Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## ANALISIS PROPOKSUR LD50 TERHADAP PERTUMBUHAN LARVA LALAT Sarcophaga sp. DENGAN

## KROMATOGRAFI GAS-SPEKTROMETRI MASSA
Faizal Arief Nurokhman 1 , Prof. Dr. Ahmad Basori, Drs., M.S., Apt. 2 , Prof. Dr. rer. nat. M. Yuwono, M.S., Apt. 3
Program Studi S2 Ilmu Forensik, Sekolah Pascasarjana, Universitas Airlangga Surabaya e-mail: faizalarief@gmail.com

## Abstrak
Kasus kematian keracunan pestisida banyak dijumpai di Indonesia maupun dunia. Jenis pestisida    yang    banyak    dijumpai    adalah    golongan    karbamat,    salah    satunya    propoksur. Propoksur  merupakan  zat  yang  mudah  menguap.  Penelitian  ini  bertujuan  menganalisis  kadar propoksur pada sampel larva lalat Sarcophaga sp. dan mengidentifikasi pengaruhnya terhadap pertumbuhan  larva  lalat.  Dosis  propoksur  menggunakan  dosis  LD50  dengan  volume  100 mg/kgBB.  Media  tumbuh  yang  digunakan  adalah  tikus   putih  galur   wistar.  Pengamatan dilakukan  pada  empat  variable  stadium  larva  yakni  instar  II,  instar  III,  pupa  dan  dewasa. Setiap stadium dilakukan replikasi sebanyak lima kali. Larva dikoleksi lalu diukur panjang dan beratnya  setiap  hari  hingga  mencapai  stadium  dewasa,  selanjutnya  larva  lalat  diekstraksi dengan  metode  cair-cair. Hasil estraksi sampel diinjeksikan ke KG-SM sebanyak  1  µl. KG-SM diatur dengan parameter suhu inlet 250 o C, injeksi splitless. Gas pembawa Helium berkecepatan 1,2 ml/menit. Hasil validasi metode didapatkan nilai regresi 0,9984, nilai akurasi 100,4-107%, nilai  presisi  3,023%.  Hasil  profil  kadar  propoksur  menunjukkan  penurunan  pada  tiga stadium awal  dan  meningkat  pada  stadium  dewasa.  Untuk  hasil  distribusi  menunjukkan  pertumbuhan panjang    larva    kelompok    perlakuan    cenderung    lebih    panjang,    pertumbuhan    berat    larva kelompok  kontrol  cenderung  lebih  besar  dibanding  kelompok  perlakuan.  Analisis  data  dengan ANOVA  satu  arah  ada  pengaruh  yang  signifikan  kadar  propoksur  terutama  pada  stadium dewasa  dan  analisis  T-test  sampel  independen  pertumbuhan  larva  menunjukkan  adanya perbedaan  yang  siginifikan  antara  kelompok  kontrol  dan  kelompok  perlakuan.  Penelitian  ini menunjukkan    penggunaan    metode    KG-SM    dapat    digunakan    dalam    penentuan    penyebab kematian  akibat  keracunan  pestisida  propoksur.  Untuk  kedepannya  dapat  dikembangkan untuk meneliti racun jenis lain pada kasus kematian keracunan yang belum diketahui penyebabnya .
Kata kunci : forensik entomologi, larva, lalat, pasca merta, kromatografi gas-spektrometri massa.
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## Abstract
Death  cases  of  pesticide  poisoning  are  common  in  Indonesia  and  the  world.  Types  of pesticides  that  are  commonly  found  are  carbamates,  one  of  them  is  propoxur.  Propoxur  is  a volatile  substance.  This  study  aims  to  analyze  the  level  of  propoxure  in  the  sample  of Sarcophaga sp. fly larvae and to identify their effect on the growth of fly larvae. The dosage of propoxur  using  dose  LD50  with  volume  100  mg  /  kgBB.  The  growing  medium  used  was  the wistar  strain  white  rat.  Observations  were  performed  on  four  larval  stage  variables  which  is instar II, instar III, pupa and adult. Each stage is replicated five times. The larvae are collected and then measured the length and weight each day until it reaches the adult stage, then the fly larvae  is  extracted  by  liquid-liquid  method.  The result  of  the  sample  estraction is  injected into KG-SM  by  1  μl.  KG-SM  is  set  with  the inlet  temperature  parameter  250oC,  splitless  injection. Helium  carrier  gas  speed  1.2  ml  /  min.  The  result  of  validation  method  got  regression  value 0,9984,  accuracy  value  100,4-107%,  precision  value  3,023%.  Profile  profiles  of  propoxur content  showed  decrease  in  the  first  three  stages  and  increased  in  adult  stage.  For  the distribution result  showed that the length  of larvae  of the treatment  group tends to  be longer, the  weight  of  control  group  larvae  tend  to  be  larger  than  the  treatment  group.  Data  analysis with one-way ANOVA was significantly influenced by propoxur content especially in adult stage and  T-test  of  independent  sample  of  larval  growth  showed  significant  difference  between control  group  and  treatment  group.  This  study  shows  KG-SM  method  can  be  used  in determining  the  cause  of  death  due to  poisoning  of  propoksur  pesticide.  For  the future  can be developed to examine other types of toxins in cases of poisoning deaths that the cause have not been known.
Keywords: entomology forensics, larvae, flies, postmortem, gas chromatography-mass spectrometry .
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## 1.    PENDAHULUAN
Angka  kematian  tidak  wajar  akibat  racun atau  zat  kimia  lain  masih  banyak  dijumpai. Pestisida  merupakan  salah  satu  zat  kimi  yang banyak  menyebabkan  kasus  keracunan.  Kasus keracunan  akut  pestisida  ( acute  pesticide poisoning /APP)  secara  signifikan  meningkat angka  kesakitan  dan  kematian  di  seluruh  dunia, khususnya negara-negara berkembang. Tidak ada angka  perkiraan  pasti  berapa jumlah  orang  yang mengalami  gangguan  kesehatan  akibat  terpapar pestisida. Laporan Badan Kesehatan Dunia dalam WHO’s  World  Report  on  Violence  and  Health tahun  2002  menyebutkan  bahwa  terjadi  1,6  juta kematian  dengan  kekerasan  terhadap  diri  sendiri dan  63%  terjadi  di  wilayah  Asia  Pasifik.  Angka bunuh diri pada negara-negara Asia Tenggara dan Pasifik tahun 2000 tercatat sebesar 71% (512.000 dari 722.000) (Eddleston & Philips, 2004).
Kasus bunuh diri dengan meracuni diri (self poisoning)  menggunakan  racun  pestisida  sangat marak di  Indonesia. Data di Rumah Sakit Cipto Mangungkusumo  Jakarta  pada  tahun  2004-2005 terdapat 1.119 kasus bunuh diri, yang menggunakan  racun  serangga  sebanyak  23%. Penelitian di Rumah Sakit Pringadi Medan pada tahun  2006-2011  mencatat  sebanyak  116  kasus meracuni  diri  sendiri,  dimana  61,2%  (71  kasus) menggunakan  racun  pestisida  rumah  tangga seperti  Baygon,  Soffel,  racun  tikus  dan  racun hama (Pardede, 2012).
Propoksur  [nama  dagang-  Baygon®,   2(1- methylethoxy)phenol       methyl       carbamate)] merupakan  insektisida  golongan  karbamat  yang dikembangkan  oleh  perusahaan  Bayer  AG  di Jerman. Saat ini telah banyak digunakan sebagai pengendali  hama  kecoa,  jangkrik,  kutu,  lalat, nyamuk, tawon, dan kutu baik dalam lingkungan kerja  atau  rumah  tangga.  Propoksur  mudah terserap  dalam  tanah  dan  terbawa  air,  namun karena  sifatnya  yang  mudah  terdekomposisi propoksur    dianggap    mempunyai    potensi pencemar  lingkungan  persisten.  Paparan  akut propoksur akan menyebabkan proses karbamilasi dari  enzim  kolinesterase  yang  memproduksi akumulasi asetilkolin.
Asetilkolin
ini menyebabkan  efek  muskarinik  (diare,  gangguan berkemih,    miosis,    bradikardia,    bronkorea, muntah,  lakrimasi,  dan  berkeringat  banyak)  dan efek  nikotinik  (fasikulasi,  kelemahan,  dan kelumpuhan)  (Enviromental  Protecting  Agency, 1992).
Penentuan   kematian   tidak   alami   yang diduga   disebabkan   oleh   keracunan   zat   kimia
(misalnya,  pestisida  Baygon)  tidak  dapat didasarkan  hasil  pemeriksaan  lambung  semata. Menurut  Idries  (2008),  lambung  masih  diartikan sebagai dunia luar, korban mati dapat disebabkan oleh  hal  lain  tapi  untuk  menutupi  hal  itu dimasukkan racun  ke  dalam  mulut  dan lambung korban.  Oleh  sebab  itu  diperlukan  pemeriksaan tambahan dari darah dan urine korban atau organ dalam  lainnya  untuk  membuktikan  bahwa  racun telah  masuk  saat  korban  masih  hidup  dan didistribusikan ke seluruh tubuh.
Pada kasus mati keracunan yang ditemukan dalam  waktu  hari,  minggu  hingga  bulan  akan semakin   sulit   mengidentifikasi   penyebab   dan waktu  kematiannya.  Proses  pembusukan  tentu sudah  terjadi  dan  dapat  mengaburkan  zat-zat kimia  toksik  yang  ada  di  dalam  tubuhnya. Penyebab  kematian  dan  waktu  kematian  (Post- mortem  interval/PMI)  menjadi  lebih  sulit ditegakkan.  Pengembangan  metode  baru  dengan menggunakan serangga sebagai alat bantu dalam proses identifikasi mayat, ilmu ini disebut dengan entomologi  forensik.  Beberapa  jenis  serangga mempunyai sifat atau kebiasaan untuk berkoloni, berkembang  biak  dan  mencari  makanan  pada jenazah atau jasad biologis. Serangga  ini  disebut serangga pemakan jenazah (necrofagus). Peranan serangga   yang  berada  disekitar  jenazah  dapat menjadi  jam  biologis  untuk  menghitung  waktu perkiraan  sejak  kematian  atau  lebih  dikenal sebagai  post-mortem interval  (PMI)  atau interval pasca merta (Amendt, et al., 2010).
Penelitian  mengenai  insektisida  golongan karbamat,  khususnya  propoksur  yang  dapat menimbulkan  intoksikasi  penyebab  penyakit  dan kematian pada manusia belum banyak dilakukan. Metode-metode  penelitian  yang  sudah  dilakukan masih bisa dikembangkan lagi untuk menentukan interval  pasca  merta  dengan  menggunakan bantuan    serangga.    Peneliti    merasa    perlu dilakukan  studi  untuk  mendeteksi  secara kuantitatif  dan  kualitatif  pengaruh  propoksur dengan  proses  dekomposisi  kadaver  oleh serangga, untuk mendukung metode penyelidikan secara medikolegal.

