PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY  TEST  OF EXTRACTS AND FRACTIONS OF ASCIDIAN (Lissoclinum badium) FROM MANTEHAGE ISLAND WATERS

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK  DAN FRAKSI ASCIDIAN
( Lissoclinum badium ) DARI  PERAIRAN PULAU MANTEHAGE
Falinry Woran 1)* , Defny Wewengkang 1) ,  Meilani Jayanti 1)
1) Program Studi Farmasi  FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *falinryibreine@gmail.com

## ABSTRACT
Lissoclinum badium is a type of ascidian that contains bioactive compounds. This study aims to determine of presence  of  antibacterial  activity  from  extracts  and  fractions  of  Lissoclinum  badium  collected  from Mantehage  Island  Manado  against  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  bacteria.  Samples  were extracted by maceration method using 95% ethanol solvent and fractionated using solvents of chloroform, n- hexane and methanol. Antibacterial activity was carried out by the disk diffusion agar method. The results showed that the ethanol extracts an methanol fraction had activity to inhibit the growth of Escherichia coli bacteria  with  strong  category.  Meanwhile,  against  the  Staphylococcus  aureus  the  ethanol  extracts, chloroform and n-hexane fractions had ability to inhibit the growth of bacteria with weak category . .
Keywords : Antibacterial activity, Lissoclinum badium, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Lissoclinum  badium merupakan  salah  satu  jenis  tunikata  yang  memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif  yang dapat  digunakan  untuk  pengobatan  berbagai  penyakit.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi Lissoclinum  badium yang  diperoleh  dari  Pulau  Mantehage Manado terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Sampel diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan  pelarut  etanol  95%  dan  fraksinasi  menggunakan  pelarut  metanol,  kloroform,  dan  n-heksan. Aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan    metode  difusi  agar  cakram  kertas.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa ekstrak etanol dan fraksi metanol memiliki aktivitas untuk menghambat bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus dengan  daya  hambat  kuat.  Sedangkan  untuk  fraksi  kloroform  dan  fraksi  n-heksan memiliki aktivitas untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus saja dengan daya hambat sedang.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri, Lissoclinum badium , Escherichia coli, Staphylococcus aureus .
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman organisme laut di Indonesia  yang  sangat  tinggi  memiliki  potensi untuk  menyokong  perekonomian  negara  (Wagey, 2017).  Indonesia  sebagai  negara  yang  kaya dengan keanekaragaman hayati, memiliki berbagai  macam  tanaman  laut  yang  dapat dimanfaatkan sebagai obat alternatif  (Lalamentik, 2017). Keanekaragaman organisme laut ( biodiversity ) juga
mempunyai arti keanekaragaman  senyawa  kimia  ( chemodiversity ) yang  terkandung  dalam  organisme.  Senyawa- senyawa tersebut dapat memiliki aktivitas biologis yang  bervariasi  dan  berpotensi  dikembangkan sebagai bahan obat (Dahuri, 2003).
Akhir-akhir  ini  para  peneliti  bahan  alam cenderung untuk menemukan bahan obat dari laut yang  dapat  digunakan  untuk  berbagai  penyakit termasuk  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri. (Rajasekar  et  al.,  2012).    Kebutuhan  antibiotik yang terus meningkat, mendorong makin banyaknya  penelitian  untuk  mengeksplorasi  laut sebagai sumber substansi bioaktif (Brammavidhya dan  Usharani,  2013).  Salah  satu  biota  laut  yang berpotensi untuk dijadikan obat adalah hewan laut tunikata (ascidian ).
Tunikata  merupakan  salah  satu  biota  laut yang  terdiri  dari  3  kelas  utama  diantaranya, Ascidiacea, Appendicularia,
Thaliacea
(Dewanto,2009).  Pemanfaatan  tunikat    (ascidian )
untuk  pengobatan  disebabkan  karena  tunikata kaya akan senyawa bioaktif yang dapat dimanfaatkan  untuk  pengobatan  berbagai  macam penyakit (Sumilat, 2018).
