## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAUN SEMBUNG RAMBAT
( Mikania micrantha) TERHADAP PERTUMBUHAN
Streptococcus mutans
Ivana Renata Polakitan 1) , Fatimawali 2) , Michael A. Leman 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado, 95115
2) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sembung  rambat  plant  (Mikania  micrantha)  is  one  weed  in  Indonesia  which  has  a  great potential as one alternative antibacterial. Sembung rambat leaf contains active substances in the form of  secondary  metabolites  such  as  alkaloids,  saponins,  flavonoids,  steroids,  tannins,  and  terpenoids. However, substances that act as an antibacterial are flavonoids and tannins. Streptococcus mutans is a  bacterium  that  causes  dental  caries  and  has  the  ability  to  produce  the  acid  sensation  in  the  oral cavity. One way that can be done to cope with Streptococcus mutans is by using sembung rambat.The purpose of this study is to determine whether the extract sembung rambat  leaf (Mikania micrantha) have  inhibitory  effect  on  the  growth  of  Streptococcus  mutans,  as  well  as  knowing  the  amount  of inhibition extract sembung rambat leaf (Mikania micrantha) on the growth of Streptococcus mutans. This study is an experimental laboratory research using sinks with a modified method of Kirby-bauer. The  samples  are  taken  from  the  Patokaan  village  in  North  Minahasa  then  extracted  by  maceration method  using  96%  ethanol.  Streptococcus  mutans  bacteria  are  taken  from  the  pure  stock  bactery Pharmacy  Lab.  Faculty  of  Science  University  of  Sam  Ratulangi.  The  result  showed  inhibition  zone diameter of the extract of sembung rambat against Streptococcus mutans by 15 mm and is included in the strong category. From this study it can be concluded that the extract of sembung rambat (Mikania micrantha) have inhibitory effect on the growth of Streptococcus mutans.
Keywords : sembung rambat leaf (Mikania micrantha), Streptococcus mutans, inhibition zone

## ABSTRAK
Tanaman  sembung  rambat  ( Mikania  micrantha )  merupakan  salah  satu  gulma  di  Indonesia yang  memiliki  potensi  besar  sebagai  salah  satu  antibakteri  alternatif.  Daun  sembung  rambat mengandung  zat aktif dalam bentuk  metabolit sekunder seperti alkaloid, saponin, flavonoid, steroid, tanin,  dan  terpenoid.  Akan  tetapi,  yang  berperan  sebagai  antibakteri  yaitu  flavonoid  dan  tanin. Streptococcus  mutans merupakan  bakteri  penyebab  karies  gigi  dan  memiliki  kemampuan menghasilkan  suasana  asam  dalam  rongga  mulut.  Salah  satu  cara  yang  dapat  dilakukan  untuk menanggulangi Streptococcus  mutans yaitu  dengan  menggunakan  daun  sembung  rambat.  Tujuan penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  apakah  ekstrak  daun  sembung  rambat  ( Mikania  micrantha ) memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans , serta mengetahui besarnya daya hambat  ekstrak  daun  sembung  rambat  ( Mikania  micrantha )  terhadap  pertumbuhan Streptococcus mutans .  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan  metode  modifikasi Kirby-bauer  menggunakan  sumuran.  Sampel  daun  sembung  rambat  diambil  dari  desa  Patokaan kabupaten  Minahasa  Utara  kemudian  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Bakteri Streptococcus  mutans diambil  dari  stok  bakteri  murni  Laboratorium  Farmasi Fakultas  M-IPA  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado.  Hasil  penelitian  didapatkan  diameter  zona hambat  ekstrak  daun  sembung  rambat  terhadap Streptococcus  mutans sebesar  15  mm  dan  termasuk dalam  kategori  kuat.  Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  sembung  rambat (Mikania micrantha) memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans .
Kata kunci : daun sembung rambat ( Mikania micrantha ), Streptococcus mutans , zona hambat

## PENDAHULUAN
Karies  gigi  merupakan  suatu  penyakit yang  disebabkan  oleh  adanya  interaksi antara  bakteri  plak, diet ,  dan  gigi. 1
Berdasarkan Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) Nasional tahun 2013, prevalensi nasional masalah kesehatan gigi dan  mulut  mencapai  25,9%  dan  sebanyak 14 provinsi di Indonesia memiliki prevalensi  masalah  gigi  dan  mulut  di  atas prevalensi  nasional  dan  index  DMF-T mencapai  4,6%  yang  artinya  kerusakan gigi  penduduk  Indonesia  mencapai  460 buah gigi per 100 orang (Anonim, 2013).
