## EVALUASI KUALITAS SEMEN BEKU AKIBAT PERBEDAAN METODE LAMA EQUILIBRASI DAN LAMA PENURUNAN SUHU SELAMA PROSESING SEMEN
Melkianus L. Jadi, Max. A. Supit 1) , Damai Kusumaningrum, dan Andrijanto H. Angi 2)
1) Program Studi Produksi Ternak Politeknik Pertanian Negeri Kupang
2) Program Studi Kesehatan Ternak Politeknik Pertanian Negeri Kupang Jl. Adisucipto Penfui, P. O. Box. 1152, Kupang 85011

## ABSTRACT
The  research  is  experiment  in  laboratory  with  using  semen  from  3  Priangan  rams. The  experiment  use  completely  Randomized  Design  (CRD)  of  4  x  4  Faktorial  with three  Priangan  rams  as  replications.  The  treatment  are  equilibration  time  as  first faktor with level 1 hour, 2 hours, 3 hours, 4 hours, and freezing time as second faktor with level 4 minutes, 8 minutes, 12 minutes, and 16 minutes.
The variable observed is sperm motility, sperm abnormality, sperm membrane intact and  sperm  macrodome  intact  after  thawing.  Data  was  analysis  by  Analysis  of Variance and further analysis by Duncan’s Multiple Range Test (DMRT).
The result of experiment  show  that  treatment between 3  hours equilibration  and  12 minutes freezing time are the best significantly influence (P 0>01) with significantly (P >0,05)  with  significantly  interaction  between  two  factors  on  sperm  motility,  sperm membrane  intact  and  sperm  macrodome  intact  after  thawing  but  there  is  no interaction(P<0,05) for sperm abnormality after thawing.
Keywords: Equilibration, freezing, frozen semen.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  cara  untuk  meningkatkan  populasi  dan  perbaikan  mutu genetik  ternak  domba  adalah  dengan  mengembangkan  program  inseminasi buatan  secara  intensif  dan  berkesinambungan.  Inseminasi  buatan  merupakan teknologi perkembangbiakan yang sangat menunjang keberhasilan pengembangan populasi dan sekaligus perbaikan mutu genetik. Pejantan unggul sangat  terbatas  kemampuannya  mengawini  betina,  dengan  inseminasi  buatan yang  menggunakan  semen  yang  diencerkan  mampu  mengawini  jumlah  betina jauh lebih banyak.
Dalam  pelaksanaan  inseminasi  buatan  pada  ternak  domba  dapat dilakukan  secara  sederhana  yakni  dengan  menggunakan  semen  segar  hasil penampungan. Untuk dapat meningkatkan jumlah betina yang diinseminasi dari sekali penampungan semen perlu ditambahkan sejumlah bahan pengencer.
Pengencer yang dapat digunakan harus dapat menjamin kebutuhan  fisik dan kimia bagi kehidupan sperma serta dapat disimpan pada suhu dan kondisi tertentu  sehingga  mampu  mempertahankan  kehidupan  dan  fertilitas  sperma selama waktu yang diinginkan. Penambahan pengencer pada semen berkualitas baik  akan  sangat  bermanfaat  apabila  dilakukan  pengawetan  agar  dapat digunakan untuk mengawini betina secara inseminasi buatan diberbagai tempat dan  waktu.  Pengawetan  semen  pada  suhu  yang  sangat  rendah  (-196 o C) berpengaruh terhadap daya tahan hidup sperma, motilitas dan fertilitas sperma.
Semen yang telah diencerkan perlu dilakukan ekuilibrasi dan penurunan suhu  dalam  proses  pembekuan  semen.  Ekuilibrasi  dilakukan  agar  sperma beradaptasi  dengan  pengencer  yang  digunakan  sebelum  dilakukan  pembekuan semen. Lama ekuilibrasi yang terlalu singkat dapat menurunkan daya adaptasi sperma terhadap pengencernya, sebaliknya ekuilibrasi yang terlalu lama, maka sperma akan kehilangan banyak energi sehingga menurunkan aktivitas sperma. Dalam  proses  pembekuan  semen,  dilakukan  penurunan  suhu  secara gradual.  Lama  waktu  penurunan  suhu  menentukan  keberhasilan  pengolahan semen beku domba, selain itu juga penggunaan pengencer dan lama ekuilibrasi yang tepat. Pengolahan semen beku domba dikatakan berhasil apabila kualitas semen  dapat  dipertahankan  yang  dapat  diketahui  melalui  evaluasi  setelah thawing.
