87/410/CEE: Decisione della Commissione del 14 luglio 1987 che stabilisce i metodi da impiegare per la ricerca dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica



Gazzetta ufficiale n. L 223 del 11/08/1987 pag. 0018 - 0036



CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTE GC 6.1 . L'ANALITA DEVE ELUIRE NEL TEMPO DI RITENZIONE CHE E CARATTERISTICO DEL MATERIALE STANDARD CORRISPONDENTE . 6.2 . NEL CROMATOGRAMMA IL MASSIMO DEL PICCO PIU VICINO AL PICCO RELATIVO ALL'ANALITA RIVELATO DEVE DISTARE DA QUEST'ULTIMO ALMENO UNA LARGHEZZA MISURATA A META ALTEZZA MASSIMA . 6.3 . PER L'IDENTIFICAZIONE, ALLA GC DEVE ESSERE ABBINATA ANCHE UNA CO-CROMATOGRAFIA . IN QUEST'ULTIMA, DOVREBBE RISULTARE INGRANDITO SOLTANTO IL PICCO CHE SI RITIENE DOVUTO ALL'ANALITA E LA LARGHEZZA MISURATA A META ALTEZZA MASSIMA NON DOVREBBE DISCOSTARSI DI +/- IL 10 % DALLA LARGHEZZA MISURATA A META ALTEZZA MASSIMA . 7 . CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTE TLC O HPTLC 7.1 . I VALORI RF DELL'ANALITA DEVONO CORRISPONDERE A QUELLI CARATTERISTICI DEL MATERIALE STANDARD . QUESTA CONDIZIONE E SODDISFATTA QUANO I VALORI RF DELL'ANALITA NON SI DISCOSTANO DI OLTRE IL +/- 3 % DEI VALORI RF DEL MATERIALE STANDARD NELLE STESSE CONDIZIONI . 7.2 . ALLA VISTA, L'ANALITA NON DEVE RISULTARE DIVERSO DEL MATERIALE STANDARD . 7.3 . IL CENTRO DELLA MACCHIA PIU VICINA A QUELLA DELL'ANALITA DEVE DISTARE DA QUEST'ULTIMA DI UNA DISTANZA PARI ALMENO ALLA META DELLA SOMMA DEI DIAMETRI DELLE MACCHIE . 7.4 . PER L'IDENTIFICAZIONE, ALLA TLC SI DEVE ABBINARE UNA CO-CROMATOGRAFIA . IN QUESTA DOVREBBE RISULTARE INGRANDITA SOLTANTO LA MACCHIA CHE SI PRESUME DOVUTA ALL'ANALITA : NON DOVREBBE FORMARSI NESSUNA NUOVA MACCHIA E L'ASPETTO DELLA MACCHIA NON DOVREBBE CAMBIARE . 7.5 . COME PROVA DI CONFERMA OCCORRE EFFETTUARE UNA TLC BIDIMENSIONALE . 8 . CRITERI PER L'IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTE HPLC-SP 8.1 . LA MASSIMA LUNGHEZZA D'ONDA DI ASSORBIMENTO DELL'ANALITA NELLO SPETTRO UV DEVE RISULTARE LA STESSA DEL MATERIALE STANDARD CON UN MARGINE CHE DIPENDE DALLA RISOLUZIONE DEL SISTEMA DETETTORE . PER LA RIVELAZIONE A SERIE DI DIODI TALE MARGINE E DI SOLITO +/- 2 MM . 8.2 . PER LE PARTI DEI DUE SPETTRI CON UN ASSORBANZA RELATIVA >10 %, LO SPETTRO DELL'ANALITA NON DEVE APPARIRE DIVERSO DALLO SPETTRO DEL MATERIALE STANDARD . QUESTO CRITERIO E SODDISFATTO QUANDO SI HANNO GLI STESSI MASSIMI E IN NESSUNO DEI PUNTI OSSERVATI LA DIFFERENZA TRA I DUE SPETTRI RISULTA SUPERIORE AL 10 % DELL'ASSORBANZA DEL MATERIALE STANDARD . 8.3 . PER L'IDENTIFICAZIONE, ALL'HPLC DEVE ESSERE ABBINATA ANCHE UNA CO-CROMATOGRAFIA . IN QUESTA, DOVREBBE RISULTARE INGRANDITO SOLTANTO IL PICCO CHE SI RITIENE DOVUTO ALL'ANALITA . 9 . CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTA TLC-SP O HPTLC-SP 9.1 . I VALORI RF DELL'ANALITA DEVONO CORRISPONDERE A QUELLI CARATTERISTICI DEL MATERIALE STANDARD . QUESTA CONDIZIONE E SODDISFATTA QUANDO I VALORI RF DELL'ANALITA NON SI DISCOSTANO DI OLTRE IL 3 % DAI VALORI RF DEL MATERIALE STANDARD NELLE STESSE CONDIZIONI . 9.2 . L'ANALITA NON DEVE APPARIRE DIVERSO DAL MATERIALE STANDARD . 9.3 . IL CENTRO DELLA MACCHIA PIU VICINA A QUELLA DELL'ANALITA DEVE DISTARE DA QUEST'ULTIMA DI UN SEGMENTO PARI ALMENO ALLA META DELLA SOMMA DEI DIAMETRI DELLE MACCHIE . 9.4 . PER L'IDENTIFICAZIONE, ALLA TLC DEVE ESSERE ABBINATA ANCHE UNA CO-CROMATOGRAFIA . IN QUESTA, DOVREBBE RISULTARE INGRANDITA SOLTANTO LA MACCHIA CHE SI RITIENE SIA DOVUTA ALL'ANALITA; NON SI DOVREBBE AVERE ALCUNA NUOVA MACCHIA . 9.5 . LA MASSIMA LUNGHEZZA D'ONDA DI ASSORBIMENTO DELL'ANALITA NELLO SPETTRO DEVE RISULTARE LA STESSA DEL MATERIALE STANDARD CON UN MARGINE CHE DIPENDE DALLA RISOLUZIONE DEL SISTEMA DETETTORE . 9.6 . LO SPETTRO DELL'ANALITA NON DEVE APPARIRE DIVERSO DALLO SPETTRO DEL MATERIALE STANDARD . 10 . CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTE GC-HRMS 10.1 . PER ESSERE CLASSIFICATE COME MISURE AD ALTA RISOLUZIONE OCCORRE OTTENERE RISULTATI CON UNA RISOLUZIONE SUPERIORE A 9 500 CON UNA VALLE TRA PICCHI ADIACENTI NON SUPERIORE AL 10 % DELLE ALTEZZE DEI PICCHI . 10.2 . IL RAPPORTO DI INTENSITA DELLA RISPOSTA IONI F+ E ( F+1 ) + O M+ E ( M+1 )+ DEL DERIVATO DEL MATERIALE STANDARD DEV'ESSERE UGUALE AL VALORE TEORICO CON UNO SCOSTAMENO DELL'A %. 10.3 . LA MASSA DEL FRAMMENTO DEL DERIVATO DELL'ANALITA ( DETERMINATO IN CORRISPONDENZA DEL PICCO ) DEV'ESSERE UGUALE AL VALORE TEORICO DEL DERIVATO CORRISPONDENTE DEL MATERIALE DI RIFERIMENTO CON UNO SCOSTAMENTO MASSIMO DI B AMU . // NOTA : PER ALCUNI ANABOLIZZANTI I VALORI DI A E B SONO RIPORTATI A TITOLO ESEMPLIFICATIVO NELLA TABELLA 1 DELL'APPENDICE . IL METODO HA PERO APPLICAZIONE GENERALE E NON E LIMITATO AI SOLI AGENTI ANABOLICI . 11 . CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA PER GC-LRMS 11.1 . CRITERI PER LA GASCROMATOGRAFIA 11.1.1 . IL TEMPO DI RITENZIONE DI UN'ANALITA NELLA GC DEV'ESSERE UGUALE A QUELLO DEGLI STANDARD DI RIFERIMENTO CON UNO SCOSTAMENTO MASSIMO DI +/- 5 SEC . 11.1.2 . SE SI USA UNO STANDARD INTERNO, IL TEMPO DI RITENZIONE RELATIVO ( B/A ) DELL'ANALITA DEV'ESSERE UGUALE, CON UNO SCOSTAMENTO MASSIMO DI +/- 5/A, A QUELLO DEL MATERIALE STANDARD NELLA MATRICE APPROPRIATA, ESSENDO : // A = TEMPO DI RITENZIONE ASSOLUTO DI UN INTERNO STANDARD ESPRESSO IN SECONDI, // B = TEMPO DI RITENZIONE ASSOLUTO, ESPRESSO IN SECONDI . 11.2 . CRITERI PER LA SPETTROMETRIA DI MASSA 11.2.1 . TUTTI GLI IONI DETERMINATI DEVONO ESSERE DERIVATI DALL'ANALITA ELUITO IN UN SOLO TEMPO DI RITENZIONE . 11.2.2 . DETERMINARE LE INTENSITA DI ALMENO DUE IONI O, MEGLIO, PIU DI DUE . // NOTA : PER IDENTIFICARE CON CERTEZZA UN ANALITA OCCORRE SCEGLIERE UN NUMERO ADEGUATO DI IONI CHE DIPENDERA DAL PARTICOLARE COMPOSTO E DALLA SPECIFICITA DEGLI IONI SCELTI . PER LA MAGGIOR PARTE DEI DERIVATI DEGLI ANABOLIZZANTI RIPORTATI NELLE TABELLE DA 2 A 6 DELL'APPENDICE SI RACCOMANDA DI PRENDERE IN CONSIDERAZIONE ALMENO QUATTRO IONI . 11.2.3 . INTENSITA RELATIVA DEGLI IONI RIVELATI, ESPRESSA IN PERCENTUALE DELL'INTENSITA DELLO IONE CHE PRESENTA L'INTENSITA PIU ELEVATA ( PICCO BASE ) DEVE ESSERE UGUALE A QUELLA DELLO STANDARD DI RIFERIMENTO ADEGUATO CON UNO SCOSTAMENTO MASSIMO DI +/- 20 % ( METODO CI ) O +/- 10 % ( METODO EI ). 11.2.4 . SE POSSIBILE, LO IONE MOLECOLARE, DEL MATERIALE STANDARD DEV'ESSERE PRESENTE NELLO SPETTRO MID DELL'ANALITA . // NOTA : LE TABELLE DA 2 A 6 DELL'APPENDICE RIPORTANO A TITOLO ESEMPLIFICATIVO ALCUNI DATI SUGLI IONI MOLECOLARI E SUI FRAMMENTI IONICI DEI DERIVATI DI ALCUNI AGENTI ANABOLICI E RELATIVI COMPOSTI OTTENUTI PER TMS, MOX-TMS, MOX E HFB . I CRITERI HANNO PERO APPLICAZIONE GENERALE E NON SONO LIMITATI SOLTANTO A QUESTI DERIVATI . 12 . CRITERI DI IDENTIFICAZIONE DI UN ANALITA MEDIANTE SPETTROMETRIA IR 12.1 . DEFINIZIONE DI PICCHI IDONEI // SI DEFINISCONO PICCHI IDONEI I MASSIMI DI ASSORBIMENTO DELLO SPETTRO IR DI UN MATERIALE STANDARD, CHE SODDISFINO ALLE SEGUENTI CONDIZIONI : 12.1.1 . ASSORBIMENTO MASSIMO NELLA ZONA COMPRESA TRA 1 800 E 500 CM-1 . 12.1.2 . L'INTENSITA DELL'ASSORBIMENTO NON INFERIORE A : 12.1.2.1 . UN COEFFICIENTE DI ASSORBANZA MOLARE SPECIFICO UGUALE A : // _ 40 RISPETTO AD ASSORBANZA ZERO, E // _ 20 RISPETTO ALLA LINEA DI BASE DEL PICCO // OPPURE A 12.1.2.2 . UNA ASSORBANZA RELATIVA DI : // _ 12,5 % DELL'ASSORBANZA DEL PICCO PIU ALTO DELLA ZONA 1 800-500 CM_1 SE SONO ENTRAMBI MISURATI RISPETTO AD ASSORBANZA ZERO, E // _ 5 % DELL'ASSORBANZA DEL PICCO INTENSO DELLA ZONA 1 800-500 CM-1 SE SONO ENTRAMBI MISURATI RISPETTO ALLA LORO LINEA DI BASE DEL PICCO . // NOTA : ANCHE SE I PICCHI IDONEI DI CUI AL PUNTO 12.1.2.1 POSSONO ESSERE PREFERIBILI DA UN PUNTO DI VISTA TEORICO, QUELLI DI CUI AL PUNTO 12.1.2.2 SONO IN PRATICA DI PIU FACILE DETERMINAZIONE . 12.2 . NUMERO DI PICCHI IDONEI // SI RICHIEDE UN MINIMO DI SEI PICCHI IDONEI . 12.3 . INDIVIDUAZIONE DEI PICCHI IDONEI // LE ESATTE POSIZIONI DEI PICCHI IDONEI, ESPRESSE IN NUMERI D'ONDA INTERI FUNGONO DA PARAMETRI OGGETTIVI E DIGITALIZZATI PER VALUTARE GLI SPETTRI DEI CAMPIONI . // NOTA : LA TABELLA 7 DELL'APPENDICE RIPORTA I PICCHI IDONEI DEGLI SPETTRI IR DI 49 AGENTI ANABOLICI E RELATIVI COMPOSTI . IL METODO HA PERO APPLICAZIONE GENERALE E NON E LIMITATO AI SOLI ANABOLIZZANTI . 12.4 . USO DELLE TABELLE DEI PICCHI IDONEI 12.4.1 . SI CONFRONTANO LE POSIZIONI DEI PICCHI DELLO SPETTRO IR DELL'ANALITA CON LE POSIZIONI DEI PICCHI ADEGUATI DELLO SPETTRO IR DEL MATERIALE STANDARD . 12.4.2 . SI DETERMINA IL NUMERO DI PICCHI DELLO SPETTRO IR DELL'ANALITA LE CUI FREQUENZE CORRISPONDONO A UN PICCO ADEGUATO DELLO SPETTRO IR DEL MATERIALE STANDARD CON UNO SCOSTAMENTO MASSIMO DI +/- 1 CM-1; 12.4.3 . SI CALCOLA QUINDI L'INDICE DEL MATERIALE STANDARD NELLO SPETTRO DELL'ANALITA . 