Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Tegining Ganang  ( Cassia planisiliqua Burm.F.)  Terhadap  Mencit Jantan ( Mus musculus L.)
Sister Sianturi * , Amelia Febriani, Mia Aty Dolok Rosa Manalu
Program Studi S1 Farmasi, Institut Sains dan Teknologi Nasional, Jl. M. Kahfii II, Srengseng Sawah, Jakarta Selatan, 12640
E-mail: sianturisister@istn.ac.id

## Abstrak
Daun  tegining  ganang  ( Cassia  planisiliqua Burm.f.)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  berkhasiat  di  Lombok.  Berdasarkan pengalaman empiris masyarakat, daun tegining ganang dapat mengobati sakit perut, muntaber, maag, nyeri ulu hati, nyeri pinggang, batu ginjal, dan lain-lain. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui LD 50 sehingga didapatkan tingkat toksisitas sediaan uji , dan efek toksik yang dihasilkan dari daun tegining ganang. Penelitian dilakukan dengan cara serbuk tegining ganang dimaserasi menggunakan etanol 70%, kemudian diuapkan dengan rotary vacum evaporator . Kemudian dilakukan uji organoleptis, bebas pelarut etanol, dan penapisan fitokimia. Pengujian toksisitas akut dilakukan dengan cara memberikan sediaan uji  pada 4 kelompok mencit jantan pada dosis 800 mg/kgBB, 1600 mg/kgBB, 3200 mg/kgBB dengan batas uji 5000 mg/kgBB, dan suspensi CMC Na 1% sebagai kontrol negatif secara oral. Setelah pemberian, dilakukan pengamatan tanda toksisitas pada 4 jam pertama, kemudian pengamatan tanda toksisitas setelah 24 jam dan selama 14 hari dan dilakukan pengamatan efek toksik tertunda. Dari hasil penelitian didapatkan nilai LD 50 semu (LD 0 ) 3200 mg dengan kategori praktis tidak toksik dan tidak ada gejala klinis ketoksikan akut yang signifikan yang terjadi pada seluruh hewan coba.
Kata kunci: toksisitas, ekstrak, tegining, Cassia

## 1. Pendahuluan
Daun  tegining  ganang  ( Cassia  planisiliqua Burm.f.) merupakan salah satu tumbuhan berkhasiat yang tumbuh di Lombok.  Berdasarkan  pengalaman  empiris  masyarakat, daun  tegining  ganang  dapat  mengobati  penyakit  dalam, seperti  sakit  perut,  muntaber,  maag,  nyeri  ulu  hati,  nyeri pinggang, batu ginjal, keracunan, diabetes, dan hipertensi. Sebagai  obat  luar,  seperti  gigitan  binatang,  tanaman beracun,  ikan  beracun,  gatal-gatal  pada  kulit,  luka, ambeien, dan lain-lain [1]. Kandungan kimia yang terdapat pada daun tegining ganang antara lain sitronelal, tumeron, asam hexadekanoat, oksasikloheptadek, neofitatadin, asam palmitat,  asam  stearat,  glikosida  antrakuinon,  flavonoid, alkaloid,  fitosterol,  saponin,  tanin,  galaktomanan, polisakarida, dan terpenoid [1,2,3].
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  70%  daun tegining  ganang  diketahui  memiliki aktivitas  analgesik.  Efek  analgesik  yang  dimiliki  daun tegining ganang diperoleh sebesar 98,90% pada dosis 800 mg/kg  BB  mencit    yang hampir  sama dengan  efektivitas asetosal pada dosis 650 mg/kg BB mencit sebesar 100%. Penelitian lain menunjukkan bahwa ekstrak etanolik daun tegining  ganang  pada  dosis  200  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB  mempunyai  efek  mengurangi  inflamasi  pada tapak kaki mencit [3,4].
Toksisitas  akut  dengan  parameter  dosis  letal  median LD 50 memberikan  petunjuk tentang  dosis  yang  sebaiknya digunakan  dalam  waktu  lama.  LD 50 merupakan  dosis
tunggal  suatu  zat  yang  diharapkan  akan membunuh  50% hewan  coba,  selain  itu  dari  uji  toksisitas  akut  dapat diketahui kategori toksisitas bahan [5].
Setiap  bahan  atau  zat  kimia  yang  merupakan  obat harus  diteliti  sifat  toksiknya  sebelum  diperbolehkan penggunaannya  secara  luas,  agar  obat  tradisional  dapat diterima  dikalangan  masyarakat.  Khasiat  empiris  juga harus  didukung  oleh  bukti-bukti  ilmiah  adanya  manfaat klinik  dalam  pencegahan  atau  pengobatan  penyakit  dan tidak menyebabkan  efek  samping  serius  dalam  arti  aman untuk pemakaian obat pada manusia. Oleh sebab itu perlu dilakukan uji toksisitas akut daun tegining ganang  untuk melihat ada tidaknya efek toksik pada hewan uji [6,7].
Pengujian  toksisitas  akut  pada  penelitian  ini menggunakan metode konvensional berdasarkan ketentuan Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan No. 7  tahun  2014  tentang  Pedoman  Uji  Toksisitas  Nonklinik Secara In Vivo, hewan uji yang digunakan adalah mencit jantan  galur Dutche  Danken  Yoken (DDY)  yang  terbagi menjadi 4 kelompok uji dengan masing-masing kelompok terdiri atas 6 ekor mencit pada dosis 800 mg/kg BB mencit, 1600  mg/kg  BB  mencit,  3200  mg/kg  BB  mencit  dengan batas  dosis  maksimum  5000  mg/kgBB,  dan  suspensi  Na CMC 1% sebagai kontrol negatif.
Parameter  toksisitas  yang  diamati  adalah  LD 50 , pengamatan tanda toksisitas pada 4 jam pertama (jam ke- 0,  0,5,  1, 2,  3,  4)  yang  meliputi pengamatan  pada  sistem
kardiovaskuler,  pernafasan,  kulit,  dan  bulu,  selain  itu pengamatan akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma, perubahan berat badan, jumlah hewan yang mati, kemudian pengamatan anda toksisitas setelah 24 jam yang meliputi pengamatan pada sistem kardiovaskuler, pernafasan,  kulit,  dan  bulu,  selain  itu  pengamatan  akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma, perubahan  berat  badan,  jumlah  hewan  yang  mati,  dan setelah itu sehari sekali selama 14 hari untuk pengamatan efek toksik tertunda yang meliputi pengamatan pada sistem kardiovaskuler,  pernafasan,  kulit,  dan  bulu,  pengamatan akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma,  perubahan  berat  badan,  jumlah  hewan  yang  mati. Nilai  LD 50 dihitung  dengan  metode  Thompson  &  Weil dengan parameter yang diamati adalah semua hewan yang mati,  baik  yang  mati  dengan  sendirinya  atau  yang  mati dalam keadaan moribound digabungkan jumlahnya untuk perhitungan nilai LD 50 [8].

