Studi Literatur Mikroenkapsulasi Bakteri Asam Laktat sebagai Bahan Aktif Sediaan Cokelat untuk Anti-Diare pada Anak
Adelya Pratiwi * ,Dina Mulyanti
Prodi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Islam Bandung, Indonesia.
* adelyapratiwi04@gmail.com, dina.sukma83@gmail.com
Abstract . Lactobacillus plantarum and Lactobacillus acidophilus are included in lactic acid bacteria (BAL) which are probiotic bacteria that have health benefits in humans. The viability of both BAL can be decreased during the product manufacturing process, storage, and when passing through the gastrointestinal  tract.  Microencapsulation  can  be  used  to  solve  the  problem.  This  literature  study aims  to  study  methods  and  coating  materials  that  are  more  suitable  for  microenkapsulation  of  L. plantarum and L. acidophilus therefore can made as an active ingredient in chocolate. This literature study  used  data  sources  research  from  indexed  national  and  internatioanl  journals  as  the  method. The results of this study showed that the use of freeze drying method resulted in a smaller decrease in BAL  viability  than spray  drying.  The use  of       maltodextrin  and skimmed  milk can  reduce the viability  of  both  BAL.  The  combination  of  the  both  coating  materials  can  increase  the thermoprotective effect, therefor BAL will be heat resistant.
Keywords: Microencapsulation,  L.  plantarum,  L.  acidophilus,  Spray  Drying,  Freeze  Drying, Maltodextrin, Skim Milk.
Abstrak. Lactobacillus  plantarum dan  Lactobacillus  acidophilus  termasuk  ke  dalam bakteri  asam laktat  (BAL)  yang  merupakan  bakteri  probiotik  yang  memiliki  manfaat  kesehatan  pada  manusia. Viabilitas dari kedua BAL tersebut dapat mengalami penurunan selama proses pembuatan produk, penyimpanan, dan saat melewati saluran cerna. Pembuatan mikroenkapsulasi dapat digunakan untuk mengatasi masalah tersebut. Studi literatur ini bertujuan untuk mengkaji metode dan bahan penyalut yang  lebih  sesuai  untuk  mikroenkapsulasi  L.  plantarum  dan  L.  acidophilus  agar  dapat  menjadi bahan  aktif  pada  sediaan  cokelat.  Metode  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  studi  literatur dengan menelaah sumber dari berbagai jurnal internasional maupun jurnal nasional yang terindeks.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  penggunaan  metode  freeze  drying  menghasilkan penurunan  viabilitas  BAL  yang  lebih  kecil  daripada  spray  drying.  Penggunaan  bahan  penyalut maltodekstrin  dan  susu  skim  dapat  memperkecil  penurunan  viabilitas  kedua  BAL.  Penggabungan kedua bahan penyalut tersebut dapat meningkatkan  efek  termoprotektif, sehingga BAL  akan  lebih tahan panas.
Kata  Kunci: Mikroenkapsulasi,  L.  plantarum,  L.  acidophilus,  Spray  Drying,  Freeze  Drying, Maltodekstrin, Susu Skim.

## A. Pendahuluan
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  merupakan  mikroflora  normal  yang  terdapat  di  dalam  saluran pencernaan  manusia  dan  juga  merupakan  probiotik  terpenting  yang  diketahui  memiliki  efek menguntungkan  pada  saluran  pencernaan  manusia  (Burgain et  al. ,  2011).  Probiotik didefinisikan sebagai mikroorganisme hidup yang dapat memberikan manfaat kesehatan pada inangnya  apabila  diberikan  dalam  jumlah  yang  memadai  (Hill et  al. ,  2014).  BAL  yang umumnya digunakan sebagai probiotik yaitu Lactobacillus dan Bifidobacterium spp. (Giraffa, 2012).  Selain  itu,  bakteri  probiotik  juga  merupakan  alternatif  yang  potensial  dalam pencegahan  dan  pengendalian  infeksi  yang  ditularkan  melalui  makanan,  karena  diketahui efektif  dalam  menghambat  patogenisitas  patogen  penyebab  infeksi  (Campana,  Van  Hemert and Baffone, 2017).
