## IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KADAR RHODAMIN B PADA KUE BERWARNA MERAH DI PASAR ANTASARI KOTA BANJARMASIN
Submitted : 20 April 2015 Edited : 10 Mei 2015 Accepted : 20 Mei 2015

## Ratih Pratiwi Sari
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin E-mail : ratih_pratiwi_sari@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Rhodamine B is a synthetic dye used to dye the textile industry. Rhodamine B is presence in food can cause  poisoning,  skin  irritation,  lung  irritation,  eye  irritation,  throat  irritation,  nasal  irritation,  and  cause liver  damage  if  exposed  to  high  concentrations.  Samples  taken  from  the  red  cake  seller  in  the  Antasari Banjarmasin  market.  This  research  is  a  descriptive  study.  The  sampling  technique  used  was  accidental sampling.  Rhodamine  B  on  a  method  of  identification  of  samples  using  Thin  Layer  Chromatography  and Visible spectrophotometry. Samples were prepared using the absorption method wool. The resulting solution will be used as identification in Thin Layer Chromatography using silica gel GF 254 plates with a mobile phase  of  n-butanol  :  ethyl  acetate  :  ammonia  (10:4:5).  Rhodamine  B  assay  performed  visible spectrophotometry at a wavelength of 544 nm.
Results of identification were putri ayu cake, Apam cake, Kukus cake A, Bolu cake, Singkong cake, and Kukus cakes B, shows that 1 positive samples containing Rhodamine B is a Apam cake. After that, the assay of  Rhodamine  B  was  performed  in  the  sample  apam    cake  and  obtained  for 0,4229  ±  0,1157  mg of Rhodamine B in 1 piece of red cake.

## K eywords: Rhodamine B, red cake, Thin Layer Chromatography, Visible spectrophotometry

## PENDAHULUAN

## Belakang
Kue  merupakan  salah  satu  makanan  ringan yang  diminati  oleh  masyarakat,  karena  harga  kue yang  murah,  mudah  didapat,  dan  cita  rasa  yang cocok dengan selera masyarakat. Penampilan kue termasuk  bentuk  dan  warnanya  dapat  menambah daya tarik masyarakat. Untuk itulah para produsen sering  menambahkan bahan tambahan pangan. Menurut  Peraturan  Menteri  Kesehatan  Nomor  33 Tahun 2012, menyatakan bahwa Bahan Tambahan  Pangan  (BTP)  merupakan  bahan  yang ditambahkan
kedalam pangan untuk mempengaruhi sifat atau bentuk pangan. Penggunaan  bahan  tambahan  pangan  beragam, seperti pengawet, pemberi rasa dan pewarna.Masyarakat
Indonesia biasa menggunakan  bahan  alami  sebagai  pewarna makanan,  misalnya  kunyit untuk  warna  kuning, daun  suji  untuk  warna  hijau,  dan  jambu  untuk warna  merah.  Seiring  dengan  perkembangan zaman, penggunaan pewarna alami mulai tergantikan  dengan  pewarna  makanan  sintesis, contohnya  karmosin  dan  pounceau  4R.  Hal  ini
dikarenakan  pewarna  alami  memiliki  warna  yang mudah  pudar,  penggunaannya  tidak  praktis,  dan tidak  cocok  digunakan  dalam  produksi  pangan skala  industri,  sedangkan  pewarna  sintesis memiliki  warnanya  lebih  menarik,  harga  yang relatif  murah,  penggunaannya  praktis,  dan  tidak mudah pudar, namun ada beberapa produsen yang dengan  sengaja  menambahkan  pewarna  sintesis yang  dilarang,  contohnya  seperti  pewarna Rhodamin B.
