Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
Mastuti Widianingsih, Dian Catur Setyorini. (2019). Identifikasi Staphulococcus Aureus pada Abon sapi di Pasar Pahing Kota Kediri. Journal Bioeksperimen. Vol. 5 (2) Pp. 99-105. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i2.2795

## IDENTIFIKASI STAPHYLOCOCCUS AUREUS PADA ABON SAPI DI PASAR PAHING KOTA KEDIRI
Mastuti Widianingsih * , Dian Catur Setyorini Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata
* E-mail: widianingsihmastuti910224@gmail.com
Abstract- Contamination of processed beef foods such as abon can be caused by various types of microbes, one of which is Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus can cause various infections, both on the skin, gastrointestinal tract, or endocarditis. The objective of this research was to determine the presence of Staphylococcus aureus in beef abon sold in Pahing Market, Kediri. Abon used is non-branded beef abon which is as many as 10 samples obtained by total sampling technique. Samples were tested by observation of colony morphology through Gram staining, mannitol fermentation test, catalase and coagulase test, and acetoin test. The samples were inoculated on Broth NaCl (ink. 24 hour-37°C), then inoculated on MSA (ink. 24 hour-37°C), and VP (ink. 2x24 hours-37°C). Catalase and coagulase tests were carried out by taking colonies on MSA media. The results showed that there were 9 abon samples contaminated with Staphylococcus aureus as indicated by Gram positive staining results, positive (perfect) mannitol fermentation, and positive acetoin, catalase, and coagulase test. The causes of contamination are contaminated abon ingredients, the manufacturing process using less sterile tools, poor handling and processing, processing food with dirty hands, food stored without cover, sick food processors, and dirty markets.
Keywords: Abon, contamination, catalase, coagulase, Staphylococcus aureus

## Pendahuluan
Dewasa ini, banyak penyakit yang disebabkan oleh bakteri dengan melibatkan berbagai agen perantara, seperti udara, air, tanah, makanan, minuman, ataupun barang-barang lainnya. Genus Staphylococcus, khususnya Staphylococcus aureus ditemukan dapat menyebabkan kontaminasi pada daging se’i sapi, sosis babi (Rahayu dkk, 2014), ayam broiler (Lowder et al., 2009) serta olahan ikan asap (Karimela dkk, 2017) yang tidak bermerk. Proses pengolahan makanan tidak bermerk umumnya dilakukan secara tradisional sehingga dapat meningkatkan risiko kontaminasi Staphylococcus aureus (Salasia dkk, 2009). Kontaminasi Staphylococcus aureus mengakibatkan berbagai macam infeksi klinis, seperti bakterimia, infeksi kulit, infeksi saluran pencernaan (Thomer et al., 2016), endokarditis, osteoartikular, dan pleuropulmonari  (Tong et al., 2015). Pemeriksaan adanya kontaminasi dapat dilakukan dengan identifikasi secara bakteriologi, yaitu melalui uji morfologi
(pewarnaan Gram), fermentasi manitol ( Manitol Salt Agar ), koagulase, katalase, dan uji produksi asetoin ( Voges-Proskauer ) (Windria et al., 2016). Abon menjadi salah satu produk olahan daging sapi yang mudah terkontaminasi. Sejauh ini, belum ada penelitian yang mengungkapkan adanya Staphylococcus aureus pada abon sapi, khususnya yang dijual di Pasar Pahing, Kota Kediri. Kondisi penyimpanan dan pasar yang kurang baik dapat mendukung terjadinya kontaminasi. Selain itu, kandungan nutrisi tinggi yang dimiliki abon, dapat dijadikan sebagai sumber nutrisi dan agen pertumbuhan bagi mikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya Staphylococcus aureus pada abon sapi tidak bermerk yang dijual di Pasar Pahing, Kota Kediri.

