ALLEGATO III

Campionamento e prove di cui agli articoli 4 e 7

1. Il campionamento e le prove per le indagini ufficiali di individuazione di cui all’articolo 4, paragrafi 1 e 2, sono effettuati come segue: per il campionamento deve essere preso in considerazione un campione di terreno di dimensioni standard pari ad almeno 1 500 ml terreno/ha, prelevato con almeno 100 carote/ha, di preferenza secondo una griglia rettangolare che copre l’intero sito di produzione, in cui i punti di prelievo non distano meno di 5 m in larghezza e più di 20 m in lunghezza. La totalità del campione è usata per gli esami successivi, ossia l’estrazione di cisti, l’identificazione della specie e, se del caso, la determinazione del patotipo/gruppo di virulenza; per le prove devono essere applicati i seguenti metodi per l’estrazione dell’organismo nocivo specificato, descritti nei pertinenti protocolli diagnostici convalidati e riconosciuti a livello internazionale: a) per quanto riguarda l’estrazione, i metodi basati sull’apparato di Fenwick, la centrifuga di Schuiling, l’elutriatore di Seinhorst o l’elutriatore di Kort; b) per quanto riguarda l’individuazione e l’identificazione, uno dei seguenti: i) isolamento delle cisti di Globodera dai detriti basato sulla morfologia della cisti, seguito dall’identificazione della specie basata sulla morfologia delle singole cisti e larve, unitamente a PCR tradizionale sulla base di Bulman & Marshall, 1997 (1) (in caso di dubbio in merito alla presenza di G. tabacum può essere eseguita, in aggiunta, la PCR tradizionale sulla base di Skantar et al., 2007 (2); ii) isolamento delle cisti di Globodera dai detriti basato sulla morfologia della cisti, seguito dall’identificazione della specie basata sulla morfologia delle singole cisti e larve, unitamente a PCR in tempo reale sulla base di Gamel et al., 2017 (3); iii) isolamento delle cisti di nematodi dai detriti, seguito dall’individuazione della specie con PCR in tempo reale sulla base di Gamel et al., 2017 (3).

2. Il campionamento per l’indagine ufficiale di monitoraggio di cui all’articolo 7 è effettuato secondo una delle seguenti modalità: a) campionamento di cui al punto 1, con campione minimo di terreno di almeno 400 ml/ha; b) campionamento mirato di almeno 400 ml di terreno dopo esame visivo delle radici quando i sintomi siano visibili; oppure c) campionamento di almeno 400 ml di terreno a contatto con le patate dopo la raccolta, purché il sito di produzione in cui le patate sono state coltivate sia identificabile. Le prove per l’indagine ufficiale di monitoraggio di cui all’articolo 7 sono effettuate come illustrato al punto 1.

3. In deroga al punto 1, le dimensioni standard di campionamento possono essere ridotte a un minimo di 400 ml di terreno/ha in ciascuno dei seguenti casi: a) esistono prove documentali attestanti che nel sito di produzione non sono state coltivate e non erano presenti patate o piante di cui all’allegato I, punto 1, nei sei anni precedenti l’indagine ufficiale di individuazione; b) non è stata rilevata la presenza di esemplari dell’organismo nocivo specificato nelle ultime due indagini ufficiali di individuazione eseguite su campioni di 1 500 ml terreno/ha e non sono state coltivate patate o piante di cui all’allegato I, punto 1, diverse da quelle per le quali è richiesta un’indagine ufficiale di individuazione a norma dell’articolo 4, paragrafo 1, dopo la prima indagine ufficiale di individuazione; c) non è stata rilevata la presenza di esemplari dell’organismo nocivo specificato o di cisti dell’organismo nocivo specificato senza contenuto vivo nell’ultima indagine ufficiale di individuazione, eseguita su un campione di almeno 1 500 ml terreno/ha, e nel sito di produzione non sono state coltivate patate o piante di cui all’allegato I, punto 1, diverse da quelle per le quali è richiesta un’indagine ufficiale di individuazione a norma dell’articolo 4, paragrafo 1, da quando è stata eseguita l’ultima indagine ufficiale di individuazione.

4. Le dimensioni di campionamento possono essere ridotte per i campi di superficie superiore rispettivamente a 8 ha e a 4 ha in ciascuno dei seguenti casi: a) nel caso di dimensioni standard di cui al punto 1, i primi 8 ha sono campionati nella misura ivi specificata, ma questa può essere ridotta per ciascun ettaro supplementare ad un minimo di 400 ml di terreno/ha; b) nel caso di dimensioni ridotte di cui al punto 3, i primi 4 ha sono campionati nella misura ivi specificata, ma questa può essere ulteriormente ridotta per ciascun ettaro supplementare ad un minimo di 200 ml di terreno/ha.

5. Nelle successive indagini ufficiali di individuazione di cui all’articolo 3, paragrafo 1, può essere utilizzato il campione di dimensioni ridotte di cui ai punti 3 e 4, fintanto che nel sito di produzione interessato non è stata rilevata la presenza degli organismi nocivi specificati.

6. Le dimensioni standard del campione di terreno possono essere ridotte ad un minimo di 200 ml di terreno/ha purché il sito di produzione si trovi in un’area dichiarata indenne dall’organismo nocivo specificato e designata, tutelata e sottoposta ad indagine in conformità alle pertinenti Norme internazionali per le misure fitosanitarie (4).

7. Le dimensioni minime del campione di terreno sono in tutti i casi pari a 200 ml di terreno per sito di produzione.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997). «Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR)». New Zealand Journal of Crop and Horticulture Science 25, 123-129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). «Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho». Journal of Nematology, 39(2), 133-144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017). «Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii». Nematology, 19 (7): 789-804.

(4) ISPM 4. 1995. Requirements for the establishment of the pest free areas, Roma, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/