Vol. 8 (2) : 59 - 74

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG MANGGA KWENI ( Mangifera odorata Griff) TERHADAP
Escherichia coli ATCC 25922 DAN Staphylococcus aureus ATCC 25923
(The Antibacterial Activity Essay of Ethanol Extract Kweni Mango Bark (Mangifera odorata Griff) Againts Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923)

## Wuri Prihatiningtyas, Yeni Mariani, H.A. Oramahi, Fathul Yusro, Lolyta Sisillia
Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura Jalan Imam Bonjol Pontianak 78124 Email : wuriprihatiningtyas94@gmail.com

## Abstract
The  aims  of  this  research  are  to  determine  the  secondary  metabolite  content  found  in  the ethanol  extract  of  kweni  mango  bark  (Mangifera  odorata  Griff)  and  analyze  its  potency  as  a natural  antibacterial  against  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus.  The  research  was started  by  maceration  process  using  96%  ethanol  solvent,  then  evaporated  at  40-50 o C  and obtain  yield  of  20,61%  with  powder  content  of  8,34%.  Furthermore,  phytochemical  screening was  performed  qualitatively  to  determine  the  secondary  metabolite  of  the  extract.  The  results showed that ethanol extract of M. odorata Griff bark contained secondary metabolites such as alkaloids,  flavonoids,  saponins,  tannins,  terpenoids  and  phenolics.  In  this  study  antibacterial activity was carried out using disc diffusion method in Plate Count Agar media and incubated for  24-48  hours.  The  results  showed that  the  largest diameter  of inhibitory  zones  formed  at  a concentration  of  15  mg/ml  for  S.  aureus  was  12,33  mm  with  strong  classified  and  for  E.  coli bacteria with a concentration of 200 mg/ml of 23,67 mm with very strong classified, and almost equal  with  the  result  shown  by  30  µg  tetracycline  as  positive  control,  which  is  25  mm.  The results of this study it can be concluded that the ethanol extract of the kweni mango bark (M. odorata Griff) is bacteriostatic.
Keywords:  antibacterial  activity,  Mangifera  odorata  Griff,  phytochemical  screening, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Diare merupakan salah satu
penyakit  klinis  yang  umum  ditemui  di Negara  berkembang  seperti  Indonesia. Pada tahun 2008, 2009, dan 2010 terjadi peningkatan  jumlah  penderita  diare yang  menyebabkan  kematian  sehingga dilaporkan  sebagai  wabah  Kejadian Luar  Biasa  (KLB)  (Kemenkes  RI, 2011).  Diare  dapat  disebabkan  oleh adanya  infeksi  yang  berasal  dari  virus, parasit  dan  bakteri.  Di  Indonesia,  pada umumnya diare disebabkan oleh bakteri
Escherichia coli , Staphylococcus aureus , Vibrio cholerae , Salmonella sp .,
Shigella sp ., dan Campylobacter (Ajizah, 2004). Secara umum serangan atau infeksi bakteri dapat diatasi dengan menggunakan  antibakteri  dan  antibiotik
(Yang et al . 2009), tetapi seiring dengan adanya  peningkatan  resistensi  bakteri yang  salah  satunya  disebabkan  oleh penggunaan dari antibakteri dan antibiotik yang tidak tepat mengakibatkan berkurangnya
Vol. 8 (2) : 59 - 74
keefektifan  dan  kinerja  dari  metode pengobatan  tersebut  (Candrasari et  al . 2012).  Berdasarkan  hal  tersebut,  maka dilakukanlah  berbagai  penelitian  yang bertujuan untuk  menemukan antibakteri baru  sebagai  alternatif  lain  dalam mengatasi  infeksi  bakteri.  Antibakteri baru  ini  diharapkan  berasal  dari  bahan alam  yang  mudah  didapat  dengan ketersediaan  yang  melimpah,  dapat diperbaharui  serta  memiliki  resiko  efek samping  yang  lebih  kecil.  Salah  satu bahan  alam  yang  berpotensi  sebagai antibakteri adalah tumbuhan
(Djajadisastra et al . 2009). Pemanfaatan  tumbuhan  sebagai antibakteri
telah dikenal oleh
masyarakat  Indonesia  dalam  bentuk tumbuhan  obat,  dimana  pada  umumya tumbuhan obat ini berasal dari kawasan hutan.  Salah  satu  tumbuhan  yang berpotensi  sebagai  tumbuhan  obat antibakteri adalah mangga kweni ( Mangifera  odorata Griff). M.  odorata Griff  merupakan  tumbuhan  dari  famili
Anarcardiaceae, dimana golongan famili  Anarcardiaceae  dikenal  memiliki senyawa fenolik yang berpotensi sebagai  tumbuhan  obat  dan  antibakteri alami. Menurut hasil penelitian
Lukmandaru et  al .  (2012),  ekstrak metanol M.  odorata Griff  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  seperti flavonoid,  alkaloid,  fenolik  dan  tanin. Dimana  senyawa  tanin,  flavonoid, saponin,  fenolik, terpenoid  dan  alkaloid merupakan  senyawa  yang  mempunyai sifat antibakteri (Santoso, 2012).
Ekstraksi  kulit  batang M.  odorata
Griff dilakukan dengan metode
maserasi yang merupakan proses
ektraksi  yang  paling  umum  digunakan (Depkes RI, 2000). Dengan menggunakan pelarut yang sesuai seperti  pelarut  etanol  yang  bersifat polar,  diperoleh  senyawa  metabolit sekunder  yang  bersifat  polar,  nonpolar dan semi polar (Poelengan et al. 2007).
Beberapa pengujian aktivitas antibakteri M.  odorata Griff  telah dilakukan  dengan  menggunakan  bagian tanaman  berupa  buah  dan  daun. Berdasarkan penelitian, ekstrak buah M. odorata
Griff dapat menghambat Staphylococcus aureus pada konsentrasi 50%  sebesar  7  mm  dan  konsentrasi 100%  sebesar  8,667  mm  (Suerni et  al . 2013).  Selain  itu,  ekstrak  daun M. odorata Griff  dengan  konsentrasi  10 mg/ml juga dapat menghambat Bacillus cereus sebesar 8,9 mm (Muskhazli et al . 2009).  Sejauh  ini  penelitian  aktivitas antibakteri  dari M.  odorata Griff  hanya pada  bagian  daun  dan  buah,  namun belum dilakukan penelitian pada bagian kulit  batang M.  odorata Griff.  Menurut Haygreen dan Bowyer (1989), kandungan ekstraktif dalam kulit batang kayu lebih tinggi daripada dalam kayu. Aktivitas  antibakteri  dari  suatu ekstrak  atau  senyawa  dapat  diketahui dengan melakukan pengujian
penghambatan pertumbuhan bakteri
(Dart,  1996).    Metode  difusi  atau  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer )  merupakan metode pengujian yang umum digunakan dalam uji aktivitas
antibakteri.  Pada  metode  ini,  kertas cakram yang telah berisi bahan antibakteri  (ekstrak)  diletakkan  di  atas permukaan media yang telah tersuspensi bakteri  uji.  Adanya  zona  bening  pada
permukaan media mengindikasikan
hambatan  pertumbuhan  bakteri  oleh bahan aktibakteri (Rhimou et al . 2010).
