1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 1
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►B ERSTE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 15. Juni 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futter-
mitteln
(71/250/EWG)
(ABl. L 155 vom 12.7.1971, S. 13)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 81/680/EWG der Kommission vom 30. Juli 1981 L 246 32 29.8.1981
►M2Richtlinie 98/54/EG der Kommission vom 16. Juli 1998 L 208 49 24.7.1998
►M3Richtlinie 1999/27/EG der Kommission vom 20. April 1999 L 118 36 6.5.1999
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ERSTE RICHTLINIE DER KOMMISSION
vom 15. Juni 1971
zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln
(71/250/EWG)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-
meinschaft,
gestützt auf die Richtlinie des Rates vom 20. Juli 1970 über die Einfüh-
rung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren und Analysemethoden
für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1), insbesondere auf
Artikel 2,
in Erwägung nachstehender Gründe:Die obengenannte Richtlinie bestimmt, daß die amtlichen Untersu-
chungen von Futtermitteln zur Feststellung, ob die auf Grund derRechts- und Verwaltungsvorschriften festgelegten Vorschriftenhinsichtlich der Beschaffenheit und der Zusammensetzung der Futter-
mittel erfüllt sind, nach gemeinschaftlichen Probenahmeverfahren und
Analysemethoden durchgeführt werden.
Es erscheint nunmehr geboten, schnellstmöglich zu einer Festlegung
aller erforderlichen Analysemethoden zu gelangen. Einen ersten Schrittsollen dabei die Methoden für die Bestimmung von Blausäure,Calcium, Carbonaten, Rohasche, in Salzsäure unlöslicher Asche, Chlor
aus Chloriden, Senföl, Lactose, Kalium, Natrium, Zucker, Theobromin
und Harnstoff, die Bestimmung von Alkaloiden in Lupinen und dieBestimmung der Ureaseaktivität von Sojaprodukten bilden.
Die in dieser Richtlinie vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Ständigen Futtermittelausschusses —
HAT FOLGENDE RICHTLINIE ERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaaten schreiben vor, daß die Analysen für die amtliche
Untersuchung von Futtermitteln auf ihren Gehalt an Blausäure,Calcium, Carbonaten, Rohasche, in Salzsäure unlöslicher Asche, Chlor
aus Chloriden ►
M3 ◄, Lactose, Kalium, Natrium,
Zucker►M3 ◄und Harnstoff ►M2 ◄
sowie auf die Ureaseaktivität von Sojaprodukten nach den in derAnlage zu dieser Richtlinie beschriebenen Methoden durchgeführtwerden.
Die sich in Teil 1 der Anlage befindlichen allgemeinen Bestimmungen
gelten für Analysemethoden, die gemäß der Richtlinie 70/373/EWG
des Rates verabschiedet wurden
Artikel 2
Die Mitgliedstaaten setzen spätestens am 1. Juli 1972 die erforderlichen
Rechts- oder Verwaltungsvorschriften in Kraft, um den Bestimmungendieser Richtlinie nachzukommen. Sie setzen die Kommission unverzüg-lich davon in Kenntnis.
Artikel 3
Diese Richtlinie ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 2
(1) ABl. Nr. L 170 vom 3. 8. 1970, S. 2.▼M1
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ANLAGE
ANALYSENMETHODEN FÜR FUTTERMITTELBESTANDTEILE
1.ALLGEMEINE BESTIMMUNGEN ÜBER ANALYSEMETHODEN
FÜR FUTTERMITTEL
A. VORBEREITUNG DER PROBEN ZUR ANALYSE
1.Zweck
Die nachfolgend beschriebenen Verfahren beziehen sich auf die Vorberei-
tung der zur Analyse bestimmten Endproben, die gemäß den
Bestimmungen der ersten Richtlinie 76/371/EWG der Kommission vom 1.
März 1976 zur Festlegung gemeinschaftlicher Probenahmeverfahren für die
amtliche Untersuchung von Futtermitteln(1) entnommen und an die
Kontroll-Laboratorien gesandt werden.
Die Vorbereitung dieser Proben ist so vorzunehmen, daß die in den Analy-
semethoden vorgesehenen Einwaagen homogen und repräsentativ für die
Endprobe sind.
2.Vorsichtsmaßnahmen
Alle notwendigen Schritte sind so durchzuführen, daß eine Verunreinigung
der Probe oder eine Veränderung ihrer Zusammensetzung soweit wie
möglich vermieden wird. Das Zerkleinern, Mischen und Sieben ist
möglichst rasch durchzuführen, wobei die Probe möglichst wenig Luft und
Licht ausgesetzt wird. Die Verwendung von Mühlen oder Zerkleinerungs-
geräten, die zu einer merklichen Erwärmung der Probe führen könnten, ist
zu vermeiden. Für besonders hitzeempfindliche Futtermittel wird manuelles
Zerkleinern empfohlen. Es ist außerdem darauf zu achten, daß die verwen-
deten Geräte keine Kontaminationsquelle für Spurenelemente bilden.
Kann die Probe nicht ohne merkliche Veränderung ihres Feuchtigkeitsge-
halts vorbereitet werden, so erfolgt dessen Bestimmung vor und nach der
Vorbereitung nach dem Verfahren von Teil 1 des Anhangs der zweiten
Richtlinie 71/393/EWG der Kommission vom 18. November 1971 zur Fest-
legung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung
von Futtermitteln(2), geändert durch die Richtlinie 73/47/EWG der
Kommission vom 5. Dezember 1972(3).
3.Verfahren
Die Endprobe wird mechanisch oder manuell gründlich gemischt und in
zwei gleiche Teile geteilt (sofern möglich, sollte das Vierteilungsverfahren
angewendet werden). Ein Teil wird in einem geeigneten sauberen, trok-
kenen, luftdicht verschließbaren Gefäß aufbewahrt; der andere Teil oder
eine repräsentative Menge davon (mindestens 100 g) wird wie folgt vorbe-
reitet:
3.1.Futtermittel, die direkt gemahlen werden können
Sofern keine besonderen Angaben in der Analysemethode gemacht werden,
wird die gesamte Probe erforderlichenfalls zerkleinert und durch ein Sieb
mit einer Maschenweite von 1 mm Seitenlänge (entsprechend der Empfeh-
lung ISO R 565) vollständig passiert. Zu starkes Zerkleinern ist zu
vermeiden. Die gesiebte Probe wird gemischt und in ein geeignetes
sauberes, trockenes, luftdicht verschließbares Gefäß abgefüllt. Unmittelbar
vor der Einwaage muß die Probe jedesmal gemischt werden.
3.2.Futtermittel, die nach Trocknung gemahlen werden können
Sofern keine besonderen Angaben in der Analysemethode gemacht werden,
wird die Probe bis auf einen Feuchtigkeitsgehalt von 8 bis 12 % unter
Anwendung des unter Punkt 4.3 der Methode zur Bestimmung des Feuch-
tigkeitsgehalts (siehe vorstehenden Punkt 2) vorgesehenen
Vortrocknungsverfahrens vorgetrocknet. Die weitere Vorbereitung erfolgt
gemäß Punkt 3.1.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 3
(1) ABl. Nr. L 102 vom 15. 4. 1976, S. 1.
(2) ABl. Nr. L 279 vom 20. 12. 1971, S. 7.
(3) ABl. Nr. L 83 vom 30. 3. 1973, S. 35.▼M1
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3.3.Flüssige oder halbflüssige Futtermittel
Die Probe wird in ein geeignetes sauberes, trockenes, luftdicht verschließ-
bares Gefäß abgefüllt und unmittelbar vor der Einwaage gründlich
gemischt.
3.4.Andere Futtermittel
Futtermittel, die nach keinem der oben genannten Verfahren vorbereitet
werden können, sind durch irgendein anderes Verfahren zu behandeln, das
eine homogene und repräsentative Einwaage der Endprobe gestattet.
4.Aufbewahrung der Proben
Die Proben müssen bei einer Temperatur gelagert werden, die ihre Zusam-
mensetzung nicht beeinflußt. Für Proben, die zur Analyse von Vitaminen
oder besonders lichtempfindlichen Substanzen bestimmt sind, werden
braune Glasgefäße verwendet.
B. BESTIMMUNGEN ÜBER IN ANALYSEVERFAHREN VERWENDETE
REAGENZIEN UND GERÄTE
1. Vorbehaltlich besonderer Angaben in den Analysemethoden müssen alle
zur Analyse verwendeten Reagenzien von p.a. Qualität sein. Bei der
Analyse von Spurenelementen muß die Reinheit der Reagenzien in einem
Reagenzienblindversuch überprüft werden. Je nach dem erhaltenen Wert
kann eine weitere Reinigung der Reagenzien erforderlich sein.
2. Jeder in den Analysemethoden erwähnte Lösungs-, Verdünnungs-, Spül-
oder Auswaschvorgang ohne Angabe über die Art des zu verwendenden
Lösungs- oder Verdünnungsmittels bedeutet, daß Wasser zu verwenden
ist. Im allgemeinen wird destilliertes oder demineralisiertes Wasser
verwendet. In besonderen in den Analysemethoden angegebenen Fällen
muß das Wasser speziellen Reinigungsverfahren unterzogen werden.
3. Da die übliche Ausstattung von Kontroll-Laboratorien vorausgesetzt wird,
werden nur besondere Instrumente und Geräte oder solche, die speziellen
Anforderungen entsprechen müssen, in den Analysemethoden aufgeführt.
