PROTOKOLL ZU DEM EUROPÄISCHEN ÜBEREINKOMMEN über den Austausch von Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung

ALLGEMEINE BESTIMMUNGEN

1. Spezifität

Ein Reagenz zur Blutgruppenbestimmung muß mit allen getesteten Blutproben reagieren, die das Antigen enthalten, das dem Antikörper oder einer anderen auf dem Etikett angegebenen Substanz homolog ist.

Wird ein Reagenz in der vom Hersteller empfohlenen Weise verwendet, so dürfen folgende Faktoren oder Erscheinungen nicht auftreten: a) hämolytische Eigenschaften;

b) Antikörper oder sonstige Substanzen, ausser denen, die auf dem Etikett angegeben sind;

c) bakterielle Produkte, die möglicherweise falsche positive oder falsche negative Reaktionen verursachen;

d) Pseudoagglutination durch Geldrollenbildung;

e) Zonenphänomen (Prozone).

2. Wirksamkeit

Der Titer wird durch immer erneute Verdünnung des zu untersuchenden Reagenzes auf das doppelte in einem geeigneten Medium gemessen. Jeder Verdünnung wird die gleiche Menge einer Erythrozyten-Aufschwemmung hinzugefügt. Der Titer ist der reziproke Wert der Zahl der stärksten Serumverdünnung, in der eine Reaktion auftritt ; die Verdünnung wird ausschließlich des Volumens der Blutkörperchenaufschwemmung in dem Gesamtvolumen berechnet.

Bei Anti-A, Anti-B oder sonstigen Reagenzien, die auf Objektträgern verwendet werden sollen, wird die Aktivität durch die Zeit ausgedrückt, die für eine Agglutination auf einem Objektträger erforderlich ist.

3. Internationale Normen und internationale Einheiten

Die Weltgesundheitsorganisation hat für Anti-A und Anti-B sowie inkomplette Anti-D-Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung Internationale Normen festgelegt, und für Reagenzien anderer Spezifität werden zur Zeit Normen ausgearbeitet. Ein Internationales Standardpräparat enthält laut Definition eine bestimmte Anzahl Internationaler Einheiten pro mg oder ml, und diese Definition ist unabhängig von den Titern, die bei einzelnen Zubereitungen roter Blutkörperchen beobachtet werden (1). (1)Die Wirksamkeit der Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung der meisten Spezifitäten wird als Agglutinationstiter ausgedrückt, der in einer Serie von Verdünnungen bei einer Erythrozytenaufschwemmung beobachtet wird. Der Titer gibt die Verdünnung des Reagenzes in der letzten Mischung innerhalb einer Serie an, bei der eine mikroskopisch sichtbare Agglutination auftritt.

Die Wirksamkeit der Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung, für die Internationale Standardpräparate vorhanden sind (zur Zeit Anti-A und Anti-B sowie inkomplettes Anti-D), kann auf der Grundlage der Titration des unbekannten Reagenzes im Vergleich zum Internationalen Standardpräparat oder einem staatlichen Normenpräparat in Internationalen Einheiten (Siehe Bulletin WHO OMS 1954, 10, 937, 941 - 1950, 3, 301.) ausgedrückt werden.

Die Internationalen Standardpräparate von Sera zur Blutgruppenbestimmung werden in Ampullen mit menschlichem Trockenserum verteilt. Bringt man sie wieder auf ein Volumen von 1 ml, so enthalten die Anti-A und Anti-B Seren laut Definition 256 Internationale Einheiten pro ml. Die Präparate sind kostenlos von dem Internationalen Laboratorium für biologische Normen der Weltgesundheitsorganisation, Statens Serum Institut, Kopenhagen, erhältlich.

Die folgende Tabelle zeigt ein Beispiel für eine vergleichende Titration des Internationalen Standardserums Anti-A (S) und eines "unbekannten" Anti-A-Reagenzes (U) gegen rote Blutkörperchen A1 und rote Blutkörperchen A2B. >PIC FILE= "T0045083">

4. Haltbarkeit und Verfalldatum

Wird ein Reagenz unter den vom Hersteller empfohlenen Bedingungen gelagert, so sollen seine erforderlichen Eigenschaften mindestens ein Jahr lang erhalten bleiben.

