## PERKEMBANGAN AKTIVITAS ENZIM PENCERNAAN LARVA IKAN KERAPU
RAJA SUNU ( Plectropomus laevis )

## DEVELOPMENT OF DIGESTIVE ENZYMES ACTIVITY ON BLACK SADDLED CORAL GROUPER (Plectropomus laevis) LARVAE
Bejo Slamet 1* dan Titiek Aslianti 1
1 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Budidaya Laut, Gondol-Bali. *E-mail: bedjoselamet@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Protease,  amylase,  and  lipase  enzymes  were  used  as  biological  indicators  to  measure  larvae’s  food digestion.  The  aim  of  this  study  was  to  describe  digestive  enzyme  activity  development  of  black saddled coral grouper (Plectropomus laevis) larvae. The just hatching larvae were reared in concrete tank  2x3x1  m 3 with  stocking  density  of  10  larvae/L.  In  the  larval  rearing  media  were  added  with Nanochloropsis  oculata  at  10 5 cel/ml  started  from  1  day  old  (D-1).  The  larvae  was  fed  with  rotifer (Brachionus rotundiformis) at 10-20 ind/ml started from D-2 and artificial diet from D-10. To analyze the protease, amylase, and lipase enzymes activities, samples were taken 0.5-1 g or about 1000 larvae on  D-3,  D-4,  D-6,  D-8  and  500  larvae  on  D-10,  D-12,  D-16,  and  D-20.  The  result  showed  that  the protease, amylase, and lipase  enzymes activity were positively correlated with the growth.  Digestive enzymes activity was increased when larvae started on endogenous feeding (D-3), become down on D- 6,  stable  on  D-8  to  D-10,  increased  on  D-12,  and  reached  the  highest  level  on  D-16.  Digestive enzymes  activity  was  higher  when  larvae  started  feeding  with  artificial  diet  compared  to  the  larvae before feeding with artificial diet.
Keywords: digestive enzymes, development, larvae, blacksaddled coral grouper

## ABSTRAK
Enzim protease, amilase dan lipase merupakan indikator biologis yang dapat menunjukkan kesesuaian jenis  pakan  yang  dikonsumsi  larva  melalui  kemampuannya  untuk  mencerna.  Penelitian ini  bertujuan untuk  mengevaluasi  perkembangan  aktivitas  enzim  pencernaan  larva  ikan  kerapu  raja  sunu ( Plectropomus  laevis ).  Larva  yang  baru  menetas  dipelihara  di  bak  beton  ukuran  2x3x1m  dengan kepadatan  10  ekor/L.  Pada  wadah  pemeliharaan  larva  mulai  umur  1  hari  (D-1)  ditambahkan Nanochloropsis  oculata dengan  kepadatan  10 5 cel/ml,  mulai  umur  2  hari  diberi  pakan  rotifer ( Brachionus  rotundiformis )  dengan  kepadatan  10-20  ind./ml,  sedangkan  pakan  buatan  (micropellet) diberikan  mulai  umur  10  hari.  Untuk  pengukuran  aktivitas  enzim  protease,  amilase,  dan  lipase dilakukan pengambilan sampel larva sebanyak 0,5-1 g atau sekitar 1000 ekor pada D-3, D-4, D-6, D-8, dan 500 ekor pada D-10, D-12, D-16 dan D-20. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas enzim protease,  lipase  dan  amilase  berkorelasi  positif  terhadap  pertumbuhan  larva.  Aktifitas  enzim pencernaan meningkat saat larva mendapat makanan dari luar tubuh (D-3), menurun pada D-6, stabil pada D-8 sampai D-10 dan mencapai level tertinggi pada D-16. Larva yang sudah diberi pakan buatan cenderung  memiliki  aktivitas  enzim  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  larva  saat  sebelum  diberi  pakan buatan.
Kata kunci: enzim pencernaan, perkembangan, larva, kerapu raja sunu

## I. PENDAHULUAN
Ikan kerapu  raja sunu ( Plectropomus laevis )  merupakan  komoditi  ekspor  yang bernilai  ekonomis  tinggi  di  pasar  Asia.  Saat
ini stok  ikan kerapu raja sunu di  alam sudah sangat  langka  sebagai  akibat  penangkapan yang  berlebih.  Usaha  kearah  budidaya  ikan ini  perlu  dilakukan  dalam  rangka  perlin- dungan  populasinya  di  alam,  pemenuhan
kebutuhan  pasar  dan  diversifikasi  usaha  bu- didaya  ikan  kerapu.  Pembenihan  ikan  ke- rapu  raja  sunu  perlu  dilakukan  guna  men- dukung pemenuhan kebutuhan benih.
