Patent ES-2880335-T3 (ES)
Title: Métodos y composiciones para la preparación rápida de bibliotecas de ácidos nucleicos
Inventor: BROWN KEITH
IPC: C12Q1/6806
Filed: 2015-09-09
Granted: 2021-11-24
Abstract: Un método de generación de un conjunto de datos almacenados en ordenador que comprende una población de secuencias de moléculas de ácido nucleico marcadas por afinidad no idénticas, que comprenden cada una un subconjunto de secuencias de una muestra de ácido nucleico, comprendiendo el método: a) almacenar en un ordenador una primera secuencia de molécula de ácido nucleico que comprenda una primera secuencia de marcador molecular en posición 5' y una primera secuencia de inserción que tiene una primera longitud de dicha muestra de ácido nucleico, en donde el método comprende obtener dicha primera secuencia de ácido nucleico a través de (i) poner en contacto un primer cebador que comprende una primera secuencia de marcador molecular de una primera población de oligonucleótidos aleatorios con una primera molécula de ácido nucleico de dicha muestra de ácido nucleico; (ii) realizar la prolongación de ácido nucleico que comprende poner en contacto dicha primera molécula de ácido nucleico y dicho primer cebador con una polimerasa de ácido nucleico que incorpora un ddNTP marcado por afinidad en una cadena de ácido nucleico de prolongación para producir un primer producto de prolongación de una población de primeros productos de prolongación que tienen cada uno un número indeterminado de bases complementarias con dicha muestra de ácido nucleico; (iii) poner en contacto dicho primer producto de prolongación de dicha población de primeros productos de prolongación con un segundo cebador que comprende una segunda secuencia de marcador molecular de una población de oligonucleótidos aleatorios; (iv) realizar la prolongación de ácido nucleico para producir una primera molécula de ácido nucleico bicatenario de una población de moléculas de ácido nucleico bicatenario que comprende dicha primera secuencia de marcador molecular, una primera secuencia de molécula de ácido nucleico que tiene una primera longitud, y dicha segunda secuencia de marcador molecular; y (v) secuenciar la primera molécula de ácido nucleico para obtener dicha primera secuencia de molécula de ácido nucleico; b) almacenar en dicho ordenador una segunda secuencia de molécula de ácido nucleico que comprende una tercera secuencia de marcador molecular, una segunda secuencia de molécula de ácido nucleico que tiene una segunda longitud, y una cuarta secuencia de marcador molecular; c) excluir dicha segunda secuencia de molécula de ácido nucleico del conjunto de datos cuando: dicha tercera secuencia de marcador molecular es idéntica a dicha primera secuencia de marcador molecular; dicha cuarta secuencia de marcador molecular es idéntica a dicha segunda secuencia de marcador molecular; dicha segunda secuencia de molécula de ácido nucleico es idéntica a dicha primera secuencia de molécula de ácido nucleico; y dicha segunda longitud de secuencia de molécula de ácido nucleico es idéntica a dicha primera longitud de secuencia de molécula de ácido nucleico; d) incluir la segunda secuencia de molécula de ácido nucleico en el conjunto de datos cuando: dicha tercera secuencia de marcador molecular es diferente de dicha primera secuencia de marcador molecular; dicha cuarta secuencia de marcador molecular es diferente de dicha segunda secuencia de marcador molecular; dicha segunda secuencia de molécula de ácido nucleico es diferente de dicha primera secuencia de molécula de ácido nucleico; o dicha segunda longitud de secuencia de molécula de ácido nucleico es diferente de dicha primera longitud de secuencia de molécula de ácido nucleico, generando de este modo dicho conjunto de datos almacenados en ordenador que comprende dicha población de moléculas de ácido nucleico marcadas no idénticas que comprenden cada una un subconjunto de secuencia de dicha muestra de ácido nucleico.