Penelitian ini menarik untuk
dilakukan  guna  mengetahui  kandungan metabolit  sekunder  kulit  batang M. odorata Griff  serta  potensinya  sebagai bahan  antibakteri  alami,  sehingga  dapat menjadi alternatif lain dalam penanganan diare  yang disebabkan oleh bakteri E. coli dan S. aureus.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  empat tempat  yaitu  Wood  Work  Shop  dan
Laboratorium  Teknologi  Kayu  Fakultas Kehutanan Untan Pontianak, Laboratorium  Kimia  Fakultas  MIPA Untan  Pontianak,  serta  Laboratorium Mikrobiologi Unit Laboratorium Kesehatan. Persiapan Sampel Penelitian ini dimulai dengan pembuatan  serbuk  kulit  batang M. odorata Griff  (diameter  ±25  cm,  umur pohon ±10 tahun) dengan menggunakan alat hammer  mill (Qingdao  Dahua Double  Circle  Machinery  Co.,  LTD). Kulit  batang  diperoleh  dari  pohon M. odorata Griff  yang  diambil  dari halaman  rumah  warga  di  Jalan  Parit  H. Husin  Komplek  Disbun  Blok  A Pontianak.  Serbuk yang  diperoleh selanjutnya  diayak  dengan mesh  screen (Endecotts  LTD.  London,  England) lolos  40  mesh  tertahan  60  mesh. Selanjutnya  dilakukan  pengujian  kadar air dengan mengoven (Memmert,
Germany) sebanyak 2 gram serbuk pada suhu  103±2 o C  sampai  mencapai  berat konstan  (Manuhuwa,  2007).  Penentuan
persentase  kadar  air  dapat  dihitung menggunakan rumus:
Kadar  air  dihitung  berdasarkan rumus:
KA = BA – BKO x 100%
BKO
dimana : KA = Kadar air (%) BA = Berat serbuk awal (gram)
BKO  = Berat kering oven (gram)
Ekstraksi Kulit Batang M. odorata

## Griff

## Perhitungan Rendemen
Sebanyak  1  gram  serbuk  kulit batang M. odorata Griff dimasukkan ke dalam  Erlenmeyer  dan  ditambahkan pelarut  etanol  96%  hingga  tercapai perbandingan  volume  1:30.  Selanjutnya Erlenmeyer  diletakkan  di  atas  s haker (IKA  KS  260  basic  and  control  shaker, USA)  untuk  dimaserasi  selama  1x24 jam  pada  suhu  kamar.  Setelah  24  jam, ekstrak  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring  meteran.  Perlakuan  ini diulang hingga diperoleh larutan ekstrak yang  jernih  dengan  asumsi  bahwa semua zat ekstraktif yang terlarut etanol dapat diperoleh. Ekstrak yang diperoleh selanjutnya  diuapkan  dengan waterbath (Memmert,  Germany) hingga  diperoleh ekstrak  kering  dan  ditimbang  (Mettler Toledo)  untuk  mengetahui  rendemen ekstrak. Rendemen ekstrak dapat dihitung  dengan  menggunakan  rumus berikut: (Rahmah, 2012).
Rendemen ekstrak = 𝑎 (1−𝑥)𝑏 x 100% dimana : a = berat ekstrak (gram)
b = berat serbuk (gram) x = kadar air (%)
Pembuatan Ekstrak Kulit Batang M. odorata Griff
Pembuatan  ekstrak  kulit  batang M. odorata Griff dilakukan dengan metode maserasi,  dimana  sebanyak  200  gram serbuk  kulit  batang M.  odorata Griff dilarutkan  dengan  1200  ml  pelarut etanol  96%  (perbandingan  1:6),  diaduk selama  5  menit  kemudian  di  shaker selama ±24 jam. Setelah 24 jam ekstrak kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring  meteran,  perlakuan  tersebut diulangi  hingga  4  kali.  Selanjutnya filtrat diuapkan dengan rotary
evaporator (Yamato  Scientific  Co., LTD, Japan) pada suhu 40-55 0 C sampai diperoleh  ekstrak  pekat  kulit  batang M. odorata Griff.  Ekstrak  pekat  yang diperoleh  selanjutnya  diuapkan  dengan waterbath hingga  sisa-sisa  pelarutnya teruap (Sangi, 2012).
Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Kulit Batang M. odorata Griff Ekstrak  etanol  kulit  batang M. odorata Griff  di  uji  fitokimia  untuk mengetahui keberadaan senyawa
metabolit  sekunder  berupa  fenolik, tanin,  saponin,  flavanoid,  alkaloid,
steroid dan terpenoid. Pengujian Fitokimia  ekstrak  kulit  batang M. odorata Griff  dilakukan  mengikuti prosedur  Harborne  (1996)  yang  telah dimodifikasi.  Persiapan  ekstrak  dimulai dengan  memasukkan  1  gram  ekstrak ekstrak kulit batang M. odorata Griff ke dalam  tabung  reaksi  (Iwaki  Pyrex, Japan)  dan  diencerkan  dengan  pelarut
metanol  sebanyak  ±  10  ml  (Mailuhu et al . 2017).
