Patent RU-2707537-C1 (RU)
Title: Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов COL1A1, COL1A2, BMP2, BMP7, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- COL1A1 или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- COL1A2 или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BMP2 или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BMP7, несущий генотерапевтический ДНК-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора
Inventor: Savelieva Natalia
IPC: C12N15/12
Filed: 2018-09-04
Granted: 2019-11-27
Abstract: Изобретение относится к генной инженерии. Описан генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7, для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17- COL1A2, или VTvaf17- ВМР2, или VTvaf17-ВМР7 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 соответственно. Каждый из созданных генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17-COL1A2, или VTvaf17-ВМР2, или VTvaf17-ВМР7 за счет ограниченного размера векторной части VTvaf17, не превышающего 3200 п.н, обладает способностью эффективно проникать в клетки и экспрессировать клонированный в него целевой ген, выбранный из группы генов COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7. В составе генотерапевтического ДНК-вектора отсутствуют нуклеотидные последовательности вирусного происхождения и отсутствуют гены антибиотикорезистентности, обеспечивая возможность его безопасного применения для генетической терапии человека и животных. Создан также способ получения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7, который заключается в том, что каждый генотерапевтический ДНК-вектор: VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17-COL1A2, или VTvaf17-ВМР2, или VTvaf17-ВМР7, получают следующим образом: кодирующую часть целевого гена из группы генов COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7 клонируют в ДНК-вектор VTvaf17 и получают генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-COL1A1, SEQ ID №1, или VTvaf17-COL1A2, SEQ ID №2 или VTvaf17-BMP2, SEQ ID №3, или VTvaf17-BMP7, SEQ ID №4 соответственно. Способ применения созданного генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов заключается во введении выбранного генотерапевтического ДНК-вектора или нескольких выбранных генотерапевтических ДНК-векторов в клетки, органы и ткани человека или животного, и/или во введении в органы и ткани человека или животного аутологичных клеток человека или животного, трансфицированных выбранным генотерапевтическим ДНК-вектором или несколькими выбранными генотерапевтическими ДНК-векторами, или в сочетании обозначенных способов. Представлен способ получения штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-COL1A1 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-COL1A2, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-BMP2, или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-BMP7 заключается в электропорации компетентных клеток штамма Escherichia coli SCS110-AF созданным генотерапевтическим ДНК-вектором и последующей селекцией стабильных клонов штамма с использованием селективной среды. Представлен штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-COL1A1, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-COL1A2, или штамм Escherichia coli SCS110-AFA/Tvaf17-BMP2, или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-BMP7, несущий генотерапевтический ДНК-вектор для его наработки с возможностью культивирования штамма без использования антибиотиков. Способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора заключается в масштабировании бактериальной культуры штамма до количеств, необходимых для наращивания бактериальной биомассы в промышленном ферментере, после чего биомассу используют для выделения фракции, содержащей целевой ДНК-продукт - генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17-COL1A2, или VTvaf17-VTvaf17-BMP2, или VTvaf17-BMP7, многостадийно фильтруют и очищают хроматографическими методами. Изобретение может быть использовано в биотехнологии, медицине и сельском хозяйстве для создания препаратов генной терапии. 12 н. и 2 з.п. ф-лы, 14 ил., 19 пр.