* Penulis untuk korespondensi. e-mail: arifah.rahayu@unida.ac.id ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Agustus 2021, 49(2):212-218 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v49i2.35576 Perbanyakan Tanaman Nilam ( Pogostemon cablin Benth.) Menggunakan Sistem Fotoautotrofik dengan Berbagai Konsentrasi Gula dan Jumlah Ventilasi
Propagation of Patchouli (Pogostemon cablin Benth.) Using Photoautotroph System with Various Concentrations of Sugar and Number of Ventilations
Inda Hidayati Rachmani 1 , Arifah Rahayu 1* , dan Sulassih 2
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Djuanda Bogor Jl. Tol Ciawi No. 1, Kota Bogor, Jawa Barat 16720, Indonesia
2 Program Studi Teknologi Industri Benih, Sekolah Vokasi, Institut Pertanian Bogor (IPB University) Jl. Kumbang No.14, Kota Bogor, Jawa Barat 16128, Indonesia
Diterima 10 Mei 2021/Disetujui 20 Agustus 2021

## ABSTRACT
Patchouli (Pogostemon cablin Benth.) is a plant that produces essential oils. In vitro propagation of patchouli has been carried out as an effort to meet market demand. Photoautotrophic conditions with appropriate sugar concentration and number of ventilations is needed to get the best seedling growth. This research was conducted from June to September 2020 using a randomized complete block design with two factors. The first factor was sugar concentration (10, 20, and 30 g L -1 ) and the second factor was number of vents (0, 2, and 4 holes). The results showed that the interaction of sugar concentration and number of ventilation treatments affected to number of callus explants and number of leaves patchouli plant at 6 week after treatment. The best treatment for patchouli plant multiplication was 20 g L -1 of sugar without ventilation which increase number of leaves by 9-61% and number of nodes by 20% at 6 WAT (weeks after treatment) as compared to other treatments. Application of two holes ventilation increased number of roots by 10-20%, number and density of stomata 28-57% at 6 WAT compared to other treatments. Increased number of roots, number and density of stomata in explants grown in photoautotrophic systems in vitro showed the ability to integrate environment and was thought to be more adapted to acclimatization for seedling production.

## Keywords: acclimatization, in vitro, photosynthesis, rooting, stomata

## ABSTRAK
Nilam (Pogostemon cablin Benth.) merupakan  tanaman  perkebunan  penghasil  minyak atsiri. Perbanyakan nilam secara  in  vitro  dilakukan  sebagai  upaya  memenuhi  permintaan  pasar.  Penggunaan  sistem  fotoautotrofik  pada  kultur  in vitro dilakukan melalui pengaturan konsentrasi gula dan jumlah ventilasi untuk mendapatkan pertumbuhan bibit terbaik. Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Juni  sampai  September  2020.  Bahan  tanaman  yang  digunakan  berupa  planlet steril nilam varietas Tapak Tuan koleksi BALITTRO. Rancangan yang digunakan adalah Rancangan kelompok Lengkap Teracak dengan dua faktor. Faktor pertama adalah konsentrasi gula (10, 20, dan 30 g L -1 ) dan faktor kedua adalah jumlah ventilasi (0, 2, dan 4 lubang). Hasil penelitian menunjukkan interaksi antara perlakuan konsentrasi gula dan jumlah ventilasi berpengaruh terhadap jumlah eksplan berkalus dan jumlah daun tanaman nilam. Hasil terbaik dalam multiplikasi tanaman nilam menggunakan media penambahan 20 g L -1 gula tanpa ventilasi yang meningkatkan jumlah daun sebanyak 9-61% dan jumlah buku sebanyak 20% pada 6 MSP (minggu setelah perlakuan) dibandingkan perlakuan lainnya. Pemberian ventilasi 2 lubang meningkatkan jumlah akar 10-20%,  jumlah dan kerapatan stomata 28-57% pada 6 MSP dibandingkan perlakuan lainnya. Peningkatan jumlah akar, jumlah dan kerapatan stomata pada eksplan yang tumbuh dalam sistem fotoautotrofik secara  in  vitro  menunjukkan  kemampuan  untuk  mengintegrasikan  lingkungan  dan  diduga  lebih  mampu  bertahan  pada aklimatisasi untuk produksi bibit.

