2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 1
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►B RICHTLINIE 2002/69/EG DER KOMMISSION
vom►C1 30. Juli 2002 ◄
zur Festlegung der Probenahme- und Untersuchungsverfahren für die amtliche Kontrolle von
Dioxinen sowie zur Bestimmung von dioxinähnlichen PCB in Lebensmitteln
(Text von Bedeutung für den EWR)
(ABl. L 209 vom 6.8.2002, S. 5)
Berichtigt durch:
►C1Berichtigung, ABl. L 252 vom 20.9.2002, S. 40 (2002/69/EG)
▼B
RICHTLINIE 2002/69/EG DER KOMMISSION
vom►C1 30. Juli 2002 ◄
zur Festlegung der Probenahme- und Untersuchungsverfahren für
die amtliche Kontrolle von Dioxinen sowie zur Bestimmung von
dioxinähnlichen PCB in Lebensmitteln
(Text von Bedeutung für den EWR)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft,
gestützt auf die Richtlinie 85/591/EWG des Rates vom 20. Dezember
1985 zur Einführung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren und
Analyseverfahren für die Kontrolle von Lebensmitteln(1),
►C1insbesondere auf Artikel 1 Absatz 4 ◄,
in Erwägung nachstehender Gründe:
(1)Mit der Verordnung (EG) Nr. 466/2001 der Kommission(2),
zuletzt geändert durch die Verordnung (EG) Nr. 563/2002(3)
und geändert durch die Verordnung (EG) Nr. 2375/2001 des
Rates(4), werden Höchstwerte für Dioxine und Furane in
bestimmten Lebensmitteln festgelegt.
(2)Mit der Richtlinie 89/397/EWG des Rates vom 14. Juni 1989
über die amtliche Lebensmittelüberwachung(5) wurden die allge-
meinen Grundsätze für die Durchführung vonLebensmittelkontrollen festgelegt. Mit der Richtlinie 93/99/EWG des Rates vom 29. Oktober 1993 über zusätzlicheMaßnahmen im Bereich der amtlichen Lebensmittelüberwa-chung(
6) wird ein System von Qualitätsstandards für
Laboratorien eingeführt, die von den Mitgliedstaaten mit der
amtlichen Kontrolle von Lebensmitteln betraut sind.
(3)Mit der Richtlinie 85/591/EWG wurden allgemeine Kriterien fürProbenahme- und Analyseverfahren festgelegt. In bestimmten
Fällen müssen jedoch spezifischere Kriterien und/oder Anforde-
rungen an das Analyseverfahren festgelegt werden, damitsichergestellt ist, dass die Laboratorien Analyseverfahren mitvergleichbarem Leistungsniveau anwenden.
(4)Die Bestimmungen für Probenahme und Analyseverfahrenwurden nach dem heutigen Kenntnisstand festgelegt und könnenentsprechend dem wissenschaftlich-technischen Fortschritt ange-passt werden.
(5)Die Bestimmungen dieser Richtlinie gelten nur für die Proben-
ahme und Analyse von Dioxinen und dioxinähnlichen PCB zur
Durchführung der Verordnung (EG) Nr. 466/2001 und betreffennicht das Probenahmeverfahren, den Umfang und die Häufigkeitder Proben gemäß den Anhängen III und IV der Richtlinie 96/23/EG des Rates vom 29. April 1996 über Kontrollmaßnahmen
hinsichtlich bestimmter Stoffe und ihrer Rückstände in lebenden
Tieren und tierischen Erzeugnissen und zur Aufhebung der Rich-tlinien 85/358/EWG und 86/469/EWG und der Entscheidungen89/187/EWG und 91/664/EWG(
7). Sie betreffen nicht die in der
Entscheidung 98/179/EG der Kommission vom 23. Februar 1998mit Durchführungsvorschriften für die amtlichen Probenahmen
zur Kontrolle von lebenden Tieren und tierischen Erzeugnissen
auf bestimmte Stoffe und Rückstände festgelegten Zielkriterienfür die Probenahme(
8).2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 2
(1) ABl. L 372 vom 31.12.1985, S. 50.
(2) ABl. L 77 vom 16.3.2001, S. 1.
(3) ABl. L 86 vom 3.4.2002, S. 5.
(4) ABl. L 321 vom 6.12.2001, S. 1.
(5) ABl. L 186 vom 30.6.1989, S. 23.
(6) ABl. L 290 vom 24.11.1993, S. 14.
(7) ABl. L 125 vom 23.5.1996, S. 10.
(8) ABl. L 65 vom 5.3.1998, S. 31.
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(6)Zur Erlangung umfassender und zuverlässiger Daten über das
Vorhandensein dioxinähnlicher PCB in Lebensmitteln sollte ein
aktiver Ansatz verfolgt werden. Daher sollten Anforderungen andie Analyseverfahren zur Bestimmung von dioxinähnlichen PCBin Lebensmitteln festgelegt werden.
(7)Ein Screening-Verfahren mit nachgewiesener, allgemein akzep-tabler Validierung und großem Durchsatz könnte zur Auswahlder Proben mit einem signifikanten Dioxingehalt verwendetwerden. Der Dioxingehalt dieser Proben muss dann durch einBestätigungsverfahren ermittelt werden. Daher ist es angezeigt,strenge Anforderungen an die Bestätigungsverfahren und
Mindestanforderungen an das Screening-Verfahren festzulegen.