Ciri-ciri makanan yang mengandung Rhodamin  B  dapat  dilihat  dari  warna  pada makanan  tersebut  yang  lebih  terang,  warna  yang tidak homogen, warnanya lebih lengket dibanding dengan  pewarna  alami,  dan  adanya  sedikit  rasa pahit 1 .  Rhodamin  B  adalah  bahan  kimia  yang digunakan  untuk  pewarna  pada  industri  tekstil plastik  dan  keberadaan  Rhodamin  B  dalam makanan dengan dosis yang tinggi bisa menyebabkan  kanker,  keracunan,  iritasi  paru- paru, iritasi mata, tenggorokan, hidung dan usus 2 . Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh Paulina  V.Y.  Yamlean  (2011)  pada  jajanan  kue
yang berwarna merah muda yang beredar di Kota Manado  menunjukkan  bahwa  5  dari  16  sampel jajanan  kue  yang  berwarna  merah  muda  positif mengandung pewarna Rhodamin B.
Berdasarkan  survei  pendahuluan  yang  telah dilakukan, terdapat 6 penjual kue berwarna merah
yang berada di pasar Antasari Banjarmasin, maka dilakukanlah penelitian untuk mengetahui keberadaan dan kadar pewarna Rhodamin B pada kue  yang  berwarna  merah  yang  dijual  di  pasar Antasari Kota Banjarmasin.

## BAHAN DAN METODE Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian senyawa Rhodamin  Bdalam kue  berwarna  merah yang beredar di pasar Antasari Kota Banjarmasin adalah erlenmeyer, timbangan analitik, labu takar, gelas ukur, gelas beker, batang pengaduk, kompor listrik, pipet tetes, pipet volum, pipet ukur, mikro pipet  (Dragon  Lab),  pipa  kapiler,  plat  silika  gel GF  254,  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm, spektrofotometri  Visibel    (Rayleigh),  kertas saring, oven, chamber, dan benang wool.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian senyawa Rhodamin  Bdalam kue  berwarna  merah muda  yang  beredar  di  pasar  Antasari  Kota Banjarmasin adalah kue putri ayu, kue apam, kue kukus,  kue  bolu,  kue  singkong,  aquadest,  etanol 70%, larutan baku Rhodamin B, larutan n-butanol, larutan  etil  asetat, larutan  asam  asetat  10%, larutan ammonia 2% dan larutan ammonia 10%.

## METODE

## Pengumpulan Sampel
Pembelian  sampel    kue  berwarna  merah  di pasar  Antasari  Kota  Banjarmasin  dan  diberikan kode sampel.

## Preparasi Sampel
Timbang  sampel  sebanyak  10  g,  masukkan ke  dalam  Erlenmeyer  kemudian  direndam  dalam 20  mL  larutan  ammonia  2%  (yang  dilarutkan dalam etanol 70%), diamkan satu malam. Larutan disaring  filtratnya  dan  dipanaskan  di  atas  hot plate. Residu dari penguapan dilarutkan dalam 10 mL air yang mengandung asam. Ke dalam larutan asam,  dimasukkan  benang  wol  dan  dididihkan selama  10  menit,  kemudian  benang  diangkat. Benang wol dicuci dengan air. Kemudian benang wol dimasukkan ke dalam larutan ammonia 10%, dididihkan. Larutan basa yang diperoleh selanjutnya  akan  digunakan  sebagai  cuplikan sampel pada analisis kromatografi lapis tipis.

## Identifikasi Rhodamin B Menggunakan K LT
Masukkan  cairan  fase  gerak  berupa  n- butanol:etil  asetat:  ammonia  (10:4:5)  ke  dalam chamber  dan  jenuhkan  chamber.  Kemudian, sampel  ditotolkan  pada  plat  KLT  dengan  jarak  1 cm  dari  bagian  bawah  plat,  0,5  cm  dari  bagian atas plat dan 1 cm antara totolan yang satu dengan totolan  sampel  yang  lain.  Biarkan  hingga  terelusi sempurna.  Setelah  itu,  plat  KLT  diangkat  dan dikeringkan.  Diamati  warna  secara  visual  dan  di bawah  sinar  UV.  Sampel  positif  mengandung Rhodamin  B  apabila  jika  dilihat  secara  visual maka  akan  berwarna  merah  jambu  sedangkan apabila  dilihat  di  bawah  sinar  UV  254  nm  akan berfluoresensi  orange  dan  berfluoresensi  merah muda di bawah sinar UV 366 nm.
