## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI HANDWASH EKSTRAK DAUN TURI (Sesbania grandiflora L) TERHADAP Staphylococus aureus
Submitted : 6 Januari 2021 Edited : 22 Mei 2020 Accepted : 29 Mei 2021
Inur Tivani, Wilda Amananti, Anggy Rima Putri
DIII Farmasi, Politeknik Harapan Bersama Jl. Mataram No.9 Kota Tegal Jawa Tengah Indonesia. Email : tiva.nie40@gmail.com

## ABSTRACT
The  corona  virus  which infects  humans in  almost  all  corners  of the  world  changes  new habits in human life. One of the highly recommended habits is washing your hands with soap. Turi leaves have active substances such as flavonoid compounds and saponins which can be used for making handwash. The purpose of this study was to determine the effectiveness of liquid soap (handwash)  from  turi  leaf  extract  against  Staphylocous  aureus  bacteria.  This  research  was conducted in the microbiology laboratory of the Harapan Bersama Tegal Polytechnic. Turi leaves were extracted using the maceration method with 95% ethanol solvent, then the extract was made by hand washing soap with 3 formulas. The three formulas were then tested on S. aureus bacteria using  the  well  diffusion method  with  three  replications.  The  results  of  this  study  indicate  that formula 1 has a diameter of inhibition of 13.72 ± 0.57mm, formula 2 is 16.36 ± 0.58 mm and formula 3 is 20.36 ± 1.13 mm. Thus it can be concluded that the liquid soap of formula 3 turi leaf extract is the best in inhibiting S.aureus bacteria.
Keywords : antibacterial, turi leaf extract, handwash, S.aureus

## PENDAHULUAN
COVID  19  yang  melanda  dunia membuat  tatanan  kehidupan  yang  baru  dari segala  bidang.  Kebiasaan  masyarakat  pun mau  tak  mau  harus  berubah.  Penerapan menjaga  jarak  dengan  sesama  manusia, memakai masker dan membiasakan mencuci tangan  sudah  menjadi  kebutuhan  yang  mau tak  mau  harus  dilakukan  untuk  mengurangi angka  pasien  yang  terjangkit  COVID-19. Seiring  dengan  meningkatnya  penggunaan sabun  cair  di  era  pademi  ini,  maka  pada penelitian  kali  ini,  peneliti  fokus  pada pembuatan sabun cair dengan berbahan dasar alam yaitu daun turi.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang
dilakukan oleh Wilda, dkk (2017) menyimpulkan bahwa pada daun, tangkai dan biji  tanaman  turi  terdapat  kandungan
senyawa  saponin (1) .  Dari  ketiga  bagian tanaman  tersebut,  daun  turi  memiliki kandungan  saponin  yang  paling  tinggi dibandingkan  dengan  bagian  tanaman  yang lain.  Saponin  dikenal  sebagai  antibakteri. Penelitian Tivani, dkk (2020) juga
menunjukkan  bahwa  perasan  daun  turi mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans (2) . Jadi,  selain  sebagai antibakteri,  saponin  juga  mampu  berfungsi sebagai antifungi. Selain saponin, pada daun turi juga terkandung senyawa flavonoid yang berfungsi pula sebagai zat antibakteri.
Bakteri Staphylococus
aureus
merupakan  salah  satu  bakteri  yang  sering menginfeksi kulit. Bakteri ini dapat menyebabkan  infeksi  kulit  ringan  sampai berat. Maraknya resistensi terhadap antibiotik terutama  pada  bakteri S.aureus,  mendorong
peneliti membuat produk dengan bahan dasar alam guna meminimalisir permasalahan ini.
Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk menguji  keefektifan handwash ekstrak  daun turi dalam menghambat bakteri S. aureus.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  peralatan antara lain beaker glass 500 m L, gelas ukur (Iwaki Pyrex®) 100 mL, cawan petri (Iwaki Pyrex®),  corong  kaca  (Iwaki  Pyrec®), tabung  reaksi  (Iwaki  Pyrex®),  autoklaf (HL36Ac®), timbangan digital (Citizen®MB200),  pelubang  sumuran  (boor prop),  mikropipet  dan  tip  (Acura®), jangka sorong,  inkubator  (Memmert®),  batang pengaduk, Laminar  Air  Flow (LAF),  kertas aluminium  foil,  kertas  saring  whatman, ayakan 60 mesh, blender, plastik wrap, kapas, kasa. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  antara  lain  daun  turi  yang  di  ekstrak menggunakan metode maserasi, SLS, nipagin,  Carbopol,  gliserin,  EDTA,  Asam sitrat, Trietanolamin, KOH, aquadest, etanol 96%,  alkohol  70%,  Media Nutrient  Agar (NA),  Media Brain  Heart  Infusion (BHI), Media Mueller  Hinton  Agar (MHA), Staphylococcus aureus ATCC 25923.