## Metode Penelitian
Keseluruhan penelitian dilakukan pada bulan Februari-Maret 2017. Pengambilan sampel penelitian dilakukan di Pasar Pahing Kota Kediri, sedangkan pengujian sampel
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019) ISSN 2460-1365
dilakukan di Laboratorium Bakteriologi Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri. Sampel yang digunakan berupa 10 abon sapi tidak bermerk dan penentuan jumlah sampel dilakukan dengan teknik total sampling. Desain penelitian berupa deskriptif analitik dengan melibatkan 2 variabel yaitu variable bebas dan variable terikat. Variabel bebas yang digunakan yaitu Staphylococcus aureus, sedangkan abon sapi sebagai variabel terikat.
Alat yang digunakan meliputi neraca analitik Merck, spatel, beaker glass Pyrex, erlenmeyer Pyrex, gelas ukur Iwaki, ose bulat, autoclave Memmert (sterilisasi), incubator Memmert, mikroskop binokuler Olympus, centrifuge Hettich, centrifuge tube Iwaki, tabung reaksi, tabung Durham, dan tabung Khan Pyrex, serta plate Pyrex. Bahan yang dibutuhkan yaitu aluminium foil, object glass, beef extract , pepton, NaCl, aquadest, Manitol Salt Agar (MSA) Merck, KOH 40%, Voges- Proskauer (VP), α- napthol 5%, H 2 O 2 3%, sampel darah, natrium citrate, NaCl fisiologis, carbol gential violet, lugol, alkohol 95%, dan fuschine .

## Pengujian Sampel Penelitian
1.  Preparasi sampel Sampel abon yang didapat, diberi label untuk menghindari tertukarnya data. Label yang digunakan berupa huruf yaitu abon sapi A sampai J.
2.  Sterilisasi alat dan bahan
Seluruh alat dan bahan disterilkan dalam autoclave pada suhu 121°C dengan tekanan 1,5 atm selama 15 menit (Yulvizar, 2013).
3.  Pembuatan Media
a. NaCl Broth Media NaCl Broth terdiri dari beef extract (0,06 gram) , pepton (0,51 gram), dan NaCl (0,1 gram) yang ditambahkan dengan 20 ml aquadest. Media dihomogenkan, kemudian
dimasukkan dalam tabung (@ 2ml) dan sterilkan.
b. Voges-Proskauer
Pembuatan VP membutuhkan 40 ml aquadest dan 0,68 gram VP yang dilarutkan dalam erlenmeyer, kemudian dituang masing-masing 4 ml ke tabung Khan (Hemraj et al., 2013).
c. Manitol Salt Agar
Sebanyak 16,2 gram MSA dimasukkan dalam Erlenmeyer yang berisi aquadest 150 ml , selanjutnya dipanaskan hingga larutan homogen. Larutan tersebut kemudian dituang dalam plate (@ 15ml), lalu disterilkan (Yulvizar, 2013).
d.  Plasma Sitrat Pembuatan plasma sitrat 3,8% dilakukan dengan perbandingan antara darah (manusia) dan natrium citrate sebanyak 1:9. Campuran tersebut disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 1500 rpm (Jiwintarum dkk, 2015).

