## ISSN: 0215-7950
*Alamat penulis korespondensi: Departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Jalan Kamper, Kampus Darmaga IPB, Bogor 16680. Tel: 0251-8629354, Faks: 0251-8629362; Surel: giyanto@apps.ipb.ac.id
Volume 17, Nomor 5, September 2021 Halaman 183–194 DOI: 10.14692/jfi.17.5. 183–194
Asap Cair Sebagai Pemacu Pertumbuhan dan Ketahanan Tanaman Pisang terhadap Ralstonia syzygii subsp . celebesensis
Wood Vinegar as Plant Growth and Defense Inducer of Banana Plants against Ralstonia syzygii subsp. celebesensis
Muhammad Evan Nurrahmawan 1 , Giyanto 1 * , Abdjad Asih Nawangsih 1 , Erina Sulistiani 2 1 Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680 2 Southeast Asian Regional Centre for Tropical Biology, Bogor 16141

## ABSTRAK
Bibit pisang hasil kultur jaringan diketahui rentan terhadap cekaman pada awal pertumbuhan di lapangan. Pra-pengondisian bibit menggunakan agens priming dilaporkan meningkatkan pertumbuhan dan ketahanan tanaman. Asap cair tempurung kelapa dilaporkan mampu memacu pertumbuhan dan menginduksi ketahanan tanaman. Penelitian ini bertujuan mendapatkan informasi pengaruh asap cair asal tempurung kelapa terhadap pertumbuhan dan aktivitas enzim ketahanan pada plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran serta penekanan R. syzygii subsp . celebesensis secara in vitro . Tahapan penelitian mencakup uji fitotoksisitas asap cair, analisis pertumbuhan plantlet , analisis aktivitas enzim peroksidase dan polifenol oksidase, isolasi R . syzygii subsp. celebesensis , dan uji toksisitas asap cair terhadap R . syzygii subsp. celebesensis secara in vitro . Hasil penelitian menunjukkan perlakuan asap cair pada konsentrasi ≥ 1.5% bersifat fitotoksik dengan gejala meliputi klorosis, nekrosis, terbentuk lendir dan kematian plantlet . Perlakuan asap cair pada konsentrasi ≤ 1% tidak bersifat fitotoksik, bahkan peningkatan pertumbuhan plantlet optimum ditunjukkan pada perlakuan asap cair 0.1%. Perlakuan asap cair menyebabkan peningkatan aktivitas enzim ketahanan pada 2, 4 dan 6 hari setelah tanam (HST), tetapi menurun pada 30 HST. Selain itu, asap cair bersifat antibakteri melalui terbentuknya zona hambat dan menyebabkan penurunan nilai kerapatan sel R. syzygii subsp. celebesensis . Penelitian ini menunjukkan potensi teknik priming untuk pengendalian penyakit darah pisang terutama pada bibit pisang hasil kultur jaringan.
Kata kunci: asam pyroligneous , penyakit darah pisang, peroksidase, polifenol oksidase, priming

## ABSTRACT
Banana seedlings derived from tissue culture are known to be susceptible to stress at early growing stage  in  the  field.  Pre-conditioning  of  seedlings  using  priming  agents,  such  as  coconut  shell  wood vinegar was reported to enhance plant growth and resistance. This study aimed to obtain information on the effect of coconut shell wood vinegar on growth and defense-related enzymes activity of Cavendish banana plantlet in the root induction phase and suppression of R. syzygii subsp. celebesensis in vitro. Research was conducted involving evaluation of wood vinegar phytotoxicity, analysis of plantlet growth, analysis of peroxidase and polyphenol oxidase activities, isolation of R. syzygii subsp. celebesensis , and toxicity assay of wood vinegar against R. syzygii subsp. celebesensis in vitro. Application of wood vinegar  at 1.5% concentraion was phytotoxic, indicated by symptom development including chlorosis, necrosis, mucus secretion and plantlet death. Lower concentration of wood vinegar, i.e. ≤ 1.0% was

## PENDAHULUAN
Pisang Cavendish ( Musa acuminata Colla) dilaporkan rentan terhadap penyakit darah yang disebabkan oleh bakteri Ralstonia syzygii subsp. celebesensis (Safni et al. 2014). Insidensi penyakit darah dilaporkan mencapai 100% di Nanggroe Aceh Darussalam (Sahetapy et al. 2015)  dan  kehilangan  hasil  mencapai  64% pada tahun 1997 di Lampung (Cahyaniati et al. 1997). Pengelolaan penyakit darah yang telah dilakukan meliputi penggunaan varietas tahan dan bibit bebas patogen (Supriadi 2005), sanitasi peralatan (Safni et al. 2018), pemangkasan bunga jantan (Hermanto et al. 2013), pemusnahan tanaman terinfeksi secara in situ , pembungkusan tandan buah, panen buah dengan memotong batang semu (Drenth et al. 2020), apikasi bakteri Bacillus sp. (Abidin 2018), aplikasi bakteri EAL15 dan EK22 (Marwan et al. 2020), dan aplikasi asap cair (Aisyah et al. 2018b). Bibit pisang hasil kultur jaringan banyak digunakan oleh perkebunan komersil karena karakternya seragam dan bebas patogen (Bednarek dan Orlowska 2019). Akan tetapi, bibit ini memiliki kekurangan yakni (1) ketahanan bibit terhadap cekaman di lapangan rendah, (2) keragaman genetik bibit rendah, (3) penggunaan bahan kimia sintetik berlebihan selama produksi, dan (4) eliminasi mikrob menguntungkan pada bibit akibat perlakuan aseptik. Ketahanan bibit hasil kultur jaringan pada awal pertumbuhan di lapangan sangat menentukan keberhasilan budi daya pisang komersil. Salah satu solusi menjanjikan ialah priming ketahanan tanaman. Priming ialah pengondisian sel atau organisme agar lebih cepat dan kuat dalam mengaktifkan respons ketahanan terhadap
