PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTIOXIDANT ACTIVITY OF SEA CUCUMBER  (H.atra)  WITH THE DPPH (1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl) METHOD
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK TERIPANG ( H.atra )  DENGAN METODE DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)
Avinda Shania Wiane Bawole 1)* , Defny S. Wewengkang 1) , Irma Antasionasti 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *avindabawole23@gmail.com

## ABSTRACT
Utilization of marine life is not just consumptive but can be used as raw material for medicines, one of which is  sea  cucumber.  Sea  cucumbers  (H.atra)  are  marine  invertebrates  belonging  to  the  Echinoderms  phylum which  have  been  studied  containing  antioxidants.  Therefore,  a  study  was  conducted  to  determine  the antioxidant activity of sea cucumber (H.atra) extract taken from the waters of Manado Bay using the DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. Sea cucumber samples were extracted using the maceration method. The ethanol extract of sea cucumber showed high antioxidant activity at a concentration of 8 μg / ml with 77.83% inhibition percentage.
Keywords : H.atra, Antioxidant, DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl).

## ABSTRAK
Pemanfaatan biota laut bukan hanya sekedar konsumtif saja tapi dapat berpotensi sebagai bahan baku obat- obatan salah satunya teripang. Teripang ( H.atra ) adalah hewan invertebrata laut yang termasuk ke dalam filum Echinodermata yang  pernah  diteliti  mengandung  antioksidan.  Oleh  karena  itu,  dilakukan  penelitian  untuk mengatehui  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  teripang  ( H.atra )  yang  diambil  dari  perairan  Teluk  Manado dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ).  Sampel  teripang  diekstraksi menggunakan metode maserasi. Ekstrak etanol teripang menunjukkan aktivitas antioksidan yang tinggi pada konsentrasi 8 μg/ml dengan persen inhibisi 77,83%.
Kata kunci : H.atra , Antioksidan, DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl )
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Perkembangan  dunia  pengobatan  yang semakin  pesat  telah  memunculkan  beragam jenis obat-obatan        baru.        Penelitian        untuk menemukan    sumber    metabolit  sekunder    yang dapat    digunakan    untuk    berbagai  macam    jenis bahan    obat    juga    terus    dilakukan.    Sejak    satu dekade          terakhir          ini,          perhatian          dunia pengobatan  mulai  terarah  pada  organisme  laut sebagai    sumber    daya    yang    sangat    potensial (Dwijendra et al., 2014).
Salah  satu  biota  laut  yang  berpotensi menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  dapat digunakan sebagai bahan baku obat-obatan adalah teripang (Albuntana et al ., 2011).
Teripang ( H.atra ) adalah hewan invertebrata laut yang termasuk ke dalam filum Echinodermata yang  merupakan  hewan  dengan  pergerakan  yang lambat, sehingga memerlukan mekanisme pertahanan  diri.  Mekanisme  pertahanan  diri teripang  ( H.atra )  terjadi  secara  mekanik  dan kimiawi.  Mekanisme  pertahanan  diri  secara kimiawi dilakukan dengan menghasilkan senyawa metabolit sekunder (Chairunnisa 2012).
Maka  dari  hal  itu,  penelitian  ini  bertujuan Untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari ekstrak  Teripang  ( H.atra )  dengan  menggunakan metode DPPH ( 1,1-defenil-2-pikrilhidrazil ). Antioksidan  merupakan  komponen  penting  yang berperan  dalam  aktivitas  alami  suatu  makhluk hidup,  karena  Senyawa  antioksidan  diperlukan tubuh  untuk  menetralisir  radikal  bebas  dan mencegah  kerusakan  yang  ditimbulkan  oleh radikal  bebas  terhadap  sel  normal,  protein,  dan lemak.  Senyawa  ini  memiliki  struktur  molekul yang  dapat  memberikan  elektronnya  kepada molekul radikal bebas tanpa terganggu sama sekali fungsinya dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal bebas (Murniasih et al., 2015).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu  dan Tempat Penelitian
Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Agustus-September 2020 di Laboratorium Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Jenis  penelitian  ini  yaitu  eksperimen laboratorium  dengan  sampel  penelitian  adalah Teripang  ( H.atra )  yang  diambil  dan  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  95%  lalu  dilakukan  pengujian  aktivitas
antioksidan  terhadap  DPPH  ( 1,1-diphenil-2- picrylhydrazyl ).

