## Sintesis dan Karakterisasi Senyawa Turunan 2-Benzamido- N-Benzoilbenzamida
(Synthesis  and  characterization  of  2-Benzamido -N - Benzylbenzamide Derivative)
ANI RIANI HASANA 1* , SISWANDONO 2 , MARCELLINO RUDYANTO 2
1 Prodi S1 Farmasi, STIKes Panti Waluya Malang, Jl. Yulius Usman No.62, Malang, Jawa Timur, 65117, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Jl. Dharmawangsa No.4-6, Airlangga, Surabaya, Jawa
Timur, 60286, Indonesia
Diterima 12 November 2021, Disetujui 20 April 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2022,  hlm. ISSN 1693-1831
Abstract: Anthranilamide  derivatives  exhibit  anti-inﬂ ammatory,  antipyretic,  antibacterial, antiangiogenic,  and  anticoagulant  properties.  With  an  early  in  silico  examination  of  its  analgesic capabilities, this study aimed to generate a novel anthranilamide molecule by altering 2-Benzamido- N-Benzylbenzamide.  Modiﬁ cation  of  anthranilamide  with  1/2/3-chloro  benzoyl  chloride  by acylation  resulted  in  the  design,  synthesis,  characterization,  and  research  of  the  analgesic  eﬀ ects of  2-benzamido-N-benzoylbenzamide  derivatives.  2-(2-chlorobenzamido)-N-(2-chlorobenzoyl) benzamide, 2-(3-chlorobenzamido)-N-(3-chlorobenzoyl)benzamide, and 2-(4-chlorobenzamido)-N-(4- chlorobenzoyl)benzamide were prepared. The nucleophilic acyl substitution reaction method was used to prepare these three chemicals by interaction with anthranylamide and benzoyl chloride molecules. Melting point and thin-layer chromatography were used to check the purity of the synthesis ﬁ ndings. The structure was conﬁ rmed by UV-Vis and infrared spectrophotometry.
Abstrak: Turunan antranilamida memiliki aktivitas analgesik, antipiretik, antiinﬂ amasi, antimikroba, antiangiogenik,  dan  antikoagulan.   Penelitian  ini  bertujuan  membuat  senyawa  antranilamida  baru dengan  memodiﬁ kasi  2-Benzamido- N -Benzylbenzamide  dengan  studi  pendahuluan in  silico atas kemampuan analgesiknya. Telah dilakukan perancangan, sintesis, karakterisasi dan  studi tentang sifat analgesik  turunan  2-benzamido- N -benzoilbenzamida  dengan  memodiﬁ kasi  Anthranilamida  dengan 1/2/3-kloro benzoil klorida melalui reaksi melalui asilasi. Diperoleh senyawa 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil)benzamida; 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)benzamida; dan
2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)benzamide. Ketiga senyawa ini diperoleh dengan mereaksikan antranilamida  dan  senyawa-senyawa  benzoil  klorida  kemudian  diperoleh  senyawa  hasil  sintesis dengan rendemen sebanyak 71-73 %. Hasil sintesis diuji kemurnian dengan melakukan pengamatan terhadap Kromatograﬁ  Lapis Tipis (KLT) dan titik lebur. Karakterisasi struktur senyawa menggunakan Spektrofotometri Ultra Violet- Visible (UV-Vis), Spektrofotometri inframerah (FT-IR), Spektrofotometri resonansi  magnetik  nuklir  (NMR)  dan  Spektrofotometri  Massa  (MS).  Uji in  silico dilakukan  untuk memprediksi  sifat  analgesik  melalui  besarnya  interaksi  senyawa  turunan  terhadap  reseptor  COX-2 (pdb:  1PXX).  Pada  tahap  ini  interaksi  senyawa  uji  terhadap  reseptor  1PXX  dibandingkan  besarnya nilai rerank score senyawa turunan, antranilamida dengan asam mefenamat. Hasil interaksi senyawa uji terhadap reseptor menunjukkan nilai rerank score senyawa hasil sintesis (-91 hingga -112) lebih kecil dibandingkan dengan antranilamida (-54) dan asam mefenamat (-84) dan hal ini menunjukkan prediksi aktivitas analgesik turunan senyawa ini lebih baik dibanding antranilamida dan asam mefenamat.
Kata kunci: Analgesik, antranilamida, permodelan molekul, turunan
28 1 -29 0
2-benzamido- N -benzoilbenzamida
Keywords: 2-benzamido- N -benzoylbenzamide derivative, analgesic, anthranilamide, in sillico
HASANA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
2
benzamida  layak  disintesis   tiga  turunannya  yaitu 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil)benzamida, 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)benzam- ida,  dan  2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil) benzamida (8) .
Senyawa turunan 2-benzamido- N -benzoilbenzam- ida dapat disintesis melalui reaksi 2 tahap simultan. Pada  tahap  pertama  reaksi  asil  nukleoﬁ lik  antara benzoil klorida dengan antranilamida, kemudian pada tahap kedua 2-benzamidobenzamida hasil dari reaksi tahap pertama direaksikan lagi dengan benzoil klorida sehingga menghasilkan senyawa 2-benzamido- N -ben- zoilbenzamida. Dalam desain penelitian ini  senyawa 2-benzamido- N -benzoilbenzamida  dan  turunannya akan  disintesis  melalui  reaksi  subtitusi  nukleoﬁ lik (subtitusi asil nukleoﬁ lik) dengan menggunakan reaksi Schotten-Baumann yang dimodiﬁ kasi (9) .
