1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—1
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►B ERSTE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 15. Juni 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futter-
mitteln
(71/250/EWG)
(ABl.L155vom12.7.1971,S.13)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 81/680/EWGderKommissionvom30.Juli1981 L246 32 29.8.1981
►M2Richtlinie 98/54/EGderKommissionvom16.Juli1998 L208 49 24.7.1998
▼B
ERSTE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 15. Juni 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln
(71/250/EWG)
DIEKOMMISSIONDEREUROPÄISCHENGEMEINSCHAFTEN—
gestütztaufdenVertragzurGründungderEuropäischenWirtschaftsge-
meinschaft,
gestütztaufdieRichtliniedesRatesvom20.Juli1970überdieEinfüh-
rung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren und Analysemethoden
für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1), insbesondere auf
Artikel 2,
inErwägungnachstehenderGründe:Die obengenannte Richtlinie bestimmt, daß die amtlichen Untersu-
chungen von Futtermitteln zur Feststellung, ob die auf Grund derRechts- und Verwaltungsvorschriften festgelegten Vorschriftenhinsichtlich der Beschaffenheit und der Zusammensetzung der Futter-
mittel erfüllt sind, nach gemeinschaftlichen Probenahmeverfahren und
Analysemethoden durchgeführt werden.
Es erscheint nunmehr geboten, schnellstmöglich zu einer Festlegung
allererforderlichen Analysemethodenzugelangen.EinenerstenSchrittsollen dabei die Methoden für die Bestimmung von Blausäure,Calcium, Carbonaten, Rohasche, in Salzsäure unlöslicher Asche, Chlor
aus Chloriden, Senföl, Lactose, Kalium, Natrium, Zucker, Theobromin
und Harnstoff, die Bestimmung von Alkaloiden in Lupinen und dieBestimmung derUreaseaktivität vonSojaprodukten bilden.
Die in dieser Richtlinie vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme desStändigenFuttermittelausschusses —
HATFOLGENDERICHTLINIEERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaaten schreiben vor, daß die Analysen für die amtliche
Untersuchung von Futtermitteln auf ihren Gehalt an Blausäure,Calcium, Carbonaten, Rohasche, in Salzsäure unlöslicher Asche, Chlor
aus Chloriden, Senföl, Lactose, Kalium, Natrium, Zucker, Theobromin
undHarnstoff ►
M2 ◄sowieaufdieUreaseaktivitätvon
Sojaprodukten nach den in der Anlage zu dieser Richtlinie beschrie-benenMethodendurchgeführt werden.
DiesichinTeil 1derAnlagebefindlichen allgemeinen Bestimmungen
gelten für Analysemethoden, die gemäß der Richtlinie 70/373/EWG
desRatesverabschiedet wurden
Artikel 2
DieMitgliedstaatensetzenspätestensam1.Juli1972dieerforderlichen
Rechts- oder Verwaltungsvorschriften in Kraft, um den BestimmungendieserRichtlinienachzukommen.SiesetzendieKommissionunverzüg-lich davoninKenntnis.
Artikel 3
DieseRichtlinie istanalle Mitgliedstaaten gerichtet.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—2
(1) ABl.Nr.L170vom3.8.1970,S.2.▼M1
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ANLAGE
ANALYSENMETHODEN FÜR FUTTERMITTELBESTANDTEILE
1.ALLGEMEINE BESTIMMUNGEN ÜBER ANALYSEMETHODEN
FÜR FUTTERMITTEL
A. VORBEREITUNGDERPROBENZURANALYSE
1.Zweck
Die nachfolgend beschriebenen Verfahren beziehen sich auf die Vorberei-
tung der zur Analyse bestimmten Endproben, die gemäß den
Bestimmungen der ersten Richtlinie 76/371/EWG der Kommission vom 1.
März1976zurFestlegunggemeinschaftlicherProbenahmeverfahrenfürdie
amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1) entnommen und an die
Kontroll-Laboratorien gesandtwerden.
DieVorbereitungdieserProbenistsovorzunehmen,daßdieindenAnaly-
semethoden vorgesehenen Einwaagen homogen und repräsentativ für die
Endprobesind.
2.Vorsichtsmaßnahmen
Alle notwendigen Schritte sindsodurchzuführen, daß eine Verunreinigung
der Probe oder eine Veränderung ihrer Zusammensetzung soweit wie
möglich vermieden wird. Das Zerkleinern, Mischen und Sieben ist
möglichst raschdurchzuführen, wobei dieProbemöglichst wenig Luftund
Licht ausgesetzt wird. Die Verwendung von Mühlen oder Zerkleinerungs-
geräten, die zu einer merklichen Erwärmung der Probe führen könnten, ist
zuvermeiden.Fürbesondershitzeempfindliche Futtermittelwirdmanuelles
Zerkleinern empfohlen. Esistaußerdem daraufzuachten, daßdieverwen-
detenGerätekeineKontaminationsquelle fürSpurenelemente bilden.
Kann die Probe nicht ohne merkliche Veränderung ihres Feuchtigkeitsge-
halts vorbereitet werden, so erfolgt dessen Bestimmung vor und nach der
Vorbereitung nach dem Verfahren von Teil 1 des Anhangs der zweiten
Richtlinie71/393/EWGderKommissionvom18.November1971zurFest-
legunggemeinschaftlicherAnalysemethodenfürdieamtlicheUntersuchung
von Futtermitteln(2), geändert durch die Richtlinie 73/47/EWG der
Kommissionvom5.Dezember 1972(3).
3.Verfahren
Die Endprobe wird mechanisch oder manuell gründlich gemischt und in
zwei gleiche Teile geteilt (sofern möglich, sollte das Vierteilungsverfahren
angewendet werden). Ein Teil wird in einem geeigneten sauberen, trok-
kenen, luftdicht verschließbaren Gefäß aufbewahrt; der andere Teil oder
eine repräsentative Mengedavon(mindestens100g)wirdwiefolgtvorbe-
reitet:
3.1.Futtermittel, die direkt gemahlen werden können
SofernkeinebesonderenAngabeninderAnalysemethodegemachtwerden,
wird die gesamte Probe erforderlichenfalls zerkleinert und durch ein Sieb
mit einer Maschenweite von1mmSeitenlänge (entsprechend derEmpfeh-
lung ISO R 565) vollständig passiert. Zu starkes Zerkleinern ist zu
vermeiden. Die gesiebte Probe wird gemischt und in ein geeignetes
sauberes, trockenes, luftdicht verschließbares Gefäß abgefüllt. Unmittelbar
vorderEinwaagemußdieProbejedesmal gemischt werden.
3.2.Futtermittel, die nach Trocknung gemahlen werden können
SofernkeinebesonderenAngabeninderAnalysemethodegemachtwerden,
wird die Probe bis auf einen Feuchtigkeitsgehalt von 8 bis 12 % unter
Anwendung des unter Punkt 4.3 der Methode zur Bestimmung des Feuch-
tigkeitsgehalts (siehe vorstehenden Punkt 2) vorgesehenen
Vortrocknungsverfahrens vorgetrocknet. Die weitere Vorbereitung erfolgt
gemäßPunkt3.1.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—3
(1) ABl.Nr.L102vom15.4.1976,S.1.
(2) ABl.Nr.L279vom20.12.1971,S.7.
(3) ABl.Nr.L83vom30.3.1973,S.35.▼M1
▼M1
3.3.Flüssige oder halbflüssige Futtermittel
Die Probe wird in ein geeignetes sauberes, trockenes, luftdicht verschließ-
bares Gefäß abgefüllt und unmittelbar vor der Einwaage gründlich
gemischt.
3.4.Andere Futtermittel
Futtermittel, die nach keinem der oben genannten Verfahren vorbereitet
werden können, sind durch irgendein anderes Verfahren zu behandeln, das
eine homogeneundrepräsentative Einwaage derEndprobegestattet.
4.Aufbewahrung der Proben
DieProbenmüssenbeieiner Temperatur gelagert werden,dieihreZusam-
mensetzung nicht beeinflußt. Für Proben, die zur Analyse von Vitaminen
oder besonders lichtempfindlichen Substanzen bestimmt sind, werden
brauneGlasgefäßeverwendet.
B. BESTIMMUNGEN ÜBER IN ANALYSEVERFAHREN VERWENDETE
REAGENZIENUNDGERÄTE
1. Vorbehaltlich besonderer Angaben in den Analysemethoden müssen alle
zur Analyse verwendeten Reagenzien von p.a. Qualität sein. Bei der
Analyse von Spurenelementen muß die Reinheit der Reagenzien in einem
Reagenzienblindversuch überprüft werden. Je nach dem erhaltenen Wert
kanneine weitereReinigungderReagenzien erforderlich sein.
2. Jeder in den Analysemethoden erwähnte Lösungs-, Verdünnungs-, Spül-
oder Auswaschvorgang ohne Angabe über die Art des zu verwendenden
Lösungs- oder Verdünnungsmittels bedeutet, daß Wasser zu verwenden
ist. Im allgemeinen wird destilliertes oder demineralisiertes Wasser
verwendet. In besonderen in den Analysemethoden angegebenen Fällen
mußdasWasserspeziellen Reinigungsverfahren unterzogen werden.
3. Da die übliche Ausstattung von Kontroll-Laboratorien vorausgesetzt wird,
werden nur besondere Instrumente und Geräte oder solche, die speziellen
Anforderungen entsprechen müssen, in den Analysemethoden aufgeführt.
Das Material muß gut gereinigt sein, vor allem bei Bestimmungen von
sehrgeringen Substanzmengen.
C. ANWENDUNG VON ANALYSEMETHODEN UND FORMULIERUNG
DERERGEBNISSE
1. Im allgemeinen wird zur Bestimmung eines Stoffes in Futtermitteln eine
einzige Analysemethode festgelegt. Beim Vorhandensein von mehreren
Methoden muß die vom Kontroll-Laboratorium angewandte Methode im
Analysebericht angegeben werden.