Efek  menguntungkan  BAL  pada  saluran  pencernaan  manusia  diantaranya adalah dapat mengatasi  dan mencegah diare, mengatasi intoleransi laktosa, mencegah terjadinya  tukak  lambung,  dan  mengatasi  maag  (Masood et  al. ,  2011).  Sejumlah penelitian yang telah dilakukan terhadap anak-anak, BAL menunjukkan manfaat pada infeksi saluran cerna akut dan antibiotic associated diarrhea (AAD) (Agustina, 2012). Penyakit  diare  akut  masih  menjadi  salah  satu  penyebab  utama  morbiditas  dan mortalitas  pada anak usia di  bawah 5 tahun di  Indonesia, dengan angka kematian 2,3 per  1000  anak  (Indriyani,  Juffrie  and  Setyati,  2012).  BAL  yang  umum  digunakan sebagai  probiotik  untuk  mengobati  diare  diantaranya  adalah Lactobacillus  plantarum (Yan and Goldman, 2020) dan Lactobacillus acidophilus (El-Soud et al. , 2015). BAL biasanya ditambahkan ke dalam berbagai produk makanan dan minuman agar dapat dikonsumsi dengan mudah (Wong, Odamaki and Xiao, 2019), salah satunya yaitu  cokelat  (Mirković et  al. ,  2018).  Diketahui  bahwa viabilitas  BAL dalam  sediaan pangan  dapat  mengalami  penurunan  selama  proses  pembuatan  produk,  penyimpanan (Pradipta, 2017), dan saat dikonsumsi (berada dalam sistem pencernaan)  (Adib et al. , 2013). Oleh karena itu, upaya peningkatan viabilitas BAL harus dilakukan, salah satu caranya adalah dengan teknik mikroenkapsulasi (Solanki et al. , 2013).
Teknik mikroenkapsulasi dapat dilakukan dengan penambahan bahan penyalut yang  umumnya  digunakan  untuk  menyalut  probiotik,  yaitu  susu  skim  dan maltodekstrin  (Nocianitri,  Sujaya  and  Ramona,  2019).  Susu  skim  digunakan  sebagai salah satu bahan penyalut karena mengandung kasein yang memiliki efek melindungi bahan  inti.  Kasein  sangat  stabil  dengan  adanya  suhu  tinggi  dan  tidak  menyebabkan koagulasi  akibat  dari  pemanasan  pada  suhu  100  °C  selama  24  jam  atau  pemanasan pada suhu 140 °C selama 20 menit (Yudiastuti et al., 2019). Sedangkan maltodekstrin dianggap bahan penyalut yang baik karena memiliki viskositas yang rendah, kelarutan yang tinggi, dan daya ikat yang tinggi dalam membentuk mikrokapsul (Balasubramani et  al.,  2015),  harganya  relatif  murah,  lebih  komersil,  dan  mudah  didapat  (Nocianitri, Sujaya and Ramona, 2019).
Metode  mikroenkapsulasi  yang  umumnya  digunakan  untuk  mengenkapsulasi probiotik yaitu ekstrusi, spray drying (Solanki et al. , 2013), dan freeze drying (de Vos et al. , 2010) . Teknik spray drying merupakan proses pendispersian bahan inti di dalam bahan  penyalut,  yang  diikuti  dengan  atomisasi  dan  penyemprotan  campuran  tersebut ke  dalam  chamber  pengering  dengan  udara  panas.  Sedangkan  teknik  freeze  drying merupakan  proses  penjerapan  yang  terjadi  berdasarkan  proses  liofilisasi  pada  larutan emulsi  yang  mengandung  bahan  inti  dan  bahan  penyalut (Suganya  and  Anuradha, 2017).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  rumusan  masalah  dari  studi  literatur  ini adalah menganalisa metode serta bahan penyalut yang paling sesuai untuk enkapsulasi BAL  jenis L.  plantarum dan L.  acidophilus agar  memiliki  viabilitas  yang  baik  di
dalam  sediaan  cokelat.  Maka  dari  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui metode  dan  bahan  penyalut  yang  lebih  sesuai  untuk  enkapsulasi L.  plantarum dan L. acidophilus agar  dapat  menjadi  bahan  aktif  pada  sediaan  cokelat.  Studi  literatur  ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah terkait mikroenkapsulasi L. plantarum dan L. acidophilus yang ditambahkan ke dalam formula cokelat.

## B. Metodologi Penelitian
Metode yang digunakan pada penelitin ini yaitu menggunakan studi literatur dengan mencari berbagai  sumber  berupa  jurnal  internasional,  junrla  nasional  dan  buku  yang  didapat  secara daring.  Pencarian  sumber  tersebut  dilakukan  melalui  Garuda, Google  Scholar, PubMed , ScienceDirect , Springer , Taylor  &  Francis ,  dan Wiley dengan  kata  kunci  “ Lactic  acid bacteria ”, “ Encapsulation ”, Microencapsulation of lactic acis bacteria ”.
