1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Το έγγραφο αυτό συνιστά βοήθηµα τεκµηρίωσης και δεν δεσµεύει τα κοινοτικά όργανα
►B ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ (ΕΚ) αριθ. 86/94 ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ
της 19ης Ιανουαρίου 1994
περί θεσπίσεως µεθόδου αναφοράς για τν προσδιορισµό σιτοστερόλης και στιγµαστερόλης στο
βούτυρο
(ΕΕL17 της 20.1.1994, σ. 7)
Τροποποιείται από:
Επίσηµη Εφηµερίδα
αριθ. σελίδα ηµεροµηνία
►M1Κανονισµός (ΕΚ) αριθ. 175/1999 της Επιτροπής της 26ης Ιανουα-
ρίου 1999 L20 22 27.1.1999
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ (ΕΚ) αριθ. 86/94 ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ
της 19ης Ιανουαρίου 1994
περί θεσπίσεως µεθόδου αναφοράς για τν προσδιορισµό σιτοστε-
ρόλης και στιγµαστερόλης στο βούτυρο
Η ΕΠΙΤΡΟΠΗ ΤΩΝ ΕΥΡΩΠΑΪΚΩΝ ΚΟΙΝΟΤΗΤΩΝ,
Έχοντας υπόψη:
τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Κοινότητας,τον κανονισµό (ΕΟΚ) αριθ. 804/68του Συµβουλίου της27ηςΙου-
νίου 1968 περί της κοινής οργανώσεως αγοράς στον τοµέα τουγάλακτοςκαιτωνγαλακτοκοµικών προϊόντων(
1),όπωςτροποποι-
ήθηκετελευταία απότον κανονισµό (ΕΟΚ) αριθ. 2071/92(2),και
ιδίως το άρθρο 6 παράγραφος 7,
Εκτιµώντας:ότι το βούτυρο ενδέχεται να ιχνηθετηθεί και τα ιχνηθετηµένα
προϊόντα πρέπει ναελέγχονται σύφωναµεταάρθρα 3και6τουκανονισµού (ΕΟΚ) αριθ. 570/88 της Επιτροπής(
3), όπως τροπο-
ποιήθηκε τελευταία από τον κανονισµό (ΕΚ) αριθ. 3049/93(4)·
ότι η αυστηρή τήρηση των όρων που αφορούν την ιχνηθέτηση
του βουτύρου είναι αναγκαία για να αποφευχθεί ο κίνδυνος µηεπιτρεπόµενης χρησιµοποίησης επιδοτούµενου βουτύρου·
ότι, λαµβανοµένης υπόψη τηςσηµασίας τηςιχνηθέτησης, γιατη
σωστήλειτουργία τουενλόγωσχεδίου είναιαναγκαίοναθεσπι-στούν κοινέςµέθοδοι γιατονεντοπισµό όλωντωνιχνηθετώνπουαπαιτούνται απότο εν λόγω σχέδιο που εφαρµόζονται κατάόλωντωνιχνηθετώνπουαπαιτούνταιαπότοενλόγωσχέδιοπουεφαρ-µόζονται κατά τον ίδιο τρόπο σε όλη την Κοινότητα· ότι κατ’αυτότοντρόπο θαεξασφαλισθεί, κυρίως,ίσηµεταχείρηση όλωντωνσυναλλασσόµενων φορέων που έχουν πρόσβαση στα σ χέδια
αυτάθαεξαλειφθούν άνισοι όροιανταγωνισµούπουενδέχεται να
προκύπτουν, προςτοπαρόν,λόγωδιαφορετικών εθνικώνµεθόδωνανάλυσης·
ότι η µέθοδος αναφοράς για τον π ροσδιορισµό της στιγµαστε-
ρόλης καιτηςσιτοστερόλης στοβουτυρέλαιο θεσπίστηκε µετονκανονισµό (ΕΟΚ) αριθ. 3942/92τηςΕπιτροπής(
5)·ότι ηµέθοδος
αυτήείναιδυνατόνναεφαρµοσθεί µεµιαµικρήτροποποίηση γιατον καθορισµό των ιχνηθετών στερόλης στο βούτυρο·
ότι πρέπει να καθοριστούν η ακρίβεια της µεθόδου και τα όρια
ανοχής·
ότι τα µέτρα που π ροβλέπονται στον παρόντα κανονισµό είναι
σύµφωναµετηγνώµητηςΕπιτροπής ∆ιαχείρισης Γάλακτος καιΓαλακτοκοµικών Προϊόντων,
ΕΞΕ∆ΩΣΕ ΤΟΝ ΠΑΡΟΝΤΑ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟ:
Άρθρο 1
Ηµέθοδος αναφοράς γιατον π ροσδιορισµό τηςπεριεκτικότητας
τουβουτύρου σεστιγµαστερόλη ήβ-σιτοστερόλη σύµφωναµετοάρθρο6 ►
M1τουκανονισµού (ΕΚ)αριθ.2571/97 ◄,περιγράφε-
ται στο παράρτηµα.
