2002L0070 — FI — 18.02.2005 — 001.001

Tämä asiakirja on ainoastaan dokumentointitarkoituksiin. Toimielimet eivät vastaa sen sisällöstä.

►B KOMISSION DIREKTIIVI 2002/70/EY, annettu 26 päivänä heinäkuuta 2002, rehujen dioksiinipitoisuuksien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden pitoisuuksien määrittämistä koskevista vaatimuksista (ETA:n kannalta merkityksellinen teksti) (EYV L 209, 6.8.2002, p.15)

Muutettu:









▼B

KOMISSION DIREKTIIVI 2002/70/EY,

annettu 26 päivänä heinäkuuta 2002,

rehujen dioksiinipitoisuuksien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden pitoisuuksien määrittämistä koskevista vaatimuksista

(ETA:n kannalta merkityksellinen teksti)







EUROOPAN YHTEISÖJEN KOMISSIO, joka ottaa huomioon Euroopan yhteisön perustamissopimuksen, ottaa huomioon yhteisön näytteenotto- ja määritysmenetelmistä rehujen virallista tarkastusta varten 20 päivänä heinäkuuta 1970 annetun neuvoston direktiivin 70/373/ETY ( 1 ), sellaisena kuin se on viimeksi muutettuna Itävallan, Suomen ja Ruotsin liittymisasiakirjalla, ja erityisesti sen 2 artiklan, sekä katsoo seuraavaa: (1) Haitallisista aineista ja tuotteista eläinten ruokinnassa 22 päivänä huhtikuuta 1999 annetussa neuvoston direktiivissä 1999/29/EY ( 2 ), sellaisena kuin se on viimeksi muutettuna direktiivillä 2001/102/EY ( 3 ), vahvistetaan dioksiinien ja furaanien enimmäismäärät useissa rehuaineissa ja rehuissa. (2) On tarpeen vahvistaa vaatimukset, jotka analyysimenetelmien olisi täytettävä, jotta laboratorioiden käyttämät analyysimenetelmät olisivat vertailukelpoisia. (3) Näytteenotto- ja analyysimenetelmiä koskevat säännökset perustuvat nykyiseen tietämykseen, ja niitä voidaan mukauttaa tieteen ja tekniikan kehitykseen. (4) Tässä direktiivissä vahvistetut säännökset koskevat ainoastaan dioksiinien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden määrittämistä, jota tarvitaan haitallisista aineista ja tuotteista eläinten ruokinnassa annetun direktiivin 1999/29/EY muuttamisesta annetun direktiivin 2001/102/EY panemiseksi täytäntöön. (5) Olisi aktiivisesti kerättävä kattavaa ja luotettavaa tietoa dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden esiintymisestä rehuaineissa ja rehuissa. Sen vuoksi olisi vahvistettava vaatimukset analyysimenetelmille, joita on käytettävä rehuaineissa ja rehuissa olevien dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden määrittämisessä. (6) Tehokkaan seulonta-analyysimenetelmän ja koetellun, laajalti hyväksytyn validoinnin avulla voitaisiin valita näytteet, joiden dioksiinipitoisuudet ovat huomattavat. Näiden näytteiden dioksiinipitoisuudet tulee määrittää varmistavan analyysimenetelmän avulla. On siis asianmukaista vahvistaa vaatimukset varmistaville analyysimenetelmille ja seulontamenetelmälle. (7) Tässä direktiivissä säädetyt toimenpiteet ovat elintarvikeketjua ja eläinten terveyttä käsittelevän pysyvän komitean lausunnon mukaiset, sekä katsoo seuraavaa: ON ANTANUT TÄMÄN DIREKTIIVIN:







1 artikla

Jäsenvaltioiden on varmistettava, että näytteet rehujen dioksiini- ja furaanipitoisuuksien virallista tarkastusta ja rehuissa olevien dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden pitoisuuksien määrittämistä varten otetaan liitteessä I esitettyjen menetelmien mukaisesti.

