1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 1
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►B ZWEITE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 18. November 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futter-
mitteln
(71/393/EWG)
(ABl. L 279 vom 20.12.1971, S. 7)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 73/47/EWG der Kommission vom 5. Dezember 1972 L 83 35 30.3.1973
▼B
ZWEITE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 18. November 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln
(71/393/EWG)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-
meinschaft,
gestützt auf die Richtlinie des Rates vom 20. Juli 1970 über die Einfüh-
rung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren und Analysemethoden
für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1), insbesondere auf
Artikel 2,
in Erwägung nachstehender Gründe:Die oben genannte Richtlinie bestimmt, daß die amtlichen Untersu-
chungen von Futtermitteln zur Feststellung, ob die auf Grund derRechts- und Verwaltungsvorschriften festgelegten Anforderungenhinsichtlich Beschaffenheit und Zusammensetzung der Futtermittel
erfüllt sind, nach gemeinschaftlichen Probenahmeverfahren und Analy-
semethoden durchgeführt werden.
Die Richtlinie Nr. 71/250/EWG der Kommission vom 15. Juni 1971(
2)
hat bereits eine Reihe von Analysemethoden festgelegt. Nach demStand der seitdem durchgeführten Arbeiten ist es nunmehr geboten,eine zweite Serie von Analysemethoden festzulegen.
Die in dieser Richtlinie vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Ständigen Futtermittelausschusses —
HAT FOLGENDE RICHTLINIE ERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaaten schreiben vor, daß die Analysen für die amtliche
Untersuchung von Futtermitteln auf ihren Gehalt an Feuchtigkeit, stick-
stoffhaltigen Basen, Gesamtphosphor und Rohfett nach den in derAnlage zu dieser Richtlinie beschriebenen Methoden durchgeführtwerden.
Die allgemeinen Bestimmungen des Teils 1 (Einführung) der Anlage
zur Ersten Richtlinie Nr. 71/250/EWG der Kommission vom 15 Juni
1971 zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln finden für die in der Anlagezu dieser Richtlinie beschriebenen Methoden Anwendung.
Artikel 2
Die Mitgliedstaaten setzen spätestens zum 1. Januar 1973 die erforder-
lichen Rechts- und Verwaltungsvorschriften in Kraft, um denBestimmungen dieser Richtlinie nachzukommen. Sie setzen dieKommission unverzüglich hiervon in Kenntnis.
Artikel 3
Diese Richtlinie ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 2
(1) ABl. Nr. L 170 vom 3. 8. 1970, S. 2.
(2) ABl. Nr. L 155 vom 12. 7. 1971, S. 13.
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ANLAGE
1.BESTIMMUNG VON FEUCHTIGKEIT
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Feuchtigkeitsgehalts von Futtermit-
teln.►M1Sie bezieht sich nicht auf die Untersuchung von
Milcherzeugnissen als Einzelfuttermittel, von Mineralstoffen und von
Mischungen, die überwiegend aus Mineralstoffen bestehen, von tierischen
und pflanzlichen Fetten und Ölen sowie von Ölsaaten und Ölfrüchten im
Sinne der Verordnung Nr. 136/66/EWG des Rates vom 22. September 1966
über die Errichtung einer gemeinsamen Marktorganisation für Fette(1).◄
Die Methode zur Bestimmung des Feuchtigkeitsgehalts der Ölsaaten und
-früchte wird in der Anlage III der Verordnung (EWG) Nr. 1470/68 der
Kommission vom 23. September 1968 über die Entnahme und Verkleinerung
von Proben sowie über die Bestimmung des Gehalts der Ölsaaten an Öl,
Fremdbestandteilen und Feuchtigkeit(2) festgelegt.
2.Prinzip
Die Probe wird unter definierten Bedingungen getrocknet, die von der Art
des Futtermittels abhängen. Der Gewichtsverlust wird ermittelt. Bei festen
Futtermitteln mit einem hohen Feuchtigkeitsgehalt ist eine zusätzliche
Vortrocknung erforderlich.
3.Geräte
3.1 Zerkleinerungsgerät aus einem Material, das keine Feuchtigkeit absor-
biert, leicht zu reinigen ist, eine schnelle und gleichmäßige
Zerkleinerung ermöglicht, ohne eine merkbare Erwärmung hervorzu-
rufen, so weit wie möglich den Kontakt mit der Außenluft verhindert
und den unter 4.1.1 und 4.1.2 gestellten Forderungen entspricht (z. B.
