Patent BR-112015021799-A2 (BR)
Title: ativação alcalina para imobilização de indicadores de dna
Inventor: ABDELKRIM BERRADA
IPC: C07H21/04
Filed: 2014-03-06
Abstract: “ativação alcalina para imobilização de indicadores de dna” campo da técnica [0001] a presente invenção refere-se a métodos para facilitar a imobilização e ligação estável de indicadores (taggants) de dna rastreáveis sobre a superfície de um objeto, ou para a inclusão em líquidos, incluindo corantes e tintas que contêm líquidos que podem ser aplicados a um objeto de modo que o indicador possa ser ligado e subsequentemente detectado e o objeto autenticado. antecedentes da invenção [0002] a falsificação e mistura de produtos de alto padrão com material de baixo custo se tornou um grande problema de imputabilidade para os principais nomes comerciais. a câmara de comércio internacional (icc) relatou que em 2008, produtos falsificados resultaram em uma perda de $650 bilhões dólares de faturamento e 2,5 milhões de empregos. a icc projetou que a perda em faturamentos excederá $1,7 trilhões de dólares em 2015, o que é equivalente a 2% da economia mundial. além das perdas de faturamento, determinados produtos falsificados estavam ligados diretamente a sérios problemas de segurança e saúde. os produtos falsificados se infiltraram na maioria das indústrias de têxteis a microchips, e até mesmo farmacêuticas. [0003] a falsificação se tornou um problema sério, se espalhado por muitas indústrias diferentes em todo o mundo. estimou se que cerca de $600 bilhões de dólares em produtos falsificados entram no mercado anualmente (cattaui, 2012). os produtos que incluem farmacêuticos, brinquedos, produtos de entretenimento, vestuário, acessórios de moda, dinheiro, eletrônicos, e quaisquer outros produtos de valor têm imitações falsificadas no mercado para os consumidores. o problema com falsificados é que os mesmos não atingem somente o nome do original e a economia, mas porque esses produtos não têm uma origem confiável, sua qualidade de eficácia poderia estar comprometida. a falsificação, com frequência, tem consequências mínimas sobre aqueles que distribuem os produtos falsos, em comparação às consequências mortais que poderiam resultar do mau funcionamento dos produtos com componentes falsificados. em 2011, visiontech de clearwater, fl foi uma das poucas empresas realmente acusadas pela venda de chips falsificados, após milhares desses chips falsos terem sido vendidos para todos os setores da indústria de eletrônicos. [0004] a falsificação de produtos farmacêuticos também se tornou uma indústria gigante dentro dos estados unidos. esses fármacos falsos podem ser extremamente perigosos já que não há precisão ou consistência requeridas para vendê-los. com o uso de fármacos reais ou similares para passarem pelo teste inicial, esses falsificadores podem, posteriormente, vender produtos com uma variedade de ingredientes diferentes, sem o conhecimento do consumidor. uma tendência de aumento global na medicina adquirida online se tornou mais fácil vender farmacêuticos falsificados. esses produtos falsificados compuseram 70% do suprimento de fármaco nas nações como china e índia, levando a mais mortes por todo o mundo, já que essas nações suprem fármacos para muitos outros países (consulte chakraborty, foxbusiness, junho de 2012). em abril de 2012, um fármaco chamado de avastin, um fármaco de câncer, foi imitado. “… 120 ampolas falsas foram adquiridas na turquia sob o nome alzutan e enviadas pela bretanha por intermediários baseados no ru em um padrão de envio notavelmente semelhante aos falsos que chegaram primeiro aos consultórios dos eua em fevereiro.” esses fármacos falsos são vendidos para lucros altos, com baixas penalidades, tornando o processo atraente para criminosos. isso se tornou uma indústria multibilionária, com uma estimativa de atingir $100 bilhões de dólares dentro da próxima década (chakraborty). isso poderia representar alguns riscos sérios de saúde para os consumidores, que gravitarão aos produtos mais baratos, que são inadvertidamente falsificados, tornando-os susceptíveis a esses falsos. [0005] outra indústria que foi invadida com