1994D0577 — DE — 05.07.1999 — 001.001 — 1
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►B ENTSCHEIDUNG DER KOMMISSION
vom 15. Juli 1994
über die Veterinärbedingungen und Veterinärbescheinigungen für die Einfuhr von Rindersperma
aus Drittländern
(94/577/EG)
(ABl. L 221 vom 26.8.1994, S. 26)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Entscheidung 1999/495/EG der Kommission vom 1. Juli 1999 L 192 56 24.7.1999
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▼B
ENTSCHEIDUNG DER KOMMISSION
vom 15. Juli 1994
über die Veterinärbedingungen und Veterinärbescheinigungen für
die Einfuhr von Rindersperma aus Drittländern
(94/577/EG)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft,
gestützt auf die Richtlinie 88/407/EWG des Rates vom 14. Juni 1988
zur Festlegung der tierseuchenrechtlichen Anforderungen an den inner-gemeinschaftlichen Handelsverkehr mit Samen von Rindern und andessen Einfuhr (
1), zuletzt geändert durchdie Rich tlinie 93/60/EWG (2),
insbesondere auf die Artikel 10 und 11,
in Erwägung nachstehender Gründe:Mit der Entscheidung 90/14/EWG der Kommission(
3), zuletzt geändert
durchdie Entsch eidung 91/276/EWG (4), wurde die Liste der Dritt-
länder festgelegt, aus denen die Mitgliedstaaten die Einfuhr von Rinder-sperma zulassen.
Aufgrund der Tiergesundheitslage in Israel wurden Einfuhren aus
diesem Land mit der Entscheidung 91/277/EWG der Kommission(
5)
untersagt.
In den Entscheidungen 91/479/EWG (6), 91/549/EWG (7), 92/
123/EWG (8), 92/124/EWG (9), 92/125/EWG (10), 92/126/EWG (11), 92/
127/EWG (12), 92/128/EWG (13), 92/386/EWG (14), 92/387/EWG (15)
und 92/445/EWG (16) der Kommission wurden die Tiergesundheitsan-
forderungen und die Veterinärbescheinigung für die Einfuhr vonRindersperma aus den Vereinigten Staaten von Amerika, Kanada,Polen, Finnland, Neuseeland, Österreich, der Schweiz, Schweden,Ungarn, Norwegen und der Tschechoslowakei geregelt.
Die Richtlinie 93/60/EWG muß in den Mitgliedstaaten spätestens ab 1.
Juli 1994 angewandt werden. Sie ändert die Richtlinie 88/407/EWG,weshalb auch die obengenannten Drittlandentscheidungen geändertwerden müssen. Zur Vereinfachung und Verdeutlichung der gemein-schaftlichen Rechtsvorschriften in diesem Bereich sind die obenge-nannten Entscheidungen zusammenzufassen und die für jedes einzelneLand geltenden Entscheidungen aufzuheben.
Nach dem Abkommen über den Europäischen Wirtschaftsraum sind für
Einfuhren von Rindersperma aus Österreich, Finnland, Norwegen undSchweden keine Veterinärbescheinigungen mehr erforderlich.
Nach Auffassung des Wissenschaftlichen Veterinärausschusses ist ein
zusätzlicher Test für die epizootische hämorrhagische Krankheit erfor-derlich.
(1) ABl. Nr. L 194 vom 22. 7. 1988, S. 10.
(2) ABl. Nr. L 186 vom 28. 7. 1993, S. 28.
(3) ABl. Nr . L 8 vom 11. 1. 1990, S. 71.
(4) ABl. Nr. L 135 vom 30. 5. 1991, S. 58.
(5) ABl. Nr. L 135 vom 30. 5. 1991, S. 60.
(6) ABl. Nr. L 258 vom 16. 9. 1991, S. 1.
(7) ABl. Nr. L 298 vom 29. 10. 1991, S. 6.
(8) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 1.
(9) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 10.
(10) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 19.
(11) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 28.
(12) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 37.
(13) ABl. Nr. L 48 vom 22. 2. 1992, S. 46.
(14) ABl. Nr. L 204 vom 21. 7. 1992, S. 13.
(15) ABl. Nr. L 204 vom 21. 7. 1992, S. 22.
(16) ABl. Nr. L 247 vom 27. 8. 1992, S. 1.
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Nur in Kanada werden die Routinetests für diese Krankheit vor der
Samengewinnung lediglich alle sechs Monate durchgeführt. Daher ist esangezeigt, eine Übergangszeit für die Anwendung dieser Entscheidungauf Kanada vorzusehen, damit den kanadischen Veterinärbehördengenügend Zeit bleibt, um diesen neuen Test in ihr Routineprogrammaufzunehmen.
Darüber hinaus kann aufgrund der jüngsten Erkenntnisse über die
Epidemiologie der Blauzungenkrankheit nunmehr die Einfuhr vonRindersperma aus Australien zugelassen werden.
Offenbar ist die Tiergesundheitslage in den in der Liste aufgeführten
Drittländern gut und wird in bezug auf die Krankheiten, die durchSperma übertragen werden können, von einwandfrei strukturierten undorganisierten Veterinärdienststellen überwacht.