(8)Die in dieser Richtlinie vorgesehenen Maßnahmen stimmen mit
der Stellungnahme des Ständigen Ausschusses für die Lebens-
mittelkette und Tiergesundheit überein —
HAT FOLGENDE RICHTLINIE ERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaaten stellen sicher, dass die Probenahme für die
amtliche Kontrolle der Dioxin- und Furangehalte und die Bestimmung
des Gehalts an dioxinähnlichen PCB in Lebensmitteln entsprechendden in Anhang I aufgeführten Verfahren durchgeführt werden.
Artikel 2
Die Mitgliedstaaten stellen sicher, dass die Probenvorbereitung und die
Untersuchungsverfahren, die zur amtlichen Kontrolle der Dioxin- undFurangehalte sowie zur Bestimmung des Gehalts an dioxinähnlichenPCB in Lebensmitteln verwendet werden, die in Anhang II beschrie-
benen Kriterien erfüllen.
Artikel 3
Die Mitgliedstaaten setzen die erforderlichen Rechts- und Verwaltungs-
vorschriften in Kraft, um dieser Richtlinie bis spätestens 28. Februar
2003 nachzukommen. Sie setzen die Kommission umgehend davon inKenntnis.
Wenn die Mitgliedstaaten derartige Vorschriften erlassen, nehmen sie
in den Vorschriften selbst oder durch einen Hinweis bei der amtlichenVeröffentlichung auf die vorliegende Richtlinie Bezug. Die Mitglied-staaten regeln die Einzelheiten dieser Bezugnahme.
Artikel 4
Diese Richtlinie tritt am zwanzigsten Tag nach ihrer Veröffentlichung
imAmtsblatt derEuropäischenGemeinschaften in Kraft.
Artikel 5
Diese Richtlinie ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 3
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ANHANGI
PROBENAHMEVERFAHREN FÜR DIE AMTLICHE KONTROLLE
DER DIOXINGEHALTE (PCDD/PCDF) SOWIE ZUR BESTIMMUNG
DIOXINÄHNLICHER PCB IN BESTIMMTEN LEBENSMITTELN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die zur amtlichen Kontrolle der Dioxingehalte (PCDD/PCDF) sowie zur
Bestimmung der Gehalte an dioxinähnlichen PCB(1) in Lebensmitteln
bestimmten Proben sind entsprechend den unten beschriebenen Verfahren
zunehmen. Die mit diesem Verfahren gewonnenen Sammelproben sind
als repräsentativ für die betreffenden Partien bzw. Teilpartien anzusehen.
Anhand der bei den Laborproben bestimmten Gehalte wird festgestellt, ob
die in der Verordnung (EG) Nr. 466/2001 zur Festsetzung der Höchstge-
halte für bestimmte Kontaminanten in Lebensmitteln festgelegten
Grenzwerte eingehalten wurden.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 4
(1) Tabelle: TEF der WHO zur Risikobewertung beim Menschen, auf der Grundlage der
Schlussfolgerungen der Sitzung der Weltgesundheitsorganisation in Stockholm, 15.-18.Juni 1997 (Van den Berg et al., (1998) Toxic Equivalency Factors (TEFs) for PCBs,PCDDs, PCDFs for Humans and for Wildlife. Environmental Health Perspectives,106(12), 775).
Kongener TEF-Wert
Dibenzo-p-dioxine(„PCDD“)
2,3,7,8-TCDD 1
1,2,3,7,8-PeCDD 1
1,2,3,4,7,8-HxCDD 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDD 0,11,2,3,7,8,9-HxCDD 0,1
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 0,01
OCDD 0,0001
Dibenzofurane(„PCDF“)
2,3,7,8-TCDF 0,1
1,2,3,7,8-PeCDF 0,05
2,3,4,7,8-PeCDF 0,5
1,2,3,4,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,7,8,9-HxCDF 0,1
2,3,4,6,7,8-HxCDF 0,11,2,3,4,6,7,8-HpCDF 0,01
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 0,01
OCDF 0,0001
Dioxinähnliche PCB Non-orthoPCB+Mono-orthoPCB
Non-ortho PCB
PCB 77 0,0001
PCB 81 0,0001
PCB 126 0,1
PCB 169 0,01
Mono-ortho PCB
PCB 105 0,0001
PCB 114 0,0005
PCB 118 0,0001
PCB 123 0,0001
PCB 156 0,0005
PCB 157 0,0005PCB 167 0,00001
PCB 189 0,0001
Abkürzungen: „T“ = tetra; „Pe“ = penta; „Hx“ = hexa; „Hp“ = hepta; „O“ = octa;
„CDD“ = Chlordibenzodioxin; „CDF“ = Chlorodibenzofuran; „CB“ = Chlorbiphenyl.
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2.Definitionen
Partie: Eine unterscheidbare Menge eines in einer Sendung angelieferten
Lebensmittels, das gemäß der amtlichen Prüfung gemeinsame Merkmale
wie Ursprung, Sorte, Art der Verpackung, Verpacker, Absender oder Kenn-
zeichnung aufweist. Bei Fischen und Fischereierzeugnissen muss auch die
Größe der Fische vergleichbar sein.
Teilpartie: Bestimmter Teil einer großen Partie, der dem Probenahmever-
fahren zu unterziehen ist. Jede Teilpartie muss physisch getrennt und
identifizierbar sein.
