(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
Uji Daun Nusa Indah Putih ( Mussaenda pubescens ) Sebagai Antilitiasis Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus)
Etrit Sabenar 1 , Selvana S. Tulandi 2* , Amal R. Ginting 1 , Ferdy A. Karauwan 2 , Yessie K. Lengkey 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon *Penulis Korespondensi; selvanatulandi20@gmail.com Diterima: 2 Juli 2021; Disetujui : 24 September 2021

## ABSTRAK
Ekstrak n-Butanol daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens ) telah diteliti untuk mengetahui ada atau tidaknya potensi Antilitiasis dengan proses ekstraksi. Pada proses ekstraksi ada beberapa tahap yaitu maserasi, destilasi fraksinasi, dan ekstraksi cair-cair.
Metode Penelitian yang digunakan adalah metode Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 kali ulangan. Sebanyak 20 ekor tikus jantan dewasa dengan berat rata-rata 150-200 gram dibagi dalam 4 kelompok perlakuan. Kelompok kontrol normal (P0), kelompok etilen glikol 0,75 % (P1), kelompok ekstrak  daun  nusa  indah  putih  ( Mussaenda  pubescens) dosis  150  mg/kg  BB  (P2)  dan  kelompok ekstrak daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) dosis 300 mg/kg BB (P3) dengan parameter pengamatan  kadar  kreatinin  serum  darah  tikus  dan  histopatologi  ginjal  pada  setiap  kelompok perlakuan dengan pengujian selama 28 hari.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih  berpotensi  sebagai antilitiasis  dimana  pada  dosis  150  mg/kg  BB  dan  300  mg/kg  BB  tidak  terdapat  adanya  endapan Kristal. Ekstrak n-Butanol daun nusa indah putih dosis 300 mg/kg lebih baik dapat menurunkan kadar kreatinin  dibandingkan  dengan  dosis  150  mg/kg  BB.  Penurunan  kadar  kreatinin  dan  hilangnya kristal,  kemungkinan  karena  kandungan  metabolit  sekunder  yang  ada  pada  daun  nusa  indah  putih yang memiliki aktivitas diuretik yang membantu pengeluaran batu ginjal secara spontan dengan cara meningkatkan volume urine, pH dan aktivitas anti kalsifikasi.
Kata kunci : Daun Nusa Indah Putih (Mussaenda pubescens), Tradisional, Antilitiasis.

## ABSTRACT
The n-butanol extract of Nusa Indah Putih (Mussaenda pubescens) leaves has been investigated to determine  whether there is  antilithiasis potential through the extraction process. In the extraction process  there  are  several  stages,  namely  maceration,  fractional  distillation,  and  liquid-liquid extraction.
The research method used was a completely randomized design (CRD) method with 5 replications. 20 adult male rats with an average weight of 150-200 grams were divided into 4 treatment groups. Normal control group (P0), 0.75% ethylene glycol group (P1), Nusa Indah Putih leaf extract group (Mussaenda pubescens) at a dose of 150 mg/kg BW (P2) and Nusa Indah Putih leaf extract group (Mussaenda pubescens) at a dose of 300 mg/kg BW (P3) with the parameters of observation of rat blood serum creatinine levels and kidney histopathology in each treatment group by testing for 28 days.
The results showed that the n-Butanol extract of Nusa Indah Putih leaves could be antilithiasis where at doses of 150 mg/kg BW and 300 mg/kg BW there were no crystal deposits. Extract of n-Butanol from Nusa Indah Putih leaves at a dose of 300 mg/kg BW was better in lowering creatinine levels compared to a dose of 150 mg/kg BW. The decrease in creatinine levels and loss of crystals, possibly due to the content of secondary metabolites in Nusa Indah Putih leaves which have diuretic activity that helps expel kidney stones spontaneously by increasing urine volume, pH and anti-calcification activity.
Key words : Nusa Indah White Leaves (Mussaenda pubescens), Traditional, Antilithiasis
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7

## PENDAHULUAN
Sumber  daya  alam  hayati  Indonesia sangat berlimpah dan beraneka ragam. Diantara berbagai jenis sumber daya alam tersebut banyak yang  memiliki  nilai  ekonomi  antara  lain  jenis- jenis tumbuhan jamu dan obat. Indonesia dikenal sebagai wilayah yang memiliki koleksi tumbuhan  jamu  dan  obat  yang  sangat  tinggi keanekaragamannya  [9].  Organisasi  Kesehatan Dunia (WHO) melaporkan bahwa secara global 80%  dari  semua  Negara  tergantung  pada tanaman  obat  dan  lebih  dari  25.000-30.000 tanaman  telah  dilakukan  penelitian  untuk berbagai  penyakit  [1].  Salah  satu  dari keanekaragaman  hayati  yang  memiliki  potensi untuk  dikembangkan  sebagai  obat  tradisional adalah  daun  nusa  indah  putih (Mussaenda pubescens).
