## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK PROPOLIS LEBAH MADU KELULUT (TRIGONA MELINA) ASAL KEBUN RAYA UNIVERSITAS MULAWARMAN SAMARINDA (KRUS) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI SALMONELLA TYPHI DAN KLEBSIELLA PNEUMONIAE
Khoirul Anam 1 *, Yuliati 1 , Yanti Puspita Sari 2 , Reni Kurniati 2 , Hetty Manurung 2 , Jusmaldi 2 , Ratna Kusuma 2 , Muhammad Fahmi Aminuddin 1
1 Program Studi Teknologi Laboratorium Medis ITKES Wiyata Husada Samarinda
2 Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Mulawarman
E-mail: sanambwi@yahoo.co.id/ khoirulanam@itkeswhs.ac.id

## ABSTRACT
Latar belakang ; Propolis merupakan resin yang dihasilkan oleh lebah madu, setelah lebah mengkonsumsi resin kuncup bunga di sekitar lingkungan hidupnya. Propolis yang dihasilkan oleh lebah menjadi sistem pertahanan lebah  dari  serangan  bakteri. Tujuan ;  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri Salmonella thypi dan Klebsiella pneumoniae. Metode; Metode yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL), yang terdiri dari 9 perlakuan dan 3 ulangan. Konsentrasi ekstrak yang diujikan adalah 0%, 1%, 2%,  3%,  4%,  5%,  6%  7%  dan  0,001%  ampicilin.  Aktivitas  antibakteri  ditentukan  oleh  zona  hambatan menggunakan  metode  difusi  kertas  cakram. Hasil ;  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa  ekstrak propolis  lebah  madu  kelulut  (Trigona  melina)  menghasilkan  zona  hambatan  antara  0  –  11,33  mm  terhadap bakteri  Salmonella  typhi  dan  pada  Klebsiella  pneumoniae  menghasilkan  zona  hambat  antara  0  –  5,60  mm. Kesimpulan; Ekstrak propolis Trigona melina, efektif untuk menghambat pertumbuhan dari bakteri Salmonella typhi dan Klebsiella pneumoniae.
Kata Kunci: Propolis, Trigona melina, Antibakteri, Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae

## PENDAHULUAN
Lebah  madu  merupakan  insekta  sosial yang  hidup  dalam  suatu  keluarga  besar yang disebut koloni. Lebah madu yang ada di  Indonesia  terdiri  atas  dua  jenis  yaitu, lebah madu lokal dan lebah madu dari luar negeri.  Masing-masing  jenis  mempunyai ciri-ciri  yang  berbeda.  Lebah  madu  luar negeri  memiliki  ukuran  tubuh  yang  lebih besar  serta  mampu  menghasilkan  madu, royal  jelly,  serta  tepung  sari  lebih  banyak dibandingkan  dengan  lebah  madu  lokal. Namun  lebah  madu  luar  negeri  harus memiliki  perawatan  yang  intensif  dan professional  dibandingkan  dengan  lebah madu lokal. Lebah madu lokal dapat hidup dan  dibudidayakan  secara  sederhana  dan tradisional (Uleander, 2009).
Trigona sp.  (kelulut)  merupakan  jenis lebah  kecil  yang  tidak  menyengat
( Stingless  bee ).  Lebah  ini  menghasilkan beberapa  produk  seperti  madu,  royal  jeli, polen dan propolis. Trigona sp. menghasilkan  madu  lebih  sedikit  jika dibandingkan  dengan  lebah  madu  jenis Apis sp.  dan  jarang  diternakkan  (Indriani, 2003).  Jenis  lebah  madu Trigona sp. bernilai  bukan  karena  madunya  tetapi karena  propolisnya,  di  mana  propolis memiliki  sifat  antibakteri  yang  tinggi (Tukan,  2008) . Propolis  adalah  salah  satu dari produk lebah yang sangat efisien dari sudut  pandang  prinsip  transmisi  aktif  dari tumbuhan ke manusia (Walji, 2001).
Banyak penemuan yang mengungkapkan  sifat  propolis,  yakni sebagai  bahan  antibakteri,  antivirus,  dan antifungi  dan  pengobatan  untuk  berbagai jenis penyakit yang lain. Propolis Trigona spp.  mengandung  tanin,  flavonoid,  steroid
dan  alkaloid.  Kandungan  fitokimia  dari propolis  Trigona  spp.  yang  terdiri  dari tanin,  flavonoid  dan  steroid.  Perbedaan kandungan  kimia  didasarkan  pada  waktu pengumpulan  propolis  dan  daya  dukung flora  disekitarnya  yang  menjadi  sumber resin  bagi  lebah  madu  dalam  membangun sarangnya.  Propolis  lebah  madu Trigona spp  efektif  menghambat  pertumbuhan beberapa jenis bakteri seperti Staphylococcus aureus,  Baccillus  subtilis, Escherichia coli , Pseudomonas
aeruginosa dan Streptococcus  mutans. Analisis  fitokimia  terhadap  ekstrak propolis Trigona spp  asal  Pandeglang, membuktikan bahwa ekstrak propolis jenis tersebut  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  beberapa  isolat  bakteri  usus  sapi ( E.  coli,  Salmonella sp, Klebsiella sp , Campylobacter sp , Bacteroides sp , Lactoacillus casei dan Bifidobacterium sp. (Lasmayanti, 2007; Tukan, 2008).
Kebun  Raya  Unmul  Samarinda (KRUS)  memiliki  peternakan  lebah.  Jenis lebah  yang  dikembangkan  adalah  lebah madu  kelulut  (Trigona)  yang  memiliki jenis  yang  bermacam-macam. Trigona melina merupakan  salah  satu  jenis  lebah kelulut  yang sangat  mudah  diternakkan, mempunyai  penampilan  menarik  karena memiliki  warna  orange  yang  lebih  terang pada  seluruh  tubuhnya.  Sampai  saat  ini belum  ada  penelitian  tentang  ekstrak propolis lebah madu kelulut jenis Trigona melina dan  uji  aktivitas  antibakterinya terhadap  bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella pneumoniae .
Tujuan  penelitian  ini  untuk  menguji fitokimia  ekstrak  propolis  lebah  madu kelulut  ( Trigona  melina ),  dan  pengujian aktivitas  antibakterinya  terhadap  bakteri Salmonella  typhi yang  merupakan  bakteri penyebab tifus dan Klebsiella pneumoniae yang  merupakan  jenis  bakteri  penyebab pneumoni  yaitu  infeksi  akut  yang menyerang jaringan paru-paru.

## METODE
Rancangan Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik dan Biokimia, Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Laboratorium Unit Penyulingan  Jurusan  Biologi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Mulawarman serta di Laboratorium Kesehatan Unit Mikrobiologi  –  Bakteriologi,  Provinsi Kalimantan Timur. Penelitian  menggunakan  Rancangan Acak Lengkap (RAL), dengan 8 perlakuan yaitu  perlakuan  konsentrasi  ekstrak Propolis Kelulut ( Trigona melina)
terhadap  bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella  pneumoniae adalah  sebagai berikut : K1 = 0 ppm, K2 = 1 ppm, K3 = 5 ppm, K4 = 10 ppm, K5 = 15 ppm, K6 = 20 ppm, K7 = 25 ppm dan K8 = 30 ppm, dan K  Positif  =  larutan  ampicilin.  Pada  setiap bakteri  yang  diujikan,  masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali ulangan.

