## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 16, No. 1, JUNI 2019, Hal. 21 – 27 ISSN: 1693 -7899

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN
SELADA ROMAINE ( Lactuca sativa var . Longifolia ) DAN DAUN SELADA KERITING ( Lactuca sativa var . Crispa ) BESERTA IDENTIFIKASI BEBERAPA SENYAWA ANTIOKSIDAN

## Maria Ulfah*, Ady Laksono Putro, Efa Erfiana Safitri
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22 Semarang (024)8505680
* Email: mariau_astra@yahoo.com

## INTISARI
Radikal  bebas  diduga  sebagai  pemicu  berbagai  macam  penyakit  degeneratif.  Antioksidan merupakan  senyawa  yang  dapat  menangkal  radikal  bebas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH  dan  menganalisis  senyawa  aktif  yang terdapat dalam ekstrak selada romaine ( Lactuca sativa var. Longifolia ) dan ekstrak selada keriting ( Lactuca  sativa var. Crispa ).  Ekstraksi  tanaman  selada romaine dan  tanaman  selada  keriting menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan adalah 12,5; 25; 50; 100; 200 dan 400 ppm serta konsentrasi vitamin C sebagai pembanding adalah 0,5;  1;  1,5;  2;  2,5  dan  3  ppm  diuji  aktivitas  antioksidannya  dengan  metode  DPPH  secara spektrofotometri  visibel,  hingga  diperoleh  nilai  IC 50 .  Identifikasi  senyawa  aktif  dilakukan  dengan skrining  fitokimia  dan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa selada  romaine  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  151,1515  ppm  dan  selada  keriting  sebesar  183,7560 ppm  dan  vitamin  C  sebesar  1,7005  ppm.  Senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol selada romaine dan selada keriting adalah alkaloid, fenol dan flavonoid.
Kata kunci: Antioksidan, DPPH, IC 50 , KLT, Selada Romaine , Selada Keriting

## ABSTRACT
Free  radicals  are  suspected  as  triggers  of  various  degenerative  diseases.  Antioxidants  are compounds that can counteract free radicals. This study aims to determine the antioxidant activity by DPPH method and analyze the active compounds contained in romaine lettuce extract (Lactuca sativa var Longifolia) and lactuca sativa var Crishpa lettuce extract (Lactuca sativa  var Crishpa). Romaine lettuce and and lactuca sativa var Crishpa was done extraction with a maceration method using 70%  as  ethanol  solvent.  The  concentration  of  extract  used  was  12.5;  25;  50; 100; 200  and 400 ppm and vitamin C concentrations as comparison was 0.5; 1; 1.5; 2; 2,5 and 3 ppm tested its antioxidant activity by DPPH method by spectrophotometry visible, until IC 50 value was obtained. The  identification  of  the  active  compound  was  performed  by  phytochemical  screening  and  Thin Layer Chromatography (TLC). The results showed that romaine lettuce has IC 50 value of 151,1515 ppm  and  lactuca  sativa  var  Crishpa  has  IC 50 value  of  183,7560  ppm  and  vitamin  C  value  was 1,7005 ppm. The chemical compounds contained in romaine ethanol extract and lactuca sativa var Crishpa lettuce extract are alkaloids, phenols and flavonoids.
Keywords: Antioxidant, DPPH, IC 50 , TLC, Romaine, Lactuca sativa var Crishpa
*Corresponding author: Maria Ulfah Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22 Semarang (024)8505680