## 2.    TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tinjauan tentang kematian
Kematian  didefinisikan  sebagai  berhentinya kehidupan secara irreversible . Mati
diklasifikasikan  sebagai  mati  somatik  dan  mati molekuler.  Ketika  tiga  penyangga  (disebut  juga “tripod”)  yakni  otak,  paru-paru  dan  jantung berhenti    sepenuhnya,    itu    disebut    kematian
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
somatik.  Kematian  molekul  terjadi  sekitar  3-4 jam  setelah  kematian  somatik  saat  sel-sel individual dan jaringan  mulai  sekarat  dan tanda- tanda dekomposisi mulai tampak (Sharma, 2011).
Tanda  kematian  dapat  diklasifikasikan menjadi berikut (Sharma, 2011): 1)   Perubahan segera Ditandai dengan berhentinya secara permanen pernapasan dan sirkulasi darah.
2)   Perubahan awal a)    Perubahan pada pupil mata
b)   Perubahan pada kulit
c)    Penurunan suhu tubuh
d)   Adanya lebam mayat
3)   Perubahan lanjut
a)    Rigor mortis
b)   Putrefakasi
c)    Adiposera
d)   Mumifikasi

## 2.2 Tahapan tentang dekomposisi
Peristiwa  dekomposisi  melibatkan  berbagai aspek  selain  faktor  biotik,  yakni  faktor  abiotik yang  meliputi  parameter  fisik seperti temperatur, kelembaban,  dan  lain-lain.  Menurut  Goff  (2000) dan Gennard (2012), tahapan dekomposisi terdiri dari lima tahap antara lain: 1)  Tahap 1 ( fresh stage )
Tahapan  dimulai  pada  saat  kematian  dan ditandai adanya tanda penggelembungan pada tubuh.  Serangga  yang  pertama  kali  datang adalah  lalat  dari  famili  Calliphoridae  dan Sarcophagidae. Lalat betina akan meletakkan telurnya di daerah yang terbuka seperti daerah kepala (mata, hidung, mulut, dan telinga).
2)  Tahap 2 ( bloated stage )
Merupakan tahapan pembusukan yang sedang dimulai.  Gas  yang  dihasilkan  oleh  aktivitas metabolisme  bakteri  anaerob  menyebabkan penggelembungan  pada  pada  perut  mayat. Selanjutnya suhu internal naik selama tahapan ini   sebagai   akibat   dari   aktivitas   bakteri pembusuk dan aktivitas metabolime dari larva lalat.  Lalat  dari  famili  Calliphoridae  sangat tertarik  pada  mayat  selama  tahapan  ini. Kemudian    selama    mengembang    akibat adanya  gas,  cairan  dalam  tubuh  terdorong keluar dari lubang-lubang tubuh dan meresap ke dalam tanah. Cairan tersebut tersusun oleh senyawa seperti amonia  yang dihasilkan oleh aktivitas metabolisme dari larva lalat sehingga akan menyebabkan tanah di bawah mayat itu untuk  menjadi  alkali  (basa)  dan  fauna  tanah menjadi tertarik untuk menuju ke mayat.
3)  Tahap 3 ( decay stage )
Tahapan  ini  ditandai  adanya  kerusakan  kulit dan  mengakibatkan  gas  keluar  dari  tubuh.
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Larva  lalat  membentuk  gerombolan  yang besar  pada  mayat.  Meskipun  beberapa serangga  predator,  seperti  kumbang,  tawon, dan semut, pada tahap bloated stage, serangga pemakan  bangkai  dan  predator  dapat  diamati dalam  jumlah  besar  menjelang  tahapan  ini berakhir. Pada akhir tahap ini, lalat dari famili Calliphoridae dan Sarcophagidae telah
menyelesaikan  perkembangan  siklusnya  dan meninggalkan  mayat  untuk  menjadi  pupa.
Pada  akhir  tahap  ini,  larva  lalat  akan menghilang dari jaringan tubuh pada mayat.
4)  Tahap 4 ( postdecay stage )
Pada  tahap  ini  sisa-sisa  tubuh  seperti  kulit, kartilago     dan     usus     sudah     mengalami pembusukan.  Selanjutnya  sisa  jaringan  tubuh yang  masih  ada  akan  mengering.  Indikator pada tahap ini adalah hadirnya  kumbang dan berkurangnya dominansi lalat di dalam tubuh mayat.
5)  Tahap 5 ( skeletal stage )
Pada  tahap  ini  hanya  tersisa  tulang  belulang dan rambut. Tahapan ini tidak jelas serangga apa  saja  yang  hadir.  Pada  kasus  tertentu, kumbang  dari  famili  Nitidulidae  terkadang ditemukan.  Tubuh  mayat  sudah  mengalami akhir dari dekomposisi.

