Patent AR-125260-A1 (AR)
Title: Método de preparación y purificación del intermedio conjugado de fármaco y anticuerpo
Inventor: LI ZHUANGLIN
IPC: C07K16/00
Filed: 2022-03-31
Abstract: La presente invención se refiere a un método de preparación y purificación para un intermedio de conjugado de anticuerpo y fármaco, y más particularmente se refiere a un método de preparación y purificación para un conjugado de parte conectora y parte de fármaco en un conjugado de anticuerpo y fármaco, que no solo puede eliminar eficazmente las impurezas de un producto objetivo y subproductos en un proceso de reacción, lo que hace que la pureza del producto objetivo finalmente se obtenga hasta el 99% o más, pero también realiza una producción en masa estable y cumple con los requisitos estándar de calidad de los medicamentos clínicos, a fin de proporcionar un tremendo garantía de seguridad de los medicamentos y suministro estable.  Reivindicación 1: Un método de preparación y purificación para un intermedio de conjugado de anticuerpo y fármaco, siendo el intermedio de conjugado de anticuerpo y fármaco un compuesto, un enantiómero, un racemato o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como se muestra en la fórmula (1), en la que D representa la parte de toxina unida, la ruta sintética del método es la siguiente: Esquema (2), la toxina parte D es un agente citotóxico de auristatina, un agente citotóxico de antramicina, un agente citotóxico de antraciclina o un agente citotóxico de puromicina, en el que el agente citotóxico de auristatina comprende MMAE, MMAF, MMAD o derivados de los mismos; el agente citotóxico antramicina comprende antramicina o derivados de la misma; el agente citotóxico de antraciclina comprende daunorrubicina, adriamicina, epirrubicina, idarrubicina, valrrubicina, mitoxantrona o derivados de las mismas; el agente citotóxico puromicina comprende puromicina o derivados de la misma; el método comprende específicamente los siguientes pasos: A. disolver el Compuesto 1 en una cantidad apropiada de Disolvente 1, y agregar sucesivamente carbonato de bis(4-nitrobenceno) y base orgánica, en donde el número de moles del carbonato de bis(4-nitrobenceno) agregado y el número de moles del carbonato de bis(4-nitrobenceno) agregado base orgánica son mayores que las del Compuesto 1; B. obtener el filtrado por filtración por succión después de un tiempo de reacción apropiado; C. añadir sucesivamente una cantidad suficiente de acetato de etilo y n-hexano al filtrado obtenido en la Etapa B, agitar durante un tiempo adecuado después de añadir gota a gota el n-hexano y obtener la torta de filtración por filtración por succión; D. lavar sucesivamente la torta de filtración obtenida en la Etapa C con una cantidad apropiada de acetato de etilo y n-hexano, y obtener la torta de filtración por filtración por succión; E. disolver la torta de filtración obtenida en el Paso D en una solución mixta de ácido acético y metanol, agregar una cantidad apropiada de agua purificada, agitar durante un tiempo apropiado después de agregar el agua purificada y obtener la torta de filtración por filtración por succión; F. lavar sucesivamente la torta de filtración obtenida en el Paso E con una cantidad apropiada de agua purificada, metanol, acetato de etilo y n-hexano, y obtener el Compuesto 2 (MC-Val-Cit-PAB-PNP) después de filtración por succión y secado; G. disolver el Compuesto 2 y un compuesto a base de triazol en una cantidad adecuada de Disolvente 2 para formar la Solución X, disolver la parte D de la toxina conjugada en el Disolvente 3 para formar la Solución Y, agregar la Solución Y a la Solución X y mezclar uniformemente para formar la Solución Z; H. agregar una cantidad apropiada de base orgánica a la Solución Z para ajustar el pH del sistema y catalizar la reacción; I. obtener el filtrado por filtración por succión después de un tiempo de reacción adecuado; J. agregar sucesivamente una cantidad apropiada de acetato de etilo y n-hexano al filtrado en el Paso I, agitar durante un tiempo apropiado y obtener la torta de filtración por filtración por succión; K. lavar sucesivamente la torta de filtración obtenida en la Etapa J con acetato de etilo y n-hexano, y obtener la torta de filtración por filtración por succión; L. disolver la torta de filtración obtenida en el Paso K en una cantidad apropiada de solución de metanol, preparar y purificar mediante cromatografía líquida preparativa y recolectar una solución de preparación; M. concentrar la solución de preparación obtenida en el Paso L a presión reducida; N. disolver el concentrado obtenido a presión reducida en el Paso M con una cantidad apropiada de metanol, y luego concentrar nuevamente a presión reducida; O. secar al vacío el concentrado obtenido a presión reducida en el Paso N para obtener el compuesto purificado como se muestra en la fórmula (1); donde: El solvente 1 en el paso A, el solvente 2 y el solvente 3 en el paso G son solventes polares; preferiblemente, el Disolvente 1, el Disolvente 2 y el Disolvente 3 se seleccionan cada uno independientemente de uno o más de DMF, DMA y NMP; y más preferiblemente, el Disolvente 1, el Disolvente 2 y el Disolvente 3 son DMF.