## KOMBINASI ENZIM POLIGALAKTURONASE DAN SELULASE PADA KLARIFIKASI SARI BUAH NAGA SUPER MERAH ( Hylocereus costaricensis ) DALAM PEMBUATAN SIRUP

## COMBINATION OF POLYGALACTURONASE AND CELLULASE ENZYME ON THE CLARIFICATION OF SUPER RED DRAGON FRUIT (Hylocereus costaricensis) JUICE IN THE SYRUP MANUFACTURE

## Esti Widowati, Ardhea Mustika Sari, Fitriana Husnayaini
Program Studi Ilmu Teknologi Pangan, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas Maret Jl. Ir. Sutami 36A Kentingan Jebres Surakarta 57126 Email : esti_widowati@yahoo.com, estiwidowati@staff.uns.ac.id
Diserahkan [31 Maret 2020]; Diterima [22 Agustus 2020]; Dipublikasi [24 November 2020]

## ABSTRACT
Super red dragon fruit (Hylocereus costaricensis) has shelf life 7-14 days at 14-20°C. The shelf life of the dragon  fruit  is  relatively  short  due  to  the  high  moisture  content  amount  90%,  therefore  it  needs  advanced processing  become  syrup.  Syrup  characteristic  which  produced  was  cloudy,  turbid  and  not  clear  because  of pectin  and  cellulose. The hydrolisis process used polygalacturonase and cellulase enzymes, and clear syrup as the result. The aim of the research were to investigate the various concentration polygalacturonase enzyme from Bacillus licheniformis GD2A AR2 and cellulase from Bacillus subtilis Krakarya_1 S6 to syrup quality, and the best concentration from combination of both enzymes towards the effectiveness of clarification in making super red  dragon  fruit  syrup  based  on  pH,  viscosity,  total  dissolved  solids  and  transmittance.  This  study  used Completely  Randomized  Factorial  Design  with  two  factors.  The  first  factor  was  the  type  of  enzyme.  The research used polygalacturonase and cellulase enzymes . The second factor was the concentration of enzyme, i.e 0%;  0.06%;  0.09%;  0.1%  (polygalacturonase)  and  0%;  0.1%;  0.13%;  0.16%  (cellulase).  The  study  was conducted  with  three  times  of  sampling  repetition and  one time  of  analysis . The  data  obtained  were  analyzed statistically  with  two  way  Analysis  of  Variance  (ANOVA)  and  continued  with  Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  at  5%  significance  level.  The  results  showed  that  polygalacturonase  and  cellulase  enzymes  have enzyme activity of  0.32  U /  ml  and  0.06  U  /  ml.  The  addition  of  polygalacturonase and cellulase enzymes and their  combinations  significantly  affect  to decrease  pH  and viscosity  and  to increase  total  dissolved  solids and the  transmittance  of  the  syrup.  The  best  treatment  was  in  addition  of  0.09%  polygalacturonase  and  0.1% cellulase  enzymes  because  it  can  decrease  pH  (4.24),  decrease  viscosity  (10.6  cP),  increase  TSS (43.5°brix) and transmittance (66.2%T).
Keywords : cellulase, cellulose, dragon fruit, pectin, polygalacturonase, syrup

## ABSTRAK
Buah naga super merah ( Hylocereus costaricensis ) mempunyai umur simpan 7-14 hari pada suhu 14-20°C. Umur  simpan  buah  naga  relatif  singkat  disebabkan  karena  kandungan  air  yang  tinggi  sebesar  90%  sehingga perlu dilakukan pengolahan lanjutan menjadi sirup. Karakteristik sirup yang dihasilkan keruh, berkabut dan tidak jernih karena pektin dan selulosa. Kekeruhan tersebut dapat diatasi dengan enzim poligalakturonase dan selulase sehingga dihasilkan sirup yang jernih.  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh penggunaan variasi  konsentrasi  enzim  poligalakturonase Bacillus  licheniformis GD2A  AR2  dan  selulase Bacillus  subtilis Krakarya_1S6  terhadap  kualitas  sirup,  mendapatkan    konsentrasi    terbaik    dari    kombinasi    kedua    enzim tersebut  terhadap  efektivitas  klarifikasi  dalam  pembuatan  sirup  buah  naga  super  merah  berdasarkan  pH, viskositas,  total  padatan  terlarut  dan  transmitansi.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap Faktorial (RALF) dengan dua faktor. Faktor  pertama   yaitu  jenis  enzim  terdiri  atas  poligalakturonase  dan selulase.  Faktor  kedua  konsentrasi  enzim  yang  digunakan  yaitu  0%;  0,06%;  0,09%;  0,1%  (poligalakturonase) dan 0%; 0,1%; 0,13%; 0,16% (selulase). Penelitian ini dilakukan dengan tiga kali ulangan sampel dan satu kali ulangan analisis. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan SPSS menggunakan two way Analysis  of Varian (ANOVA)  dan  dilanjutkan  dengan Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  pada  tingkat  signifikansi 5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  enzim  poligalakturonase  dan  selulase  mempunyai      aktivitas  enzim 0,32 U/ml dan 0,06 U/ml. Penambahan enzim poligalakturonase  dan  selulase  serta  kombinasinya  berpengaruh nyata  terhadap penurunan pH dan viskositas dna peningkatan total padatan terlarut dan transmitansi sirup yang dihasilkan.  Perlakuan  terbaik  terdapat  pada  penambahan  enzim  poligalakturonase  0,09%  dan  selulase  0,1% karena  dapat  menurunkan  pH  (4,24)  dan  viskositas  (10,6  cP)  serta  meningkatkan  total  padatan  terlarut (43,5°brix) dan transmitansi (66,2%T).
Kata kunci : buah naga, selulase, selulosa, pektin, poligalakturonase, sirup

## PENDAHULUAN
Buah  naga  super  merah  ( Hylocereus costaricensis )  merupakan  tanaman  suku Cactaceae  yang  banyak  dikembangkan  di Indonesia.  Buah  ini  berbentuk  lonjong mempunyai warna kulit merah gelap dengan  sisik  besar  dan  berdaging  merah keunguan dengan bertabur biji kecil  hitam di dalamnya  yang  dapat  dimakan.  Berat buahnya  mencapai 250-600 g dengan tingkat kemanisan  berkisar  13-15°brix  (Kristanto, 2008).  Menurut  Harvey  dkk.,  (2009),  trend produksi  buah  ini  setiap  tahun  mengalami peningkatan  seperti  pada  daerah  Jember produksi  tahun  2010  mencapai  4.274  kg sedangkan  pada  tahun  2011  mencapai  4.720 kg.
Buah  naga  super  merah  paling  diminati masyarakat  karena  rasanya  yang  lebih  manis tanpa  rasa  langu  dibandingkan  dengan varietas  lainnya  (Wulandari,  2012).  Buah naga  mengandung  beberapa  mineral  seperti kalsium,  fosfor,  besi,  dan  lain-lain.  Vitamin yang terdapat di  dalam  buah  naga antara lain vitamin  B1,  vitamin  B2,  vitamin  B3,  dan vitamin  C  (Pratomo,  2008).  Umur  simpan buah  naga  tidak  lama  yaitu  sekitar  1-2 minggu  dalam  suhu  14-20°C.  Hal  ini disebabkan  karena  buah  naga  mempunyai kandungan air  yang tinggi  yaitu sebesar 90% (Farikha  dkk.,  2013).  Salah  satu  cara  untuk mempertahankan  keawetan  dan  nilai  gizi buah  naga  dapat  diolah  menjadi  sirup (Hadiwijaya, 2014).
Sirup  merupakan  larutan  gula  pekat dengan  atau  tanpa  penambahan  bahan tambahan  pangan  yang  diizinkan  (BSN, 1994).  Penelitian  ini  bekerja  sama  dengan UKM CV.  Wana Bekti Handayani  Dukuhan, Prampalan, Masaran,
Sragen
yang memproduksi  produk  olahan  buah  naga. Salah  satunya  sirup  buah  naga  super  merah. Masalah  yang  dihadapi  pada  pengolahan sirup  buah  naga  super  merah  di  CV.  Wana Bekti  Handayani  yaitu  terdapat  pemisahan dan pengentalan pada bagian atas permukaan sesaat  setelah  dilakukan  ekstraksi  buah. Selain  itu,  pada  dasar  permukaan  terbentuk endapan  yang  mengakibatkan  kekeruhan pada sirup yang dihasilkan. Menurut Vinjamuri  (2015),  kekeruhan  yang  terdapat
pada  sirup  tersebut  akan  mengurangi  minat konsumen  karena  sirup  dengan  kekeruhan tinggi  akan  menimbulkan  endapan  ketika penyimpanan  sedangkan  sirup  yang  jernih dan  tinggi  nutrisi  lebih  disukai  konsumen. Sampai saat ini, untuk mengurangi kekeruhan yang terbentuk dilakukan penyaringan endapan dengan cara konvensional  namun,  penyaringan  tersebut dapat  menurunkan  rendemen  sirup  yang dihasilkan.
Kekeruhan  dan  endapan  tersebut  dapat disebabkan  karena  adanya  komponen  yang tersuspensi.  Komponen  tersebut  berupa pektin dan selulosa yang termasuk polisakarida  penyusun  tanaman.  Pektin merupakan  polisakarida  kompleks  yang terdapat  dalam  sel  tanaman  tersusun  atas polimer  linier  asam  D-galakturonat  yang terhubung  oleh ikatan  1-4  glikosidik. (Sharma et al ., 2014). Hasil analisis rata-rata kandungan  pektin pada daging   buah     naga super   merah   yaitu   0,7061%.   Sedangkan selulosa  merupakan  homopolisakarida  linier tidak  bercabang,  terdiri  dari  unit  D-glukosa yang berikatan dengan ikatan β-1,4- glikosidik  (Wahlstrom,  2014). Hasil  analisis rata-rata    kandungan    selulosa    pada    daging buah    naga    super  merah    yaitu    0,7061%. Adanya    pektin    dan    selulosa    menjadi penghambat  proses  filtrasi  melalui  membran (Widowati et  al .,  2017).  Pektin  juga mengakibatkan  kekentalan  pada  jus  buah naga  super  merah  yang  dapat    mengurangi hasil  rendemen  sari  buah  naga  super.