Mikroschlagkreuzmühlen, Mikrozerkleinerer mit Wasserkühlung, zerleg-
bare Kegelmühlen, langsam laufende Kegelmühlen und
Zahnscheibenmühlen);
3.2. Analysenwaage mit 0,5 mg Ablesegenauigkeit;
3.3. getrocknete Gefäße aus korrosionsbeständigem Metall oder Glas, mit
luftdicht schließenden Deckeln; die Nutzfläche muß eine solche Vertei-
lung der Probe ermöglichen, daß etwa 0,3 g auf 1 cm2kommen;
3.4. elektrisch beheizter, temperaturgeregelter Trockenschrank (± 1 ºC), der
eine schnelle Regelung der Temperatur gewährleistet und eine gute
Lüftung besitzt (1);
3.5. elektrisch beheizter regulierbarer Vakuumtrockenschrank mit einer
Ölpumpe, der entweder mit einer Vorrichtung für die Zufuhr warmer
und getrockneter Luft oder mit einem Trocknungsmittel (z. B. Calciu-
moxid) versehen ist;
3.6. Exsikkator mit dicker, perforierter Platte aus Metall oder aus Porzellan,
der ein wirksames Trocknungsmittel enthält.
4.Verfahren
NB: Die Verfahren, die in diesem Abschnitt beschrieben werden, müssen
sofort nach der Öffnung der Packungen, die die Proben enthalten,
durchgeführt werden.
Die Analysen sind mindestens doppelt auszuführen.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 3
(1) ABl. Nr. 172 vom 30. 9. 1966, S. 3025/66.
(2) ABl. Nr. L 239 vom 28. 9. 1968, S. 2.
(3) Für die Trocknung von Getreide, Mehl, Grütze und Grieß soll der Trockenschrank eine
solche Wärmekapazität haben, daß er, wenn er auf eine Temperatur von 131 ºC einge-
stellt worden ist, diese Temperatur in weniger als 45 Minuten wieder erreicht, nachdem
die Höchstzahl gleichzeitig zu trocknender Proben hineingestellt wurde.Die Ventilation soll so beschaffen sein, daß wenn alle Weichweizenproben, die derSchrank enthalten kann, zwei Stunden lang gleichzeitig getrocknet werden, die Erge-bnisse mit Bezug auf die nach 4stündiger Trocknung erzielten Ergebnisse eine unter
0,15 v. H. liegende Differenz aufweisen.
▼B
4.1.Vorbereitung
4.1.1.Futtermittel, außer den unter 4.1.2 und 4.1.3 genannten
Mindestens 50 g der Probe werden entnommen und, wenn nötig,
in erforderlicher Weise unter Vermeidung von Feuchtigkeitsände-
rungen zerkleinert (siehe 6).
4.1.2.Getreide und Grütze
Mindestens 50 g der Probe werden entnommen. Sie wird so
gemahlen, daß die Teilchengröße beim Sieben mit Maschen von
0,5 mm eine Durchlässigkeit von zumindest 50 v. H. gestattet und
daß beim Sieben mit Rundmaschen von 1 mm höchstens 10 v. H.
Rückstand verbleibt.
4.1.3.Flüssige oder breiige Futtermittel; Futtermittel, die überwiegend
aus Fett bestehen
Etwa 25 g der Probe, auf 10 mg genau gewogen, werden
entnommen, mit einer entsprechenden, auf 10 mg genau gewo-
genen Menge wasserfreiem Sand vermischt bis ein homogenes
Produkt entsteht.
4.2.Trocknung
4.2.1.Futtermittel, außer den unter 4.2.2 und 4.2.3 genannten
Ein Gefäß mit Deckel (3.3) wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der Probe werden auf 1 mg genau in das tarierte
Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß wird
nach Abnahme des Deckels in einen auf 103 ºC erhitzten Trok-
kenschrank gestellt. Damit die Temperatur des Trockenschranks
nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß möglichst rasch hineinzu-
stellen. Es wird 4 Stunden lang getrocknet, wobei die
Trocknungszeit von dem Zeitpunkt an gerechnet wird, an dem
der Trockenschrank die Temperatur von 103 ºC wieder erreicht
hat. Nach Öffnen des Trockenschranks wird das Gefäß sofort
mit dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank genommen, zum
Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsikkator (3.6) gestellt
und anschließend auf 1 mg genau gewogen.
Bei Proben, die überwiegend aus Fett bestehen, wird eine zusätz-
liche Trocknung von 30 Minuten im Trockenschrank bei 103 ºC
vorgenommen. Der Unterschied zwischen den beiden Wägeerge-
bnissen darf nicht mehr als 0,1 v. H. Feuchtigkeit betragen.
