1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 1
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►B ZWEITE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 18. November 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futter-
mitteln
(71/393/EWG)
(ABl. L 279 vom 20.12.1971, S. 7)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 73/47/EWG der Kommission vom 5. Dezember 1972 L 83 35 30.3.1973
►M2Richtlinie 81/680/EWG der Kommission vom 30. Juli 1981 L 246 32 29.8.1981
►M3Richtlinie 84/4/EWG der Kommission vom 20. Dezember 1983 L 15 28 18.1.1984
►M4Richtlinie 98/64/EG der Kommission vom 3. September 1998 L 257 14 19.9.1998
▼B
ZWEITE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 18. November 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln
(71/393/EWG)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-
meinschaft,
gestützt auf die Richtlinie des Rates vom 20. Juli 1970 über die Einfüh-
rung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren und Analysemethoden
für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1), insbesondere auf
Artikel 2,
in Erwägung nachstehender Gründe:Die oben genannte Richtlinie bestimmt, daß die amtlichen Untersu-
chungen von Futtermitteln zur Feststellung, ob die auf Grund derRechts- und Verwaltungsvorschriften festgelegten Anforderungenhinsichtlich Beschaffenheit und Zusammensetzung der Futtermittel
erfüllt sind, nach gemeinschaftlichen Probenahmeverfahren und Analy-
semethodendurchgeführt werden .
Die Richtlinie Nr. 71/250/EWG der Kommission vom 15. Juni 1971(
2)
hat bereits eine Reihe von Analysemethoden festgelegt. Nach demStand der seitdem durchgeführten Arbeiten ist es nunmehr geboten,eine zweite Serie von Analysemethoden festzulegen.
Die in dieser Richtlinie vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Ständigen Futtermittelausschusses —
HAT FOLGENDE RICHTLINIE ERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaatenschreibenvor, daß die An alysenfür die amtliche
Untersuchung von Futtermitteln auf ihren Gehalt an Feuchtigkeit, stick-
stoffhaltigen Basen, Gesamtphosphor und Rohfett nach den in derAnlage zu dieser Richtlinie beschriebenen Methoden durchgeführtwerden.
Artikel 2
Die Mitgliedstaaten setzen spätestens zum 1. Januar 1973 die erforder-
lichen Rechts- und Verwaltungsvorschriften in Kraft, um denBestimmungen dieser Richtlinie nachzukommen. Sie setzen dieKommission unverzüglich hiervon in Kenntnis.
Artikel 3
Diese Richtlinie ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 2
(1) ABl. Nr. L 170 vom 3. 8. 1970, S. 2.
(2) ABl. Nr. L 155 vom 12. 7. 1971, S. 13.▼M2
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ANLAGE
1.BESTIMMUNG VON FEUCHTIGKEIT
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Feuchtigkeitsgehalts von Futtermit-
teln.►M1Sie bezieht sich nicht auf die Untersuchung von
Milcherzeugnissen als Einzelfuttermittel, von Mineralstoffen und von
Mischungen, die überwiegend aus Mineralstoffen bestehen, von tierischen
und pflanzlichen Fetten und Ölen sowie von Ölsaaten und Ölfrüchten im
Sinne der Verordnung Nr. 136/66/EWG des Rates vom 22. September 1966
über die Errichtung einer gemeinsamen Marktorganisation für Fette(1).◄
Die Methode zur Bestimmung des Feuchtigkeitsgehalts der Ölsaaten und
-früchte wird in der Anlage III der Verordnung (EWG) Nr. 1470/68 der
Kommission vom 23. September 1968 über die Entnahme und Verkleinerung
vonProbensowie über die Bestimmun g des Gehalts der ÖlsaatenanÖl,
Fremdbestandteilen und Feuchtigkeit(2) festgelegt.
2.Prinzip
Die Probe wird unter definierten Bedingungen getrocknet, die von der Art
des Futtermittels abhängen. Der Gewichtsverlust wird ermittelt. Bei festen
Futtermitteln mit einem hohen Feuchtigkeitsgehalt ist eine zusätzliche
Vortrocknung erforderlich.
3.Geräte
3.1 Zerkleinerungsgerät aus einem Material, das keine Feuchtigkeit absor-
biert, leicht zu reinigen ist, eine schnelle und gleichmäßige
Zerkleinerung ermöglicht, ohne eine merkbare Erwärmung hervorzu-
rufen, so weit wie möglich den Kontakt mit der Außenluft verhindert
und den unter 4.1.1 und 4.1.2 gestellten Forderungen entspricht (z. B.
