N° C 300/10 Diario Oficial de las Comunidades Europeas 29. 11. 90 
Propuesta de Directiva del Consejo por la que se modifica la Directiva 64/432/CEE en lo que 
se refiere al diagnóstico de la brucelosis bovina y de la leucosis bovina enzoótica 
COM(90) 492 final 
(Presentada por la Comisión el 19 de noviembre de 1990) 
(90/C 300/08) 
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS, 
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Econó­
mica Europea y, en particular, su artículo 43, 
Vista la propuesta de la Comisión, 
Visto el dictamen del Parlamento Europeo, 
Visto el dictamen del Comité Económico y Social, 
Considerando que la Directiva 64/432/CEE del Con­
sejo, de 26 de junio de 1964, relativa a problemas de 
policía sanitaria en materia de intercambios intracomuni-
tarios de animales de las especies bovina y porcina ('), 
cuya última modificación la constituye la Directiva 
90/422/CEE (2), establece los métodos para mantener el 
título de explotación oficialmente indemne de brucelosis 
y de explotación indemne de leucosis bovina enzoótica; 
Considerando que, debido a los nuevos conocimientos 
científicos y a los avances técnicos en el diagnóstico y 
(') DO n° 121 de 29. 7. 1964, p. 1977/64. 
(2) DO n° L 224 de 18. 8. 1990, p. 9. 
ANEXO 
1. Se sustituye el inciso ii) de la letra c) del apartado 1 de la letra A de la Parte II del Anexo A por el texto 
siguiente: 
«ii) se controla anualmente para determinar la ausencia de brucelosis mediante tres pruebas del anillo o 
tres pruebas ELISA sobre leche efectuadas a intervalos de tres meses por lo menos o dos pruebas del 
anillo o tres pruebas ELISA sobre leche a intervalos de tres meses por lo menos y una prueba 
serológica (prueba de seroaglutinación, prueba del antígeno brucelar tamponado, prueba de plas-
moaglutinación, prueba del anillo de leche efectuada sobre plasma sanguíneo, prueba de microaglu-
tinación o prueba ELISA realizada sobre sangre) practicada por lo menos seis semanas después de 
la segunda prueba del anillo o de la prueba ELISA sobre leche. Cuando no se practiquen las prue­
bas del anillo o las pruebas ELISA sobre leche, se efectuarán cada año dos pruebas serológicas 
(prueba de seroaglutinación, prueba del antígeno brucelar tamponado, prueba de plasmoaglutina-
ción, prueba del anillo de leche efectuada sobre plasma sanguíneo, prueba de microaglutinación o 
prueba ELISA realizada sobre sangre) a intervalos de tres meses como mínimo y de seis meses como 
máximo. 
Cuando, en un Estado miembro o en una región de un Estado miembro donde la totalidad del 
ganado bovino esté sometida a las operaciones oficiales de lucha contra la brucelosis, el porcentaje 
de ganado bovino infectado no sea superior a 1, bastará con proceder anualmente a dos pruebas del 
anillo o dos pruebas ELISA sobre leche a intervalos de tres meses por lo menos o a la prueba 
serológica (prueba de seroaglutinación, prueba del antígeno brucelar tamponado, prueba de plas-
moaglutinación, prueba del anillo de leche efectuada en plasma sanguíneo, prueba de microagluti­
nación o prueba ELISA sobre sangre). control de la brucelosis bovina y la leucosis bovina en­
zoótica, resulta necesario modificar las actuales medidas 
comunitarias existentes en la materia, 
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA: 
Artículo 1 
Los Anexos de la Directiva 64/432/CEE quedarán mo­
dificados según se prevé en el Anexo de la presente Di­
rectiva. 
Artículo 2 
Los Estados miembros adoptarán las disposiciones lega­
les, reglamentarias y administrativas necesarias para 
cumplir la presente Directiva, a más tardar, el 1 de enero 
de 1991. Informarán inmediatamente de ello a la Comi­
sión. 
Artículo 3 
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Esta­
dos miembros. 
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Cuando la prueba del anillo se realice sobre el contenido de las cisternas, el número de pruebas 
establecido en los párrafos precedentes deberá duplicarse y los intervalos se reducirán a la mitad». 