## LANGKAH KERJA PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  ada  beberapa Langkah dalam pengambilan data penelitian sebagai berikut:
Sterilisasi Alat dan Bahan Penelitian
Alat seperti tabung reaksi, cawan petri, kapas  lidi  (cotton  bud)  dan  juga  media  NA, BHI  dan MHA  disterilkan  menggunakan autoklaf  dengan  suhu  121 0 C  tekanan  1  atm selama 15-20 menit. Sterilisasi jarum ose dan pelubang sumuran dilakukan dengan pemijaran  di  bawah  nyala  api  bunsen. Ruangan  dan  tangan  pengambil  data  di sterilkan menggunakan alkohol 70%

## Pembuatan Ekstrak Daun Turi
Ekstrak daun turi dibuat menggunakan metode  maserasi.  Langkah  yang  dilakukan yaitu  daun  turi  disortasi  kering  agar  semua kotoran  yang  masih  ikut  dalam  sampel
terbuang.  Daun  turi  dikeringkan  di  dalam oven  pada  suhu  80 – 90 0 C. Setelah  kering sampel  diserbukkan  dan  siap  diekstrak. Sebanyak  100  gram  serbuk  simplisia dimasukan  kedalam  bejana  maserasi  lalu ditambahkan  etanol  90%  sebanyak  400  ml. Biarkan selama 1 hari dalam bejana tertutup dan  terlindung  dari  cahaya  sambil  diaduk sesering  mungkin.  Setelah 1  hari,  kemudian disaring  ke  dalam  wadah  penampung  dan ampasnya diekstraksi kembali dengan etanol yang  baru,  maserasi  dilakukan  sebanyak  3 kali  penyarian.  Hasil  penyarian  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan cara diuapkan  dengan menggunakan  penangas hingga ekstrak etanol kental.

## Uji Bebas Etanol
Uji  bebas  etanol  dilakukan  untuk mengetahui  masih  ada  atau  tidaknya  etanol yang  terkandung  dalam  ekstrak.  Melakukan uji  bebas  etanol  dengan  cara masukan  1  ml ekstrak  kental  ke  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan 2 tetes H 2 SO 4 dan 2 tetes asam asetat kemudian dipanaskan. Ekstrak
dikatakan  bebas  etanol  bila  tidak  ada  bau ester yang khas dari etanol.
Pembuatan Sabun Cuci Tangan (Handwash) Ekstrak Daun Turi
Proses  pembuatan  dimulai  dengan mencampurkan  SLS,  nipagin,  dinatrium- EDTA  selanjutnya  dilarutkan  dalam  air suling.  Lalu  ditambahkan  Carbopol  dan ekstrak daun turi yang telah dilarutkan dalam gliserin.  Langkah  berikutnya  menambahkan asam  sitrat  dan trietanolamin  serta  KOH. Terakhir, menambahkan  air  suling  hingga 100  mL  dan  diaduk  hingga  homogen. Formulasi sabun cair ekstrak turi dapat dilihat pada tabel 1.

## Tabel 1. Formulasi Handwash Ekstrak Daun
Turi (modifikasi) (3) Nama Bahan Formula (%) I II III Kontrol Ekstrak daun turi 6 8 10 - SLS 3 3 3 3 Nipagin 0,1 0,1 0,1 0,1 Carbopol 1 1 1 1 Gliserin 5 5 5 5 Dinatrium -EDTA 0,1 0,1 0,1 0,1 Asam Sitrat 0,5 0,5 0,5 0,5 Trietanola min 1 1 1 1 KOH 1 1 1 1 aquadest Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100

## Uji Identifikasi Saponin
Uji  identifikasi  senyawa  saponin dilakukan  dengan  mencampurkan  0,5 gr sampel ke dalam 10 ml air panas, kemudian dikocok  kuat-kuat  selama  10  detik.  Jika terbentuk  buih  yang  bertahan  selama  10 menit artinya zat tersebut positif mengandung senyawa saponin.

## Uji Identifikasi Flavonoid
Memasukan  2  ml  filtrat  sampel kedalam tabung reaksi, Menambahkan 2 ml etanol  95  %  dan  2  ml  HCl  2N  kemudian menambahkan 10 tetes HCl pekat. Mengamati  perubahan  warna  yang  terjadi apabila sampel berubah warna merah, biru, ungu  sebagian  kuning  menunjukan sampel mengandung senyawa flavonoid.