## PENDAHULUAN
Radikal bebas adalah suatu molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan dalam orbital terluarnya  sehingga  sangat  reaktif.  Radikal  bebas  terbentuk  di  dalam  tubuh  dalam  kondisi  normal (Winarsi,  2007).  Radikal  bebas  ini  dapat  diatasi  dengan  suatu  senyawa  penangkal  yang  disebut antioksidan.  Sumber  radikal  bebas  ada  yang  bersifat  internal  dari  dalam  tubuh  dan  bersifat eksternal  dari  luar  tubuh  (Khaira,  2010).  Hal  tersebut  menyebabkan  senyawa  antioksidan  alami sangat  diharapkan  dan  dibutuhkan.  Salah  satu  sumber  antioksidan  alami  yang  berasal  dari tumbuhan dan dapat ditemui di  Indonesia adalah selada  keriting ( Lactuca sativa var Crishpa) dan selada romaine ( Lactuca sativa var Longivolia). Kandungan kimia tanaman selada keriting adalah betakaroten,  falat,  lutein,  senyawa  indol,  karotenoid  serta  senyawa  fitokimia  seperti  fenolik, antosianin  dan  asam  fenolik  (López  dkk ., 2014),  (Backer  dkk ., 1968). Kandungan  kimia  tanaman Selada Romaine antara  lain  carotenoid,  antosianin  dan  fenolik  (Kim  dkk ., 2016).  Selada  keriting dan selada romaine sering dikonsumsi oleh masyarakat sebagai sayur dan lalapan makanan. Selain itu  juga  mempunyai  manfaat  yang  baik  bagi  kesehatan  tubuh,  tetapi  mengenai  aktivitas  sebagai antioksidan  dan  kandungan  senyawa  kimia  di  dalam  tanaman  selada  keriting  belum  diketahui. Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  selada  keriting  dan  selada  romaine  serta  untuk  mengetahui  beberapa kandungan senyawa antioksidan yang dapat dimanfaatkan dalam kehidupan sehari-hari.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Selada Romaine dan  selada keriting, Etanol  70% (PT. Brataco), aquadest p.a, kristal DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil), vitamin C, silika gel 60 F 254 . Kloroform, metanol etil  asetat, air dan butanol, asam asetat, Dragendorff , FeCl 3 dan uap amoniak. . Alat Penelitian
Timbangan  elektrik  (Henherr),  oven  (Memmert),  blender  (Philiph),  ayakan  Mesh  40, tampah,  moisture  balance  (Ohaus),  seperangkat  toples  maserasi, rotary  evaporator (Heidolp)  dan alat-alat gelas (Pyrex), kayu pengaduk dan seperangkat alat saring vacum. Kaca bejana dan Lampu sinar UV.

