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►B VERORDNUNG (EWG) Nr. 3942/92 DER KOMMISSION
vom 22. Dezember 1992
zur Erstellung einer Referenzmethode für die Bestimmung von Sitosterin und Stigmasterin in
Butterfett
(ABl. L 399 vom 31.12.1992, S. 29)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1 Verordnung (EWG) Nr. 2539/93 der Kommission vom 15. September
1993 L 233 1 16.9.1993
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▼B
VERORDNUNG (EWG) Nr. 3942/92 DER KOMMISSION
vom 22. Dezember 1992
zur Erstellung einer Referenzmethode für die Bestimmung von
Sitosterin und Stigmasterin in Butterfett
DER RAT DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-meinschaft,
gestützt auf die Verordnung (EWG) Nr. 804/68 vom 27. Juni 1968 über
die gemeinsame Marktorganisation für Milch und Milcherzeugnisse (
1),
zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr. 2071/92 (2), insbe-
sondere auf Artikel 6,
in Erwägung nachstehender Gründe:Nach den Artikeln 5 und 6 der Verordnung (EWG) Nr. 3143/85 der
Kommission (
3), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr.
1264/92 (4), muß Butterfett gekennzeichnet und das gekennzeichnete
Butterfett kontrolliert werden.
Nach den Artikeln 3 und 6 der Verordnung (EWG) Nr. 570/88 der
Kommission (5), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr.
124/92 (6), kann Butterfett gekennzeichnet werden und müssen die
gekennzeichneten Erzeugnisse kontrolliert werden.
Nach den Artikeln 10 und 11 der Verordnung (EWG) Nr. 429/90 der
Kommission (7), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr.
1264/92, muß Butterfett gekennzeichnet und das gekennzeichneteButterfett kontrolliert werden.
Damit eine unzulässige Verwendung subventionierter Butter ausge-
schlossen ist, sind die Bedingungen hinsichtlich der Markierung mitKennzeichnungsstoffen genauestens zu erfüllen.
Wegen der Bedeutung der Markierung mit Kennzeichnungsstoffen für
das Funktionieren dieser Regelungen bedarf es gemeinsamer Verfahrenfür den Nachweis sämtlicher Markierungsstoffe; diese Verfahren solltengemeinschaftsweit einheitlich durchgeführt werden. Dies dient derGleichbehandlung aller diese Regelungen in Anspruch nehmendenMarktteilnehmer und der Beseitigung etwa auftretender Wettbewerbs-verzerrungen als Folge der gegenwärtig von Mitgliedstaat zu Mitglied-staat unterschiedlichen Analyseverfahren.
Derartige Referenzmethoden können nicht ohne weiteres für alle Kenn-
zeichnungsstoffe gleichzeitig festgelegt werden. Die Festlegung einerReferenzmethode zur Bestimmung von Stigmasterin und Sitosterin istein erster Schritt in diese Richtung.
Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Verwaltungsausschusses für Milch und Milcher-zeugnisse —
HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:
(1) ABl. Nr. L 148 vom 28. 6. 1968, S. 13.
(2) ABl. Nr. L 215 vom 30. 7. 1992, S. 64.
(3) ABl. Nr. L 298 vom 12. 11. 1985, S. 9.
(4) ABl. Nr. L 135 vom 19. 5. 1992, S. 5.
(5) ABl. Nr. L 55 vom 1. 3. 1988, S. 31.
(6) ABl. Nr. L 14 vom 21. 1. 1992, S. 28.
(7) ABl. Nr. L 45 vom 21. 2. 1990, S. 8.
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Artikel 1
▼M1
Die Referenz-Analysemethode zur Bestimmung des Stigmasteringehaltsvon Butterfett gemäß Artikel 6 der Verordnung (EWG) Nr. 3143/85,Artikel 6 der Verordnung (EWG) Nr. 570/88 oder Artikel 11 derVerordnung (EWG) Nr. 429/90 sowie des β-Sitosteringehalts von
Butterfett gemäß Artikel 6 der Verordnung (EWG) Nr. 570/88 ist imAnhang aufgeführt.
▼
B
Butterfett ist dann korrekt gekennzeichnet worden, wenn die Ergebnisseden in Absatz dieses Anhangs genannten Anforderungen genügen.
