1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—1
Dieses Dokument ist lediglich eine Dokumentationsquelle, für deren Richtigkeit die Organe der Gemeinschaften keine
Gewähr übernehmen
►B RICHTLINIE DES RATES
vom 26. Juni 1990
zur Festlegung der tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das Verbringen von Equiden und für
ihre Einfuhr aus Drittländern
(90/426/EWG)
(ABl.L224vom18.8.1990,S.42)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Richtlinie 90/425/EWGdesRatesvom26.Juni1990 L224 29 18.8.1990
►M2Richtlinie 91/496/EWGdesRatesvom15.Juli1991 L268 56 24.9.1991
►M3Entscheidung 92/130/EWG derKommissionvom13.Februar1992 L47 26 22.2.1992
►M4Richtlinie 92/36/EWGdesRatesvom29.April1992 L157 28 10.6.1992
►M5Entscheidung 2001/298/EGderKommissionvom30.März2001 L102 63 12.4.2001
►M6Entscheidung 2002/160/EGderKommissionvom21.Februar2002 L53 37 23.2.2002
►M7Verordnung(EG)Nr.806/2003desRatesvom14.April2003 L122 1 16.5.2003
Geändert durch:
►A1Beitrittsakte Österreichs,FinnlandsundSchwedens C241 21 29.8.1994
(angepaßt durchdenBeschluß95/1/EG, Euratom, EGKSdesRates) L1 1 1.1.1995
Berichtigt durch:►
C1Berichtigung, ABl.L296vom27.10.1990,S.66(90/426/EWG)
▼B
RICHTLINIE DES RATES
vom 26. Juni 1990
zur Festlegung der tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das
Verbringen von Equiden und für ihre Einfuhr aus Drittländern
(90/426/EWG)
DERRATDEREUROPÄISCHENGEMEINSCHAFTEN—
gestütztaufdenVertragzurGründungderEuropäischenWirtschaftsge-
meinschaft, insbesondereaufArtikel 43,
aufVorschlagderKommission(1),
nachStellungnahme desEuropäischen Parlaments(2),
nachStellungnahme desWirtschafts- undSozialausschusses(3),
inErwägungnachstehenderGründe:
Equiden sind als lebende Tiere in der Liste der in Anhang II des
Vertrages aufgeführten Erzeugnisse enthalten.
Um eine sinnvolle Entwicklung der Zucht von Equiden zu gewährlei-
sten und dadurch die Produktivität dieses Wirtschaftszweigs zu
erhöhen, sindaufGemeinschaftsebene Vorschriften fürdasVerbringen
voneinem Mitgliedstaat ineinen anderen zuerlassen.
Die Zucht von Equiden, insbesondere von Pferden, ist im allgemeinen
einTeilbereich derlandwirtschaftlichen Tätigkeit. Siedienteinem Teil
derlandwirtschaftlichen Bevölkerung alsEinkommensquelle.
Um den innergemeinschaftlichen Handel mit Equiden zu fördern,
müssen die zwischen den Mitgliedstaaten bestehenden UnterschiedeimBereich derTiergesundheitsvorschriften beseitigt werden.
Damit sich der innergemeinschaftliche Handel harmonisch entwickeln
kann, muß eine Gemeinschaftsregelung für die Einfuhren aus Drittlän-dernfestgelegt werden.
BeiregistriertenEquiden,diemiteinemDokumentzuihrerIdentifizie-
rungversehensind,solltenauchdieBedingungenihrerVerbringungim
Inlandgeregelt werden.
UmzumHandelzugelassenzuwerden,müssendieEquidenbestimmte
viehseuchenrechtliche Anforderungen erfüllen, die gewährleisten, daß
die Ausbreitung ansteckender Krankheiten vermieden wird. Es
erscheint insbesondere angebracht, eine mögliche Regionalisierung dereinschränkenden Maßnahmen vorzusehen.
Zu diesem Zweck sind auch Bedingungen für den Transport dieser
Tiere festzulegen.
Um die Einhaltung dieser Anforderungen zu gewährleisten, ist die
Ausstellung einer Gesundheitsbescheinigung durch einen amtlichenTierarzt vorzusehen, die die Equiden bis zu ihrem Bestimmungsortbegleitet.
DieBestimmungen zurOrganisation derKontrollen durchdenBestim-
mungsmitgliedstaatunddiedarauszuziehendenFolgerungensowiediezu treffenden Schutzmaßnahmen sind im Rahmen der zu erlassendenRegelung über Veterinärkontrollen im innergemeinschaftlichen Handelmit lebenden Tieren im Hinblick auf die Verwirklichung des Binnen-
marktes festzulegen.
Außerdem ist vorzusehen, daß die Kommission eigene Kontrollen
durchführen kann. Diese Kontrollen sind in Zusammenarbeit mit denzuständigen nationalen Behördenvorzunehmen.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—2
(1) ABl.Nr.C327vom30.12.1989,S.61.
(2) ABl.Nr.C149vom18.6.1990.
(3) ABl.Nr.C62vom12.3.1990,S.46.
▼B
Eine Gemeinschaftsregelung für die Einfuhren aus Drittländern setzt
die Aufstellung einer Liste der Drittländer oder Teile von Drittländernvoraus,ausdenenEquideneingeführt werdenkönnen.
BeiderEntscheidungüberdieAufnahmeindieseListesindallgemeine
Kriterien zugrunde zu legen, etwa der Gesundheitszustand des Viehs,
die Organisation und die Befugnisse der Veterinärbehörden und die
viehseuchenrechtlichen Vorschriften indembetreffenden Drittland.
Ferner ist die Einfuhr von Equiden aus Drittländern zu verbieten, die
nicht oder seit zu kurzer Zeit frei sind von Tierkrankheiten, die eine
ernste GefahrfürdenViehbestand inderGemeinschaft darstellen. DasgleichegiltfürdieEinfuhrausDrittländern,indenenImpfungengegensolcheKrankheiten vorgenommen werden.
Die allgemeinen Bedingungen für die Einfuhr aus Drittländern sind
durch besondere Bedingungen zu ergänzen, die entsprechend dergesundheitlichen Lage in dem jeweiligen Land festzulegen sind. Dadiese besonderen Bedingungen unter Zugrundelegung technischer und
unterschiedlicher Kriterien festgelegt werden müssen, ist hierzu ein
flexibles und schnelles Gemeinschaftsverfahren vorzusehen, in dessenRahmen die Kommission und die Mitgliedstaaten eng zusammenar-beiten.
DieVorlageeinernacheinemgemeinsamen Mustererstellten Beschei-
nigung bei der Einfuhr ist ein wirksames Mittel, um die Anwendungder Gemeinschaftsregelung zu gewährleisten. Da diese Regelungbesondere und für die einzelnen Drittländer unterschiedliche Bestim-
mungen vorsehen kann, sind die Muster der Bescheinigung
dementsprechend zuerstellen.
Die Veterinärsachverständigen der Gemeinschaft haben zu überprüfen,
ob Anforderungen der vorliegenden Richtlinie insbesondere in denDrittländern eingehalten werden.
Bei derEinfuhrmüssenHerkunftundGesundheitszustand derEquiden
kontrolliert werden.
Die allgemeinen Bestimmungen für die bei der Einfuhr durchzufüh-
rendenKontrollen müssensichineinGesamtkonzepteinfügen.
