Patent BR-112015005549-A2 (BR)
Title: anticorpos específicos polipeptídicos amiloides de ilhota humanos (hiapp) e suas utilizações
Inventor: CHEN FENG PH D
IPC: A61K39/395
Filed: 2013-09-12
Abstract: [0001] O presente invento faz uso da resposta imunológica especifica de MAPP de seres humanos saudáveis para promover o isolamento de anticorpos naturais monodonais humanos específicos anti-hIAPP. Em particular, experimentos realizados em conformidade com o presente invento foram bem sucedidos no isolamento de anticorpos monoclonais de hjAPP e/ou específicos de proIAPP de um grupo de seres humanos saudáveis ou de grupos de pacientes obesos e de outros grupos de pacientes com risco ampliado de desenvolver DT2, que no momento do isolamento do anticorpo não exibiram sinais de DT2.
[0002] O presente invento é, portanto, direcionado a anticorpos humanos, fragmentos de ligação ao antígeno e moléculas semelhantes de ligação ao antígeno que são capazes de reconhecer especificamente IAPP e/ou proIAPP. Salvo por indicação em contrário, os trechos "reconhecer espycifieamente IAPP e/ou proIAPP", "anticorpo específico de/para IAPP e/ou prolAPP" e "anticorpo anti-TAPP e/ou anti-proIAPP" significam especiticamente, em geral e coletivamente, anticorpos para a forma monomérica nativa de IAPP; anticorpos para a forma precursora proIAPP dè ÍAPP; anticorpos que se ligam especificamente a uma das duas formas, IAPP e proIAPP; anticorpos que se ligam a espécies agregadas, oligoméricas, fibrilares e/ou não fibrilares de IAPP e/ou proIAPP. São aqui fornecidos anticorpos humanos seletivos para formas agregadas e/ou integrais, como por exemplo, formas agregadas oligoméricas, fibrilares e não fibrilares de IAPP e/ou proIAPP.  
[0003] Em uma concretização de particular preferência do presente invento, o anticorpo humano ou seu fragmento de ligação ao antígeno demonstra as características de ligação imunológica de um anticorpo caracterizado pelas regiões variáveis VH e/ou VL, conforme exposto nas Fig. 1 ou Fig. 2.
[0004] O fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo pode ser uni fragmento Fv de cadeia simples, um fragmento F(ab'), um fragmento F(ab) e um fragmento F(ab')2, ou qualquer outro fragmento de ligação ao antígeno. Em uma concretização específica, infra, o anticorpo ou seu fragmento, é um anticorpo humano de isotipo IgG. Como alternativa, o anticorpo é um anticorpo quimérico roedor-humano ou roedorizado, como por exemplo, o anticorpo murino ou murinizado, de rato ou ratinizado, com as versões de roedores sendo particularmente úteis para métodos de diagnóstico e estudos em animais.
[0005] Além disso, o presente invento é relacionado a composições que compreendem o anticorpo do presente invento ou seus fragmentos ativos e a métodos imunoterapêuticos e imunodiagnósticos que utilizam essas composições para a prevenção, o diagnóstico ou o tratamento de transtornos relacionados com IAPP, como por exemplo, DT2, em que uma quantidade . eficaz da composição é administrada a um paciente que necessite dela. 
[0006] Naturalmente, o presente invento estende-se aos linfócitos B de memória humanos imortalizados e à célula B, respectivamente, que produz o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno e que possui as características distintas e únicas, conforme exposto abaixo. 
[0007] O presente invento também é relacionado a polinucleotídeos que codificam pelo menos uma região variável de uma cadeia de imunoglobulina do anticorpo do invento. De preferência, essa região variável compreende peio menos uma região determinante de complementaridade (CDR) do VH e/ou VL da região variável, conforme exposto na Fig. 1 ou na Fig. 2. 
[0008] Por conseguinte, o presente invento também engloba vetores que compreendem esses poIinucleotídeos e células hospedeiras transformadas com eles, bem como sua utilização na produção de um anticorpo e de moléculas de ligação equivalentes, que são específicas para IAPP e/ou proIAPP. Meios e métodos para a produção recombinante de anticorpos e simulações dos mesmos, bem como métodos de triagem de moléculas de ligação concorrentes, que podem ou não ser anticorpos, são conhecidos na arte. No entanto, tal como aqui descrito, em particular no que diz respeito a aplicações terapêuticas em humanos, o anticorpo do presente .invento é uni anticorpo humano, no sentido de que a aplicação do referido anticorpo é substancialmente livre de uma resposta imunológica direcionada contra esse anticorpo, observado de outra forma para anticorpos quiméricos e até humanizados. 
