JFFI. 2019; 6(2) 347-352 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia

## EFEK PERBEDAAN PELARUT TERHADAP UJI TOKSISITAS EKSTRAK PINEUNG NYEN TEUSALE
Hilka Yuliani*, Maya Indra Rasyid Prodi Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Pertanian, Universitas Teuku Umar
* hilka.yuliani@utu.ac.id
Submission Date: 07-12-2018; Review Completed: 11-05-2019; Accepted Date: 28-05-2019

## ABSTRACT
Smoked young areca nut  seed or pineung nyen teusalee is a material commonly used by the Acehnese as medicine, especially diabetes medicine. This study aims to determine the phytochemical content and toxicity level of pineung  nyen  teusalee  extracted  using  ethanol  and  aquadest.  The  concentration  of  pineung  nyen  teusalee  extract solution used as the toxicity test concentration was 0 mg / L, 50 mg / L, 100 mg / L, 500 mg / L, and 1000 mg / L. Qualitative  methods  were  used  in  testing  phytochemical  compounds  while  the  toxicity  level  of  LC 50 using  probit analysis using SPSS version 16.0 software. From the results of phytochemical analysis tests (flavonoids, tannins, and saponins)  positive  results  were  obtained  for  ethanol  extract  and  aquadest  extract  for  all  phytochemical  test parameters. Probit analysis showed that the concentration of  ethanol extract  of  pineung nyen teusalee had a toxic effect  on  50%  of  the  population  of  Artemia  salina  Leach  larvae  with  LC 50 values  of  115.71  mg/L.  While  the concentration of aquadest extract of pineung nyen teusalee gave an LC 50 value of 338.40 mg/L.
Keywords: Areca nut; Phytochemical; Toxicity test

## I. PENDAHULUAN
Biji  Pinang  ( Areca  catechu L.)  merupakan salah  satu tanaman  obat  di  Indonesia  yang  memiliki banyak  manfaat,  salah  satu  manfaatnya  yaitu berkhasiat sebagai antidiabetik dan antihiperglikemik. Masyarakat  Aceh  menggunakan  biji  pinang  muda yang  diasapi  yang  disebut  dengan  pineung  nyen teusale  secara  empiris  untuk  mengobati  penyakit diabetes. Biji pinang  muda paling banyak digunakan karena  memiliki  bahan  aktif  yang  paling  tinggi (Haditomo,  2010)  diantaranya  alkaloid  (arekolin, arrekoidin,  gurasin,  guvalin)  sekitar  0,3  –  0,6%, flavonoid, tanin sekitar 15% dan saponin (Novarianto, 2012;  Sa’roni  dan  Anjirni,  2005).  Senyawa  arekolin yang  terkandung  dalam  pinang  dilaporkan  memiliki aktivitas antihiperglikemik (Voigt et al . 2013; Jensen et al . 2014). Namun, arekolin diketahui dapat bersifat memabukkan bagi penggunanya (Grieve, 1995).
Ekstraksi merupakan suatu proses pemisahan bahan  padat  maupun  cair  dengan  bantuan  pelarut. Pelarut  yang  digunakan  harus  dapat  mengekstrak substansi  yang diinginkan tanpa  melarutkan  material lainnya.  Ekstraksi  menggunakan  pelarut  didasarkan pada kelarutannya (Ansel, 1989).Jenis pelarut dalam ekstraksi,  dapat  mempengaruhi  perolehan  kadar  zat aktif dari tumbuhan. Maka dari itu, pemakaian pelarut yang terbaik akan semakin mempertinggi optimalisasi dalam  pengekstraksi  sampel.  Pelarut  metanol  adalah
salah satu pelarut yang dapat mengekstraksi golongan semua flavonoid dan juga salah satu pelarut yang lebih polar  digunakan  untuk  mengekstraksi  glikosida flavonoid (Miryanti, 2011). Penelitian ini
menggunakan pelarut etanol dan aquadest dikarenakan  kedua  pelarut  tersebut  memiliki  sifat semi polar dan polar. Sarastani et al . (2002), ekstraksi menggunakan pelarut dengan polaritas berbeda dapat menghasilkan ekstrak dengan polaritas yang berbeda pula  sesuai  dengan  sifat  kepolaran  masing-masing ekstrak.
