## PENGARUH PEMBERIAN KOPI TERHADAP PENURUNAN KADAR GLUKOSA DARAH PADA TIKUS PUTIH STRAIN WISTAR DIABETES MELLITUS TIPE 2
Alifaneta Yustisiani 1 , Desy Andari 2 , Isbandiyah 3
Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang,  Jl. Bendungan Sutami No. 188A, Kota Malang, 65145, Indonesia, (0341)551149

## ABSTRAK
Penilitian ini bertujuan untuk membuktikan pengaruh kopi terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2.penelitin ini menggunakan metode eksperimen laboratoris rancangan the post test only control group desain . Sampel tikus putih strain wistar dibagi 4 kelompok. Sampel I : kontrol negatif, II: kontrol positif, dua kelompok lainnya diberikan kopi Robusta berbagai dosis (5,4 mL/200 gr BB/ hari, 10,8 mL/200 gr BB/hari). Analisis data menggunakan One Way Anova , uji Tukey 5%, uji korelasi dan uji regresi linier. Hasil uji One Way Anova terdapat pengaruh perlakuan dengan perbedaan yang bermakna terhadap penurunan kadar glukosa darah. Dari uji korelasi terdapat korelasi yang berbanding lurus dan sangat bermakna antara dosis kopi dan jumlah penurunan kadar glukosa darah tikus putih diabetes mellitus tipe 2 dengan nilai Pearson Correlation -0,978 pada glukosa darah puasa dan -0,932 pada glukosa darah 2 jam post pandrial, sedangkan hasil uji regresi didapatkan nilai R2 = 0,956 pada glukosa darah puasa dan 0,869 pada glukosa darah 2 jam post pandrial. Kesimpulan : Pemberian kopi berbagai dosis dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus diabetes mellitus tipe 2.
Kata kunci : diabetes mellitus tipe 2, kadar glukosa darah, kopi Robusta

## ABSTRACT
The objectives of this research were to understanding the effect of coffee to decrease the blood glucose level in diabetes mellitus type 2 wistar strain white mice models. This research was Laboratory experiment the post test only control group design. Wistar white mice groups were divided into 4 groups. Sample I : negative control, II: positive control, the other two groups were treated with Robusta coffee in various doses (5,4 mL/200 grBW/day, 10,8 mL/200 gr BW/day). Data analysis used One Way Anova , Tukey test 5%, correlation test, and linear regression test. One way Anova test result’s that there were an influence of  treatments with the obviously different to decrease the blood glucose level. From the correlation test result that there were an inversely and meaningful correlation between coffee doses and the increasing of decrease of blood glucose level in diabetes mellitus type 2 white mice models with the value of Pearson Correlation -0,978 fasting glucose blood and -0,932 2 hours post pandrial, while regression test result was R2 = 0,956 fasting glucose blood and R2= 0,869 2 hours post pandrial. Conclusion : Coffee administration in various doses can reduce the number of blood glucose level in diabetes type 2 mice models.
Key words : diabetes type 2, the number of blood glucose level, Robusta coffee

## PENDAHULUAN

## Diabetes
Diabetes yang lebih dikenal sebagai penyakit kencing manis di Indonesia adalah penyakit kronik, yang terjadi ketika pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau ketika tubuh tidak dapat memanfaatkan insulin hasil produknya sendiri (WHO, 2011).
Dalam bidang medis, salah satu yang terpenting adalah mulai berkembangnya cara pengobatan dengan bahan alam yang lebih dikenal dengan fitofarmaka sebagai alternatif lain dari pengobatan kimiawi (Kumalaningsih, 2007).
Menurut World Health Organization (WHO) tahun 2009, Diabetes Melitus adalah penyakit kronik yang terjadi ketika pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau ketika tubuh
tidak dapat secara efektif menggunakan insulin. Insulin adalah suatu hormon yang meregulasi glukosa dalam darah. Hiperglikemia atau peningkatan kadar glukosa dalam darah adalah efek yang biasa terjadi pada diabetes yang tidak terkontrol dan lebih lanjut akan menimbulkan kerusakan yang serius pada banyak sistem dalam tubuh, terutama saraf dan pembuluh darah (WHO, 2009).

## Kopi
Selama ini di Indonesia lebih dikenal sebagai penghasil Kopi Robusta terbesar didunia, meskipun kontribusi kopi Arabika Indonesia dalam perdagangan kopi dunia secara kuantitatif kecil namun secara kualitatif sangat disukai konsumen dengan keanekaragaman jenis serta cita rasa yang spesifik (Tondok, 1999).
Lebih dari 90% kopi di Indonesia diusahakan oleh rakyat. Umumnya komoditi kopi telah menjadi komoditas penting dalam bidang perekonomian beberapa propinsi penghasil kopi seperti Sulawesi Selatan, Bali, Sumatera Selatan, Sumatera Utara dan Aceh (AAK, 2009).
Pada saat ini saja tanaman Kopi Robusta lebih dari 95%, sedangkan selebihnya adalah kopi Arabika dan jenis lainnya. Meskipun kopi Robusta ini semula ditanam dan diusahakan oleh perkebunan besar, namun dalam perkembangannya tanaman ini telah banyak menjadi tanaman rakyat atau pertanian rakyat (AAK, 2009).
Svilass (2004) telah melakukan penelitian tentang asupan berbagai bahan pangan sumber antioksidan terhadap kadar antioksidan dalam plasma, dengan subjek 61 orang Norwegia dewasa selama 7 hari. Dia melaporkan bahwa asupan kopi menyumbang antioksidan plasma sebanyak 11,1 mmol, asupan buah-buahan 1,8 mmol, teh 1,4 mmol, anggur 0,8 mmol, sereal 0,8 mmol dan sayuran 0,4 mmol. Asupan total antioksidan tersebut berkaitan erat dengan kadar lutein, zeaxanthin dan 3 likopen plasma. Data ini membuktikan bahwa kopi menyumbang total antioksidan terbesar diantara sumber antioksidan lainnya.
Kopi lebih dikenal dengan efek buruknya bagi kesehatan, namun telah dibuktikan dalam penelitian bahwa kopi ternyata juga mengandung senyawa antioksidan.
Di dalam kopi, terdapat senyawa polifenol yang telah dikenal sebagai senyawa antioksidan yang dapat melawan radikal bebas. Menurut beberapa hasil penelitian, mengkonsumsi kopi dapat menurunkan insiden dari berbagai macam penyakit diantaranya diabetes mellitus tipe II (Johnston, 2003), kardiovaskuler (Morton, 2007), kanker (Svilaas et al ., 2004), serta menurunkan kadar asam urat (Choi, 2007).