Jeder Mitgliedstaat muß die Möglichkeit haben, Einfuhren aus einem
Drittland unverzüglich zu verbieten, wenn diese eine Gefahr für die
Gesundheit der Tiere darstellen können. In diesem Fall muß unbe-schadet der etwaigen Änderungen der Liste der Länder, die in dieGemeinschaft ausführen dürfen, unverzüglich die Haltung allerMitgliedstaaten gegenüber dem betreffenden Drittland koordiniert
werden.
Die Bestimmungen dieser Richtlinie müssen im Zusammenhang der
VollendungdesBinnenmarktes überprüft werden.
Es ist ein Verfahren vorzusehen, durch das eine enge und wirksame
Zusammenarbeit zwischen den Mitgliedstaaten und der Kommission
imStändigenVeterinärausschuß gewährleistet wird—
HATFOLGENDERICHTLINIEERLASSEN:
KAPITELI
Allgemeine Bestimmungen
Artikel 1
Diese Richtlinie legt die tierseuchenrechtlichen Vorschriften für das
Verbringen von Equiden von einem Mitgliedstaat in einen anderenundfürihreEinfuhrausDrittländern fest.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—3
▼B
Artikel 2
ImSinnedieserRichtlinie sind
a) Betrieb: landwirtschaftlicher Betrieb, Schulungsbetrieb, Stall oder
ganzallgemeinjedeRäumlichkeitoderAnlage,inderüblicherweiseEquiden — gleichgültig zu welchem Verwendungszweck —gehalten oderaufgezogen werden;
b) Equiden: als Haustiere gehaltene oder freilebende Pferde —
einschließlichZebras—undEselundihreKreuzungen;
c) registrierte Equiden: alle Equiden, diegemäßderRichtlinie 90/427/
EWG(
1) registriert und durch ein Dokument zur Identifizierung
gekennzeichnet sind, das von der Tierzuchtbehörde oder eineranderen zuständigen Behörde des Ursprungslands des Equiden, diedasStutbuchoderdasZuchtregister desbetreffenden Equidenführt,oder einer internationalen Vereinigung bzw. Organisation, die
Pferde im Hinblick auf Wettkämpfe und Rennen führt, ausgestellt
wird;
d) Schlachttiere: Equiden, die dazu bestimmt sind, entweder direkt
oderübereinenMarktbzw.einezugelassene Sammelstelle ineinen
Schlachthofverbracht unddortgeschlachtet zuwerden;
e) Zucht- und Nutzequiden: andere Equiden als die unter den Buch-
stabenc)undd)genannten;
f) pferdepestfreier Mitgliedstaat bzw. pferdepestfreies Drittland: jeder
Mitgliedstaatbzw.jedes Drittland, in dessenGebiet kein klinischer,serologischer (bei nichtgeimpften Tieren) oder epidemiologischer
Nachweis für das Auftreten von Pferdepest während der beiden
vorangegangenenJahrevorliegtundindemimVerlaufdervorange-gangenen zwölf Monate keine Impfung gegen diese Krankheitvorgenommen wordenist;
g) anzeigepflichtige Krankheiten: dieinAnhangIaufgeführtenKrank-
heiten;
h) amtlicher Tierarzt: der von der zuständigen Zentralbehörde des
Mitgliedstaatsodereines Drittlandsbezeichnete Tierarzt;
i) zeitweiligeZulassung:StatuseinesauseinemDrittlandstammenden
registrierten Equiden, der für einen von der Kommission nach dem
Verfahren des Artikels 24 entsprechend der tiergesundheitlichen
Lage im Herkunftsland festzulegenden Zeitraum in dem Gebiet derGemeinschaft zugelassen wird, wobei dieser Zeitraum weniger als90Tage betragen muß.
KAPITELII
Vorschriften für das Verbringen von Equiden
Artikel 3
Ein Mitgliedstaat genehmigt das Verbringen von registrierten Equiden
in seinem Gebiet und versendet Equiden in das Gebiet eines anderenMitgliedstaats nur dann, wenn sie die Voraussetzungen der Artikel 4und5erfüllen.
Die zuständigen Behörden der Bestimmungsmitgliedstaaten können
jedoch allgemeine oder beschränkte Ausnahmen zugestehen für denVersandvonEquiden,die
— zu Sport- oder Freizeitzwecken in der Nähe der Binnengrenzen der
Gemeinschaft geritten odergeführtwerden,
— an kulturellen oder ähnlichen Veranstaltungen oder an Tätigkeiten
teilnehmen, die von dazu befugten örtlichen Einrichtungen in derNähederBinnengrenzen derGemeinschaft ausgerichtet werden,
— sich ausschließlich zu Weidezwecken oder zum Arbeitseinsatz
vorübergehend in der Nähe von Binnengrenzen der Gemeinschaftbefinden.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—4
(1) SieheSeite55diesesAmtsblatts.
▼B
DieMitgliedstaaten,dieeinesolcheGenehmigungerteilen,unterrichten
die KommissionüberdenInhalt dergewährten Ausnahmeregelungen.
Artikel 4
(1) Die Equiden müssen bei der Inspektion frei von klinischen
Anzeichen einer Krankheit sein. Die Inspektion darf nicht früher als48 Stunden vor der Verladung erfolgen. Diese Inspektion wird jedoch
bei registrierten Equiden unbeschadet desArtikels6nurfürdeninner-
gemeinschaftlichen Handelverlangt.
(2) Unbeschadet derAnforderungen desAbsatzes5fürdie anzeige-
pflichtigen Krankheiten muß der amtliche Tierarzt sich bei derInspektion vergewissern, daß aus den Umständen, unter anderem ausden Erklärungen des Besitzers bzw. des Züchters, nicht der Schlußgezogen werden kann, daß die Tiere in Kontakt mit Equiden
gekommen sind, die in den letzten 15 Tagen vor der Inspektion an
einer Infektionodereiner ansteckenden Krankheit gelitten haben.
(3) Es darf sich nicht um Tiere handeln, die im Rahmen eines von
einem Mitgliedstaat durchgeführten Seuchentilgungsprogramms zurAusmerzungbestimmt sind.
(4) DieTiere sindwiefolgtzukennzeichnen:
i) registrierte Pferde anhand eines Dokuments zu ihrer Identifizierung
gemäßderRichtlinie90/427/EWG,indeminsbesonderedieEinhal-
tungderAbsätze5und6sowiedesArtikels5zubestätigenist.DieGültigkeitdiesesDokumentsistwährendderDauerderinAbsatz5sowie in Artikel 5 vorgesehenen Verbote vom amtlichen Tierarztauszusetzen. EswirdnachderSchlachtung desregistrierten Pferdesan die Behörde zurückgegeben, die es ausgestellt hat. Die Durch-
führungsvorschriften zu dieser Ziffer werden von der Kommission
nachdemVerfahrendesArtikels24erlassen;
ii) Zucht- und Nutzequiden nach einer von der Kommission nach dem
VerfahrendesArtikels24festzulegenden Kennzeichnungsmethode.
Bis diese Methode zur Anwendung kommt, bleiben die amtlich
zugelassenen einzelstaatlichen Kennzeichnungsmethoden
anwendbar, sofern sie binnen drei Monaten nach Genehmigungdieser Richtlinie der Kommission und den anderen Mitgliedstaatenmitgeteilt werden.