## 2.3 Tinjuan tentang entomotoksikologi forensik
Entomotoksikologi  merupakan  cabang  baru dari entomologi forensik yang menganalisis racun pada  arthropoda  (umumnya  lalat  dan  kumbang) yang memakan jaringan tubuh mayat.
Menggunakan arthropoda yang ditemukan dalam mayat  di  tempat  kejadian,  penyelidik  dapat mendeteksi apakah racun benar-benar ada dalam tubuh saat terjadi kematian.
Ahli  entomologi  forensik  sering  diminta untuk     memeriksa     bukti     arthropoda     yang ditemukan     pada     mayat     dan     menentukan penyebab kematian dan berapa lama arthropoda tersebut  sudah  ada  pada  mayat  atau  tempat kejadian.    Periode    waktu    ini    sering diintepretasikan  sebagai  postmortem  interval (PMI),  atau  waktu  kematian  (Amendt,  et  al., 2004).   Penilaian   PMI   ditentukan   dari   waktu pertumbuhan arthropoda dan komunitas lanjutan darinya.
Selama  proses  dekomposisi  pada  jenazah hewan  atau  manusia,  jenazah  tersebut  akan mengeluarkan senyawa kimia yang dilepaskan ke udara  yang  mampu  menarik  serangga  pemakan bangkai.  Ahli  entomologi  forensik  sering memeriksa  bukti  serangga  pada  mayat  manusia dan  menetukan  berapa  lama  serangga  tersebut berada   di   mayat.   Periode   waktu   tersebut   di
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
interpretasikan dalam postmortem interval (PMI) atau  waktu  sejak  kematian.  Analsis  PMI  terbagi menjadi dua, yakni precolonization interval (pre- CI)  dan  postcolonization  interval  (post-CI) sebagaimana dilihat pada Gambar 2.1 (Gennard, 2012).
Gambar 2.3 Fase entomologikal pada proses dekomposisi vertebrata (Gennard, 2012).
Salah  satu  contoh  serangga  pemakan bangkai  adalah  lalat  yang  masuk  ke  tubuh manusia  dengan  tujuan  untuk  bertelur,  pada umumnya  lalat  memilih  dalam  lubang  tubuh lembab, seperti mulut, hidung, atau mata. Setelah beberapa  saat  telur  menetas,  dan  larva  lalat (belatung)  muncul  serta  memakan  pada  tubuh tersebut  hingga  membusuk.  Ketika  larva  telah mencukupi  kebutuhan  untuk  makanannya,  maka belatung  akan  keluar  dari  tubuh  mayat  dan mencari tempat untuk membentuk pupa (kepompong).  Pada  tahap  berikutnya  dari  siklus hidupnya,  munculah  generasi  berikutnya  yang berupa  serangga  dewasa  (imago)  yang  muncul dari  pupa  tersebut  yang  siap  memulai  siklus selanjutnya (Gambar 2.2) (Byrd & Castner, 2010)
Gambar 2.2 Siklus hidup secara utuh dari lalat hitam (Diptera: simuliidae) (Byrd & Castner, 2010).
Pada  kasus  entomotoksikologi  tersebut, serangga-serangga  yang  ditemukan  pada  mayat dapat   digunakan   untuk   analisis   toksikologi.
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Namun   ada   kelemahan   jika   menggunakan analisis    ini    untuk    menghitung    interval postmortem jika salah dalam menghitung tahapan perkembangan  serangga.  Sehingga  alternatifnya adalah  mengkaji  efek  biomakumulasi  obat  dan metabolismenya pada serangga pemakan bangkai dan  efeknya  terhadap  laju  perkembangannya (Amendt et al., 2004).

## 2.4 Tinjauan tentang lalat
Lalat adalah salah satu insekta  yang  masuk Ordo  Diptera,  anggota  kelas  Hexapoda,  dan merupakan  insekta  yang  memiliki  jumlah  genis dan spesies terbesar hingga  60-70% dari seluruh spesies  Arthropoda.  Selain  sebagai  vektor  dari berbagai macam penyakit disebut sebagai miasis, terutama  penyakit-penyakit  saluran  pencernaan, sifat sebagian jenis lalat yang suka  menetap dan berkoloni  di  dalam  jenazah  yang  mati,  bahan yang membusuk dan daging hidup dapat menjadi salah  satu  indikator  dalam  identifikasi  forensik. Spesies  ini  disebut  sebagai  pemakan  bangkai (Levine, 1994).
Spesies  lalat  pemakan  bangkai  mencari makan  langsung  dari  jenazah,  atau  cairan  yang keluar  dari  jenazah  selama  proses  dekomposisi terjadi.  Klasifikasi  ekologisnya  mencakup  dari beberapa  spesies  dari  Ordo Diptera  dari  familia Calliphoridae  (blow  flies)  dan  Sachophagidae (flesh  flies),  dan  beberapa  spesies  dari  Ordo
Coleoptera  (kumbang).  Secara  spesifik  spesies arthropoda   yang   hadir   dalam   jenazah   sangat bervariasi   tergantung  dari  lokasi   geografisnya (Goff & Lord, 2000).
Spesies  pemakan  bangkai  yang  hadir pertama  kali  dan  melakukan  koloni  pada  lokasi dekomposisi  jenazah  adalah  kelompok  familia Calliphoridae,  Sarchophagidae  dan  Muscidae (lalat    rumah).    Mereka    berkembang    dengan meletakan  telur  langsung  di  dalam  jenazah  dan daur  hidupnya  terjadi  di  dalam  atau  dekat  dari jenazah  tersebut.  Oleh  karena  itu  spesies-spesies ini berperan penting dalam estimasi interval pasca merta (PMI) (Introna, et al., 2000).

