## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI EKSTRAK DAUN PRASMAN
( Eupatorium triplinerve Vahl.) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Pseudomonas aeruginosa
Dewi Wangkanusa 1) , Widya Astuty Lolo 1) , Defny Silvia Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Prasman  (Eupatorium  triplinerve  Vahl.)  Is  One  of  the  plants  from  Genus  Asteraceae  which can be used as antibacterial. Empirically, prasman leaf decoction oftenly used to cure diseases such as urinary laxative, coughing, relief of fever, chronic diarrhea and thrush. The purpose of this study was  to  determine  the  antibacterial  activity  of  leaf  extract  of  plant  prasman  against  Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa bacteria. The extraction method in this study using maceration method  with  95%  of  ethanol  and  antibacterial  activity  was  test  using  agar  diffusion  method  with different concentration of 50, 75 and 100%, respectively. The result showed that the prasman leaves have antibacterial activity.
Keywords : Prasman Plants (Eupatorium triplinerve Vahl.), Antibacterial Activity, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeuruginosa

## ABSTRAK
Prasman (Eupatorium triplinerve Vahl. ) merupakan salah satu tanaman yang dapat  dijadikan sebagai  antibakteri    dari  suku Asteraceae .  Secara  empiris  rebusan  daun  prasman  sering    digunakan untuk  penyembuhan  penyakit  seperti    peluruh  kencing,  obat  batuk,  pereda  demam,  diare  kronis  dan sariawan.  Tujuan  penelitian  ini  ialah untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak    daun  prasman terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa. Metode  ekstraksi  dalam penelitian  ini  menggunakan  metode  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut  95%  dan  dilakukan pengujian  antibakteri  dengan  metode  difusi  agar  dengan  perbedaan  konsentrasi  50,  75  dan  100%. Hasil penelitian menunjukan bahwa daun prasman memiliki aktifitas antibakteri.
Kata  Kunci :  Tanaman  Prasman    ( Eupatorium  triplinerve), Aktivitas  Antibakteri, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeuruginosa

## PENDAHULUAN
Kesehatan  adalah  keadaan  sehat, baik secara fisik, mental, spiritual maupun sosial  yang  memungkinkan  setiap  orang untuk  hidup  produktif  secara  sosial  dan ekonomis (Anonim, 2009). Penyakit infeksi  merupakan  penyakit  yang  umum terjadi  pada  manusia  disebabkan  karena bakteri, virus dan jamur.
Salah  satu  tanaman  yang  dapat dijadikan  sebagai  antibakteri    yaitu tanaman  Prasman (Eupatorium  triplinerve Vahl. ) dari  suku  Asteraceae  (Darlimartha, 1999).    Menurut  penelitian  Munte  (2015), daun prasman terdeteksi memiliki kandungan  senyawa  fenolik,  flavonoid, alkaloid  dan  tanin  yang  diduga  memiliki efek  penghambat  terhadap  pertumbuhan bakteri.    Oleh  karena  itu  dilakukan pengujian  antibakteri  dari  ekstrak  daun prasman  ( Eupatorium    triplinerve Vahl. ) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .

## Metodologi Penelitian Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  alat-alat  gelas  ( pyrex) timbangan analitik ( A&D company limited) ,  toples  kaca,  blender,  aluminium foil, autoklaf (Automated Labware
Positioners) inkubator (Incucell) ,  kawat ose,  lampu  spiritus, rotary  evaporator (Eyla  N-1000) ,oven  ( Memmerf), kertas saring,  mikro  pipet,  mistar  berkala, laminar  air  flow ( N-Biotek) ,  pinset, gunting,  kapas,  ayakan  65  mesh, tissue , label,  sarung  tangan,  kamera,    masker, lumpang dan alu  serta alat tulis menulis.
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  ialah  daun  prasman ( Eupatorium  triplinerve Vahl .) ,  etanol 95%, Nutrien Agar, Ciprofloxacin 500 mg,
aquades, alkohol 70%, H 2 SO 4 , BaCl 2 .2H 2 O, biakan bakteri Staphylococus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.