Die zuständigen Veterinärbehörden der betreffenden Drittländer haben
sichverpflich tet, die Kommission und die Mitgliedstaaten per Telex derTelefax binnen 24 Stunden nachBestätigung des Auftretens einer der inListe A des Internationalen Tierseuchenamts (Office Internationald’Epizooties; OIE) genannten Krankheiten oder über jede Änderung derjeweiligen Impfpolitik zu unterrichten bzw. die Kommission und dieMitgliedstaaten innerhalb einer angemessenen Frist über das Auftreteneiner der in Liste B des OIE genannten Krankheiten und über jedevorgeschlagene Änderung der Einfuhrvorschriften für Haustiere bzw.deren Sperma oder Embryonen zu informieren.
Die zuständigen Veterinärbehörden der in der Liste aufgeführten Dritt-
länder haben sich verpflichtet, die Erteilung der in dieser Entscheidungvorgesehenen Bescheinigungen amtlich zu überwachen und dafür zusorgen, daß alle der Attestierung zugrundeliegenden Bescheinigungen,Abweichungen und Laborergebnisse nach dem Versand des entspre-chenden Spermas noch mindestens zwölf Monate amtlich verwahrtwerden.
Sie haben sich ferner verpflichtet, Besamungsstationen für die Ausfuhr
von Rindersperma in die Gemeinschaft gemäß Artikel 9 der Richtlinie88/407/EWG amtlichzuzulassen.
Die Tiergesundheitsanforderungen und die Veterinärbescheinigung sind
der Tiergesundheitslage des jeweiligen Drittlandes anzupassen.
Die in dieser Entscheidung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Ständigen Veterinärausschusses —
HAT FOLGENDE ENTSCHEIDUNG ERLASSEN:
Artikel 1
Die Mitgliedstaaten genehmigen die Einfuhr von Rindersperma nur,
wenn die Bedingungen der Bescheinigungen in Teil 1 der Anhänge A,B, C und D erfüllt sind und das Sperma aus den in Teil 2 der AnhängeA, B, C und D aufgeführten Drittländern stammt.
Sie genehmigen bis 31. Dezember 1994 die Einfuhr von Rindersperma
aus Kanada, das gemäß der Entscheidung 91/549/EWG gewonnen undaufbereitet wurde.
Artikel 2
Die Entscheidungen 91/479/EWG, 92/123/EWG, 92/124/EWG, 92/
125/EWG, 92/126/EWG, 92/127/EWG, 92/128/EWG, 92/386/EWG, 92/387/EWG und 92/445/EWG werden aufgehoben.
Die Entscheidung 91/549/EWG wird ab 1. Januar 1995 aufgehoben.
Artikel 3
Die Bestimmungen gemäß Artikel 1 erster Absatz bezüglichKanadas
gelten erst ab 1. Januar 1995.
Artikel 4
Diese Entscheidung ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.
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ANHANG A
TEIL 1
TIERGESUNDHEITSBESCHEINIGUNG
für die Einfuhr von Rindersperma

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▼B
13. Der unterzeichnete amtliche Tierarzt bestätigt, die Richtlinie 88/407/EWG gelesen zu haben und die Richtlini -
enbestimmungen zu kennen, und bescheinigt folgendes:
a) ............................................................................................................................. .....
(Name des Ausfuhrlands)
war in den zwölf Monaten unmittelbar vor Gewinnung des zur Ausfuhr bestimmten Spermas bis zu m
Versanddatum frei von Rinderpest und Maul- und Klauenseuche und hat in diesem Zeitraum kein e
Impfungen gegen diese Krankheiten durchgeführt.
b) Die Besamungsstation, in der das auszuführende Sperma gewonnen wurde,
i) wurde in Übereinstimmung mit Anhang A Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG zugelassen;
ii) wurde gemäß Anhang A Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG betrieben und überwacht;
iii) war während eines Zeitraums von 30 Tagen vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas bis zu m
30. Tag nachder Gewinnung (bei frisch em Sperma bis zum Versandtag) frei von Tollwut, Tuberkulose,
Brucellose, Milzbrand und infektiöser Rinderpleuropneumonie.
c) Die in der Besamungsstation eingestellten Rinder
i) stammen aus Beständen und/oder stammen von weiblichen Rindern ab, die den Bedingungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) sind vor ihrer Isolierung den Tests gemäß Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG unterzoge n
worden;
iii) sind vor ihrer Aufnahme vorschriftsmäßig isoliert worden und haben die Testanforderungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG erfüllt;
iv) wurden den Routineuntersuchungen gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG unter -
zogen, sofern sie seit mindestens einem Jahr in der Station einstehen.
d) Das auszuführende Sperma
i) wurde von Spendern gewonnen, die sichvor der Gewinnung des auszufüh renden Spermas seit minde -
stens sechs Monaten in
.............................................................................................................................
