1998R1459 — DE — 03.02.1999 — 001.001 — 1
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►B VERORDNUNG (EG) Nr. 1459/98 DER KOMMISSION
vom 8. Juli 1998
zur Festlegung eines Referenzverfahrens zur Bestimmung von Vanillin in Butterfett, Butter oder
Rahm
(ABl. L 193 vom 9.7.1998, S. 16)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Verordnung (EG) Nr. 175/1999 der Kommission vom 26. Januar 1999 L 20 22 27.1.1999
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VERORDNUNG (EG) Nr. 1459/98 DER KOMMISSION
vom 8. Juli 1998
zur Festlegung eines Referenzverfahrens zur Bestimmung von
Vanillin in Butterfett, Butter oder Rahm
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft,
gestützt auf die Verordnung (EWG) Nr. 804/68 des Rates vom 27. Juni
1968 über die gemeinsame Marktorganisation für Milch und Milcher-zeugnisse (
1), zuletzt geändert durch die Verordnung (EG) Nr. 1587/
96 (2), insbesondere auf Artikel 6 Absatz 6 und Artikel 12 Absatz 3,
in Erwägung nachstehender Gründe:Die Verordnung (EG) Nr. 2571/97 über den Verkauf von Billigbutter
und die Gewährung einer Beihilfe für Rahm, Butter und Butterfett fürdie Herstellung von Backwaren, Speiseeis und anderen Lebensmit-teln (
3) sieht vor, Rahm, Butter und Butterfett unter bestimmten
Umständen zu kennzeichnen, um eine ordnungsgemäße Verwendungdieser Erzeugnisse zu gewährleisten.
Die Kennzeichnung ist für ein reibungsloses Funktionieren des Systems
und die Gleichbehandlung der Wirtschaftsteilnehmer von grundlegenderBedeutung. Es ist daher angezeigt, gemeinsame Verfahren für dieBestimmung der Kennzeichnungsmittel gemäß der Verordnung (EG)Nr. 2571/97 festzulegen.
Es ist jedoch schwierig, solche Referenzverfahren für alle Kennzeich-
nungsmittel gleichzeitig festzulegen. Die Festlegung eines Referenzver-fahrens zur Bestimmung von Vanillin in Butterfett, Butter oder Sahnestellt daher einen weiteren Schritt in diese Richtung dar.
Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Verwaltungsausschusses für Milch und Milcher-zeugnisse —
HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:
Artikel 1
Das im Anhang beschriebene Analyseverfahren wird im Rahmen der
Verordnung (EG) Nr. 2571/97 als Referenzverfahren zur Bestimmungvon Vanillin in Butterfett, Butter oder Rahm eingesetzt.
Butterfett, Butter oder Rahm sind gemäß Artikel 6 der Verordnung (EG)
Nr. 2571/97 gekennzeichnet worden, wenn die Ergebnisse die Bedin-gungen von Nummer 8 des Anhangs erfüllen.
Artikel 2
Diese Verordnung tritt am dritten Tag nach ihrer Veröffentlichung im
Amtsblatt der Europäischen Gemeinschaften in Kraft.
Sie gilt ab 1. September 1998.
Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmit-
telbar in jedem Mitgliedstaat.
(1) ABl. L 148 vom 28. 6. 1968, S. 13.
(2) ABl. L 206 vom 16. 8. 1996, S. 21.
(3) ABl. L 350 vom 20. 12. 1997, S. 3.
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ANHANG
Bestimmung des Vanillingehalts in Butterfett, Butter oder Rahm durch
Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie
1.Zweck und Anwendungsbereich
Beschrieben wird ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von
Vanillin in Butterfett, Butter oder Sahne.
Das Verfahren ist für Proben im Rahmen der Verordnung (EG) Nr.
2571/97 zu verwenden.
2.Prinzip
Extraktion einer bekannten Probemenge mit Hilfe eines Isopropanol-
Ethanol-Acetonitril-Gemisches (1:1:2). Abscheidung des Hauptteils desFetts durch Kühlung bei −15 °C bis −20 °C und anschließendes Zentrifu-
gieren.
Nach Verdünnung mit Wasser Bestimmung des Vanillingehalts durch
Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC).