(1)ΕΕ αριθ. L148 της 28. 6. 1968, σ. 13.
(2)ΕΕ αριθ. L215 της 30. 7. 1992, σ. 64.
(3)ΕΕ αριθ. L55 της 1. 3. 1988, σ. 31.
(4)ΕΕ αριθ. L273 της 5. 11. 1993, σ. 7.
(5)ΕΕ αριθ. L399 της 31. 12. 1992, σ. 29.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
Τοβούτυρο θεωρείται ορθά ιχνηθετηµένο εάν ταληφθέντααπο-τελέσµατα είναισύµφωναµετιςπροϋποθέσεις πουορίζονται στοσηµείο 8 του παραρτήµατος.
Άρθρο 2
Οπαρών κανονισµός αρχίζει ναισχύει τηντρίτη ηµέρα απότη
δηµοσίευσή του στην Επίσηµη Εφηµερίδα των Ευρωπαϊκών Κοι-
νοτήτων.
Εφαρµόζεται από την 1η Απριλίου 1994.
Οπαρώνκανονισµός είναιδεσµευτικός ωςπρος όλαταµέρητου
και ισχύει άµεσα σε κάθε κράτος µέλος.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ
ΠΡΟΣ∆ΙΟΡΙΣΜΟΣ ΣΙΤΟΣΤΕΡΟΛΗΣ Η ΣΤΙΓΜΑΣΤΕΡΟΛΗΣ ΣΕ
ΒΟΥΤΥΡΟ ΜΕ ΑΕΡΙΟ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΤΡΙΧΟΕΙ∆ΟΥΣΣ ΤΗΛΗΣ
1. ΑΝΤΙΚΕΙΜΕΝΟ ΚΑΙ ΠΕ∆ΙΟ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ
Ηµέθοδος περιγράφει µιαδιαδικασίαπ οσοτικού σιτοστερόλης ή
στιγµαστερόλης σε βούτυρο. Ως σιτοστερόλη λαµβάνεται τοάρθοισµα τηςβ-σιτοστερόλης καιτης22-διυδρο-β-σιτοστερόλης·άλλεςσιτοστερόλες θεωρούνται αµελητέες. Εφαρµόζεται σεδείγ-µατα ληφθέντα σύµφωνα µε τον κανονισµό (ΕΟΚ) αριθ. 570/88.
2. ΑΡΧΗ
Τοαιθανολικόδιάλυµατουβουτύρου σαπωνοποιείται µευδροξεί-
διοτουκαλίουκαιταµησαπωνοποιήσιµα εκχυλίζονταιµεδιαιθυ-λαιθέρα.
Οιστερόλες µετατρέπονται σε τιµεθυλο-σιλυλο-αιθέρες καιανα-
λύονται µε αέριο χρωµατογραφία τριχοειδούς στήλης µε βετου-λίνη ως εσωτερικό πρότυπο.
3. ΣΥΣΚΕΥΕΣ
3.1. Φιάλητων150 mlγιατησαπωνοποίηση εφοδιασµένη µεεσµυρι-
σµένο κάθετο ψυκτήρα.
3.2. Χοάνες διαχωρισµού των 500 ml.
3.3. Φιάλες των 250 ml.
3.4. Χοάνες εξι σορρόπησης πίεσης των250 mlήπαερεµφερείς, προς
συλλογή του απ ορριπτόµενου διαιθυλαιθέρα.