Kekeruhan sirup  buah  naga super merah dapat dikurangi dengan menghidrolisis molekul pektin dan selulosa menjadi molekul yang  lebih  sederhana  melalui  klarifikasi enzimatis.  Proses  klarifikasi  dapat  dilakukan dengan  cara  penambahan  enzim  pektinase misalnya enzim poligalakturonase yang biasa digunakan secara komersial. Enzim poligalakturonase  memiliki kelebihan  dalam mengklarifikasi    sari    buah    dengan menghidrolisis    asam  pektat  secara  acak menjadi asam galakturonat dan  tidak menghasilkan  residu  metoksil    (Widowati et al ., 2017). Penambahan enzim poligalakturonase    konsentrasi    0,1%  dapat menurunkan  pH,  total  padatan terlarut,  dan viskositas  serta  meningkatkan  transmitansi
sari buah  naga  super merah.
Menurut Phuong (2014), enzim pektinase  dan  selulase  dapat  mengurangi kekeruhan    dengan    cara    mendegradasi masing-masing  substratnya.  Penambahan kedua  enzim  tersebut  dapat  meningkatkan stabilitas  dan  kejernihan  sari  buah.  Proses klarifikasi  dengan  enzim  pektinase  yang dikombinasikan  dengan  penambahan  enzim selulase  dapat  meningkatkan  rendemen  dan kejernihan  sari  buah  karena  terdapat  proses degradasi  polisakarida  secara  bersamaan (Jori  dkk.,  2015).  Enzim  selulase  akan menghidrolisis  ikatan  1,4-β-D-glukosa  pada selulosa  menjadi  gula-gula  yang  lebih sederhana  (Widowati et  al .,  2016).  Menurut Kothari  dkk  (2013),  penambahan  enzim selulase  pada  produksi  sari  buah  dapat menurunkan viskositas, meningkatkan proses ekstraksi, sakarifikasi,  mengurangi rasa pahit sirup.  Sedangkan  menurut  penelitian  dari Le et  al., (2012)  klarifikasi  sari  buah jambu  dengan  penambahan  enzim  selulase dengan konsentrasi 0-0,12% dapat meningkatkan  hasil  dari  sari  buah  hingga 17,5%.  Kombinasi  enzim  poligalakturonase konsentrasi  0,06%,  dan  enzim  selulase konsentrasi  0,13%  berpengaruh  nyata  pada peningkatan  transmitansi  serta  penurunan viskositas.
Penelitian
ini mengaplikasikan kombinasi  enzim  poligalakturonase  dari isolat bakteri pektinolitik Bacillus licheniformis GD2a  AR2  (Widowati et  al ., 2017)  dan  enzim  selulase  dari  isolat  bakteri selulolitik Bacillus  subtilis Krakarya_1  S6 (Widowati et  al .,  2016)  pada  klarifikasi  sari buah  naga  super  merah  dalam  pembuatan sirup.  Penelitian  ini  menggunakan  kedua enzim  tersebut  karena  memiliki  aktivitas enzim  pada  kondisi  optimum  dan  kestabilan enzim  terutama  kestabilan  pH  yang  sesuai pada  kondisi  proses  klarifikasi  sari  buah jambu  merah.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui berapa perbandingan  konsentrasi terbaik    penambahan    kedua  enzim  pada klarifikasi  sari  buah  dalam  pembuatan  sirup. Faktor  yang  diteliti  dalam  penelitian  ini adalah  perbedaan  karakteristik  sirup  buah naga  super  merah  tanpa  perlakuan  (kontrol), dengan penambahan enzim poligalakturonase  isolat  bakteri  pektinolitik
Bacillus licheniformis GD2a AR2
konsentrasi  0%;  0,06%;  0,09%;  dan  0,1% dan  penambahan  enzim  selulase  isolat bakteri selulolitik Bacillus
subtilis Krakarya_1  S6  konsentrasi  0%;  0,1;  0,13%,
0,16%  serta  keduanya  pada  klarifikasi  sari buah naga super merah ( Hylocereus costaricensis ) dalam pembuatan sirup. Penggunaan kedua enzim tersebut diharapkan  dapat  meningkatkan  efektivitas proses  klarifikasi  pada  proses  pembuatan sirup.
Bacillus    licheniformis GD2a  AR2 memiliki  karakter  Gram  positif,  berbentuk batang,  koloni  berantai  dan  ukuran  sel  0,5 µm. Bacillus subtilis Krakarya_1 S6 memiliki  karakter  sama  namun  berukuran 0,2  µm.  Enzim  poligalakturonase  dari Bacillus  licheniformis GD2a  AR2  memiliki akivitas enzim 0,32 U/ml, pH optimum 3,5-6, kestabilan  pH  4-7,  suhu  optimum  pada  55ºC dan kestabilan suhu pada 50-60ºC. Sedangkan enzim  selulase  memiliki aktivitas enzim  0,06  U/ml,  pH  optimum  7,  kestabilan pH  5-9,  suhu  optimum  pada  37ºC  dan kestabilan suhu pada 30-60ºC.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah mengetahui    hasil    penggunaan    variasi enzim    poligalakturonase    isolat  bakteri pektinolitik Bacillus  licheniformis GD2a AR2  dan  enzim  selulase  isolat  bakteri selulolitik Bacillus  subtilis Krakarya_1  S6 terhadap efektivitas   klarifikasi   sirup   buah naga   super   merah   berdasarkan parameter pH,  total  padatan  terlarut,  viskositas  dan transmitansi.  Selain  itu  untuk  mengetahui konsentrasi  terbaik  dari  kombinasi  enzim poligalakturonase  isolat  bakteri  pektinolitik Bacillus licheniformis GD2a AR2 dan enzim selulase  isolat  bakteri  selulolitik Bacillus subtilis Krakarya_1  S6  yang  menghasilkan klarifikasi  sari buah naga super  merah dalam pembuatan sirup.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam analisis penelitian  adalah  neraca  analitik  (Mettler Toledo), juicer (Phillips),  autoklaf  (Selecta), inkubator (Selecta), shaker incubator
(Selecta),  vortex  (Heidolph), sentrifuge (Hettich),  membran  selofan cut  off 12  kDa, magnetic stirrer , hand refractometer (ATAGO),  pH  meter  (Hanna), Laminar  Air Flow (Labconco),  spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu), hot  plate (IKA  Labortechnick), coolbox ,  viskometer  (HAAKE),  piknometer (PYREX),  alumunium  foil,  dan  peralatan laboratorium pada umumnya di laboratorium.

## Bahan
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  buah  naga  super  merah ( Hylocereus  costaricensis )  yang  mempunyai warna daging buah  merah  pekat  dan terdapat biji  kecil  yang  tersebar  merata  berwarna hitam.  Sampel  buah  naga  super  merah diperoleh  dari  UD.  Naga  Jaya  Makmur, Bululawang,  Malang,  Jawa  Timur  dengan berat  400-600  g,  diameter  sekitar  9-11  cm dengan  umur  panen  ±  1  tahun  dan  panen dilakukan saat penelitian berlangsung.
Media yang dibutuhkan untuk memproduksi enzim  poligalakturonase,  yaitu aquades,  alkohol  90%,  amonium  sulfat ((NH 4 ) 2 SO 4 )  (MERCK,  Germany),  buffer asetat    0,05    M    pH  5,2,    asam    asetat (CH 3 COOH)  (MERCK,  Germany),    natrium asetat  (CH 3 COONa)  (MERCK,  Germany), barium klorida (BaCl 2 ) (MERCK, Germany), yeast  extract (OXOID,  USA),  disodium hidrogen fosfat (Na 2 HPO 4 ) (MERCK, Germany),  potassium  dihidrogen    fosfat (KH 2 PO 4 ) (MERCK, Germany), magnesium  sulfat (MgSO 4 .7H 2 O) (MERCK, Germany),  kalium  klorida  (KCl)  (MERCK, Germany),  pektin  citrus  (Sigma-Aldrich, USA), bacteriological agar (Difco, USA). Media yang dibutuhkan untuk memproduksi  enzim  selulase,  yaitu  aquades, alkohol  70%,  ammonium  sulfat  (NH 4 ) 2 SO 4 ) (MERCK,  Germany),  buffer  asetat  0,05  M pH  5,2, natrium  asetat  (CH 3 COONa) (MERCK, Germany), asam asetat (CH 3 COOH) (MERCK,
Germany),
Carboxymethyl  Cellulose, magnesium  sulfat (MgSO 4 .7H 2 O) (MERCK, Germany), kalium nitrat  (KNO 3 )  (MERCK,  Germany),  kalium hidrogen sulfat (K 2 SO 4 ) (MERCK, Germany), fero sulfat (FeSO 4 .7H 2 O) (MERCK, Germany), kalsium klorida
(CaCl 2 ) (MERCK, Germany), glukosa (MERCK, Germany), yeast extract (OXOID, USA).
Serta isolat  bakteri  pektinolitik Bacillus licheniformis GD2a  AR2  dan  isolat  bakteri selulolitik Bacillus  subtilis Krakarya_1  S6 (Widowati et al ., 2016Widowati et al ., 2017).

## Tahapan Penelitian

## Proses persiapan isolat
Isolat  yang  digunakan  yaitu  isolat Bacillus  licheniformis GD2a  AR2  dan  isolat bakteri  selulotik Bacillus  subtilis krakarya_1 S6.  Isolat  diinokulasikan  pada  media  pektin dan  media  CMC  agar  miring  dengan  ose untuk  peremajaan  bakteri.  Agar  miring  yang telah  diinokulasi  diinkubasi  pada  suhu  55°C dan 37°C selama 24 jam. Tujuan peremajaan isolat  yaitu  mengoptimalkan  pertumbuhan bakteri.  Persiapan  isolat  dilakukan  dengan menggoreskan 1 ose dari subkultur ke dalam 10  ml  media  pektin  cair  dan  CMC  cair. Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  55°C  dan 37°C  selama  24  jam    menggunakan inkubator shaker .  Perhitungan  jumlah  sel menggunakan haemocytometer (Widowati et al ., 2016; Widowati et al ., 2017).
