Penghambatan Bakteri Patogen pada Ikan Segar, Topotubun et al.

## PANGHAMBATAN BAKTERI PATOGEN PADA IKAN SEGAR YANG DIAPLIKASI Caulerpa lentillifera

## The Inhibitor Pathogen Bacteria’s
of Sea Grape Caulerpa lentillifera Applies on Fresh Fish
Alfonsina M.Tapotubun*, Imelda K.E. Savitri, Theodora E.A.A. Matrutty Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Pattimura, Kampus Unpatti – Poka, Jalan. Mr. Chr. Soplanit  Poka  97233 Ambon Maluku Telepon (0911) 3825060; Faks. (0911) 3825061 *Korespondensi: am.tapotubun@gmail.com
Diterima: 21 September 2016/ Review: 09 November 2016/ Disetujui: 15 Desember 2016
Cara sitasi: Tapotubun AM, Savitri IKE, Matrutty TEAA. 2016. Penghambatan bakteri patogen pada ikan segar yang diaplikasi Caulerpa lentillifera . Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 19(3): 299-308.

## Abstrak
Kontaminasi bakteri patogen pada ikan segar dapat terjadi selama periode pascapanen hingga sesaat sebelum konsumsi, dan dapat menyebabkan penyakit. Salah satu cara sederhana dan aman untuk menjaga keamanan pangan  ikan segar adalah dengan memanfaatkan rumput laut Caulerpa letillifera untuk menekan aktivitas bakteri patogen. Penelitian ini bertujuan mempelajari kemampuan anggur laut ( C. lentillifera ) untuk menghambat keberadaan bakteri patogen Escherichia coli , Vibrio cholerae dan Salmonella sp. pada ikan segar selama penyimpanan dengan suhu ruang dan pengesan. Metode yang digunakan adalah metode percobaan laboratorium yaitu aplikasi hancuran anggur laut dengan konsentrasi 10%, 20% dan 30% pada ikan Selar crumenopthalmus segar selama penyimpanan 1, 2 dan 3 hari pada suhu suhu ruang dan suhu es. Caulerpa lentillifera yang diaplikasikan memperlihatkan kemampuan menghambat aktivitas kelompok bakteri coliform dan Eshcerichia coli pada ikan Selar crumenopthalmus segar hingga 2 x 24 jam pada suhu ruang dan 3 x 24 pada suhu es. Bakteri Salmonella sp. dan Vibrio cholerae tidak terdeteksi pertumbuhannya selama periode penyimpanan.  Konsentrasi anggur laut segar 10 % cukup efektif diaplikasikan pada ikan segar untuk menghambat aktivitas Escherichia coli selama 2 x 24 jam pada suhu ruang dan 3 x 24 jam pada suhu es, dan mencegah keberadaan Vibrio cholerae dan Salmonella sp. selama penyimpanan.
Kata kunci: Escherichia coli , keamanan pangan, rumput laut, Salmonella sp., Vibrio cholerae
Abstract
Contamination of pathogen bacteries at the fresh fish may occur during the post harvesting to the consuming period, and endanger human health. One of simple and safe way to protect secureness of fresh fish food is the use of Caulerpa lentillifera to push down pathogen bacteries activity. The aims of this research to investigate lability of sea grape ( Caulerpa lentillifera ) against the activity of pathogen bacteries Escherichia coli , Vibrio cholerae and Salmonella sp . , in fresh fish, during storage phase, at ambient and ice temperatures. Method used in this research is experimental laboratories method, that is, 10%, 20% and 30% blended sea grapes applied on fresh fishes, Selar crumenopthalmus during storage of 1, 2 and 3 days at ambient and ice temperatures.  All the applied of blended of Caulerpa lentillifera , shows the ability to obstruct the activity of bactery group coliform and Escherichia coli on fresh fish Selar crumenopthalmus up to 2x 24 hours, at ambient temperature, and 3x24 hours at ice temperature. During storage period, the occurance and grows of Salmonella sp. and Vibrio cholerae bacteries is undetected. Fresh sea grapes concentration of 10% is sufficient to be applied on fresh fish to obstruct the activity of pathogen bacteries Escherichia coli during storage time of 2 x 24 hours at room temperature, and 3 x 24 hours at ice temperature, and to block the occurance of Vibrio cholerae and Salmonella sp. during storage period.  .