(5) Neben dem Erfordernis im Sinne von Artikel 5 dürfen die
EquidennichtauseinemBetriebstammen,überdeneinederfolgenden
Sperrmaßnahmen verhängtwurde:
a) Sind nicht alle der in einem Betrieb vorhandenen Tiere der für die
betreffende Krankheit empfänglichen Art geschlachtet oder getötet
worden, so muß die Sperre des Herkunftsbetriebs für folgendeMindestdauergelten:
— sechs Monate bei allen Tieren, bei denen Verdacht auf
Beschälseuche besteht, gerechnet ab dem Zeitpunkt des letzten
Kontakts oder der letzten Kontaktmöglichkeit mit krankenEquiden. Bei Hengsten muß die Sperre bis zur Kastration fort-dauern;
— sechs Monate bei Rotz und Pferdeenzephalomyelitis, gerechnet
ab dem Zeitpunkt, an dem die befallenen Tiere ausgemerztwordensind;
— bei infektiöser Anämie muß die Sperre so lange dauern, bis —
nachdem die befallenen Tiere ausgemerzt worden sind — sichbeidenübrigenTierenaufzweiCoggins-TestsineinemAbstandvondreiMonateneinnegativer Befundergeben hat;
— sechsMonateseitdemletzten FallvonStomatitis vesicularis;— einenMonatbeiTollwut,gerechnetabdemletztenfestgestellten
Krankheitsfall;
— 15 Tage bei Milzbrand, gerechnet ab dem letzten festgestellten
Krankheitsfall.
b) SindalleineinemBetriebvorhandenenTierederfürdiebetreffende
Krankheit empfänglichen Art geschlachtet oder getötet und die1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—5
▼B
Räumlichkeiten desinfiziertworden,sobeträgtdieDauerderSperre
30 Tage, gerechnet ab dem Zeitpunkt, an dem die Tiere aus demBetrieb entfernt und die Räumlichkeiten desinfiziert wurden; bei
Milzbrand beträgt dieSperrdauerjedoch 15Tage.
Die zuständigen Behörden können für Hippodrome und Rennbahnen
Ausnahmen von diesen Sperrmaßnahmen vorsehen; sie unterrichtendie Kommissionüberdie ArtderAusnahmeregelungen.
(6) Erstellt ein Mitgliedstaat ein fakultatives oder obligatorisches
Programm zur Bekämpfung einer bei Equiden vorkommenden Krank-heit oder hat er ein solches Programm erstellt, so kann er dieses
Programm der Kommission innerhalb von sechs Monaten ab der
Bekanntgabe dieser Richtlinie vorlegen und macht dabei insbesonderefolgende Angaben:
— Situation hinsichtlich derKrankheit inseinem Gebiet;
— Begründung des Programms unter Berücksichtigung der Schwere
derKrankheit unddesKosten-Nutzen-Verhältnisses;
— geographisches Gebiet, in dem das Programm durchgeführt werden
soll;
— unterschiedlicher Status für die Betriebe, für die jeweilige Art zu
erfüllende NormensowieTestverfahren;
— dieKontrollverfahren fürdasProgramm;— Konsequenzen des Statusverlusts eines Betriebs, aus welchen
Gründenauch immer;
— Maßnahmen, die zu ergreifen sind, wenn sich bei den gemäß dem
Programmdurchgeführten Kontrollenein positiverBefundergibt;
— keine Diskriminierungen zwischen dem Handel im Gebiet des
betroffenen Mitgliedstaats und dem innergemeinschaftlichen
Handel.
Die Kommission prüft die von den Mitgliedstaaten übermittelten
Programme. Gegebenenfalls genehmigt sie diese unter Beachtung derin Unterabsatz 1 genannten Kriterien nach den Verfahren des Artikels24. Nach demselben Verfahren können die allgemeinen oderbegrenzten ergänzenden Garantien festgelegt werden, die im innerge-
meinschaftlichen Handel verlangt werden können. Diese Garantien
dürfen nicht über diejenigen hinausgehen, die der Mitgliedstaat imnationalen Rahmen anwendet.
Das von dem Mitgliedstaat vorgelegte Programm kann nach dem
Verfahren des Artikels 25 geändert oder ergänzt werden. Nachdemselben Verfahren kann die Änderung oder Ergänzung eines zuvor
genehmigten Programms oder der gemäß Unterabsatz 2 festgelegten
Garantien genehmigt werden.
Artikel 5
(1) Die nicht im Sinne von Artikel 2 Buchstabe f) pferdepestfreien
Mitgliedstaaten dürfen Equiden aus einem gemäß Absatz 2 des vorlie-gendenArtikelsalsbefallen geltenden TeilihresGebietsnurunterdenin Absatz 3 des vorliegenden Artikels genannten Voraussetzungenversenden.
(2) a) Ein Teil des Hoheitsgebiets eines Mitgliedstaats gilt als von
Pferdepestbefallen, wenn
— einklinischer,serologischer(beinichtgeimpftenTieren)und/
oder epidemiologischer Nachweis für das Auftreten vonPferdepest während der beiden vorangegangenen Jahrevorliegt oder
— während der vorangegangenen zwölf Monate gegen Pferde-
pestgeimpft wordenist.
b) Der von Pferdepest befallene Teil des Hoheitsgebiets muß
mindestens diefolgenden Zonenumfassen:
— eine Schutzzone von mindestens 100 km im Umkreis eines
jedenHerdes,1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—6
▼M4
▼M4
— eine mindestens 50 km breite Kontrollzone um die Schutz-
zone herum, in der während der vorangegangenen zwölfMonatenicht gegenPferdepestgeimpft wordenist.
c) Die Kontrollregeln für die Bekämpfungsmaßnahmen in den
Gebieten und Teilgebieten im Sinne der Buchstaben a) und b)sowie die entsprechenden Ausnahmeregelungen sind in derRichtlinie 92/35/EWG(
1)niedergelegt.
d) Alle geimpften Equiden in der Schutzzone müssen gemäß
Artikel 6 Absatz 1 der Richtlinie 92/35/EWG registriert undgekennzeichnet werden.
Aufdiese Impfungistindem DokumentzurIdentifizierung der
Equiden und/oder auf der Gesundheitsbescheinigung eindeutighinzuweisen.
(3) Ein Mitgliedstaat darf von dem in Absatz 2 Buchstabe b)
genannten Gebiet nur Equiden versenden, die folgende Anforderungenerfüllen:
a) Sie dürfen nur während bestimmter Zeiten des Jahres versandt
werden, die gemäß dem Verfahren des Artikels 25 nach MaßgabederAktivität derkrankheitsübertragenden Insektenfestzulegen sind;
b) sie dürfen am Tag der in Artikel 4 Absatz 1 genannten Inspektion
keine klinischen Anzeichen vonPferdepestaufweisen;
c) — wenn sie nicht gegen Pferdepest geimpft worden sind, müssen
sie einem Komplementfixierungstest in bezug auf Pferdepestmit negativem Befund unterzogen worden sein, der nachMaßgabedesAnhangsDzweimal,undzwarineinemzeitlichen
Abstand von 21 bis 30 Tagen und beim zweiten Mal innerhalb
vonzehnTagenvordemVersand,durchzuführen ist;
— wenn sie geimpft worden sind, so darf diese Impfung nicht
innerhalb der beiden letzten Monate vorgenommen worden seinund müssen sie dem Fixierungstest nach Anhang D mit denvorgenannten zeitlichen Abständen unterzogen worden sein,ohne daß eine Zunahme von Antikörpern festgestellt worden
ist. Die Kommission kann gemäß dem Verfahren des Artikels
24 nach der Stellungnahme des Ständigen VeterinärausschussesandereKontrollmethoden anerkennen;
d) sie müssen während einer Mindestdauer von 40 Tagen vor dem
Versandineiner Quarantänestation gehalten wordensein;
e) siemüssenwährendderQuarantänezeitundwährenddesTransports
von der Quarantänestation zum Versandort vor krankheitsübertra-genden Insektengeschützt wordensein.