## Cara Kerja
Pembuatan  ekstrak  Propolis  Lebah Kelulut (Trigona melina)
Eskstraksi  propolis  dari  sarang  lebah Trigona  melina ini  dilakukan  dengan metode  yang  dilakukan  oleh  Hasan et  al . (2006).  Sebanyak  150  gr  sarang  lebah Trigona melina yang merupakan hasil dari budi  daya  di  Kebun  Raya  Samarinda, dimaserasi  dengan  650  ml  etanol  70% (direndam sambil digojog dengan menggunakan  shaker)  selama  7  hari  di dalam wadah erlenmeyer 1000 ml. Setelah 7  hari,  filtrat  didekantasi  kemudian  residu dimaserasi  lagi  dengan  50  ml  etanol  70% yang  baru.  Proses  ini  dilakukan  secara berulang  setiap  hari  selama  tujuh  hari, hingga  pelarut  etanol  pada  residu  tampak bening,  sehingga  pelarut  yang  digunakan 350  ml.  Dengan  demikian,  total  pelarut (etanol)  yang  digunakan  adalah  sebanyak 1000  ml,  yaitu  (650+350)  ml  etanol. Sedangkan  total  waktu  maserasi  adalah
Jurnal Keperawatan Wiyata Volume 4, Nomor 1, Tahun 2023 ISSN 2774-4558 (Cetak) ISSN 2774-9789 (Online)
selama  14  hari.  Filtrat  yang  diperoleh kemudian  dilakukan  rotary  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  murni  propolis. Kemudian  dikeringbekukan (freeze-dried) hingga  membentuk  ekstrak  padat  yang kemudian  digunakan  untuk  pengujian selanjutnya.  Untuk  perlakuan  dilakukan pengenceran  terhadap  ekstrak  dengan menggunakan  aquadest  menjadi  beberapa konsentrasi yaitu 0 ppm, 1 ppm, 5 ppm, 10 ppm,  15  ppm,  20  ppm,  25  ppm  dan  30 ppm

## Pembuatan Media Luria Bertani (LB)
Media  Luria  Bertani  (LB)  dengan komposisi  sebagai  berikut:  ditimbang NaCl  sebanyak  1  gram,  media  Pepton sebanyak  2  gram,  media  Yearst  ekstrak sebanyak  1  gram,  dan  media  Agar sebanyak  3  gram.  Kemudian  dilarutkan dalam  aquadest  sampai  200  ml.  Larutan dihomogenkan kemudian dipanaskan dengan  api  kecil  hingga  mendidih. Selanjutnya  disterilkan  dengan autoclaf Hiclave  HV  –  110 suhu  121°C  selama  15 menit.  Media  yang  telah  steril  kemudian dituang  ke  dalam  cawan  petri  steril sebanyak  15  ml  secara  aseptik  lalu dibiarkan  sampai  memadat.  Setelah memadat, disimpan di lemari pendingin.

## Uji Aktivitas Antibakteri Pewarnaan Gram
Diambil  1  koloni  pada  tiap  jenis bakteri  dari  biakan  pada  media  Luria Bertani  (LB)  dengan  ose  yang  telah dipijarkan,  kemudian  diusapkan  di  atas gelas objek yang telah difiksasi dan diberi 1  tetes  NaCl  0,9%.  Dikering  anginkan, kemudian  difiksasi  kembali  diatas  lampu bunsen.  Setelah  sediaan  dingin  diteteskan cat warna gram A (Crystal Violet)  hingga menutupi  seluruh  sediaan,  lalu  didiamkan selama 1 menit. Cat dibilas di air mengalir. Sediaan  diteteskan  cat  gram  B  (Lugol’s Iodine) dan dibiarkan selama 1 menit, lalu dibilas  dengan  air  mengalir.  Sediaan diteteskan  cat  gram  C  (Alkohol  95%)
selama  30  detik,  dibilas  dengan  air mengalir.  Sediaan  diteteskan  cat  gram  D (Safranin)  selama  2  menit,  dibilas  dengan air  mengalir.  Kemudian  sediaan  dikering anginkan.  Diamati  dibawah  mikroskop dengan perbesaran 10 x 100.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Diambil  satu  ujung  ose  koloni  bakteri Salmonella typhi dan Klebsiella pneumoniae dari  media  miring  LB  (Luria Bertani),  disuspensikan  ke  dalam  larutan NaCl  0,9%  steril  dalam  tabung  sampai kekeruhannya  sama  dengan  standard Mc.Farland
(10 8 CFU/ml). Cara membandingkan yaitu tabung standard dan tabung suspensi bakteri dipegang berhimpitan dan dibandingkan kekeruhannya. Jika kurang keruh ditambah koloni  sedangkan  jika  lebih  keruh ditambah NaCl 0,9% (Soemarno, 2000).

