## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
PENGARUH EKSTRAK ETANOL RIMPANG KUNYIT ( Curcuma Longa )

## TERHADAP PEMERIKSAAN HEMOSTASIS DARAH
(EFFECT OF TURMERIC RHIZOME ETHANOL EXTRACT (Curcuma Longa) ON

## BLOOD HEMOSTASIS TEST)
Rini Roslaeni 1* , Raya Agung Maha Sakti 2 , M Fathan Zulfahmi 2 , Maharany Rizky Yuniar 2 ,  Evi Sovia 3 , Wahyu Harihardjaja 4 , Anita Liliana Susanti 1
1 Laboratorium Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
3 Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
4 Laboratorium Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
Email korespondensi : rini.roslaeni@lecture.unjani.ac.id

## ABSTRAK
Kunyit  ( Curcuma  longa )  merupakan  tanaman  obat  yang  banyak  terdapat  di  Asia,  sering digunakan  sebagai  bumbu  ataupun  obat  tradiosional.  Tanaman  kunyit  memiliki  akar (rimpang) berwarna kuning tua dan mengandung senyawa penting, diantaranya curcumin dan ar-tumeron yang berperan dalam menghambat pembekuan darah. Saat ini salah satu penyebab utama  morbiditas  dan  mortalitas  di  dunia  adalah  penyakit  kardiovaskular  seperti  stroke  dan penyakit jantung koroner. Potensi kunyit yang dapat bersifat antikoagulan diharapkan menjadi alternatif  pencegahan  penyakit  kardiovaskular.  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  efek ekstrak etanol rimpang kunyit secara in vivo terhadap bleeding time (BT), dan secara in vitro terhadap prothrombin time (PT) dan retraksi bekuan. Uji in vitro menggunakan sampel darah manusia  yang  ditambahkan  ekstrak  rimpang  kunyit,  sedangkan  uji in  vivo dengan  cara memberikan  ekstrak  rimpang  kunyit  secara  per  oral  terhadap  mencit.  Pemeriksaan  PT menggunakan metode tilt  tube , pemeriksaan retraksi  bekuan  menggunakan whole blood lalu didiamkan  selama  2  jam  dan  dihitung  sisa  serumnya  (volume  serum/volume  darah  awal x100%), sedangkan pemeriksaan BT dilakukan dengan menginsisi ekor tikus. Hasil penelitian menunjukkan rerata PT dan BT memanjang pada semua semua kelompok uji. Semakin besar dosis  ekstrak  rimpang  kunyit    maka  semakin  memanjang  nilai  PT  dan  BT.  Retraksi  bekuan pada  kelompok  uji  menunjukkan  rerata  persentase  serum  yang  rendah  dibandingkan  kontrol negatif,  dan  semakin  besar  dosis  ekstrak  yang  diberikan  maka  semakin  rendah  nilai  retraksi bekuannya.  Hal  tersebut  diduga  karena  zat-zat  aktif  seperti curcumin dan ar-tumeron dapat
DOI
DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
menghambat  proses  pembekuan  darah  sehingga  memengaruhi  hasil  pemeriksaan  hemostasis darah.
Kata kunci : bleeding time , curcumin , kunyit, prothrombin time , retraksi bekuan

## ABSTRACT
Turmeric (Curcuma longa) is medicinal plant that is widely found in Asia, often used as spice or  traditional  medicine.  Turmeric  plant  has  dark  yellow  roots  (rhizome)  and  contains important compounds, including curcumin and ar-tumeron which play role in inhibiting blood clotting.  Currently,  one  of  main  causes  of  morbidity  and  mortality  in  the  world  is cardiovascular  disease  such  as  stroke  and  coronary  heart  disease.  Potential  anticoagulant properties  of  turmeric  is  expected  to  be  an  alternative  in  prevention  of  cardiovascular disease. Purpose of this study was to determine effect of turmeric rhizome extract in vivo on bleeding  time  (BT),  and  in  vitro  on  prothrombin  time  (PT)  and  clot  retraction  test.  In  vitro study used human blood sampel added by turmeric extract. For in vivo study turmeric extract was  given  to  male  mice  orally.  The  PT  examination  used  tilt  tube  method,  clot  retraction examination used whole blood then left for 2 hours and the remaining serum was calculated (serum  volume  /  initial  blood  volume  x100%),  BT  examination  was  carried  out  by  incising rats tail. Results showed that mean PT and BT were prolonged in all test groups. The greater the dose of turmeric rhizome extract, the longer the PT and BT. Clot retraction in test group showed lower mean serum percentage compared to negative controls, the greater the extract dose,  the  lower  the  clot  retraction.  This  is  suspected  because  the  active  substances  such  as curcumin and ar-tumeron can inhibit blood clotting process so that it can affect the results of blood hemostasis tests.
Keywords: bleeding time, curcumin, clot retraction, prothrombin time, turmeric

