Patent ES-2585502-T3 (ES)
Title: Vector de expresión en mamíferos
Inventor: KNOPF HANS-PETER
IPC: C12N15/79
Filed: 2008-12-18
Granted: 2016-10-06
Abstract: Un ácido nucleico vector linealizado adecuado para expresar al menos un polipéptido de interés en una célula de mamífero que comprende (a) al menos un casete de expresión (POI) adecuado para expresar un polipéptido de interés, en donde dicho casete de expresión comprende al menos un promotor o elemento promotor/potenciador; (b) un casete de expresión (MSM) que comprende un gen marcador seleccionable de mamífero, en donde dicho gen marcador seleccionable de mamífero es un gen resistente a antibióticos y en donde dicho casete de expresión comprende al menos un promotor o elemento promotor/ potenciador; (c) un casete de expresión (MASM) que comprende un gen marcador seleccionable amplificable de mamífero que codifica una dihidrofolato reductasa (DHFR) enzimáticamente funcional, en donde dicho casete de expresión comprende al menos un promotor o elemento promotor/potenciador; y (d) un casete de expresión (PSM) que comprende un gen marcador seleccionable procariota, en donde el casete de expresión para expresar el polipéptido de interés (POI) comprende un promotor y/o potenciador más fuerte que los casetes de expresión para expresar los marcadores seleccionables, y en donde el casete de expresión (POI) está flanqueado en 5' por el casete de expresión (MASM), el casete de expresión (MSM) está localizado 3' desde el casete de expresión (POI) y en donde los casetes de expresión (MASM), (POI) y (MSM) está dispuestos en la misma orientación de 5' a 3', y en donde dicho vector ha sido linealizado a través de un sitio de restricción de linealización que está localizado en la forma circular del vector entre los casetes de expresión (PSM) y (MASM) y en donde dicha forma circular del vector, el casete de expresión (PSM) está localizado entre los casetes de expresión (MSM) y (MASM), de tal manera que en el vector linealizado, el casete de expresión (POI) está flanqueado en 5' por el casete de expresión (MASM) y en 3' por el casete de expresión (MSM) y el casete de expresión (PSM) está localizado en 3' del casete de expresión (MSM), y en donde el ácido nucleico del vector lineal comprende los siguientes elementos genéticos en la disposición indicada, en donde la dirección 5' a 3' es indicada por la → : I. Promotor del casete de expresión (MASM) (→ ) II. Gen que codifica el marcador seleccionable y amplificable de mamífero del casete de expresión MASM (→ ) III. Intrón del casete de expresión (MASM) (→ ) IV. Sitio poliA del casete de expresión (MASM) (→ ) V. Promotor del casete de expresión (POI) (→ ) VI. Intrón del casete de expresión (POI (→ ) VII. Polinucleótido que codifica un polipéptido de interés, el cual es insertado en el casete de expresión (POI') (→ ) VIII. Sitio PoliA del casete de expresión (POI) (→ ) IX. Promotor del casete de expresión (POI') (→ ) X. Intrón del casete de expresión (POI) (→ ) XI. Polinucleótido que codifica un polipéptido adicional de interés, el cual está insertado en el casete de expresión (POI') (→ ) XII. Sitio poliA del casete de expresión (POI') (→ ) XIII. Promotor del casete de expresión (MSM) (→ ) XIV. Gen que codifica el marcador seleccionable de mamíferos del casete de expresión (MSM) (→ ) XV. Sitio poliA del casete de expresión (MSM) (→ ) XVI. Casete de expresión PSM (→ ) o (← ), en donde el casete de expresión POI' tal como está indicado por los elementos IX a XII es opcional.