Jurnal Farmasi Sains dan Terapan (Journal of Pharmacy Science and Practice) pISSN 2338-8404 and eISSN 2657-2311 Journal Homepage: http://journal.wima.ac.id/index.php/JFST/ DOI: 10.33508/jfst.v9i2.3999

## Skrining Senyawa
Combretum indicum sebagai Inhibitor Caspase 3 secara In Silico
Screening of Combretum indicum Compounds as Caspase 3 Inhibitors In Silico
Samsul Hadi (a)* , Salma (a) , Amalia Khairunnisa (a) , Suci Kamelia (a)
(a) Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarmasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
Article info:
Received Date : 23/07/2022 Revised Date   : 23/07/2022 Accepted Date : 10/08/2022 Abstrak:
Osteoarthritis  (OA)  ialah  gangguan  sendi  degeneratif  yang  ditandai dengan  erosi cartilage artikular.  Salah  satu  protein  yang  mempunyai peran  besar  dalam  penyakit  ini  adalah  caspase  sub  type  3.  Skrining senyawa  melati  belanda  Inhibitor  Caspase  3  menjadi  tujuan  dalam penelitian.  Metode  dari  penelitian  ini  menggunakan  senyawa  yang terkandung  dalam Combretum  indicum .  Data  ini  kemudian  dilakukan docking menggunakan software PLANTS. Hasil dari penelitian ini adalah skor  (nilai) docking dari  masing-masing  senyawa  yaitu  Isatin Sulfonamide  -90,8975;  Casuariin  -92,4942;  asquisqualic  acid -90,8911;  1-desgalloyleugeniin  -100,988;  arachidonic  acid  -63,4613; Punicalin  -88,2142;  linoleic  acid  -97,4111;  gallic  acid  -59,1281;  Rutin -95,3717; ellagic acid -63,6793; methyl ursolate -77,5611; flavogallonic acid  -80,8221;  Quisqualic  acid  -63,1281;  brevifolin  carboxylic  acid -71,5203;  Trigonelline  -59,8987;  Quercetin  -74,4091;  quinoline-4- carbonitrile  -61,5971;  β-sitosterol  -87,3881;  Pedunculagin  -86,843; Lupeol  -76,4221;  Punicalagin  -82,1754;  linalool  -67,8673;  Eugeniin -100,7541.  Oleh  karena  itu  senyawa  yang  berpotensi  sebagai  inhibitor caspase  3  dengan  skor docking ≥  dari ligan  reference adalah  Rutin, linoleic acid, asquisqualic acid, Eugeniin, Casuariin, 1- desgalloyleugeniin.

## Abstract
Osteoarthritis  (OA)  is  a  degenerative  joint  disorder  characterized  by erosion of the articular cartilage. One of the proteins that have a major role  in  this  disease  is  caspase  sub  type  3.  The  screening  of  melati belanda  compounds  Caspase  3  inhibitors  is  the  goal  in  this  research. The method of this research used compounds contained in Combretum indicum . This data is then docked using PLANTS software. The results of this  research  were  the docking scores  (value)  of  each  compound. namely  Isatin  Sulfonamide  -90.8975;  Casuariin  -92.4942; asquisqualic acid  -90.8911;  1-desgalloyleugeniin  -100.988;  arachidonic  acid -63.4613;  Punicalin  -88.2142;  linoleic  acid  -97.4111;  gallic  acid -59.1281;  Rutin  -95.3717;  ellagic  acid  -63.6793;  methyl  ursolate -77.5611;  flavogallonic  acid  -80.8221;  Quisqualic  acid  -63.1281; brevifolin  carboxylic  acid  -71.5203;  Trigonelline  -59.8987;  Quercetin -74.4091;  quinoline-4-carbonitrile  -61.5971;  β-sitosterol  -87.3881; Pedunculagin -86.843; Lupeol -76.4221; Punicalagin -82.1754; linalool -67.8673;  Eugeniin  -100.7541.  Therefore,  compounds  that  have potential  as  caspase  3  inhibitors  with  a docking score  ≥  from  the reference  ligand  are  Rutin.  linoleic  acid.  asquisqualic  acid.  Eugeniin, Casuariin, 1-desgalloyleugeniin.