Pada  pemeliharaan  massal  larva  ikan kerapu,  periode  kritis  terjadi  pada  umur  1 hingga  20  hari.  Apabila  larva  tidak  berhasil melewati  periode  kritis  tersebut,  maka  larva akan  mengalami  kematian.  Pada  umumnya kegagalan dalam produksi benih ikan kerapu terjadi  akibat  kematian  pada  stadia  awal larva. Salah satu faktor yang diduga menjadi penyebabnya  adalah  masalah  fisiologis  larva yang berkaitan dengan enzim pencernaannya, karena  pada  periode  kritis  stadia  larva  ter- sebut mengalami perubahan sumber dan jenis pakan. Perkembangan enzim pencernaan lar- va  ikan  merupakan  hal  yang  sangat  penting untuk  diketahui  terutama  dalam  menentukan kesesuaian  pakan  dengan  sistem  pencernaan larva,  dan  untuk  mengevaluasi  efek  nutrisi yang  dibutuhkan  dalam  proses  pertumbuhan ikan.  Enzim-enzim  yang  terkait  dengan  pro- ses  pencernaan  merupakan  tolok  ukur  yang menunjukkan  seberapa  jauh  peran  pakan dalam  mendukung  pertumbuhan  larva  se- hingga  dapat  meningkatkan  kelangsungan hidupnya.  Pada  stadia  larva,  sistem  pencer- naan  dan  fungsi  enzimatik  pencernaannya masih  sangat  sederhana  dan  belum  berkem- bang secara sempurna. Hal ini diduga menye- babkan  kemampuan  larva  untuk  mencerna pakan masih sangat terbatas.
Aktifitas  enzim  merupakan  indikator biologi  dalam  mendeteksi  kemampuan  larva untuk mencerna makanan, sehingga aktivitas enzim  protease,  amilase,  dan  lipase  merupa- kan  indikator  kemampuan  larva  untuk  men- cerna  protein,  karbohidrat  dan  lemak  (Wang et al ., 2006).
Profil  enzim  pencernaan  merupakan salah satu aspek biologis yang penting untuk diamati  karena  berkorelasi  dengan  peman- faatan  pakan  dan  pertumbuhan  ikan.  Penga- matan aktivitas enzim pencernaan larva bebe- rapa  jenis  ikan  laut  telah  dilakukan  antara lain pada  larva  ikan kuwe kuning ( Gnatha- nodon speciosus ) (Aslianti dan Afifah, 2012),
kakap merah ( Diplodus puntazzo) (Savona et al .,  2011),  bawal  bintang  ( Trachinotus blochii ) (Pranata et al ., 2014), yang memper- lihatkan  bahwa  aktivitas  enzim  pencernaan meningkat  dengan  semakin  meningkatnya umur  larva.  Pada  larva  kerapu,  telah  diteliti aktivitas enzim tripsin meningkat selama pro- ses penyerapan kuning telur   (Adriyanto  dan Marzuqi,  2012),  aktivitas  enzim  tripsin  juga berhubungan  dengan  perkembangan  dan  di- ferensiasi  organ  larva  (Andrianto  dan  Mu- zaki,  2013).  Penelitian  perkembangan  enzim pencernaan  khususnya  protease,  amilase  dan lipase  pada  larva  ikan  kerapu  belum  banyak dilakukan.
Dari  hal  tersebut  perlu  dilakukan penelitian yang terfokus pada aktivitas enzim pencernaan  larva  kerapu  raja  sunu  yang  me- liputi  enzim  protease,  amilase,  dan  lipase. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi perkembangan  aktivitas  enzim  larva  kerapu raja sunu yang berhubungan dengan kesiapan larva dalam mencerna pakan yang diberikan.

## II. METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  di hatchery Ba- lai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Bu- didaya  Laut  (BBPPBL)  Gondol,  Buleleng, Bali,  pada  bulan  Maret  sampai  Mei  2015. Pemeliharaan  larva  menggunakan  bak  beton ukuran 2x3x1m (volume 6 m 3 ) yang diisi air laut  yang  telah  disaring  dengan  saringan pasir  dan  filter  bag,  kemudian  larva  ikan kerapu  raja  sunu  yang  baru  menetas  ditebar dengan  kepadatan  10  ekor/liter.  Pada  bak pemeliharaan larva diberikan Nanochloropsis oculata dengan  kepadatan  10 5 sel/ml  mulai umur  1  hari,  pakan  berupa  rotifer  ( Brachio- nus  rotundiformis )  diberikan  pada  larva mulai  umur  2  hari  dengan  kepadatan  10-20 ind/ml;    sedangkan  pakan  buatan  (khusus untuk  larva  ikan  laut  dengan  kadar  protein 56%)  diberikan  pada  larva  mulai  umur  10 hari,  dengan  jumlah  dan  ukuran  disesuaikan dengan  umur  larva.  Pergantian  air  pemeliha- raan dilakukan mulai larva umur 7 hari seba- nyak  5%  volume  media  dan  selanjutnya
pergantian  air  dinaikkan  5%  per  hari.  Untuk menjaga kualitas air di  dalam media pemeli- haraan,  dilakukan  penyifonan,  yang  dilaku- kan  secara  periodik,  mulai  larva  umur  10 hari.
