## SKRINING EKSTRAK JAMUR ENDOFIT DARI TANAMAN
MELINJO ( Gnetum gnemon L.) SEBAGAI KANDIDAT

## ANTIBAKTERI, ANTIJAMUR DAN ANTIOKSIDAN
Muhlisun Azim * , Puspawan Hariadi, Yuyun Febriani, Tri Puspita Yuliana
Program Studi Farmasi, Fakultas Kesehatan, Universitas Hamzanwadi, Jl. TGKH. Muhammad Zainuddin Abdul Madjid No. 132, Lombok Timur, Indonesia.
* Email: muhlisun.azim92@gmail.com
Received:15-10-2021 Accepted:08-11-2021 Published:30-06-2022

## INTISARI
Jamur endofit merupakan mikroorganisme potensial dalam penelusuran senyawa penuntun sebagai objek  riset  kandidat  obat  antibakteri  dan  antijamur.  Mikroorganisme  ini  dapat  menghasilkan metabolit  sekunder  yang  beragam,  bahkan  dapat  diatur  sesuai  kebutuhan  peneliti.  Hal  tersebut merupakan  kelebihan  dari  jamur  endofit  yang  memiliki  kemampuan  respon  adaptasi  yang  baik. Penelitian ini bertujuan untuk mengeksplorasi aktivitas antibakteri, antijamur dan antioksidan dari jamur  endofit  ranting  pohon  Melinjo  ( Gnetum  gnemon L.)  secara  kualitatif.  Penelitian  ini menghasilkan 13 ekstrak jamur endofit potensial untuk penelusuran lebih lanjut. Berdasarkan hasil uji KLT dari ekstrak jamur endofit tersebut dengan pereaksi 10% vanilin dalam H 2 SO 4 menunjukkan senyawa-senyawa  yang  dominan  adalah  golongan  alkaloid  dan polifenol.  Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  jamur  endofit  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  kertas  cakram  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa sedangkan antijamur pada Candida albicans dan Aspergillus  clavatus .  Uji  kualitatif  antioksidan  dari  ekstrak  jamur  endofit  dengan  pereaksi semprot DPPH menunjukkan hasil positif terhadap 8 ekstrak jamur endofit. Skrining jamur endofit dari tanaman melinjo memberikan sumber jamur endofit yang potensial sebagai kandidat antibakteri, antijamur  dan  antioksidan  untuk  dikembangkan  dalam  eksplorasi  senyawa  bahan  alam  metabolit sekunder dari mikrobia.
Kata kunci : Antioksidan, Antimikroba, Ekstrak Metanol, endofit

## ABSTRACT
Endophytic fungi are potential microorganisms in lead compounds investigation as research objects for antibacterial and antifungal drug candidates. These microorganisms are able to produce various secondary metabolites, moreover they can even be regulated according to the needs of researchers. This is an advantage of endophytic fungi with good adaptability response. This study aims to explore the  antibacterial,  antifungal  and  antioxidant  activity  of  endophytic  fungi  from  the  branch  of  the Melinjo  tree  (Gnetum  gnemon  L.)  by  qualitative  analysis.  This  study  resulted  in  13  potential endophytic fungi extracts to be explored further for their compounds. Based on the results of the TLC test of the fungal extracts with 10% vanillin in H2SO4 as a reagent, it showed that the dominant compounds  were  alkaloids  and  polyphenols.  The  antibacterial  activity  test  of  extracts  of  the endophytic fungi was carried out by the disc diffusion agar method against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa bacteria, while antifungal agents were used for Candida albicans and Aspergillus clavatus.. Meanwhile, the qualitative test of antioxidants from fungal extracts using the DPPH spray reagent showed positive results of 8 fungal extracts. Screening of endophytic fungi from melinjo represented a source of endophytes  potential as antibacterial, antifungal and antioxidant to be developed in exploration of secondary metabolites from natural products of microbial.