Uji Alkaloid Ekstrak  kulit  batang M.  odorata Griff  sebanyak  1  ml  dimasukkan  ke dalam 3 tabung reaksi. Selanjutnya pada masing-masing  tabung  ditambahkan  10 tetes  H 2 SO 4 2  N  dan  dikocok  kuat. Kemudian  ditambahkan  pereaksi  ke dalam  masing-masing  tabung  reaksi, untuk  tabung  pertama  ditambahkan pereaksi  Dragendorff,  tabung  kedua ditambahkan  pereaksi  Wagner,  dan tabung  ketiga  ditambahkan  pereaksi
Meyer. Terbentuknya endapan mengindikasikan bahwa ekstrak tersebut mengandung senyawa alkaloid. Hasil  positif  bila  dengan  pereaksi Dragendorff menghasilkan endapan berwarna merah jingga, dengan pereaksi Wagner menghasilkan endapan berwarna  coklat,  dan  dengan  perekasi Meyer menghasilkan endapan berwarna
putih (Mailuhu et al . 2017).

## Uji Saponin
Diambil  sebanyak  1  ml  ekstrak kulit  batang M.  odorata Griff  ke  dalam tabung  reaksi  dan  ditambahkan  dengan 5  mL  air  panas  sambil  dikocok  kuat selama 1 menit, kemudian ditambahkan 2  tetes  HCl  2  N.  Hasil  teruji mengandung
saponin
apabila menghasilkan  busa  yang  tetap  stabil selama kurang lebih 10 menit  (Mailuhu et al . 2017).
Uji Terpenoid dan Steroid Ekstrak  kulit  batang M.  odorata Griff  diteteskan  ke  tiga  titik  pada  plat tetes  (titik  pertama  sebagai  standart, kedua  sebagai  terpenoid  dan  ketiga sebagai  steroid)  dan  biarkan  hingga
kering.  Setelah  kering  pada  masing- masing titik plat ditetesi  dengan larutan Liebermann-Buchard  dan  dietil  eter sebanyak  2  tetes.  Ekstrak  positif mengandung steroid apabila titik tersebut  menghasilkan  warna  biru  atau hijau, sedangkan triterpenoid
menghasilkan  warna  merah  atau  ungu (Sangi et al . 2008).
Uji Fenolik FeCl 3 1%  sebanyak  2-3  tetes ditambahkan  ke  dalam  tabung  reaksi yang  telah  berisi  1  ml  ekstrak  kulit batang M. odorata Griff. Ekstrak positif mengandung  senyawa  fenol  apabila menghasilkan  warna  biru  kehitaman (Mailuhu et al . 2017).
Uji Tanin
FeCl 3 1%  sebanyak  10  tetes ditambahkan  ke  dalam  tabung  reaksi yang  telah  berisi  1  ml  ekstrak  kulit batang M. odorata Griff. Ekstrak positif mengandung tanin apabila
menghasilkan  warna  hijau  kehitaman atau biru kehitaman (Harborne, 1987). Uji Flavonoid Uji  Flavonoid  dengan  HCl  Pekat  dan Logam Magnesium
Diambil  1  ml  ekstrak  kulit  batang M.  odorata Griff  dan  dimasukkan  ke tabung reaksi, kemudian ditambahkan 2 tetes  HCL  pekat  sambil  dikocok  kuat. Selanjutnya, ditambahkan serbuk magnesium  (Mg)  dan  dikocok  kuat. Buih  yang  dihasilkan  dengan  intensitas yang  banyak  dan  larutan  menjadi berwarna  jingga  menunjukkan  bahwa ekstrak  positif  mengandung  flavonoid (Mailuhu et al . 2017).
Uji Flavonoid dengan H 2 SO 4
Sebanyak  2  tetes  H 2 SO 4 2  N ditambahkan  ke  dalam  tabung  reaksi yang berisi 1 ml ekstrak kulit batang M. odorata Griff,  kemudian  dikocok  kuat. Ekstrak  positif  mengandung  flavonoid apabila  larutan  menghasilkan  warna kuning,  merah,  atau  coklat  (Mailuhu et al . 2017).
Uji Flavonoid dengan NaOH 10%
Sebanyak 1 ml ekstrak kulit batang M.  odorata Griff  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan sebanyak  2  tetes  NaOH  10%  sambil dikocok  kuat.  Warna  kuning,  merah, coklat,  atau  hijau  yang  dihasilkan menunjukkan  bahwa  ekstrak  positif mengandung  flavonoid  (Mailuhu et  al . 2017).

## Pembuatan  Media  Plate  Count  Agar
(PCA)
Pada  penelitian  ini  media  yang digunakan  adalah  PCA  ( Plate  Count Agar ). Sebanyak  17,5  gram  serbuk media  PCA dilarutkan  dengan  air aquades  steril  hingga  1000  mL  dan selanjutnya  didihkan  diatas hot  plate (D-Lab  MS7  H550)  hingga  homogen. Setelah  mendidih  kemudian  disterilkan di  dalam autoclave (Hirayama,  Japan) pada  suhu  121°C  selama  15  menit dengan  tekanan  di  atas  1  atm  (Oxoid LTD, Basingstoke, Hampshire, England). Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan Mc. Farland) Sebanyak 9,9 ml larutan H 2 S0 4 1% ditambahkan  ke  dalam  tabung  reaksi yang  berisi  0,1  ml  larutan  BaCl 2 1,175 %,  dan  dikocok  sampai  terbentuk larutan  yang  keruh.  Kekeruhan  ini dipakai  sebagai  standar  kekeruhan
suspensi  bakteri  uji.  Standar  kekeruhan larutan  yang  digunakan  yaitu  Mc. Farland  No.  1,  dimana  setara  dengan 300 x 10 6 CFU/ml (Fatisa, 2013).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri pada penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode difusi  ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Sebanyak 5-6 ml media PCA yang telah disterilkan dimasukkan
kedalam masing-masing  cawan  petri  (Pyrex, Germany) sampai media menjadi padat. Bakteri E.  coli ATCC  25922  dan S. aureus ATCC  25923  yang  sudah disetarakan  dengan  standar  kekeruhan Mc. Farland No. 1 diswab
menggunakan  jarum  ose  steril  pada media  pertumbuhan  PCA.  Selanjutnya Kertas  cakram  Whatman  No.  3  yang berdiameter  6  mm  ditetesi  dengan masing-masing konsentrasi ekstrak kulit batang M.  odorata Griff  menggunakan mikropipet  (Socorex)  sebanyak  20  µl kemudian  diletakkan  diatas  permukaan media  PCA  yang  telah  tersuspensi bakteri uji secara steril di dalam laminar air  flow (Airstream).  Masing-masing cawan  petri  diinkubasi  (Memmert, Germany) dengan suhu 37 0 C selama 18- 24  jam.  Pengujian  ini  terdiri  dari  6 perlakuan pada setiap bakteri uji, yaitu : 4  konsentrasi  ekstrak  kulit  batang M.