Penentuan  lama  ekuilibrasi  dan  lama  pembekuan  dalam  proses pembekuan  semen  domba  belum  ada  yang  dapat  dijadikan  standar  yang  baku guna diperoleh kualitas semen beku domba yang baik.

## METODE PENELITIAN
Untuk  memperoleh  semen  dilakukan  dengan  cara  penampungan,  tetapi untuk  menjaga  kualitas  semen  dalam  proses  pengenceran  dan  pembekuan semen,  maka  sebelum  penampungan  terlebih  dahulu  membuat  pengencer. Pengencer yang digunakan adalah sitrat-kuning telur. Menurut Toelihere (1985), 2,9  gram  Na  sitrat yang  dilarutkan  dalam 100  ml  aquabidest  dan  kuning  telur segar. Komposisi larutan Na sitrat 80% dan kuning telur 20% ditambah glycerol 7%, antibiotic streptomycin 1 mg dan penicilin 1000 iµ/ml pengencer.
Pengencer dibagi 2 bagian, dimana bagian 1 dibiarkan dalam suhu kamar sedangkan  bagian  2  ditambah  glycerol  7%  dari  total  pengencer,  kemudian dimasukkan ke dalam lemari es pada suhu 4-5 oC.
Setelah  pengencer  dibuat,  kemudian  dilakukan  penampungan  semen. Semen  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diambil  dari  3  ekor  domba  jantan yang  telah  dipersiapkan.  Penampungan  dilakukan  dua  kali  dalam  seminggu yakni  setiap  hari  Rabu  dan  Sabtu  pada  pukul  08.00  pagi.  Setelah  ditampung, langsung  dibawa  ke  laboratorium  untuk  dievaluasi  kuantitas  dan  kualitasnya secara makroskopik dan mikroskopis.
Perlakuan  dalam  penelitian  ini  adalah  lama  ekuilibrasi  sebabagai perlakuan (A) dengan tingkatan 1 jam (A1), 2 jam (A2), 3 jam (A3) dan 4 jam (A4). Sedangkan  perlakuan  B  adalah  Lama  Pembekuan  semen  dengan  tingkatan  4 menit  (B1),  8  menit  (B2),  12  menit  (B3)  dan  16  menit  (B4).  Semen  yang  akan digunakan  sebagai  perlakuan  adalah  semen  yang  memenuhi  syarat  kuantitas dan  kualitas.  Semen  3  ekor  pejantan  sebagai  ulangan.  Data  pengamatan  yang diperoleh  selanjutnya  dianalisis  dengan  Sidik  Ragam  klasifikasi  2  arah.  Model analisis  menurut  Gasperz  (1991).  Selanjutnya  apabila  di  dalam  Sidik  Ragam menunjukkan perbedaan nyata dilanjutkan dengan Uji Beda Nyata Jujur (HSD) Variabel  bebas  dalam  penelitian  ini  adalah  lama  ekuilibrasi  dan  lama pembekuan.  Sedangkan  kualitas  semen  beku  sebagai  variable  tidak  bebas. Kualitas semen beku sebagai variable tidak bebas adalah sperma motil progresif, abnormalitas  sperma,  keutuhan  membran  sperma  dan  keutuhan  acrosom sperma

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  varians  menunjukkan  bahwa  angka  motilitas  sperma domba hasil penelitian berkisar antara 30,40-48,97% tidak jauh berbeda dengan motilitas  sperma  domba  Priangan  hasil  penelitian  Rusdin  (1997)  dan  Lukman (1997) dimana masing-masing berkisar antara 35,00-43,00% dan 36,50-50,00%. Sperma  motil  dalam  penelitian  ini  dapat  digunakan  untuk  inseminasi  buatan pada domba betina, karena menurut Arifiantini dan Noordin (1990), semen yang mengandung  sperma  motil  lebih  dari  40%  setelah thawing cukup  layak  untuk inseminasi.