produtos falsificados é a indústria de eletrônicos. além da bem conhecida falsificação de fones e reprodutores de música padrão, os produtos como microchips também foram falsificados. isso é um grande dilema porque um usuário desses produtos é o departamento de defesa dos estados unidos (dod). os microchips falsificados do extremo oriente chegaram aos sistemas de armas do pentágono e marinha (kelley, business insider, military & defense). esses fabricantes de falsificados primeiro desenvolvem os produtos que funcionam como o original para passar pelo teste inicial, mas então fabricam produtos de baixo custo e de qualidade inferior, enquanto ainda os vende como o original. uma vez que os mesmos entram no fluxo de armas, os falsificados são incrivelmente difíceis de detectar, e devido à sua falta de confiabilidade, o que resultou em uma falha de produto superior, deixando uma grande vulnerabilidade na defesa nacional. não só esses produtos poderiam falhar, mas o acesso a microchips falhos dentro dos sistemas de armas dos estados unidos a partir de fontes não autorizadas poderia permitir acesso às comunicações norte americanas sem detecção (kelley). [0006] os casos de microchips falsificados não são em sua maioria relatados, sem consequências para aqueles na cadeia de fornecedor, já que as empresas são reticentes em se associar a falsificações e arriscam as repercussões de reconhecer que seus sistemas podem estar comprometidos. no caso do sistema de thaad (defesa aérea de alta altitude terminal), um programa militar dos eua, foi revelado que o sistema estava comprometido como uma forma de proteger o sistema de futuras peças falsificadas e elevar a conscientização ao problema que assola esses sistemas. o sistema foi desenvolvido para derrubar mísseis em voo, exigindo um alto grau de precisão, o que poderia ser prejudicado por um mau funcionamento em até mesmo um único de seus chips. esses microchips falsificados, principalmente adquiridos pelas fontes do extremo oriente, são frequentemente produtos de grau comercial que não têm a capacidade de suportar o ambiente que o equipamento militar deve suportar, significando que o equipamento poderia parar de funcionar abruptamente, levando a consequências desastrosas. [0007] uma nova determinação, seção 818, com o ato de autorização de defesa nacional para o ano fiscal de 2012 foi criado em apoio às medidas para proteção contra falsificação. essa determinação exige que as empresas que vendem peças ou produtos ao governo dos estados unidos tenham medidas antifalsificação. as mesmas incluem a inspeção e autenticação de seus produtos antes de os mesmos serem vendidos. a determinação também responsabiliza os fornecedores pelos produtos falsificados que eles suprem, incluindo os custos e ramificações legais de quaisquer danos que ocorrem aos produtos falhos. até essa determinação ter sido adicionada ao ato de autorização de defesa de nacional, não havia consequências legais para o fornecimento de produtos falsificados aos consumidores e nenhum sistema de detecção ou monitoramento imposto requerido. [0008] o risco envolvido com a falsificação forçou muitas empresas a agirem independentemente para encontrar formas de proteger seus produtos e configurar métodos antifalsificação. uma das abordagens usadas é adicionar fluoróforo aos produtos, de modo a ter a capacidade de detectar visualmente quais produtos são legítimos. o fluoróforo é um composto químico que fluoresce ou reemite luz de um comprimento de onda mais longo através da excitação com luz. isso ocorre conforme uma molécula dentro do fluoróforo é excitada, fazendo com que a molécula emita fótons e fluoresça. o fluoróforo pode servir como um corante ou um marcador para esses produtos, que pode ser aplicado durante os estágios iniciais de produção. [0009] esse método, embora inicialmente eficaz, não mais protege os produtos já que os falsificadores copiaram os produtos junto com o fluoróforo. os falsificadores tiveram a capacidade de extrair o fluoróforo do produto, duplicá-lo e adicionar o mesmo aos seus produtos falsificados, fazendo o produto fluorescer sob a luz uv justamente como o produto real