## JURNAL BIOSILAMPARI: JURNAL BIOLOGI

## UJI AKTIVITAS SEDIAAN SPRAY HAND SANITIZER KOMBINASI EKSTRAK DAUN SIRIH HIJAU DAN DAUN SERAI SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP

## Staphylococcus aureus
Mutia M Tuasalamony 1 *, Cecilia Anna Seumahu 2 , Anneke Pesik 3 1,2.3 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon, Indonesia
*Corresponding author, e-mail: mutiatuasalamony@gmail.com

## A B S T R A C T
The  content  of  extracts  of  green  betel  leaf  and  lemongrass  leaves  have  antibacterial compounds to inhibit the growth of Staphylococcus aureus . The purpose of this study was to  determine  the  antibacterial  activity  of  the  spray  hand  sanitizer  preparation  of  a combination  of  green  betel  leaf  extract  and  lemongrass  against Staphylococcus  aureus . This type of research is  an experimental laboratory.  Green betel leaves and lemongrass leaves were partially macerated, formulated to be hand sanitizers in a ratio of 1:2,  2:1, and  2:2.  The  formula  was  tested  for  antibacterial  activity  by  the  dilution  method.  The results  showed  that  the  hand  sanitizer  combination  of  green  betel  leaf  extract  and lemongrass  had  antibacterial  activity  against Staphylococcus  aureus with  a  bactericidal formula  of  0  CFU/ml  and  total  bacteria  with  an  antiseptic  formula  of  0  CFU.  From  this research, it is known that the spray hand sanitizer combination of green betel leaf extract and lemongrass is effective in inhibiting and killing Staphylococcus aureus .
Keywords : Antibacterial, Green Betel, Hand Sanitizer, Lemongrass Leaf , Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  berjalannya  waktu,  mencuci  tangan  menggunakan  sabun bukanlah satu-satunya cara untuk membersihkan tangan dari kotoran dan mikroba. Dewasa  ini,  muncul  produk-produk  instan  yang  serba  cepat  dan  praktis,  termasuk produk inovasi pembersih tangan yang dikenal dengan sebutan hand sanitizer (Rini & Nugraheni, 2018; Oktaviana et al., 2019). Hand sanitizer merupakan salah satu bahan antiseptik  berupa gel atau spray yang  sering  digunakan  masyarakat  sebagai  media pencuci tangan yang praktis. Hand sanitizer dalam bentuk spray memiliki daya bunuh kuman yang lebih efektif, dapat bekerja efektif rata-rata dalam 15 detik sedangkan gel hand  sanitizer tercatat  membutuhkan  hingga  30  detik  aplikasi  untuk  sepenuhnya menghilangkan  kandungan  virus  atau  bakteri  di  tangan  (SaniLife  Hand  Sanitizer, 2021). Gel  hand  sanitizer juga lebih  lambat  mengering  dan  dapat  meninggalkan residu pada kulit. Hand sanitizer pada saat ini cenderung menggunakan bahan sintetis dan  kimiawi  sehingga  mempunyai  dampak  yang  tidak  baik  bagi  kesehatan  dan lingkungan. Jika digunakan berlebihan dan terus menerus akan membuat kulit kering dan iritasi karena bahan dasar antiseptik tersebut berupa alkohol dan triklosan yang merupakan bahan kimia (Effendi et al., 2020; Asngad et al., 2018).
Bahan alami yang lebih aman  dan mudah untuk  diperoleh seperti daun sirih hijau  dan  daun  serai.  Kandungan  minyak  atsiri  dalam  ekstrak  daun  sirih  sebesar 4,2%,  hal  tersebut  menyebabkan  ekstrak  daun  sirih  hijau  mempunyai  kemampuan efektifitas antibakteri yang tinggi juga memiliki kemampuan antioksidan (Putri et al.,
2019; Opilia et al., 2016). Sedangkan daun serai (Cymbopogon citratus) mengandung senyawa  metabolit  sekunder  antara  lain:  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  saponin,  steroid, terpenoid, tanin dan minyak atsiri. Minyak atsiri merupakan kelompok utama bahan kimia yang dapat memberikan aktivitas terhadap mikroba.
Untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle Linn.) dan daun serai ( Cymbopogon citratus ) sebagai bahan baku sediaan spray hand sanitizer dilakukan pengujian terhadap Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus bertanggung  jawab  atas  80%  penyakit  supuratif,  dengan  permukaan  kulit  sebagai habitat alaminya.
