## Aktivitas Antioksidan Rumput Laut Acanthophora muscoides (Linnaeus) Bory Dari Pantai Krakal Gunung Kidul Yogyakarta

## Muhamad Rahadian Akbar*, Rini Pramesti, Ali Ridlo
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl.Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail: akbarrhdn@gmail.com
ABSTRAK : Acanthophora muscoides merupakan salah satu rumput laut merah yang berpotensi sebagai senyawa bioaktif yang dapat digunakan sebagai antioksidan alami. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol  dan  n-heksan,  kadar  total  fenolat  serta kadar  pigmen  (klorofil  a  &  karotenoid)  dari  sampel  segar A.  muscoides .  Penentuan  aktivitas antioksidan  dilakukan  menggunakan  metode  transfer  elektron  dengan  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhidrazyl )  sebagai  radikal  bebas.  Penentuan  kadar  total  fenolat  menggunakan  reagen  Folin- Ciocalteu  dengan  asam  galat  sebagai  standar  dan  penentuan  kandungan  pigmen  menggunakan prinsip  spektofotomet ri  pada  λ  663  nm,  646  nm  dan  470  nm.  Hasil  penelitian  menunjukkan A. muscoides memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  lemah  dengan  nilai  IC 50 ekstrak  metanol  325,47 ppm  dan  ekstrak  n-heksan  351,27  ppm,  sedangkan  kadar  total  fenolat  pada  masing-masing ekstrak 22,68 dan 46,19 (mg GAE/g ekstrak), kadar klorofil a 7,72 dan 24,93 (mg/g sampel), dan kadar karotenoid 28,52 dan 68,55 (µ mol/g sampel).
Kata Kunci : Acanthophora muscoides, Antioksidan, Radikal Bebas

## Antioxidant Activity of Acanthophora muscoides (Linnaeus) Bory Seaweed from Krakal
Beach Gunung Kidul Yogyakarta
ABSTRACT  : Acanthophora  muscoides  is  one  of  the  red  seaweed  that  is  potentially  used  as  a natural antioxidant. This study aims to determine the antioxidant activity of methanol and n-hexane extract,  and  determine  the  total  phenolic  content  and  levels  of  pigments  (chlorophyll  and carotenoid)  of  fresh  samples  A.  muscoides.  Antioxidant  activity  measured  using  electron  transfer method with DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl) as free radicals, while the determination of total phenolic content using the Folin-Ciocalteu reagent with gallic acid as standard and determination of pigment content measured by spectrophotometer at  a wavelength of 663 nm, 646 nm and 470 nm. The result showed IC 50 value of methanol extract was 325.47 ppm and n-hexane extract was 351.27  ppm  which  means  that  A.  muscoides  have  very  weak  antioxidant  activity.  Total  phenolic content  in  each  extract  were  22.68  and  46.19  (mg  GAE/g  extract),  chlorophyll  a  7.72  and  24.93 (mg/g sample) and carotenoid 28.52 a nd 68.55 (μ mol/g sample).
Keywords: Acanthophora muscoides, Antioxidant, Free Radical

## PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan substansi nutrisi maupun non -nutrisi yang terkandung dalam  bahan pangan, mampu mencegah atau memperlambat terjadinya proses oksidasi.  Kochhar dan Rossell (1990)  mendefinisikan  antioksidan  sebagai  zat  yang  dapat  menunda  atau  mencegah  terjadinya reaksi  autooksidasi  radikal  bebas  ( free  radical )  dalam  oksidasi  lipid.  Penggunaan  senyawa antioksidan  semakin  berkembang  seiring  bertambahnya  pemahaman  masyarakat  mengenai radikal bebas.
Radikal bebas ( free radical ) merupakan salah satu bentuk senyawa yang mempunyai elektron bebas tidak berpasangan yang menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan. Reaksi  radikal  bebas  dengan  molekul  lain  di  sekitarnya  dapat  menyebabkan  terjadinya  reaksi
berantai  hingga  menghasilkan  senyawa  radikal  baru.  Hal  ini  menimbulkan  kerusakan  sel  atau jaringan, munculnya penyakit degeneratif hingga kanker dan bahkan mutasi (Winarsi, 2007).
Berdasarkan  sumbernya,  antioksidan  dikelompokkan  menjadi  dua,  yaitu  antioksidan  sintetik dan  alami.  Antioksidan  yang  umum  digunakan  yaitu Butylated  Hydroxyanisol (BHA), Butylated Hydroxytoluene (BHT), Tertbutylhydroquinone (TBHQ)  dan Propyl  Gallate (PG).  Jenis-jenis antioksidan  ini  merupakan  antioksidan  sintetik  yang  memiliki  efektifitas  tinggi,  namun  bersifat karsinogenik  hingga  dapat  menyebabkan  kerusakan  hati  (Heo et  al. ,  2005).  Hal  tersebut melatarbelakangi  permintaan  antioksidan  dari  bahan  alami  meningkat.  Antioksidan  alami  lebih aman  digunakan  karena  tidak  terkontaminasi  zat  kimia  serta  mudah  diperoleh  karena  dapat berasal dari darat dan laut. Qasim (1991); Muniarsih dan Rachmaniar (1999) menyatakan aktivitas antioksidan dari laut lebih tinggi dibanding dengan darat. Hal ini disebabkan kandungan senyawa metabolisme sekunder yang dihasilkan oleh organisme laut lebih tinggi. Salah satu organisme laut yang berpotensi sebagai antioksidan alami adalah rumput laut.
