1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 1
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►B VERORDNUNG (EWG) Nr. 4154/87 DER KOMMISSION
vom 22. Dezember 1987
zur Festlegung der Analysenmethoden und anderer technischer Bestimmungen für die Anwen-
dung der Verordnung (EWG) Nr. 3033/80 des Rates betreffend die Handelsregelung für
bestimmte aus landwirtschaftlichen Erzeugnissen hergestellte Waren
(ABl. L 392 vom 31.12.1987, S. 19)
Geändert durch:
Amtsblatt
Nr. Seite Datum
►M1Verordnung (EG) Nr. 203/98 der Kommission vom 26. Januar 1998 L 21 6 28.1.1998
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VERORDNUNG (EWG) Nr. 4154/87 DER KOMMISSION
vom 22. Dezember 1987
zur Festlegung der Analysenmethoden und anderer technischer
Bestimmungen für die Anwendung der Verordnung (EWG) Nr.3033/80 des Rates betreffend die Handelsregelung für bestimmte
aus landwirtschaftlichen Erzeugnissen hergestellte Waren
DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN —
gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Wirtschaftsge-meinschaft,
gestützt auf die Verordnung (EWG) Nr. 2658/87 des Rates vom 23.
Juli 1987 über die zolltarifliche und statistische Nomenklatur sowieden Gemeinsamen Zolltarif(
1), geändert durch die Verordnung (EWG)
Nr. 3985/87(2), insbesondere auf Artikel 9,
In erwägung nachstehender gründe:Mit der Verordnung (EWG) Nr. 1061/69 der Kommission(
3), zuletzt
geändert durch die Verordnung (EWG) Nr. 1822/86(4), sind dieAnaly-
senmethoden für die Anwendung der Verordnung (EWG) Nr. 1059/69des Rates(
5) festgelegt worden. Die Verordnung (EWG) Nr. 1059/69 ist
aufgehoben und durch die Verordnung (EWG) Nr. 3033/80 desRates(
6), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr. 3743/
87(7), ersetzt worden.
Die Vorschriften für die Anwendung der Verordnung (EWG) Nr. 3033/
80 sind bezüglich der Einfuhren in der Verordnung (EWG) Nr. 3034/80
des Rates vom 11. November 1980 zur Festlegung der Grunderzeugnis-mengen, von denen unterstellt wird, daß sie zur Herstellung von Warender Verordnung (EWG) Nr. 3033/80 verwendet worden sind, und zurÄnderung der Verordnung (EWG) Nr. 950/68 über den Gemeinsamen
Zolltarif(
8), zuletzt geändert durch die Verordnung (EWG) Nr. 4091/
87(9), festgelegt worden.
Um die wissenschaftliche und technische Entwicklung der Analysen-
methoden zu berücksichtigen und um die einheitliche Behandlung vonWaren, auf die die Verordnung (EWG) Nr. 3033/80 Anwendung findet,weiterhin sicherzustellen, ist es erforderlich, die Verordnung (EWG)Nr. 1061/69 aufzuheben und zu ersetzen.
Die in dieser Verordnung vorgesehenen Maßnahmen entsprechen der
Stellungnahme des Ausschusses für die Nomenklatur —
HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN:
Artikel 1
Diese Verordnung legt die erforderlichen gemeinschaftlichen Analysen-
methoden zur Anwendung der Verordnungen (EWG) Nr. 3033/80(soweit die Einfuhren betroffen sind) und (EWG) Nr. 3034/80 fest.Statt einer Analysenmethode können nur die verschiedenen Schritteeines anzuwendenden Verfahrens aufgezeigt oder das einer anzuwen-denden Methode zugrunde liegende Prinzip genannt werden.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 2
(1) ABl. Nr. L 256 vom 7. 9. 1987, S. 1.
(2) ABl. Nr. L 376 vom 31. 12. 1987, S. 1.
(3) ABl. Nr. L 141 vom 12. 6. 1969, S. 24.
(4) ABl. Nr. L 158 vom 13. 6. 1986, S. 1.
(5) ABl. Nr. L 141 vom 12. 6. 1969, S. 1.
(6) ABl. Nr. L 323 vom 29. 11. 1980, S. 1.
(7) ABl. Nr. L 352 vom 15. 12. 1987, S. 29.
