1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Το έγγραφο αυτό συνιστά βοήθηµα τεκµηρίωσης και δεν δεσµεύει τα κοινοτικά όργανα
►B ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ (ΕΚ) αριθ. 1459/98 ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ
της 8ης Ιουλίου 1998
σχετικάµετηθέσπισηµεθόδουαναφοράςγιατονπροσδιορισµότηςβανιλίνηςστοσυµπυκνωµένο
βούτυρο, στο βούτυρο ή στην κρέµα γάλακτος
(ΕΕL193 της 9.7.1998, σ. 16)
Τροποποιείται από:
Επίσηµη Εφηµερίδα
αριθ. σελίδα ηµεροµηνία
►M1Κανονισµός (ΕΚ) αριθ. 175/1999 της Επιτροπής της 26ης Ιανουα-
ρίου 1999 L20 22 27.1.1999
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ (ΕΚ) αριθ. 1459/98 ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ
της 8ης Ιουλίου 1998
σχετικά µε τη θέσπιση µεθόδου αναφοράς για τον προσδιορισµό
της βανιλίνης στο συµπυκνωµένο βούτυρο, στο βούτυρο ή στην
κρέµα γάλακτος
Η ΕΠΙΤΡΟΠΗ ΤΩΝ ΕΥΡΩΠΑΪΚΩΝ ΚΟΙΝΟΤΗΤΩΝ,
Έχοντας υπόψη:
τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Κοινότητας,τον κανονισµό (ΕΟΚ) αριθ. 804/68 του Συµβουλίου, της 27ης
Ιουνίου 1968, περί κοινής οργανώσεως αγοράς στον τοµέα τουγάλακτοςκαιτωνγαλακτοκοµικών προϊόντων(
1),όπωςτροποποι-
ήθηκε τελευταία από τον κανονισµό (ΕΚ) αριθ. 1587/96(2), και
ιδίως το άρθρο 6 και το άρθρο 12 παράγραφος 3,
Εκτιµώντας:ότι στον κανονισµό (ΕΚ) αριθ. 2571/97τηςΕπιτροπής, της15ης
∆εκεµβρίου 1997,σχετικά µετηνπώλησησεµειωµένητιµήβου-τύρου και τη χορήγηση ενισχύσεως στην κρέµα γάλακτος, στοβούτυρο και στο συµπυκνωµένο βούτυρο που π ροορίζονται για
τηνπαρασκευή προϊόντων ζαχαροπλαστικής, παγωτώνκαιάλλωνπροϊόντων διατροφής(
3), προβλέπεται ιχνηθέτηση, σε ορισµένες
περιπτώσεις, της κρέµας γάλακτος, του βουτύρου και τουσυµπυκνωµένου βουτύρου ώστεναδιασφαλίζεται ησωστήτελικήχρήση των εν λόγω προϊόντων·
ότι,λόγωτηςσηµασίαςτηςιχνηθέτησηςγιατηνορθήλειτουργία
του καθεστώτος και προκειµένου να εξασφαλιστεί ίση µεταχεί-ρισητωνεπιχειρηµατιών πουσυµµετέχουν σ’αυτό,είναισκόπιµοναθεσπιστούν κοινές µέθοδοι προσδιορισµού τωνιχνηθετώνπουαναφέρονται στον κανονισµό (ΕΚ) αριθ. 2571/97·
ότι είναι δύσκολο να θεσπιστούν µέθοδοι αναφοράς για όλους
τουςιχνηθέτες ταυτόχρονα· ότιηθέσπιση µεθόδου αναφοράς γιατονπροσδιορισµό τηςβανιλίνηςστοσυµπυκνωµένοβούτυρο, στοβούτυρο ή στην κρέµα γάλακτος συνιστά ένα ακόµη βήµα προςτην κατεύθυνση αυτή·
ότι τα µέτρα που προβλέπο νται στον παρόντα κανονισµό είναι
σύµφωνα µε τη γνώµη της επιτροπής διαχείρισης γάλακτος καιγαλακτοκοµικών προϊόντων,
ΕΞΕ∆ΩΣΕ ΤΟΝ ΠΑΡΟΝΤΑ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟ:
Άρθρο 1
Ηµέθοδος ανάλυσηςπουπεριγράφεται στοπαράρτηµαεφαρµόζε-
ται ως µέθοδος αναφοράς για τον π ροσδιορισµό της βανιλίνης
στοσυµπυκνωµένοβούτυρο, στοβούτυρο ήστηνκρέµα γάλακτοςδυνάµει του κανονισµού (ΕΚ) αριθ. 2571/97.
