Patent ES-2721652-T3 (ES)
Title: Método para preparar un material de matriz de tejido descelularizado animal y un material de matriz de tejido descelularizado preparado mediante el mismo
Inventor: LIU ZHIGANG
IPC: A61L27/36
Filed: 2014-05-29
Granted: 2019-08-02
Abstract: Un método para fabricar un material de matriz de tejido acelular animal, que comprende las etas de: (1) recoger una materia prima de un tejido animal, en el que el tejido animal se lava para eliminar la sangre y la suciedad, y se corta en un material tisular que tienen una longitud, una anchura y una altura de la especificación y dimensión deseadas, y después el material tisular se conserva a una baja temperatura; (2) descongelar lentamente y rehidratar el material tisular en una solución salina normal que contiene gentamicina; (3) desinfectar y esterilizar el material tisular en una solución alcalina moderada, en el que la solución alcalina moderada usada es una solución de bicarbonato de sodio o hidróxido de sodio con un pH de 10,5 a 11,5 o una solución de hidróxido de amoniaco con una concentración de un 0,1 %, siendo el método de desinfección y esterilización el empapamiento del material tisular rehidratado en la solución alcalina moderada durante 24 horas hasta 48 horas con agitación lentamente, en el que el material tisular entonces se aclara con agua pura estéril, y el pH del material tisular se ajusta para que sea neutro; (4) descelularizar y lavar el material tisular, en el que el método de descelularización es aclarar el material tisular desinfectado y esterilizado y aclarado en una solución salina normal que contiene 2,0 mmol/l de cloruro de calcio, 2,0 mmol/l de cloruro de magnesio y 100 mg/l de gentamicina a temperatura ambiente durante 1~3 horas, y después añadir una solución de dispasa para eliminar las células, siendo la solución de dispasa una solución de dispasa neutra que contiene de 1 mmol/l a 20 mmol/l de cloruro de calcio, de 1 mmol/l a 20 mmol/l de cloruro de magnesio y de 50 unidades/litro a 400 unidades/litro de dispasa, y siendo el método para eliminar las células con la solución de dispasa el empapamiento del material tisular en la solución de dispasa neutra a 37 °C durante 24 horas hasta 36 horas con agitación lentamente; en el que el lavado comprende lavar con un primer detergente y/o lavar con un segundo detergente, preparándose la primera solución de detergente disolviendo Triton X-100 a una concentración de 0,5 %, en una solución de tampón de ácido hidroxietilpiperazinaetanosulfónico con un pH entre 7,0 y 8,0 y siendo el método de lavado el empapamiento del material tisular en la primera solución de detergente a 37 °C durante 12 horas hasta 18 horas con agitación lentamente; y preparándose la segunda solución de detergente disolviendo desoxicolato de sodio a una concentración de un 1,0 %, en solución de tampón fosfato con un pH entre 7,2 y 7,8, y siendo el método de lavado el empapamiento del material tisular en la segunda solución de detergente a temperatura ambiente durante 24 horas hasta 36 horas con agitación lentamente; (5) digerir los componentes de ADN del tejido animal, en el que el tejido animal entonces se aclara con una solución salina normal; (6) digerir un antígeno de resto de α-1,3-galactosa, es decir, antígeno α-Gal del tejido animal, en el que el tejido animal entonces se aclara con una alta concentración de una solución de cloruro de sodio, y se aclara con una solución salina normal, en el que, cuando se selecciona la materia prima del tejido animal que se ha mejorado por genomanipulación y no tiene antígeno α-Gal, la etapa (6) se omite y la etapa (7) se realiza directamente; (7) inactivar los virus en el material tisular y después aclarar el material tisular, en el que el tejido animal se aclara con una solución de tampón fosfato; (8) envasar y precintar el material tisular en condiciones asépticas; (9) tratamiento de esterilización final del material tisular, para obtener el material de matriz de tejido acelular animal. en el que se usa un método enzimático para eliminar los componentes celulares y el antígeno α-Gal y mejorar la flexibilidad de un armazón.