3.5. Υάλινηστήλητων350 mm ×20mm,εφοδισµένη µευάλινοπορώ-
δες διάφραγµα.
3.6. Υδρόλουτρο ή θερµοστατούµενο µανδύα.3.7. Φιαλίδια αντίδρασης των 2 ml.
3.8. Αεριοχρωµατογράφος, που να δέχεται τριχοειδή στήλη, εφοδια-
σµένος µε σύστηµα διαχωρισµού ( splitting) αποτελούµενο από:
3.8.1. θερµοστατικό θάλαµο για στήλες ικανό προς διατήρηση της
επιθυµητής θερµοκρασίας µε ακρίβεια ±1°C·
3.8.2. είσοδο ρυθµιζόµενης θερµοκρασίας
3.8.3. ανιχνευτή ιονισµού φλόγας και ηλεκτρόµετρο-ενισχυτή·3.8.4. ολοκληρωτή-καταγραφέα κατάλληλοπρος χρήση µετοηλεκτρό-
µετρο-ενισχυτή (3.8.3).
3.9. Τριχοειδής στήληαπόσυντετηγµένο πυρίτιο( fused-silica)πλήρως
επικαλυµµένη µεΒΡ1ήισοδύναµοσεοµοιόµορφο πάχος0,25µ m·
η στήλη πρέπει να είναι ικανή να διαχωρίζει τριµεθυλοσίλυλοπαράγωγα λανοστερόλης και σιτοστερόλης· κατάλληλη στήληΒΡ1 µήκους 12 mκαι εσωτερικής διαµέτρου 0,2 mm.
3.10. Μικροσύριγγα του1µ l,γιααέριαχρωµογραφία,µεσκληρυνθείσα
βελόνα.
4. ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ
Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να είναι αναγνωρισµένης αναλυ-
τικής καθαρότητας. Το χρησιµοποιούµενο νερό πρέπει να είναιαπεσταγµένο ή ισοδύναµης, τουλάχιστον, καθαρότητας.
4.1. Αιθανόλη, τουλάχιστον 95 %.4.2. Υδροξείδιο του καλίου, διάλυµα60%:διαλύονται 600 gυδροξει-
δίου του καλίου (τουλάχιστον 85 %) σε νερό και ο όγκοςσυπληρώνεται µέχρις ενός λίτρου µε νερό.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼B
4.3. Βετουλίνη καθαρότητας τουλάχιστον 99 %.
4.3.1. ∆ιαλύµατα εσωτερικού προτύπου. Βετουλίνη σε διαιθυλαιθέρα
(4.4).
4.3.1.1. Η συγκέντρωση του χρησιµοποιούµενου διαλύµατος βετουλίνης
προς προσδιορισµό τηςσιτοστερόλης πρέπει ναείναι 1,0 mg/ml.
4.3.1.2. Η συγκέντρωση του χρησιµοποιούµενου διαλύµατος βετουλίνης
προς προσδιορισµό της στιγµαστερόλης πρέπει να είναι 0,4mg/ml.
4.4. ∆ιαιθυλαιθέρας, αναλυτικής καθαρότητας (απηλλαγµένος υπερο-
ξειδίων ή υπολειµµάτων).
4.5. Θειικό νάτριο, άνυδρο, κοκκώδες, προξηρανθέν στους 102 °Cεπί
δύο ώρες.
4.6. Αντιδραστήριο σιλυλίωσης, για παράδειγµα TRI-SIL(διαθέσιµο
από την Pierce Chemical Co .,CatΝο. 49001) ή ισοδύναµο (ΠΡΟ-
ΣΟΧΗ: το TRI-SILείναι εύφλεκτο, τοξικό, διαβρωτικό και
πιθανώς καρκινογόνο. Το εργοστηριακό π ροσωπικό πρέπει να
είναι εξοικειωµένο µεταστοιχεία ασφαλείας του TRI-SILκαινα
λαµβάνει τις απαραίτητες προφυλάξεις).
4.7. Λανοστερόλη.4.8. Σιτοστερόλη γνωστής καθαρότητας τουλάχιστον 90 % (Ρ).
