92/608/CEE: Decisione del Consiglio, del 14 novembre 1992, che stabilisce metodi di analisi e di prova del latte trattato termicamente, destinato al consumo umano diretto



Gazzetta ufficiale n. L 407 del 31/12/1992 pag. 0029 - 0046

edizione speciale finlandese: capitolo 3 tomo 47 pag. 0164

edizione speciale svedese/ capitolo 3 tomo 47 pag. 0164



DECISIONE DEL CONSIGLIO del 14 novembre 1992 che stabilisce metodi di analisi e di prova del latte trattato termicamente, destinato al consumo umano diretto (92/608/CEE) IL CONSIGLIO DELLE COMUNITÀ EUROPEE, visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea, vista la direttiva 85/397/CEE del Consiglio, del 5 agosto 1985, concernente i problemi sanitari e di polizia sanitaria negli scambi intracomunitari di latte trattato termicamente (1), in particolare l'articolo 11, paragrafo 6, vista la proposta della Commissione, considerando che, a norma dell'articolo 11, paragrafo 6 della direttiva 85/397/CEE, il Consiglio adotta, fra l'altro, le modalità dei controlli di cui al paragrafo 2 dello stesso articolo; che tali controlli, che devono essere effettuati dagli stabilimenti di trattamento sotto la supervisione e la responsabilità del servizio ufficiale, nonché sotto il controllo periodico di quest'ultimo, sono intesi a garantire l'osservanza delle norme della suddetta direttiva e, più particolarmente, dei requisiti specificati all'articolo 3, lettera A, punto 3 della stessa; considerando che, in sede di determinazione delle modalità di controllo, occorre definire metodi per metterle in atto; considerando che, per il latte trattato termicamente destinato al consumo umano diretto, è d'uopo stabilire i metodi necessari per accertare la materia secca, il tenore di materia grassa, il tenore di materia secca non grassa, il tenore di azoto totale, il tenore proteico e la massa volumica; considerando che, per motivi d'ordine tecnico, è opportuno che in una prima fase vengano definiti, per garantire l'osservanza dell'articolo 3, lettera A, punto 3 della direttiva 85/397/CEE, metodi d'analisi e di prova di riferimento; che è particolarmente importante proseguire l'esame delle condizioni d'impiego dei metodi d'analisi e di prova di uso corrente; che, in attesa dei risultati di questo esame, le autorità competenti devono verificare che i metodi d'uso corrente applicati per garantire l'osservanza delle suddette disposizioni siano adatti allo scopo; considerando che, nello stabilire i metodi d'analisi e di prova di riferimento, occorre determinare i procedimenti di analisi e fissare criteri di attendibilità, ai fini di un'interpretazione uniforme dei risultati, HA ADOTTATO LA PRESENTE DECISIONE: Articolo 1 I metodi di riferimento da applicare per l'analisi e la prova del latte trattato termicamente destinato al consumo umano diretto sono i seguenti: - determinazione della materia secca, - determinazione del tenore di materia grassa, - determinazione del tenore di materia secca non grassa, - determinazione del tenore di azoto totale del latte, - determinazione del tenore proteico, - determinazione della massa volumica. N. L 407/30 31. 12. 92 Articolo 2 L'attuazione dei metodi d'analisi e di prova di riferimento, la determinazione dei criteri di attendibilità e la raccolta dei campioni devono aver luogo secondo le norme di cui all'allegato I. Articolo 3 I metodi di cui all'articolo 1 sono descritti nell'allegato II. Articolo 4 Gli Stati membri sono destinatari della presente decisione. Fatto a Bruxelles, addì 14 novembre 1992. Per il Consiglio Il Presidente J. GUMMER (1) GU n. L 226 del 24. 8. 1985, pag. 13. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva 89/662/CEE (GU n. L 395 del 30. 12. 1989, pag. 13). ALLEGATO I I. DISPOSIZIONI GENERALI 1. INTRODUZIONE Sono descritte le disposizioni generali concernenti i reattivi, le apparecchiature, l'espressione dei risultati, i criteri di precisione e la relazione delle prove. Le autorità competenti degli Stati membri ed i lavoratori preposti ai prelievi e alle analisi del latte devono rispettare le disposizioni generali. 2. REATTIVI 2.1. Acqua 2.1.1. Tutte le volte che venga fatto riferimento all'acqua ai fini della dissoluzione, della diluizione o del lavaggio con acqua, salvo diverse indicazioni, deve essere impiegata acqua distillata, acqua deionizzata o acqua demineralizzata di purezza almeno equivalente. 2.1.2. Ove si parli, senza ulteriori precisazioni, di «soluzione» o di «diluzione», si intende «soluzione in acqua» o «diluzione con acqua». 2.2. Sostanze chimiche Salvo altra indicazione, tutte le sostanze chimiche impiegate devono avere purezza analitica riconosciuta. 3. APPARECCHIATURA 3.1. Elenco delle apparecchiature L'elenco delle apparecchiature dei vari metodi di riferimento comprende soltanto le apparecchiature destinate a particolari impieghi o che richiedono determinate specifiche. 3.2. Bilancia analitica Per «bilancia analitica» si intende una bilancia con sensibilità di 0,1 mg. 4. ESPRESSIONE DEI RISULTATI 4.1. Risultati A meno che non sia specificato diversamente il risultato dichiarato nella relazione dell'analisi (6) deve essere la media aritmetica dei valori ottenuti da due prove che soddisfino ai criteri di ripetibilità (5.1) fissati per quel dato metodo. Qualora tali criteri non vengano rispettati occorre ripetere la prova oppure dichiarare non valido il risultato. 4.2. Calcolo delle percentuali Salvo altre indicazioni, i risultati devono essere calcolati come percentuale in massa del campione. 5. CRITERI DI PRECISIONE: RIPETIBILITÀ E RIPRODUCIBILITÀ 5.1. I criteri di precisione adottati per i vari metodi sono così definiti: 5.1.1. Ripetibilità (r) è il valore al di sotto del quale dovrebbe cadere la differenza assoluta tra due singoli risultati di prova ottenuti con lo stesso procedimento su campioni di materiali identici, nelle stesse condizioni (stesso operatore, stessa apparecchiatura, stesso laboratorio e a breve distanza di tempo). 5.1.2. Riproducibilità (R) è il valore al di sotto del quale dovrebbe cadere la differenza assoluta tra due singoli risultati di prova ottenuti con lo stesso procedimento su campioni di materiali identici, in condizioni differenti (differenti operatori, differenti apparecchiature, differenti laboratori e/o tempi). 5.1.3. A meno che non sia specificato diversamente per ogni singolo metodo i valori relativi ai criteri di ripetibilità e riproducibilità rappresentano intervalli al grado di affidabilità del 95 % secondo la definizione della norma ISO 5725:2' ed. 1986. 5.1.4. Le prove interlaboratorio e gli studi necessari dovrebbero essere programmati e svolti conformemente agli orientamenti internazionali. 6. RELAZIONE La relazione della prova deve specificare il metodo di analisi adottato ed i risultati ottenuti. Riporta inoltre nei particolari procedimenti seguiti che non sono specificati nel metodo di analisi o che sono facoltativi, come pure tutti i fattori che possono aver condizionato i risultati ottenuti. La relazione della prova riporta anche tutte le informazioni necessarie per la completa identificazione del campione. N. L 407/32 31. 12. 