Screening of Potential Probiotic Vibrio sp. Against Vibriosis in the

## Litopenaeus vannamei
Munti Sarida dan Esti Harpeni
PS Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Email: munti@unila.ac.id

## Abstract
Vibriosis is a bacterial disease generated by Vibrio sp., particularly V. harveyi that becomes the biggest cause of up to 100% shrimp mortality. Using antibiotics as the curative step is not applicable   anymore,   because   of   the   residual   effects   to   the   shrimp   and   environment   and   the resistant effects to the humans as well. The purpose of this study was to screen potentially probiotic from strain Vibrio sp. that could inhibit V. harveyi as an effort of handling vibriosis diseases. Water sample from the shrimp ponds were isolated and purified in SWC-agar and TCBS-agar and then were incubated overnight at the room temperature. Bacterial concentrations were calculated using MC Pharland method and spectrophotometer. In vivo test was conducted for the best candidate of potential   probiotic   isolate,   i.e.   CP1.   Challenged   test   was   leaded   within   4   different   bacterial concentrations as the treatments and 2 replications using 10 shrimps as the tested organisms per aquarium. The treatments were 10 7 CFU/ml CP1 VS 10 7 V. harveyi MR5339 Rif R (1), 10 6 CFU/ml CP1 VS 10 7 V. harveyi MR5339 Rif R (2), 10 5 CFU/ml CP1 VS 10 7 V. harveyi MR5339 Rif R (3) and PBS (4) as the control.  Our study showed that the Survival Rate of the tested organisms was 90% in the treatment 1. This result indicated the capability of growth inhibition of the candidate probiotic bacterium against V. harveyi . Presumably, Vibrio sp. could be used in the vanamei culture as the probiotic. Finally, the candidate probiotic bacterium was identified as Vibrio furnissii.
Key words : Probiotic, Vibriosis, Litopenaeus vannamei, MC Pharland

## Pendahuluan
Bakteri Vibrio spp. merupakan patogen yang sangat penting penyebab kegagalan pertambakkan udang dan penyebarannya hampir di seluruh dunia (Lightner, 1977 dalam Maryani et   al .,   2002).   Dalam   budidaya   udang   putih,   penyakit   yang   sering  disebabkan bakteri adalah penyakit vibriosis yang disebabkan oleh serangan bakteri Vibrio harveyi . Penyakit ini lebih dikenal dengan penyakit kunang-kunang karena udang yang terserang penyakit tersebut dalam kondisi gelap terlihat bercahaya.  Hal tersebut terjadi karena jenis bakteri V. harveyi mengeluarkan pendaran ( luminensensi )(Rukyani, 1992;  Lavilla et al ., 1998; Sinrat et al., 2000; Zhang et al. , 2001; Widanarni, 2004).
Bakteri   penghasil   cahaya   ini   bersifat   sangat   patogen   dan   akut   sehingga   dapat menyebabkan kematian larva udang sampai 100% dalam waktu satu sampai dua hari. Salah   satu   tindakan   pencegahan   terhadap   serangan   bakteri   ini   adalah   menciptakan lingkungan   kondusif   yang   dibutuhkan   oleh   udang   dan   mengurangi   peluang berkembangnya   organisme   patogen   dengan   cara   pengelolaan   lingkungan   yang   baik. (Zonneveld et al.,1991; Widanarni, 2004; Cohen et al., 2005)
Penggunaan   obat-obatan   seperti   antibiotik   dapat   menyebabkan   resistensi   bakteri dan   bahkan   residu   pada   udang   yang   dapat   membahayakan   konsumen.   Untuk mengurangi   atau  bahkan   menghilangkan   penggunaan   antibiotik   para  petambak  udang mengalihkannya dengan penggunaan probiotik. Bakteri probiotik yang diberikan dianggap mampu   menambah   daya   tahan   tubuh   udang   dan   menekan   pertumbuhan     bakteri V. harveyi tanpa   menimbulkan   dampak   buruk   terhadap   sistem   keseimbangan   ekologi mikroba   dan   tanpa   harus   melakukan   eradikasi   dengan   anti   mikroba.   Atas   dasar pertimbangan tersebut maka perlu dilakukan uji skrining terhadap beberapa bakteri yang memiliki sifat mampu menekan pertumbuhan bakteri patogen. Upaya pencarian kandidat probiotik tersebut dimaksudkan sebagai upaya menambah jenis probiotik yang nantinya dapat   diaplikasikan   secara   komersial.   Upaya   pencarian   kandidat   probiotik   yang   telah banyak dilakukan dengan cara diisolasi dari beberapa lingkungan perairan, pakan yang
diberikan   dalam   produksi   budidaya   serta   udangnya   sendiri   (Rengpipat et  al .,1997; Widanarni, 2004).