2. Das im Analysebericht angegebene Ergebnis soll den Mittelwert aus
mindestens zwei Bestimmungen von separaten Einwaagen der Probe mit
ausreichender Wiederholbarkeit darstellen.
DiesesErgebnisistgemäßdenAngabenindenAnalysemethodenmiteiner
angemessenen Zahl an signifikanten Ziffern anzugeben und falls nötig,auf
denFeuchtigkeitsgehaltderEndprobevorderenVorbereitungumzurechnen1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—4
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2.BESTIMMUNG VON BLAUSÄURE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an freier und in Glyko-
siden gebundener Blausäure in Futtermitteln, insbesondere in
Leinsaatprodukten, Tapiokamehl undbestimmten Bohnenarten.
2Prinzip
Die Probe wird in Wasser aufgeschlämmt. Die Blausäure wird unter der
Einwirkung von Fermenten abgespalten, im Wasserdampfstrom abdestilliert
und in einem bestimmten Volumen von angesäuerter Silbernitratlösung
aufgefangen. Das Silbercyanid wird abfiltriert und der Überschuß an Silbe-
rnitrat miteinerAmmoniumthiocyanatlösung zurücktitriert.
3.Reagenzien
3.1. Aufschlämmung von süßen Mandeln: 20 süße, geschälte Mandeln
werden in 100 ml Wasser bei 37 bis 40 ºC zerkleinert. 10 ml dieser
Aufschlämmung werden auf Abwesenheit von abspaltbarer Blausäure
entweder mit Natriumpikratpapier oder durch einen Blindversuch, wie
unter5.letzter Absatzangegeben, geprüft.
3.2. Natriumacetatlösung 10v.H.(G/V),neutralisiertgegenPhenolphthalein
3.3. Antischaum-Emulsion (z.B.Silicon)
3.4. Salpetersäure, D:1,403.5. 0,02NSilbernitratlösung3.6. 0,02NAmmoniumthiocyanatlösung
3.7. Gesättigte Ammonium-Eisen (III)-Sulfatlösung
3.8. Ammoniaklösung,D:0,958
4.Geräte
4.1. Brutschrankmit Thermostat, auf38ºCeingestellt4.2. Apparatur zur Wasserdampfdestillation, deren Kühler mit einem
verlängerten, gebogenenEinleitungsrohr versehenist
4.3. 1000-ml-Stehkolbenmit Schliffstopfen4.4. Ölbad
4.5. Bürette mit
1/20mlTeilung
5.Ausführung
20 g der Probe werden auf 5 mg genau eingewogen und in einen 1000-ml-
Stehkolben mit 50 ml Wasser und 10 ml Aufschlämmung von süßen
Mandeln (3.1) gebracht. Der Kolben wird verschlossen und während 16 Std.
bei 38 ºC im Brutschrank stehen gelassen. Nach Abkühlen auf Raumtempe-
ratur werden 80 ml Wasser, 10 ml Natriumacetatlösung (3.2) und 1 Tropfen
Antischaum-Emulsion (3.3)zugesetzt.
Der Kolben wird an die Wasserdampfdestillationsapparatur angeschlossen
und in einem Ölbad, das auf eine Temperatur von etwas mehr als 100 ºCvorgeheizt wordenist, erhitzt. Durcheinen kräftigen Wasserdampfstrom und
unterleichtemErhitzendesÖlbadeswerden200bis300mlabdestilliert.Das
Destillat wird in einem vor Licht geschützten Erlenmeyerkolben, der genau
50 ml 0,02 N Silbernitratlösung (3.5) und 1 ml Salpetersäure (3.4) enthält,
aufgefangen. Es ist zu beachten, daß das Verlängerungsrohr des Kühlers in
dieSilbernitratlösung taucht.
Der Inhalt des Erlenmeyerkolbens wird in einen 500-ml-Meßkolben über-
führt, bis zur Marke aufgefüllt, gemischt und filtriert. In 250 ml des Filtrats
wird der Überschuß anSilbernitrat nach Zusatz von ca. 1 ml Ammonium-
Eisen(III)-Sulfatlösung (3.7) mit 0,02 N Ammoniumthiocyanatlösung (3.6)
ausderauf
1/20mlgeteilten Bürettezurücktitriert.
Gegebenenfalls wird ein Blindversuch nachdembeschriebenenVerfahrenmit
10mlAufschlämmungvonsüßenMandeln(3.1)ohneAnalysenprobeausge-
führt.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—5
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6.Berechnung der Ergebnisse
Wenn der Blindversuch einen Verbrauch an 0,02 N Silbernitratlösung zeigt,
dann wird dieser von dem Silbernitratverbrauch des Analysenprobedestillats
abgezogen.
1ml0,02NAgNO3entspricht0,54mgHCN.DasErgebniswirdinHundert-
teilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkung
Enthält die Probe eine bedeutende Menge an Sulfiden (z. B. bei Bohnen),
dann bildet sich ein schwärzlicher Niederschlag von Silbersulfid, der
zusammen mit dem Niederschlag von Silbercyanid abfiltriert wird. Die
BildungdiesesNiederschlagsverursachteinenVerbrauchan0,02NSilberni-
tratlösung, dessen Volumen von dem Volumen abzuziehen ist, das für die
Berechnung des Gehaltes an HCN berücksichtigt wird. Zu diesem Zweck
wirdwiefolgtverfahren:
Der Niederschlag auf dem Filter wird mit 50 ml Ammoniaklösung (3.8)
behandelt, wobei sich Silbercyanid löst. Nach Auswaschen mit verdünnter
Ammoniaklösung wird der Silbergehalt des Rückstandes bestimmt und in
ml0,02NSilbernitratlösung umgerechnet.
Der Gehalt an HCN der Probe kann auch durch Titration des ammoniakhal-
tigenFiltrats nachAnsäuernmit Salpetersäure bestimmt werden.
3.BESTIMMUNG VON CALCIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Gesamt-Calcium in
Futtermitteln.
2.Prinzip
Die Probe wird verascht, die Asche wird mit Salzsäure behandelt und das
Calcium in Form von Calcium-Oxalat gefällt. Nach Auflösung des Nieder-
schlags in Schwefelsäure wird die gebildete Oxalsäure mit
Kaliumpermanganatlösung titriert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a.,D:1,143.2. Salpetersäure p.a.,D:1,403.3. Schwefelsäure p.a.,D:1,13
3.4. Ammoniakp.a.,D:0,98
3.5. Kaltgesättigte Ammonium-Oxalatlösung p.a.3.6. Citronensäurelösung p.a.30v.H.(G/V)3.7. Ammoniumchloridlösung p.a.5v.H.(G/V)3.8. Bromkresolgrünlösung0,04v.H.(G/V)
3.9. 0,1NKaliumpermanganatlösung
4.Geräte
4.1. Elektrischer Muffelofenmit Thermostat
4.2. VeraschungsschalenausPlatin,QuarzoderPorzellan
4.3. Glasfiltertiegel, PorositätG
4
5.Ausführung
Etwa 5 g der Analysenprobe (oder, wenn nötig, mehr), auf 1 mg genau
gewogen,werdenbei550ºCverascht.DieAschewirdinein250-ml-Becher-
glas gebracht. Danach werden 40 ml Salzsäure (3.1), 60 ml Wasser sowie
einige Tropfen Salpetersäure (3.2) hinzugefügt. Man kocht auf und hält 30
Minuten lang im Sieden. Nach dem Abkühlen wird die Lösung in einen
250-ml-Meßkolben übergespült unddasBecherglas ausgewaschen.Anschlie-
ßend wird der Meßkolben bis zur Marke mit Wasser aufgefüllt,
umgeschüttelt undfiltriert.
JenachdemvermutetenGehaltderProbeanCalciumwirdeinaliquoterTeil,
der10bis40mgCalciumenthält,inein250-ml-Becherglasabpipettiert,1ml1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—6
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Citronensäurelösung (3.6) und 5 ml Ammoniumchloridlösung (3.7) hinzuge-
fügt und auf etwa 100 ml mit Wasser aufgefüllt. Nach Aufkochen werden 8
bis 10 Tropfen Bromkresolgrünlösung (3.8) sowie 30 ml heiße Ammonium-
Oxalatlösung (3.5) hinzugefügt. Falls ein Niederschlag entsteht, wird dieser
durchHinzufügungeinigerTropfenSalzsäure (3.1)aufgelöst.
Anschließend wird sehr langsam und unter beständigem Schütteln mit
Ammoniak (3.4) neutralisiert, bis der pH-Wert etwa zwischen 4,4 und 4,6
liegt (Umschlag des Indikators). Zum Absetzen des Niederschlags wird das
Becherglas 30 Minuten lang auf ein Bad mit kochendem Wasser gesetzt.
Dann wird das Becherglas vom Wasserbad heruntergestellt und sein Inhalt
nach einer Stunde durch einen Filtertiegel G4filtriert. Das Becherglas und
der Tiegel werden mit Wasser gewaschen, bis der überschüssige Ammo-
nium-Oxalat entfernt ist. (Die Abwesenheit von Chlorid im Waschwasser
zeigt an,daßgenügendausgewaschenwurde.)
Der Niederschlag wird auf dem Filter mit 50 ml heißer Schwefelsäure (3.3)
aufgelöst, der Tiegel mit heißem Wasser ausgewaschen und das Filtrat auf
etwa 100 ml aufgefüllt. Nach Erwärmen auf 70 bis 80 ºC wird tropfenweise
mit Kaliumpermanganatlösung (3.9) titriert, bis die Farbe 1 Min. lang rosa
bleibt.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,1 N Permanganatlösung entspricht 2,004 mg Calcium. Das Ergebnis
wirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei einem sehr geringen Calciumgehalt wird wie folgt verfahren: Der
Calcium-Oxalat-NiederschlagwirddurcheinaschefreiesPapierfilterfilt-
riert. Nach dem Auswaschen wird das Filter getrocknet und in einer
Platinschale bei 550 ºC verascht. Der Rückstand wird mit einigen
Tropfen Schwefelsäure (3.3) aufgelöst, zur Trockne verdampft, noch-
mals bei 550 ºC verascht und gewogen. Wird das Gewicht des
erhaltenen Calciumsulfats = p gesetzt, so enthält der aliquote Teil der
Probep×0,2944Calcium.
