PENGARUH FERMENTASI Actinobacillus sp. PADA KOTORAN SAPI SEBAGAI PUPUK TERHADAP PERTUMBUHAN Nannochloropsis sp.
FERMENTATION OF Actinobacillus sp. ON COW DUNK AS FERTILIZER ON THE GROWTH OF Nannochloropsis sp.
Linda Megawati Yanuaris, Rahayu Kusdarwati dan Kismiyati
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Phytoplankton  is  a  live  feed  that  is  needed  by  aquatic  organisms  and  aquaculture,  one  of Nannochloropsis sp. Cow dunk has potential as an organic fertilizer in the culture of Nannochloropsis sp. Nitrogen  and  Phospore  content of  cow  dunk to meet  the  growing  needs  of Nannochloropsis sp.,  so the cow  dunk  used  as  fertilizer  can  be  environmentally  friendly  alternatives.  Cow  dunk  is  used  as  an alternative  fertilizer  fermented  by  the  bacteria Actinobacillus sp.  so that the  content of  N  and  P  can  be increased.  N  and  P  levels  can  be  used Nannochloropsis sp.  to  grow  and  affect  the  population  of Nannochloropsis sp.
The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  and  optimal  concentration  of  bacteria Actinobacillus sp.  for the  fermentation  process  cow  manure  as  fertilizer  in  increasing  the  population  of Nannochloropsis sp.  The  research  design  used  was  Completely  Randomized  Design  (CRD).  The optimum  concentration of cow dung used was 10% with a  five-day  fermentation time. Culture over the last  five  days.  Treatment  of  primary  studies  used  were  a  control  treatment  D  (Walne  fertilizer),  two control  treatments  E  (fertilizers  without  fermentation),  treatment  A  (under  optimum  bacterial concentration  (7.5%)), Treatment  B  (optimum  bacterial  concentration  (10%  )),  Treatment  C  (above  the optimum  concentration  of  bacteria  (12.5%)).  The  results  showed  that  the  addition  of  fermented  cow manure  was  cultured  in  sea  water  media  can  increase  the  population  of Nannochloropsis sp.  The  best fermentation  to  produce  the  highest  population  is  treatment  B  (optimum  bacterial  concentration  (10%)) produces the highest population of Nannochloropsis sp. 2.175x106 cell/mL on the first day. Water quality parameters during the study is within the tolerance for the growth of Nannochloropsis sp., pH 7-8, room temperature between 30-31 o C, ranging between 35-49 ppt salinity and water temperature ranges between 26-31 o C.
Keywords : Nannochloropsis sp., Cow dunk, Actinobacillus sp.

## Pendahuluan
Budidaya  pakan  alami  adalah  suatu usaha  kultur  pakan  alami  guna  memenuhi kebutuhan dalam kegiatan pembenihan ikan dan non  ikan.  Pakan  alami  terdiri  dari  dua  jenis yaitu zooplankton dan phytoplankton. Phytoplankton  merupakan  pakan  hidup  yang sangat  dibutuhkan  oleh  organisme  akuatik budidaya,  salah  satunya Nannochloropsis sp. Nannochloropsis sp. merupakan makanan hidup bagi golongan ikan jenis-jenis tertentu sehingga seringkali  sangat  diperlukan  dalam  budidaya. Nannochloropsis sp. memiliki kandungan nutrisi  seperti  protein  (52,11%),  karbohidrat (16%), lemak (27,64%), vitamin C (0,85%), dan klorofil  A  (0,89%)  (Fulks and Main,  1991). Kebutuhan  nutrient  bisa  didapat  dari  pupuk buatan (anorganik) atau dengan cara memanfaatkan  limbah  peternakan  (organik),
seperti  kotoran  sapi.  Kotoran  sapi  merupakan salah  satu  limbah  peternakan  yang  potensial untuk  kultur Nannochloropsis sp. karena memiliki  komposisi  N  (5  kg/ton),  P2O5 (3
kg/ton)  dan  K2O  (5  kg/ton),  serta  unsur  hara esensial  lain  dalam  jumlah  yang  kecil  (Kunti dkk dalam Hardjowigeno,  2003).  Tumbuh pesatnya  fitoplankton  berkaitan  erat  dengan faktor nutrisi yang ada di lingkungannya. Secara umum  fitoplankton  membutuhkan  nutrisi  yang tergolong sebagai unsur makro dan unsur mikro. Adapun  unsur  makro  meliputi  kebutuhan  akan nitrat dan phosphat sebagai dasar nutrien utama disamping  unsur-unsur  mikro  trace  element (Vashista,  1979).  Martosudarmo  dan  Sabarudin (1979)  menyatakan,  faktor  kimia  juga  dapat menjadi  faktor  pembatas  dalam  pertumbuhan fitoplankton yaitu salinitas, pH, suhu dan CO2.