Pembuatan  Larutan  Baku  dan  Baku  K erja Rhodamin B
a. Larutan Baku Rhodamin B
Rhodamin  B  pro  analisis  didapat  dari Laboratorium FMIPA  UNLAM  Banjarbaru. Larutan baku Rhodamin B  dibuat  dengan konsentrasi 2000 ppm.
b. Larutan Baku Kerja Rhodamin B Larutan  baku kerja  Rhodamin  B  dibuat dengan  konsentrasi  10;  15;  20;  25;  30  dan  35 ppm.

## Penetapan  K adar  Rhodamin  B  menggunakan Spektrofotometri Visibel
Penetapan  kadar  Rhodamin  B  dilakukan dengan  Spektrofotometri  visible  pada  panjang gelombang  400-800  nm,  sehingga  akan  diperoleh panjang gelombang maksimal untuk Rhodamin B. Setelah itu, baca nilai serapan dari masing-masing larutan  baku  kerja.  Setelah  memperoleh  nilai serapan  dari  masing-masing  larutan  baku  kerja, kemudian  hitung  kadar  Rhodamin  B  dalam sampel  dengan  menggunakan  kurva  kalibrasi dengan persamaan regresi y= bx ± a.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Sampel  yang  diteliti  adalah kue  berwarna merah.  Pengambilansampel kue  berwarna  merah
dilakukan  di  pasar  Antasari  Kota  Banjarmasin, terdapat 6 orang penjual kue berwarna merah dan sampel yang diperoleh berjumlah 6 kue berwarna
merah  yang  tersebar  pada masing-masing  penjual kue  tersebut, lalu  kue  berwarna  merah  yang  akan diteliti  dimasukkan  ke  dalam  plastik  klip  dan diberi kode agar sampel tidak tertukar.
Sampel dilakukan  preparasi  terlebih  dahulu sebelum dilanjutkan ke tahap penotolan pada plat KLT. Sampel  dipreparasi dengan  metode  serapan benang  wol,  prinsipnya  adalah  penarikan  zat warna  dari  sampel  ke  dalam  benang  wol  dalam suasana  asam  dengan  pemanasan  dilanjutkan dengan pelunturan warna oleh suatu basa. Benang wol tersusun atas ikatan peptida yang di dalamnya terdapat ikatan sistina, asam glutarnat, lisin, asam aspartik dan arginin. Rhodamin B dapat melewati lapisan  kutikula  melalui  perombakan  sestina menjadi  sistein  dengan  suatu  asam.  Sistein
terbentuk melalui pecahnya ikatan S-S dari sistina karena adanya asam asetat. Setelah ikatan tersebut terbuka, maka Rhodamin B dapat masuk kedalam benang  wol  dan  berikatan  dengan  COO¯   dari asam  aspartik  juga  berikatan  dengan + NH3  dari Arginin 3 .
Preparasi  sampel  menggunakan  metode serapan  benang  wol  ini  bertujuan  untuk memisahkan  zat-zat  pengganggu  yang  ada  pada Rhodamin  B yang dapat mengganggu tahap identifikasi  Rhodamin  B  dengan  menggunakan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dan penetapan  kadar  menggunakan  Spektrofotometri Visibel. Gambar mekanisme peningkatan Rhodamin B dalam benang wol dapat dilihat pada gambar 1.