A.  muscoides merupakan  jenis  rumput  laut  merah  (Rhodophyceae)  dari  ordo  Ceramiales yang berpotensi sebagai antioksidan (Ganesan et al ., 2008; Zakaria et al., 2011; Lavakumar et al ., 2012; Priya dan Khora, 2013). Selain sebagai antioksidan, A. muscoides juga dapat dimanfaatkan sebagai  antimikroba  dan  antikesuburan  (Wahidulla et  al .,  1986),  antibakteri  (Gupta et  al .,  1991; Zakaria et  al., 2011), antifouling (Devi et  al .,  1997)  antivirus  (Duarte et  al .,  2004),  antikanker (Lavakumar et  al .,  2012),  antimikroba (Lavakumar  dan  Ravichandrian,  2012),  serta  anti-inflamasi (Quindere et al., 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak metanol dan n-heksan dari  sampel  segar A.  muscoides ,  serta  menentukan  kadar  total  fenolat  dan  pigmen  (klorofil  a  & karotenoid).

## MATERI DAN METODE
Materi yang digunakan adalah rumput laut jenis Acanthophora muscoides yang diambil dari Pantaik Krakal Gunung Kidul Yogyakarta.
Metode  dalam  penelitian  ini  adalah  deskriptif  eksploratif,  yaitu  untuk  menggambarkan keadaan  suatu  fenomena,  bukan  untuk  menguji  hipotesis  tertentu  melainkan  hanya menggambarkan suatu variabel, gejala atau kejadian dengan apa adanya.
A.  muscoides setelah  diambil  dicuci  dengan  air,  ditiriskan  dan  diletakkan  di  kantong  plastik hitam dalam cool box berisi es.  Sampel kemudian dipotong kecil hingga ukuran 0,5 cm.
Sebanyak  125  gram  sampel  direndam  (maserasi)  menggunakan  pelarut  metanol  500  mL selama  2  x  24  jam.  Filtrat  hasil  rendaman  kemudian  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai  bervolume  125  mL.  Sisa  hasil  penguapan  dipisahkan  (dipartisi)  dengan  n-heksan menggunakan separatory funnel (corong pemisah) agar didapat filtrat metanol dan n-heksan yang mewakili  pelarut  polar  dan  non-polar.  Kedua  filtrat  kemudian  diuapkan  menggunakan rotary evaporator dengan suhu 40 0 C hingga didapat ekstrak kasar ( crude extract ).
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  transfer  elektron  menggunakan  DPPH sebagai  radikal  bebas.  Masing  masing  ekstrak  (metanol  dan  n-heksan)  disiapkan  dalam  5  seri konsentrasi berbeda yaitu 50, 100, 150, 200 dan 250 ppm. Sebanyak 1,5 mL dari masing-masing konsentrasi  diambil  dan  ditambahkan  3  mL  larutan  DPPH  0,15  mM.  Campuran  reaksi  kemudian diinkubasi  selama  30  menit  di  ruang  gelap,  setelah  itu  diukur  nilai  absorbansinya  menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Vitamin C dengan seri konsentrasi 2, 3, 4, 5 dan 6 ppm digunakan sebagai pembanding.
Nilai persentase antioksidan dihitung dengan mencari nilai inhibisi (nilai penghambat radikal bebas) dalam persen menggunakan rumus:
x 100
Keterangan: A = absorbansi larutan DPPH; B = absorbansi ekstrak + larutan DPPH
Nilai  konsentrasi  penghambatan  aktivitas  radikal  bebas  sebanyak  50%  (IC 50 )  dihitung menggunakan  persamaan  regresi  yang  diperoleh  dari  hubungan  antara  konsentrasi  sampel dengan persentase penghambatan aktivitas radikal bebas.

## Uji  Kadar Total Fenolat
Uji  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah  total  senyawa  fenolat  yang  terkandung  dalam sampel.  Uji  ini  mengacu  pada  Yangthong et  al .  (2009),  Sharma et  al .  (2011)  dan  Santoso et  al . (2012).  Ekstrak  dengan  berat  5  mg  dilarutkan  dalam  2  mL  etanol  p.a.  lalu  ditambahkan  5  mL akuades  dan  0,5  mL  reagen  Folin-Ciocalteau  50%.  Larutan  diinkubasi  selama  5  menit  dan ditambahkan 1 mL Na 2 CO 3 5%. Larutan diaduk agar homogen lalu diinkubasi dalam kondisi gelap selama  satu  jam.  Nilai  absorbansi  larutan  diukur  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 725 nm.