Karies  gigi  merupakan  penyakit  yang merusak  struktur  gigi  yang  ditandai dengan  adanya  demineralisasi  jaringan keras gigi yang diakibatkan oleh akumulasi  bakteri  plak  pada  permukaan gigi.  Karies  gigi  disebabkan  oleh  empat komponen,  yaitu  mikroorganisme, host , substrat,  dan  waktu  (Kidd  &  Joyston, 1992).  Mikroorganisme  merupakan  salah satu  komponen  yang  menyebabkan  karies gigi. Mikroorganisme melakukan fermentasi  karbohidrat  yang  kemudian terbentuk  asam  dan  menurunkan  pH hingga  berada  pada  tingkat  pH  kritis, sehingga  terjadi  demineralisasi  jaringan keras  gigi.  Salah  satu  mikroorganisme yang  menyebabkan  karies  gigi  yaitu bakteri Streptococcus mutans.
Streptococcus mutans merupakan jenis bakteri  Gram  positif  dan  berperan  sebagai agen  utama  dalam  metabolisme  plak.
Bakteri Streptococcus mutans dapat tumbuh  subur  dalam  suasana  asam  dan dapat  menempel  pada  permukaan  gigi serta  saling  berikatan  satu  dengan  yang lain. Salah satu  cara  yang dapat dilakukan untuk  mencegah  karies  gigi  yaitu  dengan menghambat pertumbuhan bakteri penyebab (Anonim, 2013).
Daun sembung rambat ( Mikania micrantha )  merupakan  salah  satu  jenis tumbuhan  yang  memiliki  potensi  besar sebagai salah satu antibakteri alternatif dan dapat  dikembangkan.  Namun,  tumbuhan ini sering tidak termanfaatkan karena letak tumbuhnya  di  sekitar  area  perkebunan karet  dan  kelapa  sawit  yang  dianggap banyak  orang  sebagai  tumbuhan  yang tidak  memiliki  khasiat.  Berdasarkan  hasil analisis  fitokimia  ekstrak  daun  sembung rambat ( Mikania micrantha ), tumbuhan ini mengandung  zat  aktif  dalam  bentuk metabolit sekunder seperti alkaloid, saponin,  flavonoid,  steroid,  tanin,  dan terpenoid  (Narlan  dkk,  2013). Penelitian yang  dilakukan  oleh  Haisya  pada  tahun 2013  menemukan  bahwa  daun Mikania micrantha dapat  menghambat  beberapa pertumbuhan bakteri seperti Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, dan Pseudomonas  aeruginosa , tetapi  daya  hambat  tumbuhan  ini  terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans belum pernah diteliti (Narlan dkk, 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ekstrak daun sembung rambat  ( Mikania  micrantha )  memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus  mutans ,  serta  mengetahui besarnya  daya  hambat  ekstrak  daun sembung  rambat  ( Mikania  micrantha ) terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  laboratorium  dengan  desain penelitian Post-test  only  control  group design .  Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium  Farmasi  Fakultas  M-IPA Universitas Sam Ratulangi Manado.
Daun sembung rambat diambil di desa Patokaan  kabupaten  Minahasa  Utara
dengan  berat  6kg,  dicuci  dengan  air mengalir.  Kemudian  dikeringkan  dengan cara  diangin-anginkan  di  tempat  yang tidak  terkena  matahari  secara  langsung selama  5  hari.  Sampel  daun  yang  sudah kering  dihaluskan  dengan  menggunakan blender dan ditimbang sebesar 100g.
Pembuatan  ekstrak  daun  sembung rambat  menggunakan  metode  maserasi, serbuk  daun  sembung  rambat  sebanyak 100g  direndam  dalam  etanol  96%  pada suhu  25-30°C  dan  terhindar  dari  cahaya matahari langsung. Proses maserasi dilakukan  selama  lima  hari  ditambah  dua hari remaserasi, dan dilakukan pengadukan dengan  menggunakan  batang  pengaduk. Kemudian larutan tersebut difiltrasi dengan menggunakan kertas saring sehingga  diperoleh  filtrat  I  dari  hasil maserasi  pertama  dan  filtrat  II  dari  hasil remaserasi.  Semua  filtrat  dari  hasil penyaringan  dikumpulkan  menjadi  satu dan diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator  pada  suhu  50°C  sampai  semua etanol menguap sehingga diperoleh ekstrak  kental.  Ekstrak  kental  dimasukkan ke  dalam  wadah  steril,  selanjutnya disimpan di dalam lemari pendingin.