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini ialah alat-alat gelas, timbangan digital (𝐴𝐸 𝐴𝑑𝑎𝑚 ® ) ,  mikropipet,  pipet  tip  kuning  dan biru,  pisau,  gunting, cool  box ,  tabung  reaksi,  alat selam, telenan, spektrofotometer UV-Vis , aluminium foil , Vortex ( Mixer Hwashin ), Oven

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  etanol  95%,  DPPH  ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ),  dan  serbuk  vitamin  C  pro  analisis sebagai pembanding.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  diambil  dari  perairan  Teluk  Manado menggunakan alat-alat bantu menyelam. Kemudian  sampel  teripang  ( H.atra )    yang  telah diambil,  disimpan  dalam  kotak  pendingin.  Lalu dibawah  ke  Laboratorium  Farmasin  Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Sampel  yang  telah  bersih  dipotong  kecil- kecil untuk mengoptimalkan senyawa dari teripang ( H.atra )    ditarik  oleh  pelarut  dengan  mudah. Sampel  yang  sudah  dipotong  dimasukkan  dalam wadah botol yang telah disediakan lalu ditambahkan  pelarut  etanol  sampai  sampel terendam  semuanya  dan  dilanjutkan  dengan ekstraksi.

## Eskstraksi
Teripang ( H.atra )  yang sudah ada diambil dan dicuci kembali dengan bersih dengan air untuk membersihkan kotoran pada teripang ( H.atra ), lalu teripang  ( H.atra )    yang  sudah  bersih  dipotong kecil-kecil  lalu  dimasukkan  kedalam  wadah  atau botol sampai sampel terendam semuanya, kemudian  didibiarkan  terendam  selama  24  jam. Setelah perendaman, sampel disaring menggunakan  kertas  saring  sampai  menghasilkan filtrat1  dan  residu1.  Kemudian  residu1  yang didapatkan  tadi  kembali  direndam  dengan  pelarut etanol  95%  sampai  terendam  semuanya  dan dibiarkan  selama  24  jam  lalu  disaring  dengan
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
kertas  saring  sampai  menghasilkan  filtrat2  dan residu2. Setelah itu  residu 2 kembali diambil dan direndamkan  dalam  pelarut  etanol  95%  lalu dibiarkan  selama  24  jam,  lalu  disaring  lagi menggunakan  kertas  saring  sampai  menghasilkan filtrat 3 dan residu 3. Setelah itu filtrat1, 2, dan 3 dikumpulkan  dan  dicampur  menjadi  satu  lalu selanjutnya  disaring  dengan  kertas  saring  sampai mendapatkan  filtrat  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan rotary evaporator sehingga menghasilkan ekstrak yang pekat..

