminio . L'aggiunta di queste due ultime sostanze elimina , in gran parte , l'interferenza degli elementi perturbatori . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico p.a . , d : 1,12 3.2 . Cloruro di cesio , p.a . 3.3 . Nitrato d'alluminio Al ( NO3 )3 9 H2O , chimicamente puro 3.4 . Cloruro di sodio p.a . , anidro 3.5 . Solizione tampone : sciogliere nell'acqua g 50 di cloruro di cesio ( 3.2 ) e g 250 di nitrato d'alluminio ( 3.3 ) , portare ad 1 I con acqua e mescolare , conservare in bottiglie di materia plastica . 3.6 . Soluzione campione di sodio : sciogliere in acqua g 2,542 di cloruro di sodio ( 3.4 ) , aggiungendovi ml 5 di acido cloridrico ( 3.1 ) , portare ad 1 I con acqua e mescolare ; consevare in bottiglie di materia plastica . ml 1 di questa soluzione contiene mg 1,00 di sodio . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Crogiolo da incenerimento in platino , quarzo o porcellana , eventualmente muniti di coperchi 4.2 . Forno elettrico a muffola , munito di termostato 4.3 . Fotometro a fiamma . 5 . Modo di operare 5.1 . Analisi del campione Pesare , generalmente , g 10 di campione , con l'approssimazione di mg 10 , in un crogiolo da incenerimento ed incenerire la sostanza a 450 * C per circa 3 ore . Evitare che la sostanza s'infiammi . Dopo raffreddamento trasferire quantitativamente il residuo dell'incenerimento , mediante ml 250 a 300 di acqua , poi con ml 50 d'acido cloridrico ( 3.1 ) , in un pallone tarato da ml 500 . Dopo la cessazione della eventuale liberazione di anidride carbonica , riscaldare la soluzione a una temperatura vicina a 90 * C e mantenervela per 2 ore mescolando di tanto in tanto . Lasciar raffreddare a temperatura ambiente , portare al volume con acqua , agitare e filtrate . Introdurre in un pallone tarato da ml 100 , una parte aliquota del filtrato contenente al massimo mg 1,0 di sodio , aggiungere ml 10,0 di soluzione tampone ( 3.5 ) , portare al volume con acqua e mescolare . diluire la soluzione da analizzare in proporzioni adeguate , prima dell'aggiunta della soluzione tampone . La tabella che segue viene data a titolo indicativo per una quantità di g 10 circa di sostanza posta analisi . Contenuto presunto di sodio * Parte aliquota , in ml , della ( % Na ) nei campione * Fattore di diluizione * soluzione sino a 0,1 * _ * 50 da 0,1 a 0,5 * _ * 10 da 0,5 a 1,0 * _ * 5 da 1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 da 5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 da 10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 Effettuate la misura , con fotometro di fiamma , alla lunghezza d'onda di 589 nm . Calcolare il risultato mediante la curva di taratura . 5.2 . Curva di taratura Introdurre ml 10 , esatti , della soluzione campione ( 3.6 ) , in un pallone tarato da ml 250 , portare al volume con acqua e mescolare . Introdurre , in palloni tarati da ml 100 , rispettivamente ml 5 , 10 , 15 , 20 e 25 di tale soluzione , esattamente misurati corrispondenti a quantitativi di sodio di 0,2 , 0,4 , 0,6 , 0,8 , ed 1,0 mg . Completare la serie con un pallone testimone nel quale non si pone la soluzione campione . Aggiungere ad ogni pallone ml , 10,0 di soluzione tampone ( 3,5 ) , portare al volume con acqua e mescolare . Effettuare le misure come indicato in 5.1 . Il tracciato della curva di taratura è , in genere , lineare sino a una concentrazione di sodio di mg 1 in ml 100 di soluzione . 6 . Calcolo dei risultati Esprimere i risultati in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . Per i prodotti il cui contenuto di sodio e superiore al 4 % , e preferibile incenerire la sostanza per 2 ore in un crogiolo munito di coperchio . Dopo raffreddamento aggiungere acqua , porre il residuo il residuo in sospensione mediante un filo di platino , essiccare ed incenerire nuovamente per 2 ore in un crogiolo munito di coperchio . 