## AB BSTR RACT
Dadap ayam (Erythrina variegata) plant used tradisional plant of  anticancer in Indonesia. The leaves of E. variegata used medicinal folk of anticancer, however haven’t reported of bioactive compound. The search of active compound of E. variegata very important to  use of herbal medicine of anticancer. The purpose of this research was assayed an anticancer compound in vitro toward breast cancer cell-lines T47D from E. variegata. The research was extracted of methanol and fractionation from the leaves and seed of E. variegata by using guide-assay in vitro Sulphorhodamine B (SRB) method. Furthermore, by using the anticancer activity to follow separation, the active fraction was separated by combination of column chromatography to yield six active compounds (1-3). The chemical structure of active compounds (1-3) were determined on the basis of spectroscopic evidences and comparison with those previously reported and identified as steroids (1-3) groups. The active compounds (1-3) showed anticancer activity against of breast cancer cell-lines T47D with IC50 of 6.5, 5.3, and 3.2 μ g/ml, respectively. These results strongly suggested that the leaves and stem bark of the E. variegata are promising sources for anticancer agents..
Keeywo ord ds: anticancer, Erythrina variegata, breast cancer cell-lines T47D

## ABSTRAK
Dadap ayam ( Erythrina variegata) secara tradisional dikenal oleh masyarakat lokal  sebagai obat antikanker. Bagian tumbuhan ini yang biasa digunakan sebagai pengobatan adalah daun, tetapi kandungan senyawa  kimia aktif biologisnya belum banyak dilaporkan. Pencarian komponen aktif yang terdapat di dalam tumbuhan E. variegata sangat penting sebagai nilai tambah untuk bahan obat herbal antikanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui senyawa yang beraktivitas  antikanker dari bagian daun dan kulit batang E. variegata secara in vitro terhadap sel kanker payudara T47D. Penelitian dilakukan dengan cara ekstraksi metanol dan fraksionasi dari daun serta kulit batang E. variegata yang dipandu dengan uji antikanker secara in vitro menggunakan metode Sulforhodamin B (SRB). Selanjutnya, fraksi aktif dipisahkan komponen-komponennya dengan kombinasi kolom kromatografi yang dipandu dengan uji antikanker secara in vitro, diperoleh tiga senyawa aktif (1-3). Struktur kimia senyawa aktif (1-3) ditetapkan berdasarkan data spektroskopi dan perbandingan data dari senyawa yang berhubungan dari penelitian sebelumnya, dan diidentifikasikan sebagai turunan steroid (1-3). Senyawa (1-3) memperlihatkan aktivitas antikanker secara in vitro terhadap kanker payudara T47D dengan IC50 masing-masing 6,5; 5,3; dan 3,2 μ g/ml. Daun dan kulit batang E. variegata menunjukkan sumber bahan antikanker payudara.
Kata kkunci: antikanker, Erythrina variegata, sel kanker payudara T47D

## PENDAHULUAN
K anker merupakan penyakit yang disebabkan oleh pertumbuhan jaringan yang tidak normal akibat hilangnya mekanisme kontrol sel dan menjadi penyebab utama kematian di negara berkembang. 1 Data statistik menunjukkan bahwa kematian karena penyakit kanker menduduki tempat kedua setelah penyakit jantung. Kanker payudara merupakan salah satu jenis kanker
KORESPONDENSI: DR. T Tati H Herlina,
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran, Jatinangor 45363, Sumedang, Indonesia E-mail: tatat_04her@yahoo.com