7.2. Wenn das Erzeugnis nur aus Mineralstoffen besteht, dann wird die
Einwaage ohne vorherige Veraschung mit Salzsäure aufgelöst. Gewisse
Erzeugnisse, wie z. B. Calciumaluminiumphosphate, sind in Säuren
schwer löslich. In diesem Fall führt man vor der Auflösung einen alka-
lischen Aufschluß wie folgt durch: In einer Platinschale wird die Probe
mit etwa der fünffachen Menge einer Mischung aus gleichen Teilen
Kaliumcarbonat und Natriumcarbonat gemischt. Man erhitzt vorsichtig,
bis die Mischung vollständig geschmolzen ist; anschließend wird abge-
kühltundmit Salzsäure aufgelöst.
7.3. WennderGehaltanMagnesiumderProbehochist,wirdderOxalatnie-
derschlag umgefällt.
4.BESTIMMUNG VON CARBONATEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung von Carbonaten, konventionell ausge-
drückt als Calciumcarbonat, in den meisten Futtermitteln. In bestimmten
Fällen(z.B.Eisencarbonat) istjedocheinebesondereMethodeanzuwenden.
2.Prinzip
DieCarbonatewerdenmitSalzsäurezersetzt;diefreigewordeneKohlensäure
wirdineinemgraduiertenRohraufgefangen.DaserhalteneGasvolumenwird
mit demjenigen verglichen, welches unter den gleichen Bedingungen aus
einerbekannten MengeCalciumcarbonat p.a.erhalten wird.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure,D:1,103.2. Calciumcarbonat p.a.3.3 Etwa0,1NSchwefelsäure,mit Methylrotangefärbt.
4.Gerät
ApparaturnachScheibler-Dietrich (s.Skizze)odergleichwertiges Gerät.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—7
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5.Ausführung
Je nach dem Carbonatgehalt der Probe wird eine Einwaage wie folgt einge-
wogen:
0,5g bei Erzeugnissen mit 50 bis 100 v. H. Carbonaten, ausgedrückt als
Calciumcarbonat;
1g bei Erzeugnissen mit 10 bis 50 v. H. Carbonaten, ausgedrückt als
Calciumcarbonat;
2g bis3gbeianderenErzeugnissen.
Man bringt die Einwaage in die Spezialflasche (4) der Apparatur, die mit
einemRöhrchenausunzerbrechlichemMaterialversehenist,das10mlSalz-
säure (3.1) enthält, und schließt an die Apparatur an. Dann dreht man den
Drei-Weg-Hahn (5) so, daß das Rohr (1) mit der Außenluft in Verbindung
steht. Mit dem beweglichen Rohr (2), das mit ausgefärbter Schwefelsäure
(3.3) gefüllt und mit dem graduierten Rohr (1) verbunden ist, wird das
Niveau der Flüssigkeit auf den Nullpunkt der Skala eingestellt. Der Hahn
(5) wirdsogedreht, daß das Rohr(1) mit dem Rohr(2)verbunden ist,dann
wirdderNullpunktkontrolliert.
Nun läßt man langsam durch Neigen der Flasche (4) die Salzsäure auf die
Substanz fließen und gleicht den Druck durch Senken des Rohres (2) aus.
Man bewegt die Flasche (4) so lange hin und her, bis die Kohlensäureent-
wicklungganzaufgehört hat.
DerDruckausgleich erfolgt, indem dieFlüssigkeitindenRohren(1)und(2)
auf gleiches Niveau gebracht wird.Bevor abgelesen wird,wartet man einige
Minuten,bisdasVolumenkonstantbleibt.
EinVergleichsversuchmit 0,5gCalciumcarbonat (3.2)wirdunterdenselben
Bedingungendurchgeführt.
6.Berechnung der Ergebnisse
Der Gehalt an Carbonaten, ausgedrückt als Calciumcarbonat, in g pro
Hundertteilen derProbewirddurchfolgendeFormel berechnet:
V/C1100
T/C12P
wobei:
V=m lC O2entwickelt ausderEinwaage,
T = mlCO2entwickelt aus0,5gCaCO3p.a.,
P = GewichtderEinwaage ing.
7.Anmerkungen
7.1. Wenn die Einwaage mehr als 2 g beträgt, bringt man vorher 15 ml
destilliertesWasserindieFlasche(4)undmischtdenInhaltvorBeginn
des Versuchs. Man fügt dasselbe Wasservolumen bei dem Vergleichs-
versuchzu.
7.2. WennmaneinenApparatbenutzt,dessenVolumenvondemjenigenvon
Scheibler-Dietrich abweicht, muß man die Einwaage, die Vergleichs-
mengeunddieBerechnungentsprechendanpassen.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—8
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APPARATUR NACH SCHEIBLER-DIETRICH ZUR BESTIMMUNG VON
CO2
(Messungen in mm)
5.BESTIMMUNG VON ROHASCHE
1.Zweck und Anwendungsbereich
DieMethodeerlaubtdieBestimmungdesGehaltesanRohascheinFuttermit-
teln.
2.Prinzip
DieProbewirdbei550ºCverascht; derRückstandwirdgewogen.
3.Reagenzien
Ammoniumnitratlösung 20v.H.(G/V).
4.Geräte
4.1. Heizplatte4.2. Elektrischer Muffelofenmit Thermostat
4.3. Veraschungsschalen ausPlatin oder Platin-Gold-Legierung (10v.H.Pt,
90v.H.Au),rechtwinklig(60×40×25mm)oderkreisförmig(Durch-
messer:60bis75mm,Höhe:20bis25mm).1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—9
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5.Ausführung
Etwa5g(2,5gbeiStoffen,diezurBlasenbildungneigen)derProbewerden
auf 1 mg genau in eine vorher geglühte und tarierte Veraschungsschale
eingewogen. Die Schale wird auf der Heizplatte allmählich bis zum
VerkohlendesStoffeserhitzt.DieSchalewirddannindenauf550ºC±5ºC
eingestellten Muffelofen gebracht und darin so lange gehalten, bis man eine
weiße,hellgraueoderrötlicheAscheerhält,dieoffensichtlichfreivonKohle-
partikelnist.DannwirddieSchaleineinenExsikkatorgestelltundnachdem
Abkühlenunmittelbar gewogen.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Gewicht des Rückstandes wird berechnet, indem das Leergewicht abge-
zogenwird.DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei schwer zerstörbaren Stoffen werden der abgekühlten Rohasche
einige Tropfen 20 v. H. Ammoniumnitratlösung nach einer Veraschung
vonmindestens3Std.zugefügt(jedochmitVorsicht,umeinZerstäuben
und Ankleben der Asche zu vermeiden). Nach Trocknung im Trocken-
schrank wird die Veraschung weitergeführt. Die Operation wird
gegebenenfalls biszurvollständigenVeraschungwiederholt.
7.2. BeiStoffen,diederunter7.1beschriebenenBehandlungwiderstehen,ist
wiefolgtvorzugehen.NacheinerVeraschungvon3Std.wirddieAsche
mit heißem Wasser aufgenommen und durch ein kleines aschefreiesFilter abfiltriert. In der ursprünglichen Schale werden Filter und dessen
Inhalt verascht. Das Filtrat wird in die abgekühlte Schale gebracht, zur
Trockne eingedampft, veraschtundgewogen.
7.3. BeiÖlen und Fetten wirdeine Einwaagevonetwa25gineinerSchale
entsprechender Abmessung genau gewogen. Es wird dann durch
Anzünden des Stoffes mit einem Streifen aus aschefreiem Filterpapier
verkohlt. Nach der Verkohlung wird mit einer eben ausreichenden
Menge Wasser angefeuchtet. Anschließend wird getrocknet und wie
unter5.angegeben zuEndegeführt.
6.BESTIMMUNG VON IN SALZSÄURE UNLÖSLICHER ASCHE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an in Salzsäure unlösli-
chen, mineralischen Bestandteilen der Futtermittel. Abhängig von der Art
derProbesindzweiVerfahrenvorgesehen.
1.1.Verfahren A: anzuwenden bei organischen Einzelfuttermitteln und bei
denmeistenMischfuttermitteln;
1.2.Verfahren B: anzuwenden bei Mineralstoffen und Mineralstoffmisch-
ungen sowie bei allen Mischfuttermitteln, die nach Verfahren A einen
Gehalt an in Salzsäure unlöslicher Asche von mehr als 1 v. H. ergeben
haben.
2.Prinzip
2.1.Verfahren A: Die Probe wird verascht, die Asche in Salzsäure zum
Siedengebracht undderunlösliche Rückstandabfiltriert undgewogen.
2.2.Verfahren B: DieProbewirdmit Salzsäure behandelt. DieLösungwird
abfiltriert, derRückstandwirdveraschtunddieAschewirddannweiter
behandelt, wieunterVerfahrenAbeschrieben.
3.Reagenzien
3.1. 3NSalzsäure
3.2. Trichloressigsäurelösung 20v.H.(G/V)
3.3. Trichloressigsäurelösung 1v.H.(G/V)
4.Geräte
4.1. Heizplatte4.2. Elektrischer Muffelofenmit Thermostat1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—10
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4.3. Veraschungsschalen ausPlatin oder Platin-Gold-Legierung (10v.H.Pt,
90v.H.Au),rechtwinklig(60×40×25mm)oderkreisförmig(Durch-
messer:60bis75mm,Höhe:20bis25mm).
5.Ausführung
5.1.Verfahren A
DieEinwaagewirdunterdenBedingungen,diefürdieBestimmungder
Rohasche beschrieben sind, verascht. Es kann auch die bei der Roha-
schebestimmung erhaltene Ascheverwendet werden.