2 artikla

Jäsenvaltioiden on varmistettava, että näytteiden valmistaminen sekä rehujen dioksiini- ja furaanipitoisuuksien virallisessa tarkastuksessa ja rehuissa olevien dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden pitoisuuksien määrittämisessä käytetyt menetelmät vastaavat liitteessä II esitettyjä vaatimuksia.

3 artikla

Jäsenvaltioiden on saatettava tämän direktiivin noudattamisen edellyttämät lait, asetukset ja hallinnolliset määräykset voimaan viimeistään 28 päivänä helmikuuta 2003. Niiden on ilmoitettava tästä komissiolle viipymättä.

Näissä jäsenvaltioiden antamissa säädöksissä on viitattava tähän direktiiviin tai niihin on liitettävä tällainen viittaus, kun ne virallisesti julkaistaan. Jäsenvaltioiden on säädettävä siitä, miten viittaukset tehdään.

4 artikla

Tämä direktiivi tulee voimaan kahdentenakymmenentenä päivänä sen jälkeen, kun se on julkaistu Euroopan yhteisöjen virallisessa lehdessä.

5 artikla

Tämä direktiivi on osoitettu kaikille jäsenvaltioille.









LIITE I

NÄYTTEENOTTOMENETELMÄT TIETYISSÄ REHUISSA OLEVIEN DIOKSIINIEN (PCDD/PCDF) ENIMMÄISPITOISUUKSIEN VIRALLISTA TARKASTUSTA JA DIOKSIININ KALTAISTEN PCB-YHDISTEIDEN MÄÄRITTÄMISTÄ VARTEN

▼M1

1. Tarkoitus ja soveltamisala

Rehun dioksiinipitoisuuksien (PCDD-/PCDF-pitoisuuden) viralliseen tarkastukseen ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden ( 4 ) i pitoisuuksien määrittämiseen tarkoitetut näytteet on otettava direktiivin 76/371/ETY säännösten mukaisesti. Direktiivin 76/371/ETY liitteessä olevassa 5.A. kohdassa säädettyjä määrää koskevia vaatimuksia on sovellettava rehuun tasaisesti jakautuneiden aineiden tai tuotteiden tarkastuksen yhteydessä. Tällä tavoin saatujen kokoomanäytteiden katsotaan edustavan eriä tai osaeriä, joista ne on otettu. Laboratorionäytteistä määritettyjen pitoisuuksien perusteella arvioidaan, ovatko tutkittavat erät Euroopan parlamentin ja neuvoston direktiivissä 2002/32/EY ( 5 ) vahvistettujen enimmäismäärien mukaisia.

2. Erän tai osaerän säännöstenmukaisuus

Erä hyväksytään, jos yhden analyysin tulos ei ylitä direktiivissä 2002/32/EY vahvistettua enimmäismäärää, kun otetaan huomioon mittausepävarmuus.

Erää ei hyväksytä, jos analyysitulos, joka on varmennettu rinnakkaismäärityksellä laskettuna vähintään kahden erillisen määrityksen keskiarvona, ylittää selvästi direktiivissä 2002/32/EY asetetun enimmäispitoisuuden mittausepävarmuus huomioiden. Mittausepävarmuus voidaan ottaa huomioon jollakin seuraavista tavoista:

— laskemalla laajennettu epävarmuus, kun käytetään kattavuuskerrointa 2, jolloin luotettavuustaso on noin 95 prosenttia,

— vahvistamalla päätösraja (CCα) komission päätöksen 2002/657/EY ( 6 ) mukaisesti (liitteen 3.1.2.5 kohta – aineet, joille on vahvistettu sallittu raja).

Näitä tulkintasääntöjä sovelletaan virallista valvontaa varten otettujen näytteiden määritystuloksiin. Ne eivät vaikuta jäsenvaltioiden oikeuteen soveltaa kansallisia sääntöjä direktiivin 95/53/EY ( 7 ) 18 artiklassa tarkoitettuihin oikeustoimia ja kiistanratkaisumenettelyjä varten tehtyihin määrityksiin.

