UJI EFEKTIVITAS LARUTAN MADU SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus DAN Pseudomonas aeruginosae DENGAN METODE DISK DIFFUSION
Yuliati 1
1 Fakultas Kedokteran UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Email : yuli_bahruddin70@yahoo.com
______________________________________________________________________________

## ABSTRAK
Madu  merupakan  salah  satu  pengobatan  tradisional  yang  dapat  digunakan  di  masyarakat  untuk penanganan  luka  sejak  berabad  yang  lalu,  karena  madu  memiliki  efek  antibakteri  diantaranya  madu memiliki osmolaritas yang tinggi, kandungan hidrogen peroksida, pH yang rendah dan memiliki aktivitas yang  rendah.  Mekanisme  antibakteri  diantaranya  pH  madu  yang  bersifat  asam  yang  berkisar  antara  3,2– 4,5  ssehingga  akan  menghambat  metabolisme  bakteri  Gram  negatif  dan  positif  dengan  menghambat metabolisme  bakteri  akan  menyebabkan  bakteri  mudah  mengalami  lisis,  ssehingga  akhirnya  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Fungsi  madu  dapat  digunakan  sebagai  pengobatan  luka,  kontrol  gula darah  pasien  diabetes,  antioksidasi,  mencegah  radang  lapisan  luar  disekitar  mulut  pada  pengobatan  sinar laser pasien kanker, mengobati radang saluran cerna, serta sebagai bahan produk kecantikan, rambut dan kulit.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  perbandingan  efektivitas  larutan  madu  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae dengan berbagai  konsentrasi 10 5 ppm,  10 6 ppm,  5x10 6 ppm,  10 7 ppm,  dan  10 8 ppm  dengan  metode  difusi  sumur.  Berdasarkan  hasil penelitian dari hasil pengukuran zona hambat dari kuman Staphylococcus aureus termasuk dalam kategori lemah  dengan  konsentrasi  10 6 ppm.  5x10 6 ppm,  10 7 ppm,  dan  10 8 ppm  didapatkan  zona  hambat  dengan rata-rata  diameter  sebesar  6,5  mm,  10,5  mm,  12  mm,  dan  14,7  mm.  Sedangkan  untuk  kuman Pseudomonas  aeruginosae dengan  konsentrasi  10 6 ppm,  5x10 6 ppm,  10 7 ppm  didapatkan  zona  hambat sebesar  6  mm,  8,5  mmm,  dan  9,5  mmm  termasuk  dalam  kategori  rendah,  dan  konsentrasi  10 8 ppm didapatkan  zona  hambat  sebesar  10,5  mm  termasuk  dalam  kategori  lemah.  Kesimpulan  dari  penelitian efektivitas  antibakteri  larutan  madu  lebih  efektif  terhadap  kuman Staphylococcus  aureus dibandingkan terhadap kuman Pseudomonas aeruginosae , walaupun perbedaannya tidak signifikan.
Kata kunci : Madu; Metode Difusi; Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosae _____________________________________________________________________________________

## ABSTRACT
Honey  is  one  of  the  traditional  medicine  that  can  be  used  in  the  community  for  wound  treatment  since centuries  ago.  Honey  has  an  antibacterial  effect,  due  to  its  high  osmolarity  ,  hydrogen  peroxide  content, low  pH  and  low  activity.  The  pH  of  honey  is  acidic  (ranges  about  3.2-4.5),  inhibits  the  metabolism  of Gram  negative  and  positive  bacteria,  in  consequence  would  be  bacterial  metabolism  inhibition.  This condition  would lead to bacterial  lysis.  Honey  can be used as  wound treatment, controls  blood sugar in diabetes  patient`s,  antioxidants,  prevents  inflammation  outer  layer  surrounding  the  mouth  of  the  laser beam  treatment  of  cancer  patients,  treats  gastrointestinal  inflammation,  as  well  as  the  material  beauty products,  hair  and  skin.  This  study  was  conducted  to  determine  the  comparative  effectiveness  of  honey solution  on  the  growth  of Staphylococcus  aureus and Pseudomonas  aeruginosae with  various concentrations  of  10 5 ppm  ,  10 6 ppm  ,  5x10 6 ppm  ,  10 7 ppm  ,  and  10 8 ppm  by    well  diffusion  method. According to the MIC result on S .aureus , its is included in weak category, with an average diameter 6.5 mm , 10.5 mm, 12 mm, and 14.7 mm on 10 6 ppm, 5x10 6 ppm, 10 7 ppm, and 10 8 ppm, respectively. Based
on  the  MIC  result  on Pseudomonas  aeruginosae, it  also  included  in  weak  category,  with  an  average diameter 6 mm , 8.5 um ,  9.5 mm, 10.5 mm on 10 6 ppm, 5x10 6 ppm on 10 6 ppm, 5x10 6 ppm, 10 7 ppm, and 10 8 ppm,  respectively.  This  study  concluded  that  antibacterial  from  honey  solution  is  more  effective against Staphylococcus  aureus than Pseudomonas  aeruginosae ,  although  there  are  no  significantly difference.
