## Jurnal Teknik Kimia USU
Vol. 09, No. 1, Maret 2020 | 26-33 ISSN : 2337-4888
Homepage : https://talenta.usu.ac.id/jtk
ISSN : 2337-4888 JURNAL TEKNIK KIMIA - USU Departemen Tek nik Kimia Fakultas Teknik Universitas Sumatera Utara
Karakteristik Antosianin dari Kulit Buah Nipah ( Nypa frutican ) sebagai Pewarna Alami dengan Metode Soxhletasi
Characteristic of Anthocyanin from Nypa Fructican Husk as Natural Dyes by using Soxhletation Method
Putri Herfayati, Setiaty Pandia, Halimatuddahliana Nasution* Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Sumatera Utara, Jalan Almamater Kampus USU, Medan, 20155, Indonesia
*Email: halimatuddahliana@usu.ac.id

## Abstrak
Antosianin  merupakan  pigmen  alami  pemberi  warna  merah  pada  kulit  buah  nipah  ( Nypa  fructican ). Ekstraksi  antosianin  menggunakan  metode  soxhletasi  dengan  variabel  bebas  jenis  pelarut  (aquadest dan  etanol  dengan  asam  sitrat  3%  (b/v))  dan  waktu  ekstraksi  (30,  45  dan  60  menit).  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui jenis pelarut dan waktu ekstraksi terbaik untuk ekstraksi antosianin dari kulit buah nipah. Parameter penelitian meliputi analisis kualitatif dan kuantitatif antosianin (rendemen ekstrak,  total  konsentrasi  antosianin,  intensitas  warna,  aktivitas  antioksidan  dan  letal  toksisitas)  dari ekstrak kulit buah nipah. Hasil penelitian secara kualitatif dan kuantitatif menunjukkan bahwa ekstrak kulit buah nipah mengandung antosianin dengan rendemen ekstrak tertinggi diperoleh  menggunakan pelarut  etanol-asam  sitrat  3%  pada  waktu  ekstraksi  60  menit  sebesar  0,546  gram/gram.  Total antosianin  tertinggi  diperoleh  menggunakan  pelarut  etanol-asam  sitrat  3%  pada  waktu  ekstraksi  30 menit sebesar 226,036 mg/L.  Intensitas  warna tertinggi diperoleh  menggunakan pelarut  etanol-asam sitrat  3%  pada  waktu  ekstraksi  30  menit  sebesar  0,925.  Aktivitas  antioksidan  terkuat  (IC 50 )  terkuat diperoleh menggunakan pelarut aquadest-asam sitrat 3% pada waktu ekstraksi 30 menit sebesar 3,569 ppm. Aktivitas toksisitas terkuat (LC 50 ) diperoleh pada pelarut etanol-asam sitrat 3% sebesar 80,023 ppm.
Kata kunci: antosianin, ekstraksi soxhletasi, kulit buah nipah, pewarna alami

## Abstract
Anthocyanin  is  a  natural  pigment  that  gives  red  colour  on  Nipah  husk  (Nypa  fructican)  extract. Extraction of anthocyanin compounds used the soxhletation method with independent variables were the type of solvent (aquadest and ethanol with citric acid 3% (w/v)) and extraction time (30, 45 and 60 minutes). This study aims to determine the best type of solvent and extraction time used for extraction of  anthocyanin  from  Nipah  husk.  The  parameters  in  this  study  include  qualitative  and  quantitative analysis  of  anthocyanin  (extract  yield,  total  anthocyanin  concentration,  color  intensity,  antioxidant activity and analysis of toxicity) from Nipah husk extract. The results qualitatively and quantitatively indicate that Nipah husk extract had anthocyanin content with the highest extract yield was obtained using ethanol-citric acid 3% solvent at 60 minutes extraction time of 0.546 gram / gram. The highest total anthocyanin was obtained using ethanol-citric acid 3% solvent at 30 minutes extraction time of 226.36  mg  /  L.  The  highest  color  intensity  was  obtained  using  ethanol-citric  acid  3%  solvent  at  30 minutes  extraction  time  of  0.925.  The  strongest  antioxidant  activity  (IC 50 )  was  obtained  using  3% aquadest-citric acid solvent at 30 minutes extraction time of 3.569 ppm. The strongest toxicity activity (LC 50 ) in ethanol-citric acid 3% solvent was 80.023 ppm.
Keywords : anthocyanin, soxhletation extraction, nipah husk, natural dyes

