{{위키데이터 속성 추적}}
[[파일:MTT Plate.jpg|섬네일|200px|MTT 어세이 후 [[마이크로플레이트]]. 세포 양이 증가함에 따라 보라색 염색도 증가했다.]]

'''MTT 어세이'''(MTT assay)<!-- 번역 필요한지 검토 -->는 [[세포대사|세포 대사]] 활동을 평가하기 위한 비색 분석이다.<ref name=":0">Stockert JC, Horobin RW, Colombo LL, Blázquez-Castro A (April 2018). "Tetrazolium salts and formazan products in Cell Biology: Viability assessment, fluorescence imaging, and labeling perspectives" (PDF). ''Acta Histochemica''. '''120''' (3): 159–167. doi:10.1016/j.acthis.2018.02.005. <nowiki>PMID 29496266</nowiki>.</ref>

[[니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드 인산|NAD(P)H]] 의존성 [[세포]] [[산화 환원 효소]]는 정의된 조건에서 존재하는 생존 세포의 수를 반영할 수 있다. 이 [[효소]]는 [[테트라졸륨]] 염료 MTT 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드를 [[보라|보라색]]을 갖는 불용성 포르마잔으로 환원시킬 수 있다. XTT, MTS, WST를 포함한 기타 밀접하게 관련된 테트라졸륨 염료는 중간 전자 수용체인 1-메톡시 페나진 메토설페이트(PMS)와 함께 사용된다. 세포 불투과성인 WST-1을 사용하면 [[세포막|원형질막]] 전자 전달을 통해 [[세포]] 외부에서 환원된다.<ref name=":1">Berridge MV, Herst PM, Tan AS (2005). "Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction". ''Biotechnology Annual Review''. '''11''': 127–52. doi:10.1016/S1387-2656(05)11004-7. ISBN <bdi>9780444519528</bdi>. <nowiki>PMID 16216776</nowiki>.</ref> 이러한 기존 설명은 현재 MTT가 [[산화 환원 효소|산화환원효소]]의 명백한 관여 없이 [[지질 (생물학)|지질]] 세포 구조에서 포르마잔으로 환원된다는 증거가 발견되었기 때문에 나온다.<ref name=":2">{{저널 인용|제목=MTT assay for cell viability: Intracellular localization of the formazan product is in lipid droplets|저널=Acta Histochemica|성=Stockert|이름=Juan C.|성2=Blázquez-Castro|이름2=Alfonso|url=http://dx.doi.org/10.1016/j.acthis.2012.01.006|날짜=2012-12|권=114|호=8|쪽=785–796|doi=10.1016/j.acthis.2012.01.006|issn=0065-1281|성3=Cañete|이름3=Magdalena|성4=Horobin|이름4=Richard W.|성5=Villanueva|이름5=Ángeles}}</ref>

Tetrazolium 염료 분석은 또한 잠재적인 약제 및 독성 물질의 [[세포독성]](생존 세포 손실) 또는 세포 증식 억제 활성(증식에서 정지로의 이동)을 측정하는 데 사용할 수 있다. MTT 시약은 빛에 민감하기 때문에 MTT 분석은 일반적으로 어두운 곳에서 수행된다.

== 정의 ==

=== Tetrazolium 염료 ===
노란색 테트라졸인 MTT는 살아있는 [[세포]]에서 보라색 포르마잔으로 환원된다.<ref>{{저널 인용|제목=Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays|저널=Journal of Immunological Methods|성=Mosmann|이름=Tim|url=http://dx.doi.org/10.1016/0022-1759(83)90303-4|날짜=1983-12|권=65|호=1-2|쪽=55–63|doi=10.1016/0022-1759(83)90303-4|issn=0022-1759}}</ref>

XTT(2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide)가 MTT를 대체하여 더 높은 감도와 더 높은 동적 범위를 제공하는 것으로 제안되었다. 형성된 포르마잔 염료는 수용성이므로 최종 가용화 단계를 피할 수 있다.<ref>"Why should I use XTT instead of MTT" (PDF, 0.1 MB). ''[aniara.com]''. ANIARA. Retrieved 2010-11-19.</ref>

[[수용액|수용성]] 테트라졸륨 염은 MTT에 대한 보다 최근의 대안이다. 이들은 테트라졸륨 염의 페닐 고리에 [[양성자|양전하]] 또는 [[전자|음전하]] 및 [[하이드록시기|히드록시기]]를 도입하거나 페닐 고리에 직접 또는 간접적으로 추가된 설포네이트 기를 사용하여 개발되었다.

