2008R0273 — DE — 01.07.2013 — 001.001

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VERORDNUNG (EG) Nr. 273/2008 DER KOMMISSION

vom 5. März 2008

mit Durchführungsbestimmungen zu der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 des Rates hinsichtlich der Methoden für die Analyse und Qualitätsbewertung von Milch und Milcherzeugnissen







DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN — gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft, gestützt auf die Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 des Rates vom 17. Mai 1999 über die gemeinsame Marktorganisation für Milch und Milcherzeugnisse ( 1 ), insbesondere auf die Artikel 10 und 15, Artikel 26 Absatz 3, Artikel 29 Absatz 1 und Artikel 31 Absatz 4, in Erwägung nachstehender Gründe: (1) In der Verordnung (EG) Nr. 213/2001 der Kommission ( 2 ) wird die Umsetzung der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 des Rates hinsichtlich der Methoden zur Analyse und zur Qualitätsbewertung von Milch und Milcherzeugnissen ausführlich erläutert. In Anbetracht der technischen Entwicklungen im Bereich der Analysemethoden ist festzustellen, dass weitere erhebliche Änderungen vorgenommen werden müssen. Im Interesse der Klarheit und der Wirksamkeit sowie angesichts der Anzahl und der technischen Merkmale der Änderungen ist die Verordnung (EG) Nr. 213/2001 aufzuheben und durch eine neue Verordnung zu ersetzen. (2) Die Zusammensetzung und die Qualitätsmerkmale von Milch und Milcherzeugnissen sind gemäß der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 zu prüfen, um die genaue Übereinstimmung mit den vorgesehenen Anforderungen sicherzustellen. (3) Referenzmethoden für diese Prüfungen sind häufig von internationalen Organisationen wie etwa dem Europäischen Normenausschuss (CEN), der IDF (International Dairy Federation), der ISO (International Standards Organisation) und der AOAC International (Association of Official Analytical Chemists) veröffentlichte Methoden, die regelmäßig von diesen Organisationen aktualisiert werden. In bestimmten Fällen wird eine Referenzmethode der Gemeinschaft erlassen; in anderen Fällen enthalten die Gemeinschaftsvorschriften keine Referenzmethode. Um sicherzustellen, dass Referenzmethoden einheitlich angewendet werden, ist eine Liste mit Referenzmethoden zu erstellen und vorzusehen, dass die Kommission diese Liste gegebenenfalls anpasst. (4) Die Verwendung von Routinemethoden sollte nicht ausgeschlossen werden; entsprechend sind auch die maßgeblichen Mindestanforderungen zu spezifizieren. (5) Ferner sind gemeinsame Verfahren festzulegen, um eine einheitliche Praxis für die Bewertung der Analyseergebnisse herzustellen. Dies gilt auch für die sensorische Prüfung der betreffenden Erzeugnisse und die Überprüfung strittiger Ergebnisse. (6) Für die Durchführung bestimmter Analysen existieren zurzeit keine international anerkannten und validierten Referenzmethoden; daher sind keine Informationen über die Unterschiede zwischen den Analyseergebnissen der einzelnen Laboratorien verfügbar. Somit sind Methoden auf Gemeinschaftsebene festzulegen, die nach international festgelegten Regeln validiert wurden und als Referenzmethoden angewandt werden sollten. (7) Die Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 der Kommission ( 3 ) enthält ausführliche Bestimmungen zur Anwendung der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 betreffend Maßnahmen zum Absatz von Rahm, Butter und Butterfett auf dem Gemeinschaftsmarkt und sieht in bestimmten Fällen die Kennzeichnung von Rahm, Butter und Butterfett vor, um eine bestimmungsgemäße Endverwendung dieser Erzeugnisse sicherzustellen. Die Kennzeichnung ist für ein reibungsloses Funktionieren des Systems wichtig. Um sicherzustellen, dass die beteiligten Marktteilnehmer gleich behandelt werden, sollten gemeinsame Methoden für die Bestimmung einiger dieser Kennzeichnungsmittel festgelegt werden. (8) Für die private Lagerhaltung von aus Schaf- oder Ziegenmilch hergestellten Käsesorten kann gemäß Artikel 9 der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 eine Beihilfe gewährt werden. Für diese Erzeugnisse kann gemäß Artikel 31 der genannten Verordnung außerdem eine besondere Erstattung gewährt werden. Für die Einfuhr von Käse aus Schaf-, Ziegen- oder Büffelmilch oder aus Gemischen von Schaf-, Ziegen- oder Büffelmilch aus bestimmten Drittländern in die Gemeinschaft gelten Präferenzregelungen. Wegen der genannten Vorschriften muss im Wege geeigneter Kontrollen nachgewiesen werden, dass dem betreffenden Erzeugnis keine Kuhmilch zugesetzt wurde. Es empfiehlt sich daher, eine gemeinschaftliche Referenzmethode für den Kuhmilchnachweis festzulegen, die auch mit Routinemethoden durchgeführt werden kann, wenn sie bestimmte Kriterien erfüllen. (9) Gemäß der Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 der Kommission vom 10. Oktober 1990 über die Gewährung von Beihilfen für zur Herstellung von Kasein und Kaseinaten bestimmte Magermilch ( 4 ) muss nachgewiesen werden, dass keine coliformen Keime vorhanden sind. ISO 4831 ist international als Referenzmethode für den Nachweis coliformer Keime in Milch und Milcherzeugnissen anerkannt. Ausgehend von dieser Norm wird daher eine Referenzmethode der Gemeinschaft für die Untersuchung auf coliforme Keime beschrieben. (10) Die Verordnung (EWG) Nr. 2658/87 des Rates vom 23. Juli 1987 über die zolltarifliche und statistische Nomenklatur sowie den Gemeinsamen Zolltarif ( 5 ) sieht abhängig vom Anteil an Milcherzeugnissen unterschiedliche Zollsätze für Mischfuttermittel vor, die der Tarifposition Nr. 2309 zuzurechnen sind. Um eine einheitliche Anwendung der betreffenden Bestimmungen zu gewährleisten, ist eine allgemein anerkannte und für alle Mitgliedstaaten verbindliche Methode zur Bestimmung des Laktosegehalts festzulegen. (11) Gemäß der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 müssen bei Butter und Magermilchpulver, die zur Intervention bestimmt sind, bzw. bei Magermilchpulver zur Tierfütterung bestimmte Qualitätsbedingungen eingehalten werden. Daher sind Referenzmethoden für die Überprüfung der Einhaltung dieser Bedingungen festzulegen. (12) Einige Methoden werden in dieser Verordnung erstmals eingeführt. Nach Inkrafttreten dieser Verordnung sollte ausreichend Zeit eingeräumt werden, um diese Methoden ordnungsgemäß einführen und anwenden zu können. Wenn eine in Anhang I genannte Methode von der Normungsbehörde geändert und anschließend veröffentlicht wird, sollte den Laboratorien eine Frist von sechs Monaten zur Anpassung ihrer Analyseverfahren an die neue Norm gewährt werden. (13) Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der Stellungnahme des Verwaltungsausschusses für Milch und Milcherzeugnisse — in Erwägung nachstehender Gründe: HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:







KAPITEL I

ALLGEMEINE BESTIMMUNGEN

Artikel 1

Gegenstand und Anwendungsbereich

(1) Mit dieser Verordnung werden bestimmte Referenzmethoden für die chemische, physikalische und mikrobiologische Analyse und für die sensorische Prüfung von Milch und Milcherzeugnissen gemäß den Regelungen im Rahmen der mit der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 festgelegten gemeinsamen Marktorganisation für Milch und Milcherzeugnisse erlassen und Regelungen für die Anwendung dieser Methoden beschrieben.

(2) Anhang I dieser Verordnung enthält eine Liste der Referenzmethoden, die bei den in Absatz 1 genannten Analysen anzuwenden sind.

(3) Die Kommission bringt die genannte Liste mindestens einmal jährlich nach dem Verfahren des Artikels 42 der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 auf den neusten Stand.

Artikel 2

Routinemethoden

Für die gemäß den Gemeinschaftsvorschriften erforderlichen Analysen dürfen Routinemethoden verwendet werden, wenn an die Routinemethoden die gleichen Maßstäbe wie an die Referenzmethode angelegt werden und die Routinemethoden regelmäßig überprüft werden. Die Ergebnisse werden unter Berücksichtigung des jeweiligen systematischen Fehlers sowie der Wiederholbarkeit und der Vergleichbarkeit verglichen.

Im Streitfalle sind die Ergebnisse der Referenzmethode maßgeblich.

Die Mitgliedstaaten benachrichtigen die Kommission über die Anwendung von Routinemethoden bei den in Artikel 1 genannten Analysen.







KAPITEL II

ANALYSEMETHODEN

Artikel 3

Bewertung der Konformität einer Partie mit den gesetzlichen Grenzwerten

Außer bei der Analyse von Kennzeichnungsmitteln ist die Konformität mit den gesetzlichen Anforderungen an die Zusammensetzung der Erzeugnisse nach Maßgabe von Anhang II dieser Verordnung nachzuweisen.

Artikel 4

Sensorische Prüfung

(1) Bei Milch und anderen Milcherzeugnissen als Butter, die zur öffentlichen Lagerhaltung vorgesehen sind, wenden die Mitgliedstaaten als Referenzmethode für die sensorische Prüfung entweder die Norm IDF 99C:1997 oder andere vergleichbare Methoden an, die sie der Kommission mitteilen.

Die Methoden gemäß Anhang III können für die Überprüfung der Leistung der Prüfpersonen und der Zuverlässigkeit der Ergebnisse verwendet werden.

(2) Bei Butter zur öffentlichen Lagerhaltung werden die Methoden gemäß Anhang III für die Überprüfung der Leistung der Prüfpersonen und der Zuverlässigkeit der Ergebnisse verwendet.

Die in Anhang IV beschriebene Methode wird als Referenzmethode für die sensorische Prüfung angewendet.

Artikel 5

Kennzeichnungsmittel

(1) Die in Anhang V beschriebene Analysemethode wird als Referenzmethode zur Bestimmung des Anteils an Önanthsäure-Triglycerid in Butter, Butterschmalz und Rahm verwendet.

(2) Die in Anhang VI beschriebene Analysemethode wird als Referenzmethode zur Bestimmung von Vanillin in Butterfett, Butter oder Rahm angewendet.

(3) Die in Anhang VII beschriebene Analysemethode wird als Referenzmethode zur Bestimmung des Gehalts an Beta-Apo-8'-Karotinsäure-Ethylester in Butterfett oder Butter angewendet.

(4) Die in Anhang VIII beschriebene Analysemethode wird als Referenzmethode zur Bestimmung des β-Sitosterin- oder Stigmasteringehalts von Butter und Butterfett angewendet.

(5) Butterfett und Rahm werden als gemäß der geltenden Gemeinschaftsregelung kennzeichnungspflichtig betrachtet, wenn die ermittelten Ergebnisse im Einklang mit den Spezifikationen der Nummern 10 und 11 in Anhang V und von Nummer 8 der Anhänge VI, VII und VIII stehen.

Artikel 6

Nachweis von Kuhmilchkasein

(1) Damit gewährleistet ist, dass ausschließlich aus Schaf-, Ziegen- oder Büffelmilch oder aus Gemischen von Schaf-, Ziegen- oder Büffelmilch herzustellender Käse kein Kuhmilchkasein enthält, ist für die Untersuchung die in Anhang IX beschriebene Referenzmethode anzuwenden.

Kuhmilchkasein gilt als nachgewiesen, wenn der festgestellte Kuhmilchkaseingehalt der Analyseprobe gleich dem Gehalt der in Anhang IX beschriebenen 1 % Kuhmilch enthaltenden Referenzprobe oder größer ist.

(2) Zum Nachweis von Kuhmilchkasein in Käse der in Absatz 1 genannten Kategorien dürfen Routinemethoden verwendet werden, wenn sie folgende Bedingungen erfüllen:

a) Die Nachweisgrenze beträgt maximal 0,5 %,

b) es wurden keine falsch-positiven Ergebnisse ermittelt,

c) auch nach im Handel üblichen längeren Reifezeiten ist eine ausreichende Empfindlichkeit zum Nachweis von Kuhmilchkasein gegeben.

Wenn eine dieser Bedingungen nicht erfüllt ist, kommt die in Anhang IX beschriebene Referenzmethode zur Anwendung.

Artikel 7

Untersuchung auf coliforme Keime

Coliforme Keime in Butter, Magermilchpulver, Kasein und Kaseinaten werden gemäß der in Anhang X beschriebenen Referenzmethode nachgewiesen.

Artikel 8

Nachweis des Laktosegehalts

Der Laktosegehalt von Produkten des KN-Codes 2309 wird gemäß der in Anhang XI beschriebenen Referenzmethode bestimmt.

Artikel 9

Nachweis von Labmolke

(1) Labmolke in zur öffentlichen Lagerhaltung vorgesehenem Magermilchpulver ist gemäß der in Anhang XII beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen.

(2) Labmolke in Magermilchpulver und in Gemischen zur Tierfütterung ist gemäß der in Anhang XII beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen. Wenn Labmolke nachgewiesen wurde, ist gemäß Anhang XIII zu verfahren.

Artikel 10

Nachweis von Buttermilch

Buttermilch in Magermilchpulver ist gemäß der in Anhang XIV beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen.

Artikel 11

Nachweis von Antimikrobiotika-Rückständen

Rückstände von Antimikrobiotika in Magermilchpulver sind mit der in Anhang XV beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen.

Artikel 12

Ermittlung des Gehalts an Magermilchpulver

Der Gehalt an Magermilchpulver ist gemäß der in Anhang XVI beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen.

Artikel 13

Nachweis von Stärke

Stärke in Magermilchpulver, denaturierten Milchpulver und Mischfutter ist gemäß der in Anhang XVII beschriebenen Referenzmethode nachzuweisen.

Artikel 14

Bestimmung der Feuchtigkeit von Trockenrahm

Die Feuchtigkeit von Trockenrahm ist gemäß der in Anhang XVIII beschriebenen Referenzmethode zu bestimmen.

Artikel 15

Bestimmung der Feuchtigkeit von saurem Buttermilchpulver

Die Feuchtigkeit von saurem Buttermilchpulver zur Tierfütterung ist gemäß der in Anhang XIX beschriebenen Referenzmethode zu bestimmen.

Artikel 16

Bestimmung der Reinheit von Milchfett

Die Reinheit von Milchfett ist gemäß der in Anhang XX beschriebenen Referenzmethode zu bestimmen.







KAPITEL III

SCHLUSSBESTIMMUNGEN

Artikel 17

Qualitätssicherung

Analysen werden in Laboratorien mit bestehendem System zur Sicherung der Analysequalität und mit internen Qualitätskontrollverfahren durchgeführt. Nicht zugelassene Laboratorien unterziehen sich mindestens einmal jährlich Leistungstests, und ihre Ergebnisse dürfen vom gemeinsamen Wert höchstens um 2σR (in der Referenzmethode vorgesehene Wiederholstandardabweichung) abweichen. Eine genaue Beschreibung der angewendeten Methode muss im Laboratorium verfügbar sein.