Das Material muß gut gereinigt sein, vor allem bei Bestimmungen von
sehr geringen Substanzmengen.
C. ANWENDUNG VON ANALYSEMETHODEN UND FORMULIERUNG
DER ERGEBNISSE
1. Im allgemeinen wird zur Bestimmung eines Stoffes in Futtermitteln eine
einzige Analysemethode festgelegt. Beim Vorhandensein von mehreren
Methoden muß die vom Kontroll-Laboratorium angewandte Methode im
Analysebericht angegeben werden.
2. Das im Analysebericht angegebene Ergebnis soll den Mittelwert aus
mindestens zwei Bestimmungen von separaten Einwaagen der Probe mit
ausreichender Wiederholbarkeit darstellen.
Dieses Ergebnis ist gemäß den Angaben in den Analysemethoden mit einer
angemessenen Zahl an signifikanten Ziffern anzugeben und falls nötig, auf
den Feuchtigkeitsgehalt der Endprobe vor deren Vorbereitung umzurechnen1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 4
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2.BESTIMMUNG VON BLAUSÄURE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an freier und in Glyko-
siden gebundener Blausäure in Futtermitteln, insbesondere in
Leinsaatprodukten, Tapiokamehl und bestimmten Bohnenarten.
2Prinzip
Die Probe wird in Wasser aufgeschlämmt. Die Blausäure wird unter der
Einwirkung von Fermenten abgespalten, im Wasserdampfstrom abdestilliert
und in einem bestimmten Volumen von angesäuerter Silbernitratlösung
aufgefangen. Das Silbercyanid wird abfiltriert und der Überschuß an Silbe-
rnitrat mit einer Ammoniumthiocyanatlösung zurücktitriert.
3.Reagenzien
3.1. Aufschlämmung von süßen Mandeln: 20 süße, geschälte Mandeln
werden in 100 ml Wasser bei 37 bis 40 ºC zerkleinert. 10 ml dieser
Aufschlämmung werden auf Abwesenheit von abspaltbarer Blausäure
entweder mit Natriumpikratpapier oder durch einen Blindversuch, wie
unter 5. letzter Absatz angegeben, geprüft.
3.2. Natriumacetatlösung 10 v. H. (G/V), neutralisiert gegen Phenolphthalein
3.3. Antischaum-Emulsion (z. B. Silicon)
3.4. Salpetersäure, D: 1,403.5. 0,02 N Silbernitratlösung3.6. 0,02 N Ammoniumthiocyanatlösung
3.7. Gesättigte Ammonium-Eisen (III)-Sulfatlösung
3.8. Ammoniaklösung, D: 0,958
4.Geräte
4.1. Brutschrank mit Thermostat, auf 38 ºC eingestellt4.2. Apparatur zur Wasserdampfdestillation, deren Kühler mit einem
verlängerten, gebogenen Einleitungsrohr versehen ist
4.3. 1 000-ml-Stehkolben mit Schliffstopfen4.4. Ölbad
4.5. Bürette mit
1/20ml Teilung
5.Ausführung
20 g der Probe werden auf 5 mg genau eingewogen und in einen 1000-ml-
Stehkolben mit 50 ml Wasser und 10 ml Aufschlämmung von süßen
Mandeln (3.1) gebracht. Der Kolben wird verschlossen und während 16 Std.
bei 38 ºC im Brutschrank stehen gelassen. Nach Abkühlen auf Raumtempe-
ratur werden 80 ml Wasser, 10 ml Natriumacetatlösung (3.2) und 1 Tropfen
Antischaum-Emulsion (3.3) zugesetzt.
Der Kolben wird an die Wasserdampfdestillationsapparatur angeschlossen
und in einem Ölbad, das auf eine Temperatur von etwas mehr als 100 ºCvorgeheizt worden ist, erhitzt. Durch einen kräftigen Wasserdampfstrom und
unter leichtem Erhitzen des Ölbades werden 200 bis 300 ml abdestilliert. Das
Destillat wird in einem vor Licht geschützten Erlenmeyerkolben, der genau
50 ml 0,02 N Silbernitratlösung (3.5) und 1 ml Salpetersäure (3.4) enthält,
aufgefangen. Es ist zu beachten, daß das Verlängerungsrohr des Kühlers in
die Silbernitratlösung taucht.
Der Inhalt des Erlenmeyerkolbens wird in einen 500-ml-Meßkolben über-
führt, bis zur Marke aufgefüllt, gemischt und filtriert. In 250 ml des Filtrats
wird der Überschuß anSilbernitrat nach Zusatz von ca. 1 ml Ammonium-
Eisen(III)-Sulfatlösung (3.7) mit 0,02 N Ammoniumthiocyanatlösung (3.6)
aus der auf
1/20ml geteilten Bürette zurücktitriert.
Gegebenenfalls wird ein Blindversuch nach dem beschriebenen Verfahren mit
10 ml Aufschlämmung von süßen Mandeln (3.1) ohne Analysenprobe ausge-
führt.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 5
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6.Berechnung der Ergebnisse
Wenn der Blindversuch einen Verbrauch an 0,02 N Silbernitratlösung zeigt,
dann wird dieser von dem Silbernitratverbrauch des Analysenprobedestillats
abgezogen.
1 ml 0,02 N AgNO3entspricht 0,54 mg HCN. Das Ergebnis wird in Hundert-
teilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkung
Enthält die Probe eine bedeutende Menge an Sulfiden (z. B. bei Bohnen),
dann bildet sich ein schwärzlicher Niederschlag von Silbersulfid, der
zusammen mit dem Niederschlag von Silbercyanid abfiltriert wird. Die
Bildung dieses Niederschlags verursacht einen Verbrauch an 0,02 N Silberni-
tratlösung, dessen Volumen von dem Volumen abzuziehen ist, das für die
Berechnung des Gehaltes an HCN berücksichtigt wird. Zu diesem Zweck
wird wie folgt verfahren:
Der Niederschlag auf dem Filter wird mit 50 ml Ammoniaklösung (3.8)
behandelt, wobei sich Silbercyanid löst. Nach Auswaschen mit verdünnter
Ammoniaklösung wird der Silbergehalt des Rückstandes bestimmt und in
ml 0,02 N Silbernitratlösung umgerechnet.
Der Gehalt an HCN der Probe kann auch durch Titration des ammoniakhal-
tigen Filtrats nach Ansäuern mit Salpetersäure bestimmt werden.
3.BESTIMMUNG VON CALCIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Gesamt-Calcium in
Futtermitteln.
2.Prinzip
Die Probe wird verascht, die Asche wird mit Salzsäure behandelt und das
Calcium in Form von Calcium-Oxalat gefällt. Nach Auflösung des Nieder-
schlags in Schwefelsäure wird die gebildete Oxalsäure mit
Kaliumpermanganatlösung titriert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a., D: 1,143.2. Salpetersäure p.a., D: 1,403.3. Schwefelsäure p.a., D: 1,13
3.4. Ammoniak p.a., D: 0,98
3.5. Kalt gesättigte Ammonium-Oxalatlösung p.a.3.6. Citronensäurelösung p.a. 30 v. H. (G/V)3.7. Ammoniumchloridlösung p.a. 5 v. H. (G/V)3.8. Bromkresolgrünlösung 0,04 v. H. (G/V)
3.9. 0,1 N Kaliumpermanganatlösung
4.Geräte
4.1. Elektrischer Muffelofen mit Thermostat
4.2. Veraschungsschalen aus Platin, Quarz oder Porzellan
4.3. Glasfiltertiegel, Porosität G
4
5.Ausführung
Etwa 5 g der Analysenprobe (oder, wenn nötig, mehr), auf 1 mg genau
gewogen, werden bei 550 ºC verascht. Die Asche wird in ein 250-ml-Becher-
glas gebracht. Danach werden 40 ml Salzsäure (3.1), 60 ml Wasser sowie
einige Tropfen Salpetersäure (3.2) hinzugefügt. Man kocht auf und hält 30
Minuten lang im Sieden. Nach dem Abkühlen wird die Lösung in einen
250-ml-Meßkolben übergespült und das Becherglas ausgewaschen. Anschlie-
ßend wird der Meßkolben bis zur Marke mit Wasser aufgefüllt,
umgeschüttelt und filtriert.
Je nach dem vermuteten Gehalt der Probe an Calcium wird ein aliquoter Teil,
der 10 bis 40 mg Calcium enthält, in ein 250-ml-Becherglas abpipettiert, 1 ml1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 6
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Citronensäurelösung (3.6) und 5 ml Ammoniumchloridlösung (3.7) hinzuge-
fügt und auf etwa 100 ml mit Wasser aufgefüllt. Nach Aufkochen werden 8
bis 10 Tropfen Bromkresolgrünlösung (3.8) sowie 30 ml heiße Ammonium-
Oxalatlösung (3.5) hinzugefügt. Falls ein Niederschlag entsteht, wird dieser
durch Hinzufügung einiger Tropfen Salzsäure (3.1) aufgelöst.
Anschließend wird sehr langsam und unter beständigem Schütteln mit
Ammoniak (3.4) neutralisiert, bis der pH-Wert etwa zwischen 4,4 und 4,6
liegt (Umschlag des Indikators). Zum Absetzen des Niederschlags wird das
Becherglas 30 Minuten lang auf ein Bad mit kochendem Wasser gesetzt.
Dann wird das Becherglas vom Wasserbad heruntergestellt und sein Inhalt
nach einer Stunde durch einen Filtertiegel G4filtriert. Das Becherglas und
der Tiegel werden mit Wasser gewaschen, bis der überschüssige Ammo-
nium-Oxalat entfernt ist. (Die Abwesenheit von Chlorid im Waschwasser
zeigt an, daß genügend ausgewaschen wurde.)
Der Niederschlag wird auf dem Filter mit 50 ml heißer Schwefelsäure (3.3)
aufgelöst, der Tiegel mit heißem Wasser ausgewaschen und das Filtrat auf
etwa 100 ml aufgefüllt. Nach Erwärmen auf 70 bis 80 ºC wird tropfenweise
mit Kaliumpermanganatlösung (3.9) titriert, bis die Farbe 1 Min. lang rosa
bleibt.
6.Berechnung der Ergebnisse
1 ml 0,1 N Permanganatlösung entspricht 2,004 mg Calcium. Das Ergebnis
wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei einem sehr geringen Calciumgehalt wird wie folgt verfahren: Der
Calcium-Oxalat-Niederschlag wird durch ein aschefreies Papierfilter filt-
riert. Nach dem Auswaschen wird das Filter getrocknet und in einer
Platinschale bei 550 ºC verascht. Der Rückstand wird mit einigen
Tropfen Schwefelsäure (3.3) aufgelöst, zur Trockne verdampft, noch-
mals bei 550 ºC verascht und gewogen. Wird das Gewicht des
erhaltenen Calciumsulfats = p gesetzt, so enthält der aliquote Teil der
Probe p × 0,2944 Calcium.
7.2. Wenn das Erzeugnis nur aus Mineralstoffen besteht, dann wird die
Einwaage ohne vorherige Veraschung mit Salzsäure aufgelöst. Gewisse
Erzeugnisse, wie z. B. Calciumaluminiumphosphate, sind in Säuren
schwer löslich. In diesem Fall führt man vor der Auflösung einen alka-
lischen Aufschluß wie folgt durch: In einer Platinschale wird die Probe
mit etwa der fünffachen Menge einer Mischung aus gleichen Teilen
Kaliumcarbonat und Natriumcarbonat gemischt. Man erhitzt vorsichtig,
bis die Mischung vollständig geschmolzen ist; anschließend wird abge-
kühlt und mit Salzsäure aufgelöst.
7.3. Wenn der Gehalt an Magnesium der Probe hoch ist, wird der Oxalatnie-
derschlag umgefällt.
4.BESTIMMUNG VON CARBONATEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung von Carbonaten, konventionell ausge-
drückt als Calciumcarbonat, in den meisten Futtermitteln. In bestimmten
Fällen (z. B. Eisencarbonat) ist jedoch eine besondere Methode anzuwenden.
2.Prinzip
Die Carbonate werden mit Salzsäure zersetzt; die freigewordene Kohlensäure
wird in einem graduierten Rohr aufgefangen. Das erhaltene Gasvolumen wird
mit demjenigen verglichen, welches unter den gleichen Bedingungen aus
einer bekannten Menge Calciumcarbonat p.a. erhalten wird.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure, D: 1,103.2. Calciumcarbonat p.a.3.3 Etwa 0,1 N Schwefelsäure, mit Methylrot angefärbt.
4.Gerät
Apparatur nach Scheibler-Dietrich (s. Skizze) oder gleichwertiges Gerät.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 7
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5.Ausführung
Je nach dem Carbonatgehalt der Probe wird eine Einwaage wie folgt einge-
wogen:
0,5 g bei Erzeugnissen mit 50 bis 100 v. H. Carbonaten, ausgedrückt als
Calciumcarbonat;
1 g bei Erzeugnissen mit 10 bis 50 v. H. Carbonaten, ausgedrückt als
Calciumcarbonat;
2 g bis 3 g bei anderen Erzeugnissen.
Man bringt die Einwaage in die Spezialflasche (4) der Apparatur, die mit
einem Röhrchen aus unzerbrechlichem Material versehen ist, das 10 ml Salz-
säure (3.1) enthält, und schließt an die Apparatur an. Dann dreht man den
Drei-Weg-Hahn (5) so, daß das Rohr (1) mit der Außenluft in Verbindung
steht. Mit dem beweglichen Rohr (2), das mit ausgefärbter Schwefelsäure
(3.3) gefüllt und mit dem graduierten Rohr (1) verbunden ist, wird das
Niveau der Flüssigkeit auf den Nullpunkt der Skala eingestellt. Der Hahn
(5) wird so gedreht, daß das Rohr (1) mit dem Rohr (2) verbunden ist, dann
wird der Nullpunkt kontrolliert.
Nun läßt man langsam durch Neigen der Flasche (4) die Salzsäure auf die
Substanz fließen und gleicht den Druck durch Senken des Rohres (2) aus.
Man bewegt die Flasche (4) so lange hin und her, bis die Kohlensäureent-
wicklung ganz aufgehört hat.
Der Druckausgleich erfolgt, indem die Flüssigkeit in den Rohren (1) und (2)
auf gleiches Niveau gebracht wird. Bevor abgelesen wird, wartet man einige
Minuten, bis das Volumen konstant bleibt.
Ein Vergleichsversuch mit 0,5 g Calciumcarbonat (3.2) wird unter denselben
Bedingungen durchgeführt.
6.Berechnung der Ergebnisse
Der Gehalt an Carbonaten, ausgedrückt als Calciumcarbonat, in g pro
Hundertteilen der Probe wird durch folgende Formel berechnet:
V/C1100
T/C12P
wobei:
V = ml CO2entwickelt aus der Einwaage,
T = ml CO2entwickelt aus 0,5 g CaCO3p.a.,
P = Gewicht der Einwaage in g.
7.Anmerkungen
7.1. Wenn die Einwaage mehr als 2 g beträgt, bringt man vorher 15 ml
destilliertes Wasser in die Flasche (4) und mischt den Inhalt vor Beginn
des Versuchs. Man fügt dasselbe Wasservolumen bei dem Vergleichs-
versuch zu.
7.2. Wenn man einen Apparat benutzt, dessen Volumen von demjenigen von
Scheibler-Dietrich abweicht, muß man die Einwaage, die Vergleichs-
menge und die Berechnung entsprechend anpassen.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 8
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APPARATUR NACH SCHEIBLER-DIETRICH ZUR BESTIMMUNG VON
CO2
(Messungen in mm)
5.BESTIMMUNG VON ROHASCHE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Rohasche in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird bei 550 ºC verascht; der Rückstand wird gewogen.
3.Reagenzien
Ammoniumnitratlösung 20 v. H. (G/V).
4.Geräte
4.1. Heizplatte4.2. Elektrischer Muffelofen mit Thermostat
4.3. Veraschungsschalen aus Platin oder Platin-Gold-Legierung (10 v. H. Pt,
90 v. H. Au), rechtwinklig (60 × 40 × 25 mm) oder kreisförmig (Durch-
messer: 60 bis 75 mm, Höhe: 20 bis 25 mm).1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 9
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5.Ausführung
Etwa 5 g (2,5 g bei Stoffen, die zur Blasenbildung neigen) der Probe werden
auf 1 mg genau in eine vorher geglühte und tarierte Veraschungsschale
eingewogen. Die Schale wird auf der Heizplatte allmählich bis zum
Verkohlen des Stoffes erhitzt. Die Schale wird dann in den auf 550 ºC ± 5 ºC
eingestellten Muffelofen gebracht und darin so lange gehalten, bis man eine
weiße, hellgraue oder rötliche Asche erhält, die offensichtlich frei von Kohle-
partikeln ist. Dann wird die Schale in einen Exsikkator gestellt und nach dem
Abkühlen unmittelbar gewogen.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Gewicht des Rückstandes wird berechnet, indem das Leergewicht abge-
zogen wird. Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei schwer zerstörbaren Stoffen werden der abgekühlten Rohasche
einige Tropfen 20 v. H. Ammoniumnitratlösung nach einer Veraschung
von mindestens 3 Std. zugefügt (jedoch mit Vorsicht, um ein Zerstäuben
und Ankleben der Asche zu vermeiden). Nach Trocknung im Trocken-
schrank wird die Veraschung weitergeführt. Die Operation wird
gegebenenfalls bis zur vollständigen Veraschung wiederholt.
7.2. Bei Stoffen, die der unter 7.1 beschriebenen Behandlung widerstehen, ist
wie folgt vorzugehen. Nach einer Veraschung von 3 Std. wird die Asche
mit heißem Wasser aufgenommen und durch ein kleines aschefreiesFilter abfiltriert. In der ursprünglichen Schale werden Filter und dessen
Inhalt verascht. Das Filtrat wird in die abgekühlte Schale gebracht, zur
Trockne eingedampft, verascht und gewogen.
7.3. BeiÖlen und Fetten wird eine Einwaage von etwa 25 g in einer Schale
entsprechender Abmessung genau gewogen. Es wird dann durch
Anzünden des Stoffes mit einem Streifen aus aschefreiem Filterpapier
verkohlt. Nach der Verkohlung wird mit einer eben ausreichenden
Menge Wasser angefeuchtet. Anschließend wird getrocknet und wie
unter 5. angegeben zu Ende geführt.
6.BESTIMMUNG VON IN SALZSÄURE UNLÖSLICHER ASCHE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an in Salzsäure unlösli-
chen, mineralischen Bestandteilen der Futtermittel. Abhängig von der Art
der Probe sind zwei Verfahren vorgesehen.
1.1.Verfahren A: anzuwenden bei organischen Einzelfuttermitteln und bei
den meisten Mischfuttermitteln;
1.2.Verfahren B: anzuwenden bei Mineralstoffen und Mineralstoffmisch-
ungen sowie bei allen Mischfuttermitteln, die nach Verfahren A einen
Gehalt an in Salzsäure unlöslicher Asche von mehr als 1 v. H. ergeben
haben.
2.Prinzip
2.1.Verfahren A: Die Probe wird verascht, die Asche in Salzsäure zum
Sieden gebracht und der unlösliche Rückstand abfiltriert und gewogen.
2.2.Verfahren B: Die Probe wird mit Salzsäure behandelt. Die Lösung wird
abfiltriert, der Rückstand wird verascht und die Asche wird dann weiter
behandelt, wie unter Verfahren A beschrieben.
3.Reagenzien
3.1. 3 N Salzsäure
3.2. Trichloressigsäurelösung 20 v. H. (G/V)
3.3. Trichloressigsäurelösung 1 v. H. (G/V)
4.Geräte
4.1. Heizplatte4.2. Elektrischer Muffelofen mit Thermostat1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 10
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4.3. Veraschungsschalen aus Platin oder Platin-Gold-Legierung (10 v. H. Pt,
90 v. H. Au), rechtwinklig (60 × 40 × 25 mm) oder kreisförmig (Durch-
messer: 60 bis 75 mm, Höhe: 20 bis 25 mm).
5.Ausführung
5.1.Verfahren A
Die Einwaage wird unter den Bedingungen, die für die Bestimmung der
Rohasche beschrieben sind, verascht. Es kann auch die bei der Roha-
schebestimmung erhaltene Asche verwendet werden.
Die Asche wird in ein Becherglas von 250 ml bis 400 ml Inhalt mit
75 ml 3 N Salzsäure (3.1) überführt. Man erhitzt vorsichtig zum Sieden
und kocht 15 Min. gelinde weiter. Die Lösung wird heiß durch ein
aschefreies Papierfilter filtriert und der Rückstand mit heißem Wasser
bis zum Ausbleiben der sauren Reaktion ausgewaschen. Das Filter mit
Rückstand wird nach dem Trocknen bei einer Temperatur von
mindestens 550 ºC und höchstens 700 ºC in einer tarierten Veraschungs-
schale verascht. Nach dem Abkühlen im Exsikkator wird gewogen.
5.2.Verfahren B
5 g der Analysenprobe werden auf 1 mg genau eingewogen und in ein
250-ml- bis 400-ml-Becherglas gebracht. Man fügt nacheinander 25 ml
Wasser und 25 ml 3 N Salzsäure (3.1) hinzu, schwenkt um und wartet
bis zum Nachlassen des Aufbrausens. Dann gibt man weitere 50 ml 3 N
Salzsäure (3.1) hinzu. Nach dem Nachlassen der eventuell erneut auftre-
tenden Gasentwicklung stellt man das Becherglas 30 Min. lang in ein
siedendes Wasserbad oder, wenn notwendig, länger, bis die vollständige
Hydrolyse eventuell vorhandener Stärke eingetreten ist.
Man filtriert heiß durch ein aschefreies Filter und wäscht mit etwa 50 ml
heißem Wasser aus (s. Bemerkung 7). Man bringt das Filter mit Rück-
stand in eine Veraschungsschale, trocknet und verascht bei einer
Temperatur von mindestens 550 ºC und höchstens 700 ºC. Die Asche
wird in ein 250-ml- bis 400-ml-Becherglas mit 75 ml 3 N Salzsäure
(3.1) überführt und weiter verfahren wie in 5.1 Absatz 2.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Gewicht des Rückstandes wird berechnet, indem das Leergewicht abge-
zogen wird. Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkung
Wenn die Filtration Schwierigkeiten bereitet, so wird die Bestimmung
wiederholt. Hierbei werden an Stelle von 50 ml 3 N Salzsäure 50 ml Trichlo-
ressigsäurelösung 20 v. H. (3.2) zugegeben und das Filter mit einer heißen
Trichloressigsäurelösung 1 v. H. (3.3) ausgewaschen.
7.BESTIMMUNG VON CHLOR AUS CHLORIDEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Chlors aus wasserlöslichen Chlo-
riden, konventionell ausgedrückt als Natriumchlorid. Sie ist bei allen
Futtermitteln anwendbar.
2.Prinzip
Die Chloride werden in Wasser gelöst. Handelt es sich um Erzeugnisse, die
organische Stoffe enthalten, wird eine Klärung vorgenommen. Die Lösung
wird mittels Salpetersäure schwach angesäuert, und die Chloride werden mit
einer Silbernitrat-Lösung als Silberchlorid gefällt. Der Silbernitrat-Überschuß
wird mit einer Ammoniumthiocyanatlösung nach Methode Volhard zurücktit-
riert.
3.Reagenzien
3.1. 0,1 N Ammoniumthiocyanatlösung
3.2. 0,1 N Silbernitratlösung
3.3. Gesättigte Ammonium-Eisen(III)-Sulfatlösung
3.4. Salpetersäure, D: 1,383.5. Diäthyläther p.a.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 11
▼B
3.6. Aceton p.a.
3.7. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkacetat, (CH3COO)2Zn · 2 H2O und 3 g
Eisessig werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.8. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat (II), K4[Fe(CN)6]
·3H2O werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.9. Aktivkohle p.a., chloridfrei und keine Chloride adsorbierend.
4.Gerät
Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr 35 bis 40 U/Min.
5.Ausführung
5.1.Herstellung der Lösung
Je nach der Art der Probe wird, wie unter 5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3
beschrieben, eine Lösung hergestellt.
Im Vergleich muß ein Blindversuch ohne Analysenprobe durchgeführt
werden.
5.1.1.Probe, frei von organischen Stoffen
Eine Menge (nicht mehr als 10 g) der Analysenprobe mit einem
Gehalt von höchstens 3 g Chlor in Form von Chloriden wird auf
1 mg genau abgewogen und in einen 500-ml-Meßkolben mit
400 ml Wasser von etwa 20 ºC gebracht. Dann wird 30 Min.
lang in dem Schüttelapparat rotiert, bis zur Marke aufgefüllt,
gemischt und filtriert.
5.1.2.Probe, die organische Stoffe enthält, mit Ausnahme von den in
5.1.3 angeführten
5 g der Analysenprobe werden auf 1 mg genau eingewogen und
mit 1 g Aktivkohle in einen 500-ml-Meßkolben gebracht. Hierzu
werden 400 ml Wasser von etwa 20 ºC und 5 ml Carrez-Lösung I
(3.7) gegeben, umgeschüttelt und 5 ml Carrez-Lösung II (3.8)
zugesetzt. Dann wird 30 Min. lang in dem Schüttelapparat rotiert,
bis zur Marke aufgefüllt, gemischt und filtriert.
5.1.3.Backfutter, Leinkuchen und Leinmehl, Erzeugnisse mit einem
hohen Leinmehlgehalt oder sonstige Erzeugnisse mit einem hohen
Gehalt an Pflanzenschleim oder kolloidalen Stoffen (z. B. verklei-
sterte Stärke)
Die Lösung wird wie unter 5.1.2 beschrieben zubereitet, ausgen-
ommen das Filtrieren. Es wird dekantiert (falls erforderlich,
zentrifugiert); dann werden 100 ml des oberen Teils der Lösung
in einen 200-ml-Meßkolben pipettiert. Es wird mit Aceton (3.6)
zunächst gemischt und sodann mit Aceton bis zur Marke aufge-
füllt, geschüttelt und filtriert.
5.2.Titration
25 bis 100 ml des Filtrats (je nach dem zu erwartenden Chlorgehalt), das
nach 5.1.1, 5.1.2 oder 5.1.3 erhalten wurde, werden in einen Erlen-
meyerkolben pipettiert. Die aliquote Menge darf nicht mehr als 150 mg
Chlor (Cl) enthalten. Falls erforderlich, wird mit Wasser auf mindestens
50 ml verdünnt. Dann werden 5 ml Salpetersäure (3.4), 20 ml Ammo-nium-Eisen-Sulfatlösung (3.3) und 2 Tropfen
Ammoniumthiocyanatlösung (3.1) aus einer bis zum Nullpunkt gefüllten
Bürette hinzugesetzt. Anschließend wird aus einer Bürette Silbernitratlö-
sung (3.2) zugegeben, bis ein Überschuß von 5 ml vorhanden ist. Dann
werden 5 ml Diäthyläther (3.5) zugegeben und kräftig geschüttelt, um
den Niederschlag zum Ausflocken zu bringen.
Der Überschuß an Silbernitrat wird mit Ammoniumthiocyanatlösung
(3.1) titriert, bis eine rotbraune Farbe auftritt, die eine Min. beständig
ist.
6.Berechnung
Die Menge Chlor (p), ausgedrückt als Natriumchlorid, die in dem Volumen
des für die Titration entnommenen Filtrats vorhanden ist, wird nach
folgender Formel berechnet:
p = 5,845 (V
1−V2)m g
wobei: V1= ml der zugegebenen 0,1 N Silbernitratlösung,1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 12
▼B
V2= ml der 0,1 N Ammoniumthiocyanatlösung, die für die Titra-
tion verbraucht werden.
Falls der Blindversuch einen Verbrauch an 0,1 N Silbernitratlösung anzeigt,
wird dieser Wert von dem (V1−V2) Volumen abgezogen.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Man kann auch die potentiometrische Titration anwenden.7.2. Bei sehr fettreichen Erzeugnissen ist eine vorherige Entfettung mit
Diäthyläther oder Petroläther durchzuführen.
7.3. Bei Fischmehl kann die Titration nach der Methode Mohr durchgeführt
werden.
9.BESTIMMUNG VON LACTOSE
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Lactose in Futtermit-
teln, die mehr als 0,5 v. H. Lactose enthalten.
2.Prinzip
Die Zucker werden in Wasser gelöst. Die Lösung wird mit Hefe — Saccha-
romyces cerevisiae — vergoren, wobei die Lactose nicht angegriffen wird.
Nach Klärung und Filtration wird der Gehalt an Lactose nach Luff-Schoorl
im Filtrat bestimmt.
3.Reagenzien
3.1.Saccharomyces cerevisiae -Suspension: 25 g frische Hefe werden in
100 ml Wasser suspensiert. Im Kühlschrank ist die Suspension
höchstens eine Woche lang haltbar.
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat Zn (CH3COO)2·2H2O und 3 g
Eisessig werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.3. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat(II), K4[Fe(CN)6]·3H2O
werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.4. Reagenz nach Luff-Schoorl:
Unter vorsichtigem Umschwenken wird die Zitronensäurelösung (3.4.2)
in die Natriumcarbonatlösung (3.4.3) gegossen, dann wird die Kupfer-
sulfatlösung (3.4.1) hinzugefügt und zu 1 l mit Wasser aufgefüllt. Man
läßt über Nacht stehen und filtriert. Die Normalität des so erhaltenen
Reagenzes muß nachgeprüft werden (0,1 N Cu; 2 N Na2CO3). Der pH-
Wert beträgt etwa 9,4.
3.4.1. Kupfersulfatlösung: 25 g Kupfersulfat p.a., CuSO4·5 H2O, eisen-
frei, werden in 100 ml Wasser gelöst.
3.4.2. Zitronensäurelösung: 50 g Zitronensäure p.a., C6H8O7·H2O,
werden in 50 ml Wasser gelöst.
3.4.3. Natriumcarbonatlösung: 143,8 g Natriumcarbonat p.a., wasserfrei,
werden in ungefähr 300 ml warmem Wasser gelöst. Die Lösung
wird abgekühlt.
3.5. Bimssteinkörner mit Salzsäure ausgekocht, mit Wasser gewaschen und
getrocknet.
3.6. Kaliumjodidlösung 30 v. H. (G/V)3.7. 6 N Schwefelsäure3.8. 0,1 N Natriumthiosulfatlösung3.9. Stärkelösung; eine Aufschlämmung von 5 g löslicher Stärke in 30 ml
Wasser wird zu 1 l siedendem Wasser hinzugefügt und 3 Min. lang im
Sieden gehalten; dann wird abgekühlt und gegebenenfalls als Konservi-
erungsmittel 10 mg Quecksilberjodid hinzugefügt.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 13
▼M3
▼B
▼B
4.Gerät
Wasserbad mit Thermostat auf 38 bis 40 ºC eingestellt.
5.Ausführung
1 g der Probe wird auf 1 mg genau eingewogen und mit 25 bis 30 ml Wasser
in einen 100-ml-Meßkolben gebracht. Der Kolben wird 30 Min. lang in
kochendem Wasser stehen gelassen und danach auf etwa 35 ºC abgekühlt.
5 ml Hefesuspension (3.1) werden hinzugefügt. Dann wird der Kolben umge-
schüttelt, 2 Std. lang in einem Wasserbad bei 38 º bis 40 ºC stehen gelassen
und danach auf etwa 20 ºC abgekühlt.
Sodann werden 2,5 ml Carrez-Lösung I (3.2) hinzugefügt, es wird 30 Sek.
lang geschüttelt; dann werden 2,5 ml Carrez-Lösung II (3.3) hinzugefügt
und wieder 30 Sek. lang geschüttelt; nun wird mit Wasser auf 100 ml aufge-
füllt, geschüttelt und filtriert. VomFiltrat wird eine Menge von höchstens
25 ml, die möglichst 40 bis 80 mg Lactose enthält, in einen 300-ml-Erlen-
meyerkolben abpipettiert und, wenn nötig, mit Wasser auf 25 ml ergänzt.
Es wird auf dieselbe Weise ein Blindversuch mit 5 ml Hefesuspension (3.1)
ausgeführt.
Dann wird der Gehalt an Lactose nach Luff-Schoorl wie folgt bestimmt:
Nach Zugabe von genau 25 ml Reagenz nach Luff-Schoorl (3.4) und von 2
Körnchen Bimsstein (3.5) wird unter Schütteln mit der Hand über freier
Flamme von mittlerer Höhe erhitzt, so daß die Flüssigkeit in etwa 2 Min.
zum Sieden kommt. Anschließend wird der Erlenmeyerkolben sofort auf ein
Drahtnetz mit einer Asbestscheibe, in die ein Loch von etwa 6 cm Durch-
messer gestanzt wurde, gestellt; vorher wird unter dem Drahtnetz eine
Flamme entzündet und so eingestellt, daß der Kolben nur am Boden erhitzt
wird; dann wird der Kolben mit einem Rückflußkühler verbunden. Von
diesem Augenblick an läßt man genau 10 Min. sieden, kühlt dann sofort in
kaltem Wasser ab und titriert nach etwa 5 Min. wie folgt:
Zu der Flüssigkeit werden 10 ml Kaliumjodidlösung (3.6) und anschließend
sofort, aber vorsichtig (wegen der Gefahr des übermäßigen Schäumens),
25 ml 6 N Schwefelsäure (3.7) hinzugegeben. Dann wird mit 0,1 N Natrium-
thiosulfatlösung (3.8) zunächst bis zum Auftreten einer mattgelben Farbe
titriert und nach Zugabe von Stärkelösung (3.9) als Indikator die Titration
zu Ende geführt.
Die gleiche Titration wird in einer Mischung aus genau 25 ml Reagenz nach
Luff-Schoorl (3.4) und 25 ml Wasser durchgeführt nach Zugabe von 10 ml
Kaliumjodidlösung (3.6) und 25 ml 6 N Schwefelsäure (3.7), jedoch ohne
vorheriges Erhitzen.
6.Berechnung der Ergebnisse
Aus der beigefügten Tabelle wird diejenige Menge Lactose in mg abgelesen,
die der Differenz der Ergebnisse beider Titrationen, ausgedrückt in ml 0,1 N
Natriumthiosulfatlösung, entspricht.
Das Ergebnis entspricht dem Gehalt an wasserfreier Lactose und wird in
Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
Wenn mehr als 40 v. H. vergärbare Zucker vorhanden sind, werden mehr als
5 ml Hefesuspension (3.1) benutzt.
Tabelle für 25 ml des Reagenzes nach Luff-Schoorl
ml 0,1 N Na2S2O3bei 2 Min. Anheizen, 10 Min. Sieden
0,1 N
Na2S2O3Glukose, Fruktose, inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 81971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 14
▼B
0,1 N
Na2S2O3Glukose, Fruktose, inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 11
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 1314 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 1617 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 88,0 94,6 23
10.BESTIMMUNG VON KALIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Kalium in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird verascht und die Asche in Salzsäure gelöst. Der Kaliumgehalt
der Lösung wird flammenphotometrisch in Gegenwart von Caesiumchlorid
und Aluminiumnitrat bestimmt. Durch den Zusatz dieser Substanzen wird
eine Beeinflussung der Bestimmung durch Störelemente weitgehend verhin-
dert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a., D: 1,123.2. Caesiumchlorid, p.a.3.3. Aluminiumnitrat, Al(NO
3)3·9 H2O, chemisch rein
3.5. Kaliumchlorid, p.a., wasserfrei3.5. Pufferlösung: 50 g Caesiumchlorid (3.2) und 250 g Aluminiumnitrat
(3.3) werden in Wasser gelöst, mit Wasser auf 1 l aufgefüllt und umge-
schüttelt. Die Lösung wird in Plastikflaschen aufbewahrt.
3.6. Kalium-Standardlösung: 1,907 g Kaliumchlorid (3.4) werden in Wasser
unter Zusatz von 5 ml Salzsäure (3.1) gelöst, mit Wasser auf 1 l aufge-
füllt und umgeschüttelt. Die Lösung wird in Plastikflaschen aufbewahrt.
1 ml dieser Lösung enthält 1,00 mg Kalium.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Platin, Quarz oder Porzellan, eventuell mit
Deckel
4.2. Elektrischer Muffelofen mit Thermostat4.3. Flammenphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
Im allgemeinen werden 10 g der Probe, auf 10 mg genau, in eine
Veraschungsschale eingewogen und die Substanz bei 450 ºC etwa 3
Std. lang verascht. Nach dem Abkühlen spült man den Veraschungs-
rückstand quantitativ mit etwa 250 bis 300 ml Wasser, gefolgt von
50 ml Salzsäure (3.1), in einem 500-ml-Meßkolben über. Nach
Aufhören einer eventuellen Kohlendioxidentwicklung erhitzt man die
Lösung und hält sie anschließend 2 Std. lang, unter gelegentlichem1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 15
▼B
Umschütteln, auf einer Temperatur von etwa 90 ºC. Nach Abkühlen auf
Zimmertemperatur füllt man mit Wasser zur Marke auf, schüttelt um
und filtriert. Ein aliquoter Teil des Filtrats, der höchstens 1,0 mg Kalium
enthalten darf, wird in einen 100-ml-Meßkolben pipettiert, man gibt
10,0 ml Pufferlösung (3.5) zu, füllt mit Wasser zur Marke auf und
schüttelt um. Bei höheren Kaliumgehalten muß die Analysenlösung vor
Zugabe der Pufferlösung im geeigneten Verhältnis verdünnt werden. Als
Richtlinie bei einer Einwaage von etwa 10 g kann die folgende Tabelle
dienen:
Vermutlicher Kaliumgehalt der
Probe
(% K)Verdünnungsverhältnis Aliquoter Teil der Lösung in ml
bis 0,1 — 50
0,1 — 0,5 — 100,5 — 1,0 — 51,0 — 5,0 1: 10 10
5,0 — 10,0 1: 10 5
10,0 — 20,0 1: 20 5
Die Messung erfolgt flammenphotometrisch bei einer Wellenlänge von
763 nm.
Das Ergebnis wird mit Hilfe der Eichkurve berechnet.
5.2.Eichkurve
10 ml der Standardlösung (3.6) werden in einen 250-ml-Meßkolben
pipettiert, dann wird mit Wasser aufgefüllt und umgeschüttelt. Von
dieser Lösung werden 5, 10, 15, 20 und 25 ml, entsprechend 0,2, 0,4,
0,6, 0,8 und 1,0 mg Kalium, in 100-ml-Meßkolben pipettiert. Der Reihe
wird ein 100-ml-Meßkolben ohne Zusatz von Standardlösung beige-
geben. Man fügt in jedem Kolben 10,0 ml der Pufferlösung (3.5)
hinzu, füllt mit. Wasser zur Marke auf und schüttelt um. Die Messungen
werden wie unter 5.1 durchgeführt. Der Verlauf der Eichkurve ist im
allgemeinen bis zu einer Konzentration von 1 mg Kalium in 100 ml
Lösung linear.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
Zusatz von Pufferlösung (3.5) zur Ausschaltung der Störelemente ist nicht
immer notwendig.
11.BESTIMMUNG VON NATRIUM
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Natrium in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird verascht und die Asche in Salzsäure gelöst. Der Natriumge-
halt der Lösung wird flammenphotometrisch in. Gegenwart von
Caesiumchlorid und Aluminiumnitrat bestimmt. Durch den Zusatz dieser
Substanzen wird eine Beeinflussung der Bestimmung durch Störelemente
weitgehend verhindert.
3.Reagenzien
3.1. Salzsäure p.a., D: 1,12
3.2. Caesiumchlorid, p.a.3.3. Aluminiumnitrat, Al(NO
3)3·9 H2O, chemisch rein
3.4. Natriumchlorid, p.a., wasserfrei
3.5. Pufferlösung: 50 g Caesiumchlorid (3.2) und 250 g Aluminiumnitrat
(3.3) werden in Wasser gelöst, mit Wasser auf 1 l aufgefüllt und umge-
schüttelt. Die Lösung wird in Plastikflaschen aufbewahrt.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 16
▼B
3.6. Natrium-Standardlösung: 2,542 g Natriumchlorid (3.4) werden in
Wasser unter Zusatz von 5 ml Salzsäure (3.1) gelöst, mit Wasser auf 1 l
aufgefüllt und umgeschüttelt. Die Lösung wird in Plastikflaschen aufbe-
wahrt. 1 ml dieser Lösung enthält 1,00 mg Natrium.
4.Geräte
4.1. Veraschungsschalen aus Platin, Quarz oder Porzellan, eventuell mit
Deckel
4.2. Elektrischer Muffelofen mit Thermostat4.3. Flammenphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
Im allgemeinen werden 10 g der Probe, auf 10 mg genau, in eine
Veraschungsschale eingewogen und die Substanz bei 450 ºC etwa 3
Std. lang verascht. Ein Überhitzen (Aufglühen) muß vermieden werden.
Nach dem Abkühlen spült man den Veraschungsrückstand quantitativ
mit etwa 250 bis 300 ml Wasser, gefolgt von 50 mlSalzsäure (3.1), in
einen 500-ml-Meßkolben über. Nach Aufhören einer eventuellen
Kohlendioxidentwicklung erhitzt man die Lösung und hält sie anschlie-
ßend 2 Std. lang, unter gelegentlichem Umschütteln, auf einer
Temperatur von etwa 90 ºC. Nach Abkühlen auf Zimmertemperatur füllt
man mit Wasser zur Marke auf, schüttelt um und filtriert. Ein aliquoter
Teil des Filtrats, der höchstens 1,0 mg Natrium enthalten darf, wird in
einen 100-ml-Meßkolben pipettiert, man gibt 10,0 ml Pufferlösung
(3.5) zu, füllt mit Wasser zur Marke auf und schüttelt um. Bei höheren
Natriumgehalten muß die Analysenlösung vor Zugabe der Pufferlösung
im geeigneten Verhältnis verdünnt werden. Als Richtlinie bei einer
Einwaage von etwa 10 g kann die folgende Tabelle dienen:
Vermutlicher Natriumgehalt der
Probe
(% Na)Verdünnungsverhältnis Aliquoter Teil der Lösung in ml
bis 0,1 — 50
0,1 — 0,5 — 100,5 — 1,0 — 5
1,0 — 5,0 1: 10 10
5,0 — 10,0 1: 10 5
10,0 — 20,0 1: 20 5
Die Messung erfolgt flammenphotometrisch bei einer Wellenlänge von
589 nm.
Das Ergebnis wird mit Hilfe der Eichkurve berechnet.
5.2.Eichkurve
10 ml der Standardlösung (3.6) werden in einen 250-ml-Meßkolben
pipettiert, dann wird mit Wasser aufgefüllt und umgeschüttelt. Von
dieser Lösung werden 5, 10, 15, 20 und 25 ml, entsprechend 0,2, 0,4,
0,6, 0,8 und 1,0 mg Natrium, in 100-ml-Meßkolben pipettiert. Der Reihe
wird ein 100-ml-Meßkolben ohne Zusatz von Standardlösung beige-
geben. Man fügt in jeden Kolben 10,0 ml der Pufferlösung (3.5) hinzu,
füllt mit Wasser zur Marke auf und schüttelt um. Die Messungen
werden wie unter 5.1 durchgeführt. Der Verlauf der Eichkurve ist im
allgemeinen bis zu einer Konzentration von 1 mg Natrium in 100 ml
Lösung linear.
6.Berechnung der Ergebnisse
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei Produkten mit einem Gehalt von mehr als 4 v. H. Natrium empfiehlt
es sich, die Substanz 2 Std. lang in einer mit Deckel versehenen Schale
zu veraschen. Nach dem Abkühlen fügt man Wasser hinzu, verteilt den
Rückstand mit Hilfe eines Platindrahts bis zur Bildung einer Suspension,
trocknet und verascht nochmals 2 Std. lang in der bedeckten Schale.
7.2. Wenn das Produkt nur aus Mineralstoffen besteht, dann wird die
Einwaage ohne vorherige Veraschung aufgelöst.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 17
▼B
12.BESTIMMUNG VON ZUCKER
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung von reduzierenden Zuckern und des
Gesamtzuckers nach Inversion, berechnet als Glukose oder gegebenenfalls
multipliziert mit dem Faktor 0,95 als Saccharose. Sie ist anwendbar bei
Mischfuttermitteln. Für andere Futtermittel sind besondere Verfahren zu
beachten. Gegebenenfalls muß der Gehalt an Lactose getrennt bestimmt
werden und das Ergebnis bei der Berechnung berücksichtigt werden.
2.Prinzip
Die Zucker werden in verdünntem Äthanol gelöst; die Lösung wird mit den
Reagenzien Carrez I und II geklärt. Nach dem Verdunsten des Äthanols
werden vor und nach der Inversion die Bestimmungen nach der Methode
Luff-Schoorl durchgeführt.
3.Reagenzien
3.1. Äthanol 40 v. H. (V/V), D: 0,948 bei 20 ºC, auf den Umschlagspunkt
von Phenolphthalein eingestellt
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat Zn (CH3COO)2·2H2O und 3 g
Eisessig werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt
3.3. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat(II), K4[Fe(CN)6]·3 H2O werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser
aufgefüllt
3.4. Methylorangelösung 0,1 v. H. (G/V)3.5. 4 N Salzsäure3.6. 0,1 N Salzsäure3.7. 0,1 N Natriumhydroxidlösung3.8. Reagenz nach Luff-Schoorl:
Unter vorsichtigem Umschwenken wird die Zitronensäurelösung (3.8.2)
in die Natriumcarbonatlösung (3.8.3) gegossen, dann wird die Kupfer-
sulfatlösung (3.8.1) hinzugefügt und zu 1 l mit Wasser aufgefüllt. Man
läßt über Nacht stehen und filtriert. Die Normalität des so erhaltenen
Reagenzes muß nachgeprüft werden (0,1 N Cu; 2 N Na
2CO3). Der
pH-Wert beträgt etwa 9,4.