Einzelprobe: An einer einzigen Stelle der Partie bzw. Teilpartie entnom-
mene Menge.
Sammelprobe: Summe der einer Partie oder Teilpartie entnommenen
Einzelproben.
Laborprobe: Für das Labor bestimmte(r) repräsentative(r) Teil/Menge der
Sammelprobe.
3.Allgemeine Bestimmungen
3.1.Personal
Die Probenahme wird von einer durch die Mitgliedstaaten bevollmächtigten
qualifizierten Person vorgenommen.
3.2.Material,demProbenzuentnehmensind
Jede zukontrollierende Partie ist einzeln zubeproben.
3.3.Vorsichtsmaßnahmen
Bei der Probenahme und der Vorbereitung der Laborproben sind Vorsichts-
maßnahmen zu treffen, um Veränderungen zu verhindern, die sich auf den
Gehalt an Dioxinen und dioxinähnlichen PCB auswirken, die analytische
Bestimmung beeinträchtigen oder die Repräsentativität der Sammelproben
zunichte machen könnten.
3.4.Einzelproben
Einzelproben sind — soweit praktisch machbar — an verschiedenen, über
die gesamte Partie oder Teilpartie verteilten Stellen zuentnehmen.
Abweichungen von dieser Regel sind in dem unter Punkt 3.8 genannten
Protokoll zuvermerken.
3.5.VorbereitungderSammelprobe
Die Sammelprobe wird durch Vereinigung der Einzelproben hergestellt. Sie
besteht aus mindestens 1 kg, außer wenn dies nicht praktisch ist, z. B. wenn
eine einzige Packung beprobt wurde.
3.6.Untergliederung von Sammelproben in Laborproben für Durchsetzungs-,
Verteidigungs- undSchiedszwecke
Die Laborproben für Durchsetzungs-, Handels- (Verteidigungs-) und
Schiedszwecke sind von der homogenisierten Sammelprobe zunehmen,
sofern dies nicht gegen die Probenahmevorschriften der Mitgliedstaaten
verstößt. Die Laborproben für Durchsetzungszwecke müssen ausreichend
groß sein, dass sie zumindest eine doppelte Analyse ermöglichen.
3.7.VerpackungundVersandvonSammel-undLaborproben
Jede Sammel- und Laborprobe ist in ein sauberes, inertes Behältnis zu
verbringen, das angemessenen Schutz gegen Kontamination, Verlust von
Analyten durch Adsorption an der inneren Wand des Behältnisses sowie
gegen Beschädigung beim Transport bietet. Es sind alle notwendigen
Vorkehrungen zu treffen, um zu verhindern, dass sich die Zusammenset-
zung der Laborprobe während des Transports oder der Lagerung ändert.
3.8.VersiegelungundKennzeichnungderLaborproben
Jede amtliche Probe wird am Ort der Entnahme versiegelt und gemäß den
Vorschriften der Mitgliedstaaten gekennzeichnet. Über jede Probenahme ist
ein Protokoll zu führen, aus dem die Identität der Partie eindeutig hervor-
geht, wobei Datum und Ort der Probenahme sowie alle zusätzlichen2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 5
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Informationen, die für den Analytiker von Nutzen sein können, zu
vermerken sind.
4.Probenahmepläne
Mit dem verwendeten Probenahmeverfahren ist sicherzustellen, dass die
Sammelprobe für die zukontrollierende Partie repräsentativ ist.
AnzahlderEinzelproben
Bei Milch und Ölen, für die eine homogene Verteilung der fraglichen
Kontaminanten in einer Partie angenommen werden kann, sind drei Einzel-
proben je Partie, die die Sammelprobe ergeben, ausreichend. Die
Partienummer ist dabei anzugeben. Für andere Erzeugnisse ist die der
Partie zuentnehmende Mindestanzahl an Einzelproben in Tabelle 1 au fge-
führt.
Die Sammelprobe, in der alle Einzelproben zusammengefasst sind, muss
mindestens 1 kg wiegen (siehe Punkt 3.5). Das Gewicht der Einzelproben
muss gleich sein. Die Einzelproben sollten mindestens 100 g wiegen. Das
Gewicht der Einzelproben hängt von der Größe der Teilchen in der Partie
ab; Abweichungen von dieser Regel sind in dem unter Punkt 3.8 genannten
Protokoll festzuhalten. Entsprechend den Bestimmungen der Entscheidung
97/747/EG der Kommission vom 27. Oktober 1997 über Umfang und
Häufigkeit der in der Richtlinie 96/23/EG des Rates vorgesehenen Proben-
ahmen zum Zweck der Untersuchung in Bezug auf bestimmte Stoffe und
ihre Rückstände in bestimmten tierischen Erzeugnissen(1) beträgt der
Probenumfang bei Hühnereiern mindestens 12 Eier (bei loser Ware ebenso
wie bei Partien aus einzelnen Verpackungen, Tabellen 1 und 2).
Tabelle 1
Mindestanzahl der Einzelproben, die der Partie zu entnehmen sind
Gewicht der Partie (kg)Mindestanzahl der zuentnehmenden
Einzelproben
<5 0 3
50 bis 500 5
> 500 10
Besteht die Partie aus einzelnen Packungen, ist die Anzahl der aus der
Sammelprobe zuentnehmenden Packu ngen gemäß Tabelle 2 zuwählen.