## PROSEDUR PENELITIAN Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  daun  prasman  yang diambil di  Jalan Kampus Universitas Sam Ratulangi,  Kelurahan  Kleak  Kecamatan Malalayang Manado. Bagian yang digunakan adalah daun. Identifikasi Tanaman
Identifikasi tanaman dilakukan dilaboratorium  Taksonomo  Tumbuhan, Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Persiapan Sampel
Daun  prasman  di  cuci  pada  air mengalir  kemudian  di  rajang  menjadi bagian  yang  lebih  kecil,  lalu  dikeringkan dalam  oven  dengan  suhu  40 0 C.  Setelah kering  daun  prasman  dihaluskan  dengan blender  dan  diayak  dengan  ayakan  65 mesh sehingga berbentuk serbuk.
Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan  cara  maserasi  yaitu  sebanyak  150 gram  serbuk  simplisia  daun  prasman dimasukkan  dalam  toples  kaca  lalu direndam  dalam  pelarut  polar  (Etanol 95%)  sebanyak  750  ml,  dan  ditutup dengan aluminium  foil dan  dibiarkan selama  4  hari  sambil  diaduk  sekali  setiap hari,  lalu  disaring  dengan  kertas  saring. Kemudian  dilakukan  proses  remaserasi dengan  etanol  95%  sebanyak  650  ml, ditutup  dengan aluminium  foil dan dibiarkan  selama  2  hari  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  2  hari,  sampel  tersebut disaring sehingga menghasilkan filtrat lalu dievaporasi menggunakan rotary
evaporator .  Selanjutnya  ekstrak  diuapkan menggunakan waterbath sehingga diperoleh ekstrak kental daun prasman.
Pembuatan Larutan Standar Kekeruhan (Larutan Mc. Farland) Larutan  H 2 SO 4 0,36  N  sebanyak 9,5  ml  dicampurkan  dengan  BaCl 2 2H 2 O 1,175  sebanyak  0,5  ml  dalam  tabung reaksi.  Tabung  reaksi  dikocok  sampai terbentuk  larutan  keruh.  Kekeruhan  ini dipakai  sebagai  standar  kekeruhan  bakteri (Lay, 1995).
Pembuatan  Larutan  Kontrol          Positif dan Kontrol Negatif
Larutan  kontrol  positif  dibuat  dari sediaan  obat  tablet  Ciprofloxacin  500  mg, dengan  cara  satu  tablet  Ciprofloxacin digerus.  Setelah  itu  ditimbang  65  mg  dan dilarutkan dalam 50 ml aquades, selanjutnya  dibuat  dengan  cara  diambil  1 ml  larutan  dan  ditambahkan  aquades hingga  10  ml  untuk  memperoleh  larutan ciprofloxacin  5µg/50µl.  Larutan    ini digunakan  sebagai  kontrol  positif    pada pengujian. Larutan kontrol negatif digunakan aquades.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat larutan uji secara berturut-turut    50%,  75%,  dan  100%  b/v dengan cara ditimbang 0,50 g, 0,75  g, 1  g ekstrak  etanol  daun  prasman  kemudian masing-masing  dilarutkan  dalam  aquades hingga volume 1 ml.
Pembuatan Media a. Media Agar Miring Ditimbang  Nutrient  Agar  (NA) sebanyak  0,28  g  dan  dimasukkan  dalam erlenmeyer  kemudian dilarutkan dalam 10 ml  aquades  (28  g/1000ml).  Setelah  itu dihomogenkan    dengan stirrer diatas penangas air sampai mendidih. Selanjutnya    Sebanyak  5  ml  dituangkan
masing-masing pada 2 tabung reaksi  steril dan ditutup dengan aluminium foil. Media tersebut  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  121 o C  selama  15  menit,  kemudian dibiarkan  pada  suhu  ruangan  selama  ±  30 menit  sampai  media  memadat  pada kemiringan  30 o .  Media  Agar  miring digunakan  untuk  inokulasi  bakteri  (Lay, 1994).

## b. Media Dasar
Media  dasar  dibuat  dengan  cara ditimbang Nutrient Agar (NA) sebanyak 7 g,  lalu  dimasukan  dalam  erlenmeyer  dan dilarutkan dalam 250 ml aquades (28g/1000 ml). Setelah itu media dihomogenkan dengan stirrer diatas penangas  air  sampai  mendidih.  Media- media yang sudah homogen ini disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit,  kemudian didinginkan sampai suhu ± 45-50 o C. Media dasar  dalam pembuatan media  pengujian  sebagai  Sebagai  lapisan dasar.

## c. Media Pembenihan
Media  pembenihan  dibuat  dengan cara    yang  sama  ditimbang  7  g  Nutrien Agar (NA), lalu dimasukan dalam erlenmeyer  dan  dilarutkan  dalam  250  ml aquades (28 g/1000 ml). Setelah itu, media dihomogenkan dengan stirrer diatas penangas  air  sampai  mendidih.  Media- media yang sudah homogen ini disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit,  kemudian didinginkan sampai suhu ±  45-50 o C.  Media  pembenihan  digunakan dalam pembuatan media pengujian sebagai lapisan kedua.

