## UJI AKTIVITAS ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK, FRAKSI
METANOL DAN FRAKSI N-HEKSAN DAUN KETAPANG ( Terminalia catappa ) PADA TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI ALOKSAN
ANTIHYPERGLYCHEMIC ACTIVITY TEST OF EXTRACT, METHANOL FRACTION AND N-HEKSAN FRACTION OF KETAPANG LEAF (Terminalia catappa) IN ALLOXAN-INDUCED WHITE RATS
1 Rachma Nurhayati * , 2 Ita Rahmawati # Fakultas Farmasi, Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Submitted:2022-09-04 Accepted : 2023-05-16 Publish Online : 2023- 06-15 Latar  belakang: Daun  ketapang  ( Terminalia  catappa) merupakan  salah  satu jenis tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional yang berpotensi memiliki  aktivitas  menurunkan  kadar  gula  darah  tubuh. Tujuan: Mengetahui aktivitas  ekstrak  dan  fraksi-fraksi  daun  ketapang  dalam  menurunkan  kadar glukosa  darah  tikus  yang  diinduksi  oleh  aloksan. Metode: Penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  menggunakan  tikus  wistar  jantan sebagai hewan uji berjumlah 30 ekor terbagi atas 6 kelompok yaitu kelompok I kontrol  sehat,  kelompok  II  kontrol  negatif  (K-)  dengan  diberikan  larutan  Na CMC  0,5%,  kelompok  III  positif  (k+)  yang  diberikan  suspensi  metformin, kelompok IV, V, dan VI diberi ekstrak daun ketapang, fraksi metanol dan fraksi n-heksan. Hasil: Ekstrak  etanol  dan  fraksi  metanol  daun  ketapang  dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih karena mengandung senyawa flavonoid  yang  diduga  memiliki  aktivitas  antihiperglikemia. Kesimpulan: Fraksi metanol daun ketapang ( Terminalia catappa ) paling efektif menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih yang diinduksi aloksan.
Kata Kunci: Daun ketapang, Ekstrak, Fraksi, Antihiperglikemia

## Keywords:
Ketapang  leaf,  Extract, Fraction, Antihyperglychemic

## Abstract
Background: Ketapang  leaf  (Terminalia  catappa)  can  be  used  as  a  traditional medicine that has the potential activity to reduce blood glucose levels in the body. Objective: To determine the activity of extracts and fractions of ketapang leaves in reducing blood glucose levels of rats induced by alloxan. Methods: This study was an  experimental  study  using  30  male  wistar  rats  as  test  animals  divided  into  6 groups. Group I was healthy control, group II was negative control (K-) that given 0.5% Na CMC solution, group III was positive control (k+) that given metformin suspension,  groups  IV,  V,  and  VI  were  given  ketapang  leaf  extract,  methanol fraction  and  n-hexane  fraction,  respectively. Results: The  ethanol  extract  and methanol fraction of ketapang leaves can reduce blood glucose levels in white rats because  they  contain  flavonoid  compounds  which  are  thought  to  have antihyperglycemic  activity. Conclusions: The  methanol  fraction  of  ketapang leaves (Terminalia catappa) was most effective in reducing blood glucose levels in alloxan-induced white rats.
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023

## PENDAHULUAN
Diabetes  Melitus  (DM)  merupakan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  meningkatnya  kadar gula darah melebihi batas normal, dan termasuk dalam kategori penyakit menahun atau kronis. DM  terjadi  karena  adanya  kerusakan  di  pankreas  atau  produksi  insulin  menurun  yang mengakibatkan  peningkatan  kadar  gula  darah  atau  resistensi  insulin.  Organisasi  International Diabetes  Federation  (IDF)  menyatakan  bahwa  ada  463  juta  orang  usia  20-79  tahun  di  dunia yang  menderita  diabetes  pada  tahun  2019  dengan  angka  prevelensi  sebesar  9,3%  dari  total penduduk  yang  sama.  Prevelensi  diabetes  diperkirakan  meningkat  seiring  penambahan  umur penduduk  menjadi  19,9%  atau  111,2  juta  orang  pada  umur  65-79  tahun.  Angka  prevelensi  ini diprediksi terus meningkat hingga mencapai 578 juta ditahun 2030 dan 700 juta di tahun 2045. Wilayah Asia Tenggara dimana Indonesia berada, menempati peringkat ke 3 dengan prevelensi sebesar 11,3%. Indonesia sendiri berada pada peringkat ke-7 dunia  di antara 10 negara dengan jumlah  penderita  terbanyak  yaitu  sebesar  10,7  juta  (Kementrian  kesehatan  republik  indonesia, 2020).
Berdasarkan  data  diatas  upaya  untuk  pencegahan  DM  dilakukan  dengan  cara  pemberian obat  kimia,  akan  tetapi  pemberiaan  obat  kimia  memberikan  efek  samping  apabila  dikonsumsi dalam jangka panjang. Untuk itu diperlukan  suatu pengobatan alternatif yang dapat  membantu menurunkan kadar gula darah yang tinggi, salah satunya dengan penggunaan obat herbal. Salah satu tanaman yang dapat digunakan adalah daun ketapang (Terminalia catappa). Daun ketapang (Terminalia  catappa) diduga  memiliki  potensi  menurunkan  gula  darah  (Jena  Hayu  Widyasti, 2019)  karena  mengandung  senyawa  flavonoid.  Flavonoid  dapat  menurunkan  kadar  gula  darah dengan berperan sebagai inhibitor enzim  glukosidase, maltase dan  amylase. Flavonoid juga mampu menstimulasi pengambilan glukosa di otot melalui regulasi GLUT-4 (Anggraini, 2020). Tujuan dari penelitian ini untuk menentukan efektivitas ekstrak etanol, fraksi metanol dan fraksi n-heksan  daun  ketapang  dalam  menurunkan  kadar  gula  darah  pada  tikus  putih  yang  diinduksi aloksan.

