## KONDISI OPTIMUM ENZIM LIPASE KASAR DARI KENTOS KELAPA
(Optimum Conditions Of Rough Lipase Enzym from Coconut Houstorium )
Moh. Su’i 1) , Harijono 2) , Yunianta 2) , Aulani’am 3) ) Dosen Teknologi Hasil Pertanian Universitas Widyagama Malang
2) Dosen Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya Malang
3) Dosen FMIPA Universitas Brawijaya Malang

## Abstract
This  research  learn  about    optimum  condition  (temperature,  pH  and incubation time). Lipase isolated from coconut houstorium. Houstorium was taken from  coconut  that  has  been  grew  for  30  days  in  the  darkplace  and  rate temperature.  Determination  of  optimum  conditionswas  done  by  examination  the lipase activity in variation condition of temperature (30 – 80 o C), pH (6 – 8,5) and incubation time (30 – 210 minutes). The results showed that optimum condition of lipase isolated from coconut houstorium were 60 o C, pH 7 and 90 minutes.
Key word : Lipases, houstorium, coconut, optimum condition.

## Abstrak
Penelitian ini mempelajari kondisi optimum (suhu, pH dan lama inkubasi) lipase  dari  kentos  buah  kelapa.  Kentos  diperoleh  dari  kelapa  yang  telah ditunaskan selama 30 hari di tempat gelap pada suhu ruang. Penentuan kondisi optimum  dilakukan  dengan  menguji  aktivitas  enzim  lipase  pada  variasi  suhu inkubasi  (30 –  80 o C).  kemudian  variasi      pH  mulai  6 –  8,5  dan  lama  inkubasi antara  30 –  210  menit.    Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kondisi  optimum terdapat pada suhu 60 o C, pH 7 dan lama inkubasi 90 menit.
Kata Kunci : Lipase, Kentos Kelapa, Kondisi optimum

## PENDAHULUAN
Lipase  merupakan  enzim yang  mampu  menghidrolisa  ikatan ester  terutama  lemak  netral  seperti trigliserida.    Pada  trigliserida,  lipase menghidrolisa  ikatan  asam  lemak dengan  gliserol  pada  posisi  1  atau posisi 2 Lipase telah banyak digunakan  dalam  industri  susu, industri  oleo  kimia  dan  produksi lemak terstruktur (lemak termodifikasi). (Sana, et al ., 2004). Dalam  beberapa  tahun terakhir, terjadi peningkatan kebutuhan  enzim  lipolitik  (lipase). Enzim tersebut sangat potensi digunakan  dalam  beberapa  industri
seperti  industri  detergen,  industri makanan dan industri farmasi (Savendsen, 2000). Lipase telah banyak
diisolasi  dari  tanaman,  hewan  atau mikroorganisme (Sana, et al ., 2004).
Sumber  lipase    dari  tanaman diantaranya biji Caesalpinia bonducella  L (Pahoja,  Dahot  and
Sethar,  2001), biji Brassica  napus L . (Sana, et  al .,  2004), biji  jagung (Lin,  Wimer  dan  Huang,  1983),
Castor  bean (Muto  dan  Beevers,
1974)  dan  biji  minyak  kelapa  sawit (Oo dan Stumpf, 1983).
Aktivitas  lipase  dalam  biji- bijian meningkat dengan cepat
setelah perkecambahan (germinasi).
Perkecambahan Brassica  napus  L
selama  40  jam  menghasilkan  lipase (kasar dan telah dimurnikan) dengan aktivitas maksimal, kemudian setelah  itu  menurun  dengan  cepat (Sana, et  al .,  2004).  Sedangkan  biji kelapa  sawit,  aktivitas  lipase  paling tinggi diperoleh pada 21 hari perkecambahan    di  tempat  gelap yaitu  sebesar  574  unit  dan  aktivitas menurun  setelah  21  hari.      Jika dikecambahkan  di  tempat  terang, aktivitas tertinggi pada  18 hari yaitu sebesar  333  unit    (Oo  dan  Stumpf, 1983).