Keywords: Combretum indicum Osteoarthritis
Caspase PLANTS software
Corresponding Authors: Program Studi Farmasi. FMIPA. Universitas Lambung Mangkurat. Banjarmasin. Kalimantan Selatan. Indonesia. Email: samsul.hadi@ulm.ac.id

## PENDAHULUAN
Osteoarthritis ialah
gangguan sendi degeneratif  yang  ditandai  dengan  erosi cartilage artikular  dan  merupakan  kandidat  potensial untuk  agen  terapeutik  anti-apoptosis.  Kondrosit adalah  satu-satunya  jenis  sel  yang  ditemukan  di tulang  rawan  dan  khusus  untuk  jaringan  ini. Peningkatan  tingkat  apoptosis  telah  dilaporkan pada  kondrosit  superfisial,  zona  tengah,  dan hipertrofik  pada  kartilago Osteoarthritis (OA) (Wang et  al .,  2000).  Selain  itu,  kondrosit  yang berdekatan  dengan  lesi  OA  mengekspresikan kadar  bcl-2  yang  tinggi,  sebuah  gen  yang  terlibat dalam penghambatan apoptosis. Degradasi tulang rawan  sepertinya  hasil  dari  pembelahan  protein matriks  oleh  enzim  proteolitik  yang  berasal  dari kondrosit  dan/atau  sinoviosit.  Saat  OA  berlanjut, jaringan  kolagen  fibrilar  terdegradasi  dan kematian  sel  kondrosit  meningkat  (Hatori et  al ., 1995).
Penelitian  model  transgenik,  apoptosis disregulasi  telah  diamati  pada  kondrosit  yang terkait dengan kelainan struktural dan perkembangan  utama,  sehingga  menunjukkan peran  penting  untuk  regulasi  proses  ini  di  tulang rawan  artikular.  Peningkatan  jumlah  kondrosit apoptosis  juga  telah  diamati  pada  model  hewan dengan  OA  yang  diinduksi  pembedahan.  Oleh karena  itu,  bukti  yang  menunjukkan  peran apoptosis  pada  kondrosit  dari  tulang  rawan normal sangat luas dan meyakinkan (Karaplis dan Vautour, 1997)
Inhibitor  caspase  3  memblokir  apoptosis dalam model osteoarthritis in vitro menunjukkan untuk  pertama  kalinya  bahwa  aktivitas  caspase  3 sangat  penting  dalam  apoptosis  kondrosit  dan bahwa  inhibitor  ini  pada  akhirnya  dapat mengarah  pada  strategi  terapi  baru.  Selain  itu, senyawa inhibitor tersebut menghambat apoptosis pada neutrofil sumsum tulang tikus. Strategi baru ini  merupakan  pendekatan  untuk  pengobatan penyakit  yang  ditandai  dengan  apoptosis berlebihan, seperti OA (Yedjou et al ., 2010).
Mutan  caspase-null  telah  digunakan  untuk menunjukkan  pentingnya  anggota  keluarga individu  dalam  perkembangan  embrio  murine, dan  sel-sel  yang  berasal  dari  tikus  yang kekurangan  caspase  ini  telah  memungkinkan asosiasi  caspase  individu  dengan  perubahan morfologi  spesifik  yang  terjadi  selama  apoptosis (Hakem et  al .,  1998).  Penelitian  ini  mengenai keterlibatan  caspase  dalam  apoptosis  secara  in vitro  dengan  mengukur  aktivitas  enzim  dan mengevaluasi  efek  inhibitor  dalam  sel  yang diinduksi  oleh  senyawa.  Studi  berbasis  sel  telah dilakukan menggunakan inhibitor peptida dengan permeabilitas  sel  terbatas,  inhibitor  peptida ireversibel, dan inhibitor peptida prodrug (Garcia- Calvo et al. , 1998).
Kemajuan  signifikan  mengenai  mekanisme molekuler apoptosis telah dicapai dalam beberapa tahun  terakhir,  dan  peran  caspases  sebagai komponen  integral  dari  proses  transduksi  sinyal
telah dipelajari secara intensif (Mesner, Budihardjo,  dan  Kaufmann,  1997).  Sebelas caspase  manusia  telah  diidentifikasi.  Salah  satu caspase yang berperan penting adalah caspase 3.