Penelitian ini memiliki tujuan untuk mendapatkan kandidat probiotik dari jenis bakteri Vibrio sp. yang mempunyai kemampuan dalam menekan atau menghambat pertumbuhan V. harveyi sebagai penyebab penyakit vibriosis pada budidaya udang L. vannamei.

## Materi dan Metode
Isolasi   Vibrio   sp.   Kandidat   Probiotik. Skrining   bakteri   kandidat   probiotik   dimulai dengan isolasi bakteri dari air pada Tambak Intensif Desa Bakauheni Lampung. Untuk mendapatkan   isolat   dengan   koloni   tunggal,   air   sampel   diencerkan   sampai   dengan kelipatan 10 -2 . Kemudian tiap pengenceran diambil 100 ml dan disebar pada media SWC 100% (air laut 750 ml, akuades 250 ml, bacto peptone 5 g, yeast ekstrak 1 g, glycerol 3 ml dan bacto agar 15 g.) dan media selektif TCBS-agar (akuades 1000 ml, TCBS-agar 89 g.), kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam dalam inkubator.
Uji Tantang in vitro Bakteri Vibrio sp. Kandidat Probiotik dengan V. Harveyi MR5339. Bakteri yang dipakai dalam uji tantang adalah V. Harveyi MR5339 yang diperoleh dari koleksi Balai Penelitian Perikanan Pantai Maros, Sulawesi Selatan dan telah diuji memiliki sifat patogen pada larva udang Windu (Widanarni, 2004).  Masing-masing isolat bakteri yang diuji tantang (1 ml)   diukur nilai Optical Density (OD). Setelah itu setiap isolat uji tantang dan kontrol dilakukan pengenceran hingga 10 -6 dan dilakukan penyebaran dengan metode cawan sebar pada media TCBS-agar, diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam. Koloni Vibrio sp. kandidat probiotik yang tumbuh menunjukkan kemampuan menghambat pertumbuhan V. Harveyi MR5339. Jika pada cawan kontrol koloni V. Harveyi MR5339 tumbuh jauh lebih banyak dibandingkan dengan jumlah koloni pada cawan uji tantang. Maka Vibrio sp. kandidat probiotik dapat dipakai sebagai kandidat probiotik. Uji in   vivo   Vibrio sp. Kandidat   Probiotik. Uji in   vivo dilakukan   pada  wadah pemeliharaan ( akuarium, berukuran 50 x 30 x 35 cm 3 ) yang diisi dengan 30 liter air laut steril dengan sistem resirkulasi. Udang yang digunakan ukuran rata – rata 19 g. Sebelum dilakukan penyuntikan suspensi bakteri ke tubuh udang uji diadaptasikan dalam wadah pemeliharaan   dan   dipuasakan.   Penentuan   konsentrasi   bakteri   dibandingkan   dengan penyamaan kekeruhan dari larutan MC. Pharland yang sudah diuji secara in vitro untuk tiap isolat bakteri dengan mencampurkan senyawa H 2 SO 4 dan BaCL 2 (1:9). Uji dilakukan dengan menyuntikkan isolat bakteri V. Harveyi MR5339 Rif R ke tubuh udang dengan konsentrasi masing-masing 10 4 , 10 5 , 10 6 , 10 7 CFU/ml dan kontrol (PBS). Pengamatan dilakukan selama tujuh hari setiap empat jam, dengan parameter yang diamati adalah kematian, pengamatan morfologi dan tingkah laku, pengamatan kualitas air.
