## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology

## PENDAHULUAN
Demam  tifoid  merupakan  penyakit  yang tersebar  luas  diseluruh  dunia,  terutama  pada  negara berkembang  termasuk  Indonesia  (Bill et  al .,  2019)..
Demam  tifoid  yang  terjadi  di  Indonesia  disebabkan antara  lain  karena  faktor  kebersihan  makanan, kebersihan  pribadi  maupun  lingkungan  (Kementerian Kesehatan  RI,  2013).  Demam  tifoid  menduduki peringkat  3  dari  10  besar  penyakit  di  rumah  sakit dengan jumlah 5798 kasus. Untuk jumlah kasus demam tifoid di wilayah kerja Puskesmas Tlogosari Kulon pada tahun 2014 terdapat 211 kasus demam tifoid dan pada
tahun  2015  menduduki  peringkat  4  kejadian  demam tifoid di Kota Semarang dengan jumlah 570 kasus, pada tahun  2016  Puskesmas  Tlogosari  Kulon  menempati peringkat  1  kejadian  demam  tifoid  di  Kota  Semarang dengan jumlah 829 kasus.
Patogenitas  bakteri S.typhi tergantung  pada mikroba  yang  tertelan,  strain  virulensi,  respon  imun dari hospes dan juga paparan sebelumnya(Huang et al. , 2005; Jajere., 2019). Virulensi bakteri S.typhi tergantung kemampuannya  untuk  menyerang  sel  hospes,  yang memiliki  lapisan  lipopolisakarida  lengkap,  kehadiran antigen Vi, antigen somatik, antigen flagell, antigen pilli, serta  produksi  dan  ekskresi  protein  invasin.  Pilli
Imunogenesitas Protein Pilli Salmonella Typhi Pada Mencit Balb/C Dengan Mengukur Kadar TNF- α
Imunogenesity Of Protein Pilli Salmonella typhi in BALB/c Mice by Measuring TNF- α Controls
Al Hidayani 1*
Sri Darmawati 2
*1 Universitas Muhammadiyah
Palangkaraya
2 Universitas Muhammadiyah Semarang *email: alhidayani@umpr.ac.id

## Abstrak
Demam  tifoid  yang  sering  disebut  penyakit  tifus  disebabkan  oleh Salmonella enterica subspesies enterica  serevoar  typhi ( Salmonella  typhi ).  Virulensi  bakteri S.typhi tergantung pada kemampuannya untuk menyerang sel hospes terdiri dari beberapa  komponen  seperti  antigen  dinding  sel,  antigen  flagel,  antigen  Vi  dan antigen pilli. Pilli merupakan salah satu faktor virulensi dari bakteri S.typhi , yang berfungsi  sebagai  alat  untuk  adhesi  atau  interaksi  antara  bakteri,  Penelitian dilakukan  untuk  mengetahui  bagaimana  imunogenesitas  protein  pilli  bakteri S.typhi isolat  BA07.4  yang  diimunisasikan  pada  mencit  Balb/C  pada  dosis  yang bervariasi (2-6 μ g) dengan mengukur TNF- α . Analisis yang dilakukan didapatkan hasil optimum kadar TNF- α terdapat pada dosis 3 μ g dengan rerata kadar 62,152 pg/Ml.  Pada  penelitian  yang  dilakukan,  didapat  hasil  bahwa  protein  pilli S.typhi dapat menginduksi antibodi spesifik terhadap antigen pilli. Hal ini menunjukkan bahwa  protein  pilli  bersifat  imunogenik,  dapat  menimbulkan  terjadinya  respon imun dan dapat menginduksi antibodi yang dapat mengenali sub unit protein pilli yang diimunisasikan.

## Kata Kunci:
Salmonella typhi , Protein pilli , Imunogenitas, TNF- α
Keywords :
Salmonella typhi, Pili protein, Immunogenicity, TNF- α

