Patent AR-126838-A1 (AR)
Title: Métodos para preparar células que expresan receptores de antígeno quiméricos
Inventor: BARDROFF MICHAEL
IPC: C12N5/0783
Filed: 2022-08-19
Abstract: La invención proporciona métodos de preparación de células efectoras inmunitarias (por ejemplo, células T, células NK) que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), y composiciones generadas mediante tales métodos.  Reivindicación 1: Un método de preparación de una población de células (por ejemplo, células T) que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), comprendiendo el método: (i) poner en contacto (por ejemplo, unir) una población de células (por ejemplo, células T, por ejemplo, células T aisladas de un producto de leucoféresis fresco o congelado) con una molécula de unión multiespecífica que comprende (A) un dominio de unión anti-CD3, (B) un dominio de unión a molécula coestimuladora (por ejemplo, un dominio de unión anti-CD2 o un dominio de unión anti-CD28) y (C) una región Fc que comprende: una mutación L234A, L235A, S267K, y P329A (LALASKPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A, y P329G (LALAPG), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, P329A, y S267K (GADAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A y G237A (LALGA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación D265A, P329A y S267K (DAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, y P329A (GADAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; o una mutación L234A, L235A, y P329A (LALAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; (ii) poner en contacto la población de células (por ejemplo, células T) con una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, una molécula de ADN o ARN) que codifica el CAR, proporcionando de ese modo una población de células (por ejemplo, células T) que comprende la molécula de ácido nucleico, y (iii) recoger la población de células (por ejemplo, células T) para su almacenamiento (por ejemplo, reformulando la población de células en medios de criopreservación) o administración, en el que: (a) la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i) o no más tarde de 20 horas después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 horas después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 18 horas después del comienzo de la etapa (i), y la etapa (iii) se realiza no más tarde de 30 (por ejemplo, 26 horas) después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 horas después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 24 horas después del comienzo de la etapa (i), (b) la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i) o no más tarde de 20 horas después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 horas después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, no más tarde de 18 horas después del comienzo de la etapa (i), y la etapa (iii) se realiza no más tarde de 30 horas después del comienzo de la etapa (ii), por ejemplo, no más tarde de 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 horas después del comienzo de la etapa (ii), o (c) la población de células de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más del 5, el 10, el 15, el 20, el 25, el 30, el 35 o el 40%, por ejemplo, no más del 10%, por ejemplo, tal como se evalúa mediante el número de células vivas, en comparación con la población de células al comienzo de la etapa (i), opcionalmente donde la molécula de ácido nucleico en la etapa (ii) está en un vector viral, opcionalmente donde la molécula de ácido nucleico en la etapa (ii) es una molécula de ARN en un vector viral, opcionalmente donde la etapa (ii) comprende transducir la población de células (por ejemplo, células T) con un vector viral que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica el CAR. Reivindicación 58: Un método de aumento de una respuesta inmunitaria en un sujeto, que comprende administrar la población de células que expresan CAR de la reivindicación 56 o la composición farmacéutica de la reivindicación 57 al sujeto, aumentando de ese modo una respuesta inmunitaria en el sujeto. Reivindicación 59: Un método de tratamiento de un cáncer en un sujeto, que comprende administrar la población de células que expresan CAR de la reivindicación 56 o la composición farmacéutica de la reivindicación 57 al sujeto, tratando de ese modo el cáncer en el sujeto. Reivindicación 66: Una molécula de unión multiespecífica que comprende: (i) un dominio de unión anti-CD3, (ii) un dominio de unión anti-CD28 que comprende una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una región determinante de complementariedad 1 de cadena pesada (HCDR1), una HCDR2 y una HCDR3, y una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una región determinante de complementariedad 1 de cadena ligera (LCDR1), una LCDR2 y una LCDR3 en donde: (a) la HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID Nº 538, 539, 540, 530, 531 y 532, respectivamente; (b) la HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID Nº 541, 539, 540, 530, 531 y 532, respectivamente; (c) la HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID Nº 542, 543, 540, 533, 534 y 535, respectivamente; o (d) la HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID Nº 544, 545, 546, 536, 534, y 532, respectivamente; y (iii) una región Fc que comprende: una mutación L234A, L235A, S267K, y P329A (LALASKPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A, y P329G (LALAPG), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, P329A, y S267K (GADAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A y G237A (LALGA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación D265A, P329A y S267K (DAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, y P329A (GADAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; o una mutación L234A, L235A, y P329A (LALAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE. Reivindicación 71: Una molécula de unión multiespecífica, que comprende un primer dominio de unión y un segundo dominio de unión, en el que la molécula de unión multiespecífica comprende: (i) un primer polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VH del primer dominio de unión, VL del primer dominio de unión, VH del segundo dominio de unión, CH1 y una región Fc, que comprende una CH2 y una CH3; y (ii) un segundo polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VL del segundo dominio de unión y CL; en donde la región Fc comprende: una mutación L234A, L235A, S267K, y P329A (LALASKPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A, y P329G (LALAPG), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, P329A, y S267K (GADAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A y G237A (LALGA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación D265A, P329A y S267K (DAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, y P329A (GADAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; o una mutación L234A, L235A, y P329A (LALAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE. Reivindicación 72: Una molécula de unión multiespecífica, que comprende un primer dominio de unión y un segundo dominio de unión, en el que la molécula de unión multiespecífica comprende: (i) un primer polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VH del segundo dominio de unión, CH1, una región Fc que comprende una CH2 y una CH3, VH del primer dominio de unión, y VL del primer dominio de unión; y (ii) un segundo polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VL del segundo dominio de unión y CL; en donde la región Fc comprende: una mutación L234A, L235A, S267K, y P329A (LALASKPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A, y P329G (LALAPG), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, P329A, y S267K (GADAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A y G237A (LALGA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación D265A, P329A y S267K (DAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, y P329A (GADAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; o una mutación L234A, L235A, y P329A (LALAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE. Reivindicación 73: Una molécula de unión multiespecífica, que comprende un primer dominio de unión y un segundo dominio de unión, en el que la molécula de unión multiespecífica comprende: (i) un primer polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VH del segundo dominio de unión, CH1, VH del primer dominio de unión, VL del primer dominio de unión, y una región Fc que comprende una CH2 y una CH3; y (ii) un segundo polipéptido que comprende desde la posición N-terminal hasta la C-terminal: VL del segundo dominio de unión y CL; en donde la región Fc comprende: una mutación L234A, L235A, S267K, y P329A (LALASKPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A, y P329G (LALAPG), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, P329A, y S267K (GADAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación L234A, L235A y G237A (LALGA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación D265A, P329A y S267K (DAPASK), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; una mutación G237A, D265A, y P329A (GADAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE; o una mutación L234A, L235A, y P329A (LALAPA), enumerada según el sistema de enumeración de la UE. Reivindicación 79: Un método de activación de células (por ejemplo, células efectoras inmunitarias, por ejemplo, células T), que comprende poner en contacto (por ejemplo, unir) una población de células (por ejemplo, células T, por ejemplo, células T aisladas de un producto de leucoféresis fresco o congelado) con la molécula de unión multiespecífica de una cualquiera de las reivindicaciones 66 - 78. Reivindicación 80: Un método de transducción de células (por ejemplo, células efectoras inmunitarias, por ejemplo, células T), que comprende poner en contacto (por ejemplo, unir) una población de células (por ejemplo, células T, por ejemplo, células T aisladas de un producto de leucoféresis fresco o congelado) con (i) la molécula de unión multiespecífica de una cualquiera de las reivindicaciones 66 - 78 y (ii) una molécula de ácido nucleico, por ejemplo una molécula de ácido nucleico que codifica un CAR.