Patent ES-2620261-T3 (ES)
Title: Uso de células humanas de origen leucémico mieloide para expresión de anticuerpos
Inventor: GOLETZ STEFFEN
IPC: C07K16/28
Filed: 2007-09-10
Granted: 2017-06-28
Abstract: Un método para seleccionar una célula huésped para producir una composición de proteína que tiene al menos una de las siguientes características de glicosilación: (i) tiene una cantidad de estructuras G2 en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de dichas moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que es al menos 5% más alta en comparación con la misma cantidad de moléculas de proteína en al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC Nº CRL-9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma; y/o (ii) comprende más que 35% de estructuras G2 presentes en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de las moléculas de proteína en dicha composición de proteína; y/o (iii) tiene una cantidad de estructuras G0 en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de dichas moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que es al menos 5% más baja en comparación con la misma cantidad de moléculas de proteína en al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC No. CRL-9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma; y/o (iv) comprende menos que 22% de estructuras G0 presentes en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de las moléculas de proteína en dicha composición de proteína; y/o (v) comprende una cantidad de fucosa en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de dichas moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que es al menos 5% menos en comparación con la misma cantidad de moléculas de proteína en al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC No. CRL-9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma; y/o (vi) comprende al menos 2% de estructuras de carbohidrato de las unidades carbohidrato totales o de al menos una cadena de carbohidrato particular en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de las moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que contiene GlcNAc bisectora; y/o (vii) tiene un patrón de sialilación que está alterado en comparación con el patrón de sialilación de al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC No. CRL-9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma, en donde - tiene un grado de sialilación aumentado, con una cantidad de NeuNAc en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de las moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que es al menos 15% más alta en comparación con la misma cantidad de moléculas de proteína en al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC Nº CRL- 9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma; o - tiene un grado de sialilación disminuido, con una cantidad de NeuNAc en las estructuras de carbohidrato totales o en las estructuras de carbohidrato en un sitio de glicosilación particular de la molécula de proteína de las moléculas de proteína en dicha composición molecular de proteína que es al menos 15% más baja en comparación con la misma cantidad de moléculas de proteína en al menos una composición molecular de proteína de la misma molécula de proteína aislada de ATCC Nº CRL- 9096 (CHOdhfr-) cuando se expresa en la misma; mediante las siguientes etapas (a) introducir en al menos dos células huésped diferentes que proporcionan un patrón de glicosilación divergente al menos un ácido nucleico que codifica una proteína o al menos una parte de la misma; en donde al menos una de dichas células huésped es una célula sanguínea humana inmortalizada seleccionada del grupo que consiste en las líneas celulares DSM ACC2858 (GT-2X), DSM ACC2806 (NM-H9D8), DSM ACC2807 (NM-H9D8-E6), DSM ACC2856 (NM-H9D8-E6Q12) o una célula o línea celular derivada de las mismas; y (b) cultivar dichas al menos dos células huésped diferentes, en donde cada célula huésped diferente produce una composición de proteína que tiene un patrón de glicosilación divergente del patrón de glicosilación producido por la otra célula huésped; (c) aislar dichas composiciones de proteína expresadas que llevan un patrón de glicosilación diferente de las al menos dos células huésped diferentes; y (d) seleccionar dicha célula huésped que produce una composición de proteína que tiene al menos una de las características de glicosilación definidas en (i) a (vii).