Patent EP-3902929-A1 (EP)
Inventor: AGEL HATICE ESRA
IPC: C12Q1/6853
Filed: 2019-12-25
Abstract: Chaque année, environ 94 millions de cas de gastro-entérite à Salmonella, provoquant 155'000 morts, sont rapportés et 85 % d'entre eux sont transmis par des aliments. L'objet de la présente invention est d'analyser des aliments afin de déterminer si ils sont libres de Salmonella; pouvoir obtenir une bonne sensibilité, une applicabilité facile, une absence de faux positifs et négatifs et un procédé rapide sont les caractéristiques recherchées dans le procédé d'analyse pour cette investigation. Il n'est pas souhaitable pour l'analyse de détecter la présence de bactéries mortes dans les aliments. Bien que le produit final ne contient pas de bactéries vivantes microbiologiquement dangereuses pendant le processus alimentaire, la détection de bactéries mortes transmises avant le processus amène le produit alimentaire à être diagnostiqué comme étant nocif. Pour éviter cette situation, les kits d'analyse, en fonction des procédés moléculaires, augmentent leurs niveau de détection de microorganismes jusqu'à 104, ce qui réduit leur sensibilité. Etant donné que les procédés moléculaires ne peuvent pas distinguer les organismes morts des vivants, un test de confirmation est nécessaire pour prouver que le résultat positif de l'analyse appartient aux bactéries vivantes dans l'aliment, ce qui entraîne un coût et une perte de temps supplémentaires. De la même manière, il est nécessaire de vérifier si les colonies qui croissent dans le procédé de culture standard de référence appartiennent à des bactéries Salmonella. Dans le système développé, 105 ADN bactériens morts sont éliminé dans l'aliment pour empêcher des faux positifs et la limite de détection minimale est de 10 bactéries. En outre, dans un système développé, 4 amorces spécifiques à 6 régions d'ADN sont utilisées. Par conséquent, la spécificité du procédé est très élevée (99,9 %) et aucun test de vérification n'est nécessaire. Etant donné que les systèmes de PCR nécessitent un dispositif avec des unités de régulation de température complexes, l'analyse doit être effectuée dans un laboratoire. Dans le système proposé, l'ADN est amplifié à température constante; aucun cycle de température n'est nécessaire, ce qui permet de ne pas nécessiter d'instrument complexe ni d'infrastructure de laboratoire. Toutes les procédures peuvent être facilement réalisées à l'extérieur du laboratoire sur un mini-dispositif de chauffage portable où un pré-enrichissement, un isolement d'ADN à partir des étapes d'échantillon et de PCR sont effectués. Pour des analyses moléculaires, le dispositif est nécessaire pour afficher le résultat de l'imagerie ou de l'analyse. Dans le procédé développé, les ADN amplifiés par le procédé d'amplification d'ADN isotherme à médiation par boucle, sont hybridés et combinés avec la sonde marquée et peuvent ensuite être lus par un procédé de flux latéral à l'oeil nu. Etant donné que les résultats sont visibles à l'oeil nu, aucun dispositif supplémentaire n'est nécessaire. Le procédé de culture classique est accepté comme standard de référence, mais la durée d'analyse est de 7 jours pour des échantillons positifs, 3 jours avec un test de vérification, pour les procédés moléculaires, et 5,5 heures comprenant le temps de pré-enrichissement dans le système développé.