Patent AR-116804-A1 (AR)
Title: Métodos y composiciones para terapia con células oculares
IPC: C12N15/90
Filed: 2019-10-23
Abstract: Reivindicación 1: Una célula madre limbar modificada, que ha reducido o eliminado la expresión de b-2-microglobulina (B2M) en relación con una célula madre limbar no modificada, en donde la expresión de B2M se reduce o elimina por un sistema CRISPR que comprende una molécula de ARNg que comprende un dominio de direccionamiento complementario a una secuencia diana en el gen B2M. Reivindicación 3: La célula madre limbar modificada de la reivindicación 1 ó 2, en donde la célula madre limbar modificada se cultivó en medio que comprenden un inhibidor de la quinasa supresora de tumores grandes (“LATS”), opcionalmente en donde el inhibidor de LATS es un compuesto de la fórmula (1) o una sal del mismo, en donde X¹ y X² son respectiva e independientemente CH o N; el anillo A es (a) un heteroarilo monocíclico de 5 ó 6 miembros que está unido al resto de la molécula a través de un miembro de anillo de carbono y comprende, como miembro anular, 1 a 4 heteroátomos que son independientemente seleccionados entre N, O y S, siempre que al menos uno de los miembros del anillo heteroátomo sea un nitrógeno no sustituido (-N=) dispuesto en la posición 3 ó 4 en relación con el miembros del anillo de carbono de unión del heteroarilo de 5 miembros o en la posición para del anillo heteroarilo de 6 miembros; o (b) un heteroarilo bicíclico fusionado de 9 miembros que se selecciona entre los compuestos del grupo de fórmulas (2), en donde “*” representa el punto de unión del anillo A al resto de la molécula; en donde el anillo A no está sustituido o está sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, ciano, C₁₋₆ alquilo, C₁₋₆ haloalquilo, -NH₂, C₁₋₆ alquilamino, di-(C₁₋₆ alquil)amino, C₃₋₆ cicloalquilo, y fenilsulfonilo; R⁰ es hidroxilo o C₁₋₆ alcoxi; R¹ es hidrógeno o C₁₋₆ alquilo; R² se selecciona entre (a) C₁₋₈ alquilo no sustituido o sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre (xvi) halógeno; (xvii) ciano; (xviii) oxo; (xix) C₂ alquenilo; (xx) C₂ alquinilo; (xxi) C₁₋₆ haloalquilo; (xxii) -OR⁶, en donde R⁶ se selecciona entre hidrógeno, C₁₋₆ alquilo no sustituido o sustituido por R⁰ o -C(O)R⁰; (xxiii) -NR⁷ᵃR⁷ᵇ, en donde R⁷ᵃ es hidrógeno o C₁₋₆ alquilo, R⁷ᵇ se selecciona entre hidrógeno, -C(O)R⁰, C₁₋₆ alquilo no sustituido o sustituido por -C(O)R⁰; (xxiv) -C(O)R⁸, en donde R⁸ es R⁰ o -NH-C₁₋₆ alquilo-C(O)R⁰; (xxv) -S(O)₂C₁₋₆ alquilo; (xxvi) C₃₋₆ cicloalquilo monocíclico o C₇₋₁₀ cicloalquilo policíclico que respectivamente no están sustituidos o están sustituidos por 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados entre halógeno, C₁₋₆ alquilo, hidroxi-C₁₋₆ alquilo, C₁₋₆ haloalquilo, R⁰, -NH₂, C₁₋₆ alquilamino, y di-(C₁₋₆ alquil)amino; (xxvii) heterocicloalquilo de 6 miembros que comprende, como miembros anulares, 1 a 2 heteroátomos independientemente seleccionados entre N, O y S y que no está sustituido o está sustituido por 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados entre hidroxilo, halógeno, C₁₋₆ alquilo, C₁₋₆ alquilamino, y di-(C₁₋₆ alquil)amino; (xxviii) fenilo que no está sustituido o está sustituido por halógeno; (xxix) heteroarilo monocíclico de 5 ó 6 miembros que comprende, como miembros anulares, 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados entre N y O; y (xxx) heteroarilo bicíclico fusionado de 9 ó 10 miembros que comprende, como miembros anular, 1 a 2 heteroátomos independientemente seleccionados entre N y O; (b) -S(O)₂C₁₋₆ alquilo; (c) fenilo que no está sustituido o está sustituido por 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados entre halógeno, C₁₋₆ alquilo y R⁰; (d) C₃₋₆ cicloalquilo no sustituido o sustituido por 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados, entre C₁₋₆ haloalquilo, R⁰, C₁₋₆ alquilamino, di-(C₁₋₆ alquil)amino, -C(O)R⁰, y C₁₋₆ alquilo no sustituido o sustituido por R⁰ o -C(O)R⁰; y (e) heterocicloalquilo de 4 miembros que comprende, como miembros anulares, 1 a 2 heteroátomos