## 2. Metode

## 2.1 Umum
Bahan  uji  yang  digunakan  adalah  daun  tegining ganang  ( Cassia  planisiliqua Burm.f.)  segar  sebanyak  1,6 kg  yang  didapatkan  dari  perkebunan  di  Daerah  Narmada Desa  Peresak  Kabupaten  Lombok  Barat  Provinsi  Nusa Tenggara  Barat.  Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  mencit  berjenis  kelamin  jantan,  sehat, galur Dutche  Danken  Yoken (DDY),  berusia  6-8  minggu dengan  bobot    23-26  g.  Pengujian  toksisitas  akut berdasarkan ketentuan Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan No. 7 tahun 2014 tentang Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik Secara In Vivo .

## 2.2 Penyiapan Sampel
Bahan  uji  yang  digunakan  yaitu  daun  yang  masih segar  dan  masih muda.  Daun  tegining  ganang  yang  telah dikumpulkan selanjutnya disortasi basah untuk memisahkan  cemaran  dari  bahan  baku  dan  untuk mengurangi jumlah kontaminasi mikroba tanah. Daun yang telah disortasi basah kemudian dicuci dengan air mengalir untuk  membersihkan  bahan  baku  dari kotoran  atau  tanah yang masih menempel. Daun yang telah dicuci, selanjutnya dikeringkan pada suhu ruangan hingga kering. Daun yang telah  dikeringkan,  selanjutnya  disortasi  kering  untuk memisahkan bahan baku dari kotoran yang mungkin masih tercampur. Daun  yang  telah  disortasi  kering,  selanjutnya diserbukkan dan diayak dengan nomor pengayak 60 untuk memperoleh bahan baku dalam bentuk serbuk.

## 2.3 Ekstraksi
Serbuk kering tegining ganang diekstraksi sebanyak 285 g secara maserasi menggunakan etanol 70%. Selama 6 jam pertama sambil sekali-kali diaduk, kemudian diamkan selama  18  jam.  Maserat  diperoleh  dengan  cara pengendapan. Kemudian dilakukan remaserasi sebanyak 2 kali  dengan  jenis  dan  jumlah  pelarut  yang  sama.  Semua maserat  dikumpulkan,  kemudian  diuapkan  dengan rotary vacum  evaporator pada  suhu  40°C    lalu  dipekatkan  di
penangas  air  pada  suhu  40 ° C  sampai  didapatkan  ekstrak kental. Rendemen ekstrak dihitung dengan rumus:
% rendemen = Bobot ekstrak kental
Bobot simplisia x100%

## 2.4 Penapisan Fitokimia

## Alkaloid
Sebanyak  2  gram  ekstrak  dilembabkan  dengan  5  ml Amoniak  25%  didalam  gelas  beker,  kemudian ditambahkan  20  ml  Kloroform  hingga  massa  terendam, diaduk  dan  dipanaskan  diatas  penangas  air  lalu  disaring. Filtrat  diuapkan  sampai  setengahnya.  Sisa  penguapan dituang  kedalam  tabung reaksi  dan  ditambah  1 ml  Asam Klorida  2  N,  kemudian  dikocok  hingga  membentuk  2 lapisan, lapisan jernih yang terbentuk dimasukkan kedalam 3  tabung  reaksi  dengan  jumlah  yang  sama.  Kemudian ditambahkan  pereaksi  mayer  pada  tabung  I,  pereaksi Bouchardat  pada  tabung  II,  pereaksi  Dragendorf  pada tabung  III.  Terdapatnya  alkaloid  ditandai  dengan terbentuknya endapan putih pada pereaksi Mayer, endapan coklat  pada  pereaksi  Bouchardat,  endapan  merah  pada pereaksi Dragendorf.

## Flavonoid
Sebanyak 1 gram ekstrak diekstraksi dengan air panas 100  ml  kemudian  disaring.  Filtrat  sebanyak  5  ml dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  kedalam  larutan percobaan ditambahkan 1 ml larutan Sodium Nitrat 5%  dan 1  ml  Aluminium  Klorida  10%,  dikocok  kemudian ditambahkan 2 ml Natrium Hidroksida 1 N melalui dinding tabung.  Jika  positif  mengandung  flavonoid  warna  akan berubah menjadi merah atau jingga.

## Saponin
Sebanyak  1  gram  ekstrak  ditambahkan  dengan  air panas  100  ml  kemudian  disaring.  Filtrat  sebanyak  10  ml dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  dikocok  vertikal selama  10  detik.  Hasil  positif  saponin  ditandai  dengan terbentuknya buih yang mantap setinggi 1 hingga 10 cm. Pada  penambahan  Asam  Klorida  2  N  buih  tidak  hilang, maka hal tersebut menunjukkan adanya senyawa golongan saponin.

