Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan
Bioremediasi Logam Timbal (Pb) Menggunakan Bakteri Indigenous Pada Tanah Tercemar Air Lindi ( Leachate )

## Bioremediation of Lead using Indigenous Bacteria Isolated from Leachete Contaminated Soil
Bambang Rahadi 1* , Liliya Dewi Susanawati 1 , Rinda Agustianingrum 2
1 Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya Jl. Veteran, Malang 65145 2 Program Studi Teknik Lingkungan, Jurusan Keteknikan Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya Jl. Veteran, Malang 65145
*Email korespondensi : b.rahadi@gmail.com

## ABSTRAK
Meningkatnya  jumlah  penduduk  serta  pesatnya  arus  urbanisasi  merupakan  faktor  yang mempengaruhi  besarnya  volume  sampah  perkotaan.  Pengelolaan  sampah  perkotaan  yang kurang  terencana  akan  menimbulkan  permasalahan  lain  yaitu  pencemaran  tanah  oleh  logam berat seperti logam berat timbal (Pb). Salah satu pilihan untuk mengatasi masalah kontaminasi Pb  adalah  bioremediasi  menggunakan  mikroba.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  memperoleh dan mengidentifikasi secara morfologis bakteri indigenous dari tanah tercemar air lindi (leachate) yang  berpotensi  dapat  mereduksi  logam  berat  Pb.  Sampel  tanah  berasal  dari  tanah  timbunan sampah  di  TPA  Supit  Urang  Malang.  Penelitian  merupakan  penelitian  experimental.  Metode pengambilan  tanah  menggunakan  komposit  sampel  dan  isolasi  bakteri  menggunakan  teknik streak plate . Tahapan penelitian meliputi kultivasi bakteri, uji morfologi, dan uji reduksi logam. Tahap screening uji  reduksi  logam  dilakukan  pada  konsentrasi  10,  30,  dan  50  ppm  untuk memperoleh  bakteri  resisten  logam.  Uji  tingkat  kepadatan  juga  dilakukan  dengan menggunakan metode turbidimetri. Hasil penelitian didapat 10 isolat murni bakteri, dan semua bakteri memiliki resistensi terhadap Pb. Tiga isolat yang memiliki kemampuan menurunkan Pb yaitu isolat 4, 5, dan 6. Ketiga isolat tersebut memiliki persentase penurunan Pb sebesar 35.3%, 69.1%, dan 60.8%. Hasil identifikasi  morfologi dan uji biokimia pada tiga isolat  menunjukkan bahwa bakteri tersebut merupakan genus Bacillus.
Kata kunci : bakteri bioremoval Pb, bacillus, Tempat Pembuangan Akhir Supit Urang

## ABSTRACT
The increasing population and the rapid urbanization flows are factors affecting the magnitude of urban waste volume. Management of urban waste that is less planned will cause soil pollution by heavy metals like lead (Pb). One of the options to solve the Pb contamination is the bioremediation using microbes. This research was conducted to morphologically identify the indigenous bacteria from polluted soils (leachate) that  could  potentially  reduce  Pb.  Soil  samples  taken  from  Supit  Urang  landfill.  Research  is  an experimental study. The soil retrieval method uses sample composites. Bacterial isolation using a streak plate  technique.  The  stages  of  research  include  bacterial  cultivation,  morphological  test,  and  metal reduction test. The screening phase of metal reduction test is conducted at concentrations of 10, 30, and 50  ppm to  obtain  metal  resistant  bacteria.  Density  tests  are  performed  using  the  turbidimetry  method. The results of the study gained 10 isolates of pure bacteria, and all bacteria had resistance to Pb. Three isolates  that  have  the  ability  to  lower  Pb  are  4,  5,  and  6  isolates.  The  three  isolates  had  a  percentage decrease of Pb of 35.3%, 69.1%, and 60.8%. Three isolates of the bacterium was a genus of Bacillus.
