Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Endofit Dari Daging Buah Salak Pondih ( Salacca edulis ) Dan Salak Padang Sidempuan ( Salacca sumatrana )
Fatimah Azzahra 1 , Kartika Manalu 2 , Rizki Amelia Nasution 3
Program Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sumatera Utara.
fatimahazzahra.9983@gmail.com (1), kartikamanalu@uinsu.ac.id (2), rizkiamelianst@uinsu.ac.id (3)

## ABSTRAK
Bakteri  endofit  adalah  mikroorganisme  yang  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman  tanpa  mengganggu pertumbuhan tanaman. Bakteri endofit yang berasal dari tanaman buah, seperti buah salak (Salacca zalacca), memiliki kemampuan menghasilkan senyawa kimia yang meningkatkan kesehatan. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk  mengidentifikasi  dan  mendeskripsikan  bakteri  endofit  yang  terdapat  pada  daging  buah  salak pondoh  dan  buah  sidempuan  padang.  Untuk  mengidentifikasi  bakteri  tersebut,  penelitian  ini  menggunakan teknik  deskriptif  serta  karakterisasi  morfologi,  pewarnaan  gram,  dan  uji  biokimia.  Pendekatan  pengenceran 10-4 digunakan untuk mengisolasi bakteri endofit dari kedua jenis buah salak. Hasil analisis disajikan secara deskriptif  dan  kualitatif  untuk  setiap  strain  bakteri  endofit  yang  ditemukan.  Didapatkan  enam  isolat  buah salak  pondoh  dan  empat  isolat  buah  salak  Padangsidempuan,  sehingga  total  bakteri  endofit  sebanyak  10 isolat.  Studi  biokimia  mengungkapkan  bahwa  isolat  bakteri  endofit  berasal  dari  genus  Bacillus  dan Pseudomonas.
Kata Kunci : Salak, Bakteri Endofit, dan Karakteristik Buah.

## ABSTRACT
Endophytic  bacteria  are  bacteria  that  live  in  plant  tissues  and  develop  colonies  without  interfering  with  the host's  growth.  Endophytic  bacteria,  particularly  those  isolated  from  fruit  plants,  can  create  chemical substances that promote health. Salak fruit (Salacca zalacca) is one of the plants with health advantages. The goal  of  this  research  was  to  discover  and  describe  the  endophytic  bacteria  identified  in  the  flesh  of  the Pondoh  Salak  and  Padangsidempuan  fruits.  This  study  employed  descriptive  methods  and  bacterium identification using morphological characterization, gram staining, and biochemical assays. The 10-4 dilution method  was  used  to  isolate  bacteria  from  both  salak  fruits  The  findings  were  described  descriptively  and qualitatively for each endophytic bacteria discovered. Six samples of salak pondoh and four isolates of salak Padangsidempuan  were  recovered,  for  a  total  of  10  isolates  of  endophytic  bacteria.  Based  on  biochemical analyses  of  endophytic  bacterial  isolates  isolated  from  the  pulp  of  the  Pondoh  and  Padangsidempuan  salak fruits, they were identified as Bacillus and Pseudomonas.
Keywords : Salak, Endophytic Bacteria, and Fruit Characteristics
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )

## I. PENDAHULUAN
1. Latar Belakang
Salak  pondoh  dan  salak  Padangsidempuan  memiliki  rasa  buah  yang  manis  dan  asam karena pati diubah menjadi gula selama proses pematangan, dan jumlah asam, seperti asam sitrat,  meningkat,  memberikan  rasa  manis  dan  asam  pada  buah  salak  (Irfandi,  2005). Mikroba,  terutama  bakteri  endofit  yang  hidup  di  jaringan  tanaman,  mempengaruhi perubahan rasa buah. Bakteri endofit dapat menyebabkan kerusakan tanaman dengan cara memasuki  jaringan  tanaman  melalui  pori-pori  alami  (Hidayah,  2008).  Endofit  adalah mikroorganisme yang hidup di dalam jaringan tanaman seperti akar, batang, daun, biji, dan buah  tetapi  tidak  menimbulkan  gejala  penyakit  tanaman  (Radji,  2005).  Mikroba  endofit telah ditemukan pada berbagai tanaman, antara lain padi, kentang, anggrek, dan kina (Tian et  al,  2015).  Buah-buahan  sering  mengandung  mikroorganisme  endofit.  Bakteri  endofit dari  genus  Pseudomonas  dan  Bacillus  banyak  terdapat  pada  tanaman  tomat  dan  dapat menghasilkan  hormon  pertumbuhan  yang  berpengaruh  baik  terhadap  pertumbuhan tanaman  (Hartini,  2004).  Menurut  Husain  (2022),  Hallman  dan  Berg  (2006)  mengklaim bahwa  keberadaan  bakteri  endofit  meningkatkan  tanaman  dengan  meningkatkan pertumbuhan  tanaman  dan  konsumsi  nutrisi..  Penggunaan  mikroorganisme  endofit, khususnya  bakteri,  telah  menarik  banyak  perhatian  karena  telah  berkembang  menjadi pilihan non-kimia selama beberapa tahun terakhir (Melliawati et al., 2006). Menghasilkan zat  bioaktif  yang  mirip  dengan  tanaman  inang  merupakan  komponen  interaksi  simbiosis antara  bakteri  dan  tanaman.  Tanaman  tidak  diperlukan  jika  bakteri  dapat  membuat metabolit  sekunder  yang  mirip  dengan  tanaman  inangnya.  Sebaliknya,  menurut  Priharta (2008), tanaman ini terkait dengan mikroba endogen.

## 2. Perumusan Masalah
Ada beberapa kesimpulan yang ditarik dari konteks penelitian ini, yaitu:
1) Apakah daging buah salak pondoh dan buah salak Padangsidempuan termasuk bakteri endofit?
2) Bagaimana bakteri endofit yang terdapat pada daging buah salak pondoh dan buah salak Padangsidempuan dapat diidentifikasi?
3. Tujuan Penelitian
Berdasarkan bagaimana tantangan yang telah disajikan telah dirumuskan, maka tujuan dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
1) Merujuk  pada  bakteri  endofit  yang  dapat  dideteksi  pada  daging  buah  salak Padangsidempuan dan Pondoh.
2) Identifikasi  dan  karakterisasi  isolat  bakteri  endofit  dari  daging  buah  salak  pondoh  dan salak padangsidempuan.
4. Manfaat Penelitian
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  memberitahukan  kepada  khalayak  umum  tentang keberadaan  bakteri  endofit  pada  daging  salak  Padang  Sidempuan  dan  Pondoh.  Selain  itu diharapkan penelitian ini dapat mengkarakterisasi berbagai jenis bakteri endofit yang dapat dideteksi pada daging salak pondoh dan salak padang sidempuan.

## II. METODE Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  direncanakan  untuk  dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA Universitas Sumatera Utara, Medan, dimulai pada bulan November 2021 hingga Desember 2021.
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )

## Rancangan Penelitian atau Model
Bakteri  endofit  yang  teridentifikasi  pada  buah  Salak  Pondoh  dan  Salak  Padang,  serta dengan  isolasi  dan  pendampingan,  diteliti  dalam  penelitian  ini  menggunakan  metodologi deskriptif.
Bahan dan Peralatan 1. Alat Penelitian
Oven,  autoclave,  kertas  saring,  aluminium  foil,  cling  film,  pipet,  gelas  ukur,  spatula, hotplate,  cawan  petri,  Erlenmeyer,  rak  tabung  reaksi,  jarum,  benda  kaca,  penutup  kaca, tabung  reaksi,  lampu  Bunsen,  penjepit  kayu,  vortex,  dan  mikroskop  adalah  beberapa  alat yang digunakan dalam penelitian ini..

## 2. Bahan Penelitian
Daging buah salak pondoh dan salak Padangsidempuan, akuades, etanol konsentrasi 70%, natrium  hipoklorit  konsentrasi  3%,  media  Nutrient  Agar  (NA),  NaCl,  dan  larutan  kristal digunakan  dalam  penelitian  ini.  Violet,  larutan  yodium,  larutan  spiritus,  alkohol  aseton, larutan  safranin,  hidrogen  peroksida  (H2O2)  3%,  media  Strach  Amylum,  media  agar, media  gelatin,  media  Simmon's  Citrate  Agar  (SCA),  media  uji  Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA),  dan  media  Sulfie  Indole  Motility  (SIM)  adalah  beberapa  bahan  lain  yang digunakan dalam percobaan.