cekaman yang akan datang (Conrath 2009). Priming dapat diinduksi oleh agens kimia ( β-aminobutyric  acid , asam salisilat, asam pipekolik, dan asam jasmonat), patogen (bakteri, cendawan, virus), mikrob menguntungkan, dan serangga herbivora (Hilker et al. 2016). Kelebihan priming ialah meningkatkan efisiensi  dalam  proteksi  tanaman  sekaligus meningkatkan pertumbuhan dan produksi tanaman (van Hulten et al. 2006). Salah satu agens priming yang berpotensi digunakan ialah asap cair tempurung kelapa. Asap cair (AC) adalah produk samping dari pirolisis biomassa tumbuhan yang telah melalui kondensasi (Cheng et al. 2021). Aisyah et al. (2018b) melaporkan aplikasi AC tempurung kelapa  0.5%  dapat  memacu  pertumbuhan, meningkatkan aktivitas enzim ketahanan, dan menekan insidensi penyakit darah pada bibit pisang kepok. Aplikasi AC tempurung kelapa juga dilaporkan menekan infeksi penyakit bercak daun Cercospora sp. pada padi gogo (Ahadiyat et al. 2020). Penelitian dilakukan untuk mempelajari pengaruh perlakuan AC tempurung kelapa terhadap pertumbuhan dan aktivitas enzim ketahanan pada plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran serta penekanan terhadap R. syzygii subsp . celebesensis secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Penyediaan Plantlet Pisang Plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran berasal dari Laboratorium Kultur Jaringan, Southeast Asian Regional Centre of Tropical Biology (SEAMEO BIOTROP), Bogor. Plantlet dipilih berdasarkan morfologi yang seragam yakni memiliki tiga daun, telah
not phytotoxic; even the treatment of wood vinegar at 0.1% caused an optimum increase in plantlet growth. Application of wood vinegar also increased the activity of defense-related enzymes at 2, 4, and 6 days after planting (DAP) but decreased at 30 DAP. Furthermore, wood vinegar showed antibacterial properties through the formation of inhibition zones and it caused decreased in the value of R. syzygii subsp. celebesensis cell densities. This study shows the potential of priming techniques for controlling banana blood disease, especially for banana seedlings propagated through tissue culture.
Keywords: banana blood disease, peroxidase, polyphenol oxidase, priming, pyroligneous acid
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Nurrahmawan et al.
melalui fase multiplikasi, tidak terkontaminasi dan tidak mengalami browning .
Penyediaan Asap Cair Asap cair yang digunakan berbahan dasar tempurung kelapa diproduksi oleh Koperasi Wana Dewi Sri, Cianjur (no. reg. TDI:503/6531/05:23/TGI/BPPTPM/2013). Spesifikasi  asap  cairnya  ialah Grade 3 yang merupakan hasil pirolisis pada suhu 300 ℃.
Uji Fitotoksisitas Asap Cair Pengujian bertujuan menentukan kisaran konsentrasi  AC  nonfitotoksik.  Uji  disusun dalam rancangan acak lengkap (RAL) dengan tiga ulangan dan unit percobaan terdiri atas lima plantlet setiap perlakuan. Terdapat 11 perlakuan konsentrasi AC yang diuji dengan cara menambahkan larutan AC (v/v) ke dalam medium induksi perakaran (IP): 0.0%; 0.5%; 1.0%; 1.5%; 2.0%; 2.5%; 3.0%; 3.5%; 4.0%; 4.5%; dan 5.0%. Medium IP terdiri atas medium MS (Murashige dan Skoog 1962) tanpa zat pengatur tumbuh, setengah hara makro, dan 2 g L -1 arang aktif (Sulistiani dan Yani 2012). Medium IP tanpa perlakuan AC digunakan sebagai kontrol.
Tahap selanjutnya, plantlet diinkubasi pada suhu 25 ℃, diberi perlakuan penyinaran terang:gelap 18:6 jam selama 30 hari. Pengamatan dilakukan pada 30 HST, meliputi waktu muncul gejala fitotoksik, jumlah plantlet yang  mengalami  fitotoksik,  pertambahan tinggi plantlet (cm), dan panjang akar (cm). Gejala  fitotoksik  ditandai  dengan  klorosis dan nekrosis. Plantlet fitotoksik  dihitung berdasarkan Sriamornsak et al . (2014), yaitu: Planlet fitotoksik (%) = A B × 100%, d engan A, jumlah plantlet bergejala  fitotoksik  pada perlakuan yang sama; dan B, total jumlah plantlet yang digunakan pada perlakuan yang sama.

## Pengaruh Asap Cair terhadap Pertumbuhan
Plantlet Uji  ini  disusun  dalam  RAL  dengan tiga ulangan dan unit percobaan terdiri atas
lima plantlet setiap perlakuan. Konsentrasi AC nonfitotoksik yang digunakan ialah 0.0%; 0.1%; 0.3%; 0.5%; 0.7%; 0.9%; dan 1.0% (v/v) dalam medium IP. Plantlet diinkubasi pada suhu  25  ℃  dengan  penyinaran  terang:gelap 18:6 jam selama 30 hari. Medium IP tanpa perlakuan AC digunakan sebagai kontrol. Peubah yang diamati yakni pertambahan tinggi plantlet (cm), panjang akar (cm), jumlah daun, jumlah akar, bobot basah total (g) dan bobot kering total (g). Seluruh peubah diamati pada 30 HST.

## Pengaruh Asap Cair terhadap Aktivitas
Enzim Ketahanan Plantlet yang telah diberi perlakuan AC  nonfitotoksik  digunakan  dalam  analisis aktivitas enzim. Analisis ini disusun dalam RAL dengan tiga ulangan. Aktivitas enzim yang diamati yakni peroksidase (POD) dan polifenol oksidase (PPO). Analisis dilakukan pada 2, 4, 6, dan 30 HST. Sampel uji ialah daun komposit dari seluruh plantlet pada setiap perlakuan.