Artikel 2
Diese Verordnung tritt am dritten Tag nach ihrer Veröffentlichung im
Amtsblatt der Europäischen Gemeinschaften in Kraft.
Diese Verordnung gilt ab 1. Februar 1993.
Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmit-
telbar in jedem Mitgliedstaat.
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ANHANG
BESTIMMUNGVONSITOSTERINBZW.STIGMASTERININBUTTER-
FETT DURCH KAPILLARSÄULEN-GASCHROMATOGRAPHIE
1. ZWECK UND ANWENDUNGSBEREICH
Die Methode beschreibt ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung
von Sitosterin bzw. Stigmasterin in Butterfett. Sitosterin ist dabei dieSumme von B-Sitosterin und 22-Dihydro-B-Sitosterin; die anderen Sito-sterine sind als unbedeutend zu betrachten. Die Methode ist auf Probenanwendbar, die gemäß den Verordnungen (EWG) Nr. 3143/85, (EWG)Nr. 570/88 und (EWG) Nr. 429/90 gekennzeichnet wurden.
2. PRINZIP
Das Butterfett wird mit ethanolischer Kaliumhydroxidlösung verseift.
Die unverseifbaren Bestandteile werden mit Diethyl-Ether extrahiert.
Die Sterine werden zu Trimethyl-Silyl-Ether derivatisiert und durch
Kapillarsäulen-Gaschromotographie mit Betulin als internen Standardanalysiert.
3. GERÄTE
3.1. 150-ml-Verseifungskolben mit Rückflußkühler und Schliffverbindungen.3.2. 500-ml-Scheidetrichter.3.3. 250-ml-Kolben.3.4. Druckausgleichtrichter (250 ml oder ähnlich) zum Auffangen von über-
schüssigem Diethyl-Ether.
3.5. Glassäule, 350 mm × 20 mm, mit Sinterglasfritte.3.6. Wasserbad oder Isomantel.3.7. Reaktionsgläser, 2 ml.3.8. Zur Verwendung mit einer Kapillarsäule geeigneter Gaschromatograph
mit einem Trennsystem mit folgenden Bestandteilen:
3.8.1. ein Säulenofen, der die gewünschte Temperatur mit einer Genauigkeit
von ± 1 °C halten kann;
3.8.2. eine Verdampfungseinheit mit verstellbarer Temperatur;3.8.3. ein Flammenionisationsdetektor und ein Konverter-Verstärker;3.8.4. ein Aufzeichnungsgerät mit Integrator für den Konverter-Verstärker
(3.8.3).
3.9. Eine Quarzglas (Fused Silica)-Kapillarsäule, vollständig beschichtet mit
BP1 oder einem vergleichbaren Material mit einer einheitlichen Stärkevon 0,25 µ. Die Säule muß die Trimethyl-Silyl-Derivate von Lanosterin
und Sitosterin trennen können. Geeignet ist eine mit BP1 beschichteteSäule von 12 m Länge und 0,2 mm Innendurchmesser.
3.10. Eine 1- µl-Gaschromatographie-Mikrospritze mit gehärteter Nadel.
4. REAGENZIEN
Alle Reagenzien müssen von anerkannter Analysenqualität sein. Es ist
destilliertes Wasser oder Wasser von mindestens gleichem Reinheitsgradzu verwenden.
4.1. Ethanol, mindestens 95 %.4.2. 60 %ige Kaliumhydroxid-Lösung (600 g Kaliumhydroxid (mindestens
85 %) in Wasser lösen und bis zu einem Liter mit Wasser auffüllen).
4.3. Betulin, mindestens 99 %.4.3.1. Interne Standardlösungen. Betulin in Diethyl-Ether (4.4).4.3.1.1. Die zur Bestimmung von Sitosterin verwendete Betulinlösung muß eine
Konzentration von 1,0 mg/ml aufweisen.
4.3.1.2. Die zur Bestimmung von Stigmasterin verwendete Betulinlösung muß
eine Konzentration von 0,4 mg/ml aufweisen.
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4.4. Diethyl-Ether, analyserein (frei von Peroxiden oder Rückständen).
4.5. Natriumsulfat, wasserfrei, granular, zuvo r 2 h lang bei102 °C
getrocknet.
