## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI JAMUR LAUT  YANG BERASOSIASI DENGAN ALGA Halimeda opuntia
Ridwan Sukardi Djakatara 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado,  95115

## ABSTRACT
Algae  is  a  place  of  life  for  various  microorganisms  symbiosis  with  it,  one  of  which  is  fungi. Marine  fungi  are  known  to  have  an  important  contribution  to  the  marine  ecosystem.  Many  types  of marine  fungi  that  have  been  isolated  and  are  known  to  produce  a  number  of  antimicrobial  compounds were become a new choice in the world of health. This study aims to determine the antimicrobial activity of isolates fungi which associated with Halimeda opuntia algae collected from the Bay of Manado against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans. The results showed extracts of fungi that were  associated  with  algae  Halimeda  opuntia  did  not  possesed  antimicrobial  activity  against  S. aureus and E.coli and C. albicans.
Keywords : Antimicrobials, marine fungi, Halimeda opuntia

## ABSTRAK
Alga  merupakan  tempat  hidup  berbagai  mikroorganisme  yang  bersimbiosis  dengannya,  salah satunya ialah jamur. Jamur laut diketahui memiliki kontribusi yang penting bagi ekosistem laut . Banyak jenis jamur laut yang telah diisolasi dan diketahui menghasilkan sejumlah senyawa antimikroba yang kini menjadi  pilihan  baru  di  dunia  kesehatan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas antimikroba dari isolat jamur yang berasosiasi dengan alga Halimeda opuntia yang diperoleh dari Teluk Manado  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan  jamur Candida  albicans .  Hasil penelitian  menunjukkan  ekstrak  dari  jamur  yang  berasosiasi  dengan  alga Halimeda  opuntia tidak memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri S. aureus dan E. coli dan jamur C. albicans .
Kata kunci : Antimikroba , jamur laut , Halimeda opuntia

## PENDAHULUAN
Luas  wilayah  Indonesia  sebagian besar merupakan wilayah perairan.
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan terbesar  di  dunia  yang  mempunyai  panjang pantai  81.000  km  yang  kaya  akan  terumbu karang  dan  biota  laut  lainnya  (Van  Soest, 1989).    United  Nation  Convention  on  the Law  of  the  Sea  (UNCLOS)  melaporkan bahwa  luas  perairan  Indonesia  adalah  5,8 juta  km²  dan  didalamnya  terdapat  27,2% dari seluruh spesies flora dan fauna di dunia. Rumput  laut  atau  lebih  dikenal  dengan sebutan  seaweed  merupakan  salah  satu sumber  daya  hayati  yang  sangat  melimpah diperairan  Indonesia  yaitu  sekitar  8,6%  dari total  biota  di  laut.  Luas  wilayah  yang menjadi  habitat  rumput  laut  di  Indonesia mencapai  1,2  juta  hektar  atau  terbesar  di dunia (Dahuri, 1998).
Rumput  laut  atau  secara  ilmiah dikenal  dengan  istilah  alga  atau  ganggang merupakan  tumbuhan  tingkat  rendah  yang tidak  dapat  dibedakan  antara  bagian  akar, batang, dan daun. Semua bagian tumbuhannya disebut thallus. Secara keseluruhan,  tumbuhan  ini  mempunyai morfologi  yang mirip, walaupun sebenarnya berbeda  (Norziah et  al ., 2000).  Berdasarkan hasil  penelitian  Nufus et  al., (2017),  alga Halimeda  opuntia memiliki  komponen senyawa aktif diantaranya alkaloid, flavonoid, steroid dan triterpenoid.
Kebanyakan senyawa aktif yang terkandung dalam alga Halimeda opuntia menunjukkan aktivitas antibakteri.