Keywords : antioxidant, antimicrobial, methanol extracts, endophytes fungi
Nama : Muhlisun Azim Institusi : Program Studi Farmasi, Fakultas Kesehatan, Universitas Hamzanwadi,
Alamat institusi  : Jl. TGKH. Muhammad Zainuddin Abdul Madjid No. 132, Lombok Timur, Indonesia. E-mail : muhlisun.azim92@gmail.com

## PENDAHULUAN
Melinjo  merupakan  tanaman  yang  dapat  dikonsumsi  baik  pada  bagian  buah,  biji,  dan  daun serta  memiliki  manfaat  sebagai  antioksidan.  Ekstrak  biji  melinjo  kaya  akan  senyawa-senyawa stilbenoid seperti resveratrol seperti gnetin C dan kandungan senyawa glikosidanya, gnemonosida A dan  gnemonosida  D,  dan  juga  mengandung  trans-resveratrol  dan  glikosidanya, trans-piceid . Senyawa-senyawa ini dapat bertindak sebagai antioksidan serta aman untuk dikonsumsi karena tidak menunjukkan toksisitas secara signifikan (Kato, dkk 2009; Tatefuji dkk., 2014).
Melinjo pada habitatnya memiliki jamur endofit yang bersimbiosis secara mutualisme. Endofit merupakan mikroorganisme yang tahan terhadap stress lingkungan serta mampu beradaptasi dengan cepat. Tanaman ini memanfaatkan mekanisme pertahanan yang melibatkan endofit untuk beradaptasi dibawah stress lingkungan (Siswoyo dkk., 2021). Endofit telah banyak menyumbang peran dalam senyawa  bioaktif  untuk  terapi.  Endofit  juga  memiliki  peran  yang  sangat  signifikan  sebagai  agen biokontrol  untuk  mengurangi  efek  samping  pestisida  sekaligus  mengendalikan  penyakit  tanaman (Segaran  dan  Sathiavelu,  2019).  Kemampuan  endofit  sebagai  agen  biokontrol  tidak  lepas  dari kemampuan  respon  adaptasi  secara  cepat  dengan  memproduksi  metabolit  sekunder  sebagai pertahanan  terhadap  perubahan  iklim.  Faktor  lingkungan  dapat  memiliki  dampak  yang  signifikan terhadap jenis komunitas endofit dalam tanaman inang dan keberagaman metabolit sekunder serta bioaktivitasnya (Moghaddam dkk., 2021).
Eksplorasi senyawa bioaktif saat ini perlahan bergeser dan cenderung memanfaatkan mikroba sebagai  penghasil  senyawa  metabolit  sekunder  yang  memiliki  beberapa  keuntungan  seperti, pertumbuhan  yang  cepat,  dapat  bertahan  pada  lingkungan  ekstrim  serta  perubahan  kondisi lingkungan  mengakibatkan  produksi  metabolit  sekunder  yang  beragam,  selain  itu  juga  senyawa- senyawa  dari  bahan  alam  memainkan  peran  penting  sebagai  senyawa  penunjang  utama  dari  segi struktural sebagai kandidat obat (Berdigaliyev dan Aljofan, 2020).
Interaksi  antara  endofit  dengan  tanaman  inang  berdampak  pada  produksi  metabolit sekundernya.  Tanaman  inang  dan  endofit  saling  berinteraksi  secara  mutualisme  untuk mempertahankan  kelangsungan  hidupnya.  Produksi  senyawa  metabolit  antioksidan,  antibakteri, antijamur,  antiinflamasi  dan  insektisida  dapat  terjadi  dari  endofit  ataupun  tanaman  inang  endofit sebagai respon adaptasinya (Ogbe dkk., 2020). Jamur endofit dapat digolongkan sebagai organisme yang  mampu  memproduksi  senyawa exopolysaccharides .  Jenis  golongan  senyawa  ini  memiliki aktivitas biologis yang beragam seperti antioksidan, antitumor, antiinflamasi, antialergi dan prebiotik (Liu dkk, 2016).
Minimnya  eksplorasi  endofit  dalam  tanaman  melinjo  sebagai  hasil  dari  interaksi  endofit dengan  inang  dalam  pencarian  kandidat  antibakteri  dan  antijamur  menjadikan  penelitian  ini perlu dilakukan. Selain itu kemampuan adaptasi yang baik pada tanaman melinjo menjadikan tanaman ini kaya akan jamur endofit yang potensial dengan aktivitas yang beragam.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan mulai dari tahapan isolasi jamur, maserasi, uji kandungan kimia secara KLT dan bioaktivitas. Analisis kualitatif antioksidan dengan  pereaksi semprot DPPH mengadopsi metode Jha dkk., (2017).