Produksi,  isolasi,  dan  ekstraksi  enzim poligalakturonase dan enzim selulase (Utami  dkk.,  2015;Widowati  et  al.,  2016; Widowati et al., 2017).

## 1. Produksi  enzim  poligalakturonase  dan enzim selulase
Isolat  sebanyak  10  ml  yang  telah diinkubasi  selama  24  jam  dimasukkan  ke dalam  90  ml  media  cair  pektin  (PG)  dan selulase  (S).  Kemudian  diinkubasi  dalam incubator  shaker dengan  kecepatan  144 rpm  pada  suhu  55°C  dan  37°C.  Enzim dipanen  berdasarkan  waktu  optimum isolat  memproduksi  enzim.  Produksi enzim dilakukan pada fase log pertumbuhan  bakteri  yaitu  10  jam.  Hasil perhitungan sel bakteri dengan haemocytometer adalah  8,812  log sel/ml ( Bacillus  licheniformis GD2a  AR2)  dan 8,975 log sel/ml ( Bacillus subtilis Krakarya_1 S6).
2. Isolasi dan
ekstraksi enzim
poligalakturonase dan enzim selulase Tahapan isolasi dan ekstraksi dilakukan dengan cara sentrifugasi suspensi  sel  dari  hasil  optimum  inkubasi atau  kultur  isolat  yang  telah  mencapai waktu  produksi  (fase  logaritmik)  dengan kecepatan  6.000  rpm  selama  15  menit pada  suhu  4°C  sehingga  menghasilkan supernatan yang mengandung crude enzyme .
Pemurnian parsial enzim poligalakturonase dan enzim selulase (Sinatari dkk., 2013;Widowati et al., 2016; Widowati et al., 2017).
1. Presipitasi ammonium sulfat
Presipitasi  dengan  ammonium  sulfat bertujuan  untuk  pemisahan  (pemurnian) ekstrak kasar protein (enzim) dari molekul- molekul protein lain. Pengendapan protein menggunakan prinsip salting  out ,  yaitu  mengendapnya protein  (enzim)  karena  air  berikatan dengan  garam  amonium  sulfat.  Ketika konsentrasi garam amonium sulfat meningkat    secara    bertahap    pada    saat fraksinasi,  beberapa  molekul  air  akan tertarik  oleh  ion  garam  amonium  sulfat sehingga  menurunkan  jumlah  molekul  air yang  tersedia  untuk  berinteraksi  dengan asam  amino  hidrofilik  dari  protein, mengakibatkan protein yang mengandung      asam      amino      hidrofilik akan   mengendap (Sinatari dkk., 2013).
Presipitasi  enzim  poligalakturonase menggunakan  amonium  sulfat  fraksi kejenuhan  50%  dan  enzim  selulase dengan amonium sulfat fraksi kejenuhan      40%.      Fraksi      kejenuhan penambahan  amonium    sulfat    ditentukan berdasarkan    aktivitas    tertinggi    enzim yang  didapatkan  dari  masing-masing isolat.  Jumlah  penambahan  amonium sulfat dihitung dengan mengalikan supernatan  yang  dihasilkan  dengan  nilai kejenuhan  pada  tabel  konversi.  Nilai kejenuhan  50%  yaitu  313  g/l  dan  40% yaitu  243  g/l.  Penambahan  amonium sulfat  dilakukan  sedikit  demi  sedikit  dan diaduk  menggunakan magnetic  stirer . Proses  presipitasi  berlangsung  selama  24
jam pada suhu 4°C.
Setelah presipitasi,
supernatan disentrifugasi  pada  12.000  rpm  pada  4°C selama  10  menit.  Hasil  dari  sentrifugasi berupa  pelet  yang  mengandung  protein enzim  dan  non  enzim.  Pelet  dilarutkan dengan  penambahan  buffer  asam  asetat 0,05    M    pH    5,2    dengan  perbandingan 1:1  untuk  kemudian  dilakukan  proses dialisis.
2. Dialisis
Proses dialisis berguna untuk
memurnikan  protein  dalam  larutan  dari partikel-partikel      pengganggu      lainnya. Prinsip dari dialisis ialah aplikasi preparasi enzim  ke dalam  kantong dialisis yang terbuat dari membran semipermeabel yang  memungkinkan  molekul  berukuran kecil untuk bermigrasi. Membran semipermeabel  untuk  menahan  molekul- molekul  protein, sedangkan  molekul  yang lebih  kecil  seperti  garam  dan  air  dapat melewati membran tersebut. Pada penelitian,  membran  semipermeabel  yang digunakan    adalah  membran  selofan cut off 12 kDa.
Suspensi pelet dengan buffer dimasukkan  dalam  kantung  membran selofan cut  off 12  kDa  dan  diikat  rapat. Kemudian  dimasukkan  dalam  larutan buffer  asetat  0,05  M  pH  5,2  serta  diaduk dengan magnetic  stirer dalam cool chamber pada  suhu  konstan  4°C.  Untuk mengetahui    adanya    amonium    sulfat dalam    larutan    buffer  maka  dilakukan dengan  penambahan  BaCl 2 .  Amonium sulfat  akan  bereaksi  dengan  BaCl 2 menghasilkan  endapan  putih  BaSO 4 . Dialisis  dihentikan  saat  penambahan BaCl 2 dalam  larutan  buffer  tidak  lagi menghasilkan endapan putih BaSO 4 ,  yang mengindikasikan  bahwa  tidak  ada  lagi amonium  sulfat  yang  terkandung  dalam fraksi  enzim  (Sinatari  dkk.,  2013). Penggantian  buffer  pada  proses  dialisis dilakukan  selama  8  jam  sekali  sampai tidak  terbentuk  endapan  putih.  Setelah tidak ada endapan putih, proses dihentikan dan diperoleh enzim murni parsial.
3. Uji  aktivitas  enzim  kasar  maupun murni parsial
Aktivitas  enzim  kasar  dan  murni
parsial  diukur  menggunakan  metode dinitrosalicylic  acid (DNS).  Aktivitas enzim ditentukan dengan menghitung gula reduksi  yang  dibebaskan  dari  pektin  dan selulosa. Enzim kasar/murni parsial sebanyak 0,1  ml  ditambah  media pereaksi sebanyak    0,9    ml    CMC    0,1%    untuk selulase    dan    media  pereaksi    enzim poligalakturonase    terdiri    dari    (0,7  % w/v)    pektin  sitrus      dan  buffer  natrium asetat 0,025 M pH  4,8. Enzim diinkubasi pada  suhu  55°C  (poligalakturonase)  dan 37°C (selulase) selama 30 menit. Kemudian  ditambahkan  1  ml  reagen DNS  dan  dilakukan  pemanasan  pada suhu  90°C  selama  10  menit.  Larutan enzim  didinginkan  dan  ditambahkan  K- Na-Tartat  40%  sebanyak  0,5  ml.  Sampel dihomogenkan menggunakan vortex. Sampel kemudian ditera dengan menggunakan spektrofotometri pada panjang  gelombang  540  nm.  Aktivitas enzim p o l i g a l a k t u r o n a s e
kasar sebesar  0,15  U/ml  dan  meningkat  menjadi 0,32 U/ml setelah purifikasi parsial.
Sedangkan  aktivitas  enzim  selulase  kasar sebesar 0,02 U/ml menjadi 0,06 U/ml setelah purifikasi parsial.
Penentuan variasi konsentrasi enzim poligalakturonase  dan  enzim  selulase  serta pembuatan buah naga super merah (‘Aliaa dkk., 2010;  Le dkk., 2012;  Widowati  et al., 2016; Widowati et al., 2017)
1. Penentuan konsentrasi enzim poligalakturonase  (‘Aliaa  dkk.,  2010; Widowati et al ., 2017) Variasi konsentrasi enzim poligalakturonase  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  0%;  0,06%;  0,09%;
0,1%.
2. Penentuan  konsentrasi  enzim  selulase (Le dkk., 2012; Widowati et al., 2016). Variasi  konsentrasi  enzim  selulase yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah 0; 0,1%; 0,13%, 0,16%.
3. Penentuan    variasi    konsentrasi    enzim poligalakturonase    dan  konsentrasi enzim  selulase
Klarifikasi  sari  buah  naga  super merah  dengan  kombinasi  penambahan enzim  poligalakturonase  isolat  bakteri pektinolitik Bacillus   licheniformis GD2a AR2    pada    konsentrasi    0%;    0,06%; 0,09%;   0,1%   dan   penambahan   enzim selulase      isolat      bakteri  selulolitik Bacillus    subtilis Krakarya_1    S6    pada konsentrasi    0%;  0,1%;      0,13%;     0,16% dilakukan   pengujian   dengan   beberapa parameter uji yaitu total padatan terlarut,  viskositas,  transmitansi,  dan  pH. Variasi
konsentrasi enzim
poligalakturonase dan enzim selulase yang digunakan  dapat  dilihat  pada Tabel  2 .
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tiga  kali pengulangan sampel dan satu  kali  analisis uji.
Pembuatan dan Klarifikasi sirup buah naga buah  naga  super  merah  (Modifikasi Nugroho, 2013; Hadiwijaya, 2014)
Pembuatan sirup buah naga super merah secara umum meliputi: sortasi buah, pencucian, pengupasan, pemotongan, penghancuran/pengepresan daging buah, perebusan  I,  penyaringan,  perebusan  II, pencampuran dengan larutan gula, pengadukan, pengisian, pasteurisasi,
pengemasan  dan  penyimpanan.  Buah  naga super  merah  terpilih  dicuci,  kemudian dikupas  kulitnya.  Daging  buah  dipotong secara melintang kemudian diekstraksi dengan  menggunakan juicer . Juicer akan menghancurkan  buah  naga  super  merah  dan memisahkan  air  dengan  ampasnya  sehingga dapat  diperoleh  sari  buah  naga  super  merah. Rendemen  yang  dihasilkan  pada  ekstraksi sari  buah  naga  dapat  dilihat  pada Tabel  1 . Sari buah  hasil  filtrasi  dimasukkan dalam  48 botol yang masing-masing diisikan 50 ml sari buah naga super merah.