## Penanaman pada Luria Bertani (LB)
Dengan  menggunakan cork  borer steril,  dibuat  lubang  sumur  pada  media Luria Bertani (LB) dengan diameter 6 mm dan dengan jarak sekitar 2 cm untuk setiap lubang  sumuran.  Selanjutnya,  kedalam suspensi  bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella pneumoniae yang sudah distandardisasi  kekeruhannya,  dicelupkan kapas  lidi  steril,  ditunggu  sebentar  agar cairan  meresap  kedalam  kapas.  Kemudian lidi  diangkat  dan  diperas  dengan menekankan  lidi  pada  dinding  tabung bagian  dalam  sambil  di  putar-putar. Digores-goreskan kapas lidi pada permukaan  media  LB  hingga  seluruh permukaan  tertutup  rapat  dengan  goresan- goresan. Media LB dibiarkan selama 5 - 15 menit  agar  suspensi  bakteri  meresap kedalam  agar-agar. 7 Diteteskan  sebanyak 50 µl ekstrak dengan berbagai konsentrasi pada lubang sumur. Selanjutnya diinkubasi pada temperatur 37 o C selama 18-24 jam.
Pengukuran Diameter Zona Hambat
Setelah  18-24  jam  diukur  diameter hambatannya  menggunakan  penggaris. Diameter  zona  hambat  yang  diukur  yaitu daerah  jernih  disekitar  lubang  sumur, diukur dari ujung yang satu ke ujung yang lain  melalui  tengah-tengah  lubang  sumur. Ulangan  yang  dilakukan  tidak  pada  satu petri.

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan  Analisis  Ragam  (ANOVA), kemudian  dilakukan  uji  pembandingan
dengan uji LSR (Least significance range), dengan taraf kepercayaan 99%.

## HASIL Uji Aktivitas Antibakteri
Berdasarkan  hasil  pengamatan  pada uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan bahwa ekstrak propolis lebah madu kelulut ( Trigona  melina )  berbeda-beda  terhadap bakteri  yang  diujikan.  Hasil  uji  aktivitas antibakteri  ekstrak  propolis  lebah  madu kelulut  ( Trigona  melina) disajikan  pada Gambar 1 dan Tabel 1 berikut di bawah.
Gambar 1.  Zona Bening Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Propolis Lebah Madu Kelulut ( Trigona melina )
Tabel  1.    Rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  propolis  lebah  madu  kelulut  ( Trigona Melina) terhadap bakteri Salmonella typhi dan Klebsiella pneumoniae
Konsentrasi Ekstrak Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) Salmonella typhi Klebsiella pneumoniae 0% 0 0 1% 2,73 1,43 2% 4,00 1,93 3% 4,77 2,40 4% 5,6 2,83 5% 6,47 3,70 6% 7,80 4,93 7% 11,33 5,60 0,001 % ampicilin 14,57 1,60 Ekstrak propolis pada konsentrasi tertinggi (7%)  mampu  memberikan  hambatan
pertumbuhan  terhadap  kedua  jenis  bakteri uji.  Hal  ini  ditunjukkan  oleh  besarnya
8 6 4 2 0 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 Diameter zona hambat Linear Observed
diameter  zona  bening  yang  terbentuk  di sekitar  kertas  cakram  untuk  kedua  jenis bakteri  uji  tersebut.  Pada  konsentrasi propolis  yang  tertinggi  ini,  daya  hambat terbesar
adalah terhadap
bakteri
Salmonella  typhi (11,33  mm),  dan terhadap  bakteri Klebsiella  pneumoniae adalah (5,60 mm).
Gambar  2:  Grafik  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella pneumoniae oleh propolis Trigona melina asal Kebun Raya UNMUL Samarinda (KRUS).
Ekstrak propolis pada konsentrasi tertinggi (7%)  mampu  memberikan  hambatan pertumbuhan  terhadap  kedua  jenis  bakteri uji.  Hal  ini  ditunjukkan  oleh  besarnya diameter  zona  bening  yang  terbentuk  di sekitar  kertas  cakram  untuk  kedua  jenis
bakteri  uji  tersebut.  Pada  konsentrasi propolis  yang  tertinggi  ini,  daya  hambat terbesar adalah terhadap bakteri Salmonella  typhi (11,33  mm),  dan terhadap  bakteri Klebsiella  pneumoniae adalah (5,60 mm).
0 2 4 6 8 10 12 14 16 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 7%
0.001 am pic ilin Di am et er z ona ham bat (m m ) Salmonela Klebsiella
Gambar 3. Korelasi Pengaruh ekstrak propolis lebah madu kelulut ( Trigona melina) terhadap pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella  pneumoniae. Peningkatan  konsentasi ekstrak propolis akan memberikan efek lebih terhadap zona hambat pertumbuhan bakteri.