Untuk  pengamatan  pertumbuhan  dan penyerapan cadangan makanan  (kuning telur dan  butir  minyak)  dilakukan  pengambilan sampel 10 ekor larva  tiap hari  menggunakan pipet plastik yang bermulut lebar (diameter 5 mm).  Selanjutnya dilakukan  pengamatan morfologi  pengukuran  panjang  total,  diame- ter  kuning  telur  ( yolk )  dan  butir  minyak  ( oil globule ), duri sirip  punggung  serta  duri sirip dada  larva  menggunakan  mikroskop  stereos- kopis  yang  dilengkapi  dengan  mikrometer. Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengukuran dianalisis  secara  diskriptif  dan  ditampilkan dalam  bentuk  grafik  antara  umur  dengan variabel  pengamatan.  Sebagai  data  dukung dalam  penelitian  ini  setiap  hari  dilakukan pengamatan  kualitas  air  antara  lain  suhu, salinitas,  pH,  DO,  amonia,  nitrit,  nitrat  dan fosfat.    Selanjutnya  data  kualitas  air  media pemeliharaan  larva  di  bandingkan  dengan acuan kualitas air untuk  media pemeliharaan larva ikan kerapu macan ( Epinephelus fusco- guttatus ) menurut  Sugama et al . (2013) yai- tu suhu 28-30 o C; pH 8-8,3; D0 >5ppm; am- monia <0,1 ppm; nitrit <1,0 ppm.
Untuk  mengetahui  aktivitas  enzim pencernaan  larva  (protease,  amilase  dan lipase)  dilakukan  pengambilan  sampel  larva sebanyak 0,5-1 g atau sekitar 1000 ekor pada larva umur 3 (D-3), D-4, D-6, dan D-8, serta 500 ekor pada larva D-10, D-12, D-16, D-20. Pengambilan  sampel  dilakukan  secara  hati- hati  untuk  mencegah  larva  mengalami  stres. Pengambilan sampel dikerjakan pada kondisi suhu  0-4°C,  selanjutnya  sampel  disimpan pada  suhu  -80°C  hingga  saat  pelaksanaan analisis.  Analisis  aktivitas  enzim  pencernaan larva  dilakukan  mengikuti  metode  Berg- meyer et  al .  (1983).  Analisa  menggunakan alat spektrofotometer dengan panjang gelom- bang  340-560  nm.  Analisa  aktivitas  protease ditentukan  dengan  mengukur  kemampuan enzim dalam menghidrolisis protein sehingga
dihasilkan  tirosin  yang  dibebaskan.  Pengu- kuran dilakukan dengan menggunakan kasein sebagai  substrat  dan  tirosin  sebagai  standar, yang dibaca dengan menggunakan alat spek- trofotometer  pada  panjang  gelombang  560 nm.  Aktivitas  enzim  amilase  diketahui dengan  mengukur  kemampuan  enzim  untuk menghidrolisis  larutan  pati  hingga  dibebas- kan  gula  pereduksi.  Gula  pereduksi  yang dihasilkan  diukur  dengan  metode  Shaffer Hartman  dan automatic  analysis  Bochringer Mannheim  amylase PNP.  Aktivitas  enzim lipase  diukur  dengan  menggunakan  substrat triolein.  Asam  lemak  yang  dibebaskan  akan membentuk  garam  asam  lemak  yang  me- ngendap,  selanjutnya  garam  tersebut  diukur secara turbidimetrik pada panjang gelombang 340  nm.  Aktivitas  enzim  protease,  amilase dan  lipase  masing-masing  dinyatakan  dalam unit aktivitas enzim/mL sampel/menit.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas  enzim  protease  sudah  terli- hat  mulai  umur  3  hari  dan  relatif  tinggi sampai  umur  4  hari  (D-4)  yaitu  0,106-0,110 unit  mL/menit.  Selanjutnya  sedikit  turun pada D-6 sampai D-10 (0,088-0,096 unit mL/ menit) dan meningkat mulai D-12 (0,110 unit mL/menit) dan tertinggi pada D-16 (0,16 unit mL/menit)  serta  menurun  lagi  pada  D-20 (0,10 unit mL/menit) (Gambar. 1).
Aktivitas  enzim  lipase  sudah  terlihat tinggi  pada  umur  3  hari  (D-3)  (0,183  unit mL/menit)  dan  menurun  pada  D-4  yaitu 0,054  unit mL/menit. Selanjutnya stabil pada D-6  sampai  D-10  (0,088-0,117  unit  mL/ menit),  meningkat  mulai  D-12  (0,142  unit mL/menit)  dan  tertinggi  pada  D-16  (0,217 unit mL/menit) serta menurun lagi pada D-20 (0,021 unit mL/menit) (Gambar 2).
Aktivitas  enzim  amylase  sudah  ter- lihat pada D-3 dan relatif tinggi sampai (D-4) yaitu  0,68-0,81  unit  mL/menit.  Selanjutnya sedikit  turun  pada  D-6  sampai  D-10  (0,51- 0,55 unit mL/menit) dan meningkat mulai D- 12  (0,60  unit  mL/menit)  dan  tertinggi  pada D-16  (0,76  unit  mL/menit)  serta  menurun
Gambar 1.  Aktivitas enzim protease larva ikan kerapu raja sunu ( Plectropomus laevis ) pada umur 3 hari (D-3) hingga D-20.
Gambar 2.  Aktivitas enzim lipase larva kerapu raja sunu ( Plectropomus laevis ) pada umur 3 hari (D-3) hingga D-20.
menurun  lagi  pada  D-20  (0,58  unit  mL/ menit) (Gambar 3).
