Efek Antihiperglikemik Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona muricata Linn.)  dan  Ekstrak  Etanol  Buah  Belimbing  Wuluh ( Averrhoa  bilimbi Linn.)  serta  Kombinasinya  pada  Mencit  Jantan ( Mus musculus )

## Wahyuni
* , Henny Kasmawati, Nur Rahmayani
Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo Kendari 93232

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi antihiperglikemik ekstrak  etanol daun sirsak ( Annona muricata L.), ekstrak etanol buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) serta kombinasi dosis kecil dan kombinasi dosis besarnya dan pebandingan efektivitasnya terhadap akarbose. Uji antihiperglikemik dengan metode toleransi glukosa oral pada mencit jantan yang diberikan tiap kelompok sediaan uji yaitu dosis tunggal ekstrak etanol buah belimbing wuluh 0,105 g/KgBB, dosis tunggal ekstrak etanol daun sirsak 0,28 g/KgBB, kombinasi dosis kecil 0,05 g/KgBB ekstrak buah belimbing wuluh ditambah 0,14 g/KgBB ekstrak daun sirsak,  kombinasi  dosis  besar  0,105  g/KgBB  ekstrak  buah  belimbing  wuluh  ditambah  0,28  g/KgBB  ekstrak  daun  sirsak,  dan akarbose  6,5  mg/KgBB.  Setelah  30  menit  pemberian  sediaan  uji  kemudian  diberikan  pembebanan  sukrosa  3g/KgBB.  Data diperoleh dari pemeriksaan kadar glukosa darah pada menit ke 60, 90, 120, 150 dan 180. Untuk melihat perbedaan penurunan kadar glukosa  darah  dilakukan  dengan  uji  statistik  ANOVA one-way dan  dilanjutkan  dengan  uji  LSD.  Berdasarkan  hasil  penelitian diketahui bahwa keempat kelompok ekstrak uji dapat menurunkan kadar glukosa darah. Kelompok kombinasi dosis besar dan kombinasi  dosis  kecil  memiliki  efektivitas  yang  sama  dengan  akarbose  dosis  6,5  mg/KgBB,  maka  dosis  yang  paling  efektif menurunkan kadar glukosa darah adalah kelompok kombinasi dosis kecil 0,05 g/KgBB ekstrak buah belimbing wuluh ditambah 0,14 g/KgBB ekstrak daun sirsak.
Kata Kunci : antihiperglikemik, akarbose, Averrhoa bilimbi , Annona muricata

## 1. Pendahuluan
Hiperglikemia adalah  penyakit  degeneratif  yang angka kejadiannya cukup tinggi di berbagai negara dan merupakan  salah  satu  penyakit  yang  menjadi  masalah kesehatan  masyarakat [1]. Hiperglikemia  merupakan keadaan peningkatan  glukosa darah dari rentang kadar puasa  normal  80 - 90  mg/dL  darah,  atau  rentang  non puasa sekitar 140-160 mg/dL darah [2]. Kebanyakan dari kasus  hiperglikemia  biasanya  akan berlanjut  menjadi penyakit  diabetes  mellitus  (DM)  dengan  ditunjang pemeriksaan klinis seperti kadar gula darah puasa di atas 126 mg/dL dan kadar gula darah 2 jam setelah makan di atas 200 mg/dL [3]. Menurut World Health Organization (WHO), penderita  diabetes  mellitus  di  Indonesia menempati urutan ke empat terbanyak di dunia setelah Amerika  Serikat,  Cina,  dan  India.  Data  tersebut menyebutkan bahwa lebih dari 346 juta penduduk dunia mengidap diabetes pada tahun 2010 dan 21,3 juta orang
* KBK Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, email : wahyunimipa@gmail.com
di antaranya merupakan penderita diabetes di Indonesia. Jumlah ini  meningkat dari tahun 2000 yang berjumlah 8,4 juta penderita [4]. Terapi dengan obat-obat sintetis sering menemui kegagalan, antara lain disebabkan efek samping dan biaya yang tinggi akibat pengobatan jangka panjang . Terapi dengan obat alternatif dari tanaman obat yang  memiliki  efek  antihiperglikemik  merupakan pilihan  pengobatan  yang  baik,  selain  kurangnya  efek samping  juga  dapat  meningkatkan  peluang  untuk sembuh,  minimal  dengan  kadar  glukosa  darah  yang terkontrol [5].