Senyawa yang telah diperoleh dari hasil sintesis dikonﬁ rmasi kemurniannya melalui metode Kroma- tograﬁ   Lapis  Tipis  (KLT)  dengan  menggunakan  3 macam  eluen  yang  berbeda  kepolarannya  serta  pe- nentuan jarak lebur. Karakterisasi struktur senyawa hasil sintesis dilakukan dengan menggunakan  Spekt- rofotometri Ultra Violet- Visible (UV-Vis), Spektrofoto- metri inframerah (FT-IR), Spektrofotometri resonansi magnetik nuklir (NMR) dan Spektrofotometri Massa (MS) (10–12) .

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Antranilamida p.s (Aldrich), 2-klorobenzoil klorida  p.s  (Aldrich),  3-klorobenzoil  klorida  p.s (Aldrich),  4-klorobenzoil  klorida  p.s  (Aldrich), Tetrahidrofuran  p.a  (Merck),  Piridin  p.a  (Merck), Natrium  bikarbonat  p.a  (E.Merck),  Kloroform  p.a (E.Meck), Etil  asetat p.a (E.Merck),  n-Heksana  p.a (E.Meck), Etanol 9,8% p.a (E.Merck), Kieselgel 60 GF 254 (E.Merck), Aquabidest.
METODE. Uji in  silico . Uji in silico senyawa 2-benzamido- N -benzoilbenzamida  dan  turunannya terhadap  reseptor  berupa  enzim  siklooksigenase (COX-2  pdb:  1PXX)  dilakukan  melalui  program ChemBioDrawUltra 11 dan program Molegro Virtual Docker. Senyawa uji di docking dengan reseptor yang menghasilkan energi interaksi antara senyawa hasil sintesis dengan reseptor COX-2 berupa Rerank score. Pada penelitian ini dilakukan uji in silico pendahuluan

## PENDAHULUAN
INDONESIA sebagai negara berkembang memiliki banyak  permasalahan,  sehingga  tidak  jarang  men- jadi pemicu sakit kepala atau nyeri. Analgesik atau obat-obat  pereda  nyeri  adalah  zat  yang  meredakan atau  menghilangkan  rasa  sakit  tanpa  kehilangan kesadaran (1) . Asam antranilat merupakan  analog ni- trogen dari senyawa induk asam salisilat (2) . Turunan asam N-arylanthranilic digunakan terutama sebagai anti-inﬂ amasi untuk mengobati rematik, dan sebagai analgesik  untuk  meredakan  rasa  nyeri  yang  ringan hingga  sedang.  Turunan  ini  menyebabkan  iritasi gastrointestinal,  mual,  diare,  sakit  perut,  anemia, agranulositosis, dan trombositopenia (2) .
Salah satu tantangan pengembangan obat adalah pencarian dan penemuan senyawa bioaktif yang telah menunjukkan aktivitas sebagai seyawa penuntun atau lead compounds , kemudian dimodiﬁ kasi untuk dibuat turunannya (3,4) . Berdasarkan penelitian yang dilakukan Heindel dkk. Turunan dari antranilamida ditemukan (2-aminobenzamida),  yang  merupakan  bentuk  ami- da  dari  antranilat,  memiliki  potensi  sebagai  CNS depresan, anti  inﬂ amasi,  analgesik  dan  anti  tremor. Pembukaan cincin nukleoﬁ lik substitusi isatoic an- hydride dengan  amina  menghasilkan  antranilamida yang dibuat turunannya ternyata memberikan aktivitas analgesik yang lebih besar daripada senyawa induk (5) .
Berdasarkan latar belakang yang telah dikemuka- kan, telah dilakukan penelitian tentang rancangan pe- nelitian untuk mengembangkan turunan dari senyawa antranilamida, yaitu turunan dari 2-benzamido- N -ben- zoilbenzamida  sebagai  analgesik (3,4) .Penelitian  ini bertujuan  untuk  membuat  senyawa  antranilamida baru dengan memodiﬁ kasi 2-Benzamido- N -Benzylb- enzamide dengan studi pendahuluan in silico atas ke- mampuan analgesiknya. Pengujian in silico, docking ( Molegro Virtual Docker 5,0 ) antara senyawa turunan 2-benzamido- N -benzoilbenzamida terhadap reseptor COX-2 (5) . Struktur protein reseptor COX-2 menggu- nakan Protein Data Bank (PDB) dengan kode protein 1PXX. Pelaksanaan docking menghasilkan nilai Root Mean Deviation Square (RMSD) sebesar 0,751802; dan Rerank Score (RS) sebesar -84,5922; sedangkan nilai RS untuk senyawa turunan 2-benzamido- N -ben- zoilbenzamida  sebesar  -99,7031,  asam  mefenamat sebesar -84,7936  dan untuk senyawa antranilamida sebesar -54,7276. Hasil tersebut  menunjukkan bah- wa turunan 2-benzamido- N -benzoilbenzamida telah diprediksi memiliki kemampuan analgesik lebih baik dibanding antranilamida dan asam mefenamat (6,7) . Berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan  kemampuan analgesik in  silico maka  dapat  ditarik  kesimpu- lan  senyawa   turunan  2-benzamido- N -benzoil-
8 2
Alat. MelTemp  Electrothermal  Melting Point  Apparatus,  Rotary  evaporator ,  lampu  UV, Spektrofotometer  P erkin E lmer UV Lambda EZ 201;   Spektrofotometer   FTIR   P erkin E lmer Spectrum One; spektrometer 1 H-NMR dan 13 C-NMR JEOL  ICS  400  MHz, Gas  Chromatography-Mass Spectroscopy (GC-MS) A gilent 5975C.