Alat Autoklaf (BS-325 TOMY), Laminar air flow ( SANYO) , Sentrifuse evaporator (CVE-2000 EYELA), lempeng Kromatografi Lapis Tipis (KLT) (Merck), Rotary Evaporator (EYELA N1), dan alat-alat gelas.

## Sampel tanaman
Sampel  yang  digunakan  merupakan  ranting  kering  tanaman  melinjo  ( Gnetum  gnemon L . ) dengan metode random sampling pada lokasi yang sama sebagai sumber jamur endofit.

## Pembuatan media
Pembuatan  tiap  media  dilakukan  dengan  proses  yang  sama,  dimulai  dengan  pencampuran bahan-bahan  menggunakan magnetic  stirer ,  sterilisasi  dan  inkubasi.  Sterilisasi  dilakukan  dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C selama 20 menit. Sementara inkubasi media dilakukan di bawah sinar UV selama 24 jam. Berikut media-media yang digunakan :
i. Potato Dextrose Agar (PDA)
Media  PDA  dibuat  dengan  mencampurkan  40  g  bubuk  PDA,  bubuk  agarosa  15  g, kloramfenikol 0,2 g, dan 2 L aquades.
ii. Potato Dextrose Agar – Chloramphenicol and Cyclosporin A (PDA-CS)
Media  PDA-CS  dibuat  dengan  mencampurkan  40  g  bubuk  PDA,  bubuk  agarosa  15  g, kloramfenikol 0,2 g, dan 2 L aquades. Serbuk Cyclosporin A sebanyak 0,01 g dalam 1 mL metanol ditambahkan ke media agar setelah proses sterilisasi. iii. Arginine Glycerol Salt (AGS)
Media AGS dibuat dengan mencampurkan larutan gliserol (12,5 g), L (+) arginin hidroklorida (1 g), dipotassium hidrogen fosfat (1 g), natrium klorida (1 g), magnesium sulfat (0,5 g), besi (III) sulfat n-hidrat (0,01 g), tembaga (II) sulfat 5-hidrat (0,001g), seng sulfat 7-hidrat (0,001 g), mangan sulfat 4-5 hidrat (0,001 g), bubuk agar (15 g), sikloheksimida (0,01 g) dan aquades (1 L). iv. Peptone Yeast Glucose (PYG)
Media PYG dibuat dengan mencampurkan D+-Glukosa 10 g, pepton 5 g, ekstrak ragi 10 g, bubuk agarosa 15 g kemudian dilarutkan dalam 1 L aquades.
v. Beef Peptone Agar (BPA)
Media  BPA  dibuat  dengan  mencampurkan  ekstrak  daging  sapi  10  g,  pepton  10  g,  natrium klorida 5 g, dan bubuk agarose 15 g kemudian dilarutkan dalam 1 L aquades.

## Isolasi jamur endofit
Batang  sampel  tanaman  melinjo  dipotong  sekitar  1-2  cm  dan  dibelah  menjadi  dua  bagian disterilkan dengan etanol 70% selama 1 menit, NaOCl 5% selama 5 menit dan etanol 70% selama 1 menit.  Selanjutnya  dikeringkan  di  atas  tisu  di  dalam  LAF  clean  bench,  ruas  yang  sudah  kering ditempatkan di media PDA, PDA-CS dan AGS dan selanjutnya cawan petri disegel menggunakan parafilm serta diinkubasi dalam kondisi gelap pada suhu kamar selama 3-7 hari. Strain jamur yang muncul di setiap media disub-kultur di media PDA baru untuk diperoleh strain jamur murni.

## Pemurnian jamur endofit
Setiap koloni jamur endofit yang tumbuh dengan morfologi yang berbeda, diinokulasikan pada medium PDA baru sebanyak satu ose, kemudian diinkubasi pada suhu  25℃ selama 3 hari. Setiap koloni yang tumbuh diidentifikasi berdasarkan ciri-ciri makroskopik untuk dipastikan menjadi isolat murni.