Pemanfaatan  mikroorganisme  yang berasal  dari  rumput  laut  menarik  untuk diteliti  karena  berkaitan  dengan  pernyataan McConnell  (1994)  bahwa mikroorganisme yang    berasosiasi    dengan  inangnya  akan memproduksi  senyawa  bioaktif  yang  sama secara  struktural  dan  fungsional  dengan senyawa bioaktif yang diproduksi inang, dan penelitian  seperti  ini  belum  dieksplorasi secara maksimal. Salah satu mikroorganisme laut  yang  mulai  banyak  diteliti  akan potensinya  dalam  bidang  kesehatan  adalah jamur    yang  hidup  berasosiasi  dengan organisme lain (Harvell et al. , 2002)
Jamur laut diketahui memiliki kontribusi yang penting. Banyak jenis jamur laut  yang  telah  diisolasi  dan  diketahui menghasilkan sejumlah senyawa antimikroba,    seperti    alkaloid,    makrolid, terpenoid,  derivat  peptida,  dan  struktur lainnya yang kini menjadi pilihan baru untuk melawan  penyakit  infeksius.  Jamur  laut memiliki kelimpahannya yang tinggi, namun yang  sudah  diteliti  masih  kurang  dari  5%. Jamur  mampu  menghasilkan  senyawa  yang berpotensi diaplikasikan dalam dunia kesehatan  dan  telah  dibuktikan  memiliki banyak  sumber  metabolit  sekunder  aktif yang unik secara struktur (Bugni, 2004).

## METODE PENELITIAN

## Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian yang  menggunakan  metode  eksperimental laboratorium  yang  akan  menguji  aktivitas antimikroba  mikroorganisme  yang  diisolasi dari alga Halimeda opuntia .
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Agustus sampai bulan November 2018 di Laboratorium Farmakognosi, Laboratorium  Fitokimia  dan  Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Farmasi
Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  masker,  sarung  tangan, gunting,  snorkel,  fins,  kantong  plastik, kamera  bawah  laut,  wadah  kaca,  pisau, Erlenmeyer (pyrex), corong, rotary evaporator, timbangan  digital,  gelas  ukur (pyrex),  gelas  kimia  (pyrex),  cawan  petri, corong  pisah  (pyrex),  autoklaf,  pinset, spatula,  pembakar  spritus, magnetic  stirrer , pipet  tetes,  mikro  tub,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator,  cakram ( paper  disc) ,  mikropipet,  vial,  jangka sorong, jarum ose, jas lab.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu alga Halimeda opuntia , bakteri uji
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia  coli ATCC  25922,  jamur  uji Candida  albicans ATCC  1231 , etanol, aquadest,  etil  asetat,  aseton, Potato  Dextro Agar , Nutrient Agar , Glukosa , Polypeptone, MgSO 4 .7H 2 O, Yeast  Extract ,  KH 2 PO 4 , Sukrosa, Starch, Malt Extract, Ebios, larutan H 2 SO 4 1%,  larutan  BaCl 2 1,75%,  larutan NaCl    0,9%,      kloramfenikol paperdisc ,
label,  spidol  permanen, tissue,  aluminium foil , kertas saring, kapas.

## Pengambilan Sampel
Sampel  alga  diambil  dari  perairan Teluk  Manado  menggunakan  alat  bantu ( Scuba Diving ), diambil lalu dimasukkan ke dalam ziper bag dan disimpan dalam cooling box berisi  es  batu  untuk  dibawa  ke Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi.
Isolasi  dan  Purifikasi Jamur  yang Berasosiasi dengan Alga
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan  cara sampel dibersihkan dengan aquades kemudian
dipotong kecil-kecil menggunakan  gunting  dan  pinset  dan dimasukkan  ke  dalam  media  PDA  yang telah  disiapkan.  Sampel  ditanam    di  atas media  PDA  dengan  tiga  titik  pusat  yang berbentuk segitiga. Cawan  petri yang berisi sampel ditutup dan direkatkan menggunakan parafilm,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruangan selama 7x24 jam. Setelah didapatkan isolat jamur, dilakukan pemurnian dengan cara isolat jamur diinokulasikan  ke  media  PDA  yang  baru, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruangan selama 14x24 jam. Selanjutnya diidentifikasi morfologi secara makroskopik untuk menghasilkan isolat jamur murni.