Vol 20, 2022
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` dengan membandingkan nilai RS senyawa uji dengan pembanding yaitu senyawa antranilamida dan asam mefenamat (6,7) .
Sintesis  Senyawa  Turunan  2-benzamido-N- benzoilbenzamida. Antranilamida dilarutkan dalam tetrahidrofuran  dan  piridin  pada  labu  alas  bulat. Tambahkan  larutan  turunan  benzoil  klorida  dalam tetrahidrofuran pada corong pisah, diteteskan ke dalam labu  antranilamida  tetes  demi  tetes  dalam  wadah ice bath sambil diaduk menggunakan alat hot plate and magnetic stirer. Campuran dibiarkan pada suhu ruang.  Campuran  selanjutnya  direﬂ uks  dan  diaduk dengan magnetic stirer di atas hot plate . Setiap jam dilakukan  KLT  sampai  didapatkan  noda  tunggal yang berbeda dari antranilamida dan benzoil klorida. Setelah 1 jam direﬂ uks, sisa pelarut THF diuapkan menggunakan rotavapor. Kristal yang terbentuk dicuci dengan larutan natrium bikarbonat 10% hingga CO 2 habis  (buih  hilang).  Hasil  reaksi  disaring  dengan corong  Buchner  dan  dibilas  dengan  aquabidest untuk melarutkan senyawa sampingan yang larut air. Endapan yang diperoleh dicek dengan pH indikator universal  hingga  pH  netral.  Setelah  itu  dilakukan rekristalisasi  dengan  menggunakan  etanol  96% (13) . Etanol dipanaskan sampai mendidih lalu ditambahkan sedikit  demi  sedikit  pada  senyawa  hasil  yang  akan direkristalisasi sambil diaduk-aduk hingga tepat larut. Kemudian disaring panas. Pelarutnya diuapkan pada lemari asam sampai terbentuk padatan. Lalu padatan dipindahkan ke kaca petridisk yang sudah diketahui beratnya.  Kemudian  ditimbang  untuk  mendapatkan rendemen persentase bobot hasil sintesis (8,9) .
Spektrum  sampel  diidentiﬁ kasi  peta  absorbsi  yang khas dari gugus fungsi yang terjadi.
Uji  Karakteristik  dengan  Spektrofotometri Resonansi  Magnetik  Nuklir .  Sedikit  sampel dilarutkan  dalam Dimethyl  sulfoxide  deuterated (DMSO).  Sampel  didentiﬁ kasi  intensitas,  jumlah, dan posisi puncak pada daerah geseran kimia tertentu dari spektrum resonansi magnetik inti yang terbentuk.
Uji  Karakteristik  dengan  Spektrofotometri Massa .  Sedikit  sampel  dilarutkan  dalam  pelarut metanol.  Sampel  diidentifikasi  fragmen-fragmen massa yang terbentuk dalam spektrum (10–12) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemodelan  Molekul. Pada  penelitian  ini uji  pemodelan  molekul  dilakukan  atas  senyawa uji  terhadap  reseptor  enzim  COX-2  (pdb:  1PXX) dengan aplikasi Molegro Visual Docker. Gambar 1a diketahui antranilamida membentuk ikatan hidrogen dengan asam amino Val 523, dan memiliki nilai RS sebesar -54,7276.  Gambar 1b diketahui bahwa asam mefenamat  membentuk  ikatan  hidrogen  dengan asam amino Tyr 385 dan Ser 530, dan memiliki nilai RS  sebesar  -84,7936.  Gambar  1c  diketahui  bahwa senyawa 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil) benzamida  membentuk  ikatan  hidrogen  dengan asam amino Tyr 355, dan memiliki nilai RS sebesar -99,7031. Dari Gambar 1d di ketahui bahwa senyawa 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil) benzamida membentuk  ikatan  hidrogen  dengan  asam  amino Tyr  355,  dan  memiliki  nilai  RS  sebesar  -112,181. Dari  Gambar  e  di  atas  di  ketahui  bahwa  senyawa 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil) benzamida membentuk  ikatan  hidrogen  dengan  asam  amino Ser 353 dan Tyr 355, dan memiliki nilai RS sebesar -91,6164. Hasil interaksi senyawa uji terhadap reseptor menunjukkan nilai rerank score senyawa hasil sintesis lebih kecil dibandingkan dengan antranilamida dan asam  mefenamat  (Tabel  1).  Hal  ini  menunjukkan prediksi aktivitas analgesik turunan senyawa ini lebih baik dibanding antranilamida dan asam mefenamat.