Tabelle 2
Anzahl der Packungen (Einzelproben), die die Sammelprobe bilden,
sofern die Partie aus einzelnen Packungen besteht
Anzahl der Packungen oder Einheiten
in der PartieAnzahl der zuentnehmenden Pack-
ungen oder Einheiten
1 bis 25 1 Packung oder Einheit
26 bis 100 Etwa 5 %, mindestens 2 Pack-
ungen oder Einheiten
> 100 Etwa 5 %, höchstens 10 Pack-
ungen oder Einheiten
5.Übereinstimmung der Partie bzw. Teilpartie mit den Höchstgehalten
Das Kontrolllabor unterzieht die für die amtliche Untersuchung entnom-
mene Laborprobe einer zweiten Untersuchung, sofern das Ergebnis der
ersten weniger als 20 % unter dem Höchstgehalt oder darüber liegt, und
berechnet den Mittelwert der Ergebnisse. Die Partie wird akzeptiert, sofern
das Ergebnis der ersten Untersuchung mehr als 20 % vom jeweiligen in der
Verordnung (EG) Nr. 466/2001 festgelegten Höchstgehalt liegt oder, falls2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 6
(1) ABl. L 303 vom 6.11.1997, S. 12.
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eine zweite Untersuchung erforderlich ist, wenn der Mittelwert dem
Höchstgehalt entspricht.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 7
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ANHANGII
PROBENVORBEREITUNG UND ANFORDERUNGEN AN UNTERSU-
CHUNGSVERFAHREN ZUR AMTLICHEN KONTROLLE DES
GEHALTS AN DIOXINEN (PCDD/PCDF) UND ZUR BESTIMMUNG
VON DIOXINÄHNLICHEN PCB IN BESTIMMTEN LEBENSMITTELN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Diese Anforderungen sollten gestellt werden, wenn Lebensmittel zur amtli-
chen Kontrolle des Gehalts an Dioxinen (polychlorierte Dibenzo-p-dioxine
(PCDD) und polychlorierte Dibenzofurane (PCDF)) sowie zur Bestimmung
der dioxinähnlichen PCB untersucht werden.
Bei der Überwachung auf das Vorhandensein von Dioxinen in Lebensmit-
teln kann ein Screening-Verfahren angewandt werden, mit dessen Hilfe
diejenigen Proben mit einem Gehalt an Dioxinen und dioxinähnlichen
PCB, der weniger als 30-40 % unterhalb des interessierenden Wertes oder
darüber liegt, ausgewählt werden. Die Konzentration an Dioxinen in den
Proben mit signifikantem Gehalt muss dann durch Bestätigungsverfahren
ermittelt/bestätigt werden.
Screening-Verfahren sind Verfahren, die zum Nachweis des Vorhandens-
eins von Dioxinen und dioxinähnlichen PCB in der interessierenden
Konzentration verwendet werden. Diese Verfahren ermöglichen einen
hohen Probendurchsatz und werden eingesetzt, um eine große Anzahl von
Proben auf mögliche positive Ergebnisse zu sichten. Sie sind speziell dafür
ausgelegt, falsch negative Ergebnisse zu vermeiden.
Bestätigungsverfahren sind Verfahren, die vollständige oder ergänzende
Daten liefern, damit Dioxine und dioxinähnliche PCB in der interessie-
renden Konzentration eindeutig identifiziert werden können.
2.Hintergrund
Da Umweltproben und biologische Proben (einschließlich Proben von
Lebensmitteln) im Allgemeinen komplexe Mischungen verschiedener
Dioxin-Kongenere enthalten, wurde zur Erleichterung der Risikobewertung
das Konzept der Toxizitätsäquivalenzfaktoren (TEF) entwickelt. Durch
diese TEF werden Konzentrationen aus Gemischen aus 2,3,7,8-substi-
tuierten PCDD und PCDF ausgedrückt, und in jüngerer Zeit einige non-
ortho- und mono-orthochlorsubstituierte PCB mit dioxinähnlicher Aktivität
in Toxizitätsäquivalenten (TEQ) von 2,3,7,8-TCDD (siehe Fußnote 1 in
Anhang I).
Die Konzentrationen der einzelnen Substanzen in einer bestimmten Probe
werden mit ihren jeweiligen TEF multipliziert und addiert, woraus sich
anschließend die Gesamtkonzentration an dioxinähnlichen Verbindungen,
ausgedrückt in TEQ, ergibt.
Zur Berechnung der „Obergrenze“ wird der Beitrag jedes nicht bestimm-
baren Kongeners zum TEQ der Bestimmungsgrenze gleichgesetzt.
Zur Berechnung der „Untergrenze“ wird der Beitrag jedes nicht bestimm-
baren Kongeners zum TEQ gleich Null gesetzt.
Zur Berechnung des „Zwischenwerts“ wird der Beitrag jedes nicht
bestimmbaren Kongeners zum TEQ der Hälfte der Bestimmungsgrenze
gleichgesetzt.
3.Anforderungen an die Qualitätssicherung bei der Probenvorbereitung
— In jeder Stufe des Probenahme- und Analyseverfahrens sind
Maßnahmen zu treffen, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden.
— Die Proben sind in Glas-, Aluminium-, Polypropylen- oder Polyethylen-
Behältern zu lagern und zu transportieren. Spuren von Papierstaub sind
vom Probenbehälter zuentfernen. Die Gläser sind mit Lösu ngsmitteln
auszuspülen, die zuvor auf Vorhandensein von Dioxinen überprüft
wurden.
