## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL ALGA MERAH Eucheuma spinosum DARI PERAIRAN WONGSOREJO BANYUWANGI
Ahmad Hanapi, A. Ghanaim Fasya, Ulfatul Mardiyah dan Miftahurrahmah
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Antioxidant and antibacterial activity assay and active compound identification red algae Euchema spinosum extract was  conducted.  Active  compound  extraction  was  conducted  using  maceration  method  with  methanol.  Antioxidant  activity assay  using  DPPH  method  with  determining  EC 50 value.  Antibacterial  activity  assay  using  diffusion  method  toward Staphylococcus  aureus and Escherichia  coli bacteria.  The  results  show  that  antioxidant  activity  of Eucheuma  spinosum methanol  extract  has  EC 50 value  22.13  ppm.  Antibacterial  activity  toward Staphylococcus  aureus and Escherichia  coli bacteria  had  inhibitation  in  80  mg/mL  concentration  at  the  amount  of  4  mm  and  3  mm  respectively.  The  result  of phytochemical  essay  shows  that  compounds  which  discoveried  in Eucheuma  spinosum methanol  extract  were  flavonoids, triterpenoids and ascorbic acid.
Keywords : Eucheuma spinosum , Antioxidant activity, DPPH, antibacterial activity , E. coli, S. aureus.

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  pengujian  aktivitas  antioksidan,  antibakteri  dan  identifikasi  senyawa  aktif  ekstrak  metanol  alga merah Eucheuma  spinosum .  Ekstraksi  senyawa  aktif  dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan  metanol.  Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH dengan menentukan nilai EC 50 , sedangkan pengujian aktivitas antibakteri menggunakan  metode  difusi  cakram  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol Eucheuma  spinosum tergolong  sangat  kuat  dengan  nilai  EC 50 22,13 ppm, sedangkan aktivitas atibakterinya terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli tergolong lemah dengan daya hambat pada konsentrasi 80 mg/mL secara berturut-turut sebesar 4 mm dan 3 mm. Uji fitokimia ekstrak metanol alga merah E. spinosum menunjukkan adanya kandungan golongan senyawa flavonoid, triterpenoid dan asam askorbat .
Kata Kunci: Eucheuma spinosum , aktivitas antioksidan, DPPH, aktivitas antibakteri , E. coli, S. aureus .

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  Negara  bahari dengan keanekaragaman hayati laut terbesar di  dunia  yang  memiliki  total  luas  perairan Nusantara  seluas  2,8  juta  Km 2 , dan  laut teritorial  seluas  0,3  juta  Km 2 .  Indonesia mempunyai  luas  daratan  sekitar  1,9  juta Km 2 , panjang garis pantai lebih dari 81.000 Km  dan  jumlah  pulau  lebih  dari  18.000 pulau.  Laut  beserta  kawasan  pesisir Indonesia  mempunyai  manfaat  dan  potensi ekonomi (pembangunan) yang sangat besar dan beraneka ragam (Kusumastanto, 2011).
Salah  satu  potensi  biota  laut  perairan Indonesia  adalah makro  alga atau  dikenal dalam  perdagangan  sebagai  rumput  laut .
Saat  ini  sudah  ditemukan  555  jenis  alga yang  berdasarkan  kandungan  pigmennya dikelompokkan  menjadi  4  kelas,  yakni  : Rhodophyceae, Phaeophyceae,
Chlorophyceae,  Cyanophyceae.  Salah  satu
alga  dari  kelas  Rhodophyceae  adalah Eucheuma  spinosum .  Alga  merah  ini mempunyai  talus  yang  keras,  silindris  dan berdaging  (Romimohtarto  dan  Juwana, 1999).
Alga,  baik  yang  liar  maupun  yang telah  dibudidayakan  secara  tradisional digunakan  sebagai  obat  diet  (Wibowo, 2001),  bahan  makanan  dan  obat-obatan, karena kaya akan protein, lipid, vitamin dan mineral  yang  sangat  penting  bagi  manusia. Temuan  terakhir  membuktikan  bahwa rumput  laut  berpotensi  sebagai  antivirus (Manilal et  al., 2009),  antibakteri  (Izzati,
2007),  antijamur  (Khazanda et  al., 2007), antitumor  (Zandi et  al., 2010)  dan antioksidan (Lestario dkk., 2008).
Faten et  al. (2009)  mengekstrak  alga merah Gracilaria verrucosa menggunakan pelarut  etanol  70  %  kemudian  dipartisi menggunakan  etil  asetat, n- butanol  dan
petroleum  eter,  didapatkan  bahwasanya fraksi  etil  asetat  dan  petroleum  eter merupakan  fraksi  yang  cukup  aktif  dalam menghambat  radikal  bebas  menggunakan DPPH.  Selain  itu,  Suryaningrum  dkk. (2006)  mengekstrak  rumput  laut  segar  dan kering  dari Halmenia  harveyana dan Eucheuma  cottoni yang  tergolong  dalam kelas Rhodophceae dengan pelarut metanol p.a kemudian  dipartisi  dengan  200  mL campuran  metanol  : n- heksana  (2:3)  lalu diuji aktivitas antioksidannya dengan metode  DPPH,  dan  didapatkan  ekstrak rumput  laut  segar  memiliki  aktivitas antioksidan tertinggi.
Iskandar (2009) melakukan penelitian uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  alga merah  jenis Eucheuma  cottonii .  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  alga  merah  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  uji  dengan Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) terhadap  bakteri Bacillus  cereus adalah  0,1 % dan terhadap Escherichia coli adalah 0,5 %.  Sedangkan  Enida  (2011)  melakukan penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak n - heksan,  etil  asetat  dan  etanol  pada  alga coklat Sargassum  polycystum  C.Agardh terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan
Escherichia
coli . Hasil penelitian
menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat alga coklat  memiliki  kemampuan  menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dengan daya hambat  pada  konsentrasi  70  mg/mL  yaitu 14,78 mm dan konsentrasi 50 mg/mL  yaitu 14,39  untuk  bakteri E.  coli .  Sedangkan KHM bakteri S. aureus pada konsentrasi 30 mg/mL  yaitu  8,24  mm  dan  bakteri E.  coli pada konsentrasi 20 mg/mL yaitu 9,76 mm.
Sebagai  salah  satu  upaya  untuk mengungkapkan  sifat  biologis  dan  medis dari  flora  laut  serta  untuk  mengoptimalkan pemanfaatan  bahan  alam  laut  Indonesia, khususnya  di  daerah  Banyuwangi  maka pada  penelitian  ini  dilakukan  ekstraksi senyawa  aktif  pada  alga  merah Eucheuma spinosum dengan pelarut metanol, kemudian  dilanjutkan  dengan  pengujian aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH  dan antibakteri  menggunakan  metode  difusi
cakram  serta  mengidentifikasi  senyawa yang  berkhasiat  sebagai  antioksidan  dan antibakteri  dalam  alga  merah E.  spinosum yang berasal dari perairan laut Banyuwangi.