## Pendahuluan
Meningkatnya  kesadaran  manusia  akan dampak  buruk dari produk sintetis pada kesehatan telah  membawa  perubahan  aturan  penggunaan pewarna  dalam  makanan  dan  kosmetik.  Zat pewarna  sintetis  terbukti  lebih  murah  dan menguntungkan  dari  segi  ekonomis.  Namun penggunaannya  dapat  menyebabkan  toksik  dan karsinogenik,  karena  kandungan  logam  berat
dalam  pewarna  sintetis  tidak  dapat  dihancurkan oleh  sistem  pencernaan  manusia  dan  akan terakumulasi  di  dalam  tubuh.  Selama  dekade terakhir  semakin  banyak  aspek  baru  dimasukkan ke  dalam  penilaian  produk  sintetis  namun  setiap argumen  baru  yang  dimasukkan  memperkuat posisi  pewarna  alami  [1][2].  Dampak  negatif  dari zat  pewarna  sintetis  tersebut  menimbulkan keinginan konsumen untuk kembali pada
penggunaan  pewarna  alami.  Pewarna  alami merupakan  alternatif  pewarna  yang  tidak  toksik,
dapat diperbaharui ( renewable) , mudah terdegradasi  dan  ramah  lingkungan.  Sumber pewarna  alami  dapat  berasal  dari  alam  seperti tumbuhan dan hewan [3].
Salah  satu  alternatif  bahan  baku  untuk pembuatan  pewarna  alami  adalah  kulit  buah Nipah.  Nipah  mengandung  komponen  fenolik, flavonoid  dan  tanin  yang  merupakan  indikator antioksidan  sebagai  metabolit  defensif  yang melawan  spesies  oksigen  reaktif  [4][5].  Fenolik memberikan  gambaran  keberadaan  antosianin dalam  kulit  nipah.  Antosianin  termasuk  dalam golongan  flavonoid  yang  merupakan  bagian  dari kelompok besar senyawa polifenolik [6]. Ekstraksi merupakan  angkah  awal  dalam  mengisolasi komponen  aktif  bahan  alami.  Salah  satu  metode ekstraksi yang sangat umum adalah soxhletasi [7]. Ekstraksi  soxhletasi  umumnya  dilakukan  dalam waktu  yang  lebih  singkat  dan  berlangsung  pada suhu  titik  didih  pelarut  [8] . Waktu  ekstraksi penting  untuk  ditinjau  dalam  ekstraksi  komponen aktif dikarenakan waktu ekstraksi yang lama dalam ekstraksi soxhlet akan meningkatkan kemungkinan degradasi termal [9].
Penelitian-penelitian terdahulu tentang nipah oleh Azis dan Jack (2015), Radam dan Erni (2016),  Lovly  dan  Merlee  (2017)  dan  Sabri  et.  al (2018)  hanya  sebatas  sampai  identifikasi  senyawa fenolik  [4][5][10][11].  Hingga  saat  ini,  tidak  ada informasi  yang  telah  didokumentasikan  tentang karakteristik  antosianin  dari  ekstrak  kulit  buah nipah.  Antosianin  bersifat  termolabil,  sehingga pemilihan  waktu  yang  tepat  dalam  ekstraksi komponen  ini  sangat  penting.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengidentifikasi  antosianin  dan menentukan waktu ekstraksi terbaik yang digunakan  dalam  ekstraksi  antosianin  dari  kulit buah  nipah  terhadap  karakteristik  antosianin  yang diperoleh  dari  ekstraksi  dengan  dua  jenis  pelarut non toksik yang dipilih yaitu etanol dan aquadest .

## Teori
Nipah  ( Nypa  frutican )  adalah  satu-satunya jenis  palem  yang    termasuk  komoditas mangrove. Nipah  mengandung  minyak,  tepung,  gula  dan lainnya.  Di  Indonesia,  luas  hutan  nipah  alami mencapai 4.237.000 hektar. Buah nipah berbentuk bulat telur dan gepeng dengan 2-3 rusuk, berwarna coklat  kemerahan,  berkelompok  membentuk  bola berdiameter sekitar 30 cm (Gambar 1). Buah nipah muda  teksturnya  lembek,  berwarna  bening  dan berwarna putih seperti kelapa jika sudah tua. Nipah kaya  akan  fenol  dan  senyawa  flavonoid  yang
dihubungkan  dengan  senyawa  antioksidan  [5][12] [13].
Studi  terbaru  yang  dilakukan  oleh  Negara Malaysia mengenai aktivitas antioksidan dari cuka N. fruticans menunjukkan bahwa  nipah kaya akan antioksidan  [11].  Prasad,  dkk  (2013)  melaporkan bahwa aktivitas antioksidan dari bagian buah nipah muda  dan  tua  sangat  berhubungan  dengan kandungan  fenoliknya.  Banyak  senyawa  fenolik dan  flavonoid  yang  diidentifikasi  dari  endosperm dan  mesoperm  nipah  seperti  asam  klorogenik, asam protocatechuic dan kaemprefol [14].
Gambar 1. A. Buah nipah; B. Nipah tua; C. Endosperm nipah dengan kulit; D. Endosperm tanpa kulit; E. Zigot embrio nipah [14]
Antosianin  termasuk  ke  dalam  substansi fenolik  yang  secara  luas  terdapat  dalam  tanaman yang  memberikan  warna  biru,  merah  atau  ungu. Dalam  media  asam,  antosianin  berwarna  merah, ungu  dalam  larutan  netral,  dan  biru  hijau  dalam larutan basa. Stabilitas antosianin bergantung pada pH,  cahaya,  suhu  dan  struktur  kimianya.  Struktur antosianin dapat dilihat pada Gambar 2. Antosianin  dicirikan  oleh  gugus  hidroksil  pada posisi  4’  dan  7,  dan  gula  pada  posisi  3 (monoglikosida)  atau  3  dan  5  (diglikosida). Sampai  saat  ini,  lebih  dari  540  pigmen  antosianin telah  diidentifikasi  di  alam  yang  sebagian  besar variasi  struktural  berasal  dari  substitusi  glikosidik pada  posisi  ketiga  dan  kelima  juga  asilasi  residu gula  dengan  asam  organik.  Senyawa  antosianin yang paling banyak ditemukan adalah pelargonidin (oranye-merah), peonidin (merah), sianidin (merah-ungu),  malvidin  (ungu  tua),  petunidin
(ungu), dan delfinidin (biru-ungu) [1][15][16].
Gambar 2. Struktur molekuler antosianin (OGl = glikosida), antosianidin dan deoksiantosianin [1]
Disamping memberi pengaruh warna, antosianin  juga  memiliki  nilai  medis  sebagai  anti diabetes,  anti  kanker,  anti  radang,  anti  mikroba, anti  obeses  dan juga mencegah  penyakit kardiovaskular.  Aktivitas  antioksidan  antosianin lebih  besar  2-6  kali  dibandingkan  antioksidan umum lain seperti asam askorbat. Antosianin biasa diaplikasikan  sebagai  pewarna  makanan  non- minuman juga makanan penutup seperti gelatin, isi buah dan penganan (gula-gula) tertentu [15][16].