+
Gambar 1. Mekanisme peningkatan Rhodamin B dalam benang wol
(Soeprijino, dkk., 1974, cit: Utami dan Suhendi, 2009)
Preparasi sampel dilakukan dengan menggerus halus sampel kue berwarna merah lalu ditimbang  sebanyak  10  gram  masukkan  kedalam gelas erlenmeyer, kemudian direndam semalaman dengan  larutan  ammonia  2%  yang  dilarutkan dalam etanol 70%. Pelarut yang digunakan adalah pelarut  dengan  suasana  basa,  hal  tersebut dikarenakan  suatu  basa  dapat  melunturkan  atau melarutkan  warna  Rhodamin  B  yang  terdapat pada  kue  berwarna  merah.  Larutan  ammonia berfungsi  untuk  memisahkan  Rhodamin  B  yang terdapat pada kue dengan bantuan pelarut alkohol. Walaupun  Rhodamin  B  adalah  suatu  senyawa yang  sukar  larut  (1:100-1.000)  dalam  alkali  dan sangat  larut  dalam  alkohol,  namun  kadar Rhodamin  B  yang  terdapat  dalam  sampel  hanya sedikit  yaitu  sebesar  0,423  mg  dalam  1  kue, sehingga Rhodamin B dapat larut dalam ammonia yang  dilarutkan  dalam  etanol  dan  memisah
dengan  zat-zat  lain  yang  terdapat  pada  kue berwarna merah.
Sampel  yang  telah  didiamkan  satu  malam disaring filtratnya dengan kertas saring, kemudian larutan  dipanaskan  diatas  kompor  listrik  dengan suhu  80 ⁰ C  sampai  semua  larutan  ammonia  2% menguap,  sehingga  diperoleh  filtrat  dari  sampel. Kemudian sampel ditambahkan larutan asam yang dibuat dengan mencampurkan 10 ml air dan 5 ml asam  asetat  10%, lalu  dimasukkan  15  cm  benang wol dan didihkan selama 10 menit. Larutan asam asetat  berfungsi  untuk  memecah  ikatan  sistina yang  terdapat  pada  benang  wol  menjadi  sistein dengan bantuan pemanasan maka akan mempercepat  reaksi  tersebut  sehingga  Rhodamin B dapat menyerap ke dalam benang wol.
Benang  wol  yang  telah dididihkan  lalu dicuci, hal tersebut bertujuan untuk menghilangkan larutan asam yang
berkemungkinan  ikut  tertarik  ke  dalam  benang wol  dan  untuk  menghindari  kemungkinan terjadinya  reaksi  kimia  yang  akan  timbul  dengan pelarut  selanjutnya.  Setelah  bersih  benang  wol dilarutkan  dengan  larutan  ammonia  10%  dalam etanol  70%  kemudian  didihkan  selama  lebih kurang  2  menit.  Rhodamin  B  yang  berada  dalam benang  wol  akan  luntur  atau  larut  dalam  suatu basa,  dan  larutan  ini  lah  yang  akan  digunakan sebagai  cuplikan  untuk  dilanjutkan  ke  tahap identifikasi  menggunakan  Kromatografi  Lapis Tipis dan penetapan kadar dengan Spektrofotometri Visibel. Hasil Identifikasi Rhodamin B menggunakan Kromatografi Lapis Tipis
Pengujian
menggunakan metode Kromatografi  Lapis  Tipis  dilakukan  dengan menotolkan  sampel  pada  plat,  dalam  1  plat  KLT terdapat  8  totolan  yaitu  1  totol  kontrol  positif,  3 totol untuk  sampel  pertama,  3 totol  untuk  sampel ke  dua  dan  1  totol  untuk  kontrol  negatif. Pengujian  ini  dilakukan  3  replikasi  atau  3 pengulangan  yang  bertujuan  untuk  mempertegas atau memperjelas hasil dari pengujian sampel.
Jarak antar totol adalah 1 cm dan jarak garis bawah  plat  1  cm,  sedangkan  garis  atas  0,5  cm. Terdapat  Sampel  yang  telah ditotolkan  dibiarkan hingga  mengering,  lalu  dielusi  dalam  chamber yang  telah  dijenuhkan  dengan  fase  gerak  berupa n-butanol  :  etil  asetat  :  ammonia  (10  :  4  :  5). Kemudian plat KLT yang telah terelusi sempurna diangkat  dan  dikeringkan,  lalu  diamati  secara visual  bercak  akan  berwarna  merah  muda  dan  di bawah sinar UV 254 nm berflurosensi orange dan di  bawah  sinar  UV  366  nm  berflurosensi  merah muda.
