Patent EP-1194165-A1 (EP)
Inventor: HEFFRON FRED L
IPC: C12Q1/689
Filed: 2000-05-26
Abstract: L'invention concerne un élément transposable présentant une extrémité 3' et une extrémité 5'. L'élément transposable comprend un site 5' de recombinaison en 5' d'une séquence d'acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, un site 3' de recombinaison en 3' de la séquence d'acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, une séquence d'acide nucléique codant un épitope du CMH en 5' par rapport au site de recombinaison 5' ou en 3' par rapport au site de recombinaison 3', ainsi qu'une extrémité d'insertion contenant une séquence à répétition inversée suffisante à l'intégration de l'élément transposable à l'extrémité 5' et à l'extrémité 3' de l'élément transposable. Dans un mode de réalisation, un élément transposable est prévu lequel présente une extrémité 5' ainsi qu'une extrémité 3'. L'élément transposable contient une séquence loxP5' en 5' d'un acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, une séquence loxP3' en 3' d'un acide nucléique codant le marqueur sélectionnable, un épitope du CMH en 5' par rapport aux séquences loxP5' ou en 3' de la séquence loxP3', une extrémité d'insertion à l'extrémité 5' de l'élément transposable, ainsi qu'une extrémité d'insertion en 3' de l'élément transposable. L'invention concerne également une méthode de détection d'un épitope antigénique d'un agent pathogène par infection d'une cellule pathogène avec un élément transposable de l'invention, dans laquelle l'infection a pour résultat l'intégration de l'élément transposable dans une séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne, transformation de la cellule pathogène avec un vecteur contenant une transposase, contact d'une cellule eucaryote pouvant internaliser la cellule pathogène avec la cellule pathogène infectée par l'élément transposable, contact de la cellule eucaryote avec un partenaire de liaison spécifique reconnaissant l'épitope du CMH, identification des cellules eucaryotes marquées et externalisation de la cellule bactérienne. La cellule bactérienne externalisée peut être développée afin de produire une population de cellules bactériennes, et la séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne présentant l'élément transposable intégré est identifiée. Cette séquence d'acide nucléique code l'élément antigénique de l'agent pathogène. L'invention concerne également une méthode de production d'un vaccin porteur par infection d'une cellule bactérienne avec l'élément transposable de l'invention, dans laquelle l'élément transposable contient également un antigène associé à une maladie liée fonctionnellement à l'épitope du CMH de l'élément transposable. L'infection de la bactérie a pour résultat l'intégration de l'élément transposable dans une séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne. La cellule pathogène est alors internalisée dans une cellule eucaryote et la cellule eucaryote est exposée à un agent de liaison spécifique reconnaissant l'épitope du CMH, les cellules eucaryotes marquées d'identification sont identifiées et lysées afin d'externaliser la cellule bactérienne, laquelle est mise en culture pour produire une population de cellules bactériennes. La séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne présentant l'élément transposable intégré est identifiée, dans laquelle la séquence d'acide nucléique code l'élément antigénique de l'agent pathogène. La cellule bactérienne en développement est identifiée et peut être utilisée comme vaccin porteur.