Das Verfalldatum eines Reagenzes in fluessiger Form laut Etikett liegt höchstens ein Jahr nach dem letzten zufriedenstellenden Wirksamkeitstest. Durch Wiederholung des Wirksamkeitstests kann das Verfalldatum um jeweils ein Jahr hinausgeschoben werden.

Das auf dem Etikett anzugebende Verfalldatum für Trockenreagenzien richtet sich nach den Ergebnissen der Haltbarkeitsversuche ; es ist von den staatlichen Aufsichtsbehörden zu genehmigen.

5. Konservierung

Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung können in fluessiger oder getrockneter Form konserviert werden. Trockenreagenzien werden in einer Atmosphäre von inertem Gas oder in einem Vakuum aufbewahrt, und zwar in dem Glasbehälter, in dem sie getrocknet worden sind und der so verschlossen wird, daß keine Feuchtigkeit eindringen kann. Ein Trockenreagenz darf höchstens 0,5 v.H. seines Gewichts verlieren, wenn es durch weiteres Trocknen über Phosphorpentoxyd bei einem Druck von nicht mehr als 0,02 mm Hg innerhalb 24 Stunden getestet wird.

Reagenzien sind unter aseptischen Bedingungen herzustellen und von bakterieller Verunreinigung freizuhalten. Zur Vermeidung von Bakterienwachstum kann die zuständige staatliche Behörde bestimmen, daß dem Reagenz (oder den mit den Trockenreagenzien gelieferten Lösungsmitteln) ein Antiseptikum und/oder Antibiotikum hinzugefügt wird, sofern das Reagenz mit der hinzugefügten Substanz weiterhin die Voraussetzungen an Spezifität und Wirksamkeit erfuellt.

Sera menschlichen Ursprungs zur Blutgruppenbestimmung müssen mindestens 2,5 mg Eiweiß-Stickstoff pro ml fluessigen oder wiederaufgelösten Serums enthalten.

Die Reagenzien, gleichgültig, ob in fluessiger Form oder nach der Wiederauflösung, müssen transparent sein und dürfen weder Sedimente noch Gele oder sichtbare Teilchen enthalten.

6. Färbung

Die für den internationalen Austausch bestimmten Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung sollen möglichst nicht künstlich gefärbt werden, zumindest solange nicht, bis ein Internationales Übereinkommen über ein einheitliches System zustande gekommen ist. Etwaige zugefügte färbende Substanzen dürfen die spezifische Reaktion nicht beeinträchtigen.

7. Verteilung und Menge

Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung sind auf solche Weise und in solchen Mengen zu verteilen, daß das in einem Behälter befindliche Reagenz nicht nur zur Durchführung von Tests mit den unbekannten Blutkörperchen, sondern auch zur Durchführung von Tests mit positiven und negativen Kontroll-Blutkörperchen ausreicht. Die in einem Behälter befindliche Menge muß so groß sein, daß der Inhalt gegebenenfalls zur Durchführung der in diesem Protokoll beschriebenen Wirksamkeits-Tests verwendet werden kann.

8. Aufzeichnungen und Proben

Das Herstellerlaboratorium hat über alle Produktionsstufen und Kontrollen der Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung schriftliche Aufzeichnungen zu führen. Angemessene Proben aller ausgegebenen Reagenzien sind so lange vom Laboratorium aufzubewahren, bis mit einiger Wahrscheinlichkeit angenommen werden kann, daß die Charge nicht mehr verwendet wird.

9. Einteilung der Reagenzien

Die zur Blutgruppenbestimmung verwendeten Reagenzien können Substanzen menschlichen, tierischen, pflanzlichen (oder mineralischen) Ursprungs enthalten ; einige von diesen stellen den wirksamen Anteil dar, die anderen sind die notwendigen Hilfsmittel zur Verstärkung der Wirksamkeit und Erhaltung der Stabilität des Reagenzes.

Aus technischen Gründen sind diese Reagenzien nach dem Ursprung ihres wirksamen Anteils in drei Gruppen eingeteilt. Das bedeutet nicht, daß die Reagenzien menschlichen Ursprungs ausschließlich Substanzen menschlichen Ursprungs enthalten oder daß tierische oder pflanzliche Reagenzien keine Substanzen menschlichen Ursprungs enthalten können.