## METODE PENELITIAN Bahan
Standar  kuersetin  (Sigma  Aldrich),  simplisia  daun  ketapang (Terminalia  catappa) (Materia Medika, Malang) , aloksan (Sigma Aldrich), tablet metformin 500 mg (Hexapharm Jaya), etanol 70%  pa  (Laboratorindo  Jaya  Pekasa),  aquades  (Dee  One  Lab,  Surabaya),  etil  asetat (PT.SmartLab,Indonesia),  n-Heksan  (PT.Smart-Lab  Indonesia),  HCl  (Laboratorindo  Jaya Pekasa),  NaCl  (PT.Smart-Lab,  Indonesia),  FeCl3  (Merck,  Germany),  H2SO4  (  Merck, Germany), asam asetat (Merck Germany), hewan coba tikus putih jantan ( Rattus novergicus ). Alat
Lempeng KLT silica gel 60 F 254 aluminium sheets 20 x 20 cm (Merck), bejana pengembang 10 x 10 cm (Camag), KLT scanner 3 dengan UV detektor (Camag), Linomat 5 (Camag), winCATS software versi 1.4.8.2012 (Camag), Glukometer dan Glukotest strip test (Easy Touch)
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023

## Metode Penetapan kadar air
Penetapan  kadar  air  menggunakan  metode  gravimetri.  Ditimbang  5  gram  serbuk  simplisia didalam  cawan  kurs  yang  telah  dipanaskan  kemudian  di  oven  pada  suhu  105˚c  selama  3  jam, kemudian di dinginkan di dalam desikator dan ditimbang hingga bobot tetap.

## Pembuatan ekstrak
Ekstraksi daun ketapang dilakukan dengan menambahkan etanol 70% sebanyak 5 liter ke dalam serbuk  daun  ketapang  500mg  dengan  perbandingan  pelarut  dengan  serbuk  1:10.  Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  maserasi  selama  5  hari.  Hasil  dari  maserasi  di  saring  dan  kemudian dievaporasi dengan alat rotary evaporator pada suhu 50˚C, untuk menguapkan pelarut sehingga di peroleh ekstrak kental daun ketapang.

## Pembuatan Fraksi Metanol dan n-Heksan Daun Ketapang
Ekstrak etanol kental daun ketapang dilarutkan dengan metanol dengan perbandingan 1 : 1. Fase metanol di fraksinasi dengan metode partisi cair-cair, proses ini dilakukan mengunakan corong pisah  dengan  pelarut  n-heksan.  Proses  tersebut  dilakukan  berulang  ulang  hingga  n-heksan menjadi jernih. kemudian di tampung dan diuapkan pelarutnya menggunakan waterbath.

## Uji bebas etanol
Sampel  diuji  bebas  etanol  70  %  dengan  penambahan  1  mL  asam  asetat  dan  1  mL  asam  sulfat pekat dibantu dengan pemanasan. Sampel dinyatakan bebas etanol bila tidak ada bau ester yang khas dari etanol.