odorata Griff  (50  mg/ml,  100  mg/ml, 150  mg/ml  dan  200  mg/ml),  1  kontrol negatif  (etanol)  dan  1  kontrol  positif (tetracycline  30  µg  (Oxoid  LTD, Basingstoke,  England))  pada E.  coli
ATCC 25922. Empat konsentrasi ekstrak kulit batang M. odorata Griff (1 mg/ml,  5  mg/ml,  10  mg/ml  dan  15 mg/ml), 1 kontrol negatif (etanol) dan 1 kontrol  positif  (tetracycline)  pada S. aureus ATCC 25923. Pengujian dilakukan  dengan  3  kali  ulangan (Rhimou et  al .  2010).  Diameter  daerah hambat atau daerah bening ( clear zone ) yang  terbentuk  akan  diukur  dengan mistar.  Data  hasil  pengukuran  diameter daerah  hambat  pada  bakteri  uji  di analisis  secara  statistik  dalam  bentuk Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL), apabila  berpengaruh  sangat  nyata  dan nyata maka dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Jujur (BNJ) (Gaspersz, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang M. odorata Griff Proses  ekstraksi  merupakan  tahap pendahuluan  dalam penelitian  ini, dimana  rendemen  ekstrak  yang  didapat sebesar  20,61  %  dengan  kadar  air sebesar  8,34  %.  Data  hasil  ektraksi tersaji secara lengkap pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstraksi kulit batang M. odorata Griff ( Results of extraction from M. odorata Griff bark ) Berat Serbuk (g) Kadar Air (%) Berat Ekstrak (g) Rendemen Ekstrak (%) 200 8,34 40,5018 20,61 Berdasarkan  klasifikasi  komponen kimia  kayu  Indonesia,  maka  rendemen ekstrak etanol kulit batang M. odorta Griff
termasuk  ke  dalam  kelas  kayu  yang mengandung  kadar  zat  ekstraktif  tinggi karena rendemen ekstraknya lebih dari 4%
(Departemen  Pertanian,  1976).  Persentase rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan  pada penelitian ini lebih tinggi apabila dibandingkan  dengan  penelitian  terdahulu yang  juga  menggunakan  kulit  batang M. odorata Griff  dengan  pelarut  metanol, yang  menghasilkan  rendemen  ekstrak sebesar 2% (Lukmandaru et al . 2012).
Menurut Azis (2014) etanol merupakan pelarut dengan tingkat
kepolaran  yang  tinggi.  Etanol  memiliki gugus  -OH  yang  bersifat  polar  dan  gugus CH 2 CH 3 yang bersifat non polar, sifat non polar inilah  yang membuat etanol mampu mengekstrak  kandungan  minyak,  atsiri, dan  alkaloid  sehingga  penggunaan  etanol sebagai  pelarut  dalam  proses  ekstraksi diduga  menyebabkan  tingginya  rendemen M.  odorta Griff  yang  diperoleh  pada penelitian ini. Selain faktor pemilihan jenis pelarut, tingginya rendemen juga dipengaruhi  oleh  bagian  tanaman  yang digunakan  dalam  pembuatan  ekstrak. Pohon  memiliki  variabilitas  yang  tinggi terhadap komponen kimianya. Variabilitas ini  tidak  hanya  terjadi  antar  jenis melainkan  juga  terjadi  pada  jenis  yang sama  dengan  bagian  yang  berbeda (Sjostrom,  1995).  Haygreen  dan  Bowyer
(1989), mengemukakan bahwa kandungan ekstraktif  dalam  kulit  batang  kayu  lebih tinggi daripada bagian dalam kayu, dan hal ini  telah  dibuktikan  oleh  beberapa penelitian  terdahulu  (Lukmandaru et  al . 2012).

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  merupakan  suatu langkah  awal  yang  penting  dilakukan untuk  mendeteksi  keberadaan  golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada  suatu  bahan  alam  (Sa’adah  dan Nurhasnawati,  2015).  Uji  ini  dapat dilakukan secara kualitatif maupun kuantitatif.  Pada  penelitian  ini  dilakukan pendeteksian  senyawa  metabolit  sekunder secara kualitatif dengan melarutkan ekstrak M. odorata Griff dengan beberapa pereaksi sesuai dengan golongan senyawa yang  diinginkan.  Hasil  uji  fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit batang M. odorata Griff positif mengandung  senyawa  kimia  alkaloid, flavonoid,  tanin,  terpenoid,  fenolik  dan saponin.  Akan  tetapi  tidak  ditemukan senyawa  steroid  pada  ekstrak  tersebut. Selengkapnya,  hasil  skrining  fitokimia tersaji pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil uji skrining fitokima ( Phytochemical screening test results ) Parameter Uji Hasil Alkaloid Meyer + Wagner + Dragendroff + Flavonoid HCl + Mg
+++
H 2 SO 4 2N + NaOH 10% +++ Terpenoid ++ Steroid - Fenolik +++ Tanin +++ Saponin ++
Keterangan :        -    = Tidak ada           +    = Sedikit             ++   = Sedang            +++   = Banyak

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian ini menggunakan kontrol negatif (etanol 96%) dan kontrol positif (tetracycline). Penggunaan pelarut etanol  96%  dipertimbangkan  karena etanol  merupakan  pelarut  awal  pada proses  pembuatan  ekstrak,  selain  itu etanol bersifat netral, tidak beracun, dan penyerapannya  baik,  serta  kapang  dan kuman  sulit  tumbuh  dalam  etanol  20% ke  atas  (Sa’adah  dan  Nurhasnawati, 2015).  Antibiotik  tetracycline  dipilih sebagai  kontrol  positif  dikarenakan tetracycline  merupakan  antibiotik  yang umumnya sering digunakan oleh masyarakat  untuk  mengatasi  infeksi bakteri dan memiliki harga yang murah.
Penelitian  Rahmah et  al .  (2012) memaparkan bahwa melalui penghambatan  sintesis  protein  pada ribosom, tetracycline menjadi antibiotik yang terbukti efektif untuk menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli dan S.
aureus dibandingkan  amoxicillin  dan ampicillin.
Pengujian pada penelitian ini dilakukan  dengan  menggunakan  2 bakteri  yang  berbeda  yaitu,  bakteri E. coli dan S.  aureus .  Berdasarkan pengujian yang telah dilakukan didapatkan  hasil  bahwa  ekstrak  etanol kulit  batang M.  odorata Griff  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri E. coli dan S. aureus .
