Patent AR-124837-A1 (AR)
Title: Métodos y composiciones para congelar y descongelar células de mamíferos
Inventor: ZHOU SHUXIA
IPC: A01N1/02
Filed: 2022-02-08
Abstract: La presente descripción proporciona, entre otras cosas, un método de crioconservación y descongelación de células que deriva en que las células descongeladas tengan una funcionalidad y viabilidad celular alta después de la descongelación. En algunas modalidades, se proporciona un método de crioconservación de células a gran escala, el método comprende: (a) poner en contacto a las células con un medio de crioconservación; (b) enfriar las células hasta -80ºC a una velocidad controlada para minimizar la entalpía de fusión latente; y (c) almacenar las células en una fase de vapor con nitrógeno líquido, mediante lo cual se efectúa la crioconservación de las células inmunitarias.  Reivindicación 1: Un método a gran escala para crioconservar células inmunitarias, el método comprende: (a) proporcionar un recipiente que comprende una muestra que comprende células inmunitarias suspendidas en un medio de crioconservación, donde el volumen de la muestra es al menos un 5 por ciento menor que el volumen de capacidad total del recipiente, y donde el volumen de la muestra es de al menos 10 mL; (b) enfriar el recipiente desde una temperatura por encima de la temperatura de congelación de la muestra hasta una temperatura de alrededor de -80ºC o menos en un proceso de múltiples etapas a una velocidad controlada para minimizar la entalpía de fusión latente; (c) almacenar las células en fase de vapor de nitrógeno líquido, mediante lo cual se crioconservan las células inmunitarias. Reivindicación 20: Un método a gran escala para descongelar células inmunitarias crioconservadas, el método comprende: (a) calentar un baño de agua a una temperatura en el intervalo de 37ºC a 70ºC; (b) transferir un recipiente que comprende células inmunitarias crioconservadas de acuerdo con la reivindicación 1 al baño de agua precalentado; y (c) agitar el recipiente a una velocidad de entre alrededor de 100 y alrededor de 250 RPM durante un período de tiempo adecuado, para obtener de ese modo células inmunitarias descongeladas. Reivindicación 33: Un método para cambiar la temperatura de una muestra que contiene células inmunitarias desde una primera temperatura por encima de la temperatura de congelación de la muestra hasta una temperatura final de -80ºC o menos, mediante lo cual se crioconserva la muestra a la temperatura final, el método comprende las siguientes etapas: (a) colocar la muestra a una primera temperatura por encima de la temperatura de congelación de la muestra; (b) reducir la primera temperatura hasta una segunda temperatura a una primera velocidad controlada, donde la segunda temperatura es al menos 2ºC menor que la primera temperatura; (c) reducir la segunda temperatura hasta una tercera temperatura a una segunda velocidad controlada, donde la tercera temperatura es al menos 40ºC menor que la segunda temperatura; (d) aumentar la tercera temperatura hasta una cuarta temperatura a una tercera velocidad controlada, donde la cuarta temperatura es al menos 20ºC mayor que la tercera temperatura; (e) reducir la cuarta temperatura hasta una quinta temperatura a una cuarta velocidad controlada, donde la quinta temperatura es al menos 10ºC menor que la cuarta temperatura; y (f) reducir la quinta temperatura hasta la temperatura final a una quinta velocidad controlada, donde la temperatura final es de -80ºC o menos. Reivindicación 45: Un método que comprende la crioconservación de células inmunitarias modificadas adecuadas para la terapia celular, el método comprende (1) proporcionar un recipiente que comprende una muestra que comprende células inmunitarias suspendidas en un medio de crioconservación, donde el volumen de la muestra es al menos un 5 por ciento menor que el volumen de capacidad total del recipiente, donde el volumen de la muestra es de al menos 10 mL; y (2) congelar en etapas una población de células inmunitarias modificadas a una velocidad controlada para minimizar el impacto de la entalpía de fusión latente, donde la congelación en etapas comprende enfriar las células a una velocidad de entre 0,75ºC por minuto y 30ºC por minuto hasta una temp. final de -80ºC o menos, mediante lo cual se crioconservan las células.