## Penamaan strain jamur endofit
Setiap  isolat  jamur  murni  diberikan  penamaan  berdasarkan  media  yang  digunakan  untuk melakukan isolasi. Jamur murni yang berasal dari media AGS diberikan kode NA, dari media PDA diberikan kode PDA, dari media PDA-CS diberikan kode NP serta kode GG sebagai inisial ( Gnetum gnemon L. ). Angka yang tertera pada kode jamur murni merupakan urutan jumlah jamur yang dapat terisolasi.

## Fermentasi dan ekstraksi metabolit sekunder jamur Endofit
Semua  jamur  hasil  isolasi  pada  Media  PDA  dan  PDA-CS  berisi  jamur  murni  yang  sudah diisolasi, dipotong menjadi persegi 1 cm dan diinokulasi  ke media beras dalam tabung fermentor. Media beras ini memiliki komposisi 8 g beras mentah dalam 10 mL akuades. Tabung fermentor yang mengandung  semua  strain  jamur  yang  telah  diisolasi  ditutup  dengan  kapas  steril  dan  diinkubasi selama empat minggu. Selanjutnya jamur hasil fermentasi diekstraksi menggunakan metanol selama tiga hari. Ekstrak metanol dimasukkan ke dalam tabung microsentrifugasi untuk dikeringkan pada suhu 50 O C dengan sentrifuse evaporator.
Profil KLT dan uji kualitatif antioksidan
Skrining  kandungan  kimia  secara  KLT  terhadap  ekstrak  jamur  endofit  menggunakan  eluen kloroform:metanol (10:1) dengan visualisasi warna senyawa pada KLT menggunakan larutan vanilin 10% dalam asam sulfat. Sementara uji kualitatif antioksidan dilakukan dengan penyemprotan 2,2- difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) 0,2 mM dalam metanol.

## Uji aktivitas antimikroba
Aktivitas antimikroba dilakukan dengan metode difusi kertas cakram pada media agar terhadap Candida albicans (C.a) yang dianalisis pada media PYG dan Aspergilus clavatus (A.c) pada media PDA untuk penentuan aktivitas antijamur. Staphylococcus aureus (S.a) sebagai bakteri Gram positif dan Pseudomonas aeruginosa (P.a) sebagai bakteri Gram negatif dianalisis pada media BPA. Setiap ekstrak  kering  jamur  endofit  dilarutkan  dengan  metanol  40  µL  kemudian  disonikasi  30  detik  dan diteteskan pada kertas cakram berdiameter 8 mm kemudian dikeringkan pada ruangan tanpa terpapar sinar  matahari  selama  ±  3  jam  dan  diaplikasikan  pada  media  agar  yang  telah  dioleskan mikroorganisme patogen uji. Hasil aktivitas antibakteri dan antijamur dianalisis dengan mengukur diameter zona hambat pada media agar yang telah digoreskan bakteri dan jamur patogen tersebut.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh dari  hasil  uji aktivitas  antioksidan,  antibakteri  dan  antijamur  dianalisis secara deskriptif. Pada uji aktivitas antioksidan, ekstrak metanol yang aktif sebagai antioksidan akan menunjukkan  bercak  kuning  pucat  setelah  ±  10  menit  penyemprotan  (Jha  dkk . ,  2017).  Pada  uji aktivitas antijamur dan antibakteri dengan metode difusi agar kertas cakram dengan cara mengukur diameter zona hambat yang terbentuk di sekitar kertas cakram pada media agar yang telah digoreskan bakteri dan jamur patogen.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ranting kering melinjo yang dijadikan sebagai sumber jamur endofit merupakan ranting yang dipotong  dari  pohon  kemudian  dikeringanginkan.  Hal  ini  bertujuan  untuk  memberikan  adaptasi dalam hibernasi jamur endofit pada bagian jaringan tanaman inang melinjo.