No. Senyawa Rerank Score 1. Antranilamida -54,7276 2. Asam mefemamat -84,7936 3. 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil)benzamida -96,2791 4. 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)benzamida -112,181 5. 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)benzamida -91,6164
Tabel 1. Nilai RS antranilamida dan senyawa hasil sintesis dengan reseptor 1PXX.
Uji K arakteristik  dengan  Spektrofotometri UV-Vis .  Senyawa  dilarutkan dalam  methanol  pada konsentrasi  1-10  ppm,  kemudian  dibuat spektrum kurva absorbansi di panjang gelombang (λ) pada 200-400 nm. Spektrum UV-Vis akan teridentiﬁ kasi pada panjang gelombang maksimal (14) . Uji K arakteristik  dengan  Spektrofotometri Inframerah. Sedikit  sampel  dibuat  pelet  dengan KBr, kemudian dibuat spektrum kurva % transmisi terhadap bilangan gelombang (ϋ) pada 400 -4600 cm -1 .
Gambar 1. Ligand map interaksi senyawa antranilamida dengan reseptor: (a) Ligand map interaksi senyawa antranilamida dengan reseptor 1PXX, (b)  Ligand map interaksi senyawa asam mefenamat dengan reseptor 1PXX,  (c) Ligand map inter- aksi senyawa 2-(2-klorobenzamido)-N-(2-klorobenzoil)benzamida dengan reseptor 1PXX, (d) Ligand map interaksi senyawa 2-(3-klorobenzamido)-N-(3-klorobenzoil)benzamida dengan reseptor 1PXX,  (e) Ligand map interaksi senyawa 2-(4-kloroben-
e c d
a
b 8 4
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia `
Hasil Uji Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis. Kemurnian  senyawa  yang  disintesis  dikonﬁ rmasi dengan mengamati titik leleh dan kromatograﬁ  lapis tipis dengan tiga sistem eluen (15) . Pada uji kemurnian dengan  3  sistem  eluen  menggunakan  etil  asetat  : kloroform (1:3), etil asetat : heksan (2:3), dan aseton :  heksan  (2:3)  didapatkan  satu  noda  tunggal  yang diamati dengan lampu UV254. Hasil perhitungan nilai Retardation factor (Rf) senyawa hasil sintesis dapat dilihat pada Tabel 2.
adanya  gugus  CO-NH-CO  imida  dan  –N-H  amina sekunder. Pada penelitian ini penentuan keberadaan ikatan CO-NH-CO imida dan –N-H amina sekunder merupakan  titik  penting  dalam  konﬁ rmasi  struktur senyawa hasil sintesis. Keberadaan ikatan CO-NH- CO imida dan –N-H amina sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terbentuk karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan amida antara dua reaktan tersebut. Pita serapan dengan intensitas yang sedang pada daerah 752 cm -1 menunjukan  adanya  cincin  aromatis  1,2  disubtitusi dari ikatan C-Cl posisi orto.
Pada  spektrum 1 H- NMR (Gambar  4)  diperoleh puncak-puncak  yang  berada  pada  daerah  atom  H aromatis sekitar 6,5-8 ppm (10,11) . Terdapat 12 atom H pada daerah 8,57-7,17 ppm merupakan serapan atom H aromatis. Terdapat 2 atom H yang merupakan serapan atom H dari –NH amida yang secara teroritis menurut Pavia  (2009)  berada  pada  daerah  5-9  ppm.  Puncak serapan  atom  H  dari  –NH  amida  yang  berbentuk singlet dengan perbandingan integrasi 1 menunjukkan bahwa terbentuk –NH sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terbentuk, karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan
No.
Senyawa Rf Fase gerak 1: etil asetat : kloroform (1:3) Fase gerak 2: etil asetat : heksan (2:3) Fase gerak 3: aseton : heksan (2:3) 1. 2-(2-klorobenzamido)- N - (2-klorobenzoil)benzamida 0,57 0,35 0,42 2. 2-(3-klorobenzamido)- N - (3-klorobenzoil)benzamida 0,60 0,42 0,50 3. 2-(4-klorobenzamido)- N - (4-klorobenzoil)benzamida 0,65 0,4 0,50
Tabel 2. Nilai RS antranilamida dan senyawa hasil sintesis dengan reseptor 1PXX.
No.
Senyawa Jarak Lebur ( o C) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 1. 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil)benzamida 192-194 190-192 191-193 2. 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)benzamida 180-182 179-181 180-182 3. 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)benzamida 203-205 202-204 202-204
Tabel 3. Hasil Pengamatan jarak lebur senyawa hasil sintesis.
Pemeriksaan  kemurnian  senyawa  hasil sintesis  dengan  menggunakan  instrumen MelTemp Electrothermal  Melting  Point Apparatus dilakukan dengan 3 kali replikasi . Hasil pengamatan jarak lebur dari senyawa hasil sintesis dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil pengamatan jarak lebur dari senyawa hasil sintesis memiliki titik lebur 191-193; 180-182; 202- 204°C. Jarak lebur replikasi relatif kecil yaitu 1-2°C, menampilkan bahwa senyawa hasil sintesis tersebut dapat dikatakan murni (12,16).