Senyawa  bioaktif  yang  disintesis  oleh ascidian  merupakan  metabolit  sekunder,  yaitu turunan  dari  metabolit  primer  yang  digunakan dalam sistem pertahanan diri, untuk
mempertahankan hidup dan menghindari gangguan  dari  organisme  lain  di  lingkungan tempat hidupnya. Karena aktivitas farmakologinya  maka  senyawa  tersebut  memiliki prospek  untuk  diisolasi  dan  dimanfaatkan  dalam bidang farmasi (Sumilat, 2018).
Salah  satu  jenis  tunikata  yang  memiliki senyawa  bioaktif  yang  dapat  dimanfaatkan  untuk pengobatan  adalah  ascidian Lissoclinum  badium. Hal  ini  disebabkan  karena  ascidian  jenis Lissoclinum    badium ini  memiliki  senyawa turunan  alkaloid  yakni Lissoclibaldin e  dan lissoclinotoxin (Oda T, dkk 2007)..

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2020  sampai  bulan  Maret  2021  di Laboratorium  Farmasi  lanjut  Program  Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  dan  di  Laboratorium  Hama dan  Penyakit  Tumbuhan,  Fakultas  Pertanian, Universitas Sam Ratulang i .

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimen laboratorium  yang  menguji  komponen  ekstrak ascidian Lissoclinum  badium yang  diperoleh  dari Pulau Mantehage sebagai antibakteri . Alat Dan Bahan

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu  masker  sensi,  sarung  tangan  sensi,  gunting, tabung  oksigen,  snorkel,  fins,  bagus zipper  lock bag ,  botol  600  ml,  talenan, cool  box ,  pisau, Erlenmeyer  (Pyrex),  corong,  eyela  n-1100 rotary evaporator, Mettler  Toledo timbangan  analitik, corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia  (Pyrex), cawan  petri,  GEA  autoklaf,  pinset,  pembakar spritus, magnetic  stirrer ,  pipet  tetes, micro  tubes , hot plate, batang pengaduk, Mascotte Laminar air flow, rak  tabung  reaksi,  tabung  reaksi,  lemari pendingin  LG,  inkubator,  cakram  ( paper  disc) , mikropipet,  mistar  berskala,  kertas  label,  spidol permanen
Bahan Bahan-bahan yang digunakan yaitu ascidian Lissoclinum badium , bakteri uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli ,  etanol, akuades,  metanol,  n-heksan,  kloroform, , agar, pepton,  natrium  klorida,  ekstrak  media  agar  B1 (beef  extract )  kloramfenikol paper  disc , tissue, aluminium foil , kertas saring.
Pengambilan Sampel Sampel  ascidian Lissoclinum  badium diambil dari Pulau Mantehage Manado menggunakan  alat  bantu  (masker,  snorkel,  fins dan  tabung  oksigen).  Sampel  yang  diperoleh dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag dan diletakkan didalam cool box , kemudian dibawa ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Sampel difoto dan diberi label serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi .
Ekstraksi dengan Metode Maserasi Sampel  ascidian Lissoclinum  badium direndam  menggunakan  larutan  etanol  90%. Proses ekstraksi dilakukan dengan cara merendam sampel dengan pelarut etanol selama 3 kali 24 jam
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
pada  temperature  kamar  dan  sesekali  dikocok. Kemudian  diambil  filtratnya,  dan  residunya dibuang.  Sehingga  menghasilkan  3  filtrat  yang kemudian dicampur menjadi satu. Lalu dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  yang  terbentuk  ekstrak  kasar, ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik. Kemudian  ekstrak  kasar  ascidian Lissoclinum badium difraksinasi.
Fraksinasi Sampel
Ekstrak kasar ascidian Lissoclinum badium yang  diperoleh  dimasukkan  kedalam erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol 80%  sebanyak  100  mL.  Setelah  larut,  dimasukan kedalam corong pisah dan ditambahkan pelarut n- heksan  sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok dalam  corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  lapisan  metanol  dan  lapisan  n- heksan, kemudian masing-masing lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan n- heksan  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang dan  diperoleh  fraksi  n-heksan.  Selanjutnya, lapisan  metanol  ditambahkan  akuades  sebanyak 100  mL  kemudian  dipartisi  dengan  pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam corong pisah, setelah itu dikocok  kembali sampai homogen.  Dibiarkan  sampai  tebentuk  dua  lapisan yaitu  lapisan  metanol  dan  kloroform,  kemudian masing-masing  lapisan  ditampung  dalam  wadah yang  berbeda.  Lapisan  kloroform  selanjutnya dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang  berat  sampel  dan diperoleh  fraksi  kloroform.  Lapisan  metanol kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  metanol.  Ketiga  fraksi  yang diperoleh  akan  digunakan  dalam  pengujian antibakteri.

