## DETEKSI BRUCELLOSIS PADA SAPI PERAH PERANAKAN FRIESIAN HOLSTEIN DI KECAMATAN PAGU KABUPATEN KEDIRI
Bagus Uda Palgunadi 1 , Roeswandono 1 , Adilla Luthfita Fa’za 1 , Ady Kurnianto 1*
1 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya *Email: adykurniantodvm@gmail.com

## Abstract
Brucellosis (Keluron disease) is a strategic infectious disease with zoonotic potential, one of which  is  genus  Brucella  abortus.  This  research  aims  to  detect  Brucellosis  in  dairy  cattle  FH  in  Pagu District, Kediri  Regency. This  research  uses  two  serological tests,  namely the  Rose  Bengal  Test (RBT) and  the  Complement  Fixation  Test    (CFT)    with  descriptive  analysis  method.  30  cattle  blood  samples were taken from the coccigea vein. The blood was set aside at room temperature to form a serum. The serum that  has been  obtained  is  taken to  the Department  of Food and Livestock  of  Kediri Regency  for checking  the  RBT. The remaining serum  obtained was sent to BBVet Wates for CFT examination. The results obtained show negative results on both tests.  But one of the samples with the code S9 had gone through  an  abortion.  This  might  occur  due  to  other  factors  such  as  genetic  disorders,  the  presence  of viruses such as BVD, toxic agents and live vaccines during pregnancy.
Keywords: Brucellosis, Dairy Cattle Friesian Holstein, RBT, CFT

## PENDAHULUAN
Setiap  tahun  tingginya  permintaan  bahan pangan  asal  ternak,  menyebabkan  meningkatnya usaha  ternak  sapi  perah  di  Indonesia.  Seiring dengan  jumlah  penduduk  yang  bertambah, dengan  pendapatan  perkapita  masyarakat  yang tinggi  dan  menyebabkan  kesadaran  akan    susu dan  daging  sebagai  sumber  protein  hewani (Andaruisworo  dan  Solikin,  2015).    Hewan ternak memiliki beragam jenis penyakit, sehingga  memerlukan  wawasan  tentang  gejala penyakit  yang  mungkin  akan  terjadi  agar dilakukannya  pengobatan  dan  pengendalian secara  seksama  (Winarsih,  2018).  Sepanjang proses  produksi  dan  budidaya  peternakan, diperlukan  kewaspadaan  akan  terjadinya  suatu penyakit.  Jawa  Timur  dikenal  sebagai  gudang ternak,  sehingga  wajib  untuk  menjaga  produk ternak  yang  dihasilkan  berupa  produk  yang Aman, Sehat, Utuh, dan Halal  (ASUH).
Menurut  Winarsih  (2018)  Penyakit  hewan ternak  adalah gangguan kesehatan  yang disebabkan  oleh  kelainan  genetik,  gangguan metabolisme, trauma, toksisitas, infeksi parasit,
proses  degeneratif,  prion,  dan  mikroorganisme pathogen.
Penyakit  Keluron  (Brucellosis)  merupakan penyakit menular strategis dikarenakan penularannya  relatif  cepat  antar  daerah  dan lintas  batas  serta  diperketat  pengaturan    lalu lintas  ternak.  Bakteri  genus  Brucella  ini dikategorikan  sebagai  penyakit  zoonosis  serta diklasifikasikan sebagai mikroorganisme kelompok  BSL  III  ( Biosafety  level  3 )  (Syah, dkk.,  2011).  Penularan  Bruellosis  dapat  melalui kontak  langsung  pada  hewan,  dan  juga mengkonsumsi  produk  dari  susu,  sehingga dikategorikan  sebagai  penyakit  zoonosis  (Dwi, dkk.,  2018).  Infeksi  pada  manusia  terutama disebabkan B.  melitensis  B.  abortus  dan  B. melitensis ,  melalui  interaksi  langsung  dengan hewan  yang  terinfeksi    dan    menggunakan produk  yang  terkontaminasi,  seperti  susu  dan daging dsb (Ali, et al ., 2018).
Spesies  Brucella  merupakan  penyebab penyakit  Brucellosis,  yang  merupakan  pathogen bakteri  gram  negatif  fakultatif  intraseluler spesies  vertebrata  termasuk  manusia.  Bakteri  ini bersifat  gram  negatif,  kecil,  aerob,  berbentuk cocobacilli,  non  motil,  dan  tidak  menghasilkan spora (Mugabi, 2012).
Menurut  Novita  (2016)  Indonesia  belum bebas  Brucellosis,  terutama  daerah  yang mayoritas  beternak  sapi  perah.  Sebagian besarnya belum melakukan pemusnahan terhadap  sapi  perah  yang  terbukti  positif Brucellosis,  sehingga  sapi  penderita  bersifat carrier seumur hidupnya di lokasi tersebut.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendeteksi penyakit  Brucellosis  pada  sapi  perah  peranakan FH  di  Kecamatan  Pagu  Kabupaten    Kediri dengan  menggunakan  metode Complement Fixation  Test (CFT)  dan Rose  Bengal  Test (RBT).