## Senyawa Antikanker dari Dadap Ayam ( Erythrina variegata)

## TATI HERLINA
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran Bandung

## ARTIKEL PENELITIAN
yang paling sering terdiagnosis, terutama untuk wanita, dan merupakan penyebab kematian kedua setelah kanker paru-paru. 2 Saat ini, usaha untuk mencegah penyebaran dari sel kanker ini masih terus dilakukan, di antaranya dengan metode kemoterapi ataupun dengan mengguna- kan obat sintesis. Walaupun pada umumnya terapi antikanker yang ada dirasakan cukup menunjang hasil yang bagus, akan tetapi memiliki efek samping yang sangat berbahaya dan memakan biaya yang cukup mahal. 3 Obat kanker umumnya merupakan obat sintetis dengan harga relatif mahal dan memiliki efek samping yang cukup besar sehingga masyarakat banyak berpaling pada pengobatan tradisional yang sifatnya lebih aman dan ekonomis.Untuk mencegah semakin meningkatnya proliferasi sel kanker maka radikal bebas dalam tubuh dapat dinetralkan oleh senyawa bioaktif yang banyak diperoleh dalam tumbuhan berkhasiat obat.
Tumbuhan obat Indonesia yang telah banyak digunakan oleh masyarakat dalam pengobatan antikanker secara tradisional adalah E. variegata (nama lokal “Dadap ayam”) yang tergolong famili Leguminosae. 4,5 Bagian tumbuhan E. variegata yang digunakan dalam peng- obatan tradisional adalah bagian daun dan kulit batang yang dilaporkan mengandung senyawa alkaloid dan terpenoid serta senyawa golongan isoflavonoid. 6,7 Dalam penelitian berkelanjutan pencarian senyawa  aktif antikanker dari tumbuhan Erythrina Indonesia, peneliti terdahulu telah melaporkan adanya aktivitas antikanker secara in vitro terhadap sel kanker payudara T47D dari ekstrak metanol daun dan kulit batang. 8 Hasil isolasi dari ekstrak metanol daun E. variegata diperoleh senyawa turunan steroid (1) yang menunjukkan adanya aktivitas antikanker terhadap sel payudara T47D. 9 Pada makalah ini dipaparkan isolasi senyawa  aktif antikanker secara in vitro terhadap sel payudara T47D dari kulit batang E. variegata (2,3) menggunakan metode Sulforhodamin B. 10

## METODE PENELITIAN Umum
Penentuan titik leleh dilakukan pada alat Fischer-John Melting point apparatus. Spektrum UV dan IR diukur masing-masing dengan spektrofotometer UV/Vis Shimadzu series 1240 dan FTIR-Shimadzu series 8400. Spektrum 1 H dan 13 C-NMR diukur menggunakan spectra JEOL JNM A-500, yang bekerja pada 500 MHz ( 1 H-NMR) dan 125 MHz ( 13 C-NMR) dengan TMS sebagai standar internal. Kromatografi kolom dilakukan dengan menggunakan silika gel Merck 60 GF 254 dan analisis kromatografi lapis tipis (KLT) pada plat berlapis silika gel Merck 60 GF 254 .

## Bahan Tumbuhan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah
bagian daun dan kulit batang E. variegata yang diperoleh dari hutan lindung di daerah Sumedang, Jawa Barat pada Februari 2007. Bahan ini dideterminasi di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Sekolah Tinggi Ilmu Hayati, Institut Teknologi Bandung.

## Ekstraksi dan Isolasi
Serbuk kulit batang E. variegata (1,5 kg) diekstraksi dengan metanol dengan teknik maserasi, diperoleh ekstrak metanol pekat (44,1 g). Ekstrak metanol pekat selanjutnya antara n-heksana dan metanol, diperoleh fraksi n-heksana dan fraksi metanol. Fraksi metanol yang diperoleh dipartisi antara etil asetat dan air, diperoleh fraksi etil asetat (8,5 g). Selanjutnya, fraksi etil asetat dipisahkan menggunakan kromatografi kolom dengan silika gel G 60 dan eluen n-heksana : etil asetat : metanol bergradien, diperoleh enam fraksi (FA-F). Fraksi FB (40,4 mg) dipisahkan dengan kromatografi kolom oktadesilsilan dan eluen metanol : air (9,5 : 0,5), diperoleh senyawa 2 (18,3 mg). Selanjutnya, fraksi FC (80,8 mg) dipisahkan dengan kromatografi kolom silika gel G 60 dan eluen n-heksana : etil asetat bergradien, diperoleh senyawa  3 (14,5 mg).