Σηµείωση1:Ηκαθαρότητα τωνχρησιµοποιούµενων προς βαθµο-
νόµηση πρότυπων ουσιών πρέπει να πρσδιοριστεί µε τη µέθοδοτηςκανονικοποίησης. Υποτίθεται ότιόλες οιστερόλες πουυπάρ-χουν στο δείγµα εµφανίζονται στο χρωµατογράφηµα, ότι ησυνο-λική επιφάνεια των κορυφών αντιπ ροσωπεύει το 100 % των
συστατικών στερολών και ότι οι στερόλες έχουν την ίδια από-κριση στον ανιχνευτή. Η γραµµικότητα του συστήµατος πρέπεινα επαληθεύεται στις συγκεντρεις που ενδιαφέρουν.
4.8.1. Πρότυπο διάλυµα σιτοστερόλης —παρασκευάζεται διάλυµα
περιέχον, µεακρίβεια 0,001 mg/ml,περίπου 0,5 mg/ml(W
1)σιτο-
στερόλης (4.8) σε διαιθυλαιθέρα (4.4).
4.9. Στιγµαστερόλη γνωστής καθαρότητας, τουλάχιστον 90 % (Ρ).4.9.1. Πρότυπο διάλυµα στιγµαστερόλης παρασκευάζεται διάλυµα
περιέχον, µεακρίβεια 0,001 mg/ml,περίπου 0,2 mg/ml(W
1)στιγ-
µαστερόλης (4.9) σε διαιθυλαιθέρα (4.4).
4.10. Μείγµαελέγχου διαχωριστικήςικανότητας.Παρασκευάζεται διά-
λυµαπεριέχον 0,05 mg/mlλανοστερόλης (4.7)και0,5 mg/mlσιτο-
στερόλης (4.8) σε διαιθυλαιθέρα (4.4).
5. ΠΟΡΕΙΑ ΕΡΓΑΣΙΑΣ
5.1. Παρασκευή πρότυπων διαλυµάτων χρωµατογραφίας. Το διάλυµα
εσωτερικού πρότυπου (4.3.1) πρέπει να π ροστεθεί στο ανάλογο
πρότυπο διάλυµαστερόλης ταυτόχρονα µετηνπ ροσθήκη τουκαι
στο σαπωνοποιηθέν δείγµα (5.2.2).
5.1.1. Πρότυπο χρωµατογραφικό διάλυµασιτοστερόλης· µεταφέρεται 1
mlπρότυπου διαλύµατοςσιτοστερόλης (4.8.1)σεκαθένα απόδύο
φιαλίδιααντίδρασης (3.7)καιοδιαιθυλαιθέρας αποµακρύνεται µερεύµα αζώτου. Π ροστίθεται 1 mlδιαλύµατος εσωτερικού πρότυ-
που (4.3.1.1)καιοδιαιθυλαιθέρας αποµακρύνεται µερεύµα αζώ-του.
5.1.2. Πρότυπο χρωµατογραφικό διάλυµαστιγµαστερόλης: µεταφέρεται
1mlπρότυπου διαλύµατοςστιγµαστερόλης (4.9.1)σεκαθένα από
δύοφιαλίδιααντίδρασης (3.7)καιοδιαιθυλαιθέρας αποµακρύνε-ται µε ρεύµα αζώτου. Π ροστίθεται 1 mlδιαλύµατος εσωτερικού
πρότυπου (4.3.1.2)καιοδιαιθυλαιθέρας αποµακρύνεται µερεύµααζώτου.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
5.2. Παρασκευή των µη σαπωνοποιήσιµων.
5.2.1. Τήκεταιτοδείγµατουβουτύρου σεθερµοκρασία όχιµεγαλύτερη
από35 °C,αναµειγνύεται καλάµεανάδευση,ζυγίζεταιµεπ ροσέγ-
γιση1mg,1gπερίπου βουτύρου ( W2)σεφιάλητων150 ml(3.1).
Προστίθενται 50 mlαιθανόλης (4.1) και 10 mlδιαλύµατος υδρο-
ξειδίου τουκαλίου(4.2).Π ροσαρµόζεται ο κάθετος ψυκτήραςκαι
το όλο θερµαίνεται στους 75 °Cεπί 30 λεπτά. Ο ψυκτήρας απο-
συνδέεται και η φιάλη ψύχεται σε θερµοκρασία περιβάλλοντος.