## Skrining fitokimia
- Uji Alkaloid
Sampel ditimbang sebanyak 0,5 gram kemudian dimasukkan kedalam tabung reaksi, dilarutkan dengan  1  ml  HCL  2N  dan  9  ml  air,  dibagi  menjadi  3  bagian,  dapat  dikatakan  hasilnya  positif mengandung  alkaloid  apabila  ditambahkan  dengan  pereaksi  mayer  akan  membentuk  endapan putih  (putih  kekuningan),  dan  jika  ditambahkan  dengan  pereaksi  wanger  akan  menghasilkan endapan  coklat  dan  jika  ditambahkan  dengan  pereaksi  dragendrof  akan  menghasilkan  endapan merah jingga.
- Uji Saponin
Sampel ditimbang 0,5 gram kemudian dimasukkan  kedalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air  panas  dan  dikocok  selama  10  menit,  hingga  terbentuk  busa  atau  lebih  kemudian  ditetesi dengan HCL 2N, apabila buih tidak hilang dengan adanya penambahan HCL 2N maka ekstraksi tersebut positif mengandung saponin.
- Uji Tanin
Sampel  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  10  ml  air  panas  kemudian  dikocok, ditambahkan  20  ml  NaCl  10%  dan  disaring.  Filtrat  yang  dihasilkan  ditambahkan  FeCl3  dan apabila terjadi perubahan warna menjadi biru tua atau hitam maka positif mengandung tanin.
- Uji Flavonoid
Sampel  ditimbang  sebanyak  0,5  gram  kemudian  ditambahkan  dengan  etanol,  ditambahkan  5-6 tetes HCl pekat apabila menghasilkan warna merah berarti menunjukkan adanya flavonoid dan ada tidaknya senyawa flavon dapat ditandai dengan pembentukan warna orange.
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
- Uji Polifenol
Larutan  sampel  uji  sebanyak  1  ml  direaksikan  dengan  larutan  besi  (III)  klorida  10%,  apabila terjadi warna biru tua, biru kehitaman atau biru kehijauan maka menunjukkan adanya senyawa polifenol.
- Uji Steroid dan Triterpenoid
Sampel  ditambahkan  kloroform,  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat.  Hasil  positif terbentuk warna jingga/ungu untuk triterpenoid dan warna hijau untuk steroid.

## Identifikasi KLT
Uji  penegasan  flavonoid  dilakukan  dengan  metode  KLT-Densitometri.  Fase  gerak  yang digunakan  yaitu  kloroform-aseton-formiat  (60:15:5).  Plat  silika  gel  GF254  diaktivasi  dengan cara  dioven  pada  suhu  100ºC  selama  1  jam.  Bejana  kromatografi  sebelumnya  dijenuhi  dahulu dengan  fase  geraknya.  Sampel  kemudian  dilarutkan  dalam  metanol  dan  ditotolkan  dengan menggunakan  linomat  pada  lempeng  silika  gel  GF254.  Setelah  totolan  mengering,  lempeng KLT kemudian dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang telah jenuh dengan fase gerak, sehingga  terjadi  proses  elusi.  Lempeng  KLT  yang  telah  dielusi  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan. Plat kemudian diamati dengan densitometri.

## Penyiapan hewan uji
Hewan uji yaitu tikus putih diadaptasikan dengan lingkungan selama kurang lebih ± 1 minggu, dikandangkan  dengan  suhu  normal  selama  12  jam  serta  diberi  makan  dan  minum.  Hewan  uji dibagi  menjadi  6  kelompok  dan  setiap  kelompok  terdiri  dari  5  tikus.  Pengelompokan  dibagi menjadi kelompok I kontrol normal, kelompok II kontrol positif, kelompok III kontrol negatif, kelompok  IV  ekstrak,  kelompok  V  fraksi  metanol,  kelompok  VI  fraksi  n-heksan.  Sebelumnya tikus  ditimbang  dan  dilalukan  perhitungan  terlebih  dahulu  untuk  mengetahui  dosis  yang  akan diberikan. Selanjutnya hewan  uji dilakukan pengukuran kadar glukosa awal untuk memastikan semua  tikus  memiliki  kadar  glukosa  yang  normal  sebelum  diberikan  perlakuan.  Aloksan monohidrat diinjeksikan secara intraperitonial pada tikus dengan dosis 125 mg/KgBB, aloksan dapat  meningkatkan  keaadan  hiperglikemia  dalam  waktu  singkat  yaitu  1-3  hari  secara intraperitoneal.

## Pengukuran kadar gula darah
Pengambilan  darah  tikus  dilakukan  dengan  memotong  aliran  darah  vena  pada  ekor  dengan bantuan  disposable  syringe.  Darah  yang  keluar  dari  vena  ekor  tikus  diukur  kadar  glukosanya dengan glucometer Easy Touch® yang telah dikalibrasi. Pengambilan darah dilakukan sebanyak 3  kali  yaitu  pada  pengambilan  pertama  (T0)  (sebelum  perlakuan/  tikus  puasa),  pengambilan kedua (T1) (setelah 1 hari pemberian aloksan dan didiamkan selama 3 hari). Dan pengambilan ketiga (T2) ( setelah perlakuan ).

## Pengolahan dan analisis data
Semua  data  yang  telah  diperoleh  dianalisi  ditampilkan  dalam  bentuk  nilai  selisih.  Selanjutnya data  diolah  dan  dianalisis  menggunakan  uji  One  Way  ANOVA  dilanjutkan  dengan  uji  LSD untuk melihat beda nyata antar perlakuaan
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023

## HASIL PENELITIAN Penetapan Kadar Air
Penetapan  kadar air pada simplisia daun ketapang dilakukan untuk mengetahui kandungan air dalam simplisia daun ketapang. Hasil penetapan kadar air diperoleh rerata kadar air yaitu 8,2% sehingga memenuhi syarat mutu .

