## UJI DAYA HAMBAT PERASAN DAUN KIRINYUH
(Chromolaena odorata L.) PADA BAKTERI YANG

## DIISOLASI DARI PENDERITA JERAWAT
Armilah 1) , Mujahidah Basarang 2) , Tuty Widyanti 2) , Anita 2)
1) RSUD Mamuju
2) Politeknik Kesehatan Muhammadiyah Makassar Alamat Korespondensi: d19armilah@gmail.com
Artikel info Received Revised Accepted: Publish: : 27-12-2022 : 27-12-2022 : 28-12-2022 : 30-12-2022

## Abstrak
Kirinyuh (Chromolaena odorata) merupakan tanaman yang memiliki kandungan  senyawa  kimia  seperti  flavonoid,  saponin,  alkaloid, tannin,  steroid  dan  fenol  yang  berfungsi  sebagai  antibakteri.  Daun kirinyuh  dapat  digunakan  sebagai  antibakteri  untuk  menghambat pertumbuhan  Propionibacterium  acne  dan  Staphylococcus  aureus yang merupakan bakteri  penyebab jerawat. Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat perasan daun kirinyuh (Chromolaena  odorata)  terhadap  pertumbuhan  bakteri  yang diisolasi dari penderita jerawat. Penelitian ini menggunakan metode difusi  cakram.  Perasan  daun  kirinyuh  dibuat  menjadi  4  konsentrasi yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100%. Sebagai kontrol positif digunakan yaitu  tetrasiklin.  Dilakukan  pengujian  pada  Staphylococcus  aureus yang  diisolasi  dari  jerawat.  Hasil  pengujian  yang  telah  dilakukan dengan menggunakan perasan daun kirinyuh konsentrasi yaitu 25%, 50%,  75%  dan  100%  didapatkan  h as il pengukuran  diameter  zona hambat  di  sekitar  bakteri  uji  adalah  0  mm.  Berdasarkan  penelitian maka  dapat  disimpulkan  bahwa  perasan  daun  kirinyuh  tidak  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  yang  diisolasi  dari  penderita jerawat.
Kata Kunci: Daun kirinyuh, Chromolaena odorata, metode cakram, kirby bauer, Staphylococcus aureus

## Abstract
Siam weed (Chromolaena odorata) is a plant that contains chemical compounds such as flavonoids, saponins, alkaloids, tannins, steroids and  phenols  which  function  as  antibacterials.  So  that  siam  weed leaves  can  be  used  as  an  antibacterial  to  inhibit  the  growth  of Propionibacterium  acne  and  Staphylococcus  aureus  which  are bacteria that cause acne. This study aims to determine the inhibition of  siam  weed  leaf  extract  (Chromolaena  odorata)  on  the  growth  of bacteria  isolated  from  acne  sufferers.  This  study  used  the  disc diffusion  method.  siam  weed  leaf  extract  was  made  into  4 concentrations,  namely  25%,  50%,  75%  and  100%.  As  a  positive control,  tetracycline  was  used.  Then  testing  was  carried  out  on Staphylococcus  aureus  isolated  from  acne.  The  results  of  tests  that have been carried out using siam weed leaf extract concentrations of 25%,  50%,  75%  and  100%  obtained  the  results  of  measuring  the diameter  of  the  inhibition  zone  around  the  test  bacteria  was  0  mm. Based  on the  research,  it  can  be  concluded  that  the  extract  of  siam weed leaves cannot inhibit the growth of bacteria isolated from acne sufferers.
Keywords:  siam  weed  leaf  extract,  Chromolaena  odorata,  kirby bauer, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Jerawat (Bahasa Latin: Acne vulgaris )  merupakan  suatu  penyakit radang  pada  kulit  bagian pilosebaseus. Acne  vulgaris yang  ditandai  dengan adanya  komedo,  pus,  papula  dan  skars, sering  terjadi  pada  usia  remaja  dan dewasa. Jerawat sering muncul pada kulit wajah,  leher,  dada  dan  punggung.
