POTENSI REGENERASI SEL SERTOLI DAN SEL LEYDIG TIKUS ( Rattus norvegicus ) MODEL DIABETES PASCA PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH JENGKOL ( Archidendron pauciflorum )
Desak Made Malini 1 *) , Nining Ratningsih 2 ) , Nurullia Fitriani 3 ) , Dwi Rahmi 4 )
1,2,3,4) Departemen Biologi, FMIPA, Universitas Padjadjaran, Jatinangor *Corresponding author : desak.made@unpad.ac.id

## Abstract
Diabetes  mellitus  (DM)  is  a  metabolic  disease  that  causes  disruption  of  spermatogenesis  due  to  decreased numbers of Sertoli cells and Leydig cells. The aim of this study was to determine the potency of  ethanol extract of  Jengkol  fruit  peel  (JFPEE)  on  increasing  the  regeneration  of Leydig cells  and Sertoli cells  in  diabetic  rat models.  This  type  of  research  is  experimental  research  using  a  completely  randomized  design  (CRD)with  5 treatments and 5 replications. Treatment was given orally for 54 consecutive days consisting of negative control (NC), positive control (PC), comparison (Glibenclamide dose 10 mg/kg BW), P1 and P2 (JFPEE dose 385 and 770  mg/kg  BW).  Diabetic  induction  was  performed  with  streptozotocin  dose  65  mg/kg  BW  in  male  Wistar  rat except  for  NC  group.  The  parameters  observed  were  the  number  of Sertoli cells  and Leydig cells  in  25 seminiferous tubules.The results  of histological structured  showed that the highest number of Sertoly cells and Leydig cells were obtained in group P2 ( 4.40±0.55; 9.80±0.84) and it was not significantly different from the NC group  (5.00±1.41;  12.20±2.77).  It  can  be  concluded  that  770  mg/kg  BW  was  the effective  dose  of JFPEE  that can increase the regeneration of Sertoli cells and Leydig cells in diabetic rat models.
Keywords: Jengkol Fruit Peel Ethanol Extract, Leydig Cells, Regeneration, Sertoli Cells.

## PENDAHULUAN
International  Diabetes  Foundation mengestimasikan bahwa prevalensi diabetes  di  dunia  akan  meningkat  menjadi 552 juta jiwa pada tahun 2030 dan DM tipe II merupakan prevalensi terbanyak di dunia (WHO,  2018).  Kondisi  ini  terjadi  karena gaya  hidup  yang  tidak  sehat  dan  obesitas (IDF, 2013).
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan suatu  kondisi  meningkatnya  kadar  glukosa dalam darah (hiperglikemia) karena terganggunya fungsi pankreas dalam memproduksi  insulin  (Kong et  al .,  2018).
Kondisi  ini  menyebabkan  glukosa  yang seharusnya  ditranspor  dari  sirkulasi  darah menuju  sel  jumlahnya  menjadi  sedikit  dan
sel  akan  mencari  sumber  energi  lain melalui mekanisme pemecahan
karbohidrat,  protein,  dan  lemak.  Proses pemecahan tersebut menyebabkan produksi  radikal  bebas  berlebih  sehingga terjadi stress oksidatif (Budin et al ., 2018). Dampak  lain  yang  diakibatkan  oleh  DM adalah  dapat  menyebabkan  gangguan fungsi  seksual,  termasuk  menurunnya libido,  impotensi,  gangguan  ejakulasi  dan infertilitas yang disebabkan oleh rendahnya  konsentrasi  hormon  testosteron (Liu et al ., 2016).
Penyakit  DM  dapat  menyebabkan vakuolisasi sel Sertoli dan dapat menyebabkan terjadinya peningkatan apoptosis sel spermatogenik dalam tubulus
seminiferus  pada  Tikus  jantan  (Sexton  & Jarrow,  1997).  Penelitian  Kong et  al .
(2018)  menunjukkan  bahwa  DM  dapat menghentikan pertumbuhan dan perkembangan ( atrophy ) sel Leydig dan sel Sertoli.
Testis  tersusun  oleh  asam  lemak  tak jenuh  tinggi  dan  memiliki  cadangan antioksidan dengan jumlah sedikit sehingga  rentan  terhadap  serangan  radikal bebas.  Testis  merupakan  organ  kunci penghasil  sperma  dan  sebagai  pengatur hormon-hormon reproduksi. Kondisi diabetes  dapat  menyebabkan  disfungsi testis  termasuk  gangguan  spermatogenesis dan  menurunnya  kualitas  sperma  yang semuanya  berhubungan  langsung  dengan kesehatan  testis  (Aitken et  al .,  2014).
Proses  spermatogenesis  dikontrol  oleh hypothalamus–pituitary–gonadal (HPG), gonadotropin-releasing  hormone (GnRH) yang  diproduksi  oleh  hipotalamus  untuk menstimulasi produksi luteinizing hormone (LH)  dan follicle-stimulating  hormone (FSH).  Sel  Leydig  atau  sel  intertisial terletak  di  luar  tubulus  seminiferus  yang dapat  memproduksi  hormon  testosteron yang  dikontrol  oleh  LH.  FSH  memicu produksi antigen-binding  protein (ABP) secara  tidak  langsung  melalui  sel  Sertoli (Kong et al ., 2018). Sel Sertoli  merupakan salah  satu  sel  penyusun  utama  tubulus seminiferus  yang  melekat  di  dinding
tubulus seminiferus dan berfungsi memberikan  nutrisi  bagi  sperma  yang belum matang (Hayati, 2011).
Diabetes  merupakan  penyakit  yang membutuhkan  perawatan  seumur  hidup dan  biaya  yang  besar.  Obat  oral  sintesis yang  sering  digunakan  oleh  penderita diabetes  yaitu glibenklamid .  Obat  ini bekerja dengan cara menstimulasi pengeluaran  insulin  pada  sel  β  pankreas karena  kandungan  sulfonil  urea  namun obat  ini  memiliki  efek  samping  yaitu hipoglikemia, lemas, pucat, muncul keringat, dan berdebar (Putra et al., 2017).