Gemäß den in Artikel 12 der Verordnung (EG) Nr. 882/2004 des Europäischen Parlaments und des Rates vom 29. April 2004 über amtliche Kontrollen zur Überprüfung der Einhaltung des Lebensmittel- und Futtermittelrechts sowie der Bestimmungen über Tiergesundheit und Tierschutz ( 6 ) genannten Anforderungen zugelassene Laboratorien sind von der Verpflichtung zur Teilnahme an Leistungsprüfungen befreit.

Artikel 18

Probenahme und Beanstandung der Analyseergebnisse

(1) Probenahmen erfolgen gemäß der geltenden Verordnung für das jeweils zu prüfende Erzeugnis. Wenn keine sonstigen Bestimmungen zur Probenahme genannt werden, sind die Bestimmungen in ISO 707IDF 50, Milk and milk products — Guidance of sampling zu berücksichtigen.

(2) Laborberichte über die Ergebnisse der Analyse müssen genügend Informationen für eine Bewertung der Ergebnisse gemäß den Anhängen II und XXI beinhalten.

(3) Für die in der Gemeinschaftsregelung vorgesehenen Analysen sind Doppelproben zu entnehmen.

(4) Das in Anhang XXI dargestellte Verfahren wird in Fällen verwendet, in denen die Analyseergebnisse vom Marktteilnehmer nicht akzeptiert werden.

(5) Erbringt der Erzeuger innerhalb von fünf Tagen nach der Probenahme den Nachweis, dass diese nicht ordnungsgemäß durchgeführt wurde, muss die Probenahme möglichst wiederholt werden. Ist eine erneute Probenahme nicht möglich, wird die Partie angenommen.

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▼M1

Artikel 19a

Mitteilungen

Die in Artikel 2, Artikel 4 Absatz 1 sowie Anhang III Abschnitt C vorgesehenen Mitteilungen erfolgen nach Maßgabe der Verordnung (EG) Nr. 792/2009 der Kommission ( 7 ).

▼B

Artikel 20

Aufgehobene Verordnungen

Die Verordnung (EG) Nr. 213/2001 wird aufgehoben.

Verweise auf die aufgehobene Verordnung sind als Verweise auf diese Verordnung zu verstehen und gemäß der Korrelationstabelle in Anhang XXII auszulegen.

Artikel 21

Inkrafttreten

Diese Verordnung tritt am dritten Tag nach ihrer Veröffentlichung im Amtsblatt der Europäischen Union in Kraft.

Sie gilt ab dem 31. März 2008.

Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmittelbar in jedem Mitgliedstaat.









ANHANG I

(Artikel 1)

LISTE DER REFERENZMETHODEN

Index Mind. = Mindestwert, Max. = Höchstwert, Anhang = Anhang der zitierten Verordnung, FFTM = Fettfreie Trockenmasse, PZ = Peroxidzahl, A = Aussehen, G = Geschmack, K = Konsistenz, TBC = Gesamtkolonienzahl, Therm = thermophile Keimzahl, MS = Mitgliedstaat, IDF = International Dairy Federation, ISO = International Standards Organisation, IUPAC = International Union of Pure and Applied Chemistry, ADPI = American Dairy Products Institute, LCS = gezuckerte Kondensmilch, LCC = eingedampfte Milch oder Sahne).







TEIL A Verordnung der Kommission Erzeugnis Parameter Grenzwert (1) Referenzmethode Anmerkung Verordnung (EG) Nr. 2771/1999 — Öffentliche Lagerhaltung Ungesalzene Butter Fett Mind. 82 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Säuregrad 1,2 mmol/100 g Fett ISO 1740:2004IDF 6:2004 PZ (max.) 0,3 mEq. Sauerstoff/1 000 g Fett ISO 3976:2006IDF 74:2006 Anmerkung 1 Coliforme Keime Nicht nachweisbar in 1 g Anhang X Anmerkung 3 Fremdfett Nicht nachweisbar durch Triglyceridanalyse Anhang XX Sterol-Kennzeichnungsmittel Nicht nachweisbar, β-Sitosterin ≤40 mg/kg Anhang VIII Sonstige Kennzeichnungsmittel — Vanillin Nicht nachweisbar Anhang VI — Carotinsäure-Ethylester ≤6 mg/kg Anhang VII — Önanthsäure-Triglyceride Nicht nachweisbar Anhang V Sensorische Merkmale Mindestens 4 von 5 Punkten für Aussehen, Geschmack und Konsistenz Anhang IV Wasserdispersion Mindestens 4 Punkte ISO 7586:1985IDF 112A:1989 Verordnung (EG) Nr. 2771/1999 — Private Lagerhaltung Ungesalzene Butter Fett Mind. 82 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Verordnung (EG) Nr. 2771/1999 — Private Lagerhaltung Gesalzene Butter Fett Mind. 80 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM (ohne Salz) Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Salz Bis zu 2 % m/m ISO 15648:2004IDF 179:2004 Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel II Ungesalzene Butter Fett Mind. 82 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Fremdfett Anhang XX Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1 2001IDF 80-1:2001 FFTM Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Kennzeichnungsmittel — Sterole Siehe Anhang VIII Anhang VIII — Vanillin Siehe Anhang VI Anhang VI — Carotinsäure-Ethylester Siehe Anhang VII Anhang VII — Önanthsäure-Triglyceride Siehe Anhang V Anhang V Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel II Gesalzene Butter Fett Mind. 80 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Fremdfett Anhang XX Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM (ohne Salz) Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Salz Bis zu 2 % m/m ISO 15648:2004IDF 179:2004 Kennzeichnungsmittel — Sterole Siehe Anhang VIII Anhang VIII — Vanillin Siehe Anhang VI Anhang VI — Carotinsäure-Ethylester Siehe Anhang VII Anhang VII — Önanthsäure-Triglyceride Siehe Anhang V Anhang V Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel II Butterfett Fett Mind. 99,8 % m/m IDF 24:1964 Wasser und FFTM Bis zu 0,2 % m/m ISO 5536:2002IDF 23:2002 (Feuchtigkeit) IDF 24:1964 (FFTM) Säuregrad 1,2 mmol/100 g Fett ISO 1740:2004IDF 6:2004 PZ (max.) 0,5 mEq Sauerstoff/1 000 g Fett ISO 3976:2006IDF 74:2006 Anmerkung 1 Fremdfett Ohne Anhang XX Geschmack Unverfälscht Geruch Kein Fremdgeruch Sonst. Keine Neutralisierungsmittel, Antioxidantien und Konservierungsmittel Kennzeichnungsmittel — Sterole Siehe Anhang VIII Anhang VIII — Vanillin Siehe Anhang VI Anhang VI — Carotinsäure-Ethylester Siehe Anhang VII Anhang VII — Önanthsäure-Triglyceride Siehe Anhang V Anhang V Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel II Rahm Fett Mind. 35 % m/m ISO 2450:1999IDF 16 C:1987 Fremdfett Anhang XX Kennzeichnungsmittel — Sterole Siehe Anhang VIII Anmerkung 2 — Vanillin Siehe Anhang VI Anhang VI — Carotinsäure-Ethylester Siehe Anhang VII Anmerkung 2 — Önanthsäure-Triglyceride Siehe Anhang V Anhang V Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel III Butterfett Fett Mind. 96 % m/m Anmerkung 2 Fremdfett Anhang XX FFTM Bis zu 2 % m/m Anmerkung 2 Kennzeichnungsmittel — Stigmasterin (95 % m/m) 15 g/100 kg Butterfett Anhang VIII — Stigmasterin (85 % m/m) 17 g/100 kg Butterfett Anhang VIII — Önanthsäure-Triglyceride 10,34 kg/t Butterfett Anhang V — Ethylester der Buttersäure und Stigmasterin — Ethylester der Buttersäure — Stigmasterin: Anhang VIII Anmerkung 2 — Ethylester der Buttersäure und Önanthsäure-Triglyceride — Ethylester der Buttersäure — Önanthsäure-Triglyceride: Anhang V Anmerkung 2 Lecithin (E 322) Bis zu 0,5 % m/m Anmerkung 2 NaCl Bis zu 0,75 % m/m ISO 15648:2004IDF 179:2004 Säuregrad 1,2 mmol/100 g Fett ISO 1740:2004IDF 6:2004 PZ (max.) Bis zu 0,5 mEq. Sauerstoff/1 000 g Fett ISO 3976:2006IDF 74:2006 Anmerkung 1 Geschmack Unverfälscht Geruch Ohne Fremdgeruch Sonstige Ohne Neutralisierungsmittel, Antioxidantien und Konservierungsmittel Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel IV Ungesalzene Butter Fett Mind. 82 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Verordnung (EG) Nr. 1898/2005 Kapitel IV Gesalzene Butter Fett Mind. 80 % m/m ISO 17189:2003IDF 194:2003 Wasser Bis zu 16 % m/m ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM (ohne Salz) Bis zu 2 % m/m ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 Salz Bis zu 2 % m/m ISO 15648:2004IDF 179:2004 Artikel 9 und Titel II der Verordnung (EG) Nr. 1255/1999 Käse aus Schafsmilch und/oder Ziegenmilch Kuhmilch <1 % m/m Anhang IX Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang I — Säurekasein Wasser Bis zu 12,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Fett Bis zu 1,75 % m/m ISO 5543:2004IDF127:2004 Freie Säure Bis zu 0,30 ml 0,1 n NaOH-Lösung ISO 5547:1978IDF 91:1979 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang I — Labmolke Wasser Bis zu 12,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Fett Bis zu 1,00 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 Asche Mind. 7,50 % m/m ISO 5545:1978IDF 90:1979 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang I — Kaseinate Wasser Bis zu 6,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Milcheiweiß Mind. 88,00 % m/m ISO 5549:1978IDF 92:1979 Fett und Asche Bis zu 6,00 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 Gebundene Asche ISO 5544:1978IDF 89:1979 Asche ISO 5545:1978IDF 90:1979 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang II — Säurekasein Wasser Bis zu 10,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Fett Bis zu 1,50 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 Freie Säure Bis zu 0,20 ml 0,1 n NaOH-Lösung/g ISO 5547:1978IDF 91:1979 TBC (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Anmerkung 3 Coliforme Keime Keine in 0,1 g Anhang X Anmerkung 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Anmerkungen 3 und 4 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang II — Labkasein Wasser Bis zu 8,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Fett Bis zu 1,00 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 Asche Mind. 7,50 % m/m ISO 5545:1978IDF 90:1979 TBC (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Anmerkung 3 Coliforme Keime Keine in 0,1 g Anhang X Anmerkung 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Anmerkungen 3 und 4 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang II — Kaseinate Wasser Bis zu 6,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Milcheiweiß Mind. 88,00 % m/m ISO 5549:1978IDF 92:1979 Fett und Asche Bis zu 6,00 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 ISO 5544:1978IDF 89:1979 oder ISO 5545:1978IDF 90:1979 TBC (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Anmerkung 3 Coliforme Keime Keine in 0,1 g Anhang X Anmerkung 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Anmerkungen 3 und 4 Verordnung (EWG) Nr. 2921/90 Anhang III — Kaseinate Wasser Bis zu 6,00 % m/m ISO 5550:2006IDF 78:2006 Milcheiweiß Mind. 85,00 % m/m ISO 5549:1978IDF 92:1979 Fett Bis zu 1,50 % m/m ISO 5543:2004IDF 127:2004 Laktose Bis zu 1,00 % m/m ISO 5548:2004IDF 106:2004 Asche Bis zu 6,50 % m/m ISO 5544:1978IDF 89:1979 oder ISO 5545:1978IDF 90:1979 TBC (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Anmerkung 3 Coliforme Keime Keine in 0,1 g Anhang X Anmerkung 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Anmerkungen 3 und 4 Änderung der Verordnung (EG) Nr. 2799/1999 Mischfutter und Magermilchpulver (MMP) (Fütterung) Wasser (saures Buttermilchpulver) Bis zu 5 % m/m Anhang XIX Eiweiß 31,4 % m/m (mind.) der fettfreien Trockenmasse ISO 8968-123:2001IDF 20-123:2001 Wasser (MMP) Bis zu 5 % m/m ISO 5537:2004IDF 26:2004 Fette (MMP) Bis zu 11 % m/m ISO 1736:2000IDF 9C:1987 Labmolke (MMP) Keine Anhang XIII Anmerkung 6 Stärke (MMP) Keine Anhang XVII Wasser (Mischungen) Bis zu 5 % m/m der fettfreien Trockenmasse ISO 5537:2004IDF 26:2004 Fett (Mischungen) Kommissionsrichtlinie 84/4/EWG (ABl. L 15 vom 18.1.1984, S. 29) Labmolke (Mischungen) Keine Anhang XIII MMP-Gehalt (im Endprodukt) Mind. 50 % m/m Anhang XVI Fett (im Endprodukt) Mind. 2,5 % m/m oder 5 % m/m Kommissionsrichtlinie 84/4/EWG (ABl. L 15 vom 18.1.1984, S. 29) Anmerkung 7 Stärke (im Endprodukt) Mind. 2 % m/m Anhang XVII Anmerkung 8 Kupfer (im Endprodukt) 25 ppm Kommissionsrichtlinie 78/633/EWG (ABl. L 206 vom 26.7.1987, S. 43) Verordnung (EG) Nr. 214/2001 MMP (sprühgetrocknet) Fett Bis zu 1,0 % m/m ISO 1736:2000IDF 9C:1987 Eiweiß 31,4 % (2)m/m (mind.) der fettfreien Trockenmasse ISO 8968-1/2:2001IDF 20-1/2:2001 Wasser Bis zu 3,5 % m/m ISO 5537:2004IDF 26:2004 Säuregrad Bis zu 19,5 ml, 0,1 n NaOH, 10 g fettfreie Trockenmasse ISO 6091:1980IDF 86:1981 Laktate Bis zu 150 mg/100 g fettfreie Trockenmasse ISO 8069:2005IDF 69:2005 Phosphatase Negativ ISO 11816-1:2006IDF 155-1:2006 Löslichkeit Bis zu 0,5 ml bei 24 °C ISO 8156:2005IDF 129:2005 Verbrannte Teilchen Filterscheiben A oder B (15,0 mg) ADPI (1990) TBC 40 000/g ISO 4833:2003 Anmerkung 3 Coliforme Keime Negativ/0,1 g Anhang X Anmerkung 3 Buttermilch Negativ Anhang XIV Molke-Lab Negativ Anhang XII Molke-Säure Negativ Anmerkung 2 Antibakterielle Stoffe Anhang XV (1) Unbeschadet der Anforderungen der jeweiligen Verordnung. (2) Der Mindesteiweißgehalt müsste zum 1. September 2009 34 % betragen.







