COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS 
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Bruselas, 24.07.1996 
COM(96) 365 final 
INFORME DE LA COMISIÓN 
DESARROLLO, VALIDACIÓN Y ACEPTACIÓN LEGAL 
DE LOS MÉTQPOS ALTERNATIVOS A LA EXPERIMENTACIÓN ANIMAL 
EN EL SECTOR DE LOS COSMÉTICOS 
1995 

DESARROLLO, VALIDACIÓN Y ACEPTACIÓN LEGAL 
DE LOS MÉTODOS ALTERNATIVOS A LA EXPERIMENTACIÓN ANIMAL 
EN EL SECTOR DE LOS COSMÉTICOS 
1995 
RESUMEN 
I - INTRODUCCIÓN 
Obligaciones de la Comisión 
La letra (i) del artículo 4 de la Directiva 76/768/CEE, modificado por la Directiva 93/35/CEE 
especifica que "los Estados miembros prohiben la comercialización de los productos 
cosméticos que contienen ... ingredientes o combinaciones de ingredientes experimentados en 
animales a partir del 1 de enero de 1998". 
La ambigüedad de la formulación "combinaciones de ingredientes" quedó eliminada 
posteriormente por la Comisión, que considera que la prohibición se refiere también a los 
productos cosméticos acabados. 
La ejecución de esta prohibición está vinculada a la puesta a punto de "métodos que puedan 
substituir de manera satisfactoria a la experimentación animal... cientíñcamente validados 
como métodos que onecen al consumidor un grado de protección equivalente ". 
A fin de informar regularmente sobre la evolución de la situación se especifica que "Xa 
Comisión presentará anualmente al Parlamento Europeo y al Consejo un iníbrme sobre los 
progresos realizados en materia de desarrollo, validación y aceptación legal de métodos que 
puedan substituir a la experimentación con animales. El iníbrme contendrá datos precisos 
sobre el número y el tipo de experimentaciones que se hayan efectuado con animales relativas 
a los productos cosméticos ". 
Informe 1994 
El primer informe se presentó en 1994. En él se describían resultados interesantes pero 
limitados "que no permitían sustituir a los modelos animales, pero que podían contribuir a la 
reducción del número de animales utilizados". Sin embargo, las perspectivas eran 
razonablemente optimistas para la validación de metodologías alternativas para las pruebas 
de irritación ocular, absorción percutánea, de fototoxicidad y fotoirritación y las pruebas 
básicas de mutagenesis. Asimismo, se destacaba que "con los conocimientos actuales es poco 
probable que llegue a sustituirse completamente la experimentación animal en los estudios de 
toxicidad relativos a la evaluación del riesgo sistémico", es decir, vinculado a una acción por 
vía sanguínea sobre el conjunto del organismo después de la absorción percutánea. 
II - INFORME DE 1995 
Los objetivos del informe y el concepto de riesgo potencial para la salud humana siguen 
siendo los mismos que en el informe de 1994. 
Los afectados por la ejecución de esta disposición continúan siendo: 
La Comisión Europea: DG XI, DG-JRC, DG XXIV, DG XII 
La industria europea representada por COLIPA, Comité de enlace europeo de las 
asociaciones de la industria cosmética 
La administración americana y la federación americana de cosmetología, CFTA 
La administración japonesa y la federación japonesa de cosmetología, JCIA 
LA OCDE 
1 - Clarificación de las etapas de validación 
La validación es el método por el que se establecen la fiabilidad y la importancia de un 
procedimiento con un objetivo determinado. Este proceso ha resultado más complejo de lo 
previsto y tomará más tiempo de lo estimado. Ha sido necesario definir mejor las etapas de 
evaluación de las nuevas pruebas (desarrollo de una prueba y elaboración de un protocolo; 
prevalidación; validación propiamente dicha; evaluación objetiva e independiente del estudio; 
y progresión hacia la aceptación legal). 
2 - Iniciativas 
Los distintos interesados tomaron múltiples iniciativas para lograr los objetivos prescritos. 
DGXI 
La DG XI es responsable, por una parte, de la Directiva 86/609/CEE relativa a la 
protección de los animales utilizados con fines experimentales o con otros fines 
científicos y, a este respecto, encargada de la recopilación de las estadísticas relativas 
a los animales utilizados; y, por otra parte, de la Directiva 67/548/CEE relativa a la 
clasificación y etiquetado de las sustancias químicas peligrosas que define en sus 
Anexos los métodos de pruebas reconocidos por la UE. 
DG-JRC : 
ECVAM (European Centre for the Validation of Alternative Methods) ya ha 
organizado 14 seminarios sobre el desarrollo y la validación de métodos 
alternativos. Siete de ellos se referían a la seguridad de los productos 
cosméticos. Sus informes han sido publicados. Otros dos informes sobre los 
procedimientos de prevalidación y validación también están disponibles. 
ECB (European Chemicals Bureau) proporciona el apoyo técnico y científico 
necesario para la DG XI 
DG XXIV y CSC (Comité Científico de Cosmetología^: 
La DG XXIV desempeña un papel motriz en las acciones emprendidas, 
justificado por el hecho de que es responsable de la Directiva "Productos 
cosméticos" y de que se encarga de preparar para la Comisión el proyecto de 
medidas tendentes a reducir el plazo de prohibición de las pruebas con 
II 
animales si resultase necesario. 
El CSC y su subgrupo más específicamente encargado de los métodos alternos 
evaluaron distintos documentos y expedientes presentados por COLIPA. 
Asimismo, adoptaron un documento sobre "La información requerida para la 
evaluación científica de los estudios de validación de las pruebas alternativas 
para su utilización en la evaluación de la seguridad de los productos 
cosméticos". 
DGXH 
La DG XII ha financiado distintos programas de investigación sobre el desarrollo y 
la validación de los métodos alternativos. 
COLIPA/SCAAT ( Steering Committee on Alternatives to Animal Testing) 
Además de la elaboración de expedientes y la participación en numerosos estudios, 
COLIPA organizó un simposio científico internacional sobre las alternativas a la 
experimentación animal en Bruselas los días 29 y 30 de noviembre de 1995. 
EE.UU. 
El Gobierno estadounidense busca activamente una cooperación internacional 
que permita elaborar recomendaciones. 
La FDA (Food and Drug Administration), organismo responsable de la 
seguridad de los productos cosméticos, ha expresado su inquietud por lo que 
se refiere a la prohibición de la experimentación animal al aplicar la Directiva 
93/35/CEE. 
OCDE 
La OCDE publica directrices relativas a las pruebas de toxicidad, aprobadas por los 
países miembros. Actualmente está debatiendo una directriz relativa al control in vitro 
de la absorción percutánea. 
3 - Estadísticas sobre la experimentación animal 
La recopilación de datos relativos específicamente a los ingredientes y los productos 
cosméticos ha resultado complicada debido a que la recogida de datos sobre el número de 
animales utilizados con fines experimentales u otros fines científicos en aplicación de la 
Directiva 86/609/CEE no está concebida sobre una base anual. 
8 Estados miembros declararon que en su territorio no se efectuaban pruebas con 
animales para los productos cosméticos acabados (Italia, Grecia, Bélgica, Irlanda, 
Suecia, Finlandia, Luxemburgo, Alemania). 
6 Estados miembros declararon que en su territorio no se efectuaban pruebas con 
animales para los ingredientes cosméticos (Grecia, Países Bajos, Irlanda, Suecia, 
Finlandia y Luxemburgo). 
3 Estados miembros (Austria, Francia y Reino Unido) comunicaron cifras, precisando 
al mismo tiempo que a veces estas cifras son inciertas y no eran interpretables. 
Por otro lado, es necesario tener en cuenta que algunos Estados miembros no productores de 
ingredientes pueden utilizar ingredientes probados en otros Estados miembros o en terceros 
países, y que determinados ingredientes pueden haber sido probados con otros fines. 
