Patent AR-106063-A1 (AR)
Title: Expresión de proteínas recombinantes en pupas de trichoplusia ni
Inventor: MIGUEL CID FERNANDEZ
IPC: C12P21/02
Filed: 2016-09-19
Abstract: Reivindicación 1: Una pupa que comprende un baculovirus recombinante y/o un bácmido derivado de Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), donde la pupa pertenece al género Trichoplusia, Rachiplusia, Spodoptera, Heliothis o Helicoverpa. Reivindicación 2: La pupa de acuerdo con la reivindicación 1, donde el baculovirus y/o bácmido comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína recombinante, donde la proteína recombinante preferentemente se selecciona del grupo que consiste en vacunas de subunidades monoméricas, vacunas de subunidades multiméricas, partículas similares a virus, proteínas terapéuticas, anticuerpo, enzima, citoquina, factor de coagulación, anticoagulante, receptor, hormona, reactivos proteicos de diagnostico y proteína verde fluorescente (GFP), y/o donde la proteína recombinante preferentemente no es una proteína endógenamente producida por pupas. Reivindicación 4: Una pupa que comprende una secuencia de ácido nucleico que permite la expresión por encima de niveles endógenos de las proteínas IE-1, IE-0 y/o fragmentos de las mismas funcionando como reguladores transcripcionales por encima de niveles endógenos obtenidos durante la infección por baculovirus y una región homóloga recombinante (hr) operativamente unida a cualquier promotor que sea adecuado para dirigir la expresión de una proteína recombinante, donde preferentemente la pupa pertenece al género Trichoplusia, Rachiplusia, Spodoptera, Heliothis, o Helicoverpa, más preferentemente a la especie Trichoplusia ni, Spodoptera frugiperda, Spodoptera litoralis, Helicoverpa zea, Heliothis virescens o Rachiplusia nu, donde la secuencia de ácido nucleico que permite la expresión de las proteínas IE-1, IE-0 y/o fragmentos derivados de las mismas es seleccionada del grupo que consiste en: (a) un ácido nucleico conteniendo la secuencia nucleotídica indicada en cualquiera de SEQ ID Nº 1 - 5; (b) una secuencia de ácido nucleico que tenga una similitud de secuencia de al menos el 70%, preferentemente de al menos un 75%, más preferentemente de al menos un 80%, más preferentemente de al menos un 85%, más preferentemente de al menos un 90% y más preferentemente de al menos un 95% con la secuencia nucleotídica indicada en cualquiera de SEQ ID Nº 1 - 5 y codificando una proteína capaz de funcionar como regulador transcripcional en un baculovirus recombinante; (c) una secuencia de ácido nucleico codificando una amino ácido conteniendo la secuencia amino acídica indicada en cualquiera de SEQ ID Nº 6 - 9; y (d) una secuencia de ácido nucleico codificando una secuencia de amino ácidos que tenga una similitud de secuencia de al menos el 70%, preferentemente de al menos un 75%, más preferentemente de al menos un 80%, más preferentemente de al menos un 85%, más preferentemente de al menos un 90% y más preferentemente de al menos un 95% con la secuencia nucleotídica indicada en cualquiera de SEQ ID Nº 6 - 9 y capaz de funcionar como regulador transcripcional en un baculovirus recombinante. Reivindicación 14: Un método para la producción de un baculovirus recombinante que comprende los pasos de: (a) proveer una pupa, preferentemente una pupa libre de seda perteneciente al género Trichoplusia, Rachiplusia, Spodoptera, Heliothis o Helicoverpa, preferentemente a la especie Trichoplusia ni, Spodoptera frugiperda, Spodoptera litoralis, Helicoverpa zea, Heliothis virescens o Rachiplusia nu; (b) transfectar la pupa del paso (a) con un bácmido susceptible de producir un baculovirus recombinante derivado de Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus (AcMNPV); (c) incubar la pupa inoculada del paso (b) por un período de tiempo suficiente para la producción del baculovirus recombinante; (d) obtener pupas que comprenden el baculovirus recombinante; (e) opcionalmente, recoger el baculovirus recombinante; y (f) opcionalmente, purificar el baculovirus recombinante. Reivindicación 17: Un aparato que comprende una bomba de precisión, un brazo mecánico móvil y una aguja (desmontable) adecuada para la inyección de un fluido dentro de una pupa perteneciente al género Trichoplusia, Rachiplusia, Spodoptera, Heliothis o Helicoverpa, preferentemente a la especie Trichoplusia ni, Spodoptera frugiperda, Spodoptera litoralis, Helicoverpa zea, Heliothis virescens o Rachiplusia nu, donde preferentemente la pupa está dispuesta en una matriz o array.