## Manfaat Kopi
Kopi lebih dikenal dengan efek buruknya bagi kesehatan, namun telah dibuktikan dalam penelitian bahwa kopi ternyata juga mengandung senyawa antioksidan. Di dalam kopi, terdapat senyawa polifenol yang telah dikenal sebagai senyawa antioksidan yang dapat melawan radikal bebas. Menurut beberapa hasil penelitian, mengkonsumsi kopi dapat menurunkan insiden dari berbagai macam penyakit diantaranya diabetes mellitus tipe II (Johnston, 2003), kardiovaskuler (Morton, 2007), kanker (Svilaas et al ., 2004), serta menurunkan kadar asam urat (Choi, 2007).
Manfaat kopi antara lain dapat menurunkan resiko penyakit Alzheimer dan Demensia, menurunkan resiko batu empedu, menurunkan resiko penyakit Parkinson, fungsi kognitif yang baik, sebagai analgesic, antidiabetes, proteksi hati, penuruan resiko kanker, cardioprotective, antioksidan, mencegah karies gigi, dan Gout.

## Diabetes Mellitus
Menurut World Health Organization (WHO) tahun 2009, Diabetes Melitus adalah penyakit kronik yang terjadi ketika pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau ketika tubuh tidak dapat secara efektif  menggunakan insulin. Insulin adalah suatu hormon yang meregulasi glukosa dalam darah. Hiperglikemia atau peningkatan kadar glukosa dalam darah adalah efek yang biasa terjadi pada diabetes yang tidak
terkontrol dan lebih lanjut akan menimbulkan kerusakan yang serius pada banyak sistem dalam tubuh, terutama saraf dan pembuluh darah (WHO, 2009).
WHO sebelumnya telah merumuskan bahwa diabetes mellitus merupakan sesuatu yang tidak dapat dituangkan dalam satu jawaban yang jelas dan singkat, tetapi secara umum dapat dikatakan sebagai suatu kumpulan problem anatomik dan kimiawi akibat dari sejumlah faktor dimana didapat defisiensi insulin absolut atau relatif  dan gangguan fungsi insulin (Gustaviani, 2006).