Caspase  3  telah  ditemukan  diaktifkan  di hampir  setiap  model  apoptosis.  Itu  termasuk dalam  subfamili  caspases  efektor.  yang  juga mencakup  caspase  6  dan  7.  Caspases  ini diaktifkan  di  bagian  hilir  caspases  inisiator  yaitu caspase  8  dan  10.  Substrat  alami  caspase  3 mencakup  banyak  protein  yang  terlibat  dalam pemeliharaan  dan/atau  perbaikan  sel  (Nicholson dan  Thornberry,  1997).  Misalnya,  fragmentasi oligonukleosom (DNA laddering ) adalah ciri khas dari  apoptosis  dan  dimediasi  oleh caspase- activated  deoxyribonuclease (CAD),  satu  yang aktivasinya dipengaruhi oleh pembelahan caspase 3-mediated dari  CAD.  Ketersediaan  inhibitor selektif  caspase  3  akan  memungkinkan  evaluasi potensi  penghambatan  apoptosis  pada  tingkat efektor  caspase  (Enari et  al .,  1998).  Salah  satu tanaman  yang  kandungan  senyawanya  yang berpotensi sebagai inhibitor caspase 3 berdasarkan  pola  kemiripan  struktur  database yang dimiliki oleh PASSonline adalah Combretum indicum (melati belanda). Berdasarkan penelitian pendahuluan  (kemiripan  struktur)  senyawa  yang terkandung  dalam  melati  belanda  memiliki  Pa ( Probabbility  active )  yang  lebih  tinggi  dari  Pi ( Probabylity  inactive )  nilainya  adalah  0.111  - 0.175.  Senyawa  melati  belanda  berpotensi dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  baik  secara in silico atau in  vitro .  Dalam  hal  ini  peneliti melakukan  penelitian in  silico dengan  metode docking menggunakan PLANTS.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  untuk  penelitian  berupa  22 ligan kandungan kimia yang terdapat dalam Combretum indicum PDBID dengan kode 1gfw. Peralatan  ada  dua  yaitu  perangkat  keras  yaitu laptop  ACER  es1-431-p9p3  dan  perangkat  lunak yang
dipergunakan
adalah PLANT®, ChemAxon®, Discovery studio®, Yasara®.

## Cara Kerja
Penelitian  dimulai  dengan  dengan  validasi ligan native yang terikat dengan caspase3. Setelah mendapatkan  nilai  RMSD  di  bawah  3  Å,  maka koordinat  itu  dipergunakan  untuk docking senyawa  yang  terdapat  pada  melati  belanda. Senyawa-senyawa  yang  terdapat  pada  melati belanda  dibangun  strukturnya  dan  dibuat konformasinya  menggunakan  chemaxon.  Tahap selanjutnya adalah preparasi protein menggunakan software yasara ® dengan  cara menghilangkan  molekul  air  dan  ligan  yang  tidak berhubungan  dengan  proses docking .  Tahap kedua docking menggunakan PLANTS, dan untuk melihat  jenis  interaksi  antara  ligan  dengan protein menggunakan discovery studio .

## Analisis Data
Semakin  negatif  nilai  skor docking maka interaksi semakin bagus dan mudah terjadi reaksi, di  samping  itu  juga  melihat  skor docking yang lebih  kecil  atau  sama  dengan  dari  skor docking ligan native . E plantscore = f PLP +f clash +C site -20
F PLP merupakan  potensi  linier  interaksi  protein dan  ligan.  Potensi  linier  dari  metode  PLANTS melihat  jenis  interaksi  ( repulsive ,  ikatan hydrogen, buried , non polar dan logam). Potensial torsional  dan  benturan  ligan,  f tors dan  f clash mempertimbangkan benturan konstribusi torsional dan ligan internal serta obligasi fleksibel dalam  ligan.  C site merupakan  hukum  yang  dinilai jika konformasi ligan berada di luar lingkup ruang pencarian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Caspase 3 merupakan protein penting yang berperan  dalam  apoptosis.  sehingga  inhibitor apoptosis  ini  berguna  untuk  Osteoarthritis  atau kondisi  penyakit  yang  disebabkan  oleh  apoptosis yang berlebih. Penelitian ini telah dimulai dengan uji  pendahuluan  menggunakan PASSonline yang berguna  untuk  memprediksi  aktivitas  kandungan kimia yang terkandung dalam melati belanda yang berpotensi sebagai inhibitor caspase.