Keywords : Diffusion Methods; Honey; Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosae ______________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Sekitar  80%  penduduk  di  dunia menggunakan  pengobatan  tradisional  untuk penyembuhan  dan  perawatan  kesehatan. 1
Madu  merupakan  salah  satu  pengobatan tradisional  digunakan  di  masyarakat  untuk penanganan  luka  dan  sudah  dikenal  sejak berabad yang lalu.
Madu adalah cairan kental yang diproduksi  oleh  lebah  madu  dari  nektar bunga dan diduga berkhasiat dalam menyembuhkan  berbagai  jenis  penyakit, antioksidan,  antiinflamasi,  obat  saluran respirasi,  gangguan  mata,  diabetes  mellitus, dan  juga  dapat  mendukung  pertumbuhan mikroba probiotik. Beberapa penelitian yang telah  dilakukan  menunjukan  bahwa  madu dapat  digunakan  sebagai  antimikroba  pada luka termasuk luka pasca operasi. Penelitian yang  dilakukan  terhadap  pasien  pasca operasi  pada  luka  yang  tidak  berhasil disembuhkan  oleh  antibiotik  intravena, dengan  mengoleskan  madu  5-10  mL  dua kali sehari memperlihatkan terjadinya penyembuhan luka pada 5 hari pemakaian. 2 Madu  bersifat  antimikroba  karena tersusun  atas  beberapa  molekul  gula  seperti glukosa dan fruktosa serta sejumlah mineral dan vitamin. Dibawah ini adalah kandungan umum  madu  murni  terdiri  dari  air  (17,0%), fruktosa  (38,5%),  glukosa  (31,5%),  maltosa (7,2%), karbohidrat (4,2%), sukrosa (1,5%), enzim,  mineral,  vitamin  (0,5%),  energi kalori/100  gram/294,0%.  (Hotnida,  2002). Menurut  Puspitasari  kemampuan  madu bersifat  sebagai  antibakteri  diduga  karena madu  memiliki  osmolaritas  yang  tinggi, kandungan  hydrogen  peroksida,  pH  yang
rendah,  dan  memiliki  aktivitas  air  yang rendah.  Selain  itu,  madu  juga  memiliki aktivitas  senyawa  antibakteri  terutama  pada bakteri Gram(+), yakni bakteri S. aureus dan B. cereus . 3
Penelitian tentang khasiat madu pada zaman modern ini telah berkembang dengan cepat  dan  tidak  terbatas  pada  pengobatan luka,  madu  juga  digunakan  untuk  kontrol gula  darah  pasien  diabetes,  antioksidasi, mencegah  radang  lapisan  luar  disekitar mulut  pada  pengobatan  sinar  laser  pasien kanker,  mengobati  radang  saluran  cerna, serta  sebagai  bahan  produk  kecantikan, rambut  dan  kulit. 4 Aktivitas  antibakteri madu  telah  dikenal  sejak  tahun  1999  oleh Cooper, Mohan dan Harding mengenai efek antibakteri.  Salah  satu  penelitian  pada  saat ini  adalah  mengetahui  efek  madu  terhadap Staphylococcus  aureus ( S.aureus )  terutama pada  madu  Manuka  yang  merupakan  salah satu  jenis  madu  monoflora.    Penelitian  lain efek    madu  hutan  dari  Ciburial  Bandung yang  merupakan  salah  satu  jenis  madu multiflora  terhadap S  aureus . 5 Madu  juga dapat mencegah serta sebagai kontrol infeksi terhadap Staphylococcus  koagulase-negatif , Pseudomonas  aeruginosae , Enterococcus sp . 6 Penelitian  lain  juga  telah  dilakukan mengenai  uji  aktivitas  madu  terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans dengan 732konsentrasi 6,25%. 7
Bakteri Pseudomonas aeruginosae merupakan  salah  satu  bakteri  Gram  negatif, aerob,  dan  bergerak  dengan  menggunakan flagel,  dan  merupakan  bakteri  oportunistik. Infeksi P. aeruginosae menimbulkan penyakit di  berbagai  jaringan  antara  lain  pada  saluran
pernapasan,  mata,  saluran  kemih,  dan  kulit. 8 Selama  ini  pengobatan  terhadap  infeksi P. aeruginosae menggunakan antibiotik golongan  penisilin,  golongan  sefalosporin, golongan aminoglikosida dan golongan fluorokuinolon. Berdasarkan laporan European  Epic  Study  P.  aeruginosa telah mengalami resisten terhadap beberapa antibiotik  :  gentamisin  (46%),  imipenem (21%), seftazidim (27%), siprofloksasin (26%), dan ureidopenisilin (37%) . 9