12.4.4 . DEFINIZIONE DI " INDICE ": // L'" INDICE " E LA PERCENTUALE DEI PICCHI IDONEI TROVATA NELLO SPETTRO IR DELL'ANALITA . 12.5 . CRITERI 12.5.1 . L'INDICE DEVE RISULTARE ALMENO AL 50 %. 12.5.2 . IL PROCEDIMENTO E APPLICABILE SOLTANTO AI PICCHI DI ASSORBIMENTO DELLO SPETTRO DEL CAMPIONE AVENTI UN'ALTEZZA ALMENO TRE VOLTE MAGGIORE ALLA DISTANZA TRA PICCO E PICCO DEL RUMORE . APPENDICE TABELLA 1 DATI PER LA CONFERMA DI ANABOLIZZANTI MEDIANTE HRMS 1.2,3.4,5.6,7DERIVATI ( 1 ) MASSA DELLO IONE RAPPORTO DI INTENSITA MASSA DELLO IONE 1.2.3.4.5.6.7IONE F+ O IONE M+ VALORE NOMINALE M/Z ( AMU ) IONE ( F+1 )+ O IONE ( M+1 )+ VALORE NOMINALE M/Z ( AMU ) VALORE TEORICO SCOSTAMENTO A (%) VALORE TEORICO M/Z ( 2 ) ( AMU ) SCOSTAMENTO B M/Z ( AMU ) // // // // // // // DES-TMS M+ 412 413 0,3777 8 412,2254 0,0012 DE-TMS M+ 410 411 0,3772 8,5 410,2097 0,0012 HEX-TMS F+ 207 208 0,1889 17 207,1205 0,0007 NT-TMS M+ 346 347 NON APPLIC . // 346,2328 0,0015 NT-TMS F+ 256 257 NON APPLIC . // 256,1827 0,0015 NT-MOX-TMS M+ 375 376 NON APPLIC . // 375,2593 0,0015 EPI NT-MOX-TMS M+ 375 376 NON APPLIC . // 375,2593 0,0015 E2-DI-TMS M+ 416 417 NON APPLIC . // 416,2567 0,0015 // // // // // // // 1.2(1 ) DES = DIETILSTILBESTROLO, DE = DIENOESTROLO, HEX = ESOESTROLO, NT = 19-NORTESTOSTERONE-17SS ( NANDROLONE ), EPI NT = 19-NORTESTOSTERONE-17*, E2 = OESTRADIOLO-17SS . ********* ********* **** **** ******** * ******* *** ******** ** ****** ************* * ******** ********* **** ** ***** *** ** ******** ******** **** ****** ** 1.2.3,6** ** 1.2.3.4.5.6************ ******************* *-ESTRANO-(3SS,17*)-DIOLO 422 407 332 242 201 17*-ESTRADIOLO 416 416 401 326 285 17SS-ESTRADIOLO 416 416 401 326 285 17SS-ESTRADIOLO-16,16,17(D3 ) ( 2 ) 419 419 404 329 285 ETINILESTRADIOLO 440 440 425 300 285 ESOESTROLO 414 207 191 179 // METANDROSTENOLONE 372 372 357 302 282 METILTESTOSTERONE 374 359 317 304 284 *-NORTESTOSTERONE 346 346 331 256 215 SS-NORTESTOSTERONE 346 346 331 256 215 TESTOSTERONE 360 360 345 270 226 17-*-TRENBOLONE 342 342 252 237 211 17-SS-TRENBOLONE 342 342 252 237 211 *-ZEARALANOLO 538 538 523 433 307 SS-ZEARALANOLO 538 538 523 433 307 ZEARALANOLONE 464 464 449 335 307 ZEARALENONE 462 462 429 333 305 // // // // // // **** ************ ***** **** ******** ******* TABELLA 3 MOX-TMS DERIVATI DI ALCUNI COMPOSTI ANABOLICI E RELATIVI OMOTOPI . IONI DA USARE PER LA CONFERMA MEDIANTE MRLS ( METODO EI ) 1.2.3,6PM M/Z ( 1 ) 1.2.3.4.5.6MEDROSSIPROGESTERONE 474 474 459 443 353 METANDROSTENOLONE 401 401 386 370 280 METILTESTOSTERONE 403 403 313 298 282 *-NORTESTOSTERONE 375 375 360 344 285 SS-NORTESTOSTERONE 375 375 360 344 285 TESTOSTERONE 389 389 374 358 268 *-TRENBOLONE 371 371 281 266 253 SS-TRENBOLONE 371 371 281 266 253 ZEARALANOLONE 493 493 478 462 406 ZEARALENONE 491 491 460 444 333 **** ************ ***** **** ******* *** ******** ** ****** ************* * ******** ********* **** ** ***** *** ** ******** ******** **** ****** ** 1.2.3,6** ** 1.2.3.4.5.6******* ** ******************** ******* ** ********** ******* ** ************* ******* ** ********** **** ************ ***** **** ******* *** ******** ** ****** ************* * ******** ********* **** ** ***** *** ** ******** ******** **** ****** ** 1.2.3,6** ** 1.2.3.4.5.6******************* ************ ********** SS-ESTRADIOLO,16,16,17(D3 ) ( 2 ) 667 667 454 412 359 // // // // // // **** ************ ***** **** ******** ******* TABELLA 6 HFB DERIVATI DI STILBENI . IONI DA USARE PER LA CONFERMA MEDIANTE LRMS ( METODO CI ) A ) CI DELL'AMMONIACA 1.2.3,6MP M/Z ( 1 ) 1.2.3.4.5.6ESOESTROLO 662 681 680 484 466 DIETILSTILBOESTROLO 660 678 482 464 ( 1 ) IONE SOTTOLINEATO : PICCO BASE . B ) CI DEL METANO 1.2.3,6MP M/Z ( 1 ) 1.2.3.4.5.6DIETILSTILBOESTROLO 660 661 465 464 DIENOESTROLO 658 659 463 462 369 ( 1 ) IONE SOTTOLINEATO : PICCO BASE . NOTE 1 . L'INTENSITA RELATIVA DI ALCUNI DEGLI IONI SOPRA RIPORTATI E TROPPO BASSA ( CIRCA 10 %) PER ESSERE USATA CON UNA SUFFICIENTE AFFIDABILITA NELLA CONFERMA . 2 . L'INTENSITA RELATIVA DEGLI IONI PUO VARIARE CON LA QUANTITA DI ANALITA INIETTATO NELLA COLONNA . NEL CASO DEL DIETISTILBOESTROLO A BASSE CONCENTRAZIONI NELLA CI DEL METANO, LO IONE 661 DIVENTA IL PICCO BASE ( CIOE SI HA MENO FRAMMENTAZIONE NELLA FORMA MONO-HFB ). E PERTANTO IMPORTANTE CHE IL CONFRONTO FRA L'INTENSITA DEGLI IONI RELATIVI DELL'ANALITA E QUELLA DELLO STANDARD DI RIFERIMENTO VENGA EFFETTUATA ALL'INCIRCA ALLA STESSA CONCENTRAZIONE . 3 . LA IONIZZAZIONE CON IL METANO PRODUCE LA SCISSIONE DELLA MOLECOLA DI ESTROLO . I FRAMMENTI IONICI DI PICCOLA MASSA NON SI SEPARANO COMPLETAMENTE DAGLI ALTRI ESTRATTI . TABELLA 7 PICCHI IDONEI DEGLI SPETTRI IR DI 49 COMPOSTI ANABOLIZZANTI E COMPOSTI CORRELATI 1.2.3.4.5.6.7.8.9.101 2 3 4 5 6 7 8 9 10 // // // // // // // // // // SSE2 *E2 E2AC E2DIAC E2P E2DIP E2S E2BZ E2ME EE // // // // // // // // // // // // 1 701 1 766 1 734 1 712 1 763 1 757 1 733 // 1 729 // // // // // // // // // // // // 1 610 1 610 1 620 // 1 696 1 619 // // 1 600 1 610 1 615 // // // // // // // // // // 1 586 1 586 1 500 1 584 // 1 583 // // // 1 577 1 502 1 584 1 501 // // // // // // // // // // 1 498 1 449 1 416 1 443 1 498 1 460 1 494 1 499 1 460 1 444 1 492 1 460 1 419 1 494 1 420 1 498 1 451 1 469 1 444 1 473 1 449 1 433 // // // // // // // // // // 1 382 1 357 1 320 1 302 1 379 1 352 1 373 1 351 1 375 1 350 1 381 1 351 1 392 1 307 1 380 1 315 1 374 1 334 1 313 1 384 1 358 // // // // // // // // // // 1 283 1 250 1 231 1 284 1 253 1 234 1 292 1 276 1 248 1 235 1 262 1 248 1 288 1 249 1 225 1 212 1 273 1 247 1 224 1 241 1 266 1 223 1 216 1 291 1 278 1 252 1 236 1 299 1 257 1 203 // // // // // // // // // // 1 156 1 130 1 118 1 102 1 154 1 119 1 101 1 152 1 198 1 177 1 149 1 151 1 197 1 154 1 139 1 176 1 176 1 152 1 128 1 183 1 153 1 130 1 120 1 184 1 160 1 147 1 135 1 122 1 111 // // // // // // // // // // 1 056 1 021 1 012 1 074 1 054 1 036 1 013 1 017 1 040 1 015 1 086 1 072 1 012 1 078 1 055 1 033 1 014 1 097 1 075 1 049 1 018 1 067 1 025 1 012 1 055 1 042 1 025 1 069 1 055 1 043 1 022 1 006 // // // // // // // // // // 962 930 917 905 994 970 945 919 // 946 962 917 932 908 // // 971 930 914 // // // // // // // // // // 874 820 866 821 873 885 878 871 816 897 807 887 866 847 822 808 889 898 870 818 880 857 823 // // // // // // // // // // 786 733 787 // // // // 770 705 785 789 // // // // // // // // // // // // 624 // // // 650 688 // 646 622 // // // // // // // // // // // 573 // // // // 579 519 // // 568 // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.1011 12 13 14 15 16 17 18 19 20 // // // // // // // // // // M E1 E3 EQ EQLN SST *T TAC TP TIC // // // // // // // // // // // 1 719 // 1 719 1 717 // // 1 741 1 729 1 733 // // // // // // // // // // 1 612 1 621 1 610 1 623 1 622 1 666 1 658 1 612 1 654 1 610 1 672 1 618 1 669 1 611 1 667 1 617 // // // // // // // // // // 1 580 1 506 1 584 1 501 1 588 1 509 1 500 1 599 // // // // // // // // // // // // // // // 1 467 1 449 1 499 1 452 1 470 1 407 1 480 1 460 1 423 1 470 1 432 1 432 1 449 1 433 1 450 1 470 1 450 // // // // // // // // // // 1 377 1 352 1 325 1 396 1 361 1 384 1 353 1 322 1 354 1 389 1 378 1 360 1 380 1 377 1 362 1 333 1 331 1 378 1 331 // // // // // // // // // // 1 291 1 255 1 242 1 287 1 250 1 285 1 254 1 238 1 201 1 278 1 246 1 225 1 208 1 277 1 233 1 276 1 231 1 274 1 232 1 270 1 240 1 294 1 272 1 230 // // // // // // // // // // 1 183 1 165 1 146 1 133 1 121 1 109 // 1 174 1 149 1 118 1 103 1 158 1 148 1 169 1 199 1 131 1 114 1 189 // 1 185 1 182 1 125 1 103 // // // // // // // // // // 1 062 1 036 1 019 1 055 1 068 1 062 1 034 1 056 1 066 1 067 1 056 1 017 // 1 041 1 022 1 080 1 043 1 020 1 043 1 009 // // // // // // // // // // 967 905 920 964 943 928 917 // // 957 943 // 945 // 941 // // // // // // // // // // 862 844 833 823 877 819 886 871 851 818 875 810 849 817 870 // 863 863 864 // // // // // // // // // // 789 702 788 787 // // // // // // // // // // // // // // // // // 658 620 673 662 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 582 // // // // // // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.1021 22 23 24 25 26 27 28 29 30 // // // // // // // // // // TD TUN TPP TBZ MT MT-D9 ( 11 ) SSNT *NT NTP NTD // // // // // // // // // // 1 734 1 738 1 734 1 709 // // // // 1 741 1 734 // // // // // // // // // // 1 670 1 618 1 674 1 610 1 672 1 615 1 673 1 617 1 664 1 611 1 651 1 607 1 666 1 619 1 663 1 643 1 615 1 650 1 620 1 676 1 619 // // // // // // // // // // 1 471 1 415 1 