## Original Research

## HIJP : HEALTH INFORMATION JURNAL PENELITIAN
Studi Evaluasi Kualitas Penggunaan Pewarna Giemsa Pada Pemeriksaan Mikroskopis Malaria di Laboratorium Fasilitas Layanan Kesehatan Kota Jayapura Tahun 2023
Evaluation Study of The Quality of The Use of Giemsa Dye in Malaria Microscopic Examination in The Laboratory of Health Service Facilities
in The City of Jayapura in 2023
Risda  Hartati 1* ,  Fajar  Bakti  Kurniawan 2 ,  Dwi Setiani 3 , Asrianto 4
1,2,3,4 Jurusan  Teknologi  Laboratorium  Medis, Politeknik Kesehatan Kemenkes Jayapura, Indonesia *(Korespondensi e-mail: risdahartati@gmail.com )
Kata kunci: Giemsa, Laboratorium, Kualitas
Keywords: Giemsa, Laboratory, Quality
Poltekkes Kemenkes Kendari, Indonesia ISSN: 2085-0840 ISSN-e: 2622-5905 Periodicity: Bianual vol. 16 no. 2 2024 jurnaldanhakcipta@poltekkes-kdi.ac.id Received: 04 November 2023 Accepted: 19 Juli 2024
Funding source: Poltekkes Kemenkes Jayapura DOI: https://doi.org/10.36990/hijp.v16i2.1237 URL: https://myjurnal.poltekkes- kdi.ac.id/index.php/hijp/article/view/1237 Contract number: -
Ringkasan: Secara  global  pemeriksaan  infeksi  malaria dengan  metode  mikroskopis  masih  menjadi gold  standart untuk  diagnosis  malaria  dengan  pewarnaan  giemsa  yang berkualitas. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif untuk  memberikan  gambaran  kualitas  giemsa  yang digunakan  oleh  laboratorium  fasilitas  kesehatan  yang melakukan  pemeriksaan  malaria  metode  mikroskopis  di wilayah Kota Jayapura. Tahap penelitian dimulai dengan memberikan kuesioner kepada semua laboran mikroskopis  setiap  fasyankes  mengenai  praktek  yang dilakukan  terkait  pewarnaan  giemsa.  Uji  kualitas  giemsa dilakukan  dengan  meneteskan  pada  kertas saring larutan giemsa  stock  dan  larutan  methanol  selanjutnya  dilihat penyebaran warna yang terjadi. Hasil Kualitas giemsa pada 20  faskes  yaitu  manajemen  penangan  Giemsa  45%. Giemsa  didapatkan  dari  toko  bahan  dan  reagensia  yang ada di Kota Jayapura, 100% menggunakan Giemsa dalam bentuk larutan siap pakai dan 60% stok Giemsa yang telah terbuka.  Persiapan larutan kerja,  90% Giemsa dilarutkan menggunakan  air  mineral,  85%  tidak  pernah  menyaring larutan  Giemsa  sebelum  digunakan,  65%  persiapan Giemsa  dibuat  satu  kali untuk  pemakaian satu  hari,  dan 55%  tidak  pernah  melakukan  uji  quality  control  larutan. Hasil uji  Kualitas  Giemsa  metode  kertas saring  terdapat lingkaran biru pada kertas saring sebanyak 13 (65%) dan 7(35%)  tidak  terdapat  lingkaran  biru,  15  (75%)  terdapat lingkaran cincin ungu untuk zat warna methilen Azur dan 5(25%) tidak terdapat lingkaran ungu.  Sebanyak 11(55%) larutan  Giemsa  stok  hasil  uji  kertas  saring  terdapat lingkaran  merah  dan  9(45%)  tidak  terlihat  adanya  zat eosin.  Berbagai  macam  produk  pewarna  giemsa  telah banyak  digunakan  oleh  berbagai  laboratorium  fasilitas kesehatan terutama di kota Jayapura,  tetapi  masih perlu perbaikan  agar  memenuhi  standar  yang  telah  ditetapkan baik itu oleh WHO maupun Kementerian Kesehatan.
Abstrak  :  Globally,  examining  malaria  infection  using  the microscopic method is still the gold standard for diagnosing malaria with quality Giemsa staining. This research is a descriptive study to
provide  an  overview  of  the  quality  of  Giemsa  used  by  health facility  laboratories  that  carry  out  microscopic  malaria examinations  in  the  Jayapura  City  area.  The  research  phase began  by  giving  a  questionnaire  to  all  microscopic  laboratory assistants at each health facility regarding the practices carried out regarding Giemsa staining. The Giemsa quality test was carried out by dripping Giemsa stock solution and methanol solution onto filter  paper,  then  seeing  the  color  distribution  that  occurred. Giemsa quality results  in  20  health  facilities,  namely  Giemsa handler management, 45% Giemsa obtained from materials and reagents shops in Jayapura City, 100% using Giemsa in the form of ready-to-use solution and 60% open Giemsa stock. Preparing the  working  solution,  90%  of  the Giemsa  was  dissolved using mineral water, 85% never filtered the Giemsa solution before use, 65% of the Giemsa preparation was made once for one day's use, and 55% never carried out a quality control test of the solution. Giemsa Quality test results using the filter paper method showed 13 (65%) blue circles on the filter paper and 7 (35%) had no
blue circles, 15 (75%) had purple rings for methylene Azur dye and 5 (25%) there is no purple circle. A total of 11 (55%) of the stock Giemsa solutions from the filter paper test had a red circle and 9 (45%) did not see the presence of eosin. Various kinds of Giemsa dye  products  have  been  widely  used  by  various  health  facility laboratories, especially in Jayapura City, but still need improvement to meet the standards set by both WHO and the Ministry of Health.
.