Penelitian docking ini  menggunakan PLANT  dimulai  dengan  validasi  metode  yaitu dengan  melakukan redocking terhadap  ligan native.  Hasil  yang  diperoleh  adalah  2,865  Å, sehingga koordinat X:37.6468; Y:33.5653; Z:27.9733  dengan  radius    11.6033  memenuhi syarat  validitas  karena  nilainya  ≤  3  Å (Jain  dan Nicholls,  2008)  terlihat  pada  gambar  1.  Nilai RMSD  yang  mendekati  3  ini  melibatkan  ikatan kovalen  pada  ligan native ,  sehingga  PLANT  sulit melakukan docking kovalen.  Dengan  demikian metode ini dapat digunakan untuk I senyawa dari melati belanda.
Pada penelitian ini dihasilkan skor docking. Nilai  skor docking yang ≥  dari ligan reference adalah  asquisqualic  acid  (-90.8911),  linoleic  acid (-97.4111), Rutin (-95.3717), Eugeniin (-100.7541), Casuariin (-92.4942), 1-desgalloyleugeniin
(-100.988).  Oleh  karena  itu  keenam  ligan  ini menjadi  hal  yang  menarik  untuk  penelitian  lebih lanjut karena memiliki kestabilan yang menyerupai ligand reference .
Asquisqualic  acid  memiliki  persamaan residu yang terikat dengan ligand reference yaitu ARG207,  CYST163,  HIS121.  Ikatan  elekrostatik terjadi  antara  ligan  uji  dengan  residu  ARG64 (3,843  Å),  ARG207  (3,118  Å).  Ikatan  hidrogen terjadi  antara  ligan  uji  dengan  residu  ARG64 (2.797  Å).  ARG207  (2.907  Å).  ARG64  (2.880  Å).
HIS121  (3.068).  SER205  (2.805  Å).  Ikatan  Pi- Sulfur terjadi dengan CYS163 (5.495 Å).
Gambar 1. Visualisasi ligand reference dengan ligand docking Ligan Merah reference dan kuning adalah ligan redocking
Linoleic acid memiliki persamaan ARG207, PHE256,  CYS163,  TYR204,  TRP206.  Jembatan garam  terjadi  dengan  residu  ARG64  (2,732  Å), ARG207 (2,524 Å). Ikatan hidrogen terjadi antara ARG64  (2,934  Å),  GLN161  (2,739  Å),  ARG207 (3,690  Å).  Ikatan  hidrofob  terjadi  antara  CYS163 (4,639),  TRY204  (4,176  Å),  TRP206  (4,048  Å), PHE256  (4,325Å).  Rutin  memiliki  persamaan TYR204, ARG207, PHE256, ASN208, TRP206.
Ikatan  hidrogen  terjadi  dengan  residu THR62  (3,072  Å),  SER65  (2,299  Å),  ARG207 (2,936  Å),  ASN208  (3,173  Å),  SER209  (3,014  Å), SER251 (2,996 Å). Ikatan hidrofob terjadi dengan residu  TRP206  (4,885  Å),  TYR204  (5,475  Å)  dan PHE256 (4,518 Å). Eugeniin memiliki persamaan residu  dengan  HIS  121.  CYS163.  TYR204. ARG207.  TRP206.  PHE256.  Ikatan  elektrostatik terjadi  antara  TRP206  (4,235  Å)  dan  PHE256 (4,926 Å).  Ikatan hidrogen terjadi dengan residu THR62,  HIS121  (2,964  Å),  CYS163  (2,574  Å), TYR204  (3,059  Å),  ARG207  (2,723  Å),  ASN208 (3,153 Å), SER209 (2,780 Å), SER251 (3,101 Å).