92 II. CAMPIONAMENTO DEL LATTE TRATTATO TERMICAMENTE 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Questo procedimento descrive il metodo di riferimento per il campionamento, trasporto e la conservazione dei campioni di latte trattato termicamente. 2. GENERALITÀ Il campionamento del latte trattato termicamente contenuto in cisterne, ecc. viene effettuato da personale specializzato appositamente addestrato. Se del caso, le autorità competenti o il laboratorio di analisi provvedono a dare al personale una specifica formazione sulle tecniche di campionamento atte a garantire che il campione sia rappresentativo di tutta la partita e ad essa conforme. Le autorità competenti o il laboratorio provvedono eventualmente ad addestrare il personale su come etichettare il campione per poterlo identificare senza errori. 3. APPARECCHI PER LA CAMPIONATURA 3.1. Generalità L'attrezzatura per il campionamento deve essere fabbricato in acciaio inossidabile o in altro materiale equivalente sufficientemente robusto e realizzata in modo da servire adeguatamente allo scopo (miscelazione, campionamento, ecc.). Gli stantuffi e gli agitatori per mescolare i liquidi nei recipienti devono avere dimensioni tali da garantire un adeguato rimescolamento del prodotto senza però provocare lo sviluppo di rancidità. I mestoli devono essere provvisti di un solido manico sufficientemente lungo in modo da consentire il prelievo in qualsiasi punto del recipiente. La sua capacità non deve essere inferiore a 50 ml. I recipienti destinati a contenere i campioni e i relativi coperchi devono essere di vetro oppure di un metallo o di una materia plastica adeguati. I materiali con cui è realizzata l'attrezzatura per il campionamento (recipienti e coperchi compresi) non devono dare luogo ad alcuna interazione con il campione che possa alterare i risultati dell'esame. Tutte le superfici dell'attrezzatura per il campionamento e dei recipienti devono essere pulite ed asciutte, levigate e prive di fessure; gli spigoli devono essere arrotondati. 4. TECNICA DI CAMPIONAMENTO 4.1. Generalità A prescindere dal tipo di saggio da effettuare, prima del campionamento il latte deve essere mescolato bene manualmente o meccanicamente. Il campione deve essere prelevato subito dopo il mescolamento, quando il latte è ancora in movimento. Il volume del campione deve essere in rapporto con le esigenze dell'analisi. I recipienti usati per il campione devono avere una capacità tale da risultare quasi completamente riempiti dal campione stesso, in modo che prima della prova sia possibile mescolarne il contenuto, evitandone però la zangolatura durante il trasporto. 4.2. Campionamento 4.2.1. Campionamento di una partita contenuta in più serbatoi Quando la partita di latte da campionare è contenuta in più di un serbatoio, si preleva da ciascuno di essi un campione rappresentativo annotando la quantità di latte corrispondente. Se i campioni di ciascun serbatoio non debbono essere esaminati separatamente, mescolarli in quantità proporzionali al contenuto dei recipienti da cui erano stati effettuati i rispettivi prelievi. Dopo aver mescolato, prelevare uno o più campioni da queste quantità proporzionali. 4.2.2. Campionamento da grandi recipienti - serbatoi di stoccaggio, autocisterne e vagoni cisterna 4.2.2.1. Prima del campionamento mescolare il latte con un metodo adeguato. Per mescolare il contenuto di grandi recipienti, dei serbatoi di stoccaggio, delle autocisterne o dei vagoni cisterna, si consiglia di ricorrere all'agitazione meccanica (4.2.2.2). La durata della mescolazione deve essere commisurata al periodo durante il quale il latte è rimasto a riposo. Occorre dimostrare che il metodo di mescolamento adottato in ciascun caso particolare è adeguato agli scopi dell'analisi da effettuare; il criterio di efficienza del mescolamento influisce sensibilmente sulla similarità dei risultati delle analisi effettuate su campioni prelevati da punti diversi della partita o dallo scarico della cisterna ad intervalli regolari durante le operazioni di svuotamento. Un metodo per mescolare il latte (crudo o intero) è considerato efficace se la differenza del tenore di grassi fra due campioni, prelevati in tali condizioni, risulta inferiore allo 0,1 %. N. L 407/33 31. 12. 92 Nei grandi serbatoi provvisti sul fondo di uno scarico si può avere in tale punto una piccola quantità di latte non rappresentativa di tutto il contenuto anche dopo aver proceduto al mescolamento. È preferibile pertanto prelevare i campioni attraverso un passo d'uomo. Per i campioni prelevati dallo scarico fare scorrere prima un quantitativo sufficiente di latte in modo da garantire che i campioni siano rappresentativi di tutta la partita. 4.2.2.2. Il contenuto dei grandi recipienti, dei serbatoi di stoccaggio, delle autocisterne o dei vagoni cisterna può essere mescolato: - con un agitatore meccanico montato nel recipiente ed azionato da un motore elettrico; - con un'elica o con un agitatore sospeso nel latte, azionati da un motore elettrico e montati nel passo d'uomo; - nel caso di vagoni cisterna o di autocisterne facendo circolare il latte attraverso il tubo di trasferimento collegato alle pompe di scarico della cisterna e introdotto nel passo d'uomo; - con aria compressa filtrata e pulita. In questo caso occorre ridurre al minimo la pressione e il volume dell'aria onde evitare lo sviluppo di rancidità. 4.3. Campionamento di latte trattato termicamente destinato al consumo diretto in confezioni al dettaglio I campioni di latte trattato termicamente per il consumo diretto in confezioni al dettaglio devono essere costituiti da confezioni chiuse ermeticamente. I campioni devono essere prelevati il più presto possibile subito dopo il trattamento, se possibile dalla macchina confezionatrice o dalla cella frigorifera dell'impianto di trattamento; per il latte pastorizzato si dovrà procedere al prelievo dei campioni il giorno stesso del trattamento. I campioni devono essere prelevati per ciascun tipo di trattamento termico (pastorizzazione, UHT e sterilizzazione) in numero corrispondente alle analisi previste e conformemente alle istruzioni del laboratorio preposto alle analisi o di altre autorità competenti. 5. IDENTIFICAZIONE DEL CAMPIONE Il campione deve essere contrassegnato secondo le istruzioni del laboratorio di analisi o dell'autorità competente, con un codice che ne renda agevole l'identificazione. 6. CONSERVAZIONE, TRASPORTO E DEPOSITO DEI CAMPIONI Le istruzioni relative alle condizioni di conservazione (impiego di conservanti chimici, temperatura), di trasporto e di deposito e al tempo che deve intercorrere tra il campionamento e l'analisi del latte devono essere fornite dal laboratorio di analisi a seconda del tipo di latte e del metodo di analisi applicato; dette istruzioni debbono essere impartite di concerto con l'autorità nazionale competente. Nelle istruzioni debbono figurare i seguenti punti: - durante il trasporto e il deposito debbono essere prese opportune misure per evitare l'esposizione ad odori sgradevoli o alla luce solare diretta. I contenitori dei campioni, se trasparenti, devono essere conservati al buio. ALLEGATO II I. DETERMINAZIONE DEL TENORE DI MATERIA SECCA 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento per la determinazione del contenuto in materia secca del latte. 