## Metodologi Penelitian Pengumpulan bahan baku
Kulit  buah  nipah  berasal  dari  Desa Indrayaman (Kec. Talawi, Kab. Batubara). Pre-treatment bahan baku Kulit  buah  nipah  dicuci  dan  dikecilkan ukurannya  menjadi  ±  0,5  cm  lalu  dihaluskan dengan blender.

## Ekstraksi Metode Soxhletasi
Ekstraksi  soxhletasi  meliputi  ekstraksi untuk  analisa  kualitatif  dan  kuantitatif  serta  untuk uji toksisitas. Ekstraksi dilakukan dengan  variabel tetap  massa  sampel  (25  gram)  dan  rasio bahan:pelarut (1:10 (b/v)) dengan variabel berubah jenis  pelarut  ( aquadest dan  etanol  dengan  asam sitrat  3%)  dan  waktu  ekstraksi  (30,  45  dan  60 menit)  untuk  analisa  kualitatif  dan  kuantitatif, sedangkan  untuk  uji  toksisitas  dilakukan  hingga pelarut pada timbel soxhlet bening. Hasil ekstraksi dipekatkan  dengan rotary  evaporator dan  di analisis  kualitatif  metode  asam  –  basa  dengan penambahan  HCl  2M  dan  NaOH  2M  serta kuantitatif  (rendemen  ekstrak,  total  antosianin, intensitas  warna  dan  aktivitas  antioksidan  metode DPPH)  menggunakan  spektrofotometer  Uv-Vis. Uji  toksisitas  menggunakan  metode brine  shrimp lethality  test dengan  media  bioidikator Artemia dengan  variabel  tetap  jumlah  bioindikator  (10 ekor),  usia  bioindikator  (14  hari  bertujuan  agar mempermudah  pengamatan  kematian  larva)  dan volume  media  uji  (10  ml),  sedangkan  variabel berubah  adalah  waktu  pengamatan  kematian
bioindikator I  ∆t = 1 jam selama 6 jam dan II ∆t = 6  jam  selama  24  jam  serta  konsentrasi  larutan  uji (1000, 100, 10 dan 0 ppm).

## Hasil dan Pembahasan Analisis Antosianin Secara Kualitatif
Analisis kualitatif bertujuan untuk
mengidentifikasi  keberadaan  antosianin  pada ekstrak  kulit  buah  nipah.  Hasil  analisis  kualitatif dapat  dilihat  pada  Gambar  3  dan  Tabel  1  dimana dengan  penambahan  HCl  2M  terbentuk  warna merah  pada  ekstrak  dengan  pelarut aquadest dan etanol.  Penambahan  NaOH  2  M  mengubah  warna merah  menjadi  warna  hijau  kebiruan  pada  ekstrak dengan pelarut aquadest dan etanol.
Perubahan  warna  ekstrak  kulit  buah  nipah dari  merah  (kondisi  asam)  menjadi  hijau  kebiruan (kondisi  basa)  memperlihatkan  bahwa  terdapat antosianin  dalam  ekstrak  kulit  buah  nipah.  Warna merah  terbentuk  oleh  kation  flavilium,  dimana jumlah  gugus  metoksi  dalam  struktur  antosianin lebih dominan dibandingkan gugus  hidroksi. Pada pH netral berwarna keunguan dan pH basa berubah menjadi  hijau  kebiruan  disebabkan  struktur karbinol  pseudobase.  Ketika  pH  semakin  tinggi struktur  kalkon  terbentuk  yang  menyebabkan antosianin kehilangan warna merahnya diakibatkan terbentuknya anion quinonoidal [16][18].
(a)                      (b)                       (c)
Gambar 3. (a) Ekstrak Pekat; (b) Penambahan HCl
2 M; (c) Penambahan Larutan NaOH 2 M Tabel 1. Analisis Kualitatif Ekstrak Kulit Buah Nipah Pelarut Reaksi Karakter Warna Antosianin Warna Hasil Aquadest Ekstrak + HCl 2 M Merah mantap / tidak pudar Merah pekat Positif (+) Ekstrak + NaOH 2 M Berubah menjadi hijau biru Hijau gelap Positif (+) Etanol Ekstrak + HCl 2 M Merah mantap / tidak pudar Merah bata Positif (+) Ekstrak + NaOH 2 M Berubah menjadi hijau biru Kehijauan Positif (+)
Pengaruh  Waktu  dan  Jenis  Pelarut  Terhadap Rendemen Ekstrak Kulit Buah Nipah
Pada  Gambar  4  dapat  dilihat  rendemen ekstrak  kulit  buah  nipah  pada  waktu  ekstraksi  30,
45, dan 60  menit dengan pelarut aquadest sebesar 0,178;  0,299;  dan  0,310  gram/gram  dan  pelarut etanol sebesar 0,446; 0,497; dan 0,546 gram/gram. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semakin  lama  waktu
ekstraksi  maka  semakin  banyak  ekstrak  diperoleh yang meningkatakan nilai rendemen.
Gambar 4. Pengaruh Waktu dan Jenis Pelarut Terhadap Rendemen Ekstrak Kulit Nipah
Berdasarkan  teori,  peningkatan  rendemen dikarenakan waktu ekstraksi yang lama menyebabkan  terpenuhinya  waktu  kontak  antara matriks  bahan  dan  pelarut  sehingga  lebih  banyak senyawa  target  yang  terlarut  dengan  pelarut alkohol  lebih  baik  digunakan  untuk  mengekstrak habis  komponen  aktif  dari  golongan  fenolik [19][12] .
Meskipun  bukan  berarti  rendemen  yang semakin  meningkat  menghasilkan  antosianin  yang meningkat pula, karena ada senyawa pengotor lain yang  ikut  terekstrak  dan  terkonsentrasi  dalam ekstrak  antosianin  seperti  gula,  asam  organik, senyawa  fenol  lain  selain  antosianin  [19] . Sehingga, berdasarkan Gambar 4 dapat disimpulkan  bahwa  rendemen  ekstrak  kulit  buah nipah  terbaik  diperoleh  pada  perlakuan  dengan pelarut etanol dan waktu ekstraksi 60 menit.