4.2.2.Getreide, Mehl, Grütze und Grieß
Ein Gefäß (3.3) mit Deckel wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der zerkleinerten Probe werden auf 1 mg genau in das
tarierte Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß
wird nach Abnahme des Deckels in einen auf 130 ºC erhitzten
Trockenschrank gestellt. Damit die Temperatur des Trocken-
schranks nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß möglichst rasch
hineinzustellen. Es wird 2 Stunden lang getrocknet, wobei die
Trocknungszeit von dem Zeitpunkt an gerechnet wird, an dem
der Trockenschrank die Temperatur von 130 ºC wieder erreicht
hat. Nach öffnen des Trockenschranks wird das Gefäß sofort mit
dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank genommen, zum
Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsikkator (3.6) gestellt
und anschließend auf 1 mg genau gewogen.
4.2.3.Mischfuttermittel mit einem Anteil von mehr als 4 v. H. Saccha-
rose oder Laktose sowie folgende Einzelfuttermittel:
Johannisbrotschrot, hydrolysierte Getreideerzeugnisse, Malz-
keime, Zuckerrübenschnitzel, Fischpreßsaft, Zucker und
Mischfuttermittel von mehr als 25 v. H. kristallwasserhaltigen
Mineralstoffen
Ein Gefäß (3.3) mit Deckel wird auf 0,5 mg genau gewogen.
Etwa 5 g der Probe werden auf 1 mg genau in das tarierte
Gefäß eingewogen und gleichmäßig verteilt. Das Gefäß wird
nach Abnahme des Deckels in einen auf 80 bis 85 ºC erhitzten
Vakuumtrockenschrank (3.5) gestellt. Damit die Temperatur
desVakuumtrockenschranks nicht zu stark abfällt, ist das Gefäß
möglichst rasch hineinzustellen.
Der Druck wird auf 100 Torr eingestellt und die Probe 4 Stunden
lang bei diesem Druck entweder unter Zufuhr von heißer trok-
kener Luft oder mittels eines Trocknungsmittels (etwa 300 g für
20 Proben) getrocknet. Im letzten Fall wird beim Erreichen des1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 4
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vorgeschriebenen Drucks die Verbindung zur Vakuumpumpe
unterbrochen. Die Trocknungszeit wird von dem Zeitpunkt an
gerechnet, an dem der Trockenschrank die Temperatur von 80 º
bis 85 ºC wieder erreicht hat. Nach Ablauf der Trocknungszeit
wird der Vakuumtrockenschrank vorsichtig auf athmosphärischen
Druck gebracht. Nach öffnen des Vakuumtrockenschranks wird
das Gefäß sofort mit dem Deckel verschlossen, aus dem Schrank
genommen, zum Abkühlen 30 bis 45 Minuten lang in den Exsik-
kator (3.6) gestellt und anschließend auf 1 mg genau gewogen. Es
wird weitere 30 Minuten unter Vakuum im Trockenschrank bei
80 º bis 85 ºC getrocknet und erneut gewogen. Der Unterschied
zwischen den beiden Wägeergebnissen darf nicht mehr als 0,1 v.
H. Feuchtigkeit betragen.
4.3.Vortrocknung
4.3.1.Futtermittel, außer den unter 4.3.2 genannten
Eine Vortrocknung ist bei festen Futtermitteln mit einem hohen
Feuchtigkeitsgehalt, deren Zerkleinerung schwierig ist, wie folgt
vorzunehmen:
50 g, auf 10 mg genau, der ungemahlenen Probe (eine grobe
Zerkleinerung wird, wenn nötig, bei gepreßten oder brockenhal-
tigen Futtermitteln vorgenommen), werden in einen geeigneten
Behälter (z. B. eine Aluminiumschale 20 × 12 cm mit einem
Rand von 0,5 cm) eingewogen. In einem Trockenschrank wird
bei einer Temperatur von 60 º bis 70 ºC getrocknet, bis der
Feuchtigkeitsgehalt einen Wert zwischen 8 und 12 v. H. erreicht
hat. Der Behälter wird aus dem Trockenschrank herausgen-
ommen, man läßt 1 Stunde lang offen abkühlen, anschließend
wird auf 10 mg genau gewogen. Je nach der Art des Futtermittels
wird, wie bei 4.1.1 beschrieben, sofort danach zerkleinert und,
wie bei 4.2.1 oder 4.2.3 beschrieben, getrocknet.
4.3.2.Getreide
Körner, deren Feuchtigkeitsgehalt höher als 17 v. H. ist, müssen
wie folgt vorgetrocknet werden:
50 g der ungemahlenen Körner werden auf 10 mg genau in einen
geeigneten Behälter (z. B. eine Aluminiumschale 20 × 12 cm mit
einem Rand von 0,5 cm) eingewogen, in einem Trockenschrank 5
bis 7 Minuten lang bei einer Temperatur von 130 ºC getrocknet
und aus dem Trockenschrank herausgenommen. Man läßt im
Labor 2 Stunden lang offen abkühlen und wiegt dann auf 10 mg
genau. Sofort danach wird nach 4.1.2 gemahlen und, wie bei
4.2.2 beschrieben, getrocknet.