## PENDAHULUAN
Metode  diagnosis  cepat  dan  akurat  merupakan  landasan  dalam  pengobatan  dan  strategi pengendalian penyakit malaria. Metode mikroskopis dengan menggunakan mikroskop cahaya yang dilakukan  pada  hapusan  darah  tepi  sampai  saat  ini  masih  tetap  menjadi  standar  acuan  dalam mendiagnosis malaria (Wilson, 2013). Pemeriksaan malaria metode mikroskopis dapat memberikan berbagai  keuntungan  diantaranya  yaitu  dapat  membedakan  spesies  dan  bentuk  stadium  parasit malaria beserta kuantifikasi parasit dalam darah tepi (Dang, Saraf, Khanna, Gupta, & Sheikh, 2020), namun pemeriksaan metode mikroskopis tentulah tidak mudah untuk dapat dilakukan oleh semua orang  dalam  hal  ini  infrastruktur  laboratorium  dan  sumber  daya  untuk  menjamin  kualitas  hasil pemeriksaan terutama pada daerah endemis malaria (Wilson, 2013).
Berbagai  macam  standarisasi  sering  dilakukan  namun  masih  terhambat  pada  banyaknya variabilitas dalam kualitas dan prosedur untuk persiapan slide dan pewarnaan, serta perbedaan jumlah bidang hapusan darah tebal yang diperiksa dengan jumlah sel darah putih yang dihitung untuk dapat mendeteksi atau mengukur parasit dalam darah (parasitemia) yang menyebabkan variasi perbedaan yang  cukup  besar  dalam  metode  mikroskopis  (Das  et  al.,  2021).  Metode  mikroskopis  dengan menggunakan hapusan darah telah menjadi standar diagnosis malaria sejak diperkenalkannya larutan pewarnaan Giemsa pada tahun 1904. Stabilitas Giemsa dan kualitas pewarnaan yang persisten, dapat mewarnai  berbagai  macam  granula  leukosit  dan  dapat  dibedakan  dengan baik  sehingga  membuat Giemsa  menjadi  paling  banyak  digunakan  sebagai  pewarna  rutin  untuk  menggambarkan  elemen darah  dalam  hapusan  darah  tepi  dibandingkan  dengan  pewarna  lain  seperti  Filed,  Leishman, Romanowsky atau Wrigth stain (Fleischer, 2004).
Beberapa  penelitian  mengemukakan  bahwa  kualitas  pewarnaan  Giemsa  di  pasaran  sangat berkontribusi  terhadap  kesalahan  diagnosis  malaria  dan  variabilitas  hasil  antar  laboratorium dilaporkan  berbeda  dalam  mendiagnosis  malaria  (Organization,  2016).  Kualitas  hasil  pemeriksaan mikroskopis membutuhkan pewarnaan yang berkualitas untuk hapusan darah yang baik (Triyani & Izzati, 2023). Berbagai fasilitas layanan kesehatan laboratorium pemerintah maupun swasta di Kota Jayapura mendapatkan serbuk stok Giemsa atau larutan stok Giemsa yang sudah siap pakai tersedia di  laboratorium, namun  Giemsa  yang  diperoleh  dari  berbagai  pemasaran  produsen  yang berbeda sehingga kualitas dan kinerja dari Giemsa sangat bervariasi.