## 2.5 Tinjauan tentang Propoksur
Propoksur  (merk  dagang:  Baygon,  2(1- methylethoxy)phenol  methyl  carbamate))  adalah insektisida  jenis  karbamat  yang  diperkenalkan tahun  1959.  Merupakan  insektisida  non-sistemik yang  mampu  mengatasi  dan  mempunyai  efek residu  yang  panjang  terhadap  semut,  kecoa, jangkrik, kutu, lalat, nyamuk, tawon, dan kutu.
Aktivitas  biologis  utama  dari  propoxur adalah  dengan  melalui  karbamilasi  dari  enzim
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
kolinesterase (ChE) sehingga terjadi penghambatan. ChEs adalah keluarga enzim yang ditemukan  di  seluruh  tubuh  yang  berfungsi menghidrolisis  ester  kolin.  Dalam  sistem  saraf, asetilkolinesterase (AChE) terlibat dalam penghentian  impuls  pada  seluruh  sinapsis  saraf termasuk  penghubung  neuromuskuler  dengan cepat  menghidrolisis  neurotrasmitter,  asetilkolin. Penghambatan  AChE  mengarah  pada  akumulasi asetilkolin  di  celah  sinaps  yang  mengakibatkan stimulasi  saraf  berlebih  dan  diikuti  oleh  depresi atau  kelumpuhan  saraf  kolinergik  di  seluruh sistem saraf pusat dan perifer.
Paparan akut propoksur pada manusia lewat jalan  tertelan  mengarah  kepada  penghambatan enzim kolinesterase pada sel darah merah, dengan gejala   kolinergik  sedang   seperti   mata   kabur, mual,  muntah,  berkeringat,  dan  takikardia;  akan tetapi, efeknya bersifat sementara. Paparan kronis dapat  menekan  tingkat  enzim  kolinesterase dengan  gejala  nyeri  kepala,  mual  dan  muntah pada  manusia.  Pada  uji  dengan  hewan  terlihat juga  gejala  penurunan  berat  badan,  efek  pada liver dan kandung kemih, dan sedikit peningkatan pada gangguan neuropati. Menurut lembaga EPA (Enviromental  Protecting  Agency)  Amerika Serikat  propoksur  sebagai  agen  toksikan  dengan level  Kategori  II  untuk  paparan  per  oral  dan Kategori III untuk paparan per dermal.
Jumlah bahan kimia yang mematikan untuk satu-setengah (50%)  dari  hewan percobaan yang diberi  materi  disebut  sebagai  lethal  dose  fifty, atau  LD50.  LD50  untuk  propoksur  pada  tikus berkisar dari 40 mg/kg hingga 110 mg/kg, sedang untuk  mencit  berkisar  50  mg/kg  hingga  110 mg/kg  (Costa,  2014).  Kambing  jantan  berumur dua belas bulan memiliki LD50 lebih besar dari 800  mg/kg.  LD50  oral  untuk  propoksur  teknis pada tikus adalah 50  mg/kg  untuk pejantan dan 104  mg/kg  untuk  betina.  Pada  tikus,  keracunan propoksur     mengakibatkan     pola    otak    dan perubahan  kemampuan  belajar  pada  konsentrasi lebih  rendah  dibandingkan  yang  menyebabkan hambatan kolinesterase dan atau perubahan berat organ (Enviromental Protecting Agency, 1992).

## 2.6 Tinjauan tentang KG-SM

## 2.6.1 Kromatografi Gas
Kromatografi  gas  (KG)  digunakan  untuk memisahkan campuran yang mengandung komponen-komponen  yang  mudah  menguap (volatile) pada suhu percobaan dengan menggunakan gas sebagai fase gerak. Fase diam dapat  berupa  zat  padat  atau  zat  cair.  Bila  fase diam  berupa  zat  padat,  teknik  ini  disebut  Gas
Solid  Chromatography  (GSC).  Bila  fase  diam berupa   lapisan   tipis   zat   cair   pada   zat   padat
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
(penyangga) yang inert, kromatografi ini disebut Gas Liquid Chromatography (GLC).
Teknik kromatografi gas mempunyai keunggulan  dalam  hal  kecepatan,  kesensitifan, kespesifikan  yang  jauh  lebih  unggul  (terutama jika  dikombinasi  dengan  Spektrometri  Massa) dan dapat  digunakan untuk  menganalisis sampel gas,  zat  padat,  atau  zat  cair  berukuran  mikro untuk kualitatif dan kuantitatif (Harmita, 2009).

## 2.6.2 Spektrometri Massa
Spektrometri massa adalah suatu instrument yang menghasilkan berkas ion dari suatu zat uji, memilah  ion  tersebut  menjadi  spectrum  sesuai dengan  perbandingan  massa  terhadap  muatan (m/z),  dan  merekam  kelimpahan  relative  tiap jenis ion yang ada. Sehingga spektrometri massa dapat  digunakan  untuk  mengukur  perbandingan massa  ion  terhadap  muatan,  menetapkan kelimpahan ion, dan mempelajari proses ionisasi.
Secara  umum,  spektrometri  massa  terdiri dari  tiga  komponen  utama  yaitu:  1)  sumber  ion untuk  menghasilkan  ion  berbentuk  gas  dari  zat uji; 2) penganalisis untuk memisahkan ion mejadi komponen  massa  yang  khas  sesuai  dengan perbadingan  antara  massa  dan  muatan  ion  yang ada;  dan  3)  sistem  detector  untuk  merekam kelimpahan  relative  atau  intensitas  tiap jenis  ion yang dipisahkan (Harmita, 2009).

## 3.    METODE PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  menggunakan  sampel larva lalat Sarcophaga sp. pada stadium instar II, instar  III,  pupa  dan  dewasa.  Tikus  putih  galur wistar  digunakan  sebagai  media  tumbuh pengganti  kadaver.  Jumlah  sampel  yang  diambil sebanyak 5 larva setiap stadium. Jenis penelitian ini  adalah  penelitian  ekperimental  observasional laboratorium  dengan  menggunakan  pendekatan longitudinal perspektif untuk mengetahui pengaruh pemberian propoksur dosis LD50 pada jenazah tikus terhadap larva lalat Sarcophaga sp.
Pengujian  pada  penelitian  ini  meliputi  dua kegiatan yakni 1) pengukuran pertumbuhan larva lalat Sarcophaga  sp. kelompok  kontrol  dan perlakuan  dan  2)  identifikasi  kadar  propoksur dengan menggunakan metode Kromatografi Gas- Spektrometri  Massa.  Hasil  penelitian  dianalisa menggunakan  uji  Anova  Satu  Arah  dan  T-test Sampel  Independen  untuk  mengetahui  ada tidaknya  pengaruh  kadar  propoksur  terhadap pertumbuhan    larva    lalat Sarcophaga    sp. Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Kedokteran Forensik Fakultas Kedokteran Unair, Laboratorium            Terpadu            Universitas Muhammadiyah  Purwokerto  dan  Unit  Layanan
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Terpadu Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Surabaya.

## 3.1 Persiapan Media Tumbuh
Tikus putih ( Rattus novergicus ) strain wistar yang digunakan sebagai media tumbuh memiliki kriteria  sebagai  berikut:  1)  kelamin  jantan,  2) umur  8-12  minggu,  3)  berat  200-300  gram,  4) kondisi  sehat  dan  tidak  ada  abnormalitas.  Tikus media  tumbuh  dibagi  menjadi  dua  kelompok yakni  kelompok  perlakuan  yang  akan  diberi propoksur  dosis  LD50  per  oral  dan  kelompok kontrol  tanpa  propoksur  (diterminasi  dengan dislokasi leher). Masing-masing kelompok hanya menggunakan  satu  ekor  untuk  media  tumbuh. Sebelum  dilakukan  perlakuan,  tikus  terlebih dahulu  dikondisikan  selama  seminggu  dan  saat akan  diberikan  tindakan  dipuasakan  12  jam sebelumnya (hanya diberi air putih).
Setelah  tikus  diterminasi,  dilakukan  insisi pada garis tengah tubuh mulai dari pangkal leher hingga  1  cm  di  atas  anus  lalu  dibuka  hingga tampak orang dalamnya. Selanjutnya kedua tikus diletakkan  pada  dua  kandang  terpisah  untuk kelompok kontrol dan perlakuan. Lalat Sarcophaga sp. yang telah disiapkan sebelumnya dimasukkan sejumlah 20 ekor ke masing-masing kandang.  Kandang  ditutup  dengan  kawat/kain jaring agar terjaga dari hewan lain yang masuk.