Beberapa penelitian yang berasal dari tanaman  herbal  telah  dilakukan  untuk mengurangi dampak DM terhadap kerusakan  fungsi  reproduksi  jantan.  Salah satu  tanaman  yang  telah  digunakan  secara tradisional di beberapa daerah di Indonesia untuk  mengobati  DM  adalah  kulit  buah Jengkol. Ekstrak etanol kulit buah  Jengkol ( Archidendron  pauciflorum )  dari  famili Fabaceae dapat menurunkan kadar glukosa darah  (Syafnir et  al. , 2014).  Hasil penelitian Malini et al. (2017)
menunjukkan  bahwa  masyarakat  Desa Karangwangi,  Kabupaten  Cianjur,  Jawa Barat, mengonsumsi air rebusan kulit buah Jengkol  yang  telah  dikeringkan  sebagai obat antidiabetes. Ekstrak etanol kulit buah Jengkol memiliki kandungan kadar
Desak Made Malini et al. : Potensi Regenerasi Sel Sertoli dan Sel Leydig Tikus ( Rattus Norvegicus ) Model Diabetes Pasca Pemberian Ekstrak Etanol Kulit Buah Jengkol ( Archidendron Pauciflorum )
flavonoid (0,23%), polifenol (28,82%) dan tanin (3,83%) (Saputri, 2016).
Flavonoid merupakan golongan polifenol yang memiliki kemampuan untuk menghambat  peroksidasi  lipid,  aktifitas reduksi-oksidasi khelasi logam dan menghambat proses yang berkaitan dengan Reactive  Oxygen  Species (ROS)  (Heim et al. ,  2002).  Penelitian  Adewoyin et  al .,
(2017)  menyebutkan  bahwa  kandungan flavonoid pada
Cardiospermum
halicacabum dan Origanum  majorana dapat memulihkan gangguan fungsi reproduksi  jantan  yang  dapat  dilihat  dari adanya  peningkatan  jumlah  sperma  pada caput  epididimis  dan  hormon  testosteron serta  jumlah  sel  spermatogenik  pada tubulus  seminiferus.  Penelitian  Malini et al. ,  (2019)  menyatakan  bahwa  ekstrak etanol kulit buah Jengkol dengan dosis 770 mg/kg  BB  merupakan  dosis  yang  paling efektif dalam meningkatkan sekresi insulin dan menurunkan kadar glukosa.
Hewan  model  DM  dapat  dibuat dengan menggunakan zat kimia Streptozotosin  (STZ).    Induksi  STZ bersifat  sitotoksik  terhadap  sel  β  pankreas sehingga hewan coba menjadi hiperglikemia dan kondisi inflamasi kronis karena  defisiensi  insulin  (Bozkurt et  al ., 2018).  Hewan  coba  DM  dengan  induksi streptozotocin dapat  mempengaruhi  proses spermatogenesis akibat dari stress oksidatif
(Bozkurt et al ., 2018). Efek dari induk STZ dapat terlihat setelah 72 jam kemudian.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, maka  penelitian  ini  dilakukan  untuk menguji  potensi  ekstrak  etanol  kulit  buah Jengkol  dalam  meregenerasi  sel  Leydig dan  sel  Sertoli  pada  Tikus  jantan  diabetes yang diinduksi streptozotocin .

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  adalah maserator, platform, alat  gelas  (Pyrex), bunsen, magnetic stirrer , disposable syringe volume  5  ml  ( Terumo ), alat  bedah ( MinorSet ), blender ( Phillips ), cover glass, glukometer  dan  glukostrip  ( EasyTouch ), heating  plate ,  kaca  objek,  mikroskop cahaya  ( Olympus  CX-21 ),  oven,  pH  meter (Precisa), sonde, syringe ( Terumo ), timbangan hewan uji ( Ohaus) , dan vaccum evaporator ( Eyela ),  kandang baskom plastik  dan  penutup  besi,  mikrotom  putar , staining jar .
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya  adalah  hewan uji, bahan uji, dan bahan kimia. Hewan uji adalah  Tikus  ( Rattus  norvegicus )  Jantan galur  Wistar  sebanyak  25  ekor  dengan umur  8-12  minggu  dan  memiliki  berat badan rata-rata 200 gram. Bahan uji adalah kulit buah Jengkol (A rchidendron pauciflorum ). Bahan kimia yang digunakan meliputi  akuades,  alkohol  70%,  alkohol
80%, alkohol 90%, alkohol 100%, aquabidest,  asam  asetat  glasial, buffer sitrat, Carboxymethil  Cellulose (CMC) 0,05%, etanol 96%, glibenklamid , hematoksilin  dan  eosin,  larutan  fiksatif Bouin,  larutan xylol ,  natrium  klorida  0,9% (NaCl  fisiologis),  paraffin,  spirtus,  dan Streptozotocin (STZ).

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental  di  laboratorium  dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) faktor tunggal dengan lima perlakuan  dan  empat  pengulangan. Model hewan  diabetes  yang  digunakan  adalah Tikus  wistar  betina  ( R.  norvegicus )  yang memiliki  kadar  glukosa  ≥250  mg/dl  pada hari  ke-4  setelah  induksi  dengan  STZ (Sajedianfard,  2014).  Semua  kelompok perlakuan diinduksi diabetes kecuali kontrol  negatif  (KN).  Perlakuan  yang diberikan yaitu kontrol negatif (KN) diberi CMC  0,05%,  kontrol  positif  (KP)  diberi CMC  0,05%,  pembanding  (PB)  diberi Glibenklamid 10  mg/kg  BB,  Perlakuan  1 dan  2  diberi  ekstrak  etanol  kulit  buah Jengkol masing-masing dosis 385 (P1) dan 770  (P2)  mg/kg  BB.  Perlakuan  diberikan satu  kali  sehari  selama  54  hari  berturut- turut dengan cara oral.