Die Asche wird in ein Becherglas von 250 ml bis 400 ml Inhalt mit
75ml3NSalzsäure (3.1)überführt.Manerhitzt vorsichtigzumSieden
und kocht 15 Min. gelinde weiter. Die Lösung wird heiß durch ein
aschefreies Papierfilter filtriert und der Rückstand mit heißem Wasser
bis zum Ausbleiben der sauren Reaktion ausgewaschen. Das Filter mit
Rückstand wird nach dem Trocknen bei einer Temperatur von
mindestens550ºCundhöchstens700ºCineinertariertenVeraschungs-
schaleverascht.NachdemAbkühlenimExsikkatorwirdgewogen.
5.2.Verfahren B
5 g der Analysenprobe werden auf 1 mg genau eingewogen und in ein
250-ml- bis 400-ml-Becherglas gebracht. Man fügt nacheinander 25 ml
Wasser und 25 ml 3 N Salzsäure (3.1) hinzu, schwenkt um und wartet
biszumNachlassendesAufbrausens.Danngibtmanweitere50ml3N
Salzsäure(3.1)hinzu.NachdemNachlassendereventuellerneutauftre-
tenden Gasentwicklung stellt man das Becherglas 30 Min. lang in ein
siedendesWasserbadoder,wennnotwendig,länger,bisdievollständige
Hydrolyseeventuell vorhandenerStärkeeingetreten ist.
ManfiltriertheißdurcheinaschefreiesFilterundwäschtmitetwa50ml
heißem Wasser aus (s. Bemerkung 7). Man bringt das Filter mit Rück-
stand in eine Veraschungsschale, trocknet und verascht bei einer
Temperatur von mindestens 550 ºC und höchstens 700 ºC. Die Asche
wird in ein 250-ml- bis 400-ml-Becherglas mit 75 ml 3 N Salzsäure
(3.1)überführtundweiterverfahrenwiein5.1Absatz2.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Gewicht des Rückstandes wird berechnet, indem das Leergewicht abge-
zogenwird.DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkung
Wenn die Filtration Schwierigkeiten bereitet, so wird die Bestimmung
wiederholt.HierbeiwerdenanStellevon50ml3NSalzsäure50mlTrichlo-
ressigsäurelösung 20 v. H. (3.2) zugegeben und das Filter mit einer heißen
Trichloressigsäurelösung 1v.H.(3.3)ausgewaschen.
7.BESTIMMUNG VON CHLOR AUS CHLORIDEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Chlors aus wasserlöslichen Chlo-
riden, konventionell ausgedrückt als Natriumchlorid. Sie ist bei allen
Futtermitteln anwendbar.
2.Prinzip
Die Chloride werden in Wasser gelöst. Handelt es sich um Erzeugnisse, die
organische Stoffe enthalten, wird eine Klärung vorgenommen. Die Lösung
wird mittels Salpetersäure schwach angesäuert, und die Chloride werden mit
einerSilbernitrat-LösungalsSilberchloridgefällt.DerSilbernitrat-Überschuß
wirdmiteinerAmmoniumthiocyanatlösungnachMethodeVolhardzurücktit-
riert.
3.Reagenzien
3.1. 0,1NAmmoniumthiocyanatlösung
3.2. 0,1NSilbernitratlösung
3.3. Gesättigte Ammonium-Eisen(III)-Sulfatlösung
3.4. Salpetersäure, D:1,383.5. Diäthyläther p.a.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—11
▼B
3.6. Acetonp.a.
3.7. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkacetat, (CH3COO)2Zn · 2 H2O und 3 g
EisessigwerdeninWassergelöstundauf100mlmitWasseraufgefüllt.
3.8. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat (II), K4[Fe(CN)6]
·3H2OwerdeninWassergelöstundauf100mlmitWasseraufgefüllt.
3.9. Aktivkohlep.a.,chloridfrei undkeineChloride adsorbierend.
4.Gerät
Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr35bis40U/Min.
5.Ausführung
5.1.Herstellung der Lösung
Je nach der Art der Probe wird, wie unter 5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3
beschrieben, eine Lösunghergestellt.
Im Vergleich muß ein Blindversuch ohne Analysenprobe durchgeführt
werden.
5.1.1.Probe, frei von organischen Stoffen
Eine Menge (nicht mehr als 10 g) der Analysenprobe mit einem
Gehalt von höchstens 3 g Chlor in Form von Chloriden wirdauf
1 mg genau abgewogen und in einen 500-ml-Meßkolben mit
400 ml Wasser von etwa 20 ºC gebracht. Dann wird 30 Min.
lang in dem Schüttelapparat rotiert, bis zur Marke aufgefüllt,
gemischt undfiltriert.
5.1.2.Probe, die organische Stoffe enthält, mit Ausnahme von den in
5.1.3 angeführten
5 g der Analysenprobe werden auf 1 mg genau eingewogen und
mit 1 g Aktivkohle in einen 500-ml-Meßkolben gebracht. Hierzu
werden400mlWasservonetwa20ºCund5mlCarrez-LösungI
(3.7) gegeben, umgeschüttelt und 5 ml Carrez-Lösung II (3.8)
zugesetzt.Dannwird30Min.langindemSchüttelapparatrotiert,
biszurMarkeaufgefüllt, gemischtundfiltriert.
5.1.3.Backfutter, Leinkuchen und Leinmehl, Erzeugnisse mit einem
hohen Leinmehlgehalt oder sonstige Erzeugnisse mit einem hohen
Gehalt an Pflanzenschleim oder kolloidalen Stoffen (z. B. verklei-
sterte Stärke)
Die Lösung wird wie unter 5.1.2 beschrieben zubereitet, ausgen-
ommen das Filtrieren. Es wird dekantiert (falls erforderlich,
zentrifugiert); dann werden 100 ml des oberen Teils der Lösung
in einen 200-ml-Meßkolben pipettiert. Es wird mit Aceton (3.6)
zunächst gemischt und sodann mit Aceton bis zur Marke aufge-
füllt,geschüttelt undfiltriert.
5.2.Titration
25bis100mldesFiltrats(jenachdemzuerwartendenChlorgehalt),das
nach 5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3 erhalten wurde, werden in einen Erlen-
meyerkolben pipettiert. Die aliquote Mengedarf nicht mehr als 150mg
Chlor(Cl)enthalten.Fallserforderlich,wirdmitWasseraufmindestens
50 ml verdünnt. Dann werden 5 ml Salpetersäure (3.4), 20 ml Ammo-nium-Eisen-Sulfatlösung (3.3) und 2 Tropfen
Ammoniumthiocyanatlösung(3.1)auseinerbiszumNullpunktgefüllten
Bürettehinzugesetzt.AnschließendwirdauseinerBüretteSilbernitratlö-
sung (3.2) zugegeben, bis ein Überschuß von 5 ml vorhanden ist. Dann
werden 5 ml Diäthyläther (3.5) zugegeben und kräftig geschüttelt, um
denNiederschlagzumAusflockenzubringen.
Der Überschuß an Silbernitrat wird mit Ammoniumthiocyanatlösung
(3.1) titriert, bis eine rotbraune Farbe auftritt, die eine Min. beständig
ist.
6.Berechnung
Die Menge Chlor (p), ausgedrückt als Natriumchlorid, die in dem Volumen
des für die Titration entnommenen Filtrats vorhanden ist, wird nach
folgender Formelberechnet:
p=5,845(V
1−V2)mg
wobei: V1= mlderzugegebenen 0,1NSilbernitratlösung,1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—12
▼B
V2= ml der 0,1 N Ammoniumthiocyanatlösung, die für die Titra-
tionverbraucht werden.
Falls der Blindversuch einen Verbrauch an 0,1 N Silbernitratlösung anzeigt,
wirddieserWertvondem(V1−V2)Volumenabgezogen.
DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Mankannauchdiepotentiometrische Titration anwenden.
7.2. Bei sehr fettreichen Erzeugnissen ist eine vorherige Entfettung mit
Diäthyläther oderPetroläther durchzuführen.
7.3. Bei Fischmehl kann die Titration nach der Methode Mohr durchgeführt
werden.
8.BESTIMMUNG VON SENFÖL
1.Zweck und Anwendungsbereich
DieMethodeerlaubtdieBestimmungdesGehaltesanwasserdampfflüchtigen
Senfölen, berechnet als Allylisothiocyanat, in Kuchen von Brassica und
Sinapis-Arten,sowieinsenfölhaltigen Mischfuttermitteln.
2.Prinzip
Die Probe wird in Wasser aufgeschlämmt. Die Senföle werden unter der
Einwirkung von Fermenten abgespalten, nach Zusatz von Äthanol abdestil-
liert und in verdünnter Ammoniaklösung aufgenommen. Die Lösung wird
miteinembestimmtenVolumenSilbernitratlösungerhitzt,abgekühltundfilt-
riert. Der Überschuß an Silbernitrat wird mit einer
Ammoniumthiocyanatlösung zurücktitriert.
3.Reagenzien
3.1. Weiße Senfsaat (Sinapis alba)
3.2. Äthanol,95bis96v.H.(V/V)3.3. Antischaum-Emulsion (z.B.Silicon)
3.4. Ammoniaklösung,D:0,958
3.5. 0,1NSilbernitratlösung
3.6. 0,1NAmmoniumthiocyanatlösung
3.7. Salpetersäure, D:1,40
3.8. Gesättigte Ammonium-Eisen(III)-Sulfatlösung.
4.Geräte
4.1. 500-ml-Stehkolben mitSchliffstopfen
4.2. Destillationsapparatur mit Kühler und Destillieraufsatz, der verhindert,
daßFlüssigkeitstropfenmitgerissenwerden.