seleccionados entre N, O y S y que no está sustituido o está sustituido por 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados entre C₁₋₆ haloalquilo, R⁰, C₁₋₆ alquilamino, di-(C₁₋₆ alquil)amino, -C(O)R⁰, y C₁₋₆ alquilo no sustituido o sustituido por R⁰ o -C(O)R⁰; o R¹ y R² pueden ser tomados junto con el átomo de nitrógeno al cual se unen para formar un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que puede incluir, como miembros anulares, 1 a 2 heteroátomos adicionales independientemente seleccionados entre N, O y S, en donde el heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros formado por R¹ y R² tomados junto con el átomo de nitrógeno al cual ambos se unen no está sustituido o está sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre halógeno, C₁₋₆ alquilo, C₁₋₆ haloalquilo, y R⁰; R³ se selecciona entre hidrógeno, halógeno y C₁₋₆ alquilo; y R⁵ se selecciona entre hidrógeno, halógeno y -NH-(heteroalquilo de 3 a 8 miembros), en donde el hetero-C₃₋₈ alquilo de 3 a 8 miembros del -NH-(heteroalquilo de 3 a 8 miembros) comprende 1 a 2 átomos de oxígeno como miembros de la cadena y no está sustituido o está sustituido por R⁰. Reivindicación 12: La célula madre limbar modificada de la reivindicación 10, en donde la región diana de la molécula de ARNg es complementaria a una secuencia dentro de una región genómica chr15:44711563-44711585. Reivindicación 14: La célula madre limbar modificada de la reivindicación 13, en donde la región diana de la molécula de ARNg para B2M comprende un dominio de direccionamiento que comprende la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nº 108, 111, 115, 116, 134 ó 138. Reivindicación 26: Una célula madre limbar modificada que comprende un genoma en el que se ha editado el gen b2 microglobulina (B2M) en el cromosoma 15 (a) para eliminar un tramo contiguo de ADN genómico que comprende la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nº 141 a 159, eliminando así la expresión superficial de las moléculas MHC Clase I en la célula o (b) para formar un indel en o cerca de la secuencia diana complementaria al dominio de direccionamiento de la molécula de ARNg que comprende la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nº 23 - 105 o 108 - 119 ó 134 - 140, eliminando así la expresión superficial de las moléculas MHC Clase I en la célula. Reivindicación 30: La célula madre limbar modificada de la reivindicación 29 que comprende un genoma en el que se ha editado el gen b2 microglobulina (B2M) en el cromosoma 15: (a) para eliminar un tramo contiguo de una región de ADN genómico seleccionado entre: chr15:44715513-44715535, chr15:44711542-44711564, chr15:44711563-44711585, chr15:44715683-44715705, chr15:44711597-44711619, o chr15:44715446-44715468, o (b) para formar un indel en o cerca de la región de ADN genómico seleccionada entre cualquiera de: chr15:44715513-44715535, chr15:44711542-44711564, chr15:44711563-44711585, chr15:44715683-44715705, chr15:44711597-44711619, o chr15:44715446-44715468. Reivindicación 49: El método de acuerdo con reivindicación 44, en donde el compuesto es N-(terc-butil)-2-(piridin-4-il)-1,7-naftiridin-4-amina. Reivindicación 50: El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 44 a 49, en donde el compuesto está presente en una concentración de 3 a 10 micromolar. Reivindicación 54: Una población de células que comprende la célula madre limbar modificada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 42 o la célula madre limbar modificada obtenida por el método de cualquiera de las reivindicaciones 43 - 53. Reivindicación 59: Una composición que comprende la célula madre limbar modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 42 o la célula madre limbar modificada que se obtiene por el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 43 - 53 o la población de células de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 54 - 58 o la población de células madre limbares modificadas que se obtiene por el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 43 - 53.