Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret https://jurnal.uns.ac.id/jkpk
ISSN 2503-4154 (online)

## AKTIVITAS ANTIPLASMODIUM DAN SITOTOKSITAS FRAKSI POTENSIAL (FG2, FG3 DAN FG4) DARI DAUN KAPUR
( Harmsiopanax aculeatus , Harms) YANG SECARA

## TRADISIONAL DIGUNAKAN UNTUK TREATMENT MALARIA DI MALUKU, INDONESIA
Activity of Anti-plasmodial and Cytotoxicity of Kapur Leaves (Harmsiopanax aculeatus, Harms) Potential Fraction (FG2, FG3 and FG4) Traditionally Used to Treat Malaria in Maluku Indonesia
Rachel Turalely 1,2 *, Mustofa 3 , Mahardika Agus Wijayanti 4 , dan Triana Hertiani 5
1 Program Studi Pendidikan Kimia, FKIP, Universitas Pattimura, Ambon, Maluku, Indonesia 2 Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
3 Bagian Farmakologi dan Terapi, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
4 Bagian Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
5 Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
Untuk korespondensi: No HP : 081381219402; e-mail : rachelturalely.unpatti@gmail.com
Received: May 16, 2018 Accepted: August 15, 2018
Online Published: August 31, 2018
DOI : 10.20961/jkpk.v3i2.21068

## ABSTRAK
Daun  tanaman Harmsiopanax  aculeatus ,  Harms  yang  secara  lokal  dinamakan  tanaman kapur,  telah  digunakan  secara  tradisional  sebagai  tanaman  obat  untuk  mengobati  malaria  di Maluku, Indonesia, meskipun bukti ilmiah senyawa aktif antimalaria dari tanaman ini belum diteliti. Penelitian ini dilakukan untuk mengevaluasi aktivitas anti plasmodium dan sitotoksitas dari fraksi aktif  daun Harmsiopanax  aculeatus ,  Harms.  Fraksi  yang  diuji  adalah  FG2,  FG3  and  FG4  yang diperoleh melalui pemisahan ekstrak metanol menggunakan Vacuum Liquid Chromatograpy (VLC) secara  bergradien  menggunakan  pelarut n -heksan,  kloroform,  etil  asetat  dan  metanol.  Aktivitas Antiplasmodium secara in vitro dievaluasi pada Plasmodium falciparum strain FCR3 yang resisten klorokuin  menggunakan  metode  mikroskopik.  Aktivitas  sitotoksitas  melawan  sel  vero  dievaluasi menggunakan MTT  colorimetric  method .  Aktivitas  antiplasmodium  dan  sitotoksitas  dihitung berdasarkan IC 50 ( inhibitory concentration of 50% Plasmodium atau sel vero yang tumbuh setelah diinkubasi  dengan  fraksi  yang  diujikan),  kemudian  dihitung  menggunakan  analisis  regresi  probit dengan SPSS. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi FG2, FG3 dan FG4 mempunyai aktivitas antiplasmodium  menjanjikan  dengan  nilai  IC 50 7,48; 8,24  dan  7,75  μg/mL  secara  berturut-turut. Aktivitas sitotoksitas fraksi FG2, FG3 dan FG4 pada sel vero adalah 5814,43; 7780,48 dan 1022,44 µg/mL  secara  berturut-turut.  Indeks  selektivitas  (IC 50 sel  vero/IC 50 Plasmodium )  ketiga  fraksi tersebut berturut-turut adalah 777,33; 944,23 dan 131,93. Hal ini menunjukkan bahwa ketiga fraksi tersebut  mempunyai  aktivitas  antiplasmodium,  tidak  toksik  dan  selektif  melawan P.  falciparum . Studi selanjutnya akan dilakukan isolasi senyawa aktif dari fraksi tersebut.
