Patent WO-2015104288-A1 (WO)
Title: Nouveaux procédés pour la stabilisation de protéines
Inventor: BUCHNER JOHANNES
IPC: C07K16/00
Filed: 2015-01-07
Abstract: La présente invention concerne un procédé de production d'une protéine modifiée ayant une stabilité accrue et/ou une efficacité de pliage améliorée par comparaison à la protéine non modifiée, le procédé consistant à (i) modifier une molécule d'acide nucléique codant pour une protéine comprenant au moins une région d'immunoglobuline de type domaine constant en (a-i) remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé, de préférence un acide aminé non chargé, dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour un acide aminé chargé sélectionné dans le groupe constitué d'Arg, de Lys, d'His, de Glu et d'Asp et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé, de préférence un acide aminé non chargé, dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour un acide aminé chargé sélectionné dans le groupe constitué d'Arg, de Lys, d'His, de Glu et d'Asp; (a-ii) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé n'ayant pas de chaîne latérale qui peut former une liaison hydrogène dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour un acide aminé ayant une chaîne latérale capable de former une liaison hydrogène sélectionné dans le groupe constitué de Gin, d'Asn, de Tyr, de Ser et de Thr et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé n'ayant pas de chaîne latérale qui peut former une liaison hydrogène dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour un acide aminé ayant une chaîne latérale capable de former une liaison hydrogène sélectionné dans le groupe constitué de Gin, d'Asn, de Tyr, de Ser et de Thr; et/ou (a-iii) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour une cystéine et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour une cystéine; et/ou (b) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé non hydrophobe à une position adaptée pour participer à la formation du cœur hydrophobe avec des nucléotides codant pour un acide aminé hydrophobe sélectionné parmi le groupe formé de Val, d'He, de Leu, de Met, de Phe, de Trp et de Pro; et (ii) exprimer la molécule d'acide nucléique pour produire la protéine stabilisée. La présente invention se rapporte en outre à un procédé de production d'une protéine modifiée ayant une sécrétion améliorée à partir de cellules par comparaison à la protéine non modifiée, ainsi qu'à une protéine comprenant au moins une région d'immunoglobuline de type domaine constant ayant un pont salin supplémentaire, une liaison hydrogène supplémentaire, un pont disulfure supplémentaire et/ou un cœur hydrophobe allongé. La présente invention concerne en outre une molécule d'acide nucléique codant pour la protéine modifiée de l'invention, ainsi qu'un vecteur comprenant ladite molécule d'acide nucléique et une cellule hôte comprenant le vecteur. La présente invention concerne en outre une composition ainsi qu'un kit.