VERORDNUNG (EWG) Nr. 2676/90 DER KOMMISSION vom 17. September 1990 zur Festlegung gemeinsamer Analysemethoden für den Weinsektor

DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN -

gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsgemeinschaft,

gestützt auf die Verordnung (EWG)Nr. 822/87 des Rates vom 16. März 1987 über die gemeinsame Marktorganisation für Wein (1), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr. 1325/90 (2), insbesondere auf Artikel 74,

in Erwägung nachstehender Gründe:

Gemäß Artikel 74 Absatz 1 der Verordnung (EWG) Nr. 822/87 ist die Einführung von Analysemethoden zur Feststellung der Zusammensetzung der Erzeugnisse nach Artikel 1 der Verordnung sowie von Verfahren vorgesehen, die Auskunft darüber geben können, ob diese Erzeugnisse nicht zugelassenen önologischen Verfahren unterworfen worden sind.

Soweit die Gemeinschaft die Grenzwerte der für die Anwendung bestimmter önologischer Verfahren charakteristischen Bestandteile und Tabellen zum Vergleich der analytischen Daten nicht erlassen hat, sollten die Mitgliedstaaten ermächtigt werden, diese Grenzwerte festzusetzen.

Artikel 13

Absatz 1 der Verordnung (EWG) Nr. 822/87 sieht eine analytische Prüfung vor, die sich mindestens auf die Grenzwerte derjenigen charakteristischen Bestandteile des betreffenden Qualitätsweines b.A. erstreckt, die im Anhang der genannten Verordnung aufgeführt sind.

Die Überwachung der Angaben in den Dokumenten über die betreffenden Erzeugnisse macht die Einführung einheitlicher Analysemethoden notwendig, um präzise und vergleichbare Daten zu erhalten. Diese Methoden müssen demnach für alle Handelsgeschäfte und Kontrollmaßnahmen verbindlich sein. In Anbetracht der Erfordernisse der Kontrolle und der begrenzten Möglichkeiten des Handels ist es jedoch angebracht, eine beschränkte Anzahl gebräuchlicher Verfahren zuzulassen, die eine schnelle und ausreichend sichere Bestimmung der gesuchten Bestandteile des Weines ermöglichen.

Es sind nun so weit wie möglich Methoden festzulegen, die allgemein anerkannt sind, wie die im Rahmen der internationalen Konvention zur Vereinheitlichung der Analysen und Bewertungsmethoden für Weine von 1954 entwickelten Methoden, die vom Internationalen Weinamt in dem ""Recüil des méthodes internationales d'analyse des vins" (Sammlung der internationalen Analysemethoden für Wein) veröffentlicht wurden.

Die auf dem Weinsektor geltenden gemeinschaftlichen Analyseverfahren sind durch die Verordnung (EWG) Nr. 1108/82 der Kommission (3) erlassen worden. Mit Rücksicht auf den wissenschaftlichen Fortschritt hat es sich als notwendig erwiesen, einige Verfahren durch geeignetere Verfahren zu ersetzen, andere Verfahren zu ändern und wieder andere neu einzuführen, insbesondere wenn diese inzwischen vom Internationalen Weinamt verabschiedet wurden. Angesichts der grossen Anzahl und der Vielfalt dieser Anpassungen ist es zweckmässig, alle Analyseverfahren in einer neuen Verordnung zusammenzufassen und die Verordnung (EWG) Nr. 1108/82 aufzuheben.

Um die Ergebnisse der Anwendung der in Artikel 74 der Verordnung (EWG) Nr. 822/87 angeführten Analysemethoden vergleichen zu können, gelten für Wiederholbarkeit und Vergleichbarkeit der Ergebnisse die Definitionen, die vom Internationalen Amt für Rebe und Wein festgelegt worden sind.

Zur Berücksichtigung des wissenschaftlichen Fortschritts sowie der verbesserten technischen Ausstattung der amtlichen Laboratorien und in der Absicht, die Arbeit dieser Laboratorien leistungsfähiger und rationeller zu gestalten, sollte die Anwendung automatisierter Analysemethoden unter bestimmten Voraussetzungen zugelassen werden. Es muß darauf hingewiesen werden, daß in Streitfällen Referenzverfahren und gebräuchliche Verfahren nicht durch automatisierte Methoden ersetzt werden dürfen.

Die Ergebnisse der Messung der Dichte mit dem auf das Prinzip des Biegeschwingers gestützten automatisierten Verfahren sind hinsichtlich Genauigkeit, Wiederholbarkeit und Vergleichbarkeit mindestens gleichwertig gegenüber den Ergebnissen, die mit den im Anhang dieser Verordnung unter Punkt 1 aufgeführten Methoden zur Messung der Volumenmasse und der relativen Dichte gewonnen worden sind. Nach Artikel 74 Absatz 3 der Verordnung (EWG) Nr. 822/87 sollte dieses automatisierte Verfahren daher als gleichwertig

mit den im Anhang dieser Verordnung genannten Methoden angesehen werden.

Die in Kapitel 25 Ziffer 2.2.3.3.2 des Anhangs dieser Verordnung beschriebene Methode zur Bestimmung des Gesamtschwefeldioxidgehaltes der Weine und Moste mit einem vermuteten Gehalt unter 50 mg/l führt zu einer besseren Freisetzung des Schwefeldioxids als die in Kapitel 13 Ziffer 13.4 im Anhang der Verordnung (EWG) Nr. 1108/82 beschriebene Bestimmungsmethode. Daraus ergeben sich bei den analysierten Erzeugnissen höhere Gesamtschwefeldioxidgehalte, die- insbesondere bei einigen Traubensäften - die vorgeschriebenen Grenzwerte überschreiten können. Zur Vermeidung von Schwierigkeiten für den Absatz von Traubensäften, die beim Inkrafttreten dieser Verordnung bereits hergestellt waren, und in Erwartung, daß bei der Herstellung auf eine bessere Entschwefelung der stummgemachten Moste geachtet wird, erscheint es notwendig, während einer Übergangszeit die Anwendung der in der vorgenannten Verordnung beschriebenen Bestimmungsmethode weiter zu gestatten.

Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der Stellungnahme des Verwaltungsausschusses für Wein -

HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:

Artikel 1

(1) Im Anhang dieser Verordnung sind die gemeinschaftlichen Verfahren angegeben, mit denen für Handelsgeschäfte und für alle Kontrollmaßnahmen:

- die Zusammensetzung der Erzeugnisse nach Artikel 1 der Verordnung (EWG)Nr. 822/87 bestimmt und

- festgestellt werden kann, ob diese Erzeugnisse nicht zugelassenen önologischen Verfahren unterzogen worden sind.

(2) Für die Parameter, für die Referenzmethoden und gebräuchliche Methoden festgelegt sind, haben die mit den Referenzverfahren gewonnenen Ergebnisse Vorrang.

Artikel 2

Im Sinne dieser Verordnung gelten als:

a) Wiederholbarkeit derjenige Wert, unterhalb dessen man die absolute Differenz zwischen zwei einzelnen Prüfergebnissen, die man mit demselben Verfahren an identischem Prüfmaterial und unter denselben Bedingungen (derselbe Bearbeiter, dasselbe Gerät, dasselbe Labor, kurze Zeitspanne) erhalten hat, mit einer vorgegebenen Wahrscheinlichkeit erwarten darf; wenn nichts anderes angegeben ist, so ist diese Wahrscheinlichkeit 95 %.

b) Vergleichbarkeit ist derjenige Wert, unterhalb dessen man die absolute Differenz zwischen zwei einzelnen Prüfergebnissen, die man an identischem Material aber unter verschiedenen Bedingungen (verschiedene Bearbeiter, verschiedene Geräte, verschiedene Labors und/oder zu verschiedenen Zeiten) erhalten hat, mit einer vorgegebenen Wahrscheinlichkeit erwarten darf; wenn nichts anderes angegeben ist, so ist diese Wahrscheinlichkeit 95 %.

Unter einem""einzelnen Prüfergebnis" versteht man denjenigen Wert, den man erhalten hat, indem man ein genormtes Prüfverfahren zur Gänze auf eine einzelne Probe angewandt hat.

Artikel 3

(1) Es ist zulässig, daß unter der Verantwortung des Leiters eines Laboratoriums automatisierte Analysemethoden angewandt werden, sofern die Genauigkeit, Wiederholbarkeit und Vergleichbarkeit der Ergebnisse mindestens gleichwertig gegenüber den Ergebnissen sind, die mit den im Anhang dieser Verordnung genannten Analysemethoden gewonnen worden sind.

Bei Streitfällen dürfen die im Anhang aufgeführten Analysemethoden nicht durch die automatisierten Analysemethoden ersetzt werden.

(2) Das automatisierte Verfahren zur Bestimmung der Dichte mit dem Biegeschwinger gilt als gleichwertig mit den unter Ziffer 1 dieser Verordnung aufgeführten Methoden.

Artikel 4

Wo Wasser für Lösungen, Verdünnungen oder zum Auswaschen vorgesehen ist, handelt es sich immer um destilliertes oder gleichwertiges entmineralisiertes Wasser. Soweit nicht anderweitig angegeben, müssen alle chemischen Reagenzien analysenreine Qualität besitzen.

Artikel 5

Die Verordnung (EWG) Nr. 1108/82 wird aufgehoben.

Artikel 1

Absatz 4 dieser Verordnung gilt jedoch bis zum 31. Dezember 1990.

Artikel 6

Diese Verordnung tritt am Tag ihrer Veröffentlichung im Amtsblatt der Europäischen Gemeinschaftenin Kraft.

Sie gilt mit Wirkung vom 1. Oktober 1990.

Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmittelbar in jedem Mitgliedstaat.

Brüssel, den 17. September 1990.

Für die KommissionRay MAC SHARRYMitglied der Kommission

Anmerkung Die Tabellen und Diagramme sowie ein Teil der Abbildungen im Anhang wurden der Kommission der Europäischen Gemeinschaften vom Office International de la Vigne et du Vin in Paris zur Verfügung gestellt.

(1)ABl. Nr. L 84 vom 27. 3. 1987, S. 1. (2)ABl. Nr. L 132 vom 23. 5. 1990, S. 19. (3)ABl. Nr. L 133 vom 14. 5. 1982, S. 1.

ANHANG

1. VOLUMENMASSE UND RELATIVE DICHTE BEI 20 °C 1. DEFINITION

Volumenmasse ist der Quotient aus der Masse eines bestimmten Volumens Wein oder Most bei 20 °C und seinem Volumen, ausgedrückt in g/ml, Symbolr 20 °C.

Relative Dichte bei 20 °C oder Dichte d 20 °C/20 °C ist das in Dezimalen ausgedrückte Verhältnis der Masse eines bestimmten Volumens Wein oder Most bei 20 °C zur Masse des gleichen Volumens bei 20 °C. Symbol: d20 °C20 °C.2. PRINZIP DER METHODEN

Die Volumenmasse und die relative Dichte bei 20 °C einer Probe werden wie folgt bestimmt:

Referenzmethode: Bestimmung mit dem Pyknometer, gebräuchliche Methoden: Bestimmung mit dem Araeometer oder Bestimmung mit der hydrostatischen Waage.

Bemerkung:Für sehr genaue Bestimmungen muß die Volumenmasse um den Gehalt an Schwefeldioxid korrigiert werden.

r 20 °C = r220 °C 0,0006 · sr 20 °C = korrigierte Volumenmasser2 20 °C = festgestellte VolumenmasseS = Gesamtschwefeldioxid in g/l.3. VORBEREITUNG DER PROBE

Enthält der Wein oder der Most merkliche Mengen Kohlendioxid, muß dieses zum grössten Teil vorher entfernt werden, indem man 250 ml Wein in einem 1 000-ml-Gefäß schüttelt oder unter leichtem Vakuum durch 2 g Watte filtriert.4. REFERENZMETHODE

4.1. GerätschaftenÜbliches Labormaterial, insbesondere:

4.1.1. Pyknometer (1) aus Pyrexglas von etwa 100 ml Fassungsvermögen mit einem eingeschliffenen beweglichen Thermometer mit 1/10 Gradeinteilung von 10 °C bis 30 °C. Dieses Thermometer muß geprüft sein (Abbildung 1).

Abbildung 1 Pyknometer mit Taragefäß

Das Pyknometer besitzt seitlich ein 25 mm langes Rohr von maximal 1 mm Innendurchmesser, dessen Ende konisch geschliffen ist. Dieses seitliche Rohr kann mit einem""Auffangstöpsel" verschlossen werden, der aus einem konisch geschliffenen Rohr mit ausgezogener Spitze besteht. Dieser Stöpsel dient als ""Ausdehnungskammer".

Die beiden Schliffe des Pyknometers müssen sehr sorgfältig ausgeführt sein.

4.1.2. Als Tara verwendet man ein Gefäß von gleicher äusserer Form (< 1 ml genau) wie das beschriebene Pyknometer und von gleicher Masse wie die Masse des mit einer Flüssigkeit der Dichte 1,01 gefuellten Pyknometers; Natriumchloridlösung, 2 % (g/v).

Hitzebeständiger Mantel, der sich genau an die Form des Pyknometers anpasst.

4.1.3. Zweiarmige Waage mit einer Belastbarkeit bis zu 300 g und einer Empfindlichkeit von 0,1 mg genauodereinarmige Waage mit einer Belastbarkeit bis zu 200 g und einer Empfindlichkeit von 0,1 mg genau.4.2. Eichung des Pyknometers

Die Eichung des Pyknometers umfasst die Bestimmung folgender Merkmale:- Leergewicht;-Volumen bei 20 °C;- Masse des Wassers bei 20 °C.4.2.1. Verwendung einer zweiarmigen Waage

Das Taragefäß wird auf die linke Schale der Waage und das saubere und trockne Pyknometer mit seinem ""Auffangstöpsel" auf die rechte Schale der Waage gestellt; das Gleichgewicht wird mit Hilfe von mit ""p"-Gramm bezeichneten Gewichten hergestellt.

Das Pyknometer wird sorgfältig mit destilliertem Wasser bei Raumtemperatur gefuellt und das Thermometer angebracht. Das Pyknometer wird gut abgetrocknet und in den hitzebeständigen Mantel gegeben. Man mischt durch Hin- und Herdrehen, bis die auf dem Thermometer abgelesene Temperatur konstant bleibt. Man stellt sodann genau auf den oberen Rand des Seitenrohrs ein. Dieses Seitenrohr wird getrocknet, der Auffangstöpsel eingesetzt, die Temperatur t °C sorgfältig abgelesen und gegebenenfalls um die Ungenauigkeit des Thermometers korrigiert. Das mit Wasser gefuellte Pyknomter wird gewogen; p'=Masse in Gramm, die zur Herstellung des Gleichgewichtes dient.

Berechnung (2)

Gewicht des leeren Pyknometers:Leergewicht = p + mm = Masse der im Pyknometer enthaltenen Luftm = 0,0012 (p p').

Volumen bei 20 °C:V20 °C = (p + m p') · FtFt = Faktor aus Tabelle I für die Temperatur t °CV20 °C wird auf ± 0,001 ml genau berechnet.

Masse des Wassers bei 20 °C:M20°C = V20 °C · 0,9982030,998203 = Volumenmasse des Wassers bei 20 °C.

4.2.2. Verwendung einer einarmigen Waage

Zu bestimmen sind:- die Masse des sauberen und trocknen Pyknometers: P- die Masse des mit Wasser gefuellten Pyknometers bei t °C: P1 gemäß den Angaben unter 4.2.1- die Masse des Taragefässes To.

Berechnung (3):

Gewicht des leeren Pyknometers:Leergewicht: P mm = Masse der im Pyknometer enthaltenen Luftm = 0,0012 (PI P)

Volumen bei 20 °CV20 °C = [PI (P m)] · FtFt = Faktor aus Tabelle I für die Temperatur t °CDas Volumen bei 20 °C wird auf ± 0,001 ml genau berechnet.