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Pada  Bakteri Uji S. aureus ATCC 25923
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh pada  pengujian  didapatkan  hasil  bahwa semua  konsentrasi  ekstrak  etanol  kulit batang M. odorata Griff dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus .  Rerata  diameter  zona  hambat esktrak  etanol  kulit  batang M.  odorata Griff  terhadap  pertumbuhan  bakteri S. aureus selengkapnya  disajikan  pada Gambar 1.
Gambar 1.  Rerata dan standar deviasi diameter zona hambat uji ekstrak etanol kulit batang M. odorata Griff  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.  aureus ATCC  25923,  rerata  yang diikuti  huruf  yang  sama  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf  1%  atau  5%)  ( Mean  and standard deviation of diameter inhibition zone of ethanol extract of M. odorata Griff wood bark against the growth bacteria of S. aureus ATCC 25923, the mean followed by the same letter is not significantly different at the level of 1%).
Pada  Gambar  1  diatas  terlihat bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  semakin  besar  zona  hambatan
yang  dihasilkan,  walaupun  pada  hasil uji  lanjut  beda  nyata  jujur  (BNJ) menunjukkan bahwa pada konsentrasi 1
0 5 10 15 20 25 30 Kontrol (-) Kontrol (+) 1 mg/ml 5 mg/ml 10 mg/ml 15 mg/ml
Dia m eter Zo n a Ha m b at (m m ) Perlakuan b b c e d a
mg/ml  tidak  berbeda  nyata  dengan konsentrasi  5  mg/ml.  Respon  hambatan bakteri S.  aureus hasil  penelitian  ini diklasifikasikan  menurut  Davis  dan Stout  (1971),  respon  hambatan  yang sedang  ditunjukkan  oleh  konsentrasi  1 mg/ml  (7,17  mm),  5  mg/ml  (7,83  mm), dan 10 mg/ml, sedangkan pada
konsentrasi  15  mg/ml  (12,33  mm)
memiliki  respon  hambatan  yang  kuat. Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan penelitian  terdahulu  yang  dilakukan oleh  Suerni  (2013),  yang  memaparkan bahwa  ekstrak  buah M.  odorata Griff mampu  menghambat  pertumbuhan S. aureus dengan konsentrasi 50 % sebesar 7  mm  dan  100  %  sebesar  8,6667  mm (Gambar 2).
Gambar 2.  Hasil uji ekstrak etanol kulit batang M. odorata Griff terhadap bakteri S.  aureu ATCC 25923:  a.  kontrol  negatif  (etanol  96%);  b.  kontrol  positif  (tetracycline  30  µg);  c. konsentrasi ekstrak (1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, dan 15 mg/ml) ( Test results of ethanol extract of M. odorata Griff bark against on bacteria of S.  aureus ATCC 25923: a. negative control (96% ethanol); b. positive control (tetracycline 30 µg); c. extract’s concentration (1 mg / ml, 5 mg / ml, 10 mg / ml, and 15 mg / ml))
Tinggi  rendahnya  suatu  antibakteri dalam  menghasilkan  zona  hambat sangatlah dipengaruhi oleh zat antibakteri yang terkandung pada ekstrak  yang  digunakan.  Dari  hasil  uji skrining  fitokimia  yang  telah  dilakukan maka  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol kulit batang M. odorata Griff mengandung senyawa alkaloid, flavonoid,  fenolik,  tanin,  terpenoid  dan saponin, dimana senyawa-senyawa tersebut dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Suerni, 2013). Pada ekstrak etanol kulit batang M.
odorata Griff  mengandung  flavonoid dalam jumlah banyak. Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder
yang  bersifat  antimikroba  dan  efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif. S. aureus merupakan  salah  satu  bakteri  Gram positif  memiliki  dinding  sel  yang bersifat  polar.  Lapisan  peptidoglikan yang  bersifat  polar  ini  akan  dapat dengan  mudah  ditembus  oleh  senyawa flavonoid  yang  juga  bersifat  polar
(Suerni, 2013). Sabir (2005) menambahkan bahwa senyawa flavonoid akan berikatan dengan protein fungsional  sel  dan  DNA  bakteri  yang berakibat  pada  rusaknya  permeabilitas dinding sel mikroba.
Ekstrak  etanol  kulit  batang M. odorata Griff juga mengandung
a a b a c a
Vol. 8 (2) : 59 - 74
senyawa fenolik dan tanin dalam jumlah yang banyak. Senyawa metabolit sekunder  terbanyak  yang  terdapat  pada spesies  tumbuhan  di  dunia  adalah senyawa  fenolik.  Menurut  Cowan (1999), senyawa fenolik dapat menghambat pertumbuhan bakteri karena  dapat  mengoksidasi  bakteri dengan beberapa cara
yaitu menghancurkan  dinding  sel  bakteri,
menghilangkan  substrat,  menonaktifkan enzim  dan  berikatan  dengan  adhesin yang merupakan protein pada bakteri.
Tanin merupakan salah satu senyawa  golongan polifenol  yang dapat berikatan  secara  kompleks  dengan protein,  polisakarida,  alkaloid,  asam nukleat,  mineral  dan  lain-lain  baik secara reversibel maupun irreversible yang  dapat  menyebabkan  kerusakan pada sel bakteri (Ajizah, 2004).
Mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri  adalah  dengan  cara  merusak membran sel bakteri, senyawa astringent  tanin dapat  menginduksi pembentukan  kompleks  senyawa  ikatan terhadap  enzim  atau  subtrat  mikroba (Karlina et al . 2013).
Senyawa metabolit lain yang memiliki  aktivitas  sebagai  antimikroba dan ditemukan pada ekstrak etanol kulit batang M. odorata Griff adalah terpenoid, saponin dan alkaloid.
Terpenoid  dikenal  sebagai  senyawa metabolit sekunder yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri, fungi,  virus  dan  protozoa.  Terpenoid mampu  merusak  lapisan  dinding  sel dengan  cara  menggumpalkan  protein bakteri  yang  mengakibatkan  terjadinya
gangguan  pada  tekanan  osmosis  sel bakteri (Suerni, 2013).
Melalui  mekanisme  peningkatan permeabilitas  membran  sel  bakteri, senyawa saponin menghambat pertumbuhan  bakteri.  Ekstrak  uji  yang mengandung saponin dalam konsentrasi yang  rendah  akan  dapat  mengganggu permeabilitas sel, seiring dengan kenaikan  konsentrasi  saponin  pada ekstrak  uji  akan  dapat  menyebabkan kematian  dari  sel  yang  dikarenakan hancurnya membran sel bakteri.