Bakteri Streptococcus mutans
disimpan  di  media  agar  yang  berasal  dari biakan murni dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Unsrat. Bakteri  disimpan  pada  agar  miring, dimasukkan  ke  dalam  wadah  steril  yang berada dalam suasana anaerob dan ditutup agar  sterilisasi  terjaga.  Apabila  sudah mendekati waktu untuk digunakan, bakteri diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu 37ºC.
Brain  Heart  Infusion  Broth (BHI-B)
ditimbang sebanyak 37 gram dan dilarutkan  dalam  1  liter  akuades  dalam tabung  Erlenmeyer.  Media  disterilisasi dalam  autoklaf  pada  suhu  121°C  selama
15  menit,  selanjutnya  dituang  dalam tabung reaksi sebanyak 7 mL.
Media lapisan pembenihan Agar
Muller-Hinton (MHA) ditimbang sebanyak  28  gram  menggunakan  1  liter akuades sebagai pelarut. Media disterilisasi  dalam  autoklaf  pada  suhu 121°C  selama  15  menit.  Setelah  itu masukkan  tiga  buah  sumur  ke  dalam cawan  petri.  Selanjutnya  dimasukkan dalam  cawan  petri  sebanyak  10  mL  dan dibiarkan hingga mengeras. Lapisan berikutnya  dituang  media  yang  sama sebanyak 15 mL. Setelah mengeras, angkat sumur  yang  telah  dimasukkan  dalam cawan petri satu per satu.
Larutan  baku  McFarland  terdiri  atas dua komponen yaitu larutan BaCl2 1% dan H2SO4  1%.  Larutan  BaCl2  1%  sebanyak 0,05  mL  dicampur dengan larutan H2SO4 1%  sebanyak  9,95  mL  dan  dikocok homogen  sampai  terbentuk  larutan  yang keruh.  Nilai  absorban  larutan  baku  harus berada di kisaran 0,08 sampai dengan 0,13. Larutan  baku  McFarland  0,5  ekuivalen dengan  suspensi  sel  bakteri  dengan konsentrasi  1,5x10 8 CFU/mL.  Kekeruhan ini  yang  akan  dipakai  sebagai  standar suspensi bakteri uji.
Bakteri Streptococcus  mutans yang disimpan  di  media  agar  yang  berasal  dari stok  bakteri  murni  Laboratorium  Farmasi Fakultas M-IPA Universitas Sam
Ratulangi Manado diambil dengan menggunakan  jarum  ose  steril,  lalu ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan cara menggores. Bakteri yang telah digores pada media agar diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37°C  selama  1  x  24 jam. Bakteri yang telah diinkubasi diambil koloninya  dari  media  agar  miring  dengan menggunakan  jarum  ose  steril.  Koloni yang diambil dimasukkan ke dalam media BHI-B sampai kekeruhannya sama dengan
standard  McFarland.  Lidi  kapas  steril dicelupkan  ke  dalam  bakteri  suspensi hingga  basah.  Lidi  kapas  diperas  dengan menekankan  pada  dinding  tabung  reaksi bagian  dalam,  kemudian  digores  merata pada media MHA.
Kontrol positif dibuat dengan menggunakan sediaan bubuk obat
amoksisilin  yang  mengacu  pada minimal inhibitory concentration (MIC) amoksisilin
terhadap
Streptococcus
mutans ,  yakni  32μg/mL  yang  dicampur dengan  pelarut  akuades  hingga  homogen. Untuk  kontrol  negatif  digunakan  akuades steril.