H a s i l   S i n t e s i s   d a n   K a r a k t e r i s a s i 2-(2-klorobenzamido)-N-(2-klorobenzoil) benzamida. Interaksi  antranilamida  dengan 2-klorobenzoil  klorida  menghasilkan  senyawa 2-(2-klorobenzamido)-N-(2-klorobenzoil) benzamida dan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 . Hasil organoleptis berupa serbuk padat putih dan tidak berbau dengan persentase sebesar 72,21% (10)
Konfirmasi  struktur  senyawa  menggunakan spektrum  UV-Vis  pada  Tabel  4  dan  Gambar  2 menunjukan adanya tiga puncak pada 204 nm, 258 nm,  dan  300  nm.  Proﬁ l  spektrum  tersebut  berbeda dari  senyawa  antranilamida  yang  nemiliki  puncak puncak pada 214 nm, 250 nm, dan 332 nm. Pergeseran puncak  panjang  gelombang  pada  spektrum  UV diatas menunjukkan bahwa senyawa telah terbentuk dari  senyawa  antranilamida.  Pergeseran  puncak diperkirakan  karena  adanya  penambahan  gugus benzoil  pada  struktur.  Gugus  benzoil  merupakan gugus kromofor yang memiliki gugus benzena sebagai struktur  dasar.  Gugus  benzena  dapat  mengabsorbsi radiasi sinar UV dan mengalami transisi π → π*.
Interpretasi spektrum IR (Gambar 3) diperoleh dari analisis pita-pita serapan pada spektrum FTIR. Pita serapan dengan intensitas yang kuat pada daerah 1658,  1620  cm -1 dan  daerah  3348  cm -1 menunjukan
HASANA ET AL.
2
Gambar 4. Spektrum 1 H-NMR senyawa 2-(2-klorobenzam- ido)- N -(2-klorobenzoil) benzamida (400 MHz, DMSO-d6).
No. Senyawa λ maks (nm) dalam ethanol 96 % 1. Antranilamida 214, 250, 332 2. 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil)benzamida 204, 258, 300 3. 2-(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)benzamida 208, 272, 306 4. 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)benzamida 208, 236, 274, 306
Tabel 4. Karakteristik puncak serapan spektrum UV senyawa hasil sintesis.
amida sekunder antara dua reaktan tersebut. Terdapat total 14 atom H dari pembacaan 1 H- NMR sehingga berkesesuaian dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 . Hasil analisis 13 C- NMR pada Gambar 5 diperoleh puncak-puncak  yang  berada  pada  daerah  atom  C aromatis sekitar 110-175 ppm dan daerah C=O sekitar
Gambar 3. Spektrum serapan IR senyawa 2-(2-klorobenzam- ido)- N -(2-klorobenzoil) benzamida pada media pellet KBr.
155-185 (11,12) . Terdapat 2 puncak pada daerah karbonil yaitu 171,1 ppm, dan 164,9 ppm. Terdapat 18 atom C  pada  daerah  139,8-120,4  ppm  yang  merupakan serapan dari C aromatis. Terdapat total 21 atom C dari pembacaan 13 C- NMR pada  hasil  senyawa  sehingga berkesesuaian dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 .
8 6
2-(4-klorobenzamido)-N-(4-klorobenzoil)benzamida dalam pelarut etanol .
Gambar 2. Spektrum UV. (a) Spektrum UV senyawa antranilamida dalam pelarut etanol, (b) Spektrum UV senyawa 2-(2-klorobenzamido)-N-(2-klorobenzoil)benzamida  dengan  reseptor  1PXX  dalam  pelarut  etanol,  (c)  Spektrum  UV senyawa senyawa 2-(3-klorobenzamido)-N-(3-klorobenzoil)benzamida dalam pelarut etanol, (d) Spektrum UV senyawa
H a s i l   S i n t e s i s   d a n   K a r a k t e r i s a s i 2 -(3-klorobenzamido)-N-(3-klorobenzoil) benzamida. Interaksi  antranilamida  dengan 3-klorobenzoil  klorida  menghasilkan  senyawa 2-(3-klorobenzamido)-N-(3-klorobenzoil)benzamida dan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 . Hasil reaksi secara organoleptis teramati berupa serbuk padat putih dan tidak berbau dengan persentase sebesar 73,24%.