Keywords : Escherichia coli , food safety, S almonella sp., seaweed, Vibrio cholerae
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi

## PENDAHULUAN
Ikan merupakan sumber protein hewani yang baik dengan nilai biologis yang tinggi namun memiliki aktivitas air (Aw) yang tinggi sehingga bakteri dengan mudah berkembang biak. Hal ini terjadi bukan hanya pada bakteri yang secara alami terdapat pada ikan (terkonsentrasi pada isi perut, insang dan kulit), namun juga pada bakteri yang berasal dari sumber lain yang mengkontaminasi ikan tersebut termasuk bakteri patogen. Bagi nelayan dan pedagang ikan, penggunaan es untuk mempertahankan mutu dan kesegaran ikan merupakan beban biaya yang tinggi sehingga mendorong beberapa pihak menggunakan bahan pengawet formalin. Penggunaan formalin (pengawet non pangan) untuk menjaga kesegaran dan daya awet bahan pangan karena haganya murah, pengerjaannya mudah dan tidak memperlihatkan ciri-ciri spesifik sehingga tidak dapat diketahui oleh konsumen namun sangat berbahaya bagi kesehatan (Tapotubun 2011). Saat ini penggunaan pengawet yang tidak sesuai masih sering terjadi tanpa mempertimbangkan dampak yang ditimbulkan terhadap kesehatan konsumen (Hiariej dan Lekahena 2015). Anggur laut Caulerpa spp. adalah salah satu jenis rumput laut dari kelompok Cholorophyta yang tumbuh subur sebagai spesies endemik di Kepulauan Kei Maluku sepanjang tahun dan dikenal dengan sebutan “lat”. Caulerpa selain dimanfaatkan sebagai makanan kesehatan (Siregar dkk. 2012; Etcherla and Rao 2014), mengandung senyawa bioaktif (Blunt et al. 2016; Shannon dan Abu-Ghannam 2016; Abdel-Raouf et al. 2010; Bhadury and Wright 2004,) dan dapat berfungsi sebagai  antibakteri (Sabirin 2015; Zamzami et al. 2015, Chandrasekaran 2014;
Etcherla and Rao 2014; Salem and Nasr El- deen 2011; Singkoh 2011,), antijamur (Etcherla and Rao 2014) antitumor, antioksidan (Devi et al. 2011; Santoso et al. 2010) dan produk farmasi (Al-Saif et al. 2013; Salem et al. 2011; Eluvakkal et al. 2010; Manilal et al. 2010; Tuney et al. 2006). Penelitian menggunakan bahan alam untuk mempertahankan mutu dan keamanan
pangan telah dilakukan dan menjadi perhatian berbagai kalangan termasuk pemerintah.
Husni et al. (2015) menggunakan ekstrak etanol rumput laut Padina sp. pada ikan kembung segar memperlihatkan nilai TPC layak konsumsi sesuai SNI hanya hingga penyimpanan jam ke-6. Hasil penelitian
Prasetiawan et al. (2013) memperlihatkan nilai TPC ikan tongkol segar dengan penambahan quercetin berada pada kisaran log 5 CFU/G hingga log 8 CFU/G. Penambahan 1% senyawa quercetin dari tanaman dapat menjaga keamanan daging ikan (berdasarkan kadar histamin) selama penyimpanan suhu ruang hingga 20 jam.  Sabono (2015) mencoba aplikasi hancuran rumput laut Caulerpa sp. pada ikan segar, dapat menekan pertumbuhan bakteri dan layak dikonsumsi sesuai SNI hingga 48 jam penyimpanan pada suhu kamar dengan nilai TPC log 2,7 CFU/G (24 jam) dan log 3,7 CFU/G (48 jam). Hal ini berarti Caulerpa memiliki potensi menekan aktivitas bakteri yang lebih tinggi namun aplikasinya secara langsung untuk menghambat bakteri patogen pada ikan belum pernah dilakukan. Bakteri patogen dapat dengan mudah mengkontaminasi ikan selama penyimpanan dan distribusi dan dapat menyebabkan penyakit bagi yang mengkonsumsinya (Dwiyitno 2010). Escherichia coli , Salmonella sp. dan Vibrio cholerae merupakan bakteri patogen yang  ditetapkan  sebagai syarat keamanan pangan ikan segar dalam Standar Nasional Indonesia (BSN 2006a). Sejauh ini laporan tentang aktivitas Caulerpa terhadap bakteri patogen pada ikan masih tergolong kurang (Zainuddin dan Malina 2009; Bansemir et al. 2006; Choudhury et al. 2005). Salah satu cara sederhana yang dapat dilakukan untuk menjaga keamanan pangan ikan segar adalah dengan memanfaatkan rumput laut C. lentillifera untuk menekan aktivitas bakteri patogen. Penelitian ini bertujuan  mempelajari penggunaan Caulerpa lentillifera untuk menghambat keberadaan bakteri patogen Escherichia coli , Vibrio cholerae dan Salmonella sp. pada ikan selar segar selama penyimpanan pada suhu ruang dan suhu pengesan.
