Patent ES-2884930-T3 (ES)
Title: Inmunoensayo de canalización de oxígeno luminiscente utilizando tres anticuerpos y métodos de producción y uso de los mismos
Inventor: LEDDEN DAVID J
IPC: G01N33/58
Filed: 2015-03-24
Granted: 2021-12-13
Abstract: Un kit que contiene un sistema de detección quimioluminiscente para un analito específico, comprendiendo el kit: (a) una primera composición que comprende un compuesto quimioluminiscente activable por oxígeno singlete y un primer anticuerpo o fragmento de unión del mismo asociado con el mismo, en el que el primer anticuerpo o fragmento de unión del mismo es un anticuerpo de detección que se une específicamente a un primer epítopo del analito, por lo que el compuesto quimioluminiscente activable por oxígeno singlete es capaz de unirse indirectamente al analito a través del primer anticuerpo o fragmento de unión del mismo; (b) una segunda composición que comprende un compuesto quimioluminiscente activable por oxígeno singlete y un segundo anticuerpo o fragmento de unión del mismo asociado con el mismo, en donde el segundo anticuerpo o fragmento de unión del mismo es un anticuerpo de detección que se une específicamente a un segundo epítopo del analito, por lo que el compuesto quimioluminiscente activable por oxígeno singlete es capaz de unirse indirectamente al analito a través del segundo anticuerpo o fragmento de unión del mismo, y en donde el primer y segundo epítopos se superponen al menos parcialmente de tal manera que el primer y segundo anticuerpo o fragmentos de unión del mismo no pueden unirse a una sola molécula del analito; y (c) una tercera composición que comprende un tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo, siendo el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo un anticuerpo de captura que se une específicamente a un tercer epítopo del analito que no se superpone con el primer y segundo epítopos, por lo que una única molécula de analito puede unirse al tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo y uno del primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión del mismo, y en donde el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo es capaz de asociarse con un sensibilizador capaz de generar oxígeno singlete en su estado excitado, por lo que la asociación del tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo con el sensibilizador permite la unión indirecta del sensibilizador al analito, y comprendiendo además el sensibilizador, en el que el primer anticuerpo o fragmento de unión y el segundo anticuerpo o fragmento de unión exhiben diferentes afinidades por el analito, uno de los dos anticuerpos o fragmento de unión tiene una afinidad más baja por el analito, mientras que el otro anticuerpo o fragmento de unión tiene una mayor afinidad por el analito, donde el analito es troponina I cardíaca y donde al menos uno de: (I) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 2, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 3-7; (II) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 3, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 2 y 4-7; (III) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 4, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 2-3 y 5- 7; (IV) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 5, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 2-4 y 6- 7; (V) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 6, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 2-5 y 7; y (VI) el primer y segundo anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos se unen específicamente a los epítopos superpuestos dentro de la SEQ ID NO: 7, y el tercer anticuerpo o fragmento de unión del mismo se une específicamente a un epítopo dentro de una de las SEQ ID NOS: 2-6.