COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS 
C0M(91) 304 final 
Bruselas, 30 de julio de 1991 
Propuesta de 
REGLAMENTO (CEE) DEL CONSEJO 
por el que se establecen medidas comunitarias para 
la lucha contra la influenza aviar 
(presentada por la Comisión) 
- lb*?-
EXPOSICIÓN DE MOTIVOS 
La influenza aviar de gran patogenicidad es una enfermedad contagiosa y grave de 
las aves de corral, producida por un virus que puede presentar grandes variaciones 
tanto en la patogenicidad como en ios signos clínicos que provoca en las aves 
vulnerables. Esta enfermedad está extendida por todo el mundo, y el virus lo 
pueden transmitir las aves migratorias, en particular ciertas aves acuáticas. 
En ei articulo 19 de la Directiva 90/539/CEE del Consejo, de 15 de octubre de 
1990, relativa a las condiciones de policía sanitaria que regulan los intercambios 
intracomunitarios y las importaciones de aves de corral y de huevos para incubar 
procedentes de países terceros^), se contempla la adopción de normas de control 
para luchar contra la influenza aviar, antes del 1 de julio de 1991. 
Las medidas propuestas tienen como objetivo erradicar la influenza aviar e impedir 
su propagación, en caso de que se presenten brotes, lo que se alcanzará mediante 
la "eliminación", utilizando o no vacunas, y mediante el control escrupuloso del 
movimiento de las aves de corral, sus productos derivados, los vehículos y 
cualquier otro material capaz de transmitir el virus de dicha enfermedad. Estas 
medidas deben aplicarse tan pronto como se sospeche la presencia de la influenza 
aviar, de modo que se actúe inmediata y eficazmente. 
Para asegurar tales actuaciones, la presente propuesta consta de una serie de 
obligaciones que deben cumplir los Estados miembros entre las que se incluyen: 
organizar una investigación que permita confirmar o descartar la presencia de 
la influenza aviar, cuando se sospeche o detecte una infección en las aves de 
corral ; 
someter a vigilancia las explotaciones y prohibir los movimientos hacia o 
desde las mismas durante el periodo de vigilancia, cuando se sospeche la 
presencia de la influenza aviar; 
sacrificar y destruir las aves infectadas cuando se haya confirmado la 
influenza aviar; 
(1) DO np_ L 303 de 31.10.1990, p. 6. 
- 2 -
realizar una minuciosa investigación epizootiológica cuando se sospeche y 
confirme la influenza aviar; 
establecer zonas de protección (3 km) y zonas de vigilancia (10 km) alrededor 
de las explotaciones infectadas; 
crear laboratorios que aporten la asistencia técnica necesaria para la 
correcta aplicación de las medidas de control de la enfermedad; 
informar a la Comisión sobre los programas de vacunación; 
preparar un plan de alerta. 
Z b^o -
Propuesta"' 
de 
Reglamento (CEE) del Consejo 
por el que se establecen medidas comunitarias 
para la lucha contra la influenza aviar 
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS, 
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y, en particular, 
su articulo 43, 
Vista la propuesta de la Comisión, 
Visto el dictamen del Parlamento Europeo, 
Visto el dictamen del Comité Económico y Social, 
Considerando que el sector de las aves de corral figura en el Anexo II del 
Tratado; que la comercialización de aves de corral constituye una importante 
fuente de ingresos de la población agraria; 
Considerando que, si se presentan brotes de influenza aviar de gran patogenicidad, 
enfermedad producida por un virus de la influenza de características especiales y 
que en lo sucesivo se denominará influenza aviar, es necesario establecer a escala 
comunitaria medidas de lucha contra la misma con objeto de garantizar el 
desarrollo nacional del sector de las aves de corral y de contribuir a la 
protección de la salud animal en la Comunidad; 
Considerando que los brotes de influenza aviar pueden adquirir rápidamente un 
carácter epizoótico y provocar una mortalidad y unas perturbaciones tales que 
comprometan seriamente la rentabilidad de las explotaciones avícolas en su 
conjunto; 
- 2 £&x -
• 
Considerando que es necesario tomar medidas en cuanto existan indicios de esta 
enfermedad de manera que, si se confirma, sea posible adoptar inmediatamente 
medidas eficaces de lucha contra la misma; 
Considerando que, tan pronto como se declare un brote de esta enfermedad, es 
necesario impedir su propagación controlando de modo estricto el transporte de 
animales y la utilización de productos que puedan estar contaminados y, en su 
caso, recurriendo a la vacunación; 
Considerando que el diagnóstico de la enfermedad debe efectuarse bajo los 
auspicios de los laboratorios responsables, que deberán estar coordinados por un 
laboratorio comunitario de referencia; 
Considerando que las medidas comunitarias de lucha contra la influenza aviar 
constituyen la base para el mantenimiento de un nivel uniforme de salud animal; 
Considerando que es conveniente encomendar a la Comisión la tarea de adoptar las 
disposiciones de aplicación necesarias, 
HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO: 
Articulo 1 
1. El presente Reglamento establece las medidas comunitarias para la lucha 
contra la influenza aviar aplicables en caso de que esta enfermedad se 
declare en aves de corral, sin perjuicio de las disposiciones comunitarias 
que regulan el comercio intracomunítar¡o. 
2. El presente Reglamento no se aplicará en caso de que se detecte la influenza 
aviar en otras aves. Sin embargo, los Estados miembros deberán informar a la 
Comisión de las medidas que hayan adoptado. 
- 3 -
Articulo 2 
1. A efectos del presente Reglamento, se utilizarán como proceda las 
definiciones del articulo 2 de la Directiva 90/539/CEE del Consejo relativa a 
las condiciones de policía sanitaria que regulan los intercambios 
Intracomunitarios y las importaciones de aves de corral y de huevos para 
incubar procedentes de países terceros*1). 
2. Además, se entenderá por: 
a) "ave de corral infectada": 
toda ave de corral en la que un examen de laboratorio haya permitido 
comprobar oficialmente la influenza aviar tal como se define en el 
Anexo I, o 
tratándose de un segundo brote o de brotes subsiguientes, toda ave 
de corral en la que se hayan encontrado signos clínicos o lesiones 
post mortem propios de la influenza aviar; 
b) "ave de corral sospechosa de estar infectada": toda ave de corral con 
signos clínicos o lesiones post mortem tales que se pueda sospechar 
justificadamente la presencia de la influenza aviar o en la que se haya 
comprobado la presencia del subtipo H5 o H7 del virus de la influenza A; 
c) "ave de corral sospechosa de estar contaminada": toda ave de corral que 
haya podido estar, directa o indirectamente, en contacto con ei virus de 
la influenza aviar o con el subtipo H5 o H7 del virus de la influenza A; 
d) "autoridad competente": autoridad veterinaria designada al efecto por la 
administración nacional del pals de que se trate, ante la cual será 
directamente responsable en la materia regulada por el presente 
Reglamento y a través de la cual transmitirá la información obtenida; 
e) "veterinario oficial": el veterinario designado por la autoridad 
competente del Estado miembro en cuestión. 