— Die Lagerung und der Transport der Proben hat so zu erfolgen, dass die
Einheit der Lebensmittelprobe erhalten bleibt.
— Sofern zutreffend, sind die einzelnen Laborproben mit Hilfe eines
Verfahrens fein zumahlen u nd gründlich zumischen, mit dem nach-
weislich eine vollständige Homogenisierung erreicht wird (z. B.
Mahlung so fein, dass die Probe durch ein Sieb mit einer Maschenweite
von 1 mm ►C1gehen kann ◄); falls die Feuchtigkeit zu hoch ist,
sind die Proben vor der Mahlung zu trocknen.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 8
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— Es ist eine Blinduntersuchung durchzuführen, indem das gesamte Unter-
suchungsverfahren durchgeführt und nur die Probe dabei weggelassen
wird.
— Das Gewicht der für die Extraktion verwendeten Probe muss ausrei-
chend groß sein, dass die Anforderungen an die Messempfindlichkeit
erfüllt werden.
— Es gibt viele zufriedenstellende spezifische Probenvorbereitungsver-
fahren, die für die zu untersuchenden Erzeugnisse verwendet werden
können. Die Verfahren sind gemäß international anerkannten Leitlinien
zuvalidieren.
4.Anforderungen an Laboratorien
— Die Laboratorien führen den Nachweis der Leistungsfähigkeit eines
Verfahrens im Bereich der interessierenden Konzentration, z. B. 0,5 x,
1 x und 2 x die interessierende Konzentration mit einem akzeptablen
Abweichungskoeffizienten für wiederholte Untersuchung. Näheres zu
den Akzeptanzkriterien siehe Ziffer 5.
— Die Bestimmungsgrenze sollte beim Bestätigungsverfahren im Bereich
von etwa einem Fünftel der interessierenden Konzentration liegen,
damit sichergestellt ist, dass im Bereich der interessierenden Konzentra-
tion akzeptable Abweichungskoeffizienten eingehalten werden.
— Als interne Qualitätssicherungsmaßnahmen sollten ständige Blindkon-
trollen und Experimente mit aufgestockten Proben oder
Untersuchungen von Kontrollproben (sofern erhältlich, vorzugsweise
zertifiziertes Referenzmaterial) durchgeführt werden.
— Die erfolgreiche Teilnahme an Laborvergleichsuntersuchungen zur
Bewertung der Leistung von Laboratorien ist der beste Weg, bei spezi-
fischen Untersuchungen Kompetenz nachzuweisen. Eine erfolgreiche
Teilnahme an Laborvergleichsuntersuchungen, z. B. über Boden- oder
Abwasserproben, belegt jedoch nicht zwangsläufig auch eine Kompe-
tenz im Bereich Lebensmittel- oder Futtermittelproben, die zu einem
geringeren Grad kontaminiert sind. Daher ist die ständige Teilnahme
an Laborvergleichsuntersuchungen zur Ermittlung des Gehalts an
Dioxinen und dioxinähnlichen PCB in den entsprechenden Futter-
mittel-/Lebensmittelmatrizen obligatorisch.
— Gemäß den Bestimmungen der Richtlinie 93/99/EWG sollten die Labo-
ratorien von einer anerkannten Stelle akkreditiert sein, die nach ISO
Guide 58 arbeitet, damit sichergestellt ist, dass sie bei der Untersuchung
Qualitätssicherungsverfahren anwenden. Die Laboratorien sollten
gemäß der Norm ISO/IEC/17025/1999 akkreditiert sein.
5.Anforderungen an Verfahren zur Untersuchung auf Dioxine und
dioxinähnliche PCB
GrundsätzlicheAnforderungenzurAnnahmevonUntersuchungsverfahren:
—Große Messempfindlichkeit und niedrige Nachweisgrenze . Bei PCDD
und PCDF müssen die nachweisbaren Mengen wegen der extrem hohen
Toxizität einiger dieser Verbindungen im Bereich Pikogramm TEQ
(10-12g) liegen. Der Gehalt an PCB ist bekanntlich höher als derjenige
an PCDD und PCDF. Bei den meisten PCB-Kongeneren ist eine Messe-
mpfindlichkeit im Bereich Nanogramm (10-9g) bereits ausreichend. Zur
Messung der toxischeren dioxinähnlichen PCB-Kongenere (insbeson-
dere der non-orthosubstituierten Kongenere) muss jedoch die gleiche
Messempfindlichkeit erreicht werden wie für die PCDD und PCDF.
—Hohe Selektivität/Spezifizität . PCDD, PCDF und dioxinähnliche PCB
müssen von einer Vielzahl anderer, gemeinsam extrahierter und mögli-
cherweise interferierender Verbindungen unterschieden werden, die in
Konzentrationen von bis zumehreren Größenordnu ngen höher als dieje-
nigen der zuprüfenden Analyten vorhanden sind. Bei
Gaschromatografie-Massenspektrometrie-(GC/MS-)Verfahren ist eine
Unterscheidung zwischen verschiedenen Kongeneren erforderlich, wie
z. B. zwischen toxischen Kongeneren (z. B. die siebzehn 2,3,7,8-substi-
tuierten PCDD und PCDF sowie dioxinähnliche PCB) und anderen
Kongeneren. Bioassays sollten eine selektive Bestimmung der TEQ-
Werte als Summe aus PCDD, PCDF und dioxinähnlichen PCB ermög-
lichen.