▼B









LIITE II

NÄYTTEIDEN VALMISTUS JA VAATIMUKSET, JOTKA TIETTYJEN REHUJEN DIOKSIINIPITOISUUKSIEN VIRALLISESSA TARKASTUKSESSA JA DIOKSIININ KALTAISTEN PCB-YHDISTEIDEN MÄÄRITTÄMISESSÄ KÄYTETTYJEN ANALYYSIMENETELMIEN ON TÄYTETTÄVÄ

1 Tavoite ja soveltamisala

Näitä vaatimuksia on sovellettava analysoitaessa rehuaineita ja rehuja dioksiinin (polykloorattujen dibentso-p-dioksiinien (PCDD:t) ja polykloorattujen dibentsofuraanien (PCDF:t)) ja dioksiinin kaltaisten polykloorattujen bifenyyleiden (PCB-yhdisteiden) määrittämiseksi.

Dioksiinien esiintymistä rehuissa voidaan valvoa strategialla, johon kuuluu seulontamenetelmä niiden näytteiden valitsemiseksi, joissa on vähemmän kuin 30—40 prosentilla mitattavan tason alittavia taikka sen ylittäviä määriä dioksiineja tai dioksiinin kaltaisia PCB-yhdisteitä. Näytteiden dioksiinipitoisuudet on määritettävä tai vahvistettava varmistavan menetelmän avulla.

Seulontamenetelmät ovat menetelmiä, joita käytetään osoittamaan dioksiinien tai dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden esiintyminen tietyllä tasolla. Menetelmien näytteenkäsittelykapasiteetti on suuri, ja niillä seulotaan suuria määriä näytteitä mahdollisesti positiivisten näytteiden havaitsemiseksi. Menetelmät on erityisesti suunniteltu välttämään väärät negatiiviset tulokset.

Varmistusmenetelmät ovat menetelmiä, joilla saadaan täydelliset tiedot tai lisätietoja, joiden avulla dioksiinit ja dioksiinin kaltaiset PCB-yhdisteet voidaan tunnistaa ja kvantifioida yksiselitteisesti tietyllä tasolla.

2 Taustaa

Koska ympäristöstä otetut näytteet ja biologiset näytteet (rehuaineista ja rehuista otetut näytteet mukaan luettuina) sisältävät yleensä eri dioksiiniyhdisteiden monenlaisia seoksia, riskinarvioinnin helpottamiseksi on kehitetty toksisuusekvivalenssikertoimien (Toxic Equivalency Factor, TEF) käsite. Toksisuusekvivalenssikertoimet on kehitetty sitä varten, että niillä voidaan esittää 2,3,7,8-substituoitujen PCDD-yhdisteiden ja PCDF-yhdisteiden seoksien ja nyttemmin myös joidenkin muuhun kuin orto-asemaan substituoitujen tai toisaalta mono-orto-asemaan substituoitujen PCB-yhdisteiden — joilla on dioksiinin kaltaista aktiivisuutta — konsentraatioita 2,3,7,8-TCDD:n (2,3,7,8-tetraklooridibentso-p-dioksiinin) toksisuusekvivalentteina (TEQ) (ks. liite I, alaviite 1).

Tietyssä erässä olevien yksittäisten aineiden konsentraatiot kerrotaan kunkin aineen toksisuusekvivalenssikertoimella, ja saadut määrät lasketaan yhteen, jolloin tulokseksi saadaan dioksiinin kaltaisten yhdisteiden kokonaiskonsentraatio toksisuusekvivalentteina ilmaistuna.

Suurimmat arvot: TEQ:ta laskettaessa oletetaan kunkin määrittämättä jääneen yhdisteen arvoksi määritysrajaa vastaava arvo.

Pienimmät arvot: TEQ:ta laskettaessa oletetaan kunkin määrittämättä jääneen yhdisteen arvoksi nolla.

Väliarvot: TEQ:ta laskettaessa oletetaan kunkin määrittämättä jääneen yhdisteen arvoksi puolet määritysrajaa vastaavasta arvosta.