Tabel 1 Rendemen Sari Buah Naga Super Merah Hasil Ekstraksi
Sampel Berat awal (g) Berat akhir (g) V  akhir (ml) Rendemen (b/b) (%) Rendemen (v/b) (%) Sari buah naga super merah 10.252 7.116 4.200 69,41 40,97
Tabel  2 Variasi  Konsentrasi  Enzim  Poligalakturonase  dan  Enzim Selulase Enzim Selulase (S) Enzim Poligalakturonase (PG) 0% (A 0 ) 0,06% (A 1 ) 0,09% (A 2 ) 0,1% (A 3 ) 0% (B 0 ) A 0 B 0 A 1 B 0 A 2 B 0 A 3 B 0 0,1% (B 1 ) A 0 B 1 A 1 B 1 A 2 B 1 A 3 B 1 0,13% (B 2 ) A 0 B 2 A 1 B 2 A 2 B 2 A 3 B 2 0,16% (B 3 ) A 0 B 3 A 1 B 3 A 2 B 3 A 3 B 3 Kemudian setiap sampel diberi perlakuan  sesuai  dengan Tabel  2 .  Setelah sampel diberikan perlakuan enzim poligalakturonase dan enzim selulase, sampel tersebut  diinkubasi  pada  suhu  50°C  selama 60 menit (Widowati et al ., 2016; Widowati et al .,  2017).  Sampel      yang  telah  diberikan perlakuan      kombinasi  enzim  kemudian ditambahkan  dengan  larutan  gula  dengan perbandingan  1:1.  Sampel  dipasteurisasi dan  selanjutnya  dilakukan  pengujian  pH (Akesowan dan Choonhahirun, 2013), viskositas  (Widowati et  al .,  2017),  total padatan  terlarut  (Widowati et  al .,  2017)  dan transmitansi (Widowati et al ., 2017)

## Rancangan Penelitian
Faktor  yang  diteliti  dalam  penelitian  ini adalah  perbedaan  karakteristik  sirup  buah naga  super  merah  tanpa  perlakuan  (kontrol), dengan penambahan enzim  poligalakturonase Bacillus licheniformis GD2a AR2
konsentrasi  0%;  0,06%;  0,09%;  dan  0,1% dan  penambahan  enzim  selulase Bacillus subtilis Krakarya_1  S6  konsentrasi  0%;  0,1; 0,13%, 0,16% serta keduanya pada klarifikasi  sari  buah  naga  super  merah ( Hylocereus  costaricensis )  dalam  pembuatan sirup.  Analisis  dilakukan  terhadap  empat parameter  yaitu    pH,viskositas,  total  padatan terlarut  dan  transmitansi.  Pengujian  tersebut untuk menentukan konsentrasi enzim poligalakturonase    dan    konsentrasi    enzim selulase  terbaik  yang  digunakan  pada klarifikasi  sari buah naga super merah dalam pembuatan sirup.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap Faktorial (RALF) dengan dua faktor  yaitu  variasi  konsentrasi  dan  jenis enzim yang digunakan (enzim poligalakturonase dan enzim selulase). Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tiga  kali ulangan  sampel  dan  satu  kali  ulangan analisis.  Data  yang  diperoleh  dianalisis
secara  statistik  dengan  program  SPSS menggunakan two-way  Analysis  of  Varian (ANOVA)  dan  dilanjutkan Duncan Multiple Range Test (DMRT) (α=0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Klarifikasi  Sari  Buah  Naga  Super Merah  ( Hylocereus  costaricensis )  dalam Pembuatan Sirup
Penelitian  ini  menggunakan  enzim poligalakaturonase Bacillus  licheniformis GD2a  AR2  ( 0,32  U/ml )  dan  enzim  selulase Bacillus    subtilis Krakarya_1    S6    (0,06 U/ml)  dalam pembuatan sirup dari sari buah naga super merah ( Hylocereus costaricensis ).
Produksi
enzim poligalakturonase menggunakan  media  pektin  cair,  sedangkan untuk  enzim  selulase  dengan  media  CMC. Penggunaan kombinasi enzim dapat meningkatkan  karakteristik  total  padatan terlarut, kecerahan/kejernihan dan
menurunkan  viskositas  sari  buah  (Sharma et al ,  2014).  Konsentrasi    enzim    yang digunakan  dalam  penelitian   ini  yaitu  0%; 0,06%;  0,09%;  0,1%  tuk  poligalakturonase dan  selulase  sebesar  0%;  0,1%;  0,13%; 0,16%. Analisis dilakukan  terhadap pH, total padatan  terlarut,  nilai  transmitansi  dan viskositas sirup  buah  naga  super  merah hasil klarifikasi.
1. pH pH  merupakan  logaritma  negatif  dari ion  H + .  Pengukuran  pH  digunakan  untuk mengetahui  perubahan  tingkat  keasaman suatu produk. Konsentrasi ion H + ditentukan  oleh  molekul-molekul  yang dapat  melepaskan  ataupun  mengikat  ion dalam  larutan.  Semakin  banyak  ion  H + maka semakin besar konsentrasinya sehingga  nilai  pH  semakin  rendah  (Li et al ., 2015).
pH  buah  naga  segar  berkisar  antara
4,3-5,1  (Farikha  dkk.,  2013).  Enzim poligalakturonase  dapat  bekerja  optimal pada  pH  3,5-6  dan  stabil  pada  pH  4-7 (Widowati et  al ,  2017).  Enzim      selulase bekerja  optimum  pada  pH  5-9  dan stabil  pada  pH  7  (Widowati et  al .,  2016). Penambahan enzim poligalakturonase  dan enzim    selulase    diharapkan    dapat menurunkan    pH  sirup  buah  naga  super merah.  Penurunan  pH  dapat  menjadi indikator dalam terbentuknya asam galakturonat pada hidrolisis pektin. Hasil  analisis  pH  pada  klarifikasi  sari buah  naga  super  merah  dalam  pembuatan sirup dapat dilihat pada Tabel 3 . Penambahan enzim poligalakturonase dan selulase  maupun kombinasi  keduanya berpengaruh  nyata  dan  terdapat  interaksi antara  kedua  enzim  terhadap  pH  sirup buah  naga  super  merah  yang  dihasilkan. Penambahan enzim  poligalakturonase  dan enzim  selulase  serta  kombinasi  keduanya secara umum  dapat  menurunkan  pH sirup buah  naga  super  merah dapat  dilihat  pada Tabel  3 .  Nilai  pH  sirup  berkisar  antara 4,23-4,32.  Peningkatan  konsentrasi  enzim selulase tidak  memberikan pengaruh  yang signifikan  terhadap  perubahan  pH  sirup buah  naga  super  merah.Namun  dengan penambahan  enzim  poligalakturonase, semakin  meningkat  konsentrasi  yang diberikan maka semakin menurun pH nya. Penambahan enzim poligalakturonase secara umum  dapat  menurunkan pH  sirup buah  naga  super  merah.  Akan  tetapi, penambahan enzim poligalakturonase pada konsentrasi 0,09% tidak menunjukkan pengaruh yang nyata terhadap  penurunan  pH  dibandingkan
dengan poligalakturonase konsentrasi 0,1%.  Menurut Le et al., (2012) sari  buah naga  super  merah  dengan  penambahan enzim  poligalakturonase  (0,123  U/ml) konsentrasi  0,09%  dan  0,1%  dapat menurunkan  pH  4,06  menjadi  4,03  dan 4,04.
Prinsip kerja enzim poligalakturonase menghidrolisis  ikatan  α-1,4-  glikosidik menjadi  D-galakturonat  pada  substansi pektin  rantai  acak.  Hasil  dari  reaksi tersebut akan menghasilkan asam galakturonat dan asam karboksilat. Produksi  asam galakturonat  menyebabkan terbentuknya  kondisi  asam  sehingga  pH sirup  buah  naga  super  merah  menurun (‘Aliaa et  al .,  2010).  Hal  tersebut  sejalan dengan  penelitian  Barcelon et  al .,  (2015) yang  menjelaskan  bahwa  klarifikasi  sari buah  naga  dengan  perlakuan  enzimatik dapat  mengakibatkan  pektin  terhidrolisis sempurna  maupun  parsial  seiring  dengan penurunan pH sari buah.
Penurunan  pH  dapat  mengakibatkan penurunan muatan pektin yang merupakan penyusun    pembentuk    gel.    Produk    dari hidrolisis pectin ini adalah asam galakturonat yang merupakan asam lemah. Asam  galakturonat  mengalami  disosiasi yang  tidak    sempurna    sehingga    kurang kuat   untuk  melepaskan  ion  H + .  Sebagian molekul  akan  berdisosiasi  menjadi  kation (H + ) dan   anion,    sebagian   yang   lainnya tetap    larut    dalam    bentuk    molekul. Semakin banyak ion H + yang terakumulasi, maka semakin besar penurunan  pH  yang  dihasilkan  (Akbar dkk., 2013).
Tabel  3 Hasil  Analisis  pH  pada  Klarifikasi Sari  Buah  Naga  Super  Merah dalam Pembuatan Sirup dengan Penambahan Enzim Poligalakturonase dan Selulase Enzim Selulase (S) Enzim Poligalakturonase (PG) Rata-rata 0% (A 0 ) 0,06% (A 1 ) 0,09% (A 2 ) 0,1% (A 3 ) 0% (B 0 ) 4,28 4,27 4,24 4,24 4,26 a 0,1% (B 1 ) 4,36 4,28 4,24 4,23 4,28 b 0,13% (B 2 ) 4,34 4,28 4,22 4,22 4,27 ab 0,16% (B 3 ) 4,31, 4,25 4,23 4,22 4,25 a Rata-rata 4,32 C 4,27 B 4,23 A 4,23 A
Keterangan  :  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada  baris  dan  kolom  yang  sama  menunjukkan beda nyata pada  α= 0,05. Sig. PG = 0,000; sig . S = 0,014; sig PG*S = 0,003; R squared = 0,886
Selain menggunakan enzim
poligalakturonase,  klarifikasi  sari  buah naga  super  merah  ditambahkan  enzim selulase.  Penambahan  enzim  selulase secara  umum  dapat  menurunkan  pH  sirup buah  naga  super  merah.  Akan  tetapi, penambahan  selulase  pada  konsentrasi 0,16%  tidak  menunjukkan  pengaruh  yang nyata terhadap penurunan
pH dibandingkan  dengan  selulase  konsentrasi 0% dan 0,13%.