## Pembuatan Media NA, BHI dan MHA
Langkah  pertama  yang  dilakukan yaitu  menyiapkan  media  NA<  BHI  dan MHA  instan  untuk  ditimbang  sebesar  6 gram untuk NA, 11,1 gram untuk BHI dan 11,4  gram  untuk  MHA.  Selanjutnya, masing-masing media ditambahkan 300 mL aquadest untuk dipanaskan hingga
mendidih.  Langkah  selanjutnya  masing- masing media di cek pH menggunakan pH meter.  pH  yang  baik  untuk  ketiga  media tersebut  yaitu  6,8-7,0.  Terakhir  media  NA dan  BHI  dituangkan  ke  dalam  tabung reaksi,  ditutup  menggunakan  kapas  dan kasa  sedangkan  untuk  media  MHA diletakkan  ke  dalam  petridish  untuk selanjutnya  dibungkus dengan kertas aluminium foil. Media NA, BHI dan MHA kemudian disterilkan ke dalam autoklaf dan sebelum  digunakan  diinkubasi  terlebih dahulu selama 24 jam pada suhu 37 o C.

## Pembuatan Inokulum Bakteri S. aureus
Persiapan  yang  dilakukan  sebelum pengujian  yaitu  menyiapkan  inokulum bakteri  S.  aureus.  Langkah  awal  yaitu memindahkan  bakteri  dari  media  induk  ke media  NA  miring,  selanjutnya  diinkubasi pada suhu  37 o C  selama  24  jam.  Langkah selanjutnya  memindahkan  bakteri  dari  NA miring  kedalam  BHI  cair  menggunakan jarum  ose  steril.  Inkubasi  kembali selama 2x 24 jam pada suhu 37 o C.
Pengujian antibakteri handwash ekstrak daun turi
Handwash yang telah dibuat
selanjutnya  diujikan  ke  bakteri S.  aureus guna  mengetahui  keefektifannya  dalam menghambat bakteri tersebut. Pada penelitian ini dilakukan pengujian antibakteri melalui metode difusi sumuran.
Langkah  awal  yang  dilakukan  yaitu menyiapkan media BHI yang telah diinkubasi selama 2x24 jam dan juga cawan petri  yang  telah  berisi  media  MHA  steril. Langkah selanjutnya menyiapkan kapas lidi steril  untuk  dicelupkan  ke  dalam  media BHI  cair  yang  telah  berisi  biakan  bakteri S.aureus dan mengusapkannya pada permukaan  media  MHA  hingga  rata, biarkan  mengering  selama  lima  menit. Langkah  berikutnya  menyiapkan  pelubang sumuran  (boor  prop dengan  diameter  6
mm),  disterilkan  terlebih  dahulu  dengan cara  pemijaran  selanjutnya  melubangi media  MHA  yang  telah  dioles  bakteri S.aureus  sebanyak  tiga  lubang  sumuran untuk  handwash  formula  1,  formula  2  dan formula  3.  Pada  cawan  yang  terpisah, dibuat  2  lubang  sumuran  untuk  mengisi kontrol  negatif  yaitu handwash tanpa  zat aktif  (kontrol  negatif),  dan  satu  sumuran lagi  untuk  kontrol  positif  yaitu  antibiotik amoxicillin 30 μg menggunakan mikropipet  masing-masing  sebanyak  100 µ L.  Masing-masing  perlakuan  dibuat replikasi  sebanyak  tiga  kali.  Terakhir menginkubasi cawan petri yang telah berisi perlakuan  selama  24  jam  pada  suhu suhu 37 o C.