## 3.2 Pengambilan Sampel
Masing-masing kelompok pengamatan akan diambil  5  ekor  larva  lalat  Sarcophaga  sp.  pada masing-masing stadium yaitu instar II (L2), instar III (L3), Pupa (P) dan Dewasa (D). Pemeriksaan posterior spirakel  dilaksanakan ketika  larva  telah cukup besar untuk diiris posterior tubuhnya tanpa menghancurkan  tubuhnya,  yaitu  pada  stadium instar II. Sampel dilakukan pengamatan morfologis  pada  setiap  pengambilan.  Data kuantitatif dari  pengamatan ini  meliputi  panjang, berat  dan  durasi  pertumbuhan  antar  stadium menggunakan  standar  dan  pedoman  prosedur pengambilan  sampel  entomologi  forensik  oleh Amendt  et.al  (2010).  Larva  yang  sudah  diukur dan  dicatat  kemudian  disimpan  dalam  lemari pendingin  dengan  suhu  -20 o C  menunggu  untuk dilakukan preparasi sampel dan analisis KG-SM.

## 3.3 Alat
Alat yang digunakan meliputi alat-alat gelas yang  umum  digunakan  dalam  laboratorium analisis, dry  box ,  pipet  mikro  dengan  ukuran 1000  μL  (200-1000  μL)  dan  20  μL  (2-20  μL),
neraca  analitik,  gunting  stainless  steel,  wadah
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
plastik  bertutup,  Kromatografi  Gas  Agilent Technologies  6890  N  dengan  kolom  kapiler Agilent  19091j-413  HP-5  30,0  m x  0,25  mm x 0,25  μm  menggunakan  gas  Helium  (He)  dan Spektometri  Massa  Agilent  Technologies  5973- inert.

## 3.4 Bahan
Spesimen  yang  digunakan  dalam penelitian ini  adalah  larva  lalat  Sarcophaga  sp.  yang  telah dikoleksi.  Bahan  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bahan  kimia  dalam  derajat pro  analisis  (p.a)  yang  terdiri  dari  Larutan Propoksur  standar  dengan  kemurnian  ≥  98% yang  diperoleh  dari  Sigma  Aldrich  Chemical Singapore,  Carbosulfan  sebagai  standar  internal (ISTD),  methanol,  dichloromethane  (CH 2 Cl 2 ), tricfluoroacetic  anhidrid  (TFAA),  tert-buthil methil  ether  (TBME),  air  destilasi,  O- pthaladehide (OPA), dan Asetonitrile.

## 3.5 Pengumpulan data
3.5.1 Preparasi larutan standar propoksur
Menimbang  2  mg  standar  propoksur  ke dalam  labu  ukur  20  ml  (100  mg/ml), menambahkan  aseton  hingga  tepat  tanda kemudian  dikocok  hingga  homogen.  Kemudian larutan  induk  standar  diencerkan  menjadi  60 mg/ml,  40  mg/ml,  30  mg/ml,  25  mg/ml,  20 mg/ml, 10 mg/ml, 1 mg/ml.
3.5.2  Proses  ekstraksi  dan  analisis  spesimen larva
Proses  ekstraksi pada  penelitian  ini menggunakan  metode Liquid-liquid  Extraction (LLE)  sesuai  dengan  model  Ameno  (2005). Sebanyak  2  gram  spesimen  larva  dicampur dengan  5  ml  asetonitril  dan  50  µl  ISTD, dihomogenkan dengan homogeniser Polyton dan disentrifuse pada 3000 rpm selama 5 menit untuk membersihkan  larutan.  Diperoleh  endapan, ekstraksi  diulangi  2  kali.  Larutan  bening asetonitril  yang  diperoleh  kemudian  dicampur dengan larutan NaCl 2% sebanyak  40 ml dan n- heksana/etil  asetat  sebanyak  12,5  ml  (1:1,  v/v) pada corong pisah 250 ml. Corong pisah dikocok selama 10 menit menggunakan mesin pengaduk. Lapisan  n-heksana/atil  asetat  terbentuk.  Lapisan tersebut  dikeringkan  pada  suhu  kamar.  Larutan sisa  dilarutkan  dengan  200  µl  metanol.  Sampel siap diinjeksikan ke KG-SM sebanyak 1 µl.

## 3.5.3 Pengolahan dan analisis data
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Data yang diperoleh dari penelitian ini akan berupa  kromatogram  dengan  puncak  (peak), waktu  retensi  (tR)  dan  luas  puncak  yang kemudian  dilakukan  perhitungan  untuk  validasi metode  dan  kadar  propoksur.  Konsentrasi senyawa  propoksur  dalam  spesimen  larva  lalat Sarcophaga  sp.  diperoleh  dengan  cara  luas puncak  spesimen  diplotkan  dalam  persamaan regresi  linier  standar  sehingga  diperoleh  kadar propoksur  dalam  spesimen  rambut  pasien. Kemudian  dilakukan  uji  statistik  Anova  Satu Arah dan T-test Sampel Independen
menggunakan software IBM SPSS Statistics 22.
3.6 Validasi Metode 3.6.1 Spesifitas/Selektifitas Spesifisitas ditentukan dengan membandingkan  hasil  analisis  sampel  yang mengandung   cemaran,   hasil   urai,   senyawa sejenis, atau senyawa lainnya atau sampel plasebo dengan  hasil  analis  sampel  tanpa  penambahan bahan-bahan tadi. Derajat spesifisitas kedua hasil analis  tersebut  merupakan  ukuran  selektifitas. Pada metode KG-SM, selektifitas ditentukan dari hasil puncak ( peak ), waktu retensi dan kesamaan ion spektra massanya.

## 3.6.2 Linieritas
Uji  linieritas  dilakukan  dengan  cara membuat  persamaan  regresi  linier  berdasarkan konsentrasi dan area, dengan rumus :
y = bx + a
dengan, y = luas puncak (peak area) x = konsentrasi zat
kemudian dihitung nilai koefisien korelasi.

## 3.6.3 LOD dan LOQ
Penentuan  LOD  dan  LOQ  menggunakan perhitungan :
( � � ) � = ��
dengan,
Q  =   LOD   (batas   deteksi)   atau  LOQ   (batas kuantitasi) K  =   3 untuk batas deteksi atau 10 untuk batas kuantitasi
Sb =   simpangan   baku   respon   analitik   dari blanko
Sl  =   arah garis linier (kepekaan arah) dari kurva antara respon terhadap konsentrasi = slope (b pada persamaan garis y = a + bx)

## 3.6.4 Akurasi
Penentuan    akurasi    atau    kecermatan diperoleh  dengan  mengitung  persen  perolehan kembali  (%ER)  dari  analit  yang  ditambahkan. Untuk  mengitung  persen  perolehan  kembali menggunakan rumus:
% � = (                ) x 100 ∁∗
Cf    =   konsentrasi      total      sampel      yang diperoleh dari pengukuran Ca   =   konsentrasi sampel sebenarnya C*a =   konsentrasi analit yang ditambahkan

## 3.6.5 Presisi
Presisi  diperoleh  dengan  menginjeksikan masing-masing  standar  propoksur  dalam  tiga kadar  yang  berbeda  sebanyak  3  (tiga)  kali, kemudian dihitung nilai presisi berdasarkan harga koefisien variasi atau %RSD.