▼M1

Vain tässä direktiivissä yhden yksittäisen yhdisteen hyväksytty tietty määritysraja on se näyte-uutteessa olevan analyytin pitoisuus, joka antaa mitattaville kahdelle eri ionille vasteen, jossa vähemmän herkän signaalin signaali-kohinasuhde on 3:1, ja joka täyttää vaatimukset, jotka koskevat esimerkiksi retentioaikaa ja isotooppisuhdetta EPA-menetelmän 1613 versiossa B kuvatun määritysmenetelmän mukaisesti.

▼B

3 Laadunvarmistusvaatimukset näytteenvalmistuksessa

Tässä yhteydessä sovelletaan näytteiden esikäsittelyä koskevia yleisiä määräyksiä, joista säädetään yhteisön määritysmenetelmistä rehujen virallista tarkastusta varten annettujen direktiivien 71/250/ETY, 71/393/ETY, 72/199/ETY, 73/46/ETY, 74/203/ETY, 75/84/ETY, 76/372/ETY ja 78/633/ETY muuttamisesta 30 päivänä heinäkuuta 1981 annetun komission direktiivin 81/680/ETY ( 8 ) liitteessä.

Lisäksi on noudatettava seuraavia vaatimuksia:

— Näytteet on varastoitava ja kuljetettava lasista, alumiinista, polypropyleenistä tai polyetyleenistä valmistetuissa säiliöissä. Paperipölyjäämät on poistettava astiasta. Lasitavarat on huuhdeltava liuottimella, josta on ennalta tarkastettu dioksiinien pitoisuudet.

— On suoritettava ilman näytettä tehtävä nolla-analyysi, jossa käydään läpi kaikki analyysin vaiheet.

— Uuttamisessa käytettävän näytteen painon on oltava riittävä herkkyysvaatimusten täyttämiseksi.

4 Vaatimukset laboratorioille

— Laboratorioiden on osoitettava menetelmän suorituskyky kyseisellä mittausalueella, esimerkiksi 0,5 x, 1 x ja 2 x mitattava taso, jolla toistettujen mittausten hajonta on hyväksyttävä. Ks. hyväksymisvaatimuksia koskevat tiedot kohdasta 5.

— Varmistusmenetelmän määritysrajan tulisi olla noin yksi viidesosa mitattavasta tasosta, jotta varmistetaan, että vaihtelukertoimet ovat hyväksyttävät mittausalueella.

— Sisäistä laadunvalvontaa varten pitäisi mitata säännöllisesti nollanäytteitä tai näytteitä, joihin on lisätty analyyttiä, tai erityisiä kontrollinäytteitä mieluiten varmennetuilla vertailuaineilla.

— Menestyksekäs osallistuminen laboratorioiden välisiin laboratorioiden pätevyyttä arvioiviin tutkimuksiin on paras tapa osoittaa pätevyys analyysien tekemisessä. Menestyksekäs osallistuminen laboratorioiden välisiin esimerkiksi maaperä- tai viemärinäytteitä koskeviin tutkimuksiin ei kuitenkaan välttämättä osoita laboratorion pätevyyttä myös elintarvike- ja rehunäytteiden analysoinnin alalla, koska kyseisten näytteiden kontaminaatioalue on alempi. Jatkuva osallistuminen laboratorioiden välisiin tutkimuksiin, jotka koskevat dioksiinien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden määrittämistä rehu- tai elintarvikematriiseissa, on siksi välttämätöntä.

— Laboratorioiden on oltava ISO-oppaan 58 mukaisesti toimivan tunnustetun laitoksen hyväksymiä, millä varmistetaan, että laboratoriot soveltavat analyyttistä laadunvarmistusta. Laboratorioiden hyväksyntä on tehtävä ISO/IEC/17025:1999-standardin mukaisesti.