Secara  umum  dapat  disebutkan  bahwa
setiap ton pupuk kandang  mengandung 5 kg N, 3  kg  P2O5,  5  kg  K2O,  serta  unsur-unsur  hara esensial  lain  dalam  jumlah  yang  relatif  kecil (Kunti,  dkk dalam Hardjowigeno,  2003).  Pada kotoran  ternak  ruminansia,  khususnya  sapi mempunyai  kandungan  selulosa  yang  cukup tinggi.  Berdasarkan  hasil  analisis  diperoleh bahwa  kotoran  sapi  mengandung  22,59  % sellulosa,  18,32  %  hemi-sellulosa,  10,20  % lignin,  34,72  %  total  karbon  organik,  1,26  % total nitrogen, 27,56:1 ratio C:N, 0,73 % P, dan 0,68  %  K  (Lingaiah  dan  Rajasekaran,  1986). Salah  satu  bakteri  yang  terdapat  dalam  kotoran sapi  adalah  bakteri Actinobacillus sp.  Bakteri Actinobacillus sp. adalah bakteri
hemisellulolitik  karena  mampu  mendegradasi hemisellulosa  sehingga  dapat  mempercepat proses  fermentasi.  Berdasarkan  hal  inilah  perlu dikaji  tentang  kotoran  sapi  yang  di  fermentasi dengan  bakteri Actinobacillus sp.  Apakah pemberian  bakteri Actinobacillus sp.  dengan konsentrasi  berbeda  pada  kotoran  sapi  sebagai pupuk dapat meningkatkan
populasi Nannochloropsis sp.  dan  apakah  terdapat konsentrasi  optimal  bakteri Actinobacillus sp. untuk  proses  fermentasi  kotoran  sapi  sebagai pupuk dalam meningkatkan populasi Nannochloropsis sp. Dengan  demikian,  perlu  dilakukan penelitian untuk mengetahui penggunaan bakteri Actinobacillus sp.  sebagai  fermentor pada  kotoran  sapi  sehingga  hasil  fermentasi kotoran sapi dapat dimanfaatkan  sebagai  media pemeliharaan Nannochloropsis sp. Hasil
penelitian  diharapkan  dapat  memperoleh  hasil fermentasi  kotoran  sapi  yang  mengandung nutrisi yang tinggi untuk pertumbuhan
Nannochloropsis sp.

## Metodologi
Kegiatan  penelitian  telah  dilaksanakan pada bulan Mei-November 2010 di
Laboratorium Perikanan Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga. Materi  penelitian  yang  digunakan terdiri  atas  bahan  dan  alat  penelitian.  Bahan penelitian yang digunakan adalah
Nannochloropsis sp., kotoran sapi, isolat bakteri Actinobacillus sp.  (hasil  penelitian  Lamid dkk. , 2006),  tetes  tebu  4  %,  pupuk  Walne,  aquades, alkohol,  air  laut,  klorin  dan  Na-Thiosulfat. Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  Toples  Kaca,  Aerator,  Selang  Aerator, Plastik,  Pipet  Tetes,  Pipet  Volume,  Mikroskop,
Haemocytometer , Handtally Counter , Autoclave , Refraktometer, pH Universal, Termometer,  Timbangan  Digital  Ohaus  PA 2102,  Lampu  Neon,  Kapas,  Corong  Air,  Kasa,
Aluminium Foil, dan Kertas Saring.
Metode  penelitian  adalah  metode penelitian  eksperimental,  yang  terdiri  dari  dua tahap, penelitian tahap I dan tahap II. Penelitian ini terdiri dari dua tahap yaitu tahap I dan tahap II.  Tahap  I  bertujuan  untuk  mengetahui  atau menentukan  konsentrasi  dan  lama  fermentasi yang  akan  digunakan  pada  penelitian  tahap  II. Tahap II bertujuan untuk menentukan Konsentrasi optimal inokulasi bakteri
Actinobacillus sp.  sebagai  bekteri  fermentasi kotoran sapi untuk pupuk terhadap pertumbuhan Nannochloropsis sp. Rancangan penelitian yang digunakan  adalah  RAL  dengan  satu  perlakuan yaitu  Konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp. pada  fermentasi kotoran sapi.  Konsentrasi  yang digunakan  adalah  Konsentrasi  optimal  hasil penelitian  tahap  I,  Konsentrasi  dibawah  dan diatas Konsentrasi optimal, serta digunakan dua kontrol,  yaitu  tanpa  pemberian  bakteri  serta penggunaan  pupuk  walne.  Pada  tahap  II  ini, lama  fermentasi  tidak  lagi  menjadi  perlakuan. Lama fermentasi pada tahap II didapat dari lama fermentasi yang optimal pada tahap I.