Nusa indah putih ( Mussaenda pubescens ) adalah perdu yang tergolong familia Rubiaceae atau kopi-kopian. Merupakan tanaman  liar  ditepi  hutan  atau  semak  belukar. Tumbuh  pada  daratan  rendah  hingga  daratan tinggi  atau  pada  ketinggian  2-3  meter  dengan banyak ranting, berdaun tunggal namun rimbun [6]. Analisis fitokimia dari bagian tanaman nusa indah putih ( Mussaenda pubescens ) mengandung saponin triterpenoid, flavonoid dan memiliki  aktivitas  farmakologi  tinggi  seperti antiinflamasi, antioksidan, antimikroba, diuretik dan  lain-lain  [2].  Saponin  dan  Flavonoid merupakan  metabolit  sekunder  yang  memiliki kemampuan  dapat  menurunkan  asam  urat, kreatinin, fosfat dan oksalat dari tubuh terutama ginjal [7].
Telah  diketahui  manfaatnya  secara empiris  oleh  masyarakat  yang  tinggal  diaerah Perkamil biasanya memanfaatkan tanaman nusa indah putih sebagai obat batu ginjal. Diperkirakan terdapat 12% kejadian batu ginjal pada  penduduk  dunia,  dimana  70-81%  terdapat pada  laki-laki  dan  hanya  47-60%  pada perempuan terutama pada usia 40-50 tahun [5]. Antilitiasis  (obat  batu  ginjal)  yang  mengobati batu ginjal dimana terdapat material kristal yang keras  yang  terbentuk  dalam  ginjal  atau  saluran kencing yang disebabkan oleh karena kelebihan garam-garam  dalam  aliran  darah  dan  kemudian mengkristal  dalam  ginjal.  Hasil-hasil  buangan khususnya  substansi  nitrogen  seperti  ureum, kreatinin  dan  asam  urat  terakumulasi  dalam darah. Terdapat beberapa jenis batu namun yang paling umum adalah kalsium fosfat dan kalsium oksalat.  Antilitiasis  merupakan  penyakit  yang
dapat  menyebabkan  rasa  nyeri  bahkan  sering terjadi pendarahan kecil [3][4].
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, maka  penulis  melakukan  penelitian  mengenai pengujian  daun  nusa  indah  putih  ( Mussaenda pubescens )  sebagai  antilitiasis  pada  tikus  putih ( Rattus norvegicus ).

## METODE PENELITIAN

## Alat, Bahan, Hewan Uji
Alat  –  alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini meliputi :
1. Maserasi  :  maserator, rotary  evaporator
Heidolph , sarung tangan, masker, timbangan analitik, ayakan, gesal beaker, erlemeyer,  aluminium  foil,  kertas  saring, kapas,  oven, toples kaca, dan lebel.
2. Destilasi  :  destilator,  gelas  beaker,  gelas ukur, corong, lebel.
3. Partisi : corong pisah, rotary evaporator , gelas beaker ,  gelas  ukur,  corong,  pipet, lebel.
4. Histopatologi  :  sonde  oral,  seperangkat alat  bedah,  sarung  tangan,  masker, mikrotom, mikroskop, wadah pewarnaan.
5. Kreatinin  :  sonde  oral,  seperangkat  alat bedah, sarung tangan, masker, centrifuge, clinipette ,  tabung  serum, Fotometer mikrolab 300 , mikropipet.
Bahan  –  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  meliputi  :  Sampel  Daun  nusa  indah putih  ( Mussaenda  pubescens ) ,  etanol  70%,  n- heksan, etil asetat, butanol, aquadest , etilenglikol,  eter, kit  randox  creatinine ,  serum tikus,  NaCl  fisilogis,  larutan bouin, xylol, paraffin, pewarna hematoksilin dan eosin.
Hewan  Uji  yang  digunakan  dalam peneltian  adalah  :  Tikus  putih  jantan  ( Rattus novergicus )  dengan  kisaran  bobot    150-200g sebanyak 20 ekor. Tikus-tikus dipelihara dalam kandang  plastik  berukuran  40  x  25  x  15cm dengan penutup kawat. Pemberian pakan dan air minum  dilakukan  secara ad  libitum .  Sebelum perlakuan,  tikus-tikus  diadaptasikan  selama  1 minggu.