5 Vaatimukset dioksiinien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden analyysille

Analyysimenettelyjä koskevat perusvaatimukset:

— Hyvä herkkyys ja matalat toteamisrajat. PCDD:t ja PCDF:t ovat erittäin myrkyllisiä yhdisteitä, joten ne on pystyttävä havaitsemaan jo määrinä, joiden suuruus on pikogrammoja TEQ (pikogramma = 10- 12 g). PCB-yhdisteiden tunnetaan esiintyvän suurempina pitoisuuksina kuin PCDD- ja PCDF-yhdisteiden. Useimpien PCB-yhdisteiden osalta herkkyydeksi riittää jo nanogrammoina (10- 9 g) ilmaistava alue. Niitä toksisempien dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden (erityisesti ei-orto-yhdisteiden) mittauksessa herkkyyden on oltava samaa luokkaa kuin PCDD- ja PCDF-yhdisteiden kohdalla.

— Hyvä selektiivisyys (spesifisyys). PCDD- ja PCDF-yhdisteet sekä dioksiinin kaltaiset PCB:t on voitava erottaa lukuisista muista uuttamisessa mukana tulevista ja mahdollisesti häiriöitä aiheuttavista yhdisteistä, joiden pitoisuudet voivat olla moninkertaisia verrattuna tarkasteltavien yhdisteiden pitoisuuksiin. Kaasukromatografia-massaspektrometriamenetelmissä (GC-MS) on pystyttävä tarvittaessa erottelemaan eri yhdisteet, kuten toksiset yhdisteet (esim. seitsemäntoista 2,3,7,8-substituoitua PCDD- ja PCDF-yhdistettä ja dioksiinin kaltaiset PCB:t) muista yhdisteistä. Biotestien pitäisi pystyä määrittämään TEQ-arvot valikoiden PCDD- ja PCDF-yhdisteiden ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden summana.

— Hyvä tarkkuus (oikeellisuus ja täsmällisyys). Määrityksessä pitäisi pystyä antamaan pätevä ja luotettava arvio aineen todellisesta pitoisuudesta näytteessä. Hyvä tarkkuus (mittauksen tarkkuus: mittauksen tuloksen ja mittauksen todellisen tai annetun arvon läheisyys) on välttämätöntä, jotta voidaan välttää näytteen analyysin tuloksen hylkääminen TEQ-arvion heikon luotettavuuden perusteella. Tarkkuus ilmaistaan oikeellisuutena (varmennetusta materiaalista mitatun tutkittavan aineen määrän keskiarvon ja sen varmennetun arvon erotus prosentteina tästä arvosta) ja täsmällisyytenä (täsmällisyys lasketaan yleensä keskihajontana, jossa on mukana toistettavuus ja uusittavuus, ja se kuvaa määrätyissä koeolosuhteissa kokeita toistamalla saatujen tulosten läheisyyttä). — Seulontamenetelmiin voi kuulua biotestejä ja GC-MS-menetelmiä, varmistusmenetelmät ovat korkearesoluutioisia kaasukromatografia-massaspektrometriamenetelmiä (HRGC-HRMS-menetelmiä). TEQ-arvon kokonaismäärän osalta on noudatettava seuraavia vaatimuksia: —



Seulontamenetelmät Varmistusmenetelmät Väärien negatiivisten tulosten osuus < 1 % Oikeellisuus – 20 % — + 20 % Vaihtelukerroin < 30 % < 15 %

