## IDENTIFIKASI KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS  DAN AKTIVITAS ANTIPIRETIK EKSTRAK ETANOL DAUN Ipomoea carnea Jacq

## MELALUI INDUKSI PEPTON PADA MENCIT JANTAN
Thin Layer Chromatography Identification  and Antipyretics Activities of Ipomoea carnea Jacq Leaves Aethanol Extract by Pepton Induction to Male Mice
Nova Rahma Widyaningrum 1 , Andriani Noerlita Ningrum 2

## STIKES Mamba’ul Ulum Surakarta
thussannofx@gmail.com

## ABSTRAK
Latar  Belakang :  Antipiretik  bekerja  dengan  cara  mencegah  naiknya prostaglandin sehingga peningkatan suhu tubuh dapat dicegah dengan vasodilatasi perifer di kulit dan keringat  yang berlebih. Salah satu tanaman obat  yang diduga memiliki  aktivitas  antipiretik  adalah    tanaman  kangkung  hutan  ( Ipomeae  carnea L).  Tanaman  ini  mengandung  zat  aktif  berupa  flavonoid,  yang  diduga  memiliki kemampuan sebagai antipiretik.
Tujuan  penelitian :  Mengidentifikasi  secara  kualitatif  kandungan  kimia  ekstrak etanol  daun I.  carnea dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan  menganalisis aktivitas antipiretiknya melalui induksi pepton pada mencit jantan galur Wistar. Metode: Ektraksi senyawa aktif dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut etanol  90%,  kemudian  diuapkan  menjadi  ekstrak  kental.  Identifikasi  senyawa dilakukan  dengan  skrining  fitokimia,  dilanjutkan  dengan  identifikasi  KLT  untuk mengetahui  profil  senyawa  di  dalam  ekstrak  kangkung  hutan.  Hewan  uji  dibagi menjadi  5  kelompok  perlakuan,  yaitu  kelompok  pelarut,  kontrol  positif (parasetamol) dan dosis 125mg/kgBB; 250mg/kgBB dan 500mg/kgBB. Aktivitas antipiretik  dilihat  dari  penurunan  suhu  rektal  sebelum  dan  sesudah  diinduksi, kemudian perbedaan signifikansinya dianalisis menggunakan uji Anova dan LSD.
Hasil : Hasil penyarian diperoleh rendemen sebesar 26,94%, kemudian dilakukan skrining  fitokimia  untuk  simplisia  diperoleh  hasil  bahwa  EEDKH  positif mengandung  alkaloid,  saponin,  polifenol,  tanin  dan  flavonoid.  Hasil  KLT  juga menunjukkan  deteksi  yang  sama.  Persentase  daya  antipiretik  EEDKH  berturut- turut sebesar 40,7%; 38,03% dan 28,4% dengan pembanding parasetamol sebesar 50,73%.  Hasil  analisis  statistik  menggunakan  uji  ANOVA  menunjukkan  bahwa terdapat perbedaan signifikan antarperlakuan dengan nilai p<0,05.
Simpulan : EEDKH mengandung alkaloid, flavonoid,  fenolik, tanin dan saponin, serta memiliki aktivitas sebagai antipiretik yang sebanding dengan parasetamol.
Kata Kunci: Ipomeae carnea, antipiretik, KLT, ekstrak etanol
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 92 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)

## ABSTRACT
Background : Antipyretics work by inhibiting of prostaglandin ascends so that an increasing  of  the  body  temperature  can  be  prevented  by  peripheral  vasodilation and  excessive  sweating.  One  of  the  medicinal  plants  suspected  of  having antipyretic  activity  is  Ipomeae  carnea L .  This  plant  contains  active  substances such us flavonoids, which are thought to have antipyretic activities.
Research purposes : To qualitatively identify of the I. carnea’s substances on leaf ethanol  extract  by  thin  layer  chromatography  (TLC)  and  analyze  its  antipyretic activity through peptone induction in male Wistar strain mice.
Methods : Extraction of the active compound was carried out by maceration using 90%  ethanol  solvent,  then  evaporated  into  a  thick  extract.  Identification  of compounds  was  carried  out  by  phytochemical  screening,  followed  by  TLC identification to determine the profile of compounds in I. carnea extract. The test animals were divided into 5 treatment groups, namely the solvent group, positive control  (paracetamol)  and  the  dose  of  125mg/kgBW;  250  mg/kgBW  and  500 mg/kgBW.  Antipyretic  activity  was  seen  from  the  decrease  in  rectal  temperature before and after induction, then the difference in significance was analyzed using Anova and LSD tests .
Results : The  results  of  the  screening  obtained  a  yield  of  26.94%,  then phytochemical  screening  for  simplicia  showed  that  EEDKH  was  positive  for containing  alkaloids, saponins, polyphenols,  tannins  and flavonoids. TLC results also showed the same detection. The percentage of EEDKH antipyretic activities was 40.7%, respectively; 38.03% and 28.4% with paracetamol as comparison of 50.73%. The results of statistical analysis using the ANOVA test showed that there were significant differences between treatments with p <0.05
Conclusion : EEDKH  contained  alkaloids,  flavonoids,  phenolics,  tannins  and saponins, and had antipyretic activity comparable to paracetamol.
Keywords : Ipomea carnea , antipyretics activites, TLC, aethanol extract

## PENDAHULUAN
Hipotalamus  merupakan  organ  di  otak  yang  salah  satu  fungsinya  untuk mengatur  keseimbangan  produksi  dan  hilangnya  panas  tubuh  (Moot,  2013). Demam  merupakan  suatu  gejala  atau  penanda,  bukan  merupakan  penyakit tersendiri. Beberapa ahli menyatakan bahwa hal  tersebut merupakan kemampuan untuk  menangkis  adanya  infeksi  (Tjay  dan  Rahardja,  2015).  Peningkatan  suhu tubuh  diakibatkan  karena  adanya  pelepasan  zat  pirogen  endogen  atau  sitokinin, seperti  interleukin  yang  memacu  pelepasan  prostaglandin  berlebih  di  daerah preoptik  hipotalamus  (Moot,  2013).  Suhu  normal  tubuh  berkisar  antara  36,5  – 37,5 0 C, dan pada suhu tubuh di atas 37 0 C, limfosit serta makrofag menjadi lebih
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 93 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
aktif,  yang  kemudian  akan  terjadi  keadaan  fatal  atau  kritis  jika  suhu  tubuh mencapai  40-41 0 C.  Hal  ini  akan  menyebabkan  beberapa  kerusakan,  antara  lain dehidrasi,  kurangnya  oksigen,  kerusakan  saraf,  nyeri  otot,  kejang  bahkan kerusakan  otak  (Yapian,  2011).  Untuk  itu,  demam  perlu  diatasi  menggunakan antipiretik (Odding, 2016).