Artikel 6
Die Mitgliedstaaten führen eine alternative Kontrollregelung mit
Garantien ein, die denjenigen entsprechen, welche in Artikel 4 Absatz
5 für das Verbringen von Equiden und registrierten Equiden in ihrGebiet vorgesehen sind, und können sich insbesondere vermittels desDokuments zur Identifizierung der Equiden gegenseitig eine Abwei-chung vonArtikel 4Absatz1Satz 2sowieArtikel 8Absatz1zweiter
Gedankenstrich zugestehen.
Sieunterrichten hierüber dieKommission.
Artikel 7
(1) Die Equiden müssen unverzüglich — entweder unmittelbar oder
über einen zugelassenen Markt oder eine zugelassene Sammelstelle
gemäß Artikel 3 Absatz 6 der Richtlinie 64/432/EWG — aus demHerkunftsbetrieb in Transportmitteln oder -behältnissen, die ordnungs-gemäß gereinigt und desinfiziert worden sind, zum Bestimmungsortbefördert werden; das Desinfektionsmittel und die Häufigkeit der1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—7
(1) ABl.Nr.L157vom10.6.1992,S.19.▼B
▼B
Reinigung und Desinfektion werden vom Versandmitgliedstaat
bestimmt. DieTransportfahrzeuge müssensobeschaffen sein,daßtier-ische Abgänge, Einstreu oder Futter während des Transports nicht
heraussickern oder -fallen können. Der Transport ist so auszuführen,
daß ein wirksamer Schutz der Gesundheit und das Wohlbefinden derTiere gewährleistet sind.
(2) Der Bestimmungsmitgliedstaat kann allgemeine oder begrenzte
Abweichungen von bestimmten Anforderungen des Artikels 4 Absatz5zugestehen, soferndasTiereinebesondereKennzeichnung trägt,aus
der hervorgeht, daß es zum Schlachten bestimmt ist, und in der
Gesundheitsbescheinigung aufdieseAbweichungenhingewiesenwird.
ImFallderGewährungeinerderartigenAbweichungmüssenSchlacht-
tiere unmittelbar zu dem bezeichneten Schlachtbetrieb befördert unddortinnerhalbeinerFrist,diefünfTagenachderAnkunftimSchlacht-betrieb nicht überschreiten darf,geschlachtet werden.
(3) Der amtliche Tierarzt muß die Kennummer bzw. die Nummer
des Dokuments zur Identifizierung des geschlachteten Equiden in ein
Verzeichnis eintragen und der zuständigen Behörde des Versandortesaufihren Antraghineine Bescheinigung überdie erfolgte SchlachtungderEquiden übermitteln.
Artikel 8
(1) Die Mitgliedstaaten tragen dafür Sorge, daß folgende Auflagen
erfüllt werden:
— Beim Verbringen registrierter Equiden aus einem Betrieb muß das
Dokument zur Identifizierung nach Artikel 4 Absatz 4 mitgeführtwerden sowie zusätzlich die Bescheinigung gemäß Anhang B,wenn die Equiden für den innergemeinschaftlichen Handel
bestimmt sind;
— bei der Beförderung von Zucht-, Nutz- und Schlachtequiden muß
eineGesundheitsbescheinigung nachAnhangCmitgeführt werden.
Die Bescheinigung bzw. das Blatt des Dokuments zur Identifizierung
mit den gesundheitsrelevanten Angaben darf — unbeschadet vonArtikel 6 — nicht früher als 48 Stunden bzw. muß spätestens amletzten Werktag vor der Verladung in mindestens einer der Amtsspra-chen des Bestimmungsmitgliedstaats ausgestellt werden. DieBescheinigung ist zehn Tage lang gültig. Die Bescheinigung muß aus
einem einzigen Blatt bestehen.
(2) EinfuhrenvonanderenalsregistriertenTierenkönnenanstattmit
der Einzelbescheinigung nach Absatz 1 zweiter Gedankenstrich miteiner einzigen Gesundheitsbescheinigung jeSendungerfolgen.
Artikel 9
Die Vorschriften der Richtlinie 90/425/EWG des Rates vom 26. Juni
1990 zur Regelung der veterinärrechtlichen und tierzüchterischen
Kontrollen im innergemeinschaftlichen Handel mit lebenden Tieren
und Erzeugnissen im Hinblick auf den Binnenmarkt(
1) finden Anwen-
dung, insbesondere betreffend die Ursprungskontrollen, dieOrganisation der vom Bestimmungsmitgliedstaat durchzuführendenKontrollenunddasweitereVorgehenimAnschlußandieseKontrollen
sowiedie zuergreifendenSchutzmaßnahmen.
Artikel 10
Veterinärsachverständige der Kommission können, soweit dies für die
einheitlicheAnwendungderRichtlinieerforderlichist,inZusammenar-beit mit den zuständigen einzelstaatlichen Behörden Kontrollen an Ortund Stelle durchführen. Die Kommission unterrichtet die Mitglied-staaten überdieErgebnissedieserKontrollen.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—8
(1) ABl.Nr.L224vom18.8.1990,S.29.▼M1
▼B
▼B
Der Mitgliedstaat, in dessenGebiet eine solche Kontrolle durchgeführt
wird,gewährtdenSachverständigen jedeUnterstützungbeiderDurch-führungihrerAufgaben.
Die Durchführungsbestimmungen zu diesem Artikel werden nach dem
VerfahrendesArtikels24erlassen.
KAPITELIII
Vorschriften für die Einfuhren aus Drittländern
Artikel 11
(1) DieindieGemeinschafteingeführtenEquidenmüssendieinden
Artikeln12bis16genannten Voraussetzungenerfüllen.
(2) BiszumInkrafttretendernachdenArtikeln12bis16erlassenen
jeweiligen Beschlüsse wenden die Mitgliedstaaten auf die Einfuhrenvon Equiden aus Drittländern Vorschriften an, die denjenigen, die sichaus der Anwendung von Kapitel II ergeben, mindestens gleichwertigsind.
Artikel 12
(1) Eingeführte Equiden müssen aus Drittländern oder Teilen von
Drittländern stammen, die in einer Liste aufgeführt sind, welche in
eine besondere Spaltedergemäß Artikel 3derRichtlinie 72/462/EWGerstellten Listezuübernehmen ist.
(2) Die Verfahren und Kriterien für die Erstellung, Änderung und
Veröffentlichung der Liste der Drittländer oder der Teile von Drittlän-dern nach Artikel 3 der Richtlinie 72/462/EWG finden auf die für dieEinfuhrvonEquidengeltende Liste Anwendung.