10. Etikette, Gebrauchsanweisungen und Bescheinigungen

Auf jedem einzelnen Behälter ist ein schwarz auf weiß gedrucktes Etikett in englischer und französischer Sprache zu befestigen, das folgende Angaben enthält: 1. Name und Anschrift des Herstellers,

2. Name des Reagenzes laut Überschrift in der entsprechenden Beschreibung,

3. Name und Menge des Antiseptikums und/oder Antibiotikums, falls vorhanden, bzw. Angabe des Nichtvorhandenseins,

4. die Menge oder, bei getrockneten Reagenzien, die Menge und Zusammensetzung der zur Wiederauflösung benötigten Flüssigkeit,

5. Verfalldatum,

6. Chargennummer.

Ausserdem hat dieses Etikett oder das Etikett auf dem Karton, in dem sich die einzelnen Behälter befinden, oder die den Behältern beigefügte Gebrauchsanweisung folgende Angaben zu enthalten: 1. Vollständiger Name und Anschrift des Herstellers,

2. Name des Reagenzes laut Überschrift in der entsprechenden Beschreibung,

3. die Menge oder, bei getrockneten Reagenzien, die Menge und Zusammensetzung der zur Wiederauflösung benötigten Flüssigkeit,

4. Datum des letzten Wirksamkeitstests,

5. (gegebenenfalls) Verfalldatum,

6. Chargennummer,

7. angemessene Beschreibung der vom Hersteller empfohlenen Verwendungsmethode,

8. Angaben über Aufbewahrungsbedingungen für ungeöffnete Ampullen und Vorsichtsmaßnahmen nach dem Öffnen,

9. genaue Angaben über die Zusammensetzung, gegebenenfalls auch über das Antiseptikum und/oder Antibiotikum,

10. Hinweis auf den Gehalt oder das Nichtvorhandensein von Stoffen menschlichen Ursprungs.

Jeder Sendung ist eine Bescheinigung gemäß Artikel 4 des Übereinkommens entsprechend der Anlage zu diesem Protokoll beizufügen. Muster für die Etiketten und Gebrauchsanweisungen sind diesem Protokoll beigefügt.

BESONDERE BESTIMMUNGEN

A. SERA MENSCHLICHEN URSPRUNGS ZUR BLUTGRUPPENBESTIMMUNG

a) SERA MENSCHLICHEN URSPRUNGS FÜR DIE BESTIMMUNG DER A B 0-Gruppen i) Anti-A Serum zur Blutgruppenbestimmung (menschlich)

Anti-A Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe B gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder durch spezifische Substanzen der Gruppe A immunisiert sein können. Anti-A Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die A-Antigen enthalten, d.h. diejenigen der Gruppe A und AB einschließlich der Untergruppe A1, A2, A1B und A2B. Es agglutinieren keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein A-Antigen enthalten, d.h. diejenigen der Blutgruppen 0 und B.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-A Serum ist parallel zu dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat getrennt gegen Aufschwemmungen von A1-, A2- und A2B-Blutkörperchen zu titrieren. Die Wirksamkeit des Serums darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-A Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von A1-, A2- und A2B-Blutkörperchen gemischt, so soll die Agglutination bei jeder Aufschwemmung innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

ii) Anti-B Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-B Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe A gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder durch spezifische Substanzen der Gruppe B immunisiert sein können. Anti-B Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die B-Antigen enthalten, d.h. diejenigen der Blutgruppen B und AB ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein B-Antigen enthalten, d.h. diejenigen der Blutgruppen 0 und A.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-B Serum ist parallel zu dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat gegen eine Aufschwemmung von B-Blutkörperchen zu titrieren. Die Wirksamkeit des Serums darf nicht weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-B Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

iii) Anti-A plus Anti-B (Gruppe 0) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe 0 gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder spezifische Substanzen der Gruppe A und der Gruppe B immunisiert sein können. Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die Agglutinugene A und/oder B enthalten, d.h. diejenigen der Gruppe A einschließlich der Untergruppen A1 und A2 der Gruppe B und der Gruppe AB einschließlich der Untergruppen A1B und A2B ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die keine Agglutinugene A oder B enthalten, d.h. diejenigen der Gruppe 0. Es agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die das Ax (Ay oder Ao)-Antigen enthalten (die im allgemeinen durch Anti-A Serum von Blutspendern der Gruppe B nicht agglutiniert werden).