Metode  pengujian  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  metode
modifikasi
Kirby-Bauer dengan menggunakan  sumuran.  Media  MHA disediakan sebanyak 5 cawan petri dengan 15  buah  sumur,  5  sumur  pertama  yang sudah  terbentuk  pada  media  agar  di  5 cawan  petri  diisi  dengan  larutan  ekstrak daun sembung rambat yang sudah dilarutkan  dengan  akuades  steril  sebagai kelompok  intervensi,  5  sumur  berikutnya diisi  amoksisilin  dengan  pelarut  akuades sebagai  kelompok  kontrol  positif  dan  5 sumur  lainnya  diisi  dengan  akuades  steril sebagai  kelompok  kontrol  negatif.  Cawan petri selanjutnya diinkubasi dalam inkubator  pada  suhu  37ºC  selama  24  jam. Setiap  cawan  petri  berisi  satu  sumur kelompok intervensi, satu sumur kelompok kontrol  positif dan  satu  sumur  kelompok kontrol negatif.
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Zona  bening  kepekaan bakteri  terhadap  bahan  antibakteri  yang digunakan sebagai bahan uji dan dinyatakan  dengan  diameter  zona  hambat. Zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar sumur  diukur  diameter  vertikal  dan diameter horizontal dengan satuan
millimeter  (mm)  dengan  menggunakan jangka  sorong.  Pengukuran  diameter  zona hambat dapat dilihat pada Gambar 1.
Diameter  zona  hambat  dapat  diukur dengan rumus :
𝐷 𝑣 + 𝐷 h

## 2                   Ds
Gambar  1.  Pengukuran  diameter  zona hambat
Keterangan: : Zona hambat
D h : Diameter horizontal
D v : Diameter vertikal D s : Diameter sumuran

## HASIL PENELITIAN
Uji daya hambat ekstrak daun sembung rambat  ( Mikania  micrantha )  dilakukan dengan  mengukur  zona  hambat  yang dihasilkan  pada  media  yang  mengandung bakteri Streptococcus  mutans setelah diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam pada  suhu  37ºC.  Pertumbuhan  bakteri terlihat  menjauhi  sumur  yang  artinya terdapat  pembentukan  zona  hambat  pada sumur yang ditetesi ekstrak daun sembung rambat dan sumur yang ditetesi amoksisilin  sebagai  kontrol  positif.  Akan tetapi  pada  sumur  yang  ditetesi  akuades sebagai  kontrol  negatif  tidak  terdapat pembentukan  zona  hambat  (terlihat  pada Gambar 2).
Gambar 2. Zona hambat pada media MHA
Zona hambat  yang terbentuk di sekitar sumur  diukur  diameter  vertikal  dan diameter horizontalnya menggunakan jangka  sorong  dengan  satuan  milimeter (mm).  Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  ekstrak  daun  sembung  rambat dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Diameter  zona  hambat  ekstrak daun sembung rambat
Cawan Petri Diameter Vertikal (mm) Diameter Horizontal (mm) Diameter Zona Hambat (mm) I II III IV V 21 21 23 23 23 21 21 21 23 23 14 14 15 16 16 Total 75 Rata-rata 15
Tabel  1  menunjukkan  total  diameter zona hambat ekstrak daun sembung rambat pada  lima  cawan  petri  sebesar  75  mm dengan nilai rata-rata mencapai 15 mm.
Hasil pengukuran diameter zona hambat  amoksisilin  (kontrol  positif)  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Diameter zona hambat amoksisilin (kontrol +) Cawan Petri Diameter Vertikal (mm) Diameter Horizontal (mm) Diameter Zona Hambat (mm) I II III IV V 23 24 24 25 25 23,5 24 24,5 24 25,5 16,25 17 17,25 17,5 18,25 Total 86,25 Rata-rata 17,25 Tabel  2  menunjukkan  total  diameter zona  hambat  amoksisilin  (kontrol  positif) pada  lima  cawan  petri  sebesar  86,25  mm dengan rata-rata mencapai 17,25 mm.