5.Berechnung der Ergebnisse
Der Feuchtigkeitsgehalt der Probe in v. H. wird durch die folgenden Formeln
gegeben:
5.1.Trocknung ohne Vortrocknung
E/C0m ðÞ /C1100
E
E = Anfangsmasse der Probe in Gramm,
m = Masse der trockenen Probe in Gramm.
5.2.Trocknung mit Vortrocknung
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0
E = Anfangsmasse der Probe in Gramm,
M = Masse der Probe in Gramm nach der Vortrocknung,M′= Masse der Probe in Gramm nach der Zerkleinerung und dem
Zermahlen,1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 5
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m = Masse der trockenen Probe in Gramm.
5.3.Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe 0,2 v. H. Feuchtigkeit nicht überschreiten.
6.Bemerkung
Wenn eine Zerkleinerung sich als notwendig erweist und dabei mit einer
Änderung des Feuchtigkeitsgehalts des Materials gerechnet werden muß, so
sind die Analysenergebnisse, welche die Bestandteile des Futtermittels
betreffen, auf den Feuchtigkeitsgehalt der Originalprobe umzurechnen.
2.BESTIMMUNG VON FLÜCHTIGEN STICKSTOFFHALTIGEN
BASEN
A. BESTIMMUNG DURCH MIKRODIFFUSION
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an flüchtigen stickstoffhal-
tigen Basen, ausgedrückt als Ammoniak, in Futtermitteln.
2.Prinzip
Die Probe wird mit Wasser extrahiert, die Lösung geklärt und filtriert. Die
flüchtigen stickstoffhaltigen Basen werden nach Zusatz von Kaliumcarbo-
natlösung durch Mikrodiffusion abgetrennt, in einer Borsäurelösung
aufgefangen und mit Schwefelsäure titriert.
3.Reagenzien
3.1. Trichloressigsäurelösung 20 v. H. (G/V);
3.2. Indikator: 33 mg Bromkresolgrün und 65 mg Methylrot werden in
100 ml Äthanol 95 bis 96 v. H. (V/V) gelöst;
3.3. Borsäurelösung: 10 g Borsäure p.a. werden in einem 1-l-Meßkolben in
200 ml Äthanol 95 bis 96 v. H. (V/V) und 700 ml Wasser gelöst. Vom
Indikator (3.2) werden 10 ml hinzugefügt. Die Lösung wird gemischt
und nötigenfalls unter Zusatz von Natriumhydroxidlösung auf eine hell-
rote Farbe gebracht. 1 ml dieser Lösung kann bis zu 300 µg NH3binden;
3.4. Gesättigte Kaliumkarbonatlösung: 100 g Kaliumcarbonat p.a. werden in
100 ml siedendem Wasser gelöst; nach dem Abkühlen wird die Lösungfiltriert;
3.5. 0,02 N Schwefelsäure.
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat: ungefähr 35 bis 40 U/Min,
4.2. Conwayschalen (vgl. Skizze) aus Glas oder Plastik,4.3. Mikrobüretten
1
100ml Ablesegenauigkeit.
5.Ausführung
10 g der Probe werden auf 1 mg genau gewogen, mit 100 ml Wasser in einen
200-ml-Meßkolben gegeben und 30 Minuten lang im Schüttelapparat
geschüttelt. Dann werden 50 ml Trichloressigsäurelösung (3.1) hinzugefügt,
mit Wasser bis zur Marke aufgefüllt, kräftig geschüttelt und durch ein Falten-
filter filtriert.
In die Mitte der Conwayschale wird 1 ml Borsäurelösung (3.3) pipettiert, in
den Ring der Schale 1 ml des Probenfiltrats. Die Schale wird mit dem ange-
fetteteten Deckel teilweise bedeckt, dann gibt man schnell 1 ml der
gesättigten Kaliumcarbonatlösung (3.4) in den Ring und verschließt die
Schale luftdicht. Um mit Sicherheit eine Mischung der beiden Reagenzien
zu erreichen, wird die Schale vorsichtig in waagerechter Stellung gedreht.
Darauf läßt man das Ganze mindestens 4 Stunden lang bei Raumtemperatur
oder 1 Stunde lang bei 40 ºC stehen.
Die in der Borsäurelösung enthaltenen flüchtigen Basen werden anschließend
mit 0,02 N Schwefelsäure (3.5) unter Verwendung einer Mikrobürette (4.3)
titriert.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 6
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Nach demselben Verfahren ist ein Blindversuch , ohne die zu analysierende
Probe, durchzuführen.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,02 Schwefelsäure entspricht 0,34 mg Ammoniak.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe bei Gehalten von weniger als 1,0 v. H. Ammoniak 10 v. H.
relativ, bei Gehalten von 1,0 v. H. und mehr 0,1 v. H. absolut nicht über-
schreiten.