Enzim  selulase  bekerja  memutus rantai  ikatan  1,4-D-glikosidik  pada  rantai selulosa.    Enzim    endo-1,4-β-glukanase (EC    3.2.1.4)  bekerja    secara  acak menghidrolisis  bagian  internal  1,4-D- glikosidik rantai selulosa yang mengakibatkan terbentuknya variasi
panjang  rantai  oligosakarida.  Dampak yang ditimbulkan yaitu semakin berkurangnya  panjang  rantai  polisakarida dengan cepat dan secara bersamaan terjadi peningkatan  jumlah gula  pereduksi  secara bertahap.  Endoglukonase  mempengaruhi terjadinya perubahan pH dalam lingkungan media (Yin et al ., 2010;Widowati et  al .,  2016).  Penelitian Sinatari et  al .,  (2013)  pada  penambahan enzim  endo-1,4-β-glukonase Bacillus sp. AR  009  pada  media  dengan  pH  4-9 cenderung  mengalami  perubahan  pH menjadi  basa.  Kenaikan  pH  tersebut karena  adanya  akumulasi  produk  berupa gula  reduksi  sederhana  yang  merupakan hasil  hidrolisis  selulosa  secara  acak  pada ikatan 1,4-D-glikosidik. Hal tersebut tidak sesuai  dengan  hasil  penelitian.  Lain halnya  dengan  penelitian  Arsad  (2015), penambahan  enzim  selulase  kompleks pada  sari  buah  aren  dapat  menurunkan pH  yaitu  4,28  menjadi  4,19.  Hal tersebut sesuai  dengan  hasil  penelitian.  Pada penelitian  ini  menghasilkan  penurunan pH,  namun  intesitasnya  kecil.  Proses
hidrolisis  selulosa  oleh  enzim  selulase terjadi  pada  sisi  aktif  asam  amino glutamat.  Fraksi  gugus  (-COOH)  dari asam  amino  glutamat  akan  bermuatan negatif membentuk (-COO - ). Proses hidrolisis selulosa mengakibatkan terbentuknya kelebihan ion (-OH).
Penggunaan  kombinasi  kedua  enzim lebih  efisien  dalam  penurunan  pH  sirup buah  naga  super  merah.  Hal  tersebut dikarenakan  kedua  enzim  bekerja  pada substrat  yang  berbeda  sehingga  secara bersamaan  dapat  mengoptimalkan  proses klarifikasi  sari  buah  naga  super  merah dalam  pembuatan  sirup.  Penelitian  Abbes et  al .,  (2011),  pada  pembuatan  sirup kurma  ( deglet  nour,  allig  dan  kentichi ) dengan  penambahan  enzim  pektinase  50 U/100  g  dan  enzim  selulase  5  U/100  g menghasilkan penurunan pH. Nilai penurunan    pH    yaitu    4,87   menjadi    3,2 ( deglet  nour ),  4,48  menjadi  3,12 ( allig ) dan 4,82 menjadi 3,07 ( kentichi ).
Penurunan  pH  dalam  klarifikasi  sirup  ini masih  dalam  rentang  pH  buah  naga  super merah (4,3-5,1), sehingga tidak menghilangkan      rasa      khasnya      dan masih   dapat   diterima   oleh konsumen.

## 2. Viskositas
Viskositas merupakan sifat ketahanan terhadap aliran suatu bahan yang berwujud  cair,  pasta  atau  dalam  bentuk gel  atau  bubur  (Sasanto,  2011).  Semakin rendah  nilai  viskositas,  maka  dihasilkan cairan yang lebih encer sehingga memudahkan  dalam  proses  filtrasi  dan meningkatkan  rendemen  yang  dihasilkan. Viskositas  sirup  yang  terdapat  di  pasaran yaitu  1,811  cps  (Pratama  dkk.,  2013). Hasil  analisis  nilai  viskositas  klarifikasi sari  buah  naga  super  merah  dalam pembuatan sirup dapat dilihat  pada Tabel 4 .
Tabel 4 Hasil Analisis Viskositas Klarifikasi Sari Buah Naga Super Merah dalam Pembuatan
Sirup dengan Penambahan Enzim Poligalakturonase dan Selulase (cP) Enzim Selulase (S) Enzim Poligalakturonase (PG) Rata-rata 0% (A 0 ) 0,06% (A 1 ) 0,09% (A 2 ) 0,1% (A 3 ) 0% (B 0 ) 10,7 12,4 11,7 10,2 11,3 c 0,1% (B 1 ) 15,0 12,2 10,6 10,6 12,1 ab 0,13% (B 2 ) 14,6 12,7 10,8 10,5 12,2 b 0,16% (B 3 ) 12,4 10,8 10,7 10,2 11,0 a Rata-rata 13,2 B 12,0 B 10,9 A 10,4 A
Keterangan:  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada  baris  dan  kolom  yang  sama  menunjukkan  beda nyata  pada   α= 0,05. Sig. PG = 0,000; sig . S = 0,000; sig PG*S = 0,000; R squared = 0,999
Penambahan enzim poligalakturonase dan  enzim  selulase  maupun  kombinasi keduanya  berpengaruh  nyata  dan  terdapat interaksi  antara  kedua  enzim    terhadap nilai  viskositas  sirup  buah  naga  super merah  yang  dihasilkan.  Penambahan enzim poligalakturonase dan enzim selulase  serta  kombinasi  keduanya  secara umum  dapat  menurunkan  nilai  viskositas sirup buah naga super  merah terlihat pada Tabel  4 .  nilai  viskositas  sirup  buah  naga super  merah  setelah  klarifikasi  berkisar antara 10,4-13,2 cP. Peningkatan konsentrasi kedua enzim tidak
mempengaruhi transmitansi.  Hal  tersebut terlihat    pada    penambahan    enzim poligalakturonase  0,13%  (12,2  cP)  yang menghasilkan  nilai  viskositas  lebih  tinggi dibandingkan pada konsentrasi 0,1% (12,1 cP).
Penelitian    Pinheiro et    al (2017) penambahan    enzim  poligalakturonase dapat  menurunkan  viskositas  sari  buah markisa  sebesar  80%    dan    sari    buah apel    sebesar    50%.    Pada    penelitian `Aalia (2010), penambahan enzim Pectinex  3XL  (300  FDU/g  pektin)  dapat menurunkan  viskositas  dari  3,58  menjadi 0,97  mPas.  Namun,  nilai  viskositas semakin menurun dengan semakin tingginya  konsentrasi  enzim  pektinase. Berbeda  dengan  penelitian  Jori et  al.,
(2015),  pada  sari  buah  penambahan  1% enzim      pektinase      dan      selulase viskositas      42,4      cP      lebih      tinggi dibandingkan  dengan  penambahan  0,5% enzim  pektinase  dan  selulase  nilai viskositas yaitu 34,9 cP.
Proses hidrolisis pektin dengan enzim pektinase menjadikan struktur pektin lebih sederhana. Enzim poligalakturonase
mampu  memutus  ikatan  α-1,4-glikosidik yang terdapat pada pektin. Enzim poligalakturonase  dibagi  menjadi  terdiri atas dua jenis yaitu ekso poligalakturonase dan  endo  poligalakturonase.  Hidrolisis enzim  poligalakturonase  mempengaruhi viskositas
berdasarkan letak
pemotongannya.  Hidrolisis  pada  rantai tengah  lebih  terlihat  pengaruhnya  dalam menentukan
viskositas apabila dibandingkan  dengan  pemotongan  pada bagian ujung rantai (Pedrolli et al ., 2009). Menurut  penelitian  Tu et  al (2013), penggunaan enzim endo poligalakturonase 4  U/ml  pada  klarifikasi  sari  buah  pepaya menurunkan  viskositas  sebesar  17,6%. Pada  hidrolisis  pektin,  adanya  pektin- protein yang memiliki kemampuan memegang  kapasitas  air  yang  tinggi  dan mengembangkan  struktur  kohesi  jaringan. Hidrolisis  pektin  yang  menyebabkan kapasitas  daya  ikat  air  menjadi  menurun dan  air  bebas  dilepaskan  ke  sistem sehingga  viskositas  sari  buah  menurun (Singh et al., 2012).

## 3. Total Padatan Terlarut
Total  padatan  terlarut  menunjukkan bahan-bahan  yang  dapat  larut  dalam larutan.  Komponen-komponen  tersebut dalam  buah  berupa  glukosa,  fruktosa, sukrosa dan protein yang larut air (pektin) (Farikha  dkk.,  2013).  Nilai  total  padatan terlarut suatu larutan dapat  diukur menggunakan hand  refraktometer (Ihsan dan  Wahyudi,  2010).    Total  padatan terlarut    pada  daging  buah  naga  super merah  yaitu  38,65  ±  0,31  (Barcelon dkk.,  2015).
Total padatan terlarut dalam pembuatan  sirup  tinggi,  dikarenakan adanya  penambahan  sukrosa  (Susanto,
2011). Menurut Standar Nasional
Indonesia (SNI) 01-3544-1994, kadar gula minimum  pada  sirup  yaitu  mutu  I  65  % dan  mutu  II  55%.  Menurut  Pratama dkk.,(2013),  total  padatan  terlarut  pada sirup  di  pasaran  yaitu  mencapai  68,4 °Brix.