## METODE

## Jenis Penelitian
Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian deskriptif dengan desain cross sectional.

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  pada  Dinas  Kesehatan  Kota  Jayapura  yaitu  (Park  & Kwon,  2023)  laboratorium  Puskesmas  Kota  Jayapura  dan  Laboratorium  Klinik  milik  pemerintah maupun swasta. Waktu penelitian pada Bulan Juli-Oktober 2023.

## Populasi dan Sampel
Populasi dalam penelitian adalah Fasilitas Pelayanan Kesehatan Laboratorium Pemerintah dan Laboratorium Klinik Swasta yang melaksanakan pemeriksaan mikroskopis malaria, yang ada di Kota Jayapura. Sampel dalam penelitian ini sebanyak dua puluh 20 laboratorium yang dipilih secara acak. Sampel  dalam  penelitian  ini  sebanyak  20  laboratorium  klinik  dengan  rincian  jumlah  yaitu laboratorium  Puskesmas  Kota  Jayapura  sebanyak  10,  Laboratorium  Rumah  Sakit  Pemerintah sebanyak 4, Laboratorium Rumah Sakit Swasta 2, Laboratorium Klinik Swasta sebanyak 4.

## Pengumpulan Data
Daftar  pertanyaan  diberikan  kepada  tenaga  mikroskopis  yang  ikut  berpartisipasi  untuk mendapatkan data demografis dan informasi tentang praktik sehari-hari baik mengenai pengadaan, pengencer yang digunakan untuk pemeriksaan rutin dan penyimpanan Giemsa. Slide hasil pewarnaan setiap laboratorium dikumpulkan untuk mengamati kualitas slide baik itu karakteristik sel darah putih serta  morfologi  parasit  malaria.  Uji  kualitas  Giemsa  juga  dilakukan  dengan  meneteskan  larutan Giemsa stok 1-2 tetes di atas kertas saring Whatman No 2 pada bagian tengah, dibiarkan meresap dan  menyebar,  diteteskan  methanol  absolut  3-4  tetes,  pembacaan  hasil  pada  bagian  pinggir  luar terdapat lingkaran tipis berwarna merah (eosin), berwarna ungu (metilin  Azur) dan berwarna biru (metilin blue).

## Pengolahan dan Analisis Data
Pengolahan data dilakukan secara deskriptif yaitu data manajemen penanganan Giemsa dan kualitas Giemsa dengan metode kertas saring.