## Sterilisasi
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan terlebih dahulu. Alat-alat  gelas  disterilkan  dengan  autoklaf  pada suhu  121˚C  selama  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  diatas  api  langsung  dan media  disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit (Mpila, 2012 ).
Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g, dan aquades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata  kemudian dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, ukur pH dengan menggunakan kertas pH. Dipipet
1  mL  media  cair  B1,  kemudian  masukkan  dalam tabung  reaksi  dan  tutup  dengan  alminium  foil. Media  cair  B1  siap  digunakan  sebagai  media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu menggunakan pelarut metanol, dengan  cara  membuat  larutan  stok  metanol dengan  mengambil  sebanyak  200  μL  metanol kemudian di totolkan pada paper disc (Lalamentik, 2017).

## Pembuatan Kontrol Positif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antibakteri  ini  menggunakan kloramfenikol paper disc.

## Kultur Bakteri Uji
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing-masing bakteri  yang  sudah  dikultur  ( Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli )  sebanyak  100  µL kedalam  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Tutup dengan  aluminium  foil  tiap  tabung  reaksi  dan dimasukkan  kedalam  inkubator  selama  1x24  jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  25  mg ekstrak  kasar  ascidian Lissoclinum  badium kemudian  dilarutkan  dalam  5  mL  metanol sehingga  menghasilkan  konsentrasi  larutan  uji sebesar  250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang  sama dilakukan  pada  fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).
Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g, agar 1,5  g dan aquades sebanyak 100 mL diaduk sampai rata kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama  15  menit.  Lakukan  pengujian  pH  dengan kertas  pH.  Media  agar  B1  siap  digunakan  untuk uji aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  metode difusi  agar  (disc  diffusion  Kirby and  Bauer).  Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri ini,  cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan berukuran  6  mm  dengan  daya  serap  50  µL  tiap cakram. Sampel yang telah ditentukan kosentrasinya  (250  µg/50  µL)  ditotolkan  pada masing-masing  cakram  dengan  menggunakan mikropipet.  Untuk  media  agar  B1  yang  sudah diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C  selama  15  menit, kemudian  dinginkan  sampai  suhu  40  ˚C. Tuangkan  media  agar  B1  ke  cawan  petri,  Ambil
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sebanyak  100  µL  bakteri  yang  telah  di  kultur dalam tabung reaksi, dipipet dan diinokulasi pada media agar B1 dan tunggu sampai media agar B1 mengeras. Masing-masing cawan petri diberi label dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  ascidian Lissoclinum  badium dengan  pinset  kedalam cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama  1x24  jam (Ortez, 2005).
Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter  Zona Bening
Pengamatan dapat dilakukan setelah 1x24 jam masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau  bahan  antibakteri  yang  digunakan  sebagai bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  millimeter  (mm)  menggunakkan  mistar berskala dengan cara diukur diameter zona bening horizontal  ditambahkan  dengan  diameter  zona bening vertikal lalu dibagi dua. Diameter ≤ 5 mm memiliki  kekuatan  daya  hambat  lemah,  6-10  mm daya hambat sedang, 11-20 mm daya hambat kuat dan  ≥21  mm  daya  hambat  sangat  kuat  (Susanto, dkk, 2012). Media  cair  B1  yang  sudah disiapkan  sebelumnya,  ditambahkan  dengan masing-masing  bakteri  yang  sudah  dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ) sebanyak  100  µL  kedalam  tabung  reaksi  yang berbeda. Tutup dengan
Media cair B1 yang sudah disiapkan sebelumnya, ditambahkan dengan masing-masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ) sebanyak 100 µL kedalam tabung reaksi yang berbeda. Tutup dengan HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  ascidian Lissoclinum  badium yang    diambil  dari  Pulau  Mantehage  Manado dipotong dengan ukuran kecil, hal ini dikarenakan semakin  kecil  luas  permukaan  sampel  maka  akan semakin  mudah  pelarut  untuk  masuk  kedalam sampel  dan  kemudian  terjadi  interaksi  sehingga senyawa yang ditarik oleh pelarut semakin banyak (Sineke et al , 2016).