(1) DO nfi L 303 de 31.10.1990, p. 6. 
- 4 -
Artículo 3 
Toda sospecha de influenza aviar deberá ser notificada inmediatamente a la 
autoridad competente. 
Articulo 4 
1. Cuando en una explotación haya aves de corral sospechosas de estar infectadas 
o contaminadas por la influenza aviar, el veterinario oficial deberá realizar 
inmediatamente una investigación para confirmar o descartar la presencia de 
esta enfermedad; la investigación deberá incluir tomas de muestras adecuadas 
para analizarlas en el laboratorio. 
2. En cuanto se le notifique la sospecha de infección, la autoridad competente 
pondrá la explotación bajo vigilancia oficial y ordenará, en particular: 
a) la realización de un censo de todas las aves de corral de la explotación 
en el que se precise, por categorías, el número de aves de corral 
muertas, cuántas presentan síntomas clínicos y cuántas no. Este censo 
deberá mantenerse al día y presentarse cuando se solicite, y podrá 
controlarse en cada visita; 
b) la reclusión de todas las aves de corral de la explotación dentro de sus 
locales habituales o de cualquier otro lugar en el que queden aisladas, 
sin ningún contacto con otras aves; 
c) la prohibición tanto de la entrada de aves de corral en la explotación 
como de la salida de las que se encuentren en ésta; 
d) la prohibición de todo movimiento 
de personas, animales o vehículos cuyo destino u origen sea la 
explotación, 
de carne o canales de aves de corral, piensos, material, desechos, 
cama de paja o cualquier otro elemento procedente de la explotación 
capaz de transmitir la influenza aviar, 
salvo autorización expedida por el veterinario oficial; 
- 5 
e) la prohibición de la salida de la explotación de huevos que no estén 
destinados al consumo y que no hayan sido desinfectados a satisfacción 
del veterinario oficial; 
f) la utilización de medios de desinfección apropiados en las entradas y 
salidas de la explotación y de los edificios en que se hallen las aves de 
corral; 
g) una investigación epizootiológica con arreglo a lo dispuesto en el 
articulo 7. 
3. Hasta que entren en vigor las medidas oficiales contempladas en el apartado 
2, el propietario o avicultor de toda explotación en la que se sospeche la 
presencia de la enfermedad adoptará todas las medidas apropiadas que 
garanticen el cumplimiento de las disposiciones contempladas en dicho 
apartado, en particular las de las letras b), c), d) y e). 
4. La autoridad competente podrá hacer extensivas las medidas previstas en el 
apartado 2 a otras explotaciones cuando su ubicación, configuración o los 
contactos con la explotación en que se sospeche la existencia de la 
enfermedad permitan sospechar una posible contaminación. 
5. Las medidas contempladas en los apartados 2, 3 y 4 dejarán de aplicarse 
únicamente cuando el veterinario oficial descarte cualquier sospecha de 
influenza aviar. 
Artículo 5 
1. En cuanto se confirme oficialmente que en una explotación se ha declarado la 
influenza aviar, la autoridad competente, además de las medidas enumeradas en 
el apartado 2 del articulo 4, ordenará que se lleven a cabo inmediatamente 
las siguientes operaciones: 
a) el sacrificio inmediato de todas las aves de corral que se hallen en la 
explotación y la destrucción de las aves de corral muertas o sacrificadas 
y de todos los huevos. Estas operaciones se efectuarán de manera que se 
limite al máximo el riesgo de propagación de la enfermedad; 
- 6 -
b) la destrucción o el tratamiento de todas las materias o desechos, como 
piensos, camas o estiércol, que puedan estar contaminados. Ei tratamiento 
deberá realizarse ateniéndose a las instrucciones del veterinario oficial 
y deberá garantizar la destrucción total del virus de la influenza aviar; 
c) en lo posible, la búsqueda y destrucción de la carne de las aves de 
corral que hayan sido sacrificadas durante el supuesto periodo de 
incubación de la enfermedad; 
d) la búsqueda y destrucción de los huevos para incubar puestos durante el 
supuesto periodo de incubación que hayan salido de la explotación; en 
cualquier caso la sumisión a vigilancia oficial de las aves de corral que 
hayan nacido de esos huevos; en lo posible, la búsqueda y destrucción de 
los huevos destinados al consumo puestos durante el supuesto período de 
incubación que hayan salido de la explotación; 
e) después de haberse llevado a cabo las operaciones indicadas en la letra 
a), la limpieza y desinfección, con arreglo a lo dispuesto en el artículo 
11, de los edificios en que vivan las aves de corral y de sus 
alrededores, de los vehículos de transporte y de todo el material que 
pueda estar contaminado; 
f) después de realizar las operaciones indicadas en la letra e), la 
interposición de un periodo mínimo de veintiún días antes de volver a 
introducir aves de corral en la explotación; 
g) la realización de una investigación epizootiológica con arreglo a lo 
dispuesto en el artículo 7. 
La autoridad competente podrá aplicar las medidas previstas en el apartado 1 
a otras explotaciones cuando su ubicación, su configuración o los contactos 
con la explotación infectada permitan sospechar una posible contaminación. 
- 7 -
Artículo 6 
1. Cuando las explotaciones estén formadas por dos o más manadas independientes, 
la autoridad competente podrá eximir de las medidas enunciadas en la letra a) 
del apartado 1 del articulo 5 a las manadas sanas de una explotación 
infectada, siempre que el veterinario oficial haya confirmado que las 
operaciones que se realicen en ella reúnen unas características tales que 
hacen que las manadas permanezcan completamente independientes desde el punto 
de vista de su alojamiento, mantenimiento y alimentación, de modo que no hay 
peligro de que el virus se contagie de una manada a otra. 
2. De conformidad con el procedimiento del articulo 21, la Comisión fijará los 
criterios por los que se regirá la exención mencionada en el apartado 1. 
Art i cu I o 7 
1. La investigación epizootiológica estudiará los siguientes aspectos: 
periodo de la posible presencia de la influenza aviar en la explotación; 
posible origen de la enfermedad en la explotación y localización de las 
demás explotaciones en las que se encuentren aves de corral que hayan 
podido infectarse o contaminarse a partir del mismo foco; 
movimientos de personas, aves de corral u otros animales, vehículos, 
huevos, carne, canales y cualquier utensilio o materia que haya podido 
transmitir el virus de la influenza aviar a la explotación afectada o 
propagarlo a partir de ella. 