Casuariin, persamaan residu yang berinterakasi adalah ARG207 dan TYR204. Ikatan yang  terjadi  adalah  elektrostatik  dengan  residu ARG207  (4,836  Å).  Ikatan  hidrogen  terjadi dengan residu PHE250 (3,149 Å), PHE252 (2,938 Å),  THR62  (3,017Å),  TYR204  (3,315  Å),  SER251 (3,752  Å),  ASN208  (2,900  Å),  SER209  (2,93  Å). 1-desgalloyleugeniin  persamaan  residu  yang berinteraksi adalah ARG207 dan TRP 206. Ikatan elektrostatik  terjadi  dengan  residu  ARG  207 (4,152 Å). Ikatan hidrofob terjadi dengan TRP 206 (5,446 Å). Ikatan hidrogen terjadi dengan SER209 (2,468  Å),  SER63  (2,63  Å),  ASN208  (2,665  Å), SER65  (2,646  Å),  PHE250  (2,743  Å),  THR62 (3,645 Å), SER249 (3,636 Å), TRP206 (2,634 Å).
Tabel 1. Hasil Docking Nama Ligan Skor Docking Nama Ligan Skor Docking Ligand reference (Isatin Sulfonamide) -90.8975 Casuariin -92.4942 asquisqualic acid -90.8911 1-desgalloyleugeniin -100.988 arachidonic acid -63.4613 Punicalin -88.2142 linoleic acid -97.4111 gallic acid -59.1281 Rutin -95.3717 ellagic acid -63.6793 methyl ursolate -77.5611 flavogallonic acid -80.8221 Quisqualic acid -63.1281 brevifolin carboxylic acid -71.5203 Trigonelline -59.8987 Quercetin -74.4091 quinoline-4-carbonitrile -61.5971 β -sitosterol -87.3881 Pedunculagin -86.843 Lupeol -76.4221 Punicalagin -82.1754 linalool -67.8673 Eugeniin -100.7541 Tabel 2. Residu yang terlibat dalam interaksi, peneliti menampilkan semua interaksi yang terlibat dalam interaksi ligan dan protein. Reference  asquisqualic acid arachidonic acid linoleic acid rutin methyl ursolate Quisqualic acid GLY122 - - - - - - CYS163 + + + - + + ARG207 + + + + + + HIS121 + - - - - + PHE256 - + + + + - TYR204 - + + + + - TRP206 - + + + + - - SER205 - - - - - - ARG64 + + - - + - - GLN161 - - - - - - ALA162 - - - - - - - GLN161 - - + - - - - ASN208 - - - - - - SER209 - - - - - - SER251 - - - - - - THR62 - - - - - - SER65 - - - - - - - SER205 - - - - - ASP253 - - - - - - PHE252 - - - - - - - ALA162 - - - - - - SER120 Reference Trigonelline quinoline-4- carbonitrile pedunculagin punicalagin Eugeniin casuariin GLY122 - - - - - - CYS163 + - - + + - ARG207 + + + + + + HIS121 - - - - + - PHE256 + - + + + - TYR204 + + + - + + TRP206 + - - - + - - - - ASN208 - + + - - - SER209 - + +
Tabel 2. Residu yang terlibat dalam interaksi, peneliti menampilkan semua interaksi yang terlibat dalam interaksi ligan dan protein (lanjutan) Reference Trigonelline quinoline-4- carbonitrile pedunculagin punicalagin Eugeniin casuariin - - - SER65 - - - - - - MET61 + - + - - - - ARG64 - - - - - - SER209 - - - - - - GLN161 - - - - - - - SER251 + - - - - - - PHE250 - - - - - - PHE252 Reference 1-desgalloyleugeniin punicalin gallic acid ellagic acid flavogallonic acid brevifolin carboxylic acid GLY122 - - + - - - CYS163 - + + - - - ARG207 + + - - + + HIS121 - + + - - - PHE256 - + - + + - TYR204 - + + + - - TRP206 + - - - + + - SER249 - - - - - - SER63 - - - - - - SER65 - - - - - - SER209 - - - + + - THR62 - - - - - - PHE250 - - - - - - ASN208 + - - + - - - SER251 - + - - - - PHE250 - - - - Reference quercetin β-sitosterol Lupeol linalool GLY122 - - - - CYS163 - + - - ARG207 + + - + HIS121 - - - - PHE256 + + + + TYR204 - - + + TRP206 + + + + - SER251 - - - - - SER205 + + - - PHE252 - -