Perbedaan penggunaan jenis pelarut menyebabkan  senyawa  yang  terlarut  akan  berbeda, yang  dapat  berakibat  terhadap  perbedaan  tingkat toksisitas. Perlu  dilakukan  uji  toksisitas  biji  pinang muda  dengan  menggunakan  jenis-jenis  pelarut  yang berbeda untuk mengetahui batas LC 50 dari biji pinang muda  pada  larva  udang Artemia  salina Leach. Penelitian  mengenai  toksisitas  pineung  nyen  teusale dengan  pelarut  yang  berbeda  belum  banyak dilakukan, sehingga penelitian ini perlu dilakukan.

## II. METODE PENELITIAN

## A. Alat dan Bahan
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Pertanian dan Laboratorium Dasar Universitas Teuku Umar.  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  biji  pinang  muda  asap/pineung  nyen  teusalee
yang  diambil  di  kabupaten  Bireun  Aceh,  etanol, aquadest,  larva Artemia  salina Leach,  ragi  sebagai pakan larva udang, dan garam ikan.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  gelas  ukur,  pisau,  neraca  analitik,  pipet, batang pengaduk kaca, lup, vial atau botol kaca, kain flannel  hitam,  kain  saring,  penangas  air,  akuarium, pengatur udara dan lampu.
Metode yang digunakan yaitu uji BSLT yang bertujuan  untuk  menentukan  LC 50 terhadap  pelarut yang  bersifat  toksik  dan  non  toksik.  Penelitian  ini memiliki  beberapa  tahapan  pembuatan  ekstrak senyawa  aktif  pineung  nyen  teusalee  dengan  pelarut berbeda,  pengujian  fitokimia  pada  ektrak,  analisa probit pada hewan uji artemia.

## B. Prosedur Penelitian
1. Persiapan  sampel  (pembuatan  ekstrak  Pineung Nyen Teusalee) (Meiyanto et al , 2008 termodifikasi)
Biji  Pineung  Nyen  Teusalee  sebanyak  1  kg dikumpulkan dari Bireun. Biji Pineung Nyen Teusalee dicuci bersih, dipotong-potong dan dikeringkan dalam oven dengan suhu 70°C. Simplisia yang telah kering diserbuk, diekstraksi dengan metode maserasi, dengan cara merendam Pineung Nyen Teusalee kering dalam pelarut  alkohol  70%  selama  24  jam,  lalu  disaring dengan  kain  saring  dan  direndam  kembali  dalam alkohol  70%  sampai  tersaring  atau  terekstraksi sempurna  yang  ditandai  dengan  warna  alkohol menjadi bening kembali.
Setelah  itu,  pelarut  alkohol  yang  masih tersisa  diuapkan  pada  penangas  air  atau  water  bath serta  diangin-anginkan  sehingga  didapatkan  ekstrak yang  kental  dengan  konsentrasi  100%.  Kemudian ekstrak  Pineung  Nyen  Teusalee  yang  diperoleh  juga ditimbang dan didapatkan berat ekstrak Pineung Nyen Teusalee  murni.  Untuk  mendapatkan  konsentrasi ekstrak yang efektif membunuh larva Artemia salina Leach, maka dilakukan trial atau orientasi dengan uji coba dengan menggunakan konsentrasi desimal, yaitu 1%;  0,5%;  0,25%  dan  0,1%.  Setelah  dilakukan  trial atau  uji  orientasi,  didapatkan  bahwa  konsentrasi terkecil  yang  dapat  menyebabkan  kematian  pada hampir  semua  larva  adalah  0,1%,  maka  konsentrasi yang  ditetapkan  untuk  perlakuan  dan  replikasinya adalah 0,01%;0,02%;0,05% dan 0,1%.
