1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 1
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►B RICHTLINIE DES RATES
vom 26. Juni 1990
zur Festlegung der tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das Verbringen von Equiden und für
ihre Einfuhr aus Drittländern
(90/426/EWG)
(ABl. L 224 vom 18.8.1990, S. 42)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 90/425/EWG des Rates vom 26. Juni 1990 L 224 29 18.8.1990
►M2Richtlinie 91/496/EWG des Rates vom 15. Juli 1991 L 268 56 24.9.1991
►M3Entscheidung 92/130/EWG der Kommission vom 13. Februar 1992 L 47 26 22.2.1992
►M4Richtlinie 92/36/EWG des Rates vom 29. April 1992 L 157 28 10.6.1992
►M5Entscheidung 2001/298/EG der Kommission vom 30. März 2001 L 102 63 12.4.2001
►M6Entscheidung 2002/160/EG der Kommission vom 21. Februar 2002 L 53 37 23.2.2002
Geändert durch:
►A1Beitrittsakte Österreichs, Finnlands und Schwedens C241 21 29.8.1994
(angepaßt durch den Beschluß 95/1/EG, Euratom, EGKS des Rates) L 1 1 1.1.1995
Berichtigt durch:►
C1Berichtigung, ABl. L 296 vom 27.10.1990, S. 66 (90/426/EWG)
▼B
RICHTLINIE DES RATES
vom 26. Juni 1990
zur Festlegung der tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das
Verbringen von Equiden und für ihre Einfuhr aus Drittländern
(90/426/EWG)
DER RAT DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-
meinschaft, insbesondere auf Artikel 43,
auf Vorschlag der Kommission (1),
nach Stellungnahme des Europäischen Parlaments (2),
nach Stellungnahme des Wirtschafts- und Sozialausschusses (3),
in Erwägung nachstehender Gründe:
Equiden sind als lebende Tiere in der Liste der in Anhang II des
Vertrages aufgeführten Erzeugnisse enthalten.
Um eine sinnvolle Entwicklung der Zucht von Equiden zu gewährlei-
sten und dadurch die Produktivität dieses Wirtschaftszweigs zu
erhöhen, sind auf Gemeinschaftsebene Vorschriften für das Verbringen
von einem Mitgliedstaat in einen anderen zu erlassen.
Die Zucht von Equiden, insbesondere von Pferden, ist im allgemeinen
ein Teilbereich der landwirtschaftlichen Tätigkeit. Sie dient einem Teil
der landwirtschaftlichen Bevölkerung als Einkommensquelle.
Um den innergemeinschaftlichen Handel mit Equiden zu fördern,
müssen die zwischen den Mitgliedstaaten bestehenden Unterschiedeim Bereich der Tiergesundheitsvorschriften beseitigt werden.
Damit sich der innergemeinschaftliche Handel harmonisch entwickeln
kann, muß eine Gemeinschaftsregelung für die Einfuhren aus Drittlän-dern festgelegt werden.
Bei registrierten Equiden, die mit einem Dokument zu ihrer Identifizie-
rung versehen sind, sollten auch die Bedingungen ihrer Verbringung im
Inland geregelt werden.
Um zum Handel zugelassen zu werden, müssen die Equiden bestimmte
viehseuchenrechtliche Anforderungen erfüllen, die gewährleisten, daß
die Ausbreitung ansteckender Krankheiten vermieden wird. Es
erscheint insbesondere angebracht, eine mögliche Regionalisierung dereinschränkenden Maßnahmen vorzusehen.
Zu diesem Zweck sind auch Bedingungen für den Transport dieser
Tiere festzulegen.
Um die Einhaltung dieser Anforderungen zu gewährleisten, ist die
Ausstellung einer Gesundheitsbescheinigung durch einen amtlichenTierarzt vorzusehen, die die Equiden bis zu ihrem Bestimmungsortbegleitet.
Die Bestimmungen zur Organisation der Kontrollen durch den Bestim-
mungsmitgliedstaat und die daraus zu ziehenden Folgerungen sowie diezu treffenden Schutzmaßnahmen sind im Rahmen der zu erlassendenRegelung über Veterinärkontrollen im innergemeinschaftlichen Handelmit lebenden Tieren im Hinblick auf die Verwirklichung des Binnen-
marktes festzulegen.
Außerdem ist vorzusehen, daß die Kommission eigene Kontrollen
durchführen kann. Diese Kontrollen sind in Zusammenarbeit mit denzuständigen nationalen Behörden vorzunehmen.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 2
(1) ABl. Nr. C 327 vom 30. 12. 1989, S. 61.
(2) ABl. Nr. C 149 vom 18. 6. 1990.
(3) ABl. Nr. C 62 vom 12. 3. 1990, S. 46.
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Eine Gemeinschaftsregelung für die Einfuhren aus Drittländern setzt
die Aufstellung einer Liste der Drittländer oder Teile von Drittländernvoraus, aus denen Equiden eingeführt werden können.
Bei der Entscheidung über die Aufnahme in diese Liste sind allgemeine
Kriterien zugrunde zu legen, etwa der Gesundheitszustand des Viehs,
die Organisation und die Befugnisse der Veterinärbehörden und die
viehseuchenrechtlichen Vorschriften in dem betreffenden Drittland.
Ferner ist die Einfuhr von Equiden aus Drittländern zu verbieten, die
nicht oder seit zu kurzer Zeit frei sind von Tierkrankheiten, die eine
ernste Gefahr für den Viehbestand in der Gemeinschaft darstellen. Dasgleiche gilt für die Einfuhr aus Drittländern, in denen Impfungen gegensolche Krankheiten vorgenommen werden.
Die allgemeinen Bedingungen für die Einfuhr aus Drittländern sind
durch besondere Bedingungen zu ergänzen, die entsprechend dergesundheitlichen Lage in dem jeweiligen Land festzulegen sind. Dadiese besonderen Bedingungen unter Zugrundelegung technischer und
unterschiedlicher Kriterien festgelegt werden müssen, ist hierzu ein
flexibles und schnelles Gemeinschaftsverfahren vorzusehen, in dessenRahmen die Kommission und die Mitgliedstaaten eng zusammenar-beiten.
Die Vorlage einer nach einem gemeinsamen Muster erstellten Beschei-
nigung bei der Einfuhr ist ein wirksames Mittel, um die Anwendungder Gemeinschaftsregelung zu gewährleisten. Da diese Regelungbesondere und für die einzelnen Drittländer unterschiedliche Bestim-
mungen vorsehen kann, sind die Muster der Bescheinigung
dementsprechend zu erstellen.
Die Veterinärsachverständigen der Gemeinschaft haben zu überprüfen,
ob Anforderungen der vorliegenden Richtlinie insbesondere in denDrittländern eingehalten werden.
Bei der Einfuhr müssen Herkunft und Gesundheitszustand der Equiden
kontrolliert werden.
Die allgemeinen Bestimmungen für die bei der Einfuhr durchzufüh-
renden Kontrollen müssen sich in ein Gesamtkonzept einfügen.
Jeder Mitgliedstaat muß die Möglichkeit haben, Einfuhren aus einem
Drittland unverzüglich zu verbieten, wenn diese eine Gefahr für die
Gesundheit der Tiere darstellen können. In diesem Fall muß unbe-schadet der etwaigen Änderungen der Liste der Länder, die in dieGemeinschaft ausführen dürfen, unverzüglich die Haltung allerMitgliedstaaten gegenüber dem betreffenden Drittland koordiniert
werden.
Die Bestimmungen dieser Richtlinie müssen im Zusammenhang der
Vollendung des Binnenmarktes überprüft werden.