## Uji Hayati Antikanker
Metode uji hayati antikanker yang digunakan berdasarkan metode SRB (Sulforhodamin B). Sel yang telah siap uji sebanyak 190 μ mL ditambah dengan sampel uji sebanyak 10 μ mL, kemudian diinkubasi selama 3-4 hari pada suhu 37 o C. Setelah itu, sel difiksasi dengan TCA 50%. Pewarnaan menggunakan SRB 0,4% dalam asam asetat 1% selama 30 menit. Warna SRB yang tidak terikat dibilas dengan asam asetat 1%, sedangkan yang terikat diekstraksi dengan basa tris (pH 10). Intensitas warna yang dihasilkan diukur dengan menggunakan ELISA plate reader pada panjang gelombang 515 nm. Sedangkan IC 50 dihitung dengan cara analisis regresi nonlinear antara persen survival dan konsentrasi. 10

## HASIL PENELITIAN
Ekstrak metanol daun dan kulit batang E. variegata dipartisi antara n-heksana dan etil asetat, menghasilkan fraksi n-heksana dan etil asetat. Uji aktivitas antikanker secara in vitro dari ekstrak metanol daun dan kulit batang E. variegata terhadap sel kanker payudara T47D  sebagai kontrol positif digunakan cisplatin. Fraksi etil asetat daun dan kulit batang menunjukkan aktivitas yang signifikan. Untuk mengetahui senyawa  aktif yang berperan dalam aktivitas antikanker, selanjutnya fraksi etil asetat daun dan kulit batang yang aktif dipisahkan menggunakan kombinasi kromatografi kolom pada silika gel 60, menghasilkan satu senyawa aktif (1) dari daun dan dua senyawa aktif (2,3) dari kulit batang E. variegata yang
Senyawa Antikanker dari Dadap Ayam (Erythrina variegata).  1 15 51 1 √√ 1 15 54 4
menunjukkan aktivitas antikanker secara in vitro terhadap sel kanker payudara T47D (Tabel 1). Senyawa  3 menunjukkan aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa 1, 2, dan standar cisplatin.
Senyawa  1 merupakan turunan steroid yang diidentifikasi sebagai senyawa  aktif β -sitosterol yang sebelumnya telah dilaporkan. 9 Senyawa 2 yang diperoleh berupa padatan putih dan mempunyai titik leleh 153- 155 o C. Senyawa 3 yang diperoleh berupa padatan amorf tidak berwarna dengan titik leleh 175-178 o C. Senyawa 2 dan  3 memberikan hasil yang positif dengan pereaksi Liebermann-Burchad yang menunjukkan golongan steroid. 11