## PENDAHULUAN
Kunyit ( Curcuma longa ) merupakan  tanaman  obat  yang  sering digunakan  oleh  masyarakat  Asia,  baik sebagai  bumbu  masakan  ataupun  sebagai obat  tradiosional.  Rimpang  merupakan bagian  tanaman  kunyit  yang  dipercaya mempunyai efek untuk menurunkan demam,  antiperadangan,  hepatoprotektif, dan  antibakteri. 1,2,3 Selain  itu,  kunyit  juga diketahui  dapat  bersifat  trombolitik  dan dapat  berfungsi  sebagai  antikoagulan. 4,5 sehingga dipercaya dapat mencegah penyakit  kardiovaskular  seperti  penyakit jantung  koroner  dan  stroke. 2,6 Rimpang
kunyit  mengandung  senyawa  penting, diantaranya adalah curcumin , demethoxycurcumin , minyak atsiri bisdemethoxycurcumin , resin, kalsium, fosfor,  dan  besi . Curcumin memiliki  sifat tidak  larut  dalam  air,  sehingga  digunakan pelarut etanol dalam pembuatan ekstrak. 7,8,9 Berbagai penelitian  telah menyebutkan  bahwa  zat  aktif curcumin dapat  memengaruhi  proses  pembekuan darah,  dan  juga  dapat  menyebabkan peningkatan clot  lysis . 4,5 Penelitian  lain menyebutkan  bahwa  senyawa ar-tumeron yang  terkandung  dalam  minyak  atsiri
kunyit dapat menghambat agregasi trombosit. 10
Saat  ini  salah satu  penyebab utama morbiditas  dan  mortalitas  di  dunia  adalah penyakit  kardiovaskular.  Menurut  Riset Kesehatan  Dasar  (Riskesdas)  tahun  2018 prevalensi  penyakit  jantung  di  Indonesia 1,5%. 11 Penelitian  risiko  penyakit  jantung koroner  pada  subjek  dewasa  muda  juga menunjukkan  adanya  risiko  tinggi  pada usia 17-23 tahun. 12 Adanya plak, aterotrombotik,  serta  peningkatan  aktivasi dan  agregasi  trombosit  merupakan  hal yang  berkaitan  dengan  proses  terjadinya penyakit kardiovaskular tersebut. 11,13
Pemeriksaan  hemostasis  darah  merupakan salah  satu  parameter  untuk  mengetahui fungsi  pembekuan  darah.  Pemeriksaan hemostasis diantaranya adalah prothrombin  time (PT), activated  partial thromboplastin time (APTT), bleeding time (BT), clotting  time (CT),  dan  retraksi bekuan. 14 Kunci  utama  terjadinya  proses pembekuan  darah  adalah  terbentuknya thrombin y ang diperlukan untuk mengubah fibrinogen  menjadi  fibrin. 10,15 Curcumin diketahui dapat menghambat pembentukan thrombin sehingga  akan  memengaruhi hasil  pemeriksaan  hemostasis. 4 Selain  itu kandungan ar-tumeron juga  diketahui dapat menghambat agregasi trombosit. 16
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  efek  pemberian  ekstrak  etanol
rimpang  kunyit  secara in  vitro dan in  vivo terhadap pemeriksaan PT, BT, dan retraksi bekuan.  Secara  umum  masyarakat  luas belum  mampu  memisahkan  zat  aktif curcumin dari rimpang kunyit maka dalam penelitian  ini  digunakan  ekstrak  etanol rimpang kunyit sebagai sumber curcumin .

## BAHAN DAN METODE

## Desain Penelitian
Penelitian ini terbagi menjadi penelitian in  vitro dan in  vivo .  Pada penelitian in vitro akan dilakukan pemeriksaan  PT  dan  retraksi  bekuan. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium dengan rancangan analitik komparatif untuk melihat  perbedaan  kelompok  uji  dengan kelompok  kontrol.  Sampel  menggunakan darah atau plasma manusia yang ditambahkan ekstrak etanol rimpang kunyit.
Sedangkan  pada  penelitian in  vivo dilakukan pemeriksaan BT terhadap mencit  yang telah diberikan ekstrak  etanol rimpang  kunyit  secara  peroral. Rancangan penelitian  menggunakan  rancangan  acak lengkap (RAL) dengan pola post test ,