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan  perbedaan  yang  sangat  nyata  (P<0,01) antara  perlakuan  lama  ekuilibrasi  dan  antara  perlakuan  lama  pembekuan. Ditemukan  interaksi  yang  sangat  nyata  antara  kedua  perlakuan  tersebut. Dengan  perkataan  lain  lama  ekuilibrasi  dan  lama  pembekuan  saling mempengaruhi terhadap motilitas sperma domba setelah thawing . Hasil Uji Duncan, perlakuan ekuilibrasi tiga jam dengan lama pembekuan 12 menit dengan angka motilitas 48,97%, secara nyata lebih tinggi (P<0,01) dari perlakuan lainnya. Pada ekuilibrasi 3 jam, pengencer yang mengandung glycerol telah  berdifusi  dengan  sperma  menyebabkan  tercapainya  keseimbangan elektrolit di dalam dan di luar sel sperma. Keseimbangan ini sangat dibutuhkan sperma  pada  saat  proses  pembekuan  untuk  mencegah  terjadinya cold  shock yang berlebihan (Salamon dan Maxwell, 1987).
Ekuilibrasi  1  jam  dan  2  jam  kemungkinan  terlalu  singkat  bagi  sperma untuk  beradaptasi  dengan  pengencer,  sehingga  pada  saat  pembekuan  sperma mengalami cold  shock yang  menyebabkan  motilitas  sperma  menurun  drastis. Ekuilibrasi  4  jam  kemungkinan  terlalu  lama  bagi  sperma  untuk  beradaptasi dengan  pengencer,  karena  selama  ekuilibrasi  terjadi  metabolisme  sperma  yang terus  menerus  untuk  menghasilkan  energi.  Dengan  demikian,  ekuilibrasi  yang lama,  sperma  akan  kehilangan energi  yang  mengakibatkan  daya  tahan  sperma menurun.
Lama  pembekuan  mempengaruhi  motilitas  sperma  meskipun  semen berasal dari waktu ekuilibrasi yang sama. Lama pembekuan 12 menit dari suhu 5 o C  ke  -80 o C,  sperma  dapat  beradaptasi  lebih  baik  dengan  suhu  pembekuan, karena  lama  pembekuan  12  menit,  penurunan  suhu  berlangsung  secara perlahan-lahan  sehingga  sperma  tidak  mengalami cold  shock yang  berlebihan
Tabel  1.  Rata-rata  Motilitas  Sperma  setelah Thawing Hasil  Prosesing  dengan  Lama Ekuilibrasi dan Lama Pembekuan yang Berbeda
Lama Ekuilibrasi (jam) Mortalitas Sperma pada Lama Pembekuan (Menit) dalam % 4 (B1) 8 (B2) 12 (B3) 16 (B4) 1 jam (A1) 38,40 aA 38,87 aA 40,37 aA 40,20 aA 2 jam (A2) 39,53 aA 39,20 aA 41,47 aA 40,63 aA 3 jam (A3) 40,17 aA 45,60 bB 49,97 bC 43,77 bB 4 jam (A4) 38,80 aA 41,30 aA 42,40 aB 40,10 aA
Keterangan:   Angka yang diikuti huruf kecil yang sama pada lajur yang sama dan angka yang diikuti  huruf  kapital  yang sama  pada baris  yang  sama  menunjukkan perbedaan yang tidak nyata
dan  motilitas  sperma  dapat  dipertahankan  lebih  baik  dibandingkan  dengan perlakuan  lainnya.  Pada  lama  pembekuan  4  dan  8  menit,  sperma  mengalami cold  shock akibat  perubahan  suhu  yang  berlangsung  lebih  cepat  sehingga motilitas  menurun  bahkan  mengalami  kematian.  Sedangkan  pada  lama pembekuan  16  menit,  menyebabkan  terjadinya  kematian  sperma,  karena kemungkinan  terjadi  kerusakan  lipoprotein  dinding  sel  sperma  dan  perubahan permeabilitas  membran  sel  pada  saat thawing .  Menurut  Soeparman  (1979), pembekuan yang terlalu cepat dapat mengakibatkan cold shock terhadap sperma akibat  penurunan  suhu  yang  drastis,  dan  pembekuan  yang  lambat menyebabkan  konsentrasi  garam  meningkat,  karena  air  yang  membeku  keluar sehingga  menyebabkan  terjadinya  perubahan  tekanan  osmotic  dan  dapat merusak  lipoprotein  sperma.  Lipoprotein  yang  rusak  mengakibatkan  mantel pelindung pecah sehingga terjadi kebocoran substansi intraseluler yang vital dan mengakibatkan sperma kehilangan motilitas.
