Patent AR-100472-A1 (AR)
Title: Modificación genómica de plantas mediante el uso de sistemas guía de endonucleasa para arn / cas y métodos de uso
Inventor: JOSHUA K YOUNG
IPC: A01H5/00
Filed: 2014-08-20
Abstract: Se proporcionan composiciones y métodos para la modificación del genoma de una secuencia objetivo en el genoma de una planta o célula vegetal. Los métodos y composiciones emplean un sistema de ARN guía / endonucleasa Cas para proporcionar un sistema eficaz para modificar o alterar sitios objetivo dentro del genoma de una planta, célula vegetal o semilla. Se proporcionan además composiciones y métodos que emplean un sistema de polinucleótido guía / endonucleasa Cas para la modificación del genoma de una secuencia de nucleótidos en el genoma de una célula u organismo, para la corrección de genes, y/o para insertar o eliminar un polinucleótido de interés en o desde el genoma de una célula u organismo. Una vez que un sitio objetivo genómico se identifica, puede emplearse una variedad de métodos para modificar más aún los sitios objetivo de tal manera que contienen una variedad de polinucleótidos de interés. Además, se describen métodos de mejoramiento y métodos para la selección de plantas que utilizan un sistema de dos componentes de ARN guía y endonucleasa Cas. Además, se proporcionan composiciones y métodos para corregir una secuencia de nucleótidos en el genoma de una célula. Reivindicación 20: Una planta que comprende un constructo de ADN recombinante, el constructo de ADN recombinante comprende un promotor unido operativamente a una secuencia de nucleótidos que codifica una endonucleasa Cas9 optimizada de la planta, en donde la endonucleasa Cas9 optimizada de la planta es capaz de unirse a y crear una interrupción de la cadena doble en una secuencia objetivo genómica del genoma de la planta Reivindicación 22: Un constructo de ADN recombinante que comprende un promotor unido operativamente a una secuencia de nucleótidos que codifica una endonucleasa Cas9 optimizada de la planta, en donde la endonucleasa Cas9 optimizada de la planta es capaz de unirse a y crear una interrupción de la cadena doble en una secuencia objetivo genómica del genoma de la planta. Reivindicación 24: Un método para seleccionar una planta fértil, el método comprende seleccionar al menos una planta progenie que comprende una alteración en un sitio objetivo genómico localizado en un locus del gen de fertilidad masculina, en donde la planta progenie se obtiene por cruce de una primera planta que expresa una endonucleasa Cas9 a una segunda planta que comprende un ARN guía, en donde la endonucleasa Cas es capaz de introducir una interrupción de la cadena doble en el sitio objetivo genómico. Reivindicación 35: Un método para producir una planta mutante epsps, el método comprende: a) proporcionar un ARN guía, una plantilla de modificación del polinucleótido y al menos una endonucleasa Cas a una célula vegetal, en donde la endonucleasa Cas introduce una interrupción de la cadena doble en un sitio objetivo dentro de una secuencia genómica epsps en el genoma de la planta, en donde la plantilla de modificación del polinucleótido comprende al menos una modificación de nucleótidos de la secuencia genómica epsps; b) obtener una planta a partir de la célula vegetal de (a); c) evaluar la planta de (b) para la presencia de la al menos una modificación de nucleótidos; y, d) analizar una planta progenie de (c) que esté vacía del ARN guía y endonucleasa Cas. Reivindicación 41: La planta o célula vegetal de la reivindicación 37, en donde la célula vegetal muestra resistencia a glifosato. Reivindicación 47: Una planta que comprende al menos un sitio objetivo alterado, en donde el al menos un sitio objetivo alterado se originó de un sitio objetivo correspondiente que se reconoció y se escindió por un sistema de ARN guía / endonucleasa Cas, y en donde el al menos un sitio objetivo alterado está en una región genómica de interés que se extiende desde la secuencia objetivo que se expone en la sec. con num. de ident.: 229 en el sitio objetivo que se expone en la sec. con num. de ident.: 235. Reivindicación 50: La planta de la reivindicación 47, en donde la planta comprende al menos dos sitios objetivo alterados, en donde cada uno de los sitios objetivo alterados se originó a partir del sitio objetivo correspondiente que se reconoció y se clivó por un sistema de ARN guía / endonucleasa Cas, en donde el sitio objetivo correspondiente se selecciona del grupo que consiste en sec. con núms. de ident.: 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235 y 236.