Meskipun  tidak  berdampak  fatal  tetapi dapat  membuat  risau  terutama  pada kalangan remaja karena dapat menurunkan  tingkat  kepercayaan  diri terutama  yang  peduli  pada  penampilan (Saragih, 2016). Timbulnya jerawat disebabkan beberapa  faktor  antara  lain  seperti  faktor genetik, iklim, hormon, makanan, kondisi kulit, infeksi bakteri, pekerjaan, penggunaan  kosmetik  dan  bahan  kimia lainnya  (Carolia  dan  Noventi,  2016). Jerawat muncul pada saat kelenjar minyak pada  kulit  memproduksi  terlalu  aktif minyak  sehingga  timbunan  lemak  yang berlebihan  membuat  pori-pori  kulit  akan tersumbat, timbunan lemak yang bercampur  dengan  keringat  debu  dan kotoran  lain  menyebabkan  munculnya bintik  hitam  komedo  jika  komedo terinfeksi  bakteri  maka  kulit  akan  terjadi peradangan  yang  dikenal  sebagai  jerawat (Handayani,  2015). Sebanyak  93  orang pasien yang mengalami jerawat di Rumah Sakit Ciptomangkusomo mengalami infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus epidermidis (50.5%), Propionibacterium  acnes (11.0%) dan Staphylococcus  aureus (7.7%)  (Sitohang, Fathan, Effendi, & Wahid, 2019) Pengobatan jerawat dapat dilakukan  dengan  mengkonsumsi  atau menggunakan  antibiotik,  namun  dapat memberikan efek samping, yaitu resistensi bakteri terhadap antibiotik. Dari
10 orang pasien berjerawat yang terinfeksi Staphylococcus aureus mengalami  resisten  terhadap  klindamisin (14.4%) dan eritromisin (28.6%)
(Sitohang,  Fathan,  Effendi,  &  Wahid,
2019).  Oleh  karena  itu  dibutuhkan pengobatan  alternatif  yaitu  dari  tanaman yang  mengandung  antibakteri  (Meilina dan  Hasanah  2018).  Salah  satunya  yaitu adalah  dengan  menggunakan  tanaman daun kirinyuh ( Chromolaena odorata L. ).
Daun kirinyuh ( Chromolaena odorata L.)  memiliki  senyawa  metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antibakteri  seperti  steroid,  tanin,  saponin, alkaloid  dan  flavonoid  ( Sirinthipaporn, dan  Jiraungkoorskul,  2017) .  Senyawa aktif ini mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme seperti Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli, dan Candida  albicans (Stanley,  dkk., 2014).  Menurut  penelitian  yang  telah dilakukan oleh Yutika, Rusli dan Ramadhan  (2015),  bahwa  ekstrak  etanol daun kirinyuh dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  penyebab  gangren. Konsentrasi  30%  ekstrak  etanol  daun kirinyuh ( Chromolaena odorata ) menunjukkan  aktivitas  daya  hambat paling baik, yaitu 8 mm. Di Indonesia, daun krinyuh digunakan sebagai obat tradisional. Menurut Charaborty (2010) dalam (Stanley,  dkk.,  2014)  rebusan  daun  dan batang  daun  krinyuh  efektif  mengobati luka yang di sebabkan oleh Propianibacterium  acne s.  Selain  itu  daun muda  tanaman  krinyuh  sering  ditumbuk kemudian cairan yang dihasilkan digunakan  sebagai  obat  luka  pada  kulit.
(Chakraborty, dkk., 2016). METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  tabung  reaksi,  rak tabung,  labu  Erlenmeyer,  autoklaf,  oven, pinset,  lidi  kapas  steril,  cawan  petri, bunsen,  pipet  tetes,  batang  pengaduk, pipet  ukur,  kertas  saring,  inkubator,  kain kasa, jangka sorong, neraca analitik.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  daun kirinyuh ( Chromolaena odorata )
konsentrasi 25% 50% 75% dan 100%, pus jerawat,  media  NA  ( Nutrient A agar )
media  MSA (Mannitol  Salt  Agar) media MHA ( Muller Hinton Agar ), BHIB ( Brain Heart  Infosion  Broth ),  NaCl  0,9%, akuades, larutan McFarland . Prosedur Kerja Pembuatan Perasan Daun Kirinyuh Daun kirinyuh digerus menggunakan  lumpang  kemudian  diperas dan disaring, sehingga didapatkan perasan daun kirinyuh konsentrasi 100%. Selanjutnya air perasan ini dibuat menjadi konsentrasi  25%,  50%,  dan  75%  dengan penambahan akuades steril dengan volume berbeda sebagai pelarut. Pembuatan konsentrasi kirinyuh menggunakan rumus berikut:
V 1 x N 1 = V 2 x N 2
Keterangan: V 1 :  Volume  perasan  daun  kirinyuh  yang akan diambil untuk diencerkan
V 2 :  Volume  perasan  daun  kirinyuh  yang akan dibuat
N 1 :  Konsentrasi  perasan  daun  kirinyuh yang akan diencerkan
N 2 :  Konsentrasi  perasan  daun  kirinyuh yang akan dibuat
(Kunsah, dkk., 2018) Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  dari Penderita Jerawat

## Pengumpulan sampel
Pus  dari  jerawat  yang  ada  pada muka  pasien  diambil  secara  aseptik menggunakan lidi kapas steril. Lidi kapas dicelup  ke  dalam  tabung  berisi  media BHIB (Brain-heart  Infosion  Broth) . Tabung ditutup rapat dan diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam.