## Tanin
Sebanyak  1  gram  ekstrak  ditambahkan  dengan  air panas  100  ml  kemudian  disaring.  Filtrat  sebanyak  5  ml kemudian  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan  beberapa  tetes  Ferri  (III)  Klorida 1%.  Hasil positif  mengandung  tanin  menunjukkan  terbentuknya warna hijau ungu, atau hitam.

## Steroid/Triterpenoid
Sebanyak  2  gram  ekstrak  dimaserasi  dengan  20  ml Eter selama 2 jam, kemudian disaring dan diuapkan dalam cawan penguap hingga diperoleh residu, tambahkan 2 tetes Asetat  Anhidrat  dan  2  ml  Kloroform  kedalam  residu tersebut, lalu pindahkan kedalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan  perlahan-lahan  1  ml  Asam  Sulfat  Pekat
melalui  dinding  tabung.  Lihat  lapisan  cincin  yang terbentuk.  Hasil  positif  triterpenoid  menunjukkan terbentuknya  cincin  berwarna  merah  ungu,  sedangkan untuk steroid ditandai dengan warna hijau.

## 2.5 Uji Toksisitas Akut
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah mencit berjenis kelamin jantan, sehat, galur Dutche Danken Yoken (DDY), berusia 6-8 minggu dengan bobot  23 g-26 g. Sebelum pemberian sediaan uji, mencit di aklimatisasi selama  7  hari  serta  diberi  makan  dan  minum ad  libitum . Pembagian kelompok hewan uji dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Pembagian kelompok hewan uji Kelompok Perlakuan BB Mencit K1 Ekstrak (800 mg/kgBB) 25 g K2 Ekstrak (1600 mg/kgBB) 24 g K3 Ekstrak (3200 mg/kgBB) 23 g K4 CMC-Na 1% (kontrol -) 26 g
Dosis uji toksisitas akut yang diberikan pada hewan uji menggunakan dosis tertinggi yang tidak menimbulkan kematian dari hasil penelitian sebelumnya yaitu 800 mg/kg BB,  kemudian  digunakan  kelipatan  dua  setiap  tingkatan dosis menjadi 1600 mg/kg BB, 3200 mg/kg BB mencit [3].
Tabel 2 . Perhitungan dosis uji
Kelompok BB Mencit Perlakuan Dosis/ Kelompok (6 ekor) K1 25 g Ekstrak (800 mg/kgBB) 120 mg K2 24 g Ekstrak (1600 mg/kgBB) 228 mg K3 23 g Ekstrak (3200 mg/kgBB) 444 mg K4 26 g CMC Na 1% (kontrol negatif) 1,6 ml

## Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Larutan CMC Na 1% dibuat dengan cara menimbang 1 g serbuk CMC Na kemudian dimasukkan ke dalam mortir kemudian ditambahkan 20 ml air panas sedikit demi sedikit hingga  mengembang  sambil  diaduk.  Setelah  terbentuk suspensi  kemudian  dimasukkan  kedalam  labu  ukur tambahkan sisa air panas hingga 100 ml lalu dimasukkan kedalam mortir gerus hingga homogen.

## Pemberian Sediaan Uji dan Kontrol Negatif
Mencit  jantan  dipuasakan  sebelum  diberikan perlakuan mencit selama 3-4 jam dan diberikan air minum tanpa  batas  ( ad  libitum ).  Setelah  dipuasakan,  mencit ditimbang dan diberikan sediaan uji. Sediaan uji diberikan dalam  dosis  bertingkat  secara  oral  dengan  menggunakan sonde.  Setelah  diberikan  perlakuan,  pakan  diberikan kembali setelah 1-2 jam.

## Pengamatan
Uji  toksisitas  akut  ditentukan  dengan  pengamatan yang  meliputi  waktu  timbul  dan  hilangnya  gejala  toksik serta terjadinya kematian yang disebabkan oleh pemberian
dosis bertingkat sediaan uji pada kelompok mencit dengan dosis  800 mg/kg  BB,  1600 mg/Kg  BB,  3200  mg/kg  BB. Setelah pemberian dilakukan pengamatan tanda toksisitas pada  4  jam  pertama  (jam  ke  0,  0,5,  1,  2,  3,  4)  meliputi pengamatan  tanda  toksisitas  pada  sistem  kardiovaskuler, pernafasan,  kulit,  dan  bulu,  selain  itu  pengamatan  akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma, perubahan berat badan, jumlah hewan yang mati.
Kemudian pengamatan tanda toksisitas setelah 24 jam yang  meliputi  pengamatan  tanda  toksisitas  pada  sistem kardiovaskuler,  pernafasan,  kulit,  dan  bulu,  selain  itu pengamatan akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma, perubahan berat badan, jumlah hewan yang mati.  Setelah itu  sehari  sekali  selama  14 hari  untuk pengamatan efek toksik tertunda yang meliputi pengamatan pada  sistem  kardiovaskuler,  pernafasan,  kulit,  dan  bulu, pengamatan akan adanya tremor, kejang, salivasi, letargi, lemah, tidur, koma, perubahan berat badan, jumlah hewan yang  mati.  Hewan  yang  sekarat  dimasukkan  sebagai perhitungan hewan mati.