Berdasarkan uraian di atas, tujuan dari penelitian ini untuk menguji aktivitas sediaan spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle Linn.) dan  daun  serai (Cymbopogon  citratus) sebagai  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus .

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Jurusan  Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura, pada bulan Maret 2021 – April 2021.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  sarung  tangan,  masker,  blender,  oven,  neraca analitik ,  autoclave , shaker , waterbath , hot  plate , incubator , vortex, laminar  air  flow , rotary evaporator, spektrofotometer, colony  counter , gelas beaker, gelas ukur, cawan petri, cawan porselen, corong, erlenmeyer, tabung reaksi, mikropipet, pipet volume, magnetic stirrer , tube Eppendorf, jarum ose, spatula, drikalski spatula, pinset, ayakan, bunsen,  gunting,  pisau,  botol  kaca,  stopwatch,  alat  tulis  dan  kamera.  Bahan  yang digunakan  adalah  daun  sirih  hijau  segar,  daun  serai  segar,  etanol  96%,  gliserin, aquades , media NA, media NB, bacto agar , biakan bakteri Staphylococcus aureus, hand sanitizer komersil, alkohol, kertas pH, kertas label, aluminium foil, dan tisu.

## Prosedur Kerja Pembuatan serbuk dan ekstrak
Daun  sirih  hijau  dan  daun  serai  dikeringkan  dalam  oven  pada  kisaran  suhu 40 o C. Setelah kering dihancurkan sampai menjadi bubuk dengan blender dan di ayak dengan ayakan 40 mesh. Sebanyak  100 gr serbuk  kering  daun sirih hijau dan daun serai  tersebut  masing-masing  dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96% 500  mL  selama  72  jam  dengan  menggunakan rotary  evaporator (Meiliawati  et  al., 2018; Santoso & Riyanta, 2019).
Formulasi spray hand sanitizer Formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  daun serai  dengan  perbandingan  F 1 (1:2),  F 2 (2:1),  dan  F 3 (2:2),  masing-masing  formulasi ditambahkan  gliserin.  Gliserin  dapat  menyebabkan  sediaan  bersifat  jernih  dan transparan,  selain  itu  gliserin  bersifat emollient  gel yakni  membantu  sediaan hand sanitizer ketika  digunakan  pada  tangan  tidak  terlalu  kering  (Santoso  dan  Riyanta, 2019; Thadeus et al., 2018). K + adalah spray hand sanitizer komersil.
Uji karakteristik spray hand sanitizer
Uji  karakteristik spray  hand  sanitizer menggunakan  dua  uji  yaitu  uji karekteristik  fisik  dan  uji  karakteristik  kimia.  Kriteria  yang  baik  untuk  uji karakteristik fisik adalah sediaan spray yang dihasilkan bening atau transparan, tidak keruh, dan tidak terdapat gelembung udara (Anindhita & Oktaviana, 2020).  Kriteria yang  baik  untuk  uji  karakteristik  kimia  adalah f ormula spray  hand  sanitizer mempunyai  nilai  pH  yang  sama  dengan  pH  kulit  yaitu  5-7  agar  tidak  terjadi  iritasi pada permukaan kulit (Martono dan Suharyani, 2018).

## Uji aktivitas antibakteri
Uji  antibakteri  menggunakan  bakteri Staphylococcus  aureus . Staphylococcus aureus merupakan  bakteri  yang  didapatkan  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA UNPATTI. Staphylococcus  aureus disimpan  beku  dalam  menggunakan  gliserol  dan media  NB  ( Nutrient  Broth )  menggunakan  metode  gores.  Suhu  pada Staphylococcus aureus adalah 37 o C. Uji aktivitas antibakteri sediaan kombinasi spray hand sanitizer terdiri dari berbagai tahapan, yaitu:
Uji daya hambat formula dilakukan  dengan metode  dilusi cair. Metode dilusi cair adalah metode untuk membuat seri pengenceran agen antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Setiap tabung diisi dengan 8,8 mL media NB dan 0,1 mL kultur bakteri dengan kerapatan 10 8 sel bakteri/mL. Tabung uji (F 1 , F 2 , dan  F 3 )  ditambahkan  1  mL  larutan  ekstrak  pada  masing-masing  formulasi.  Tabung kontrol  positif  (K + )  ditambahkan  1  mL spray  hand  sanitizer komersil  dengan kandungan  alkohol  70%  dan  tabung  kontrol  negatif  (K - )  hanya  berisi  media  NB dengan  aquades  sebagai  blanko.  Semua  tabung  di vortex agar  homogen  kemudian diinkubasi  (24  jam,  37 o C),  dan  diamati  pertumbuhan  bakteri  berupa  kekeruhan menggunakan  spektrofometer.  Adanya  daya  hambat  ditandai  dengan  jernihnya medium uji (Akib et al., 2019).