Hasil  penelitian  Sui  dan Chandra (2007) menunjukkan bahwa,  buah  kelapa  yang  telah ditunaskan selama 30 hari mengandung  lipase  pada  daging buah,  kentos  dan  tunas  dengan aktivitas  yang  bervariasi.  Aktivitas spesifik tertinggi  terdapat pada kentos  kemudian  tunas,  daging  dan akar sebesar 0,02713 ; 0.01525 dan 0.00426  u mol/mg protein/jam. Lipase akan bekerja dengan  maksimal  jika  pada  kondisi optimalnya. Kondisi optimal diantaranya  pH,  waktu  dan  suhu pada  saat  enzim  menghidrolisis substrat.
Penelitian  Pahoja, et.  al .
(2001)  menyebutkan  bahwa,  pH optimal  enzim  lipase Caesalpinia bonducella  L adalah  pada  pH  7.
Kondisi    yang  sama  juga  terdapat pada lipase dari Hibiscus canabinus seeds (Kausar  and  Akhtar,  1979), Juglansregia,  Allium  cepa,  Pisum sativum,  Citrus  decumana,  Cucumis melo,  Zea  mays  and  Prumus amygdlus  seeds (Akhtar et.  al ., 1975). Sedangkan dalam biji jagung, lipase  ini  mempunyai  pH  optimum
7,5 (Lin, Wimer dan Huang, 1983). Suhu optimal lipase
Brassica  napus  L adalah  37 o C. Aktivitasnya  menjadi  sangat  rendah
pada  suhu  kurang  dari  20 o C  atau lebih dari 50 o C (Sana, et al ., 2004). Sedangkan lipase Caesalpinia bonducella L mempunyai suhu optimum    30 o C.    Hal  ini  sama dengan  lipase  dari Cajanus  cajan  L. seed (Khan et.  al .,  1991), Carissa carandas    fruit (Mala  and  Dahot, 1995).    Aktivitas  lipase  masih  stabil pada  suhu  60 o C  dengan  aktivitas sebesar  90%.    Pada  suhu  90 o C selama  10  menit,  aktivitas  lipase hilang  sama  sekali  (Pahoja,  et.  al.,
2001). Lipase Caesalpinia bonducella L . yang diinkubasi hingga 180  menit  masih  meningkatkan kecepatan hidrolisa kemudian setelah  ini  menurun.    Penurunan  ini karena produksi senyawa penghambat aktivitas enzim (Galliard, 1971), atau produk samping dari hasil reaksi atau terjadi inaktivasi  enzim  dengan  semakin lama  inkubasi  (Sonoki  and  Ikezawa, 1975),  atau  keberadaan  enzim  lain dalam  enzim  kasar  sampel  yang tidak  dapat  dipisahkan  (Pahoja, et. al ., 2001).
Lipase  yang  berasal  dari sumber  yang  berbeda  mempunyai kondisi  optimum  yang  berbeda. Kentos  mempunyai  aktivitas  spesifik lipase  paling  tinggi  tinggi  daripada tunas dan daging buah. Oleh karena itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk mempelajari  kondisi  optimum  lipase yang  berasal  dari  kentos  kelapa yang  telah  ditunaskan  selama  30 hari.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan pada  bulan  Januari –  Juli  2009  di laboratorium Pengolahan Universitas Widya Gama Malang dan Laboratorium Biokimia FMIPA Universitas Brawijaya Malang. Alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini meliputi Mortar,
sentrifuse  dingin,  lemari  pendingin, pisau  stailess  steel,  pemarut  kelapa stailess  steel,  kain  saring,  beker glass, erlenmeyer, oven, spektrofotometer  UV  Vis,  freezer, thermometer, pH meter dan stirer. Bahan yang digunakan antara lain, buah kelapa local varitas dalam  yang  diperoleh  dari  Lawang Kabupaten  Malang,  aquades,  para nitro  phenil  laurat  (PNPL),  aseton,
alkohol,  buffer fosfat.