## Skrining Fitokimia
Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  daun  ketapang  mengandung  senyawa  flavonoid, alkaloid, tanin, saponin, dan polifenol
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia
Identifikasi KLT Ekstrak dan Fraksi Daun Ketapang ( Terminalia catappa )
Hasil uji penegasan flavonoid menggunakan KLT menunjukkan bahwa flavonoid ditemukan di ekstrak dan fraksi metanol daun ketapang, ditunjukkan dengan nilai Rf noda pada ekstrak dan fraksi metanol yang diduga adalah flavonoid dibandingkan dengan nilai Rf standar.
Tabel 2. Hasil Uji KLT Rf Area Standart kuersetin 0,949 0,01490 Ekstrak 0,941 0,01656 Fraksi Metanol 0,918 0,01943 Uji Senyawa Pereaksi Hasil Pengujian Keterangan Flavonoid Serbuk Mg + HCl Pekat Warna kuning + Alkaloid Dragendroff Mayer Wagner Endapan jingga
Endapan putih
Endapan coklat + Tanin Aquadest panas 10ml dikocok + NaCl 10% 20ml dan di saring. Filtrat ditambahkan FeCl 3 Hitam + Saponin Aquadest panas 10ml dan di kocok 10 menit hingga terbentuk busa kemudian ditetesi HCl 2N busa tidak hilang selama 30 detik busa tidak hilang selama 30 detik + Polifenol FeCl 3 10% Asam asetat anhidrat + H 2 SO 4 Biru kehitaman +
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
Selain membandingkan nilai Rf, juga dibandingkan spektra dari noda standar kuersetin dengan spektra pada ekstrak dan fraksi metanol.
Gambar 1. Spektra overlay standar kuersetin, fraksi metanol dan ekstrk daun ketapang
Tabel 3. Data Korelasi Spektra
Sampel Uji track Rf Ref. spectrum Korelasi Standard kuersetin 1 0,949 Tr.3, Rf 0,938 0,979502 Sampel ekstrak 2 0,941 Tr.1 Rf.0,949 0,830463 Sampel fraksi metanol 3 0,938 Tr.1 Rf. 0,949 0,979502
Pada  data  korelasi  spektra  yang  telah  dioverlay  menunjukkan  bahwa  spektra  fraksi  metanol dibandingkan  dengan  spektra  kuersetin  memiliki  korelasi  >  0,95.  Hal  ini  menguatkan  bahwa fraksi  metanol  mengandung  kuersetin.  Untuk  spektra  ekstrak  dibandingkan  dengan  spektra kuersetin  memiliki  korelasi  <  0,95.  Hal  ini  dikarenakan  noda  kuersetin  pada  ekstrak  masih belum terpisah dengan noda senyawa lain, sehingga pada spektra ditemukan puncak lain yang menyebabkan nilai korelasinya menurun.

## Pengukuran Kadar Glukosa Darah
Uji aktivitas antihiperglikemia pada tikus yang diinduksi aloksan ini dilakukan selama 7 hari.  Selama  7  hari  tersebut  semua  tikus  memperoleh  perlakuan  sesuai  dengan  kelompok masing-masing.
Tabel 4. Rerata selisih kadar glukosa darah pada tikus putih yang diinduksi aloksan
Perlakuan Pengukuran glukosa darah Selisih T0 T1 T2 Kontrol - 85,6±15,24 175,6±15,89 169,6±14,25 6±7,64 Kontrol + 93,2±12,08 160,4±6,84 94,8±16,75 65,6±12,42 Ekstrak 97,8±8,46 160,8±32,22 92,8±9,60 68±27,72 Fraksi Metanol 91,4±9,20 176,2±37,02 92.4±26,41 83,8±38,70 Fraksi n-heksan 87,2±15,83 174,4±37,02 135,4±30,34 39±15,81
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
Dari tabel diperoleh bahwa yang memiliki selisih penurunan gula darah paling tinggi adalah fraksi metanol. Hasil yang diperoleh kemudian didukung dengan data statistika.
Pengolahan dan Analisis data
- Uji normalitas
Uji  normalitas  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  sebaran  data  yang  telah  dikumpulkan menyebar  secara  normal  atau  tidak.  Syarat  uji  normalitas  dikatakan  normal  apabila  nilai  sig. >0,05. semua nilai sig. >0,05 menunjukkan bahwa semua data kelompok perlakuan terdistribusi normal.
- Uji Homogenitas
Uji  homogenitas  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  varian  data  yang  dikumpulkan  memiliki varian  yang  homogen  atau  tidak.  Dari  hasil  uji  homogenitas  sehingga  semua  kelompok perlakuan  memiliki  variasi  yang  homogen  karena  memiliki  data  lebih  dari  0,05  (sig.  >  0,05) yaitu  0,127  maka  syarat  untuk  menggunakan  uji  ANOVA  terpenuhi  yaitu  varian  dalam kelompok sama.
- Uji One Way Anova
Uji  ANOVA  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  rata-rata  penurunan  kadar  glukosa  darah terhadap semua kelompok. Dari hasil uji ANOVA dapat disimpulkan bahwa uji analisis dengan menggunakan One Way ANOVA pada perlakuan didapatkan nilai signifikan sebesar 0,004 (Sig. < 0,05). Hal  ini menunjukan terdapat perbedaan bermakna pada semua kelompok perlakuan.
- Uji LSD
Uji  LSD  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  rata-rata  penurunan  kadar  glukosa  darah terhadap  setiap  kelompok.  Didapatkan  bahwa  kelompok  kontrol  negatif  tidak  ada  perbedaan signifikan  dengan  kelompok  perlakukan  fraksi  n-heksan.  Sedangkan  pada  kelompok  positif tidak terdapat perbedaan signifikan dengan kelompok perlakuan ekstrak dan fraksi metanol.

