Patent AR-109953-A2 (AR)
Title: Fosfolipasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para prepararlas y usarlas
Inventor: WALL MARK A
IPC: C12P21/02
Filed: 2017-10-13
Abstract: Enzimas fosfolipasas específicas de fosfatidilinositol C (PI-PLC), anticuerpos que se unen específicamente a las mismas y métodos para prepararlas y usarlas. También se proveen métodos y productos industriales que comprenden el uso de estas fosfolipasas. En determinadas formas de realización, se proveen métodos para hidratar fosfolípidos no hidratables (NHP) en una matriz lipídica. Los métodos permiten la migración de los NHP a una interfase de aceite / agua, lo que permite la reacción de los NHP y/o su remoción de entre los lípidos. En determinadas formas de realización, se provee un método para remover los NHP, los fosfolípidos hidratables y las lecitinas de los aceites vegetales, con el objeto de producir un aceite o un producto graso desgomado que puede usarse en la producción de alimentos y/o en aplicaciones no alimenticias. En determinadas formas de realización, se proveen métodos que comprenden la hidratación de los NHP que es seguida por un tratamiento enzimático y por la remoción de diversos fosfolípidos y diversas lecitinas. Los métodos provistos en la presente pueden ponerse en práctica con aceites crudos o desgomados con agua. Reivindicación 1: Un ácido nucleico, sintético o recombinante, aislado, caracterizado porque comprende o consiste en una secuencia de ácidos nucleicos: (a) que codifica un polipéptido que tiene una actividad enzimática de fosfolipasa C específica de fosfatidilinositol (PI-PLC), y (i) que tiene al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más de identidad de secuencia con la SEQ ID Nº 5 y que codifica un polipéptido que tiene al menos uno o más, o todos, los cambios de aminoácidos (mutaciones) que consisten en N176F, Q191G, Y205L, N244T, Y252R, Y276F, S282H, L284F y R291N, o cualquier combinación de los mismos, en donde la numeración de los cambios de aminoácidos comienza con el aminoácido 31 de la SEQ ID Nº 6; (ii) que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se establece en la SEQ ID Nº 6 y que tiene al menos uno de los cambios de aminoácidos o sustituciones (mutaciones) que consisten en N176F, Q191G, Y205L, N244T, Y252R, Y276F, S282H, L284F, y R291N, o cualquier combinación de los mismos, en donde la numeración de los cambios de aminoácidos comienza con el aminoácido 31 de la SEQ ID Nº 6; o (iii) un ácido nucleico que comprende o consiste en la secuencia SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 9 o SEQ ID Nº 10; o (iv) que tiene al menos 98%, 99%, o más, o 100% de identidad de secuencia con la SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 9 o SEQ ID Nº 10; (b) la secuencia de ácidos nucleicos de (a) que codifica un polipéptido que tiene la actividad enzimática de PI-PLC pero carece de una secuencia señal o una secuencia de aminoácidos de la proproteína nativa; (c) la secuencia de ácidos nucleicos de (a) o (b) que codifica un polipéptido que tiene la actividad enzimática de PI-PLC pero carece de una secuencia promotora nativa; (d) el ácido nucleico de (c) que además comprende una secuencia promotora heteróloga u otra secuencia reguladora de la transcripción; (e) la secuencia de ácidos nucleicos de cualquiera de (a) o (d) que además comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos heteróloga o además comprende una secuencia de nucleótidos heteróloga; (f) el ácido nucleico de (e), en donde el ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos heteróloga comprende, o consiste en, una secuencia que codifica una secuencia señal heteróloga (directriz), o una marca o un epitope, o la secuencia de nucleótidos heteróloga comprende una secuencia promotora heteróloga; (g) una secuencia de ácidos nucleicos totalmente complementaria con la secuencia de nucleótidos de cualquiera de (a) a (f).