Keyword : bacteria bioremoval of Pb, bacillus,  Supit Urang landfill
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan

## PENDAHULUAN
Meningkatnya  jumlah  penduduk  serta pesatnya arus urbanisasi merupakan faktor yang  mempengaruhi  besarnya  volume sampah perkotaan. Salah satu kota dengan timbulan  sampah  yang  terus  meningkat yaitu  Kota  Malang  tepatnya  di  TPA  Supit Urang.  Produksi  sampah  di  Kota  Malang terus meningkat
setiap
tahunnya. Berdasarkan  data  yang  dihimpun  dari Pemerintah  Kota  Malang dalam Anam (2011), produksi sampah Kota Malang pada tahun  2007  sebanyak  17,204,000  kg.hari -1 , tahun  2008  sebanyak  25,963,600  kg.hari -1 , tahun  2009  sebanyak  32,566,000  kg.hari -1 , dan  tahun  2010  sebanyak  45,000,000 kg.hari -1 .  Dengan  semakin  banyaknya sampah  yang  ditimbulkan,  semakin  rentan pula  terjadi  pengelolaan  sampah  yang kurang  terencana.  Pengelolaan  sampah yang kurang terencana ini akan menimbulkan  permasalahan  lain,  yaitu pencemaran tanah akibat logam berat. Pencemaran  tanah  akibat  logam  berat yang  berasal  dari  sampah  terjadi  karena adanya leachate atau  lindi yang  dihasilkan dari proses dekomposisi  sampah. Lindi itu sendiri  adalah  cairan  dari  sampah  yang mengandung
unsur
terlarut dan tersuspensi  (Ali,  2011).  Lindi  dari  sampah perkotaan  mengandung  berbagai  macam logam  berat,  salah  satunya  adalah  timbal (Pb). Pencemaran logam berat yang berasal dari  rembesan  air  lindi  perlu  diolah  untuk mengurangi  konsentrasi  pencemarnya. Salah  satu  pilihan  yang  bisa  dilakukan untuk  mengatasi  masalah  kontaminasi logam Pb
adalah
bioremediasi menggunakan  mikroba  (Suhendrayatna, 2001). Menurut Priadie (2012), bioremediasi merupakan  penggunaan  mikroorganisme yang  telah  dipilih  untuk  ditumbuhkan pada polutan tertentu sebagai upaya untuk menurunkan  kadar  polutan  tersebut. Mikroorganisme  yang  mampu  melakukan remediasi logam berat di antaranya adalah bakteri  ( Bacillus  sp,  Pseudomonas  sp ,  dan Escherichia coli) ; kapang ( Penicillium chrysogenum,
Rhizopus stolonifer dan Aspergillus oryzae)
dan khamir, Saccharomyces  cerevisae) (Suhendrayatna, 2001).  Menurut  Feliatra  (1996) dalam Dharmawibawa (2004), metode biologi atau
biodegradasi
oleh
mikroorganisme
merupakan  salah  satu  cara  yang  tepat, efektif  dan  hampir  tidak  ada  pengaruh sampingnya pada lingkungan karena tidak menghasilkan racun atau blooming . Penggunaan  mikroba indigenous untuk menurunkan  atau  mereduksi  logam  Pb perlu  diuji  sebagai  alternatif  untuk pemulihan  tanah  ataupun  air  tercemar. Penelitian ini dilakukan untuk memperoleh dan  mengidentifikasi  secara  morfologis bakteri indigenous dari  tanah  tercemar  air lindi (leachate) yang  berpotensi  dapat mereduksi  logam  berat  Pb.  Penelitian  ini diharapkan dapat digunakan untuk mengetahui
kemampuan mikroba
indigenous yang berasal dari tanah tercemar air lindi dalam penurunan logam berat Pb.
Hasil penelitian
juga dapat mengungkapkan efektifitas mikroba dalam mendegradasi logam berat Pb.

## BAHAN DAN METODE

## Lokasi Pengambilan Sampel Tanah
Sampel  tanah  yang  tercemar  air  lindi (leachate) diambil di TPA Supit Urang Kota Malang.  Lokasi  pengambilan  sampel dilakukan  di  sel  aktif  dan  sel  pasif  (Sel  IV dan  Sel  V)  TPA  Supit  Urang.  Metode pengambilan  sampel  tanah  ini  dilakukan secara  komposit  untuk  mendapatkan gambaran  umum  ( unbiased  estimation ) sebagai  atribut  mikroba  disuatu  areal  atau petak relatif homogen.