Hasil  identifikasi  Rhodamin  B  pada  kue berwarna  merah  menunjukkan  bahwa  dari  6 sampel yang diuji, terdapat 1 sampel yang positif mengandung Rhodamin B, yaitu sampel kue apam dengan kode B. Gambar plat KLT dengan sampel kue  putri  ayu  dengan  kode  A  dan  sampel  kue apam  dengan  kode  B  dapat  dilihat  pada  gambar 4.2 secara visual, lampu UV 254 nm dan 366 nm, sedangkan  untuk perhitungan  nilai  faktor  retensi atau  nilai  R f sampel  kode  B  dapat dilihat  pada tabel 1.
Tabel 1. Perhitungan nilai R f untuk plat dengan sampel kode A dan B Kode sampel Deteksi Pertihungan nilai R f 254 nm 366 nm Kontrol positif (+) Orange muda Merah muda , , = 0,692 Sampel A1 - - 0 Sampel A2 - - 0 Sampel A3 - - 0 Sampel B1 Orange muda Merah muda , , = 0,653 Sampel B2 Orange muda Merah muda , , = 0,653 Sampel B3 Orange muda Merah muda , , = 0,653 Kontrol negatif (-) - - 0 (I)
(II)
(III)
Gambar 2. Plat Kromatografi Lapis Tipis pada sampel kode A dan B Keterangan gambar 2 : ( I ) Sampel A dan B setelah selesai dielusi
( II ) Sampel A dan B pada lampu UV 245 nm ( III ) Sampel A dan B pada lampu UV 366 nm
Berdasarkan  gambar  pada 2  dapat  dilihat bahwa sampel dengan kode B memberikan bercak warna  merah  muda  di  plat  KLT,  bercak  pada lampu  UV  254  nm  terlihat  berflurosensi  warna orange  muda,  untuk  lampu  UV  366  nm  terlihat jelas  berflurosensi  warna  merah  muda. Terlihat pada  gambar 2  timbul  2  bercak  berwarna  merah muda  diatas  lintasan sampel  kode  B  replikasi  ke- 3,  karena  bercak  yang  paling  atas  tidak  sejajar dengan bercak kontrol positif maka diduga bercak tersebut  adalah  zat  pengotor  yang  terdapat  pada sampel.  Hasil  warna  bercak  secara  visual,  lampu UV 254 nm dan 366 nm sesuai dengan penelitian yang  dilakukan  oleh  Wahyu  Utami  dan  Andi Suhendi 3 .
Perhitungan  nilai  faktor  retensi  atau  nilai R f dilakukan  untuk  memperkuat  hasil  identifikasi
sampel dengan nilai R f kontrol positif Rhodamin B sebagai pembanding, dan dapat dilihat perhitungan  nilai  R f pada  tabel  1 yang menunjukkan  bahwa selisih  nilai  R f antara  sampel kode B dan larutan Rhodamin B tidak terlalu jauh, yaitu diperoleh nilai R f kontrol positif Rhodamin B sebesar  0,692  sedangkan  untuk  sampel  kode  B yang  positif  mengandung  Rhodamin  B  memiliki nilai  R f yang  sama  untuk  ketiga  replikasi  yaitu sebesar 0,653.