## I. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  pisau,  oven,  blender, ayakan, desikator, neraca analitik, erlenmeyer, rotary  evaporator ,  corong Buchner, hot  plate dan magnetic  stirrer , spektrofotometer  Uv-Vis,  autoklaf,  jarum ose,  tabung  reaksi,  beker  gelas,  inkubator, dan cawan petri.
Bahan  sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  alga  merah  jenis ( Eucheuma  spinosum )  berasal  dari  laut Wongsorejo Banyuwangi.
Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan adalah  metanol,  DPPH,  kalium  kromat, kloroform, BHT, HCl, etanol, H 2 SO 4 pekat, natrium  bikarbonat,  asam  asetat  anhidrida, pereaksi  Mayer  dan  Dragendorff,  AgNO 3 , serbuk  logam  Mg,  nutrien  agar,  penisilin, sterptomicin,  DMSO,  kertas  saring,  kapas dan pH indikator universal.

## Prosedur Penelitian Uji Taksonomi
Uji taksonomi alga merah E. spinosum dilakukan  secara  kualitatif  di daerah  perairan  Wongsorejo  Banyuwangi dan di Jurusan Biologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.

## Preparasi Sampel
Alga  merah E.  spinosum sebanyak  3 Kg dicuci dengan air, kemudian diiris kecil- kecil  lalu  dioven  pada  suhu  30  –  38 o C selama 24 jam dan dihaluskan menggunakan  blender  hingga  didapatkan serbuk alga merah E. Spinosum.
Penentuan  Kadar  Air  Secara  Thermo- gravimetri (AOAC, 1984)
Pada  penentuan  kadar  air,  disiapkan cawan  porselen  terlebih  dahulu,  lalu dipanaskan  dalam  oven  pada  suhu  105 o C sekitar  15  menit  untuk  menghilangkan
kadar  airnya.  Kemudian  cawan  disimpan dalam  desikator  sekitar  10  menit,  lalu ditimbang  dan  dilakukan  perlakuan  yang sama  sampai  diperoleh  berat  cawan  yang konstan.  Setelah  itu,  sebanyak  5  gram sampel  dimasukkan  dalam  cawan  porselen, kemudian  dimasukkan  dalam  oven  dan dikeringkan pada suhu  105 °C selama  ±15, kemudian sampel disimpan dalam desikator sekitar  ±10  menit  dan  ditimbang.  Sampel tersebut  dipanaskan  kembali  dalam  oven ±15 menit, didinginkan dalam desikator dan ditimbang  kembali.  Perlakuan  ini  diulangi sampai berat konstan. Kadar air dalam alga merah E.  spinosum dihitung  menggunakan persamaan berikut (AOAC, 1984):
Kadar air = (𝑏−𝑐) (𝑏−𝑎) x 100 %
Dimana : a    =   bobot cawan kosong b  =  bobot  sampel  +  cawan  sebelum dikeringkan c  =  bobot  cawan  +  sampel  setelah dikeringkan Penentuan Kadar Garam
Sampel  ditimbang  sebanyak  5  gram dan diekstrak dengan menggunakan akuades  panas  10  mL,  ditunggu  beberapa lama  sehingga  semua  garam  (NaCl)  larut, ekstraksi  diulang  beberapa  kali  (8-10  kali). Ekstrak  diambil  sebanyak  5  mL  lalu dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer,  setelah itu ditambahkan dengan kalium kromat 5% 3  mL  dan  dititrasi  dengan  AgNO 3 0,1  N sampai warna menjadi merah bata. Perhitungan kadar garam (NaCl) menggunakan persamaan berikut (Sudarmadji dkk., 2007): % NaCl =
x 100 %
Ekstraksi Alga Merah
Eucheuma spinosum
Ekstraksi  komponen  aktif  dilakukan dengan  cara  ekstraksi  maserasi  atau perendaman.  Alga  merah  yang  telah dikeringkan ditimbang sebanyak  100  g dan
diekstraksi  secara  maserasi  menggunakan 300 mL pelarut metanol selama 24 jam dan dilakukan pengocokan menggunakan
shaker dengan kecepatan 150 rpm ( rotation per minutes ), setelah itu dilakukan penyaringan menggunakan corong Buchner. Ampas  yang  diperoleh  dimaserasi  kembali menggunakan  pelarut  yang  sama  sebanyak 3  kali  pengulangan  dengan  perlakuan  yang sama hingga filtrar  yang dihasilkan bening, setelah  itu  dilakukan  penyaringan.  Ketiga filtrat  yang  diperoleh  digabung  menjadi satu.  Kemudian  ekstrak  yang  diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator. Ekstrak  pekat  yang  diperoleh ditimbang  lalu  dihitung  rendemen  ekstrak dengan Persamaan berikut:
% Rendemen =                               x 100 % . dan  dilanjutkan  dengan  pengujian  aktivitas antioksidan dan antibakteri.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Penentuan Panjang Gelombang

## Maksimum
Larutan  DPPH  0,2  mM  sebanyak  3 mL  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi didiamkam ± 10 menit. Kemudian dimasukkan  ke  dalam  kuvet  hingga  penuh. Dicari  λ maks larutan  dan  dicatat  hasil pengukuran  λ maks untuk  digunakan  pada tahap selanjutnya (Rahayu, dkk., 2010).
Penentuan Waktu Kestabilan