6 Erityiset vaatimukset seulonnassa tai varmistuksessa käytettäville GC-MS-menetelmille

— Analyysimenetelmän validoimiseksi on aivan menetelmän alussa eli esimerkiksi ennen uuttamista lisättävä 13C-merkittyjä 2,3,7,8-kloorisubstituoituja sisäisiä PCDD/F-standardiaineita (ja 13C-merkittyjä sisäisiä dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden standardiaineita, jos on määritettävä dioksiinin kaltaisia PCB-yhdisteitä). Vähintään yhtä näistä yhdisteistä on lisättävä kutakin tetra-oktakloorattua PCDD/F-homologiryhmää kohden (ja yhtä näistä yhdisteistä kutakin dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden homologiryhmää kohden, jos on määritettävä dioksiinin kaltaisia PCB-yhdisteitä). (Vaihtoehtoisesti voidaan lisätä vähintään yhtä näistä yhdisteistä kutakin PCDD/F:ien ja dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden valvonnassa käytettyä massaspektrillä määritettyä ionia kohden.) Ainakin varmistusmenetelmien yhteydessä on suositeltavaa käyttää kaikkia 17:ää 13C-merkittyä 2,3,7,8-kloorisubstituoitua sisäistä PCDD/F-standardiainetta ja kaikkia 12:ta 13C-merkittyä sisäistä dioksiinin kaltaisten PCB-yhdisteiden standardiainetta (jos on määritettävä dioksiinin kaltaisia PCB-yhdisteitä). — Suhteelliset vastetekijät on asianmukaista kalibrointiliuosta käyttäen määritettävä myös niille aineille, joiden osalta ei lisätä 13C-merkittyä analogia.

— Kasviperäisten ja alle 10 % rasvaa sisältävien eläinperäisten rehujen kohdalla sisäiset standardiaineet on lisättävä ennen uuttamista. Yli 10 % rasvaa sisältävien eläinperäisten rehujen kohdalla ne taas voidaan lisätä joko ennen uuttamista tai rasvauuttamisen jälkeen. Uuttamisen tehokkuus on validoitava asianmukaisesti sen mukaan, missä vaiheessa sisäiset standardiaineet lisätään, ja sen mukaan, ilmoitetaanko tulokset tuotteessa vai rasvassa olevan pitoisuuden perusteella.

— Ennen GC-MS-analyysia on lisättävä 1 tai 2 saantostandardiainetta.

— Saantojen valvonta on välttämätöntä. Varmistusmenetelmissä sisäisten standardien saantojen pitäisi olla 60—120 %. Pienemmät saantoarvot voidaan hyväksyä erityisesti hepta- ja oktaklooratun dibentsodioksiinien ja dibentsofuraanien osalta, kunhan niiden vaikutus TEQ-arvoon on enintään 10 % TEQ-arvon kokonaismäärästä (perustana ainoastaan PCDD/F). Seulontamenetelmissä saantojen tulisi olla 30—140 %.

— Dioksiinit olisi erotettava häiriöitä aiheuttavista klooratuista yhdisteistä, esimerkiksi PCB-yhdisteistä ja klooratuista bifenyylieettereistä, soveltuvilla kromatografiatekniikoilla (mieluiten florisil-, alumiinioksidi- ja/tai hiilikolonneilla).

— Isomeerien erotuksen kaasukromatografian avulla pitäisi olla riittävä (1,2,3,4,7,8-HxCDF:n ja 1,2,3,6,7,8-HxCDF:n välisen laakson korkeus ei saa ylittää 25:tä %).

— Dioksiinien määrittämiseen olisi käytettävä EPA-menetelmän 1613 versiota B (Tetra- through octa-chlorinated dioxins and furans by isotope dilution HRGC/HRMS) tai vastaavat kriteerit täyttävää menetelmää.

— Suurimman ja pienimmän arvon välinen ero saa olla enintään 20 % rehuilla, joiden dioksiinipitoisuus on enimmäismäärän rajoissa tai ylittää sen. Sellaisten rehujen osalta, joiden dioksiinipitoisuudet alittavat selvästi enimmäismäärät, ero voi olla 25—40 prosenttia.

7 Seulonta-analyysimenetelmät

7.1 Johdanto

Seulontaa voidaan käyttää erilaisiin analyyseihin: puhtaaseen seulontaan tai kvantitatiiviseen analyysiin.

Seulonta

Näytteitten vastetta verrataan vertailunäytteen vasteeseen kyseessä olevalla mittausalueella. Vertailunäytettä vähäisemmän vasteen antavia näytteitä pidetään negatiivisina, suuremman vasteen antaneita mahdollisina positiivisina. Vaatimukset:

— Kussakin koesarjassa on käytettävä nollanäytettä ja vertailunäytettä (-näytteitä), jotka uutetaan ja testataan samaan aikaan identtisissä oloissa. Vertailunäytteen vasteen on oltava selvästi kohonnut verrattuna nollanäytteeseen.