Setelah  itu  dilakukan  proses  ekstraksi menggunakan  metode  maserasi.  Metode  maserasi dipilih  karena  peralatan  yang  digunakan  dan  cara pengerjaannya  yang  cukup  sederhana,  serta mudah  untuk  mengekstrak  komponen-komponen yang  tidak  tahan  terhadap  suhu  tinggi  (Kristiani, 2014).
Ekstraksi sampel dengan metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95  %.  Hal
ini  dikarenakan  pelarut  etanol  memiliki  tingkat polaritas yang lebar mulai dari senyawa non polar sampai dengan  senyawa polar, sedangkan konsentrasi  95%  merupakan  konsentrasi  yang tinggi  sehingga  memungkinkan  pelarut  untuk menarik  senyawa-senyawa  yang  terdapat  pada sampel dengan kuat. Pelarut etanol juga memiliki sifat  toksisitas  rendah  sehingga  tidak  merusak sampel (Saifudin et al , 2011).
Ekstraksi dengan metode maserasi dilakukan  selama  3x24  jam,  dan  setiap  24  jam ekstrak  disaring  dan  dimaserasi  kembali  dengan pelarut  yang  baru,  hal  ini  dapat  disebut  juga remaserasi.  Remaserasi  ini  dilakukan  agar senyawa  aktif  yang  terdapat  pada  sampel  dapat ditarik  secara  baik  dan  optimum  (Huliselan et  al , 2015).  Filtrat  yang  diperoleh  dari  hasil  maserasi kemudian  dievaporasi  menggunakan  evaporator pada suhu 40˚C, karena suhu pada derajat ini tidak dapat  merusak  senyawa-senyawa  aktif  pada sampel.
Setelah  ekstrak  kental  diperoleh  dari proses evaporasi, maka tahap selanjutnya dilakukan  proses  fraksinasi.  Metode  partisi  cair- cair  adalah  metode  fraksinasi  yang  digunakan dalam psoses ini. Metode fraksinasi ini merupakan metode pemisahan dengan menggunakan pelarut yang tidak saling bercampur sehingga  senyawa  yang  bersifat  polar  akan  larut dalam  pelarut  polar,  senyawa  yang  bersifat    non polar  akan  larut  ke  dalam  pelarut  non  polar,dan senyawa  yang  bersifat  semi  polar  akan  larut  ke dalam pelarut semi polar (Harborne, 1998).
Sampel ascidian Lissoclinum badium yang diekstraksi  dengan  metode  maserasi  dievaporasi dan  diperoleh  ekstrak  kasar  etanol  0,77  gram. Kemudian  diambil  sebanyak  0,15  gram  untuk fraksinasi.  Hasil  randemen  ekstrak  dan  fraksi dapat dilihat pada Tabel 1.