473 1 455 1 424 1 452 1 435 1 450 // 1 412 // 1 448 1 422 1 465 1 453 // // // // // // // // // // 1 379 1 352 1 327 1 379 1 335 1 315 1 381 1 316 1 374 1 370 1 348 1 332 1 335 // 1 346 1 381 1 332 // // // // // // // // // // 1 291 1 256 1 216 1 276 1 249 1 208 1 298 1 270 1 229 1 275 1 229 1 297 1 278 1 234 1 274 1 232 1 259 1 228 1 206 1 258 1 211 1 265 1 202 1 258 1 212 // // // // // // // // // // 1 180 1 172 1 171 1 178 1 110 1 190 1 156 1 188 1 173 1 153 1 128 1 104 1 133 1 135 // 1 177 // // // // // // // // // // // // 1 068 1 009 1 070 1 023 1 091 // 1 075 1 052 1 023 1 051 1 085 1 052 1 025 // // // // // // // // // // // // // 944 998 941 950 956 937 967 968 968 // // // // // // // // // // // 867 887 862 866 873 882 885 880 884 // // // // // // // // // // // // // 748 709 719 // // // // // // // // // // // // // // // // // // 699 688 // 692 // // // // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.1031 32 33 34 35 36 37 38 39 40 // // // // // // // // // // NTL NTPP ETI SSTB *TB TBA P MP MPA MGA // // // // // // // // // // 1 735 1 730 // // // 1 737 // // 1 732 1 717 1 731 1 710 // // // // // // // // // // 1 676 1 619 1 675 1 618 1 659 1 612 1 639 1 643 1 660 1 699 1 663 1 616 1 696 1 664 1 603 1 673 1 608 1 664 1 629 // // // // // // // // // // // 1 501 // 1 569 1 578 1 573 // // // 1 584 // // // // // // // // // // 1 473 1 418 1 447 1 430 1 418 1 438 1 450 1 435 1 439 1 439 1 448 // 1 460 1 447 // // // // // // // // // // 1 381 1 335 1 330 1 383 1 331 1 379 1 353 1 346 1 322 1 391 1 369 1 346 1 321 1 310 1 375 1 386 1 358 1 328 1 349 1 365 1 390 1 366 // // // // // // // // // // 1 299 1 269 1 240 1 205 1 297 1 259 1 205 1 288 1 232 1 288 1 267 1 226 1 279 1 240 1 229 1 245 1 279 1 237 1 228 1 204 1 271 1 233 1 261 1 253 1 269 1 260 1 247 1 224 // // // // // // // // // // 1 175 1 177 1 191 1 125 1 199 1 101 1 198 1 150 1 126 // 1 162 1 186 1 123 1 187 1 167 1 143 1 127 1 109 // // // // // // // // // // 1 053 1 080 1 049 1 068 1 060 1 075 1 054 1 017 1 088 1 028 1 011 1 096 1 053 1 023 // 1 093 1 080 1 056 1 083 1 059 1 014 // // // // // // // // // // // 965 // // 937 987 948 // 965 963 // // // // // // // // // // // 879 869 // 852 // 871 871 // 878 // // // // // // // // // // // 752 704 724 // 795 762 // // // // // // // // // // // // // // // // // 697 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 597 // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.941 42 43 44 45 46 47 48 49 // // // // // // // // // MLGA DE DES HEX DEDIAC DESDIP Z CORT HCORT // // // // // // // // // 1 738 1 716 // // // 1 757 1 763 1 754 // // 1 714 // // // // // // // // // 1 666 1 625 1 619 1 608 1 609 1 613 // // 1 644 1 615 1 694 1 648 1 618 1 644 1 610 // // // // // // // // // 1 579 1 591 1 513 1 590 1 514 1 598 1 516 1 503 1 504 1 587 // // // // // // // // // // // 1 444 1 416 1 426 1 462 1 427 1 458 1 440 // 1 459 1 464 1 447 1 413 1 432 // // // // // // // // // 1 389 1 372 1 318 1 333 1 337 // 1 368 1 363 1 381 1 353 1 311 1 391 // // // // // // // // // // 1 260 1 245 1 231 1 205 1 247 1 205 1 282 1 247 1 204 1 218 1 218 1 210 1 259 1 200 1 269 1 271 1 237 // // // // // // // // // 1 123 1 171 1 102 1 173 1 114 1 174 1 107 1 196 1 164 1 157 1 167 1 186 1 159 1 133 1 115 // // // // // // // // // 1 037 // 1 012 // 1 019 1 076 1 019 1 096 1 075 1 075 1 064 1 037 1 047 1 006 // // // // // // // // // 972 953 930 // // // 910 // 989 // 942 900 // // // // // // // // // 881 853 834 826 851 831 805 847 830 804 865 895 840 875 865 // // // // // // // // // // 775 721 716 // // // // // // // // // // // // // // 627 612 649 620 646 646 679 // // // // // // // // // // // // // 551 520 586 573 510 // // // // // // // // // // // // // // ELENCO DELLE ABBREVIAZIONI 1.21 SSE2 ESTRADIOLO-17SS 2 *E2 ESTRADIOLO-17* 3 E2AC ESTRADIOLO-17-ACETATO 4 E2DIAC ESTRADIOLO DIACETATO 5 E2P ESTRADIOLO-17-PROPIONATO 6 E2DIP ESTRADIOLO DIPROPIONATO 7 E2S ESTRADIOLO-3-SOLFATO 8 E2BZ ESTRADIOLO-3-BENZOATO 9 E2ME ESTRADIOLO-3-METILETERE 10 EE ETINILESTRADIOLO 11 M MESTRANOLO 12 E1 ESTRONE 13 E3 ESTRIOLO 14 EQ EQUILINO 15 EQLN EQUILENINO 16 SST TESTOSTERONE-17SS 17 *T TESTOSTERONE-17* 18 TAC ACETATO DI TESTOSTERONE 19 TP PROPIONATO DI TESTOSTERONE 20 TIC ISOCAPROATO DI TESTOSTERONE 21 TD DECANOATO DI TESTOSTERONE 22 TUN UNDECANOATO DI TESTOSTERONE 23 TPP FENILPROPIONATO DI TESTOSTERONE 24 TBZ BENZOATO DI TESTOSTERONE 25 MT METILTESTOSTERONE-17* 26 MT-D9(11 ) METILTESTOSTERONE-D9(11 ) 27 SSNT NORTESTOSTERONE-17SS 28 *NT NORTESTOSTERONE-17* 29 NTP NORTESTOSTERONE PROPIONATO 30 NTD NORTESTOSTERONE DECANOATO 21 NTL NORTESTOSTERONE LAURATO 32 NTPP NORTESTOSTERONE FENILPROPRIONATO 33 ETI ETILSTERONE 34 SSTB TRENBOLONE-17SS 35 *TB TRENBOLONE-17* 36 TBA ACETATO DI TRENBOLONE 37 P PROGESTERONE 38 MP MEDROSSIPROGESTERONE 39 MPA ACETATO DI MEDROSSIPROGESTERONE 40 MGA ACETATO DI MEGESTROLO 41 MLGA ACETATO DI MELENGESTROLO 42 DE DIENOESTROLO 43 DES DIETILSTILBOESTROLO 44 HEX ESOESTROLO 45 DEDIAC DIENOESTROLO DIACETATO 46 DESDIP DIETILSTILBOESTROLO DIPROPIONATO 47 Z ZERANOLO 48 CORT CORTICOSTERONE 49 HCORT IDROCORTISONE***** DECISIONE DELLA COMMISSIONE del 14 luglio 1987 che stabilisce i metodi da impiegare per la ricerca dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica (87/410/CEE) LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE, visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea, vista la direttiva 85/358/CEE del Consiglio, del 16 luglio 1985, che completa la direttiva 81/602/CEE concernente il divieto di talune sostanze ad azione ormonica e delle sostanze ad azione tireostatica (1), modificata dal regolamento (CEE) n. 3768/85 (2), in particolare l'articolo 5, considerando che, a norma dell'articolo 5, paragrafo 2 della direttiva 85/358/CEE, compete alla Commissione fissare, secondo la procedura di cui all'articolo 11 della stessa direttiva, i metodi di analisi dei campioni da impiegare per la ricerca dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica; considerando che, a norma dell'articolo 4, paragrafo 1, lettera b) della direttiva 64/433/CEE del Consiglio, del 26 giugno 1964, relativa a problemi sanitari in materia di scambi intracomunitari di carni fresche (3), modificata da ultimo dalla direttiva 86/587/CEE (4), nonché dell'articolo 11, paragrafo 4, secondo comma della direttiva 85/397/CEE del Consiglio, del 5 agosto 1985, concernente i problemi sanitari e di polizia sanitaria negli scambi intracomunitari di latte trattato termicamente (5), modificata dal regolamento (CEE) n. 3768/85, gli esami dei residui devono essere effettuati secondo metodi scientificamente riconosciuti e praticamente sperimentati, in particolare quelli definiti nelle direttive comunitarie o in altre disposizioni internazionali; considerando che la determinazione dei metodi di analisi dei campioni comprende la definizione dei procedimenti di analisi da impiegare, delle regole da seguire per il campionamento e dei criteri relativi all'esecuzione delle analisi; considerando che i procedimenti di analisi da impiegare devono essere abbastanza sensibili da individuare la presenza di residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica; considerando che il campionamento rappresenta una parte essenziale del metodo di analisi; che è pertanto opportuno stabilire regole per il prelievo dei campioni; considerando che, il 20 dicembre 1985, il Consiglio ha adottato la direttiva 85/591/CEE concernente l'istituzione di modalità di prelievo dei campioni e di metodi di analisi comunitari per il controllo dei prodotti destinati all'alimentazione umana (6); che, ai fini della presente decisione, è opportuno tener conto dei criteri previsti al punto 1 dell'allegato di detta direttiva; considerando che le misure previste dalla presente decisione sono conformi al parere del comitato veterinario permanente, HA ADOTTATO LA PRESENTE DECISIONE: Articolo 1 I procedimenti di analisi da impiegare per la ricerca dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica sono i seguenti: - prova immunologica (IA), - cromatografia su strato sottile (TLC), - cromatografia in fase liquida ad alta pressione (HPLC). - cromatografia in fase gassosa (GC), - spettrometria di massa (MS), - spettrometria (SP). Articolo 2 I campioni devono essere prelevati secondo le regole seguenti: 1) le dimensioni dei campioni devono essere sufficienti per consentire una analisi adeguata, di ripetere tale analisi e di fare delle analisi di conferma; 2) i campioni devono essere contrassegnati in modo da rendere possibile la loro identificazione in tutte le fasi dell'esame; 3) i metodi di condizionamento, di conservazione e di trasporto dei campioni devono essere tali da mantenerne l'integrità e non nuocere ai risultati dell'esame. Articolo 3 I criteri per l'esecuzione delle analisi sono fissati in allegato. Articolo 4 La presente decisione sarà riesaminata anteriormente al 1o gennaio 1991 allo scopo di tenere conto dell'evoluzione delle conoscenze scientifiche e tecnologiche. Articolo 5 Gli Stati membri sono destinatari della presente decisione. Fatto a Bruxelles, il 14 luglio 1987. Per la Commissione Frans ANDRIESSEN Vicepresidente (1) GU n. L 191 del 23. 