Το συµπυκνωµένο βούτυρο, το βούτυρο ή η κρέµα γάλακτος
έχουν ιχνηθετηθεί σύµφωναµετοάρθρο 6του κανονισµού (ΕΚ)αριθ. 2571/97 όταν τα λαµβανόµενα αποτελέσµατα ανταποκρίνο-νται στις προδιαγραφές της παραγράφου 8 του παραρτήµατος.
(1)ΕΕL148 της 28. 6. 1968, σ. 13.
(2)ΕΕL206 της 16. 8. 1996, σ. 21.
(3)ΕΕL350 της 20. 12. 1997, σ. 3.
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
Άρθρο 2
Οπαρών κανονισµός αρχίζει ναισχύει τηντρίτη ηµέρα απότη
δηµοσίευσή του στην ΕπίσηµηΕφηµερίδατων ΕυρωπαϊκώνΚοι-
νοτήτων.
Εφαρµόζεται από την 1η Σεπτεµβρίου 1998.
Οπαρώνκανονισµός είναιδεσµευτικός ωςπρος όλαταµέρη του
και ισχύει άµεσα σε κάθε κράτος µέλος.
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ
Προσδιορισµόςτηςπεριεκτικότηταςτουσυµπυκνωµένουβουτύρου,τουβου-
τύρουήτηςκρέµαςγάλακτοςσεβανιλίνηµευγρήχρωµατογραφίαυψηλής
απόδοσης
1.Αντικείµενοκαι πεδίοεφαρµογής
Στη µέθοδο αυτή περιγράφεται διαδικασία π οσοτικού προσδιορι-
σµού τηςβανιλίνης στο συµπυκνωµένο βούτυρο, τοβούτυρο ήτηνκρέµα γάλακτος.
Ηµέθοδος εφαρµόζεται σεδείγµαταπουέχουν ληφθείδυνάµειτου
κανονισµού (ΕΚ) αριθ. 2571/97.
2.Αρχή
Εκχύλισηγνωστήςπ οσότητας δείγµατος µεµείγµαισοπροπανόλης/
αιθανόλης/ακετονιτριλίου (1:1:2). Καταβύθιση του µεγαλυτέρουµέρους των λιπαρών υλών µε ψύξη σε θερµοκρασία −15°Cέως
−20°C, και στη συνέχεια φυγοκέντρηση.
Αραίωσηµενερό καιπροσδιορισµός τηςπεριεκτικότητας σεβανι-
λίνη µε υγρή χρωµατογραφία υψηλής απόδοσης ( HPLC).
3.Εργαστηριακάσκεύηκαι όργανα
Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισµός και ειδικότερα:
3.1. καταψύκτηςµε πεδίο τιµών θερµοκρασίας λειτουργίας −15°Cέως
−20°C·
3.2. σύριγγες µίας χρήσεως χωρητικότητας 2 ml.
3.3. µικροδιηθητικές µεµβράνες µεγέθους πόρων0,45µ m,ανθεκτικέςσε
διάλυµα περιεκτικότητας 5% στο διάλυµα εκχύλισης (4.4)·
3.4. σύστηµαυγρήςχρωµατογραφίαςαποτελούµενο απόαντλία(παροχή
0,1ml/min),διάταξηέγχυσης εγχυόµενη π οσότητα 20µ l,αυτόµατη
ήχειροκίνητη, ανιχνευτήυπεριώδους ακτιν οβολίας (λειτουργία σε
µήκος κύµατος 306 nm,0,01AUπλήρους κλίµακας)καταγραφέα ή
ολοκληρωτή και θερµοστάτη στήλης που λειτουργεί στους 25 °C.