Bakteri  lain  yang  menimbulkan penyakit  infeksi  pada  luka  bakar  adalah Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri Gram positif, bulat, tersusun dalam rangkaian  tak  beraturan  seperti  anggur, mudah  tumbuh  dalam  berbagai  perbenihan dan  mempunyai  metabolisme  aktif,  serta menghasilkan  pigmen  yang  bervariasi  dari warna putih sampai kuning tua. Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan pernanahan, abses, dan lain-lain. 10 Pada saat ini  sekitar  40%  dari  bakteri S.  aureus yang dapat  diisolasi  di  rumah  sakit,  bakteri  ini banyak  resisten  terhadap  berbagai  jenis antibiotik,  tetapi  beberapa  masih  sensitif terhadap Vankomisin, Clindamycin , Trimetoprim-sulfametoksazol,  Gentamisin. Salah satu jenis Staphylococcus aureus yang telah  resisten  terhadap  antibiotika  adalah Staphylococcus  aureus Resisten  Metisilin (MRSA) . Bakteri MRSA telah menyebar luas sebagai  patogen  dalam  bentuk  sekumpulan bakteri,  selain  resisten  terhadap  metisilin MRSA juga  kini  telah  resisten  terhadap penisilin,  oxasilin,  dan  eritromisin. 11 Oleh karena  itu  bakteri  ini  banyak  ditemukan resisten  di  rumah  sakit,  ssehingga  biaya pengobatan  dan  status  kondisi  penyakit pasien  akan  lebih  tinggi.  Maka  salah  satu alternatif  pengobatan  infeksi  luka  bakar selain  dengan  antibiotik  yaitu  yang  berasal dari  bahan  alam. , bakteri  ini termasuk bakteri  Gram  positif  yang  menyebabkan penyakit  penting  pada  manusia  yang berkisar  dari  infeksi  kulit  permukaan  yang ringan  hingga  penyakit  sistemik  yang
mengancam hidup. Infeksi  khasnya bermula di  tenggorokan  atau  kulit.  Infeksi  ringan Streptococcus  pyogenes termasuk  faringitis (radang  tenggorokan)  dan  infeksi  kulit setempat (impetigo). Ensipelar dam seluliitis dicirikan dengan pertumbuhan dan penyebaran samping
Streptococcus pyogenes dilapisan dalam kulit. 12
Beberapa uji kepekaan madu terhadap aktivitas  antibakteri  secara  in  vitro dapat  dilakukan  dengan  beberapa  metode, yaitu  metode  difusi  dengan:  cakram,  parit, dan  lubang,  semetara  metode  yang  lain adalah  metode  dilusi  yang  terdiri  dari  dilusi padat dan dilusi cair. 13
Berdasarkan  uraian  tersebut  diatas, maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk menguji secara in vitro efektivitas antibakteri  madu  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosae dengan  metode disc  diffusion . Dalam  penelitian ini  digunakan  madu  hutan Sumbawa Apis dorsata (Merk UKMWAY).

## METODOLOGI PENELITIAN Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian ekperimental  laboratorik  melalui  metode disc diffusion untuk    uji  efektifitas antibakteri  madu  terhadap  pertumbuhan bakteri S taphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosae dengan  metode difusi sumuran.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  akan  dilakukan  pada Bulan  Mei    2013  sampai  Oktober  2013  di Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Bahan yang diuji Madu Hutan Sumbawa ( Apis dorsata )  merk  UKMWAY  dengan  berbagai konsentrasi.

## Sampel Penelitian
Bakteri
Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosae pada Nutrient Agar (NA).

## Identifikasi Variabel Variabel Bebas
Madu  Hutan  Sumbawa  (Apis  dorsata)  merk UKMWAY dengan berbagai konsentrasi.

## Variabel Terikat
Pertumbuhan Staphylococcus  aureus  dan Pseudomonas aeruginosae.

## Cara Kerja Penelitian
Cara kerja penelitian ini sebagai berikut : 1. Pembuatan Konsentrasi Madu Pembuatan  Stok  konsentrasi  madu  yang akan  divariasikan  adalah  mulai  dari  0% (kontrol),  10 6 ppm,  5x10 6 ppm,  10 7 ppm, 10 8 ppm    dan  antibiotik  Amoksilin sebagai kontrol positif, ssehingga seluruhnya berjumlah 5 variabel, dilakukan secara triplo. 2. Uji Efektivitas Madu terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Psedomonas aeruginosae.