. Kata Kunci: daun kapur, aktivitas antiplasmodium, sitotoksitas, malaria, tumbuhan obat

## ABSTRACT
Harmsiopanax  aculeatus ,  Harms,  also  known  as kapur ,  have  been  traditionally  used  as medicinal  plants  to  treat  malaria  in  Maluku,  Indonesia,  although  scientific  evidence  of  the antimalarial  active  compounds  of  this  plant  has  not  been  studied.  This  study  was  conducted  to evaluate the anti-plasmodial and cytotoxicity activity of the active fraction of H. aculeatu s leaves. The  fractions  tested  were  FG2,  FG3  and  FG4  obtained  by  separation  of  methanol  extract  using Vacuum Liquid Chromatography (VLC) by gradually using n-hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol solvents. Anti-plasmodial activity in vitro was evaluated in Plasmodium falciparum strain FCR3 which is chloroquine resistant using microscopic method. The activity of cytotoxicity against vero  cells  was  evaluated  using  MTT  colorimetric  method.  The  anti-plasmodial  activity  and cytotoxicity  were expressed by  IC 50 ,  inhibitory concentration  of 50% Plasmodium or cells growth after  incubation  with  the  fraction  tested,  which  calculated  using  probit  regression  analysis  with SPSS.  The results showed that the fraction of FG2, FG3 and FG4 had a promising anti-plasmodial activity with IC 50 value of 7.48; 8.24 and 7.75 μg/mL, respectively. The cytotoxicity activity of the three fractions on vero cell were 5814.43; 7780.48 and 1022.44 μg/mL, respectively. Moreover, the selectivity  index  (IC 50 Vero  cells/IC 50 Plasmodium )  of  those  were  777.33,944.23  and  131.93, respectively  indicated  that  the  three  fractions  were  active,  non-toxic  and  selective  against P. falciparum . Further study will be conducted to isolate the active compounds of the fraction.
Keywords: kapur leaves, antiplasmodium activity, cytotoxicity, malaria, medicinal plants

## PENDAHULUAN
Plasmodium merupakan  salah  satu jenis  parasit yang dapat  menginfeksi manusia  terutama  yang  hidup  di  daerah tropis maupun sub tropis. Plasmodium yang terinfeksi  tubuh  manusia  dapat  menyebab- kan penyakit malaria yang berbahaya bahkan dapat  menyebabkan  kematian.  Lima  jenis Plasmodium yang menginfeksi manusia yaitu Plasmodium falciparum , Plasmodium malariae , Plasmodium  vivax , Plasmodium  ovale dan Plasmodium knowlesi s [1].
Saat  ini,  secara  global  malaria  belum dapat  dituntaskan  sehingga  menjadi  pusat perhatian  di  dunia.  Menurut  laporan  WHO tahun  2015,adanya  212  kasus  malaria  baru pada  tahun  2015  dan  diperkirakan  ada 429.000  kematian  akibat  malaria  (kisaran 235.000-639.000) di seluruh dunia. Sebagian besar kematian ini terjadi di Afrika (92%),  di Asia Tenggara (6%) dan di Mediterania Timur (2%). Tahun 2010 sampai 2015 jumlah kasus
malaria  mengalami  penurunan    hingga  21% karena  adanya  berbagai  tindakan  preventif dan pengobatan yang dilakukan. Namun  tiap tahunnya  jumlah  kasus  malaria  baru  pun masih tetap ada [2].
Salah    satu  kendala  malaria  belum dapat  dituntaskan  adalah  adanya  resistensi Plasmodium terhadap  obat  malaria  yang selama ini digunakan. Penggunaan artemisinin dan semisintetik derivatnya (artesunat, artemeter  dan  dihidroartemisinin)  yang  telah direkomendasikan  WHO  untuk  mengobati malaria  pengganti  klorokuin  dan  beberapa obat  antimalaria  lainnya  seperti  meflokuin, kuinin, proguanil, atovakuin, dan sulfadoksin- pirimetamin  pun  sudah  resisten  sejak  tahun 2000  [3].  Artemisinin  diketahui  merupakan suatu dimensi baru untuk terapi  malaria yang dapat  mengeliminasi  semua  fase  aseksual Plasmodium sekaligus membunuh per- kembangan gametosit Plasmodium [4]. Namun saat  ini  penggunaan  artemisinin  dan  kom-
binasinya (ACTs atau Artemisinin Combination Therapies)  telah  dilaporkan  juga  mengalami resistensi.  Resistensi Plasmodium terhadap artemisinin  pertama  kali  dilaporkan  di  Asia Tenggara  dimulai  dari  Propinsi  Pailin,  Bagian Barat  Kamboja sejak tahun 2009 [5-9].