Asam galat digunakan sebagai standar dengan seri konsentrasi 0, 10, 20, 30 dan 40 ppm. Kurva kalibrasi asam galat digunakan untuk menentukan kadar senyawa fenolat yang terkandung dalam sampel melalui persamaan regresi dan dinyatakan dalam satuan mg ekuivalen asam galat/g ekstrak (mg GAE/g ekstrak) dengan rumus perhitungan:

## Total Fenolat =
Keterangan: a = konsentrasi asam galat (mg/l); V  =  volume  total  larutan  uji  (mL);  G  =  massa ekstrak yang digunakan (g); 1000 = faktor konversi terhadap volume larutan total (mL)

## Uji Kadar Pigmen Klorofil a dan Karotenoid
Penentuan kadar  klorofil  a  dan  karotenoid  berdasarkan  Lichtenthaler  (1987).  Ekstrak sebanyak  5  mg  dilarutkan  menggunakan  aseton  p.a.  dengan  konsentrasi  5  mg  ekstrak/5  mL aseton. Masing-masing pelarut diukur absorbansinya pada panjang gelombang 646, 663 dan 470 nm. Kadar klorofil a dan karotenoid dihitung menggunakan rumus:
Klorofil a (mg/g sampel) = 12,21 x A 663 – 2,81 x A 646
Karotenoid (µmol/g sampel) = Keterangan: A 663 = Absorbansi pada panjang gelombang 663 nm; A 646 = Absorbansi pada panjang gelombang 646 nm; A 470 = Absorbansi pada panjang gelombang 470 nm; V = Volume ekstrak

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  merendam  sampel  dalam  pelarut  metanol  dan  kemudian dipartisi  dengan  n-heksan  menggunakan  corong  pemisah  ( separatory  funnel ).  Proses  ekstraksi bertujuan  untuk  mendapatkan  senyawa  bioaktif  dari  suatu  bahan  (Harborne,  1987),  sedangkan penggunaan  pelarut  yang  berbeda  tingkat  kepolarannya  bertujuan  untuk  menarik  senyawa  yang memiliki  sifat  yang  sama  ( like  dissolve  like ).  Senyawa  polar  akan  larut  dalam  pelarut  polar, sedangkan senyawa non -polar akan larut dalam pelarut non -polar (Gritter et al ., 1991).

## Tabel 1. Hasil Ekstraksi
Pelarut Bentuk Warna Berat Ekstrak (g) Rendemen (%) Metanol Padat Hijau Pekat 0,68 0,54 n-heksan Pasta Hijau 0,48 0,38
Hasil penelitian diperoleh ekstrak metanol lebih banyak dengan berat dan rendeman sebesar 0,68  gram  dan  0,54%  dibanding  ekstrak  n-heksan  0,48  gram  dan  0,38%.  Hal  ini  diduga  karena rumput  laut A.  muscoides memiliki  senyawa  polarlebih  banyak  dibandingkan  dengan  senyawa non -polar  (Gritter et  al .,  1991).  Pelarut  metanol  tidak  hanya  memiliki  kemampuan  untuk  menarik senyawa  polar  tapi  juga  senyawa  yang  bersifat  semi  polar.  Pelarut  metanol  dapat  mengekstrak senyawa-senyawa  dengan  tingkat  kepolaran  yang  tinggi  seperti  senyawa  fenolat  polar (napthoquinon,  echinochrom,  hidrosiquinon)  dan  karotenoid  polar  (xanthofil,  lutein,  zeaxhantin). Pelarut n-heksan dapat mengekstrak senyawa non -polar seperti senyawa fenolat non -polar (lignin,
Journal of Marine Research Vol.7, No.1 Februari 2018, pp. 9-18
flavonoid, querectin) dan karotenoid non - polar (α-karoten, β-karoten) (Harborne, 1984; Thompson, 1985).
Ekstrak  yang  diperoleh berwarna  hijau  menunjukkan  bahwa  sampel  mengandung  banyak klorofil.  Atmadja  (1996)  menambahkan  bahwa  rumput  laut  merah  memilki  kandungan  pigmen berupa klorofil a, klorofil d, pikobiliprotein (pikoeritrin dan pikosianin), karoten dan xantofil.

## Aktivitas Antioksidan A. muscoides
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  transfer  elektron  menggunakan  DPPH sebagai  radikal  bebas.  Aktivitas  antioksidan  didasarkan  pada  kemampuan  ekstrak A.  muscoides dalam  mengurangi  absorbansi  radikal  bebas  DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil ).  Prinsip  kerja metode  ini  berdasarkan  kemampuan  substansi  antioksidan  dalam  menetralisir  radikal  bebas. Senyawa  berfungsi  sebagai  antioksidan  apabila  mampu  mendonorkan  atom  hidrogennya  untuk mengikat  DPPH  sehingga  terbentuk  DPPH  yang  tereduksi.  Reduksi  DPPH  ditandai  dengan berubahnya warna awal DPPH (ungu) menjadi kuning pucat (Molyneux, 2004; Sheikh et al ., 2009).