5.Ausführung
10 g der Probe werden auf 1 mg genau eingewogen und in einem 500-ml-
Stehkolben mit 2 g fein zerriebener weißer Senfsaat (3.1) (Fermentträger)
und 200 ml Wasser von 20 ºC versetzt. Der Kolben wird verschlossen und
während 2 Std. unter häufigem Schütteln auf etwa 20 ºC gehalten. Dann
werden nach Zugabe von 40 ml Äthanol (3.2) und einem Tropfen Anti-
schaum-Emulsion (3.3) etwa 150 ml abdestilliert und das Destillat in einem
250-ml-Meßkolben, der 20 ml Ammoniak enthält, aufgefangen, wobei das
EndedesKühlersindieFlüssigkeiteintauchenmuß.NachZusatzvon50ml
0,1NSilbernitratlösung(3.5)(oder,wennnötig,mehr)wirddemMeßkolben
ein kleiner Trichter aufgesetzt und die Mischung 1 Std. lang auf einem
kochenden Wasserbad erhitzt. Nach Abkühlen wird mit Wasser zur Marke
aufgefüllt, geschüttelt und filtriert. 100 ml des klaren Filtrats werden
entnommen, und nach Zusatz von 5 ml Salpetersäure (3.7) und etwa 5 ml
Ammonium-Eisen(III)-Sulfatlösung (3.8) wird der Überschuß an Silbernitrat
mit 0,1NAmmoniumthiocyanatlösung (3.6)zurücktitriert.
EinBlindversuch wird unter Anwendung desselben Verfahrens mit 2 g fein
zerriebener weißerSenfsaatohneAnalysenprobeausgeführt.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—13
▼B
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Volumen an 0,1 N Silbernitratlösung, das im Blindversuch verbraucht
wird, wird von dem Verbrauch der Analysenprobenlösung abgezogen. Der
so erhaltene Wert gibt den Verbrauch in ml 0,1 N Silbernitratlösung durch
dasSenfölderAnalysenprobean.
1 ml 0,1 N AgNO3entspricht 4,956 mg Allylisothiocyanat. Das Ergebnis
wirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
9.BESTIMMUNG VON LACTOSE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Lactose in Futtermit-
teln, diemehrals0,5v.H.Lactoseenthalten.
2.Prinzip
Die Zucker werdenin Wasser gelöst. Die Lösungwird mit Hefe — Saccha-
romyces cerevisiae — vergoren, wobei die Lactose nicht angegriffen wird.
Nach Klärung und Filtration wird der Gehalt an Lactose nach Luff-Schoorl
imFiltratbestimmt.
3.Reagenzien
3.1.Saccharomyces cerevisiae -Suspension: 25 g frische Hefe werden in
100 ml Wasser suspensiert. Im Kühlschrank ist die Suspension
höchstenseine Woche langhaltbar.
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat Zn (CH3COO)2·2H2O und 3 g
EisessigwerdeninWassergelöstundauf100mlmitWasseraufgefüllt.
3.3. Carrez-LösungII:10,6gKaliumhexacyanoferrat(II),K4[Fe(CN)6]·3H2O
werdeninWassergelöstundauf100mlmit Wasseraufgefüllt.
3.4. Reagenz nachLuff-Schoorl:
Unter vorsichtigem Umschwenken wird die Zitronensäurelösung (3.4.2)
in die Natriumcarbonatlösung (3.4.3) gegossen, dann wird die Kupfer-
sulfatlösung (3.4.1) hinzugefügt und zu 1 l mit Wasser aufgefüllt. Man
läßt über Nacht stehen und filtriert. Die Normalität des so erhaltenen
Reagenzes muß nachgeprüft werden (0,1 N Cu; 2 N Na2CO3). Der pH-
Wertbeträgt etwa9,4.
3.4.1. Kupfersulfatlösung: 25 g Kupfersulfat p.a., CuSO4·5 H2O, eisen-
frei,werdenin100mlWassergelöst.
3.4.2. Zitronensäurelösung: 50 g Zitronensäure p.a., C6H8O7·H2O,
werdenin50mlWassergelöst.
3.4.3. Natriumcarbonatlösung:143,8gNatriumcarbonatp.a.,wasserfrei,
werden in ungefähr 300 ml warmem Wasser gelöst. Die Lösung
wirdabgekühlt.
3.5. Bimssteinkörner mit Salzsäure ausgekocht, mit Wasser gewaschen und
getrocknet.
3.6. Kaliumjodidlösung 30v.H.(G/V)
3.7. 6NSchwefelsäure3.8. 0,1NNatriumthiosulfatlösung3.9. Stärkelösung; eine Aufschlämmung von 5 g löslicher Stärke in 30 ml
Wasser wird zu 1 l siedendem Wasser hinzugefügt und 3 Min. lang im
Sieden gehalten; dann wird abgekühlt und gegebenenfalls als Konservi-
erungsmittel 10mgQuecksilberjodid hinzugefügt.
4.Gerät
Wasserbadmit Thermostat auf38bis40ºCeingestellt.
5.Ausführung
1gderProbewirdauf1mggenaueingewogenundmit25bis30mlWasser
in einen 100-ml-Meßkolben gebracht. Der Kolben wird 30 Min. lang in
kochendem Wasser stehen gelassen und danach auf etwa 35 ºC abgekühlt.
5mlHefesuspension(3.1)werdenhinzugefügt.DannwirdderKolbenumge-
schüttelt, 2Std.lang ineinem Wasserbad bei38 ºbis 40ºCstehen gelassen
unddanachaufetwa20ºCabgekühlt.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—14
▼B
Sodann werden 2,5 ml Carrez-Lösung I (3.2) hinzugefügt, es wird 30 Sek.
lang geschüttelt; dann werden 2,5 ml Carrez-Lösung II (3.3) hinzugefügt
undwieder30Sek.langgeschüttelt; nunwirdmitWasserauf100mlaufge-
füllt, geschüttelt und filtriert. VomFiltrat wird eine Menge von höchstens
25 ml, die möglichst 40 bis 80 mg Lactose enthält, in einen 300-ml-Erlen-
meyerkolben abpipettiert und,wennnötig,mit Wasserauf25mlergänzt.
Es wird auf dieselbe Weise ein Blindversuch mit 5 ml Hefesuspension (3.1)
ausgeführt.
Dann wird der Gehalt an Lactose nach Luff-Schoorl wie folgt bestimmt:
Nach Zugabe von genau 25 ml Reagenz nach Luff-Schoorl (3.4) und von 2
Körnchen Bimsstein (3.5) wird unter Schütteln mit der Hand über freier
Flamme von mittlerer Höhe erhitzt, so daß die Flüssigkeit in etwa 2 Min.
zum Sieden kommt. Anschließend wird der Erlenmeyerkolben sofort auf ein
Drahtnetz mit einer Asbestscheibe, in die ein Loch von etwa 6 cm Durch-
messer gestanzt wurde, gestellt; vorher wird unter dem Drahtnetz eine
Flamme entzündet und so eingestellt, daß der Kolben nur am Boden erhitzt
wird; dann wird der Kolben mit einem Rückflußkühler verbunden. Von
diesem Augenblick an läßt man genau 10 Min. sieden, kühlt dann sofort in
kaltem Wasserabundtitriert nachetwa5Min.wiefolgt:
Zu der Flüssigkeit werden 10 ml Kaliumjodidlösung (3.6) und anschließend
sofort, aber vorsichtig (wegen der Gefahr des übermäßigen Schäumens),
25ml6NSchwefelsäure(3.7)hinzugegeben.Dannwirdmit0,1NNatrium-
thiosulfatlösung (3.8) zunächst bis zum Auftreten einer mattgelben Farbe
titriert und nach Zugabe von Stärkelösung (3.9) als Indikator die Titration
zuEndegeführt.
DiegleicheTitration wirdineinerMischungausgenau25mlReagenznach
Luff-Schoorl (3.4) und 25 ml Wasser durchgeführt nach Zugabe von 10 ml
Kaliumjodidlösung (3.6) und 25 ml 6 N Schwefelsäure (3.7), jedoch ohne
vorherigesErhitzen.
6.Berechnung der Ergebnisse
AusderbeigefügtenTabelle wirddiejenige MengeLactoseinmgabgelesen,
diederDifferenz derErgebnissebeiderTitrationen, ausgedrücktinml0,1N
Natriumthiosulfatlösung, entspricht.
Das Ergebnis entspricht dem Gehalt an wasserfreier Lactose und wird in
Hundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
Wennmehrals40v.H.vergärbareZuckervorhandensind,werdenmehrals
5mlHefesuspension(3.1)benutzt.
Tabelle für 25 ml des Reagenzes nach Luff-Schoorl
ml0,1NNa2S2O3bei2Min.Anheizen, 10Min.Sieden
0,1N
Na2S2O3Glukose,Fruktose,inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 23 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 1516 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 201971L0250—DE—13.08.1998—002.001—15
▼B
0,1N
Na2S2O3Glukose,Fruktose,inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 88,0 94,6 23
10.BESTIMMUNG VON KALIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Kalium in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
DieProbewirdveraschtunddieAscheinSalzsäuregelöst.DerKaliumgehalt
der Lösung wird flammenphotometrisch in Gegenwart von Caesiumchlorid
und Aluminiumnitrat bestimmt. Durch den Zusatz dieser Substanzen wird
eine Beeinflussung der Bestimmung durch Störelemente weitgehend verhin-
dert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a.,D:1,12
3.2. Caesiumchlorid, p.a.3.3. Aluminiumnitrat, Al(NO
3)3·9H2O,chemischrein
3.5. Kaliumchlorid, p.a.,wasserfrei3.5. Pufferlösung: 50 g Caesiumchlorid (3.2) und 250 g Aluminiumnitrat
(3.3)werdeninWassergelöst,mitWasserauf1laufgefüllt undumge-
schüttelt. DieLösungwirdinPlastikflaschen aufbewahrt.
3.6. Kalium-Standardlösung: 1,907 g Kaliumchlorid (3.4) werden in Wasser
unter Zusatz von5ml Salzsäure (3.1)gelöst, mit Wasserauf1laufge-
fülltundumgeschüttelt. DieLösungwirdinPlastikflaschen aufbewahrt.
