Abstrak —Perairan Pulau Talango Madura merupakan habitat bagi berbagai  invertebrata  laut.  Spons Haliclona  cymaeformis adalah salah satu spesies invertebrata laut yang dapat ditemukan di perairan tersebut.  Spons Haliclona  cymaeformis biasanya  ditemukan  dalam hubungan  simbiosis  dengan  makroalga Ceratodictyon  spongiosum . Analisis  data  kromatogram  dan  spektra  massa  pada  setiap  fraksi menunjukkan  adanya  senyawa  lipid  golongan  fosfolipid  dan glikolipid.  Senyawa  asam  fosfatidat  (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z))  dan fosfatidiletanolamina  (2:0/22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z))  berpotensi sebagai  biomarka.  Ekstrak  metanol  dari  spons Haliclona cymaeformis menunjukkan  potensi  aktivitas  inhibitor  pertumbuhan mikroba Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ..
Kata  Kunci —aktivitas  antimikroba; biomarka;
Haliclona cymaeformis ; lipid.

## I. PENDAHULUAN
ERAIRAN yang  meliputi  70%  permukaan  bumi merupakan  habitat  bagi  satu  hingga  dua  juta  spesies. Keanekaragaman  spesies  ini  terpusat  pada  pesisir  lautan menjadikan wilayah tersebut paling tinggi tingkat produktivitas dan  biodiversitasnya.  Organisme  yang  hidup di  habitat  padat seperti pesisir laut memaksa mereka untuk berevolusi menjadi lebih  kompleks  dan  kompetitif  [1].  Evolusi  organisme  laut telah  berlangsung sejak  makhluk hidup  pertama  yang muncul di  lautan  3500  juta  tahun  lalu.  Evolusi  tersebut  melengkapi banyak  organisme  laut  dengan  mekanisme  untuk  dapat bertahan  pada  suhu  ekstrim,  perubahan  salinitas dan  tekanan, serta menahan efek mutasi, bakteri dan virus patogen [2].
Pesisir  lautan  adalah  wilayah  ideal  untuk  habitat organisme  laut  karena  tersedia  nutrisi  melimpah,  cahaya matahari,  arus air  dan suhu yang mendukung. Organisme laut dibagi  menjadi  dua  berdasarkan  geraknya  yaitu  sesil  yang hidup menetap dan motil yang dapat bergerak aktif. Organisme sesil  yang  hidup  melekat  di  dasar  laut,  seperti  alga,  karang, spons  dan  invertebrata  lain  selalu  bersaing  untuk  dapat melekat  di  posisi  tertentu  pada  habitat  ideal  tersebut.  Akan tetapi,  mayoritas  invertebrata  sesil  tidak  mempunyai  struktur morfologi  untuk  dapat  bertahan  dan  bersaing  dengan  sesama spesies sesil maupun motil. Oleh karena itu, invertebrata sesil mengembangkan  senyawa  metabolit  sekunder  untuk  dapat bertahan  dari  predator,  bersaing  dengan  spesies  lain,  dan membantu  aktivitas pencernaan.  Golongan senyawa  metabolit
sekunder  yang  dihasilkan  oleh  invertebrata  sesil  antara  lain terpenoid,  alkaloid,  poliketida,  peptida,  gula  dan  steroid  [3], [1].
Spons yang termasuk organisme sesil, menghasilkan lebih banyak  senyawa  metabolit  baru  yang  ditemukan  setiap tahunnya bila dibandingkan dengan filum tanaman atau hewan lain  dari  ekosistem  laut. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  spons adalah  organisme  yang  sangat  produktif  menghasilkan senyawa  dengan  beragam  struktur  melalui  proses  biosintesis yang  khas  [4].  Siklus  hidup  spons  laut  terkait  erat  dengan berbagai  mikroorganisme  sehingga  menghasilkan  metabolit sekunder  yang  beragam.  Banyak  bahan  alam  turunan  dari spons  laut  seperti  halichondrin,  discodermolide,  hemiasterlin, dan  arenastatin-A  menunjukkan  aktivitas  yang  baik  pada  uji farmakologi  dan  telah  diidentifikasi  sebagai  senyawa  utama untuk pengobatan tumor, peradangan, dan penyakit lainnya[5].
Tidak semua bahan alam turunan spons selalu dibiosintesis oleh  spons  tersebut  namun  dapat  dihasilkan  dari  bakteri  atau mikroorganisme  lain  yang  bersimbiosis  atau  dimakan melalui sistem filter  feeding spons.  Senyawa  asam  okadat  yang diisolasi dari spons Halichondria diketahui merupakan produk dinoflagelata dari genus Prorocentrum [5].  Adanya hubungan antara  mikroorganisme  dan  inang  (spons)  yang  dapat menghasilkan  suatu  senyawa  khas  merupakan  topik  yang menarik  untuk  diteliti.  Senyawa-senyawa  khas  dari  hubungan simbiosis tersebut dapat  dijadikan sebagai penanda biomarka. Penanda  biomarka  tersebut  dapat  menunjukkan  hubungan kemotaksonomi dalam suatu ekosistem [6].