Es ist ein Verfahren vorzusehen, durch das eine enge und wirksame
Zusammenarbeit zwischen den Mitgliedstaaten und der Kommission
im Ständigen Veterinärausschuß gewährleistet wird —
HAT FOLGENDE RICHTLINIE ERLASSEN:
KAPITEL I
Allgemeine Bestimmungen
Artikel 1
Diese Richtlinie legt die tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das
Verbringen von Equiden von einem Mitgliedstaat in einen anderenund für ihre Einfuhr aus Drittländern fest.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 3
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Artikel 2
Im Sinne dieser Richtlinie sind
a) Betrieb: landwirtschaftlicher Betrieb, Schulungsbetrieb, Stall oder
ganz allgemein jede Räumlichkeit oder Anlage, in der üblicherweiseEquiden — gleichgültig zu welchem Verwendungszweck —gehalten oder aufgezogen werden;
b) Equiden: als Haustiere gehaltene oder freilebende Pferde —
einschließlich Zebras — und Esel und ihre Kreuzungen;
c) registrierte Equiden: alle Equiden, die gemäß der Richtlinie 90/427/
EWG (
1) registriert und durch ein Dokument zur Identifizierung
gekennzeichnet sind, das von der Tierzuchtbehörde oder eineranderen zuständigen Behörde des Ursprungslands des Equiden, diedas Stutbuch oder das Zuchtregister des betreffenden Equiden führt,oder einer internationalen Vereinigung bzw. Organisation, die
Pferde im Hinblick auf Wettkämpfe und Rennen führt, ausgestellt
wird;
d) Schlachttiere: Equiden, die dazu bestimmt sind, entweder direkt
oder über einen Markt bzw. eine zugelassene Sammelstelle in einen
Schlachthof verbracht und dort geschlachtet zu werden;
e) Zucht- und Nutzequiden: andere Equiden als die unter den Buch-
staben c) und d) genannten;
f) pferdepestfreier Mitgliedstaat bzw. pferdepestfreies Drittland: jeder
Mitgliedstaat bzw. jedes Drittland, in dessen Gebiet kein klinischer,serologischer (bei nichtgeimpften Tieren) oder epidemiologischer
Nachweis für das Auftreten von Pferdepest während der beiden
vorangegangenen Jahre vorliegt und in dem im Verlauf der vorange-gangenen zwölf Monate keine Impfung gegen diese Krankheitvorgenommen worden ist;
g) anzeigepflichtige Krankheiten: die in Anhang I aufgeführten Krank-
heiten;
h) amtlicher Tierarzt: der von der zuständigen Zentralbehörde des
Mitgliedstaats oder eines Drittlands bezeichnete Tierarzt;
i) zeitweilige Zulassung: Status eines aus einem Drittland stammenden
registrierten Equiden, der für einen von der Kommission nach dem
Verfahren des Artikels 24 entsprechend der tiergesundheitlichen
Lage im Herkunftsland festzulegenden Zeitraum in dem Gebiet derGemeinschaft zugelassen wird, wobei dieser Zeitraum weniger als90 Tage betragen muß.
KAPITEL II
Vorschriften für das Verbringen von Equiden
Artikel 3
Ein Mitgliedstaat genehmigt das Verbringen von registrierten Equiden
in seinem Gebiet und versendet Equiden in das Gebiet eines anderenMitgliedstaats nur dann, wenn sie die Voraussetzungen der Artikel 4und 5 erfüllen.
Die zuständigen Behörden der Bestimmungsmitgliedstaaten können
jedoch allgemeine oder beschränkte Ausnahmen zugestehen für denVersand von Equiden, die
— zu Sport- oder Freizeitzwecken in der Nähe der Binnengrenzen der
Gemeinschaft geritten oder geführt werden,
— an kulturellen oder ähnlichen Veranstaltungen oder an Tätigkeiten
teilnehmen, die von dazu befugten örtlichen Einrichtungen in derNähe der Binnengrenzen der Gemeinschaft ausgerichtet werden,
— sich ausschließlich zu Weidezwecken oder zum Arbeitseinsatz
vorübergehend in der Nähe von Binnengrenzen der Gemeinschaftbefinden.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 4
(1) Siehe Seite 55 dieses Amtsblatts.
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Die Mitgliedstaaten, die eine solche Genehmigung erteilen, unterrichten
die Kommission über den Inhalt der gewährten Ausnahmeregelungen.
Artikel 4
(1) Die Equiden müssen bei der Inspektion frei von klinischen
Anzeichen einer Krankheit sein. Die Inspektion darf nicht früher als
48 Stunden vor der Verladung erfolgen. Diese Inspektion wird jedochbei registrierten Equiden unbeschadet des Artikels 6 nur für den inner-gemeinschaftlichen Handel verlangt.
(2) Unbeschadet der Anforderungen des Absatzes 5 für die anzeige-
pflichtigen Krankheiten muß der amtliche Tierarzt sich bei derInspektion vergewissern, daß aus den Umständen, unter anderem ausden Erklärungen des Besitzers bzw. des Züchters, nicht der Schlußgezogen werden kann, daß die Tiere in Kontakt mit Equiden
gekommen sind, die in den letzten 15 Tagen vor der Inspektion an
einer Infektion oder einer ansteckenden Krankheit gelitten haben.
(3) Es darf sich nicht um Tiere handeln, die im Rahmen eines von
einem Mitgliedstaat durchgeführten Seuchentilgungsprogramms zur
Ausmerzung bestimmt sind.
(4) Die Tiere sind wie folgt zu kennzeichnen:
i) registrierte Pferde anhand eines Dokuments zu ihrer Identifizierung
gemäß der Richtlinie 90/427/EWG, in dem insbesondere die Einhal-
tung der Absätze 5 und 6 sowie des Artikels 5 zu bestätigen ist. DieGültigkeit dieses Dokuments ist während der Dauer der in Absatz 5sowie in Artikel 5 vorgesehenen Verbote vom amtlichen Tierarztauszusetzen. Es wird nach der Schlachtung des registrierten Pferdesan die Behörde zurückgegeben, die es ausgestellt hat. Die Durch-
führungsvorschriften zu dieser Ziffer werden von der Kommission
nach dem Verfahren des Artikels 24 erlassen;
ii) Zucht- und Nutzequiden nach einer von der Kommission nach dem
Verfahren des Artikels 24 festzulegenden Kennzeichnungsmethode.
Bis diese Methode zur Anwendung kommt, bleiben die amtlich
zugelassenen einzelstaatlichen Kennzeichnungsmethodenanwendbar, sofern sie binnen drei Monaten nach Genehmigungdieser Richtlinie der Kommission und den anderen Mitgliedstaatenmitgeteilt werden.