Uji  daya  bunuh  dilakukan  dengan  metode  dilusi  padat.  Metode  dilusi  padat merupakan  metode  yang  dilakukan  dengan  menginokulasi  mikroba  uji  dengan kerapatan 10 8 sel bakteri/mL pada media agar yang mengandung agen antimikroba. Formulasi spray  hand  sanitizer yang  diinokulasi  pada  bakteri  dikulturkan  untuk melihat  bakteri  yang  masih  mampu  hidup.  Masing-masing  isi  tabung  digoreskan  di atas  media  NA  padat,  diinkubasi  (24  jam,  37 o C),  dan  diamati  pertumbuhan  bakteri pada media. Total koloni bakteri dihitung menggunakan colony counter . Hasil  inkubasi  dapat  dilihat  dengan  ada  tidaknya  pertumbuhan  koloni  pada nutrient agar Total koloni bakteri dihitung menggunakan colony counter (Akib et al., 2019;  Zen  et  al.,  2015).  Uji  daya  antiseptik  formula  menggunakan  metode  replika (Shu,  2013).  Metode  tersebut  dilakukan  dengan  cara,  yaitu  kontrol  dan  sediaan  uji. Kontrol. Telapak tangan dicuci dengan air kran tanpa menggunakan sabun, kemudian dikeringkan. Selanjutnya sidik ibu jari  ditempelkan pada media padat nutrient  agar dalam  cawan  petri.  Media  ini  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam.  Setelah diinkubasi  jumlah  koloni  dihitung.  Sediaan  uji.  Telapak  tangan  dicuci  dengan  air tanpa menggunakan sabun, kemudian dikeringkan. Selanjutnya pada telapak tangan diteteskan  sediaan  kemudian  diratakan  dan  didiamkan  selama  satu  menit. Selanjutnya sidik ibu jari ditempelkan pada media padat nutrient agar dalam cawan petri. Media ini diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Setelah diinkubasi jumlah koloni dihitung.

## Analisis Data
Data hasil uji karakteristik fisik dan kimia, daya hambat, daya bunuh dan dan daya  antiseptik  pada  masing-masing  formula  dikumpulkan  dan  dianalisis  secara deskriptif kuantitatif (Priyono, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  karakteristik  fisik  dilakukan  pada  suhu  ruang  dengan  mengamati bentuk,  warna,  dan  bau  dari  tiap  formula  sediaan.  Hasil  pengamatan  ditunjukkan pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Karakteristik Fisik Formula Sediaan Formula Bentuk Warna Bau F 1 Cair Hijau (pekat) Khas daun sirih hijau F 2 Cair Hijau (pekat) Khas daun serai F 3 Cair Hijau (pekat) Khas daun sirih hijau dan daun serai K + Cair Bening Alkohol 70% Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil
Berdasarkan hasil uji pH sediaan spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau  dan  daun  serai  yang  dilakukan  pada  tiga  formula  dan  satu  kontrol.  Hasil  uji  pH ditunjukkan pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Karakteristik Kimia Formula Sediaan Formula pH F 1 6 F 2 6 F 3 6 K + 5 Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil
Hasil  evaluasi  uji  karakteristik  fisik  sediaan spray  hand  sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai yang dilakukan pada tiga formula yaitu, F 1 , F 2 , dan F 3 diketahui bahwa ketiga formula tersebut memiliki bentuk cair , berwarna hijau (pekat) dan berbau khas ekstrak daun sirih hijau dan daun serai. K + yang merupakan sampel hand  sanitizer komersil  memiliki  bentuk  cair , berwarna  bening  dan  berbau alkohol 70%.
Berdasarkan  beberapa  kriteria  tersebut,  maka  formula hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  daun  serai  berpotensi  untuk  digunakan sebagai hand sanitizer . Akan tetapi, memiliki kelemahan dari sisi warna yang pekat, sehingga  saat  diaplikasikan  di  tangan  nampak  tidak  begitu  menarik  secara  visual,. Warna ekstrak yang pekat dipengaruhi pada saat proses ekstraksi.   Kekeruhan pada formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  daun  serai memiliki  warna  ekstrak  yang  pekat,  meskipun  sudah  melakukan  penyaringan  pada proses  ekstraksi.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode ekstraksi  parsial  atau  metode  ekstraksi  tidak  bertingkat,  dengan  menggunakan pelarut  etanol.  Ekstraksi  tidak  bertingkat  yaitu  hanya  menggunakan  satu  pelarut
untuk ekstraksi etanol, sedangkan pada ekstraksi bertingkat menggunakan dua atau lebih pelarut (Permadi et al., 2015).