## Prosedur kerja
Persiapan hewan uji
Hewan  uji  dipelihara  di  kandang hewan yang beralaskan sekam dan masing- masing  kandang  berisi  4  ekor  hewan  uji sesuai dengan perlakuan  yang  diberikan. Sebelum  diberi  perlakuan hewan  uji terlebih dahulu diaklimatisasi selama 7 hari untuk membiasakan hewan uji hidup dalam lingkungan  laboratorium.  Makanan  yang diberikan  berupa  pakan  pelet  CV  551  dan sebagai  air  minum  diberi  air  ledeng  yang diberikan  secara Ad  libitum .  Kandang disimpan  pada  ruangan  dengan  kodisi ruangan  12  jam  terang  dan  12  jam  gelap, suhu ruangan sekitar 26 0 C dan kelembaban 60-75 %.

## Pembuatan bahan uji
Pembuatan  bahan  uji Ekstrak  etanol kulit  buah  Jengkol  dilakukan  dengan metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Kulit  buah  Jengkol  dipotong kecil-kecil,  dicuci,  dikering-anginkan  dan kemudian  diblender  hingga  berbentuk serbuk simplisia. Serbuk simplisia dimaserasi  dengan  menggunakan  etanol 96%  dan  serbuk  1:6  (w/v).  Perendaman dilakukan selama 3 x 24 jam. Maserat yang diperoleh,  disaring  dan  diuapkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 o C  sampai  diperoleh  ekstrak  dalam bentuk  pasta  (Khan et  al .  2010).  Induksi diabetes  hewan  uji  dilakukan  dengan  cara injeksi tunggal streptozotocin (STZ) secara intravena dengan dosis 65 mg/kg  BB  yang
Desak Made Malini et al. : Potensi Regenerasi Sel Sertoli dan Sel Leydig Tikus ( Rattus Norvegicus ) Model Diabetes Pasca Pemberian Ekstrak Etanol Kulit Buah Jengkol ( Archidendron Pauciflorum )
dilarutkan  dengan  larutan  0,1  M citrate buffer (pH  4,5).  Sebelum  diinduksi  Tikus dipuasakan  terlebih  dahulu  selama  12  jam dan  diukur  kadar  glukosa  darahnya.  Tikus dianggap  menderita  diabetes  dan  dapat digunakan sebagai hewan uji apabila kadar glukosa  darahnya  >250  mg/dl  setelah  72 jam induksi (Sajedianfard et al ., 2014).
Aklimatisasi dan Pemeliharaan Hewan Uji Hewan  uji  diaklimatisasi  di  kandang hewan Program Studi Biologi selama tujuh hari sebelum perlakuan dengan tujuan agar hewan uji dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan. Suhu di ruang kandang hewan uji  merupakan suhu kamar dengan rentang suhu  antara  22-30 o C.  Hewan  uji  diberikan pakan  dan  minum  air  secara ad-libitum . Penggantian  sekam  dilakukan  sebanyak dua kali dalam seminggu.
Perlakuan terhadap hewan uji
Pemberian  perlakuan  ekstrak  etanol kulit  buah  Jengkol  sehari  setelah kadar glukosa  ≥250  mg/dl masing-masing dengan  2  dosis  yang  berbeda  yaitu  dosis 385  dan  770  mg/kg  BB,  sedangkan  untuk kontrol negatif  (KN)  diberi  CMC  0,05%, kontrol  positif  (KP)  diberi  CMC  0,05%, pembanding  (PB) diberi Glibenklamid 10 mg/kg  BB.  Perlakuan  diberikan  satu  kali sehari  selama  54  hari  berturut-turut  (satu siklus spermatogenesis pada Tikus) dengan cara oral.

## Teknik pengambilan data
Sehari  setelah  perlakuan  dihentikan, semua hewan uji dikorbankan dengan cara dislokasi leher, selanjutnya dibedah, diisolasi  organ  testisnya  dan  sebelum ditimbang  dibersihkan  terlebih  dahulu dengan larutan NaCl  fisiologis  0,9%. Kemudian  organ  dibuat  sediaan  preparat histologis  dengan  menggunakan  metode parafin  dan  pewarnaan  Hematoxylin- Eosin. Analisis kuantitatif untuk parameter histologi testis dilakukan dengan menghitung  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel Leydig  pada  25  tubulus  seminiferus  yang dipilih  secara  acak  dan  diamati  pada perbesaran  400  x.  Jumlah  dari  masing- masing  sel  ditentukan  dengan  membagi jumlah  sel  total  dibagi  dengan  jumlah tubulus seminiferus yang diamati (Mardanshahi et  al .,  2018). Data  yang diperoleh  selanjutnya  dianalisis  dengan analisis  varians  (ANAVA)  dengan  taraf kepercayaan  95%  (α=5%)  dan  uji  Jarak berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah Jengkol  terhadap Struktur Histologis Gambaran  histologis  penampang melintang testis pasca perlakuan ditampilkan  pada Gambar  1 .  Sel  Sertoli memiliki  bentuk  piramida  yang  melekat pada lamina basalis dan ujung selnya
Gambar 1. Gambaran histologi testis Tikus dengan pewarnaan H&E dan perbesaran 100x Keterangan : KN (CMC 0,05%); KP (STZ 60 mg/kg BB+ CMC 0,05%); P1 (STZ 60 mg/kg BB+ CMC 0,05%+ EEKBJ 385 mg/kg BB); P2 (STZ 60 mg/kg BB+ CMC 0,05%+ EEKBJ 770 mg/kg BB); dan Pb (STZ 60 mg/kg BB+ CMC 0,05%+ Glibenklamid 10 mg/kg BB). Tanda panah hitam menunjukkan Sel Sertoli dan tanda panah biru menunjukkan Sel Leydig.
mengarah ke dalam lumen tubulus seminiferus. Hal ini sesuai dengan
Mescher  (2012)  yang  menyatakan  bahwa sel  Sertoli  merupakan  sel  piramid  atau kolumnar  yang  dasarnya  melekat  pada lamina  basal  dan  ujung  apikalnya  terjulur ke  dalam  lumen  tubulus  seminiferus.  Sel Leydig  tampak  berada  di  kompartemen interstisial  di  antara  tubulus  seminiferus dan memiliki bentuk oval.