Artikel 13
(1) Eingeführte EquidenmüssenausDrittländern stammen,
a) die freisindvonPferdepest;
b) dieseitzweiJahrenfreisindvonVenezolanischerPferdeenzephalo-
myelitis (VEE);
c) die seitsechsMonaten freisindvonBeschälseuche undRotz.
(2) DieKommissionkannnachdemVerfahrendesArtikels24
a) beschließen,daßAbsatz1nurfüreinenTeildesGebietseinesDritt-
landesgilt.
Werden die Auflagen hinsichtlich der Pferdepest regionalisiert, so
müssen zumindest die in Artikel 5 Absätze 2 und 3 vorgesehenen
Maßnahmen eingehalten werden;
b) zusätzliche Garantien für Krankheiten verlangen, die für die
Gemeinschaftalsexotischgelten.
Artikel 14
Vor dem Tag ihrer Verladung zum Versand nach dem Bestimmungs-
mitgliedstaat müssen die Equiden im Gebiet oder in einem Teil desGebiets eines Drittlandes oder, bei Regionalisierung, in dem gemäß
Artikel 13 Absatz 2 Buchstabe a) festgelegten Teil des Gebiets unun-
terbrochen während eines Zeitraums gehalten worden sein, der bei derGenehmigung der gemäß Artikel 15 zu fassenden Beschlüsse festge-setzt wird.
Sie müssen aus einem unter tierärztlicher Aufsicht stehenden Betrieb
stammen.
Artikel 15
Equiden dürfen nur dann aus dem Gebiet eines in der Liste gemäß
Artikel 12 Absatz 1 aufgeführten Drittlandes oder aus einem gemäßArtikel 13Absatz2 Buchstabe a) festgelegten Teil eines Gebiets eines1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—9
▼B
solchen Drittlandes eingeführt werden, wenn sie neben den Auflagen
desArtikels13
a) dienachdemVerfahrendesArtikels24entsprechendderjeweiligen
Art und den Kategorien von Equiden festgelegten tierseuchenrecht-lichen Bedingungen für die Einfuhr von Equiden aus dembetreffendenLand erfüllen.
Als Bezugsgrundlage für die Festlegung der tierseuchenrechtlichen
Bedingungen nach dem ersten Unterabsatz gelten die in den Arti-keln4und5festgelegten Normen;
b) darüber hinaus im Fall von Drittländern, die während mindestens
sechs Monaten nicht frei von Stomatitis vesicularis und Virusarte-riitis sind,folgende Bedingungen erfüllen:
i) Die Equiden müssen aus einem Betrieb stammen, der seit
mindestens sechs Monaten frei von Stomatitis vesicularis ist,und vor ihrer Verbringung auf einen serologischen Test negativreagiert haben;
ii) bei Virusarteriitis müssen die Hengste unbeschadet des Artikels
19 Ziffer ii) auf einen serologischen Test, einen Virusisolations-
test oder jeden anderen Test negativ reagiert haben, der nachdemVerfahrendesArtikels24anerkanntwirdundgewährleistet,daßdasTier freivondieserKrankheit ist.
DieKommissionkannnachdemVerfahrendesArtikels24nach
Stellungnahme des Ständigen Veterinärausschusses die Katego-rien männlicher Equiden einschränken, für die dieses
Erfordernis gilt.
Artikel 16
(1) Die Equiden sind gemäß Artikel 4 Absatz 4 zu kennzeichnen;
für sie muß eine Bescheinigung mitgeführt werden, die von einemamtlichen Tierarzt des versendenden Drittlandes ausgestellt worden
ist.DieseBescheinigung muß
a) amTagderVerladungderTierezumVersandindenBestimmungs-
mitgliedstaat — bei registrierten Pferden am letzten Werktag vorderVerladung—ausgestellt wordensein;
b) mindestens in einer der Amtssprachen des Bestimmungsmitglied-
staats und in einer der Amtssprachen des Mitgliedstaats ausgestelltwordensein,indemdieEinfuhrkontrolle vorgenommen wird;
c) inderUrschriftmitgeführt werden;
d) bestätigen, daß die Tiere die Voraussetzungen dieser Richtlinie
erfüllenunddenVorschriftenentsprechen,dieinAnwendungdieser
Richtlinie fürdie Einfuhren ausDrittländern festgelegt werden;
e) auseinem einzigen Blattbestehen;
f) für einen einzigen Empfänger bzw. bei Schlachttieren für eine
ordnungsgemäßgekennzeichnete Sendungbestimmt sein.
Die Mitgliedstaaten unterrichten die Kommission, wenn sie von
dieserMöglichkeit Gebrauch machen.
(2) Die Bescheinigung muß mit Hilfe eines Formblatts ausgestellt
werden, das einem nach dem Verfahren des Artikels 24 erstellten
Musterentspricht.
Artikel 17
Tierärztliche Sachverständige der Mitgliedstaaten und der Kommission
kontrollierenanOrtundStelle,obdieBestimmungendieserRichtlinie,insbesondere Artikel12Absatz2,tatsächlich eingehalten werden.
ErgebensichbeieinerInspektionnachdiesemArtikelschwerwiegende
Sachverhalte zu Lasten des zugelassenen Betriebs, so unterrichtet dieKommission hiervon sofort die Mitgliedstaaten und erläßt umgehendeine Entscheidung zur vorläufigen Aussetzung der Zulassung. Eineendgültige Entscheidung erfolgt nachdemVerfahrendesArtikels25.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—10
▼B
Die Sachverständigen der Mitgliedstaaten, die diese Kontrollen durch-
führen sollen, werden von der Kommission auf Vorschlag derMitgliedstaaten bezeichnet.
Die Kontrollen werden im Auftrag der Gemeinschaft vorgenommen,
die dieentsprechenden Kostenträgt.
Periodizität und Einzelheiten der Durchführung dieser Kontrollen
werdennach demVerfahrendesArtikels24festgelegt.
Artikel 18
(1) Schlachttiere müssensofortnach ihrem EingangindemBestim-
mungsmitgliedstaat entweder unmittelbar oder über einen Markt bzw.eine Sammelstelle in einen Schlachthof verbracht werden und entspre-chend den tierseuchenrechtlichen Erfordernissen innerhalb einer Frist
geschlachtet werden, die bei der Genehmigung der gemäß Artikel 15
zufassendenBeschlüssefestgelegt wird.
(2) Unbeschadet der besonderen Voraussetzungen, die gegebenfalls
nach dem Verfahren des Artikels 24 festgelegt werden, kann diezuständige Behörde des Bestimmungsmitgliedstaats aufgrund tierseu-
chenrechtlicher Erfordernisse den Schlachthof bestimmen, in den die
Tiere verbracht werdenmüssen.
Artikel 19
NachdemVerfahrendesArtikels24
i) kann die Kommission die Einfuhr aus einem Drittland oder einem
Teil eines Drittlandes auf einzelne Tierarten oder Tiergruppenbeschränken;
ii) legt die Kommission abweichend von Artikel 15 fest, unter
welchen besonderen Voraussetzungen gestattet werden kann, daß
registrierte oder für besondere Zwekke bestimmte Equiden zeit-weilig im Gebiet der Gemeinschaft zugelassen oder nachzeitweiliger Ausfuhrwiedereingeführt werdendürfen;
iii) bestimmt die Kommission die Voraussetzungen, unter denen eine
zeitweilige Zulassung in eine endgültige Zulassung umgewandeltwerdendarf.