(8) ABl. Nr. L 323 vom 29. 11. 1980, S. 7.
(9) ABl. Nr. L 382 vom 31. 12. 1987, S. 27.
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Artikel 2
Nach den Begriffsbestimmungen im Anhang III der Verordnung
(EWG) Nr. 3034/80 für Stärke/Glucose und Saccharose/Invertzucker/
Isoglucose und zur Anwendung der Anhänge II und III der genannten
Verordnung sind folgende Formeln, Verfahrensweisen und Methodenanzuwenden:
1.Gehalt an Stärke/Glucosegehalt:
(berechnet als Stärke Trockensubstanz, Reinheit 100 %, bezogen auf
dieWare )
a) (Z − F) × 0,9,
wenn der Glucosegehalt gleich hoch oder höher ist als der Fruc-
tosegehalt oder
b) (Z − G) × 0,9,
wenn der Glucosegehalt niedriger ist als der Fructosegehalt.
In den Formeln bedeuten:
Z = Glucosegehalt in der Ware, bestimmt nach der Methode im
Anhang I dieser Verordnung;
F = Fructosegehalt in der Ware, bestimmt mittels Hochlei-
stungsflüssigkeitschromatographie (HPLC);
G = Glucosegehalt in der Ware, bestimmt mittels HPLC.
Wenn im Fall von Ziffer 1 Buchstabe a) hydrolysierte Lactose als
Bestandteil der Ware angemeldet und/oder Lactose und Galactoseneben anderen Zuckern festgestellt werden, so ist die der Galactose-menge (HPLC) äquivalente Glucosemenge (HPLC) von der
Glucosemenge (Term Z) vor jeder weiteren Berechnung abzuziehen.
2.Gehalt an Saccharose/Invertzucker/Isoglucose:
(berechnet als Saccharose und bezogen auf die Ware)
a) S + (2F) × 0,95,
wenn der Glucosegehalt in der Ware gleich hoch oder höher istals der Fructosegehalt,
b) S + (G + F) × 0,95,
wenn der Glucosegehalt niedriger ist als der Fructosegehalt.
In den Formeln bedeuten:
S = Saccharosegehalt in der Ware, bestimmt mittels HPLC;
F = Fructosegehalt in der Ware, bestimmt mittels HPLC;
G = Glucosegehalt in der Ware, bestimmt mittels HPLC.
Wenn hydrolysierte Lactose als Bestandteil der Ware angemeldet
und/oder Lactose und Galactose neben anderen Zuckern festgestellt
werden, so ist die der Galactosemenge (HPLC) äquivalente Glucose-menge (HPLC) von der Glucosemenge (Term G) vor jeder weiterenBerechnung abzuziehen.
3.Gehalt an Milchfett:
a) Vorbehaltlich der Bestimmungen von Buchstabe b) wird der
Milchfettgehalt der Waren in Gewichtshundertteilen nach voran-
gegangenem Salzsäureaufschluß ermittelt. Als Milchfett geltendie nach diesem Aufschluß mit Petroläther extrahierbaren Stoffe.
b) Enthält eine Ware nach der Anmeldung neben Milchfett andere
Fette und/oder Öle, so ist wie folgt zu verfahren:
— der Gesamtfettgehalt in Gewichtshundertteilen wird nach den
Bestimmungen des Buchstabens a) ermittelt;
— zur Bestimmung des Milchfettgehalts ist eine Extraktion mit
Petroläther nach Salzsäureaufschluß, der eine gaschromato-
graphische Analyse der Fettsäuren als Methylester folgt,
vorzunehmen. Wird hierbei das Vorhandensein von Milchfettfestgestellt, so gilt als Milchfettgehalt der ermittelte Gehalt anButtersäuremethylester in Gewichtshundertteilen, multipliziertmit dem Faktor 25, wobei der so erhaltene Wert mit derGesamtfettmenge multipliziert und durch 100 dividiert wird.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 3
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4.Gehalt an Milcheiweiß:
a) Vorbehaltlich der Bestimmungen des Buchstabens b) wird zur
Ermittlung des Milchproteingehalts der Waren in Gewichtshun-dertteilen ihr Stickstoffgehalt nach der Kjeldahl-Methode
festgestellt. Als Gehalt der Ware an Milchprotein gilt der Gehalt
an Stickstoff, multipliziert mit dem Faktor 6,38.