## PENDAHULUAN
Nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.)  merupakan tanaman  perkebunan  penghasil  minyak  atsiri.  Produksi nilam mencapai rata-rata 2,100 ton pada tahun 2015-2019 (BPS,  2019),  sehingga  Indonesia  mampu  memenuhi  80- 90% kebutuhan pasar dunia (Rosiana et al ., 2017). Upaya memenuhi  permintaan  pasar,  memerlukan  ketersediaan bibit nilam. Perbanyakan bibit nilam selama ini diperoleh dari hasil perbanyakan benih secara setek. Hal ini membuat bibit  nilam  mudah  terinfeksi  patogen  dan  membutuhkan waktu  yang  relatif  lama  untuk  diperbanyak  (Amalia  dan Hadipoentyanti, 2018). Perbanyakan melalui teknik kultur jaringan ( in vitro ) menjadi alternatif untuk memperoleh bibit nilam dalam jumlah massal yang sehat, efektif dan efisien (Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Pertanian,  2012). Kultur jaringan dapat menjamin pasokan bibit nilam yang stabil untuk industri wewangian dan farmasi (Inampudi et al ., 2017). Perbanyakan  secara in  vitro merupakan  kondisi heterotrofik  yaitu  planlet  belum  mampu  berfotosintesis secara optimal, jaringan pembuluh antara akar dan pucuk, dan lapisan kutikula belum berkembang, serta stomata yang belum berfungsi dengan baik. Kondisi tersebut menyebabkan rendahnya persentase hidup setelah dilakukan aklimatisasi pada lingkungan ex vitro atau kondisi autotrofik (Suminar et  al .,  2016).  Sistem  fotoautotrofik  dengan  menggunakan gula  berkonsentrasi  rendah  dan  ventilasi  dapat  diterapkan untuk  mengurangi  rendahnya  persentase  daya  hidup planlet  setelah  aklimatisasi  (Rahayu,  2015).  Penggunaan ventilasi dapat mengurangi RH yang tinggi di dalam botol kultur  (95-100%),  kondisi  RH  yang  tinggi  menyebabkan hiperhidrisitas  pada  tanaman.  Hiperhidrisitas  merupakan gejala kelainan fisiologi dan morfologi pada tanaman yang menghambat  proses  regenerasi  planlet.  Hiperhidrisitas juga mengakibatkan rendahnya kadar klorofil pada planlet, tingginya kadar air di planlet, dan kelainan anatomi tubuh struktur daun (Zen et al ., 2016). Hasil  penelitian  pada  planlet Solanum  tuberosum , penggunaan gula berkonsentrasi rendah dan ventilasi dapat meningkatkan  jumlah  kloroplas,  kerapatan  stomata,    dan penyempitan diameter stomata pada daun. Hal ini mampu meningkatkan  persentase  daya  hidup  planlet  pada  saat tahap aklimatisasi  (Rai et al ., 2015). Hasil penelitian pada planlet Carica papaya juga menunjukkan bahwa pada hari ke-17,  kombinasi  konsentrasi  gula  rendah  dan  IBA  pada media  dengan  pemberian  ventilasi  mampu  meningkatkan pembentukan  akar  dibandingkan  perlakuan  lainnya  pada tahap in  vitro (Perez et  al .,  2015).  Perbanyakan  tanaman nilam  dalam  lingkungan  fotoautotrofik  secara in  vitro perlu dilakukan untuk menekan rendahnya persentase daya hidup di lingkungan ex vitro dalam produksi bibit secara in vitro .  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui pengaruh sistem fotoautotrofik pada teknik kultur in vitro dengan pengaruh kadar gula dan jumlah ventilasi terhadap pertumbuhan tanaman nilam.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juni-September 2020, di Laboratorium Kultur Jaringan, Sekolah Vokasi IPB, Jl. Kumbang No. 14 Bogor dan Laboratorium Bioteknologi Universitas Djuanda Bogor, Jl. Ciawi No. 1 Bogor. Bahan yang digunakan untuk penelitian adalah planlet steril tanaman nilam varietas Tapak Tuan koleksi Unit Pengelolaan Benih Unggul Pertanian Bogor, BALITTRO.

