Pratama et al.

## Penghambatan Pertumbuhan Jamur Patogen Kakao Phytophthora palmivora oleh Pseudomonas fluorescence dan Bacillus subtilis
Growth Inhibition of Cocoa Pod Rot Fungus Phytophthora palmivora by Pseudomonas fluorescence and Bacillus subtilis bacteria
Sakti Widyanta Pratama 1*) , Sri-Sukamto 1) , Iis Nur Asyiah 2) , dan Yeni Vida Ervina 2)
1) Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, Jl. PB. Sudirman No. 90 Jember, Indonesia.
2) Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Jember, Jl. Kalimantan Tegalboto, Jember, Indonesia *)Alamat penulis  (corresponding author): sakti.pratama@gmail.com Naskah diterima (received) 16 April 2012, disetujui (accepted) 2  April 2013

## Abstrak
Penyakit busuk buah yang disebabkan oleh jamur Phytophthora palmivora merupakan salah satu penyakit penting pada tanaman kakao karena menyebabkan kerugian cukup besar.  Sampai saat  ini jamur patogen  penyebab  penyakit busuk buah  tersebut  masih  merupakan  masalah  krusial  dan  belum  ada  fungisida  yang benar-benar efektif. Salah satu alternatif pengendalian penyakit busuk buah kakao adalah  menggunakan  agens  hayati  sebagai  biofungisida,  diantaranya  dengan memanfaatkan bakteri Pseudomonas fluorescence dan Bacillus subtilis. Penelitian dilakukan dengan mengisolasi jamur P. palmivora dari buah terserang di Kebun Percobaan Kaliwining untuk mendapatkan biakan murni dan memperbanyak bakteri P. fluorescence dan B. subtilis. Uji antagonis dilakukan dengan menginokulasikan P.  palmivora  ke  dalam  cawan  petri  berisi  medium  PDA  pada  jarak  3  cm  dari tepi. Bakteri P. fluorescence dan B. subtilis diinokulasikan ke cawan petri pada perlakuan  tiga  hari  setelah  jamur.  Kontrol  hanya  diinokulasi  dengan  isolat P. palmivora. Pertumbuhan jamur diukur dengan cara menghitung pertambahan jari-jari koloni jamur setiap hari, mulai dari 24 jam setelah inokulasi. Pertumbuhan Phytophthora palmivora pada dua perlakuan digunakan untuk menghitung persentase penghambatan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa bakteri P. fluorescence dan B.  subtilis  mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur  P.  palmivora  berdasarkan persentase  penghambatan.  Berdasarkan  kriteria  keefektifan  yang  diperoleh menunjukkan bahwa lebar zona  bening B. subtilis menghasilkan  luas area  lebih lebar terhadap jamur P. palmivora dibandingkan dengan P. fluorescence. B. subtilis dan P. fluorescence efektif digunakan sebagai agens hayati.
Kata kunci: Penyakit  busuk  buah  kakao,  pengendalian  hayati,  Phytophthora  palmivora, Pseudomonas fluorescence, Bacillus subtilis