Masse des Wassers bei 20 °C:M20 °C = V20 °C· 0,9982030,998203 = Volumenmasse des Wassers bei 20 °C.4.3. Durchführung der Bestimmung (3)

4.3.1. Verwendung einer zweiarmigen Waage

Das mit der für die Bestimmung vorbereiteten Probe gefuellte Pyknometer wird nach der Beschreibung unter 4.2.1 gewogen. Dabei ist p" die Masse in Gramm, die zur Herstellung des Gleichgewichtes bei t °C dient.

Masse der im Pyknometer enthaltenen Flüssigkeit = p + m p".

Scheinbare Volumenmasse bei t °C:

Die Volumenmasse bei 20 °C wird mit Hilfe einer der nachstehenden Korrekturtabellen je nach Art der untersuchten Flüssigkeit berechnet: trockner Wein (Tabelle II), natürlicher oder konzentrierter Most (Tabelle III), Süßweine (Tabelle IV).

Man erhält die Dichte 20 °C/20 °C des Weines durch Division der Volumenmasse bei 20 °C durch 0,998203.4.3.2. Verwendung einer einarmigen Waage

Man wägt das Taragefäß = TI.Berechnung dT = TI To.Die Masse des leeren Pyknometers zum Zeitpunkt der Messung = P m + dT.

Das mit der für die Bestimmung vorbereiteten Probe gefuellte Pyknometer wird nach den Angaben unter 4.2.1 gewogen. P2 ist die Masse bei t °C.

Masse der im Pyknometer enthaltenen Flüssigkeit bei t °C = P2 (P m + dT).

Scheinbare Volumenmasse bei t °C:

Die Volumenmasse bei 20 °C der untersuchten Flüssigkeit - trockner Wein, natürlicher Most und konzentrierter Most, Süßwein - wird gemäß 4.3.1 berechnet.

Man erhält die Dichte 20 °C/20 °C durch Division der Volumenmasse 20 °C durch 0,998203.4.3.3. Wiederholbarkeit für trockne und liebliche Weine: r = 0,00010, für Süßweine: r = 0,00018.

4.3.4. Vergleichbarkeit für trockne und liebliche Weine: R = 0,00037, für Süßweine: R = 0,00045.5. GEBRÄUCHLICHE VERFAHREN

5.1. Bestimmung mit dem Araeometer

5.1.1. Gerätschaften

5.1.1.1. Araeometer

Die Araeometer müssen hinsichtlich ihrer Ausmasse und Gradeinteilungen den Vorschriften der ISO entsprechen.

Sie müssen einen zylindrischen Schwimmer mit einem Rohr von mindestens 3 mm Durchmesser besitzen. Für trockne Weine muß die Skala eine Gradeinteilung von 1/1000 und 5/1000 zwischen 0,983 bis 1,003 aufweisen. Der Abstand zwischen den Tausendstel-Markierungen muß mindestens 5 mm betragen. Zur Bestimmung der Dichte der entalkoholisierten Weine sowie von Süßweinen und Mosten ist ein Satz von 5 Araeometern mit folgenden Skalenbereichen zu verwenden: 1,000-1,030; 1,030-1,060; 1,060-1,090; 1,090-1,120; 1,120-1,150. Auf den Skalen dieser Geräte muß die Volumenmasse bei 20 °C mindestens in Tausendsteln und halben Tausendsteln abzulesen sein, wobei der Abstand zwischen den Tausendstel-Markierungen mindestens 3 mm betragen muß.

Diese Araeometer müssen so graduiert sein, daß die Ablesung am unteren Meniskus erfolgt. Auf die Angabe der Gradeinteilung in Volumenmasse bei 20 °C oder relative Dichte bei 20 °C und die Art der Ablesung am Meniskus muß entweder durch einen Vermerk an der Skala oder durch einen im Schwimmer eingeschlossenen Zettel hingewiesen werden.

Die Geräte müssen von einer amtlichen Stelle geprüft sein.

5.1.1.2. Geeichtes Thermometer mit mindestens 0,5 °C Gradeinteilung.

5.1.1.3. Glaszylinder; 36 mm Innendurchmesser und 320 mm Höhe, der mit Hilfe eines Stativs befestigt wird.5.1.2. Durchführung der Bestimmung

5.1.2.1. Messung

In einen Glaszylinder (5.1.1.3) werden 250 ml der nach 3 vorbereiteten Probe eingefuellt und das Araeometer sowie das Thermometer eingebracht. Man schüttelt, um den Temperaturausgleich herzustellen, und liest nach 1 Minute das Thermometer ab. Das Thermometer wird herausgenommen und die scheinbare Volumenmasse bei t °C am Schwimmer des Araeometers nach 1 Minute abgelesen.

Die bei t °C abgelesene scheinbare Volumenmasse wird mit Hilfe der Tabellen für trockne Weine (Tabelle V), Moste (Tabelle VI) und Weine mit Restzucker (Tabelle VII) korrigiert.

Die Dichte 20 °C/20 °C erhält man durch Division der Volumenmasse bei 20 °C durch 0,998203.5.2. Bestimmung mit der hydrostatischen Waage

5.2.1. Gerätschaften

5.2.1.1. Hydrostatische Waage

Hydrostatische Waage mit einer Belastbarkeit bis zu 100 g, Empfindlichkeit: 0,1 mg.

Unter jeder Waagschale befindet sich ein Schwimmer aus Pyrexglas mit einem Volumen von mindestens 20 ml. Diese beiden identischen Schwimmer hängen an einem Draht von höchstens 0,1 mm Durchmesser.

Der unter der rechten Waagschale befestige Schwimmer taucht in einen Glaszylinder, der mit einer Marke versehen ist, ein. Der Innendurchmesser des Glaszylinders muß mindestens 6 mm mehr betragen als der Durchmesser des Schwimmers. Der Schwimmer muß vollständig in die im Glaszylinder befindliche Flüssigkeit eintauchen, so daß die Flüssigkeit den Faden berührt. Die Temperatur der im Glaszylinder enthaltenen Flüssigkeit wird mittels eines Thermometers mit 1/5-Grad-Skala gemessen.

Eine einarmige hydrostatische Waage kann auch verwendet werden.5.2.2. Durchführung der Bestimmung

5.2.2.1. Eichung der hydrostatischen Waage

Das Gleichgewicht wird, während die Schwimmer in der Luft hängen, auf der rechten Waagschale mit den Gewichten p eingestellt.

Man fuellt den Glaszylinder bis zur Marke mit Wasser, liest 2 oder 3 Minuten nach dem Schütteln die Temperatur t °C ab und stellt das Gleichgewicht auf der rechten Waagschale mit den Gewichten p' wieder ein.

Volumen des Schwimmers bei 20 °C:V20 °C = (p' p) (F + 0,0012)F = Faktor gemäß Tabelle I für die Temperatur t °C

p und V20 °C sind die Merkmale des Schwimmers.5.2.2.2. Messung

Der rechte Schwimmer taucht in den mit Wein oder Most bis zur Marke gefuellten Glaszylinder ein. Man liest die Temperatur t °C des Weines (oder des Mostes) ab,

p" = Gewichte, die zur Wiederherstellung des Gleichgewichtes aufgelegt wurden,r t °C = scheinbare Volumenmasse:Diese Volumenmasse wird auf 20 °C mittels der Tabellen II, III oder IV umgerechnet.

6. BEISPIEL FÜR DIE BERECHNUNG DER VOLUMENMASSE BEI 20 °C UND DER DICHTE 20 °C/20 °C (REFERENZMETHODE)

6.1. Verwendung einer zweiarmigen Waage

6.1.1. Aufstellung der Pyknometerkonstanten

1. Wägung des sauberen und trocknen Pyknometers:Gewicht = Pyknometer + p

p = 104,9454 g.

2. Wägung des mit Wasser gefuellten Pyknometers bei der Temperatur t °C:Gewicht = Pyknometer + Wasser + p2

p2 = 1,2396 g für t = 20,5 °C.

3. Berechnung der Masse der im Pyknometer enthaltenen Luft:m = 0,0012 (p p2)

m = 0,0012 (104,9454 1,2396)

m = 0,1244 g.

4. Konstante MerkmaleGewicht des leeren Pyknometers p + m:

p + m = 104,9454 + 0,1244

p + m = 105,0698 gVolumen bei 20 °C = (p + m p2) · Ft °CF20,50 °C = 1,001900

V20 °C = (105,0698 1,2396) · 1,001900

V20 °C = 104,0276 mlMasse des Wassers bei 20 °C = V20 °C · 0,998203

M20 °C = 103,8405 g.6.1.2. Bestimmung der Volumenmasse bei 20 °C und der Dichte 20 °C/20 °C eines trocknen Weins:

r" = 1,2622 bei 17,80 °Cr17,80 °C = 0,99788 g/ml

Tabelle II erlaubt die Berechnung von r20 °C aus rt °C mittels der Gleichung:

Bei t = 17,80 °C und einem Alkoholgehalt von 11 % vol beträgt c = 0,54.6.2. Verwendung einer einarmigen Waage

6.2.1. Aufstellung der Pyknometerkonstanten

1. Wägung des sauberen und trocknen PyknometersP = 67,7913 g.

2. Wägung des mit Wasser gefuellten Pyknometers bei der Temperatur t °C:PI = 169,2715 bei 21,65 °C.

3. Berechnung der Masse der im Pyknometer enthaltenen Luft:m = 0,0012 (PI P)

m = 0,0012 × 101,4802

m = 0,1218 g.

4.Konstante Merkmale:Gewicht des leeren Pyknometers: P m

P m = 67,7913 0,1218

P m = 67,6695 g

Volumen bei 20 °C = [PI (P m)] Ft °C

F21,65 °C = 1,002140

V20 °C= (169,2715 67,6695) · 1,002140

= 101,8194 ml

Masse des Wassers bei 20 °C = V20 °C · 0,998203

M20 °C = 101,6364 g

Masse des Taragefässes: To

To = 171,9160 g.6.2.2. Bestimmung der Volumenmasse bei 20 °C und der Dichte 20 °C/20 °C eines trocknen Weines

TI = 171,9178 g

dT = 171,9178 171,9160 = + 0,0018 g

P m + dT = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g

P2 = 169,2799 bei 18 °Cr18 °C = 0,99793 g/ml.

Tabelle II erlaubt die Berechnung von r20 °C aus rt °C mittels der Gleichung:

Bei t = 18 °C und einem Alkoholgehalt von 11 % vol beträgt c = 0,49

TABELLE I Faktor FMit diesen Faktoren muß die Masse des Wassers, die im Pyknometer aus Pyrexglas bei t °C enthalten ist, multipliziert werden, um das Volumen des Pyknometers bei 20 °C zu erhalten

TABELLE II Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von trocknen Weinen und entalkoholisierten trocknen Weinen, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Pyknometer aus Pyrexglas.

TABELLE III Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von nicht angereicherten Mosten und Mostkonzentraten, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Pyknometer aus Pyrexglas.

TABELLE IV Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von süssen Weinen mit einem Alkoholgehalt von 13 % Vol. oder mehr, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Pyknometer aus Pyrexglas.

TABELLE V Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von trocknen Weinen und entalkoholisierten, trocknen Weinen, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Pyknometer oder dem Araeometer aus gewöhnlichem Glas.

TABELLE VI Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von nicht angereicherten Mosten und Mostkonzentraten, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Pyknometer oder dem Araeometer aus gewöhnlichem Glas.

TABELLE VII Korrekturtabelle zur Umrechnung der Volumenmasse von Weinen mit einem Restzuckergehalt bei einem Alkoholgehalt von 13 % Vol. oder mehr, gemessen bei t °, bezogen auf 20 °C. Bestimmung mit dem Araeometer oder mit dem Pyknometer aus gewöhnlichem Glas.

2. BESTIMMUNG DES ZUCKERGEHALTES VON MOST, KONZENTRIERTEM MOST UND REKTIFIZIERTEM TRAUBENMOSTKONZENTRAT (RTK) NACH DEM REFRAKTOMETRISCHEN VERFAHREN 1. PRINZIP DER METHODE

Bestimmung der Refraktion bei 20 °C, ausgedrückt als Brechungsindex oder als Massenprozente Saccharose, und Ermittlung des Zuckergehaltes in g/l und g/kg aus einer entsprechenden Tabelle für Most, konzentrierten Most und rektifiziertes Traubenmostkonzentrat.2. GERÄTSCHAFTEN

2.1. Abbé-Refraktometer

Abbé-Refraktometer mit Skaleneinteilung entweder:- in Massenprozent Saccharose (auf 0,1 % genau) oder- in Brechungsindex mit 4 Dezimalen.

Das Refraktometer muß ausgerüstet sein mit einem Thermometer (15-25 °C) und einer Temperiereinrichtung zur Messung bei 20 °C ± 5 °C.

Die Gebrauchsanweisung für das Gerät muß genau befolgt werden, vor allem hinsichtlich der Eichung und der Lichtquelle.3. VORBEREITUNG DER PROBE

3.1. Most und konzentrierter Most

Der Most wird gegebenenfalls durch eine trockene, gefaltete Gaze filtriert. Nachdem die ersten Tropfen des Filtrats verworfen wurden, wird die Bestimmung mit der filtrierten Probe durchgeführt.3.2. Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat

Je nach Konzentration verwendet man entweder das RTK direkt oder eine Verdünnung, die durch Auffuellen von 200 g genau gewogenem RTK mit destilliertem Wasser auf 500 g hergestellt wird.4. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

Die Probe wird auf eine Temperatur von etwa 20 °C gebracht. Einige Tropfen werden auf das Prisma des Refraktometers gegeben, so daß sich die Probe beim Aufeinanderpressen der beiden Prismen gleichmässig auf der Oberfläche verteilt. Die Messung wird entsprechend der Arbeitsanleitung für das verwendete Gerät durchgeführt.

Man liest entweder die Massenprozent Saccharose auf 0,1 % genau oder den Brechungsindex mit 4 Dezimalen ab.

Es werden mindestens 2 Bestimmungen an derselben Probe durchgeführt. Man stellt die Temperatur t °C fest.5. BERECHNUNG

5.1. Temperaturkorrektur

5.1.1. Skaleneinteilung in Massenprozent Saccharose: Zur Temperaturkorrektur wird Tabelle I verwendet.

5.1.2. Skaleneinteilung in Brechungsindex: der dem bei t °C abgelesenen Brechungsindex entsprechende Saccharosegehalt in % (g/g) wird Tabelle II entnommen (Spalte 1). Dieser Wert wird unter Verwendung von Tabelle I auf 20 °C korrigiert.5.2. Invertzuckergehalt von Most und konzentriertem Most

Der den Massenprozent Saccharose bei 20 °C entsprechende Invertzuckergehalt, ausgedrückt in g/l und g/kg, wird Tabelle II entnommen. Die Angabe erfolgt mit 1 Dezimale.5.3.Invertzuckergehalt von rektifiziertem Traubenmostkonzentrat (RTK)

Der den Massenprozent Saccharose bei 20 °C entsprechende Invertzuckergehalt, ausgedrückt in g/l und g/kg, wird Tabelle III entnommen. Die Angabe erfolgt mit 1 Dezimale.

Wurde die Messung mit verdünntem RTK durchgeführt, so ist das Ergebnis mit dem Verdünnungsfaktor zu multiplizieren.5.4. Brechungsindex von Most, konzentriertem Most und rektifiziertem Traubenmostkonzentrat

Der Brechungsindex bei 20 °C wird entsprechend den Massenprozent Saccharose bei 20 °C Tabelle II entnommen. Die Angabe erfolgt mit 5 Dezimalen.

TABELLE I Korrektur für die Bestimmung der Saccharose bei einer anderen Temperatur als 20 °C

Die Temperaturschwankungen gegenüber 20 °C dürfen 5 °C nicht überschreiten.

TABELLE II Zuckergehalt (4) von Most und konzentriertem Most in Gramm je Liter und in Gramm je Kilogramm, bestimmt mittels Refraktometrie, abgelesen bei 20 °C als Massenprozent Saccharose oder als Brechungsindex. Die Volumenmasse bei 20 °C ist ebenfalls angegeben.