Konfirmasi  struktur  menggunakan  spektrum UV-Vis  menunjukan  adanya  tiga  puncak  pada  208 nm, 272 nm, dan 306 nm. Proﬁ l spektrum tersebut berbeda  dari  senyawa  antranilamida  yang  nemiliki puncak puncak pada 214 nm, 250 nm, dan 332 nm. Pergeseran puncak panjang gelombang pada spektrum UV  diatas  menunjukkan  bahwa  senyawa  telah terbentuk  dari  senyawa  antranilamida.  Pergeseran puncak  diperkirakan  karena  adanya  penambahan gugus benzoil pada struktur. Gugus benzoil merupakan gugus kromofor yang memiliki gugus benzena sebagai struktur  dasar.  Gugus  benzena  dapat  mengabsorbsi radiasi sinar UV dan mengalami transisi π → π*. Interpretasi spektrum IR (Gambar 6) diperoleh dari analisis pita-pita serapan pada spektrum FTIR. Pita serapan dengan intensitas yang kuat pada daerah 1656,  1614  cm -1 dan  daerah  3493  cm -1 menunjukan adanya  gugus  CO-NH-CO  imida  dan  –N-H  amina
Data  spektrum  MS  yang  menggunakan spektrometer Waters Qtof Xevo dengan metode ESI (Electrospray  Ionisation). Analisa  spektrum  massa diperoleh perbandingan nilai m/z = 412 (M; 100%); m/z = 414 (M+2; 67 %) dan m/z = 416 (M+4; 10 %). Adanya kelimpahan relatif dengan pebandingan M : M+2 : M+4 = 10 : 6 : 1 menunjukkan terdapat isotop Cl sebanyak 2 atom Cl pada senyawa (11,12) . Hasil ESI diperoleh nilai [M+Na] + = 436. Hal ini bermakna berat molekul yang terukur adalah C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 ditambah dengan  berat  molekul  Na,  dengan  komposisi  atom yaitu C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 [M+Na] + membuktikan senyawa 2-(2-klorobenzamido)- N -(2-klorobenzoil) benzamida sesuai yang diharapkan.
sekunder. Pada penelitian ini penentuan keberadaan ikatan CO-NH-CO imida dan –N-H amina sekunder merupakan  titik  penting  dalam  konﬁ rmasi  struktur senyawa hasil sintesis. Keberadaan ikatan CO-NH-CO imida dan –N-H amina sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terjadi, karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan amida  sekunder  antara  dua  reaktan  tersebut.  Pita serapan dengan intensitas yang lemah pada daerah 732 dan 798 cm -1 menunjukan adanya cincin aromatis 1,3 disubtitusi dari ikatan C-Cl posisi meta.
Pada  spektrum 1 H- NMR (Gambar  7)  diperoleh puncak-puncak  yang  berada  pada  daerah  atom  H aromatis sekitar 6,5-8 ppm (11,12) . Terdapat 12 atom H pada daerah 8,62-7,17 ppm merupakan serapan atom H aromatis. Terdapat 2 atom H yang merupakan serapan atom H dari –NH amida yang secara teroritis menurut Pavia  (2009)  berada  pada  daerah  5-9  ppm.  Puncak serapan  atom  H  dari  –NH  amida  yang  berbentuk singlet dengan perbandingan integrasi 1 menunjukkan bahwa  membentuk  –NH  sekunder  menunjukkan bahwa  sintesis  telah  terjadi,  karena  melalui  reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan  amida  sekunder  antara  dua  reaktan  tersebut. Terdapat total 14 atom H dari pembacaan 1 H- NMR pada senyawa sehingga berkesesuaian dengan dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 .
Gambar 5. Spektrum 13C-NMR senyawa 2-(2-klorobenzam- ido)-N-(2-klorobenzoil) benzamida (400 MHz, DMSO-d6) .
Gambar  6.  Spektrum  IR  senyawa  2-(3-klorobenzami- do)- N -(3-klorobenzoil) benzamida pada media pellet KBr .
HASANA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
2
dapat mengabsorbsi radiasi sinar UV dan mengalami transisi π → π*.
Interpretasi spektrum IR pada Gamabr 9 diperoleh dari analisis pita-pita serapan pada spektrum FTIR. Pita serapan dengan intensitas yang kuat pada daerah 1658,  1620  cm -1 dan  daerah  3400  cm -1 menunjukan adanya  gugus  CO-NH-CO  imida  dan  –N-H  amina sekunder. Pada penelitian ini penentuan keberadaan ikatan CO-NH-CO imida dan –N-H amina sekunder merupakan  titik  penting  dalam  konﬁ rmasi  struktur senyawa hasil sintesis. Keberadaan ikatan CO-NH- CO imida dan –N-H amina sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terbentuk, karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan amida antara dua reaktan tersebut. Pita serapan dengan  intensitas  yang  kuat  pada  daerah  842  cm -1 menunjukan  adanya  cincin  aromatis  1,4  disubtitusi dari ikatan C-Cl posisi para.
Hasil analisis 13 C- NMR diperoleh puncak-puncak yang  berada  pada  daerah  atom  C  aromatis  sekitar 110-175 ppm dan daerah C=O sekitar 155-185 (11,12) . Terdapat 2 puncak pada daerah karbonil yaitu 171,7 ppm, dan 163,5 ppm. Terdapat 18 atom C pada daerah 140,4-119,8  ppm  yang  merupakan  serapan  dari  C aromatis. Terdapat total 21 atom C dari pembacaan 13 C- NMR pada senyawa berkesesuaian dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 .
Gambar  9.  Spektrum  serapan  inframerah  senyawa 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)  benzamida  pada media pellet KBr.