## Abstract
Black pod disease caused by Phytophthora palmivora fungus is one of the important diseases on cocoa crop. Pod rot is the most important disease because it may cause loss  of  cocoa pod. Until now, the fungal  pathogen  of cocoa black pod  disease  is  still  a  crucial  problem  and  there  is  no  fungicide  that  is  really effective  against  the  disease.  One  alternative  to  control  the  cocoa  black  pod disease is by using biological agents as biofungicide, including utilizing Pseudomonas fluorescence  and  Bacillus subtilis  bacteria.  The  research was done  by isolation
Pelita Perkebunan 29(2) 2013, 120 - 127
of  P.  palmivora  from  infected  pods  of  Kaliwining  Experimental  Station  to obtain  pure  cultures  of  fungus  and  by  multiplication  of  P.  fluorescence  and B.  subtilis.  Antagonist  test  was  performed  by  inoculating  P.  palmivora  into  a petri  dish in  a distance  of  3  cm from  the edge.  P.  fluorescence  and  B.  subtilis were  inoculated  into  petridishes  in  three  days  after  the  fungal  treatment. Control  was  inoculated  with  isolate  of  P.  palmivora  only.  Fungal  growth  was measured  everyday  by  measuring  radius  of  fungal  colonies  first  time  24  hours after  inoculation.  Growth  of  Phytophthora  palmivora  in  the  two  treatmens were  used  to  calculate  the  percentage  of  inhibition.  The  results  of  this study  indicated  that  P.  fluorescence  and  B.  subtilis  were  able  to  inhibit  fungal growth  of  P.  palmivora.  Both  bacterial  antagonists  had  the  same  effectiveness in  inhibiting  the  growth  of  P.  palmivora  fungus  based  on  the  percentage  of inhibition  and  effectiveness  criteria.  Based  on  the  results  of  translucent  zones indicated that B. subtilis was more powerfull in inhibiting growth of P. palmivora compared to P. fluorescence.
Key words: Black pod disease of cocoa, biological control, Phytophthora palmivora, Pseudomonas fluorescence, Bacillus subtilis
busuk buah kakao antara lain yang berbahan aktif tembaga. Selain fungisida kimia juga telah  dihasilkan  biofungisida  yaitu  jamur antagonis  Trichoderma  spp.  yang  dapat menekan intensitas serangan penyakit busuk buah kakao (Bagian Proyek Penelitian Kopi dan Kakao, 2001).
Hingga saat ini permintaan akan produk makanan yang memenuhi standar kesehatan semakin meningkat, sehingga penggunaan agens  hayati  juga  semakin  meningkat. Penelitian mengenai agens hayati semakin berkembang  untuk  menemukan  alternatif pengendalian penyakit dengan mengurangi penggunaan  bahan kimia.  Beberapa jenis mikroba  yang  telah  dilaporkan  dapat digunakan  sebagai  agens  hayati  terhadap aktivitas jamur patogen adalah Pseudomo- nas fluorescens, Agrobacterium radiobacter, Bacillus subtilis, B. cereus, B. amylolique- faciens, Trichoderma virens, Burkholderia cepacia, Saccharomyces sp, Gliocadium sp. (Suprapta, 2012).
Alternatif  agens  hayati  lain  yang dapat dikembangkan sebagai biofungisida pengendali  P.  palmivora  adalah  bakteri Pseudomonas  fluorescence  dan  Bacillus

