Patent AR-124063-A1 (AR)
Title: Anticuerpo biespecífico anti-tspan8 / anti-cd3 y anticuerpo anti-tspan8
Inventor: TENDA YOSHIYUKI
IPC: C12P21/08
Filed: 2021-11-15
Abstract: Un objetivo de la presente invención es proporcionar un anticuerpo anti-TSPAN8 / anti-CD3 específico y un anticuerpo anti-TSPAN8 utilizable en el tratamiento o prevención en un ser humano. Se inmunizó un ratón productor de anticuerpos monoclonales humanos con una célula cancerosa diseminada peritoneal aislada de un paciente, para obtener un anticuerpo 16B11 y un anticuerpo 16B12 que se unen selectivamente a una célula cancerosa diseminada peritoneal. Estos anticuerpos eran anticuerpos anti-TSPAN8 que se unen a la región de las posiciones de aminoácidos 126 a 155 de TSPAN8 y mostraron una fuerte actividad de unión a TSPAN8 expresada en la célula cancerosa diseminada peritoneal. Además, un anticuerpo biespecífico anti-TSPAN8 (16B11)-anti-CD3 producido sobre la base de la secuencia de 16B11 exhibió una actividad citotóxica contra la célula cancerosa que expresa TSPAN8 in vitro, ejerció una acción antitumoral en ratones portadores de células cancerosas que expresan TSPAN in vivo, y prolongaron la vida útil de los ratones modelo de diseminación peritoneal.  Reivindicación 1: Un anticuerpo biespecífico que se une a TSPAN8 y CD3, que comprende: (a) una región de Fab de un anticuerpo anti-TSPAN8 que consiste en: un fragmento de cadena pesada que comprende una región variable de la cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8; y una cadena liviana que comprende una región variable de la cadena liviana del anticuerpo anti-TSPAN8; (b) una región anti-CD3-scFv que comprende una región variable de la cadena pesada y una región variable de la cadena liviana de un anticuerpo anti-CD3; y (c) una región Fc que consiste en un primer polipéptido de Fc ligado al fragmento de cadena pesada de la región Fab (a) y un segundo polipéptido de Fc ligado a la región anti-CD3-scFv (b). Reivindicación 20: Un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en los siguientes (a) a (e): (a) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena de un anticuerpo anti-TSPAN8 en el que un fragmento de cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 121 de la SEQ ID Nº 6 está ligado a un primer polipéptido de Fc; (b) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena liviana de un anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena liviana que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 107 de la SEQ ID Nº 8; (c) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena de un anticuerpo anti-TSPAN8 en el que un fragmento de cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 121 de la SEQ ID Nº 10 está ligado a un primer polipéptido de Fc; (d) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena liviana de un anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena liviana que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 107 de la SEQ ID Nº 12; (e) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido en el que una región anti-CD3-scFv que comprende una región variable de la cadena pesada de un anticuerpo anti-CD3 que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 125 de la SEQ ID Nº 14, y una región variable de la cadena liviana de un anticuerpo anti-CD3 que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 146 a 254 de la SEQ ID Nº 14 está ligado a un segundo polipéptido de Fc. Reivindicación 21: Un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en los siguientes (a) a (c): (a) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena de un anticuerpo anti-TSPAN8 en el que un fragmento de cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8 que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 6 está ligado a un primer polipéptido de Fc; (b) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena liviana de un anticuerpo anti-TSPAN8 que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 8; y (c) un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido en el que una región anti-CD3-scFv que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 14 está ligado a un segundo polipéptido de Fc. Reivindicación 22: Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 20 ó 21. Reivindicación 23: Una célula huésped transformada con el vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 22. Reivindicación 24: Una célula huésped que comprende: un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena de un anticuerpo anti-TSPAN8 en el que un fragmento de cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 121 de la SEQ ID Nº 6 está ligado a un primer polipéptido de Fc; un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena liviana de un anticuerpo anti-TSPAN8 que comprende una región variable de la cadena liviana que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 107 de la SEQ ID Nº 8; y un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido en el que una región anti-CD3-scFv que comprende una región variable de la cadena pesada de un anticuerpo anti-CD3 que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 1 a 125 de la SEQ ID Nº 14, y una región variable de la cadena liviana de un anticuerpo anti-CD3 que consiste en una secuencia de aminoácidos de las posiciones de aminoácidos 146 a 254 de la SEQ ID Nº 14 está ligado a un segundo polipéptido de Fc. Reivindicación 25: Una célula huésped que comprende: un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena de un anticuerpo anti-TSPAN8 en el que un fragmento de cadena pesada del anticuerpo anti-TSPAN8 que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 6 está ligado a un primer polipéptido de Fc; un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena liviana de un anticuerpo anti-TSPAN8 que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 8; y un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido en el que una región anti-CD3-scFv que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 14 está ligado a un segundo polipéptido de Fc. Reivindicación 26: Un método para producir un anticuerpo biespecífico que se une a TSPAN8 y CD3, que comprende una etapa de cultivar la célula huésped de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 25. Reivindicación 27: Una composición farmacéutica que comprende: el anticuerpo biespecífico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.