## 2.6 Analisis Data
Hasil  pengamatan  tanda-tanda  toksisitas  digunakan sebagai  data  kualitatif  untuk  mengevaluasi  penyebab kematian.  Data  jumlah  hewan  yang  mati  pada  masing- masing kelompok digunakan sebagai data kuantitatif untuk menghitung  LD 50 .  Bila  sampai  dengan  batas  volume maksimum yang boleh diberikan pada hewan uji dan dosis yang  diberikan  tidak  menimbulkan kematian  pada hewan uji,  maka  dosis  tersebut  dinyatakan  sebagai  LD 50 semu (LD 0 ).  Hasil pengamatan rata-rata berat badan mencit yang diperoleh dari  kelompok hewan uji  selanjutnya  dianalisis secara statistik dengan menggunakan perangkat lunak SPSS version 17. Analasisis statistik yang digunakan adalah Uji Levene  untuk  mengetahui  homogenitas  varian  dari beberapa  kelompok  dan Uji  Shapiro-Wilk  untuk mengetahui  data  tersebut  terdistribusi  normal  atau  tidak. Data tersebut digunakan sebagai salah satu syarat untuk Uji Parametrik. Jika data tersebut homogen dan normal maka dilanjutkan  dengan  Uji  Anova  dan  dilanjutkan  analisis lebih  lanjut  apabila  ada  perbedaan  bermakna.  Uji  lebih lanjut dilakukan dengan Uji Duncan-W. Jika data tersebut tidak  terdistribusi normal dan tidak homogen  maka perlu dilakukan  Uji  Non  Parametrik  dengan  menggunakan Kruskal  Wallis  untuk  mengetahui  perbedaan  antar kelompok lalu dilanjutkan dengan Uji Mann Whitney.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1 Ekstraksi
Pembuatan  serbuk  bertujuan  untuk  meningkatkan luas permukaan  dari  simplisia,  umumnya  penyarian akan bertambah  baik  bila  permukaan  serbuk  simplisia  yang bersentuhan dengan cairan penyari makin luas [10]. Hasil rendemen  serbuk  yang  didapatkan  yaitu  32,5%.  Hasil rendemen  serbuk  yang  didapatkan  dari  penelitian sebelumnya yaitu 23,07% [3].
Ekstraksi  bertujuan untuk  menarik  dan memisahkan berbagai komponen kimia yang terdapat dalam bahan alam dengan  menggunakan  pelarut  organik  tertentu  [11].
Ekstraksi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini menggunakan  metode  maserasi.    Karena  metode  ini tergolong sederhana dan cepat tetapi sudah dapat menyari zat  aktif  dari  simplisia  dengan  maksimal  serta  dapat mencegah  rusaknya  atau  hilangnya  zat  aktif  yang  ingin disari [12].
Pelarut yang digunakan dalam maserasi yaitu etanol 70%.  Etanol  digunakan  sebagai  cairan  penyari  karena pelarut  etanol  merupakan  pelarut  universal  yang  dapat menarik senyawa-senyawa yang dapat larut dalam pelarut polar hingga non polar, lebih efektif, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan.  Selain  itu  etanol  dengan  konsentrasi  70% sangat efektif dalam menghasilkan jumlah bahan aktif yang optimal [26,27]. Hasil ekstraksi etanol 70% daun tegining ganang  yang  didapatkan  yaitu  122,6  g  dengan  rendemen ekstrak  yaitu  43%.  Hasil  ekstraksi  yang  didapatkan  dari penelitian  sebelumnya  yaitu  72,13  g  dengan  rendemen ekstrak yaitu 18,03%.

## 3.2 Pemeriksaan Organoleptis
Pemeriksaan  organoleptis  ekstrak  dilakukan  dengan tujuan  untuk  pemeriksaan  awal  yang  sederhana  meliputi bentuk, warna, rasa, bau dari ekstrak yang diperoleh [14]. Hasil pemeriksaan organoleptis pada ekstrak daun tegining ganang yaitu bentuk ekstrak kental, berwarna hitam, rasa pahit, dan bau khas. Rasa pahit yang terdapat pada ekstrak daun tegining  ganang kemungkinan  berasal  dari  senyawa kimia yang terkandung dalam daun tegining ganang yaitu alkaloid. Secara organoleptik, daun yang berasa sepat dan pahit biasanya teridentifikasi mengandung alkaloid. Fungsi alkaloid bagi tumbuhan sebagai pelindung tumbuhan dari serangan hama dan penyakit, pengatur tumbuh atau sebagai basa  mineral  untuk  mempertahankan  keseimbangan  ion [15].  Tujuan  dari  pemeriksaan  bebas  pelarut  yaitu  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  yang  diperoleh  masih mengandung  etanol  atau  tidak,  sehingga  tidak memengaruhi hasil uji toksisitas akut yang dilakukan. Hasil pemeriksaan  bebas  pelarut  etanol  pada  ekstrak  daun tegining ganang yaitu negatif mengandung etanol ditandai dengan tidak terbentuk endapan kuning dan tidak terdapat bau iodoform.
Tabel 3. Hasil pemeriksaan organoleptis ekstrak No Uji Organoleptis Hasil Pemeriksaan 1 Bentuk Ekstrak kental 2 Warna Hitam 3 Rasa Pahit 4 Bau Khas