— Lisäksi olisi käytettävä mitattavan tason 0,5- ja 2-kertaista arvoa edustavia vertailunäytteitä, joilla osoitetaan testin toimivuus halutulla mittausalueella mitattavan tason kontrollia varten.

— Muita matriiseja testattaessa on osoitettava vertailunäytteiden sopivuus mieluiten ottamalla mukaan näytteitä, joiden TEQ-arvoksi on korkearesoluutioisella kaasukromatografia-massaspektrometrialla määritetty vertailunäytteen arvoa lähellä oleva arvo, taikka arvoltaan vastaavaksi säädettyä nollanäytettä.

— Koska sisäisiä standardiaineita ei voida käyttää biotesteissä, on erittäin tärkeää tehdä toistettavuustestejä, jotta saadaan tietoja yksittäisen koesarjan keskihajonnasta. Suhteellisen standardipoikkeaman olisi oltava pienempi kuin 30 %.

— Biotestien osalta olisi määriteltävä kohdeyhdisteet, mahdolliset häiriöt sekä suurimmat hyväksyttävät nollatasot.

Kvantitatiivinen analyysi

Kvantitatiivisessa analyysissa tarvitaan standardilaimennussarja, kaksin- tai kolminkertainen puhdistus sekä mittaus-, nolla- ja saantokontrollit. Tulos voidaan ilmoittaa TEQ:na, jolloin oletetaan signaalista vastaavien yhdisteiden olevan TEQ-periaatteen mukaisia. Tämä voidaan tehdä tuottamalla TCDD:n (tai dioksiini-furaanistandardiseoksen) avulla kalibrointikuvaaja, jonka perusteella lasketaan TEQ-taso uutteessa ja sitä kautta näytteessä. Arvo korjataan nollanäytteelle (jotta otetaan huomioon epäpuhtaudet käytetyistä liuottimista ja kemikaaleista) lasketun TEQ-arvon ja saannon (lasketaan pitoisuudeltaan noin kyseessä olevaa tasoa edustavan laadunvalvontanäytteen TEQ-arvosta) perusteella. On huomattava, että osa ilmeisestä saantohäviöstä voi johtua matriisivaikutuksista ja/tai biotestien TEF-arvojen ja WHO:n virallisten TEF-arvojen eroista.

7.2 Vaatimukset seulontaan käytettäville analyysimenetelmille

— Seulontaan voidaan käyttää GC-MS-menetelmiä ja biotestimenetelmiä. GC-MS-menetelmien osalta vaatimuksina on käytettävä kohdassa 6 esitettyjä vaatimuksia. Solupohjaisten biotestien erityisvaatimukset esitetään kohdassa 7.3 ja testisarjapohjaisten biotestien erityisvaatimukset kohdassa 7.4.

— On ilmoitettava väärien positiivisten ja väärien negatiivisten tulosten määrä suuressa näytemäärässä enimmäismäärien tai toimintarajojen ala- ja yläpuolella varmistavalla analyysimenetelmällä määritettyyn TEQ-arvoon verrattuna. Todellisten väärien negatiivisten tulosten osuuden pitäisi olla alle 1 %. Väärien positiivisten tulosten määrän pitäisi olla niin pieni, että seulontavälineen käytöstä on hyötyä.

— Positiiviset tulokset on aina vahvistettava varmistavalla analyysimenetelmällä (HRGC/HRMS). Lisäksi laajaa TEQ-vaihtelualuetta edustavat näytteet olisi vahvistettava HRGC/HRMS:llä (noin 2—10 % negatiivisista näytteistä). Tiedot biotestin ja HRGC/HRMS:n tulosten vastaavuudesta on ilmoitettava.