Spons Haliclona  cymaeformis dengan  makroalga Ceratodictyon spongiosum adalah salah satu bentuk hubungan simbiosis.  Simbiosis  antara  spons  dan  alga  tersebut  jarang ditemui  dibandingkan  dengan  mikroorganisme  fotosintetik (cyanobacteria,  diatom).  Simbiosis  ini  biasanya  terjadi  pada lingkungan  laut  yang  kurang  nutrisi  sehingga  dua  organisme ini  dapat  memperoleh  keuntungan  dari  pertukaran  metabolit [7].  Hubungan  simbiosis  spons  dengan  makroalga  tersebut dapat  diamati  dari  kenampakan  morfologinya.  Makroalga Ceratodictyon  spongiosum ditunjukkan dengan  adanya ramus berwarna  hijau  yang  tumbuh  pada  cabang-cabang  spons Haliclona  cymaeformis yang  berwarna  coklat  [8].  Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa hubungan simbiosis ini dapat menghasilkan senyawa 1-gliserileter yang mempunyai aktivitas

## Senyawa Lipid Spons Haliclona cymaeformis sebagai Biomarka dan Aktivitasnya terhadap Mikroba
Ridho Herdhiansyah, Yulfi Zetra dan Zjahra V. Nugraheni Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail : yzetra@chem.its.ac.id
P
sitotoksik  lemah  terhadap  sel  kanker  [9],  senyawa nortetilapirona  yang  berguna  sebagai  antifungi  [10] dan senyawa ceratospongamida yang berpotensi sebagai antiradang [11].
Perairan  tropis  seperti  kawasan  Indo-Pasifik  diketahui mempunyai  keanekaragaman  hayati  hingga  sekitar  1000 spesies  setiap  meter  persegi,  termasuk  didalamnya  beraneka ragam spesies spons [2].  Spons Haliclona cymaeformis dapat ditemukan  pada  perairan  Thailand,  Filipina,  Sulawesi  dan bagian utara Australia. Spons Haliclona cymaeformis pada dua penelitian  sebelumnya,  ditemukan  telah  bersimbiosis  dengan makroalga Ceratodictyon spongiosum seperti yang ditemukan pada perairan Teluk Thailand [10] dan Filipina [12]. Perairan Pulau  Talango,  Madura  merupakan  habitat  dari  beragam invertebrata  laut.  Spons Haliclona  cymaeformis dapat ditemukan  di  perairan  tersebut.  Makroalga Ceratodictyon spongiosum juga dapat ditemukan di perairan yang sama pada posisi  yang  berdekatan.  Penelitian  ini  akan  mengkaji  apakah ada  hubungan  simbiosis  antara  spons  dengan  makroalga tersebut  melalui  pendekatan  biomarka.  Pendekatan  biomarka dilakukan  dengan  membandingkan  kelompok  senyawa  yang dihasilkan  oleh  masing-masing  spesies.  Uji  antimikroba terhadap ekstrak juga dilakukan sebagai pendukung.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## A. Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kotak styrofoam, lemari  pendingin,  neraca  analitik,  gelas  beker, erlenmeyer, gelas ukur, corong pisah, vaccum rotaryevaporator ,  peralatan  distilasi,  kolom  kromatografi, botol vial, cawan petri, lampu UV, instrumen KC-SM Agilent 1200  RRLC. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  sampel  spons Haliclona  cymaeformis,dry  ice , formaldehida,  metanol, molecular  sieve ,  gas  nitrogen,  n- heksana, etil asetat, plat kromatografi lapis tipis (KLT), silica gel , sea  sand , aluminium  foil , nutrient  agar, antibiotik streptomycin, serta kultur mikroba Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli yang  didapatkan  dari  Laboratorium  Kimia Mikroorganisme, Jurusan Kimia, FMIPA, ITS.