Gambar  hasil  identifikasi  sampel  kue  kukus dengan kode C dan sampel kue bolu dengan kode D  dengan  menggunakan  plat  KLT  dilihat  secara visual,  lampu  UV  254  nm  dan  366 nm  dapat dilihat  pada  gambar 3,  sedangkan  untuk perhitungan  nilai  R f atau  nilai  faktor  retensi  dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Perhitungan nilai R f untuk plat dengan sampel kode C dan D Kode sampel Deteksi Pertihungan nilai R f 254 nm 366 nm Kontrol positif (+) Orange muda Merah muda , , = 0,714 Sampel C1 - - 0 Sampel C2 - - 0 Sampel C3 - - 0 Sampel D1 - - 0 Sampel D2 - - 0 Sampel D3 - - 0 Kontrol negatif (-) - - 0
(I)
(II)

## (III)
Gambar 3. Plat Kromatografi Lapis Tipis pada sampel kode C dan D Keterangan gambar 3  : ( I ) Sampel C dan D setelah selesai dielusi
( II ) Sampel C dan D pada lampu UV 245 nm
( III ) Sampel C dan D pada lampu UV 366 nm
Berdasarkan  hasil  gambar  pada 3  dapat dilihat bahwa sampel dengan kode C dan D tidak memberikan  bercak  warna  merah  muda  di  plat KLT,  dan  tidak  terlihat  flurosensi  warna  pada lampu UV 254 nm atau pada lampu UV 366 nm. Dari hasil tersebut dinyatakan bahwa sampel kode C  dan  D  tidak  mengandung  Rhodamin  B,  dan perhitungan nilai R f larutan Rhodamin B pada plat dengan  kode  sampel  C  dan  D  dapat  dilihat  pada tabel 2,  karena  kedua  sampel  pada  plat  ini  tidak
ada  yang  mengandung  Rhodamin  B  maka  hanya nilai  R f larutan  Rhodamin  B  yang  dapat  dihitung yaitu sebesar 0,714.
Gambar  hasil  identifikasi  sampel  kue singkong  dengan  kode  E  dan  sampel  kue  kukus dengan  kode  F  dengan  menggunakan  plat  KLT dilihat  secara  visual,  lampu  UV  254  nm  dan  366 nm dapat dilihat pada gambar 4, sedangkan untuk perhitungan  nilai R f atau  nilai  faktor  retensi  dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Perhitungan nilai R f untuk plat dengan sampel kode E dan F Kode sampel Deteksi Pertihungan nilai R f 254 nm 366 nm Kontrol positif (+) Orange muda Merah muda , , = 0,685 Sampel E1 - - 0 Sampel E2 - - 0 Sampel E3 - - 0 Sampel F1 - - 0 Sampel F2 - - 0 Sampel F3 - - 0 Kontrol negatif (-) - - 0
(I)
(II)

## (III)
Gambar 4. Plat Kromatografi Lapis Tipis pada sampel kode E dan F Keterangan gambar 4 : ( I ) Sampel E dan F setelah selesai dielusi
( II ) Sampel E dan F pada lampu UV 245 nm
( III ) Sampel E dan F pada lampu UV 366 nm
Hasil identifikasi pada gambar 4 dapat dilihat bahwa  sampel  dengan  kode  E  dan  F  tidak memberikan  bercak  warna  merah  muda  di  plat KLT,  dan  tidak  terlihat  flurosensi  warna  pada lampu UV 254 nm atau pada lampu UV 366 nm, hanya  kontrol  positif  yang  memberikan  bercak warna.  Dari  hasil  tersebut  dinyatakan  bahwa sampel  kode  E  dan  F  tidak  mengandung Rhodamin  B,  dan  perhitungan  nilai  R f larutan Rhodamin B pada plat dengan kode sampel E dan
F dapat dilihat pada tabel 3 dan diperoleh nilai R f larutanRhodamin B yaitu sebesar 0,685.
Berdasarkan hasil pengujianidentifikasi Rhodamin B menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis yang dilakukan di Laboratorium Kimia Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin terhadap sampel kue berwarna merah yang beredar di pasar Antasari Kota Banjarmasin gambar 5.
Gambar 5. Diagram presentase hasil identifikasi Rhodamin B pada kue berwarna merah menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (n = 6)
Indentifikasi Rhodamin B pada kue berwarna merah menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis Positif Negatif 83,34 % 16,67 %
Hasil dari gambar 5 menyatakan bahwa dari 6 sampel yang diuji, diperoleh nilai sebanyak 16,67 % untuk sampel positif mengandung Rhodamin B dan  sebanyak  83,34  %  untuk  sampel  yang dinyatakan negatif mengandung Rhodamin B. Hal tersebut  mungkin  dikarenakan  pedagang  di  pasar Antasari  Kota  Banjarmasin  masih  banyak yang menggunakan pewarna yang diperbolehkan seperti  Karmoisin  dan  merah  allura,  atau menggunakan  bahan  pewarna  alami  seperti Karmin dan merah bit.