4.6. Silylierungs Reagenz, z.B. TRI-SIL (erhältlich von Pierce Chemical Co,
Kat-Nr. 49001) oder vergleichbares Reagenz. (Achtung: TRI- SIL istentflammbar, giftig, ätzend und ein potentielles Kanzerogen. Das Labor-personal muß mit den Sicherheitsdaten zu TRI-SIL vertraut sein und dieerforderlichen Vorsichtsmaßregeln treffen.)
4.7. Lanosterin.4.8. Sitosterin, bekannter Reinheitsgrad mindestens 90 % (P).
Anmerkung 1: Die Reinheit der Standardstoffe für die Eichung ist durch
Normalisierung zu bestimmen. Dazu wird angenommen, daß das Chro-matogramm alle in der Probe vorhandenen Sterine wiedergibt, daß dieGesamtfläche der Peaks 100 % der Sterinbestandteile darstellt und daßalle Sterine ein gleich starkes Detektorsignal hervorrufen. Es ist sicher-zustellen, daß das System in den interessierenden Konzentrationsberei-chen von Belang linear verläuft.
4.8.1. Sitosterin-Standardlösung: Lösung von Sitosterin (4.8) in Diethyl-Ether
(4.4) mit einer Konzentration von rund 0,5 mg/ml, auf 0,001 mg/mlgenau (W
1).
4.9. Stigmasterin, bekannter Reinheitsgrad mindestens 90 % (P).4.9.1. Stigmasterin-Standardlösung: Lösung von Sitosterin (4.9) in Diethyl-
Ether (4.4) mit einer Konzentration von rund 0,2 mg/ml, auf 0,001 mg/ml genau (W
1).
4.10. Testlösung für die Prüfung der Auflösung: Lösung von Lanosterin (4.7)
(0,05 mg/ml) und Sitosterin (4.8) (0,5 mg/ml) in Diethyl-Ether (4.4).
5. AUSFÜHRUNG
5.1. Herstellung der Standardlösungen für die Chromatographie. Die interne
Standardlösung (4.3.1) muß der entsprechenden Sterin-Standardlösungund der verseiften Probe gleichzeitig zugesetzt werden (siehe 5.3.3).
5.1.1. Sitosterin-Standardlösung für die Chromatographie: je 1 ml der Sito-
sterin-Standardlösung (4.8.1) in 2 Reaktionsgläser (3.7) überführen undden Diethyl-Ether mit Stickstoff entfernen. 1 ml der internen Standardlö-sung (4.3.1.1) zugeben und den Diethyl-Ether mit Stickstoff entfernen.
5.1.2. Stigmasterin-Standardlösung für die Chromatographie: je 1 ml der Stig-
masterin-Standardlösung (4.9.1) auf 2 Reaktionsgläser (3.7) übertragenund den Diethyl-Ether mit Stickstoff entfernen. 1 ml der internen Stan-dardlösung (4.3.1.1) zugeben und den Diethyl-Ether mit Stickstoffentfernen.
5.2. Vorbereitung der unverseifbaren Bestandteile.5.2.1. Ungefähr 1 g Butterfett (W
2) auf 1 mg genau in einen 150 ml-Kolben
(3.1) einwiegen. 50 ml Ethanol (4.1) und 10 ml Kaliumhydroxid-Lösung(4.2) zugeben. Rückflußkühler anbringen und 30 Minuten auf rund75°C erhitzen. Kühler entfernen und den Kolben auf Raumtemperatur
abkühlen lassen.
5.2.2. 1,0 ml der internen Standardlösung (4.3.1.1 bei der Bestimmung von
Sitosterin bzw. 4.3.1.2 bei der Bestimmung von Stigmasterin) in denKolben geben. Gründlich mischen. Den Inhalt des Kolbens quantitativ ineinen 500-ml-Scheidetrichter (3.2) überführen, den Kolben nacheinandermit 50 ml Wasser und 250 ml Diethyl-Ether (4.4) ausspülen. Den Schei-detrichter 2 Minuten kräftig schütteln und Trennung der Phasenabwarten. Die untere Wasserschicht ablaufen lassen und die Etherschichtviermal mit je 100 ml Wasser ausschütteln.
