Patent AR-124416-A1 (AR)
Title: Método de pcr en tiempo real para detectar parvovirus bovino 3
Inventor: AMINI BAVIL OLYAEE SAMAD
IPC: C12Q1/70
Filed: 2021-12-17
Abstract: La invención proporciona combinaciones de cebador-sonda para detectar ADN que codifica ADN genómico de parvovirus bovino 3 (BPV-3) en el ADN extraído de una muestra de prueba. También se proporciona un control positivo interno.  Reivindicación 1: Una composición que comprende oligonucleótidos seleccionados de los grupos que consisten en a) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 1, SEQ ID Nº 2, y SEQ ID Nº 3; b) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 4, SEQ ID Nº 5, y SEQ ID Nº 6; c) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 8, y SEQ ID Nº 9; d) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 10, SEQ ID Nº 11, y SEQ ID Nº 12; e) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 13, SEQ ID Nº 14, y SEQ ID Nº 15; f) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 20, SEQ ID Nº 21, y SEQ ID Nº 22; g) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 23, SEQ ID Nº 24, y SEQ ID Nº 25; y h) oligonucleótidos que tienen la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID Nº 26, SEQ ID Nº 27, y SEQ ID Nº 28. Reivindicación 5: Un reactivo para detectar ADN genómico de parvovirus bovino 3 (BPV-3) en el ADN extraído de una muestra de prueba seleccionado del grupo que consiste en a) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 1, SEQ ID Nº 2, y SEQ ID Nº 3; b) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 4, SEQ ID Nº 5, y SEQ ID Nº 6; c) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 8, y SEQ ID Nº 9; d) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 10, SEQ ID Nº 11, y SEQ ID Nº 12; e) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 13, SEQ ID Nº 14, y SEQ ID Nº 15; f) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 20, SEQ ID Nº 21, y SEQ ID Nº 22; g) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 23, SEQ ID Nº 24, y SEQ ID Nº 25; y h) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 26, SEQ ID Nº 27, y SEQ ID Nº 28. Reivindicación 25: Un método para determinar la presencia o ausencia de ADN genómico de parvovirus bovino 3 en el ADN extraído de una muestra de prueba que comprende 1) una mezcla de reacción que comprende una muestra de prueba, un control positivo, un ADN de plásmido de control positivo de BPV-3_IPC, reactivos de amplificación de ácido nucleico, una combinación de cebador-sonda de control positivo interno que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 16, SEQ ID Nº 17, y SEQ ID Nº 18, en donde SEQ ID Nº 18 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3, y una combinación de cebador-sonda selectiva para una secuencia de ADN de parvovirus bovino 3, seleccionada del grupo que consiste en a) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 1, SEQ ID Nº 2, y SEQ ID Nº 3, en donde SEQ ID Nº 3 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; b) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 4, SEQ ID Nº 5, y SEQ ID Nº 6, en donde SEQ ID Nº 6 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; c) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 8, y SEQ ID Nº 9, en donde SEQ ID Nº 9 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; d) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 10, SEQ ID Nº 11, y SEQ ID Nº 12, en donde SEQ ID Nº 12 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; e) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 13, SEQ ID Nº 14, y SEQ ID Nº 15, en donde SEQ ID Nº 15 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; f) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 20, SEQ ID Nº 21, y SEQ ID Nº 22, en donde SEQ ID Nº 22 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; g) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 23, SEQ ID Nº 24, y SEQ ID Nº 25, en donde SEQ ID Nº 25 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; y h) una combinación de cebador-sonda que tiene las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nº 26, SEQ ID Nº 27, y SEQ ID Nº 28, en donde SEQ ID Nº 28 tiene un tinte indicador fluorescente en el extremo 5 y un extintor sin fluorescencia en el extremo 3; 2) someter la mezcla de reacción a una técnica de PCR cuantitativa para obtener copias de la secuencia diana, 3) medir cualquier aumento de la señal de fluorescencia, en donde un aumento de la señal de fluorescencia indica la presencia de ADN genómico de parvovirus bovino 3 en la muestra de prueba.