5.2.2. Προστίθεται στη φιάλη1,0 mlδιαλύµατος εσωτερικού πρότυπου
(4.3.1.1)εάνπρόκειται ναπ ροσδιοριστεί σιτοστερόλη, ή(4.3.1.2),
εάν πρόκειται ναπ ροσδιοριστεί στιγµαστερόλη. Γίνεται πλήρης
ανάµειξη. Το περιεχόµενο της φιάλης µεταφέρεται π οσοτικά σε
διαχωριστικήχοάνητων500 ml(3.2),καιεκπλύεται στησυνέχεια
ηφιάληµε50 mlνερού και250 mlδιαιθυλαιθέρα(4.4).Ηδιαχωρι-
στική χοάνη αναικινείται ζωηράεπί δύολεπτά καιαφήνονται οιφάσεις ναδιαχωριστούν. Ηκατώτερη υδατικήστοιβάδα αποχύνε-ταικαιηστοιβάδα του αιθέρα εκπλύεται µεανάδευση µετέσσε-ρις διαδοχικές δόσεις νερού των 100 ml.
Σηµείωση 2: Είναι ουσιώδες, προς αποφυγή σχηµατισµού
γαλακτώµατος,ναεκτελεστούν ήπιαοιδύοπρώτες εκπλήσεις µενερό (10αναστροφές). Ητρίτη έκπλυση µπορεί ναπραγµατοποι-ηθεί µεζωηρήανάδευση επί 30δευτερόλεπτα. Εάνσχηµατιστείγαλάκτωµα µπορεί να δισπασθεί µε την π ροσθήκη 5 έως 10 ml
αιθανόλης. Εάνπ ροστεθείαιθανόλη, πρέπει ναεκτελεστούν δύο
ακόµα ζωηρές εκπλύσεις µε νερό.
5.2.3. Η καθαρή, απαλλαγµένη σάπωνος στοιβάδα αιθέρα διαβιβάζεται
µέσα από υάλινη στήλη (3.5) περιέχουσα 30 gάνυδρου θειικού
νατρίου (4.5). Ο αιθέρας συλλέγεται σε φιάλη των250 ml(3.3).
Προστίθεται 1 σφαιρίδιο βρασµού και ακολουθεί εξάτµιση σχε-δόνµέχρι ξηρού σευδρόλουτρο ήθερµοστατούµενο µανδύα,λαµ-βάνοντας µέριµνα γιατησυλλογή τωναπ ορριπτόµενων διαλυτών.
Σηµείωση 3: Εάν τα εκχυλίσµατα του δείγµατος ξηραθούν
πλήρωςσε πολύ υψηλήθερµοκρασία, πιθανόν ναεπέλθουν απώ-λειες στερόλης.
5.3. Παρασκευή τριµεθυλο-σιλυλο-αιθέρων.
5.3.1. Το αιθερικό διάλυµα που παρέµεινε στη φιάλη µεταφέρεται σε
φιαλίδιο αντίδρασης των2 ml(3.7) µε 2 mlδιαιθυλαιθέρα και ο
αιθέρας αποµακρύνεται χρησιµοποιώντας ρεύµα αζώτου.Ηφιάληεκπλύεται σε δύο ακόµη δόσεις διαιθυλαιθέρα των 2 ml,π ο υ
µεταφέρονται στο φιαλίδιο και αποµακρύνεται ο αιθέρας µεάζωτο κάθε φορά.
5.3.2. Τοδείγµασιλυλιούται µεπ ροσθήκη 1 ml TRI-SIL(4.6).Τοφιαλί-
διο κλείνεται και αναδεύεται ζωηρά ώστε να επέλθει διάλυση.Εάνηδιάλυσηδενείναιπλήρης,θερµαίνεται στους 65έως70 °C.
Αφήνεταιναηρεµήσει επίτουλάχιστον 5λεπτάπρινενωθείστοναεριοχρωµατογράφο. Τα πρότυπα σιλυλιούνται κατά τον ίδιοτρόπο µε τα δείγµατα. Το µείγµα ελέγχου της διαχωριστικήςικανότητας(4.10)σιλυλιούταικατάτονίδιοτρόποµεταδείγµατα.
