Vegetable Oil Sebagai Alternatif Pengganti Immersion Oil
Ria Ika Maharani (1) , Dewi Mustikaningtyas (2) , Kartika Widyaningrum (3)

## Laboratorium Biologi Jurusan Biologi FMIPA UNNES
Ria.ika@mail.unnes.ac.id (1) , dewi_mustikaningtyas@mail.unnes.ac.id (2) , kartikawidya@mail.unnes.ac.id (3)

## ABSTRAK
Menemukan  alternatif  pengganti  immersion  oil  sebagai  media  dalam  pengamatan  preparat  bakteri  dengan perbesar kuat mikroskop perlu dilakukan. Prinsip yang digunakan adalah nilai indek bias minyak yang dipilih harus masuk dalam rentang yang dibutuhkan. Penelitian ini dirancang dengan tujuan mendapatkan alternatif pengganti  immersion  oil  dengan  vegetable  oil.  Metode  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental dengan berfokus pada ketajaman dan kontras gambar hasil pengamatan. Analisis data dengan uji normalitas menggunakan saphiro wilh test spss , dilajutkan uji kruskal wallis test spps . Hasil penelitian ini menunjukan bahwa vegetable oil dapat digunakan sebagai alternatif pengganti immersion oil dengan perbedaan hasil pengamatan tidak berbeda secara signifikan.
Kata Kunci : immersion oil, vegetable oil , mikroskop, preparat bakteri

## ABSTRACT
Finding  alternative  substitutes  for  immersion  oil  as  a  medium  in  observing  bacterial  preparations  with  a stronger microscope needs to be done The principle used is the refractive index value of the selected oil is still within the required range. This research was designed with the aim of getting an alternative to immersion oil with  vegetable  oil.  The  method  used  in  this  study  is  an  experimental  study  focusing  on  the  sharpness  and contrast of the images observed. Data analysis with normality test using saphiro wilh test spss, continued by kruskal wallis test spps test. The results of this study indicate that vegetable oil can be used as an alternative to immersion oil with different observations not significantly different.
Keywords : immersion oil, vegetable oil, microscope, bacterial preparation.

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Penggunaan  perbesaran  kuat  dengan  lensa  obyektif  100x  memerlukan  tambahan  minyak sebagai media dalam peningkatan resolusi dan bukaan numerik (NA). Fungsi minyak disini untuk  mengurangi  jumlah  refraksi  dan  pantulan  cahaya  dari  obyek,  serta  meningkatkan kemampuan  dalam  menangkap  cahaya  yang  menyimpan.  Jenis  minyak  yang  digunakan memiliki indeks bias mendekati indeks bias kaca obyek, sehingga tidak ada penyimpangan cahaya saat  menembusnya. Minyak  yang digunakan secara umum di  laboratorium adalah immersion oil dengan indeks bias 1.51, sedangkan indek bias kaca 1.485-1.755. Immersion oli  yang  sekarang  ini  banyak  diproduksi  dan  beredar  memang  telah  terstandarisasi  untuk memastikan  bahwa  mereka  tidak  merusak  lensa  atau  tidak  berubah  warna  seiring bertambahnya usia (Wilson,  2017). Meskipun begitu terdapat  kekurangan dari immersion oil berkerja optimal pada suhu 23 °C dan mengalami perubahan indeks bias 0,0004 dengan adanya perubahan suhu 1 °C (Cargille, 2008). Dan immersion oil telah diketahui memiliki dampak  negatif  untuk  kulit  (Christophe et.al ,  2017)  dan  berbahaya  bagi  lingkungan  air dalam  jangka  panjang  (U.S.  National  Library  Of  Medicine.  2020).  Harga  perolehan immersion oil cukup mahal, karena harus menerapkan aturan ketat berdasarkan ISO (Sacher, R.  2000).  Vegetable  oil  merupakan  kekayaan  hayati  yang  perlu  dimanfaatkan  dan dikonservasikan. Penelitian mengenai beberapa jenis vegetable oil dapat digunakan sebagai pengganti immersion oil yaitu coconut oil (Balba et.al , 2018) dan castor oil (Victor et.al , 2005).  Obyek  yang  diamati  dari  penggunaan  vegetable  oil  diatas  berupa  histologi  dan kromosom, belum ada penggunaan untuk obyek berupa bakteri. Selain dua minyak diatas masih  ada  olive  oil  yang  memiliki  indek  bias  1.44-1.47,  masih  berada  direntang  kedua minyak  terdahulu  (International  Gem  Society.  2017).  Di  laboratorium  biologi  FMIPA UNNES penggunaan immersion  oil paling banyak pada kegiatan pengamatan bakteri  dan belum  pernah  dicoba  untuk  memanfaatkan  minyak  lain.  Pemilihan  vegetable  oil  sebagai pengganti dikarena beberapa pertimbangan  yaitu memiliki indeks bias  yang masih masuk dalam syarat sebagai minyak pengamatan, panasnya stabil, tidak mudah teroksidasi, aman bagi pengguna, murah bila dibandingkan dengan immersion oil (Adeniyi et.al , 2015), dan yang paling utama sebagai sarana konservasi dan pemanfaatan keanekaragaman hayati...