2. A fin de coordinar todas las medidas necesarias para erradicar la influenza 
aviar lo más rápidamente posible y con objeto de realizar la investigación 
epizootiológica, se creará un centro de crisis. 
- 8 -
Las disposiciones generales sobre los centros de crisis nacionales y 
comunitarios se establecen en el Reglamento (CEE) no. ../... del Consejo. 
Artículo 8 
1. Cuando el veterinario oficial disponga de indicios de contaminación de aves 
de corral de una explotación debida a movimientos de personas, animales o 
vehículos o a cualquier otra circunstancia, las explotaciones afectadas se 
someterán a control oficial con arreglo a lo dispuesto en el apartado 2. 
2. El control oficial tendrá como finalidad detectar inmediatamente cualquier 
indicio de influenza aviar, llevar a cabo el censo de las aves de corral, 
controlar sus movimientos y, en su caso, aplicar las medidas establecidas en 
ei apartado 3. 
3. Cuando una explotación esté sometida al control oficial establecido en las 
disposiciones del apartado 2, la autoridad competente prohibirá la salida de 
las aves de corral de la explotación cuando no sea para su transporte directo 
a un matadero bajo control oficial para su sacrificio inmediato. Antes de que 
pueda autorizarse tal salida, el veterinario oficial deberá haber efectuado 
un examen clínico de todas las aves de corral que demuestre que la 
explotación está libre de influenza aviar. Las restricciones de movimientos 
antes mencionadas se aplicarán durante un periodo de veintiún días a partir 
de la última fecha en que pueda haberse producido la contaminación; en 
cualquier caso, estas restricciones se aplicarán durante un periodo mínimo de 
siete días. 
4. Cuando considere que las condiciones lo permiten, la autoridad competente 
podrá limitar la aplicación de las medidas establecidas en el presente 
articulo a una parte de la explotación y a las aves de corral que se hallen 
en ésta, siempre que hayan sido alojadas, mantenidas y alimentadas de forma 
totalmente separada y por diferente personal. 
- 9 -
Articulo 9 
1. Cuando el diagnóstico de la influenza aviar se haya confirmado oficialmente, 
la autoridad competente delimitará, alrededor de la explotación infectada, 
una zona compuesta por una zona de protección de un radio mínimo de 3 km y 
una zona de vigilancia de un radío mínimo de 10 km. Para la delimitación de 
estas zonas deberán tenerse en cuenta las barreras naturales y las 
características epizootiológícas del brote. 
2. En la zona de protección se aplicarán las siguientes medidas: 
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de corral; 
b) visitas periódicas a todas las explotaciones con aves de corral, con 
exámenes clínicos de éstas y, en su caso, toma de muestras para su examen 
en laboratorio; se llevará un registro de visitas y resultados de los 
exámenes; 
c) mantenimiento de todas las aves de corral en su alojamiento habitual o en 
cualquier otro lugar que permita aislarlas; 
d) utilización de sistemas de desinfección apropiados en las entradas y 
salidas de las explotaciones; 
e) control de los desplazamientos dentro de la zona de las personas que 
manipulen aves de corral, sus canales y huevos, asi como de los vehículos 
utilizados para su transporte; en general, se prohibirá el transporte de 
las aves, exceptuando el tránsito por las carreteras y lineas férreas más 
importantes; 
f) prohibición de sacar aves de corral y huevos para incubar de la 
explotación en que se encuentren, salvo que la autoridad competente haya 
autorizado el transporte: 
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i) de aves para su sacrificio inmediato, preferentemente a un matadero 
situado en la zona infectada, o, de no ser posible, a uno situado 
fuera de ésta y designado por la autoridad competente. La carne 
resultante deberá llevar la marca sanitaria especial establecida en 
el apartado 1 del articulo 6 del Reglamento (CEE) ne .../... del 
Consejo sobre las condiciones de policía sanitaria a las que deben 
ajustarse ios intercambios intracomunitarios y las importaciones de 
carnes frescas de aves de corral y de aves de caza de cria 
procedentes de terceros países(1); 
i i) de pollitos de un día de edad o de pollitas maduras para la puesta a 
una explotación situada dentro de la zona infectada y que no tenga 
otras aves de corral. Esta explotación estará sometida al control 
oficial establecido en el apartado 2 del artículo 8; 
i i i) de huevos para incubar bien a una incubadora situada dentro de la 
zona de protección o, si está fuera de ella, a una incubadora 
designada por la autoridad competente; los huevos y sus envases 
deberán desinfectarse antes de ser enviados. 
Los desplazamientos indicados en los puntos i), i i) y i i i) deberán ser 
realizados directamente bajo control oficial y únicamente se autorizarán 
después de que el veterinario oficial haya efectuado una inspección 
sanitaria de la explotación. Los medios de transporte empleados deberán 
limpiarse y desinfectarse antes y después de su utilización; 
g) prohibición de retirar o esparcir sin autorización el estiércol de las 
aves de corral o sus camas de paja; 
h) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás 
concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves. 
3. Las medidas aplicadas en la zona de protección se mantendrán al menos durante 
veintiún días después de que se hayan efectuado en la explotación infectada 
las operaciones preliminares de limpieza y desinfección con arreglo a lo 
dispuesto en el articulo 11. Cuando se levanten esas medidas, la zona de 
protección pasará a formar parte de la zona de vigilancia. 
(1) C0M(89) 507 final. 
- 11 -
4. En la zona de vigilancia se aplicarán las siguientes medidas: 
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de corral; 
b) control de los desplazamientos de las aves de corral y de los huevos para 
incubar dentro de la zona; 
c) prohibición de sacar aves de corral fuera de la zona durante los quince 
primeros días, excepto para enviarlas directamente a un matadero situado 
fuera de la zona de vigilancia y designado por la autoridad competente, 
en cuyo caso la carne de estas aves deberá llevar la marca sanitaria 
especial establecida en el articulo 6 del Reglamento (CEE) no. .../... del 
Consejo sobre las condiciones de policía sanitaria a las que deben 
ajustarse los intercambios intracomunitarios y las importaciones de 
carnes frescas de aves de corral y de aves de caza de cria procedentes de 
terceros países; 
d) prohibición de sacar huevos para incubar fuera de la zona de vigilancia, 
salvo que se envíen a un local designado por la autoridad competente. 
Antes de ser enviados, los huevos y sus envases deberán ser 
desinfectados; 
e) prohibición de sacar estiércol de aves de corral o sus camas de paja 
fuera de la zona; 
f) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás 
concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves; 
g) sin perjuicio de las disposiciones contempladas en las letras b) y c), 
prohibición de transportar aves de corral, exceptuando el tránsito por 
las carreteras y lineas férreas más importantes. 
