Patent AR-121861-A2 (AR)
Title: MÉTODO PARA PREPARAR UNA COMPOSICIÓN DE IgG ENRIQUECIDA A PARTIR DE PLASMA
Inventor: BRUCKSCHWAIG LEOPOLD
IPC: A61P31/00
Filed: 2021-04-16
Abstract: Método para preparar una composición de IgG enriquecida a partir de plasma, que comprende los pasos de: (a) enfriar una mezcla de donaciones de plasma combinadas a una temperatura entre 2ºC y 10ºC, (b) separar el líquido y el precipitado de la mezcla del paso (a) por centrifugación, (c) mezclar etanol en el sobrenadante líquido formado en el paso (b) hasta una concentración final entre 5% (v/v) y 10% (v/v) de etanol, formando así una mezcla, (d) enfriar la mezcla formada en la etapa (c) entre -4ºC y 0ºC, (e) separar el líquido y el precipitado de la mezcla del paso (d) por centrifugación y aislar el sobrenadante, formando así una primera fracción de plasma, (f) ajustar el pH de la primera fracción de plasma a 7,0, (g) ajustar la concentración de etanol de la primera fracción de plasma del paso (f) al 25% (v/v) a una temperatura entre -7ºC y -9ºC, formando así una mezcla, (h) separar el líquido y el precipitado de la mezcla del paso (g), (i) resuspender el precipitado del paso (h) con una solución reguladora que contiene fosfato y acetato, donde el pH de la solución reguladora se ajusta con entre 300 ml y 700 ml de ácido acético glacial por 1000 l de solución reguladora, formando así una suspensión, (j) mezclar dióxido de silicio (SiO₂) finamente dividido con la suspensión del paso (i) durante al menos 30 minutos, (k) filtrar la suspensión con un filtro prensa, formando así un filtrado, (l) lavar el filtro prensa con al menos 3 volúmenes muertos de filtro prensa de una solución reguladora que contiene fosfato y acetato, donde el pH de la solución reguladora se ajusta con entre 50 ml y 200 ml de ácido acético glacial por 1000 l de solución reguladora, formando así un solución de lavado, (m) combinar el filtrado del paso (k) con la solución de lavado del paso (g), formando así una solución, y tratar la solución con un detergente, (n) ajustar el pH de la solución del paso (m) a 7,0 y añadir etanol hasta una concentración final del 25%, formando así un precipitado, (o) separar el líquido y el precipitado de la mezcla del paso (n), (p) disolver el precipitado en una solución acuosa que comprende un solvente o detergente y mantener la solución durante al menos 60 minutos, (q) separar la fracción soluble de la suspensión formada en el paso (p), (r) hacer pasar la fracción soluble separada en el paso (q) a través de una columna de cromatografía de intercambio catiónico y eluir las proteínas absorbidas en la columna en un eluato, (s) pasar el eluido del paso (r) a través de una columna de cromatografía de intercambio aniónico para generar un efluente, (t) pasar el efluente de lo(s) paso(s) a través de un nanofiltro para generar un nanofiltrado, (u) hacer pasar el nanofiltrado del paso (t) a través de una membrana de ultrafiltración para generar un ultrafiltrado y (v) diafiltrar el ultrafiltrado de la etapa (u) contra una solución reguladora de diafiltración para generar un diafiltrado que tiene una concentración de proteína entre 8% (p/v) y 12% (p/v), obteniendo así una composición de IgG concentrada.