## Diabetes Mellitus Tipe II
Diabetes tipe ini terjadi pada 90-95% penderita diabetes yang biasa disebut diabetes non-depende insulin , diabetes tipe 2 dan adult onset diabetes (diabetes onset dewasa). Diabetes tipe ini meliputi individu yang memiliki resistensi insulin dan biasanya memiliki defisiensi insulin relatif. Pada pasien diabetes tipe ini tidak dibutuhkan terapi insulin untuk bertahan ( American Diabetes Association , 2011).
Ada banyak kemungkinana penyebab diabetes tipe ini. Meskipun etiologi spesifik masih belum diketahui, kerusakan autoimun sel â tidak terjadi pasien diabetes tipe ini. Hampir semua pasien dengan diabetes tipe adalah obese dan obesitas itu sendiri yang menimbulkan beberapa tingkatan resistensi insulin. ( American Diabetes Association , 2011)
Pasien yang tidak obese menurut kriteria berat badan tradisional dapat meningkatkan prosentase distribusi lemak tubuh terutama pada regio abdomen. Ketoasidosis jarang terjadi secara tiba-tiba pada diabetes tipe ini, namun ketika muncul ketoasidosis maka berhubungan stres akibat adanya penyakit lain seperti adanya infeksi ( American Diabetes Association , 2011).
Diabetes tipe ini sering tidak terdiagnosa selama beberapa tahun karena hiperglikemia berkembang secara bertahap dan pada tahap awal tidak cukup parah untuk pasien memperhatikan gejala klasik diabetes ( American Diabetes  Association , 2011). Meskipun demikian pasien tersebut meningkatkan resiko makrovaskular dan mikrovaskular. Padahal pasien dengan diabetes tipe ini memiliki kadar insulin yang normal atau lebih, kadar glukosa darah yang tinggi akan meningkat kadar insulin dimana sel â berfungsi normal. Hingga sekresi insulin menjadi tergaggu dan tidak cukup untuk mengkompensasi resistensi insulin ( American Diabetes Association, 2011 ).
Resistensi insulin dapat membaik pada penurunan berat badan dan/atau terapi farmakologi untuk tapi jarang pulih kembali normal. Yang meningkatkan resiko berkembangnya diabetes tipe ini adalah meningkatnya usia dan berat badan serta berkurangnya aktivitas fisik. Ini sering terjadi pada wanita yang sebelumnya GDM dan individu dengan hipertensi atau dislipidemia, serta frekuensinya bervariasi pada setiap ras atau etnik ( American Diabetes Association , 2011).
Kadar glukosa dapat dipertahankan dalam waktu yang cukup lama dengan meningkatkan resiko berkembangnya diabetes tipe ini adalah meningkatnya usia dan berat badan serta berkurangnya aktivitas fisik. Ini sering terjadi pada wanita yang sebelumnya GDM dan individu dengan hipertensi atau dislipidemia, serta frekuensinya bervariasi pada setiap ras atau etnik ( American Diabetes Association , 2011).
Kadar glukosa dapat dipertahankan dalam waktu yang cukup lama dengan meningkatkan sekresi insulin, tetapi pada akhirnya sekresi  insulin menurun dan jumlah insulin yang beredar tidak lagi memadai untuk mempertahankan keadaan euglikemia. Pasien diabetes mellitus tipe II sekitar 80% mengalami obesitas, maka kemungkinan besar gangguan glukosa pada  diabetes mellitus yang pada akhirnya terjadi pada pasien diabetes mellitus tipe II merupakan akibat dari obesitasnya (Schteingart, 2005).
Patogenesa pasien diabetes mellitus tipe II disebabkan oleh tiga faktor penting, yaitu kerentanan genetik, menurunnya fungsi sel beta pankreas, dan terjadinya resistensi insulin akibat penurunan kerja insulin pada reseptor insulin yang meliputi otot skeletal, hati, dan jaringan lemak. Seringkali faktor herediter menyebabkan timbulnya diabetes melalui peningkatan kerentanan sel-sel beta pankreas terhadap penghancuran oleh virus atau mempermudah perkembangan antibodi autoimun melawan selsel beta, jadi juga mengarah kepada penghancuran sel-sel beta pankreas (Guyton, 2007).
Manifestasi diabetes mellitus bervariasi dari pasien ke pasien. Pertolongan medis paling sering dicari karena gejala yang berkaitan dengan hiperglikemia (poliuria, polidipsi, dan polifagia), tetapi kejadian pertama mungkin berupa dekompensasi metabolik akut yang menyebabkan koma diabetik (Foster, 2000).
Gejala-gejala diabetes mellitus meliputi frekuensi buang air kecil yang meningkat, rasa haus berlebihan, rasa lapar berlebihan, merasa lelah dan lemah hampir disepanjang waktu, menurunnya berat badan, luka yang sulit sembuh, rasa kesemutan pada kaki, penglihatan kabur, kulit yang kering atau gatal (Soegondo, 2007).
Terdapat gejala klasik yaitu poliuri, polidipsi, polifagi serta penurunan berat badan tanpa penyebab ditambah satu dari tiga keadaan : 1) kadar glukosa darah sewaktu ?200 mg/ dL 2) kadar glukosa darah puasa ?126 mg/dL 3) tes toleransi glukosa sebanyak 75 gram oral dan setelah 2 jam kadar glukosa darah sewaktu ?200 mg/dL ( American Association of Clinical Endocrinologist, 2007).

## Kopi dan Diabetes Mellitus Tipe II
Kopi di absorbsi di lambung dan usus halus kurang dari 45 menit setelah intake dan mencapai konsesntrasi maksimum dalama darah 15-120 menit (Sinclair, 2000). Metabolisme kafein pada liver diawali dengan pembuangan methyl 1 dan 7 grup pada reaksi katalisasi oleh sitokrom P450, memunkingkan formasi menjadi 3 grup methylxantine : paraxantine, theobromine, theophyline . Theophyline yang berperan dalam mengontrol metabolisme gukosa (Kallow, 1993).
Pengaruh kopi terhadap sekresi gastrointestinal peptide seperti glukagon-like peptide 1 (GLP-1) dan gastric inhibitory polypeptide (GIP) menurunkan absorpsi glukosa pada usus halus dan aktivasi central anorexigenic peptides (POMC/CART). Mekanisme langsung juga terjadi pada beta pankreas oleh kafein dan theophylline (Gustavo, 2009).
Kafein ( 1,3,7-trimthylxanthine ) terlibat dalam regulasi metabolisme glukosa lipid termasuk aksi seperti insulin- dependent glucose transport , ekspresi glucose transporter 4 dan pemanfaatan asam lemak di otot skeletal. Efek ini mirip dengan exercise-induced dan 5’adenosine monophosphate actived
protein kinase (AMPK) dimediasi perubahan metabolik di otot skeletal, menunjukkan bahwa kafein terlibat dalam regulasi metabolisme otot melalui aktivasi AMPK (Egawa T, 2009).
Hasil studi menunjukkan dalam stimulasi akut dari glucose transport , aktivasi AMPK memegang peranan penting dalam meningkatkan kapasitas untuk glucose transport dengan menginduksi peningkatan GLUT 4 pada otot skletal (Edward O, 2002).

## KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

## Kerangka
Streptozotocin adalah kombinasi dari glucosamine- nitrosourea yang memiliki efek diabetogenik poten pada beberapa spesies binatang termasuk mencit, tikus, anjing, dan kera. Diabetes yang dipicu oleh streptozotocin pada binatang bersifat ireversibel dan mewakili diabetes mellitus tipe 2 pada manusia (McEvoy, 2002). Streptozotocin toksik pada sel dengan merusak DNA, meskipun mekanisme lainnya juga berperan. Struktur streptozotocin cukup mirip dengan glukosa sehingga ditransportasikan ke dalam sel melalui protein trasport glukosa GLUT 2, tetapi hal ini tidak terjadi pada transpor glukosa yang lain (Schnedl et al., 1994; Wang and Gleichmann, 1998).
Induksi STZ menyebabkan resistensi         insulin yang mengakibatkan penurunan pemasukkan glukosa ke dalam otot dan jaringan adipose sehingga kadar glukosa dalam darah tinggi (Rees dan Alcolado, 2005). Nicotinamide adalah bentuk Vitamin B3 yang dapat mempertahankan dan meningkatkan fungsi sel beta (Knip, 2000). Alasan untuk menggunakan nicotinamide dalam pencegahan dan diabetes mellitus tipe 1 berasal dari studi manusia dan hewan serta
P ENGARUH P EMBERIAN K OPI TERHADAP P ENURUNAN K ADAR G LUKOSA D ARAH PADA .... 41 dalam penelitian in vitro. Dalam studi in vitro telah menunjukkan bahwa nicotinamide dapat mencegah makrofag-atau interleukin-â1 yang menginduksi kerusakan sel β .
Setelah terjadi resistensi insulin pre-diabetik, pankreas mengkompensasi dengan mensekresi insulin lebih banyak untuk membantu uptake glukosa dalam sel dan terjadi defek aktivitas GLUT 4 sehinggu timbul diabetes mellitus tipe 2 (Emily, 2003).
Insulin sendiri dapat mencetuskan resisten insulin, apabila setiap saat sel terpapar insulin, produksi GLUT 4 (reseptor glukosa tipe 4) pada membran sel menurun, hal ini menyebabkan kebutuhan insulin meningkat yang menyebabkan reseptor glukosa berkurang (MacLean, 2002).
Kopi mengandung senyawa antioksidan yang kuat yaitu chlorogenic acid atau asam klorogenat. Ketika kopi dipanggang, asam klorogenat berubah menjadi senyawa baru yang memberikan aroma unik. Hilangnya molekul air dan terbentuknya ikatan ester dari asam klorogenat menghasilkan quinolakton atau quinida yang tidak asam. Menurut hasil pengujian hasil pengujian, asam klorogenat dan derivatnya ternyata dapat diserap aktif dalam tubuh (Hery W, 2007).
Senyawa quinida terdapat dalam jumlah banyak berupa 3- caffeoylquinide dan 4- caffeoylquinide . Senyawa ini mampu memperbaiki kerja insulin, terutama yang bekerja dalam otot skelet. Sehingga sensitivitas insulin meningkat (Hery W, 2007). Asam klorogenat juga menyebabkan penurunan resistensi insulin, menghambat absorpsi glukosa, menghambat atau memperlambat hidrolisis glucose-6-phos- phatase pada hepatic stage yang mungkin dapat menurunkan output plasma glukosa darah, menyebabkan penurunan konsentrasi plasma glukosa darah (Gustavo, 2009).
Asam klorogenat juga dapat meningkatkan uptake glukosa dengan meningkatkan ekspresi GLUT 4 melalui PI3K independent pathway dimana ferulic acid meningkatkan uptake glukosa memalui PI3K dependent pathway (Prabhakar PK, 2009).

## Hipotesis
Terdapat penurunan kadar glukosa darah setelah pemberian kopi pada tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan menggunakan metode The Post Test Only Control Group Design.
Penelitian ini akan dilaksanakan selama 4 minggu bertempat di Laboratorium Biokimia dan laboratorium Bomedik Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang.
Populasi penelitian adalah tikus putih ( Rattus novergicus ) strain wistar dewasa, jenis kelamin jantan, umur 2-3 bulan, berat badan 150-250 gram dengan kondisi sehat yang ditandai dengan gerakannya yang aktif.
Sampel diambil secara random dari populasi tikus putih ( Rattus norwegicus ) strain wistar jantan sebagai hewan
coba. Sampel terdiri atas 4 kelompok yang diambil secara random.
Alat yang digunakan adalah Timbangan untuk menimbang berat badan tikus, gelas ukur, botol air dan botol kopi, beker gelas, Spuit mikro, strip glukosa dan glucometer, sonde modifikasi, spet insulin.
Bahan-bahannya antara lain hewan percobaan, makanan tikus, pengukuran variable, zat yang diberikan untuk membuat tikys diabet streptozotocin dan Nicotinimide
Alur Penelitian