Setelah  dilakukan  pengujian  antibakteri ekstrak  dan  fraksi  ascidian Lissoclinum  badium terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus diperoleh hasil yang dapat dilihat pada Tabel 2.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Tabel 1. Randemen fraksi ascidian Lissoclinum badium No Sampel Berat (g) Randemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 0,77 1,28 Coklat pekat 2 Fraksi n-Heksan 0,20 133 Putih kekuningan 3 Fraksi Kloroform 0,20 133 Cream 4 Fraksi Metanol 0,34 226 Coklat
Tabel 2 . Hasil pengukuran diameter zona bening ekstrak dan fraksi ascidian Lissoclinum badium terhadap Escherichia coli dan Stapphylococcus aureus . Ket: C+ = Kontrol positif, C- = Kontrol negative, Ec = Bakteri Escherichia coli , Sa = Stapphylococcus aureus , Ʃ = Total pengukuran, 𝑿 ̅ = Rata-rata pengukuran
EtOH ChCl3 n-Hxn MeOH C+ C- Ec 12,23 - - 16,29 13,06 - - 18,48 21,7 12,12 - - 19,29 ∑ 37,41 - - 54,06 𝑿 ̅ 12,47 - - 18,02 Sa 7,55 7,72 7,10 13,50 6,90 7,09 7,24 7,09 12,83 18,96 - 7,24 6,95 13,34 ∑ 21,54 22,2 21,14 39,67 𝑿 ̅ 7,18 7,4 7,04 13,22

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar. Metode difusi  agar  merupakan  metode  yang  dilakukan dengan  pengukuran  dan  pengamatan  diameter zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  cakram yang  berisi  zat  antibakteri  yang  diletakkan  pada media  agar  yang  telah  diinokulasi  bakteri (Lalamentik, 2017). Metode difusi agar ini dipilih karena dapat digunakan untuk melihat sensitivitas berbagai  jenis  bakteri  terhadap  antibakteri  pada konsentrasi tertentu, juga metode ini lebih mudah untuk  dikerjakan  dan  peralatannya  mudah didapatkan (Akhyar, 2010).
Bakteri yang digunakan dalam pengujian ini adalah Staphylococcus aureus untuk mewakili bakteri  Gram  positif  dan Escherichia  coli untuk mewakili bakteri Gram negatif. Tujuan penggunaan  dua  jenis  bakteri  ini    adalah  untuk mengetahui apakah ekstrak/fraksi dari ascidian
Lissoclinum badium memiliki aktivitas antibakteri, juga untuk mengetahui  berapa kisaran atau  spektrum  yang  dihasilkan  dari  aktivitas antibakteri  ascidian Lissoclinum  badium ,  apakah sampel  ini  berada  pada  spektrum  sempit  yang hanya  mampu  menghambat  atau  membunuh  satu golongan bakteri saja, atau berada pada spektrum luas  yang  mampu  menghambat  atau  membunuh lebih dari satu golongan bakteri baik itu golongan Gram  positif  maupun  Gram  negatif  (Pratiwi, 2008).
Pengujian  ini,  daya  antibakteri  dilihat dengan  terbentuknya    zona  bening  disekitar cakram  yang  berukuran  6  mm,  hal  ini menunjukkan  adanya  kepekaan  bakteri  terhadap ekstrak  dan  fraksi  dari Lissoclinum  Badium .  250 μg  adalah  konsentrasi  ekstrak  dan  fraksi  yang digunakan  pada  setiap paper  disc dengan  daya serap  50  μL.  Pengamatan  dilakukan  setelah diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  1x24  jam,dan dilakukan  pengulangan  sebanyak  3  kali  pada
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
masing-masing bakteri. Suhu 37 0 C yang digunakan    pada  proses  inkubasi  tersebut menyesuaikan dengan suhu
tubuh manusia,dimana dua jenis bakteri dalam pengujian  ini  bertahan  hidup  dalam  tubuh
manusia.Kemudian  untuk  pengulangan  sebanyak 3  kali  pada  masing-masing  bakteri  bertujuan untuk lebih mengakuratkan hasil yang diperoleh.
A

## B
Gambar 5 . Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak dan Fraksi ascidian Lissoclinum badium : (A). Escherichia coli , (B). Staphylococcus aureus . Ket : (1) Ekstrak Etanol, (2) Fraksi Kloroform, (3) Fraksi n- Heksan, (4) Fraksi Metanol, (5) Kontrol Positif, (6) Kontrol Negatif
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Kontrol  positif  dan  kontrol  negatif digunakan sebagai pembanding dalam pengujian ini.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah kloramfenikol, hal ini disebabkan karena kloramfenikol  memiliki  spektrum  kerja  yang  luas (Rachmawati,  2015).  Hasil  yang  diperoleh  dari kontrol positif kloramfenikol menunjukan diameter  zona  hambat  paling  besar  (21,7  mm) dibandingkan  dengan  ekstrak  dan  fraksi  sampel ascidian Lissoclinum badium .