7.2 . Se il campione è costituito soltanto di sostanze minerali , eseguire la sua dissoluzione senza preventiva incenerazione . 12 . DETERMINAZIONE DEGLI ZUCCHERI 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto in zuccheri riduttori ed in zuccheri totali dopo inversione , espressi in glucosio e se del caso , in saccarosio per conversione , mediante il fattore 0,95 . Il metodo è applicabile principalmente agli alimenti composti . Particolari modalità sono previste per altri alimenti . All'occorrenza si doserà separatamente il lattosio e se ne terrà conto nel calcolo dei risultati . 2 . Principio Gli zuccheri presenti vengono disciolti nell etanolo diluito ; la soluzione viene chiarificata con i reattivi di Carrez I e II . Dopo l'eliminazione dell'etanolo , le determinazioni sono effettuate , prima e dopo l'inversione , secondo il metodo Luff-Schoorl . 3 . Reattivi 3.1 . Etanolo al 40 % ( v/v ) , d : 0,948 a 20 * C , neutralizzato alla fenolftaleina 3.2 . Soluzione di Carrez I : sciogliere nell'acqua g 24 d'acetato di zinco Zn ( CH3COO )2 . 2 H2O e g 3 d'acido acetico glaciale . Portare a 100 ml con acqua 3.3 . Soluzione di Carrez II : Sciogliere nell'acqua g 10,6 di ferrocianuro di potassio K4 ( Fe ( CN ) 6 ) . 3H20 . Portare a 100 ml con acqua . 3.4 . Soluzione alla 0,1 % ( p/v ) di metilarancio 3.5 . Acido cloridrico 4 N 3.6 . Acido cloridrico 0,1 N 3.7 . Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N 3.8 . Reattivo di Luff-Schoorl : Aggiungere , agitando sempre lentamente , la soluzione d'acido citrico ( 3.8.2 ) alla soluzione di carbonato di sodio ( 3.8.3 ) . Aggiungere quindi la soluzione di solfato di rame ( 3.8.1 ) e portare al volume di 1 l con acqua . Lasciar riposare una notte e filtrare . Controllare la normalità del reattivo cosi ottenuto ( Cu 0,1 N ; Na2 CO3 2N ) . Il pH della soluzione deve essere di circa 9,4 . 3.8.1 . Soluzione di solfato di rame : sciogliere g 25 di solfato di rame p.a . , CuSO4 . 5H2O , esente da ferro , in ml 100 d'acqua . 3.8.2 . Soluzione d'acido citrico : sciogliere g 50 d'acido citrico p.a . , C6H8O7 . H2O , in ml 50 d'acqua . 3.8.3 . Soluzione di carbonato di sodio : sciogliere g 143,8 di carbonato di sodio anidro p.a . in circa ml 300 d'acqua calda . Lasciar raffreddare . 3.9 . Soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N 3.10 . Soluzione d'amido : Aggiungere una miscela di g 5 d'amido solubile in ml 30 d'acqua a 1 l d'acqua bollente . Far bollire per minuti 3 , lasciar raffreddare , aggiungere eventualmente mg 10 di ioduro di mercurio , quale agente conservatore 3.11 . Acido solforico 6 N 3.12 . Soluzione di ioduro di potassio al 30 % ( p/v ) 3.13 . Granelli di pietra pomice bolliti nell'acido cloridrico , lavati in acqua ed essiccati 3.14 . Isopentanolo . 4 . Apprecchiatura Mescolatore rotativo a capovolgimento : circa 35 a 40 giri al minuto . 5 . Modo di operare 5.1 . Preparazione della sol izione Introdurre g 2,5 di sostanza , pesata con l'approssimazione del mg , in un pallone tarato da ml 250 . Aggiungere ml 200 di etanolo ( 3.1 ) e far girare il pallone per 1 ora nell'apparecchio rotativo . Aggiungere ml 5 di soluzione Carrez I ( 3.2 ) ed agitare per un minuto . Aggiungere in seguito ml 5 di soluzione Carrez II ( 3.3 ) ed agitare di nuovo per un minuto . Portare a volume con etanolo ( 3.1 ) , omogeneizzare e filtrare . Prelevare ml 200 del filtrato ed evaporare circa la metà del volume iniziale allo scopo di eliminare la maggior quantità di etanolo . Trasportare quantitativamente , mediante acqua calda , tutto il residuo della evaporazione in