2. DEFINIZIONE Percentuale di materia secca: la massa ottenuta alla fine del processo di essiccazione ed espressa in percentuale in massa. 3. PRINCIPIO L'acqua contenuta nell'aliquota di analisi in esame viene fatta evaporare in una stufa di essiccazione alla temperatura di 102±2 oC. 4. APPARECCHIATURA E VETRERIA Materiale di uso comune in laboratorio ed in particolare: 4.1. Bilancia analitica 4.2. Essicatore contenente un opportuno essiccante (ad esempio, gel di silice addizionato di un indicatore di umidità e attivato di recente). 4.3. Stufa di essiccazione, ventilata e termostatata a 102±2 oC; la temperatura deve essere uniforme in tutta la stufa. 4.4. Capsule a fondo piatto, alte 20-25 mm e con diametro di 50-75 mm, in materiale adeguato, complete di coperchio ad ottima tenuta ma facili da togliere. 4.5. Bagnomaria bollente 4.6. Omogeneizzatore 5. PREPARAZIONE DEL CAMPIONE PER L'ANALISI Portare il campione di latte alla temperatura di 20-25 oC. Mescolare accuratamente il fondo in modo da avere una distribuzione omogenea del grasso in tutto il campione. Non agitare troppo energicamente onde evitare la formazione di schiuma o la separazione del grasso. Se non si riesce a disperdere lo strato di panna, riscaldare lentamente in bagnomaria a 35-40 oC e mescolando accuratamente incorporare la crema aderente alle pareti del recipiente. Raffreddare quindi rapidamente il campione a 20-25 oC. Se si ritiene opportuno, per agevolare la dispersione del grasso si puó ricorrere ad un omogenizzatore. I risultati delle analisi non possono essere esatti se nel campione si separa del grasso liquido oppure delle particelle bianche di forma irregolare aderenti alle pareti del contenitore. 6. MODO DI OPERARE 6.1. Preparazione della capsula Riscaldare la capsula (4.4) con il suo coperchio accanto nella stufa (4.3), termostatata a 102 ± 2 oC, per almeno 30 minuti. Porre il coperchio sulla capsula e trasferirla immediatamente nell'essiccatore (4.2). Lasciar raffreddare a temperatura ambiente (cioè per almeno 30 minuti) e pesare con la precisione di 0,1 mg. 6.2. Aliquota di analisi Pesare immediatamente, con la precisione di 0,1 mg, 3-5 g del campione preparato per l'analisi (5) nella capsula preparata (6.1). 6.3. Determinazione 6.3.1. Preessiccare la capsula per 30 minuti, scaldandola in bagnomaria bollente (4.5). N. L 407/35 31. 12. 92 6.3.2. Riscaldare la capsula, con il suo coperchio accanto, nella stufa (4.3) termostatata a 102±2 oC, per due ore. Coprire la capsula con il coperchio togliendola quindi dalla stufa. 6.3.3. Lasciare raffreddare la capsula nell'essiccatore (4.2) a temperatura ambiente (cioè per almeno 30 minuti) e pesare con la precisione di 0,1 mg. 6.3.4. Scaldare nuovamente la capsula, con accanto il coperchio, nella stufa per un'ora. Coprire la capsula con il coperchio togliendola quindi dalla stufa. Lasciare raffreddare per circa 30 minuti nell'essiccatore e pesare con la precisione di 0,1 mg. 6.3.5. Ripetere le operazioni descritte al punto 6.3.4 finché la differenza in massa tra due successive pesate sia pari o inferiore a 0,5 mg. Registrare il più basso valore di massa trovato. 7. ESPRESSIONE DEI RISULTATI 7.1. Calcolo e formula Calcolare il contenuto in materia secca espresso come percentuale sulla massa: T = m2 m0 m1 m0 × 100 dove T = è il contenuto totale in materia secca espresso in g per 100 g; m0 = è la massa, espressa in grammi, della capsula e del coperchio (cfr. 6.1); m1 = è la massa, espressa in grammi, della capsula, del coperchio e dell'aliquota di analisi (cfr. 6.2); m2 = è la massa, espressa in grammi, della capsula, del coperchio e dell'aliquota di analisi essiccata (cfr. 6.3.5). Arrotondare il valore ottenuto a meno dello 0,01 % (percentuale sulla massa). 7.2. Precisione 7.2.1. Ripetibilità (r): 0,10 g di materia secca per 100 g di prodotto. 7.2.2. Riproducibilità (R): 0,20 g di materia secca per 100 g di prodotto. II. DETERMINAZIONE DEL TENORE DI MATERIA GRASSA 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento per la determinazione del tenore in materia grassa del latte crudo e del latte intero, parzialmente scremato e scremato. 2. DEFINIZIONE Tenore in materia grassa del latte: tutta la materia determinata con il presente metodo. Si esprime in percentuale di massa. 3. PRINCIPIO La determinazione viene effettuata per estrazione con etere etilico ed etere di petrolio di una soluzione etanolico-ammoniacale dell'aliquota di analisi seguita da distillazione o evaporazione dei solventi e determinazione della massa del residuo estratto solubile in etere di petrolio (procedimento di solito conosciuto come metodo Rôse-Gottlieb). 4. REATTIVI Tutti i reattivi devono essere di purezza analitica riconosciuta e non devono lasciare residui apprezzabili quando sono impiegati nella prova in bianco. Per verificare la qualità dei reattivi, effettuare una determinazione come descritto al punto 6.3. Per la pesata utilizzare un pallone vuoto, un bicchiere o una capsula metallica (5.8) preparati come tara come specificato al punto 6.4 (per permettere la correzione degli effetti sul risultato della pesatura, dovuti a variazioni delle condizioni atmosferiche). Se il residuo, corretto per il cambiamento apparente della massa della tara, è superiore a 0,5 mg, determinare il residuo dei solventi separatamente facendo evaporare rispettivamente 100 ml di etere etilico (4.4) e 100 ml di etere di petrolio (4.5). Utilizzare ugualmente una tara per la pesata. Se il residuo è superiore a 2,5 mg purificare il solvente mediante distillazione o sostituire il solvente. 4.1. Soluzione ammoniacale, circa al 25 % (m/m) di NH3. Può essere impiegata anche una soluzione ammoniacale più concentrata (cfr. 6.5.1 e A.1.5.1). N. L 407/36 31. 12. 92 4.2. Etanolo, almeno 94 % (v/v). Può essere impiegato anche etanolo denaturato con metanolo purché sia sicuro che non vi siano interferenze con i risultati della determinazione. 4.3. Soluzione di rosso Congo o rosso Cresolo Sciogliere in acqua 1 g di rosso Congo o di rosso Cresolo e diluire a 100 ml. Note: Questa soluzione consente di evidenziare meglio la superficie di separazione tra le fasi acquose e quella del solvente; il suo impiego è facoltativo (6.5.2). Possono essere utilizzate anche altre soluzioni acquose di coloranti a condizione che non interferiscano con il risultato della determinazione. 4.4. Etere etilico esente da perossidi. Non deve inoltre contenere più di 2 mg/kg di antiossidanti e deve essere conforme alle specifiche relative alla prova in bianco (6.3). 4.5. Etere di petrolio, avente un punto di ebolizione tra i 30 e i 60 oC. 4.6 Miscela di solventi, da preparare poco prima dell'uso mescolando volumi uguali di etere etilico (4.4) e di etere di petrolio (4.5). 5. APPARECCHIATURA E VETRERIA Avvertenza - Poiché la determinazione comporta l'impiego di solventi volatili infiammabili, le apparecchiature elettriche impiegate devono essere conformi alla legislazione relativa all'impiego di tali solventi. Materiale di uso comune in laboratorio, segnatamente: 5.1. Bilancia analitica 5.2. Centrifuga, in cui i palloni o i tubi di estrazione della materia grassa (5.6) possono essere centrifugati a 500-600 giri/min. in modo da ottenere all'estremità inferiore del pallone o del tubo un campo gravitazionale di 80-90 g. Nota: L'impiego della centrifuga è facoltativo (6.5.5). 