2. Se añade la siguiente letra al Anexo C: -
«H. La prueba ELISA para la detección de la brucelosis, tal como se describe en el Anexo G». 
3. En el Anexo G: 
a) Se añaden al título las siguientes palabras: 
«y la brucelosis» 
b) Se sustituye la letra C por el siguiente texto: 
«C. Prueba de inmunoabsorción enzimática (ELISA) para la detección de la leucosis bovina enzoó-
tica y la brucelosis bovina. 
1. Los materiales y reactivos que han de utilizarse en el método ELISA son los siguientes: 
a) microplacas de fase sólida, platillos o cualquier otra fase sólida; 
b) el antígeno se fijará a la fase sólida con o sin ayuda de anticuerpos captores policlonales o 
monoclonales. Si el antígeno se asocia directamente a la fase sólida, y tratándose de la 
leucosis bovina enzoótica, todas las muestras de ensayo que den reacciones positivas debe­
rán someterse a nuevas pruebas con el antígeno de control. El antígeno de control deberá 
ser idéntico al antígeno examinado, excepto en el caso de los antígenos VLB (virus de la 
leucosis bovina). Si los anticuerpos captores están asociados a la fase sólida, los anticuer­
pos sólo deben reaccionar ante antígenos VLB o de la brucelosis; 
c) el líquido biológico que deba examinarse; 
d) un control positivo y negativo; 
e) conjugado; 
f) un sustrato adaptado a los enzimas utilizados; 
g) en su caso, una solución de interrupción; 
h) soluciones para la dilución de las muestras de ensayo, las preparaciones de reactivos y el 
lavado; 
i) un sistema de lectura apropiado al sustrato utilizado. 
2. Normalización y sensibilidad de la prueba: 
a) La sensibilidad del ensayo ELISA par la detección de la leucosis bovina enzoótica deberá 
ser de un nivel tal que el suero E4 dé positivo tras diluirse 10 veces más (muestras de 
suero) o 250 veces más (muestras de leche) que la dilución obtenida a partir de muestras 
puestas en común. 
En ensayos en los que las muestras (suero y leche) sean sometidas a pruebas por separado, 
el suero E4 diluido en una proporción de 1 a 10 (suero negativo) o de 1 a 250 (leche 
negativa) deberá dar positivo cuando se le haga la prueba en la misma dilución de ensayo 
que la utilizada para las pruebas individuales. 
El laboratorio veterinario nacional de Copenhague suministrará el suero E4. 
b) Detección de la brucelosis: 
i) Las muestras de leche a granel se considerarán negativas cuando den una reacción 
inferior al 50 °/o de la que ofrezca una dilución de 1 en 10 000 del segundo suero 
patrón internacional de brucelosis, preparada en leche negativa. 
ii) Las muestras de suero por separado se considerarán negativas cuando den una reacción 
inferior al 10 % de la que ofrezca una dilución de 1 en 200 del segundo suero patrón 
internacional de brucelosis, preparada en solución salina. 
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Los patrones de la prueba ELISA para la detección de la brucelosis serán los que se 
indican en los apartados 1 y 2 de la letra A del Anexo C (deberán utilizarse en las 
diluciones que se indican en la etiqueta). 
3. Condiciones de utilización de la prueba ELISA para la detección de la leucosis bovina enzoó-
tica. 
El método ELISA podrá aplicarse a una muestra de leche o suero tomada de la leche de 
recogida procedente de una explotación donde al menos el 30 % de las vacas lecheras estén 
en período de lactación. 
Cuando se utilice una de las posibilidades antes citadas, deberán adoptarse medidas que ga­
ranticen la correspondencia entre las muestras tomadas y los animales de los que procedan la 
leche o el suero que se examinan. 
Si una de las muestras diera una reacción positiva, el ganado debe quedar bajo control oficial 
hasta que haya podido registrarse un resultado negativo en al menos dos pruebas individuales 
efectuadas, con un intervalo de cuatro meses como mínimo, en todos los bovinos de más de 
seis meses, de conformidad con las disposiciones anteriormente citadas y en un laboratorio 
directamente supervisado por un laboratorio mencionado en la letra A».