Tabel 2 . Nilai Absorbansi, %Inhibisi dan IC50 Ekstrak A. muscoides
Ekstrak Konsentrasi (ppm) Absorbansi DPPH Absorbansi Sampel Uji + DPPH % Inhibisi IC 50 (ppm) Metanol 50 0,895 38,4033 100 0,875 39,7798 150 1,453 0,818 43,7027 325,47 200 0,794 45,3544 250 0,778 46,4556 n-heksan 50 0,806 44,5286 100 0,781 46,2491 150 1,453 0,778 46,4556 351,27 200 0,773 46,7997 250 0,747 48,5891 Vitamin C 2 0,635 12,6548 3 0,425 41,5406 4 0,727 0,221 69.6011 3,34 5 0,093 87,2077 6 -0.259 135,625
Aktivitas  antioksidan  pada  sampel  dinyatakan  dalam  persen  inhibisinya  terhadap  radikal bebas DPPH. Persen inhibisi didapat dari pengurangan nilai absorbansi DPPH dengan absorbansi DPPH ditambah ekstrak. Parameter yang digunakan untuk menginterpretasikan hasil adalah nilai IC 50 .  IC 50 merupakan  konsentrasi  suatu  sampel  dalam  meredam  50%  aktivitas  radikal  bebas DPPH.
n-heksan
Metanol
Journal of Marine Research Vol.7, No.1 Februari 2018, pp. 9-18
Gambar 2 . Grafik Inhibisi Vit. C ditambah DPPH
Aktivitas  antioksidan  berdasarkan  nilai  IC 50 pada  ekstrak A.  muscoides berturut-turut 325,47 ppm (metanol) dan 351,27 ppm (n-heksan). Suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm dan sangat lemah jika lebih dari 200 ppm (Mardawati et  al .,  2008).  Aktivitas  antioksidan  pada  sampel  tergolong  sangat  lemah.  Hasil  ini  sangat  jauh berbeda  dibanding  dengan  Zakaria et  al .  (2011) serta  Kumar  dan  Jeyaprakash  (2015).  Nilai  IC 50 Sampel  Acanthophora  kering  dan  basah  dibawah  50  ppm  pada  semua  pelarut,  baik non -polar, semi  polar  dan  juga  polar  (n-heksan,  dietil  eter,  etil  asetat,  kloroform,  butanol  dan  juga  metanol) (Zakaria et al ., 2011) serta 56,75 ppm (Kumar dan Jeyaprakash, 2015). Aktivitas antioksidan pada sampel diduga dipengaruhi oleh beberapa faktor lainnya seperti zat  pengotor,  parameter  lingkungan  lokasi  pengambilan  sampel  dan  juga  jenis  sampel.  Sampel yang  diuji  masih  berupa  ekstrak kasar  sehingga  diduga  masih  memiliki  kandungan  senyawa  lain misal garam, mineral dan nutrien lain yang menghambat kerja dari senyawa antioksidan (Wikanta et  al., 2005).  Jensen et  al .  (2001)  menyatakan  setiap  lokasi  memiliki  karakteristik  dan  nilai parameter  lingkungan  yang  berbeda.  Kondisi  lingkungan  lokasi  pengambilan  sampel  seperti kedalaman, suhu dan intensitas cahaya matahari akan mempengaruhi kompisisi lipid dan pigmen pada suatu sampel sehingga berpengaruh pada kandungan vitamin dan juga antioksidan. Proses biosintesis  senyawa  antioksidan  akan  menghasilkan  senyawa  yang  optimal  apabila  kondisi lingkungannya  mendukung.  Hal  ini  karena  proses  biosintesis  berawal  dari  proses  fotosintesis. Selain  itu,  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  berawal  dari  metabolit  primer  yang dihasilkan  dari  proses  fotosintesis  (Taiz  dan  Zeiger,  2002).  Jenis  sampel  (kering  atau  segar) mempengaruhi aktivitas antioksidan karena proses pengeringan dapat mengurangi senyawa yang berperan  sebagai  antioksidan  misal  senyawa  fenolat  di  suatu  sampel  (Santoso et  al .,  2010), sehingga  aktivitas  antioksidan  terbaik  terdapat  pada  sampel  basah  (Sari et  al .,  2015;  Rifkowaty dan Wardanu, 2016).

## Kadar Total Fenolat
Kadar  total  fenolat  dihitung  secara  spektrofotometri  menggunakan  asam  galat  sebagai standar.  Nilai  regresi  linier  dari  konsentrasi  asam  galat  dengan  nilai  absorbansinya  digunakan untuk menentukan nilai kadar total fenolat.