## Pengaruh  Waktu  dan  Jenis  Pelarut  Terhadap Total Antosianin Ekstrak Kulit Buah Nipah
Pada  Gambar  5  diperoleh  hasil  total antosianin  dalam  ekstrak  kulit  buah  nipah  pada waktu  ekstraksi  30,  45,  dan  60  menit  dengan pelarut aquadest sebesar  206,348;  173,705;  dan 101,491  mg/L  dengan  pelarut  etanol  pada  waktu ekstraksi  30,  45,  dan  60  menit  sebesar  226,036; 126,484 dan 84,764 mg/L. Hal ini memperlihatkan bahwa  peningkatan  waktu  ekstraksi  menyebabkan penurunan jumlah total antosianin.
Berdasarkan teori, ada batasan tertentu bagi pelarut  untuk  melarutkan solute yang  terdapat dalam bahan baku yang diekstrak sekalipun waktu ekstraksi  diperpanjang solute dalam  bahan  baku sudah  tidak  ada.  Sehingga  yang  terjadi  selama penambahan  waktu  hanyalah  pemaparan  panas pada  hasil  ekstraksi,  dimana  akibat  dari  waktu pemaparan  panas  yang  terlalu  lama  ini  adalah peningkatan  resiko  degradasi  senyawa  antosianin [20].  Hal  yang  sama  diungkapkan  oleh  Muangrat dan  Phanat  (2018)  dan  Laksanalamai  (2015)  yang
menyatakan  bahwa  total  antosianin  lebih  tinggi diperoleh pada waktu ekstraksi 15 menit dari pada 30,  45,  dan  60  menit  dikarenakan  peningkatan waktu  menyebabkan  degradasi  atau  kehilangan antosianin  [21][22].   Nayal dan Onkar (2017) dan Ruiz et. al (2017) bahwa total antosianin menurun secara  signifikan  dengan  meningkatnya  waktu pemanasan  ketika  menggunakan  metode  soxhlet diakibatkan degradasi antosianin [23][24] . Qadariyah et.  al (2017)  menyatakan  total antosianin  menurun setelah ekstraksi  lebih dari 20
menit  [25] . Sedangkan  Klavins et.  al (2017) menyatakan  waktu  ekstraksi  optimal  antosianin adalah 15 sampai 25 menit [26] .
Gambar 5. Pengaruh Waktu dan Jenis Pelarut Terhadap Total Antosiain Ekstrak Kulit Nipah
Sehingga berdasarkan Gambar 5 dapat disimpulkan  bahwa  total  antosianin  ekstrak  kulit buah nipah terbaik diperoleh dengan pelarut etanol pada waktu ekstraksi 30 menit.

## Pengaruh  Waktu  dan  Jenis  Pelarut  Terhadap Intensitas Warna Ekstrak Kulit Buah Nipah

## Gambar 6. Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut terhadap Intensitas Warna Ekstrak Kulit Buah Nipah
Pada  Gambar  6  diperoleh  hasil  intensitas warna  ekstrak  kulit  buah  nipah  pada  waktu ekstraksi  30,  45,  dan  60  menit  dengan  pelarut aquadest masing-masing sebesar 0,659; 0,521; dan 0,378  dan  dengan  pelarut  etanol  pada  waktu ekstraksi  30,  45,  dan  60  menit  masing-masing
sebesar  0,925;  0,768;  dan  0,753.  Hal  ini memperlihatkan  bahwa  semakin  lama  waktu ekstraksi menyebabkan intensitas warna antosianin menurun.
Berdasarkan  teori,  waktu  pemanasan  yang lama  menghasilkan  nilai  absorbansi  warna  yang menurun  dikarenakan  semakin  lama  waktu pemanasan  mengakibatkan  pigmen  antosianin terdekomposisi  sehingga  terjadi  pemucatan  dan nilai  absorbansinya  menurun.  Pigmen  antosianin bersifat tidak stabil terhadap pemanasan. Ekstraksi selama  30  menit  pada  suhu  tertentu  memicu degradasi  antosianin  lebih  cepat  dibandingkan ekstraksi  tanpa  pemanasan  [27] . Hal  serupa diungkapkan  oleh  Ali et.  al (2013)  dimana semakin  lama  waktu  pemanasan  maka  semakin lama  antosianin  terpapar  panas  sehingga  derajat kecerahan semakin menurun disebabkan antosianin terekstrak memiliki kecenderungan berwarna pekat sehingga  warna  yang  dihasilkan  mengalami penurunan  tingkat  kecerahan  [28].  Sehingga, berdasarkan  Gambar  6.  dapat  disimpulkan  bahwa intensitas  warna  ekstrak  kulit  buah  nipah  terbaik diperoleh  dengan  pelarut  etanol  pada  waktu ekstraksi 30 menit.