(5) Neben dem Erfordernis im Sinne von Artikel 5 dürfen die
Equiden nicht aus einem Betrieb stammen, über den eine der folgendenSperrmaßnahmen verhängt wurde:
a) Sind nicht alle der in einem Betrieb vorhandenen Tiere der für die
betreffende Krankheit empfänglichen Art geschlachtet oder getötetworden, so muß die Sperre des Herkunftsbetriebs für folgende
Mindestdauer gelten:
— sechs Monate bei allen Tieren, bei denen Verdacht auf
Beschälseuche besteht, gerechnet ab dem Zeitpunkt des letztenKontakts oder der letzten Kontaktmöglichkeit mit krankenEquiden. Bei Hengsten muß die Sperre bis zur Kastration fort-dauern;
— sechs Monate bei Rotz und Pferdeenzephalomyelitis, gerechnet
ab dem Zeitpunkt, an dem die befallenen Tiere ausgemerztworden sind;
— bei infektiöser Anämie muß die Sperre so lange dauern, bis —
nachdem die befallenen Tiere ausgemerzt worden sind — sich
bei den übrigen Tieren auf zwei Coggins-Tests in einem Abstandvon drei Monaten ein negativer Befund ergeben hat;
— sechs Monate seit dem letzten Fall von Stomatitis vesicularis;
— einen Monat bei Tollwut, gerechnet ab dem letzten festgestellten
Krankheitsfall;
— 15 Tage bei Milzbrand, gerechnet ab dem letzten festgestellten
Krankheitsfall.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 5
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b) Sind alle in einem Betrieb vorhandenen Tiere der für die betreffende
Krankheit empfänglichen Art geschlachtet oder getötet und dieRäumlichkeiten desinfiziert worden, so beträgt die Dauer der Sperre
30 Tage, gerechnet ab dem Zeitpunkt, an dem die Tiere aus dem
Betrieb entfernt und die Räumlichkeiten desinfiziert wurden; beiMilzbrand beträgt die Sperrdauer jedoch 15 Tage.
Die zuständigen Behörden können für Hippodrome und Rennbahnen
Ausnahmen von diesen Sperrmaßnahmen vorsehen; sie unterrichten
die Kommission über die Art der Ausnahmeregelungen.
(6) Erstellt ein Mitgliedstaat ein fakultatives oder obligatorisches
Programm zur Bekämpfung einer bei Equiden vorkommenden Krank-
heit oder hat er ein solches Programm erstellt, so kann er dieses
Programm der Kommission innerhalb von sechs Monaten ab derBekanntgabe dieser Richtlinie vorlegen und macht dabei insbesonderefolgende Angaben:
— Situation hinsichtlich der Krankheit in seinem Gebiet;
— Begründung des Programms unter Berücksichtigung der Schwere
der Krankheit und des Kosten-Nutzen-Verhältnisses;
— geographisches Gebiet, in dem das Programm durchgeführt werden
soll;
— unterschiedlicher Status für die Betriebe, für die jeweilige Art zu
erfüllende Normen sowie Testverfahren;
— die Kontrollverfahren für das Programm;
— Konsequenzen des Statusverlusts eines Betriebs, aus welchen
Gründen auch immer;
— Maßnahmen, die zu ergreifen sind, wenn sich bei den gemäß dem
Programm durchgeführten Kontrollen ein positiver Befund ergibt;
— keine Diskriminierungen zwischen dem Handel im Gebiet des
betroffenen Mitgliedstaats und dem innergemeinschaftlichenHandel.
Die Kommission prüft die von den Mitgliedstaaten übermittelten
Programme. Gegebenenfalls genehmigt sie diese unter Beachtung der
in Unterabsatz 1 genannten Kriterien nach den Verfahren des Artikels24. Nach demselben Verfahren können die allgemeinen oderbegrenzten ergänzenden Garantien festgelegt werden, die im innerge-meinschaftlichen Handel verlangt werden können. Diese Garantien
dürfen nicht über diejenigen hinausgehen, die der Mitgliedstaat im
nationalen Rahmen anwendet.
Das von dem Mitgliedstaat vorgelegte Programm kann nach dem
Verfahren des Artikels 25 geändert oder ergänzt werden. Nach
demselben Verfahren kann die Änderung oder Ergänzung eines zuvor
genehmigten Programms oder der gemäß Unterabsatz 2 festgelegtenGarantien genehmigt werden.
Artikel 5
(1) Die nicht im Sinne von Artikel 2 Buchstabe f) pferdepestfreien
Mitgliedstaaten dürfen Equiden aus einem gemäß Absatz 2 des vorlie-
genden Artikels als befallen geltenden Teil ihres Gebiets nur unter den
in Absatz 3 des vorliegenden Artikels genannten Voraussetzungenversenden.
(2) a) Ein Teil des Hoheitsgebiets eines Mitgliedstaats gilt als von
Pferdepest befallen, wenn
— ein klinischer, serologischer (bei nichtgeimpften Tieren) und/
oder epidemiologischer Nachweis für das Auftreten von
Pferdepest während der beiden vorangegangenen Jahrevorliegt oder
— während der vorangegangenen zwölf Monate gegen Pferde-
pest geimpft worden ist.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 6
▼M4
▼M4
b) Der von Pferdepest befallene Teil des Hoheitsgebiets muß
mindestens die folgenden Zonen umfassen:
— eine Schutzzone von mindestens 100 km im Umkreis eines
jeden Herdes,
— eine mindestens 50 km breite Kontrollzone um die Schutz-
zone herum, in der während der vorangegangenen zwölf
Monate nicht gegen Pferdepest geimpft worden ist.
c) Die Kontrollregeln für die Bekämpfungsmaßnahmen in den
Gebieten und Teilgebieten im Sinne der Buchstaben a) und b)sowie die entsprechenden Ausnahmeregelungen sind in der
Richtlinie 92/35/EWG (
1) niedergelegt.
d) Alle geimpften Equiden in der Schutzzone müssen gemäß
Artikel 6 Absatz 1 der Richtlinie 92/35/EWG registriert undgekennzeichnet werden.
Auf diese Impfung ist in dem Dokument zur Identifizierung der
Equiden und/oder auf der Gesundheitsbescheinigung eindeutighinzuweisen.
(3) Ein Mitgliedstaat darf von dem in Absatz 2 Buchstabe b)
genannten Gebiet nur Equiden versenden, die folgende Anforderungenerfüllen:
a) Sie dürfen nur während bestimmter Zeiten des Jahres versandt
werden, die gemäß dem Verfahren des Artikels 25 nach Maßgabeder Aktivität der krankheitsübertragenden Insekten festzulegen sind;
b) sie dürfen am Tag der in Artikel 4 Absatz 1 genannten Inspektion
keine klinischen Anzeichen von Pferdepest aufweisen;
c) — wenn sie nicht gegen Pferdepest geimpft worden sind, müssen
sie einem Komplementfixierungstest in bezug auf Pferdepestmit negativem Befund unterzogen worden sein, der nach
Maßgabe des Anhangs D zweimal, und zwar in einem zeitlichen
Abstand von 21 bis 30 Tagen und beim zweiten Mal innerhalbvon zehn Tagen vor dem Versand, durchzuführen ist;
— wenn sie geimpft worden sind, so darf diese Impfung nicht
innerhalb der beiden letzten Monate vorgenommen worden seinund müssen sie dem Fixierungstest nach Anhang D mit denvorgenannten zeitlichen Abständen unterzogen worden sein,ohne daß eine Zunahme von Antikörpern festgestellt worden
ist. Die Kommission kann gemäß dem Verfahren des Artikels
24 nach der Stellungnahme des Ständigen Veterinärausschussesandere Kontrollmethoden anerkennen;
d) sie müssen während einer Mindestdauer von 40 Tagen vor dem
Versand in einer Quarantänestation gehalten worden sein;
e) sie müssen während der Quarantänezeit und während des Transports
von der Quarantänestation zum Versandort vor krankheitsübertra-genden Insekten geschützt worden sein.
Artikel 6
Die Mitgliedstaaten führen eine alternative Kontrollregelung mit
Garantien ein, die denjenigen entsprechen, welche in Artikel 4 Absatz5 für das Verbringen von Equiden und registrierten Equiden in ihrGebiet vorgesehen sind, und können sich insbesondere vermittels desDokuments zur Identifizierung der Equiden gegenseitig eine Abwei-
chung von Artikel 4 Absatz 1 Satz 2 sowie Artikel 8 Absatz 1 zweiter
Gedankenstrich zugestehen.