5. Las medidas aplicadas en la zona de vigilancia se mantendrán al menos durante 
treinta días después de haberse realizado en la explotación infectada las 
operaciones preliminares de limpieza y desinfección con arreglo a lo 
dispuesto en el artículo 11. 
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Articulo 10 
1. La autoridad competente establecerá las normas que le permitan seguir los 
desplazamientos de huevos y de aves de corral. 
2. A petición de la autoridad competente, el propietario o el avicultor deberá 
facilitarle los datos sobre las entradas y salidas de su explotación de aves 
y huevos. 
3. Toda persona que se dedique al transporte o al comercio de aves de corral y 
de huevos deberá poder informar a la autoridad competente sobre los 
desplazamientos de aves y huevos que haya transportado o comercializado y 
aportar documentación detallada al respecto. 
Articulo 11 
1. Los desinfectantes que se vayan a utilizar así como su concentración deberán 
estar autorizados por la autoridad competente. 
2. Las operaciones de limpieza y desinfección deberán efectuarse bajo la 
supervisión oficial y con arreglo a las instrucciones del veterinario 
oficial. 
Articulo 12 
Las tomas de muestras y los análisis de laboratorio que se efectúen para detectar 
el virus de la influenza aviar deberán realizarse con arreglo a las disposiciones 
de I Anexo I. 
Artículo 13 
1. Los Estados miembros designarán: 
a) uno o varios laboratorios nacionales, que se mantendrán dotados de las 
instalaciones y el personal especializado necesarios, para realizar la 
evaluación de la patogenicidad de los virus de la influenza que se hayan 
aislado (Capitulo 7 del Anexo I) y la identificación de los subtipos H5 o 
H7 del virus de la influenza A; 
- 13 -
b) uno o varios laboratorios nacionales encargados de controlar los 
reactivos utilizados por los laboratorios regionales; 
c) uno o varios institutos o laboratorios nacionales en los cuales las 
vacunas autorizadas puedan ser controladas para verificar su conformidad 
con las especificaciones contempladas en la autorización de 
comercialización. 
2. Los laboratorios nacionales enumerados en el Anexo II se encargarán de la 
coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico, el uso de reactivos 
y el control de vacunas. 
3. Los laboratorios nacionales a los que hace referencia el apartado 2 se 
encargarán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico 
establecidos en cada laboratorio de diagnóstico de la influenza aviar en el 
Estado miembro. A tal fin: 
a) podrán proporcionar a los laboratorios regionales reactivos para el 
diagnóstico; 
b) controlarán la calidad de todos los reactivos de diagnóstico utilizados 
en ese Estado miembro; 
c) organizarán periódicamente pruebas comparativas; 
d) mantendrán aislados virus de la influenza aviar recogidos de casos 
confirmados en ese Estado miembro; 
e) confirmarán los resultados positivos obtenidos en los laboratorios de 
diagnóstico regionales. 
4. Habrá una conexión entre los laboratorios nacionales enumerados en el Anexo 
Il y el laboratorio comunitario de referencia mencionado en el articulo 14. 
Artículo 14 
En el Anexo III figura el laboratorio comunitario de referencia para la influenza 
aviar. Sus competencias y obligaciones se establecerán con arreglo al 
procedimiento contemplado en el artículo 21, en la medida en que no estén 
regulados ya por el articulo 28 de la Directiva 90/424/CEE del Consejo*1) 
relativa a determinados gastos del sector veterinario. 
(1) DO no. L 224 de 18.8.1990, p. 19. 
- 14 -
Articulo 15 
1. La vacunación contra la influenza aviar con vacunas autorizadas por la 
autoridad competente podrá realizarse únicamente como complemento de las 
medidas de control que se adopten cuando se declare la enfermedad. 
2. La Comisión, en colaboración con el Estado miembro afectado, tomará la 
decisión de realizar la vacunación como complemento de las medidas de 
control, de conformidad con el procedimiento establecido en el articulo 21. 
Tal decisión atenderá principalmente a los siguientes elementos. 
la concentración de aves de corral en la zona afectada; 
las características y composición de la vacuna utilizada; 
los procedimientos de supervisión de la distribución, el almacenamiento 
y la utilización de las vacunas; 
las especies y categorías de aves de corral que vayan a ser vacunadas; 
las zonas en que se vaya a efectuar la vacunación. 
3. Cuando, de acuerdo con las disposiciones del apartado 2, un Estado miembro 
esté autorizado para recurrir a la vacunación de emergencia en una parte 
limitada de su territorio, el estatuto del resto del territorio no se verá 
afectado, siempre que se apliquen las normas de inmovilización de los 
animales vacunados durante un periodo de tres meses a partir del final de las 
operaciones de vacunación. 
Articulo 16 
1. Cuando, en una determinada región, una epizootia de influenza aviar presente 
un carácter excepcionalmente grave y una tendencia a propagarse, el Estado 
miembro afectado deberá: 
declarar "zona de alto riesgo sanitario" una zona delimitada 
terri tor la I mente que abarque como mínimo todas las zonas de protección y 
vigilancia que se encuentren dentro de la zona en cuestión; 
- 15 -
aplicar las medidas establecidas en el apartado 3 del articulo 9 en la 
"zona de alto riesgo sanitario"; 
prohibir la salida de toda ave de corral viva y todo huevo para incubar 
de la "zona de alto riesgo sanitario"; 
Informar a la Comisión y a los demás Estados miembros a través del Comité 
Veterinario Permanente sobre la situación de la enfermedad y las medidas 
de control aplicadas. 
2. Los limites de la "zona de alto riesgo sanitario" podrán modificarse 
eliminando progresivamente las zonas de vigilancia. Las disposiciones del 
apartado 1 dejarán de aplicarse cuando se haya suprimido la última zona de 
vigiI ancla. 
3. En caso de que persista la situación alarmante, las medidas que deba adoptar 
el Estado miembro afectado, en particular la determinación de la "zona de 
alto riesgo sanitario" y la aplicación de las disposiciones del articulo 17, 
deberán decidirse con arreglo al procedimiento establecido en el artículo 21. 
Artículo 17 
1. Cada Estado miembro preparará un plan de alerta en el que se especifiquen las 
medidas que deberán aplicarse a escala nacional en caso de que se registren 
brotes de influenza aviar. 
Este plan deberá permitir el acceso a las instalaciones, equipo, personal y 
cualquier otro material adecuado necesario para la rápida y eficaz 
erradicación del brote. Cada Estado miembro hará figurar en el plan de manera 
precisa sus cálculos en cuanto a las vacunas necesarias en caso de vacunación 
de emergencia. 
