## PENGUJIAN TOKSISITAS AKUT ORAL DAN DERMAL PADA BIOLARVASIDA Metarhizium anisopliae TERHADAP

## TIKUS PUTIH SPRAQUE DAWLEY
Deni Zulfiana* UPT BPP Biomaterial-LIPI
*Corresponding author: zulfiana@yahoo.com

## Abstract
Acute oral and dermal toxicity test against white rats was conducted to determine the toxicity and side effects of bio-larvacide (Metarhizium anisopliae crude extract) on humans. In the oral test used a  maximum  dose  5000  mg/kg  and  dermal  testing  used  a  maximum  dose  of  2000  mg/kg.  Dose treatment and control tested to 5 Spraque Dawley male rats. The results showed that oral treatment with a dose of 5000 mg/kg did not cause mortality and did not cause changes in anatomic pathology of viceral organs. In the dermal treatment with a dose of 2000 mg/kg did not cause mortality and did not cause changes in anatomic pathology of viceral organs. Based on these results LD50 acute oral  M.  anisopliae  biolarvacide  above  5000  mg/kg  and  the  acute  dermal  is  above  2000  mg/kg.  It was therefore concluded that the formulation of Metarhizium anisopliae biolarvasida classified as not hazardous when used in accordance with the recommendation of the class I (WHO, 2003).
Keywords: Biolarvacide, Metarhizium anisopliae, toxixity test

## PENDAHULUAN
Penelitian  dan  pengembangan  jamur entomopatogen Metarhizium anisopliae sebagai  agen  biokontrol  dan  biolarvasida sedang  giat-giatnya  dilakukan  di  berbagai belahan  dunia.  Hal  ini  dilakukan  sebagai alternatif  untuk  mengurangi  penggunakan larvasida  kimia  secara  terus  menerus  yang berdampak  buruk  terhadap  lingkungan  dan kesehatan  manusia.  Berbagai  strain M. anisopliae telah  terbukti  virulen  terhadap vektor penyakit malaria (Scholte et al ., 2003) dan Aedes  aegypty yang  merupakan  vektor penyakit  demam  berdarah  (Scholte et  al ., 2007; Darbro et al ., 2011). Namun keamanan penggunaan  biopestisida  ini  terhadap  ling- kungan perlu dikaji lebih dalam.
Beberapa formulasi pestisida dapat bersifat  sangat  toksik  sehingga  dapat  menim- bulkan  kematian  pada  hewan,  dan  makhluk lain  yang  bukan  sasaran.  Beberapa  pestisida juga  dapat  mengiritasi  kulit  dan  mata  serta bersifat  karsinogenik  (Cabral et  al .,  2006).
Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  uji  toksisitas untuk  mengetahui  reaksi  tubuh  terhadap bahan  suatu  pestisida  dan  mengukur  kemam-
puan pestisida dalam menimbulkan perubahan patologi akibat keracunan.
Uji toksisitas terhadap tikus putih merupakan satu diantara upaya untuk menge- tahui  daya  racun  dan  efek  sampingnya  terha- dap  manusia.  Uji  toksisitas  yang  umum dilakukan  adalah  secara  oral  dan  dermal.  Uji toksisitas  akut  oral  bertujuan  untuk  menge- tahui  daya  racun  suatu  bahan  kimia  apabila langsung masuk ke dalam saluran pencernaan, sedang  uji  toksisitas  akut  dermal  bertujuan untuk  mengetahui  daya  racun  suatu  bahan kimia melalui kontak dengan kulit. Pengujian secara  oral  dan  dermal  dilakukan  karena keracunan sering terjadi melalui makanan dan minuman  serta  kontak  dengan  kulit.  Peneliti- an  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  toksisitas oral  dan  dermal  dari  biolarvasida M. anisopliae dengan  menentukan  dosis  yang menyebabkan  kematian  50%  tikus  putih Spraque Dawley .