Sie unterrichten hierüber die Kommission.
Artikel 7
(1) Die Equiden müssen unverzüglich — entweder unmittelbar oder
über einen zugelassenen Markt oder eine zugelassene Sammelstelle1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 7
(1) ABl. Nr. L 157 vom 10. 6. 1992, S. 19.▼B
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gemäß Artikel 3 Absatz 6 der Richtlinie 64/432/EWG — aus dem
Herkunftsbetrieb in Transportmitteln oder -behältnissen, die ordnungs-gemäß gereinigt und desinfiziert worden sind, zum Bestimmungsort
befördert werden; das Desinfektionsmittel und die Häufigkeit der
Reinigung und Desinfektion werden vom Versandmitgliedstaatbestimmt. Die Transportfahrzeuge müssen so beschaffen sein, daß tier-ische Abgänge, Einstreu oder Futter während des Transports nichtheraussickern oder -fallen können. Der Transport ist so auszuführen,
daß ein wirksamer Schutz der Gesundheit und das Wohlbefinden der
Tiere gewährleistet sind.
(2) Der Bestimmungsmitgliedstaat kann allgemeine oder begrenzte
Abweichungen von bestimmten Anforderungen des Artikels 4 Absatz5 zugestehen, sofern das Tier eine besondere Kennzeichnung trägt, ausder hervorgeht, daß es zum Schlachten bestimmt ist, und in der
Gesundheitsbescheinigung auf diese Abweichungen hingewiesen wird.
Im Fall der Gewährung einer derartigen Abweichung müssen Schlacht-
tiere unmittelbar zu dem bezeichneten Schlachtbetrieb befördert unddort innerhalb einer Frist, die fünf Tage nach der Ankunft im Schlacht-betrieb nicht überschreiten darf, geschlachtet werden.
(3) Der amtliche Tierarzt muß die Kennummer bzw. die Nummer
des Dokuments zur Identifizierung des geschlachteten Equiden in ein
Verzeichnis eintragen und der zuständigen Behörde des Versandortes
auf ihren Antrag hin eine Bescheinigung über die erfolgte Schlachtungder Equiden übermitteln.
Artikel 8
(1) Die Mitgliedstaaten tragen dafür Sorge, daß folgende Auflagen
erfüllt werden:
— Beim Verbringen registrierter Equiden aus einem Betrieb muß das
Dokument zur Identifizierung nach Artikel 4 Absatz 4 mitgeführtwerden sowie zusätzlich die Bescheinigung gemäß Anhang B,wenn die Equiden für den innergemeinschaftlichen Handelbestimmt sind;
— bei der Beförderung von Zucht-, Nutz- und Schlachtequiden muß
eine Gesundheitsbescheinigung nach Anhang C mitgeführt werden.
Die Bescheinigung bzw. das Blatt des Dokuments zur Identifizierung
mit den gesundheitsrelevanten Angaben darf — unbeschadet von
Artikel 6 — nicht früher als 48 Stunden bzw. muß spätestens amletzten Werktag vor der Verladung in mindestens einer der Amtsspra-chen des Bestimmungsmitgliedstaats ausgestellt werden. DieBescheinigung ist zehn Tage lang gültig. Die Bescheinigung muß auseinem einzigen Blatt bestehen.
(2) Einfuhren von anderen als registrierten Tieren können anstatt mit
der Einzelbescheinigung nach Absatz 1 zweiter Gedankenstrich miteiner einzigen Gesundheitsbescheinigung je Sendung erfolgen.
Artikel 9
Die Vorschriften der Richtlinie 90/425/EWG des Rates vom 26. Juni
1990 zur Regelung der veterinärrechtlichen und tierzüchterischen
Kontrollen im innergemeinschaftlichen Handel mit lebenden Tieren
und Erzeugnissen im Hinblick auf den Binnenmarkt (
1) finden Anwen-
dung, insbesondere betreffend die Ursprungskontrollen, dieOrganisation der vom Bestimmungsmitgliedstaat durchzuführendenKontrollen und das weitere Vorgehen im Anschluß an diese Kontrollensowie die zu ergreifenden Schutzmaßnahmen.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 8
(1) ABl. Nr. L 224 vom 18. 8. 1990, S. 29.▼M1
▼B
Artikel 10
Veterinärsachverständige der Kommission können, soweit dies für die
einheitliche Anwendung der Richtlinie erforderlich ist, in Zusammenar-
beit mit den zuständigen einzelstaatlichen Behörden Kontrollen an Ortund Stelle durchführen. Die Kommission unterrichtet die Mitglied-staaten über die Ergebnisse dieser Kontrollen.
Der Mitgliedstaat, in dessen Gebiet eine solche Kontrolle durchgeführt
wird, gewährt den Sachverständigen jede Unterstützung bei der Durch-
führung ihrer Aufgaben.
Die Durchführungsbestimmungen zu diesem Artikel werden nach dem
Verfahren des Artikels 24 erlassen.
KAPITEL III
Vorschriften für die Einfuhren aus Drittländern
Artikel 11
(1) Die in die Gemeinschaft eingeführten Equiden müssen die in den
Artikeln 12 bis 16 genannten Voraussetzungen erfüllen.
(2) Bis zum Inkrafttreten der nach den Artikeln 12 bis 16 erlassenen
jeweiligen Beschlüsse wenden die Mitgliedstaaten auf die Einfuhrenvon Equiden aus Drittländern Vorschriften an, die denjenigen, die sich
aus der Anwendung von Kapitel II ergeben, mindestens gleichwertig
sind.
Artikel 12
(1) Eingeführte Equiden müssen aus Drittländern oder Teilen von
Drittländern stammen, die in einer Liste aufgeführt sind, welche ineine besondere Spalte der gemäß Artikel 3 der Richtlinie 72/462/EWG
erstellten Liste zu übernehmen ist.
(2) Die Verfahren und Kriterien für die Erstellung, Änderung und
Veröffentlichung der Liste der Drittländer oder der Teile von Drittlän-dern nach Artikel 3 der Richtlinie 72/462/EWG finden auf die für dieEinfuhr von Equiden geltende Liste Anwendung.
Artikel 13
(1) Eingeführte Equiden müssen aus Drittländern stammen,
a) die frei sind von Pferdepest;
b) die seit zwei Jahren frei sind von Venezolanischer Pferdeenzephalo-
myelitis (VEE);
c) die seit sechs Monaten frei sind von Beschälseuche und Rotz.
(2) Die Kommission kann nach dem Verfahren des Artikels 24
a) beschließen, daß Absatz 1 nur für einen Teil des Gebiets eines Dritt-
landes gilt.
Werden die Auflagen hinsichtlich der Pferdepest regionalisiert, so
müssen zumindest die in Artikel 5 Absätze 2 und 3 vorgesehenenMaßnahmen eingehalten werden;
b) zusätzliche Garantien für Krankheiten verlangen, die für die
Gemeinschaft als exotisch gelten.
Artikel 14
Vor dem Tag ihrer Verladung zum Versand nach dem Bestimmungs-
mitgliedstaat müssen die Equiden im Gebiet oder in einem Teil des
Gebiets eines Drittlandes oder, bei Regionalisierung, in dem gemäßArtikel 13 Absatz 2 Buchstabe a) festgelegten Teil des Gebiets unun-terbrochen während eines Zeitraums gehalten worden sein, der bei derGenehmigung der gemäß Artikel 15 zu fassenden Beschlüsse festge-setzt wird.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 9
▼B
Sie müssen aus einem unter tierärztlicher Aufsicht stehenden Betrieb
stammen.