—Hohe Genauigkeit (Richtigkeit und Präzision) . Die Bestimmung sollte
eine valide Schätzung der tatsächlichen Konzentration in einer Probe
erbringen. Hohe Genauigkeit (Messgenauigkeit: der Grad der Überein-
stimmung zwischen dem Ergebnis einer Messung und dem echten oder
zugeordneten Wert der Messgrenze) ist notwendig, damit die Zurück-
weisung des Ergebnisses einer Probenuntersuchung aufgrund der
geringen Zuverlässigkeit der TEQ-Schätzung vermieden wird. Genauig-
keit wird ausgedrückt als Richtigkeit (Differenz zwischen dem2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 9
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gemessenen Mittelwert eines Analyten in einem zertifizierten Material
und seinem zertifizierten Wert, ausgedrückt als Prozentsatz dieses
Wertes) und Präzision (Präzision wird gewöhnlich errechnet als Stand-
ardabweichung einschließlich Wiederholbarkeit und Reproduzierbarkeit,
sie gibt den Grad der Übereinstimmung zwischen den Ergebnissen an,
die durch die wiederholte Durchführung des Testverfahrens unter
vorgeschriebenen Bedingungen erzielt werden).
Screening-Verfahren können Bioassays und GC/MS-Verfahren
umfassen; Bestätigungsverfahren sind hochauflösende Gaschromato-
grafie-Massenspektrometrie-Verfahren (HRGC/HRMS). Die folgenden
Kriterien müssen vom Gesamt-TEQ-Wert erfüllt werden:
Screening-Verfahren Bestätigungsverfahren
Falsch negativerAnteil<1%
Richtigkeit – 20 % bis + 20 %
Variationskoeffizient < 30 % < 15 %
6.Spezielle Anforderungen an GC/MS-Verfahren, wenn sie zu Screening-
oder Bestätigungszwecken eingesetzt werden
— Die Addition von
13C-markierten 2,3,7,8-chlorsubstituierten internen
PCDD/F-Standards (und13C-markierten internen dioxinähnlichen PCB-
Standards, sofern dioxinähnliche PCB zubestimmen sind) ist ganz zu
Anfang des Untersuchungsverfahrens, z. B. vor der Extraktion, durchzu-
führen, damit das Analyseverfahren validiert werden kann. Bei jeder der
tetra- bis octa-chlorierten homologen Gruppen von PCDD/F (und bei
jeder der homologen Gruppen von dioxinähnlichen PCB, sofern
dioxinähnliche PCB zubestimmen sind) mu ss mindestens ein Kongener
addiert werden (alternativ dazumindestens ein Kongener je massen-
spektrometrisch ausgewählter Ionenaufzeichnungsfunktion zur
Überwachung von PCDD/F und dioxinähnlichen PCB). Im Fall der
Bestätigungsverfahren ist die Verwendung aller 1713C-markierten
2,3,7,8-substituierten internen PCDD/F-Standards und aller 1213C-
markierten internen dioxinähnlichen PCB-Standards eindeutig vorzu-
ziehen (sofern dioxinähnliche PCB zubestimmen sind).
Die relativen Responsefaktoren sollten mittels geeigneter Kalibrierlö-
sungen auch für diejenigen Kongenere bestimmt werden, bei denen
kein13C-markiertes Analogon addiert ist.
— Bei Lebensmitteln pflanzlichen Ursprungs und Lebensmitteln tierischen
Ursprungs, die weniger als 10 % Fett enthalten, ist die Addition der
internen Standards vor der Extraktion obligatorisch. Bei Lebensmitteln
tierischen Ursprungs, die mehr als 10 % Fett enthalten, können die
internen Standards entweder vor der Extraktion oder nach der Fettex-
traktion addiert werden. Die Extraktionseffizienz sollte auf geeignete
Weise validiert werden, je nachdem, auf welcher Stufe interne Stand-
ards eingeführt und ob die Ergebnisse auf Produkt- oder Fettbasis
angegeben werden.
— Vor der GC/MS-Analyse ist/sind 1 oder 2 Wiederfindungs-(Surrogat-)
Standard(s) zuaddieren.
— Es ist eine Kontrolle der Wiederfindungsrate erforderlich. Bei Bestäti-
gungsverfahren sollten die Wiederfindungsraten der einzelnen internen
Standards im Bereich zwischen 60 und 120 % liegen. Geringere oder
höhere Wiederfindungsrate für einzelne Kongenere, insbesondere
einiger hepta- und octachlorierte Dibenzodioxine und Dibenzofurane,
können unter der Bedingung akzeptiert werden, dass ihr Beitrag zum
TEQ-Wert 10 % des gesamten TEQ-Wertes (nur für PCDD/F) nicht
übersteigt. Bei Screening-Verfahren sollten die Wiederfindungen
zwischen 30 und 140 % liegen.
— Die Dioxine sollten von interferierenden chlorierten Verbindungen, wie
z. B. PCB und chlorierten Diphenylethern, mittels geeigneter chromato-
grafischer Verfahren getrennt werden (vorzugsweise mit Florisil-,
Aluminiumoxid- und/oder Aktivkohlesäule).