## B. Ekstraksi dan Fraksinasi Senyawa
Sampel  spons  ditimbang  sebanyak  100  g  dan  dipotong hingga bentuk butiran kecil. Butiran spons dimasukkan dalam erlenmeyer  dan  diekstraksi  dengan  metanol.  Maserat  metanol dipisahkan  dengan  residu  spons  menggunakan  kertas  saring dan  dipekatkan  dengan vaccum  rotaryevaporator .Maserat metanol  yang  telah  dipekatkan  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  dan  ditambahkan  n-heksana  dengan  rasio  (1:1). Dipisahkan  lapisan  atas  (fase n-heksana)  dan  lapisan  bawah (fase metanol).  Fase n-heksana  dipekatkan  dengan vaccum rotary  evaporator. Pemisahan  komponen  dari  fase  n-heksana dilakukan  menggunakan  kromatografi  kolom.  Kolom  yang akan  digunakan  dikemas  dengan  cara  kering.  Proses  elusi dilakukan  dengan  gradien  kepolaran  eluen  dari  pelarut  n-
heksana  – etil  asetat  – metanol.  Hasil  pemisahan  kolom dimonitoring  dengan  plat  KLT . Tujuh  fraksi  hasil  kolom diidentifikasi kandungan senyawanya menggunakan kromatografi cair-spektrometri massa (KC-SM)

## C. Uji Pendahuluan Antimikroba
Ekstrak  n-heksana  diuji  potensi  bioaktivitasnya  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan  metode uji  kertas  cakram.  Patogen  yang  akan  digunakan  untuk  uji antimikroba diinokulasi pada media NA ( Nutrient Agar) dalam cawan petri selama 24 jam pada suhu 37 ˚C. Ekstrak n-heksana dilarutkan  dalam  pelarut  n-heksana  dan  metanol  dengan konsentrasi  masing-masing  100  ppm  kemudian  diaplikasikan pada  kertas cakram steril  (Whatman, diameter 6  mm).  Kertas cakram  diletakkan  di  atas nutrient  agar dalam  cawan  petri. Cawan  petri  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37  ˚C. Antibiotik streptomycin digunakan  sebagai  variasi  kontrol positif dan masing-masing pelarut sebagai kontrol negatif.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Ekstraksi dan Partisi Spons Haliclona cymaeformis
Spesimen  invertebrata  laut  didapatkan  dari  perairan  Pulau Talango,  Madura  memiliki  bentuk  bercabang  dengan  tubuh berwarna coklat dan lunak seperti ditunjukkan oleh Gambar 1. Identifikasi  spesimen oleh  Laboratorium  Ekologi,  Jurusan Biologi,  ITS  menunjukkan  bahwa  spesimen  tersebut merupakan  spons  laut  dengan  nama  latin Haliclona cymaeformis dari famili Chalinidae. Spesies spons ini biasanya hidup  bersimbiosis  dengan  makroalga Ceratodictyon spongiosum. Makroalga Ceratodictyon spongiosum ditunjukkan dengan adanya ramus berwarna hijau yang tumbuh pada  cabang-cabang  spons Haliclona cymaeformis yang berwarna coklat [8].
Gambar1Spesimen spons Haliclona cymaeformis dari perairan Pulau Talango Madura
Ekstraksi dengan metode maserasi dilakukan terhadap spons Haliclona  cymaeformis menggunakan  pelarut  metanol. Maserasi  dipilih  karena metode ini sederhana  dan  tidak  perlu dilakukan pemanasan  sehingga  dapat  menghindari penguraian senyawa  aktif.  Pelarut  metanol  yang  digunakan  akan  dapat menembus  dinding  sel  spons  dan  masuk  ke  rongga  sel  yang mengandung senyawa metabolit sekunder. Proses  difusi dapat terjadi akibat perbedaan konsentrasi dalam sel dengan pelarut
metanol.  Difusi  tersebut  berlangsung  hingga  dicapai keseimbangan  konsentrasi  antara  dalam  dan  luar  sel.  Pelarut metanol  akan  melarutkan  hampir  seluruh  senyawa  metabolit sekunder spons yang bersifat polar maupun non polar.  Proses maserasi  dilakukan  selama  3  x  24  jam  untuk  mendapatkan ekstrak maksimal dari sampel sebanyak 200,04 g.
Maserasi  pertama  dihasilkan  ekstrak  metanol  dengan warna  coklat  pekat,  untuk  itu  dilakukan  maserasi  lanjutan menggunakan pelarut yang sama dengan pengulangan dua kali. Hasil  ekstrak  metanol  terakhir  berwarna  coklat  pucat/kuning mengindikasikan  sebagian  besar  senyawa  telah  terekstrak dalam  pelarut  metanol.  Maserat  metanol  dipekatkan  dengan rotary  evaporator dalam  keadaan  vakum  untuk  dapat menguapkan  pelarut  dibawah  titik  didihnya  sehingga  dapat dihindari  kerusakan  senyawa  terlarut  akibat  pemanasan berlebih.  Ekstrak  pekat  maserat  metanol  yang  didapatkan adalah 110,07 g.