Kadar total fenolat pada sampel menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan memiliki nilai yang lebih tinggi dibanding dengan ekstrak metanol dengan nilai masing masing 46,19 dan 22,68 (mg GAE/g  ekstrak).  Hal  ini  mengindikasikan  senyawa  fenolat  yang  terdapat  pada  esktrak A. muscoides bersifat non-polar (lignin,  flavonoid  dan  querectin).  Senyawa  fenolat  terbanyak  tidak selalu  terdapat  dalam  ekstrak  polar  (Harborne,  1987),  namun  tergantung  dari  struktur  senyawa fenolat yang terkandung dalam sampel (Sheikh et al ., 2009). Hasil ini menunjukkan nilai yang lebih
Tabel 3. Kadar Total Fenolat
Pelarut Total Fenolat (mg GAE/g ekstrak) Metanol 22,68 n-heksan 46,19
tinggi  dibanding  penelitian  sebelumnya  yaitu  29,917  mg  GAE/g  ekstrak  (n-heksan)  dan  5,33 – 7,837 mg GAE/g ekstrak (metanol) pada sampel kering Acanthophora (Zakaria et al ., 2011). Hasil ini menunjukkan nilai yang lebih rendah apabila dibanding Kumar dan Jeyaprakash (2015) dengan kadar  total  fenolat  217,59  mg  GAE/g  ekstrak  (metanol)  pada  sampel  segar  Acanthophora. Perbedaan  ini  diduga  karena  perbedaan  jenis  sampel  yang  digunakan.  Sampel  segar menunjukkan  kandungan  total  fenolat  yang  lebih  tinggi.  Hal  ini  dikarenakan  senyawa  fenolat memiliki  sifat  mudah  teroksidasi  dan  sensitif  terhadap  perlakuan  panas  (Santoso et  al .,  2010). Suhu dan waktu ekstraksi juga berpengaruh terhadap kandungan total fenolat  (Sari et al ., 2013). Selain perlakuan sampel, perbedaan kandungan total fenolat juga dapat disebabkan oleh metode ekstraksi yang digunakan. Proses ekstraksi melalui soxhletasi lebih efektif dibanding melalui partisi menggunakan separatory funnel (Zakaria et al ., 2011).
Senyawa  fenolat  memiliki  aktivitas  antioksidan  karena  dapat  menangkap  radikal  bebas. Senyawa fenolat yang memiliki aktivitas antioksidan adalah senyawa fenolat yang memiliki gugus hidroksi yang tersubstitusi pada posisi ortho dan para (Andayani et al ., 2008).
Kadar  total  fenolat  pada  sampel  tidak  menunjukkan  nilai  yang  berbanding  lurus  dengan aktivitas  antioksidan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  metanol lebih tinggi (325,47 ppm) dibanding n-heksan (351,47 ppm), sedangkan kadar total fenolat tertinggi terdapat pada ekstrak n-heksan (46,19 mg GAE/g ekstrak) dibanding ekstrak metanol (22,68 mg GAE/g  ekstrak).  Putranti  (2013)  dan  Chayati  dan  Miladiyah  (2014)  menambahkan  tidak  adanya korelasi positif antara kandungan total fenolat dengan aktivitas antioksidan. Hal ini diduga karena adanya  senyawa  antioksidan  lain  selain  senyawa  fenolat.  Meskipun  senyawa  fenolat  adalah senyawa utama yang berperan pada efek antioksidan, namun senyawa non -fenolat seringkali juga terlibat (Aljadi dan Kamaruddin, 2004).

## Kadar Pigmen Klorofil a dan Karotenoid
Kadar  klorofil  a  dan  karotenoid  diukur  pada  panjang  gelombang  ( λ) 470, 646 dan 663 nm. Kadar klorofil a pada ekstrak n-heksan sebesar 24,93 mg/g sampel, lebih tinggi dibanding ekstrak metanol yaitu 7,72 mg/g sampel. Klorofil termasuk pigmen non -polar  sehingga dapat larut dalam pelarut non -polar  (Masojidek et  al .,  2004;  dan  Sedjati et  al .  2012).  Kadar  klorofil  a  pada  rumput laut  merah  menunjukkan  nilai  yang  terkecil  dibanding  dengan  rumput  laut  hijau  dan  coklat (Fleurence dan Levine, 2016).
Klorofil dapat meredam radikal bebas karena adanya logam Mg yang terkelat dan kerangka porfirin yang dimilikinya. Logam yang terkelat itu membuat radikal bebas cenderung memberikan elektronnya kepada logam Mg tersebut, sehingga dapat menetralkan karakter radikal bebas.
Gambar 3. Penangkapan Radikal Bebas oleh Fenol
Tabel 4 . Kadar Pigmen
Pelarut Kadar Pigmen Klorofil a (mg/g sampel) Karotenoid (µmol/g sampel) Metanol 7,72 28,52 n-heksan 24,93 68,55
Logam  Mg  pada  klorofil  dapa  berpengaruh  pada  aktivitas  antioksidan  klorofil  jika  dalam  bentuk terkelat bukan dalam bentuk ionik (Endo et al., 1985).
Kadar  karotenoid  tertinggi  terdapat  pada  ekstrak  n-heksan  68,55  µmol/g  sampel dibandingkan dengan ekstrak metanol 28,52 µmol/g sampel. Hal ini diduga kandungan karotenoid pada  sampel  temasuk  golongan non -polar (α-karoten  dan  β-karoten).  Senyawa  karoten mengandung hidrokarbon tak jenuh sehingga dapat melarutkan senyawa karoten yang non -polar seperti α-karoten dan β-karoten. Kandungan karoten pada beberapa rumput laut merah bervariasi dari 0,5 – 52,5% berat kering (Esteban et al ., 2008). Fleurence dan Levine (2016) menambahkan variasi  kandungan  pigmen  dipengaruhi  oleh  faktor  musim,  lokasi  geografi  tempat  tumbuh,  jenis spesies, umur panen hingga kondisi lingkungan.