— Die gaschromatografische Trennung von Isomeren sollte ausreichen
(< 25 % von Peak zuPeak zwischen 1,2,3,4,7,8-HxCDF u nd
1,2,3,6,7,8-HxCDF).
— Die Bestimmung sollte nach der EPA-Methode 1613 Revision B
erfolgen: „Tetra- through octa-chlorinated dioxins and furans by isotope
dilution HRGC/HRMS“ oder nach einer anderen Methode mit gleich-
wertigen Leistungskriterien.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 10
▼B
— Bei Lebensmitteln mit einer Dioxinkontamination von etwa 1 pg WHO-
TEQ/g Fett sollte die Differenz zwischen oberer und unterer Grenze
nicht mehr als 20 % (nur für PCDD/PCDF) betragen. Bei Lebensmitteln
mit geringem Fettgehalt sind die gleichen Anforderungen bei einer
Kontamination von etwa 1 pg WHO-TEQ/g Erzeugnis anzuwenden.
Bei geringerer Kontamination, wie z. B. 0,50 pg WHO-TEQ/g
Erzeugnis, kann die Differenz zwischen Obergrenze und Untergrenze
im Bereich zwischen 25 und 40 % liegen.
7.Screening-Verfahren
7.1.Einführung
Bei der Untersuchung gibt es verschiedene Vorgehensweisen mit einem
Screening-Verfahren: das reine Screening und eine quantitative Untersu-
chung.
ScreeningDie Response der Proben wird mit derjenigen einer Referenzprobe an der
interessierenden Konzentration verglichen. Proben mit einer unter dem
Referenzwert liegenden Response werden als negativ erklärt, diejenigen
mit einer höheren Response als positiv vermutet. Anforderungen:
— Bei jeder Testreihe ist eine Blind- und eine Referenzprobe einzube-
ziehen, die zur gleichen Zeit und zu den gleichen Bedingungen
extrahiert und untersucht werden. Die Referenzprobe muss im
Vergleich zueiner Blindprobe eine deu tlich erhöhte Response
aufweisen.
— Zusätzliche Referenzproben von 0,5 x und 2 x die interessierende
Konzentration sollten einbezogen werden, damit die ordnungsgemäße
Durchführung des Tests in dem für die Kontrolle der interessierenden
Konzentration relevanten Bereich nachgewiesen werden kann.
— Bei der Untersuchung anderer Matrizen ist die Eignung der Referenz-
proben nachzuweisen, vorzugsweise durch die Aufnahme von Proben,
bei denen sich durch HRGC/HRMS ein TEQ-Gehalt vergleichbar mit
dem der Referenzprobe ergeben hat, oder andernfalls von einer Blind-
probe, die bis zu dieser Höhe aufgestockt wurde.
— Da in Bioassays keine internen Standards verwendet werden können,
sind Wiederholbarkeitstests zur Erlangung von Informationen über die
Standardabweichung innerhalb einer Testreihe sehr wichtig. Der
Abweichungskoeffizient sollte unter 30 % liegen.
— Bei Bioassays sollten Zielverbindungen, mögliche Interferenzen und die
zulässigen Höchstwerte definiert werden.
Quantitative UntersuchungZur quantitativen Untersuchung sind Standardverdünnungsreihen, doppelte
oder dreifache Clean-up und Bestimmung sowie Blind- und Wiederfin-
dungskontrollen erforderlich. Das Ergebnis kann in TEQ ausgedrückt
werden, wobei davon ausgegangen wird, dass die für das Signal verant-
wortlichen Verbindungen dem TEQ-Prinzip entsprechen. Dies kann durch
die Verwendung von TCDD (oder eine Dioxin-/Furanstandardmischung)
durchgeführt werden, was eine Kalibrierungskurve ergibt, mit der der
TEQ-Wert im Extrakt und somit in der Probe errechnet werden kann. Diese
wird anschließend um den für eine Blindprobe (zur Berücksichtigung von
Verunreinigungen durch Lösungsmittel und Chemikalien) errechneten
TEQ-Wert und eine Wiederfindung (errechnet aus dem TEQ-Wert in einer
Qualitätskontrollprobe von etwa der interessierenden Konzentration) korri-
giert. Es sei hier darauf aufmerksam gemacht, dass der offensichtliche
Wiederfindungsverlust teilweise auf Matrixeffekte und/oder Unterschiede
zwischen den TEF-Werten in den Bioassays und den amtlichen TEF-
Werten der WHO zurückzuführen sein kann.
7.2.AnforderungenanzumScreening verwendete Untersuchungsverfahren
— Zum Screening können GC/MS-Verfahren und Bioassays verwendet
werden. Bei GC/MS-Verfahren sind die unter Punkt 6 festgelegten
Anforderungen heranzuziehen. Für zellbasierte Bioassays sind spezielle
Anforderungen unter Punkt 7.3 und für kit-basierte Bioassays unter
Punkt 7.4 festgelegt.