## Pengukuran Antioksidan
Dibuat  larutan  ekstrak  100  ppm sebanyak  25  mL,  kemudian  diambil sebanyak  2,25  mL.  Ditambahkan  0,2  mM larutan DPPH sebanyak 0,75 mL, kemudian dicari waktu kestabilan setelah inkubasi dan sebelum inkubasi pada rentangan waktu 5 – 50  menit  dengan  interval  5  menit.  Sampel diukur  pada  λ maks dan  waktu  kestabilan yang telah didapatkan.
Pengukuran  Potensi  Antioksidan  Pada Sampel
mL AgNO 3 x N AgNO 3 x 58,5 massa sampel  x  1000
Berat ekstrak
Berat sampel
a)  Absorbansi  kontrol:  Larutan  DPPH
dengan konsentrasi 0,2 mM sebanyak 3 mL  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi, lalu diinkubasi pada suhu 37 o C selama  waktu  kestabilan  yang  telah didapatkan  pada  tahap  sebelumnya, setelah  itu  larutan  dimasukkan  ke dalam  kuvet  hingga  penuh  dan  diukur absorbansinya dengan λ maks yang didapatkan.
b)  Ekstrak  pekat Eucheuma  spinosum, dilarutkan  dalam  metanol  dengan konsentrasi  1,  5,  25,  50,  100,  150,  dan 200  ppm.  Disiapkan  tabung  reaksi kemudian diisi dengan 2,25 mL ekstrak dan ditambahkan DPPH sebanyak 0,75 mL  dengan  konsentrasi  0,2  mM  dalam etanol  95  %  v/v  (perbandingan  larutan DPPH  :  ekstrak  1:3).  Setelah  itu diinkubasi  dengan  suhu  37 o C  pada waktu kestabilan yang didapatkan pada tahap sebelumnya, kemudian
dimasukkan  ke  dalam  kuvet  hingga penuh  untuk  mengukur  absorbansinya pada  λ maks .  Data  absorbansi  (A)  yang diperoleh  dari  masing-masing  ekstrak dihitung  nilai  persen  (%)  aktivitas antioksidannya.
Nilai tersebut diperoleh  dengan  persamaan  berikut (Arindah, 2010): =                                        X 100%

## Uji Aktivitas Antibakteri Sterilisasi Alat dan Bahan
Sterilisasi alat dan bahan dengan cara menutup  alat-alat  yang  akan  disterilkan dengan alumunium foil atau kapas. Dimasukkan  ke  dalam  autoklaf  dan  diatur pada  suhu  121 o C  dengan  tekanan  15  psi (per  square  inchi) .  Sterilisasi  dilakukan untuk  alat  selama  30  menit  dan  bahan selama  15  menit  (Irianto,  2006).  Alat-alat yang  tidak  tahan  terhadap  panas  tinggi disterilkan  dengan  menggunakan  etanol  70 % (Volk dan Wheeler, 1993).

## Pembuatan Media
Media  yang  disiapkan  adalah  media padat  agar  ( Nutrient  Agar )  miring  untuk peremajaan biakan murni dan uji antibakteri senyawa hasil reaksi pada bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Media  cair  ( Nutrient  Broth )  untuk pembuatan  larutan  inokulum  bakteri S. aureus dan E. coli . Pembuatan media padat dilakukan  dengan  cara  sebanyak  2  gram nutrien  agar  dilarutkan  dalam  100  mL akuades dalam beaker glass dan dimasukkan  dalam  erlenmeyer  dan  ditutup kapas.  Selanjutnya,  suspensi  dipanaskan hingga mendidih lalu dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  (masing-masing  7  mL  untuk peremajaan biakan murni dan 10 mL untuk media  uji  aktivitas  antibakteri)  (Zamrodi, 2011).  Proses  ini  dilakukan  secara  aseptis dengan  cara  bagian  ujung  alat  dipanaskan dan  ditutup  dengan  kapas  dan  alumunium foil.  Media  NA  disterilkan  dalam  autoklaf dan  diatur  pada  suhu  121  ˚C  selama  15 menit,  kemudian  media  untuk  peremajaan diletakkan dalam posisi miring dan didiamkan  pada  suhu  ruang  sampai  media memadat.
Media  cair  ( Nutrient  Broth )  dibuat dengan  cara  sebanyak  1  gr Nutrient  Broth (NB)  dilarutkan  dalam  125  mL  aquades, kemudian  dimasukkan  dalam  erlenmeyer dan  ditutup  dengan  kapas.  Selanjutnya, suspensi  dipanaskan  sampai  mendidih, kemudian  didinginkan  dalam  suhu  ruang. Selanjutnya, media disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 ºC dan tekanan 15 psi (per square inchi) (Volk dan Wheeler, 1993).
Peremajaan Biakan Murni S. aureus dan E. coli
Biakan  murni S.  aureus dan E.  coli digoreskan secara aseptis dengan jarum ose pada  media  padat  agar  miring  dan  tabung media ditutup dengan kapas. Media tersebut diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37 o C di  dalam  inkubator . Kemudian  diletakkan dalam lemari pendingin.
% Aktivitas antioksidan A kontrol – A sampel A kontrol
Pembuatan Larutan Biakan Aktif Bakteri S. aureus dan E. coli Satu  ose  bakteri  hasil  peremajaan biakan  murni S.  aureus  dan  E.  coli dibiakkan  dalam  10  mL  media  cair  (NB) steril  dan  dihomogenkan.  Larutan  ini berfungsi sebagai biakan aktif.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Media  padat  10  mL  yang  telah dipanaskan  hingga  mencair,  didinginkan sampai  suhu    40 o C,  dan  dituang  dalam cawan  petri  steril.  Ditambahkan  0,1  mL larutan  biakan  aktif  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dihomogenkan. Dibiarkan  hingga  memadat.  Kertas  cakram (diameter  5  mm)  diresapkan  dalam  ekstrak alga merah E. spinosum dan kontrol. Proses peresapan dilakukan dengan cara meneteskan 20 μL kontrol positif (penisilin dan  streptomisin),  kontrol  negatif  (pelarut) dan  larutan  ekstrak  (Zakaria et  al., 2007).
Kertas  cakram  tersebut  diletakkan  di  atas permukaan  media  bakteri  menggunakan pinset  dan  ditekan  sedikit.  Media  bakteri yang  sudah  diberi  bahan  antibakteri diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam dalam  inkubator.  Diameter  zona  hambatan yang terbentuk diukur menggunakan penggaris  untuk  menentukan  efektivitas antibakteri  (Volk  dan  Wheeler,  1993). Diameter  zona  hambat  adalah  diameter yang  tidak  ditumbuhi  bakteri  di  sekitar kertas  cakram  dikurangi  diameter  kertas cakram.
Uji antibakteri dilakukan dengan cara memvariasi konsentrasi yaitu pada kosentrasi  ekstrak  sebesar  30,  40,  50,  60, 70,  dan  80  mg/mL).  Kemudian  dilakukan pengulangan  uji  antibakteri  pada  masing- masing konsentrasi sebanyak tiga kali. Pada penelitian  ini  kontrol  positif  penisilin (konsentrasi  25  mg/mL)  digunakan  untuk bakteri Staphylcoccus aureus (gram positif) sedangkan  kontrol  positif  streptomisin (konsentrasi  6,25 mg/mL) digunakan untuk bakteri Escherichia  coli (gram  negatif) (Soetan, et.al , 2006).

## Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Identifikasi Flavonoid
Ekstrak  kasar  5  mg  ditambahkan dengan  air  panas  1-2  mL  air  panas  dan sedikit  serbuk  Mg.  Kemudian  ditambahkan 4-5 tetes HCl 37 % dan etanol 95 % dengan volume  yang  sama  lalu  dikocok.  Jika menunjukkan  warna  merah,  kuning  atau jingga maka ekstrak kasar positif mengandung flavonoid (Febriany, 2004).

## Identifikasi Alkaloid
Ekstrak  kasar  dimasukkan  dalam tabung  reaksi,  ditambah  0,5  mL  HCl  2  % dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  2-3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.

## Identifikasi Steroid
Ekstrak kasar diambil 5 mg dilarutkan dalam 2-3 mL kloroform, lalu ditambahkan 10 tetes asam asetat anhidrida dan 2-3 tetes H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung,  jika terbentuk warna biru sampai hijau menunjukkan  adanya  steroid,  sedangkan jika  hasil  yang  diperoleh  berupa  cincin kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan  dua pelarut  menunjukkan  adanya  triterpenoid (Auterhoff, dkk., 1987).

## Uji Triterpenoid
Ekstrak  alga  merah E.  spinosum dimasukkan dalam tabung reaksi, dilarutkan dalam  0,5  mL  kloroform  lalu  ditambah dengan  0,5  mL  asam  asetat  anhidrat. Campuran ini selanjutnya ditambah dengan 1-2  mL  H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding tabung  tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh berupa  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya triterpenoid dalam sampel (Indrayani, dkk., 2006).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Alga  merah Eucheuma  spinosum dicuci  hingga  bersih  untuk  menghilangkan pasir maupun lumpur  yang menempel pada tallusnya.  Setelah  benar-benar  bersih,  alga merah E. spinosum dioven pada suhu 38 o C selama  24  jam.  Tujuan  pengeringan  ini untuk  meminimalisir  kadar  air  yang terkandung  dalam  alga  merah E.  spinosum dan untuk menghambat aktivitas mikroorganisme  (jamur  maupun  bakteri) agar  dapat  disimpan  dalam  jangka  waktu yang  cukup  lama.  Pengeringan  sampel dilakukan  pada  suhu  38  °C  agar  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  sampel  alga merah E. spinosum tidak rusak karena suhu yang terlalu tinggi.
Alga  merah  yang  sudah  kering dipotong  kecil-kecil  lalu  diblender  hingga halus, dan disaring menggunakan penyaring (ayakan)  dengan  ukuran  60-250  mesh. Tujuan  penghalusan  sampel  yaitu  untuk memperbesar  ukuran  permukaan  sampel sehingga  proses  ekstraksi  berjalan  optimal karena  semakin  luas  permukaan  sampel maka  interaksi  antara  pelarut  dan  sampel semakin  besar.  Hasil  yang  diperoleh  dari proses  ini  menunjukkan  bahwa  dari  4  Kg sampel  basah  didapatkan  serbuk E. spinosum sebanyak  350  gram.  Selain  itu, serbuk  alga  merah E.  spinosum berwarna coklat dan berbau menyengat.