7. 1985, pag. 46. (2) GU n. L 362 del 31. 12. 1985, pag. 8. (3) GU n. 121 del 29. 7. 1964, pag. 2012/64. (4) GU n. L 339 del 2. 12. 1986, pag. 26. (5) GU n. L 226 del 24. 8. 1985, pag. 13. (6) GU n. L 372 del 31. 12. 1985, pag. 50. ALLEGATO CAPITOLO I: PRINCIPI GENERALI Introduzione Per poter valutare obiettivamente i metodi di rivelazione dei residui, occorre disporre dei dati quantitativi relativi ad alcune caratteristiche standard dei metodi stessi. Per una parte di queste caratteristiche si devono fissare inoltre requisiti quantitativi che tengano conto, fra l'altro, dello scopo del metodo (ad esempio screening, determinazione quantitativa, conferma). Nel presente capitolo si definiscono i criteri prescritti dall'allegato della direttiva 85/591/CEE da applicare nell'esame dei metodi correnti per l'analisi dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica. Definizioni i) Specificità La specificita è la capacità di un metodo di distinguere l'analita da misurare rispetto alle altre sostanze. Questa caratteristica dipende soprattutto dalla metodica adottata. I dati sulla specificità devono riferirsi almeno a tutte quelle sostanze che si pensa possano dare origine ad un segnale quando viene impiegata la metodica descritta (ad esempio omologhi, analoghi, prodotti metabolici del residuo che interessa). Da tali dati deve essere possibile risalire quantitativamente al limite oltre il quale il metodo non consente più di distinguere, nelle condizioni sperimentali, la sostanza da analizzare dalle altre sostanze. ii) Esattezza Nel presente documento per esattezza si intende l'esattezza del valore medio delle misure. La definizione che viene qui adottata è quella data dal punto 2.83 della norme ISO 3534-1977 (esattezza della media: lo scostamento tra il valore vero e il valore medio dei risultati di prove che si otterrebbero applicando il metodo sperimentale un gran numero di volte). Note: I limiti principali dell'esattezza sono: a) gli errori casuali, b) gli errori sistematici, ad esempio: una bassa compensazione. Nel caso di un gran numero di esperimenti l'esattezza del valore medio si avvicina all'errore sistematico. Per valutare l'esattezza di un metodo occorre specificare il numero di esperimenti effettuati. La misura dell'esattezza richiesta è data dalla differenza tra il valore medio misurato per la sostanza di riferimento ed il valore vero, espressa in percentuale del valore vero. iii) Precisione: la variabilità della ripetibilità intralaboratorio (nello stesso laboratorio) e della riproducibilità interlaboratorio (in differenti laboratori). Con il generico termine statistico « precisione » si intende la definizione data al punto 2.84 dalla norma ISO 3534-1977 (precisione: la concordanza tra i risultati di prove ottenuti applicando varie volte il procedimento sperimentale nelle condizioni fissate). Ai sensi dell'allegato della direttiva 85/591/CEE, i valori di precisione dei metodi di analisi da adottare in conformità alle disposizioni di detta direttiva verranno determinati con una prova interlaboratorio effettuata di preferenza secondo la norma ISO 5725-1986 che definisce i termini ripetitibilità e riproducibilità. Per effettuare una prima selezione dei metodi presentati sulla base della documentazione disponibile, è sufficiente che vengano prodotti i dati sulla ripetibilità. A tale scopo, il termine ripetibilità è da intendere nel significato definito al punto 2.85 a) della norma ISO 3534/1977 [ripetibilità: concordanza tra i risultati di prove mutualmente indipendenti ottenuti con lo stesso metodo su un identico materiale, nelle medesime condizioni (stesso operatore, stessa apparecchiatura, stesso laboratorio e in brevi intervalli di tempo]. Per misurare la ripetibilità si usa il coefficiente di varianza quale definitivo al punto 2.35 dalla norma ISO 3534-1977 (coefficiente di varianza: il rapporto tra la deviazione standard ed il valore assoluto della media aritmetica). iv) Limite di rivelazione Il limite di rivelazione è la minima concentrazione misurata da cui si possa dedurre con ragionevole certezza statistica la presenza dell'analita. Esso è uguale alla media dei tenori misurati nei bianchi (n20) più tre volte la deviazione standard del valore medio. Nota: caso si preveda che fattori quali le specie, il sesso, l'età, ecc. possono influenzare le caratteristiche del metodo, occorre disporre di una serie di bianchi per ogni singola popolazione omogenea cui il metodo viene applicato. v) Sensibilità La sensibilità misura il grado in cui un metodo rivela piccole differenze nel tenore di un analita. Nel presente documento, la sensibilità è definita come la pendenza della curva di taratura in corrispondenza della concentrazione data. vi) Praticabilità ed applicabilità La praticabilità è una caratteristica non standardizzata di un procedimento analitico. Essa dipende dal campo di applicazione del metodo e dipende da parametri quali la quantità di campione necessaria ed i costi. L'applicabilità è un elenco dei prodotti cui il metodo può essere applicato sia direttamente che con lievi modifiche. vii) Altri criteri eventualmente adottabili Limite di decisione Il limite di decisione è il più basso tenore dell'analita che, se realmente presente, può essere rivelato con un grado di probabilità statistica accettabile e può essere identificato con i criteri di identificazione del metodo. Se in un intorno del limite di rivelabilità l'esattezza e la precisione si mantengono costanti, allora il limite di decisione è uguale alla media del tenore misurato dei bianchi di riferimento più sei volte la deviazione standard del valore medio. Limite di quantificazione Il limite di quantificazione è il più piccolo tenore misurato al di sopra del quale è possibile determinare l'analita con un determinato grado di esattezza e ripetibilità (in uno stesso laboratorio). Requisiti per l'esattezza e la ripetibilità Esattezza: Nel caso di più analisi sullo stesso campione di riferimento, la differenza tra il valore medio delle misure e il valore vero, espressa come percentuale del valore vero, non deve superare i seguenti limiti: 1.2 // // limiti // - valore vero sino a 1 mg/kg: // da 50 % a +20 % // - valore vero maggiore da 1 mg/kg sino a 10 m g/kg: // da 30 % a +10 % // - valore vero maggiore di 10 m g/kg: // da 20 % a +10 % Ripetibilità: Nel caso di più analisi effettuate sullo stesso campione di riferimento, il coefficiente di variazione (C.V.) della media non deve superare i seguenti valori: 1.2 // // C.V. // - valore medio sino a 1 mg/kg: // 0,30 // - valore medio maggiore da 1 mg/kg sino a 10 mg/kg: // 0,20 // - valore medio maggiore di 10 mg/kg: // 0,15 Curve di taratura Se il metodo prevede l'uso di curve di taratura, occorre conoscere: - la formula matematica che descrive la curva di taratura, - i valori numerici dei parametri delle curve di taratura con intervalli di confidenza del 95 % (in condizioni ottimali), - gli intervalli accettabili entro cui possono variare da un giorno all'altro i parametri della curva di taratura, - l'intervallo di lavoro della curva di taratura, - particolari sulla varianza delle variabili valida almeno nell'intervallo di lavoro della curva di taratura. Sensibilità all'interferenza Per quelle condizioni sperimentali che nella pratica potrebbero essere soggette a fluttuazione (ad esempio stabilità dei reagenti, composizione del campione, pH, temperatura) occorre indicare quali sono le variazioni che potrebbero condizionare i risultati analitici. Occorre anche segnalare se si conoscono sostanze che possono interferire con la determinazione dell'analita indicando eventualmente anche come ovviare al problema. È di fondamentale importanza esaminare tutte le possibili interferenze dei componenti della matrice. Va quindi indicato almeno il massimo equivalente di campione che non ha effetti di interferenza sulla determinazione dell'analita (dopo una qualsiasi purificazione del campione specificata). Relazione tra i valori di tolleranza e i limiti