2. Uji Fitokimia
Uji Flavonoid (Harborne, 1996)
Ekstrak  ditimbang  sebanyak  50  mg  dan ditambahkan  air  panas  sebanyak  100  mL  kemudian didihkan selama 5 menit dan disaring. 0,05 mg serbuk Magnesium ditambahkan ke dalam filtrat sebanyak 5 mL dan 1 mL HCl pekat, kemudian dikocok dengan kuat.  Warna  merah  magenta  yang  terbentuk menunjukkan adanya senyawa flavonoid.
Uji Tanin (Harborne, 1996) Ekstrak ditimbang sebanyak 50 mg dilarutkan  dalam  2  mL  air  kemudian  ditambahkan  2 tetes larutan FeCl3 1%. Adanya tannin ditunjukkkan dengan terbentuknya warna biru kehitaman dan hijau kehitaman.
Uji Saponin (Harborne, 1996)
Ekstrak ditimbang sebanyak 50 mg kemudian ditambahkan 10 mL air dan dikocok selama 1  menit.  Setelah  itu  ditambahkan  2  tetes  HCl  1  N. Adanya  saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya busa yang tetap stabil selama 7 menit. Pemilihan telur Artemia salina Leach Pemilihan  telur  udang  dilakukan  dengan merendam  telur  dalam  aquadest  selama  satu  jam. Telur  yang  baik  akan  mengendap  sedangkan  telur yang kurang baik akan mengapung.
Penyiapan larva Artemia Salina Leach Penyiapan  larva  udang  dilakukan  dengan menetaskan telur udang 48 jam sebelum dilakukan uji. Penetasan dilakukan dengan merendam telur tersebut dalam air  laut secukupnya dengan  menerangi  bagian wadah yang tidak ditempati telur udang dengan sinar lampu.
3. Pembagian kelompok perlakuan
Pada penelitian ini larva udang dibagi dalam lima kelompok perlakuan secara acak, yaitu:
a) Kelompok  Kontrol  adalah  10  larva  udang  yang diberi  ekstrak  Pineung  Nyen  Teusalee  dengan konsentrasi 0 mg/L dalam media.
b) Kelompok  P1  adalah  10  larva  udang  yang  diberi ekstrak Pineung Nyen Teusalee dengan konsentrasi 50 mg/L dalam media.
c) Kelompok  P2  adalah  10  larva  udang  yang  diberi ekstrak Pineung Nyen Teusalee dengan konsentrasi 100 mg/L dalam media.
d) Kelompok  P3  adalah  10  larva  udang  yang  diberi ekstrak Pineung Nyen Teusalee dengan konsentrasi 500 mg/L dalam media.
e) Kelompok  P4  adalah  10  larva  udang  yang  diberi ekstrak Pineung Nyen Teusalee dengan konsentrasi 1000 mg/L dalam media.
4. Penentuan LC 50
10  ekor  udang  Artemia  salina  dimasukkan kedalam  larutan  uji  dengan  konsentrasi  1000,  500, 250, 100, 50 mg/L dan pada kontrol. Setiap larutan uji dilakukan  5  kali  pengulangan  dan  dibandingkan dengan kontrol. Pengamatan terhadap udang Artemia salina Leach  dilakukan  selama  24  jam.  Prosentase kematian  udang Artemia  salina Leach  dihitung dengan persamaan berikut:
% Mortalitas = Jumlah larva yang mati Jumlah larva uji x 100%
Rumus  Abbot’s  digunakan  apabila  pada  kontrol  ada udang yang mati:
%Mortalitas=
% kematian pada uji- % kematian pada kontrol 100-% Kematian pada kontrol x 100%
5. Data yang dikumpulkan
Data  yang  dikumpulkan  adalah  data  primer yang didapatkan dari jumlah larva udang yang mati 24 jam  setelah  perlakuan  pada  tiap-tiap  konsentrasi ekstrak biji pineung nyen teusalee.