Mikroschlagkreuzmühlen, Mikrozerkleinerer mit Wasserkühlung, zerleg-
bare Kegelmühlen, langsam laufende Kegelmühlen und
Zahnscheibenmühlen);
3.2. Analysenwaage mit 0,5 mg Ablesegenauigkeit;
3.3. getrocknete Gefäße aus korrosionsbeständigem Metall oder Glas, mit
luftdicht schließenden Deckeln; die Nutzfläche muß eine solche Vertei-
lung der Probe ermöglichen, daß etwa 0,3 g auf 1 cm2kommen;
3.4. elektrisch beheizter, temperaturgeregelter Trockenschrank (± 1 ºC), der
eine schnelle Regelung der Temperatur gewährleistet und eine gute
Lüftung besitzt (1);
3.5. elektrisch beheizter regulierbarer Vakuumtrockenschrank mit einer
Ölpumpe, der entweder mit einer Vorrichtung für die Zufuhr warmer
und getrockneter Luft oder mit einem Trocknungsmittel (z. B. Calciu-
moxid) versehenist;
3.6. Exsikkator mit dicker, perforierter Platte aus Metall oder aus Porzellan,
der ein wirksames Trocknungsmittel enthält.
4.Verfahren
NB: Die Verfahren, die in diesem Abschnitt beschrieben werden, müssen
sofort nach der Öffnung der Packungen, die die Proben enthalten,
durchgeführt werden.
Die Analysen sind mindestens doppelt auszuführen.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 3
(1) ABl. Nr. 172 vom 30. 9. 1966, S. 3025/66.
(2) ABl. Nr. L 239 vom 28. 9. 1968, S. 2.
(3) Für die Trocknung von Getreide, Mehl, Grütze und Grieß soll der Trockenschrank eine
solche Wärmekapazität haben, daß er, wenn er auf eine Temperatur von 131 ºC einge-
stellt worden ist, diese Temperatur in weniger als 45 Minuten wieder erreicht, nachdem
die Höchstzahl gleichzeitig zu trocknender Proben hineingestellt wurde.Die Ventilation soll so beschaffen sein, daß wenn alle Weichweizenproben, die derSchrank enthalten kann, zwei Stunden lang gleichzeitig getrocknet werden, die Erge-bnisse mit Bezug auf die nach 4stündiger Trocknung erzielten Ergebnisse eine unter
0,15 v. H. liegende Differenz aufweisen.
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4.1.Vorbereitung
4.1.1.Futtermittel, außer den unter 4.1.2 und 4.1.3 genannten
Mindestens 50 g der Probe werden entnommen und, wenn nötig,
in erforderlicher Weise unter Vermeidung von Feuchtigkeitsände-
rungen zerkleinert (siehe 6).
4.1.2.Getreide und Grütze
Mindestens 50 g der Probe werden entnommen. Sie wird so
gemahlen, daß die Teilchengröße beim Sieben mit Maschen von
0,5 mm eine Durchlässigkeit von zumindest 50 v. H. gestattet und
daß beim Sieben mit Rundmaschen von 1 mm höchstens 10 v. H.
Rückstand verbleibt.
4.1.3.Flüssige oder breiige Futtermittel; Futtermittel, die überwiegend
aus Fett bestehen
Etwa 25 g der Probe, auf 10 mg genau gewogen, werden
entnommen, mit einer entsprechenden, auf 10 mg genau gewo-
genen Menge wasserfreiem Sand vermischt bis ein homogenes
Produkt entsteht.
4.2.Trocknung
4.2.1.Futtermittel, außer den unter 4.2.2 und 4.2.3 genannten
Ein Gefäß mit Deckel (3.3) wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der Probe werdenauf 1 mg gen au indas tarierte
Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß wird
nach Abnahme des Deckels in einen auf 103 ºC erhitzten Trok-
kenschrank gestellt. Damit die Temperatur des Trockenschranks
nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß möglichst rasch hineinzu-
stellen. Es wird 4 Stunden lang getrocknet, wobei die
Trocknungszeit von dem Zeitpunkt an gerechnet wird, an dem
der Trockenschrank die Temperatur von 103 ºC wieder erreicht
hat. Nach Öffnen des Trockenschranks wird das Gefäß sofort
mit dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank genommen, zum
Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsikkator (3.6) gestellt
und anschließend auf 1 mg genau gewogen.
Bei Proben, die überwiegend aus Fett bestehen, wird eine zusätz-
liche Trocknung von 30 Minuten im Trockenschrank bei 103 ºC
vorgenommen. Der Unterschied zwischen den beiden Wägeerge-
bnissen darf nicht mehr als 0,1 v. H. Feuchtigkeit betragen.
4.2.2.Getreide, Mehl, Grütze und Grieß
Ein Gefäß (3.3) mit Deckel wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der zerkleinerten Probe werden auf 1 mg genau in das
tarierte Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß
wird nach Abnahme des Deckels in einen auf 130 ºC erhitzten
Trockenschrank gestellt. Damit die Temperatur des Trocken-
schranks nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß möglichst rasch
hineinzustellen. Es wird 2 Stunden lang getrocknet, wobei die
Trocknungszeit von dem Zeitpunkt an gerechnet wird, an dem
der Trockenschrank die Temperatur von 130 ºC wieder erreicht
hat. Nach öffnen des Trockenschranks wird das Gefäß sofort mit
dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank genommen, zum
Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsikkator (3.6) gestellt
und anschließend auf 1 mg genau gewogen.