analitici Per la sostanze con tolleranza zero, il limite di decisione del metodo analitico deve essere sufficientemente basso in modo che il tenore residuo che si pensa di trovare a causa di un uso illecito possa essere rivelato con una probabilità di almeno il 95 %. Per le sostanze con un livello di tolleranza, fissato al massimo livello fisiologico naturale, il limite di quantificazione non deve superare la tolleranza di cui sopra meno tre volte la deviazione standard prodotta dal metodo per un campione a livello di tolleranza. Materiale di riferimento Si intende per materiale di riferimento un campione della sostanza o un singolo manufatto per il quale una o più proprietà sono determinate con sufficiente esattezza in modo da poterlo usare per calibrare una apparecchiatura o per verificare un metodo di misura. L'attestazione deve essere basata su un processo tecnicamente valido. Nel caso in cui non sia disponibile un materiale di riferimento, i parametri da misurare possono essere valutati analizzando un campione di materiale cui sia stata addizionata la sostanza di riferimento. CAPITOLO II: CRITERI DI QUALITÀ PER L'INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI 1.2,3 // 1. // Abbreviazioni e simboli // // Metodi analitici // 1.2.3 // // GC // = gascromatografia // // HPLC // = cromatografia liquida ad alta pressione // // HPTLC // = cromatografia su strato sottile ad alta efficienza // // HRMS // = spettrometria di massa ad alta risoluzione // // IA // = prova immunologica // // IR // = infrarosso // // UV // = ultravioletto // // LRMS // = spettrometria di massa a bassa risoluzione // // MS // = spettrometria di massa // // RIA // = dosaggio radioimmunologico // // SP // = spettrometria (ad esempio sistema a serie di diodi) // // TLC // = cromatografia su strato sottile // // / // = tecniche combinate off-line // // - // = tecniche combinate on-line 1.2,3 // // Per esempio: HPLC/CG-MS = HPLC fuori linea seguito da GC con MS in linea. // 1.2.3 // // Per RIA: // // // cpm // = impulsi al minuto // // dpm // = disintegrazioni al minuto // // T // = radioattività totale (cpm o dpm) indotta nel campione // // B // = radioattività della frazione legata di un campione // // Bo // = radioattività della frazione legata di un bianco campione // // B/Bo // = frazione della radioattività della frazione legata di un campione rispetto a quella relativa ad un bianco campione (frazione di legame rispetto a legame zero) // // %B/Bo // = radioattività della frazione legata di un campione espressa in percentuale di bianco // // Bo/T // = frazione della radioattività della frazione legata di un bianco rispetto all'attività indotta (frazione a legame zero rispetto al totale) // // NSB // = legame non specifico = legame aspecifico (ASB) // // Per MS: // // // amu // = unità di massa atomica // // CI // = ionizzazione chimica // // EI // = ionizzazione a impatto elettronico // // MID // = rivelazione multipla di ioni // // M // = massa // // Z // = carica // // HFB // = acido eptafluorobutirrico o eptafluorobutirril derivato // // MOX // = metossima derivato // // TMS // = trimetilsilil derivato // // MOX-TMS // = metossima e trimetilsilil derivato // // F + // = frammento ionico // // (F+1)+ // = satellite dell'isotopo naturale, M/Z volte più grande del frammento ionico dell'isotopo principale corrispondente // // M + // = ione molecolare // // (M+1) + // = satellite dell'isotopo naturale, M/Z volte più grande dello ione molecolare dell'isotopo principale corrispondente. 1.2,3 // 2. // Introduzione // // I laboratori che eseguono le prove per la ricerca dei residui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze ad azione tireostatica devono applicare i criteri di qualità per l'interpretazione di risultati ottenuti con metodi analitici conformemente alle prescrizioni del presente capitolo. I criteri di qualità sono previsti per l'analisi qualitativa allo scopo di impedire erronei risultati positivi. Perché una conclusione sia positiva i risultati analitici devono soddisfare i criteri di qualità fissati per il metodo di rivelazione applicato. // 3. // Definizioni sulla presenza di un analita // 3.1. // Analita: un componente del campione di cui occorre dimostrare la presenza. Il termine « analita » comprende i derivati che si formano dall'analita durante l'analisi qualora ciò si verifichi. // 3.2. // Materiale standard: una sostanza ben definita con il massimo grado di purezza ottenibile che viene usata nell'analisi come riferimento. // 3.3. // Positivo: la presenza dell'analita nel campione è provata, secondo il metodo, quando vengono soddisfatti i criteri generali ed i criteri fissati per il metodo di rivelazione adottato. Il risultato dell'analisi è « positivo ». // 3.4. // Negativo: il risultato dell'analisi è considerato « negativo » se i criteri fissati per il metodo in questione non sono soddisfatti o se l'analisi non indica una presenza dell'analita nel campione superiore al limite di decisione. // 3.5. // Co-cromatografia: si applica il seguente procedimento. Prima della cromatografia la soluzione purificata da esaminare viene suddivisa in due parti. // // a) su una parte viene direttamente effettuata la cromatografia, // // b) all'altra parte si addiziona il materiale standard da identificare e si effettua la cromatografia della soluzione ottenuta. // // La quantità del materiale standard addizionato deve essere circa uguale alla quantità dell'analita che si ritiene presente. // 4. // Considerazioni generali per l'intero procedimento analtico // 4.1. // Criteri generali per l'intero procedimento // // Occorre provare che il metodo è in grado di distinguere l'analita da tutti i materiali di una adeguata matrice che possono interferire. // // Il comportamento fisico e chimico dell'analita durante l'analisi non deve discostarsi da quello del corrispondente materiale standard nella matrice adeguata. // 4.2. // Criteri generali per le tecniche di separazione // // L'intero procedimento va effettuato simultaneamente su ciascuna porzione di campione da anlizzare e su campioni di riferimento che contengono quantità note dell'analita. In alternativa si può aggiungere uno standard interno ai campioni. // 4.3. // Criteri per l'eventuale preconcentrazione, purificazione e separazione fisica e/o chimica off-line // // L'analita deve trovarsi nella frazione che è caratteristica del corrispondente materiale standard nel materiale di una matrice adeguata. // 4.4. // Criteri per l'eventuale separazione on-line (ad esempio GC) // // L'analita deve essere eluito nel tempo di ritenzione che è caratteristico del corrispondente materiale standard nel materiale di una matrice adeguata. // 4.5. // Preparazione del campione per l'analisi // // Il campione per l'analisi deve essere ricavato dal campione di laboratorio in modo che si abbiano le massime probabilità di rivelare l'analita se è presente. // 4.6. // Preparazione della porzione per l'analisi // // La porzione per l'analisi deve essere preparata a partire da un campione di analisi in modo che si abbiano le massime probabilità di rivelare l'analita se è presente. // 5. // Requisiti di almeno sei la determinazione di un analita mediante RIA // // Per effettuare uno screening: // 5.1. // Occorre specificare l'intervallo di lavoro della curva di taratura che deve coprire un intervallo di concentrazione di almeno 10 unità. // 5.2. // Ogni prova comprende i controlli. Valori della concentrazione: zero e un valore preso nella prima metà dell'intervallo di lavoro, un valore centrale ed un valore preso nella seconda metà dell'intervallo di lavoro. I risultati ottenuti devono essere coerenti con quelli delle prove precedenti. // 5.3. // Al limite di decisione, il coefficiente di variazione per i controlli deve essere inferiore a 0,15. // 5.4. // Si richiedono almeno sei punti di taratura adeguatamente distribuiti lungo la curva di taratura. // 5.5. // Controllare e specificare il recupero. // 5.6. // Nell'intorno del limite di decisione la curva di taratura deve essere tracciata con la massima precisione. // 5.7. // Determinati parametri del controllo di qualità devono essere conformi a quelli delle prove precedenti, ad esempio Bo/T, NSB, pendenza e intercetta della curva di taratura. // // Nota: La conformità con questi requisiti di qualità non esclude la possibilità di risultati positivi errati che traggono origine da errori sistematici quali reattività incrociate di anticorpi e dall'interferenza di materiale campionato non rappresentativo. // 6. // Criteri di identificazione di un analita mediante GC // 6.1. // L'analita