Ekstraksi dan analisis enzim dilakukan berdasarkan metode Zheng dan van Huystee (1992) dan Cho dan Ahn (1999). Sebanyak 0.25 g sampel komposit dihomogenkan dengan 1.5 mL potassium  phosphate  buffer (PPB) 100 mM pH 6.5. Selanjutnya suspensi disentrifugasi pada 10 000 rpm selama 20 menit pada suhu 4 ℃. Supernatan dijadikan ekstrak kasar untuk analisis aktivitas enzim. Aktivitas POD dilakukan dengan mencampur 1 mL ekstrak enzim ke dalam 1.7 mL PPB (100 mM, pH 6.5); 0.1 mL H 2 O 2 (0.3%);  dan  0.1  mL guaiacol (0.2%). Campuran reaksi diukur nilai absorbansi pada 470 nm setiap 20 detik selama 2 menit. Analisis aktivitas PPO dilakukan dengan mencampur 1 mL ekstrak enzim ke dalam 0.9 mL PPB (100 mM, pH 6.5) dan 1 mL catechol (50 mM). Campuran reaksi diukur nilai absorbansi pada 420 nm setiap 5 detik selama 1 menit. Nilai absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer ( Spectronic 20D+ ). Sampel blanko terdiri atas campuran reaksi yang sama tanpa penambahan ekstrak kasar enzim.
Isolasi R. syzygii subsp. celebesensis Bakteri R. syzygii subsp. celebesensis diisolasi dari buah pisang ambon bergejala penyakit darah yakni garis berwarna merah kecokelatan pada bagian mesokarp (Gambar 1). Buah diperoleh dari tempat pengepul pisang di Ciawi, Bogor (6°41’00.5”S 106°52’21.8”E). Permukaan kulit buah disterilkan permukaannya, kemudian daging buah disuspensikan dalam larutan dH 2 O steril. Suspensi di- encerkan berseri, disebarkan pada medium 2,3,5-triphenyl  tetrazolium  chloride (TZC), dan diinkubasi selama 3–4 hari pada suhu ruang. Koloni yang tumbuh diseleksi sesuai karakteristik R. syzygii subsp. celebesensis pada medium TZC (Drenth et al. 2020) dan disimpan sebagai galur murni. Deteksi molekuler galur murni meng- gunakan metode polymerase chain reaction (PCR). Ekstraksi DNA total bakteri mengikuti metode Ahmed dan Dablool (2017). Amplifikasi DNA dan program PCR mengikuti metode Aisyah et al. (2018a) menggunakan primer spesifik 121F (5’-CGT ATT GGA TGC CGT AAT GGA-3’) dan 121R (5’-AAG TTC ATT GGT GCC GAA TCA-3’) berukuran 317 pb (Hadiwiyono 2011). Amplikon DNA bakteri dielektroforesis dalam gel agarosa 1%  pada  tegangan  100  V  selama  50  menit. Pita DNA dalam gel yang telah ditambahkan pewarna Fluorovue (SMOBIO) divisualisasi menggunakan Transluminator UV.
Uji Toksisitas Asap Cair terhadap R. syzygii subsp . celebesensis secara in vitro Pengujian dilakukan melalui metode difusi cakram dan pengukuran nilai kerapatan sel bakteri berdasarkan Cappuccino dan Sherman (2014). Pengujian disusun menggunakan RAL dengan tiga ulangan. Galur bakteri R . syzygii subsp. celebesensis sebanyak 100 µL dengan kerapatan 10 8 cfu mL -1 disebar pada medium agar Mueller-Hinton. Selanjutnya, setiap cakram kertas saring (diameter 6 mm) di- rendam dalam larutan AC nonfitotoksik (v/v) selama 30 detik kemudian diletakkan di atas medium. Kultur diinkubasi selama 48 jam pada suhu ruang hingga muncul zona hambat. Cakram kertas saring yang hanya ditambahkan dH 2 O steril digunakan sebagai kontrol. Kerapatan sel bakteri diukur menggunakan spektrofotometer. Galur bakteri R . syzygii subsp. celebesensis sebanyak satu koloni dimasukkan ke dalam tabung reaksi secara terpisah berisi 3 mL medium Luria Broth yang telah ditambahkan perlakuan AC nonfitotoksik (v/v). Kultur diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang. Setelah itu, kerapatan sel diukur nilai absorbansi pada panjang gelombang A600 nm. Tabung hanya berisi medium Luria Broth digunakan sebagai kontrol.
Analisis Data Seluruh data dianalisis menggunakan uji analisis varian (ANOVA) satu arah. Perlakuan yang berpengaruh secara nyata dianalisis lanjut dengan uji Tukey pada taraf 5%.

## HASIL
Fitotoksisitas Asap Cair Asap  cair  dengan  konsentrasi  ≥  1.5% menimbulkan gejala fitotoksik  pada plantlet , juga menghambat pertambahan tinggi plantlet dan panjang akar (Tabel 1). Gejala klorosis muncul pada 9 hingga 12 HST, kemudian menjadi nekrosis, dan akhirnya plantlet mati berwarna cokelat-kehitaman disertai lendir pada 30 HST (Gambar 2). Sebaliknya, perlakuan  AC  ≤  1.0%  tidak  menimbulkan
Gambar 1  Penampang melintang buah pisang ambon yang terinfeksi R. syzygii subsp . celebesensis penyebab penyakit darah dengan gejala berupa garis berwarna merah kecokelatan pada bagian mesokarp (panah merah).
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Nurrahmawan et al.