Penghambatan Bakteri Patogen pada Ikan Segar, Topotubun et al.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ikan Selar crumenopthalmus segar yang dibeli dari nelayan desa Hative Besar Kota Ambon, Caulerpa lentillifera segar dari perairan Desa Letman Kabupaten Maluku Tenggara, es curai dan media untuk analisis bakteri patogen yaitu Buterffield Phosphate Buffered (Merc), Plate Count Agar (Difco), Laktosa Broth (Merc), Tetrathionate Base Broth (Difco), Hektoen Enterik (Difco), Bismuth Sulfate Agar (Difco), Xylose Lysine Desoxycholate (Difco), Triple Sugar Iron Agar (Difco), Lysine Iron Agar (Difco), Urea
Broth (Difco), Simmon Citrate Agar (Difco), Lactose (Difco), Tryptose Broth (Difco), M-R Up (Difco), Lauryl Tryptose Broth (Difco), Levine’s Eosin Methylene Blue Agar (BDBBL), Brillian Green Lactose Bile Broth (Difco),
MR-VP Medium (Difco), EC Medium (Difco), Brillian Green Lactose Blue Agar (Difco), TCBA(Difco), TSA (Difco), NaCl (K 45005604342), KIA (BDBBL). Alat-alat yang digunakan yaitu timbangan Ohause (ARB 120), thermocouple (tipe 52 II), stomacher (serial no.050716015), autoclave (HL 36 A), inkubator (IMB 500), oven (UM 400), lemari pendingin (G55-388), vortex (F
202A0175), cawan petri (pyrex), erlenmeyer (pyrex), pipet (A EX 20OC), pipet (boy accu jet 01J16302).
Prosedur Penelitian Aplikasi Caulerpa lentillifera pada Ikan Selar Segar
Aplikasi C. lentillifera pada ikan selar segar merujuk dari Sabono (2015). Sejumlah 6 ekor ikan selar ditimbang dan dicatat beratnya untuk menentukan berat C. lentillifera . Rumput laut C. lentillifera dicuci bersih dengan air mengalir dan ditiriskan, kemudian ditimbang sesuai konsentrasi 10%, 20% dan 30% terhadap berat ikan (b/b). Tahap selanjutnya C. lentillifera dihaluskan menggunakan blender dan diaplikasikan pada ikan selar segar menggunakan kuas. Ikan yang telah diaplikasi disimpan pada suhu ruang dan suhu dingin selama 1, 2 dan 3 hari. Penyimpanan dingin menggunakan
es curai dengan perbandingan terhadap ikan 2:1 dan pergantian es dilakukan setiap 24 jam. Analisis bakteri patogen Escherichia coli SNI 01-2332.1-2006 (BSN. 2006b), Salmonella SNI 01-2332.2-2006 (BSN. 2006c), Vibrio cholerae SNI 01-2332.4-2006 (BSN. 2006d).
Analisis Escherichia coli (BSN.
2006b)
Timbang 25 g daging ikan, lumatkan dan dimasukan ke dalam kantong plastik steril yang berisi 225 larutan BFP, aduk dengan stomacher lalu buat pengenceran. Masukan 1 ml larutan tiap pengenceran ke dalam 3 seri tabung larutan LTB yang berisi tabung durham dan inkubasi (pendugaan Coliform ). Inokulasi tabung LTB  positif ke tabung BGLB Broth yang berisi tabung durham dengan menggunakan jarum ose lalu inkubasi selama 48 jam pada suhu 35 o C±1 o C. Inokulasikan dari setiap tabung LTB positif ke tabung-tabung EC Broth yang berisi tabung durham dengan menggunakan jarum ose dan inkubasi dalam waterbath selama 48 jam±2 jam pada suhu 45 o C±0,5 o C (penegasan Coliform ). Tentukan nilai APM/G faecal Coliform berdasarkan jumlah tabung-tabung EC yang positif.  Ambil 1 jarum ose larutan pada EC positif dan goreskan pada media LEMB agar dan inkubasi selama 24 jam pada suhu 35 o C±1 o C. Ambil lebih dari 1 koloni ( typical ) Escherichia coli dan goreskan ke media PCA miring, inkubasi selama 24 jam±2 jam pada suhu 35 o C±1 o C.
Salmonella (BSN. 2006c) Sebanyak 25 G sampel daging ikan, dimasukkan dalam wadah plastic steril lalu tambahkan 225 mL larutan Lactose Broth, kemudian dihomogenkan selama 2 menit. Secara aseptis, pindahkan larutan contoh dalam wadah steril yang sesuai dan biarkan pada suhu ruang selama 60 menit dengan wadah tertutup (pra pengkayaan). Pindahkan 0,1 ml larutan contoh ke dalam 10 ml RV medium dan 1 ml larutan contoh ke dalam 10 ml TTB, kocok rata lalu inkubasi 24 jam±2 jam pada suhu 35°C±1°C (pengkayaan). Kocok tabung (dengan vortex) dan ambil dengan jarum loop (3 mm) gores TTB yang diinkubasi ke dalam media HE, XLD dan BSA.
Gores ke dalam media yang sama dari RV Broth kemudian inkubasi selama 24 jam pada 35°C±1°C (isolasi selektif agar). Ambil 2 atau lebih koloni Salmonella dari masing-masing media agar selektif menggunakan jarum inokulasi steril dan goreskan ke permukaan media TSI agar dengan cara menggores agar miring dan dan menusuk agar tegak. Selanjutnya tanpa mengambil koloni baru, gunakan jarum yang sama untuk menggores media LIA  dengan cara menusuk agar tegak lebih dahulu, setelah itu goreskan pada agar miring. Inkubasi TSI dan LIA selama 24 jam±2 jam pada suhu 35°C±1°C kemudian dilanjutkan dengan uji biokimia.