Σηµείωση4:Ησιλυλίωση πρέπει ναλάβει χώρα σε περιβάλλον
απηλλαγµένο απόνερό. Ηµηπλήρης σιλυλίωση τηςβετουλίνηςεντοπίζεται από µια δεύτερη κορυφή κοντά σε αυτή της βετου-λίνης.
Η παρουσία αιθανόλης στο στάδιο της σιλυλίωσης θα έχει επί-
δραση στη σιλυλίωση. Αυτό µπορεί να προκύψει από ανεπαρκήέκπλυσηκατάτοστάδιοεκχύλισης.Εάντοπ ρόβληµα αυτόεπιµέ-
νει, µιαπέµπτη έκπλυση, µεζωηρήανάδευση επί 30δευτερόλε-πτα, µπορεί να εισαχθεί στο στάδιο εκχύλισης.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 7
▼B
5.4. Αεριοχρωµατογραφική ανάλυση.
5.4.1. Επιλογή συνθηκών λειτουργίας.
Ο αεριοχρωµατογράφος ρυθµίζεται ανάλογα µε τις οδηγίες του
κατασκευαστή.
Οι συνιστώµενες συνθήκες λειτουργίας είναι οι εξής:
—θερµοκρασία στήλης: 265 °C
—θερµοκρασία εισόδου: 280 °C
—θερµοκρασία ανιχνευτή: 300 °C
—ταχύτητα ροής φέροντος αερίου: 0,6 ml/λεπτό
—πίεση υδρογόνου: 84 kPa
—πίεση αέρα: 155 kPa
—διαχωρισµός δείγµατος 10:1 έως 50:1, ο λόγος διαχωρισµού
πρέπει να βελτιστοποιηθεί σύµφωνα µε τις οδηγίες του κατα-σκευασή και κατόπιν να εξεταστεί η γραµµικότητα της από-κρισης τουανιχνευτήστηνπεριοχή συγκεντρώσεων πουενδια-φέρει.
Σηµείωση5:Είναιεξαιρετικά σηµαντικόνακαθαρίζεται τακτικά
ο υποδοχέας έκγχυσης.
—ποσότητα ενιόµενης ουσίας: 1 µ lδιαλύµατος TMSE.
Το σύστηµα αφήνεται να εξι σορροπήσει και να απο κτήσει µια
ικανοποιητικά σταθερή απόκριση, πριναρχίσει οποιαδήποτε ανά-λυση.
Οι συνθήκες αυτές µπ ορούν να µεταβ άλλονται ανάλογα µε τα
χαρακτηριστικά της στήλης και του αεριοχρωµατογράφου, έτσιώστε να λαµβάνονται χρωµατογραφήµατα που να εκπληρούν τιςακόλουθες προϋποθέσεις:
—ηκορυφή τηςσιτοστερόλης πρέπει ναδιαχωρίζεται επαρκώς
από αυτή της λανοστερόλης. Το σχήµα 1 δείχνει το τυπικόχρωµατογράφηµα που πρέπει να ληφθεί από το σιλυλιωµένοµείγµα ελέγχου της διαχωριστικής ικανότητας (4.10),
—οισχετικοί χρόνοι κατακράτησης γιατιςακόλουθες στερόλες
πρέπει να είναι κατά π ροσέγγιση:
Χοληστερόλη: 1,0
Στιγµαστερόλη: 1,3Σιτοστερόλη: 1,5Βετουλίνη: 2,5,
—οχρόνος κατακράτησης τηςβετουλίνης πρέπει ναείναι κατά
προσέγγιση 24 λεπτά.
5.4.2. Αναλυτική πορεία εργασίας
Ενίεται 1µ lσιλυλιωµένου πρότυπου διαλύµατος (στιγµαστερόλης
ή σιτοστερόλης) και ρυθµίζονται οι παράµετροι βαθµονόµησηςτου ολοκληρωτή.
Ενίεται 1µ lσιλυλιωµένου πρότυπου διαλύµατος προς π ροσδιορι-
σµό των σχετικών συντελεστών απόκρισης ως προς βετουλίνη.