Berdasarkan  hasil  pengukuran  pH  sediaan spray  hand  sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai pada tiga formula yaitu, F 1 , F 2 , dan F 3 , ketiga formula  tersebut  memiliki  nilai  pH  6  sedangkan  K + memiliki  nilai  pH  5.  Idealnya sediaan topikal mempunyai nilai pH yang sama dengan pH kulit yaitu 5-7 agar tidak terjadi iritasi pada permukaan kulit. Berdasarkan pengujian pH keseluruhan formula masuk  dalam  kisaran  pH  kulit  yang  berarti  telah  memenuhi  persyaratan  umum  pH hand  sanitizer berdasarkan  SNI  No.  06-2588  berkisar  antara  4.5-  6.5,  sehingga sediaan hand sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai memenuhi kriteria  ideal  sediaan  topikal  maka  aman  digunakan  dan  diaplikasikan  pada  kulit tangan.  Apabila  produk hand  sanitizer berada  pada  kondisi  pH  yang  sangat  rendah atau asam dapat menyebabkan iritasi pada kulit tangan. Sedangkan pada kondisi pH yang  sangat  tinggi  atau  basa  mengakibatkan  kulit  tangan  menjadi  bersisik  dan pengelupasan pada kulit tangan (Baizuroh et al., 2020; Titaley et al., 2014).
Pengujian  daya  hambat  formula  dilakukan  menggunakan  metode  dilusi  cair, adanya daya hambat bakteri ditandai dengan jernihnya medium uji.  Hasil pengujian daya hambat formula sediaan hand sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai terhadap bakteri S. aureus ditunjukkan pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Daya Hambat Formula Sediaan
Formula Kondisi Tabung Medium Uji F 1 + F 2 + F 3 +
K + +
K - - Keterangan: (+) : Keruh (-) : Jernih Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil
Uji  daya  bunuh  formula  sediaan  menggunakan  metode  dilusi  padat  karena pertumbuhan bakteri tampak lebih jelas dan dapat langsung dihitung menggunakan colony counter . Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 4.

## Tabel 4. Hasil Uji Daya Bunuh Formula Sediaan
Formula Jumlah Koloni Bakteri Staphylococcus aureus (CFU/ml) U 1 U 2 U 3 F 1 0 0 0 F 2 0 0 0 F 3 0 0 0 K + 0 0 0 K - TBUD TBUD TBUD Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil K- : Aquades TBUD : Terlalu banyak untuk dihitung CFU : Colony forming unit
Pengujian  aktivitas  antibakteri  terdiri  atas  uji  daya  hambat,  uji  daya  bunuh dan  uji  daya  antiseptik  formula  pada  sediaan.  Hal  ini  guna  memastikan  bahwa sediaan  uji  memiliki  aktivitas  bakterisidal  atau  tidak.  Adapun  hal  ini  dapat  menjadi dasar  dalam  penentuan  formula  optimum.  Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah S. aureus karena bakteri ini merupakan flora normal kulit manusia. Uji aktivitas bakteri pada penelitian ini dilakukan dengan tiga formula yaitu, F 1 , F 2 , dan F 3 dengan kontrol positif  berupa  sediaan hand  sanitizer komersil  sebagai  pembanding  bertujuan membandingkan  efek  bakterisidal  sediaan  uji  dengan  sediaan  yang  beredar  di masyarakat  dan  kontrol  negatif  berupa  aquades.  Hasil  uji  daya  antiseptik  kontrol negatif  pada  telapak  tangan  menunjukkan  bahwa  bakteri  total  yang  tumbuh  pada telapak tangan sangat banyak (Akib et al., 2019; Shu, 2013).