## Kultivasi/Isolasi Bakteri
Larutan NaCl (85%) 1 ml diencerkan dalam 100 ml akuades. Sampel diencerkan dengan NaCl  fisiologis  menggunakan  vortex  di dalam tabung reaksi. Sampel tanah diambil sebanyak  1  gram  dan  dilarutkan  dalam larutan  garfis  9  ml.  Selanjutnya  membuat pengenceran  berseri  hingga  10 -6 pada tabung  lain  yang  telah  berisi  9  ml  garfis dengan mengambil 1 ml pada pengenceran sebelumnya.    Kemudian  memindahkan    1 ml biakan dari tabung pengencer ke media Nutrient  Agar  yang  telah  disiapkan  dan kemudian  diratakan  dengan  memutar membentuk  angka  8  hingga  10  kali. Diinkubasi  pada  suhu  37  ºC  selama  1  x  24 jam.  Setelah  terlihat  ada  pertumbuhan bakteri,  dilihat  bentuk  koloni  bakteri  yang
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan berbeda  dan  diambil  single  koloni secepatnya  dan  goreskan  atau  pindahkan ke media NA baru. Setelah terlihat tumbuh kembali, lanjutkan pemurnian isolat hingga benar-benar  murni.  Isolat  yang  mampu tumbuh  pada  media  NA  ditumbuhkan kembali  pada  media  NA  yang  telah diperkaya  Pb(NO 3 ) 2 5  ppm.  Isolat diperbanyak dalam media agar miring dan cawan petri untuk uji morfologi. Teknik  isolasi  bakteri  yang  baik  dan benar  dapat  menentukan  bakteri  yang cocok  dalam  proses  remediasi  yang diinginkan.  Oleh  karena  itu  prinsip pemilihan  bakteri  hasil  isolasi  dapat memberikan  kinerja  penurunan  kadar polutan  yang  optimal  (Thompson et  al, 2005). Pada umumnya jumlah bakteri yang diinginkan lebih sedikit dari jumlah bakteri yang  tidak  diinginkan,  maka  diperlukan proses isolasi untuk memperbanyak bakteri yang  dimaksud  (Barrow  and  Feltham, 2003).

## Identifikasi Morfologi
Identifikasi  morfologi  dilakukan  secara makroskopik dan mikroskopik. Identifikasi morfologi  makroskopik  merupakan  proses identifikasi  yang  bisa  dilakukan  secara langsung  sedangkan  identifikasi  morfologi mikroskopik memerlukan mikroskop. Identifikasi ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan  dari  masing-masing  isolat  yang ditemukan  serta  juga  dapat  digunakan sebagai  dasar  untuk  proses  identifikasi genus  maupun  spesies  bakteri  dengan  uji lanjut (uji biokimia maupun uji molekuler). Sebelum  proses  identifikasi  morfologi dilakukan,  10  isolat  yang  diperoleh dipindahkan  ke  media  cair nutrient  broth ( NB) untuk proses selanjutnya. Pengamatan  makroskopik  dilakukan secara  langsung  menggunakan  metode Benson. Karakteristik makroskopik diketahui  dengan  cara  mengidentifikasi morfologi  koloni  bakteri  seperti  bentuk, bentuk  tepian,  warna,  elevasi,  dan  sifat koloni  apabila  diamati  dibawah  cahaya (mengkilap  atau  suram).  Karakteristik mikroskopik diketahui dengan cara mengidentifikasi  bentuk  bakteri  yang ditemukan serta pewarnaan gram. Pengamatan  hasil  pewarnaan  dilakukan pada  perbesaran  1000x  menggunakan
mikroskop  dengan  ditetesi  terlebih  dahulu dengan emersi
untuk memperjelas pengamatan.  Pada  isolat  bakteri  terpilih (Isolat resisten) atau bakteri yang  memiliki daya  reduksi  logam  lebih  baik  juga dilakukan  pengujian  mikroskopik  meliputi pewarnaan  endospora,  uji  motilitas, pernafasan  bakteri  dan  uji  biokimia.  Uji mikroskopik  tambahan  dan  uji  biokimia (uji  katalase  dan  uji  oksidase)  dilakukan untuk  mengetahui  genus  bakteri  yang mampu mereduksi logam.

## Uji Reduksi Bakteri
Isolat murni yang diperoleh,
diinokulasikan  pada  7  ml  media  cair Nutrient  Broth  (NB)  yang  telah  diperkaya Pb(NO 3 ) 2 pada  konsentrasi  10,  30,  dan  50 ppm. Isolat murni kemudian diinkubasi ke dalam incubator  shaker selama  24  jam  pada suhu  37  ºC  dengan  kecepatan  120  rpm. Proses screening menggunakan  metode turbidimetri  untuk  mengetahui  ketahanan bakteri  terhadap  logam.  Kemudian  untuk mengetahui  kepadatan  bakteri  dilakukan pengukuran  nilai Optical  Density (OD) dengan  panjang  gelombang  600  nm menggunakan spectrophotometer .  Setelah diketahui  beberapa  isolat  yang  bertahan terhadap  logam  berat  berdasarkan  tingkat kepadatannya, diambil isolat yang memiliki kepadatan tertinggi untuk dilanjutkan ke tahap uji reduksi.