## Inokulasi  Bakteri  pada  Media  Agar Miring
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum ose steril, lalu ditanamkan pada media agar miring dengan cara menggores. Selanjutnya  diinkubasi  dalam  inkubator
pada suhu 37 o C selama 24 jam. Perlakuan yang sama dilakukan jenis bakteri uji yang lain (Siregar, 2009).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikan  kedalam  tabung  yang  berisi 2 ml larutan NaCl 0,9% hingga di peroleh kekeruhan  yang  sama  dengan  standar kekeruhan  larutan  Mc.  Farland.  Perlakuan yang sama dilakukan jenis bakteri uji yang lain (Davis and Stout, 1971).

## Pembuatan Media Pengujian
Media  nutrien  agar  (NA)  dituang kedalam  cawan  petri  sebanyak  65  ml  dan dibiarkan hingga memadat. Setelah memadat  pada  permukaan  lapisan  dasar diletakkan 5 pecadang dan diatur sedemikian  rupa  sehingga  terdapat  daerah yang cukup untuk mengamati zona hambat yang terjadi. Setelah itu, dituangkan 75 ml campuran suspensi dan media pembenihan ke  dalam  tiap  cawan  petri  sebagai  lapisan kedua. Selanjutnya  cawan petri diputar  ± 60 0 sebanyak  3x  sehingga  membentuk lapisan  yang  rata  dan  dibiarkan  memadat. Selanjutnya,  pencadang  diangkat  secara aseptik dari cawan petri, sehingga akhirnya terbentuklah sumur-sumur.

## Uji Aktivitas Antibakteri secara In-vitro
Larutan  uji  ekstrak  etanol  daun prasman  dengan  berbagai  konsentrasi (50%,  75%,  dan  100%),  aquades  sebagai kontrol  negatif,  larutan  Ciprofloxacin  5 μg/50μl  sebagai  kontrol  positif,  masing- masing  diteteskan  pada  sumur  yang
berbeda sebanyak 50 μl. Kemudian cawan petri diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 1x24 jam.

## Pengamatan Zona Hambat
Pengamatan dilakukan setelah 1x24 jam,    masa  inkubasi  dengan  3  kali pengulangan untuk masing-masing bakteri. Diamati    zona  hambat  yang  terbentuk disekitar lubang kemudian diukur diameter zona hambat dalam satuan milimeter (mm) secara  horizontal  dan  vertikal  dengan menggunakan mistar berskala.
Teknik  pengumpulan  data  dan  analisis data
Pengumpulan data dilakukan dengan  cara  mengukur  diameter  zona bening  dari  masing-masing  konsentrasi setelah 1x24 jam masa inkubasi. Diameter diukur    secara  horizontal  dan  vertikal. Kedua  diameter  tersebut  ditambahkan  dan dihitung nilai rata-ratanya sehingga didapatkan  nilai  diameter  zona  hambat. Data  yang ada kemudian dianalisa dengan menggunakan  metode  analisis  ragam  satu arah (One Way Anova) .

## Hasil dan Pembahasan Hasil ekstraksi
Tanaman  daun  prasman  diekstraksi dengan  menggunakan  metode  maserasi dengan  menggunakan  pelarut  etanol  95% sehingga diperoleh ekstrak kental sebanyak  3,9  g  dengan  hasil  rendemen ekstrak  sebanyak  2,6%    berwarna  hijau kehitaman.
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Prasman (Eupatorium triplinerve Vahl. ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel 2. Hasil Penggolongan Kekuatan Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Prasman (Eupatorium  triplinerve Vahl. ) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus menurut Davis and Stout (1971).
Tabel  3.  Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Prasman ( Eupatorium triplinerve Vahl. ) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.
Perlakuan Diameter Zona Hambat  (mm)
Rata – rata I II III Kontrol (-) 0 0 0 0 Kontrol (+) 16,50 20,50 16,00 17,83 P1 3,50 3,00 3,50 3,00 P2 5,00 4,50 4,00 4,50 P3 5,00 4,00 5,00 4,67 Perlakuan Rata-rata diameter zona hambat Ketegori Kekuatan Daya Antibakteri Kontrol (-) 0 Lemah Kontrol (+) 17,83 Kuat P1 3,00 Lemah P2 4,50 Lemah P3 4,67 Lemah Perlakuan
Diameter Zona Hambat (mm)
Rata-rata I II III Kontrol (-) 0 0 0 0 Kontrol (+) 21,00 17,50 17,00 18,50 P1 4,50 5,00 4,50 4,67 P2 5,00 4,50 5,50 5,00 P3 5,50 8,00 6,00 6,50
Tabel 4. Hasil Penggolongan Kekuatan Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Prasman (Eupatorium  triplinerve Vahl. ) terhadap  bakteri Pseudomonas  aeruginosa menurut Davis and Stout (1971).
Keterangan : Kontrol (+) : Ciprofloxacin Kontrol (-)  : Aquades Steril P1: Konsentrasi 50% P2: Konsentrasi 75% P3: Konsentrasi 100%