5.3. Apparecchio di distillazione o di evaporazione, che consenta di distillare i solventi e l'etanolo dai palloni o di farli evaporare dai becher e dalle capsule (6.5.12 e 6.5.15) a una temperatura non superiore ai 100 oC. 5.4. Stufa elettrica con feritoie di ventilazione completamente aperte, termostatabile uniformemente a 102±2 oC. La stufa è anche corredata di un termometro adeguato. 5.5. Bagnomaria, regolabile a temperature comprese tra 35 a 40 oC. 5.6. Estrattori di Mojonnier per la determinazione della materia grassa Nota: Si possono anche usare tubi di estrazione con sifone o con dispositivo di lavaggio, ma il procedimento è allora diverso ed è specificato nell'appendice. I palloni (o i tubi) devono essere muniti di tappo di vetro smerigliato, di sughero di buona qualità o di altri materiali inattaccabili dai reattivi impiegati. I tappi di sughero devono essere sgrassati con etere etilico (4.4), mantenuti in acqua a 60 oC almeno 15 minuti e quindi lasciati raffreddare in acqua in modo da essere impregnati al momento dell'uso. 5.7. Rastrelliera, per sostenere i matracci (o i tubi) di estrazione della materia grassa (5.6). 5.8. Spruzzetta, adatta a contenere la miscela dei solventi (4.6). È da escludere l'impiego di una spruzzetta di plastica. 5.9. Recipienti per la raccolta della materia grassa, ad esempio palloni da ebollizione (a fondo piatto) o matracci di Erlenmeyer, della capacità di 125-250 ml, oppure capsule di metallo. Queste ultime devono essere preferibilmente in acciaio inossidabile, a fondo piatto, possibilmente con un becco, e devono avere un diametro di 80-100 mm ed un'altezza di circa 50 mm. 5.10. Regolatori di ebollizione, esenti da materie grasse, in porcellana non porosa, carburo di silicio oppure costituiti da perline di vetro (l'impiego con le capsule metalliche è facoltativo). 5.11. Cilindri graduati, della capacità di 5 e 25 ml. 5.12. Pipette, graduate, della capacità di 10 ml. 5.13. Pinze, in metallo, per il sostegno di palloni, becher o capsule. N. L 407/37 31. 12. 92 6. MODO DI OPERARE Nota: L'altro procedimento che impiega tubi di estrazione della materia grassa con sifone o con dispositivo di lavaggio (nota 5.6) è descritto nell'appendice. 6.1. Preparazione del campione per l'analisi Riscaldare il campione in esame fino alla temperatura di circa 35-40 oC 15 minuti, ricorrendo se occorre al bagnomaria. Mescolare il campione a fondo, ma dolcemente capovolgendo, più volte il flacone che lo contiene e avendo cura di non provocare la formazione di schiuma o burrificazione e raffreddare rapidamente a circa 20 oC. 6.2. Aliquota di analisi Mescolare il campione per l'analisi (6.1) capavolgendo dolcemente il flacone 3 o 4 volte e pesare immediatamente, con la precisione di 1 mg, 10-11 g del campione da analizzare, direttamente o per differenza, in uno dei palloni di estrazione (5.6). L'aliquota di analisi deve essere interamente contenuta per quanto possibile nel bulbo inferiore (piccolo) dell'estrattore. 6.3. Prova in bianco Contemporaneamente alla determinazione effettuare una prova in bianco con lo stesso procedimento e gli stessi reattivi, sostituendo l'aliquota di analisi con 10-11 ml d'acqua. La differenza tra la massa del recipiente di raccolta della materia grassa, e quella del recipiente della prova in bianco non deve superare 2,5 mg. 6.4. Preparazione del recipiente di raccolta della materia grassa Essiccare nella stufa (5.4) per un'ora un recipiente (5.9) assieme ad alcuni regolatori di ebollizione (5.10) per favorire un'ebollizione moderata durante la successiva eliminazione del solvente. Lasciare raffreddare il recipiente (non in un essiccatore, ma al riparo dalla polvere) sino a raggiungere la temperatura della camera delle bilance (per i recipienti in vetro lasciare raffreddare almeno 1 ora e per le capsule metalliche almeno mezz'ora). Avendo cura di evitare variazioni di temperatura porre con l'aiuto delle pinze il recipiente sulla bilancia e pesare con la precisione di 0,1 mg. 6.5. Determinazione 6.5.1. Aggiungere 2 ml della soluzione ammoniacale (4.1) o un volume equivalente di una soluzione ammoniacale più concentrata e mescolare a fondo con l'aliquota di analisi nel bulbo piccolo del pallone. Effettuare la determinazione subito dopo aver addizionato l'ammoniaca. 6.5.2. Aggiungere 10 ml dell'etanolo (4.2) e mescolare dolcemente ma accuratamente facendo fluire il contenuto del pallone avanti ed indietro tra i due bulbi; evitare che il liquido si porti troppo vicino al collo del pallone. Eventualmente aggiungere 2 gocce della soluzione di rosso di Congo o di rosso di Cresolo (4.3). 6.5.3. Aggiungere 25 ml di etere etilico (4.4), chiudere il pallone con un tappo di sughero saturato d'acqua o di altro materiale bagnato d'acqua (5.6), ed agitarlo energicamente, ma non eccessivamente (in modo da evitare la formazione di emulsioni persistenti), per 1 minuto con il pallone in posizione orizzontale e il bulbo piccolo in alto. Lasciare scorrere periodicamente il liquido del bulbo grande in quello piccolo. All'occorrenza raffreddare il pallone con acqua corrente; togliere quindi con precauzione il sughero o il tappo e sciacquarlo assieme al collo del pallone con una piccola quantità di miscela dei solventi (4.6) servendosi della spruzzetta (5.8), in modo che i liquidi di lavaggio si raccolgano nel pallone. 6.5.4. Aggiungere 25 ml di etere di petrolio (4.5), chiudere il pallone con il sughero o il tappo nuovamente inumidito (immergendolo in acqua), ed agitare dolcemente il pallone per 30 secondi come descritto al punto 6.5.3. 6.5.5. Centrifugare il pallone chiuso per 1-5 minuti a 500-600 giri/min (5.2). In mancanza di una centrifuga (cfr. nota al punto 5.2) lasciare il pallone chiuso a riposo sulla rastrelliera (5.7) per almeno 30 minuti fino a quando il surnatante divenga limpido e si separi nettamente dalla fase acquosa. Eventualmente, raffreddare il pallone in acqua corrente. 6.5.6. Togliere con precauzione il pezzo di sughero o il tappo e sciacquarlo così come la parte interna del collo del pallone con pochi millilitri della miscela di solventi (4.6) raccogliendo il liquido di lavaggio nel pallone. Se l'interfaccia si trova sotto la base del collo del pallone, portarla un poco al di sopra di tale livello aggiungendo acqua, facendola scorrere lungo la parete, in modo da far decantare più facilmente il solvente. 6.5.7. Tenendo il pallone di estrazione per il bulbo piccolo, travasare con precauzione la maggior parte possibile del surnatante nel recipiente di raccolta della materia grassa preparato (cfr. 6.4) contentente alcuni regolatori di ebollizione (5.10) nel caso si tratti di palloni, (facoltativi se si usano capsule metalliche) ed avendo cura di evitare che con esso venga versato una quantità anche piccola della fase acquosa. 6.5.8. Sciacquare la parte esterna del collo del pallone di estrazione con una piccola quantità di miscela di solventi (4.6), raccogliendo i liquidi di lavaggio nel recipiente di raccolta della materia grassa e facendo in modo che la miscela di solventi non si versi all'esterno del pallone di estrazione. Eventualmente, il solvente può essere eliminato tutto o in parte dal recipiente per distillazione o per evaporazione come descritto al punto 6.5.12. N. L 407/38 31. 