## PEMBAHASAN
Ekstraksi metanol dari bagian daun dan kulit batang E. variegata bertujuan untuk mengekstrak semua komponen yang terdapat di dalam bagian tumbuhan tersebut. Uji pendahuluan antikanker secara in vitro terhadap sel kanker payudara T47D dari ekstrak metanol daun dan kulit batang untuk mengetahui khasiat farmakologi. 8 Hal ini bertujuan untuk membenarkan pemakaian tumbuhan E. variegata yang selama ini sudah digunakan oleh masyarakat sebagai pengobatan tradisional. 4,5 Senyawa  2 menunjukkan rumus molekul C 28 H 48 O berdasarkan data 1 H-dan 13 C-NMR. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa aktif mempunyai lima ekivalensi ikatan rangkap. Spektrum inframerah menunjukkan adanya serapan yang kuat pada bilangan gelombang n maks 3386 cm- 1 dari regangan ulur gugus O-H, diikuti dengan se- rapan pada bilangan gelombang n maks 1037 cm- 1 yang merupakan regang C-O untuk alkohol. Spektrum 13 C-NMR DEPT 135 o dalam CDCl 3 , 125 MHz menunjukkan bahwa isolat tersebut memiliki dua puluh delapan karbon yang terdiri atas tujuh (CH 3 ), sebelas (CH 2 ), empat (CH), dan enam (Cq). Spektrum 1 H-NMR dalam CDCl 3 , 500 MHz menunjukkan adanya empat puluh delapan hidrogen yang terdiri atas lima signal singlet dari gugus metil tersier pada geseran kimia δ H 0,88 (3H-18); 0,82 (3H-19); 0,86 (3H-26); 0,98 (3H-27); 0,85 (3H-28) ppm; dan hidrogen yang terikat pada karbon yang mengikat atom  oksigen pada δ H 4,64 ppm (OH-15) dan hidrogen pada δ H 3,12 ppm (H-15); hidrogen pada δ H 4,56 dan 4,69 ppm (2H-21) menunjukkan adanya hidrogen yang terikat pada
karbon sp 2 . Sedangkan hidrogen yang lainnya merupakan hidrogen yang terikat pada karbon sp 3 . Spektrum 1 H- 1 H COSY menunjukkan adanya korelasi pada H-2 ( δ H 0,95) berkorelasi dengan H-3 ( δ H 1,28); proton pada H-15 ( δ H 3,12) berkorelasi dengan H-16 ( δ H 1,68); proton pada H- 22 ( δ H 1,76) berkorelasi dengan H-23 ( δ H 1,41); dan proton pada H-23 ( δ H 1,41) berkorelasi dengan H-24 ( δ H 1,08). Spektrum HMBC menunjukkan adanya korelasi antara H-16 ( δ H 1,68) dengan C-20 ( δ H 152,0); proton pada H-14 ( δ H 0,76) berkorelasi dengan C-15 ( δ H 79,8). Berdasarkan data spektra di atas dan data spektra yang telah diperoleh pada penelitian sebelumnya 12,13 serta pendekatan biogenetik tentang keberadaan senyawa golongan steroid, struktur isolat murni ditetapkan sebagai 5,8,9,10,13,22-heksametil-20-en-kolan-15-ol yang merupakan turunan senyawa steroid yang baru ditemukan pada marga Erythrina.
Senyawa  aktif  3 menunjukkan rumus molekul C 28 H 44 O 3 berdasarkan data 1 H-dan 13 C-NMR. Spektrum infra merah menunjukkan adanya serapan untuk gugus fungsi alkohol yang ditunjukkan oleh serapan dengan intensitas sedang pada bilangan gelombang ν maks 3521,8 cm- 1 yang merupakan regang ulur untuk gugus O-H pada alkohol dan serapan berupa pita lebar pada bilangan gelombang ν maks 3317,3 cm- 1 yang menunjukkan serapan untuk ikatan hidrogen intermolekular pada gugus O-H. Spektrum 13 C-NMR yang menunjukkan adanya sinyal untuk karbon sp 2 metin, yaitu δ C 135,6 (C-22); 135,4 (C-6); 132,5 (C-23); dan 130,9 (C-7) ppm. Spektrum 1 H-NMR me- nunjukkan terdapatnya empat puluh empat proton, terdiri atas empat sinyal proton sp 2 yang diemban oleh atom karbon sp 2 . Di antaranya terdapat dua sinyal doblet, yaitu pada daerah geseran kimia δ H 6,50 (d; J = 8,5 Hz; 1H-6) dan 6,25 (d; J = 7,9 Hz; 1H-7) ppm yang menunjukkan ikatan rangkap pada sistem siklik. Sinyal dobel doblet pada daerah geseran kimia 5,19 (dd; J = 16,5 Hz; 2H; H- 22; H-23) ppm menunjukkan ikatan rangkap dengan sistem konfigurasi trans pada rantai alifatik. Di antaranya dua sinyal singlet untuk karbon metil, yaitu pada δ H 0,83 (H-18) dan 0,88 (H-19) ppm. Keempat sinyal metil lainnya yaitu pada δ H 0.81 (t, H-28); 0,91 (d; 6,7 Hz; H-26); 1.00 (d; 6,1 Hz; H-27); dan 1,22 (d; 9,8 Hz; H-21) ppm. Senyawa 6 diidentifikasi sebagai (22E)-5 α , 8 α -epidioksiergosta-6,22- dien-3 β -ol. 14
Senyawa  1-3 yang diperoleh merupakan turunan steroid. Hubungan struktur molekuler dan aktivitas antikanker dari senyawa 1-3 menunjukkan bahwa senyawa 3 dengan nilai IC50 lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa  1 dan  2. Hal ini menunjukkan bahwa adanya gugus diokso pada senyawa 3 dapat meningkatkan aktivitas antikanker terhadap sel kanker payudara T47D. Bagian daun dan kulit batang E. variegata menunjukkan sumber bahan antikanker payudara yang dapat digunakan
TATI HERLINA.  151 √ 154
Sampel
IC 5 50 0 (±g/mL) Senyawa 1 6,5 Senyawa 2 5,3 Senyawa 3 3,2 Cisplatin 3,3
Tabel 1 1: IIC 5 50 0 isolat ((1-3) tterhadap ssel kkanker p payudara T T47D
sebagai pengobatan alternatif kanker payudara dari bahan alam.