(Ausfuhrland)
befanden und die den Bedingungen des Anhangs C der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) wurde von Spendern gewonnen, die
— in einer Besamungsstation eingestellt sind, in der alle Rinder innerhalb des Zwölfmonatszeitraum s
vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas einem Serumneutralisationstest oder ELISA zu m
Ausschluß der infektiösen bovinen Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis mit nega -
tivem Testergebnis unterzogen wurden(1),
oder
— negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA zum Ausschluß der infektiösen bovine n
Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis, der innerhalb des Zwölfmonatszeitraums vo r
der Gewinnung des auszuführenden Spermas vorgenommen wurde, reagiert haben(1),
oder
— aufgrund einer Impfung gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG seropositiv sin d
und die negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA reagiert haben, der vor der Impfun g
in der zugelassenen Besamungsstation durchgeführt wurde(1);
(1) Unzutreffendes bitte streichen.
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▼B
►(1)◄
►(2)◄
iii) wurde unter Bedingungen aufbereitet, gelagert und transportiert, die den Vorschriften der Richtlini e
88/407/EWG entsprechen.
Ausgefertigt in .................................................,
(Ort)am ...............................................................
(Datum)
/SS74(Stempel)(2)Unterschrift(2): .....................................................................
Name in Druckbuchstaben: .......................................................
Amtsbezeichnung: ..................................................................
►(2)◄
(2) Die Farbe der Unterschrift und des Stempels müssen sich von der Druckfarbe der Bescheinigung unterscheiden.
►(1)M1
►(2)M1
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TEIL 2
Liste der Länder, die die Tiergesundheitsbescheinigung in Teil 1 dieses
Anhangs verwenden dürfen
TSCHECHISCHE REPUBLIKUNGARNNEUSEELANDPOLENRUMÄNIENSCHWEIZSLOWAKISCHE REPUBLIK
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ANHANG B
TEIL 1
TIERGESUNDHEITSBESCHEINIGUNG
für die Einfuhr von Rindersperma aus den Vereinigten Staaten von Amerika

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▼B
13. Der unterzeichnete amtliche Tierarzt bestätigt, die Richtlinie 88/407/EWG gelesen zu haben und die Richtlini -
enbestimmungen zu kennen, und bescheinigt folgendes:
a) ............................................................................................................................. .....
(Name des Ausfuhrlands)
war in den zwölf Monaten unmittelbar vor Gewinnung des zur Ausfuhr bestimmten Spermas bis zu m
Versanddatum frei von Rinderpest und Maul- und Klauenseuche und hat in diesem Zeitraum kein e
Impfungen gegen diese Krankheiten durchgeführt.
b) Die Besamungsstation, in der das auszuführende Sperma gewonnen wurde,
i) wurde in Übereinstimmung mit Anhang A Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG zugelassen;
ii) wurde gemäß Anhang A Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG betrieben und überwacht;
iii) war während eines Zeitraums von 30 Tagen vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas bis zu m
30. Tag nachder Gewinnung (bei frisch em Sperma bis zum Versandtag) frei von Tollwut, Tuberkulose,
Brucellose, Milzbrand und infektiöser Rinderpleuropneumonie.
c) Die in der Besamungsstation eingestellten Rinder
i) stammen aus Beständen und/oder stammen von weiblichen Rindern ab, die den Bedingungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) sind vor ihrer Isolierung den Tests gemäß Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG unterzoge n
worden;
iii) sind vor ihrer Aufnahme vorschriftsmäßig isoliert worden und haben die Testanforderungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG erfüllt;
iv) wurden den Routineuntersuchungen gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG unter -
zogen, sofern sie seit mindestens einem Jahr in der Station einstehen.
d) Das auszuführende Sperma
i) wurde von Spendern gewonnen, die sichvor der Gewinnung des auszufüh renden Spermas seit minde -
stens sechs Monaten in
.............................................................................................................................
(Ausfuhrland)
befanden und die den Bedingungen des Anhangs C der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) wurde von Spendern gewonnen, die
— in einer Besamungsstation eingestellt sind, in der alle Rinder innerhalb des Zwölfmonatszeitraum s
vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas einem Serumneutralisationstest oder ELISA zu m
Ausschluß der infektiösen bovinen Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis mit nega -
tivem Testergebnis unterzogen wurden(1),
oder
— negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA zum Ausschluß der infektiösen bovine n
Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis, der innerhalb des Zwölfmonatszeitraums vo r
der Gewinnung des auszuführenden Spermas vorgenommen wurde, reagiert haben(1),
oder
— gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG aufgrund der Impfung seropositiv sind un d
die negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA reagiert haben, der vor der Impfung i n
der zugelassenen Besamungsstation durchgeführt wurde(1);
(1) Unzutreffendes bitte streichen.
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►(1)◄
►(2)◄
iii) wurde unter Bedingungen aufbereitet, gelagert und transportiert, die den Vorschriften der Richtlini e
88/407/EWG entsprechen;
iv) stammt von Spendern, die zweimal im Abstand von weniger als zwölf Monaten jeweils vor und nac h
der Spermagewinnung und mit negativem Ergebnis in einem zugelassenen Labor folgenden Test s
unterzogen wurden, wobei für den Test nachder Gewinnung Blutproben verwendet wurden, die nich t
weniger als 21 Tage nachder Gewinnung des auszufüh renden Spermas genommen wurden:
— kompetitiver ELISA auf Blauzungenkrankheit nach Anhang E;
— Agargel-Immunodiffusionstest gemäß Anhang E und Virusneutralisationstest auf alle der i m
Ausfuhrland bekanntermaßen vorkommenden Serotypen der hämorrhagischen Krankheit (EHD).