## Prosedur Penelitian
1. Adaptasi Hewan Percobaan
Tikus diaklimatisasi dahulu dengan lingkungan dan pakan selama satu minggu di laboratorium sebelum injeksi Streptozotocin dan Nicotinamide sambil diamati kesehatannya.
2. Penentuan Dosis
Dosis Aquades, nicotinamide, streptozotocin, dan kopi. Pada manusia, di dalam 1 cangkir kopi 200ml air mengandung 10g bubuk kopi (konsentrasi 1 kali), dan dosis konversi banyaknya volume larutan untuk tikus yang setara dengan 200ml air ~ 0,018 x 200ml adalah 3,6ml. Untuk 2 cangkir kopi setara dengan 7,2ml; sedang untuk 4 cangkir kopi setara dengan 14,4ml; dan untuk 8 cangkir kopi setara dengan 28,8ml.
Sehingga dapat diperoleh dosis kopi Robusta menurut hasil konversi dari dosis manusia, dimana berat badan manusia 70 kg setara dengan 200 gram berat badan tikus dengan satuan konversi = 0,018 (Laurence & Bacharach, 1964). Sehingga dosis kopi Robusta yang diberikan yaitu : - Dosis I = 300 mL x 0,018 = 5,4 ml/200 gr BB/hari Dosis II = 600 mL x 0,018 = 10,8 ml/200 gr BB/hari. 3. Penyiapan Larutan Uji
- Serbuk nicotinamide dilarutkan dalam larutan PBS ( phosphate buffered saline ) sebelum disuntikkan ke hewan coba (Firdous et al , 2009). Serbuk STZ dilarutkan dengan dapar sitrat. Larutan dapar sitrat merupakan kombinasi antara dinatrium sitrat (asam sitrat
monohidrat dan NaOH 1M) dengan volume 53,2 ml serta penambahan larutan NaOH 1M sehingga larutan tepat 100 ml. Larutan yang disuntikkan ke tikus yaitu 0,5 ml tiap ekor tikus. Kopi robusta diberikan dalam sediaan seduhan sesuai dengan dosis masing-masing kelompok.
4. Pengambilan Darah Tikus Seluruh hewan coba dari semua kelompok diukur kadar gula darahnya. Darahnya diteteskan pada strip glukosa dan ditentukan angka glukosa darahnya dengan melihat hasilnya pada glukometer.
5. Percobaan
a. Pembuatan Tikus Diabetes Induksi diabetes mellitus tipe 2 pada tikus putih dilakukan dengan jalan memberikan nicotinamide 240 mg/kg BB (Barik, 2008) yang dilarutkan dgn PBS secara intraperitoneal (Firdous, 2009). Setelah 15 menit pemberian nicotinamide dilanjutkan dengan pemberian STZ sebanyak 100 mg/kg BB (Firdous, 2009). Dalam waktu 10 menit sebelum disuntikkan, STZ dilarutkan dengan buffer sitrat yang memiliki pH 4,5 (Robert et al , 1984).
b. Pemberian Kopi Robusta Kelompok I sebagai kelompok kontrol negatif. Kelompok I ini tidak diberi pemberian apapun (pakan standar). Kelompok II sebagai kelompok kontrol positif hanya diberi perlakuan injeksi streptozotocin dan nicotinamide , sedangkan pada kelompok III dan IV selain pemberian injeksi larutan streptozotocin dan nicotinamide pada hari ke 2 selama 7 hari juga diberi perlakuan kopi ro- busta. Kopi diberikan masingmasing dengan dosis 5,4 ml/200 gr BB/hari untuk kelompok III dan 10,8 ml/200 gr BB/hari untuk kelompok
IV. Untuk keseragaman maka pemberian kopi robusta dilakukan setiap hari selama 14 hari jam 12.00 – 13.00 WIB siang. Setelah selama 14 hari tikus diberikan kopi robusta kemudian tikus dihitung kadar glukosa darahnya.
c. Pemeriksaan Kadar Gula Darah Dalam penelitian ini, pemeriksaan kadar gula darah tikus dilakukan sebelum perlakuan, pada hari ke-7, dan hari ke-14. Pemeriksaan pada hari- 7 bertujuan untuk mengetahui efek hiperglikemi dari Streptozotocin. Pemeriksaan pada hari ke-14 adalah untuk mengetahui pengaruh pemberian kopi robusta terhadap penurunan kadar gula darah tikus putih (Rattus norvegicus) strain wistar yang diinduksi Streptozotocin dan Nicotinamide.

## Analisis Data
Analisis statistik yang digunakan adalah:
1. One way ANOVA , yaitu untuk menguji hipotesis kesamaan rata-rata antar kelompok (> 2 kelompok), apakah rata- rata antar sampel berbeda secara signifikan atau tidak; dengan tingkat kepercayaan p = 0,05, di mana apabila diperoleh p > 0,05 artinya tidak ada perbedaan yang bermakna sebaliknya bila p < 0,05 menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna.
2. Uji Tukey 5% merupakan uji kelanjutan dari uji ANOVA, digunakan untuk mengetahui perbedaan yang bermakna antar kelompok perlakuan dalam penelitian.
3. Uji korelasi digunakan untuk mengetahui hubungan yang signifikan antara dosis kopi dengan perlakuan (penurunan kadar glukosa darah ) .
4. Analisa regresi linier untuk mengetahui seberapa kuat hubungan antara dosis kopi dengan penurunan kadar glukosa darah.

## HASIL PENELITIAN
Pada penelitian ini dilakukan tiga kali pengukuran kadar glukosa darah, yaitu sebelum perlakuan, setelah pemberian streptozotocin dan nicotinamide , dan setelah pemberian kopi.
Pengukuran pertama dilakukan pada semua kelompok sebelum perlakuan yaitu setelah tikus diadaptasikan selama 7 hari. Pengukuran kedua dilakukan setelah pemberian streptozotocin 100mg/kg dan nicotinamide 240mg/kg BB secara intraperitoneal yang diberikan pada kelompok II, III dan IV dan ditunggu selama 1 minggu kemudian pengukuran ketiga dilakukan setelah pemberian kopi yang diberikan pada kelompok III dan IV dengan masing – masing dosis 5,4 mL/200 gr BB/hari pada kelompok III dan 10,8 mL/200gr BB/hari pada kelompok IV yang diberikan selama 14 hari. Kadar glukosa yang diukur adalah kadar glukosa puasa dan kadar glukosa darah 2 jam PP.
Dari pengukuran tersebut didapatkan hasil glukosa darah sebelum perlakuan, setelah pemberian streptozotocin dan nicotiname , dan setelah pemberian kopi robusta dengan dosis yang telah ditentukan seperti table di bawah ini:
Dari tabel hasil rerata di atas dapat dilihat setelah pemberian kopi rerata kadar glukosa darah puasa tikus putih strain wistar terendah terdapat pada kelompok IV dengan pemberian dosis kopi 10,8 ml/200 gr BB/hari yaitu 68.375, sedangkan kadar glukosa darah 2 jam PP tikus putih strain wistar terendah terdapat pada kelompok IV dengan pemberian kopi 10,8 ml/200 gr BB/hari yaitu 173,852.
Peningkatan kadar glukosa darah terbukti dengan dilakukan uji One way ANOVA dan uji tukey 5% yang membuktikan adannya pengaruh yang bermakna terhadap kadar glukosa darah setelah pemberian s treptozotocin dan nicotinamid e, dirangkum dalam diagram batang di bawah ini
Setelah pemberian streptozotocin dan nicotinamide , tikus dalam keadaan diabetes  mellitus tipe 2. Dalam penelitian ini hewan coba akan dibiarkan selama 1 minggu atau 7 hari dalam keadaan hiperglikemia. Kemudian dilanjutkan perlakuan pemberian kopi pada kelompok III dan kelompok IV. Pada Kelompok III dan IV terjadi penurunan kadar glukosa darah dari kadar glukosa darah setelah perlakuan streptozotocin dan nicotinamide dengan kadar glukosa darah setelah perlakuan kopi pada gambar di bawah ini
Uji One Way ANOVA
Tabel uji One way ANOVA menunjukkan rata-rata antar sampel berbeda secara signifikan atau tidak; dengan tingkat kepercayaan p = 0,05, di mana apabila diperoleh p > 0,05 artinya tidak ada perbedaan bermakna sebaliknya bila p < 0,05 menunjukkan adanya perbedaan bermakna.
Uji One way ANOVA Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Putih setelah Pemberian Kopi.
Pada uji anova kadar glukosa darah puasa tikus setelah pemberian kopi ( Lampiran 2 ) menunjukkan bahwa nilai sig = 0,000 lebih kecil daripada p = 0,05 yang berarti terdapat perbedaan bermakna antara pemberian kopi terhadap penurunan kadar glukosa darah puasa tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2.
Uji One way ANOVA Kadar Glukosa Darah 2 Jam PP Tikus Putih setelah Pemberian Kopi.
Pada uji anova kadar glukosa darah 2 jam post-pandrial tikus setelah pemberian kopi (L ampiran 2 ) menunjukkan bahwa nilai sig = 0,000 lebih kecil daripada p = 0,05 yang berarti terdapat perbedaan bermakna antara pemberian kopi terhadap penurunan kadar glukosa darah 2 jam PP tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2.