TABELLE III Zuckergehalt (5) von rektifiziertem Traubenmost in Gramm je Liter und in Gramm je Kilogramm, bestimmt mittels Refraktometrie, abgelesen bei 20 °C als Massenprozent Saccharose oder als Brechungsindex. Die Volumenmasse bei 20 °C ist ebenfalls angegeben.

3. ALKOHOLGEHALT 1. DEFINITION

Der in Volumenprozent ausgedrückte Alkholgehalt ist gleich der Anzahl Liter Ethanol, die in 100 l Wein enthalten sind. Beide Volumina werden bei 20 °C gemessen. Symbol: ""% vol".

Bemerkung:Die Homologen des Ethanols sowie der Ethanol und die Homologen des Ethanols der Ester sind im Alkoholgehalt enthalten, da sie in das Destillat übergehen.2. PRINZIP DER METHODEN

2.1. Destillation des durch Calciumhydroxid alkalisierten Weines und Bestimmung des Alkoholgehaltes im Destillat

2.2. Referenzmethode: Pyknometrische Bestimmung der Volumenmasse des Destillates2.3. Gebräuchliche Methoden

2.3.1. Bestimmung des Alkoholgehaltes des Destillates mit dem Araeometer

2.3.2. Bestimmung des Alkoholgehaltes des Destillates durch Messung der Volumenmasse mittels hydrostatischer Waage

2.3.3. Bestimmung des Alkoholgehaltes des Destillates mit dem Refraktometer

Anmerkung:Der Alkoholgehalt entsprechend der Volumenmasse des Destillates kann den Tabellen I, II und III im Anhang dieses Kapitels entnommen werden. Diese sind aufgrund der internationalen Alkoholtabelle berechnet worden, die von der internationalen Organisation für das gesetzliche Meßwesen im Jahr 1972 in ihrer Empfehlung Nr. 22 veröffentlicht und vom ""internationalen Weinamt" (Office international de la Vigne et du Vin) auf der Generalversammlung 1974 angenommen wurde.Die allgemeine Gleichung zur Berechnung des Alkoholgehaltes in % Vol. aus der Volumenmasse einer wäßrig-alkoholischen Lösung unter Berücksichtigung der Temperatur ist im Anhang dieses Kapitels angegeben.3. GEWINNUNG DES DESTILLATES

3.1. Gerätschaften

3.1.1. Destillationsapparatur bestehend aus:- einem 1-Liter-Normalschliffkolben;- einer Rektifizierkolonne von etwa 20 cm Länge oder einer anderen Einrichtung zur Verhinderung eines Überschäumens;- einer Wärmequelle: jegliches Anbrennen der Extraktstoffe ist durch die Verwendung eines entsprechenden Gerätes zu vermeiden;- einem in ein dünnes Rohr auslaufenden Kühler, durch das das Destillat bis zum Boden des Vorlagegefässes, das einige Milliliter Wasser enthält, geführt wird.

3.1.2. Wasserdampfdestillationsapparatur bestehend aus:1. einem Wasserdampfentwickler;2. einem Destillierkolben;3. einer Rektifizierkolonne;4. einem Kühler.

Es kann jede Art von Destillations- oder Wasserdampfdestillationsapparatur verwendet werden, wenn sie den folgenden Bedingungen entspricht: Eine wäßrig-alkoholische Mischung von 10 % Vol. Alkohol wird fünfmal hintereinander destilliert. Nach der fünften Destillation muß das Destillat einen Alkoholgehalt von mindestens 9,9 % Vol. aufweisen, d. h. der Alkoholverlust während einer Destillation darf nicht mehr als 0,02 % Vol. betragen.3.2. Reagenzien

3.2.1. Calciumhydroxidsuspension (Ca(OH)2), 2M

Diese wird so hergestellt, daß 1 l heisses Wasser (60-70 °C) vorsichtig auf 120 g ungelöschten Kalk (CaO) gegossen wird.3.3. Vorbereitung der Probe

Bei Jungweinen oder Schaumweinen muß vorher die Hauptmenge an Kohlendioxid entfernt werden. Hierzu werden 250 bis 300 ml Wein in einen 500-ml-Kolben gegeben und geschüttelt.3.4. Durchführung der Bestimmung

In einem 200-ml-Meßkolben wird der Wein abgemessen und die Temperatur festgestellt.

Der Wein wird in den Destillierkolben der Destillations- bzw. Wasserdampfdestillationsapparatur umgefuellt. Der Meßkolben wird viermal mit 5 ml Wasser nachgespült und das Wasser ebenfalls in den Kolben gegeben. Sodann fügt man 10 ml Calciumhydroxidlösung (3.2.1) und im Fall der Destillation einige Siedesteine aus porösem inerten Material (Bimsstein) hinzu.

Das Destillat wird in demselben 200-ml-Meßkolben aufgefangen, der zur Abmessung des Weines gedient hat.

Bei der Destillation müssen drei Viertel des Ausgangsvolumens, bei der Wasserdampfdestillation 198 bis 199 ml überdestilliert werden. Man fuellt mit destilliertem Wasser auf 200 ml auf. Die Temperatur des Destillates soll nicht mehr als ± 2 °C von der Ausgangstemperatur abweichen.

Man mischt vorsichtig mit kreisförmigen Bewegungen. Bemerkung:Bei Weinen, die besonders reich an Ammoniumionen sind, wird das Destillat gegebenenfalls unter den obengenannten Bedingungen erneut destilliert, wobei die Calciumhydroxidsuspension durch 1 ml 10 %ige (v/v) Schwefelsäure ersetzt wird.4. REFERENZMETHODE

Bestimmung des Alkoholgehaltes des Destillates mit dem Pyknometer.4.1. Gerätschaften

4.1.1. Geeichte Pyknometer, siehe""Bestimmung der Volumenmasse".4.2. Durchführung der Bestimmung

Die Bestimmung der scheinbaren Volumenmasse bei t °C des Destillates (3.4) wird, wie in Kapitel 1 ""Volumenmasse" unter 4.3.1 und 4.3.2 angegeben, durchgeführt. rt = scheinbare Volumenmasse bei t °C.4.3. Angabe der Ergebnisse

4.3.1. Berechnung

Der Alkoholgehalt bei 20 °C wird der Tabelle I entnommen. Hierzu sucht man entlang der Zelle, die dem ganzzahligen Anteil T °C der gemessenen Temperatur t °C entspricht, den zu rt nächst höheren Volumenmassenwert. Mit der darunterstehenden Tabellendifferenz wird die Volumenmasse r bei der Temperatur T °C berechnet.

Nun sucht man, wiederum entlang der Zeile der Temperatur T °C, den zu der berechneten Volumenmasse r nächsthöheren Wert r2. Man berechnet die Differenz beider Volumenmassen (r2 r) und dividiert durch die rechts neben r2 stehende Tabellendifferenz. Der Quotient gibt die Alkoholvolumenprozente in Dezimalen an, deren ganze Zahlen oberhalb der Spalte, in der sich der Volumenmassewert r2 befindet, angegeben sind. Ein Beispiel für die Berechnung des Alkholgehaltes ist in Abschnitt 6 dieses Kapitels angegeben.

Anmerkung:Diese Temperaturkorrektur ist programmiert worden und kann gegebenfalls automatisch erfolgen.4.3.2. Wiederholbarkeit (r):

r = 0,10 % Vol.4.3.3.Vergleichbarkeit (R):

R = 0,19 % Vol.5. GEBRÄUCHLICHE METHODEN

5.1. Aräometrie

5.1.1. Gerätschaften

5.1.1.1. Alkoholmeter

Das Alkoholmeter muß den Definitionen für die Geräte der Klasse I oder II gemäß der Internationalen Empfehlung Nr. 44 ""Alkoholmeter und Araeometer für Alkohol" der IOML (Internationale Organisation für das gesetzliche Meßwesen) entsprechen.

5.1.1.2. Thermometer von 0-40 °C, Einteilung in 1/10 Grad, auf 1/20 Grad genau geprüft.

5.1.1.3. Glaszylinder, 36 mm Innendurchmesser und 320 mm Höhe, der mit Hilfe eines Stativs befestigt wird.5.1.2. Durchführung des Bestimmung

Das Destillat (3.4) wird in den Glaszylinder gefuellt, und das Thermometer und das Alkoholmeter werden hineingebracht. Das Ablesen des Thermometers erfolgt eine Minute nach dem Schütteln, um einen Temperaturausgleich zwischen dem Glaszylinder, dem Thermometer, dem Alkoholmeter und dem Destillat zu gewährleisten. Das Thermometer wird herausgenommen und der scheinbare Alkoholgehalt nach einer Minute abgelesen. Es wird mindestens dreimal mit Hilfe einer Lupe abgelesen. Die Temperaturkorrektur des scheinbaren Alkoholgehaltes gemessen bei t °C wird mit Hilfe von Tabelle II vorgenommen.

Die Temperatur der Flüssigkeit soll nur gering von der der Raumtemperatur abweichen (höchstens 5 °C Unterschied).5.2. Bestimmung der Volumenmasse mit der hydrostatischen Waage

5.2.1. Gerätschaften

5.2.1.1. Hydrostatische Waage, siehe Kapitel 1 ""Volumenmasse".

5.2.2. Durchführung der Bestimmung

Die Bestimmung der scheinbaren Volumenmasse bei t °C des Destillates wird, wie in Kapitel 1 ""Volumenmasse" unter 5.2.2 beschrieben, durchgeführt.5.2.3. Angabe der Ergebnisse

Der Alkoholgehalt bei 20 °C wird gemäß den unter 4.3.1 gegebenen Anweisungen der Tabelle I entnommen, sofern der Schwimmer aus Pyrexglas besteht und gemäß der Tabelle III, sofern der Schwimmer aus gewöhnlichem Glas besteht.5.3. Refraktometrie

5.3.1. Gerätschaften

5.3.1.1. Refraktometer, das die Messung der Brechungsindizes zwischen 1,330 und 1,346 ermöglicht.

Je nach Art des Gerätes werden folgende Messungen durchgeführt:- bei 20 °C, mit Hilfe einer geeigneten Einrichtung;- bei Raumtemperatur t °C, gemessen mittels eines Thermometers (Genauigkeit 0,05 °C). Eine Korrekturtabelle für die Temperatur wird mit dem Gerät geliefert.5.3.2. Durchführung der Bestimmung

Die Messung des Brechungsindexes des Weindestillates (3.4) erfolgt gemäß der für den verwendeten Gerätetyp beschriebenen Arbeitsweise.5.3.3. Angabe der Ergebnisse

Der dem Brechungsindex bei 20 °C entsprechende Alkoholgehalt ist der Tabelle IV zu entnehmen.

Anmerkung:Tabelle IV gibt die Beziehung zwischen den Brechungsindizes für reine wäßrig-alkoholische Lösungen und Weindestillaten an. Bei Weindestillaten werden Verunreinigungen des Destillates (hauptsächlich höhere Alkohole) berücksichtigt. Das Vorhandensein von Methanol ist durch eine Verringerung des Brechungsindexes, somit also des Alkoholgehaltes, zu erkennen.

6. BEISPIEL FÜR DIE BERECHNUNG DES ALKOHOLGEHALTES EINES WEINES

(Referenzmethode)

6.1. Verwendung einer zweiarmigen Waage

6.1.1. Die Pyknometerkonstanten sind, wie in Kapitel 1""Volumenmasse und relative Dichte" unter 6.1.1 angegeben, bestimmt und berechnet worden.6.1.2. Wägung des mit Destillat gefuellten Pyknometers:Zahlenbeispielt °C = 18,90 °C

Gewicht = Pyknometer + Destillat bei t °C + p"t °C korrigiert = 18,70 °C

p" = 2,8074 g

p + m p" = Masse des Destillats bei t °C: 105,0698 2,8074 = 102,2624 g

Scheinbare Volumenmasse bei t °C:

6.1.3. Berechnung des Alkoholgehaltes:

Man bezieht sich auf die Tabelle der scheinbaren Volumenmassen von wäßrig-alkoholischen Lösungen bei verschiedenen Temperaturen (siehe 4.3.1).

Auf der Zeile 18 °C der Tabelle der scheinbaren Volumenmasse ist die zu der gemessenen Volumenmasse 0,983076 nächsthöhere Volumenmasse 0,98398 in der Spalte 11 % Vol.

Volumenmasse bei 18 °C: (98307,6 + 0,7 × 22) 10 5 = 0,98323

0,98398 0,98323 = 0,00075

Dezimalstellen der Alkoholvolumenprozente = 75/114 = 0,65

Der Alkoholgehalt beträgt somit 11,65 % Vol.6.2. Verwendung einer einarmigen Waage

6.2.1 Die Pyknometerkonstanten sind, wie in Kapitel 1 ""Volumenmasse und relative Dichte" unter 6.2.1 angegeben, bestimmt und berechnet worden.

6.2.2. Wägung des mit Destillat gefuellten Pyknometers:

Gewicht des Taragefässes zum

Zeitpunkt der Bestimmung in Gramm: T1 = 171,9178Mit Destillat gefuelltes

Pyknometer bei 20,50 °C in Gramm: P2 = 167,8438Änderung des Luftdrucks: dT = 171,9178 171,9160

= + 0,0018Masse des Destillates bei 20,50 °C: Lt = 167,8438 (67,6695 + 0,0018)

= 100,1725Scheinbare Volumenmasse des Destillates:6.2.3. Berechnung des Alkoholgehaltes

Man bezieht sich auf die Tabelle der scheinbaren Volumenmassen von wäßrig-alkoholischen Lösungen bei verschiedenen Temperaturen (siehe 4.3.1).

Auf der Zeile 20 °C der Tabelle der scheinbaren Volumenmassen ist die zu der gemessenen Volumenmasse 0,983825 nächsthöhere Volumenmasse 0,98471 in der Spalte 10 % Vol.

Volumenmasse bei 20 °C:

(98382,5 + 0,50 × 24) 10 5 = 0,983945

0,98471 0,983945 = 0,000765

Dezimalstellen der Alkoholvolumenprozente = 76,5/119 = 0,64

Der Alkoholgehalt beträgt somit 10,64 % Vol.

FORMEL ZUR BERECHNUNG DER ALKOHOLTABELLEN FÜR MISCHUNGEN AUS ETHYLALKOHOL UND WASSERDie Volumenmasse ""r", ausgedrückt als Kilogramm je Kubikmeter (kg/m³), einer Mischung aus Ethylalkohol und Wasser bei der Temperatur t, ausgedrückt in Grad Celsius, ist durch folgende Formel in Abhängigkeit von

- dem Massengehalt p, ausgedrückt durch eine Dezimalzahl (6),- der Temperatur t, ausgedrückt in Grad Celsius (E. I. P. T. 68),- den nachstehenden numerischen Koeffizientengegeben.Die Formel gilt für Temperaturen zwischen 20 °C und + 40 °C.

Numerische Koeffizienten der Formel

TABELLE I INTERNATIONALE ALKOHOLVOLUMENPROZENTE - BEI 20 °CTabelle der scheinbaren Volumenmassen von wäßrig-alkoholischen Mischungen - Pyknometer aus Pyrex-Glas - Volumen bei t° mit Luftdruckkorrektur

TABELLE II INTERNATIONALE ALKOHOLVOLUMENPROZENTE - BEI 20 °CTabelle für die Temperaturkorrektur der scheinbaren AlkoholvolumenprozenteDie unten angegebenen Korrekturwerte sind zu den scheinbaren Alkoholvolumenprozenten bei t ° (Alkoholmeter aus gewöhnlichem Glas) hinzuzufügen oder abzuziehen.

TABELLE III INTERNATIONALE ALKOHOLVOLUMENPROZENTE - BEI 20 °CTabelle der scheinbaren Volumenmassen von wäßrig-alkoholischen Mischungen- Geräte aus gewöhnlichem Glas -Volumenmasse bei t°, mit Luftdruckkorrektur

TABELLE IV Beziehung zwischen dem Brechungsindex bei 20 °C und dem Alkoholgehalt bei 20 °C von reinen wäßrig-alkoholischen Mischungen und Destillaten

4. GESAMT-TROCKENEXTRAKT

Gesamt-Trockensubstanz1. DEFINITION

Der Gesamt-Trockenextrakt oder die Gesamt-Trockensubstanz stellt die Gesamtmenge aller Weinsubstanzen dar, die sich unter bestimmten physikalischen Bedingungen nicht verfluechtigen. Diese Bedingungen müssen in der Weise festgelegt werden, daß die den Extrakt bildenden Stoffe nur möglichst geringe Veränderungen erfahren.