6. Analisis data
Data  hasil  penelitian  akan  diolah  dan disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  grafik.  Penentuan Nilai LC 50 Penentuan nilai LC 50 menggunakan metode anilasa probit SPSS 16.0.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Proses Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  biji  pinang  muda dilakukan  melalui  proses  ekstraksi  dengan  metode maserasi.  Proses  ekstraksi  merupakan  suatu  cara untuk  memisahkan  campuran  beberapa  zat  menjadi komponen-komponen  yang  terpisah  yang  meliputi pembuatan  serbuk,  pembahasan,  penyaringan,  dan pemekatan  (Ansel,  1989;  Williams,  1981).  Maserasi
yaitu  proses  ekstraksi  dimana  sampel  yang  sudah halus  memungkinkan  untuk  direndam  dalam  pelarut sampai  meresap  dan  melunakkan  susunan  sel, sehingga yang mudah larut akan melarut dan metode ini baik digunakan untuk komponen yang tidak tahan panas  (Ansel,  1989).  Pelarut  yang  digunakan  yaitu etanol dan aquadest yang memiliki sifat polar. Pelarut lebih  cenderung  melarutkan  senyawa  aktif  yang mempunyai  golongan  sama,  sedangkan  untuk  semi polar dapat melarutkan sebagian atau seluruh senyawa aktif dari golongan polar dan nonpolar (Keenan et al , 1990).
Senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak etanol biji pinang adalah senyawa-senyawa yang larut dalam  pelarut  polar  (Rairisti,  2014).  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Sa’roni  dan Adjirni (2005), yang menyatakan bahwa ekstraksi biji pinang  dengan  pelarut  etanol  mengandung  senyawa alkaloid, saponin, tanin, dan flavonoid.
Hasil ekstraksi pineung nyen teusalee dengan berat  simplisia  50  gram  dengan  menggunakan  2 pelarut  yaitu  etanol  dan  aquadest  ditampilkan  pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Pineung Nyen Teusalee
Ekstrak Berat ekstrak (g) Rendemen (%) Bentuk Warna Etanol Aquadest 32,7 23,8 65,6 47,6 Pasta Pasta Coklat kehitaman Coklat kehitaman
Ekstrak  pineung  nyen  teusalee  memiliki rendemen ekstrak etanol sebesar 65,6% dan aquadest sebesar 47,6%. Hal ini diduga pineung nyen teusalee memiliki  senyawa  bioaktif  yang  bersifat  polar. Menurut  Leksono et  al .  (2018),  setiap  pelarut memiliki karakter berbeda dalam mengambil senyawa bioaktif  suatu  sampel  yang  berbeda  kepolarannya.
Pelarut  etanol  dan  aquadest  yang  digunakan  dalam ekstraksi  untuk  mendapatkan  senyawa  berdasarkan tingkat kepolarannya.

## Uji Fitokimia
Adapun hasil uji fitokimia berbagai fraksi ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil Uji Fitokimia Berbagai Fraksi Jenis Senyawa Jenis Ekstrak Fraksi Aquadest Fraksi Etanol Flavonoid + + Tanin + + Saponin + + Keterangan: (+) terdapat senyawa bioaktif Uji Flavonoid Uji flavonoid dilakukan
dengan menambahakan  serbuk  Mg  dan  HCl  pekat  sehingga menghasilkan  warna  merah,  kuning,  atau  jingga akibat  reduksi  dengan  magnesium  dan  HCl  pekat. Dari  hasil  pengujian  diperoleh  bahwa  ekstrak  etanol dan aquadest positif mengandung flavonoid.

## Uji Tanin
Hasil  uji  tanin  dari  sampel  pineung  nyen teusalee  hasil eksktraksi etanol dan aquadest dengan
pereaksi  FeCl 3 0,1%  menunjukkan  uji  positif  yaitu warna  larutan  menjadi  kuning  kehijauan.  Hal  ini terjadi karena adanya reaksi reduksi.