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  tanaman  yang  digunakan  adalah  daun  yang  telah  dinyatakan kebenarannya  berdasarkan  hasil  determinasi  di  Materia  Medika  Batu,  Malang  Jawa  Timur. Determinasi bertujuan untuk mencocokan atau penyesuaian ciri morfologi yang terdapat dalam tanaman  serta  untuk  menghindari  terjadinya  kesalahan  dalam  pengambilan  daun  ketapang ( Terminalia  catappa )  sebagai  bahan  penelitian  dan  mencegah  tercampurnya  bahan  dengan tanaman  lain.  Berdasarkan  hasil  determinasi  tanaman  menunjukkan  bahwa  bahan  yang digunakan  benar  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa ).  Tanaman  Ketapang  ( Terminalia catappa )  dalam  penelitian  ini  diteliti  sebagai  tanaman  obat.  Daun  ketapang  ( Terminalia catappa )  dapat  digunakan  sebagai  obat  herbal  dalam  mengobati  penyakit  diabetes.  Menurut penelitian    (Jena  Hayu  Widyasti,  2019)  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa )  memiliki  potensi menurunkan menurunkan gula darah.
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  ketapang  dilakukan  menggunakan  metode  maserasi. Prinsip  dari  ekstraksi  maserasi  adalah  cairan  penyari  akan  menembus  dinding  sel  dan  masuk kedalam  rongga  sel  yang  mengandung  zat  aktif.  Zat  aktif  akan  larut  karena  adanya  perbedaan konsetrasi  larutan  zat  aktif  didalam  dan  diluar  sel,  maka  larutan  yang  terpekat  didesak  keluar. Peristiwa  berulang  sehingga  terjadi  kesetimbangan  konsentrasi  antara  larutan  di  dalam  sel  dan di luar sel (Depkes RI,2000). Hasil maserasi kemudian diuapkan menggunakan waterbath suhu
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
50˚C  sampai  didapat  ekstrak  kental.  Penggunaan  suhu  50˚C  karena  pada  suhu  ini  relatif  aman untuk  mencegah  terjadinya  kerusakan  senyawa  metabolit  sekunder  khususnya  flavonoid,  yang tidak tahan pemanasan dengan suhu tinggi (Harborne, 1996). Hasil ekstrak yang diperoleh dari ekstraksi  etanol  daun  ketapang  sebesar  52,699  gram  dengan  hasil  rendemen  10,538%. Perhitungan  rendemen  berguna  sebagai  acuan  peneliti  selanjutnya  dan  mengetahui  besarnya jumlah  ekstrak  yang  dihasilkan  proses  ekstraksi  melalui  perbandingan  ekstrak  yang  diperoleh dengan simplisia awal (Pratiwi et al., 2015).
Ekstrak  kental  yang  didapatkan  kemudian  di  fraksinasi  dengan  menggunakan  pelarut yang  tingkat  kepolarannya  berbeda-beda,  yaitu  metanol  dan  n-heksan.  Dari  hasil  fraksinasi didapatkan  rendemen  metanol  sebesar  66,8  %  dan  hasil  rendemen  n-heksan  sebesar  6,75%. Persentase rendemen yang didapat dari masing-masing fraksi berbeda-beda, hal ini disebabkan karena  adanya  perbedaan  kemampuan  menarik  senyawa  dari  masing-masing  pelarut  yang digunakan  dalam  proses  fraksinansi.  Persentase  rendemen  dari  fraksi  metanol  lebih  besar dibanding n-heksan (Anjaswati et al., 2021).
Penentuan  kadar  air  pada  ekstrak  bertujuan  untuk  memberi  batasan  minimal  atau rentang tentang besarnya kandungan air dalam bahan (ekstrak). Semakin tinggi kadar air maka semakin  mudah  untuk  ditumbuhi  jamur  dan  kapang  sehingga  dapat  menurunkan  aktivitas biologi ekstrak dalam masa penyimpanan. Kadar air yang diperoleh pada simplisia dan ekstrak masing-masing sesuai dengan syarat mutu yaitu ≤ 10%. Ekstrak kental memilki kadar air antara 5 – 30% (Voight, 1994). Penentuan kadar air juga terkait dengan kemurnian ekstrak. Kadar air yang terlalu tinggi (> 10%) menyebabkan tumbuhnya mikroba yang akan menurunkan stabilitas ekstrak (Saefudin, A., Rahayu, 2011).