Residu  asam  amino  yang  beperan  dalam interaksi  ini  adalah  daerah  katalitik  yaitu  residu HIS 121 and CYS163, karena dua residu berperan dalam  terjadinya  reaksi  (Lee et  al. ,  2000). Interaksi  ini  terjadi  antara  protein  dengan senyawa  asquisqualic  acid,  Quisqualic  acid, Trigonelline,  punicalagin,  Eugeniin,  punicalin, gallic acid, β -sitosterol, sedangkan daerah binding site adalah  TYR204-PHE256-TRP206 ( Lee et  al. , 2000).  Hal  ini  terjadi  antara  residu  dengan  ligan arachidonic  acid,  linoleic  acid,  Rutin,  methyl ursolate,  Trigonelline,  pedunculagin,  punicalagin, Eugeniin,  Casuariin,  1-desgalloyleugeniin,  puni-
calin,  gallic  acid,  ellagic  acid,  flavogallonic  acid, brevifolin  carboxylic  acid,  quercetin, β -sitosterol, Lupeol,  linalool.  Pengembangan  obat  inhibitor caspase  3  dipergunakan  untuk  gangguan Parkinson  dengan  kode  obat  Z-VAD-FMK, A lzheimer’s  kode  obat  Q -VD-OPH, Amyotrophic lateral  sclerosis (ALS)  kode  Z-VAD-FMK, Huntington’s  disease (HD)  kode  M826, Ischemic stroke Ac-DMQD-CHO, Spinal cord injury Q-VD- OPH  (Lee et  al .,  2018).  Mengenai  mekanisme kerja  dari  inhibitor  caspase  3  (Z-DEVD-Fmk) terlihat seperti di gambar 3.
asquisqualic acid
linoleic acid
Rutin
Eugeniin
Casuariin 1-desgalloyleugeniin Gambar 2. Interaksi-interaksi senyawa yang berpotensi dengan caspase 3
Tumor  necrosis  factor-related  apoptosis- inducing ligand (TRAIL) melakukan rebound efek multi drug resintace (MDR) dengan menginduksi apoptosis  pada  sel  karsinoma  lambung  dengan peran  c-myc  dalam  memodulasi  reseptor kematian  DR4  dan  DR5,  sehingga  penggunaan inhibitor caspase  -3  mampu menekan c-myc oleh siRNA  dan  mengurangi  ekspresi  DR4  dan  DR5 yang akan berpengaruh terhadap caspase 3 (Kuhn et  al .,  2008;  Zhu et  al .,  2015). Knockdown gen TNFRSF1B  menghasilkan  induksi  program apoptosis  yang  bergantung  pada  caspase-8, caspase-2  dan  P53  dalam  sel  endotel  yang
melewati  caspase-3.  Keseimbangan  antara  TNFR yaitu  TNFRSF1A  memberi  sinyal  apoptosis melalui caspase-8, sedangkan TNFRSF1B memberi  sinyal  kelangsungan  hidup  melalui  NF- KB  hal  ini  terlihat  pengaruhnya  pada  DNA fragmentation factor (DFFB) (Espín et al ., 2013). Amyotrophic  lateral  sclerosis (ALS)  adalah penyakit  neurodegeneratif  yang  ditandai  dengan kematian  neuron  motorik,  degenerasi  akson,  dan denervasi neuromuscular  junctions (NMJ). Mekanismenya  melalui  peningkatan  DR6  pada jalur  pensinyalan  caspase  3,  sehingga  salah  satu mekanisme menghambat apoptosis adalah
menge- block fungsi
DR6
pada
ciliary
neurotrophic factor (CNTF) (Huang et al .. 2013). Ketika  terjadi  apoptosis  maka  protein  Bcl-2 downregulated dan  BAX upregulated ,  sehingga inhibitor  caspase  3  berperan  dalam  augmentasi Bcl-2  dan  meningkatkan  protein  BAD  melalui beta-secretase 1 isoform E (KIAA1149) (Park et al. , 2014).  Permasalahan  apoptosis  dapat  meng- akibatkan  penyakit  yang  berhubungan  dengan tulang  seperti  osteonekrosis.  Strategi  anti- apoptosis  termasuk  penghambatan  protein caspase 3, poly [ADP-ribose] polymerase (PARP), dan  Bcl-2  serta  induksi  jalur  PKB/Akt  dan keluarga  protein  inhibitor  of  apoptosis  (IAP), melalui beta-site APP-cleaving enzyme 1 (BACE1) pada tulang (Mollazadeh, Bazzaz dan Kerachian et al. , 2015).