Isolasi pada media MSA Setelah inkubasi, sampel dari media BHIB  diinokulasikan  menggunakan  ose steril ke dalam media MSA menggunakan teknik  gores  T  secara  hati-hati.  Media diinkubasi  pada  suhu  37  ºC  selama  24 jam. Diamati secara makroskopis karakteristik  morfologi  koloni  bakteri pada  media  MSA (Manitol  Salt  Agar) meliputi  bentuk  koloni,  warna  koloni, tekstur  koloni,  tepian  koloni,  dan  elevasi
koloni.  Koloni  yang  dicurigai  sebagai S. aureus dibuat  apusan  dan  selanjutnya diwarnai  menggunakan  pewarnaan  Gram. Lakukan  pengamatan  mikroskopis  untuk melihat  warna,  bentuk  dan  susunan bakteri.

## Uji katalase dan koagulase
Koloni  yang  dicurigai  tersebut dilakukan uji katalase dengan meneteskan H 2 O 2 3%  sebanyak  1  tetes  di  atas  kaca objek.  Dipijarkan  ose  bulat  kemudian didinginkan.  Selanjutnya  diambil  1  ose koloni  bakteri  dari  media  NA (Natrium Agar) secara  steril,  lalu  dicampurkan koloni bakteri ke H 2 O 2 3%. Dilakukan uji koagulase  dengan  cara  diteteskan  1  tetes NaCl 0,9%. Selanjutnya diteteskan plasma  sebanyak  1  tetes  ke  NaCl  0,9%.
Dipijarkan  ose  dan  didinginkan  kembali. Setelah  itu  diambil  1  ose  koloni  bakteri dari  media  secara  steril,  dicampurkan koloni  bakteri  ke  plasma  (Departemen Kesehatan, 2000).
Uji  Daya  Hambat  Perasan  Daun Kirinyuh
S.  aureus yang  telah  diidentifikasi dijadikan  bakteri  uji.  Bakteri  dibuat suspensi  dengan  tingkat  kekeruhan  sesuai dengan  standar  MacFarland.  Diambil suspensi bakteri lalu di sebar dipermukaan  media Muller  Hinton  Agar (MHA).  Masing-masing  cakram  kertas direndam ke dalam kontrol positif, kontrol negatif  dan  perasan  daun  kirinyuh konsentrasi  25%,  50%,  75%,  dan  100%. Diletakkan  masing-masing  kertas  cakram kontrol  positif,  kontrol  negatif  dan perasan  daun  kirinyuh  konsentrasi  25%, 50%,  75%,  dan  100%  pada  permukaan media  MHA  dengan  memberi  jarak  pada setiap  perlakuan.  Diulangi  pada  dua media  MHA  berbeda.  Diinkubasi  selama 1x24 jam suhu 37 0 c. Jika terbentuk daerah bening di sekitar kertas cakram menunjukkan daerah zona hambat. Diameter zona hambatan diukur menggunakan  jangka  sorong  dari  ujung yang  satu  ke  ujung  yang  lain  secara horisontal  dan  vertikal  (Lay,  1994).  Dari data ini dilakukan analisis secara
deskriptif dan dikelompokkan berdasarkan pengelompokan menurut Morales, dkk. (2003): 21-30 mm : +++ 11-20 mm : ++ 6-10 mm : + 0 : tidak menghambat

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini diawali dengan isolasi  bakteri  pada  jerawat,  pus  dari jerawat.  Sampel  tersebut  ditanam  pada media BHIB ( Brain Heart Infusion Broth ) lalu  diinkubasi  selama  24  jam.  Biakan dari  media  BHIB  diinokulasi  ke  media MSA (Manitol  Salt  Agar) dan  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37ºC.  Koloni yang  tumbuh  pada  media  MSA  berwarna kuning,  berbentuk  bulat,  berukuran  kecil dan  media  berubah  dari  merah  menjadi kuning  yang  merupakan  ciri  koloni bakteri S. aureus (gambar 1). Perubahan  warna  ini  disebabkan oleh kemampuan S. aureus memfermentasi  mannitol  pada  media MSA  yang  menyebabkan  pH  media menjadi asam. Perubahan pH ini menyebabkan  indikator  warna phenol  red pada  media  menjadi  kuning.    (Cowan  & Smith, 2018).