## Kultur Cair
Kultur  cair  dilakukan  dengan  cara biakan  jamur  murni  yang  telah  diperoleh diinokulasikan  ke  dalam  labu  erlenmeyer yang  berisi  (2  gram  glukosa,  0,5  gram
polypeptone ,  0,05  gram  MgSO 4 .7H 2 O,  0,2 gram yeast  extract ,  0,1  gram    KH 2 PO 4, dan 0,1  gram    agar  ditambahkan  100  mL aquades).  Labu  tersebut  kemudian  diaduk menggunakan  alat shaker pada  suhu  27 0 C dengan kecepatan 120 rpm selama 3x24 jam untuk  memperoleh  bibit  kultur.  Setelah didapatkan bibit kultur, kemudian dipindahkan  sebanyak  3  mL  ke  media produksi  yang  berisi  (4,5  gram  sukrosa,  4,5 gram starch ,  1,5  gram ekstrak  malt ,  0,45 Ebios ,  0,75  gram  KH 2 PO 4 ,  dan  0,075 MgSO 4 .7H 2 O dalam 150 mL aquades). Labu tersebut kemudian diaduk menggunakan alat shaker pada  suhu  27 0 C  dengan  kecepatan 120 rpm selama 7x24 jam.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Setelah  proses  fermentasi  dengan kultur  cair  ,  dilakukan  ekstraksi  pada campuran miselium jamur dan broth dengan menggunakan  200  mL  aseton.  Dilakukan Ekstraksi  pada  campuran  miselium  jamur dan  broth  dengan  menggunakan  aseton. Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan shaker pada suhu ruangan dengan kecepatan 150  rpm  selama  5  menit.  Selanjutnya dipisahkan  antara  fase  air  dan  aseton menggunakan  corong  pisah  dan  kertas saring.  Setelah  didaptkan  filtrat  dari  hasil penyaringan  kemudian  diuapkan  dengan rotary evaporator.
Ekstrak cair dari hasil evaporasi, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan pelarut etil asetat sebanyak 200 mL  setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah sampai homogen. Dibiarkan sampai terbentuk dua lapisan. Masing-masing lapisan  ditampung  pada  wadah  yang berbeda.  Lapisan  H 2 O  (air)  kemudian
difraksinasi  lagi  menggunakan  pelarut  etil asetat  sebanyak  200  mL.  Hal  ini  dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Selanjutnya  fraksi  etil asetat dikumpulkan kemudian pelarut diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai  diperoleh  ekstrak  kasar  yang  akan digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara ditimbang  ekstrak  kasar  jamur  dari  alga Halimeda opuntia. . sebanyak 1 mg, kemudian  dilarutkan  dalam  200  μL  CMC sehingga  menghasilkan  konsentrasi  larutan uji sebesar 250 μg/50 μL (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode kertas cakram ( cara Kirby and Bauer ).  Aktivitas  penghambatannya  diuji terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 25923  (bakteri  Gram  positif), Eschrichia coli ATCC  25922  (bakteri  Gram  negatif) dan Candida  albicans ATCC  1231  (jamur), yang digunakan sebagai mikroorganisme uji. Pada  pengujian  aktivitas  antimikroba  ini, cakram  ( paper  disc) yang  digunakan berukuran 6 mm. Suspensi mikroba kemudian  diinokulasikan  ke  dalam  media dan  dihomogenkan.  Kemudian  media  yang telah  diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke dalam cawan petri dan tunggu sampai media memadat. Masing-masing cawan petri diberi label dan nomor sampel yang sesuai. Sampel yang  telah  ditentukkan  konsentrasinya (250μg/50μL)  ditotolkan  pada  masing- masing cakram dengan menggunakan mikropipet.  Letakkan  kertas  cakram  yang telah  ditotolkan  sampel  uji  dengan  pinset
kedalam  cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama 1 x 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam masa inkubasi. Zona bening merupakan petunjuk  kepekaan  mikroba  terhadap  bahan antimikroba  yang  digunakan  sebagai  bahan uji  yang  dinyatakan  dengan  lebar  diameter zona  hambat  (Vandepite,  2005).  Diameter zona hambat diukur kemudian dikategorikan kekuatan  daya  antimikrobanya  berdasarkan penggolongan (Davis dan Stout 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi Sampel
Determinasi  Alga Halimeda  opuntia dilakukan  di  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan  Program  Studi  Ilmu  Kelautan Universitas  Sam  Ratulangi.  Determinasi dilakukan  agar  mengetahui  sampel  yang diambil  dan  dilakukan  pengujian  adalah sampel  yang  sesuai  yaitu  alga Halimeda opuntia.