## Uji Saponin
Hasil  uji  saponin  dari  sampel  pineung  nyen teusalee  hasil  ekstraksi  etanol  dan  aquadest menunjukkan  hasil  positif  yang  ditandai  dengan pereaksi  aquadest  menunjukkan  uji  positif  yaitu terbentuknya  busa  yang  konsisten  selama  7  menit. Menurut Prihatna (2001), saponin memiliki
karakteristik berupa buih, sehingga ketika direaksikan dengan  air  dan  dikocok  maka  akan  terbentuk  buih yang dapat bertahan lama. Saponin mudah larut dalam air  dan  tidak  larut  dalam  eter,  memiliki  rasa  pahit menusuk.
Uji  Aktifitas  Toksisitas  dengan  Menggunakan BSLT Lethal Concentration (LC 50 ) adalah konsentrasi  yang  menyebabkan  kematian  50%  dari
organisme uji pada suatu waktu pengamatan tertentu (Astuti,  2004;  Rossiana,  2006).  Berdasarkan  hasil  di atas, terdapat perbedaan tingkat toksisitas dari ekstrak pineung  nyen,  hal  ini  juga  karena  perbedaan  jenis pelarut  yang  digunakan,  sehingga  menyebabkan senyawa  yang  terlarut  akan  berbeda  yang  dapat berakibat  terhadap  perbedaan  tingkat  toksisitas  pada larva udang Artemia salina .
Tabel 3 . Hasil uji BSLT dari setiap fraksi pada pineung nyen teusalee
Sampel Konsentrasi mg/L Akumulasi hidup Akumulasi mati Mortalitas (%) LC 50 Ekstrak Etanol 50 7,67 2,33 23,3 115,71 mg/L 100 7,33 2,67 26,7 500 0 10 100 1000 0 10 100 Ekstrak Aquadest 50 8 2 20 338,40 mg/L 100 7 3 30 500 5,33 4,67 46,7 1000 2,33 7,67 76,7 Tingkat kematian larva tidak hanya dipengaruhi oleh komponen kimia yang terkandung di dalamnya tetapi erat hubungannya dengan konsentrasi terhadap  larva Artemia  salina .  Konsentrasi  yang digunakan dalam penelitian  ini adalah 50  mg/L, 100 mg/L,  500  mg/L  dan  1000  mg/L  terhadap  ektrak etanol  dan  ekstrak  aquadest.  Pada  konsentrasi terendah  sampai  tertinggi  (50  –  1000  mg/L)  ekstrak etanol didapatkan persentase kematian larva Artemia salina sebesar23,3%,  26,7%,  100%  dan  100%. Sedangkan untuk ekstrak aquadest diperoleh persentase  kematian  larva  Artemia  salina  pada konsentrasi  terendah  sampai  tertinggi  (50  –  1000 mg/L)  yaitu  20%,  30%,  46,7%  dan  76,7%.  Ekstrak etanol  merupakan  ekstrak  yang  paling  aktif  karena pada konsentrasi 500 mg/L mampu membunuh 100% larva  udang  dalam  waktu  24  jam.  Analisis  probit menunjukkan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  etanol pineung  nyen  teusalee  memberikan  efek  toksik terhadap  50%  populasi  larva  Artemia  salina  dengan nilai  LC 50 115,71  mg/L.  Sedangkan  konsentrasi ekstrak aquadest pineung  nyen teusalee  memberikan nilai LC 50 338,40 mg/L. Nilai ini menunjukkan bahwa pada  konsentrasi  dimana  ekstrak  tersebut  dapat membunuh  50%  hewan  uji.  Berdasarkan  nilai  LC 50 ekstrak  etanol  dan  aquadest  pineung  nyen  teusalee bersifat  toksik  dikarenakan  nilai  LC 50 berada  lebih rendah dari 1000 mg/L. Menurut Meyer et al (1982), tingkat toksisitas suatu ekstrak adalah sebagai berikut: LC 50 ≤ 30 mg/L = sangat toksik; LC 50 ≤ 1.000 mg/L = toksik;  LC 50 >  1.000  mg/L  =  tidak  toksik.Menurut Ningdah et al . (2015) tinggi rendahnya kematian larva berbanding  terbalik  dengan  nilai  LC 50 .  Ketika  nilai
LC 50 besar maka tingkat kematian larva akan semakin rendah begitu juga sebaliknya.