## Pembuatan Larutan Vitamin C p.a
Vitamin C p.a ditimbang sebanyak 10 mg menggunakan  timbangan  digital.  Kemudian, vitamin C p.a dilarutkan dalam etanol p.a sebanyak 10 mL dalam erlenmeyer, buat larutan stok dengan konsentrasi yang sama, yaitu konsentrasi l0 μg/ml, 8 μg/ml, 6 μg/ml, 4 μg/ml. dan 2 μg/ml . Kemudian vitamin  C  p.a  diukur  serapannya  dengan menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang  517  nm.  Diambil  masing- masing  konsentrasi  ,  lalu  di  uji  menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan
Sebanyak  0,4  mM  DPPH  ditimbang  lalu dilarutkan  kedalam  etanol  96%  sebanyak  50  ml . Setelah itu larutan yang sudah jadi diukur sebanyak 1  mL  dengan  pipet  tetes  dan  gelas  ukur  lalu dimasukkan  kedalam  tabung  teaksi.setelah  itu diukur  setiap  masing-masing  konsentrasi  sampel kemudian  masukkan  ke  dalam  labu  takar  yang sudah  terdapat  larutan  DPPH  sampai  mencapai volume  5  mL.    Setelah  itu  setiap  knsentrasi divortex  selama  15  detik  dengan  tujuan  untuk melihat perubahan warna yang terjadi, dari warna ungu  berubah  menjadi  warna  kuning  maka  dapat menunjukkan efesiansi penangkalan radikal bebas
yang baik. Kemudian setelah itu akan di inkubasi pada  suhu  27 0 C  selama  30  menit,  setelah  di inkubasi,  sampel  uji  diukur  serapannya  dengan menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang  517  nm.  Diambil  masing- masing  konsentrasi  ,  lalu  di  uji  menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm, sebagai uji perbandingan aktivitas antara sampel uji Teripang ( H.atra )
% 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒔𝒊 = 𝟏 − 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 × 𝟏𝟎𝟎%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Untuk melihat aktivitas antioksidan dalam teripang  ( H.atra )  maka  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenil-2- picrylhydrazyl )  dimana  metode  DPPH  memiliki keuntungan  metode DPPH  adalah  metode  yang sederhana,  cepat    dan    mudah    diukur absorbansinya dengan  spektrofotometer  Uv –Vis (Kurniawan  2013).
Pada  pengukuran  absorbansi    larutan DPPH  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang  gelombang  517  nm  hingga  hasil yang didapat pada absorbansi DPPH adalah 0,807. Konsentrasi  yang  digunakan  yaitu.  l0  μg/ml,  8 μg/ml, 6 μg/ml, 4 μg/ml. dan 2 μg/ml (Wijaya, et al., 2019).
Masing-masing  dari  konsentrasi  tersebut dicampurkan  dengan  larutan  DPPH  yang  telah dibuat  kemudian  divortex  selama  15  detik kemudian  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu ruangan. Hasil dari ekstrak dilakukan pengukuran absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang  gelombang  517  nm, dilakukan  sebanyak  3  kali  secara  berurutan  pada setiap  konsentrasi.  Hasil  pengujian  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  dapat  dilihat pada Tabel berikut ini:
Tabel 1. Hasil uji % inhibisi aktivitas antioksidan ekstrak etanol H.atra Konsentrasi Pengulangan I Ekstrak Pengulangan II Ekstrak Pengulangan III Ekstrak Rata-Rata 2 μg/ml 74,40 % 73,80 % 76,60 % 74,93 % 4 μg/ml 75,30 % 75,80 % 76,80 % 75,96 % 6 μg/ml 75,10% 75,10 77,60 % 75,93 % 8 μg/ml 75,90 % 77,40 % 80,20 % 77,83 % 10 μg/ml 74,90 % 78,20 % 77,90 % 77,00 %
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Pada  hasil  penelitian  yang  didapatkan (Tabel)  teripang  ( H.atra )  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  kuat  dan  ekstrak  tersebut mengalami  peningkatan  dari  konsentrasi  2  μg/ml dengan nilai rata-rata 74,93 % konsentrasi 4 μg/ml nilai  rata-rata  75,96  %,  konsentrasi  6  μg/ml  nilai rata-rata  75,93  %,  konsentrasi  8  μg/ml  nilai  rata- rata 77,83 %, dan konsentrasi 10 μg/ml 77,00 % . Peningkatan  persen  inhibisi  ini  pada  ekstrak menandakan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi ekstrak maka semakin besar persen inhibisi . Hal ini didukung  oleh  penelitian  yang  dilakukan  oleh Damanis et al ., (2020), hasil penelitian menunjukkan bahwa dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak maka absorbansi sampel akan menurun dan tingkat inhibisi akan naik.Untuk hasil pengujian,  pembanding  yang  digunakan  sebagai kontrol  positif  adalah  vitamin  C  p.a  karena  lebih murah,  mudah  didapati  dan  tergolong  senyawa antioksidan yang sangat kuat. Hal ini sesuai dengan hasil pengujian aktivitas antioksidan vitamin C p.a yang  lebih  tinggi  pada  konsentrasi  10  μg/ml sebesar  99,66%  .  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  vitamin  C  p.a  lebih  tinggi daripada ekstrak etanol teripang ( H.atra ). ). Hal ini dapat  terjadi,  karena  vitamin  C  p.a  merupakan senyawa  antioksidan  alami  dalam  bentuk  murni sehingga  aktivitas  antioksidannya  sangat  kuat dalam  meredam  radikal  bebas  DPPH  dengan  % inhibisi  hampir  mencapai  100  %.  Vitamin  C  p.a termasuk  golongan  antioksidan  sekunder  yang mampu  menangkal  berbagai  radikal  bebas ekstraseluler (Isnidar & Setyowati  2011).
Menurut  hasil  penelitian  Puspitasari et  al , 2013  ditemukan  kandungan  senyawa  dalam ekstrak teripang ( H.atra ) adalah senyawa flavonoid,fenol,alkaloid  dan  saponin.  Menurut Mierziak et al (2014), menyatakan bahwa beberapa senyawa flavonoid diantaranya merupakan senyawa  yang  bersifat  antioksidan  dan  mampu menghambat  aktivitas  dari  enzim  xantin  oksidase maupun  reaksi  superoksida.  Dengan  demikian, senyawa flavonoid yang terdeteksi keberadaannya pada teripang uji, menunjukkan potensinya sebagai antioksidan.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang    maka  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  teripang ( H.atra )  Teluk  Manado  memiliki  aktivitas antioksidan yang kuat pada setiap konsentrasi dan aktivitas  tertinggi  terdapat  pada  konsentrasi  8 μg/ml sebesar 77,83 %.
SARAN
Sebaiknya  dilakukan  penentuan  nilai  IC 50 terhadap  aktivitas  antioksidan  teripang  ( H.atra ) dengan  konsentrasi  yang  lebih  besar,  isolasi senyawa aktif yang memiliki aktifitas antioksidan, dan  identifikasi  senyawa  apa  saja  yang  dimiliki oleh teripang ( H.atra ).