Maserat  metanol  hasil  ekstraksi  yang  masih  merupakan ekstrak kasar, dipartisi untuk mendapatkan kelompok senyawa dengan  perbedaan  tingkat  polaritas.  Ekstraksi  cair-cair  ini menggunakan  dua  pelarut  yang  mempunyai  beda  polaritas sehingga tidak saling bercampur. Senyawa yang terlarut dalam maserat  akan  terdistribusi  diantara  kedua  pelarut  berdasarkan tingkat  polaritasnya.  Partisi  dilakukan  dengan  pelarut  n- heksana. Ekstrak metanol pekat dimasukkan ke dalam corong pisah  kemudian  ditambahkan dengan  pelarut  n-heksana  (1:1) untuk  memisahkan  komponen  senyawa  non  polar.  Corong pisah  dikocok  dan  didiamkan  hingga  terpisah  antara  lapisan atas (fase n-heksana) dan lapisan bawah (fase metanol). Partisi ini  diulang  sampai  pelarut  n-heksana  lebih  jernih  yang menunjukkan senyawa non polar telah larut ke fase n-heksana. Fase  n-heksana  pekat  dari  ekstrak  metanol  yang  diperoleh sebesar 4,75 g.

## B. Fraksinasi menggunakan Kromatografi Kolom
Fase n-heksana hasil partisi masih merupakan ekstrak kasar sehingga diperlukan  fraksinasi  untuk  memisahkan  ekstrak kasar  tersebut  menjadi  kelompok  senyawa  sederhana. Pemisahan senyawa dengan kolom kromatografi ini akan dapat terjadi  atas  dasar  perbedaan  polaritas.  Eluen  dipilih  dengan gradien kepolaran dari n-heksana 100%, selanjutnya kepolaran ditingkatkan  hingga  etil  asetat  100%  dan  terakhir  eluen metanol  100%.  Fraksinasi  dengan  kolom  kromatografi memperoleh  7  fraksi  yang  dikelompokkan  berdasarkan pemisahan  warna  saat  proses  elusi  berlangsung. Monitoring hasil  fraksinasi  pada plat  KLT dengan  eluen  n-heksana:etil asetat  (4:6)  dilakukanuntuk  mengamati  senyawa  yang dikandung setiap fraksi berbeda berdasarkan tingkat polaritas. Pengamatan  plat  KLT  dibawah  lampu  UV  (254  nm  dan  366 nm) menunjukkan noda yang terpisah antara satu fraksi dengan fraksi  lain,  seperti  ditunjukkan  Gambar  2.  Fraksi  1  tidak memperlihatkan  adanya  noda.  Noda  fraksi  2  berwarna  merah muda dan biru yang terelusi hingga dekat batas garis. Fraksi 3 ditunjukkan  dengan  noda  merah  yang  diikuti  dengan  noda merah  muda  dan  biru. Fraksi  4  dan  6  tampak  sebagai  noda merah  muda,  sedangkan  fraksi  5  tidak  tampak  adanya  noda.
Fraksi  7  ditunjukkan  oleh  noda  samar  yang  memanjang  dari titik awal hingga titik akhir berwarna oranye.

## Gambar 2 Monitoring hasilkolompada Plat KLT

## C. Identifikasi Senyawa menggunakan KC-SM
Fraksi 1-7 hasil fraksinasi kolom kromatografi diidentifikasi menggunakan instrumen KC-SM untuk mengetahui kandungan senyawa  masing-masing  fraksi.  Analisis data  komponen senyawa pada kromatogram ion total (TIC) dan spektra massa seluruh  fraksi  dilakukan  menggunakan  software Automated MassSpectral  Deconvolution  and  Identification  System (AMDIS)  yang  dilengkapi  dengan  database  LipidBlast  [13]. Hasil  analisis  pada  masing-masing  fraksi  menunjukkan kandungan senyawa turunan fosfolipid dan glikolipid. Turunan senyawa  tersebut  biasanya  ditemukan  sebagai  komponen penyusun membran sel. Tabel 1 menunjukkan hasil identifikasi senyawa dari seluruh fraksi.
