Patent WO-9820041-A1 (WO)
Title: Expression specifique de l'endothelium regulee par des elements regulateurs du recepteur epcr
Inventor: ESMON CHARLES T
IPC: C12P21/02
Filed: 1997-11-07
Abstract: Le promoteur du gène EPCR (récepteur de protéines C de cellules endothéliales) a été isolé à la fois à partir de bibliothèques génomiques murines (numéro d'identification de séquence 1) et humaines (numéro d'identification de séquence 2). Il a été démontré que ce promoteur contient une région qui produit une expression sélective dans les cellules endothéliales, entre les positions -1 à -220 sur la base des positions par rapport à l'ATG codant le premier acide aminé de la protéine EPCR murine (nucléotides 3130 à 3350 de la séquence numéro d'identification 1), ainsi qu'une région qui produit sélectivement une expression dans des cellules endothéliales de gros vaisseaux, en opposition à toutes les cellules endothéliales, situées aux positions -700 à -1080 (nucléotides 2270 à 2840 de la séquence numéro d'identification 1). Un élément réagissant à la thrombine a été identifié dans le promoteur EPCR, aux positions -337 à -345 dans le promoteur murin (nucléotides 3007 à 3014 de la séquence numéro d'identification 1) et en position -360 à -368 (nucléotides 2722 à 2729 de la séquence numéro d'identification 2) dans le promoteur humain. Cette séquence est CCCACCCC (séquence numéro d'identification 3). Un élément réagissant au sérum a été identifié aux positions -280 à -350 (nucléotides 2990 à 3061 de la séquence numéro d'identification 1). On peut utiliser les séquences régulatrices présentes dans le promoteur EPCR en association avec des gènes codant d'autres protéines, ainsi que les oligonucléotides plus courts, pour accroître l'expression par exposition à la trombine ou au sérum ou pour obtenir une expression sélective dans des cellules endothéliales, généralement ou de préférence dans des cellules endothéliales de gros vaisseaux sanguins. Les éléments régulateurs de gènes contiennent des éléments réagissant à des stimuli du milieu ambiant (soit la trombine soit le sérum); ainsi que des informations pour déterminer la répartition de l'expression protéique désirée (dans les gros vaisseaux). Parmi les stratégies thérapeutiques, on trouve l'utilisation du promoteur minimal (-220 à -1) pour produire l'expression dans toutes les cellules endothéliales, par exemple pour tout type de thérapie génique dans laquelle une répartition systémique est désirée, l'utilisation d'un promoteur contenant un ou plusieurs éléments réagissant à des stimuli du milieu ambiant, déstinés à servir à l'administration d'agents dont l'expression doit être augmentée pendant les périodes d'activation de thrombine/plaquettes accrue ou lors d'un traumatisme local; l'utilisation du promoteur minimal contenant un élément réagissant à des stimuli du milieu ambiant ainsi que l'élément dirigeant l'expression vers l'endothélium de gros vaisseaux, où une réponse à un trauma local est désirable mais uniquement dans l'endothélium de gros vaisseaux, ainsi que l'utilisation du promoteur minimal et de l'élément dirigeant l'expression vers l'endothélium de gros vaisseaux, où l'expression est spécifiquement ciblée sur l'endothélium de gros vaisseaux mais n'est pas accrue en réponse à un stimulus particulier.