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  dilakukan  proses ekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi  karena  memiliki  keunggulan yaitu cara pengerjaan yang cepat, peralatan yang  digunakan  sederhana,  relatif  mudah dan  murah.  Selain  itu  juga  dipilih berdasarkan  sifat  senyawa  aktif  yang bersifat  tidak  tahan  panas.  dimana  prinsip ekstraksi  yaitu  dengan  memisahkan  dua komponen atau lebih berdasarkan perbedaan  kelarutan  komponen  tersebut dalam pelarut yang digunakan (Suryanto,2012).
Uji  aktifitas  antibakteri  ekstrak etanol daun prasman (Eupatorium triplinerve Vahl ) terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa menggunakan  metode  difusi agar.  Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah ekstrak daun prasman dan diencerkan menjadi tiga seri konsentrasi  yaitu  50%,  75%  dan  100%, yang selanjutnya diujikan terhadap
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosa.
Aktivitas  antibakteri  ditunjukkan  dengan pengukuran  zona  hambat  yang  terbentuk setelah diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam.
Kontrol  negatif  yang  digunakan ialah  aquades  steril  dan  hasil  yang diperoleh tidak memberikan efek antibakteri  pada  kedua  bakteri  uji  yang terlihat  dengan  tidak  terbentuknya  zona hambat. Pada kontrol positif hasil menunjukan  terbentuknya  zona  bening pada cawan petri dan hasil yang diperoleh lebih  besar  dari  kelima  seri  konsentrasi dimana  kontrol  positif  yang  digunakan adalah ciprofloxacin 5µg/50µL.
Ciprofloxacin  memiliki  efek  antibakteri yang besar (spektrum luas). Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  diameter zona hambat yang dibentuk oleh Ciprofloxacin  lebih  besar  pada  bakteri Gram positif Staphylococcus aureus (17,83  mm)  dibandingkan  bakteri  Gram
Perlakuan Rata-rata diameter zona hambat Ketegori Kekuatan Daya Antibakteri Kontrol (-) 0 Lemah Kontrol (+) 18,50 Kuat P1 4,67 Lemah P2 5,00 Sedang P3 6,50 Sedang
negatif Pseudomonas  aeruginosa (18,50 mm). Menurut kategori daya hambat CSLI (2011) yaitu bakteri Staphylococcus aureus dan bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki diameter zona hambat 16-20 mm dimana termasuk dalam kategori Intermediately  susceptible (I) yang  berarti  bakteri  dapat  dihambat  tapi dengan daya hambat yang lemah. Mekanisme  kerjanya  dengan  menghambat topoisomerase  II  (=  DNA  girase)  dan topoisomerase  VI  pada  bakteri.  Enzim topoisomerase  II  berfungsi  menimbulkan relaksasi  dan  DNA  yang  mengalami positive supercoiling pada waktu transkrip dalam proses replikasi DNA (Pratiwi,2008).  Pada  ektrak  etanol  daun prasman untuk  masing-masing bakteri   uji efek  antibakteri  yang  paling  baik  terlihat pada konsentrasi 100% untuk daya hambat bakteri    ekstrak    dimana  pada  konsentrasi 100%  memiliki  zona  hambat  yang  besar seperti pada bakteri Staphylococcus aureus yaitu  4,67  mm  dan    pada  bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 100% ialah 6,50 mm.
Menurut  kriteria  kekuatan  daya antibakteri  Davis  dan  Stout  (1971)  hasil pengukuran  daya  hambat  ekstrak  daun prasman  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ,  pada  konsentrasi  50%,  75%  dan 100%  memberikan  daya  hambat  yang tergolong lemah dan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi ekstrak  50%  memberikan  daya  hambat yang  tergolong  lemah  sedangkan  pada konsentrasi  75%  dan  100%  memberikan konsentrasi yang tergolong sedang.
Walaupun  terdapat  hasil  yang  berbeda- beda tetapi dapat dilihat bahwa konsentrasi ekstrak  50%,  75%  dan  100%  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Berdasarkan  hasil  tersebut
dapat diketahui bahwa bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi ekstrak memiliki  sifat  dan  karakteristik  yang berbeda dalam merespon bahan antibakteri.  Dinding  sel  bakteri  Gram positif  terdiri  atas  beberapa  lapisan peptidoglikan  yang  membentuk  struktur yang  tebal  dan  kaku  serta  mengandung substansi  dinding  sel  yang  disebut  asam teikoat,  sedangkan  dinding  sel  bakteri Gram  negatif  hanya  terdiri  atas  satu  atau lebih  lapisan  peptidoglikan  yang  tipis  dan membran di bagian luar lapisan peptidoglikan.  Dinding  sel  bakteri  Gram negatif  hanya  mengandung  sedikit  lapisan peptidoglikan dan tidak mengandung asam teikoat  dan  karena  hanya  mengandung sejumlah kecil peptidoglikan, maka dinding  sel  bakteri  gram  negatif  lebih rentan  terhadap  guncangan  fisik,  seperti pemberian antibiotik atau bahan antibakteri  lainnya  (Radji,  2011).  Hasil penelitian  yang  diperoleh  menunjukan bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun prasman lebih kuat dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram negatif ( Pseudomonas aeruginosa)
dibandingkan  pertumbuhan    bakteri  Gram positif ( Staphylococcus aureus) .
Berdasarkan  analisis  ragam  satu arah (One  Way  Anova) didapatkan  hasil pengujian  aktifitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  prasman  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus  aureus yang  menunjukan nilai  signifikan  yaitu  0,26  (p>0,05)  untuk bakteri Staphylococcus  aureus dan  nilai signifikan  0,75  (p>0,05)  untuk  bakteri Pseudomonas  aeruginosa .  Berdasarkan data  yang  diperoleh  bahwa  daya  hambat dari kedua bakteri memiliki nilai signifikan lebih besar dari nilai taraf nyata yang  berarti  tidak  terdapat
perbedaan  signifikan  terhadap  perlakuan dari  kelima  konsentrasi  yang  diberikan pada  bakteri  uji.  Hal  ini  menunjukan bahwa  dari  ketiga  seri  konsentrasi  ekstrak memiliki  daya  hambat  yang  hampir  sama pada  kedua  bakteri  uji.  Walaupun  tidak terdapat  perbedaan  secara  signifikan, terlihat konsentrasi ekstrak dapat memberikan  efek  penghambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri  uji  dimana  terlihat
luas  zona  hambat  pada  setiap  konsentrasi ekstrak.  Pada  penelitian  ini,  kemampuan untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri dari ekstrak etanol daun prasman (Eupatorium  triplinerve Vahl. ) diduga karena adanya kandungan senyawa- senyawa yang berkhasiat sebagai antibakteri  seperti  flavonoid,  saponin  dan alkaloid