## Uji Tukey 5%
Sebagai kelanjutan dari uji anova dilakukan uji lanjut tukey 5%. Uji Tukey 5% dilakukan untuk mengetahui perbedaan yang bermakna pada masing- masing kelompok dan bagaimana perbedaan tersebut. Tabel dibawah ini menunjukkan bahwa angka yang diikuti huruf yang sama berarti tidak berbeda secara signifikan pada uji Tukey 5%, sedangkan angka yang memiliki notasi yang berbeda dapat diartikan berbeda nyata pada uji tukey 5% ( Lampiran 2 )

## Uji Korelasi
Uji korelasi digunakan untuk mengetahui hubungan yang signifikan antara dosis kopi dengan penurunan kadar glukosa darah.

## Uji Korelasi Kadar Glukosa Darah Tikus Putih setelah Pemberian Kopi
Tabel uji korelasi antara perlakuan dan penurunan kadar glukosa darah puasa menunjukkan bahwa nilai sig (2- tailed) = 0,000 < p (0,05) dan dengan nilai pearson corre- lation = -0,978, hal tersebut menunjukkan korelasi yang berbanding terbalik bermakna yang berarti bahwa semakin tinggi dosis kopi menyebabkan semakin besar penurunan glukosa puasa tikus putih diabetes pada akhir perlakuan.

## Uji Korelasi Kadar Glukosa Darah 2 Jam PP Tikus Putih Setelah Pemberian Kopi
Uji korelasi antara perlakuan dan penurunan glukosa puasa menunjukkan bahwa nilai sig (2-tailed) = 0,000 < p (0,05) dan dengan nilai pearson correlation = -0,932, hal tersebut menunjukkan korelasi yang berbanding terbalik sangat bermakna yang berarti semakin tinggi dosis kopi menyebabkan semakin besar penurunan glukosa 2 jam pp tikus putih strain wistar diabetes pada akhir perlakuan.

## Uji Regresi
Uji regresi digunakan untuk menentukan hubungan antara dosis kopi terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih strain wistar model diabetes mellitus tipe 2.
Uji Regresi Glukosa Darah Puasa Tikus setelah Pemberian Kopi.
Y = 114,713 – 4,281 (X) Keterangan:
Y = Kadar glukosa puasa (mg/dl)
X = dosis kopi (ml/ekor/hari)
R2 = 0,956 Persamaan tersebut dapat digunakan, hal ini dikarenakan sig anova regresi = 0,000 < p = 0,05. Koefisien determinasi R2 = 0,956, berarti penurunan kadar glukosa darah puasa pada tikus putih strain wistar ditentukan oleh 95,6% pemberian dosis kopi.
Uji Regresi Penurunan Kadar Glukosa Darah 2 jam PP Tikus Putih setelah
Y = 221,476 - 4,515 (X)
Keterangan:
Y = Kadar glukosa 2 jam pp (mg/dl)
X = dosis kopi (ml/ekor/hari) R2 = 0,869
Persamaan tersebut dapat digunakan, hal ini dikarenakan sig anova regresi = 0,000 < p (0,05). Koefisien determinasi R2 = 0,873, berarti penurunan kadar glukosa darah 2 jam pp pada tikus putih strain wistar ditentukan oleh 86,9% pemberian dosis kopi.