Tabel1Hasilidentifikasisenyawamenggunakaninstrumen KC-MS
Fraksi Senyawa
1 Fosfatidiletanolamina (PE) (5:0/19:0)
2 Digalaktosildiasilgliserol (DGDG) (2:0/13:0);
DGDG (18:2(2E,4E)/20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)); PE (7:0/16:0) 3 Asam fosfatidat (PA) (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z));
PE (3:0/20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z))
4 PA (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z));
PE (2:0/18:4(6Z,9Z,12Z,15Z))
5 PA (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z)); PE (2:0/22:5(4Z,7Z, 10Z,13Z,16Z))
6 Liso fosfatidilkolin (PC) (18:1(11E)); DGDG (16:1(7Z)/18:4(6Z,9Z,12Z,15Z)); PE (2:0/22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)) 7
PE (2:0/8:0); PA (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z)); PE (2:0/22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z))

## D. Uji Pendahuluan Antimikroba
Uji  pendahuluan  antimikroba  dilakukan  untuk  mengetahui potensi  bioaktivitas  ekstrak  spons Haliclona  cymaeformis. Fase n-heksana hasil partisi maserat metanol digunakan untuk uji  antimikroba  terhadap  dua  kultur  mikroba. Staphylococcus
aureus sebagai  bakteri  gram  positif  dan Escherichia coli sebagai  bakteri  gram  negatif.  Metode  difusi  agar digunakan karena  memiliki  tingkat  ketelitian  cukup  tinggi dengan  metodologi  sederhana.  Daya  hambat  ekstrak  spons Haliclona  cymaeformis ini dapat  diketahui dari diameter area yang  lebih  jernih.  Koloni  mikroba  ditunjukkan  dengan kekeruhan  pada  media  agar.  Fase  pekat  n-heksana  dilarutkan dengan  dua  macam  pelarut  yaitu  n-heksana  dan  metanol. Antibiotik  streptomycin  digunakan  sebagai  kontrol  positif, sedangkan  kontrol  negatif  menggunakan  masing-masing pelarut.  Tabel  2 menunjukkan  zona  hambat  masing-masing sampel uji.
Tabel2Pengamatan zona hambat di sekitarkertascakram
Sampel Zona Hambat (mm) Metanol n-Heksana S. aureus E. coli S. aureus E. coli Ekstrak H.cymaeformis 14 9,5 6,5 0 Streptomycin (kontrol +) 19,5 20 19 18,5 Pelarut (kontrol –) 11,5 0 0 0
Berdasarkan  zona  hambat  yang  terbentuk  diketahui  bahwa ekstrak Haliclona  cymaeformis mempunyai  aktivitas antimikroba  yang  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  antibiotik streptomycin , baik dengan pelarut metanol maupun n-heksana. Daya  hambat  pertumbuhan  mikroba  dengan  pelarut  metanol menunjukkan  aktivitas  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan pelarut  n-heksana,  bahkan  metanol  sebagai  kontrol  negatif mempunyai  daya  hambat  terhadap  mikroba.  Senyawa metabolit  dari  ekstrak  spons Haliclona  cymaeformis lebih mudah larut dalam metanol sehingga mempunyai efek inhibitor pertumbuhan  bakteri  lebih  baik.  Pelarut  metanol  juga cenderung  mempunyai  daya  hambat  terhadap  bakteri  apabila metanol  tersebut  berkonsentrasi  tinggi,  seperti  yang  terlihat pada  kontrol negatif metanol terhadap bakteri Staphylococcus aureus .  Kemampuan  daya  hambat  tersebut  dapat  dikurangi apabila  digunakan  pelarut  metanol  dengan  konsentrasi  lebih rendah [14].
Tabel 2 menunjukkan aktivitas hambat yang lebih baik pada bakteri Staphylococcus aureus. Bakteri  gram  positif  seperti Staphylococcus aureus mempunyai  struktur  dinding  sel  yang tebal  sekitar  15–80  nm  dan  berlapis  tunggal.  Dinding  sel tersebut memiliki kandungan lipid yang rendah dan 90 % berat dinding sel merupakan peptidoglikan. Escherichia coli sebagai bakteri gram negatif mempunyai struktur dinding sel tipis (10- 15  nm),  berlapis  tiga  (lipopolisakarida,  lipoprotein,  dan peptidoglikan)  dengan  kandungan  lipid  tinggi.  Senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak Haliclona  cymaeformis dapat menyebabkan  kerusakan  pada  dinding  bakteri  gram  positif dengan  mekanisme  peningkatan  permeabilitas  membran  sel yang  menyebabkan  keluarnya  materi  intraseluler  [15].  Tiga lapis  dinding  sel  pada  bakteri  gram  negatif  lebih  tahan
terhadap  aktivitas inhibitor  ekstrak karena adanya mekanisme seleksi zat-zat asing pada lapisan lipopolisakarida [16].
Senyawa golongan fosfolipid dan glikolipid telah terbukti mempunyai  potensi  bioaktivitas.  Senyawa  fosfolipid  yang dihasilkan  oleh  bakteri Bacillus  subtilis dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif  dengan daya  inhibitor  paling  baik  pada S.  aureus [17].  Senyawa glikolipid  seperti  caminosida  yang  diisolasi  dari  spons Caminus  sphaeroconia juga  mempunyai  kemampuan  hambat bakteri,  namun  terbatas  pada  bakteri  gram  positif  [18]. Rujukan [19] memaparkan bahwa potensi bioaktivitas senyawa fosfolipid  berkaitan  dengan  asam  lemak  yang  terasilasi  pada struktur  senyawa  tersebut,  terutama  asam  lemak  tak  jenuh jamak.