## DAFTAR PUSTAKA
Albuntana, A,. Yasman dan Wisnu, W. 2011. Uji Toksisitas  Ekstrak  Empat  Jenis  Teripang Suku  Holothuriidea  dari  Pulau  Penjaliran Timur, Kepulauan Seribu, Jakarta Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT ). Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Kelautan Tropis . 3 (1): 65-66.
Chairunnisa,  N,  2012 , Uji  Potensi  Ekstrak  Kasar Teripang  H.atra  Jeager  Sebagai  Pencegah Kanker  Melalui  Uji  Mikronukleus  pada Sumsum Tulang Mencit ( Mus musculus L.)
Jantan  Galur  DDY,  [Skripsi],  Universitas Indonesia, Depok.
Damanis,  F.,  Wewengkang,  D.,  dan  Antasionasti, I.2020.Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol Ascidian Herdmania Momus dengan  Metode  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) .  [Skripsi]  Program  Studi Farmasi, Universitas Sam Ratulangi.
Dwijendra,  I.,  Defny,  S.T.,  dan  Frenly,  W. 2014. Aktivitas        Antimikroba        dan Karakterisasi    Senyawa Fraksi    Spons Lamellodysidea        herbacea yang Diperoleh  dari    Teluk  Manado .  Jurnal Ilmiah Farmasi . 3 (4) : 1-2.
Kurniawan  J.C,  Suryanto  Edi,  dan  Yudistira  A. 2013.Analisis  Fitokimia  dan  Uji  aktivitas Antioksidan dari Getah Kulit Buah Pisang Goroho  ( Musa  acuminate  L ). Jurnah Ilmiah Farmasi. UNSRAT Vol 2 No 3.
Isnidar, W. S. & Setyowati, E. P. 2011. Isolasi dan Identifikasi  Senyawa  Antioksidan  Daun Kesemek  ( diospyros  kaki  thunb .)  Dengan Metode DPPH ( 2,2-difenil-1 pikrilhdrazil ). Majalah Obat Tradisional, 16 (3), 157-164.
Mierziak,  J.,  Kostyn,  K.,  &  Kulma,  A.  2014. Flavonoids as important molecules of plant interactions with the environment.
Molecules , 19 (10), 16240–16265.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Murniasih,  T.,  Putra,  M.,  &  Pangestuti,  R.  2015.
Antioxidant  Capacities  of  Holothuria  Sea Cucumbers . 21–26.
Puspitasari,  G.,  S.  Murwani,  dan  Herawati.  2013. Uji  Daya  Antibakteri  Perasan  Buah Mengkudu  Matang  ( Morinda  citrifolia ) terhadap  Bakteri  Methicilin  Resistant Staphylococcus  aureus  (MRSA)  M.2036.T secara In Vitro .
Wijaya.
S., Bodhi. W &Yudistira.
A.2019.Skrining  Fitokimia  Uji  Aktivitas
Antioksidan  dari  Ekstrak  Daun  Karsen
( Muntingia  calabura  L )  dengan  Metode
1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) dan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Farmasi,Fmipa,Sam Ratulangi, vol 8 , no 2.