## ANALISIS DATA
Setelah didapatkan kadar glukosa darah akhir penelitian dilakukan analisa data dengan menggunakan uji one way ANOVA, uji tukey 5%, uji korelasi dan uji regresi linier.
Dari data perhitungan yang diperoleh dilakukan uji asumsi normalitas dan uji homogenitas. Hasil uji normalitas dan homogenitas, menunjukkan bahwa data bersifat normal dan homogen sehingga dapat dilakukan uji ANOVA.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain the posttest only group yang membuktikan pengaruh kopi terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2. Penelitian ini dilakukan selama 4 minggu dengan injeksi streptozotocin dan nicotinamide pada kelompok II, III, dan IV selama 1 minggu, sedang kelompok I sebagai kontrol negatif (K-). Pada tikus kelompok III dan IV dilakukan pemberian kopi selama 2 minggu (14 hari) dengan dosis yang telah ditentukan.
Kadar glukosa darah puasa dan 2 jam PP pada tiap – tiap kelompok dihitung kemudian dibuat rerata. Setelah induksi nicotinamide dan streptozotocin dan dibiarkan 7 hari dalam kondisi hiperglikemi kemudian ditambah dengan pemberian kopi Robusta selama 14 hari dosis 5,4 ml/ 200grBB tikus/hari (kelompok III) didapatkan rerata kadar glukosa darah puasa 91,814 dan kadar glukosa darah 2 jam PP 194,817 sedangkan dengan dosis 10,8 ml/200 grBB tikus/hari (kelompok IV) didapatkan rerata kadar glukosa darah puasa 68,375 dan kadar glukosa darah 2 jam PP 173.852.
Hasil diatas menunjukkan adanya pengaruh pemberian injeksi streptozotocin dan nicotinamide ditambah dengan pemberian berbagai dosis kopi robusta pada kelompok III dan kelompok IV terhadap penurunan kadar glukosa darah. Hasil tersebut disebabkan oleh beberapa mekanisme senyawa yang terdapat dalam kopi seperti yang dikemukakan oleh peneliti lain.
Kopi mengandung dua senyawa kompleks terbanyak, yaitu chlorogenic acid (asam klorogenat) dan kafein. Chloro- genic acid memiliki mekanisme dalam menurunkan hiperglikemia intraselular serta berperan sebagai senyawa polifenol yang bekerja sebagai antioksidan kuat di dalam kopi. Tingginya kadar antioksidan kopi juga telah dilaporkan oleh beberapa peneliti (Pellegrini et al., 2003; Richelle, 2001). Mereka meyakini bahwa chlorogenic acid , yakni ester dari asam kafeat dan asam kuinat, merupakan komponen polifenol yang bertanggung jawab sebagai antioksidan (Winarsi, 2009).
Chlorogenic acid mampu meningkatkan sensitivitas in- sulin terutama yang bekerja di otot melalui senyawa quinida di dalamnya yang terbentuk saat kopi dipanggang (Herry W, 2007). Selain menurunkan resistensi insulin, chlorogenic acid
juga menurunkan konsentrasi plasma glukosa darah (Gustavo 2009) dan meningkatkan ekspresi GLUT 4 melalui PI3K independent pathways.
Beberapa studi menyatakan konsumsi kafein yang terkandung dalam kopi berhubungan dengan penurunan berat badan dan meningkatkan rasa kenyang (Gustavo, 2009). Kafein pada kopi dimetabolisme dalam hepar dan memungkinkan formasi menjadi 3 grup methylxanthine salah satunya theophyline yang berperan dalam mengontrol metabolisme glukosa darah (Kallow).
Pada kelompok II atau sebagai K+ dari penelitian ini hanya diberikan injeksi streptozotocin dan nicotinamide untuk mendapatkan hasil tikus DM tipe II. Hasilnya adalah kadar glukosa darah puasa dan 2 jam PP masing-masing 118.374 mg/dl dan 228.150mg/dl. Hasil ini dapat dibandingkan dengan kelompok satu sebagai K- yaitu kelompok yang tidak diberikan perlakuan apapun. Pada kelompok I didapatkan hasil kadar glukosa darah puasa dan 2 jam PP masing-masing 60.836 mg/dl dan 115.606 mg/dl. Dari perbedaan hasil dari kedua kelompok tersebut dapat dilihat bahwa pemberian injeksi streptozotocin dan nicotinamide dapat meningkatkan kadar glukosa darah.
Kafein juga terlibat dalam metabolisme glukosa lain, salah satunya dengan menginduksi peningkatan glucose transporter 4 melalui aktivasi AMPK (Egawa T, 2009) dimana pada diabetes mellitus tipe 2 selain resistensi insu- lin juga didapatkan penurunan GLUT 4 yang memperparah kondisi diabetes mellitus (MacLean, 2002). Mekanisme kopi ini terbukti dengan adanya penurunan kadar glukosa darah pada tikus kelompok III dan IV yang diberi perlakuan tambahan yakni dengan pemberian kopi dengan dosis yang ditentukan.
Pada kelompok II atau sebagai K+ dari penelitian ini hanya diberikan injeksi streptozotocin dan nicotinamide untuk mendapatkan hasil tikus DM tipe II. Hasilnya adalah kadar glukosa darah puasa dan 2 jam PP masing-masing 118.374 mg/dl dan 228.150mg/dl. Hasil ini dapat dibandingkan dengan kelompok satu sebagai K- yaitu kelompok yang tidak diberikan perlakuan apapun. Pada kelompok I didapatkan hasil kadar glukosa darah puasa dan 2 jam PP masing-masing 60.836 mg/dl dan 115.606 mg/dl.
Dari perbedaan hasil dari kedua kelompok tersebut dapat dilihat bahwa pemberian injeksi streptozotocin dan nicotinamide dapat meningkatkan kadar glukosa darah. Kondisi hiperglikemia intraselular disebabkan dari injeksi streptozotocin (STZ) dan nicotinamide . STZ adalah kombinasi dari glucosamine -nitrosourea .STZ memiliki efek diabetogenik poten pada beberapa spesies binatang termasuk mencit, tikus, anjing, dan kera. Diabetes yang dipicu oleh STZ pada binatang bersifat ireversibel dan mewakili diabetes mellitus tipe 2 pada manusia (McEvoy, 2002).
Pada hewan coba yang diinduksi STZ akan mengalami gangguan respon terhadap glukosa dan sensitivitas sel β terhadap glukosa. Di lain pihak sel α dan γ tidak dipengaruhi secara signifikan oleh pemberian STZ (Szkudelski, 2001). Induksi STZ dapat mengakibat resistensi insulin yang sehingga kadar glukosa dalam darah tinggi, STZ juga dapat pula menyebabkan Glucose Transporter 4 (GLUT 4) yang memfasilitasi glukosa masuk ke dalam sel menurun. Hal
tersebut mengakibatkan penurunan pemasukkan glukosa ke dalam otot dan jaringan adiposa (Rees and Alcolado, 2005).
Nicotinamide adalah bentuk Vitamin B3 yang dapat mempertahankan dan meningkatkan fungsi sel beta. Dalam studi in vitro telah menunjukkan bahwa nicotinamide dapat mencegah makrofag-atau interleukin- α 1 yang menginduksi kerusakan sel α . Sebuah studi intervensi di Selandia Baru menggunakan pengobatan nicotinamide yang menunjukkan penurunan 50% dari insiden IDDM selama periode lima tahun. Namun, penggunaan nicotinamide sehubungan dengan penyakit diabetes mellitus adalah dalam studi eksperimental (Passero, 2011).
Induksi hewan coba menjadi DM tipe II selain diberikan STZ juga perlu diinjeksikan nicotinamide yang digunakan untuk mencegah pengaruh pemberian STZ sebagai bahan diabetogenik yang dapat merusak sel β pankreas. Pemberian STZ dan nicotinamide pada hewan coba akan menyebabkan resistensi insulin yang merupakan mekanisme patologis dari diabetes mellitus tipe 2. Mekanisme dari STZ yang masuk ke dalam sel β melalui GLUT 2 dan mengalami metabolisme di dalam sel sehingga dapat melepaskan molekul NO yang selanjutnya dapat menyebabkan kerusakan DNA sel β pankreas. Nicotinamide dapat mencegah makrofag-atau interleukin- β 1 yang menginduksi kerusakan sel β pankreas sehing ga yang terjadi bukanlah kerusakan sel β pankreas pada DM tipe I namun terjadi resistensi insulin pada diabetes mellitus tipe 2 (Ruskar, 2010).
Dari berbagai fakta yang ditemukan pada penelitian ini dan melalui kajian statistika, maka hipotesis tentang pemberian kopi pada tikus putih strain wistar diabetes mellitus tipe 2 menurunan kadar glukosa darah terbukti, namun masih memerlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui mekanisme pasti kopi dalam menurunkan kadar glukosa darah.