4 - Conclusiones y perspectivas relativas al desarrollo de métodos alternativos para las 
distintas pruebas de toxicidad utilizadas en la evaluación de la seguridad de los ingredientes 
y productos cosméticos 
4-1 Ingredientes 
Fototoxicidad y fotoirritación (reacción cutánea tras la aplicación epicutánea de una 
sustancia química con exposición a rayos UV). Esto se refiere especialmente a los 
filtros UV. 
Los resultados de la fase II del estudio internacional de validación EE.UU./COLIPA 
sobre las pruebas in vitro para la fotoirritación han permitido ya progresos 
importantes. Está prevista una fase III. Será necesario un estudio complementario 
sobre los filtros UV. La validación es previsible en un futuro cercano. 
Absorción percutánea 
Una nueva directriz relativa a las pruebas in vitro para la absorción percutánea podría 
ser aceptada por los Estados miembros y la OCDE en un futuro próximo. 
Irritación cutánea 
Se propone evaluar la irritación cutánea de los ingredientes cosméticos sobre 
voluntarios humanos. Esto podría ser posible cuando los estudios previos relativos al 
riesgo tóxico ofrezcan garantías suficientes. 
Sensibilización cutánea 
La evaluación in vitro de la sensibilización cutánea requiere estudios más profundos 
sobre la base de mecanismo de la sensibilización antes de considerar la realización de 
un estudio de validación. 
Irritación ocular 
Los resultados de los estudios de validación de métodos alternativos a la prueba de 
irritación ocular de Draize fueron decepcionantes (estudio EE.UU./Home Office y 
estudio COLIPA) y ninguna de las pruebas utilizadas ha respondido a los objetivos de 
los estudios. Podría intentarse un enfoque más flexible de la experimentación, 
aceptando combinaciones de métodos científicamente validados y evaluando la 
toxicidad de las sustancias en cuestión en relación con sustancias estándar de control 
convenientes (sustancias de referencia). 
Fotomutagenicidad (conjunto de modificaciones del contenido informativo del material 
genético que ocurre en la exposición a rayos UV) 
Se propusieron algunas recomendaciones sobre los criterios a adoptar con el fin de 
definir protocolos de pruebas in vitro. 
IV 
Corrosividad cutánea 
En los productos cosméticos no se utilizan ingredientes corrosivos. Sin embargo, el 
estudio de validación ECVAM de pruebas in vitro sobre corrosividad cutánea podría 
servir para la fase de cribado (screening) y proporcionar datos esenciales antes de 
considerar la realización de estudios en voluntarios humanos. 
Mutagenicidad 
El uso de pruebas in vitro para evaluar el potencial mutágeno de los ingredientes 
cosméticos es habitual. Sólo se practican pruebas in vivo cuando las pruebas in vitro 
dan resultados dudosos. 
Es probable que en un plazo determinado sea imposible sustituir completamente 
pruebas in vivo de evaluación del riesgo sistémico como las pruebas de toxicidad 
aguda, toxicidad subcrónica, carcinogenesis, toxicidad de la reproducción y el 
desarrollo. Sin embargo, el refinamiento de los métodos empleados ya ha permitido 
reducir considerablemente el número de animales utilizados. 
4-2 Productos cosméticos acabados 
La tolerancia ocular y la tolerancia cutánea de los productos cosméticos acabados 
normalmente pueden evaluarse in vitro si los datos relativos a la toxicidad de los 
ingredientes y a sus propiedades fisicoquímicas se conocen y ofrecen las garantías 
necesarias. 
La compatibilidad cutánea (ausencia de irritación cutánea) de los productos cosméticos 
acabados puede evaluarse en seres humanos si puede encuadrarse entre los estudios 
clínicos estrictamente controlados. 
Es importante destacar que la utilización de voluntarios humanos como método de 
sustitución de las pruebas con animales debe considerarse con la mayor prudencia. 
Estas pruebas, cuya dimensión ética es obvia, sólo deberían autorizarse cuando los 
estudios in vitro e in vivo hayan demostrado la ausencia de riesgos de consecuencias 
graves. 
En resumen : - La validación de métodos alternativos para la evaluación de la 
absorción percutánea y la fotoirritación en el caso de los 
ingredientes y para la evaluación de la tolerancia ocular y la 
tolerancia cutánea para los productos acabados puede preverse 
para un futuro próximo. 
La puesta a punto de métodos alternativos para la evaluación de 
la irritación ocular, la irritación cutánea y la sensibilización 
cutánea relativa a los ingredientes requiere la realización previa 
de otros estudios. 
La puesta a punto de métodos in vitro en sectores que implican 
un riesgo sistémico no es previsible en un futuro próximo, 
aunque puede lograrse una reducción del número de animales. 
GLOSARIO 
CAPT: Committee of adaptation to Technical progress 
CAAT: Centro for Alternatives to Animal Testing (John Hopkins University. EE.UU.) 
CFTA: Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association (EE.UU.) 
COLIPA: European Cosmetic, Toiletry and Perfumery Association 
DEREK: Deductive Estimation of Risk from Existing Knowledge 
ECB: European Chemicals Bureau 
ECVAM: European Centre for the Validation of Alternative Methods 
ERGATT: European Research Group for Alternatives in Toxicity Testing 
ES AC: ECVAM Scientific Advisory Committee 
EU: European Unión 
EU/HO international validation study: 
European Unión/Home Office international validation study 
FDA: Food and Drug Administration (EE.UU.) 
FDCA: Food, Drug and Cosmetics Act (EE.UU.) 
FLT: Fluorescein Leakage Test 
FRAME: Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments 
GLP: Good Laboratory Practice 
ICCV AM: US Inter Inter-Agency Coordinating Committee for the validation of alternative 
Methods 
IF AW: International Fund for animal Welfare 
IRAG: Interagency Regulatory alternatives Group 
IVTIP: In vitro Testing Industrial Platform 
JCIA: Japanese Cosmetics Industry association 
JRC: Joint Research Centre 
MM AS: Modified Maximum Average Score 
MHW: Ministry for Health and Welfare (Japan) 
NIEHS: National Institute of Environmental Health Sciences (EE.UU.) 
NRU: Neutral Red Uptake Assay 
NTP: National Toxicology Program (EE.UU.) 
PM: Prediction Model 
OECD: Organisation for Economic Cooperation and Development 
QSAR: Quantitative Structure-Activity Relationships 
RBC: Red Blood Cell Haemolysis Test 
SCAAT: Steering Committee on Alternatives to Animal Testing 
SCC: Scientific Committee on Cosmetology 
SLAT: Scweizerisches Institut fur Alternativen zu Tierversuchen 
TEA: Tissue Equivalent Assay 
UV: Ultravioleta 
ZEBET: Zentrastelle zur Erfassung und Bewertung von Ersatz und Erganzungsmethoden 
zum Tierversuch im Bundesgesundheitsamt 
VI 
TABLA DE CONTENIDOS 
PÁGINA 
A. Introducción 2 
B. Clarificación de las etapas de la validación 2-5 
- Validación de métodos alternativos utilizados con diferentes objetivos 2-3 
- Etapas en la evaluación de las neuvas pruebas 4-5 
C. Iniciativas en 1995 5-14 
Los agentes 5-7 
Las iniciativas 7 
1. Unión Europea 
DGXI 7 
DGCCI 7-9 
DGXXIV/SCC 9-11 
DG XII 12 
COLIPA/SCAAT 12-13 
2 Los EE.UU 13-14 
3. Japón 14 
4. OCDE 14 
D. Estado actual de los trabajos 15-18 
E. Estadísticas sobre experimentos con animales 19 
F. Conclusiones 20-21 
G. Perspectivas 21-22 
A. INTRODUCCIÓN 
El presente informe es el segundo de los que la Comisión debe presentar anualmente al 
Parlamento Europeo y al Consejo sobre los progresos realizados en materia de desarrollo, 
validación y aceptación legal de métodos que pueden substituir a la experimentación con 
animales para las pruebas de cosméticos. 