Uji   tantang   secara in   vivo. Pada   tahap   ini   tiap   isolat   bakteri   kandidat   probiotik dengan konsentrasi 10 7 ,10 6 ,10 5 CFU/ml yang diuji tantang dengan V. Harveyi MR5339 Rif R serta kontrol dengan tujuan   untuk melihat kemampuan Vibrio sp kandidat probiotik dalam   menghambat   serangan   dari V.  Harveyi MR5339   pada   udang   uji.  Dalam   uji   ini suspensi   bakteri   kandidat   probiotik   disuntikkan   terlebih   dahulu,   enam   jam   sebelum suspensi bakteri V. Harveyi MR5339 Rif R diinjeksikan ke udang. Pengamatan dilakukan selama enam hari setiap empat jam.
Keberadaan dan penyebaran isolat bakteri V. harveyi MR5339 Rif R perlu diketahui pada   organ   tubuh   udang   dengan   cara   pertama   disuntikkan   suspensi   bakteri   kandidat probiotik dengan konsentrasi jumlah bakteri sesuai dengan hasil terbaik dalam uji tantang dengan suspensi bakteri 10 7 CFU/ml V. harveyi MR5339 Rif R . Kedua disuntikan suspensi bakteri V. harveyi MR5339 Rif R dengan jumlah konsentrasi bakteri sebesar 10 7 CFU/ml. Pengamatan   dilakukan   selama   24   jam   yakni   pada   waktu   tiga   jam   pertama   dan berikutnya setiap enam jam setelah diinjeksi. Untuk pengamatan jumlah bakteri V. harveyi MR5339 Rif R dapat dilihat dari hasil penghitungan jumlah koloni bakteri dicawan dengan media   TCBS-agar.   Bakteri   yang   tumbuh   dicawan   didapat   dari   hasil   re-isolasi   organ hepatopankreas  dan  usus  udang.  Sampling  udang   yang  di  re-isolasi   adalah   dua  ekor udang pada tiap-tiap perlakuan. Re-isolasi udang dilakukan dengan menggerus organ;
sebesar   0.1   ml   diambil   untuk   pengenceran   serial   sampai   pada   pengenceran   10 -2 dan disebar dimedia SWC yang ditambah Rifampisin 50 µg/ml sebanyak 0,1 ml. Kemudian di inkubasi pada suhu ruang. Bakteri kandidat probiotik yang sudah diuji baik secara in vitro maupun in vivo di identifikasi.

## Hasil dan Pembahasan
Jumlah bakteri yang digunakan sebagai kandidat probiotik yang diperoleh dari hasil isolasi sebanyak dua buah isolat jenis bakteri Vibrio sp. dan tiga buah isolat bakteri non Vibrio sp. Hasil isolat bakteri kandidat probiotik diperoleh dari media pemeliharaan tambak budidaya   dan  sampel  udang  (dari  organ  hepatopankreas   dan  usus).   Koloni Vibrio sp. yang   tumbuh   di   media   TCBS-agar   berwarna   kuning   dengan   karakteristik   satu   isolat memiliki bentuk koloni bulat cembung dan satu isolat lain dengan sifat menyebar. Kelima isolat yang ditumbuhkan di media SWC memiliki sifat menyebar dan berwarna putih susu.