Hasil pengukuran zona hambat akuades  steril  (kontrol  negatif)  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3.  Diameter  zona  hambat  akuades steril (kontrol -) Cawan Petri Diameter Vertikal (mm) Diameter Horizontal (mm) Diameter Zona Hambat (mm) I II III IV V 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Total 0 Rata-rata 0
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  akuades steril  menghasilkan  nilai  zona  hambat  0 mm  pada  lima  kali  pengulangan  yang artinya  tidak  menunjukkan  adanya  daya hambat. Perbandingan zona hambat antara ekstrak daun sembung rambat, amoksisilin (kontrol positif) dan akuades steril (kontrol negatif) dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Perbandingan zona hambat Cawa n Petri Ekstrak Daun Sembun g Rambat (mm) Amoksisili n (mm) Akuade s Steril (mm) I II
III IV
V 14 14 15 16 16 16,25 17 17,25 17,5 18,25 0 0 0 0 0 Total 75 86,25 0 Rata- rata 15 17,25 0
Tabel  4  menunjukkan  bahwa  terdapat zona  hambat  pada  ekstrak  daun  sembung rambat  di  setiap  pengulangan,  begitu  pula pada  amoksisilin  sebagai  kontrol  positif. Akan  tetapi,  pada  akuades  steril  tidak terdapat zona hambat.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini menggunakan uji eksperimental laboratorium untuk mengetahui  jika  ekstrak  daun  sembung rambat  ( Mikania  micrantha )  memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans . Penelitian ini dilakukan dengan cara membiakkan bakteri Streptococcus  mutans pada  media MHA  yang  telah  ada  pada  lima  cawan petri  disertai  pembentukan  tiga  buah sumur di setiap cawan  yang diberi ekstrak daun sembung rambat, amoksisilin sebagai kontrol  positif  dan  akuades  steril  sebagai kontrol  negatif.  Setelah  itu,  kelima  cawan petri  diinkubasi  dalam  inkubator  selama 1x24 jam pada suhu 37ºC.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang dilakukan  pada  lima  kali  pengulangan  di lima  cawan  petri  menunjukkan  adanya daya  hambat  di  sekitar  sumur  yang  diberi ekstrak  daun  sembung  rambat.  Rata-rata nilai diameter zona hambat yang dihasilkan  oleh  ektrak  daun  sembung
rambat  sebesar  15  mm.  Penilaian  zona hambat  digolongkan  berdasarkan  kategori diameter zona hambat di mana diameter ≤ 5  mm  berarti  kekuatan  daya  hambatnya lemah,  6-10  mm  berarti  kekuatan  daya hambatnya  sedang,  11-20  mm  berarti kekuatan  daya  hambatnya  kuat,  dan  ≥  21 mm  berarti  kekuatan  daya  hambatnya sangat kuat (Susanto dkk, 2012).
Berdasarkan  kategori  tersebut,  maka ekstrak  daun  sembung  rambat  termasuk dalam kategori kuat. Apabila dibandingkan dengan  zona  hambat  pada  amoksisilin, zona hambat ekstrak daun sembung rambat lebih  kecil,  sedangkan  pada  akuades  steril tidak menunjukkan adanya daya hambat.
Menurut  Jarvinen et.  al, 1993,  faktor yang  memengaruhi  terbentuknya  diameter zona  hambat  amoksisilin  yang  lebih  besar karena MIC amoksisilin terhadap Streptococcus  mutans telah  diketahui yakni  sebesar  32μg/mL,  sedangkan  untuk kemampuan  daun  sembung  rambat  belum diketahui  konsentrasi  paling  tepat  untuk menghambat  pertumbuhan Streptococcus mutans (Jarvinen  dkk,  1993).  Amoksisilin juga  menunjukkan  diameter  zona  hambat yang lebih besar karena memiliki spektrum yang  luas  dalam  menghambat  bakteri (Brooks  &  Carroll,  2008).  Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Sweeney et.  Al (2004),  amoksisilin  merupakan antibiotik  yang  paling  luas  dan  sering digunakan  serta  diresepkan  oleh  dokter gigi .
Akuades  steril  sebagai  kontrol  negatif tidak  menunjukkan  adanya  daya  hambat. Hal  tersebut  mengartikan bahwa tidak ada pengaruh akuades steril pada pembentukan zona  hambat  di  sekitar  sumur  yang  diberi ekstrak daun sembung  rambat  yang  dalam pembuatannya menggunakan pelarut akuades steril.
Daun  sembung  rambat  mengandung beberapa  senyawa  seperti  tanin,  steroid, alkaloid  dan  flavonoid.  Zat  aktif  yang dikandung  daun  sembung  rambat  yang berperan sebagai antibakteri yaitu flavonoid dan tannin (Haisya dkk, 2013).
Flavonoid merupakan senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada tanaman hijau. Flavonoid termasuk senyawa  fenolik  alam  yang  potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioktivitas sebagai obat. Manfaat flavonoid antara lain adalah untuk melindungi  struktur  sel,  meningkatkan efektivitas vitamin C, antiinflamasi, mencegah  keropos  tulang  dan  sebagai antibiotic  (Waji  &  Sugrani,  2009).  Di dalam flavonoid mengandung suatu senyawa fenol. Pertumbuhan  bakteri
Streptococcus  mutans dapat  terganggu disebabkan  oleh  senyawa  fenol.  Fenol merupakan  suatu  alkohol  yang  bersifat asam sehingga disebut juga asam karbolat. Fenol memiliki kemampuan untuk mendenaturasi protein dan merusak membran sel (Dwyana dkk, 2011).