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Serum ist parallel zu dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat, getrennt gegen Aufschwemmungen von A1 und A2 Blutkörperchen zu titrieren. Ferner ist es parallel zu dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat gegen eine Aufschwemmung von B-Blutkörperchen zu titrieren.

Die Wirksamkeit des Serums darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Unverdünnt verwendetes Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Blutserum muß ebenfalls eine leicht erkennbare Agglutination der Blutkörperchen der Gruppe Ax (Ay oder Ao) hervorrufen.

Bestimmung der Avidität

Wird ein Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Serum auf einem Objektträger mit gleichen Mengen von 5- bis 10prozentigen Aufschwemmungen von A1 und A2 Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn die gleichen Versuche mit dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Aktivität durchgeführt werden. Wird Anti-A + Anti-B (Gruppe 0) Serum auf einen Objektträger mit einer gleichen Menge von 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird. Wird ein Anti-A + ein Anti-B (Gruppe 0) Serum auf einem Objektträger mit der gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von Ax (Ay oder Ao) Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb von 5 Minuten bei einer Temperatur von 18 bis 25 °C auftreten.

b) SERA MENSCHLICHEN URSPRUNGS ZUR RH-BLUTGRUPPENBESTIMMUNG

Anti-Rh Blutgruppensera jeder Spezifität können zu einer von zwei Arten gehören, die sich durch die Voraussetzungen unterscheiden, unter denen eine Agglutination homologer Blutkörperchen erreicht wird. Bestimmte Sera, die als "komplett" bezeichnet werden, agglutinieren Blutkörperchen in einer Kochsalzlösung. Mit anderen, die als "inkomplett" bezeichnet werden, kann eine Agglutination nur bei Vorhandensein bestimmter Kolloide wie etwa Rinderalbumin oder mit Hilfe sonstiger besonderer Methoden erreicht werden. Die Sera sollen unter den Bedingungen verwendet werden, die das herstellende Laboratorium angibt.

Einige "inkomplette" Sera agglutinieren auf Objektträgern auch homologe rote Blutkörperchen, die in ihrem eigenen Serum oder Plasma aufgeschwemmt sind.

Die folgenden Anforderungen an die Wirksamkeit von Sera zur Bestimmung der Rh-Gruppe sind möglicherweise zu ändern, wenn Internationale Standardpräparate zur Verfügung stehen. i) Anti-D (Anti-Rho) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-D Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch das Antigen D des Rh-Systems immunisiert sind. Es reagiert mit menschlichen roten Blutkörperchen, die das Antigen D enthalten, jedoch nicht mit menschlichen roten Blutkörperchen, die das Antigen D nicht enthalten.

Wirksamkeit

Titration

"Komplette" Anti-D Sera müssen einen Titer von mindestens 1 : 32 gegenüber CcDee Blutkörperchen in einer 0,9prozentigen Kochsalzlösung haben.

Ein "inkomplettes" Anti-D Serum ist parallel zu dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des inkompletten Anti-D (Anti-Rho) Serums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat gegenüber CcDee Blutkörperchen zu filtrieren. Es muß eine Wirksamkeit von nicht weniger als 32 Internationalen Einheiten haben. Neben einer Reaktion mit allen roten Blutkörperchen, die das Antigen D enthalten, soll das Serum nach Möglichkeit mit Blutkörperchen, die Do-Antigen enthalten, reagieren.

Bestimmung der Avidität

Anti-D Sera, die zur Verwendung von Objektträgern gemäß dem Test nach Diamond und Abelson bestimmt sind, müssen, nachdem sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40- bis 50prozentigen Aufschwemmung von CcDee-Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination aufweisen, und die Agglutination muß innerhalb von 120 Sekunden vollständig sein.

ii) Anti-C-(Anti-rh') Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-C Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch das Agglutinogen C des Rh-Systems immunisiert sind. Es reagiert mit Aufschwemmungen menschlicher roter Blutkörperchen, die das Antigen C enthalten, jedoch nicht mit menschlichen roten Blutkörperchen, die das C-Antigen nicht enthalten. In diesem Zusammenhang gilt das Cw-Antigen als zum C-Antigen gehörend.

Die meisten diagnostischen Anti-C Sera enthalten sowohl "komplettes" Anti-C als auch "inkomplettes" Anti-D. Diese Sera sind deshalb für das C-Antigen nur dann spezifisch, wenn die getesteten Blutkörperchen in einer 0,9prozentigen Kochsalzlösung aufgeschwemmt sind.