Ενίεται 1 µ lσιλυλιωµένου διαλύµατος και µετρώνται τα εµβαδά
τωνκορυφών. Κάθε σειρά χρωµατογραφικών αναλύσεων πρέπειναπαρεµβάλλεται µεταξύαναλύσεωνπροτύπων.Κατάκανόναέξιεκγχύσεις δειγµάτων παρεµβάλλονται µεταξύ δύο ενέσεων προ-τύπων.
Σηµείωση 6: Η ολοκλήρωση της κορυφής της στιγµαστερόλης
πρέπει νασυµπεριλαµβάνει κάθετυχόντµήµα«ουράς» όπωςορί-ζεται από τα σηµεία 1, 2 και 3 στο σχήµα 2β.
Ηολοκλήρωση τηςκορυφής τηςσιτοστερόλης πρέπει νασυµπε-
ριλαµβάνει το εµβαδόν της κορυφής της 22-διυδρο-β-σιτοστε-ρόλης(στιγµαστανόλης), ηοποίαεκλούεται αµέσωςµετάτησιτο-
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 8
▼B
στερόλη (βλέπε σχήµα 3β), όταν µετράται η συνολική σιτοστε-
ρόλη.
6. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ
6.1. Προσδιορίζεται τοεµβαδόν τωνκορυφών τωνστερολών καιτων
κορυφών βετουλίνης που συνοδεύουν µια σειρά αναλύσεων, καιυπολογίζεται το R
1:
R1=Μέσο εµβαδόν κορυφών στερολών στο πρότυπο
Μέσο εµβαδόν κορυφών βετουλίνης στο πρότυπο
Προσδιορίζεται το εµβαδόν τωνκορυφών της στερόλης (στιγµα-
στερόλης ή σιτοστερόλης) και της κορυφής ης βετουλίνης στοδείγµα και υπολογίζεται το R
2:
R2=Εµβαδόν κορυφής στερόλης στο δείγµα
Εµβαδόν κορυφής βετουλίνης στο δείγµα
W1= περιεκτικότητα πρότυπου σε στερόλη ( mg) περιεχοµένη
σε 1mlπρότυπου διαλύµατος (4.8.1 ή 4.9.1)
W2= βάρος δείγµατος ( g) (5.2.1)
Ρ = καθαρότητα πρότυπης στερόλης (4.8 ή 4.9)
Περιεκτικότητα του δείγµατος σε στερόλη ( mg/kg)=
R2
R1×W1
W2×P×10.
7. ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΤΗΣ ΜΕΘΟ∆ΟΥ
7.1. Επαναληψιµότητα
7.1.1. Στιγµαστερόλη
Ηδιαφορά µεταξύ τωναποτελεσµάτων δύοπ ροσδιορισµών εκτε-
λεσθέντων εντός του συντοµότερου δυνατού χρονικού διαστήµα-τος,απόένα χειριστή πουχρησιµοποιεί τοίδιοόργανο µεπανο-µοιότυπο αναλυτικό υλικό δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 19,3mg/kg.
7.1.2. Σιτοστερόλη
Ηδιαφορά µεταξύ τωναποτελεσµάτων δύοπ ροσδιορισµών εκτε-
λεσθέντων εντός του συντοµότερου δυνατού χρονικού διαστήµα-τος,απόένα χειριστή πουχρησιµοποιεί τοίδιοόργανο µεπανο-µοιότυπο αναλυτικό υλικό δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 23,0mg/kg.
7.2. Αναπαραγωγικότητα
7.2.1. Στιγµαστερόλη
Ηδιαφορά µεταξύ τωναποτελεσµάτων δύοπ ροσδιορισµών εκτε-
λεσθέντων από χειριστές σε διαφορετικά εργαστήρια, χρησιµο-ποιώντας διαφορετικά όργανα µε πανοµοιότυπο αναλυτικό υλικόδεν πρέπει να υπερβαίνει τα 31,9 mg/kg.
7.2.2. Σιτοστερόλη
Ηδιαφορά µεταξύ τωναποτελεσµάτων δύοπ ροσδιορισµών εκτε-
λεσθέντων από χειριστές σε διαφορετικά εργαστήρια, χρησιµο-ποιώντας διαφορετικά όργανα µε πανοµοιότυπο αναλυτικό υλικόδενπρέπει ναυπερβαίνει το8,7%τουµέσου τωνπ ροσδιορισµών.