Pada  pengamatan  setelah  pencairan  kembali  ( thawing ),  ditemukan sperma yang abnormalitasnya sekunder dimana ditandai dengan kepala sperma terputus atau ekor terputus. Hasil pengamatan dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa  lama  ekuilibrasi  dan  lama pembekuan berpengaruh sangat nyata (P<0,01) terhadap abnormalitas sekunder sperma  setelah thawing tetapi interaksi  antara  kedua  perlakuan  tersebut  tidak nyata  (P>0,05).  Angka  abnormalitas  terendah  pada  tabel  2  terdapat  pada perlakuan lama ekuilibrasi 3 jam yaitu 3,32,diikuti berturut-turut makin tinggi pada lama ekuilibrasi 4jam yaitu 3,56%, dua jam yaitu 3,87%, dan abnormalitas tertinggi  pada  perlakuan  lama  ekuilibrasi  1  jam  yaitu  4,62%.  Rata-  rata persentase  abnormalitas  sperma  sekunder  dari  perlakuan  lama  pembekuan  12 menit, 8 menit, 16 menit dan 4 menit masing-masing: 3,50%, 3,74%, 3,76%, dan 4,36%.
Dari  Tabel  2  terlihat  bahwa  ada  perbedaan  yang  sangat  nyata  (P<0,01) lebih  baik  antara  lama  ekuilibrasi  3  jam  dan  4  jam  dengan  lama  ekuilibrasi  1 jam, demikian pula antara 1 jam dengan 2 jam, sedangkan antara ekuilibrasi 3 jam  dengan  ekuilibrasi  4  jam  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05).  Pada  lama ekuilibrasi  tiga  jam,  natrium  sitrat  dan  pengeceran  sitrat  kuning-telur-gliserol berfungsi  sebagai  penyangga  dengan  mengikat  logam-logam  seperti  kalsium, magnesium,  natrium  dan  potassium  yang  memecahkan  butir-butir  lemak menjadi  energi,  kuning  telur  yang  mengandung  lipoprotein  dan  lesithin berfungsi  melindungi  dan  mempertahankan  keutuhan  selubung  protein  sel
Tabel 2. Rata-rata Abnormalitas Sperma setelah Thawing Hasil Prosesing dengan Lama
Ekuilibrasi dan Lama Pembekuan yang Berbeda Lama Ekuilibrasi (jam) Lama Pembekuan (Menit) dalam % Rataan 4 (B1) 8 (B2) 12 (B3) 16 (B4) 1 jam (A1) 5,53 4,47 4,13 4,37 4,62 a 2 jam (A2) 4,33 3,90 3,43 3,80 3,87 b 3 jam (A3) 3,93 3,23 2,93 3,20 3,32 c 4 jam (A4) 3,67 3.37 3,53 3,67 3,56 c Rataan 4,36 a 3,74 b 3,50 b 3,76 b
Keterangan:  Angka yang diikuti huruf yang sama pada rataan lajur yang sama atau rataan baris yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak nyata
sperma dari cold shock . Gliserol pada lama ekuilibrasi tersebut berdifusi dengan menembus  dan  memasuki  sperma  untuk  menggantikan  air  yang  bebas  dan mendesak  keluar  elektrolit-elektrolit,  menurunkan  konsentrasi  elektrolit  intra selluller sehingga mengurangi daya perusak sperma pada saat pembekuan.