## Tahapan Penelitian

## 1. Persiapan alat dan bahan
Setiap  peralatan  yang  digunakan  dalam  penyelidikan  ini  dibersihkan  dengan  cermat  dan dikeringkan  dalam  oven.  Alat  dan  bahan  kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf  selama  20 menit pada suhu 121°C dan tekanan 15 psi
2. Sampel
Daging buah Salak Padangsidempuan dan Salak Pondoh disajikan sebagai sampel tanaman penelitian. Pedagang buah di Medan dihubungi untuk membeli sampel Salak Pondoh dan Padang  Sidempuan.  Dari  kebun  salak  milik  warga  di  Desa  Simatorkis,  Tapanuli  Selatan, Sumatera  Utara,  dikumpulkan  buah  salak.  Sterilitas  dipertahankan  selama  seluruh  proses pengambilan  sampel,  dan  setelah  itu,  sampel  tersebut  akan  menjalani  pengujian laboratorium.  Proses  pengambilan  sampel  dilakukan  dengan  menjaga  sterilitas,  kemudian sampel tersebut akan diuji di laboratorium.

## 3. Preparasi Sampel
Bahan  hancur  seberat  satu  gram  ditempatkan  dalam  botol  uji  bersih.  Selanjutnya,  rasio pengenceran  larutan  berair  pepton  mulai  dari  10-4  hingga  10-6  digunakan  untuk mengencerkan  bahan.  Dengan  mengisolasi  asam  laktat,  bakteri  juga  menjalani  pengujian tambahan (Waluyo, 2008)
4. Pengembangan Sampel
Sampel  salak  pondoh  dan  salak  padang  disterilkan  dengan  merendamnya  selama  3  menit dalam  etanol  70%  dan  5  menit  dalam  natrium  hipoklorit  3%.  Sampel  kemudian dibersihkan  dengan  etanol  70%  selama  30  detik  dan  dicuci  selama  dua  menit  dengan  air suling  steril.  Menggunakan  air  suling  steril,  cuci  tiga  kali.  Setelah  itu,  keringkan  sampel dengan  kertas  saring.  Buah  salak  dibagi  menjadi  beberapa  bagian  setelah  disterilkan. Sampel  diencerkan  hingga  faktor  10-4  pada  langkah  berikutnya.  Isolasi  bakteri  endofit diperbolehkan untuk pengujian tambahan (Desriani et al., 2013) .
5. Isolasi Bakteri
Pemanfaatan buah salak  pondoh dan padangsidempuan untuk  mengisolasi  bakteri  dengan metode  pour  plate.  Sampel  sebanyak  1  ml  diambil  dengan  pengenceran  10-4,  dan kemudian dituangkan ke dalam cawan petri steril yang disiapkan secara aseptik.
6. Pengamatan Morfologi
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )
Setelah inkubasi, diamati morfologi koloni bakteri yang berkembang pada media Nutrient Agar  (NA).  Bentuk,  kenampakan,  dan  warna  koloni  yang  terbentuk  pada  media  Nutrient Agar  merupakan  faktor  yang  perlu  diperhatikan.  Ciri-ciri  bakteri  juga  dapat  diamati melalui pewarnaan gram (Varghese and Joy, 2014).

## 7. Pewarnaan Gram
Prosedur  pewarnaan  Gram  dilakukan  sebagai  berikut:  Pertama,  gunakan  alkohol  70% untuk membersihkan kaca objek. Potongan kaca kemudian diratakan dan direndam dalam suspensi  bakteri.  Apusan  bakteri  kemudian  diberi  2-3  tetes  larutan  kristal  violet  dan dibiarkan selama 1 menit.
8. Uji Biokimia
1. Hidrolisis Pati 2. Uji Citrat
3. Uji Triple Sugar Iron Agar (TSIA) 4. Uji Motilitas 5. Uji Katalase

## HASIL PENELITIAN
1. Isolasi  Bakteri  Endofit  dari  Daging  Buah  Salak  Pondoh  dan  Salak

## Padangsidempuan
Teknik pemisahan satu jenis bakteri dari bakteri lain dalam campuran mikroba disebut isolasi bakteri. Bakteri tersebut diekstrak dari daging buah salak pondoh dan salak padangsidempuan untuk mengidentifikasi bakteri endofit dari kedua jenis buah salak tersebut. Pedagang buah di Medan, Sumatera Utara, menyediakan isolat bakteri endofit. 10 gram daging buah pondoh dan buah sidempuan padang digabung dengan air mengalir. Setelah direndam dalam larutan etanol 70% selama 30 detik, natrium hipoklorit selama 5 menit, dan etanol 70% selama 3 menit, permukaan tanaman disterilkan. Mereka kemudian dicuci tiga kali dengan air suling.