b) Enthält die Ware nach der Anmeldung neben Milcheiweiß
Bestandteile, die anderes Eiweiß als Milcheiweiß enthalten, soist folgendermaßen zu verfahren:
— der Gesamtstickstoffgehalt in Gewichtshundertteilen ist nach
der Kjeldahl-Methode, wie oben unter Buchstabe a)beschrieben, zu ermitteln;
— der Gehalt an Milchprotein wird wie oben unter Buchstabe a)
beschrieben berechnet, wobei jedoch vor der Multiplikationvom Gesamtstickstoffgehalt in Gewichtshundertteilen derStickstoffgehalt subtrahiert wird, der von anderem Eiweiß alsMilcheiweiß herrührt.
Artikel 3
Zur Anwendung des Anhangs I der Verordnung (EWG) Nr. 3034/80
sind die folgenden Verfahrensweisen und/oder Methoden anzuwenden:
1. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 0403 10 51bis
0403 10 59, 0403 10 91 bis 0403 10 99, 0403 90 71 bis 0403 90 79und 0403 90 91 bis 0403 90 99 der Kombinierten Nomenklatur istder Milchfettgehalt der Waren nach den Bestimmungen von Artikel
2 Ziffer 3 dieser Verordnung zu ermitteln.
2. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 1704 10 11 bis
1704 10 99 und 1905 20 10 bis 1905 20 90 der Kombinierten
Nomenklatur ist der Saccharosegehalt der Waren (einschließlichInvertzucker als Saccharose berechnet) mittels HPLC zu ermitteln.Als Invertzucker gilt die Summe aus Fructose und Glucose, bis zurMenge, in der beide Zucker in gleichen Teilen vorhanden sind,
multipliziert mit 0,95.
3. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 1806 10 10bis
1806 10 90 der Kombinierten Nomenklatur ist der Gehalt der Waren
an Saccharose/Invertzucker/Isoglucose nach den Formeln, Verfah-rensweisen und Methoden von Artikel 2 Ziffer 2 dieser Verordnungzu ermitteln.
4. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 3505 20 10bis
3505 20 90 der Kombinierten Nomenklatur ist der Gehalt der Warenan Stärken, Dextrinen oder anderen modifizierten Stärken nach der
Methode im Anhang II zu ermitteln.
5. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 3809 10 10bis
3809 10 90 der Kombinierten Nomenklatur ist der Gehalt der Warenan Stärke und Stärkederivaten nach der Methode im Anhang II zuermitteln.
6. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 1901 90 11 und
1901 90 19 der Kombinierten Nomenklatur ist der Trockenstoffge-halt in Gewichtshundertteilen durch Trocknung bei 103 ºC ± 2 ºC
bis zur Gewichtskonstanz zu bestimmen.
7. Zur Einreihung von Waren der Unterpositionen 1902 19 10 und
1902 19 90 der Kombinierten Nomenklatur werden Weichweizen-
mehl und Weichweizengrieß in Teigwaren nach der im Anhang IIIzu dieser Verordnung beschriebenen Methode nachgewiesen.
8. Zur Bestimmung des Gehalts in Gewichtshundertteilen an Mannitol
in Waren der Unterpositionen 2905 44 11 bis 2905 44 99 und3823 60 11 bis 3823 60 99 der Kombinierten Nomenklatur, bezogenauf den Gehalt an D-Glucitol (Sorbit) in Gewichtshundertteilen, ist
ein Verfahren auf Grundlage der HPLC anzuwenden.
Artikel 4
(1) Es ist ein Untersuchungszeugnis anzufertigen.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 4
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(2) Das Untersuchungszeugnis muß insbesondere folgende Angaben
enthalten:
— alle erforderlichen Angaben, um die Nämlichkeit der Warenprobe
sicherzustellen;
— die Bezeichnung des angewandten gemeinschaftlichen Verfahrens
unter Angabe der zugrunde liegenden Rechtsvorschrift oder die
Angabe des Literaturzitats, dem die genaue Methodenbeschreibung
oder das Prinzip eines in dieser Verordnung vorgesehenen Verfah-rens entnommen wurde;
— die Vorkommnisse, die das Analysenergebnis beeinflußt haben
können;
— die Analysenergebnisse, in der Form dargestellt, wie dies in der
Beschreibung des angewandten Verfahrens vorgesehen ist undentsprechend den Bedürfnissen der Zolldienststelle oder jederanderen Verwaltung, die die Untersuchung veranlaßt hat.