Adanya  tingkat  kesakitan  dan  ke- matian yang sangat tinggi sebagai akibat dari resistensi  terhadap  obat  antimalaria,  telah mendorong upaya dari berbagai pihak seperti akademisi  maupun  industri  farmasi  untuk melakukan  terobosan  dalam  menemukan obat baru. Salah satu upaya untuk penemuan obat  malaria  baru  adalah  dengan  teknik screening bahan alam yang memiliki aktivitas biologis  dan  terapi  terutama  bahan  alam yang  secara  etnofarmakologi  yang  sudah digunakan  sebagai  obat  tradisional  anti- malaria oleh masyarakat endemis malaria [5].
Salah  satu  tanaman  tradisional  yang digunakan oleh masyarakat Maluku,
Indonesia  untuk  mengobati  malaria  adalah Harmsiopanax  aculeatus ,  Harms.  Tanaman ini  secara  lokal  disebut  tanaman  kapur. Keunikan  dari  pengobatan  malaria  meng- gunakan  daun  tanaman H.  aculeatus di- bandingkan dengan cara pengobatan malaria secara tradisional lainnya lainnya  di Indonesia  maupun  di  berbagai  negara endemis  malaria  adalah    perasan    daun kapur    yang  sudah  dibersihkan,  diteteskan pada mata penderita [10].
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun kapur memiliki aktivitas antiplasmodium secara in vivo (ED 50 =  16,16  mg/kgBB)  dan  secara  in  vitro (IC 50 =14,22  µg/mL)  [10].  Beberapa  fraksi hasil pemisahan ekstrak metanol daun kapur telah  diujikan  aktivitasnya.  Fraksi  FG8  dari
ekstrak  metanol menghambat aktivitas polimerisasi hem dengan IC 50 sebesar 18,22 µg/mL  [10].  Fraksi  larut  kloroform  etil-asetat (FG5)  dan  Fraksi  larut  metanol  (FG12)  juga memiliki  aktivitas    antiplasmodium in  vitro dengan  nilai  IC 50 berturut-turut    3 ,24 μg/mL dan    3,88  μg/mL  [11-12].  Fraksi  larut n - heksan  (FG1)  esktrak  metanol  dilaporkan memiliki  aktivitas  antiplasmodium  lemah yaitu sebesar 76,92 µg/mL menurut kategori Gessler  et  al  (1994)  dalam  [13].  Tetapi berdasarkan  penelitian  yang  lain  FG1 dikategorikan tidak aktif [14]. Beberapa fraksi lain  hasil  pemisahan  ekstrak  metanol  daun kapur,  belum  pernah  dilaporkan  aktivitas biologisnya  seperti  antiplasmodium  dan sitotoksitasnya. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi  aktivitas  antiplasmodium  dan sitotoksik  Fraksi  FG2,  FG3  dan  FG4  ekstrak daun  kapur  ( H.  aculeatus ),  sehingga  dapat menjadi acuan untuk penelusuran lebih lanjut senyawa aktif antimalaria dari daun kapur ( H. aculeatus ).

## METODE PENELITIAN

## 1.  Alat utama
Seperangkat alat vakum liquid chromatography (VLC), mikroskop, Inkubator CO 2 , mikroskop inverter, Laminary Air Flow , evaporator, vacuum pump, Elisa Reader.

## 2.  Kemikali
Etil  asetat,  n-heksan,  etil  asetat  dan metanol, kloroform berderajat analisis. silica gel  40  Merck  (37-50  mesh),  silika  gel  60H (1105932), Giemsa,  minyak  emersi,  media komplit RPMI, media komplit M199, MTT.