Sebanyak   12   koloni V.   harveyi   MR5339 memiliki   sifat   berpendar   apabila ditumbuhkan di media TCBS-agar atau SWC dan di inkubasi di suhu ruang (28 sampai 30 o C), dengan sifat pendaran terlihat aktif pada usia 18 sampai 20 jam, diruang gelap. Koloni yang tumbuh di media TCBS berwarna hijau sedangkan koloni yang tumbuh di media SWC berwarna krem. Beberapa karakter morfologi dan fisiologi V. harveyi MR5339 diantaranya adalah bakteri gram negatif bersifat motil,berbentuk batang pendek, dapat menggunakan   glukosa   dan   laktosa   sebagai   sumber   karbon   tetapi   tidak   dapat menggunakan sukrosa, menghasilkan enzim protease, amilase, dan kitinase.
Dua   isolat   yang   dapat   tumbuh   dengan   baik   selanjutnya   dipakai   sebagai   isolat kandidat   probiotik   dalam   penelitian   selanjutnya   diberi   sandi   CP1   dan   CP2.   Adapun prasyarat   probiotik   yaitu   bakteri   yang   dapat   dipakai   sebagai   kandidat   probiotik   harus mampu hidup di Intestinum dan dapat disiapkan sebagai produk sel hidup dalam skala industri   serta   dapat   terjaga   stabilitas   serta   lintasan   untuk   waktu   yang   lama   pada penyimpanan maupun di lapangan.
Vibrio sp. dan V. harveyi adalah bakteri yang sensitif terhadap antibiotik Rifampisin meskipun kedua jenis bakteri ini resisten hampir semua jenis probiotik (Tjahyadi et al ., 1994 dalam Widanarni, 2004). Rifampisin mempunyai spektrum antibakteri yang luas dan terutama   efektif   terhadap   bakteri,   bakteri   gram   positif   dan   mikrobakteria.   Selama   ini rifampisin sangat efektif untuk pengobatan Tuberkolosis secara total. Rifampisin adalah salah satu jenis antibiotik yang mampu menghambat sintesis protein (Liu, 1996). Sampai saat   ini   penggunaan   Rifampisin   tidak  digunakan   pada   pembenihan   udang   (Widanarni, 2004).
Pembuatan   “mutan”   resisten   terhadap   Rifampisin   diperoleh   dari   10 7 CFU/ml V. harveyi MR5339 dan didapat sebanyak 37 koloni yang tumbuh di media SWC ditambah Rifampisin 50 µg/ml media. Pembuatan mutan bertujuan untuk membedakan koloni isolat- isolat Vibrio sp. alami dengan isolat yang didapatkan sebagai kandidat probiotik, karena hanya bakteri yang telah dibuat mutan yang dapat tumbuh di media SWC/TCBS agar ditambah Rifampisin 50 µg/ml.
Tabel 1. Jumlah   koloni V.   harveyi   MR5339 Rif R yang   tumbuh   pada   media   TCBS-agar berdasarkan nilai Optical Density Table 1. Number of V. harveyi MR5339 Rif R colony grew on TCBS-agar medium based on
Optical Density values Jenis dan konsentrasi bakteri (CFU/ml) OD Jumlah koloni V. harveyi MR5339 Rif 0,347 17.550.000 CP1 + V. harveyi MR5339 Rif 0,350 ±0,347 250.000 CP2 + V. harveyi MR5339 Rif 0,325 ± 0,347 3.700.000
Tiga   isolat   yang   dimurnikan   di   SWC   tidak   dapat   tumbuh   dengan   baik   sehingga hanya dua isolat yang memiliki koloni berwarna kuning yang dipakai dalam uji tantang
dengan V. harveyi MR5339 . Hasil uji tantang dari dua isolat dengan V. harveyi MR5339 secara in vitro disajikan dalam Tabel 1.