Wirksamkeit

Titration

Der Titer der Anti-C Sera ("komplette" oder "inkomplette") muß mindestens 1 : 8 gegenüber Ccddee-Blutkörperchen betragen.

Bestimmung der Avidität

Anti-C Sera, die zur Verwendung auf Objektträgern gemäß dem Test nach Diamond und Abelson bestimmt sind (und keine Form von Anti-D enthalten dürfen), müssen, wenn sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40- bis 50prozentigen Aufschwemmung von Ccddee-Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination aufweisen, und die Agglutination muß innerhalb von 120 Sekunden vollständig sein.

iii) Anti-E (Anti-rh") Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-E Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch das Antigen E des Rh-Systems immunisiert sind. Es reagiert mit menschlichen roten Blutkörperchen, die E-Antigen enthalten.

Wirksamkeit

Titration

Anti-E Sera ("komplette" oder "inkomplette") sollen einen Titer von mindestens 1 : 8 gegenüber CcddEe-Blutkörperchen haben.

Bestimmung der Avidität

Anti-E Sera, die zur Verwendung auf Objektträgern gemäß dem Test nach Diamond und Abelson bestimmt sind (und in keiner Form Anti-D enthalten dürfen), müssen, wenn sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40- bis 50prozentigen Aufschwemmung von CcddEe-Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination aufweisen, und die Agglutination muß innerhalb von 120 Sekunden abgeschlossen sein.

iv) Anti-D + -C (Anti-Rhorh') Blutgruppenserum (menschlich)

Anti-D + -E (Anti-Rhorh") Blutgruppenserum (menschlich)

Sera der Spezifität Anti-D + -C und der Spezifität Anti-D + -E können unmittelbar aus dem Blut immunisierter Personen gewonnen werden oder können durch Mischen von Anti-D mit Anti-C oder Anti-E Serum hergestellt werden. In einem gegebenen Serum müssen beide Antikörper unter den vom Hersteller festgelegten Reaktionsbedingungen gleichzeitig wirksam sein. Jedes Serum muß bei allen denjenigen roten Blutkörperchen eine Reaktion hervorrufen, die bei einem der beiden Antikörper, aus denen sich das Serum zusammensetzt, eine Reaktion zeigen würde ; bei roten Blutkörperchen, die weder C-noch D-Antigen im Falle von Anti-D + -C und weder D- noch E-Antigen im Falle von Anti-D + -E enthalten, dürfen sie jedoch keine Reaktion bewirken. Die Titer dürfen nicht niedriger sein als die, wie sie bei den beiden Antikörpern, aus denen sich das Serum zusammensetzt, gefordert werden ; im Falle von Anti-D + -C (eine häufige Kombination im Serum immunisierter Personen) soll der Anti-C Titer jedoch nach Möglichkeit nicht weniger als 1 : 32 und im Falle von Anti-D + -E soll der Anti-E Titer nach Möglichkeit nicht weniger als 1 : 8 betragen. Ist ein Serum zur Verwendung auf Objektträgern gemäß dem Test nach Diamond und Abelson bestimmt, so soll die Agglutinationszeit bei allen Arten roter Blutkörperchen, die eine Reaktion zeigen, nicht geringer sein als bei den anteiligen Antikörpern.

B. REAGENZIEN NICHTMENSCHLICHEN URSPRUNGS

a) SERA TIERISCHEN URSPRUNGS i) Anti-A Blutgruppenserum (tierisch)

Anti-A Serum wird aus dem Blut von Tieren gewonnen, die durch Blutkörperchen oder spezifische Substanzen der Gruppe A immunisiert sein können. Anti-A Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die A-Antigen enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen A und AB einschließlich der Untergruppen A1, A2, A1B und A2B ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein A-Antigen enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen 0 und B.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-A Serum ist, parallel zu dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat, getrennt mit Aufschwemmungen von A1, A2 und A2B roten Blutkörperchen zu titrieren (1). Die Wirksamkeit des Serums darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-A Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von A1-, A2- und A2B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination bei jeder Aufschwemmung innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

ii) Anti-B Blutgruppenserum (tierisch)