## Penentuan Kadar Air
Penentuan  kadar  air  bertujuan  untuk mengetahui  kadar  air  dalam  sampel  alga merah E. spinosum yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi dan meminimalkan  kerusakan  akibat  degradasi oleh  mikroorganisme  maupun  penguraian oleh  enzim  pada  proses  penyimpanan sampel.  Kadar  air  dalam  alga  merah E. spinosum ditentukan dengan proses penguapan  menggunakan  oven  pada  suhu 105 o C hingga berat sampel konstan. Selisih berat sampel sebelum dan sesudah pengeringan  menunjukkan  banyaknya  air yang  diuapkan.  Kandungan  air  rumput  laut segar sama seperti tanaman pada umumnya yaitu berkisar antara 80 – 90 % dan setelah
pengeringan  menjadi  10  –  20  %  (Astawan, et  al. 2001).  Kadar  air  alga  merah E. spinosum sebelum maupun setelah dikeringkan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1  Kadar  air  dalam  alga  merah E.
spinosum Sampel Kadar Air (%) E. spinosum basah E. spinosum kering 79,996 9,947
Kandungan kadar air pada alga merah E.  Spinosum basah  cukup  tinggi,  yaitu sebesar  79,96  %.  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  proses  pengeringan  sebelum sampel  alga  merah E.  spinosum dimaserasi agar  tidak  mengganggu  proses  ekstraksi. sampel  alga  merah E.  spinosum setelah pengeringan  memiliki  nilai  kadar  air  yang lebih  rendah  daripada  kadar  air  maksimum yang  disyaratkan  yakni  9,947  %.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  sampel  memiliki kadar  air  yang  cukup  baik  untuk  dilakukan proses  ekstraksi,  karena  semakin  rendah nilai  kadar  air  bahan  maka  akan  semakin memudahkan  pelarut  untuk  mengekstrak komponen  senyawa  aktif  yang  diinginkan. Setyowati  (2009)  menyatakan  bahwa  kadar air maksimum yang disyaratkan agar proses ekstraksi dapat berjalan lancar yaitu sebesar 11 %.
Penentuan Kadar Garam Pada penentuan kadar garam dilakukan  untuk  mengetahui  besarnya kandungan  garam dalam sampel  yang akan dianalisis. Pada penelitian uji antibakteri ini kadar  garam  sangat  berpengaruh  karena kadar  garam  tinggi  dalam  suatu  sampel maka akan dapat menjadi faktor penghambat  pertumbuhan  bakteri  uji.  Uji kadar garam dilakukan  menggunakan salinometer  Atago  PAL-06S  refraktometer. Prinsip  alat  ini  berdasarkan  pembiasan sinar,  dipakai  untuk  menentukan  indeks bias cairan dan mengukur kadar/konsentrasi bahan terlarut dengan memanfaatkan reaksi cahaya.  Semakin  besar  kandungan  garam yang  terlarut  maka  menyebabkan  indek refraktif  larutan  semakin  besar.  Garam (NaCl)  memiliki  indek  bias  =  1,544 terhadap cahaya kuning natrium.
Hasil  pengukuran  kadar  garam  alga merah E. spinosum ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2 Kadar garam alga merah E.spinosum Sampel Kadar Garam (%) E. spinosum basah 2 E. spinosum kering 11,5 Kadar garam alga merah E. spinosum basah  lebih  kecil  daripada  alga  merah E. Spinosum kering  dikarenakan  pada  sampel basah  masih  banyak  mengandung  air. Sedangkan  pada  sampel  kering  kadar  air sudah  terkurangi  sehingga  kadar  garam meningkat.
Pada  umumnya  konsentrasi  10-15  % sudah  cukup  untuk  membunuh  sebagian besar  jenis-jenis  bakteri  (Hudaya  dan Darajat,  1980). S.  aureus masih  mungkin tumbuh  pada  beberapa  produk  dengan kadar  garam  agak  tinggi  yaitu  sampai  7– 10%. S. aureus akan dihambat pertumbuhannya  pada  konsentrasi  garam 15–20%  dan  pH  dibawah  4,5–5  (Rahayu, dkk . ,  1992).  Sedangkan E.  coli akan dihambat pertumbuhannya pada konsentrasi garam 13% (Rosida, dkk., 2007). Jadi pada penelitian  ini,  bakteri  uji S.  aureus (gram positif)  dan E.  coli (gram  negatif)
kemungkinan
tidak terhambat pertumbuhannya  dengan  kadar  garam 11,5%.
Ekstraksi  Senyawa  Aktif  Alga  Merah E. spinosum
Ekstraksi senyawa aktif alga merah E. spinosum menggunakan  metode  maserasi dengan  pelarut  metanol.  Metode  maserasi dipilih  karena  metode  ini  menguntungkan dalam  isolasi  bahan  alam  karena  dengan perendaman, sampel tumbuhan akan mengalami pemecahan dinding dan membran  sel  akibat  perbedaan  tekanan antara  di  dalam  dan  di  luar  sel  sehingga metabolit  sekunder yang  ada  dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut. Maserasi dilakukan selama 24 jam menggunakan shaker dengan kecepatan 150
rpm ( rotation per minutes ) untuk
mempercepat  kontak  antara  sampel  dengan pelarut.  Selanjutnya  dilakukan  penyaringan dan  diperoleh  filtrat  berwarna  hijau  tua. Berat  sampel  yang  digunakan  ialah  100 gram  dalam  300  mL.  Maserasi  dilakukan pengulangan  sebanyak  5  kali  sampai  filtrat berwarna bening.
Ekstrak metanol kemudian dipekatkan menggunakan rotary
evaporator, proses pemekatan ini dihentikan  ketika  pelarut  sudah  tidak menetes  lagi  ke  dalam  labu  alas  bulat. Ekstrak  pekat  yang  diperoleh  kemudian dialiri  gas  N 2 agar  sisa-sisa  pelarut  yang masih terdapat  dalam ekstrak  dapat dihilangkan.  Hasil  penelitian  menunjukkan ekstrak  metanol  (filtrat)  pada  pengulangan 1  dan  2  berwarna  hijau  pekat,  sedangkan pada  pengulangan  ekstraksi  yang  ke-3 sampai  ke-5  ekstrak  metanol  (filtrat) berwarna  hijau  kekuningan  dan  bening. Hasil  ekstraksi  dengan  pelarut  metanol ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel  3  Rendemen  hasil  ekstraksi  dengan pelarut metanol Ekstrak Kasar Rendemen (%) Metanol 1 16,86 Metanol 2 16,60 Metanol 3 15,29 R a ta-rata 16,25 Nilai rendemen yang didapatkan pada penelitian  ini  cukup  tinggi  yaitu  16,256  %. Hal itu disebabkan metabolit sekunder yang terdapat  dalam  sampel  alga  merah E. spinosum cukup  banyak.  Hasil  ini  lebih baik  daripada  penelitian  Maulida  (2007) menyebutkan  bahwa  nilai  rendemen  alga hijau Caulerpa lentillifera kering dan basah hasil  ekstraksi  maserasi  dengan  pelarut metanol masing-masing sebesar 7,84 % dan 3,06 %.
Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil Pengukuran  potensi  antioksidan  pada sampel dilakukan dengan berbagai konsentrasi sampel yakni 200, 150, 100, 50, 25,  5  dan  1  ppm,  selanjutnya  diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  515 nm  dengan  waktu  kestabilan  yang  sudah ditentukan.
Pengukuran aktivitas
antioksidan  tiap-tiap  konsentrasi  pada sampel  harus  menggunakan  larutan  kontrol yang  berupa  larutan  DPPH  0,2  mM. Larutan  DPPH  kontrol  digunakan  untuk memberikan kestabilan pada saat pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada sampel (Arindah, 2010). Menurut
Molyneux  (2003)  nilai  absorbansi  kontrol dapat berkurang dari hari ke hari dikarenakan  kehilangan  aktivitasnya  saat dalam  stok  larutan  DPPH,  tetapi  nilai absorbansi  kontrol  tetap  dapat  memberikan baseline untuk pengukuran saat itu. Absorbansi
kontrol maupun
absorbansi sampel yang diperoleh selanjutnya  digunakan  untuk  menentukan persen  (%)  aktivitas  antioksidan.  Persen (%)  aktivitas  antioksidan  merupakan  salah satu parameter yang menunjukkan kemampuan suatu antioksidan dalam menghambat  radikal  bebas.  Semakin  tinggi persen (%) aktivitas antioksidan
menunjukkan  banyaknya  atom  hidrogen yang  diberikan  senyawa  aktif  kepada radikal  DPPH  sehingga  tereduksi  menjadi
DPPH-H
(1,1-difenil-2-pikrilhidrazin) (Rahayu, et  al .,  2010).  Banyaknya  atom hidrogen  yang  didonorkan  oleh  molekul antioksidan dapat diketahui secara kualitatif dengan  terjadinya  perubahan  warna  radikal DPPH  dari  ungu  menjadi  kuning.  Hasil pengukuran    ekstrak  metanol E.  spinosum ketika  ditambahkan  larutan  DPPH  tidak mengalami  perubahan  warna  dari  ungu menjadi  kuning,  melainkan  hanya  terjadi pemudaran  warna  dari  ungu  menjadi  pink keunguan.