Karotenoid  sebagai  antioksidan  mampu  melindungi  sel  dan  organisme  dari  kerusakan oksidatif  yang  disebabkan  oleh  radikal  bebas  yang  dihasilkan  tubuh  pada  waktu  metabolisme. Perlindungan  tersebut  karena  karotenoid  mampu  meniadakan  aktivitas  radikal  bebas. Penghambatan  radikal  bebas  oleh  karotenoid  dilakukan oleh  β-karoten.  Aktivitas  antioksidan  β- karoten  dapat  menunjukkan  pengaruh  pro-oksidan  secara  autokatalitik  (Limantara  &  Rahayu, 2008). Burton dan Inglod (1984) menjelaskan mekanisme kerja karotenoid berupa β-karoten yaitu dengan bereaksi dengan radikal peroksil sehingga terbentuk radikal ROO-Carotene (radikal ROO- CAR) dan terjadi delokalisasi elektron. Hal ini menyebabkan elektron tersebar  di seluruh struktur β-karoten. β-karoten  netral  terbentuk  apabila radikal  ROO-CAR  bereaksi  dengan  radikal  ROOR- CAR.
Kadar pigmen, baik klorofil a dan karotenoid, juga tidak menunjukkan nilai yang berbanding lurus  dengan  aktivitas  antioksidannya.  Hasil  perhitungan  menunjukkan  kadar  pigmen  tertinggi terdapat  pada  ekstrak  n-heksan.  Hal  ini  sesuai  Biranti et  al .  (2009).  Penyebab  terjadinya  hal  ini diduga  karena  terdapat  zat  pengotor  berupa  komponen  lain  dalam  pigmen  yang  menghambat kinerja antioksidan misal garam, mineral atau nutrien lainnya (Wikanta et al ., 2005).
Gambar 4 . Logam Mg Terkelat pada Klorofil
Gambar 5. Mekanisme β-karoten Mereduksi Radikal Bebas

## KESIMPULAN
Nilai IC 50 ekstrak metanol A. muscoides sebesar 325,47 ppm dan ekstrak n- heksan sebesar 351,27 ppm. Keduanya  memiliki aktivitas antioksidan dengan kategori sangat lemah. Kandungan total  fenolat  ekstrak  metanol  dan  n-heksan  masing-masing  sebesar  22,68  dan  46,19  (mg  GAE/g ekstrak), kadar klorofil a 7,72 dan 24,93 (µmol/g sampel) serta kadar karotenoid 28,52 dan 68,55 (µmol/g sampel).

## DAFTAR PUSTAKA
Aljadi, A. M., dan M. Y. Kamaruddin.  2004. Evaluation of The Phenolic Contents and Antioxidant Capacities of Two Malaysian Floral Honeys. Journal of Food Chemistry. 85(4): 513-518. Andayani,  R.,  Maimunah  dan  Y.  Lisawati.  2008.  Penentuan  Aktivitas  Antioksidan,  Kadar  Fenolat Total  dan  Likopen  pada  Buah  Tomat  ( Solanum  licopersicum ).  Jurnal  Sains  dan  Teknologi Farmasi, 13: 1-9.
Atmadja,  W.  S.,  A.  Kadi,  Sulistijo  dan  R.  Satari.  1996.  Pengenalan  Jenis-Jenis  Rumput  Laut Indonesia. Puslitbang Oseanologi LIPI, Jakarta.
Biranti,  F.,  M.  Nursid,  dan  B.  Cahyono.  2009.  Analisis  Kuantitatif  β-Karoten  dan  Uji  Aktivitas Karotenoid  dalam  Alga  Coklat Turbinaria  decurrens .  Jurnal  Sains  dan  Matematika  (JSM). 17(2): 90-96.
Burton, W. dan Ingold, U. 1984. Β-Carotene: An Unusual Type of Lipid Antioxidant. Science 224: 569-573.
Chayati,  I.,  dan  I.  Miladiyah.  2014.  Kandungan  Komponen  Fenolat,  Kadar  Fenolat  Total,  dan Aktivitas Antioksidan Madu dari Beberapa Daerah di Jawa dan Sumatra. MGMI 6(1): 11-24.
Devi, P., W. Solimabi, L. D. Souza, S. Y. Sonak, S. Y. S. Singbal. 1997. Screening of Some Marine Plants for Activity Against Marine Fouling Bacteria. Botanica Marina, 40: 87-91
Duarte, M. E. R., J. R. Cauduro, G. D. Noseda, M. D. Noseda, A. G. Goncalves, C. A. Pujol, E. B,
Damonte dan A. S. Cerezo. 2004. The structure of 23 the Agaran Sulfate from Acanthophora spicifera Composition  and  Antibacterial  Activity  of  (Rhodomelaceae,  Ceramiales)  and  its Antiviral  Activity.  Relation  Between  Structure  and  Antiviral  Activity  in  Agarans.  Carbohydrate Research, 35-347
Endo, Y., R. Usuki, dan T. Kaneda. 1985. Antioxidant Effects of Chlorophyll and Pheophytin on the Autoxidation of Oils in the Dark. The Mechanism of Antioxidative Action of Chlorophyll. Journal of the American Oil Chemists Society 62(9) : 1387 –1390.