Pada  Gambar  4  dapat  dilihat  bahwa dari  D-0  sampai  D-2  terjadi  penyerapan  ku- ning telur yang tinggi, hingga pada D-2 pagi seluruh  kuning  telur  hampir  habis  terserap, hingga  ukuran  diameter  245  ±  32  m.  Pada 69  jam  setelah  menetas  (SM)  dari  penga- matan isi lambung didapatkan hampir semua larva  sudah  makan  rotifer,  semuanya  masih mempunyai kuning telur, namun pada malam harinya  (79  jam  SM)  sebagian  larva  kuning telurnya  sudah  habis  terserap.  Pada  88  jam SM semua larva kuning telurnya sudah habis terserap; hasil pengamatan isi lambung dida- patkan semua larva sudah terlihat makan roti- fer, butir minyak sudah banyak terserap sam-
pai pada ukuran diameter 45-56  m. Pada 90 jam  SM  sebagian  larva  butir  minyaknya  ha- bis terserap dan pada 95 jam SM semua larva butir  minyaknya  habis  terserap.  Dengan demikian dapat dikatakan bahwa penyerapan kuning  telur  berlangsung  selama  77-85  jam dan butir minyak selama 90-95 jam.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  per- tumbuhan  setiap  hari  terhadap  10  sampel larva,  terlihat  bahwa  pertumbuhan  larva  ke- rapu raja sunu D-1 sampai D-6 relatif lambat, kemudian meningkat pada D-7 sampai D-10, dan tertinggi  pada D-11  sampai  D-16 (Gam- bar  5).  Duri  sirip    dada  dan  sirip    punggung sebenarnya  sebagian  larva  sudah  mulai terlihat  sejak  D-8  sore,  namun  semua  larva baru  tumbuh  umur  D-10  pagi  sehingga
Gambar 3.  Aktivitas enzim amylase larva kerapu raja sunu ( Plectropomus laevis ) pada umur 3 hari (D-3) hingga D-20.
Gambar 4.  Penyerapan kuning telur ( yolk ) dan butir minyak ( oil globule ) larva ikan kerapu raja sunu ( Plectropomus laevis ).
pada  Gambar  5  data  panjang  duri  dada  dan duri  punggung  baru  terlihat  mulai  umur  10 hari.  Pada  Gambar  5  terlihat  bahwa  pada mulanya  (D-10  sampai  D-11)  pertumbuhan duri  dada  lebih  tinggi  dari  duri  punggung namun  mulai  D-12  pertumbuhan  duri punggung lebih tinggi dari duri dada.  Calon duri  sirip  dada  (Gambar  6)  mulai  terbentuk pada  D-6  dan  duri  sirip  dada  mulai  terlihat pada  sebagian  kecil  larva  pada  D-8  pagi; sedangkan  duri  sirip  pungggung  mulai terlihat  pada  D-8  sore.  Lebih  lambatnya
pertumbuhan  panjang  total  larva  pada  umur 1-6  hari  dikarenakan  pada  umur  1-4  hari (Gambar  4  dan  6)  terjadinya  perubahan sumber pakan dari dalam tubuh (endogenus) berupa kuning telur (yolk) dan butir minyak (oil  globule)  ke  sumber  pakan  dari  luar tubuh  (eksogenus)  berupa  rotifer;  dan  pada larva umur 5-6 hari (Gambar 6) terjadi  pro- ses  pembentukan  calon  duri  dada  dan  duri punggung.  Kedua  proses  tersebut  memer- lukan  energy  yang  tinggi,  sehingga  pertum- buhan panjangnya agak terhambat.
Gambar  5.    Pertumbuhan  panjang  total,  duri  sirip  punggung  dan  duri  sirip  dada  larva  ikan kerapu raja sunu ( Plectropomus laevis ) D-3                          D4 D6 D-8 D-10 D-12 D16                        D20
Gambar 6. Perkembangan morfologi  larva ikan kerapu raja sunu ( Plectropoma laevis ).
Hasil  pengamatan  Slamet et  al . (2015)  secara  histology  larva  kerapu  raja sunu  pada  D-7  belum  begitu  berkembang dimana dinding ususnya baru mulai  menebal dan baru mulai  terbentuk microfili  pada per- mukaan  usus.  Hal  ini  mengindikasikan  pe- nyerapan  makanan  baru    mulai  optimal,  la- pisan  intestine  mulai  melipat,  lipid  vocuola mulai  terbentuk  yang  menunjukkan  mulai adanya  berlangsungnya  proses  pencernaan. Gelembung renang sudah terbentuk dan pada bagian  mulut  baru  terbentuk  sel  epitel  ber- lapis  yang  akan  membentuk taste  bud .  Pada larva  D-10  dan  D-12,  saluran  pencernaan larva  telah  terbentuk phili-phili usus  yang
sudah  sempurna,  sel  goblet  dan  sel  mucosa sudah  terlihat  pada farink dan esophagus . Pada  larva  ikan  kerapu  bebek  ( Cromileptes altivelis ),  jumlah  sel  goblet  pada esophagus , midgut dan hidgut akan  terus  bertambah jumlahnya seiring dengan perkembangan sis- tem  pencernaan  dan  berhenti  hingga  ter- bentuknya  kelenjar  pencernaan  ( gastric gland ) (Andriyanto dan Muzaki, 2013).