3.Geräte
Normale Laborausstattung und insbesondere:
3.1. Gefrierschrank mit Kühltemperatur zwischen −15 °C und −20 °C
3.2. Einwegspritzen, 2 ml3.3. Membranmikrofilter (Porengröße 0,45 µm), beständig gegen eine Lösung
mit 5 %-Extraktionslösung (4.4)
3.4. Flüssigkeitschromatographie-System, bestehend aus einer Pumpe (Durch-
fluß von 1,0 ml/min), einem Injektor (20 µl Injektion, automatisch oder
manuell), einem UV-Detektor (306 nm, 0,01 AU gesamter Bereich),einem Aufzeichnungsgerät oder Integrator und einem Säulenthermostatbei 25 °C
3.5. Analysesäule (250 mm × 4,6 mm I.D.), gepackt mit LiChrospher RP 18
(Merck, 5 µm) oder gleichwertigem Material
3.6. Vorsäule (ca. 20 m m×3m m I.D.), trocken gepackt mit Perisorb RP 18
(30 bis 40 µm) oder gleichwertigem Material
4.Reagenzien
Alle verwendeten Reagenzien müssen analysenrein sein.
4.1. Isopropanol4.2. Ethanol 96 % (v/v)4.3. Acetonitril4.4. Extraktionslösung
Gemisch aus Isopropanol (4.1), Ethanol (4.2) und Acetonitril (4.3) im
Verhältnis 1:1:2 (V/V)
4.5. Vanillin (4-Hydroxy-3-methoxybenzaldehyd)4.5.1. Vanillin-Stammlösung (=500 µg/ml)
Etwa 50 mg Vanillin (4.5) auf 0,1 mg (CM mg) genau in einen 100-ml-
Meßkolben einwiegen, 25 ml Extraktionslösung (4.4) hinzufügen und mitWasser auffüllen.
4.5.2 Vanillin-Standardlösung (=10 µg/ml)
5 ml der Vanillin-Stammlösung (4.5.1) in einen 250-ml-Meßkolben pipe-
ttieren und mit Wasser auffüllen.
4.6. Methanol, HPLC Qualität4.7. Eisessig4.8. Wasser, HPLC Qualität4.9. HPLC mobile Phase
300ml Methanol (4.6) und etwa 500 ml Wasser (4.8) und 20 ml Essig-
säure (4.7) in einem 1 000-ml-Meßkolben mischen, mit Wasser (4.8)auffüllen und durch den 0,45- µm-Filter filtern.
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5.Durchführung
5.1.Vorbereitung der Probe
5.1.1. Butter
Die Probe erhitzen, bis sie zu schmelzen beginnt. Ein lokales Erhitzen auf
über 40 °C ist zu vermeiden. Wenn die Probe ausreichend pastös ist, durch
Schütteln homogenisieren. Die Butter 15 s lang rühren und anschließendeine Probe nehmen . 5 g (SM g) Butter auf 1 mg genau in einen 100-ml-
Meßkolben einwiegen.
5.1.2. Butterfett
Unmittelbar vor der Probenahme den Behälter mit dem Butterfett in einen
Ofen bei 40 bis 50 °C geben, bis das Butterfett komplett geschmolzen ist.
Die Probe durch Schütteln oder Rühren vermischen, wobei die Bildungvon Blasen durch zu starkes Rühren zu vermeiden ist. Etwa 4 g (SM g)Butterfett auf 1 mg genau in einen 100-ml-Meßkolben einwiegen.
5.1.3. Rahm
Die Probe im Wasserbad oder Wärmeschrank auf eine Temperatur von 35
bis 40 °C erhitzen. Das Fett durch Schütteln und falls notwendig durch
Rühren homogen verteilen. Die Probe schnell auf 20 ± 2 °C abkühlen. Die
Probe sollte homogen aussehen, ansonsten ist das Verfahren zu wieder-holen. Etwa 10 g (SM g) Rahm auf 1 mg genau in einen 100-ml-Meßkolben einwiegen.
