Patent ES-2848705-T3 (ES)
Title: Amadoriasa modificada y método para producirla, agente para mejorar la resistencia a tensioactivos de la amadoriasa y composición para medir la HbA1c usando la misma
Inventor: MASAKARI YOSUKE
IPC: G01N33/72
Filed: 2014-08-08
Granted: 2021-08-11
Abstract: Una amadoriasa modificada que tiene actividad residual mejorada 5 minutos después de que se añada un tensioactivo iónico en comparación con dicha amadoriasa antes de la modificación, teniendo dicha amadoriasa modificada: (I) una secuencia de aminoácidos tal como se muestra en los SEQ ID NO: 1 o 37, teniendo además dicha secuencia de aminoácidos una deleción, una inserción, una adición y/o una sustitución de uno a 15 aminoácidos en la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en los SEQ ID NO: 1 o 37, y/o (II) una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de al menos un 80 % con la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en el SEQ ID NO: 1, o que tiene una identidad de al menos un 90 % con la secuencia de aminoácidos tal como se muestra en los SEQ ID NO: 37, en donde dicha amadoriasa modificada que tiene la secuencia de aminoácidos de (I) o (II) comprende una o más sustituciones seleccionadas del grupo que consiste en: (i) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 257 en el SEQ ID NO; 1 con cisteína, serina o treonina; (ii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 253 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (iii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 262 en el SEQ ID NO: 1 con histidina; (iv) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 337 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (v) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 249 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (vi) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 340 en el SEQ ID NO: 1 con prolina; (vii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 232 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (viii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 129 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (ix) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 132 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (x) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 133 en el SEQ ID NO: 1 con alanina, metionina, lisina o arginina; (xi) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 44 en el SEQ ID NO: 1 con prolina; (xii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 256 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (xiii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 231 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; y (xiv) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 81 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; en donde, cuando la sustitución es: (i) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 257 en el SEQ ID NO; 1 con cisteína, serina o treonina; (ii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 253 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (iii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 262 en el SEQ ID NO: 1 con histidina; (iv) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 337 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (v) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 249 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (vi) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 340 en el SEQ ID NO: 1 con prolina; (vii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 232 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (viii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 129 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (ix) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 132 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (x) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 133 en el SEQ ID NO: 1 con alanina, metionina, lisina o arginina; (xi) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 44 en el SEQ ID NO: 1 con prolina; (xii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 256 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; (xiii) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 231 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; o (xiv) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 81 en el SEQ ID NO: 1 con lisina o arginina; entonces dicha actividad residual mejorada es una actividad residual mejorada después de que se añade un tensioactivo catiónico; y en donde, cuando la sustitución es: (i) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 257 en el SEQ ID NO; 1 con cisteína, serina o treonina; o (vi) sustitución del aminoácido en la posición correspondiente a la posición 340 en el SEQ ID NO: 1 con prolina; entonces dicha actividad residual mejorada es una actividad residual mejorada después de que se añade un tensioactivo aniónico.