Der reduktionsfreie Extrakt ist der Gesamt-Trockenextrakt abzueglich des Gesamtzuckers.

Der reduzierte Extrakt ist der Gesamt-Trockenextrakt, vermindert um den 1 g/l übersteigenden Gesamtzucker, um das 1 g/l übersteigende Kaliumsulfat, um Mannit (soweit vorhanden) sowie abzueglich aller gegebenenfalls dem Wein zugesetzter Substanzen.

Der Extraktrest ist der reduktionsfreie Extrakt abzueglich der als Weinsäure berechneten nichtfluechtigen Säuren.

Der Extrakt wird in g/l ausgedrückt und muß mit einer Genauigkeit von 0,5 g bestimmt werden.2. PRINZIP DER METHODEN

Einzige Methode: densimetrische Bestimmung.

Der Gesamt-Trockenextrakt wird indirekt aus der Dichte des Mostes bzw. aus der Dichte des entalkoholisierten Weines berechnet.

Der Trockenextrakt wird durch die Menge Saccharose ausgedrückt, die in 1 Liter wäßriger Lösung die gleiche Dichte wie der Most bzw. der entalkoholisierte Wein aufweist. Die Werte sind der Tabelle I zu entnehmen.3. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

Die relative Dichte d2020 des ""entalkoholisierten Weines" (dr) wird mit Hilfe der Formel berechnet:dr = dw dA + 1,000dw = relative Dichte des Weines bei 20 °C (korrigiert um den Anteil der fluechtigen Säure) (7); dA = relative Dichte bei 20 °C einer wäßrig-alkoholischen Lösung mit dem gleichen Alkoholgehalt wie der Wein.

Man kann dr auch aus der Volumenmasse bei 20 °Crw des Weines und rA der wäßrig-alkoholischen Mischung von gleichem Alkoholgehalt berechnen durch die Formel:dr = 1,0018 (rw rA) + 1,000,wobei der Faktor 1,0018 in den Fällen, in denen rW kleiner als 1,05 ist, d. h. in den meisten Fällen, durch 1 ersetzt werden kann.4. ANGABE DER ERGEBNISSE

Der Gesamt-Trockenextrakt in g/l wird entsprechend der Dichte dr2020 des entalkoholisierten Weines bzw. d2020 des Mostes der Tabelle I entnommen.

Der Gesamt-Trockenextrakt wird mit 1 Dezimale angegeben.

TABELLE I Berechnung des Gehaltes am Gesamt-Trockenextrakt (g/l)

Ergänzungstabelle

5. REDUZIERENDE ZUCKER

1. DEFINITION

Die reduzierenden Zucker, die sich aus den Gesamtzuckern mit einer Keto- oder Aldehydgruppe zusammensetzen, werden durch Reduzierung einer alkalischen Kupfersalzlösung bestimmt.2. PRINZIP DER METHODEN

2.1. Klärung

2.1.1. Referenzmethode: Behandlung des neutralisierten und vom Alkohol befreiten Weines über eine Anionenaustauschersäule, wobei dessen Anionen gegen Acetationen ausgetauscht werden, und anschließende Klärung mit neutralem Bleiacetat.

2.1.2. Gebräuchliche Methoden: Behandlung des Weines mit einem der folgenden Reagenzien:

2.1.2.1. Neutrales Bleiacetat

2.1.2.2. Zinkhexacynoferrat II2.2. Bestimmung

2.2.1. Einzige Methode: Nachdem der geklärte Wein oder Most mit einer bestimmten Menge Kupfersulfat reagiert hat, wird der Überschuß an Kupferionen iodometrisch bestimmt.3. KLÄRUNG

Die Lösung, in der die Zuckerbestimmung erfolgt, soll einen Zuckergehalt zwischen 0,5 und 5 g/l aufweisen.

Handelt es sich um einen trockenen Wein, so ist während der Klärung eine Verdünnung zu vermeiden. Bei zuckerreichen Weinen soll bei der Klärung eine Verdünnung in der Weise vorgenommen werden, daß der Zuckergehalt zwischen den in der nachfolgenden Tabelle angegebenen Grenzwerten liegt.

BezeichnungZuckergehalt liegt zwischen (g/l)Volumenmasse 20 °C zwischenVorzunehmende Verdünnung (%)Moste und Mistellen>125>1,0381Süsse Weine mit oder ohne Alkoholzusatz25 und 1251,005 und 1,0384Liebliche Weine5 und 250,997 und 1,00520Trockne Weine< 5< 0,997keine Verdünnung 3.1. Referenzmethode

3.1.1. Reagenzien

3.1.1.1. Salzsäure (HCl), 1 M

3.1.1.2. Natronlauge (NaOH), 1 M

3.1.1.3. Essigsäure (CH3 COOH), 4 M

3.1.1.4. Natronlauge (NaOH), 2 M

3.1.1.5. Anionenaustauscherharz (Typ Dowex 3 (20-50 mesh) oder gleichwertiges Harz).

Vorbereitung der Austauschersäule. In eine 50-ml-Bürette, deren unteres Ende mit einem Glaswollepfropfen verschlossen ist, werden 15 ml Anionenaustauscherharz (3.1.1.5) eingebracht.

Vor der Verwendung des Harzes wird dieses in zwei vollständigen Arbeitsgängen regeneriert, wobei abwechselnd eine 1-M-Salzsäurelösung (3.1.1.1) und eine 1-M-Natronlauge (3.1.1.2) verwendet werden. Nach dem Nachwaschen mit 50 ml destilliertem Wasser wird das Harz in ein Becherglas gegeben, 50 ml einer 4-M-Essigsäurelösung (3.1.1.3) hinzugefügt, 5 Minuten lang geschüttelt und in die Bürette zurückgefuellt. Danach werden 100 ml 4-M-Essigsäurelösung (3.1.1.3) über die Säule gegeben. (Es ist zweckmässig, das Harz unter 4-M-Essigsäure (3.1.1.3) aufzubewahren.) Die Säule wird mit destilliertem Wasser gewaschen, bis die ablaufende Flüssigkeit neutral reagiert.

Regenerierung des Harzes. Man lässt 150 ml einer 2-M-Natronlauge (3.1.1.4) durch die Säule laufen, um die Säuren und einen grossen Teil der am Harz haftenden Farbstoffe zu entfernen und wäscht mit 100 ml Wasser nach. Dann lässt man 100 ml 4-M-Essigsäurelösung (3.1.1.3) durchlaufen und wäscht nach bis die ablaufende Flüssigkeit neutral reagiert.

3.1.1.6. Neutrale Bleiacetatlösung (annähernd gesättigt):250 g neutrales Bleiacetat (CH3 COO)2Pb · 3 H2O) werden mit sehr heissem Wasser auf 500 ml gebracht und bis zur Lösung geschüttelt.

3.1.1.7. Calciumcarbonat (Ca CO3)3.1.2. Durchführung der Bestimmung

3.1.2.1. Trockne Weine

50 ml Wein werden in einer Schale (Durchmesser 10-12 cm) mit 0,5 (n-0,5) ml 1-M-Natronlauge (3.1.1.2) versetzt (n = ml 0,1 M-Natronlauge, die zur Bestimmung der Gesamtsäure von 10 ml Wein verbraucht wurden) und auf einem siedenden Wasserbad mit Hilfe eines heissen Luftstroms auf etwa 20 ml eingeengt.

Diese Lösung lässt man durch die Anionenaustauschersäule in Acetatform (3.1.1.5) mit einer Geschwindigkeit von 3 ml in 2 Minuten durchlaufen. Das Eluat wird in einem 100-ml-Meßkolben aufgefangen. Die Schale und die Säule werden insgesamt 6 × mit je 10 ml destilliertem Wasser gewaschen, sodann fügt man dem Meßkolben 1 ml der gesättigten Bleiacetatlösung (3.1.1.6) und 0,5 g Calciumcarbonat (3.1.1.7) hinzu, schüttelt mehrfach um und lässt mindestens 15 Minuten stehen; danach fuellt man mit Wasser zur Marke auf und filtriert.

1 ml dieses Filtrats entspricht 0,5 ml Wein.

3.1.2.2. Moste, Mistellen, Süßweine und liebliche Weine

Nachstehende Verdünnungen werden als Beispiele angegeben.

1. Moste und MistellenDie zu untersuchende Flüssigkeit wird 10 zu 100 verdünnt, 10 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

2. Süßweine mit oder ohne Alkoholzusatz, mit einer Volumenmasse 20 °C zwischen 1,005 und 1,038. Die zu untersuchende Flüssigkeit wird 20 zu 100 verdünnt, 20 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

3. Liebliche Weine, deren Volumenmasse 20 °C zwischen 0,997 und 1,005 liegt. 20 ml des unverdünnten Weines werden zur Bestimmung verwendet.Durch die Austauschersäule in Acetatform (3.1.1.5) wird die oben angegebene Menge des Weines gegeben und mit einer Geschwindigkeit von 3 ml in 2 Minuten durch die Säule durchlaufengelassen. Das Eluat wird in einem 100-ml-Meßkolben aufgefangen. Die Säule wird so lange mit Wasser gewaschen, bis die Flüssigkeitsmenge im Kölbchen 90 ml beträgt. Sodann gibt man 0,5 g Calciumcarbonat (3.1.1.7) und 1 ml der gesättigten Bleiacetatlösung (3.1.1.6) zu, schüttelt um und lässt 15 Minuten unter zeitweiligem Umschütteln stehen. Man fuellt mit Wasser zur Marke auf und filtriert.

Im Fall:1. 1 ml Filtrat entspricht 0,01 ml Most oder Mistelle.2. 1 ml Filtrat entspricht 0,04 ml Süßwein.3. 1 ml Filtrat entspricht 0,20 ml lieblichem Wein.

3.2. Gebräuchliche Methoden

3.2.1. Klärung mit neutralem Bleiacetat

3.2.1.1. Reagenzien

Neutrale Bleiacetatlösung (annähernd gesättigt) (siehe 3.1.1.6).Calciumcarbonat.3.2.1.2. Durchführung der Bestimmung

3.2.1.2.1. Trockne Weine

50 ml eines trocknen Weines werden in einem 100-ml-Meßkolben mit 0,5 (n-0,5) ml 1-M-Natronlauge (3.1.1.2) versetzt (n = ml 0,1-M-Natronlauge, die zur Bestimmung der Gesamtsäure von 10 ml Wein verbraucht wurden). Unter Schütteln werden 2,5 ml der gesättigten Bleiacetatlösung (3.1.1.6) und 0,5 g Calciumcarbonat (3.1.1.7) hinzugefügt. Man schüttelt mehrmals um und lässt mindestens 15 Minuten stehen. Dann wird mit Wasser zur Marke aufgefuellt und filtriert.1 ml Filtrat entspricht 0,5 ml Wein.3.2.1.2.2. Moste, Mistellen, Süßweine und liebliche Weine

In einem 100-ml-Meßkolben wird eine entsprechende Menge Wein (oder Most oder Mistelle) gegeben, wobei die nachstehend aufgeführten Verdünnungen als Beispiel dienen:

1. Moste und Mistellen.Die zu untersuchende Flüssigkeit wird 10 zu 100 verdünnt, 10 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

2. Süßweine, mit oder ohne Alkoholzusatz, mit einer Volumenmasse zwischen 1,005 und 1,038. Die zu untersuchende Flüssigkeit wird 20 zu 100 verdünnt, 20 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

3. Liebliche Weine, mit einer Volumenmasse zwischen 0,997 und 1,005. 20 ml des unverdünnten Weines werden zur Bestimmung verwendet.Zu der entsprechenden Flüssigkeitsmenge fügt man 0,5 g Calciumcarbonat, etwa 60 ml Wasser und 0,5 bzw. 1 oder 2 ml der gesättigten Bleiacetatlösung hinzu, schüttelt um, lässt mindestens 15 Minuten stehen (von Zeit zu Zeit umschütteln), fuellt zur Marke mit Wasser auf und filtriert.

Im Fall:1. 1 ml Filtrat entspricht 0,01 ml Most oder Mistelle.2. 1 ml Filtrat entspricht 0,04 ml Süßwein.3. 1 ml Filtrat entspricht 0,20 ml lieblichem Wein.3.2.2. Klärung mit Zinkhexacyanoferrat (II)

Dieses Verfahren soll nur für Weißweine, hellfarbige Süßweine und Moste verwandt werden.3.2.2.1. Reagenzien

3.2.2.1.1. Lösung I (Kaliumhexacyanoferrat (II)-Lösung)

Kaliumhexacyanoferrat (II) (K4 Fe (CN)6 · 3H2O) 150 g

mit Wasser auf 1 000 ml.

3.2.2.1.2. Lösung II (Zinksulfatlösung):Zinksulfat (Zn SO4 · 7 H2O) 300 g

mit Wasser auf 1 000 ml.

3.2.2.2.Durchführung der Bestimmung

In einen 100-ml-Meßkolben wird eine entsprechende Menge Wein (oder Most oder Mistelle) gegeben, wobei die nachstehend aufgeführten Verdünnungen als Beispiel dienen:

1. Moste und Mistellen.Die zu untersuchende Flüssigkeit wird 10 zu 100 verdünnt, 10 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

2. Süßweine, mit oder ohne Alkoholzusatz, mit einer Volumenmasse 20 °C zwischen 1,005 und 1,038. Die zu untersuchende Flüssigkeit wird 20 zu 100 verdünnt, 20 ml dieser Verdünnung werden zur Bestimmung verwendet.

3. Liebliche Weine, mit einer Volumenmasse 20 °C zwischen 0,997 und 1,005. 20 ml des unverdünnten Weines werden zur Bestimmung verwendet.

4. Trockne Weine.50 ml des unverdünnten Weines werden zur Bestimmung verwendet.Zu der entsprechenden Flüssigkeitsmenge werden 5 ml Kaliumhexacyanoferrat (II)-Lösung (3.2.2.1.1) und 5 ml Zinksulfatlösung (3.2.2.1.2) hinzugefügt, gemischt, mit Wasser zur Marke aufgefuellt, 10 Minuten stehengelassen und filtriert.

Im Fall:1. 1 ml Filtrat entspricht 0,01 ml Most oder Mistelle.2. 1 ml Filtrat entspricht 0,04 ml Süßwein.3. 1 ml Filtrat entspricht 0,20 ml lieblichem Wein.4. 1 ml Filtrat entspricht 0,50 ml trocknem Wein.

4. BESTIMMUNG

4.1. Reagenzien

4.1.1. Alkalische Kupfersalzlösung:Kupfersulfat, p.a. (CuSO4 · 5 H2O) 25 g

Citronensäure p.a. (C6 H8 O7 · H2O) 50 g

kristallisiertes Natriumcarbonat (Na2 CO3 · 10 H2O) 388 g

mit Wasser auf 1 000 ml.Man löst das Kupfersulfat in 100 ml Wasser, die Citronensäure in 300 ml Wasser und das Natriumcarbonat in 300 bis 400 ml heissem Wasser. Zunächst werden die Citronensäurelösung und die Natriumcarbonatlösung gemischt, sodann die Kupfersulfatlösung hinzugefügt und auf 1 l aufgefuellt.4.1.2. 30%ige Kaliumjodidlösung:Kaliumjodid (K) 30 g

mit Wasser auf 100 ml.In dunkler Glasflasche aufbewahren.4.1.3.25%ige Schwefelsäure:Schwefelsäure p.a. (H2SO4) r20 = 1,84 g/ml 25 g

mit Wasser auf 1 000 ml.Man gibt die Schwefelsäure zum Wasser, lässt abkühlen und fuellt auf 100 ml auf.4.1.4. Stärkelösung 5 g/l:

5 g Stärke werden in etwa 500 ml Wasser gelöst, unter Rühren zum Kochen gebracht und 10 Minuten im Sieden gehalten. Man fügt 200 g Natriumchlorid (NaCl) zu und fuellt nach dem Abkühlen auf 1 l auf.