Anmerkung 2: Damit keine Emulsion entsteht, ist es wichtig, die ersten
beiden Waschvorgänge mit Wasser vorsichtig auszuführen (10Drehungen). Beim dritten Waschvorgang kann 30 Sekunden lang kräftiggeschüttelt werden. Sollte sich eine Emulsion bilden, so kann diesedurch Zugabe von 5 — 10 ml Ethanol zerstört werden. BeiZugabe vonEthanol muß unbedingt noch weiter zweimal kräftig mit Wasser ausge-schüttelt werden.
5.2.3. Die klare seifenfreie Etherschicht durch eine Glassäule (3.5) mit 30 g
wasserfreiem Natriumsulfat (4.5) laufen lassen. Den Ether in einem250-ml-Kolben (3.3) auffangen. Siedesteinchen zugeben und auf einem
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Wasserbad oder Isomantel fast bis zur völligen Trockenheit eindampfen
lassen; dabei die überschüssigen Lösungsmittel auffangen.
Anmerkung 3: Werden die Probenextrakte bei zu hoher Temperatur
vollständig getrocknet, so können Sterine verloren gehen.
5.3. Vorbereitung der Trimethyl-Silyl-Ether.5.3.1. Die im Kolben verbliebene Etherlösung in ein 2-ml-Reagenzglas (3.7)
mit 2 ml Diethyl-Ether übertragen und den Ether durch einen Stickstoff-strom entfernen. Den Kolben mit 2 weiteren 2-ml-Aliquoten Diethyle-ther ausspülen, dabeijedes Mal den Inhalt i n das Reagenzglas über-tragen und den Ether mit einem Stickstoffstrom entfernen.
5.3.2. Die Probe durch Zugabe von 1 ml TRI-SIL (4.6) silylieren. Glas
verschließen und zwecks Auflösen kräftig schütteln. Bei unvollständigerAuflösung auf 65 — 70 °C erwärmen. Vor der Injektion in den Gaschro-
matographen mindestens 5 Minuten stehen lassen. Die Standards ingleicher Weise wie die Proben silylieren. Die Mischung zur Prüfung derAuflösung (4.10) in gleicher Weise wie die Proben silylieren.
Anmerkung 4: Die Silylierung ist in wasserfreier Umgebung vorzu-
nehmen. Die unvollständige Silylierung von Betulin wird durch einenzweiten Peak dicht neben dem von Betulin angezeigt.
Die Silylierung wird in Gegenwart von Ethanol (ungenügendes Spülen
bei der Extraktion) beeinträchtigt. In diesem Fall muß bei der Extraktionein fünftes Mal gespült werden (30 Sekunden kräftiges Schütteln).
5.4. Gaschromatographische Analyse.5.4.1. Wahl der Arbeitsbedingungen.
Den Gaschromatographen nach der Anleitung des Herstellers vorbe-
reiten.
Als Leitlinie gelten die folgenden Arbeitsbedingungen:
— Säulentemperatur: 265 °C
— Temperatur des Injektors: 280 °C
— Temperatur des Detektors: 300 °C
— Durchflußgeschwindigkeit des Trägergases: 0,6 ml/min.— Wasserstoffdruck: 84 kPa— Luftdruck Splitverhältnis: 155 kPa— 10:1 bis 50:1. Das Splitverhältnis nach der Anleitung des Herstel-
lers optimieren und daraufhin die Linearität des Detektorsignals iminteressierenden Konzentrationsbereich überprüfen.
Anmerkung 5: Es ist unbedingt darauf zu achten, daß die Injektions-
röhre regelmäßig gereinigt wird.
Menge der eingespritzten Substanz 1 µl TMSE-Lösung.
Vor Beginn jeglicher Analysen warten, bis das System äquilibriert ist
und ein zufriedenstellend stabiles Response-Signal liefert.
Diese Bedingungen können je nach Beschaffenheit der Säule und des
Gaschromatographen abgewandelt werden, damit Chromatogrammeentstehen, die den folgenden Anforderungen genügen:
— Der Sitosterin-Peak muß vom Lanosterin-Peak genügend abgesetzt
sein. Abbildung 1 zeigt ein typisches Chromatogramm, wie es ausder silylierten Testlösung zur Prüfung der Auflösung erhaltenwerden sollte (4.10).
— Die relativen Retentionszeiten der folgenden Sterine sollten ungefähr
betragen:
Cholesterin 1,0
Stigmasterin 1,3Sitosterin 1,5Betulin 2,5.