"La Comisión presentará anualmente al Parlamento Europeo y al Consejo un 
iníbrme sobre los progresos realizados en materia de desarrollo, validación y 
aceptación legal de métodos que puedan sustituir a la experimentación con los 
animales. El informe contendrá datos precisos sobre el número y el tipo de 
experimentaciones que se hayan efectuado con animales relativas a los productos 
cosméticos. Los Estados miembros deberán recoger dichos datos, además de las 
estadísticas que les impone la Directiva 86/609/CEE, relativa a la protección de 
los animales utilizados para experimentación y otros unes cientíñcos. La 
Comisión velará en especial por el desarrollo, la validación y la aceptación legal 
de los métodos experimentales que no utilicen animales vivos". (Directiva 
93/35/CEE, letra i) del artículo 4). 
A excepción de los objetivos, de los agentes y del concepto de riesgo potencial para la 
salud humana, que siguen siendo los mismos, se examinan los puntos desarrollados en 
el primer informe anual (COM (94) 606). 
* clarificación de las etapas de la validación (B) 
* iniciativas en 1995 (C) 
* estado actual de los trabajos (D) 
* estadísticas sobre experimentos con animales (E) 
* conclusiones (F) 
* perspectivas (G) 
B. CLARIFICACIÓN DE LAS ETAPAS DE LA 
VALIDACIÓN 
El objetivo principal de la Comisión sigue siendo fomentar el desarrollo, la 
validación y la adopción légal de métodos alternativos que puedan ofrecer al 
consumidor un nivel de protección por lo menos equivalente al alcanzado mediante 
la experimentación con animales. 
La validación es el proceso por el que se establece la fiabitídad y la pertinencia de 
una prueba para un objetivo dado. 
Las etapas que hay que superar para obtener este resultado son más numerosas y el 
proceso más complejo de lo inicialmente previsto. 
El primer seminario celebrado en Amden (Suiza) en 1990 sentó la base teórica esencial 
del proceso de validación; a saber, una evaluación intralaboratorio, una evaluación 
interlaboratorios, la creación de bancos de datos y la evaluación de los resultados. 
La experiencia adquirida en los estudios de validación realizados desde 1990 ha 
demostrado que es necesario definir mejor los distintos objetivos de los estudios de 
validación e integrar nuevas etapas en el proceso de evaluación de las nuevas pruebas. 
El ECVAM (Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos), unidad 
del Centro Común de Investigación (ISPRA), se encuentra en el centro de los debates 
sobre la validación y se han aportado importantes contribuciones en los siguientes 
ámbitos: 
* aspectos prácticos de la validación 
* esquema de prevalidación 
* debates internacionales con el ICCVAM (EE.UU - Comité Coordinador entre 
Organismos para la Validación de Métodos Alternativos) y con la OCDE 
(Organización de Cooperación y Desarrollo Económico) sobre la armonización de 
los criterios de validación y de aceptación. 
En el segundo seminario de Amden (24-28 de enero 1994), organizado conjuntamente por 
el ECVAM y ERGATT (Grupo europeo de investigación para alternativas en las pruebas 
de toxicidad), se emitieron recomendaciones sobre los aspectos prácticos y logísticos de 
la validación de los protocolos de tests alternativos, que fueron recogidas en el informe 
n° 5 del ECVAM. 
Validación de métodos alternativos utilizados con diferentes objetivos 
La validación de las pruebas alternativas puede llevarse a cabo con cuatro tipos de 
objetivos principales. Se distingue entre: 
1. Validación de métodos alternativos para su uso en estudios no reglamentarios. 
2. Validación de métodos alternativos para su inclusión como parte de directrices 
reglamentarias. 
3. Validación de pruebas alternativas para sustituir a las directrices existentes. 
4. Validación de pruebas alternativas destinadas a proporcionar una parte de la 
información requerida por una línea reglamentaria. 
Etapas en la evaluación de las nuevas pruebas 
1. Desarrollo de una prueba y producción de un protocolo. 
Los criterios tenidos en cuenta durante el desarrollo de una prueba incluyen 
principalmente la descripción de la base del método, la definición de su objetivo 
científico, la especificación y la medida de la finalidad biológica, y la expresión 
e interpretación de los resultados mediante un modelo de predicción (PM). 
El modelo de predicción debe permitir que el resultado obtenido con ayuda de 
un método alternativo se convierta en una predicción correcta de toxicidad in 
vivo. 
El modelo de predicción es crítico para que un programa de validación llegue a 
término con éxito. Permite probar una hipótesis claramente definida, evaluar 
objetivamente los resultados de la prueba y sirve de guía para la planificación del 
estudio de validación. 
2. Prevalidación : 
La experiencia ha demostrado que el resultado de amplios y costosos estudios de 
validación puede verse comprometido si sus directores no insisten en que antes del 
comienzo del estudio de validación formal se presenten protocolos de test 
optimizados y una prueba de su rendimiento. En el primer informe del Grupo de 
trabajo del ECVAM sobre prevalidación se describen los objetivos de la 
prevalidación y un esquema del proceso de esta última. 
Los objetivos de la prevalidación son: 
optimizar y normalizar el protocolo 
evaluar la transferibilidad del método 
El ejercicio de prevalidación comprende tres fases: 
un ajuste del protocolo que implica la colaboración entre el laboratorio que 
desarrolló el método y el laboratorio designado para optimizar el método 
la transferencia del protocolo, que implica la colaboración entre los dos 
primeros laboratorios y el laboratorio designado para la transferencia 
un estudio a ciegas que implica al menos la participación de estos 3 
laboratorios destinados a estudiar los resultados del protocolo. 
3. Validación: 
La fase de validación comprende un estudio formal interlaboratorios. 
Las etapas principales son: 
. la descripción del estudio 
la selección de las pruebas 
la selección de los laboratorios 
la selección y la distribución de los materiales de prueba 
la colección y el análisis de los resultados 
la evaluación del estudio 
4. Evaluación independiente de la realización y de los resultados del estudio 
Debe incluir una evaluación objetiva del valor de los pruebas científicamente 
validadas en comparación con otras pruebas, teniendo en cuenta los objetivos de 
validación. 
5. Proceso hacia la aceptación legal. 
Es absolutamente necesario que cualquier nuevo método que se considere 
adecuadamente validado como sustitución para un método existente reciba un 
reconocimiento internacional lo más amplio posible. Por ejemplo, las directrices 
para pruebas de la OCDE son particularmente importantes a este respecto, puesto 
que son utilizadas para las pruebas realizadas en países miembros en Europa y en 
Norteamérica, y en Japón, Australia y Nueva Zelanda. 
Además, en virtud del Acuerdo de la OCDE de Aceptación mutua de datos, los 
países miembros han acordado aceptar datos de pruebas realizadas conforme a las 
normativas de la OCDE, a condición de que se observen los Principios de buenas 
prácticas de laboratorio (GLP). La OCDE ha establecido un procedimiento para 
actualizar las directrices para las pruebas y para la introducción de nuevos 
métodos de pruebas. 
C. LAS INICIATIVAS EN 1995 
LOS AGENTES 
Se recuerda que los agentes en materia de estímulo de la investigación, del desarrollo y 
de la validación de los métodos alternativos son: 
1. UNIÓN EUROPEA 
La Comisión Europea: 
Varios servicios de la Comisión se ocupan de cuestiones relacionadas con la 
experimentación animal y el desarrollo y evaluación de métodos alternativos. 
La DG XI, Medio Ambiente, Seguridad Nuclear y Protección Civil gestiona y es 
la responsable de la Directiva 86/609/CEE relativa a la protección de los animales 
utilizados para experimentación y otros fines científicos, y de la Directiva 
67/548/CEE, relativa a la clasificación, embalaje y etiquetado de las sustancias 
peligrosas. 
DG - CCI, Centro Común de Investigación 
. ECVAM, Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos 
. ESAC, Comité consultivo científico del ECVAM 
. ECB, Oficina europea de productos químicos 
La DG XXIV: Política de los Consumidores 
. Unidad 4, Política de calidad y mercado de productos, gestiona la Directiva 
76/768/CEE (Directiva de Cosméticos) 
. SCC. El Comité Científico de Cosmetología, comité consultivo de la Comisión 
La DG J3I, Ciencia, Investigación y Desarrollo, financia programas de 
investigación. 