Sebelum  melakukan  penelitian  tahap  I dan  tahap  II,  dilakukan  persiapan  peralatan antara  lain  sterilisasi  alat,  bahan  dan  media, persiapan  kotoran  sapi  yang  diperoleh  dari kandang  sapi  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Airlangga  Surabaya,  persiapan sediaan  isolat  bakteri  murni  yang  dikultur  pada media  agar  NA  didapat  dari  hasil  penelitian Lamid dkk . (2006).
Proses  fermentasi  ini  diawali  dengan mencampur    tetes  tebu  4  %,  1,5  ml  air;  5  gr kotoran  sapi  dan  isolat Actinobacillus sp. dengan  konsentrasi  sesuai  perlakuan  0%, 5%,10%  dan  15%  dari  berat  kotoran  sapi  yang akan difermentasi yaitu 5 gr didapat konsentrasi 0  ml,  0,25  ml,  0,5  ml,dan  0,75  ml.  Kemudian diaduk merata. Setelah itu dimasukkan ke dalam plastik  selanjutnya  diinkubasi  dalam  jangka waktu  5,7,  dan  9  hari  sesuai  perlakuan  pada suhu  27-32º  C.  Kotoran  sapi  hasil  fermentasi kemudian  dikeringkan  selama  7  hari  pada  suhu ruang  antara  25–32 o C  untuk  mengurangi  kadar air  sebelum  dibuat  sebagai  larutan  pupuk  dan mengurangi kerja bakteri fermentor. Berikutnya pembuatan media atau pupuk kotoran sapi hasil fermentasi dilakukan pada tahap I dan tahap II. Pada  tahap  I  kotoran  sapi yang  telah difermentasi  dengan  isolat Actinobacillus sp.
0%,  5%,  10%  dan  15%  selama  5,  7  dan  9  hari ditimbang masing-masing  sebanyak  5  g dilarutkan  dalam  500  mL  aquadest  untuk mendapatkan  konsentrasi  larutan  10  ppm  dan penggunaan  dalam  kultur Nannochloropsis sp. adalah 1 ppm (Satyantini dan  Masithah, 2008).
Pada  tahap  II  pupuk  yang  digunakan adalah pupuk dengan  konsentrasi optimal hasil penelitian  tahap  I,  konsentrasi  dibawah  dan diatas konsentrasi optimal dengan lama fermentasi  tidak  lagi  menjadi  perlakuan. Kontrol  pada  penelitian  tahap  II  ada  2  yaitu kontrol negatif dengan pupuk tanpa penambahan  bakteri  dan  kontrol  positif  dengan pupuk Walne didapat dari BBAP Situbondo.
Lingkungan  kultur    dikondisikan  sama untuk  setiap  perlakuan  pada  tahap  I  maupun tahap  II  yaitu  pada  suhu  20-30 o C,  salinitas  30- 33 ppt, pH 8-9,5, intensitas cahaya 1000–10000 lux  dan  photoperiod  18  jam  dalam  keadaan terang dan 6 jam dalam keadaan gelap (Hirata et al .,  1981).    Rak  kultur  ditutupi  dengan  plastik hitam,  agar  suhu  ruang  stabil,  mengatur photoperiod dan untuk menghindari kontaminan. Pertumbuhan fitoplankton ditandai
dengan  pertambahan  kepadatan  fitoplankton yang  dikultur  (Mudjiman,  2008).  Parameter yang  diamati  adalah  kepadatan  populasi Nannochloropsis sp.  yang  dihitung  dengan menggunakan  haemositometer  dan  pengukuran kualitas air.