Tabel 1  Rerata waktu muncul gejala fitotoksik, plantlet fitotoksik, pertambahan tinggi plantlet , dan panjang akar pada plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran setelah diberi perlakuan asap cair Asap cair (%) Muncul gejala fitotoksik (HST) Plantlet fitotoksik (%) Pertambahan tinggi plantlet (cm) Panjang akar (cm) 0.0 - 0.0 ± 0.00 d 0.66 ± 0.10 ab 7.45 ± 1.05   a 0.5 - 0.0 ± 0.00 d 1.02 ± 0.44 a 6.59 ± 0.92   a 1.0 - 0.0 ± 0.00 d 0.49 ± 0.09 bc 3.77 ± 1.51   b 1.5 12.0 ± 0.40 a 33.3 ± 11.55 cd 0.24 ± 0.093 c 0.36 ± 0.15   c 2.0 11.4 ± 0.20 ab 53.3 ± 30.60 bc 0.22 ± 0.097 c 0.29 ± 0.08   c 2.5 10.7 ± 0.12 bc 73.3 ± 11.55 abc 0.16 ± 0.03 c 0.15 ± 0.03   c 3.0 10.5 ± 0.31 cd 73.3 ± 23.10 abc 0.16 ± 0.02 c 0.10 ± 0.03   c 3.5 10.0 ± 0.12 cde 80.0 ± 20.00 ab 0.13 ± 0.006 c 0.07 ± 0.01   c 4.0 9.8 ± 0.40 def 86.7 ± 11.55 ab 0.14 ± 0.05 c 0.05 ± 0.11   c 4.5 9.3 ± 0.12 ef 93.3 ± 11.55 ab 0.13 ± 0.02 c 0.02 ± 0.004 c 5.0 9.0 ± 0.40 f 100.0 ±   0.00 a 0.14 ± 0.03 c 0.01 ± 0.004 c
Nilai adalah rataan dari tiga ulangan diikuti standar deviasi. Angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5% menurut uji lanjut Tukey.
gejala  fitotoksik  hingga  akhir  pengamatan (Tabel  1).  Oleh  karena  itu,  AC  ≤  1.0% digunakan untuk uji lanjutan.
Asap Cair pada Pertumbuhan Plantlet Perlakuan  AC  0.1%  meningkatkan  per- tambahan tinggi plantlet sebesar  249% (Tabel 2). Perlakuan AC tidak menyebabkan perbedaan terhadap panjang akar, jumlah daun, dan jumlah akar. Sementara itu, hasil pengamatan bobot basah total dan bobot kering total menunjukkan peningkatan berbeda  nyata  pada  perlakuan AC  0.1%  dan 0.3%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semakin tinggi konsentrasi AC yang digunakan, semakin rendah tingkat pertumbuhan plantlet
pisang Cavendish pada fase induksi perakaran (Gambar 3).
Pengaruh Asap Cair terhadap Aktivitas Enzim Ketahanan Seluruh perlakuan AC menunjukkan peningkatan aktivitas POD dan PPO, kecuali perlakuan  AC  1.0%  yang  menunjukkan penurunan pada 30 HST. Aktivitas POD dan PPO meningkat seiring dengan bertambahnya konsentrasi AC dan hari setelah tanam hingga mencapai puncak aktivitas enzim kemudian menurun.  Perlakuan AC  0.1%  dan AC  0.3% meningkatkan aktivitas POD dari 2 HST hingga 6 HST, kemudian menurun pada 30 HST (Tabel 3). Sebaliknya, aktivitas PPO pada perlakuan AC 0.1% dan 0.3% mengalami peningkatan dari 2 HST hingga 4 HST kemudian menurun pada 6 HST hingga 30 HST (Tabel 4).
Karakteristik R. syzygii subsp. celebesensis Morfologi galur bakteri pada medium TZC memiliki karakteristik isolat R . syzygii subsp. celebesensis yaitu Gram negatif, koloni berbentuk bulat, berwarna putih susu dengan lingkaran merah-gelap di tengah, berdiameter 0.5–2 mm, tepian rata, elevasi cembung, permukaan licin, dan cenderung lengket pada
Gambar  2    Gejala  fitotoksik  pada plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran setelah perlakuan asap cair. a, Daun mengalami klorosis; b, Nekrosis; dan c, Seluruh jaringan plantlet mati berwarna cokelat-kehitaman disertai lendir.
a
b c
Gambar 3  Pengamatan plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran pada 30 hari setelah perlakuan berbagai konsentrasi asap cair. Skala batang = 2.5 cm. 0%             0.1%                0.3%              0.5%        0.7%     0.9%      1.0% Tabel 2  Respons pertumbuhan plantlet pisang Cavendish pada berbagai konsentrasi asap cair pada pengamatan 30 HST Asap cair (%) Pertambahan tinggi plantlet (cm) Panjang akar (cm) Jumlah daun Jumlah akar Bobot basah total (g) Bobot kering total (g) 0.0 0.43 ± 0.04 d 7.08 ± 0.43 ab 7.30 ± 0.48 ab 7.45 ± 0.75 ab 0.88 ± 0.04 bcd 0.036 ± 0.005 bc 0.1 1.49 ± 0.12 a 8.74 ± 1.80 a 9.39 ± 1.28 a 9.79 ± 2.52 a 1.37 ± 0.09 a 0.061 ± 0.010 a 0.3 0.95 ± 0.11 b 6.60 ± 1.72 ab 8.97 ± 1.72 a 9.31 ± 3.36 a 1.27 ± 0.03 a 0.057 ± 0.001 a 0.5 0.86 ± 0.19 bcd 6.04 ± 0.91 ab 8.36 ± 0.59 a 8.28 ± 0.26 ab 1.10 ± 0.06 abc 0.049 ± 0.005 ab 0.7 0.88 ± 0.24 bcd 5.32 ± 1.28 ab 7.86 ± 0.84 ab 7.87 ± 0.80 ab 0.88 ± 0.21 cd 0.042 ± 0.003 abc 0.9 0.85 ± 0.08 bcd 5.09 ± 1.59 ab 7.69 ± 0.89 ab 6.10 ± 1.94 ab 0.63 ± 0.27 d 0.031 ± 0.010 bc 1.0 0.45 ± 0.21 cd 3.77 ± 1.51 b 5.60 ± 0.15 b 3.79 ± 0.98 b 0.63 ± 0.06 d 0.028 ± 0.006 c Nilai adalah rataan dari tiga ulangan diikuti standar deviasi. Angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5% menurut uji lanjut
Tukey.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Nurrahmawan et al.