## Subjek Penelitian
Penelitian in  vitro menggunakan sampel  darah  vena  dari  individu  sehat, laki-laki,  usia  17-20  tahun,  dan  tidak memiliki  riwayat  kelainan  darah  seperti
kelainan  agregasi  trombosit,  hemofilia, anemia,  dan  trombositopenia.  Semua sampel  darah  tersebut  diperiksakan  PT terlebih  dahulu,  dan  menunjukkan  hasil yang normal.
Penelitian in  vivo menggunakan mencit jantan berumur 1-2 bulan. Berat 20- 30  gram  dan  sehat  yang  ditandai  dengan gerakan  aktif,  memiliki  respons  baik apabila  dikejutkan,  dan  tidak  terdapat kecacatan.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  tahun  2017 sampai  2019.  Pembuatan  ekstrak  etanol rimpang kunyit dilakukan di  Laboratorium
Kimia Institut Teknologi Bandung. Adaptasi hewan percobaan di Laboratorium  Hewan  di  bawah  koordinasi Pusat Studi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani.
Pemeriksaan PT,  retraksi  bekuan,  dan  BT di lakukan di laboratorium Patologi Klinik Fakultas  Kedokteran  Universitas  Jenderal Achmad Yani.

## Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit
Ekstrak  etanol  dibuat  dengan  cara menghaluskan  1  kg  rimpang  kunyit, kemudian  dimasukan ke  dalam  maserator yang alasnya telah diberi kapas, tambahkan pelarut  (etanol)  lalu  diamkan  24  jam,  lalu keluarkan  ekstrak  dari outlet di  bawah maserator,  larutan  ini  di  sebut  ekstrak
encer.  Tambahkan  etanol  baru  kedalam ampas yang ada di dalam maserator begitu seterusnya sampai pelarut yang keluar dari outlet maserator  tidak  berwarna  lagi (biasanya  5-6  kali  rendaman)  pekatkan ekstrak  encer  menggunakan  alat rotary evaporator sampai pekat atau sampai tidak ada  lagi  pelarut  yang  menetes  dari kondensor rotary evaporator.

## Plasma sitrat
Plasma  sitrat  berasal  dari  darah vena fossa  cubiti .  Darah  vena  sebanyak  3 ml dimasukan ke dalam tabung antikoagulan  sitrat  dengan  perbandingan 1:9, kemudian disentrifus 1500 rpm selama 10 menit. Plasma sitrat ini akan digunakan untuk pemeriksaan PT.

## Whole Blood
Darah  vena  diambil  dari fossa cubiti .  Darah  vena  ini  tidak  diberikan antikoagulan  apapun,  dan  akan  digunakan untuk pemeriksaan retraksi bekuan.
Prothrombine Time (PT)
Pemeriksaan  PT  pada  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit secara in  vitro terhadap  hasil  pemeriksaan PT.  Pemeriksaan  PT  dilakukan  secara manual  (metode tilt  tube ),  menggunakan reagen  tromboplastin,  batang  pengait, tabung  reaksi,  penangas  air,  dan  sampel plasma  sitrat. 17 Plasma  sitrat  digunakan
untuk  2  kelompok  kontrol  (kontrol  negatif dan  kontrol  positif),  dan  3  kelompok perlakuan  dengan  menambahkan  ekstrak etanol  rimpang  kunyit  masing-masing sebanyak  5µl,  10µl,  dan  15µl.  Masing-
masing  kelompok  terdiri  dari  12  sampel sehingga seluruhnya dilakukan 60 pemeriksaan  PT.  Perlakuan  pada  sampel plasma sitrat dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Sampel pemeriksaan PT
No Label Tabung Sampel PT Komposisi 1 Kontrol positif Plasma sitrat 50 µl 2 Uji A Plasma sitrat 50 µl + 5µl ekstrak 3 Uji B Plasma sitrat 50 µl + 10µl ekstrak 4 Uji C Plasma sitrat 50 µl + 15µl ekstrak 5 Kontrol negatif Plasma sitrat 50 µl + glass beads