Keberadaan  alkaloid  pada  ekstrak etanol  kulit  batang M.  odorata Griff jumlahnya sedikit, sehingga kemungkinan  besar  senyawa  alkaloid tidak terlalu berperan dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S.
aureus maupun E.  coli. Alkaloid merupakan  senyawa  nitrogen  yang umumnya  sering  digunakan  dalam bidang pengobatan. Hal ini dikarenakan alkaloid memiliki kemampuan bioaktivitas  dan  memiliki  aktivitas fisiologi  yang  tinggi  (Mustikasari,
2010). Alkaloid bekerja sebagai senyawa antibakteri dengan cara berinteraksi  dengan  dinding  dan  DNA sel bakteri (Cushnie dan Lamb, 2005). Uji  Aktivitas  Antibakteri  Pada  Bakteri Uji E. coli ATCC 25922
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan dapat dikatakan bahwa ekstrak  etanol  kulit  batang M.  odorata Griff mampu menghambat pertumbuhan bakteri S.  aureus lebih  baik  daripada bakteri E.coli .  Hal  ini  diduga  karena E. coli merupakan  bakteri  Gram  negatif yang secara alamiah memiliki resistensi yang  tinggi  terhadap  antibakteri. Oleh
karena itu, pada penelitian ini digunakan  konsentrasi  yang  berbeda untuk  kedua  jenis  bakteri  uji.  Rerata diameter  zona  hambat  esktrak  etanol kulit  batang M.  odorata Griff  terhadap pertumbuhan bakteri E. coli selengkapnya disajikan pada Gambar 3.
Gambar 3. Rerata dan standar deviasi diameter zona hambat uji ekstrak etanol kulit batang M. odorata Griff  terhadap  pertumbuhan  bakteri E.  coli ATCC  25922, rerata  yang  diikuti huruf berbeda menunjukkan bahwa setiap perlakuan berbeda sangat nyata pada taraf 1% ( Mean  and  standard  deviation  of  diameter  inhibition  zone  of  ethanol  extract  from    M. odorata Griff  bark against the growth bacteria of E. coli ATCC 25922, the mean followed by different letters showed that each treatment very significantly different at level of 1% )
Hasil pengujian menyatakan bahwa setiap  konsentrasi  memiliki  pengaruh yang berbeda dalam menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli .  Semakin tinggi  konsentrasi  maka  semakin  besar diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan (Gambar 4). Klasifikasi respon hambatan  bakteri E.  coli berdasarkan rerata  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan menunjukkan bahwa
konsentrasi  50  mg/ml  (7,67  mm),  100 mg/ml  (9,67  mm)  memiliki  respon hambatan yang sedang, sedangkan pada konsentrasi  150  mg/ml  (15  mm) memiliki  respon  hambatan  yang  kuat, bahkan  pada  konsentrasi    200  mg/ml menunjukkan  respon  hambatan  yang sangat kuat (Davis dan Stout, 1971).
E. coli merupakan golongan bakteri Gram negatif yang secara alamiah lebih resisten  terhadap  bahan  antibakteri. Resistensi  alami  ini  merupakan  suatu mekanisme  pertahanan  yang  dimiliki oleh  bakteri  terhadap  antibiotik  (Adila
et al . 2013), sehingga ekstrak tumbuhan yang  biasanya  diujikan  pada  bakteri Gram positif akan menunjukkan efektivitas  yang  lebih  tinggi  dalam penghambatan pertumbuhan bakteri
dibandingkan pada bakteri Gram negatif (Cimanga et  al .  2002).  Hal  ini dikarenakan struktur dinding sel bakteri Gram positif memiliki kepadatan lapisan lipopolisakarida pada
permukaan  luar  dinding  sel  yang  lebih rendah  dibandingkan  dengan  bakteri Gram negatif (Burn, 1988). Oleh karena itu,  antibakteri  yang  diberikan  pada bakteri  Gram  positif  akan  lebih  mudah melalui  lapisan  peptidoglikan  dinding sel  bakteri  dan  menembus  ke  dalam sitoplasma yang akhirnya akan menyebabkan  hilangnya  tekanan  turgor sel (Clements et al . 2002).
0 5 10 15 20 25 30 Kontrol (-) Kontrol (+) 50 mg/ml 100 mg/ml 150 mg/ml 200 mg/ml Diam eter Z o n a Ham b at (m m ) Perlakuan a f d c b e
Gambar 4. Hasil uji ekstrak etanol kulit batang M. odorata Griff terhadap bakteri E. coli ATCC 25922:  a.  kontrol  negatif  (etanol  96%);  b.  kontrol  positif  (tetracycline  30  µg);  c. konsentrasi ekstrak (50  mg/ml, 100  mg/ml, 150  mg/ml,  dan 200  mg/ml) ( Test  results of ethanol  extract  of  M.  odorata  Griff  bark  against  on  bacteria  of  E.  coli  ATCC  25922:  a. negative  control  (96%  ethanol);  b.  positive  control  (tetracycline  30  µg);  c.  extract’s concentration (50 mg / ml, 100 mg / ml, 150 mg / ml, and 200 mg / ml))
Pelezar dan Chan (2006) menambahkan  bahwa  kompleksitas  dari struktur  penyusun  dinding  sel  bakteri Gram negatif menyebabkan bakteri golongan  ini  lebih  resisten  terhadap antibakteri.  Secara  umum,  bakteri  Gram negatif termasuk E. coli memiliki dinding sel  yang  terdiri  atas  3  lapisan  yaitu lipoprotein,  membran  luar  fosfolipid  dan lipopolisakarida.  Keberadaan  membran luar  fosfolipid  pada  bakteri  Gram  negatif menyebabkan  senyawa  yang  bersifat antibakteri  akan  sulit  menembus  dinding sel  bakteri  (Poeloengan et  al .    2007).
Sebaliknya,  bakteri  gram  positif  pada umumnya  memiliki  dinding  sel  yang hanya  terdiri  dari  1  lapisan  saja  sehingga dengan  mudah  senyawa  yang  bersifat aktibakteri dapat menembus dinding sel.
