Patent AR-112334-A2 (AR)
Title: Alelo mutante parcialmente noqueado de un gen ind y método para identificar dicho alelo
Inventor: LAMBERT BART
IPC: C12Q1/68
Filed: 2018-07-13
Abstract: Reivindicación 1: Un proceso para producir una planta de Brassica que tiene un incremento en la resistencia al desgrane de vainas, caracterizado porque dicho método comprende introducir al menos dos alelos IND mutantes parcialmente noqueados en una planta de Brassica que comprende al menos dos genes IND, o una célula, parte, semilla o progenie de la misma, donde dichos alelos IND mutantes parcialmente noqueados se seleccionan del grupo que consiste de (a) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 1 en el que la g en la posición 370 está sustituida por a, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 5 en el que la g en la posición 930 está sustituida por a o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 2 en la que la Valina en la posición 124 está sustituida por Metionina, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB con el número de acceso NCIMB 41570, (b) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 1 en el que la g en la posición 436 está sustituida por a, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 5 en el que la g en la posición 996 está sustituida por a o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 2 en la que la Glicina en la posición 146 está sustituida por Serina, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB con el número de acceso NCIMB 41571, (c) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 1 en el que la c en la posición 476 está sustituida por t, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 5 en el que la c en la posición 1036 está sustituida por t o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 2 en la que la Alanina en la posición 159 está sustituida por Valina, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB con el número de acceso NCIMB 41572, (d) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 3 en el que la c en la posición 424 está sustituida por t, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 7 en el que la c en la posición 920 está sustituida por t o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 4 en la que la Arginina en la posición 142 está sustituida por Cisteína, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB, con el número de acceso NCIMB 41575, (e) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 3 en el que la c en la posición 407 está sustituida por t, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 7 en el que la c en la posición 903 está sustituida por t o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 4 en la que la Treonina en la posición 136 está sustituida por Metionina, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB con el número de acceso NCIMB 41573, y (f) un ácido nucleico de SEQ ID Nº 3 en el que la g en la posición 415 está sustituida por a, un ácido nucleico de SEQ ID Nº 7 en el que la g en la posición 911 está sustituida por a o un ácido nucleico que codifica una proteína de SEQ ID Nº 4 en la que la Alanina en la posición 139 está sustituida por Treonina, semilla de referencia que comprende dicho alelo que fue depositada en NCIMB con el número de acceso NCIMB 41574. Reivindicación 9: Una proteína IND mutante inducida de no ocurrencia natural, caracterizada porque es codificada por un alelo mutante de acuerdo con la reivindicación 7 u 8. Reivindicación 10: Un método para identificar un alelo IND mutante de acuerdo con reivindicación 7 u 8 en una muestra biológica, que caracterizado porque comprende determinar la presencia de una región IND mutante especifica en un ácido nucleico presente en dicha muestra biológica, el cual además comprende someter la muestra biológica a un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa usando un juego de al menos dos cebadores, donde dicho juego se selecciona del grupo formado por: un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 929 de la SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 930 al 946 de la SEQ ID Nº 5 en donde la g en la posición 930 está sustituido por a; un conjunto de cebadores en el que uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 931 al 1622 de SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 914 al 930 de SEQ ID Nº 5 en donde la g en la posición 930 es sustituido por a; un conjunto de cebadores en el que uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 995 de la SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 996 al 1012 de la SEQ ID Nº 5 en donde la g en la posición 996 está sustituido por a; un conjunto de cebadores en el que uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 997 a 1622 de SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 980 al 996 de SEQ ID Nº 5 en donde la g en la posición 996 es sustituido por a; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia, de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 1035 de la SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 1036 al 1052 de ha SEQ ID Nº 5 en donde la c en la posición 1036 está sustituido por t; un conjunto de cebadores en el que uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 1037 a 1622 de SEQ ID Nº 5 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 176 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 1020 a 1036 de SEQ ID Nº 5 en donde la c en la posición 1036 es sustituido por t; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 902 de la SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 903 al 919 de la SEQ ID Nº 7 en donde la c en la posición 903 está sustituido por t; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 904 al 1593 de SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 887 a 903 de SEQ ID Nº 7 en la que la c en la posición 903 es sustituido por t; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 910 de la SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 911 al 927 de la SEQ ID Nº 7 en donde la g en la posición 911 está sustituido por a; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos un nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 912 al 1593 de SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 895 al 911 de SEQ ID Nº 7 en donde la g en la posición 911 es sustituido por a; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados de los nucleótidos 1 a 919 de la SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ el complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 920 al 936 de la SEQ ID Nº 7 en donde el c en la posición 920 está sustituido por t; un conjunto de cebadores en donde uno de dichos cebadores consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 32’ una secuencia de nucleótidos de al menos 17 nucleótidos consecutivos seleccionados del complemento de la secuencia de nucleótidos del nucleótido 921 al 1593 de SEQ ID Nº 7 y dicho otro cebador consiste en una secuencia de nucleótidos de 17 a 200 nucleótidos consecutivos y comprende en su extremo 3’ la secuencia de nucleótidos del nucleótido 904 al 920 de SEQ ID Nº 7 en donde la c en la posición 920 es sustituido por t. Reivindicación 13: Un proceso para incrementar la resistencia al desgrane de vainas en una planta de Brassica que comprende al menos dos genes IND, caracterizado porque dicho proceso comprende introducir al menos dos alelos IND mutantes parcialmente noqueados de acuerdo con la reivindicación 7 u 8 en el genoma de dicha planta de Brassica.