Artikel 5
Die Verordnung (EWG) Nr. 1061/69 wird aufgehoben.
Artikel 6
Diese Verordnung tritt am 1. Januar 1988 in Kraft.
Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmit-
telbar in jedem Mitgliedstaat.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 5
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ANHANG I
METHODE ZUR BESTIMMUNG DES GEHALTS IN GEWICHTSHUN-
DERTTEILEN AN STÄRKE UND IHREN ABBAUPRODUKTEN,
EINSCHLIESSLICH GLUCOSE
1.Zweck und Anwendungsbereich
a) Die Methode ermöglicht die Bestimmung des Gehalts in Gewichtshun-
dertteilen an Stärke und ihren Abbauprodukten einschließlich Glucose
(„Stärke“).
b) Als Gehalt an „Stärke“ in Gewichtshundertteilen gilt der Wert E, wie
er in Ziffer 6 der vorliegenden Methode errechnet wird.
2.Prinzip
Die Probe wird mit Natriumhydroxid aufgeschlossen und die „Stärke“ mit
Amyloglucosidase in Glucose gespalten. Die Glucose wird enzymatisch
bestimmt.
3.Reagenzien
Es ist bidestilliertes Wasser zu verwenden.
3.1. Natriumhydroxid-Lösung, c = 0,5 mol/l.
3.2. Essigsäure (Eisessig), mindestens 96 % mas.
3.3. Enzymlösung:
Unmittelbar vor Gebrauch ca. 10 mg Amyloglucosidase (EC 3.2.1.3) (6
U/mg) in 1 ml Wasser auflösen(1).
3.4. Triethanolaminpuffer:
14,0 g Triethanolaminhydrochlorid (Tris(2-hydroxyethyl)ammoniumch-
lorid) und 0,25 g Magnesiumsulfat (MgSO47H2O) in 80 ml Wasser
lösen, ca. 5 ml NaOH (c = 5 mol/l) zusetzen und pH mit NaOH (c =
1 mol/l) auf 7,6 einstellen und mit Wasser auf 100 ml auffüllen. Der
Puffer ist bei + 4 ºC mindestens 4 Wochen haltbar.
3.5. NADP (Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat-dinatriumsalz)-Lösung:
60 mg NADP in 6 ml Wasser lösen. Diese Lösung ist bei + 4 ºC
mindestens 4 Wochen haltbar.
3.6. ATP (Adenosin-5-triphosphat-dinatriumsalz)-Lösung:
300 mg ATP 3H2O und 300 mg Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3)i n
6 ml Wasser lösen. Diese Lösung ist bei + 4 ºC mindestens 4 Wochen
haltbar.
3.7. HK/G6P-DH (Hexokinase — EC 2.7.1.1)- und Glucose-6-phosphat-Dehy-
drogenase — (EC 1.1.1.49)-Suspension:
280 U HK und 140 U G6P-DH in 1 ml Ammoniumsulfatlösung (c =
3,2 mol/l) suspendieren. Diese Suspension ist bei + 4 ºC mindestens ein
Jahr haltbar.
4.Geräte
4.1. Magnetrührer-Thermostat (60 ºC).4.2. Magnetrührer.
4.3. UV-Spektrophotometer mit Küvette von 1 cm Schichtdicke.
4.4. Pipetten für die enzymatische Analyse.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 6
(1) U entspricht einer International Unit für die Enzymaktivität.
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5.Verfahren
5.1.Aufschluß mit Natriumhydroxid und enzymatische Hydrolyse der Stärke
und ihrer Abbauprodukte:
5.1.1. Je nach dem erwarteten Gehalt an „Stärke“ ist eine der nachstehenden
Einwaagen zu wählen (der „Stärkegehalt“ darf 0,4 g je Einwaage nicht
überschreiten):
Erwarteter „Stärkege-
halt“ des Erzeugnisses
in g/100 gUngefähre Einwaage (p)
in gInhalt des Meßkolbens
in mlFaktor (f) der Verdün-
nung zu einem Liter
> 70 0,35-0,4 500 2
20-70 max. 0,5 500 2
5-20 max. 1 250 4
< 5 max. 2 200 5
5.1.2. Probe auf 0,1 mg genau einwägen.
5.1.3. Mit 50 ml Natriumhydroxidlösung (c = 0,5 mol/l) (3.1) versetzen und 30
Minuten unter ständigem Rühren im Magnetrührer-Thermostaten (4.1) bei
60 ºC belassen.