3.  Hasil  Penetapan  Kadar  Rhodamin  B menggunakan Spektrofotometri Visibel
a. Penentuan panjang gelombang maksimal
Larutan  baku  Rhodamin  B  dibuat  dalam berbagai  seri  konstentrasi  pengukuran  yaitu  10; 15;  20;  25;  30;  dan  35  ppm,  dilakukan  dengan cara mengencerkan dari larutan Rhodamin B 2000 ppm  menggunakan pipet mikro diambil sebanyak 125 µl; 188 µl; 250 µl; 313 µl; 375 µl; dan 438 µl lalu  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  25  ml ditambahkan  etanol  96  %  hingga  batas  tanda,
maka akan diperoleh seri konstentrasi 10; 15; 20; 25; 30; dan 35 ppm.
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum dilakukan pada larutan Rhodamin 10 ppm dengan rentang  panjang  gelombang  400-800  nm.  Hal  ini dikarenakan  larutan  Rhodamin  B  merupakan larutan berwarna. Menurut Gandjar dan Rohman 4 , sinar  tampak  mempunyai  panjang  gelombang 400-750  nm.  Larutan  Rhodamin  B  10  ppm  yang telah selesai dibuat, ditunggu selama 19-21 menit terlebih  dahulu,  karena  pada  rentang  waktu tersebut  diperoleh  pengukuran  larutan  Rhodamin B  yang  stabil,  lalu  dimasukkan  ke  dalam spektrofotometri  visibel  untuk  diukur  serapan panjang gelombang maksimum dengan menggunakan  larutan  blanko.  Larutan  blanko yang  digunakan  adalah  pelarut  dari  Rhodamin  B yaitu  etanol  96  %  dan  fungsi  adalah  untuk menghilangkan  serapan  dari  zat  yang  tidak  diuji atau  pelarut  agar  tidak  mempengaruhi  serapan dari  Rhodamin  B.  Kurva  panjang  gelombang larutan  Rhodamin B  10  ppm  dapat  dilihat  pada gambar 1.6.
Gambar 6. Kurva panjang gelombang larutan Rhodamin B 10 ppm
Panjang gelombang maksimum larutan Rhodamin  B  10  ppm  pada  gambar  1.6, menunjukkan bahwa panjang gelombang maksimum  larutan  Rhodamin  B  10  ppm  terdapat pada  panjang  gelombang  544  nm.  Hasil  panjang gelombang  maksimum  tersebut  sesuai  dengan penelitian yang dilakukan oleh Winda Kirana Ade Putri 5 .
b. Penentuan  kurva  baku  Larutan  Rhodamin

## B
Pembuatan  kurva  baku  menggunakan  larutan Rhodamin  B  dengan  berbagai  konsentrasi pengukuran, yaitu 10; 15; 20; 25; 30; dan 35 ppm. Setiap  konsentrasi  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  544  nm  serta  menggunakan larutan  blanko.  Gambar  kurva  baku larutan Rhodamin  B  pada  panjang  gelombang  544  nm dapat dilihat pada gambar 1.7.
Gambar 7. Kurva baku larutan Rhodamin B pada
panjang gelombang 544 nm
Berdasarkan  dari  gambar 7  diperoleh persamaan  regresi  linear  y  =  bx  +  a,    yaitu  y  = 0.0232  x - 0.0352,  dengan  koefisien  korelasi  (r) sebesar  0.998055.  Dari  hasil  tersebut  dapat dinyatakan  bahwa  terdapat  korelasi  yang  positif, yang artinya meningkat konsentrasi suatu senyawa  maka  absorbansi  juga  akan  meningkat. Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Winda Kirana Ade Putri 5 menyatakan bahwa kurva baku larutan Rhodamin B pada panjang gelombang 544 nm juga menghasilkan korelasi yang positif.