Pengujian  antioksidan  pada  ekstrak metanol E.  spinosum dibandingkan  dengan antioksidan yang sudah ada  yaitu BHT dan asam  askorbat.  Penggunaan  pembanding untuk  mengetahui  seberapa  kuat  potensi antioksidan  yang  ada  pada  ekstrak E. spinosum jika dibandingkan dengan antioksidan  sintetik  yang  sudah  sering dipakai  seperti  BHT  dan  asam  askorbat. Apabila  %  aktivitas  antioksidan  sampel sama atau mendekati nilai aktivitas antioksidan pembanding maka dapat dikatakan bahwa sampel berpotensi sebagai
salah  satu  alternatif  antioksidan  (Yuliani, 2010).
Persen (%) aktivitas antioksidan yang diperoleh
selanjutnya dianalisis menggunakan persamaan regresi non linear menggunakan GraphPad  prism5  software, Regression  for  analyzing  dose-response data ,  sehingga  nantinya  didapatkan  nilai EC 50 dari sampel. EC 50 (Effective concentration) merupakan  parameter  yang menunjukkan  konsentrasi  ekstrak  uji  yang mampu menangkap radikal sebanyak 50 %. Semakin kecil nilai  EC 50 suatu senyawa uji maka  senyawa  tersebut  semakin  aktif sebagai  penangkap  radikal  bebas  atau antioksidan. Dengan kata lain EC 50 merupakan  konsentrasi  yang  dibutuhkan untuk  menurunkan  sebesar  50  %  dari konsentrasi  substrat  (radikal  DPPH).  Nilai EC 50 ekstrak metanol E. spinosum ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel  4  Nilai  EC 50 ekstrak  metanol E. spinosum
Ekstrak Nilai EC 50 (mg/L) Metanol 22,13 Vitamin C 3,702 BHT 38,25
Tabel  4  menunjukkan  bahwa  nilai EC 50 ekstrak  metanol  adalah  22,13  ppm. Aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol tergolong sangat kuat karena memiliki nilai EC 50 kurang dari 50 ppm.
Aktivitas  antioksidan  yang  baik  pada ektrak  metanol  dapat  dikorelasikan  dengan hasil  uji  fitokimia.  Hasil  uji  fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  methanol E. spinosum mengandung  golongan  senyawa flavonoid,  triterpenoid  dan  asam  askorbat. Diduga berbagai golongan senyawa tersebut aktif dalam meredam radikal bebas (DPPH).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan terhadap  bakteri S.  aureus (gram  positif) dan E.  coli (gram  negatif)  dengan  variasi konsentrasi  30  mg/mL,  40  mg/mL,  50 mg/mL, 60 mg/mL, 70 mg/mL, 80 mg/mL. Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak
metanol  ditunjukkan  pada  Tabel  5  dan Tabel 6.
Tabel  5  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri E. Coli
Konsentrasi ekstrak metanol (mg/mL) Diameter zona hambat (mm) 30 - 40 - 50 1 60 1 70 2 80 3 Total bakteri (CFU/mL) 2,7x10 8 Streptomisin (6,25 mg/mL) 13 Kontrol negatif (pelarut) -
Tabel  6  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri S. aureus Konsentrasi ekstrak metanol (mg/mL) Diameter zona hambat (mm) 30 - 40 1 50 2 60 2 70 3 80 4 Total bakteri (CFU/mL) 1,8x10 8 Ampisilin (0,4 mg/mL) 22 Kontrol negatif (pelarut) -
Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri E.  coli (Tabel  5)  menunjukkan ekstrak  metanol  pada  konsentrasi  30 mg/mL  dan  40  mg/mL  tidak  dapat memberikan  daya  penghambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri E.  coli .  Hal  ini kemungkinan disebabkan karena kandungan senyawa antibakteri yang terkandung  dalam  ekstrak  metanol  hanya sedikit  sehingga  pada  konsentrasi  30 mg/mL  dan  40  mg/mL  tidak  dapat memberikan  daya  penghambatan  terhadap pertumbuhan bakteri E. coli .
Aktivitas penghambatan ekstrak metanol  terhadap  pertumbuhan  bakteri E. coli meningkat  dengan  semakin  tingginya konsentrasi ekstrak yang ditunjukkan
dengan  semakin  besarnya  diameter  zona bening  di  sekitar  kertas  cakram.  Salah  satu faktor  penyebabnya  yaitu  senyawa  aktif yang  terdapat  dalam  ekstrak  yang  bersifat sebagai  antibakteri semakin banyak dengan semakin  tingginya  konsentrasi  ekstrak sehingga kemampuan ekstrak dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli juga semakin besar.
Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri S.  Aureus (Tabel  6)  menunjukkan bahwa  kemampuan  ekstrak  metanol  dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. Aureus semakin  bertambah  besar  dengan semakin bertambahnya konsentrasi  ekstrak. Salah  satu  faktor  penyebabnya  ialah banyaknya  komponen  senyawa  aktif  yang bersifat  antibakteri  akan  semakin  banyak dengan  semakin  bertambahnya  konsentrasi ekstrak  sehingga  diameter  zona  hambat akan  semakin  besar.  Jika  dibandingkan dengan  kontrol  streptomisin  6,25  mg/mL dengan  daya  hambat  13  mm  dan  ampisilin 0,4  mg/mL  dengan  daya  hambat  22  mm, maka ekstrak yang dihasilkan pada penelitian  mempunyai  daya  hambat  lebih kecil dari pada kontrol. Hal ini kemungkinan  disebabkan  karena  terjadinya mekanisme  resistensi  bakteri  terhadap senyawa  antibakteri.  Terjadinya  resistensi dapat  disebabkan  oleh  kemampuan  bakteri dalam menghambat kerja senyawa antibakteri  oleh  mutasi  yang  kemungkinan bakteri  untuk  memintasi  langkah-langkah peka  yang  dihambat  oleh  zat  antibakteri, atau  oleh  mutasi  yang  menyebaban  sel bakteri  menjadi  sulit  untuk  ditembus  oleh bakteri (Volk dan Wheeler, 1993). Mekanisme resistensi bakteri ini juga dapat terjadi karena bakteri menurunkan permeabilitas  dinding  selnya  sehingga senyawa  antibakteri  akan  sulit  masuk  ke dalam  sel.  terjadinya  resistensi  bakteri menyebabkan terbentuknya beberapa populasi  bakteri  yang  resisten  sehingga zona  hambat  yang  dihasilkan  disekitar cakram  semakin  kecil.  Akan  tetapi,  hal  ini perlu  dilakukan  kajian  lebih  lanjut,  yaitu dengan melakukan penelitian dengan variasi  konsentrasi  yang  lebih  luas  karena
ekstrak yang digunakan dalam penelitian ini merupakan  ekstrak  kasar  dan  belum dimurnikan.
Kontrol positif yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  streptomisin  ntuk E. coli dan  ampisilin  untuk S.  aureus . Diameter  zona  hambat  ampisilin  dengan konsentrasi  0,4 mg/mL sebesar 22 mm dan diameter  zona  hambat  streptomisin  6,25 mg/mL  adalah  sebesar  13  mm.  Hal  ini menunjukkan bahwa bakteri S. aureus yang digunakan pada penelitian ini tidak tergolong resisten terhadap kontrol ampisilin dengan menghasilkan zona hambat  sebesar  22  mm  karena  bakteri S. aureus dapat  dikatakan  resisten  apabila menghasilkan  zona  hambat  kurang  dari  20 mm.  Begitu  juga  pada  streptomisin  untuk bakteri E.  coli menghasilkan  zona  hambat 13 mm. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri E.  coli yang  digunakan  pada  penelitian  ini tidak  resisten  terhadap  streptomisin  karena menghasilkan zona hambat sebesar 13 mm. E.  coli dapat  dikatakan  resisten  terhadap streptomisin  apabila  menghasilkan  zona hambat kurang dari 11 mm.
Ekstrak  metanol  alga  merah E. spinosum tetap dianggap mempunyai potensi  sebagai  antibakteri  karena  dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus pada  konsentrasi  80  mg/mL  sebesar  4  mm dan E.  coli pada  konsentrasi  80  mg/mL sebesar  3  mm  yang  ditunjukkan  dengan adanya  zona  bening  di  sekitar  cakram.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  kekuatan  senyawa antibakteri dalam ekstrak tersebut tergolong lemah.
Kontrol  negatif  digunakan  untuk mengetahui apakah pelarut  yang digunakan juga memiliki potensi menghambat bakteri. Kontrol  negatif  yang  digunakan  ialah metanol.  Hasil  penelitiaan  menunjukkan bahwa  kontrol  negatif  tidak  memberikan zona  hambat  pada  bakteri S.  aureus dan E. coli .  Hal  ini  bisa  diasumsikan  bahwa  tidak ada  pengaruh  dari  pelarut  terhadap  zona hambat yang diberikan oleh ekstrak.