La industria europea 
COLIPA - Comité de enlace europeo de la industria cosmética, de los productos 
de tocador y de perfumería, que puso en marcha el SCAAT. 
. SCAAT - Comité directivo de métodos alternativos a la experimentación con 
animales, que supervisa los estudios de validación del COLIPA y coordina los 
esfuerzos de validación de la industria cosmética sobre una base mundial. 
2. LOS EE.UU. 
CTFA - Asociación de cosmética, productos de tocador y perfumería. 
3. JAPÓN 
JCIA - Asociación de la industria cosmética japonesa 
4. ORGANIZACIÓN DE COOPERACIÓN Y DESARROLLO ECONÓMICOS 
(OCDE) 
La OCDE publica directrices para pruebas, aprobadas por consenso entre sus 
Estados miembros. Estas directrices son casi idénticas a los métodos de prueba 
del Anexo V de los Estados Unidos y, junto con los principios de la Aceptación 
mutua de datos, suponen una oportunidad para la armonización internacional y 
para un enfoque equilibrado de la aplicación de las tres R. 
LAS INICIATIVAS 
1. UNIÓN EUROPEA 
DG 
XI 
La DG XI, Medio Ambiente, Seguridad Nuclear y Protección Civil convino con los 
Estados miembros sobre el mejor método para recoger, de forma semestral, los datos 
estadísticos impuestos por los artículos 13 y 26 de la Directiva 86/609/CEE relativa a la 
protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos. Los 
cuadros que los Estados miembros deben cumplimentar incluyen una cifra para el número 
total de animales utilizados para la experimentación con cosméticos. La DG XI también está 
encargada de la Directiva 67/548/CEE y de los métodos de prueba de la UE, tal como se 
recoge en la Directiva de la Comisión 87/302/CEE y en el Anexo de la Directiva 92/69/CEE 
de la Comisión (Parte B - Métodos para la determinación de la toxicidad). 
La DG XI apoyó el estudio internacional de validación UE/HO sobre alternativas al test de 
irritación ocular de Draize, y también el estudio internacional de validación UE/COLIPA 
sobre la fototoxicidad in vitro. 
DGCCI 
El ECVAM, Centro europeo para la validación de los métodos alternativos, está al 
servicio de todas las DG interesadas por la problemática de los métodos alternativos. 
El ECVAM fue creado en Europa por la Comisión Europea en octubre de 1991 en virtud de 
una Comunicación de la Comisión al Consejo y al Parlamento Europeo y en respuesta al 
artículo 23 de la Directiva 86/609/CEE, en la que se establece que: "La Comisión y los 
Estados miembros deberán fomentar la investigación sobre el desarrollo y la confirmación 
de técnicas alternativas que puedan aportar el mismo nivel de información que el obtenido 
en experimentos con animales, que supongan el uso de menos animales o que impliquen 
procedimientos menos dolorosos, y darán los pasos oportunos, en la medida en que lo 
consideren apropiado, para fomentar la investigación en este campo." 
El ECVAM fue creado principalmente para: 
1. coordinar la validación de los métodos alternativos a escala de la Unión Europea 
2. constituir un foro para el intercambio de información sobre el desarrollo de métodos de 
prueba alternativos 
3. crear, mantener y gestionar un banco de datos sobre los métodos alternativos 
4. promover el diálogo entre legisladores, industrias, científicos biomédicos, organizaciones 
de consumidores y grupos de protección de los animales con vistas al desarrollo, la 
validación y el reconocimiento internacional de los métodos alternativos. 
El simposio de apertura del ECVAM organizado en Ispra el 18 de octubre de 1994 estuvo 
dedicado a la validación de los métodos alternativos de sustitución. En este simposio se 
analizó la función del ECVAM en el desarrollo, la validación y la aceptación de pruebas 
alternativas y estrategias de tests, incluidos los dirigidos al ensayo de cosméticos, y esta 
puede resumirse de la siguiente manera: 
contribuir a la elaboración de líneas directrices a través del propio proceso de validación, 
ya que este está relacionado con el desarrollo y la aceptación de pruebas pertinentes y 
fiables para objetivos específicos; 
determinar las prioridades, teniendo en cuenta el progreso científico en ámbitos concretos; 
. velar por que las pruebas alternativas impliquen resultados biológicos simples, claros y 
bien definidos con una comprensión suficiente de sus bases mecanicistas; 
. promover un planteamiento multidisciplinario con vistas a la creación de estrategias de 
pruebas integradas que incluyan las relaciones cuantitativas estructura actividad (QSAR), 
la biocinética y los métodos de cultivo celular y tisular; 
hacer frente a las dificultades debidas a la falta de materiales de prueba con datos in vivo 
de calidad; 
. fomentar la reevaluación de las líneas directrices existentes y de los procedimientos 
reglamentarios; 
. alcanzar un consenso trabajando con las correspondientes organizaciones gubernamentales, 
industriales, académicas y de otro tipo; 
. establecer criterios para la validación, para la evaluación independiente de los resultados 
de los estudios de validación y para la aceptación legal de las pruebas alternativas y de 
las estrategias de tests, a través de una cooperación activa con, por ejemplo, la OCDE y 
el ICCVAM (Comité coordinador entre organismos para la validación de métodos 
alternativos de los Estados Unidos. 
Hasta ahora, el ECVAM ha organizado varios seminarios sobre el desarrollo y la validación 
de pruebas alternativas y ha publicado los informes de 14 de estos seminarios. El ECVAM 
concedió prioridad a las alternativas para las pruebas de cosméticos. Los informes que 
presentan un interés directo para la evaluación de la seguridad de los cosméticos son: 
- informe 2 - Ensayo de fotoxicidad in vitro (1994) 
- informe 5 - Aspectos prácticos de la validación de los procedimientos de pruebas 
de toxicidad (1995) 
- informe 6 - Estudio de prevalidación sobre los ensayos in vitro de corrosividad de 
la piel (1995) 
- informe 7 - Desarrollo y validación de las pruebas no 
realizadas sobre animales y de estrategias de 
pruebas: determinación de una respuesta 
coordinada al problema y la oportunidad que 
ofrece la sexta modificación de la Directiva 
sobre cosméticos (1995) 
8 
- informe 8 - El uso integrado de métodos alternativos para la 
predicción de los riesgos tóxicos (1995) 
- informe 11 - Las tres R: el procedimiento a seguir (1995) 
- informe 13 - Métodos para valorar la absorción percutánea 
(1995) 
En 1995 se publicaron otros dos informes sobre: 
- La validación de métodos de prueba alternativos (declaración conjunta del 
ECVAM y la ECB) 
- El primer Informe del Grupo de trabajo del ECVAM sobre prevalidación. 
Entre los temas prioritarios del ECVAM para los años 1995-1998 también se encuentran: 
- la toxicidad del desarrollo 
- el metabolismo 
- la corrosividad 
- la fototoxicidad 
- la penetración cutánea 
- la irritación ocular y cutánea 
- la sensibilización. 
La ECB (Oficina europea de productos químicos) proporciona ayuda técnica y científica 
a la DG XI sobre la clasificación y etiquetado de sustancias peligrosas, sobre notificación de 
nuevas sustancias, sobre productos químicos existentes, sobre exportación e importación de 
sustancias peligrosas y sobre métodos de prueba (conforme al Anexo V de la Directiva 
67/548/CEE). Se está creando un enlace muy eficaz entre la ECB y el ECVAM en lo que 
se refiere a los métodos de prueba alternativos y a las modificaciones para procedimientos 
con animales que reducen el número de animales necesarios o atenúan el sufrimiento de los 
utilizados necesariamente para cumplir las normas y directrices. 
DG XXIV/ SCC 
La DG XXIV - Política de los consumidores, que gestiona la Directiva "cosméticos" 
(Directiva 76/768/CEE), sigue siendo la fuerza impulsora y ha multiplicado sus actividades 
con la finalidad de respetar en la mayor medida posible las disposiciones de la Directiva 
93/35/CEE dentro dé los plazos previstos. 
