Patent ES-2811251-T3 (ES)
Title: Producción de vectores de expresión y selección de células de alta capacidad de procesamiento
Inventor: BRADLEY ALLAN
IPC: C12N15/09
Filed: 2014-09-18
Granted: 2021-03-11
Abstract: Un método para producir células que codifican un repertorio de anticuerpos que comprende cadenas pesadas y cadenas ligeras de anticuerpo cognadas, comprendiendo dicho método: a) proporcionar una población de células que expresan un repertorio de anticuerpos que comprende cadenas pesadas y cadenas ligeras de anticuerpo cognadas, cuyas células se aíslan de uno o más animales, y que comprende células B, células del centro germinal, células B de memoria, células secretoras de anticuerpos, células plasmáticas o células de plasmablastos; b) clasificar la población de células mediante la unión de los anticuerpos a un antígeno de interés para producir una población clasificada de células individuales, y cada célula comprende un ácido nucleico que codifica una respectiva cadena pesada de anticuerpo y cadena ligera de anticuerpo cognadas, y cada célula clasificada se proporciona en un recipiente distinto; c) amplificar el ácido nucleico comprendido en la población de células individuales clasificadas usando PCR para producir un repertorio clasificado de ácidos nucleicos amplificados que codifican secuencias VH y VL cognadas, en el que las secuencias VH y VL de cada anticuerpo están comprendidas por el anticuerpo cognado procedente de la misma célula y se amplifican en el mismo recipiente; d) modificar los ácidos nucleicos que codifican VH y VL cognadas amplificados y clasificados procedentes de la etapa (c) para producir un repertorio clasificado de módulos de expresión, y cada recipiente comprende: un primer tipo de módulo de expresión de anticuerpo cognado que comprende: (i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de región constante flanqueada en 5' por una secuencia de VH cognada derivada de dicha célula individual para producir una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena pesada de anticuerpo; y (ii) uno o más elementos reguladores para expresar la cadena pesada de anticuerpo, y un segundo tipo de módulo de expresión de anticuerpo cognado que comprende: (iii) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de región constante flanqueada en 5' por una secuencia de VL cognada derivada de dicha célula individual para producir una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena ligera de anticuerpo; y (iv) uno o más elementos reguladores para expresar la cadena pesada de anticuerpo, y en el que la secuencias de VH y VL de cada cadena pesada de anticuerpo y cadena ligera de anticuerpo cognadas se modifican en el mismo recipiente; y e) transferir los módulos de expresión de anticuerpo cognado desde dicho repertorio de módulos a una población clasificada de células hospedantes, manteniendo al mismo tiempo la clasificación de los módulos de expresión de anticuerpo cognado, y producir un repertorio clasificado de células hospedantes que coexpresan un anticuerpo que comprende una cadena pesada de anticuerpo y una cadena ligera de anticuerpo cognadas, en el que el repertorio clasificado de células hospedantes es capaz de expresar de forma estable el repertorio de anticuerpos.