Kemudia dilakukan pemilihan jurnal berdasarkan kriteria inklusi dan kriteria eksklusi. Berikut kriteria inklusi:
1. Jurnal yang terbit 10 tahun terakhir (2011-2021)
2. Jurnal yang berbentuk penelitian.
3. Jurnal tentang enkapsulasi L. plantarum dengan bahan penyalut maltodekstrin dan/atau susu skim menggunakan metode spray drying dan/atau freeze drying .
4. Jurnal  tentang  enkapsulasi L.  acidophilus dengan  bahan  penyalut  maltodekstrin dan/atau susu skim menggunakan metode spray drying dan/atau freeze drying.
Dan berikut kriteria eksklusi:
1. Jurnal yang terbit lebih dari 10 tahun terakhir (sebelum 2011)
2. Jurnal yang berbentuk review
3. Jurnal tentang enkapsulasi tetapi bukan bakteri L. plantarum dan L. acidophilus
4. Jurnal tentang enkapsulasi L. plantarum dan L. acidophilus tetapi bukan dengan bahan penyalut  maltodekstrin  dan/atau  susu  skim  serta  bukan  menggunakan  metode spray drying dan/atau freeze drying.
Selanjutnya  dilakukan  ekstraksi  data  dan  kemudian  data  tersebut  dianalisis  hingga didapat data yang sesuai untuk menjawab rumusan masalah dan tuujuan penelitian yang telah ditentukan.

## C. Hasil Penelitian dan Pembahasan
Viabilitas BAL setelah Proses Mikroenkapsulasi Viabilitas L.  plantarum dan L.  acidophilus dalam  bentuk  sel  bebas  (tanpa  bahan  penyalut) mengalami  penurunan  yang  lebih  besar  dibandingkan  sel  bakteri  dengan  bahan  penyalut setelah dilakukan proses mikroenkapsulasi dengan metode spray drying dan freeze drying . Hal tersebut dapat dilihat pada Tabel 1.
Penurunan  viabilitas  kedua  BAL  tersebut  dapat  terjadi  karena  adanya  pengeringan yang  menggunakan  suhu  tinggi  pada  proses spray  drying dan  adanya  pembekuan  yang menggunakan  suhu  rendah  pada  proses freeze  drying (Lapsiri,  Bhandari  and Wanchaitanawong,  2013;  Sohail et  al. ,  2013;  Maciel et  al. ,  2014;  Soukoulis et  al. ,  2014; Wang et al. , 2016, 2019; Reyes et al. , 2018; Tang et al. , 2020). Diketahui bahwa kedua BAL tersebut memiliki kemampuan tumbuh maksimal pada suhu 45 °C dan minimal pada suhu 15 °C  (Todorov  and  de  Melo  Franco,  2010;  Bull et  al. ,  2013),  sehingga  pada  saat  proses enkapsulasi L.  acidophilus dan L.  plantarum menjadi  tidak  stabil.  Maka  dari  itu,  untuk menjaga  agar  bakteri  tetap  stabil  dapat  dilakukan  dengan  penambahan  matriks  atau  bahan penyalut (Poddar et al. , 2014).
Tabel 1. Penurunan Viabilitas L. plantarum dan L. acidophilus

## Pengaruh Metode Mikroenkapsulasi terhadap BAL
Spray  drying dan freeze  drying dapat  mempengaruhi  viabilitas  dan  stabilitas  probiotik  BAL (Sohail et  al. ,  2013).  Pada  proses spray  drying ,  inaktivasi  sel  diakibatkan  oleh  adanya  suhu tinggi  yang  dapat  mempengaruhi  membran  sitoplasma,  dinding  sel,  DNA  dan  RNA  bakteri, sehingga  aktivitas  metabolisme  bakteri  akan  berkurang.  Selain  itu,  dapat  menyebabkan
peningkatan permeabilitas sel yang akan mengakibatkan hilangnya komponen intraseluler dari dalam sel menuju ke luar sel (lingkungan ekstraselular) (Poddar et al. , 2014; Tripathi and Giri, 2014).
Pada  metode freeze  drying, terdapat  proses  pembekuan  dan  pengeringan  yang  dapat menyebabkan  inaktivasi  sel  bakteri.  Sebagian  besar,  inaktivasi  selular  terjadi  pada  proses pembekuan  dengan  terbentuknya  kristal  es  ekstraseluler,  sehingga  dapat  menyebabkan kerusakan  pada  membran  sel  dan  juga  memberikan  kondisi  stres  dengan  osmolaritas  yang tinggi  (Tripathi  and  Giri,  2014;  Iaconelli et  al. ,  2015).  Selain  itu,  pada  proses  pengeringan dapat  terjadi  kerusakan  pada  protein  permukaan,  dinding  sel,  dan  membran  sel  akibat  dari dehidrasi sel bakteri, serta dimungkinkan terjadi peroksidasi lipid (Tripathi and Giri, 2014).