Memasukkan  nutrien  agar  ke  dalam cawan petri  sebanyak kurang lebih 10 ml diberi  suspensi  bakteri  sebanyak  kurang lebih 2 ml dan diratakan ke dalam cawan petri  dengan  metode pour  plate dan digoyangkan dengan vorteks. Media yang sudah  di  inokulasikan  kuman  tunggu beberapa  menit  hingga  kering.  Media yang  sudah  di  inokulasikan  kuman  pada media  Mueller  Hinton  Agar  (MHA), kemudian  dibuat  beberapa  lubang  pada media  MHA  sebanyak  sesuai  dengan jumlah  konsentrasi,  lalu  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  24  jam,  keesokan harinya  diukur  diameter  zona  terang ( clear zone ) dengan menggunakan penggaris.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Uji Efektivitas Larutan Madu Terhadap Pertumbuhan Kuman

## Staphylococcus aureus
Penelitian  uji  efektivitas  madu  sebagai antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus ini  diuji  secara  in  vitro  dengan  mengukur zona  hambat  pada  media  agar  yang  dibuat sumur  diisi  madu  dan  pengukurannya menggunakan satuan millimeter.
Tabel  1.  Hasil  Pengamatan  Uji  Efektivitas Madu Terhadap Staphylococcus sureus Per cob aan Zona Hambat Madu/millimeter & Konsentrasi Madu (ppm) 10 5 10 6 5.10 6 10 7 10 8 K(+) K(-) 1 0 6 11 12 16 26 0 2 0 7 10 12 18 23 0 Tot al 0 13 21 24 34 49 0 Mea n 0 6,5 10,5 12 17 24,5 0 Berdasarkan hasil penelitian
didapatkan  hasil  uji  aktivitas  konsentrasi madu  terhadap Staphylococcus  aureus , didapatkan  diameter  zona  hambat  paling rendah pada konsentrasi madu 10 6 ppm yaitu 6,5  mm.  Dari  hasil  klasifikasi  menurut Green  Wood  (1995)  bahwa  kriteria  daya hambat  bakteri  dengan  konsentrasi  tidak termasuk  kategori,  hal  ini  disebabkan  zona hambat  bakteri  tersebut  adalah  kurang  dari 10 mm. 14
Pada penelitian ini dari hasil pengukuran  zona  hambat  pada  konsentrasi madu  terhadap Staphylococcus  aureus termasuk  klasifikasi  kriteria  daya  hambat bakteri  yang  kategori  lemah  yaitu  pada konsentrasi  5x10 6 ppm  dan    10 7 ppm  yaitu diameter  sebesar  10,5  mm  dan  12  mm.  Hal ini  disebabkan  pada  uji  efektivitas  kategori lemah  termasuk dalam ukuran diameter 10- 15  mm. 14 Pada  penelitian  ini juga  dari  hasil pengukuran  zona  hambat  pada  konsentrasi madu  terhadap Staphylococcus  aureus termasuk  klasifikasi  kriteria  daya  hambat
bakteri  yang  kategori  sedang  yaitu  pada konsentrasi  10 8 ppm  dengan  diameter sebesar 17 mm. Hal ini disebabkan pada uji efektivitas  kategori  lemah    termasuk  dalam ukuran diameter 17-20 mm. 14
Penelitian  madu  juga    dilakukan oleh Suci  Lucyana (2012)  yang menyatakan bahwa daya hambat madu terhadap pertumbuhan
Staphylococcus
aureus terdapat  pada  konsentrasi  40%,  80%,  dan 100% dengan ukuran zona hambat 1,75 mm, 9,25  mm,  dan  11,25  mm. 16 Penelitian  ini dilakukan  dengan  membandingkan  larutan madu  kapuk  dan  madu  hutan  terhadap Staphylococcus  aureus dengan  metode difusi.  Perbedaannya  dengan  penelitian  ini dengan  penelitian  Suci  Lucyani  adalah penelitian  ini  melakukan  uji  aktivitas  madu antara  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosae dan  konsentrasi madu yang digunakan.