## PENDAHULUAN
Penyakit busuk buah yang disebabkan oleh jamur Phytophthora palmivora adalah salah satu penyakit penting pada tanaman kakao.  Busuk  buah  merupakan  penyakit paling penting karena menyebabkan kerugian berkisar antara 10 dan 30% di seluruh dunia (McMahon & Purwantara, 2004). Sampai saat ini jamur patogen penyebab penyakit busuk buah kakao tersebut masih merupakan masalah krusial yang belum bisa dituntaskan. Jamur P. palmivora merupakan jamur dari kelas  Oomycetes  yang  memiliki  ciri-ciri morfologi miselium panjang dan berwarna putih dengan spora berbentuk seperti buah pir (Drenth & Sendall, 2001).
Pengendalian  penyakit  busuk  buah P. palmivora secara umum dilakukan dengan tiga cara, yaitu: sanitasi kebun, penanaman klon  tahan,  dan  pengendalian  secara kimiawi. Penyakit busuk buah P. palmivora sulit dikendalikan secara kuratif. Oleh karena itu,  tindakan  preventif  sangat  dianjurkan agar perkembangan penyakit tidak meluas. Salah satu tindakan preventif adalah dengan menggunakan  fungisida.  Fungisida  yang dianjurkan  untuk  pengendalian  penyakit
Pratama et al.
subtilis. P. fluorescence dapat menghasilkan beberapa  metabolit  sekunder  berupa  zat antibiotik seperti phenazin, pyrrolnitrin, dan pseudomonic acid yang terbukti efektif dalam menghambat mikroba patogen (Oedjijono, 1994).  Isolat  B.  subtilis  dari  tanah  juga diketahui dapat menghasilkan antibiotik dan antifungal  seperti:  subtilin,  aterimin, basitrasin,  subtilosin,  micobacillin, subsporin,  ituirin,  serexin,  surfaktin, basillomicin,  bacilisin,  asam  sianida, fengimicin, dan bacilisocin (Katz & Demain, 1977).
Bakteri P. fluorescence dan B. subtilis juga  dapat  memberikan  pengaruh  meng- untungkan  terhadap  perkembangan  dan pertumbuhan tanaman, yaitu sebagai rizo- bakteri perangsang pertumbuhan tanaman (plant  growth  promoting  rhizobacteria, PGPR). Bakteri tersebut juga menghasilkan antibiotika  yang  dapat  menghambat  per- tumbuhan patogen, terutama patogen tular tanah dan mempunyai kemampuan mengoloni akar tanaman (Soesanto, 2008). Mekanisme penghambatan oleh bakteri antagonis adalah melalui  produksi  antibiotik,  siderofor, ketahanan  terimbas  sistemik,  enzim, perangsang  per tum buhan  tanaman, persaingan,  mikroparasitisme  dan  toksin (Hasanudin,  2003).  Chrisnawati  et  al. (2009)  melapor kan  bahwa  aplikasi Bacillus spp. dapat mengendalikan penyakit layu  bakteri  pada  tanaman  nilam  dan meningkatkan pertumbuhannya.
Menurut Djatmiko et al. (2007) isolat bakteri dari genus Pseudomonas kelompok fluoresen, Bacillus spp., dan Streptomyces spp. bersifat  antagonis  dan  mem punyai kemampuan menekan pertumbuhan Ralstonia solanacearum dan Meloidogyne incognita.
Berdasarkan keefektifan P. fluorescence dan B. subtilis sebagai agens hayati, maka perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap penyakit busuk buah yang sampai
saat ini belum diketahui. Tujuan penelitian ini  adalah  untuk  mengkaji  pengaruh P.  fluorescence  dan  B.  subtilis  terhadap pertumbuhan jamur P. palmivora penyebab penyakit  busuk  buah  kakao  dalam  skala laboratorium.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Laboratorium Penyakit Tanaman, Pusat Penelitian Kopi dan  Kakao  Indonesia  dan  Laboratorium Mikrobiologi FMIPA Universitas Jember. Bahan dan peralatan yang digunakan dalam bidang mikrobiologi ini dalam keadaan steril sehingga tidak ada mikroba lain yang akan mengganggu  pertumbuhan  bakteri  yang sedang diteliti (Surawiria, 1997). Sterilisasi alat dilakukan dengan menggunakan otoklaf pada suhu 120 O C dan tekanan 1 atm selama 30 menit.
Medium padat yang digunakan dalam penelitian ini adalah potato dextrose agar (PDA) untuk isolasi jamur  P. palmivora. Pembuatan  medium  PDA  sebanyak  1  L memerlukan  bahan  dasar  kentang  200 g, dekstrose 20 g, agar 20 g, dan air suling untuk membuat volume menjadi 1 L. Cara pembuatan  medium  PDA  yakni  terlebih dahulu  mengekstrak  kentang,  kemudian ditambah dengan agar sebanyak 20 g, dan diaduk  hingga  merata.  Setelah  merata kemudian  ditambahkan  dengan  dekstrose sebanyak  ±20 g dan diaduk hingga larutan homogen.  K edalam  ekstr ak  kentang ditambahkan air suling hingga volumenya mencapai 1.000 mL. Setelah larutan media homogen,  larutan  dipanaskan  kemudian dituang ke dalam erlenmeyer. Erlenmeyer ditutup dan disterilisasi dengan menggunakan otoklaf  pada  suhu 120 O C   tekanan 1  atm selama  ±20  menit.  Medium  cair  dan medium  padat  digunakan  untuk  isolasi bakteri  antagonis  P.  fluorescence  dan B. subtilis.
Phytophthora palmivora diisolasi dari buah kakao yang terserang penyakit busuk buah.  Isolasi  dilakukan  dengan  cara memotong kulit  bagian dalam buah batas antara yang  sehat dan  yang sakit sebesar 0,5 cm x 0,5 cm menggunakan pisau steril dan  dicelupkan  ke  dalam  larutan  alkohol 70% selama 3 menit. Potongan kulit buah dibilas  menggunakan  air  suling  steril, kemudian dipindahkan pada kertas saring dan  diletakkan  secara  aseptik  di  atas permukaan medium PDA. Isolat diinkubasi dalam  kondisi  gelap  pada  ruang  kultur bersuhu 26 O C selama 5 hari. Koloni yang tumbuh kemudian diidentifikasi berdasar- kan  ciri-ciri  morfologi  dan  dimurnikan untuk  mendapatkan  isolat  murni  jamur P. palmivora.
Perbanyakan isolat bakteri P. fluores- cence  dan  B.  subtilis  dilakukan  dengan menggunakan  medium  cair  dan  padat. Karakterisasi dilakukan dengan pewarnaan gram. Setelah dilakukan karakterisasi bakteri maka sebelum digunakan untuk penelitian, dibuat  biakan  turunan  (sub  kultur)  dari biakan murni dengan cara mengambil 1 ose biakan isolat P. fluorescence dan B. subtilis kemudian masing-masing bakteri ditumbuh- kan pada medium agar miring dan diinkubasi pada suhu 37 O C selama 24 jam.