Esteban,  R.,  B.  Martinez,  B.  Fernandez-Marin,  J.  M.  Becerril  dan  I.  Garcia-Plazaola.  2008.
Carotenoid  Composistion  in  Rhodhophyta:  Insights  into  Xanthophyll  Regulation  in Corallina elongate . European Journal Phycology. 44(2): 221-230.
Fleurence, J., dan I. Levine. 2016. Seaweed in Health and Disease Prevention. Elsevier Inc. ISBN:
978-0-12-802772-1
Ganesan P., C.S. Kumar, dan N. Bhaskar. 2008. Antioxidant Properties of Methanol Extracts and its Solvent Fractions Obtained from India Red Seaweeds. Bioresource Technology, 99: 2717- 2723.
Gritter,  R.  J.,  M.  B  James  dan  E.  S.  Arthur.  1991.  Pengantar  Kromatografi.  Institut  Teknologi Bandung, Bandung. (diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata).
Gupta, M.P., N. E. Gomez, A. I. Santana, P. N. Solis, dan G. Palacios. 1991. Antimicrobial Activity of Various Algae of The Panamian Atlantic Coast. Review in Medical Panama, 16: 64-8.
Harborne.  1987.  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan.  Institut Teknologi  Bandung,  Bandung.  (diterjemahkan  oleh  Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro).
Heo,  S.  J.,  S.  H.  Cha.,  K.  W.  Lee.,  S.  K.  Cho.  dan  Y.  J.  Jeon.  2005.  Antioxidant  Activities  of Chlorophyta and Phaeophyta from Jeju Island. Algae, 20(3): 251-260.
Jensen, G., G. I. Ginsberg dan C. Drapeu. 2001. Blue-Green Algae as an Immune-Enhancer and Biomodulator. Jana 3(4): 24-30
Kochhar, S. P. dan J. B. Rossel. 1990. Detection, Estimation and Evaluation of Antioxidant in Food Systems.  In:  B.J.F.  Hudson  (Ed.),  Food  Antioxidant.  Elservier  Applied  Science,  London  and New York.
Kumar,  R.,  R.  dan  K.  Jeyaprakash.  2015.  Screening  of  Phytochemical  and  In  Vitro  Antioxidant Efficacy  on  Selected  Red  Seaweed  ( Acanthophora  spicifera )  Collected from  Gulf  of  Mannar, Tamilnadu, India. World Journal of Pharmaceutical Research, 4(6): 1505-1518. Lavakumar,  V.,  N.  Ahamed  dan  V.  Ravichandrian.  2011.  Anticancer  and  Antioxidant  Effect  of Acanthophora  spicifera Against  EAC  Induced  Carcinoma  in  Mice.  Journal  of  Pharmacy Research, 5(3): 1503-1507.
Lavakumar,  V.  dan  V.  Ravichandrian.  2012.  Antimicrobial  Activity  of Acanthophora  spicifera . International Journal Research Pharmaceutical Sciences, 3(1): 176-178.
Lichtentaler. H. K. 1987. Chlorophylls and Carotenoids: Pigments of Photosynthetic Biomembranes Methods in Enzimology. Weinheim: Verlag Chemie.
Limantara,  L.  dan  P.  Rahayu.  2008.  Sains  dan  Teknologi  Pigmen  Alami.  Prosiding  Seminar Nasional Sains dan Teknologi Pigmen Alami,  Universitas Kristen Satya Wacana, Salatiga, p: 2-42.
Mardawati,  E.,  F.  Fitry  dan  M.  Herlina.  2008.  Kajian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstak  Kulit  Manggis ( Garcinia  Mangostana  L )  dalam  Rangka  Pemanfaatan  Limbah  Kulit  Manggis  di  Kecamatan Puspahiang Kabupaten Tasikmalaya. Fakultas Teknologi Industri. Universitas Padjajaran Masojidek,  J.,  M.  Koblizek,  dan  G.  Torzillo.  2004.  Photosyntesis  in  Microalgae  in:  A.  Richmond (Ed). Handbook of Microalgal Culture: Biotechnology and Applied Phycology. Blakwell Science Ltd., Iowa. P. 20-39
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  The  Stable  Free  Radical Diphenylpicryl-hydrazil (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Science Technology, 26(2): 211-219. Muniarsih,  T  dan  Rachmaniar,  R.  1999.  Isolasi  Substansi  Bioaktif  Antimikroba  dari  Spons  Asal Pulau  Pari  Kepulauan  Seribu. Prosiding  Seminar  Bioteknologi  Kelautan  Indonesia .  Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. 151- 158.
Priya,  M.,  K.,  dan  S.S.  Khora.  2013.  Ameliorative  Effect  of  Red  Algae Acanthophora  spicifera Against  Puffer  Fish Arothron  hispidus Induced  Biochemical  and  Oxidative  Stress  in  Mice. International Journal of Pharma and Bio Science, 4(3): 1043-1052.