## Isolasi dan Purifikasi Jamur yang
Berasosiasi dengan Alga
Sampel yang telah disiapkan kemudian dibersihkan dengan aquades untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme epifit,  sehingga  koloni  yang  tumbuh  pada media  isolasi  merupakan  koloni  simbion (Arnold et al ., 2000). Selanjutnya penanaman  jamur  yang  berasosiasi  dengan alga  dilakukan  dengan  cara  dipotong berukuran  kecil  kemudian  ditanam  di  atas media  PDA  yang  telah  disipakan  dan diinkubasi. Inkubasi merupakan suatu teknik perlakuan  bagi  mikroorganisme  yang  telah
diinokulasikan  pada  media  padat  atau  cair, kemudian disimpan pada suhu tertentu untuk dapat  melihat  pertumbuhannya.  Media isolasi  diinkubasi  selama  7x24  jam  pada suhu ruangan dan dipantau setiap hari untuk memeriksa  pertumbuhan  mikroorganisme koloni dari alga.
Koloni jamur berasosiasi yang tumbuh  diamati  perbedaan  karakterisitik secara  makroskopik.  Pada  penelitian  ini setelah 7x24 jam, isolat  jamur  yang tumbuh terlihat  seperti  benang-benang  halus  yang berwarna  putih.  Selanjutnya  pemurnian isolat  jamur  yang tumbuh dilakukan dengan cara diinokulasikan menggunakan jarum ose ke  media  PDA  yang  baru  dan  diinkubasi selama  14x24  jam  pada  suhu  ruangan.  Hal ini  bertujuan  untuk  memisahkan  koloni- koloni  jamur  agar  didapatkan  isolat  jamur dengan  karakteristik  secara  makroskopik yang  mempunyai  morfologi  yang  sama sehingga  dapat  disebut  sebagai  isolat  murni jamur.

## Kultur Cair
Dalam  penelitian  ini,  isolat  jamur dikultivasi sebanyak dua kali dengan periode yang  berbeda.  Kultivasi  pertama  dilakukan selama  3x24  jam  untuk  memperoleh  bibit kultur.  Setelah  hari  ketiga  dari  kultivasi pertama, selanjutnya kultivasi kedua dilakukan selama 7x24 jam untuk memproduksi  senyawa  dari  bibit  kultur. Kultivasi  dilakukan pada media cair dengan metode shaker pada  suhu  27 0 C  dengan kecepatan  150  rpm,  hal  ini  bertujuan  agar semua  nutrisi  yang  dikandung  dalam medium  dapat  digunakan  oleh  jamur  secara optimal sebagai bahan untuk proses metabolismenya sehingga senyawa
antimikroba dapat dihasilkan dengan optimal.