Hal ini sesuai dengan yang dinyatakan  oleh  Hayati  (2011)  bahwa  sel Leydig  berada  pada  jaringan  interstisial testis  di  antara  tubulus  seminiferus, berbentuk  poligon  atau  ovoid,  berukuran relatif  besar  dibandingkan  dengan  sel
lainnya, serta memiliki warna  yang sedikit pucat.
Penderita diabetes melitus menunjukkan  terjadinya  penurunan  kadar Follicle  Stimulating  Hormone (FSH), Interstitial  Cell  Stimulating  Hormone (ICSH), Insulin-like  Growth  Factor  1 (IGF-1), dan Stem Cell Factor (SCF) yang disebabkan  karena  kepekaan  reseptor insulin  mengalami  gangguan  (Ballester et al. ,  2004).  Peningkatan  glukosa  darah berpengaruh  terhadap  penurunan  ICSH sehingga respon sel Leydig untuk mensekresi testoteron juga menurun (Allan, 2015). Gangguan kepekaan reseptor insulin juga menyebabkan
KN KP
P1
P2 Pb
menurunnya SCF testis sehingga menurunkan  regenerasi  sel  Leydig  yang dapat  menyebabkan  jaringan  interstitial testis kehilangan kepadatannya dan penurunan  jumlah  volume  sel  Leydig  per ruang interstitial (Ballester et al. , 2004).
Sel  Sertoli  pada  mamalia  berperan penting dalam diferensiasi dan perkembangan  fungsi  testis.  Jumlah  sel Sertoli  pada  testis  menentukan  ukuran testis  dan  produksi  sperma  sehingga kerusakan  atau  penurunan  jumlah  sel Sertoli  akan  menyebabkan  terjadinya penurunan produksi sperma dan peningkatan  jumlah  sperma  abnormal (Schulz et  al .,  2005). Folicle  Stimulating Hormone mengawali  proses  proliferasi spermatogenesis  dan  testosteron  berdifusi dari  sel  interstitial  yang  diperlukan  untuk pematangan  akhir  spermatozoa  (Agarwal et  al .,  2003).  Terhambatnya  pembentukan FSH  dapat  menyebabkan  spermatogenesis terganggu dan juga menyebabkan turunnya jumlah sel Sertoli (Guyton & Hall, 2008).
Menurut  Boekelheide et  al .,  (2000), terjadinya  penurunan  jumlah  sel  Sertoli mengindikasikan  kegagalan  fungsi  sel Sertoli melindungi sel-sel germinal terhadap  apoptosis.  Kerusakan  sel  Sertoli akan mengganggu proses spermatogenesis. Selanjutnya, Lohiya et al . (2002), menyatakan jika fungsi sel Sertoli terganggu,  maka  sekresi  ABP,  suplai
nutrisi,  faktor  pertumbuhan,  laktat,  dan transferin  juga  terganggu  karena  zat-zat tersebut  sangat  dibutuhkan  dalam  proses spermatogenesis.
Sel Leydig dirangsang oleh Luteinizing Hormone (LH) untuk
memproduksi testosteron. Testosteron diperlukan  untuk  perkembangan  sel-sel spermatogenik. Oleh karena  itu, bila kadar testosteron  menurun  ada  kemungkinan terjadinya penghambatan pembentukan sel- sel spermatogenik (Lukitasari & Abdulgani,  2013).  Menurut  penelitian Kermani et  al .  (2019)  menyatakan  bahwa Tikus yang diinduksi streptozotocin menyebabkan kondisi hiperglikemik sehingga  terjadi  penurunan  jumlah  sel Leydig.
Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah Jengkol    terhadap  Jumlah  Sel  Sertoli dan Sel Leydig
Rerata  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel
Leydig disajikan pada Tabel 1 . Pengamatan  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel Leydig  dilakukan  dengan  menghitung jumlah  sel-sel  tersebut  pada  25  tubulus seminiferus. Hasil uji ANAVA menunjukkan  bahwa  nilai  F hitung >  F tabel yang  artinya  terdapat  pengaruh  nyata  dari pemberian  perlakuan  terhadap  jumlah  sel Sertoli  dan  sel  Leydig.  Analisis  data dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan untuk membandingkan rerata tiap perlakuan yang hasilnya ditampilkan pada Tabel 1 .
Tabel 1. Rerata Jumlah Sel Sertoli dan Sel Leydig Pascaperlakuan
Keterangan : Data disajikan dalam bentuk 𝑥 ̅ ± SD. Rerata jumlah sel Sertoli dan sel Leydig Tikus  dianalisis menggunakan  uji  ANOVA  (Analisis  Variansi)  yang  dilanjutkan  dengan  Uji  Duncan  pada  taraf  kepercayaan 95% (α = 0,05). Huruf yang sama pada satu kolom menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata .
Pada Tabel  1 dapat  dilihat  bahwa jumlah  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig  pada Tikus  yang  diinduksi streptozotocin (KP) lebih sedikit dibandingkan dengan KN dan secara  statistik  berbeda  nyata.  Hal  ini berarti terjadi penurunan jumlah sel Sertoli dan  Leydig  pada  Tikus  yang  diinduksi streptozotocin .  Menurut  Pathak et  al. (2008), streptozotocin (STZ) yang diberikan  pada  Tikus  melalui  intravena dapat  merusak  sel beta pankreas  karena STZ  bersifat  sitotoksik  spesifik  pada  sel beta pankreas dan akibatnya fungsi sel beta sebagai  penghasil  hormon  insulin  akan terganggu  dan  menginduksi  terjadinya DM.
Salah satu ciri dari DM adalah kadar glukosa  yang  tinggi  atau  hiperglikemia yang dapat menyebabkan terjadinya peningkatan  Reaktif  Oksigen  Spesies (ROS)  dan  dapat  memicu  terjadinya cekaman  oksidatif  di  dalam  tubuh.  Reaksi peroksidasi  lipid  yang  terjadi  secara berlebihan  pada tingkat  jaringan  sel  gonad
(testis) dapat menimbulkan beberapa perubahan pada fungsi seksual, diantaranya adalah menurunnya kadar hormon testosteron di dalam serum akibat terjadinya  kelainan  fungsi  dari  sel  Leydig (Rho et al ., 2000).