4.1.5. Natriumthiosulfatlösung (Na2S2O3) 0,1 M

4.1.6. Invertzuckerlösung 5 g/l:

Diese Lösung ist zur Überprüfung der Bestimmungstechnik zu verwenden.

In einen 200 ml Meßkolben gibt manSaccharose p.a. (C12H22O11) 4,75 g

Wasser, etwa 100 ml

Salzsäure p.a. (HCl), r20 = 1,16-1,19 g/ml 5 mlIn einem Wasserbad von 60 °C wird die Lösung auf 50 °C erwärmt und 15 Minuten bei dieser Temperatur gehalten. Man lässt 30 Minuten bei Raumtemperatur und anschließend in einem kalten Wasserbad abkühlen. Die Lösung wird in einen 1 000-ml-Meßkolben übergeführt und zur Marke aufgefuellt. Diese Lösung ist etwa 1 Monat haltbar.

Vor Gebrauch wird die Lösung mit Natronlauge neutralisiert (Acidität der Lösung etwa 0,06 M).4.2.Durchführung der Bestimmung

In einen 300-ml-Erlenmeyer-Kolben gibt man 25 ml alkalische Kupfersalzlösung, 15 ml Wasser und 10 ml der geklärten Flüssigkeit. Die Lösung darf nicht mehr als 60 mg Invertzucker enthalten.

Man fügt einige Körnchen Bimsstein hinzu, bringt die Lösung am Rückfluß innerhalb von 2 Minuten zum Sieden und hält genau 10 Minuten lang im Sieden.

Es wird sofort unter fließendem Wasser abgekühlt. Nach vollständigem Abkühlen werden 10 ml 30%ige Kaliumjodidlösung (4.1.2), 25 ml 25%ige Schwefelsäure (4.1.3) und 2 ml Stärkelösung (4.1.4) zugegeben.

Man titriert mit 0,1 M-Natriumthiosulfatlösung (4.1.5).

n = ml verbrauchte Natriumthiosulfatlösung des Hauptversuches.

Ausserdem wird ein Blindwert ermittelt, bei dem die 10 ml Probelösung durch 10 ml destilliertes Wasser ersetzt werden.

n2 = ml verbrauchte Natriumthiosulfatlösung des Blindversuches.4.3. Angabe der Ergebnisse

4.3.1. Berechnung

Der in der untersuchten Lösung enthaltene Zuckergehalt, ausgedrückt als Invertzucker, ist in Abhängigkeit von n2-n ml verbrauchter 0,1 M-Natriumthiosulfatlösung nachstehender Tabelle zu entnehmen.

Der Zuckergehalt des Weines wird in Gramm Invertzucker je Liter mit einer Dezimalstelle angegeben, wobei die während der Klärung durchgeführten Verdünnungen und das Probevolumen zu berücksichtigen sind.4.3.2. Wiederholbarkeit

r = 0,015 xixi = Konzentration des Invertzuckers in g/l der Probe.4.3.3. Vergleichbarkeit

R = 0,058 xixi = Konzentration des Invertzuckers in g/l der Probe.

6. SACCHAROSE 1. PRINZIP DER METHODEN

II. Qualitativer Nachweis mittels Dünnschichtchromatographie. Die Saccharose wird dünnschichtchromatographisch auf Celluloseplatten von den anderen Zuckern getrennt und mit dem Reagenz Harnstoff-Salzsäure bei 105 °C nachgewiesen.

II. Nachweis und Bestimmung durch Hochdruckfluessigkeitschromatographie, Trennung der Saccharose über eine aminomodifizierte Kieselgelsäule, Detektion mittels Refraktometrie und Quantifizierung über einen externen Standard.

Anmerkungen:Der Nachweis eines Zusatzes von Saccharose zum Most rektifizierten Traubenmostkonzentrat oder Wein kann durch die Kernresonanzmagnetische Messung des Deuteriums geführt werden.Für den Nachweis und die Bestimmung von Saccharose kann auch die Gaschromatographie, wie in Kapitel 42 unter f) beschrieben, angewandt werden.2. DÜNNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE METHODE

2.1. Gerätschaften

2.1.1. Cellulose-Fertigplatten

2.1.2. Chromatographiekammer

2.1.3. Mikroliterspritze oder Mikropipette

2.1.4. Trockenschrank, einstellbar auf 105 ± 2 °C2.2. Reagenzien

2.2.1. Aktivkohle

2.2.2. Fließmittel: Dichlormethan - Essigsäure (r20 = 1,05 g/ml) - Ethanol - Methanol - Wasser(50:25:9:6:10).

2.2.3. Sprühreagenz:Harnstoff 5 g

Salzsäure, 2 M 20 ml

Ethanol 100 ml.

2.2.4. Vergleichslösung:Glucose 35 g

Fructose 35 g

Saccharose 0,5 g

Wasser zu 1 000 ml.2.3. Durchführung der Bestimmung

2.3.1. Vorbereitung der Probe

Stark gefärbte Moste und Weine werden mit Aktivkohle entfärbt.

Bei rektifiziertem Traubenmostkonzentrat verwendet man eine Lösung, die 25 % (g/g) Zucker enthält (25 ° Brix), siehe Kapitel ""pH-Wert des Weines und des Mostes" unter 4.1.2, und verdünnt diese 1:4 (25 ml/100 ml) mit Wasser.

2.3.2. Chromatographie

2,5 cm vom unteren Plattenrand entfernt werden- 10 µl der Probelösung,- 10 µl der Vergleichslösungaufgetragen.

Man chromatographiert bei Kammersättigung bis etwa 1 cm unterhalb des oberen Plattenrandes. Sodann wird die Platte in einem warmen Luftstrom getrocknet und die Chromatographie noch zweimal wiederholt, wobei die Platte jedes Mal getrocknet wird. Danach besprüht man mit 15 ml des Sprühreagenzes und erhitzt 5 Minuten bei 105 °C im Trockenschrank.2.4. Ergebnis

Saccharose und Fructose erscheinen als dunkelblaue Flecken auf weissem Grund, Glucose als weniger intensiver grünlicher Fleck.3. NACHWEIS UND BESTIMMUNG DURCH HPLC

Die chromatographischen Bedingungen sind lediglich beispielhaft angegeben.3.1. Gerätschaften

3.1.1. Hochdruckfluessigkeitschromatograph ausgerüstet mit:

1. einem Injektor mit Probenschleife, 10 µl;2. einem Detektor, Differential-Refraktometer oder Interferometer;3. einer Trennsäule, Länge 250 mm, innerer Durchmesser 4 mm, stationäre Phase aminodifiziertes (NH2) Kieselgel;4. einer Vorsäule, gefuellt mit derselben Phase;5. einer Einrichtung zum Temperieren der Vor- und Trennsäule auf 30 °C;6. einem Schreiber, evtl. Integrator;7. Fließgeschwindigkeit der mobilen Phase: 1 ml/Min.3.1.2. Membranfiltration (0,45 µm)3.2. Reagenzien

3.2.1. Bidestilliertes Wasser

3.2.2. Acetonitril (CH3CN) HPLC-Qualität

3.2.3. Mobile Phase: Acetonitril-Wasser (80-20 (v/v)), filtriert über eine Membrane (0,45 µm).Das Fließmittel wird vor Gebrauch entgast.

3.2.4. Eichlösung: Wäßrige Saccharoselösung, 1,2 g/l, filtriert über eine Membrane (0,45 µm).

3.3. Durchführung der Bestimmung

3.3.1. Vorbereitung der Probe

- Wein und Most: Man filtriert die Proben über eine Membrane (0,45 µm).- Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat (RTK): Man verwendet eine verdünnte Lösung des RTK (40 %, g/v), siehe ""Gesamtsäure" unter 5.1.2 und filtriert diese über eine Membrane (0,45 µm).3.3.2.Chromatographie

Man injiziert jeweils 10 µl der Eichlösung und der nach 3.3.1 vorbereiteten Probenlösung und nimmt die Chromatogramme auf. Die Einspritzungen werden wiederholt.Die Retentionszeit der Saccharose beträgt etwa 10 Minuten.3.4. Berechnung

Zur Berechnung nimmt man die Mittelwerte aus jeweils 2 Einspritzungen der Eichlösung und der Probelösung.3.4.1. Wein und Most

Der Gehalt wird in g/l berechnet.3.4.2. Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat (RTK)

Der Saccharosegehalt in g/kg RTK beträgt 2,5 × C.

C = Saccharosegehalt in g/l der 40%igen (g/v) RTK-Lösung.3.5. Angabe der Ergebnisse

Der Saccharosegehalt des Weines, des Mostes und des RTK wird in g/l (Wein und Most) bzw. g/kg RTK mit 1 Dezimalstelle angegeben.

7. GLUCOSE UND FRUCTOSE 1. DEFINITION

Glucose und Fructose werden enzymatisch bestimmt. Diese Bestimmung wird nur zur Berechnung des Verhältnisses Glucose/Fructose herangezogen.2. PRINZIP

Glucose und Fructose werden mit Adenosin-52-triphosphat (ATP) während einer durch das Enzym Hexokinase (HK) katalysierten Reaktion phosphoriliert und bilden Glucose-6-phosphat (G6P) und Fructose-6-phosphat (F6P):

Glucose + ATP G6P + ADP

Fructose + ATP F6P + ADP

Zunächst wird Glucose-6-phosphat durch Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat (NADP) in Gegenwart des Enzyms Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (G6PDH) zu Gluconat-6-phosphat oxidiert. Die reduzierte Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat-Menge (NADPH), die während der Reaktion gebildet wird, entspricht der Menge Glucose-6-phosphat, somit also der Glucosemenge.

G6P + NADP+ Gluconat-6-phosphat + NADPH + H+

Das reduzierte Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat (NADPH) ist Meßgrösse und wird aufgrund seiner Absorption bei 340 nm bestimmt.

Nach Ablauf dieser Reaktion wird Fructose-6-phosphat durch Phosphoglucose-Isomerase (PGI) in Glucose-6-phosphat überführt.

Glucose-6-phosphat reagiert erneut mit Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat und bildet dabei Gluconat-6-phosphat und reduziertes Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat (NADPH); dieses wird wiederum bestimmt.3. GERÄTSCHAFTEN

- Spektralphotometer zur Durchführung der Messung bei 340 nm, dem Absorptionsmaximum von NADPH. Da es sich um absolute Messungen handelt (Berechnung nicht über eine Eichkurve, sondern über den molaren Extinktionsköffizienten von NADPH), müssen die Richtigkeit der Wellenlänge und die Linearität der Extinktionen gewährleistet sein.Gegebenenfalls kann auch ein Spektrallinienphotometer verwendet werden, das Messungen bei 334 nm oder 365 nm erlaubt.- Glas- oder Einwegküvetten, Schichtdicke 1 cm.- Enzymtestpipetten, 0,02 - 0,05 - 0,1 - 0,2 ml.4. REAGENZIEN

4.1. Lösung 1: Puffer (Triethanolamin 0,3 M; pH = 7,6; 4· 10 3 M Mg2+): 11,2 g Triethanolaminhydrochlorid (C2H5)3N · HCl) und 0,2 g Mg SO4 · 7 H2O werden in 150 ml bidestilliertem Wasser gelöst, 4 ml 5 M Natronlauge (NaOH) hinzugefügt, um einen pH = 7,6 zu erreichen, und auf 200 ml aufgefuellt.

Diese Pufferlösung kann vier Wochen lang bei + 4 °C aufbewahrt werden.

4.2. Lösung 2: Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat (ungefähr 11,5.10 3M): 50 mg Dinatrium-Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat werden in 5 ml bidestilliertem Wasser gelöst.

Diese Lösung kann vier Wochen lang bei + 4 °C aufbewahrt werden.

4.3. Lösung 3: Adenosin-52-triphosphat (ungefähr 81 10 3M): 250 mg Dinatrium-adenosin-52-triphosphat und 250 mg Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3) werden in 5 ml bidestilliertem Wasser gelöst.

Diese Lösung kann vier Wochen lang bei + 4 °C aufbewahrt werden.

4.4. Lösung 4:Hexokinase/Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase: 0,5 ml Hexikonase (2 mg Protein/ml, d. h. 280 U/ml) und 0,5 ml Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (1 mg Protein/ml) werden gemischt.

Die Mischung kann ein Jahr lang bei ungefähr + 4 °C aufbewahrt werden.

4.5. Lösung 5: Phosphoglucose-Isomerase (2 mg Protein/ml, d. h. 700 U/ml). Die Suspension wird unverdünnt verwendet.

Aufbewahrung: 1 Jahr bei ungefähr + 4 °C.

Anmerkung:Die für diese Bestimmung notwendigen Reagenzien sind im Handel erhältlich.5. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

5.1. Vorbereitung der Probe

Nach Maßgabe der geschätzten Glucose- und Fructosemenge je Liter werden folgende Verdünnungen hergestellt:

Messung bei 340 und 334 nm365 nmVerdünnung mit WasserVerdünnungsfaktor FBis 0,4 g/l 0,8 g/l- -Bis 4,0 g/l 8,0 g/l1 + 9 10Bis 10,0 g/l20,0 g/l1 + 24 25Bis 20,0 g/l40,0 g/l1 + 49 50Bis 40,0 g/l80,0 g/l1 + 99 100Über 40,0 g/l80,0 g/l1 + 9991 000

5.2. Messung

Das Spektralphotometer wird auf die Wellenlänge 340 nm eingestellt, die Messungen werden gegen Luft (keine Kuevette im Strahlengang) oder gegen Wasser durchgeführt.Temperatur 20 bis 25 °C.In 2 Kuevetten, Schichtdecke 1 cm, pipettiert man:

Leerwert ProbeLösung 1 (4.1) (Temperatur auf 20 °C) 2,50 ml 2,50 ml

Lösung 2 (4.2) 0,10 ml 0,10 ml

Lösung 3 (4.3) 0,10 ml 0,10 ml

Probe 0,20 ml

Destilliertes Wasser 0,20 ml

Man mischt und misst nach ungefähr 3 Minuten die Extinktion der Lösungen (E1). Die Reaktion wird gestartet durch die Zugabe vonLösung 4 (4.4) 0,02 ml 0,02 ml.

Man mischt, wartet 15 Minuten und misst die Extinktion der Lösungen. Der Stillstand der Reaktion wird nach 2 Minuten überprüft (E2).

Anschließend fügt man:Lösung 5 (4.5) 0,02 ml 0,02 ml

hinzu und mischt. Nach 10 Minuten wird die Extinktion gemessen und über Stillstand der Reaktion nach 2 Minuten überprüft (E3).

Man berechnet die Extinktionsdifferenzen (DE) für den Leerwert und die Probe:E2 - E1 entspricht Glucose;E3 - E2 entspricht Fructose.

Die Extinktionsdifferenz des Leerwertes (DEL) wird von der Extinktionsdifferenz der Probe (DEp) abgezogen, man erhältfür Glucose: DEG = DEp DELfür Fructose: DEF = DEp DEL.

Bemerkung:Die für die Reaktion der Enzyme erforderliche Zeit kann sich von einer Charge zur anderen ändern; sie wird hier nur als Beispiel angegeben. Es wird empfohlen, diese für jede Charge zu bestimmen.5.3. Angabe der Ergebnisse

5.3.1. Berechnung

Die allgemeine Formel für die Berechnung der Konzentration lautet:V = Testvolumen (ml)

v = Probevolumen (ml)

MG = Molekulargewicht der zu bestimmenden Substanz

d = Schichtdicke der Kuevette (cm)

e = Extinktionsköffizient von NADPH bei 340 nm = 6,3 (mmol 1 · l · cm 1)

V = 2,92 ml für die Bestimmung der Glucose

V = 2,94 ml für die Bestimmung der Fructose

v = 0,20 ml

MG = 180

d = 1.