12. 92 6.5.9. Aggiungere 5 ml di etanolo (4.2) al contenuto del pallone di estrazione servendosi dell'etanolo per lavare l'interno del collo del pallone e mescolare come descritto al punto 6.5.2. 6.5.10. Procedere ad una seconda estrazione ripetendo le operazioni descritte dal punto 6.5.3 al punto 6.5.8 incluso, ma adoperando soltanto 15 ml di etere etilico (4.4) e 15 ml di etere di petrolio (4.5); usare l'etere per lavare l'interno del collo del pallone di estrazione. Se occorre, fare salire l'interfaccia al centro della colonna dell'estrattore per poter ottenere una decantazione finale quanto più completa possibile dei solventi. 6.5.11. Effettuare una terza estrazione ripetendo nuovamente le operazioni da 6.5.3 a 6.5.8 compreso, impiegando soltanto 15 ml di etere etilico (4.4) e 15 ml di etere di petrolio (4.5); usare l'etere per lavare l'interno del collo del pallone di estrazione. Se occorre, fare salire l'interfaccia al centro del collo dell'estrattore per far sì che la decantazione finale del solvente sia la più completa possibile. Per il latte scremato si puó omettere la terza estrazione. 6.5.12. Eliminare quanto più possibile i solventi (etanolo compreso) dal pallone per distillazione, oppure dal becher o dalla capsula per evaporazione (cfr. 5.3), lavando l'interno del collo del pallone con una piccola quantità di miscela di solventi (4.6) prima di iniziare la distillazione. 6.5.13. Riscaldare per 1 ora il recipiente di raccolta della materia grassa (collocando il pallone in posizione inclinata in modo da consentire ai vapori del solvente di allontanarsi) nella stufa (5.4). Togliere il recipiente di raccolta della materia grassa dalla stufa e lasciare raffreddare (non in un essiccatore, ma al riparo della polvere) alla temperatura della camera delle bilance (per almeno 1 ora per i recipienti in vetro e per almeno mezz'ora per le capsule metalliche) e pesarlo con la precisione di 0,1 mg. Non asciugare il recipiente subito prima della pesata. Porre il recipiente sulla bilancia servendosi di un paio di pinze ed evitare, in particolare, le variazioni di temperatura. 6.5.14. Ripetere le operazioni di cui al punto 6.6.13 finché tra due pesate successive la massa del recipiente di raccolta della materia grassa aumenti o diminuisca di non più di 0,5 mg. Registrare il valore minimo della massa ottenuto come la massa del recipiente di raccolta della materia grassa e della materia estratta. 6.5.15. Aggiungere 25 ml di etere di petrolio al recipiente di raccolta della materia grassa per verificare se la sostanza estratta sia completamente solubile. Riscaldare dolcemente ed agitare il solvente con movimento rotatorio fino a sciogliere tutta la materia grassa. Se la materia estratta è completamente solubile nell'etere di petrolio, prendere come massa del grasso la differenza tra la massa finale del recipiente contenente le sostanze estratte (6.5.14) e la sua massa inziale (6.4). 6.5.16. Se l'estratto non è completamente solubile nell'etere di petrolio, oppure in caso di dubbio, estrarre completamente la materia grassa contenuta nel recipiente lavando ripetutamente con etere di petrolio caldo. Lasciare che tutta la materia insolubile si depositi e decantare con cautela l'etere di petrolio evitando di rimuovere il residuo insolubile. Ripetere tale operazione ancora tre volte impiegando l'etere di petrolio per lavare l'interno del collo del recipiente. Lavare infine l'esterno del collo del recipiente con la miscela di solventi evitando di versarla all'esterno del recipiente. Eliminare il vapore di etere di petrolio dal recipiente riscaldandolo per un'ora in una stufa, lasciar raffreddare e pesare seguendo il procedimento descritto ai punti 6.5.13 e 6.5.14. La massa della materia grassa è data dalla differenza tra la massa determinata al punto 6.5.14 e questa massa finale. 7. ESPRESSIONE DEL RISULTATI 7.1. Calcolo e formula Il tenore in materia grassa, espresso in percentuale sulla massa, è dato dalla formula: F = (m1 m2) (m3 m4) m0 × 100 dove F è il tenore di materia grassa; m0 è la massa, espressa in grammi, dell'aliquota di analisi (6.2); m1 è la massa, espressa in grammi, del recipiente di raccolta della materia grassa e della sostanza estratta determinata al punto 6.5.14; m2 è la massa, espressa in grammi, del recipiente di raccolta della materia grassa preparato o, in presenza di residuo insolubile, del recipiente di raccolta della materia grassa e del residuo insolubile determinato al punto 6.5.16; m3 è la massa, espressa in grammi, del recipiente di raccolta della materia grassa impiegato per la prova in bianco (6.3) e della materia estratta determinata al punto 6.5.14; m4 è la massa, espressa in grammi, del recipiente di raccolta della materia grassa preparato (6.4), usato per la prova in bianco (6.3), oppure, in presenza di residuo insolubile, del recipiente per il recupero della materia grassa e del residuo insolubile determinato al punto 6.5.16. Esprimere il risultato con almeno due cifre decimali. 7.2. Precisione 7.2.1. Ripetibilità (r): - per il latte intero e per quello parzialmente scremato: 0,02 g di materia grassa per 100 g di prodotto; - per il latte scremato: 0,01 g di materia grassa per 100 g di prodotto. 7.2.2. Riproducibilità (R): - per il latte intero: 0,04 g di materia grassa per 100 g di prodotto; - per il latte parzialmente scremato: 0,03 g di materia grassa per 100 g di prodotto; - per il latte scremato: 0,025 g di materia grassa per 100 g di prodotto. III. DETERMINAZIONE DEI SOLIDI TOTALI NON GRASSI 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento per la determinazione del tenore di solidi non grassi nel latte trattato termicamente. 2. DEFINIZIONE E CALCOLO Il tenore di solidi non grassi va espresso come percentuale sulla massa. Il tenore di solidi non grassi è dato da: il tenore di solidi totali (cfr. I) meno il tenore di materia grassa (cfr. II). IV. DETERMINAZIONE DEL TENORE DI AZOTO TOTALE DEL LATTE 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento per la determinazione del tenore di azoto totale del latte intero, parzialmente scremato e scremato. 2. DEFINIZIONE Per tenore di azoto totale si intende il tenore di azoto, espresso in percentuale sulla massa, determinato secondo il metodo di Kjeldahl. 3. PRINCIPIO Si fa digerire una quantità pesata del campione di latte con acido solforico concentrato e solfato di potassio in presenza di solfato di rame (II) come catalizzatore, in modo da trasformare l'azoto dei composti organici in solfato di ammonio. Per addizione di soluzione di idrossido di sodio si libera ammoniaca che viene quindi distillata e assorbita in una soluzione di acido borico. Si titola quindi questa soluzione con una soluzione acida. 4. REATTIVI 4.1. Solfato di potassio (K2SO4) 4.2. Soluzione di solfato di rame. Sciogliere 5,0 g di solfato di rame (II) pentaidrato (CuSO4 , 5 H2O) in acqua e diluire a 100 ml (a 20 oC) in un pallone tarato. 4.3. Acido solforico, almeno al 98,0 % (m/m), (H2SO4). 