Kerusakan  pada  membran  sel  epitel germinal tubulus seminiferus dan degenerasi  sel  testis  merupakan  akibat yang  paling  utama  dari  adanya  ROS. Senyawa oksigen reaktif seperti O 2 -, H 2 O 2 , dan  OH-,  merupakan  mediator  yang memegang  peranan  penting  terjadinya kerusakan  oksidatif  pada  sel  termasuk  sel Sertoli  (Dina et  al. ,  2017).  Penurunan jumlah  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig  ini  juga diduga terjadi akibat radikal bebas sehingga terjadi gangguan pada hipotalamus  yang  mensekresikan  GnRH (Gonadotrophin Releasing Hormon) , untuk merangsang hipofisa mensekresikan hormon LH dan FSH yang bekerja pada sel Leydig  dan  sel  Sertoli,  gangguan  ini menyebabkan  aktivitas  sel-sel  tersebut
Perlakuan Rerata±SD Sel Sertoli Sel Leydig Kontrol Negatif (CMC 0,05%) 5,00±1,41 c 12,20±2,77 b Kontrol Positif (STZ 60 mg/kg BB + CMC 0,05 %) 2,60±0,55 a 8,00±2,35 a P1 (STZ 60 mg/kg BB + CMC 0,05 % + EEKBJ 385 mg/kgBB) 4,20±0,84 b,c 8,20 ±2,17 a P2 (STZ 60 mg/kg BB + CMC 0,05 % + EEKBJ 770 mg/kgBB) 4,40±0,55 b,c 9,80±0,84 a,b Pb (STZ 60 mg/kgBB + CMC 0,05 % + Glibenklamid 10 mg/kg BB) 3,60±0,55 a,b 8,20±2,89 a
menjadi
berkurang, sehingga
mempengaruhi  pula  aktivitas  pembelahan pada  sel  Leydig  dan  sel  Sertoli.  Aktivitas pembelahan sel yang berkurang menyebabkan penurunan jumlah sel Leydig  dan  sel  Sertoli  (Lukitasari  & Abdulgani, 2013; Fithriyah et al. , 2014).
Pada Tabel  1 dapat  dilihat  bahwa rerata  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig pada  Tikus  yang  diberi glibenklamid (Pb), menunjukkan perbedaan yang nyata apabila  dibandingkan  dengan  kelompok Tikus  yang  tidak  diinduksi  (KN)  tetapi tidak  berbeda  nyata  dengan  kelompok positif  yang  diinduksi  diabetes  (KP).  Hal ini menunjukkan bahwa pemberian glibenklamid tidak  berpengaruh  terhadap peningkatan  jumlah  sel  Sertoli  dan  Leydig pada  testis  Tikus  diabetes. Glibenklamid merupakan salah satu obat oral antidiabetes golongan sulfonilurea yang biasa digunakan untuk penderita Diabetes Mellitus  tipe  2.  Golongan sulfonilurea ini dapat mengakibatkan efek samping  berupa toksisitas.  Sel  yang  akan  mati  pada  tahap nekrosis akan membesar, struktur organelanya berubah kemudian lisis sebagai  akibat  respon  terhadap  zat  toksik (Confederat et al ., 2015).
Berdasarkan Tabel  1 tampak  bahwa jumlah  sel  Sertoli  pada  Tikus  yang  diberi perlakuan  EEKBJ  berbeda  nyata  dengan kelompok Tikus yang dinduksi streptozotocin (KP).  Kelompok  perlakuan
dengan  dosis  EEKBJ  770  mg/kg  BB memiliki  jumlah  sel  Sertoli  yang  secara statistik  tidak  berbeda  nyata  dengan kelompok  Tikus  yang  diberi  pelakuan EEKBJ  385  mg/kg  BB  dan  kelompok Tikus  yang  diberi Glibenklamid (PB).  Hal ini menunjukkan bahwa kemampuan EEKBJ  dosis  770  mg/kg  BB  dan  385 mg/kg  BB  sebanding  dalam  meningkatkan jumlah  sel  Sertoli  pada  testis  Tikus diabetes.
Pada Tabel  1 juga  dapat  dilihat bahwa  jumlah sel  Leydig  pada  Tikus  yang diberi  perlakuan  EEKBJ  tidak  berbeda nyata  dengan  kelompok  Tikus  yang dinduksi streptozotocin (KP).  Kelompok perlakuan dengan dosis EEKBJ 770 mg/kg BB  memiliki  jumlah  sel  Leydig  yang secara  statistik  tidak  berbeda  nyata  pula dengan  kelompok  Tikus  yang  tidak diinduksi streptozotocin (KN).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kemampuan  EEKBJ dosis  770  mg/kg  BB  sebanding  dalam meningkatkan  jumlah  sel  Leydig  pada testis Tikus diabetes.
Pemberian EEKBJ
dapat meningkatkan  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel Leydig  secara  signifikan,  hal  ini  diduga karena adanya  senyawa  kimia  bioaktif yang  terkandung  di  dalam  kulit  buah Jengkol  yang  mampu  merangsang  sel  beta pankreas untuk mensekresi hormon insulin (Malini et  al. ,  2019).  Ekstrak  etanol  kulit buah Jengkol mengandung beberapa
senyawa bioaktif diantaranya adalah flavonoid,  polifenol  dan  tanin  (Saputri, 2017).  Tumbuhan  yang  memiliki  senyawa metabolit sekunder flavonoid dapat digunakan  untuk  menyembuhkan  diabetes dengan  cara  merangsang  sekresi  hormon insulin (Waltner-Law, 2002).
Flavonoid merupakan senyawa metabolit  sekunder  yang  paling  banyak ditemukan  di  jaringan  tumbuhan  dan diduga  mampu  meregenerasi  sel  beta pankreas  yang  rusak  (Birben et  al., 2012). Aksi  flavonoid pada  diabetes  mellitus adalah  menghindari  absorbsi  glukosa  atau memperbaiki  toleransi  glukosa.  Sehingga menurut  penelitian  Malini et  al. (2019), senyawa  flavonoid  yang  terkandung  di dalam  kulit  buah  Jengkol  juga  dapat menurunkan  KGD  dan  meningkatkan kadar  hormon  insulin  pada  Tikus  yang diinduksi STZ.