## Analisis Data
Hasil dari pengujian aktivitas antibakteri yaitu terbentuknya zona bening di  sekitar  sumuran.  Pembacaan  daerah hambat dilakukan dengan mengukur diameter total zona bening yang mengelilingi  lubang  sumuran  dengan menggunakan  jangka  sorong. Uji  aktivitas antibakteri yang  paling  baik  ditandai dengan  diameter  daerah  hambat  yang terbentuk.  Semakin  luas  diameter  daerah hambat maka kemampuan alam menghambat bakteri semakin baik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 2. Hasil Uji bebas etanol Keterangan Gambar 2 tetes ekstrak + 2 tetes Asam Asetat + 2 tetes H 2 SO 4
Tabel  2 merupakan  hasil  uji  bebas etanol.  Tujuan  dilakukan  uji  ini  untuk memastikan  jika  ekstrak  kental  tersebut merupakan  ekstrak  murni  dan  tidak  ada kandungan etanol di dalamnya.
Berdasarkan  tabel  uji  bebas  etanol  diatas menunjukkan bahwa hasil uji ekstrak kental daun turi yang diperoleh tidak tercium bau ester, hasil tersebut dapat dikatakan ekstrak kental daun turi sudah bebas etanol. Ekstrak yang  tidak  mengandung  etanol  ditandai dengan  tidak  berbau  ester  pada  saat dipanaskan  setelah  penambahan  asam asetat  dan asam  sulfat.  Ekstrak  ini kemudian diencerkan dengan aquades steril menjadi beberapa macam konsentrasi yakni 6%, 8% dan 10% untuk selanjutnya dibuat sabun  cuci  tangan  (handwash).  Untuk memastikan  adanya  senyawa  antibakteri yaitu  senyawa  flavonoid  maka  dilakukan uji identifikasi  senyawa tersebut.  Hasil uji identifkasi  flavonoid  dapat  dilihat  pada tabel 3.

## Tabel 3. Hasil  Uji  Identifikasi  senyawa
saponin Reaksi Hasil Keterangan 0,5 gr sampel + 10 ml air panas + dikocok kuat-kuat selama 10 detik Terbentuk buih yang bertahan selama 10 menit +
Dari hasil tabel 3 menunjukkan bahwa sampel daun turi yang digunakan sebagai zat aktif  dalam  pembuatan  sabun  cuci  tangan (handwash)  memang  positif  mengandung senyawa saponin.

## Tabel 4. Hasil  Uji  Identifikasi Senyawa Flavonoid
Keterangan Gambar 2  tetes  ekstrak +  2  ml  etanol 95%  +  2  ml
HCl 2 N  +  2  ml HCl Pekat
Terlihat  pada  tabel  4 bahwa  sampel daun turi yang digunakan sebagai zat aktif dalam  pembuatan  sabun  cuci  tangan (handwash)  memang  positif  mengandung senyawa  flavonoid. Penambahan  etanol bertujuan  untuk  melarutkan  flavonoid karena flavonoid mudah larut dalam etanol, kemudian  penambahan  HCl  2N  bertujuan agar  flavonoid  dapat  terdistribusi  secara optimal  dalam  larutan  HCl  yang  bersifat polar,  yang  terakhir dengan  meneteskan HCl  pekat  pada  sampel  bertujuan  untuk menghidrolisis flavonoid menjadi
aglikonnya (4) .
Pada  tabel  5  menunjukkan  bahwa formula  1,formula  2  dan  formula  3 memiliki  kekuatan  daya  hambat  dengan kriteria kuat. Rentang daya hambat menurut Repi dkk  (2016)  dengan  rentang  nilai antara  11-20  mm  masuk  dalam  kategori kuat.  Meskipun  tidak  sekuat  dari  kontrol positif,  namun  pada  formula  3  yang  berisi 10%  ekstrak  daun  turi  diameter  hambat yang terbentuk hampir mendekati rentangan  nilai  yang  kuat  >21 (5) . Kontrol negatif  menggunakan  aquadest  steril  tidak terbentuk daerah hambat. Perbedaan diameter hambat yang terbentuk akibat dari persentasi  ekstrak  daun  turi  yang  berbeda dalam pembuatan handwash dimana formula  1  hanya  berisikan  6  %,  formula  2 berisikan 8% sedangkan formula 3 berisikan  10%  ekstrak  daun  turi.  Jadi jelaslah bahwa semakin banyak kandungan ekstrak  daun  turi,  semakin  banyak  pula kandungan zat antibakteri di dalam sediaan
handwash tersebut
sehingga
kemampuannya dalam menghambat bakteri
S. aureus semakin besar. Namun, diameter daya hambat untuk kontrol positif menggunakan antibiotik amoxicillin 30 μg menunjukkan  hasil  yang  jauh  lebih  besar dibandingkan  dengan handwash ekstrak daun turi dengan konsentrasi terbesar 10%.
Antibiotik  amoxicillin  merupakan  jenis antibiotik  dengan  spektrum  luas.  Kaur  et al., (2011) menjelaskan bahwa amoxicillin bekerja dengan cara menghambat biosintesis  dari  mukopeptida  pada  dinding sel  bakteri  ketika  bakteri  melakukan multiplikasi (6) .  Dari  hasil  penelitian  ini terlihat bahwa antibiotik amoxicillin mempunyai  senyawa  kimia  yang  secara langsung berefek lebih cepat dibandingkan dengan  kandungan  senyawa  yang  ada  di dalam  daun  turi  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus. Adanya  penghambatan handwash daun  turi terhadap  bakteri S.  aureus
disebabkan adanya zat aktif yang terkandung  di  dalam  daun  turi  yang  telah teridentifikasi  yaitu  saponin.  Wilda  dkk (2017)  menyatakan  bahwa  kadar  saponin dalam  daun  turi  sebesar  0,536mg/10ml (1) . Cara kerja saponin dalam menghambat atau membunuh bakteri melalui perusakan pada protein dalam sel bakteri sehingga berimbas pada enzim dan protein di dalam sel  menjadi  bocor  atau  pecah (7) .  Selain saponin, senyawa flavonoid yang teridentifikasi  juga  berfungsi  sebagai  zat antibakteri.  Sukadana  (2010)  menyatakan bahwa  flavonoid  mempunyai  kekuatan dalam  menghambat  bakteri  tumbuh (8) . Sebagai zat antibakteri, senyawa flavonoid bekerja  melalui  pembentukan  senyawa kompleks. Senyawa ini selanjutnya bergabung  dengan  protein  ekstraseluler, akibatnya senyawa  ini  terlarut.  Dengan demikian, membran sel bakteri dapat rusak seiring  senyawa  intraseluler  yang  keluar dari  sel (9) .  Menurut  Cowan  (1999)  adanya Cincin  beta  serta  gugus – OH  yang terkandung  di  dalam  flavonoid  merupakan struktur  utama  yang  berperan  dalam aktivitas antibakteri (10) .
Tabel 5. Uji Aktivitas Antibakteri Metode Difusi Sumuran Formula Sabun Diameter Total (mm) Rata-Rata ± Standar Deviasi (mm) Kontrol Positif Kontrol Negatif RI R2 R3 F1 14,04 13,06 14,06 13,72 ± 0,57 32,04 ± 2,04 0 F2 16,01 17,03 16,04 16,36 ± 0,58 F3 21 21,02 19,05 20,36 ± 1,13