Pertunasan kelapa menggunakan metode Oo and Stumpf  (1983)  yang  dimodifikasi. Isolasi  lipase  dengan  metode  Sana, et  al .  (2004)  yang  dimodifikasi. Kelapa dibuang sabut dan tempurungnya  dengan  hati-hati  dan kentos dipisahkan kemudian disimpan  pada  suhu  4 o C.    Sampel (5 gram)  ditambahkan larutan buffer fosfat  5  mM    12,5  ml  yang  sudah didinginkan  kemudian  dihancurkan dengan mortar. Suspensi disentrifugasi  pada  8000  g,    4 o C selama 20 menit. Supernatan diambil  dan  dimasukkan  dalam beker  glass.    Endapan  ditambah buffer  fosfat  12,5  ml  kemudian disentrifugasi  pada  8000  g,    4 o C selama  20  menit.      Supernatan digabung dengan supernatant
sebelumnya  dan  merupakan  enzim kasar yang siap diuji aktivitas lipase.
Suhu  optimum  ditentukan dengan  mengukur  aktivitas  enzim yang  telah  diinkubasi    (campuran enzim  substrat)  pada  beberapa macam  suhu  (20 –  80 o C).  pH optimum  dengan  cara  mengatur  pH reaksi  (campuran  enzim  substrat) pada beberapa macam pH (6 – 8,5).
Lama  inkubasi  optimum  diatur  pada beberapa lama inkubasi (30, 60, 90, 120, 150, 180 dan 210 menit). Aktvitas lipase diukur dengan  menggunakan  Para  Nitro Phenil Laurat (PNPL) sebagai
substrat. Para nitrofenol yang dilbebaskan  dari  hirolisa  PNPL  oleh lipase diukur dengan spektofotometer pada panjang gelombang  410  nm  (Bhardwaj,  Raju dan  Rajasekharan,  2001).    Kadar protein enzim diukur dengan metode Lowry et al.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Suhu Optimum
Lipase  yang  berasal  dari kentos  kelapa  mempunyai  suhu optimum 60 o C yaitu sebesar 0,4147 u  mol/ml/jam.    Jika  suhu  meningkat menjadi  70 o C,  aktivitas  menurun dengan  tajam  menjadi    0,112931  u mol/ml/jam    atau  sebesar  27,23% dari  aktivitas  maksimumnya.    Suhu inkubasi  80 o C,  aktivitas  hanya tersisa  11,617  %.   Pasa  suhu  30 o C
aktivitasnya menjadi 0,1047 u mol/ml/jam  u  mol/ml/jam  atau  25,24 %.    Aktivitas  lipase  pada  beberapa suhu  inkubasi  dapat  dilihat  pada
Tabel 1 dan Gambar 1.
Suhu optimum lipase bervariasi tergantung sumber enzimnya.    Lipase  dari Brassica napus L Brassica napus L
mempunyai  suhu  optimum  37 o C. Aktivitasnya  sangat  rendah  pada suhu  kurang  dari  20 o C  atau  lebih dari  50 o C  (Sana, et  al .,  2004).
Sedangkan lipase Caesalpinia bonducella L mempunyai suhu optimum    30 o C.    Hal  ini  sama dengan  lipase  dari Cajanus  cajan  L. seed (Khan et.  al .,  1991), Carissa carandas    fruit (Mala  and  Dahot, 1995).    Aktivitas  lipase  masih  stabil pada  suhu  60 o C  dengan  aktivitas sebesar  90%.    Pada  suhu  90 o C selama  10  menit,  aktivitas  lipase hilang  sama  sekali  (Pahoja,  et.  al., 2001).  Suhu  optimum  80 o C  dimiiliki olen lipase dari rice brand
(Bhardwaj, et al., 2001).