3.  Koleksi material tanaman dan ekstraksi
Sampel  daun  kapur  ( H.aculetus ) diambil  dari  desa  Amahai,  Kecamatan Amahai, Kabupaten Maluku Tengah, Maluku, Indonesia. Determinasi
dilakukan di
Laboratorium  Taksonomi,  Fakultas  Biologi, Universitas Gadjah Mada.
Ekstraksi simplisia daun kapur ( H.aculeatus ) dilakukan dengan teknik maserasi bertingkat menggunakan pelarut n - heksan, etil asetat dan metanol kemudian di evaporasi sehingga diperoleh ekstrak kental.

## 4.  Fraksinasi ekstrak metanol daun kapur
Esktrak  metanol  sebanyak  10  gram yang telah diimpregnasi dengan silika gel 40 Merck (37-50 mesh), difraksinasi mengguna- kan vacuum  liquid  chromatography (VLC).
Fase diam yang digunakan adalah  silika gel 60H  (1105932)  sebanyak 3 4 kolom.  Elusi dilakukan secara bergradien dimulai dengan heksan,  kloroform,  etil  asetat  dan  metanol dengan  berbagai  perbandingan  Fraksi  yang diperoleh,  dimonitoring  menggunakan  kro- matografi  lapis  tipis  (KLT).  Fraksi  dengan profil KLT  yang mirip digabung. Fraksi FG2, FG3  dan  FG4  yang  diperoleh  selanjutnya diujikan aktivitas antiplasmodium dan sitotoksik.
5.  Uji  aktivitas  antiplasmodium in  vitro
fraksi FG2, FG3 dan F4
Kultur P.  falciparum strain  resisten klorokuin (FCR3) dikerjakan dengan metode candle jar [15] yang dimodifikasi. Pembiakan sel  darah  merah  yang  terinfeksi  dilakukan dalam culture  flask yang  berisikan  8  mL media  komplit  (yang  mengandung  10% serum). Kultur dimanipulasi secara aseptis di
dalam laminary  flow  cabinet .  Selanjutnya diikubasi  pada  temperatur  37 0 C  di  dalam inkubator  CO 2 . Pada  tahap  pengujian, volume  akhir  suspensi  untuk  kontrol  dan perlakuan  pada  tiap  sumuran  yang  diujikan yaitu  sebanyak  100  µL  media  komplit (berisikan  parasit Plasmodium yang  telah disinkronisasikan dengan sorbitol 5%) dengan  hematokrit  3%  dan  parasitemia  2% pada tiap sumuran. Bahan uji (FG2, FG3 dan FG4) sebanyak 5 mg dilarutkan dengan 100 µL  (kurang  dari  5%)  DMSO,  kemudian ditambahkan  RPMI  sampai  volume  5,2  mL sebagai  larutan  stok.  Selanjutnya  dibuatkan seri  konsentrasi  untuk  tiap  bahan  uji  (FG2, FG3  dan  FG4)  didalam well yaitu  400,  200. 50,  25,  5,  1  μg/mL  dan  dibuat  triplikat.
Mikroplate diletakkan di dalam  kotak desikator hampa udara dengan memakai lilin ( candle  jar )  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 48 jam di dalam inkubator CO 2 .
Setiap  sampel  dibuat  apusan  darah  tipis setelah inkubasi berakhir. Pewarnaan apusan dilakukan menggunakan giemsa dan selanjutnya secara visual parasitemia dihitung  menggunakan  mikroskop.  IC 50 Plasmodium ditentukan  berdasarkan  per- hitungan  menggunakan  analisis  regresi probit dengan SPSS.