## 2. Perumusan Masalah
Masalah yang dapat dirumuskan dari latar belakang tersebut adalah mendapatkan alternatif pengganti immersion oil yang aman, murah dan berkontribusi dalam konservasi hayati.

## 3. Tujuan Penelitian
Tujuan  yang  ingin  dicapai  yaitu  mengidentifikasi  kemungkinan  vegetable  oil  sebagai alternatif  pengganti  immersion  oil  dari  segi  kualitas  gambar  berdasarkan  ketajaman  dan kontras dan untuk menentukan apakah ada perbedaan yang signifikan antara gambar yang dihasilkan menggunakan immersion oil dan vegetable oil

## 4. Manfaat Penelitian
Manfaat  yang  akan  didapat  dari  penelitian  ini  adalah  mendapatkan  bahan  alternatif  yang mudah  untuk  diaplikasikan  dalam  kegiatan  di  laboratorium  serta  memenuhi  dari  segi ekonomi, keamanan dan kontribusi terhadap konservasi keanekaragaman hayati

## II. METODE PENELITIAN
Metode yang dipakai dalam penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan berfokus pada  ketajaman  dan  kontras  gambar  hasil  pengamatan.  Teknik  pengambilan  data menggunakan  metode  skor  1-3  dengan  indikator  pengamatan  dari  ketajaman  dan  kontras
gambar.  Sampel  pengamat  diambil  berdasarkan purposive  sampling ,  sebagai  bahan pertimbangan  penentu  sampel  adalah  pengguna  yang  paham  dan  terbiasa  dengan pengamatan  bakteri  perbesaran  kuat.  Jadi  sampel  yang  dipilih  adalah  peneliti  terkait  dan mahasiswa  yang  telah  mengambil  mata  praktikum  mikrobiologi.  Data  yang  diperoleh digunakan sebagai data mentah kedalam uji normalitas dalam statistik spss . Analisis dengan uji normalitas menggunakan saphiro wilk test spss , dilanjutkan dengan uji kruskal wallis test spps .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan preparat bakteri pada saat dilakukan praktikum mata mikrobiologi selama ini tidak  lepas  dari  penggunaan  immersion  oil,  sebagai  pengurang  jumlah  refraksi,  pantulan cahaya  dari  obyek  dan  menaikkan  kemapuan  menangkap  cahaya  yang  menyimpang. Pemilihan minyak sebagai media perendaman menjadi hal penting untuk mendapatkan indek bias  yang  tepat.  Pengaruhnya  ada  pada  penurunan  kualitas  dan  kontras  gambar  secara signifikan  dan  menjadi  salah  satu  penyimpangan  yang  paling  umum  dalam  mikroskop cahaya  fluoresensi.Vegetable  oil  yang  dipakai  adalah  EVCO,  EVOO  dan  castor  dengan indek bias 1.43-1.46, 1.44-1.47 dan 1.47-1.48 (Davidson, Michael W. 2017). Ketiga minyak ini memiliki indek bias yang masih berada dalam rentang indek bias kaca yaitu 1.485-1.755. Fisik  dari  ketiga  minyak  ini  memiliki  warna  jernih  hingga  kekuningan.  Kelebihan  dari vegetable  oil dapat  diperbaharui/terbarukan/renewable,  sustainable,  tidak  beracun,  dapat diurai  kembali/biodegradable,  dan  ramah  lingkungan. Indeks  bias  yang  dihasilkan  dalam pengamatan  preparat  dengan  minyak  dipengaruhi  oleh  suhu,  ketebalan  gelas  penutup preparat,  ketebalan  dari  preparat,  indek  bias  minyak  yang  digunakan,  dan  panjang gelombang  eksitasi  (GE  Healthcare  Bio-Sciences  Corp.  2017).  Variasi  suhu  dapat mempengaruhi  indeks  bias  minyak  untuk  setiap  kenaikan  suhu  3  ºC,  indek  bias  naik sebanyak  0,002.  Hal  ini  akan  sangat  berpengaruh  ketika  penggunaan  mikroskop  dalam jangka waktu lama, karena sumber cahaya yang digunakan akan meningkatkan suhu minyak yang  dilewatinya.  Penggunaan  gelas  penutup  pada  preparat  yang  diamati  memberikan pengaruh  terhadap  indek  bias  yang  diteruskan,  bila  ketebalan  meningkat  1  μm  saja  akan dapat meningkatkan indek bias 0,010. Sehingga perlu diperhatikan dalam pemilihan gelas penutup  yang  ideal  digunakan  memiliki  ketebalan  170  μm.  Pengaruh  yang  diberikan ketebalan  preparat  terhadap  indek  bias  cukup  besar  pula,  yaitu  untuk  setiap  kenaikan ketebalan  5μm  membuat  indek  bias  bertambah  0,002.  Ini  menyebabkan  pada  proses pembuatan  preparat  hingga  pewarnaan  menjadi  bagian  yang  vital.  Pewarnaan  preparat bakteri  menggunakan  bantuan  alat  STAFAN  untuk  menghasilkan  hasil  lebih  cepat  dan dalam  jumlah  lebih  dari  satu  (Maharani  dkk,  2019).  Hasil  pembuatan  preparat  bakteri sebagai preparat pengamatan dalam penelitian (gambar 2). Faktor pemilihan minyak dengan indek  bias  tertentu  memberikan  efek  yang  besar,  sebab  dengan  minyak  yang  tepat  dapat dihasilkan  hasil  pengamatan  optimal.  Selain  itu  pula  adanya  pengaruh  dari  panjang gelombang  eksitasi  dari  sumber  cahaya  yang  dihasilkan,  pemilihan  sumber  cahaya  pada mikroskop berpengaruh terhadap hasil yang optimal pada pangamatan.