## HASIL
Hasil  penggunaan  persiapan  larutan  kerja  Giemsa  yang  diambil  dari  larutan  stok  untuk identifikasi parasit malaria dapat dilihat pada Tabel 2 yaitu sebagai berikut:
Tabel 1. Sumber dan Cara Penanganan Giemsa Variabel Jumlah Presentase Pasokan Giemsa Stok Toko bahan bangunan 9 45 Suplier 5 25 Vendor 6 30 Jenis Giemsa Stok Serbuk 0 0 Larutan 20 100
Merk Giemsa Stok Merck 1 5 One Care 4 20 Merck KGaA 2 10 Sigma-Aldrich 5 25 Mikrorom Stain 1 5 OneMed 7 35 Penyimpanan Giemsa Botol gelap bahan kaca 13 65 Botol gelap bahan plastic 5 25 Lemari/Rak 2 5 Frekuensi membuka Giemsa Stok Selalu 12 60 Sesekali 6 30 Jarang 2 10 Tidak pernah 0 0 Frekuensi Menutup Giemsa Stok Selalu 18 90 Sesekali 2 10 Tabel 2. Persiapan Larutan Kerja Giemsa Variabel Jumlah Presentase Penggunaan larutan pengencer Larutan Buffer 0 0 Aquadest 2 10 Air Keran 0 0 Air Mineral 18 90 Frekuensi penyaring larutan Tidak pernah 17 85 Sesekali 2 10 Selalu 1 5 Frekuaensi Persiapan Larutan 15 Menit sebelum digunakan 7 35 30 Menit sebelum digunakan 0 0 3 Jam sebelum digunakan 0 0 6 jam sebelum digunakan 0 0 1 kali untuk pemakaian sehari 13 65 Frekuaensi Quality Control Larutan Tidak Pernah 11 55 Sesekali 5 25 Selalu 4 20 Larutan Pembilas Setelah Pewarnaan Air Kran 11 55 Air Penampungan 7 35 Air Mineral 2 10 Aquadest 0 0
Hasil  penelitian  pada  Tabel  1  untuk  kategori  manajemen  Giemsa  stok  menujukkan  bahwa sebagian besar laboratorium mendapatkan Giemsa stok dari toko alat dan bahan kesehatan sebesar 45% dalam bentuk larutan/cair stok 100% rata-rata petugas laboratorium belum mengetahui merek asal dari Giemsa stock yang mereka dapatkan pada semua layanan laboratorium. Pengadaan serbuk Giemsa jarang sekali dilakukan oleh karena memerlukan banyak bahan tambahan atau komponen bahan seperti methanol dan gliserol yang ditambahkan untuk menjadi larutan stok sehingga memilih pembelian  praktis  dalam  bentuk  larutan.  Persentase  penyimpanan  persediaan  Giemsa  pada  botol gelap  berbahan  kaca  yaitu  sebesar  65%  dan  menjawab  selalu  membuka  botol  sebesar  60%  dan menutup botol Giemsa dengan rapat 90%. Proses penyimpanan Giemsa stok beberapa laboratorium bervariasi yaitu 65% disimpan pada botol berbahan gelas kaca, 25% disimpan pada bahan plastik yang  berwarna  gelap  dan  sekitar  5% disimpan  dalam  lemari  dengan  botol  plastik  yang  ada  ditiap laboratorium.

## Gambar 1. Hasil Uji Kualitas Giemsa
Dari hasil uji kualitas Giemsa pada Gambar 1 menunjukkan dari 20 fasilitas laboratorium yang dilakukan uji kualitas Giemsa terdapat berbagai macam variasi untuk uji kertas saring pada larutan Giemsa stok yaitu terdapat lingkaran biru pada kertas saring sebanyak 13 (65%) dan 7(35%) tidak terdapat lingkaran biru pada kertas saring uji, kemudian sebanyak 15 (75%) terdapat lingkaran cincin ungu untuk zat warna methilen Azur dan 5 (25%) tidak terdapat lingkaran ungu pada kertas saring uji.  Sebanyak  11(55%)  larutan  Giemsa  stok  hasil  uji  kertas  saring  terdapat  lingkaran  merah  yang menunjukkan adanya zat eosin yang masih baik dan 9 (45%) tidak terlihat adanya zat eosin sehingga dapat memebrikan pengaruh pada larutan Giemsa stok belum mampu untuk memberikan warna yang baik pada inti sel parasit maupun sel darah.

## PEMBAHASAN
Penelitian  kami  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  bahwa  sebagian  besar  laboratorium  dilaporkan menggunakan air mineral sebagai sumber larutan pengencer untuk pembuatan larutan kerja Giemsa
7 5 9 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Lingkaran Biru (Methilen Blue) Lingkaran Cincin Ungu (Methilen Azur) Lingkaran Merah (Eosin) HASIL UJI KUALITAS GIEMSA Tidak Ada