KAPITELIV
Schlußbestimmungen
Artikel 22
DieBestimmungendieserRichtlinieundinsbesondereArtikel4Absatz
1Satz2sowiedieArtikel6,8und21werdenvordem1.Januar1993im Rahmen der Vorschläge für die Vollendung des Binnenmarktes,
überdiederRatmit qualifizierter Mehrheitbeschließt, überprüft.
Artikel 23
Die Anhänge zu dieser Richtlinie werden von der Kommission nach
demVerfahrendesArtikels25geändert.
Artikel 24
(1) Die Kommission wird von dem durch Artikel 58 der
Verordnung (EG) Nr. 178/2002(
1) eingesetzten Ständigen Ausschuss
fürdieLebensmittelkette undTiergesundheit unterstützt.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—11
(1) ABl.L31vom1.2.2002,S.1.▼M2
▼B
▼M7
▼M7
(2) WirdaufdiesenArtikelBezuggenommen,sogeltendieArtikel5
und7desBeschlusses1999/468/EG(1).
Der Zeitraum nach Artikel 5 Absatz 6 des Beschlusses 1999/468/EG
wirdaufdreiMonatefestgesetzt.
(3) DerAusschussgibtsicheineGeschäftsordnung.
Artikel 25
(1) Die Kommission wird von dem Ständigen Ausschuss für die
Lebensmittelkette undTiergesundheit unterstützt.
(2) WirdaufdiesenArtikelBezuggenommen,sogeltendieArtikel5
und7desBeschlusses1999/468/EG.
Der Zeitraum nach Artikel 5 Absatz 6 des Beschlusses 1999/468/EG
wirdauffünfzehnTage festgesetzt.
Artikel 26
FürKapitel IIIgiltArtikel 34derRichtlinie72/462/EWG.
Artikel 27
Die Mitgliedstaaten erlassen die erforderlichen Rechts- und Verwal-
tungsvorschriften, um dieser Richtlinie spätestens am 1. Januar 1992nachzukommen. SiesetzendieKommissiondavoninKenntnis.
Artikel 28
DieseRichtlinie istandieMitgliedstaatengerichtet.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—12
(1) ABl.L184vom17.7.1999,S.23.▼B
▼B
ANHANG A
ANZEIGEPFLICHTIGE KRANKHEITEN
FolgendeKrankheiten sindanzeigepflichtig:
— Beschälseuche
— Rotz— Pferdeenzephalomyelitis (alle Formen,einschließlich derVEE)— Infektiöse Anämie— Tollwut
— Milzbrand
— Pferdepest— Stomatitis vesicularis1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—13
▼M3
ANHANG B
►(1)M51990L0426—DE—05.06.2003—008.001—14
▼M3
ANHANG C
1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—15
▼M3
►(1)A1
►(2)M51990L0426—DE—05.06.2003—008.001—16
▼M6
ANHANG D
AFRIKANISCHE PFERDEPEST
DIAGNOSTIK
Reagenzien für die nachstehend beschriebenen Enzym-Immuntests (enzyme-
linked immunosorbent assays — ELISA) können vom Referenzlabor der Euro-
päischenGemeinschaftodervondenOIE-Referenzlaboratorien fürAfrikanische
Pferdepestbezogenwerden.
1. KOMPETITIVER ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN
GEGEN DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV)
(PFLICHTTEST)
Die kompetitive ELISA-Methode wird zum Nachweis spezifischer APV-
Antikörper in Equidenseren angewandt. Das Breitspektrum-, polyklonale
Meerschweinchen-Anti-APVImmunserum (im Folgenden „Meerschwein-
chen-Antiserum“ genannt) ist serogruppenspezifisch und eignet sich zum
Nachweisaller bekannten SerotypendesAP-Virus.
Testprinzip ist die Unterbrechung der Reaktion zwischen dem APV-Antigen
und einem Meerschweinchen-Antiserum mit einer Testserumprobe. APV-
AntikörperimTestserumkonkurrierenmitdenAntikörpernimMeerschwein-
chen-Antiserum und bewirken so eine Abschwächung der erwarteten
Farbreaktion (nach Zugabe von enzymmarkiertem Anti-Meerschweinchen-
Antikörper und Substrat). Seren können bei einer einfachen Verdünnung
von 1:5 getestet (Test einer Serum-Einfachverdünnung) oder, um Verdün-
nungsendpunkte zu erhalten, titriert werden (Test von Serumtitrationen).
Hemmwerte vonüber50%gelten alspositiv.
Das im Folgenden beschriebene Testprotokoll wird vom Regionalen Refe-
renzlabor für Afrikanische Pferdepest in Pirbright, Vereinigtes Königreich,
angewandt.
1.1.Testverfahren
1.1.1.Vorbereitung der Platten
1.1.1.1. ELISA-Platten mit Antigen, aus infizierten Zellkulturen extra-
hiert und in Karbonat-Bikarbonat-Puffer mit einem pH-Wert
von 9,6 verdünnt, beschichten und über Nacht bei 4 ºC inku-
bieren.
1.1.1.2. Vertiefungen leeren und Platten dreimal mit phosphatgepuf-
ferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS) mit einem pH-
Wertvon7,2-7,4abspülenundaufSaugpapierabklopfen.
1.1.2.Kontrollvertiefungen
1.1.2.1. Positive Kontrollseren in zweifachen Verdünnungsreihen, von
1:5 bis 1:640 über Reihe 1 verteilt in Blocking-Puffer (PBS
mit einem Gehalt an 0,5 % (v/v) Tween 20, 5 % (w/v) Mage-
rmilchpulver (Cadbury's MarvelTM) und 1 % (v/v) Serum
ausgewachsener Rinder) titrieren, bis ein Endvolumen von
50µl/Vertiefung erreicht ist.
1.1.2.2. 50 µl des negativen Kontrollserums, 1:5 verdünnt (10 µl
Serum + 40 µl Blocking-Puffer), in Vertiefungen A und B der
Reihe2geben.
1.1.2.3. 100 µl/VertiefungBlocking-PufferinVertiefungenCundDder
Reihe2geben(BLANK).
1.1.2.4. 150 µl Blocking-Puffer in Vertiefungen E, F, G und H der
Reihe2geben(Meerschweinchen-Kontrolle).
1.1.3.Test einer Serum-Einfachverdünnung
1.1.3.1. Jedes Testserum, im Verhältnis 1:5 in Blocking-Puffer
verdünnt, in Doppelvertiefungen der Reihen 3 bis 12 geben
(10µlSeren+40 µlBlocking-Puffer).
oder
1.1.4.Test von Serumtitrationen
1.1.4.1. Eine zweifache Verdünnungsreihe von jeder Testprobe (1:5 bis
1:640) in Blocking-Puffer anlegen, über acht Vertiefungen
einzelner Reihen(3bis12)verteilt.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—17
▼M6
anschließend
1.1.5. 50 µl Meerschweinchen-Antiseren, in Blocking-Puffer vorver-
dünnt, in alle Vertiefungen geben, ausgenommen die BLANK-
Vertiefungen der ELISA-Platte (alle Vertiefungen haben jetzt
einEndvolumen von100 µl).