5.1.4. Mit wenig Essigsäure (3.2) pH auf 4,6 bis 4,8 einstellen.
5.1.5. In den Magnetrührer-Thermostaten (4.1) (60 ºC) stellen, 1 ml Enzymlö-
sung (3.3) zusetzen und 30 Minuten unter Rühren inkubieren.
5.1.6. Nach dem Abkühlen quantitativ in einen geeichten Meßkolben (5.1.1)
überführen und mit Wasser bis zur Marke auffüllen.
5.1.7. Falls erforderlich, durch ein Faltenfilter filtrieren (Siehe Bemerkungen
unter Ziffer 1).
5.2.Bestimmung der Glucose:
5.2.1. Die Probelösung muß 100 bis 1 000 mg Glucose je Liter enthalten, was
einem ∆Ε340zwischen 0,1 und 1,0 entspricht. Die Extinktion (E340) einer
Verdünnung von einem Teil Probelösung mit 30 Teilen Wasser darf,
gegen Luft gemessen, 0,4 nicht überschreiten.
5.2.2. Pufferlösung (3.4) auf Raumtemperatur (20 ºC) bringen.
5.2.3. Die Temperatur der Reagenzien und der Probelösung muß im Zeitpunkt
der Messung 20 ºC bis 25 ºC betragen.
5.2.4. Extinktion bei 340 nm gegen Luft messen (keine Küvette im Referenz-
strahl).
5.2.5. Durchführung der Messung nach dem folgenden Pipettierschema:
In die Küvetten pipettierenLeerwert
(ml)Probe
(ml)
Puffer (3.4) 1,00 1,00
NADP (3.5) 0,10 0,10
ATP (3.6) 0,10 0,10Probelösung (5.1.6 oder
5.1.7)— 0,10
Wasser 2,00 1,90
Mischen. Nach ca. 3 Minuten Extinktion der Lösungen messen (E
1). Auslösen der Reaktion
durch Zugabevon:
HK/G6P-DH (3.7) 0,02 0,02
Mischen. Ende der Reaktion abwarten (ca. 15 Minuten) und Extinktion der Lösungen messen
(E2). Falls die Reaktion nach 15 Minuten nicht zum Stillstand gekommen ist, Extinktionen
weiter in 5-Minuten-Abständen messen, bis eine konstante Extinktionszunahme in 5 Minuten
erreicht ist. Wurden bei E2konstante Extinktionszunahmen festgestellt, sind die Extinktionen
auf den Zeitpunkt der Zugabe der Enzymsuspension (3.7) zu extrapolieren (Siehe Bemer-
kungen unter Ziffer 2).1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 7
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5.2.6. Für Reagentienleerwert und Probe berechnet man die Extinktionsdifferenz
E2—E1. Die Extinktionsdifferenz des Leerwerts ist von derjenigen der
Probe abzuziehen (= ∆Ε):
∆Ε340=∆ΕProbe−∆ΕReagentienleerwert
Daraus ergibt sich der Gehalt Gl der Probelösung an Glucose:
Glucosegehalt Gl in g/l Probelösung
Gl¼3;22/C2180 ;16
6;3/C21/C20;1/C21000/C2∆Ε340¼0;921/C2∆Ε340
(3,22 = Volumen Meßlösung (ml); 1 = Schichtdicke der Küvette, hier
1 cm; 0,1 = Volumen der Probelösung (ml); Molare Masse der Glucose
180,16 g/mol)
5.2.7. Wenn die Messung bei 365 nm oder 334 nm durchgeführt wird, ist statt
des Werts 6,3 in der Formel der Ziffer 5.2.6 der Wert 3,5 bzw. 6,18 zu
verwenden.