Hormon  insulin  akan  menurunkan kadar  gula  darah  dan  melancarkan  aksi hipotalamus-hipofisis sebagai fungsi sistem  endokrin  dalam  meningkatkan produksi hormon-hormon reproduksi (Nieschlag et  al .,  2010).  Peningkatan insulin akan meningkatkan efek gonadotropin  (LH  dan  FSH)  pada  sel Sertoli  dan  sel  Leydig  sehingga  aktivitas sel-sel  tersebut  menjadi  meningkat,  dan mempengaruhi  pula  aktivitas  pembelahan pada  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig.  Aktivitas
pembelahan  sel  yang  meningkat  akan menyebabkan  peningkatan  jumlah  sel Sertoli  dan  sel  Leydig  (Fithriyah et  al. , 2014).
Penelitian Wankeu-Nya et al . (2019), menyatakan bahwa flavonoid dan polifenol yang terkandung dalam tumbuhan Dracaena  arborea merupakan  senyawa antioksidan  kuat  untuk  memperbaiki  sel Leydig  dan  terlibat  dalam  penghambatan siklooksigenase-2  (COX2),  enzim  yang bertanggung jawab atas penghambatan gen StAR,  yang  mengarah  pada  peningkatan steroidogenesis (proses pembentukan hormon pada testis). Oleh karena  itu dapat diduga  bahwa  kulit  buah  Jengkol  yang mengandung senyawa flavonoid dan polifenol  dapat  meningkatkan  potensi regenerasi sel Leydig.
Kandungan  senyawa  tanin  yang terdapat  pada  kulit  buah  Jengkol  juga diduga dapat menurunkan kadar gula darah dengan  cara  meningkatkan  penyerapan glukosa.  Tanin  diketahui  dapat  memacu metabolisme  glukosa  dan  lemak  sehingga timbunan  kedua  sumber  kalori  ini  dalam darah  dapat  dihindari.  Tanin  mempunyai aktivitas  antioksidan  dan  menghambat pertumbuhan tumor. Tanin juga mempunyai  aktivitas  hipoglikemik  yaitu dengan meningkatkan glikogenesis (Kumari  &  Jain,  2012). Peningkatan jumlah  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig  ini  juga
dipengaruhi  oleh  meningkatnya  produksi insulin.  Hormon  insulin  akan  menurunkan kadar  gula  darah  dan  melancarkan  aksi hipotalamus-hipofisis sebagai fungsi sistem  endokrin  dalam  meningkatkan produksi hormon-hormon reproduksi (Nieschlag et al. , 2010).
Ekstrak  kulit  Jengkol  dalam  juga mengandung  senyawa  alkaloid  (Syafnir et al. ,  2015).  Alkaloid  merupakan  senyawa organik  yang  bersifat  basa  dan  terdapat dalam tumbuh-tumbuhan (Sumardjo, 2008). Aktivitas antioksidan mampu menangkap radikal bebas yang menyebabkan  perbaikan  pada  kerusakan sel  beta  pankreas  penyebab  DM.  Adanya perbaikan  pada  jaringan  pankreas,  maka terjadi peningkatan jumlah insulin didalam tubuh  sehingga  glukosa  darah  akan  masuk kedalam  sel  sehingga  terjadi  penurunan glukosa  darah  dalam  tubuh.  Sehingga diduga  senyawa  alkaloid  yang  terkandung di  dalam  kulit  buah  Jengkol  dapat menurunkan  kadar  gula  darah  Tikus  yang diinduksi STZ (Malini et al. , 2019).
Peningkatan
insulin akan meningkatkan  efek  gonadotropin  (LH  dan FSH)  pada  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig  di testis.  Hormon  insulin  akan  menstimulus sel  Leydig  sehingga  akan  meningkatkan fungsi  sel  Leydig  dan  menimbulkan meningkatnya reseptor FSH. Reseptor FSH yang  meningkat  akan  meningkatkan  kadar FSH  yang  juga  berpengaruh  terhadap
naiknya  kadar  LH  (Ballester et  al. ,  2004). Peningkatan tersebut akan memicu peningkatan  produksi  hormon  testosteron dan ABP ( Androgen Binding Protein ) yang digunakan  dalam  proses  spermatogenesis (Sabirosi et al. , 2014).
Antioksidan  merupakan  zat  yang mampu  memperlambat  dan  mencegah proses  oksidasi  dalam  tubuh.  Adanya  zat antioksidan  dalam  tubuh  dapat  melindungi sel  dari  efek  berbahaya  radikal  bebas. Senyawa  antioksidan  akan  menghambat terjadinya  pembentukan  radikal  bebas  dan menetralisir  radikal  bebas  yang  tersisa dalam tubuh. Cara kerja antioksidan dalam menetralisir radikal bebas yakni melengkapi  kekurangan  elektron  yang dimiliki radikal bebas yang dapat menimbulkan  stress  oksidatif  dengan mengeluarkan spesies oksigen yang potensial  bersifat  toksik  (pro-oksidan), menekan  pembentukannya,  atau  menekan kerja  pro-oksidan  tersebut.  Menurunnya radikal  bebas  karena  aktivitas  antioksidan ini  akan  mencegah  kerusakan  mitokondria DNA  sperma  serta  terjadinya  apoptosis spermatozoa yang ditimbulkan oleh radikal bebas  terhadap  sel  normal  pada  saat spermatogenesis  (Selawa et  al. ,  2013). Diabetes Mellitus mengakibatkan penurunan  jumlah  sel  Sertoli  dan  sel Leydig  sehingga  proses  spermatogenesis terganggu.  Adanya  senyawa  flavonoid, polifenol, alkaloid dan tanin dapat
meningkatkan regenerasi sel Sertoli dan sel Leydig.  Sehingga  dapat  diduga  bahwa terjadinya  peningkatan  jumlah  sel  Sertoli dan sel Leydig disebabkan karena
kandungan senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit buah Jengkol ( Archidendron pauciflorum ).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  ditarik  kesimpulan bahwa  ekstrak  etanol  kulit  buah  Jengkol ( Archidendrom pauciflorum ) memiliki potensi dalam meningkatkan regenerasi sel Leydig  dan  sel  Sertoli  Tikus  ( Rattus norvegicus ) jantan diabetes yang diinduksi streptozotocin .  Dosis  770  mg/kg  BB adalah  dosis  ekstrak  etanol  kulit  buah Jengkol  ( Archidendrom  pauciflorum )  yang efektif  dalam  meningkatkan  regenerasi  sel Leydig  dan  Sertoli  pada  Tikus  ( Rattus novergicus )  jantan diabetes  yang diinduksi streptozotocin .