TEIL B Die in Teil B genannten Referenzmethoden können bei der Analyse sämtlicher Produkte verwendet werden, die mindestens einer der in Spalte 1 genannten Verordnungen unterliegen. Verordnung der Kommission Produkt KN-Code Parameter Grenzwert Referenzmethode Anmerkung Verordnung (EWG) Nr. 2658/87 Verordnung (EG) Nr. 2535/2001 Verordnung (EG) Nr. 1282/2006 Milch und Rahm, weder eingedickt noch mit Zusatz von Zucker oder anderen Süßmitteln 0401 Fett (≤6 % m/m) Die Grenzwerte wurden der Beschreibung des KN-Codes des jeweiligen Produkts bzw. Teil 9 der in der Verordnung (EWG) Nr. 3846/87 der Kommission (ABl. L 366 vom 24.12.1987, S. 1) enthaltenen Nomenklatur für Ausfuhrerstattungen oder der Verordnung (EG) Nr. 2535/2001 (ABl. L 341 vom 22.12.2001, S. 29) entnommen. ISO 1211:2001IDF 1D:1996 Fett (> 6 % m/m) ISO 2450:1999IDF 16C:1987 Milch und Rahm, eingedickt oder mit Zusatz von Zucker oder anderen Süßmitteln 0402 Fett (flüssig) ISO 1737:1999IDF 13C:1987 Fett (fest) ISO 1736:2000IDF 9C:1987 Eiweiß ISO 8968-123:2001IDF20-123:2001 Saccharose (normaler Gehalt) ISO 2911:2004 IDF 35:2004 Saccharose (niedriger Gehalt) Anmerkung 2 Gesamtfeststoffe (LCS) ISO 6734:1989IDF 15B:1991 Gesamtfeststoffe (LCC) ISO 6731:1989IDF 21B:1987 Wasser (Milchpulver) ISO 5537:2004IDF 26:2004 Wasser (Rahmpulver) Anhang XVIII Buttermilch, fermentierte oder gesäuerte Milch (einschließlich Rahm) eingedickt oder nicht eingedickt unter Zusatz von Zucker oder anderen Süßmitteln 0403 Fett ISO 1211:2001IDF 1D:1996 ISO 1736:2000IDF 9C:1987 ISO 2450:1999IDF 16 C:1987 ISO 7208:1999IDF 22B:1987 ISO 8262-3:2005IDF 124-3:2005 Eiweiß ISO 8968-123:2001IDF 20-123:2001 Saccharose (normaler Gehalt) ISO 2911:2004IDF 35:2004 Saccharose (niedriger Gehalt) Anmerkung 2 Wasser (saures Buttermilchpulver) Anhang XIX Wasser (süßes Buttermilchpulver) ISO 5537:2004IDF26:2004 Gesamtfeststoffe (sonst. Produkte) Von der zuständigen Behörde zugelassene Methoden Molke, auch eingedickt oder mit Zusatz von Zucker oder sonstigen Süßmitteln; Erzeugnisse, die aus natürlichen Milchbestandteilen bestehen 0404 Fett ISO 1736:2000IDF 9C:1987 ISO 2450:1999IDF 16C:1987 ISO 7208:1999IDF 22B:1987 Eiweiß ISO 8968-123:2001IDF 20-123:2001 Saccharose (normaler Gehalt) ISO 2911:2004IDF 35:2004 Saccharose (niedriger Gehalt) Anmerkung 2 0404 90 Eiweiß ISO 8968 1/2 2001IDF 20-1/2:2001 Wasser IDF 21B:1987 Gesamtfeststoffe ISO 6734:1989IDF 15B:1991 (Eingedickte Produkte) ISO 6731:1989IDF 21B:1987 Butter und sonstige Fettstoffe aus Milch; Milchstreichfette 0405 Fett (wenn ≤ 85 % m/m) ISO 17189:2003IDF 194:2003 Butter Wasser ISO 3727-1:2001IDF 80-1:2001 FFTM ISO 3727-2:2001IDF 80-2:2001 NaCl ISO 15648:2004IDF 179:2004 Fett (wenn > 99 % m/m) IDF 24:1964 Butterschmalz Wasser (wenn Fett < 99 % m/m) ISO 5536:2002IDF 23:2002 Käse und Quark/Topfen 0406 Fett ISO 1735:2004IDF 5:2004 Trockenmasse ISO 5534:2004IDF 4:2004 Trockenmasse (Ricotta) ISO 2920:2004IDF 58:2004 NaCl ISO 5943:2006IDF 88:2006 Laktose ISO 5765-1/2:2002IDF 79-1/2:2002 Verordnung (EWG) Nr. 2658/87 Mischfutter 2309 Laktose Anhang XI

Anmerkungen zur Liste der EU-Referenzmethoden

Anmerkung 1: Milchfettisolierung siehe ISO 1740:1991 (Lichtschutz).

Anmerkung 2: Es wurde keine Referenzmethode festgelegt. Die Methoden wurden von der zuständigen Behörde zugelassen.

Anmerkung 3: Vorbereitung der Probe gemäß ISO 8261:2001IDF 122:2001.

Anmerkung 4: Bebrütung 48 Stunden bei einer Temperatur von 55 °C; das Austrocknen des Nährmediums ist zu verhindern.

Anmerkung 5: % m/m FFTM = % m/m Trockenmasse — % m/m Fett.

Anmerkung 6: Richtlinie 84/4/EWG der Kommission.

Anmerkung 7: Verordnung (EG) Nr. 2799/1999 der Kommission (ABl. L 340 vom 31.12.1999, S. 3–27).

Anmerkung 8: Richtlinie 78/633/EWG der Kommission.









ANHANG II

(Artikel 3)

BEWERTUNG DER KONFORMITÄT EINER PARTIE MIT DEN GESETZLICHEN GRENZWERTEN

1. KURZBESCHREIBUNG

Wenn die maßgeblichen Rechtsvorschriften ausführliche Verfahren für die Probenahme vorsehen, sind diese Verfahren einzuhalten. Ansonsten ist aus einer zur Kontrolle vorgelegten Partie grundsätzlich eine aus mindestens drei Probeneinheiten bestehende Stichprobe zu nehmen. Es kann eine Sammelprobe hergestellt werden. Das ermittelte Ergebnis wird mit den gesetzlichen Grenzwerten verglichen, indem ein Konfidenzintervall von 95 % (zweifache Standardabweichung) berechnet wird; die jeweilige Standardabweichung hängt davon ab, 1. ob die betreffende Methode im Wege einer internationalen Zusammenarbeit durch Werte für σr und σR validiert wurde bzw. 2. — bei interner Validierung — ob ein Wert für die interne Wiederholbarkeit berechnet wurde. Dieses Konfidenzintervall gibt dann Aufschluss über die Messunsicherheit des Ergebnisses.

2. DIE METHODE WIRD IM WEGE INTERNATIONALER ZUSAMMENARBEIT VALIDIERT

In diesem Fall wurden die Wiederholstandardabweichung σr und die Vergleichsstandardabweichung σR ermittelt, und das Laboratorium kann die Konformität mit den Leistungsmerkmalen der validierten Methode nachweisen.

Das arithmetische Mittel

n

Die erweiterte Messunsicherheit (k = 2) von

Wenn das Endergebnis x der Messung mit einer Gleichung der Form x = y 1 + y 2, x = y 1 – y 2, x = y 1 · y 2 oder x = y 1 / y 2 berechnet wird, sind die üblichen Verfahren zur Kombination von Standardabweichungen in diesen Fällen anzuwenden.

Die Partie wird als nicht konform mit dem oberen gesetzlichen Grenzwert UL eingestuft, wenn gilt:

;

Ansonsten ist die Konformität der Partie mit UL festzustellen.

Die Partie wird als nicht mit dem unteren gesetzlichen Grenzwert LL eingestuft, wenn

ist.

Ansonsten wird die Konformität mit LL festgestellt.

3. INTERNE VALIDIERUNG UNTER BERECHNUNG DER INTERNEN VERGLEICHSSTANDARDABWEICHUNG

Wenn in dieser Verordnung nicht spezifizierte Methoden verwendet werden und keine Präzisionsmessungen durchgeführt wurden, ist eine interne Validierung vorzunehmen. Die interne Wiederholstandardabweichung sir und die interne Vergleichsstandardabweichung siR sind anstelle von σr bzw. σ R in der Formel zur Berechnung der erweiterten Messunsicherheit U zu verwenden.

Es gelten die in Absatz 1 genannten Entscheidungskriterien. Wenn die Partie allerdings als nicht mit den gesetzlichen Grenzwerten konform bewertet wird, müssen die Messungen mit der in dieser Verordnung genannten Methode wiederholt werden, und es ist eine Entscheidung gemäß Absatz 1 zu treffen.









ANHANG III

(Artikel 4)

BEWERTUNG DER PRÜFPERSONEN UND DER ZUVERLÄSSIGKEIT DER ERGEBNISSE BEI SENSORISCHEN PRÜFUNGEN

Von den Verfahren mit Skala (IDF-Norm 99C:1997) sind folgende Verfahren anwendbar:

A. BESTIMMUNG DES „WIEDERHOLINDEXES“

Während eines Zeitraums von 12 Monaten werden mindestens zehn Proben als Blind-Doppelanalysen durch eine Prüfperson analysiert. Diese Analyse erfolgt gewöhnlich zu verschiedenen Zeitpunkten. Die Ergebnisse für individuelle Produktmerkmale werden anhand folgender Formel bewertet:

Dabei sind:

w1 : Wiederholindex

xi1 : Punktzahl für die erste Bewertung der Probe xi

xi2 : Punktzahl für die zweite Bewertung der Probe xi

n : Anzahl Proben

Die zu beurteilenden Proben müssen einen breiten Qualitätsbereich umfassen. w1 darf den Wert 1,5 (5-Punkte-Skala) nicht überschreiten.

B. BESTIMMUNG DES „ABWEICHUNGSINDEXES“

Dieser Index ist zu verwenden um nachzuprüfen, ob eine Prüfperson die gleiche Skala für Qualitätsbewertung wie eine erfahrene Prüfpersonengruppe verwendet. Die von der Prüfperson erzielten Ergebnisse werden mit dem Durchschnitt der von der Prüfpersonengruppe erzielten Ergebnisse verglichen.

Folgende Formel wird für die Bewertung der Ergebnisse verwendet:

Dabei sind:

xi1; xi2 : Siehe Abschnitt A)

; : Durchschnittspunktzahl der Prüfpersonengruppe für die erste bzw. zweite Bewertung von Probe xi

n : Anzahl Proben (mindestens zehn innerhalb von 12 Monaten)

Die zu bewertenden Proben müssen einen weiten Qualitätsbereich erfassen. D1 darf den Wert 1,5 (5-Punkte-Skala) nicht überschreiten.

Die Mitgliedstaaten teilen alle Schwierigkeiten bei der Anwendung dieses Verfahrens mit.

Wenn festgestellt wird, dass bei einzelnen Prüfpersonen der Grenzwert 1,5 für den Abweichungs- oder den Wiederholungsindex überschritten wurde, müssen Experten der zuständigen Behörden binnen der jeweils nächsten Wochen mindestens eine Stichprobe unter den von diesen Prüfpersonen bewerteten Proben einer „erneuten Prüfung“ unterziehen oder mindestens eine weitere „begleitete“ Prüfung gemeinsam mit diesen Prüfpersonen durchführen. Eine sorgfältige Überwachung ist die Voraussetzung für die Entscheidung, ob diese Prüfpersonen weiter in Anspruch genommen werden sollen. Die Ergebnisse sollten dokumentiert und für etwaige Folgemaßnahmen als Nachweis aufbewahrt werden.

C. VERGLEICH DER IN VERSCHIEDENEN REGIONEN EINES MITGLIEDSTAATS UND IN VERSCHIEDENEN MITGLIEDSTAATEN ERZIELTEN ERGEBNISSE

Wenn durchführbar, wird mindestens einmal pro Jahr ein Versuch organisiert, um den Vergleich der Ergebnisse der Prüfpersonen verschiedener Regionen zu ermöglichen. Werden signifikante Unterschiede beobachtet, müssen die erforderlichen Maßnahmen getroffen werden, um die Gründe zu ermitteln und zu vergleichbaren Ergebnissen zu gelangen.

Die Mitgliedstaaten können Versuche organisieren, die den Vergleich der Ergebnisse ihrer eigenen Prüfpersonen mit den Ergebnissen von Prüfpersonen der benachbarten Mitgliedstaaten ermöglichen. Bei signifikanten Unterschieden muss eine gründliche Untersuchung erfolgen, um zu vergleichbaren Ergebnissen zu gelangen.

Die Mitgliedstaaten teilen der Kommission die Ergebnisse dieser Vergleiche mit.









ANHANG IV

(Artikel 4)

SENSORISCHE PRÜFUNG VON BUTTER

1. ANWENDUNGSBEREICH

Diese Arbeitsvorschrift beschreibt ein Verfahren für die sensorische Prüfung von Butter, das einheitlich in allen Mitgliedstaaten angewandt werden soll.

Nähere Informationen sind der geltenden Norm für Milch und Milcherzeugnisse IDF 99 — Teile 1, 2 und 3 über sensorische Prüfungen zu entnehmen.

2. BEGRIFFSBESTIMMUNGEN

Sensorische Prüfung (Sinnenprüfung): Beurteilung der Merkmale eines Erzeugnisses durch menschliche Sinne.

Prüfergruppe: Gruppe von ausgewählten Prüfern, bei deren Arbeit es nicht zu einem Gedankenaustausch oder einer gegenseitigen Beeinflussung kommen darf.

Prüfperson: eine Person, die wegen ihrer Fähigkeit zur Durchführung einer sensorischen Prüfung ausgewählt wurde; dieser Typ von Prüfpersonen kann über eingeschränkte Erfahrung verfügen.

Fachkundige Prüfperson: eine Person mit hoch entwickelter sensorischer Empfindlichkeit und ausgeprägter Erfahrung mit Methoden zur sensorischen Prüfung, die konsistente und zuverlässige sensorische Bewertungen unterschiedlicher Produkte vornehmen kann; dieser Typ von Prüfpersonen verfügt über ein gutes sensorisches Langzeitgedächtnis.

Bewertende Prüfung: sensorische Prüfung durch eine Prüfergruppe anhand einer Punkteskala; eine Terminologie zur Bezeichnung von Fehlern ist zu verwenden.

Benotende Prüfung: Qualitätseinstufung aufgrund der bewertenden Prüfung.

Prüfformulare: Formulare zur Aufzeichnung der Einzelmesswerte für jedes Merkmal und der Gesamtnote des Erzeugnisses. (Dieses Formular kann auch zur Aufzeichnung der chemischen Zusammensetzung verwendet werden.)

3. PRÜFRAUM

Siehe ISO 8589 und ISO/DIS 22935-2IDF 99-2 Absatz 7.

Es ist dafür Sorge zu tragen, dass die Prüfer im Prüfraum nicht durch äußere Einflüsse gestört werden.

Der Prüfraum muss frei von Fremdgerüchen und einfach zu reinigen sein. Die Wände müssen hell sein und dürfen nicht reflektieren.