Uji  reduksi  dilakukan  pada  tiga  isolat hasil screening. Uji  reduksi  dilakukan  pada media  cair  NB  pada  volume  100  ml, suspense  bakteri  10  ml,  dan  logam  timbal 0.204  ppm  sebanyak  40  ml.  Kemudian diinkubasi ke dalam incubator shaker selama 24  jam  pada  suhu  37  ºC  dengan  kecepatan 120  rpm.  Sentrifugasi  dengan  kecepatan 10,000  rpm  selama  5  menit  untuk memperoleh  cairan  supernatant.  Hasilnya kemudian  diuji  menggunakan atomic absorption  spectrophotometer. Spesifikasi  alat yang  digunakan  yaitu  Incubator  (MMM), LAF  ( Nuaire),  Refrigrated  sentrifuse  (sigma- sartorius  3-18K ),  Mikroskop  trinokuler (Olympus
CX41), Incubator shaker (JEIOTECH/S1-600R), dan Vortex
(Barnstead Thermolyne type 37600 ).
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar  Timbal  pada  Tanah  TPA  Supit Urang Berdasarkan  SNI  (1991) dalam Widyasari dkk (2013),  batas  maksimum  timbal  (Pb) adalah  0.0405  mg.L -1 .  Konsentrasi  Pb  pada sampel  tanah  yang  telah  diuji  adalah  0.57 ppm.  Hasil  pengujian  mengindikasikan bahwa  sampel  tanah  yang  diperoleh  dari TPA  Supit  Urang  tercemar  logam  berat timbal  (Pb)  dan  konsentrasi  timbal  dalam tanah  melebihi  batas  maksimum  timbal yang  diperbolehkan.  Berdasarkan  hasil pengujian  diduga  dalam  tanah  tersebut terdapat  kelompok  bakteri  yang  toleran dan  resisten  terhadap  logam  timbal sehingga  mampu  mereduksi logam timbal. Mikroba  merupakan  organisme  yang mempunyai niche yang  sempit  sehingga rentan terhadap perubahan lingkungan dan mampu bermutasi untuk bertahan (Widyati, 2008).

## Isolasi Bakteri
Proses  isolasi  untuk  memperoleh  isolat murni  dilakukan  melalui  proses  kultivasi mikroba  yang  menghasilkan  22  koloni bakteri  dari  proses  pengenceran  tanah tercemar.
Koloni yang
dihasilkan dimurnikan  pada  proses  isolasi  yang menghasilkan 10 isolat murni. Metode yang dilakukan pada proses isolasi ini merupakan  metode streak  plate secara four way  streak. Menurut  William  (2007),  teknik streak  plate  yang  bertujuan  untuk mengevaluasi  kemurnian  kultur  bakteri, meneliti  keragaman  spesies  dalam  sampel, memisahkan  spesies  dari  kultur  campuran sehingga  biakan  murni  dapat  dibuat,  dan mempelajari  karakteristik  koloni.  Paling umum  teknik  ini  dilakukan  untuk mendapatkan koloni terisolasi. Mendapatkan    koloni  terisolasi,  sel-sel individual  harus  tersebar  di  permukaan media  agar-agar.  Prosedurnya  dilakukan dengan  menyebarkan  sampel  sebagai rangkaian  "coretan"  pada  media  padat dalam  cawan  petri.  Prinsip  metode  isolasi streak  plate atau  cawan  gores  untuk mendapatkan koloni murni dengan membagi cawan menjadi 4 bagian. Four way streak
merupakan
metode
untuk
mengisolasi  bakteri  dengan  membagi media padat menjadi 4 ruang
Karakteristik bentuk koloni yang mampu  bertahan  adalah  bentuk  koloni bulat, bulat oval, bulat lonjong, dan bentuk koloni tidak beraturan. Setelah pemurnian, sepuluh isolat
bakteri kemudian dimurnikan kembali pada media padat NA dalam  cawan  petri  untuk  memastikan bahwa  tidak  ada  isolat  lain  yang  tumbuh. Isolat  bakteri  murni  yang  tumbuh kemudian diuji resistensinya dengan media padat NA yang diperkaya Pb(NO 3 ) 2 sebesar 5  mg.l -1 .  Sepuluh  isolat  diuji  ketahanan terhadap  lingkungan  yang  mengandung logam timbal. Hasilnya sepuluh isolat yang diperoleh  resisten  dan  mampu  hidup walaupun  kondisi  lingkungan  (media) diperkaya dengan Pb(NO 3 ) 2 5 mg.L -1 .