## DAFTAR PUSTAKA
Adewoyin  M,  M  Ibrahim,  R  Roszaman,
MLM.  Isa,  NAM  Alewi,  AAA  Rafa
& MNN Anuar. 2017. Male
infertility:  The  Effect  of  natural antioxidants and phytocompounds on seminal  oxidative  stress. Diseases 2017 , 5(9). doi: 10.3390 /diseases5010009.
Agarwal A, RA Saleh & MA  Bedaiwi.
2003.  Role  of  reactive  oxygen species in the   pathophysilogy of
human reproduction. J. Fertil. Steril, 79(4): 829-843.
Aitken  RJ,  Smith  TB,  Jobling  MS,  Baker MA  &  De  Iuliis  GN.  2014. OxidativeStress and male
reproductive  health. Asian  J  Androl , 16(1): 31-38.
Allan  C.  2015.  Diabetes  and  sexual  and reproductive  health.  A  fact  sheet for  men  with  diabetes. Andrology Australia . Online at https://www.andrologyaustralia.org/ wpcontent/uploads/Factsheet_Diabet es.pdf .
Ballester  J,  Dominguez  J,  Muñoz  MC,
Sensat  M,  Rigau  T,  Guinovart  JJ  & Rodriguez-Gil, J. E. 2004. Tungstate treatment  improves  Leydig  cell function  in streptozotocin -diabetic rats. Journal  of  Andrology ,  26(6)  : 706-715.
Birben  E,  Sahiner  UM,  Sackesen  C,
Erzurum  S  &  Kalayci  O.  2012. Oxidative  Stress  and  Antioxidant Defense. World Allergy Organization Journal , 5(1) : 9– 19.
Boekelheide  K,  SL  Fleming,  KJ  Johnson, SR  Patel  &  HA  Schoenfeld.  2000. Role  of  Sertoli  cell  in  injury- associated testicular germ cell apoptosis. Proc. Soc. Exp. Biol. Med, 225(2) : 105-115.
Bozkurt  A,  Karabakan  M,  Aydin  M, Gumustas  S,  Onk  D,  Gursul  C  &
Erol  H.  2018.  Effects  of  melatonin treatment on thespermatogenesis and serum  inflammatory  cytokine  levels in diabetic  rats. Annals  of Medical Research , 25(4). Doi:10.5455/annalsmedres.2018.09.1 92. Budin  SB,  WZA  Rahman,  FF  Jubaidi,
NLM. Yusof, IS Taib & S Zainalabidin. 2018. Roselle ( Hibiscus  sabdiriffa )  Polyphenol-
Rich Extract prevents testicular damage  of  diabetes  Rats. Journal of
Applied Pharmaceutical Science, 8(2).  doi:10.7324/JAPS. 2018.8210.
Confederat  L,  C  Sandra,  L  Florentina,  P
Andrea, H Monica & Lenuta P. 2015. Hypoglicemia Induced by Antidiabetic Sulfonylureas. Rev Med  Chir  Soc  Med  Nat  Iasi  J ,
119(2): 579-584. Dina  MS,  Dasrul,  Sugito,  S  Wahyuni,  T Armansyah TR & Ismail. 2017. Penurunan  jumlah  sel  leydig  dan  sel sertoli Tikus Putih (Rattu snorvegicus)  Strain Wistar  setelah pemberian formalin. JMVET ,
1(2):203-209. ISSN:2540 -9492.
Fithriyah  R,  Tjandrakirana  &  N  Ducha.
2014.  Efek  filtrat tauge  kacang  hijau terhadap jumlah sel sertoli pada testis mencit yang terpapar MSG.
LenteraBio ,  3(3):  192-197.  ISSN: 2252-3979.
Guyton  AC  dan  JE  Hall.  2008. Buku  Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi ke- 11. Jakarta: EGC, Penerbit Buku Kedokteran.
Hayati  A.  2011. Spermatologi .  Surabaya: Airlangga University Press (AUP).
Heim  KE,  AR  Tagliaffero  &  DJ  Bobilya. 2002. Flavonoid antioxidants:
Chemistry, metabolism and structure-activity relationship. J Nutr Biochem, 13: 572-584.
International  Diabetes  Federation.  2013.
IDF  Diabetes  Atlas  Sixth  Edition . New York: Nolan.
Kermani  J,  N  Goodarzi  &  M  Bakhtiari.
2019.  An  experimental  study  to evaluate  the  protective  effects  of solanum  lycopersicum seed  essential oil  on  diabetes-induced  testicular injuries. Medicina , 55: 499. doi:10.3390/medicina55080499.
Khan  ZI,  Badrun  N,  Abu  JM,  Shahnaz  R,
Majeedul HC & Mohammed R. 2012. An  evaluation  of  antihyperglicemic and antinociceptive  effects  of methanol  extract  of Cassia  fistula
( Fabaceae )  Leaves  in  Swiss  Albino Mice. Advances  in  Natural  and Applied Sciences , 4: 305-310.
Kong Z, A Johnson, F Ko, J He & S Cheng. 2018.  Effect  of Cistanche  tubulosa
extracts on male reproductive
function in streptozotocin nicotinamide-induced  diabetic  Rats. Nutriens , 10: 1562. doi: 10.3390/nu10101562. Kumari  M  &  Jain,  S.  2012.  Tannins:  An
Antinutrient  with  Positive  Effect  to Manage  Diabetes. Research  Journal of Recent Sciences . 1(12): 70-73.