## Gambar 2. Preparat bakteri E.Coli
Pengamatan  yang dilakukan pada preparat  bakteri E. Coli dengan menggunakan keempat minyak disajikan dalam tabel 1. Dari pengamatan tidak memberikan perbedaan signifikan hasil pengamatan, preparat dapat teramati dengan ketajaman dan kontras yang hampir sama. Tabel 1. Perbandingan pengamatan menggunakan keempat minyak dengan preparat E.Coli Minyak
Hasil pengamatan Immersion oil EVCO
EVOO

## Castor
Data  untuk  hasil  pengamatan  terhadap  katajaman  dan  kotras  hasil  pengamatan  dilakukan untuk  keempat  perlakukan  diambil  dari  kuisioner  yang  diberikan  kepada  tim  peneliti  dan mahsiswa  yang  telah  mendapatkan  mata  praktikum  mikrobiologi.  Setelah  dilakukan pengujian  stastistik  normalitas  terhadap  ketajaman  dan  kontras  gambar  yang  dihasilkan terhadap  keempat  minyak  didapat  hasil  seperti  dalam  tabel  2.  Hasilnya  yang  diperoleh menunjukkan nilainya sig < 0,05 maka dilanjutkan menggunakan uji non parametrik kruskal wallis test spss.
Tabel 2. Hasil test normalitas ketajaman dan kontras gambar
Dengan hasil test statistik kruskal-wallis dengan nilai asymp.sig 0,888 > 0,05 (tabel 3), hal ini  menunjukan  bahwa  tidak  ada  perbedaan  antara  pengunaan  keempat  perlakukan  pada preparat  preparat  bakteri pada saat  dilakukan pengamatan di  bawah mikroskop. Sehingga penggunaan  vegetable  oil  dapat  sebagai  alternatif  pengganti  immersion  oil.  Penelitian terdahulu menyebutkan tidak ada pebedaan signifikan hasil gambar yang dihasilkan antara penggunaan coconut oil dengan immersion oil pada pengamatan mikroskopis (Balba et.al , 2018). Tanaman penghasil minyak ini merupakan tanaman endemik di negara-negara tropis dan memiliki nilai lebih murah dibandingkan dengan minyak imersi sintetis (Adeniyi et.al , 2015). Minyak ini tidak terfraksi sehingga dapat disimpan pada suhu kamar dalam jangka waktu  tidak  terbatas  dalam  bentuk  cair.  Hal  inilah  yang  menyebabkan  minyak  ini  cocok untuk digunakan di laboratorium (Wallace, 2017). Olive oil ini juga telah terbukti sebagai bahan alternatif ramah lingkungan (Sugunakar et.al , 2015).
Tabel 3 . Hasil test kruskal wallis ketajaman dan kontras gambar
Dalam penggunaan minyak saat pengamatan harus diperhatikan pula peralatan laboratorium yang telah dipakai, dalam hal ini adalah mikroskop. Setelah pemakaian immersion oil perlu dilakukan pembersihan lensa obyektif yang terendam minyak, biasanya menggunakan xylol sebagai  agen  pembersih.  Dengan  begitu  akan  menambah  biaya  dan  meningkatkan  resiko penggunaan bahan kimia. Sedangkan untuk penggunaan vegetable oil hanya menggunakan tissue  lensa  sudah  bisa  terhapus.  Perbandingan  saat  dilakukan  pembersihan  dengan menggunakan tissue lensa dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Tissue lensa untuk membersihkan minyak di lensa obyektif mikroskop