Ranting  melinjo  yang  telah  dikumpulkan  selanjutnya  dilakukan  isolasi  jamur  endofit.  Pada tahap  ini  proses  isolasi  dimulai  dengan  melakukan surface  sterilization dengan  larutan  natrium hipoklorit  dan  etanol.  Sterilisasi  umumnya  merupakan  tahap  penghilangan  kapang  yang  masih menempel pada ranting ataupun bagian tanaman lainnya yang dijadikan sebagai sampel. Sterilisasi permukaan ini akan mengurangi kontaminasi terhadap permukaan ranting sehingga diperoleh jamur yang  tumbuh  sebagai jamur  endofit.  Metode  sterilisasi  permukaan  dengan  natrium  hipoklorit  dan etanol pada bagian tanaman stroberi khususnya pada pucuk dalam teknik kultur organotip oleh Jan dkk.,  (2013)  melaporkan  bahwa  metode  sterilisasi  permukaan  pada  tanaman  strawberry menggunakan larutan etanol dan natrium hipoklorit dengan durasi waktu berbeda akan mengurangi kontaminasi, namun sterilisasi dengan durasi yang lama akan memberikan kerusakan jaringan pada sampel.  Berdasarkan  pernyataan tersebut  proses  sterilisasi  dilakukan  dengan  menggunakan  etanol dan natrium hipoklorit dengan durasi sterilisasi pada natrium hipoklorit dipersingkat selama 5 menit untuk menghindari kerusakan jaringan pada endofit yang bersimbiosis pada jaringan tanaman sampel (melinjo).
Proses isolasi jamur endofit sangat memperhatikan kemurnian kultur jamur endofit. Koleksi dilakukan  dengan  mengamati  perbedaan  morfologi  dari  jamur  endofit  yang  tumbuh  pada  3  jenis media  yang  digunakan.  Penyaringan  dan  pengelompokkan  jamur  endofit  diamati  berdasarkan morfologinya  yang  teramati  secara  makroskopik  atau  tampak  mata  mulai  dari  pola  pertumbuhan, hifa, warna koloni dan medianya, tekstur permukaan dan miselium (Fitriarni dan Kasiamdari, 2018). Hasil isolasi jamur endofit dapat dilihat pada gambar 1.
Isolasi  jamur  endofit  menggunakan  3  jenis  media  yang  berbeda  menghasilkan  13  jamur endofit. Penggunaan media yang berbeda bertujuan untuk memperoleh keberagaman spesies jamur endofit. Kultur jamur  endofit  menggunakan  3  jenis  media  yaitu  media  PDA  dengan  kode  awalan pada  strain  jamur  PDA,  media  PDA-CS  dengan  kode  awalan  NP  dan  media  AGS  dengan  kode awalan  NA,  namun  dominan  dihasilkan  jamur  endofit  dari  media  AGS.  Media  AGS  merupakan media yang kaya akan sumber nutrisi, hal ini menyebabkan media AGS menghasilkan jamur endofit yang  lebih  beragam.  Keberagaman  jenis  media  kultur  suatu  endofit  juga  akan  menentukan  hasil endofit yang dapat diisolasi (Eevers dkk., 2015).
Gambar 1. Hasil isolasi jamur endofit dengan 3 media kultur berbeda
Jamur-jamur yang dapat diisolasi dan teridentifikasi dengan morfologi berbeda diberikan kode tertentu. Jamur-jamur endofit tersebut diantaranya NP-GG-11-1, NA-GG-6-C, NP-GG-4-2, NA-GG- 9-H, NA-GG-8-I, NA-GG-5-B, NA-GG-5-D, NA-GG-3-J, NP-GG-8-3, NA-GG-5-C-1, NA-GG-11- G, NA-GG-5-C-2, PDA-GG-1. Hasil identifikasi jamur endofit tampak pada gambar 2.
Gambar 2. Profil senyawa kimia dan skrining antioksidan berbasis KLT dari ekstrak metanol jamur endofit.