Artikel 15
Equiden dürfen nur dann aus dem Gebiet eines in der Liste gemäß
Artikel 12 Absatz 1 aufgeführten Drittlandes oder aus einem gemäß
Artikel 13 Absatz 2 Buchstabe a) festgelegten Teil eines Gebiets eines
solchen Drittlandes eingeführt werden, wenn sie neben den Auflagendes Artikels 13
a) die nach dem Verfahren des Artikels 24 entsprechend der jeweiligen
Art und den Kategorien von Equiden festgelegten tierseuchenrecht-
lichen Bedingungen für die Einfuhr von Equiden aus dembetreffenden Land erfüllen.
Als Bezugsgrundlage für die Festlegung der tierseuchenrechtlichen
Bedingungen nach dem ersten Unterabsatz gelten die in den Arti-keln 4 und 5 festgelegten Normen;
b) darüber hinaus im Fall von Drittländern, die während mindestens
sechs Monaten nicht frei von Stomatitis vesicularis und Virusarte-riitis sind, folgende Bedingungen erfüllen:
i) Die Equiden müssen aus einem Betrieb stammen, der seit
mindestens sechs Monaten frei von Stomatitis vesicularis ist,
und vor ihrer Verbringung auf einen serologischen Test negativreagiert haben;
ii) bei Virusarteriitis müssen die Hengste unbeschadet des Artikels
19 Ziffer ii) auf einen serologischen Test, einen Virusisolations-
test oder jeden anderen Test negativ reagiert haben, der nach
dem Verfahren des Artikels 24 anerkannt wird und gewährleistet,daß das Tier frei von dieser Krankheit ist.
Die Kommission kann nach dem Verfahren des Artikels 24 nach
Stellungnahme des Ständigen Veterinärausschusses die Katego-
rien männlicher Equiden einschränken, für die dieses
Erfordernis gilt.
Artikel 16
(1) Die Equiden sind gemäß Artikel 4 Absatz 4 zu kennzeichnen;
für sie muß eine Bescheinigung mitgeführt werden, die von einemamtlichen Tierarzt des versendenden Drittlandes ausgestellt wordenist. Diese Bescheinigung muß
a) am Tag der Verladung der Tiere zum Versand in den Bestimmungs-
mitgliedstaat — bei registrierten Pferden am letzten Werktag vorder Verladung — ausgestellt worden sein;
b) mindestens in einer der Amtssprachen des Bestimmungsmitglied-
staats und in einer der Amtssprachen des Mitgliedstaats ausgestelltworden sein, in dem die Einfuhrkontrolle vorgenommen wird;
c) in der Urschrift mitgeführt werden;
d) bestätigen, daß die Tiere die Voraussetzungen dieser Richtlinie
erfüllen und den Vorschriften entsprechen, die in Anwendung dieserRichtlinie für die Einfuhren aus Drittländern festgelegt werden;
e) aus einem einzigen Blatt bestehen;
f) für einen einzigen Empfänger bzw. bei Schlachttieren für eine
ordnungsgemäß gekennzeichnete Sendung bestimmt sein.
Die Mitgliedstaaten unterrichten die Kommission, wenn sie von
dieser Möglichkeit Gebrauch machen.
(2) Die Bescheinigung muß mit Hilfe eines Formblatts ausgestellt
werden, das einem nach dem Verfahren des Artikels 24 erstelltenMuster entspricht.
Artikel 17
Tierärztliche Sachverständige der Mitgliedstaaten und der Kommission
kontrollieren an Ort und Stelle, ob die Bestimmungen dieser Richtlinie,insbesondere Artikel 12 Absatz 2, tatsächlich eingehalten werden.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 10
▼B
Ergeben sich bei einer Inspektion nach diesem Artikel schwerwiegende
Sachverhalte zu Lasten des zugelassenen Betriebs, so unterrichtet dieKommission hiervon sofort die Mitgliedstaaten und erläßt umgehend
eine Entscheidung zur vorläufigen Aussetzung der Zulassung. Eine
endgültige Entscheidung erfolgt nach dem Verfahren des Artikels 25.
Die Sachverständigen der Mitgliedstaaten, die diese Kontrollen durch-
führen sollen, werden von der Kommission auf Vorschlag derMitgliedstaaten bezeichnet.
Die Kontrollen werden im Auftrag der Gemeinschaft vorgenommen,
die die entsprechenden Kosten trägt.
Periodizität und Einzelheiten der Durchführung dieser Kontrollen
werden nach dem Verfahren des Artikels 24 festgelegt.
Artikel 18
(1) Schlachttiere müssen sofort nach ihrem Eingang in dem Bestim-
mungsmitgliedstaat entweder unmittelbar oder über einen Markt bzw.
eine Sammelstelle in einen Schlachthof verbracht werden und entspre-
chend den tierseuchenrechtlichen Erfordernissen innerhalb einer Fristgeschlachtet werden, die bei der Genehmigung der gemäß Artikel 15zu fassenden Beschlüsse festgelegt wird.
(2) Unbeschadet der besonderen Voraussetzungen, die gegebenfalls
nach dem Verfahren des Artikels 24 festgelegt werden, kann diezuständige Behörde des Bestimmungsmitgliedstaats aufgrund tierseu-
chenrechtlicher Erfordernisse den Schlachthof bestimmen, in den die
Tiere verbracht werden müssen.
Artikel 19
Nach dem Verfahren des Artikels 24
i) kann die Kommission die Einfuhr aus einem Drittland oder einem
Teil eines Drittlandes auf einzelne Tierarten oder Tiergruppenbeschränken;
ii) legt die Kommission abweichend von Artikel 15 fest, unter
welchen besonderen Voraussetzungen gestattet werden kann, daßregistrierte oder für besondere Zwekke bestimmte Equiden zeit-weilig im Gebiet der Gemeinschaft zugelassen oder nach
zeitweiliger Ausfuhr wiedereingeführt werden dürfen;
iii) bestimmt die Kommission die Voraussetzungen, unter denen eine
zeitweilige Zulassung in eine endgültige Zulassung umgewandelt
werden darf.
KAPITEL IV
Schlußbestimmungen
Artikel 22
Die Bestimmungen dieser Richtlinie und insbesondere Artikel 4 Absatz
1 Satz 2 sowie die Artikel 6, 8 und 21 werden vor dem 1. Januar 1993im Rahmen der Vorschläge für die Vollendung des Binnenmarktes,über die der Rat mit qualifizierter Mehrheit beschließt, überprüft.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 11
▼M2
▼B
▼B
Artikel 23
Die Anhänge zu dieser Richtlinie werden von der Kommission nach
dem Verfahren des Artikels 25 geändert.
Artikel 24
(1) Wird auf das in diesem Artikel festgelegte Verfahren Bezug
genommen, so befaßt der Vorsitzende des mit Beschluß 68/361/EWGdes Rates (
1) eingesetzten Ständigen Veterinärausschusses, im
folgenden „Ausschuß“ genannt, diesen Ausschuß unverzüglich vonsich aus oder auf Antrag des Vertreters eines Mitgliedstaats.
(2) Der Vertreter der Kommission unterbreitet dem Ausschuß einen
Entwurf der zu treffenden Maßnahmen. Der Ausschuß gibt seine Stel-lungnahme zu diesem Entwurf innerhalb einer Frist ab, die derVorsitzende unter Berücksichtigung der Dringlichkeit der betreffendenFrage festsetzen kann. Die Stellungnahme wird mit der Mehrheit abge-
geben, die in Artikel 148 Absatz 2 des Vertrages für die Abnahme der
vom Rat auf Vorschlag der Kommission zu fassenden Beschlüssevorgesehen ist. Bei der Abstimmung im Ausschuß werden die Stimmender Vertreter der Mitgliedstaaten gemäß dem vorgenannten Artikelgewogen. Der Vorsitzende nimmt an der Abstimmung nicht teil.