## 4.    HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Validasi Metode
4.1.1 Spesifitas/Selektifitas
Berdasarkan  hasil  analisis  terlihat  bahwa pada  blanko  hanya  ditemukan  puncak  ISTD
Carbosulfan  dan  tidak  ditemukan  puncak  yang merupakan senyawa propoksur. Hasil pada larutan standar terkonsentrasi menunjukkan puncak senyawa propoksur terdeteksi  pada  waktu  retensi  4,282  pada  mode Full  Scan  dan  4,274  pada  mode  SIM  ( Selected Ion  Monitoring )  dengan  hasil  faktor  kecocokan mencapai nilai 92.
Mode  Full  Scan  dilakukan  terlebih  dahulu guna  memastikan  senyawa  apa  yang  terdapat dalam  sampel  tersebut,  dilanjutkan  analisis dengan mode SIM. Mode SIM relatif  lebih peka dikarenakan  dengan  mode  SIM  senyawa- senyawa  dengan  ion-ion  fragmentasi  yang diinginkan  atau  dengan  kelimpahan  yang  tinggi saja       yang      akan       dideteksi       walaupun konsentrasinya   relatif   rendah   (Moffat   et   al., 2004).
Hasil  perbandingan  ion  spektra  massa  dari sampel  yang  diuji  dengan  Wiley  Library  pada Spektrometri  Massa  dan  data  Library  literatur menunjukkan   ada   kecocokan   untuk   senyawa propoksur pada ion fragmentasi 53, 81, 92, 110
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
dan  152.  Hal  ini  menguatkan  hasil  pemeriksaan mode  Full  Scan  dan  mode  SIM  yang  telah dilakukan.

## 4.1.2 Linieritas
Uji  linieritas  dilakukan  untuk  melihat hubungan  linier  antara  konsentrasi  dan  puncak area.  Hasil  perhitungan  menunjukkan  nilai koefisien  korelasi  (r)  =  0,9984.  Nilai  koefisien korelasi  yang  mendekati  positif  1  menunjukkan adanya  korelasi  positif  antara  kedua  variabel sedangkan   hasil   koefisien   determinan   (R 2 )   = 0,9968  yang  menunjukkan  bahwa  variabel  X (konsentrasi    larutan    standar)    mempengaruhi variabel Y (luas area) sebesar 99,68%.

## 4.1.3 LOD dan LOQ
Hasil  perhitungan  diperoleh  nilai  LOD sebesar 847.289,65  µg/mL sedangkan  nilai LOQ    sebesar 2.824.298,82    µg/mL .    Nilai LOD  berguna  untuk  mengetahui  jumlah  terkecil analit  dalam  sampel  yang  masih  dapat  dideteksi oleh instrument sedangkan nilai LOQ menunjukkan jumlah terkecil analit dalam sampel yang   masih   memenuhi   kriteria   presisi   dan akurasi.  Berdasarkan  hasil  perhitungan  diperoleh konsentrasi  terkecil  analit  dalam  sampel  yang dapat terdeteksi adalah 847.289,65 µg/mL dan konsentrasi  terkecil  analit  dalam  sampel  yang memenuhi  kriteria  presisi  dan  akurasi  namun masih   dapat   dideteksi   adalah 2.824.298,82 µg/mL .

## 4.1.4 Akurasi
Hasil  pengukuran  pada  konsentrasi  20,  30, dan  80  ppm  dengan  replikasi  masing-masing sebanyak  3  kali  didapatkan  nilai  %  rekoveri sebesar 100,4%, 105,3% dan 107%. Berdasarkan AOAC  syarat  keberterimaan  %  rekoveri disesuaikan  dengan  konsentrasi  yang  digunakan seperti pada tabel 4.1 dibawah.
Tabel 4.1 Syarat keberterimaan % rekoveri disesuaikan konsentrasi sampel berdasar AOAC.