## Gambar 1. Hasil Daya Hambat S.aureus

## SIMPULAN
Handwash ekstrak daun turi formula 3 paling  efektif  dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wilda,  Tivani.  Kandungan  Saponin
Daun,  Tangkai  dan  Biji  Tanaman  Turi (Sesbania  grandiflora L).  Prosiding Senit 2017 Politeknik Harapan Bersama. 2. Tivani, Inur dan Amananti, Wilda. 2020.
Uji Efektivitas Antifungi Perasan Daun
Turi  (Sesbania  grandiflora (L.)  Pers.) terhadap  Jamur Candida albicans. Jurnal  Pharmacy.  Vol.17  No.1  Hal  35-
40
3. Nur  I  Akib;  Mariani  Triwatami;  Andi E.P  Putri.  2019.  Aktivitas Antibakteri Sabun  Cuci  Tangan  yang  Mengandung Ekstrak Metanol Rumput Laut Eucheuma  spinosum.  EISSN:  2443- 0218 4. Dayu.  P.  N.  2014.  Uji  Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  Metanol  Daun Kenikir  (Cosmos  caudatus  Kunth) Terhadap  Bakteri Salmonella  typhi. Skripsi.  Malang  :  Universitas  Islam Negeri Maulana Ibrahim Malik.
5. Repi,  Noviano  B.,  Christi  Mambo,  dan
Jane Wuisan. 2016. “Uji Efek Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Kayu  Manis (Cinnamomum  burmannii)  Terhadap Esherichia  coli  dan  Streptococcus pyogenes.” Universitas  Sam  Ratulangi Manado 6. Kaur  SP,  Rao  R,  Nanda  S.  2011. Amoxicillin: A Broad Spectrum Antibiotic. India. 3(3):30-37 7. Madduluri, Suresh. Rao, K.Babu. Sitaram B. 2013. In Vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indegenous Plants Extract Against Five Bacterial Pathogens of Human. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. Volume 5(4): hal 679-684.
8. Sukadana,  I.  M.  2010.  Aktivitas Antibakteri  Senyawa  Flavonoid  dari Kulit  Akar  Awar-Awar  (Ficus  septica Burm F). Jurnal Kimia, 4(1): 63-70.
9. Amalia, Alfi; Sari, Irma; Nursanty, Risa. 2019. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Daun Sembung (Blumea balsamifera (L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Methicillin Resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  . Prosiding Seminar Nasional Biotik 2017 ISBN: 978-602-60401-3-8 387. Volume 7 Nomor 1 10. Cowan,  M.M.  1999.  Plant  Product  as Antimicrobial Agent. Clinical Microbiology Reviews,12(4):564- 582