(3) Die Kommission erläßt die beabsichtigten Maßnahmen, wenn sie
mit der Stellungnahme des Ausschusses übereinstimmen.
(4) Stimmen die beabsichtigten Maßnahmen mit der Stellungnahme
des Ausschusses nicht überein oder liegt keine Stellungnahme vor, sounterbreitet die Kommission dem Rat unverzüglich einen Vorschlagfür die zu treffenden Maßnahmen. Der Rat beschließt mit qualifizierter
Mehrheit.
Hat der Rat innerhalb von drei Monaten nach seiner Befassung keinen
Beschluß gefaßt, so werden die vorgeschlagenen Maßnahmen von derKommission erlassen, es sei denn, der Rat hat sich mit einfacher Mehr-heit gegen diese Maßnahmen ausgesprochen.
Artikel 25
(1) Wird auf das in diesem Artikel festgelegte Verfahren Bezug
genommen, so befaßt der Vorsitzende unverzüglich den Ausschuß von
sich aus oder auf Antrag eines Mitgliedstaats.
(2) Der Vertreter der Kommission unterbreitet dem Ausschuß einen
Entwurf der zu treffenden Maßnahmen. Der Ausschuß gibt seine Stel-lungnahme zu diesem Entwurf innerhalb einer Frist von zwei Tagen ab.
Die Stellungnahme wird mit der Mehrheit abgegeben, die in Artikel
148 Absatz 2 des Vertrages für die Annahme der vom Rat aufVorschlag der Kommission zu fassenden Beschlüsse vorgesehen ist.Bei der Abstimmung im Ausschuß werden die Stimmen der Vertreterder Mitgliedstaaten gemäß dem vorgenannten Artikel gewogen. DerVorsitzende nimmt an der Abstimmung nicht teil.
(3) Die Kommission erläßt die beabsichtigten Maßnahmen, wenn sie
mit der Stellungnahme des Ausschusses übereinstimmen.
(4) Stimmen die beabsichtigten Maßnahmen mit der Stellungnahme
des Ausschusses nicht überein oder liegt keine Stellungnahme vor, sounterbreitet die Kommission dem Rat unverzüglich einen Vorschlag
für die zu treffenden Maßnahmen. Der Rat beschließt mit qualifizierter
Mehrheit.
Hat der Rat innerhalb von 15 Tagen nach seiner Befassung keinen
Beschluß gefaßt, so werden die vorgeschlagenen Maßnahmen von derKommission erlassen, es sei denn, der Rat hat sich mit einfacher Mehr-heit gegen diese Maßnahmen ausgesprochen.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 12
(1) ABl. Nr. L 255 vom 18. 10. 1968, S. 23.
▼B
Artikel 26
Für Kapitel III gilt Artikel 34 der Richtlinie 72/462/EWG.
Artikel 27
Die Mitgliedstaaten erlassen die erforderlichen Rechts- und Verwal-
tungsvorschriften, um dieser Richtlinie spätestens am 1. Januar 1992nachzukommen. Sie setzen die Kommission davon in Kenntnis.
Artikel 28
Diese Richtlinie ist an die Mitgliedstaaten gerichtet.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 13
▼B
ANHANG A
ANZEIGEPFLICHTIGE KRANKHEITEN
Folgende Krankheiten sind anzeigepflichtig:
— Beschälseuche
— Rotz— Pferdeenzephalomyelitis (alle Formen, einschließlich der VEE)— Infektiöse Anämie— Tollwut
— Milzbrand
— Pferdepest— Stomatitis vesicularis1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 14
▼M3
ANHANG B
►(1)M51990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 15
▼M3
ANHANG C
1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 16
▼M3
►(1)A1
►(2)M51990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 17
▼M6
ANHANG D
AFRIKANISCHE PFERDEPEST
DIAGNOSTIK
Reagenzien für die nachstehend beschriebenen Enzym-Immuntests (enzyme-
linked immunosorbent assays — ELISA) können vom Referenzlabor der Euro-
päischen Gemeinschaft oder von den OIE-Referenzlaboratorien für Afrikanische
Pferdepest bezogen werden.
1. KOMPETITIVER ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN
GEGEN DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV)
(PFLICHTTEST)
Die kompetitive ELISA-Methode wird zum Nachweis spezifischer APV-
Antikörper in Equidenseren angewandt. Das Breitspektrum-, polyklonale
Meerschweinchen-Anti-APV Immunserum (im Folgenden „Meerschwein-
chen-Antiserum“ genannt) ist serogruppenspezifisch und eignet sich zum
Nachweis aller bekannten Serotypen des AP-Virus.
Testprinzip ist die Unterbrechung der Reaktion zwischen dem APV-Antigen
und einem Meerschweinchen-Antiserum mit einer Testserumprobe. APV-
Antikörper im Testserum konkurrieren mit den Antikörpern im Meerschwein-
chen-Antiserum und bewirken so eine Abschwächung der erwarteten
Farbreaktion (nach Zugabe von enzymmarkiertem Anti-Meerschweinchen-
Antikörper und Substrat). Seren können bei einer einfachen Verdünnung
von 1:5 getestet (Test einer Serum-Einfachverdünnung) oder, um Verdün-
nungsendpunkte zu erhalten, titriert werden (Test von Serumtitrationen).
Hemmwerte von über 50 % gelten als positiv.
Das im Folgenden beschriebene Testprotokoll wird vom Regionalen Refe-
renzlabor für Afrikanische Pferdepest in Pirbright, Vereinigtes Königreich,
angewandt.
1.1.Testverfahren
1.1.1.Vorbereitung der Platten
1.1.1.1. ELISA-Platten mit Antigen, aus infizierten Zellkulturen extra-
hiert und in Karbonat-Bikarbonat-Puffer mit einem pH-Wert
von 9,6 verdünnt, beschichten und über Nacht bei 4 ºC inku-
bieren.
1.1.1.2. Vertiefungen leeren und Platten dreimal mit phosphatgepuf-
ferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS) mit einem pH-
Wert von 7,2-7,4 abspülen und auf Saugpapier abklopfen.
1.1.2.Kontrollvertiefungen
1.1.2.1. Positive Kontrollseren in zweifachen Verdünnungsreihen, von
1:5 bis 1:640 über Reihe 1 verteilt in Blocking-Puffer (PBS
mit einem Gehalt an 0,5 % (v/v) Tween 20, 5 % (w/v) Mage-
rmilchpulver (Cadbury's MarvelTM) und 1 % (v/v) Serum
ausgewachsener Rinder) titrieren, bis ein Endvolumen von
50µl/Vertiefung erreicht ist.
1.1.2.2. 50 µl des negativen Kontrollserums, 1:5 verdünnt (10 µl
Serum + 40 µl Blocking-Puffer), in Vertiefungen A und B der
Reihe 2 geben.
1.1.2.3. 100 µl/Vertiefung Blocking-Puffer in Vertiefungen C und D der
Reihe 2 geben (BLANK).
1.1.2.4. 150 µl Blocking-Puffer in Vertiefungen E, F, G und H der
Reihe 2 geben (Meerschweinchen-Kontrolle).