## Pembuatan media dan Penanaman Eksplan
Pembuatan  media  Murashige  and  Skoog  (Gunawan, 1992)  menggunakan  larutan    stok    yang  terdiri  atas  hara makro, mikro A, mikro B, vitamin, Ca, Fe dan myo inositol sesuai    dengan    komposisi    media  ditambah  dengan  gula sesuai  masing-masing  perlakuan,  yaitu  10,  20,  dan  30  g L -1 dan    agar    jenis  agarose  8  g  L -1 .  Sebanyak  4  eksplan buku tunggal dengan mata tunas aksilar berumur 9 minggu ditanam  di  dalam  botol  kultur  pada  media  MS0  dengan berbagai konsentrasi gula sesuai dengan perlakuan yaitu 10, 20 atau 30 g L -1 . Botol ditutup dengan plastik yang sudah diberi lubang menggunakan pelubang kertas dengan ukuran diameter lubang 7 mm. Jumlah lubang pada plastik sesuai dengan perlakuan yaitu 0, 2 atau 4 lubang. Botol yang sudah ditutup dengan plastik diberi micropore tape pada lubang tersebut dan disimpan dalam ruang inkubasi.
Metode penelitian yang digunakan adalah rancangan kelompok lengkap teracak (RKLT), dengan dua faktor, yaitu konsentrasi gula dan jumlah ventilasi yang dikelompokkan berdasarkan  waktu  penanaman.  Faktor  konsentrasi  gula terdiri  atas  tiga  taraf  yaitu  G0  =  10  g  L -1 ,  G2  =  20  g  L -1 dan G3 = 30 g L -1 sedangkan jumlah ventilasi terdiri atas tiga  taraf  yaitu V0  =  0  lubang, V2  =  2  lubang  dan V4  = 4  lubang,  sehingga  terdapat  9  kombinasi  perlakuan. Percobaan menggunakan bahan tanam buku tunggal dengan 10  ulangan.  Jumlah  satuan  percobaan  adalah  90  satuan percobaan.  Setiap  satuan  percobaan  terdiri  atas  4  eksplan sebagai  satuan  amatan  pada  kondisi in  vitro .  Data  yang diperoleh dianalisis menggunakan sidik ragam atau analysis of varience (ANOVA). Perlakuan yang berpengaruh nyata dilanjutkan dengan uji jarak berganda dari Duncan (DMRT) pada taraf α 5%.
Pengamatan  yang  dilakukan  meliputi  pengamatan kuantitatif serta uji morfologi stomata pada tahap in vitro . Peubah  yang  diamati  adalah  jumlah  eksplan  berkalus, jumlah daun, jumlah buku, jumlah akar, waktu munculnya tunas  dan  akar  yang  dihitung  saat  eksplan  berumur  1-6 MSP  (minggu  setelah  perlakuan).  Persentase  kontaminasi dan persentase eksplan hidup diamati setiap hari selama 6 minggu.  Panjang  akar,  tinggi  tanaman  dan  uji  morfologi stomata dilakukan pada eksplan berumur 6 MSP. Analisis morfologi stomata dimulai dengan mengambil daun bagian epidermis bawah dan epidermis atas tanaman yang sudah diolesi kuteks kemudian meletakkannya pada selotip. Tahap selanjutnya hanya tersisa lapisan tipis daun, lalu diamati di
bawah mikroskop. Foto dibuat di bawah mikroskop dengan perbesaran 10x40. Stomata diamati sebanyak tiga ulangan. Jumlah  stomata  diamati  melalui  tiga  bidang  pandang. Diameter  stomata  diukur  dari  sisi  terlebar  dengan  jumlah sebanyak  tiga  stomata  untuk  tiga  ulangan  pada  setiap perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Keadaan Umum Kultur In Vitro
Kondisi tanaman nilam dengan sistem fotoautotrofik secara in  vitro dipengaruhi  oleh  suhu,  RH  dan  intensitas cahaya. Suhu ruang diatur dalam suhu rendah (18-20 o C). Suhu    ruangan  kultur  berkisar  23.7-24.8  ºC  dengan  RH berkisar  46-53%,  suhu  di  dalam  rak  kultur  berkisar  25- 25.9  ºC  dengan  RH  berkisar  42-47%  setiap  harinya.  Rak kultur  dilengkapi  dengan  lampu  LED  dengan  intensitas penyinaran 900-1,500 lux dan lama penyinaran selama 24 jam. Perbedaan  suhu  di  dalam  dan  di  luar  kultur  terjadi akibat adanya lampu penerangan di dalam rak kultur.

## Pertumbuhan Tanaman Nilam Fotoautotrofik In Vitro
Pertumbuhan  tanaman  nilam  fotoautotrofik in  vitro pada hasil analisis uji sidik ragam menunjukkan interaksi antara  perlakuan  konsentrasi  gula  dan  jumlah  ventilasi berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  eksplan  berkalus  dan jumlah daun (Tabel 1 dan 2). Konsentrasi gula berpengaruh nyata  terhadap  jumlah  buku  dan  tinggi  tanaman.  Jumlah ventilasi berpengaruh nyata terhadap eksplan hidup, jumlah buku,  jumlah  akar,  tinggi  tanaman,  panjang  akar,  jumlah dan kerapatan stomata (Tabel 3 dan 4).