Vibrio cholerae (BSN 2006 d ) Timbang secara aseptis 25 g contoh, kemudian tambahkan 225 ml larutan Alkaline Peptone Water dan dihomogenasi selama 2-3 menit. Inkubasi pada suhu 36°C±1°C selama 6 jam (pengkayaan). Tanpa mengocok tabung, ambil 1 ose dari setiap tabung yang positif (keruh) pada setiap pengenceran sedalam 1 cm dari permukaan cairan dan goreskan ke dalam TCBS agar. Inkubasikan TCBS agar pada suhu 36°C±1°C selama 18 jam–24 jam (isolasi). Amati keberadaan Vibrio cholerae pada TCBS agar dengan ciri besar, permukaan halus, agar datar, bagian tengah buram dan bagian pinggir terang, berwarna kuning (sukrosa positif). Tahap pemurnian: ambil 3 koloni terduga atau lebih dari setiap TCBS agar, goreskan ke dalam T1N¬1 agar atau TSA +1,5% NaCl (total mengandung NaCl 2%) kemudian inkubasi selama 18–24 jam pada suhu 36°C±1°C. Selanjutnya uji biokimia pendahuluan dan uji biokimia lanjutan.

## Analisis Data
Data diolah menggunakan Microsoft office
Excel (Microsoft  Inc.,USA), dianalisis secara deskriptif dan ditampilkan dalam bentuk tabel sehingga dapat diketahui kemampuan
C. lentilliera terhadap keberadaan bakteri patogen pada ikan selar segar selama penyimpanan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Anggur Laut
Identifikasi anggur laut yang dilakukan di Laboratorium Pusat Penelitian Laut Dalam,
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Ambon dengan berpedoman pada panduan identifikasi “Field Guide to the COMMON MANGROVES, SEAGRASSES and ALGAE of the PHILIPPINES” menunjukkan jenis anggur laut dari perairan Kei Maluku yang digunakan sebagai objek penelitian ini adalah Caulerpa lentillifera dengan morfologi seperti terlihat pada Gambar 1.
Bakteri Patogen pada Ikan Segar yang Diaplikasi Rumput  Laut Caulerpa lentillifera
Mikroba patogen yang terdapat dalam bahan pangan masuk ke dalam tubuh melalui saluran pencernaan, menembus sistem pertahanan tubuh dan berkembang biak. Mikroorganisme yang dapat menginfeksi dan menimbulkan penyakit adalah mikroorganisme yang mempunyai daya patogenitas yang tinggi, daya virulensi kuat dan daya invasi yang tinggi sehingga dapat berkembang biak dan menyebar ke dalam tubuh (Adams and Moss 2008).
Masyarakat telah semakin sadar untuk memelihara kesehatannya melalui konsumsi
Gambar 1 Morfologi Caulerpa lentillifera
Penghambatan Bakteri Patogen pada Ikan Segar, Topotubun et al.
makanan yang sehat sehingga penyediaan ikan segar yang aman (sebagai sumber protein masyarakat) merupakan hak asasi masyarakat yang harus diperhatikan. Aplikasi C. lentillifera pada ikan selar segar dimaksudkan untuk mengetahui kemampuannya dalam menghambat bakteri patogen Escherichia coli , Salmonella sp. dan Vibrio cholerae pada ikan segar selama penyimpanan.
Coliform & Escherichia coli
Bakteri Coliform ditemukan dalam jumlah yang cukup banyak pada semua sampel penelitian yaitu 1100 MPN/G (1,1x10 3 ) dan hal ini mengindikasikan adanya pencemaran kelompok bakteri Coliform di perairan tersebut. Coliform merupakan suatu kelompok bakteri dan heterogen kuman batang gram negatif yang digunakan sebagai indikator adanya polusi yang berasal dari kotoran hewan atau manusia dan menunjukkan kondisi sanitasi yang tidak baik (Duta et al. 2015, Dwiyitno 2015).  Kelompok Coliform antara lain: Escherichia coli , Edwardsiella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia , Serratia, Proteus, Arizona, Providentia, Pseudomonas dan basil parakolon.  Sifat-sifat kuman Coliform secara umum adalah:  bentuk batang, gram negatif, non motile atau motile, memiliki flagella peritrikus berfimbria atau tidak dan berkapsul atau tidak.