- 16 
2. Los criterios que deberán aplicarse para la elaboración de los planes de 
alerta serán los que se establecen en la Decisión 91/42/CEE de la 
Comisión*1), de 8 de enero de 1991, por la que se establecen los criterios 
que se deberán aplicar cuando se elaboren los planes de alerta para 
controlar la fiebre aftosa, en aplicación de lo dispuesto en el articulo 5 
de la Directiva 90/423/CEE del Consejo, que se aplicarán mutatis mutandis . 
Con arreglo al articulo 21, la Comisión podrá modificar o completar dichos 
criterios habida cuenta de las características especificas de la influenza 
aviar. 
3. Los planes elaborados con arreglo a los criterios a los que se refiere el 
apartado 2 serán sometidos a la Comisión, a más tardar doce meses después de 
la entrada en vigor del presente Reglamento. 
4. La Comisión examinará los planes para determinar si permiten alcanzar el 
objetivo perseguido y sugerirá a los Estados miembros cualquier modificación 
que sea necesario introducir, en particular para que resulten compatibles 
con los de los demás Estados miembros. 
La Comisión aprobará los planes, modificados si fuera necesario, con arreglo 
ai procedimiento establecido en el articulo 21. 
Posteriormente, con arreglo al mismo procedimiento, podrán modificarse o 
ampliarse según lo aconseje la evolución de la situación. 
Articulo 18 
En la medida en que sea necesario para garantizar la aplicación uniforme del 
presente Reglamento, los veterinarios especializados de la Comisión podrán 
realizar inspecciones sobre el terreno en colaboración con las autoridades del 
Estado miembro de que se trate. La Comisión comunicará a los Estados miembros los 
resultados de la investigación. 
(1) DO nfi L 23 de 29.1.1991, p. 29, 
- 17 -
Los Estados miembros en cuyo territorio se esté realizando una inspección 
facilitarán la necesaria asistencia a los expertos para el desempeño de sus 
funciones. 
Las disposiciones generales de aplicación del presente articulo se determinarán 
con arreglo al procedimiento establecido en el articulo 21. 
Articulo 19 
En la Decisión 90/424/CEE del Consejo, relativa a determinados gastos en el sector 
veterinario, se fijan las normas que regulan la participación financiera de la 
Comunidad en las medidas resultantes de la aplicación del presente Reglamento. 
Articulo 20 
Los Anexos del presente Reglamento podrán ser modificados por la Comisión, con 
arreglo al procedimiento establecido en el articulo 21, en particular para 
adaptarlos a la evolución de los procedimientos de diagnóstico. 
Articulo 21 
1. La Comisión estará asistida por el Comité Veterinario Permanente, creado 
mediante la Decisión 68/361/CEE*1)CEE, en adelante denominado "el Comité". 
2. Cuando se recurra al procedimiento definido en el presente articulo, se 
aplicarán las siguientes disposiciones. 
El representante de la Comisión someterá al Comité un proyecto de las medidas 
que deban adoptarse. El Comité emitirá su dictamen sobre dicho proyecto en un 
plazo que el presidente podrá fijar en función de la urgencia del asunto, 
procediendo, en su caso, a una votación. 
El dictamen se incluirá en el acta; además, cada Estado miembro tendrá 
derecho a solicitar que su posición conste en acta. 
(1) DO nfi L 255 de 18.10.1968, p. 23. 
- 18 -
La Comisión tendrá en cuenta, en la mayor medida posible, el dictamen emitido 
por el Comité y le informará del modo en que lo haya tenido en cuenta. 
Articulo 22 
El presente Reglamento entrará en vigor el 1 de julio de 1991. 
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y directamente 
aplicable en cada Estado miembro. 
Hecho en Bruselas, Por el Consejo 
-1?-
ANEXQ t 
PROCEDÍ MiENTOS PARA LA CONFIRMACIÓN 
Y DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE LA INFLUENZA AVIAR 
Los siguientes procedimientos de aislamiento y caracterización de los virus de la 
influenza aviar han de considerarse como directrices y constituyen los requisitos 
mínimos que deben aplicarse en el diagnóstico de dicha enfermedad. 
A los efectos de los procedimientos de diagnóstico para la confirmación y el 
diagnóstico diferencial de la influenza aviar, se empleará la siguiente 
definición: 
Por "influenza aviar" se entiende una infección de las aves de corral producida 
por cualquier virus de la influenza aviar A cuyo indice de patogenicidad 
intravenosa sea superior a 1,2 en pollitos de seis semanas de edad, o cualquier 
infección provocada por virus del subtipo H5 o H7 de la influenza A cuya 
secuenciación de nucleótidos haya demostrado la presencia de múltiples aminoácidos 
básicos en el punto de corte de la hemagiuti nina. 
CAPÍTULO 1: Toma de muestras v tratamiento de las mismas 
1. Muestras 
Hisopos de cloaca (o materias fecales) e hisopos traqueales de aves enfermas; 
materias fecales o contenido intestinal, tejido cerebral, tráquea, pulmones, 
hígado, bazo y otros órganos manifiestamente afectados procedentes de aves 
recién fallee i das. 
2. Tratamiento de las muestras 
Aunque los órganos y los tejidos arriba mencionados pueden mezclarse, las 
materias fecales deberán tratarse por separado. Se sumergirán completamente 
los hisopos en una cantidad suficiente de medio con antibióticos. A su vez, 
las muestras de materias fecales y de órganos deberán homogène i zarse (en un 
mezclador cerrado o utilizando un mortero y arena esterilizada) en un medio 
con antibióticos para convertirlas en suspensiones en ese medio al 10-20% p/v. 
Posteriormente, esas suspensiones se dejarán a temperatura ambiente durante 
dos horas aproximadamente (o durante más tiempo a una temperatura de 4*C) y se 
clarificarán por centrifugación (p. ej., de 800 a 1.000 g durante 10 minutos). 
- 20-
3. Medio con antibióticos 
Diferentes laboratorios han utilizado distintos medios con antibióticos, 
obteniendo buenos resultados. En cada pais, los laboratorios nacionales podrán 
asesorar al respecto. Para las muestras de materias fecales es necesaria una 
fuerte concentración de antibióticos; una mezcla típica es la siguiente: 
10.000 unidades/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina, 0,25 mg/ml de 
gentamicina y 5.000 unidades/ml de micostatina en una solución salina 
amortiguadora de fosfato. Estos niveles pueden reducirse hasta cinco veces 
cuando se trabaje con tejidos e hisopos traqueales. Para evitar el crecimiento 
de Chlamydia, pueden añadirse 50 mg/ml de oxitetracicli na. Al elaborar el 
medio, es imprescindible comprobar el pH después de añadir los antibióticos y 
corregirlo hasta que fluctúe entre 7,0 y 7,4. 