## Eksplan berkalus
Eksplan  berkalus  terjadi  pada  media  perlakuan gula  10  g  L -1 dengan  berbagai  jumlah  ventilasi  (Tabel  1). Pembentukan kalus dapat dipengaruhi oleh genotipe maupun media induksi yang digunakan (Saepudin et al., 2016). Pemberian 2 lubang dan 4 lubang ventilasi pada gula rendah  10  g  L -1 dapat  menurunkan  pembentukan  kalus pada  eksplan  sebanyak  50-75%.  Ventilasi  diduga  dapat
mengurangi terbentuknya kalus pada pemberian gula rendah karena sirkulasi CO 2 yang baik (Rahayu, 2015). Kalus  yang  terbentuk  pada  perlakuan  gula  10  g L -1 dengan  berbagai  jumlah  ventilasi berubah  menjadi kecoklatan  pada  minggu  ke-3.  Pada  hasil  penelitian ini  diduga  pemberian  gula  yang  rendah  menyebabkan tanaman kekurangan nutrisi sehingga kalus berubah warna menjadi  kecoklatan.  Kalus  yang  berubah  warna  menjadi kecoklatan dapat disebabkan proses senesensi/penuaan dini akibat kekurangan nutrisi organik dari media (Amalia dan Hadipoentyanti, 2018).

## Jumlah Daun
Jumlah  daun  kultur  fotoautotrofik  dipengaruhi interaksi konsentrasi gula dan jumlah ventilasi. Perlakuan terbaik  terdapat  pada  planlet  yang  tidak  diberi  ventilasi dengan penambahan konsentrasi gula 20 g L -1 , walaupun tidak berbeda nyata dengan yang ditambah gula 30 g L -1 . Perlakuan  ini    pada  6  MSP,  menghasilkan  peningkatan jumlah daun 9-61% dibandingkan dengan perlakuan lainnya (Tabel  2).  Hal  ini  tidak  sejalan  dengan  penelitian  pada planlet Chrysanthemum  indicum L.,  bahwa  jumlah  daun hanya dipengaruhi oleh konsentrasi gula sedangkan tingkat permeabilitas tutup botol kultur dan interaksi keduanya tidak berpengaruh terhadap jumlah daun (Triyastuti et al., 2018). Perbedaan tersebut mungkin terjadi karena adanya perbedaan intensitas cahaya pada ruang kultur. Pada penelitian planlet Chrysanthemum  indicum L.  tersebut,  intensitas  cahaya yang digunakan pada ruang kultur adalah 1,300 lux. Pada penelitian ini, intensitas cahaya dapat mencapai 1,500 lux. Intensitas  cahaya  yang  tinggi  pada  pemberian  ventilasi mempercepat peningkatan laju transpirasi sehingga kondisi tersebut dapat mempengaruhi pertumbuhan tanaman seperti penurunan jumlah daun (Oseni et al ., 2018) .

## Waktu Muncul Tunas dan Akar
Hasil  analisis  data  menunjukkan  waktu  munculnya tunas aksilar dan akar dengan pemberian konsentrasi gula dan  jumlah  ventilasi  tidak  berbeda  nyata.  Pada  penelitian ini, tunas dan akar muncul pada 3 MSP (Tabel 4). Hal ini sejalan dengan penelitian pada planlet Solanum tuberosum yang menunjukkan bahwa interaksi gula dan ventilasi tidak mempengaruhi munculnya akar (Rai et al., 2015).