un pallone tarato da ml 200 , raffreddare , portare a volume con acqua distillata , omogeneizzare e filtrare , se necessario . Questa soluzione sarà utilizzata per la determinazione degli zuccheri riduttori , e , dopo inversione , per il dosaggio degli zuccheri totali . Gazzetta ufficiale delle Comunità europee 5.2 . Determinazione degli zuccheri riduttori Pipettate una quantita di soluzione non superiore a ml 25 e contenente meno di mg 60 di zuccheri riduttori , espressi glucosio . Se necessarie , completare at volume di al 25 con acqua distillata e determinare il contenuto in zuccheri riduttori secondo Luff-Schoorl . Esprimere il resultato in glucosio per cento . 5.3 . Determinazzione degli zuccheri totali dopo inversione Pipettare ml 50 della soluzione e porli in un pallone tarato da ml 100 . Aggriungere qualche goccia di soluzione di metilarancio ( 3.4 ) , poi , con molta attenziore , e sempre agitando , aggiungere acido cloridrico 4 N ( 3.5 ) fino ad ottenere un viraggio nettamente rosso . Aggiungere ml 15 di acido cloridirco 0.1 N ( 3.6 ) , Mantere il pallone per 30 minuti in un bagnomaria a forte ebollizione . Raffreddare rapidamente alla temperatura di cirza 20 * C ed aggiungere ml 15 di soluzione di edrossido di sodio 0.1 N ( 3.7 ) . Portare al volume di al 100 con acqua distillata ed omogeneizzare . Prelevare una quantità non superiore a ml 25 e contenente meno di mg 60 di zuccheri riduttori espressi in glucosio . Se necessario , completare con acqua distillata al volume di ml 25 e determinare il contenuto in zuccheri riduttori secondo Luff-Schoorl . Esprimere il risultato in per cento di glucosio , o se del caso , di saccrosio moltiplicando per il fattore 0, 95 . 5.4 . Titolazione secondo Luff-Schoorl Pipettare ml 25 del reattivo di Luff-Schoorl ( 3.8 ) e portarlo in un pallone di erlenmeyer da ml 300 ; aggiungere ml 25 , esattamente misurati , della soluzione zuccherina chiarificata . Dopo aver aggiunto due granuli di pietra pomice ( 3.13 ) riscaldare , agitando a mano , su fiamma libera di altezza media e portare il liquido all'ebollizione in circa 2 minuti . Portare immediatamente l'erlenmeyer su una tela metallica , provista di uno schermo d'amianto munito di un foro del diametro di circa cm 6 , sulla quale è stata preventivamente accesa una fiamma . Questa è regolata in modo tale che soltanto il fondo dell'erlenmeyer venga riscaldato . Adattare sull'erlenmeyer un refrigerante a riflusso . A decorrere da tale momento far bollire per 10 minuti esatti . Raffreddare immediatamente in acqua fredda e dopo circa 5 minuti titolare nel sequente modo : aggiungere ml 10 di soluzione di ioduro di potassio ( 3.12 ) e , subito dopo , con molta attenzione ( a causa del rischio della formazione di schiuma abbondante ) ml 25 di'acido solforico 6 N ( 3.11 ) . Titolare quindi con la soluzione di tiosolfato di sodio 0.1 N ( 3.9 ) sino all'apparire di una colorazione giallo opaco , aggiungere l'indicatore all'amido ( 3.10 ) e terminare la titolazione . Effettuare la stessa titolazione su di una mescolanza esattamente misurata di ml 25 di reattivo di Luff-Schoore ( 3.8 ) e ml 25 d'acqua , dopo aver aggiunto ml 10 di soluzione di ioduro di potossio ( 3.12 ) e ml 25 d'acido solforico 6N ( 3.11 ) senza portare all'ebollizione . 6 Calcolo dei risultati Stabilire , a mezzo della tabella , la quantità in mg di glucosio corrispondente alla diffrenza dei risultati delle due titolazioni espresse in ml di tiosolfato di sodio 0.1 N . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Modi di operare per casi particolari 7.1 . Per gli alimenti molto ricchi in melasso e altri alimenti poco omogenci , pesare introdurli in un pallone tarato da 1 1 con ml 500 di aqua . Far girare nell'apparecchio rotativo per un'ora . Chiarificare con i reattis di carrez I ( 3.2 ) e * ( 3.3 ) come descritto in 5.1 utilizzando , tuttavia , una quantita voite più elevat . . di ciascun reattivo . Portare volume con alcool all'80 % ( V/V ) . Omogeneizzare e filtrare . In questo caso convience eliminare l'alcool come descritto in 5.1 . In caso di assenza d'amido destrinizzato , portare a volume con acqua distillata . 7.2 . Per i melassi e per gli alimenti semplici , ricchi in zuccheri e praticamente essenti di amido ( carrube , fettucce essiccate di barbabietole ecc . ) , pesare g 5 , introdurli in un pallone tarato da ml 50 , aggiungere ml 200 di acqua distillata e far girare nell'apparecchio rotativo , per un'ora o più , se necessario . Chiarificare con i reattivi di Carrez I ( 3.2 ) e II ( 3.3 ) , come descritto al punto 5.13 . Portare a volume con acqua , omogeneizzare e filtrare . Per la determinazione degli zucchere totali , contiuare come descritto al punto 5.3 . 8 . Osservazioni 8.1 . E consiggliabile aggiungere circa ml 1 di isopentanolo ( 3.14 ) ( senza tener conto del volume ) , prima dell'ebollizione con il reattivo Luff-Schoorl , per evitare la produzione di schiuma . 8.2 . La differenza tra il per cento di zuccheri totali dopo inversione , espressi in glucosio , ed il per cento di zuccheri riduttori espressi in glucosio , moltiplicata per 0,95 , dà il contenuto percentuale di saccarosio . 8.3 . Per determinare il contenuto di zuccheri riduttori , ad esclusione del lattosio , possono essere addotate due vie : 8.3.1 . Per un calcolo approssimativo si moltiplica per 0,675 il contenuto di lattosio stabilito con una determinazione separata e detrarre il risultato ottenuto dalla percentuale di zuccheri riduttori . 8.3.2 . Per un calcolo preciso degli zuccheri riduttori , fatta eccezione del lattosio , è necessario partire dalla medesima quantità pesata per le due determinazioni finali . Un'analisi è effetuata con una piccola parte della soluzione ettenuata in 5.1 , l'altra è effetuata su una parte di soluzione ottenuta durante la determinazione del lattosio , secondo il metodo appropriato ( dopo fermentazione degli altri zuccheri e chjarificazione ) . Nei due casi , la quantita di zucchero presente è determinata secondo il metodo Luff-Schoorl e calcolata in milligrammi di glucosio . I due valori sono detratti uno dall'atro e la differenza viene espressa in percento del campione . Esempio Le due quantità pipettate corrispondono , per ciascuna analisi , a una quantità di mg 250 del campione . Nel primo caso si consumano ml 17 di una soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N , correspondenti a mg 44,2 di glucosio ; nel secondo caso si consumano ml 11 corrispondenti a mg 27,6 di glucosio . La differenza è pari a mg 16,6 di glucosio . Il contenuto in zuccheri riduttori ( eccettuato il lattosio ) , calcolato in glucosio , e percio di : 4 x 16,6/10 = 6.64 % Tabella dei valori per ml 25 del reattivo dopo Luff-Schoorl tal di Na2S2O30 , 1 N a minuti di riscaldamento , 10 minuti di ebollizione Na2S2O3 * Glucosio , fruttosio * Lattosio * Maltosio * Na2S9O3 0 , 1 N * zuccherri invertiti * C12H22O11 * C12H22O11 * ) O , 1 N C6H12O6 ml * mg * differenza * mg differnza * mg * differenza * ml 1 * 2,4 * 2,4 * 3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 * 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 23 * 62,2 * * 88,0 * * 94,6 * * 23 13 . DETERMINAZIONE DELLA TEOBROMINA 1 . Scopo e campo di applicazione ll metodo permette la determinazione del contenuto in teobromina ne sottoprodotti provenienti dalla trasformazione delle fave di cacao . 