Antipiretik  (penurun  panas  tubuh)  merupakan  senyawa  atau  golongan  obat yang  mampu  bekerja  untuk  mendapatkan  “ thermostat ”  di  hipotalamus  untuk menekan  pelepasan  interleukin  yang  meningkat  akibat  kenaikan  suhu.  Tubuh kemudian  akan  bekerja  untuk  menurunkan  suhu  ke  suhu  baru  yang  lebih  rendah dan  hasilnya  adalah  penurunan  demam.  Antipiretik  juga  mampu  mengurangi sintesis prostaglandin di hipotalamus, dengan menghambat efek pirogen endogen atau  infeksi  jasad  renik  pada  pengatur  sensor  panas  di  hipotalamus  otak. Akibatnya, peningkatan prostaglandin di otak dapat dicegah, sehingga suhu tubuh dapat  diturunkan  dengan  pengeluaran  kalor  yang  disertai  dengan  keringat  (Tjay dan Rahardja, 2013).
Saat  ini  minat  masyarakat  untuk  memanfaatkan  kembali  obat  yang  berasal dari  alam  sangat  besar.  Hal  ini  dikarenakan  efek  sampingnya  relatif  kecil  atau bahkan tidak ada bila dibandingkan dengan obat yang berasal dari bahan sintetis. Banyak  jenis  tumbuhan  yang  telah  diteliti,  dan  terbukti  memiliki  efek  yang berkhasiat sebagai tanaman obat dan dijadikan untuk alternatif pengobatan. Salah satunya adalah tanaman kangkung hutan ( Ipomea carnea Jacq).
Tanaman  kangkung  hutan  ini  adalah  salah  satu  tanaman  yang  memiliki racun  untuk  binatang  ternak.  Racun  terletak  pada  biji,  dimana  banyak mengandung  selenium  dengan  kadar  tinggi.  Racun  ini    dapat  menyebabkan depresi,  tremor,  gugup,  kurus  karena  terjadi  kegagalan  saluran  pencernaan,  dll (Sharma and Bacheeti, 2013). Selain kandungan seleniumnya, tanaman kangkung hutan  juga  memiliki  kandungan  senyawa  aktif  golongan  fenolik,  yang terakumulasi  pada  bunga  (konsentrasi  fenolik  paling  besar)  dan  batang (konsentrasi  fenolik  paling  rendah).  Sedangkan  kandungan  flavonoid,  khususnya katekol  dan  kuersetin  tersebar  pada  bunga,  daun  dan  batang  (Khatiwora, et  al , 2010).  Senyawa  fenol  ini  berkhasiat  sebagai  antioksidan  juga  sebagai imunomodulator,  sedangkan  flavonoid  memiliki  khasiat  sebagai  antibakteri, antiinflamasi,  antialergi  serta  antikanker  (Khatiwora, et  al ,  2010;  Adsul, et  al, 2012;  Khalid, et  al, 2011;  dan  Deshpande, et  al, 2012).  Kandungan  lain  pada tanaman  kangkung  hutan  ini  antara  lain  saponin,  xanthoprotein,  triterpenoid  dan tannin (Sharma and Bacheeti, 2013).
Pemanfaatan  daun  kangkung  hutan  belum  cukup  optimal,  hal  ini dikarenakan minimnya pengetahuan masyarakat  tentang manfaat  besarnya. Daun kangkung hutan diduga memiliki kemampuan sebagai antiinflamasi, maka diduga pula  mampu  memiliki  kemampuan  antipiretik  (Khalid, et  al, 2011).  Flavonoid yang  terkandung  pada  daun  kangkung  hutan  merupakan  senyawa  terbesar  dari fenol,  yang bekerja dengan menghambat pertumbuhan bakteri  serta menghambat prostaglandin  akibat  adanya  pirogen  (Moot, et  al ,  2013).  Kandungan  flavonoid
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 94 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
pada  daun  kangkung  hutan  diduga  bekerja  dengan  menghambat  enzim siklooksigenase,  yaitu  enzim  yang  muncul  saat  peradangan  atau  infeksi  jasad renik,  sehingga  dapat  menurunkan  prostaglandin.  Hal  ini  akan  berakibat meningkatkan  vasodilatasi  di  kulit,  sehingga  pengeluaran  kalor  akan  meningkat disertai dengan meningkat pula pengeluaran keringat (Wilmana, 2007).
Pepton  adalah  salah  satu  protein  sebagai  bahan  pirogen  yang  mampu memicu  kenaikan  suhu  tubuh  (demam).    Hal  inilah  yang  mendorong  peneliti untuk  melakukan  penelitian  tentang  kemampuan  antipiretis  dari  ekstrak  etanol daun kangkung hutan pada mencit galur Wistar, setelah diinduksi dengan pepton secara intramuskular, kemudian menentukan ekstrak dan dosis yang paling efektif untuk menurunkan suhu pada mencit tersebut.