Tabel 3  Peningkatan aktivitas peroksidase (POD) pada plantlet pisang Cavedish pada berbagai konsentrasi asap cair Asap cair (%) Peningkatan aktivitas peroksidase (%) 2 HST 4 HST 6 HST 30 HST 0.1 11.14 e 14.79 d 15.29 d 10.10 de 0.3 15.96 de 17.66 cd 18.24 cd 13.46 cd 0.5 17.77 cd 19.46 cd 22.06 bc 20.43 c 0.7 21.08 bc 21.86 bc 24.71 abc 34.38 b 0.9 24.40 ab 25.75 ab 27.65 ab 57.40 a 1.0 28.01 a 28.14 a 28.82 a -13.70 f
Aktivitas adalah peningkatan terhadap kontrol. Angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5% menurut uji lanjut Tukey.
Tabel 4  Peningkatan aktivitas polifenol oksidase (PPO) pada plantlet pisang Cavendish pada berbagai konsentrasi asap cair
Perlakuan (%) Peningkatan aktivitas polifenol oksidase (%) 2 HST 4 HST 6 HST 30 HST 0.1 48.00 a 61.54 b 49.06c 33.80 d 0.3 56.00 a 57.69 b 54.72c 45.07 cd 0.5 60.00 a 69.23 b 73.58bc 69.01 bc 0.7 60.00 a 84.62 ab 115.09ab 97.18 ab 0.9 72.00 a 92.31 ab 139.62a 111.27 a 1.0 76.00 a 134.62 a 156.60a -28.17 e
Aktivitas adalah peningkatan terhadap kontrol. Angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5% menurut uji lanjut Tukey.
Gambar 4  Karakteristik R. syzygii subsp . celebesensis pada medium TZC. A, biakan murni; b, koloni murni; dan c, hasil pewarnaan termasuk Gram negatif.
b a c
medium (Gambar 4). Visualisasi amplikon DNA galur bakteri menggunakan primer spesifik  121F/121R  berhasil  menunjukkan pita DNA berukuran 317 pb (Gambar 5).
Toksisitas Asap Cair terhadap R. syzygii subsp . celebesensis in vitro Perlakuan AC menunjukkan penghambatan pertumbuhan R . syzygii subsp. celebesensis secara in vitro . Zona hambat mulai terbentuk pada  perlakuan  AC  0.1%  (Gambar  6)  dan
terus meningkat seiring dengan tingginya konsentrasi perlakuan AC (Tabel 5). Perlakuan AC 0.1% juga menunjukkan penurunan nilai kerapatan sel R . syzygii subsp. celebesensis tidak berbeda nyata dan terus menurun seiring dengan tingginya konsentrasi perlakuan AC (Tabel 5).

## PEMBAHASAN
Penyakit darah adalah penyakit endemik yang sulit dikendalikan karena patogen bersifat  endofit  dan  saprofit  fakultatif  serta mampu menginfeksi hampir seluruh varietas pisang lokal di Indonesia (Supriadi 2005). Pengelolaan penyakit darah yang sesuai untuk diterapkan adalah melalui pengondisian secara fisiologis  bibit  atau plantlet melalui priming sebelum penanaman di lapangan. Dalam penelitian ini, perlakuan AC ≤ 1.0% tidak bersifat fitotoksik sedangkan AC ≥ 1.5% bersifat  fitotoksik  dan  menghambat  per- tumbuhan plantlet . Hasil ini sejalan dengan
Tabel 5  Rerata diameter zona hambat dan nilai kerapatan sel Ralstonia syzygii subsp. celebesensis pada berbagai konsentrasi asap cair
Asap cair (%) Rerata diameter zona hambat (mm) Nilai kerapatan sel (OD 600 nm) 0.0 0.00 e ± 0.00 0.668 a ± 0.002 0.1 8.10 d ± 0.05 0.629 b ± 0.001 0.3 8.93 c ± 0.02 0.572 c ± 0.002 0.5 9.30 bc ± 0.04 0.431 d ± 0.001 0.7 9.63 abc ± 0.01 0.429 d ± 0.003 0.9 9.93 ab ± 0.02 0.402 e ± 0.002 1.0 10.30 a ± 0.02 0.197 f ± 0.001
Nilai adalah rataan dari tiga ulangan diikuti standar deviasi. Angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf signifikansi 5% menurut uji lanjut Tukey.
M 1 2 3 4 5 6 500 pb 300 pb
100 pb
Gambar 5  Visualisasi fragmen DNA galur bakteri  hasil  amplifikasi  dengan  primer spesifik  121F/121R  pada  gel  agarosa  1% dengan buffer TAE 1X. (M) ExcelBand TM 100 bp DNA Ladder (SMOBIO); (1-6) amplikon DNA galur bakteri.
Aisyah et al. (2018b) yang melaporkan bahwa aplikasi AC tempurung kelapa 0.5% pada bibit pisang  Kepok  tidak  bersifat  fitotoksik  dan meningkatkan pertumbuhan sedangkan AC
>  2.0%  bersifat  fitotoksik  dan  menghambat pertumbuhan.
Munculnya  gejala  fitotoksik  dipengaruhi oleh senyawa asam dan fenol yang terkandung di dalam AC. Senyawa asam dilaporkan mengganggu integritas membran plasma, proses produksi energi seperti fosforilasi oksidatif dan respirasi (Valletta et al . 2016), dan menurunkan fungsi selektivitas membran dalam pengangkutan nutrisi (de Tunes et al. 2012). Senyawa fenol seperti 2-methoxy phenol , 4-ethyl-2-methoxy phenol , dan 4-propyl-2-methoxy  phenol dilaporkan mengakibatkan cekaman oksidatif pada membran  sel,  tilakoid,  dan  struktur  klorofil sehingga terjadi klorosis dan nekrosis (Lu et al. 2019).