## Identifikasi Morfologi
Isolat  yang  diperoleh  sebagian  besar berbentuk  basil  dan  memiliki  gram  positif, kecuali  pada  isolat  3  dan  isolat  9    yang memiliki  bentuk  kokus,  dan  pada  isolat  2 dan  isolat  7  yang  memiliki  gram  negatif. Perbedaan  gram  tergantung  pada  warna yang  dapat  dipertahankan  oleh  bakteri. Komposisi  kimia  dinding  sel  bakteri  gram positif  terdiri  dari  peptidoglikan  dan  non peptidoglikan,  sedangkan  komposisi  kimia dinding  sel  bakteri  gram  negatif  lebih kompleks  dimana  terdapat  membran  luar yang melindungi peptidglikan. Bentuk dari setiap  isolat  basil  berbeda  bentuk bakterinya  yaitu  diantaranya  monobasil, diplobasil, dan streptobasil.
Bentuk  koloni  umumnya  adalah  bulat, bulat  oval,  bulat  lonjong,  dan  tidak beraturan.  Warna  koloni  putih,  kuning mentega,  biru,  dan  putih  suram.  Tepi koloni  isolat  bakteri  memiliki  tepi  yang halus,  bergelombang,  tidak  beraturan,  dan tepi  dengan cilia .  Elevasinya  diperoleh dengan pengamatan elevasi koloni terhadap  mediumnya.  Elevasi flat atau datar  artinya  koloni  bakteri  memiliki elevasi yang sama rata dengan mediumnya. Elevasi reised atau terangkat artinya elevasi koloni memiliki perbedaan dengan mediumnya  (timbul).  Elevasi convex merupakan  elevasi  pada  koloni  yang terlihat  cembung.  Sedangkan  tepi  koloni dengan  tipe in  growing  into  medium
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan merupakan  elevasi  koloni  yang  yang timbul seperti kedalam medium.
Tabel 1. Pengamatan mikroskopik Nama Isolat Bentuk Bakteri Gram Isolat 1 Basil/ Diplobasil (+) Positive Isolat 2 Basil/Monobasil (-)  Negative Isolat 3 Coccus (+) Positive Isolat 4 Basil/Diplobasil (+) Positive Isolat 5  Basil/Streptobasil (+) Positive Isolat 6 Basil/Monobasil (+) Positive Isolat 7 Basil/Monobasil (-) Negative Isolat 8 Basil/Monobasil (+) Positive Isolat 9 Coccus (+) Positive Isolat 10 Basil/Monobasil (+) Positive
Menurut  Isa  (2013),  bakteri  dengan genus Bacillus merupakan  bakteri  yang toleran  terhadap  toksisitas  logam  berat serta  mampu  menghilangkan  logam  berat di lingkungan dengan kemampuan menyerap  logam  tinggi.  Bakteri Bacillus digolongkan ke dalam bakteri gram positif, berbentuk  batang,  aerobik  dan  aerobik fakultatif, dan umumnya dijumpai ditanah. Berdasarkan  pengamatan  mikroskopik isolat  bakteri  yang  diperoleh  umumnya berbentuk  basil  dan  memiliki  gram  positif sesuai  dengan  pengamatan  dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000 x.
Screening Isolat Bakteri a. Metode Turbimetri
Proses  isolasi  bakteri  yang  menghasilkan sepuluh  isolat  bakteri  yang  resisten  logam timbal  selanjutnya  dipindahkan  ke  media cair nutrient  broth (NB)  untuk  uji  lanjut resistensi  terhadap  logam.  Isolat  1  hingga Isolat 10 dipindahkan dari media padatnya dengan  mengambil  satu  ose  penuh  ke media  cair  NB  sebanyak  7  ml.  Kemudian isolat  bakteri  yang  telah  ditumbuhkan  di media  cair  diambil  sebanyak  0.5  ml  untuk ditumbuhkan  pada  media  cair  NB  5  ml yang  diperkaya  logam  timbal  10  ppm,  30 ppm,  dan  50  ppm  dengan  masing-masing menambahkan 2.5 ml. Berdasarkan metode turbidimetri, sepuluh isolat bakteri yang telah dipindahkan  kemudian  diinkubasi  selama 1  x  24  jam  pada incubator  shaker. Setelah inkubasi,  masing-masing  isolat  diuji kekeruhannya
menggunakan
spectrofotometer pada  panjang  gelombang 600  nm.  Hasil  yang  diperoleh  digunakan sebagai  dasar  untuk  menentukan  isolat bakteri  yang  memiliki  daya  reduksi  logam timbal  yang  lebih  efektif  berdasarkan tingkat kekeruhan . Pengukuran OD dilakukan untuk proses skrining  lanjutan  untuk  menentukan  isolat yang  memiliki  kemampuan  lebih  tinggi. Berdasarkan  pengukuran  OD  awal  dan pengukuran OD secara triplo menunjukkan adanya  potensi  pada  tiga  isolat  yang memiliki  nilai  OD  paling  tinggi  dari  isolat lain.  Isolat  4,  5,  dan  6  memiliki  nilai  OD yang  tinggi  dibandingkan  isolat  lain. Tingginya  nilai  OD  dipengaruhi  oleh kepadatan  pertumbuhan  bakteri.  Bakteri mengalami  peningkatan  jumlah  karena kondisi
lingkungan yang
sesuai, ketersediaan  makanan,  serta  kecepatan pertumbuhan yang tinggi. Menurut Lewaru dkk (2012) , hasil optical density (OD) menunjukkan  tingkat  kepadatan  bakteri artinya isolat yang memiliki nilai OD tinggi tersebut  tahan  dan  dapat  beradaptasi terhadap logam.