3.5. Αναλυτική στήλη (µήκος 250 mmκαι εσωτερικής διαµέτρου 4,6
mm),ηοποία έχει πληρωθεί µε LiChrospher RP 18(Merck,5µm)ή
ισοδύναµο υλικό·
3.6. Στήληασφαλείας (µήκους 20 mmκαιεσωτερικής διαµέτρου 3 mm
περίπου), ηοποίαέχει πληρωθείσεξηράκατάστασηµε Perisorb RP
18 (30-40 µ m) ή ισοδύναµο υλικό.
4.Αντιδραστήρια
Όλατααντιδραστήρια πρέπει ναείναιαναγνωρισµένης αναλυτικής
καθαρότητας.
4.1. Ισοπροπανόλη4.2. Αιθανόλη 96% ( v/v)
4.3. Ακετονιτρίλιο4.4. ∆ιάλυµα εκχύλισης
Μείγµα ισοπροπανόλης (4.1), αιθανόλης (4.2) και ακετονιτριλίου
(4.3) σε αναλογία 1:1:2 (ν/ν)
4.5. Βανιλίνη (4-υδροξυ-3-µεθοξυβενζαλδεΰδη)4.5.1. Μητρικό διάλυµα βανιλίνης (=500 µ g/ml)
Σε ογκοµετρική φιάλη των100 mlζυγίζονται µε ακρίβεια 0,1 mg
περίπου 50 mg(CM mg)βανιλίνης(4.5).Π ροστίθενται 25 mlδιαλύ-
µατοςεκχύλισης(4.4)καιοόγκοςσυµπληρώνεται µενερόµέχριτηχαραγή.
4.5.2. Πρότυπο διάλυµα βανιλίνης (=10 µ g/ml).
Αναρροφώνται µεσιφώνιο 5,00 mlµητρικού διαλύµατος βανιλίνης
(4.5.1) και φέρονται σε ογκοµετρική φιάλη των 250 ml. Ο όγκος
συµπληρώνεται µε νερό µέχρι τη χαραγή.
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼B
4.6. Μεθανόλη, καθαρότητας για HPLC
4.7. Παγόµορφο οξικό οξύ4.8. Νερό, καθαρότητας για HPLC
4.9. Κινητή φάση HPLC
Σε ογκοµετρική φιάλη των1000 mlαναµειγνύονται 300 mlµεθα-
νόλης (4.6), περίπου 500 mlνερού (4.8) και 20,0 mlοξικού οξέος
(4.7) και ο όγκος συµπληρώνεται µε νερό (4.8) µέχρι τη χαραγή.Ακολουθεί διήθηση µε ηθµό 0,45 µ m.
5.Εκτέλεση
5.1.Προετοιµασία του δείγµατος δοκιµής
5.1.1. Βούτυρο
Το δείγµα θερµαίνεται έως ότου αρχίσει να τήκεται. Πρέπει να
αποφεύγεται τοπική υπερθέρµανση άνωτων40 °C.Όταντοδείγµα
µαλακώσει αρκετά οµογενοποιείται µε ανακίνηση. Το βούτυροαναδεύεται επί 15 sπριν από τη δειγµατοληψία. Σε ογκοµετρική
φιάλητων100 mlζυγίζονται,µεακρίβεια 1 mg,περίπου 5 g(SM g)
βουτύρου.
5.1.2. Συµπυκνωµένο Βούτυρο
Ο περιέκτης µε το συµπυκνωµένο βούτυρο τοποθετείται αµέσως
πριν από τη δειγµατοληψία σε πυραντήριο στους 40-50 °Cµέχρις
πλήρους τήξεως. Το δείγµα αναµιγνύεται µε περιστροφικές κινή-σεις ήανάδευση καιαποφεύγεται οσχηµατισµός φυσαλίδωναέραλόγω υπερβολικής ζωηρήςανάδευσης. Σεογκοµετρική φιάλητων100mlζυγίζονται, µε ακρίβεια 1 mg, περίπου 4 g(SMσεg)
συµπυκνωµένου βουτύρου.