## Pengaruh  Waktu  dan  Jenis  Pelarut  Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kulit Nipah
Pada  Gambar  7  dapat  dilihat  bahwa  persen inhibisi  ekstrak  kulit  buah  nipah  pada  kedua pelarut aquadest dan  etanol  dipengaruhi  oleh konsentrasi  larutan  uji.  Semakin  banyak  ekstrak kulit  buah  nipah  yang  terdapat  dalam  larutan  uji maka  semakin  besar  konsentrasi  larutan  uji  dan berpengaruh  pada  semakin  meningkatnya  persen inhibisi.

## Gambar 7. Pengaruh Konsentrasi Larutan Ekstrak Kulit Buah Nipah Terhadap Persen Inhibisi
Berdasarkan  teori,  persen  inhibisi  berpola linier  dimana  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak maka  nilai  persen  inhibisi  semakin  tinggi. Konsentrasi  yang  lebih  tinggi  akan  menunjukkan aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi  [29].  Data persen  inhibisi  dalam  metode  DPPH  digunakan untuk menentukan  nilai aktivitas antioksidan  yang
dinyatakan  dalam  bentuk  IC 50 .  Nilai  IC 50 merupakan  konsentrasi  larutan  sampel  yang dibutuhkan untuk  mereduksi DPPH sebesar 50 %. Semakin  kecil nilai  IC 50 berarti  aktivitas antioksidannya semakin tinggi [12] .

## Gambar 8. Pengaruh Waktu dan Jenis Pelarut Ekstraksi Terhadap Aktivitas Antioksidan
Pada  Gambar  8  diperoleh  nilai  aktivitas antioksidan  ekstrak  kulit  buah  nipah  pada  waktu ekstraksi  30,  45,  dan  60  menit  masing-masing dengan pelarut aquadest sebesar 3,569; 3,887; dan 4,096  %  dan  pelarut  etanol  sebesar  5,832;  6,251 dan  6,677  %.  Hal  ini  memperlihatkan  bahwa semakin  lama  waktu  ekstraksi  maka  semakin menurun  aktivitas  antioksidannya  ditandai  dengan nilai IC 50 yang meningkat. Perbedaan  nilai  IC 50 ini  disebabkan  oleh perbedaan  jumlah  antioksidan  yang  terkandung didalam  ekstrak.  Penurunan  aktivitas  antioksidan terjadi  akibat  kerusakan  antosianin  yang  bersifat labil  terhadap  pemanasan  yang  lama  [30]. Berdasarkan  pelarut,  kemampuan  menghambat radikal  bebas  paling  tinggi  tampak  pada  ekstrak dengan  pelarut aquadest yang menunjukkan  daya hambat  besar  disebabkan  senyawa  antosianin memiliki  banyak  gugus  penangkap  radikal  bebas lebih  aktif  terhadap  radikal  bebas  yang  terdapat dalam  pelarut aquadest dibandingkan  dengan pelarut  alcohol  [31].  Kopjar et.  al (2014) menyatakan  aktivitas  antioksidan  lebih  tinggi berada  pada  ekstrak  dengan  pelarut aquadest dibandingkan  dengan  etanol  dengan  aktivitas antioksidan  keseluruhan  berada  di  urutan  metanol > air > etanol > etil asetat dalam ekstrak [32].

## Analisis Toksisitas Ekstrak Kulit Nipah
Suatu  senyawa  dikategorikan  sangat  toksik jika nilai LC 50 kurang dari 30 ppm, toksik jika nilai LC 50 30-1000 ppm, dan tidak toksik jika nilai LC 50 di  atas  1000  ppm.  Tingkat  toksisitas  tersebut menunjukkan potensi aktivitasnya sebagai antikanker  dimana  semakin  kecil  nilai  LC 50 maka semakin  toksik  suatu  senyawa  dan  berpotensi sebagai  antikanker  [33].  Nilai  LC 50 dari  ekstrak kulit buah nipah dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Analisis Toksisitas Metode Brine Shrimp Lethality Test Pelarut Persamaan linier LC 50 (ppm) Aquadest y = 2,9612x -1,404 145,4365 Etanol y = 2,4634x + 0,311 80,0234
Berdasarkan  Tabel  2  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  kulit  buah  nipah  dapat  digunakan sebagai  pewarna  alami  dalam  berbagai  produk pangan dengan penggunaan 145,436 ppm (145,436 mg/L)  per  kg  produk  pangan  untuk  ekstrak  yang diperoleh dengan pelarut aquadest dan 80,023 ppm (80,023 mg/L) per kg produk pangan untuk ekstrak yang berasal dari pelarut etanol.