Total  padatan  terlarut  pada  hasil klarifikasi  sari  buah  naga  super  merah dalam pembuatan sirup mengalami peningkatan  seiring  dengan  pertambahan konsentrasi  enzim.  Peningkatan  total padatan  terlarut  dapat  menjadi  indikator dalam  pemutusan  rantai  selulosa  oleh enzim  selulase  yang  menghasilkan  gula- gula  sederhana.  Selain  itu,  total  padatan terlarut  yang  tinggi mengindikasikan adanya pemecahan pektin menjadi struktur    yang  lebih  sederhana.  Hasil analisis  total  padatan  terlarut  pada klarifikasi  sari  buah  naga  super  merah dalam  pembuatan  sirup  dapat dilihat pada Tabel 5 .
Penambahan enzim poligalakturonase dan selulase  maupun kombinasi keduanya berpengaruh  nyata  dan  terdapat  interaksi antara kedua enzim terhadap total padatan terlarut sirup buah naga super merah yang dihasilkan. Penambahan enzim poligalakturonase dan enzim selulase serta kombinasi  keduanya  secara  umum  dapat meningkatkan  total  padatan  terlarut  sirup buah  naga  super  merah  terlihat  pada Tabel  5 .  Nilai  total  padatan terlarut  sirup berkisar antara
39,7-42,6°Brix.
Peningkatan  konsentrasi  kedua  enzim mempengaruhi  kenaikan  total    padatan terlarut.    Hal    tersebut  terlihat  pada penambahan enzim poligalakturonase 0,09%  (42,6°Brix)  dan  enzim  selulase 0,13%  (42,1°Brix)  dibandingkan  dengan penambahan enzim poligalakturonase 0,1%  (41,4°Brix)  dan  enzim  selulase 0,16% (41,8°Brix).
Peningkatan    total    padatan    terlarut pada      klarifikasi      sari      buah      naga
super   merah   baik   dengan penambahan enzim  poligalakturonase,  enzim  selulase dan  kombinasi  kedua  enzim.  Konsentrasi enzim  dalam  hal  ini  tidak  memberikan pengaruh  yang  signifikan.  Selain  itu, peningkatan  total  padatan  terlarut  terjadi pada  penelitian  Arsad et  al (2015)  yaitu pada  sari  buah  aren  dengan  penambahan enzim  pektinase,  enzim  selulase  maupun kombinasi  keduanya  dapat  meningkatkan nilai total padatan terlarut apabila dibandingkan dengan kontrol.
Menurutnya,  hal  tersebut  terjadi  karena adanya  kenaikan    gula  terlarut  yang merupakan  hasil  dari  konversi  pektin terlarut oleh enzim pektinolitik dan enzim selulase dalam hidrolisisnya menghasilkan gula.
Penambahan enzim poligalakturonase mengakibatkan pemecahan pektin menjadi asam galakturonat. Semakin banyak pemecahan  pektin  dapat  meningkatkan terbentuknya  asam  galakturonat.  Prinsip kerja enzim poligalakturonase
menghidrolisis ikatan α-1,4-glikosidik menjadi D- galakturonat   pada   substansi pektin      rantai      acak.      Asam galakturonat merupakan gula reduksi yang termasuk dalam komponen padatan terlarut  sehingga,  dapat  meningkatkan nilai  total  padatan  terlarut  (Pedrolli et  al ., 2009).
Penambahan  enzim  selulase  yang dalam bentuk endo-β-1,4-glukanase bekerja  dengan  memotong  secara  acak pada  sisi  internal  dari rantai selulosa dan menghasilkan oligosakarida dengan panjang  rantai  yang  bervariasi  sehingga menghasilkan  ujung  rantai  baru.  Hal tersebut berefek pada berkurangnya rantai polisakarida dan terjadi peningkatan gula pereduksi secara bertahap  (Le et  al .,  2012).  Peningkatan gula  pereduksi  mengakibatkan  nilai  total padatan  terlarut  sirup  buah  naga  super merah meningkat.
Tabel  5 Hasil  Analisis  Total  Padatan Terlarut  pada Klarifikasi Sari  Buah Naga Super Merah dalam  Pembuatan Sirup dengan Penambahan Enzim Poligalakturonase  dan Selulase
(°Brix) Enzim Selulase (S) Enzim Poligalakturonase (PG) Rata-rata 0% (A 0 ) 0,06% (A 1 ) 0,09% (A 2 ) 0,1% (A 3 ) 0% (B 0 ) 35,3 40,8 42,2 40,7 39,7 a 0,1% (B 1 ) 41,0 41,3 43,5 41,3 41,8 b 0,13% (B 2 ) 42,0 42,1 42,7 41,5 42,1 c 0,16% (B 3 ) 41,1 42,0 42,1 41,9 41,8 Rata-rata 39,9 A 41,6 C 42,6 D 41,4 B
Keterangan  :  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada  baris  dan  kolom  yang  sama  menunjukkan beda nyata pada  α= 0,05. Sig. PG = 0,000; sig . S = 0,000; sig PG*S = 0,000; R squared = 0,991 Menurut Vinjamuri (2015), peningkatan   TPT   berkaitan    erat  dengan derajat  pemecahan  jaringan,  komponen seperti  gula  pada  proses  ini  cenderung lebih banyak yang dilepaskan.
Berdasarkan  hal  tersebut,  kombinasi kedua enzim dapat menghasilkan pemecahan komponen pektin dan selulosa secara  bersamaan  dibandingkan  dengan menggunakan  satu  enzim  saja.  Hal tersebut  mengakibatkan  semakin  banyak terbentuknya  gula  sederhana  yang  akan berkontribusi dalam kenaikan total padatan  terlarut  sirup  buah  naga  super merah.
4. Transmitansi Transmitansi merupakan perbandingan  intensitas  cahaya  yang ditransmitansikan  dengan  cahaya  datang. Nilai  transmitansi  merupakan  parameter penting untuk mengetahui tingkat kejernihan atau kekeruhan sirup. Semakin tinggi  nilai  transmitansi,  maka  tingkat kejernihan  semakin  tinggi  atau  tingkat kekeruhan semakin  rendah (Sharma et  al., 2014). Nilai transmitansi diukur menggunakan  spektrofotometer  dengan panjang gelombang 535 nm. Hasil analisis transmitansi  pada  klarifikasi  sari  buah naga  super  merah  dalam  pembuatan  sirup dapat dilihat pada Tabel 6 . Penambahan enzim poligalakturonase dan  enzim  selulase  maupun  kombinasi keduanya  berpengaruh  nyata  dan  terdapat interaksi  antara  kedua  enzim  terhadap nilai  transmitansi  sirup  buah  naga  super merah  yang  dihasilkan.  Penambahan enzim poligalakturonase dan enzim selulase  serta  kombinasi  keduanya  secara
umum dapat meningkatkan nilai transmitansi  sirup  buah  naga  super merah  terlihat  pada Tabel  6 .  Nilai transmitansi  sirup  berkisar  antara  56,7- 72  %T.  Peningkatan  konsentrasi  kedua enzim  mempengaruhi  kenaikan  nilai transmitansi.  Hal  tersebut  terlihat  pada penambahan enzim poligalakturonase 0,06%  (72  %T)  dan  enzim  selulase 0,1% (71%T) menghasilkan nilai transmitansi  lebih  tinggi  dibandingkan dengan penambahan enzim poligalakturonase  0,09%  (60,5  %T)  dan enzim selulase 0,13% (61,6 %T). Peningkatan nilai
transmitansi disebabkan  adanya  kerja  spesifik  enzim dalam  menghidrolisis  pektin dan selulosa. Penambahan enzim poligalakturonase mengakibatkan pemecahan pektin menjadi asam galakturonat. Semakin banyak pemecahan  pektin  dapat  meningkatkan terbentuknya  asam  galakturonat.  Prinsip kerja enzim
poligalakturonase menghidrolisis      ikatan      α-1,4-glikosidik menjadi   D-galakturonat    pada substansi pektin rantai acak (‘Aliaa et al ., 2010).
Menurut  Utami  dkk.,  (2015),  sari buah  yang  baru  diekstrak  kaya  akan partikel  yang  tidak  larut  ( cloud  particles ) yang sebagian besar terbentuk dari pektin. Di  partikel  ini  nukleus  protein  yang bermuatan  positif  dilapisi  oleh  molekul pektin  yang  bermuatan  negatif  yang berkontribusi  memberikan  efek  keruh pada  sari  buah  ( cloudiness ).  Dengan adanya  pektinase  yang  menghidrolisis pektin  maka  molekul  yang  bermuatan negatif  pun  juga  terhidrolisis  sehingga kekeruhan sari buah akan berkurang.
Tabel  6 Hasil  Analisis  Transmitansi  Klarifikasi  Sari  Buah  Naga  Super  Merah    dalam Pembuatan    Sirup    dengan    Penambahan    Enzim  Poligalakturonase  dan  Selulase (%T)
Enzim Selulase (S) Enzim Poligalakturonase (PG) Rata-rata 0% (A 0 ) 0,06% (A 1 ) 0,09% (A 2 ) 0,1% (A 3 ) 0% (B 0 ) 50,0 0,53 62,6 0 66,8 71,6 62,8 b 0,1% (B 1 ) 71,9 0,23 77,2 66,2 68,7 71,0 d 0,13% (B 2 ) 54,5 0,42 70,4 49,4 72,2 61,6 a 0,16% (B 3 ) 50,3 0,38 77,9 59,7 74,4 65,6 c Rata-rata 56,7 A 72,0 D 60,5 B 71,7 C
Keterangan  :  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada  baris  dan  kolom  yang  sama  menunjukkan beda nyata pada  α= 0,05. Sig. PG = 0,000; sig . S = 0,000; sig PG*S = 0,000; R squared = 0,999.