## Jalannya Penelitian
1. Pembuatan ekstrak etanol daun selada romaine dan daun selada keriting
Daun  selada  romaine  dan  daun  selada  keriting  yang  telah  dipanen  disortasi  basah, selanjutnya  dicuci  bersih  dengan  air  kemudian  ditiriskan  dan  diangin-anginkan.  Setelah  itu dikeringkan dengan oven pada suhu 50-70ºC sampai kering. Simplisia kering ditimbang dan dibuat serbuk dengan cara diblender kemudian diayak dengan ayakan ukuran 40 mesh serta diukur kadar airnya  dengan moisture  balance .  Serbuk  simplisia  daun  selada  romaine  dan  daun  selada  kriting diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan cairan penyari etanol 70% yang dibiarkan selama tiga hari  dalam  toples  kaca  tertutup  rapat  dan  terhindar  dari  cahaya  dengan  pengadukan  minimal  3  kali sehari dan kemudian disaring sehingga diperoleh maserat I. Ampas setelah tiga hari kemudian diperas dan  ditambahkan  sisa  25%  cairan  penyari  etanol.  Maserat  I  dan  II  dicampur  dan  dienaptuangkan selama  dua  hari  untuk  selanjutnya  dipekatkan  dengan  rotary  evaporator  pada  suhu  <50 0 C  sampai diperoleh ekstrak kental.
2. Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol selada romaine dan ekstrak etanol selada keriting dengan metode DPPH
Ekstrak etanol daun selada romaine dan ekstrak etanol daun selada keriting dibuat dalam seri konsentrasi (12,5; 25; 50; 100; 200 dan 400) ppm. Seri konsentrasi vitamin C (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 dan 3,0) ppm digunakan sebagai larutan  antioksidan  standar.  Sebanyak 2,0 mL larutan DPPH 0,1
mM ditambahkan dengan 1,0 mL larutan sampel, kemudian divortex, lalu didiamkan dalam tempat gelap  selama  30  menit.  Absorbansi  larutan  DPPH  0,1  mM  dibaca  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis    pada  panjang  gelombang    516,6  nm. Perbandingan  absorbansi  sampel  dan absorbansi larutan kontrol digunakan dalam perhitungan persentase aktivitas antioksidan  ekstrak etanol daun  selada romaine dan selada keriting  atau vitamin C terhadap  terhadap radikal bebas DPPH.
3. Uji identifikasi senyawa kimia
a. Senyawa alkaloid
Bahan  Identifikasi  kandungan  senyawa  alkaloid  dalam  ekstrak  etanol  daun  selada romaine  dan  ekstrak  etanol  daun  selada  kriting  dilakukan  dengan  melarutkan  ekstrak  dengan etanol  p.a,  kemudian  sampel  ditetesi  pereaksi  dragendorff.  Identifikasi  senyawa  alkaloid menggunakan  metode  KLT  dilakukan  dengan  lempeng  silica  gel  (fase  diam)  dan  fase  gerak kloroform : metanol (3:2).
b. Senyawa fenolik
Identifikasi  kandungan  senyawa  fenolik  dalam  ekstrak  etanol  daun  selada  romaine  dan selada  keriting  dilakukan  dengan  melarutkan  sedikit  ekstrak  dengan  etanol,  kemudian  ditetesi dengan  FeCl 3 .  Identifikasi  senyawa  fenolik  menggunakan  metode  KLT  dilakukan  dengan  fase diam lempeng silika gel dan fase gerak etil asetat : metanol : air (7:2:1).
c. Senyawa flavonoid
Identifikasi  kandungan  senyawa  flavonoid  dilakukan  dengan  cara  melarutkan  ekstrak etanol  daun  selada  kriting  dalam  etanol,  kemudian  ditambahkan  0,05  mg  serbuk  magnesium, dan  asam  klorida  tetes  demi  tetes,  kocok  kuat-kuat.  Identifikasi  senyawa  flavonoid menggunakan  KLT  dilakukan  dengan  fase  diam  lempeng  silika  gel  dan  fase  gerak  butanol  : asam asetat : air (7:1:2) (Harborne, 1996).

## Analisis Data
Data  uji  aktivitas  antioksidan  yang  dihasilkan  berupa  nilai  absorbansi  DPPH  terhadap ekstrak etanol daun selada Romaine dan ekstrak etanol daun selada keriting dan baku pembanding vitamin C, kemudian dihitung presentase aktivitas antioksidannya.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  selada  romaine  dan  ekstrak  etanol  daun selada keriting dapat dilihat pada Tabel I.