## Gambar 9. Pengaruh Konsentrasi Larutan Uji Terhadap Persen Mortalitas
Gambar  9  memperlihatkan  bahwa  nilai mortalitas meningkat dengan meningkatnya konsentrasi  larutan  uji,  hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Sabri et.  al (2018)  dimana  laju mortalitas  larva  meningkat  dengan  meningkatnya konsentrasi  larutan  uji  [11] . Sedangkan  nilai  LC 50 untuk  masing-masing  pelarut aquadest adalah 145,4365  ppm  dan  pelarut  etanol  adalah  80,0234 ppm  yang  dikategorikan  bersifat  toksik.  Sifat sitotoksik  dari  ekstrak  dikarenakan  ekstrak mengandung  golongan  flavonoid  yang  mengikat gugus  glikosida  yang  mengandung  gugus  OH. Gugus  OH  lebih  aktif  untuk  membunuh  dan menghambat pertumbuhan Artemia dengan merusak  struktur  dinding  sel,  menghambat  kerja enzim,  menghambat  fungsi  membran  sel,  sintesis protein  dan  asam  nukleat  [34].  Toksisitas antosianin  belum  banyak  dipelajari.  Komite FAO/WHO bagian zat adiktif makanan menetapkan  asupan  harian  antosianin  diizinkan sebesar 2,5 mg/kg berat badan per hari. Sedangkan otoritas keamanan makanan China belum menemukan efek toksik dari antosianin pada tikus dan  kelinci  percobaan  selama  15–90  hari. Penelitian  pada  manusia  menunjukkan  bahwa antosianin  cepat  diserap  dan  muncul  dalam  aliran darah  beberapa  menit  setelah  dikonsumsi  [35]. Sedangkan untuk standar konsumsi harian
antosianin  di  Indonesia  mengikuti  standar  SNI yang  diatur  dalam  KBPOM  RI  Nomor  37  Tahun 2013  diperbolehkan  dalam  rentang  0–2,5  mg/kg berat badan. Sebagai pewarna adiktif pangan 100– 10000 mg/kg berat bahan pangan [36].
Kesimpulan Ekstrak kulit buah nipah positif mengandung antosianin ditandai dengan perubahan warna  ekstrak  menjadi  merah  pada  larutan  asam dan  hijau  pada  larutan  basa.  Rendemen  ekstrak tertinggi dan aktivitas antioksidan terkuat diperolehh menggunakan pelarut etanol-asam sitrat 3% dengan waktu ekstraksi 60 menit sebesar 0,546 gram/gram  dan  nilai  IC 50 6,677  ppm.  Total antosianin dan intensitas warna tertinggi diperoleh dengan  menggunakan  pelarut  etanol-asam  sitrat 3% pada waktu ekstraksi 30 menit sebesar 226,036 mg/L  dan  0,925.  Aktivitas  toksisitas  terkuat diperoleh  dengan  nilai  LC 50 sebesar  80,023  ppm atau  setara  dengan  0,080%  pada  pelarut  etanol- asam sitrat 3%.

## Daftar Pustaka
[1]  T.  Bechtold  and  R.  Mussak, Handbook  of Natural Colorants . 2009.
[2]  E.  Paryanto,  Kwartiningsih,  W.  A.  W,  S.  H. Pranolo, R. Hidayat, and I. R. S,
“Pengambilan  Zat  Warna  Alami  dari  Buah Mangrove  Spesies  Rhizophora  Mucronata untuk Pewarna Batik Ramah Lingkungan,” J.
Purifikasi , vol. 15, no. 1, pp. 33–40, 2015.
[3]  Yernisa,  E.  G.  Said,  and  K.  Syamsu, “Aplikasi Pewarna Bubuk Alami dari Ekstrak Biji  Pinang  (Areca  Cathechu  L.)  pada Pewarnaan  Sabun  Transparan,” J.  Teknol. Ind.  Pertan. ,  vol.  23,  no.  3,  pp.  190–198, 2013.
[4]  R.  R.  Radam  and  E.  Purnamasari,  “Uji Fitokimia  Senyawa  Kimia  Aktif  Akar  Nipah (Nyfa  Fruticans  Wurmb)  Sebagai  Tumbuhan Obat di Kalimantan Selatan,” J. Hutan Trop. , vol. 4, no. 1, p. 28, 2017, doi: 10.20527/jht.v4i1.2879. [5]  L.  M.  S.  and  M.  T.  M.  V.,  “In  Vitro Bioactivity and Phytochemical
Characterization  of  Nypa  fruticans.  Wurmb : a Mangrove from Kerala,” Int. J. Res. J. Biol. Sci. , vol. 6, no. 6, pp. 42–52, 2017.
[6]  A.  Masci,  A.  Coccia,  E.  Lendaro,  L.  Mosca, P.  Paolicelli,  and  S.  Cesa,  “Evaluation  of Different Extraction Methods from
Pomegranate  Whole  Fruit  or  Peels  and  The Antioxidant and  Antiproliferative  Activity of The  Polyphenolic  Fraction,” Food  Chem. , vol. 202, pp. 59–69, 2016, doi:
10.1016/j.foodchem.2016.01.106.
[7]  A.  P.  Kristijarti  and  A.  Arlene,  “Isolasi  Zat
Warna  Ungu  pada  Ipomoea  batatas  Poir dengan Pelarut Air,” Rekayasa Sist. Ind. , vol. 1, no. 3, pp. 1–31, 2012.
[8]  I. Y. Bae, J. S. An, I. K. Oh, and H. G. Lee, “Optimized Preparation of Anthocyanin-Rich Extract  From  Black  Rice  and  Its  Effects  on In-vitro Digestibility,” Food Sci. Biotechnol. , vol.  26,  no.  5,  pp.  1415–1422,  2017,  doi: 10.1007/s10068-017-0188-x.
[9]  Q.  W.  Zhang,  L.  G.  Lin,  and  W.  C.  Ye, “Techniques  for  Extraction  and  Isolation  of Natural Products: a Comprehensive Review,” Chinese Med. (United Kingdom) , vol. 13, no. 1,  pp.  1–26,  2018,  doi:  10.1186/s13020-018- 0177-x.
[10]  A. Aziz and R. Jack, “Total Phenolic Content and  Antioxidant  Activity  in  Nypa  Fructicans Extracts,” J.  Sustain.  Sci.  Manag. ,  vol.  10, no. 1, pp. 87–91, 2015.
[11]  W.  M.  A.  W.  Sabri,  M.  R.  A.  R.  Asaruddin, A.  H.  Sukairi,  and  S.  A.  T.  W.  Yusop, “Antioxidant  and  Cytotoxicity  Studies  of Nypa  fruticans  (Nypa  Palm  Sugar)  Extract,” Indones.  J.  Pharm.  Sci.  Technol. ,  vol.  1,  no.
1, pp. 65–69, 2018, doi:
10.15416/IJPST.V1I1.17246.
[12]  Imra,  K.  Tarman,  and  Desniar,  “Aktivitas Antioksidan  dan  Antibakteri  Ekstrak  Nipah (Nypa  fruticans)  Terhadap  Vibrio  sp  .  Isolat Kepiting  Bakau  (Scylla  sp.),” J.  Pengolah. Has.  Perikan.  Indones. ,  vol.  19,  no.  3,  pp. 241–250, 2016, doi: 10.17844/jphpi.2016.19.3.241.
[13]  V.  C.  Lapitan,  K.  L.  C.  Nicolas,  and  J. Eufemio T.  Rasco,  “Tissue  Culture Technique  for  Clonal  Propagation  of  Nipa Palm  (  Nypa  fruticans  Wurmb.,  Arecaceae) from  Embryo  Culture,” Asia  Life  Sci. ,  vol. 24, no. 1, pp. 111–125, 2015.
[14]  N.  Prasad et  al. ,  “Phytochemicals  and Antioxidant  Capacity  from  Nypa  fruticans Wurmb. Fruit,” Evidence-based Complement. Altern.  Med. ,  vol.  2013,  pp.  1–9,  2013,  doi: 10.1155/2013/154606.
[15]  N.  N., Extraction  and  Utilization  of
Anthocyanin Pigments from Jamun
(Syzygium  Cumini  Skeels.) .  Vellanikkara, 2016.
[16]  H. E. Khoo, A. Azlan, S. T. Tang, and S. M. Lim,  “Anthocyanidins  and  Anthocyanins: Colored  Pigments  as  Food,  Pharmaceutical Ingredients,  and  The  Potential  Health Benefits,” Food  Nutr.  Res. ,  vol.  61,  no.  1, 2017, doi: 10.1080/16546628.2017.1361779.
[17]  N.  M.  Saptarini  and  I.  E.  Herawati, “Extraction  Methods  and  Varieties  Affect Total  Anthocyanins  Content  in  Acidified Extract of Papery Skin of Onion(Allium cepa
L.),” Drug  Invent.  Today ,  vol.  10,  no.  4,  pp.
471–474, 2018.
[18]  K. D. Rajesh, S. Vasantha, N. V. Rajesh, and A. Panneerselvam, “Qualitative and quantitative  phytochemical  analysis  in  four pteridophytes,” Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. , vol. 27, no. 2, pp. 408–412, 2014.
[19]  R.  Farida  and  F.  C.  Nisa,  “Ekstraksi
Antosianin  Limbah  Kulit  Manggis  Metode Microwave Assisted Extraction (Lama
Ekstraksi  dan  Rasio  Bahan :  Pelarut),” J. Pangan  dan  Agroindustri ,  vol.  3,  no.  2,  pp. 362–373, 2015, doi: 10.1111/j.1540- 6261.2008.01330.x.
[20]  F.  Al  Mamoori  and  R.  Al  Janabi,  “Recent Advances  in  Microwave-Assisted  Extraction (MAE)  of  Medicinal  Plants:  a  Review,” Int. Res. J. Pharm. , vol. 9, no. 6, pp. 22–29, 2018, doi: 10.7897/2230-8407.09684.
[21]  R. Muangrat and P. Saengcharoenrat, “Effect of  Processing  Conditions  of  Hot  Pressurized Solvent  Extraction  in  Batch  Reactor  on Anthocyanins  of  Purple  Field  Corn,” Agric.
Eng.  Int.  CIGR  J. ,  vol.  20,  no.  2,  pp.  173– 182, 2018.
[22]  B. Vayupharp and V. Laksanalamai,
“Antioxidant  Properties  and  Color  Stability of  Anthocyanin  Purified  Extracts  from  Thai Waxy Purple Corn Cob,” J. Food Nutr. Res. , vol.  3,  no.  10,  pp.  629–636,  2015,  doi: 10.12691/jfnr-3-10-2.
[23]  H. Ruiz, L. Luna, and P. H. Carranza, “Effect of Solvents and Extraction Methods on Total Anthocyanins,  Phenolic  Compounds  and Antioxidant  Capacity  of  Renealmia  alpinia Rottb.  Maas  Peel,” J.  Food  Technol.  Econ. Eng.  Phys.  Prop.  Czech ,  vol.  35,  no.  5,  pp. 456–465,  2017,  doi:  10.17221/316/2016- CJFS.
[24]  K.  Nayal  and  A.  Onkar,  “Optimization  of Primary Extraction Conditions of Anthocyanin  from Morusrubra L. by Solvent
Extraction  Method,” Babar  Int.  J.  Eng.
Technol. Sci. Res. , vol. 4, no. 10, 2017.
[25]  L.  Qadariyah,  M.  Mahfud,  E.  Sulistiawati, and  P.  Swastika,  “Natural  Dye  Extraction from  Teak  Leves  (Tectona  Grandis)  Using Ultrasound  Assisted  Extraction  Method  for Dyeing  on  Cotton  Fabric,” MATEC  Web Conf. ,  vol.  156,  pp.  4–7,  2018,  doi: 10.1051/matecconf/201815605004.
[26]  L.  Klavins,  J.  Kviesis,  and  M.  Klavins, “Comparison  of  Methods  of  Extraction  of Phenolic Compounds from American Cranberry (Vaccinium macrocarpon L.) Press
Residues,” Agron.  Res. ,  vol.  15,  no.  Special Issue 2, pp. 1316–1329, 2017.
[27]  J.  Müller-Maatsch,  R.  M.  Schweiggert,  and