## IV. KESIMPULAN
Hasil yang diperoleh menunjukan vegetable oil dapat digunakan sebagai penganti immersion oil.  Dengan  hasil  uji  statistik  menunjukkan  hasil  0,888  diatas  standar  penentu  perbedaan signifikan 0,05, sehingga dinyatakan bahwa tidak ada perbedaan secara signifikan terhadap keempat perlakukan yang diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Adeniyi, I.M., Adejoba, O.R., Akinlabi F.M., Alao, O.J. (2015). Vegetable Oils as Clearing Agents.  Achievements  in  the  Life  Sciences,  10,  Retrieved  Februari  11,  2020  from http://doi.org/10.1016/j.als.2016.05.001
Balba, Dolce Monica U., Karla Anika A. Quiobe, Casey Lyn Z. Valbuena. (2018). Coconut oil as an alternative for immersion oil. LPU- Laguna Journal of allied medicine Vol. 3 No. 1 August 2018
Cargille,  J.  J.  (2008).  Immersion  oil  and  the  microscope  from http://www.cargille.com/ immersionoilmicroscope.shtml
Christophe ‐ J.  Le  Coz , Dagmar  Coninx , Annik  Van  Rengen , Suzane  El  Aboubi , Georges Ducombs , Marie ‐ Hélène  Benz , Sylvie  Boursier , Martine  Avenel ‐ Audran , Jean ‐ Luc Verret . (2017). An epidemic of occupational contact dermatitis from an immersion oil for  microscopy  in  laboratory  personnel. Contact  Dermatitis : Volume  40,  Issue  2 . https://doi.org/10.1111/j.1600-0536.1999.tb05995.x
Davidson, Michael W. (2017). Introduction to microscope objectives. Retrieved February11, 2020 from https://www.microscopyu.com/
GE  Healthcare  Bio-Sciences  Corp.  (2017).  DeltaVision™  OMX  V4/SR  :  Immersion  Oil Optimization. Retrieved Juni 23, 2020 from www.gelifesciences.com
International  Gem  Society.  (2017).  Refractive  index  of  common  household  liquids. Retrieved November 2017, from https://www.gemsociety.org/
Maharani, R.I, Sriyadi, dan F.A. Sasi. (2019). STAFAN modifikasi alat staining tray dalam perwanaan  bakteri.  Prosiding  Seminar  Nasional  IV  Hasil  Penelitian  PLPI,  20 September 2019. Vol IV-ISSN: 2548-1924
Sacher, R. (2000). Microscope Immersion Oil. Volume 8 , Issue 8 , October 2000, pp. 33-35. DOI: https://doi.org/10.1017/S1551929500060442 .  Published  online  by  Cambridge University Press: 14 March 2018
U.S.  National  Library  Of  Medicine.  (2020).  Compound  Summary:  Benzyl  Benzoate. Retrieved  Februari  28,  2020  from  https://Pubchem.Ncbi.Nlm.Nih.Gov/  Compound /Benzyl-Benzoate
Victor R, Jayalakshamma, Rajangam Ssayee. (2005). Cost effective, qualitative immersion oil  for  microscopy.  J.Anat.Soc.  India  54  (2)  1-9. http://medind.nic.in/jae/t05/ i2/jaet05i2p48.pdf
Wallace. (2017). How Do I Store Coconut Oil? Retrieved from https://www.livestrong.com/ Wilson, M. (2017). Immersion Objectives: Using Oil, Glycerol, or Water to Overcome some of  the  Limits  of  Resolution.  Article:  August  09,  2017.  https://www.leica- microsystems.com/science-lab/immersion-objectives-using-oil-glycerol-or-water-to- overcome-some-of-the-limits-of-resolution.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 21 Juli 2020 30 Juli 2020 04 Agustus 2020 Ya