## PEMBAHASAN
Hasil  uji  hambat  terhadap  pertumbuhan bakteri
memperlihatkan bahwa
Konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum (KHTM)  dari  ekstrak  propolis Trigona melina asal  Kebun  Raya  UNMUL Samarinda  adalah  sebagai  berikut: pada konsentrasi  1%  kedua  bakteri  tersebut yaitu Salmonella  typhi dan Klebsiella pneumonia mampu  memberikan  daya hambat,  dengan  daya  hambat  lebih kuat terhadap  bakteri Salmonella  typhi .  Kedua bakteri  ini  merupakan  bakteri  Gram negatif mampu menghambat pada konsentrasi  ekstrak  propolis  yang  rendah ini,  diduga  berkaitan  erat  dengan  sifat khasiat  propolis  dan  perbedaan  komposisi struktur  dinding  sel  bakteri.  Kedua  jenis bakteri  tersebut  tergolong  bakteri  Gram negatif,  dan  merupakan  anggota  dari bakteri  patogen.  Karena  merupakan kelompok  bakteri  Gram  negatif,  maka struktur dinding sel kedua bakteri tersebut lebih  kompleks  dengan  beberapa  lapisan, yakni peptidoglikan yang relatif tipis, yang dikelilingi  oleh  lapisan  lipoprotein, lipopolisakarida,  fosfolipid  dan  beberapa protein.  Lapisan-lapisan  ini  bersifat impermiable  terhadap  molekul-molekul kecil seperti nukleosida, oligosakarida dan asam amino (Timotius, 1982).
Kedua  bakteri  kelompok  Gram  negatif tersebut  lebih  bertahan  terhadap  infiltrasi propolis  yang  menyebabkan  lisis  sel,  jika dibandingkan dengan bakteri Gram positif. Hasil  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini yaitu  bahwa  kedua    bakteri  Gram  negatif tersebut mengalami hambatan pertumbuhan oleh ekstrak propolis Trigona melina asal Kebun Raya UNMUL Samarinda,  meskipun  pada  konsentrasi yang  rendah.  Hal  ini  dapat  terjadi,  diduga
karena  propolis Trigona  melina asal Kebun Raya UNMUL Samarinda memiliki sifat  seperti  antibiotik  polimiksin  atau streptomiksin. Antibiotik polimiksin merupakan  bahan  antibiotik  yang  sensitif menghancurkan  membran  bakteri  Gram negatif.  Polimiksin  berinteraksi  kuat dengan fospholipid membran sel ,
mengakibatkan kehilangan kontrol osmotik,  sehingga  terjadi  kebocoran  ion K+  dan  komponen  vital  bakteri  lainnya. Penetrasinya ke dalam menjadi mudah dan merusak  struktur  membran  sel.  Kerja antibiotik  jenis  ini  adalah  merusak membran  sel  setelah  bereaksi  dengan fosfat  pada  fosfolipid  membran  sel (Simanjuntak, 2005).
Propolis Trigona  melina asal Kebun Raya UNMUL Samarinda memiliki kemampuan  lebih  aktif  dan  sensitive terhadap  beberapa  bakteri  Gram  negatif seperti  yang  ditunjukkan  dalam  penelitian ini.  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  adanya interaksi  komponen-komponen  senyawa aktif  dalam  propolis  terhadap  fosfat  pada fosfolipid  membran  sel  bakteri-bakteri tersebut.  Ekstrak  propolis Trigona  melina asal  KRUS,  lebih  dominan  terhadap kelompok  bakteri  patogen.    Dari  segi konsentrasi  minimum  dosis  propolis, kelompok  bakteri  patogen  telah  terlebih dahulu dihambat pertumbuhannya (Lestradet,  1994).  Propolis  tidak  bersifat toksik,  namun  sebaliknya  memiliki  daya antibakteri,  antivirus  dan  antifungi  yang efektif  Nuklin,  1979).  Propolis  juga memiliki  sifat  dapat  merangsang  sistem imunitas  secara  alamiah.  Kemampuan  ini merupakan  suatu  hal  yang  berbeda  dari efek  yang  diberikan  oleh  obat-obatan sintetik.
Jurnal Keperawatan Wiyata Volume 4, Nomor 1, Tahun 2023 ISSN 2774-4558 (Cetak)
ISSN 2774-9789 (Online)

