2002D0225 — DE — 16.03.2002 — 000.001 — 1
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►B ENTSCHEIDUNG DER KOMMISSION
vom 15. März 2002
mit Durchführungsbestimmungen zur Richtlinie 91/492/EWG des Rates hinsichtlich der Grenz-
werte und der Analysemethoden für bestimmte marine Biotoxine in lebenden Muscheln,
Stachelhäutern, Manteltieren und Meeresschnecken
(Bekannt gegeben unter Aktenzeichen K(2002) 1001)
(Text von Bedeutung für den EWR)
(2002/225/EG)
(ABl. L 75 vom 16.3.2002, S. 62)
Berichtigt durch:
►C1Berichtigung, ABl. L 46 vom 20.2.2003, S. 32 (2002/225/EG)
▼B
ENTSCHEIDUNG DER KOMMISSION
vom 15. März 2002
mit Durchführungsbestimmungen zur Richtlinie 91/492/EWG des
Rates hinsichtlich der Grenzwerte und der Analysemethoden fürbestimmte marine Biotoxine in lebenden Muscheln, Stachelhäutern,
Manteltieren und Meeresschnecken
(Bekannt gegeben unter Aktenzeichen K(2002) 1001)
(Text von Bedeutung für den EWR)
(2002/225/EG)
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft,gestützt auf die Richtlinie 91/492/EWG des Rates vom 15. Juli 1991
zur Festlegung der Hygienevorschriften für die Erzeugung undVermarktung lebender Muscheln (
1), zuletzt geändert durch die Rich-
tlinie 97/79/EG (2), insbesondere auf Kapitel V Absätze 3 und 5 des
Anhangs,
in Erwägung nachstehender Gründe:
(1)Gemäß Kapitel V Nummer 7 des Anhangs zur Richtlinie 91/492/
EWG dürfen die üblichen biologischen Analysemethoden keinepositive Reaktion auf fettlösliche Algentoxine (Diarrhetic Shell-fish Poisoning — DSP) in den essbaren Muschelteilen (ganzeKörper oder einzeln verzehrbare Teile) ergeben.
(2)Es ist wissenschaftlich erwiesen, dass bestimmte marine Bioto-xine wie Toxine der DSP-Gruppe (Diarrhetic ShellfishPoisoning) — Okadainsäure (OA) und Dinophysistoxine (DTX)— ebenso wie Yessotoxine (YTX), Pectenotoxine (PTX) undAzaspirosäuren (AZA) die menschliche Gesundheit ernsthaft
gefährden, wenn ihr Gehalt in lebenden Muscheln, Stachelhäu-
tern, Manteltieren und Meeresschnecken bestimmteHöchstgrenzen überschreitet.
(3)Anhand neuerer wissenschaftlicher Studien können nun Grenz-
werte und Analysemethoden für die genannten Biotoxine
festgelegt werden.
(4)Zum Schutz der menschlichen Gesundheit sollten die Grenz-werte und Analysemethoden harmonisiert und von denMitgliedstaaten angewendet werden.
(5)Nebendenbiologischensolltenaltern ative Nachweismethodenwie chemische Methoden oder In-vitro-Versuche zulässig sein,sofern erwiesen ist, dass die gewählten Methoden nicht wenigerleistungsfähig sind als die biologischen und dass ihre Anwen-
dung einen gleichwertigen Gesundheitsschutz gewährleistet.
(6)Die vorgeschlagenen Grenzwerte beruhen auf vorläufigen Daten
und sollten erneut geprüft werden, sobald neue wissenschaftlicheErkenntnisse vorliegen.
(7)Die Maßnahmen dieser Entscheidung entsprechen der Stellung-nahme des Ständigen Veterinärausschusses —
HAT FOLGENDE ENTSCHEIDUNG ERLASSEN:
Artikel 1
Die vorliegende Entscheidung legt die Grenzwerte und Nachweisme-
thoden für die marinen Biotoxine der DSP-Gruppe (Diarrhetic
Shellfish Poisoning) — Okadainsäure und Dinophysistoxine —, Yesso-toxine, Pectenotoxine und Azaspirosäuren fest. Sie gilt für lebende2002D0225 — DE — 16.03.2002 — 000.001 — 2
(1) ABl. L 268 vom 24.9.1991, S. 1.
(2) ABl. L 24 vom 30.1.1998, S. 31.
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Muscheln, Stachelhäuter, Manteltiere und Meeresschnecken, die zum
unmittelbaren menschlichen Verzehr oder zur Weiterverarbeitung vordem Verzehr bestimmt sind.
Artikel 2
Der Grenzwert für den Gesamtgehalt an Okadainsäure, Dinophysisto-
xinen und Pectenotoxinen in Tieren gemäß Artikel 1 (ganze Körper
oder einzeln verzehrbare Teile) wird auf 160 µg Okadainsäure-Äquiva-
lent je kg festgesetzt. Die Analysemethoden werden im Anhang zudieser Entscheidung festgelegt.
Artikel 3
Der Grenzwert für den Yessotoxin-Gehalt in Tieren gemäß Artikel 1
(ganze Körper oder einzeln verzehrbare Teile) wird auf 1 mg Yesso-toxin-Äquivalent je kg festgesetzt. Die Analysemethoden werden imAnhang zu dieser Entscheidung festgelegt.