Hasil  perlakuan  lama  pembekuan,  tidak  terdapat  perbedaan  nyata (P>0,05)antara  lama  pembekuan  8  menit  (3,74%)  dengan  lama  pembekuan  12 menit 3,50% dan 16 menit3,76%, tetapi ketiga perlakuan berbeda sangat nyata (P<0,01)lebih  baik  dibandingkan  dengan  lama  p;embekuan  4  menit  (4,36%). Dengan melihat hasil tersebut, lama pembekuan 8 menit, 12 menit dan 16 menit cukup baik pengaruhnya terhadap abnormalitas sperma domba setelah thawing . Kisaran  lama  pembekuan  tersebut  ternyata  lebih  baik  bagi  sperma  dalam beradaptasi  dengan  perubahan  suhu  selama  pembekuan  dan  pengaruh cold shock yang  ditandai  dengan  ekor  sperma  bagian  tengah  dan  ekor  melipat  kea rah  kepala  sehingga  kepala  sperma  terlepas  dari  leher  atau  ekor  patah. Persentase abnormalitas hasil pengamatan cukup baik untuk suatu pengolahan semen beku domba. Angka yang diperoleh lebih baik dibandingkan dengan yang dinyatakan  Hafez  (1993)  bahwa  semen  domba  yang  mengandung  abnormalitas lebih  dari  15%  menunjukkan  fertilitas  rendah.  Sedangkan  menurut  Toelihere (1985)  apabila  persentase  abnormal  semen  14%,  maka  ternak  tersebut menunjukkan gejala infertil.
Hasil  pengamatan  setelah  pencairan  kembali  ( thawing) keutuhan membran sperma dapat dilihat pada Tabel 3.
Berdasarkan  hasil  sidik  ragam,  pengaruh  lama  ekuilibrasi  dan  lama pembekuan terhadap keutuhan membran sperma setelah thawing menunjukkan ada  perbedaan  yang  sangat  nyata  (P<0,01).  Interaksi  yang  nyata  antara  kedua faktor  perlakuan  yaitu  adanya  saling  mempengaruhi  terhadap  keutuhan membran  sperma  domba  setelah thawing .  Interaksi  terbaik  dan  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  pada  perlakuan  lama  ekuilibrasi  3  jam  dengan  lama pembekuan  12  menit  (48,70%)  seperti  yang  terlihat  pada  Tabel  3.  Dikuti  oleh perlakuan  ekuilibrasi  3  jam  dan  pembekuan  6  menit,  ekuilibrasi  4  jam  dan pembekuan 12 menit, ekuilibrasi 3 jam dan pembekuan 16 menit, ekuilibrasi 4 jam  dan  pembekuan  8  menit  masing-masing  44,07%,  42,00%,  41,47%,  dan 40,73%.  Persentase  terendah  adalah  pada  perlakuan  ekuilibrasi  1  jam  dan pembekuan 4 menit (35,50%).