4.2.3.Mischfuttermittel mit einem Anteil von mehr als 4 v. H. Saccha-
rose oder Laktose sowie folgende Einzelfuttermittel:
Johannisbrotschrot, hydrolysierte Getreideerzeugnisse, Malz-
keime, Zuckerrübenschnitzel, Fischpreßsaft, Zucker und
Mischfuttermittel von mehr als 25 v. H. kristallwasserhaltigen
Mineralstoffen
Ein Gefäß (3.3) mit Deckel wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der Probe werdenauf 1 mg gen au indas tarierte
Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß wird
nach Abnahme des Deckels in einen auf 80 bis 85 ºC erhitzten
Vakuumtrockenschrank (3.5) gestellt. Damit die Temperatur
desVakuumtrockenschranks nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß
möglichst rasch hineinzustellen.
Der Druck wird auf 100 Torr eingestellt und die Probe 4 Stunden
lang bei diesem Druck entweder unter Zufuhr von heißer trok-
kener Luft oder mittels eines Trocknungsmittels (etwa 300 g für
20 Proben) getrocknet. Im letzten Fall wird beim Erreichen des1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 4
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vorgeschriebenen Drucks die Verbindung zur Vakuumpumpe
unterbrochen. Die Trocknungszeit wird von dem Zeitpunkt an
gerechnet, an dem der Trockenschrank die Temperatur von 80 º
bis 85 ºC wieder erreicht hat. Nach Ablauf der Trocknungszeit
wird der Vakuumtrockenschrank vorsichtig auf athmosphärischen
Druck gebracht. Nach öffnen des Vakuumtrockenschranks wird
das Gefäß sofort mit dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank
genommen, zum Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsik-
kator (3.6) gestellt und anschließend auf 1 mg genau gewogen. Es
wird weitere 30 Minuten unter Vakuum im Trockenschrank bei
80 º bis 85 ºC getrocknet und erneut gewogen. Der Unterschied
zwischendenbeidenWägeergebn issendarf n icht mehr als 0,1 v.
H. Feuchtigkeit betragen.
4.3.Vortrocknung
4.3.1.Futtermittel, außer den unter 4.3.2 genannten
Eine Vortrocknung ist bei festen Futtermitteln mit einem hohen
Feuchtigkeitsgehalt, deren Zerkleinerung schwierig ist, wie folgt
vorzunehmen:
50 g, auf 10 mg genau, der ungemahlenen Probe (eine grobe
Zerkleinerung wird, wenn nötig, bei gepreßten oder brockenhal-
tigen Futtermitteln vorgenommen), werden in einen geeigneten
Behälter (z. B. eine Aluminiumschale 20 × 12 cm mit einem
Rand von 0,5 cm) eingewogen. In einem Trockenschrank wird
bei einer Temperatur von 60 º bis 70 ºC getrocknet, bis der
Feuchtigkeitsgehalt einen Wert zwischen 8 und 12 v. H. erreicht
hat. Der Behälter wird aus dem Trockenschrank herausgen-
ommen, man läßt 1 Stunde lang offen abkühlen, anschließend
wird auf 10 mg genau gewogen. Je nach der Art des Futtermittels
wird, wie bei 4.1.1 beschrieben, sofort danach zerkleinert und,
wie bei 4.2.1 oder 4.2.3 beschrieben, getrocknet.
4.3.2.Getreide
Körner, deren Feuchtigkeitsgehalt höher als 17 v. H. ist, müssen
wie folgt vorgetrocknet werden:
50 g derungemahlenen Körner werden auf 10 mg genau in einen
geeigneten Behälter (z. B. eine Aluminiumschale 20 × 12 cm mit
einem Rand von 0,5 cm) eingewogen, in einem Trockenschrank 5
bis 7 Minuten lang bei einer Temperatur von 130 ºC getrocknet
und aus dem Trockenschrank herausgenommen. Man läßt im
Labor 2 Stunden lang offen abkühlen und wiegt dann auf 10 mg
genau. Sofort danach wird nach 4.1.2 gemahlen und, wie bei
4.2.2 beschrieben, getrocknet.
5.Berechnung der Ergebnisse
Der Feuchtigkeitsgehalt der Probe inv. H. wird durch die folgen denFormeln
gegeben:
5.1.Trocknung ohne Vortrocknung
E/C0m ðÞ /C1100
E
E = Anfangsmasse der Probe in Gramm,
m = Masse der trockenen Probe in Gramm.
5.2.Trocknung mit Vortrocknung
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0
E = Anfangsmasse der Probe in Gramm,
M = Masse der Probe in Gramm nach der Vortrocknung,M′= Masse der Probe in Gramm nach der Zerkleinerung und dem
Zermahlen,1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 5
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m = Masse der trockenen Probe in Gramm.
5.3.Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe 0,2 v. H. Feuchtigkeit nicht überschreiten.
