Patent AR-122379-A1 (AR)
Title: Composiciones inmunogénicas y vacunas de covid-19 vectorizadas con sarampión
Inventor: ESCRIOU NICOLAS
IPC: C12N15/86
Filed: 2021-02-12
Abstract: La invención se relaciona con el campo de la inmunidad contra Coronavirus. Al respecto, la invención provee antígenos vectorizados derivados de Coronavirus que disparan una respuesta inmune contra Coronavirus. La invención correspondientemente se relaciona con un ingrediente activo, el cual es un virus de sarampión vivo atenuado que expresa antígeno(s) de Coronavirus, y con su uso para promover inmunidad, en particular inmunidad protectora contra la cepa SARS-CoV-2, y ventajosamente una inmunidad protectora de amplio espectro contra varias cepas de Coronavirus.  Reivindicación 1: Un constructo de ácido nucleico que comprende: (1) una molécula de ADNc que codifica una hebra de ARN (+) antigenómica de longitud completa de una cepa atenuada del virus de sarampión (VS); y (2) un primer polinucleótido heterólogo que codifica: (a) una proteína spike (S) de SARS-CoV-2 de la SEQ ID Nº 3, o (b) un fragmento inmunogénico de la proteína S de longitud completa en (a) seleccionado del grupo que consiste en el polipéptido S1 de la SEQ ID Nº 11, el polipéptido S2 de la SEQ ID Nº 13, el polipéptido Secto de la SEQ ID Nº 7 y el polipéptido tri-Secto de la SEQ ID Nº 16, o (c) una variante de (a) o (b) en la cual desde 1 a 10 aminoácidos están modificados por inserción, sustitución o deleción. Reivindicación 14: Un vector de transferencia para el rescate de un virus de Sarampión (VS) recombinante, que comprende el constructo de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13. Reivindicación 15: Un vector de transferencia que comprende una secuencia que codifica un polipéptido de SARS-CoV-2 que está seleccionado del grupo que consiste en: i. SEQ ID Nº 1 ó 2 ó 36 (constructo S), ii. SEQ ID Nº 4 (constructo stab-S), iii. SEQ ID Nº 6 (constructo Secto), iv. SED ID Nº 8 (constructo stab-Secto), v. SEQ ID Nº 10 (constructo S1), vi. SEQ ID Nº 12 (constructo S2), vii. SEQ ID Nº 14 (constructo stab-S2), viii. SEQ ID Nº 16 (constructo tri-Secto), ix. SEQ ID Nº 18 (constructo tristab-Secto), x. SEQ ID Nº 42 (constructo S3F), xi. SEQ ID Nº 44 (constructo S2P3F), xii. SEQ ID Nº 46 (constructo S2PDF), xiii. SEQ ID Nº 48 (constructo S2PDF2A), xiv. SEQ ID Nº 21 ó 37 (constructo N), xv. SEQ ID Nº 51 (constructo T4-S2P3F (tristab-Secto-3F)), xvi. SEQ ID Nº 53 (constructo S6P), xvii. SEQ ID Nº 55 (constructo S6P3F), xviii. SEQ ID Nº 57 (constructo S6PDF), xix. SEQ ID Nº 59 (constructo SCCPP), xx. SEQ ID Nº 61 (constructo SCC6P), xxi. SEQ ID Nº 63 (constructo SMVₒₚₜ2P), xxii. SEQ ID Nº 64 (constructo SMVₒₚₜDF), y xxiii. SEQ ID Nº 66 (constructo SMVₒₚₜ2PDF). Reivindicación 16: Un virus de sarampión recombinante de la cepa Schwarz que comprende en su genoma un cassette de expresión ligado operativamente al mismo, comprendiendo el cassette de expresión el constructo de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13. Reivindicación 18: Una composición inmunogénica o una vacuna que comprende (i) una dosis eficaz del virus de sarampión recombinante de acuerdo con la reivindicación 16 ó 17, y (ii) un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde la composición o la vacuna dispara una respuesta humoral y/o una respuesta celular neutralizante contra el(los) polipéptido(s) de SARS-CoV-2 en un huésped animal después de una única inmunización. Reivindicación 20: Un proceso para rescatar virus de sarampión recombinante que expresa el polipéptido de SARS-CoV-2 codificado por el primer polinucleótido heterólogo como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, 4 y 6 de SARS-CoV-2, que comprende: (a) cotransfectar células colaboradoras que expresan establemente la polimerasa de ARN T7 y las proteínas N y P del virus de sarampión con (i) el constructo de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o con el plásmido vector de acuerdo con la reivindicación 13 ó 14, y con (ii) un vector que codifica la polimerasa L de VS; (b) mantener las células transfectadas en condiciones adecuadas para la producción de virus de sarampión recombinante; (c) infectar células que permiten la propagación del virus de sarampión recombinante mediante co-cultivo de las mismas con las células transfectadas de la etapa (b); y (d) cosechar el virus de sarampión recombinante. Reivindicación 30: Un constructo de ácido nucleico que comprende: (1) una molécula de ADNc que codifica una hebra de ARN (+) antigenómica de longitud completa de una cepa atenuada del virus de sarampión (VS); y (2) un primer polinucleótido heterólogo que codifica una proteína S o fragmento inmunogénico de la misma de SARS-CoV-2 que comprende una inserción, sustitución o deleción en la secuencia de 11 residuos aminoácidos de la proteína S alineada con las posiciones 1263 a 1273 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 3, y en donde la inserción, sustitución o deleción aumenta la expresión en la superficie celular de la proteína S o fragmento inmunogénico de la misma, en donde el primer polinucleótido heterólogo está posicionado en una unidad de transcripción adicional (ATU) situada entre el gen P y el gen M del VS (ATU2) o en una ATU situada 3 del gen H del VS (ATU3). Reivindicación 51: Un virus de sarampión recombinante que comprende en su genoma el constructo de ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 49. Reivindicación 58: Un proceso para rescatar virus de sarampión recombinante de la reivindicación 51, que comprende: (a) cotransfectar células colaboradoras que expresan establemente polimerasa de ARN T7 y las proteínas N y P del virus de sarampión con (i) el constructo de ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 49 o con el plásmido vector que comprende el constructo de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 50, y con (ii) un vector que codifica la polimerasa L de VS; (b) mantener las células colaboradoras transfectadas en condiciones adecuadas para la producción de virus de sarampión recombinante; (c) infectar células que permiten la propagación del virus de sarampión recombinante mediante co-cultivo de las mismas con las células colaboradoras transfectadas de la etapa (b); y (d) cosechar virus de sarampión recombinante.