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa :
a) Ekstrak    daun  prasman (Eupatorium triplinerve Vahl .) memiliki  aktifitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.
b) Ekstrak    daun  prasman (Eupatorium triplinerve Vahl .) dengan  konsentrasi
100% memiliki aktivitas antibakteri lebih besar  dibandingkan  dengan  konsentrasi 50 % dan 75 %.

## SARAN
a) Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  mengisolasi  senyawa  aktif untuk menghasilkan daya antibakteri.
b) Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  pengujian  efektifitas  daun prasman  dengan menggunakan metode lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1985. Cara Pembuatan Simplisia . Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Anonim,  2000. Parameter  Standar  Umum Ektrak Tumbuhan Obat . Jakarta.  Dektorat      Jendral
POM-DEPKES RI.
Anonim,  2009. Undang-Undang  No  36 tentang  Kesehatan .  Jakarta. Dektorat Jendral POM- DEPKES RI Davis,  Stout.  1971. Disc  Plate  Method  Of Microbiological Antibiotic Essay . Journal Of Microbiology. Vol 22 No 4. Dalimartha,  S.  1999. Atlas  Tumbuhan Obat  Indonesia  Ungaran . Jakarta: Trubus Agriwidya.
Lay, B.W.1994.Analisis Mikroba di Laboratorium  Edisi  1.Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Munte,  L.  2014. Aktivitas  Antioksidan
Dari Ekstrak  Daun Prasman (Eupatorium triplinerve
Vahl.). [Skripsi].  Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Pratiwi,S.T.  2008 .  Mikrobiologi  Farmasi . Jakarta:  Erlangga  Medical Series.
Radji,  M.  2011. Mikrobiologi .  Buku Kedokteran ECG, Jakarta.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan .
Putra Media Nusantara, Surabaya.
Volk,  Wheeler.  1993. Mikrobilogi  Dasar . Jakarta: Erlangga.