Anti-B Serum wird aus dem Blut von Tieren gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder spezifische Substanzen der Blutgruppe B immunisiert sein können. Anti-B Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die B-Antigen enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen B und AB ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein B-Antigen enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen 0 und A.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-B Serum ist, parallel zu dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat, mit einer Aufschwemmung von Blutkörperchen der Gruppe B zu titrieren (1). Die Wirksamkeit des Serums darf nicht weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-B Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

iii) Anti-Human-Globulin-Serum (tierisch) (2)

Anti-Human-Globulin-Serum zur Verwendung in der Blutgruppenserologie muß agglutinierende Antikörper gegen IgG Globulin und agglutinierende Antikörper gegen Komplementfaktoren enthalten. Es wird aus dem Blut von Tieren gewonnen, die durch Einspritzung von menschlichen Serumproteinen immunisiert sind. Es muß alle mit menschlichem IgG Globulin und/oder Komplementfaktoren beladenen menschlichen roten Blutkörperchen agglutinieren. Wird es nach Vorschrift des Herstellers verwendet, so agglutiniert es keine unbeladenen menschlichen roten Blutkörperchen, gleichgültig, welcher Blutgruppe sie angehören.

Spezialität

Die Spezialität eines Anti-Human-Globulin-S Serum zur Verwendung in der Blutgruppenserologie muß mit menschlichen roten Blutkörperchen getestet werden, die mit verschiedenen Antikörpern beladen sind, das heisst, rote Blutkörperchen, die mit menschlichen inkompletten Anti-D-, Anti-K- und Anti-Fya-Antikörpern sensibilisiert sind, rote Blutkörperchen, die bei Vorhandensein von frischem Menschenserum mit komplement bindenden inkompletten (1) Das Internationale Standardpräparat ist menschlichen Ursprungs ; ein gegebenenfalls verwendetes entsprechendes Vergleichspräparat kann menschlichen oder nichtmenschlichen Ursprungs sein. (2) Coombs, R.R.A. ; Mourant, A.E. und Race, R.R. (1945) ; Lancet, II, 15. Coombs, R.R.A. ; Mourant, A.E. und Race, R.R. (1945) ; Brit. J. exp. Path., 26, 255. AntiLea Antikörpern sensibilisiert sind, und rote Blutkörperchen, die mit den vorgenannten "inkompletten Kälte-Antikörpern" sensibilisiert sind, und mit Tannin behandelte rote Blutkörperchen, die mit menschlichem IgG Globulin sensibilisiert sind, und schließlich mit 10 verschiedenen Proben unbeladener menschlicher roter Blutkörperchen mit und ohne A- und B-Antigene.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-Human-Globulin-Serum muß in der gelieferten Form oder in der auf dem Etikett angegebenen Verdünnung eine starke Agglutination der roten Blutkörperchen verursachen, die mit menschlichen inkompletten Anti-D-Sera mit einem Titer von 1 : 4 (oder weniger) beladen sind, wenn die Titration mit D-positiven Blutkörperchen nach der "Albumin-Replacement"- Methode durchgeführt wird. In derselben Verdünnung muß es die mit ausgesucht schwachen Anti-K Antikörpern sensibilisierten K-positiven menschlichen roten Blutkörperchen und die mit ausgesucht schwachen Anti-Fya Antikörpern sensibilisierten Fya-positiven roten Blutkörperchen agglutinieren.

In derselben oder einer anderen auf dem Etikett angegebenen Verdünnung muß es auch menschliche rote Blutkörperchen agglutinieren, die in Gegenwart von frischem Menschenserum mit schwachen komplement bindenden inkompletten Anti-Lea Antikörpern sensibilisiert sind.

Für den klinischen Gebrauch sollte die Beladung mit allen Arten der oben genannten inkompletten Antikörper mit einer einzigen Verdünnung des Anti-Human-Globulin-Serums nachweisbar sein.

b) BLUTGRUPPENREAGENZIEN PFLANZLICHEN URSPRUNGS i) Anti-A Blutgruppenreagenz (pflanzlich)

Anti-A Reagenz wird durch Extraktion aus dem Samen oder anderen Teilen einer geeigneten Pflanze und gegebenenfalls anschließender Reinigung gewonnen. Das Anti-A Reagenz agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die A-Antigene enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen A und AB einschließlich der Untergruppen A1, A2, A1B und A2B ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein A-Antigen enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen 0 und B.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-A Reagenz ist parallel zu dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat, getrennt gegen Aufschwemmungen von A1-, A2- und A2B-Blutkörperchen zu titrieren (1).