Si no hay métodos alternativos científicamente validados y legalmente aceptados, la DG 
XXIV se encarga de preparar para la Comisión un proyecto de medidas destinadas a 
ampliar el plazo de prohibición de las pruebas sobre animales según el procedimiento 
del Comité para la adaptación al progreso técnico (artículo 10, Dir. 76/768/CEE). 
Este Comité (C.A.P.T.) está compuesto por representantes de los Estados miembros y 
presidido por un representante de la Comisión. Este último presenta al Comité un proyecto 
de medidas que han de adoptarse. 
El dictamen se emite por mayoría cualificada. 
De acuerdo con el nuevo procedimiento de codecisión, se informará al Parlamento Europeo 
al mismo tiempo y en las mismas condiciones sobre cualquier proyecto de medidas presentado 
alCAPT. 
"Cuando debido a progresos cientíñcos insuñcientes en la puesta a punto de métodos que 
puedan sustituir de manera satisfactoria a la experimentación animal, especialmente en los 
casos en que los métodos de experimentación alternativos, a pesar de todos los esíuerzos 
razonablemente posibles, no han sido cientíñcamente validados como métodos que onecen 
al consumidor un grado de protección equivalente, teniendo en cuenta las directrices de la 
Organización de Cooperación y Desarrollo Económico (OCDE) en materia de toxicidad, 
la Comisión presentará a más tardar el 1 de enero de 1997, un proyecto de medidas 
encaminadas a aplazar, por un periodo suñciente, que en ningún caso será inferior a dos 
años, la fecha de aplicación de esta disposición, de conformidad con el procedimiento 
establecido en el artículo 10. Antes de presentar dicho proyecto de medidas, la Comisión 
consultará al Comité Cientíñco de Cosmetología " (Dir. 93/35/CEE, letra i) del artículo 4). 
En diversas ocasiones, la DG XXIV instó a los Estados miembros a que respetaran sus 
obligaciones en cuanto a la recogida de datos precisos sobre las experimentaciones animales 
efectuadas para ingredientes y para productos cosméticos acabados. Los datos estadísticos que 
deben recogerse según lo establecido en la Directiva 93/35/CEE en lo que se refiere a los 
productos cosméticos van más allá de los datos que deben facilitar los Estados miembros para 
respetar las obligaciones de la Directiva 86/609/CEE, y se ha pedido a los Estados miembros 
que presenten resultados más detallados, con una periodicidad anual. 
La DG XXIV ha mantenido contactos, de forma regular, principalmente con la DG XI y con 
el ECVAM, y ha facilitado la comunicación entre todos los agentes. 
SCC: El Comité cientíñco de cosmetología, comité consultivo de la Comisión, se encarga 
de emitir un dictamen científico para la DG XXIV sobre la aplicabilidad de los métodos 
alternativos validados en el proceso de evaluación de la seguridad de los cosméticos para el 
uso humano. 
El Subcomité de métodos alternativos y líneas directrices del SCC organizó dos reuniones 
de trabajo (2 de febrero, 11 de mayo) y dos reuniones conjuntas con SCAAT/COLEPA (19 
de septiembre, 1 de diciembre) durante las cuales se desarrollaron las acciones siguientes. 
1. Evaluación de los documentos y expedientes presentados por COLIPA 
Fotoirritación in vitro ŒU/COLIPA) 
El análisis de los datos comunicados por COLIPA, es decir, de los resultados parciales 
publicados, respecto a la prevalidación y una información parcial sobre la fase 2 de los 
estudios de validación, no permitió al SCC expresar una opinión científica sobre el 
conjunto del proyecto. 
No obstante, el SCC destaca que los modelos animales no son adecuados para predecir 
los efectos fototóxicos en la persona y considera que el estudio del potencial fototóxico 
10 
"in vitro" es un paso importante en el proceso de evaluación de la seguridad de los 
cosméticos que contienen filtros UV. 
Absorción percutánea in vitro (COLIPA) 
Tras el análisis de los documentos presentados por COLIPA, es decir, de las líneas 
directrices para las pruebas de absorción percutánea in vitro, de los protocolos 
normalizados y de un examen general de las correlaciones in vitro/in vivo, el SCC 
recomienda presentar la metodología de absorción percutánea "in vitro" de manera 
normalizada y completarla con resultados intra e interlaboratorios obtenidos sobre 
materiales de pruebas y vehículos convenientemente elegidos. 
Fotomutagenicidad (COUPA) 
Las recomendaciones de COLIPA en el informe final presentado al SCC indican los 
criterios que deben utilizarse en el establecimiento de los protocolos de prueba. 
El SCC lamenta no poder basar aún la evaluación del potencial fotomutagénico de los 
filtros UV en métodos debidamente validados, a pesar de que en 1990 haya desarrollado 
criterios generales para la realización de las pruebas de fotomutagenicidad (SPC/803/90). 
2. Información requerida para la evaluación científica de los estudios de validación de 
las pruebas alternativas para su utilización en la evaluación de la seguridad de los 
cosméticos 
Teniendo en cuenta los problemas relativos a la validación de las metodologías 
alternativas, el SCC consideró que era pertinente redactar un documento que constituya 
una contribución directa para los futuros estudios de validación. 
En este informe se tienen en cuenta los aspectos cualitativos y cuantitativos de los 
problemas de validación. 
Los criterios elegidos: 
. conciernen a la validación científica de las pruebas 
. permiten medir un grado de toxicidad 
. son aplicables a los ingredientes cosméticos 
. implican la definición de los procedimientos de análisis estadístico 
Se destaca la necesidad de aportar las pruebas de la optimización de los protocolos y de 
formalizar la relación entre los datos in vitro y los datos in vivo en forma de una relación 
matemática. 
11 
I DG XII | 
La DG XII, Ciencia, Investigación y Desarrollo, financia programas de investigación, y 
en concreto el desarrollo y la validación de métodos alternativos, conforme a la Decisión N° 
111/94/CE del Parlamento Europeo y el Consejo, de 26 de abril de 1994, relativa al cuarto 
programa marco para acciones comunitarias en materia de investigación y desarrollo 
tecnológicos que establece claramente: "Siempre que sea posible, la experimentación y las 
pruebas sobre animales deberán sustituirse por métodos in vitro o de otro tipo..." 
La DG XQ ha apoyado varios programas sobre desarrollo y validación de pruebas in vitro 
que han sido ya realizados o están en curso. Algunos de los proyectos podrían ser de utilidad 
para el sector cosmético: 
BRIDGE - Informe final (EUR 15777, publicado en 1995) 
Elaboración de un test predictivo in vitro para la detección de componentes 
sensibilizadores. 
BIOTECH - (199201994) 
Algunos de los proyectos se refieren a la toxicología experimental in vitro. 
BIOTECH (1994-1998) 
El programa de trabajo prevé la investigación prenormativa sobre alternativas in vitro 
para los experimentos con animales en toxicología farmacológica. 
IVTIP (In Vitro Testing Industrial Platform) 
Foro organizado para mejorar las relaciones entre productores y usuarios de tecnología. 
En 1995 se organizaron dos reuniones, sobre la marcha del cuarto programa marco y 
sobre una visión general de los progresos logrados con la validación. 
COLIPA/SCAAT 
Para cada ámbito de investigación, SCAAT ha creado grupos de trabajo específicos que 
reúnen a varios expertos para la aplicación de los trabajos de validación. 
Un simposio científico internacional sobre las alternativas a la experimentación con animales, 
organizado por COLIPA, reunió en Bruselas el 29 y 30 de noviembre de 1995 a los 
representantes de la industria, de la comunidad científica, de la Comisión y del Parlamento 
Europeo, y de las sociedades protectoras de los animales. 
La primera sesión, dedicada a la VALIDACIÓN, destacó el papel crítico de los modelos de 
predicción e hizo una recapitulación de los estudios de validación en curso sobre la 
fotoirritación y la irritación ocular, y terminó con una mesa redonda sobre las perspectivas 
de un planteamiento reglamentario. 
12 
La segunda sesión, dedicada al DESARROLLO, incluía presentaciones sobre la absorción 
percutánea, la compatibilidad cutánea y la sensibilización cutánea. 