Ausgefertigt in .................................................,
(Ort)am ...............................................................
(Datum)
/SS74(Stempel)(2)Unterschrift(2): .....................................................................
Name in Druckbuchstaben: .......................................................
Amtsbezeichnung: ..................................................................
►(2)◄
(2) Die Farbe der Unterschrift und des Stempels müssen sich von der Druckfarbe der Bescheinigung unterscheiden.
►(1)M1
►(2)M1
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TEIL 2
Liste der Länder, die die Tiergesundheitsbescheinigung in Teil 1 dieses
Anhangs verwenden dürfen
VEREINIGTE STAATEN VON AMERIKA
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ANHANG C
TEIL 1
TIERGESUNDHEITSBESCHEINIGUNG
für die Einfuhr von Rindersperma

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13. Der unterzeichnete amtliche Tierarzt bestätigt, die Richtlinie 88/407/EWG gelesen zu haben und die Richtlini -
enbestimmungen zu kennen; und bescheinigt folgendes:
a) ............................................................................................................................. .....
(Name des Ausfuhrlands)
war in den zwölf Monaten unmittelbar vor Gewinnung des zur Ausfuhr bestimmten Spermas bis zu m
Versanddatum frei von Rinderpest und Maul- und Klauenseuche und hat in diesem Zeitraum kein e
Impfungen gegen diese Krankheiten durchgeführt.
b) Die Besamungsstation, in der das auszuführende Sperma gewonnen wurde,
i) wurde in Übereinstimmung mit Anhang A Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG zugelassen;
ii) wurde gemäß Anhang A Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG betrieben und überwacht;
iii) war während eines Zeitraums von 30 Tagen vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas bis zu m
30. Tag nachder Gewinnung (bei frisch em Sperma bis zum Versandtag) frei von Tollwut, Tuberkulose,
Brucellose, Milzbrand und infektiöser Rinderpleuropneumonie.
c) Die in der Besamungsstation eingestellten Rinder
i) stammen aus Beständen und/oder stammen von weiblichen Rindern ab, die den Bedingungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) sind vor ihrer Isolierung den Tests gemäß Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG unterzoge n
worden;
iii) sind vor ihrer Aufnahme vorschriftsmäßig isoliert worden und haben die Testanforderungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG erfüllt;
iv) wurden den Routineuntersuchungen gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG unter -
zogen, sofern sie seit mindestens einem Jahr in der Station einstehen.
d) Das auszuführende Sperma
i) wurde von Spendern gewonnen, die sichvor der Gewinnung des auszufüh renden Spermas seit minde -
stens sechs Monaten in
.............................................................................................................................
(Ausfuhrland)
befanden und die den Bedingungen des Anhangs C der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) wurde von Spendern gewonnen, die
— in einer Besamungsstation eingestellt sind, in der alle Rinder innerhalb des Zwölfmonatszeitraum s
vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas einem Serumneutralisationstest oder ELISA zu m
Ausschluß der infektiösen bovinen Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis mit nega -
tivem Testergebnis unterzogen wurden(1),
oder
— negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA zum Ausschluß der infektiösen bovine n
Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis, der innerhalb des Zwölfmonatszeitraums vo r
der Gewinnung des auszuführenden Spermas vorgenommen wurde, reagiert haben(1),
oder
— gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG aufgrund einer Impfung seropositiv sin d
und die negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA reagiert haben, der vor der Impfun g
in der zugelassenen Besamungsstation durchgeführt wurde(1);
(1) Unzutreffendes bitte streichen.
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►(1)◄
►(2)◄
iii) wurde unter Bedingungen aufbereitet, gelagert und transportiert, die den Vorschriften der Richtlini e
88/407/EWG entsprechen;
iv) wurde von Spendern gewonnen, die entweder
— am 1. Juli 1994 in der zugelassenen Besamungsstation eingestellt waren
oder
— die nachdem 1. Juli 1994 in die zugelassene Besamungsstation eingestellt, in einem zugelassene n
Labor mit negativem Ergebnis auf Blauzungenkrankheit und die epizootische hämorrhagisch e
Krankheit getestet und in jedem Falle alle sechs Monate in einem zugelassenen Labor mit nega -
tivem Ergebnis folgenden Tests unterzogen wurden:
— kompetitiver ELISA auf Blauzungenkrankheit gemäß E;— Agargel-Immunodiffusionstest gemäß Anhang E und Virusneutralisationstest auf alle im Ausfuhr
-
land nachgewiesenen Serotypen des Erregers der epizootischen hämorrhagischen Krankheit.
Ausgefertigt in .................................................,
(Ort)am ...............................................................
(Datum)
/SS74(Stempel)(2)Unterschrift(2): .....................................................................
Name in Druckbuchstaben: .......................................................
Amtsbezeichnung: ..................................................................