## MATERI DAN METODE
Penelitian  dilakukan  di  peternakan  daerah Kecamatan  Pagu  Kabupaten  Kediri  sebagai tempat pengambilan sampel darah.
Pengambilan  sampel  darah  sebanyak  5  ml dengan  jumlah  30  ekor  sapi  perah.  Uji  RBT dilakukan  di  laboratorium  Kesmavet  Dinas Ketahanan  Pangan  dan  Peternakan  Kabupaten Kediri  dan  uji  CFT  dilakukan  di  Balai  Besar Veteriner Wates Yogyakarta.

## Pengambilan darah
Alat  dan  bahan  untuk  pengambilan  darah adalah  tabung venoject ,  jarum venoject G12, handle  (thorax),  desinfektan,  kapas,  akuades steril  dan  alkohol.  Sampel  diambil  pada vena jugularis atau vena  coccigea menggunakan tabung vacutainer yang  dilapisi silicon .  Setelah itu,  diamkan  pada  suhu  kamar    hingga    kental dan  membentuk  serum  atau  disentrifugasi. Pengambilan  secara  aseptis  agar  terhindar  dari kontaminasi  bakteri  yang tidak  diinginkan.  Alat yang  digunakan  pada  laboratorium  harus  dalam kondisi steril.

## Prinsip Uji RBT
Reaksi  ini  membentuk  pengikatan  antigen Brucella  sp. yang  sudah  dilemahkan  serta diwarnai  dengan  antibodi  dari  serum.  Pada permukaan  antigen  terjadi  pengikatan  dengan antibodi  menimbulkan  reaksi  teraglutinasi,  jika non  reaktif  maka,  tidak  ada  antibodi  dalam serum.

## Prosedur Uji RBT
Serum  dan  antigen Brucella RBT  diambil dari  mesin  pendingin    lalu  diamkan    selama 1 / 2 - 1  jam  pada  suhu  ruangan.  30  µl  serum  yang telah di koleksi diteteskan pada plate  dan
dicampur  dengan  antigen  Brucella    dengan jumlah  yang  sama,  sehingga  percampurannya membentuk  diameter  sebesar  2  cm.  Serum  dan antigen  tadi  dicampur  menggunakan  pengaduk ( rotary  aglutinartor ),  kemudian  plate  digoyang goyangkan  dengan  tangan  selama  4  menit  dan akan  terlihat  proses  aglutinasi  jikan  serum mengandung antibodi Brucella. Tingkat aglutinasi disesuaikan  dengan kriteria: 0 = tidak terjadi aglutinasi, + = aglutinasi hanya  sedikit, ++  =  aglutinasi  terlihat  sebagian,  +++  = aglutinasi  terlihat  sangat  jelas  (Novita,  dkk., 2016).

## Prinsip Uji CFT
Complement  Fixation  Test adalah  reaksi pengikatan  komplemen,  juga  direkomendasikan sebagai  uji  penyaringan  ( screening )  brucellosis pada  populasi  ternak  dan  secara  individual (Mujiatun,  dkk.,  2016).  Prinsip  reaksi  ini menyebabkan lisisnya sel darah merah, dikarenakan  adanya  antibodi  dan  antigen kompleks  yang  homolog  menarik  komplemen, sehingga  berikatan  dengan  antibodi    di    bagian Fc (Astarina, 2017).