MTS(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸륨)는 페나진 메토설페이트(PMS)의 존재 하에 포르마잔을 생성한다. [[인산완충생리식염수|인산완충식염수]]에서 최대 [[흡광도]]가 490 nm인 제품. MTS 분석은 종종 '원스텝' MTT 분석으로 설명되며, MTT 분석에 필요한 간헐적 단계 없이 시약을 세포 배양에 바로 추가할 수 있는 편리함을 제공한다. 그러나 MTT 분석의 간헐적 단계가 미량의 유색 화합물을 제거하기 때문에 이러한 편리성으로 인해 MTS 분석이 비색 간섭에 취약한 반면, 이들은 1단계 MTS 분석에서 미세역가 플레이트에 남아 있다. 이 분석법을 사용할 때 정확성을 보장하기 위해 예방 조치가 필요하며 [[현미경]]으로 정성적 관찰을 사용하여 MTS 결과를 확인해야 한다는 강력한 주장이 있다.<ref>{{저널 인용|제목=Use of an Aqueous Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth Assays in Culture|저널=Cancer Communications|성=Cory|이름=Ann H.|성2=Owen|이름2=Terence C.|url=http://dx.doi.org/10.3727/095535491820873191|날짜=1991-07-01|권=3|호=7|쪽=207–212|doi=10.3727/095535491820873191|issn=0955-3541|성3=Barltrop|이름3=John A.|성4=Cory|이름4=Joseph G.}}</ref>

WST(수용성 테트라졸륨 염)는 형성된 포르마잔의 다른 흡수 스펙트럼을 제공하기 위해 개발된 MTT 분석을 위한 일련의 기타 수용성 염료이다.<ref>"Water Soluble Tetrazolium Salts (WSTs)" (PDF, 0.4 MB). ''[interchim.com]''. Interchim. Retrieved 2013-08-12.</ref> WST-1 및 특히 WST-8(2-(2-메톡시-4-니트로페닐)-3-(4-니트로페닐)-5-(2,4-디술포페닐)-2H-테트라졸륨)은 MTT보다 유리하다. PMS 전자 매개체와 결합하여 세포 외부에서 환원되어 수용성 포르마잔을 생성한다. 이 분석의 특징은 다음과 같다.

# (가용화 단계가 필요한 MTT와 달리) 직접 읽을 수 있다.
# MTT보다 더 효과적인 신호를 제공한다.
# 세포에 대한 독성을 감소시킬 수 있다([[세포]] 투과성 MTT 및 불용성 세포 내부에 축적되는 포르마잔).

== 측정 ==

=== 방법 ===
MTT assay는 위에서 언급된 MTT 염료를 이용한다. 가용화 용액(보통 디메틸 설폭사이드, 산성화된 [[에탄올]] 용액 또는 묽은 염산에 세제 나트륨 도데실 설페이트 용액)을 첨가하여 불용성 보라색 포르마잔 생성물을 착색 용액에 용해시킨다. 이 착색 용액의 [[흡광도]]는 [[분광광도법|분광 광도계]]로 특정 파장(보통 500~600nm)에서 측정하여 정량화할 수 있다. 빛의 흡수 정도는 [[세포]] 내부와 세포 표면에 축적된 포르마잔 [[농도]]의 정도에 따라 다르다. 포르마잔 농도가 높을수록 보라색이 짙어지며 [[흡광도]]가 높아진다.

=== 해석 ===
위에서 이야기한 것처럼 테트라졸륨 염료 [[산화·환원 반응|환원]]은 일반적으로 세포의 [[세포질]] 구획에서 주로 [[니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드 인산|NAD(P)H]] 의존성 [[산화 환원 효소|산화환원효소]]에 의존하는 것으로 가정된다.<ref name=":1" /> 따라서 MTT 및 기타 테트라졸륨 염료의 감소는 [[니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드 인산|NAD(P)H]] 플럭스로 인한 [[세포]] 대사 활성에 따라 달라진다. [[가슴샘|흉선]] 세포 및 [[비장]] 세포와 같이 대사가 낮은 세포는 MTT를 거의 감소시키지 않는다.

대조적으로, 빠르게 [[세포 분열|분열]]하는 세포는 높은 MTT 감소율을 나타낸다. 분석 조건은 세포 생존에 영향을 미치지 않으면서 대사 활동을 할 수 있어야 한다. 따라서 테트라졸륨 염료 감소를 변경할 수 있음을 명심하는 것이 중요하다. <!-- 저도 쓰면서 잘 이해가 안되는데 번역에 오류가 있을까요? 아시는 분 수정해 주세요 -->

또한, 테트라졸륨 염료의 환원 메커니즘, 즉 세포내(MTT, MTS) 대 세포외(WST-1)도 생성물의 양을 결정한다. 또한, [[효소]] 촉매 작용 없이 지질 세포 구획/구조에서 자발적인 MTT 감소에 대한 증거가 제공되었다.<ref name=":2" /> 그럼에도 불구하고, 이러한 대안적 패러다임에서도 MTT 분석은 여전히 세포의 환원 가능성(즉, 세포 에너지를 구동하기 위한 [[산화·환원 반응|환원]] 화합물의 가용성)을 평가하는데 중요한 지표가 된다.<ref name=":0" /> 따라서 최종 세포 생존력 해석은 변한다.

3D 섬유 스캐폴드에 시드된 [[세포]]의 생존 가능성을 연구할 때 스캐폴드의 두께가 MTT 분석 결과에 영향을 미칠 수 있다.

== 각주 ==
<references />

[[분류:생화학 기법]]
[[분류:생물학 실험]]
[[분류:생화학 검출 반응]]