Patent AR-126194-A1 (AR)
Title: Producción, extracción y purificación de 6,7-dihidro-14,15-epoxipulitona a partir de pichia membranifaciens y su uso como bactericida agrícola
Inventor: DOMNGUEZ PUENTE JESS ALEJANDRO
IPC: C07D493/22
Filed: 2022-06-22
Abstract: La presente invención proporciona un compuesto químico de fórmula general (1) obtenido a partir de la fermentación secuencial aeróbica / anaeróbica, de un sustrato de azucares no refinados por la levadura Pichia membranifaciens, que presenta un marcado efecto bactericida en bacterias patógenas relevantes para la industria agrícola.  Reivindicación 3: El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque presenta actividad bactericida contra bacterias fitopatógenas en cultivos. Reivindicación 4: El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado porque las bacterias fitopatógenas se seleccionan del grupo consistente en Xanthomonas campestris, Clavibacter michiganensis y Pseudomonas syringae. Reivindicación 5: Procedimiento para la preparación del compuesto de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende los pasos de: a) disolver azúcares no refinados mediante agitación mecánica hasta obtener una solución de entre 4% a 6% de contenido de azúcares, durante un periodo de tiempo de entre 0.5 a 5 horas; b) adicionar agua a la solución del paso a) y homogenizar durante un periodo de tiempo de entre 0.5 a 2 horas, hasta obtener una concentración final de azúcares de entre 15 a 25 g/L; c) adicionar a la solución obtenida del paso b), entre 0.3 a 0.5% (p/v) de un inóculo compuesto de Pichia membranifaciens con una densidad óptica de entre 1.5 a 2.0 unidades de absorbancia (UA) medidas a una longitud de onda (l) de 540 a 560 nm, para obtener una mezcla; d) fermentar aeróbicamente la mezcla obtenida del paso c) durante un período de tiempo de 12 a 30 días a una temperatura de entre 5ºC a 45ºC, introduciendo oxígeno mediante movimiento mecánico de 0.5 a 2 horas cada 24 horas durante los primeros 3 a 5 días de la fermentación, para obtener un sustrato de fermentación; e) pasteurizar el sustrato de fermentación del paso d) a una temperatura de entre 70º a 75ºC durante 20 a 25 minutos para obtener un líquido (A); f) diluir el líquido (A) a una razón de entre 1:2.5 y 1:5 y adicionar un azúcar no refinado hasta obtener una concentración de azúcares reductores de entre 5 a 10 g/l, agitando mecánicamente por 2 horas al inicio y posteriormente por una hora cada 24 horas, en condiciones anaeróbicas incubando a una temperatura ambiente por un tiempo de 10 a 30 días; g) filtrar el producto del paso f) a vacío, para obtener una fase acuosa primaria, ajustar el pH a 6 y volver a filtrar a vacío para obtener una fase acuosa neutra (F-CN); h) hacer una extracción, líquido / líquido sobre el producto del paso g), colocando la fase acuosa neutra (F-CN) en un embudo de separación y adicionando 1 parte de acetato de etilo por cada 5 partes de la fase acuosa neutra (F-CN) en tres ocasiones, para obtener las fases orgánicas (F-O); i) reunir las fases orgánicas (F-O) del paso h), secarlas con sulfato de sodio y recuperar el disolvente con rotavapor para obtener un residuo café aceitoso (F-01) y; j) purificar el residuo (F-01) mediante cromatografía de columna hasta obtener un líquido aceitoso amarillo con un Rf de 0.56, que corresponde al compuesto de formula (I).