## Rancangan Penelitian
Tikus-tikus  dibagi  kedalam  4  kelompok perlakuan dimana setiap perlakuan terdiri dari 5 ekor tikus sebagai berikut :
1. Kelompok 1 : Kelompok kontrol (P0)
2. Kelompok 2 : Kelompok perlakuan dengan etilen glikol (P1)
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
3. Kelompok 3 :
Kelompok perlakuan dengan  etilen  glikol  kemudian  diikuti dengan dosis 150 mg/kg BB (P2)
4. Kelompok 4  : Kelompok perlakuan dengan  etilen  glikol  kemudian  diikuti dengan dosis 300mg/kg BB (P3)
Parameter yang diamati :
1. Kadar kreatinin dalam serum darah
2. Histopatologi ginjal

## Cara Kerja
1. Pembuatan Simplisia
Daun  dibersihkan  dari  ranting-ranting sebanyak  6  kg,  dipotong-potong  dan  dicuci dengan air mengalir sampai bersih lalu dikering- anginkan pada suhu kamar dengan menggunakan  kipas  angin  di  ruang  yang  tidak terkena  sinar  matahari.  Setelah  kering,  daun dihaluskan  menggunakan  blender,  kemudian ditimbang dan diukur kadar air.
Penentuan  kadar  air  menggunakan metode  pengeringan  (oven)  dilakukan  dengan mengambil  sedikit  sampel  kering  (kira-kira segenggam)  kemudian  timbang  (P1).  Sampel kemudian  dimasukkan  kedalam  gelas  piala, selanjutnya  dipanaskan  dalam  oven  pada  suhu 100 0 C  selama  5  menit  kemudian  didinginkan dalam desikator lalu ditimbang (P2). Pengukuran kadar air dilakukan menurut rumus:
% Kadar Air = (P1 – P2) x 100%
P2
2. Pembuatan Ekstrak
Serbuk  kering  daun  nusa  indah  putih ( Mussaenda  pubescens )  dimaserasi  dengan etanol  70%  selama  24  jam,  kemudian  disaring. Maserasi  dilakukan  sebanyak  5  kali.  Pertama, serbuk  daun  nusa  indah  putih  sebanyak  1.4  kg dimasukkan  dalam alat maserasi lalu dilarutkan 4  liter  etanol  70%  waktu  maserasi  dilakukan selama  24  jam  kemudian  disaring.  Filtrat disimpan  sedangkan  terhadap  residu  dilakukan maserasi  dengan  menambahkan  3  liter  etanol 70%  selama  24  jam.  Dengan  cara  yang  sama dilakukan maserasi selama masing  – masing 24 jam  waktu berturut dengan 3 liter, 3 liter dan 2 liter  etanol  70%.  Filtrat  dari  hasil  maserasi dikumpulkan  sekitar  15  liter  lalu  dievap. Ekstrak kental kemudian dipartisi dengan pelarut berturut  –  turut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  n- butanol. Cara partisinya adalah dengan memasukkan  ekstrak  kental  25  gram  kedalam corong pisah kemudian ditambahkan aquades 50
ml  dan  n-heksan  75  ml  lalu  dikocok  sekitar  3 menit  dibiarkan  hingga  terbentuk  2  lapisan. Bagian  atas  dari  corong  pisah  siambil  untuk dipekatkan dengan rotary evaporator Heidolph. Dengan  cara  yang  sama  dilakukan  partisi terhadap ekstra kental menggunakan pelarut etil asetat  dan  n-Butanol.  Ekstrak  terakhir  ini  yang diperoleh  dari  pelarut  n-Butanol  yang  akan digunakan  dalam  penelitian  ini.  Ekstrak  kental kemudian di partisi dengan pelarut yang berbeda kepolarannya. Pertama, partisi dilakukan dengan menggunakan  n-heksan  sehingga  diperoleh ekstrak  air  dan  ekstrak  n-heksan  (EH).  Tahap kedua,  ekstrak  air  dipartisi  kembali  dengan menggunakan  etil  asetat  sehingga  diperoleh ekstrak air dan ekstrak etil asetat (EEA). Tahap terakhir, ekstrak air dipartisi kembali dengan n - butanol  dan  diperoleh  ekstrak n -butanol  (EB). Ekstrak n -butanol  selanjutnya  dievaporasi sehingga  diperoleh  ekstrak  kental n -butanol yang akan digunakan sebagai antilitiasis.