Tanaman di Indonesia yang dapat memberi manfaat sebagai  antihiperglikemia  adalah  tanaman  sirsak (Annona  muricata L.),  bagian  yang  diduga  memiliki khasiat adalah daunnya. Beberapa penelitian yang telah dilakukan  menyebutkan  bahwa ekstrak daun  sirsak mampu  menjadi  antidiabetes  secara in  vivo melalui
Wahyuni, dkk : Efek Antihiperglikemik Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn.) dan Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.) serta Kombinasinya pada Mencit Jantan (Mus musculus)
mekanisme  penurunan  stres  oksidatif  dan  penurunan kadar glukosa darah [6], dan secara in vitro ekstrak air dan  etanol daun  sirsak  mampu  menunjukkan  daya inhibisi  terhadap  aktivitas  enzim  α-glukosidase [7]. Tanaman  obat  lain  yang  digunakan  sebagai antihiperglikemia  adalah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.), dimana air  perasan  buah  belimbing  wuluh dapat menurunkan kadar glukosa darah mencit diabetes yang  diinduksi  aloksan [8].  Ekstrak  alkohol  buah belimbing wuluh dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus wistar ( Rattus norvegicus) yang diinduksi aloksan [9]. Selain itu, diketahui pula bahwa ekstrak etanol buah dan  daun  belimbing  wuluh  dapat  menurunkan  glukosa darah tikus yang dibuat diabetes [10].
Berdasarkan  uraian  diatas  maka  dilakukan  uji  efek antihiperglikemik  ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona muricata L.) dan ekstrak etanol buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)  serta kombinasinya pada  mencit jantan ( Mus musculus ).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Alat dan Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah aquadest,  sukrosa,  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoea  bilimbi fructus) ,  daun  sirsak  ( Annona muricata folium) , mencit jantan, akarbose, etanol 96% , natrium carboxy  methyl  cellulosse 1  %    (Na CMC), logam  Mg,  FeCl 3, kloroform,  asam  asetat  anhidrat, H 2 SO 4, etanol  95%,  amoniak  5%,  HCl  10%,  pereaksi Mayer,  pereaksi  Dragendorff,  dietil  eter,  amil  alkohol, gelatin, kapas, kertas saring, dan pakan standar mencit.
Alat-alat  yang  digunakan antara  lain alat-alat  gelas (Pyrex), kandang mencit, lumpang dan stamfer, sarung tangan  (Safety  gloves),  sendok  tanduk,  toples  kaca, timbangan digital, neraca hewan (GW-1500), timbangan Analitik, Rotary evaporator , gunting, blender (Phillips), glukometer (Easy Touch), glukotest strip (Easy Touch), sonde  oral, aluminium  foil ,  kertas  saring, waterbath , sudip, restrainer , stopwatch , botol semprot, pipet tetes, pipet  ukur,  batang  pengaduk,  pinset,  gunting,  vial  dan tutup,  hot  plate,  plat  tetes,  cawan,  rak  tabung  reaksi, piknometer, kaca arloji, dan chamber.

## 2.2 Penyiapan Ekstrak
Serbuk simplisia daun sirsak sebanyak 500 gram dan buah  belimbing  wuluh  sebanyak  850  gram  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  96  %, Filtrat yang dikumpulkan kemudian dipekatkan dengan rotary vacuum evaporator (Buchi) pada suhu 50 0 , yang
selanjutnya diuapkan  dengan water  bath sampai diperoleh ekstrak kental.