►(2)◄
(2) Die Farbe der Unterschrift und des Stempels müssen sich von der Druckfarbe der Bescheinigung unterscheiden.
►(1)M1
►(2)M1
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TEIL 2
Liste der Länder, die die Tiergesundheitsbescheinigung in Teil 1 dieses
Anhangs verwenden dürfen
KANADA ausgenommen das innerhalb folgender Linie gelegene Gebiet des
Okanagan-Tals in Britisch-Kolumbien: von dem auf der Grenzezwischen Kanada und den Vereinigten Staaten gelegenen Punkt 120 °
15 /prime1Länge — 49 °Breite nachNorden bis zu dem Punkt 119 °35 /prime1
Länge 50 °30 /prime1Breite, dann nachNordosten bis zu dem Punkt 119 °
Länge 50 °45 /prime1Breite und nachSüden bis zu dem auf der Grenze
zwischen Kanada und den Vereinigten Staaten gelegenen Punkt 118 °
15 /prime1Länge 49 °Breite
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ANHANG D
TEIL 1
TIERGESUNDHEITSBESCHEINIGUNG
für die Einfuhr von Rindersperma

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13. Der unterzeichnete amtliche Tierarzt bestätigt, die Richtlinie 88/407/EWG gelesen zu haben und die Richtlini -
enbestimmungen zu kennen, und bescheinigt folgendes:
a) ............................................................................................................................. .....
(Name des Ausfuhrlands)
war in den zwölf Monaten unmittelbar vor Gewinnung des zur Ausfuhr bestimmten Spermas bis zu m
Versanddatum frei von Rinderpest und Maul- und Klauenseuche und hat in diesem Zeitraum kein e
Impfungen gegen diese Krankheiten durchgeführt.
b) Die Besamungsstation, in der das auszuführende Sperma gewonnen wurde,
i) wurde in Übereinstimmung mit Anhang A Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG zugelassen;
ii) wurde gemäß Anhang A Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG betrieben und überwacht;
iii) war während eines Zeitraums von 30 Tagen vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas bis zu m
30. Tag nachder Gewinnung (bei frisch em Sperma bis zum Versandtag) frei von Tollwut, Tuberkulose,
Brucellose, Milzbrand und infektiöser Rinderpleuropneumonie.
c) Die in der Besamungsstation eingestellten Rinder
i) stammen aus Beständen und/oder stammen von weiblichen Rindern ab, die den Bedingungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) sind vor ihrer Isolierung den Tests gemäß Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG unterzoge n
worden;
iii) sind vor ihrer Aufnahme vorschriftsmäßig isoliert worden und haben die Testanforderungen gemä ß
Anhang B Kapitel I der Richtlinie 88/407/EWG erfüllt;
iv) wurden den Routineuntersuchungen gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG unter -
zogen, sofern sie seit mindestens einem Jahr in der Station einstehen.
d) Das auszuführende Sperma
i) wurde von Spendern gewonnen, die sichvor der Gewinnung des auszufüh renden Spermas seit minde -
stens sechs Monaten in
.............................................................................................................................
(Ausfuhrland)
befanden und die den Bedingungen des Anhangs C der Richtlinie 88/407/EWG genügen;
ii) wurde von Spendern gewonnen, die
— in einer Besamungsstation eingestellt sind, in der alle Rinder innerhalb des Zwölfmonatszeitraum s
vor der Gewinnung des auszuführenden Spermas einem Serumneutralisationstest oder ELISA zu m
Ausschluß der infektiösen bovinen Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis mit nega -
tivem Testergebnis unterzogen wurden(1),
oder
— negativ auf einen Serumneutralisationstest oder ELISA zum Ausschluß der infektiösen bovine n
Rhinotracheitis/infektiösen pustulösen Vulvovaginitis, der innerhalb des Zwölfmonatszeitraums vo r
der Gewinnung des auszuführenden Spermas vorgenommen wurde, reagiert haben(1),
oder
— gemäß Anhang B Kapitel II der Richtlinie 88/407/EWG seropositiv sind und die negativ auf eine n
Serumneutralisationstest oder ELISA reagiert haben, der vor der Impfung in der zugelassene n
Besamungsstation durchgeführt wurde(1);
(1) Unzutreffendes bitte streichen.
1994D0577 — DE — 05.07.1999 — 001.001 — 18
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►(1)◄
►(2)◄
iii) wurde unter Bedingungen aufbereitet, gelagert und transportiert, die den Vorschriften der Richtlini e
88/407/EWG entsprechen;
iv) stammt von Spendern, die zweimal im Abstand von weniger als 12 Monaten jeweils vor und nachde r
Spermagewinnung und mit negativem Ergebnis in einem zugelassenen Labor folgenden Tests unter -
zogen wurden, wobei für den Test nachder Gewinnung Blutproben verwendet wurden, die nich t
weniger als 21 Tage nachder Gewinnung des auszufüh renden Spermas genommen wurden:
— kompetitiver ELISA auf Blauzungenkrankheit nach Anhang E;
— Agargel-Immunodiffusionstest gemäß Anhang E und Virusneutralisationstest auf alle der i m
Ausfuhrland bekanntermaßen vorkommenden Serotypen der hämorrhagischen Krankheit de r
Hirsche (EHD);
— Serumneutralisationstest zum Ausschluß des Akabane-Virus.