## Bahan Penyalut yang Sesuai untuk BAL
Maltodekstrin  dan  susu  skim  adalah  bahan  penyalut  yang  biasa  digunakan  untuk  menyalut probiotik  (Nocianitri,  Sujaya  and  Ramona,  2019)  yang  diketahui  dapat  menghambat penurunan  viabilitas  BAL.  Viabilitas  BAL dengan  bahan  penyalut  maltodekstrin  menurun sebesar 1,87 log CFU/g setelah spray drying dan 1,59 log CFU/g setelah freeze drying (Sohail et  al. ,  2013),  sedangkan  viabilitas  BAL  dengan  bahan  penyalut  susu  skim  rata-rata  menurun sebesar  3,72  log  CFU/mL  setelah spray  drying dan  2,74  log  CFU/mL  setelah freeze  drying (Tang et al. , 2020).
Tabel  2  dan  3  menunjukkan  bahwa  selama  penyimpanan  30  hari  pada  suhu  40  °C, viabilitas  BAL  yang  dienkapsulasi  dengan  bahan  penyalut  maltodekstrin  atau  susu  skim mengalami  penurunan  viabilitas  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  penyimpanan  pada suhu  4  dan  25  °C,  baik  itu  mikroenkapsulasi  BAL  hasil spray  drying maupun freeze  drying (Tang et  al. ,  2020) . Hal  tersebut  dapat  terjadi  karena  suhu  penyimpanan  yang  rendah  dapat memperlambat  terjadinya  reaksi  merugikan  dari  mikroorganisme,  seperti  menghambat oksidasi  lipid  membran  plasma  yang  dibentuk  oleh  fosfolipid  tak  jenuh,  sedangkan  suhu penyimpanan yang tinggi menyebabkan laju degradasi yang lebih tinggi (Wang et al. , 2019).
Tabel 2. Penurunan Viabilitas BAL yang dienkapsulasi dengan Maltodekstrin selama penyimpanan 30 hari
Maltodekstrin  adalah  bahan  penyalut  karbohidrat  yang  paling  umum  untuk enkapsulasi  probiotik  (Sanchez et  al. ,  2013),  yang  dapat  bermanfaat  untuk  menggantikan  air dengan  ikatan  hidrogen  pada  gugus  fosfolipid  membran  sel  bakteri,  dapat  membentuk  amorf selama  pengeringan  dan  memberikan  viskositas  yang  tinggi,  sehingga  dapat  membatasi pertukaran  air  dan  oksigen  (Poddar et  al. ,  2014).  Selain  itu,  maltodekstrin  merupakan polisakarida  dengan  berat  molekul  tinggi  yang  dihasilkan  oleh  pati  yang  umum  digunakan untuk menjaga stabilitas mikrokapsul dan melindunginya terhadap perubahan fisik yang tidak diinginkan  seperti  lengket  dan  hancur,  melindungi  dari  perubahan  kimia  seperti  mencegah oksidasi  bahan  yang  dienkapsulasi,  dan  selama  pengeringan  maltodekstrin  (Sanchez et  al. , 2013; Reyes et al. , 2018).