4.4. Soluzione di idrossido di sodio, 47 % (m/m) 704 g NaOH/l (20 oC). Nota: Si può anche utilizzare una soluzione di idrossido di sodio meno concentrata; ad esempio: 40 % (m/m) 572 g/l, 20 oC oppure 30 % (m/m) 399 g/l, 20 oC. 4.5. Soluzione di acido borico. Sciogliere 40 g di acido borico (H3BO3) in 1 litro di acqua calda, lasciare raffreddare, e conservare in una bottiglia in vetro al borosilicato. 4.6. Indicatore. Sciogliere 0,01 g di rosso di metile, 0,02 g di blu di bromotimolo e 0,06 g di verde di bromocresolo in 100 ml di etanolo. Conservare la soluzione in una bottiglia scura chiusa, in luogo buio e fresco. 4.7. Soluzione volumetrica, c (1/2 H2SO4) oppure c (HCl) = 0,01 mol/l, titolata con la precisione di 0,0001 mol/l. 4.8. Saccarosio esente da azoto 4.9. Sale di ammonio, puro, come ossalato di ammonio (NH4)2C2O4 , H2O oppure solfato di ammonio (NH4)2SO4. 4.10. Triptofano (C11H12N2O2), fenacetina (C10H7CH2CONH2) o lisina mono o dicloridrato (C6H14N2O2 , HCl oppure C6H14N2O2 , 2HCl). Nota: Il grado di purezza dei reattivi di cui ai punti 4.9 e 4.10 dovrebbero essere di qualità superiore alla «qualità analitica». Se possibile dovrebbe essere usata una soluzione di sale di ammonio di purezza attestata. 5. APPARECCHIATURA E VETRERIA Comune dotazione di laboratorio e segnatamente: 5.1. Palloni di Kjeldahl della capacità di 500 ml. 5.2. Regolatori di ebollizione adeguati, ad esempio, palline di vetro del diametro di circa 5 mm, granuli di Hengar, pietra pomice. 5.3. Buretta o pipetta automatica, per dosi da 1,0 ml. 5.4. Cilindri graduati, in vetro, della capacità di 50, 100 e 250 ml. 5.5. Apparecchiatura per la digestione (5.1) in posizione inclinata (circa 45o), munita di riscaldatori elettrici o di bruciatori a gas, che non riscaldino il pallone al di sopra del livello del liquido, con un dispositivo di estrazione dei vapori. 5.6. Apparecchiatura di distillazione, in vetro al borosilicato, cui possa essere adattato un pallone di Kjeldahl (5.1), costituito da una efficiente bolla paraspruzzi collegata ad un refrigerante adeguato con tubo interno retto e da un tubo convogliatore connesso alla sua estremità inferiore; il tubo di collegamento ed il(i) tappo(i) devono essere a tenuta stagna e di preferenza in neoprene. 5.7. Pipetta o pipetta automatica, per dosi da 0,10 ml. 5.8. Beute, da 500 ml, graduate a 200 ml. 5.9. Buretta della capacità di 50 ml, graduata in decimi di millilitro, tolleranza ±0,05 ml. 5.10. Lenti di ingrandimento, per la lettura della buretta (5.9). 5.11. pHmetro 5.12. Buretta automatica 6. PROCEDIMENTO 6.1. Introdurre nel pallone di Kjeldahl (5.1) i regolatori di ebollizione (5.2) (ad esempio, 3 perle di vetro), 15 g di solfato di potassio (4.1), 1,0 ml di soluzione di solfato di rame (4.2), circa 5 g del campione di latte (pesato con la precisione di 0,001 g) e 25 ml di acido solforico (4.3). Lavare con l'acido gli eventuali residui della soluzione di solfato di rame o del solfato di potassio o del latte rimasti sul collo del pallone e mescolare dolcemente il contenuto del pallone. Nota: Poiché durante l'ebollizione le sostanze organiche consumano acido solforico, se il latte contiene più del 5 % (m/m) di materia grassa è opportuno usare per la digestione 30 ml di H2SO4 (4.3) invece di 25 ml. Ciò vale anche per la prova in bianco. 6.2. Riscaldare i vari palloni di Kieldahl nell'apparecchiatura di digestione (5.5), all'inizio molto lentamente per evitare che la schiuma nera fuoriesca dal pallone. Quando la schiuma iniziale scompare e si ha la formazione di abbondanti vapori bianchi, fare bollire energicamente (i vapori dell'acido si condenseranno a metà strada nel collo del pallone) fino a quando le particelle nere scompaiono completamente e il contenuto del pallone sia divenuto limpido e di colore verde-blu pallido. Continuare a far bollire lentamente per almeno 1,5 ore. Tenere presente che: a) la chiarificazione dovrebbe verificarsi entro 1 ora mentre per la digestione dovrebbero essere necessarie almeno 2,5 ore. Se per ottenere la chiarificazione dovesse essere necessaria più di 1 ora occorrerà aumentare in proporzione il tempo di digestione; b) il solfato di potassio favorisce la digestione in quanto fa aumentare la temperatura di ebollizione della miscela. Se alla fine della digestione il volume residuo dell'H2SO4 risultasse inferiore a 15 ml potrebbe essersi verificata una perdita di azoto dovuta all'eccessivo riscaldamento. Se il riscaldamento viene effettuato con gas, usare una piastra di materiale isolante con un foro circolare di diametro tale che la fiamma libera venga a contatto soltanto con la parte di pallone che si trova al di sotto della superficie del liquido che contiene (5.5); c) se nel collo del pallone entrano particelle nere che non vengono trasportate tutte all'interno del pallone dall'acido che refluisce durante la fase iniziale di ebollizione energica (ciò può essere favorito dalla rotazione del pallone), lasciare raffreddare sufficientemente il pallone e lavare con precauzione con una minima quantità di acqua. Fare quindi continuare la digestione come descritto precedentemente. 6.3. Una volta raffreddati i palloni di Kieldahl, aggiungere 300 ml di acqua (cfr. nota) in ciascuno dei recipienti in modo da lavare con cura il collo del pallone e mescolare a fondo il contenuto fino a sciogliere i cristalli che si erano separati. Aggiungere alcuni regolatori di ebollizione (5.2) per ottenere un'ebollizione omogenea. Aggiungere quindi in ciascun pallone 70 ml di soluzione di idrossido di sodio (4.4) (cfr. nota) facendo scorrere lentamente la soluzione lungo il collo inclinato del pallone in modo che l'idrossido di sodio vada a costituire lo strato inferiore nel pallone; fare attenzione a non bagnare con la soluzione di idrossido di sodio l'estremità superiore del collo del pallone. Nota: Per poter raccogliere circa 150 ml di distillato prima che inizi l'ebollizione a scosse (6.4), occorre che il volume totale dell'acqua e della soluzione di idrossido di sodio sia di 370 ml. Se si aggiunge una maggiore quantità equivalente di soluzione di idrossido di sodio con concentrazione inferiore a 47 % (m/m) il volume di acqua addizionato deve essere ridotto in proporzione. Ad esempio se si aggiungono 85 ml di soluzione di idrossido di sodio al 40 % (m/m) o 125 ml al 30 % (m/m) il corrispondente volume di acqua sarà rispettivamente di 285 ml e di 245 ml. 6.4. Raccordare immediatamente ciascun pallone di Kjeldahl ad un'apparecchiatura di distillazione (5.6), accertando che l'estremità del tubo di scarico del refrigerante sia immerso in una beuta (5.8) contenente 50 ml di soluzione di acido borico (4.5) e 0,20 ml (5-6 gocce) di indicatore (4.6). Agitare il contenuto dei palloni di Kjeldahl per mescolarne bene il loro contenuto e portare ad ebollizione, all'inizio lentamente in modo da evitare un'eccessiva formazione di schiuma. Dopo aver raccolto 100-125 ml di distillato abbassare le beute in modo che le estremità del tubo di scarico di ciascun refrigerante siano portate a circa 40 mm al di sopra della tacca di 200 ml. Continuare le varie distillazioni sino a quando comincia l'ebollizione a scosse, interrompendo quindi immediatamente il riscaldamento. Disinserire ciascun pallone di Kjeldahl e lavare l'estremità del tubo di scarico di ciascun refrigerante con una piccola quantità di acqua