## Tabel I. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Selada Kriting dan Romaine
Sampel Konsentrasi sampel (ppm) Absorbansi Aktivitas antioksidan (%) Persamaan Regresi Linier IC 50 (ppm) Ekstrak etanol selada kriting 12,5 0,631 29,2600 Y= 0,1033X + 31,0180 183,75 25 0,607 31,9506 50 0,556 37,6681 100 0,487 45,4035 200 0,428 52,0179 400 0,257 71,1883 Ekstrak etanol selada romaine 12,5 0,623 30,1569 Y = 0,1148X + 151,15 25 0,58 34,9775 32,6478 50 0,559 37,3318 100 0,48 46,1883 200 0,33 63,0044 400 0,226 74,6636 Vitamin C 0,5 0,659 26,1210 Y = 23,2878X 1,72 1 0,604 32,2869 + 9,1168 1,5 0,528 40,8071 2 0,398 55,3811 2,5 0,219 75,4484 3 0,208 76,6816
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  selada  kriting  dan  romaine  pada  tabel  I, menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  sampel  yang  digunakan  maka  semakin  besar presentse  aktivitas  antioksidannya.  Hal  tersebut  dikarenakan  kemampuan  senyawa  antioksidan untuk  merendam  radikal  bebas  pada  konsentrasi  sampel  yang  tinggi  semakin  besar,  sedangkan absorbansi  yang  dihasilkan  semakin  turun  karena  konsentrasi  DPPH  yang  ada  didalam  sampel semakin  kecil  (Winarsi,  2007)  serta  mempunyai  aktivitas  antioksidannya  tinggi  dan  sangat  kuat dengan  nilai  IC 50 sebesar 2,857 ppm ((Indranila dan Ulfah, 2015). Hasil dari nilai  IC 50 vitamin C dan esktrak etanol selada kriting tersebut, persamaan regresi linier memiliki koefisien korelasi yang mendekati  1  yang  berarti  adanya  korelasi  yang  sangat  kuat  (Sarwono,  2006).  Nilai  koefisien korelasi  terbaik  untuk  vitamin  C  yaitu  0,9786  serta  nilai  koefisien  korelasi  terbaik  dari  ekstrak etanol selada kriting sebesar 0,9865. Hasil nilai IC 50 vitamin C adalah 1,7005 ppm serta hasil nilai IC 50 ekstrak etanol selada kriting adalah 183,75 ppm. Semakin kecil nilai IC 50 maka semakin kuat pula  aktivitas  antioksidan  senyawa  tersebut  karena  dengan  konsentrasi  yang  kecil  mampu menimbulkan  efek.  Penelitian  ini  menunjukan  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  selada  keriting  sebesar 183,75  ppm.  Artinya,  pada  konsentrasi  tersebut  larutan  uji  dapat  meredam  DPPH  sebesar  50%. Menurut  Bloiss  (1958)  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  selada  kriting  tersebut dikategorikan lemah karena memiliki IC 50 berada diantara 151-200 ppm.
Hasil  skrining  fitokimia  dapat  dilihat  pada  Tabel  II  serta  hasil  kromatogram  lapis  tipis dapat dilihat pada Gambar 1 sampai 6.
Tabel II. Hasil Skrining Fitokimia ekstrak etanol daun selada kriting dan romaine
Senyawa Pereaksi Tanda positif Selada romaine Selada Kriting Kesimpulan Alkaloid - Dragendorf - Mayer - Adanya endapan orange /  merah - Adanya endapan putih / kuning - Adanya endapan orange - Adanya endapan putih - Adanya endapan orange - Adanya endapan putih - Positif - Positif Flavonoid - HCl pekat dan serbuk Mg - Terbentuknya warna merah/ jingga - Terbentuknya warna jingga - Terbentuknya warna jingga - Positif Fenol - FeCl 3 - Terbentuknya warna hijau gelap/ biru - Terbentuknya warna hijau gelap - Terbentuknya warna hijau gelap - Positif
Gambar 1. Profil senyawa alkaloid dengan KLT, (p) pembanding (kafein), (e) sampel ekstrak selada Romaine, (a) sebelum disemprot Dragendorff, (b) setelah disemprot Dragendorff, (c) diamati pada sinar UV 254 nm.
Gambar 2. Profil senyawa Flavonoid dengan KLT, (p) pembanding (kuersetin), (e) sampel ekstrak selada Romaine, (a) sebelum diuapi amoniak, (b) setelah diuapi amoniak (c) diamati pada sinar UV 254 nm.
Gambar 3. Profil senyawa Fenolik dengan KLT, (p) pembanding (Tanin), (e) sampel ekstrak selada Romaine, (a) sebelum disemprot FeCl 3 ; (b) diamati pada sinar UV 254 nm; setelah disemprot FeCl 3 ,
Gambar 4. Profil senyawa alkaloid dengan KLT, (p) pembanding (kafein), (e) sampel ekstrak selada keriting, (a) sebelum disemprot Dragendorff, (b) setelah disemprot Dragendorff, (c) diamati pada sinar UV 254 nm.
Gambar 5. Profil senyawa Flavonoid dengan KLT, (p) pembanding (kuersetin), (e) sampel ekstrak selada keriting, (a) sebelum diuapi amoniak, (b) setelah diuapi amoniak (c) diamati pada sinar UV 254 nm.
Gambar 6. Propil senyawa Fenolik dengan KLT, (p) pembanding (Tanin), (e) sampel ekstrak selada keriting, (a) sebelum disemprot FeCl 3 ; (b) diamati pada sinar UV 254 nm; setelah disemprot FeCl 3 ,
Tabel  II  dan  gambar  KLT  menunjukan  bahwa  skrining  fitokimia  beberapa  senyawa  yang teridentifikasi  adalah  senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  fenolik  dalam  ekstrak  etanol  daun  selada keriting dan romaine. Adanya kandungan senyawa alkaloid ditunjukkan dengan terbentuknya  spot atau  endapan  berwarna  merah  hingga  jingga  dan  senyawa  fenolik  ditunjukkan  dengan  terjadinya perubahan  warna  spot  dan  larutan  menjadi  hijau,  biru,  merah,  ungu  dan  hitam  dan  flavonoid ditunjukkan  dengan  terbentuknya  sopt  atau  warna  larutan  merah,  kuning  atau  jingga  (Harborne, 1996).