6.Berechnung des Gehalts an „Stärke“ E bzw. an „Glucose“ Z
a) Gehalt an „Stärke“ in g/100 g:
E¼100/C20;9/C2GlðÞ
p/C2f
b) Gehalt an „Glucose“ in g/100 g:
Z¼100/C2Gl
p/C2f
In diesen Formeln bedeuten:
Gl = Glucosegehalt, in g/l (5.2.6);
f = Verdünnungsfaktor (5.1.1);
p = Einwaagein g;
0,9 = Umrechnungsfaktor von Glucose in Stärke.
Bemerkungen
1. Falls die Lösung nicht filtrierbar ist, ergreift der Chemiker die erforderlichen
Maßnahmen.
2. Stellt man fest, daß die Enzyme inhibiert werden, so wird empfohlen, mittels
Zugabe bekannter Mengen an nativer Stärke einen Faktor für den Grad der
Störung zu ermitteln.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 8
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ANHANG II
BESTIMMUNG DES GEHALTS AN STÄRKEN, DEXTRINEN ODER
ANDEREN MODIFIZIERTEN STÄRKEN, DIE IN WAREN DER
UNTERPOSITIONEN 35052010 BIS 35052090 DER KOMBINIERTEN
NOMENKLATUR ENTHALTEN SIND, SOWIE AN STÄRKE ODER
STÄRKEDERIVATEN, DIE IN WAREN DER UNTERPOSITIONEN
38091010 BIS 38091090 DER KOMBINIERTEN NOMENKLATUR
ENTHALTEN SIND
I.Prinzipder Methode
Durch Säurehydrolyse wird die Stärke in reduzierende Zucker zerlegt, die
volumetrisch mit Fehling-Lösung bestimmt werden.
II.Geräte und Reagenzien
1. Kolben von ungefähr 250 ml Fassungsvermögen;
2. Meßkolben von 200 ml Fassungsvermögen;3. Bürette von 25 ml Fassungsvermögen;
4. Salzsäure, Dichte 1,19 g/cm
3;
5. wäßrigeKalilauge ;6. Aktivkohle;
7. Fehling-I- und Fehling-II-Lösung;
8. wäßrige Methylenblaulösung 1 % mas.
III.Versuchsdurchführung
In einem Kolben von ungefähr 250 ml Fassungsvermögen wird eine etwa
1 g Stärke enthaltende Probemenge eingewogen und 100 ml destilliertes
Wasser sowie 2 ml Salzsäure zugefügt. Die Mischung wird 3 Stunden unter
Rückfluß gekocht.
Nach dem Abkühlen wird der Inhalt des Kolbens quantitativ in einen
Meßkolben mit einem Fassungsvermögen von 200 ml gespült und soviel
Kalilauge zugefügt, daß die Lösung nur noch schwach sauer reagiert. Nun
wird mit destilliertem Wasser auf 200 ml aufgefüllt und zum Entfärben
durch etwas Aktivkohle filtriert.
Mit dieser Lösung wird sodann eine Bürette gefüllt und 10 ml Fehling-
Lösung wie folgt reduziert:
In einen Stehkolben von etwa 250 ml Fassungsvermögen werden 10 ml
Fehling-Lösung (5 ml Lösung I und 5 ml Lösung II) gegeben. Man schüt-
telt, bis eine klare Lösung entsteht, und fügt sodann 40 ml destilliertes
Wasser und eine geringe Menge Quarz oder Siedesteinchen hinzu.
Der Kolben wird auf eine quadratförmige Platte aus geeignetem Material
gesetzt, die in der Mitte eine kreisförmige Öffnung mit einem Durchmesser
von etwa 6 cm aufweist. Diese Platte wird wiederum auf ein Drahtnetz
gelegt. Der Kolben ist nunmehr so zu erhitzen, daß die Flüssigkeit in etwa
2 Minuten zu sieden beginnt.
Der siedenden Flüssigkeit wird jetzt aus der Bürette so viel von der Zucker-
lösung zugegeben, bis die blaue Farbe der Fehling-Lösung kaum noch
wahrnehmbar ist. Es werden nun 2 bis 3 Tropfen Methylenblaulösung als
Indikator zugesetzt und die Titration durch weiteren tropfenweisen Zusatz
der Zuckerlösung fortgesetzt, bis die blaue Farbe des Indikators
verschwindet.