Der Prüfraum und seine Beleuchtung müssen so beschaffen sein, dass die zu prüfenden Produktmerkmale nicht beeinflusst werden.

Der Raum muss mit einer geeigneten Thermostatregelung ausgestattet sein, um eine gleich bleibende Temperatur der Butter sicherstellen zu können. Die Butter sollte bei der benotenden Prüfung eine Temperatur von 12 °C (± 2 °C) haben.

4. AUSWAHL DER PRÜFPERSONEN

Die Prüfperson muss mit Buttererzeugnissen vertraut und zur sensorischen Prüfung geeignet sein. Ihre Eignung ist von der zuständigen Behörde regelmäßig zu überprüfen (mindestens einmal jährlich).

4.1. ISO/DIS 22935-1IDF 99-1 Absatz 4 (Einstellung) und Absatz 5.1 sind bezüglich der allgemeinen Anforderungen sowie der Prüfungen zu beachten, die möglicherweise vor dem offiziellen Einsatz einer neuen Prüfperson durchzuführen sind. Wesentlich ist, dass ständig Schulungsmaßnahmen durchgeführt werden, und regelmäßig sollten allgemeine Zusammenkünfte stattfinden. Bezüglich der Qualifizierung der Prüfergruppe ist ISO 8586-1 zu beachten.

4.2. Eine erste Qualifizierungsmaßnahme sollte folgende Inhalte zum Gegenstand haben: — allgemeine Theorie und praktische Bedeutung der sensorischen Prüfung; — Methoden, Punkte-Skalen und Beschreibung sensorischer Eindrücke; — Erkennung und Nachweis sensorischer Merkmale und spezifische sensorische Begriffe; — allgemeine Unterweisung zur Herstellung von Butter; — validierte Referenzen und Proben, die der Prüfperson helfen können, spezifische Qualitäten und Intensitäten des Produktgeschmacks zu bestimmen.

5. ANFORDERUNGEN AN DIE PRÜFERGRUPPE

Die Gruppe soll sich aus einer ungeraden Zahl von Prüfern zusammensetzen und mindestens drei Prüfer umfassen. Dabei muss es sich mehrheitlich um Bedienstete der zuständigen Behörde oder um eigens dazu befugte Personen handeln, die nicht für die Milchwirtschaft tätig sind.

Ein Prüfungsleiter ist für das gesamte Verfahren verantwortlich; er kann der Prüfergruppe angehören.

Vor der Prüfung müssen mehrere Faktoren berücksichtigt werden, damit die Prüfer bestmögliche Leistungen erbringen können:

— Die Prüfer dürfen an keiner Krankheit leiden, die ihre Leistungen beeinträchtigen könnte. Ansonsten muss ein anderer Prüfer in die Gruppe aufgenommen werden;

— die Prüfer müssen sich pünktlich zur Prüfung einfinden und dafür sorgen, dass sie genügend Zeit für ihre Prüfung haben;

— die Prüfer sollten keine stark riechenden Erzeugnisse wie Parfüm, Rasierwasser, Deodorants usw. benutzen und keine stark gewürzten Speisen gegessen haben;

— die Prüfer dürfen während der letzten halben Stunde vor der Prüfung nicht rauchen und nicht essen und ausschließlich Wasser trinken.

6. LEISTUNGSFÄHIGKEIT

Alle Prüfpersonen sollten regelmäßig in Gruppen zur Durchführung sensorischer Prüfungen eingesetzt werden, damit sie ihre Kompetenz nicht verlieren. Die Häufigkeit wird von der Menge und dem Durchsatz der zu prüfenden Butter abhängen; nach Möglichkeit sollte pro Monat mindestens eine Prüfergruppe zusammenkommen.

Auch erfahrenere Prüfpersonen sollten jährlich an mehreren Prüfergruppen beteiligt werden (möglichst mindestens einmal pro Vierteljahr).

7. PROBENAHME UND VORBEREITUNG DER PROBE

Entscheidend ist, dass keine störenden Rückschlüsse auf die Identität der Proben gezogen werden können; die Proben sollten codiert werden.

Die entsprechenden Vorkehrungen sollten vor der Prüfung getroffen werden. Die Butter muss während der Beförderung zum Prüfraum entsprechend temperiert sein (6 °C ± 2 °C).

Erfolgt die sensorische Bewertung in einem Kühlhaus, wird die Probe mit Hilfe eines Butterbohrers entnommen. Findet die sensorische Bewertung an einem anderen Ort statt, sollte mindestens eine 500-g-Probe entnommen werden. Während der Prüfung sollte die Butter eine Temperatur von 12 °C (± 2 °C) haben; (in ISO/DIS 22935-2IDF 99-2 wird die Prüftemperatur für Butter mit 14 °C ± 2 °C angegeben.) Größere Abweichungen sind unter allen Umständen zu vermeiden.

8. BEWERTUNG DER PRÜFMERKMALE

8.1. Die sensorische Prüfung bezieht sich auf drei Merkmale: Aussehen, Konsistenz und Geschmack. Das „Aussehen“ wird durch folgende Kriterien bestimmt: Farbe, augenscheinliche Reinheit, Fehlen physikalischer Verunreinigungen, Fehlen von Schimmelbildung und Einheitlichkeit der Wasserdispersion. Die Wasserdispersion wird gemäß der IDF-Norm 112A/1989 geprüft. Die „Konsistenz“ ergibt sich aus folgenden Kriterien: Struktur, Textur undFestigkeit. Die Streichfähigkeit kann physisch geprüft werden, wenn ein einzelner Mitgliedstaat dies wünscht, um den Anforderungen der Kunden nachzukommen. Die Kommission kann beschließen, die Methodik künftig zu harmonisieren. Der Begriff „Struktur“ bezieht sich auf die Stabilität des Produktes in der vom Verbraucher verwendeten Form. Im Allgemeinen besteht ein Zusammenhang zwischen Struktur, Festigkeit und Streichfähigkeit, und die Struktur sollte im Allgemeinen im gesamten Produkt einheitlich sein. Dieses Merkmal steht in engem Zusammenhang auch mit der Textur und beschreibt die Formstabilität des Produktes unter dem Eigengewicht. Die Struktur zeigt sich in der Schnittfestigkeit und kann mechanisch sowie mit dem Mund und den Fingern erfühlt werden. Als „Geschmack“ wird die im Mund, vornehmlich durch die Geschmacksknospen der Zunge, wahrnehmbare Beschaffenheit bezeichnet. Als „Aroma“ wird die mit der Nase und mit dem Geruchssinn wahrnehmbare Beschaffenheit bezeichnet. Bei einer deutlichen Abweichung von der empfohlenen Temperatur ist eine zuverlässige Prüfung der Konsistenz und des Geschmacks nicht möglich. Die Temperatur ist von größter Bedeutung. Die benotende Prüfung von Butter muss auf einen späteren Zeitpunkt verschoben werden, wenn die Temperatur außerhalb der empfohlenen Bandbreite liegt.

8.2. Jedes Merkmal ist separat zu beurteilen. Die Bewertung der Merkmale erfolgt gemäß Tabelle 1.

8.3. Vor dem Beginn der Prüfung sollten die Prüfer eine gemeinsame Beurteilung einer oder zweier Kontrollproben auf Aussehen, Konsistenz und Geschmack bzw. Aroma durchführen, um Übereinstimmung hinsichtlich der Kriterien zu erzielen.

8.4. Für die Akzeptanz erforderliche Bewertung Siehe Teil 7 — Terminologie und Beschreibung der jeweils maßgeblichen Bewertungskriterien.



Höchstwert Mindestanforderung Aussehen 5 4 Konsistenz 5 4 Geschmack/Aroma 5 4 — Wird die erforderliche Mindestpunktzahl nicht erreicht, ist der jeweilige Mangel zu beschreiben. — Die von den einzelnen Prüfern vergebenen Punktzahlen sind auf dem Prüfformular zu vermerken. — Das Erzeugnis wird aufgrund der Mehrheitsentscheidung akzeptiert oder verworfen. — Fälle, in denen zwischen den einzelnen bewertenden Prüfungen auf die jeweiligen Merkmale größere Unterschiede auftreten als zwischen benachbarten Punkten, sollten Ausnahmen darstellen (höchstens eine von 20 Proben). Anderenfalls ist die Eignung der Prüfergruppe vom Prüfungsleiter zu überprüfen.

9. ÜBERWACHUNG

Der Prüfungsleiter, bei dem es sich um einen offiziellen Bediensteten der zuständigen Behörde handeln muss und der auch Mitglied der Prüfergruppe sein kann, muss generell für das gesamte Verfahren verantwortlich sein. Er muss alle für jedes Merkmal vergebenen und auf dem Prüfformular vermerkten Bewertungen erfassen und bescheinigen, dass das Erzeugnis akzeptiert oder zurückgewiesen wurde.

10. TERMINOLOGIE

Siehe Anhang, Tabelle 2.

11. LITERATUR

FIL-IDF 99C:1997 Sensory evaluation of dairy products by scoring — Reference method.

ISO/DIS 22935IDF 99 Milch und Milcherzeugnisse — Sensorische Analyse — Teile 1-3.

ISO 8586-1 Sensorische Analyse; Allgemeine Richtlinien für die Auswahl, Schulung und Überprüfung von Prüfpersonen, Teil 1.

ISO 8589 Sensorische Analyse; Allgemeine Richtlinien für die Gestaltung von Prüfräumen.

FIL-IDF 112A:1989 Butter — Determination of Wasser dispersion value.







Tabelle 1 Bewertende Prüfung von Butter Aussehen Konsistenz Geschmack + Aroma Punktzahlen Nr. (1) Bewertung Punktzahlen (Qualitätsklasse) Nr. (1) Bewertung Punktzahl (Qualitätsklasse) Nr. (1) Bewertung 5 Sehr gut Idealtyp Höchste Qualität (uniform, seco) 5 Sehr gut Idealtyp Höchste Qualität (gut streichfähig) 5 Sehr gut Idealtyp Höchste Qualität (absolut rein, feinstes Aroma) 4 Gut (2) Keine offensichtlichen Mängel 4 17 18 Gut (2) hart weich 4 Gut (2) keine offensichtlichen Mängel 3 1 2 3 4 5 6 7 8 Genügend (geringe Mängel) wasserlässig zweifarbig (bunt) streifig geflammt, marmoriert fleckig ausgeölt überfärbt locker, nicht kompakt 3 14 15 16 17 18 Genügend (geringe Mängel) kurz, spröde, krümelig salbig, teigig, schmierig klebrig hart weich 3 21 22 25 27 33 34 35 Genügend (geringe Mängel) unrein Fremdgeschmack sauer Kochgeschmack Futtergeschmack herb bitter versalzen 2 1 3 4 5 6 10 11 12 Mangelhaft (offensichtliche Mängel) wasserlässig streifig geflammt, marmoriert fleckig ausgeölt Fremdbestandteile schimmelig ungelöstes Salz 2 14 15 16 17 18 Mangelhaft (offensichtliche Mängel) kurz, spröde, krümelig salbig, schmierig, teigig klebrig hart weich 2 21 22 23 25 32 33 34 35 36 38 Ungenügend (wahrnehmbare Mängel) unrein Fremdgeschmack schal sauer Oxydationsgeschmack, Metallgeschmack Futtergeschmack herb, bitter versalzen dumpf, muffig, faulig Chemikaliengeschmack 1 1 3 4 5 6 7 9 10 11 12 Schlecht (ausgeprägte Mängel) wasserlässig streifig geflammt, marmoriert fleckig ausgeölt überfärbt körnig Fremdbestandteile schimmelig ungelöstes Salz 1 14 15 16 17 18 Sehr mangelhaft (ausgeprägte Mängel) kurz, bröckelig, krümelig salbig, schmierig, teigig klebrig hart weich 1 22 24 25 26 28 29 30 31 32 34 35 36 37 38 Sehr mangelhaft (ausgeprägte Mängel) Fremdgeschmack käsig, käsigsauer sauer hefeartig Schimmelgeschmack ranzig ölig, fischig talgig Oxidationsgeschmack, Metallgeschmack grob, bitter versalzen dumpf, muffig, faulig Malzig Chemikaliengeschmack (1) Tabelle 2. (2) Die unter der Bewertung „gut“ genannten Mängel sind nur als sehr geringfügige Abweichungen vom Idealtyp zu betrachten.







Tabelle 2 Mängelbezeichnungen bei Butter I. Aussehen 1. Wasserlässig 2. Zweifarbig (bunt) 3. Streifig 4. Geflammt, marmoriert 5. Fleckig 6. Ausgeölt 7. Überfärbt 8. Locker (nicht kompakt) (mit Löchern und Spalten) 9. Körnig 10. Fremdbestandteile 11. Schimmelig 12. Ungelöstes Salz II. Konsistenz 14. Kurz, spröde, krümelig, bröckelig 15. Salbig, teigig, schmierig 16. Klebrig 17. Hart 18. Weich III. Geruch und Geschmack 20. Ohne Geschmack 21. Unrein (1) 22. Fremdgeschmack 23. Schal 24. Käsig, käsigsauer 25. Sauer 26. Hefeartig 27. a) Kochgeschmack b) Anbrenngeschmack (brandig) 28. Schimmel-Geschmack 29. Ranzig 30. Ölig, fischig 31. Talgig 32. a) Oxydationsgeschmack b) Metall-Geschmack 33. Futtermittel-Geschmack 34. Grob, bitter 35. Versalzen 36. Dumpf, muffig, faulig 37. Malzig 38. Chemikalien-Geschmack (1) Diese Mängelbezeichnung soll möglichst wenig verwendet und auf die Fälle beschränkt werden, in denen der Geschmacksmangel nicht genauer umschrieben werden kann.









ANHANG V

(Artikel 5)

BESTIMMUNG DES GEHALTS AN ÖNANTHSÄURE-TRIGLYCERID IN BUTTER, BUTTERSCHMALZ UND RAHM DURCH GASCHROMATOGRAFISCHE ANALYSE DER TRIGLYCERIDE

1. ANWENDUNGSBEREICH

Im Folgenden wird eine Methode zur Bestimmung des Gehalts an Önanthsäure-Triglycerid in Butterschmalz, Butter und Rahm beschrieben.

2. BEGRIFFSBESTIMMUNGEN

Önanthsäure-Gehalt: Der mit dem in dieser Methode beschriebenen Verfahren ermittelte Gehalt an Önanthsäure-Triglycerid.

Anmerkung: Der Önanthsäure-Gehalt wird bei Butterschmalz und Butter ausgedrückt in kg/t Produkt und bei Rahm in kg/t Milchfett.

3. KURZBESCHREIBUNG

Milchfett wird aus den verschiedenen Produkten gemäß ISO 14156IDF 172:2001 extrahiert. Die quantitative Bestimmung des Gehalts an Önanthsäure-Triglycerid im gewonnenen Fett erfolgt durch Kapillarsäulen-Gaschromatografie. Das für die Probe ermittelte Ergebnis wird unter Annahme des Capronsäure-Triglycerids als interne Standardprobe bewertet.