1.1.3.Test einer Serum-Einfachverdünnung
1.1.3.1. Jedes Testserum, im Verhältnis 1:5 in Blocking-Puffer
verdünnt, in Doppelvertiefungen der Reihen 3 bis 12 geben
(10µl Seren + 40 µl Blocking-Puffer).
oder
1.1.4.Test von Serumtitrationen
1.1.4.1. Eine zweifache Verdünnungsreihe von jeder Testprobe (1:5 bis
1:640) in Blocking-Puffer anlegen, über acht Vertiefungen
einzelner Reihen (3 bis 12) verteilt.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 18
▼M6
anschließend
1.1.5. 50 µl Meerschweinchen-Antiseren, in Blocking-Puffer vorver-
dünnt, in alle Vertiefungen geben, ausgenommen die BLANK-
Vertiefungen der ELISA-Platte (alle Vertiefungen haben jetzt
ein Endvolumen von 100 µl).
1.1.5.1. Bei 37 ºC für eine Stunde auf einem Orbitalschüttler inku-
bieren.
1.1.5.2. Platten dreimal waschen und wie vorstehend vorgegeben
abklopfen.
1.1.5.3. 50 µl Kaninchen-Anti-Meerschweinchen-Meerrettichperoxidase-
Konjugat, in Blocking-Puffer vorverdünnt, in jede Vertiefung
geben.
1.1.5.4. Bei 37 ºC für eine Stunde im Orbitalschüttler inkubieren.1.1.5.5. Platten dreimal waschen und wie vorstehend vorgegeben
abklopfen.
1.1.6.Substrat — Chromogen
Die Chromogen OPD-Lösung (OPD = Orthophenyldiamin)
unmittelbar vor der Verwendung nach Herstellerspezifikationen
(0,4 mg/ml in sterilem destilliertem Wasser) anlegen. Substrat
(Wasserstoffperoxid = H
2O2) zugeben, bis eine Endkonzentra-
tion von 0,05 % (v/v) (1:2 000 bei einer 30%igen H2O2-
Lösung) erreicht ist. 50 µl der OPD-Lösung in jede Vertiefung
geben, und die Platten auf dem Arbeitstisch für 10 Minuten bei
Raumtemperatur stehen lassen. Die Reaktion durch Zugabe von
50µl/Vertiefung 1M Schwefelsäure (H2SO4) stoppen.
1.1.7.Ablesen
Ergebnis spektrophotometrisch bei 492 nm ablesen.
1.2.Ergebnisauswertung
1.2.1. Mittels geeigneter Software die OD-Werte (OD = optische
Dichte) und, ausgehend von dem für die vier Meerschweinchen-
serum-Kontrollvertiefungen verzeichneten Durchschnittswert, den
Hemmungsprozentsatz (percentage inhibition — PI) für Test- und
Kontrollseren, ausdrucken. Anhand der als OD- und PI-Werte
ausgedrückten Daten lässt sich bestimmen, ob der Test innerhalb
akzeptabler Grenzen durchgeführt wurde. Die oberen Kontroll-
grenzen (upper control limits — UCL) und die unteren
Kontrollgrenzen (lower control limits — LCL) für die Meer-
schweinchenserum-Kontrolle liegen zwischen den OD-Werten
1,4 bzw. 0,4. Der auf einem Hemmungsprozentsatz (PI) von
50 % basierende Endpunkttiter für die Positivkontrolle sollte
(innerhalb eines Bereichs von 1:120 bis 1:480) 1:240 betragen.
Testplatten, die die genannten Kriterien nicht erfüllen, werden
verworfen. Ist der Serumtiter der Positivkontrolle jedoch größer
als 1 in 480 und sind die Testproben nach wie vor negativ, so
können die negativen Testproben akzeptiert werden.
Die doppelt angelegten Vertiefungen der Negativkontrolle und
doppelt angelegten Vertiefungen der BLANK-Kontrolle sollten
PI-Werte zwischen + 25 % und – 25 % bzw. zwischen + 95 %
und + 105 % zeigen. Werte außerhalb dieser Grenzbereiche
machen das Plattenergebnis zwar nicht ungültig, lassen jedoch
absehen, dass sich eine Hintergrundfärbung ausbildet.
1.2.2. Der diagnostische Schwellenwert (Grenzwert) für Testseren ist
50 % (PI 50 %). Proben mit PI-Werten über 50 % sind positiv,
Proben mit PI-Werten unter 50 % sind negativ.
Proben mit PI-Werten unter und über dem Schwellenwert bei
doppelt angelegten Vertiefungen gelten als zweifelhaft. Sie
können in einer Einfachverdünnung und durch Titrierung neu
analysiert werden. Auch Positivproben sollten titriert werden, um
einen Anhaltspunkt über den Grad der Positivität zu erhalten.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 19
▼M6
Schema der Einfachverdünnung
1 2 3456789 1 0 1 1 1 2
+Kont-
r.Testseren
A 1:5 – Kontr. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
B 1:10 – Kontr. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
C 1:20 BLANK
D 1:40 BLANK
E 1:80 MS-Kontr.
F 1:160 MS-Kontr.
G 1:320 MS-Kontr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
H 1:640 MS-Kontr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
– Kontr. = Negativkontrolle
+ Kontr. = Positivkontrolle
MS-Kontr. = Meerschweinchenkontrolle
Schema der Serumtitrierung
1 2 3 456789 1 0 1 11 2
+Kont-
r.Testseren
A 1:5 – Kontr. 1:5 1:5
B 1:10 – Kontr. 1:10 1:10
C 1:20 BLANK 1:20 1:20
D 1:40 BLANK 1:40 1:40
E 1:80 MS-Kontr. 1:80 1:80
F 1:160 MS-Kontr. 1:160 1:160
G 1:320 MS-Kontr. 1:320 1:320
H 1:640 MS-Kontr. 1:640 1:640
– Kontr. = Negativkontrolle
+ Kontr. = contrôle positif.
MS-Kontr. = Meerschweinchenkontrolle
2. INDIREKTER ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN GEGEN
DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV) (PFLICHT-
TEST)
Der nachstehend beschriebene Test entspricht den Verfahrensvorschriften
gemäß Kapitel 2.1.11 des Handbuchs der OIE mit Normenempfehlungen zu
Untersuchungsmethoden und Vakzinen, vierte Ausgabe, 2000.
Aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit und Spezifität wurde zum Nachweis
von APV-Antikörpern das rekombinante VP7 Protein verwendet. Es ist
außerdem stabil und nicht infektiös.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 20
▼M6
2.1.Testverfahren:
2.1.1.Festphase:
2.1.1.1. ELISA-Platten mit rekombinantem APV-4 VP7, in Karbonat-
Bikarbonat-Puffer mit einem pH-Wert von 9,6 verdünnt,
beschichten. Platten über Nacht bei 4 ºC inkubieren.
2.1.1.2. Platten fünfmal mit destilliertem Wasser, dem 0,01 % (v/v)
Tween 20 gesetzt wurde (Waschlösung), waschen. Die Platten
auf saugfähigem Material leicht abklopfen, um restliche Wasch-
lösung zu entfernen.
2.1.1.3. Die Platten (200 µl/Vertiefung) mit phosphatgepufferter physio-
logischer Kochsalzlösung (PBS) + 5 % (w/v) Magermilch
(Nestle Dry Skim MilkTM) für eine Stunde bei 37 ºC blockieren.
2.1.1.4. Blocking-Lösung wegschütten, und Platten auf saugfähigem
Material leicht abklopfen.
2.1.2.Testproben:
2.1.2.1. Serumtestproben sowie positive und negative Kontrollseren im
Verhältnis 1:25 in PBS + 5 % (w/v) Magermilch + 0,05 % (v/
v) Tween 20 verdünnen, 100 µl je Vertiefung. Für eine Stunde
bei 37 ºC inkubieren.