Ekstraksi dan Fraksinasi
Setelah  fermentasi  dengan  cara kultur  cair  selesai,  selanjutnya  diekstraksi dengan metode ekstraksi cair-cair menggunakan  pelarut  aseton.  Penggunaan pelarut  aseton  ini  dikarenakan  aseton merupakan  pelarut  polar dan  mudah menguap.  Aseton  yang  bersifat  polar  akan menarik senyawa yang bersifat polar sampai non  polar  (Sarastani et  al .,  2002).  Proses ekstraksi ini tidak dilakukan dengan metode ekstraksi  panas  karena  dikhawatirkan  ada golongan  senyawa  yang  tidak  tahan  panas. Sampel  diekstraksi  dengan  cara  sampel direndam  dengan  pelarut  aseton  dan  diaduk menggunakan alat shaker pada suhu ruangan selama  ±  5  menit.  Kemudian  filtratnya diuapkan dan diperoleh ekstrak cair. Ekstrak cair  yang  diperoleh  kemudian  difraksinasi dengan  pelarut  etil  asetat. Tujuan  dilakukan fraksinasi  yaitu untuk  memisahkan senyawa berdasarkan perbedaan kepolaran. Fraksinasi dilakukan  sebanyak  tiga  kali  agar  semua senyawa  yang  terkandung  dalam  sampel dapat diambil dengan sempurna. Pelarut etil asetat  digunakan  untuk  menarik  senyawa yang  bersifat  semi  polar,  seperti  fenol, flavonoid,  terpenoid,  dan  steroid  yang memiliki sifat antibakteri tertinggi (Pambayun et  al .,  2007;  Reskika,  2011) Dalam  penelitian  ini,  fraksinasi  dilakukan dengan  metode  FCC  (Fraksinasi  Cair-Cair). Hal  ini    bertujuan  untuk  memisahkan  dan memurnikan kandungan tertentu yang terdapat dalam sampel berdasarkan perbedaan kepolaran (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000). Dalam fraksinasi
cair-cair terjadi
perpindahan solut dari satu fasa ke fasa yang lain.  Pada  fraksinasi  cair-cair,  fasa  yang digunakan  adalah  dua  cairan  yang  tidak saling  bercampur,  biasanya  digunakan  air dan pelarut organik (Harborne, 1987).
Fraksinasi  dilakukan  menggunakan corong  pisah    dengan  cara  ekstrak  cair dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan dicampur dengan pelarut etil asetat , setelah itu  dikocok.  Setelah  dikocok,  didiamkan beberapa  menit  sehingga  terbentuk  dua fraksi  secara  terpisah.  Fraksi  etil  asetat berada  di  lapisan  atas  dan  fraksi  H 2 O  (air) berada  di  lapisan  bawah.  hal  ini  disebabkan karena massa jenis air lebih tinggi dari pada massa  jenis  etil  asetat.  Selanjutnya,  fraksi yang sudah terpisah ditampung dalam wadah yang  berbeda  diuapkan  dan  diperoleh ekstrak  kasar  untuk  pengujian  aktivitas antimikroba.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan dengan  metode  difusi  agar.  Metode  difusi agar dipilih karena memiliki kelebihan yaitu jumlah  zat  yang  digunakan  dapat  diatur, cepat,  mudah  dan  sederhana  (Valgas et  al ., 2007).  Mikroba  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococus aureus ATCC 25923
mewakili  bakteri  Gram  positif, E.  coli ATCC  25922  mewaliki  bakteri  Gram negatif,  dan Candida  albicans ATCC  1231 mewakili  golongan  jamur.  Ketiga  mikroba uji  ini  ada  dalam  tubuh  manusia. S.  aureus umumnya  ditemukan  pada  kulit, E.  coli umumnya  ditemukan  di  usus,  dan C. albicans ditemukan  di  mulut  dan  area kelamin. Pengujian antimikroba ini bertujuan untuk mengetahui apakah terdapat
aktivitas  antimikroba  dari  jamur  laut  yang berasosiasi dengan alga Halimeda opuntia
Dalam  pengujian  ini,  hasil  yang diperoleh  yaitu  tidak  terbentuknya  zona hambat  disekeliling  cakram  yang  ditandai dengan  tidak  adanya  area  bening.  Hal    ini menunjukkan bahwa  tidak  adanya kepekaan mikroba  terhadap  ekstrak  jamur  yang diisolasi dari alga spesies Halimeda opuntia . Pengujian  ini  dilakukan  sebanyak  3  (tiga) kali  pengulangan  dengan  tujuan  untuk  lebih mengakuratkan hasil pengujian yang diperoleh. Kemampuan penghambatan pertumbuhan  mikroba  uji  dipresentasikan oleh  terbentukanya  zona  bening  pada pengujian aktivitas antimikroba. Jamur yang berasosiasi  dengan  alga Halimeda  opuntia tidak mampu mengahasilkan senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, terpenoid,  steroid,  flavonoid,  kuinon,  fenol,
dan  lain  sebaginya.  Senyawa-senyawa  ini sebagian  besar  mempunyai  potensi  sebagai senyawa bioaktif (Tan dan Zou, 2001).