Dari Gambar 1, 2 dan 3 secara umum dapat dilihat bahwa aktivitas enzim protease, lipase dan amylase hubungannya dengan per- kembangan  umur  larva,  menunjukkan  pola yang  hampir  sama  (kecuali  lipase  pada  D-4 yang  lebih  rendah);  dimana  terlihat  tinggi
pada umur D-3,  menurun pada D-6 selanjut- nya  stabil  pada  D-8  sampai  D-10  kemudian meningkat mulai D-12 dan dan tertinggi pada D-16.  Cenderung  meningkat  aktivitas  enzim pencernaan  (protease,  lipase  dan  amylase) larva  ikan  raja  sunu  pada  saat  D-3  dan  D-4, diduga  berhubungaan  dengan  terserapnya hampir seluruh cadangan makanan larva D-3 sampai  D-4  (endogen)  berupa  kuning  telur (yolk)  dan  butir  minyak  (oil  globule) (Gambar  4  dan  6),  serta  mulai  menerima pakan dari luar (eksogen) berupa jasad pakan rotifer.  Menurut  Slamet et al . (2011) bahwa pada  saat  larva  kerapu  raja  sunu  D-3  sore cadangan  makanan  berupa  kuning  telur (yolk)  sudah  habis  terserap  dan  pada  D-4 cadangan  makanan  berupa  butir  minyak  (oil globule)  sudah  habis  terserap;  pada  saat  ini larva sudah mulai makan pakan alami berupa rotifer.  Di  samping  itu  tingginya  aktivitas enzim  pada  larva  D-3  sampai  D-4,  diduga berasal  dari  enzim  pencernaan  yang  terdapat pada  rotifer  yang  dikonsumsi  oleh  larva. Rotifer yang merupakan satu-satunya sumber pakan  bagi  larva,  memiliki  aktivitas  enzim pencernaan  yang  relatif  tinggi,  di  mana zooplankton  ini  memiliki  kemampuan  au- tolisis  sekaligus  membawa  enzim  eksogen bagi  proses  pencernaan  larva  (Melianawati, 2009).  Pola  aktifitas  enzim  pada  larva  ikan kerapu raja sunu ini hampir sama bila diban- dingkan  pada    larva  ikan  kuwe ( Gnatha- nodon  speciosus ),  dimana  aktivitas  enzim pencernaannya  cenderung  meningkat  pada saat  larva  mulai  menerima  pakan  eksogen (D-3),  kemudian  menurun  pada  D-4  sampai D-8  selanjutnya  relatif  stabil  hingga  D-30 (Aslianti  dan  Afifah,  2012).  Pola  ini  juga hampir  sama  dengan  pola  aktivitas  enzim pencernaan  pada  larva  ikan  bawal  bintang dimana aktivitas enzim protease sudah mulai terdeteksi  tinggi  pada  hari-1,  kemudian menurun  sampai  hari  ke-6.  Pada  hari  ke-9 aktivitas  enzim  protease  cenderung  terus meningkat  sejalan  bertambahnya  umur  larva ikan sampai hari ke-30 (Pranata et al ., 2014). Bila  dibandingkan  pada  larva  ikan  bandeng adalah berbeda dimana peningkatan aktivitas
enzim  lipase,  amylase  dan  protease  terjadi pada  umur  10  dan  15  hari  (Haryati  e t  al ., 2003),  hal  ini  disebabkan  larva  bandeng bersifat  omnivore  sedangkan  larva  bawal bintang  dan  kuwe  bersifat  karnivor.  Menu- runnya  aktivitas  enzim  pada  umur  6  hari dikarenakan tumbuhnya calon duri punggung dan duri dada (Gambar 6), dimana larva pada umur ini merupakan fase kritis kedua setelah melalui  masa  kritis  pertama  pada  umur  2-3 hari  saat  terjadi  pergantian  sumber  makanan dari  dalam  tubuh  (endogenus)  ke  makanan dari  luar  tubuh  (eksogenus).  Menurut Moguel-Hernandez et al. (2013), bahwa pada awal  perkembangan  larva  ikan  kakap  memi- liki  kemampuan  untuk  mencerna  protein, lemak,  dan  karbohidrat  yang  terdapat  pada kantong  kuning  telur  dan oil  globule .  Enzim pencernaan  larva  kerapu  bebek  mulai  fung- sional  sekitar  umur  25  hari  setelah  mene- tas/HSM  (Munafi et  al. ,  2011). Hasil  yang sama juga dilaporkan pada spesies ikan yang lain,  seperti  yellow  kingfish, Seriola  lalandi (Chen et  al., 2006),  red  drum  (Lazo et  al.,
2007)  dan  California  halibut  (Alvarez- González et al., 2006). Selain itu peningkatan aktivitas  enzim  protease  ini  diduga  juga disebabkan  adanya  substrat  makanan  yang dimakan  oleh  larva  terutama  kontribusi enzim  endogenous  dari  pakan  alami  yang dikonsumsi  terhadap  peningkatan  aktivitas enzim  tersebut  di  dalam  saluran  pencernaan. Larva  kerapu  sunu  yang  diberi  pakan  kope- poda  dan  rotifer  mempunyai  aktifitas  enzim pencernaan yang lebih tinggi dibanding yang diberi  pakan  kopepoda  saja  atau  rotifer  saja (Melianawati et al . 2015).