Tabel 3.   Rata-rata  Keutuhan  Membran  Sperma  Domba  setelah Thawing Hasil
Prosesing dengan Lama Ekuilibrasi dan Lama Pembekuan yang Berbeda
Lama Ekuilibrasi (jam) Lama Pembekuan (Menit) dalam % 4 (B1) 8 (B2) 12 (B3) 16 (B4) 1 jam (A1) 35,50 aA 37,97 aB 38,67 aB 38,97 aB 2 jam (A2) 38,40 bA 38,67 aAB 40,80 acB 38,70 aAB 3 jam (A3) 39,53 bA 44,07 bB 48,70 bC 41,47 bDA 4 jam (A4) 38,00 bA 40,73 caB 42,00 cCB 39,07 abDAB
Keterangan:   Angka yang diikuti huruf kecil yang sama pada lajur yang sama dan angka yang diikuti  huruf  kapital  yang sama  pada baris  yang  sama  menunjukkan perbedaan yang tidak nyata
Persentase keutuhan membran tertinggi pada perlakuan 3 jam danpembekuan 12menit  yang  berbeda  sangat  nyata  (P<0,01)  lebih  baik  dari  pada  perlakuan lainnya.Karena  pada  kombinasi  perlakuan  tersebut  sperma  tidak  mengalami kerusakan membran yang berlebihan dimana selama ekuilibrasi tiga jam dapat mengurangi  perubahan  tekanan  osmotik  ,perubahan  pHdan  tercapainya keseimbangan  elektrolit  yang  terdapat  diluar  dan  didalam  sel  sperma  sehinga pada saat pembekuan selama 12 menit yang berlangsung secara perlahan-lahan dapat  mencegah  kerusakan  membran  sperma  secaar  drastic  terutama  ketika melewati titik kritis pada suhu (1,5sampai -30 o C). Membran sperma yang utuh akan  melindungi  enzim-enzim  yang  berperanan  dalam  fertilisasi  seperti hyarulonidase,  corona  penetrating  enzyme ,  acrosin  masih  dapat  dipertahankan (Setiadi,  dkk.  1992).  Pada  perlakuan  1  jam  dengan  laam  pembekuan  4  menit, sperma  mengalami cold  shock sehingga  terjadi  kerusakan  membran  tertinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya.  Sperma  yang  mengalami cold  shock akan  terjadi  peningkatan  kontraksi  lapisan  protein  sehingga  mantel  pelindung sperma  pecah  atau  membrane  menglami  kerusakan.  Jeyendran  dan  Zaneveld (1986)  menegaskan  bahwa  persentase  sperma  yang  mengembung  sebagai indikasi  sperma  yang  membrannya  utuh  mempunyai  hubungan  yang  erat dengan kemampuan penetrasi sperma secara in vitro.
Angka  persentase  keutuhan  membrane  hasil  pengamatan  ini  tidak  jauh berbeda dengan pengamatan Rusdin (1997) yaitu 45% dan Lukman (1997) yang memperoleh persentase keutuhan membrane tertinggi 49,70%.
Hasil pengamatan setelah pencairan kembali, keutuhan acrosome sperma domba dapat dilihat pada Tabel 4.
Hasil  sidik  ragam  pengaruh  lama  ekuilibrasi  dan  lama  pembekuan terhadap  keutuhan  acrosom  sperma  setelah thawing menunjukkan  perbedaan yang  sangat  nyata  (P<0,01)  terdapat  interaksi  yang  nyata  antaar  ke  2  faktor perlakuan  yaitu  adanya  saling  mempengaruhi  terhadap  keutuhan  acrosom sperma domba setelah thawing .  Interaksi  terbaik  terjadi  pada  perlakuan olama ekuilibrasi 3 jam dengan lama pembekuan 12 menit seperti yang terlihat pada  Tabel  4  yaitu  (44,73%)  diikuti  oleh  perlakuan  lama  ekuilibrasi  4  jam dengan  lama  pembekuan  12  menit, ekuilibrasi  3  jam  dengan lama  pembekuan 16 menit, ekuilibrasi 2 jam dengan lama pembekuan 12 menit, ekuilibrasi 3 jam dengan lama pembekuan 4 menit, masing-masing 43, 40%, 41,7%, 41,00%, dan 40,  93%.  Sedangkan  persentase  terendah  pada  kombinasi  perlakuan  lama ekuilibrasi 1 jam dengan lama pembekuan 4 menit (35,20%).
