Patent RU-2677972-C1 (RU)
Title: Способ оценки антимикобактериального действия противотуберкулезных препаратов с использованием биологического материала пациентов, больных туберкулезом легких
Inventor: UFIMTSEVA ELENA GENNADEVNA
IPC: C12N5/071
Filed: 2017-12-25
Granted: 2019-01-22
Abstract: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ оценки антимикобактериального действия противотуберкулезных препаратов с использованием биологического материала пациентов, больных туберкулезом легких, включающий забор биологического материала, культивирование в питательной среде, ее замену на свежую питательную среду в контрольной культуре и на такую же питательную среду в опытной культуре, дополнительно содержащую противотуберкулезный препарат, сопоставление роста микобактерий туберкулеза в контрольной и опытной культурах, где в качестве биологического материала используют образцы ткани легкого из операционного материала; получают из него ex vivo культуру альвеолярных макрофагов; культивируют ее в течение 1 суток в питательной среде; заменяют питательную среду на свежую в контрольной культуре клеток и на такую же среду с добавлением противотуберкулезного препарата в опытных культурах клеток, различающихся концентрациями одного и того же противотуберкулезного препарата; продолжают культивирование в течение трех дней; фиксируют клетки на покровных стеклах; окрашивают по методу Циля-Нильсена; проводят цитологический анализ на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги; определяют доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, от общего числа альвеолярных макрофагов в контрольной и опытной культурах клеток; при отсутствии признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги в опытной культуре, отсутствии микобактерий в альвеолярных макрофагах или снижении доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, в 2 и более раз в опытной культуре относительно контрольной делают положительное заключение об антимикобактериальном действии противотуберкулезного препарата и его минимальной концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального эффекта, и при проведении цитологического анализа на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги учитывают наличие ядра с признаками конденсации хроматина, и/или отсутствие целостности плазматической мембраны, и/или образование апоптозных телец, и/или разрушение клеток до отдельных участков цитоплазмы, и/или появление клеток без ядер; при наличии по меньшей мере одного из них делают заключение о наличии признаков цитотоксического воздействия. Изобретение позволяет сократить срок осуществления способа до 4 дней от момента получения биологического материала, обеспечение условий для оценки действия противотуберкулезных препаратов на микобактерии туберкулеза, находящиеся в альвеолярных макрофагах из операционного материала легких пациента, определение противотуберкулезного препарата и его концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального действия на микобактерии пациента при отсутствии цитотоксического эффекта на альвеолярные макрофаги. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 7 пр.