Berdasarkan  aktivitasnya  zat  antibakteri  dibedakan  menjadi  2  jenis,  yaitu bakteriostatik (menghambat bakteri) dan bakterisidal (membunuh bakteri)  (Irianto, 2006). Adanya daya hambat pada bakteri ditandai dengan jernihnya medium uji (Zen et al., 2015). Hasil pengamatan melalui pengamatan secara visual pada penelitian ini sebenarnya  sudah  cukup  untuk  menentukan  daya  hambat  formula,  dengan  melihat tingkat  kekeruhan  masing-masing  perbandingan  kombinasi  ekstrak  untuk menandakan ada tidaknya pertumbuhan bakteri tetapi metode ini bersifat kualitatif. Selain  itu,  memiliki  kelemahan  yaitu  ketidakmampuan  mata  manusia  untuk membedakan antara sel bakteri hidup dengan sel bakteri mati pada saat pengamatan kekeruhan yang dapat menghasilkan hasil yang kurang akurat. Oleh karena itu, untuk mendapatkan  hasil  yang  akurat  perlu  dilakukan  pengujian  lebih  lanjut  dengan mengukur nilai OD atau nilai absorbansi menggunakan spektrofotometer (Rori et al., 2018;  Lingga,  2017).  Hasil  pengukuran  OD  menggunakan  spektrofotometer  tidak terbaca dengan baik pada penelitian ini karena dipengaruhi oleh warna ekstrak daun yang  pekat.  Warna  (kekeruhan)  ekstrak  yang  terlalu  pekat  dapat  mempengaruhi pembacaan  nilai  absorbansi  oleh  spektrofotometer  terhadap  perlakuan  berbagai dosis yang dilakukan.
Hasil  pengujian  daya  bunuh  pada  sediaan  uji  yang  mengandung  kombinasi ekstrak  daun sirih hijau dan daun serai terbukti memiliki aktivitas bakterisidal. Hal ini ditunjukkan oleh tidak adanya pertumbuhan bakteri pada media agar di cawan F 1 , F 2, dan  F 3 sehingga  hasil  daya  bunuh  bernilai  0.  Kontrol  positif  juga  tidak menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri, berbeda dengan kontrol negatif, terdapat koloni yang tumbuh pada media agar.  Hasil daya bunuh formula dapat dilihat pada tabel 4.
Hasil uji daya antiseptik sediaan hand sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau  dan  daun  serai  membuktikan  bahwa  sediaan  yang  diaplikasikan  pada  tangan dapat membunuh bakteri total. Hasil dapat dilihat pada Tabel 5.
Pengujian daya antiseptik juga dilakukan sebagai uji lanjutan guna memperkuat sekaligus  membuktikan  bahwa  nilai  daya  hambat  sediaan hand  sanitizer aktivitas dalam hal menghambat maupun membunuh bakteri terutama untuk bakteri uji yaitu, Staphylococcus  aureus .  Hasil  pengujian  daya  antiseptik  diketahui  bahwa  F 3 terbukti tidak  hanya  memiliki  aktivitas  bakteriostatik  namun  juga  bakterisidal  (Tabel  5) karena tidak ada satu pun koloni bakteri yang tumbuh di media agar. Ekstrak daun sirih  hijau  dan  daun  serai  diformulasikan  dengan  konsentrasi  yang  seimbang sehingga  aktivitas  senyawa  aktif  pada  kedua  ekstrak  ini  dapat  bekerja  sinergis  dan efektif membunuh bakteri.
Tabel 5. Hasil Uji Daya Antiseptik Formula Sediaan
Formula Jumlah Koloni Bakteri (CFU) F 1 12 F 2 1 F 3 0 K + 0 K - TBUD Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun sirih hijau dan daun serai dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil K- : Aquades TBUD : Terlalu banyak untuk dihitung CFU
: Colony forming unit
Kombinasi  antibakteri  merupakan  dua  antibakteri  yang  digunakan  secara bersamaan dan saling mempengaruhi kerja dari masing-masing antibakteri. Ekstrak beberapa tanaman yang disatukan memiliki daya hambat antibakteri yang lebih besar dibandingkan dengan ekstrak tanaman tunggal. Semakin tinggi konsentrasi interaksi yang  diberikan  semakin  besar  daya  hambat  dan  daya  bunuh  terhadap  bakteri. Dengan  demikian,  formula  optimum  dengan  perbandingan  terbaik  dalam menghambat  dan  membunuh  bakteri  adalah  F 3 karena  aktivitas  antibakteri  setara dengan  kontrol  positif  ( hand  saniizer komersil).  Sediaan  uji  F 2 dan  F 3 bersifat bakteriostatik atau hanya memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri. Daun  sirih  hijau  dan  serai  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder  antara  lain: alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, terpenoid, tanin, minyak atsiri, dan fenol dengan komponen  utama  senyawa  fenolik  (Subramanian  et  al.,  2015).  Masing-masing metabolit  sekunder  memiliki  mekanisme  antibakteri  yang  berbeda  dan  berkerja secara spesifik
