Patent AR-091025-A1 (AR)
Title: Variantes de hppd (hidroxifenilpiruvato dioxigenasa) y procedimientos de uso
Inventor: FABIEN DR POREE
IPC: C12P21/02
Filed: 2013-05-10
Abstract: Reivindicación 1: Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de HPPD mutada, en donde dicha proteína de HPPD mutada tiene actividad de HPPD y en donde, en dicha proteína de HPPD mutada, al menos un aminoácido fue reemplazado de modo tal que la secuencia de aminoácidos resultante comprende al menos un aminoácido seleccionado de: a) Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Gln, Arg, Ser, Thr, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 250 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; b) Ala, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 251 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; c) Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 252 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; d) Ala, Phe, His, Gln, Val o Trp en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 253 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; e) Leu o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 265 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; f) Leu, Gln, Arg, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 268 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; g) Ala, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 269 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; h) Ala, Ile, Asn, Pro, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 280 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; i) Leu, Gln o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 293 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; j) Ile o Met en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 294 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; k) Gln en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 307 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; l) Ile, Met o Asn en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 335 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; m) Leu en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 368 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; n) Phe o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 381 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; o) Phe o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 392 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; p) Phe o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 419 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; q) Asp, Lys o Asn en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 421 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; r) Ala, Gly, Met, Pro o Thr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 422 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; s) Ala, Phe, Ile o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 424 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; t) Ile, Pro, Arg o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 425 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; u) Glu, Phe, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 426 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; v) Ile, Met, Gln o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 431 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; y w) al menos una deleción o sustitución de un aminoácido en cualquiera de las posiciones 228, 248, 270, 271, 379 y/o 427. Reivindicación 24: Una proteína codificada por el ácido nucleico aislado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23. Reivindicación 25: Un gen quimérico que comprende una secuencia codificadora que comprende el ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 operativamente ligado a un promotor que se puede expresar en plantas y opcionalmente una región de terminación de la transcripción y poliadenilación. Reivindicación 26: Un procedimiento de obtención de una proteína de HPPD mutada capaz de modular la tolerancia de una planta a al menos un herbicida que actúa sobre HPPD, en donde dicha proteína de HPPD mutada tiene actividad de HPPD, comprendiendo el procedimiento i) proporcionar una proteína de HPPD; ii) sustituir al menos un aminoácido en dicha proteína de HPPD de modo tal que la secuencia de aminoácidos resultante comprenda al menos una seleccionada de a) Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Lys, Gln, Arg, Ser, Thr, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 250 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; b) Ala, Asp, Glu, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Arg o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 251 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; c) Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 252 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; d) Ala, Phe, His, Gln, Val o Trp en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 253 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; e) Leu o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 265 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; f) Leu, Gln, Arg, Val o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 268 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; g) Ala, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 269 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; h) Ala, Ile, Asn, Pro, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 280 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; i) Leu, Gln o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 293 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; j) Ile o Met en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 294 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; k) Gln en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 307 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; l) Ile, Met o Asn en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 335 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; m) Leu en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 368 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; n) Phe o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 381 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; o) Phe o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 392 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; p) Phe o Tyr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 419 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; q) Asp, Phe, Lys, Asn en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 421 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; r) Ala, Gly, Met, Pro o Thr en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 422 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; s) Ala, Phe, Ile o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 424 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; t) Ile, Pro, Arg o Ser en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 425 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; u) Glu, Phe, Thr o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 426 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; v) Ile, Met, Gln o Val en una posición en una proteína de HPPD, donde dicha posición corresponde a la posición 431 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; y w) una deleción o sustitución de un aminoácido en al menos una posición en una proteína de HPPD, en donde dicha posición corresponde a al menos una de las posiciones 228, 248, 270, 271, 379 y 427 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 2; iii) determinar la inhibición de la proteína de HPPD resultante por al menos un herbicida que actúa sobre HPPD, en donde una inhibición de la proteína resultante de menos o más que la observada con una proteína de HPPD de referencia es indicativa de que la proteína resultante es capaz de modular la tolerancia de una planta a dicho herbicida. Reivindicación 29: Un procedimiento de producción de una planta transgénica que comprende introducir en dicha planta el ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 o un ácido nucleico que codifica la enzima de HPPD identificada por el procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, ambos operativamente ligados a un promotor expresable en plantas, o el gen quimérico de acuerdo con la reivindicación 25 y obtener su progenie que comprende dicho ácido nucleico operativamente ligado o dicho gen quimérico. Reivindicación 33: Una planta, parte suya o tejido vegetal que consist