1.1.5.1. Bei 37 ºC für eine Stunde auf einem Orbitalschüttler inku-
bieren.
1.1.5.2. Platten dreimal waschen und wie vorstehend vorgegeben
abklopfen.
1.1.5.3. 50 µlKaninchen-Anti-Meerschweinchen-Meerrettichperoxidase-
Konjugat, in Blocking-Puffer vorverdünnt, in jede Vertiefung
geben.
1.1.5.4. Bei37ºCfüreine StundeimOrbitalschüttler inkubieren.1.1.5.5. Platten dreimal waschen und wie vorstehend vorgegeben
abklopfen.
1.1.6.Substrat — Chromogen
Die Chromogen OPD-Lösung (OPD = Orthophenyldiamin)
unmittelbar vor der Verwendung nach Herstellerspezifikationen
(0,4 mg/ml in sterilem destilliertem Wasser) anlegen. Substrat
(Wasserstoffperoxid = H
2O2) zugeben, bis eine Endkonzentra-
tion von 0,05 % (v/v) (1:2000 bei einer 30%igen H2O2-
Lösung) erreicht ist. 50 µl der OPD-Lösung in jede Vertiefung
geben,unddiePlattenaufdemArbeitstischfür10Minutenbei
Raumtemperatur stehenlassen.DieReaktiondurchZugabevon
50µl/Vertiefung 1MSchwefelsäure (H2SO4)stoppen.
1.1.7.Ablesen
Ergebnisspektrophotometrisch bei492nmablesen.
1.2.Ergebnisauswertung
1.2.1. Mittels geeigneter Software die OD-Werte (OD = optische
Dichte) und, ausgehend von dem für die vier Meerschweinchen-
serum-Kontrollvertiefungen verzeichneten Durchschnittswert, den
Hemmungsprozentsatz(percentageinhibition—PI)fürTest-und
Kontrollseren, ausdrucken. Anhand der als OD- und PI-Werte
ausgedrückten Daten lässt sich bestimmen, ob der Test innerhalb
akzeptabler Grenzen durchgeführt wurde. Die oberen Kontroll-
grenzen (upper control limits — UCL) und die unteren
Kontrollgrenzen (lower control limits — LCL) für die Meer-
schweinchenserum-Kontrolle liegen zwischen den OD-Werten
1,4 bzw. 0,4. Der auf einem Hemmungsprozentsatz (PI) von
50 % basierende Endpunkttiter für die Positivkontrolle sollte
(innerhalb eines Bereichs von 1:120 bis 1:480) 1:240 betragen.
Testplatten, die die genannten Kriterien nicht erfüllen, werden
verworfen. Ist der Serumtiter der Positivkontrolle jedoch größer
als 1 in 480 und sind die Testproben nach wie vor negativ, so
könnendienegativen Testprobenakzeptiert werden.
Die doppelt angelegten Vertiefungen der Negativkontrolle und
doppelt angelegten Vertiefungen der BLANK-Kontrolle sollten
PI-Werte zwischen + 25 % und – 25 % bzw. zwischen + 95 %
und + 105 % zeigen. Werte außerhalb dieser Grenzbereiche
machen das Plattenergebnis zwar nicht ungültig, lassen jedoch
absehen,dasssicheine Hintergrundfärbungausbildet.
1.2.2. Der diagnostische Schwellenwert (Grenzwert) für Testseren ist
50 % (PI 50 %). Proben mit PI-Werten über 50 % sind positiv,
ProbenmitPI-Werten unter50%sindnegativ.
Proben mit PI-Werten unter und über dem Schwellenwert bei
doppelt angelegten Vertiefungen gelten als zweifelhaft. Sie
können in einer Einfachverdünnung und durch Titrierung neu
analysiert werden. AuchPositivproben sollten titriert werden,um
einenAnhaltspunktüberdenGradderPositivität zuerhalten.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—18
▼M6
SchemaderEinfachverdünnung
1 2 34567891 0 1 1 1 2
+Kont-
r.Testseren
A 1:5 –Kontr. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
B 1:10 –Kontr. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
C 1:20 BLANK
D 1:40 BLANK
E 1:80 MS-Kontr.
F 1:160 MS-Kontr.
G 1:320 MS-Kontr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
H 1:640 MS-Kontr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
–Kontr. = Negativkontrolle
+Kontr. = Positivkontrolle
MS-Kontr. = Meerschweinchenkontrolle
Schema derSerumtitrierung
1 2 3 4567891 0 1 11 2
+Kont-
r.Testseren
A 1:5 –Kontr. 1:5 1:5
B 1:10 –Kontr. 1:10 1:10C 1:20 BLANK 1:20 1:20
D 1:40 BLANK 1:40 1:40
E 1:80 MS-Kontr. 1:80 1:80
F 1:160 MS-Kontr. 1:160 1:160
G 1:320 MS-Kontr. 1:320 1:320H 1:640 MS-Kontr. 1:640 1:640
–Kontr. = Negativkontrolle
+Kontr. = contrôle positif.
MS-Kontr. = Meerschweinchenkontrolle
2. INDIREKTER ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN GEGEN
DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV) (PFLICHT-
TEST)
Der nachstehend beschriebene Test entspricht den Verfahrensvorschriften
gemäß Kapitel 2.1.11 des Handbuchs der OIE mit Normenempfehlungen zu
UntersuchungsmethodenundVakzinen,vierte Ausgabe,2000.
Aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit und Spezifität wurde zum Nachweis
von APV-Antikörpern das rekombinante VP7 Protein verwendet. Es ist
außerdem stabilundnichtinfektiös.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—19
▼M6
2.1.Testverfahren:
2.1.1.Festphase:
2.1.1.1. ELISA-Platten mit rekombinantem APV-4 VP7, in Karbonat-
Bikarbonat-Puffer mit einem pH-Wert von 9,6 verdünnt,
beschichten. PlattenüberNachtbei4ºCinkubieren.
2.1.1.2. Platten fünfmal mit destilliertem Wasser, dem 0,01 % (v/v)
Tween 20 gesetzt wurde (Waschlösung), waschen. Die Platten
aufsaugfähigemMaterialleichtabklopfen,umrestlicheWasch-
lösungzuentfernen.
2.1.1.3. DiePlatten(200 µl/Vertiefung)mitphosphatgepufferterphysio-
logischer Kochsalzlösung (PBS) + 5 % (w/v) Magermilch
(NestleDrySkimMilkTM)füreineStundebei37ºCblockieren.
2.1.1.4. Blocking-Lösung wegschütten, und Platten auf saugfähigem
Material leicht abklopfen.
2.1.2.Testproben:
2.1.2.1. Serumtestproben sowie positive und negative Kontrollseren im
Verhältnis 1:25 in PBS + 5 % (w/v) Magermilch + 0,05 % (v/
v) Tween 20 verdünnen, 100 µl je Vertiefung. Für eine Stunde
bei37ºCinkubieren.
ZurTitrierungeinezweifacheVerdünnungsreihe,beginnendmit
1:25 (100 µl/Vertiefung und ein Serum je Plattenreihe),
anlegen. Mit den positiven und negativen Kontrollen ebenso
verfahren.Füreine Stundebei37ºCinkubieren.