## IV. KAJIAN LIPID, BIOMARKA DAN BIOAKTIVITAS
Interpretasi  data  kromatogram  ion  total  beserta  spektra massa  masing-masing  dari  hasil  analisis  menggunakan instrumen  KC-SM,  diketahui  bahwa  golongan  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  metanol  spons  Haliclona cymaeformis  adalah  lipid.  Secara  umum  ada  dua  kelompok senyawa  lipid  yang  terkandung  dalam  setiap  fraksi,  yaitu fosfolipid  dan  glikolipid.  Dua  golongan  lipid  tersebut  adalah penyusun  utama  membran  biologis.  Beberapa  senyawa fosfolipid tersebut antara lain fosfatidiletanolamina (PE), asam fosfatidat  (PA),  dan  fosfatidilkolin  (PC).  Sedangkan  satu senyawa  glikolipid  adalah  digalaktosildiasilgliserol  (DGDG). Senyawa  PE  adalah  kelompok  senyawa  yang  paling  banyak ditemukan  pada  setiap  fraksi.  Hal  ini  bersesuaian  dengan pernyataan  yang  dikemukakan  oleh  rujukan  [20] bahwa senyawa  PE  adalah  penyusun  utama  fosfolipid  spons  laut. Kelimpahan  senyawa  PE  akan  mendukung  densitas  membran sel  karena  adanya  ikatan  hidrogen  antara  gugus-gugus etanolamina.  Membran  ini  menjadikan  spons  mampu beradaptasi  dengan  lingkungan  laut  dengan  perubahan  suhu ekstrim,  perubahan  salinitas  dan  tekanan,  serta  menahan  efek mutasi,  bakteri  dan  virus  patogen.  Adaptasi  yang  dilakukan spons  akan  menyesuaikan  habitat  dimana  spons  tersebut melekat,  sehingga  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  juga akan  berbeda  [20]. Senyawa  metabolit  sekunder  yang dihasilkan  oleh  spons Haliclona  cymaeformis di  habitat perairan Pulau Talango, Madura ini berbeda dengan spesimen Haliclona  cymaeformis yang  diteliti  dari  perairan  lain  [9], [10], [11], [12] karena bentuk adaptasi yang berbeda.
Perbandingan  dengan  senyawa  hasil  identifikasi  dari ekstrak  makroalga Ceratodictyon  spongiosum yang  diambil dari  perairan  yang  sama,  menunjukkan  adanya  kesamaan kelompok  senyawa,  yaitu  fosfolipid  dan  glikolipid  [21].  Dua spesies ini ditemukan pada  posisi berbeda dalam radius 10  m di  perairan  Pulau Talango,  Madura.  Hubungan  simbiosis antara  spons Haliclona  cymaeformis dan  makroalga Ceratodictyon  spongiosum belum  dapat  dipastikan  melalui kemiripan kelompok senyawa. Pengamatan secara visual pada morfologi spons Haliclona cymaeformis juga tidak ditemukan adanya  ramus  hijau  milik  makroalga Ceratodictyon
spongiosum .  Senyawa  fosfolipid  dan  glikolipid  merupakan penyusun  utama  membran  spons  dan  makroalga.  Senyawa glikolipid (DGDG) (2:0/13:0) dan DGDG
(18:2(2E,4E)/20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)) adalah senyawa yang dapat  ditemukan  pada  masing-masing  ekstrak  spons  dan makroalga  ini.  Kedua  spesies  tersebut  dapat  menghasilkan senyawa yang sama karena keduanya beradaptasi pada habitat yang  sama  dan  menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder yang identik sebagai mekanisme pertahanan diri.