## Eksplan Hidup
Hasil analisis data menunjukkan jumlah eksplan hidup hanya dipengaruhi oleh jumlah ventilasi. Pada umur 6 MSP, perlakuan tanpa ventilasi dan 2 lubang ventilasi menunjukan daya  hidup  100%,  tetapi  pada  pemberian  perlakuan    4 lubang  ventilasi  mengalami  penurunan  persentasi  eksplan hidup menjadi 83% (Tabel 4). Pada minggu ke-5, beberapa daun berubah berwarna kekuningan hingga kecoklatan dan gugur, karena media menipis dan terjadi penguapan berlebih yang  diakibatkan  banyaknya  lubang  ventilasi.  Banyaknya lubang ventilasi mempengaruhi pertukaran gas di dalam dan
Konsentrasi gula (g L -1 ) Jumlah ventilasi 0 2 4 10 1.6a 0.4b 0.8ab 20 0.0b 0.0b 0.0b 30 0.0b 0.0b 0.0b Tabel 1. Jumlah  eksplan  berkalus  tanaman  nilam  sistem fotoautotrofik  pada  6  minggu  setelah  perlakuan pada berbagai konsentrasi gula dan ventilasi
Keterangan: Semua  data  ditransformasi  ke  √((x+0.5)).  Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada keseluruhan tabel  tidak  berbeda  nyata  menurut  uji  DMRT  pada taraf 5%.
di  luar  botol,  sehingga  menyebabkan  perubahan  tekanan, suhu,  kecepatan  arus  dan  pola  pergerakan  udara  (Xiao et al., 2011). Banyaknya lubang ventilasi juga mengakibatkan cekaman  air.  Hal  ini  mempengaruhi  beberapa  karakter fisiologis  tanaman  nilam,  sehingga  membuat  tanaman mengeluarkan respon meminimalkan air yang keluar dengan menutup stomata, menggulung daun, menggugurkan daun, mengurangi  pertumbuhan  dan  mempertahankan  suplai  air dengan penyesuaian osmotik (Setiawan et al ., 2013). Tingkat kelangsungan hidup dikaitkan dengan ketersediaan sumber energi  untuk  mempertahankan  pertumbuhan  tanaman (Mangesha et al., 2013). Media yang menipis mengurangi ketersediaan sumber energi.

## Jumlah Buku
Jumlah  buku  dipengaruhi  konsentrasi  gula  maupun jumlah  ventilasi.  Perlakuan  gula  20  g  L -1 mampu meningkatkan jumlah buku hingga 20%. Hal tersebut diduga karena konsentrasi gula 20 g L -1 mampu menstabilkan tekanan osmotik pada tanaman nilam. Gula berperan sebagai sumber energi  bagi  tumbuhan,  pemberian  gula  mempengaruhi multiplikasi tanaman. Pada tingkat pemberian konsentrasi gula  yang  rendah,  pertumbuhan  tanaman  akan  menurun akibat kurangnya pasokan energi. Pada tingkat konsentrasi gula  yang  tinggi,  pertumbuhan  dan  pembentukan  organ tanaman terhenti sebagai hasil penghentian pengambilan air akibat dari tekanan osmotik media. Hal ini mengakibatkan jumlah tunas, jumlah buku, panjang ruas, dan tinggi tanaman akan menjadi rendah (Kailola, 2015).

## Jumlah Akar
Hasil  analisis  data  menunjukkan  jumlah  akar  hanya dipengaruhi  oleh  jumlah  ventilasi.  Pemberian  jumlah ventilasi  2  lubang  meningkatkan  jumlah  akar  10-20%
dibandingkan  pemberian  perlakuan  tanpa  ventilasi  dan ventilasi 4 lubang (Tabel 3). Ventilasi dapat meningkatkan ketersediaan CO 2 sehingga merangsang pembentukan akar dan meningkatkan keberhasilan aklimatisasi. Faktor-faktor yang  mempengaruhi  keberhasilan  aklimatisasi  tanaman diantaranya  kondisi  planlet  (ukuran  bibit,  perakaran), kondisi  lingkungan  (kesesuaian  media  tumbuh,  suhu  dan RH lingkungan), ketepatan perlakuan sebelum dan sesudah transplantasi dari media in vitro ke media aklimatisasi, dan sanitasi lingkungan (Suminar et al ., 2016).