Tabel 1.  Aktivitas lipase kasar pada variasi suhu inkubasi Suhu ( o C) Akt (u mol/ml/jam) Akt (% dari akt maksimum) 20 0,067111 16,18153 30 0,1047 25,24477 40 0,262189 63,21778 50 0,31185 75,19185 60 0,414739 100 70 0,112931 27,22943 80 0,04818 11,61683 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 20 30 40 50 60 70 80 Suhu (oC) A k t e n z im ( u m o l/ m l/ ja m )
Gambar 1.  Aktivitas lipase kasar pada beberapa suhu inkubasi
pH Optimum pH  optimum  dari  kentos kelapa  adalah  pH  7  yaitu  sebesar 0,401  u  mol/ml/jam.    Pada  pH  6,5 aktivitas enzim menjadi 61,21 % dan dan  pada  pH    8,  enzim  masih mempunyai aktifitas
sebesar
68,19%.    Aktivitasnya  menjadi 0,143 u  mol/ml/jam    (35,55  %)  pada  pH  6
dan  hanya    0.064  u  mol/ml/jam (15,85  %)  pada  pH  8,5.  Hasil selengkapnya  dapat  dilihat  pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Hasil  ini  sama  dengan hasil  peneliti  terdahulu  dengan  pH
optimum 7 yaitu lipase dari
Caesalpinia  bonducella  L (Pahoja, et.  al .,  2001), rape  seeds (Hoope and Theimer, 1997), Hibiscus canabinus seeds (Kausar and Akhtar, 1979), Sun flower cotyledons (Huang and Morea, 1978), Juglansregia,  Allium  cepa,  Pisum sativum,  Citrus  decumana,  Cucumis melo,  Zea  mays  and  Prumus amygdlus  seeds (Akhtar et.  al .,
1975). Sedangkan dalam biji jagung, lipase  ini  mempunyai  pH  optimum 7,5 (Lin, Wimer dan Huang, 1983). Tabel 2. Aktivitas lipase kasar pada variasi pH reaksi pH Akt (u mol/ml/jam) Akt (% dari akt maksimum) 6,0 0,142563 35,55008 6,5 0,245452 61,2069 7,0 0,401021 100 7,5 0,306363 76,39573 8,0 0,273438 68,18555 8,5 0,063544 15,84565
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 pH A k t e n zi m (u m o l/ m l/ m e n it)

## Gambar 2. Aktivitas lipase kasar pada beberapa pH reaksi

## Lama inkubasi optimum
Lama inkubasi optimum lipase  dari  kentos  kelapa  diperoleh
pada  90 menit  yaitu  0.625  u mol/ml.
Meskipun inkubasi dilanjutkan hingga  180  menit  aktivitas  masih cukup  tinggi  yaitu  0.512  u  mol/ml (81%). Tetapi jika inkubasi dilanjutkan menjadi 210 menit, aktivitas menurun tajam dan aktivitasnya  hanya 25%  dari aktivitas maksimumnya (Tabel 3 dan Gambar 3). Menurut Galliard (1971), penurunan aktivitas ini karena produksi senyawa penghambat aktivitas  enzim  selama  inkubasi. Ditambahkan oleh Sonoki and Ikezawa (1975),   bahwa  penurunan itu  juga karena  produk  samping  dari hasil  reaksi  atau  terjadi  inaktivasi enzim dengan semakin lama inkubasi.    Keberadaan  enzim  lain dalam  enzim  kasar  sampel  yang tidak  dapat  dipisahkan  dari  lipase juga menjadi penyebab menurunnya aktivitas  enzim  (Pahoja, et.  al .,
2001).