Senyawa  yang  dipilih  sebagai  biomarka  makroalga Ceratodictyon spongiosum adalah asam arakhidonat (C20:4(n- 6)). Senyawa tersebut merupakan asam lemak tak jenuh jamak yang  menjadi  pembeda  kandungan  bahan  organik  antara  3 filum utama makroalga yaitu, Rhodophyta kaya dengan PUFA C20:4(n-6)  dan  C20:5(n-3),  Phaeophyta  C20:5(n-3)  dan C18:4(n-3), sedangkan Chlorophyta dominan dengan C18:3(n- 3) [21].Asam lemak dalam organisme hidup merupakan gugus asil  yang  terikat  pada  struktur  kompleks  lipid.  Organisme hidup  hanya  mempunyai  sedikit  asam  lemak  bebas.  Dalam struktur  fosfolipid  dan  glikolipid  yang  diperoleh  dari  ekstrak spons ini, ditemukan asam lemak beragam jenis yang terasilasi pada posisi sn-1 maupun sn-2. Asam lemak yang dibiosintesis dalam  spons  bergantung  pada  makanan  yang  dimakan  dan mikroorganisme  yang  hidup  bersimbiosis.  Oleh  karena  itu, komposisi  asam  lemak  yang  terekstrak  dari  spons  berkaitan dengan  komposisi  asam  lemak  dari  makanan  dan mikroorganisme  simbionnya.  Adanya  keterkaitan  tersebut membuat  asam  lemak  dapat  dijadikan  suatu  biomarka  [22]. Apabila diamati pada setiap fraksi yang dianalisis, asam lemak khas  yang  sering  ditemukan  adalah  C18:3(6Z,9Z,12Z)  dan C22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z).  Asam  lemak  C18:3(6Z,9Z,12Z) terasilasi  pada  struktur  asam  fosfatidat  (PA)  dan  asam  lemak C22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z) pada struktur fosfatidiletanolamina (PE). Berdasarkan analisis struktur yang dilakukan,  maka  kemungkinan  dua  senyawa  tersebut merupakan biomarka untuk spesies Haliclona cymaeformis ini.

## V. KESIMPULAN DAN SARAN

## A. Kesimpulan
Analisis  yang  dilakukan  terhadap  fase  n-heksana  dari ekstrak  metanol  spons Haliclona  cymaeformis menunjukkan bahwa ekstrak spons ini mengandung lipid golongan fosfolipid dan  glikolipid.  Beberapa  kelompok  senyawa  yang  termasuk fosfolipid  adalah  asam  fosfatidat  (PA),  fosfatidilkolin  (PC), dan  fosfatidiletanolamina  (PE).  Sedangkan  satu  senyawa glikolipid  adalah  digalaktosildiasilgliserol  (DGDG).  Senyawa asam
fosfatidat (3:0/18:3(6Z,9Z,12Z)) dan
fosfatidiletanolamina
(2:0/22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z))
merupakan  dua  senyawa  yang  banyak  ditemukan  pada  setiap fraksinya dan berpotensi digunakan sebagai biomarka.
Uji  bioaktivitas  yang  dilakukan  terhadap  ekstrak  spons Haliclona  cymaeformis dari  perairan  Pulau  Talango,  Madura menunjukkan adanya aktivitas inhibitor terhadap bakteri gram positif Staphylococcus  aureus dan  gram  negatif Eschericia
coli .

## B. Saran
Perlu  dilakukan penelitian lanjut terhadap  fraksi lain untuk proses  ekstraksi  spons Haliclona  cymaeformis untuk mengetahui hubungan simbiosis dengan makroalga Ceratodictyon spongiosum melalui pendekatan biomarka.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima kasih disampaikan kepada  DIKTI  atas dana penelitian dan Center for Marine Natural Products and Drugs Discovery,  Seoul  National  University  atas  kerjasama  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Simmons T. L., Andrianasolo E., McPhail K., Flatt P. dan Gerwick W. H.  (2005)  Marine  Natural  Products  as  Anticancer  Drugs.  Mol  Cancer Ther 4, 333–342.
[2] Thakur N. L., Thakur A. N. dan Muller W. E. G. (2005) Marine Natural Products in Drug Discovery. Nat. Prod. Rad 4, 471–477.
[3] Hussain  M.  S.,  Fareed  S.,  Ansari  S.  dan Khan  M.  S.  (2012)  Marine Natural  Products:  A  Lead  for  Anticancer.  Indian  J.  Geo-Mar.  Sci.  41, 27–39.
[4] Taylor  M.  W.,  Radax  R.,  Steger  D.  dan Wagner  M.  (2007)  Sponge- Associated  Microorganisms:  Evolution,  Ecology,  and  Biotechnological Potential. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 71, 295–347.
[5] Ebada S. S. dan Proksch P. (2012) The Chemistry of Marine Sponges. In Handbook of Marine Natural Products (ed. E. Fattorusso). Springer, London. p. 191.
[6] Bergé J.-P. dan Barnathan G. (2005) Fatty Acids from Lipids of Marine Organisms:  Molecular  Biodiversity,  Roles  as  Biomarkers,  Biologically Active  Compounds,  and  Economical  Aspects.  Adv.  Biochem. Engin./Biotechnol. 96, 49–125.