Meskipun bakteri E. coli lebih resisten terhadap  bahan  antibakteri  dibandingkan bakteri S. aureus , tetapi dengan peningkatan  konsentrasi  ekstrak  membuat bakteri E. coli dapat dihambat pertumbuhannya  bahkan  pada  konsentrasi
200  mg/ml  menghasilkan  zona  hambat yang  mendekati  hasil  zona  hambat  untuk antibiotik  tertacyline.  Penelitian  lain menggunakan  ekstrak  dari  famili  yang sama  dengan  pelarut  yang  berbeda  yaitu ekstrak  metanol M.  indica L  dengan konsentrasi  250  mg/ml  menghasilkan diameter  zona  hambat  yang  lebih  kecil yaitu  sebesar  9  mm  (Douhari  dan Manzara,  2008).  Pada  bakteri E.  coli , senyawa fenol bekerja dengan
mendenaturasi protein dan merusak membran  sel  sehingga  menyebabkan kematian  pada  bakteri  (Harbone,  1978). Mekanisme kerja senyawa aktif antibakteri lainnya sama seperti yang telah dipaparkan sebelumnya.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan pembahasan,  maka  dapat  disimpulkan bahwa  rendemen  ekstrak  etanol  kulit batang M.  odorata Griff  sebesar  20,61% dengan  kadar  air  serbuk  sebesar  8,34%. Dari  hasil  skrining  fitokimia  menunjukan bahwa  ekstrak  etanol  kulit  batang M.
a a b a c a
odorata Griff positif mengandung senyawa  metabolit  sekunder  golongan terpenoid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid  dan  alkaloid,  serta  negatif steroid.
Ekstrak  etanol  kulit  batang M.
odorata Griff  terbukti  memiliki  aktivitas antibakteri,  hal  ini  dibuktikan  dengan kemampuan ekstrak ini dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli
dan S. aureus,  dimana  konsentrasi  15 mg/ml  merupakan  konsentrasi yang menghasilkan  daya  hambat  pertumbuhan bakteri  uji S.  aureus terbesar  sedangkan konsentrasi  ekstrak  200  mg/ml  pada bakteri  uji E.  coli menghasilkan  daya hambat  pertumbuhan  terbesar  dan  hampir setara dengan antibiotik tetracycline 30 µg. Saran
Setelah  dilakukan  penelitian  tentang pengaruh  esktrak  etanol  kulit  batang M.
odorata Griff dalam menghambat
pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus , maka  disarankan  agar  ekstrak  etanol  kulit batang M.  odorata Griff    dapat  dijadikan bahan alternatif dalam pengobatan penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri E. coli dan S.  aureus .  Selanjutnya,  perlu adanya penelitian lanjutan guna
mengetahui  pengaruh  ekstrak  etanol  kulit batang M. odorata Griff terhadap penyakit lain  yang  disebabkan  oleh  kapang  dan jamur.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  berterima  kasih  kepada  ibu Yeni  Mariani,  S.Hut,  M.Sc,  Ph.D  (Dosen Fak.  Kehutanan  UNTAN)  yang  telah mempersiapkan bakteri uji. Penulis berterima  kasih  kepada  Zaka  Prihatin (Mahasiswa  Fak.  Kehutanan  UNTAN)
atas  pemberian  kulit  kayu M.  odorata Griff  untuk sampel penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Adila, R, Nurmiati, dan Anthoni A. 2013. Uji  Antimikroba Curcuma  spp. Terhadap  Pertumbuhan Candida albicans , Staphylococcus  aureus , dan Escherichia coli . Jurnal Biologi Universitas Andalas . Vol 2 (1): 1-7.
ISSN : 2303-2162.
Ajizah  A.  2004.  Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap  Ekstrak  Daun Psidium guajava L. Journal Bioscientiae .  Vol 1 (1): 31-38.
Azis  T,  Febrizky  S  dan  Mario  AD. 2014. Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap Persen  Yield  Alkaloid  Dari  Daun Salam  India  ( Murraya  koenigii ). Teknik Kimia . Vol 20 (2).
Burn  P.  1988.  Amphitropic  proteins:  A new  class  of  membrane  proteins. Trends in Biochemical Sciences . Vol 13: 79–83.
Candrasari A, Muhammad AR, Masna H, Ovi RA. 2012. Uji Daya Antimikroba  Ekstrak  Etanol  Daun Sirih  Merah  ( Piper crocatum Ruiz
&  Pav.)  Terhadap  Pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia  coli ATCC  11229  dan Candida a lbicans ATCC  10231 Secara  In  Vitro. Jurnal  Biomedika . Vol 4 (1): 9-16.
Cimanga, K, Kambu K, Tona L, Apers S,
De Bruyne T, Hermans N, Tott´e J, Pieters  L,  dan  Vlietinck  AJ.  2002. Correlation Between Chemical Composition and Antibacterial Activity  of  Essential  Oils  of  Some Aromatic Medicinal Plants Growing in  The  Democratic  Republic  of Congo. Journal of Ethnopharmacology .  Vol  79:  213  – 220.
Vol. 8 (2) : 59 - 74
Clements  JM,  Coignard  F,  Johnson  I,
Chandler  S,  Palan  S,  Waller  A, Wijkmans J, dan Hunter MG. 2002. Antibacterial Activities and Characterization of Novel Inhibitors of  LpxC. Antimicrobial  Agents  and
Chemotherapy .  Vol  4  (6):  1793  – 1799.
Cowan  MM.  1999.  Plant  Products  as Antimicrobial Agents. Clinical
Microbiology  Reviews .  Vol  12  (4):
564 – 582. Cushnie  TP  dan  Lamb  AJ.  2005. Amtimicrobial Activity of Flavonoids. International Journal of Antimicrobial  Agents .  Vol  26:  343-
356.
Dart  RK.  1996. Microbiology  of  The Analytical  Chemist .  The  Royal
Society of Chemistry. London. Davis WW dan Stout TR. 1971. Disc Plate Method of Microbiological Antibiotic Assay. Journal Of Microbiology . Vol 22 (4):659-665.
Depkes  RI.  2000. Parameter  Standart Umum  Ekstak  Tumbuhan  Obat .
Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Jakarta. Departemen  Pertanian.  1976. Vademecum Kehutanan Indonesia . Balai Penjelidikan Kehutanan. Jakarta.
Djajadisastra J, Abdul M, Dessy NP. 2009. Formulasi Gel Topikal Dari Ekstrak Nerii  Folium Dalam  Sediaan  Anti Jerawat. Jurnal  Farmasi  Indonesia .
Vol 4: 210 -216.