Man erhält:für Glucose: Cg/l = 0,417· DEG

für Fructose: Cg/l = 0,420· DEF.

Ist bei der Vorbereitung der Probe eine Verdünnung vorgenommen worden, so wird das Ergebnis mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor F multipliziert.

Anmerkung:Wurde die Messung bei den Wellenlängen 334 oder 365 nm, durchgeführt, so ergibt sich für die- Messung bei 334 nm e = 6,2 (mmol 1 · l · cm 1)für Glucose: Cg/l = 0,425 · DEG

für Fructose: Cg/l = 0,428 · DEF;- Messung bei 365 nm e = 3,4 (mmol 1 · l · cm 1)für Glucose: Cg/l = 0,773 · DEG

für Fructose: Cg/l = 0,778 · DEF.5.3.2. Wiederholbarkeit (r)

r = 0,056 xi.5.3.3. Vergleichbarkeit (R)

R = 0,12 + 0,076 xi

xi = Glucose- bzw. Fructosegehalt in g/l.

8. NACHWEIS DER ANREICHERUNG VON TRAUBENMOST, TRAUBENMOSTKONZENTRAT, REKTIFIZIERTEM TRAUBENMOSTKONZENTRAT UND WEIN DURCH KERNRESONANZMAGNETISCHE MESSUNG DES DEUTERIUMGEHALTES (RMN FINS / SNIF NMR) 1. DEFINITION

Die im Zucker und im Wasser des Traubenmostes enthaltenen Deuteriumatome sind nach der Gärung in den Molekülen I, II, III und IV des Weines wie folgt verteilt:CH2D CH2 OH CH3CHD OH

I IICH3 CH2 OD HOD

III IV

Die Zugabe von Zucker (Trockenzuckerung) vor der Gärung des Mostes wirkt sich auf die Verteilung der Deuteriumatome aus.

Im Vergleich zu den Werten der entsprechenden Parameter eines natürlichen Weines aus dem gleichen Weinanbaugebiet hat die Trockenzuckerung folgende Änderungen zur Folge:

Parameter

Wein(D/H)I(D/H)II(D/H)QWR- ohne Anreicherung - angereichert mit - Rübenzucker - Rohrzucker - Maiszucker

(D/H)I : Isotopenverhältnis im Molekül I(D/H)II : Isotopenverhältnis im Molekül II(D/H)QW : Isotopenverhältnis im Wasser des Weines.

R = 2(D/H)II/(D/H)I gibt die relative Verteilung des Deuteriums in den Molekülen I und II wieder : R wird direkt gemäß den Signalintensitäten h gemessen und beträgt R = 3hII/hI.

(D/H)I kennzeichnet vor allem die Pflanzenart, die den Zucker synthetisiert hat und in geringem Masse die geographische Lage des Anbauortes (Art des bei der Photosynthese assimilierten Wassers).

(D/H)II gibt Aufschluß über die klimatischen Verhältnisse des Anbauortes der Trauben (Art des Regenwassers und meteorologische Bedingungen) und in geringem Masse über die anfängliche Zuckerkonzentration des Mostes.

(D/H)QW beschreibt die klimatischen Verhältnisse des Anbauortes und den Zuckergehalt des Ausgangsmostes.2. PRINZIP

Die Bestimmung der oben definierten Parameter R, (D/H)I und (D/H)II erfolgt durch NMR-Messung des Deuteriums an dem aus Wein oder Produkten der Gärung von Most, Mostkonzentrat oder rektifiziertem Mostkonzentrat unter bestimmten Bedingungen extrahierten Ethanol; sie wird gegebenenfalls durch die Bestimmung des Isotopenverhältnisses des aus dem Wein extrahierten Wassers (D/H)QW und des Isotopenverhältnisses 13C/12C im Ethanol ergänzt.

Aus der zu erwartenden Datenbank der Gemeinschaft müssen- bei Weinen neben den in den betreffenden Anbaugebieten entnommenen Untersuchungsproben auch authentische Vergleichsproben gleichen Ursprungs (geographischer Ort und Jahrgang) entnommen werden (mindestens 3);- bei Mosten, Mostkonzentraten und rektifizierten Mostkonzentraten als Vergleichsproben authentische Moste gleichen Ursprungs (geographischer Ort und Jahrgang) entnommen werden (mindestens 3).

Für die Kontrolle der auf ihrem Hoheitsgebiet hergestellten Erzeugnisse und in Erwartung des Aufbaus einer Datenbank der Gemeinschaft können die Mitgliedstaaten vorläufig eine einzelstaatliche Datenbank benutzen3. VORBEREITUNG DER PROBE

3.1. Gewinn von Ethanol und Wasser aus dem Wein

Anmerkung: Jede andere Apparatur zur Gewinnung des Ethanols kann verwendet werden, wenn 98-98,5 % des vorhandenen Weinalkohols gewonnen werden und das Endprodukt 92-93 % (g/g) Alkohol (95 % Vol.) enthält.3.1.1. Gerätschaften und Reagenzien

- Apparatur zur Gewinnung von Ethanol (Abbildung 1), bestehend aus:- Pilzheizhaube mit Spannungsregler;- Schliffkolben, Inhalt 1 Liter;- Drehbandkolonne mit Teflon-Spirale;- 125 ml Erlenmeyerkolben mit Schliff;- 125 und 60 ml Flaschen mit Kunststoffstopfen.- Karl-Fischer-Reagenzien zur Bestimmung des Wassers (zum Beispiel Merck 9241 und 9243).3.1.2.Durchführung der Bestimmung

3.1.2.1. Der Alkoholgehalt des Weines wird auf mindestens 0,05 % Vol. genau bestimmt (tv).3.1.2.2. Gewinnung des Ethanols

500 ml gut gemischter Wein mit einem Alkoholgehalt von tv werden in den Kolben der Destillationsapparatur, die mit einem konstanten Rückflußverhältnis von etwa 0,9 arbeitet, gegeben. Das Destillat wird in einem zuvor gewogenen 125-ml-Schlifferlenmeyerkolben aufgefangen. 40 bis 60 ml der im Temperaturbereich 78,0 bis 78,2 °C siedenden Flüssigkeit werden aufgefangen. Übersteigt die Temperatur 78,5 °C, so wird die Entnahme 5 Minuten lang unterbrochen.

Nach Abkühlen auf 78 °C wird wiederum Destillat entnommen, bis die Temperatur erneut 78,5 °C erreicht; dieser Vorgang wird wiederholt, bis die Temperatur nach Unterbrechung der Entnahme und bei Betrieb im geschlossenen Kreislauf nicht mehr abnimmt. Die vollständige Destillation dauert rund 5 Stunden. Auf diese Weise können 98 bis 98,5 % des Gesamtalkoholgehaltes des Weines überdestilliert werden. Man erhält so ein Destillat von 92 bis 93 Gewichtsprozent (95 % Vol.) Alkohol, ein Alkoholgehalt, auf den sich die in Kapitel 4 beschriebenen Meßbedingungen beziehen.

Das so erhaltene Ethanol wird gewogen.

60 ml der homogenen Destillationsrückstände werden in einem 60-ml-Fläschchen aufbewahrt. Dies entspricht dem Wasser des Weines, dessen Isotopenverhältnis eventuell bestimmt wird.

Anmerkung: Steht ein Spektrometer mit einem Probenkopf von 10 mm zur Verfügung (siehe Kapital 4), so ist die Entnahme einer homogenen Probe von 300 ml Wein ausreichend.3.1.2.3.Bestimmung des Alkoholgehaltes des gewonnenen Ethanoldestillates

An einer Probe von etwa 0,5 ml Ethanol mit genau bekannter Masse p in g wird der Wassergehalt (p2) nach dem Karl-Fischer-Verfahren bestimmt.

Abbildung 1: Einrichtung für die Extraktion von Ethanol

Die Massenprozente Ethanol werden nach folgender Formel berechnet:3.2. Vergärung des Mostes, Mostkonzentrates und rektifizierten Mostkonzentrates

3.2.1. Gerätschaften und Reagenzien

- Weinsäure;- Bacto Yeast Nitrogen (Base ohne Aminosäuren) DIFCO;- Trockenhefe (Saccharomyces cerevisä).

Wenn das Isotopenverhältnis des Wassers aus dem Most bekannt ist, so können die Hefen vor der Zugabe 15 Minuten lang in wenig lauwarmem, nicht destilliertem Wasser, dessen Isotopenverhältnis nahe bei dem des Wassers des Mostes liegt, reaktiviert werden (1 g/50 ml).

Kennt man das Isotopenverhältnis des Wassers aus dem Most nicht, so ist es vorteilhaft, die Hefen direkt zu verwenden. 1 g Trockenhefe (etwa 1010 Zellen) werden 1 Liter Most zugesetzt.

Gärbehälter, Inhalt 1,5 l, mit Gäraufsatz, um die Alkoholdämpfe zu kondensieren. Ein Verlust an Alkohol während der Gärung ist unbedingt zu vermeiden. Der vorhandene Zucker muß zu mehr als 98 % vergoren werden.3.2.2. Durchführung der Vergärung

3.2.2.1. Most

- Frischer Most1 Liter Most, dessen Gehalt an vergärbaren Zuckern vorher bestimmt wurde, wird in den Gärbehälter gegeben und mit 1 g reaktivierter Trockenhefe versetzt. Der Gärbehälter wird mit einem Gäraufsatz (Vergärung unter Luftabschluß) versehen. Die Gärung wird bei etwa 20 °C bis zur vollständigen Vergärung der Zucker durchgeführt. Nach der Bestimmung des Alkoholgehaltes und der Berechnung der Alkoholausbeute, wird der vergorene Most zentrifugiert und zur Gewinnung des Ethanols destilliert.

- Mit Schwefeldioxid stummgemachter MostEtwas mehr als 1 Liter Most (1,2 l) werden entschwefelt, indem durch den auf einem Wasserbad von 70-80 °C unter Rückfluß erhitzten Most ein Stickstoffstrom geleitet wird, bis der Gehalt an Schwefeldioxid weniger als 200 mg/l beträgt. Eine Konzentrierung des Mostes durch Verdampfen von Wasser ist unbedingt zu vermeiden (Verwendung eines geeigneten Kühlsystems).Man gibt 1 Liter des entschwefelten Mostes in den Gärbehälter und verfährt weiter wie unter ""frischer Most" beschrieben.Anmerkung: Ist zur Stummschwefelung Kaliummetabisulfit verwendet worden, so müssen vor der Entschwefelung 0,25 ml konzentrierte Schwefelsäure (r20 = 1,84 g/ml) je Gramm Metabisulfit pro Liter Most zugegeben werden.3.2.2.2. Mostkonzentrat

V ml Mostkonzentrat mit einem Zuckergehalt von etwa 170 g werden in den Gärbehälter gegeben und das Volumen mit (1 000 - V ml) Wasser, dessen Isotopenverhältnis gleich dem des authentischen Vergleichsmostes ist, auf 1 Liter ergänzt. Man fügt, wie unter 3.2.1 beschrieben, Trockenhefe und zusätzlich 3 g Bacto Yeast Nitrogen (ohne Aminosäuren) DIFCO zu, mischt und verfährt weiter wie oben beschrieben.3.2.2.3. Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat

Man verfährt wie unter 3.2.2.2 beschrieben, wobei zu 1 Liter mit 1 000 - V ml Wasser, in dem zuvor 3 g Weinsäure gelöst wurden, ergänzt wird. Das Isotopenverhältnis des verwendeten Wassers muß gleich dem des Wassers des authentischen Vergleichsmostes sein.

Anmerkung: Je 50 ml Most, entschwefelter Most, Mostkonzentrat oder rektifiziertes Traubenmostkonzentrat werden zur evtl. Gewinnung des Wassers und zur Bestimmung seines Isotopenverhältnisses (D/H)QW aufbewahrt. Das Wasser kann aus dem Most durch azeotrope Destillation mit Toluol sehr leicht extrahiert werden.

3.3. Vorbereitung der Alkoholprobe für die NMR-Messung

3.3.1. Reagenzien

N,N-Tetramethylharnstoff (TMU); man verwendet eine TMU-Referenzprobe mit bekanntem und kontrolliertem Isotopenverhältnis (D/H). Diese Probe wird geliefert von der:Generaldirektion Wissenschaft, Forschung und Entwicklung der Kommission der EG,

Referenzbüro der Gemeinschaft (BCR),

Rü de la Loi 200,

B - 1049 Brüssel.3.3.2. Durchführung der Bestimmung

- NMR-Probenkopf mit 15 mm Durchmesser:In ein zuvor gewogenes Fläschchen werden 7 ml des nach 3.1.2 erhaltenen Alkohols gegeben und auf 0,1 mg genau gewogen (mA). Nach Zugabe von 3 ml des internen Standards (TMU) wird wieder auf 0,1 mg genau gewogen (mSt und gut durchgemischt.

- NMR-Probenkopf mit 10 mm Durchmesser:Es genügen 3,2 ml Alkohol und 1,3 ml TMU.

Entsprechend dem Spektrometertyp und des verwendeten Probenkopfes (siehe Kapitel 4) wird eine ausreichende Menge an Hexafluorbenzol (C6F6) zur Stabilisierung der Feldfrequenz (Locksubstanz) hinzugefügt.

SpektrometerProbenkopf10 mm15 mm7,05 T150 µl200 µl9,4 T 35 µl 50 µl

3.4. Vorbereitung der Wasserprobe für die NMR-Messung im Hinblick auf eine eventuelle Bestimmung des Isotopenverhältnisses.3.4.1. Reagenzien

N,N-Tetramethylharnstoff (TMU) : Siehe 3.3.1.

3.4.2. Durchführung der Bestimmung

In ein zuvor gewogenes Fläschchen werden 3 ml des nach 3.1.2 bzw. 3.2 (Anmerkung) erhaltenen Wassers gegeben und auf 0,1 mg genau gewogen (m2E). Nach Zugabe von 4 ml des internen Standards (TMU) wird wiederum auf 0,1 mg genau gewogen und gut durchmischt (m2st).

Anmerkung:Wenn das Laboratorium über ein Massenspektrometer zur Isotopenanalyse verfügt, so kann zur Entlastung des NMR-Gerätes die Messung auch mit diesem Gerät durchgeführt werden, denn es ist notwendig, für jede Serie der zu untersuchenden Weine das Verhältnis TIV (5.2) zu bestimmen.4. AUFNAHME DES ²H-NMR-SPEKTRUMS VON ALKOHOL UND WASSER

Bestimmung der Isotopenverhältnisse.4.1. Gerätschaften

- Kernresonanzspektrometer, ausgerüstet mit einem selektiven Deuterium-Probenkopf, der bei gegebener Feldstärke optimal auf die Resonanzfrequenz des Deuteriumisotops abstimmbar ist (z. B. für Bo = 7,05 T beträgt Vo = 46,05 MHz und für Bo = 9,4 T beträgt Vo = 61,4 MHz), sowie einem Protonenentkopplungskanal und einem 19-F-Locksystem.

Die Auflösung, ausgedrückt durch die Halbwertsbreite des Methyl-, Methylensignals des Alkohols und des Methylsignals von TMU (Tetramethylharnstoff) wird wie folgt bestimmt: Exponentielle Multiplikation mit LB = 0 (Abbildung 2b; d. h. ohne Window-Funktion) und Ausmessen der Linienbreite auf halber Höhe des Signals von Tetramethylharnstoff. Die Halbwertsbreite sollte kleiner als 0,5 Hz sein. Die Empfindlichkeit sollte mindestens ein Signal-Rauschverhältnis von 150 : 1 erreichen, gemessen am Methylsignal von Ethanol bei 95 % Vol. (93,5 % g/g) und berechnet mit einer exponentiellen Multiplikation von LB = 2 (Abbildung 2a).