Dalam  pengujian  ini  digunakan kontrol  positif  dan  negatif.  Penggunaan kontrol positif berfungsi sebagai kontrol dari zat  uji,  dengan  membandingkan  diameter daerah  hambat  yang  terbentuk  (Dwijendra, 2014). Sedangkan tujuan penggunaan kontrol  negatif  agar  dapat  mengetahui  ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan  mikroba  uji,  sehingga  dapat dipastikan bahwa aktivitas yang ditunjukkan oleh ekstrak ialah senyawa yang terkandung dalam  sampel  bukan  berasal  dari  pelarut yang  digunakan.  Dalam  penelitian  ini, pelarut  metanol  digunakan  sebagai  kontrol negatif.

## Tabel 1. Kategori respon hambatan pertumbuhan bakteri berdasarkan diameter
zona hambat (Susanto, Sudrajat, & R. Ruga., 2012) Diameter Zona Bening (mm) Kategori ≥ 21 Sangat Kuat 11-20 Kuat 6-10 Sedang <5 Lemah
Tabel  2.  Hasil  pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  antimikroba  ekstrak  jamur yang  berasosiasi  dengan  alga Halimeda  opuntia terhadap  bakteri S.  aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922 dan jamur C. albicans ATCC 1231.
Perlakuan
Rata-rata Diameter Total (mm) SA EC CA Ekstrak Etil Asetat 0,00 0,00 0,00 Kontrol Positif 20,6 20,5 15,2
Kontrol Negatif 0,00 0,00 0,00 Keterangan:  SA : Staphylococcus aureus
EC : Escherichia coli CA : Candida albicans
Penilaian  zona  hambat  digolongkan berdasarkan  kategori  diameter  zona  hambat di  mana  diameter  ≤  5  mm  berarti  kekuatan daya  hambatnya  lemah,  6-10  mm  berarti kekuatan  daya  hambatnya  sedang,  11-20 mm  berarti  kekuatan  daya  hambatnya  kuat, dan  ≥  21  mm  berarti  kekuatan  daya hambatnya sangat kuat (Susanto dkk, 2012). Dalam  penelitian  ini  didapatkan  hasil  yaitu adanya  zona  hambat  ( clear  zone) yang hanya  terbentuk  disekitaran  kertas  cakram kontrol positif.  Daya antimikroba dari isolat jamur alga Halimeda opuntia pada bakteri S. aureus ATCC  25923, E.  coli ATCC  25922 dan  untuk  jamur C.  albicans ATCC  1231 adalah  tidak  ada.  Dari  hasil  menunjukan diameter  zona  hambat  dari  kontrol  positif pada  bakteri S.  aureus ATCC  2592  (20,6 mm)  termasuk  dalam  kategori  kuat, E.  coli ATCC  25922  (20,5  mm)  termasuk  dalam kategori  kuat  ,  dan  untuk  jamur C.  albicans ATCC  1231  (15,2  mm)  termasuk  dalam kategori  kuat.  Kontrol  positifnya  digunakan antibiotik kloramfenikol. Kloramfenikol digunakan  untuk  melawan  infeksi  yang disebabkan oleh beberapa jenis bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Kloramfenikol mempunyai khasiat
bakterisid  (Sumardjo,  2009) . Penggunaan kontrol positif berfungsi sebagai kontrol dari zat  uji,  dengan  membandingkan  diameter hambat  yang  terbentuk.  Menurut  Mycek et al .  (2001),  suatu  antimikroba  bersifat bakteristatik  dan  fungistatik  jika  suatu senyawa  antimikroba  mampu  menghambat
pertumbuhan mikroba jika pemberian secara terus-menerus dan jika penambahan senyawa  dihentikan  atau  habis  maka pertumbuhan  mikroba  akan  meningkat. Bakterisidal  dan  fungisidal  jika  suatu senyawa  antimikroba  mampu  membunuh dan  menghentikan  aktivitas  fisiologis  dari mikroba  uji  meskipun  pemberian  senyawa dihentikan.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa kontrol  yang  digunakan  tidak  berpengaruh pada uji antimikroba, sehingga daya hambat yang  terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh pelarut  melainkan  karena  aktivitas  senyawa yang  ada  pada  alga Halimeda  opuntia . Penggunaan metanol sebagai kontrol negatif diperkuat  dengan  penelitian  oleh  Ginting (2010),  yang  menyatakan  bahwa  kontrol metanol pada uji antibakteri tidak menunjukan adanya aktivitas sehingga dapat dipastikan bahwa metanol tidak berpengaruh terhadap aktivitas yang terbentuk.