Data  populasi Nannochloropsis sp. dianalisis menggunakan  uji  ANAVA ( Analysis of  Variance )  untuk  mengetahui  pengaruh  dari perlakuan  yang  diberikan.  Apabila  terdapat pengaruh  penambahan  fermentasi  kotoran  sapi dengan  bakteri Actinobacillus sp.  konsentrasi berbeda terhadap populasi Nannochloropsis sp., maka dilakukan uji lanjutan dengan menggunakan  Uji  Jarak  Berganda  Duncan ( Duncan’s Multiple Range Test ) dengan α=0,05 untuk  mengetahui  perlakuan  yang  optimal (Kusriningrum, 2009).

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengamatan  penelitian  tahap  I berupa kepadatan populasi Nannochloropsis sp. untuk mengetahui pengaruh pemberian fermentasi kotoran sapi oleh bakteri
Actinobacillus sp.  dan  lama  fermentasi  terbaik terhadap  populasi Nannochloropsis sp.  Hasil pengamatan penelitian tahap II berupa kepadatan  populasi Nannochloropsis sp.  untuk mengetahui pengaruh pemberian bakteri
Actinobacillus sp.  dengan  konsentrasi  berbeda pada  kotoran  sapi  sebagai  pupuk  terhadap populasi Nannochloropsis sp.  dan    mengetahui konsentrasi  optimal  bakteri Actinobacillus sp. untuk  proses  fermentasi  kotoran  sapi  sebagai pupuk dalam meningkatkan populasi Nannochloropsis sp.
Hasil terbaik dan konstan didapat pada fermentasi  kotoran  sapi  dengan  konsentrasi bakteri Actinobacillus sp.  10  %  dalam  waktu fermentasi  5  hari  selanjutnya  digunakan  untuk penelitian tahap yang ke II. Hasil analisis varian (ANAVA)  pada  hari  pertama  sampai  hari kelima  menunjukkan  bahwa  masing-masing perlakuan  memberikan  pengaruh  yang  berbeda nyata (p<0,05) terhadap populasi Nannochloropsis sp. Hasil pengamatan penelitian berupa penghitungan pertumbuhan Nannochloropsis sp. dari hari  pertama  sampai hari  kelima yang  telah  dianalisis  menggunakan diagram garis disajikan pada Gambar 1 dibawah ini.  Pada  perlakuan  E  (tanpa  fermentasi), perlakuan  B  (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  10%)  dan  perlakuan  C  (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  12,5%)  populasi  terus meningkat  mulai  hari  ke  0  kultur  hingga  hari pertama  dan  menurun  pada  hari  keempat. Perlakuan  D  (walne)  dan    perlakuan  A (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  7,5%)
Gambar 1.   Grafik  Populasi Nannochloropsis sp. Setelah  Penambahan  Pupuk  Kotoran  Sapi Fermentasi Dengan Bakteri Actinobacillus sp. Pada Media Kultur Hari Pertama Sampai Hari Kelima.
populasi meningkat mulai hari ke 0 kultur hingga hari ke dua dan menurun pada hari keempat
Data grafik populasi gambar 1. Tampak bahwa  hari  pertama  merupakan  puncak  populasi Nannochloropsis sp. pada perlakuan B (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  10  %), perlakuan  C  (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  12,5%)  dan    perlakuan  E  (tanpa  fermentasi). Hari  ke  dua  merupakan  puncak  populasi Nannochloropsis sp. pada perlakuan A (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp. 7,5%) dan perlakuan  D  pupuk  walne.  Grafik  penurunan populasi Nannochloropsis sp.  perlakuan  A (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  7,5%), perlakuan  B  (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp.  10  %)  perlakuan  C  (konsentrasi  bakteri Actinobacillus sp. 12,5%), perlakuan  D  (  pupuk  walne)  dan  perlakuan  E (tanpa fermentasi) terjadi pada hari keempat.
Gambar 1 menunjukkan bahwa penambahan  bakteri Actinobacillus sp.  pada kotoran  sapi  sebagai  pupuk  terhadap  populasi Nannochloropsis sp. yang dikultur pada media air laut  terdiri  dari  4 fase yaitu adaptasi, eksponensial,  stasioner  dan  kematian.  Fase adaptasi terjadi  setelah  penambahan  inokulum  ke dalam  media  kultur,tetapi  tidak  nampak.  Fase eksponensial  terjadi  pada  hari  penambahan inokulum ke dalam media kultur Nannochloropsis sp.  sampai  hari  ketiga  (perlakuan  B,C  dan  E) sedangkan perlakuan  A dan D pada  hari pertama sampai  hari  ketiga.  Fase  kematian  terjadi  pada hari kelima (perlakuan A, B, C, D dan E).