Data  spektrum  MS  yang  menggunakan spektrometer Waters Qtof Xevo dengan metode ESI (Electrospray  Ionisation). Analisa  spektrum  massa diperoleh perbandingan nilai m/z = 412 (M; 100%); m/z = 414 (M+2; 67 %) dan m/z = 416 (M+4; 10 %). Adanya kelimpahan relatif dengan pebandingan M : M+2 : M+4 = 10 : 6 : 1 menunjukkan terdapat isotop Cl sebanyak 2 atom Cl pada senyawa (10,11) . Hasil ESI diperoleh nilai [M+Na] + = 436. Hal ini bermakna berat molekul yang terukur adalah C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 ditambah dengan  berat  molekul  Na,  dengan  komposisi  atom yaitu C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 [M+Na] + membuktikan senyawa -(3-klorobenzamido)- N -(3-klorobenzoil)  benzamida sesuai yang diharapkan.
H a s i l   S i n t e s i s   d a n   K a r a k t e r i s a s i 2-(4-klorobenzamido)-N-(4-klorobenzoil) benzamida. Interaksi  antranilamida  dengan 4-klorobenzoil  klorida  menghasilkan  senyawa 2-(4-klorobenzamido)-N-(4-klorobenzoil)benzamida dan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 . Hasil reaksi secara organoleptis teramati berupa serbuk padat putih dan tidak berbau dengan persentase sebesar 71,98%,
K onf i r m as i   s t r uk t ur  s eny a wa   de ngan menggunakan spektrum UV-Vis menunjukan adanya tiga puncak pada 208 nm, 274 nm, dan 306 nm. Proﬁ l spektrum tersebut berbeda dari senyawa antranilamida yang nemiliki puncak puncak pada 214 nm, 250 nm, dan 332 nm. Pergeseran puncak panjang gelombang pada  spektrum  UV  diatas  menunjukkan  bahwa senyawa telah terbentuk dari senyawa antranilamida. Pergeseran  puncak  diperkirakan  karena  adanya penambahan  gugus  benzoil  pada  struktur.  Gugus benzoil  merupakan  gugus  kromofor  yang  memiliki gugus benzena sebagai struktur dasar. Gugus benzena
Pada  spektrum 1 H- NMR (Gambar  10  dan  11) diperoleh  puncak-puncak  yang  berada  pada  daerah atom  H  aromatis  sekitar  6,5-8  ppm (10,11) .  Terdapat 12  atom  H  pada  daerah  8,64-7,16  ppm merupakan serapan atom H aromatis. Terdapat 2 atom H yang merupakan  serapan  atom  H  dari  –NH  amida  yang secara  teroritis  menurut  Pavia  (2009)  berada  pada daerah 5-9 ppm. Puncak serapan atom H dari –NH amida yang berbentuk singlet dengan perbandingan integrasi  1  menunjukkan  bahwa  terbentuk  –NH sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terbentuk, karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan  terbentuk ikatan  amida sekunder  antara dua reaktan tersebut. Terdapat total 14 atom H dari pembacaan 1H-NMR sehingga berkesesuaian dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 .
Pada spektrum 1 H- NMR diperoleh puncak-puncak yang  berada  pada  daerah  atom  H  aromatis  sekitar 6,5-8  ppm (10,11) .  Terdapat  12  atom  H  pada  daerah 8,64-7,16 ppm merupakan serapan atom H aromatis.
8 8
Gambar 8. Spektrum 13 C-NMR senyawa 2-(3-klorobenzami- do)- N -(3-klorobenzoil) benzamida (400 MHz, DMSO-d6) .
Vol 20, 2022
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia `
(400 MHz, DMSO-d6) sesuai yang diharapkan.

## SIMPULAN
Senyawa  2-(2-klorobenzamido)-N-(2-klorobenzoil) benzamida,  senyawa  2-(3-klorobenzamido)-N- (3-klorobenzoil)  benzamida,  dan  senyawa 2-(4-klorobenzamido)-N-(4-klorobenzoil) benzamida dapat  disintesis  dengan  mereaksikan  antranilamida dengan  turunan  benzoil  klorida.  Rendemen  yang didapatkan  berturut-turut  sebesar  72%,  73%, dan  71%.  Karakterisasi  struktur  senyawa  telah dilakukan  menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis, Spektrofotometri  inframerah,  Spektrofotometri resonansi  magnetik  nuklir  dan  Spektrofotometri Massa (MS) menunjukkan senyawa hasil sintesis telah dibuat sesuai dengan struktur teoritis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  dan  penghargaan  disampaikan kepada  Prof.  Dr.  Siswandono, Apt.,  MS.  dari Fakultas  FarmasiUniversitas  Airlangga  se- bagai  promotor  dan  yang  mempunyai  lisensi program  Molegro,  Drs.  Marcellino  Rudyan- to,  M.Si.,  Ph.D., Apt.  dari  Fakultas  Farmasi Universitas Airlangga  sebagai co-promotor .

## DAFTAR PUSTAKA
1. Khairani  S,  Rahayu  L,  Sandhiutami NM,  Dewi  RS,  Rahmawati  I.  Uji  efek anti-inflamasi  dan  analgesik  dari  re- busan  daun  bambu  kuning  ( Bambusa vulgaris Schard).  Jurnal  Ilmu  Kefar- masian  Indonesia.  2021;19(2):266-71.
2. Prasher  P,  Sharma  M.  Medicinal chemistry  of  anthranilic  acid  deriva- tives: A  mini  review.  Drug  Develop- ment  Research.  2021;82(7):945-58.