Beberapa  hasil  penelitian  yang  telah di  telusuri    mengenai  aktivitas  antimikroba dengan  mengisolasi  jamur  diantaranya menurut  Suay et  al. (2000),  uji  aktivitas antimikroba  yang    dilakukan  terhadap basidiomisetes  yang dikoleksi  dari perairan Spanyol, hanya 53 %  ( 109 dari 204 strain ) yang  menunjukkan  aktivitas  antimikroba. Rotinsulu (2013) dalam disertasinya melaporkan  bahwa  dari  139  strain  yang diisolasi dari perairan Sulawesi Utara, hanya 2  strain yang  menunjukkan  aktivitas antimikroba.  Peneliti  melakukan    pencarian
lebih  dalam    mengenai    penelitian    yang serupa    untuk  membandingkan  dengan penelitian  ini,  namun  tidak  ditemukan adanya  satupun  penelitian  tentang  uji aktivitas  antimikroba  dengan  mengisolasi jamur daripada alga Halimeda opuntia.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat    disimpulkan  bahwa, jamur  laut  yang  berasosiasi  dengan  alga Halimeda opuntia yang diperoleh dari Teluk Manado tidak memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri E.coli,
S.aureus dan jamur Candida albicans .

## SARAN
Diharapkan dapat dilakukan penelitian  lanjut  mengenai  uji  aktivitas antimikroba  terutama  dalam  hal  isolasi jamur  berasosiasi  atau  jamur  endofit terhadap  pertumbuhan  mikroba,  dengan beragam metode uji maupun tempat pengambilan sampel yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnold,  A.  E.,  Maynard,  Z.,  Gilbert,  G.  S.,
Coley,  P.  D.,  Kursat,  T.  A.  2000.  Are Tropycal Fungal Endophytes Hyperdiverse. Ecology Latters . 3(3) :267- 274.
Bugni,  T.  S  and  Ireland,  C.  M.  2004.
Marine-derived fungi: A Chemically and Biologically Diverse Group of Microorganisms. Natural  Production .
21 : 143-63.
Dahuri, R. 1998. Coastal Zone Management in  Indonesia:  Issues  and  Approaches . Journal  of  Coastal  Development.  1 . 2 :
97-112
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay. Journal of microbiology 22: 659-665. Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,
2000. Parameter  Standard  Umum Ekstrak  Tanamn  Obat .  Direktorat
Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan, Jakarta. Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas
Antimikroba dan Karakterisasi  Senyawa Fraksi  Spos  Lamellodysidea  herbacea yang  Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi]. Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Ginting, E. L., Warouw, V., Suleman, R. W.
2010. Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak
Kasar Bakteri Yang Berasosiasi Dengan Sponge Acanthostrongylophora sp. [skripsi] . Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan.  Edisi  kedua .  Diterjemahkan oleh  Kosashi  Padmawinata  dan  Iwang Soedira. ITB Press, Bandung.
Harvell, C. D., Mitchell, C. E., Ward, J. R., Altizer, S., Dobson, A. P., Ostfeld, R. S., and  Samuel,  M.  D.  2002.  Climate warming  and  disease  risks  for  terrestrial and marine biota. Science Journal . 296 : 2158–2162.