Liu  CY,  YJ  Hsu,  YWE  Chien,  TL  Cha  & CW  Tsao.  2016.  Dietary  resistant maltodextrin  ameliorates  testicular function  and  spermatogenesis  in streptozotocin-nicotinamide-induced diabetic  Rats. Andrologia, 48:  363- 373. doi :10.1111/and.12454. Lohiya NK, B Manivannan, PK Mishra, N Pathak,  S  Sriram,  S  Bhande  &  S
Panneerdoss. 2002. Chloroform extract  of Carica  papaya seeds induces long-term reversible azoospermia  in  langur  monkey. Asian. J. Androl, 4(1): 17-26.
Lukitasari  M  &  N  Abdulgani.  2013.
Potensi  regenerasi  sel  leydig  dan  sel spermatogenik  pada  testis  Mencit ( Mus  musculus )  hiperglikemik  yang diinduksi ekstrak ikan gabus ( Channa striata ).
Jurnal Sains  dan  Seni  Pomits ,  2(1):  2337- 3520.
Malini  DM,  Madihah,  DA  Khoirunnisa,  I Sasmita,  N  Ratningsih,  K  Alipin  & W  Hermawan.  2019.  Ekstrak  etanol kulit buah jengkol menurunkan kadar glukosa dan meningkatkan hormon insulin Tikus diabetes yang diinduksi Streptozotocin . Veteriner,
20(36): 65–73.
doi:10.19087/jveteriner.2019.20.1.65 .
Malini  DM,  Madihah,  J  Kusmoro,  F Kamilawati  &  J  Iskandar.  2017. Ethnobotanical  study  of  medicinal plants  in  Karangwangi,  District  of Cianjur,  West  Java. Biosaintifika ,
9(2): 345-356.
Mardanshahi  T,  Rezaei  N,  Zare  Z, Malekzadeh  SM,  &  Mohammadi  H. 2018.  Effects  of  L-Carnitine  on  the sperm parameters disorders,
apoptosis of spermatogenic cells and testis histopathology in diabetic Rats. Int  J  Reprod  BioMed ,  17:  325–336. doi:10.18502/ijrm.v17i5.4 600.
Mescher  AL.  2012. Histologi  Dasar Junqueira edisi  12.  Jakarta:  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Nieschlag  E,  Behre  HM  &  Nieschlag  S. 2010. Andrology-Male  Reproductive Health and Dysfuntion . New York: Springer Heidelberg Dordrecht. Pathak  M,  Chatterjee  TK,  Chakraborty  A &  Sengupta  GC.  2008.  Effects  of plant extract Centella asiatica (Linn.)  on  cold  restraint  stress  ulcer in  rats. Indian  Journal  Experimental Biology, 30:889-891. PMID:1293014.
Putra  RJS,  Anisyah  A  &  Hanandita  RP.
2017. Kejadian efek samping potensial  terapi  obat  antidiabetes pasien  diabetes  melitus  berdasarkan algoritma  naranjo. Pharmaceutical Journal of Indonesia , Vol. 2.
Rho H, Lee JN, Kim HR, Pard BH & Park JW.  2000.  Protective  mechanism  of glucose against  alloxaninduced β- cell  damage:  pivotal  role  of  ATP. Experimental and Molecular Medicine , 32(1): 12-17. Sabirosi BG, Trisunuwati P  &  Winarso  D.
2014. Ekspressi Tumor  Necrossis Factor-Alpha  (TNF-α)  pada  Tikus ( Rattus  norvegicus )  model  diabetes mellitus tipe 1 hasil induksi streptozotocin yang  diterapi  dengan ekstrak etanol rimpang Kunyit
( Curcuma longa L.). Jurnal
Kedokteran Hewan , 4(3): 1-9.
Sajedianfard  J,  Behroozi  Z  &  Nazifi  S. 2014. The  effect of  a  hydroalcoholic extract  of  silymarin  on  serum  lipids profiles  in  streptozotocin  induced diabetic  Rats. Comparative  Clinical Pathology , 23(3): 779-784.
Saputri  DHA.  2017.  Skripsi  Sarjana.
Program  Studi  Biologi,  FMIPA, Universitas Padjadjaran, Jatinangor.
Schulz  RW,  S  Menting,  J  Bogerd,  LR Franca,  DA  Vilela  &  HP  Godinho. 2005.  Sertoli  cell  proliferation  in  the adult  testis  evidence  from  two  fish species belonging to different orders. Biol.  Reprod ,  73(3):  891- 898.
Selawa  W,  Max  RJR  &  Gayatri  C.  2013.
Kandungan  flavonoid  dan  kapasitas antioksidan  total  ekstrak  etanol  daun Binahong ( Anredera   cordifolia ). Jurnal Ilmiah Farmasi , 2(1): 18-22. Sexton  WJ  &  Jarow  JP.  1997.  Effect    of diabetes mellitus upon male reproductive  function. Urology ,  49: 508.
Sumardjo  D.  2008. Pengantar  Kimia .
Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Syafnir  L,  Krishnamurti  Y  &  Ilmi,  M. 2014.  Uji  aktivitas  antidiabetes ekstrak etanol kulit Jengkol ( Archidendron  pauciflorum (Benth.) I.C.Nielsen). Prosiding  SNaPP2014 Sains, Teknologi, dan   Kesehatan,
4: 65–72.
Wankeu-Nya  M,  A.Florea,  S  Balici,  H Matei,  P  Watcho  &  A  Kamanyi. 2019. Cytoarchitectural improvement in  Leydig  cells  of  diabetic  rats  after treatment  with  aqueous  and  ethanol extracts of Dracaena arborea (Dracaenaceae)  extracts. Journal  of
Traditional and  Complementary
Medicine , 19:2225- 4110.
doi:10.1016/j.jtcme.2019.09.004.
Waltner-Law  ME,  Wang  XL,  Law  BK,
Hall RK, Nawano M & Granner DK. 2002.  Epigallocatechin  gallate,  a constituent  of  green  tea,  represses hepatic  glucose  production .  J  Biol
Chem , 277: 34933–34940.
World  Health  Organization  (WHO).  2018. Diabetes. Online at
http://www.who.int/mediacentre/fact sheets/fs312/en/