Patent AR-126199-A1 (AR)
Title: Métodos para aislar linfocitos infiltrantes de tumores y uso de los mismos
Inventor: BISWAS SUNETRA
IPC: A61K35/17
Filed: 2022-06-22
Abstract: Métodos para determinar la potencia de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) aislados y expandidos y para producir poblaciones terapéuticas de TIL, así como composiciones que los comprenden y métodos de tratamiento con los mismos.  Reivindicación 1: Un método para evaluar la potencia de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) contra células cancerosas, caracterizado porque comprende: a) obtener una población aislada y expandida ex vivo de los TIL; b) cocultivar la población de los TIL con células diana modificadas que activan las células T a través de CD3 para preparar una población de TIL activada; c) agregar a la población de TIL activada, un anticuerpo anti-CD107a marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo, un anticuerpo anti-CD2 marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y un anticuerpo anti-IFN-g marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo; d) detectar la presencia o ausencia de células T CD2+ viables que expresan uno o ambos entre: a. IFN-g, y b. CD107a; y, e) determinar el porcentaje de potencia de la población de TIL activada. Reivindicación 99: Un método para preparar una población terapéutica de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL), caracterizado porque comprende: a) desagregar de manera aséptica un tumor extirpado de un sujeto para preparar de esa manera un producto de tumor desagregado, en donde la desagregación comprende aplicar repetidamente presión física entre 120 y 360 veces por minuto a como máximo 6 N/cm² en presencia de un medio de una solución de enzimas, en donde el tumor está suficientemente desagregado en una suspensión de células como para que el producto de tumor desagregado se pueda criopreservar; b) dentro de las 24 horas de preparar el producto de tumor desagregado, enfriar el producto de tumor desagregado hasta una temperatura de criopreservación adecuada para preparar un producto de tumor desagregado criopreservado; c) guardar el producto de tumor desagregado criopreservado en un estado congelado; d) descongelar el producto de tumor desagregado criopreservado; e) realizar una primera expansión mediante el cultivo del producto de tumor desagregado criopreservado en un medio de cultivo celular que comprende IL-2 para producir una primera población de TIL; f) realizar una segunda expansión mediante cultivo de la primera población de TIL en un medio de cultivo celular con IL-2 adicional, OKT-3 y células presentadoras de antígenos (APC), para producir una segunda población de TIL; y g) criopreservar la segunda población de TIL para preparar una población terapéutica de TIL criopreservada; en donde los pasos (a), (b), (c), (d), (e), (f) y (g) se conducen en un sistema cerrado; h) obtener una muestra de la segunda población de TIL del paso f) o una muestra de la población terapéutica de TIL criopreservada del paso g); i) cocultivar la población de los TIL del paso h) con células del tumor para preparar una población de TIL activada; j) agregar a la población de TIL activada, un anticuerpo anti-CD107a marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo, un anticuerpo anti-CD2 marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y un anticuerpo anti-IFN-g marcado con fluorescencia o un fragmento de unión a antígeno del mismo k) detectar la presencia o ausencia de células T CD2+ viables que expresan uno o ambos entre: a. IFN-g, y b. CD107a; y, l) determinar el porcentaje de potencia de la población de TIL activada.