Tanin merupakan senyawa aktif metabolit sekunder yang diketahui mempunyai beberapa khasiat yaitu sebagai antibakteri.  Tanin  yang  terkandung  dalam daun  sembung  rambat  merupakan  salah satu  antibakteri  yang  umumnya  terdapat pada  tanaman  obat  yang  digunakan  dalam pengobatan (Malangngi dkk, 2016).
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  sembung  rambat  memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans yaitu sebesar 75 mm dengan nilai rata-rata mencapai 15 mm.

## KESIMPULAN
Ekstrak daun sembung rambat memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan Streptococcus  mutans .  Zona
hambat  ekstrak  daun  sembung  rambat terhadap  bakteri Streptococcus  mutans sebesar 15 mm.

## SARAN
Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian lanjut  mengenai  uji  daya  hambat  ekstrak daun sembung rambat terhadap pertumbuhan Streptococcus  mutans pada berbagai  konsentrasi  kepekatan  ekstrak, sehingga dapat diketahui minimal inhibitor concentration ekstrak  terhadap  bakteri
Streptococcus mutans .
Diharapkan  ada  penelitian  lebih  lanjut tentang  zat  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak  daun  sembung  rambat  terhadap daya  hambat  pertumbuhan Streptococcus mutans .

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2013. Riset  kesehatan  dasar riskesdas 2013. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI; 2013.h.147-54. Brooks GF, Carroll KC. 2008.
Bakteriologi.  In:  Jawetz,  Melnick, Aldelberg. Mikrobiologi  kedokteran . Jakarta:  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC;.h. 369-74.
Dwyana  Z,  Johanes  Eva,  Saerong  W. 2011.  Uji  ekstrak  kasar  alga  merah eucheuma cottonii sebagai antibakteri terhadap bakteri pathogen. Jurnal Universitas Hassanudin . h. 4-6. Haisya, Nisa, Asfi,  RL  & Riris,  PS, 2013. Sembung rambat (Mikania
micrantha H.B.K.) as natural alternative  antibacterial  and  its study  against  bacterial  common  as causative  agent  in  cattle  mastitis  in indonesia . Tersedia dalam: http://cisak.perpika.kr/wp-
content/uploads/2013/07/2013- 73.pdf. Diakses 25 Agustus 2015 . Jarvinen H, Tenovuo J, Huovinen P. 1993.
In vitro susceptibility of streptococcus mutans to chlorhexidine and six other antimicrobial  agents. Journal  ASM ;
p. 1158-9.
Kidd  EAM,  Joyston  S.  Pencegahan  karies dengan  pengendalian  plak.  Dalam: Narlan  Sumawinata,  Safrida  Faruk.
Dasar-dasar  karies :  Penyakit  dan penanggulangannya.  Jakarta:  EGC; 1992. h. 141–54.
Malangngi  LP,  Sangi  MS,  Paendong  JJE. 2016.  Penentuan  kandungan  tannin dan  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak biji alpukat (persea Americana mill). [Online] Jurnal  MIPA  Unsrat 1  (1).
h. 5-10. Tersedia dalam http://ejournal.unsrat.ac.id/index.php /jmuo.  Diakses  pada  30  Oktober 2016.
Susanto,  D.  Sudrajat  dan  R.  Ruga.  2012.
Studi kandungan bahan aktif
tumbuhan  meranti  merah  (Shorea leprosula  Miq)  sebagai  sumber senyawa  antibakteri. Mulawarmnan Scientifie. 11(2): 181-190.
Sweeney  LC,  Dave  J,  Chambers  PA,
Heritage J. 2004. Antibiotic resistance in general practice. Journal of Antimicrobial Chemotherapy ; 4(53): 568.
Waji RA, Sugrani A. 2009. Makalah kimia organik bahan alam flavonoid (Quercetin). Program  S2  Kimia Fakultas  Matematika  dan Ilmu
Pengetahuan  Alam  Unhas.  2009.  h. 4-10.