## Identifikasi Golongan Senyawa Aktif
Hasil  identifikasi  golongan  senyawa aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  metanol alga  merah E.  spinosum ditunjukkan  pada Tabel 7.
Hasil identifikasi menunjukkan bahwa ekstrak metanol mengandung golongan  senyawa  flavonoid,  triterpenoid dan asam askorbat.
Tabel  7  Hasil  identifikasi  senyawa  aktif estrak metanol alga merah (E. spinosum)
Golongan Senyawa Ekstrak  metanol  alga merah (E. spinosum) Flavonoid +++ Triterpenoid ++ Steroid Alkaloid - Mayer - Dragendrof Asam Askorbat - - - +
Keterangan:
+++    =  Kandungan  senyawa  lebih  banyak (warna sangat pekat)
++    = Mengandung senyawa (warna cukup pekat)
+      = Mengandung senyawa (berwarna)
-       = Tidak terkandung senyawa
Berbagai  golongan  senyawa  yang terdapat  dalam  alga  merah E.  spinosum sangat  berperan  penting  dalam  pengujian aktivitas  antioksidan  dan  antibakteri.  Hasil pengujian aktivitas antioksidan menunjukkan  bahwa  sampel  alga  merah E. spinosum sangat  aktif  dalam  menghambat oksidasi radikal bebas yang dapat menyebabkan  berbagai  penyakit  seperti penuaan  dini,  arthritis  dan  kanker.  Hal  ini dapat dilihat dari nilai EC 50 masing-masing fraksi yang berkisar antara 12-80 ppm yang menunjukkan  alga  merah E.  spinosum memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat kuat,  sehingga  dari  pengujian  ini  dapat diketahui  bahwa  alga  merah  ini  memiliki manfaat yang sangat penting bagi kemaslahatan umat manusia terutama dalam bidang kesehatan masyarakat.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  metanol  alga  merah E. spinosum mempunyai  aktivitas  antioksidan terhadap  DPPH  dengan  nilai  EC 50 sebesar 22,13  ppm dan  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli dengan daya  hambat  pada konsentrasi 80 mg/mL secara berturut-turut sebesar  4  mm  dan  3  mm.  Uji  fitokimia ekstrak  metanol  alga  merah E.  spinosum menunjukkan  adanya  kandungan  golongan senyawa  flavonoid,  triterpenoid  dan  asam askorbat.

