Patent ES-2589079-T3 (ES)
Title: Tecnología de amplificación de ácido nucleíco acelerado isotérmicamente
Inventor: TISI LAURENCE CARLO
IPC: C12Q1/68
Filed: 2010-06-15
Granted: 2016-11-10
Abstract: Un método para sintetizar a un ácido polinucleico donde dicho método comprende los pasos de a) Suministrar a una plantilla objetivo que comprende de por lo menos una primera y una 2ª regiones de enlace de cebadores recíprocos; b) Suministrar a un primer cebador que tiene a un primer y 2º segmentos, donde el primer segmento es sustancialmente complementario a la primera región de enlace de cebadores recíprocos en la plantilla y el 2º segmento tiene una secuencia que es sustancialmente complementaria a otra región en el primer cebador o a una región en el amplicón generado a partir del primer segmento del primer cebador de tal forma que el 2º segmento es capaz de formar un bucle, donde, cuando el primer cebador comprende a un 2º segmento que es sustancialmente complementario a una región en el amplicón generado a partir del primer segmento del primer cebador, la primera región de enlace de cebadores recíprocos también abarca a la región en la plantilla que es sustancialmente idéntica al 2º segmento del primer cebador; c) Suministrar un 2º cebador que comprende a un primer y opcionalmente a un 2º segmentos, donde el primer segmento es sustancialmente complementario a la 2ª región de enlace de cebadores recíprocos en la plantilla y el 2º segmento opcional comprende a una secuencia que es sustancialmente complementaria a otra región en el 2º cebador o a una región en el amplicón generado a partir del primer segmento del 2º cebador de tal forma que la 2ª región está disponible para formar a un bucle, donde, cuando el 2º cebador comprende a un 2º segmento que es sustancialmente complementario a una región en el amplicón generado a partir del primer segmento del 2º cebador, la 2ª región de enlace de cebadores recíprocos también abarca a la región en la plantilla que es sustancialmente idéntica al 2º segmento del 2º cebador; d) Suministrar por lo menos un cebador madre que sea capaz de enlazarse a la región entre la primera y la 2ª regiones de enlace de cebadores recíprocos, donde dichas cebador es (i) Un cebador simple, que es complementario a un lugar de enlace de cebadores en un ácido polinucleico y que contiene menos de 5 nucleótidos 3' o 5' de la región de cebadores que es sustancialmente complementario al lugar de enlaces de cebadores; (ii) Un cebador que forma bucles, que comprende a un primer y a un 2º segmentos, donde el primer segmento es sustancialmente complementario a una región de enlace de cebadores en la plantilla y el 2º segmento comprende a una secuencia que es sustancialmente complementaria a una región en el amplicón generado a partir del primer segmento del primer cebador de tal forma que el 2º segmento puede formar a un bucle; (iii) Un cebador tipo horquilla, que es un cebador que comprende a un primer y a un 2º segmentos, donde el primer segmento es sustancialmente complementario a una región de enlace de cebadores en una plantilla y el 2º segmento comprende a una secuencia que es sustancialmente complementaria a otra región en el cebador; (iv) Un cebador suministrador de bucles, que es un cebador tipo horquilla en el cual las repeticiones invertidas son separadas por una región enlazadora; o (v) Un cebador quimérico; e) Suministrar los reactivos y condiciones necesarias para realizar la síntesis del ácido polinucleico; f) Realizar la síntesis del ácido polinucleico.