3. S i s w a n d o n o   E .   K i m i a   M e d i s - inal  1  Edisi  2.  Airlangga  Universi- ty  Press;  2020  Jan  14:100–120. 4. Okunrobo  LO,  Usifoh  CO,  Scriba  GK. Synthesis and pharmacological evaluation of 2-hydroxymethylbenzamides as anti-in- ﬂ ammatory and analgesic agents. Acta Po- loniae Pharmaceutica. 2006;63(1):25-31. 5. Aldilla VR, Chen R, Martin AD, Marjo CE,  Rich AM,  Black  DS,  Thordarson P,  Kumar  N.  Anthranilamide-based
Terdapat  2  atom  H  yang  merupakan  serapan  atom H  dari  –NH  amida  yang  secara  teroritis  menurut Pavia  (2009)  berada  pada  daerah  5-9  ppm.  Puncak serapan  atom  H  dari  –NH  amida  yang  berbentuk singlet dengan perbandingan integrasi 1 menunjukkan bahwa terbentuk –NH sekunder menunjukkan bahwa sintesis telah terbentuk, karena melalui reaksi subtitusi nukleoﬁ lik (benzoilasi) antara antranilamida dengan turunan benzoil klorida diharapkan terbentuk ikatan amida sekunder antara dua reaktan tersebut. Terdapat total 14 atom H dari pembacaan 1H-NMR sehingga berkesesuaian dengan rumus kimia C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 . Data  spektrum  MS  yang  menggunakan spektrometer Waters Qtof Xevo dengan metode ESI (Electrospray  Ionisation). Analisa  spektrum  massa diperoleh perbandingan nilai m/z = 412 (M; 100%); m/z = 414 (M+2; 67 %) dan m/z = 416 (M+4; 10 %). Adanya kelimpahan relatif dengan pebandingan M : M+2 : M+4 = 10 : 6 : 1 menunjukkan terdapat isotop Cl sebanyak 2 atom Cl pada senyawa (10,11) . Hasil ESI diperoleh nilai [M+Na] + = 436. Hal ini bermakna berat molekul yang terukur adalah C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 ditambah dengan  berat  molekul  Na,  dengan  komposisi  atom yaitu C 21 H 14 Cl 2 N 2 O 3 [M+Na] + membuktikan senyawa 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil) benzamida
Gambar 11. Spektrum 13 C-NMR senyawa 2-(4-klorobenzam- ido)- N -(4-klorobenzoil) benzamida (400 MHz, DMSO-d6).
Gambar  10.  Spektrum  Spektrum 1 H-NMR  senyawa 2-(4-klorobenzamido)- N -(4-klorobenzoil)  benzamida  (400 MHz, DMSO-d6).
HASANA ET AL.
2
short  peptides  self-assembled  hydro- gels  as  antibacterial  agents.  Scien- tific  reports.  2020  Jan  21;10(1):1-2.
6. DeRuiter  J.  Non-Steroidal Antiinﬂ am- matory  Drugs  (NSAIDS).  Principles of  Drug  Action  2.  Fall.  2002;1–25.
7. Puspaningtyas AR.  Drug  Development of  Mefenamic Acid  Derivatives  as An- algesic  by  Molecular Approach.  Inter- national  Journal  of  Pharmaceutical  and Clinical  Research.  2017;9(2):123-30.
8. Ha s a na   AR ,   R ud ya nt o  M .  S yn- t h e s i s   a n d   c h a r a c t e r i z a t i o n   o f 2-Benzamido-  N  -Benzoylbenzam- ide.    Synthesis.  2018;3(01):1–5.
9. Shalas  AF,  Siswandono  RM.  Syn- thesis  and  structure-activity  relation- ship  of  1-allyl-3-(2-chlorobenzoyl) thiourea  as  analgesic.  International Journal  of  Pharmacy  and  Pharma- ceutical  Sciences.  2016;8(6):297-8.
10. Suchetan PA, Gowda BT, Foro S, Fuess H.  2-Chloro-N-(2-chlorobenzoyl) benzenesulfonamide.  Acta  Crystal-
lographica  Section  E:  Structure  Re- ports  Online. 2010  May  1;66(5):o1040.
11. Pavia  DL,  Lampman  GM,  Kriz  GS,
Vyvyan  JA.  Introduction  to  spec- troscopy.  Cengage  learning;  2014.
12. Thangavel N, Al Bratty M, Alhazmi HA, Najmi A, Sivadasan D. Structural attrib- utes of organic compounds for UV-Spec- trophotometric determination of dissocia- tion constant-A systematic review. Orien- tal Journal of Chemistry. 2022(1):85-93.
13. Hallberg H. Approaches to modeling of recrystallization. Metals. 2011;1(1):16-48.
14. Satiadarma K, Mulya M, Tjohjono DH dan Kartasasmita  RE. Asas  Pengembangan Prosedur Analisis.  1  ed.  Surabaya: Air- langga University Press; 2004. 183–210 15. M u l j a   M   .   A na l i s i s   i n s t r u m e n - tal.  Surabaya:  Airlangga  University Press;  1995.  26–71,  114–36,  192–4
16. McMurry  JE.  Fundamentals  of  organic chemistry.  Cengage  Learning;  2010.