Gejala  fitotoksik  juga  berkaitan  dengan terhambatnya pertumbuhan tanaman (Luo et al. 2019). de Souza Silva et al. (2020) melaporkan penurunan perkecambahan dan pertumbuhan awal tanaman lamtoro ( Leucaena leucocephala ) ketika diberi perlakuan AC dalam konsentrasi tinggi. Selain itu, senyawa fenol hydroxyquinone dilaporkan menghambat pertumbuhan tanaman leafy spurge ( Euphorbia esula ) (Kamran et al. 2017). Perlakuan AC 0.1% menunjukkan pengaruh optimum dalam memacu pertumbuhan plantlet . Hasil yang sama dilaporkan oleh Aisyah et al. (2018b) yaitu  aplikasi AC tempurung kelapa 0.5% meningkatkan pertumbuhan bibit pisang kepok. Senyawa butanolide moiety , karrikin , dan etanol dalam AC dilaporkan menstimulus germinasi benih dan pertumbuhan bibit (Mungkunkamchao et al. 2013). Mekanisme AC dalam memacu pertumbuhan tanaman terjadi melalui asidifikasi interseluler (Lashari et al. 2013), peningkatan ketersediaan hara N (Sharma et al. 2016), peningkatan kemampuan penyerapan nutrisi, aktivitas metabolisme, respirasi, absorbsi ion, kesetimbangan hormon, dan sintesis protein (Gulzar et al. 2016; Latif et al. 2017).
Perlakuan  AC  0.1%  menunjukkan peningkatan aktivitas POD dan PPO hingga 30 HST. Studi sebelumnya melaporkan aktivitas enzim ketahanan seperti POD, PPO, kitinase, beta-1,3 glukanase, superoksidase
Gambar 6  Penghambatan pertumbuhan R. syzygii subsp. celebesensis oleh AC tempurung kelapa. a, kontrol tanpa penambahan AC; b, perlakuan AC  0.5%;  c,  perlakuan AC  1.0%. Panah merah: zona hambat.
a
b c
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Nurrahmawan et al.
dismutase, guaiacol , dan katalase mengalami peningkatan setelah diberi perlakuan AC pada konsentrasi tertentu (Chen et al. 2020; Wang et al. 2019). Peningkatan aktivitas enzim ketahanan oleh agens penginduksi yang terjadi sebelum serangan patogen adalah bentuk pengondisian tanaman agar mampu mengaktifkan sistem ketahanan lebih cepat ketika terserang oleh patogen di masa mendatang (Martinez-Medina et al. 2016). Peningkatan aktivitas enzim ketahanan tersebut dapat bersifat permanen atau terpelihara dalam waktu yang lama, dan dapat diturunkan pada generasi berikutnya melalui mekanisme metilasi DNA, modifikasi histon, dan perubahan bentuk kromatin (Baccelli dan Mauch-Mani 2016). Hasil penelitian ini memperkuat penelitian lain yang melaporkan penggunaan agens priming yakni senyawa β -Aminobutyric  acid (BABA) pada Arabidopsis menyebabkan induksi ketahanan sementara melalui peningkatan enzim ketahanan peroksidase dan polifenol oksidase, akumulasi asam aspartat, induksi asam trikarboksilik, asam salisilat dan glukosida asam salisilat bebas, konjugat asam jasmonat, derivat indolik, xantosin, dan transkripsi gen RBOHD dan GSH1 (Luna et al . 2014; Pastor et al . 2014). Terbentuknya zona hambat dan penurunan nilai kerapatan sel R . syzygii subsp. celebesensis mengindikasikan bahwa AC tempurung kelapa memiliki sifat antibakteri. Sebelumnya Aisyah et al. (2018a) melaporkan bahwa senyawa asam dan fenol yang terkandung di dalam AC menghambat pertumbuhan isolat R . syzygii subsp. celebesensis . Senyawa asam seperti asam benzelsulfonik dan asam asetat me- nurunkan pH lingkungan sel dan menghambat pertumbuhan sel bakteri secara langsung melalui pengikatan molekul ion H + pada lapisan fosfolipid membran sel yang meng- ganggu interaksi van der Waals antara rantai lipid asil, mengakibatkan disintegrasi membran dan gangguan kesetimbangan ion sehingga sel bakteri mengalami lisis dan kematian (Pernin et al . 2019; Synowiec et al . 2021). Selain itu, senyawa fenol seperti 4-methoxy-phenol , 2-methyl-1,4-benzenediol , dan hydroxyquinone
juga dilaporkan mengganggu integritas membran sel bakteri melalui cekaman oksidatif yang disebabkan oleh pelepasan reactive oxygen species dan ion K+ dari membran sel bakteri, destabilisasi membran sel, dan kebocoran kandungan sitoplasma (Jeyanthi et al . 2021).
Disimpulkan  bahwa  AC  ≥  1.5%  bersifat fitotoksik  pada plantlet pisang Cavendish pada fase induksi perakaran. Perlakuan AC 0.1%  meningkatkan  pertumbuhan  optimum pada pertambahan tinggi plantlet , bobot basah total, bobot kering total, dan mampu menginduksi ketahanan melalui peningkatan aktivitas enzim POD dan PPO. Selain itu, AC menekan pertumbuhan bakteri R. syzygii subsp. celebesensis secara in vitro . Hasil penelitian ini menunjukkan potensi teknik priming untuk pengendalian penyakit darah pisang terutama pada bibit pisang hasil kultur jaringan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin  A.  2018.  Bakteri  endofit  penghasil AHL-laktonase asal tanaman pisang untuk pengendalian penyakit darah [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Ahadiyat YR, Rostaman R, Fauzi A. 2020.
Pengaruh aplikasi asap cair tempurung kelapa dan pupuk NPK terhadap hama dan penyakit pada padi Gogo. J Penelit Pertan Tanam Pangan. 4(3):153–160. DOI: https://doi.org/10.21082/jpptp.v4n3.2020.
p153-160.
Ahmed OB, Dablool AS. 2017. Quality improvement of the DNA extracted by boiling method in Gram negative bacteria. Int. J. Bioassays 6(4):5349. DOI: https:// doi.org/10.21746/ijbio.2017.04.004.
Aisyah I, Giyanto, Sinaga MS, Nawangsih AA, Pari G. 2018a. Uji in vitro asap cair terhadap Ralstonia syzygii subsp. celebesensis penyebab penyakit darah pada pisang. J Fitopatol Indones. 14(4):145–151. DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.14.4.145.