Dari hasil uji skrining fitokimia yang telah dilakukan pada ekstrak kental daun ketapang didapatkan  bahwa  dalam  ekstrak  daun  ketapang  mengandung  senyawa  metabolit  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  polifenol.  Dimana  senyawa  yang  diduga  sangat  berperan  dalam aktivitas antihiperglikemia pada daun ketapang adalah flavonoid. Flavonoid dapat menurunkan kadar  gula  darah  dengan  berperan  sebagai  inhibitor  enzim  glukosidase,  maltase  dan  amylase.  Flavonoid  juga  mampu  menstimulasi  pengambilan  glukosa  di  otot  melalui  regulasi GLUT-4 (Anggraini, 2020).
Untuk mengidentifikasi senyawa flavonoid dalam ekstrak, fraksi metanol dan fraksi n- heksan daun ketapang maka di lakukan uji penegasan menggunakan metode KLT-Densitometri. KLT-Densitometri digunakan untuk menentukan identitas dan kadar senyawa dengan cara noda yang  terpisah  pada  plat  KLT  tersebut  dimasukkan  kedalam  instrument  yang  kadarnya ditentukan  berdasarkan  hubungan  Area  Under  Curve  (AUC)  masing-masing  noda  pada  plat (Sherma,  1994).  Dalam  menggunakan  alat  KLT  Densitometri  yang  memiliki  kepekaan  yang tinggi untuk menganalisis senyawa yang dideteksi maka dalam pengerjaan diperhatikan  jumlah dan teknik penotolan ekstrak (Waris et al., 2013).
Dari hasil KLT-Densitometri diperoleh bahwa nilai Rf dari standart kuersetin 0,949, Rf dari ekstrak etanol daun ketapang 0,941 dan Rf dari fraksi metanol 0,933. Berdasarkan nilai Rf tersebut dapat diduga ekstrak dan fraksi metanol mengandung flavonoid, sedangkan pada fraksi n-heksan  tidak  ditemukan  Rf  noda  yang  sama  dengan  Rf  standar  kuersetin  sehingga  diduga fraksi n-heksan tidak mengandung flavonoid. Hal ini dikarenakan kepolaran flavonoid sehingga tidak  terekstrak  di  fraksi  n-heksan.  Data  Rf  didukung  dengan  overlay  spektra  dari  noda  yang
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
diduga  kuersetin  dalam  ekstrak  dan  fraksi  metanol  dibandingkan  dengan  spektra  dari  noda standar  kuersetin. Dari  hasil overlay spektra  menunjukkan adanya  kemiripan dari  spektra  pada standart  kuersetin  dan  fraksi  metanol.  Sedangkan  pada  ekstrak  juga  diduga  memiliki  senyawa flavonoid  dikarenakan  spektra  yang  ditunjukan  mirip  dengan  spektra  dari  standard  kuersetin akan  tetapi  sedikit  bergeser  hal  ini  dapat  dikarenakan  oleh  adanya  senyawa  lain  yang  tidak memisah dengan sempurna.
Pada penelitian uji aktivitas antihiperglikemia ini menggunakan hewan coba tikus putih jantan  pada  usia  3-4  bulan  adalah  tikus  dewasa  muda  yang  mempunyai  keadaan  fisiologis optimum.  Tikus  yang  digunakan  adalah  tikus  yang  sehat  dengan  ciri-ciri  :  bulu  bersih,  mata merah  jernih,  tingkah  laku  normal  dan  berat  badan  150-250g.  Pengelompokan  hewan  uji dilakukan  secara  acak  tujuannya  agar  setiap  anggota  kelompok  memiliki    kesempatan  yang sama  untuk  dijadikan  sampel.  Penelitian  menggunakan  30  ekor    tikus  yang  terdiri  atas  6 kelompok yang terbagi atas kelompok kontrol normal dengan tidak diberikan perlakuan apapun, kelompok  kontrol  negatif    dengan  pemberian  suspensi  CMC-Na  0,5%,  kontrol  positif  dengan pemberian    suspensi  metformin,  kelompok  perlakuan  ekstrak  etanol  daun  ketapang  300 mg/KgBB, kelompok perlakuan dengan fraksi metanol daun  ketapang  272,46 mg/KgBB, dan kelompok  perlakuan  dengan  fraksi  n-heksan  27,5  mg/KgBB.  Semua  tikus  diinduksi  dengan aloksan dan dari data hasil peningkatan kadar glukosa darah tikus yang telah diinduksi aloksan menunjukkan  terjadinya  peningkatan  glukosa  darah  setelah  pemberian  aloksan.  Berdasarkan Wolfenshon dan Lloyd (2013) kadar glukosa darah normal 50-135 ml/dL.