— Es sind Informationen über die Anzahl falsch positiver und falsch nega-
tiver Ergebnisse eines großen Probensatzes unterhalb und oberhalb der
Höchstwerte oder der Auslösewerte im Vergleich zum TEQ-Gehalt
erforderlich, der durch ein Bestätigungsverfahren bestimmt wurde. Der
tatsächliche Anteil der falsch negativen Ergebnisse sollte unter 1 %
betragen. Der Anteil der falsch positiven Proben sollte so gering sein,
dass ein Screening von Vorteil ist.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 11
▼B
— Positive Ergebnisse sind immer durch ein Bestätigungsverfahren zu
bestätigen. Außerdem sollten die Proben aus einem großen TEQ-
Bereich durch HRGC/HRMS (ca. 2-10 % der negativen Proben) bestä-
tigt werden. Informationen über Übereinstimmungen von Bioassays mit
HRGC/HRMS-Ergebnissen sollten zur Verfügung gestellt werden.
7.3.Spezielle AnforderungenanzellbasierteBioassays
— Für jeden Testlauf in einem Bioassay ist eine Referenzkonzentrations-
reihe von TCDD oder einem Dioxin-Furan-Gemisch (vollständige
Dosis-Response-Kurve mit R2> 0,95) erforderlich. ZuScreening-
Zwecken könnte eine erweiterte Kurve im Niedrigkonzentrationsbereich
zur Untersuchung von Proben im Niedriggehaltbereich verwendet
werden.
— Für das Ergebnis des Bioassays über einen konstanten Zeitraum hinweg
sollte eine TCDD-Referenzkonzentration (etwa 3 x die Quantifizie-
rungsgrenze) auf einem Qualitätskontrollblatt verwendet werden. Eine
Alternative dazuwäre die relative Response einer Referenzprobe im
Vergleich zur TCDD-Kalibrierungslinie, da die Response der Zellen
von vielen Faktoren abhängen kann.
— Für jeden Typ Referenzmaterial sollten Qualitätskontroll-Charts aufge-
zeichnet und geprüft werden, damit sichergestellt ist, dass das Ergebnis
mit den Leitlinien übereinstimmt.
— Insbesondere bei quantitativen Berechnungen muss die Induktion der
Probenverdünnung innerhalb des linearen Teils der Response-Kurve
liegen. Über dem linearen Teil der Response-Kurve liegende Proben
sind zuverdünnen u nd neuzutesten. Daher wird empfohlen, immer
mindestens drei oder mehr Lösungen zur gleichen Zeit zu testen.
— Die Standardabweichung sollte bei einer dreifachen Bestimmung einer
Probenlösung nicht mehr als 15 % betragen und zwischen drei unab-
hängigen Versuchen nicht mehr als 30 %.
— Die Nachweisgrenze kann auf 3 x die Standardabweichung der Blindlö-
sung oder der Hintergrund-Response festgelegt werden. Eine andere
Möglichkeit wäre, auf die Gleichung der Kalibrierungskuve eine über
dem Hintergrund liegende Response anzuwenden (Induktionsfaktor 5 x
der Blindwert des Lösungsmittels), der anhand der Kalibrierungskurvedes Tages berechnet wird. Die Quantifizierungsgrenze kann auf 5 bis
6 x die Standardabweichung der Blindlösung oder der Hintergrundres-
ponse festgelegt werden, oder es kann eine Response über dem
Hintergrund (Induktionsfaktor 10 x der Blindwert) angewandt werden,
der anhand der Kalibrierungskurve des Tags berechnet wird.
7.4.Spezielle AnforderungenanKit-basierteBioassays (
1)
— Bei der Vorbereitung und Untersuchung der Proben sind die Anwei-
sungen des Herstellers zu beachten.
— Testkits, deren Haltbarkeitsdatum abgelaufen ist, sollten nicht mehr
verwendet werden.
— Es sollten keine Materialien oder Bestandteile verwendet werden, die
zur Verwendung mit anderen Kits bestimmt sind.
— Die Testkits sollten zu den angegebenen Lagertemperaturen aufbewahrt
und zu den angegebenen Betriebstemperaturen verwendet werden.
— Die Nachweisgrenze wird — basierend auf 10 Wiederholungen von
Blinduntersuchungen (Blank) — als die dreifache Standardabweichung
festgelegt, die durch den Anstieg der linearen Regressionsgleichung zu
dividieren ist.
— Für die Labortests sollten Referenzstandards verwendet werden, damit
sichergestellt ist, dass die Response des Standards im Test innerhalb
eines akzeptablen Bereichs liegt.
8.Bericht über die Ergebnisse
Sofern das Untersuchungsverfahren dies zulässt, sollten die Untersuchungs-
ergebnisse die Werte der einzelnen PCDD/F- und PCB-Kongenere
enthalten und als Obergrenze und Untergrenze vorgelegt werden, damit
möglichst viele Informationen in den Untersuchungsberichten enthalten
sind und die Ergebnisse somit entsprechend den speziellen Anforderungen
interpretiert werden können.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 12
(1) Bislang wurde nicht nachgewiesen, dass im Handel erhältliche Kit-basierte Bioassays
für das Screening von Lebensmittel- und Futtermittelproben auf das Vorhandensein
von Dioxinen im fraglichen Bereich ausreichend empfindlich und zuverlässig sind.
▼B
In dem Bericht sollte auch der Lipidgehalt der Probe sowie das zur Lipi-
dextraktion verwendete Verfahren genannt werden.
Die Wiederfindungsraten der einzelnen internen Standards sind zur Verfü-
gung zu stellen, sofern die Wiederfindungsraten außerhalb des unter Punkt
6 genannten Bereichs liegen und sofern diese den Höchstwert über-
schreiten, andernfalls auf Nachfrage.2002L0069 — DE — 26.08.2002 — 000.001 — 13