Berdasarkan  hasil  penelitian  perlakuan lama  fermentasi  terbaik  adalah  perlakuan  B (fermentasi  5  hari).  Uji  laboratorium  kadar nitrogen  dan  fosfor  sebelum  fermentasi  adalah 1,3333  %  dan  1,48  %.  Kadar  unsur  nitrogen kotoran  sapi  setelah  fermentasi  menggunakan bakteri Actinobacillus sp.  Terjadi  peningkatan menjadi  1,4497  %  sedangkan  kadar  unsur  fosfor mengalami penurunan menjadi 0,37 %.
Hasil  pengukuran  kualitas  air  selama penelitian  dilakukan  setiap  hari.  Kualitas  air adalah factor penunjang
pertumbuhan Nannochloropsis sp.  kualitas  air  yang  diukur antara  lain pH, salinitas dan  suhu  air. pH selama penelitian berkisar pada 7-8, salinitas antara 35-49 ppt dan suhu air berkisar antara 26-31 o C. Hasil  penghitungan  ANAVA  pada lampiran menunjukkan bahwa penggunaan pupuk dari kotoran sapi yang difermentasi menggunakan bakteri Actinobacillus sp.  menghasilkan  populasi yang  berbeda  nyata  pada  semua  perlakuan  (p  < 0,05).  Data  pertumbuhan Nannochloropsis sp. terjadi  peningkatan  populasi  pada  hari  pertama, Peningkatan  tersebut  diduga  karena  adanya pengaruh  nyata  dari  penambahan  pupuk  kotoran
sapi yang  difermentasi Actinobacillus sp. Peningkatan jumlah populasi Nannochloropsis sp. diperlukan  kandungan  nutrient  antara  lain nitrogen dan fosfor.
Kotoran  sapi  mengandung  nutrien  yang dapat  dimanfaatkan Nannochloropsis sp.  yaitu nitrogen.  Setiawan    (2002)    mejelaskan  bahwa kotoran  sapi  memiliki  kandungan  N,  P,  dan  K yang  tinggi  sebagai  pupuk  kompos  mampu mensuplai  unsur  hara  yang  dibutuhkan  untuk pertumbuhan tanaman maupun fitoplankton salah satunya Nannochloropsis sp.  Kualitas  unsur  hara kotoran sapi dapat ditingkatkan dengan fermentasi menggunakan  bakteri Actinobacillus sp.  Peranan Actinobacillus sp.  adalah  sebagai  fermentor karena  bersifat  hemisellulolitik  karena  memiliki kemampuan mendegradasi hemisellulosa menjadi xilosa, arabinosa, glukuronat, galaktosa dan asetat (Subramaniyan  dan  Prema,  2002)  yang  terdapat dalam  kotoran  sapi  sehingga  unsur  organik  dan kualitasnya  dapat  ditingkatkan.  Unsur  penting yang dibutuhkan
fitoplankton dalam pembentukan  klorofil  adalah  nitrogen  (Vashista, 1979).    Berdasarkan  hasil  penelitian  tentang fermentasi  kotoran  sapi  menggunakan  bakteri Actinobacillus sp.  terlihat  bahwa  kadar  unsur  N meningkat.  Peningkatan  rasio  N  dan  P  terjadi setelah  kotoran  sapi  difermentasi  menggunakan bakteri Actinobacillus sp.  Rachmawati  (2002) mengemukakan  bahwa  rasio  nitrogen  dan  fosfor yang  sesuai  untuk  pertumbuhan  fitoplankton berkisar  antara  25  :  1.  Akan  tetapi  rasio  N  :  P setelah  fermentasi  lebih  tinggi  dari  rasio  ideal, diduga  kebutuhan  nutrient  bagi Nannochloropsis sp.  lebih  tercukupi  dibanding  rasio  N:P  sebelum fermentasi.
Pada  Gambar  1  menunjukkan  bahwa Nannochloropsis sp. mengalami 4 fase pertumbuhan yaitu fase adaptasi, fase eksponensial,  fase  stasioner  dan  fase  kematian. Hal  ini  sesuai  dengan  yang  diungkapkan  oleh Isnansetyo  dan  Kurniastuty  (1995)  bahwa  fase pertumbuhan  plankton  ada  4  fase  yaitu  fase adaptasi,  fase  eksponensial,  fase  stasioner  dan fase  kematian.  Fase  adaptasi  kurang  dari  24  jam terjadi  setelah  penambahan  plankton  ke  dalam media kultur sehingga tidak Nampak terlihat pada grafik Gambar 6. Hal ini disebabkan karena unsur nitrogen  didalam  media  kultur  diduga  tersedia cukup banyak sehingga pertumbuhan Nannochloropsis sp. dapat cepat terjadi. Richmond (1986) menyatakan bahwa ketersediaan unsur nitrogen mempengaruhi pertumbuhan Nannochloropsis sp.  Pada  fase  ini ukuran  sel  meningkat,  fitoplankton  menjadi  aktif dan terjadi sintesis protein. Organisme mengalami metabolisme, tetapi belum mengalami pembelahan  (Isnansetyo  dan  Kurniastuty,1995).