## 4. Inokulasi
Sampel ditambahkan dalam tabung reaksi yang berisi NaCl Broth, dihomogenkan dengan centrifuge, dan diinkubasi selama 1x24 jam suhu 37°C. Setelah itu, hasil inokulasi dilanjutkan ke media MSA serta VP (inkubasi 2x24 jam; 37°C) (Adejuwon et al ., 2011).
5.  Pewarnaan Gram Satu masa ose bakteri dihomogenkan dengan NaCl fisiologi kemudian dibuat apusan pada object glass, selanjutnya dikeringkan dengan fiksasi . Pewarnaan dilakukan berjenjang, yaitu dengan menambahkan 1 tetes gentian violet (2 menit), kemudian buang dan dilanjutkan dengan 1 tetes lugol selama 1 menit. Penambahan alkohol (1 tetes; 1 menit) pada tahap ketiga berfungsi melunturkan gentian violet. Tahap terakhir yaitu dengan pemberian fuschine (2 menit), lalu bilas dengan
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
aquadest. Preparat diamati dengan mikroskop binokuler guna mengetahui morfologi bakteri (Abera et al ., 2010).
6.  Uji Katalase Koagulase dan Uji VP a.  Uji katalase
Koloni bakteri yang ada pada media MSA diambil dengan menggunakan ose bulat steril, kemudian diletakkan pada object glass dan diberi 1 tetes H 2 O 2 3%. Hasil positif ditandai dengan terbentuknya gelembung udara (Hemraj et al., 2013; Yurdakul et al., 2013).
b.  Uji Koagulase ( Slide Test ) Koloni yang sama pada media MSA diletakkan pada object glass lalu ditambahkan larutan plasma sitrat. Apabila terjadi presipitasi saat dihomogenkan dengan ose bulat steril, maka disimpulkan koagulase positif (Abera et al ., 2010).
c.  Uji VP Uji VP digunakan untuk mendeteksi asetoin yang dihasilkan bakteri setelah 2x24 jam inkubasi. Adanya kekeruhan menandakan adanya pertumbuhan bakteri, sedangkan produk asetoin ditunjukkan dengan adanya perubahan warna menjadi merah setelah dilakukan penambahan reagent KOH 40% dan α- napthol 5% (Hemraj et al., 2013).
d. Interpretasi Hasil Hasil positif pada uji katalase dan koagulase menjadi salah satu parameter identifikasi Staphylococcus aureus. Selain itu, fermentasi manitol positif (pada media MSA),
serta produksi asetoin positif juga menunjukkan adanya Staphylococcus aureus.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil identifikasi menunjukkan ada sebanyak 9 sampel abon sapi tidak bermerk yang terkontaminasi Staphylococcus aureus (Tabel 1). Hasil tersebut diperoleh berdasarkan pengamatan morfologi dengan pewarnaan Gram (Gambar 1), hasil fermentasi manitol (Gambar 2), uji katalase (Gambar 3) dan koagulase (Gambar 4), serta uji VP (Gambar 5). Adapun faktor yang mempengaruhi adanya kontaminasi abon dapat disebabkan oleh beberapa kemungkinan, yaitu pengambilan bahan dasar abon yang kurang baik serta proses pembuatan abon yang menggunakan alat-alat rumah tangga yang tidak bersih, penanganan, dan pengolahan yang kurang baik. Selain itu, kontaminasi juga dapat terjadi karena pengolahan makanan dengan tangan kotor, makanan yang disimpan tanpa tutup dan lembab, pengolah makanan dalam kondisi sakit, serta kondisi lingkungan tempat pemasaran yang tercemar (kotor).
Staphylococcus aureus adalah suatu bakteri yang memproduksi enterotoksin penyebab keracunan (Lowder et al ., 2009). Keracuan ditandai dengan gejala mual, muntah, kejang perut, bahkan sampai diare. Bakteri tersebut sering ditemukan pada makanan-makanan, merupakan bakteri coccus Gram positif, dan termasuk dalam family Micrococcaceae. Tumbuh secara anaerobik fakultatif dengan membentuk kumpulan sel-sel seperti buah anggur dan umum dijadikan indikator higienitas pengolahan makanan. Staphylococcus aureus tahan tehadap kadar garam dan memproduksi koagulase (Ahmetagic et al., 2013; Frey et al ., 2013). Uji koagulase dapat dijadikan sarana identifikasi dan penentuan spesies Staphylococcus aureus (Keteete et al. , 2010).