## Kepuasan Hasil Pewarnaan
Selalu 7 35 Sesekali 13 65
(90%)  dan  hanya  10%  yang  menggunakan  aquadest  namun  dilaporkan  juga  tidak  pernah menggunakan larutan buffer (pH 7,2) dalam proses pewarnaan. Penggunaan air keran menghasilkan jumlah parasite yang lebih rendah dibandingkan dengan penggunaan air suling/aquadest yang diberi buffer  (Oktiyani,  Muhlisin,  Roebiakto, Norsiah,  & Mahpolah,  2023).  Penggunaan  buffer  pada  air suling terbukti penting untuk pewarnaan (Park & Kwon, 2023) yang baik dan berkualitas karena dapat menghasilkan  pewarnaan  pada  parasit  baik  itu  bagian  morfologi  inti  dan  sitoplasma  dari  parasit malaria (Kudisthalert, Pasupa, & Tongsima, 2020). Pewarnaan giemsa sangat dipengaruhi oleh jenis larutan  pengencer.  Pengencer  Giemsa  mempunyai  keadaan  seperti  adanya  buffer  yang  bersifat isotonic dengan pH 6,8-7,0 (Diarti, Tatontos, & Turmuji, 2016). Beberapa komponen Giemsa terdiri dari Azur B (Trimethyl thionine) berperan dalam mewarnai komponen sel yang bersifat asam, dan eosin memiliki peran dalam mewarnai komponen yang bersifat basa, seperti inti sel, granula leukosit serta kombinasi dari eosin dan Azur B memberikan warna ungu pada sel (Muflihah et al., 2022).
Berbagai  macam pewarnaan  differensial  telah  dikembangkan  untuk  dapat  membantu  dalam deteksi parasit malaria (Jemere, Melaku, Jemeber, & Abate, 2018), namun pewarnaan Romanowsky yang  mampu  mewarnai  dengan  baik  bagian  nukleus/inti  parasite  menjadi  merah  dan  sitoplasma berwarna biru yang telah banyak terbukti dan paling mudah beradaptasi sehingga menjadi andalan dalam pekerjaan rutin sehari-hari (Organization, 2016). Pewarnaan Giemsa berbahan dasar alchhol adalah standar baku emas, dengan cara ini paling umum dapat digunakan sehingga diagnosis rutin terbaik untuk membuat hapusan darah baik tebal maupun hapusan darah tipis, sifatnya yang sangat stabil baik itu dalam proses penyimpanan dan menghasilkan kualitas pewarnaan yang sangat konstan. Kualitas yang terjamin dari pewarna ini menjadikan harga di pasaran dengan kategori mahal sehingga banyak layanan laboratorium yang mengabaikannya sehingga menjadikan pilihan pewarna rutin untuk diagnostik. Oleh karena mementingkan dan memastikan adanya kualitas yang baik sehingga serbuk Giemsa harus dibeli dari distributor dengan reputasi terbaik dan terpercaya dengan larutan stok harus disiapkan dalam batch yang dapat dikontrol kualitasnya dan didistribusikan sendiri kepada pengguna fasilitas layanan laboratorium. Salah satu faktor penting dalam pewarnaan adalah pH larutan pewarna dan air yang digunakan untuk mencuci pada saat pewarnaan. Pengukuran pH yang sederhana harus tersedia disemua layanan laboratorium diagnostic malaria, karena kertas pH tidak cukup akurat untuk mengukur pH air dan buffer. Perbedaan pH yang kecil saja misalkan antara pH 7,0 dan pH 7,2 atau pH  6,5  dan  pH  7,0  dapat  menjadi  faktor  yang  mempengaruhi  kualitas  pewarna  Giemsa  secara signifikan.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Manajemen  penanganan  pewarna  Giemsa  memerlukan  beberapa  langkah  penting  untuk memastikan kualitas pewarnaan dan keamanan penggunaan, seperti proses penyimpanan, persiapan larutan,  prosedur  pewarnaan  serta proses  pencucian  dan pengeringan  dengan  mengikuti  langkah- langkah  ini,  pewarnaan  Giemsa  dapat  dilakukan  dengan  aman  dan  efektif,  sehingga  dapat memberikan hasil yang optimal untuk analisis mikroskopis yang dapat membantu diagnosis penyakit malaria di Kota Jayapura.

## KEKURANGAN KAJIAN
Pada  penelitian  ini  ada  beberapa  kekurangan  yang  dapat  kami  kemukakan  dalam  proses berjalannya penelitian yaitu kami belum mendata hasil sediaan hapusan darah yang telah diwarnai oleh setiap fasilitas laboratorium kesehatan yang ada di Kota Jayapura.