## Abstract
Typhoid  fever,  often  called  typhoid  disease,  is  caused  by  Salmonella  enterica subspecies enterica  serevoar  typhi  (Salmonella  typhi). The  virulence  of  S.typhi bacteria  depends  on  its  ability  to  invade  host  cells  consisting  of  several components  such  as  cell  wall  antigens,  flagellum  antigens,  Vi  antigens  and  pilli antigens. Pilli is one of the virulence factors of S.typhi bacteria, which functions as  a  tool  for  adhesion  or  interaction  between  bacteria.  The  study  was conducted  to  determine  how  the  immunogenicity  of  pilli  protein  of  S.typhi bacteria isolate BA07.4 was immunized in Balb/C mice at varying doses (2-6 μ g) by measuring TNF- α . The analysis carried out obtained the optimum results of TNF- α levels at a dose of 3 μ g with an average level of 62.152 pg / ml. In the research  conducted,  it  was  found  that  S.typhi  pilli  protein  can  induce  specific antibodies  against  pilli  antigens.  This  shows  that  the  pilli  protein  is immunogenic,  can  cause  an  immune  response  and  can  induce  antibodies  that can recognize the immunized pilli protein sub-unit.
merupakan  salah  satu    faktor  virulensi  dari  bakteri S.typhi ,  tersusun  dari  protein  pillin  yang  terdiri  oleh beberapa  sub  unit  protein  pilli,  disandi  oleh  gen PilS, yang  diklasifikasikan  sebagai  pilli  operon  (Rakov et  al .,
2019).  Pilli  berfungsi  sebagai  alat  untuk  adhesi  atau interaksi pengenalan antara bakteri, bakteri dengan sel pada  permukaan  sel  hospes,  serta  bakteri  dengan lingkungan  di  sekitarnya  (Thanassi et  al .,  2012).
Beberapa  peneliti  menggunakan  antigen  pilli S.typhi untuk  mengukur  kemampuan  protein  pilli  dalam menimbulkan terjadinya respon imun dan menginduksi antibodi.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan jenis penelitian eksperimental.  Analisis  data  didapatkan  dari  data primer,  setiap  hasil  yang  didapatkan  pada  saat penelitian  ditabulasikan  dalam  bentuk  tabel  ataupun gambar. Selanjutnya dianalisis secara deskriptif

## 1. Antigen protein pilli
Bahan  penelitian  yang  digunakan  dalam    karakterisasi imunogenesitas  protein  pilli Salmonella  typhi adalah;
Protein  pilli  (sebagai  antigen) Salmonella  typhi BA07.4 isolat Semarang. Pelaksanaan penelitian diawali dengan Isolasi  protein  pilli  dari  Salmonella  typhi  dengan metode  Bipasik,  setelah  itu  dilakukan  pemotongan dengan super  mixer ,  selanjutnya  dilakukan  pemekatan dengan  ammonium  sulfat  40%  dan  dialisa  hingga didapat protein pilli native (keseluruhan).

## 2. Imunisasi mencit
Hewan  coba  yang  digunakan  adalah  mencit  galur Blab/C  betina  umur  8  minggu  dengan  berat  ±30gr setiap ekor (EC No. Sertifikat: 00034/04/LPPT/XI/2020). 3. Imunisasi mencit Balb/C untuk
pengukuran TNF- α
Mencit  Balb  /C  betina  umur  8  –  10  minggu  dengan berat  ±30gr  setiap  ekor  diimunisasi  dengan  cara sebagai berikut: pada hari pertama, dilakukan imunisasi
primer dengan emulsi dari 2, 3, 4, 5 dan 6 µg antigen dalam  PBS  1x  dan Freunds    adjuvans komplit  1:1  (v/v) metode  intraperitoneal.  Pada  hari  ke  14,  dilakukan pengambilan darah pada masing-masing mencit, dengan tujuan untuk pengukuran kadar TNF- α .

## 4. Mengukur TNF- α
Pengukuran  kadar  TNF- α dilakukan  dengan  metode ELISA. Pada hari ke-14 masa percobaan, diambil darah (jantung) mencit kemudian pisahkan serum dan simpan pada suhu -20  C. Selanjutnya dilakukan uji ELISA TNF- α ( EliKine TM Mouse TNF- α ELISA Kit) . Absorbansi segera dibaca  pada  450nm,  konsentrasi  sampel  dihitung berdasarkan kurva standar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  dianalisis    secara deskriptif  yang  disajikan  dengan  tabel.  Analisis dilakukan  dengan    menggunakan    program SPSS Statistic 17 for windows .
Analisis  data  kadar  TNF- α dilakukan  dengan  analisis secara  deskriptif.  Hasil  pemeriksaan  kadar  TNF- α disajikan  dalam  tabel  1.  Kadar  optimum  TNF- α ditunjukkan  pada  kelompok  dosis  5 μ g  dengan  rerata kadar 36,392 pg/Ml.
Tabel  1 .  Kadar  TNF- α serum  mencit  Balb/C  setelah Imunisasi dengan protein pilli S.typhi pada dosis 2- 6 μ g
Dosis ( μ g) TNF- α [pg/mL] Mean±Std.Deviation Kontrol (PBS 1x + Adjuvant komplit) 29,566±2,756 2 28,871±3,042 3 33,615±9,333 4 30,586±4,908 5 36,392±7,169 6 32,275±4,177
Analisis data kadar TNF- α pada mencit Balb/C diawali dengan analisis secara  deskriptif, selanjutnya dilakukan pembuatan  kurva  untuk  melihat  regresinya  dan dilanjutkan  analisis menggunakan  program SPSS . Hasil One Way ANOVA menunjukkan nilai p dari titer TNF-
α yaitu  sebesar  0,455  ( p  ≤ 0,05)  dapat  disimpulkan bahwa  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara pemberian varian dosis dari antigen yang diimunisasikan  pada  mencit  Balb/C  terhadap  kadar TNF- α .