— Die Retentionszeit für Betulin sollte rund 24 Minuten betragen.
5.4.2. Analyseverfahren
1µl der silylierten Standardlösung (Stigmasterin bzw. Sitosterin)
einspritzen und die Parameter für die Eichung des Integrators einstellen.
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Nochmals 1 µl der silylierten Probelösung einspritzen, um die Response-
Faktoren in bezug auf Betulin zu bestimmen.
1µl der silylierten Probelösung einspritzen und Peakflächen messen.
Am Anfang und am Ende einer jeden gaschromatographischen Analysemuß die Standardlösung eingespritzt werden. Als Leitlinie sollte nach je6 Probelösungen die Standardlösung eingespritzt werden.
Anmerkung 6: Bei der Integration des Stigmasterin-Peaks sind alle
durch die Punkte 1, 2 und 3 in Abbildung 2b markierten Ausläufer mitzu erfassen.
Bei der Integration des Sitosterin-Peaks ist die Fläche des Peaks von
22-Dihydro-B-Sitosterin (Stigmasterin), das unmittelbar nach Sitosterineluiert wird, mit zu erfassen, wenn das gesamte Sitosterin berechnetwerden soll.
6. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE
6.1. Fläche der Sterin-Peaks und der Betulin-Peaks in den zu Beginn und am
Ende eines Durchgangs eingespritzten Standardlösungen bestimmen undR
1berechnen:
R1−durchschnittliche Peakfläche von Betulin im Standarddurchschnittliche Peakfläche von Sterin im Standard
Fläche des Sterin-Peaks (Stigmasterin oder Sitosterin) und des Betulin-
Peaks in der Probe bestimmen und R2berechnen:
R2−Peakfläche von Sterin in der Probe
Peakfläche von Betulin in der Probe
W1− Steringehalt des Standards (mg) in 1 ml Standardlösung (4.8.1
oder 4.9.1)
W2− Gewicht der Probe (g) (5.2.1)
P − Reinheitsgrad des Standardsterins (4.8 oder 4.9)
Steringehalt der Probe mg/kg =B2
R1×W1
W2×P×1 0 .
7. GENAUIGKEIT DER METHODE
7.1. Wiederholbarkeit.7.1.1. Stigmasterin.
Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von derselben Person mit
denselben Geräten am gleichen Testmaterial so rasch wie möglich nach-einander ausgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 10,2 mg/kgvoneinander abweichen.
7.1.2. Sitosterin.
Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die von derselben Person mit
denselben Geräten am gleichen Testmaterial so rasch wie möglich nach-einander ausgeführt worden sind, dürfen um nicht mehr als 3,6 % vomDurchschnitt der Bestimmungen voneinander abweichen.
7.2. Vergleichbarkeit.7.2.1. Stigmasterin.
Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die in verschiedenen Labors mit
verschiedenen Geräten am gleichen Testmaterial durchgeführt wordensind, dürfen um nicht mehr als 25,3 mg/kg voneinander abweichen.
7.2.2. Sitosterin.
Die Ergebnisse zweier Bestimmungen, die in verschiedenen Labors mit
verschiedenen Geräten am gleichen Testmaterial ausgeführt wordensind, dürfen um nicht mehr als 8,9 % des Durchschnitts der Bestim-mungen voneinander abweichen.
7.3. Quelle der Daten bezüglich der Genauigkeit.
Die Daten zur Genauigkeit stammen aus einem 1991 durchgeführten
Versuch, an dem 9 Labors beteiligt waren und bei dem 6 Proben (3Blindproben) auf Stigmasterin und 6 Proben (3 Blindproben) auf Sito-sterin untersucht wurden.
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8. ZULÄSSIGE ABWEICHUNGEN
8.1. Zur Prüfung der Homogenität sind dem gekennzeichneten Produkt drei
Proben zu entnehmen.
8.2. Stigmasterin.8.2.1. Der Stigmasterinzusatz beträgt 150 g bei mindestens 95 % reinem Stig-
masterin je Tonne Butterfett, d. h. 142,5 mg/kg, bzw. 170 g bei minde-stens 85 % reinem Stigmasterin je Tonne Butterfett, d. h. 144,5 mg/kg.