Bila dilihat aktivitas enzim pada larva kerapu  raja  sunu  yang  belum  diberi  pakan buatan  yaitu  sebelum  umur  11  hari  (D-3,  D- 4,  D-6,  D-8,  dan    D-10)  dan  yang  sudah  di- beri pakan buatan yaitu setelah umur 11 hari (D-12, D-16 dan  D-20) (Gambar 1,  2 dan 3) menunjukkan  adanya  perbedaan;  di  mana larva  setelah  diberi  pakan  buatan  cenderung memiliki  aktivitas  enzim  yang  lebih  tinggi dibandingkan larva  yang belum diberi  pakan buatan.  Demikian  juga  bila  dilihat  dari
peningkatan  pertumbuhan  larva  pada  D-12 sampai  D-16  tampak  lebih  tinggi  dibanding- kan  pada  D-3  sampai  D-11  (Gambar  5).  Sa- lah  satu  faktor  yang  dapat  mempengaruhi tingkat  pertumbuhan  ikan  secara  umum adalah aktivitas enzim. Bila dikaitkan dengan hasil analisis aktivitas enzim, nampak adanya keterkaitan antara aktivitas ketiga  enzim ter- sebut  dengan  pertumbuhan  larva.  Peningkat- an  aktivitas  enzim  pada  larva  yang  mulai diberi  pakan  buatan  yaitu  setelah  umur  11 hari  (D12,  D-16,  dan  D-20)  menunjukkan bahwa sistem pencernaan larva telah mampu menghidrolisis pakan buatan  yang diberikan, dan  hal  tersebut  nampak  pada  pertumbuhan larva  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan saat  larva  belum  diberi  pakan  buatan  yaitu sebelum  umur  11  hari  (D3,  D6,  D-8  dan  D- 10).  Hal  ini  sangat  terkait  antara  aktivitas enzim  pencernaan  dengan  kecepatan  makan larva  yang  cenderung lebih tinggi pada larva umur lebih dari 11 hari dibandingkan dengan larva sebelum umur 11 hari.
Menurut  McBride  (2004),  bahwa  je- nis  pakan  yang  diberikan  memberi  pengaruh terhadap aktivitas enzim pencernaan, dimana jenis  pakan  tertentu  dapat  meningkatkan aktivitas  enzim  pencernaan  larva.  Pemberian pakan  buatan  harus  disesuaikan  dengan kesiapan larva secara fisiologis karena pakan buatan  terdiri  dari  nutrien  yang  mempunyai struktur  molekul  yang  kompleks  dan  tidak mengandung  enzim  sehingga  diperlukan ketersediaan  enzim  untuk  mencernanya. Kemampuan  ikan  dalam  mencerna  pakan sangat  bergantung  pada  kelengkapan  organ pencernaan  dan  ketersediaan  enzim  pencer- naan. Perkembangan saluran pencernaan ber- langsung  secara  bertahap  dan  setelah  ikan mencapai  ukuran  atau  umur  tertentu,  maka saluran pencernaannya akan mencapai kesempurnaan.  Perkembangan  struktur  alat pencernaan larva kerapu raja sunu pada larva umur  12  hari  sudah  berkembang  baik, dimana  pada  dinding  usus  larva  sudah  ter- bentuk phili-phili (Slamet et al ., 2015). Pada stadia  awal  larva  struktur  sistem  pencernaan yang masih sederhana pada larva berkorelasi
pula  dengan  rendahnya  produksi  enzim pencernaan  (Handayani,  2006).  Peningkatan aktivitas  enzim  juga  dapat  menunjukkan bahwa  larva  semakin  banyak  mengkonsumsi pakan  buatan.  Hasil  penelitian  Melianawati dan  Suwirya  (2006)  menyatakan  bahwa pemberian  pakan  buatan  mampu  menstimu- lasi  peningkatan aktivitas protease.
Aktifitas  enzim  pencernaan  dipenga- ruhi beberapa faktor yaitu umur larva (Wang et al. , 2006), jenis dan komposisi pakan (Wei et  al. ,  2010;  Tillner et  al. ,  2014;  Navarro- Guillén et  al. ,  2015).  Enzim  eksogenous umumnya  bervariasi  tergantung  pada  jenis pakan  yang  dikonsumsi  oleh  larva,  enzim eksogenous  dapat  mengaktivasi  meningkat- nya  aktifitas  enzim  dengan  mengaktifkan zymogen,  memproduksi  protease  (Srichanun et  al. ,  2012).  Produksi  enzim  pencernaan berkorelasi erat dengan perkembangan struk- tur sistem pencernaan dan umur larva. Hal ini juga  terjadi  pada  larva  ikan  kerapu  bebek, Cromileptes altivelis (Melianawati, 2010). Hasil pengukuran  kualitas air pemeli- haraan  larva  selama  pengamatan  didapatkan bahwa  suhu  berkisar  antara  28,1-29,7 o C; salinitas  berkisar  antara  33-34  ppt;  pH berkisar  antara  8,16-8,24;  dan  DO  berkisar antara  5,9-6,8  ppm,    amonia  (NH 3 )  0,026- 0,125  ppm.  nitrit  (NO 2 )  0,026-0,884  ppm.; nitrat (NO 3 ) 0,182-1,65 ppm dan fosfat (PO 4 ) 0,039-0,243  ppm.  Kualitas  air  ini  diasumsi- kan  masih  dalam  kisaran  yang  layak  untuk pemeliharaan  larva  ikan  kerapu  raja  sunu, karena  masih  dalam  batas-batas  toleransi yang  mendukung  pertumbuhan  dan  kelang- sungan  hidup  larva  kerapu.  Menurut  acuan kualitas  air  untuk  media  pemeliharaan  larva ikan  kerapu  macan  ( Epinephelus  fuscogut- tatus )  suhu  28-30 o C;  pH  8-8,3;  D0  >5ppm; ammonia <0,1 ppm; nitrit <1,0 ppm (Sugama et al ., 2013).