Putranti, R.,I. 2013. Skrining Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rumput Laut Sargassum duplicatum dan Turbinaria  ornata dari  Jepara.  [Tesis].  Program  Studi  Magister  Manajemen Sumberdaya Pantai, Universitas Diponegoro, Semarang.
Qasim,  R.  1991.  Amino  Acid  Composition  of  Some  Common  Seaweeds.  Pakistan  Journal  of Pharmaceutical Sciences, 4(1): 49-54.
Quindere, G. L. A., Fontes, P. B., Vanderlei, O. S. E., Queiroz, L. N. I., Rodrigues, G. A. J., Araujo,
F. W. I., Jorge, B. J. R., Menezes, B. D., Silva, R. A. A., Chaves, V. H., Evangelista, M. A. S. J.,  Bezerra,  M.  M.,  Benevides,  B.  M.  N.  2013.  Peripheral  Antinociception  and  Anti- Edematogenic  Effect  of  a  Sulfated  Polysaccharide  from Acanthophora  muscoides . Pharmacological Reports. ISSN 1734-1140.
Rifkowaty, E. E., A. P. Wardanu. 2016. Pengaruh Ekstraksi Cara Basah dan Cara Kering Terhadap Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Cengkodok  ( Melastoma  malabathricum L.).  Jurnal  Aplikasi Teknologi Pangan 5(1): 10-15.
Santoso, J., N.  Aryudhani and S. H. Suseno. 2010.  Kandungan  Senyawa  Fenol Rumput  Laut Hijau Caulerpa racemosa dan  Aktivitas  Antioksidannya. Jurnal Kelautan Nasional, 2: 109- 118.
Santoso, J., S.  Anwariyah, R.  O.  Rumiantin, A.  P.  Putri, N.  Ukhty dan Y. Yoshie Stark. 2012. Phenol  Content,  Antioxidant  Activity  and  Fibers  profile  of  Four  Tropical  Seagrasses  from Indonesia. Journal of Coastal Development, 15(2): 189-196.
Sari, B. L., N. Susanti dan Sutanto. 2015. Skrining Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Alga Merah Eucheuma spinosum . Journal Pharm. Sci. Res. 2(1). 59-67.
Sari,  K.  D.,  D.  H.  Wardani,  A.  Prasetyaningrum.  2013.  Kajian  Isolasi  Senyawa  Fenolik  Rumput Laut Eucheuma cottonii Berbantu Gelombang Mikro dengan Variasi Suhu dan Waktu. Jurnal Teknik Kimia (3):19. 38-43
Sedjati,  S.,  Yudiati  dan  Suryono.  2012.  Profil  Pigmen  Polar  Mikroalga  Laut Spirulina sp.  dan Potensinya Sebagai Pewarna Alami. Indonesian Journal of Marine Science, 17(3). 176-181. Sharma,  G.    N.,  S.  K.    Dubey,  N.  Sati  and  J.    Sanadaya.  2011.    Phytochemical  Screening  and Estimation  of  Total  Phenolic  Content  in Aegle  marmelos Seeds.    International  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research, 3(2): 27-29.
Sheikh,  T.  Z.  B.,  C.L.  Yong  dan  M.S.  Lian.  2009.  In  Vito  Antioxidant  Activity  of  The  Hexane  and Methanolic  Extracts  of Sargassum  baccularia and Cladophora  patentiramea .  Journal  of Applied Sciences. 13(9): 2490-2493 Taiz, L., dan Zeiger, E. 2002. Plant Physiology, 3 rd edition. Aannals of Botany 91: 750-751 Thompson,  E.B. 1985. Drug Bioscreening. America: Graceway Publishing Company, Inc. Pp.  40, 118.
Wahidulla,  S.,  L.D.  Souza  dan  S.Y.  Kamax  1986.  Chemical  Constituents  of  the  Red  Algae
Acanthophora spicifera . Bot. mar. 29: 49 - 50.
Wikanta,  T.,  H.D.  Januar  dan  M.  Nursed.  2005.  Uji  Aktivitas  Antioksidan,  Toksisitas  dan Sitoksisitas Ekstrak Alga Merah Rhodymenia palmate . Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia. 11(4): 41-49
Winarsi, H, 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Kanisius, Yogyakarta.
Yangthong,  M.,  N.  Hutadilok-Towatana,  dan  W.  Phromkunthong.  2009.  Antioxidant  Activities  of Four  Edible  Seaweeds  from  the  Southern  Coast  of  Thailand.    Plant  Foods  Human  Nutrition, 64: 218-223 Zakaria, N. A., D. Ibrahim, S. F. Shaida dan A.N. Supardy. 2011 a . Phytochemical Composition and Antibacterial  Potential  of  Hexane  Extract  from  Malaysian  Red  Algae Acanthophora  spicifera (Vahl) Borgesen. World Applied Sciences Journal. 15(4): 496-501.
Zakaria,  N.  A.,  D.  Ibrahim,  S.  F.  Shaida  dan  A.N.  Supardy.  2011 b .  Assessment  of    Antioxidant Activityheo,    Total    Phenolic    Content  and    Invitro    Toxicity    of  Malaysian    Red    Seaweed, Acanthophora  spicifera .  Journal of Chemical and Pharmaceutical Research. 3(3): 182-191.