## 3.3 Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  dilakukan  dengan  tujuan  untuk memberikan  gambaran  metabolit  sekunder  yang  terdapat pada  simplisia  yang  diujikan  [14].  Hasil  penapisan fitokimia  ekstrak  daun  tegining  ganang  yang  didapatkan positif mengandung alkaloid, saponin dengan tinggi 3 cm, tanin, dan triterpenoid, flavonoid. Hasil penapisan fitoimia tersebut sedikit berbeda dengan hasil penapisan fitokimia sebelumnya.  Pada  penelitian  sebelumnya  hasil  penapisan fitokimia  yang  didapatkan  antara  lain  alkaloid,  phenol,
flavonoid,  tannin,  steroid,  saponin,  terpenoid  [2]. Pada penelitian lain hasil  penapisan  fitokimia  yang  didapatkan antara lain alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, dan steroid. Perbedaan tersebut dipengaruhi karena metabolit sekunder diproduksi  organisme  [3]  tertentu  dalam  kondisi  spesifik yang  dipengaruhi  oleh  faktor  ketinggian  tempat,  curah hujan,  kondisi  hara  tanah,  perbedaan  wilayah  tumbuh mengakibatkan  kandungan  senyawa  kimia  yang  berbeda [16].
Tabel 4 . Hasil penapisan fitokimia Identifikasi Pereaksi Hasil Kesimpulan Alkaloid Mayer Tidak terbentuk endapan putih - Dragendorf Terbentuk endapan  merah bata + Bouchardat Terbentuk endapan coklat + Flavonoid NaNO 3
AlCl 3 10% NaOH 0,1 N Terbentuk warna merah/jingga +++ Saponin HCl 2N Terbentuk buih 3 cm dan buih tidak hilang +++ Tanin FeCl 3 1% Terbentuk warna hijau kehitaman + Steroid/ Triterpenoid CHCl 3 CH 3 COO H H 2 SO 4 pekat
Terbentuk cincin warna merah ungu ++ Keterangan: (-) :  Hasil pengujian negatif pada kandungan yang diujikan.
(+) :  Hasil  pengujian  positif  pada  kandungan  yang  diujikan terlihat kurang jelas.
(++)  :  Hasil  pengujian  positif  pada  kandungan  yang  diujikan terlihat jelas.
(+++)  :  Hasil  pengujian  positif  pada  kandungan  yang  diujikan terlihat sangat jelas.

## 3.4 Uji Toksisitas

## Uji Toksisitas Akut 4 Jam dan 24 Jam
Pengamatan tanda toksiksitas pada 4 jam dan 24 jam setelah  perlakuan  (jam  ke  0,  0,5,  1,  2,  3,  4,  24)  untuk melihat  efek  toksik  yang  ditimbulkan.  Pada  kelompok  1 (dosis  800  mg/kgBB)  terdapat  tanda  toksisitas  pada kardiovaskuler  ditandai  dengan  jantung  berdebar  cepat (jam  ke-  1  dan  2),  pada  pernafasan  ditandai  dengan pernafasan  menurun  (jam  ke-  1,  2,  dan  3),  pada  kulit ditandai dengan kulit terasa gatal (jam ke- 2 dan 3), lemah ditandai dengan aktivitas menurun (jam ke- 1, 2, 3, 4), tidur pada jam ke- 4 dan terdapat penurunan berat badan yang sedikit setelah 24 jam.
Kelompok  2  (dosis  1600  mg/kgBB)  memperlhatkan tanda  toksisitas  pada  kardiovaskuler  ditandai  dengan jantung berdebar cepat (jam ke- 0 dan 0,5), pada pernafasan ditandai dengan pernafasan menurun (jam ke- 0,5, dan 1), pada kulit ditandai dengan kulit terasa gatal (jam ke- 0,5, 1), lemah ditandai dengan aktivitas menurun (jam ke- 1, 2, 3, 4), tidur pada jam ke- 2, 3 dan 4 dan terdapat penurunan berat badan yang sedikit setelah 24 jam.
Tabel 5. Hasil pengamatan tanda toksiksitas selama 4 jam dan 24 jam
Kelompok Parameter Pengamatan Jam Ke- 0 0,5 1 2 3 4 24 Kelompok 1 Kardiovaskuler - - + + - - - Pernafasan - - + + + - - Kulit - - - + + - - Bulu - - - - - - - Mata - - - - - - - Tremor - - - - - - - Kejang - - - - - - - Salivasi - - - - - - - Diare - - - - - - - Lemah - - + + + + - Tidur - - - - - + - Koma - - - - - - - Mati - - - - - - - Berat Badan - - - - - - + Kelompok 2 Kardiovaskuler + + - - - - - Pernafasan + + + - - - - Kulit - + + - - - - Bulu - - - - - - - Mata - - - - - - - Tremor - - - - - - - Kejang - - - - - - - Salivasi - - - - - - - Diare - - - - - - - Lemah - - + + + + - Tidur - - - + + + - Koma - - - - - - - Mati - - - - - - - Berat Badan - - - - - - +
Kelompok 3
Kardiovaskuler + + - - - - - Pernafasan + + + - - - - Kulit + + - - - - - Bulu - - - - - - - Mata - - - - - - - Tremor + - - - - - - Kejang - - - - - - - Salivasi - - - - - - - Diare - - - - - - - Lemah - + + + + + - Tidur - - + + + + - Koma - - - - - - - Mati - - - - - - - Berat Badan - - - - - - + Kelompok 4 Kardiovaskuler - - - - - - - Pernafasan - - - - - - - Kulit - - - - - - - Bulu - - - - - - - Mata - - - - - - - Tremor - - - - - - - Kejang - - - - - - - Salivasi - - - - - - - Diare - - - - - - - Lemah - - - - - - - Tidur - - - - - - - Koma - - - - - - - Mati - - - - - - - Berat Badan - - - - - - - Keterangan:
(+) :  terdapat tanda toksisitas (-)  :  tidak terdapat tanda toksisitas
Kelompok  3  (dosis  3200  mg/kgBB)  menunjukkan tanda toksisitas pada kardiovasuler ditandai dengan jantung berdebar  cepat  (jam  ke-  0  dan  0,5),  pada  pernafasan ditandai  dengan  pernafasan  menurun  (jam  ke-  0,5,  1,  2), pada kulit ditandai dengan kulit terasa gatal (jam ke- 0,5, 1), lemah ditandai dengan aktivitas menurun (jam ke- 0,5, 1, 2, 3, 4), tremor ditandai dengan badan gemetar (jam ke- 1), tidur pada jam ke- 1, 2, 3 dan 4 dan terdapat penurunan berat badan yang sedikit setelah 24 jam.
Tanda  toksisitas  dan  penurunan  berat  badan  yang terdapat  pada  kelompok  1,  2  dan  3  kemungkinan  terjadi karena dosis yang digunakan tinggi dan dipengaruhi oleh kandungan  kimia  yang  dikandung  dari  ekstrak  daun tegining  ganang  yang  bersifat  toksik  yang  kemungkinan merupakan  golongan  alkaloid.    Berdasarkan  literatur banyak  alkaloid  beracun  bagi  organisme  lain,  alkaloid tersebut  bersifat  toksik,  biotoksisitas  dari  alkaloid tergantung  dari  organisme  dan  struktur  kimia  alkaloid tersebut  [17].  Pada  kelompok  4  tidak  terdapat  tanda toksisitas, dan tidak terdapat kematian pada hewan uji, hal ini  karena  kelompok  hewan  uji  pada  kelompok  4  hanya diberi kontrol negatif suspensi CMC Na 1% yang bersifat tidak toksik dan tidak menyebabkan iritan [18].
Tabel 6. Penurunan rata-rata berat badan dan jumlah kematian hewan uji setelah 24 jam
Kelompok BB awal (g) Rata-Rata BB 24 jam (g) ± SD Jumlah Kematian Setelah 24 Jam Kelompok 1 25 24 ± 0,63 0 Kelompok 2 24 22,83 ± 0,75 0 Kelompok 3 23 22,16 ± 0,98 0 Kelompok 4 26 26, 6 ± 0,4 0