Susu skim adalah bahan penyalut protein yang umum digunakan dan mengandung dua jenis  protein,  yaitu  kasein  dan  protein whey. Susu  skim  memiliki  manfaat  dalam  mencegah kerusakan  sel  dengan  menstabilkan  membran  sitoplasma,  memfasilitasi  rehidrasi  sediaan kering,  dapat  membentuk  lapisan  pelingdung  pada  dinding  sel  untuk  melindungi  sel  BAL (Halim et al. , 2017). Kasein yang terkandung dalam susu skim yang tercerna di lambung dapat melepaskan  peptida  dan  asam  amino  yang  dapat  mendukung  pertumbuhan  probiotik,  serta protein whey dalam  susu  skim  tidak  terhidrolisis  oleh  cairan  lambung  sehingga  dapat memberikan  perlindungan  (Maciel et  al. ,  2014).  Sedangkan  protein whey dapat  melepaskan asam amino  yang  mengandung belerang  ketika adanya  suhu  panas, dimana belerang tersebut
dapat mengikat oksigen sehingga menghambat oksidasi lipid (Soukoulis et al. , 2014). Kombinasi antara susu skim dan maltodekstrin dapat memberikan viabilitas yang lebih tinggi setelah proses enkapsulasi (Tang et al. , 2020), karena penambahan maltodekstrin dapat meningkatkan  efek  termoprotektif  dari  susu  skim,  serta  telah  terbukti  penggunaan maltodekstrin dan susu skim menjadi strategi  yang baik untuk produksi enkapsulasi probiotik (Soukoulis et al. , 2014). Selain dapat dikombinasi dengan maltodekstrin, susu skim juga dapat dikombinasikan  dengan  karbohidrat  lain  yaitu  pektin.  Menurut  penelitian  Yasmin et  al. , (2019),  penggunaan  pektin  bersama  dengan  protein whey dapat  meningkatkan  efisiensi  dan kebulatan  bubuk  hasil  enkapsulasi,  selain  itu  pektin  dapat  membentuk  struktur  seperti  film yang berkontribusi terhadap peningkatan viabilitas sel dalam kondisi asam dan garam empedu. Telah diketahui bahwa susu skim sendiri mengandung protein whey (Lin et al. , 2021). Selain  itu,  pektin  biasa  digunakan  sebagai  bahan  penyalut  pada  mikroenkapsulasi karena  sifatnya  yang  resisten  terhadap  enzim  pencernaan  seperti  amilase  dan  protease,  serta tetap  dalam  bentuk  agrerat  makromolekul  saat  dalam  media  asam  (Meneguin et  al. ,  2017) sehingga  dapat  memberikan  perlindungan  pada  BAL  saat  melewati  saluran  cerna.  Pektin merupakan  serat  makanan  sehingga  dapat  berperan  sebagai  prebiotik  (Ginting,  Antara  and Wijaya,  2020)  yang  bermanfaat  dalam  menstimulasi  satu  atau  lebih  kelompok  mikroba  yang bermanfaat  dalam  usus,  sehingga  memiliki  efek  positif  pada  kesehatan  manusia  (Sarao  and Arora, 2017).
Salah  satu  tanaman  yang  mengandung  pektin  sebagai  kandungan  utamanya  yaitu cincau  hijau  (Ginting,  Antara  and  Wijaya,  2020).  Karena  kandungan  pektinnya  cincau  hijau juga  telah  digunakan  sebagai  bahan  baku  pembuatan edible  coating (Hendrawan,  Sumarlan and  Ilham,  2017).  Penelitian  Winarsih  (2018),  menyatakan  bahwa edible  coating dengan bahan  dasar  cincau  dapat  memperpanjang  masa  simpan  stroberi  hingga  14  hari  pada penyimpanan 5 °C.

## BAL Terenkapsulasi dalam Sediaan Cokelat
Cokelat merupakan pembawa yang lebih baik daripada susu untuk penghantaran oral probiotik (Posseimers,  2010),  karena  pembawa  susu  memiliki  kerugian  untuk  orang  yang  memiliki alergi protein susu dan intoleransi laktosa, serta memerlukan pendinganan dan memiliki umur simpan  yang  relatif  lebih  singkat  (Nambiar,  Sellamuthu  and  Perumal,  2018).  Selain  itu, cokelat  diketahui  mengandung  padatan  kakao  yang  tinggi  dikenal  sebagai  sumber  polifenol, seperti  katekin,  prosianidin,  proantosianin,  dan  flavonol  glikosida.  Adanya  kandungan polifenol  yang  berperan  sebagai  antioksidan  membuat  cokelat  bermanfaat  menjadi  pembawa untuk  probiotik  (Laličić-Petronijević et  al. ,  2017).  Cokelat  juga  merupakan  makanan  yang disukai  oleh  anak-anak,  sehingga  cokelat  berpotensi  sebagai  pembawa  BAL  yang dienkapsulasi  (Mirković et  al. ,  2018;  Nambiar,  Sellamuthu  and  Perumal,  2018)  untuk  tujuan mengatasi masalah diare pada anak.
Berikut formula cokelat  yang dapat digunakan sebagai pembawa BAL terenkapsulasi C (Nambiar, Sellamuthu and Perumal, 2018):
1. Padatan kakao 28%
2. Sukrosa 4%
3. Susu skim 16%
4. Mentega kakao 15%
5. Lesitin kedelai 00,3%
BAL yang dienkapsulasi  menggunakan  maltodekstrin berhasil ditambahkan  ke dalam formula  cokelat  tersebut  dengan  menghasilkan  viabilitas  BAL  lebih  besar  dari  8  log  CFU/g selama 180 hari pada suhu 25 °C (Nambiar, Sellamuthu and Perumal, 2018).