Penelitian  lain  juga  dilakukan  oleh Hendri  Wasito,  Sani  Ega  dan  Yani Lukmayani (2008), penelitian in menggunakan sampel jenis madu hutan dari wilayah  Ciburial  Bandung  yang  termasuk jenis multiflora. Berdasarkan hasil penelitian ini  ternyata  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S.  aureus ,  media  yang  digunakan Vogel  Jhonson  Agar  dengan  metode  difusi agar sumuran dengan kedalaman yang sama. Konsentrasi  madu  yang  di  gunakan  adalah 1%, 2,5%, 5%, 10%, 25%, dan 50%.    Hasil uji  aktivitas  madu  menghasilkan  zona hambat  pada  media  pertumbuhan  dimulai madu  yang  digunakan  dengan  konsentrasi 5%, 10%, 25% dan 50% menuunjukan zona hambat  sebesar  22,8  mm,  26,90  mm,  28,80 mm dan 28,7 mm.
2. Uji Efektivitas Larutan madu Terhadap  pertumbuhan Pseudomonas aeruginosae
Penelitian  uji  efektivitas  madu  sebagai antibakteri
terhadap Pseudomonas aeruginosae ini  diuji  secara  in  vitro  dengan
mengukur  zona  hambat  pada  media  agar yang  dibuat  sumuran  pada  media,  diisi larutan madu dan pengukurannya menggunakan satuan millimeter.
Tabel 2.Hasil Pengamatan Uji Efektivitas
Madu Terhadap P. Aeruginosae
Perco baan Zona Hambat Madu/millimeter & Konsentrasi Madu (ppm) 10 5 10 6 5x10 6 10 7 10 8 K(+) K(-) 1 0 6 10 11 12 19 0 2 0 6 7 8 9 19 0 Total 0 12 17 19 21 38 0 Mean 0 6 8,5 9,5 10,5 19 0 Berdasarkan hasil penelitian
didapatkan  hasil  uji  aktivitas  konsentrasi madu  terhadap P.  aeruginosae ,  didapatkan diameter  zona  hambat  paling  rendah  pada konsentrasi  madu  10 6 ppm,  5x10 6 ppm,  10 7 ppm yaitu 6 mm, 8,5 mm, dan 9,5 mm. Dari hasil klasifikasi kriteria daya hambat bakteri ke-3 konsentrasi tidak termasuk kategori, hal ini  disebabkan  zona  hambat  kurang  dari  10 mm. 14
Pada penelitian ini dari hasil pengukuran  zona  hambat  pada  konsentrasi madu  terhadap Staphylococcus  aureus termasuk  klasifikasi  kriteria  daya  hambat bakteri  yang  kategori  lemah  yaitu  pada konsentrasi 10 8 ppm  yaitu 10,5 mm.  Hal  ini disebabkan  pada  uji  efektivitas  kategori rendah termasuk dalam ukuran 10-15 mm. 14 Penelitian  ini  juga  dilakukan    oleh Suci  Lucyana  (2012)  yang  menyatakan bahwa daya hambat madu terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus terdapat  pada  konsentrasi  40%,  80%,  dan 100% dengan ukuran zona hambat 1,75 mm, 9,25  mm,  dan  11,25  mm.  Penelitian  ini dilakukan  dengan  membandingkan  larutan madu  kapuk  dan  madu  hutan  terhadap Staphylococcus  aureus dengan  metode difusi.  Perbedaannya  dengan  penelitian  ini dengan  penelitian  Suci  Lucyani  adalah
penelitian  ini  melakukan  uji  aktivitas  madu antara  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosae dan  konsentrasi madu yang digunakan.
Penelitian  lain  juga  dilakukan  oleh Hendri  Wasito,  Sani  Ega  dan  Yani Lukmayani (2008), penelitian in menggunakan sampel jenis madu hutan dari wilayah  Ciburial  Bandung  yang  termasuk jenis multiflora. Berdasarkan hasil penelitian ini  ternyata  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S.  aureus ,  media  yang  digunakan Vogel  Jhonson  Agar  dengan  metode  difusi agar sumuran dengan kedalaman yang sama. Konsentrasi  madu  yang  di  gunakan  adalah 1%, 2,5%, 5%, 10%, 25%, dan 50%.    Hasil uji  aktivitas  madu  menghasilkan  zona hambat  pada  media  pertumbuhan  dimulai dengan konsentrasi 5%, 10%, 25% dan 50% menunjukkan zona hambat sebesar 22,8 mm, 26,90 mm, 28,80 mm dan 28,7 mm.