## V. DAFTAR PUSTAKA
AOAC.  1984. Official  Methods  of  Analysis  of the  Association  of    Official    Analitycal
Chemist, Inc . Washington DC: Association of Offcial Analytical Chemists Arindah,  D.  2010.  Fraksinasi  dan  Identifikasi Golongan  Senyawa  Antioksidan  pada Daging Buah Pepino ( Solonum Muricatum  aiton )  yang  Berpotensi sebagai  Antioksidan. Skripsi  Tidak Diterbitkan .  Malang:  Jurusan  Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang Astawan,  M.,  Muchtadi,  D.,  Tutik,  W.,  2001. Pemanfaatan Rumput Laut pada
Berbagai Makanan Jajanan Untuk Mencegah Timbulnya Defisiensi Iodium dan  Penyakit  Degeneratif. Laporan
Penelitian . Bogor: IPB Auterhoff,  H.,  dan  Kovar,  K.A.  1987.
Identifikasi Obat ,  Bandung: ITB Enida,  F.  BR  Naibaho,  Ruth.  2011.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  n-heksana, Etilasetat  dan  Etanol  Rumput  Laut
Coklat ( Sargassum polycystum C.Agardh)  terhadap  bakteri  Escherichia coli  dan  Staphylococcus  aureus. Tugas Akhir Tidak Diterbitkan . Medan: Universitas Sumatera Utara. Faten,  M.,  Abou,  E.,  and  Emad,  A.S.  2009. Antioxidant  Activity  of  Extract  and Semi-Purified  Fractions  of  Marine  Red Macroalga, Gracilaria Verrucosa .
Australian. Journal of Basic and Applied Sciences . Kairo: Biochemistry Department,  Faculty  of  Agriculture, Cairo University Febriany,  S.  2004.  Pengaruh  Beberapa  Ekstrak Tunggal Bangle dan Gabungannya  yang Berpotensi Meningkatkan Aktivitas Enzim  Lipase  Secara  In  Vitro. Skripsi tidak diterbitkan . Bogor: Fakultas MIPA IPB Hudaya, S. dan Daradjat, S. 1981. Dasar-Dasar Pengawetan  I .  Departemen  Pendidikan dan Kebudayaan, Jakarta Indrayani,  L.,  H.  Soetjipto,  dan  L.  Sihasale. 2006.  Skrinning  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas  Ekstrak  Daun  Pecut  Kuda ( Stachytarpheta  jamaicensis L.  Vahl)
Terhadap  Larva  Udang  Artemia  salina Leach. Jurnal  Fakultas  Sains  dan Matematika . Salatiga: Universitas Kristen Satya Wacana.
Iskandar, Yoppi. 2009.  Uji aktivitas antibakteri ekstrak  etanol  rumput  laut  ( Eucheuma cottonii )  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Bacillus  cereus .  Sumedang:
Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Padjadjaran Jatinangor, Sumedang 45363.
Izzati,  Munifa.  2007.  Skreening  Potensi Antibakteri  pada  Beberapa  Spesies Rumput  Laut  terhadap  Bakteri  Patogen pada  Udang  Windu. Laboratorium Fungsi  Tumbuhan .  Vol.  9,  No.  2.  62  – 67 Khazanda,  K.A.,  Wazir,  S.T.G.,  Samina,  K., Shahzadi,  S.  2007    et  al. Antifungal Activity, Elemental Analysis And
Determination  Of  Total  Protein  Of Seaweed,  Solieria  robusta  (Greville)
Kylin  From  The  Coast  Of  Karachi .
National  Center  of  Excellence  for Aanalytical Chemistry. Pakistan: University of Sindh, Jamshoro-76080, Kusumastanto, T. 2011. Pengembangan Sumberdaya Kelautan dalam Memperkokoh  Perokonomian  Nasional Abad 21. Tugas Akhir Tidak Diterbitkan .  Bogor:  Insitut  Pertanian
Bogor
Lestario,  Ninan,  L.,  Sugiarto,  S.,  Timotius, K.H.  2008.  Aktivitas  antioksidan  dan Kadar  Fenolik  Total  dari  Ganggang Merah  ( Gracilaria  verucosa ). Jurnal Teknologi dan Industri Pangan Vol XIX No 2. Salatiga: Universitas Kristen Satya Wacana.
Manilal.  A.,  Sujith,  S.,  Selvin,  J.,  Kiran,  G.S., Shakir,  C.  2009.  In  vivo  Antiviral Activity  of  Polysaccharide  from  the
Indian Green Alga, Acrosiphonia orientalis (J. Agardh): Potential Implication in Shrimp Disease Management, Journal  of  Fish  and Marine Sciences . Department of Microbiology. India: Bharathidasan University Molyneux,  P.,  2003,  The  Use  of  The  Stable Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH),  for  Estimating  Antioxidant Activity. Journal  of  Science  and Technology , Vol 26(2) : 211-219
Rahayu,  D.S.,  Dewi,  K.,  Enny,  F.  2010. Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dari Ekstrak Etanol Daun Ketapang
( Terminalia  catappa L)  dengan  Metode 1,1  difenil  2  Pikrilhidrazil  (DPPH).
Skripsi  Diterbitkan .  Semarang:  Jurusan Kimia FMIPA Universitas Diponegoro.
Rahayu  PW,  Ma’oen  S,  Suliantari,  Fardiaz  S.
1992. Teknologi  Fermentasi  Produk
Perikanan . Bogor: Departemen Pendidikan  dan  Kebudayaan,  Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Pusat Antar Universitas  Pangan  dan  Gizi,  Institut
Pertanian Bogor.
Romimuhtarto,  K.,  dan  Sri  Juwana.  1999. Biologi Laut . Jakarta: Puslitbang Oseanologi LIPI. Rosida  dan  Susiloningsih,  E.K.B.  2007. Pengaruh Konsentrasi Starter Lactobacillus  plantarum dan  Lama Fermentasi  Terhadap  Kualitas dan Kerusakan Produk Terasi. Jurnal Protein : Vol.15 No.2
Setyowati  A,  Hidayati  D,  Awik  PDN, Abdulgani  N.  2009.  Studi  Histopatologi Hati  Ikan  Belanak  ( Mugil  cephalu )  di muara  sungai  Aloo  Sidoarjo. Tugas Akhir  Tidak  Diterbitkan .  Surabaya:
Program  Studi  Biologi  FMIPA,  Institut Teknologi Sepuluh Nopember.
Soetan,  K.,  Oyekunle,  M.,  Aiyelaagbe,  O.,  and Fafunso,  M.,  2006,  Evaluation  of  The Antimicrobial  Activity  of  Saponins Extract  of Sorgum  bicolor L.  Moench, African Journal of Biotechnology , Vol 5 (23): 2405-2407.
Sudarmadji,  S.,  B.,  Haryono,  dan  Suhardi. 2007. Analisis  Bahan  Makanan  dan Pertanian . Yogyakarta: Liberty. Volk.W.A dan Wheeler M.F 1993.
Mikrobiologi  Dasar .  Markham.  Jakarta: PT. Gelora Aksara Pratama.
Wibowo,  S.T.  2001.  Potensi  Jenis-Jenis Rumput  Laut  dari  Pantai  Sayang Heulang-Pameungpeuk  Garut  Sebagai Antibakteri Escherichia  coli . Jurnal Biologi.  Bogor :  Jurusan  biologi,  Institut
Pertanian Bogor
Yuliani, D. 2011. Kajian Aktivitas Antioksidan Fraksi  Etanol  Jintan  Hitam  ( Nigella sativa ,  L.). Skripsi  Tidak  Diterbitkan . Malang:  Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains dan  Teknologi  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
Zakaria, Z.A., Zaiton, H., Henie, E.F.P., Jais, A. M.M.,  and  Zainuddin,  E.N.H.,  2007,  In Vitro Antibacterial Activity of Averrhoa bilimbi  L.  Leaves  and  Fruits  Extracts, International Journal of Tropical Medicine , (Online), 2(3):96- 100,http://www.medwelljournals.com/fu lltext/ijtm/2007/96-100  .pdf,  diakses  1 November 2011.
Zamrodi,  Moh.  2011.  Uji  Fitokimia    dan  Uji
Aktivitas  Antibakteri  Senyawa  Aktif Tanaman Anting-anting ( Acalypha indica L.). Tugas Akhir Tidak Diterbitkan .  Malang:  UIN  Maulana Malik Ibrahim Malang.
Zandi,  K.,  Saeed,  T.  Iraj,  N.,  Zahra,  R., Forough,  Y.,  Samin,  S.,  Kohzad,  S. 2010.  In  Vitro  Antitumor  Activity  of Gracilaria  corticata (A  Red  Alga) Against  Jurkat  And  Molt-4  Human Cancer Cell Lines. Journal of Biotechnology  Bushehr Iran:  University of Medical Sciences