Pada Tabel 1 dapat diketahui   bahwa isolat  kandidat probiotik CP1 adalah isolat kandidat probiotik yang terbaik dalam menghambat kerja dari bakteri V. harveyi MR5339 , dan koloni probiotik CP1 tersebut jauh lebih banyak tumbuh dibandingkan dengan isolat penguji  tantang V. harveyi MR5339 .  Hasil jumlah koloni  ini dapat dilihat  setelah isolat Vibrio sp.   kandidat   probiotik   yang   diuji   tantang   dengan V.  harveyi   MR5339 diinkubasi selama 24  jam pada  suhu  ruang.  Apabila  dibandingkan   dengan  kontrol,   jumlah  koloni Vibrio sp. kandidat probiotik yang tumbuh di media lebih banyak dibandingkan dengan V. harveyi MR5339 . Dengan OD yang sama jumlah V. harveyi MR5339 pada perlakuan kontrol ( 10 7 CFU/ml ) dan pada perlakuan V. harveyi MR5339 lawan isolat CP2 sebesar 10 6 CFU/ml, ini menunjukkan jumlah yang lebih besar dibandingkan dengan jumlah V. harveyi MR5339 pada   perlakuan   uji   tantang   ( V.   harveyi   MR5339 lawan   isolat   CP1)   yakni   sekitar   10 5 CFU/ml. Jumlah koloni CP1 yang tumbuh lebih dominan dibandingkan koloni bakteri V. harveyi MR5339 .
Dari isolat yang terpilih untuk di uji tantang secara in vivo yang didasarkan pada hasil   uji in   vitro didapat   satu   jenis   isolat Vibrio sp   kandidat   probiotik   (CP1),   lalu   diuji kepatogenitasannya   didapatkan   bahwa   isolat   tersebut   tidak   patogen   dan   aman disuntikkan   pada   udang   uji   coba   hingga   konsentrasi   10 7 cfu/ml   dengan   tingkat kelangsungan hidup sebesar 100 %.
Hal ini membuktikan bahwa bakteri CP1 aman untuk dipakai dan dapat dijadikan probiotik karena tidak merugikan inangnya. Hal ini dipertegas dengan kultur bakteri yang menguntungkan   yang   ditambahkan   kedalam   pakan   atau   media   budidaya   yang   dapat meningkatkan kelangsungan hidup dan ketahanan tubuh inangnya dapat dipakai sebagai probiotik   menurut   Moriarty   (1999).   Salah   satu   mekanisme   kerja   probiotik   yaitu peningkatan   respon   imun   (kekebalan),   perbaikan   kualitas   air,   dan   interaksi   dengan fitoplankton (Gomez-Gil, 2000).
V.  harveyi   MR5339 adalah   bakteri   yang   patogen   terhadap   udang   uji.   Dalam   uji tantang dengan Vibrio sp. perlu diketahui jumlah konsentrasi V. harveyi MR5339 yang sudah dapat mematikan udang uji lebih dari 50% (LD 50 ), yang nantinya digunakan untuk melihat kemampuan CP1 dalam menghambat V. harveyi MR5339 dan perannya sebagai probiotik. Hasil uji kelangsungan hidup V. harveyi MR5339 dapat dilihat pada Tabel 2. V.   harveyi   MR5339 merupakan   agen   utama   penyakit   vibriosis   atau   bercahaya, menyerang organisme vertebrata dan invertebrata laut  pada  area geografis yang luas (Aliffudin, et   al .,   2004).   Bakteri V.   harveyi   MR5339 sebagai   pathogen   udang   yang signifikan   di   beberapa   Negara   tropik   dapat   menyebabkan   mortalitas   hingga   100   % dihatcheri udang (Alifuddin et al ., 2004).
Tabel 2. Tingkat mortalitas udang uji (n = 30) pada uji LD 50 terhadap tingkat patogenitas V. harveyi MR5339 Rif Table 2. Level of shrimp mortality (n = 30) at LD 50 on pathogen level of V. harveyi MR5339 Rif
V. harveyi MR5339 Rif R Mortalitas Reisolasi 10 7 CFU/ml 21 Positif 10 6 CFU/ml 5 Positif 10 5 CFU/ml 3 Positif 10 4 CFU/ml 0 Negative Kontrol (PBS) 0 Negative
Penyakit vibriosis senang hidup pada temperatur tinggi, kepadatan penuh, stress dan   kualitas   air   yang   buruk   (Howard,   1989).   Beberapa   dari   galur V.   harveyi dapat menyebabkan   kematian   total   larva   udang   dengan   dosis   yang   sangat   rendah   yakni konsentrasi   10 2 CFU/ml   (Widanarni,   2004).   Pada   penelitian   Mario et   al .,   (2000)   dan
Maryani et   al .,   (2002),   jumlah V.  harveyi yang   ditemukan   pada   larva   yang   mati   juga berkisar 10 2 sampai10 3 CFU/ml.