## Persentase Penghambatan
Isolat murni P. palmivora hasil isolasi setelah  mencapai  pertumbuhan  optimum diinokulasikan  ke  dalam  cawan  petri diameter 10 cm pada jarak 3 cm dari tepi. Bakteri  P.  fluorescence  dan  B.  subtilis diinokulasikan ke cawan petri pada perlakuan tiga hari setelah jamur. Perlakuan kontrol hanya  diinokulasi  dengan  isolat  jamur P. palmivora. Pertumbuhan jamur diukur dengan cara menghitung pertambahan jari- jari  koloni  jamur  setiap  harinya  setelah 24 jam sejak inokulasi. Pertumbuhan jamur
P. palmivora digunakan untuk menghitung persentase penghambatan.
Uji  antagonism e  secara  in  vitro dilakukan  dengan  cara  menumbuhkan bakteri antagonis dan jamur patogen pada satu cawan petri secara berdampingan.
Persentase penghambatan pertumbuhan koloni P. palmivora dihitung dengan rumus:
Keterangan :
I = Persentase penghambatan R1 =  jari-jari  koloni  jamur  pada  kontrol
R2 =  jari-jari koloni jamur pada perlakuan

## Keefektifan Penghambatan
Pengamatan zona bening yang terbentuk di  sekitar  bakteri  P.  fluorescence  dan B.  subtilis  dilakukan  untuk  menentukan keefektifan dalam menghambat pertumbuhan jamur P. palmivora. Pseudomonas fluores- cence dan B. subtilis dapat dikatakan efektif jika  koloni  jamur  patogen  tidak  mampu melewati koloni bakteri antagonis selama ±10  hari  dan  bakteri  antagonis  mampu membentuk zona bening. Kurang efektif jika koloni jamur patogen tidak mampu melewati koloni bakteri antagonis selama ±10 hari tetapi  bakteri  antagonis  tidak  mampu membentuk zona bening. Tidak efektif jika koloni  jamur  patogen  mampu  melewati koloni bakteri antagonis selama ±10 hari.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jamur patogen penyebab penyakit busuk buah kakao adalah jamur P. palmivora dari kelas  Oomycetes  yang  memiliki  ciri-ciri morfologi miselium panjang dan berwarna putih dengan spora berbentuk seperti buah pir (Drenth & Sendall, 2001). Jamur patogen ini  umumnya  menyerang  tanaman  kakao pada waktu musim penghujan. Salah satu upaya  pengendaliannya  yaitu  dengan
R1 — R2
I =                 x 100 % R1
Pratama et al.

## memanfaatkan agens hayati bakteri antagonis
P. fluorescence dan B. subtilis.
Menurut Soesanto (2008), P. fluorescence merupakan bakteri berbentuk batang lurus atau agak lengkung, berukuran (0,5 - 1,0) x  (1,5  -  5,0) µ m,  tidak  spiral,  bergerak dengan satu atau beberapa flagellum polar, bersifat gram negatif, hidup secara aerob dan tumbuh pada kisaran suhu 4 O C - 41 O C. Sementara itu B. subtilis dicirikan sebagai bakteri  gram  positif,  berbentuk  batang, bersel  satu,  berukuran  (0,5  -  2,5)  x (1,0 - 1,2) µm, bersifat aerob atau anaerob fakultatif, dan bertahan pada suhu 5 - 75 O C.
Data  hasil  penelitian  persentase penghambatan bakteri antagonis P. fluores- cence dan B. subtilis terhadap pertumbuhan jamur  P.  palmivora  menunjukkan  bahwa kedua  bakteri  tersebut  menghambat pertumbuhan jamur P. palmivora. Persentase penghambatan  oleh  P.  fluorescence  dan B.  subtilis  tidak  berbeda  nyata.  Pada
pengamatan hari kesepuluh, besar persentase penghambatan oleh bakteri P. fluorescence mencapai  69,5%   sedangkan  bakteri B. subtilis mencapai 72,8% (Gambar 1).
Bakteri P. fluorescence dan B. subtilis efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur P. palmivora. Penghambatan dapat diketahui dengan melihat perbandingan antara perlakuan dan kontrol. Perlakuan kontrol tidak menunjukkan adanya penghambatan.