che verrà raccolta nella beuta. Tenere presente che: a) la velocità di distillazione deve essere tale che quando inizia l'ebollizione a scosse siano stati già raccolti circa 150 ml di distillato corrispondenti a un volume totale del contenuto della beuta di circa 200 ml; b) l'efficienza di ogni refrigerante deve essere tale che durante la distillazione la temperatura del liquido contenuto nelle beute non superi i 25 oC. 6.5. Titolare ciascun distillato con la soluzione volumetrica standard (4.7) sino a ph 4,6±0,1, usando un phmetro ed eventualmente una buretta automatica. L'aggiunta di un indicatore serve a controllare se la titolazione sta procedendo correttamente. Effettuare le letture sulla buretta con la precisione di 0,01 ml utilizzando una lente di ingrandimento (5.10) in modo da evitare errori di parallasse. La titolazione può essere effettuata mediante un solo indicatore. Titolare fino a che il colore del distillato corrisponda a quello di una soluzione di recente preparazione costituita da 150 ml d'acqua con aggiunta di 50 ml di soluzione di acido borico e di 20 ml dell'indicatore contenute in una boccetta di Erlenmeyer (5.8). 6.6. Effettuare una prova in bianco seguendo il procedimento descritto da 6.1 a 6.5 incluso, usando al posto del campione di latte 5 ml di acqua distillata con circa 0,1 g di saccarosio (4.8). Nota: Per la titolazione del distillato bianco basterà una piccolissima quantità di soluzione volumetrica standard (4.7). 6.7. Verificare periodicamente l'accuratezza del procedimento effettuando due prove di recupero secondo quanto descritto dal punto 6.1 al punto 6.5. 6.7.1. Verificare che durante la distillazione non si verifichi una perdita di azoto a causa di un eccessivo riscaldamento o fuoriuscite di natura meccanica utilizzando un'aliquota di analisi composta da 0,15 g di ossalato o solfato di ammonio (4.9) pesato con la precisione di 0,001 g e da 0,1 g di saccarosio (4.8). La percentuale di azoto recuperato deve essere compresa tra 99,0 e 100 %. Risultati inferiori o superiori saranno indice di errori di procedimento o/e di errori di concentrazione della soluzione standard (4.7). 6.7.2. Verificare che il procedimento di digestione sia in grado di liberare tutto l'azoto proteico utilizzando un'aliquota di analisi di 0,20 g di triptofano puro, 0,35 g di fenacetina o 0,20 g di lisina cloridrato (4.10) effettuando tutte le pesate con la precisione di 0,001 g. L'azoto recuperato deve essere almeno il 98-99 %. 7. MISURE DI SICUREZZA Lavorando con acido solforico e idrossido di sodio concentrati o maneggiando i palloni di Kieldahl, indossare sempre un camice da laboratorio ed usare occhiali di protezione e guanti resistenti agli acidi. Durante la distillazione sorvegliare continuamente i palloni di Kjeldahl. In considerazione dei rischi esistenti, se il contenuto del pallone bolle con scosse troppo violente fermare immediatamente la distillazione. Se il riscaldamento si interrompe accidentalmente per più di 2-3 minuti, abbassare il pallone di raccolta in modo che l'estremità del refrigerante fuoriesca dal liquido. 8. ESPRESSIONE DEI RISULTATI 8.1. Calcolo e formula Calcolare il tenore in azoto WN, espresso in grammi di azoto per 100 g di prodotto, si calcola con la formula: N = 1,40 (V VO) c m dove: N = è il tenore di azoto, V = è il volume in millilitri della soluzione volumetrica standard di acido impiegata per la determinazione, VO = è il volume in millilitri della soluzione volumetrica standard di acido impiegata per la prova in bianco, c = è la concentrazione, espressa in moli per litro della soluzione volumetrica standard acida (4.7), m = è la massa in grammi dell'aliquota di analisi. Per 100 g approssimare il risultato a meno di 3 cifre decimali. 8.2. Precisione 8.2.1. Ripetibilità (r): 0,007 g per 100 g 8.2.2. Riproducibilità (R): 0,015 g per 100 g 9. PROCEDIMENTI MODIFICATI 9.1. Se invece dell'apparecchiatura per la digestione e dei palloni di Kjeldahl di cui i punti 5.5 e 5.1 si usa un'apparecchiatura di digestione dotata di recipienti cilindrici, per individuare eventuali guasti occorre verificare singolarmente l'efficienza di ciascuna unità (6.7). 9.2. Usando la distillazione in corrente di vapore anziché il riscaldamento diretto dei palloni (6.4), se l'apparecchiatura non consente di utilizzare acqua distillata, occorre verificare che l'acqua non contenga sostanze acide o alcaline volatili. 9.3. Invece di 5 g (6.1) di latte si può utilizzare un'aliquota di analisi di 1 g a condizione che: - le quantità di reattivi usati per la mineralizzazione (6.1): H2SO4, CUSO4, 5 K2SO4, vengano ridotte nella stessa proporzione (1/5); - la durata complessiva della digestione (6.2) venga ridotta a 75 minuti; - la quantità della soluzione di idrossido di sodio (6.3) venga ridotta nella stessa proporzione (1/5); - si usi una soluzione standard acida (4.7) a più bassa concentrazione (0,02-0,03 moli/l). Nota: La scelta di una o più di queste alternative è accettabile solo a condizione che i valori della ripetibilità (8.2.1) e i risultati dei due test di controllo della precisione (6.7) corrispondano ai valori fissati per il presente metodo. V. DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO DI MATERIE PROTEICHE 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento di determinazione del contenuto di materie proteiche del latte trattato termicamente (cfr. articolo 3, lettera A, punto 3, della direttiva 85/397/CEE). 2. DEFINIZIONE Il contenuto di materie proteiche si ottiene moltiplicando per un determinato fattore (3). Il tenore totale di azoto espresso in percentuale sulla massa e determinato con il metodo di cui al capitolo IV. 3. CALCOLO Proteine totali del latte espresse in percentuale sulla massa = 6,38× tenore totale di azoto del latte in %. VI. DETERMINAZIONE LA MASSA SPECIFICA 1. OGGETTO E CAMPO DI APPLICAZIONE Il presente procedimento descrive il metodo di riferimento per la determinazione della massa specifica a 20 oC nel latte intero, parzialmente scremato e scremato. 2. DEFINIZIONE Si definisce massa specifica del latte il rapporto tra la massa di un dato volume di latte a 20 oC e quella dello stesso volume di acqua a 20 oC. 3. PRINCIPIO La massa specifica a 20 oC viene determinata con un aerometro. 4. APPARECCHIATURA E VETRERIA Apparecchiatura di uso comune in laboratorio e segnatamente: 4.1. Aerometro L'aerometro a peso costante è uno strumento costituito da un galleggiante di vetro, avente la parte inferiore grande e zavorrata, e terminante nella parte superiore con un'asta cilindrica di vetro coassiale al galleggiante e chiusa superiormente. Il galleggiante di vetro contiene la zavorra (piombo, mercurio, ecc.) per tarare la massa dell'aerometro. L'asta reca una scala graduata da 1,025 a 1,035 g/ml. L'aerometro deve essere controllato col metodo picnometrico usando un picnometro della capacità di circa 100 ml, munito di termometro di precisione. 