Alkaloid  merupakan  senyawa  memiliki  kemampuan  sebagai  antibakteri, dengan  cara  mengganggu  komponen  penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel  tersebut  (Siregar  et  al.,  2012).  Adapun  senyawa  flavonoid  berfungsi  sebagai antibakteri,  dengan  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  jalan  merusak membran sel melalui pembentukan senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler yang  mengganggu  integritas  membran  sel  bakteri  (Vifta  et  al.,  2017).  Akan  tetapi senyawa  saponin  memiliki  jalur  yang  berbeda  dalam  penghambatan  bakteri,  yakni dengan  jalan  mengganggu  kestabilan  sitoplasma  sehingga  sitoplasma  bocor  dan mengakibatkan  kematian  sel  (Rizkita,  2017).  Steroid  dapat  merusak  membran  sel bakteri dengan meningkatkan permeabilitas sel, sehingga terjadi kebocoran sel yang diikuti keluarnya material interaseluler. Terpenoid membentuk ikatan polimer yang kuat dengan porin (protein transmembran) sehingga porin tersebut rusak (Alamsyah et al., 2014). Tanin memiliki aktivitas  antibakteri, secara garis besar mekanismenya adalah  toksisitas  tannin  dapat  merusak  membran  sel  bakteri,  senyawa  tanin  dapat menginduksi pembentukan kompleks  senyawa ikatan terhadap  enzim atau substrat mikroba  dan  pembentukan  suatu  kompleks  ikatan  tannin  terhadap  ion  logam  yang dapat  menambah  daya  toksisitas  tannin  itu  sendiri  (Ngajowa  et  al.,  2013).  Minyak atsiri  bekerja  efektif  sebagai  antibakteri,  dengan  cara  mengganggu  proses terbentuknya  membran  atau  dinding  sel  sehingga  tidak  terbentuk  atau  terbentuk tidak sempurna (Dwianggraini et al., 2013).

## SIMPULAN
Kesimpulan  dalam  penelitian  ini  adalah  sediaan spray  hand  sanitizer kombinasi ekstrak  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L. ) dan  daun  serai  ( Cymbopogon  citratus )  memiliki aktivitas daya hambat (bakteriostatik) terhadap Staphylococcus aureus . Sediaan spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun sirih hijau ( Piper betle L. ) dan daun serai ( Cymbopogon citratus ) memiliki kemampuan dan aktivitas daya bunuh (bakterisidal) yang sama dengan spray  hand  sanitizer komersil  karena  efektif  dalam  membunuh Staphylococcus  aureus . Formula  sediaan spray  hand  sanitizer dengan  perbandingan  perbandingan  2:2  pada kombinasi ekstrak daun sirih hijau ( Piper betle L. ) dan daun serai ( Cymbopogon citratus ) memiliki kemampuan bakterisidal yang baik dalam membunuh Staphylococcus aureus dan bakteri total pada telapak tangan.

## REFERENSI
Akib, N. I., Wulandari, I. W., Suryani, dan Hanari. (2019). Formulasi Gel Hand Sanitizer Antibakteri Kombinasi Ekstrak Rumput Laut Eucheuma spinosum dan Eucheuma cotonii Asal Kepulauan Wakatobi Sulawesi Tenggara. J. Fish Protech , 2(2), 180- 189. http://dx.doi.org/10.33772/jfp.v2i2.9232. Alamsyah, H. K., Widowati,  I.,  dan Sabdono, A. (2014). Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Rumput  Laut Sargassum cinereum (J.G.  Agardh)  dari  Perairan  Pulau  Panjang Jepara terhadap Bakteri Escherichia coli Dan Staphylococcus epidermidis . Journal of Marine Research , 3(2), 69-78. https://doi.org/10.14710/jmr.v3i2.4966. Anindhita, M. A. dan Oktaviana, N. (2020). Formulasi Spray Gel Ekstrak Daun Pandan Wangi    sebagai  Antiseptik  Tangan. Jurnal  Ilmiah  Farmasi , 9(1),  14-21. http://dx.doi.org/10.30591/pjif.v9i1.1503.
Asngad, A., Bagas, R. A., dan Nopitasari. (2018). Kualitas Gel Pembersih Tangan ( Hand Sanitizer )  Dari  Ekstrak  Batang  Pisang  Dengan  Penambahan  Alkohol,  Triklosan Dan  Gliserin  Yang  Berbeda  Dosisnya. Bioeksperimen ,  4(2),  61-20. https://doi.org/10.23917/bioeksperimen.v4i2.6888.