Gambar 1. Koloni Bakteri yang Tumbuh pada Media MSA Koloni  yang  tumbuh  pada  media MSA, dilanjutkan pengamatan mikroskopik,  koloni  di  warnai  dengan metode pewarnaan gram, pewarnaan gram bertujuan  untuk  mengetahui  sifat  gram bakteri
dan morfologi bakteri.
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan ditemukan  bakteri  gram  positif  berwarna ungu dengan bentuk kokus dan bergerombol.  Koloni  bakteri  ini  diuji katalase dan koagulase (gambar 2).
Gambar 2. Hasil Uji Katalase Positif (A), dan Hasil Uji Koagulase Positif (B) Uji  katalase  menunjukkan  hasil positif  yaitu  terbentuknya  gelembung setelah  ditambahkan  hidrogen  peroksida. Hal ini menandakan bahwa koloni bakteri memiliki  enzim  katalase  yang  dapat mendekomposisi hidrogen peroksida menjadi  oksigen  dan  air  (Bisen,  Debnath,
& Prasad, 2012). Katalase positif merupakan  ciri  genus Staphylococcus (Peterson, 2020).
Uji  koagulase  merupakan  uji  yang umum  digunakan  untuk  membedakan S. aureus dan Staphylococcus spp. S. aureus positif pada uji koagulase sedang Staphylococcus  spp. negatif.  (Peterson,
2020).  Koloni  bakteri  yang  ditambahkan plasma  akan  membentuk  gumpalan- gumpalan  kecil  menyerupai  butiran  pasir yang menunjukkan adanya aglutinasi. Hal ini  disebabkan S.  aureus memiliki  enzim koagulase  yang  dapat  menggumpalkan plasma (Bisen, Debnath, & Prasad, 2012). S. aureus yang  telah  diidentifikasi digunakan  sebagai  bakteri  uji  untuk mengetahui  kemampuan  perasan  daun kirinyuh  sebagai  antibakteri.  Hasil  uji daya  hambat  perasan  daun  kirinyuh konsentrasi  25%,  50%,  75%  dan  100% ditunjukkan pada tabel 1 berikut.
A
B
Tabel  1.  Rata-rata  Diameter  Zona Hambat Perasan Daun Kirinyuh Konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100% Perlakuan Rata-rata Zona Hambat (mm) K (+) 20.5 K (-) 0 25% 0 50% 0 75% 0 100% 0
Berdasarkan  tabel  1  di  atas,  bahwa zona  hambat  terlihat  pada  kontrol  positif
(tetrasiklin)  sebesar  20,5  mm.  Namun zona hambat disekitar kertas cakram yang mengandung perasan daun kirinyuh konsentrasi  25%,  50%,  75%,  dan  100% tidak  terbentuk.  Hal  ini  terlihat  pada gambar 3 berikut.
Gambar 3. Uji Daya Hambat Perasan Daun Kirinyuh Konsentrasi 25%, 50%,
75%, dan 100%
Hasil yang didapatkan pada penelitian ini berbeda dari hasil penelitian sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa hasil uji fitokimia daun kirinyuh mengandung senyawa flavonoid, saponin, tannin, dan steroid yang memiliki potensi antibakteri (Vital & Rivera, 2009). Hal ini sejalan dengan hasil penelitian menggunakan ekstrak etanol daun
kirinyuh menunjukkan 30% ekstrak etanol
daun kirinyuh dapat menghambat pertumbuhan S.  aureus sebesar  8  mm (Yutika,  Rusli  dan  Ramadhan,  2015). Penelitian lain yang menggunakan ekstrak etanol daun kirinyuh fraksi etil asetat 6%, 8%,  dan  10%  yang  dibuat  dalam  bentuk krim  dapat  menghambat S.  aureus berturut-turut  sebesar  12.52  mm,  13.90 mm, dan 12.42 mm. Hal ini menunjukkan bahwa  untuk  mendapatkan  senyawa  aktif yang  digunakan  sebagai  antibakteri  dapat diperoleh  melalui  prosedur  ekstraksi. Proses  ini  akan  memisahan  bahan  dari campurannya dengan menggunakan pelarut  yang  sesuai  (Mukhriani,  2014). Sehingga  perasan  daun  kirinyuh  tidak efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan S. aureus .

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  penelitian  maka  dapat disimpulkan bahwa perasan daun kirinyuh tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  yang  diisolasi  dari  penderita jerawat.