A1, A2, A3 : Profil senyawa kimia
B1, B2, B3 : Hasil uji kualitatif antioksidan dengan DPPH
: Area spot berwarna kuning pada uji kualitatif antioksidan dengan DPPH
A1 B1 B2 A2 B3
A3
Isolat murni jamur endofit difermentasi dengan beras coklat yang masih mengandung kulit ari dari  biji  padi.  Penggunaan  jenis  beras  yang  seperti  ini  dimaksudkan  supaya  ketika  dilakukan sterilisasi menggunakan autoklaf, media beras tersebut tidak mengabsorbsi air terlalu banyak yang dapat menghambat pertumbuhan jamur ketika dilakukan fermentasi. Kulit ari pada biji padi ini dapat menahan  absorbsi  air  yang  berlebih  dari    komposisi  media  yang  mengandung  air.  Sementara penggunaan  metanol  sebagai  pelarut  disebabkan  metanol  memiliki  gradien  ekstraksi  yang  lebih universal jika dibandingkan etanol dalam fitokimia endofit karena dapat melarutkan senyawa polar ataupun non polar. Metanol selain itu, tidak menyerap air dan mampu membentuk azeotrop dengan air. Selain itu juga gugus polar (OH) dan non polar (CH 3 ) pada pelarut metanol memiliki perbedaan momen  dipol  yang  tidak  terlalu  jauh  antara  kedua  gugus  tersebut  sehingga  metanol  memberikan gradien ekstraksi yang universal melalui dua cara yaitu interaksi Van der Walls untuk gugus non- polar dan interaksi ikatan hidrogen untuk gugus polar (Dias dkk., 2019). Penggunaan pelarut metanol dalam  ekstraksi  metabolit  sekunder  akan  memberikan  total  ekstrak  terbaik  terhadap  golongan senyawa seperti fenol alami dan flavonoid yang umumnya memiliki aktivitas antioksidan misalnya pada tanaman Severinia buxifolia dan beluntas (Truong dkk., 2019; Mahasuari dkk., 2020). Ekstrak  metanol  dari  13  jamur  endofit  yang  diperoleh  selanjutnya  diidentifikasi  sebaran senyawanya dalam KLT dengan eluen kloroform : metanol (10:1) menggunakan reagen penyemprot 10%  vanilin  dalam  asam  sulfat  pekat.  Reagen  tersebut  digunakan  karena  merupakan  reagen universal. Berdasarkan hasil KLT pada Gambar 2, A1-A3 terlihat warna spot yang muncul adalah merah, kuning, ungu, hitam hingga  kecoklatan sebagai profil senyawa kimia. Pada lempeng KLT B1-B3 merupakan profil hasil uji kualitatif antioksidan dan warna spot kuning pucat menunjukkan bahwa  ekstrak  tersebut  mengandung  senyawa  yang  aktif  sebagai  antioksidan  (Jha  dkk.,  2017). Sebaran warna spot pada A1-A3 tersebut menunjukkan  profil senyawa  ekstrak jamur endofit dari tanaman melinjo dengan reagen universal vanilin-H 2 SO 4 mendeteksi keberadaan senyawa golongan steroid, alkohol rantai panjang, fenol dan minyak atsiri. Ekstrak metanol dari tiga belas jamur endofit yang diujikan antioksidan secara kualitatif, dihasilkan ada 8 ekstrak metanol jamur endofit yang aktif. Delapan jamur endofit yang aktif sebagai antioksidan dapat dilihat pada Tabel 1.
Warna kuning pucat yang terbentuk dari spot tersebut merupakan hasil dari pergeseran Panjang gelombang  dari  daerah  ultraviolet  menuju  daerah visible akibat  interaksi  senyawa  yang  memiliki kemampuan menangkap radikal bebas dari DPPH dan terstabilkan oleh resonansi yang ada dalam molekul atau senyawa metabolit sekunder dari ekstrak  metanol sehingga Panjang  gelombang dari ekstrak  metabolit  sekunder  lebih  besar  dan  memunculkan  warna  kuning  pucat.  Mekanisme  hal tersebut  dapat  dijelaskan  melalui  mekanisme  reaksi  pada  Gambar  3  berikut  ini  (Stochmal  dkk., 2012).
Tiga  belas  ekstrak  metanol  dari  hasil  fermentasi  jamur  endofit  yang  diperoleh  memiliki aktivitas antibakteri dan antifungi, sedangkan 8 diantaranya menunjukkan hasil yang positif sebagai antioksidan. Pada Tabel I ini menyajikan hasil uji aktivitas antimikroba terhadap bakteri dan fungi serta aktivitas antioksidan dari 13 jamur endofit.