6.  Uji  sitotoksitas  fraksi  FG2,  FG3  dan

## FG4
Sifat  sitotoksitas  bahan  uji  diujikan pada sel vero. Sel vero yang inaktif ditumbuh- kan  sampai  konfluen  (80%).  Penentuan toksisitas  bahan  uji  dilakukan  dengan  cara 100 μl  sel  dengan  kepadatan  2x104  sel/ sumuran  dimasukan  kedalam microplate 96 sumuran. Inkubasi dilakukan selama 48 jam pada suhu 37 0 C setelah pencucian pertama
dengan  100  μL  PBS  dalam  100  μl  media kultur  yang  mengandung  5  mg/mL  garam tetrazolium MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium bromid). Selanjutnya diberi- kan reagen stopper 100μL SDS 10% dalam HCl  0,1N  dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar semalam dalam ruang gelap. Absorbansi tiap sumuran  diukur  pada  panjang  gelombang 595 nm menggunakan ELISA reader. IC 50 sel vero  dihitung  dengan  analisis  regresi  probit menggunakan SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Fraksinasi  ekstrak  metanol  daun  kapur menggunakan  VLC  diperoleh  12  fraksi.  Fraksi tersebut diperoleh setelah monitoring profil KLT. Fraksi  FG2  larut  dalam n -heksan  100%,  FG3 larut dalam n -heksan: kloroform (7:3) dan FG4 larut  dalam n -heksan:  kloroform  (3:7).  Ketiga fraksi  tersebut  kemudian  diuji  aktivitas  anti- plasmodium    secara in   vitro pada Plasmodium falciparum strain FCR3. Data aktivitas penghambatan pertumbuhan Plasmodium
diperlihatkan seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Data  Persentase  Penghambatan  Pertumbuhan Plasmodium dan IC 50 Plasmodium Fraksi FG2, FG3, FG4
Fraksi Persentase Tiap Konsentrasi Fraksi (%) ± SD (n=3) IC 50 (μg/mL) 400 (μg/mL ) 200 (μg/mL) 50 (μg/mL) 25 (μg/mL) 5 (μg/mL) 1 ( μg/mL) FG2 89,67 ±  0,72 87,85 ± 1,04 56,79 ± 0,15 51,07 ± 1,06 42,56 ± 1,33 41,00 ± 1,39 7,48 FG3 94,47 ± 1,16 92,2 ± 1,53 64,07 ± 0,92 51,33 ± 1,30 40,33 ± 0,19 34,70 ± 0,47 8,24 FG4 81,61 ± 0,79 66.47 ± 2,10 56,27 ± 1,56 51,40 ± 0,82 47,95 ± 0,55 43,86 ± 0,48 7,75
SD= standar deviasi; n= pengulangan tiap konsentrasi bahan uji.
Data  pada  Tabel  1,  menunjukkan bahwa  semakin  rendah  konsentrasi  bahan uji, semakin rendah pula persentase penghambatan  pertumbuhan Plasmodium .
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semakin  besar konsentrasi  bahan  uji  yang  diberikan,  maka semakin besar pula pertumbuhan Plasmodium dihambat. Demikian pula nilai IC 50 Plasmodium semakin  kecil.  Semakin  kecilnya  nilai  IC 50 , semakin baik pula aktivitas bahan uji tersebut. Aktivitas antiplasmodium bahan alam dikategorikan sebagai berikut: aktivitas tinggi bila IC 50 ˂ 5 μg/mL, aktivitas menjanjikan jika IC 50 = 5-15 μg/mL, aktivitas moderat jika IC 50 =  15- 50 μg/mL dan tidak aktif jika IC 50 >  50 μg/mL  [14].  Berdasarkan  kategori  tersebut,
FG2,  FG3  dan  FG4  memiliki  aktivitas  men- janjikan sehingga berpotensi untuk dikembang- kan  dalam  pencarian dan  penemuan senyawa aktif antimalaria.