5.2.Vorbereitung der Versuchslösung
Der Probe (5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3) etwa75 ml der Extra ktionslösung (4.4)
hinzufügen, ca. 15 Minuten lang umrühren oder stark schütteln und mitExtraktionslösung (4.4) auffüllen. Etwa 10 ml dieses Extrakts in einReagenzglas mit Stopfen geben. Das Reagenzglas in den Gefrierschrank(3.1) setzen und ca. 30 Minuten stehenlassen. Den kalten Extrakt 5Minuten lang bei etwa 2 000 rpm zentrifugieren und unmittelbar abgießen.Die abgegossene Lösung auf Zimmertemperatur abkühlen lassen. 5 ml derabgegossenen Lösung in einen 100-ml-Meßkolben pipettieren und mitWasser auffüllen. Einen aliquoten Teil durch einen Membranmikrofilter(3.3) filtern. Das Filtrat ist für die HPLC bereit.
5.3. Ka librierlösung
5 ml der Vanillin-Standardlösung (4.5.2) in einen 100-ml-Meßkolben
pipettieren. 5,0 ml Extraktionslösung (4.4) hinzufügen und bis zur Markie-rung mit Wasser auffüllen. Diese Lösung enthält 0,5 µg/ml Vanillin.
5.4.Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie
Den Chromatographen ca. 30 Minuten lang stabilisieren lassen, dann die
Standardlösung einspritzen. Diesen Vorgang wiederholen, bis die Diffe-renz der Peakflächen oder Peakhöhen zwischen zwei aufeinanderfol-genden Einspritzungen weniger als 2 % beträgt. Unter den beschriebenenBedingungen beträgt die Retentionszeit von Vanillin etwa 9 Minuten. DieKalibrierlösung (5.3) wird doppelt analysiert, indem 20 µl eingespritzt
werden. 20 µl der Versuchslösungen (5.2) einspritzen. Die Peakflächen
oder -höhen für Vanillin bestimmen. Nach 10 Einspritzungen derVersuchsproben (5.2) doppelte Einspritzung der Kalibrierlösung wieder-holen.
6.Berechnung der Ergebnisse
Für jede Partie Versuchslösungen die durchschnittliche Peakfläche (oder
-höhe) (AC) der Vanillin-Peaks in Zusammenhang mit den umgebendenDoppeleinspritzungen der Kalibrierlösung berechnen (insgesamt 4Flächen).
Der Responsfaktor (R) wird folgendermaßen berechnet:
R = AC/CM
Dabei ist CM die Masse des Vanillins in mg (4.5.1).
Der Vanillin-Anteil (C) der Versuchsprobe (in mg/kg) wird wie folgt
berechnet:
C=AS × 20 × 0,96
S M×R
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Dabei ist:
AS = die Peakfläche des Vanillin-Peaks der Versuchsprobe,
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SM = die Masse der Versuchsprobe in g (5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3).
Bei der Untersuchung von Rahm auf Vanillin wird die Kennzeich-
nungsmittelkonzentration als mg Kennzeichnungsmittel/kg Milch-fett ausgedrückt. Dazu wird C mit 100/f multipliziert. Bei fhandelt es sich um den Fettgehalt von Rahm in Prozent (m/m),
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20 = der Faktor zur Berücksichtigung der Verdünnung der Standard-
und der Versuchsprobe,
0,96 = der Korrekturfaktor für den Fettgehalt in der ersten Verdünnung
der Versuchsprobe.
Anmerkung:
Anstelle von Peakflächen können auch Peakhöhen verwendet werden
(siehe 8.3).
7.Genauigkeit des Verfahrens
7.1. Wiederholbarkeit (r)
Die Differenz zwischen den Ergebnissen von zwei Bestimmungen, die
innerhalb der kürzest möglichen Zeitspanne von einem Analytiker mitdenselben Geräten an derselben Probe durchgeführt wurden, darf nichthöher als 16 mg/kg liegen.
7.2. Reproduzierbarkeit (R)
Die Differenz zwischen den Ergebnissen von zwei Bestimmungen, die
von Laboranten in verschiedenen Laboratorien mit verschiedenen Gerätenan derselben Probe durchgeführt wurden, darf nicht höher als 27 mg/kgliegen.
8.Toleranzgrenzen
8.1. Dem gekennzeichneten Erzeugnis sind drei Proben zu entnehmen, um die
Homogenität zu prüfen.
8.2. Das Kennzeichnungsmittel wird entweder aus Vanille oder aus syntheti-
schem Vanillin gewonnen.
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8.2.1. Die Beimischungsquote für 4-Hydroxy-3-methoxybenzaldehyd beträgt
250 Gramm je Tonne Butterfett oder Butter. Bei der Kennzeichnung vonRahm beträgt die Beimischungsquote 250 Gramm je Tonne Milchfett.
8.2.2. Die bei der Analyse der drei Proben des Erzeugnisses erzielten Ergeb-
nisse werden zur Kontrolle der Kennzeichnungsstoff-Beimischungsquoteund der Kennzeichnungsstoffreinheit verwendet, wobei das niedrigsteErgebnis mit folgenden Grenzwerten (kritische Differenz für einen 95 %-Vertrauensbereich (CrD95-Wert)) verglichen wird:
— 221,0 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote),
— 159,0 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote).
Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem nied-
rigsten Ergebnis, das man durch Interpolierung zwischen 221,0 mg/kg und159,0 mg/kg erhält, verwendet.
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8.3. Das Kennzeichnungsmittel wird ausschließlich aus Vanilleschoten oder
deren vollständigen Auszügen gewonnen.
▼M1
8.3.1. Die Beimischungsquote für 4-Hydroxy-3-methoxybenzaldehyd beträgt
100 Gramm je Tonne Butterfett oder Butter. Bei der Kennzeichnung vonRahm beträgt die Beimischungsquote 100 Gramm je Tonne Milchfett.
8.3.2. Die bei der Analyse der drei Proben des Erzeugnisses erzielten Ergeb-
nisse werden zur Kontrolle der Kennzeichnungsstoff-Beimischungsquoteund der Kennzeichnungsstoffreinheit verwendet, wobei das niedrigsteErgebnis mit folgenden Grenzwerten (kritische Differenz für einen 95 %-Vertrauensbereich (CrD95-Wert)) verglichen wird:
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— 79,0 mg/kg (95 % der Beimischungsmindestquote),
— 54,0 mg/kg (70 % der Beimischungsmindestquote).
Es wird die Kennzeichnungsmittelkonzentration der Probe mit dem nied-
rigsten Ergebnis, das man durch Interpolierung zwischen 79,0 mg/kg und54,0 mg/kg erhält, verwendet.
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9.Anmerkungen
9.1. Die Wiederholbarkeit r ist der Wert, unter dem der absolute Unterschied
zwischen zwei einzelnen Versuchsergebnissen bei gleicher Methode undam gleichen Material unter den gleichen Bedingungen (gleiches Gerät,gleiches Laboratorium und kurzer zeitlicher Abstand) innerhalb einergewissen Wahrscheinlichkeit liegen müßte. Liegen keine anderenAngaben vor, so beträgt die Wahrscheinlichkeit 95 %.
9.2. Die Vergleichbarkeit R ist der Wert, unter dem der absolute Unterschied
zwischen zwei einzelnen Versuchsergebnissen bei gleicher Methode undam gleichen Material unter unterschiedlichen Bedingungen (andere Analy-tiker, anderes Gerät, andere Laboratorien und/oder zu anderer Zeit) inner-halb einer gewissen Wahrscheinlichkeit liegen müßte. Liegen keineanderen Angaben vor, so beträgt die Wahrscheinlichkeit 95 %.
9.3. Die Wiederfindung von Vanillinzusätzen liegt bei einer Menge von 250
mg/kg Butterfett zwischen 97 und 103,8 %. Durchschnittlich wurden99,9 % mit einer Standardabweichung von 2,7 % ermittelt.
9.4. Die Standardlösung enthält 5 % Extraktionslösung, um die Peakerweite-
rung durch die in den Proben vorhandenen 5 % Extraktionslösung zukompensieren. Dadurch wird eine Quantifizierung über die Peakhöhenmöglich.
9.5. Die Analyse basiert auf einer linearen Kalibrierungslinie mit Nullachsen-
abschnitt. Die Linearität sollte bei der ersten Analyse und später in regel-mäßigen Abständen und nach Änderungen oder Reparaturen der HPLC-Geräte durch Verwendung geeigneter Verdünnungen der Standardlösung(4.5.2) geprüft werden.