4.2. Cilindri (in vetro o acciaio inossidabile). Le dimensioni minime devono essere: - diametro interno circa 35 mm - altezza interna circa 225 mm 4.3. Bagnomaria, termostatato a 20±0,1 oC. 4.4. Bagnomaria, termostatato a 40±2 oC. 4.5. Termometro, graduato almeno per 0,5 oC. 5. PROCEDIMENTO 5.1. Mescolare il campione capovolgendolo in modo da disperdere la materia grassa. Porre il campione nel bagnomaria (4.4), portarlo alla temperatura di 40 oC e mantenervelo per 5 minuti. Mescolare a fondo capovolgendo il campione con cautela, in modo che la materia grassa sia distribuita omogeneamente. Raffreddare a 20 oC nel secondo bagnomaria (4.3). 5.2. Mescolare bene il campione capovolgendo con cautela per evitare l'incorporazione di aria. Versare il latte nel cilindro (4.2), mantenuto in posizione inclinata per evitare la formazione di schiuma o di bolle. Utilizzare come campione una quantità di latte sufficiente in modo che una parte di esso trabocchi dal cilindro quando vi si immerge l'aerometro (4.1). Affondare con cura l'aerometro nel latte e lasciario galleggiare liberamente fino a raggiungere la posizione di equilibrio. Il cilindro deve essere collocato verticalmente e l'aerometro deve essere posizionato nel centro della colonna di liquido senza venire a contatto con le pareti del cilindro. 5.3. Quando l'aerometro ha raggiunto l'equilibrio effettuare la lettura della graduazione nella parte superiore del menisco. 5.4. Subito dopo questa lettura dell'aerometro immergere il termometro (4.5) nel campione e leggere la temperatura con una precisione di 0,0 oC. La temperatura non deve discostarsi dai 20 oC di oltre ±2 oC. 6. CORREZIONE DELLA TEMPERATURA 6.1. Se quando si effettua la misurazione della sua massa specifica la temperatura del campione di latte non è esattamente 20 oC il risultato ottenuto deve essere corretto addizionando alla massa specifica determinata 0,0002 per ciascun grado Celsius sopra i 20 oC, o sottraendo 0,0002 per ciascun grado Celsius al di sotto dei 20 oC. Tale correzione va effettuata soltanto se la temperatura del campione di latte si discosta dai 20 oC di non più di 5 oC. 7. ESPRESSIONE DEI RISULTATI Il risultato del metodo di calcolo e della formula per il calcolo della massa specifica del campione è espresso in g/ml di latte scremato a 20 oC, secondo la seguente formula: 1 000 7 mv MG 7 mv = 0,92 mv (1 000 MG) 1 000 MG 7 mv 0,92 920 MG 7 mv dove mv = è la massa specifica del campione letta sull'aerometro (5.4), espresssa in g/l, MG = è il tenore di materia grassa del campione, espresso in g/l, 0,92 = è la densità della materia grassa. 8. PRECISIONE 8.1. Ripetibilità (r): 0,0003 g/ml. 8.2. Riproducibilità (R): 0,0015 g/ml. Appendice (all'allegato III) ALTRO PROCEDIMENTO CHE IMPIEGA TUBI DI ESTRAZIONE DELLA MATERIA GRASSA CON SIFONE O CON DISPOSITIVI DI LAVAGGIO A.1. PROCEDIMENTO A.1.1. Preparazione del campione per l'analisi Cfr. 6.1. A.1.2. Aliquota di analisi Procedere secondo le istruzioni di cui al punto 6.2, ma usando i tubi di estrazione della materia grassa (5.6). L'aliquota di analisi deve essere trasferito nel fondo del tubo di estrazione possibilmente senza perdite. A.1.3. Prova in bianco Cfr. 6.3. A.1.4. Preperazione del recipiente di raccolta della materia grassa. Cfr. 6.4. A.1.5. Determinazione A.1.5.1. Aggiungere 2 ml di soluzione ammoniacale (4.1) o un volume equivalente di una soluzione ammoniacale più concentrata e mescolare completamente con l'aliquota di analisi posta sul fondo del tubo. Effettuare la determinazione subito dopo l'addizione dell'ammoniaca. A.1.5.2. Addizionare 10 ml di etanolo (4.2) e agitare dolcemente ma completamente nel fondo del tubo. Eventualmente addizionare due gocce di una soluzione di rosso Congo o di rosso Cresolo (4.3). A.1.5.3. Addizionare 25 ml di etere etilico (4.4), chiudere il tubo con un tappo di sughero saturato con acqua o di altro materiale bagnato con acqua (5.6) ed agitare il tubo energicamente, ma non eccessivamente (in modo da evitare la formazione di emulsioni persistenti), capovolgendo più volte per un minuto. Raffreddare eventualmente il tubo in acqua corrente e togliere quindi con cautela il tappo di sughero o il dispositivo di chiusura. Lavare il tappo e il collo del tubo con una piccola quantità di miscela di solventi (4.6) usando la spruzzetta (5.8) in modo che il liquido di lavaggio si raccolga all'interno del tubo. A.1.5.4. Addizionare 25 ml di etere di petrolio (4.5), chiudere il tubo con il tappo di sughero riumidificato o con altro dispositivo di chiusura (riumidificato immergendolo in acqua), ed agitare il tubo dolcemente per 30 secondi come descritto al punto A.1.5.3. A.1.5.5. Centrifugare il tubo chiuso per 1-5 minuti a 500-600 g/min (5.2). Se non si dispone di una centrifuga (cfr. nota al punto 5.2), lasciare riposare il tubo chiuso sulla rastrelliera (5.7) per almeno 30 minuti, sino a quando il surnatante è chiaro e nettamente separato dalla fase acquosa. Se occorre, raffreddare il tubo in acqua corrente. A.1.5.6. Togliere con precauzione il tappo di sughero o il dispositivo di chiusura e lavarlo assieme al collo del tubo con un po' di miscela di solventi facendo in modo che il liquido di lavaggio si raccolga nel tubo. A.1.5.7. Introdurre un sifone o un dispositivo di lavaggio nel tubo affondando il braccio lungo interno del dispositivo fino a quando l'orifizio si trovi circa 3 mm al di sopra dell'interfaccia delle due fasi. Il braccio interno del dispositivo deve essere parallelo all'asse del tubo di estrazione. Travasare con precauzione il surnatante dal tubo nel recipiente di raccolta della materia grassa preparato (6.4), contenente nel caso di palloni alcuni regolatori di ebollizione (5.10) (facoltativi con le capsule metalliche), avendo cura di evitare di versare quantità anche piccole della fase acquosa. Lavare l'orifizio del dispositivo con un po' di miscela di solventi, raccogliendo il liquido di lavaggio nel recipiente di raccolta della materia grassa. A.1.5.8. Allentare il dispositivo dal collo del tubo, sollevarlo leggermente e lavare la parte inferiore del suo braccio lungo interno con un po' di miscela di solventi. Abbassare e reinserire il dispositivo e versare il liquido di lavaggio nel recipiente di raccolta della materia grassa. Lavare l'orifizio esterno del dispositivo con un po' di miscela di solventi, raccogliendo il liquido di lavaggio nel recipiente. Eventualmente, il solvente o parte di esso può essere allontanato dal recipiente per distillazione o per evaporazione come descritto al punto 6.5.12. N. L 407/46 31. 12. 92 A.1.5.9. Allentare nuovamente il dispositivo dal collo, sollevarlo leggermente ed aggiungere nel tubo 5 ml di etanolo, utilizzando l'etanolo per sciacquare il braccio lungo interno del dispositivo; agitare come descritto al punto A.1.5.2. A.1.5.10. Effettuare una seconda estrazione ripetendo le operazioni descritte dal punto A.1.5.3 al punto A.1.5.8, impiegando però soltanto 15 ml di etere etilico (4.4) e 15 ml di etere di petrolio (4.5). Utilizzare l'etere per lavare il braccio lungo interno del dispositivo mentre lo si toglie dal tubo dopo l'estrazione precedente. A.1.5.11. Effettuare una terza estrazione ripetendo nuovamente le operazioni descritte dal punto A.1.5.3 al punto A.1.5.8 impiegando 15 ml di etere etilico e 15 ml di etere di petrolio e lavando il braccio lungo interno del dispositivo come descritto al punto A.1.5.10. Per il latte scremato la terza estrazione è facoltativa. A.1.5.12. Continuare il procedimento come descritto dal punto 6.5.12 al punto 6.5.16.