## MATERIAL DAN METODE
Persiapan Ekstrak Jamur M. anisopliae Ekstrak  kasar  jamur  diperoleh  dari penelitian sebelumnya (Zulfiana et al ., 2009).
Jamur ditumbuhkan dalam media Czapex-dox broth (CDB)  dan  diinkubasi  di  atas rotary shaker dengan  agitasi  120  rpm  selama  8  hari pada  suhu  kamar.  Filtrat  hasil  fementasi selanjutnya  digunakan  sebagai  bahan  untuk pengujian toksistas pada tikus.
Pengujian  ekstrak  jamur M.  anisopliae pada tikus Pengujian toksisitas akut oral
Pada pengujian ini digunakan satu dosis maksimal (dosis tunggal) dari biolarvasida M. anisopliae yaitu  dosis  5000  mg/kg  BB. Masing-masing  dosis  dan  kontrol  dicobakan kepada  5  ekor  tikus  jantan Sprague  Dawley . Berat  badan  tikus Sprague  Dawley jantan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah 180-190  gram  untuk  perlakuan  dan  185-195 gram  untuk  kontrol  dengan  umur  antara  2-3 bulan.  Sebelum  diberi  perlakuan,  tikus dipuasakan  selama  24  jam.  Setelah  diberi perlakuan,  dilakukan  pengamatan  perubahan perilaku  dan  reaksi  fisiologis  pada  1  jam,  2 jam,  3  jam  4  jam  dan  24  jam  setelah perlakuan.  Pengamatan  berupa  penimbangan berat  badan,  perhitungan  jumlah  tikus  yang mati  dan  gejala-gejala  klinis  yang  tampak, dilakukan  sampai  hari  ke  14  setelah  perla- kuan. Pada hari ke-14 semua tikus yang masih hidup  dimatikan  dan  dilakukan  pengamatan makroskopis  (patologi  anatomi)  terhadap organ visceral .  Apabila  dengan  dosis  maksi- mal  terjadi  kematian  selama  masa  pengamat- an, pengujian dilakukan dengan dosis berting- kat (Deptan, 2004).

## Pengujian toksisitas akut dermal
Pada  pengujian  secara  dermal  diguna- kan  satu  dosis  yaitu  2000  mg/kg  BB.  Dosis perlakuan dan kontrol  dicobakan pada 5 ekor tikus  jantan.  Berat  badan  tikus  yang  diguna- kan 185-195 gram dan untuk kontrol 175-185 untuk  perlakuan.  Tikus  yang  akan  diberi perlakuan  dicukur  rambutnya  pada  bagian punggung  seluas  3x3  cm  menggunakan  alat pencukur,  dibiarkan  selama  24  jam  sebelum diberi  perlakuan.  Pemberian  bahan  uji dilakukan dengan meneteskan bahan  uji pada bagian  kulit  yang  dicukur.  Bagian  kulit  yang telah  diberi  perlakuan  ditutup  dengan  plastik supaya cairan tidak menguap, lapis paling luar ditutup dengan kain kasa dan diperban.
Pengamatan perubahan perilaku dengan reaksi fisiologis dilakukan pada  1 jam, 2 jam, 3  jam,  4  jam  dan  24  jam  setelah  perlakuan. Setelah  selesai  pengamatan  24  jam  perban dibuka,  kulit  dibersihkan  dengan  air  dan diamati  perubahan  yang  terjadi  pada  kulit tersebut.  Pengamatan  berupa  penimbangan berat  badan,  penghitungan  jumlah  tikus  yang mati, dan gejala klinis yang tampak dilakukan sampai  hari  ke-14  setelah  perlakuan.  Pada hari  ke-14  semua  tikus  yang  masih  hidup dimatikan  dan  dilakukan  pengamatan  makro- skopis  (patologi  anatomi)  terhadap  organ viseral .  Apabila  dalam  14  hari  pengamatan terjadi  kematian  dan  perubahan  dermal  yang nyata,  maka  pengujian  dilakukan  dengan dosis bertingkat (Deptan, 2004).
Analisis  data  dilakukan  secara  statistik menggunakan  program  statistik  probit  berda- sarkan  jumlah  kematian  tikus  untuk  masing- masing  dosis,  untuk  mengetahui  nilai  LD 50 dan dilakukan pada batas kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Toksisitas akut oral Kematian
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa setelah  dilakukan  pengujian  secara  oral  bio- larvasida M.  anisopliae dengan  dosis  5000 mg/kg  BB,  selama  14  hari  setelah  inokulasi tidak terjadi kematian tikus, karena biolarvasida ini tidak menyebabkan gangguan pada sistem pernafasan tikus. Menurut Lorgue et  al .,  (1996),  kematian  akan  terjadi  bila terjadi  gangguan  dan  kegagalan  respirasi (pernafasan)  pada  tikus.  Tidak  adanya  tikus yang  mati  sehingga  pengujian  toksisitas  oral akut  tidak  dilanjutkan  dengan  dosis  berting- kat.  Tikus  perlakuan  yang  tidak  mati, dieuthanasi  dan  dilakukan  nekropsi  pada  hari ke-14  perlakuan  untuk  diamati  perubahan patologi  anatomi  yang  terjadi  pada  organ viseral .