## Retraksi Bekuan
Pemeriksaan retraksi bekuan dilakukan  terhadap  sampel whole  blood .
Pada  pemeriksaan  ini  ekstrak  kunyit  sulit larut dalam whole blood sehingga ditambahkan dimethyl  sulfoxide DMSO) sebagai  pelarut  ekstrak  kunyit  didalam darah. Sampel whole blood dibagi menjadi 6  kelompok  yaitu  kontrol  positif,  kontrol negatif, kelompok perlakuan dengan menambahkan  ekstrak  etanol  rimpang kunyit  masing-masing  sebanyak  5  µg/µl, 10  µg/µl,  dan  20  µg/µl.  Tabung  terakhir adalah whole blood yang hanya
ditambahkan DMSO. Masing-masing kelompok  terdiri  dari  4  tabung  sampel sehingga seluruhnya dilakukan 24 pemeriksaan  retraksi  bekuan.  Kontrol positif  menggunakan  aspirin.  Larutan
aspirin  dibuat  dengan  melarutkan  25  mg aspirin  dalam  10  ml  DMSO.  Konsentrasi aspirin dalam whole blood adalah 25µg/ml (50µg/2 ml darah).
Pemeriksaan retraksi bekuan dilakukan  dengan  metode  manual,  yaitu whole  blood dimasukan  kedalam  tabung sentrifus  berskala  kemudian  diberikan batang  pengait  dan  sumbat  diatasnya,  lalu didiamkan  dalam  posisi  tegak  lurus  dalam rak selama 2 jam. Setelah itu bekuan darah dilepaskan  dari  tabung  dengan  hati-hati melalui  dinding  tabung  lalu  sentrifus dengan  kecepatan  1000  rpm  selama  5 menit,  kemudian  dihitung  jumlah  serum yang terbentuk menggunakan rumus volume serum/volume darah awal x 100%. Perlakuan  pada  sampel whole  blood dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 Sampel pemeriksaan retraksi bekuan
No  Label Tabung Sampel Retraksi Bekuan Komposisi 1 Kontrol positif 2 ml Whole blood + 20 µl larutan aspirin DMSO 2 Uji E 2 ml Whole blood + 5 µg ekstrak /10 µl DMSO 3 Uji F 2 ml Whole blood + 10 µg ekstrak /10 µl DMSO 4 Uji G 2 ml Whole blood + 20 µg ekstrak /10 µl DMSO 5 Kontrol negatif 2 ml Whole blood 6 Pelarut 2 ml Whole blood + 10 µl DMSO
*Ket: DMSO: dimethyl sulfoxide
Bleeding Time ( BT )
Pemeriksaan BT dilakukan terhadap 25  ekor  mencit  jantan  yang  sudah diadaptasikan  di  Laboratorium  Hewan  di bawah  koordinasi  Pusat  Studi  Fakultas Kedokteran  Unjani.  Mencit  diadaptasikan dengan  suasana  ruangan  Laboratorium Hewan FK Unjani selama 7 hari pada suhu ruangan  26-30 o C.  Penerangan  pada  siang hari berasal dari sinar matahari dari jendela kaca  dan  cahaya  lampu  yang  terdapat  di dalam  ruangan  pemeliharaan.  Kandang yang digunakan berjumlah 5 buah, masing- masing  berisi  5  ekor  mencit.  Dalam pelaksanaan  penelitian,  mencit  dibagi menjadi  5  kelompok,  yaitu  2  kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan.
Sebelum diberikan perlakuan, mencit  dipuasakan  selama  12  jam  untuk pengosongan organ pencernaan agar absorbsi  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit
baik. Satu jam setelah pemberian perlakuan,  mencit  di  anestesi  dengan  CO 2 konsentrasi 30% secara inhalasi menggunakan chamber anestesi.  Setelah hewan  di  anestesi,  ekor  mencit  diinsisi pada  jarak  2  mm  dari  ujung  ekor.  Waktu perdarahan  diukur  mulai  sejak  terjadinya perdarahan  setelah  dilakukan  insisi  pada ekor  mencit  dan  terhentinya  perdarahan tersebut dengan cara ditempelkan menggunakan kertas saring setiap 30 detik. Pencatatan  waktu  perdarahan  dengan menggunakan stopwatch .  Apabila  waktu perdarahan  terjadi  >15  menit,  pengukuran dihentikan  dan  waktu  perdarahan  dicatat sebagai  15  menit.  Metode  pemeriksaan bleeding  time mengadaptasi  dari  metode Duke  dan  Ivy  yang  dilakukan  pada manusia. 18 Perlakuan terhadap hewan coba disajikan pada Tabel 3.

## Tabel 3 Perlakuan hewan percobaan
No Kelompok Mencit Pemberian peroral 1 Kontrol negatif Pakan standar 2 Kontrol positif Pakan standar dan aspirin 0,208 mg/20g BB 3 Uji K Pakan standar dan ekstrak 7 mg/20g BB 4 Uji L Pakan standar dan ekstrak 14 mg/20g BB 5 Uji M Pakan standar dan esktrak 28 mg/20g BB

