Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
PENGARUH PENAMBAHAN FILTRAT ROSELLA ( Hibiscus sabdariffa Linn ) KE DALAM PENGENCER TRIS-KUNING TELUR TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA KAMBING KACANG
(THE EFFECT OF ROSELLA FILTRATE (Hibiscus sabdariffa Linn) SUPLEMENTATION IN TRIS- EGG YOLK EXTENDER ON SPERMATOZOA QUALITY OF KACANG GOAT)
Reynold Laos * , Aloysius Marawali, Petrus Kune, Henderiana L. L. Belli, Kirenius Uly Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana, Jln. Adisucipto Penfui, Kupang 850001
* Correspondent author, email: reynoldlaos@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan  berbagai  level  filtrat  rosella  (FR)  ke dalam  pengencer  tris-kuning  telur  (T-KT)  terhadap  kualitas  spermatozoa  kambing  kacang.  Semen  ditampung dua  kali  seminggu  menggunakan  metode  vagina  buatan  dari  tiga  ekor  kambing  pejantan.  Semen  segar  yang diperoleh  dievaluasi  secara  makroskopis  dan  mikroskopis  dengan  nilaimotilitas  80%,  viabilitas  86,58%, konsentrasi  2.099,40  jutasel  spermatozoa/ml,  dan  abnormalitas  2,83%.  Kemudian  semen  segar  tersebut diencerkan sesuai dengan perlakuan yaitu P0 (T-KT 100%), P1 (T-KT 100% + FR 1%), P2 (T-KT 100% + FR 2%),  P3  (T-KT  100%  +  FR  3%),  P4  (T-KT  100%  +  FR  4%),  P5  (T-KT  100%  +  FR  5%).  Semen  yang  telah diencerkan  disimpan  pada  suhu  3- Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  spermatozoa  dalam  pengencer  T-KT  dengan  penambahan  FR  3%  (P3) mempunyai kualitas  yang lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan  ke lima perlakuan  lainnya,  yaitu dengan motilitas  mencapai  (42,99±2,19%),  viabilitas  (49,30±2,24%),  dan  abnormalitas  (4,012±0,49%)  selama  5  hari penyimpanan. Kesimpulan dari penelitian ini adalah penambahan filtrat rosella 3% dalam pengencer tris-kuning telur merupakan level terbaik dan lebih efektif dalam mempertahankan kualitas spermatozoa kambing kacang.
Kata-kata kunci : Tris, kuning telur, filtrat rosella, spermatozoa, kambing kacang

## ABSTRACT
The purpose of this study was to determinate the effect of adding various levels of roselle filtrate (RF) into tris- egg yolk diluents (T-EY) on the quality of kacang goat spermatozoa. Semen was collected twice a week using an  artificial  vagina  method  of  three  male  goats.  Fresh  semen  obtained  was  evaluated  macroscopically  and microscopically  with  a  motility  value  of  80%,  viability  86.58%,  concentration  of  2,099.40  milionspermatozoa cells/ml, and an abnormality of 2.83%. Then the fresh semen was diluted according to the treatment, namely T0 (T-EY 100%), T1 (T-EY 100% + RF 1%), T2 (T-EY 100% + RF 2%), T3 (T-EY 100% + RF 3%), T4 (T-EY 100%  +  RF  4%),  T5  (T-EY  100%  +  RF  5%).  The  diluted  semen  was  stored  at  3- carried  out  every  24  hours  on  the  quality  of  the  spermatozoa.  The  results  showed  that  spermatozoa  in  T-EY diluent  with  the addition of 3% RF (T3) had a higher quality (T<0.05) compered to the other  five treatments, namely the motility reached (42,99±2,19%), viability (49,30±2,24%), and abnormalities (4,012±0,49%) during 5 days of storage. The conclusion of this study is the addition of 3% roselle filtrate in tris-egg yolk diluent is the best level and is more effective in maintaining the quality of spermatozoa kacang goat.
Keywords: Tris, egg yolk, roselle filtrate, spermatozoa, kacang goat

## PENDAHULUAN
Kambing kacang adalah salah satu bangsa kambing  lokal  yang  tersebar  luas  diseluruh wilayah  Indonesia  dan  memiliki  keunggulan yaitu  mampu  beradaptasi  dengan  keadaan  alam sekitar serta mempunyai daya reproduksi sangat tinggi  pada  lingkungan  yang  buruk  .  Namun pengembangan kambing kacang jika dibandingkan  dengan  sapi  dan  kerbau  masih
tertinggal  jauh,  oleh  sebab  itu  perlu  dilakukan peningkatan  mutu  genetik  kambing  kacang melalui program inseminasi buatan (IB).
Dalam  menunjang  keberhasilan  kegiatan IB  maka  perlu  dilakukan  pengenceran  semen yang  bertujuan  untuk  meningkatkan  volume semen  dan  mempertahankan  kualitas  semen. Susilawati  (2011),  menyatakan  bahwa  bahan
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
pengencer  yang  digunakan  harus  tidak  racun, bersifat  isotonis,  dapat  melindungi  spermatozoa dari  kejut  dingin  (cold  shock),  menghambat pertumbuhan mikroba, bersifat sebagai penyangga (buffer), dapat meningkatkan volume semen  dan  sebagai  sumber  nutrisi  bagi spermatozoa.  Tris  aminomethane  kuning  telur adalah  salah  satu  pengencer  yang  banyak digunakan dan mampu mempertahankan kualitas semen cair.
Situmorang  (2002),  menyatakan  bahwa Tris aminomethane berfungsi sebagai penyanggah  yang  baik  dengan  toksisitas  yang rendah  dalam  konsistensi  yang  tinggi.  Kuning telur  berfungsi  sebagai  anti  cold  shock  yang dapat  melindungi  spermatozoa  pada  saat
(Aboagla dan Terada, 2004). Untuk mempertahankan  dan  meningkatkan  kualitas semen  yang  lebih  baik,  maka  kedalam pengencer  tris  kuning  telur  perlu  ditambahkan bahan  pengencer  lain  yang  didalamnya  terdapat zat-zat  yang  dibutuhkan  oleh  spermatozoa seperti  zat  antioksidan  yang  berfungsi  sebagai penangkal radikal bebas.
Rosella ( Hibiscus sabdariffa Linn ) merupakan  salah  satu  tamanan  yang  berpotensi sebagai  sumber  antioksidan  alami.  Menurut Maryani  dan  Kristiana,  (2005),  bahwa  dalam kelopak bunga rosella terdapat kandungan kalori 44  kal,  air  86,2%,  protein  1,6  g,  lemak  0,1  g, karbohidrat 11,1 g, serat 2,5 g, abu 1 g, kalsium
486 g, fosfor 60 ml, besi 3,8 mg, β-karoten 285 g,  vitamin  C  214,68  mg,  tiamin  0,04  mg, riboflavin 0,6 mg, niasin 0,5 mg.
Setyaningsih  (2011),  dalam  penelitiannya tentang  pengaruh  pemberian  infuse  simplisia rosella  ( Hibiscus  sabdariffa  Linn )  terhadap kualitas  spermatozoa  mencit  ( Mus  musculus  L.) jantan  galur  DDY.  Dosis  yang  digunakan dihitung  berdasarkan  jumlah  kelopak  kering yang  umum  dikonsumsi  masyarakat  yaitu berjumlah 5 kelopak atau sekitar 3-4 g per hari, kemudian dikonversikan terhadap mencit sehingga  diperoleh  dosis  3%.  Dosis  tersebut diturunkan  dan  dinaikan  sehingga  dosis  yang digunakan  yaitu  1,5%  (P1),  3%  (P2),  dan  6% (P3).  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pemberian infus simplisa rosella dapat meningkatkan  motilitas  spermatozoa  dengan nilai rata-rata persentase spermatozoa motil pada setiap  perlakuan  yaitu  38,20%  (P1),  43,00% (P2),  dan  38,60%  (P3)  serta  menurunkan abnormalitas  pada  semua  kelompok  perlakuan yaitu  30,40%  (P1),  26,80%  (P2),  dan  37,60% (P3).
Dalam penelitian ini, spermatozoa kambing  kacang  dipreservasi  dalam  pengencer T-KT  yang  ditambahkan  dengan  berbagai konsentrasi  filtrat  rosella  (FR).  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh penambahan  FR  ke  dalam  pengencer  T-KT terhadap kualitas spermatozoa kambing kacang.

## METODE PENELITIAN

## Materi Penelitian
Penelitian  menggunakan  semen  segar yang  diperoleh  dari  3  ekor  ternak  kambing Kacang jantan  yang  berumur  3 tahun.  Kambing jantan  tersebut  dipelihara  dalam  kandang individu  yang  dilengkapi  dengan  tempat  makan dan  minum.  Pakan  hijauan  jenis  legum  yaitu lamtoro  diberikan  2  kali  sehari  sebanyak  10% dari  berat  badan  dan  penambahan  konsentrat sebanyak 0,5 kg/ekor/hari serta air minum.

## Penyiapan Bahan Pengencer: Tris aminomethane
Siapkan  tris  aminomethane,  fruktosa,  dan asam  sitrat  kemudian  masing-masing  bahan ditimbang  sebanyak  3,634  g  tris,  0,5  g  fruktosa dan  1,99  g  asam  sitrat.  Ke-3  bahan  tersebut ditambahkan  ke  dalam  100  ml  aquades  pada gelas erlenmeyer, kemudian dihomogenkan.
Kuning telur Mengambil telur ayam kemudian membersihkannya  dengan  kapas  yang  telah dibasahi  dengan  alkohol  70%.  Pecahkan  kulit telur  dibagian  lancipnya  kemudian  tuangkan semua  putih  telur  dan  pisahkan  putih  telur dengan kuning telur yang masih terbungkus oleh membran  vitelin,  kemudian  menempatkan  pada kertas  saring  lalu  dimiringkan  sambil  diputar agar semua putih telur terserap habis. Kemudian pecahkan  membran  vitellin  pada  kuning  telur, setelah  itu  masukan  kuning  telur  kedalam  gelas ukur. Kuning telur siap digunakan.

## Filtrat rosella (FR)
Memilih  kelopak  rosella  yang  baik, bentuknya  masih  utuh  dan  warnanya  merah. Kemudian dicuci sampai bersih, diiris tipis-tipis lalu  dikeringkan  menggunakan  oven  dengan
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
suhu  105 o C  selama  24  jam.  Memasukan  rosella kering  ke  dalam  blender  kemudian  memblender sampai  halus.  Setelah  dihaluskan,  timbang  100 mg  menggunakan  timbangan  elektrik  kemudian dilarutkan  dengan  15  ml  aquabides  lalu dicentrifuge dengan kecepatan 3.000 rpm selama 10  menit,  untuk  mendapatkan  filtratnya. Supernatan yang terpisah diambil dan merupakan FR yang siap digunakan.

## Pengencer perlakuan
Pembuatan pengencer perlakuan menggunakan  80  mL  pengencer  Tris  dan tambahkan  20  mL  kuning  telur,  homogenkan hingga tercampur menggunakan stirer, selanjutnya  tambahkan  antibiotic  dan  FR  sesuai perlakuan, yaitu: T-KT 100% + FR 0% (P0), T- KT 100% + FR 1% (P1), T-KT 100% + FR 2% (P2), T-KT 100% + FR 3% (P3), T-KT 100% + FR 4% (P4), T-KT 100% + FR 5% (P5).

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Penampungan  semen  dilaksanakan  2  kali seminggu  dengan  menggunakan  vagina  buatan dan  kambing  betina  birahi  sebagai  pemancing. Semen  segar  yang  diperoleh  di  evaluasi  secara makroskopis yaitu warna, bau, volume, konsistensi  dan  pH  serta  secara  mikroskopis meliputi  gerakan  massa,  motilitas,  viabilitas, abnormalitas dan konsentrasi.

## Pengenceran dan Penyimpanan Semen
Semen  yang  digunakan  harus  memiliki nilai  motilitas  diatas  70%,  konsentrasi  diatas 800×106,  dan  tingkat  abnormalitasnya  dibawah 15%.  Semen  yang  layak  digunakan  kemudian diencerkan menggunakan bahan pengencer yang telah  disiapkan  berupa  tris-kuning  telur  yang
telah  ditambahkan  dengan  filtrat  rosella  sesuai dengan  masing-masing  perlakuan.  Semen  yang telah diencerkan kemudian dievaluasi (motilitas, viabilitas, dan abnormalitas), setelah itu disimpan  pada  suhu  3-5oC.  Semen  yang  telah disimpan kemudian kembali dievaluasi setiap 24 jam meliputi motilitas, viabilitas, dan abnormalitas.

## Variabel Penelitian
Motilitas  spermatozoa  (%)  ditentukan melalui  pengamatan  spermatozoa  di  bawah mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran  lensa objektif  40x10.  Penilaian  terhadap  persentase spermatozoa  motil  adalah  spermatozoa  yang bergerak  progresif  ditentukan  secara  subjektif pada 5 lapang pandang berbeda.
Viabilitas  spermatozoa  (%)  diketahui dengan  mengamati  preparat  hasil  pewarnaan differensial (eosin-negrosin) menggunakan mikroskop dengan pembesaran 40×10. Spermatozoa  hidup  memiliki  kepala  berwarna putih  sedangkan  yang  mati  berwarna  merah. Hitungan  total  sperma  ≥  800  sel  spermatozoa atau pada 10 lapang pandang berbeda.
Abnormalitas  (%)  diketahui  dengan  cara menempatkan preparat hasil pewarnaan differensial  di  bawah  mikroskop  dan  amati dengan pembesaran 40×10 berdasarkan abnormalitas primer dan sekunder.

## Analisis Data
Data yang diperoleh dihitung rata-rata dan standard  deviasi  dan  dianalisis  dengan  analysis of  variance  (ANOVA)  dan  dilanjutkan  dengan uji  duncan’s  multiple  range  test  (DMRT). Analisis  mengunakan  software  SPSS  22.0  for windows dan MS office exell 2007.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen Segar Kambing Kacang
Karakteristik semen segar kambing Kacang  yang  digunakan  pada  penelitian  dapat dilihat pada Tabel 1.
Nilai  rataan  volume  semen  segar  yang ditampung dari pejantan kambing kacang (Tabel 3) dalam penelitian ini adalah 0,74 ml, hasil ini lebih  rendah  dari  penelitian  yang  diperoleh Kusumawati et  al .,  (2017)  yaitu  1  ml.  Volume hasil  penelitian  ini  berada  pada  kisaran  normal menurut  Sekosi et  al .,  (2016)  yang  melaporkan bahwa  volume  semen  kambing  per-ejakulat berkisar antara 0,5-1,5 ml.
Warna semen segar kambing kacang hasil penelitian  ini  adalah  krem  dengan  konsistensi kental.  Hasil  ini  sesuai  dengan  pendapat  dari Pamungkas et  al .,  (2008)  bahwa  semen  segar kambing  PE  berwarna  krem  dengan  konsistensi kental,  namun  lebih  baik  jika  dibandingkan dengan laporan Kusumawati et al ., (2017) yaitu berwarna krem dengan konsistensi sedang.
Derajat keasaman/pH semen segar kambing  kacang  hasil  penelitian  ini  yaitu  6,52. Hasil  ini  berbeda  dari  pendapat  Kusumawati et al .,  (2017)  yakni  pH  semen  7,  namun  berada pada  kisaran  normal  karena  menurut  Garner  & Hafez,  (2000)  yang  melaporkan  bahwa  setiap
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
individu memiliki derajat kesaman yang hampir
sama yang berkisar antara 6,4-7,8.
Tabel 1. Karakteristik semen segar kambing kacang Karekteristik semen Rerata±standar deviasi Volume (ml) 0,74±0,42 Warna Krem Konsistensi Kental pH 6,52±0,16 Gerakan Massa +++ Konsentrasi (10 6 sel/ml) 2.099,40±116,78 Motilitas (%) 80,00±3,53 Viabilitas (%) 86,58±3,04 Abnormalitas (%) 2,83±0,34
Dari  uraian  diatas  menunjukkan  bahwa terjadi  perbedaan  volume,  warna,  konsistensi dan pH semen antara hasil penelitian ini dengan hasil  penelitian  para  ahli  yang  disebabkan karena  perbedaan  bangsa,  umur,  ukuran  badan, kondisi tubuh, frekuensi dan waktu penampungan,  dan  pola  pemeliharaan  (Lubis et al ., 2013).
Gerakan  massa  dari  hasil  penelitian  ini adalah  sangat  baik  (+++),  hasil  ini    sesuai dengan  pendapat  Inonie et  al .,  (2016)  bahwa kambing  Boerawa  dan  Kacang  sama-sama memiliki  gerakan  massa  spermatozoa  yang sangat baik (+++).
Rerata  konsentrasi  semen  segar  dari penelitian ini yaitu 2.099,40±116,78 juta sel/ml. Hasil  ini  sedikit  lebih  rendah  dari  pendapat Tambing et  al .,  (2000)  bahwa  rataannya  yaitu 2.940×106  sel/ml.  Sedangkan  menurut  laporan Evans  &  Maxwell,  (1987)  yaitu  rata-rata konsentrasi semen kambing normal berada pada kisaran 2.500juta-5.000juta sel/ml.
Dari  penelitian  ini  diperoleh  hasil  rerata motilitas semen segar yaitu 80%, hasil penelitian ini  lebih  tinggi  dari  persentase  motilitas  semen segar  kambing  kacang  menurut  Kusumawati et al ., (2017) yaitu 75,2%.
Rata-rata  viabilitas  semen  segar  yang diperoleh dari penelitian ini adalah 86,58%, nilai ini  lebih  rendah  dari  penelitian  yang  dilakukan oleh  Kusumawati et  al .,  (2017)  pada  kambing kacang yaitu 95,8%.
Rataan  abnormalitas  semen  segar  pada penelitian  ini  yaitu  2,83%,  hal  ini  menunjukan bahwa  semen  segar  tersebut  layak  digunakan karena menurut Saili et al ., (2016) bahwa semen yang  akan  digunakan  dalam  kegiatan  IB  harus memiliki persentase abnormalitas <15%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Motilitas Spermatozoa
Motilitas  spermatozoa  merupakan  salah satu  faktor  yang  mempengaruhi  fertilitas spermatozoa  serta  merupakan  indikator  penting dalam menentukan kualitas semen secara umum. Menurut  Balai  Inseminasi  Buatan  Lembang persentase  motilitas  spermatozoa  ≥40%  masih layak  digunakan  untuk  IB  (Nurfirman,  2001). Rataan dan standar devisiasi motilitas spermatozoa  kambing  Kacang  dalam  pengencer tris-kuning  telur  (T-KT)  yang  mengandung berbagai  konsentrasi  filtrat  rosella  (FR)  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai Rata-Rata Motilitas Spermatozoa Hari Perlakuan T-KT-FR(%) P0 (0%) P1 (1%) P2 (2%) P3 (3%) P4 (4%) P5 (5%) 0 80,41±3,45 a 80,70±3,48 a 80,59±3,71 a 80,74±3,57 a 80,50±3,68 a 80,39±3,52 a 1 70,11±1,45 bc 71,61±1,14 abc 71,78±1,49 ab 74,55±1,83 a 70,52±3,17 bc 67,78±5,02 c 2 60,63±2,21 bc 61,85±1,64 b 62,75±1,43 b 66,46±0,84 a 60,29±3,35 bc 57,16±5,05 c 3 50,52±5,14 bc 52,76±2,29 b 53,56±2,56 ab 59,21±1,43 a 50,47±4,68 bc 45,58±7,42 c 4 38,39±2,20 bc 41,00±2,27 b 41,24±1,54 b 50,73±2,28 a 38,31±3,92 bc 35,78±5,50 c 5 26,98±2,90 c 31,22±2,26 bc 33,88±3,21 b 42,99±2,19 a 30,72±4,16 bc 27,98±4,91 c
Keterangan: a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Berdasarkan Tabel 2 diatas terlihat bahwa rataan  motilitas  spermatozoa  kambing  Kacang pada setiap perlakuan yang disimpan selama 0-5
hari  pada  suhu  3-5oC  mengalami  penurunan dengan  nilai  rata-rata  rentang  penurunan motilitas  spermatozoa  kambing  Kacang  pada
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
setiap  perlakuan  tidak  sama.  Pada  kelompok perlakuan  P3  masih  memperlihatkan  persentase pergerakan  progresif  >40%  sampai  hari  ke-5, sedangkan  pada  perlakuan  kontrol,  P1,  P2,  P4, dan  P5  pada  hari  ke-5  menunjukan  persentase pergerakan spermatozoa progresif <40% dengan rataan rentang  penurunan motilitas spermatozoa per hari selama 5 hari penyimpanan pada setiap perlakuan  dari  yang  terendah  hingga  tertingi yaitu P3 7,55%, P2 9,34%, P1 9,90%, P4 9,96%, P5  10,48%,  P0  10,69%.  Penurunan  persentase motilitas  spermatozoa  kambing  Kacang  terjadi seiring  dengan  lama  waktu  pendinginan,  hal  ini diduga  terjadi  karena  ketersediaan energi  dalam bahan  pengencer  semakin  berkurang  seiring dengan lama waktu penyimpanan, zat-zat nutrisi pada pengencer menjadi toksik karena mengalami reaksi oksidasi selama penyimpanan, meningkatnya  radikal  bebas  sehingga  merusak keutuhan membran plasma semen, bertambahnya  konsentrasi  asam  laktat  sehingga derajat  keasaman  meningkat  serta  terdapat spermatozoa  yang  mati  dan  rusak  akibat  suhu dingin sehingga menjadi racun bagi spermatozoa lain  (Rizal  dan  Herdis,  2005;  Wiyanti et  al ., 2013;  Kusumawati et  al .,  2017).  Persentase pergerakan individu yang dihasilkan juga sangat dipengaruhi oleh faktor lingkungan seperti jenis pengencer,  zat  kimia  penyusun  ekstender,  dan osmolaritas (Urabi et al ., 2019).
Hasil  analisis  statistik  menggunakan analisis  of  variance  (ANOVA)  dan  dilanjutkan dengan  duncan’s  multiple  range  test  (DMRT) terhadap  persentase  motilitas  spermatozoa menunjukkan  bahwa  pada  pengamatan  pasca pengenceran  (hari  ke-0)  penambahan  FR  dalam pengencer  T-KT  berpengaruh  tidak  nyata (P>0,05) terhadap persentase motilitas spermatozoa kambing Kacang. Namun pada hari ke-1  hingga  hari  ke-5  menunjukkan  pengaruh yang  nyata  (P<0,05)  terhadap  persentase motilitas  spermatozoa  kambing  kacang.  Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa penambahan  FR  dalam  pengencer  T-KT  dapat mempengaruhi persentase motilitas spermatozoa kambing  Kacang.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa  telah  terjadi  interaksi  antara  pengencer semen dengan spermatozoa, selain itu komponen pengencer  termasuk  kandungan  FR  sudah mempengaruhi metabolisme dan kondisi fisologis spermatozoa.
Pada hari ke-5 perlakuan kontrol menunjukkan  persentase  spermatozoa  motil lebih rendah secara tidak nyata (P>0,05) dari P5 dan  lebih  rendah  secara  nyata  (P<0,05)
dibandingkan  dengan  perlakuan  P1,  P2,  P3  dan P4. Rendahnya persentase motilitas spermatozoa pada  perlakuan  kontrol  diduga  terjadi  karena pengencer  T-KT  hanya  berfungsi  sebagai sumber  nutrisi  dan  bersifat  sebagai  penyangga dan anti cold shock namun tidak bersifat sebagai antioksidan.  Hal  ini  didukung  oleh  Widjaya, (2011); Iskandari et al ., (2020), yang berpendapat  bahwa  dalam  pengencer  T-KT terkandung  bahan  seperti  tris  aminomethane, asam  sitrat,  raffinosa  dan  kuning  telur  yang berfungsi  sebagai  sumber  nutrisi  dan  bersifat sebagai  penyangga  untuk  mempertahankan  pH semen dari adanya kejutan dingin.
Pada perlakuan P1 menunjukkan persentase  motilitas  spermatozoa  yang  lebih rendah  secara  nyata  (P<0,05)  dari  perlakuan  P2 dan  P3,  namun  lebih  tinggi  secara  nyata (P<0,05)  dari  P4  dan  lebih  tinggi  secara  nyata (P<0,05) dari P0 dan P5 serta lebih tinggi secara tidak nyata (P>0,05) dari P4. Perlakuan P2 juga menunjukkan  persentase  motilitas  spermatozoa yang lebih rendah secara nyata (P<0,05) dari P3, namun  lebih  tinggi  secara  nyata  (P<0,05)  dari perlakuan  lainnya.  Hal  tersebut  menunjukkan bahwa  kandungan  antioksidan  dalam  FR  pada perlakuan  P1  dan  P2  belum  efektif  dalam mencukupi  kebutuhkan  spermatozoa  untuk mempertahankan motilitasnya. Hal ini didukung oleh  Devipriya et  al .,  (2007);  dan  Setyaningsih, (2011)  yang  berpendapat  bahwa  kandungan antioksidan  yang  diberikan  dalam  dosis  yang rendah  belum  efektif  dalam  menangkal  radikal bebas.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa perlakuan 3% (P3) merupakan perlakuan terbaik dan  lebih  tinggi  secara  nyata  (P<0,05)  dari perlakuan  kontrol,  P1,  P2,  P4,  P5.  Kondisi  ini diduga  terjadi  karena  jumlah  kandungan  nutrisi dan  senyawa  antioksidan  yang  terkandung dalam  FR  pada  level  3%  diduga  merupakan jumlah yang dibutuhkan untuk mempertahankan motilitas  spermatozoa  dan  mencegah  terjadinya kerusakan spermatozoa akibat radikal bebas. Hal ini  didukung  oleh  pendapat  Bebas  &  Gorda, (2016);  dan  Yahaq et  al .,  (2019)  bahwa kerusakan membran plasma spermatozoa karena peroksidasi  lipid  yang  disebabkan  oleh  radikal bebas  dapat  dicegah  dengan  menambahkan antioksidan dalam pengencer.
Pada kelompok perlakuan P4 menunjukkan  persentase  motilitas  spermatozoa lebih  tinggi  secara  nyata  (P<0,05)  dari  P0  dan P5,  namun  labih  rendah  secara  tidak  nyata (P>0,05)  dari  P1  dan  lebih  rendah  secara  nyata
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
(P<0,05)  dari  P2,  dan  P3.  Pada  kelompok perlakuan  P5  juga  menunjukkan  persentase motilitas  spermatozoa  yang  lebih  rendah  secara nyata  (P<0,05)  dengan  perlakuan,  P1,  P2,  P3 dan  P4,  namun  lebih  tinggi  secara  tidak  nyata (P>0,05) dari P0. Hasil ini membuktikan bahwa penambahan  FR  4%  dan  5%  dalam  pengencer T-KT  justru  menurunkan  persentase  motilitas spermatozoa  kambing  Kacang  dan  merupakan level  yang  dapat  menyebabkan  toksik  bagi spermatozoa, karena penambahan dosis antioksidan  yang  terlalu  banyak.  Hal  ini didukung  oleh  pendapat  Savitri et  al .,  (2014), bahwa  pemberian  antioksidan  dalam  jumlah banyak  dapat  mempengaruhi  laju  oksidasi  yang mengakibatkan  hilangnya  aktivitas  antioksidan serta antioksidan tersebut bisa menjadi prooksidan.
Senyawa  antioksidan  yang  terkandung dalam 100 g kelopak bunga rosela yaitu vitamin C 214,68 mg, vitamin E 4,9 mg, polifenol dan β- karoten  285  mg  (Maryani  &  Kristiana,  2005). Vitamin  C  dan  vitamin  E  berperan  dalam meningkatkan laju laju fruktolisis untuk memenuhi kebutuhan energi spermatozoa, selain itu vitamin C dan E merupakan antioksidan yang dapat  menangkal  senyawa-senyawa  radikal bebas  dan  mengatasi  terbentuknya  degradasi oksidatif  lipid  sehingga  glikolisis  dan  motilitas tidak  terganggu  (Rosmaidar et  al .,  2014).
Senyawa  polifenol  yang  terdapat  pada  kelopak bunga  rosella  yaitu  asam  fenolik,  flafonoid (antosianin),  flavonol  dan  flavon.  Senyawa polifenol  tersebut  berfungsi  sebagai  antioksidan karena  mampu  mencegah  terbentuknya  radikal
bebas dalam tubuh (Ali et al ., (2005); dan Putri et  al .,  (2014).  Selain  vitamin  C,  vitamin  E  dan senyawa  polifenol,  didalam  kelopak  bunga rosella  juga  terdapat  senyawa  β-karoten  yang diduga mampu memperbaiki kualitas spermatozoa. Siahaan et al ., (2012) berpendapat bahwa  β-karoten  adalah  senyawa  antioksidan yang  larut  dalam  lemak  yang  berfungsi  untuk memotong reaksi berantai peroksidasi lipid pada membran  plasma  sel  yang  berasal  dari  radikal bebas.
Hasil motilitas spermatozoa pada penelitian  ini  lebih  tinggi  dari  hasil  penelitian yang  dilakukan  oleh  Marawali et  al .,  (2019), dengan  rata-rata  persentase  motilitas  53,40% selama  3  hari  penyimpanan  pada  pengencer filtrat  jambu  biji  dalam  pengencer  air  kelapa- kuning  telur  pada  semen  cair  sapi  bali  dengan suhu  5oC.  Hafez  &  Hafez,  (2000),  menyatakan bahwa perbedaan persentase motilitas dipengaruhi  oleh  usia  sperma,  maturasi  sperma, penyimpanan  energi,  agen  aktif,  fisiologik, cairan suspensi dan adanya hambatan.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Viabilitas Spermatozoa
Kusumawati et  al .,  (2016),  mengatakan bahwa  untuk  keperluan  inseminasi  buatan  (IB) maka  spermatozoa  yang  digunakan  harus memiliki  persentase  viabilitas  spermatozoa ≥50%.  Hasil  pengamatan  nilai  rata-rata  dan standar  deviasi  viabilitas  spermatozoa  dalam pengencer  tris-kuning  telur  (T-KT)  yang mengandung  berbagai  level  filtrat  rosella  (FR) dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai Rata-Rata Viabilitas Spermatozoa Hari Perlakuan T-KT-FR(%) P0 (0%) P1 (1%) P2 (2%) P3 (3%) P4 (4%) P5 (5%) 0 86,44±2,18 a 86,48±2,23 a 86,62±2,49 a 86,70±2,45 a 86,54±2,15 a 86,46±2,11 a 1 73,83±1,15 b 74,76±1,16 b 76,31±1,97 b 81,21±1,67 a 72,65±3,72 bc 70,00±4,68 c 2 64,31±2,47 b 65,30±2,39 b 67,42±1,54 b 73,22±0,92 a 63,37±3,50 b 59,43±5,12 c 3 54,61±5,10 b 56,88±2,80 b 57,96±2,54 b 65,90±1,67 a 53,65±4,48 bc 48,08±7,80 c 4 42,17±1,91 bc 44,67±2,30 b 45,30±1,32 b 56,85±2,51 a 41,54±3,83 bc 38,26±5,31 c 5 31,46±3,37 c 35,10±2,34 bc 38,00±3,20 b 49,30±2,24 a 33,74±4,45 bc 30,42±5,26 c a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Berdasarkan  Tabel  3  diatas  menunjukkan bahwa  rataan  persentase  viabilitas  spermatozoa kambing Kacang dalam pengencer T-KT dengan penambahan FR yang disimpan selama 0-5 hari pada suhu 3-5oC mengalami penurunan. Tingkat penurunan  persentase  viabilitas  spermatozoa setelah  pendinginan  terjadi  secara  bertahap  dan
berbeda-beda  antar  kelompok  perlakuan.  Pada perlakuan  kontrol  (P0),  1%  (P1),  2%  (P2),  3% (P3),  4%  (P4)  dan  P5  pada  hari  ke-5 menunjukkan  spermatozoa  hidup  <50%,  namun pada  perlakuan  3%  pada  hari  tersebut  masih memperlihatkan  persentase  motilitas  mendekati 50%. Nilai rata-rata rentang penurunan motilitas
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
spermatozoa per hari selama 5 hari penyimpanan pada  setiap  perlakuan  berturut-turut  dari  yang terendah  hingga  tertinggi  yaitu  P3  7,48%,  P2 9,72%,  P1  10,28%,  P4  10,56%,  P0  11,00%  dan P5 11,21%.
Penurunan persentase viabilitas spermatozoa terjadi karena selama penyimpanan pada suhu dingin terjadi perubahan struktur dari fosfolipid membran plasma yang mengakibatkan fungsi  dan  permeabilitas  membran  plasma  sel terganggu (Cotter et al ., 2005). Sukmawati et al . (2014),  berpendapat  bahwa  jika  kerusakan membran  plasma  sel  terjadi,  maka  akan mengganggu  proses  metabolisme  dan  proses sintesa  Adenosin  Tri  Fosfat  (ATP)  terhambat sehingga  menyebabkan  viabilitas  spermatozoa menurun.  Selain  itu  menurunnya  persentase viabilitas spermatozoa selama masa penyimpanan  pada  suhu  dingin  karena  energi yang  terkandung  dalam  pengencer  berkurang sedangkan energi yang dibutuhkan oleh spermatozoa  semakin  tinggi  dan  konsentrasi asam  laktat  dalam  pengencer  meningkat  (Hafez and  Hafez  2000;  dan  Kusumawati et  al .  2017). Wiyanti et al . (2013), menambahkan bahwa zat- zat  yang  terdapat  pada  pengencer  yang digunakan  menjadi  toksik  karena  mengalami reaksi  oksidasi  selama  penyimpanan  dan meningkatkan  radikal  bebas  yang  merusak keutuhan membran plasma spermatozoa. Selama penyimpanan  pada  suhu  dingin  spermatozoa akan mengalami kerusakan akibat stres oksidatif yang  menyebabkan  terjadinya  penurunan  pada viabilitas spermatozoa (Amtiran et al ., 2020).
Hasil  analisis  statistik  menggunakan analisis of variance (ANOVA) yang dilanjutkan dengan  duncan’s  multiple  range  test  (DMRT) terhadap  persentase  viabilitas  spermatozoa menunjukkan  bahwa  pada  pengamatan  pasca pengenceran  (hari  ke-0)  penambahan  FR  dalam pengencer  T-KT  berpengaruh  tidak  nyata (P>0,05) terhadap persentase viabilitas spermatozoa kambing kacang. Namun setelah 1- 5 hari penyimpanan pada suhu dingin menunjukkan  pengaruh  yang  nyata  (P<0,05) terhadap  persentase  viabilitas  spermatozoa kambing  kacang.  Hasil  ini  mengindikasikan bahwa  telah  terjadi  interaksi  antara  bahan pengencer  dengan  spermatozoa,  selain  itu kandungan  FR  dalam  pengencer  memberikan pengaruh  positif  terhadap  spermatozoa  dalam mempertahankan  viabilitasnya.  Inonie et  al . (2016),  menyatakan  bahwa  persentase  viabilitas spermatozoa  sangat  berkaitan  dengan  tingkat fertilitas  spermatozoa,  dimana  semakin  tinggi
persentase  viabilitas  maka  semakin  tinggi  pula tingkat fertilitasnya.
Pada perlakuan kontrol (P0) menunjukkan bahwa  persentase  spermatozoa  hidup  lebih tinggi secara tidak nyata (P>0,05) dibandingkan dengan  P5,  namun  lebih  rendah  secara  nyata (P<0,05) dari P1, P2, P3 dan P4. Pada perlakuan P1 menunjukkan persentase viabilitas spermatozoa  yang  lebih  rendah  secara  nyata (P<0,05)  dengan  perlakuan  P2  dan  P3,  namun lebih tinggi secara tidak nyata (P>0,05) dari P4, serta  lebih  tinggi  secara  nyata  (P<0,05)  dari perlakuan  P5.  Pada  perlakuan  P2  menunjukkan persentase  viabilitas  spermatozoa  yang  lebih rendah  secara  nyata  (P<0,05)  dari  P3,  namun lebih  tinggi  secara  nyata  (P<0,05)  dari  P0,  P1, P4  dan  P5.  Pada  perlakuan  P3  merupakan perlakuan  terbaik  dan  lebih  tinggi  secara  nyata (P<0,05)  dari  perlakuan  kontrol  maupun perlakuan  lainnya  dalam  mempertahankan viabilitas spermatozoa. Pada kelompok perlakuan P4 menunjukkan persentase viabilitas spermatozoa  yang  lebih  rendah  secara  nyata (P<0,05)  dibandingkan  dengan  P2  dan  P3,  dan lebih  rendah  secara  tidak  nyata  (P>0,05)  dari perlakuan  P1,  serta  lebih  tinggi  secara  nyata (P<0,05)  dari  perlakuan  P0  dan  P5.  Pada kelompok  perlakuan  P5  juga  menunjukkan persentase  motilitas  spermatozoa  yang  lebih rendah  secara  nyata  (P<0,05)  dengan  perlakuan P1,  P2,  P3  dan  P4,  serta  lebih  rendah  secara tidak nyata (P>0,05) dari P0.
Hasil ini membuktikan bahwa penambahan  filtrat  rosella  3%  dalam  pengencer T-KT  dapat  mempertahankan  kondisi  fisiologis pengencer, sehingga persentase viabilitas spermatozoa  dapat  dipertahankan.  Keadaan  ini terjadi  karena  dalam  filtrat  rosella  terkandung vitamin  C,  vitamin  E,  β-karoten  dan  polifenol yang  berfungsi  sebagai  antioksidan.  Kandungan antioksidan  tersebut  dapat  meningkatkan  laju fruktolisis  sehingga  kebutuhan  energi  untuk kelangsungan hidup spermatozoa dapat terpenuhi.  Selain  itu  kandungan  vitamin  C, vitamin  E,  β-karoten,  dan  polifenol  dapat menangkal radikal bebas sehingga pembentukan peroksidasi lipid yang merusak membran plasma sel  spermatozoa  dapat  dicegah  (Siahaan et  al . 2012; Lubis et al . 2013; Putri et al . 2014).
Akan  tetapi  penambahan  filtrat  rosella melebihi  3%  dalam  pengencer  T-KT  pada penelitian  ini  justru  menurunkan  persentase viabilitas  kambing  Kacang  setelah  pendinginan. Keadaan  ini  kemungkinan  terjadi  karena semakin  tinggi  konsentrasi  filtrat  rosella  yang
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
diberikan akan meningkatkan kandungan antioksidan dalam pengencer, sehingga mempercepat laju fruktolisis dan terjadi peningkatan  konsentrasi  asam  laktat  dalam pengencer  yang  menyebabkan  menurunnya  pH semen dan selanjutnya mengakibatkan menurunnya aktivitas enzim-enzim metabolisme,  akibatnya  energi  yang  dibutuhkan spermatozoa  untuk  bertahan  hidup  tidak terpenuhi.  Tingginya  kandungan  antioksidan dalam  pengencer  juga  dapat  beralih  fungsi menjadi prooksidan yang menyebabkan terjadinya  stres  oksidatif  pada  sel  spermatozoa (Savitri et al ., 2014).
Hasil  penelitian  ini  juga  menunjukkan bahwa  persentase  viabilitas  spermatozoa  yang diperoleh  pada  semua  kelompok  perlakuan penambahan  filtrat  rosella  lebih  tinggi  dari persentase motilitas spermatozoa yang diperoleh pada perlakuan kontrol. Hal tersebut disebabkan karena  adanya  spermatozoa  yang  tidak  motil namun  masi  hidup  sehingga  tidak  terjadi penyerapan  warna  dari  larutan  eosin-negrosin yang diberikan (Susilowati, 2010).
Persentase  viabilitas  spermatozoa  hasil penelitian  ini  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan Rosmaidar et  al .,  (2014),  dengan  rata-rata persentase viabilitas spermatozoa sebesar 62,40%  menggunakan  sari  buah  tomat  dalam pengencer  sitrat  kuning  telur  pada  spermatozoa kambing  boer.  Perbedaan  ini  disebabkan  oleh sifat  fisik,  kimiawi  dan  kadar  bahan  pengencer, suhu dan cahaya dalam perlakuan, penyimpanan sperma,  tekanan  osmotik,  elektrolit  dan  non elektrolit (Toelihere, 1993).

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Abnormalitas Spermatozoa
Strukrur sel yang abnormal akan menyebabkan  terjadinya  gangguan  pada  saat fertilisasi,  sehingga  salah  satu  indikator  penting yang harus diketahui dalam menentukan kualitas spermatozoa adalah dengan mengetahui persentase  abnormalitas  spermatozoa  (Afiati et al .,  2015).  Rata-rata  dan  standar  deviasi abnormalitas  spermatozoa  dari  setiap  perlakuan yang  ditambahkan  filtrat  rosella  (FR)  dalam penelitian ini disajikan pada Tabel 4.
Tabel 4. Nilai rata-rata abnormalitas spermatozoa Hari Perlakuan T-KT-FR(%) P0 (0%) P1 (1%) P2 (2%) P3 (3%) P4 (4%) P5 (5%) 0 2,86±0,67 a 2,68±0,58 a 2,83±0,55 a 3,10±0,52 a 2,82±0,36 a 2,73±0,54 a 1 3,20±0,57 a 3,06±0,61 a 3,01±0,47 a 3,13±0,40 a 3,19±0,58 a 3,26±0,42 a 2 3,64±0,47 ab 3,53±0,39 ab 3,72±0,43 ab 3,43±0,31 b 3,66±0,33 ab 4,03±0,41 a 3 4,07±0,54 a 3,98±0,51 a 4,05±0,51 a 3,84±0,53 a 4,17±0,53 a 4,47±0,43 a 4 4,42±0,49 ab 4,13±0,50 b 4,23±0,53 ab 4,00±0,51 b 4,35±0,52 ab 4,87±0,48 a 5 4,80±0,47 ab 4,66±0,46 ab 4,30±0,62 b 4,12±0,49 b 4,73±0,48 ab 5,17±0,35 a a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Pada  Tabel  4  diatas  menunjukkan  bahwa rataan  persentase  abnormalitas  spermatozoa kambing Kacang dalam pengencer T-KT dengan penambahan  FR  mengalami  kanaikan  seiring dengan  lama  waktu  pendinginan.  Kenaikan persentase  abnormalitas  spermatozoa  diduga terjadi  karena  proses pembentukan  spermatozoa yang  tidak  sempurna,  kerusakan  yang  timbul akibat  cara  pengkoleksian  semen  dan  pada proses  pengenceran  semen  serta  pembuatan ulasan untuk pengamatan. Hal ini didukung oleh Solihati  dan  Kune  (2009);  Hastuti  dan  Riviani (2020), bahwa peningkatan abnormalitas spermatozoa dipengaruhi oleh ketidak-normalan proses spermatogenesis dalam tubulus seminiferi,  proses  pengenceran  dan  pembuatan preparat ulas serta lamanya waktu penyimpanan. Selain  disebabkan  saat  pembuatan  preparat  ulas
untuk  pengamatan,  persentase  abnormalitas spermatozoa  juga  disebabkan  oleh  peroksidasi lipid  yang  teradi  akibat  reaksi  asam  lemak  tak jenuh  dan  radikal  bebas  yang  menyebabkan kerusakan  pada  membran  plasma  spermatozoa (Suyadi et al ., 2012; Fafo et al ., 2016).
Namun  rentang  kenaikan  abnormalitas spermatozoa  yang  terjadi  tidak  terlalu  drastis dan tergolong rendah, dimana pada pengamatan pasca  pengenceran  (hari  ke-0)  hingga  pada pengamatan  5  hari  setelah  penyimpanan  pada suhu  dingin  menunjukkan  rentangan  persentase abnormalitas spermatozoa dalam kisaran normal yaitu berkisar antara 2,68-5,17%. Hasil penelitian  ini  sesuai  dengan  standar  Inseminasi Buatan  (IB)  menurut  Sekosi et  al .,  (2016), bahwa  untuk  keperluan  IB  semen  yang digunakan  harus  mengandung  abnormalitas
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
spermatozoa  <20%.  Saili et  al .,  (2016), menambahkan bahwa standar persentase abnormalitas spermatozoa kambing untuk keperluan IB adalah ≤15%.
Kisaran persentase abnormalitas spermatozoa  hasil  penelitian  ini  lebih  rendah dibandingkan  dengan  hasil  penelitian  (Hidayah, 2018)  tentang  penambahan  filtrat  daun  kelor dalam  pengencer  tris-kuning  telur  terhadap selama 4 hari penyimpanan dengan kisaran 8,20- 17,00%.  Perbedaan  ini  dipengaruhi  oleh kecerobohan  pada  saat  perlakuan,  perbedaan isotonis  pada  bahan  pengencer  yang  digunakan, dan kejutan dingin (Susilawati, 2011).
Rendahnya rentang kenaikan abnormalitas spermatozoa  pada  penelitian  ini  diduga  terjadi karena  didalam  pengencer  T-KT  terdapat kandungan zat-zat nutrisi yang mampu mencegah  terjadinya  peningkatan  abnormalitas spermatozoa  akibat  suhu  dingin.  Hal  tersebut didukung  oleh  pendapat  Effendi et  al .,  (2015), bahwa dalam kuning telur terkandung lesitin dan lipoprotein yang berfungsi untuk mempertahankan integritas selubung lipoprotein spermatozoa  dan  mencegah  terjadinya  cold shock.  Selain  itu  rendahnya  rentang  kenaikan abnormalitas  spermatozoa  pada  penelitian  ini diduga  terjadi  karena  kandungan  antioksidan dalam  FR  dapat  menangkal  radikal  bebas sehingga kerusakan spermatozoa dapat dicegah.
Hasil  analisis  statistik  menggunakan analisis  of  variance  (ANOVA)  dan  dilanjutkan dengan  duncan’s  multiple  range  test  (DMRT) terhadap  persentase  abnormalitas  spermatozoa kambing  Kacang  menunjukkan  bahwa  pada pengamatan hari ke-0 dan hari ke-1 penambahan FR  dalam  pengencer  T-KT  berpengaruh  tidak nyata (P>0,05) terhadap persentase abnormalitas spermatozoa kambing Kacang. Namun pada hari ke-2  hingga  hari  ke-5  menunjukkan  pengaruh yang  nyata  (P<0,05)  terhadap  persentase abnormalitas  spermatozoa  kambing  kacang, dimana  persentase  abnormalitas  dari  terendah sampai tertinggi berturut-turut pada hari terakhir pengamatan  yaitu  P3  (4,12%),  P2  (4,30%),  P1 (4,66%),  P4  (4,73%),  P0  (4,80%)  dan  P5 (5,17%).  Hasil  analisis  tersebut  menunjukan
bahwa  penambahan  FR  dalam  pengencer  T-KT dapat  mempengaruhi  persentase  abnormalitas spermatozoa  kambing  Kacang.  Hal  tersebut mengindikasikan  bahwa  telah  terjadi  interaksi antara  pengencer  semen  dengan  spermatozoa, selain  itu  komponen  pengencer  termasuk kandungan FR sudah mempengaruhi metabolisme dan kondisis fisiologis pengencer.
Penambahan  FR  dengan  dosis  3% merupakan  perlakuan  terbaik  dimana  pada  hari ke-0 perlakuan tersebut menunjukkan persentase abnormalitas  tertinggi  dari  semua  perlakuan namun setelah 5 hari penyimpanan perlakuan P3 menunjukkan persentase abnormalitas spermatozoa terendah secara nyata (P<0,05) dari semua  perlakuan.  Hasil  tersebut  membuktikan bahwa  penambahan  FR  3%  kedalam  pengencer T-KT  memberikan  respon  positif  terhadap spermatozoa,  Karena  FR  pada  dosis  3% mempunyai  senyawa  antioksidan  yang  diduga sesuai  dengan  kebutuhan  spermatozoa  untuk mengatasi dan mengurangi kerusakan spermatozoa akibat radikal bebas sehingga dapat menekan  angka  abnormalitas  spermatozoa  yang terjadi.  Selain  itu  penambahan  antioksidan dalam  pengencer  dapat  mengatasi  kerusakan membran  plasma  spermatozoa  akibat  adanya peroksidasi  lipid  yang  disebabkan  oleh  radikal bebas (Bebas and Gorda, 2016; dan Yahaq et al ., 2019).
Pada kelompok perlakuan 5% menunjukkan
persentase abnormalitas
spermatozoa  yang  lebih  rendah  secara  nyata (P<0,05) dibandingkan dengan perlakuan kontrol,  P1,  P2,  P3,  dan  P4.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  penambahan  5%  dalam pengencer  T-KT  justru  menurunkan  persentase abnormalitas  spermatozoa  kambing  Kacang  dan merupakan  dosis  yang  dapat  menyebabkan toksik  bagi  spermatozoa  karena  mengandung senyawa antioksidan dalam jumlah yang banyak melebihi  kebutuhan  spermatozoa.  Selain  itu pemberian  antioksidan  dalam  jumlah  banyak dapat mempengaruhi laju oksidasi yang menyebabkan  aktivitas  antioksidan  menghilang serta  antioksidan  tersebut  bisa  berubah  menjadi prooksidan (Savitri et al ., 2014).
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..

## SIMPULAN
Kesimpulan penelitian ini adalah penambahan filtrat rosella dalam pengencer tris- kuning  telur  memiliki  pengaruh  yang  baik  dan mampu  mempertahankan  kualitas  spermatozoa kambing  kacang.  Pada  penambahan  dosis  3% filtrat  rosella  menunukkan  persentase  tertinggi
merupakan  dosis  terbaik  dibanding  dengan  ke lima  perlakuan  lainnya  dalam  mempertahankan motilitas, viabilitas dan abnormalitas spermatozoa  kambing  kacang  yang  disimpan selama 5 hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Aboagla  EME,  Terada  T.  2004.  Effects  of  egg yolk  during  the  freezing  step  of cryopreservation  on  the  viability  of  goat spermatozoa. Theriogenology 62(6): 1160-1172.
Afiati  F,  Yulnawati,  Riyadi  M,  Arifiantini  RI. 2015.  Abnormalitas  spermatozoa  domba dengan  frekuensi  penampungan  berbeda. Pros  Sem  Nas  Masy  Biodiv  Indon 1(4): 930-934.
Ali  BH,  Wabel  NA,  Blunden  G.  2005.
Phytochemical, pharmacological and toxicological aspects of Hibiscus
sabdariffa  L.:  A  review. Phytotherapy Research 19(5), 369-375.
Amtiran  DE,  Hine  TM,  Uly  K.  2020.  Pengaruh
Penambahan  Vitamin  E  dalam  Pengencer
Tris-Kuning  Telur  terhadap  Kualitas
Spermatozoa Babi Duroc. Jurnal
Peternakan  Lahan  Kering ,  2(4):  1111- 1118.
Bebas  W,  Gorda  W.  2016.  Penambahan astaxanthin  pada  pengencer  kuning  telur berbagai  jenis  unggas  dapat  memproteksi semen  babi  selama  penyimpanan. Jurnal Veteriner 17(4): 484-491.
Cotter  PZ,  Goolsby  HA,  Prien  SD.  2005. Preliminary  evaluation  of  a  unique freezing technology for bovine spermatozoa cryopreservation.
Reproduction in Domestic Animals 40(2):
98-99.
Devipriya N, Srinivasan M, Sudheer AR, Menon
VP. 2007. Effect of ellagic acid, a natural polyphenol, on alcohol-induced prooxidant  and  antioxidant  imbalance:  A drug  dose  dependent  study. Singapore Medical Journal 48(4): 311-318.
Effendi  FI,  Wahjuningsih  S,  Ihsan  MN.  2015. Pengaruh  pengencer  tris  aminomethane kuning  telur  yang  disuplementasi  sari kulit  manggis  ( Garcinia  Mangostana ) terhadap  kualitas  semen  sapi  limousin selama  penyimpanan  suhu  dingin  5 o C.
Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 25(3):  69- 79.
Evans  G,  Maxwell  WMC.  1987.  Salamons’ Artificial  Insemination  Of  Sheep  And Goats (Ed. 2). Butterworths.
Fafo M, Hine TM, Nalley WM. 2016. Pengujian efektivitas  ekstrak  daun  kelor  dalam pengencer  sitrat-  kuning  telur  terhadap kualitas  semen  cair  babi  landrace. Jurnal Nukleus Peternakan 3(2): 184-195.
Garner DL, Hafez ESE. 2000. Spermatozoa And Seminal Plasma. In Reproduction In Farm Animals, 96-109.
Hafez  ESE,  Hafez  B.  2000.  X  and  Y Chromosome-Bearing  Spermatozoa.  In Reproduction in Farm Animals: 390-394.
Hastuti  DWB,  Riviani.  2020.  Efektifitas penggunaan  jenis  ekstender  dan  dosis madu  berbeda  terhadap  motilitas  dan viabilitas  sperma  ikan  nilem  ( Osteochilus vittatus )  setelah  penyimpanan. Jurnal Airaha 9(2): 122-129.
Hidayah  SN.  2018.  Pengaruh  level  filtrat  daun kelor  ( Moringa  oleifera )  pada  pengecer tris  kuning  telur  ayam  kampung  dalam mempertahankan  kualitas  spermatozoa kambing kacang pada suhu 5 o c. Disertasi.
Universitas Mataram.
Inonie  RI,  Baa  LO,  Saili  T.  2016.  Kualitas spermatozoa kambing boerawa dan kmbing  kacang  pada  penggunaan  tris- kuning  telur  yang  berbeda. JITRO 3(1):
52-64.
Iskandari  NN,  Madyawati  SP,  Wibawati  PA,
Suprayogi TW, Prastiya RA, Agustono B. 2020. Perbandingan pengencer tris kuning telur dan susu skim kuning telur terhadap persentase motilitas, viabilitas dan integritas  membran  plasma  spermatozoa kambing  sapera  pada  penyimpanan  suhu 5 o C. Jurnal  Medik  Veteriner 3(2):  196- 202.
Kusumawati ED, Krisnaningsih ATN, Romadlon RR. 2016. Kualitas
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
spermatozoa  semen  beku  sapi  Simental dengan  suhu  dan  lama  thawing  yang berbeda. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 26(3): 38-41.
Kusumawati  ED,  Utomo  KN,  Krisnaningsih ATN,  Rahadi  S.  2017.  Kualitas  semen kambing  kacang  dengan  lama  simpan yang berbeda pada suhu ruang menggunakan pengencer tris aminomethan  kuning  telur. JITRO 4(3):
42-51.
Lubis TM,  Dasrul, Thasmi  CN,  Akbar T.  2013.
Spermatozoa  after  cold  storage. Sains Pertanian 3(1): 347-61.
Marawali  A,  Abdullah  MS,  Jalaludin.  2019.
Efektivitas  suplementasi  filtrat  jambu  biji dalam  pengencer  airkelapa-kuning  telur terhadap  kualitas  semen  cair  sapi  bali. Jurnal Veteriner 20(1): 20-29.
Maryani  H,  Kristiana  L.  2005.  Khasiat  & Manfaat  Rosela  (Revisi). Astuti  &  Purwa (eds.). Jakarta, Agromedia Pustaka.
Nurfirman.  2001.  Efektifitas  medium  beltsville poultry  semen  extender  (BPSE)  terhadap kualitas  semen  cair  ayam  lokal.  Bogor Agricultural University (IPB).
Pamungkas  FA,  Mahmilia  F,  Elieser  S.  2008.
Perbandingan
karakteristik semen kambing  boer  dengan  kacang. Seminar Nasional  Teknologi  Peternakan  Dan Veteriner , 367–370.
Putri  DD,  Nurmagustina  DE,  Chandra  AA.
2014. Kandungan total fenol dan aktivitas antibakteri kelopak buah rosela merah dan ungu sebagai kandidat feed additive alami pada  broiler. Jurnal  Penelitian  Pertanian Terapan 14(3): 174-180.
Rizal M, Herdis. 2005. Daya hidup spermatozoa
epididimis domba garut yang dikriopreservasi  menggunakan  modifikasi pengencer tris. Hayati Journal of Biosciences 12(2): 61-66. Rosmaidar,  Dasrul,  Lubis  TM.  2014.  Pengaruh penambahan sari buah tomat dalam media pengencer terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa kambing boer yang disimpan pada suhu 3–5°C. Jurnal Ilmiah Peternakan 1(1): 7-17.
Saili T, Baa LO, Sani LOA, Rahadi S, Sura IW, Lopulalan  F.  2016.  Sinkronisasi  estrus dan  inseminasi  buatan  menggunakan semen  cair  hasil  sexing  pada  sapi  bali induk yang dipelihara dengan sistem yang berbeda. Jurnal Ilmu Ternak 16(2): 49-55.
Savitri  FK,  Suharyatib  S,  Siswanto.  2014. Kualitas  semen  beku  sapi  bali  dengan penambahan  berbagai  dosis  vitamin  c pada  bahan  pengencer  skim  kuning  telur. Jurnal  Ilmiah  Peternakan  Terpadu 2(3): 30-36.
Sekosi  PPP,  Kusumswati  ED,  Krisnaningsih ATN.  2016.  Motilitas  dan  viabilitas semen  segar  kambing  peranakan  etawa (pe)  dengan  menggunakan  pengencer cauda  epididymal  plasma  (CEP-2)  pada lama  dan  suhu  simpan  yang  berbeda. Jurnal Sains Peternakan 4(1): 34-39. Setyaningsih  VR.  2011.  Pengaruh  pemberian infus simplisia rosella ( Hibiscus subdariffa L ) secara oral terhadap kualitas spermatozoa  mencit  ( Mus  musculus  L ) jantan  galur  DDT. Skripsi. Depok, Universitas Indonesia.
Siahaan  EA,  Laksmi  DNDI,  Bebas  W.  2012. Efektivitas penambahan berbagai konsentrasi  β-karoten  terhadap  motilitas dan daya hidup spermatozoa sapi bali post thawing. Indonesia  Medicus  Veterinus 1(2): 239-251.
Situmorang  P.  2002.  Pengaruh  kolesterol terhadap daya hidup dan fertilitas spermatozoa sapi. JITV 7(4): 251-258.
Solihati  N,  Kune  P.  2009.  Pengaruh  jenis pengencer  terhadap  motilitas  dan  daya tahan  hidup  spermatozoa  semen  cair  sapi Simmental. Seminar Nasional Peternakan Dan Veteriner : 1-6.
Sukmawati  E,  Arifiantini  L,  Purwantara  B.
2014.  Daya  Tahan  spermatozoa  terhadap proses  pembekuan  pada  berbagai  jenis sapi  pejantan unggul. Jurnal  Ilmu  Ternak Dan Veteriner 19(3): 168-175.
Susilawati  T.  2011.  Spermatology.  Universitas Brawijaya Press.
Susilowati  S.  2010.  Efek  waktu  sentrifugasi terhadap  motilitas,  daya  tahan  hidup  dan tudung  akrosom  spermatozoa  kambing. Veterinaria Medika 3(1): 61-64.
Suyadi  AR,  Iswanto  N.  2012.  Effect  of  α  - Tocopherol  in  Tris-Aminomethane  –  Egg Yolk  on  the  Semen  Quality  during  Cold Storage  in  Boer  goats. Jurnal  Ilmu-Ilmu Peternakan 22(3): 1-8.
Tambing SN, Toelihere MR, Yusuf TL, Sutama IK.  2000.  Pengaruh  gliserol  dalam pengencer  tris  terhadap  kualitas  semen beku  kambing  peranakan  etawah. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner 5(2): 1-8.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:124-135                    pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Laos et al .: Pengaruh Penambahan Filtrat Rosella…..
Toelihere  MR.  1993.  Inseminasi  Buatan  pada Ternak. Angkasa, Bandung.
Urabi  D,  Farida,  Lestari  TP.  2019.  Pengaruh
Penambahan  Madu  Pada  Pengenceran Sperma  Terhadap  Motilitas  Spermatozoa Ikan  Baung  (Mystus  Nemurus). Jurnal Ruaya 7(2): 47-54.
Widjaya  N.  2011.  Pengaruh  pemberian  susu skim  dengan  pengencer  tris  kuning  telur terhadap  daya  tahan  hidup  spermatozoa sapi  pada  suhu  penyimpanan  5 o C. Sains
Peternakan 9(2): 72-76.
Wiyanti  DC,  Isnaini  N,  Trisunuwati  P.  2013. Pengaruh  lama  simpan  semen  dalam pengencer  NaCl  fisiologis  pada  suhu kamar  terhadap  kualitas  spermatozoa ayam  kampung  ( Gallus  domesticus ). Jurnal Kedokteran Hewan 7(1): 53-55. Yahaq  MA,  Ondho  YS,  Sutiyono.  2019. Pengaruh  Penambahan  Vitamin  C  dalam Pengencer  Semen  Sapi  Limousin  yang
Dibekukan Terhadap Kualitas Post Thawing. Jurnal Sain Peternakan Indonesia 14(4): 380-386.