La tercera sesión, consagrada a la EVALUACIÓN DE LA SEGURIDAD, abordó las 
iniciativas adoptadas por el SCC y el enfoque de las autoridades normativas británicas y 
alemanas. Se destacó la importancia de la presentación de los datos científicos que apoyan 
los estudios y se destacaron las estrategias internas de la industria cosmética para la 
evaluación de la seguridad de los productos acabados. 
Una exposición de posters completó las presentaciones. En esta exposición, se entregó a los 
participantes un folleto en el que se recogía un esquema del planteamiento del IFAW 
(Internacional Fund for Animal Welfare). Como parece evidente que no es posible sustituir 
una prueba sobre animales por una simple prueba in vitro, el IFAW presenta una estrategia 
gradual basada fundamentalmente en alternativas de sustitución que favorecen la utilización 
de células y de tejidos de origen humano, excluyendo el recurso a cualquier experimentación 
con animales in vivo y preconizando pruebas in vivo sobre voluntarios humanos. 
El simposio destacó el papel de líder de COLIPA (Industria cosmética europea) en la 
organización de trabajos de investigación para el desarrollo y la validación de métodos 
alternativos. Los esfuerzos realizados por las grandes sociedades cosméticas europeas son 
considerables en relación con el número de animales utilizados en la experimentación 
cosmética, y los conocimientos adquiridos suponen un enorme beneficio para las demás 
industrias. 
Por otro lado, el simposio contribuyó a informar de manera científica y precisa a las distintas 
partes interesadas y dio lugar a interesantes intercambios de opiniones. Las conclusiones 
apelan a un enfoque conjunto de la industria y de la Comisión para sustituir rápidamente las 
pruebas sobre animales en los ámbitos de la compatibilidad cutánea, de la fotoirritación y de 
la absorción cutánea. 
2. LOS EE.UU. 
El Gobierno de los Estados Unidos es partidario de la cooperación internacional para 
recomendar un planteamiento y fijar los criterios para la adopción con carácter normativo de 
nuevos métodos alternativos, estableciendo claramente las condiciones en las que deberán 
utilizarse tales métodos (resultados biológicos, pertinencia para tipos de sustancias, etc.). El 
ICCVAM organizó en diciembre de 1995 en Arlington, Virginia, un seminario sobre la 
validación y la aceptación normativa de métodos alternativos de pruebas toxicológicas, 
patrocinado por el National Institute of Environmental Health Sciences (NIEHS) y el National 
Toxicology Program (NTP). El objeto del seminario era estudiar el borrador del informe del 
ICCVAM en el que se planteaban recomendaciones sobre criterios y procesos para la 
validación y aceptación normativa de nuevos métodos de pruebas toxicológicas y la revisión 
de otros. 
La Food and Drug Administration (FDA) es el organismo estadounidense competente para 
la seguridad de los cosméticos. La FDA mantiene relaciones interactivas con las agencias 
13 
públicas y privadas que trabajan en el desarrollo y la validación de pruebas alternativas y se 
concentra en métodos que generan datos científicos sólidos. 
La FDA expresa sus inquietudes por lo que respecta a la exclusión de la experimentación 
con animales en la aplicación de la Directiva 93/35. Algunos cosméticos fabricados en la 
UE podrían no reunir las condiciones de seguridad (para la salud) establecidas por la FDCA 
(Food, Drug and Cosmetic Act) de los Estados Unidos. 
3. JAPÓN 
El Ministerio japonés de Salud y Bienestar (MHW) es el que tiene competencias sobre las 
pruebas y las directrices para las pruebas. Los grupos de investigación japoneses trabajan 
especialmente en la validación de pruebas alternativas al test de Draize. Su aceptación 
depende de su función específica en la evaluación de la irritación ocular (selección o 
sustitución, prueba individual o batería de pruebas). La JCIA considera que para la 
evaluación de la seguridad de los cosméticos será difícil recomendar una prueba o una batería 
de pruebas cuyo predictibilidad no sea equivalente a la de los métodos in vivo. 
4. OCDE 
En octubre de 1994, en la V reunión de los Coordinadores Nacionales del Programa de 
directrices de pruebas de la OCDE, se convino en intentar armonizar internacionalmente los 
diferentes conceptos publicados y utilizados para la validación de los métodos de prueba 
alternativos. Con vistas a un debate internacional sobre esta cuestión, se consideró que la 
OCDE debía ofrecerse como plataforma para todas las partes involucradas, a través de la cual 
fuera posible llegar a un consenso internacional sobre criterios de validación y aceptación. 
Los coordinadores nacionales afirmaron que, más que crear un nuevo concepto, deberían 
utilizarse las propuestas existentes como base para un enfoque internacionalmente aceptable. 
A este respecto, se reconoció el trabajo de centros como el CAAT (Johns Hopkins University 
Center for Alternatives to Animal Testing) de los Estados Unidos, el ECVAM de la UE, 
ERGATT, y de varios centros y comités nacionales (e.g., FRAME en el Reino Unido, IRAG 
e ICCVAM en los Estados Unidos, NCA en los Países Bajos, SIAT en Suiza y ZEBET en 
Alemania). 
Los Coordinadores nacionales acordaron que el mejor método sería un Seminario OCDE , 
ya que este tipo de reunión ofrecería una oportunidad para que todas las partes que tienen un 
interés en la cuestión discutan el tema y busquen el consenso. Además, se consideró 
extremadamente importante que los Estados miembros incluyan en sus nombramientos a 
personas que tengan competencias en el ámbito de la normativa. Suecia se ofreció como sede 
del seminario. 
En enero de 1995 se creó un Comité directivo para asesorar a la Secretaría de la OCDE 
sobre el alcance y la estructura del seminario, y para asistir en el desarrollo del programa 
para el seminario, cuya fecha de celebración fue fijada para el 22-24 de enero de 1996, en 
Soma, Suecia. El ECVAM y ZEBET estuvieron representados en dicho comité directivo. 
14 
D. ESTADO ACTUAL DE LOS 
TRABAJOS 
MÉTODOS EN CURSO DE DESARROLLO Y DE VALIDACIÓN 
Sensibilización cutánea 
La sensibilización es un sector muy amplio para la investigación y enormemente relacionado 
con la seguridad de los cosméticos. Durante el simposio organizado por COLIPA (29-30 de 
noviembre de 1995), se presentó un método muy interesante para la evaluación in vitro de 
la sensibilización cutánea. En 1995 se celebró un seminario del ECVAM sobre sensibilización 
cutánea, sobre el cual se publicará un informe en 1996. 
La estructura química y el potencial sensibilizante de diversos compuestos han sido 
examinados de forma muy exhaustiva, y se están elaborando sistemas expertos como DEREK 
("Deductive Estimation of Risk from Existing Knowledge", cálculo deductivo de riesgos a 
partir de los conocimientos existentes) para detectar problemas estructurales asociados con 
el potencial sensibilizante de la piel. Un método posible de predicción podría basarse en la 
medición de señales moleculares inducidas en cultivos celulares mediante sustancias 
sensibilizantes. 
En este ámbito en particular debe destacarse que la predicción del potencial de sensibilización 
en humanos sigue siendo una gran problema, debido a la variabilidad individual de las 
respuestas. 
Fotomutagenicidad - Validación (COLIPA) 
Desde 1990, COLIPA ha presentado expedientes sobre los filtros UV que contenían datos de 
fotomutagenicidad obtenidos a partir de distintos tipos de pruebas. 
Organizó un ensayo del anillo para la definición de un protocolo conveniente utilizando dos 
sustancias cuyo potencial fotomutagénico es conocido, activadas por los rayos UVA, y 
distintas cepas bacterianas. Los resultados de este test del anillo permitieron elaborar 
recomendaciones relativas a los criterios de selección de las cepas bacterianas o de los 
cultivos celulares, el simulador solar, la técnica de irradiación de las muestras, las dosis de 
radiación UV, las cantidades de sustancias por probar y la utilización de controles positivos. 