## 2.3 Uji Toleransi Glukosa
Hewan uji dikelompokkan secara acak dibagi dalam tujuh  kelompok,  tiap  kelompok  terdiri  dari  5  ekor mencit, dilakukan penimbangan bobot badan awal untuk semua hewan uji sebelum dilakukan pengujian. Setelah dipuasakan selama 10-12 jam, lalu diukur kadar glukosa darah mencit dengan mengambil sampel darah dari vena ekor  untuk  penentuan  kadar  glukosa  awal  (t 0 ). Selanjutnya Kelompok Kontrol Normal (KN) diberi Na. CMC  1%,  Kelompok  Kontrol  Negatif  K(-)  diberi Na.CMC  1  %,  Kelompok  Kontrol  Positif  K(+)  diberi akarbose 6,5 mg/kgBB, Kelompok uji DT1 diberi 0,105 g/KgBB  ekstrak  tunggal  buah  belimbing  wuluh, Kelompok  uji  DT2  diberi  0,28  ekstrak  tunggal  daun sirsak, Kelompok KK yang diberi kombinasi dosis kecil 0,05  g/KgBB  ekstrak  buah  belimbing  wuluh  ditambah 0,14  g/KgBB  ekstrak  daun  sirsak,  kelompok  KB  yang diberi  Kombinasi  dosis  besar  0,105  g/KgBB  ekstrak buah  belimbing  wuluh ditambah  0,28  g/KgBB  ekstrak daun sirsak.
Setelah  30  menit,  semua  hewan  uji  diberi  larutan sukrosa 3 g/kgBB secara oral. Selanjutnya kadar glukosa darah diukur selama periode waktu menit ke-60, 90, 120, 150,  dan  180  dengan  menggunakan  glukometer easy touch .

## 2.4 Analisis Statistik
Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan program  statistika IBM-SPSS.  Beda  nyata  antar perlakuan diuji dengan one way ANOVA, jika terdapat beda nyata dilanjutkan dengan pengujian LSD (p<0,05).

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil penapisan  fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak  etanol  daun  sirsak  dan  buah  belimbing  wuluh mengandung  berbagai  senyawa metabolit  sekunder seperti alkaloid dan flavonoid ( Tabel 1 )
Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh Dan Ekstrak Etanol Daun Sirsak Golongan Buah Belimbing Wuluh Daun Sirsak Alkaloid + + Flovonoid + + Tanin - - Saponin - + Steroid + + Keterangan : (-)  tidak terdeteksi, (+) terdeteksi
Wahyuni, dkk : Efek Antihiperglikemik Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn.) dan Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.) serta Kombinasinya pada Mencit Jantan (Mus musculus)
Kadar  zat  terlarut ini  merupakan  uji  kemurnian ekstrak  untuk  mengetahui  jumlah  terendah  kandungan kimia  ekstrak  yang  terlarut  dalam  pelarut  yang digunakan,  dimana  kedua  jenis  ekstrak    sesuai  dengan persyaratan MMI [11] ( Tabel 2 ).
Dari  hasil  penelitian  dapat  dilihat  bahwa  terjadi peningkatan kadar glukosa darah mencit pada menit ke- 60. Hal ini disebabkan karena pembebanan sukrosa yang diberikan.  Kadar  glukosa  darah  meningkat  seiring dengan  pencernaan  dan  penyerapan  glukosa  dari makanan.  Kadar  glukosa  darah  individu  sehat  dan normal tidak melebihi 140 mg/dL.
Profil  kadar  glukosa  darah  pada  pengujian antihiperglikemia ( Gambar 1 ) menunjukkan pada menit ke  60  untuk  kelompok  K(-)  terjadi  peningkatan  kadar glukosa  darah  yang  tinggi  dibandingkan  kelompok perlakuan  yang  lain.  Terjadinya  peningkatan  kadar glukosa darah disebabkan karena Kelompok K(-) hanya diberikan suspensi Na.CMC 1 % sehingga tidak mampu menekan  kenaikan  kadar  glukosa  darah  akibat pembebanan  sukrosa  dibandingkan  dengan  kelompok yang  diberikan  bahan  uji  DT1,  DT2,  KK,  KB  dan kelompok  K(+)  mampu  menekan  kenaikan  kadar glukosa darah akibat pembebanan sukrosa.