3. Perlakuan Hewan Uji
Setelah  adaptasi,  tikus  perlakuan  untuk kontrol (P0) hanya diberi makan dan air minum, sedangkan  kelompok    P1,  P2  dan  P3  diberi inducer etilen  glikol  0.75%  dalam  air  minum selama  14  hari  untuk  mendapatkan  tikus urolitiasis. Pada hari ke 15 perlakuan, kelompok P2 dan P3 diberi fraksi butanol daun nusa indah putih  masing-masing  dengan  dosis  150  mg/kg BB  dan  300  mg/kg  BB  yang  telah  diencerkan dengan  aquades  hingga  hari  ke  28.  Pemberian fraksi  butanol  daun  nusa  indah  putih  dilakukan melalui  oral  dengan  menggunakan  siring.  Di akhir percobaan, tikus-tikus dikorbankan melalui pembiusan dengan menggunakan eter.
4. Analisis Kreatinin
Untuk  analisis  kreatinin  dilakukan dengan menggunakan serum darah tikus. Tikus- tikus  dibedah,  kemudian  sebanyak  3  ml  darah diambil  melalui  jantung  dengan  menggunakan siring.  Darah  disentrifus  dengan  kecepatan 10000  rpm  selama  10  menit  dengan  alat centrifuge (Ependorf) untuk mendapatkan serum darah  guna  analisis  kadar  kreatinin.  Analisis kreatinin  dilakukan  dengan  metode  Jaffe Reaction  menggunakan  R 1 (Picric  acid)  dan  R 2 ( Sodium  hydroxide ).  Adapun  langkah-langkah yang  dilakukan  untuk  menganalisis  kreatinin dengan  Alat Fotometer  Mikrolab  300 sebagai berikut :
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
1) Menyiapkan  tabung  sesuai  banyaknya sampel (4 buah)
2) 250  µL  R 2 diencerkan  lalu  ditaruh  pada jumlah tabung pemeriksaan
3) Ambil R 1 creatinine ditambah 250 µL R 2
4) Pembacaan  hasil  dapat  dilakukan  pada alat Fotometer Mikrolab 300 (RN-CREA DOC 2010)
5. Analisis Histopatologi Ginjal
Abdomen  dibuka  kemudian  ginjal diambil,  dibersikan  dari  jaringan  sekitarnya kemudian  difiksasi  dengan  larutan  bouin. Selanjutnya  di  embedding  diparaffin,  dipotong secara  horizontal  dengan  ketebalan  5µ  dan diwarnai  dengan  hematoksilin-eosin  (H-E) untuk melihat perubahan histopatologi.

## Analisis Data
Untuk  melihat  perubahan  histopatologi dilakukan analisis deskritif secara kualitatif dan untuk analisis kadar  kreatinin dilakukan secara kuantitatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Antilitiasis Daun Nusa Indah Putih
a. Ekstrak  n-Butanol  Daun  Nusa  Indah  Putih ( Mussaenda pubescens)
Sebelum  dilakukan  ekstraksi  terlebih dahulu ditentukan kadar airnya. Penentuan kadar air  dilakukan  dengan  menimbang  berat  mula  - mula  sampel  kering  dikurangi  berat  setelah pemenasan dalam oven dan dibagi dengan berat dari  oven  kemudian  dikalikan  dengan  100% sehingga  hasil  yang  diperoleh  adalah  4.25%. Setelah  sudah  diketahui  kadar  airnya,  ekstraksi dapat  dilakukan  karena  sampel  mengandung kadar air dibawa 10%. Ekstrak daun nusa indah putih diperoleh dari hasil maserasi serbuk kering daun nusa indah putih. Hasil maserasi dari daun nusa  indah  putih  1.4  kg  sebagaimana  diuraikan dalam  metode  penelitian  diperoleh  15  liter. Terhadap filtrat ini dilakukan rotary evaporator pada  temperatur  40  C  dan  diperoleh  ekstrak kental 217.72 gram dengan karakteristik sampel berwarna  hijau  pekat.  Untuk  memperoleh ekstrak  daun  nusa  indah  putih  yang  akan digunakan untuk uji antilitiasis  maka dilakukan partisi  dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan, etil asetat, dan n-Butanol.