Setelah didapat satu isolat terbaik yang tidak patogen terhadap udang uji, dilakukan uji  tantang dengan V. harveyi MR5339 . Hal ini  dimaksudkan untuk melihat kemampuan Vibrio sp kandidat probiotik (CP1) sebagai probiotik dalam kemampuannya menghambat serangan dari V. harveyi MR5339 pada udang uji. Tingkat kelangsungan hidup udang uji yang terbaik adalah penyuntikan CP1 dengan konsentrasi 10 7 CFU/ml dan V. harveyi MR5339 konsentrasi 10 7 Cfu/ml sebesar 90% sama dengan kontrol (Tabel 3). Penambahan konsentrasi CP1 dapat meningkatkan kemampuan melawan serangan patogen V.  harveyi   MR5339 .   Nilai   tingkat   kelansungan     pada   perlakuan   penambahan konsentrasi Vibrio sp. kandidat probiotik 10 5 CFU/ml, 10 6 CFU/ml, 10 7 CFU/ml berturut- turut adalah 35%, 65%, dan 90 % (Tabel 3). Ini berarti semakin besar jumlah konsentrasi yang   diberikan   semakin   tinggi   kemampuannya   dalam   menghambat   pertumbuhan V. harveyi MR5339 .   Sehingga isolat CP1 dapat dipakai sebagai kandidat probiotik karena mampu menekan serangan patogen V. harveyi MR5339 dengan konsentrasi 10 7 cfu/ml.
Tabel 3. Tingkat kelangsungan hidup udang uji (n=20) pada uji tantang secara in vivo V. harveyi MR5339 dengan CP1 Table 3. Shrimp survival (n = 20) on in vivo test of V. harveyi MR5339 with CP1
Menurut Widanarni (2004),
penambahan   masing–masing Vibrio SKT-b,   PL 2 T-a,   dan   N-C   dengan   konsentrasi   10 6 cfu/ml yang diuji tantang dengan V. harveyi MR5339 dengan konsentrasi 10 3 cfu/ml dapat meningkatkan kelangsungan hidup berturut– turut adalah 93%, 90%, dan 82% sedangkan pada kontrol ( V. harveyi MR5339 ) 68%. Peningkatan kelangsungan hidup pada perlakuan penambahan   konsentrasi   CP1   diduga   karena   adanya   kemampuan   CP1   dalam menghambat   pertumbuhan V.  harveyi   MR5339 .   Dengan   pertumbuhan Vibrio sp   lebih mendominasi pertumbuhan  MR5339.
Keberadaan   total   bakteri V.   harveyi   MR5339 pada   organ   hepatopankreas   dan intestinum dapat dilihat pada tabel 4. Pada perlakuan 10 7 CFU/ml CP1 VS 10 7 CFU/ml V. harveyi   MR5339 pada   organ   hepatopankreas   keberadaan   bakteri V.  harveyi menurun setelah 24 jam penyuntikkan, sedangkan pada organ intestinum semakin meningkat pada saat 24 jam setelah penyuntikkan.
