Patent AR-066167-A1 (AR)
Title: Metodo para amplificar acidos nucleicos ( pcr ) para identificar un polimorfismo o mutacion
Filed: 2008-09-19
Abstract: Reivindicacion 1: Un método para detectar un polimorfismo o una mutacion en un ácido nucleico, caracterizado porque dicho método comprende: (i) conducir una reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) bajo condiciones suficientes como para amplificar un templado de ácido nucleico que comprende un polimorfismo o una mutacion con uno o más juegos de primeros cebadores, produciendo así un primer producto de amplificacion, donde dichos uno o más juegos de primeros cebadores capaces de alinearse selectivamente con templado de ácido nucleico comprenden un polimorfismo o una mutacion a una primera temperatura; (ii) conducir una PCR bajo condiciones suficientes como para amplificar el primer producto de amplificacion con uno o más segundos cebadores o juegos de segundos cebadores y/o con uno o más de los cebadores del juego de primeros cebadores, produciendo así un segundo producto de amplificacion que comprende una secuencia complementaria de la region específica del alelo y la region de marca, donde dichos uno o más segundos cebadores comprenden una region específica del alelo capaz de alinearse con el templado de ácido nucleico y/o el primer producto de amplificacion y una region de marca que no se alinea con el templado de ácido nucleico, en donde dicha region específica del alelo tiene una temperatura de fusion (Tm) menor que el primer cebador y no puede alinearse selectivamente al templado de ácido nucleico o al primer producto de amplificacion a la primera temperatura y en donde el segundo cebador es capaz de alinearse selectivamente a un ácido nucleico que comprende una secuencia complementaria de la region específica del alelo y la region de marca a una temperatura aproximadamente igual a la primera temperatura, en donde dichas condiciones comprenden una temperatura de alineacion adecuada para la alineacion de la region específica del alelo de dicho uno o más segundos cebadores o uno o más juegos de segundos cebadores con el primer producto de amplificacion y/o el templado de ácido nucleico y para la alineacion del primer juego de cebadores con el primer producto de amplificacion y/o el templado de ácido nucleico; (iii) conducir una PCR bajo condiciones suficientes como para amplificar el segundo producto de amplificacion para producir uno o más terceros productos de amplificacion, donde dichas condiciones comprenden una temperatura de alineacion adecuada para la alineacion de uno o más segundos cebadores o uno o más juegos de segundos cebadores con el segundo producto de amplificacion y para la alineacion de uno o más cebadores del juego de primeros cebadores con el segundo producto de amplificacion pero no para la alineacion de la region específica del alelo de uno o más segundos cebadores o uno o más juegos de segundos cebadores, para alinearse selectivamente con el primer producto de amplificacion a un nivel detectable, en donde el o los terceros productos de amplificacion son amplificados con el o los juegos de segundos cebadores y/o un segundo cebador y un primer cebador; y (iv) detectar el o los terceros productos de amplificacion con un medio de deteccion, en donde la deteccion de dichos uno o más terceros productos de amplificacion es indicativo del polimorfismo o de la mutacion. Reivindicacion 30: El proceso de la reivindicacion 29, caracterizado porque el agente infeccioso es un virus, una bacteria, un hongo, un protista, un protozoario o un parásito. Reivindicacion 32: El proceso de la reivindicacion 31, caracterizado porque el polimorfismo o la mutacion es un gen de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) humano. Reivindicacion 33: El proceso de acuerdo con la reivindicacion 31, caracterizado porque el polimorfismo o la mutacion se encuentra en un gen vegetal asociado con la resistencia de una planta a sequías, heladas, enfermedades o una plaga, o un gen vegetal asociado con la brotacion precosecha o la calidad nutricional de los granos.