5.1.3. Κρέµα γάλακτος
Το δείγµα θερµαίνεται σε υδατόλουτρο ή επωαστήρα στους 35-
40°C. Η λιπαρή ύλη κατανέµεται οµοιογενώς µε περιστροφικές
κινήσεις και,εάν είναι αναγκαίο,µεανάδευση. Τοδείγµα ψύχεταιταχέωςστους 20 ±2°C.Πρέπει ναεµφανίζει οµοιογένεια. Σεαντί-
θετη περίπτωση η διαδικασία επαναλαµβάνεται. Σε ογκοµετρικήφιάλητων100 mlζυγίζονται,µεακρίβεια 1 mgπερίπου 10 g(SM g)
κρέµας γάλακτος.
5.2.Παρασκευή του διαλύµατος δοκιµής
Στηζυγισµένη π οσότητα δείγµατος (5.1.1,5.1.2ή5.1.3).π ροστίθε-
νταιπερίπου 75 mlδιαλύµατοςεκχύλισης(4.4).Ηφιάληαναδεύεται
ήανακινείται ζωηράεπί 15 minπερίπου καιοόγκος συµπληρώνε-
ταιµεδιάλυµαεκχύλισης (4.4)µέχρι τηχαραγή.Απότοεκχύλισµααυτόµεταγγίζονται 10 mlπερίπου σε δοκιµαστικό σωλήναεφοδια-
σµένο µεπώµα.Οδοκιµαστικός σωλήναςτοποθετείται στον κατα-ψύκτη(3.1)καιαφήνεται σε ηρεµία επί 30 minπερίπου. Τοψυχρό
εκχύλισµα φυγοκεντρείται επί 5 minστις 2000 rpmπερίπου και
ακολουθεί αµέσως απόχυση.
5.3.Βαθµονόµηση
Αναρροφώνται µεσιφώνιο 5,00 mlπροτύπου διαλύµατος βανιλίνης
(4.5.2)καιφέρονται σε ογκοµετρική φιάλητων100 ml.Προστίθε-
νται5,0mlδιαλύµατοςεκχύλισης (4.4)καιοόγκος συµπληρώνεται
µέχρι τηχαραγήµενερό. Ηπεριεκτικότητα τουδιαλύµατοςαυτούσε βανιλίνη είναι 0,5 µ g/ml.
5.4.Προσδιορισµός µε HPLC
Το χρωµατογραφικό σύστηµα αφήνεται να σταθεροποιηθεί επί 30
minπερίπου. Εγχέεται τοπρότυπο διάλυµα(5.3).Ηεργασία επανα-
λαµβάνεται έωςότου ηδιαφορά ωςπρος τοεµβαδόν ήτούψοςτωνκορυφών µεταξύ δύο διαδοχικών εγχύσεων είναι µικρότερη από2%. Στις συγκεκριµένες συνθήκες ο χρόνος κατακράτησης τηςβανιλίνηςείναι9 minπερίπου. Τοπρότυποδιάλυµα(5.3)υποβάλλε-
ταισε ανάλυση εις διπλούν µεέγχυση 20µ l.Εγχέονται 20µ lτων
διαλυµάτων δοκιµής (5.2). Π ροσδιορίζεται το εµβαδόν ή το ύψος
της λαµβανόµενης κορυφής της βανιλίνης. Η ανάλυση του προτύ-που διαλύµατος (5.3) επαναλαµβάνεται εις διπλούν µετά από 10εγχύσεις δειγµάτων δοκιµής (5.2).
6.Υπολογισµόςτων αποτελεσµάτων
Υπολογίζεται ο µέσος όρος των εµβ αδών (ή υψών) ( AC)τ ω ν
κορυφώντηςβανιλίνηςπουαντιστοιχούν στιςδιπλέςεγχύσεις προ-
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
τύπου διαλύµατος γιακάθεπαρτίδα διαλυµάτωνδοκιµής (τέσσερις
περιοχές συνολικά).
Υπολογίζεται ο συντελεστής απόκρισης ( R):
R=AC/CM
όπ ο υCMείναι η µάζα της βανιλίνης σε mg(4.5.1).
Η περιεκτικότητα ( C) του δείγµατος δοκιµής σε βανιλίνη ( mg/kg)
δίδεται από τον τύπο:
C=AS×20×0,96
SM×R
όπου:AS= το εµβαδόν της κορυφής της βανιλίνης του δείγµατος
δοκιµής
▼
M1
SM= η µάζα του δείγµατος δοκιµής σε g(5.1.1, 5.1.2 ή 5.1.3).