1mldieserLösungenthält 1,00mgKalium.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Platin, Quarz oder Porzellan, eventuell mit
Deckel
4.2. Elektrischer Muffelofenmit Thermostat4.3. Flammenphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
Im allgemeinen werden 10 g der Probe, auf 10 mg genau, in eine
Veraschungsschale eingewogen und die Substanz bei 450 ºC etwa 3
Std. lang verascht. Nach dem Abkühlen spült man den Veraschungs-
rückstand quantitativ mit etwa 250 bis 300 ml Wasser, gefolgt von
50 ml Salzsäure (3.1), in einem 500-ml-Meßkolben über. Nach
Aufhören einer eventuellen Kohlendioxidentwicklung erhitzt man die
Lösung und hält sie anschließend 2 Std. lang, unter gelegentlichem
Umschütteln, auf einer Temperatur von etwa 90 ºC. Nach Abkühlen
auf Zimmertemperatur füllt man mit Wasser zur Marke auf, schütteltum und filtriert. Ein aliquoter Teil des Filtrats, der höchstens 1,0 mg
Kalium enthalten darf, wird in einen 100-ml-Meßkolben pipettiert, man
gibt 10,0 ml Pufferlösung (3.5) zu, füllt mit Wasser zur Marke auf und
schüttelt um. Bei höheren Kaliumgehalten muß die Analysenlösung vor
ZugabederPufferlösungimgeeignetenVerhältnisverdünntwerden.Als
Richtlinie bei einer Einwaage von etwa 10 gkann die folgende Tabelle
dienen:1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—16
▼B
VermutlicherKaliumgehaltder
Probe
(%K)Verdünnungsverhältnis Aliquoter Teil derLösunginml
bis0,1 — 50
0,1—0,5 — 100,5—1,0 — 5
1,0—5,0 1:10 10
5,0—10,0 1:10 5
10,0—20,0 1:20 5
Die Messung erfolgt flammenphotometrisch bei einer Wellenlänge von
763nm.
DasErgebniswirdmit HilfederEichkurve berechnet.
5.2.Eichkurve
10 ml der Standardlösung (3.6) werden in einen 250-ml-Meßkolben
pipettiert, dann wird mit Wasser aufgefüllt und umgeschüttelt. Von
dieser Lösung werden 5, 10, 15, 20 und 25 ml, entsprechend 0,2, 0,4,
0,6,0,8und1,0mgKalium,in100-ml-Meßkolbenpipettiert. DerReihe
wird ein 100-ml-Meßkolben ohne Zusatz von Standardlösung beige-
geben. Man fügt in jedem Kolben 10,0 ml der Pufferlösung (3.5)
hinzu,fülltmit.WasserzurMarkeaufundschütteltum.DieMessungen
werden wie unter 5.1 durchgeführt. Der Verlauf der Eichkurve ist im
allgemeinen bis zu einer Konzentration von 1 mg Kalium in 100 ml
Lösunglinear.
6.Berechnung der Ergebnisse
DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
Zusatz von Pufferlösung (3.5) zur Ausschaltung der Störelemente ist nicht
immer notwendig.
11.BESTIMMUNG VON NATRIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Natrium in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird verascht und die Asche in Salzsäure gelöst. Der Natriumge-
halt der Lösung wird flammenphotometrisch in. Gegenwart von
Caesiumchlorid und Aluminiumnitrat bestimmt. Durch den Zusatz dieser
Substanzen wird eine Beeinflussung der Bestimmung durch Störelemente
weitgehend verhindert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a.,D:1,123.2. Caesiumchlorid, p.a.3.3. Aluminiumnitrat, Al(NO
3)3·9H2O,chemischrein
3.4. Natriumchlorid, p.a.,wasserfrei3.5. Pufferlösung: 50 g Caesiumchlorid (3.2) und 250 g Aluminiumnitrat
(3.3)werdeninWassergelöst,mitWasserauf1laufgefüllt undumge-
schüttelt. DieLösungwirdinPlastikflaschen aufbewahrt.
3.6. Natrium-Standardlösung: 2,542 g Natriumchlorid (3.4) werden in
WasserunterZusatzvon5mlSalzsäure(3.1)gelöst,mitWasserauf1l
aufgefüllt undumgeschüttelt. DieLösungwirdinPlastikflaschen aufbe-
wahrt.1mldieserLösungenthält 1,00mgNatrium.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Platin, Quarz oder Porzellan, eventuell mit
Deckel1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—17
▼B
4.2. Elektrischer Muffelofenmit Thermostat
4.3. Flammenphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
Im allgemeinen werden 10 g der Probe, auf 10 mg genau, in eine
Veraschungsschale eingewogen und die Substanz bei 450 ºC etwa 3
Std.langverascht. EinÜberhitzen (Aufglühen)mußvermieden werden.
Nach dem Abkühlen spült man den Veraschungsrückstand quantitativ
mit etwa 250 bis 300 ml Wasser, gefolgt von 50 mlSalzsäure (3.1), in
einen 500-ml-Meßkolben über. Nach Aufhören einer eventuellen
Kohlendioxidentwicklung erhitzt man die Lösung und hält sie anschlie-
ßend 2 Std. lang, unter gelegentlichem Umschütteln, auf einer
Temperaturvonetwa90ºC.NachAbkühlenaufZimmertemperaturfüllt
man mit Wasser zur Marke auf, schüttelt um und filtriert. Ein aliquoter
Teil des Filtrats, der höchstens 1,0 mg Natrium enthalten darf, wird in
einen 100-ml-Meßkolben pipettiert, man gibt 10,0 ml Pufferlösung
(3.5) zu, füllt mit Wasser zur Marke auf und schüttelt um. Bei höheren
Natriumgehalten muß die Analysenlösung vor Zugabe der Pufferlösung
im geeigneten Verhältnis verdünnt werden. Als Richtlinie bei einer
Einwaage vonetwa10gkanndiefolgendeTabelle dienen:
VermutlicherNatriumgehalt der
Probe
(%Na)Verdünnungsverhältnis Aliquoter Teil derLösunginml
bis0,1 — 50
0,1—0,5 — 100,5—1,0 — 5
1,0—5,0 1:10 10
5,0—10,0 1:10 5
10,0—20,0 1:20 5
Die Messung erfolgt flammenphotometrisch bei einer Wellenlänge von
589nm.
DasErgebniswirdmit HilfederEichkurve berechnet.
5.2.Eichkurve
10 ml der Standardlösung (3.6) werden in einen 250-ml-Meßkolben
pipettiert, dann wird mit Wasser aufgefüllt und umgeschüttelt. Von
dieser Lösung werden 5, 10, 15, 20 und 25 ml, entsprechend 0,2, 0,4,
0,6,0,8und1,0mgNatrium,in100-ml-Meßkolbenpipettiert.DerReihe
wird ein 100-ml-Meßkolben ohne Zusatz von Standardlösung beige-
geben. Man fügt in jeden Kolben 10,0 ml der Pufferlösung (3.5) hinzu,
füllt mit Wasser zur Marke auf und schüttelt um. Die Messungen
werden wie unter 5.1 durchgeführt. Der Verlauf der Eichkurve ist im
allgemeinen bis zu einer Konzentration von 1 mg Natrium in 100 ml
Lösunglinear.
6.Berechnung der Ergebnisse
DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. BeiProduktenmiteinemGehaltvonmehrals4v.H.Natriumempfiehlt
essich,dieSubstanz2Std.langineinermit Deckel versehenen Schale
zu veraschen. Nach dem Abkühlen fügt man Wasser hinzu, verteilt den
RückstandmitHilfeeinesPlatindrahtsbiszurBildungeinerSuspension,
trocknet undveraschtnochmals 2Std.langinderbedeckten Schale.
7.2. Wenn das Produkt nur aus Mineralstoffen besteht, dann wird die
Einwaage ohnevorherigeVeraschungaufgelöst.
12.BESTIMMUNG VON ZUCKER
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung von reduzierenden Zuckern und des
Gesamtzuckers nach Inversion, berechnet als Glukose oder gegebenenfalls
multipliziert mit dem Faktor 0,95 als Saccharose. Sie ist anwendbar bei
Mischfuttermitteln. Für andere Futtermittel sind besondere Verfahren zu1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—18
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beachten. Gegebenenfalls muß der Gehalt an Lactose getrennt bestimmt
werdenunddasErgebnisbeiderBerechnungberücksichtigt werden.
2.Prinzip
Die Zucker werden in verdünntem Äthanol gelöst; die Lösung wird mit den
Reagenzien Carrez I und II geklärt. Nach dem Verdunsten des Äthanols
werden vor und nach der Inversion die Bestimmungen nach der Methode
Luff-Schoorldurchgeführt.
3.Reagenzien
3.1. Äthanol 40 v. H. (V/V), D: 0,948 bei 20 ºC, auf den Umschlagspunkt
vonPhenolphthalein eingestellt
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat Zn (CH3COO)2·2H2O und 3 g
EisessigwerdeninWassergelöstundauf100mlmitWasseraufgefüllt
3.3. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat(II), K4[Fe(CN)6]·3 H2O werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser
aufgefüllt
3.4. Methylorangelösung 0,1v.H.(G/V)
3.5. 4NSalzsäure
3.6. 0,1NSalzsäure
3.7. 0,1NNatriumhydroxidlösung
3.8. Reagenz nachLuff-Schoorl:
UntervorsichtigemUmschwenkenwirddieZitronensäurelösung(3.8.2)
in die Natriumcarbonatlösung (3.8.3) gegossen, dann wird die Kupfer-
sulfatlösung(3.8.1)hinzugefügtundzu1lmitWasseraufgefüllt.Man
läßt über Nacht stehen und filtriert. Die Normalität des so erhaltenen
Reagenzes muß nachgeprüft werden (0,1 N Cu; 2 N Na2CO3). Der
pH-Wert beträgtetwa9,4.
3.8.1. Kupfersulfatlösung: 25 g Kupfersulfat p.a., CuSO4·5H2O,
eisenfrei, werdenin100mlWassergelöst.
3.8.2. Zitronensäurelösung: 50 g Zitronensäure p.a., C6H8O7·H2O,
werdenin50mlWassergelöst.
3.8.3. Natriumcarbonatlösung: 143,8 g Natriumcarbonat p.a., wasser-
frei, werden in ungefähr 300 ml warmem Wasser gelöst. Die
Lösungwirdabgekühlt.
