Patent PL-419813-A1 (PL)
Inventor: SZAFRAN ROMAN
IPC: C12Q1/02
Filed: 2016-12-15
Abstract: Sposób wytwarzania stabilnego gradientu stężenia substancji aktywnej w mikrosystemach do prowadzenia hodowli komórkowych, charakteryzujący się tym, że w pierwszym etapie zbiorniki płynów zasilających komory mikrourządzenia wypełnia się rozpuszczalnikami, kolejno: zbiorniki pierwszej i kolejnych komór (ślepa próba i hodowla właściwa) rozpuszczalnikiem zawiesiny komórkowej, a ostatnią komorę (komora wskaźnikowa) rozpuszczalnikiem barwnej substancji wskaźnikowej, w tym celu do zbiorników po jednej stronie mikrourządzenia wprowadza się ciecz i pochyla się mikrosystem, tak by wymusić jej przepływ ze zbiorników zasilających przez komory mikrourządzenia do zbiorników wypływowych usytuowanych po przeciwnej jego stronie, a po wypełnieniu komór, ciecz ze zbiorników usuwa się. W drugim etapie wprowadza się zawiesinę komórek do co najmniej dwóch zbiorników zasilających usytuowanych po jednej stronie mikrourządzenia (ślepa próba i każda hodowla właściwa), a rozpuszczalnik barwnej substancji wskaźnikowej do ostatniego zbiornika (komora wskaźnikowa) i pochyla się mikrosystem, tak by wymusić przepływ płynów ze zbiorników zasilających przez komory do zbiorników usytuowanych po przeciwnej ich stronie, tak by poziom płynów w przeciwległych zbiornikach wyrównał się. W trzecim etapie prowadzi się krótkotrwałą hodowlę komórek w celu ich adhezji do powierzchni komór. W czwartym etapie opróżnia się zbiorniki po obu stronach komór, przy czym komory pozostają wypełnione płynem i wprowadza się odmierzoną objętość rozpuszczalnika zawiesiny komórkowej do zbiornika zasilającego pierwszej komory (ślepa próba), roztworu substancji aktywnej do zbiornika zasilającego drugiej i kolejnych komór (hodowla właściwa) i barwnego roztworu wskaźnikowego do zbiornika zasilającego ostatniej komory (komora wskaźnikowa), następnie pochyla się mikrosystem pod kątem od 10 do 90 stopni w kierunku pustych zbiorników, wymuszając przepływ płynu przez komory do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających uprzednio wypełnionych płynem, jednak bez opróżniania zawartości komór, po czym usuwa się ciecz ze wszystkich zbiorników. W piątym etapie wprowadza się do zbiorników po stronie wypływowej określoną, niewielką objętością odpowiedniego rozpuszczalnika, stosownie do składu cieczy w każdej z komór i przechyla się mikrosystem kierunku pustych zbiorników w celu wymuszenia przepływu płynu w komorach mikrourządzenia i do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających, następnie mikrosystem przechyla się w przeciwnym kierunku i wymusza powrotny przepływ płynu w komorach, czynność naprzemiennego pochylania mikrourządzenia powtarza się wielokrotnie do czasu uzyskania pożądanego rozkładu stężenia substancji barwnej w komorze wskaźnikowej, po czym usuwa się ciecz ze zbiorników. W szóstym etapie zbiorniki wypełnia się jednakową objętością płynu, adekwatnie do składu mieszaniny na wylotach z komór do nich przyległych - odpowiednim rozpuszczalnikiem, roztworem barwnika lub roztworem substancji aktywnej. W siódmym etapie zbiorniki mikrourządzenia zabezpiecza się osłonami zbiorników dla zapewnienia stabilizacji gradientów stężenia.