Hasil pengamatan pada ikan selar segar yang diaplikasi anggur laut C. lentillifera segar yang  disimpan pada suhu ruang dan suhu dingin menunjukkan jumlah Coliform > 1100 MPN/G kecuali pada ikan yang diaplikasi 30% C. lentillifera segar pada penyimpanan hari ketiga suhu dingin menunjukkan penurunan nilai  MPN  yaitu  sebesar  150  MPN/G (Tabel 1). Anggur laut dengan konsentrasi 30% pada suhu dingin, dapat menghambat pertumbuhan kelompok bakteri Coliform . Aktivitas penghambatan terhadap kelompok bakteri Coliform berhubungan dengan kadar air Caulerpa lentillifera yang tinggi dimana makin tinggi kadar air maka konsentrasi bahan lain semakin rendah. Coliform merupakan suatu kelompok bakteri dan heterogen bakteri berbentuk batang gram negatif yang digunakan sebagai indicator adanya polusi yang berasal dari kotoran hewan atau manusia dan menunjukkan kondisi sanitasi yang tidak baik  (Duta et al. 2015; Sopandi dan Wardah, 2014). Bakteri Coliform dapat dibedakan atas dua kelompok yaitu Coliform fekal, misalnya Escherichia coli (berasal dari kotoran hewan dan manusia) dan Coliform non fekal misalnya Enterobacter aerogenes (ditemukan pada hewan dan tanaman mati). Hasil analisis lanjut untuk mendeteksi keberadaan Escherichia coli memperlihatkan bahwa semua sampel yang diamati tidak
Tabel 1  Hasil analisa bakteri Coliform sp.  pada ikan segar yang diaplikasi C. lentillifera segar Variabel Coliform (MPN/G) Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Suhu Ruang Kontrol > 1100 > 1100 - 10% > 1100 > 1100 - 20% > 1100 > 1100 - 30% > 1100 > 1100 - Suhu Es (Dingin) Kontrol > 1100 > 1100 150 10% > 1100 > 1100 > 1100 20% > 1100 > 1100 > 1100 30% > 1100 > 1100 150 Keterangan : (-) = Tidak dianalisa
menunjukkan adanya  bakteri  ini kecuali pada ikan selar yang diaplikasi anggur laut 30% dengan penyimpanan satu dan dua hari.
Keberadaan Escherichia coli pada sampel tersebut kemungkinan berasal dari saluran pencernaan ikan yang turut terambil pada saat analisa. Escherichia coli termasuk basil Coliform , merupakan flora komensal yang paling banyak pada usus manusia dan hewan, hidup aerobik/fakultatif anaerobik (Duta et al. 2015, Adams and Moss 2008).  Terlihat adanya aktivitas penghambatan dimana pada hari ketiga penyimpanan  jumlah E. coli menjadi <3 APM/G (Tabel 2). Badan Standardisasi Nasional Indonesia
(2006a) menetapkan standar mutu dan keamanan pada ikan segar pada SNI 01- 2729.1-2006  untuk Escherichia coli adalah maksimal < 3 APM/G. Dengan demikian aplikasi anggur laut (yang telah dihancurkan) pada ikan segar, telah menunjukkan kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan dan perkembangan kelompok bakteri Coliform dan bakteri Escherichia coli .
Kemampuan menghambat ini telah terlihat walaupun anggur laut segar yang digunakan masih didominasi oleh air  sehingga senyawa antibakteri hanya  terdapat dalam jumlah yang sangat kecil.  Sedangkan kemungkinan lain adalah bahwa suatu antibakteri memiliki kemampuan menghambat  jenis bakteri tertentu saja.
Escherichia coli merupakan flora normal dalam saluran pencernaan manusia dan hewan yang mudah mencemari air.  Perairan yang tercemar kotoran hewan dan manusia memungkinkan organisme yang hidup di dalamnya juga tercemar (Sopandi dan Wardah 2014; Adams and Moss 2008). Sampel ikan yang diaplikasi rumput laut C. lentillifera pada penyimpanan suhu ruang pada hari ketiga sudah tidak dapat dianalisa karena telah mengindikasikan terjadinya proses pembusukan. Suhu ruang selama penelitian berlangsung berkisar antara 28 o C hingga 38 o C, yang merupakan kisaran suhu optimal pertumbuhan berbagai jenis bakteri sehingga  memungkinkanproses perombakan oleh bakteri maupun enzim (bakteri dan ikan) dan perubahan biokimia lainnya berlangsung lebih cepat.  Buckle et al. (2007) menyatakan bahwa suhu adalah salah satu faktor lingkungan terpenting yang mempengaruhi kehidupan dan pertumbuhan karena suhu mempengaruhi kecepatan metabolisme dan pertumbuhan. Aplikasi anggur laut C. lentilliera 10% hingga 30% menunjukkan kemampuan menghambat pertumbuhan dan perkembangan kelompok bakteri Coliform dan Escherichia coli dan sesuai standard  keamanan
SNI ikan segar.  Standard Nasional Indonesia (SNI) untuk Escherichia coli ikan segar yaitu < 3 APM/G (BSN. 2006a).  Dengan demikian
Tabel 2  Hasil analisa bakteri Escherichia coli pada ikan segar yang diaplikasi C.lentillifera segar Variabel Coliform (MPN/G) Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Suhu Ruang Kontrol 3,0 3,0 - 10% < 3,0 < 3,0 - 20% < 3,0 < 3,0 - 30% < 3,0 < 3,0 - Suhu Es (Dingin) Kontrol 3,0 3,0 3,0 10% 3,0 < 3,0 < 3,0 20% < 3,0 < 3,0 < 3,0 30% 3,0 3,0 < 3,0 Keterangan : (-) = Tidak dianalisa
Penghambatan Bakteri Patogen pada Ikan Segar, Topotubun et al.
ikan selar segar yang diaplikasi C. lentillifera layak dikonsumsi hingga penyimpanan hari kedua  pada suhu ruang dan hari ketiga  pada suhu dingin.