Artikel 4
Der Grenzwert für den Gehalt an Azaspirosäure in Tieren gemäß
Artikel 1 (ganze Körper oder einzeln verzehrbare Teile) wird auf
160µg Azaspirosäure-Äquivalent je kg festgesetzt. Die Analyseme-
thoden werden im Anhang zu dieser Entscheidung festgelegt.
Artikel 5
Ergeben die durchgeführten Analysen Abweichungen zwischen den
verschiedenen Methoden, so gilt der Maus-Bioassay als Referenzme-thode.
Artikel 6
Diese Entscheidung ist an alle Mitgliedstaaten gerichtet.2002D0225 — DE — 16.03.2002 — 000.001 — 3
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ANHANG
NACHWEISMETHODEN
Biologische Methoden
Zum Nachweis der in Artikel 1 genannten Toxine kann eine Reihe von Maus-
Bioassay-Verfahren angewendet werden, die sich durch die untersuchte Menge
(Hepatopankreas oder Ganzkörper) und die zur Extraktion und Purifikation
verwendeten Lösungen unterscheiden. Sensitivität und Selektivität hängen von
den für die Extraktion und Purifikation gewählten Lösungen ab. Dies sollte bei
der Wahl der Methode berücksichtigt werden, damit alle Toxine erfasst werden.
Ein einziger Maus-Bioassay mit Azeton-Extraktion kann angewendet werden,
um Okadainsäure, Dinophysistoxine, Pectenotoxine und Yessotoxine nachzu-
weisen. Dieser Assay kann nötigenfalls durch Flüssig-Flüssig-Trennung mit
Ethylacetat/Wasser oder Dichlormethan/Wasser ergänzt werden, um mögliche
Interferenzen auszuschließen. Der Nachweis von Azaspirosäure innerhalb der
regulativen Grenzwerte mit diesem Verfahren erfordert die Ganzkörperuntersu-
chung.
Für jeden Test sollten drei Mäuse verwendet werden. Der Tod zweier von drei
Mäusen binnen 24 Stunden nach der Injektion eines Extraktes von je 5 g Hepa-
topankreas oder 25 g Ganzkörper sollte als positiver Nachweis eines oder
mehrerer der in Artikel 1 genannten Toxine in Mengen gelten, welche die in
den Artikeln 2, 3 und 4 festgelegten Grenzwerte überschreiten.
►C1Zum Nachweis von Okadainsäure Dinophysistoxinen, Pectenotoxinen und
Azaspirosäuren kann ein Maus-Bioassay mit Aceton-Extraktion und nachfol-
gender Flüssig-Flüssig-Trennung mit Diethylether verwendet werden, nicht
jedoch zum Nachweis von Yessotoxinen, da bei der Trennung Toxine ◄
verloren gehen können. Für jeden Test sollten drei Mäuse verwendet werden.
Der Tod zweier von drei Mäusen binnen 24 Stunden nach der Injektion eines
Extraktes von je 5 g Hepatopankreas oder 25 g Ganzkörper ►C1sollte als
positiver Nachweis von Okadainsäure, Dinophysistoxinen, Pectenotoxinen und
Azaspirosäuren in Mengen gelten, welche die in Artikel 2 und 4 festgelegten
Mengen überschreiten. ◄
Mit dem Ratten-Bioassay können Okadainsäure, Dinophysistoxine und Azaspi-
rosäuren nachgewiesen werden. Für jeden Test sollten drei Ratten verwendet
werden. Eine diarrhöische Reaktion einer der drei Ratten gilt als positiver Nach-
weis von Okadainsäure, Dinophysistoxinen und Azaspirosäuren in Mengen,
welche die in den Artikeln 2 und 4 genannten Mengen überschreiten.
Alternative Nachweismethoden
Als Alternative oder Ergänzung zu den biologischen Nachweismethoden kann
eine Reihe von Methoden wie die Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie
(HPLC) mit fluorimetrischer Detektion, Flüssigkeits-Chromatographie-(LC)-
Massenspektrometrie (MS), Immunassays und funktionale Assays ►C1wie
der Phosphatase-Inhibitionsassay verwendet werden, sofern sie nicht weniger
leistungsfähig sind als die biologische Methode, ihre Verwendung ein gleich-
wertiges Gesundheitsschutzniveau gewährleistet und mit ihnen, allein oder in
Kombination, mindestens folgende Analoga nachweisbar sind: ◄
— Okadainsäure und Dinophysistoxine: zum Nachweis von DTX3 kann ein
Hydrolyse-Schritt erforderlich sein;
— Pectenotoxine: PTX1 und PTX2;— Yessotoxine: YTX, 45 OH YTX, Homo YTX und 45 OH Homo YTX;— Azaspirosäuren: AZA1, AZA2 und AZA3.
Für den Fall, dass neue, für die öffentliche Gesundheit relevante Analoga
entdeckt werden, sollten diese in die Analyse einbezogen werden. Zuerst müssen
Standards für die chemische Analyse vorliegen. Die Gesamttoxizität wird auf
der Grundlage der für jedes Toxin vorliegenden Toxizitätsdaten mittels Umrech-
nungsfaktoren errechnet.
Die Leistungsmerkmale dieser Methoden sind nach einer Validierung auf der
Grundlage eines international anerkannten Protokolls zu definieren.2002D0225 — DE — 16.03.2002 — 000.001 — 4