7.3. Πηγή δεδοµένων ακριβείας
Ταδεδοµένα ακριβείας προσδιορίστηκαν σεπείραµα εκτελεσθέν
το 1992, που περιλάµβανε οκτώ εργαστήρια, έξι δείγµατα (τρίατυφλά) στιγµαστερόλης και έξι δείγµατα (τρία τυφλά) σιτοστε-ρόλης.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 9
▼B
8. ΟΡΙΑ ΑΝΟΧΗΣ
▼M1
8.1. Πρέπει να λαµβάνονται τρία δείγµατα από το ιχνηθετηµένο
προϊόν για τον έλεγχο της ορθής ιχνηθέτησης του προϊόντος.
▼B
8.2. Στιγµαστερόλη
8.2.1. Τοποσοστό ενσωµάτωσηςτηςστιγµαστερόλης είναι150γραµµά-
ρια στιγµαστερόλης καθαρότητας τουλάχιστον 95 % ανά τόνοβουτύρου, δηλαδή142,5 mg/kgή170γραµµάρια στιγµαστερόλης
καθαρότητας τουλάχιστον 85%ανάτόνοβουτύρου, δηλαδή144,5mg/kg.
▼
M1
8.2.2. Οιτιµές τωντριών δειγµάτωνπου προκύπτουν απότηνανάλυση
του προϊόντος χρησιµοποιούνται για έλεγχο του π οσοστού και
τηςοµοιογένειας κατανοµής τηςενσωµάτωσης του ιχνηθέτη καιηχαµηλότερη απόαυτές τιςτιµές συγκρίνεται µετιςακόλουθεςοριακές τιµές [λαµβανοµένης υπόψη της κρίσιµης διαφοράς πουαντιστοιχεί σε τιµή πιθανότητας 95% ( CrD95)]:
—116,0mg/kg(95%του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
στιγµαστερόλη καθαρότητας 95%),
—118,0mg/kg(95%του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
στιγµαστερόλη καθαρότητας 85%),
—81,0mg/kg(70% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
στιγµαστερόλη καθαρότητας 95%),
—82,0mg/kg(70% του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
στιγµαστερόλη καθαρότητας 85%).
Η συγκέντρωση του ιχνηθέτη στο δείγµα από το οποίο προκύ-
πτουν οι χαµηλότερες τιµές χρησιµοποιείται µαζί µε παρεµβολήµεταξύ τωντιµών 116,0 mg/kgκαι 81,0 mg/kg, ή 118,0 mg/kgκαι
82,0mg/kg.
▼
B
8.3. Σιτοστερόλη
8.3.1. Τοποσοστό ενσωµάτωσηςγιατησιτοστερόλη είναι600γραµµά-
ρια σιτοστερόλης καθαρότητας τουλάχιστον 90%ανάτόνο βου-τύρου, ήτοι 540 mg/kg.
▼
M1
8.3.2. Οιτιµές τωντριών δειγµάτωνπου προκύπτουν απότηνανάλυση
του προϊόντος χρησιµοποιούνται για έλεγχο του π οσοστού και
της οµοιογένειας ενσωµάτωσης του ιχνηθέτη και η χαµηλότερηαπό αυτές τις τιµές συγκρίνεται µε τις ακόλουθες οριακές τιµές[λαµβανοµένης υπόψητηςκρίσιµης διαφοράς πουαντιστοιχεί σεεπίπεδο πιθανότητας 95% ( CrD95)]:
—486,0mg/kg(95%του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
σιτοστερόλη καθαρότητας 90%),
—358,0mg/kg(70%του ελάχιστου π οσοστού ενσω µάτωσης για
σιτοστερόλη καθαρότητας 90%).
Ησυγκέντρωση τουιχνηθέτηστοδείγµααπότοοποίο προκύπτειη χαµηλότερη τιµή χρησιµοποιείται µαζί µε παρεµβολή µεταξύτων τιµών 486,0 mg/kgκαι 358,0 mg/kg.
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 10
▼M1

1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 11
▼
M1
1994R0086 — EL — 03.02.1999 — 001.001 — 12
▼
M1