Tabel 4.   Rata-rata  Keutuhan  Akrosom  Sperma  Domba  setelah Thawing Hasil
Prosesing dengan Lama Ekuilibrasi dan Lama Pembekuan yang Berbeda
Lama Ekuilibrasi (jam) Lama Pembekuan (Menit) dalam % 4 (B1) 8 (B2) 12 (B3) 16 (B4) 1 jam (A1) 35,20 aA 37,27 aB 37,73 aB 37,80 aB 2 jam (A2) 37,00 bA 39,93 bB 41,00 bCB 38,70 baDB 3 jam (A3) 40,93 cA 44,33 bA 44,73 cB 41,07 cA 4 jam (A4) 39,73 cA 40,60 bA 43,40 cB 40,13 cbA
Keterangan:   Angka yang diikuti huruf kecil yang sama pada lajur yang sama dan angka yang diikuti  huruf  kapital  yang sama  pada baris  yang  sama  menunjukkan perbedaan yang tidak nyata
Keutuhan  acrosom  sperma  dapat  dipertahankan  lebih  baik  pada kombinasi  lama  ekuilibrasi  3  jam  dengan  lama  pembekuan  12  menit.  Hal  ini dapat  terjadi  karena  padqa  kombinasi  perlakuan  tersebut,  pengencer  sitrat kuning  telur  yang  mengandung  gliserol  dapat  berfungsi  dengan  baik  dalam melindungi  sel  sperma  terutama  pada  perubahan  tekanan  osmotikdan keseimbangan  elektrolit.  Karena  konsentrasi  elektrolit  yang  berlebihan  akan merusak  sel  sperma.  Ovivitelin  yang  terdapat  pada  kuning  telur  berfungsi melindungi mantel sel sperma pada bagian kepala sehingga tidak mudah terjadi kerusakan acrosom.
Kombinasi lama ekuilibrasi 1 jam dan lama pembekuan 4 menit dengan hasil  keutuhan  acrosom  terendah  (35,20%)  kemungkinan  waktu  ekuilibrasi terlalu  singkat  dengan  penuruhan  suhu  yang  cepat  menyebabkan  sperma mengalami  kerusakan  acrosom  ayng  berlebihan.  Kerusakan  ini  terjadi  karena acrosom sangat peka terhadap perubahan suhu yang mendadak. Menurut Perry (1969)  pada  bagian  acrosom  terdapat  ikatan  protein  mucopolisacharida  yang diduga  merupakan  bagian  dari  struktur  acrosom  yang  mudah  rusak  atau menyebabkan pembengkakan acrosom akibat penurunan suhu yang mendaadk. Keutuhan  membrane  sperma  terkait  erat  dengan  keutuhan  acrosom,  karena membrane  sebagai  mantel  pelindung  akan  melindungi  acrosom  akibat perubahahn  tekanan  osmotic,  perubahan  pH  atau  perubahan  suhu  pada  saat pepmbekuan dan thawing. Membran sperma yang mengalami kerusakan akibat cold shock menyebabkan terjadinya kebocoran substansi intra selluler yang vital terutama  pada  bagian  acrosom.  Keutuhan  membrane  tertinggi  pada  penelitian adalah  48,70%  (Tabel  3)  dan  keutuhan  acrosom  tertinggi  44,73%  (Tabel  4). Keutuhan  acrosom  lebih  rendah  dari  keutuhan  membran  karena  kerusakan akrosom  selain  akibat  kerusakan  membran  juga  karena  akibat  kerusakan protein  mucopolisacharida  pada  struktur  acrosom  akibat cold  shock sehingga terjadi pembengkakan atau kerusakan acrosom.