faria. isso criou uma necessidade para um método antifalsificação por quais os produtos podem ser autenticados de modo forense, que é seguro e não pode ser duplicado pelos próprios falsificadores. um método que o exército dos eua está pesquisando é o uso de dna para marcar produtos autênticos. dna, com sequências específicas, é incorporado nesses produtos através de tinta ou outros materiais. isso pode, então, ser detectado sob uma luz uv, com a forma que o material fluoresce. as sequências de dna específicas são virtualmente impossíveis de duplicar, tornando a falsificação impossível. esse dna seria impossível de remover, já que estaria incorporado no material inteiro. ácidos nucleicos como marcadores de segurança [0010] apesar de serem compostos de blocos de construção de nucleotídeo relativamente simples, os ácidos nucleicos têm a capacidade de codificar um vasto gama de informações: por exemplo, o genoma humano codifica todas as informações necessárias para a síntese e montagem de todos os componentes do corpo humano a partir das redes neurais do cérebro até as estruturas intrincadas do esqueleto, tecidos e órgãos. os ácidos nucleicos incluem ácido desoxirribonucleico (dna) e o ribonucleico mais lábil (rna). as sequências de ácido nucleico podem ser únicas e complexas e a utilização dessas características particulares na resolução de diversos problemas de codificação comuns, como autenticação e rastreamento de produtos e detecção de produtos falsificados, atraiu recentemente grande interesse. [0011] muitos fabricantes de produtos utilizam qualidades aparentes e projetos definitivos identificáveis como “imagem comercial” para identificar de forma única seus produtos de valor alto e qualidade e ganham assim a confiança de seus usuários. outros também adicionam rótulos para propósitos antifalsificação. os rótulos antifalsificação tradicionais são formados, de modo geral, a partir de materiais que têm características físicas ou químicas particularmente alvejadas, por exemplo, tiras magnéticas em talões de cheques, hologramas a laser em cartões de crédito, tinta fluorescente em certificados de ações, e tintas termossensíveis em documentos confidenciais. os rótulos antifalsificação também foram produzidos adicionando-se antígenos específicos a objetos que precisam ser identificados, os antígenos podem, então, ser detectados com um anticorpo específico para o antígeno. entretanto, os antígenos e anticorpos são proteínas com estabilidade caracteristicamente insatisfatória sob muitas condições ambientais de temperatura e umidade, e são inclinados à desnaturação ou até mesmo degradação e consequentemente perdem atividade e podem ser destruídos com facilidade, reduzindo assim a precisão e confiabilidade da identificação. [0012] portanto, os ácidos nucleicos, como, por exemplo, ácido desoxirribonucleico (dna) e ácido ribonucleico (rna) que codificam informações hereditárias essenciais foram pesquisados como uma alternativa aprimorada a marcadores e rótulos antifalsificação comumente usados. o dna e rna são polímeros que consiste em uma cadeia de nucleotídeos, chamados de “oligonucleotídeos” que consistem em cadeias relativamente curtas de até digamos, vinte a cinquenta bases de comprimento, ou “polinucleotídeos” para cadeias mais longas. essas cadeias de oligonucleotídeo ou polinucleotídeo consistem em diversos nucleotídeos ligados juntos em sequência como contas em um fio. cada nucleotídeo consiste em um fosfato de açúcar ribose ligado a um dentre somente quatro tipos de bases azotadas: adenina (frequentemente representada na forma abreviada como “a”), guanina (representada como “g”), citosina (representada como “c”) e timina (representada como “t”) no caso de dna; e adenina (a), guanina (g), citosina (c) e uracila (u) no caso de rna. os oligonucleotídeos ou polinucleotídeos compartilham a mesma estrutura principal de fosfato de açúcar. o grupo 3’-hidroxila do açúcar ribose de um nucleotídeo é covalentemente ligado ao grupo 5’-fosfato de seu nucleotídeo vizinho para formar uma estrutura de cadeia entre si das bases azotadas planas que se projetam a partir da cadeia semelhante aos dentes de um