6.Bemerkung
Wenn eine Zerkleinerung sich als notwendig erweist und dabei mit einer
Änderung des Feuchtigkeitsgehalts des Materials gerechnet werden muß, so
sind die Analysenergebnisse, welche die Bestandteile des Futtermittels
betreffen, auf den Feuchtigkeitsgehalt der Originalprobe umzurechnen.
2.BESTIMMUNG VON FLÜCHTIGEN STICKSTOFFHALTIGEN
BASEN
A. BESTIMMUNG DURCH MIKRODIFFUSION
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an flüchtigen stickstoffhal-
tigen Basen, ausgedrückt als Ammoniak, in Futtermitteln.
2.Prinzip
Die Probe wird mit Wasser extrahiert, die Lösung geklärt und filtriert. Die
flüchtigenstickstoffhaltigenBasenwerdenn ach Zusatz vonKaliumcarbo-
natlösung durch Mikrodiffusion abgetrennt, in einer Borsäurelösung
aufgefangen und mit Schwefelsäure titriert.
3.Reagenzien
3.1. Trichloressigsäurelösung 20 v. H. (G/V);
3.2. Indikator: 33 mg Bromkresolgrün und 65 mg Methylrot werden in
100 ml Äthanol 95 bis 96 v. H. (V/V) gelöst;
3.3. Borsäurelösung: 10 g Borsäure p.a. werden in einem 1-l-Meßkolben in
200 ml Äthanol 95 bis 96 v. H. (V/V) und 700 ml Wasser gelöst. Vom
Indikator (3.2) werden 10 ml hinzugefügt. Die Lösung wird gemischt
und nötigenfalls unter Zusatz von Natriumhydroxidlösung auf eine hell-
rote Farbe gebracht. 1 ml dieser Lösung kann bis zu 300 µg NH3binden;
3.4. Gesättigte Kaliumkarbonatlösung: 100 g Kaliumcarbonat p.a. werden in
100 ml siedendem Wasser gelöst; nach dem Abkühlen wird die Lösungfiltriert;
3.5. 0,02 N Schwefelsäure.
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat: ungefähr 35 bis 40 U/Min,
4.2. Conwayschalen (vgl. Skizze) aus Glas oder Plastik,4.3. Mikrobüretten
1
100ml Ablesegenauigkeit.
5.Ausführung
10 g der Probe werden auf 1 mg genau gewogen, mit 100 ml Wasser in einen
200-ml-Meßkolben gegeben und 30 Minuten lang im Schüttelapparat
geschüttelt. Dann werden 50 ml Trichloressigsäurelösung (3.1) hinzugefügt,
mit Wasser bis zur Marke aufgefüllt, kräftig geschüttelt und durch ein Falten-
filter filtriert.
In die Mitte der Conwayschale wird 1 ml Borsäurelösung (3.3) pipettiert, in
den Ring der Schale 1 ml des Probenfiltrats. Die Schale wird mit dem ange-
fetteteten Deckel teilweise bedeckt, dann gibt man schnell 1 ml der
gesättigten Kaliumcarbonatlösung (3.4) in den Ring und verschließt die
Schale luftdicht. Um mit Sicherheit eine Mischung der beiden Reagenzien
zu erreichen, wird die Schale vorsichtig in waagerechter Stellung gedreht.
Darauf läßt man das Ganze mindestens 4 Stunden lang bei Raumtemperatur
oder 1 Stunde lang bei 40 ºC stehen.
Die in der Borsäurelösung enthaltenen flüchtigen Basen werden anschließend
mit 0,02 N Schwefelsäure (3.5) unter Verwendung einer Mikrobürette (4.3)
titriert.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 6
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Nach demselbenVerfahrenist ein Blindversuch , ohne die zu analysierende
Probe, durchzuführen.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,02 Schwefelsäure entspricht 0,34 mg Ammoniak.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe bei Gehalten von weniger als 1,0 v. H. Ammoniak 10 v. H.
relativ, bei Gehalten von 1,0 v. H. und mehr 0,1 v. H. absolut nicht über-
schreiten.
7.Bemerkung
Bei einem Gehalt der Probe von mehr als 0,6 v. H. Ammoniak ist das
ursprüngliche Filtrat zu verdünnen.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 7
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CONWAY-SCHALE
Maßstab 1/1
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B. BESTIMMUNG DURCH DESTILLATION
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an flüchtigen stickstoff-
haltigen Basen, ausgedrückt als Ammoniak, in Fischmehl, das praktisch
keinen Harnstoff enthält. Sie ist nur anzuwenden bei Gehalten kleiner als0,25 v. H. Ammoniak.
2.Prinzip
Die Probe wird mit Wasser extrahiert, die Lösung geklärt und filtriert. Die
flüchtigen stickstoffhaltigen Basen werden nach Zusatz von Magnesiu-
moxid in der Siedehitze abgetrennt und in einer definierten Menge
Schwefelsäure aufgefangen, deren Überschuß durch Natriumhydroxidlö-
sung zurücktitriert wird.
