Patent AR-087063-A1 (AR)
Title: Establecimiento de lineas de miocitos cardiacos con especificidad por un paciente o por una persona a partir de celulas madre pluripotenciales humanas inducidas (ipsc)
Inventor: JINSONG SHEN
IPC: A61P9/00
Filed: 2012-07-04
Abstract: Reivindicación 1: Un método para generar una línea de células o una composición que contiene células a partir de una o más células madre pluripotenciales inducidas (iPSC), caracterizado porque comprende los siguientes pasos: (a) obtener una o más iPSC; (b) iniciar la diferenciación de las una o más iPSC; (c) separar una o más células o uno o más grupos de células que presentan un latido espontáneo; (d) llevar a cabo un primer cultivo con las células diferenciadas o con los grupos de células diferenciadas durante un período de tiempo determinado; (e) separar una o más células o uno o más grupos de células que presentan un latido espontáneo del primer cultivo; (f) llevar a cabo un segundo cultivo con las células diferenciadas o los grupos de células diferenciadas provenientes del primer cultivo durante un período de tiempo determinado; (g) remover una o más células o uno o más grupos de células que presentan un latido espontáneo del segundo cultivo, de manera tal que en el segundo cultivo permanezcan una o más células diferenciadas; (h) cosechar las una o más células diferenciadas que permanecen en el segundo cultivo; y (i) expandir las células diferenciadas cosechadas del segundo cultivo para obtener la línea de células o la composición que contiene células. Reivindicación 3: El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la obtención de las una o más iPSC comprende los siguientes pasos: la provisión de un cultivo primario que comprende una o más células no pluripotenciales provenientes de un sujeto mamífero; y la transfección de las una o más células no pluripotenciales con uno o más factores de transcripción o con uno o más genes asociados a las células madre, con el propósito de generar iPSC a partir de las células no pluripotenciales. Reivindicación 6: El método de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado porque el sujeto mamífero es un sujeto humano, que puede ser al menos un sujeto saludable, un sujeto que padece un trastorno metabólico, una enfermedad cardiovascular, una disfunción cardiaca, un infarto de miocardio, una isquemia en el miocardio, una reperfusión en el miocardio, una isquemia en el subendocardio, una arteritis de Takayasu, una fibrilación atrial, un accidente cerebrovascular hemorrágico, una isquemia combinada con reperfusión, una lesión provocada por la reperfusión y/o una enfermedad cardiaca congénita, y/o que ha sido sometido a una cirugía en el corazón. Reivindicación 16: Un método para generar una línea de cardiomiocitos o una composición que contiene cardiomiocitos a partir de una o más células madre pluripotenciales inducidas (iPSC), caracterizado porque comprende los siguientes pasos: (a) obtener una o más iPSC; (b) iniciar la diferenciación de las una o más iPSC; (c) separar una o más células diferenciadas o uno o más grupos de células diferenciadas, donde las una o más células diferenciadas o los uno o más grupos de células diferenciadas comprenden miocitos cardiacos que presentan la capacidad de latir; (d) llevar a cabo un primer cultivo con uno o más miocitos cardiacos o con uno o más grupos de miocitos cardiacos durante un período de tiempo determinado; (e) separar uno o más miocitos cardiacos o uno o más grupos de miocitos cardiacos que presentan un latido espontáneo del primer cultivo; (f) llevar a cabo un segundo cultivo con los uno o más miocitos cardiacos diferenciados o los uno o más grupos de miocitos cardiacos diferenciados provenientes del primer cultivo durante un período de tiempo determinado; (g) remover uno o más miocitos cardiacos o uno o más grupos de miocitos cardiacos que presentan un latido espontáneo del segundo cultivo, de manera tal que en el segundo cultivo permanezcan uno o más miocitos cardiacos diferenciados; (h) cosechar los uno o más miocitos cardiacos diferenciados que permanecen en el segundo cultivo; y (i) expandir los miocitos cardiacos diferenciados cosechados del segundo cultivo para obtener la línea de cardiomiocitos o la composición que contiene cardiomiocitos. Reivindicación 19: El método de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque el sujeto mamífero es un sujeto humano, que puede ser al menos un sujeto saludable, un sujeto que padece un trastorno metabólico, una enfermedad cardiovascular, una disfunción cardiaca, un infarto de miocardio, una isquemia en el miocardio, una reperfusión en el miocardio, una isquemia en el subendocardio, una arteritis de Takayasu, una fibrilación atrial, un accidente cerebrovascular hemorrágico, una isquemia combinada con reperfusión, una lesión provocada por la reperfusión y/o una enfermedad cardiaca congénita, y/o que ha sido sometido a una cirugía en el corazón. Reivindicación 26: Un sistema o un modelo in vitro con los que pueden llevarse a cabo estudios para analizar el mecanismo subyacente de diversas enfermedades, con los que pueden diagnosticarse diversas enfermedades cardiovasculares o las complicaciones cardiacas de uno o más trastornos metabólicos, con los que puede analizarse la actividad y/o la toxicidad de diversas drogas en el corazón, con los que puede optimizarse un régimen terapéutico en el corazón o con los que puede cumplirse con cualquier combinación de estos objetivos, caracterizados porque comprenden los siguientes pasos: proveer una o más líneas de cardiomiocitos o una composición que contiene uno o más cardiomiocitos; aplicar una droga candidata a un sistema in vitro que comprende una línea de cardiomiocitos o una composición que contiene una población de uno o más cardiomiocitos, donde al menos algunos de los cardiomiocitos pueden proliferar, formar miotubos, presentar marcadores propios del corazón o cualquier combinación de éstos; monitorear los cambios resultantes del tratamiento con la droga candidata en la actividad, en la expresión, en la morfología o en cualquier combinación de éstas en la línea o la población de cardiomiocitos; y correlacionar los cambios en la actividad, en la expresión, en la morfología o en cualquier combinación de éstas en la línea o la población de cardiomiocitos con la actividad y/o la efectividad de la droga candidata. Reivindicación 33: Una composición con la que puede proveerse un tratamiento o un tratamiento optimizado para una o más enfermedades cardiovasculares o para una o más complicaciones cardiovasculares de la enfermedad de Fabry en un sujeto humano o animal, caracterizada porque comprende una línea de cardiomiocitos o una composición que contiene uno o más cardiomiocitos, donde la línea de cardiomiocitos o la composición que contiene uno o más cardiomiocitos se generan con un método de acuerdo con la reivindicación 16. Reivindicación 36: El método de acuerdo con la reivindicación 34, caracterizado porque las una o más enfermedades cardiovasculares se seleccionan entre una disfunción cardiaca, un infarto de miocardio, una isquemia en el miocardio, una reperfusión en el miocardio, una isquemia en el subendocardio, una arteritis de Takayasu, una fibrilación atrial, un accidente cerebrovascular hemorrágico, una isquemia combinada con reperfusión, una lesión provocada por la repercusión, una enfermedad cardiaca congénita o un trastorno provocado por una cirugía en el corazón.