## KESIMPULAN
Kami  memberi  kesimpulan  bahwa
Ekstrak  propolis Trigona  melina ,  efektif untuk  menghambat  pertumbuhan  dari
bakteri Salmonella  typhi dan Klebsiella pneumoniae dan  digunakan  sebagai alternatif  dari  antibiotik  yang  sudah banyak dipergunakan.

## REFERENSI
Hasan AEZ, Artika IM, Kasno, Anggraini AD. (2006). UjiAktivitas Antibakteri Propolis Lebah  Madu Trigona  spp.    Didalam:  Arifin  B, Wukirsari T, Gunawan S, Wahyuni  WT.  Seminar  Nasional
HKI;  Bogor,  12  September  2006. Departemen  Kimia,FMIPA  IPB dan  Himpunan  Kimia  Indonesia.. 204-215
Indriani,  H.  (2003). Cara  Beternak  Lebah Madu  dan  Pemanfaatan. Jakarta: Penebar Swadaya.
Lasmayanti M. (2007). Potensi Antibakteri  Propolis  Lebah  Madu Trigona  Sp  Terhadap  Bakteri Kariogenik  (Streptococcusmutans).
Institus Pertanian Bogor. 1-32.
Lestradet,
H. (1994). Probiotiques: utilisation  chez  l’animal.  Med. Chirur. Dig.. 23: 421–424
Nuklin at    al .  (1979).  Propolis    in    the Treatment    of    inflammatory diseases  of  the  airways, Zh Ushn Nos Gorl Bolzen Nov-Lec.: 9-12.
Simanjuntak  CH. Epidemiologi  disentri . Pusat  Penelitian  Penyakit  (2005).
Menular,  Rattan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan R.I. Jakarta. Soemarno. (2000). Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Klinik . Yogyakarta: Akademi Analisis Kesehatan
Yogyakarta. .
Timotius KH. (1982). Mikrobiologi Dasar . Universitas Kristen Satya Wacana, Salatiga.
Tukan.G.D.  (2008). Pengaruh  Propolis Trigona  spp.  Asal  Pandeglang Terhadap Beberapa Isolat Bakteri Usus  Sapi  dan  Penelusuran Komponen  Aktifnya .  Tesis  S-2. Bogor: IPB.
Uleander,  B.  (2009). Khasiat  Madu  di Koran  Pak  Oles:  BAB  II. . http://madu terapi.  blogspot.com. Diakses tanggal 05 Juni 2010
Walji.  H.  (2001). Terapi  lebah  daya kekuatan dan khasiat lebah, madu, dan  serbuk  sari  bergizi  bagi kesehatan . Jakarta: Prestasi Pustaka.