Unter diesen Bedingungen sollte die Standardabweichung der Messung kleiner als 0,35 % sein, bezogen auf die Höhe der Signale bei 10 Wiederholungen und 97,5 %iger statistischer Sicherheit.- Automatischer Probenwechsler (eventuell).- Zugehöriges Auswerteprogramm.- 15 mm oder 10 mm Probenröhrchen je nach Ausrüstung des Spektrometers.4.2. Einstellung und Überprüfung des NMR-Spektrometers

4.2.1. Einstellung

Die Homogenität und Empfindlichkeit werden wie üblich gemäß den Anweisungen des Herstellers eingestellt.4.2.2. Überprüfung der Einstellung

Man verwendet Referenzalkohole mit unterschiedlichen, aber genau bestimmten Isotopengehalten, bezeichnet mit den Buchstaben C (Alkohol aus Rohrzucker oder Maiszucker), V (Weinalkohol) und B (Alkohol aus Zuckerrüben). Diese Proben werden von der unter Ziffer 3.3.1 angegebenen Adresse geliefert.

Man bestimmt die Isotopenwerte dieser Alkohole wie unter 4.3 beschrieben und bezeichnet diese als Cmes, Vmes und Bmes (siehe 5.3).

Man vergleicht diese Werte mit den entsprechenden Referenzwerten Cst, Vst und Bst (siehe 5.3).

Abbildung 2a²H-NMR-Spektrum von Ethanol aus Wein mit einem internen Standard (TMU: N,N Tetramethylharnstoff)

Abbildung 2b²H-Spektrum von Ethanol, gleiche Bedingungen wie in Abbildung 2a, aber ohne exponentielle Multiplikation (LB = 0)

Die Wiederholstandardabweichung aus 10 Messungen für jedes Spektrum muß für den R-Wert weniger als 0,01 und für die Verhältnisse (D/H)I und (D/H)II weniger als 0,3 ppm betragen.

Die Mittelwerte der so bestimmten Isotopenwerte (R, (D/H)I, (D/H)II) müssen innerhalb der Wiederholbarkeit, die vom Referenzbüro der Gemeinschaft für diese Parameter für die 3 Referenzalkohole angegeben wird, liegen. Wenn nicht, so muß die Einstellung wiederholt werden.4.3. Aufnahme der NMR-Spektren

Die nach 3.3 aufbereitete Alkoholprobe (oder nach 3.4 aufbereitete Wasserprobe) wird in ein 15- oder 10-mm-Proberöhrchen eingebracht und in das Gerät eingesetzt.

Die Bedingungen zur Aufnahme der Spektren sind folgende:- Die Temperatur des Gerätes (z. B. 302 K) muß konstant gehalten werden.- Aufnahmezeit (Acquisition time) (ACS) mindestens 6,8 s bei einer Spektralbreite (Sween-width) (SW) von 1 200 Hz und einer Grösse (Size) (SI) von 16 K, d. h. ungefähr 20 ppm bei 61,4 MHz oder 27 ppm bei 46,1 MHz.- Pulswinkel: 90°.- Verzögerung der Aufnahme: dieser Wert muß etwa in der gleichen Grössenordnung liegen wie die Zeit des Probedurchlaufs (dwell time).- Quadratur-Detektion: Offset 01 (Einstrahlfrequenz zur Anregung der Deuteriumspinsysteme) zwischen die Referenzsignale OD und CHD für den Alkohol und zwischen die Referenzsignale HOD und TMU für das Wasser einstellen.- Offset 02 (Einstrahlfrequenz des Entkopplers) anhand eines Protonenspektrums der aktuellen Probe bestimmen. Eine gute Entkopplung ist erreicht, wenn sich 02 in der Mitte des Frequenzabstandes zwischen den CH3- und CH2-Gruppen befindet. Es sollte das Breitbandentkopplungsverfahren angewendet werden.

Für jedes Spektrum ist eine genügende Anzahl Akkumulationen NS (number of scans) durchzuführen, um das unter 4.1 angegebene Signal-Rauschverhältnis zu erhalten. Man wiederholt dieses für jede Probe 10mal. Die NS-Werte hängen vom verwendeten Spektrometertyp und Probenkopf ab (siehe 4). Es empfiehlt sich beispielsweise:

SpektrometerProbenkopf10 mm15 mm7,05 TNS = 304NS = 2009,04 TNS = 200NS = 128

5. ANGABE DER ERGEBNISSE

5.1. Ethanol

Für jedes dieser zehn Spektren ist folgendes zu bestimmen (siehe NMR-Spektrum des Ethanols, Abbildung 2a):- CH3 CHD OH mSt und mA siehe 3.3.2- tDm siehe 3.1.2.3- (D/H)St = Isotopenverhältnis des internen Standards (TMU), laut Angabe auf der Flasche, die vom Referenzbüro der Gemeinschaft (BCR) bezogen wurde.

Anstelle der Signalflächen kann man durchaus die Höhen der Signale zur Berechnung heranziehen, vorausgesetzt die Breiten in halber Höhe sind gleich (Abb. 2 b).5.2. Wasser

Wird das Isotopenverhältnis des Wassers mittels NMR aus dem Gemisch Wasser-TMU ermittelt, so wird folgende Gleichung angewendet:mit- m2st und m2E siehe 3.4.2- (D/H)St = Isotopenverhältnis des internen Standards (TMU) laut Angabe auf der Flasche, die vom Referenzbüro der Gemeinschaft (BCR) gezogen wurde.5.3. Für jeden Isotopenparameter wird der Mittelwert der 10 Bestimmungen und die Standardabweichung berechnet.

Mit einer mit dem Rechner des Spektrometers kompatiblen Software (z. B. SNIF-NMR) können diese Werte ""on line" berechnet werden.

Anmerkung:Wenn nach Einstellen des Spektrometers systematische Abweichungen zwischen den nach 4.2.2 erhaltenen Mittelwerten für die Isotopen-Parameter der Referenzalkohole und den vom Referenzbüro der Gemeinschaft angegebenen Werten auftreten, so kann folgende Korrektur angewendet werden, um für eine Probe X den wahren Wert zu erhalten.

Die Interpolation wird mit den Werten der Referenzproben, die die Probe X einschließen, durchgeführt.

Wenn (D/H)iXmes der gemessene Wert und (D/H)iXcorr der korrigierte Wert ist, so erhält man:(D/H)iXcorr = (D/H)iBst + a [(D/H)iXmes (D/H)iBmes]

Beispiel:Referenzprobe, geliefert und gemessen vom Referenzbüro der Europäischen Gemeinschaften:(D/H)IVSt = 102,0 ppm (D/H)IBSt = 91,95 ppm.Referenzprobe, gemessen im Laboratorium:(D/H)IVmes = 102,8 ppm (D/H)IBmes = 93,0 ppm.Verdächtige Probe, nicht korrigiert:(D/H)IXmes = 100,2 ppm.Man berechnet also a = 1,0255 und (D/H)IXcorr = 99,3 ppm.6. INTERPRETATION DER ERGEBNISSE

Man vergleicht den für das Verhältnis R des verdächtigen Weines erhaltenen Wert RX mit den für die Vergleichsweine erhaltenen Werten RT. Weicht RX um mehr als das Doppelte vom Vertrauensbereich des von dem für die Vergleichsweine erhaltenen Mittelwertes RT ab, besteht Verdacht auf Verfälschung.6.1. Anreicherung mit Rüben-, Rohr- oder Maiszucker

6.1.1. Wein

RX grösser als RT: Verdacht auf Zusatz von Rübenzucker.

RX kleiner als RT: Verdacht auf Zusatz von Rohr- oder Maiszucker.(D/H)XII und (D/H)WQX sind erhöht.Man prüft (D/H)IX bei Verdacht auf:- Anreicherung mit Rübenzucker:(D/H)IX der verdächtigen Probe ist kleiner als (D/H)IT, Mittelwert der Vergleichsproben. Die Differenz ist grösser als eine Standardabweichung.- Anreicherung mit Rohrzucker oder Maiszucker:

(D/H)IX ist grösser als (D/H)IT. Die Differenz ist grösser als eine Standardabweichung.- Berechnung der Anreicherung, E, ausgedrückt in % Vol. Ethanol:- Anreicherung mit Rübenzucker:(D/H)IB = Isotopenverhältnis für die Methylgruppe des Alkohols aus Rübenzucker: (D/H)IB = 92,5 (8).tV = Alkoholgehalt (% Vol.) des zu untersuchenden Weines (X).- Anreicherung mit Rohr- oder Maiszucker:

(D/H)IC = Isotopenverhältnis für die Methylgruppe des Alkohols aus Rohr- oder Maiszucker: (D/H)IC = 110,5 (9).tV = Alkoholgehalt (% Vol.) des zu untersuchenden Weines (X).6.1.2. Most, Mostkonzentrat, rektifiziertes Traubenmostkonzentrat (RTK)

Die Werte der Isotopenparameter des Alkohols, der nach 3.1 und 3.2 aus dem Most, Mostkonzentrat oder rektifizierten Traubenmostkonzentrat erhalten worden ist, werden nach 6.1.1""Interpretation der Ergebnisse" geprüft und den Werten des Alkohols gegenübergestellt, der aus den entsprechenden authentischen Mosten erhalten wurde.

Die Anreicherung E % Vol. bezieht sich auf das vergorene Erzeugnis. Unter Berücksichtigung einer evtl. vor der Vergärung vorgenommenen Verdünnung (Mostkonzentrat und RTK) und der Tatsache, daß 16,83 g Zucker 1 % Vol. Alkohol ergeben, berechnet man die Massenkonzentration an Zucker, die 1 l Most, Mostkonzentrat oder RTK zugesetzt wurde.6.2. Anreicherung mit einer Mischung aus Rübenzucker mit Rohr- oder Maiszucker

Die Isotopenverhältnisse (D/H)I und R sind weniger verändert, als wenn nur mit einer Zuckerart angereichert wird.

(D/H)II ist ebenso wie (D/H)WQ erhöht.Ein solcher Zusatz kann durch die massenspektrometrische Bestimmung des Verhältnisses13C/12C im Alkohol bestätigt werden; in diesem Fall ist das Verhältnis erhöht.

9. ASCHE 1. DEFINITION

Als Asche bezeichnet man die Gesamtheit der Stoffe, die durch Veraschung des Abdampfrückstandes des Weines erhalten werden. Die Veraschung wird in der Weise durchgeführt, daß die Gesamtheit der Kationen (ausser Ammonium) in der Carbonatform oder anderen wasserfreien Mineralsalzen vorliegt.2.PRINZIP DER METHODE

Die Veraschung des Weinextraktes wird bis zur vollständigen Verbrennung des Kohlenstoffs bei 500° bis 550 °C durchgeführt.3. GERÄTSCHAFTEN

3.1. Wasserbad 100 °C.

3.2. Analysenwaage, auf 0,1 mg genau.

3.3. Heizplatte oder Infrarotstrahler.

3.4. Muffelofen mit Temperaturregelung.

3.5. Exsikkator.

3.6. Platinschale, 70 mm Durchmesser und 25 mm Höhe mit flachem Boden.4. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

20 ml Wein werden in eine gewogene Platinschale (Po g) gegeben und auf dem Wasserbad bei 100 °C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird auf einer Heizplatte bei 200 °C oder unter dem Infrarotstrahler abgeraucht. Gibt der Rückstand keinen Rauch mehr ab, so wird die Schale in den Muffelofen (Temperatur 525 °C ± 25 °C) gestellt. Nach 15 Minuten Veraschung wird die Schale aus dem Muffelofen genommen und 5 ml destilliertes Wasser hinzugefügt. Anschließend wird auf dem Wasserbad oder unter dem Infrarotstrahler eingeengt und erneut bei 525 °C etwa 10 Minuten verascht.

Ist die Veraschung nicht vollständig, so wiederholt man den oben beschriebenen Vorgang (Aufnehmen mit Wasser, Einengen, Veraschen).

Für zuckerreiche Weine ist der Zusatz von wenigen Tropfen reinen Pflanzenöls vor der ersten Veraschung empfehlenswert, um das Überschäumen des Inhalts zu vermeiden.

Nach dem Abkühlen im Exsikkator wird die Schale gewogen (PI g).

Die dem eingesetzten Probevolumen (20 ml) entsprechenden Gramm Asche betragen p = (PI Po) g.5. ANGABE DER ERGEBNISSE

5.1. Berechnung

Der Aschegehalt P, ausgedrückt in Gramm je Liter mit 2 Dezimalstellen beträgt:

P = 50.p.

10. ALKALITÄT DER ASCHE 1. DEFINITION

Als Alkalität der Asche bezeichnet man die Summe der Kationen (ausser Ammonium), die an die organischen Säuren des Weines gebunden sind.2. PRINZIP DER METHODE

Die Asche wird in einer gemessenen, überschüssigen Menge Säure in der Wärme gelöst und der Überschuß an Säure in Gegenwart von Methylorange zurücktitriert.3. REAGENZIEN UND GERÄTSCHAFTEN

3.1. 0,05 M Schwefelsäure (H2SO4).

3.2. 0,1 M Natronlauge (NaOH).

3.3. 0,1 %ige (g/v) wäßrige Methylorangelösung.

3.4. Wasserbad 100 °C.

4. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

In die Platinschale mit der Asche von 20 ml Wein werden 10 ml 0,05 M Schwefelsäurelösung (3.1) gegeben; die Schale wird dann 15 Minuten lang auf dem Wasserbad von 100 °C erhitzt und der Rückstand zur Beschleunigung der Auflösung mit einem Glasstab umgerührt. Anschließend fügt man 2 Tropfen Methylorangelösung hinzu und titriert den Schwefelsäureueberschuß mit 0,1 M Natronlauge (3.2) bis zum Farbumschlag des Indikators nach gelb.5. ANGABE DER ERGEBNISSE

Berechnung

Die Alkalität der Asche, ausgedrückt in Milliäquivalent je Liter mit 1 Dezimale, beträgt:

A = 5 (10-n)n = ml 0,1 M Natronlauge.

11. CHLORIDE 1. PRINZIP DER METHODE

Direkte Bestimmung der Chloride im Wein durch potentiometrische Titration mit einer Ag/AgCl-Elektrode.2. GERÄTE

2.1. pH-Millivoltmeter mit mindestens 2 mV-Einstellung.

2.2. Magnetrührer.

2.3. Ag/AgCl-Elektrode mit gesättigter Kaliumnitratlösung als Elektrodenfluessigkeit.

2.4. Feinbürette mit 0,01 ml Einstellung.

2.5. Stoppuhr.3. REAGENZIEN

3.1. Chlorid-Standardlösung: 2,1027 g Kaliumchlorid (max. 0,005 % Br) z. A. (K Cl), das vor Gebrauch einige Tage im Exsikkator getrocknet wurde, werden mit bidestilliertem Wasser zu 1 Liter gelöst. 1 ml dieser Lösung enthält 1 mg Cl .

3.2. Silbernitrat-Maßlösung; 4,7912 g Silbernitrat z. A. (AgNO3) werden in einer 10%igen ethanolischen Lösung zu 1 Liter gelöst. 1 ml dieser Lösung entspricht 1 mg Cl .

3.3. Salpetersäure mind. 65 % (r20 = 1,40 g/ml).4. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG:

4.1. 5,0 ml Chlorid-Standardlösung werden in ein 150-ml-Becherglas pipettiert, mit destilliertem Wasser auf etwa 100 ml ergänzt und 1,0 ml Salpetersäure mind. 65 % hinzugefügt. Nach Eintauchen der Elektrode bis über das Diaphragma wird unter langsamem Rühren (Magnetrührer) mit der Silbernitrat-Maßlösung aus einer Feinbürette titriert. Zunächst wird in Schritten von 1,00 ml bis zu einem Verbrauch von 4,00 ml titriert und der jeweils angezeigte mV-Wert abgelesen. Dann wird in Teilschritten von 0,20 ml weitertitriert, bis nochmals 2,00 ml zugegeben sind. Schließlich wird wieder in 1,00 ml Schritten titriert, bis insgesamt 10,00 ml zugegeben sind. Nach jedem Zusatz wird etwa 30 Sekunden bis zum Ablesen des mV-Wertes gewartet. Die erhaltenen Werte trägt man auf Millimeterpapier gegen die zugehörigen Milliliter Maßlösung auf und bestimmt das Umschlagspotential aus dem Wendepunkt der sich ergebenden Kurve.

