Patent AR-101057-A1 (AR)
Title: Composiciones y métodos que comprenden una variante de la enzima xilanasa
Inventor: PIM VAN DER KLEY
IPC: C12P21/02
Filed: 2015-01-30
Abstract: Reivindicación 1: Una variante de polipéptido de xilanasa caracterizada porque comprende una sustitución en una posición productiva de aminoácido comparado con una xilanasa GH10 parental, en donde dicha sustitución aumenta la termoestabilidad del polipéptido sin reducir significativamente la actividad especifica, resistencia a pepsina y expresión del polipéptido, y en donde por lo menos 2 de 20 sustituciones posibles de aminoácidos en la posición productiva hacen a la variante de xilanasa capaz de cumplir por lo menos con uno de los siguientes criterios: a) el rendimiento relativo (Índice de Rendimiento, PI) para la actividad especifica en por lo menos uno de los dos ensayos de actividad I y II es mayor que 0,8, PI para la resistencia a pepsina es mayor que 0,9, PI para la expresión (ensayo de actividad sin estrés 1) es mayor que 0,057, y PI para el Ensayo de termoestabilidad 1 es mayor que 1,2 o PI para el ensayo de termoestabilidad 2 es mayor que 1.5; b) el rendimiento relativo (Índice de Rendimiento, PI) para la actividad específica en por lo menos uno de los dos ensayos de actividad l y II es mayor que 0,5, PI para la resistencia a pepsina es mayor que 0,8, PI para la expresión (ensayo de actividad sin estrés 1) es mayor que 0,057, y PI para el Ensayo de termoestabilidad 1 es mayor que 1,2 o PI para el ensayo de termoestabilidad 2 es mayor que 1,3; o c) el rendimiento relativo (Índice de Rendimiento, PI) para la actividad especifica en por lo menos uno de los dos ensayos de actividad l y II es mayor que 0,9, PI para la resistencia a pepsina es mayor que 0,9, Pl para la expresión (ensayo de actividad sin estrés 1) es mayor que 0,057, y PI para el Ensayo de termoestabilidad 1 es mayor que 1,0 o PI para el ensayo de termoestabilidad 2 es mayor que 1,0; en donde la posición productiva se selecciona del grupo que consiste en 135, 28, 57, 62, 70, 79, 89, 102, 105, 118, 151, 153, 160, 181, 184, 200, 220, 232, 262, 298, 4, 21, 25, 30, 56, 59, 64, 65, 71, 74, 77, 98, 99, 100, 103, 104, 106, 113, 115, 117, 120, 134, 141, 142, 148, 150, 152, 156, 161, 163, 167, 176, 180, 193, 198, 199, 201, 202, 215, 217, 227, 229, 230, 233, 3, 6, 7, 11, 12, 16, 18, 29, 32, 33, 37, 38, 52, 53, 58, 67, 72, 75, 92, 93, 94, 96, 97, 107, 109, 110, 112, 114, 116, 125, 129, 132, 133, 136, 138, 139, 146, 147, 149, 155, 159, 162, 164, 168, 169, 182, 183, 188, 190, 191, 194, 196, 206, 209, 211, 219, 221, 231, 235, 236, 238, 244, 249, 260, 266, 268, 269, 274, 296, 300, 302 y 304, y en donde el polipéptido detallado en SEQ ID Nº 2 se usa para numeración. Reivindicación 17: Un método para producir una variante de xilanasa, caracterizado porque comprende: a) modificar (por ejemplo transformar) una célula huésped con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 ó 16, o un vector o construcción (por ejemplo construcción de ADN) de acuerdo con la reivindicación 14, o con una construcción de ADN que comprende un promotor que tiene actividad transcripcional en la célula huésped ligado operativamente con una secuencia de polinucleótidos heteróloga de acuerdo con la reivindicación 13, o con una construcción de ADN que comprende un promotor que tiene actividad transcripcional en la célula huésped ligado operativamente con una secuencia de polinucleótidos heteróloga que codifica para una variante de xilanasa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12; b) cultivar la célula huésped modificada (por ejemplo transformada) en un medio de cultivo adecuado para permitir la expresión de la xilanasa. Reivindicación 24: Una premezcla caracterizada porque comprende una variante de enzima xilanasa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, o el fermentado de acuerdo con la reivindicación 20, o la xilanasa de acuerdo con la reivindicación 21, o la composición de enzima de acuerdo con la reivindicación 22, o una composición de aditivo para pienso de acuerdo con la reivindicación 23, y por lo menos una vitamina y/o por lo menos un mineral. Reivindicación 29: Uso de una variante de enzima xilanasa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, o el fermentado de acuerdo con la reivindicación 20, o la xilanasa de acuerdo con la reivindicación 21, o la composición de enzima de acuerdo con la reivindicación 22, o una composición de aditivo para pienso de acuerdo con la reivindicación 23 o reivindicación 25, o una premezcla de acuerdo con la reivindicación 24 o reivindicación 25, caracterizados porque son para solubilizar arabinoxilano en un material que contiene xilano. Reivindicación 41: Una bebida fermentada, por ejemplo cerveza, caracterizada porque es producida por un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes 28 a 36 o reivindicación 40.