Angka  persentase  kerusakan  acrosom  dalam  penelitian  ini  tidak  jauh berbeda dengan hasil penelitian Valcarel, dkk. (1994) yakni persentase keutuhan acrosom  setelah thawing yang  menggunakan  pengencer  sitrat  kuning  telur adalah  42%.  Menurut  Toelihere  (1985)  persentase  keutuhan  acrosom  setelah thawing 42,67%  cukup  baik  untuk  keperluan  inseminasi.  Hafez  (1993)  dan Heras,  dkk.  (1996)  menyatakan  penilaian  terhadap  keutuhan  acrosom merupakan  indicator  untuk  mengetahui  kemampuan  sperma  membuahi  sel telur.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Perlakuan  lama  ekuilibrasi  tiga  jam  dengan  lama  pembekuan  12  menit menghasilkan  motilitas  sperma,  keutuhan  membran,  keutuhan  akrosom tertinggi  dan  angka  abnormalitas  terendah.  Terdapat  interaksi  antara  lama ekuilibrasi  dan  lama  pembekuan,  dimana  interaksi  terbaik  terdapat  pada perlakuan  lama  ekuilibrasi  tiga  jam  dan  lama  pembekuan  12  menit  terhadap motilitas sperma (48,97%), keutuhan membran sperma (48,70%) dan keutuhan akrosom  sperma  (44,73%)  setelah thawing, sedangkan  terhadap  abnormalitas sekunder  sperma  tidak  terdapat  interaksi  antara  lama  ekuilibrasi,  dan  lama pembekuan.presentase abnormalitas sekunder sperma untuk lama
ekuilibrasi,terdapat  pada  lama  ekuilibrasi  3  jam(3,32%)  dan  untuk  lama pembekuan pada 12 menit (3,50%)
Kombinasi  lama  ekuilibrasi  3  jam  dengan  lama  pembekuan  12  menit disarankan  untuk  digunakan  dalam  proses  pengolahan  semen  beku  domba. Perlu  dilakukan  peneletian  lanjutan  untuk  menguji  hasil  terbaik  dalam penelitian ini dengan melakukan inseminasi pada domba betina.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifiantini, I dan M. Noordin. 1990. Pembekuan semen pada beberapa ternak dan hewan  menggunakan  sistim  minitub .  Laporan  hasil  penelitian  Fakultas Kedokteran Hewan, IPB Bogor.
Gasperz, V. 1991. Metode perancangan percobaan. CV. Armico, Bandung. Heras, M. A. D. , A. Varcarel , C. Funus , L. Perez , D. F. Mozes. 1996. Changes in  sperm  bound  amidase  activity  suggest  subtile  damage  to  ram  sperm acrosomes by freezing thawing not detected by light microscopy . J. Animal Reprod. Sci. Vol. 45 No. 1. 61-89.
Hoesni,  F.  1997. Pengaruh  kadar  kuning  telur  dalam  berbagai  pengencer terhadap  kualitas  sperma  domba  pasca  pembekuan .  Thesis  Program Pascasarjana Universitas Padjadjaran, Bandung.
Lukman Hy. 1997. Pengaruh berbagai pengencer dan waktu ekuilibrasi terhadap keberhasil  pembekuan  semen  domba  Priangan .  Thesis  Program Pascasarjana Universitas Padjadjaran, Bandung.
Perry,  E.  J.  1969.  The  artificial  insemination  of  farm  animals.  New  Brunswich, New Jersey
Rusdin.  1997. Pengaruh  macam  pengencer  dan  lama  pembekuan  terhadap kualitas  sperma  domba .  Thesis  Program  Pascasarjana  Universitas Padjadjaran, Bandung.
Salomon, S. dan W. M. C. Maxwell. 1995. Frozen storage of ram semen processing freezing thawing and fertility after cervical insemination . J. Anim. Sci. N0. 37
Setiadi,  M.  A.,  I.  Supriatna  dan  I.  Arifiantini.  1992. Pengujian  kesuburan spermatozoa  saqpi  dengan  larutan  hipoosmotik. Prosiding  Lokakarya Penelitian  Komoditas  dan  studi  khusus  Vol.  1  Departemen  Pertanian bekerjasama dengan Dirjen Dikti, Jakarta.
Soeparna. 1979. Pengaruh berbagai konsentrasi glycerol dan lama penyimpanan sperma  manusia  yang  dibekukan  dalam  bentuk  butiran .  Thesis  Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Toelihere, M. R. 1985. Inseminasi Buatan pada ternak. Angkasa. Bandung Valcarel, A. M. , M. A. de las Heras, I. Perez, D. F. Mozes dan Baldassare. 1994.
Fluorscent staining as a method of assessing membrane damage and post thaw survival of ram spermatozoa . J. Theriogenelogy 41.