## Perilaku
Hasil  pengamatan  terhadap  perilaku menunjukan  bahwa  tikus-tikus  yang  diberi perlakuan  dengan  biolarvasida M.  anisopliae pada  dosis  maksimal  (5000  mg/kg  BB) memperlihatkan  gejala  klinis  yaitu  hiper- lakrimasi,  hipersalivasi,  lemah  dan  rambut
berdiri  sampai  pada  jam  ke-4  setelah intoksikasi  (Tabel  1).  Hal  ini  disebabkan karena  adanya  proses  adaptasi  dari  bio- larvasida dengan badan tikus selama beberapa jam  pertama  perlakuan.  Hal  ini  tidak  terjadi lagi  setelah  4  jam  perlakuan  sampai  hari terakhir perlakuan.

## Perubahan patologi anatomi
Hasil  pengamatan  secara  makroskopis pada  organ viseral kelompok  tikus  yang diberi  perlakuan  dengan biolarvasida M. anisopliae menunjukan  adanya  perubahan patologi  anatomi  yaitu  degenerasi  hati, dilatasi ventrikel kanan, dilatasi ventrikel kiri, apeks  jantung  tumpul  (Tabel  2).  Akan  tetapi biopestisida  tidak  menyebabkan  perubahan dan  ganggan  pada  organ  viceral  lainnya seperti  paru-paru,  hati,  ginjal,  otak,  usus, lambung, diagfragma dan limpa.

## Berat badan
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa kelompok  tikus  perlakuan  dengan biolarva- sida M.  anisopliae pada  dosis  5000  gram/kg BB  menunjukan  penghambatan  berat  badan sampai  hari  ke-3  setelah  intoksikasi  jika dibandingkan  dengan  berat  sebelum  intoksi- kasi  (Tabel  3).  Penghambatan  berat  badan diduga  disebabkan  dosis  biopestisida  yang cukup tinggi  sehingga mempengaruhi dengan cepat  sistem  pencernaan  dan  mengganggu proses  absorpsi  pada  saluran  pencernaan. Akan  tetapi  penghambatan  berat  badan  yang tunjukan akibat perlakuan biopestida ini tidak samapai merusak dan menghancurkan permukaan  internal  dari  lambung  dan  usus. Hal  ini  bertolak  belakang  dengan  pestisida kimia  yang  mengandung  peritoid  (Manahan, 2003).  Menurut  Lorgue et  al .  (1996),  gejala klinis  yang  juga  terlihat  akibat  terpapar insektisida  piretroid  berupa  efek  gastro- intestinal.
Toksisitas akut dermal

## Kematian
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa setelah  dilakukan  pengujian  secara  dermal dengan  dosis  2000  mg/kg  BB  tidak  terjadi kematian  pada  tikus  percobaan  sama  seperti pengujian  secara  akut  oral.  Pengujian  toksi- sitas  akut  dermal  tidak  dilanjutkan  dengan dosis bertingkat. Semua tikus dieuthanasi dan
dinekropsi  pada  hari  ke-14  setelah  perlakuan untuk  mengetahui  perubahan  makroskopis yang terjadi pada organ viseral .

## Perilaku
Selama  pengamatan  perilaku  sampai hari  ke-14,  menunjukan  bahwa  sampai  jam ke-4  setelah  intoksikasi  tikus  mengalami lemah,  dan  rambut  berdiri.  Pada  pengamatan hari  ke-2  tikus  tidak  menunjukan  adanya peubahan  perilaku  (Tabel  4),  tidak  seperti pada  pengujian  akut  oral  yang  menunjukan perubahan  perilaku  sampai  jam  ke-4  setelah perlakuan.  Hal  ini  diduga  disebabkan  dosis yang  diberikan  pada  pengujian  akut  dermal lebih  rendah  dibandingkan  dengan  pengujian akut oral.