## 3. Perbandingan Uji Efektivitas Larutan
Madu Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae Dengan

## Metode Difusi Sumur
Berdasarkan  hasil  pengamatan  zona hambat antara kuman Staphylococcus aureus (Gram  positif)  dan Pseudomonas aeruginosae (Gram  negatif),  zona  hambat bakteri Gram positif lebih besar dibandingkan bakteri Gram negatif, disebabkan  terdapat  perbedaaan  struktur antara  bakteri  Gram    positif  dengan  bakteri Gram    negatif,  struktur  dinding  sel  bakteri Gram    negatif  terdiri  dari  tiga  lapis  (multi), kandungan  lipid  pada  dinding  sel  lebih tinggi  (11-22%),  hal  inilah  yang  mungkin dapat mempengaruhi penetrasi dari zat aktif ekstrak  menjadi  lebih  sulit  pada  bakteri Gram  negatif,  ssehingga  pertumbuhannya dihambat tidak sebesar bakteri Gram positif. Selain itu persentase zat antibakteri juga ikut mempengaruhi. 16 Hasil penelitian uji efektivitas  larutan  madu  ternyata  dapat
menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosae dikarenakan pada  madu  terdapat  kandungan  hidrogen peroksida,  pH  yang  rendah  dan  aktivitas air yang rendah. 17
Efek  antibakteri  ini  kemungkinan disebabkan  oleh  beberapa  faktor  antibakteri yang  terdapat  didalamnya.  Yang  pertama adalah  kandungan  glukosa  dan  fruktosa madu  yang  sangat  tinggi  dengan  demikian menyebabkan  larutan  sangat  hipertonis  bila dibandingkan  dengan  lingkungan  di  dalam tubuh  bakteri , sifat  ini  akan  menyebabkan lisisnya  bakteri  akibat  dehidrasi  yang  berat karena  efek  osmosis. 18 Faktor  yang  kedua adalah  pH  madu  yang  bersifat  asam  berkisar antara  3,2  –  4,5  ssehingga  akan  menghambat metabolisme  bakteri  Gram  negatif , dengan terhambatnya metabolisme bakteri menyebabkan bakteri  mudah  mengalami  lisis,  ssehingga akhirnya dapat menghambat pertumbuhan bakteri . Sedangkan untuk tumbuh dan berkembang  biak  secara  optimum  ke-2  bakteri membutuhkan  pH  6-8. 18 Faktor  yang  ketiga adalah  adanya  kandungan  hidrogen  peroksida yang  bersifat  sitotoksik  bagi  sel  bakteri.  Proses antimikroba  dari  hidrogen  peroksidase  karena kemampuan pengoksidasian serta formasi radikal  bebas  hidroksil  yang  lebih  toksik  dari peroksida,  ssehingga  memudahkan  terjadinya kerusakan  sel-sel  bakteri. 18 Faktor  yang  lain adalah  karena  kandungan  nutrisi  dan  gizi  yang terdapat dalam madu ssehingga mampu meningkatkan imunitas tubuh apabila digunakan secara in  vivo .  Madu  banyak  mengandung vitamin  B 2 ,  B 3 ,  B 6 ,  C,  K,  karoten,  biotin,  dan lain-lain;  dimana  bahan-bahan  tersebut  dapat meningkatkan  ketahanan  tubuh  terhadap  infeksi bakteri. 18 Faktor-faktor  antimikroba  tersebut tidak menutup kemungkinan juga diperkuat oleh faktor-faktor  lain  dalam  madu  yang  mendukung sifat antimikroba madu.
Menurut  Ika  Puspitasari  (2007)  adanya zona  hambat  pada  larutan  madu  terhadap  ke-2 bakteri  disebabkan  karena  komposisi  lengkap dari  madu,  diantaranya  konsentrasi  gula  yang tinggi, keasaman dan adanya pollen. Sedangnkan  menurut  Mundo  et.al  (2004)  ada beberapa  faktor  yang  menyebabkan  madu
mempunyai aktivitas antibakteri, seperti keasaman,  tekanan  osmotik,  dan  hidrogen peroksida. Komponen tambahan lain pada madu misalnya  asam  aromatik  dan  kandungan  fenol yang berperan dalam aktivitas antibakteri. Faktor lain  yang  ikut  berperan  adalah  faktor  non peroksida  dalam  aktivitas  antibakteri  madu. Komponen lain seperti lisozim, asam fenolik dan flavonoid  juga  terdapat  madu.  Komponen fenolik  lainnya  yang  terdapat  pada  nektar  juga mempunyai    aktivitas  antioksidan,  aktivitas antioksidan  ini  berperan  dalam  menghambat bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif.  Pada madu  terkandung  konsentrasi  gula  yang  tinggi yang berperan sebagai antibakteri yang berkaitan dengan  banyaknya  penggunaan  larutan  madu untuk  penanganan  luka  akibat  luka  bakar. Penanganan  luka  ini  berhubungan  dengan  kadar gula  yang  tinggi  pada  madu  menimbulkan viskositas  yang  tinggi  ssehingga  jugaa  sebagai barier  infeksi  pada  luka,  selain  itu  kadar  gula yang  tinggi  menjamin  suplai  gula  untuk  lekosit dan makrofag. 