Berdasarkan  konsentrasi  larutan  uji  yang digunakan,  diperoleh  bahwa  konsentrasi  dan  jenis pelarut  yang  digunakan  mempengaruhi  tingkat toksisitas  suatu  bahan.  Konsentrasi  dan  jenis  pelarut yang bervariasi pada setiap botol uji memiliki jumlah kematian A.  Salina yang  berbeda.  Hasil  uji  BSLT konsentrasi 1000 mg/L etanol menyebabkan rata-rata kematian  larva  tertinggi,  sedangkan  pada  aquadest menunjukkan  kematian  terendah.  Kelompok  kontrol tanpa  penambahan  ekstrak  tidak  ditemukan  adanya kematian pada larva. Hal tersebut menujukkan bahwa setiap  konsentrasi  memiliki  pengaruh  yang  berbeda pada  kematian  larva A.  Salina .  Semakin  tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin tinggi pula jumlah kematian larva. Hal ini sesuai dengan Harbone (1994) yang menyebutkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka sifat toksiknya akan semakin tinggi.
Perbedaan  pelarut  dalam  ekstraksi  dapat mempengaruhi  kandungan  total  senyawa  bioaktif (Santoso et  al ,  2012).  Hal  ini  disebabkan  karena perbedaan polaritas dari pelarut (Megha et al ., 2014). Proses  ekstraksi  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, diantaranya  jenis  pelarut,  perbandingan  pelarut dengan  bahan  ekstraksi,  suhu,  tekanan  dan  waktu ekstraksi  serta  komponen  bioaktif  tumbuhan.  Jika kondisi suhu dan temperatur sama, maka jenis pelarut dan  komponen  senyawa  kimia  yang  terdapat  pada tanaman menjadi faktor yang menentukan keberhasilan proses ekstraksi (Lopez, 2011). Adanya sistem  perendaman,  maka  pelarut  akan  menembus dinding sel dan masuk ke dalam sel yang mengandung
zat aktif sehingga akan larut dalam pelarut (Khoiriyah, 2014).
Kedua  jenis  ektrak  berbentuk  pasta  dengan aroma  yang  khas.  Karakteristik  warna  filtrat  relatif sama antara ekstrak etanol dan aquadest yaitu coklat terang, sedangkan ekstrak kasar kadar dari kedua jenis pelarut  menunjukkan  warna  yang  relatif  sama  yaitu coklat  pekat.  Ekstrak  terbanyak  diperoleh  pada ekstrak  aquadest.  Hal  ini  berarti  bahwa  sampel pineung  nyen  teusalee  mengandung  senyawa  polar tertinggi.  Hal  ini  berarti  bahwa  senyawa-senyawa aktif  pada  pineung  nyen  teusalee  relatif  larut  dalam pelarut polar.

## IV. KESIMPULAN
Adapun  kesimpulan  yang  dapat  diperoleh dari penelitian ini adalah:
1. Pelarut untuk ekstraksi berpengaruh terhadap hasil ekstraksi.
2. Variasi  konsentrasi  dan  jenis  pelarut  yang digunakan dalam ekstraksi mempengaruhi tingkat toksisitas pineung nyen teusalee.
3. Semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin  tinggi sifat toksisitasnya.

## V. UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada
Kementrian  Riset,  teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi atas  bantuan  dana  penilitian,  Fakultas  Pertanian  dan Laboratorium  Dasar  Universitas  Teuku  Umar  atas segala  fasilitas  yang  diberikan  selama  penelitian  ini, serta  semua  pihak  yang  telah  membantu  sehingga penelitian ini dapat berjalan lancar.

## DAFTAR PUSTAKA
Ansel,  H.C.  (1989). Pengantar  Bentuk  Sediaan Farmasi,  Penerjemah:  Farida  Ibrahim . 2008. UI Press. Jakarta. Grieve,  M.  (1995). A  Modern  Herbal ( Areca  Nut ). [online].
Tersedia http://www.botanical.com/botanical/mgmh/
a/arecaorg.html .