Bakteri Salmonella sp.
Salmonella merupakan salah satu genus dari Enterobactericiae, berbentuk batang gram negatif, anaerobik  fakultatif dan anaerobik. Bakteri tumbuh pada suhu 5 o C–47 o C dengan suhu optimum 35 o C–37 o C (beberapa sel masih tetap hidup pada penyimpanan beku), kondisi   pH 4,1–9,0 dengan pH optimum 6,5–7,5 serta Aw 0,945–0,999 (Sopandi dan Wardah 2014; Adams and Moss 2008).
Salmonella sp. merupakan bakteri penyebab infeksi yang disebut salmonelosis dengan gejala gastroenteristis maupun gejala penyakit lainnnya misalnya demam tifoid dan demam tifoid dan demam paratifoid serta infeksi lokal. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat bakteri Salmonella pada sampel ikan segar yang diaplikasi anggur laut Caulerpa lentillifera (Tabel 3).   Hal ini berarti perairan tempat ikan tersebut ditangkap merupakan perairan belum terkontaminasi bakteri Salmonella.  Selain itu penanganan ikan setelah penangkapan yang dilakukan oleh nelayan  telah dilakukan dengan cukup baik dan memenuhi syarat penanganan ikan yang tepat sehingga tidak terjadi kontaminasi Salmonella sp. Demikian pula dengan
penggunaan es tabung yang berstandar pangan pada penyimpanan suhu dingin saat penelitian berlangsung, tidak terkontaminasi bakteri Salmonella . Pencemaran oleh Salmonella dapat terjadi dimana saja terutama pada daerah yang beriklim tropis dengan suhu lingkungan yang tinggi atau musim panas.  Duta et al.
(2015) menyatakan bahwa suhu lingkungan yang tinggi akan menstimulir perkembangan Salmonella . Kehadiran bakteri Salmonella sp. tidak diharapkan pada produk hasil perikanan karena merupakan bakteri patogen yang dapat membahayakan kesehatan konsumen yang mengkonsumsi ikan yang telah terkontaminasi bakteri ini. Badan Standardisasi Nasional Indonesia menetapkan standar mutu dan keamanan untuk Salmonella sp. pada ikan segar pada SNI 01-2729.1-2006 adalah negatif (BSN. 2006a).

## Vibrio cholerae
Vibrio cholerae merupakan bakteri gram negatif, berbentuk batang melengkung seperti koma atau lurus dan hidup secara anaerobik fakultatif, dapat tumbuh pada  suhu optimum 18 o C–37 o C dan kisaran pH 6,4–9,6 dengan pH optimum 7,8–8,0. Vibrio sp. merupakan jenis bakteri yang hidupnya saprofit di air, air laut, dan tanah namun dapat juga hidup pada salinitas yang relatif tinggi (Sopandi dan Wardah 2014; Adams and Moss 2008).
Tabel 3  Hasil analisa bakteri Salmonella sp.  pada ikan segar yang diaplikasi C. lentillifera segar Variabel Salmonella sp. (APM/25 G) Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Suhu Ruang Kontrol Negatif Negatif - 10 % Negatif Negatif - 20 % Negatif Negatif - 30 % Negatif Negatif - Suhu Dingin Kontrol Negatif Negatif Negatif 10 % Negatif Negatif Negatif 20 % Negatif Negatif Negatif 30 % Negatif Negatif Negatif Keterangan : (-) = Tidak dianalisa
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat bakteri Vibrio cholerae pada semua sampel ikan segar yang diaplikasi lat selama penyimpanan pada suhu yang berbeda (Tabel 4).  Hal ini berarti perairan tempat ikan tersebut ditangkap merupakan perairan belum terkontaminasi  bakteri Vibrio cholerae , dan perlakuan pascatangkap oleh nelayan telah memenuhi syarat penanganan ikan yang baik sehingga tidak terjadi kontaminasi bakteri Vibrio cholerae . Habitat Vibrio cholerae adalah laut namun dapat juga dapat ditemukan pada bahan pangan lainnya termasuk es.  Penggunaan es dengan bahan baku air yang memenuhi syarat kesehatan merupakan syarat utama pembuatan es untuk pangan karena kontaminasi bakteri dapat terjadi melalui es yang digunakan untuk menurunkan suhu ikan selama penyimpanan. Tapotubun (2000) menemukan adanya kontaminasi bakteri Vibrio cholerae pada ikan selama penyimpanan ikan kembung, yang bersumber dari es yang digunakan untuk menurunkan suhu ikan sehingga mengkontaminasi ikan tersebut. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa perairan Desa Hative Besar Kota Ambon yang merupakan tempat pengambilan ikan selar dan perairan Desa Letman Kepulauan Kei Maluku yang merupakan tempat pengambilan C. lentillifera tidak tercemar bakteri V.