Anmerkung: Auch Tributyrin hat sich als ausreichende interne Standardprobe erwiesen.

4. REAGENZIEN

Es sind ausschließlich anerkannt analysenreine Reagenzien zu verwenden.

4.1. n-Hexan

4.2. Standard-Capronsäure-Triglycerid, Reinheit mindestens 99 %

4.3. Standard-Önanthsäure-Triglycerid, Reinheit mindestens 99 %

4.4. Wasserfreies Natriumsulfat (Na2SO4)

5. APPARATUR

Normale Laborausrüstung sowie insbesondere:

5.1. eine Analysewaage, Genauigkeit 1 mg

5.2. Messkolben, Füllmengen 10 ml und 20 ml

5.3. Zentrifugenröhrchen, Füllmenge 30 ml

5.4. ein Rotationsverdampfer

5.5. ein Ofen, in dem eine gleich bleibende Temperatur von 50 °C ± 5 °C aufrechterhalten werden kann

5.6. Filterpapier, mittlere Porengröße, Durchmesser ca. 15 cm

5.7. Gaschromatografie-Ausrüstung: 5.7.1. ein Gaschromatograf mit Injektor (split/splitless oder on-column) und Flammenionisations-Detektor (FID); 5.7.2. eine GC-Säule, mit einer stationären Phase, in der erfolgreich eine Triglycerid-Abtrennung durchgeführt wurde (100 % Dimethylpolysiloxan oder 5 % Phenyl — 95 % Methylpolysiloxan). Die stationäre Phase, die Säulenhöhe (4 bis 15 m), der Innendurchmesser (0,22 bis 0,50 mm) und die Filmstärke (mindestens 0,12 μm) sind aufgrund von Erfahrungen im Laboratorium sowie abhängig vom jeweiligen Injektionssystem zu wählen. In jedem Fall müssen mit der gewählten Säule der Lösungsmittel-Peak und der Capronsäure-Triglycerid-Peak klar getrennt dargestellt und eine Basislinien-Auflösung zwischen dem Capronsäure-Triglycerid- und dem Önanthsäure-Triglycerid-Peak ermöglicht wird. Im Folgenden werden exemplarisch einige mögliche Aufbauten beschrieben. 5.7.2.1. Beispiele möglicher Aufbauten mit Split-Injektor: — Trägergas: Helium; — Kopfdruck Säule: 100 kPa; — Säule: 12 m Höhe, 0,5 mm Innendurchmesser, 0,1 μm Filmstärke Quarzglassäule; — stationäre Phase: 100 % Dimethylpolysiloxan oder 5 % Phenyl/95 % Dimethylpolysiloxan (z. B. HT5); — Säulentemperatur: Ausgangstemperatur 130 °C, Dauer 1 Minute, steigend um 20 °C/min bis auf 260 °C; anschließend weiterer Anstieg um 30 °C/min bis auf 360 °C; 10 min bei 360 °C; — Detektortemperatur: 370 °C; — Injektortemperatur: 350 °C; — Splitverhältnis: 1:30; — injiziertes Probenvolumen: 1 μl; 5.7.2.2. Beispiel eines möglichen Aufbaus mit On-Column-Injektor: — Trägergas: Wasserstoff (Constant-Flow-System); — Kopfdruck Säule: 89 kPa; — Säule: 4 m Höhe, 0,32 mm Innendurchmesser, 0,25 μm Filmstärke, Quarzglassäule; — stationäre Phase: 5 % Phenyl/95 % Dimethylpolysiloxan; — Säulentemperatur: Ausgangstemperatur 60 °C, Dauer 2 min, ansteigend um 35 °C/min auf 340 °C, Beibehaltung dieser Temperatur 5 min; — Detektortemperatur: 350 °C; — injiziertes Probenvolumen: 1 μl;

5.8. eine Injektionsspritze, Fassungsvermögen 5 μl.

6. PROBENAHME

Wichtig ist, dass das Laboratorium eine Probe erhält, die tatsächlich repräsentativ ist und bei Transport oder Lagerung nicht beschädigt oder verändert wurde.

Die Probenahme ist nicht Bestandteil der in dieser internationalen Norm spezifizierten Methode. Eine empfohlene Methode zur Probenahme ist IDF-Norm 50C: 1995 bzw. ISO 707-1997 — „Milch und Milchprodukte — Leitfaden zur Probenahme“ zu entnehmen.

7. VERFAHREN

7.1. Herstellung der Testprobe und der Probeneinwaage

Verfahren gemäß ISO 14156IDF 172:2001

7.1.1. Butterschmalz, Butter

7.1.1.1. 50 bis 100 g der Testprobe werden im Ofen (5.5) geschmolzen.

7.1.1.2. 0,5 bis 1,0 g wasserfreies Natriumsulfat (5.4) werden auf ein Faltenfilterpapier gegeben.

7.1.1.3. Das Fett wird durch das Filterpapier mit dem wasserfreien Natriumsulfat gefiltert, und das entstehende Filtrat in einem im Ofen (5.5) vorgehaltenen Becherglas aufgefangen. Beim Dekantieren der geschmolzenen Butter auf das Filterpapier ist darauf zu achten, dass kein Serum übertragen wird.

7.1.2. Rahm

7.1.2.1. Die Testprobe wird auf 20 °C ±2 °C erwärmt.

7.1.2.2. Die Probe wird gründlich gemischt oder gerührt.

7.1.2.3. Von der Testprobe wird eine geeignete Menge aufgelöst, so dass sich eine Probeneinwaage von 100 ml mit einem Fettmasseanteil von etwa 4 % ergibt.

7.1.2.4. Anschließend ist das Fett wie bei Rohmilch und bei homogenisierter Milch (siehe ISO 14156IDF 172:2001, Absatz 8.3) aus dem Rahm abzutrennen.

7.1.2.5. In einen 10-ml-Messkolben (5.2) wird 1 g des gewonnenen Fetts gegeben (Toleranz 1 mg). 1 ml der in Absatz 7.2.2 genannten Lösung wird hinzugegeben. Anschließend ist der Messkolben unter Zugabe von n-Hexan (4.1) auf eine Füllmenge von 10 ml aufzufüllen und zu homogenisieren.

7.1.2.6. 1 ml der in Absatz 7.1.1.2 genannten Lösung wird in einen 10-ml-Messkolben (5.2) gegeben; anschließend wird mit n-Hexan (4.1) auf 10 ml aufgefüllt.

7.2. Vorbereitung der Kalibrierungsstandards

7.2.1. 100 mg Önanthsäure-Triglycerid (4.3) werden in 10 ml n-Hexan (4.1) aufgelöst.

7.2.2. 100 mg Capronsäure-Triglycerid (4.2) werden in 10 ml n-Hexan (4.1) aufgelöst.

7.2.3. 1 ml der in Absatz 7.2.2 genannten Lösung wird in einen 10-ml-Messkolben (5.2) gegeben; anschließend wird mit n-Hexan (4.1) auf 10 ml aufgefüllt.

7.2.4. Jeweils 1 ml der in Absatz 7.2.1 und der in Absatz 7.2.2 genannten Lösung wird in einen 10-ml-Messkolben (5.2) gegeben; anschließend wird mit n-Hexan (4.1) auf 10 ml aufgefüllt.

7.2.5. 1 ml der in Absatz 7.2.4 genannten Lösung wird in einen 10-ml-Messkolben (5.2) gegeben; anschließend wird mit n-Hexan (4.1) auf 10 ml aufgefüllt.

7.3. Chromatografische Bestimmung

7.3.1. Von der in Absatz 7.2.5 genannten Standardlösung wird zweimal 1 μl injiziert.

7.3.2. Von jeder Probenlösung ist jeweils 1 μl zu injizieren. Anmerkung: Wenn der On-Column-Injektor eingesetzt wird, sollten sowohl die Standardlösung als auch die Probenlösungen in einer erhöhten Verdünnung verwendet werden.

7.3.3. Das in Absatz 7.3.1 genannte Verfahren ist bei jeder dritten Probe zu wiederholen, damit jeweils am Anfang und am Ende einer Probenreihe eine Standardinjektion erfolgen kann. Die Ergebnisse beruhen auf den mittleren durchschnittlichen Kalibrierfaktoren der Standardchromatogramme.

8. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE

Bei jedem Chromatogramm sind die Peak-Flächen des Önanthsäure- und des Capronsäure-Triglycerids zu integrieren.

Diese Anweisungen sind für alle Probenfolgen zu wiederholen, bei denen jeweils vorher und nachher die Standardlösung injiziert wird. (Unmittelbar vor jeder Probenreihe wird zweimal die Standardlösung STD1 injiziert, und unmittelbar nach jeder Probenreihe wird zweimal die Standardlösung STD2 eingespritzt.)

8.1. Kalibrierung

8.1.1. Jeweils für die zweite Probe von STD1, Rf1(a) und Rf1(b) ist der Reaktionsfaktor zu berechnen. Rf1 (a) oder (b) = (Peak-Fläche Capronsäure-Triglycerid/Peak-Fläche Önanthsäure-Triglycerid) × 100 Der mittlere durchschnittliche Reaktionsfaktor Rf1 wird berechnet: Rf1 = (Rf1(a) + Rf1(b)) / 2

8.1.2. Ähnlich wird der mittlere durchschnittliche Reaktionsfaktor für STD2 und Rf2 berechnet.

8.1.3. Der mittlere durchschnittliche Reaktionsfaktor Rf wird berechnet: Rf = (Rf1 + Rf2) /2

8.2. Testproben

Für jedes ermittelte Proben-Chromatogramm zwischen STD1 und STD2 wird der Önanthsäuregehalt (C (in kg/t)) berechnet:

C = (Peak-Fläche für Önanthsäure-Triglycerid × Rf × 100)/(Peak-Fläche Capronsäure-Triglycerid × Wt × 1 000)

Dabei sind:

— Wt = Gewicht des gewonnenen Fetts (g),

— 100 = Verdünnungsvolumen der Probe,

— 1 000 = Umrechnungsfaktor (μg/g in kg/t).

Bei Butterproben wird der Fettgehalt der Butter berücksichtigt und ein bereinigter Konzentrationswert CButter (kg/t Butter) berechnet

CButter = CFett × F

Dabei ist: F = Fettgehalt der Butter.

9. GENAUIGKEIT

Nähere Informationen zu einem Leistungstest mit Butter gemäß ISO 5725-1 und ISO 5725-2 (Genauigkeit der Methode) sind Ziffer 12 zu entnehmen.

Die Grenzwerte für die Wiederholbarkeit und die Vergleichbarkeit werden für das Konfidenzintervall 95 % ausgedrückt und sind auf andere als die genannten Konzentrationsbereiche und Matrizen möglicherweise nicht übertragbar.

9.1. Wiederholbarkeit

Die absoluten Unterschiede zwischen zwei einzelnen Testergebnissen, die nach derselben Methode bei identischem Testmaterial im selben Laboratorium von demselben Analytiker und mit derselben Ausrüstung binnen eines kurzen Zeitraums ermittelt wurden, liegen in höchstens 5 % aller Fälle über 0,35 kg/t.

9.2. Vergleichbarkeit

Die absoluten Unterschiede zwischen zwei einzelnen Testergebnissen, die nach derselben Methode bei identischem Testmaterial in verschiedenen Laboratorien von verschiedenen Analytikern und mit unterschiedlicher Ausrüstung ermittelt wurden, liegen in höchstens 5 % aller Fälle über 0,66 kg/t.

10. TOLERANZGRENZEN: UNTERGRENZE (BEI UNZUREICHENDEN MENGEN)

10.1. Zur Prüfung der richtigen Kennzeichnung des Erzeugnisses sind dem gekennzeichneten Erzeugnis drei Proben zu entnehmen.

10.2. Butter und Butterfett 10.2.1. Die Beimischungsquote beträgt 11 kg Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von 95 % pro Tonne Butter (d. h. 10,45 kg/t). 10.2.2. Die Ergebnisse von drei Proben, die aus der Analyse des Produkts ermittelt wurden, werden zur Prüfung der Quote und der Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels verwendet; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 9,51 kg/t (95 % der Mindestquote der Beimischung von Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von 95 %, einfache Bestimmung); — 6,89 kg/t (70 % der Mindestquote der Beimischung von Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von 95 %, einfache Bestimmung); — es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das man durch Interpolierung zwischen 9,51 kg und 6,89 kg erhält.

10.3. Rahm 10.3.1. Die Beimischung beträgt 10 kg Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von mindestens 95 % pro Tonne Milchfett (d. h. 9,50 kg/t gekennzeichnetes Milchfett). 10.3.2. Aufgrund der Ergebnisse der drei in der Produktanalyse untersuchten Proben wird die Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels geprüft; das niedrigste Ergebnis wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 8,60 kg/t (95 % der Mindestquote der Beimischung von Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von 95 %, einfache Bestimmung); — 6,23 kg/t (70 % der Mindestquote der Beimischung von Önanthsäure-Triglycerid mit einer Reinheit von 95 %, einfache Bestimmung); — es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das man durch Interpolierung zwischen 8,60 kg und 6,23 kg erhält.

11. TOLERANZGRENZEN: OBERGRENZEN (BEI ÜBERSCHREITUNG DER MENGE UM MEHR ALS 20 %)

11.1. Zur Prüfung der richtigen Kennzeichnung des Erzeugnisses sind dem gekennzeichneten Erzeugnis drei Proben zu entnehmen.

11.2. Butter und Butterfett 11.2.1. Die Ergebnisse von drei Proben, die aus der Analyse des Produkts ermittelt wurden, werden zur Prüfung der Quote und der Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels verwendet; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf den folgenden Grenzwert beurteilt: — oberer Grenzwert 12,96 kg/t.

11.3. Rahm 11.3.1. Die Ergebnisse von drei Proben, die aus der Analyse des Produkts ermittelt wurden, werden zur Prüfung der Quote und der Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels verwendet; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf den folgenden Grenzwert beurteilt: — oberer Grenzwert 11,82 kg/t.

12. WEITERE INFORMATIONEN: STATISTISCHE ANALYSE VON ERGEBNISSEN BEI DER BESTIMMUNG VON ÖNANTHSÄURETRIGLYCERID IN BUTTERFETT DURCH TRIGLYCERIDANALYSE

Zur Bestimmung des Önanthsäuretriglycerid-Gehalts in gekennzeichneter Butter wurden vier gemeinsame Versuche durchgeführt.

Am ersten Ringtest haben sich neun Laboratorien beteiligt; es wurden keine Spezifikationen bezüglich der anzuwendenden Analysemethoden vorgegeben.

Am zweiten Ringtest nahmen zehn Laboratorien teil; es wurden vier unterschiedliche Methoden angewendet:

— quantitative Methylheptanoat-Bestimmung mit n-Nonan oder Methylnonanoat als interner Standardprobe;

— quantitative Önanthsäuretriglycerid-Bestimmung mit Tricaproat als interner Standardprobe;

— quantitative Methylheptanoat-Bestimmung mit einer Kalibrierungsprobe/Gemisch;

— quantitative Methylheptanoat-Bestimmung mit einem Kalibrierungsgemisch.

