2)

Lisätään D osa seuraavasti: ”D. Magneettisekoitinmenetelmä yhdistettyjen näytteiden digestiota varten / suodatineristysmenetelmä ja toukkien osoittaminen lateksi-agglutinaatiotestillä Tätä menetelmää pidetään vastaavana ainoastaan kotieläiminä pidettävien sikojen lihan testausta varten. 1. Välineistö ja reagenssit a) Veitsi tai sakset ja pinsetit näytteiden leikkaamista varten. b) Tarjottimia, joihin on merkitty 50 ruutua, joihin kuhunkin mahtuu noin 2 g:n lihanäyte, tai muita välineitä, jotka antavat samanlaiset takeet näytteiden jäljitettävyydestä. c) Sekoitin, jossa on terävä leikkausterä. Jos näytteen paino on yli 3 g, on käytettävä lihamyllyä, jonka reikälevyn aukkojen läpimitta on 2–4 mm, tai saksia. Jos kyseessä on jäädytetty liha tai kieli (josta on poistettu pintakerros, jota ei voi digestoida), tarvitaan lihamyllyä, ja näytteen kokoa on suurennettava huomattavasti. d) Magneettisekoittimia, joissa on termostaattiohjattu lämpölevy ja teflonpäällysteiset, noin 5 cm:n pituiset sekoitussauvat. e) Lasimaljoja, joiden vetoisuus on 3 l. f) Siivilöitä, joiden silmäkoko on 180 μm, ulkohalkaisija 11 cm ja verkko ruostumatonta terästä. g) Teräksinen suodatinlaite 20 μm:n verkkosuodattimia varten ja terässuppilo. h) Tyhjiöpumppu. i) Metalli- tai muoviastioita, joiden vetoisuus on 10–15 l, digestionesteen keräämiseen. j) Kaksisuuntainen kiertosekoittaja. k) Alumiinifoliota. l) 25-prosenttista suolahappoa. m) Pepsiiniä, jonka vahvuus on 1:10 000 NF (US National Formulary) eli 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) eli 2 000 FIP (International Pharmaceutical Federation), tai stabiloitua nestemäistä pepsiiniä vähintään 660 Euroopan farmakopean yksikköä/ml. n) Vesijohtovettä, joka on lämmitetty 46–48 °C:n lämpötilaan. o) Vaaka, jonka tarkkuus on 0,1 g. p) Erikokoisia pipettejä (1, 10, 25 ml), mikropipettejä lateksi-agglutinaatiotestien valmistajan ohjeiden mukaisesti ja pipetinpidikkeitä q) Nailonisia 20 μm:n verkkosuodattimia, joiden halkaisija sopii suodatinjärjestelmään. r) Muoviset tai teräksiset 10–15 cm:n pinsetit/atulat. s) Kartiomaisia 15 ml:n pikkupulloja. t) Survin, jossa on kartiomainen teflon- tai teräskärki, joka sopii kartiomaisiin pulloihin. u) Lämpömittari, jonka tarkkuus on ± 0,5 °C ja mittausalue 1–100 °C. v) Koodinumerolla EURLP_D_001/2011 validoidun Trichin-L-antigeenitestin lateksi-agglutinaatiokortit. w) Koodinumerolla EURLP_D_001/2011 validoidun Trichin-L-antigeenitestin näytteen laimennuspuskuriliuosta. x) Koodinumerolla EURLP_D_001/2011 validoidun Trichin-L-antigeenitestin puskuriliuosta, jota on täydennetty säilytysaineeella (negatiivinen kontrolli). y) Koodinumerolla EURLP_D_001/2011 validoidun Trichin-L-antigeenitestin puskuriliuosta, jota on täydennetty Trichinella spiralis -antigeeneillä ja säilytysaineeella (positiivinen kontrolli). z) Koodinumerolla EURLP_D_001/2011 validoidun Trichin-L-antigeenitestin säilytysaineella täydennettyä puskuriliuosta, jossa on vasta-aineilla päällystettyjä polystyreenihiukkasia (lateksihelmet). aa) Kertakäyttöpuikkoja. 2. Näytteenotto Noudatetaan I luvun 2 kohtaa. 3. Menettely I Täysien erien (100 g näytettä kerrallaan) osalta on seurattava I luvun 3 kohdan I alakohdan a–i alakohdassa esitettyä menettelyä. Lisäksi on noudatettava seuraavaa menettelyä: a) Nailoninen 20 μm:n verkkosuodatin asetetaan suodatintelineeseen. Kartiomainen teräksinen suodatinsuppilo kiinnitetään telineeseen ja suppiloon sijoitetaan 180 μm:n terässiivilä. Tyhjiöpumppu kytketään suodatintelineeseen ja metalli- tai muoviastiaan digestionesteen keräämiseksi. b) Lopetetaan sekoittaminen ja kaadetaan digestioneste suodatinsuppiloon siivilän kautta. Huuhdotaan lasimalja 250 ml:lla lämmintä