## Prosedur Uji CFT
Prosedur
CFT sebagai berikut:
Menggunakan microplate 96 well dengan dasar U.  Pada  baris  A1-A10  microplate  diisi  dengan serum  sampel  sebanyak  50  µl,  tambahkan kontrol  serum  positif  pada  baris  A11  dan  baris A12  kontrol  serum  negatif.  Kemudian  serum diinaktivitaskan  pada  suhu  58°C  selama  30 menit.  Pada  semua  sumur  diisikan  pelarut  CFT buffer  kecuali  baris  A11-A12  sebanyak  25µl. Lalu  dilakukan  pengenceran  seimbang,  25  µl serum diambil dari baris A dipindahkan ke baris B  lalu  dikocok  beberapa  kali  dan  seterusnya dilakukan  sampai  baris  H.  Semua    sumur    di baris  C-H  diisikan  Antigen  sebanyak  25  µl. Tambahkan  25  µl  komplemen  di  semua  sumur (baris  B-H),  lalu  tambahkan  pelarut  CFT  buffer sebanyak  25  µl  pada  semua  sumur  baris  B (sebagai kontrol positif aktivitas antikomplemen).  Plat  ditutup  menggunakan selotip,  kemudian  inkubasi  selama  30  menit dengan  suhu  37°C.  Setelah    itu    dilepas (penutup), tambahkan 25 µl sel yang disensitisasi  di  semua sumur, lalu  kocok  dengan microshaker selama  45  menit,  baca  reaksinya (Kartini, dkk., 2017).

## HASIL
Wilayah  pengambilan  sampel  berada  di Kecamatan Pagu Kabupaten Kediri. Pemilihan kandang  atau  peternak  hasil  dari  diskusi dengan  pengurus  koperasi  unit  desa  setempat serta  tenaga  medis  yang  akan  membantu  di lapangan.  Lalu  melakukan  wawancara  dengan peternak  tentang  gejala  klinis  dan  riwayat vaksinasi.  Total  sampel  yang  didapatkan adalah  30  darah,  kemudian  menjadi  serum untuk  diuji  dengan  uji  RBT  dan  CFT.  Hasil dari  penelitian  ini  30  serum  sapi  diuji  dengan metode Rose  Bengal  Test (RBT)  dan Complement  Fixation  Test (CFT).  Dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel 1. Hasil Pemeriksaan RBT
Tabel 2. Hasil Pemeriksaan CFT
Hasil  RBT  ini  dibaca  dengan  melihat adanya aglutinasi pada plate. Dikatakan positif jika  adanya  butiran  pasir  (aglutinasi),    jika negatif  maka  tidak  teraglutinasi.  Dari  semua sampel,  kode  S9  memiliki  gejala  klinis abortus.  Pada  pemeriksaan  ini,  30  serum didapatkan    hasil  negatif.  Dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil Pemeriksaan RBT