Tabel 4. Keberadaan dan penyebaran isolat bakteri V. harveyi MR5339 Rif R pada organ tubuh udang Table 4. Presence and distribution of V. harveyi MR5339 Rif R isolate on shrimp organ
Titik waktu Pengamatan 10 7 CFU/ml CP VS 10 7 CFU/ml MR5339 10 7 CFU/ml MR5339 Hepatopankreas Intestine Hepatopankreas Intestine 3 Jam 122500 80 1025400 13995 6 Jam 34950 0 355000 2580 12 Jam 6130 1480 116440 17248.5 18 Jam 15890 423 155800 25600 24 Jam 1750 2300 3250 670
Dari   dua   perlakuan   yang   dicobakan   didapatkan   keberadaan   bakteri V.   harveyi MR5339 pada organ hepatopankreas dan usus pada perlakuan 10 7 CFU/ml V. harveyi MR5339 lebih besar dibandingkan dengan perlakuan 10 7 CFU/ml V. harveyi MR5339 VS 10 7 CFU/ml   CP1   (Tabel   4).   Berdasarkan   pengamatan   morfologi   pada   uji   LD 50 bahwa
CP1 + V. harveyi MR5339 Rif R Mortalitas Reisolasi SR (%) 10 7 CFU/ml + 10 7 CFU/ml 2 positif 90 10 6 CFU/ml  + 10 7 CFU/ml 7 positif 65 10 5 CFU/ml  + 10 7 CFU/ml 13 positif 35 Kontrol (PBS) 2 negatif 90
kematian   akibat   serangan   patogen V.  harveyi   MR5339 adalah   pada   0   sampai   3   jam pertama setelah disuntikkan ke udang uji.
Dari keberadaan bakteri V. harveyi MR5339 ini dapat menambah satu fakta yang dapat mendukung kesimpulan dari hasil uji tantang secara in vivo yakni keberadaan V. harveyi MR5339 lebih banyak pada perlakuan kontrol yakni perlakuan tanpa penambahan probiotik.   Ini   menyatakan   bahwa   probiotik   dapat   menghambat   pertumbuhan   dari V. harveyi MR5339 .
Hasil   identifikasi   dari Vibrio sp.   CP1   adalah   bakteri   gram-negatif,   bersifat   motil, berbentuk  batang  pendek,   koloni   berwarna  kuning  bulat  pada   media TCBS,  berwarna putih krem dan menyebar pada media SWC-agar. Isolat Vibrio sp kandidat probiotik yang menunjukkan hasil yang paling potensial dalam uji in vitro dan uji in vivo adalah isolat dengan sandi CP1, berdasarkan hasil identifikasi CP1 adalah Vibrio furnissii.

## Kesimpulan dan Saran
Hasil isolat Vibrio sp sebagai kandidat probiotik yang didapat dari hasil isolasi adalah sebanyak dua jenis isolat. Isolat Vibrio sp kandidat probiotik yang menunjukkan hasil yang paling potensial dalam uji in vitro dan uji in vivo adalah isolat dengan sandi CP1, dimana berdasarkan hasil identifikasi CP1 adalah Vibrio furnissii . Perlakuan dengan konsentrasi penambahan   probiotik   CP1   sebesar   10 6 CFU/ekor   dapat   meningkatkan   sintasan   dari udang   uji   sebesar   90%.   Secara   umum   dapat   disimpulkan   bahwa   penambahan konsentrasi Vibrio furnissii dapat dikuti dengan peningkatan sintasan udang uji.

## Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini terselengara atas hibah Penelitian Dosen Muda  Direktorat Penelitian dan Pengabdian Kepada Masyarakat Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan   Nasional.Terima   kasih   juga   kepada   Riviewer   Jurnal   Biosfera   yang   sudah mengoreksi jurnal ini.

## Daftar Pustaka
Alifuddin, M.D.D., Pasaribu, F.H., dan Afandi, R., 2004. Pengaruh imunostimulan 60 ppm (LPS, Saccharomyces   cerevisiae dan   Levamisol)   terhadap   respon   imunitas   ikan jambal   siam   ( Pangasius   hyphopthalmus Fowler).   Jurnal   ilmu–ilmu   Perairan   dan Perikanan Indonesia, VIII (1), 49-56.
Alifuddin,   Sukenda,   dan   Dana,   D.,   2004.   Manfaat   bahan   aktif   hidrokuinon   dari   buah Sonneratia   caseolaris untuk   mengendalikan   infeksi   buatan Vibrio   harveyi pada udang windu Penacus monodon FAB. Akuakultur Indonesia,  3(1), 29–35.