7.Bemerkung
Bei einem Gehalt der Probe von mehr als 0,6 v. H. Ammoniak ist das
ursprüngliche Filtrat zu verdünnen.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 7
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CONWAY-SCHALE
Maßstab 1/1
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B. BESTIMMUNG DURCH DESTILLATION
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an flüchtigen stickstoff-
haltigen Basen, ausgedrückt als Ammoniak, in Fischmehl, das praktisch
keinen Harnstoff enthält. Sie ist nur anzuwenden bei Gehalten kleiner als0,25 v. H. Ammoniak.
2.Prinzip
Die Probe wird mit Wasser extrahiert, die Lösung geklärt und filtriert. Die
flüchtigen stickstoffhaltigen Basen werden nach Zusatz von Magnesiu-
moxid in der Siedehitze abgetrennt und in einer definierten Menge
Schwefelsäure aufgefangen, deren Überschuß durch Natriumhydroxidlö-
sung zurücktitriert wird.
3.Reagenzien
3.1. Trichloressigsäurelösung 20 v. H. (G/V),
3.2. Magnesiumoxid p.a.,
3.3. Antischaumemulsion (z. B. Silikon),
3.4. 0,1 N Schwefelsäure,3.5. 0,1 N Natriumhydroxidlösung,
3.6. Methylrotlösung 0,3 v. H. (G/V) in Äthanol 95 - 96 v. H. (V/V).
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr 35 bis 40 U/Min.
4.2. Destillationsapparatur nach Kjeldahl.
5.Ausführung
10 g der Probe werden, auf 1 mg genau gewogen, mit 100 ml Wasser in
einen 200-ml-Meßkolben gegeben und 30 Minuten lang im Schüttelap-
parat geschüttelt.
Dann werden 50 ml Trichloressigsäurelösung (3.1) hinzugefügt, mit
Wasser bis zur Marke aufgefüllt, kräftig geschüttelt und durch ein Falten-
filter filtriert.
Je nach dem vermuteten Gehalt an flüchtigen stickstoffhaltigen Basen
wird eine entsprechende Menge (im allgemeinen 100 ml) des klaren
Filtrats auf 200 ml verdünnt und 2 g Magnesiumoxid (3.2) sowie einige
Tropfen Antischaumemulsion (3.3) hinzugefügt. Die Lösung muß gegen
Lackmuspapier alkalisch reagieren; anderenfalls ist noch Magnesiumoxid
(3.2) zuzusetzen. In der Kjeldahl-Apparatur werden etwa 150 ml der
Lösung abdestilliert und das Destillat in einem Erlenmeyerkolben aufge-
fangen, der eine genau definierte Menge (zwischen 25 und 50 ml) 0,1 N
Schwefelsäure (3.4) enthält. Bei der Destillation ist eine Überhitzung der
Kolbenwände zu vermeiden. Die schwefelsaure Lösung wird 2 Minuten
lang aufgekocht, dann abgekühlt; der Überschuß an Schwefelsäure wird
mit 0,1 N Natriumhydroxidlösung (3.5) nach Zugabe von Methylrot (3.6)
als Indikator zurücktitriert.
Nach demselben Verfahren ist ein Blindversuch , ohne die zu analysie-
rende Probe, durchzuführen.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,1 Schwefelsäure entspricht 1,7 mg Ammoniak.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe 10 v. H. (relativ) Ammoniak nicht überschreiten.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 9
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3.BESTIMMUNG VON GESAMTPHOSPHOR
— photometrische Methode —
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehalts an Gesamtphosphor in
Futtermitteln. Sie ist besonders für die Untersuchung von Futtermitteln mit
einem geringen Gehalt an Phosphor geeignet. In bestimmten Fällen (phos-
phorreiche Erzeugnisse) kann eine gravimetrische Methode angewandt
werden.
2.Prinzip
Die Probe wird entweder auf trockenem Wege (besonders bei organischen
Futtermitteln) oder auf nassem Wege (besonders bei Mineralstoffen und flüs-
sigen Futtermitteln) aufgeschlossen und in Säure gelöst. Die Lösung wird mit
dem Vanadatmolybdat-Reagenz behandelt. Die Extinktion der gelb gefärbten
Lösung wird bei 430 nm im Spektralphotometer gemessen.
3.Reagenzien
3.1. Calciumcarbonat p. a.,3.2. Salzsäure p. a., D: 1,1 (etwa 6 N),3.3. Salpetersäure p. a., D: 1,045,3.4. Salpetersäure p. a., D: 1,38 bis 1,42,3.5. Schwefelsäure p. a., D: 1,84.