Zwecks größerer Genauigkeit wird die Titration unter den gleichen Bedin-
gungen wiederholt, wobei jedoch fast die gesamte Zuckerlösung, die zum
Reduzieren der Fehling-Lösung erforderlich ist, auf einmal zugesetzt wird.
Bei dieser Titration muß die Fehling-Lösung in 3 Minuten vollständig redu-
ziert sein.
Man erhitzt genau weitere 2 Minuten zum Sieden und titriert dann tropfen-
weise unter Sieden innerhalb 1 Minute bis zum Endpunkt.
Der Gehalt der Probe an Stärke in Gewichtshundertteilen wird nach
folgender Formel berechnet:
St¨arkein v :H:¼T/C2200/C2100
n/C2p/C20;951987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 9
▼B
Hierin bedeuten:
T = die Menge in g an wasserfreier Glucose, die 10 ml Fehling-Lösung
entsprechen. 10 ml Fehling-Lösung (5 ml Lösung I und 5 ml
Lösung II) entsprechen 0,04945 g wasserfreier Glucose, wenn
Lösung I 17,636 g Kupfer je Liter enthält;
n = die bei der Titration verbrauchte Menge an Zuckerlösung in ml;p = dieEinwaage ;
0,95 = der Faktor zur Umrechnung von wasserfreier Glucose in Stärke.
IV.Herstellung der Fehling-Lösungen
Lösung I: In einem Meßkolben werden 69,278 g kristallisiertes, analy-
senreines, eisenfreies Kupfersulfat (CuSO
4·5H2O) in
destilliertem Wasser zu 1 Liter gelöst. Der genaue Titer der
Lösung ist durch eine quantitative Bestimmung des Kupfers
festzustellen.
Lösung II: In einem Meßkolben werden 100 g Natriumhydroxyd und
346 g Kaliumnatriumtartrat (Seignettesalz) in destilliertem
Wasser zu 1 Liter gelöst.
Die beiden Lösungen I und II sind zu gleichen Teilen unmittelbar vor der
Verwendung zu mischen. 10 ml Fehling-Lösung (5 ml Lösung I und 5 ml
Lösung II) werden durch 0,04945 g wasserfreie Glucose vollständig redu-
ziert, wenn wie unter III beschrieben verfahren wird.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 10
▼B
ANHANG III
NACHWEIS VON WEICHWEIZENMEHL ODER WEICHWEIZEN-
GRIESS IN TEIGWAREN
(nach der Methode Young und Gilles, abgeändert durch Bernaerts und Gruner)
I.Prinzipder Methode
Von der Teigwarenprobe wird unter Verwendung eines nichtpolaren
Lösungsmittels ein Auszug gewonnen.
Dieser Auszug wird auf einer Kieselgeldünnschicht chromatographiert.
Hierdurch werden die vorhandenen Sterine in verschiedene streifenförmige
Fraktionen zerlegt.
Aus der Zahl der intensiven Farbstreifen kann geschlossen werden, ob die
Teigware nur aus Hart- oder Weichweizen oder aus einer Mischung von
Hart- und Weichweizen hergestellt worden ist. Ferner kann festgestellt
werden, ob bei der Herstellung der Teigwaren Eier verwendet worden sind.
II.Geräte und Reagenzien
1. Homogenisator oder Laboratoriumsmühle, um ein Mahlgut zu errei-
chen, das ein Sieb mit Maschenweite 0,200 mm passiert;
2. genormtes Sieb mit einer Maschenweite von 0,200 mm;
3. Vakuum-Eindampfgerät mit Wasserbad;4. Glasplatte, Aluminiumfolien oder andere geeignete Träger im Format
20 x 20 cm mit Kieselgeldünnschicht. Wird die Kieselgeldünnschicht
selbst hergestellt, so wird eine Kieselgel-Gips-Mischung mit einem
Gipsgehalt von etwa 13 v. H. verwendet. Die Schicht wird unter Befol-
gung der Angaben des Herstellers mit einem geeigneten Gerät
aufgebracht. Sie soll 0,25 mm dick sein;
5. Mikropipette zum Abmessen von 20 Mikrolitern;
6. Gefäß mit Deckel für die Entwicklung der Chromatogramme;7. Sprühgerät;8. Petroläther mit einem Siedebereich von 40 ºC bis 60 ºC, vor Gebrauch
frischdestilliert;
9. Diethylether, wasserfrei, zur Analyse;
10. Tetrachlorkohlenstoff, für die Chromatographie, vor Gebrauch frisch-
destilliert;