Es difícil programar un estudio de validación a falta de datos de referencia in vivo. 
Absorción percutánea 
El ECVAM, COLIPA y la OCDE han colaborado para facilitar la adopción internacional de 
una línea directriz para las pruebas de absorción percutánea in vitro. 
15 
Fotoirritación/Fototoxicidad: validación - fase II (EU/COLIPA) 
El ECVAM y la DG XI están representados en el Equipo de Dirección para el estudio, que 
es coordinado por ZEBET, y está analizando la posibilidad de un estudio de validación 
complementario para predecir el potencial fotoirritante de los filtros UV. 
En la primera fase del estudio (prevalidación), el análisis de los resultados obtenidos con una 
prueba de viabilidad celular permitió determinar un factor de fotoirritación que distingue las 
sustancias fotoirritantes de las que no lo son. El objetivo de la 2a fase (validación), 
programada como una prueba a ciegas, era determinar si una prueba de toxicidad celular y 
una prueba que mide los daños celulares [la prueba NRU1 y la prueba combinada RBC2 
(Fotohemolisis+oxidación de hemoglobina)] son capaces de predecir correctamente el 
potencial fotoirritante para el hombre de 32 sustancias químicas administradas por vía 
sistémica o por vía tópica. 
Los resultados preliminares de la fase II, terminada en 1995, se limitan a la prueba NRU 
utilizada en todos los laboratorios. El protocolo RBC sólo se utilizó en 3 laboratorios. 
Un bioestadístico independiente realizó evaluaciones estadísticas suplementarias que serán 
publicadas durante el primer semestre de 1996. 
Irritación ocular - informe final del estudio EU/HO sobre las alternativas al test de 
irritación ocular de Draize 
El objetivo de este estudio consistía en establecer si nueve pruebas alternativas, por separado 
o combinadas, podían sustituir al test de Draize para materiales de prueba muy irritantes o 
para evaluar el potencial irritante de substancias químicas, con o sin relación con la clase 
química y en toda la gama de potenciales mensurables. 
Se analizaron un total de 60 substancias químicas de forma independiente en 37 laboratorios. 
Los resultados se compararon con los MMASS (índices medios máximos modificados) 
obtenidos en la prueba de Draize y presentados para evaluación estadística. 
A excepción de la predicción del potencial irritante de los agentes tensoactivos, ninguna de 
las nueve pruebas logró ninguno de los objetivos previstos. 
Las enseñanzas de este estudio fueron muy útiles,y se tuvieron en cuenta para la planificación 
del estudio COLIPA, además de dar lugar al seminario ECVAM sobre aspectos prácticos de 
la validación y al perfeccionamiento del esquema de prevalidación del ECVAM. Se comprobó 
que la variabilidad de los datos in vivo es el mayor obstáculo para el establecimiento de la 
pertinencia y fiabilidad de las pruebas in vivo. 
NRU: Neutral red uptake assay, utiliza las células como objetivo y la toxicidad celular como finalidad 
biológica. 
RBC. Red blood cell haemolysis test, evalúa los daños de las membranas celulares. 
16 
Irritación ocular: validación (COLIPA) 
El ejercicio de validación se realizó sobre 23 ingredientes cosméticos (agentes tensoactivos, 
alcohol, conservantes), de los que 20 son comunes con el estudio EU/HO antes citado, y 
sobre 32 formulaciones cosméticas [con una amplia gama de formas físico-químicas]. Los 
materiales de las pruebas se probaron in vivo de acuerdo con las líneas directrices de la 
OCDE (OCDE 405). 
Los objetivos específicos de este estudio consistían en determinar si los datos obtenidos a 
partir de 10 protocolos in vitro generalmente utilizados en la industria cosmética (5 de los 
cuales también habían sido evaluados en el estudio EU/HO): 
muestran una correlación aceptable con el MMAS (índice medio máximo modificado) 
proporcionan una correlación aceptable con las notaciones individuales y el tiempo de 
recuperación como se describe en la línea directriz OCDE 405 
predicen correctamente el potencial de irritación ocular del ojo del conejo sobre la base 
de algoritmos alternativos. 
Por primera vez en un estudio de validación, se establecieron algunos modelos de 
predicción (PM) antes del principio de cada prueba. Definen con precisión los resultados 
biológicos obtenidos para cada modelo in vitro y cómo convertir cada resultado biológico in 
vitro en predicción de un potencial de irritación ocular. Los PM utilizados en este estudio se 
basan en datos históricos disponibles para ingredientes y formulaciones de interés para la 
industria cosmética y, en particular, para sustancias con un potencial de irritación de bajo a 
moderado. 
£1 programa no permitió una validación completa debido al reducido número de 
laboratorios que participaron en las pruebas particulares del programa. Ninguno de los 
métodos probados puede aún sustituir válidamente al test de irritación ocular de Draize. 
La fiabilidad de los PM se evaluó determinando si los resultados interlaboratorios eran 
reproducibles y si los datos eran distribuidos dentro de los intervalos de predicción de los PM 
predefinidos. 
El protocolo (RBC) muestra una buena reproducibilidad interlaboratorios y, además, cumple 
los criterios de fiabilidad. 
Tres de los protocolos probados se ajustan razonablemente a sus modelos de predicción 
(FLT3, RBC, TEA4) pero antes de que puedan establecerse conclusiones finales sobre sus 
resultados se necesitan trabajos suplementarios para solucionar varios problemas técnicos 
graves asociados con los PM. 
FLT: Fluorescein leakage test, mide los daños causados a una barrera celular. 
TEA: Tissue equivalente assay, mide el tiempo necesario para una reducción del 50% de la viabilidad 
celular en piel humana reconstituida. 
17 
Este estudio de validación demuestra la importancia de disponer de datos in vivo de 
buena calidad 
Los datos in vivo disponibles son adecuados para la evaluación del riesgo. Sin embargo, para 
comparar los datos in vivo e in vitro, las dos series de datos deberían teóricamente presentar 
la menor variabilidad posible para garantizar una evaluación estadística precisa. La 
experiencia ha demostrado que no siempre es así. 
El examen de los resultados indica que en un próximo estudio algunos de los PM podrían ser 
refinados y comprobados. 
Corrosividad cutánea: prevalidación (ECVAM) 
Cuatro tests de corrosividad cutánea son objeto de una evaluación y de un trabajo de 
optimización (TER = resistencia eléctrica transcutánea en piel de rata, CORROSITEX*, 
SKIN2* y EPISKIN*) con vistas a la preparación de un programa de validación formal para 
1996. 
Compatibilidad cutánea (COLIPA) 
La compatibilidad cutánea se define como la ausencia de irritación cutánea en las condiciones 
normales de utilización y en condiciones razonablemente previsibles de mala utilización. 
Las siete compañías miembros del COLIPA evalúan la compatibilidad cutánea de sus 
productos acabados para las personas en condiciones controladas, porque el potencial irritante 
de la mayoría de los productos cosméticos es muy bajo. 
COLEPA ha elaborado líneas directrices para la evaluación de la compatibilidad de los 
productos cosméticos acabados para la piel humana: 
teniendo en cuenta las exigencias éticas, los estudios sobre las personas deben realizarse 
de acuerdo con la Declaración de Helsinki (1964, 1989); 
es absolutamente necesario un enfoque prudente de las pruebas, etapa tras etapa; 
se precisa un conocimiento previo de la composición y la estabilidad de los productos 
probados y una evaluación previa de los datos de toxicidad de los ingredientes que entran 
en la composición de los productos. 
En la actualidad se están elaborando líneas directrices sobre la compatibilidad cutánea de los 
ingredientes cosméticos. 
Estudios en voluntarios humanos (ECVAM) 
Con frecuencia, los estudios sobre voluntarios humanos se incluyen con las demás alternativas 
de sustitución para los tests con animales. El ECVAM, en colaboración con la Universidad 
de Pavía, la Universidad de Nottingham y una serie de empresas de cosméticos, está 
18 
investigando los problemas éticos, legales, de seguridad, logísticos y científicos asociados a 
dichos estudios. 