## D. Kesimpulan
Berdasarkan  pembahasan  dalam  penelitian  ini,  peneliti  menyimpulkan  beberapa  hasil penelitian sebagai berikut:
1. Metode mikroenkapsulasi yang lebih sesuai untuk L. plantarum dan L. acidophilus agar dapat ditambahkan pada formula cokelat yaitu freeze drying .
2. Bahan  penyalut  yang  lebih  sesuai  untuk  mengenkapsulasi L.  plantarum dan L.
acidophilus agar dapat ditambahkan ke dalam formula cokelat yaitu kombinasi antara maltodekstrin  dan  susu  skim,  dimana  maltodekstrin  dapat  meningkatkan  efek termoprotektid dari susu skim.

## Acknowledge
Penulis  sangat  berterimakasih  kepada  semua  orang  yang  telah  memberi  dukungan  selama penulis menempuh pendidikan Farmasi di Universitas Islam Bandung, terutama kepada orang tua  penulis  yang  tiada  henti  mendo‟akan  untuk  kelancaran  penulis.  Selain  itu,  penulis berterimakasih kepada dosen pembimbing yaitu Ibu Dr. apt. Dina Mulyanti, M.Si. dan Ibu apt. Bertha  Rusdi,  M.Si.,  P.hD.  yang  telah  memberi  bimbingan  sehingga  penulis  dapat menyelesaikan tugas akhir dengan tepat waktu.

## Daftar Pustaka
[1] Adib,  A. et al. (2013) „Lactobacillus  Plantarum  Pada  Feses  Individu  Dewasa  Sehat  Yang Mengonsumsi  Lactobacillus  Plantarum  Is-10506  Dari  Dadih‟, Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan , 24(2), pp. 154–161. doi: 10.6066/jtip.2013.24.2.154.
[2] Agustina, R. (2012) Effect of milk calcium with or without probiotics on growth, iron and zinc  status  of  Indonesian  children , Probiotics,  calcium  and  acute  diarrhea .  Netherlands: Wageningen University. Available at: http://library.wur.nl/WebQuery/edepot/231281#page=64.
[3] Bull, M. et al. (2013) „The life history of Lactobacillus acidophilus as a probiotic: A tale of revisionary  taxonomy,  misidentification  and  commercial  success‟, FEMS  Microbiology Letters , 349(2), pp. 77–87. doi: 10.1111/1574-6968.12293.
[4] Burgain, J. et al. (2011) „Encapsulation of probiotic living cells: From laboratory scale to industrial  applications‟, Journal  of  Food  Engineering ,  104(4),  pp.  467–483.  doi: 10.1016/j.jfoodeng.2010.12.031.
[5] El-Soud, N. H. A. et al. (2015) „Bifidobacterium lactis in treatment of children with acute diarrhea.  A  randomized  double  blind  controlled  trial‟, Macedonian  Journal  of  Medical Sciences , 3(3), pp. 403–407. doi: 10.3889/oamjms.2015.088.
[6] Ginting, F. E., Antara, N. S. and Wijaya, I. M. M. (2020) „Potensi Ekstrak Cincau Hijau (Premna  oblongifolia  Merr.)  dalam  Menstimulasi  Pertumbuhan  Bakteri  Asam  Laktat Saluran  Pencernaan‟, Jurnal  Rekayasa  Dan  Manajemen  Agroindustri ,  8(3),  p.  319.  doi: 10.24843/jrma.2020.v08.i03.p01.
[7] Giraffa,  G.  (2012)  „Selection  and  design  of  lactic  acid  bacteria  probiotic  cultures‟, Engineering in Life Sciences , 12(4), pp. 391–398. doi: 10.1002/elsc.201100118.
[8] Halim,  M. et  al. (2017)  „Effect  of  encapsulant  and  cryoprotectant  on  the  viability  of probiotic  Pediococcus acidilactici  ATCC  8042  during  freeze-drying  and  exposure  to  high acidity,  bile  salts  and  heat‟, LWT  -  Food  Science  and  Technology ,  81,  pp.  210–216.  doi: 10.1016/j.lwt.2017.04.009.
[9] Hendrawan, Y., Sumarlan, S. H. and Ilham, N. A.-Z. (2017) „Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Cincau  Hijau  (Premna  Oblongifolia  L.)  Sebagai  Edible  Coating  dan  Lama  Pencelupan terhadap  Kualitas  Stroberi  (Fragaria  Sp.)‟, Jurnal  Keteknikan  Pertanian  Tropis  dan Biosistem , 5(1), pp. 35–48.
[10] Hill, C. et al. (2014) „Expert consensus document: The international scientific association for probiotics and prebiotics consensus statement on the scope and appropriate use of the term  probiotic‟, Nature  Reviews  Gastroenterology  and  Hepatology ,  11(8),  pp.  506–514. doi: 10.1038/nrgastro.2014.66.