19 Menurut Molan (2001) menyatakan  bahwa  dalam  madu  terkandung hidrogen peroksida yang dihasilkan oleh glukosa oksidase  madu  yang  merupakan  komponen penghambat  melawan  bakteri  atau  sebagai antibakteri. Zat glukosa oksidae dikeluarkan dari kelenjar hipofaring lebah ke dalam nektar  untuk membantu  pembentukan  madu  dari  nektar. Kuman Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosae merupakan  bakteri yang menghasilkan katalase yang akan mengeliminasi  hidrogen  peroksida,  ke-2  bakteri ini    katalase  aktif  dengan  konsentrasi  hidrogen peroksida  yang  tinggi.  Oleh    karena  itu  kasus penghambatan  yang  dihasilkan  oleh  madu terhadap  ke-2  bakteri  ini  yaitu Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosae dapat disebabkan  adanya  hidrogen  peroksida.  Faktor lain  yang  lebih  berperan  adalah  keasaman,  efek osmotik, dan senyawa fenol dalam madu. Berdasarkan  hasil  penelitian  ternyata larutan  madu  dapat  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae ,  dikarenakan  madu  mengandung senyawa  flavonoid  dan  alkaloid  yang  berfungsi sebagai  bahan  obat-obatan.  Mekanisme  reaksi ini  menunjukkan  bahwa  interaksi  antara  derivat
fenolik  dengan  protein  pada  membran  sel  yang menyebabkan  rusaknya  struktur  membran  sel. Senyawa  fenol  masuk  ke dalam  sel  bakteri melewati  dinding  sel  bakteri  dan  membran sitoplasma, ternyata  senyawa fenol di dalam sel  bakteri  mengakibatkan  penggumpalan (denaturasi)  protein  penyusun  protoplasma ssehingga dalam keadaan demikian metabolisme  bakteri  menjadi  inaktif  dan pertumbuhan  bakteri  menjadi  terhambat. 20 Berdasarkan hasil uji larutan madu terhadap ke-2  bakteri  tersebut,  maka  ternyata  madu efektif  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosae ada pengaruh berbagai konsentrasi madu terhadap pertumbuhan ke- 2  bakteri  tersebut  dimana  semakin  tinggi konsentrasi madu semakin besar konsentrasi zona  hambat  bakteri.  Dari  penelitian  ini dapat  diketahui  bahwa  madu  memiliki peluang untuk digunakan sebagai pengobatan  infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae khususnya penyakit  infeksi  luka  bakar  akibat  infeksi nosokomial. Mekanisme madu dalam penyembuhan  infeksi  ini  selain  karena  sifat antimikrobanya  juga  karena  kemampuannya dalam meningkatkan stamina tubuh ssehingga  dapat  membantu  meringankan penderita.  Berdasarkan  hasil  penelitian ternyata  larutan  madu  dapat  menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae , dikarenakan madu  mengandung  senyawa  flavonoid  dan alkaloid yang berfungsi sebagai bahan obat- obatan.  Mekanisme  reaksi  ini  menunjukkan bahwa  interaksi  antara  derivat  fenolik dengan  protein  pada  membran  sel  yang menyebabkan  rusaknya  struktur  membran sel.  Senyawa  fenol  masuk  ke  dalam  sel
bakteri  melewati  dinding  sel  bakteri  dan membran  sitoplasma,  ternyata    senyawa fenol  di  dalam  sel  bakteri  mengakibatkan penggumpalan (denaturasi) protein penyusun  protoplasma  sehingga  dalam keadaan  demikian  metabolisme  bakteri menjadi  inaktif  dan  pertumbuhan  bakteri menjadi terhambat. 20

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan  yang  dapat  diambil  dari penelitian ini adalah :
1. Uji  efektivitas  larutan  madu  terhadap S. aureus pada konsentrasi  10 6 ppm, 5x10 6 ppm,  10 7 ppm,  dan  10 8 ppm  didapatkan zona  hambat    dengan  rata-rata  diameter hambatan  sebesar    6,5  mm,  10,5  mm,  12 mm,  dan  14,7  mm.  Berdasarkan  hasil penelitian  didapatkan  konsentrasi  larutan madu telah dapat menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dengan kategori hambatan lemah.
2. Uji  efektivitas  larutan  madu  terhadap P. aeruginosae pada  konsentrasi  10 6 ppm, 5x10 6 ppm, dan 10 7 ppm didapatkan  zona hambat    dengan  rata-rata  sebesar    6  mm, 8,5  mm,  dan  9,5  mm,  diameter  zona hambat  tersebut  tidak  termasuk  dalam kategori  (rendah).  Sedangkan  konsentrasi 10 8 ppm    didapatkan  zona  hambat  10.5 mm,  berdasarkan  hasil  dari  zona  hambat tersebut  maka  uji  efektivitas  termasuk dalam kategori lemah.