Zur Titrierung eine zweifache Verdünnungsreihe, beginnend mit
1:25 (100 µl/Vertiefung und ein Serum je Plattenreihe),
anlegen. Mit den positiven und negativen Kontrollen ebenso
verfahren. Für eine Stunde bei 37 ºC inkubieren.
2.1.2.2. Platten wie unter 2.1.1.2 vorgegeben waschen.2.1.3.Konjugat:
2.1.3.1. In jede Vertiefung 100 µl Meerrettichperoxidase-Anti-Pferd-
Gammaglobulin-Konjugat, in PBS + 5 % Milch + 0,05 %
Tween 20 mit einem pH-Wert von 7,2 verdünnt, einpipettieren.
Für eine Stunde bei 37 ºC inkubieren.
2.1.3.2. Platten wie unter 2.1.1.2 vorgegeben waschen.2.1.4.Chromogen/Substrat:
2.1.4.1. In jede Vertiefung 200 µl Chromogen-/Substratlösung
[10 ml 80,6 DMAB (Dimethylaminobenzyldehyd) + 10 ml 1,56
MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazolinehydrazone
hydrochlorid) + 5 µlH
2O2] geben.
Nach ungefähr 5 bis 10 Minuten (bevor sich die negativen
Kontrollen zu verfärben beginnen) die Farbentwicklung durch
Zugabe von 50 µl3 NH2SO4stoppen.
Andere Substrate wie ABTS (2,2 ′-Azino-bis-[3-Ethylbenzothia-
zolin-6-Sulfonsäure]), TMB (Tetramethylbenzidin) oder OPD
(Orthophenyldiamin) können ebenfalls benutzt werden.
2.1.4.2. Platten bei 600 nm (oder 620 nm) ablesen.
2.2.Auswertung der Ergebnisse:
2.2.1. Durch Addition von 0,6 zum Wert der Negativkontrolle den
Grenzwert (cut-off value) berechnen. (0,6 entspricht der aus einer
Gruppe von 30 negativen Seren abgeleiteten Standardabwei-
chung).
2.2.2. Testproben mit Absorptionswerten unter dem Grenzwert gelten
als negativ.
2.2.3. Testproben mit Absorptionswerten + 0,15 über dem Grenzwert
gelten als positiv.
2.2.4. Testproben mit intermediären Absorptionswerten sind zweifel-
haft; zur Bestätigung des Testergebnisses muss der Test
wiederholt werden.
3. BLOCKING-ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN GEGEN
DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV) (PFLICHT-
TEST)
Der Blocking-ELISA ist eine serologische Methode zum Nachweis spezifi-
scher APV-Antikörper in Seren empfänglicher Arten. VP7 ist das wichtigste
antigene APV-Protein und ist innerhalb der neun Serotypen konserviert. Da1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 21
▼M6
der monoklonale Antikörper (MAK) ebenfalls gegen das VP7 gerichtet ist,
gewährleistet der Test ein hohes Niveau an Empfindlichkeit und Spezifität.
Außerdem ist das rekombinante VP7-Antigen vollkommen unschädlich und
garantiert somit ein hohes Maß an Sicherheit.
Testprinzip ist die Unterbrechung der Reaktion zwischen dem rekombi-
nantem VP7 als an die ELISA-Platte gebundenem Antigen und dem VP7-
spezifischen konjugierten monoklonalen Antikörper. Antikörper in den Test-
seren blockieren die Reaktion zwischen Antigen und MAK. Dieser Vorgang
manifestiert sich als Abschwächung der Farbintensität.
Der im Folgenden beschriebene Test wird vom Referenzlabor der Europäi-
schen Gemeinschaft für Afrikanische Pferdepest in Algete, Spanien,
angewandt.
3.1.Testverfahren:
3.1.1.ELISA-Platten
3.1.1.1. Platten mit rekombinantem APV-4 VP7, in Karbonat-Bikar-
bonat-Puffer mit einem pH-Wert von 9,6 verdünnt beschichten
und über Nacht bei 4 ºC inkubieren.
3.1.1.2. Platten fünfmal mit phosphatgepufferter physiologischer Koch-
salzlösung (PBS) mit einem Gehalt an 0,05 % (v/v) Tween 20
(PBST) waschen.
3.1.1.3. Platten mit einer Stabilisierungslösung behandeln (um eine
langfristige Lagerung bei + 4 ºC ohne Aktivitätsverlust zu
ermöglichen), und auf Saugpapier trocknen klopfen.
3.1.2.Testproben und Kontrollen
3.1.2.1. Für Screening-Tests: Testseren und Kontrollen im Verhältnis
1:10 direkt auf der Platte in PBST
verdünnen, so dass ein Endvolumen
von 100 µl/Vertiefung vorliegt. Für
eine Stunde bei 37 ºC inkubieren.
3.1.2.2. Für die Titrierung: Eine Verdünnungsreihe von Testseren
und positiven Kontrollen (100 µl/
Vertiefung) von 1:10 bis 1:1280 in 2
Verdünnungsschritten anlegen (über
acht Vertiefungen verteilt). Die Nega-
tivkontrolle in einer Verdünnung von
1:10 testen.
3.1.3.Konjugat
In jede Vertiefung 50 µl der Gebrauchsverdünnung der Meerret-
tich-Peroxidase-konjugierten monoklonalen Antikörper (mAk
reaktiv gegen VP7), geben und vorsichtig mischen, um ein
homogenes Ergebnis zu gewährleisten. Für 30 Minuten bei
37 ºC inkubieren.
3.1.4. Platten fünfmal mit PBST waschen und auf Saugpapier
trocknen.
3.1.5.Chromogen/Substrat
100µl Chromogen-/Substratlösung [1 ml ABTS (2,2 ′-Azino-
bis-[3-Ethylbenzothiazolin-6-Sulfonsäure]) 5 mg/ml + 9 ml
Substrat-Puffer (0,1 M Citrat-Phosphat-Puffer mit pH 4 und
einem Gehalt an 0,03 % H2O2] in jede Vertiefung geben und
für 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Die Farbent-
wicklung durch Zugabe von 100 µl 2 %igem (w/v) SDS
(Natriumdodecylsulfat) in jede Vertiefung stoppen.
3.1.6.Ablesen
Das Testergebnis bei 405 nm in einem ELISA-Ablesegerät
ablesen.
3.2.Auswertung der Ergebnisse
3.2.1.Testgültigkeit
Der Test ist gültig, wenn die optische Dichte (OD) der negativen
Kontrolle (NK) über 1,0 und die OD der positiven Kontrolle (PK)
unter 0,2 liegt.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 22
▼M6
3.2.2.Grenzwertberechnung
Positiver Grenzwert = NK - ((NK - PK) × 0,3)
Negativer Grenzwert = NK - ((N - PK) × 0,2),
wobei NK der OD der negativen Kontrolle und PK der OD der
positiven Kontrolle entspricht.
3.2.3.Auswertung der Ergebnisse
Proben mit einem OD-Wert unter dem positiven Grenzwert
sollten als APV-positiv gewertet werden.
Proben mit einem OD-Wert über dem negativen Grenzwert
sollten als APV-negativ gewertet werden.
Proben mit einem OD-Wert zwischen den beiden Grenzwerten
gelten als zweifelhaft und nach zwei bis drei Wochen sollte neues
Serum der betreffenden Tiere wieder getestet werden.1990L0426 — DE — 23.02.2002 — 007.001 — 23