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan Prothrombin Time (PT)
Nilai  rerata  pemeriksaan  PT  pada  tiap kelompok  dapat  dilihat  pada  Tabel  4.
Tabel 4 Rerata protombin time pada semua kelompok
No Kelompok n Rerata (detik) + Simpangan baku Nilai P 1 Kontrol positif 12 12,08 + 1,08 2 Uji A 12 46,00 + 8,91 3 Uji B 12 253,33 + 109,62 0.000* 4 Uji C 12 1164,92 + 121,53 5 Kontrol negatif 12 10,42 + 1,50
Uji A: esktrak kunyit 5µl, Uji B: esktrak kunyit 10µl, Uji C: esktrak kunyit 15µl,
*Terdapat perbedaan bermakna (uji Kruskal Wallis )
Berdasarkan  Tabel  4  diketahui bahwa  kelompok  uji  A,  B,  dan  C menunjukkan nilai rerata PT yang memanjang dibandingkan kelompok kontrol.  Hal  ini  menunjukkan  adanya penghambatan  proses  pembekuan  darah pada  kelompok  sampel  plasma  yang ditambahkan ekstrak etanol rimpang kunyit. Nilai P=0,00 (P<0,05)
menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna diantara kelompok penelitian.
Pemeriksaan  PT digunakan  untuk mengetahui  proses  pembekuan  darah melalui jalur ekstrinsik yang akan menghasilkan  thrombin. 10 Ekstrak  etanol
rimpang kunyit memiliki zat aktif curcumin yang  menghambat  aktivasi  FX menjadi FXa sehingga menghambat pembentukan  thrombin  dan  menyebabkan pemanjangan waktu pembekuan darah. 4
Analisis  lebih  lanjut  (uji post  hoc ) pada nilai rerata PT menunjukkan terdapat perbedaan  bermakna  (P=  0,00)  antara kelompok  uji  A  terhadap  kelompok  uji  B maupun  uji  C.  Demikian  juga  untuk kelompok  uji  B  terhadap  kelompok  uji  C. Hasil  analisis  ini  memperlihatkan  bahwa rerata  nilai  PT pada  kelompok  uji  yang diberi  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit  dosis 5µl,  10µl,  dan  15µl  memiliki  perbedaan
yang signifikan.
Perbedaan signifikan nilai rerata PT pada berbagai dosis ekstrak etanol rimpang kunyit dipengaruhi oleh kandungan curcumin .  Semakin  besar  dosis  ekstrak,
maka  semakin  besar  kandungan curcumin yang menghambat pembentukan thrombin. Hal  tersebut  ditunjukkan  rerata  PT  pada kelompok  uji  A  46,00  ±  8,91  detik,
kelompok uji B 253,33 ±109,62 detik, dan nilai  PT  yang  paling  memanjang  adalah kelompok  uji  C  (dosis  ekstrak  kunyit paling besar) yaitu 1164,92 ±121,53 detik.