[0009] Além disso, descrevemos aqui composições e métodos que podem ser utilizados para identificar IAPP e/ou proIAPP em amostras e/ou in vivo. Os anticorpos anti-IAPP e/ou proIAPP descritos ou seus fragmentos de ligação de IAPP e/ou proIAPP podem ser utilizados para triagem, em humanos, de sangue, piasma, soro, saliva, fluido peritoneal, líquido cefalorraquidiano ("LCR") e urina em busca da presença de ÍAPP e/ou prolAPP em amostras, por exemplo, utilizando ensaios adaptados à superfície ou baseados em ELISA. Em uma concretização, o presente invento é relacionado a um método de diagnóstico ou monitoramento da progressão de um transtorno relacionado a IAPP e/ou proIAPP em um individuo, o método que compreende a determinação da . presença de oligômeros, agregados ou fibrilas de LAPP e/ou proIAPP em uma amostra proveniente do indivíduo que será diagnosticado com, pelo menos, um anticorpo do presente invento ou de uma molécula de ligação de IAPP e/ou proIAPP que possui substancialmente as mesmas especificidades de ligação de qualquer um deles, em que a presença de oligômeros, agregados ou fibrilas de IAPP e/ou proIAPP seja indicativa do transtorno.  
[0010] Além disso, em uma concretização do presente invento, os anticorpos anti-IAPP e/ou proiAPP descritos ou seus fragmentos de ligação de IAPP e/ou proLAPP, e/ou moléculas de ligação de IAPP e/ou proIAPP compreendendo pelo menos um CDR de um anticorpo do presente invento são fornecidos para a preparação de uma composição para detecção in vivo (também chamada imageamento in vivo) de ou almejando um agente terapêutico e/ou de diagnóstico para IAPP e/ou projAPP no corpo humano ou animal. Os métodos e composições descritos no presente instrumento podem auxiliar em transtornos relacionados ao IAPP e caracterizados, por exemplo, pela ocorrência de formas agregadas oligoméricas, fibrilares e não fibrilares de IAPP e/ou proIAPP, como em um diagnóstico de DT2, por exemplo, e podem ser utilizados para monitorar a progressão da doença e a eficácia terapêutica do tratamento realizado no individuo, por exemplo, em métodos de diagnóstico relacionados ao imageamento in vivo. Portanto, em uma concretização, a molécula de ligação de IAPP e/ou proIAPP do presente invento é fornecida, em que a supracitada detecção in vivo (imageamento) compreenda tomografia por emissão de pósitrons (PET), tomografia por emissão de fóton único'(SPELT), imageamento ótico por espectrometria de infravermelho próximo (NIR) ou ressonância magnética (MRI). 
[0011] Por isso, é um objetivo particular do presente invento proporcionar métodos para o tratamento, o diagnóstico ou a prevenção de uma doença relacionada ao IAPP e/ou proIAPP agregado e/ou oligomérico, fibrilar e/ou não fibrilar, como por exemplo, Diabetes Tipo 2 (DT2). Os métodos compreendem a administração de uma concentração eficaz de um anticorpo humano ou de um anticorpo derivado para um individuo em que o anticorpo ataque IAPP e/ou prolAPP. 
[0012] Em um outro aspecto, o presente invento proporciona um peptídeo com um epítopo de IAPP e/ou proIAPP reconhecido especificamente por um anticorpo do presente invento. Esse peptídeo compreende ou é composto por uma sequência de aminoácidos, conforme indicado abaixo na descrição detalhada e nos exemplos, ou por uma sequência modificada do mesmo, em que  um ou mais aminoácidos são substituídos, eliminados e/ou adicionados. Além disso, o presente invento proporciona um método de diagnosticar DT2 ou o risco de desenvolver DT2 em um individuo, compreendendo uma etapa de determinação da presença de um anticorpo que se liga ao referido peptídeo em uma amostra biológica desse indivíduo. 
[0013] Outras concretizações do presente invento ficam evidentes na descrição e nos Exemplos que se seguem.