## IV. KESIMPULAN
Aktivitas  enzim  protease,  lipase  dan amylase  sejalan  dengan  fase  perkembangan larva ikan kerapu raja sunu yaitu tinggi pada
saat awal mulai makan (D-3), menurun pada masa  kritis  saat  tumbuh  calon  duri  dada  dan duri punggung (D-6), selanjutnya stabil pada D-8 sampai D-10 kemudian meningkat mulai D-12  (saat  mulai  diberi  pakan  buatan)  dan tertinggi pada D-16.  Larva setelah diberi pa- kan  buatan  cenderung  memiliki  aktivitas  en- zim  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan larva yang sebelum diberi pakan buatan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima kasih yang tak terhingga kami sampaikan kepada Sdr. Ahmad Gufron Arief dan  Sdr.  Made  Suparya  yang  telah  berperan aktif  dalam  membantu  pelaksanaan  peneli- tian  ini  khususnya  di  bidang  pemeliharaan larva ikan kerapu raja sunu hingga penelitian berakhir. Kami juga mengucapkan terima ka- sih  kepada  para  reviewer  yang  telah  banyak memberikan  saran  dan  komentar  dalam memperbaiki kualitas paper ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alvarez-Gonzalez  C.A.  and  M.  Cervantes- Trujano. 2006. Development of diges- tive  enzymes  in  California  halibut Paralichthys californicus larvae. Fish Physiol Biochem. , 31:83-93.
Andriyanto,  W.  dan  M.  Marzuqi.  2012. Periode  bukaan  mulut  dan  laju  sera- pan  kuning  telur  kaitannya  dengan aktivitas  enzim  pencernaan  pada  sta- dia  awal  kerapu  bebek  hasil  turunan ke-2. J. Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis , 4(2):198-207.
Andriyanto,  W.  dan  A.  Muzaki.  2013.
Diferensiasi  organ  pencernaan  larva kerapu  bebek  turunan  ke-3  dan  bebe- rapa  aktifitas  enzim  yang  terkait. J. Ris. Akuakultur, 8(1):51-63. Aslianti,  T.  dan  Afifah.  2012.  Studi  aktifitas enzim  pencernaan  larva  ikan  kuwe, Gnathanodon  speciosus yang  dipeli- hara  dengan  jenis  pakan  awal  ber- beda. J. Riset Akuakultur , 7(1):49-59.
Bergmeyer,  H.U.,  M.  Grossi,  and  H.E.  Wal- ter.  1983.  Reagents  for  enzymatic analysis. In: H.U.  Bergmeyer  ( ed. ) Methods in enzymatic analysis vol. II. 3 th ( eds. ). Weinheim. 274-275pp.
Chen  B.N.,  J.G.  Qin,  M.S.  Kumar,  W.G. Hutchinson,  and  S.M.  Clarke.  2006. Ontogenetic development of digestive enzymes in  yellowtail kingfish Serio- la  lalandi larvae. Aquaculture ,  260: 364-271.
Handayani,  S.  2006.  Studi  efisiensi  peman- faatan karbohidrat pakan bagi partum- buhan  ikan  gurame (Osphronemus gouramy Lac.)  sejalan  dengan  peru- bahan  enzim  pencernaan  dan  insulin. Thesis.  Institut  Pertanian  Bogor.
Bogor. 97hlm.
Haryati, S. Kusman,  I.  Mokoginta, T.M. Su- hartono,  D.  Darnas,  dan  S.  Dedi. 2003.  Perkembangan  aktivitas  enzim ikan  bandeng, Chanos  chanos Forss- kal    selama  periode  larva. J.  Torani , 13(4):174-181.
Lazo  J.P.,  R.  Mendoza,  G.J.  Holt,  C.  Agui- lera,  and  C.R.  Arnold.  2007.  Charac- terization of digestive enzymes during larval  development  of  red  drum  ( Sci- aenops  ocellatus ). Aquaculture ,  265: 194-205.
McBride,  S.  2004.  The  activity  of  digestive enzymes  in  larval  grouper  and  live feed. In: Rimmer,  M.A et  al.  (eds.). Advances  in  grouper  aquaculture. Canberra. 41-46pp.
Melianawati,  R.  dan  K.  Suwirya.  2006. Pengaruh  perbedaan  frekuensi  pem- berian  pakan  terhadap  pertambahan bobot  yuwana  kakap  merah Lutjanus argentimaculatus.  J.  Riset  Akuakul- tur, 1(2):151-159.