Ausgefertigt in .................................................,
(Ort)am ...............................................................
(Datum)
/SS74(Stempel)(2)Unterschrift(2): .....................................................................
Name in Druckbuchstaben: .......................................................
Amtsbezeichnung: ..................................................................
►(2)◄
(2) Die Farbe der Unterschrift und des Stempels müssen sich von der Druckfarbe der Bescheinigung unterscheiden.
►(1)M1
►(2)M1
1994D0577 — DE — 05.07.1999 — 001.001 — 19
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TEIL 2
Liste der Länder, die die Tiergesundheitsbescheinigung in Teil 1 dieses
Anhangs verwenden dürfen
AUSTRALIEN
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ANHANG E
Protokoll für einen Blocking- bzw. kompetitiven Enzym-Immuntest (ELISA)
unter Verwendung eines gruppenspezifischen monoklonalen Antikörpers
zum Nachweis von BTV-Antikörpern
KOMPETITIVER ELISA ZUM BTV-ANTIKÖRPERNACHWEIS UNTER
VERWENDUNG DESMONOKLONALEN ANTIKÖRPERS3-17-A3
Mit diesem Test können Antikörper aller bekannten Serotypen des Blauzungen-
virus (BTV) nachgewiesen werden.
Testprinzip ist die Unterbrechung der Reaktion zwischen BTV-Antigen und
einem gruppenspezifischen monoklonalen Antikörper (3-17-A3) durch Zugabevon Testserumverdünnungen. Antikörper gegen im Testserum vorhandenes BTVblockieren die Reaktionsfähigkeit des monoklonalen Antikörpers (Mab) undreduzieren nach Zusatz von Enzymsubstrat die voraussichtliche Farbenentwick-lung.
MATERIALIEN UND REAGENZIEN
1. Flachgrundige Mikrotiterplatten.
2. Antigen: wie folgt zubereitet.3. Blocking-Puffer : 5 % (w/v) „Marvel“ Milchpulver, 0,1 % (v/v) Tween-20
(als Polyoxydethylensorbitonmonolauratsyrup) in phosphatgepufferterKochsalzlösung (PBS).
4. Monoklonaler Antikörper 3-17-A3 (als aufschwimmende Hybridom-
Gewebekultur), aufbewahrt bei − 20 °C oder gefriergetrocknet, vor
Verwendung mit Blocking-Puffer 1:50 verdünnt und gegen das gruppen-spezifische Polypeptid p7 gerichtet.
5. Konjugat: Kaninchen-Anti-Maus-Globulin (absorbiert und eluiert), zu
Meerrettichperoxidase konjugiert und bei 4 °C im Dunkeln aufbewahrt.
6. Substrat und Chromogen: 0,2 g o-Phenylendiamin (OPD), aufgelöst in
einer Pufferlösung aus 2,553 g Zitronensäure und 4,574 g Dinatrium-Hydrogenorthophosphat und mit destilliertem Wasser auf 500 ml aufge-füllt, in 25 ml-Aliquoten aufgeteilt und bei − 20 °C im Dunkeln aufbe-
wahrt, unter Zusatz von 12 µl/25 ml Wasserstoffperoxyd (30 % w/v)
unmittelbar vor der Verwendung.
OPD VORSICHTIG HANDHABEN — GUMMIHANDSCHUHE
TRAGEN — MUTAGENVERDÄCHTIG.
7. 1 Mol Schwefelsäure: 26,6 ml Säure, zugegeben zu 473,4 ml destilliertem
Wasser.
VORSICHT — STETS SÄURE ZU WASSER, NIEMALS WASSER
ZUR SÄURE GEBEN.
8. Orbitalschüttler.9. ELISA-Plattenableser (das Testergebnis kann visuell abgelesen werden).
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TEST FORMAT
TESTPROTOKOLL
Blindkontrolle
Reihe 1 (A - H) ist eine Blindkontrolle, bestehend aus BTV-Antigen und
Konjugat. Sie kann zur Nichtanzeige des ELISA-Lesers verwendet werden.
Mab-Kontrolle
Reihe 2 (A - H) ist die monoklonale Antikörper-Kontrolle, bestehend aus BTV-
Antigen, monoklonalem Antikörper und Konjugat. Sie stellt eine Negativ-Kontrolle dar. Der Mittelwert der optischen Dichte (OD) dieser Kontrollreiheentspricht dem Hemmungswert von 0 %.
Positivkontrolle
Reihe 3 (A - H) ist die Positivkontrolle, bestehend aus BTV-Antigen, BTV-posi-
tiven Antiserumverdünnungen, Mab und Konjugat. Damit soll angezeigt werden,daß der Test sachgerecht funktioniert, und ähnliche Hemmungsniveaus solltenvon Test zu Test erzielt werden.