Doughari  J dan Manzara S. 2008. In Vitro Antibacterial Activity of Crude Leaf Extracts  of Mangifera  indica Linn. African  Journal  of  Microbiology Research . Vol 2 (1): 67-72.
Fatisa Y. 2013. Daya Antibakteri Kulit dan Biji  Buah  Pulasan  ( Nephelium
mutabile )  Terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli Secara In Vitro.  Jurnal  Peternakan.  Vol  10: 31-38. ISSN 1829-8729.
Gaspersz V. 2006. Teknik Analisis Dalam Penelitian Percobaan . Jilid I Cetakan Ketiga. Tarsito. Bandung. Harborne JB. 1978. Phytochemical methods  (3rd  edn).Chapman  and
Hall . London. pp 60: 135, 203. Harborne  JB.  1987. Metode  Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan  Edisi  I , diterjemahkan  Padmawinata  K  dan Soediro I. ITB. Bandung. Harborne  JB.  1996. Metode  Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan  Edisi  II , diterjemahkan  Padmawinata  K  dan Soediro I. ITB. Bandung.
Haygreen JG dan Bowyer JL. 1989. Hasil Hutan dan Ilmu Kayu, diterjemahkan  Hadikusuma  SA. Gajah  Mada  University  Press. Yogyakarta.
Karlina  CY,  Ibrahim  M,  dan  Trimulyono
G.  2013.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Herba  Krokot  ( Portulaca oleracea L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli . LenteraBio .  Vol 2(1):87–93. ISSN: 2252-3979
Kementerian  Kesehatan  RI.  2011. Situasi Diare di  Indonesia. Buletin Jendela Data  dan  Informasi  Kesehatan .
ISSN 2088 – 270x.
Lukmandaru  G,  Kristian  V,  Anisa  AG. 2012. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Kayu Mangifera indica L.,
Mangifera foetida Lour, dan
Mangifera  odorata Griff. Jurnal Ilmu Kehutanan. Vol 6 (1) : 18-29.
Mailuhu  M,  Runtuwene  MRJ,  Koleangan HSJ.  2017.  Skrining  Fitokimia  dan Aktivitas Antiosidan Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Soyogik ( Saurauia  bracteosa DC). Chem Prog . Vol 10:1. Manuhuwa E. 2007. Kadar Air dan  Berat Jenis Pada Posisi Aksial dan Radial Kayu Sukun ( Arthocarpus communis ,  J.R  dan  G.Frest). Jurnal Agroforestri . Vol 2 (1).
Muskhazli  M,  Dirnahayu  M,  Azwady NAA,  Nurhafiza  Y,  Dalilah  NE. 2009.  Antibacterial  Activity  of Methanolic  Crude  Extracts  from Selected  Plant  Against Bacillus cereus . Jurnal  Pertanika  J.  Trop.
Agric.  Sci .  Vol  32  (2)  :  175-183.
ISSN : 1511-3701.
Mustikasari  K  dan  Ariyani  D.  2010)\. Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Biji  Kalangkala  ( Litseaangulata ).
Sains dan Terapan Kimia . Vol 4 (2):
131-136.
Pelezar  MJ  dan  Chan  ECS.  2006.  Dasar-
Dasar  Mikrobiologi  (I).  UI  Press. Jakarta.
Poeloengan  M,  Andriani,  Susan  MN, Komala  I,  Hasnita  M.  2007.  Uji Daya  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Kulit Batang Bungur ( Largerstoremia  speciosa Pers.)
Terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli Secara  In Vitro. Seminar  Nasional  Teknologi
Peternakan dan Veteriner. Rahmah  SA,  Suharti,  Subandi.  2012.  Uji Antibakteri dan Daya Inhibisi Ekstra Kulit Manggis ( Garcinia mangostana L.)  Terhadap  Aktivitas
Xantin Aksidase yang Diisolasi dari Air Susu Sapi Segar. Jurnal  Online Kimia  Universitas  Malang .  Vol  1 (1).
Rhimou  B,  Hassane  R,  Jose  M,  Nathalie B. 2010. The Antibacterial Potential of  The  Seaweeds  ( Rhodophyceae ) of  The  Strait  of  Gibraltar  and  The Mediterranean  Coast  of  Morocco. African  Journal  of  Biotechnology . Vol 9 (38): 6365-6372. ISSN: 1684- 5315.
Sabir  A.  2005.  Aktivitas  Antibakteri
Flavonoid  Propolis Trigona  sp . Terhadap  Bakteri Streptococcus mutans (in vitro). Jurnal Kedokteran
Gigi . Vol 38 (3): 135-141. Sangi  M,  Runtuwene  MRJ,  Simbala  HE, Makang VA. 2008. Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di Kabupaten  Minahasa  Utara. Chem
Prog .Vol 1 (1).
Sangi  MS,    Momuat  L,  Kumaunang  M. 2012.  Uji  Toksisitas  dan  Skrinning Fitokimia  Tepung  Gabah  Pelepah Aren  ( Arenga  pinnata ).  Jurnal Ilmiah Sains. Vol 12 (2): 128-134.
Santoso  RM,  Praharani  D,  Purwanto. 2012.  Daya  Antibakteri  Ekstrak Daun  Pare  ( Momordica  charantia ) dalam  Menghambat  Pertumbuhan Streptococcus viridans . Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa.
Sa’adah  H  dan  Nurhasnawati  H.  2015.
Perbandingan Pelarut Etanol dan Air Pada  Pembuatan  Ekstrak  Umbi Bawang Tiwai ( Eleutherine americana ). Jurnal Ilmiah Manuntung .  Vol  1  (2):149-153.
ISSN 2477-1821.
Sjostrom E. 1995. Kimia  Kayu : Dasar  – Dasar  dan  Penggunaan  Jilid  2 . Gadjah  Mada  University  Press. Yogyakarta.
Suerni  E,  Alwi  M,  Guli  MM.  2013.  Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Buah  Nanas ( Ananas  comosus L.  Merr . ),  Salak ( Salacca edulis Reinw.) dan
Mangga Kweni ( Mangifera odorata
Griff.)  Terhadap  Daya  Hambat Staphylococcus aureus . Jurnal Biocelebes . Vol 7 (1): 35-47. ISSN: 1978-6417. Yang D, Pornpattananangkul D, Nakatsuji T,  Chan  M,  Carson  D,  Huang  CM. 2009. The Antimicrobial Activity of Liposomal  Lauric  Acids  Against Proponibacterium acnes . Biomaterials .  Vol 30:  6035-6040.