3.8.1. Kupfersulfatlösung: 25 g Kupfersulfat p.a., CuSO4·5H2O,
eisenfrei, werden in 100 ml Wasser gelöst.
3.8.2. Zitronensäurelösung: 50 g Zitronensäure p.a., C6H8O7·H2O,
werden in 50 ml Wasser gelöst.
3.8.3. Natriumcarbonatlösung: 143,8 g Natriumcarbonat p.a., wasser-
frei, werden in ungefähr 300 ml warmem Wasser gelöst. Die
Lösung wird abgekühlt.
3.9. 0,1 N Natriumthiosulfatlösung3.10. Stärkelösung; eine Aufschlämmung von 5 g löslicher Stärke in 30 ml
Wasser wird zu 1 l siedendem Wasser hinzugefügt und 3 Min. lang
im Sieden gehalten; dann wird abgekühlt und gegebenenfalls als
Konservierungsmittel 10 mg Quecksilberjodid hinzugefügt.
3.11. 6 N Schwefelsäure3.12. Kaliumjodidlösung 30 v. H. (G/V)3.13. Bimssteinkörner mit Salzsäure ausgekocht, mit Wasser gewaschen und
getrocknet
3.14. Isopentanol
4.Geräte
Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr 35 bis 40 U/min.
5.Ausführung
5.1.Auflösung
2,5 g der Probe werden auf 1 mg genau in einen 250-ml-Meßkolben
eingewogen. Nach Zugabe von 200 ml Äthanol (3.1) wird der Kolben1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 18
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1 Std. lang im Schüttelapparat geschüttelt. Sodann werden 5 ml Carrez-
Lösung I (3.2) hinzugefügt, und es wird 1 Min. lang geschüttelt; dann
werden 5 ml Carrez-Lösung II (3.3) hinzugefügt und wieder 1 Min.
lang geschüttelt; nun wird mit Äthanol (3.1) zur Marke aufgefüllt,
geschüttelt und filtriert. 200 ml des Filtrats werden abpipettiert und auf
ungefähr die Hälfte des Volumens eingedampft, wobei der größte Teil
des Äthanols verdunstet. Der Abdampfrückstand wird mit heißem
Wasser in einen 200-ml-Meßkolben übergespült, abgekühlt, mit Wasser
zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und, falls erforderlich, filtriert. Diese
Lösung wird für die Bestimmung der reduzierenden Zucker und nach
Inversion zur Bestimmung des Gesamtzuckers verwendet.
5.2.Bestimmung der reduzierenden Zucker
Eine Menge von höchstens 25 ml der Lösung, die weniger als 60 mg
reduzierende Zucker, ausgedrückt als Glukose, enthält, wird abpipettiert,
falls erforderlich mit destilliertem Wasser auf 25 ml aufgefüllt und der
Gehalt an reduzierendem Zucker nach Luff-Schoorl bestimmt. Das
Ergebnis wird in Hundertteilen Glukose ausgedrückt.
5.3.Bestimmung des Gesamtzuckers nach Inversion
50 ml der Lösung werden in einen 100-ml-Meßkolben abpipettiert,
einige Tropfen Methylorangelösung (3.4) hinzugefügt und sodannvorsichtig unter Schütteln 4 N Salzsäure (3.5) bis zum eindeutigen
Umschlag nach Rot hinzugegeben. Dann werden 15 ml 0,1 N Salzsäure
(3.6) hinzugefügt, der Kolben wird 30 Min. lang in ein Bad mit kräftig
siedendem Wasser gestellt, schnell auf die Temperatur von etwa 20 ºC
abgekühlt und 15 ml 0,1 N Natriumhydroxidlösung (3.7) hinzugefügt.
Der Kolben wird mit Wasser zur Marke aufgefüllt, umgeschüttelt und
eine Menge von höchstens 25 ml entnommen, die weniger als 60 mg
reduzierende Zucker, ausgedrückt als Glukose, enthält, falls erforderlich,
wird mit Wasser auf 25 ml aufgefüllt und der Gehalt an reduzierenden
Zuckern nach Luff-Schoorl bestimmt. Das Ergebnis wird in Hundert-
teilen Glukose angegeben oder gegebenenfalls nach Multiplikation mit
dem Faktor 0,95 als Saccharose.
5.4.Titration nach Luff-Schoorl
25 ml Reagenz nach Luff-Schoorl (3.8) werden in einen 300-ml-Erlen-
meyerkolben pipettiert und anschließend genau 25 ml der geklärten
Zuckerlösung hinzugefügt. Nach Zugabe von 2 Körnchen Bimsstein
(3.13) wird unter Schütteln mit der Hand über freier Flamme von mitt-
lerer Höhe erhitzt, so daß die Flüssigkeit in etwa 2 Min. zum Sieden
kommt. Anschließend wird der Erlenmeyerkolben sofort auf ein Draht-
netz mit einer Asbestscheibe, in die ein Loch von etwa 6 cm
Durchmesser gestanzt wurde, gestellt; vorher wird unter dem Drahtnetz
eine Flamme entzündet und so eingestellt, daß der Kolben nur am
Boden erhitzt wird; dann wird der Kolben mit einem Rückflußkühler
verbunden. Von diesem Augenblick an läßt man genau 10 Min. sieden,kühlt dann sofort in kaltem Wasser ab und titriert nach etwa 5 Min. wie
folgt:
Zu der Flüssigkeit werden 10 ml Kaliumjodidlösung (3.12) und
anschließend sofort, aber vorsichtig (wegen der Gefahr des übermäßigen
Schäumens), 25 ml 6 N Schwefelsäure (3.11) hinzugegeben. Dann wird
mit 0,1 N Natriumthiosulfatlösung (3.9) zunächst bis zum Auftreten
einer mattgelben Farbe titriert und nach Zugabe von Stärkelösung (3.9)
als Indikator die Titration zu Ende geführt.
Die gleiche Titration wird in einer Mischung aus genau 25 ml Reagenz
nach Luff-Schoorl (3.8) und 25 ml Wasser nach Zugabe von 10 ml Kali-
umjodidlösung (3.12) und 25 ml 6 N Schwefelsäure (3.11) durchgeführt,
jedoch ohne vorheriges Erhitzen.
6.Berechnung der Ergebnisse
Aus der beigefügten Tabelle wird diejenige Menge Glukose in mg abgelesen,
die der Differenz der Ergebnisse beider Titrationen, ausgedrückt in ml 0,1 N
Natriumthiosulfatlösung, entspricht.
Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Besondere Verfahren
7.1. Bei sehr stark melassehaltigen Futtermitteln und anderen wenig homo-
genen Futtermitteln werden 20 g in einen 1-l-Meßkolben eingewogen,
500 ml Wasser hinzugefügt und 1 Std. lang geschüttelt. Danach wird
mit jeweils der vierfachen Menge der Carrez-Lösungen I (3.2) und II
(3.3) wie bei 5.1 geklärt. Sodann wird mit Äthanol 80 v. H. (V/V) zur1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 19
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Marke aufgefüllt, gemischt und filtriert. In diesem Fall wird das Äthanol
wie bei 5.1 entzogen. Bei Abwesenheit dextrinierter Stärke wird mit
Wasser aufgefüllt.
7.2. Bei Melasse und bei Futtermitteln, die reich an Zucker, aber praktisch
stärkefrei sind (Johannisbrot, Zuckerrübentrockenschnitzel usw.), werden
5 g in einen 250-ml-Meßkolben eingewogen, 200 ml destilliertes Wasser
hinzugefügt und 1 Std. lang oder, falls erforderlich, länger geschüttelt.
Danach wird mit den Carrez-Lösungen I (3.2) und II (3.3) wie bei 5.1
geklärt, mit Wasser zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und filtriert. Zur
Bestimmung des Gesamtzuckers verfährt man wie bei 5.3.
8.Bemerkungen
8.1. Es wird empfohlen, vor dem Erhitzen mit dem Luff-Schoorl-Reagenz
etwa 1 ml Isopentanol (3.14) hinzuzufügen (ohne das Volumen zu
berücksichtigen), um die Schaumbildung zu vermeiden.
8.2. Die Differenz zwischen den Hundertteilen des Gesamtzuckers, nach
Inversion, ausgedrückt als Glukose, und den Hundertteilen der reduzie-
renden Zucker, ausgedrückt als Glukose, ergibt mit 0,95 multipliziert
das Ergebnis in Hundertteilen Saccharose.
8.3. Wenn man den Gehalt an reduzierendem Zucker mit Ausnahme von
Milchzucker (Laktose) bestimmen will, kann man zwei Wege
einschlagen:
8.3.1. Zur annähernden Berechnung multipliziert man den aus einer
getrennten Bestimmung gefundenen Gehalt an Laktose mit
0,675. Das Ergebnis wird von dem Gehalt an reduzierendem
Zucker abgezogen.
8.3.2. Für eine genaue Berechnung des reduzierenden Zuckers mit
Ausnahme von Laktose ist es aber notwendig, daß bei den beiden
endgültigen Bestimmungen die gleiche Menge der Einwaage
zugrunde liegt. Die eine Bestimmung wird in einem Teil der
Lösung nach 5.1., die zweite Bestimmung wird in einem Teil
der Lösung, die man bei der Bestimmung der Laktose nach der
diesbezüglichen Methode erhält (nach Vergärung der anderen
Zuckerarten und Klärung) ausgeführt.