Wenn FAME analysiert würde, müssten zudem zwei verschiedene Verfahren zum Methylierungsnachweis (De Francesco und Christopherson & Glass) eingesetzt werden.

Wegen der ermittelten Ergebnisse wurden zwei Methoden zur Durchführung des dritten Ringtests gewählt:

— quantitative Methylheptanoat-Bestimmung mit n-Nonan oder Methylnonanoat als interner Standardprobe;

— quantitative Önanthsäuretriglycerid-Bestimmung mit Tricaproat als interner Standardprobe.

Die Ergebnisse von sieben Laboratorien zeigten, dass sich mit der FAME-Methode eine höhere Variabilität ergab, und entsprechend wurde entschieden, ausschließlich die Bestimmung mit Önanthsäuretriglycerid als Triglycerid gemäß dem Verfahren zum quantitativen Önanthsäuretriglycerid-Nachweis mit Tricaproat als interner Standardprobe zu verwenden. Zudem muss die Triglyceridanalyse mit einer Kapillarsäule durchgeführt werden.

Im vierten Ringtest wurden vier Proben (A, B, C und D) verteilt, und neun Laboratorien übermittelten Ergebnisse (Tabellen 1-2).

Zwei Laboratorien (DE und EU) analysierten die Proben nach der FAME-Methode.

Wegen der geringeren Anzahl der Laboratorien wurde die statistische Berechnung sowohl für die gesamte Datengruppe (Abbildungen 1-2) einschließlich der FAME-Ergebnisse als auch für die aus der TG-Analyse ermittelten Daten durchgeführt.

Tests auf Ausreißer

— Probe A: In Dixon-, Cochran- und Grubbs-Tests mit 1 und 5 % wurde ein Ausreißer in einem Laboratorium festgestellt.

— Probe B: Im Grubbs-Test mit 5 % wurde ein Ausreißer in einem Laboratorium festgestellt.

— Probe C: In Dixon- und Grubbs-Tests mit 1 und 5 % wurde in einem Labor ein Ausreißer festgestellt.

— Probe D: In Dixon- und Grubbs-Tests mit 1 und 5 % wurde in einem Laboratorium ein Ausreißer festgestellt.

Der Ausreißer wurde bei der Berechnung nicht berücksichtigt.

Die mit der FAME-Methode ermittelten Ergebnisse wurden mit den durchgeführten Tests nie als Ausreißer gewertet.

Parameter für die Genauigkeit

In den Tabellen 1 und 2 sind die Ergebnisse aller Laboratorien und die Parameter für die Genauigkeit genannt, die für eine annehmbare Anzahl (8) an Laboratorien berechnet wurden; die Ergebnisse beruhen leider aber nicht alle auf derselben Analysemethode.

In den Tabellen 3 und 4 sind ausschließlich mit der TG-Methode ermittelte Ergebnisse sowie die entsprechenden Genauigkeitsparameter zusammengestellt. Die Annahme dieser Parameter unterliegt dem Vorbehalt der Annahme der geringen Anzahl an Laboratorien (6).

Aus den Abbildungen 2 und 3 gehen die Trends der berechneten Werte für Sr und SR der vier Proben der beiden beschriebenen Datenreihen hervor.

In Tabelle 5 sind die Werte für Sr und SR mit den entsprechenden Pool-Werten und den Gesamtparametern r und R zusammengestellt.

Außerdem wurde die kritische Differenz bei einem Konfidenzintervall von 95 % berechnet.







Tabelle 1 Statistische Ergebnisse TG- und FAME*-Methode Probe A R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausscheiden von Ausreißern 8 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Ausreißer DК ZPLA DE* 11,6 11,8 11,7 Mittelwert 11,3 ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Tatsächlicher Wert 11,0 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,09 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 0,80 ËÈLA FI 11,3 11,2 11,3 Wiederholbarkeit < r (95 %) 0,26 ISPRA EU* 11,0 11,0 11,0 Relative Wiederholbarkeit r % 2,24 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,23 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 2,04 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,84 Relative Vergleichbarkeit R % 5,71 Probe B R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 8 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Ausreißer DK ZPLA DE* 14,0 13,8 13,9 Mittelwert 13,4 ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Tatsächlicher Wert 13,5 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,14 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 1,04 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,40 ISPRA EU* 13,2 13,3 13,3 Relative Wiederholbarkeit r % 2,91 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,35 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 2,61 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,99 Relative Vergleichbarkeit R % 7,31







Tabelle 2 Statistische Ergebnisse TG- und FAME*-Methode Probe C R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 8 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Ausreißer DK ZPLA DE* 9,2 9,4 9,3 Mittelwert 9,3 ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Tatsächlicher Wert 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,14 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 1,50 EELA FI 9,4 9,6 9,5 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,40 ISPRA EU* 9,4 9,3 9,4 Relative Wiederholbarkeit r % 4,20 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,17 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 1,82 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,47 Relative Vergleichbarkeit R % 5,10 Probe D R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 8 RENNES R1 1,6 1,6 1,6 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Ausreißer DK ZPLA DE* 2,3 2,3 2,3 Mittelwert 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Tatsächlicher Wert 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,08 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 3,81 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,22 ISPRA EU* 2,3 2,3 2,3 Relative Wiederholbarkeit r % 10,67 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,24 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 11,43 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,67 Relative Vergleichbarkeit R % 32,00







Tabelle 3 Statistische Ergebnisse TG- und FAME*-Methode Probe A R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 6 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Ausreißer DК ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Mittelwert 11,2 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Tatsächlicher Wert 11,0 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,09 ËÈLA FI 11,3 11,2 11,3 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 0,80 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,25 Relative Wiederholbarkeit r % 2,24 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,13 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 1,16 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,36 Relative Vergleichbarkeit R % 3,25 Probe B R1 R2 Mittelwert Verbleibende Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 6 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Ausreißer DК ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Mittelwert 13,3 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Tatsächlicher Wert 13,5 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,15 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 1,13 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,42 Relative Wiederholbarkeit r % 3,16 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,33 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 2,48 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,93 Relative Vergleichbarkeit R % 6,94







Tabelle 4 Statistische Ergebnisse TG-Methode Probe C R1 R2 Mittelwert Verbleibende Anzahl Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 6 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Ausreißer DК ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Mittelwert 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Tatsächlicher Wert 9,3 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,15 ËÈLA FI 9,4 9,6 9,5 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 1,61 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,42 Relative Wiederholbarkeit r % 4,51 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,19 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 2,04 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,53 Relative Vergleichbarkeit R % 5,71 Probe D R1 R2 Mittelwert Verbleibende Anzahl Laboratorien nach Ausschluss von Ausreißern 6 RENNES FR1 1,6 1,6 1,6 Anz. Ausreißer 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Ausreißer Mittelwert DK Mittelwert 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Tatsächlicher Wert 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Wiederholstandardabweichung (Sr) 0,09 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Relative Wiederholbarkeit sd (RSDr %) 4,29 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Wiederholbarkeit r (95 %) 0,26 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Relative Wiederholbarkeit r% 12,01 Vergleichsstandardabweichung (SR) 0,25 Relative Vergleichbarkeit sd (RSDR %) 11,90 Vergleichbarkeit R (95 %) 0,69 Relative Vergleichbarkeit R % 33,32







Tabelle 5 Wiederholbarkeit und Vergleichbarkeit (mit FAME) Anz. Laboratorien Ausreißer Wiederholbarkeit Sr (95 %) Vergleichbarkeit SR (95 %) Probe A 8 1 0,09 0,23 Probe Β 8 1 0,14 0,35 Probe C 8 1 0,14 0,17 Probe D 8 1 0,08 0,24 Pool-Wert 0,116 0,256 r R Pool-Wert * 2,8 0,324 0,716 CrD95 = 0,40 Erklärte Mindestreinheit für Önanthsäuretriglycerid = 95 % Erklärter unterer Grenzwert für Önanthsäuretriglycerid in Butterfett = 11 kg/t In Anbetracht der kritischen Differenz bei einem Konfidenzintervall von 95 % darf der Mittelwert dieser beiden Ergebnisse folgende Werte nicht unterschreiten: bei Beimischung von Önanthsäuretriglycerid mit einer Reinheit von 95 % 10,05 kg/t.







Wiederholbarkeit und Vergleichbarkeit (ohne FAME) Anz. Laboratorien Ausreißer Wiederholbarkeit Sr (95 %) Vergleichbarkeit SR (95 %) Probe A 6 1 0,09 0,13 Probe B 6 1 0,15 0,33 Probe C 6 1 0,15 0,19 Probe D 6 1 0,09 0,25 Pool-Wert 0,124 0,237 r R Pool-Wert * 2,8 0,347 0,663 CrD95 = 0,36 Erklärte Mindestreinheit für Önanthsäuretriglycerid = 95 % Erklärter unterer Grenzwert für Önanthsäuretriglycerid in Butterfett = 11 kg/t In Anbetracht der kritischen Differenz bei einem Konfidenzintervall von 95 % darf der Mittelwert dieser beiden Ergebnisse folgende Werte nicht unterschreiten: bei Beimischung von Önanthsäuretriglycerid mit einer Reinheit von 95 % 10,09 kg/t.

Abbildung 1 ( 8 )

Versuchsergebnisse Probe A

Versuchsergebnisse Probe B

Versuchsergebnisse Probe C

Versuchsergebnisse Probe D

Abbildung 2

Wiederholstandardabweichung und Vergleichsstandardabweichung bei verschiedenen Konzentrationen (TG und FAME)

Abbildung 3

Wiederholstandardabweichung und Vergleichsstandardabweichung bei verschiedenen Konzentrationen (TG)

Abbildung 4

Beispiel unter Verwendung eines On-Column-Injektors









ANHANG VI

(Artikel 5)

BESTIMMUNG DES VANILLIN-GEHALTS IN BUTTERFETT, BUTTER ODER RAHM DURCH HPLC

1. GEGENSTAND UND ANWENDUNGSBEREICH

Beschrieben wird ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Vanillin in Butter, Butterfett oder Rahm.

2. KURZBESCHREIBUNG

Extraktion einer bekannten Probemenge mit Hilfe eines Isopropanol-Ethanol-Acetonitril-Gemisches (1:1:2); Abscheidung des Hauptteils des Fetts durch Kühlung bei –15 °C bis –20 °C und anschließendes Zentrifugieren.

Nach Verdünnung mit Wasser Bestimmung des Vanillingehalts durch Hochleistungs-Flüssigkeitschromatografie (HPLC).

3. APPARATUR

Normale Laborausstattung und insbesondere:

3.1. Gefrierschrank zur Kühlung auf einen Temperaturbereich von –15 bis –20 °C;

3.2. Einwegspritzen mit einem Fassungsvermögen von 2 ml;

3.3. Membranmikrofilter (Porengröße 0,45 μm), beständig gegen eine Lösung mit 5 % Extraktionslösung (4.4);

3.4. Flüssigkeitschromatografie-System, bestehend aus einer Pumpe (Durchfluss von 1,0 ml/min), einem Injektor (20 μl Injektionsvolumen, automatisch oder manuell), einem UV-Detektor (306 nm, 0,01 Å gesamter Bereich), einem Aufzeichnungsgerät oder Integrator und einem Säulenthermostat für eine Betriebstemperatur von 25 °C;

3.5. Analysesäule (250 mm × 4,6 mm ID), gepackt mit LiChrospher RP 18 (Merck, 5 μm) oder gleichwertigem Material;

3.6. Vorsäule (ca. 20 mm × 3 mm ID), trocken gepackt mit LiChrospher RP 18 (5 bis 10 μm) oder gleichwertigem Material;

3.7. Zentrifuge (2 000 Umin-1).

4. REAGENZIEN

Alle verwendeten Reagenzien müssen analysenrein sein.

4.1. Isopropanol

4.2. Ethanol 96 % (v/v)

4.3. Acetonitril

4.4. Extraktionslösung Gemisch aus Isopropanol (4.1), Ethanol (4.2) und Acetonitril (4.3) im Verhältnis 1:1:2 (v/v)

4.5. Vanillin (4-Hydroxy-3-methoxy-benzaldehyd) ≥98 % 4.5.1. Vanillin-Stammlösung (= 500 μg/ml) Etwa 50 mg Vanillin (4.5) auf 0,1 mg (CM mg) werden genau in einen 100-ml-Messkolben eingewogen; anschließend werden 25 ml Extraktionslösung (4.4) hinzugefügt und mit Wasser aufgefüllt. 4.5.2. Vanillin-Standardlösung (= 10 μg/ml) 5 ml der Vanillin-Stammlösung (4.5.1) werden in einen 250-ml-Messkolben pipettiert und mit Wasser aufgefüllt. 4.5.3. Methanol, HPLC-Qualität 4.5.4. Eisessigsäure 4.5.5. Wasser, HPLC-Qualität 4.5.6. HPLC, mobile Phase 300 ml Methanol (4.5.3) werden mit etwa 500 ml Wasser (4.5.5) und 20 ml Essigsäure (4.5.4) in einem 1 000-ml-Messkolben gemischt und mit Wasser (4.5.5) aufgefüllt. Dieses Gemisch wird durch einen Filter mit einer Porengröße von 0,45 μm (3.3) gefiltert.

5. VERFAHREN

5.1. Vorbereitung der Probe

5.1.1. Butter

Die Probe wird erhitzt, bis sie zu schmelzen beginnt. Eine Überhitzung auf etwa 30 °C ist zu vermeiden. Möglicherweise trennt sich die Butter nicht in zwei Phasen. Wenn die Probe ausreichend pastös ist, ist sie durch Schütteln zu homogenisieren. Nach 15-minütigem Rühren der Butter wird eine Probe genommen. Etwa 5 g (SM g) Butter werden auf 1 mg genau in einen 100-ml-Messkolben eingewogen.

5.1.2. Butterfett

Unmittelbar vor der Probenahme wird der Behälter mit dem Butterfett in einen Ofen mit einer Temperatur von 40 bis 50 °C gegeben und dort belassen, bis das Butterfett vollständig geschmolzen ist. Die Probe wird durch Schütteln oder Rühren vermischt; dabei ist die Bildung von Blasen durch zu starkes Rühren zu vermeiden. Etwa 4 g (SM g) Butterfett werden auf 1 mg genau in einen 100-ml-Messkolben eingewogen.

5.1.3. Rahm

Die Probe wird in einem Wasserbad oder einem Inkubator auf 35 bis 40 °C erwärmt. Anschließend wird das Fett durch Schütteln bzw. wenn nötig durch Rühren homogenisiert. Die Probe wird rasch auf 20 ±2 °C abgekühlt. Nun müsste die Probe homogen aussehen; ansonsten ist das Verfahren zu wiederholen. Etwa 10 g (SM g) Rahm werden auf 1 mg genau in einen 100-ml-Messkolben eingewogen.

5.2. Vorbereitung der Versuchslösung

Zur Probe (5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3) werden etwa 75 ml der Extraktionslösung (4.4) hinzugefügt; anschließend wird ca. 15 Minuten umgerührt oder stark geschüttelt und mit Extraktionslösung (4.4) aufgefüllt. Etwa 10 ml dieses Extrakts werden in ein Reagenzglas mit Stopfen gegeben. Das Reagenzglas wird in den Gefrierschrank (3.1) gesetzt und ca. 30 Minuten stehen gelassen. Der kalte Extrakt wird 5 Minuten bei etwa 2 000 min-1 zentrifugiert und sofort abgegossen. Die abgegossene Lösung muss auf Zimmertemperatur abkühlen. 5 ml der abgegossenen Lösung werden in einen 100-ml-Messkolben pipettiert; danach wird mit Wasser aufgefüllt. Ein Aliquot wird mit einer Spritze (3.2) durch einen Membran-Mikrofilter (3.3) gefiltert. Das Filtrat ist nun für die HPLC bereit.

5.3. Kalibrierung

5 ml der Vanillin-Standardlösung (4.5.2) werden in einen 100-ml-Messkolben pipettiert. 5 ml Extraktionslösung (4.4) werden hinzugefügt; anschließend wird bis zur Markierung mit Wasser aufgefüllt. Diese Lösung enthält 0,5 μg/ml Vanillin.

5.4. Bestimmung durch HPLC

Das Chromatografiesystem wird zur Stabilisierung etwa 30 Minuten stehen gelassen. Die Standardlösung (5.3) wird eingespritzt. Dieser Vorgang wird wiederholt, bis die Differenz der Peak-Flächen oder Peak-Höhen zwischen zwei aufeinanderfolgenden Einspritzungen weniger als 2 % beträgt. Unter den beschriebenen Bedingungen beträgt die Retentionszeit von Vanillin etwa 9 Minuten. Die Kalibrierlösung (5.3) wird doppelt analysiert, indem 20 μl eingespritzt werden. 20 μl der Versuchslösungen (5.2) werden eingespritzt. Die Peak-Flächen oder -Höhen für Vanillin werden ermittelt. Nach 10 Einspritzungen der Testproben (5.2) wird erneut zweimal die Kalibrierlösung (5.3) eingespritzt.

6. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE

Für jede Partie Versuchslösungen wird die durchschnittliche Peak-Fläche (oder -Höhe) (AC) der Vanillin-Peaks in Zusammenhang mit den Doppeleinspritzungen der Kalibrierlösung jeweils vor und nach einer Probenreihe berechnet (insgesamt 4 Flächen oder Höhen).

Der Kalibrierfaktor (R) wird wie folgt berechnet:

Dabei ist CM die Masse des Vanillins in mg (4.5.1).

Der Vanillin-Anteil (C) der Testprobe (in mg/kg) wird wie folgt berechnet:

Dabei sind:

AS = Peak-Fläche des Vanillin-Peaks der Testprobe

SM = Masse der Testprobe in g (5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3)

Anmerkung: Bei der Untersuchung von Rahm auf Vanillin wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration als mg Kennzeichnungsmittel/kg Milchfett ausgedrückt. Dazu wird C mit 100/f multipliziert. Mit f wird der Fettgehalt von Rahm in Prozent (m/m) bezeichnet.

20 = Faktor zur Berücksichtigung der Verdünnung der Standard- und der Testprobe

0,96 = Korrekturfaktor für den Fettgehalt in der ersten Verdünnung der Testprobe

Anmerkung: Anstelle von Peak-Flächen können auch Peak-Höhen verwendet werden (siehe 8.3).

7. GENAUIGKEIT DER METHODE

7.1. Wiederholbarkeit (r)

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von demselben Analytiker mit denselben Geräten am gleichen Testmaterial so rasch wie möglich nacheinander ausgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 16 mg/kg voneinander abweichen.

7.2. Vergleichbarkeit (R)

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von Analytikern in verschiedenen Laboratorien mit verschiedenen Geräten am gleichen Testmaterial durchgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 27 mg/kg voneinander abweichen.

8. TOLERANZGRENZEN

8.1. Dem gekennzeichneten Erzeugnis sind drei Proben zu entnehmen, um die Homogenität zu prüfen.

8.2. Das Kennzeichnungsmittel wird entweder aus Vanille oder aus synthetischem Vanillin gewonnen. 8.2.1. Die Beimischungsquote für 4-Hydroxy-3-methoxy-benzaldehyd beträgt 250 g je Tonne Butterfett oder Butter. Bei der Kennzeichnung von Rahm beträgt die Beimischungsquote 250 g je Tonne Milchfett. 8.2.2. Die Ergebnisse der drei in der Produktanalyse gewonnenen Proben werden verwendet, um die Quote und die Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels zu bestimmen; das niedrigste ermittelte Ergebnis wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 220,8 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote), — 158,3 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote). Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das man durch Interpolierung zwischen 220,8 mg/kg und 158,3 mg/kg erhält.

8.3. Das Kennzeichnungsmittel wird ausschließlich aus Vanilleschoten oder deren vollständigen Auszügen gewonnen. 8.3.1. Die Beimischungsquote für 4-Hydroxy-3-methoxy-benzaldehyd beträgt 100 g je Tonne Butterfett oder Butter. Bei der Kennzeichnung von Rahm beträgt die Beimischungsquote 100 g je Tonne Milchfett. 8.3.2. Aufgrund der Ergebnisse der drei aus der Produktanalyse gewonnenen Proben werden die Quote und die Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels geprüft; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 78,3 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote), — 53,3 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote). Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das man durch Interpolierung zwischen 78,3 mg/kg und 53,3 mg/kg erhält.

9. ANMERKUNGEN

9.1. Die Wiederfindung von Vanillinzusätzen liegt bei einer Menge von 250 mg/kg Butterschmalz zwischen 97 und 103,8 %. Durchschnittlich wurde ein Gehalt von 99,9 % mit einer Standardabweichung von 2,7 % ermittelt.

9.2. Die Standardlösung enthält 5 % Extraktionslösung, um die Peak-Erweiterung durch die in den Proben vorhandenen 5 % Extraktionslösung zu kompensieren. Dadurch wird eine Quantifizierung über die Peak-Höhen möglich.

9.3. Die Analyse basiert auf einer linearen Kalibrierungslinie mit Nullachsenabschnitt.

9.4. Die Linearität sollte bei der ersten Analyse und später in regelmäßigen Abständen sowie nach Änderungen oder Reparaturen der HPLC-Geräte durch Verwendung geeigneter Verdünnungen der Standardlösung (4.5.2) geprüft werden. Vanillin kann durch in unpasteurisiertem Rahm oder in Erzeugnissen aus unpasteurisiertem Rahm enthaltene Enzyme zu Vanillinsäure, Divanillin und sonstigen Verbindungen abgebaut werden.









ANHANG VII

(Artikel 5)

BESTIMMUNG VON BETA-APO-8'-CAROTINSÄURE-ETHYLESTER IN BUTTERFETT UND IN BUTTER DURCH SPEKTROMETRIE

1. GEGENSTAND UND ANWENDUNGSBEREICH

Die Methode beschreibt ein Verfahren für die quantitative Bestimmung von Beta-Apo-8'-Carotinsäure-Ethylester (Apo-Carotin-Ester) in Butterfett und Butter. Apo-Carotin-Ester stellt die Summe aller Stoffe in einem Extrakt von Proben dar, die unter den in der Methode dargestellten Bedingungen gewonnen werden und Licht bei 440 nm absorbieren.

2. KURZBESCHREIBUNG

Das Butterfett wird in Petrolether gelöst; anschließend wird die Absorption bei 440 nm gemessen. Der Apo-Carotinester-Gehalt wird bezogen auf eine externe Standardprobe bestimmt.

3. APPARATUR

3.1. Messpipetten mit Fassungsvermögen von 0,25, 0,50, 0,75 und 1,0 ml

3.2. Spektrophotometer, geeignet für die Verwendung bei 440 nm (und 447-449 nm), ausgestattet mit Küvetten mit optischer Weglänge von 1 cm

3.3. Messkolben, 20 ml und 100 ml

3.4. Analysewaage, Empfindlichkeit 0,1 mg, Messgenauigkeit 1 mg, Skalenteilung 0,1 mg

3.5. Ofen, 45 °C ±1 °C

3.6. Aschefreie Schnellfilter

4. REAGENZIEN

Alle Reagenzien müssen analysenrein sein.

4.1. Apo-Carotinester-Suspension (ungefähr 20 %) 4.1.1. Der Gehalt der Suspension ist wie folgt zu bestimmen: Die Suspension wird auf 45 bis 50 °C erwärmt und in der ungeöffneten Originalverpackung homogenisiert. Etwa 400 mg werden genau in einen 100-ml-Messkolben eingewogen und in 20 ml Chloroform (4.4) aufgelöst; anschließend wird bis zur Marke mit Cyclohexan (4.5) aufgefüllt. 5 ml dieser Lösung werden mit Cyclohexan auf 100 ml aufgefüllt (Lösung A). 5 ml der Lösung A werden mit Cyclohexan auf 100 ml verdünnt. Die Absorption wird bei 447-449 nm gemessen. (Das Maximum im Vergleich zu Cyclohexan unter Verwendung von 1-cm-Küvetten wird als Blindprobe gemessen.) P Apo-Carotin-Ester-Gehalt (%) = (Absmax × 40 000) / (Msusp × 2 550) bzw. (Absmax / 2 550) × (100 / 5) × (100 / 5) × (100 / Msusp) Absmax = Höchstabsorption der Kalibrierlösung Msusp = Masse der Suspension (g) 2 550 = Referenzlaboratorien (1 %, 1 cm) P = Reinheit (Gehalt) der Suspension (%) Anmerkung: Apo-Carotin-Ester-Suspension ist empfindlich gegenüber Luft, Hitze und Licht. In der ungeöffneten Originalverpackung (unter Stickstoffsiegel) und an einem kühlen Platz kann sie etwa zwölf Monate aufbewahrt werden. Nach Öffnung ist der Inhalt innerhalb kurzer Zeit zu verwenden. 4.1.2. Apo-Carotin-Ester-Standardlösung, ungefähr 0,2 mg/ml 0,100 g Apo-Carotin-Ester-Suspension (4.1.1) (W) werden auf 1 mg genau abgewogen, in Petroleumbenzin (4.2) aufgelöst und quantitativ in einen 100-ml-Messkolben gegeben; anschließend wird bis zur Marke mit Petroleumbenzin aufgefüllt. Diese Lösung enthält (W × P) 10 mg/ml Apo-Carotin-Ester. Anmerkung: Die Lösung muss kühl und dunkel aufbewahrt werden. Nicht verwendete Lösung ist nach einem Monat zu beseitigen.

4.2. Petroleumbenzin (40-60 °C)

4.3. Natriumsulfat, wasserfrei, granular, zuvor 2 Stunden lang bei 102 °C getrocknet.

4.4. Chloroform

4.5. Cyclohexan

5. VERFAHREN

5.1. Vorbereitung der Probe

5.1.1. Butterfett

Die Probe wird in einem Ofen bei etwa 45 °C geschmolzen.

5.1.2. Butter

Die Probe wird in einem Ofen bei etwa 45 °C geschmolzen und ein repräsentativer Teil durch einen Filter mit etwa 10 g wasserfreiem Natriumsulfat (4.3) gefiltert; diese Schritte werden unter Abschirmung von starkem natürlichem oder künstlichem Licht und bei einer gleich bleibenden Temperatur von 45 °C durchgeführt. Es wird eine geeignete Menge Butterfett entnommen.

5.2. Bestimmung

Etwa 1 g Butterfett oder Milchfett (5.1.2) (M) werden auf 1 mg genau abgewogen. Das Fett wird unter Verwendung von Petroleumbenzin (4.2) quantitativ in einen 20-ml-(V)-Messkolben gegeben; anschließend wird bis zur Marke aufgefüllt und gründlich gemischt.

Ein Aliquot dieses Gemisches wird in eine 1-cm-Küvette gebracht; dann wird die Absorption bei 440 nm im Vergleich zur Blindprobe mit Petroleumbenzin gemessen. Die Konzentration des Apo-Carotin-Esters in der Lösung wird durch Vergleich mit der Kalibrierkurve C (μg/ml) ermittelt.

5.3. Kalibrierung

0, 0,25, 0,5, 0,75 und 1,0 ml der Apo-Carotin-Ester-Standardlösung (4.1.2) werden in fünf 100-ml-Messkolben pipettiert. Anschließend wird mit Petroleumbenzin (4.2) aufgefüllt und gemischt.

Die ungefähren Konzentrationen der Lösungen liegen im Bereich 0 bis 2 μg/ml und werden im Vergleich mit der Konzentration der Standardlösung (4.1.2) (W × P) / 10 mg/ml genau berechnet. Die Absorptionswerte bei 440 nm werden bezogen auf die Petroleumbenzin-Blindprobe (4.2) gemessen.

Die Absorptionswerte auf der y-Achse und die jeweiligen Apo-Carotin-Ester-Konzentrationen werden auf der x-Achse eintragen. Die Formel der Kalibrierkurve wird berechnet.

6. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE

6.1. Der Apo-Carotin-Ester-Gehalt, ausgedrückt in mg/kg des Erzeugnisses, wird mit den folgenden Formeln berechnet: Butterfett: Butterfett (C × V)/M Butter: 0,82 (C × V)M Dabei sind: C = Apo-Carotin-Ester-Gehalt in μg/ml, von der Kalibrierkurve (5.3) abzulesen V = Volumen (ml) der Versuchslösung (5.2) M = Masse (g) der Testprobe (5.2) 0,82 = Berichtigungsfaktor für den Milchfettgehalt der Butter

7. GENAUIGKEIT DER METHODE

7.1. Wiederholbarkeit

7.1.1. Butteranalyse

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von demselben Analytiker mit denselben Geräten am gleichen Testmaterial so rasch wie möglich nacheinander ausgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 1,4 mg/kg voneinander abweichen.

7.1.2. Butterfettanalyse

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von demselben Analytiker mit denselben Geräten am gleichen Testmaterial so rasch wie möglich nacheinander ausgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 1,6 mg/kg voneinander abweichen.

7.2. Vergleichbarkeit

7.2.1. Butteranalyse

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von Analytikern in verschiedenen Laboratorien mit verschiedenen Geräten am gleichen Testmaterial durchgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 4,7 mg/kg voneinander abweichen.

7.3. Butterfettanalyse

Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von Analytikern in verschiedenen Laboratorien mit verschiedenen Geräten am gleichen Testmaterial durchgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 5,3 mg/kg voneinander abweichen.

7.4. Herkunft der Präzisionsdaten

Die Präzisionsdaten stammen aus einem 1995 unter Beteiligung von elf Laboratorien und zwölf gekennzeichneten Proben (sechs Blindduplikate) für Butter und zwölf gekennzeichneten Proben (sechs Blindduplikate) für Butterfett durchgeführten Versuch.