3.6. Vanadatmolybdat-Reagenz: 200 ml Ammoniumheptamolybdatlösung
(3.6.1) werden mit 200 ml Ammoniummonovanadatlösung (3.6.2) und
134 ml Salpetersäure (3.4) in einem l-l-Meßkolben gemischt und bis
zur Marke mit Wasser aufgefüllt.
3.6.1. Ammoniumheptamolybdatlösung: 100 g Ammoniumheptamo-
lybdat p. a., (NH
4)6Mo7O24·4 H2O, werden in warmem Wasser
gelöst. 10 ml Ammoniak (D: 0,91) werden hinzugefügt, und das
Volumen wird mit Wasser auf 1 l ergänzt.
3.6.2. Ammoniummonovanadatlösung: 2,35 g Ammoniummonovanadat
p. a, NH4VO3, werden in 400 ml warmem Wasser gelöst. 20 ml
verdünnte Salpetersäure (7 ml HNO3(3.4) + 13 ml H2O) werden
unter Rühren langsam hinzugefügt, und das Volumen wird auf 1 l
mit Wasser ergänzt.
3.7. Phosphor-Standardlösung 1 mg pro ml: 4,387 g Kaliumdihydrogenphos-
phat p. a., KH2PO4, werden in Wasser gelöst und auf 1 l mit Wasser
aufgefüllt.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Quarz oder Porzellan,4.2. elektrischer Muffelofen mit Thermostat auf 550ºC geregelt,4.3. Kjeldahlkolben, 250 ml,4.4. Meßkolben und Präzisions-Pipette,4.5. Spektralphotometer,4.6. Reagenzgläser, ca. 16 mm Durchmesser mit N 14,5; Fassungsvermögen:
2 5—3 0m l .
5.Ausführung
5.1.Vorbereitung der Lösung
Je nach der Art der Probe wird die Lösung, wie unter 5.1.1 oder 5.1.2
angegeben, vorbereitet.
5.1.1.Allgemeines Verfahren
1 g oder mehr der Probe werden auf 1 mg genau eingewogen und
in einen Kjeldahlkolben gebracht. 20 ml Schwefelsäure (3.5)
werden hinzugefügt; dann wird umgeschüttelt, um das Material
mit der Säure gut zu benetzen und zu verhindern, daß es an den
Wandungen des Kolbens anhaftet; anschließend wird erhitzt und
10 Minuten im Sieden gehalten. Nach geringem Abkühlen1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 10
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werden 2 ml Salpetersäure (3.4) hinzugefügt; es wird schwach
erhitzt und wieder etwas abgekühlt. Dann wird erneut wenig
Salpetersäure (3.4) hinzugegeben, zum Sieden erhitzt und das
Verfahren so oft wiederholt, bis die Lösung farblos geworden
ist. Hierauf wird abgekühlt, etwas Wasser zugesetzt und die Flüs-
sigkeit in einen 500-ml-Meßkolben überführt, wobei der
Kjeldahlkolben mit warmem Wasser ausgespült wird. Nach
Abkühlen wird zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt und filtriert.
5.1.2.Verfahren für Proben, die organische Stoffe enthalten, aber frei
sind von Calcium- bzw. Magnesium-dihydrogenphosphaten
Etwa 2,5 g der Probe werden auf 1 mg genau in eine
Veraschungsschale eingewogen und mit 1 g Calciumcarbonat
(3.1) innig gemischt. Im Muffelofen wird bei 550ºC ± 5ºC
verascht, bis die Asche weiß oder grau ist (kleine Mengen Kohle
stören nicht).
Die Asche wird in ein 250-ml-Becherglas gebracht, 20 ml Wasser
und soviel Salzsäure (3.2) zugefügt, bis das Aufbrausen ausbleibt;
zuletzt wird ein Überschuß von 10 ml Salzsäure (3.2) zugegeben.
Dann wird das Becherglas auf ein Sandbad gestellt und bis zur
Trockne eingedampft, um die Kieselsäure unlöslich zu machen.
Der Rückstand wird in 10 ml Salpetersäure (3.3) aufgenommen
und 5 Minuten lang auf dem Sandbad zum Sieden erhitzt, wobei
der Rückstand nicht ganz trocken werden soll. Die Flüssigkeit
wird in einen 500-ml-Meßkolben übergespült, wobei das Becher-
glas mehrmals mit heißem Wasser ausgewaschen wird. Nach
Abkühlen wird mit Wasser zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt
und filtriert.
5.2.Entwicklung der Färbung und Messung der Extinktion
Ein aliquoter Teil des nach 5.1.1 oder 5.1.2 erhaltenen Filtrats wird
verdünnt, um eine Konzentration an Phosphor von höchstens 40 µg/ml
zu erhalten. 10 ml dieser Lösung werden in ein Reagenzglas mit Schliff
(4.6) pipettiert und 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) hinzugefügt.