Gambar 3. Skema interaksi terbentuknya spot kuning ekstrak positif antioksidan
Tabel I. Hasil uji aktivitas antimikroba terhadap C.a = Candida albicans , P.a = Pseudomonas aeruginosa , S.a= Staphylococcus aureus ,  A.c = Aspergillus clavatus dan aktivitas antioksidan dari 13 jamur endofit No Kode Strain Jamur Endofit Antibakteri Antijamur Antioksidan S.a mm P.a mm C.a mm A.c mm 1 NP-GG-11-1 12 12 - - Aktif 2 NA-GG-6-C 16 - - - Aktif 3 NP-GG-4-2 15 18 - 18 Aktif 4 NA-GG-9-H 20 20 - - - 5 NA-GG-8-I 18 14 - - Aktif 6 NA-GG-5-B 12 13 - 17 Aktif 7 NA-GG-5-D 18 17 - - - 8 NA-GG-3-J 15 - 14 - - 9 NP-GG-8-3 13 18 - - Aktif 10  NA-GG-5-C-1 17 17 - 12 - 11  NA-GG-11-G 28 10 - - Aktif 12  NA-GG-5-C-2 19 15 - - - 13  PDA-GG-1 20 11 - 16 Aktif
Hasil  uji  aktivitas  antimikroba,  menunjukkan  semua  strain jamur  endofit  memiliki  aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri S. aureus , 11 jamur endofit aktif terhadap bakteri P. aeruginosa, 4 jamur endofit aktif terhadap fungi A. clavatus dan 1 fungi endofit aktif terhadap C. albicans sebagai antibakteri  dan  antijamur.  Jamur  endofit  sebagai  bagian  dari  pertahanan  tumbuhan  terhadap predatornya juga dapat memiliki aktivitas biologis yang serupa dengan ekstrak tanaman inangnya. Selain  itu  jamur  endofit  merupakan  sumber  yang  potensial  untuk  dieksplorasi  dalam  skrining fitokimia dan isolasi senyawa baru dengan kerangka struktur kimia yang baru (Astuti dkk., 2014 ; Liu dkk. 2020). Jamur endofit dalam  mekanisme pertahanan  tanaman inangnya  terhadap predator akan memproduksi senyawa metabolit sekunder tanpa merusak jaringan tanaman inang. Metabolit sekunder  yang  dapat  dihasilkan  dalam  mekanisme  pertahanan  terhadap  predator  dapat  berupa senyawa  golongan  metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  terpenoid,  turunan  isocoumarin,  kuinon, flavonoid, metabolit terklorinasi, fenol dan asam fenolik dan banyak lainnya (Kaur, 2020).
Pada penelitian ini tidak dilakukan uji terhadap kontrol positif sebagai pembanding. Hal ini sesuai dengan tujuan  penelitian  untuk  melakukan  skrining  dan  uji  kualitatif  terhadap strain jamur untuk dilakukan kajian lebih lanjut. Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan dalam mengidentifikasi jenis  spesies  jamur  endofit  serta  isolasi  senyawa-senyawa  bioaktif  yang  bertindak  sebagai antibakteri, antijamur dan antioksidan baik secara kromatografi kolom ataupun lebih modern dengan kromatografi cair kinerja tinggi.

## KESIMPULAN
Jamur  endofit  yang  bersimbiosis  dengan  ranting  tanaman  melinjo  memiliki  potensi  sebagai antibakteri, antijamur dan antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti, P., Wahyono., dan Nababan, O. A, 2014, Antimicrobial and cytotoxic activities of endophytic fungi  isolated  from Piper  crocatum Ruiz  &amp,  Pav. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine , 4(Suppl 2), S592–S596.
Berdigaliyev, N., dan Aljofan, M, 2020, An overview of drug discovery and development, Future Medicinal Chemistry , 12(10), 939–947.
Dias, R. F., da Costa, C. C., Manhabosco, T. M., de Oliveira, A. B., Matos, M. J. S., Soares, J. S., dan  Batista,  R.  J.  C,  2019,  Ab  initio  molecular  dynamics  simulation  of  methanol  and acetonitrile:  The  effect  of  van  der  Waals  interactions, Chemical  Physics  Letters , 714(November 2018), 172–177.
Eevers, N., Gielen, M., Sánchez-López, A., Jaspers, S., White, J. C., Vangronsveld, J., dan Weyens,
N, 2015, Optimization of isolation and cultivation of bacterial endophytes through addition of plant extract to nutrient media, Microbial Biotechnology , 8(4), 707–715.