pente. [0013] cada uma das bases a, t, g e c em uma cadeia de oligonucleotídeos ou polinucleotídeos tem capacidade de emparelhamento específico com outra base ou cadeia diferente para formar uma estrutura de filamento duplo, ou com a mesma cadeia para formar um laço de filamento duplo ou estrutura em forma de grampo (hairpin): a adenina se liga especificamente a timina através de duas ligações de hidrogênio em dna (ou com uracila em rna) e citosina se liga especificamente à guanina através de três ligações de hidrogênio. isto é, t se ligará a a e g a c unindo duas cadeias de nucleotídeo para formar um filamento duplo, ou duas partes de uma única cadeia de nucleotídeo para formar uma região de filamento duplo com cada filamento do duplex conectado por um laço. [0014] uma vantagem adicional dos ácidos nucleicos para uso como marcadores ou indicadores é que com a proteção adequada essas moléculas podem ser conservadas por longos períodos de tempo. a evidência de espécimes conservados nas geleiras, placas de gelo, poços de piche e pântanos e brejos mostram que o dna é resiliente à degradação ao longo de milhares, e em alguns casos milhões de anos. essa evidência foi usada para deduzir informações que dizem respeito à ancestralidade e origens de povos antigos bem como de plantas e animais. o dna marcador protegido também pode ser estabilizado em polímeros para revestimento de artigos de alto valor ou objetos de interesse com a finalidade de sobreviver longos períodos de tempo e pode, então, ser usado para os propósitos de identificação, autenticação e rastreamento. essa capacidade de persistir durante longos períodos de tempo em conjunto com métodos muitos sensíveis para detectar números baixos de moléculas, por exemplo, por amplificação com o uso da reação em cadeia de polimerase (pcr), tornam os ácidos nucleicos, e o dna em particular, um candidato atraente para uso como um marcador. ademais, os ácidos nucleicos oferecem uma capacidade de codificação quase ilimitada visto que o número de sequências únicas possíveis aumenta em quatro vezes com cada base adicional da sequência do oligonucleotídeo ou polinucleotídeo. [0015] existe uma necessidade na técnica por um sistema que permite a marcação eficaz, estável e detectável de um artigo, particularmente um artigo de valor com indicadores de dna para os propósitos de identificação, autenticação, rastreamento e validação. existe uma necessidade de proteger nomes de marca, para detectar com facilidade e rapidez produtos falsificados e fornecer evidência forense para auxiliar na instauração de processo contra falsificadores. sumário da invenção [0016] a presente invenção fornece métodos para imobilizar um ácido desoxirribonucleico a um substrato ou para ligar um ácido desoxirribonucleico a um substrato. o método inclui expor o ácido desoxirribonucleico um ph alcalino e colocar o ácido desoxirribonucleico exposto a alcalino em contato com o substrato. [0017] uma modalidade da presente invenção fornece um método de ligação de um ácido desoxirribonucleico a um substrato, em que o método inclui expor o ácido desoxirribonucleico a condições alcalinas em que as condições alcalinas são produzidas misturando-se o ácido desoxirribonucleico com uma solução alcalina que tem um ph alto (como, por exemplo, um ph de cerca de 9,0 a cerca de 14,0), e colocar o ácido desoxirribonucleico exposto a alcalino em contato com o substrato. em uma modalidade, a solução alcalina é uma solução de um hidróxido de um metal alcalino. [0018] em outra modalidade da presente invenção, a solução alcalina é uma solução de um tampão de ph alto. em outra modalidade, o tampão de ph alto é selecionado a partir do grupo que consiste em cabs (ácido 4-[ciclohexilamino]-1-butanossulfônico), caps (ácido n-ciclohexil-3-amino-propanossulfônico), amp (2-amino-2-metil-1-propanol), capso (ácido n-ciclohexil-2-hidroxil-3-aminopropanossulfônico), ches (ácido 2-(n ciclohexilamino) etanossulfônico), ampso (ácido 3-[(1,1-dimetil-2-hidroxietil) amino]-2-hidroxipropanossulfônico) e uma mistura de quaisquer dois ou mais dos anteriores. [0019] em outra modalidade, é fornecido um objeto marcado com dna marcador em