## Pengamatan Efek Toksik Tertunda Selama 14 Hari
Pengamatan  efek  toksik  tertunda  selama  14  hari dilakukan untuk mengetahui efek toksik yang tidak terdapat pada  pengamatan  24  jam  sebelumnya  serta  jumlah kematian hewan uji sebagai parameter nilai LD 50 . Hasil  pengamatan  memperlihatkan  kelompok  1,  2, dan 3 terdapat terdapat tanda toksisitas hanya pada hari ke- 1 dan pada hari ke- 2 hingga hari ke-14 tidak terdapat tanda toksisitas,  hal  ini  disebabkan  karena  efek  toksisitas  yang sudah  di  eliminasi  melalui  ekskresi.  Sementara  itu  pada kelompok  4  tidak  menunjukkan  tanda  toksisitas.  Hal  ini karena kelompok hewan uji pada kelompok 4 hanya diberi kontrol negatif suspensi CMC Na 1% yang bersifat tidak toksik dan tidak menyebabkan iritan [18].
Setelah 1 hari pada kelompok 2 terdapat 1 ekor mencit yang terlihat tanda toksisitas pada hari ke- 2, 3, 4, 5, 6 yang meliputi  pada  pernafasan  ditandai  dengan  pernafasan menurun,  lemah  yang  ditandai  dengan  aktivitas  yang menurun,  tidur  hingga  mati  pada  hari  ke-  6.  Hal  ini kemungkinan  karena  dosis  yang  digunakan  tinggi  dan dipengaruhi  oleh  kandungan  kimia  yang  dikandung  dari ekstrak  daun  tegining  ganang  yang  bersifat  toksik. Senyawa  tersebut  kemungkinan  alkaloid  .Beberapa alkaloid  beracun  bagi  organisme  lain,  alkaloid  tersebut bersifat  toksik,  biotoksisitas  dari  alkaloid tergantung  dari organisme dan struktur kimia alkaloid tersebut [17].
Tabel 7 . Hasil pengamatan efek toksik tertunda selama 14 hari
Kelompok Efek yang Ditimbulkan Kelompok 1  Tidak terdapat tanda tokisitas pada hari ke-1 hingga ke-14 Kelompok 2 Hanya pada 1 ekor mencit yang terdapat tanda toksisitas yaitu pernafasan menurun, lemah, tidur hingga mati. Kelompok 3  Tidak terdapat tanda tokisitas pada hari ke-1 hingga ke-14
Kelompok 4  Tidak terdapat tanda tokisitas pada hari ke-1 hingga ke-14