Dari  hasil  ekstrak  kental  diambil  25 gram,  kemudian  di  partisi  dengan  pelarut  yang berbeda kepolarannya. Pertama, partisi
dilakukan  dengan  menggunakan  n-heksan  yang bersifat  nonpolar  yang  dilakukan  dengan  cara dikocok  dan  dibiarkan  hingga  terbentuk  dua lapisan  sehingga  diperoleh  ekstrak  air  dan pelarut  n-heksan  (EH).  Partisi  dilakukan berulang  sampai  ekstrak  terpartisi  sempurna kemudian  hasil  partisi  diambil  dan  dipekatkan dengan rotary  evaporator sehingga  didapatkan ekstrak  n-heksan.  Tahap  kedua,  ekstrak  air dipartisi  kembali  dengan  menggunakan  etil asetat yang bersifat semi polar dilakukan dengan cara dikocok dan dibiarkan hingga terbentuk dua lapisan  sehingga  diperoleh  ekstrak  air  dan pelarut  etil  asetat    (EEA).  Hasil  partisi  diambil dan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator sehingga  didapatkan  ekstrak  etil  asetat  (EEA). Tahap  terakhir,  ekstrak  air  dipartisi  kembali dengan n-Butanol yang bersifat polar dilakukan dengan  cara  dikocok  dan  dibiarkan  hingga terbentuk dua lapisan sehingga diperoleh ekstrak air  dan  pelarut  n-Butanol    (EB).  Hasil  partisi tersebut diambil selanjutnya dievaporasi sehingga diperoleh ekstrak n -butanol.
b. Skrining Saponin dan Flavonoid Tabel 1.  Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  n-
Butanol daun nusa indah putih Golongan senyawa Hasil uji Saponin + Flavonoid + Keterangan : tanda ( + ) menunjukan tingkat intensitas warna
c. Analisis Histopatologi Ginjal Tikus
Hasil  penelitian  histopatologi  dari  uji daun  nusa  indah  putih (Mussaenda  pubescens) sebagai  antilitiasis  pada  tikus  putih (Rattus norvegicus) adalah sebagai berikut :
Gambar  1  histologi  ginjal  tikus  kontrol nampak  glomerulus  dan  tubulus  yang  dalam keadaan  normal  dimana  pada  tubulus  ginjal dengan  sel  –  sel  inti  yang  masih  utuh  dan glomerulus yang masih nampak jelas.
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
Gambar  1  :  Histopatologi  ginjal  tikus  control dengan perbesaran mikroskop 40x
a. Glomerulus b. Tubulus Gambar 2 : Histopatologi ginjal tikus urolitiasis dengan perbesaran mikroskop 40x a. Glomerulus     b. Tubulus c. Mikrokristal
Pada  tikus  yang  diinduksi  etilen  glikol 0.75%  (Gambar  2)  terlihat  adanya  kerusakan pada  glomerulus.  Pada  tubulus  ginjal,  sel-sel epitel  mengalami  inflamasi  bahkan  kehilangan inti yang ditandai dengan sel-sel mulai mengecil. Terdapat endapan kristal yang terlihat ditubulus ginjal tikus.
Gambar 3 : Histopatologi ginjal tikus ekstrak n- butanol  daun  nusa indah putih 150
mg/kg  BB    dengan  perbesaran mikroskop 40x a. Glomerulus b. Tubulus Pemberian ekstrak n-Butanol daun nusa indah  putih  dosis  150  mg/kg  BB  pada  tikus urolitiasis (Gambar 3) ternyata belum menunjukkan adanya perbaikan pada glomerulus  dan  tubulus  ginjal.  Masih  terlihat adanya  kerusakan  pada  glomerulus  dan  tubulus seperti inflamasi, sel-sel  epitel yang  kehilangan inti. Namun tidak  terdapat lagi  endapan kristal seperti  yang  terlihat  pada    ginjal  tikus  yang diinduksi dengan etilen glikol.
Gambar 4 : Histopatologi ginjal tikus ekstrak n- butanol daun nusa indah putih 300 mg/kg BB  dengan perbesaran mikroskop 40x a. Glomerulus b. Tubulus
Pemberian ekstrak n-Butanol daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens )  300 mg/kg BB  pada  tikus  urolitiasis  (Gambar  4)  masih menunjukkan adanya kerusakan pada glomerulus dan tubulus seperti inflamasi, sel sel epitel  yang  kehilangan  inti  tetapi  tidak  terdapat adanya endapan kristal seperti yang terlihat pada ginjal tikus yang diinduksi dengan etilen glikol.