## b. Uji Reduksi Timbal
Uji  reduksi  logam  digunakan  untuk mengetahui  kemampuan  isolat  bakteri menurunkan
logam timbal
pada konsentrasi  10  ppm,  30  ppm,  dan  50  ppm. Pengujian dilakukan dengan perbandingan volume  yang  digunakan  1  :  20,  volume media  cair  NB  yang  digunakan  100  ml, logam  Pb  50  ml,  dan  kultur  bakteri  10  ml. Kultur  bakteri  diperoleh  dari  penanaman isolat sebanyak satu ose penuh dalam 50 ml NB.  Kultur  isolat  bakteri  yang  diperkaya logam  timbal  kemudian  di  inkubasi  pada incubator  shaker dengan  kecepatan  120  rpm pada  suhu  37  ºC  selama  24  jam.  Isolat  4,  5 dan  6  dapat  dikatakan  tahan  dengan adanya logam timbal. Isolat bakteri Isolat 4 memiliki  persentase  konsentrasi  logam paling  tinggi  mencapai  99%  pada  ketiga perlakuan yang diberikan.
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan
Tabel 2. Nilai uji penurunan  logam Pb
Isolat Awal (ppm) Akhir (ppm) Total reduksi (ppm) Penu- runan Logam (%) Isolat 4 10 <0.0044 9.996 99.96 30 0.026 29.974 99.91 50 0.266 49.734 99.46 Isolat 5 10 1.558 8.442 84.42 30 3.929 26.071 86.90 50 6.583 43.417 86.83 Isolat 6 10 0.912 9.088 90.88 30 3.003 26.997 89.99 50 6.098 43.902 87.80

## Reduksi Logam Timbal
Uji  kemampuan  isolat  bakteri  dalam menurunkan  logam  berat  di  medium tumbuh dilakukan
dengan menginokulasikan  1  ose  penuh  koloni bakteri  ke  dalam  50  mL  medium  NB  dan diinkubasi  selama  24  jam.  Kemudian menginokulasikan  10%  (v/v)  isolat  bakteri ke  dalam  100  ml  NB    yang  diperkaya Pb(NO 3 ) 2 pada  masing-masing  konsentrasi 0.204  ppm  selama  24  jam.  Perhitungan jumlah  reduksi  bakteri  terhadap  Pb dilakukan menggunakan spektrofotometerr serapan  atom  (SSA).  Perlakuan  di sentrifugasi menggunakan refrigerated sentrifuse. Hasilnya  akan  diperoleh  cairan media yang mengandung Pb setelah proses inkubasi  dan  pada  bagian  bawah tube merupakan endapan dari bakteri.
Tabel 3. Persentase penurunan logam Pb
Isolat Awal (mg.L -1 ) Akhir (mg.L -1 ) Penurunan logam (%) Isolat 4 0.204 0.132 a 35.294 Isolat 5 0.063 a 69.120 Isolat 6 0.080 a 60.784
Tiga  isolat  di  atas  merupakan  bakteri yang  mampu  mengurai  logam  Pb  dan berpotensi  dapat  digunakan  sebagai bioremoval .  Pengujian  ulang  terhadap  daya reduksi logam Pb pada konsentrasi tersebut juga  menunjukkan  persentase  yang  tinggi. Pada  konsentrasi  yang  sama  isolat  4 memiliki  nilai  persentase  lebih  rendah yaitu  35%.  Sedangkan  pada  isolat  5  dan  6 persentase  penurunan  sebesar  69%  dan 60%.