## PEMBAHASAN
Pada  pengujian  CFT  didapatkan  hasil negatif, ditunjukkan pada lubang microplate tidak ada  endapan  pada  dasar  sumur,  hemolisis sempurna  serta  cairan  warna  merah  muda. Berdasarkan  hasil  pengujian  30  sampel  dengan metode Rose  Bengal  Test dan  memiliki  gejala abortus,  namun  menunjukkan  hasil  negatif  pada dua  metode  ini.  Pada  pemeriksaan  RBT didapatkan  hasil  negatif,  menurut  Besung,  dkk., (2015)  hasil  positif  terbagi  menjadi  tiga  kriteria yaitu  teraglutinasi  ringan  (+),  teraglutinasi sedang  (++)  dan  teraglutinasi  sempurna  (+++). Tetapi  pada  hasil  pemeriksaan  yang  didapatkan tidak  memenuhi  kriteria  diatas.  Pada  uji  CFT juga menunjukkan hasil negatif, Amanitin (2012) menjelaskan  bahwa  hasil  positif  ditandai  dengan titer 1 / 4 atau lebih  dan tidak terjadi lisis pada sel darah  domba,  terdapat  endapan  eritrosit  dan cairan  berwarna  bening.  Pada  pemeriksaan  ini juga  tidak  memenuhi  kriteria  tersebut.  Dapat disimpulkan  bahwa  semua  sampel  di  daerah kecamatan Pagu bebas Brucellosis.
Ketika melakukan wawancara ke peternak,  pemilik  memberitahu  bahwa  salah  satu sapinya  pernah    mengalami  abortus.   Setelah  di uji,  sapi  ini    memiliki    hasil    negatif.  Penyebab terjadinya  abortus    selain      brucellosis,    ada factor  lainnya  menurut  Horvingh        (2009)yaitu kelainan genetic pada janin yang dapat menyebabkan aborsi  tidak sering  didiagnosis  dan Complement  Fixation Test menunjukkan  hasil negatif. Salah satu dari sampel yang di dapatkan biasanya terjadi pada sapi individu.  Kelainan ini, yang  mungkin  tidak    menyebabkan  perubahan pada penampilan luar janin, dapat mengakibatkan aborsi karena  janin  yang tumbuh tidak memiliki kemampuan  untuk  berkembang  dengan  baik dalam uterus. Heat stress juga dapat mempengaruhi  kinerja  reproduksi  sapi  perah, meskipun  umumnya akan  menyebabkan  masalah konsepsi daripada  aborsi. Sementara  ada beberapa  bukti  yang  menunjukkan  bahwa peningkatan  yang  sangat  mendadak  dalam  suhu lingkungan  dapat  mengakibatkan  aborsi,  ada sedikit  bukti  mendukung  bahwa  stres  panas sebagai  penyebab umum  aborsi.  Kejadian langka juga  terjadi  seekor  sapi  mengalami  demam  yang sangat  tinggi  dan  dapat  mengalami  keguguran janin  nya.  Agen  toksik  juga  dapat  menyebabkan abortus  atau  kematian  embrio  awal.  Sapi  rentan terhadap  pupuk  nitrit  dan  nitrat  atau  nitrat  yang ditemukan  pada  tanaman  di  bawah  kondisi
Jumlah Serum Sapi Negatif RBT Positif RBT 30 30 0 Jumlah Serum Sapi Negatif CFT Positif CFT 30 30 0
Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.9, November 2019
tertentu (misalnya kekeringan-stres).  Jika seekor sapi  terpapar  dengan  tingkat  nitrat/nitrit  yang cukup  tinggi  (~.  55%  atau  lebih    besar  nitrat dalam  hijauan),  abortus  dapat  terjadi,  terutama pada akhir kehamilan.
Horvingh (2009) menyebutkan ada beberapa virus yang dapat  menyebabkan abortus salah  satumya Bovine  Viral  Diarrhea  virus (BVD).  Virus  ini  memiliki    berbagai  macam sindrom penyakit pada sapi dan setelah virus ini beredar, dapat menjangkau janin melalui plasenta.  Bakteri  penyebab  selain Brucella abortus adalah Streptococcus  spp. , Leptospira spp. Pemberian  vaksin  hidup  modifikasi  selama kehamilan  termasuk  faktor  terjadinya  abortus. Dimaksud  vaksin  hidup  adalah  vaksin  yang dimodifikasi  mengandung  virus  hidup  atau bakteri  yang  di  ubah  untuk  mencegah  mereka menyebabkan  penyakit  klinis  selagi  merangsang sistem kekebalan tubuh.
Azzahrawani,  dkk.,  (2018)  menjelaskan, keadaan  lingkungan  yang  tercemar  mampu menimbulkan  adanya  faktor  penyakit dan mudahnya  penularan  secara  kontak  langsung. Populasi  ternak  dan  manajemen  pemeliharaan termasuk  faktor  yang    berhubungan    dengan infeksi  Brucellosis.  Faktor  resikonya  seperti lapangan  gembala, lalu  lintas,  lingkungan  dengan kelembapan  tinggi  dan  parit.  Bakteri  ini  mampu bertahan  hidup  dalam  beberapa  bulan  dalam jerami,  air,  lumpur,  fetus  abortus  dan  perlatan, serta  dalam  kondisi  kering  pun  dapat  bertahan hidup  dalam  debu  dan  tanah.  Saat  mengamati dilapangan,  kondisi  kandang  cukup  baik.  Sapi tidak  di  gembala,  tepat  di  belakang  sapi  ada tumpukan  pupuk  organik,  sebelah  kandang terdapat  tempat  pembuangan  sisa  feses  dan  urin. Ditemukan  juga  sisa  tumpukan  pakan  yang tegenang  dengan  air.  Bisa  disimpulkan  dengan kondisi  kandang  tersebut  kemungkinan  bisa terjadinya  Brucellosis  atau  faktor  penyakit lainnya.  Perlunya  pemeriksaan  Brucellosis  pada sapi  perah  peranakan  Friesian  Holstein  penting untuk  dilakukan,  karena  guna  mengantisipasi adanya  penularan  pada  hewan  lainnya  dan manusia.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  sapi perah  peranakan  Friesian    Holstein    di Kecamatan  Pagu  Kabupaten  Kediri  dapat disimpulkan  bahwa  tidak  ditemukan  adanya Brucellosis.