## Perubahan patologi anatomi
Hasil  pengamatan  secara  makroskopis pada  organ viseral kelompok  tikus  yang diberi  perlakuan  dengan  biolarvasida M. anisopliae tidak menunjukan adanya perubah- an patologi anatomi (Tabel 5). Hal ini diduga disebabkan  karena  perlakuan  akut  dermal tidak  secara  langsung  berpengaruh  pada organ-organ viseral karena  perlakuan  dila- kukan melalui kulit.
Berat badan
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa kelompok  tikus  perlakuan  dengan biolarva- sida M.  anisopliae pada  dosis  5000  g/kg  BB menunjukkan  penghambatan  berat  badan sampai  hari  ke-3  setelah  intoksikasi  jika dibandingkan  dengan  berat  sebelum  intoksi- kasi  (Tabel  3).  Penghambatan  berat  badan diduga  disebabkan  dosis  biopestisida  yang cukup tinggi  sehingga mempengaruhi dengan cepat  sistem  pencernaan  dan  mengganggu proses  absorpsi  pada  saluran  pencernaan. Akan  tetapi  penghambatan  berat  badan  yang tunjukan akibat perlakuan biopestida ini tidak samapai merusak dan menghancurkan permu- kaan  internal  dari  lambung  dan  usus.  Hal  ini bertolak  belakang  dengan  pestisida  kimia yang  mengandung  peritoid  (Manahan,  2003). Menurut  Lorgue et  al .,  (1996),  gejala  klinis yang  juga  terlihat  akibat  terpapar  insektisida piretroid berupa efek gastrointestinal.
Tabel 1 . Gejala klinis kelompok tikus Spraque Dawley yang mendapat perlakuan toksisitas akut oral, setelah pemberian biolarvasida Metarhizium anisopliae dengan dosis 5000mg/kg BB
Waktu Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Tikus 5 1 jam pi Rambut berdiri, lemah, hiperlakrimasi Rambut berdiri, lemah, hiperlakrimasi Rambut berdiri, lemah, hiperlakrimasi TAK Rambut berdiri, lemah 2 jam pi Rambut berdiri, lemah, hiperlakrimasi hipersalivasi Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi TAK Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi 3 jam pi TAK Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi TAK Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi 4 jam pi TAK TAK Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi TAK TAK 24 jam pi TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-1 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-2 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-3 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-4 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-5 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-6 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-7 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-8 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-9 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-10 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-11 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-12 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-13 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-14 TAK TAK TAK TAK TAK Keterangan: TAK: Tidak Ada Kelainan

## Toksisitas akut dermal Kematian
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa setelah  dilakukan  pengujian  secara  dermal dengan  dosis  2000  mg/kgBB  tidak  terjadi kematian  pada  tikus  percobaan  sama  seperti pengujian secara akut oral sehingga pengujian toksisitas  akut  dermal  tidak  dilanjutkan dengan dosis bertingkat. Semua tikus dieutha- nasi  dan  dinekropsi  pada  hari  ke-14  setelah perlakuan  untuk  mengetahui  perubahan  mak- roskopis yang terjadi pada organ viseral.

## Perilaku
Selama  pengamatan  perilaku  sampai hari  ke-14,  menunjukan  bahwa  sampai  jam ke-4  setelah  intoksikasi  tikus  mengalami lemah,  dan  rambut  berdiri.  Pada  pengamatan hari  ke-2  tikus  tidak  menunjukan  adanya peubahan  perilaku  (Tabel  4),  tidak  seperti pada  pengujian  akut  oral  yang  menunjukan perubahan  perilaku  sampai  jam  ke-4  setelah perlakuan.  Hal  ini  diduga  disebabkan  dosis yang  diberikan  pada  pengujian  akut  dermal lebih  rendah  dibandingkan  dengan  pengujian akut oral.
Tabel  2 .  Temuan  patologi  anatomi  kelompok  tikus Spraque  Dawley yang  mendapat  perlakuan toksisitas  akut  oral,  setelah  pemberian  biolarvasida M.  anisopliae dengan  dosis  5000 mg/kg BB