7.3 Erityisvaatimukset solupohjaisille biotesteille

— Biotestiä suoritettaessa on kussakin testauksessa käytettävä TCDD-viitepitoisuussarjaa tai dioksiini-furaaniseosta (täysimittainen annos-vastekuvaaja, jossa R2 > 0,95). Seulonnassa voidaan kuitenkin käyttää matalien pitoisuuksien näytteitten analysointiin laajennettua matalien pitoisuuksien kuvaajaa.

— Biotestin tulosten valvomiseen vakiomittaisella ajanjaksolla olisi käytettävä laadunvalvontalomakkeessa TCDD-viitepitoisuutta (noin 3 kertaa määritysraja). Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää vertailunäytteen suhteellista vastetta verrattuna TCDD-kalibrointikäyrään, sillä solukohtainen vaste voi riippua useista eri tekijöistä.

— Kullekin vertailumateriaalille on luotava laadunvalvontakortti, joka on tarkastettava. Näin varmistetaan, että tulokset vastaavat ohjeita.

— Erityisesti kvantitatiivisissa laskelmissa on käytetyn näytelaimennuksen oltava vastekäyrän lineaarisella osuudella. Pitoisuudeltaan vastekäyrän lineaarisen osuuden ylittävät näytteet on laimennettava ja testattava uudelleen. Onkin suositeltavaa testata kerralla vähintään kolme laimennosta.

— Prosentuaalinen keskihajonta saa olla enintään 15 % kunkin näytelaimennoksen kolminkertaisessa määrityksessä ja enintään 30 % kolmen erillisen kokeen välillä.

— Toteamisrajan arvoksi voidaan asettaa kolme kertaa nollaliuoksen tai taustavasteen keskihajonnan arvo. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää tausta-arvoa suurempaa vastetta (5 kertaa nollaliuoksen vaste) laskettuna kyseisen päivän kalibrointikäyrältä. Määritysrajaksi voidaan asettaa 5—6 kertaa nollaliuoksen tai tausta-arvon keskihajonta, tai sitten voidaan käyttää selvästi tausta-arvoa suurempaa vastetta (10 kertaa nollaliuoksen vaste) laskettuna kyseisen päivän kalibrointikäyrältä.

7.4 Erityisvaatimukset testisarjapohjaisille biotesteille ( 9 )

— Valmistajan ohjeita näytteen valmistamiselle ja analyyseille on noudatettava.

— Viimeisen käyttöpäivän ohittaneita testisarjoja ei pidä käyttää.

— Muitten sarjojen yhteydessä käytettäviksi tarkoitettuja tarvikkeita tai komponentteja ei pidä käyttää.

— Testisarjoja on säilytettävä annettujen säilytyslämpötilarajojen ja käytettävä annettujen käyttölämpötilarajojen puitteissa.

— Toteamisraja on immunomäärityksissä summa, joka saadaan laskemalla yhteen keskiarvo sekä 3 kertaa keskihajonta, joka on määritetty 10:llä nollanäytteen toistoanalyysillä ja jaetaan lineaarisen regressiokuvaajan kulmakertoimella.

— Laboratoriotesteissä olisi käytettävä vertailustandardeja, jotta taataan, että vastaavuus standardiin nähden on hyväksyttävissä rajoissa.

8 Tulosten raportointi

Mikäli analyyttinen menetelmä sallii, analyysin tuloksiin olisi sisällyttävä yksittäisten PCDD/F:ien ja PCB-yhdisteiden pitoisuudet ja tulokset olisi ilmoitettava pienimpinä, suurimpina ja väliarvoina, jotta tulosten raportointiin saataisiin mukaan mahdollisimman paljon tietoja, jolloin tuloksia pystytään tulkitsemaan erityisten vaatimusten mukaisesti.

Raporttiin tulisi sisältyä myös näytteen rasvapitoisuus sekä rasvan uuttamiseen käytetty menetelmä.

Yksittäisten sisäisten standardiaineiden saantotiedot on toimitettava, jos saantojen arvo on kohdassa 6 mainitun alueen ulkopuolella tai jos enimmäismäärä ylittyy. Muissa tapauksissa ne on toimitettava pyydettäessä.