Nilai transmitansi berbanding terbalik dengan  viskositas  sari  buah  jeruk,  karena semakin rendah viskositas  sari  buah  maka semakin tinggi  nilai  transmitansinya.   Hal ini    disebabkan    oleh    kerja    spesifik masing-masing  enzim  dalam  memecah pektin    dan  selulosa.  Sehingga  dapat mengurangi  kekeruhan  dalam  sari  buah dan  meningkatkan  kejernihan  sari  buah. Penelitian Widowati et  al .,  (2017) menyebutkan  bahwa,  penggunaan  variasi konsentrasi enzim pektinase dapat mengurangi  kekeruhan  pada  klarifikasi sari  buah  jeruk. Menurut Widowati et  al .,
(2016),    selulosa  merupakan  polimer glukosa  dengan  ikatan  1,4-β.  Enzim selulase  akan  menghidrolisis  selulosa menjadi  gula-gula  sederhana,  sehingga ikatan  yang  mengikat glukosa akan hilang dan  dapat  mengurangi  kekeruhan  dalam klarifikasi sari buah naga dalam pembuatan sirup.
Berdasarkan hasil analisis pH, viskositas,  total  padatan  terlarut  dan transmitansi  pada  klarifikasi  sari  buah naga  super  merah  dalam  pembuatan  sirup terdapat  keterkaitan  antara  keempat  uji. Penurunan  pH  dapat  disebabkan  proses hidrolisis  pektin  yang  membentuk  asam galakturonat  dan  asam  karboksilat.  Asam galakturonat  dalam  hal  ini  termasuk dalam  jenis  gula  reduksi  yang  merupakan komponen  padatan  terlarut.  Di  samping itu, hasil dari hidrolisis selulosa merupakan  gula-gula  sederhana,  dengan kombinasi  kedua  hal  tersebut  dapat
meningkatkan  total  padatan  terlarut  pada sirup.  Semakin  banyaknya  pektin  dan selulosa  yang  terhidrolisis  maka  semakin banyak  terbentuk  molekul  yang  lebih sederhana. Sehingga partikel yang mengendap menurun dan tingkat kekeruhan turun dan meningkatkan kejernihan  sirup.  Hal  tersebut  yang mengakibatkan peningkatan nilai
transmitansi. Hidrolisis pektin dan selulosa juga menyebabkan reduksi kapasitas  mengikat  air.  Air  bebas  akan dilepaskan ke dalam sistem yang mengakibatkan
menurunnya nilai viskositas.

## Pemilihan Perlakuan Terbaik
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui  pengaruh  penambahan  enzim poligalakturonase  isolat  bakteri Bacillus licheniformis GD2a  AR2  konsentrasi  0%; 0,06%;  0,09%  dan  0,1%  dengan  enzim selulase  isolat  bakteri Bacillus  subtilis Krakarya_1 S6 0%; 0,1%; 0,13% dan 0,16% terhadap  klarifikasi  sari  buah  naga  super merah  dalam  pembuatan  sirup.  Hasil  dari perlakuan  kombinasi  kedua  enzim  tersebut dibandingkan  dengan  perlakuan  kontrol, sehingga  didapatkan  perlakuan  terbaik. Perlakuan terbaik dipilih berdasarkan pertimbangan  hasil  parameter  uji  meliputi pH,  total  padatan  terlarut,  transmitansi  dan viskositas.  Penentuan  konsentrasi  terbaik pada  klarifikasi  sari  buah  dalam  pembuatan sirup dapat dilihat pada Tabel 7 .
Tabel 7 Penentuan Konsentrasi Terbaik
Sampel Sirup Buah Naga pH TPT (°Brix) %T Viskositas (cP) PG 0% + S 0%(Kontrol) 4,28 cd 35,3 a 50 b 10,7 b 0 PG 0% + S 0,1% 4,36 e 41 bcd 71,9 j 15,0 g 0 PG 0% + S 0,13% 4,34 e 42 f 54,5 c 14,6 f 0 PG 0% + S 0,16% 4,31 d 41,1 cd 50,3 b 12,4 de 0 PG 0,06% + S 0% 4,27 bc 40,8 bc 62,6 e 12,4 de 0 PG 0,06% + S 0,1% 4,28 cd 41,3 de 77,2 l 12,2 d 0 PG 0,06% + S 0,13% 4,28 cd 42,1 f 70,4 i 12,7 e 0 PG 0,06% + S 0,16% 4,25 abc 42 f 77,9 m 10,8 b 2 PG 0,09% + S 0% 4,24 ab 42,2 f 66,8 g 11,7 c 1 PG 0,09% + S 0,1% 4,24 ab 43,5 h 66,2 f 10,6 ab 3 PG 0,09% + S 0,13% 4,22 a 42,7 g 49,4 a 10,8 b 1 PG 0,09% + S 0,16% 4,23 a 42,1 f 59,7 d 10,7 b 1 PG 0,1% + S 0% 4,24 ab 40,7 b 71,6 j 10,2 a 2 PG 0,1% + S 0,1% 4,23 a 41,3 de 68,7 h 10,6 ab 2 PG 0,1% + S 0,13% 4,22 a 41,5 e 72,2 j 10,5 ab 2 PG 0,1% + S 0,16% 4,22 a 41,9 f 74,4 k 10,2 a 2
Keterangan :
- Notasi huruf  yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada α = 0,05 - PG = Enzim Poligalakturonase dan S = Enzim Selulase
Berdasarkan      hasil      penelitian      yang telah      dilakukan      didapatkan  konsentrasi terbaik dari kombinasi enzim
poligalakturonase dan selulase pada klarifikasi  sari buah  naga super  merah dalam pemnbuatan sirup. Konsentrasi terbaik dipilih  menurut  interaksi  terhadap  semua parameter uji kemudian diberikan bobot skor. Penambahan enzim poligalakturonase dengan konsentrasi  0,09%    dan    enzim    selulase konsentrasi    0,1%    memiliki    bobot    skor tertinggi sehingga dipilih sebagai  konsentrasi terbaik.
Penambahan kombinasi enzim
poligalakturonase dan selulase pada parameter  pH    terdapat    pengaruh    nyata. Penambahan    kedua    enzim    tersebut menghasilkan    penurunan    pH    yang disebabkan    oleh    kinerja    enzim    pada hidrolisis  substrat  masing-masing.  Nilai  pH yang  diperoleh  pada  pemilihan  konsentrasi terbaik  tersebut  yaitu  4,24,  masih  mendekati nilai  pH  buah  naga  super  merah  pada umumnya yaitu 4,7-5,1.
Penambahan
kombinasi enzim poligalakturonase  dan  enzim  selulase  pada parameter  viskositas  menunjukkan  adanya pengaruh  yang  nyata  terhadap  peningkatan nilai  viskositas.  Semakin  rendah  nilai
viskositas,  maka  tingkat  semakin    encer sirup    buah    naga    super    merah.    Pada pemilihan  konsentrasi terbaik diperoleh nilai viskositas  sirup  buah  naga  super  merah sebesar 10,2 cP menurun apabila dibandingkan    dengan    kontrol    yaitu    10,7 cP,    interaksi  keduanya  berpengaruh  nyata. Penambahan enzim  mengakibatkan  hidrolisis pektin  sehingga  kapasitas  daya  ikat  air menurun  dan  air  bebas  dilepaskan  ke  sistem dan menyebabkan viskositas menurun (Singh et al ., 2012). Enzim selulase akan menghidrolisis  selulosa,  kemudian  menjadi selobiosa  dan  hasil  akhirnya  adalah  glukosa (Sharma et  al .,  2014).  Semakin  banyak pektin  dan  selulosa  yang  terhidrolisis mengakibatkan semakin menurunnya viskositas. Penambahan kombinasi enzim poligalakturonase dan selulase pada parameter  total  padatan  terlarut  terdapat pengaruh  nyata.  Secara  keseluruhan  nilai total  padatan  terlarut  mengalami  kenaikan. Menurut Arsad et al., (2015) yaitu penambahan enzim pektinase, enzim selulase,  dan  kombinasi  keduanya  dapat meningkatkan nilai total padatan terlarut jika dibandingkan  dengan  kontrol.  Menurutnya hal  tersebut  terjadi  karena  adanya  kenaikan
gula  terlarut  yang  merupakan  hasil  dari konversi pektin terlarut oleh enzim pektinolitik.  Selain  itu,  hidrolisis  selulosa menghasilkan  molekul-molekul  gula  yang sedcerhana    yang    memberikan    pengaruh pada    peningkatan    total    padatan  terlarut. Pemilihan  perlakuan terbaik  untuk  nilai  total padatan  terlarut  yang  mempunyai  nilai tertinggi  dibandingkan  dengan  kontrol  yaitu 43,5°Brix  sedangkan  total  padatan  terlarut kontrol yaitu 35,3°Brix.
Penambahan kombinasi enzim
poligalakturonase dan selulase pada parameter transmitansi menunjukkan adanya  pengaruh  yang  nyata  terhadap peningkatan  nilai  transmitansi.  Semakin tinggi  nilai  transmitansi,  maka  tingkat kecerahan  sirup  buah  naga  super  merah semakin tinggi. Selulosa  dapat menyebabkan tingkat    kekeruhan    pada    sari    buah    dalam pembuatan    sirup,  dengan  adanya  enzim selulose dapat menghidrolisis selulosa sehingga  dapat  meningkatkan  kecerahan pada  sirup  yang  dihasilkan  (Kanmani  dkk., 2011).  Perlakuan  terbaik  pada  parameter transmitansi  diperoleh  nilai  transmitansi sebesar  66,2  %T  lebih  tinggi  dibandingkan dengan kontrol (50%T).

## KESIMPULAN
Penambahan  enzim  poligalakturonase isolat  bakteri Bacillus  licheniformis GD2a AR2,  enzim  selulase  isolat  bakteri Bacillus subtilis Krakarya_1  S6  dapat  menurunkan pH,  meningkatkan  total  padatan  terlarut, meningkatkan  transmitansi  dan  menurunkan viskositas.
Penambahan
enzim poligalakturonase dan selulase pada klarifikasi  sari  buah  naga  super  merah menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata  pada semua  parameter.  Konsentrasi    terbaik    hasil klarifikasi    sari    buah    naga    super    merah dalam pembuatan sirup terdapat pada sampel dengan penambahan 0,09 % enzim poligalakturonase  isolat  bakteri Bacillus licheniformis GD2a  AR2  dan  0,1  %  enzim selulase  isolat  bakteri Bacillus  subtilis Krakarya_1 S6.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbès,  F.,  Bouaziz,  M.I.,  Blecker,  C.,
Masmoudi,  M.,  Attia,  H.,  Besbes,  S.