2.1.2.2. Plattenwieunter2.1.1.2vorgegebenwaschen.2.1.3.Konjugat:
2.1.3.1. In jede Vertiefung 100 µl Meerrettichperoxidase-Anti-Pferd-
Gammaglobulin-Konjugat, in PBS + 5 % Milch + 0,05 %
Tween20mit einem pH-Wert von7,2verdünnt, einpipettieren.
Füreine Stundebei37ºCinkubieren.
2.1.3.2. Plattenwieunter2.1.1.2vorgegebenwaschen.2.1.4.Chromogen/Substrat:
2.1.4.1. In jede Vertiefung 200 µl Chromogen-/Substratlösung
[10ml80,6DMAB(Dimethylaminobenzyldehyd) +10ml1,56
MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazolinehydrazone
hydrochlorid)+5 µlH
2O2]geben.
Nach ungefähr 5 bis 10 Minuten (bevor sich die negativen
Kontrollen zu verfärben beginnen) die Farbentwicklung durch
Zugabevon50 µl3NH2SO4stoppen.
Andere Substrate wie ABTS (2,2 ′-Azino-bis-[3-Ethylbenzothia-
zolin-6-Sulfonsäure]), TMB (Tetramethylbenzidin) oder OPD
(Orthophenyldiamin) könnenebenfallsbenutzt werden.
2.1.4.2. Plattenbei600nm(oder620nm)ablesen.
2.2.Auswertung der Ergebnisse:
2.2.1. Durch Addition von 0,6 zum Wert der Negativkontrolle den
Grenzwert(cut-offvalue)berechnen.(0,6entsprichtderauseiner
Gruppe von 30 negativen Seren abgeleiteten Standardabwei-
chung).
2.2.2. Testproben mit Absorptionswerten unter dem Grenzwert gelten
alsnegativ.
2.2.3. Testproben mit Absorptionswerten + 0,15 über dem Grenzwert
gelten alspositiv.
2.2.4. Testproben mit intermediären Absorptionswerten sind zweifel-
haft; zur Bestätigung des Testergebnisses muss der Test
wiederholt werden.
3. BLOCKING-ELISA ZUM NACHWEIS VON ANTIKÖRPERN GEGEN
DAS VIRUS DER AFRIKANISCHEN PFERDEPEST (APV) (PFLICHT-
TEST)
Der Blocking-ELISA ist eine serologische Methode zum Nachweis spezifi-
scher APV-Antikörper in Seren empfänglicher Arten. VP7 ist das wichtigste
antigene APV-Protein und ist innerhalb der neun Serotypen konserviert. Da1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—20
▼M6
der monoklonale Antikörper (MAK) ebenfalls gegen das VP7 gerichtet ist,
gewährleistet der Test ein hohes Niveau an Empfindlichkeit und Spezifität.
Außerdem ist das rekombinante VP7-Antigen vollkommen unschädlich und
garantiert somiteinhohesMaßanSicherheit.
Testprinzip ist die Unterbrechung der Reaktion zwischen dem rekombi-
nantem VP7 als an die ELISA-Platte gebundenem Antigen und dem VP7-
spezifischen konjugierten monoklonalen Antikörper. Antikörper in den Test-
seren blockieren die Reaktion zwischen Antigen und MAK. Dieser Vorgang
manifestiert sichalsAbschwächungderFarbintensität.
Der im Folgenden beschriebene Test wird vom Referenzlabor der Europäi-
schen Gemeinschaft für Afrikanische Pferdepest in Algete, Spanien,
angewandt.
3.1.Testverfahren:
3.1.1.ELISA-Platten
3.1.1.1. Platten mit rekombinantem APV-4 VP7, in Karbonat-Bikar-
bonat-Puffer mit einem pH-Wert von 9,6 verdünnt beschichten
undüberNachtbei4ºCinkubieren.
3.1.1.2. Platten fünfmal mit phosphatgepufferter physiologischer Koch-
salzlösung (PBS) mit einem Gehalt an 0,05 % (v/v) Tween 20
(PBST)waschen.
3.1.1.3. Platten mit einer Stabilisierungslösung behandeln (um eine
langfristige Lagerung bei + 4 ºC ohne Aktivitätsverlust zu
ermöglichen), undaufSaugpapiertrocknen klopfen.
3.1.2.Testproben und Kontrollen
3.1.2.1. FürScreening-Tests: Testseren und Kontrollen im Verhältnis
1:10 direkt auf der Platte in PBST
verdünnen, so dass ein Endvolumen
von 100 µl/Vertiefung vorliegt. Für
eineStundebei37ºCinkubieren.
3.1.2.2. FürdieTitrierung: Eine Verdünnungsreihe von Testseren
und positiven Kontrollen (100 µl/
Vertiefung) von 1:10 bis 1:1280 in 2
Verdünnungsschritten anlegen (über
acht Vertiefungen verteilt). Die Nega-
tivkontrolle in einer Verdünnung von
1:10testen.
3.1.3.Konjugat
InjedeVertiefung50 µlderGebrauchsverdünnungderMeerret-
tich-Peroxidase-konjugierten monoklonalen Antikörper (mAk
reaktiv gegen VP7), geben und vorsichtig mischen, um ein
homogenes Ergebnis zu gewährleisten. Für 30 Minuten bei
37ºCinkubieren.
3.1.4. Platten fünfmal mit PBST waschen und auf Saugpapier
trocknen.
3.1.5.Chromogen/Substrat
100µl Chromogen-/Substratlösung [1 ml ABTS (2,2 ′-Azino-
bis-[3-Ethylbenzothiazolin-6-Sulfonsäure]) 5 mg/ml + 9 ml
Substrat-Puffer (0,1 M Citrat-Phosphat-Puffer mit pH 4 und
einem Gehalt an 0,03 % H2O2] in jede Vertiefung geben und
für 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Die Farbent-
wicklung durch Zugabe von 100 µl 2 %igem (w/v) SDS
(Natriumdodecylsulfat) injede Vertiefungstoppen.
3.1.6.Ablesen
Das Testergebnis bei 405 nm in einem ELISA-Ablesegerät
ablesen.
3.2.Auswertung der Ergebnisse
3.2.1.Testgültigkeit
DerTestistgültig,wenndieoptische Dichte(OD)dernegativen
Kontrolle(NK)über1,0unddieODderpositivenKontrolle(PK)
unter0,2liegt.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—21
▼M6
3.2.2.Grenzwertberechnung
PositiverGrenzwert = NK-((NK-PK)×0,3)
Negativer Grenzwert = NK-((N-PK)×0,2),
wobei NK der OD der negativen Kontrolle und PK der OD der
positivenKontrolle entspricht.
3.2.3.Auswertung der Ergebnisse
Proben mit einem OD-Wert unter dem positiven Grenzwert
solltenalsAPV-positivgewertetwerden.
Proben mit einem OD-Wert über dem negativen Grenzwert
solltenalsAPV-negativgewertet werden.
Proben mit einem OD-Wert zwischen den beiden Grenzwerten
geltenalszweifelhaftundnachzweibisdreiWochensollteneues
Serumderbetreffenden Tiere wiedergetestet werden.1990L0426—DE—05.06.2003—008.001—22