[11] Iaconelli,  C. et  al. (2015)  „Drying  process  strongly  affects  probiotics  viability  and functionalities‟,
Journal of Biotechnology , 214, pp. 17–26. doi:
10.1016/j.jbiotec.2015.08.022.
[12] Indriyani,  A.,  Juffrie,  M.  and  Setyati,  A.  (2012)  „Effect  of  Live  versus  Heat-Killed Probiotics Diarrhea in Young Children‟, 52(5), pp. 249–254. doi: 10.14238/pi.
[13] Laličić-Petronijević,  J. et  al. (2017)  „Synergistic  effect  of  three  encapsulated  strains  of probiotic bacteria on quality parameters of chocolates with different composition‟, Journal of Functional Foods , 38, pp. 329–337. doi: 10.1016/j.jff.2017.09.041.
[14] Lapsiri,  W.,  Bhandari,  B.  and  Wanchaitanawong,  P.  (2013)  „Stability  and  Probiotic Properties  of  Lactobacillus  plantarum  Spray-Dried  with  Protein  and  Other  Protectants‟, Drying Technology , 31(13–14), pp. 1723–1733. doi: 10.1080/07373937.2013.775658.
[15] Lin, L. et al. (2021) „The effects of casein and whey proteins on the rheological properties of  calcium-induced  skim  milk  gels‟, International  Dairy  Journal ,  113.  doi: 10.1016/j.idairyj.2020.104893.
[16] Maciel,  G.  M. et  al. (2014)  „Microencapsulation  of  Lactobacillus  acidophilus  La-5  by spray-drying  using  sweet  whey  and  skim  milk  as  encapsulating  materials‟, Journal  of Dairy Science , 97(4), pp. 1991–1998. doi: 10.3168/jds.2013-7463.
[17] Masood,  M.  I. et  al. (2011)  „Beneficial  effects  of  lactic  acid  bacteria  on  human  beings‟, Critical Reviews in Microbiology , 37(1), pp. 91–98. doi: 10.3109/1040841X.2010.536522.
[18] Meneguin,  A.  B. et  al. (2017) Resistant  starch/pectin  free-standing  films  reinforced  with nanocellulose intended for colonic methotrexate release , Carbohydrate Polymers . Elsevier Ltd. doi: 10.1016/j.carbpol.2016.10.062.
[19] Mirković,  M. et  al. (2018)  „The  sensory  quality  and  volatile  profile  of  dark  chocolate enriched  with  encapsulated  probiotic  lactobacillus  plantarum  bacteria‟, Sensors (Switzerland) , 18(8). doi: 10.3390/s18082570.
[20] Nambiar,  R.  B.,  Sellamuthu,  P.  S.  and  Perumal,  A.  B.  (2018)  „Development  of  milk chocolate  supplemented  with  microencapsulated  Lactobacillus  plantarum  HM47  and  to determine the safety in a Swiss albino mice model‟, Food Control , 94, pp. 300–306. doi: 10.1016/j.foodcont.2018.07.024.
[21] Nocianitri,  K.  A.,  Sujaya,  I.  N.  and  Ramona,  Y.  (2019)  „Mikroenkapsulasi  Probiotik Lactobacillus  Rhamnosus  Fbb81  Dan  Viabilitasnya  Selama  Penyimpanan‟,  6(1),  pp.  76– 82.
[22] Poddar,  D. et  al. (2014)  „Stability  of  probiotic  Lactobacillus  paracasei  during  storage  as affected  by  the  drying  method‟, International  Dairy  Journal ,  39(1),  pp.  1–7.  doi: 10.1016/j.idairyj.2014.04.007.
[23] Pradipta,  M.  S.  I.  (2017)  „Pengaruh  Mikroenkapsulasi  Probiotik  Bakteri  Asam  Laktat Indigenous  Unggas  Menggunakan  Bahan  Penyalut  Maltodekstrin  Terhadap  Viabilitas Selama Penyimpanan‟, Journal of Livestock Science and Production , 1(1), pp. 37–43. doi: 10.31002/jalspro.v1i1.452.
[24] Reyes,  V. et  al. (2018)  „Influence  of  wall  material  on  production  of  spray  dried lactobacillus plantarum nrrl b-4496 and its viability at different storage conditions‟, Drying Technology , 36(14), pp. 1738–1748. doi: 10.1080/07373937.2017.1423324.