3.Reagenzien
3.1. Trichloressigsäurelösung 20 v. H. (G/V),
3.2. Magnesiumoxid p.a.,
3.3. Antischaumemulsion (z. B. Silikon),
3.4. 0,1 N Schwefelsäure,3.5. 0,1 N Natriumhydroxidlösung,
3.6. Methylrotlösung 0,3 v. H. (G/V) in Äthanol 95 - 96 v. H. (V/V).
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr 35 bis 40 U/Min.
4.2. Destillationsapparatur nach Kjeldahl.
5.Ausführung
10 g der Probe werden, auf 1 mg genau gewogen, mit 100 ml Wasser in
einen 200-ml-Meßkolben gegeben und 30 Minuten lang im Schüttelap-
parat geschüttelt.
Dann werden 50 ml Trichloressigsäurelösung (3.1) hinzugefügt, mit
Wasser bis zur Marke aufgefüllt, kräftig geschüttelt und durch ein Falten-
filter filtriert.
Je nach dem vermuteten Gehalt an flüchtigen stickstoffhaltigen Basen
wird eine entsprechende Menge (im allgemeinen 100 ml) des klaren
Filtrats auf 200 ml verdünnt und 2 g Magnesiumoxid (3.2) sowie einige
Tropfen Antischaumemulsion (3.3) hinzugefügt. Die Lösung muß gegen
Lackmuspapier alkalisch reagieren; anderenfalls ist noch Magnesiumoxid
(3.2) zuzusetzen. In der Kjeldahl-Apparatur werden etwa 150 ml der
Lösung abdestilliert und das Destillat in einem Erlenmeyerkolben aufge-
fangen, der eine genau definierte Menge (zwischen 25 und 50 ml) 0,1 N
Schwefelsäure (3.4) enthält. Bei der Destillation ist eine Überhitzung der
Kolbenwände zu vermeiden. Die schwefelsaure Lösung wird 2 Minuten
lang aufgekocht, dann abgekühlt; der Überschuß an Schwefelsäure wird
mit 0,1 N Natriumhydroxidlösung (3.5) nach Zugabe von Methylrot (3.6)
als Indikator zurücktitriert.
Nach demselbenVerfahrenist ein Blindversuch , ohne die zu analysie-
rende Probe, durchzuführen.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,1 Schwefelsäure entspricht 1,7 mg Ammoniak.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe 10 v. H. (relativ) Ammoniak nicht überschreiten.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 9
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3.BESTIMMUNG VON GESAMTPHOSPHOR
— photometrische Methode —
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an Gesamtphosphor in
Futtermitteln. Sie ist besonders für die Untersuchung von Futtermitteln mit
einem geringen Gehalt an Phosphor geeignet. In bestimmten Fällen (phos-
phorreiche Erzeugnisse) kann eine gravimetrische Methode angewandt
werden.
2.Prinzip
Die Probe wird entweder auf trockenem Wege (besonders bei organischen
Futtermitteln) oder auf nassem Wege (besonders bei Mineralstoffen und flüs-
sigen Futtermitteln) aufgeschlossen und in Säure gelöst. Die Lösung wird mit
dem Vanadatmolybdat-Reagenz behandelt. Die Extinktion der gelb gefärbten
Lösung wird bei 430 nm im Spektralphotometer gemessen.
3.Reagenzien
3.1. Calciumcarbonat p. a.,3.2. Salzsäure p. a., D: 1,1 (etwa 6 N),3.3. Salpetersäure p. a., D: 1,045,3.4. Salpetersäure p. a., D: 1,38 bis 1,42,3.5. Schwefelsäure p. a., D: 1,84.
3.6. Vanadatmolybdat-Reagenz: 200 ml Ammoniumheptamolybdatlösung
(3.6.1) werden mit 200 ml Ammoniummonovanadatlösung (3.6.2) und
134 ml Salpetersäure (3.4) in einem l-l-Meßkolben gemischt und bis
zur Marke mit Wasser aufgefüllt.
3.6.1. Ammoniumheptamolybdatlösung: 100 g Ammoniumheptamo-
lybdat p. a., (NH
4)6Mo7O24·4 H2O, werdeninwarmem Wasser
gelöst. 10 ml Ammoniak (D: 0,91) werden hinzugefügt, und das
Volumenwird mit Wasser auf 1 l ergän zt.
3.6.2. Ammoniummonovanadatlösung: 2,35 g Ammoniummonovanadat
p. a, NH4VO3, werdenin400 ml warmem Wasser gelöst. 20 ml
verdünnte Salpetersäure (7 ml HNO3(3.4) + 13 ml H2O) werden
unter Rühren langsam hinzugefügt, und das Volumen wird auf 1 l
mit Wasser ergänzt.