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002).
Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019) ISSN 2460-1365
Tabel 1. Hasil Identifikasi Staphylococcus aureus pada Abon Sapi
No Abon Sapi Morfologi Koloni Macam Uji Keteran- gan Warna/ Sifat Bentuk MSA VP Kata- lase Koagu- lase 1 A U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 2 B U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 3 C U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 4 D U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 5 E U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 6 F U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 7 G - - - - - - - 8 H U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 9 I U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus 10 J U/GP Coccus FM+ + + + S. aureus
Keterangan: FM+: Fermentasi manitol positif; GP: Gram positif; MSA: Manitol Salt Agar;
U: berwarna ungu, -: tidak ada pertumbuhan pada NaCl Broth
Gambar 1. Hasil Pewarnaan Gram Staphylococcus aureus
1.  Morfologi Koloni
Pewarnaan Gram menjadi salah satu cara mengetahui morfologi koloni bakteri. Staphylococcus aureus diketahui sebagai bakteri Gram positif yang berbentuk coccus berwarna ungu (Gambar 1) (Sindhu et al., 2010; Adejuwon et al., 2011). Selain itu, bakteri Gram positif memiliki ciri umum berupa dinding sel (peptidoglikan) yang lebih tebal (20-80 nm) dibandingkan bakteri Gram negatif. Hal tersebut yang mengakibatkan Staphylococcus aureus memiliki tingkat pertumbuhan, tingkat infeksi, dan pola resistensi yang tinggi dibandingkan dengan bakteri Gram negatif seperti Escherichia coli (Lykov et al ., 2017).
2.  Fermentasi Manitol
Manitol Salt Agar menjadi media uji fermentasi manitol. Adanya fermentasi manitol ditandai dengan perubahan warna media yang semula merah menjadi kuning (Adejuwon et al.,
2011) akibat adanya penurunan pH menjadi asam (Karimela dkk, 2017). Hasil penelitian menunjukkan Staphylococcus aureus yang didapat memiliki kemampuan fermentasi manitol sempurna (media menjadi kuning keseluruhan) dengan koloni berwarna putih (Gambar 2).
Gambar 2. Uji fermentasi manitol positif pada MSA
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
3.  Uji Katalase Uji katalase digunakan untuk membedakan genus Staphylococcus dan Streptococcus (Todar, 2005; Karimela dkk, 2017). Gelembung udara yang terbentuk pada uji katalase (Gambar 3) menunjukkan hasil katalase positif untuk Staphylococcus (Sindhu et al., 2010) merupakan hasil hidrolisis H 2 O 2 menjadi molekul air dan oksigen (Hemraj et al ., 2013). Hidrolisis H 2 O 2 distimulasi oleh enzim katalase yang terletak pada permukaan membran sel bakteri Staphylococcus (Hemraj et al., 2013; Yurdakul et al., 2013). Reaksi tersebut berlangsung sebagai mekanisme pertahanan diri bakteri terhadap H 2 O 2 yang bersifat toksik (Locke et al., 2012).
Gambar 3. Uji Katalase
4.  Uji Koagulase
Staphylococcus aureus umumnya memiliki hasil uji koagulase positif, namun ada pula yang menunjukkan hasil negatif. Berdasarkan hasil penelitian Yurdakul et al. (2013) menyatakan bahwa hasil negatif menunjukkan bahwa Staphylococcus oportunistik. Pada penelitian ini, dihasilkan koagulase positif yang ditunjukkan dengan adanya presipitasi (gumpalan) (Gambar 4). Uji koagulase slide ( Slide Coagulase Test/ SCT) dilakukan dengan mendeteksi adanya faktor penggumpalan yang bereaksi secara langsung dengan fibrinogen yang terikat pada plasma (McAdow et al., 2011) sehingga didapatkan hasil yang lebih cepat dibandingkan uji koagulase tabung ( Tube Coagulase Test/ TCT) (Kateete et al., 2010).