que o dna marcador é um dna ativado por ph alcalino ligado ao objeto. [0020] em outra modalidade, o dna ativado por ph alcalino é ligado a um material selecionado a partir do grupo que consiste em algodão, lã, náilon, plástico, metal, vidro, madeira, tinta de impressão e uma composição farmacêutica. [0021] em uma modalidade, o objeto marcado com o dna marcador inclui um dentre um tablete farmacêutico, uma cápsula farmacêutica, ou um pó farmacêutico. breves descrições das figuras [0022] a figura 1 representa a marcação e autenticação de algodão giza 86. a figura 1a mostra uma análise de dna de segundo plano de giza 86. a figura 1b representa a autenticação do algodão 86 após a marcação por dna. as figuras 1c e 1d representam a autenticação do algodão giza 86 após a lavagem. [0023] a figura 2 representa a marcação e autenticação de algodão giza 88. a figura 2a mostra uma análise de dna de segundo plano de algodão giza 88. a figura 2b representa a autenticação do algodão 86 após a marcação por dna. as figuras 2c e 2d representam a autenticação do algodão giza 88 após a lavagem. [0024] a figura 3 representa a marcação e autenticação de algodão giza 86. a figura [[1]]3a: representa a autenticação de giza 86 antes da lavagem. a figura 3b representa a autenticação do algodão giza 86 após a lavagem com água. a figura 3c representa a autenticação do algodão giza 86 após a lavagem com água e álcool sequencial. a figura 3d representa a autenticação do algodão giza 86 após a lavagem com água, álcool e solvente sequencial. [0025] a figura 4 representa a marcação e autenticação de algodão giza 88. a figura 4a representa a autenticação de giza 88 antes da lavagem. a figura 4b representa a autenticação do algodão giza 88 após a lavagem com água. a figura 4c: representa a autenticação do algodão giza 88 após a lavagem com água e álcool sequencial. a figura 4d representa a autenticação do algodão giza 88 após a lavagem com água, álcool e solvente sequencial. [0026] a figura 5 representa a marcação do fio de lã e autenticação do pano acabado. o fio foi marcado com dna signature®, tecido, e acabo de forma profissional. o dna signature® foi recuperado e autenticado. a figura 5a representa a autenticação do pano acabado. a figura 5b representa o procedimento de autenticação idêntico executado no pano não marcado. [0027] a figura 6 representa a autenticação do pano marcado com o dna signature® após uma série de dez lavagens a seco: o fio foi marcado com o dna signature®, o pano foi tecido, acabado de forma profissional, e submetido a 10 ciclos de lavagem a seco. as figuras 6a a e são autenticações após os panos serem lavados a seco 6, 7, 8, 9, e 10 vezes, respectivamente. [0028] a figura 7 representa a mistura padrão de náilon (figura 7a) e péletes de pet (figura 7b) foram misturados com o dna signature®, extrudados, e os fios e filmes resultantes foram lavados. a figura 7c mostra um controle sem dna. os produtos finais foram autenticados conforme descrito. [0029] a figura 8 representa a autenticação de casimira marcada com o dna signature® antes e após a lavagem: a figura 8a mostra a detecção do dna marcador a partir da casimira marcada. a figura 8b mostra a detecção do dna marcador a partir da casimira marcada após a lavagem. [0030] a figura 9 representa a autenticação da casimira marcada com o dna signature® antes e após ciclos de lavagem a seco: casimira não marcada e casimira marcada com dna antes e após um, dois ou três ciclos de lavagem a seco. descrição detalhada definições: [0031] conforme usado no presente documento, os termos “ligação a um substrato” e “imobilização” são intercambiáveis conforme aplicado à imobilização e ligação de dna. [0032] o termo “indicador” conforme usado no presente documento denota um dna marcador, e opcionalmente o dna marcador pode estar em combinação com uma segunda substância marcadora. o dna marcador e os um ou mais marcadores adicionais, quando presentes são afixados a um objeto para indicar uma propriedade do objeto, como, por exemplo, sua fonte de fabricação. o objeto a ser marcado com o indicador pode ser qualquer item rastreável sólido, como um dispositivo eletrônico, um