3. Perbandingan  Uji  efektivitas  larutan madu  terhadap  laju  pertumbuhan  kuman Sthapylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosae ternyata  efektivitas  larutan madu  lebih  efektif  terhadap S.  aureus
daripada P. aeruginosae walaupun perbedaannya tidak signifikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. WHO.  Infectious disease are the biggest killer of the young; 1999. Avalaible from http://www.who.int/infectous-disease-
report/index-rpt99.htm.  Accessed  Juli 12, 2009.
2. Vardi  A,  Barzilay  Z,  Linder  N,  Cohen HA, Paret G, Barzilai A. Local application  of  Honey  for  Treatment  of Neonatal Postoperative Wound Infection.; 1998. Available from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/96 28301. Accessed Mei 17,  2009. 3. Hotnida CH. Pengaruh metode penurunan  kadar  air,  suhu  dan  lama penyimpanan  terhadap  kualitas  madu randu (thesis). Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; 1998. 4. Aiman BAF. Pengobatan dan Penyembuhan  menurut  wahyu  Nabi,
Jakarta: Pustaka As-sabil; 2004.
5. Hendri  W,  Sani  EP    &  Yani  L.  Uji Akivitas  Antimikroba  Madu  Terhadap Mikroba Staphylococcus  aureus; 2008. Available from: http://hendriapt. wordpress.com/2008/11/14/uji-aktivitas- antibacteri-madu-terhadap-bakteri- staphylococcus-aureus.  Accessed  Nov 2008.
6. French VM, Cooper RA and  Molan PC. The  Antibacterial  of  Honey  against coagulae-negative Staphylococci.
Oxforddjournals  (serial  on  the  internet). 2005.    Available  from:  http://jac.oxford djournals.org/cgj/content/full/56/1/228. Accessed March 2005.
7. Lasmayanty.Potensi Antibakteri Propolis
Lebah  Madu  Trigona  Terhadap  bakteri Kariogenik ( Streptococcus mutans ).
Program  Studi  Biokimia  MIPA  IPB Bogor. 2007. 8. Todar
Kenneth.Textbook of bacteriology:  Pseudomonas  aeruginosa. University of Wisconsin-Madison
Department of Bacteriology. 2004. 9. Dwiprahasto I. Kebijakan untuk meminimlakan Resiko Terjadinya
Resistensi  Bakteri  di  Unit  Perawatan Intensif RS.JMPK. 2005; 8(4) : 177-178.
10. Jawetz  E,  Melnick  JL  &  EA  Adelber. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta:
Salemba Medika. 2006.
11. Karchmer,  A.W. From  theory  to practice:  resistance  in Staphylococcus aureus and  new  treatments.  Clin.
Microbiol. Infect. 2006; 12 (8): 15-21.
12. Jawetz E, Melnick JL, and Adelber EA . Mikrobiologi  Kedokteran  Edisi  20. Penerjemah:  Edi  Nugroho  &  RF Maulany,  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC, Jakarta. 2006; 211-215.
13. Pratiwi,  Silvia  T.  Mikrobiologi  Farmasi, Jakarta, Erlangga; 2010.
14. Greenwood.  Antibiotics  Susceptibility (Sensitivity)  Test,  Antimicrobial  and Chemotheraphy.  USA  :  Mc  Graw  Hill Company. 1995.
15. Jawetz  E.,  Melnick  JL  and  EA  Adelber. Medical  Microbiology,  Edisi  ke-22. Penerjemah:  Edi  Nugroho  &  RF Maulany.  Penerbit  Buku  Kedokteran
EGC: Jakarta. 2001; 229-231.
16. Puspitasari  I.  Rahasia  Sehat  Madu. Yogyakarta:
B-First (PT.Bentang Pustaka). 2007.
17. Suci  L,  Uji  Aktivitas  Antimikroba Larutan  Madu  Kapuk  dan  Madu  Hutan Terhadap Staphylococcus  aureus Secara
In  vitro,  Skripsi  FKUPN  “Veteran”
Jakarta. 2010.
18. Suriawiria  U.  Pengantar  Mikrobiologi Umum. Angkasa Bandung. 2000.
19. Molan PC. The Antibacterial Activity of Honey:  The  Nature  of  the  Antibacterial Activity, Bee World. 1992; 73(1) : 5-8.
20. Dwidjoseputro:Dasar-Dasar  Mikrobiologi. Djambatan, Jakarta. 2005.