## KESIMPULAN
Pemberian kopi dapat menurunkan secara signifikan kadar glukosa darah pada tikus diabetes mellitus tipe 2.
Pada penelitian ini, dosis paling efektif dalam menurunkan kadar glukosa darah tikus adalah 10,8 ml/ 200gr BB/hari atau setara dengan 600 ml pada manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
Edward O, Terry E, Lorraine A, et al., 2002, Regulation of GLUT4 Biogenesis in Muscle : Evidence for Involvement of AMPK and Ca2+, Am J Physiol Endocrinol Metab 282, pp. 1008-1013. Emily Updegraff, C. Wilborn, 2003, What’s GLUT 4?, viewed 9 March 2012,  < http://www.wisegeek.com/ what-is-glut4.htm>.
Hery Winarsi MS, 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Penerbit Kanisius, Jakarta.
Johnston KL, Clifford MN, Morgan LM, 2003, Coffee
Acutely ModifiesGastrointestinal Hormone Secretion and Glucose Tolerance in Humans:Glycemic Effects of Chlorogenic Acid and Caffeine, Am J Clin Nutr, 79(4), pp. 728–733.
Kallow W, Tang BK, 1993, The Use of  Caffeine for Enzyme Assays: A Critical Appraisal, Clin Pharmacol Ther , 53(5), pp.503–514.
Kumalaningsih S, 2007, Antioksidan Alami Penangkal Radikal Bebas, PT. Trubus Swadaya, Depok.
Morton, Lincoln W, Rima ACC, et al., 2007, Chemistry And Biological Effects of Dietary Phenolic Compounds: Relevance To Cardiovascular Disease, Clin Exp Pharmacol and Physiol , 27(3): 152-59
Prabhakar PK, Doble M, 2009, Synergistic effect of phyochemical drugs on glukose uptake myotubes, Departement of  Biotechnolog. Indian Institute of Thechnology Madras.
Schnedl WJ, Ferber S, Johnson JH, et al, 1994, STZ Trans- port and Cytotoxicity, Specific Enhancement in GLUT2- Expressing Cells, Diabetes 43(11), pp. 1326–33
Svilaas A, 2004, Intakes of Antioxidants in Coffee, Wine, and Vegetablesare Correlated with Plasma Carotenoids in Humans, Journal of  Nutritions , 134, pp. 562-567.
Svilaas A, 2004, Intakes of Antioxidants in Coffee, Wine, and Vegetablesare Correlated with Plasma Carotenoids in Humans, Journal of  Nutritions , 134, pp. 562 567. Tondok, A.R, 1999, Kebijakan Pengembangan Kopi di Indonesia, Warta Pusat Penelitian Kopi dan Kakao. Wang Z, Gleichmann H, 1998, GLUT2 in pancreatic islets: crucial target moleculein diabetes induced with multiple low doses of streptozotocin in mice, Diabetes, 47 (1): 50–6.
World Healthy Organization, 2011, Diabetes Programme, viewed 9 February 2011, <http://www.who.int/ diabetes/action_online/basics/en/index.html>.