Meskipun  FG2,  FG3  dan  FG4  memiliki aktivitas menjanjikan sebagai antiplasmodium, namun  informasi  tentang  tingkat  kemananan ketiga fraksi tersebut terhadap sel normal perlu diketahui.  Pada  penelitian  ini,  ketiga  fraksi tersebut  telah  diujikan  aktivitas  sitotoksitas terhadap sel vero yang merupakan sel normal pada  mamalia  (sel  epidermis  pada  ginjal monyet  hijau).  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa    ketiga  fraksi  tersebut  memiliki  nilai IC 50 > 1000 µg/mL seperti yang diperlihatkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Data IC 50 Sel Vero Fraksi FG2, FG3 dan FG4 Fraksi IC 50 Sel Vero (μg/mL) FG2 5814,43 FG3 7780,48 FG4 1022,44
Data ini menunjukkan bahwa diantara ketiga  fraksi  tersebut,  FG3  memiliki  IC 50 terbesar yang berarti bahwa sel vero mampu tumbuh hingga 50% ketika diberi fraksi FG3. Hal ini memperlilhatkan bahwa FG3 memiliki sifat  tidak  toksik  terhadap  sel  mamalia. Demikian halnya dengan FG2 dan FG4 tidak toksik  terhadap  sel  mamalia  walaupun memiliki  kemampuan  yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  FG3.  Ketiga  fraksi tersebut  dikategorikan  aman  (tidak  toksik) karena memiliki IC 50 > 30 µg/mL [3].
Berdasarkan  data  IC 50 Plasmodium
(Tabel  1)  dan  IC 50 sel  vero  (Tabel  2)  ketiga fraksi  tersebut,  maka  dapat  ditentukan  nilai indeks  selektivitas.  Nilai  indeks  selektivitas ketiga  fraksi  tersebut  ditentukan  dari  rasio IC 50 sel  vero  terhadap  IC 50 Plasmodium seperti diperlihatkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Data Indeks Selektivitas Fraksi FG2,
FG3 dan FG4 Fraksi Indeks Selektivitas FG2 777,33 FG3 944,23 FG3 131,93 Berdasarkan data pada Tabel.2, FG2, FG3  dan  FG4 memiliki nilai indeks selektivitas  >  100.  Hal  ini  menunjukkan
bahwa ketiga fraksi tersebut selektif melawan Plasmodium  falciparum penyebab  malaria.
Itu  berarti  bahwa  FG2,  FG3  dan  FG4 berpotensi  dikembangkan  lebih  lanjut  untuk mencari  dan  menemukan  senyawa  aktif antiplasmodium.
Jika  dibandingkan  dengan  fraksi  FG5 dan  FG12  ekstrak  metanol  daun  kapur  ( H. aculeatus ) dalam penelitian sebelumnya [11- 12], kemampuan FG2, FG3, dan FG4 masih rendah. Namun demikian,  berdasarkan data hasil  penelitian  ini,  FG2,  FG3  dan  FG4 memiliki range nilai  IC 50 Plasmodium ,  IC 50 sitotoksik  dan  indeks  selektivitas  yang dikategorikan  menjanjikan  dan  tidak  toksik serta selektif melawan P. falciparum sehingga      berpotensi  untuk  dikembangkan lebih lanjut  untuk menemukan senyawa aktif antiplasmodium dari ketiga fraksi tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini, maka dapat disimpulkan bahwa:
1.  Fraksi  FG2,  FG3  and  FG4  mempunyai aktivitas antiplasmodium menjanjikan dengan  nilai  IC 50 berturut-turut  7,48 µg/mL; 8,24  µg/mL dan 7,75 µg/mL.
2.  Fraksi  FG2,  FG3  dan  FG4  tidak  toksik (aman) terhadap sel mamalia dengan nilai IC 50 berturut-turut 5814,43 µg/mL;
7780,48 µg/mL dan 1022,44 µg/mL.
3.  Fraksi  FG2,  FG3  dan  FG4  selektif melawan P.  falciparum dengan  nilai indeks  selektivitas  berturut-turut  777,33; 944,23 dan 131,93.
4.  Studi  selanjutnya  akan  dilakukan  isolasi senyawa aktif dari fraksi tersebut.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  pihak Kementerian Ristek RI yang telah membiayai penelitian ini melalui dana Insinas Ristek.

## DAFTAR RUJUKAN
[1]  E.  Salas-Sarduy et  al. ,  “Antiparasitic effect  of  a  fraction  enriched  in  tight- binding protease inhibitors isolated from
the Caribbean coral Plexaura homomalla,” Exp.  Parasitol. ,  vol.  135, no. 3, pp. 611 –622, 2013.
[2]  World Health Organization, World Malaria Report , vol. WHO/HTM/GM, no. December. 2015, p. 238.