McConnell,  OJ,  Longley,  RE,  and  Koehn,
FE.1994. The  discovery  of  marine natural products with therapeutic potential.  In  Gullo  V.  P.  (ed.)  The Discovery  of  Marine  Natural    Products With    Therapeutic  Potential .    Boston, Butterworth-Heineman.
Mycek,  M.J.,  Harvey,  R.A.,  Champe,  P.C.,
Fisher,  B.D.  2001. Farmakologi  Ulasan Bergambar:  Obat-obat  Antijamur .  Edisi 2. Jakarta: Widya Medika. pp.341-7.
Norziah,  M.  H  and  Ching,  C.  Y.  2000.
Nutritional Composition of edible Seaweed  Gracillaria  changgi. Journal  of Food Chemistry . 68 : 69-76.
Nufus,  C.,  Nurjanah.,  dan  Abdullah,  A.
2017.  Karakteristik  Rumput  Laut  Hijau Dari  Perairan  Kepulauan  Seribu  Dan Sekotong  Nusa  Tenggara  Barat  Sebagai
Antioksidan. Jurnal  Pengolahan  Hasil Perikanan . 20 ( 3 ) : 627-628.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed).
American  society  for  Microbiology, America.
Pambayun,  R.  ,  Gardjito,  M.,  Sudarmadji, S.,  Kuswanto,  K.  R.,.  2007.  Kandungan Fenol dan Sifat Antibakteri dari
Berbagai  Jenis  Ekstrak  Produk  Gambir (Uncaria gambir Roxb.), Majalah Farmasi Indonesia 18(3) , 141-146.
Reskika,  A.  2011. Evaluasi  Potensi  Rumput
Laut Coklat (Phaeophyceae) Dan Rumput  Laut  Hijau  (Chlorophyceae) Asal Perairan Takalar Sebagai Antibakteri Vibrio Spp . Jurusan Perikanan  Fakultas  Ilmu  Kelautan  Dan Perikanan Universitas Hasanuddin.
Makassar. Rotinsulu,H.  2013. Bioactive  Secondary Metabolites  From  Tropical  and  Sub- Tropical Marine-Derived Fungi (Doctoral Disesrtation). Tohoku Pharmaceutical University, Sendai-
Japan.112 pages.
Sarastani  D,  Soekarto  ST,  Muhchtadi  TR, Fardiaz  D,  Apriyantono  A.  2002. Aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi ekstrak biji antung (Parinarium glaberrimum). Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan . 13 (2) .
Suay,I.,  Arenal,F.,  Asensio,F.J.,  Basilio,A., Cabello,M.A.,  M.T.,  Garcia,  J.B.,  Del Val, A.G., Gorrochategui, J., Hernandez, P.,  Pelaez,  F.,  Vicente,  M.F.  2000. Screening of Basidiomycetes for Antimicrobial  Activities.  Antonie  Van Leeuwenhoek . 78 : 129 -139. Sumardjo,Damin.  2009. Pengantar  Kimia . Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Susanto,  D.  Sudrajat  dan  R.  Ruga.  2012. Studi  kandungan  bahan  aktif  tumbuhan meranti  merah  (Shorea  leprosula  Miq) sebagai  sumber  senyawa  antibakteri. Mulawarmnan  Scientifie .  11 (2) :  181- 190.
Tan,  R.  X.  And  Zou,  W.  X.  2001.
Endophytes: a Rich Source of Functional Metabolites. Natural Product Reports . 18 , p. 448-459.
Vandepite, S. 2005. Prosedur Laboratorium Dasar  untuk  Bakteriologis  Klinis  Edisi 2. Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Valgas,  C.,  Souza,  S.  M.  D.,  Smania,  E.  F.
A.  and  Artu,  S.  2007.  Screening Methods  to  Determine  Antibacterial Activity  of  Natural  Products. Brazilian Journal of Microbiology . 38, p. 369-380. Van  Soest,  R.  W.  1989. The  Indonesian
Sponge  Fauna :  A  Status  Report.
Institute of Taxonomic Zoology, University of Amsterdam.Perikanan Dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor.