ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002).
Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)

## ISSN 2460-1365
Caroline Dwiseptianti, Febri Adi Susanto, Yekti Asih Purwestri, Tri Rini Nuringtyas. (2019). Optimasi Metode 1H-NMR Profiling pada RImpang Kunyit (Curcuma Longa L. ) . Journal Bioeksperimen. Vol. 5 (2) Pp. 106-113. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i2.2795
OPTIMASI METODE 1H-NMR PROFILING PADA RIMPANG KUNYIT (CURCUMA LONGA L. )
Caroline Dwiseptianti, Febri Adi Susanto * , Yekti Asih Purwestri, Tri Rini Nuringtyas * Laboratorium Biokimia, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada * Email: tririni@ugm.ac.id; febri.adi.s@mail.ugm.ac.id Paper diterima : 23 Januari 2018, Paper publish : September 2019
Abstract- The use of medicinal plants is increasing due to the lack of side effects caused and the number of bioactive compounds that cannot be represented by synthetic chemical synthesis compounds. However, the management and use of natural medicines for the main handling of diseases are often hampered by the quality of the ingredients which are low and unstable. The standardized quality control system of OAI (Indonesian Natural Medicine) is the main key to improve clinical assurance and safety of the use of herbal medicines in Indonesia. One of the medicinal plants known to the public is Curcuma longa L. (turmeric). The main active components contained in turmeric are curcumin, demetoksikurkumin, bis-demetoksikurkumin, and ar-turmeron. Information about the quality of turmeric is needed in its use as a raw material for drugs so we need an analytical technique that is able to identify the diversity of metabolite profiles of active compounds. In this research, an optimization method is used to improve efficiency in the extraction of turmeric rhizome metabolites so that the best solvent concentration is known for the analysis of fingerprinting secondary metabolites with 1H-NMR 500 MHz spectroscopy in turmeric rhizomes. The results were analyzed with MNOVA software and chemical shift obtained compared with the reference. From the results obtained a concentration of methanol-d4 (CD3OD) 100% able to extract curcumin better than other solvents. The solvent is able to extract saccharide (sugar) compounds in the form of sucrose, amino acids and fatty acids in the form of methionine, glutamine, acetate, and glycero phospho choline.
Key words : Curcuma longa, 1H-NMR, Metabolomics, curcumin

## Pendahuluan
Masyarakat Indonesia secara luas telah mengkonsumsi Obat Alam Indonesia (OAI) sejak beratus tahun lamanya. Data WHO menunjukan pada tahun 2008 sebanyak 68% penduduk dunia masih menggantungkan sistem pengobatan tradisional yang mayoritas menggunakan tumbuhan untuk penyembuhan penyakit dan lebih dari 80% penduduk dunia menggunakan obat herbal untuk meningkatkan vitalitas tubuh serta mendukung kesehatan. Kecenderungan masyarakat terhadap penggunaan tanaman obat ini semakin meningkat beberapa tahun belakangan, hal ini bukan hanya disebabkan minimnya efek samping yang ditimbulkan dibandingkan bahan kimia namun juga banyaknya senyawa bioaktif yang tidak dapat diwakili oleh senyawa sintesis
meski dengan bantuan teknik kombinatorial kimia (Henkel, Brunne, H., & Reichel, 1999). Namun pengelolaan dan pemakaian obat bahan alam untuk penangangan utama penyakit seringkali terhambat oleh kualitas bahan yang rendah dan tidak stabil (Xie & Leung, 2009). Salah satu tanaman obat yang dikenal secara luas oleh masyarakat Indonesia ialah Curcuma longa L. (kunyit). Kunyit atau kunir ( C. longa ) termasuk salah satu tanaman rempah dan obat yang biasa digunakan di negara Timur Tengah dan kawasan lain di Asia (Pribadi, 2009). Komponen aktif utama yang terdapat dalam kunyit yaitu kurkumin, demetoksikurkumin, bis-demetoksikurku-min, dan ar-turmeron (Prakash, Satyan, & S.Majeed, 2003). Kualitas suatu senyawa dapat ditunjukkan dengan sifat bioaktivitasnya dan sifat tersebut dipengaruhi oleh komposisi kimia yang terkandung di
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
dalamnya. Oleh sebab itu, diperlukan suatu teknik analisis yang mampu mengidentifikasi keragaman profil metabolit dalam suatu senyawa.
Dari berbagai teknik analisis yang ada, fingerprinting berbasis NMR merupakan pilihan yang sangat tepat karena NMR memiliki kisaran deteksi yang luas mencakup senyawa dari golongan non-polar sampai polar, dan preparasi sampel yang sederhana. NMR memiliki reprodusibilitas yang paling tinggi dibanding analisis kimia yang lain sehingga data yang telah diukur baik itu ekstrak obat herbal, senyawa standar atau referensi dapat dijadikan sebagai acuan dan menjadi database untuk analisis selanjutnya. Untuk keberhasilan analisis fingerprinting NMR ini maka perlu dilakukan optimasi dalam protokol penyiapan sampel dan metode baku pengukuran NMR. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui pelarut yang paling optimum dan optimasi metode untuk mengekstraksi senyawa aktif pada rimpang kunyit dan senyawa yang terekstrak pada pelarut yang terpilih.

## Metodologi Penelitian
1.  Preparasi sampel Rimpang kunyit yang digunakan dikoleksi dari Karanganyar kemudian dibersihkan dan dicuci dengan air mengalir dan mencegah kontaminasi yang dapat mempengaruhi mutu rimpang. Rimpang segera ditiriskan dengan rak pengering dan dibolak-balik secara periodik selama ± 1 minggu untuk memastikan keseragaman pengeringan dan mencegah fermentasi. Untuk mempercepat proses pengeringan rimpang kunyit dirajang secara split (membujur untuk mengurangi terputusnya serat-serat yang didalamnya terdapat minyak atsiri) dengan ketebalan 4-5 mm (Prasetya & Yuliani, 2014). Setelah dirajang rimpang kunyit kemudian dikeringkan dengan oven bersuhu 50°C selama 8-10 jam, kemudian diserbuk dan di lakukan freeze drying untuk menghilangkan kadar air.
2. Analisis 1 H-NMR
Sampel kering dalam tabung Eppendorf ditimbang (50 mg) dan ditambahkan solvent ekstraksi dengan variasi tiga konsentrasi yang berbeda yaitu methanol- d 4 100%, 70% dan 30%(750 μl CD 3 OD + 750 μl KH 2 PO 4 buffer dalam D 2 O (pH 6.0). Sampel dihomogenisasi dengan vortex dahulu selama 1 menit di suhu ruang (20-25 o C) kemudian diekstraksi menggunakan ultrasonikator selama 15 menit di suhu ruang. Supernatan sebanyak 1ml dimasukkan ke tabung Eppendorf 1,5 ml. Kemudian sampel disentrifugasi pada kecepatan 10.000 g di suhu ruang selama 10 menit untuk mendapatkan supernatan yang jelas. Supernatan sebanyak 800 μl  dimasukkan kedalam tabung NMR 5mm, dan ditempatkan di suhu ruang selama setengah jam sebelum pengukuran NMR untuk menghindari shimming akibat perbedaan temperatur pada sampel dan setelahnya dapat dianalisis dalam spektroskopi H NMR.
3.  Analisis data 1 H-NMR Hasil spektra NMR dikonversikan ke bentuk yang sesuai untuk dilakukan analisis multivariat. Penelitian ini menggunakan software (Mestrelab) MNOVA v.11.0.4 untuk pengolahan data 1D NMR. Identifikasi metabolit dilakukan dengan perbandingan sinyal NMR dengan referensi senyawa atau dengan spektra satu dimensi. Pengukuran kandungan metabolit secara semikuantitatif dilakukan dengan membandingkan jarak sinyal metabolit yang dianalisis dengan sinyal standar solvent atau pergeseran kimia ( chemical shift ).

## Hasil dan Pembahasan
Profiling metabolit berbasis NMR merupakan langkah awal analisis metabolit secara kualitatif dan kuantitatif.NMR memiliki kisaran deteksi yang luas mencakup senyawa dari golongan non-polar sampai polar, dan preparasi sampel yang sederhana serta memiliki reprodusibilitas yang paling tinggi dibanding analisis kimia yang lain sehingga data yang telah diukur baik itu ekstrak obat herbal,
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)

## ISSN 2460-1365
senyawa standar atau referensi dapat dijadikan sebagai acuan dan menjadi database untuk analisis selanjutnya. Untuk keberhasilan analisis fingerprinting NMR ini maka perlu dilakukan optimasi dalam protokol  penyiapan sampel dan metode baku pengukuran NMR.
Pada persiapan sampel rimpang kunyit yang berasal dari wilayah Karanganyar diidentifikasi untuk kemudian dilakukan preparasi di laboratorium. Pada penelitian dilakukan sonikasi terhadap seluruh sampel selama 15 menit dengan Ultrasonicator LC 130.
Sonikator memberikan adanya lokal kavitasi pada senyawa atsiri, volatil atau semivolatil di dalam dinding sel tumbuhan, sehingga diharapkan meningkatkan jumlah senyawa bioaktif yang terekstraksi tanpa adanya pemanasan yang dapat merusak konformasi senyawa.
Dalam pengukuran sampel dilarutkan dalam pelarut yang tidak mengandung proton (salah satunya Metanol- d 4 ) yang memiliki sifat
semipolar sehingga sesuai untuk mengekstraksi senyawa bioaktif terutama kurkumin pada rimpang kunyit, buffer fosfat untuk menstabilkan kondisi pH larutan agar dapat mencegah perubahan konformasi atau struktur beberapa senyawa bioaktif yang sensitif, 3-(trimethylsilyl)- 2,2,3,3-tetradeuteropropionic acid (TMSP- d 4 ) 0,01% ditambahkan sebagai standar internal, dan dilarutkan dalam D 2 O untuk kuantifikasi metabolit dengan pelarut methanol-d4 berbagai konsentrasi (Kim, et al., 2011). Selain itu kurkumin dapat mengalami perubahan warna akibat perubahan pH lingkungan. Kurkumin berwarna kuning atau kuning jingga pada suasana asam,sedangkan dalam suasana basa berwarna merah. Kurkumin dalam suasana basaatau pada lingkungan pH 8,5-10,0 dalam waktu yang relatif lama dapat mengalami proses disosiasi, kurkumin mengalami degradasi membentuk asamferulat dan feruloilmetan. Sehingga penting untuk menjaga kestabilan pH pada ekstrak kasar tersebut.
Gambar 1. Stack 1 H NMR 500 MHz rimpang kunyit pada pelarut CD 3 OD
Pada penelitian ini digunakannya protokol 1 H NMR dengan pre-sat untuk menekan sinyal air dan meningkatkan resolusi spektra 1 H NMR. Dari hasil yang diperoleh berupa spektra 1 H NMR rimpang kunyit pada pelarut methanol berbagai konsentrasi mengandung ratusan
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
sinyal yang ditunjukan pada Gambar 1. Sinyal tersebut memperlihatkan keseluruhan jumlah metabolit yang terekstraksi oleh masing-masing pelarut sesuai polaritas atau karakteristik tiap metabolit. Konsentrasi absolut metabolit dapat dihitung dengan membandingkan intensitas puncak ( peak )-nya dengan standard internal. Puncak diukur tidak berdasar posisi resonansi melainkan jarak geseran dari TMSP atau standar internal yang digunakan ( chemical shift ). Dari stack 1 H NMR dapat dibagi tiga wilayah untuk profiling metabolit yaitu diperkirakan senyawa golongan aromatik terekstraksi pada chemical shift 5,75- 8,0 pm; senyawa golongan sakarida terekstraksi pada kisaran 2,75-5,75 ppm ; dan senyawa golongan asam amino dan asam lemak terekstraksi pada
kisaran 0,5-2,75 ppm. Untuk kurkumin sebagai komponen bioaktif utama pada rimpang kunyit merupakan senyawa golongan aromatik sehingga terekstraksi pada wilayah 6,5-7,75 ppm. Senyawa yang berjumlah sedikit sulit dideteksi karena lemahnya sinyal serta adanya kemungkinan tumpukan puncak ( peak) dalam satu area. Sehingga untuk mendeteksi seluruh sinyal secara lengkap menghabiskan waktu banyak meski dengan deteksi NMR dua dimensi. Seluruh daftar metabolit yang diduga terekstraksi dalam tiap pelarut (Tabel 1) diidentifikasi cepat menggunakan software MNOVA v.11.0.4 dan dibandingkan dengan referensi chemical shift NMR yang telah diketahui terekstraksi pada kondisi yang sama (Kim, Choi, & Verpoorte, 2010).
Gambar 2. Spektra spektroskopi 1 H NMR 500 MHz kurkumin pada pelarut CDCl 3
Untuk langkah selanjutnya perlu dilakukan identifikasi sinyal senyawa yang belum diketahui dengan pengukuran dua dimensi. Sehingga didapatkan informasi berupa plot chemical shift versus coupling constants.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002).
Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)

## ISSN 2460-1365
Gambar 3. Spektra spektroskopi 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 100% CD 3 OD
Gambar 4. Spektrum spektroskopi 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 70% CD 3 OD
Spektra hasil 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 100% CD 3 OD (Gambar 3.) menunjukan senyawa kurkumin terekstrak lebih baik melalui perbandingan geseran kimia ( chemical shift ) dan tinggi garis integral dengan referensi yang ada (Gambar 3). Signal kurkumin muncul pada geseran kimia 7,52; 7,21; 6,83;
6,81; dan 6,62 δ (ppm), namun senyawa golongan sakarida tidak terekstraksi lebih baik dibanding konsentrasi pelarut lainnya yakni hanya sukrosa pada 5,39 ppm. Senyawa golongan asam amino dan asam lemak yang diduga muncul diantaranya glycerophospocholine, asparagin, O-Acetyl carnosine, metionin,
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
glutamin dan asetat. Namun dari grafik terlihat banyaknya sinyal yang tumpang tindih pada satu area ( crowded in one area ), sehingga masih adanya senyawa yang tidak teridentifikasi. Spektra hasil 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 70% CD 3 OD (Gambar 4.) menunjukan adanya beberapa sinyal senyawa kurkumin yang terekstrak melalui perbandingan geseran kimia ( chemical shift ) yang telah diketahui, namun ditinjau dari tinggi garis integral tidak lebih baik dibanding hasil ekstraksi pelarut 100%. Signal kurkumin muncul pada geseran kimia 7,68; 7,21; 7,13; 7,09 dan 6,88 δ (ppm), sementara senyawa golongan sakarida terlihat terekstraksi lebih banyak dibanding konsentrasi pelarut lainnya yakni fruktosa pada 4,16 ppm serta sinyal lainnya yang tumpang tindih pada satu area sehingga belum dapat teridentifikasi. Senyawa golongan asam amino dan asam lemak yang diduga muncul berupa glycerophospocholine dan asetat.
Spektra hasil 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 50% CD 3 OD (Gambar 5.) menunjukan tidak terdeteksinya sinyal kurkumin, sementara senyawa golongan sakarida terlihat lebih banyak terekstraksi yakni fruktosa pada 4,02 ppm serta sinyal lainnya yang tumpang tindih pada satu area sehingga belum dapat teridentifikasi. Senyawa golongan asam amino dan asam lemak yang diduga muncul hanya asetat.
Hasil ekstraksi pelarut Metanol- d 4 100% mampu mengekstrak kurkumin, senyawa golongan aromatik yang cenderung memiliki polaritas rendah lebih baik. Hal ini terkait sifat Metanol- d 4 sebagai pelarut universal yang mampu mengekstrak senyawa polaritas rendah hingga tinggi serta kesesuaian polaritas-nya (asas like dissolve like ) terhadap metabolit primer golongan sakarida dan asam amino maupun metabolit sekunder seperti golongan fenolik atau kurkuminoid (Tabel 1).
Gambar 5. Spektra spektroskopi 1 H NMR rimpang kunyit dengan pelarut 50% CD 3 OD
Ketika CD 3 OD atau methanol dilarutkan dalam D 2 O menyebabkan meningkatnya polaritas solvent sehingga tidak cukup optimal untuk mengekstraksi senyawa non-polar.
Senyawa yang diprediksi terekstrak oleh pelarut Metanol- d 4 pada rimpang kunyit dengan spektroskopi 1 H NMR 500 MHz.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)

## ISSN 2460-1365
Tabel 1. Prediksi metabolit terdeteksi 1 H NMR rimpang kunyit pada berbagai konsentrasi pelarut
No Nama Chemical shift ( δ , ppm) Jenis spektra* 100 % solvent 70 % solvent 50 % solvent 1 Curcumin 7.68 7.57 7.21 7.09 – 7.11 7.13 6.81 – 6.83 6.88 – 6.9 6.62 d d s s d d d d - Ada Ada - - Ada Ada Ada Ada - Ada Ada Ada - Ada - 2 Acetate 1.86 – 1.9 d Ada Ada Ada 3 Glutamine 2.45 m Ada - - 4 Methionine 2.7 m Ada - - 5 Asparagine 2.85 m Ada - - 6 0-acethyl carnosine 3.2 s Ada - - 7 Glycero Phospho Coline 3.32-3.35 s Ada Ada - 8 Fructose 4.02-4.03 4.16 d - Ada Ada Sucrose 5.39 d Ada - - 9 Tyrosine 6.9 d - - Ada *s= singlet, d= doublet, m=multiplet

## Simpulan
Konsentrasi Methanol–d4 (CD 3 OD) 100% mengekstraksi kurkumin lebih baik dibandingkan pelarut lainnya. Pelarut CD 3 OD mampu mengekstrak senyawa golongan sakarida berupa sukrosa, asam amino serta asam lemak berupa metionin, glutamin, asparagin.
asetat, O-Acetyl carnosine, dan glycero phospo choline

## Ucapan Terimakasih
Penelitian ini dibiayai oleh Penelitian Unggul Perguruan Tinggi Kemenristekdikti tahun anggaran 2107 kepada Y.A.P.

## Daftar Pustaka
Henkel, T., Brunne, R., H., M., & Reichel, F. (1999). Statistical Investigation into the Structural Complementarity of Natural Products and Synthetic Compounds. Angew. Chem., Int. Ed , Vol 38(5): p 643-647.
Kim, E., Kwon, J., Park, S., Park, C., Seo, Y., Shin, H., . . . Hwang, D. R. (2011). Metabolite pro- filing of Angelica gigas from different geographical origin using 1H NMR and UPLC-MS analyses. J Agric Food Chem. , Vol 59: p 8806-8815.
Kim, H., Choi, Y., & Verpoorte, R. (2010). Protocol NMR-based metabolomic analysis of plants. Nature Publishing Group , Vol 5(3): p 536-548.
Prakash, L., Satyan, K., & S.Majeed. (2003). Multifunctional Ingredients. The Novel Face of Natu- ral, Cosmetics and Toiletries , Vol 118(11):p 41-46.
Prasetya, D., & Yuliani, S. (2014). Aktivitas Ekstrak Rimpang Remulawak (Curcuma xanthorrhiza
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi,
Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
roxb.) pada Radial Arm Maze dan Pasive Avoidance Test Tikus Model Demensia. Pharmaҫia- na, 4(2):157-164 , Vol 4(2):p 157-164.
Pribadi, E. (2009). Pasokan dan permintaan tanaman obat Indonesia serta arah penelitian dan pengembangannya. Perspektif. 8: 52-64. Perspektif , Vol 8: p 52-64.
Xie, P., & Leung, A. (2009). Understanding the traditional aspect of Chinese medicine in or- der to achieve meaningful quality control of Chinese materia medica. J Chromatogr A , Vol 1216(11): p 1933-1940.