CAPITULO 2: Aislamiento del virus 
Aislamiento del virus en huevos embrionados de aves de corral 
Deberán inocularse dosis de 0,1 a 0,2 mi del liquido sobrenadante clarificado 
dentro de la cavidad aiantoidea de al menos 4 huevos embrionados que hayan sido 
incubados de 8 a 10 di as. Es preferible que los huevos procedan de una manada 
exenta de patógenos específicos, aunque, si ello no fuera posible, podrán 
utilizarse huevos de una manada exenta de anticuerpos del virus de la influenza 
aviar. Los huevos inoculados deberán mantenerse a 37°C y se examinarán al trasluz 
diariamente. Los huevos que contengan embriones muertos o moribundos serán 
refrigerados a 4*C a medida que se vayan comprobando. Los demás lo serán a la 
misma temperatura 6 días después de la inoculación. Los fluidos alantoideos o 
amni óticos se someterán además a la prueba de hemaglutinación. Si ésta resultase 
negativa, deberá repetirse el procedimiento anterior utilizando fluido alantoideo 
o amni ótico como inoculo. 
Cuando la hemaglutinación sea positiva, deberá descartarse la posible presencia de 
bacterias mediante la realización de un cultivo. Si se confirma la presencia de 
bacterias, podrán filtrarse los fluidos con un filtro de membrana de 450 nm, 
añadirse más antibióticos e inocularse en huevos embrionados como ya se explicó 
anteriormente. 
^¿4-
CAPÍTULO 3; Diagnóstico diferencial 
1. Diferenciación preliminar 
Teniendo en cuenta que es fundamental que se adopten medidas para limitar la 
propagación del virus lo antes posible, cada laboratorio regional deberá estar 
en condiciones de detectar cualquier virus hemaglutinante aislado, tales como 
los del subtipo H5 o H7 de la influenza, además de los de la enfermedad de 
Newcastle. Los fluidos hemaglutinantes deberán someterse a las pruebas de 
inhibición de la hemagluti nación descritas en los capítulos 5 y 6. Una 
inhibición positiva, es decir de 24 o más, con antisuero poli clona I 
especifico para los subtipos H5 o H7 de la influenza A (con un titulo de al 
menos 29), se considerará una identificación preliminar suficiente para 
imponer medidas provisionales de control. 
2. Confirmación de la identificación 
Dado que hay 13 subtipos de hemagluti ni na y 9 subtipos de neuraminidasa del 
virus de la influenza y que en cada uno de ellos se presentan variaciones, no 
es viable ni rentable que cada laboratorio nacional tenga antisueros que 
posibiliten una caracterización antígénica completa del virus de la influenza. 
No obstante, cada laboratorio nacional deberá: 
i) confirmar que el microorganismo es un virus de la influenza A utilizando 
una prueba de inmunodifusión doble para detectar el antigeno de grupo, 
efectuada de acuerdo con el Capitulo 9 del presente Anexo (si asi lo 
prefieren, los laboratorios nacionales podrán emplear técnicas de 
ínmunofluorescencia o ELISA para la detección de los antigenos de grupo); 
i i) determinar sí el virus aislado es o no del subtipo H5 o H7; 
- Il-
ill) realizar pruebas del indice de patogenicidad intravenosa en pollitos de 
seis semanas de edad, efectuadas de acuerdo con el Capitulo 7 del presente 
Anexo. Un indice de patogenicidad intravenosa superior a 1,2 es la señal 
de que hay virus y de que es necesario aplicar a fondo las medidas de 
control (seria útil que los laboratorios nacionales realizasen también 
pruebas de determinación de la capacidad del virus para producir placas en 
cultivos de células, efectuadas de acuerdo con el Capitulo 8). 
Los laboratorios nacionales deberán enviar inmediatamente todo el material de 
la influenza aviar y de ios subtipos H5 o H7 al laboratorio comunitario de 
referencia para su caracterización total. 
3. Tipificación v caracterización adicional del material 
Los laboratorios nacionales enviarán al laboratorio comunitario de referencia 
todos los virus hemaglutinantes y éste, en consonancia con las funciones y 
cometidos que le han sido asignados, someterá esos virus a estudios 
antigénicos y genéticos adicionales para llegar a un mejor conocimiento de la 
epizootio log I a de la enfermedad o enfermedades en la Comunidad Europea. 
Además de esos cometidos, el laboratorio comunitario de referencia llevará a 
cabo una tipificación antigénica completa de todos los virus de la influenza 
que haya recibido. En cuanto a los virus H5 o H7 cuyos indices de 
patogenicidad intravenosa no sean superiores a 1,2, deberá realizarse también 
la secuenciación de nucleótidos del gen de hemagluti ni na para determinar si 
hay abundancia o no de aminoácidos básicos en el punto de corte de la protelna 
de hemagluti ni na. 
~n-
CAPITULQ 4: Pruebas serolóoicas para la detección de 
anticuerpos del virus de la Influenza aviar 
1. Tratándose de programas de erradicación en los que el subtipo H del virus ya 
se conoce, el control serológico para poner de manifiesto la infección puede 
llevarse a cabo mediante pruebas de inhibición de la hemagluti nación 
realizadas de acuerdo con los Capítulos 5 y 6, o utilizando el virus homólogo 
como anti geno. 
Si el subtipo de hemagluti ni na no se conoce, la prueba de que la infección es 
producida por virus de la influenza A podrá obtenerse detectando anticuerpos 
dirigidos a los antigenos especifieos de grupo. Con ese fin podrá emplearse 
una prueba de inmunodifusión doble (tal como se describe en el Capitulo 9 del 
presente Anexo) o una prueba ELISA (ésta presenta el inconveniente de la 
especificidad del hospedador de la prueba ya que depende de la detección de 
las inmunogIobuI i ñas del hospedador). Las aves acuáticas raras veces dan 
resultados positivos al practicarse pruebas de inmunodifusión doble y, a menos 
que se conozca el subtipo, es probable que tales aves sólo puedan examinarse 
para comprobar la presencia de anticuerpos contra los subtipos H5 y H7. 
2. a) Muestras 
Deberán tomarse muestras de sangre de todas las aves cuando la manada esté 
compuesta de menos de 20 animales y muestras de 20 aves cuando la manada 
sea mayor. (De este modo, la probabilidad de detectar al menos un suero 
positivo será >99% si el 25% o más de la manada es positivo, 
independientemente del tamaño de ésta). Deberá dejarse que la sangre se 
coagule y se extraerá el suero para la prueba. 
b) Examen de los anticuerpos 
Se probará la capacidad de las muestras individuales de suero para inhibir 
el antlgeno hemaglutinante del virus de la influenza aviar en pruebas 
estándar de inhibición de la hemaglutinación efectuadas de acuerdo con el 
capitulo 6. 