## PEMBAHASAN
TNF- α merupakan  sitokin  yang  dihasilkan  makrofag dan  sel  berinti  satu  yang  lain,  sebagai  antibakteri  yang baik  melawan Salmonella spp , khususnya Salmonella typhi .  Mekanisme  utama  pertahanan  tubuh  terhadap S.typhi pertama kali melalui perlawanan oleh  neutrofil, kemudian  diikuti  oleh  sel  berinti  satu.  Secara in  vivo , kadar  TNF- α yang  rendah  terbukti  dapat  melindungi mencit  dari  infeksi Salmonella ,  dosis  tinggi  pemberian antigen memicu makrofag menginduksi TNF- α dengan kadar  berlebih  yang  dapat  menyebabkan  gejala  syok septik yang dapat berakibat fatal bagi hewan coba. Hal  ini  setara  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh (Rogerson et  al .,  2003;  Poovassery et  al .,  2010) menyatakan jika TNF- α merupakan suatu sitokin yang bersifat  pirogen  dan  multifungsi  diproduksi  oleh makrofag,  sel  T,  sel  B  serta  sel  mast,  juga  terlibat dalam  immunoprotection/  perlindungan  terhadap infeksi,  tetapi  juga  berperan  penting  dalam  penanda peradangan,  autoimun  serta  patofisiologi.  TNF- α pada kadarnya yang rendah dapat menjadi perlindungan bagi tubuh, dalam melawan antigen yang masuk, akan tetapi jika  kadar  yang  dikeluarkan  berlebihan,  dapat menyebabkan kerusakan jaringan yang sangat berat dan fatal (Irawati et al. , 2008).

## KESIMPULAN
Protein  pilli S.typhi bersifat  imunogenik  dapat menimbulkan  terjadinya  respon  imun  dan  dapat menimbulkan  terbentuknya  antibodi  yang  dapat mengenali  sub  unit  protein  pilli  yang  diimunisasikan. TNF- α pada  mencit  Balb/C  pada  dosis  imunisasi optimum  5 μ g,  serta  dapat  menimbulkan  terbentuknya antibodi pada dosis optimum 5 μ g.
Saran  untuk  penelitian  selanjutnya  diharapkan dilakukan pula pengukuran  kadar TNF- α pada hari ke- 4 setelah imunisasi mencit.

## DAFTAR PUSTAKA
Bill.  F,  and  M.  G.  Foundation.  2019.  “Articles  The Global  Burden  of Typhoid and Paratyphoid Fevers :  A Systematic  Analysis  for the  Global  Burden  of Disease Study 2017.” Lancet Infection Disease 3099(18).
Irawati,  L,  N.  Acang,  and  N.  Irawati.  2008.  “Artikel Penelitian Ekspresi Tumor Necrosis Factor-Alfa ( Tnf- Α )  dan  Interleukin-10  ( Il-10  )  Pada  Infeksi.” Majalah Kedokteran andalas 10.
Poovasser,  J,  D.  Sarr,  G.  Smith,  T.  Nagy,  and  J.  M. Moore.  2010.  “Malaria-Induced  Murine  Pregnancy Failure:  Distinct  Roles  For  Ifn- Γ And  Tnf.” Nih  Public Access 183(8): 5342–49.
Rogerson,  S.  J  Hviid,  L.  Duff,  P.  E.  Leke,  R.  F.  G. Taylor,  D.  W.  2003.  “Placental  Tumor  Necrosis Factor Alpha but Not Gamma Interferon Is Associated with  Placental  Malaria  and  Low  Birth  Weight  in Malawian Women.” Infection And Immunity 71(1): 267– 70.
Rakov, A. V, E. Mastriani, S. L. Liu, and D. M. Schifferli. 2019.  “Association  of  Salmonella  Virulence  Factor Alleles  with  Intestinal  and  Invasive  Serovars.” BMC Genomics : 1–14.