item de vestuário, papel, fibra, ou pano, ou qualquer outro item de comércio, ou dinheiro ou objetos de valor, em armazenamento ou em trânsito. alternativamente, o item de comércio a ser marcado com o indicador pode ser um líquido, como, por exemplo, uma tinta, um corante ou uma aspersão. em outra alternativa, o item de comércio pode ser um item de mercadoria, como papel, metal, madeira, um plástico ou um pó. o indicador pode ser, por exemplo, específico à empresa ou ao tipo de item (por exemplo, um número de modelo), específico a um particular lote ou batelada do item (número de lote), ou específico ao item real, como, por exemplo, um número de série único ao item. além disso, o indicador pode indicar qualquer um ou mais dentre uma variedade de itens úteis dos dados; por exemplo, o indicador pode codificar dados que indicam o nome e as informações de contato da empresa que fabricou o item ou produto etiquetado, a data de fabricação, o distribuidor e/ou o revendedor pretendido do produto ou item. o indicador também pode indicar, por exemplo, e sem limitação, os dados de componente, como a fonte do componente incorporado no item ou a identidade do maquinário ou instalação de produção que foi usada na fabricação do produto ou item; a data que o produto ou item foi colocado no fluxo do comércio, a data de aceitação pelo distribuidor e/ou a data de entrega ao revendedor e qualquer outros dados comerciais, ou outros dados como, por exemplo, informações pessoais do proprietário de um item feito personalizado. cada elemento de dados ou indícios podem ser criptografados ou codificados no indicador e podem ser decifrados a partir do indicador recuperado do objeto e decodificado ou descriptografado de acordo com os métodos descritos no presente documento. os dados decodificados ou descriptografados podem, então, ser usados para verificar as propriedades do objeto, ou para autenticar o objeto, ou para excluir itens falsificados. [0033] o termo “pcr” se refere a uma reação em cadeia de polimerase. a pcr é uma tecnologia de amplificação útil para expandir o número de cópias de uma sequência de ácidos nucleicos modelo por meio de uma ciclagem de temperatura através de ciclos de fusão, recozimento e polimerização com partes de oligonucleotídeos iniciadores curtos complementares às sequências específicas marginais à sequência de ácidos nucleicos modelo na presença de uma polimerase de dna, de preferência uma polimerase de dna termoestável como a polimerase taq termoestável originalmente isolada da bactéria termofílica (thermus aquaticus). a pcr inclui, sem limitação, métodos de pcr padrão, em que os filamentos de dna são copiados para fornecer um milhão ou mais cópias dos filamentos de dna originais (por exemplo, pcr com o uso de iniciadores: consulte, por exemplo, pcr with arbitrary primers: approach with care. w.c. black iv, ins. mol. biol. 2: 1 a 6, dezembro de 2007); tecnologia de pcr em tempo real, em que a quantidade de produtos de pcr pode ser monitorada em cada ciclo (real time quantitative pcr: c.a. heid, j. stevens, k.j. livak e p.m. williams, 1996 genome research 6: 986 a 994); pcr de transcrição inversa em que o rna é copiado primeiro em filamentos de dna e posteriormente os filamentos de dna são amplificados por reações pcr padrão (consulte, por exemplo: quantitative rt-pcr: pitfalls and potential: w.f. freeman, s.j. walker e k.e. vrana; biotechniques 26:112 a 125, janeiro de 1999). [0034] o termo “monômero” conforme usado no presente documento se refere a qualquer entidade química que pode ser covalentemente ligado a um ou mais dessas entidades para formar um oligômero ou um polímero. os exemplos “monômeros” incluem nucleotídeos, aminoácidos, sacarídeos, aminoácidos, e similares. [0035] o termo “ácido nucleico” significa um polímero composto de nucleotídeos que podem ser desoxirribonucleotídeos ou ribonucleotídeos. esses compostos podem ser desoxirribonucleotídeos ou ribonucleotídeos naturais ou sinteticamente produzidos. o ácido nucleico sinteticamente produzido pode ser de uma sequência de ocorrência natural, ou uma sequência única não natural. [0036] os termos “ácido ribonucleico” e “rna” denotam um polímero composto de ribonucleotídeos. os termos “ácido desoxirribonucleico” e “dna” denotam um polímero composto de desoxirribonucleotídeos. [0037] o termo “nucleotídeo” significa uma unidade monomérica que compreende um fosfato de açúcar, geralmente ribose-5’-fosfato ou 2’-desoxiribose-5’-fosfato covalentemente ligado a uma base que contém nitrogênio, geralmente, adenina (a), guanina (g), citosina (c), ou timina (t) no caso de um desoxirribonucleotídeo, e geralmente, adenina (a), guanina (g), citosina (c), ou uracila (u) no caso de ribonucleotídeos. [0038] o termo “oligonucleotídeo” conforme usado neste relatório descritivo se refere a polímero com filamento único ou duplo composto de monômeros de nucleotídeo covalentemente ligados que formam uma cadeia de duas a cerca de vinte nucleotídeos de comprimento. [0039] o termo “polinucleotídeo” conforme usado neste relatório descritivo se refere a polímero com filamento único ou duplo composto de monômeros de nucleotídeo covalentemente ligados que formam uma cadeia de genericamente mais do que cerca de vinte nucleotídeos de comprimento. [0040] os ácidos nucleicos que têm uma sequência de ocorrência natural podem hibridizar com ácidos nucleicos de forma específica de sequência. isto é, as mesmas podem participar das reações de hibridizações em que os pares básicos complementares a:t (adenina:timina) e g:c (guanina:citosina) formam ligações de hidrogênio intermolecular (ou intramolecular) e interações de empilhamento cooperativas entre as bases vizinhas planas em cada filamento através de elétrons pi, juntos conhecidos como interações de emparelhamento de base de watson-crick. as bases dos filamentos de ácido nucleico também podem hibridizar para formar pares básicos de não watson-crick por assim chamadas interações de “wobble” em que os pares g (guanina) com u (uracila), ou alternativamente, os pares de i (inosina) com c (citosina), u (uracil) ou a (adenina), mas com energias de ligação menores do que as interações de emparelhamento de base de watson-crick normais. [0041] o termo “sequência identificável” ou “sequência detectável” significa uma sequência de nucleotídeos que pode ser detectada pela tecnologia de hibridização e/ou pcr por um iniciador ou sonda projetada para interação específica com a sequência de nucleotídeos alvo a ser identificada. a interação da sequência de nucleotídeos alvo com a sonda ou iniciador específico pode ser detectada por meios ópticos e/ou visuais para determinar a presença da sequência de nucleotídeos alvo. [0042] em uma modalidade, a presente invenção fornece um método pelo qual o dna e fluoróforo podem ser ligados a vários substratos. com esse método, o dna pode ser ligado a materiais, resistir a todos os tipos de processos de acabamento, como lavagem e limpeza, e ainda ser recuperado com segurança a fim de autenticar o produto. a autenticação pode ocorrer através de vários métodos. um método envolve a adição de fluoróforo ao produto, tornando a identificação rápida possível, já que uma luz uv poderia detectar a presença de um fluoróforo. outro método de autenticação envolve a ligação de dna a substratos por meio de um ligante químico. um ligante frequentemente inclui uma cadeia de átomos de carbono com um grupo funcional reativo na extremidade. esse grupo funcional reativo pode ser ativado para se ligar de forma covalentemente a um grupo disponível ou ao substrato ou o produto a ser marcado. esse dna fixado ao produto é único ao produto particular e, portanto, age como sua identificação, tornando a autenticação possível. esses métodos combinados criariam um método de identificação à prova de falha, em que a fluorescência do produto seria o primeiro nível de proteção e o dna seria a segunda camada única e definitiva que não poderia ser duplicada. [0043] em uma modalidade a invenção fornece marcadores de dna botânicos, dna signature®(applied dna sciences, stony brook, ny) que essencialmente não podem ser copiados, e são resistentes a vários tratamentos químicos e têxteis. para assegurar a aderência, o dna signature® foi formulado para ser intimamente ligado a ambas as fibras natural e sintética e