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun selada keriting mempunyai aktivitas antioksidan dengan metode DPPH. Nilai Inhibition Concentration (IC 50 ) yang diperoleh dari ekstrak etanol daun selada kriting  adalah sebesar 183,75 ppm dan Vitamin C sebesar 1,7005 ppm. Senyawa aktif yang terkandung di dalam ekstrak etanol daun selada keriting dan romaine adalah alkaloid, flavonoid dan fenolik.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian aktivitas antioksidan terhadap ekstrak etanol daun selada keriting dengan  menggunakan  metode  ekstraksi  yang  lain  dan  perlu  dilakukan  fraksinansi  ekstrak  etanol daun selada keriting.

## DAFTAR PUSTAKA
Backer,  C.A.,  1968, Flora  of  Java  Spermatophytes  Only Vol.  II,  Groningen,  Noordhoft-The Netherlands, Pp. 476-477.
Blois, M.S., 1958, Antioxidant Determiination by The Use Of A Stable Free Radical, Nature , 181: 1199-1200.
Harborne, J.B, 1996, Metode Fitokimia , Edisi Kedua, Penerbit ITB, Bandung. Indranila  dan  Ulfah,  M.,  2015,  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Karika  ( Carica Pubescens )  Dengan  Metode  DPPH  Beserta  Identifikasi  Senyawa  Alkaloid,  Fenol  Dan Flavonoid, Prosiding Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine.
Khaira,  K.,  2010,  Menangkal  Radikal  Bebas  dengan  Antioksidan, Jurnal  Sainstek Vol.  II,  No.  2: 183-187, ISSN: 2085-8019.
Kim H. J., et all , 2016, Nutritional Value Of Crips Head And Romaine Lettuces (Latuca Sativa L. ), Journal of Agricultural Science.
López,  A.,  Javier,  G.  A.,  Fenoll,  J.,  Hellin,  P.,  &  Flores,  P.,  2014,  Chemical  Composition  And Antioxidant Capacity Of Lettuce: Comparative Study Of Regular-Sized (Romaine) And Baby-Sized (Little Gem And Mini Romaine) Types. Journal Of Food Composition And Analysis , 33(1), 39-48. Sarwono, J., 2006, Metode Penelitian Kuantitatif dan Kualitatif , Graha Ilmu, Yogyakarta. Winarsi, H, 2007, Antioksidan Alami Dan Radikal Bebas , Penerbit Kanisius, Yokyakarta