Kelompok kontrol negatif diberikan suspensi CMC-Na 0,5 %. Hasil  pengukuran kadar glukosa  darah  dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan  lainnya,  kadar  glukosa  kelompok kontrol CMC-Na 0,5% tidak mengalami penurunan yang signifikan dapat dikatakan bahwa hasil pengukuran T2 tikus dalam kondisi glukosa darah yang masih tinggi. Hal ini dikarenakan pada kontrol  CMC-Na  tidak  memiliki  atau  mengandung  senyawa  aktif  atau  bahan  aktif  yang  dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus putih yang diinduksi aloksan, menurut  Soriton suspensi CMC-Na 1% hanya berfungsi  sebagai pembanding  yang tidak  memberikan efek terhadap laju penurunan kadar glukosa darah (Soriton et al., 2014).
Kelompok kontrol positif yang digunakan dalam penelitian ini adalah metformin 500mg yang  dikonversikan  ke  tikus  200g/BB.  Penggunaan  metformin  sebagai  kontrol  positif dikarenakan mekanisme kerja metformin  dalam tubuh dengan memperbaiki  sensitivitas hepar dan  jaringan  perifer    terhadap  insulin  tanpa  mempengaruhi    sekresi  insulin.  Efek  ini  terjadi karena    adanya  aktivitas  kinase  di  sel  (AMP-  activated  kinase).  Metformin  meningkatkan pemakaian  glukosa  oleh  sel  usus  sehingga    menurunkan  glukosa  darah  dan  juga    menghambat absorbsi  glukosa  di  usus  sesudah  asupan  makanan  (Soegondo,  2006).  Metformin  diberikan secara  oral  dalam  bentuk    suspensi  dikarenakan  metformin  tidak  larut  dalam  air  sehingga diberikan  dalam    bentuk  suspensi  menggunakan  agen  pensuspensi  CMC-Na.  CMC-Na  dipilih sebagai  pensuspensi  karena  mempunyai  toksisitas  yang  rendah  dan  terdispersi  di    dalam  air dibandingkan  dengan  pensuspensi  lain  (Rowe,  2003).  Hasil    kontrol  positif  metformin menunjukan terjadi penurunan kadar glukosa darah  sebesar 65,6  pada pengukuran T2. Kontrol positif berfungsi sebagai  pembanding untuk melihat pengaruh antidiabetik oral terhadap sampel yang akan  diteliti.
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
Hasil  pengukuran  kadar  glukosa  darah  kelompok  perlakuan  ekstrak  etanol  daun ketapang  300  mg/KgBB,  kelompok  perlakuan  dengan  fraksi  metanol  daun    ketapang    272,46 mg/KgBB, dan kelompok perlakuan dengan fraksi n-Heksan 27,5 mg/KgBB. Hasil pengukuran glukosa  darah  pada  kelompok  perlakuan  ekstrak  daun  ketapang  300  mg/KgBB  mengalami penurunan  sebesar  68  pada  pengukuran  T2.  Fraksi  metanol  daun  ketapang  272,46  mg/KgBB mengalami penurunan  kadar glukosa darah sebesar 84,2 pada pengukuran T2. Fraksi n-Heksan daun  ketapang  27,5  mg/KgBB  mengalami  sedikit  penurunan  kadar  glukosa  darah    sebesar  39 pada  pengukuran  T2.  Adanya  kemampuan    menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  tikus  putih disebabkan adanya senyawa flavonoid yang terkandung pada daun ketapang karena berdasarkan hasil  skrining  fitokimia  dan  hasil  KLT  dimana  daun  ketapang  positif  mengandung  senyawa flavonoid. Menurut (Meng et al., 2013), flavonoid memiliki aktivitas dalam menurunkan kadar glukosa darah dikarenakan daya antioksidannya yang dapat mengikat dan menetralisir senyawa radikal  bebas.  Flavonoid  juga  diketahui  mampu  mempertahankan  integritas  sel  beta  pankreas melalui  stimulasi  sel-sel  progenitor  di  pankreas  untuk  berdiferensiasi  membentuk  sel  pulau langerhans baru (Wei et al., 2009).