Man schüttelt um und läßt mindestens 10 Minuten lang bei einerTemperatur von 20ºC stehen. Anschließend wird die Extinktion im
Spektralphotometer bei 430 nm gegen eine Lösung von 10 ml Wasser
und 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) gemessen.
5.3.Eichkurve
Aus der Standardlösung (3.7) werden Lösungen, die 5, 10, 20, 30 und
40 µg Phosphor pro ml enthalten, hergestellt. Zu je 10 ml dieser
Lösungen werden 10 ml Vanadatmolybdat-Reagenz (3.6) hinzugefügt.
Man schüttelt um und läßt mindestens 10 Minuten lang bei einer
Temperatur von 20ºC stehen. Dann wird die Extinktion unter den bei
5.2 angegebenen Bedingungen gemessen. Die Eichkurve wird aufge-
stellt, indem die Extinktionswerte in die Ordinate und die
entsprechende Phosphormenge in die Abszisse eingetragen werden. Die
Kurve ist linear für die Konzentrationen an Phosphor von 0 bis 40 µg/
ml.
6.Berechnung der Ergebnisse
Der Gehalt an Phosphor der Analysenprobe wird unter Benutzung der Eich-
kurve bestimmt.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe bei Gehalten von
weniger als 5 v. H. Phosphor 3 v. H. relativ, bei Gehalten
von 5 v. H. Phosphor und mehr 0,15 v. H. absolut nicht überschreiten.
4.BESTIMMUNG VON ROHFETT
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode dient zur Bestimmung des Rohfettgehalts von Futtermitteln. Sie
bezieht sich nicht auf die Untersuchung von Ölsaaten und Ölfrüchten im
Sinne der Verordnung Nr. 136/66/EWG des Rates vom 22. September 1966.
Die Bestimmung des Ölgehalts dieser Erzeugnisse wird in der Anlage V der1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 11
▼B
Verordnung (EWG) Nr. 1470/68 der Kommission vom 23. September 1968
festgelegt. Je nach Art des Futtermittels sind zwei Verfahren vorgesehen.
1.1.Verfahren A (Ätherextrakt): ist auf alle Futtermittel anzuwenden, mit
Ausnahme der in 1.2 genannten.
1.2.Verfahren B: ist anzuwenden auf Futtermittel, deren Fett nicht ohne
vorherige Hydrolyse gänzlich mit Diäthyläther extrahiert werden kann,
Futtermittel tierischer Herkunft, Kleber, getrocknete Kartoffelpülpe,
getrocknete Brauerei- und Brennereitreber, Trockenhefe, Reste von
Keksen, Brot und gekochten Nahrungsmitteln, Milchprodukte sowie auf
Mischfuttermittel mit einem hohen Anteil an solchen Erzeugnissen
(mindestens 40 v. H.) und auf mit Fett angereicherte Mischfuttermittel.
2.Prinzip
2.1.Verfahren A: Das Fett wird mit Diäthyläther extrahiert. Das Lösungs-
mittel wird abdestilliert und der Ätherextrakt getrocknet und gewogen.
2.2.Verfahren B: Die Probe wird heiß mit Salzsäure hydrolysiert. Die
Lösung wird abgekühlt und filtriert. Der gewaschene und getrocknete
Rückstand wird nach dem Verfahren A mittels Diäthyläther extrahiert.
3.Reagenzien
3.1. Diäthyläther, wasserfrei, D: 0,720, Kp: 43,5 ºC, praktisch frei von Pero-
xiden,
3.2. Natriumsulfat p. a., wasserfrei,
3.3. 3 N Salzsäure,3.4. Filtrationsmittel, z. B. Kieselgur, Hyflo-supercel,3.5. Tetrachlorkohlenstoff p. a.
4.Geräte
4.1. Extraktionsapparat nach Soxhlet oder gleichwertiges Gerät,
4.2. Heizapparat mit Temperaturregulierung, explosionssicher,
4.3. Vakuumtrockenschrank (weniger als 100 Torr).
5.Ausführung
5.1.Verfahren A (s. Bemerkungen 7.1)
5 g der Probe werden auf 1 mg genau abgewogen und mit 2 bis 3 g
(nötigenfalls mehr) wasserfreiem Natriumsulfat (3.2) gemischt. Das
Gemisch wird in eine fettfreie Extraktionshülse gefüllt und mit einem
entfetteten Wattepropfen bedeckt.
Die Hülse wird in einen Extraktionsapparat (4.1) gesteckt und sechs
Stunden lang mit Diäthyläther (3.1) extrahiert. Bei Anwendung eines
Extraktionsapparats nach Soxhlet ist die Heizung so einzustellen, daß
mindestens 15 mal in der Stunde abgehebert wird. Der Extrakt wird in
einem trockenen, mit einigen Stückchen Bimsstein(
1) versehenen,
tarierten Kolben aufgefangen.