Fitriarni,  D.,  dan  Kasiamdari,  R.  S,  2018,  Isolation  and  Identification  of  Endophytic  Fungi  from Leave  and  Stem  of  Calopogonium  mucunoides, Journal  of  Tropical  Biodiversity  and Biotechnology , 3(1), 30.
Jan, A., Bhat, K. M., Mir, M. A., Bhat, M. A., dan Wani, I. A, 2013, Surface sterilization method for reducing  microbial  contamination  of  field  grown  strawberry  explants  intended  for  in  vitro culture, African Journal of Biotechnology , 12(39), 5749–5753.
Jha,  B.  N.,  Shrestha,  M.,  Pandey,  D.  P.,  Bhattarai,  T.,  Bhattarai,  H.  D.,  dan  Paudel,  B,  2017, Investigation of antioxidant, antimicrobial and toxicity activities of lichens from high altitude regions of Nepal, BMC Complementary and Alternative Medicine , 17(1), 282.
Kato, Eishin, Yuji Tokunaga, dan Fujio Sakan, 2009, Stilbenoids Isolated from the Seeds of Melinjo ( Gnetum  Gnemon L.)  and  Their  Biological  Activity,  Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry 57(6), 2544–49.
Kaur, Tamanreet, 2020, Fungal Endophyte-Host Plant Interactions: Role in Sustainable Agriculture, Sustainable Crop Production . IntechOpen.
Liu,  Jun.,  Xingchi  Wang.,  Huimin  Pu.,  Shuang  Liu.,  Juan  Kan.,  dan  Changhai  Jin,  2016,  Recent advances  in  endophytic  exopolysaccharides:  Production,  structural  characterization, physiological role and biological activity, Carbohydrate Polymers , 157 (2017), 1113-1124. Liu, Zhen., Jing-Yi Zhao., Sen-Feng Sun., Yong Li., dan Yun-Bao Liu, 2020, Fungi: Outstanding Source of Novel Chemical Scaffolds, Journal of Asian Natural Products Research, 22 (2): 99–120.
Mahasuari, N P Sinta., N L P Vidya Paramita., dan A A G R Yadnya Putra, 2020, Effect of Methanol Concentration as A Solvent on Total Phenolic and Flavonoid Content of Beluntas Leaf Extract ( Pulchea indica L .), Journal of Pharmaceutical Science and Application , 2 (2): 77–84. Moghaddam  M.S.H.,  Naser  S.,  Leho  T.  and  Niloufar  Hagh-Doust,  2021,  Diversity,  community composition  and  bioactivity  of  cultivable  of  fungal  endophytes  in  saline  and  dry  soils  in deserts, Fungal Ecology ,  29, 1-13.
Ogbe, A. A., Finnie, J. F., dan Van Staden, J, 2020, The role of endophytes in secondary metabolites accumulation in medicinal plants under abiotic stress, South African Journal of Botany , 134, 126–134.
Segaran, G., dan Sathiavelu, M, 2019, Fungal endophytes: A potent biocontrol agent and a bioactive metabolites reservoir, Biocatalysis and Agricultural Biotechnology , 21 (2), 1-10. Siswoyo, T. A., Arum, L. S., Sanjaya, B. R. L., dan Aisyah, Z. S, 2021, The growth responses and antioxidant  capabilities  of  melinjo  ( Gnetum  gnemon L.)  in  different  durations  of  drought stress, Annals of Agricultural Sciences , 66(1), 81–86.
Stochmal, A., Oleszek, W.,  Waksmundzka-hajnos, M., Cie, Ł., dan Krysze, J, 2012, Approach to develop a standardized TLC-DPPH• test for assessing free radical scavenging properties of selected phenolic compounds, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 70, 126– 135.
Tatefuji, T., Yanagihara, M., Fukushima, S., dan Hashimoto, K, 2014, Safety assessment of melinjo (Gnetum gnemon L.) seed extract: Acute and subchronic toxicity studies, Food and Chemical Toxicology , 67, 230–235.
Truong,  D.-H.,  Nguyen,  D.  H.,  Ta,  N.  T.  A.,  Bui,  A.  V.,  Do,  T.  H.,  dan  Nguyen,  H.  C,  2019, Evaluation of the Use of Different Solvents for Phytochemical Constituents, Antioxidants, and In Vitro Anti-Inflammatory Activities of Severinia buxifolia, Journal of Food Quality , 1–9.