## Pseudomonas  fluorescence  mampu
m e n g h a m b a t   p e r t u m b u h a n   j a m u r P. palmivora karena bakteri mampu mem- produksi  antibiotik  seperti  tetracylin, oksitetracilin, phenazine 1 carboxylic acid, 2,4-diphloroglucinol,  pyrrolnitrin  dan pseudomonic  acid  yang  dilaporkan  telah terbukti  efektif  untuk  mengendalikan mikr oba  yang  ber sifat  patogen  baik y a n g   m e n y e r a n g   m a n u s i a   m a u p u n tanaman  (Oedjijono,  1994).  Selain  itu, P. fluorescence juga menghasilkan senyawa
Gambar 1. Perkembangan  persentase  penghambatan  jamur  Phytophthora  palmivora  oleh  bakteri
Pseudomonas  fluorescence  (Pf)  dan  Bacillus  subtilis  (Bs)
Figure  1. Percentage of inhibition of Phytophthora palmivora by Pseudomonas fluorescence (Pf) and  Bacillus  subtilis  (Bs)
Pf B s P e n g h am b at an , % In h ib it io n , % 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Hari Day
pengikat  ion  besi  (siderofor)  seperti pseudobaktin dan piroverdin yang bersifat fungistatik  yaitu  hanya  mampu  bekerja menghambat pertumbuhan jamur (Arwiyanto et al., 2007).
Bakteri  P.  fluorescence  juga  dikenal sebagai rhizobakteri perangsang pertumbuhan tanaman atau PGPR yang dapat memberikan pengar uh  m enguntungkan  terhadap perkembangan dan pertumbuhan tanaman (Soesanto, 2008). Aplikasi Pseudomonas sp. dan  Bacillus  sp.  terbukti  nyata  dalam mengurangi serangan Meloidogyne incog- nita pada tanaman Vigna mungo. Perlakuan dengan menggunakan kedua jenis bakteri tersebut pada tanaman Vigna mungo nyata meningkatkan  tinggi  tanaman,  panjang akar, kesegaran tunas, dan bobot keringnya, kesegaran akar dan bobot kering akar, dan jum lah  bintil  pada  akar   meningkat dibandingkan dengan kontrol (Akhtar et al., 2012).
Kemampuan  Bacillus  subtilis  meng- hambat pertumbuhan jamur P. palmivora dikarenakan bakteri ini dapat menghasilkan beberapa  peptida  yang  berperan  sebagai antibiotik dan antifungi, seperti:  subtilin, aterimin, basitrasin, subtilosin, mikobasillin, subsporin,  ituirin,  serexin,  surfaktin, basillomicin, basillisin, asam 10  sianida, fengimisin,  dan  basillisosin  (Schaechter, 2004). Bacillus subtilis juga menghasilkan enzim degradatif makromolekul yang bisa menghancurkan dinding sel jamur, seperti protease (intraselluler) dan beberapa enzim ekstraseluler yang disekresikan pada medium seperti levansukrase, glukanase, amilase, xilanase, kitinase, dan protease (Kunts & Rapoport, 1995; Schaechter, 2004). Adanya B. subtilis juga memberikan keuntungan bagi tanaman  karena  B.  subtilis  merupakan rhizobakteri  perangsang  pertumbuhan tanaman atau PGPR.
Penggunaan  bakteri  P.  fluorescence dan B. subtilis apabila diaplikasikan secara bersamaan dapat melindungi tanaman tomat dari penyakit layu fusarium yang disebabkan jamur  Fusarium  oxysporum  (Baharuddin et al., 2005). Bacillus subtilis juga efektif digunakan untuk mengendalikan Ralstonia solanacearum  pada  tanaman  kentang (Hanudin et al., 2012).
Zona bening yang terbentuk di sekitar bakteri P. fluorescence dan B. subtilis masih dapat  bertahan  pada  hari  pengamatan kesepuluh. Luas zona bening semakin ber- kurang hingga pengamatan hari kesepuluh (Gambar  2),  karena  bakteri  mempunyai siklus  hidup  yang  lebih  pendek  daripada jamur, sehingga apabila digunakan sebagai agens hayati maka harus selalu diperbaharui. Penelitian ini menunjukkan bahwa sebelum hari kesepuluh bakteri agens hayati harus diaplikasikan kembali untuk menjaga tingkat penghambatannya.  Zona  bening  yang dibentuk oleh bakteri B. subtilis lebih besar daripada  P.  fluorescence.  Hasil  tersebut menunjukkan bahwa bakteri P. fluorescence dan  B.  subtilis  dapat  digunakan  sebagai agens hayati untuk mengendalikan penyakit busuk buah pada skala laboratorium. Hal ini menunjukkan bahwa zat antibiotik yang dihasilkan oleh B. subtilis lebih banyak dan Phytophthora  palmivora  lebih  rentan dibandingkan dengan Pseudomonas fluores- cence. Menurut Morin & Gormin (1995), B.  subtilis  menghasilkan  senyawa  anti- biotik  aterimin  dan  basitasin  yang  lebih efektif  terhadap  patogen  dibandingkan dengan  senyawa  antibiotik  tetrasilin  dan oksitetrasilin.  Mekanisme  antagonistik P. fluorescence terhadap jamur P. palmivora lebih cenderung menggunakan kemampuan kolonisasi  akar,  produksi  siderofor,  dan asam sianida,  di  samping  antibiotik  yang begitu  rendah.  Sebaliknya,  B.  subtilis cenderung  m empunyai  mekanisme
Pratama et al.
antagonistik  yang  lebih  cenderung  pada kemampuan  memproduksi  antibiotik (Campbell, 1989).