[3]  R.  S.  O.  Nondo et  al. ,  “Anti-plasmodial activity of Norcaesalpin D and extracts of four  medicinal  plants  used  traditionally for  treatment  of  malaria,” BMC Complement.  Altern.  Med. ,  vol.  17,  no. 1, pp. 1 –8, 2017.
[4]  P.  B.  Memvanga,  G.  L.  Tona,  G.  K. Mesia,  M.  M.  Lusakibanza,  and  R.  K. Cimanga,  “Antimalarial  activity  of medicinal  plants  from  the  Democratic Republic  of  Congo:  A  review,” J. Ethnopharmacol. ,  vol.  169,  pp.  76 –98, 2015.
[5]  T.  N.  C. Wells,  R.  H.  Van  Huijsduijnen, and  W.  C.  Van  Voorhis,  “Malaria medicines: A glass half full?,” Nat. Rev. Drug  Discov. ,  vol.  14,  no.  6,  pp.  424 – 442, 2015.
[6] R.  M.  Fairhurst,  “Purpose  of  review— The emergence of artemisinin resistance  in  Southeast  Asia,  where artemisinin combination
therapies (ACTs)  are  beginning  to  fail,  threatens global endeavors to control and eliminate Plasmodium falciparum malaria. Future e fforts to prevent,” Curr Opin Infect Dis , vol. 28, no. 5, pp. 417 –
425, 2016.
[7]  R.  M.  Fairhurst  and  A.  M.  Dondorp, “Artemisinin-resistant Plasmodium falciparum  malaria,” Microbiol  Spect , vol. 11, no. 4, pp. 1 –14, 2016.
[8]  C.  J.  Woodrow  and  N.  J.  White, “The clinical  impact  of  artemisinin  resistance in  Southeast  Asia  and  the  potential  for future  spread,” FEMS  Microbiol.  Rev. , vol. 41, no. 1, pp. 34 –48, 2017.
[9]  A.  A.  Lover,  R.  Gosling,  R.  Feachem, and  J.  Tulloch,  “Eliminate  now:  Seven critical  actions  required  to  accelerate elimination  of  Plasmodium  falciparum malaria in the Greater Mekong Subregion,” Malar. J. , vol. 15, no. 1, pp.
1 –7, 2016.
[10]  R.  Turalely,  R.  A.  Susidarti,  and  M.  A. Wijayanti, “In vivo Antiplasmodial of the Most Active Fraction and Its Compound of Kapur Leaves (Harmsiopanax aculeatus Harms) Extract Against
Plasmodium berghei,” Trop. Med. J. , vol. 1, no. 2, pp. 131 –140, 2011.
[11] R.  Turalely  and  F.  Mahulete,  “Kajian
Aktivitas  Antiplasmodium  In  Vitro  dan Aktivitas  Sitotoksik  Fraksi  5  (Fg5) Ekstrak Metanol Daun Kapur
(Harmsiopanax  aculeatus Harms),”  in Prosiding Insinas Ristek 2014 , 2014.
[12] R. Turalely, “Uji Aktivitas Anti- plasmodium  Fraksi  12  (Fg12)  Ekstrak Metanol  Daun  Kapur  (Harmsiopanax aculeatus Harms),” Molluca  J.  Chem. Educ. , vol. 12, no. 2, pp. 1 –5, 2015.
[13] R. Turalely, “Uji Aktivitas Anti- plasmodium  Fraksi  1  (Fg1)  Ekstrak
Metanol  Daun  Kapur  (Harmsiopanax aculeatus  Harms),” Molluca  J.  Chem. Educ. , vol. 1, no. 2, pp. 8 –13, 2014.
[14]  M.  C.  Jonville et  al. ,  “Screening  of medicinal plants from Reunion Island for antimalarial  and  cytotoxic  activity,” J. Ethnopharmacol. ,  vol.  120,  pp.  382 – 386, 2008.
[15] W.  Trager  and  J.  B.  Jensen,  “Human malaria parasites in continuous culture,” Science , vol. 193, no. 4254, pp. 673 –5, 1976.