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  ketapang  dan  fraksi  metanol  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa ) dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih yang diinduksi aloksan. Fraksi metanol daun ketapang ( Terminalia catappa ) paling  efektif menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih yang diinduksi aloksan.

## SARAN
Perlu  penelitian  lebih  lanjut  untuk  menguji  efek  ekstrak  dan  fraksi  daun  ketapang dengan  dosis  yang  beragam  untuk  mengetahui  dosis  toksik  ekstrak  dan  fraksi-fraksi  daun ketapang  dengan  waktu  yang  relatif  singkat. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan menggunakan metode ekstraksi yang lain.

## REFERENSI
Anggraini,  A.  2020.  Manfaat  Antioksidan  Daun  Salam  Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  dan Penurunan  Apoptosis  Neuron  di  Hippocampus  Otak  Tikus  yang  Mengalami  Diabetes. Jurnal Medika Hutama , 2 (1), 349–355.
Anjaswati, D., Pratimasari, D., & Nirwana, A. P. 2021. Perbandingan Rendemen Ekstrak Etanol ,  Fraksi  n-  Heksana  ,  Etil  Asetat  ,  dan  Air  Daun  Bit  (  Beta  vulgaris  L  .)  Menggunakan Fraksinasi Bertingkat. Stikes , 1 (1), 1–6.
Harborne,  J.  1996. Metode  Fitokimia,  Cetakan  II,  diterjemahkan  oleh  Kosasih  Padmawinata dan Iwang Soediro (Cetakan II). ITB press.
Jena  Hayu  Widyasti,  F.  K.  2019.  UJI  AKTIVITAS  ANTIHIPERGLIKEMIK  EKSTRAK DAUN PETAI CINA (Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit) PADA MENCIT INDUKSI ALOKSAN. Jurnal  Farmasi  Indonesia , 16 (01),  1–9.  https://doi.org/.1037//0033- 2909.I26.1.78
Rachma Nurhayati | Uji Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak ….. Jurnal Wiyata, Vol. 10 No. 01 Tahun 2023
Kementrian  kesehatan  republik  indonesia.  2020.  Pusat  Data  dan  Informasi  Kementerian Kesehatan RI Diabetes Melitus. In pusat data dan informasi kementrian kesehatan RI .
Meng,  S., Cao, J., Feng, Q., Peng, J., & Hu, Y. 2013. Roles of chlorogenic acid on regulating glucose and lipids metabolism: A review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine , 2013 . https://doi.org/10.1155/2013/801457
Pratiwi,  D.,  Prahastiwi,  E.  A.,  &  Safitri,  M.  2015.  Uji  Aktivitas  Larvasida  Ekstrak  Etil  Asetat Herba  Anting-Anting  (Alcalypha  indica.  L)  Terhadap  Larva  Nyamuk  Aedes  aegypti.
Jurnal Farmagazine , 2 (1), 16–23. https://stfm.ac.id/ejournals/index.php/JurnalFarmagazine/article/view/14
Rowe,  R.  C.  P.  J.  S.  2003. Handbook  of  Pharmaceutical  Excipients  Fourt  Edition . Pharmaceutical Press.
Saefudin, A., Rahayu, T. 2011. Standarisasi Bahan Obat Alam . Graha Ilmu.
Sherma. 1994. Handbook Of Thin Layer Chromatography (3nd ed). Marcel Dekker Inc.
Soegondo.  2006. Penyuluhan  sebagai  Komponen  Terapi  Antidiabetes  dan  Penatalaksanaan Terpadu . Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Soriton, H., Yamlean, P. V. Y., & Lolo,  dan W. A. 2014. Uji Efektivitas Ekstrak Etanol Daun Tapak  Dara  (Catharantus  Roseus  (L.)  G.Don)  Terhadap  Penurunan  Kadar  Gula  Darah Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar  (Rattus  Norvegicus  L.)  Yang  Diinduksi  Sukrosa.
Pharmacon , 3 (3), 162–169.
Voight,  R.  1994. Buku  Pengantar  Teknologi  Farmasi (diterjemah).  Universitas  Gadjah  Mada Press.
Waris, R., Kadir, A., & Akbar, C. 2013. Identifikasi Dan Penetapan Kadar Sildenafil Sitrat Pada Jamu Kuat Lelaki Yang Beredar Di Kota Makassar. Jurnal Ilmiah As-Syifaa , 5 (1), 95–102. https://doi.org/10.33096/jifa.v5i1.74
Wei,  W.,  Liu,  Q.,  Tan,  Y.,  Liu,  L.,  Li,  X.,  &  Cai,  L.  2009.  Oxidative  Stress,  Diabetes,  and Diabetic Complications. Hemoglobin , 33 (5), 370–377. https://doi.org/10.3109/03630260903212175