## REFERENSI
Ali, S., Nawaz Z, Akhtar A, Aslam R, Zahoor M.A. and Ashraf M., 2018. Epidemiological Investigation of Human
Brucellosis  in  Pakistan. Jundisapur  J Microbiol. 11(7):1-5.
Amanitin.  2012. Kajian  Infeksi    Brucella abortus Pada Sapi  Perah  Menggunakan Uji  Serologik  dan  Polymerase  Chain Reaction  (PCR). [M.Si.  Tesis].  Institut Pertanian Bogor.
Andaruisworo,  S.  dan  N.  Solikin,  2015. Pendapatan  Usaha  Peternakan  Sapi Perah  Rakyat  Di  Kecamatan  Ngancar Kabupaten  Kediri. Modernisasi.  11(3):1- 10.
Astarina, D.K., 2017. Penggunaan Immunostik Sebagai  Uji  Cepat  Serologik  Untuk Melacak  Brucella  abortus  Pada  Sapi. [M.Si. Tesis]. Institut Pertanian Bogor.
Azzahrawani, N., E. Martalina, S. Herman dan A.  Abdillah.  2018. Investigasi  Outbreak Bovine  Brucellosis  di  Pulau  Bengkalis Tahun  2018. Proc.  of  the  20th  FAVA
CONGRESS  &  The  15th  KIVNAS
PDHI, Bali Nov 1-3, 2018. 390-392.
Besung,  I.N.K.,  Suwiti  N.K  dan    Suarjana
I.G.K., 2015. Seroedpidemiologi Brucellosis  Pada  Sapi  Bali  di  Nusa Tenggara  Barat  Sebagai  Upaya  Deteksi Dini Kejadian Penyakit. Seminar Nasional Sains dan Teknologi. 1-8.
Dwi,  W.K,  Tyasningsih  W,  Praja  R.N., Hamid  I.S.,  Sarudji  S  dan  Purnama M.T.E.,  2018. Deteksi  Antibodi  Brucella pada Sapi Perah di Kecamatan Purwoharjo Kabupaten Banyuwangi dengan Metode Rose Bengal Test (RBT).
Jurnal Medik Veteriner. 1(3):142-147. Horvingh,  E.,  2009. Common  Causes  of Abortions. Virginia Cooperation Extension. Pp. 404-288.
Kartini,  D.,  Noor  S.M  dan  Pasaribu  F.H., 2017. Deteksi  Brucellosis  Pada  Babi Secara  Serologis  dan  Molekuler  di
Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.9, November 2019
Rumah  Pototng  Hewan  Kapuk,  Jakarta dan Ciroyom, Bandung. Acta Veterinaria Indonesiana. 5(2):66-73.
Mugabi,  R.,  2012. Brucellosis  Epidemiology,
Virulence Factors, Control and
Molecular  Targets  to  Prevent  Bacterial Infectious  Diseases. [M.Sc.  Thesis]. North Dakota State Univ.
Mujiantun., Soejoedono R.N. Sudarnika E dan Noor  S.M.,  2016. Deteksi  Spesies Brucella  pada  Kambing  di  Rumah Potong Hewan Jakarta. Jurnal Sain
Veteriner 34(2) : 172-181.
Novita, R.,  2016. Brucellosis:    Penyakit Zoonosis Yang  Terabaikan. Pusat  Penelitian  dan Pengembangan  Biomedis  dan  Teknologi Dasar Kesehatan. 12(2):135-140.
Novita,  R.,  Hananto  M,  Sembiring  M.M.,  Noor S.M.,  Kambang  S,  Lilian  dan  Khairirie, 2016. Seroprevalensi  Ancaman  Brucella abortus  Pada  Pekerja  Peternakan  Sapi Perah  Kecamatan  Ciwatu,  Garut .  Jurnal Kesehatan Reproduksi. 7(3):210-216.
Syah,  S.P.,  E.  Saswiyanti  dan  I.S.  Nurhayati, 2011. Brucellosis di Indonesia.https:// docplayer.info/53843933-  Brucellosis-di- indonesia.html.
Winarsih,  W.H.,  2018. Penyakit  Ternak  yang Perlu  Diwaspadai  Terkait  Keamanan Pangan. Cakrawala. 12(2):208-221