Patent ES-2613805-T3 (ES)
Title: Composición de bacillus resistente a la bilis
Inventor: KNAP INGE
IPC: C12N1/20
Filed: 2009-12-16
Granted: 2017-05-26
Abstract: Composición de Bacillus subtilis, que comprende de 105 a 1012 CFU/g de células de espora de Bacillus subtilis, donde la composición de Bacillus subtilis se caracteriza por el hecho de que: (i): las esporas de Bacillus subtilis tienen una germinación y crecimiento rápidos de espora a célula vegetativa en presencia de un medio de sal de bilis que comprende 4 mM de sales de bilis y en presencia de un medio de sal de bilis que comprende 6 mM de sales de bilis, definido por el hecho de que las esporas de Bacillus subtilis alcanzan un punto de crecimiento de célula vegetativa de 0,4 OD630 dentro de menos de 18 y 19 horas, respectivamente, donde el punto de crecimiento de célula vegetativa es el punto en la curva de crecimiento donde el valor OD comienza a aumentar (debido a crecimiento de las células vegetativas) en un cierto sentido continuo y alcanza un OD630 de 0,4; (I): donde el medio de sal de bilis es el medio de Caldo de Infusión de Ternero no selectivo (VIB) del ejemplo 1 aquí suplementado con una mezcla de sal de bilis que comprende el taurodesoxicolato de sales de bilis conjugadas y glicodeoxicolato y el deoxicolato de sal de bilis desconjugada en las proporciones 60 % del taurodesoxicolato, 30 % del glicodeoxicolato y 10 % de deoxicolato; y (II): donde el análisis de ensayo OD se realiza por los pasos siguientes: (a): rellenar un pocillo en una placa de microtitulación con 0,150 ml medio de sal de bilis con 108 esporas de Bacillus subtilis por ml medio (es decir, este es tiempo cero); y (b): incubar la placa a 37 °C bajo condiciones atmosféricas y medir los valores OD630, utilizando un espectrofotómetro y con agitación antes cada lectura, para obtener una curva de crecimiento representativa a lo largo del tiempo; y (ii) las células vegetativas de Bacillus subtilis producen una enzima o un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en fenilalanina, valina, treonina, triptófano, isoleucina, metionina, leucina, lisina, cisteína, tirosina, histidina y arginina; y con la condición de que las células vegetativas de Bacillus subtilis no son células, como se describe en la reivindicación 1 de PCT/EP2008/057296 y la solicitud de prioridad de esta, EP07111 939.0, publicada como EP2011858A1, donde las células vegetativas de bacillus del punto (ii) según la reivindicación 1 de PCT/EP2008/057296 y EP2011858 A1 producen fitasa en una cantidad de al menos 1,25 veces más de la célula de Bacillus de referencia DSM 19467, donde la cantidad de fitasa producida se mide por el ensayo de fitasa del ejemplo 2 de PCT/EP2008/057296 y EP2011858A1 después de 4 horas de crecimiento a 37 °C en el medio de Caldo de Infusión de Corazón (HIB) no selectivo del ejemplo 2 de PCT/EP2008/057296 y EP2011858A1, y donde el análisis de ensayo de fitasa se realiza por los pasos siguientes: (a): hacer un cultivo de células vegetativas de bacillus durante toda la noche en un medio de cultivo enriquecido; y (b): transferir un 1 % de inóculo del cultivo a un medio HIB (es decir, este es tiempo cero) durante toda la noche e incubar a 37 °C hasta la medición de actividad de fitasa.