Tabel 3. Aktivitas lipase kasar pada variasi lama inkubasi Waktu (menit) Akt (u mol/ml/jam) Akt (% dari akt maksimum) 30 0,182896 29,28051 60 0,46001 73,64491 90 0,624633 100 120 0,580734 92,97198 150 0,531347 85,06545 180 0,512141 81,99069 210 0,158202
25,32724
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 30 60 90 120 150 180 210 Waktu (m enit) A k t e n z im ( u m o l/ m l/ m e n it )

## Gambar 3. Aktivitas lipase kasar pada lama inkubasi yang berebda

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Lipase dari kentos kelapa yang ditunaskan selama 30 hari adalah pH optimum 7, suhu optimum 60 o C dan lama  inkubasi optimum 90 menit dengan aktivitas sebesar 0.401 u mol/mg protein/jam. Saran
Untuk penelitian lebih lanjut perlu dilakukan penelitian pengaruh ion-ion logam terhadap aktivitas ipase baik sebagai activator maupun inhibitor.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhtar,  M.W.,  Parveen,  H.,  Kausar S.  and  Chughtai  M.I.D.,  1975, Lipase  activity  in  plant  seeds,
Pak.  J.  of  Biochem.,  8  :  77 – 82. Bhardwaj  K.,  Raju  A.  and  Raja sekharan R., 2001, Identification,  Purification  and Characterization of a Thermally Stable  Lipase  from  Rice  Bran. A New Menber of the (Phospho) Lipase Family, Plant Physiology,  December  2001, Vol. 127 : 1728-1738.
Galliard, T., 1971, Enzymic deacylation  of  lipids  in  plants. The  effects  of  free  fatty  acids on the hydrolysis of phospholipids  by  the  lipolytic acyl hydrolase of potato tubers, Eur. J. Biochem., 21 : 90-98.
Kausar  S  and  Akhtar,  M..W,  1978, Isolation  and  characterization of  Hibiscus  canabinus  (kenaf) seed  lipase,  Pak.  J.  Biochem.,
12 : 58 – 64.
Khan M.Y., Dahot M.U. and Noomrio M.H.,  1991,  Investigation  of lipase  activity  from  Cajanus cajan L. seed, Pak. J. Sci. Ind.
Res., 34 : 384 – 386.
Lin Y. H., Wimer L. T. and Huang A. H. C., 1983, Lipase in the Lipid Bodies of Corn Scutella During Seedling Growth, Plant Physiol. 1983, 73, 460 – 463. Mala  V.  and  Dahot  M.U.,  1995, Lipase activity of Carissa carandas fruit, Sci. Int. (Lahore), 7 : 161-164. Muto  S.  and  Beevers  H.,  1974, Lipase  Activities  in  Castor Bean Endosperm during Germination, Plant Physiol, 1974, 23-28. Oo  K.  C.  and  Stumpf  P.  K,  1983, The metabolisme of the
Germinating  Oil  Palm  (Elaeis guineensis)  Seedling,  Plant Physiol (1983), 73, 1033-1037.
Oo  K.  C.  and  Stumpf  P.  K,  1983,
Some Enzymic Activities in The
Germinating  Oil  Palm  (Elaeis guineensis)  Seedling,  Plant Physiol (1983), 73, 1028-1032. Pahoja  V.  M.,  Dahot  M.  U.  and Sethar M. A., 2001, Characteristic Properties of Lipase Crude Extract of Caesalpinia bounducella L. Seeds, J. of Biological Sciences 1 (8), 775-778. Sana,  Hossin  I.,  Haque  E.M.  and Shaha R.K., 2004, Identification,  Purification  and Characterization of Lipase from Germination Oil Seed (Brassica  napus  L.),  Pakistan Journal  of  Biological  Sciences 7 (2): 246 – 252.
Savendsen  A.,  2000,  Lipase  protein engineering, Biochemica et
Biophysica  Acta.,  1543:223-
238.
Sonoki  S  and  Ikezawa  H.,  1975,
Studies  on  phospholipase  C. from Pseudomonas aureofaciens  ,  Purification  and some properties of phospholipase  C.  Biochemica et  Biophysica  Acta.,  403:412- 424.