## 2. Pengamatan Karakteristik Makroskopis Koloni Bakteri
Temuan pengamatan penelitian ini mengungkapkan kesamaan yang cukup besar dalam hal evaluasi makroskopik antara daging salak pondoh dan buah salak Padangsidempuan yang diisolasi  sebagai  bakteri  endofit.  Terlepas dari kenyataan bahwa isolat  tertentu mirip satu sama lain, tidak mungkin untuk mengetahui apakah mereka benar-benar identik. Roka dan Buddi (2017) mengutip Janda et al. (2007) mengatakan bahwa urutan nukleotida dan sifat biokimia dapat digunakan untuk membedakan antar spesies.

## Tabel 4.1 Karakteristik Morfologi Isolat Bakteri Endofit
No Kode Isolat Koloni Bentuk Tepi Warna Elevasi
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
8. 9. 10. SP1 SP2 SP3 SP4 SP5 SP6 SS01 SS02 SS03 SS04 Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Irregular Bergelombang Lobat Lobat Lobat Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Datar Datar Datar Convex Datar Datar Convex Convex Convex Convex Keterangan: SP : Bakteri endofit yang diisolasi dari daging buah salak Pondoh
SS : Bakteri endofit yang diisolasi dari daging buah salak Padangsidempuan.
3. Pengamatan Karakteristik Mikroskopis Sel Bakteri

## 1) Hasil Pewarnaan Gram
Pewarnaan  Gram  digunakan  untuk  memeriksa  struktur  mikroskopis  sel  bakteri,  dan  uji biokimia  digunakan  untuk  menentukan  genus  bakteri.  Berdasarkan  struktur  sel  bakteri, pewarnaan  Gram  menunjukkan  bahwa  bakteri  endofit  yang  diisolasi  adalah  kokus  dan basil.  Berdasarkan  Tabel  4.3  terdapat  dua  isolat  bakteri  Gram  positif  dan  delapan  isolat bakteri  Gram  negatif  diantara  bakteri  endofit.  Menurut  Pelczar  (1989),  variasi  ini dihasilkan  dari  variasi  bagaimana  bakteri  Gram-positif  dan  Gram-negatif  mendapatkan nutrisi  dari  produk  sisa  metabolisme,  serta  variasi  seberapa  efisien  bakteri  Gram-negatif mampu mempertahankan diri terhadap pertahanan inang dan fisik. gangguan. Bakteri gram positif  kurang  kompleks  daripada  bakteri  gram  negatif  dalam  hal  struktur  dan  susunan dinding sel bakteri. Sementara bakteri Gram negatif memiliki tiga lapisan (luar, tengah dan dalam), bakteri Gram positif hanya memiliki satu lapisan (mono).
Tabel 4.2 Hasil Pengamatan Bakteri Berdasarkan Pewarnaan Gram
No. Kode Isolat
Pewarnaan Gram Bentuk 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
10. SP1 SP2 SP3 SP4 SP5 SP6 SS01 SS02 SS03 SS04 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Positif
Negatif Negatif Basil Basil Basil Basil Basil Basil Basil Basil Basil Basil
Keterangan:
SP   : Salak Pondoh SS   : Salak Padangsidempuan
Dua  isolat  bakteri  teridentifikasi  sebagai  Gram  positif  berdasarkan  hasil  uji  pewarnaan Gram. yang ditunjukkan dengan mikroba bewarna ungu, dan delapan isolat bakteri adalah Gram negatif yang ditunjukkan oleh bewarna merah. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua sel bakteri adalah basil.
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )

## 2) Hasil Uji Biokimia
Temuan  penelitian  meliputi  data  uji  biokimia  aktivitas  sel  bakteri  yang  akan  digunakan sebagai acuan dalam mengidentifikasi bakteri, seperti uji hidrolisis pati, hidrolisis gelatin, sitrat, TSIA, motilitas, dan katalase. Hasil uji biokimia ditunjukkan pada grafik, sedangkan data uji fitomik ditunjukkan pada Tabel 4.3.