Berdasarkan  pengujian  statistik  uji  t, pemberian  logam  berpengaruh  nyata terhadap  penurunan  logam  timbal.  Uji  t dilakukan  untuk  mengetahui  adanya pengaruh  pemberian  konsentrasi  logam terhadap penurunan logam. Hasil dari T hit yang  berdasarkan  data  nilai  konsentrasi awal  dan  konsentrasi  akhir  adalah  5.412, nilai  tersebut  dibandingkan  dengan  taraf uji atau selang kepercayaan 95% yaitu 2.92. Berdasarkan  data  tersebut  dapat  ditarik kesimpulan,  nilai  t  hitung  lebih  besar  dari nilai t Tabel sehingga pemberian konsentrasi logam terhadap isolat
berpengaruh  nyata  terhadap  penurunan konsentrasi logam
pada persentase 35.294%, 69.120%, dan 60.784%. Sedangkan berdasarkan  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT) 5% sebesar 0.135. Pengujian BNT dilakukan untuk  mengetahui  adanya  pengaruh perbedaan  penggunaan  isolat  bakteri sebagai  agen bioremoval logam  timbal  (Pb). Menurut Suhendrayatna (2001), mekanisme pembersihan
logam
berat oleh mikroorganisme sebagian besar merupakan proses  pertukaran  ion.  Mekanisme  ini dapat  dibagi  atas 3  cara  yaitu  berdasarkan metabolisme  sel  yang  dibagi  atas;  proses yang  terkait  pada  metabolisme  dan  proses yang  tidak  terkait  pada  metabolisme  sel, sedangkan  berdasarkan  posisi  logam  berat dapat  dibagi  atas;  akumulasi  ekstraseluler (presipitasi),  akumulasi  intraseluler  dan penyerapan  logam  oleh  permukaan  sel. Pada  proses  metabolisme,  logam  berat terakumulasi pada
membran sel
(ekstraseluler) dan pada sitoplasma
(intraseluler)  (Wulandari  dkk.,  2001).  Pada saat  proses  bioremediasi  berlangsung, enzim-enzim yang diproduksi oleh mikroorganisme  memodifikasi  struktur polutan  beracun  menjadi  tidak  kompleks sehingga  menjadi  metabolit  yang  tidak beracun dan berbahaya (Priadie, 2012). Tingkat  penurunan  logam  yang  tinggi pada  ketiga  isolat,  mengindikasikan adanya  bakteri indigenous (lokal)  pada tanah  tercemar  lindi  di  TPA  Supit  Urang. Selain  data  penurunan  logam,  data karakteristik mikroskopik juga bisa digunakan  sebagai  parameter  untuk mengetahui  genus  bakteri.  Berdasarkan karakteristik  mikroskopik,  isolat  bakteri
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan memiliki  pewarnaan  gram  positif  dengan bentuk sel basil.
Isolat 4 Isolat 5
Isolat 6 Gambar 1. Isolat bakteri
Menurut  Isa  (2013),  bakteri Bacillus sangat  toleran  terhadap  logam  Pb.  Bakteri tersebut memiliki karakteristik sel berbentuk  batang  mempunyai  ukuran 0.3-2.2  µm  x  1.27-7.0  µm,  dapat  bergerak (motil), membentuk endospora, tidak  lebih dari  satu  dalam  satu  sel  isolatorangium, gram  positif,  aerobik  dan  anaerobik fakultatif,  dan  umumnya  dijumpai  di tanah.  Isolat  4,  5,  dan  6  memiliki  ciri-ciri sama  dengan  genus bacillus. Selain  itu, berdasarkan
data uji morfologi mikroskopik dan makroskopis
menunjukkan  bahwa  isolat  4,  5,  dan  6 merupakan bakteri pada genus bacillus . Uji biokimia dilakukan untuk mendukung data
identifikasi morfologi. Selain uji pewarnaan gram,  isolat  bakteri  juga  diuji  endospora, motilitas,  katalase,  jenis  pernapasan,  dan oksidase.  Berdasarkan  uji  lanjut  tersebut menunjukkan bahwa tiga isolat merupakan genus Bacillus. Berdasarkan pemaparan diatas, diperoleh kesimpulan antara lain : 1. Isolasi  bakteri  dari  sampel  tanah tercemar  air  lindi  di  TPA  Supit  Urang menghasilkan  10  isolat  bakteri  dengan kode Isolat 1, Isolat 2, Isolat 3, Isolat 4, Isolat 5, Isolat 6, Isolat 7, Isolat 8, Isolat 9,  dan  Isolat  10  yang  mampu  bertahan pada  media  padat  yang  diperkaya  Pb 5 mg.l -1 2. Uji  turbidimetri  dan  uji  reduksi menunjukkan tiga isolat yang berpotensi  menjadi  agen bioremoval logam timbal yaitu Isolat 4, 5, dan 6
3. Hasil uji mikroskopik,  uji katalase dan uji  oksidase  isolat  bakteri  4,  isolat  5, dan  isolat  6  merupakan  genus  bakteri Bacillus
4. Bakteri Bacillus yang diperoleh merupakan mikroba lokal yang memiliki potensi sebagai agen bioremediasi dengan persentase penurunan  Pb  pada  Isolat  4  sebesar 35.294%;  Isolat  5  sebesar  69.120%,  dan
Isolat 6 sebesar 60.784%
5. Bakteri  yang  ditemukan  merupakan bakteri genus Bacillus

## DAFTAR PUSTAKA
Ali  M.  2011. Monograf  Rembesan  Air  Lindi (Leachate)  Dampak  Pada  Tanaman Pangan  Dan  Kesehatan . UPN  Press.