Sintesis  protein  akan  berjalan  baik  apabila nitrogen tersedia  dalam  jumlah  yang cukup (Sze, 1993).  Sumber  nitrogen  yang  digunakan  untuk pertumbuhan Nannochloropsis sp.  dalam  media kulturnya  berasal  dari  kotoran  sapi  yaitu  sebesar 1,4497 %. Fase berikutnya adalah fase
eksponensial  yang  terjadi  pada  hari  kesatu,  pada fase  ini  diduga  ketersediaan  nutrient  untuk pertumbuhan Nannochloropsis sp.  habis  terserap hingga hari kedua. Sehingga populasi Nannochloropsis sp.  meningkat.  Sesuai  dengan pendapat Isnansetyo dan Kurniastuty (1995) yang menyatakan  bahwa  fase  eksponensial  ditandai dengan  meningkatnya  pembelahan  sel  sehingga populasi Nannochloropsis sp.  akan  mengalami puncak  pertumbuhan.  Hal  ini  dikarenakan  oleh ketersediaan  nutrient  fosfor  yang  cukup  dan kondisi lingkungan kultur yang sesuai. Richmond (1986)  menyatakan  bahwa  unsur  fosfor  sangat diperlukan  dalam  proses  metabolisme  sel  serta transfer  energi.  Nutrien  fosfor  yang  terkandung dalam  pupuk  kotoran  sapi  terfermentasi  yang digunakan dalam penelitian ini sebesar 0,37 %.
Fase stasioner yang diduga terjadi antara hari kedua (setelah puncak fase eksponensial) dan hari ketiga (fase kematian) tidak jelas terlihat pada grafik  karena  pengamatan  populasi  selama penelitian dilakukan 24 jam sekali. Fase stasioner terjadi  dalam  waktu  singkat,  diduga  akibat  dari populasi  yang  padat,  sedangkan  nutrient  telah habis  terserap.  Fase  kematian  disebabkan  saat populasi  meningkat,  penetrasi  cahaya  menurun, terjadi  pula  persaingan  dalam  mendapatkan oksigen  dan  nutrient.  Populasi  yang  meningkat, penetrasi cahaya yang mampu ditangkap Nannochloropsis sp.  menurun  sehingga  akan menyebabkan  terjadinya  peningkatan  kematian jumlah sel (Wijaya, 2006).
Peningkatan pertumbuhan Nannochloropsis sp. pada perlakuan B, C dan E mulai terlihat pada pengamatan sehari setelah penambahan Nannochloropsis sp. pada media kultur, sedangkan  A  dan  D  peningkatan  pertumbuhan terlihat pada hari kedua. Jumlah populasi tertinggi terdapat  pada  perlakuan  B  (konsentrasi  10%), kemudian  tertinggi  kedua  pada  perlakuan  D (pupuk  Walne).  Hal  ini  diduga  karena  nutrient yang  dihasilkan  oleh  konsentrasi  bakteri  10  % memenuhi  kebutuhan  nutrient Nannochloropsis sp., sedangkan pada perlakuan D (pupuk Walne ), komposisi yang ada dalam pupuk walne menurut Cahyaningsih, 2009 adalah Na2EDTA, NaH2PO4.2H2O, FeCl3.6H2O, H3BO3, MnCl2.4H2O,  NaNO3  dan  Na2SiO3.9H2O,
vitamin  didalam  walne  terdiri  dari  B1  dan  B12, untuk  larutan  logam  mikro  berupa  ZnCl2, CuSO4.5H2O,  ZnSO4.7H2O,  CoCl2.6H2O  dan
(NH4)6.Mo7O24.4H2O. Walne merupakan komposisi  yang  sesuai  untuk  pertumbuhan Nannochloropsis sp. sehingga dapat meningkatkan populasi Nannochloropsis sp.