## KESIMPULAN
Bagian daun dan kulit batang E. variegata menunjuk- kan aktivitas antikanker payudara terhadap sel kanker payudara T47D secara in vitro. Hal ini menunjukkan bahwa daun dan kulit batang E. variegata berpotensi sebagai bahan dasar obat herbal antikanker payudara.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi atas dana yang diberikan melalui Hibah Penelitian Fundamental dan Indonesian Managing Higher Education Relevance and Efficiency Project (I-MHERE) Tahun Anggaran 2009. Terima kasih kepada staf peneliti Laboratorium Kimia Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Bandung, atas kesempatan yang diberikan untuk melakukan uji antikanker. v

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Hill RP, Tannock IF. Cancer as a Cellular Disease. The Basic  Science of Oncology. New York: Mc-Graw-Hill Inc; 1992.
2.   Wingo PA. Cancer incidence and mortality, 1973-1999: a report card for the US. Cancer 1998; 82:1197-1207.
3.  Siswandono, Soekardjo B. Kimia Medisinal. Surabaya: University Airlangga Press; 1995.
4.   Heyne K. Tumbuhan Berguna Indonesia, terjemahan Badan Litbang Kehutanan, Jilid II. Cetakan kesatu. Badan Penelitian dan Pengembangan Kehutanan, Departemen Kesehatan; 1987.
5.   Hanum F, Maesen LJG. Plant Resources of South-East Asia.
PROSEA. Bogor, Indonesia; 1997.
6.   Herlina T, Muis A, Supratman U, dkk. Senyawa Bioaktif  dari Erythrina variegata (Leguminosae).  Berkala Ilmiah MIPA 2005; 15:21-26.
7.  Herlina T, Nasrudin, Supratman U, Subarnas A, Sutardjo S, Hayashi H. An isoflavonoid, warangalone from the stem bark of dadap ayam ( Erythrina variegata). Journal of Basic Sciences 2008; 9:45-47.
8.  Herlina T, Nurlelasari, Supratman U. Aktivitas Antikanker Dari Tumbuhan Dadap Ayam ( Erythrina  variegata). Prosiding dari Seminar Nasional Ikatan Alumni Ahli Ilmu Faal Indonesia; Bandung; 26 – 28 Juli 2007.
9. Herlina T, Nurlelasari, Maharani R, Supratman U, Zalinar, U, Subarnas A,  Sutardjo S, Hayashi H. Potency of the leaves of Erythrina variegata (Leguminosae) as an anticancer. Prosiding dari the sixth Princess Chulabhorn International Sciences Congress: The Interface of Chemistry and Biology in The “Omics” Era: Environment & Health and Drug Discovery; Bangkok, Thailand; November 25 – 29. 2007.h. 125.
10. Skehan PR, Storeng D, Scudiero A, Monks J, McMahon D, Vistica JT, Warren H, Boskesch S, Kenney, Boyd MR.. Journal Natural Product 1990; 82:13.
11.  Fransworth NR. Biological and Phytochemical Screening of Plant. J. of Pharm. Sci. 1966; 55:3.
12. Viviane SP, Takeda ATC, Gosmann G, Schenkel EP. Saponins and Sapogenins from Brachiaria decumbens Stapf. J. Braz. Chem. Soc. 2002; 13:135-139.
13. Nahar L, Sarker SD, Turner AB.. Synthesis and spectroscopic data analyses of 5?-cholane derivatives. Acta Pharm 2006; 56:369-374.
14. Ponce AM, Ramirez JA, Galagovsky LR, Gross EG, Ella-Balsells R.. A new look into the reaction between ergosterol and singlet oxygen in vitro. Photochem. Photobiol. Sci. 2002; 1:749-756.
Senyawa Antikanker dari Dadap Ayam (Erythrina variegata).  1 15 51 1 √√ 1 15 54 4