In beiden Fällen wird der anwesende Zucker nach Luff-Schoorl
bestimmt und in Milligramm Glukose berechnet. Diese beiden Werte
werden voneinander abgezogen und die Differenz wird auf Hundertteile
der Probe umgerechnet.
Beispiel
Die beiden abpipettierten Mengen entsprechen bei jeder Bestimmung
einer Probeneinwaage von 250 mg.
Im ersten Fall werden 17 ml 0,1 N Natriumthiosulfatlösung verbraucht,
entsprechend 44,2 mg Glukose, im zweiten Fall werden 11 ml
verbraucht, entsprechend 27,6 mg Glukose. Die Differenz beträgt also
16,6 mg Glukose.
Der Gehalt an reduzierendem Zucker ohne Laktose, berechnet als
Glukose, ist demnach:
4/C216;6
10¼6;64 v :H:
Tabelle für 25 ml des Reagenzes nach Luff-Schoorl
ml 0,1 N Na2S2O3bei 2 Min. Anheizen, 10 Min. Sieden
0,1 N
Na2S2O3Glukose, Fruktose, inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 34 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 71971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 20
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0,1 N
Na2S2O3Glukose, Fruktose, inver-
tierter Zucker
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg Differenz mg Differenz mg Differenz ml
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 8
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 1516 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 2122 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 88,0 94,6 23
14.BESTIMMUNG VON HARNSTOFF
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung des Gehaltes an Harnstoff in Futtermit-
teln.
2.Prinzip
Die Probe wird unter Zusatz eines Klärungsmittels mit Wasser geschüttelt.
Die Suspension wird filtriert. Nach Zugabe von 4-Dimethylaminobenzal-
dehyd (4-DMAB) wird der Gehalt an Harnstoff im Filtrat durch Messung
der Extinktion bei einer Wellenlänge von 420 nm bestimmt.
3.Reagenzien
3.1. 4-Dimethylaminobenzaldehydlösung: 1,6 g 4-DMAB werden in 100 ml
Äthanol p.a. 96 v. H. gelöst und 10 ml Salzsäure p.a. (D: 1,19) hinzuge-
fügt. Das Reagenz hält sich nur zwei Wochen.
3.2. Carrez-Lösung I: 24 g Zinkazetat (CH3COO)2Zn · 2 H2O und 3 g
Eisessig werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.3. Carrez-Lösung II: 10,6 g Kaliumhexacyanoferrat (II), K4[Fe(CN)6]·
3H2O werden in Wasser gelöst und auf 100 ml mit Wasser aufgefüllt.
3.4. Aktivkohle p.a., keinen Harnstoff adsorbierend (zu prüfen).3.5. Harnstofflösung p.a. 0,1 v. H. (G/V).
4.Geräte
4.1. Mechanischer Schüttelapparat, ungefähr 35 bis 40 U/Min.4.2. Reagenzgläser: 160 × 16 mm, mit Schliffstopfen4.3. Spektralphotometer
5.Ausführung
5.1.Analysengang der Probe
2 g der Probe werden auf 1 mg genau eingewogen und mit 1 g Aktiv-
kohle (3.4) in einen 500-ml-Meßkolben gebracht. Hierzu werden 400 ml
Wasser und je 5 ml Carrez-I- und -II-Lösungen (3.2) (3.3) gegeben und
30 Min. lang in dem Schüttelapparat rotiert. Dann wird mit Wasser bis
zur Marke aufgefüllt, geschüttelt und filtriert. Von den klaren und farb-
losen Filtraten werden je 5 ml in je ein Reagenzglas mit Schliffstopfen
pipettiert, 5,0 ml 4-DMAB-Lösung (3.1) zugesetzt und gemischt. Die
Gläser werden in einem Wasserbad bei 20 ºC temperiert. Nach 15 Min.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 21
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▼B
▼B
wird die Extinktion der Probelösung im Vergleich mit der Blindprobe-
lösung der Reagenzien im Spektralphotometer bei 420 nm gemessen.
5.2.Eichkurve
Volumen von 1, 2, 4, 5 und 10 ml Harnstofflösung (3.5) werden
entnommen, in 100-ml-Meßkolben gebracht und bis zur Marke mit
Wasser aufgefüllt. 5 ml jeder Lösung werden mit je 5 ml 4-DMAB-
Lösung (3.1) gemischt. Die Extinktion wird im Vergleich mit einer
Lösung, frei von Harnstoff, die 5 ml 4-DMAB und 5 ml Wasser enthält,
wie oben angegeben, gemessen. Eine Eichkurve wird aufgestellt.
6.Berechnung der Ergebnisse
Mit Hilfe der Eichkurve ist die Menge an Harnstoff der Versuchsprobe zu
bestimmen. Das Ergebnis wird in Hundertteilen der Probe ausgedrückt.
7.Bemerkungen
7.1. Bei einem Gehalt an Harnstoff, höher als 3 v. H., ist die Einwaage auf
1 g zu erniedrigen bzw. die Anfangslösung soweit zu verdünnen, daß in
500 ml nicht mehr als 50 mg Harnstoff enthalten sind.
7.2. Bei niederen Gehalten an Harnstoff soll die Einwaage erhöht werden,
soweit man ein Filtrat klar und farblos herstellen kann.
7.3. Enthält die Substanz einfache Stickstofformen, insbesondere Amino-
säuren, so ist die Messung der Extinktion bei 435 nm zu empfehlen.
16.BESTIMMUNG DER UREASEAKTIVITÄTVON SOJAPRODUKTEN
1.Zweck und Anwendungsbereich
Die Methode erlaubt die Bestimmung der Ureaseaktivität in Sojaprodukten.
Der Test dient zur Feststellung eines ungenügenden Toastungsgrades.
2.Prinzip
Man bewertet die Ureaseaktivität durch die Menge Ammoniak-Stickstoff, die
von 1 g Substanz pro Min. bei 30 ºC aus einer Harnstofflösung freigesetzt
wird.
3.Reagenzien
3.1. 0,1 N Salzsäure3.2. 0,1 N Natriumhydroxidlösung
3.3. 0,05 M Phosphatpufferlösung, enthaltend 4,45 g Dinatriumhydrogen-
phosphat (Na
2HPO4·2H2O) und 3,40 g Kaliumdihydrogenphosphat
(KH2PO4) in 1000 ml.
3.4. Gepufferte Harnstofflösung, frisch hergestellt, enthaltend 30,0 g Harn-
stoff in 1000 ml Phosphatpufferlösung (3.3); pH-Wert 6,9 — 7,0.
4.Geräte
4.1. Titrierautomat für potentiometrische Titration oder hochempfindliches
pH-Meter (0,02 pH) mit Magnetrührer
4.2. Wasserbad mit Thermostat auf 30 ºC genau eingestellt
4.3. Reagenzgläser: 150 × 18 mm, mit Schliffstopfen.
5.Ausführung
Etwa 10 g der Probe werden so fein zerkleinert (z. B. mit einer Mokka-
mühle), daß sie durch ein Sieb von 0,2 mm Maschenweite hindurchgehen.
0,2 g dieser Probe werden auf 1 mg genau in ein Reagenzglas mit Schliff-
stopfen eingewogen und mit 10 ml gepufferter Harnstofflösung (3.4)
versetzt. Das Reagenzglas wird sogleich verschlossen und nach kräftigem
Schütteln in das genau auf 30 ºC eingestellte Wasserbad gebracht, worin
man es genau 30 Min. lang beläßt. Unmittelbar danach gibt man 10 ml
0,1 N Salzsäure (3.1) hinzu, kühlt schnell auf 20 ºC ab und überführt den
Inhalt des Reagenzglases quantitativ in ein Titriergefäß, wobei man zweimal
mit je 5 ml Wasser nachspült. Dann wird sofortund schnell mit 0,1 N1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 22
▼M2
▼B
▼B
Natriumhydroxidlösung (3.2) bis pH 4,7 elektrometrisch mit Hilfe einer Glas-
elektrode titriert.
EinBlindversuch wird wie folgt durchgeführt:
Man gibt in ein Reagenzglas mit Schliffstopfen schnell hintereinander 0,2 g
der auf 1 mg genau gewogenen Probe, 10 ml 0,1 N Salzsäure (3.1) und 10 mlgepufferte Harnstofflösung (3.4), kühlt sofort in Eiswasser ab und beläßt das
Glas 30 Min. darin. Sodann wird der Inhalt des Reagenzglases unter den
oben genannten Bedingungen in das Titriergefäß überführt und mit 0,1 N
Natriumhydroxidlösung (3.2) bis pH 4,7 titriert.
6.Berechnung der Ergebnisse
Die Ureaseaktivität ist nach folgender Formel zu berechnen:
1;4b/C0a ðÞ
30/C1E¼mg N
g/C1Min :bei 30 ºC
wobei a = verbrauchte ml 0,1 N Natriumhydroxidlösung im Versuch,
b = verbrauchte ml 0,1 N Natriumhydroxidlösung im Blindversuch,
E = Einwaage in g.
7.Bemerkungen
7.1. Die Methode ist auf eine Ureaseaktivität von höchstens 1 mg N/g · Min.
bei 30 ºC abgestellt. Bei Produkten mit höherer Aktivität kann die
Einwaage bis auf 50 mg herabgesetzt werden.
7.2. Produkte, deren Rohfettgehalt 10 v. H. übersteigt, sind vorher durch
kalte Extraktion zu entfetten.1971L0250 — DE — 26.05.1999 — 003.001 — 23