## Tinggi Tanaman
Tinggi  tanaman  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  gula maupun jumlah ventilasi. Tanaman tertinggi terdapat pada perlakuan pemberian 10 g L -1 gula, tetapi tidak berbeda nyata dengan pemberian 20 g L -1 gula. Gula pada kultur in vitro bertindak  sebagai  energi  untuk  pertumbuhan  dan  proses biosintesis  (Martins et  al., 2015).  Perlakuan  konsentrasi gula  yang  tinggi  pada  media  dapat  menyebabkan  eksplan memperoleh  sumber  karbon  sebagai  sumber  energi  yang lebih banyak, sehingga mempercepat pertumbuhan eksplan. Namun demikian, sukrosa juga berperan sebagai regulator osmotik.  Penambahan  sukrosa  dengan  konsentrasi  tinggi dalam  media  kultur  dapat  menyebabkan  penghambatan terhadap pertumbuhan kultur (Triyastuti et al ., 2018). Pemberian  jumlah  ventilasi  berpengaruh  nyata terhadap tinggi tanaman. Planlet nilam pada perlakuan tanpa ventilasi memiliki tanaman tertinggi dibandingkan planlet nilam yang diberi perlakuan 2 dan 4 ventilasi.  Penggunaan ventilasi  dengan  jumlah  yang  banyak  menyebabkan terhambatnya tinggi tanaman akibat cekaman lingkungan. Tanaman yang mengalami cekaman kekeringan umumnya mengalami pertumbuhan yang tidak normal seperti tumbuh kerdil dan mempengaruhi laju fotosintesis (Maslukah et al., 2019).
Jumlah ventilasi Konsentrasi gula (g L -1 ) Jumlah daun 3 MSP 4 MSP 5 MSP 6 MSP 0 10 4.0b 6.3bc 7.9b 9.0b 20 8.1a 10.9a 12.0a 13.3a 30 5.1b 8.4b 10.5a 12.1a 2 10 5.3b 6.9bc 8.0b 9.0b 20 5.4b 6.8bc 7.5bc 8.1bc 30 4.5b 6.3bc 7.2bc 7.6bcd 4 10 4.0b 4.9c 5.1c 5.2d 20 5.4b 6.4bc 8.2b 8.7b 30 4.6b 5.6c 5.8bc 5.9cd KK (%) 16.79 14.27 14.4 14.27
Tabel 2. Jumlah daun tanaman nilam sistem fotoautotrofik pada berbagai konsentrasi gula dan ventilasi
Keterangan: Semua data ditransformasi ke √(x+0.5). Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada keseluruhan tabel tidak berbeda nyata menurut uji DMRT pada taraf 5%. KK: Koefisien keragaman

## Panjang Akar
Panjang  akar  planlet  nilam  hanya  dipengaruhi oleh  jumlah  lubang  ventilasi.  Perlakuan  tanpa  ventilasi meningkatkan  panjang  akar  51%  lebih  panjang dibandingkan perlakuan menggunakan ventilasi (Tabel 4). Sistem  perbanyakan  fotoautotrofik  memiliki  keterbatasan, sehingga perlu memahami lingkungan in vitro dan kontrol lingkungan  yang  mendorong  fotosintesis,  transpirasi  dan
penyerapan nutrisi (Krisantini dan Wiendi, 2018). Keadaan lingkungan dengan suhu dan intensitas cahaya yang tinggi di dalam rak kultur diindikasikan menyebabkan pertumbuhan fisiologi perpanjangan akar tanaman terhambat.