Adanya  kandungan  senyawa  dalam  kedua  ekstrak tanaman  dapat  mencegah  terjadinya  absorbsi  glukosa menuju brush  border  intestinal diusus  halus  dan menghambat  enzim  α-glikosidase,  terhambatnya aktivitas enzim ini menyebabkan berkurangnya glukosa yang diserap oleh usus sehingga berkurang pula glukosa yang  masuk  ke  dalam  aliran  darah,  sehingga  sediaan ekstrak dapat menekan peningkatan kadar glukosa darah oleh  sukrosa  yang  diberikan,  yang  juga  akan menurunkan keadaan hiperglikemia.
Dari  profil  penurunan  kadar  glukosa  darah  pada menit  ke-90,  120,  150,  dan  180, data  yang diperoleh kemudian  diuji  sebaran  datanya  menggunakan  uji Homogeneity  of Variances ,  karena  nilai  signifikan  uji homogeneity lebih besar dari 0,05 (P>0,05)  maka dapat dikatakan  bahwa  sebaran  datanya  homogen  sehingga
memenuhi  syarat  dilakukan  uji  statistik  untuk  melihat apakah  ada  perbedaan  yang  signifikan  dari  ketujuh kelompok  menggunakan  program  SPSS  ( Statistical Product and Service Solution ) ANOVA one-way .
Gambar 1. Profil Peningkatan dan penurunan kadar glukosa darah setelah pemberian sukrosa
Tabel 2 . Karakterisasi ekstrak Jenis Karakterisasi Ekstrak Buah belimbing wuluh Daun sirsak Kadar Sari Larut Air (%) 14,62 43,07 Kadar Sari Larut Etanol (%) 30,76 52 Bobot Jenis (g) 0,8 0,76 Persayaratan MMI * Tidak kurang dari 18% Tidak kurang dari 12,5% * Materia Medika Indonesia [11]
Tabel 3. Data rata-rata pengukuran kadar glukosa darah (mg/dL) pada metode toleransi glukosa oral
Kelompok Kadar Glukosa Darah (mg/dL) t0 t60 t90 t120 t150 t180 KN 80±9,98 79±9,81 79±9,5 77±9,7 76±9,7 75±9,4 K(-) 75±2,55 197±2,74 176±4,0 171±6,8 135±2,9 124±4,0 K(+) 89±3,03 171±1,92 126±4,0 101±4,8 85±5,3 74±5,3 DT1 82± 10,9 184±3,05 151±4,6 121±9,0 111±9,2 105±8,6 DT2 78±9,89 181±2,41 147±5,40 117±9,5 96±9,8 90±9,98 KK 90±4,82 179±2,74 137±2,9 112±7,9 92±6,2 82±5,1 KB 89±2,88 170±1,87 128±4,4 91±9,9 76±10,0 64±9,6 Keterangan : KN : Kontrol normal K(-) : Kontrol negatif (Na.CMC) K(+) : Kontrol positif (akarbose 6,5 mg/kgBB)
DT1 : Kelompok dosis tunggal buah belimbing wuluh DT2 : Kelompok dosis tunggal daun sirsak KK : Kelompok Kombinasi dosis kecil KB : Kelompok Kombinasi dosis besar
Wahyuni, dkk : Efek Antihiperglikemik Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn.) dan Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.) serta Kombinasinya pada Mencit Jantan (Mus musculus)
Analisis  data  menggunakan  ANOVA one  way menunjukkan  bahwa  nilai  p<0,05 yang  berbeda bermakna  pada  kelompok  perlakuan.  Analisis dilanjutkan  dengan  metode  LSD  untuk  melihat kelompok  yang  mengalami  perbedaan  bermakna, dimana hasil penelitian  menunjukkan penurunan kadar glukosa darah oleh tiap kelompok mulai t 90 sampai t 180 . Rata-rata kadar glukosa darah kelima kelompok berbeda bermakna p<0,05 terhadap kelompok K(-) ( Tabel 3 ). Ekstrak metanol daun  keji  beling (Strobilanthes crispus BI .) tidak tidak  menunjukkan  adanya  potensi toksisitas akut terhadap Artemia salina L. dengan nilai LC 50 sebesar    4427,95  µg/mL.  Sedangkan  ekstrak metanol  bunga  dan  batang  jarak  tintir  ( Jatropha multifida L.)  memiliki  potensi  toksisitas  akut  terhadap Artemia salina