2 . Principio La teobromina è estratta con il cloroformio . L'estratto viene evaporato a secco quindi viene posto in soluzione nell'acqua e trattato con un volume determinato di soluzione di nitrato d'argento . L'acido nitrico liberato è titolato con una soluzione di idrossido di sodio . 3 . Reattivi 3.1 . Cloroformio p.a . 3.2 . Ammoniaca , d : 0,958 3.3 . Solfato di sodio anidro p.a . 3.4 . Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N 3.5 . Soluzione di nitrato d'argento 0,1 N 3.6 . Soluzione all'1 % ( p/v ) di rosso di fenolo in etanolo 3.7 . Etere dietilico . 4 . Apparecchiatura Palloni a fonco piatto da ml 500 , tappo smerigliato . 5 . Modo di operare Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , una quantità di campione di g 10 al massimo , non contenente più di mg 80 di teobromina . Introdurla in un pallone da ml 500 a fondo piatto ed a tappo smerigliato , aggiungero ml 270 di cloroformio ( 3.1 ) e ml 10 di ammoniaca ( 3.2 ) . Chiudere il pallone ed agitare energicamente per 5 minuti . Aggiungere g 12 di solfato di sodio anidro ( 3.3 ) , agitare nuovamente e lasciare in riposo sino all'indomani . Filtrate in un erlenmeyer da ml 500 e lavare il residuo con ml 100 di cloroformio ( 3.1 ) . Far evaporare il solvente per distillazione , eliminandone le ultime tracce su un bagno di acqua bollente . Aggiungere al residuo ml 50 di acqua e portare all'ebollizione . Dopo raffreddamento neutralizzare esattamente con soluzione d'idrossido di sodio ( 3.4 ) in presenza di ml 0,5 di soluzione di rosso di fenolo ( 3.6 ) . Aggiungere 20 ml di soluzione di nitrato d'argento ( 3.5 ) . Titolare l'acido nitrico liberato con la soluzione di idrossido di sodio ( 3.4 ) sino a viraggio dell'indicatore ( pH 7,4 ) . 6 . Calcolo dei risultati ml 1 di NaOH 0,1 N corrisponde a mg 18 di teobromina . Esprimere il risultato in percento del campione . 7 . Osservazione Il prodotto il cui contenuto in sostanze grasse gregge sorpassa 1'8 % , deve essere preventivamente sgrassato a freddo con un'estrazione , della durata di 6 ore , effettuata con etere di petrolio ( Eb . 40 * C ) . 14 DETERMINAZIONE DELL'UREA 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto di urea-negli alimenti per gli ammali 2 . Principio Il campione è messo in sospensione nell'acqua in presenza di un chiarificante La sospensione viene filtrata . Il contenuto di urea del filtrato è determinato , dopo aggiunta di 4-dimetilamminobenzaldeide ( 4-DMAB ) , misurando la densita ottica alla lunchezza d'onda di 420 nm . 3 . Reattivi 3.1 . Soluzione di 4-dimetilamminobenzaldeide : scioliere g 1,6 di 4-DMAR in ml 100 di etanolo p.a . al 96 % ed aggiungere ml 10 di acido e'oridrico p.a . ( D : 1,19 ) . Questo reattivo si conserva soltanto per due settimane . 3.2 . Soluzione di Carrez 1 : sciogliere nell'acqua g 24 di acetato di zinco . Zn ( CH2COO ) 2 2H2O e.g . 3 di acido acetico glaciale . Portare a ml 100 con acqua . 3.3 . Soluzione di Carrez II : sciogliere nell'acqua g 10,6 di ferrocianuro di potassio K4 ( Fe ( CN ) 6 ) 3 H2O . Portare a ml 100 con acqua . 3.4 . Carbone attivo p.a . non assorbente urea eseguire un controllo . 3.5 . Soluzione allo 0.1 % ( p/v ) d'urea p.a . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Agitatore rotativo a capovolgimento , circa 35 a 40 giri per minuto 4.2 . Tubi da saggio di mm 160 16 , a tappo smerigliato 4.3 . Spettrofotometro . 5 . Modo di operare 5.1 . Analisi del campione Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , g 2 di campione ed introdurli , con g 1 di carbone attivo ( 3.4 ) , in un matraccio tarato da ml 500 , con ml 400 di acqua e ml 5 di ciascuna delle soluzioni di Carrez I e II ( 3.2 ) e ( 3.3 ) . Mescolare per mezz'ora mediante l'agitatore rotativo a capovolgimento . Portare al volume con acqua , agitare e filtrare . Prelevare ml 5 del filtrato limpido ed incolore e del filtrato della prova in bianco e porli nei tubi da saggio con tappo smerigliato , aggiungere ml 5 di soluzione di 4-DMAB ( 3.1 ) e mescolare . Porre i tubi in un bagno d'acqua a 20 * C . Dopo 15 minuti , misurare l'estinzione della soluzione del campione allo spettrofotomentro a 420 nm rispetto alla prova in bianco dei reattivi . 