Saran  untuk  peneliti  selanjutnya agar  daun    kirinyuh  ( Chromolaena odorata L.)  dibuat  dalam  bentuk  infus daun  kirinyuh  ( Chromolaena  odorata L.)
untuk  mendapatkan  hasil  daya  hambat yang efektif. DAFTAR PUSTAKA Bisen, P. S., Debnath, M., & Prasad, G. B. (2012). Microbe:  Concepts  and Applications,  First  Edition. New Jersey: John Wiley & Sons, Inc. Carolia, N. & Noventi, W. (2016). Potensi Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  (Piper betle. L) sebagai Alternatif Terapi Acne vulgaris’, Majority, 5. Chakraborty,  A.K.,  Rambhade,  S.,  & Patil,  U.K.  (2016).  Chromolaena odorata (L.) : An Overview. Journal  of  Pharmacy Research , 573-576. Cowan,  M.  K.,  &  Smith,  H.  (2018). Mycrobiology: A Systems Approach. New  York:  Mc  Graw Hill Education. Dewi,  H.  E.,  Rusli,  R.,  &  Ayu,  W.  D. (2019). Formulasi Krim
Antibakteri  Fraksi  Etil  Asetat
Daun  Kirinyuh  (Chromolaena odorata). Jurnal Sains dan Kesehatan, 2 (2), 100-106. Departemen  Kesehatan.  (2000).  Standard Operating  Procedures  (SOP)  in Microbiology. Jakarta: Kementerian Kesehatan. Handayani , V. (2015). Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Dau  Kersen  Muntingia calbural.) Terhadap Bakteri Penyebab Jerawat. Jurnal fitofarmaka  indonesia.  2(1).  94- 96 . Kunsah, B., dkk. (2018). Modul Praktikum  Reagensia.  Surabaya: Universitas Muhammadiyah Surabaya. Lay,  B.  W.  (1994). Analisis  Mikroba  di
Laboratorium .  Jakarta:  PT.  Raja Grafindo Persada. Meilina.  N.  E.,  &  Aliya  Nur  Hasanah. (2018). Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Kulit  Buah  Manggis (Garnicia mangostana L) Terhadap Bakteri Penyebab Jerawat . Jurnal Farmaka Suplemen 16 (2). 322-326. Mukriani.  (2014).  Ekstraksi,  Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa  Aktif.  Jurnal  Kesehatan 7 (2). 361-367.
Peterson,  E.  M.  (2020).  Staphylococcus, Micrococcus, and Other Catalase- Positive Cocci. In L. M. Maza, M.
T. Pezzlo, C. E. Bittencourt, & E. M.  Peterson, Color  Atlas  of Medical Bacteriology Third Edition (pp.  1-10).  Washington, DC: ASM Press.
Saragih,  D  .F.,  Hendri  Opod,  &  Cicilia Pali.  (2016). Hubungan  Tingkat
Kepercayaan  Diri  dan  Jerawat (Acne Vulgaris) pada Siswa Siswi
Kelas  XII  di  SMA  Negeri  1
Manado . Jurnal e-Biomedik. 4(1)
Sirinthipaporn  A,  &  Jiraungkoorskul  W. (2017).  Wound  Healing  Property Review of Siam Weed, Chromolaena odorata . Pharmacogn Rev. Jan- Jun;11(21):35-38. doi: 10.4103/phrev.phrev_53_16. PMID: 28503052; PMCID: PMC5414454. Yutika, M., Rusli R., & Ramadhan, A. M. (2015). Aktivitas  Antibateri  Daun Kirinyuh  (Chromolaena  odorata) terhadap Bakteri Ganren . Prosiding Seminar Nasional Kefarmasian Ke-2 Samarinda. 75- 81. Vital,  P.  G.,  &  Rivera,  W.  L.  (2009). Antimicrobial activity and cytotoxicity of Chromolaena odorata (L. f.) King and Robinson and  Uncaria  perrottetii  (A.  Rich) Merr. extracts. Journal of Medicinal  Plants  Research,  3 (7), 511-518. Sitohang, I. B., Fathan, H., Effendi, E., & Wahid, M. (2019). The susceptibility of pathogens associated  with  acne  vulgaris  to antibiotics. Medical  Journal  of
Indonesia, 28 (1), 21-26. Vital,  P.  G.,  &  Rivera,  W.  L.  (2009). Antimicrobial activity and cytotoxicity of Chromolaena odorata (L. f.) King and Robinson and  Uncaria  perrottetii  (A.  Rich) Merr. extracts. Journal of Medicinal  Plants  Research,  3 (7), 511-518.