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Testseren
Im Testformat (siehe oben) können 18 Seren, verdünnt 1:2, 1: 4, 1:8 und 1:16,
getestet werden. So läßt sichder Titer von Antikörpern in den Testseren in etwaermitteln. Die Verdünnungsreihe könnte bis zu Serumverdünnungsendpunkttiternfortgesetzt werden. Alternativ könnten bei großangelegten serologischen Unter-suchungen Seren einmal (1:4) oder zweimal (1:2 und 1:4) verdünnt im Rapid-screening-Testverfahren getestet werden.
VERFAHRENSWEISE
1. BTV-Antigen zu vortitrierter Konzentration in PBS verdünnen, zusammen-
geballte Viren durch akustisches Abscheiden kurz dispergieren (falls keinakustischer Abscheider vorhanden, kräftig pipettieren) und 50 µl in alle
Mulden der ELISA-Platte geben. Zur Dispergierung des Antigens Platteleicht antippen.
2. Bei 37 °C 60 Minuten auf einem Orbitalschüttler inkubieren. Platten
dreimal durch Ausschwemmen der Mulden mit nicht steriler PBS waschenund auf Löschpapier abtropfen lassen.
3. 50 µl Blocking-Puffer in jede Mulde geben. Testseren und Positivserum in
die entsprechenden Mulden geben und über die Platte verteilt mit einerMehrfach-Pipette verdünnen. Die Seren auf keinen Fall in die Blindkon-trolle oder die Mab-Kontrolle geben.
4. Unmittelbar nachZugabe der Testseren Mab im Blocking-Puffer (zu vorti-
trierter Verdünnung) verdünnen und 50 µl in alle Mulden, ausgenommen
der Blindkontrolle, geben.
5. Bei 37 °C 60 Minuten auf einem Orbitalschüttler inkubieren. Dreimal mit
PBS waschen und abtropfen lassen.
6. Kaninchen-Antimaus-Konzentrat in Blocking-Puffer 1:5000 verdünnen
und 50 µl in alle Mulden geben.
7. Bei 37 °C 60 Minuten auf einem Orbitalschüttler inkubieren. Dreimal mit
PBS waschen und abtropfen lassen.
8. OPD auftauen und unmittelbar vor der Verwendung 12 µl 30 %iges
Wasserstoffperoxid zu je 25 ml OPD geben. 50 µl in alle Mulden geben.
Farbe ungefähr 10 Minuten lang entwickeln lassen und Reaktion mit 1 MSchwefelsäure (50 µl je Mulde) stoppen. Eine Färbung sollte sichin den
Mab-Kontrollmulden und in den Mulden mit Seren ohne BTV-Antikörperentwickeln.
9. Plattenergebnisse entweder visuell oder mittels eines spektralphotometri-
schen Lesers ablesen und registrieren.
ERGEBNISANALYSE
Den OD-Mittelwert, der einem Hemmungswert von 0 % entspricht, anhand der
Mab-Kontrollen berechnen. Die OD-Werte der Testseren werden anhandfolgender Formel in Hemmungsprozentwerten ausgedrückt.
Hemmungsprozentwert = 100 − OD in Anwesenheit des TestserumsOD in
Abwesenheit des Testserums × 100
Hemmungswerte von über 40 % bei einer Serumverdünnung von 1:4 gelten als
positiv. Visuelles Ablesen ist möglich, da eine 40 %ige Hemmung der niedrigsteWert ist, der mit bloßem Auge problemlos erfaßbar ist.
ZUBEREITUNG DESBTV-ELIS A-ANTIGENS
1. 10 Roux konfluierende BHK-21-Zellen dreimal mit serumfreiem Zell-
züchtungsmedium nach Eagle waschen und mit BTV-Serotyp 1 in vorge-nanntem Medium infizieren.
2. Bei 37 °C inkubieren und täglich auf zytopathischen Effekt (cpe) prüfen.
3. Wird bei 80 bis 90 % der Zellschicht jedes Roux ein zytopathischer
Effekt verzeichnet, das Virus durch Losschütteln noch anhaftender Zellenvom Glas ernten.
4. Die Zellen bis zur Pelletierung bei 2 000 bis 3 000 upm zentrifugieren.5. Die aufschwimmende Flüssigkeit abnehmen und die Zellen in ungefähr
30 ml PBS mit 1 % „Sarkosyl“ und 2 ml Phenolmethylsulphonylfluorid(Lysis-Puffer) erneut suspendieren. Eine eventuelle Gelbildung kanndurchZugabe von meh r Lysis-Puffer reduziert werden.
Anmerkung: Phenylmethylsulphonylfluorid ist schädlich — mit äußerster
Vorsicht handhaben.
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6. Die Zellen in 60 Sekunden mit einem Ultraschallprüfkopf bei 30 Mikron
Amplitude trennen.
7. Bei 10 000 upm 10 Minuten zentrifugieren.8. Die aufschwimmende Flüssigkeit bei + 4 °C aufbewahren und das
verbleibende Zellpellet in 10 bis 20 ml Lysis-Puffer erneut suspendieren.
9. Insgesamt dreimal akustisch abscheiden und klären; dabei die aufschwim-
mende Flüssigkeit jedes Arbeitsgangs aufbewahren.