5.2 . Curva di taratura Prelevare volumi di ml 1 , 2 , 4 , 5 e 10 della soluzione di urea ( 3.5 ) ed introdurli in palloni tarati da ml 100 , portando al volume con acqua . Prelevare ml 5 di ciascuna soluzione aggiungendovi , rispettivamente , ml 5 di soluzione di 4-DMAB ( 3.1 ) , mescolare e misurare l'estinzione , come avanti indicato , rispetto ad una soluzione testimone contenente 5 ml di 4-DMAB e 5 ml d'acqua , esente da urea . Tracciare la curva di taratura . 6 . Calcolo dei risultati Determinare la quantità d'urea , nella parte di campione sottoposta all'analisi , riferendosi alla curva di taratura . Esprimere il risultato in per cento del campione . 7 . Osservazioni 7.1 . Per contenuti di urea superiori al 3 % ridurre la quantità di campione da sottoporre all'analisi a g 1 , per non avere più di mg 50 d'urea in ml 500 . 7.2 . Per piccoli contenuti di urea , aumentare la quantità di campione da sottoporre all'analisi , compatibilmente con l'ottenimento di un filtrato limpido ed incolore . 7.3 . Quando il prodotto contiene composti azotati semplici ed in particolare modo amminoacidi , è consigleabile eseguire la misurazione dell'estinzione a 435 nm . 15 . DETERMINAZIONE DEGLI ALCALOIDI DEI LUPINI 1 . Scopo e campo di applicazione Il metodo permette di determinare il contenuto in alcaloidi dei semi di lupini . 2 . Principio Gli alcaloidi sono sciolti in una mescolanza di etere dietilico e di cloroformio ed estratti con una soluzione di acido cloridrico . Gli alcaloidi sono precipitati con l'acido silico tungstico , il precipitato e incenerito ed il residuo viene pesato . 3 . Reattivi 3.1 . Etere dietilico 3.2 . Cloroformio 3.3 . Soluzione d'idrossido di sodio 4 N 3.4 . Acido cloridrico 0,3 N 3.5 . Cloruro di sodio p.a . 3.6 . Soluzione al 10 % ( p/v ) d'acido silico-tungstico , SIO2 DWO3 26 H2O . 4 . Apparecch atura 4.1 . Agitatore meccanico 4.2 . Crogioli da incenerimento in platino , quarzo o porcellana 4.3 . Forno elettrico a muffola . 5 . Modo di operare Pesare , con l'approssimazione di mg 5 , g 15 di campione ed introdurlo in un imbuto separatore da ml 200 circa , provisto di tappo smerigliato ( per es . imbuto separatore ) . Aggiungere ml 100 di etere dietilico ( 3.1 ) e ml 50 di cloroformio ( 3.2 ) esattamente misurati e , mediante buretta graduata , ml 10 di soluzione d'idrossido di sodio ( 3.3 ) . Agitare vigorosamente per evitare la formazione di grumi . Dibattere ancora a diverse ripresa e lasciare riposare sino all'indomani . Se il liquido dello strato etere-cloroformio , Reccogliere ml 50 del filtraro in un pallone tarato da ml 50 e travasare , quantitativamente , in un imbuto separatore da ml 150 , mediante ml 50 di etere dietilico ( 3.1 ) . Estrarre 3 volte , successivamente , con ml 20 d'acido cloridrico ( 3.4 ) , lasciar decantare e raccogliere l'estratto acido dopo ciascuna estrazione . Reunire gli estratti acidi in un becher da ml 250 . Elimenare le'ultime tracce d'etere e di cloroformio riscaldando leggermente . Aggiungere circa g 1 di cloruro di sodio ( 3.5 ) , lasciar raffreddare e precipitare gli alcaloidi con la soluzione d'acido silico-tungstico ( 3.6 ) . Agitare con l'agitatore meccanico per 30 min . lasciare riposare una notte , filtrare su filtro senza ceneri e lavare il precipitato successivamente , per 2 volte con ml 10 e 2 volte con ml 5 d'acido cloridrico ( 3.4 ) . Porre il filro , contenente il precipitato , in un crogiolo da incenerimento ed incenerire a 900 * C . Lasciar raffreddare e pesare . 