[7] Azzini  F.,  Calcinai  B.,  Cerrano  C.  dan Pansini  M.  (2008)  Symbiotic Associations  of  Sponges  and  Macroalgae:  The  Case  of Haliclona (Gellius)  cymaeformis and Ceratodictyon  spongiosum from  the  Ha Long Bay (Vietnam). Biol. Mar. Mediterr. 15, 248–249.
[8] Trautman  D.  A.,  Hinde  R.  dan Borowitzka  M.  A.  (2000)  Population dynamics  of  an  association  between  a  coral  reef  sponge  and  a  red macroalga. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 244, 87–105.
[9] Akiyama  T.,  Ueoka  R.,  van  Soest  R.  dan Matsunaga  S.  (2009) Ceratodictyols,  1-Glyceryl  Ethers  from  the  Red  Alga-Sponge Association Ceratodictyon  spongiosum/Haliclona cymaeformis . J. Nat. Prod. 72, 1552–1554.
[10] Wattanadilok  R.,  Sawangwong P.,  Rodrigues C.,  Cidade H., Pinto  M., Pinto E., Silva A. dan Kijjoa A. (2007) Antifungal Activity Evaluation of  the  Constituents  of Haliclona  baeri and Haliclona  cymaeformis , Collected from the Gulf of Thailand. Mar. Drugs 5, 40–51.
[11] Tan L. T., Williamson R. T., Gerwick W. H., Watts K. S., McGough K. dan Jacobs  R.  (2000)  cis,cis- and  trans,trans-Ceratospongamide,  New Bioactive  Cyclic  Heptapeptides  from  the  Indonesian  Red  Alga Ceratodictyon  spongiosum and  Symbiotic  Sponge Sigmadocia symbiotica . J. Org. Chem. 65, 419–425.
[12] Bugni  T.  S.,  Concepcion  G.  P.,  Mangalindan  G.  C.,  Harper  M.  K., James  R.  D.  dan Ireland  C.  M.  (2002)  p-Sulfooxyphenylpyruvic  acid from  the  Red  Macro  Alga Ceratodictyon  spongiosum and  its  Sponge Symbiont Haliclona cymaeformis . Phytochemistry 60, 361–363.
[13] Kind T., Liu K.-H., Lee D. Y., DeFelice B., Meissen J. K. dan Fiehn O. (2013) LipidBlast in silico tandem mass spectrometry database for lipid identification. Nat. Methods 10, 755–758.
[14] Wadhwani T., Desai K., Patel D., Lawani D., Bahaley P., Joshi P. dan Kothari  V.  (2008)  Effect  of  various  solvents  on  bacterial  growth  in context  of  determining  MIC  of  various  antimicrobials.  Internet  J. Microbiol. 7.
[15] Judianti  O.  W.  D.,  Fiqri  M.  M.,  Ansyori  M.  K.  dan Trimulyono  G. (2014)  Aktivitas  Antibakteri  Isolat  Bakteri  yang  Berasosiasi  dengan
Spons Demospongiae dari Pantai Paciran Lamongan. Sains Mat. 2, 49– 53.
[16] Zuhud  E.  A.  M.,  Rahayu  W.  P.,  Wijaya  C.  H.  dan Sari  P.  P.  (2001) Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Kedawung ( Parkia roxburghii G. Don ) terhadap Bakteri Patogen. J. Teknol. dan Ind. Pangan 12, 6–12.
[17] More  S.  M.,  Shinde  V.  A.,  Saiqua  K.,  Girde  A.  V.  dan Pawar  V.  N.
(2012) Antimicrobial Activity of Phospholipid Compound Produced by Acidophilic Bacillus subtilis Isolated from Lonar Lake, Buldhana, India.
Res. J. Recent Sci. 1, 22–26.
[18] Linington R. G., Robertson M., Gauthier A., Finlay B. B., MacMillan J. B., Molinski T. F., Soest R. van dan Andersen R. J. (2006) Caminosides B-D,  Antimicrobial  Glycolipids  Isolated  from  the  Marine  Sponge Caminus sphaeroconia . J. Nat. Prod. 69, 173–177.
[19] Khaselev  N.  dan Murphy  R.  C.  (1999)  Susceptibility  of  plasmenyl glycerophosphoethanolamine  lipids  containing  arachidonate  to oxidative degradation. Free Radic. Biol. Med. 26, 275–284.
[20] Djerassi C. dan Lam W.-K. (1991) Sponge Phospholipids. Acc. Chem. Res 24, 69–75.
[21] Ikrari K. I. (2015) Lipid Makroalga Ceratodictyon spongiosum : sebagai Biomarka  dan  Senyawa  Bioaktif.  Skripsi,  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember.
[22] Rod’kina S. A. (2005) Fatty Acids and Other Lipids of Marine Sponges.
Russ. J. Mar. Biol. 31, 49–60.