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'''TA 클로닝''' ('''TA cloning''', '''신속 클로닝''' 또는 '''T 클로닝''' 이라고도함)은 [[제한 효소|제한효소(restriction enzyme)]]의 사용을 피하는 서브클로닝 기술이다<ref name="caister">{{웹 인용|url=http://www.caister.com/molecular-biology-blog/2009/06/improved-ta-cloning.html|제목=Improved TA Cloning|출판사=Caister Academic Press|보존url=https://web.archive.org/web/20110708111710/http://www.caister.com/molecular-biology-blog/2009/06/improved-ta-cloning.html|보존날짜=2011-07-08|url-status=dead|확인날짜=2009-10-17}}</ref> . 이는 전통적인 서브클로닝보다 쉽고 빠르다. 이 기술은 다른 DNA 단편에서 [[아데닌]](A)과 [[티민]](T) (상보적 염기쌍)이 혼성화(hybridize)하고 결찰효소(ligase)의 존재하에 함께 결찰되는 능력에 의존한다. [[중합효소 연쇄 반응|PCR]] 생성물은 일반적으로 생성물의 3 '말단에 아데닌을 우선적으로 첨가하는 [[Taq 중합효소|Taq DNA 중합효소]]를 사용하여 증폭된다. 이러한 PCR 증폭된 인서트는 상보적인 3 ' [[티민]] 돌출부를 갖는 선형화된 [[플라스미드|벡터]]로 클로닝된다.<ref>{{웹 인용|url=http://www.premierbiosoft.com/tech_notes/TA_Cloning.html|제목=TA Cloning|웹사이트=www.premierbiosoft.com|확인날짜=2017-02-05}}</ref>
[[파일:Tacloning.svg|대체글=Diagram of TA Cloning.|섬네일|400x400픽셀| TA 클로닝 도식 ]]

=== 인서트(삽입물, insert) 만들기 ===
인서트는 [[Taq 중합효소]]를 사용하여 PCR에 의해 생성된다. 이 중합효소는 3 '내지 5' 교정 활성(proofreading activity)이 없고, 높은 확률로 PCR 생성물의 각 말단에 단일 3'- [[아데닌|아데닌(A)]] 돌출부를 추가한다. 말단 프라이머 아데노신 오버행을 추가하는 Taq DNA 중합효소의 가능성을 최대화하기 때문에 PCR 프라이머에 5 '말단에 [[구아닌|구아닌(G)]] 이 있는 것이 가장 좋다.<ref name="HCGS">{{웹 인용|url=http://hcgs.unh.edu/protocol/basic/Cltaclone.html|제목=TA cloning protocol|출판사=Hubbart Center for Genomic Studies|위치=Durham, New Hampshire, USA|보존url=https://web.archive.org/web/20081202013523/http://hcgs.unh.edu/protocol/basic/Cltaclone.html|보존날짜=2008-12-02|url-status=dead|확인날짜=2009-10-17}}</ref> 광범위한 3 '내지 5' 엑소뉴클레아제(exonuclease) 활성을 함유하는 열 안정성 중합효소는 이들이 3 '아데닌 돌출부를 떠나지 않기 때문에 사용되어서는 안된다.<ref name="invitrogenmanual">{{웹 인용|url=http://stanxterm.aecom.yu.edu/wiki/data/Product_manuals_attach/ta.pdf|제목=TA Cloning Kit Manual|날짜=7 April 2004|출판사=Invitrogen|쪽=31|보존url=https://web.archive.org/web/20100624165645/http://stanxterm.aecom.yu.edu/wiki/data/Product_manuals_attach/ta.pdf|보존날짜=24 June 2010|url-status=dead|확인날짜=2009-10-17}}</ref>

=== 벡터 만들기 ===
표적 벡터는 선형화되고 블런트엔드(무딘 말단부, blunt-end) 제한 효소(restriction enzyme)로 절단한다. 이어서, 이 벡터는 말단 트랜스퍼라제(terminal transferase)를 사용하여 ddTTP로 꼬리가 난다. 하나의 T 잔류물만 추가하기 위해 ddTTP를 사용하는 것이 중요하다. 이 꼬리는 각 블런트엔드에 단일 3'- 오버행 티민(T) 잔기를 갖는 벡터를 남긴다.<ref>{{저널 인용|제목=A simple and efficient method for direct cloning of PCR products using ddT-tailed vectors|저널=Nucleic Acids Research|성=Holton|이름=T.A.|성2=Graham, M.W|날짜=1991-03-11|권=19|호=5|쪽=1156|doi=10.1093/nar/19.5.1156|pmc=333802|pmid=2020554}}</ref> 제조업체는 일반적으로 이미 선형화되고 돌출된 티민으로 태그가 지정된 광범위한 준비된 벡터가있는 TA 클로닝 "키트"를 판매한다.

== 장점과 단점 ==
선형화된 벡터를 생성하는 것 이외의 제한 효소가 필요하지 않다면, 절차는 기존의 서브 클로닝 보다 훨씬 간단하고 빠르다. 프라이머를 설계할 때 제한 부위를 추가할 필요가 없으므로 더 짧은 프라이머를 사용하여 시간과 비용을 절약 할 수 있다. 또한 전통적인 복제에 사용할 수 있는 실행 가능한 제한 사이트가없는 경우 TA 복제가 종종 대안으로 사용된다. TA 클로닝의 주요 단점은 방향성 클로닝이 불가능하므로 유전자가 50 %의 반대 방향으로 클로닝 될 가능성이 있다는 것이다.<ref name="caister">{{웹 인용|url=http://www.caister.com/molecular-biology-blog/2009/06/improved-ta-cloning.html|제목=Improved TA Cloning|출판사=Caister Academic Press|보존url=https://web.archive.org/web/20110708111710/http://www.caister.com/molecular-biology-blog/2009/06/improved-ta-cloning.html|보존날짜=2011-07-08|url-status=dead|확인날짜=2009-10-17}}</ref>

== 각주 ==
{{각주}}

[[분류:분자생물학 기술]]
[[분류:생명공학]]
[[분류:분자생물학]]
[[분류:복제]]