Perlakuan  A dan E dapat  meningkatkan populasi Nannochloropsis sp.  tetapi  kurang optimal,  diduga  disebabkan  karena  nutrient  yang dihasilkan  oleh  konsentrasi  pada  perlakuan  A (konsentrasi  7,5%)  kurang  memenuhi  kebutuhan nutrient  yang  digunakan Nannochloropsis sp. Nutrient  yang dihasilkan oleh perlakuan E (tanpa fermentasi)  diduga  terlalu  sedikit  karena  proses perombakan  bahan  organik  didalam  kotoran  sapi hanya  dilakukan  oleh  bakteri  yang  ada  didalam kotoran sapi itu sendiri.
Selain faktor nutrien, kualitas air selama kultur  ikut  berpengaruh  pada  pertumbuhan populasi Nannochloropsis sp.  Parameter  kualitas air  yang  mendukung  pertumbuhan  populasi Nannochloropsis sp. antara lain salinitas,suhu dan pH.  Parameter  kualitas  air  selama  penelitian masih  berada  pada  batas  toleransi.  Menurut Sylvester dkk., (2002), salinitas yang sesuai untuk kultur Nannochloropsis sp.  berkisar antara 25-35 ppt,  tetapi  salinitas  selama  penelitian  berkisar antara  33-49  ppt.  Hal  ini  diduga  karena Nannochloropsis sp.  tidak  lagi  memanfaatkan nutrient  yang  ada  di  media  kultur.  Selain  itu salinitas juga dipengaruhi karena adanya penguapan  yang  tinggi  akibat  tingginya  suhu media  kultur  (Meadwos and Campbell,  1988). Salinitas  air  berpengaruh  terhadap  tekanan osmotik  suatu  perairan.  Semakin  tinggi  tekanan osmotiknya  maka  salinitas  suatu  perairan  akan semakin tinggi. Bagi organisme akuatik multiseluler, tekanan osmotik sel terkait  langsung dengan penyerapan nutrien untuk metabolismenya (Handayani, 2002). Menurut  Hirata et  al., (1981)  suhu  air yang  baik  untuk Nannochloropsis sp  berkisar antara  25-30 o C,  sedangkan  suhu  selama penelitian  berkisar  antara  26-28  untuk  pagi  hari dan 29-31 untuk suhu siang hari. Suhu air media kultur  mempengaruhi  prose  pertukaran  zat,kadar oksigen  dan  laju  reaksi  kimia.  Suhu  air dipengaruhi  oleh  intensitas  cahaya  yang  berasal lampu  dan  radiasi  sinar  matahari.  Suhu  selama penelitian sesuai untuk pertumbuhan Nannochloropsis sp. karena berada dalam kisaran suhu yang normal. Pengontrolan derajat keasaman (pH) media kultur sangat penting dilakukan untuk menjaga keseimbangan pertumbuhan Nannochloropsis sp.  pH  media  kultur  selama penelitian berkisar antara 7- 8. Menurut Hirata et al., (1981)  pH  yang  baik  untuk  kultur
Nannochloropsis sp. berkisar 8.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa pemberian bakteri Actinobacillus sp.  dengan  konsentrasi  berbeda pada  kotoran  sapi  sebagai  pupuk  dalam  media kultur berpengaruh terhadap populasi Nannochloropsis sp. Perlakuan dengan
konsentrasi  10%  dari  berat  kotoran  sapi  yang difermentasi  isolat  bakteri Actinobacillus sp. dengan jangka  waktu fermentasi 5 hari menghasilkan pertumbuhan populasi
Nannochloropsis sp.  yang  optimal. Pemberian perlakuan  fermentasi  kotoran  sapi  dengan konsentrasi  10%  isolat  bakteri Actinobacillus sp.
dengan  jangka  waktu  fermentasi  5  hari  dapat meningkatkan pertumbuhan populasi Nannochloropsis sp. dan  mampu  menjadi
pengganti pupuk komersial Walne. Perlu dilakukan  penelitian  tentang  penggunaan  isolat bakteri Actinobacillus sp.  Pada  pertumbuhan populasi Nannochloropsis sp.  dengan  kisaran waktu fermentasi yang lebih lama.

## Daftar Pustaka
Cahyaningsih,  S.  2009.  Jurnal  Teknis  :  Produksi Pakan  Alami.  Departemen  Kelautan  dan Perikanan  Direktorat  Jendral  Perikanan Budidaya  Balai  Budidaya  Air  Payau Situbondo. Hal 1 – 35.