Cohen,   J.,   Samocha,   T.M.,   Fox,   J.M.,   Gandy,   R.L.,   and   Lawrence,   A.L.,   2005. Characterization   of   water   quality   factors   during   intensive   raceway   production   of juvenile   L.   vannamei   using   limited   discharge   and   biosecure   management   tools. Aquaculture Engineering, 32 (3–4), 425–442.
Gomez, G.B. and Roque A., 1998. Selection of Probiotic Bacteria for Use in Aquaculture. Di dalam : Flegel TW, editor. Advances in Shrimp Biotechnology. Proceedings to the Special Session on Shrimp Biotechnology, 5 th Asian Fisheries Forum; Chiengmai, Thailand.  Bangkok :  National Center for Genetic Engineering and Biotechnology. hlm 175.
Howard, H. H., 1989. Handbook of Fish Disease. TFH Publications. p 123 - 131.
Lavilla-Pitogo   C.R.,   Lean˜o   E.M.,   and   Paner   M.G.,   1998.   Mortalities   of   pond-cultured juvenile   shrimp, Penaeus   monodon ,   associated   with   dominance   of   luminescent vibriosis in the rearing environment. Aquaculture, 164, 337- 349.
Liu B. C, Lee, K.K., and Chen, S.N., 1996. Pathogenicity of different isolates of Vibrio harveyi in tiger prawn, Penaeus monodon. Letters in Applied Microbiology, 22, 413– 416.
Mario, Y. T., Rogelio Q.G., and Rogelio, T.D., 2000. The beneficial effects of a probiotic product on selected chemical and growth parameters in Penacus monodon Pond waters. Abstract. World Aquaculture ,   p 454.
Maryani,   D.D.   dan   Sukenda,   2002.   Peranan   ekstrak   kelopak   dan   buah   mangrove Sonneratia caseolaris (L) terhadap infeksi bakteri Vibrio harveyi pada udang windu ( Penaeus monodon FAB.). Akuakultur Indonesia, I (3): 129–138.
Moriarty, D.J.W., 1999. Disease control in shrimp aquaculture with probiotic bacteria. Di dalam: Bell, C.R., Brylinsky, M., and Johnson-Green, P. (Editor). Proceeding of the 8 th International Symposium on Microbial Ecology. Halifax, Canada.
Rengpipat, S., Phianphak, Piyatiratitivorakul, S., Menasveta, P., Sirirat, R., Wannipa, P., Somkiat, P., and Piamsak, M., 1998. Effects of a probiotic bacterium on black tiger shrimp Penaeus monodon survival and growth. Aquaculture, 161,  301–313.
Rukyani, A., Taufik P., dan Taukhid,  1992.  Penyakit kunang-kunang ( luminescecce vibrios ) di hatchery udang windu dan cara penanggulangan penyakit benur di hatchery udang. J. Litbang Pert, 2,1 -17.
Sinrat, R., Sombat, R., Somkiat , P., and Piamsar, M., 2000. Immunity enhancement in black   tiger   shrimp Penacus   monodon by   a   probiont   bacterium Bacillus S11 . Aquaculture, 191, 271–288.
Tjahjadi, M.R.,  Angka  S.L., and  Suwanto,  A.,   1994.   Isolation and evaluation of marine bacteria for  biocontrol  of luminous bacterial diseases in tiger shrimp larvae ( Penaeus monodon Fab.) Aspac. J. Mol. Biol. Biotechnol, 2,234-352.
Widanarni, 2004. Penapisan bakteri probiotik untuk biokontrol vibriosis pada larva udang windu:   konstruksi   penanda   molekuler   dan   esei   pelekatan.   Disertasi.   Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Zhang, X. H., Meaden, P.G., and Austin, B., 2001. Duplication of hemolysin genes in a virulent isolate of Vibrio harveyi . Applied and Environmental Microbiology, 67, 3161– 3167.