11. Molybdatophosphorsäure, zur Analyse;12. Ethylalkohol, 94 % vol.
III.Versuchsdurchführung
Etwa 20 g der Probe werden so fein gemahlen, daß sie das Sieb vollständig
passieren. Die zerkleinerte Probe wird in einen Erlenmeyer-Kolben
gegeben, mit 150 ml Petroläther bedeckt und bis zum nächsten Tag bei
Zimmertemperatur stehengelassen. Der Kolben ist dabei von Zeit zu Zeit
zu schütteln.
Danach wird die Mischung durch einen Büchner-Trichter mit Filtrierschicht
oder durch ein Faltenfilter filtriert. Das klare Filtrat wird portionsweise in
einen 100-ml-Kolben übergeführt und das Lösungsmittel unter vermin-
dertem Druck bei 40 ºC bis 50 ºC Wasserbadtemperatur verdampft. Nach
Abdampfen des Lösungsmittels wird das Erwärmen unter vermindertem
Druck noch etwa 10 Minuten fortgesetzt.
Nach Abkühlen des Kolbens wird das Gewicht des erhaltenen Auszugs
bestimmt. Der Auszug wird sodann in Diethylether gelöst, wobei je 60 mg
Auszug 1 ml Diethylether zu verwenden ist.
Die Kieselgeldünnschichten werden durch dreistündiges Erwärmen bei
130 ºC aktiviert. Man läßt sie im Exsikkator über Kieselgel abkühlen. Nicht
sofort verwendete Platten werden im Exsikkator belassen.
Auf eine möglichst frisch aktivierte Schicht werden 20 Mikroliter der klaren
Lösung in Form eines aus nebeneinander liegenden Tröpfchen bestehenden
gleichbleibenden Streifens von 3 cm Länge aufgebracht, worauf man das
Lösungsmittel verdampfen läßt.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 11
▼B
Das Chromatogramm wird bei Zimmertemperatur mit Tetrachlorkohlenstoff
in einem Chromatographiergefäß entwickelt, dessen Wände mit Filterpapier
bedeckt werden, welches das Laufmittel enthält. Nach etwa einer Stunde hat
das Lösungsmittel eine Höhe von 18 cm erreicht. Man nimmt die Platte
heraus und läßt das Laufmittel an der Luft verdunsten. Das Chromato-
gramm wird alsdann ein zweites Mal entwickelt, damit die Streifen besser
getrennt werden. Das Laufmittel läßt man wieder an der Luft verdunsten.
Die Kieselgeldünnschicht wird nunmehr mit einer Lösung von Molybdato-
phosphorsäure in 20 % mas Ethylalkohol besprüht. Die Farbe der Schicht
muß gleichmäßig gelb sein. Durch anschließendes 5 Minuten langes
Erwärmen auf 110 ºC werden die Streifen sichtbar gemacht.
IV.Auswertung des Chromatogramms
Weist das Chromatogramm einen einzigen kräftigen Hauptstreifen mit
einem Rf-Wert von etwa 0,4 bis 0,5 auf, so ist zur Herstellung der Teig-
waren Hartweizen verwendet worden. Zeigen sich dagegen zwei
Hauptstreifen von gleicher Intensität, ist der verwendete Rohstoff Weich-
weizen. Mischungen von Hart- und Weichweizen können durch die
unterschiedliche Intensität der beiden Streifen erkannt werden.
Stellt man auf dem Chromatogramm drei Streifen fest (zwei Streifen in
Höhe der Hauptstreifen des Weichweizens sowie einen dazwischenlie-
genden Streifen), so weist dies auf einen Eigehalt der Teigware hin. Wenn
in diesem Fall der obere Streifen schwächer ist als der Zwischenstreifen,
diente als Rohstoff Hartweizen. Ist der obere Streifen dagegen ausgeprägter
als der Zwischenstreifen, so ist Weichweizen verwendet worden.1987R4154 — DE — 18.02.1998 — 001.001 — 12