Patent AR-126787-A1 (AR)
Title: Producción heteróloga de citoquininas en levaduras
Inventor: CATALDO VICENTE F
IPC: C12N9/02
Filed: 2022-08-15
Abstract: La presente invención proporciona cepas de levadura manipulada por ingeniería metabólica, tales como cepas de Saccharomyces cerevisiae manipuladas por ingeniería metabólica, que producen altas cantidades de al menos una, preferentemente cuatro citoquininas naturales: trans-zeatina (tZ), trans-zeatina ribósido (tZR), isopenteniladenina (iP) e isopenteniladenina ribósido (iPR).  Reivindicación 1: Una levadura modificada genéticamente que produce al menos una citoquinina seleccionada del grupo que consiste en trans-zeatina, trans-zeatina ribósido, isopenteniladenina, isopenteniladenina ribósido y cualquier combinación de las mismas, caracterizada porque la levadura modificada genéticamente comprende una pluralidad de polinucleótidos exógenos que comprende: (i) un polinucleótido que codifica una isopentenil transferasa; (ii) un polinucleótido que codifica una citoquinina hidroxilasa; (iii) un polinucleótido que codifica una NADPH-citocromo P450 reductasa; y (iv) un polinucleótido que codifica un ribósido fosforibohidrolasas 5-monofosfato. Reivindicación 53: Un método para producir al menos una citoquinina seleccionada grupo que consiste en trans-zeatina, trans-zeatina ribósido, isopenteniladenina, isopenteniladenina ribósido y cualquier combinación de las mismas, el método comprende: (A) proporcionar una levadura modificada genéticamente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 52; (B) cultivar la levadura modificada genéticamente en un medio de cultivo bajo condiciones aptas para expresión de los polinucleótidos exógenos; y (C) recuperar la al menos una citoquinina del medio. Reivindicación 57: Un casete de expresión para modificar genéticamente una levadura, que comprende al menos un elemento regulador ligado operativamente a una secuencia de ácido nucleico seleccionado del grupo que consiste en: (a) una secuencia de ácido nucleico que codifica una isopentenil transferasa; (b) una secuencia de ácido nucleico que codifica una citoquinina hidroxilasa; (c) una secuencia de ácido nucleico que codifica una NADPH- citocromo P450 reductasa; y (d) una secuencia de ácido nucleico que codifica una fosforibohidrolasas 5-monofosfato citoquinina ribósido. Reivindicación 65: Una construcción de ácido nucleico para modificar genéticamente una levadura para producir citoquininas que comprende una pluralidad de casetes de expresión, la pluralidad de casetes de expresión comprende: un casete de expresión para expresar A. thaliana IPT4 que comprende la secuencia contemplada en la SEQ ID Nº 15; un casete de expresión para expresar A. thaliana CYP735A1 que comprende la secuencia contemplada en la SEQ ID Nº 16; un casete de expresión para expresar A. thaliana ATR1 que comprende la secuencia contemplada en la SEQ ID Nº 17; y un casete de expresión para expresar A. thaliana LOG7 que comprende la secuencia contemplada en la SEQ ID Nº 18. Reivindicación 66: Un vector para transformar una célula de levadura para producir citoquininas, el vector comprende la construcción de ácido nucleico de la reivindicación 65, flanqueada por secuencias de integración genómica de levadura en 5 y 3. Reivindicación 68: Un método para generar una levadura que produce al menos una citoquinina seleccionada del grupo que consiste en trans-zeatina, trans-zeatina ribósido, isopenteniladenina, isopenteniladenina ribósido y cualquier combinación de las mismas, el método comprende transformar la levadura con una pluralidad de polinucleótidos exógenos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 57 - 64.