-2k-
Dado que las opiniones difieren en cuanto a la utilización de 4 u 8 
unidades de hemagluti ni na en la prueba de inhibición de la 
hemagluti nación, y como al parecer ambas dosis son válidas, la elección 
deberla dejarse al arbitrio de los laboratorios nacionales. Téngase en 
cuenta, sin embargo, que del antigeno utilizado dependerá el nivel en el 
que un suero sea considerado positivo: con 4 unidades de hemagluti ni na un 
suero se considerará positivo cuando presente un titulo superior o igual a 
24, mientras que con 8 unidades el titulo deberá ser igual o superior 
a 23. 
CAPÍTULO 5: Prueba de hemaolutInación (HA) 
Reactivos 
1) Solución salina isotónica amortiguadora de fosfato (0,05M) de pH 7,0 a 7,4. 
2) Hématies extraídos de un mínimo de 3 pollitos exentos de patógenos específicos 
(a falta de éstos, podrá utilizarse sangre de aves que hayan estado bajo 
control regular y que estén exentas de anticuerpos del virus de la influenza 
aviar), reunidos y mezclados a partes iguales con solución de AI sever. Antes 
de utilizarlos, los hématies deberán lavarse tres veces en la solución salina 
isotónica amortiguadora de fosfato (SSIAF). Para la prueba, se recomienda una 
suspensión en SSIAF al 1% (hematíes empaquetados v/v). 
3) El laboratorio comunitario de referencia suministrará virus H5 o H7 de bajo 
poder patógeno o recomendará su utilización como antigeno estándar. 
Procedimiento 
1) Distribuir 0,025 mi de SSIAF en cada uno de los pocilios de una placa de 
microti tu I ación (utilizar pocilios con fondo en V). 
2) Introducir 0,025 mi de suspensión de virus (es decir, fluido alantoideo) en el 
primer pocilio. 
3) Utilícese una micropipeta para hacer diluciones del virus a la mitad (de 1:2 a 
1:4096) en toda la placa. 
4) Distribuir otros 0,025 mi de SSIAF en cada pocilio. 
5) Añadir 0,025 mi de una suspensión al 1% de hématies a cada pocilio. 
?>--
6) Homogène i zar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4°C. 
7) Examinar las placas después de 30 o 40 minutos cuando se hayan sedimentado los 
hematíes de control. El examen se efectuará inclinando la placa y observando 
la presencia o ausencia de un movimiento de los hematíes en forma de lágrima. 
Los pocilios en los que no se haya producido la hemagluti nación deberán 
presentar un movimiento similar al de los pocilios de control que no contengan 
virus. 
8) El titulo de hemagluti nación será la mayor dilución que produzca la 
aglutinación de los hématies. Puede considerarse que tal dilución contiene una 
unidad de hemaglutinación. Otro método más preciso para determinar el titulo 
de hemaglutinación consiste en realizar pruebas de hemaglutinación con virus 
en una gama de diluciones iniciales muy cercanas entre si, p. ej., 1:3, 1:4, 
1:5, 1:6, etc. Este método se recomienda para preparar con gran precisión 
antigenos para las pruebas de inhibición de la hemaglutinación (Capitulo 6). 
CAPÍTULO 6: Prueba de inhibición de la hemaglutinación (IH) 
Reactivos 
1) Solución amortiguadora de fosfato (SSIAF). 
2) Fluido alantoideo que contenga el virus, diluido con SSIAF hasta que contenga 
4 u 8 unidades de hemagluti nación por cada 0,025 mi. 
3) Suspensión de hématies de pollito al 1%. 
4) Suero de pollito de control negativo. 
5) Suero de control positivo. 
Procedimiento 
1) Distribuir 0,025 mi de SSIAF en cada uno de los pocilios de una placa de 
microtitulación de plástico (utilizar pocilios con fondo en V). 
2) Introducir 0,025 mi de suero en el primer pocilio de la placa. 
-2é~ 
3) Utilizar una micropipeta para hacer diluciones a la mitad del suero en toda la 
placa. 
4) Añadir 0,025 ml de fluido alantoideo diluido que contenga 4 u 8 unidades de 
hemaglutinación. 
5) Homogène i zar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4*C durante al 
menos 60 minutos o dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos como 
m i n i mo. 
6) Añadir 0,025 mi de suspensión de hematíes al 1% a todos los pocilios. 
7) Homogène i zar golpeando ligeramente las placas y refrigerarlas a 4°C. 
8) Examinar las placas después de 30 a 40 minutos cuando se hayan sedimentado los 
hematíes de control. El examen se efectuará inclinando las placas y observando 
la presencia o ausencia de un movimiento en forma de lágrima similar al de los 
pocilios de control que contengan hematíes (0,025 mi) y SSIAF (0,05 mi) 
solamente. 
9) El titulo de inhibición de la hemaglutinación será la mayor dilución del 
antisuero que produzca una inhibición completa de 4 u 8 unidades de virus (en 
todas las pruebas deberá incluirse una titulación de hemaglutinación para 
confirmar la presencia de las unidades de hemaglutinación necesarias). 
10) La validez de los resultados dependerá de la obtención de un título de menos 
de 23 para 4 unidades de hemaglutinación o de 22 para 8 unidades de 
hemaglutinación con el suero de control negativo y de un titulo que esté entre 
el doble y la mitad (un orden de dilución) del titulo conocido del suero de 
control positivo. 
CAPITULO 7: Indice de patogenicidad intravenosa (IPIV) 
1. Diluir a 10~1 fluido alantoideo infeccioso del pase más bajo posible, 
preferentemente del aislamiento inicial y sin selección alguna, en una 
solución salina isotónica esterilizada. 
2. Inyectar por via intravenosa en cada uno de los diez pollitos de seis semanas 
de edad (deberán utilizarse aves libres de patógenos específicos) 0,1 mi de 
virus di luido. 
3. Examinar las aves cada 24 horas durante diez días. 
~n~ 
4. Puntuar todas las aves en cada examen: 0 - normal, 1 - enferma, 2 - gravemente 
enferma y 3- muerta. 