10. Die aufschwimmenden Flüssigkeiten poolen und bei 24 000 upm 120
Minuten bei 4 °C über einem 5 ml-Kissen aus 40 % Sukrose (w/v in
PBS) unter Verwendung von 30 ml Beckmann-Zentrifugenröhrchen undeines SW 28 Rotors zentrifugieren.
11. Die aufschwimmende Flüssigkeit abnehmen, die Röhrchen gründlich
leeren und das Pellet durch akustische Abscheidung in PBS erneutsuspendieren. Das Antigen in Aliquoten bei 70 °C aufbewahren.
TITRIERUNG DESBTV-ELIS A-ANTIGENS
Das BTV-ELISA-Antigen wird anhand des indirekten ELISA titriert. Zweifache
Antigenverdünnungen werden gegenüber einer konstanten Verdünnung (1:50)des monoklonalen Antikörpers 3-17-A3 titriert. Es gilt folgendes:
VERFAHRENSWEISE
1. BTV-Antigen in PBS über die Mikrotiterplatte verteilt in Zweifach-
Verdünnungsreihen mit einer Mehrfach-Pipette verdünnen (50 µl/Mulde).
2. Eine Stunde bei 37 °C auf einem Orbitalschüttler inkubieren.
3. Platten dreimal mit PBS waschen.4. 50 µl monoklonalen Antikörper 3-17-A3 (verdünnt 1:50) in jede Mulde
der Mikrotiterplatte geben.
5. Eine Stunde bei 37 °C auf einem Orbitalschüttler inkubieren.
6. Platten dreimal mit PBS waschen.7. 50 µl Kaninchen-Antimaus-Globulin, zu Meerrettichperoxidase konjugiert
und zu einer vortitrierten optimalen Konzentration verdünnt, in jede Muldeder Mikrotiterplatte geben.
8. Eine Stunde bei 37 °C auf einem Orbitalschüttler inkubieren.
9. Substrat und Chromogen wie vorstehend beschrieben zugeben. Die Reak-
tion nach10 Minuten durchZugabe von 1 Mol Sch wefelsäure (50 µl/
Mulde) stoppen.
Beim kompetitiven ELISA muß der monoklonale Antikörper überschüssig sein.
Demnachwird eine Antigenverdünnung gewäh lt, die auf die Titrationskurvefällt, die nach10 Minuten ungefäh r 0,8 OD ergibt.
Protokoll für einen Agargel-Immunodiffusionstest zum Nachweis von Anti-
körpern der epizootischen hämorrhagischen Krankheit
Der Agargel-Immunodiffusionstest wird nach folgendem Protokoll durchgeführt:
MATERIALIEN UND REAGENZIEN
1. Antigen
Präzipitierendes Antigen wird in einer Zellkultur bereitet, die die schnelle
Vermehrung der entsprechenden Serotypen des Virus der epizootischenhämorrhagischen Krankheit unterstützt. Es werden BHK- oder Vero-Zellenempfohlen. Nach abgeschlossenem Viruswachstum ist Antigen in deraufschwimmenden Flüssigkeit vorhanden, erfordert jedoch eine 50- bis100fache Konzentration, um wirksam zu werden. Dazu kann jedes Standard-Proteinkonzentrationsverfahren herangezogen werden. Viren im Antigenkönnen durchZugabe von 0,3 % (v/v) Beta-Propiolactin inaktiviert werden.
2. Bekanntes positives Kontrollserum
Unter Verwendung des internationalen Referenzserums und des Antigens wird
ein nationales Standardserum hergestellt, für ein optimales Verhältnis gegen-über dem internationalen Referenzserum standardisiert, gefriergetrocknet undals das bekannte Kontrollserum in jedem Test verwendet.
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3. Testserum.
VERFAHREN
1. 1 % Agarose, bereitet in Borat oder Natriumbarbitalpuffer pH 8,5 bis 9,0,
in eine Petrischale gießen, so daß sich eine mindestens 3 mm tiefeAgarose-Schicht ergibt.
2. Aus dem Agar ein Testmuster von sieben feuchtigkeitsfreien Mulden von
5 mm Durchmesser herausstanzen. Das Muster besteht aus einer zentralensowie sechs kreisförmig im Abstand von 3 mm darum herum angeordnetenMulden:
3. Die zentrale Mulde mit Standardantigen, die peripheren Mulden 2, 4 und 6
mit dem positiven Kontrollserum, die peripheren Mulden 1, 3 und 5 mitden Testseren füllen.
4. Die so vorbereitete Schale bis zu 72 Stunden bei Raumtemperatur in einer
geschlossenen feuchten Kammer inkubieren.
AUSLEGUNG
Ein Testserum ist positiv, wenn sicheine spezifisch e Präzipitationslinie mit dem
Antigen bildet, die mit der entsprechenden Linie des Kontrollserums völligidentischist. Ein Testserum ist negativ, wenn es mit dem Antigen keine spezifi-sche Linie bildet und die Linie des Kontrollserums nicht beugt. Die Petrischalensollten bei indirekter Beleuchtung gegen einen dunklen Hintergrund geprüftwerden.