3.7. Phosphor-Standardlösung 1 mg pro ml: 4,387 g Kaliumdihydrogenphos-
phat p. a., KH2PO4, werdeninWasser gelöst un d auf 1 l mit Wasser
aufgefüllt.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Quarz oder Porzellan,4.2. elektrischer Muffelofenmit Thermostat auf 550ºC geregelt,4.3. Kjeldahlkolben, 250 ml,4.4. Meßkolben und Präzisions-Pipette,4.5. Spektralphotometer,4.6. Reagenzgläser, ca. 16 mm Durchmesser mit N 14,5; Fassungsvermögen:
2 5—3 0m l .
5.Ausführung
5.1.Vorbereitung der Lösung
Je nach der Art der Probe wird die Lösung, wie unter 5.1.1 oder 5.1.2
angegeben, vorbereitet.
5.1.1.Allgemeines Verfahren
1 g oder mehr der Probe werden auf 1 mg genau eingewogen und
inein enKjeldahlkolbengebracht. 20 ml Schwefelsäure (3.5)
werden hinzugefügt; dann wird umgeschüttelt, um das Material
mit der Säure gut zu benetzen und zu verhindern, daß es an den
Wandungen des Kolbens anhaftet; anschließend wird erhitzt und
10 Minuten im Sieden gehalten. Nach geringem Abkühlen1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 10
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werden2 ml Salpetersäure (3.4) hin zugefügt; es wird schwach
erhitzt und wieder etwas abgekühlt. Dann wird erneut wenig
Salpetersäure (3.4) hinzugegeben, zum Sieden erhitzt und das
Verfahrenso oft wiederholt, bis die Lösun g farblos geworden
ist. Hierauf wird abgekühlt, etwas Wasser zugesetzt und die Flüs-
sigkeit inein en500-ml-Meßkolbenüberführt, wobei der
Kjeldahlkolbenmit warmem Wasser ausgespült wird. Nach
Abkühlenwird zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt un d filtriert.
5.1.2.Verfahren für Proben, die organische Stoffe enthalten, aber frei
sind von Calcium- bzw. Magnesium-dihydrogenphosphaten
Etwa 2,5 g der Probe werden auf 1 mg genau in eine
Veraschungsschale eingewogen und mit 1 g Calciumcarbonat
(3.1) innig gemischt. Im Muffelofen wird bei 550ºC ± 5ºC
verascht, bis die Asche weiß oder grau ist (kleine Mengen Kohle
störenn icht).
Die Asche wird inein250-ml-Becherglas gebracht, 20 ml Wasser
und soviel Salzsäure (3.2) zugefügt, bis das Aufbrausen ausbleibt;
zuletzt wird einÜberschuß von10 ml Salzsäure (3.2) zugegeben .
Dann wird das Becherglas auf ein Sandbad gestellt und bis zur
Trockne eingedampft, um die Kieselsäure unlöslich zu machen.
Der Rückstand wird in 10 ml Salpetersäure (3.3) aufgenommen
und 5 Minuten lang auf dem Sandbad zum Sieden erhitzt, wobei
der Rückstand nicht ganz trocken werden soll. Die Flüssigkeit
wird inein en500-ml-Meßkolbenübergespült, wobei das Becher-
glas mehrmals mit heißem Wasser ausgewaschenwird. Nach
Abkühlenwird mit Wasser zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt
und filtriert.
5.2.Entwicklung der Färbung und Messung der Extinktion
Ein aliquoter Teil des nach 5.1.1 oder 5.1.2 erhaltenen Filtrats wird
verdünnt, um eine Konzentration an Phosphor von höchstens 40 µg/ml
zu erhalten. 10 ml dieser Lösung werden in ein Reagenzglas mit Schliff
(4.6) pipettiert und 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) hinzugefügt.
Man schüttelt um und läßt mindestens 10 Minuten lang bei einer
Temperatur von 20ºC stehen. Anschließend wird die Extinktion im
Spektralphotometer bei 430 nm gegen eine Lösung von 10 ml Wasser
und 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) gemessen.
5.3.Eichkurve
Aus der Standardlösung (3.7) werden Lösungen, die 5, 10, 20, 30 und
40 µg Phosphor pro ml enthalten, hergestellt. Zu je 10 ml dieser
Lösungen werden 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) hinzugefügt.
Man schüttelt um und läßt mindestens 10 Minuten lang bei einer
Temperatur von 20ºC stehen. Dann wird die Extinktion unter den bei
5.2 angegebenen Bedingungen gemessen. Die Eichkurve wird aufge-
stellt, indem die Extinktionswerte in die Ordinate und die
entsprechende Phosphormenge in die Abszisse eingetragen werden. Die
Kurve ist linear für die Konzentrationen an Phosphor von 0 bis 40 µg/
ml.
6.Berechnung der Ergebnisse
Der Gehalt an Phosphor der Analysenprobe wird unter Benutzung der Eich-
kurve bestimmt.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselbenProbe bei Gehaltenvon
weniger als 5 v. H. Phosphor 3 v. H. relativ, bei Gehalten
von 5 v. H. Phosphor und mehr 0,15 v. H. absolut nicht überschreiten.