## KESIMPULAN

## Berdasarkan hasil penelitian pengaruh
P.  fluorescence  dan  B.  subtilis  terhadap pertumbuhan jamur P. palmivora penyebab penyakit  busuk  buah  kakao,  maka  dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:
1. Pseudomonas fluorescence dan Bacillus subtilis efektif menghambat pertumbuhan jamur  P.  palmivora  penyebab  penyakit busuk  buah  kakao  pada  kondisi  di laboratorium.
2. Pseudomonas fluorescence dan Bacillus subtilis mempunyai keefektifan yang sama dalam menghambat pertumbuhan jamur

## P. palmivora berdasarkan kriteria tingkat
keefektifan  dan  persentase  peng- hambatan. Namun berdasarkan luas zona bening  B.  subtilis  lebih  luas  daripada P. fluorescence.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhtar, A.; Hisamuddin; Abbasi & R. Sharf (2012).  Antagonistic  effects  of Pseudomonas fluorescens and Bacillus subtilis  on  Meloidogyne  incognita infecting Vigna mungo L. International Journal of Plants, Animal, and Envi- ronmental Sciences, 2, 55 - 63.
Arwiyanto,  T.;  Y.M.S.  Maryudani  & N.N.  Azizah  (2007).  Sifat-sifat Pseudomonas  fluorescence,  agensia pengendalian  hayati  penyakit  lincat
Gambar 2. Perkembangan  luas  zona  bening  dalam  menghambat  perkembangan  Phytophtora  palmivora oleh Pseudomonas  fluorescence  (Pf)  dan  Bacillus  subtilis  (Bs)
Figure  2. Area  development  of  clear  zone  in  inhibiting  the  development  of  Phytophtora  palmivora  by
Pseudomonas  fluorescence  (Pf)  and  Bacillus  subtilis  (Bs)
Hari Day 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Z o n a b en in g , cm C le a r zo n e , cm 2.5 2 2.5 1 0.5 0 y = 0.005x 2 - 0.160x + 2.032 R 2 = 0.980 y = 0.015x 2 - 0.325x + 2.212 R 2 = 0.982 Pf B s