[25] Sanchez,  V. et  al. (2013)  „Freeze-Drying  Encapsulation  of  Red  Wine  Polyphenols  in  an Amorphous  Matrix  of  Maltodextrin‟, Food  and  Bioprocess  Technology ,  6(5),  pp.  1350– 1354. doi: 10.1007/s11947-011-0654-z.
[26] Sarao,  L.  K.  and  Arora,  M.  (2017)  „Probiotics,  prebiotics,  and  microencapsulation:  A review‟, Critical  Reviews  in  Food  Science  and  Nutrition ,  57(2),  pp.  344–371.  doi: 10.1080/10408398.2014.887055.
[27] Sohail,  A. et  al. (2013)  „The  Viability  of  Lactobacillus  rhamnosus  GG  and  Lactobacillus acidophilus NCFM Following Double Encapsulation in Alginate and Maltodextrin‟, Food and Bioprocess Technology , 6(10), pp. 2763–2769. doi: 10.1007/s11947-012-0938-y.
[28] Solanki, H. K. et al. (2013) „Development of microencapsulation delivery system for long- term preservation of probiotics as biotherapeutics agent‟, BioMed Research International , 2013. doi: 10.1155/2013/620719.
[29] Soukoulis,  C. et  al. (2014)  „Impact  of  Milk  Protein  Type  on  the  Viability  and  Storage Stability  of  Microencapsulated  Lactobacillus  acidophilus  NCIMB  701748  Using  Spray
Drying‟, Food and Bioprocess Technology , 7(5), pp. 1255–1268. doi: 10.1007/s11947-013- 1120-x.
[30] Tang,  H.  W. et  al. (2020)  „Influence  of  freeze-drying  and  spray-drying  preservation methods  on  survivability  rate  of  different  types  of  protectants  encapsulated  Lactobacillus acidophilus  FTDC  3081‟, Bioscience,  Biotechnology  and  Biochemistry ,  84(9),  pp.  1913– 1920. doi: 10.1080/09168451.2020.1770572.
[31] Todorov,  S.  D.  and  de  Melo  Franco,  B.  D.  G.  (2010)  „Lactobacillus  plantarum: Characterization  of  the  species  and  application  in  food  production‟, Food  Reviews International , 26(3), pp. 205–229. doi: 10.1080/87559129.2010.484113.
[32] Tripathi, M. K. and Giri, S. K. (2014) „Probiotic functional foods: Survival of probiotics during  processing  and  storage‟, Journal  of  Functional  Foods ,  9(1),  pp.  225–241.  doi: 10.1016/j.jff.2014.04.030.
[33] de  Vos,  P. et  al. (2010)  „Encapsulation  for  preservation  of  functionality  and  targeted delivery of bioactive food components‟, International Dairy Journal , 20(4), pp. 292–302. doi: 10.1016/j.idairyj.2009.11.008.
[34] Wang,  C. et  al. (2019)  „Effects  of  polymerized  whey  protein  on  survivability  of Lactobacillus  acidophilus  LA-5  during  freeze-drying‟, Food  Science  and  Nutrition ,  7(8), pp. 2708–2715. doi: 10.1002/fsn3.1130.
[35] Wang, L. et al. (2016) „Effect of skim milk coated inulin-alginate encapsulation beads on viability  and  gene  expression  of  Lactobacillus  plantarum  during  freeze-drying‟, LWT  - Food Science and Technology , 68, pp. 8–13. doi: 10.1016/j.lwt.2015.12.001.
[36] Winarsih,  S.  (2018)  „Pengawetan  Strawberry  (Fragaria  Ananassa)  Menggunakan  Edible Coating  Berbasis  Pektin  Dari  Cincau  Hijau  (Cylea  barbata)‟, Agrika ,  12(2).  doi: 10.31328/ja.v12i2.762.
[37] Wong, C. B., Odamaki, T. and Xiao, J. zhong (2019) „Beneficial effects of Bifidobacterium longum  subsp.  longum  BB536  on  human  health:  Modulation  of  gut  microbiome  as  the principal  action‟, Journal  of  Functional  Foods ,  54(February),  pp.  506–519.  doi: 10.1016/j.jff.2019.02.002.
[38] Yan,  T.  and  Goldman,  R.  D.  (2020)  „Probiotics  for  antibiotic-associated  diarrhea  in children‟, Canadian Family Physician , 66(1), pp. 37–39.
[39] Yasmin, I. et al. (2019) „Development of Whey Protein Concentrate-Pectin-Alginate Based Delivery  System  to  Improve  Survival  of  B.  longum  BL-05  in  Simulated  Gastrointestinal Conditions‟, Probiotics  and  Antimicrobial  Proteins ,  11(2),  pp.  413–426.  doi: 10.1007/s12602-018-9407-x.