4.2. 5 ml Chlorid-Standardlösung werden in ein 150 ml-Becherglas pipettiert und 95 ml destilliertes Wasser sowie 1,0 ml Salpetersäure mind. 65 % zugefügt. Nach Eintauchen der Elektrode titriert man unter Rühren bis zu dem vorher bestimmten Äquivalenzpotential. Diese Bestimmung wird solange wiederholt, bis eine gute Übereinstimmung der Ergebnisse erzielt wird. Die Festlegung des Äquivalenzpotentials muß vor jeder Bestimmungsserie erneut durchgeführt werden.

4.3. 50 ml der zu untersuchenden Flüssigkeit werden in ein 150 ml-Becherglas pipettiert. Man fügt 50 ml destilliertes Wasser und 1,0 ml Salpetersäure mind. 65 % hinzu und titriert wie unter 4.2 beschrieben.5. ANGABE DER ERGEBNISSE

5.1. Berechnung

Wurden n ml Silbernitrat-Maßlösung verbraucht, so errechnet sich der Chloridgehalt der untersuchten Flüssigkeit nach der Formel:

20 n = Milligramm Cl/Liter0,5633 n = Milliäquivalente/Liter32,9 n = Milligramm Natriumchlorid/Liter.5.2. Wiederholbarkeit

r = 1,2 mg/l Clr = 0,03 Milliäquivalente/lr = 2,0 mg NaCl/l.5.3. Vergleichbarkeit

R = 4,1 mg/l ClR = 0,12 Milliäquivalente/lR = 6,8 mg NaCl/l.6. Anmerkung:

Für besonders genaue Bestimmungen kann die vollständige Titrationskurve durch Titration der untersuchten Flüssigkeit mit Silbernitrat-Maßlösung aufgenommen werden und aus dem Äquivalenzpunkt der Endpunkt der Titration zeichnerisch, oder genauer rechnerisch, ermittelt werden.

a) 50 ml der zu untersuchenden Flüssigkeit werden in einem 150 ml Becherglas mit 50 ml destilliertem Wasser versetzt und 1 ml Salpetersäure (65%ig) zugefügt. Man titriert mit der Silbernitrat-Standardlösung durch Zugabe von jeweils 0,5 ml und Messung des entsprechenden Potentials in Millivolt. Aus dieser ersten Titration wird das benötigte Titrationsvolumen annähernd ermittelt.

b) Man wiederholt die Bestimmung unter den gleichen Bedingungen. Man titriert zunächst in Teilschritten von 0,5 ml und reduziert diese 1,5 bis 2 ml vor dem zu erwartenden Endpunkt auf 0,2 ml; danach setzt man weiter 0,2 ml zu und erhöht wiederum auf 0,5 ml.

Zur Berechnung des Titrationsendpunktes dient die folgende Formel:Es bedeuten:V = Volumen Maßlösung am ÄquivalenzpunktV2 = Volumen Maßlösung vor dem PotentialsprungD Vi = Konstantes Volumen der zugefügten Maßlösung, z. B. 0,2 mlDD E1 = Zweite Potentialdifferenz vor dem grössten PotentialsprungDD E2 = Zweite Potentialdifferenz nach dem grössten Potentialsprung.

Beispiel:

Volumen der AgNO3-MaßlösungPotentiale in mVDifferenz ESekundär-Differenz E 0204 4 0,2208 0 4 0,4212 2 6 0,6218 0 6 0,8224 0 6 1,0230 2 8 1,2238 4 12 1,4250 10 22 1,6272 22 44 1,8316 10 34 2,0350 8 26 2,2376 6 20 2,4396

In diesem Beispiel liegt der Titrationsendpunkt zwischen 1,6 und 1,8 ml, denn hier tritt der grösste Potentialsprung auf (DE = 44 mV). Das bis zu diesem Titrationsendpunkt verbrauchte Volumen an Silbernitrat beträgt:

12. SULFATE 1. PRINZIP DER METHODEN

1.1. Referenzmethode:

Fällung als Bariumsulfat, das gravimetrisch gestimmt wird. Das unter den gleichen Bedingungen gefällte Bariumphosphat wird durch Waschen des Niederschlags mit Salzsäure entfernt.

Im Fall von Mosten und Weinen, die grössere Mengen an schwefliger Säure enthalten, wird diese durch vorheriges Erhitzen unter Luftabschluß entfernt.1.2. Schnellmethode:

Eingruppierung der Weine in verschiedene Kategorien, nach der sogenannten Grenzwertmethode, deren Prinzip in der Fällung des Sulfats als Bariumsulfat mit einer Bariumchloridlösung bekannten Gehaltes beruht.2. REFERENZMETHODE

2.1. Reagenzien.

2.1.1. Salzsäure 2 M.

2.1.2. Bariumchloridlösung: 200 g BaCl2 × 2H2O werden mit Wasser zu 1 Liter gelöst.2.2. Durchführung der Bestimmung.

2.2.1. 40 ml der zu untersuchenden Flüssigkeit werden in einem 50-ml-Zentrifugenglas mit 2 ml Salzsäure (2.1.1) und 2 ml Bariumchloridlösung (2.1.2) versetzt, mit einem Glasstab umgerührt, und der Glasstab wird abgespült. Man lässt 5 Minuten stehen und zentrifugiert weitere 5 Minuten. Die überstehende Flüssigkeit wird vorsichtig in ein Becherglas dekantiert. Nun wäscht man den Bariumsulfatniederschlag in dem Zentrifugenglas wie folgt aus: Man fügt 10 ml Salzsäure 2 M (2.1.1) hinzu, rührt den Niederschlag auf und zentrifugiert 5 Minuten. Die überstehende Flüssigkeit wird vorsichtigt entfernt. Man wiederholt das Auswaschen 2 mal unter den gleichen Bedingungen mit jeweils 15 ml destilliertem Wasser.

Der Niederschlag wird nun mit destilliertem Wasser aus dem Zentrifugenglas quantitativ in eine gewogene Platinschale gebracht und auf dem Wasserbad zur Trockne eingedampft. Der getrocknete Niederschlag wird durch mehrmaliges kurzes Glühen über offener Flamme weiß geglüht, im Exsikkator abgekühlt und gewogen.

Menge des gewogenen Bariumsulfats: m mg (Bariumsulfat).

2.2.2. Im Fall von Mosten und Weinen mit höheren Gehalten an SO2.

In einen 500 ml-Erlenmeyerkolben, der mit einem Tropfhahn und einem Steigrohr verbunden ist, gibt man 25 ml destilliertes Wasser, 1 ml konzentrierte Salzsäure (r 20 = 1,15 1,18 g/ml) und erhitzt zum Sieden, um die Luft zu entfernen. Sodann lässt man durch den Tropftrichter 100 ml der Probe zufließen, wobei darauf zu achten ist, daß das Sieden nicht unterbrochen wird. Das Sieden wird solange fortgesetzt, bis die Flüssigkeit auf etwa 75 ml reduziert ist. Nach dem Abkühlen überführt man die Flüssigkeit quantitativ in ein 100 ml-Meßkölbchen und fuellt mit Wasser zur Marke auf. Die Sulfatbestimmung in 40 ml Probelösung wird dann wie unter 2.2.1 beschrieben durchgeführt.

2.3. Angabe der Ergebnisse

2.3.1. Berechnungen

Der Sulfatgehalt in Milligramm pro Liter als Kaliumsulfat berechnet beträgt:18,67 x m.

Der Sulfatgehalt des Mostes oder des Weines wird in Milligramm pro Liter (mg/l) Kaliumsulfat ohne Dezimale angegeben.2.3.2. Wiederholbarkeit

bis 1 000 mg/l : r = 27 mg/lungefähr 1 500 mg/l : r = 41 mg/l.2.3.3. Vergleichbarkeit

bis 1 000 mg/l : R = 51 mg/lungefähr 1 500 mg/l : R = 81 mg/l.3. SCHNELLMETHODE

3.1. Reagenzien

3.1.1. Bariumchlorid-Standardlösung:

2,804 g Bariumchlorid BaCl2 × 2H2O und 10 ml Salzsäure (r 20 = 1,15 - 1,18 g/ml) werden mit destilliertem Wasser zu 1 Liter gelöst. 1 ml dieser Lösung fällt 2 Milligram Kaliumsulfat.

3.1.2. 10 %ige Schwefelsäure (g/v) (r20 = 1,84 g/ml).3.2. Durchführung der Bestimmung

In 3 Reagenzgläser gibt man 10 ml Most oder Wein und fügt dann dem 1. Glas 3,5 ml, dem 2. Glas 5 ml und dem 3. Glas 10 ml der Bariumchloridlösung hinzu. Nach dem Schütteln erhitzt man zum Sieden und lässt 1 bis 2 Stunden stehen. Die Flüssigkeit in jedem der drei Reagenzgläser wird dekantiert, filtriert und in 2 Hälften geteilt. Eine Hälfte wird mit einigen Tropfen verdünnter Schwefelsäure, die andere Hälfte mit einigen Tropfen Bariumchloridlösung versetzt. Die Klarheit oder die entstandene Trübung in den Gläsern wird nach folgender Tabelle ausgewertet:

WeinBaCl2Wein filtriert +Verdünnte SchwefelsäureBaCl21. Probe(ml)(ml)trübeklar103,5(weniger als 0,7 g K2SO4/l)

klar trübe

(mehr als 0,7 g K2SO4/l)2. Probe105trübeklar(weniger als 1 g K2SO4/l)

klar trübe

(mehr als 1 g K2SO4/l)3. Probe1010trübeklar(weniger als 2 g K2SO4/l)

klar trübe

(mehr als 2 g K2SO4/l)

13. GESAMTSÄURE 1. DEFINITION

Die Gesamtsäure stellt die Summe aller titrierbaren Säuren dar. Die Titration erfolgt mit einer alkalischen Maßlösung bis zum pH 7,0.

Kohlensäure ist in der Gesamtsäure nicht einbegriffen.2. PRINZIP DER METHODE

Potentiometrische Titration oder Titration in Anwesenheit von Bromthylmolblau als Indikator gegen eine Farbvergleichslösung.3. REAGENZIEN

3.1. Pufferlösung pH 7,0:prim. Kaliumphosphat KH2PO4: 107,3 g

1 M Natronlauge (NaOH): 500 ml

mit Wasser auf 1 000 ml auffuellen.

Handelsübliche Pufferlösungen können ebenfalls verwendet werden.

3.2. 0,1 M Natronlauge (NaOH).

3.3. Bromthymolblaulösung 4 g/l.

Bromthymolblau (C27H28Br2O5S) 4 gNeutraler Alkohol 96 % Vol. 200 mlNach dem Auflösen werden hinzugefügt:Kohlendioxidfreies Wasser 200 ml1 M Natronlauge bis zum Farbumschlagnach blaugrün (pH 7) etwa 7,5 mlWasser auf1 000 ml4. GERÄTSCHAFTEN

4.1. Wasserstrahlpumpe.

4.2. Saugflasche, 500 ml.

4.3. pH-Meter und Elektroden. Die Glaselektrode muß in destilliertem Wasser, die Kalomel-gesättigte Kaliumchlorid-Elektrode in einer gesättigten Kaliumchloridlösung aufbewahrt werden. Meist wird eine kombinierte Elektrode gebraucht; sie ist in destilliertem Wasser aufzubewahren.

4.4. Bechergläser mit 50 ml Inhalt (bei Wein) und 100 ml Inhalt (bei rektifiziertem Traubenmostkonzentrat).5. DURCHFÜHRUNG DER BESTIMMUNG

5.1. Vorbereitung der Probe

5.1.1. Wein

Zur Entfernung des Kohlendioxids werden ungefähr 50 ml Wein in eine 500 ml-Saugflasche gegeben und 1 2 Minuten an der Wasserstrahlpumpe geschüttelt.

5.1.2. Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat (RTK)

200 g RTK werden genau in einen 500 ml-Meßkolben eingewogen, mit Wasser zur Marke aufgefuellt und gemischt.5.2. Potentiometrische Titration

5.2.1. Eichung des pH-Meters

Die Eichung erfolgt gemäß der Betriebsanleitung des verwendeten pH-Meters mit der Pufferlösung pH 7,0 bei 20 °C.5.2.2. Messung

In ein Becherglas (4.4) werden 10 ml des nach 5.1 vorbereiteten Weines bzw. 50 ml der RTK-Lösung gegeben, 10 ml destilliertes Wasser hinzugefügt und mit 0,1 M Natronlauge (3.3) bis pH 7,0 (20 °C) titriert. Der Zusatz der Natronlauge muß langsam erfolgen und die Lösung ständig gerührt werden.

n = ml der verbrauchten 0,1 M Natronlauge.5.3. Titration mit Indikator (Bromthylmolblau)

5.3.1. Vorversuch: Herstellung der Farbvergleichslösung

In ein Becherglas (4.4) werden 25 ml ausgekochtes destilliertes Wasser, 1 ml Bromthylmolblaulösung (3.3) und 10 ml des nach 5.1 vorbereiteten Weines bzw. 50 ml der RTK-Lösung gegeben. Man fügt 0,1 M Natronlauge (3.2) bis zum Farbumschlag nach blaugrün und anschließend 5 ml der Pufferlösung pH 7,0 (3.1) hinzu.5.3.2. Bestimmung

In ein Becherglas (4.4) werden 30 ml ausgekochtes destilliertes Wasser, 1 ml der Bromthylmolblaulösung (3.3) und 10 ml des nach 5.1 vorbereiteten Weines bzw. 50 ml der RTK-Lösung gegeben. Man titriert mit 0,1 M Natronlauge (3.2) auf den im Vorversuch (5.3.1) ermittelten Farbton.

n = ml verbrauchte 0,1 M Natronlauge.6. ANGABE DER ERGEBNISSE

6.1. Berechnung

6.1.1. Wein

Die Gesamtsäure, ausgedrückt als Milliäquivalent (mval) je Liter, beträgt:

A = 10 n.Die Angabe erfolgt mit 1 Dezimalstelle.Die Gesamtsäure, ausgedrückt als Gramm Weinsäure je Liter, beträgt:

A2 = 0,075 · A.Die Angabe erfolgt mit 1 Dezimalstelle.6.1.2. Rektifiziertes Traubenmostkonzentrat (RTK)

- Die Gesamtsäure, ausgedrückt als Milliäquivalent (mval) je Kilogramm RTK, beträgt: a = 5 · n.

- Die Gesamtsäure, ausgedrückt als Milliäquivalent (mval) je Kilogramm Gesamtzucker, beträgt:P = Gesamtzuckergehalt in % (g/g).

Die Angabe erfolgt mit 1 Dezimalstelle.6.2. Wiederholbarkeit (r): Für die Titration mit Indikator (5.3)

r = 0,9 mval/lr = 0,07 g/l Weinsäurefür Weiß-, Rosé- und Rotweine.6.3. Vergleichbarkeit (R): Für die Titration mit Indikator (5.3)

Für Weiß- und Roséweine:R = 3,6 mval/lR = 0,3 g/l Weinsäure.

Für Rotweine: R = 5,1 mval/lR = 0,4 g/l Weinsäure.

14. FLÜCHTIGE SÄUREN 1. DEFINITION

Die fluechtigen Säuren setzen sich aus den Homologen der Essigsäure zusammen, die im Wein in freier oder gebundener Form enthalten sind.2. PRINZIP DER METHODE

Titration der durch Wasserdampfdestillation abgetrennten fluechtigen Säuren.

Der Wein wird zuvor von Kohlendioxid befreit.

Die freie und gebundene schweflige Säure, die unter diesen Bedingungen auch überdestilliert, wird von den fluechtigen Säuren abgezogen.

Eventüll dem Wein zugesetzte Sorbinsäure wird ebenfalls abgezogen.

Anmerkung: Die in einigen Ländern zur Stabilisierung der Weine vor der Analyse verwendete Salicylsäure geht zum Teil in das De