## Gambar 4. Uji Koagulase

## 6.  Uji VP
Deteksi asetoin melalui uji VP dilakukan dengan penambahan reagent KOH 40% dan α - napthol 5%. Hasil penelitian menunjukkan 9 sampel positif dengan terbentuknya cincin berwarna merah pada bagian atas media ( Gambar 5 ). Uji tersebut ditentukan oleh kemampuan bakteri membentuk asetoin (asetiletilkarbinol) melalui pemecahan glukosa. Asetoin selanjutnya bereaksi dengan α - napthol 5% dan KOH 4% sehingga menghasilkan warna merah pada media (Hemraj et al., 2013).

## Gambar 5. Uji VP positif ditunjukkan dengan adanya cincin merah di bagian atas media

## Simpulan
Abon sapi yang dijual di Pasar Pahing Kota Kediri positif terkontaminasi Staphylococcus aureus dengan persentase 90%.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019) ISSN 2460-1365

## Daftar Pustaka
Abera, M., Demie, B., Aragaw, K., Regassa, F., & Regassa, A. (2010). Isolation and identification of Staphylococcus aureus from bovine mastitic milk and their drug resistance patterns in Adama town, Ethiopia. Journal of Veterinary Medicine and Animal Health , 2 (3), 29–34.
Adejuwon, A. O., Ogunkanmbi, D., Adejumoke, M., & Johnson, B. (2011). Staphylococcus aureus isolated from septic caesaerean wound at Ile Ife Nigeria: Antibiotics susceptibility patterns. International Journal of Medicine and Medical Sciences , 3 (5), 149–154.
Ahmetagic, A., Fatima, N., Sead, A., Rakovac-Tupkovic, L., & Porobic-Jahic, H. (2013). Etiology of peritonitis. Journal Medical Archives , 64 (4), 278–281.
Frey, Y., Rodriguez, J. P., Thomann, A., Schwendener, S., & Perreten, V. (2013). Genetic characterization of antimicrobial resistance in coagulase-negative staphylococci from bovine mastitis milk. Journal of Dairy Science , 96 (4), 2247–2257. https://doi.org/10.3168/ JDS.2012-6091
Hemraj, V., Diksha, S., & Avneet, G. (2013). A review on commonly used biochemical test for bacteria. Innovare Journal of Life Science , 1 (1), 1–7. Retrieved from http://innovareacademics. in/journals/index.php/ijls/article/viewFile/30/36
Jiwintarum, Y., Srigede, L., & Rahmawati, A. (2018). Perbedaan Hasil Uji Koagulase Menggunakan Plasma Sitrat Manusia 3,8%, Plasma Sitrat Domba 3,8%, dan Plasma Sitrat Kelinci 3,8% pada Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Kesehatan Prima , 9 (2), 1559–1569. https://doi. org/10.32807/JKP.V9I2.77
Karimela, E. J., Ijong, F. G., & Dien, H. A. (2017). Karakterisasi Staphylococcus aureus yang Diisolasi dari Ikan Asap Pinekuhe Hasil Olahan Tradisional Kabupaten Sangihe. Jphpi , 20 (1), 188–198. https://doi.org/10.17844/jphpi.2017.20.1.356
Kateete, D. P., Kimani, C. N., Katabazi, F. A., Okeng, A., Okee, M. S., Nanteza, A., … Najjuka, F. C. (2010). Identification of Staphylococcus aureus: DNase and Mannitol salt agar improve the efficiency of the tube coagulase test. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials ,
9 (1), 23. https://doi.org/10.1186/1476-0711-9-23
Locke, T., Keat, S., Walker, A., & Mackinnon, R. (2012). Microbiology and Infectious Diseases on The Move (First Edit). London: CRC Press.
Lowder, B. V, Guinane, C. M., Ben Zakour, N. L., Weinert, L. A., Conway-Morris, A., Cartwright, R. A., … Fitzgerald, J. R. (2009). Recent human-to-poultry host jump, adaptation, and pandemic spread of Staphylococcus aureus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America , 106 (46), 19545–19550. https://doi.org/10.1073/pnas.0909285106
Lykov, A., Gaidul, K., Goldina, I., Konenkov, V., Kozlov, V., Lyakhov, N., & Dushkin, A. (2017). Silica Nanoparticles as a Basis for Efficacy of Antimicrobial Drugs. Nanostructures for Antimicrobial Therapy , 551–575. https://doi.org/10.1016/B978-0-323-46152-8.00025-1
McAdow, M., Kim, H. K., DeDent, A. C., Hendrickx, A. P. A., Schneewind, O., & Missiakas, D. M. (2011). Preventing Staphylococcus aureus Sepsis through the Inhibition of Its Agglutination in Blood. PLoS Pathogens , 7 (10), e1002307. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1002307
Rahayu, N. P. N., Kawuri, R., & Suriani, N. L. (2014). Uji Keberadaan Staphylococcus aureus pada Sosis Tradisional (Urutan) yang Beredar Di Pasar Tradisional Di Denpasar, Bali. SIMBIOSIS ,
2 (1). Retrieved from https://ojs.unud.ac.id/index.php/simbiosis/article/view/9497
S., S., Khusnan, & Sugiyono. (2009). Distribusi gen enterotoksin Staphylococcus aureus dari susu
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
segar dan pangan asal hewan. Jurnal Veteriner , 10 , 111–117.
Sindhu, N., Sharma, A., & Jain, V. K. (2010). Coagulase gene based molecular detection of Staphylococcus aureus directly from mastitic milk samples of murrah buffalo. Buffalo Bulletin ,
29 (1), 62–69.
Thomer, L., Schneewind, O., & Missiakas, D. (2016). Pathogenesis of Staphylococcus aureus Bloodstream Infections. Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease , 11 (1), 343–364. https://doi.org/10.1146/annurev-pathol-012615-044351
Todar, K. (2005). Todar ʹ s Online Textbook of Bacteriology. Retrieved June 19, 2019, from http:// textbookofbacteriology.net/
Tong, S. Y. C., Davis, J. S., Eichenberger, E., Holland, T. L., & Fowler, V. G. (2015). Staphylococcus aureus infections: epidemiology, pathophysiology, clinical manifestations, and management. Clinical Microbiology Reviews , 28 (3), 603–661. https://doi.org/10.1128/CMR.00134-14
Windria, S., Widianingr, D. C., & Salasia, S. I. O. (2016). Identification of Staphylococcus aureus and Coagulase Negative Staphylococci Isolates from Mastitis Milk of Etawa Crossbred Goat. Research Journal of Microbiology , 11 (1), 11–19. https://doi.org/10.3923/jm.2016.11.19
Yulvizar, C. (2013). Isolation and Identification of Probiotic Bacteria In Rastrelliger sp. Biospecies ,
6 (2), 1–7.
Yurdakul, N. E., Erginkaya, Z., & Unal, E. (2013). Antibiotik Resistance of Enterococci, Staphylococcus aureus Isolated from Chicken Meat Czech. Journal Food Sci , 31 (1), 14–19.