## 4.1.5 Presisi
Hasil  uji  presisi  dihitung  berdasarkan  nilai koefisien  variasi.  Tabel  4.2  menunjukkan  hasil koefisien  variasi  dari  masing-masing  kadar standar  yang  digunakan.  Kriteria  seksama diberikan jika hasil %RSD atau koefisien variasi (CV)  sebesar  2%  atau  kurang.  Namun  hal  ini bersifat  fleksibel,  bergantung  pada  konsentrasi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium.  Menurut  penelitian  oleh  Hortwitz dkk., dijumpai bahwa koefisien variasi meningkat dengan  menurunnya  kadar  analit  yang dianalisis. Horwitz membuat sebuah kurva yang menghubungkan  reproduksibilitas  (presisi  yang dinyatakan  %KV)  dengan  konsentrasi  analit seperti  pada  gambar  4.1  di  bawah.  Tabel  4.3 menunjukkan tingkat presisi berdasarkan
Association  of  Analytical  Communities (AOAC) disesuaikan  juga  dengan  konsentrasi  komponen dalam   sampel   berdasarkan   AOAC   (Riyanto, 2014).
Gambar 4.1 Kurva variansi Horwitz hubungan konsentrasi analit dengan KV (%)
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
(Riyanto, 2014).
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Ka d ar ( m g /m l) Tabel 4.2 Nilai koefisien variasi masing-masing konsentrasi standar propoksur. 4.2 Profil kadar propoksur LD50 Penelitian  ini  mengamati  dan  menganalisis Kadar Rep- Kadar perubahan kadar propoksur pada empat stadium metamorfosis  larva  lalat  Sarcophaga  sp.  Setiap (ppm) likasi Pero- Rerata    %RSD stadium  diambil  lima  replikasi  sehingga  total lehan 1         20,68     20,073      0,541 20            2          19,9 3         19,64 1         32,28     31,577      0,646 30           2         31,44 3         31,01 1          94,7      85,607      7,881
sampel  adalah  dua  puluh  sampel.  Dari  hasil pengujian  dengan  alat  KG-SM  didapatkan konsentrasi   atau   kadar   dari   masing-masing sampel pada tiap stadium.
Hasil   pengukuran   kadar   propoksur   pada sampel     larva     lalat     Sarcophaga     sp.     ini menunjukkan  adanya  kecenderungan  menurun pada  tiga  stadium  awal  (instar  II,  instar  III  dan pupa),  namun  pada  stadium  dewasa  terjadi lonjakan  kadar  seperti  tampak  pada  gambar  4.2
80           2         81,36 3         80,76 7000.00 6000.00 Tabel 4.3 Tingkat presisi disesuaikan dengan konsentrasi komponen sampel berdasarkan AOAC. 5000.00 4000.00 3000.00 2000.00 1000.00 0.00 -1000.00 L2       L3        P         D Stadium Keterangan: *) L2, larva instar 2; L3, larva instar 3; P, pupae; D, dewasa.
Hasil  koefisien  variasi  pada  sampel  yang dianalisis  pada  tabel  4.1  berdasarkan  AOAC maka hanya konsentrasi 20 dan 30 ppm saja yang memenuhi  syarat  ≤  4%.  Adanya  variasi  pada hasil  ini  bisa  disebabkan  oleh  kesalahan  acak. Kesalahan  acak  dapat  muncul  pada  penelitian disebabkan  kesalahan  dalam  pengukuran  karena gangguan    dan    perbedaan    kondisi    saat pengukuran.
Gambar 4.2 Profil Kadar Propoksur LD50 Rerata dengan Stadium
Hasil  pada  uji  kromatogram  menunjukkan bahwa  propoksur  dapat  terdeteksi  pada  sampel dengan  waktu  retensi  4,280  menit  dan  dapat terpisah dengan ISTD carbosulfan yang memiliki waktu  retensi  5,082  menit  seperti  tampak  pada gambar 4.3.
Gambar 4.3 Kromatogram pada sampel propoksur LD50.
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Proses dekomposisi mayat
ikut mempengaruhi  suksesi  serangga  selain  faktor lingkungan.  Pada  fase  bloating  dimana  gas-gas dalam  tubuh  hasil  katabolisme  substrak  organik oleh  bakteri  anorganik  mulai  memenuhi  rongga organ  dalam  mayat,  hal  ini  memacu  proses pembusukan  lebih  cepat.  Gas  amonia  yang banyak  mulai  keluar  dari  tubuh  menarik  bagi serangga-serangga  disekitarnya  termasuk  larva lalat  Sarcophaga  sp.  Proses  makan  mulai  terjadi sejak  larva  muda  instar  I  dilahirkan.  Pada  tahap pembusukan  selanjutnya  proses  kolonisasi  larva mulai   meningkat   begitupun   fase   makannya. Larva lalat Sarcophagidae mulai membentuk fase instar  II  pada  tahap  ini.  Menjelang  akhir  tahap pembusukan larva lalat Sarcophaga sp. memasuki akhir  fase  penyebaran  atau  sering  disebut  post- feeding  phase  dan  bermigrasi  untuk  persiapan pupariasi.  Setelah  fase  pembusukan  lewat,  sisa jaringan lunak mulai menipis sehingga larva lalat mulai  kekurangan  sumber  makanan.  Sisa  larva yang ada akan mengering dengan cepat dan mati. Ketika  jaringan  lunak  sudah  habis  dan  hanya tersisa  tulang,  kartilago  dan  rambut,  proses aktivitas  dekomposisi  oleh  serangga  telah berkakhir (Greenberg, 2014).
Fenomena  pada  penelitian  ini  adalah  pada saat   memasuki   stadium   lalat   dewasa   terjadi peningkatan  kadar  propoksur  pada  uji  dengan metode KG-SM. Hal ini dapat disebabkan faktor lingkungan  pada  kandang  yang  tertutup  rapat sehingga  lalat  dewasa  tidak  bisa  terbang  keluar dan  akhirnya  mencari  makanan  dari  sisa  jasad media   tumbuh   di   dalamnya.   Terlebih   lalat Sarcophaga  sp.  tergolong  lalat  nekrofagus  yang memakan bangkai sehingga saat sudah mencapai fase ini dia akan segera mencari sumber makanan untuk kebutuhan energi pertumbuhannya (Greenberg, 2014).
4.4 Pertumbuhan larva lalat Sarcophaga sp .
Prose pengamatan dan pengukuran pertumbuhan  larva  lalat  Sarcophaga  sp.  yang telah dilakukan terhadap kelompok perlakuan dan kelompok  kontrol,  didapatkan  data  antropometri berupa  panjang  dan  berat  larva.  Pemantauan dilakukan  selama  10  hari,  dimulai  dari  H-1  (24 jam  pasca  perlakuan)  hingga  H-10  saat  sudah terbentuk lalat dewasa.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa adanya propoksur pada media tumbuh mempengaruhi panjang larva lalat Sarcophaga sp. secara  signifikan.  Pada  hari  ke-1  pengamatan belum dijumpai adanya larva lalat. Hal ini dapat dimengerti    karena    saat    lalat    dewasa    baru
dimasukkan  butuh  waktu  dari  proses  makan hingga larva lalat lahir. Pada hari ke-2 larva lalat
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
sudah  mulai  tampak  dan  bisa  dilakukan pengukuran. Perbedaan yang tampak mencolok terjadi  mulai  hari  ke-tiga  dimana  pada kelompok kontrol panjang larvanya sudah lebih dari  10  mm,  sedangkan  pada  kelompok perlakuan  panjang  larvanya  masih  kurang  dari 10  mm.  Perubahan  panjang larva  mulai  terjadi pada  hari  ke-6  dimana  larva    yang    dikoleksi panjangnya    mulai  berkurang,  terutama  pada kelompok  kontrol.  Sedangkan  pada  kelompok perlakuan  panjang  larva  lalatnya  cenderung tidak banyak perbedaan. Pertumbuhan  panjang larva  dapat  dilihat  pada gambar 4.4.
Hasil  pengukuran  berat  larva  juga menunjukkan  kelompok propoksur  pada  media tumbuh  terdapat  pengaruh  yang  signifikan. Pada hari ke-3 berat badan kelompok perlakuan mencapai  berat  tertinggi  sebesar  5,9  mg, sedangkan  kelompok  kontrol  mencapai  berat tertinggi pada hari ke-4 sebesar 86,9 mg. Sejak stadium instar II atau pada hari ke-3  kelompok kontrol  sudah  terlihat  mempunyai  berat  badan yang  lebih  dibadingkan  kelompok  perlakuan. Hal  ini  terjadi  sampai  stadium  lalat  dewasa. Pertumbuhan  berat  larva  dapat  dilihat  pada gambar 4.5.
Proses  perkembangan  larva  lalat  selain faktor  dekomposisi  mayat  juga  dipengaruhi faktor lingkungan  dan  zat-zat  cemaran  pada  mayat, dalam  penelitian  ini  propoksur  dianggap sebagai  cemaran  yang  mempengaruhi  proses perkambangan larva. Penelitian oleh Goff et al. (1989),  pada  kelinci  yang  diberi    kokain dosis  lethal    dan    dua    kali    dosis    lethal menunjukkan pertumbuhan larva lalat Boettcherisca peregrina meningkat  pesat  hingga  tahap  post-feeding. Begitupun penelitian lain menggunakan Heroin oleh  Goff  et  al.  menunjukkan  pertumbuhan larva lalat Lucilia sericata meningkat pesat, dan juga  pada  lalat  jenis  sarchopagid  mengalami pembesaran  berat  badan  (Greenberg,  2014).
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Gambar 4.4 Diagram pengamatan panjang larva pada kelompok kontrol dan perlakuan.
Gambar 4.5 Diagram pengamatan berat larva pada kelompok kontrol dan perlakuan.
4.3  Pengaruh  propoksur  LD50  terhadap pertumbuhan larva lalat Sarcophaga sp.
Hasil uji anova satu arah pada panjang larva didapatkan  nilai  F  yaitu  5,533  dan  signififkasi 0,024,  sedangkan  hasil  pada  berat  larva didapatkan  nilai  F  yaitu  4,378  dan  signifikasi 0,042.  Artinya  larva  pada  kelompok  perlakuan propoksur LD50 pertumbuhan panjang dan berat badannya terpengaruh sangat nyata pada stadium instar II, instar III, pupa dan Dewasa.
Uji homogenitas pada kadar propoksur antar stadium  dinyatakan  tidak  homogen  sehingga diperlukan multiple  comparisons antar  masing- masing stadium larva lalat. Untuk hasil uji anova satu arah pada kadar propoksur didapatkan angka siginifikasi  sebesar  0,002,  artinya  ada  perbedaan antara  masing-masing  stadium.  Hasil multiple
comparisons antar  stadium  terlihat  pada  tabel 5.12, dimana  terdapat  perbedaan yang nyata  jika stadium  Dewasa  dibandingkan  dengan  stadium instar II, instar III atau pupa.
Hasil  uji  anova  satu  arah  memperlihatkan bahwa  ada  pengaruh  signifikan  propoksur  LD50 pada  kelompok  perlakuan.  Untuk  melengkapi hasil  penelitian  maka  dilakukan  uji  komparasi untuk  menilai  ada  tidaknya  perbedaan  antara kelompok perlakuan dan kelompok  kontrol  pada distribusi  panjang  dan  berat  badan  larva  yang telah  diukur  sebelumnya.  Pengujian  data  ini menggunakan  cara  T-test  Sampel  Independen. Didapatkan  nilai  t-hitung  yang  didapatkan  pada panjang  larva  sebesar  8,406  dan  berat  larva sebesar 6,457 lebih besar dari nilai t-tabel yakni 2,021.  Hipotesis  diterima,  artinya  panjang  larva
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan mempunyai perbedaan bermakna.