## Pengamatan Berat Badan selama 14 hari
Pengamatan  berat  badan  selama  14  hari  bertujuan untuk  mengetahui  hubungan  sediaan  uji  ekstrak  daun tegining ganang terhadap perubahan rata-rata berat badan mencit  selama  14  hari.  Hasil  pengamatan  berat  badan selama 14 hari menunjukkan penurunan berat badan pada kelompok  1,  2,  dan  3  hanya  pada  hari  ke-  1  dan dibandingkan  dengan  kelompok  4  (kontrol  negatif)  yang tidak  mengalami  penurunan  berat  badan  yang  signifikan. Pada hari ke- 2 hingga hari ke- 14 terdapat kenaikan berat badan  pada  kelompok  1,  2, 3.  Hal ini  disebabkan  karena efek toksisitas yang sudah dieliminasi melalui ekskresi.
Tabel 8. Hasil Pengamatan Rata-Rata Berat Badan ± SD Hewan Uji Selama 14 Hari
Hari Ke- Rata-Rata Berat Badan ± SD K1 K2 K3 K4 0 25 ± 0 24 ± 0 23 ± 0 26 ± 0 1 24 ± 0,63 22,9 ± 0,75 22,3 ± 0,81 26,7 ± 1,21 2 28,2 ± 1,16 25,5 ± 2,8 25,8 ± 0,75 29,5 ± 0,54 3 29,5 ± 1,51 26,7 ± 3,44 27,8 ± 0,98 30,7 ± 1,5 4 30,5 ± 1,03 27,8 ± 4,07 28,5 ± 1,64 32,2 ± 1,69 5 30,5 ± 1,37 28,17 ± 4,62 29,2 ± 1,72 33,3 ± 2,34 6 31,9 ± 1,72 28,7 ± 5,95 30,7 ± 1,5 34,5 ± 2,34 7 32,3 ± 1,36 26 ± 1,64 30,7 ± 1,03 34,5 ± 2,13 8 32,9 ± 1,47 26,7 ± 1,87 30,3 ± 1,21 35,2 ± 2,28 9 33,3 ± 1,75 27 ± 1,51 31,3 ± 0,81 36 ± 2,34 10 33,9 ± 1,72 27,5 ± 1,87 31,9 ± 1,16 36,5 ± 2,13 11 32,3 ± 1,21 26,7 ± 2,91 32 ± 1,09 37,2 ± 2,25 12 34,3 ± 1,86 27,6 ± 2,28 32,7 ± 1,21 37,7 ± 2,16 13 35 ± 2,09 28,3 ± 2,44 32,9 ± 1,16 38,3 ± 2,5 14 36,3 ± 2,16 29,3 ± 2,05 34,3 ± 1,36 40,3 ± 2,59
Gambar 1. Grafik Rata-Rata Berat Badan Hewan Uji ± SD
Selama 14 Hari 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 2 4 6 8 10 12 14 Ra ta -Ra ta Be ra t Ba da n ± SD Hari Ke- BB Rata-Rata Kelompok 1 BB Rata-Rata Kelompok 2
BB Rata-Rata Kelompok 3
BB Rata-Rata Kelompok 4
Kelompok 2 memperlihatkan penurunan berat badan yang signifikan hanya pada 1 ekor mencit pada hari ke-1, 2,  3,  4,  5.  Hal  ini  kemungkinan  dipengaruhi  kandungan kimia  yang  dikandung  dari  ektrak  daun  tegining  ganang. Kandungan  kimia  tersebut  kemungkinan  alkaloid. Berdasarkan  literatur  banyak  alkaloid  beracun  bagi organisme  lain,  alkaloid  tersebut  bersifat  toksik, biotoksisitas  dari  alkaloid  tergantung  dari  organisme  dan struktur kimia alkaloid tersebut [18]. Kelompok 4 sendiri menunjukkan kenaikan berat badan selama 14 hari. Hal ini karena kelompok hewan uji pada kelompok 4 hanya diberi kontrol negatif suspensi CMC Na 1% yang bersifat tidak toksik dan tidak menyebabkan iritan [18].
Penentuan Nilai LD 50 Penentuan nilai LD 50 diperoleh menggunakan rumus Thompson dan Weil. metode ini dipilih karena mempunyai tingkat  kepercayaan  yang  cukup  tinggi  dan  merupakan metode  yang  paling  sering  digunakan,  metode  ini  juga menggunakan daftar perhitungan LD 50 sehingga hasil yang diperoleh  lebih  akurat  [19].  Perhitungan  LD 50 memperlihatkan  tidak  adanya  nilai  R  pada  tabel  Weil karena hanya 1 ekor mencit yang mati  pada kelompok ke- 2  sehingga  nilai  R  yang  didapat  adalah  0,  1,  0,  0.  Hasil tersebut  dapat  diabaikan  karena hanya  terjadi pada1  ekor mencit  (tidak mencapai 50%),  yang  mungkin  disebabkan oleh faktor lain diluar efek  yang disebabkan oleh sediaan uji  daun  tegining  ganang.  Kematian  tersebut  dapat disebabkan adanya kesalahan pada saat pemberian sediaan.
Jika  dosis  maksimal  tidak  menimbulkan  kematian hewan  coba,  maka  LD 50 dinyatakan  dengan  LD 50 semu dengan  mengambil  dosis  maksimal.  Sehingga  dalam penelitian  ini  LD 50 diketahui  sebagai  LD 50 semu,  yaitu 3200  mg/kgBB.  Hasil  ini  tidak  dapat  dimasukkan  dalam kriteria  Loomis,  karena  LD 50 yang  didapat  bukan merupakan  LD 50 yang  sesungguhnya  [20].  Apabila  pada dosis maksimal tidak ada kematian pada hewan coba, maka jelas  senyawa  terseb ut  termasuk  dalam  kriteria  “Praktis Tidak  Toksik”.  Sehingga  dosis  maksimal  pada  manusia yang  dikonversikan  menjadi  800  mg/kgBB,  1600 mg/kgBB,  3200  mg/kgBB    pada  mencit,  di  mana  dosis tersebut tidak menimbulkan kematian pada   hewan uji [20].
Tabel 12. Jumlah Kematian Hewan Uji Selama 14 Hari Nama Kelompok Dosis Jumlah Kematian Kelompok 1 Ekstrak Daun Tegining Ganang 800 mg/kgBB 0 Kelompok 2 Ekstrak Daun Tegining Ganang 1600 mg/kgBB 1 Kelompok 3 Ekstrak Daun Tegining Ganang 3200 mg/kgBB 0 Kelompok 4 Suspensi CMC Na 1% 0

## Uji Statistik
Hasil  statistik  Uji  Levene menunjukkan  bahwa  data rata-rata  berat  badan  kelompok  1,  2,  3,  dan  4  teristribusi normal  (p  >  0.05). Kemudian  dilanjutkan  dengan  Uji Shapiro-Wilk  yang  menunjukkan  bahwa  data  rata-rata berat  badan  tersebut  terdistribusi  homogen  (p>0,05).
Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  Anova  yang menunjukkan  bahwa  data  tersebut  terdapat  perbedaan bermakna  (p  <  0,05).  Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji lebih lanjut ( Post Hoc Test )  Duncan-W yang menunjukkan data rata-rata berat badan pada kelompok 1 (ekstrak daun tegining ganang dosis 800mg/kgBB), kelompok 2 (ekstrak daun tegining ganang dosis 1600 mg/kgBB) dan kelompok 3 (ekstrak daun tegining ganang dosis 3200 mg/gBB) tidak ada  perbedaan  bermakna  ditandai  dengan  terdapat  pada kolom yang sama.
Pada kelompok 2 (ekstrak daun tegining ganang dosis 1600  mg/kgBB)  dan  kelompok  3  (ekstrak  daun  tegining ganang dosis 3200 mg/gBB) terdapat perbedaan bermakna dibandingkan dengan kelompok 4 (kontrol negatif) ditandai dengan tidak terdapat pada kolom yang sama.   Data rata- rata berat badan kelompok 1 dan 4 tidak terdapat perbedaan bermakna ditandai dengan terdapat pada kolom yang sama.