Haditomo,  I.  (2010)  ‘Efek  Larvasida  Ekstrak  Biji Pinang  (Areca  catechu)  terhadap  Aedes aegypti L’. Fakultas Kedokteran Universitas
Sebelas Maret. Surakarta.
Harborne,  J.B.  (1987) Metode  Fitokimia,  Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan, Penerjemah:  K.  Padmawinata  dan  I. Soediro . Terbitan ke-2. ITB. Bandung.
Khoiriyah, S., Hanapi, S., dan Fasya, A.G. (2014) ‘Uji
Fitokimia  dan  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi Etil  Asetat,  Kloroform,  dan  Petroleum  Eter Ekstrak  Metanol  Alga  Coklat  Sargassum vulgare  dari  Pantai  Kapong  Pamekasan
Madura’, Alchemy:  Journal  of  Chemisty . 3(2), pp. 133 – 144.
Lopez, A. Rico, M, Rivero, A,., dan de Tangil, M.S.
(2011)  ‘The  Effects  of  Solvent  on  The Phenolic Contents and  Antioxidant Activity of  Stypocaulon  scoparium  algae  Extracts’, Food Chemistry . 125(3), pp. 1104 – 1109. Megha, N.M dan Sabale, A.B. (2014) ‘Antimicrobial, Antioxidant  and  Haemolityc  Potential  of Brown Macroalga Sargosum’, World
Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences . 3(8), pp. 2091 – 2104. Miryanti, A. (2011) Ekstraksi Antioksidan dari Kulit Buah  Manggis (Garcinia  mangostana L.). Bandung.
Ningdyah,  A.W,  Andi,  H.A,  dan  Afghani  Jayuska. (2015) ‘Uji Toksisitas dengan Metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) terhadap Hasil Fraksinasi  Ekstrak  Kulit  Buah  Tampoi (Baccaurea macrocarpa)’, JKK. 4(1), pp. 75 – 83. ISSN: 2303 -1077.
Novarianto,  H.  (2012) Prospek  Pengembangan Tanaman Pinang . Balai Penelitian Tanaman Palma. Manado. Prihatna,  K.  (2001) Saponin  untuk  Pembasmi  Hama Udang .  Penelitian  perkebunan  Gambung. Bandung.
Rairisti, A. (2014) ‘Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Biji Pinang (Areca catechu L.) terhadap Penyembuhan  Luka Sayat pada Tikus Putih (Rattus  norvegicus)  Jantan  Galur  wistar’,
[Skripsi]. Program Studi Pendidikan Dokter. Fakultas Kedokteran. Universitas Tanjungpura.
Sa’roni dan Adjirni. (2005) ‘Spesifikasi Simplisia dan Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang  (Areca  catechu) Asal  Tawamangu  serta  Toksisitas  Akut  dan Khasiat  Hemostatiknya  pada  Hewan  Coba’, [online], tersedia http://ejournal.litbang.depkes.go.id/index.ph p/MPK/article/download/1136/480 .
Santoso,  J.,  Anwariyah,  S.,  Rumiantin,  R.  O.,  Putri,
A.P., Ukhty, N., dan Yoshie-stark, Y. (2012) ‘Phenol  Content,  Antioxidant  Activity  and Fibers  Profile  of  Four  Tropical  Seagrasses from  Indonesia’, Journal  of  Coastal Development , 15(2), pp. 189 – 196.
Sarastani, D. Soekarto, S.T, Muchtadi,  T.R, Fardiaz,
D.,  dan  Apriyantono,  A.  (2002)  ‘Aktivitas Antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  Ekstrak  Biji Atung’, Jurnal. Teknol. Ind. Pang , 13(2), pp.
149 – 156.
Sharon, N. Anam, S. Yuliet. (2013) ‘Formulasi Krim Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Bawang  Hutan (Eleutherine palmifolia L. Merr)’, Jurnal  of
Natural  Science ,  2(3),  pp.  111-122.  ISSN:
2338-0950.
Williams,  D.F.  (1981)  ‘Extraction  with  Supercritical Gases’, Chem.  Engineering  Sci ,  36(11),  pp.
1769-178