Όταν η κρέµα γάλακτος αναλύεται για τον π ροσδιορισµό
της βανιλλίνης, η συγκέντρωση του ιχνηθέτη πρέπει ναεκφράζεται σε mgιχνηθέτη/ kgλιπαρής ουσίας γάλακτος,
µετον πολλαπλασιασµό του Cεπί 100/f,όπου το fείναι η
περιεκτικότητα σελιπαρές ουσίες τηςκρέµας γάλακτοςσεποσοστό τοις ε κατό (m/m).
▼
B
20 = ο συντελεστής αραίωσης του προτύπου δείγµατος και του
δείγµατος δοκιµής
0,96 = ο διοθρωτικός συντελεστής για την περιεκτικότητα της
πρώην αραίωσης του δείγµατος δοκιµής σε λιπαρές ύλες
Σηµείωση:
Αντίτωνεµβαδών, είναι δυνατόν ναχρησιµοποιηθούν ταύψητων
κορυφών (βλέπε σηµείο 8.3).
7.Ακρίβειατηςµεθόδου
7.1. Ενδοεργαστηριακή επαναληπτικότητα ( r)
Η διαφορά µεταξύ των αποτελεσµάτων δύο π ροσδιορισµών που
εκτελούνται µε τη µικρότερη εφικτή χρονική διαφορά σε πανο-µοιότυποελεγχόµενο υλικό,απότονίδιοτεχνικόπουχρησιµοποιείτον ίδιο εξοπλισµό δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 16 mg/kg.
7.2. ∆ιεργαστηριακή επαναληπτικότητα ( R)
Η διαφορά µεταξύ των αποτελεσµάτων δύο π ροσδιορισµών που
εκτελούνται σε πανοµοιότυπο ελεγχόµενο υλικό από τους τεχνι-κούς διαφορετικών εργαστηρίων που χρησιµοποιούν διαφορετικόεξοπλισµό, δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 27 mg/kg.
8.Όρια ανοχής
8.1. Από το ιχνηθετηµένο προϊόν λαµβάνονται τρία δείγµατα για τον
έλεγχο της οµοιογένειας.
8.2. Ότανοιχνηθέτηςέχει ληφθείείτεαπόφυσικήείταιαπόσυνθετική
βανίλια:
▼
M1
8.2.1. Το ποσοστό ενσω µάτωσης της 4-υδροξυ-3-µεθοξυβενζαλδεΰδης
είναι 250 γραµµάρια ανά τόνο συµπυκνωµένου βουτύρου ή βουτύ-ρου. Όταν ιχνοθετείται η κρέµα γάλακτος, το π οσοστό ενσω-
µάτωσης είναι 250 γραµµάρια ανά τόνο λιπαρής ουσίας γάλακτος.
8.2.2. Οι τιµές τωντριών δειγµάτων που προκύπτουν από την ανάλυση
τουπροϊόντος χρησιµοποιούνται γιαέλεγχο τουπ οσοστού καιτης
οµοιογένειας ενσωµάτωσης του ιχνηθέτη και η χαµηλότερη απόαυτέςτιςτιµέςσυγκρίνεται µετιςακόλουθες οριακές τιµές[λαµβα-νοµένης υπόψη της κρίσιµης διαφοράς που αντιστοιχεί σε τιµήπιθανότητας 95% ( CrD95)]:
—221,0mg/kg(95% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης),
—159,0mg/kg(70% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης).
Ησυγκέντρωση τουιχνηθέτηστοδείγµααπότοοποίοπροκύπτει η
χαµηλότερη τιµή χρησιµοποιείται µαζί µε παρεµβολή µεταξύ τωντιµών 221,0 mg/kgκαι 159,0 mg/kg.
1998R1459 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 7
▼B
8.3. Ότανοιχνηθέτηςέχει ληφθείαποκλειστικά απόκαρπούς βανίλιας
ή από πλήρη εκχυλίσµατα αυτών:
▼M1
8.3.1. Το ποσοστό ενσω µάτωσης της 4-υδροξυ-3-µεθοξυβενζαλδεΰδης
είναι 100 γραµµάρια ανά τόνο συµπυκνωµένου βουτύρου ή βουτύ-ρου. Όταν προσδιορίζεται η κρέµα γάλακτος, το π οσοστό ενσω-
µάτωσης είναι 100 γραµµάρια ανά τόνο λιπαρής ουσίας γάλακτος.