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam pengujian ini adalah metanol, hal ini dikarenakan pelarut  yang  digunakan  untuk  melarutkan  larutan uji  adalah  metanol.  Hasil  yang  diperoleh  dari kontrol  negatif  yaitu  tidak  memiliki  daya  hambat antibakteri  pada  bakeri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . Sehingga diketahui bahwa aktivitas yang ditimbulkan dari ekstrak dan fraksi sampel ascidian Lissoclinum badium adalah murni dari  senyawa  aktif  yang  terkandung  dari  dalam sampel.
Hasil  yang  diperoleh  dari  ekstrak  etanol, menunjukkan  bahwa  diameter  zona  bening  yang terbentuk  pada Escherichia  coli termasuk  dalam kategori  kuat  (12,47  mm)  ,  sedangkan  untuk Staphylococcus  aureus termasuk  dalam  kategori sedang  (7,18  mm).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol memiliki senyawa aktif yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli serta Staphylococcus aureus dengan spectrum kerja yang luas.
Fraksi  kloroform  menunjukkan  bahwa diameter zona bening yang terbentuk pada  bakeri Staphylococcus aureus memiliki aktivitas antibakteri  yang  sedang  (7,4  mm),  sedangkan untuk bakteri Escherichia coli tidak menunjukkan adanya aktivitas antibakteri. Hal ini berarti bahwa fraksi  kloroform  memiliki  senyawa  aktif  yang hanya  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus saja  dengan  spektrum kerja  yang  sempit,  karena  hanya  mampu menghambat pertumbuhan satu jenis bakteri yakni bakteri  Gram  positif  dan  tidak  menunjukkan aktivitas antibakteri  pada bakteri Gram negatif.
Fraksi  n-heksan  menunjukkan  adanya aktivitas antibakteri melalui diameter zona bening yang  ditimbulkan  pada Staphylococcus  aureus dengan  kekuatan  sedang  (7,04  mm),  sedangakan pada Escherichia coli, tidak menunjukkan adanya aktivitas  antibakteri. Hal  ini  menunjukkan  bahwa fraksi  n-heksan  memiliki  senyawa  aktif  yang hanya  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri gram  positif  dan  tidak  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  gram  negatif.  Hal  ini
mengartikan bahwa senyawa aktif dalam fraksi n- heksan memiliki spectrum kerja yang sempit.
Fraksi  methanol  menunjukkan  bahwa diameter zona bening yang terbentuk pada bakteri Escherichia  coli memiliki  aktivitas  antibakteri dengan  daya  hambat  kuat  (18,02  mm).  Begitu pula  dengan  bakteri Staphylococcus  aureus yang menunjukkan  aktivitas  antibakteri  dengan  daya hambat  yang  kuat  (13,22  mm)    Hal  ini menunjukkan  bahwa  fraksi  metanol  memiliki senyawa aktif yang dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan  kerja  spectrum  yang luas.
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak  etanol  dan  fraksi  metanol  memiliki aktivitas  menghambat  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Sedangkan  untuk fraksi  kloroform  dan  fraksi  n-heksan  memiliki aktivitas untuk menghambat bakteri Staphylococcus  aureus saja  .  Selain  itu,  bakteri gram  positif Staphylococcus  aureus lebih  sensitif terhadap  ekstrak  dan  fraksi  sampel  ascidian Lissoclinum  badium ,  hal  ini  dikarenakan  struktur dinding  sel  dari  bakteri  Gram  positif  lebih sederhana sehingga memudahkan senyawa antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan menemukan  sasaran  untuk  bekerja  (Kumayas et al , 2015).
Escherichia  coli hanya  mampu  bekerja pada  senyawa-senyawa  polar  yakni  fraksi  etanol dan metanol. Hasil pengukuran rata-rata diameter daya  antibakteri  dari  ekstrak  etanol,  fraksi kloroform,  fraksi  metanol  dan  fraksi  n-heksan terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus ditujukan pada Table 2.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  dan  fraksi  metanol  dari sampel  ascidian Lissoclinum  badium yang diperoleh dari Pulau Mantehage Manado memiliki  aktivitas  untuk  menghambat  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dengan  daya  hambat  kuat.  Sedangkan  untuk Fraksi  kloroform  dan  fraksifraksi  n-heksan memiliki  aktivitas  untuk  menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus saja  dengan  daya  hambat yang sedang yaitu 6-10 mm.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lanjut terhadap ascidian Lissoclinum  badium ,  dengan  uji  bakteri yang berbeda dan dengan metode pengujian yang berbeda.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## DAFTAR PUSTAKA
Akhyar, 2010. Uji Daya Hambat dan Analisis KLT Bioautografi Ekstrak Akar dan Buah Bakau  (  Rhizophora  stylosa  Griff.) Terhadap Vibrio Harveyi ,[skripsi].
Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin,
Makassar.
Brammavidhya, S. and Usharani, G. 2013.
Bioactive  Potential  of  Sponge  Associated Bacillus  Cereus  Sbs02  Isolated  from Hyattela  cribriformis.  ISSN  2249–9695. International  Journal  of  Research  in Environmen-tal  Science  and  Technology. 3(2): International  Journal  of  Research  in Environmen-tal  Science  and  Technology. 3(2): 61-64 Dahuri, R. 2003. Keanekaragaman Hayati Laut: Aset Pembangunan Berkelanjutan
Indonesia. Gramedia  Pustaka  Utama. Jakarta. Harborne, J.B. 1998. Phytochemical Methods: A Guide  to  ModernTechniques  of  Plant Analysis . Third Edition. UK : Chapman & Hall. Kristiani, V. 2014. Pengaruh Konsentrasi Etanol dan Waktu Maserasi Terhadap Perolehan Fenolik, Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Rambut  Jagung .
[ Skripsi ].  Fakultas  Teknik  Universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya. Kumayas, A. R., et al . 2015. Aktifitas Antibakteri dan  Karateristik  Gugus  Fungsi  dari Tunikata Polycarpa  aurata . Pharmacon . 4: (1) , 32-44. Lalamentik, G. 2017. Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Karang  Lunak  Klyxum  sp.  yang Diperoleh  dari  Teluk  Manado .  [ Skripsi ].
Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Mpila, D. A. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  (Coleus atropurpureus benth) Terhadap Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan Pseudomas aeruginosa Secara Invitro . [ Skripsi ]. Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American society for Microbiology.
Oda, T., Kamoshita, K., Maruyama, S., Mashuda, K.,  Nishimoto,  M.,  Xu,  J.,  Ukay,
K.,Mangindaan,  R.E.P.,  and  Namikoshi, M.  2007. Cytoticicity  of  Lissoclibaldins and  Liiso-  clinotoxins,  Isolated  from  a Tropical Ascidian Lissoclinum cf badium,  against  Human  Solid-  Tumor
Derived  Celllines .  Biol.  Pharm.  Bull  30 (2).
Rajasekar,  T.,  Balaji,  S.,  Kumaran,  S., Deivasigamani, B., Pugzhavendhan, S.R. 2012. Isolation and Characterization of Marine  Fungal  Metabolites  against Clinical    Pathogens .    Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Disease.  Elsevier. S387-S392
Rachmawaty, D. U. 2016. Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol,  Etil  Asetat dan  Petroleum  Eter  Rambut  Jagung Manis ( Zea  mays  ssaccharata  Sturt ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan  Escherichia  coli .  [ Skripsi ].  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Saifudin,  A., et  al .  Teruna.  2011. Standarisasi Bahan  Obat  Alam .  Yogyakarta:  Graha Ilmu.
Sineke,  F.  U., et  al .  2016.  Penentuan  Kandungan Fenolik  dan  Sun  Protection  Factor  (SPF) dari Ekstrak Etanol  dari Beberapa Tongkol Jagung ( Zea mays L.). Pharmacon . 5: (1) , 275-283.
Sumilat, D.A., Wewengkang, D.S., Rotinsulu, H., Yamazaki, H., Oda, T., Ukai, K., Sarker, Namikoshi,  M.  2018. Bioactivity  of extracts  from  ascidians  collected  in North    Sulawesi as seeds of
marinederived  drugs .  AACL  Bioflux. 11(2): 516-524.
Wagey,  B.T.  2017. Morphometric  analysis  of congeneric seagrasses (Cymodocea Oda,  T.,  rotundata  and  Cymodocea serrulata)  in  the  coastal  areas  of Bunaken  National.Park,North  Sulawesi, Indonesia.  AACL  Bioflux,  10(6):1638- 1646