Patent ES-2548776-T3 (ES)
Title: Fitasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para su producción y uso
Inventor: STEER BRIAN
IPC: A23L11/00
Filed: 2007-09-21
Granted: 2015-10-20
Abstract: Un ácido nucleico aislado, sintético o recombinante que comprende (a) una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una actividad fitasa y que tiene al menos 95%, 96%, 97%, 98% o 99% o más identidad de secuencia con SEC ID Nº: 1, y que tiene al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o todas las 13 modificaciones de nucleótidos seleccionadas a partir del grupo que consiste en: los nucleótidos en las posiciones 139 a 141 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por TTT o TTC; los nucleótidos en las posiciones 289 a 291 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GTT, GTC, GTA o GTG; los nucleótidos en las posiciones 289 a 291 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GAA o GAG; los nucleótidos en las posiciones 406 a 408 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por CAT o CAC; los nucleótidos en las posiciones 475 a 477 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GTT, GTC, GTA o GTG; los nucleótidos en las posiciones 475 a 477 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GAA o GAG; los nucleótidos en las posiciones 487 a 489 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por CGT, CGC, CGA, CGG, AGA o AGG; los nucleótidos en las posiciones 490 a 492 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por CGT, CGC, CGA, CGG, AGA o AGG; los nucleótidos en las posiciones 502 a 504 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por CGT, CGC, CGA, CGG, AGA o AGG; los nucleótidos en las posiciones 535 a 537 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por CGT, CGC, CGA, CGG, AGA o AGG; los nucleótidos en las posiciones 676 a 678 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GAT o GAC; los nucleótidos en las posiciones 697 a 699 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por TGG; los nucleótidos en las posiciones 823 a 825 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GTT, GTC, GTA o GTG; los nucleótidos en las posiciones 865 a 867 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por GCT, GCC, GCA o GCG; y los nucleótidos en las posiciones 1045 a 1047 de la SEC ID Nº: 1 se reemplazan por TAT o TAC; donde el polipéptido tiene una termoestabilidad mejorada sobre la fitasa de la SEC ID Nº: 2, y retiene 100% de la actividad tras el tratamiento a 80 °C durante 30 minutos; (b) un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una actividad fitasa y que tiene al menos 95%, 96%, 97%, 98% o 99% o más identidad de secuencia de SEC ID Nº: 2, y que tiene al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o todas las trece modificaciones de aminoácidos seleccionadas a partir del grupo que consiste en: el aminoácido alanina en la posición de aminoácido 47 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una fenilalanina; el aminoácido cisteína en la posición de aminoácido 97 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una valina; el aminoácido cisteína en la posición de aminoácido 97 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por un ácido glutámico; el aminoácido en la posición equivalente a la de la treonina en la posición de aminoácido 136 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una histidina; el aminoácido asparagina en la posición de aminoácido 159 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una valina; el aminoácido asparagina en la posición de aminoácido 159 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por un ácido glutámico; el aminoácido en la posición equivalente a la de la treonina en la posición de aminoácido 163 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una arginina; el aminoácido ácido aspártico en la posición de aminoácido 164 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una arginina; el aminoácido ácido glutámico en la posición de aminoácido 168 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una arginina; el aminoácido glicina en la posición de aminoácido 179 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una arginina; el aminoácido cisteína en la posición de aminoácido 226 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por un ácido aspártico; el aminoácido valina en la posición de aminoácido 233 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por un triptófano; el aminoácido glutamina en la posición de aminoácido 275 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una valina; el aminoácido arginina en la posición de aminoácido 289 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una alanina; y el aminoácido treonina en la posición de aminoácido 349 de la SEC. ID Nº: 2 se reemplaza por una tirosina; donde el polipéptido tiene una termoestabilidad mejorada sobre la fitasa de la SEC. ID Nº: 2 y retiene 100% de la actividad después del tratamiento a 80 °C durante 30 minutos; (c) la secuencia de ácido nucleico de (a) o (b) que codifica un polipéptido que tiene una actividad fitasa pero que carece de: una secuencia señal o secuencia de proproteína, o una secuencia promotora homóloga; (d) el ácido nucleico de cualquiera de (a) a (c) que codifica un polipéptido que tiene una actividad fitasa y que comprende además una secuencia de aminoácidos heteróloga, o el ácido nucleico de cualquiera de (a) a (c) que comprende además una secuencia de nucleótidos heteróloga; (e) el ácido nucleico de (d), donde la secuencia de aminoácidos heteróloga comprende, o consiste en una secuencia que codifica una secuencia señal heteróloga (líder), o un marcador o un epítopo, o la secuencia de nucleótidos heteróloga que comprende una secuencia promotora heteróloga o codifica una secuencia de dirección; o (f) una secuencia de ácido nucleico completamente complementaria de la secuencia de ácido nucleico de cualquiera de (a) a (e).