## Tabel 4.3 Data Hasil Uji Biokimia
Kode isolat P G C
TSIA M K Slunt Butt Keretaka n Endapan SP1 SP2 SP3 SP4 SP5 SP6 SS01 SS02
SS03 SS04 + - + + + - - - - - - + + + - - + + - - - - - - - - - - - - A K A K A K K A A A
A A K K K K K K K K - - - - - - - - - - + - - - - - - + + - + - - - - - - - - - - - + - - - - -

## Keterangan:
1. Hidrolisis pati (+) terdapat zona bening              5.Motilitas  (+)  pertumbuhan  di  area tusukan
2. Hidrolisis gelatin (+) media tetap cair 6.Katalase (-) tidak terdapat gelembung gas
3. Citrat (-) tidak terjadi perubahan warna
4. TSIA :
A  : Asam (media menjadi warna kuning) B   : Basa (media berwarna merah) (-)  : Tidak terdapat keretakan media (+) : Terdapat endapan hitam

## III. KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah :
1. Pada  penelitian  ini  daging  buah  salak  pondoh  dan  salak  padang  sidempuan dimasukkan  10  isolat  bakteri  endofit.  Enam  isolat  berasal  dari  daging  buah  salak pondoh  dan  empat  isolat  berasal  dari  daging  buah  salak  Padangsidempuan.  Genus Bacillus  dan  Pseudomonas  diduga  merupakan  bakteri  yang  hidup  bersimbiosis dengan daging buah salak pondoh dan buah salak Padangsidempuan.
2. Sebagian besar bakteri  endofit merupakan bakteri  gram  negatif berupa basil, koloni berwarna putih susu, dan tidak memiliki motil.

## DAFTAR PUSTAKA
Afriani, Imas., Fifi Puspita dan Muhammad Ali. 2018. Isolasi dan Karakterisasi Morfologi dan  Fisiologi  Bakteri  Endofit  dari  Tanaman  Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus polyhizrus ). Jurnal UR . VOL.5, No.1.
Azzahra  F,  Manalu K,  Amelia Nasution  R :  Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Dari Daging  Buah  Salak  Pondih  ( Salacca  edulis )  Dan  Salak  Padang  Sidempuan  ( Salacca sumatrana )
Aji, Oktira Roka dan Iva Dita Lestari. 2020. Bakteri Endofit Tanaman Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia ) Penghasil Asam Indol Asetat (AIA). Jurnal Biologi . Vol. 13, No.2. Al-Mubarok,  S.  2006. Shahih  Tafsir  Ibnu  Katsir  Jilid  I .  Bogor:  Pustaka  Ibnu  Katsir. Penerjemah Abu Ihsan Al-Atsari..
Anarsis, Widji. 1996. Agribisnis Komoditas Salak . Jakarta: Bumi Aksara. Anonim. 1989. Salak Pondoh Ada Lima Macam . Jakarta: Trubus. Bergey, D.H. dan Boone, D.R. 2009. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology Second Edition Volume Three: The Fermicutes . Springer: United States of America. Cappucino,  J.G.,  dan  N.  Sherman.  2013. Microbiology  a  Laboratory  Manual .  San Fransisco: Benjamin Cummings.
Departemen Agama RI. 2009. Al-Qur’an dan Tafsirnya . Jakarta: Departemen Agama RI.
Desriani. et  al .  2013.  Potential  Endophytic  Bacteria  For  Increasing  Paddy  Var  Rojolele Productivity. Int. J. On Adv. Sci., Eng and Information Tech . Vol.3, No.1. Dwijoseputro. 1989. Dasar-dasar Mikrobiologi . Surabaya: Djembatan.
Fatichah,  N.  F.  Y.  2011.  Potensi  Bakteri  Endofit  Sebagai  Penghasil  Enzim  Kitinase, Protease  dan  Selulose  Secara  In  Vitro. Skripsi .  Malang  :  Fakultas  Sains  dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.
Firdausi, Nailul., Wirdhatul Muslihatin, dan Tutik Nurhidayati. 2016. Pengaruh Kombinasi Media Pembawa Pupuk Hayati Bakteri Pelarut Fosfat Terhadap pH dan Unsur Hara Fosfor dalam Tanah. Jurnal Sains dan Seni ITS . Vol.5, No.2.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 12 Juli  2023 05 Agustus  2023 02 Oktober 2023 Ya