deve eluire nel tempo di ritenzione che è caratteristico del materiale standard corrispondente. // 6.2. // Nel cromatogramma il massimo del picco più vicino al picco relativo all'analita rivelato deve distare da quest'ultimo almeno una larghezza misurata a metà altezza massima. // 6.3. // Per l'identificazione, alla GC deve essere abbinata anche una co-cromatografia. In quest'ultima, dovrebbe risultare ingrandito soltanto il picco che si ritiene dovuto all'analita e la larghezza misurata a metà altezza massima non dovrebbe discostarsi di ± il 10 % dalla larghezza misurata a metà altezza massima. // 7. // Criteri di identificazione di un analita mediante TLC o HPTLC // 7.1. // I valori Rf dell'analita devono corrispondere a quelli caratteristici del materiale standard. Questa condizione è soddisfatta quano i valori Rf dell'analita non si discostano di oltre il ±3 % dei valori Rf del materiale standard nelle stesse condizioni. // 7.2. // Alla vista, l'analita non deve risultare diverso del materiale standard. // 7.3. // Il centro della macchia più vicina a quella dell'analita deve distare da quest'ultima di una distanza pari almeno alla metà della somma dei diametri delle macchie. // 7.4. // Per l'identificazione, alla TLC si deve abbinare una co-cromatografia. In questa dovrebbe risultare ingrandita soltanto la macchia che si presume dovuta all'analita: non dovrebbe formarsi nessuna nuova macchia e l'aspetto della macchia non dovrebbe cambiare. // 7.5. // Come prova di conferma occorre effettuare una TLC bidimensionale. // 8. // Criteri per l'identificazione di un analita mediante HPLC-SP // 8.1. // La massima lunghezza d'onda di assorbimento dell'analita nello spettro UV deve risultare la stessa del materiale standard con un margine che dipende dalla risoluzione del sistema detettore. Per la rivelazione a serie di diodi tale margine è di solito ±2 mm. // 8.2. // Per le parti dei due spettri con un assorbanza relativa >10 %, lo spettro dell'analita non deve apparire diverso dallo spettro del materiale standard. Questo criterio è soddisfatto quando si hanno gli stessi massimi e in nessuno dei punti osservati la differenza tra i due spettri risulta superiore al 10 % dell'assorbanza del materiale standard. // 8.3. // Per l'identificazione, all'HPLC deve essere abbinata anche una co-cromatografia. In questa, dovrebbe risultare ingrandito soltanto il picco che si ritiene dovuto all'analita. // 9. // Criteri di identificazione di un analita medianta TLC-SP o HPTLC-SP // 9.1. // I valori Rf dell'analita devono corrispondere a quelli caratteristici del materiale standard. Questa condizione è soddisfatta quando i valori Rf dell'analita non si discostano di oltre il 3 % dai valori Rf del materiale standard nelle stesse condizioni. // 9.2. // L'analita non deve apparire diverso dal materiale standard. // 9.3. // Il centro della macchia più vicina a quella dell'analita deve distare da quest'ultima di un segmento pari almeno alla metà della somma dei diametri delle macchie. // 9.4. // Per l'identificazione, alla TLC deve essere abbinata anche una co-cromatografia. In questa, dovrebbe risultare ingrandita soltanto la macchia che si ritiene sia dovuta all'analita; non si dovrebbe avere alcuna nuova macchia. // 9.5. // La massima lunghezza d'onda di assorbimento dell'analita nello spettro deve risultare la stessa del materiale standard con un margine che dipende dalla risoluzione del sistema detettore. // 9.6. // Lo spettro dell'analita non deve apparire diverso dallo spettro del materiale standard. // 10. // Criteri di identificazione di un analita mediante GC-HRMS // 10.1. // Per essere classificate come misure ad alta risoluzione occorre ottenere risultati con una risoluzione superiore a 9 500 con una valle tra picchi adiacenti non superiore al 10 % delle altezze dei picchi. // 10.2. // Il rapporto di intensità della risposta ioni F+ e (F+1) + o M+ e (M+1)+ del derivato del materiale standard dev'essere uguale al valore teorico con uno scostameno dell'A %. // 10.3. // La massa del frammento del derivato dell'analita (determinato in corrispondenza del picco) dev'essere uguale al valore teorico del derivato corrispondente del materiale di riferimento con uno scostamento massimo di B amu. // // Nota: Per alcuni anabolizzanti i valori di A e B sono riportati a titolo esemplificativo nella tabella 1 dell'appendice. Il metodo ha però applicazione generale e non è limitato ai soli agenti anabolici. // 11. // Criteri di identificazione di un analita per GC-LRMS // 11.1. // Criteri per la gascromatografia // 11.1.1. // Il tempo di ritenzione di un'analita nella GC dev'essere uguale a quello degli standard di riferimento con uno scostamento massimo di ± 5 sec. // 11.1.2. // Se si usa uno standard interno, il tempo di ritenzione relativo (B/A) dell'analita dev'essere uguale, con uno scostamento massimo di ±5/A, a quello del materiale standard nella matrice appropriata, essendo: // // A = tempo di ritenzione assoluto di un interno standard espresso in secondi, // // B = tempo di ritenzione assoluto, espresso in secondi. // 11.2. // Criteri per la spettrometria di massa // 11.2.1. // Tutti gli ioni determinati devono essere derivati dall'analita eluito in un solo tempo di ritenzione. // 11.2.2. // Determinare le intensità di almeno due ioni o, meglio, più di due. // // Nota: Per identificare con certezza un analita occorre scegliere un numero adeguato di ioni che dipenderà dal particolare composto e dalla specificità degli ioni scelti. Per la maggior parte dei derivati degli anabolizzanti riportati nelle tabelle da 2 a 6 dell'appendice si raccomanda di prendere in considerazione almeno quattro ioni. // 11.2.3. // Intensità relativa degli ioni rivelati, espressa in percentuale dell'intensità dello ione che presenta l'intensità più elevata (picco base) deve essere uguale a quella dello standard di riferimento adeguato con uno scostamento massimo di ± 20 % (metodo CI) o ± 10 % (metodo EI). // 11.2.4. // Se possibile, lo ione molecolare, del materiale standard dev'essere presente nello spettro MID dell'analita. // // Nota: Le tabelle da 2 a 6 dell'appendice riportano a titolo esemplificativo alcuni dati sugli ioni molecolari e sui frammenti ionici dei derivati di alcuni agenti anabolici e relativi composti ottenuti per TMS, MOX-TMS, MOX e HFB. I criteri hanno però applicazione generale e non sono limitati soltanto a questi derivati. // 12. // Criteri di identificazione di un analita mediante spettrometria IR // 12.1. // Definizione di picchi idonei // // Si definiscono picchi idonei i massimi di assorbimento dello spettro IR di un materiale standard, che soddisfino alle seguenti condizioni: // 12.1.1. // Assorbimento massimo nella zona compresa tra 1 800 e 500 cm-1. // 12.1.2. // L'intensità dell'assorbimento non inferiore a: // 12.1.2.1. // un coefficiente di assorbanza molare specifico uguale a: // // - 40 rispetto ad assorbanza zero, e // // - 20 rispetto alla linea di base del picco // // oppure a // 12.1.2.2. // una assorbanza relativa di: // // - 12,5 % dell'assorbanza del picco più alto della zona 1 800-500 cm-1 se sono entrambi misurati rispetto ad assorbanza zero, e // // - 5 % dell'assorbanza del picco intenso della zona 1 800-500 cm-1 se sono entrambi misurati rispetto alla loro linea di base del picco. // // Nota: Anche se i picchi idonei di cui al punto 12.1.2.1 possono essere preferibili da un punto di vista teorico, quelli di cui al punto 12.1.2.2 sono in pratica di più facile determinazione. // 12.2. // Numero di picchi idonei // // Si richiede un minimo di sei picchi idonei. // 12.3. // Individuazione dei picchi idonei // // Le esatte posizioni dei picchi idonei, espresse in numeri d'onda interi fungono da parametri oggettivi e digitalizzati per valutare gli spettri dei campioni. // // Nota: La tabella 7 dell'appendice riporta i picchi idonei degli spettri IR di 49 agenti anabolici e relativi composti. Il metodo ha però applicazione generale e non è limitato ai soli anabolizzanti. // 12.4. // Uso delle tabelle dei picchi idonei // 12.4.1. // Si confrontano le posizioni dei picchi dello spettro IR dell'analita con le posizioni dei picchi adeguati dello spettro IR del materiale standard. // 12.4.2. // Si determina il numero di picchi dello spettro IR dell'analita le cui frequenze corrispondono a un picco adeguato dello spettro IR del materiale standard con uno scostamento massimo di ±1 cm-1; // 12.4.3. // Si calcola quindi l'indice del materiale standard nello spettro dell'analita. // 12.4.4. // Definizione di « indice »: // // l'« indice » è la percentuale dei