4.BESTIMMUNG VON ROHFETT
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode dient zur Bestimmung des Rohfettgehalts von Futtermitteln. Sie
bezieht sich nicht auf die Untersuchung von Ölsaaten und Ölfrüchten im
Sinne der Verordnung (EWG) Nr. 136/66 des Rates.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 11
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Je nach Art und Zusammensetzung des Futtermittels sowie dem Zweck der
Untersuchung ist eines der beiden nachstehend beschriebenen Verfahren
anzuwenden.
1.1.Verfahren A — Direkt extrahierbares Rohfett
Das Verfahren ist anzuwenden bei Einzelfuttermitteln pflanzlicher
Herkunft mit Ausnahme derjenigen, die in den Anwendungsbereich von
VerfahrenB fallen .
1.2.Verfahren B — Gesamtrohfett
Das Verfahren ist anzuwenden bei Einzelfuttermitteln tierischen
Ursprungs und bei allen Mischfuttermitteln. Es ist außerdem bei allen
Materialien anzuwenden, aus denen Fett ohne vorherige Hydrolyse nicht
vollständig extrahiert werden kann, z. B. Kleber, Hefen, Kartoffeleiweiß
und Erzeugnissen, die Verfahren unterzogen wurden wie Extrudieren,
Flockieren und Erhitzen.
1.3.Auswertung
In allen Fällen, in denen mit Verfahren B ein höheres Ergebnis erzielt
wird als mit Verfahren A, gilt das mit Verfahren B erhaltene Ergebnis
als der richtige Wert.
2.Prinzip
2.1.Verfahren A
Die Probe wird mit Petrolether extrahiert. Das Lösungsmittel wird
abdestilliert und der Rückstand getrocknet und gewogen.
2.2.Verfahren B
Die Probe wird heiß mit Salzsäure behandelt. Die Mischung wird abge-
kühlt und filtriert. Der gewaschene und getrocknete Rückstand wird
nach dem Verfahren A weiterbehandelt.
3.Reagenzien
3.1. Petrolether mit einem Siedebereich von 40-60 ºC. Die Bromzahl muß
weniger als 1 und der Abdampfrückstand weniger als 2 mg/100 ml
betragen.
3.2. Natriumsulfat, wasserfrei.
3.3. Salzsäure, c = 3 mol HCl/l.
3.4. Filtrationsmittel, z. B. Kieselgur, Hyflo-supercel.
4.Geräte
4.1. Extraktionsapparat: Sofern das Gerät mit einem Siphon (Soxhletapparat)
ausgestattet ist, muß die Rückflußmenge so bemessen sein, daß das
Lösungsmittel mindestens zehnmal in der Stunde abläuft; wenn es sich
um ein Gerät ohne Siphon handelt, muß die Rückflußmenge etwa 10 ml
pro Minute betragen.
4.2. Extraktionshülsen: Diese müssen frei sein von petroletherlöslichen
Stoffen und eine Porosität besitzen, die den Forderungen unter 4.1
entspricht.
4.3. Trockenschrank: Vakuumtrockenschrank, einstellbar auf 75 ºC ± 3 ºC,
oder Lufttrockenschrank, einstellbar auf 100 ºC ± 3 ºC.
4.4. Mikrowellengerät.
5.Ausführung
5.1.Verfahren A (für Proben mit hohem Fettgehalt siehe Bemerkung 8.1)
5 g der Probe werden auf 1 mg genau abgewogen, dann in eine Extrak-
tionshülse (4.2) übergeführt und mit einem fettfreien Wattebausch
abgedeckt.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 12
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Die Hülse wird in einen Extraktionsapparat (4.1) gebracht und sechs
Stunden mit Petrolether (3.1). extrahiert, wobei der Petroletherextrakt
in einem trockenen, mit einigen Stückchen Bimsstein(1) versehenen,
tariertenKolbenaufgefan genwird.
Nach beendeter Extraktion wird das Lösungsmittel abdestilliert, der
Rückstand mit Kolben anschließend 1,5 Stunden in einem Trocken-
schrank (4.3) getrocknet und nach dem Abkühlen in einem Exsikkator
gewogen. Durch eine zweite Trocknung von 30 Minuten Dauer ist zu
prüfen, ob das Gewicht des Fettes konstant geblieben ist (der Gewichts-
verlust zwischen zwei aufeinanderfolgenden Wägungen muß unter 1 mg
bleiben).
5.2.Verfahren B
2,5 g der Probe (siehe Bemerkung 8.2) werden auf 1 mg genau abge-
wogen und in ein 400-ml-Becherglas oder einen 300-ml-
Erlenmeyerkolben gebracht. Anschließend werden 100 ml Salzsäure, c
= 3 mol/l (3.3), und einige Stückchen Bimsstein hinzugefügt. Das
Becherglas wird mit einem Uhrglas abgedeckt, bzw. dem Erlenmeyer-
kolbenwird einRückflußkühler aufgesetzt. Das Gemisch wird auf
kleiner Flamme oder auf einer Heizplatte bis zum Siedepunkt erhitzt
und eine Stunde schwach siedengelassen. Es muß vermieden werden,
daß das Material an den Wänden des Gefäßes ansetzt.