5. Anotar los resultados y calcular el indice del siguiente modo: 
Síntomas clínicos Días después de la inoculación 
123456789 10 Puntuación total 
normal 10 20000000 0 12 x 0 - 0 
enferma 042000000 0 6x1- 6 
gravemente enferma* 022200000 0 6x2-12 
muerta 0 2 6 8 10 10 10 10 10 10 76 x 3 - 228 
TOTAL - 246 
El indice será la puntuación media por ave y por observación - 246 
100 2,46 
* Se trata de un diagnóstico subjetivo que en general se aplicará a las aves 
que presenten más de uno de los síntomas siguientes: problemas 
respiratorios, depresión, diarrea, cianosis en la piel no recubierta o en 
las barbillas, edema en la cara o en la cabeza o signos nerviosos. 
CAPITULO 8: Evaluación de la capacidad de formación de placas 
1. Normalmente, lo más conveniente es utilizar una serie de diluciones del virus 
a fin de obtener un número adecuado de placas en el cultivo. Bastará con 
diluciones decimales hasta llegar a una concentración de 10~7 en SSIAF. 
2. Preparar capas monocelulares confluentes de células de embrión de pollito o 
una linea celular apropiada (por ejemplo, la linea de riñon de bovino de 
Madin-Darby) en placas de Petri de 5 cm de diámetro. 
3. Introducir 0,2 mi de cada dilución de virus en dos placas de Petri y esperar 
30 minutos para que el virus se absorba. 
4. Tras lavar tres veces con SSIAF las células infectadas, se cubrirán con un 
medio apropiado que contenga agar al 1% p/v (también puede añadirse 0,01 mg/ml 
de tripsina). Es importante no añadir suero al medio de recubrimiento. 
-Zf~ 
5. Tras 72 horas de incubación a 37°C, las placas habrán alcanzado un tamaño 
adecuado. Para observarlas, conviene retirar la capa de agar y teñir la capa 
monocelular con violeta cristal (0,5% p/v) en etanol al 25% (v/v). 
6. Todos los virus incubados con tripsina en el medio producirán placas claras. 
Por el contrario, a falta de tripsina, sólo producirán placas los virus que 
resulten virulentos para los pollitos. 
CAPITULO 9: Inmunodifusión doble 
El método preferido para determinar la presencia del virus de la influenza A 
consiste en demostrar la existencia de antígenos de la nucleocápsida o de la 
matriz, que se hallan presentes en todos los virus de la influenza A. Tal 
demostración se realiza generalmente mediante pruebas de inmunodifusión doble, 
para las que se necesitan preparaciones de virus concentrados o extractos de 
membranas corioalantoideas infectadas. 
Una preparación adecuada de virus concentrados puede conseguirse sencillamente 
centrifugando a alta velocidad fluido alantoideo infeccioso y disgregando los 
virus con detergente de lauri I sarcos i nato sódico para liberar los antigenos 
internos de la nucleocápsida y de la matriz. También puede recurrirse a la 
precipitación acida añadiendo CIH 1N al fluido alantoideo infeccioso hasta obtener 
un pH final comprendido entre 3,5 y 4,0; se enfria luego durante al menos una hora 
a 0°C y se centrifuga a baja velocidad (1.000 g) durante diez minutos. Se puede 
retirar el sobrenadante y resuspender el precipitado que contiene los virus en un 
volumen mínimo de solución amortiguadora de g Iicinasarcosilo (lauri I sarcos i nato 
sódico al 1% ajustado a pH 9,0 con glicina 0,5 M). Esta preparación contiene 
antigenos de la nucleocápsida y de la matriz. 
En 1970, Beard describió la preparación de un producto enriquecido en antigenos de 
nucleocápsida a partir de membranas corioalantoideas procedentes de huevos 
infectados. Este método comprende los siguientes pasos: retirar las membranas 
corioalantoideas de huevos infectados que den positivo a la prueba de 
hemagluti ni na, triturar u homogène i zar las membranas, congelar y descongelar tres 
veces y centrifugar a continuación a 1.000 g durante diez minutos. Se retira el 
precipitado y se trata el sobrenadante con formol al 0,1% para utilizarlo como 
antigeno. 
??-
Cualquiera de estos dos antigenos puede utilizarse en las pruebas de 
inmunodifusión doble empleando ge I es de agarosa o agar al 1% que contengan un 8,0% 
de cloruro sódico en una solución amortiguadora de fosfato 0,1 M de pH 7,2. La 
presencia del virus de la influenza A queda confirmada cuando las lineas de 
precipitación formadas por el antigeno problema y el antigeno positivo conocido 
frente al antisuero positivo conocido se unen para dar una linea de identidad. 
LISTA DE LABORATORIOS NACIONALES PARA LA INFLUENZA AVIAR 
- Bélgica 
- Dinamarca 
República Federal 
de Alemania 
- Grecia Institut National de Recherches 
Vétérinaires, Groeselenberg 99, 
B 1180 Bruxelles 
National Veterinary Laboratory, 
Poultry Disease Division, Hangévej 2 
DK 8200 Aarhus N. 
Institut für Kleintierzucht der 
Bundesforschungsanstalt für Land-
wi rtschaft, Braunschwe ig-VôIkenrode, 
Postfach 280, D 3100 Celle 
:- España 
- Francia 
- irlanda 
- Italia 
- Luxemburgo 
- Países Bajos 
;- Portugal 
- Reino Unido Centre National d'Etudes Vétérinaires 
et Alimentation - Laboratoire Central 
de Recherches Agricoles et Porcines, 
B.P. 53, 22440 Ploufragan 
Veterinary Research Laboratory, 
Abbotstown, Castleknock, Dublin 15 
Istituto Patologie Aviaire, Facoltà 
di Medicina Veterinaria, Università 
di Napoli, Via Aniezzo Falcone 394, 
I 80127 Napoli F Del pi no 1 
Institut National de Recherches 
Vétérinaires, Groeselenberg 99, 
B 1180 Bruxelles 
Centraal Diergeneeskundig Instituut, 
Vestiginig Virologie, Hourtibweg 39, 
NL 8221 RA Lelystad 
Laboratorio Nacional de 
Invest igaçao Veterinaria (LNIV), 
Estrada de Benfica 701; 1500 Lisboa 
Central Veterinary Laboratory, New 
Haw, Weybridge, GB-Surrey KT15 3NB 
3/-
ANEEP Ml 
NOMBRE DEL LABORATORIO COMUNITARIO PE REFERENCIA PARA LA INFLUENZA AYIAR 
Central Veterinary Laboratory 
New Haw 
Weybr i dge 
Surrey KT15 3NB 
REINO UNIDO 
ISSN 0257-9545 
COM(91) 304 final 
DOCUMENTOS 
ES 03 
N° de catálogo : CB-CO-91-344-ES-C 
ISBN 92-77-74813-3 
Oficina de Publicaciones Oficiales de las Comunidades Europeas 
L-2985 Luxemburgo