8.3.2. Οι τιµές τωντριών δειγµάτων που προκύπτουν από την ανάλυση
τουπροϊόντος χρησιµοποιούνται γιαέλεγχο τουπ οσοστού καιτης
οµοιογένειας ενσωµάτωσης του ιχνηθέτη και η χαµηλότερη απόαυτέςτιςτιµέςσυγκρίνεται µετιςακόλουθες οριακές τιµές[λαµβα-νοµένης υπόψητηςκρίσιµης διαφοράς πουαντιστοιχεί σεεπίπεδοπιθανότητας 95% ( CrD95)]:
—79,0mg/kg(95% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης),
—54,0mg/kg(70% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης).
Ησυγκέντρωση τουιχνηθέτηστοδείγµααπότοοποίοπροκύπτει η
χαµηλότερη τιµή χρησιµοποιείται µαζί µε παρεµβολή µεταξύ τωντιµών 79,0 mg/kgκαι 54,0mg/kg.
▼
B
9.Σηµειώσεις
9.1. Η ενδοεργαστηριακή επαναληπτικότητα rείναι η τιµή κάτω από
την οποία η διαφορά, σε απόλυτες τιµές, µεταξύ των αποτελε-σµάτωνδύοµεµονωµένων δοκιµών που έχουν εκτελεστεί µεπανο-µοιότυποελεγχόµενο υλικό,µετηνίδιαµέθοδοκαιτιςίδιεςσυνθή-κες (ίδιος εξοπλισµός, ίδιο εργαστήριο, µικρή χρονική διαφορά)αναµένεται ναπροκύψει µεδεδοµένη πιθανότητα.Εκτόςαντίθετωνυποδείξεων, η πιθανότητα είναι 95%.
9.2. Η ενδοεργαστηριακή επαναληπτικότητα Rείναι η τιµή κάτω από
τηνοποία ηδιαφορά σεαπόλυτες τιµέςµεταξύαποτελεσµάτων δύοµεµονωµένων δοκιµών που έχουν εκτελεστεί µε πανοµοιότυποελεγχόµενο υλικό,µετηνίδιαµέθοδοαλλάµεδιαφορετικές συνθή-κες (διαφορετικοί τεχνικοί, διαφορετικός εξοπλισµός, διαφορετικάεργαστήρια ή/καιδιαφορετικός χρόνος) αναµένεται ναπροκύψειµεδεδοµένη πιθανότητα. Εκτός αντίθετων υποδείξεων, η πιθανότηταείναι 95%.
9.3. Ηανάκτησητηςβανιλίνηςπουέχει π ροστεθεί στοε πίπεδο των250
mg/kgβουτυρελαίου κυµαίνεται από97,0έως 103,8.∆ιαπιστώθηκε
ότι ηµέση περιεκτικότητα ήταν99,9%µετυπικήαπόκλιση 2,7%.
9.4. Τοπρότυπο διάλυµαπεριέχει διάλυµαεκχύλισης σε αναλογία 5%
για την αντιστάθµιση της διεύρυνσης της κορυφής που οφείλεταιστην παρουσία του διαλύµατος εκχύλισης 5% των δειγµάτωνδοκιµής. Αυτό επιτρέπει τον π οσοτικό προσδιορισµό µε µέτρηση
του ύψους της κορυφής.
9.5. Ηανάλυση βασίζεται σε καµπύληβαθµονόµησης που είναι ευθεία
γραµµήδιερχόµενη απότοµηδέν.Πριναπότηνπρώτηανάλυσηθαπρέπει να ελέγχεται η γραµµικότητα της καµπύλης χρησιµοποιώ-ντας κατάλληλες αραιώσεις του προτύπου διαλύµατος (4.5.2). Οέλεγχος αυτός θα πρέπει να επαναλαµβάνεται σε τακτά χρονικάδιαστήµατα καθώς και µετά από οποιαδήποτε µετατροπή ή επι-σκευή του εξοπλισµού HPLC.