## Pemeriksaan Retraksi Bekuan
Nilai  rerata  retraksi  bekuan  untuk masing-masing  kelompok  disajikan  dalam Tabel 5.

## Tabel 5 Nilai rerata retraksi bekuan
No Kelompok n Rerata (%) + Simpangan baku Interpretasi Nilai P 1 Kontrol positif 4 24,25 + 1,893 Menurun 2 Uji E 4 35,00 + 3,464 Menurun 3 Uji F 4 31,25 + 1,500 Menurun <0,001* 4 Uji G 4 28,00 + 0,816 Menurun 5 Kontrol negatif 4 43,00 + 0,000 Normal 6 DMSO 4 43,25 + 2,217 Normal
Uji E: 5 µg ekstrak kunyit /10 µl DMSO, Uji F:10 µg ekstrak kunyit /10 µl DMSO, Uji G: 20 µg ekstrak kunyit /10 µl DMSO, DMSO: dimethyl Sulfoxide 10µl *Terdapat perbedaan bermakna ( Oneway Annova )
Mekanisme fungsi trombosit terdiri dari  2,  yaitu  adesi  dan  agregasi.  Adesi adalah  perlekatan  awal  trombosit  pada endotel yang mengalami trauma diperantai glikoprotein  (GP)  dengan Von  Willebrand Factor .  Lalu  trombosit  yang  adesi  ini mengeluarkan adenosin difosfat (ADP) dan merangsang perlengketan antara sel trombosit  dengan  sel  trombosit  yang lainnya sehingga terbentuk sumbat trombosit. Perlengketan sel trombosit yang satu  dengan  yang  lainnya  disebut  agregasi trombosit. 10,19 Pada  keadaan  normal,  bila
terjadi bekuan darah maka fibrin clot akan mengalami  retraksi  (ukuran  memadat)  dan memeras  cairan  serum  keluar.  Gangguan fungsi trombosit akan menyebabkan gangguan  proses  retraksi  ditandai  serum yang terbentuk menurun. 18,20
Nilai rerata retraksi bekuan kelompok  kontrol  negatif  dan  kelompok yang hanya ditambahkan DMSO menunjukkan nilai normal. Larutan DMSO ditambahkan sebagai pelarut ekstrak rimpang  kunyit  dalam  darah.  Kelompok kontrol negatif tidak mendapatkan
perlakuan  apapun  sehingga  nilai  retraksi bekuan normal.
Penambahan DMSO pada
Kelompok sampel sudah mengikuti rekomendasi  penelitian  sebelumnya,  yaitu DMSO  tidak  melebihi  0,5%  dari  volume darah  sampel. 21,22 Penambahan  DMSO pada  sampel  darah  dapat  menyebabkan hemolisis, 23 sehingga peneliti menambahkan  kelompok  kontrol  DMSO untuk  mengetahui  apakah  pada  penelitian ini ada bias  akibat efek  DMSO  atau tidak. Penelitian  ini  menunjukkan  nilai  rerata retraksi  bekuan  kelompok  DMSO  sangat mirip  dengan  kelompok  kontrol  negatif (43,25% ± 2,270 vs 43% ± 0,00) sehingga dapat  disimpulkan  penambahan  DMSO tidak memengaruhi hasil penelitian.
Penambahan aspirin dapat menghambat  fungsi  trombosit. 22,24 Hal tersebut konsisten dengan rerata kelompok kontrol  positif  yang  menunjukkan  nilai lebih  rendah  dibandingkan  dengan  nilai normalnya yaitu 24,25% ± 1,893.
Kelompok  uji  E,  F,  G  menunjukkan rerata  retraksi  bekuan  lebih  rendah dibanding  kontrol  negatif.  Masing-masing kelompok uji memberikan nilai rerata yang berbeda,  semakin  besar  dosis  ekstrak kunyit,    semakin  besar  daya  hambat pembekuan darahnya sehingga menunjukkan  hasil  retraksi  bekuan  yang semakin rendah.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa penambahan ekstrak etanol rimpang kunyit  menyebabkan  penurunan  nilai retraksi  bekuan.  Hal  tersebut  sejalan dengan  penelitian  lain  yang  menunjukkan bahwa ar-turmerone dalam  kunyit  dapat menghambat  agregasi  trombosit  yang diinduksi oleh kolagen dan asam arakhidonat. 16 Penelitian lain juga menyatakan  pemberian curcumin dapat menghambat adesi platelet. 25
Analisis post  hoc mengenai  perbedaan antara  berbagai  kelompok  perlakuan  dan kelompok kontrol diketahui terdapat perbedaan  bermakna  (P  <0,005)  antara semua  kelompok  terhadap  kontrol  positif, kecuali  kelompok  uji  G.  Hal  tersebut menarik,  karena  nilai  rerata  uji  G  (10  µg ekstrak)  dan  kontrol  positif  (aspirin)  tidak memiliki  perbedaan  bermakna  (28,00  ± 0,816  vs  24,25  ±  1,893),  apakah  hal  ini menunjukkan  bahwa  efektifitasnya  hampir sama? Tentu saja hal ini masih memerlukan penelitian lebih lanjut. Berdasarkan  uji post  hoc diketahui rerata  uji  F  tidak  berbeda  bermakna  baik terhadap Uji E maupun Uji G. Hal tersebut menunjukkan  penambahan  dosis  ekstrak rimpang  kunyit  dari  5  µg  menjadi  10  µg atau  dari  10  µg  menjadi  15  µg  tidak menyebabkan perbedaan rerata yang signifikan. Tetapi hasil bermakna didapatkan  ketika  Uji  E  dibandingkan
dengan uji G (35% ±3,464 vs 28 %±0,816) dengan nilai P 0,001. Hal ini menunjukkan bahwa  peningkatan  dosis  ekstrak  rimpang kunyit dari 5µg menjadi 15µg menyebabkan perbedaan  hambatan  pembekuan  darah yang  signifikan,  semakin  tinggi  dosisnya semakin rendah nilai retraksi bekuannya.
Pemeriksaan Bleeding Time (BT)
Perbedaan  rerata  BT  kelompok perlakuan  menunjukkan  perbedaan  yang bermakna (P=0,00) dapat dilihat pada tabel 6.  Nilai  rerata  BT  paling  memanjang adalah  kelompok  yang  diberikan  aspirin (kontrol  positif),  aspirin  menyebabkan terhambatnya  fungsi  trombosit  sehingga pembekuan  darah  terhambat  dan  akan menunjukkan hasil BT yang memanjang.
Tabel 6 Rerata bleeding time (BT) Variabel n Rerata ± SD (detik) Nilai p Kontrol negatif 5 169 ± 22,1 Kontrol positif 5 789 ± 71,3 Uji K 5 252 ± 32,1 0,000* Uji L 5 451 ± 51,9 Uji M 5 558 ± 21,5 *Berbeda bermakna ( Oneway Annova ) Kontrol positif: aspirin 0,208 mg/20g BB, Uji K: ekstrak kunyit 7 mg/20g BB, Uji L: ekstrak kunyit 14 mg/20g BB, Uji M: ekstrak kunyit 28 mg/20g BB.
Analisis  lebih  lanjut  menunjukkan hampir semua kelompok memiliki perbedaan  bermakna  dengan  nilai  P<0,05, kecuali  kelompok  uji  K  dibandingkan dengan kontrol negatif (P=0,055).
Kelompok  uji  K  adalah  kelompok  dosis ekstrak  kunyit  paling  rendah,  yaitu  7 mg/20  gBB,  rerata  BT  yang  dihasilkan adalah  yang  paling  rendah  dibandingkan dengan  kelompok  uji  L  dan  M.  Hal  ini menunjukkan  pemberian  ekstrak  rimpang kunyit sebanyak 7 mg/20 gBB pada hewan coba  dapat  menyebabkan  pemanjangan nilai  BT  tetapi  bila  dibandingkan  terhadap kontrol  negatif  secara  statistik  tidak
bermakna.
Hasil  kelompok  uji  L  dan  M menunjukkan  rerata BT  yang  berbeda bermakna  baik  dibandingkan  dengan kontrol  negatif  maupun  kontrol  positif (P=0,00).  Semakin  tinggi  dosis  ekstrak kunyit,  semakin  memanjang  nilai  BT.  Hal ini  berkaitan  dengan  kemampuan  zat  aktif didalam  ekstrak  rimpang  kunyit  seperti curcumin dan ar tumeron dalam menghambat proses pembekuan darah. 4,16
Pemeriksaan  BT  merupakan  salah satu pemeriksaan untuk mengetahui kondisi hemostasis primer, 17 adanya pemanjangan  nilai  BT  pada  kelompok  uji
K,  L,  dan  M  menunjukkan  bahwa pemberian  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit dapat memengaruhi hemostasis primer.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  etanol  rimpang kunyit  secara in  vitro pada  sampel  darah manusia  menunjukkan  pengaruh  yang signifikan  terhadap  pemeriksaan  PT  dan retraksi bekuan. Semakin besar dosis, semakin  memanjang  rerata  PT,  dan semakin  rendah  rerata  retraksi  bekuan. Sedangkan pemberian ekstrak etanol rimpang kunyit secara in vivo pada mencit secara  per  oral  menunjukkan  pengaruh yang  signifikan  terhadap  pemeriksaan  BT. Semakin  besar  dosis  yang  diberikan  maka semakin memanjang rerata BT.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulisan  artikel  ini  tidak  terdapat konflik kepentingan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  pihak  yang  telah  membantu penulisan karya ilmiah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Rathore S, Mukim M, Sharma P, Devi S,  Nagar  JC,  Khalid  M.  Curcumin:  A Review  for  Health  Benefits.  Int  J  Res Rev. 2020;7(1):273–90.
2.  Hewlings  SJ,  Kalman  DS.  Curcumin: A  Review  of  Its’  Effects  on  Human
Health. Foods. 2017;6(92):1–11.
3.  Rezvanirad A, Mardani M, Shirhaz H,
Ahmadzadeh SM, Asgary S, Naimi A, et  al.  Curcuma  longa:  A  review  of therapeutic  effects  in  traditional  and modern  medical  references.  J  Chem Pharm Sci. 2016;9(4):3438–48. 4.  Kim DC, Su SK, Bae JS.