## 5.    KESIMPULAN DAN SARAN

## 5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian analisis toksikologi forensik pada  sampel  larva  lalat  Sarcophaga  sp.      yang terpapar  propoksur  dosis  LD50  didapatkan kesimpulan sebagai berikut:
1.  Hasil validasi metode diperoleh nilai regresi 0,998,   nilai   akurasi   memenuhi   standar AOAC 100,4-107,00%, nilai presisi diperoleh rerata RSD 3,023%, nilai didapat LOD 847.289,65 µg/mL dan LOQ sebesar
2.824.298,82 µg/mL.
2.    Hasil  profil  kadar  propoksur  menunjukkan adanya  kecenderungan  menurun  pada  tiga stadium awal (instar II, instar III dan pupa), akan  tetapi  melonjak  drastis  pada  stadium dewasa.
3.   Analisis statistik dengan uji Anova satu arah menunjukkan    adanya    pengaruh    kadar propoksur dosis LD50 terhadap pertumbuhan  larva  lalat  Sarcopha  sp.  yang signifikan.
4.  Hasil    analisis    data    pertumbuhan    larva menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna antara   kelompok   kontrol   dan   kelompok perlakuan propoksur dosis LD50.
5.  Metode    Kromatografi    Gas-Spektrometri Massa    dapat    digunakan    untuk    uji toksikologi  forensik  pada  kasus  kematian akibat keracunan pestisida propoksur.

## 5.2 Saran
1.    Proses  penanganan  sampel  larva  lalat  dari mulai pengumpulan,
pengukuran, pengekstrasian, penyimpanan dan pengujian perlu  dilakukan  dengan  lebih  teliti  dan berkesinambungan  agar  bisa  meminimalisir hasil data yang bias.
2.  Perlu  penambahan  jumlah  sampel  atau replikasi  yang  lebih  banyak  agar  dapat mencegah  munculnya  data  bias  untuk penelitian-penelitian yang selanjutnya.
3.    Metode  dengan  menggunakan  KG-SM  ini sangat layak untuk dikembangkan lebih jauh dalam proses identifikasi kasus keracunan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Melalui
kesempatan ini penulis
menyampaikan ucapan terima kasih kepada para
pembimbing,  penguji  dan  guru-guru  saya  yang telah  banyak  meluangkan  waktu  memberikan bimbingan  dan  arahan,  serta  semua  pihak  atas saran  dan  kritiknya  sehingga  penelitian ini dapat terselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Amendt,  J.,  Goff,  M.  L.,  Campobasso,  C.  P.,  &
Grassberger, M. (2010). Current Concepts in Forensic Entomology. London:
Springer.
Byrd,  J.  H.,  &  Castner,  J.  L.  (2010).  Forensic
Entomology: The Utility of Arthropods in Legal  Investigations.  Boca  Ranton:  CRC Press.
Eddleston,   M.,   &   Philips,   M.   (2004).   Self Poisoning with Pesticides. British Medical Journal, 328, 42-44.
Enviromental     Protecting     Agency.     (1992).
Propoxur:         Risk         Characterization Document. California: EPA.
Gennard, D. E. (2012). Forensic Entomology: An Introduction (2nd Ed.). West Sussex: John Wiley & Sons Ltd.
Goff, M., & Lord, W. (2000). Entomotoxicology: insects as toxicological indicators and the impact  of  drugs  and  toxins  on  insect development.   In  J.  H.  Byrd,  &  J.  L.
Castner,    Forensic    Entomology:    The Utility of Arthropods in Legal Investigations  [1  ed.]  (pp.  331-340). Florida: CRC Press. Greenberg,  B.  (2014).  Insect  succession  on carrion    under    natural    and    artificial conditions.  In  D.  B.  Rivers,  &  G.  A.
Dahlem  (Eds.),  The  Science  of  Forensic Entomology  (pp.  193-201).  West  Sussex: Wiley-Blackwell. Harmita. (2009). Analisis Fisikokimia: Kromatografi. Jakarta: EGC. Harmita. (2009). Analisis Fisikokimia: Potensiometri  &  Spektroskopi.  Jakarta: EGC. Idries, A. M. (1997). Pedoman Ilmu Kedokteran
Forensik. Jakarta: Binarupa Aksara. Introna, F.,
Campobasso, C., & Goff, M. (2000). Entomotoxicology. In J. H. Byrd, & J. L. Castner,    Forensic    Entomology:    The Utility of Arthropods in Legal Investigations [1 ed.] (pp. 58-59). Florida: CRC Press.
Levine,  N.  (1994).  Parasitologi  Veteriner  (2nd ed.).      Yogyakarta:      Gadjah      Mada University  Press.
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © 2018 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Moffat,  A.  (2004).  Clarke’s  Analysis  of  Drugs and Poisons (Third Edition ed.). London: Press.
Pardede,  C.  M.  (2012).  Karakteristik  Penderita Percobaan  Bunuh  Diri  dengan  Racun  di RSUD  Dr.  Pringadi  Kota  Medan  Tahun
2006-2011.     Jurnal     Gizi,     Kesehatan Reproduksi dan Epidemiologi, 1.
Riyanto.  (2014).  Validasi  &  Verifikasi  Metode Uji:    Sesuai    dengan    ISO/IEC    17025
Pharmaceutical
Laboratorium   Pengujian   dan   Kalibrasi (Pertama ed.). Yogyakarta: Deepublish. Sharma,   R.   (2011).   Medico-legal   Aspects   of Death.  In  R.  Sharma,  Concise  Textbook Of Forensic Medicine & Toxicology (pp. 38-51).  Uttar  Pradesh:  Global  Education Consultan.