(2011). Date Syrup: Effect of Hydrolytic Enzymes (Pectinase/Cellulase) on Physicochemical Characteristics, Sensory  and  Functional  Properties. Journal Food Science and Technology ,44 (1): 1827-1834.
Akbar,  A.,  Paindoman,  R.,  Coniwanti,  P.
(2013).  Pengaruh  Variabel  Waktu  dan Temperatur  terhadap  Pembuatan  Asap Cair  dari  Limbah  Kayu  Pelawan ( Cyanometra  cauliflora ). Jurnal  Teknik Kimia , 1 (19): 1-8.
Akesowan,  A.,  Choonhahirun,  A.  (2013).
Effect  of  Enzyme  Treatment  On  Guava Juice Production Using Response Surface  Methodology. Journal  Animal
Plant Science , 23 (1): 114-120.
‘Aliaa,  A.R.N.,  Mazlina,    M.K.S.,  Taip,
F.S.  ( 2010).    Impact  of  Commercial Pectolytic Enzymes on Selected
Properties  of  White Dragon Fruit  Juice . The Institation of Engineers Journal , 17 (4): 25-31.
Arsad,  P.,  Sukor,  R.,  Wam  Ibadullah,  WZ., Mustapha,  NA.,  Meor  Hussin,  AS.
(2015). Effects of  Enzymatic Treatment on Physicochemical Properties of Sugar Palm  Fruit  Juice. International  Journal on  Advanced  Science  Engineering Information Technology , 5 (5): 308-312.
Barcelon,  E.,  Carreon,  L.,  Guillermo,  J.,
Jacob,  E.,  Jocson,  S.,  Panopio  J.  G., Rosalinas,      S.      (2015).  Consumer Acceptability and Physico-chemical Content  of  Red  Flesh  Dragon  Fruit Spread. Australian  Journal  of  Basic and Applied Sciences, 9 (2): 18-21.
Badan    Standarisasi    Nasional  (BSN).
(1994). SNI    01-3544-1994    Sirup . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Farikha,    I.N.,  Anam,  C.,  Widowati,  E.
( 2013). Pengaruh Jenis dan Konsentrasi  Bahan  Penstabil  Alami terhadap  Karakteristik  Fisikokimia  Sari
Buah Naga Merah ( Hylocereus polyrhizus ) Selama Penyimpanan . Jurnal Teknosains Pangan , 2 (1): 30-38.
Hadiwijaya,    H.    (2014).    Pengaruh Perbedaan  Penambahan  Gula  terhadap Karakteristik        Sirup        Buah        Naga Merah (Hylocereus        polyrhizus) . Jurusan  Teknologi  Hasil  Pertanin. Universitas
Andalas, Padang. Repository Unand.
Harvey,  F.I.W.,  Januar,  J.,  Kusmiati,  A. (2009).  Trend  Produksi  dan  Prospek Pengembangan  Komoditas  Buah  Naga di  Kabupaten  Jember. Jurnal  SEP ,  3 (2): 71-78.
Ihsan,  F. ,   W ahyudi,  A.  ( 2010).  Teknik Analisis  Kadar  Selulosa  pada  Buah Pepaya. Buletin  Teknik  Pertanian ,  15 (1): 10-12.
Jori,  D.B.,  Pawar,  A.V.,  Kudake,  D.C. (2015) . Multienzymatic  Clarification  of Blended    Pineapple    and    Mango    Pulp Using  Response  Surface Methodology . International  Journal  of  Advanced Biotechnology  and  Research ,  6 (1):  49- 56.
Kanmani,  R.,  P.  Vijayabaskar,  dan  S. Jayalakshmi. (2011). Sachaarification of Banana-agro Waste and Clarification of Apple  Juice  by  Cellulase  Enzyme Produced  from Bacillus  pumilis . World Applied Sciences Journal 12(11): 2120- 2128.
Kothari,  M.N.,  Kulkarni,  J.A.,  Maid,  P.M., Baig,  M.M.V.  (2013).  Clarification  of Apple  Juice  by  Using  Enzymes  and Their Mixture .  World  Research Journal of Biotechnology , 1 (2): 29-31.
Kristanto D. ( 2008). Buah Naga, Pembudidayaan  di  Pot  dan  di  Kebun . Penebar Swadaya. Jakarta.
Le,  T.T.,  Nguyen,  V.P.T.,  Lee  V.V.M. (2012). Application of Cellulase Preparation  to  Guava  Mash  Treatment in  Juice  Processing:  Optimization  of Treatment  Conditions  by  RSM. Asian Journal  of  Food  and  Agro-  Industry, 5 (4): 284-291.
Li, Q., Anthony. M., Coffman, Lu-Kwang Ju. 2015.  Development  of  reproducible assays for polygalacturonase and pectinase. Journal Enzyme and Microbial Technology 72: 42-48.
Pedrolli,  D.B.,  Monteiro,  A.C.,  Gomes,  E., Carmona,  E.C.  (2009).  Pectin  and
Pectinases: Production, Characterization and  Industrial  Application  of  Microbial Pectinolytic Enzymes. The Open
Biotechnology Journal, 3 (9): 9-18.
Phuong,  T.N.M.  (2014).  Application  of Hydrolytic  Enzymes  for  Improvement of  Red  Dragon  Fruit  Juice  Processing .
The School of Biotechnology, International University. Pinheiro, V.E., Desagiacomo, C.C.V., Michelin,  M.,  Maller,  A.,  Monteiro, L.M.O.,  Jorge,  J.A.,  Maria  de  Lourdes Teixeira  de  Moraes  Polizeli.  ( 2017). Neosartorya  Glabra  Polygalacturonase Produced  from  Fruit  Peels  as  Inducers has  the  Potential  for  Application  in Passion Fruit and Apple Juices. Brazilian  Journal  of  Food  Technology,
ISSN 198 1-6723: 45-50.
Pratama,  S.  B.,  Wijana,  S.,  Febrianto,  A.
(2013). Studi Pembuatan Sirup Tamarillo  (Kajian  Perbandingan  Buah dan  Konsentrasi  Gula. Jurnal  Industria 1(3): 181-194.
Pratomo.  2008. Superioritas  Jambu  Biji  dan Buah Naga . http://www.unika.ac.id/pasca/pmpt/?p= 5.  (Diakses  pada    tanggal  12  Agustus 2020). Sasanto,  W.H.,  Setyohadi,  B.R.  (2011). Pengaruh Varietas Apel ( Malus sylvestris )  dan  Lama  Fermentasi  oleh Khamir Saccharomyces cerivisiae sebagai Perlakuan Pra-Pengolahan terhadap  Karakteristik  Sirup. Jurnal Teknologi Pangan , 12 (3): 771-775.
Sharma, P. K., Chand, D. (2012). Pseudomonas sp. Xilanase for Clarification  of  Mozambi  and  Orange Fruit  Juice. International  Journal  of Advancement in Research & Technology, 21 (1): 1-14.
Sharma,  H.  P.,  Patel,  H.,  Sharma,  S.  (2014).
Enzymatic  Extraction  and  Clarification of Juice From Various Fruits-A Review .
Trends  in  Post  Harvest  Technolog y, 2(1) , 1-14. https://doi.org/10.1080/10408398.2014. 977434.
Sinatari,  H.  M.,  Aminin,  A.L.N.,  Sarjono, P.R.  (2013).  Pemurnian  Selulase  dari Isolat  Kb  Kompos  Termofilik  Desa Bayat  Klaten  Menggunakan  Fraksinasi Amonium  Sulfat. Chem  Info 1(1):  130-
140.
Singh,  A,  Sanjay  K,  H.K.  Sharma.  (2012). Effect  of  Enzymatic  Hydrolysis  on  the Juice  Yield  from  Bael  Fruit (Aegle maemelos  Correa) Pulp . American Journal of Food Technology , Vol. 7 No.
9: 64.
Tu, Tao., Kun Meng., Yingguo Bai., Pengjun Shi.,  Huiying  Luo.,  Yaru  Wang., Peilong  Yang.,  Yuhong  Zhang.,  Wei Zhang  dan  Bin  Yao.  (2013).  High-
Yield Production
of a Low- Temperature-Active  Polygalacturonase for  Papaya  Juice  Clarification. Food Chemistry Journal , 141 (3): 33-35.
Utami, R., Widowati, E., Rahayu, A. (2015). Screening dan Karakterisasi Pektinesterase  Sebagai  Enzim  Potensial dalam  Klarifikasi  Sari  Buah  Jeruk
Keprok  Garut  ( Citrus  nobilis var. chrysocarpa). Jurnal  Agritechnology 35
(4): 422-433.
Vinjamuri,  S.  (2015).  Optimization  Studies on  Enzymatic  Clarification  of  Mixed Fruit  Juices .  International  Journal  of Latest  Trends  in  Engineering  and Technology , 5 (2): 22-25.
Wahlstrom, R. ( 2014). Enzymatic
Hydrolysis  of  Cellulose  in  Aqueous Ionic  Liquids. VTT  Technical  Research Centre of Finland.
Widowati,  E.,  Utami,  R.,  Nurhartadi,  E., Putro,  R.  R.  M.  (2016).  Screening  and Characterization  of  Cellulose  Enzyme in Sweet Orange ( Citrus  sinensis ) Juice Clarification.  Proceeding.  The  Sixth
Indonesian  Biotechnology  Conference: 397-403.
Widowati,E.,  Utami,  R.,  Khalistyatika,  K. (2017).  Screening  and  Characterization pf Polygalacturonase as Potential
Enzyme  for  keprok  Garut  orange ( Citrus  nobilis var  chrysocarpa)  Juice Clarification. Journal of Physics:
Conference of Series 909 (1), 012088.
Yin  L,  Lin  H,  Xiao  Z.  (2010).  Purification and  Characterization  of  a  Cellulose from Bacillus  subtilis YJ1. J  Marine Science Technol, 18 (3): 43-46.