Anticoagulant  activities  of  curcumin and  its  derivatives.  BMB  Rep. 2012;45(4):221–6.
5.  Khan  IN,  Habib  MR,  Rahman  MM, Mannan  A,  Islam  SMM,  Sourav  H. Thrombolytic  potential  of  Ocimum sanctum  L.,  Curcuma  longa  L., Azadirachta indica L. and Anacardium occidentale  L.  J  basic  Clin  Pharm. 2011;02(03):125–7.
6.  Keihanian  F,  Saeidinia  A,  Bagheri  R,
Johnston  T,  Sahebkar  A.  Curcumin, hemostasis, thrombosis, and coagulation.  J  Cell  Physiol.  2017;1– 15.
7.  Nelson K, Dahlin J, Bisson J, Graham J,  Pauli  G,  Walters  M.  The  essential medicinal chemistry of curcumin. Vol. 60, J.Med.Chem. 2017. 1620–37 p.
8.  Shan CY, Iskandar P. Studi kandungan kimia dan aktivitas farmakologi tanaman  kunyit  (Curcuma  longa  L). Farmaka. 2018;16(2):547–55.
9.  Sirisidthi  K,  Kosai  P,  Jiraungkoorskul K, Jiraungkoorskul W. Antithrombotic
activity  of  turmeric  (Curcuma  longa): A  review.  Agric  Res  Commun  Cent. 2016;50(2):101–6.
10. Sherwood L. Darah. 8th ed. Fisiologi manusia dari sel ke sistem. Singapura: EGC; 2014. 433–37 p.
11.  Badan  penelitian  dan  pengembangan kesehatan  Kemenkes  RI.  Laporan Nasional Riset Kesehatan Dasar RISKESDAS 2018. Jakarta; 2018.
12. Roslaeni R, Sundari R, Baswedan M. Gambaran  Risiko  Penyakit  Jantung Koroner  Berdasarkan  Rasio  Profil Lipid  pada  Usia  Dewasa  Muda.  Med kartika. 2019;2(2):121–33. 13.  Rad  JS,  Rodrigues  CF,  Sharovop  F, Docea AO, Karaca AC, Rad MS, et al. Diet,  Lifestyle  and  Cardiovascular Diseases:  Linking  Pathophysiology  to Cardioprotective  Effects  of  Natural Bioactive  Compounds.  Int  J  Environ Res  Public  Health.  2020;17(2326):1– 31.
14.  Hoffbrand  A,  Moss  P,  Pettit  J. Essential  Haematology.  2008.  264–77 p.
15.  Bos  MH,  Veer  C  van’t,  Reitsma  PH.
Molecular  biology  and  biochemistry of the coagulation factors and pathways of hemostasis.
In:
Kaushansky  K,  Licthman  MA,  Prchal JT, Levi MM, Press OW, Burns LJ, et al., editors. Williams Hematology. 9th
ed. Mc Graw Hill; 2016. p. 1915–45. 16.  Lee  H.  Antiplatelet  property  of Curcuma longa L. rhizome-derived ar- turmerone.  Bioresour  Technol  97. 2006;07(06):1372–6.
17. Bethel M. Coagulation Procedure. In: Harmening D, editor. Clinical Hematology  and  Fundamentals  of Hemostasis.  5th  ed.  Philadelpia:  FA Davis; 2009. p. 876.
18. WHO. Pedoman Teknik Dasar Untuk Laboratorium  Kesehatan  (Manual  of Basic  Techniques  for  A  Health Laboratory).  2nd  ed.  Mahode  AA, editor. EGC; 2011. 284–7 p.
19.  Smyth  SS,  Whiteheart  S,  Italiano  Jr JE,  Bray  P,  Coller  BS.  Platelet morphology, biochemistry, and function. In: Kaushansky K, Lichtman MA, Prchal JT, Levi MM, Press O w, Burns  LJ,  et  al.,  editors.  Williams Hematology.  9th  ed.  Mc  Graw  Hill;
2016. p. 1829–50. 20.Gandosoebrata R. Penuntun
Laboratorium  Klinik.  16th  ed.  Dian Rakyat; 2010. 54 p.
21.  Shah  BH,  Nawaz  Z,  Pertani  SA,
Roomi  A,  Mahmood  H,  Saeed  SA,  et al.  Inhibitory  effect  of  curcumin,  a spice  from  turmeric,  on  platelet- activating factor and arachidonic acid- mediated  platelet  aggregation  through inhibition  of  thromboxane  formation
and Ca2+ signaling. Biochem
Pharmacol. 1999;58:1167–72.
22.  Jantan  I,  Raweh  S,  Sirat  H,  Jamil  S,
Mohd Yasin Y, Jalil J, et al. Inhibitory effect of compounds from
Zingiberaceae  species  on  human platelet  aggregation.  Phytomedicine 15. 2008;306–9.
23. Yi X, Liu M, Luo Q, Zhuo H, Cao H,
Wang  J,  et  al.  Toxic  effects  of dimethyl  sulfoxide  on  red  blood  cells, platelets, and vascular endothelial cells in  vitro.  FEBS  Open  Bio.  2016;489– 94.
24.  Ceron  LFZ,  Torres  JSS,  Amezquita
CAN.  The  role  of  platelet  and  its interaction  with  aspirin.  Revfacmed.
2016;64(2):351–63.
25.  Zhang  L,  Gu  Z,  Qin-Zheng-hong,
iang  Z.  Effect  of  curcumin  on  the
dhesion of platelets to brain
icrovascular  endothelial  cells  in  vitro. Acta  Pharmacol  Sin.  2008;29(7):800–
7.