Baizuroh, N., Yahdi, dan Dewi, Y. K. (2020). Uji Kualitas Hand Sanitizer Ekstrak Daun
Kunyit (Curcuma longa Linn). al-Kimiya , 7(2), 88-94. https://doi.org/10.15575/ak.v7i2.8744.
Dwianggraini  W.  R.,  Pujiastuti,  P.,  dan  Ermawati,  T.  (2013).  Perbedaan  Efektifitas Antibakteri  Antara  Ekstrak  Daun  Sirih  Merah (Piper  crocatum) dan  Ekstrak Daun  Sirih  Hijau (Piper  betle L. ) Terhadap Porphyromonas  gingivalis.
Stomatognatic Jurnal Kedokteran Gigi , 10(1), 1-5. http://dx.doi.org/10.20473/jkr.v2i2.6196.
Effendi, A. P. P., Sholikah, N., dan Ismawati. (2020). Pembuatan Hand Sanitizer Alami Dengan  Memanfaatkan  Tumbuhan  Daun  Sirih  Di  RW  04  Desa  Setia  Mekar. BDIPRAJA: Jurnal Pengabdian Kepada Masyarakat , 1(1), 29-35. http://dx.doi.org/10.31002/abdipraja.v1i1.3197.
Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme Jilid 1 . Bandung: Yrama Widya.
Martono,  C.  dan  Suharyani,  I.  (2018).  Formulasi  Sediaan Spray  Gel Antiseptik  Dari Ekstrak  Etanol  Lidah  Buaya (Aloe  vera) . Jurnal  Farmasi  Muhammadiyah Kuningan ,  3(1),  29-37.    https://ojs.stikesmuhammadiyahku.ac.id/index.php/ jurnalfarmaku/article/view/55
Meiliawati,  N.  A.  A.,  Pramanti  N.,  Amalia,  L.  Z.,  Salsabila,  G.  A.  F.,  Puspito,  R.  I.,  dan Retnoningrum.  (2018).  Hand  Sanitizer  Ekstrak  Daun  Trembesi  ( Albizia  saman
(Jacq.) Merr) Aroma Anggur Sebagai Antiseptik. Jurnal Kedokteran Diponegoro , 7(1), 359-365. https://doi.org/10.14710/dmj.v7i1.19394. Ngajowa, M., Abidjulua, J. dan Kamua, V. S. (2013). Pengaruh Antibakteri Ekstrak Kulit Batang Matoa ( Pometia pinnata ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Secara In Vitro.
Jurnal MIPA Unsrat online , 2(2), 128-132. https://doi.org/10.35799/jm.2.2.2013.3121.
Oktaviana, S. (2018). Uji  Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Biji Mengkudu  ( Morinda citrifolia L.)  Dan  Sediaan  Gel  Hand  Sanitizer.  Skripsi.  Jurusan  Kimia  Fakultas Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Negeri  Semarang. http://lib.unnes.ac.id/38013/1/4311414031.pdf.
Opilia,  T.,  Priyantono,  dan  Suharyani,  I.  (2016).  Formulasi  Minyak  Atsiri  Daun  Sirih Hijau ( Piper bettle L.) Dalam Sediaan Gel Pencuci Tangan. Jurnal Farmaku , 1(1), 24-31. https://jurnalstikesluwuraya.ac.id/index.php/eq/article/view/75/55. Permadi, A., Sutanto, Sri, W. (2015). Perbandingan Metode Ekstraksi Bertingkat Dan Tidak Bertingkat Terhadap  Flavonoid  Total Herba Ciplukan  (Physalis angulata l.) Secara Kolorimetri. Jurnal Online Mahasiswa. 1(1): 1-10. https://jom.unpak.ac.id/index.php/farmasi/article/view/706.
Priyono. (2016). Metode Penelitian Kuantitatif . Surabaya: Zifatama Publishing. Putri,  M.  A.,  Saputra,  M.  E.,  Amanah,  I.  N.,  dan  Fabiani,  V.  A.  (2019).  Uji  Sifat  Fisik Sediaan  Gel  Hand  Sanitizer  Ekstrak  Daun  Pucuk  Idat  ( Cratoxylum  glaucum ). Seminar  Nasional:  Prosiding  Seminar  Nasional  Penelitian  &  Pengabdian  Pada Masyarakat, 3, 39-41. https://doi.org/10.33019/snppm.v3i0.1309.