3.9. 0,1NNatriumthiosulfatlösung
3.10. Stärkelösung; eine Aufschlämmung von 5 g löslicher Stärke in 30 ml
Wasser wird zu 1 l siedendem Wasser hinzugefügt und 3 Min. lang
im Sieden gehalten; dann wird abgekühlt und gegebenenfalls als
Konservierungsmittel 10mgQuecksilberjodid hinzugefügt.
3.11. 6NSchwefelsäure
3.12. Kaliumjodidlösung 30v.H.(G/V)
3.13. Bimssteinkörner mit Salzsäure ausgekocht, mit Wassergewaschen und
getrocknet
3.14. Isopentanol
4.Geräte
Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr35bis40U/min.
5.Ausführung
5.1.Auflösung
2,5 g der Probe werden auf 1 mg genau in einen 250-ml-Meßkolben
eingewogen. Nach Zugabe von 200 ml Äthanol (3.1) wird der Kolben
1Std.langimSchüttelapparat geschüttelt. Sodannwerden5mlCarrez-
Lösung I (3.2) hinzugefügt, und es wird 1 Min. lang geschüttelt; dann
werden 5 ml Carrez-Lösung II (3.3) hinzugefügt und wieder 1 Min.
lang geschüttelt; nun wird mit Äthanol (3.1) zur Marke aufgefüllt,
geschüttelt und filtriert. 200 ml des Filtrats werden abpipettiert und auf
ungefähr die Hälfte des Volumens eingedampft, wobei der größte Teil
des Äthanols verdunstet. Der Abdampfrückstand wird mit heißem
Wasser in einen 200-ml-Meßkolben übergespült, abgekühlt, mit Wasser1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—19
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zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und, falls erforderlich, filtriert. Diese
Lösung wird für die Bestimmung der reduzierenden Zucker und nach
InversionzurBestimmungdesGesamtzuckers verwendet.
5.2.Bestimmung der reduzierenden Zucker
Eine Menge von höchstens 25 ml der Lösung, die weniger als 60 mg
reduzierendeZucker,ausgedrücktalsGlukose,enthält,wirdabpipettiert,
falls erforderlich mit destilliertem Wasser auf 25 ml aufgefüllt und der
Gehalt an reduzierendem Zucker nach Luff-Schoorl bestimmt. Das
ErgebniswirdinHundertteilen Glukoseausgedrückt.
5.3.Bestimmung des Gesamtzuckers nach Inversion
50 ml der Lösung werden in einen 100-ml-Meßkolben abpipettiert,
einige Tropfen Methylorangelösung (3.4) hinzugefügt und sodann
vorsichtig unter Schütteln 4 N Salzsäure (3.5) bis zum eindeutigen
Umschlagnach Rothinzugegeben. Dannwerden15ml0,1NSalzsäure
(3.6) hinzugefügt, der Kolben wird 30 Min. lang in ein Bad mit kräftig
siedendem Wasser gestellt, schnell auf die Temperatur von etwa 20 ºC
abgekühlt und 15 ml 0,1 N Natriumhydroxidlösung (3.7) hinzugefügt.
Der Kolben wird mit Wasser zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt und
eine Menge von höchstens 25 ml entnommen, die weniger als 60 mg
reduzierendeZucker,ausgedrücktalsGlukose,enthält,fallserforderlich,
wird mit Wasser auf 25 ml aufgefüllt und der Gehalt an reduzierenden
Zuckern nach Luff-Schoorl bestimmt. Das Ergebnis wird in Hundert-
teilen Glukose angegeben oder gegebenenfalls nach Multiplikation mit
demFaktor0,95alsSaccharose.
5.4.Titration nach Luff-Schoorl
25 ml Reagenz nach Luff-Schoorl (3.8) werden in einen 300-ml-Erlen-
meyerkolben pipettiert und anschließend genau 25 ml der geklärten
Zuckerlösung hinzugefügt. Nach Zugabe von 2 Körnchen Bimsstein
(3.13) wird unter Schütteln mit der Hand über freier Flamme von mitt-
lerer Höhe erhitzt, so daß die Flüssigkeit in etwa 2 Min. zum Sieden
kommt. Anschließend wird der Erlenmeyerkolben sofort auf ein Draht-
netz mit einer Asbestscheibe, in die ein Loch von etwa 6 cm
Durchmesser gestanzt wurde, gestellt; vorher wird unter dem Drahtnetz
eine Flamme entzündet und so eingestellt, daß der Kolben nur am
Boden erhitzt wird; dann wird der Kolben mit einem Rückflußkühler
verbunden. Von diesem Augenblick an läßt man genau 10 Min. sieden,
kühltdannsofortinkaltemWasserabundtitriertnachetwa5Min.wie
folgt:
Zu der Flüssigkeit werden 10 ml Kaliumjodidlösung (3.12) und
anschließendsofort,abervorsichtig(wegenderGefahrdesübermäßigen
Schäumens), 25 ml 6 NSchwefelsäure (3.11) hinzugegeben. Dannwird
mit 0,1 N Natriumthiosulfatlösung (3.9) zunächst bis zum Auftreten
einer mattgelben Farbe titriert und nach Zugabe von Stärkelösung (3.9)
alsIndikator dieTitration zuEndegeführt.
Die gleiche Titration wird in einer Mischung aus genau 25 ml Reagenz
nachLuff-Schoorl(3.8)und25mlWassernachZugabevon10mlKali-
umjodidlösung(3.12)und25ml6NSchwefelsäure(3.11)durchgeführt,
jedochohnevorherigesErhitzen.
6.Berechnung der Ergebnisse
AusderbeigefügtenTabellewirddiejenigeMengeGlukoseinmgabgelesen,
diederDifferenz derErgebnissebeiderTitrationen, ausgedrücktinml0,1N
Natriumthiosulfatlösung, entspricht.
DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Besondere Verfahren
7.1. Bei sehr stark melassehaltigen Futtermitteln und anderen wenig homo-
genen Futtermitteln werden 20 g in einen 1-l-Meßkolben eingewogen,
500 ml Wasser hinzugefügt und 1 Std. lang geschüttelt. Danach wird
mit jeweils der vierfachen Menge der Carrez-Lösungen I (3.2) und II
(3.3) wie bei 5.1 geklärt. Sodann wird mit Äthanol 80 v. H. (V/V) zur
Markeaufgefüllt,gemischtundfiltriert.IndiesemFallwirddasÄthanol
wie bei 5.1 entzogen. Bei Abwesenheit dextrinierter Stärke wird mit
Wasseraufgefüllt.
7.2. Bei Melasse und bei Futtermitteln, die reich an Zucker, aber praktisch
stärkefreisind(Johannisbrot,Zuckerrübentrockenschnitzelusw.),werden
5gineinen250-ml-Meßkolbeneingewogen,200mldestilliertesWasser
hinzugefügt und 1 Std. lang oder, falls erforderlich, länger geschüttelt.
Danach wird mit den Carrez-Lösungen I (3.2) und II (3.3) wie bei 5.11971L0250—DE—13.08.1998—002.001—20
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geklärt, mit Wasser zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und filtriert. Zur
BestimmungdesGesamtzuckersverfährt manwiebei5.3.
8.Bemerkungen
8.1. Es wird empfohlen, vor dem Erhitzen mit dem Luff-Schoorl-Reagenz
etwa 1 ml Isopentanol (3.14) hinzuzufügen (ohne das Volumen zu
berücksichtigen), umdieSchaumbildung zuvermeiden.
8.2. Die Differenz zwischen den Hundertteilen des Gesamtzuckers, nach
Inversion, ausgedrückt als Glukose, und den Hundertteilen der reduzie-
renden Zucker, ausgedrückt als Glukose, ergibt mit 0,95 multipliziert
dasErgebnisinHundertteilen Saccharose.
8.3. Wenn man den Gehalt an reduzierendem Zucker mit Ausnahme von
Milchzucker (Laktose) bestimmen will, kann man zwei Wege
einschlagen:
8.3.1. Zur annähernden Berechnung multipliziert man den aus einer
getrennten Bestimmung gefundenen Gehalt an Laktose mit
0,675. Das Ergebnis wird von dem Gehalt an reduzierendem
Zuckerabgezogen.
8.3.2. Für eine genaue Berechnung des reduzierenden Zuckers mit
AusnahmevonLaktoseistesabernotwendig,daßbeidenbeiden
endgültigen Bestimmungen die gleiche Menge der Einwaagezugrunde liegt. Die eine Bestimmung wird in einem Teil der
Lösung nach 5.1., die zweite Bestimmung wird in einem Teil
der Lösung, die man bei der Bestimmung der Laktose nach der
diesbezüglichen Methode erhält (nach Vergärung der anderen
Zuckerarten undKlärung)ausgeführt.
In beiden Fällen wird der anwesende Zucker nach Luff-Schoorl
bestimmt und in Milligramm Glukose berechnet. Diese beiden Werte
werdenvoneinander abgezogen unddie Differenz wirdaufHundertteile
derProbeumgerechnet.
Beispiel
Die beiden abpipettierten Mengen entsprechen bei jeder Bestimmung
einerProbeneinwaage von250mg.
Im ersten Fall werden 17 ml 0,1 N Natriumthiosulfatlösung verbraucht,
entsprechend 44,2 mg Glukose, im zweiten Fall werden 11 ml
verbraucht, entsprechend 27,6 mg Glukose. Die Differenz beträgt also
16,6mgGlukose.
Der Gehalt an reduzierendem Zucker ohne Laktose, berechnet als
Glukose,istdemnach:
4/C216;6
10¼6;64v :H:
Tabelle für 25 ml des Reagenzes nach Luff-Schoorl
ml0,1NNa2S2O3bei2Min.Anheizen, 10Min.Sieden
0,1N
Na2S2O3Glukose,Fruktose,inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 23 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 151971L0250—DE—13.08.1998—002.001—21
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0,1N
Na2S2O3Glukose,Fruktose,inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 2021 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 88,0 94,6 23
13.BESTIMMUNG VON THEOBROMIN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methodeerlaubt die Bestimmung desGehalts anTheobromin in Neben-
erzeugnissenausderVerarbeitungvonKakaobohnen.