## METODE PENELITIAN

## 1.  Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kangkung Hutan
a. Pengeringan dan pembuatan serbuk Daun  kangkung  hutan  dicuci  dengan  air  dan  disortir  dari  pengotor,  daun dikeringkan  di  bawah  matahari  langsung  selama  2  hari,  lalu  diangin- anginkan  selama  satu  minggu,  daun  kemudian  dikeringkan  dalam  oven pada  suhu  50 ⁰ C  selama  24  jam.  Simplisia  yang  telah  kering  diserbuk menggunakan mesin serbuk.
b. Ekstraksi Dengan Pelarut Etanol Serbuk  daun  kangkung  hutan  sebanyak  1  kg  dimaserasi  dengan  etanol volumnya  10  liter,  lalu  disaring  dengan  corong Buchner .  Kemudian dilakukan  remaserasi  dengan  perbandingan  simplisia  dan  penyari  yang sama  seperti  pada  saat  maserasi  awal.  Filtrat  diuapkan  dengan rotary evaporator lalu  diangin-anginkan  hingga  masing  –  masing  pelarutnya menguap dan diperoleh filtrat yang kental. Ekstrak kental diletakkan dalam desikator untuk pengeringan lebih lanjut.
c. Skrining Fitokimia
Setelah  ekstrak  kental  terbentuk,  dilakukan  skrining  fitokimia,  yaitu identifikasi  secara  kimia  zat  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  etanol meliputi  uji  polifenol,  uji  alkaloid,  uji  triterpenoid  dan  steroid,  uji flavonoid, uji tannin dan uji saponin.
d. Profil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Larutan  uji  dari  ekstrak,  ditotolkan  pada  lempeng  selulosa,  dikeringkan dan  dikembangkan  dalam  bejana  pengembang  berisi  n-butanol  :  asam asetat  :  air  dengan  perbandingan  4  :  1  :  5.  Pengembangan  dilakukan setinggi  10  cm  kemudian  pelat  diangkat  dan  dikeringkan.  Penampakan bercak dilakukan dengan menyemprotkan sitroborat. Jika terbentuk warna kuning maka positif mengandung flavonoid.
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 95 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
2.  Pengujian Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Kangkung Hutan
a. Pembuatan larutan Parasetamol Dosis parasetamol yang digunakan pada mencit adalah 91mg/kgBB secara peroral.  Pembuatannya  dengan  menimbang  serbuk  parasetamol  sebanyak 36,4 mg, kemudian dilarutkan dengan menggunakan bantuan CMC Na 1% sebanyak 10 ml.
b. Perlakuan Hewan Uji Sebelum dan Sesudah Induksi Pepton Mencit  jantan  galur  wistar  dipuasakan  selama  8  jam,  dan  diadaptasikan selama  3  hari  di  tempat  penelitian.    Sebanyak  30  ekor  mencit,  dipilih secara  acak,  kemudian  dikelompokkan  menjadi  5  kelompok  perlakuan untuk  masing-masing  ekstrak  etanol  daun  kangkung  hutan.  Tiap-tiap mencit  diukur  suhu  rektalnya  sebelum  diinduksi  dengan  pepton,  suhu  ini merupakan suhu normal mencit. Kemudian diukur kembali suhu rektalnya 2  jam  setelah  induksi  pepton,  untuk  mengetahui  peningkatan  suhu  tubuh, pasca  induksi.  Pemberian  pepton  dilakukan  secara  intramuskuler  dengan volume  0,3  ml/kgBB.  Intramuskuler  ini  adalah  pemberian  injeksi  pada paha mencit (Ermawati, 2010).
c. Pengujian Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Kangkung Hutan Rancangan  uji  mengikuti  acak  lengkap  pola  searah  dengan  hewan  uji mencit putih jantan galur Wistar B dengan berat badan 20-30 g dan umur 2,5-4 minggu sebanyak 30 ekor dibagi 5 kelompok (kelompok I, kelompok II  dan  3  kelompok  perlakuan).  Sebelumnya  suhu  normal  mencit  diukur terlebih dahulu pada rektal, kemudian diinduksi dengan pepton, lalu diukur peningkatan  suhunya  (2jam  setelah  induksi),  dan  kemudian  diberi perlakuan sebagai berikut:
1) Kelompok I adalah kontrol pelarut (kontrol negatif). Mencit diberi pelarut yang sesuai secara oral.
2) Kelompok II adalah kontrol positif. Mencit diberi larutan parasetamol dosis 91 mg/kg BB secara oral
3) Kelompok III adalah kelompok perlakuan I.
Mencit  diberi  perlakuan  ekstrak  etanol  daun  kangkung  hutan  dengan dosis 125mg/kgBB secara oral
4) Kelompok IV adalah kelompok perlakuan II.
Mencit  diberi  perlakuan  ekstrak  etanol  daun  kangkung  hutan  dengan dosis 250mg/kgBB secara oral
5) Kelompok V adalah kelompok perlakuan III.
Mencit  diberi  perlakuan  ekstrak  etanol  daun  kangkung  hutan  dengan dosis 500mg/kgBB secara oral
30 menit setelah perlakuan di atas, suhu kembali diukur, diulangi kembali setiap 30 menit sampai pada menit ke-180.
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 96 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)

## Analisis Hasil 1.  Uji Anova dan Post Hoc
Data  yang  diperoleh  adalah  perubahan  suhu  sebelum  dan  sesudah  diinduksi pepton,  kemudian  dilakukan  perhitungan,  diperoleh  persentase  aktivitas antipiretik.  Dari  data  tersebut,  kemudian  diolah  secara  statistik  dengan  Uji Anova,  dilanjutkan  degan  uji post  Hoc dengan  bantuan software SPSS. Analisis  ini  digunakan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak terhadap kontrol. T 0 - T 1 %  Aktivitas Antipiretik = -------------------   x 100% T 0
Keterangan: T 0 = Suhu sebelum induksi pepton T 1 = Suhu sesudah induksi pepton DPT
2.  Analisis Efektivitas Antipiretik
Analisis efektivitas antipiretik ditentukan dengan membandingkan persentase masing-masing daya antipiretik ekstrak dnegan kontrol positif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
1. Hasil Penyarian
Penyarian  atau  penarikan  zat  aktif  yang  terkandung  dalam  daun  kangkung hutan  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  90%.  Adapun  hasil penyariannya adalah sebagai berikut :
Tabel 1. Hasil maserasi ekstrak etanol daun kangkung hutan (EEDKH) Warna Ekstrak Bau Bentuk Bobot Rendemen Persentase Rendemen Hijau pekat Khas ekstrak/aromatis Ekstrak kental sedikit glossy 29,36 gram 26,94%

## 2. Hasil Uji Kualitatif Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  merupakan  analiss  kualitatif  terhadap  kandungan senyawa  aktif  tanaman,  yang  dimulai  dengan  uji  pendahuluan  kemudian dilanjutkan  dengan  uji  kimia  tanaman  tersebut  dengan  berbagai  pereagen  yang spesifik. Hal ini dilakukan untuk mendeteksi kandungan metabolit sekunder yang tersari  saat  dilakukan  ekstraksi.  Adapun  hasil  uji  pendahuluan  dan  skrining fitokimia menggunakan metode uji tabung adalah sebagai berikut :
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 97 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)

## Tabel 2. Hasil skrining fitokimia ekstrak dan simplisia daun kangkung hutan
Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Hasil Skrining Fitokimia Simplisia Gugus kromofor positif Gugus kromofor positif Alkaloid positif Alkaloid positif Alkaloid tersier positif Alkaloid tersier positif Polifenol positif Alkaloid kuertener positif Saponin positif Polifenol positif Flavonoid positif Tanin positif Saponin positif Flavonoid positif
Tabel  2  di  atas  menunjukkan  bahwa  EEDKH  mengandung  senyawa alkaloid, polifenol, saponin dan flavonoid, sedangkan untuk uji skrining fitokimia pada  simplisia  hampir  semuanya  metabolit  sekunder  positf  seperti  alkaloid  baik tersier maupun kuertener, polifenol, tanin, saponin dan flavonoid.