6 . Calcolo dei risultati Il quantitativo di alcaloidi della quantità di sostanza analizzata si ottiene moltiplicando il peso delle ceneri per il fattore 0,2 . Esprimere il risultato in per cento del campione . 16 . DETERMINAZIONE DELL'ATTIVITA UREASICA DEI PRODOTTI DERIVATI DALLA SOIA 1 . Scopo e campo di applicazione Il saggio permette di determinare l'attivita ureasica dei prodotti derivati dalla soia e di mettere in evidenza l'insufficiente cottura di tali prodotti . 2 . Principio L'attività ureasica è determinata dalla quantità di azoto ammoniacale liberata in un minuto da g 1 di prodotto , a 30 * C , partendo da una soluzione di urea . 3 . Reattivi 3.1 . Acido cloridrico 0,1 N 3.2 . Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N 3.3 . Soluzione tampone di fosfati 0,05 M contenente in ml 1000 , g 4,45 di fosfato disodico ( Na2 HPO4 . 2H2O ) e g 3,40 di fosfato monopotassico ( KH2 PO4 ) . 3.4 . Soluzione tamponata d'urea , di recente preparazione , contenente g 30 d'urea in ml 1000 di soluzione tampone ( 3.3 ) ; pH 6,0 _ 7,0 . 4 . Apparecchiatura 4.1 . Apparecchio per la titolazione potenziometrica o pH-metro molto sensibili 0,02 pH ) , con agitatore magnetico 4.2 . Bagno d'acqua munito di termostato , regolato a * C esattamente 4.3 . Tubi da saggio delle misure di mm 150.18 , a tappo smerigliato . 5 . Modo di operare Macinare ( per esempio in un macinacaffè ) g 10 circa del campione in modo che passi in un setaccio a maglie di mm 0,2 . In un tubo da saggio a tappo smerigliato , pesare , con l'approssimazione di circa mg 1 , g 0,2 del campione macinato ed aggiungere ml 10 di soluzione tamponata d'urea ( 3.4 ) . Chiudere immediatamente il tubo ed agitare vigorosamente . Porre il tubo in un bagno d'acqua , regolato esattamente a 30 * C e lasciarvelo per 30 minuti esatti . Subito dopo aggiungere ml 10 d'acido cloridrico 0,1 N ( 3.1 ) , raffreddare rapidamente a 20 * C e trasfirire quantitativamente il contenuto del tubo in un recipiente per la titolazione , ripulendo il tubo in due riprese con ml 5 di acqua . Titolare immediatamente e rapidamente con la soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N ( 3.2 ) , con il pH-metro munito di un elettrodo di vetro , sino al pH 4,7 . Effettuare un saggio in bianco operando come segue : Introdurre rapidamente e successivamente in un tubo da saggio a tappo smerigliato , un quantitativo di campione di g 0,2 , pesati con l'approssimazione di mg 1 , ml 10 d'acido cloridrico 0,1 N ( 3.1 ) e ml 10 di soluzione tamponata d'urea ( 3.4 ) . Raffreddare immediatamente il tubo in acqua ghiacciata e lasciarvelo per minuti . Trasferire poi quantitativamente , con le stesse norme avanti riportate , il contenuto del tubo in un recipiente per le titolazione e titolare con la soluzione di indrossido di sodio 0,1 N ( 3.2 ) sino a pH 4,7 . 6 . Calcolo dei risultati L'attivita ureasica è data della formula ; mg N 1,4 ( b _ a ) a 30 * C = g min . 30 . E nella quale a = ml di soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N consumata nell'analisi b = ml di soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N consumata nella prova in bianco E = quantità in grammi del campione sottoposta all'analisi . 7 . Osservazioni 7.1 . Il metodo è applicabile per un'attività ureasica che puo raggiungere al massimo mg 1 di N/g min . a 30 * C . prodotti più attivi la quantità di campione da sottoporre all'analisi puo essere ridotto sino as mg 50 . 7.2 . I prodotti il cui contenturo in sostanza grasse sorpassa il 10 % dovranno preventivamente essere sgrassati a freddo .