## Jumlah dan Kerapatan Stomata
Hasil  analisis  data  menunjukkan  jumlah  ventilasi berpengaruh  terhadap  jumlah  dan  kerapatan  stomata.
Perlakuan Waktu muncul akar (hari) Waktu muncul tunas (hari) Eksplan hidup Tinggi tanaman (cm) Panjang akar (cm) Jumlah stomata Kerapatan stomata (/mm 2 )
Konsentrasi gula (g L -1 ) 10 18.8 20.0 4.0 2.97a 0.64 33.8 187.7 20 17.5 21.4 3.6 2.74ab 0.52 30.3 168.5 30 17.4 18.4 3.7 2.27b 0.46 26.0 145.1 Uji F tn tn tn * tn tn tn Jumlah ventilasi 0 18.2 20.0 4.0a 4.66a 0.84a 18.0c 101.2c 2 18.0 20.1 4.0a 1.82b 0.41b 30.0b 167.3b 4 17.1 19.0 3.3b 1.50b 0.37b 42.0a 232.7a Uji F tn tn * ** ** ** ** GxV tn tn tn tn tn tn tn KK (%) 16.30 11.20 13.66 11.10 11.31 12.18 12.13
Tabel 4. Waktu muncul akar dan tunas, jumlah eksplan hidup, tinggi tanaman, panjang akar, jumlah dan kerapatan stomata tanaman nilam sistem fotoautotrofik pada 6 minggu setelah perlakuan
Keterangan: * = berpengaruh nyata pada taraf 5%; ** = berpengaruh nyata pada taraf 1%, tn = tidak berpengaruh nyata. Semua data ditransformasi ke √(x+0.5). Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata menurut uji DMRT taraf 5%. KK = koefisien keragaman.
Perlakuan Jumlah buku Jumlah akar 3 MSP 4 MSP 5 MSP 6 MSP 3 MSP 4 MSP 5 MSP 6 MSP Konsentrasi gula (g L -1 ) 10 1.2b 2.1b 2.5b 2.8b 1.6 1.6 1.8 2.1 20 2.1a 2.7a 3.3a 3.5a 1.4 1.7 1.9 2.0 30 1.5b 2.4ab 2.7b 2.9b 1.3 1.8 1.9 2.0 Uji F ** * ** ** tn tn tn tn Jumlah ventilasi 0 2.3a 3.3a 3.7a 4.2a 1.8 1.8 1.9 2.0ab 2 1.5b 2.3b 2.6b 2.8b 1.7 1.7 2.0 2.2a 4 1.0c 1.5c 2.2c 2.2c 1.6 1.6 1.8 1.8b Uji F ** ** ** ** tn tn tn * GxV tn tn tn tn tn tn tn tn KK (%) 23.80 18.30 11.20 10.93 16.53 13.26 12.59 11.18
Tabel 3. Jumlah buku dan jumlah akar  tanaman nilam sistem fotoautotrofik pada 3-6 MSP
Keterangan: * = berpengaruh nyata pada taraf 5%; ** = berpengaruh nyata pada taraf 1%; tn = tidak berpengaruh nyata. Semua data ditransformasi ke √(x+0.5). Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama tidak berbeda nyata menurut uji DMRT taraf 5%. KK = koefisien keragaman.
Perlakuan ventilasi 4 lubang meningkatkan jumlah stomata dan  kerapatan  stomata  bawah  28-57%  dibandingkan perlakuan 0 dan 2 ventilasi (Tabel 4).
Pemberian  ventilasi  dapat  meningkatkan  kerapatan stomata  terutama  stomata  bagian  bawah  daun.  Perbedaan kerapatan stomata dapat memengaruhi dua proses penting pada  tanaman,  yaitu  fotosintesis  dan  transpirasi.  Stomata yang  rapat  dapat  meningkatkan  evaporasi  pendinginan daun  dan  mempercepat  asimilasi  CO 2 .  Bagian  atas  daun memiliki jumlah stomata lebih sedikit, karena letaknya yang berada  paling  luar  dari  lapisan  epidermis  berfungsi  untuk mengurangi  transpirasi.  Pada  bagian  bawah  epidermis daun  terdapat  mesofil  yang  merupakan  tempat  terjadinya proses  fotosintesis,  karena  sel-sel  di  jaringan  ini  banyak mengandung  klorofil  (Juairiyah,  2014).  Sejalan  dengan temuan  tersebut,  Rai et  al. (2015)  melaporkan  bahwa pengurangan gula pada media yang dikombinasikan dengan ventilasi  akan  menyebabkan  tanaman  kentang  mengalami peningkatan fotosintesis yang dapat dilihat melalui jumlah dan kerapatan stomata yang tinggi.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  interaksi  antara perlakuan  konsentrasi  gula  dan  jumlah  ventilasi  pada kultur fotoautotrofik berpengaruh terhadap jumlah eksplan berkalus  dan  jumlah  daun  tanaman  nilam  varietas  Tapak Tuan  pada  pengamatan.  Hasil  terbaik  dalam  multiplikasi tanaman  nilam    menggunakan  media  penambahan  20  g L -1 gula  tanpa  ventilasi  yang  meningkatkan  jumlah  daun sebanyak  9-61%  dan  jumlah  buku  sebanyak  20%  pada  6 MSP dibandingkan perlakuan lainnya. Pemberian ventilasi 2  lubang  meningkatkan  jumlah  akar  10-20%,  jumlah  dan kerapatan  stomata  28-57%  pada  6  MSP  dalam  kondisi in vitro dibandingkan perlakuan lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia,  Hadipoentyanti.  2018.  Perbanyakan  nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  menggunakan  media dasar alternatif secara in vitro . J. Perspektif. 17:39- 149.
[BPS]  Badan  Pusat  Statistik.  2019.  Produktivitas  nilam menurut  provinsi  di  indonesia  2015-2019.  https:// www.pertanian.go.id [27 Oktober 2019].
Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Pertanian.  2012. Inovasi  Teknologi  Perkebunan  Indonesia.  IAARD Press, Jakarta, ID.
Gunawan, L.W. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan. Departemen Pendidikan  dan  Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Bioteknologi Institut Pertanian Bogor, Bogor, ID.
Inampudi, S., L. Bhosale, A. Rohinikar, I. A. Shaker, C. G. Komal,  A.  Gangavane.  2017.  Evaluation  study  of micropropagation  stages  of  patchouli  plant.  Int.  J. Plant. Sci. 12:149-155.
Juairiah, L. 2014. Studi Karakteristik stomata beberapa jenis tanaman  revegetasi  di  lahan  pasca  penambangan timah di bangka. Widyariset. 17:213-218.
Kailola,  J.J.G.  2015.  Pengaruh  konsentrasi  nitrogen  dan sukrosa  terhadap  produksi  umbi  mikro  kentang kultivar granola. J. Budidaya Pertanian 11:12-21.
Krisantini, N.M.A Wiendi. 2018. Photoautotrophic  system: a  review  and  potential applications in plant micro propagation. J. Trop. Crop. Sci. 3:73-77.
Mangesha,  A.,  B.  Ayenew,  T.  Tadesse.  2013.  Energy sources  affect  in  vitro  propagation  and  subsequent acclimatization  of Ananas  comosus, var.  smooth cayenne plants. J. Microbiol. Biotechnol. Food Sci. 2:2372-2376.
Martins, J.P., M. Pasqual, A. D. Martins, S. F. Ribeira. 2015. Effects of salts and sucrose concentrations on in vitro propagation  of Billbergia  zebrina (herbert)  lindley (bromeliaceae). Aust. J. Crop. Sci. 9:85-91.
Maslukah  R.,  F.  Yulianti,  M.  Roviq,  M.  D.  Maghfoer. 2019.  Pengaruh  polyethylene  glycol  (PEG) terhadap  hardening  planlet  apel  ( Malus sp.)  akibat hiperhidrisitas  secara  in  vitro.  Plant.  J.  Agri.  Sci. 4:30-38.
Oseni, O.M., V. Pande, T. K. Nailwal. 2018. A review on plant tissue culture, a technique for propagation and conservation of endangered plant species. Int. J. Curr. Microbiol. App. Sci. 7:3778-3786.
Perez, L. P., Y. P. Montesinos. J. G. Olmedo, R. R. Sanchez, O. N. Montenegro, R. B. Rodriguez, O.H. Ribalt, R. C. R. Escriba, D. Daniels, R. G. Kosky. 2015. Effects of  different  culture  conditions  (photoautotrophic, photomixotropic) and the auxin indole-butyric acid on  the  in  vitro  acclimatization  of  papaya  ( Carica papaya L. Var. Red Maradol) plants using zeolite as support.  Afr. J. Biotechnol. 35:2622-2635.
Rahayu,  E.S.  2015.  Kultur  Fotoautotrofik:  Solusi Mikropropagasi  Tumbuhan  Berkayu.  Swadaya Manunggal, Semarang, ID.
Rai,  S.P.,  N.M.A.  Wiendi,  Krisantini.  2015.  Optimasi produksi bibit tanaman kentang ( Solanum tuberosum ) kultivar  granola  dengan  teknik  fotoautotrofik.  Bul. Agrohorti. 3:28-38.
Rosiana,  N.,  Feryanto,  V.  R.  Sinaga.  2017.  Posisi  daya saing dan tingkat persaingan minyak atsiri Indonesia di  pasar  global.  Agricore.  J.  Agribisnis  dan  Sosial Ekonomi Pertanian. 2:205-290.
Saepudin, A., N. Khumaida, D. Sopandie, S. W. Ardie. 2016.
Induksi  dan  proliferasi  embriogenesis  somatik    in vitro pada lima genotipe kedelai. J. Agron. Indonesia. 44:261-270.
Setiawan,  Tohari,  D.  Shiddieq.  2013.  Pengaruh  cekaman kurang  air  terhadap  beberapa  karakter  fisiologis tanaman nilam ( Pogostemon cablin Benth. ). J. Littri. 19:108-116.
Suminar,  E.,  D.S.  Sobarna,  A.  Nuraini,  S.  Mubarok, P.  Suryatmana,  Y.  Sihombing,  C.  Angel.  2016.
Regenerasi ekplan nilam klon Sidikalang dan aplikasi
azotobacter  pada  tahap  aklimatisasi.  J. Agrikultura 27:72-82.
Triyastuti,  N,  E.S  Rahayu,  T.  Widiatningrum.  2018. Optimasi  pertumbuhan  plantlet  krisan  melalui peningkatan permeabilitas tutup botol dan penurunan sukrosa. Indones. J. Math. Sci. 41:20-26.
Xiao,Y., T. Kozai, G. Niu. 2011. Development and application of photoautotrophic micropropagation plant system. Plant Cell Tissue Organ Cult. 105:149-158.
Zen,  A.R.,  W.  Widoretno,  S.  Indriyani.  2016.  Water  and chlorophyll  content  and  leaf  anatomy  of  patchouli planlet ( Pogostemon cablin Benth.) resulted by shoot- tip culture experience hyperhydricity after treatment of  modification  ammonium  nitrate  or  macro  salt concentration on MS medium (murashige skoog). J. Exp. Life Sci . 6:38-44.