## 3. Hasil Uji Kualitatif Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi lapis tipis merupakan prosedur pemisahan senyawa campuran berdasarkan  kecepatan  migrasi  yang  disebabkan  karena  adanya  perbedaan koefisien distribusi  masing-masing senyawa pada fase  gerak dan  fase diam  yang tidak  saling  bersinggungan  dan  tidak  saling  campur  (Puspita  MD.,  2010).  KLT digunakan  untuk  pemisahan  senyawa  secara  cepat,  menggunakan  fase  diam berupa  silika  gel  yang  bersifat  polar  dan  fase  gerak  yang  bersifat  kurang  polar. Adapun hasil dari penegasan bercak KLT adalah sebagai berikut :
Tabel 3. Hasil KLT EEDKH Pereaksi Warna hRf Sebelum Setelah 254 366 254 366 Liebermann burchard hijau hijau hijau Jingga, hijau 41,3 Vanillin : H 2 SO 4 kuning - kuning - 50,0; 58,8; 91,3 FeCl 3 Biru kehijauan Hijau kebiruan Biru kehijauan Hijau kebiruan 91,3; 62,5 KOH etanolis kuning Jingga Kuning kuning Jingga coklat 43,8; 48,8; 92,5 Meyer Kuning orange Kuning orange jingga jingga 53,8; 62,0 Dragendroff Kuning coklat Kuning coklat Kuning coklat Jingga kecoklatan 53,8; 61,3; 92,5 Sitroborat Kuning kuning Kuning kehijauan Kuning kehijauan 56,3; 62,5; 91,3
Hasil  penotolan  pada  bercak-bercak  yang  diperoleh  kemudian  diamati berdasarkan pengamatan UV254nm dan UV366nm juga deteksi pereagen semprot agar  lebih  spesifik.  Perubahan-perubahan  warna  pada  bercak  kemudian dicocokkan dengan referensi untuk menyimpulkan kandungan metabolit sekunder yang  tersari  pada  EEDKH  tersebut.  Adapun  referensi  warna  standar  dari  deteksi beberapa pereagen adalah sebagai berikut :
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 98 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Tabel 4. Warna standar penampakan bercak berdasarkan literatur
Pereaksi Warna Jenis senyawa Libermann burchard Hijau, kuning, merah, biru Ungu, violet Saponin Fenolik, flavonoid Vanillin : asam sulfat Berbagai warna Alkaloid FeCl 3 Berbagai warna, biru-hitam Fenol, tannin KOH etanolis Merah Kuning, jingga, coklat Antrakinon Fenolik, flavonoid Mayer Dragendrof Kuning kecoklatan, kuning orange   Antrakinon, alkaloid sitroborat Kuning, hijau Flavonoid Sumber :  Metode  fitokimia  (Harborne,  J.B.,  1987).  Petunjuk  praktikum  fitokimia (Maryati  dan  Sri  wahyuni,  2007).  (Markham,  1988).  (Parmadi,  2000).  (Murwanto  dan Santoso, 2012)
4. Hasil Pengujian Antipiretik
Pengujian antipiretik dilakukan dengan menginduksi hewan uji menggunakan senyawa pepton untuk menaikkan suhu tubuh pada mencit. Hal ini dikarenakan  pepton  merupakan  salah  satu  bahan  pirogen  yang  mampu menimbulkan  demam.  Adapun  hasil  persentase  daya  antipiretik  tiap  perlakuan adalah sebagai berikut :
Tabel 5. Persentase daya antipiretik EEDKH Perlakuan Persen Daya Antipiretik (% DAP) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Rerata Dosis 125mg/kgBB 26,3 28,4 30,5 28,4 Dosis 250mg/kgBB 37,6 37,2 39,3 38,03 Dosis 500mg/kgBB 43,1 39,7 39,3 40,7 Parasetamol 47,8 44 60,4 50,73
Setelah persentase daya antipiretis diperoleh kemudian dilakukan pengujian statistik menggunakan analisis ANOVA dengan bantuan program SPSS versi 16. Adapun hasil pengujian statistik % DAP adalah sebagai berikut :
Tabel 6. Uji prasyarat dan uji ANOVA persentase daya antipirerik EEDKH Uji Statistik Nilai Signifikansi Kesimpulan Normalitas kolmogorof smirnov 0,542 0,930 > 0,05 Data terdistribusi normal Homogenitas levine 15,987 0,057 > 0,05 Data homogen ANOVA 12,089 0,002 < 0,05 Berbeda signifikan Pembahasan Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan desain post test  comparative  group dengan  variasi  dosis  pada  ekstrak  etanol  daun  kangkung hutan  (EEDKH).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  kemampuan antipiretik  atau  menurunkan  kenaikan  suhu  badan  dari  ekstrak  etanol  daun kangkung hutan sekaligus mengidentifikasi secara kualitatif, baik melalui skrining fitokimia  maupun  dengan  kromatografi  lapis  tipis  senyawa-senyawa  aktif  yang terkandung pada eksrak etanol daun kangkung hutan (EEDKH). Mekanisme kerja
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 99 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
antipiretik adalah menghambat aktivitas enzim siklooksigenase, di mana enzim ini berperan  dalam  pembentukan  endoperoksida  dari  asam  arakhidonat,  sehingga prostaglandin  akan  terhambat  (Tjay  dan  Rahardja,  2015).  Salah  satu  metabolit sekunder  pada  tanaman  yang  memiliki  mekanisme  kerja  tersebut  adalah flavonoid,  di  mana  struktur  senyawa  tersebut  mirip  dengan  struktur  parasetamol (Widyaninrum, dkk, 2021).
Selain  flavonoid,  kandungan  seenyawa  aktif  pada  daun  kangkung  hutan antara  lain  senyawa  fenolik  khususnya  katekol  dan  kuersetin,  saponin, xantoprotein,  triterpenoid  dan  tanin  (Widyaningrum,  dkk,  2021;  Sharma  dan Bacheeti, 2013). Beberapa senyawa tersebut dapat larut baik dalam senyawa polar maupun  semipolar.  Pelarut  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  untuk  proses ekstraksi  adalah  etanol  90%.  Etanol  90%  merupakan  pelarut  yang  bersifat semipolar,  sehingga  diharapkan  dapat  menyari  senyawa  aktif  daun  kangkung hutan secara maksimal dan dihasilkan rendemen yang lebih banyak, karena dapat menyari baik senyawa yang bersifat polar maupun nonpolar (Widyaningrum, dkk, 2019; Septianingsih, 2008). Berdasarkan pernyataan Voight (1995) bahwa alasan penggunaan  etanol  90%  sebagai  pelarut  ekstraksi  antara  lain  etanol  merupakan pelarut  universal,  lebih  selektif  dibandingkan  dengan  air,  sukar  ditumbuhi mikroba  atau  kapang  pada  konsentrasi  etanol  diatas  20%,  tidak  toksik,  netral, absorbsi baik, bercampur dengan air di segala perbandingan, mampu memperbaiki stabilitas  bahan  obat  terlarut  dan  tidak  memerlukan  panas  yang  tinggi  untuk pemekatan.
Hasil  penyarian  diperoleh  ekstrak  kental  dengan  bobot  rendemen  sekitar 26,94%  atau  bobot  ekstrak  sebesar  29,36  gram,  berbentuk  cair  sedikit  kental glossy , berwarna hijau pekat, berbau aromatis khas ekstrak. Langkah selanjutnya yang  dilakukan  adalah  mengidentifikasi  secara  kualitatif  senyawa  aktif  yang terkandung pada daun kangkung hutan baik bentuk simplisianya maupun ekstrak kentalnya menggunakan metode skrining fitokimia uji tabung. Skrining fitokimia dimulai  dengan  uji  pendahuluan  untuk  mengidentifikasi  semua  senyawa  aktif tanaman yang mengandung gugus kromofor, kemudian dilanjutkan uju tabung dan uji penegasan menggunakan kromatgrafi lapis tipis.
Simplisia  maupun  ekstrak  kental  daun  kangkung  hutan  pada  uji pendahuluan  menunjukkan  positif  memiliki  gugus  kromofor,  hal  ini  ditandai dengan  adanya  perubahan  warna  larutan  ke  kuning  atau  kuning  kemerahan. Selanjutnya  pada  uji  tabung,  perbedaan  kandungan  metabolit  yang  tersari  antara ekstrak dan simplisia kering adalah pada ekstrak tidak terdapat tanin dan alkaloid kuertener,  sedangkan  pada  simplisiaterdeteksi  mengandung  tanin  dan  alkaloid kuertener.  Secara  teori  tanin  bersifat  polar,  sedangkan  pelarut  ekstraksi  yang digunakan  adalah  etanol  90%,  cenderung  bersifat  semipolar,  namun  meskipun pelarut  yang  digunakan  bersifat  semipolar,  tanin  seharusnya  masih  bisa  larut, sedangkan  jika  pelarut  ekstraksi  yang  digunakan  bersifat  nonpolar  seperti  n- heksana  atau  benzena  maka  tanin  praktis  tidak  akan  larut  ke  dalamnya  (Puspita MD., 2010).
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 100 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Langkah selanjutnya setelah dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam  daun  kangkung  hutan,  lalu  dilakukan identifikasi  kualitatif  berupa  pemisahan  senyawa  secara  sederhana  menggunakan KLT  yang  dilengkapi  dengan  beberapa  deteksi  semprot  seperti  FeCL 3 ,  vanilin asamsulfat,  Libereman-Bouchardat,  KOH-etanolis,  sitroborat,  dragendroff  dan meyer.  FeCL 3 merupakan  pereagen  deteksi  semprot  untuk  mengidentifikasi adanya  senyawa  aktif  tanin,  saponin  dan  flavonoid  atau  senyawa  fenolik,  yang ditandai dengan bercak berwarna mulai dari hijau sampai kehitaman. Identifikasi KLT menggunakan pereaksi semprot FeCL 3 (tabel 3) menunjukkan nilai hRF dari bercak  yang  terdeteksi  adalah  91,3  dan  62,5  dengan  warna  hijau  kebiruan  pada deteksi  UV  254nm  dan  biru  kehijauan  pada  deteksi  UV  366nm.  Hal  ini  sesuai dengan Harborne, JB. (1987) dan Widyaningrum, et al., (2016) yang menyatakan bahwa senyawa aktif tanin, saponin dan flavonoid jika disemprot dengan pereagen FeCL 3 akan  berwarna  biru  kehitaman,  hijau,  biru  kehijauan,  abu-abu  kehitaman dengan  nilai  hRF  untuk  tanin  sebesar  73,7;  saponin  56,5  dan  flavonoid  di  atas 87,8. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa EEDKH mengandung senyawa saponin dan flavonoid.
Deteksi  vanilin  asam  sulfat  digunakan  untuk  mendeteksi  adanya  senyawa saponin  dan  alkaloid  yang  ditandai  dengan  bercak  yang  berwarna  biru  sampai ungu  atau  kuning,  hijau  serta  merah  (saponin)  atau  berbagai  warna  (alkaloid) (Harborne, 1987). Hasil dari penelitian ini menunjukkan harga hRF saat dideteksi menggunakan  vanilin  asam  sulfat  pada  UV254nm  berkisar  50,0;  58,8  dan  91,3 dengan warna bercak kuning, sedangkan pada UV366 tidak nampak hRF bercak maupun  warna  fluorosensinya.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  EEDKH  positif mengandung  alkaloid  dengan  hRF  sekitar  50,0  –  58,8  dan  saponin  dengan  hRF sekitar 91,3.
