Patent AR-125225-A1 (AR)
Title: Edición del gen de tcr eficaz en linfocitos t
Inventor: RUTZ SASCHA
IPC: C07K14/725
Filed: 2022-03-25
Abstract: La presente divulgación se refiere a linfocitos T modificados por ingeniería genética y métodos para su elaboración y uso, así como reactivos para elaborar los linfocitos T modificados por ingeniería genética.  Reivindicación 1: Un método para elaborar un linfocito T modificado por ingeniería genética, el método comprende: a) poner en contacto un linfocito T con una primera partícula de ribonucleoproteína (RNP) y un ADN donante, en donde la primera RNP comprende un primer ARN guía que actúa sobre un locus TCR endógeno, y en donde el ADN donante comprende una secuencia de ácido nucleico que comprende un gen que codifica un polipéptido que comprende un TCR-b exógeno y un TCR-a exógeno o porción de este, en condiciones que permiten que la RNP y el ADN donante ingresen a la célula; b) incubar el linfocito T durante un período de tiempo; y c) cultivar la célula en un medio durante un período de tiempo para permitir que el ADN donante se inserte en el locus TCR-a endógeno, y así formar un linfocito T modificado por ingeniería genética. Reivindicación 75: Un método para elaborar una población de linfocitos T modificados por ingeniería genética, que comprende llevar a cabo el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 75 en una población de linfocitos T. Reivindicación 93: Un linfocito T modificado por ingeniería genética elaborado mediante el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 92. Reivindicación 94: Una población de linfocitos T modificados por ingeniería genética elaborada mediante cualquiera de las reivindicaciones 1 a 92. Reivindicación 124: Un linfocito T modificado por ingeniería genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende un TCR-b exógeno y/o un TCR-a exógeno o porción de estos, en donde la secuencia de ácido nucleico se inserta en un locus TCR-a o TCR-b del linfocito T modificado por ingeniería genética. Reivindicación 142: Una población de linfocitos T modificados por ingeniería genética que comprende una pluralidad del linfocito T modificado por ingeniería genética de acuerdo con la reivindicación 141, en donde la expresión del gen TCR-b endógeno se interrumpe en más que alrededor de 80% de las células. Reivindicación 154: Una composición farmacéutica que comprende una población de linfocitos T modificados por ingeniería genética de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 124 a 153 y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Reivindicación 155: Una composición que comprende una población de linfocitos T aislados, en donde al menos 5% de las células en la población son linfocitos T modificados por ingeniería genética, cada linfocito T modificado por ingeniería genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende un TCR-b exógeno y/o un TCR-a exógeno o porción de estos, en donde la secuencia de ácido nucleico se inserta en un locus TCR del linfocito T modificado por ingeniería genética, y en donde los linfocitos T modificados por ingeniería genética no expresan un TCR-b endógeno. Reivindicación 190: Un ARN guía que actúa sobre una secuencia dentro de las secuencias endógenas del exón 1, 2 ó 3 del locus del dominio constante de TCR-a (TRAC). Reivindicación 193: Un ARN guía que actúa sobre un locus TCR-b endógeno consiste esencialmente en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de SEQ ID Nº 23 - 48. Reivindicación 195: Un ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un TCR-b exógeno y una secuencia que codifica un TCR-a exógeno o porción de estas, y en donde la secuencia de ácido nucleico además comprende una secuencia que codifica un primer péptido de autoescisión. Reivindicación 212: Un kit para producir linfocitos T modificados por ingeniería genética que comprende un ARN guía de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 190 a 193.