Patent AR-125316-A1 (AR)
Title: COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA GENERAR CÉLULAS T gd A PARTIR DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS
Inventor: WALLET MARK
IPC: A61K39/00
Filed: 2022-04-07
Abstract: Se proporcionan métodos para generar células T gd a partir de células madre pluripotentes inducidas. Además se proporcionan iPSCs, células T gd, células CAR-T gd modificadas genéticamente, y métodos de uso de las mismas.  Reivindicación 11: Una célula T derivada de la iPSC de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 10. Reivindicación 12: Una célula madre pluripotente inducida (iPSC) o una célula T derivada de la misma que comprende: uno o más polinucleótidos que codifican un receptor de células T gd reordenado (TCR) y un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR); y una o más de los siguientes elementos adicionales: a. un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido de muerte celular artificial; b. una deleción o expresión reducida de uno o más genes entre B2M, TAP 1, TAP 2, Tapasina, RFXANK, CIITA, RFX5 y RFXAP; c. una deleción o expresión reducida de los genes RAG1 y RAG2; d. un polinucleótido exógeno que codifica una variante que no ocurre naturalmente de FcgRIII (CD16); e. un polinucleótido exógeno que codifica interleucina 15 (IL-15) y/o receptor de IL-15 o una variante o truncamiento del mismo; f. un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de interleucina 7 (IL-7) constitutivamente activo o una variante del mismo; g. un polinucleótido exógeno que codifica interleucina 12 (IL-12) o interleucina 21 (IL-21) o una variante de las mismas; h. un polinucleótido exógeno que codifica antígeno leucocitario humano E (HLA-E) y/o antígeno leucocitario humano G (HLA-G); i. un polinucleótido exógeno que codifica el clúster de diferenciación del antígeno de superficie leucocitario CD47 (CD47) y/o CD24; o j. un polinucleótido exógeno que codifica una o más proteínas indicadoras o para imágenes, como PSMA o HSV-tk. Reivindicación 38: Una célula madre pluripotente inducida (iPSC) o una célula T que comprende: (i) un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR) que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 61; (ii) un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido de muerte celular artificial que comprende un dominio inductor de la apoptosis que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 71; (iii) un polinucleótido que codifica un locus del receptor de células T reordenado (TCR) que comprende un TCR γ que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 133, 135, o 150 y un TCR d que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 134, 136, o 151; y (iv) opcionalmente, un polinucleótido exógeno que codifica un antígeno leucocitario humano E (HLA-E) que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 66; en donde uno o más de los polinucleótidos exógenos están integrados en los loci de los genes AAVS1, CIITA y B2M, para en consecuencia eliminar o reducir la expresión de CIITA y B2M. Reivindicación 39: Una composición que comprende la célula T de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 - 38. Reivindicación 47: Un método de elaboración de la célula T de acuerdo con la reivindicación 11 o 12, que comprende diferenciar una célula iPSC de acuerdo con la reivindicación 1 en condiciones de diferenciación celular para obtener así la célula T. Reivindicación 50: Una célula progenitora hematopoyética CD34+ (HPC) derivada de una célula madre pluripotente inducida (iPSC) que comprende uno o más polinucleótidos que codifican un receptor de células T gd reordenado (TCR) y un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR); y una o más de los siguientes elementos adicionales: (a) un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido de muerte celular artificial; (b) una deleción o expresión reducida de uno o más genes entre B2M, TAP 1, TAP 2, Tapasina, RFXANK, CIITA, RFX5 y RFXAP; (c) una deleción o expresión reducida de los genes RAG1 y RAG2; (d) un polinucleótido exógeno que codifica una variante que no ocurre naturalmente de FcgRIII (CD16); (e) un polinucleótido exógeno que codifica interleucina 15 (IL-15) y/o el receptor de interleucina (IL-15) o una variante o truncamiento del mismo; (f) un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de interleucina 7 (IL-7) constitutivamente activo o una variante del mismo; (g) un polinucleótido exógeno que codifica interleucina 12 (IL-12) o interleucina 21 (IL-21) o una variante de las mismas; (h) un polinucleótido exógeno que codifica antígeno leucocitario humano E (HLA-E) y/o antígeno leucocitario humano G (HLA-G);(i) un polinucleótido exógeno que codifica el clúster de diferenciación del antígeno de superficie leucocitario CD47 (CD47) y/o CD24; o (j) un polinucleótido exógeno que codifica una o más proteínas indicadoras o para imágenes, como PSMA o HSV-tk. Reivindicación 55: Un polipéptido de muerte celular artificial que comprende una timidina quinasa del virus del herpes simple (HSV-tk) fusionada a un polipéptido del antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) mediante un enlazador. Reivindicación 61: Un polipéptido de muerte celular artificial que comprende un polipéptido del antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) y un clúster de diferenciación 24 (CD24) operativamente unido por una secuencia peptídica de autoproteasa. Reivindicación 64: Una iPSC o célula T que comprende un polipéptido de muerte celular artificial de cualquiera de las reivindicaciones 55 - 60. Reivindicación 65: Una iPSC o célula T que comprende un polipéptido de muerte celular artificial de cualquiera de las reivindicaciones 61 - 63. Reivindicación 66: Una célula madre pluripotente inducida (iPSC) o una célula T derivada de la misma que comprende: uno o más polinucleótidos que codifican (a) un receptor de células T gd reordenado (TCR) (b) un polinucleótido exógeno que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR); y (c) un polipéptido de muerte celular artificial que comprende una timidina quinasa del virus del herpes simple (HSV-tk) fusionada a un polipéptido del antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) mediante un enlazador. Reivindicación 67: Un polipéptido variante DLL4 recombinante que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID Nº 140 - 142. Reivindicación 68: Un método para diferenciar iPSCs en células T que comprende el cultivo de células en un medio que comprende una variante de la proteína tipo Delta 4 recombinante (DLL4) seleccionada entre los polipéptidos de la reivindicación 67.