Deteksi  Lieberman  Buchardad  menunjukkan  positif  saponin  jika  muncul warna  kuning,  jingga,  ungu,  merah  ungu  dan  hijau  pada  pengamatan  UV, sedangkan  jika  positif  mengandung  senyawa  fenol  maka  bercak  akan  berwarna ungu  dan  jika  mengandung  flavonoid  maka  bercak  akan  berwarna  violet (Parmadi,  2000;  Wagner,  1987).  Nilai  hRF  pada  hasil  deteksi  menggunakan Lieberman-bouchardat sangat rendah,  yaitu 41,3 yang artinya senyawa terdeteksi bersifat nonpolar atau semipolar dengan warna bercak hijau atau jingga kehijauan. Hal  ini  menunjukkan  senyawa  yang  terkandung  dalam  EEDKH  adalah  positif golongan triterpenoid yaitu saponin.
Deteksi  KOH-etanolis  digunakan  untuk  mengidentifikasi  adanya  senyawa antrakinon  (bercak berwarna merah) atau senyawa fenolik dan flavonoid  (bercak berwarna kuning, jingga hingga kecoklatan). Hasil dari penelitian ini pada deteksi KOH-etanolis  dihasilkan  bercak  berwarna  kuning  pada  pengamatan  UV254nm sedangkan pada pengamatan UV366nm  berwarna jingga kecoklatan dengan nilai
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 101 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
hRF  yang  beragam,  antara  43,8;  48,8  dan  92,5  (tabel  3).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  kemunginan  senyawa  yang  terkandung  pada  EEDKH  adalah  golongan senyawa fenolik atau flavonoid yang kurang polar karena harga retensinya rendah.
Deteksi  berikutnya  adalah  menggunakan  pereagen  semprot  Meyer  dan Dragendroff  yang  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  adanya  senyawa  alkaloid. Warna bercak yang dihasilkan jika senyawa alkaloid berinteraksi dengan pereagen Meyer  atau  Dragendroff  adalah  kuning,  orange  hingga  coklat  (Wagenr,  1987). Hasil  dari  KLT  pada  bercak  EEDKH  baik  di  pengamatan  UV254nm  maupun UV366nm  berwarna  kuning  orange  setelah  dideteksi  dengan  pereagen  Mayer berubah  warna  menjadi  jingga,  sedangkan  pada  bercak  yang  disemprot  dengan Dragendroff berwarna kuning kecoklatan (UV254nm) dan jingga kecoklatan pada UV366nm.  Hasil  jarak  retensi  senyawa  tersebut  berada  pada  hRF  sekitar  53,8  – 92,5.  Hasil  dari  deteksi  tersebut  menunjuukkan  bahwa  senyawa  aktif  yang terkandung pada EEDKH adalah senyawa alkaloid.
Deteksi  yang  terakhir  adalah  deteksi  dengan  menggunakan  pereagen sitroborat.  Pereagen  sitroborat  digunakan  untuk  mendeteksi  adanya  senyawa fenolik,  flavonoid  ataupun  tanin,  dimana  warna  bercak  yang  dihasilkan  adalah kuning, kuning orange (senyawa flavonoid) dan kuning kehijauan untuk senyawa tanin.  Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  positif  senyawa  flavonoid,  hal  ini ditunjukkan dengan perubahan warna bercak setelah disemprot dengan sitroborat berwarna  kuning  dan  berfluorosensi  kuning  kehijauan  pada  pengamatan UV366nm.
Langkah  berikutnya  pada  penelitian  ini  adalah  pengujian  aktivitas antipiretik  EEDKH  menggunakan  induksi  pepton  secara  intramuskular.  Metode pengujian aktivitas antipiretik dapat dilakukan dengan tiga metode,  yaitu metode lipopolisakarida,  induksi  ragi  dan  induksi  pepton.  Metode  yang  digunakan penelitian  ini  adalah  induksi  pepton,  hal  ini  dikarenakan  lebih  murah,  mudah diperoleh  dan  tidak  toksik.  Senyawa  pepton  bersifat  pirogen  sehingga  dapat menyebabkan kenaikan suhu/demam pada hewan uji (Novadyanti, Kusharyanti I., dan  Wahdaningsih  S.,  2015).  Budiman  (2010)  mengatakan  bahwa  pepton merupakan protein yang terhidrolisis, yang berpotensi sebagai pemicu demam dan tidak memiliki sifat toksik. Sebelum dilakukan induksi demam, suhu tubuh mencit diukur  terlebih  dahulu  sebagai  suhu  awal  perrektal,  kemudian  diinduksi  dengan pepton dan diukur peningkatan suhunya sampai 2 jam setelah diinduksi kemudian diberi  perlakuan  berupa  variasi  dosis  EEDKH  dan  kontrol  positif  yaitu parasetamol.  Hewan  uji  yang  mengalami  peningkatan  suhu  tubuh  sebesar  atau sama dengan 0,6 0 C dapat dikategorikan demam (Novadyanti, Kusharyanti I., dan Wahdaningsih S., 2015).
Suhu awal mencit yang diukur sebelum induksi berkisar antara 33 0 C – 36 0 C dengan rata-rata kenaikan suhu setelah induksi berkisar antara 1-2 0 C. Grafik rata- rata penurunan suhu rektal mencit setelah perlakuan dengan EEDKH dan kontrol positif adalah sebagai berikut :
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 102 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Gambar 1. Grafik penurunan suhu perektal pada kelompok perlakuan Grafik  tersebut  di  atas  menunjukkan  bahwa  penurunan  suhu  tubuh  mencit  yang tajam  terjadi  pada  menit  ke-10  pada  dosis  125mg/kgBB  namun  mengalami kenaikan suhu lagi pada menit ke-20 sampai 30. Penyebab penurunan suhu tubuh yanh bervariasi ini dikarenakan berbagai faktor antara lain galur hewan uji, berat badan,  hormon,  diet,  lingkungan  dan  juga  faktor  pskologis  berupa  stres  pada hewan  uji  (Rahma  NW.,  dkk,  2015).  Rata-rata  penurunan  suhu  paling  linier  dan tinggi  adalah  pada  parasetamol,  kemudian  menyusul  dosis  500mg/kgBB  dan 250mg/kgBB.