cholerae . Demikian pula dengan es curai yang digunakan pada penyimpanan suhu
dingin saat penelitian berlangsung terbukti tidak menimbulkan kontaminasi bakteri V. cholerae pada ikan yang diaplikasi lat selama penyimpanan dingin karena merupakan es berstandar pangan. Bakteri Vibrio cholerae menyebabkan penyakit kolera ( cholera ) yaitu penyakit infeksi saluran usus bersifat akut. Vibrio cholerae mengeluarkan enterotoksin pada saluran usus sehingga terjadi diare disertai muntah yang akut dan hebat, akibatnya seseorang dalam waktu hanya beberapa hari kehilangan banyak cairan tubuh dan masuk pada kondisi dehidrasi. Apabila dehidrasi tidak segera ditangani, maka akan berlanjut kearah hipovolemik dan asidosis metabolik dalam waktu yang relatif singkat dan dapat menyebabkan kematian (Sopandi dan Wardah 2014; Adams and Moss 2008). Kehadiran bakteri Vibrio cholerae tidak diharapkan pada produk hasil perikanan karena merupakan bakteri patogen yang dapat membahayakan kesehatan konsumen yang mengkonsumsi ikan yang telah terkontaminasi.  Penyakit yang disebabkan oleh Vibrio maupun bakteri patogen lainnya telah menjadi isu global yang mendapat perhatian serius (Shannen and Abu-Ghannam 2016). Standar mutu dan keamanan untuk Vibrio cholerae pada ikan segar pada SNI 01-2729.1-
2006 adalah negatif (BSN. 2006a). Dengan demikian ikan selar ( Selar crumenopthalmus ) segar yang diaplikasi anggur laut Caulerpa
Tabel 4  Hasil analisa bakteri Vibrio cholerae pada ikan segar yang diaplikasi C. lentillifera segar Variabel Vibrio cholerae (APM/25 G) Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Suhu Ruang Kontrol Negatif Negatif - 10% Negatif Negatif - 20% Negatif Negatif - 30% Negatif Negatif - Suhu Dingin Kontrol Negatif Negatif Negatif 10% Negatif Negatif Negatif 20% Negatif Negatif Negatif 30% Negatif Negatif Negatif Keterangan : (-) = Tidak dianalisa
Penghambatan Bakteri Patogen pada Ikan Segar, Topotubun et al.
lentillifera dalam penelitian ini  bebas dari kontaminasi Vibrio cholerae .

## KESIMPULAN
Anggur laut C. lentillifera dapat menghambat keberadaan bakteri patogen pada ikan segar, dan konsentrasi 10% cukup efektif diaplikasikan untuk menghambat aktivitas Escherichia coli dan mencegah kontaminasi Vibrio cholerae dan Salmonella sp. selama penyimpanan 2 x 24 jam pada suhu ruang dan 3 x 24 jam pada suhu pengesan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima kasih kepada Pemerintah Republik Indonesia dalam hal ini Kementerian Riset, Teknologi dan Pendidikan Tinggi melalui Direktorat Jenderal  Penguatan Riset dan Pengembangan, yang telah membiayai penelitian ini melalui skema penelitian Hibah Bersaing.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdel-Raouf N, Ibraheem IBM, Abdel- Hameed MS, El-Yamany KN. 2008. Evaluation of Antibacterial, Antifungal anda Antiviral Activities of Ten Marine Macroalgae from read Sea, Egypt.
Egyptian Journal of Biotechnology 29:157-
172.
Adams MR, Moss MO. 2008.  Food microbiology.  Third Ed. Royal Society of Chemistry. Cambridge CB. WF: UK.
Bansemir A, Blume M, Schröder S, Lindequist U. 2006. Screening of cultivated seaweeds for antibacterial activity against fish patogenic bacteria. Aquaculture 252:79–
84.
Bhadury P, Wright CP. 2004.  Exploitation of marine algae: biogenic compound for potential antifouling application. In Planta 219:561-578 Blunt JW, Copp BR, Keyzers RA, Munro MHG, Prinsep MR. 2016. Marine Natural Products. Journal Natural Product Report (33):382-341.
[BSN] Badan Standardisasi Nasional. 2006a. Ikan Segar-Bagian 1:Spesifikasi : SNI 01- 2729-1-2006. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
[BSN] Badan Standardisasi Nasional.
2006b. Cara Uji Mikrobiologi-Bagian 1: Penentuan Coliform dan Escherichia coli pada Produk Perikanan: SNI 01-2332- 1-2006. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
[BSN] Badan Standardisasi Nasional. 2006c. Cara Uji Mikrobiologi-Bagian 2: Penentuan Salmonella pada Produk Perikanan: SNI 01-2332-2-2006. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
[BSN] Badan Standardisasi Nasional.
2006d. Cara Uji Mikrobiologi-Bagian 4: Penentuan Vibrio cholerae pada Produk Perikanan: SNI 01-2332-4-2006.  Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
Buckle KA, Edwards RA, Fleet GA, Wootton M. 2007. Ilmu pangan. Penerjemah H.Purnomo dan Adiono. Jakarta: UI Press. Chandrasekaran M, Venkatesalu V, Raj GA. 2014. Antibacterial activity of selected marine macro algae against vancomycin resistand Enterococccus faecalis . Journal of
Coastal Life Medicine 2(12):940-946.