Rini, E. dan Nugraheni, E. R. (2018). Uji Daya Hambat Berbagai Merek Hand Sanitizer Gel Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Journal  of  Pharmaceutical  Science  and  Clinical  Research ,  01,  18-26.  DOI: 10.20961/jpscr.v3i1.15380.
Rizkita  A.  D.  (2017).  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Sereh  Wangi,  Sirih  Hijau, dan  Jahe  Merah  Terhadap  Pertumbuhan  S treptococcus  mutans . Seminar
Nasional Sains dan Teknologi , 1-7. https://jurnal.umj.ac.id/index.php/semnastek/article/view/1927/1579.
Rori,  B.  N.  D.,  Johanna,  A.  K.,  &  Aurelia,  S.  R.  S.  (2018).  Uji  Konsentrasi  Hambat Minimum  Ekstrak  Daun  Gedi  ( Abelmoschus  manihot L.  Medik)  terhadap Pertumbuhan Streptococcus  mutans. Jurnal  e-GiGi  (eG) , 6(2),  83-90. https://doi.org/10.35790/eg.6.2.2018.20200.
Sanilife Solutions. (2021). Sanilife Hand Sanitizer. https://sanilifesolutions.com/liquid-hand-sanitizer-vs-gel/.  Diakses  18  Januari 2021.
Santoso,  J.  dan  Riyanta,  A.  B.  (2019).  Aktivitas  Antibakteri  Sediaan Foot  Sanitizer Spray Yang Mengandung Ekstrak Biji Kopi Dan Jahe . Jurnal Ilmiah Farmasi , 8(1), 47-50. http://dx.doi.org/10.30591/pjif.v8i1.1300.
Shu, M. (2013). Formulasi Sediaan Gel Hand Sanitizer Dengan Bahan Aktif Triklosan 0,5% Dan 1%. Calyptra: Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya , 2(1), 1- 14. https://journal.ubaya.ac.id/index.php/jimus/article/view/173
Siregar,  A.  F.,  Sabdono,  A.,  dan  Pringgenies,  D.  (2012).  Potensi  Antibakteri  Ekstrak Rumput  Laut  terhadap  Bakteri  Penyakit  Kulit Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus epidermidis, Dan Micrococcus luteus . Journal of Marine Research , 1(2), 152-160. https://doi.org/10.14710/jmr.v1i2.2032.
Subramanian,  P.,  Takwa,  C.  W.  I.  C.  W.,  dan  Zubair,  N.  E.  A.    (2015).  Chemical Composition  and Antibacterial Activity  of Essential Oil  of Cymbopogon citratus
And Cymbopogon nardus Against Enterococcus faecalis . International Journal of Biosciences , 6(9), 9-17. http://dx.doi.org/10.12692/ijb/6.9.9-17.
Thaddeus,  N.  I.,  Francis,  E.  C.,  Jane,  O.  O.,  Obumneme,  A.  C.,  and  Okechukwu,  E.C. (2018).  Effects  of  Some  Common  Additives  on  The  Antimicrobial  Activities  of Alcohol-Based Hand Sanitizer. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine , 11(3),
222-226. DOI : 10.4103/1995-7645.228437
Titaley,  S.,  Fatimawali,  dan  Lolo,  W.A.  (2014).  Formulasi  dan  Uji  Efektifitas  Sediaan Gel  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangrove  Api-Api  ( Avicennia  marina )  Sebagai Antiseptik Tangan.
Jurnal Ilmiah Farmasi , 3(2), 99-106. https://doi.org/10.35799/pha.3.2014.4781.
Vifta, R. L., Wansyah, P. M. A., dan Hati, A. K. (2017). Perbandingan Total Rendemen Dan Skrining Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau (Piper betle L. ) Secara Mikrodilusi. Journal  of  Science  and  Applicative  Technology ,  1(2),  87-93. https://doi.org/10.35472/281450.
Widyawati L., Mustriani, B.A.A., Purmafitriah, E. (2017). Formulasi Sediaan Gel Hand Sanitizer  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata Linn.)  Sebagai Antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus . Jurnal  Farmasetis ,  6(2),  47-57. https://doi.org/10.32583/farmasetis.v6i2.274.
Zen,  N.  A.  M.,  Queljoe,  E.D.,  dan  Singkoh,  M.  (2015).  Uji  Bioaktivitas  Ekstrak Padina Australis dari  Pesisir  Pantai  Molas  Sulawesi  Utara  terhadap  Bakteri Staphylococcus  epidermidis . Jurnal  Pesisir  dan  Laut  Tropis ,  2(1),  34-40. https://doi.org/10.35800/jplt.3.2.2015.10451.