Penurunan suhu  tersebut dilanjutkan dengan menghitung luas bawah kurva atau area  under  curve (AUC)  yang  dimaksudkan  untuk  mengetahui  rata-rata penurunan  suhu  tiap  satu-satuan  waktu,  yang  kemudian  digunakan  untuk menganalisis  persentase  daya  antipiretik  dari  EEDKH.  Adapun  persentase  daya antipiretik  (%DAP)  dari  EEDKH  yang  diperoleh  dari  hasil  analisis  AUC  adalah sebagai berikut :
Gambar 4. Grafik persentase daya antipiretik EEDKH pada kelompok perlakuan
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 103 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Pada  gambar  grafik  di  atas  menunjukkan  bahwa  parasetamol  sebagai kontrol positif tetap memberikan daya antipiretis yang lebih besar daripada ketiga perlakuan  ekstrak tersebut.  Berturut-turut rata-rata persentase daya antipireti dari parasetamol,  dosis  500mg/kgBB,  dosis  250mg/kgBB  dan  dosis  125mg/kgBB adalah 50,73%;  40,7%;  38,03% dan 28,4%. Hasil  analisis statistik menggunakan uji  ANOVA  menunjukkan  adanya  perbedaan  dari  keempat  perlakuan  tersebut, dimana p<0,05, namun untuk dosis 500mg/kgBB dan 250mg/kgBB menunjukkan tidak ada perbedaan bermakna setelah dilakukan analisis 2 variabel menggunakan uji LSD, dimana p>0,05.
Aktivitas  antipiretik  dari  EEDKH  dikarenakan  EEDKH  mengandung beberapa  senyawa  yang  berkhasiat  sebagai  antipiretik  seperti  senyawa  fenolik, flavonoid,  saponin  dan  alkaloid.  Kandungan  flavonoid  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  serta  menghambat  aktivitas  prostaglandin  akibat  adanya pirogen  (Moot, et  al ,  2013).  Flavonoid  memiliki  mekanisme  kerja  menghambat enzim siklooksigenase yang muncul akibat peradangan, sehingga berakibat terjadi peningkatan  vasodilatasi  di  kulit,  terjadi  pengeluaran  panas  tubuh  yang  disertai dengan  meningkatnya  pengeluaran  keringat  sehingga  subu  tubuh  akan  turun (Reynerston, 2007).

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
1. Berdasarkan  identifikasi  kualitatif  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis (KLT)  bahwa  ekstrak  etanol  daun  kangkung  hutan  mengandung  senyawa fenolik, flavonoid, alkaloid, tanin dan saponin.
2. Ekstrak etanol daun kangkung hutan (EEDKH) memiliki aktivitas antipiretik melalui induksi pepton pada mencit galur Wistar dengan nilai persentase daya antipiretiknya  berturut-turut  dari  dosis  500mg/kgBB,  250mg/kgBB, 125mg/kgBB  sebesar  40,7%;  38,03%  dan  28,4%  hampir  setara  dengan kontrol positif parasetamol sebesar 50,73% (untuk dosis 500mg/kgBB).

## Saran
1. Penelitian  lanjutan  dapat  meneliti  tentang  uji  aktivitas  antipiretiknya  baik dengan  senyawa  polar  maupun  nonpolar  atau  hasil  fraksinasi  dari  ekstrak etanol 96% kangkung hutan
2. Penelitian  lanjutan  dapat  dilakukan  dengan  mengidentifikasi  kemampuan analgetik  pada  senyawa  polar  tersebut  atau  ekstrak  etanol  daun  kangkung hutan.
3. Perlu  dilakukan  penelitian  tentang  toksisitas  ekstrak  etanol  daun  kangkung hutan terkait dengan dosis sebagai analgetik ataupun antipiretiknya.
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 104 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)

## DAFTAR PUSTAKA
Abbasi MA., Zafar A., Riaz T., Rehman A., Arshad S., Shahwar D., et al , 2010, Evaluation of Comparative Antioxidant Potential of Aqueous and Organic Fractions of Ipomoea carnea , Journal of Medicinal Plants Research Vol 4 (18), 1883-1887
Adsul VB, et al , 2012, Antimicrobial Activities of Ipomea carnea Leaves , J. Nat. Prod. Plant Resour, 2(5):597-600
Budiman,  2010, Ilmu  Kesehatan  Masyarakat  dalam  Konteks  Kesehatan Lingkungan , Jakarta: EGC Deshpande NR, et al, 2012, Evaluation of Antioxidant activity of Ipomea carnea Leaves , J. Nat. Prod. Plant Resour, 2(5):584-588 Ermawati  EF.,  2010, Efek  Antipiretik  Ekstrak Daun Pare  (Momordica charantia L) Pada Tikus Putih Jantan, Skripsi, Fakultas Kedokteran UNS; Surakarta Freddy  IW.,  2007, Analgesik,  antipiretik,  antiinflamasi  non  steroid  dan  obat pirai; Farmakologi dan Terapi Edisi 5 , Fakultas Kedokteran UI; Jakarta Gunawan, 2007, Farmakologi dan Terapi Edisi Kelima , UI Press; Jakarta Harborne, J.B.1987. Metode Fitokimia II. Bandung: ITB. Jeffrey  AG.,  1994, Demam,  Termasuk  Demam  yang  Tidak  Diketahui Penyebabnya,  Prinsip-Prinsip  Ilmu  Penyakit  Dalam  Harrison ,  Penerbit Buku Kedokteran EGC; Jakarta
Khalid  S, et  al, 2011, Antiinflamatory  Activity  of  Aqueous  Extract  of  Ipomea carnea Jacq, Pharmacologyonline:326-331 Khatiwora  E, et  al ,  2010, Spectroscopic  determination  of  total  phenol  and flavonoid  contents  of  Ipomea  carnea ,  International  Journal  of  ChemTech Research, Vol 2, No. 3, 1698-1701
Maryati  dan  Wahyuni,  Sri.  2007. Petunjuk  Praktikum  Fitoki mia.  Surakarta: Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi UMS.