E. ESTADÍSTICAS SOBRE EXPERIMENTOS CON 
ANIMALES 
La recogida de datos sobre el numero de animales utilizados con fines experimentales u otros 
fines científicos, conforme a los artículos 13 y 26 de la Directiva 86/609/CEE no está 
concebida con una frecuencia anual, lo que explica, en parte, las dificultades para recoger 
anualmente los datos en lo que se refiere, concretamente, a los ingredientes y a los productos 
cosméticos. 
No obstante, la Comisión ha insistido repetidas veces ante los Estados miembros para obtener 
las estadísticas necesarias, tal como se ha reflejado en las actividades de la DG XXIV y de 
laDGXI. 
1) Ocho Estados miembros declararon que en su territorio no se hacen tests sobre animales 
para los productos cosméticos acabados (Italia, Grecia, Bélgica, Irlanda, Suecia, 
Finlandia, Luxemburgo, Alemania). 
2) Seis Estados miembros declararon que en su territorio no se hacen tests sobre animales 
para los ingredientes cosméticos (Grecia, Países Bajos, Irlanda, Suecia, Finlandia y 
Luxemburgo). 
3) Sólo tres Estados miembros (Austria, Francia y el Reino Unido) comunicaron cifras sobre 
el numero de animales utilizados, precisando a veces que dichas cifras no eran 
interpretables y que había dudas en cuanto a su realidad. En estas condiciones, el 
presente informe no puede presentar cuadros comparativos que comprendan datos 
numéricos, porque tal cuadro daría una visión errónea y falsa de la realidad. 
4) En lo que concierne a las declaraciones de falta de tests, hay que observar igualmente 
que algunos Estados miembros no productores de ingredientes pueden utilizar sin duda 
ingredientes probados en otros Estados miembros o en terceros países y que algunos 
ingredientes utilizados para los productos cosméticos pueden haber sido probados con 
otros fines. 
La Comisión lamenta vivamente no disponer de datos más precisos en este momento, pero 
la recogida de datos depende de los Estados miembros. 
19 
F. CONCLUSIONES 
Los progresos realizados durante 1995 en lo que se refiere a los métodos de prueba 
alternativos y su validación pueden resumirse del siguiente modo: 
1. En 1996 se hará público el informe sobre la Fase II del estudio internacional de 
validación de UE/COLIPA sobre las pruebas in vitro para fototoxicidad (fotoirritación), 
pero ya es evidente que la validación de la prueba de cultivo celular NRU ha obtenido 
muy buen resultado. Los participantes en el estudio confían en que al cabo de unos dos 
años, es decir, una vez publicado el informe final sobre el estudio e introducidas algunas 
ligeras modificaciones en los protocolos, pueda elaborarse una línea directriz. 
2. La experiencia en la industria europea sobre la cuestión crítica de la absorción percutánea 
ha llevado a una propuesta concreta de una directriz OCDE para un test in vitro. 
ECVAM y COLIPA están trabajando con la OCDE y otros para facilitar la adopción por 
parte de los países miembros de la OCDE de una directriz de prueba in vitro. 
3. Los resultados del estudio internacional de validación CE/HO sobre alternativas para el 
test de irritación ocular de Draize fueron decepcionantes, en el sentido de que ninguna 
de las pruebas alcanzó los objetivos del estudio. No obstante, lo aprendido durante el 
estudio fue de gran valor, y como consecuencia de ello la calidad de los futuros estudios 
de validación mejorará notablemente. 
4. La primera fase de la evaluación de las alternativas al test ocular de Draize realizada por 
COLIPA desembocó en una gama más limitada de materiales que el estudio CE/HO, dio 
resultados más prometedores y demostró las ventajas de incorporar modelos de predicción 
a los protocolos de tests. 
5. Como resultado del estudio de COLIPA se han elaborado recomendaciones sobre criterios 
que deben adoptarse para definir los protocolos de pruebas in vitro para 
fotomutagenicidad. 
6. Como resultado de otra iniciativa de COLIPA, se han elaborado directrices sobre las 
pruebas de compatibilidad cutánea de las pruebas de productos cosméticos y sus 
ingredientes en el hombre. 
7. La utilización de voluntarios humanos como alternativa de sustitución merece ser 
examinada más atentamente, pero debe destacarse que este tipo de estudios sólo deben 
realizarse tras disponer de resultados de estudios previos in vitro o in vivo que permitan 
evitar el riesgo de cualquier consecuencia grave. 
8. La validación ha resultado ser más difícil, más laboriosa y más cara de lo previsto. Es 
más, todavía se está debatiendo sobre lo que significa realmente la validación y cuál es 
el modo más idóneo para establecer la pertinencia y fiabilidad de los métodos 
alternativos. ECVAM se encuentra en el centro de estos debates y se han hecho 
contribuciones especialmente importantes en una serie de aspectos. 
20 
9. El esquema de prevalidación de ECVAM, que actualmente se encuentra sometido a 
evaluación internacional, mejorará probablemente el porcentaje de éxito de los estudios 
de validación y reducirá el tiempo necesario para llevarlos a cabo, así como su coste. 
10. Tanto en Europa como en los Estados Unidos y en Japón se han desarrollado 
conversaciones internacionales sobre la armonización de criterios para la validación y 
aceptación de métodos de prueba alternativos para sustitución. 
G. PERSPECTIVAS 
1. Surgirán expectativas más realistas del proceso de validación, y puede esperarse que el 
éxito de los debates internacionales sobre criterios para la validación y aceptación de 
métodos alternativos de sustitución dé como resultado un progreso sustancial en el futuro. 
2. Tras la conclusión de otro estudio de reducidas dimensiones sobre productos químicos 
especialmente interesante para el SCC, puede preverse la elaboración de un borrador de 
directriz obligatoria para las pruebas de fototoxicidad in vitro que se propondrá para su 
aceptación por las autoridades reguladoras. 
3. Se espera que en breve los Estados miembros de la UE y los países miembros de la 
OCDE acepten una nueva directriz sobre pruebas in vitro para absorción percutánea. 
4. Es previsible una aceleración del progreso hacia el desarrollo de métodos in vitro 
normalizados y apropiados para detectar el potencial de sensibilización . 
5. Será absolutamente necesaria una reevaluación de las expectativas de las pruebas de 
irritación ocular (in vivo e in vitro) y, mientras tanto, podrá favorecerse un planteamiento 
más flexible de las pruebas, por ejemplo, aceptando la evaluación de la toxicidad de 
nuevos productos e ingredientes por comparación con el conocimiento de marcadores 
apropiados. 
6. Podrá darse mayor utilidad al hecho de que la tolerancia ocular y la tolerancia cutánea 
de los productos cosméticos acabados puede ser evaluada in vitro, con una condición: el 
conocimiento previo de los datos de toxicidad relativos a los ingredientes y sus 
propiedades fisicoquímicas. Además, la compatibilidad cutánea de los productos 
cosméticos acabados puede ser evaluada en el contexto de estudios clínicos estrictamente 
controlados. 
7. Puede esperarse un buen resultado del estudio ECVAM de validación sobre las pruebas 
para la corrosividad cutánea, que podrá ser utilizado, por ejemplo, para facilitar parte de 
la información considerada imprescindible antes de que se puedan permitir los estudios 
sobre voluntarios humanos. 
21 
8. Se prestará mayor importancia al uso integrado de varios planteamientos distintos (e.g., 
predicciones informáticas, pruebas in vitro) y a las estrategias de pruebas jerárquicas para 
disminuir, perfeccionar y reemplazar la utilización de animales para pruebas. 
La sexta modificación de la Directiva 76/768/CEE supone una oportunidad tínica para realizar 
un progreso notable en la vía hacia la sustitución de las pruebas sobre animales en el terreno 
de los cosméticos. Ya se está logrando tal progreso, pero su continuación dependerá del 
mantenimiento de buenas relaciones y una colaboración eficaz entre todas las partes 
involucradas, es decir, la Comisión y sus comités consultivos, los Estados miembros, la 
industria cosmética y las autoridades reguladoras. 
22 

ISSN 0257-9545 
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