vettä. Huuhteluneste on kaadettava suodatinliuskalle sen jälkeen, kun digestioneste on onnistuneesti suodatettu. c) Otetaan pinseteillä/atuloilla kiinni suodatinkalvon reunasta. Taitetaan suodatinkalvo vähintään neljä kertaa ja asetetaan se 15 ml:n kartiomaiseen putkeen. d) Suodatinkalvo työnnetään survimen avulla 15 ml:n kartiomaisen putken pohjalle ja sitä painetaan voimakkaasti liikuttamalla survinta edestakaisin; survin olisi asetettava suodatinkalvotaitoksen sisälle valmistajan ohjeiden mukaisesti. e) Lisätään pipetillä näytelaimennetta 15 ml:n kartiomaiseen putkeen ja homogenoidaan suodatinkalvo survimella pienin edestakaisin liikkein välttäen äkkinäisiä liikkeitä nesteen roiskumisen rajoittamiseksi valmistajan ohjeiden mukaisesti. f) Kukin näyte, negatiivinen kontrolli ja positiivinen kontrolli annostellaan pipeteillä agglutinaatiokortin eri kenttiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. g) Lateksihelmet lisätään kuhunkin agglutinaatiokortin kenttään pipetillä valmistajan ohjeiden mukaisesti siten, etteivät ne joudu kosketuksiin näytteen (näytteiden) ja kontrollien kanssa. Lateksihelmet sekoitetaan sitten kussakin kentässä varovaisesti kertakäyttöpuikolla, kunnes homogeeninen neste täyttää koko kentän. h) Agglutinaatiokortti asetetaan kaksisuuntaiseen sekoittajaan, ja sitä sekoitetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. i) Valmistajan ohjeissa mainitun ajan kuluttua sekoittaminen lopetetaan, agglutinaatiokortti asetetaan tasaiselle pinnalle ja reaktiotulokset luetaan. Jos näyte on positiivinen, ilmestyy helmikeräymiä. Jos näyte on negatiivinen, suspensio säilyy homogeenisenä ilman helmikeräymiä. j) Kaikki lihan kanssa kosketuksiin joutuvat välineet on huolellisesti puhdistettava käyttökertojen välillä kastamalla ne muutamaksi sekunniksi lämpimään veteen (60–90 °C). Pinnat, joilla on lihajäämiä tai inaktivoituja toukkia, voidaan puhdistaa puhtaalla sienellä ja vesijohtovedellä. Kun menettely on saatu päätökseen, voidaan lisätä muutama tippa pesuainetta rasvan poistamiseksi välineistä. Kukin osa on huuhdeltava perusteellisesti useaan kertaan pesuaineen poistamiseksi niistä kokonaan. k) Survin on huolellisesti puhdistettava käyttökertojen välillä kastamalla se muutamaksi sekunniksi vähintään 250 ml:aan lämmintä vettä (60–90 °C). Lihajäämät tai inaktivoidut toukat, joita saattaa edelleen olla sen pinnalla, on poistettava puhtaalla sienellä ja vesijohtovedellä. Kun menettely on saatu päätökseen, voidaan lisätä muutama tippa pesuainetta rasvan poistamiseksi survimesta. Survin on tämän jälkeen huuhdeltava perusteellisesti useaan kertaan pesuaineen poistamiseksi siitä kokonaan. II Alle 100 g:n erät I luvun 3 kohdan II alakohdan mukaisesti Alle 100 g:n erien osalta on seurattava I luvun 3 kohdan II alakohdassa esitettyä menettelyä III Positiiviset tai epävarmat tulokset Jos yhdistetystä näytteestä saatu lateksi-agglutinaatiotestin tulos on positiivinen tai epävarma, jokaisesta siasta on otettava 20 g:n lisänäyte I luvun 2 kohdan a alakohdan mukaisesti. Viiden sian 20 g:n näytteet on yhdistettävä ja tutkittava I alakohdassa esitetyllä menetelmällä. Tällä tavoin tutkitaan 20:n viidestä siasta koostuvan ryhmän näytteet. Jos viiden sian ryhmästä saadaan positiivinen lateksi-agglutinaatio, jokaisesta kyseisen ryhmän siasta on otettava erillinen 20 g:n näyte, ja jokainen niistä on tutkittava erikseen jollakin I luvussa esitetyllä menetelmällä. Loisnäytteet on pidettävä 90-prosenttisessa etyylialkoholissa niiden säilyttämiseksi ja loislajin tunnistamiseksi EU:n tai kansallisessa vertailulaboratoriossa. Kun loiset on kerätty, positiivisiksi todetut liuokset on tehtävä tartuntavaarattomiksi kuumentamalla ne vähintään 60 °C:een.”