Aisyah I, Sinaga MS, Nawangsih AA, Giyanto, Pari G. 2018b. Utilization of liquid smoke to suppress blood diseases on bananas and its effects on the plant growth. Agrivita J
Agric Sci. 40(3):453–460. DOI: https:// doi.org/10.17503/agrivita.v40i3.1390. Baccelli I, Mauch-Mani B. 2016. Beta- aminobutyric acid priming of plant defense: the role of ABA and other hormones. Plant Mol. Biol. 91(6):703–711. DOI: https:// doi.org/10.1007/S11103-015-0406-Y.
Bednarek PT, Orłowska R. 2019. Plant tissue culture environment as a switch-key of (epi)genetic changes. Plant Cell Tissue Organ Cult. 140(2):245–257. DOI: https:// doi.org/10.1007/S11240-019-01724-1.
Cahyaniati C, Mortensen N, Marthur S. 1997.
Bacterial  Wilt  of  Banana  in  Indonesia . Jakarta (ID): Departemen Pertanian Indonesia.
Cappuccino JG, Sherman N. 2014. Microbiology:  A  Laboratory  Manual . Ed  ke-10.  New  York  (USA):  Pearson Education, Inc.
Chen  YH,  Li  YF,  Wei  H,  Li  XX,  Zheng HT,  Dong  XY,  Xu  TF,  Meng  JF.  2020. Inhibition  efficiency  of  wood  vinegar  on grey mould of table grapes. Food Biosci. 38:1–8. DOI: https://doi.org/10.1016/j. fbio.2020.100755.
Cheng  J,  Hu  SC,  Kang  K,  Li  XM,  Geng ZC,  Zhu  MQ.  2021.  The  effects  of pyrolysis temperature and storage time on the compositions and properties of the pyroligneous acids generated from cotton stalk based on a polygeneration process. Ind Crops Prod. 161:1–11. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.indcrop.2020.113226. Cho  YK,  Ahn  HK.  1999.  Purification  and characterization of polyphenol oxidase from potato: I. purification and properties. J Food Biochem. 23(6):577–592. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1745-4514.1999.tb00587.x.
Conrath  U.  2009.  Priming  of  induced  plant defense responses. Adv Bot Res. 513:61– 395. DOI: https://doi.org/10.1016/S0065- 2296(09)51009-9.
de Souza Silva SI, Pimenta AS, de Oliveira Miranda N, Lourenço YBC, de Souza EC. 2020. Wood vinegar inhibits emergence and initial growth of Leucaena ( Leucaena leucocephala /Lam./ de Wit) seedlings. Agric Conspec Sci. 85(2):153–158.
de Tunes LM, Avelar SAG, Barros ACSA, Pedroso DC, Muniz MFB, de Menezes NL. 2012. Critical levels of organic acids on seed germination and seedling growth of wheat. Rev Bras Sementes. 34(3):366– 372. DOI: https://doi.org/10.1590/S0101- 31222012000300002.
Drenth A, Ray J, Subandiyah S. 2020.
Reversing  The  Impact  of  Banana  Blood Disease  in  Indonesia .  Brisbane  (AU): APBSF Project Final Report PBSF016. Gulzar A, Siddiqui M, Bi S. 2016. Phenolic acid allelochemicals induced morphological, ultrastructural, and cytological modification  on Cassia sophera L. and Allium cepa L. Protoplasma. 253:1211– 1221. DOI: https://doi.org/10.1007/ s00709-015-0862-x.
Hadiwiyono. 2011. Blood bacterial wilt disease of banana: the distribution of pathogen in infected plant, symptoms, and potentiality of diseased tissues as source of infective inoculums. Nusant Biosci. 3(3):112–117. DOI: https://doi.org/10.13057/nusbiosci/ n030307.
Hermanto C, Eliza E, Emilda D. 2013. Bunch management of banana to control blood disease. Australas Plant Pathol. 42(6):653– 658. DOI: https://doi.org/10.1007/s13313- 013-0248-5.
Hilker M, Schwachtje J, Baier M, Balazadeh S, Bäurle I, Geiselhardt S, Hincha DK, Kunze R, Mueller-Roeber B, Rillig MC, et al .. 2016. Priming and memory of stress responses in organisms lacking a nervous system. Biological Reviews. 91(4):1118– 1133. DOI: https://doi.org/10.1111/ brv.12215.
Jeyanthi V, Velusamy P, Kumar GV, Kiruba K.  2021.  Effect  of  naturally  isolated hydroquinone in disturbing the cell membrane integrity of Pseudomonas aeruginosa MTCC 741 dan Staphylococcus auerus MTCC 740. Heliyon. 7(5):1– 7. DOI: https://doi.org/10.1016/j. heliyon.2021.e07021.
Kamran M, Khan AL, Ali L, Hussain J, Waqas M, Al-Harrasi A, Imran QM, Kim YH, Kang SM, Yun BW, et al. . 2017. Hydroquinone:
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Nurrahmawan et al.
A novel bioactive compound from plant- derived smoke can cue seed germination of lettuce. Front Chem. 5:30. DOI: https:// doi.org/10.3389/fchem.2017.00030. Lashari MS, Liu Y, Li L, Pan W, Fu J, Pan G, Zheng J, Zheng J, Zhang X, Yu X. 2013. Effects  of  amendment  of  biochar-manure compost in conjunction with pyroligneous solution on soil quality and wheat yield of a salt-stressed cropland from Central China Great Plain. Field Crops Res. 144:113– 118. DOI: https://doi.org/10.1016/j. fcr.2012.11.015.
Latif S, Chiapusio G, Weston L. 2017.
Allelopathy and the role of allelochemicals in plant defence. Adv Bot Res. 82:19– 54. DOI: https://doi.org/10.1016/ bs.abr.2016.12.001.
Lu  X,  Jiang  J,  He  J,  Sun  K,  Sun  Y.  2019. Effect  of  pyrolysis  temperature  on  the characteristics of wood vinegar derived from Chinese fir waste: A comprehensive study on its growth regulation performance and mechanism. ACS Omega. 4(21):19054–19062. DOI: https://doi. org/10.1021/acsomega.9b02240.