Surabaya.
Anam    M.,  Evi  K.,  Bambang  S.  2013. Penurunan  kandungan  logam  Pb  dan cr  leachate  melalui  fitoremediasi bamboo air  (Equisetum hyemale) dan zeolite. Jurnal  Keteknikan  Pertanian Tropis Biosistem 1(2), 43-59.
Barrow  G  I  &  Feltham  R.K.A.  2003. Cowan And  Steel  Manual  For  Identification  Of Medical  Bacteria. 3 rd .  Ed.  Cambridge University Press.
Dharmawibawa  I.D.    2004. Isolasi identifikasi  dan  uji  kemampuan  bakteri
Rahadi, et al. Jurnal Sumberdaya Alam dan Lingkungan pengurai  minyak  solar  dari  perairan pelabuhan  Benoa  Bali. Universitas Udayana. Bali
Isa  I.  Yuliana  R.  2013. Pemanfaatan  berbagai jenis  bakteri  dalam  proses  bioleaching limbah  logam  berat.  Laporan  tahunan Penelitian  Fundamental. Universitas Negeri Gorontalo. Gorontalo
Lewaru  S.,  Indah  R.,  Yuniar  M.  2013.
Identifikasi bakteri
indigenous pereduksi logam berat Cr (VI) dengan metode  molekuler  di  sungai  cikijing rancaekek, jawa barat. Jurnal Perikanan Dan  Kelautan 3(4),  81-92.    UNPAD. Jawa Barat
Priadie  B.  2012.  Teknik  bioremediasi sebagai  alternatife  dalam  upaya pengendalian  pencemaran  air. Jurnal Ilmu Lingkungan 10(1), 38-48.
Suhendrayatna.  2001a.  Bioremoval  logam berat dengan menggunakan mikroorganisme: Suatu Kajian Kepustakaan.  Makalah.  Disampaikan pada Seminar  Bioteknologi,  Kagoshima University , Tokyo.
Suhendrayatna.  2001b.  Bioremoval  logam berat dengan menggunakan mikroorganisme. Suatu kajian
kepustakaan  (heavy  metal  bioremoval by  microorganism  :  a  literature  study. Synergy  forum-  ppi  Tokyo  institute  of technology.
Thompson l. P, Christopher V. G., Lena C., Andrew  C.  S.  2005.  Bioaugmentation for  bioremediation  :  the  challenge  of strain
selection
environmental
microbiologi. Environ  Microbiol 7(7), 909-915.
Widyasari  N.,  Moelyaningrum,  Anita  D., Pujiati  R.  S.  2013.  Analisis  potensi pencemaran  timbal  (Pb)  pada  tanah, air  lindi  dan  air  tanah  (sumur monitoring)
di TPA Pakusari Kabupaten Jember. Skripsi. Univerditas Jember. Jember
Widyati  E.  2008.  Peranan  mikroba  tanah pada  kegiatan  rehabilitas  lahan  bekas tambang  (roles  of  soil  microbes  in  ex- minning  land  rehabilitation). Info Hutan 5(2), 151-160
Williams A., Barton E., Slatko, John R. 2007. Laboratory  Investigation  in  Molecular Biology. Jones  and  Barlett  Publisher. Canada
Wulandari  S.,  Dewi  N.  F.,  Suwondo,  2005. Identifikasi  bakteri  pengikat  timbal (Pb)  pada  sedimen  di  perairan  Sungai Siak. Jurnal Biogenesis 1(2), 62-65