## Keterangan: TAK: Tidak Ada Kelainan
Tabel 3 . Rata-rata berat badan kelompok tikus Spraque Dawley yang mendapat perlakuan toksisitas akut oral, setelah pemberian  biolarvasida M. anisopliae dengan dosis 5000 mg/kg BB
Organ Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Tikus 5 Paru-paru TAK TAK TAK TAK TAK Hati TAK TAK Degenerasi TAK TAK Ginjal TAK TAK TAK TAK TAK Otak TAK TAK TAK TAK TAK Usus TAK TAK TAK TAK TAK Lambung TAK TAK TAK TAK TAK Jantung Dilatasi ventrikel kanan, dilatasi ventrikel kiri,
apeks tumpul TAK TAK Dilatasi ventrikel kanan, dilatasi ventrikel kiri, apeks tumpul Dilatasi ventrikel kanan, dilatasi ventrikel kiri, apeks tumpul Diafragma TAK TAK TAK TAK TAK Limpa TAK TAK TAK TAK TAK Lain-lain Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke-14 setelah intoksikasi Hari Ke- Berat Badan Tikus (gram) Kontrol Dosis 5000 mg/kgBB 0 183,42 185,32 1 185,35 177,54 2 189,56 179,16 3 191,23 182,52 4 195,43 185,43 5 197,65 186,75 6 199,33 189,45 7 201,24 190,16 8 205,78 193,23 9 209,76 196,40 10 213,90 196,75 11 214,19 199,68 12 218,37 203,77 13 223,34 208,34 14 231,56 213,92
Tabel  4 .  Gejala  klinis  kelompok  tikus Spraque  Dawley yang  mendapat  perlakuan  toksisitas  akut dermal, setelah pemberian biolarvasida M. anisopliae dengan dosis 2000 mg/kg BB Waktu Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Tikus 5 1 jam pi Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah 2 jam pi Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah Rambut berdiri, lemah 3 jam pi TAK TAK Rambut berdiri, lemah TAK TAK 4 jam pi TAK TAK TAK TAK Rambut berdiri, lemah, hipersalivasi TAK 24 jam pi TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-1 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-2 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-3 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-4 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-5 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-6 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-7 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-8 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-9 TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-10  TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-11  TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-12  TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-13  TAK TAK TAK TAK TAK Hari ke-14  TAK TAK TAK TAK TAK

## Keterangan: TAK=Tidak Ada Kelainan
Tabel  5 .  Temuan  patologi  anatomi  kelompok  tikus Spraque  Dawley yang  mendapat perlakuan toksisitas akut dermal, setelah pemberian biolarvasida M. anisopliae dengan dosis 2000 mg/kg BB Organ Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Tikus 5 Paru-paru TAK TAK TAK TAK TAK Hati TAK TAK TAK TAK TAK Ginjal TAK TAK TAK TAK TAK Otak TAK TAK TAK TAK TAK Usus TAK TAK TAK TAK TAK Lambung TAK TAK TAK TAK TAK Jantung TAK TAK TAK TAK TAK Diafragma TAK TAK TAK TAK TAK Limpa TAK TAK TAK TAK TAK Lain-lain Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi Dieuthanasi pada hari ke- 14 setelah intoksikasi
Keterangan: TAK: Tidak Ada Kelainan
Tabel 6 . Rata-rata berat badan kelompok tikus Spraque Dawley yang mendapat perlakuan toksisitas akut dermal, setelah pemberian biolarvasida M. anisopliae dengan dosis 2000 mg/kg BB
Hari Ke- Berat Badan Tikus (gram) Kontrol Dosis 2000 mg/kg BB 0 183,42 180,70 1 185,35 184,87 2 189,56 197,23 3 191,23 190,75 4 195,43 194,43 5 197,65 200,23 6 199,33 203,45 7 201,24 208,35 8 205,78 210,27 9 209,76 215,14 10 213,90 219,09 11 214,19 223,12 12 218,37 229,57 13 223,34 233,87 14 231,56 238,73

## Perubahan patologi anatomi
Hasil  pengamatan  secara  makroskopis pada organ viseral kelompok tikus yang diberi perlakuan  dengan  biolarvasida M.  anisopliae tidak menunjukan adanya perubahan patologi anatomi (Tabel 5). Hal ini diduga disebabkan karena  perlakuan  akut  dermal  tidak  secara langsung  berpengaruh  pada  organ viseral karena perlakuan dilakukan melalui kulit.