## pada tembakau Temanggung. Jurnal
Biodiversitas, 8, 147 - 151.
Bagian  Proyek  Penelitian  Kopi  dan  Kakao (2001). Laporan Kegiatan Penelitian Tahun Anggaran 2001. Pusat Penelitian Kopi dan Kakao, Jember, 60 - 64.
Baharuddin; Badawi & Z. Masjkur (2005). Uji efektivitas  formulasi  seed  coating berbahan aktif bakteri Pseudomonas fluorescence dan Bacillus subtilis untuk pengendalian penyakit layu fusarium (Fusarium oxysporum) pada tanaman tomat. Prosiding Seminar Ilmiah dan Pertemuan Tahunan PEI dan PFI XVI Komda Sul-Sel, 186 - 189.

## Campbell, R. (1989). Biological Control of
Microbial Plant Pathogens. Cambridge University Press. Cambridge.
Chrisnawati; Nasrun & T. Arwiyanto (2009). Pengendalian  penyakit  layu  bakteri nilam menggunakan Bacillus spp. dan Pseudomonad fluoresen. Jurnal Littri, 15, 116 - 123.
Djatmiko H.A.; T. Arwiyanto; B. Hadisutrisno & B.H. Sunarminto (2007). Potensi tiga genus bakteri dari tiga rizosfer tanaman sebagai  agensia  pengendali  hayati penyakit  lincat.  Jurnal  Ilmu-ilmu Pertanian Indonesia, 9, 40 - 47.
Drenth,  A.  & B.  Sendall  (2001).  Practical Guide to Detection and Identification of Phytophthora. Version 1.0. CRC for Tropical Plant Protection, Brisbane, Australia.
Hanudin;  B.  Marwoto;  Hersanti  & A. Muharam (2012). Kompatibilitas Bacillus subtilis, Pseudomonas fluores- cence,  dan  Trichoderma  harzianum untuk mengendalikan Ralstonia solana- cearum pada tanaman kentang. Jurnal Hortikultura, 22, 173 - 180.
Hasanuddin  (2003).  Peningkatan  Peranan Mikroorganisme  dalam  Sistem Pengendalian  Penyakit  Tumbuhan
Secara  Terpadu.  Jurusan  Hama dan  Penyakit  Tumbuhan,  Fakultas Pertanian, Universitas Sumatra Utara.
Katz, E. & A.L. Demain (1977). The peptide antibiotics  of  Bacillus:  chemistry, biogenesis, and possible functions. ASM Bacteriologycal Review, 41, 449 - 474.
Kunst, F. & G. Rapoport (1995). Salt stress is an environmental signal affecting degradative  enzyme  synthesis  in Bacillus subtilis. Journal of Bacterio- logy, 177, 2.403 - 2.407.
McMahon,  P.  &  A.  Purwantara  (2004). Phytophthora on cocoa. p. 104 - 115. In: A. Drenth  & D.I. Guest (Eds.). Diversity  and  Management  of Phytophthora in Southeast Asia. ACIAR Monograph. No. 114.
Morin,  R.B.  &  M.  Gormin  (1995). Kimia  Biologi  Antibiotik  ß  Laktan, Volume I. Academic Press, London (Terjemahan).
Oedjijono  (1994).  Isolasi  dan  Deteksi Metabolit  Sekunder  Pseudomonas fluorescence  yang  Menghambat Pertumbuhan Mikroba Patogen. Laporan Hasil  Penelitian.  Fakultas  Biologi,
Universitas  Jendral  Sudirman. Purwokerto.
Schaechter, M. (2004). The Desk Encyclope- dia  of  Microbiology.  Elsevier Academic Press. California USA.
Soesanto, L. (2008). Pengantar Pengendalian
Hayati Penyakit Tanaman.
PT.  Rajawali  Grafindo  Persada.
Jakarta
Suprapta, D.N. (2012). Potential of microbial antagonists as biocontrol agents against plant fungal pathogens. International Society for Southeast Asian Agricultural Sciences Journal, 18, 1 - 8.
Surawiria, U. (1997). Pengantar Mikrobiologi Umum. Angkasa, Bandung.
*********.