2.Prinzip
Theobromin wird mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird zur Trockne
eingedampft, in Wasser gelöst und mit einem bestimmten Volumen von
Silbernitratlösung behandelt. Die freigesetzte Salpetersäure wird mit einer
Natriumhydroxidlösungtitriert.
3.Reagenzien
3.1. Chloroformp.a.
3.2. Ammoniaklösung,D:0,9583.3. Natriumsulfat p.a.,wasserfrei3.4. 0,1NNatriumhydroxidlösung
3.5. 0,1NSilbernitratlösung
3.6. Äthanolische Phenolrotlösung1v.H.(G/V)3.7. Diäthyläther
4.Gerät
500-ml-Stehkolben mitSchliffstopfen
5.Ausführung
Eine Einwaage von höchstens 10 g, die auf 1 mg genau abgewogen ist und
nicht mehr als 80 mg Theobromin enthält, wird in einen 500-ml-Stehkolben
mit Schliffstopfen gegeben. 270 ml Chloroform (3.1) und 10 ml Ammo-
niaklösung (3.2) werden hinzugefügt. Der Kolben wird verschlossen und
5Min.langkräftiggeschüttelt.Dannwerden12gwasserfreiesNatriumsulfat
(3.3) hinzugefügt, nochmals geschüttelt und bis zum nächsten Morgen
stehengelassen. Dann wird in einen 500-ml-Erlenmeyerkolben abfiltriert und
der Rückstand mit 100 ml Chloroform (3.1) gewaschen. Das Lösungsmittel
wird abdestilliert und die letzten Spuren auf einem kochenden Wasserbad
beseitigt. DerExtraktwirdmit50mlWasserversetztundaufgekocht.
Nachdem Abkühlenwirdmit Natriumhydroxidlösung(3.4)nach Zusatzvon
0,5mlPhenolrotlösung(3.6)genauneutralisiert und20mlSilbernitratlösung
(3.5) zugegeben. Die freigesetzte Salpetersäure wird mit Natriumhydroxidlö-
sung(3.4)biszumUmschlagdesIndikators(pH7,4)titriert.
6.Berechnung der Ergebnisse
1ml0,1NNaOHentspricht 18mgTheobromin.DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkung
Produkte,derenRohfettgehalt8v.H.übersteigt,sinddurcheine6Std.lange
Extraktion mit Petroläther (Kp.40ºC)zuentfetten.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—22
▼B
14.BESTIMMUNG VON HARNSTOFF
1.Zweck und Anwendungsbereich
DieMethodeerlaubtdieBestimmungdesGehaltesanHarnstoffinFuttermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird unter Zusatz eines Klärungsmittels mit Wasser geschüttelt.
Die Suspension wird filtriert. Nach Zugabe von 4-Dimethylaminobenzal-
dehyd (4-DMAB) wird der Gehalt an Harnstoff im Filtrat durch Messung
derExtinktion beieinerWellenlänge von420nmbestimmt.
3.Reagenzien
3.1. 4-Dimethylaminobenzaldehydlösung: 1,6 g 4-DMAB werden in 100 ml
Äthanolp.a.96v.H.gelöstund10mlSalzsäurep.a.(D:1,19)hinzuge-
fügt.DasReagenz hält sichnurzweiWochen.
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat (CH3COO)2Zn · 2 H2O und 3 g
EisessigwerdeninWassergelöstundauf100mlmitWasseraufgefüllt.
3.3. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat (II), K4[Fe(CN)6]·
3H2OwerdeninWassergelöstundauf100mlmit Wasseraufgefüllt.
3.4. Aktivkohlep.a.,keinenHarnstoffadsorbierend(zuprüfen).3.5. Harnstofflösungp.a.0,1v.H.(G/V).
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr35bis40U/Min.4.2. Reagenzgläser: 160×16mm,mit Schliffstopfen4.3. Spektralphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
2 g der Probe werden auf 1 mg genau eingewogen und mit 1 g Aktiv-
kohle(3.4)ineinen500-ml-Meßkolbengebracht.Hierzuwerden400ml
Wasserundje 5mlCarrez-I- und-II-Lösungen(3.2)(3.3)gegeben und
30 Min. lang in dem Schüttelapparat rotiert. Dann wird mit Wasser bis
zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und filtriert. Vonden klaren und farb-
losen Filtraten werden je 5 ml in je ein Reagenzglas mit Schliffstopfen
pipettiert, 5,0 ml 4-DMAB-Lösung (3.1) zugesetzt und gemischt. Die
Gläser werdenin einem Wasserbad bei 20ºCtemperiert. Nach 15Min.
wird die Extinktion der Probelösung im Vergleich mit der Blindprobe-
lösungderReagenzien imSpektralphotometer bei420nmgemessen.
5.2.Eichkurve
Volumen von 1, 2, 4, 5 und 10 ml Harnstofflösung (3.5) werden
entnommen, in 100-ml-Meßkolben gebracht und bis zur Marke mit
Wasser aufgefüllt. 5 ml jeder Lösung werden mit je 5 ml 4-DMAB-
Lösung (3.1) gemischt. Die Extinktion wird im Vergleich mit einer
Lösung,freivonHarnstoff,die5ml4-DMABund5mlWasserenthält,
wieobenangegeben, gemessen.EineEichkurve wirdaufgestellt.
6.Berechnung der Ergebnisse
Mit Hilfe der Eichkurve ist die Menge an Harnstoff der Versuchsprobe zu
bestimmen. DasErgebniswirdinHundertteilen derProbeausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei einem Gehalt an Harnstoff, höher als 3 v. H., ist die Einwaage auf
1gzuerniedrigenbzw.dieAnfangslösungsoweitzuverdünnen,daßin
500mlnichtmehrals50mgHarnstoffenthalten sind.
7.2. Bei niederen Gehalten an Harnstoff soll die Einwaage erhöht werden,
soweitmaneinFiltratklarundfarblosherstellen kann.
7.3. Enthält die Substanz einfache Stickstofformen, insbesondere Amino-
säuren,soistdieMessungderExtinktion bei435nmzuempfehlen.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—23
▼M2
16.BESTIMMUNG DER UREASEAKTIVITÄTVON SOJAPRODUKTEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung der Ureaseaktivität in Sojaprodukten.
DerTestdientzurFeststellungeinesungenügenden Toastungsgrades.
2.Prinzip
ManbewertetdieUreaseaktivitätdurchdieMengeAmmoniak-Stickstoff,die
von 1 g Substanz pro Min. bei 30 ºC aus einer Harnstofflösung freigesetzt
wird.
3.Reagenzien
3.1. 0,1NSalzsäure3.2. 0,1NNatriumhydroxidlösung3.3. 0,05 M Phosphatpufferlösung, enthaltend 4,45 g Dinatriumhydrogen-
phosphat (Na
2HPO4·2H2O) und 3,40 g Kaliumdihydrogenphosphat
(KH2PO4)in1000ml.
3.4. Gepufferte Harnstofflösung, frisch hergestellt, enthaltend 30,0 g Harn-
stoffin1000mlPhosphatpufferlösung(3.3);pH-Wert 6,9—7,0.
4.Geräte
4.1. Titrierautomat für potentiometrische Titration oder hochempfindliches
pH-Meter(0,02pH)mit Magnetrührer
4.2. Wasserbadmit Thermostat auf30ºCgenaueingestellt4.3. Reagenzgläser: 150×18mm,mit Schliffstopfen.
5.Ausführung
Etwa 10 g der Probe werden so fein zerkleinert (z. B. mit einer Mokka-
mühle), daß sie durch ein Sieb von 0,2 mm Maschenweite hindurchgehen.
0,2 g dieser Probe werden auf 1 mg genau in ein Reagenzglas mit Schliff-
stopfen eingewogen und mit 10 ml gepufferter Harnstofflösung (3.4)
versetzt. Das Reagenzglas wird sogleich verschlossen und nach kräftigem
Schütteln in das genau auf 30 ºC eingestellte Wasserbad gebracht, worin
man es genau 30 Min. lang beläßt. Unmittelbar danach gibt man 10 ml
0,1 N Salzsäure (3.1) hinzu, kühlt schnell auf 20 ºC ab und überführt den
Inhalt desReagenzglases quantitativ in ein Titriergefäß, wobei man zweimal
mit je 5 ml Wasser nachspült. Dann wird sofortund schnell mit 0,1 N
Natriumhydroxidlösung(3.2)bispH4,7elektrometrischmitHilfeeinerGlas-
elektrode titriert.
EinBlindversuch wirdwiefolgtdurchgeführt:
Man gibt in ein Reagenzglas mit Schliffstopfen schnell hintereinander 0,2 g
derauf1mggenaugewogenenProbe,10ml0,1NSalzsäure(3.1)und10ml
gepufferte Harnstofflösung(3.4),kühlt sofortinEiswasserabundbeläßt das
Glas 30 Min. darin. Sodann wird der Inhalt des Reagenzglases unter den
oben genannten Bedingungen in das Titriergefäß überführt und mit 0,1 N
Natriumhydroxidlösung(3.2)bispH4,7titriert.
6.Berechnung der Ergebnisse
DieUreaseaktivität istnachfolgender Formelzuberechnen:
1;4b/C0a ðÞ
30/C1E¼mgN
g/C1Min :bei30ºC
wobei a = verbrauchte ml0,1NNatriumhydroxidlösungimVersuch,
b = verbrauchte ml0,1NNatriumhydroxidlösungimBlindversuch,E = Einwaage ing.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—24
▼B
▼B
7.Bemerkungen
7.1. DieMethodeistaufeineUreaseaktivitätvonhöchstens1mgN/g·Min.
bei 30 ºC abgestellt. Bei Produkten mit höherer Aktivität kann die
Einwaage bisauf50mgherabgesetzt werden.
7.2. Produkte, deren Rohfettgehalt 10 v. H. übersteigt, sind vorher durch
kalte Extraktion zuentfetten.1971L0250—DE—13.08.1998—002.001—25