Patent ES-2899826-T3 (ES)
Title: Kit para detectar conjuntamente múltiples ácidos nucleicos diana que difieren entre sí y procedimiento de detección usando el mismo
Inventor: NAGANO TAKASHI
IPC: C12Q1/68
Filed: 2016-05-10
Granted: 2022-03-14
Abstract: Un procedimiento para detectar conjuntamente múltiples ácidos nucleicos diana que difieren entre sí, incluyendo los múltiples ácidos nucleicos diana un primer ácido nucleico diana y un segundo ácido nucleico diana, usando el procedimiento: una solución que puede contener el primer ácido nucleico diana y el segundo ácido nucleico diana en la misma, a una temperatura de desnaturalización TO, escindiéndose un primer enlace de hidrógeno bicatenario del primer ácido nucleico diana que se va a disociar en las dos primeras hebras individuales, escindiéndose un segundo enlace de hidrógeno bicatenario del segundo ácido nucleico diana que se va a disociar en las dos segundas hebras individuales, respectivamente, la solución conteniendo además en la misma: un cebador de la primera diana a una temperatura de hibridación T1 que se enlaza específicamente con cualquiera de las dos primeras hebras individuales en las que se ha disociado el primer ácido nucleico diana; un cebador de la segunda diana a la temperatura de hibridación T1 que se enlaza específicamente con cualquiera de las dos segundas hebras individuales en las que se ha disociado el segundo ácido nucleico diana; una sonda de la primera diana a la temperatura de hibridación T1 que se enlaza específicamente con cualquiera de las dos primeras hebras individuales en las que se ha disociado el primer ácido nucleico diana, incluyendo la sonda de la primera diana una primera sustancia de marcado que cambia las primeras señales fluorescentes de la misma cuando la sonda de la primera diana se enlaza específicamente con cualquiera de las dos primeras hebras individuales; ADN polimerasa; desoxirribonucleósido trifosfato a una temperatura de alargamiento T2 que se enlaza por acción de la ADN polimerasa tanto con las dos primeras hebras individuales en las que se ha disociado el primer ácido nucleico diana como con las dos segundas hebras individuales en las que se ha disociado el segundo ácido nucleico diana; y una sonda de la segunda diana a la temperatura de hibridación T1 que no se enlaza con ninguna de las dos primeras hebras individuales en las que se ha disociado el primer ácido nucleico diana ni con las dos segundas hebras individuales en las que se ha disociado el segundo ácido nucleico diana, enlazándose la sonda de la segunda diana a una temperatura de detección de la segunda diana T3 con las dos segundas hebras individuales en las que se ha disociado el segundo ácido nucleico diana, incluyendo la sonda de la segunda diana una segunda sustancia de marcado que cambia las segundas señales fluorescentes de la misma cuando la sonda de la segunda diana se enlaza específicamente con cualquiera de las dos segundas hebras individuales, en el que T0 se define como la temperatura de desnaturalización; T1 se define como la temperatura de hibridación; T2 se define como la temperatura de alargamiento; T3 se define como la temperatura de detección de la segunda diana, y se establece de T0 a T3 de modo que una condición de que: T0>T2>=T1>T3 se satisface; y la primera sustancia de marcado y la segunda sustancia de marcado son idénticas; en el que se capta una diferencia provocada por los cambios de las primera y segunda señales fluorescentes de acuerdo con la segunda sustancia de marcado para evaluar la existencia o inexistencia del segundo ácido nucleico diana.