Dann wird abgekühlt und so viel vom Filtrationsmittel (3.4) zugesetzt,
daß beim Filtrieren kein Fettverlust eintritt. Filtriert wird unter Verwen-
dung zweier ineinandergelegter feuchter fettfreier Papierfilter. Der
Rückstand wird bis zur neutralen Reaktion mit kaltem Wasser gewa-
schen. Danach ist zu prüfen, ob das Filtrat noch Fett enthält.
Vorhandensein von Fett zeigt, daß vor der Hydrolyse eine Extraktion
der Probe mit Petrolether nach Verfahren A vorzunehmen ist.
Der doppelte Papierfilter mit dem Rückstand ist auf ein Uhrglas zu
legen und ca. 1,5 Stunden bei 100 ºC ± 3 ºC im Trockenschrank oder
bei 75 ºC ± 3 ºC im Vakuumtrockenschrank (4.3) zu trocknen.
Der doppelte Filter mit dem trockenen Rückstand wird in eine Extrak-
tionshülse (4.2) gebracht und mit einem fettfreien Wattebausch
bedeckt. Die Hülse wird in einen Extraktionsapparat (4.1) eingesetzt.
Dann wird wie unter 5.1 Unterabsätze 2 und 3 beschrieben fortgefahren.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Gewicht des Rückstands wird in Hundertteilen (Prozenten) der Probe
ausgedrückt.
7.Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen den Ergebnissen zweier Parallelbestimmungen
(eines Analytikers) sollte bei derselben Probe bei Gehalten an Rohfett von
— bis zu 5 v. H.: 0,2 v. H. absolut,
— 5 bis 10 v. H.: 4,0 v. H. des höherenResultats,
— mehr als 10 v. H.: 0,4 v. H. absolut
nicht überschreiten
8.Bemerkungen
8.1. Bei Erzeugnissen mit hohem Fettgehalt, die schwer zu zerkleinern sind
oder sich zur Entnahme einer reduzierten homogenen Probe nicht
eignen, ist folgendermaßen zu verfahren:
20 g der Probe werden auf 1 mg genau abgewogen und mit 10 g oder
mehr wasserfreiem Natriumsulfat (3.2) gemischt. Dann wird mit Petro-
lether (3.1) wie unter 5.1 beschrieben extrahiert. Der dabei
aufgefangene Extrakt wird mit Petrolether (3.1) auf 500 ml aufgefüllt
und gemischt. Von der Lösung werden 50 ml entnommen und in einen
kleinen, trockenen, mit Bimssteinkörnchen versehenen (1) und tarierten
Kolben gebracht. Das Lösungsmittel wird abdestilliert; dann wird wie
unter 5.1 letzter Unterabsatz beschrieben getrocknet und weiterver-
fahren.1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 13
(1) Wenn das Fett später qualitativ untersucht werden soll, sind die Bimssteinstückchen
durch Glasperlenzu ersetzen .
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Der Extraktionsrückstand in der Hülse wird vom Lösungsmittel befreit
und auf 1 mm zerkleinert. Das Material wird in die Extraktionshülse
zurückgebracht (kein Natriumsulfat hinzufügen). Dann wird wie unter
5.1 Unterabsätze 2 und 3 beschrieben fortgefahren.
Der Rohfettgehalt, ausgedrückt in Hundertteilen der Probe, wird nach
folgender Formel ermittelt:
(10 a + b) × 5
Darinsin d:
a = Rückstandsmasse in Gramm nach der ersten Extraktion (aliquoter
Teil des Extraktes),
b = Rückstandsmasse in Gramm nach der zweiten Extraktion.
8.2. Bei fettarmen Erzeugnissen kann mit einer Einwaage von 5 g gearbeitet
werden.
8.3. Heimtierfutter mit hohem Wassergehalt müssenvor der Hydrolyse un d
Extraktionn ach VerfahrenB möglicherweise mit wasserfreiem Natrium-
sulfat gemischt werden.
8.4. In 5.2 kann die Verwendung von heißem statt kaltem Wasser zum
Waschen des Rückstands nach der Filtration möglicherweise wirksamer
sein.
8.5. Die Trocknungszeit von 1,5 Stunden muß bei einigen Futtermitteln
möglicherweise verlängert werden. Übermäßiges Trocknen ist zu
vermeiden, da dies zu niedrigen Ergebnissen führen kann. Es kann
auch ein Mikrowellengerät (4.4) verwendet werden.
8.6. Bei einem Rohfettgehalt von mehr als 15 v. H. wird eine Extraktion
nach Verfahren A vor der Hydrolyse und eine erneute Extraktion nach
VerfahrenB empfohlen .1971L0393 — DE — 09.10.1998 — 004.001 — 14