## KESIMPULAN
Senyawa  dari  melati  belanda  yang berpotensi  sebagai  inhibitor  caspase  3  adalah Rutin,  linoleic  acid,  asquisqualic  acid,  Eugeniin, Casuariin, 1-desgalloyleugeniin.
Gambar  3 .  Mekanisme  senyawa  inhibitor caspase 3 dengan STICTH (Kuhn et al ., 2008)

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada Universitas  Lambung  Mangkurat  melalui  PDWM 2022.

## DAFTAR PUSTAKA
Enari, M., Sakahira, H., Yokoyama, H., Okawa, K., Iwamatsu, A.,  dan  Nagata,  S.,  1998,  A  caspase-activated  DNase  that degrades  DNA  during  apoptosis,  and  its  inhibitor    ICAD, Nature , 391 (6662), 43 – 50, https://doi.org/10.1038/34112.
Espín,  R.,  Roca,  F.J.,  Candel,  S.,  Sepulcre,  M.P.,  González- Rosa,  J.M.,  Alcaraz-Pérez,  F.,  Meseguer,  J.,  Cayuela,  M.L., Mercader,  N.,  dan  Mulero,  V.,  2013,  TNF  receptors  regulate vascular  homeostasis  in  zebrafish  through  a  caspase-8, caspase-2 and P53 apoptotic program that bypasses caspase-3, Disease Models dan Mechanisms , 6 (2): 383 – 396, https://doi.org/10.1242/dmm.010249.
Garcia-Calvo,  M.,  Peterson,  E.P.,  Leiting,  B.,  Ruel,  R., Nicholson,  D.W.,  dan  Thornberry,  N.A.,  1998,  Inhibition  of human  caspases  by  peptide-based  and  macromolecular inhibitors, The  Journal  of  Biological  Chemistry , 273 (49): 32608 – 32613, https://doi.org/10.1074/jbc.273.49.32608.
Hakem,  R.,  Hakem,  A.,  Duncan,  G.S.,  Henderson,  J.T.,  Woo, M., Soengas, M.S., Elia, A., de la Pompa, J.L., Kagi, D., Khoo, W.,  Potter,  J.,  Yoshida,  R.,  Kaufman,  S.A.,  Lowe,  S.W., Penninger,  J.M.,  dan  Mak,  T.W.,  1998,  Differential requirement for caspase 9 in apoptotic pathways in vivo, Cell ,
94 (3), 339 – 352, https://doi.org/10.1016/s00928674(00) 81477-4.
Hatori, M., Klatte, K.J., Teixeira, C.C., dan Shapiro, I.M., 1995, End  labeling  studies  of  fragmented  DNA  in  the  avian  growth plate:  evidence  of    apoptosis  in  terminally  differentiated chondrocytes, Journal  of  Bone  and  Mineral  Research:  The Official  Journal  of  the  American    Society  for  Bone  and Mineral  Research , 10 (12):  1960 – 1968,  https://doi.org/10. 1002/jbmr.5650101216.
Huang,  G.,  Lee,  X.,  Bian,  Y.,  Shao,  Z.,  Sheng,  G.,  Pepinsky, R.B.,  dan  Mi,  S.,  2013,  Death  receptor  6  (DR6)  antagonist antibody is neuroprotective in the mouse  SOD1G93A model of
amyotrophic  lateral  sclerosis, Cell  Death  dan  Disease ,
4 (10):e841, https://doi.org/10.1038/cddis.2013.378.
Jain,  A.N.  dan  Nicholls,  A.,  2008,  Recommendations  for evaluation  of  computational  methods, Journal  of  Computer- Aided  Molecular  Design , 22 (3 – 4):  133 – 139,  https://doi.org/ 10.1007/s10822-008-9196-5.
Karaplis,  A.C.  dan  Vautour,  L.,  1997,  Parathyroid  hormone- related  peptide  and  the  parathyroid  hormone/parathyroid hormone-related  peptide  receptor  in  skeletal  development, Current Opinion in Nephrology and Hypertension , 6 (4): 308 – 313, https://doi.org/10.1097/00041552-199707000-00002.