8.2.2. Unter Berücksichtigung der kritischen Differenz für einen 95 %-Vertrau-
ensbereich (CrD
95-Wert) muß der Durchschnitt der drei Ergebnisse
— bei 95 % reinem Stigmasterin mindestens 128,3 mg/kg,
— bei 85 % reinem Stigmasterin mindestens 130,3 mg/kg
betragen.
8.2.3. Neben den in 8.2.2 genannten Kriterien wird das niedrigste bei der
Analyse der gekennzeichneten Proben erzielte Ergebnis verwendet, umdie homogene Verteilung des Kennzeichnungsmittels zu überprüfen.Dies geschieht durch einen Vergleich mit folgenden Grenzwerten:
— 120,4 mg/kg (95 % der Mindestzusatzmenge bei 95 % reinem Stig-
masterin unter Berücksichtigung des CrD
95-Wertes für eine Einzel-
probe),
— 122,3 mg/kg (95 % der Mindestzusatzmenge bei 85 % reinem Stig-
masterin unter Berücksichtigung des CrD95-Wertes für eine Einzel-
probe),
— 99,0 mg/kg (80 % der Mindestzusatzmenge bei 95 % reinem Stigma-
sterin unter Berücksichtigung des CrD95-Wertes für eine Einzel-
probe),
— 100,6 mg/kg (80 % der Mindestzusatzmenge bei 85 % reinem Stig-
masterin unter Berücksichtigung des CrD95-Wertes für eine Einzel-
probe).
Es wird die Konzentration des Kennzeichnungsmittels in der Probe mit
dem niedrigsten Ergebnis, das man durch Interpolierung zwischen120,4 mg/kg und 99,0 mg/kg bzw. zwischen 122,3 mg/kg und100,6 mg/kg erhält, verwendet.
8.3. Sitosterin.8.3.1. Der Zusatz von Sitosterin beträgt 600 g bei mindestens 90 % reinem
Sitosterin je Tonne Butterfett, d.h. 540 mg/kg.
8.3.2. Unter Berücksichtigung des CrD
95-Wertes muß der Durchschnitt der drei
Ergebnisse mindestens 513,0 mg/kg betragen.
8.3.3. Neben den in 8.3.2 genannten Kriterien wird das niedrigste bei der
Analyse der gekennzeichneten Proben erzielte Ergebnis verwendet, umdie homogene Verteilung des Kennzeichnungsmittels zu überprüfen.Dies geschieht durch einen Vergleich mit folgenden Grenzwerten:
— 484,4 mg/kg (95 % der Mindestzusatzmenge bei 90 % reinem Sito-
sterin unter Berücksichtigung des CrD
95-Wertes für eine Einzel-
probe),
— 403,4 mg/kg (80 % der Mindestzusatzmenge bei 90 % reinem Sito-
sterin unter Berücksichtigung des CrD95-Wertes für eine Einzel-
probe).
Es wird die Konzentration des Kennzeichnungsstoffes in der Probe mit
dem niedrigsten Ergebnis, das man durch Interpolieren zwischen484,4 mg/kg und 403,4 mg/kg erhält, verwendet.
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Abbildung 1 Chromatogramm der Mischung zur Prüfung der Auflösung
Wünschenswert ist eine vollständige Auflösung, d. h. die Peaks für
Lanosterin und Sitosterin sollten vollständig zur Grundliniezurückkehren. Eine vollständige Auflösung ist jedoch zulässig.

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Abbildung 2
Stigmasterin-Standard

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▼B
Abbildung 2b
Butterfettprobe, gekennzeichnet mit Sigmasterin
Anmerkung: Bei der Integration des Stigmasterin-Peaks sind alle von den
Punkten 1, 2 und 3 markierten Ausläufer mit zu erfassen.
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Abbildung 3a
Sitosterol-Standard

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▼B
Abbildung 3b
Butterfettprobe, gekennzeichnet mit β-Sitosterol
Anmerkung: β-Sitosterol enthält oft eine Verunreinigung (als Stigmastanol iden-
tifiziert), die unmittelbar nach dem β-Sitosterol eluiert wird. Die Flächen dieser
beiden Peaks sollten aufsummiert weden, wenn das insgesamt vorhandene β-
Sitosterol bestimmt wird.