picchi idonei trovata nello spettro IR dell'analita. // 12.5. // Criteri // 12.5.1. // L'indice deve risultare almeno al 50 %. // 12.5.2. // Il procedimento è applicabile soltanto ai picchi di assorbimento dello spettro del campione aventi un'altezza almeno tre volte maggiore alla distanza tra picco e picco del rumore. APPENDICE TABELLA 1 Dati per la conferma di anabolizzanti mediante HRMS 1.2,3.4,5.6,7 // // // // // Derivati (1) // Massa dello ione // Rapporto di intensità // Massa dello ione // // // 1.2.3.4.5.6.7 // // ione F+ o ione M+ valore nominale M/Z (amu) // ione (F+1)+ o ione (M+1)+ valore nominale M/Z (amu) // valore teorico // scostamento A (%) // valore teorico M/Z (2) (amu) // scostamento B M/Z (amu) // // // // // // // // DES-TMS // M+ 412 // 413 // 0,3777 // 8 // 412,2254 // 0,0012 // DE-TMS // M+ 410 // 411 // 0,3772 // 8,5 // 410,2097 // 0,0012 // HEX-TMS // F+ 207 // 208 // 0,1889 // 17 // 207,1205 // 0,0007 // NT-TMS // M+ 346 // 347 // non applic. // // 346,2328 // 0,0015 // NT-TMS // F+ 256 // 257 // non applic. // // 256,1827 // 0,0015 // NT-MOX-TMS // M+ 375 // 376 // non applic. // // 375,2593 // 0,0015 // epi NT-MOX-TMS // M+ 375 // 376 // non applic. // // 375,2593 // 0,0015 // E2-di-TMS // M+ 416 // 417 // non applic. // // 416,2567 // 0,0015 // // // // // // // 1.2 // (1) DES // = Dietilstilbestrolo, // DE // = Dienoestrolo, // HEX // = Esoestrolo, // NT // = 19-nortestosterone-17ss (nandrolone), // epi NT // = 19-nortestosterone-17a, // E2 // = oestradiolo-17ss. (2) Psalpsolati prendendo psome vase l'isotopo 12PS = 12,0000. TAVELLA 2 TMS derioati di alpsthni anavolizzanti e psomposti psorrelati. Ioni da thsare per la psonferma mediante LRMS (metodo EI) 1.2.3,6 // // // // // PM // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // Dienoestrolo // 410 // 410 // 395 // 381 // // Dietilstilvoestrolo // 412 // 412 // 397 // 383 // // 5a-Estrano-(3ss,17a)-diolo // 422 // 407 // 332 // 242 // 201 // 17a-Estradiolo // 416 // 416 // 401 // 326 // 285 // 17ss-Estradiolo // 416 // 416 // 401 // 326 // 285 // 17ss-Estradiolo-16,16,17(d3) (2) // 419 // 419 // 404 // 329 // 285 // Etinilestradiolo // 440 // 440 // 425 // 300 // 285 // Esoestrolo // 414 // 207 // 191 // 179 // // Metandrostenolone // 372 // 372 // 357 // 302 // 282 // Metiltestosterone // 374 // 359 // 317 // 304 // 284 // a-Nortestosterone // 346 // 346 // 331 // 256 // 215 // ss-Nortestosterone // 346 // 346 // 331 // 256 // 215 // Testosterone // 360 // 360 // 345 // 270 // 226 // 17-a-Trenbolone // 342 // 342 // 252 // 237 // 211 // 17-ss-Trenbolone // 342 // 342 // 252 // 237 // 211 // a-Zearalanolo // 538 // 538 // 523 // 433 // 307 // ss-Zearalanolo // 538 // 538 // 523 // 433 // 307 // Zearalanolone // 464 // 464 // 449 // 335 // 307 // Zearalenone // 462 // 462 // 429 // 333 // 305 // // // // // // (1) Ione sottolineato: pipspso vase. (2) Standard interno. TABELLA 3 MOX-TMS derivati di alcuni composti anabolici e relativi omotopi. Ioni da usare per la conferma mediante MRLS (metodo EI) 1.2.3,6 // // // // // PM // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // Medrossiproges terone // 474 // 474 // 459 // 443 // 353 // Metandrostenolone // 401 // 401 // 386 // 370 // 280 // Metiltestosterone // 403 // 403 // 313 // 298 // 282 // a-Nortestosterone // 375 // 375 // 360 // 344 // 285 // ss-Nortestosterone // 375 // 375 // 360 // 344 // 285 // Testosterone // 389 // 389 // 374 // 358 // 268 // a-Trenbolone // 371 // 371 // 281 // 266 // 253 // ss-Trenbolone // 371 // 371 // 281 // 266 // 253 // Zearalanolone // 493 // 493 // 478 // 462 // 406 // Zearalenone // 491 // 491 // 460 // 444 // 333 // // // // // // (1) Ione sottolineato: pipspso vase. TAVELLA 4 MOCH derioati di alpsthni anavolizzanti e psomposti psorrelati. Ioni da thsare per la psonferma mediante LRMS (metodo EI) 1.2.3,6 // // // // // PM // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // Apsetato di medrossiprogesterone // 415 // 415 // 330 // 312 // 287 // Apsetato di megestrolo // 413 // 413 // 353 // 338 // 310 // Apsetato di melengestrolo // 425 // 425 // 365 // 350 // 322 // Apsetato di trenvolone // 341 // 341 // 298 // 281 // 266 // // // // // // (1) Ione sottolineato: pipspso vase. TAVELLA 5 IFV derioati di alpsthni anavolizzanti e psomposti psorrelati. Ioni da thsare per la psonferma mediante LRMS (metodo EI) 1.2.3,6 // // // // // PM // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // AEéaaôéëóôéëâïaaó trolo // 660 // 660 // 631 // 447 // 341 // Dienoestrolo // 658 // 658 // 629 // 445 // 341 // Esoestrolo // 662 // 332 // 331 // 304 // 303 // 17-ss-Estradiolo,16,16,17(d3) (2) // 667 // 667 // 454 // 412 // 359 // // // // // // (1) Ione sottolineato: pipspso vase. (2) Standard interno. TABELLA 6 HFB derivati di stilbeni. Ioni da usare per la conferma mediante LRMS (metodo CI) a) CI dell'ammoniaca 1.2.3,6 // // // // // MP // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // Esoestrolo // 662 // 681 // 680 // 484 // 466 // Dietilstilboestrolo // 660 // 678 // 482 // 464 // // // // // // // (1) Ione sottolineato: picco base. b) CI del metano 1.2.3,6 // // // // // MP // M/Z (1) // // // 1.2.3.4.5.6 // // // // // // // Dietilstilboes trolo // 660 // 661 // 465 // 464 // // Dienoestrolo // 658 // 659 // 463 // 462 // 369 // // // // // // (1) Ione sottolineato: picco base. Note 1. L'intensità relativa di alcuni degli ioni sopra riportati è troppo bassa (circa 10 %) per essere usata con una sufficiente affidabilità nella conferma. 2. L'intensità relativa degli ioni può variare con la quantità di analita iniettato nella colonna. Nel caso del dietistilboestrolo a basse concentrazioni nella CI del metano, lo ione 661 diventa il picco base (cioè si ha meno frammentazione nella forma mono-HFB). È pertanto importante che il confronto fra l'intensità degli ioni relativi dell'analita e quella dello standard di riferimento venga effettuata all'incirca alla stessa concentrazione. 3. La ionizzazione con il metano produce la scissione della molecola di estrolo. I frammenti ionici di piccola massa non si separano completamente dagli altri estratti. TABELLA 7 Picchi idonei degli spettri IR di 49 composti anabolizzanti e composti correlati 1.2.3.4.5.6.7.8.9.10 // // // // // // // // // // // 1 // 2 // 3 // 4 // 5 // 6 // 7 // 8 // 9 // 10 // // // // // // // // // // // ssE2 // aE2 // E2Ac // E2diAc // E2P // E2diP // E2S // E2Bz // E2ME // EE // // // // // // // // // // // // // 1 701 // 1 766 1 734 // 1 712 // 1 763 1 757 1 733 // // 1 729 // // // // // // // // // // // // // 1 610 // 1 610 // 1 620 // // 1 696 1 619 // // // 1 600 // 1 610 // 1 615 // // // // // // // // // // // 1 586 // 1 586 1 500 // 1 584 // // 1 583 // // // // 1 577 1 502 // 1 584 1 501 // // // // // // // // // // // 1 498 1 449 1 416 // 1 443 // 1 498 1 460 // 1 494 // 1 499 1 460 1 444 // 1 492 1 460 1 419 // 1 494 1 420 // 1 498 1 451 // 1 469 1 444 // 1 473 1 449 1 433 // // // // // // // // // // // 1 382 1 357 1 320 1 302 // 1 379 1 352 // 1 373 1 351 // 1 375 // 1 350 // 1 381 1 351 // 1 392 1 307 // 1 380 1 315 // 1 374 1 334 1 313 // 1 384 1 358 // // // // // // // // // // // 1 283 1 250 1 231 // 1 284 1 253 1 234 // 1 292 1 276 1 248 1 235 // 1 262 1 248 // 1 288 1 249 1 225 1 212 // 1 273 1 247 1 224 // 1 241 // 1 266 1 223 1 216 // 1 291 1 278 1 252 1 236 // 1 299 1 257 1 203 // // // // // // // // // // // 1 156 1 130 1 118 1 102 // 1 154 1 119 1 101 // 1 152 // 1 198 1 177 1 149 // 1 151 // 1 197 1 154 1 139 // 1 176 // 1 176 1 152 1 128 // 1 183 1 153 1 130 1 120 // 1 184 1 160 1 147 1 135 1 122 1 111 // // // // // // // // // // // 1 056 1 021 1 012 // 1 074 1 054 1 036 1 013 // 1 017 // 1 040 1 015 // 1 086 1 072 1 012 // 1 078 1 055 1 033 1 014 // 1 097 1 075 1 049 1 018 // 1 067 1 025 1 012 // 1 055 1 042 1 025 // 1 069 1 055 1 043 1 022 1 006 // // // // // // // // // // // 962 930 917 905 // 994 970 945 919 // // 946 // 962 // 917 // 932 908 // // // 971 930 914 // // // // // // // // // // // 874 820 // 866 821 // 873 // 885 // 878 871 816 // 897 807 // 887 866 847 822 808 // 889 // 898 870 818 // 880 857 823 // // // // // // // // // // // 786 733 // 787 // // // // // 770 // 705 // 785 // 789 // // // // // // // // // // // // // 624 // // // // 650 // 688 // // 646 622 // // // // // // // // // // // // 573 // // // // // 579 519 // // // 568 // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.10 // // // // // // // // // // // 1 1 // 12 // 13 // 14 // 15 // 16 // 17 // 18 // 19 // 20 // // // // // // // // // // // M // E1 // E3 // Eq // Eqln // ssT // aT // TAc // TP // TiC // // // // // // // // // // // // 1 719 // // 1 719 // 1 717 // // // 1 741 // 1 729 // 1 733 // // // // // // // // // // // 1 612 // 1 621 // 1 610 // 1 623 // 1 622 // 1 666 1 658 1 612 // 1 654 1 610 // 1 672 1 618 // 1 669 1 611 // 1 667 1 617 // // // // // // // // // // // 1 580 1 506 // 1 584 // 1 501 // 1 588 1 509 1 500 // 1 599 // // // // // // // // // // // // // // // // 1 467 1 449 // 1 499 // 1 452 // 1 470 1 407 // 1 480 1 460 1 423 // 1 470 1 432 // 1 432 // 1 449 1 433 // 1 450 // 1 470 1 450 // // // // // // // // // // // 1 377 1 352 1 325 // 1 396 1 361 // 1 384 1 353 1 322 // 1 354 // 1 389 // 1 378 1 360 // 1 380 // 1 377 1 362 1 333 // 1 331 // 1 378 1 331 // // // // // // // // // // // 1 291 1 255 1 242 // 1 287 1 250 // 1 285 1 254 1 238 1 201 // 1 278 1 246 // 1 225 1 208 // 1 277 1 233 // 1 276 1 231 // 1 274 1 232 // 1 270 1 240 // 1 294 1 272 1 230 // // // // // // // // // // // 1 183 1 165 1 146 1 133 1 121 1 109 // // 1 174 1 149 1 118 1 103 // 1 158 1 148 // 1 169 // 1 199 1 131 1 114 // 1 189 // // 1 185 // 1 182 1 125 1 103 // // // // // // // // // // // 1 062 1 036 1 019 // 1 055 // 1 068 1 062 1 034 // 1 056 // 1 066 // 1 067 1 056 1 017 // // 1 041 1 022 // 1 080 1 043 1 020 // 1 043 1 009 // // // // // // // // // // // 967 905 // 920 // 964 943 928 917 // // // 957 943 // // 945 // // 941 // // // // // // // // // // // 862 844 833 823 // 877 819 // 886 871 851 818 // 875 810 // 849 817 // 870 // // 863 // 863 // 864 // // // // // // // // // // // 789 702 // 788 // 787 // // // // // // // // // // // // // // // // // // 658 620 // 673 // 662 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 582 // // // // // // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.10 // // // // // // // // // // // 2 1 // 22 // 23 // 24 // 25 // 26 // 27 // 28 // 29 // 30 // // // // // // // // // // // TD // TUn // TPP // TBz // MT // MT-D9 (11) // ssNT // aNT // NTP // NTD // // // // // // // // // // // 1 734 // 1 738 // 1 734 // 1 709 // // // // // 1 741 // 1 734 // // // // // // // // // // // 1 670 1 618 // 1 674 1 610 // 1 672 1 615 // 1 673 1 617 // 1 664 1 611 // 1 651 1 607 // 1 666 1 619 // 1 663 1 643 1 615 // 1 650 1 620 // 1 676 1 619 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 1 471 1 415 // 1 473 // 1 455 1 424 // 1 452 1 435 // 1 450 // // 1 412 // // 1 448 1 422 // 1 465 1 453 // // // // // // // // // // // 1 379 1 352 1 327 // 1 379 1 335 1 315 // 1 381 // 1 316 // 1 374 // 1 370 1 348 1 332 // 1 335 // // 1 346 // 1 381 1 332 // // // // // // // // // // // 1 291 1 256 1 216 // 1 276 1 249 1 208 // 1 298 1 270 1 229 // 1 275 1 229 // 1 297 1 278 1 234 // 1 274 1 232 // 1 259 1 228 1 206 // 1 258 1 211 // 1 265 1 202 // 1 258 1 212 // // // // // // // // // // // 1 180 // 1 172 // 1 171 // 1 178 1 110 // 1 190 1 156 // 1 188 1 173 1 153 1 128 1 104 // 1 133 // 1 135 // // 1 177 // // // // // // // // // // // // // 1 068 1 009 // 1 070 1 023 // 1 091 // // 1 075 1 052 1 023 // 1 051 // 1 085 1 052 1 025 // // // // // // // // // // // // // // 944 // 998 941 // 950 // 956 937 // 967 // 968 // 968 // // // // // // // // // // // // 867 // 887 // 862 // 866 // 873 // 882 // 885 // 880 // 884 // // // // // // // // // // // // // // 748 709 // 719 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 699 // 688 // // 692 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9.10 // // // // // // // // // // // 3 1 // 32 // 33 // 34 // 35 // 36 // 37 // 38 // 39 // 40 // // // // // // // // // // // NTL // NTPP // Eti // ssTB // aTB // TBA // P // MP // MPA // MGA // // // // // // // // // // // 1 735 // 1 730 // // // // 1 737 // // // 1 732 1 717 // 1 731 1 710 // // // // // // // // // // // 1 676 1 619 // 1 675 1 618 // 1 659 1 612 // 1 639 // 1 643 // 1 660 // 1 699 1 663 1 616 // 1 696 1 664 1 603 // 1 673 1 608 // 1 664 1 629 // // // // // // // // // // // // 1 501 // // 1 569 // 1 578 // 1 573 // // // // 1 584 // // // // // // // // // // // 1 473 1 418 // 1 447 // 1 430 1 418 // 1 438 // 1 450 1 435 // 1 439 // 1 439 // 1 448 // // 1 460 1 447 // // // // // // // // // // // 1 381 1 335 // 1 330 // 1 383 1 331 // 1 379 1 353 1 346 1 322 // 1 391 1 369 1 346 1 321 1 310 // 1 375 // 1 386 1 358 1 328 // 1 349 // 1 365 // 1 390 1 366 // // // // // // // // // // // 1 299 1 269 1 240 1 205 // 1 297 1 259 1 205 // 1 288 1 232 // 1 288 1 267 1 226 // 1 279 1 240 1 229 // 1 245 // 1 279 1 237 1 228 1 204 // 1 271 1 233 // 1 261 1 253 // 1 269 1 260 1 247 1 224 // // // // // // // // // // // 1 175 // 1 177 // 1 191 1 125 // 1 199 1 101 // 1 198 1 150 1 126 // // 1 162 // 1 186 1 123 // 1 187 // 1 167 1 143 1 127 1 109 // // // // // // // // // // // 1 053 // 1 080 1 049 // 1 068 1 060 // 1 075 1 054 1 017 // 1 088 1 028 1 011 // 1 096 1 053 1 023 // // 1 093 // 1 080 1 056 // 1 083 1 059 1 014 // // // // // // // // // // // // 965 // // // 937 // 987 // 948 // // 965 // 963 // // // // // // // // // // // // 879 // 869 // // 852 // // 871 // 871 // // 878 // // // // // // // // // // // // 752 704 // 724 // // 795 762 // // // // // // // // // // // // // // // // // // 697 // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // // 597 // // // // // // // // // // // // 1.2.3.4.5.6.7.8.9 // // // // // // // // // // 41 // 42 // 43 // 44 // 45 // 46 // 47 // 48 // 49 // // // // // // // // // // MLGA // DE // DES // HEX // DEdiAc // DESdiP // Z // Cort // HCort // // // // // // // // // // 1 738 1 716 // // // // 1 757 // 1 763 1 754 // // // 1 714 // // // // // // // // // // 1 666 1 625 // 1 619 1 608 // 1 609 // 1 613 // // // 1 644 1 615 // 1 694 1 648 1 618 // 1 644 1 610 // // // // // // // // // // 1 579 // 1 591 1 513 // 1 590 1 514 // 1 598 1 516 // 1 503 // 1 504 // 1 587 // // // // // // // // // // // // 1 444 1 416 // 1 426 // 1 462 1 427 // 1 458 1 440 // // 1 459 // 1 464 // 1 447 1 413 // 1 432 // // // // // // // // // // 1 389 1 372 1 318 // 1 333 // 1 337 // // 1 368 // 1 363 // 1 381 1 353 1 311 // 1 391 // // // // // // // // // // // 1 260 1 245 1 231 1 205 // 1 247 1 205 // 1 282 1 247 1 204 // 1 218 // 1 218 // 1 210 // 1 259 1 200 // 1 269 // 1 271 1 237 // // // // // // // // // // 1 123 // 1 171 1 102 // 1 173 1 114 // 1 174 1 107 // 1 196 1 164 // 1 157 // 1 167 // 1 186 1 159 // 1 133 1 115 // // // // // // // // // // 1 037 // // 1 012 // // 1 019 // 1 076 1 019 // 1 096 1 075 // 1 075 1 064 1 037 // 1 047 1 006 // // // // // // // // // // 972 953 930 // // // // 910 // // 989 // // 942 900 // // // // // // // // // // 881 // 853 834 826 // 851 831 805 // 847 830 804 // 865 // 895 // 840 // 875 // 865 // // // // // // // // // // // 775 // 721 // 716 // // // // // // // // // // // // // // // 627 612 // 649 620 // 646 // 646 // 679 // // // // // // // // // // // // // // 551 // 520 // 586 // 573 510 // // // // // // // // // // // // // // Elenco delle abbreviazioni 1.2 // 1 ssE2 // Estradiolo-17ss // 2 aE2 // Estradiolo-17 a // 3 E2Ac // Estradiolo-17-acetato // 4 E2diAc // Estradiolo diacetato // 5 E2P // Estradiolo-17-propionato // 6 E2diP // Estradiolo dipropionato // 7 E2S // Estradiolo-3-solfato // 8 E2Bz // Estradiolo-3-benzoato // 9 E2ME // Estradiolo-3-metiletere // 10 EE // Etinilestradiolo // 11 M // Mestranolo // 12 E1 // Estrone // 13 E3 // Estriolo // 14 Eq // Equilino // 15 Eqln // Equilenino // 16 ssT // Testosterone-17ss // 17 aT // Testosterone-17a // 18 TAc // Acetato di testosterone // 19 TP // Propionato di testosterone // 20 TiC // Isocaproato di testosterone // 21 TD // Decanoato di testosterone // 22 TUn // Undecanoato di testosterone // 23 TPP // Fenilpropionato di testosterone // 24 TBz // Benzoato di testosterone // 25 MT // Metiltestosterone-17a // 26 MT-D9(11) // Metiltestosterone-D9(11) // 27 ssNT // Nortestosterone-17ss // 28 aNT // Nortestosterone-17a // 29 NTP // Nortestosterone propionato // 30 NTD // Nortestosterone decanoato // 21 NTL // Nortestosterone laurato // 32 NTPP // Nortestosterone fenilproprionato // 33 Eti // Etilsterone // 34 ssTB // Trenbolone-17ss // 35 aTB // Trenbolone-17a // 36 TBA // Acetato di trenbolone // 37 P // Progesterone // 38 MP // Medrossiprogesterone // 39 MPA // Acetato di medrossiprogesterone // 40 MGA // Acetato di megestrolo // 41 MLGA // Acetato di melengestrolo // 42 DE // Dienoestrolo // 43 DES // Dietilstilboestrolo // 44 HEX // Esoestrolo // 45 DEdiAc // Dienoestrolo diacetato // 46 DESdiP // Dietilstilboestrolo dipropionato // 47 Z // Zeranolo // 48 Cort // Corticosterone // 49 HCort // Idrocortisone