Melianawati,  R.  2009.  Aktivitas  enzim  pen- cernaan  larva  ikan  kerapu  macan (Epinephelus  fuscogutattus Forsskal,
1775)  terkait  dengan  perbedaan  jenis pakan.  Program  Pascasarjana  Univer- sitas  Gadjah  Mada.  Yogyakarta.  165 hlm.
Melianawati,  R.,  R.  Andamari,  dan  I.  Setya- di.  2010.  Identifikasi  profil  enzim pencernaan  untuk  optimasi  peman- faatan  pakan  dalam  usaha  budidaya ikan  kerapu  bebek (Cromileptes  alti- velis). Laporan  penelitian  progam  in- sentif  peningkatan  kemampuan  pene- liti  dan  perekayasa  Dewan  Riset  Na- sional  Kementerian  Riset  dan  Tek- nologi tahun 2010. 17hlm.
Melianawati,  R.,  R.  Pratiwi,  N.  Puniawati, and  P.  Astuti.  2015.  The  effect  of various kind of live feeds to digestive enzymes  activity  of  coral  trout Plec- tropomus leopardus (Lacepède, 1802) larvae. J.  fisheries  and  aquatic  stu- dies , 3(2):83-88.
Munafi,  A.B.,  W.  Andriyanto,  S.  Ismi,  A.Y.
Nirmala,  I.  Mastuti,  A.  Muzaki,  and A.W.M. Effendy. 2011. The ontogeny of  the  digestive  tract  and  associated organs  of  Humpback  Grouper  ( Cro- mileptes  altivelis )  larvae. Asian  Fi- sheries Science, 24:379-386.
Navarro-Guillen  C.,  F.J.  Moyano,  and  M. Yufera.  2015.  Diel  food  intake  and digestive  enzyme  production  patterns in Solea  senegalensis larvae. Aqua- culture. 435:33-42.
Pranata,  A.,  Haryati,  dan  M.  Y.    Karim, 2014.  Perkembangan  aktivitas  enzim pada  larva  ikan  bawal  bintang (Tra- chinotus  blochii,  Lacepede  1801).  J.
Sains & Teknologi , 14(3):199-208.
Savona  B.,  C.  Tramati,  and  A.  Mazzola. 2011.  Digestive  Enzymes  in  Larvae and  Juveniles  of  Farmed  Sharpsnout Seabream  ( Diplodus puntazzo) (Cetti, 1777 ). The  Open  Marine  Biology  J., 5:47-57.
Slamet,  B.,  K.  Suwirya,  R.  Melianawati,  S.
Ismi, dan R.  Andamari. 2011. Penga- matan  perkembangan  morfologi,  pe- nyerapan  energi  endogenous,  dan  isi perut  larva  ikan  kerapu  raja  sunu ( Plectropomus  laevis ).  Prosiding  Se- minar Forum Inovasi Teknologi Aku- akultur. Denpasar. Hlm.:1217-1223.
Slamet,  B.,  T.  Aslianti,  K.M.  Setiawati,  W. Andrianto,  dan  A.  Nasukha.  2015. Pemeliharaan  larva  kerapu  raja  sunu ( Plectropomus  laevis )  dengan  awal pemberian  pakan  buatan. J.  Riset Akuakultur , 10(4):531-540.
Srichanun,  M.,  C.  Tantikitti,  V.  Vatanakul, and  P.  Musikarune.  2012.  Digestive enzyme  activity  during  ontogenetic development and effect of live feed in green  catfish  larvae  ( Mystus  nemurus Cuv.  &  Val.). Songklanakarin  J.  Sci.
Technol ., 34(3):247-254.
Sugama,  K.,  M.A.  Rimmer.,  S.  Ismi,  I.
Koesharyani,  K.  Suwirya,  N.A.  Giri, dan  V.R.  Alava.  2013.  Pengelolaan pembenihan  kerapu  macan  ( Epine- phelus  fuscoguttatus ):  suatu  panduan praktik  terbaik.  Monograf  ACIAR No. 149a. Australian Centre for Inter- national  Agricultural  Research.  Can- berra. 66hlm.
Tillner,  R.,  I.  Ronnestad,  P.  Dhert,  and  B. Ueberschar.  2014.  The  regulatory loop between gut cholecystokinin and tryptic enzyme activitcxuy in sea bass ( Dicentrarchus  labrax )  trigger  subs- tances. Aquaculture ,  421:139-146. Wang  C.,  S.  Xie,  X.  Zhu,  W.  Lei,  Y.  Yang, and  J.  Liu.  2006.  Effects  of  age  and dietary  protein  level  on  digestive  en- zyme  activity  and  gene  expression  of Pelteobagrus fulvidraco larvae. Aqua- culture ,  254:554-562.
Wei  L.,  Z.  Xiu-Mei,  and  W.  Li-Bo.  2010. Digestive  enzyme  and  alkaline  phos- phatase  activities  during  the  early stages  of Silurus  soldatovi develop- ment. Zoological  Research, 31(6):
627-632.
Diterima: 20 Oktober 2015 Direview: 21 Maret 2016 Disetujui: 9 Mei 2016