Luna E, Bruce TJA, Roberts MR, Flors V, Ton J. 2012. Next-generation systemic acquired resistance. Plant Physiol. 158(2):844– 853. DOI: https://doi.org/10.1104/ pp.111.187468.
Luo  X,  Wang  Z,  Meki  K,  Wang  X,  Liu  B, Zheng H, You X, Li F. 2019. Effect of co- application of wood vinegar and biochar on seed germination and seedling growth. J Soils Sediments. 19(12):3934–3944. DOI: https://doi.org/10.1007/s11368-019- 02365-9.
Martinez-Medina A, Flors V, Heil M, Mauch- Mani B, Pieterse CMJ, Pozo MJ, Ton J, van Dam NM, Conrath U. 2016. Recognizing plant defense priming. Trends Plant Sci. 21(10):818–822. DOI: https://doi. org/10.1016/j.tplants.2016.07.009. Marwan H, Rainiyati R, Mulyati S. 2020. Pengaruh aplikasi bakteri endofit terhadap perkembangan penyakit darah ( Ralstonia solanacearum Phylotipe IV) pada tanaman pisang. J Budid Pertan. 16(1):95–
101. DOI: https://doi.org/10.30598/ jbdp.2020.16.1.95.
Mungkunkamchao T, Kesmala T, Pimratch S, Toomsan B, Jothityangkoon D. 2013. Wood vinegar and fermented bioextracts: Natural products to enhance growth and yield of tomato ( Solanum lycopersicum L.). Sci Hortic. 154:66–72. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.scienta.2013.02.020.
Murashige T, Skoog F. 1962. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant. 15(3):473–497. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1399-3054.1962.tb08052.x. Pastor V, Balmer A, Gamir J, Flors V,
Mauch-Mani  B.  2014.  Preparing  to  fight back: generation and storage of priming compounds. Front. Plant Sci. 5(295):1– 13. DOI: https://doi.org/10.3389/ FPLS.2014.00295.
Pernin A, Guillier L, Dubois-Brissonnet F. 2019. Inhibitory activity of phenolic acids against Listeria monocytogenes : deciphering the mechanisms of action using three  different  models.  Food  Microbiol. 80:18–24. DOI: https://doi.org/10.1016/j. fm.2018.12.010.
Safni I, Cleenwerck I, De Vos P, Fegan M, Sly L, Kappler U. 2014. Polyphasic taxonomic revision of the Ralstonia solanacearum species complex: proposal to emend the descriptions of Ralstonia solanacearum and Ralstonia syzygii and reclassify current R. syzygii strains as Ralstonia syzygii subsp. syzygii subsp. nov., R. solanacearum phylotype IV strains as Ralstonia syzygii subsp. indonesiensis subsp. nov., banana blood disease bacterium strains as Ralstonia syzygii subsp. celebesensis subsp. nov. and R. solanacearum phylotype I and III strains as Ralstonia pseudosolanacearum sp. nov. Int J Syst Evol Microbiol. 64(9):3087–3103. DOI: https://doi.org/10.1099/ijs.0.066712-0.
Safni I, Subandiyah S, Fegan M. 2018. Ecology, epidemiology and disease management of Ralstonia syzygii in Indonesia. Front Microbiol. 9:419. DOI: https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.00419.
Sahetapy B, Maryana N, Manuwoto Sjafrida, Mutaqin KH. 2015. Peranan beberapa jenis serangga sebagai vektor penyakit darah pada tanaman pisang [disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Sharma T, Dreyer I, Kochian L, Piñeros MA.
2016. The ALMT family of organic acid transporters in plants and their involvement in  detoxification  and  nutrient  security. Front Plant Sci. 7:1488. DOI: https://doi. org/10.3389/fpls.2016.01488.
Sriamornsak P, Limmatvapirat S, Piriyaprasart
S.  2014.  Effect  of Azadirachta  indica A. Juss var indica , Nicotiana tabacum L., and Derris elliptica (Roxb.) on growth of duckweed. Adv Mat Res. 1060:211- 214. DOI: https://doi.org/10.4028/www. scientific.net/AMR.1060.211.
Sulistiani E, Yani SA. 2012. Produksi Plantlet Tanaman  dengan  Menggunakan  Teknik Kultur Jaringan . Bogor (ID): SEAMEO BIOTROP.
Supriadi. 2005. Present status of blood disease in Indonesia. Di dalam: Allen C, Prior P, Hayward A, editor . Bacterial Wilt Disease and  the Ralstonia solanacearum Species Complex . Minnesota (US): APS Press. hlm 394–404. Synowiec A, Żyła K, Gniewosz M, Klieliszek M. 2021. An effect of positional isomerism
of benzoic acid derivatives on antibacterial activity against Escherichia coli . Open Life Sci. 16:594–601. DOI: https://doi. org/10.1515/biol-2021-0060.
van Hulten M, Pelser M, Van Loon LC, Pieterse CMJ,  Ton  J.  2006.  Costs  and  benefits of priming for defense in Arabidopsis. Proceedings  of  the  National  Academy  of Sciences of the United States of America . 103(14):5602–5607. DOI: https://doi. org/10.1073/pnas.0510213103.
Valletta A, De Angelis G, Badiali C, Brasili E, Miccheli A, Di Cocco ME, Pasqua G. 2016. Acetic acid acts as an elicitor exerting a chitosan-like effect on xanthone biosynthesis in Hypericum perforatum L. root cultures. Plant Cell Rep. 35(5):1009– 1020. DOI: https://doi.org/10.1007/ s00299-016-1934-x.
Wang Y, Qiu L, Song Q, Wang S, Wang Y, Ge Y. 2019. Root proteomics reveals the effects  ofwood  vinegar  on  wheat  growth and subsequent tolerance to drought stress. Int J Mol Sci. 20(4):1–23. DOI: https://doi. org/10.3390/ijms20040943.
Zheng X, van Huystee RB. 1992. Peroxidase- regulated elongation of segments from peanut hypocotyls. Plant Sci. 81(1):47– 56. DOI: https://doi.org/10.1016/0168- 9452(92)90023-F.