8. TOLERANZGRENZEN

8.1. Zur Prüfung der richtigen Kennzeichnung des Erzeugnisses sind dem gekennzeichneten Erzeugnis drei Proben zu entnehmen.

8.2. Butter 8.2.1. Der Beimischungsanteil für Butter beträgt unter Berücksichtigung der Hintergrundabsorption 22 mg/kg. 8.2.2. Die Ergebnisse der drei aus der Produktanalyse erhaltenen Proben werden verwendet, um die Quote und die Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels zu prüfen; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 17,7 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote), — 12,2 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote). Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das durch Interpolierung zwischen 17,7 mg/kg und 12,2 mg/kg ermittelt wurde.

8.3. Butterfett 8.3.1. Der Beimischungsanteil für Butterfett beträgt unter Berücksichtigung der Hintergrundabsorption 24 mg/kg. Die Ergebnisse der drei aus der Produktanalyse erhaltenen Proben werden verwendet, um die Quote und die Homogenität der Beimischung des Kennzeichnungsmittels zu prüfen; das niedrigste dieser Ergebnisse wird bezogen auf die folgenden Grenzwerte beurteilt: — 19,2 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote), — 13,2 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote). Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem niedrigsten Ergebnis verwendet, das durch Interpolierung zwischen 13,2 mg/kg und 19,2 mg/kg ermittelt wurde.









ANHANG VIII

(Artikel 5)

BESTIMMUNG DES SITOSTERIN- ODER DES STIGMASTERIN-GEHALTS IN BUTTER ODER BUTTERFETT DURCH KAPILLARSÄULEN-GASCHROMATOGRAFIE

1. GEGENSTAND UND ANWENDUNGSBEREICH

Die Methode beschreibt ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Sitosterin bzw. Stigmasterin in Butterfett und Butter. Sitosterin ist dabei die Summe von β-Sitosterin und 22-Dihydro-β-Sitosterin; die anderen Sitosterine werden als unbedeutend betrachtet.

2. KURZBESCHREIBUNG

Das Butterfett bzw. die Butter wird mit ethanolischer Kaliumhydroxidlösung verseift. Die unverseifbaren Bestandteile werden mit Ether extrahiert.

Die Sterine werden zu Trimethylsilylethern derivatisiert und durch Kapillarsäulen-Gaschromatografie mit Betulin als interner Standardprobe analysiert.

3. APPARATUR

3.1. 150-ml-Verseifungskolben mit Rückflusskühler und Schliffverbindungen

3.2. 500-ml- Scheidetrichter

3.3. 250-ml-Kolben

3.4. Druckausgleichtrichter (etwa 250 ml) zum Auffangen von überschüssigem Ether

3.5. Glassäule, 350 mm × 20 mm, mit Sinterglasfritte

3.6. Wasserbad oder Heizhaube

3.7. Reaktionsglas, 2 ml

3.8. Zur Verwendung mit einer Kapillarsäule geeigneter Gaschromatograf, ausgerüstet mit einem „Split-System“ und folgenden Bestandteilen: 3.8.1. Säulenofen, der die gewünschte Temperatur mit einer Genauigkeit von ±1 °C halten kann; 3.8.2. Verdampfer mit einstellbarer Temperatur; 3.8.3. Flammenionisationsdetektor und einem Signal-Verstärker; 3.8.4. Aufzeichnungsgerät mit Integrator für den Signal-Verstärker (3.8.3).

3.9. Quarzglas-Kapillarsäule, vollständig mit BP1 oder einem gleichwertigen Material beschichtet (oder eine sonstige Säule mit mindestens gleicher Auflösung) mit einheitlicher Stärke von 0,25 μm; die Säule muss die Trimethylsilylderivate von Lanosterin und Sitosterin trennen können. Geeignet ist eine mit BP 1 beschichtete Säule von 12 m Länge und 0,2 mm Innendurchmesser.

3.10. 1-μl-Gaschromatografie-Mikrospritze mit gehärteter Nadel.

4. REAGENZIEN

Alle Reagenzien müssen analysenrein sein. Das verwendete Wasser muss destilliert sein oder einen mindestens gleichwertigen Reinheitsgrad aufweisen.

4.1. Ethanol, Reinheitsgrad mindestens 95 %

4.2. 60 %ige Kaliumhydroxid-Lösung (600 g Kaliumhydroxid (mindestens 85 %) werden in Wasser gelöst; die Lösung wird anschließend mit Wasser bis auf einen Liter aufgefüllt

4.3. Betulin, Reinheitsgrad mindestens 99 % 4.3.1. Betulinlösungen in Diethylether (4.4) 4.3.1.1. Die zur Bestimmung von Sitosterin verwendete Betulinlösung muss eine Konzentration von 1,0 mg/ml aufweisen. 4.3.1.2. Die zur Bestimmung von Stigmasterin verwendete Betulinlösung muss eine Konzentration von 0,4 mg/ml aufweisen.

4.4. Diethylether, analysenrein (frei von Peroxiden oder Rückständen)

4.5. Natriumsulfat, wasserfrei, granular, zuvor 2 Stunden bei 102 °C getrocknet

4.6. Silylierungsreagens, z. B. TRI-SIL (erhältlich von Pierce Chemical Co., Kat.-Nr. 49001) oder vergleichbares Reagenz. (Achtung: TRI-SIL ist entflammbar, giftig, ätzend und potenziell kanzerogen. Das Laborpersonal muss mit den Sicherheitsdaten zu TRI-SIL vertraut sein und die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen treffen.)

4.7. Lanosterol

4.8. Sitosterin, bekannter Reinheitsgrad mindestens 90 % (P) Anmerkung 1: Die Reinheit der Standardstoffe für die Kalibrierung ist durch Normalisierung zu bestimmen. Dazu wird angenommen, dass das Chromatogramm alle in der Probe vorhandenen Sterine wiedergibt, dass die Gesamtfläche der Peaks 100 % der Sterinbestandteile darstellt und dass alle Sterine ein gleich starkes Detektorsignal hervorrufen. Es ist sicherzustellen, dass das System in den maßgeblichen Konzentrationsbereichen linear verläuft. 4.8.1. Sitosterin-Standardlösung: Sitosterin (4.8) wird in Diethylether (4.4) mit einer Konzentration von etwa 0,5 mg/ml (Genauigkeit 0,001 mg/ml) gelöst;

4.9. Stigmasterin, bekannter Reinheitsgrad mindestens 90 % (P); 4.9.1. Stigmasterin-Standardlösung: Stigmasterin (4.9) wird in Diethylether (4.4) mit einer Konzentration von etwa 0,2 mg/ml (Genauigkeit 0,001 mg/ml) gelöst;

4.10. Testlösung für die Prüfung der Auflösung: Lanosterin (4.7) (0,05 mg/ml) und Sitosterin (4.8) (0,5 mg/ml) werden in Diethylether (4.4) gelöst.

5. METHODE

5.1. Herstellung der Standardlösungen für die Chromatografie:

Die interne Standardlösung (4.3.1) muss der entsprechenden Sterin-Standardlösung und der verseiften Probe gleichzeitig zugesetzt werden (siehe 5.2.2).

5.1.1. Sitosterin-Standardlösung für die Chromatografie: je 1 ml der Sitosterin-Standardlösung (4.8.1) werden in 2 Reaktionsgläser (3.7) gegeben; der Ether ist durch einen Stickstoffstrom zu entfernen. 1 ml der internen Standardlösung (4.3.1.1) werden hinzugegeben und der Ether durch einen Stickstoffstrom entfernt.

5.1.2. Stigmasterin-Standardlösung für die Chromatografie: je 1 ml der Stigmasterin-Standardlösung (4.9.1) wird in 2 Reaktionsgläser (3.7) gegeben und der Ether durch einen Stickstoffstrom entfernt. 1 ml der internen Standardlösung (4.3.1.2) wird hinzugegeben und der Ether durch einen Stickstoffstrom entfernt.

5.2. Vorbereitung der unverseifbaren Bestandteile

5.2.1. Die Butterprobe wird bei höchstens 35 °C geschmolzen und unter Rühren gründlich durchgemischt. Ungefähr 1 g Butter (W2) oder Butterfett (W2) werden auf 1 mg genau in einen 150-ml-Kolben (3.1) eingewogen. 50 ml Ethanol (4.1) und 10 ml Kaliumhydroxid-Lösung (4.2) werden hinzugegeben. Der Rückflusskühler wird angebracht und 30 Minuten auf etwa 75 °C erhitzt. Der Kühler wird abgenommen; danach wird gewartet, bis sich der Kolben auf Raumtemperatur abgekühlt hat.

5.2.2. 1,0 ml der internen Standardlösung (4.3.1.1 bei der Bestimmung von Sitosterin bzw. 4.3.1.2 bei der Bestimmung von Stigmasterin) werden in den Kolben gegeben. Die Lösung wird gründlich gemischt. Der Inhalt des Kolbens wird quantitativ in einen 500-ml-Scheidetrichter (3.2) gegeben, in dem der Kolben nacheinander mit 50 ml Wasser und 250 ml Diethylether (4.4) ausgespült wird. Der Scheidetrichter wird zwei Minuten kräftig geschüttelt; anschließend wird die Phasentrennung abgewartet. Die untere Wasserschicht wird abgelassen und die Etherschicht viermal mit je 100 ml Wasser ausgeschüttelt. Anmerkung 2: Damit keine Emulsion entsteht, ist es wichtig, die ersten beiden Waschvorgänge mit Wasser vorsichtig auszuführen (10 Drehungen). Beim dritten Waschvorgang kann 30 Sekunden lang kräftig geschüttelt werden. Sollte sich eine Emulsion bilden, kann diese durch Zugabe von 5-10 ml Ethanol aufgelöst werden. Bei Zugabe von Ethanol muss unbedingt noch zweimal kräftig mit Wasser ausgeschüttelt werden.

5.2.3. Die klare seifenfreie Etherschicht wird durch eine Glassäule (3.5) mit 30 g wasserfreiem Natriumsulfat (4.5) eluiert. Der Ether wird in einem 250-ml-Kolben (3.3) aufgefangen. Ein Siedesteinchen wird hinzugegeben; anschließend wird die Flüssigkeit auf einem Wasserbad oder einer Heizhaube fast bis zur völligen Trockenheit eingedampft; dabei wird das überschüssige Lösungsmittel aufgefangen. Anmerkung 3: Werden die Probenextrakte bei zu hoher Temperatur vollständig getrocknet, können Sterinverluste auftreten.

5.3. Vorbereitung der Trimethylsilylether

5.3.1. Die im Kolben verbliebene Etherlösung mit 2 ml Ether wird in ein 2-ml-Reaktionsglas (3.7) gegeben und der Ether durch einen Stickstoffstrom entfernt. Der Kolben wird mit 2 weiteren 2-ml-Aliquoten Ether ausgespült; dabei wird jeweils der Inhalt in das Reaktionsglas umgefüllt und der Ether durch einen Stickstoffstrom entfernt.

5.3.2. Die Probe wird durch Zugabe von 1 ml TRI-SIL (4.6) silyliert. Das Glas wird verschlossen und kräftig geschüttelt, damit sich die Probe auflöst. Wenn sich die Probe nicht vollständig auflöst, wird die Probe auf 65-70 °C erwärmt. Danach wird die Probe mindestens fünf Minuten stehen gelassen, bevor sie in den Gaschromatografen injiziert wird. Die Standardlösungen werden in gleicher Weise wie die Proben silyliert. Die Mischung zur Prüfung der Auflösung (4.10) wird ebenfalls in gleicher Weise wie die Proben silyliert. Anmerkung 4: Die Silylierung ist in wasserfreier Umgebung vorzunehmen. Die unvollständige Silylierung von Betulin wird durch einen zweiten Peak dicht neben dem von Betulin angezeigt. Ethanol-Rückstände in der Silylierungsphase können die Silylierung beeinträchtigen. Möglicherweise wurde in der Extraktionsphase nicht hinreichend gespült. In diesem Fall muss bei der Extraktion ein fünftes Mal gespült werden (30 Sekunden kräftiges Schütteln).

5.4. Analyse durch Gaschromatografie

5.4.1. Herstellung der Arbeitsbedingungen

Der Gaschromatograf wird gemäß der Herstelleranweisung vorbereitet.

Als Leitlinie gelten die folgenden Arbeitsbedingungen:

— Säulentemperatur: 265 °C

— Injektortemperatur: 265 °C

— Detektortemperatur: 300 °C

— Durchflussgeschwindigkeit des Trägergases: 0,6 ml/min

— Wasserstoffdruck: 84 kPa

— Luftdruck: 155 kPa

— Splitverhältnis: 10:1 bis 50:1; das Splitverhältnis ist nach den Herstelleranweisungen zu optimieren; anschließend wird die Linearität des Detektorsignals im interessierenden Konzentrationsbereich überprüft. — Anmerkung 5: Es ist unbedingt darauf zu achten, dass die Injektionsröhre regelmäßig gereinigt wird.

— Menge der eingespritzten Substanz: 1 μl TMSE-Lösung.

Vor Beginn jeglicher Analysen muss gewartet werden, bis das System äquilibriert ist und ein hinreichend stabiles Response-Signal liefert.

Diese Bedingungen können je nach Beschaffenheit der Säule und des Gaschromatografen abgewandelt werden, damit Chromatogramme entstehen, die den folgenden Anforderungen genügen:

— Der Sitosterin-Peak muss vom Lanosterin-Peak genügend abgesetzt sein. Abbildung 1 zeigt ein typisches Chromatogramm, das sich aus der silylierten Testlösung zur Prüfung der Auflösung ergeben sollte (4.10).

— Die relativen Retentionszeiten der folgenden Sterine sollten ungefähr betragen: — Cholesterin: 1,0 Stigmasterin: 1,3 Sitosterin: 1,5 Betulin: 2,5

— Die Retentionszeit für Betulin sollte etwa 24 Minuten betragen.

5.4.2. Analyseverfahren

1 μl der silylierten Standardlösung (Stigmasterin bzw. Sitosterin) wird eingespritzt; danach sind die Parameter für die Kalibrierung des Integrators einzustellen.

Darauf wird nochmals 1 μl der silylierten Standardlösung eingespritzt, um die Response-Faktoren in Bezug auf Betulin zu bestimmen.

1 μl der silylierten Probelösung wird eingespritzt; danach werden die Peak-Flächen gemessen. Am Anfang und am Ende einer jeden gaschromatografischen Analysenfolge muss die Standardlösung eingespritzt werden.

Als Leitlinie sollte nach je sechs Probelösungen die Standardlösung eingespritzt werden.

Anmerkung 6: Bei der Integration des Stigmasterin-Peaks ist auch das durch die Punkte 1, 2 und 3 in Abbildung 2b markierte Tailing mit zu erfassen.

Bei der Integration des Sitosterin-Peaks ist die Fläche des Peaks von 22-Dihydro-β-Sitosterin (Stigmastanin), das unmittelbar nach Sitosterin eluiert wird, mit zu erfassen, wenn das gesamte Sitosterin berechnet werden soll.

6. B