## PERNYATAAN

## Ucapan Terimakasih
Terimakasih kami ucapkan kepada Pusat Penelitian dan Pengabdian Masyarakat Poltekkes Kemenkes Jayapura  dalam  memfasilitasi  kami  melalui  penelitian  tahun  2023.  Kami  juga  mengucapkan terimakasih Kepada Dinas Kesehatan Kota Jayapura dan seluruh tenaga mikroskopis malaria yang terlibat dalam kegiatan penelitian.

## Pendanaan
Pendanaan kegiatan penelitian ini bersumber pada dana DIPA Poltekkes Kemenkes Jayapura Tahun Anggaran 2023.

## Kontribusi Setiap Penulis
Risda Hartati :  Writing – original draft Fajar Bakti Kurniawan, Asrianto :  Writing – review & editing Dwi Setiani :  Data curation

## Pernyataan Konflik Kepentingan
Tidak ada konflik kepentingan.

## DAFTAR PUSTAKA
Dang, N., Saraf, V., Khanna, A., Gupta, D., & Sheikh, T. H. (2020). Malaria Detection on Giemsa-Stained Blood  Smears  Using  Deep  Learning  and  Feature  Extraction. Paper  presented  at  the International Conference  on  Innovative  Computing  and  Communications:  Proceedings  of  ICICC  2019, Volume 1.
Das, D., Dahal, P., Dhorda, M., Citarella, B. W., Kennon, K., Stepniewska, K., . . . Guerin, P. J.
(2021). A systematic literature review of microscopy methods reported in malaria clinical trials. The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 104 (3), 836.
Diarti,  M.  W.,  Tatontos, E.  Y.,  &  Turmuji,  A. (2016).  Larutan  Pengencer  Alternatif NaCl  0,  9% Dalam Pengecatan Giemsa Pada Pemeriksaan Morfologi Spermatozoa. Jurnal Kesehatan Prima, 10 (2), 1709-1716.
Fleischer, B. (2004). 100 years ago: Giemsa's solution for staining of plasmodia. Tropical Medicine and International Health, 9 (7), 755-756.
Jemere, K. A., Melaku, M. Y., Jemeber, T. H., & Abate, M. A. (2018). Performance evaluation of laboratory  professionals  on  malaria  microscopy  at  health  facilities  in  Bahir  Dar  city administration,
Northwest Ethiopia. PLoS One, 13 (10), e0203420. doi:10.1371/journal.pone.0203420
Kudisthalert, W., Pasupa, K., & Tongsima, S. (2020). Counting and classification of malarial parasite from giemsa-stained thin film images. IEEE Access, 8 , 78663-78682. Muflihah, A. I., Destiawan, R. A., Wijaya, A. F., Sari, L. Y. W., Sufi, Q. N., & Camelia, L. (2022). The Effect of Differences Time On The Macroscopic Picture Of Giemsa Staining Using Aquades Diluent. Jurnal EduHealth, 13 (02), 1217-1221.
Oktiyani,  N.,  Muhlisin,  A.,  Roebiakto,  E.,  Norsiah,  W.,  &  Mahpolah,  M.  (2023).  Utilization  of Alternative Buffer Solutions for Staining Thin Blood smears by the Giemsa, Wright stain and Romanowsky method. Tropical Health and Medical Research, 5 (1).
Organization,  W.  H.  (2016). Malaria  microscopy  quality  assurance  manual-version  2 :  World  Health Organization.
Park,  C.-H.,  &  Kwon,  H.  (2023).  Quality  Assessment  of  Wright-Giemsa  Staining  in  Digital  Cell Imaging. Journal of Laboratory Medicine and Quality Assurance, 45 (1), 18-24.
Triyani, P., & Izzati, A. (2023). Pengaruh Variasi Waktu Fiksasi Sediaan Apusan Darah Tepi pada Pewarnaan Giemsa terhadap Morfologi Sel Darah Merah. Health Information: Jurnal Penelitian , e1280-e1280.
Wilson, M. L. (2013). Laboratory diagnosis of malaria: conventional and rapid diagnostic methods. Archives of Pathology and Laboratory Medicine, 137 (6), 805-811.