Kuhn,  M.,  von  Mering,  C.,  Campillos,  M.,  Jensen,  L.J.,  dan Bork,  P.,  2008,  STITCH:  interaction  networks  of  chemicals and  proteins, Nucleic  Acids  Research , 36 (Database  issue): D684 – D688, https://doi.org/10.1093/nar/gkm795.
Lee,  D.,  Long,  S.A.,  Adams,  J.L.,  Chan,  G.,  Vaidya,  K.S., Francis, T.A., Kikly, K., Winkler, J.D., Sung, C.M., Debouck, C., Richardson,  S.,  Levy,  M.A.,  DeWolf,  W.E.J.,  Keller,  P.M., Tomaszek,  T.,  Head,  M.S.,  Ryan,  M.D.,  Haltiwanger,  R.C., Liang,  P.H.,  Nuttall,  M.E.,  2000,  Potent  and  selective nonpeptide  inhibitors  of  caspases  3  and  7  inhibit  apoptosis and  maintain  cell  functionality, The  Journal  of  Biological Chemistry , 275 (21):  16007 – 16014,  https://doi.org/10.1074/ jbc.275.21.16007.
Lee,  H.,  Shin, E.A.,  Lee,  J.H., Ahn,  D., Kim,  C.G.,  Kim, J.-H., dan Kim, S.-H., 2018, Caspase inhibitors: a review of recently patented  compounds  (2013-2015), Expert  Opinion  on Therapeutic  Patents , 28 (1):  47 – 59,  https://doi.org/10.1080/ 13543776.2017.1378426.
Mesner,  P.W.J.,  Budihardjo,  I.I.,  dan  Kaufmann,  S.H.,  1997, Chemotherapy-induced apoptosis, Advances in Pharmacology (San Diego, California) , 41 : 461 – 499, https://doi.org/10.1016/
s1054-3589(08)61069-8.
Mollazadeh, S., Bazzaz, B.S.F., dan Kerachian, M.A., 2015, Role of  apoptosis  in  pathogenesis  and  treatment  of  bone-related diseases, Journal  of  Orthopaedic  Surgery  and  Research , 10 : 15, https://doi.org/10.1186/s13018-015-0152-5.
Nicholson,  D.W.  dan  Thornberry,  N.A.,  1997,  Caspases:  killer proteases, Trends  in  Biochemical  Sciences , 22 (8):  299 – 306, https://doi.org/10.1016/s0968-0004(97)01085-2.
Park, C., Lee, W.S., Go, S.-I., Nagappan, A., Han, M.H., Hong, S.H., Kim,  G.S.,  Kim,  G.Y., Kwon,  T.K.,  Ryu,  C.H.,  Shin, S.C., dan  Choi,  Y.H.,  2014,  Morin,  a  flavonoid  from  moraceae, induces  apoptosis  by  induction  of  BAD  protein    in  human leukemic  cells, International  Journal  of  Molecular  Sciences , 16 (1):645 – 659, https://doi.org/10.3390/ijms16010645.
Wang, F.-L., Connor, J.R., Dodds, R.A., James, I.E., Kumar, S.,
Zou,  C.,  Lark,  M.W.,  Gowen,  M.,  dan  Nuttall,  M.E.,  2000, Differential  expression  of  Egr-1  in  osteoarthritic  compared  to normal  adult  human  articular  cartilage, Osteoarthritis  and Cartilage , 8 (3):  161 – 169,  https://doi.org/https://doi.org/ 10.1053/joca.1999.0295.
Yedjou,  C.G.,  Milner,  J.N.,  Howard,  C.B.,  dan  Tchounwou, P.B.,  2010,  Basic  apoptotic  mechanisms  of  lead  toxicity  in human  leukemia  (HL-60)  cells, International  Journal  of Environmental Research and Public Health , 7 (5): 2008 – 2017, https://doi.org/10.3390/ijerph7052008.
Zhu, X., Zhang, K., Wang, Q., Chen, S., Gou, Y., Cui, Y., dan Li, Q,  2015,  Cisplatin-mediated  c-myc  overexpression  and cytochrome c (cyt c) release result  in the up-regulation of the death receptors DR4 and DR5 and the activation of caspase 3 and  caspase  9,  likely  responsible  for  the  TRAIL-sensitizing effect  of  cisplatin, Medical  Oncology  (Northwood,  London, England) , 32 (4):133,  https://doi.org/10.1007/s12032-015- 0588-9.