Fulks,  W.  And  K.I.  Main.  1991.  Rotifer  and Microalgae  Culture  Systems.  Proceeding of  a  U.S.  Asia  Workshop.  The  Oceanic Institute, Honolulu. Hawai. 364 p.
Handayani,  L.  2002.  Pertumbuhan Spirulina platensis Yang  Dikultur  Dengan  Ekstrak Kotoran  Puyuh.  Skripsi.  Program  Studi Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu  Kelautan  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor, pp. 2 - 19.
Hardjowigeno,  S.  2003.  Ilmu  Tanah.  PT.
Medyatama  sarana  Perkasa.  Jakarta.  Hlm. : 73-76.
Hirata,  H.,  A.  Ishak,  and  S.  Yamashaki.  1981. Effect of Salinity and Temperature on The
Growth  of  The  Marine  Phytoplankton
Chlorella  saccharophila . Journal  of  the Kagoshima  Univ  of  Fisheries .  Japan.  30 (2) : 257-262.
Isnansetyo,  A.  dan  Kusniastuty.  1995.  Teknik
Kultur  Phytoplankton  dan  Zooplakton,
Pakan Alami untuk Pembenihan
Organisme  Laut.  Kanisius.  Yogyakarta. 116 hal.
Kusriningrum.  2009.  Perancangan  Percobaan.
Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas
Airlangga.  Airlangga  University  Press.
Surabaya. Hal 5-69
Lamid, M., S. Chuzaemi, N. T. Puspaningsih dan
Kusmartono.  2006.  Inokulasi  Bakteri Xilanolitik  Asal  Rumen  sebagai  Upaya
Peningkatan  Nilai  Nutrisi  Jerami  Padi. Fakultas  Kedokteran  Hewan    Universitas Airlangga. Surabaya. http//www. mirnilamid@yahoo.com.  11/03/2010.  7 hal Lingaiah V. and P Rajasekaran. 1986.
Biodigestion  of  cowdung  and  organic wastes  mixed  with  oil  cake  in  relation  to energy  in  Agricultural  Wastes 17(1986):
161-173
Martosudarmo,  B.  dan  S.  Sabarudin.  1979. Makanan  Larva  Udang.  Balai  Budidaya Air Payau. Jepara.
Meadows,  P.  S.and  J.  L.  Campbell.  1988.  An Introduction  to  Marine  Science.  John Wiley and Sons. New York.
Mudjiman, A. 2008. Makanan Ikan Edisi Revisi. Penebar Swadaya. Jakarta. 186 hal.
Rachmawati,  D.  2002.  Pertumbuhan Dunaliella salina,  Phaeodactylum  tricormitum, dan
Anabaenopsis circularis Dalam Rario N/P Yang  Berbeda  Pada  Skala  Laboratorium.
Tesis. Institut  Pertanian Bogor. Bogor. 33
hal Richmond,  A.  1986.  CRC  Handbook  of
Mikroalga  Mass  Culture.  CRC  Press  Ino. Florida. p. 156 – 190.
Satyantini,  W.  H  dan  E.  D.  Masithah  2008.
Pemilihan  Jenis  dan  Nilai  Nutrisi  Pakan Alami. Universitas Airlangga.Surabaya.
Setiawan,  A.I.  2002.  Memanfaatkan  Kotoran
Ternak. Cetakan ke tiga. Penebar
Swadaya. Jakarta.
Subramaniyan,  S.  and  P.  Prema.  2002.
Biotechnology  of  Microbial  Xylanases  :
Enzymology,  Molecular  Biology  and application. Critical Rev Biotecnol 22: 33- 64 Sylvester, B. D., D. Nelvy, dan Sudjiharno. 2002.
Persyaratan  Budidaya  Fitoplankton  dalam Budidaya  Fitoplankton  dan  Zooplankton. Balai  Budidaya  Laut,  Direktorat  Jendral Perikanan Budidaya Kelautan dan Perikanan. Bandar Lampung. Hal 34 – 57. Sze,  P.  1993. A  Biology  of  the  Algae .  Third Ed.Wm.C.Brown Publishes. 1-81p Vashista, B. R. 1979. Botany for Degree Student. S.  Chand  and  Company  Ltd.  Ram  Nager. New Delhi.
Wijaya.  S.  A.  2006.  Pengaruh  Pemberian Konsentrasi Urea  yang  Berbeda Terhadap pertumbuhan Nannochloropsis  oculata . Skiripsi. Program Studi Budidaya Perairan.  Fakultas  Kedokteran  Hewan. Universitas Airlangga. Surabaya. 2-3 hal.