## Berat badan
Hasil  pengamatan  menunjukan  bahwa kelompok  tikus  perlakuan  dengan biolarva- sida M. anisopliae tidak mengalami pengham- batan berat badan sampai pengamatan hari ke- 14  setelah  intoksikasi.  Hal  ini  disebabkan karena  perlakuan  akut  dermal  tidak  berdam- pak secara langsung pada organ-organ viseral terutama  pada  organ-organ  viseral.  Hasil penimbangan berat badan tikus selama 14 hari ditampilkan pada Tabel 6.
Hasil Analisis Data Penentuan LD 50 Dalam  pengujian  ini,  penentuan  LD 50 tidak  dapat  ditentukan  karena  dosis  yang dipergunakan  adalah  dosis  maksimal  yaitu 5000  mg/kg  BB  untuk  oral  dan  2000  mg/kg BB untuk dermal.

## KESIMPULAN
1. Perlakuan  oral  dengan  dosis  5000  mg/kg BB  tidak  menimbulkan  kemati-an  dan menimbulkan perubahan pato-logi anatomi organ viceral pada tikus percobaan.
2. Pada  perlakuan  dermal  dengan  dosis  200 mg/kg  BB  tidak  menyebabkan  kematian pada tikus perlakuan dan tidak menimbulkan perubahan pato-logi anatomi pada organ viceral .
3. Berdasarkan  point  1  dan  2,  biolarva-sida M.  anisopliae tergolong  dalam  klasifikasi tidak  berbahaya  jika  digu-nakan  sesuai dengan anjuran yaitu kelas I (WHO, 2003).

## DAFTAR PUSTAKA
Cabral, R., Hasegawa, R., Hoshiya, T., Hakoi, K.,  Ogiso,  T.,  Boonyaphiphat,  P., Shirai, T., & Ito, N. (2006). Carcinogenic Potential of some
Pesticides in a Mediumterm Multiorgan Bioassay  in  Rats. International  Journal of Cancer . 54. 489-493.
Deptan.  (2004).  Pedoman  Metode  Pengujian Toksisitas  Akut  Formulasi  pada  Tikus,
Ikan  dan  Cacing  Tanah.  Jakarta: Direktorat Jenderal Bina Sarana
Pertanian, Direktorat Pupuk dan
Pestisida.
Darbro,  J.  M.,  Graham,  R.  I.,  Kay,  B.  H., Ryan,  P.  A.,  &  Thomas,  M.  B.  (2011). Evaluation  of  Entomopathogenic  Fungi as  Potential  Biological  Control  Agents of the Dengue Mosquito, Aedes aegypti (Diptera:  Culicidae). Biocontrol  Sci Technol. 21. 1027-1047.
Farenhorst,  M.,  Hunt,  R.  H.,  Thomas,  M.  B.,
& Coatzee M. (2010). The Infectivity of the Entomopathogenic Fungus
Beauveria  bassiana to  Insecticide- Resistant  and  Susceptible Anopheles arabiensis Mosquitoes at Two Different Temperatures. Malar J. 9. 71.
Lorgue, G., Lechnet, J., & Riviere, A. (1996).
Clinical Veterinary Toxicology . Oxford: Blackwell Science.
Manahan,  S.  E.  (2003). Toxicological Chemistry  and  Biochemistry .  3 rd ed. USA: Lewis Publisher.
Scholte,  E-J.,  Njiru,  B.  N.,  Smallegange,  C.,
Takken,  W.,  &  Knols,  B.  G.  (2003).
Infection of Malaria ( Anopheles
gambiae s.s.)  and  Filariasis  ( Culex quinquefasciatus )  Vectors  with  the Entomopathogenic  Fungus  M etarhizi- um anisopliae . Malar J . 2. 29.
Scholte,  E-J.,  Takken,  W.,  &  Knols,  B.  G.
(2007).  Infection  of  Adult Aedes aegypti and Ae.  albopictus Mosquitoes with  the  Entomopathogenic  Fungus Meta-rhizium  anisopliae . Acta  Trop . 102. 151-158.
WHO.  (2003).  Space  Spray  Application  of Insecticides  for  Vector  and  Public Health  Pest  Control.  A  Ractitioner’s Guide.WHO/CDS/WHOPES/GCDPP/2 003.5  Communicable  Desease  Control, Prevention  and  Eradication.  Geneva: WHO  Pesticides  Evaluation  Scheme (WHOPES),  World  Health  Organizati- on.
Zulfiana,  D.  (2009).  Pengaruh  Komposisi Media  Fermentasi Metarhizium sp.  terhadap Mortalitas  Larva Aedes  aegypti .  Prosiding Seminar  Nasional  Hari  Nyamuk.  10  Agustus 2009. Bogor. Hal: 75-84.