Die Wirksamkeit des Reagenzes darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-A Reagenz auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von A1-, A2- und A2B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination bei jeder Aufschwemmung innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wieder aufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-A Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird. ii) Anti-B Blutgruppenreagenz (pflanzlich)

Anti-B Reagenz wird durch Extraktion aus dem entsprechenden Teil einer geeigneten Pflanze und gegebenenfalls anschließender Reinigung gewonnen. Das Anti-B Reagenz agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die Agglutinogen B enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen B und AB ; es agglutiniert keine menschlichen roten Blutkörperchen, die kein Agglutinogen B enthalten, das heisst diejenigen der Blutgruppen 0 und A.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti-B Reagenz ist parallel zu dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat gegen eine Aufschwemmung von B-Blutkörperchen zu titrieren (1).

Die Wirksamkeit des Reagenzes muß mindestens 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti-B Reagenz auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5- bis 10prozentigen Aufschwemmung von B-Blutkörperchen gemischt, so muß die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem wiederaufgelösten, aber unverdünnten Internationalen Standardpräparat des Anti-B Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

(1) Das Internationale Standardpräparat ist menschlichen Ursprungs ; ein gegebenenfalls verwendetes entsprechendes Vergleichspräparat kann menschlichen oder nichtmenschlichen Ursprungs sein.

ANLAGEN ZUM PROTOKOLL

MUSTER EINES ETIKETTS EUROPARAT EUROPÄISCHES ÜBEREINKOMMEN ÜBER DEN AUSTAUSCH VON REAGENZIEN ZUR BLUTGRUPPENBESTIMMUNG

>PIC FILE= "T0045084"> MUSTER EINER GEBRAUCHSANWEISUNG EUROPARAT EUROPÄISCHES ÜBEREINKOMMEN ÜBER DEN AUSTAUSCH VON REAGENZIEN ZUR BLUTGRUPPENBESTIMMUNG

1. Zentrallaboratorium für Bluttransfusionen, 1 Main Street, Metropolis, Westland

2. Anti-E (Anti-rh") Serum (menschlich)

3. 10 ml

4. Datum der letzten Wirksamkeitsprüfung : 30. Mai 1961

5. Verfalldatum : 30. Mai 1962

6. Nr. 5432

7. Die zu untersuchenden roten Blutkörperchen werden einmal oder mehrmals in 0,9prozentiger Kochsalzlösung gewaschen. Durch Mischen von einem Teil oder Tropfen konzentrierter roter Blutkörperchen mit 30 Teilen oder Tropfen Kochsalzlösung wird eine etwa 3prozentige Aufschwemmung hergestellt. Mit einiger Erfahrung lässt sich die Konzentration der Aufschwemmung mit blossem Auge ausreichend beurteilen.

Mit einer Pasteur-Pipette wird ein kleiner Tropfen Serum in ein Rundboden-Röhrchen (6 mm x 30 mm) gegeben, und ein ähnlicher Tropfen der Blutkörperchenaufschwemmung wird hinzugefügt. (Mit einiger Erfahrung können durch Benutzung von graduierten Pipetten mit 0,01 ml Skala erhebliche Einsparungen bei der Verteilung des Serums und der Blutkörperchenaufschwemmung erreicht werden). Der Inhalt des Röhrchens wird gemischt und in einem Brutschrank zwei Stunden lang bei 37 °C erhitzt. Der Inhalt des Röhrchens wird dann vorsichtig auf einen Objektträger übertragen und darauf verteilt. Sofern eine Agglutination nicht mit dem blossen Auge klar zu erkennen ist, wird der Objektträger mikroskopisch untersucht, um festzustellen, ob eine Agglutination aufgetreten ist und bejahendenfalls wie stark diese ist.

8. Das Serum ist bei einer Temperatur von - 20 °C oder darunter aufzubewahren. Wenn es erst nach dem Tage der Öffnung verwendet werden soll, so ist 0,1 ml einer 10prozentigen Natriumazidlösung hinzuzufügen.

9. Menschliches Anti-E (Anti-rh") Serum : 5 ml, 30prozentige Rinderalbuminlösung : 5 ml.

10. Dieses Präparat enthält Stoffe menschlichen Ursprungs.

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