Der Äther wird abdestilliert und der Rückstand anschließend eineinhalb
Stunden lang im Vakuumtrockenschrank (4.3) bei 75 ºC getrocknet.
Nach dem Abkühlen im Exsikkator wird der Rückstand gewogen. Durch
eine zweite Trocknung von 30 Minuten Dauer vergewissert man sich, ob
das Gewicht des Fettes konstant geblieben ist (der Gewichtsverlust muß
unter 1 mg bleiben).
5.2.Verfahren B
2,5 g der Probe (s. Bemerkungen 7.2) werden auf 1 mg genau abge-
wogen und in ein 400-ml-Becherglas oder einen 300-ml-
Erlenmeyerkolben gebracht. Anschließend werden 100 ml 3 N Salzsäure
(3.3) und einige Stückchen Bimsstein hinzugefügt. Das Becherglas wird
mit einem Uhrglas bedeckt, bzw. der Erlenmeyerkolben wird mit einen
Rückflußkühler versehen.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 12
(1) Wenn das Fett später qualitativ untersucht werden soll, sind die Bimssteinstückchen
durch Glasperlen zu ersetzen.
▼B
Das Gemisch wird auf kleiner Flamme oder auf einer Heizplatte zu
leichtem Sieden gebracht und eine Stunde lang so gehalten. Es ist zu
verhindern, daß das Material sich an den Wänden des Gefäßes festsetzt.
Dann wird abgekühlt und so viel vom Filtrationsmittel (3.4) zugesetzt,
daß beim Filtrieren kein Fettverlust eintritt. Filtriert wird unter Verwen-
dung eines feuchten, fettfreien doppelten Papierfilters. Der Rückstand
wird bis zum Verschwinden der sauren Reaktion mit kaltem Wasser
gewaschen. Danach ist zu prüfen, ob das Filtrat noch Fett enthält.
Vorhandensein von Fett im Filtrat zeigt, daß vor der Hydrolyse eine
Extraktion der Probe mit Diäthyläther nach dem unter 5.1 beschriebenen
Verfahren vorzunehmen ist.
Der doppelte Filter mit dem Rückstand ist auf ein Uhrglas zu legen und
eineinhalb Stunden lang bei 95 bis 98 º C im Trockenschrank zu
trocknen.
Der trockene Rückstand und der doppelte Filter werden in eine Extrak-
tionshülse gebracht und mit Diäthyläther extrahiert. Dann wird wie unter
5.1, 2. Absatz, beschrieben fortgefahren.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
Wiederholbarkeit
Der Unterschied zwischen zwei Parallelbestimmungen darf bei ein und
derselben Probe 0,3 v. H. Rohfett nicht überschreiten.
7.Bemerkungen
7.1. Bei Erzeugnissen mit hohem Fettgehalt, die schwer zu zerkleinern sind
oder sich zur Entnahme einer reduzierten homogenen Probe nicht
eignen, ist folgendermaßen zu verfahren: 20 g der Probe werden auf
1 mg genau abgewogen und mit 10 g oder mehr wasserfreiem Natrium-
sulfat (3.2) gemischt. Dann wird mit Diäthyläther (3.1) wie unter 5.1
beschrieben extrahiert. Der dabei aufgefangene Extrakt wird mit
Tetrachlorkohlenstoff (3.5) auf 500 ml aufgefüllt und gemischt. Von
der Lösung werden 50 ml entnommen und in einen kleinen, trockenen,
mit Bimssteinkörnchen versehenen(1) und tarierten Kolben gebracht.
Das Lösungsmittel wird abdestilliert; dann wird wie unter 5.1, letzter
Absatz, beschrieben getrocknet und weiter verfahren. Der Extraktions-
rückstand in der Hülse wird vom Lösungsmittel befreit und auf 1 mm
zerkleinert. Das Material wird in die Extraktionshülse zurückgebracht
(kein Natriumsulfat hinzufügen) und mit Diäthyläther extrahiert; dann
wird wie unter 5.1, zweiter und dritter Absatz, beschrieben fortgefahren.
Das Endergebnis wird unter Berücksichtigung des aliquoten Teiles bei
der 1. Extraktion ermittelt und in Hundertteilen der Probe wie folgt
ausgedrückt:
(10 a + b) · 5
a = Ätherextrakt in Gramm nach der 1. Extraktion im aliquoten Teil,
b = Ätherextrakt in Gramm nach der 2. Extraktion.
7.2. Bei fettarmen Erzeugnissen kann mit einer Einwaage von 5 g gearbeitet
werden.1971L0393 — DE — 15.12.1972 — 001.001 — 13
(1) Wenn das Fett später qualitativ untersucht werden soll, sind die Bimssteinstückchen
durch Glasperlen zu ersetzen.