Choudhury S, Sree A, Mukherjee SC, Pattnaik
P, Bapuji M. 2005. Antibacterial activity of organic extracts of selected marine algae and mangroves against fish patogens. Asian Fisheries Sci 18:285-294. Devi GK, Manivanan K, Thirumaran G, Rajathi FAA, Anantharaman P. 2011.  In vitro antioxidant activities of selected seaweeds from South East Coast India. Asia Pacific Journal of Tropical Medicine 4:2015-2011.
Dutta C, Panigrahi AK, Sengupta C. 2015. Prevalence of pathogenic bacteria in finfish and shellfish obtained from domestic markets of West Bengal, India. Frontiers in Enviromental Microbiology 1(2):14-18.
Dwiyitno  2010. Identifikasi bakteri patogen pada produk perikanan dengan teknik molekuler. Jurnal Squalen 5(2):67-78. Etcherla M, Rao GMN. 2014. In vitro study of antimicrobial activity in marine algae Caulerpa taxifolia and Caulerpa racemosa (J.Agardh). International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technology 5(2): 57-62.
Hiariej S, Lekahena V. 2015. Pengaruh
pemberian ekstrak biji atung sebagai pengawet alami terhadap perubahan nilai mutu ikan tongkol asap. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 18(3): 329-340. Husni A, Brats AK, Budhiyanti SA. 20015. Peningkatan daya simpan ikan kembung dengan ekstrak etanolik Padina sp. selama penyimpanan suhu kamar. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 18(1):1-10. Kandhasamy M, Arunachalan KD. 2008. Evaluation of  invitro antibacterial property of seaweeds of southeast coast of India. African Journal of Biotechnology 7(12): 1956-1961. Manilal A, Sujith S, Selvin J, Kiran GS, Shakir C, Lipton AP. 2010. Antimicrobial potential of marine organisms collected from the southwest coast of India against multiresistant human and shrimp patogens. Scientia Marina 74(2): 287-296. Prasetiawan NR. 2013. Penghambatan pembentukan histamin pada daging ikan tongkol ( Euthynus affinis ) oleh quercetin selama penyimpanan. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 16(2): 150-158. Sabirin F, Jamil A, Kazi IS, Ibrahim and Muhamad MA. Rashit. 2015. Screening of seaweeds potential against oral infections. Journal of Applied Sciences Research
11(15):1-6
Sabono I. 2015.  Studi pendahuluan mutu ikan layang ( Decapterus macrosoma ) segar yang diaplikasi hancuran anggur laut ( Caulerpa spp.) selama penyimpanan dingin [Skripsi]. Ambon. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Pattimura. Salem WM, Galal H, Nasr El-deen, F. 2011. Screening for antibacterial activities in some main algae from the Red Sea
(Hurgada, Egypt). African Journal of Microbiology Research 5(15):2160-2167. Santoso J, Maulida R, dan Suseno SH. 2010. Aktivitas antioksidan ekstrak metanol, etil asetat dan heksana rumput laut hijau Caulerpa lentilliera . Jurnal Ilmu Kelautan 1-10. Shannon E and Abu-Ghannam N. 2016. Review antibacterial derivatives of marine algae: an overview of pharmacological mechanisms and applications. Marine Drugs 14(4):81. Singkoh MFO. 2011.  Aktivitas antibakteri ekstrak alga laut Caulerpa racemosa dari perairan pulau nain. Jurnal Perikanan dan Kelautan Tropis VII(3):123–127. Sopandi T, Wardah. 2014. Mikrobiologi pangan (Teori dan Praktik). Yogyakarta: Penerbit Andi. Tapotubun AM. 2011.  Kombinasi suhu tinggi dan asap untuk menghambat aktivitas mikroorganisme pada produk ikan asap. Inopstek, Jurnal Inovasi Pembelajaran Sains dan Teknologi 4(1):10-18. Tapotubun AM. 2000.  Pengaruh penambahan garam pada es dan lama penyimpanan terhadap pertumbuhan bakteri dan beberapa komponen mutu ikan kembung ( Rastrelliger negletus ) [Tesis]. Bandung: Program Pascasarjana, Universitas Padjadjaran. Tuney I, Cadirci BH, Unal D, Sukatar A. 2006. Antimicrobial activities of the extracts of marine algae from the coast of Urla (zmir,
Turkey). Turk. J. Biol. 30: 1-5 Zainuddin EN, dan Malina AC. 2009.  Skrining rumput laut komersil asal Sulawesi Selatan sebagai antibiotik melawan bakteri patogen pada ikan. Penelitian Research Grant, Biaya IMHERE-DIKTI. Zamzami I, Andayani S,  Maftuch 2015. Characterization of Caulerpa racemosa fraction as Aeromonas hydrophila anti- bacterial. Journal of Life Science And Biomedicine 5(2):30-33. .