L. dengan nilai LC 50 sebesar 225,086 dan 253,29µg/mL (interpretasi low toxic )
Daftar Pustaka 1. Depkes, 2005, Pharmaceutical care untuk penyakit Diabetes  Melitus,
Direktorat  Jenderal  Bina Kefarmasian  dan  Alat  kesehatan  Departemen Kesehatan RI, Jakarta
2. Corwin  EJ.  2001, Buku  Saku  Patofisiologi , terjemahan dari Handbook of pathophysiology oleh Brahm U, Pendit, Jakarta : EGC 3. Sukandar,  E.  Y.,  2009, ISO  Farmakoterapi ,  PT ISFI. Jakarta.
4. World  Health  Organization,  2010,  Definition, diagnosis andclasification of diabetes melitus and its complications, Geneva, WHO Publishing
5. Marianne,  Yuandani,  Rosnani,  2011,  Antidiabetic Activity  from  etanol  ekstrak  of  kluwih’s  leaf  ( Artocarpus camansi ), jurnal natural vol.11 (2 ) 6. Adewole,  S.O.,  Ezkiel,  A.,  Martins,  C.,  2006, Morphological  changes  and  hypoglycemic  effects of Annona  muricata linn.  (Annonaceae)  leaf aqueous  extract  on  pancreatic  β-cells  of streptozotocin-treated diabetic rats, African Journal of Biomedical Research 9 : 173-187. 7. Purwatresna,  E.,  2012,  Aktivitas  Antidiabetes Ekstrak  air  dan  etanol  Daun  sirsak  secara  in  vitro melalui  inhibisi  Enzim  α  Glukosidase, Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor 8. Armenia,  Megawati,  Rusdi,  2004,  Efek  penurun gula  darah  air  perasan  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi Linn) pada mencit diabetes yang diinduksi  aloksan  dan  mencit  yang  dibebani glukosa, Jurnal sains dan teknologi Farmasi Vol. 9 (2). 2IIIM. 62-69. ISSN 1410-0177 9. Candra, S., 2012,  Pengaruh pemberian ekstrak buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi Linn) terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  tikus  wistar  yang diinduksi aloksan. Laporan Hasil KTI, Universitas Diponegoro, Semarang 10. Pushparaj, P.C.H Tan & B.H.K. Tan, 2000, Effect of Averrhoa Bilimbi leaf extract on blood glucose and  lipids  in  streptozotacin  Diabetic  Rats. J Ethnopharmacol. 72 (1-2) : 69 – 76 11. Depkes  RI,  Materia  Medika  Indonesia,  jilid  VI, 1995
Tabel 5. Data Analisis Lanjutan Metode LSD
Kelompok KN K(-) K(+) DT1 DT2 KK KB KN 0 -59.000* -9.200 -35.200* -20.400* -16.000* .200 K(-) 59.000* 0 49.800* 23.800* 38.600* 43.000* 59.200* K(+) 9.200 -49.800* 0 -26.000* -11.200* -6.800 9.400 DT1 35.200* -23.800* 26.000* 0 14.800* 19.200* 35.400* DT2 20.400* -38.600* 11.200* -14.800* 0 4.400 20.600* KK 16.000* -43.000* 6.800 -19.200* -4.400 0 16.200* KB -.200 -59.200* -9.400 -35.400* -20.600* -16.200* 0 Keterangan : * = p<0,05 berbeda bermakna antar kelompok