Berdasarkan  hasil  identifikasi  Rhodamin  B pada  sampel  menyatakan  bahwa  sampel  dengan kode  B  yaitu  sampel  kue  apam,  positif
mengandung  Rhodamin  B  karena  memiliki  nilai R f lebih  kurang  dari  nila  R f kontrol  positif. Sampel  kode  B  dilanjutkan  ke  tahap  penetapan kadar menggunakan spektrofotometri visibel pada panjang gelombang 544 nm, sebelum diuji sampel di  tambahkan  5  ml  larutan  ammonia  20  %  dalam etanol 70 %, lalu dipanaskan dengan menggunakan hotplate dengan  suhu  80 ⁰ C  dan setelah  itu  didiamkan  selama  19-21  menit,  sesuai waktu yang  diperoleh  dari  penentuan  OT.  Hasil penetapan  absorbansiRhodamin  B  pada  sampel kode B dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Nilai absorbansiRhodamin B pada sampel kode B No Replikasi Absorbansi (A) 1 I 0,091 2 II 0,106 3 III 0,076
Konsentrasi  untuk  sampel  B1  adalah  5,4397 ppm,  konsentrasi  sampel  B2  adalah  6,0862  ppm, dan  untuk  konsentrasi  sampel  B3  adalah  4,8783 ppm dan diperoleh kadar Rhodamin B dalam rata- rata  5  buah  sampel  kue  apam  diperoleh  sebesar 0,4229  ±  0,1157  mg dalam  satu buah  kue  atau
hanya berkisar 0,3072-0,5386 mg dalam satu buah kue  berwarna  merah,  sehingga  dapat  dikatakan bahwa kue berwarna merah yang beredar di pasar Antasari  Kota  Banjarmasin  masih  ada  yang mengandung  pewarna  yang  dilarang  yaitu Rhodamin B, data dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Kadar Rhodamin B pada sampel kode B Sampel kode Kadar Rhodamin B (mg/kue) Standart Deviasi (SD) B 0,4229 ± 0,1157 0,0467

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,
maka dapat diambil kesimpulan, yaitu:
a. Hasil identifikasi  dengan  menggunakan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis yang dilakukan  terhadap 6 sampel kue  berwarna
merah  yang  beredar  di  pasar  Antasari  Kota Banjarmasin, diperoleh 1 sampel yang positif mengandung  Rhodamin  B,  yaitu  sampel dengan kode B (sampel kue apam).
b. Hasil  penetapan  kadar  Rhodamin  B  pada sampel  dengan  kode  B  (sampel  kue  apam) yang dilakukan menggunakan
spektrofotometri visibel pada panjang gelombang  544  nm  adalah  sebesar 0,4229  ±
0,1157 mg dalam satu kue berwarna merah.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wijaya,  H.C.  dan  Mulyono,  N.,  2009, Bahan  Tambahan  Pangan  Pewarna, hal  86,  IPB  Press,  Bogor, Indonesia.
2. Sari, R.W., 2008, Dangerous Junk Food, hal 22-23 dan 62-63, O 2, Yogyakarta, Indonesia.
3. Utami,  W.,  dan  Suhendi,  A.,  2009,  Analisis  Rhodamin  B  dalam  jajanan  pasar  dengan  metode Kromatografi Lapis Tipis, Jurnal Penelitian Sains dan Teknologi, Vol. 10 no. 2, hal 150-151.
4. Ghanjar, I.G. dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, hal 12, 222-223, 243, 252-256 dan 262, Pustaka Belajar, Yogyakarta, Indonesia.
5. Putri, W.K.A., 2009, ‘Pemeriksaan Penyalahgunaan Rhodamin B sebagai Pewarna pada Sediaan Lipstik yang beredar di Pusat Pasar Kota Medan’, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan,
Indonesia.