## 4. Kesimpulan
Nilai LD 50 ekstrak etanol 70% daun tegining ganang diketahui LD 50 semu yaitu 3200 mg/kgBB termasuk dalam kriteria praktis tidak toksik, dan tidak menunjukkan adanya gejala klinis ketoksikan akut yang signifikan yang terjadi pada seluruh hewan coba.

## Ucapan Terima Kasih
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada: Direktorat  Riset  dan  Pengabdian  Masyarakat  (DRPM) Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi (Kemenristekdikti)  atas  bantuan  dana  yang  diberikan melalui  Hibah  Penelitian  Dosen  Pemula  2018.  Demikian juga  kepada  Bapak  I  Wayan  Rusha  Satya  yang  telah memiliki hak  paten  atas tanaman  asli  Lombok  (Tegining ganang).

## Daftar Pustaka
1. Sudarma IM, Kimia Bahan Alam. Mataram: Penerbit FMIPA Press. Universitas Mataram, 2006:13-20.
2. Aja  PM,  Ugwu  Okechukwu  PC,  Kennedy  K,  Ibere  JB, Ekpono  EU,  Phytochemical  analys  of Senna  occidentalis leaves, IDOSR Journal  Of  Applied  Science ,  2017, 2(1) ;75-
91.
3. Satrana DK, Uji Efek Analgetik Ekstrak Etanol 70% Daun Tegining Ganang ( Cassia planisiliqua . Burm.F) pada mencit jantan  ( Mus  musculus ), Skripsi, Jakarta:  Institut  Sains  dan Teknologi Nasional, 2017.
4. Benvenuto AF, Tasminatun. Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol  Daun  Tegining-Ganang  ( Cassia  planisiliqua )  Pada Mencit  ( Mus  musculus ), Skripsi, Yogyakarta:  Universitas Muhammadiyah Yogyakarta, 2007.
5. Lu  C, Toksikologi  Dasar:  Asas  Organ  Sasaran  Dan Penelitian Resiko , Edisi 2, Jakarta: UI Press, 1995: 74
6. Gani-Sulistia. Farmakologi  dan  Terapi ,  Edisi  4,  Jakarta: Bagian  Farmakologi,  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. Jakarta, 1995: 763
7. Tjokronegoro  A,  Baziad  A, Etik  Penelitian  Obat Tradisional , Edisi 2, Jakarta: Universitas Indonesia, 1992: 14
8. Badan Pengawas  Obat  dan Makanan  RI.  Peraturan  Kepala Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia Nomor  7  Tahun  2014  tentang Pedoman  Uji  Toksisitas Nonklinik Secara In Vivo . Jakarta.
9. Sini KR, Sinha BN, Sangeetha PT, Analgesic and antipyretic activity  of Cassia  occidentalis Linn., Annals  of  Biological Research , 2011, 2(1) ;195-200 10. Voigt R, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi , Diterjemahkan oleh  Soendani  Nurono  Suwandi,  Yogyakarta:  UGM  Press, 1995: 56
11. Departemen  kesehatan  Republik  Indonesia. Sediaan Galenik . Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1986: 4, 25
12. Sa’adah  H ,  Nurhasnawati  H,  Perbandingan  pelarut  etanol dan  air  pada  pembuatan  ekstrak  umbi  bawang  tiwai (Eleutherine  americana Merr ) menggunakan  metode maserasi, Jurnal Ilmiah Manuntung , 2015, 1(2) ;144-153.
13. Padmasari  PD,  Astuti  KW,  Warditiani  NK,  Skrining fitokimia ekstrak etanol 70% daun rimpang bangle ( Zingiber purpureum Roxb . ), Jurnal Farmasi Udayana, 2013, 2(4) . 14. Departemen  Kesehatan  RI. Parameter  Standard  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Jakarta:  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000; 1-2, 10-12.31-32.
15. Hammado  N,  Iling  I,  Identifikasi  senyawa  bahan  aktif alkaloid  pada  tanaman  lahuna  ( Eupatorium  odoratum ),
Jurnal Dinamika , 2013, 4(1) ;1-18.
16. Salim M,  Yahya,  Sitorus  H,  Nimah  T, Marini,  Kandungan hara tanah dengan produksi senyawa metablit sekunder pada tanaman  duku (Lansium  domesticum Corr var Duku ) dan potensinya sebagai larvasida, Jurnal Vektor Penyakit, 2016, 10(1) ;11-18.
17. Aniszewski T, Alkaloid-Secret Of Life , Edisi I, Amsterdam: Elsevier B. V., 2007;161.
18. Pamuji R, Uji toksisitas akut ekstrak etanol daun Sengkubak ( Pycnarrhena  cauliflora Diels)  terhadap  tikus  betina  galur istar dengan metode OECD 425. Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran UNTAN, 2015, 3(1) ;1-11. 19. Nonci  FY,  Rusdi  M,  La  Mohan  IZF, Uji  toksisitas  akut ekstrak  etanol  klika  jambu  mede (Anacardium  occidentale L .) pada  mencit  jantan (Mus  musculus) , JFFIK  UINAM , 2014, 2(2) ;62-68
20. Armansyah  TR,  Indriany  S,  Sutriana  A,  Rosmaidar  R, Asmilia N, Panjaitan B, Aliza D, Hamdan H, Uji toksisitas akut  ekstrak  etanol  daun  malaka (Phyllantus  emblica)
terhadap mencit (Mus musculus) , Jurnal Kedokteran Hewan ,
2016, 10(2) ;192-194.
© 2019 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/ licenses/by/4.0/ )