Patent ES-2851378-T3 (ES)
Title: Un método para marcar específicamente las bacterias vivas que comprende el uso de compuestos de tipo monosacárido modificado
Inventor: DUKAN SAM
IPC: G01N33/58
Filed: 2014-10-29
Granted: 2021-09-06
Abstract: Un método para marcar de forma específica las bacterias vivas de una categoría dada de bacterias en una muestra que comprende bacterias, en donde el método comprende las etapas de: a) incubar dicha bacteria de dicha muestra con al menos un compuesto de tipo monosacárido modificado que comprende un primer grupo químico reactivo capaz de reaccionar químicamente con un segundo grupo reactivo, de tal forma que un resto de monosacárido que lleva dicho primer grupo reactivo se incorpora en los polisacáridos de la membrana externa de tales bacterias, sobre todo en el LPS o el CPS de la membrana externa de tales bacterias, y b) poner en contacto dicho resto de monosacárido modificado incorporado en la membrana externa de la bacteria, con una molécula marcadora que comprende un mencionado segundo grupo reactivo, para generar la reacción química de dicho primer grupo reactivo de dicho resto de monosacárido incorporado dentro de dicha membrana externa de dicha bacteria viva con dicho segundo grupo reactivo de dicha molécula marcadora, lo que da lugar a un enlace covalente, caracterizado por que dicho compuesto de tipo monosacárido modificado es un precursor endógeno modificado de un resto de ácido ulosónico endógeno de dichos polisacáridos de la membrana externa de dicha bacteria, dicho compuesto de tipo monosacárido modificado es un compuesto que tiene una de las siguientes fórmulas (Ix-1) a (Ix-4) o una sal del mismo: **(Ver fórmula)** en donde: - R4 es H o una cadena de alquilo de C1 a C4, en donde cada carbono está sustituido o no por OH o NH2 sustituido o no por grupos protectores de los mismos, preferiblemente por grupos alquilo, hidroxialquilo, acilo, formilo o imidoílo, y - R5 y R6 son independientemente grupos alquilo, hidroxialquilo, acilo, formilo o imidoílo, sustituidos o no, y - en donde al menos uno de los grupos R4, R5 y R6 está sustituido por un mencionado primer grupo reactivo, o dicho compuesto de tipo monosacárido modificado es un compuesto que tiene la siguiente fórmula (Iy-1) o una sal del mismo, en donde: **(Ver fórmula)** en donde - R4 es H o una cadena de alquilo de C1 a C4, en donde cada carbono está sustituido o no por OH o NH2 sustituidos o no por grupos protectores de los mismos, preferiblemente por grupos alquilo, hidroxialquilo, acilo, formilo o imidoílo, en donde R4 es preferiblemente CH2OH, y - R5 puede ser grupos alquilo, hidroxialquilo, acilo, formilo o imidoílo, sustituidos o no, en donde R5 es preferiblemente COCH3, y - al menos uno de los grupos R4 y R5 está sustituido por un mencionado primer grupo reactivo; las partes monosacarídicas de los compuestos de las fórmulas (Ix-1) a (Ix-4) son precursores de los siguientes monosacáridos endógenos de las fórmulas Ic-1 a Ic-5 respectivamente, a saber: - (Ix-1) es un precursor de compuestos de tipo monosacárido endógeno de las siguientes fórmulas (Ic-1) e (Ic-2); - (Ix-2) es un precursor del compuesto de tipo monosacárido endógeno de la siguiente fórmula (Ic-3); - (Ix-3) es un precursor del compuesto de tipo monosacárido endógeno de la siguiente fórmula (Ic-4); y - (Ix-4) es un precursor del compuesto de tipo monosacárido endógeno de la siguiente fórmula (Ic-5); - (Ic-1) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en Legionella pneumophila, Vibrio alginolyticus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas fluorescens y Vibrio salmonicida; - (Ic-2) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en el LPS de las bacterias Legionella pneumophila y en Schewanella japonica; - (Ic-3) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en las cepas de E. coli, Providencia stuartii, Pseudomonas aeruginosa, Yersinia ruckeri, Salmonella arizonae, Morganella morganii, Shewanella putrefaciens; - (Ic-4) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en el O-antígeno de Pseudomonas aeruginosa, Shigella boydii, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudoalteromonas altantica, Pseudoalteromonas distincta, Sinorhizobium fredii, Vibrio cholerae, Pseudoalteromonas atlantica y la pared celular de Kribella spp. 5 (grampositiva) y Actinoplanes Utahensis (grampositiva) y el núcleo del LPS de Vibrio parahaemolyticus y en las glucoproteínas del flagelo de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Helicobacter pylori y Clostridium botulinum, y en el CPS de las bacterias Sinorhizobium; - (Ic-5) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en Tenacibaculum maritimum; la parte monosacarídica de los compuestos de las fórmulas (Iy-1) es el precursor del siguiente monosacárido endógeno de las fórmulas Ic-6, a saber: - (Ic-6) es **(Ver fórmula)** que se puede encontrar en el CPS de E. coli, Neisseria meningitidis, Moraxella nonliquefaciens y Mannheimia (Pasterurella) haemolytica, Streptococcus agalactiae (grampositiva), Streptococcus suis (grampositiva) y en O- antígeno del LPS de las bacterias que incluyen Hafnia alvei, Escherichia albertii, Salmonella enterica, E. coli, Citrobacter, Vibrio cholereae, Shewanella algae, y en el núcleo del LPS de varios microorganismos patógenos, entre ellos N. meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, H. influenzae, Haemophilus ducreyi, Histophilus somni, Campylobacter jejuni y Helicobacter pylori.