Patent AR-125308-A1 (AR)
Title: Vectores de transferencia de genes y métodos de ingeniería celular
Inventor: NASO MICHAEL FRANCIS
IPC: A61K39/00
Filed: 2022-04-07
Abstract: La presente divulgación proporciona composiciones y métodos para su uso en la ingeniería genómica de células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Específicamente, los métodos y composiciones descritos son útiles para introducir transgenes en iPSC tales como células madre hematopoyéticas pluripotentes y/o células progenitoras (HSC/PC) mediante un sistema con base en la nucleasa CRISPR (p. ej., el sistema con base en la nucleasa MAD7) y preparar células inmunitarias efectoras derivadas de las iPSC.  Reivindicación 1: Una composición de complejo de ribonucleoproteína (RNP) MAD7/gRNA (RNP) para la inserción de un transgén, lo caracterizada porque comprende: (I) una nucleasa MAD7; (II) un RNA guía (gRNA) específico para la nucleasa MAD7, donde el gRNA comprende una secuencia guía capaz de hibridarse a una secuencia dirigida de un locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL en una célula, donde la secuencia guía se selecciona de las SEQ ID Nº 120 - 130, donde cuando el gRNA forma un complejo con la nucleasa MAD7, la secuencia guía dirige la unión específica para la secuencia de la nucleasa MAD7 con la secuencia dirigida, y (III) un vector de un transgén que comprende: (1) secuencias de polinucleótidos izquierda y derecha que sean homólogas a los brazos izquierdo y derecho de la secuencia dirigida de los locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL, (2) un promotor que esté unido operativamente a (3) una secuencia de polinucleótidos que codifica el transgén, y (4) una secuencia de terminación de la transcripción Reivindicación 28: Un iPSC transformado con un transgén mediante la composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 27. Reivindicación 34: Una célula efectora inmunitaria genomanipulada, o una población de estas, proveniente del iPSC de cualquiera de las reivindicaciones 28-33. Reivindicación 37: Una composición de complejo de ribonucleoproteína (RNP) MAD7/gRNA (RNP) para la inserción de un transgén, lo caracterizada porque comprende: (I) un sistema de nucleasas MAD7, donde el sistema es codificado por uno o más vectores que comprenden: (a) una secuencia que codifica un RNA guía (gRNA), donde la secuencia está unida operativamente a un primer elemento de regulación, donde el gRNA comprende una secuencia guía capaz de hibridarse en una secuencia dirigida de un locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL en una célula, donde la secuencia guía se selecciona entre las SEQ ID Nº 120 - 130, y donde cuando se la transcribe, la secuencia guía dirige la unión específica para la secuencia del complejo MAD7 con la secuencia dirigida, y (b) una secuencia que codifica una nucleasa MAD7, donde la secuencia está unida operativamente a un segundo elemento de regulación, y (II) un vector de un transgén que comprende: (1) secuencias de polinucleótidos izquierda y derecha que sean homólogas a los brazos izquierdo y derecho de la secuencia dirigida de los locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL, (2) un promotor que esté unido operativamente a (3) un polinucleótido que codifica el transgén, y (4) una secuencia de terminación de la transcripción. Reivindicación 38: Un sistema de vectores basados en la ribonucleoproteína (RNP) MAD7/gRNA, caracterizado porque comprende: (I) uno o más vectores que comprenden: (a) una secuencia que codifica un RNA guía (gRNA), donde la secuencia está unida operativamente a un primer elemento de regulación, donde el gRNA comprende una secuencia guía capaz de hibridarse en una secuencia dirigida de un locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL en una célula, donde la secuencia guía se selecciona entre las SEQ ID Nº 120 - 130, donde cuando se la transcribe, la secuencia guía dirige la unión específica para la secuencia del complejo MAD7 con la secuencia dirigida, y (b) una secuencia que codifica una nucleasa MAD7, donde la secuencia está unida operativamente a un segundo elemento de regulación, y (II) un vector de un transgén que comprende: (1) secuencias de polinucleótidos izquierda y derecha que sean homólogas a los brazos izquierdo y derecho de la secuencia dirigida de los locus AAVS1, B2M, CIITA, NKG2A, TRAC, CD70, CD38, CD33 o CLYBL, (2) un promotor que esté unido operativamente a (3) un polinucleótido que codifica el transgén, y (4) una secuencia de terminación de la transcripción. Reivindicación 64: Uno o más retrovirus que comprenden el sistema de vectores según una cualquiera de las reivindicaciones 38 - 63. Reivindicación 65: Un iPSC transformado con el sistema de vectores según una cualquiera de las reivindicaciones 38 - 63 o el uno o más retrovirus según la reivindicación 64. Reivindicación 71: Una célula efectora inmunitaria, o una población de estas, proveniente del iPSC de cualquiera de las reivindicaciones 65 - 70. Reivindicación 72: Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende la célula efectora inmunitaria proveniente del iPSC de una cualquiera de las reivindicaciones 28 - 33 y 65 - 70. Reivindicación 75: Un gRNA caracterizado porque comprende una secuencia guía que se selecciona del grupo que consiste en las SEQ ID Nº 120 - 130.