## R.  Carle,  “Adulteration  of  Anthocyanin  and
Betalain Based Coloring Foodstuffs with The Textile  Dye  Reactive  Red  195  And  Its Detection  by  Spectrophotometric,  Chromatic and  HPLC-PDA-MS/MS  Analyses,” Food Control ,  vol.  70,  pp.  333–338,  2016,  doi: 10.1016/j.foodcont.2016.06.012.
[28]  F. Ali, Ferawati, and R. Arqomah, “Ekstraksi Zat  Warna  dari  Kelopak  Bunga  Rosella (Study  Pengaruh  Konsentrasi  Asam  Asetat dan  Asam Sitrat),” J.  Tek.  Kim. ,  vol.  19,  no. 1, pp. 26–34, 2013.
[29]  M.  Djaeni,  N.  Ariani,  R.  Hidayat,  and  F.  D. Utari,  “Ekstraksi  Antosianin  Dari  Kelopak Bunga  Rosella  (Hibiscus  Sabdariffa  L.) Berbantu  Ultrasonik :  Tinjauan  Aktivitas Antioksidan,” J. Apl. Teknol. Pangan , vol. 6, no. 3, pp. 148–151, 2017, doi: 10.17728/jatp.236.
[30]  D.  Tristantini,  A.  Ismawati,  B.  T.  Pradana, and  J.  Gabriel,  “Pengujian  Aktivitas Antioksidan  Menggunakan  Metode  DPPH pada Daun Tanjung (Minusops elengi L),” in Prosiding  Seminar  Nasional  Teknik  Kimia
Kejuangan , 2016, pp. 1–7.
[31]  A. Santoni, D. Darwis, and S. Syahri, “Isolasi Antosianin dari Buah Pucuk Merah (syzygium campanulatum korth.) Serta
Pengujian  Antioksidan  dan  Aplikasi  sebagai Pewarna  Alami,”  in Prosiding  Semirata FMIPA  Universitas  Lampung ,  2013,  pp.  1– 10.
[32]  M.  Kopjar,  M.  Orsolic,  and  V.  Pilizota,
“Anthocyanins,  Phenols,  and  Antioxidant Activity  of  Sour  Cherry  Puree  Extracts  and Their Stability During Storage,” Int.  J.  Food
Prop. ,  vol.  17,  no.  6,  pp.  1393–1405,  2014, doi: 10.1080/10942912.2012.714027.
[33]  F.  Susilowati,  “Uji  Brine  Shrimp  Lethality Test  (BSLT)  Ekstrak  Etil  Asetat  Spons Calthropella  sp.  Asal  Zona  Intertidal  Pantai Krakal  Gunung  Kidul  Yogyakarta,” Pharm. J.  Islam.  Pharm. ,  vol.  1,  no.  1,  p.  1,  2017, doi: 10.21111/pharmasipha.v1i1.1118.
[34]  B.  Ginting,  T.  Barus,  L.  Marpaung,  and  P. Simanjuntak,  “Uji  Toksisitas  Ekstrak  Daun (Myristica  fragrans  Houtt)  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT),”  in Prosiding Seminar Nasional Kimia , 2014, pp. 3–6.
[35]  T. C. Wallace and M. M. Giusti, “Anthocyanin,” Adv.  Nutr. ,  vol.  6,  no.  5,  pp. 620–622, 2015, doi: 10.3945/an.115.009233.Clinical. [36]  BPOM  RI, Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan  Republik  Indonesia  Nomo  11 Tahun  2019  Tentang  Bahan  Tambahan
Pangan , no. 11. 2019.