Moot  CL,  Bodhi  W  dan  Mongi  J,  2013, Uji  Efek  Antipiretik  Infusa  Daun Sesewanu  (Clerodendron  squamatum Vahl.)  Terhadap  Kelinci  Jantan  Yang Diinduksi  Vaksin  DTP-HB , Jurnal  Ilmiah  Farmasi-Pharmacon  Vol.  2  No. 03, Program Studi Farmasi UNSRAT; Manado
Murwantoro  dan  Santoso,  2012,  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Tumbuhan Cyanara scolimus L, Artemisia china L, Borreria  repens DC, Polygala  paniculata L,  Hasil  Koleksi  dari  Taman  Nasional  Gunung  Merapi  dengan  Metode Penangkapan  Radikal  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), Majalah  Obat Tradisional, 17(3), 53-60
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 105 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Novadyanti,  Kusharyanti  I.,  Wahdaningsih  S.,  2015,  Uji  Aktivitas  Antiinflamasi dan  Antipiretik  Esktrak  Etanol  Daun  Petai  ( Parkia  speciosa Hassk)  pada Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar, Naskah  Publikasi ,  Universitas Tanjungpura, Pontianak
Odding  HA.,  2016,  Uji  Aktivitas  Antipiretik  Ekstrak  Etanol  Daun  Srikaya ( Annona  squamosa Linn.)  terhadap  Mencit  ( Mus  musculus )  Jantan, Skripsi ,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  UIN  Alauddin; Makassar
Parmadi, A. 2000. Skrining Fitokimia Terhadap Tanaman Yang Mempunyai Daya Sitotoksik Terbesar  Terhadap  Artemia  Salina  (leech)  Dari  Beberapa Tanaman  Suku  Compositae .  Skripsi.  Fakultas  Farmasi  Universitas Surabaya.
Puspita, MD., 2010, Identifikasi Kandungan Tanin dalam Ekstrak Etanolik Daun Jati  Belanda  (Guazuma  ulmifolia Lamk )  dari  Kebun  Tanaman  Obat Universitas  Sanata  Dharma  dengan  Metode  KLT-Denbsitometri , Universitas Sanata Dharma; Yogyakarta
Rahma,  NW.,  Parmadi,  A.,  Candra,  Agus,  F.,  Budiyanto,  E.,  2015,  Aktivitas Ekatsrak Etanol,  Etilasetat dan Kloroform Daun Talok ( Muntingia calabura L)  sebagai  Agen  Penurun  Panas  melalui  Induksi  Vaksin  DPT  pada  Mencit Ras Swiss, 1st Annual Pharmacist Conference Comittee, http: apc.uns.ac.id Reynertson, 2007, di dalam Sutrisna, EM., 2010, Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak
Etilasetat  Buah  Semu  Jambu  Mete  ( Anacardium  occidentale L ) terhadap edema  pada  telapak  kaki  tikus  putih (Rattus  norvegicus )  Jantan  Galur Wistar yang Diinduksi Karagenin, Biomedika 2(1):33-37 Robinson T., 1991, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi Edisi 6 , Penerbit ITB; Bandung
Sarma  A.,  and  Bachheti  RK.,  2013,  A  Review  on Ipomoea  carnea , Iternational Journal of Pharma and Biosciences , 4(4):(P) 363-377 Tjay TH., dan Rahardja K., 2013. Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan Efek Samping Edisi Ke-6 , PT. Elex Media Komputindo; Jakarta Tjay  TH.,  dan  Rahardja  K.,  2015, Obat-obat  Penting,  Khasiat,  Penggunaan  dan Efek-efek Sampingnya, Edisi Ke-7 , Jakarta; PT. Elex Media Komputindo Wagner,  H,  Bladt,  S.,  Zgainski  EM.  1984. Plant  Drug  Analysis .  Berlin- heidelberg-New  York:  Springer  Verlag  Page  8,  9,  54,  55,  94,  153,  196, 226, 227.
Widyaningrum,  NR.,  Ningrum,  AN.,  Maesaroh,  S.,  2021, A  Literature  Review : Kajian  Aktivitas  Farmakologi  Ekstrak  Kangkung  Hutan  ( Ipomea  carnea Jacq), Journal of Health Research, 4, 99–110.
Widyaningrum,  NR.,  Novitasari,  M.,  Puspitasary,  K.,  2019.  Perbedaan  Variasi Formula  Basis  CMC  Na  terhadap  Sifat  Fisik  Gel  Ekstrak  Etanol  Kulit Kacang Tanah ( Arachis hypogaea L), Journal of Health Research , 2 (2), 10; 121–134.
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 4  No 2. Oktober 2021 (91 - 106) 106 Nova  Rahma  Widyaningrum,  Andriani  Noerlita  Ningrum  (Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Dan Aktivitas Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Ipomoea Carnea Jacq Melalui Induksi Pepton Pada Mencit Jantan)
Widyaningrum,  N.R.,  Parmadi,  A.,  Wicaksono,  W.,  2016.  Profil  Kromatografi Lapis  Tipis  Ekstrak  Etanol  Daun  Talok  (Muntingia  Calabura  L)  Beserta Potensinya  Sebagai  Pereda  Nyeri  Thin  Layer  Chromatography  Profile  Of Ethanol Extract Talok Leaves (Muntingia calabura L) Completed With Its Potency As Pain Reliever 3.
Wilmana F., 2007, Analgesik-Antipiretik (Analgesik Antiinflamasi Nonsteroid dan Obat  Pirai) ,  Farmakologi  dan  Terapi  Edisi  4,  Bagian  Farmakologi Kedokteran Universitas Indonesia; Jakarta
Yapian  SA.,  Bara  R.,  Awaloei  H.,  dan  Wulsan  J.,  2011, Uji  Efek  Antipiretik Ekstrak  Daun  Pepaya  (Carica  papaya  L)  Pada  Tikus  Wistar  (Rattus norvegicus) , Skripsi, Fakultas Kedokteran Sam Ratulangi; Manado