Dalam  penelitian  ini  pemilihan  tikus jantan  sebagai  hewan  uji  untuk  urolitiasis dikarenakan  pada  tikus  jantan  menyerupai sistem  urinaria  manusia.  Presentasi  terjadinya batu  ginjal  pada  tikus  jantan  mencapai  70-81% sedangkan  tikus  betina  47-60%.  Hal  ini disebabkan  tikus  jantan  memiliki  hormon testosteron yang dapat meningkatkan terjadinya batu ginjal, sedangkan pada tikus betina adanya hormon estrogen yang menghambat pembentukan batu ginjal [8].
Pemberian etilen glikol dalam penelitian ini  adalah  untuk  merangsang  terbentuknya urolitiasis, karena  etilen  glikol  merupakan agen
b a a b c b a a b
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
nefrotoksik  yang  sering  digunakan  pada  suatu eksperimen  dengan  hewan  model  tikus  untuk merangsang  terbentuknya  kalsium  oksalat  di ginjal.  Etilen  glikol  diserap  dan  dimetabolisme di  hati  oleh  enzim  alkohol  dehydrogenase  atau aldehid  dehydrogenase  menjadi  asam  glikolat. Asam  glikolat  kemudian  dioksidasi  menjadi asam  glioksalat  yang  selanjutnya  dioksidasi menjadi  asam  oksalat  oleh  enzim  glikolat oksidase atau laktat dehydrogenase.
Pemberian ekstrak n-Butanol daun nusa indah  putih  dosis  150  mg/kg  BB  pada  tikus urolitiasis  ternyata  belum  menunjukkan  adanya perbaikan  pada  glomerulus  dan  tubulus  ginjal. Begitu juga dengan dosis 300 mg/kg BB belum menunjukkan  adanya  perbaikan.  Pada  tubulus ginjal, sel-sel epitel mengalami inflamasi bahkan kehilangan  inti.  Namun  tidak  terdapat  adanya endapan kristal seperti  yang terlihat  pada ginjal tikus yang diinduksi oleh etilen glikol.
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  n-Butanol daun nusa indah putih mengandung saponin dan flavonoid.
Hasil  penelitian  histopatologi  ginjal ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih  pada dosis  150  mg/kg  BB  dan  300  mg/kg  ekstrak  n- Butanol  masih  menunjukkan  adanya  kerusakan pada  glomerulus  dan  tubulus  seperti  inflamasi, sel  sel  epitel  yang  kehilangan  inti.  Tetapi  tidak terdapat  adanya  endapan  kristal  seperti  yang terlihat pada ginjal tikus yang diinduksi dengan etilen glikol.  Karena  pada  histopatologi memerlukan  waktu perbaikan  yang cukup lama pada struktur ginjal yang mengalami urolitiasis.

## Analisis Kadar Kreatinin
Analisis kadar kreatinin dilakukan pada serum  darah  tikus  dengan  menggunakan  alat Fotometer  Mikrolab  300 .  Berdasarkan  hasil kadar  kreatinin  sebelum  perlakuan  pada kelompok  kontrol  (P0)  adalah  0.6  mg/dL kemudian setelah perlakuan pada kelompok (P1) dengan etilen glikol kadar kreatinin naik menjadi 1.8  mg/dL.  Dibandingkan  dengan  kelompok (P2)  ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih 150 mg/kg kadar kreatinin menurun menjadi 1.6 mg/dL dan penurunan juga pada kelompok (P3) ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih  300 mg/kg dengan keadaan normal 0.8 mg/dL.
Tabel 4.2 Hasil analisis kadar kreatinin serum
darah tikus putih Kelompok Kreatinin Kontrol ( P0 ) 0.6 mg/dL
Etilen glikol 0.75% ( P1 ) Etilen glikol 0.75% + ekstrak n- Butanol 150 mg/kg BB ( P2 ) Etilen glikol 0.75% + ekstrak n- Butanol 300 mg/kg BB (P3 ) 1.8 mg/dL 1.6 mg/dL 0.8 mg/dL
Pada pemberian ekstrak n-Butanol daun nusa  indah  putih  300  mg/kg  dapat  menurunkan kadar kreatinin dalam serum darah tikus. Kadar kreatinin  pada  kelompok  P3  lebih  rendah dibandingkan dengan kelompok P2. Hal tersebut membuktikan  bahwa  pada  dosis  300  mg/kg ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih  lebih baik  kerena  dapat  menurunkan  kadar  kreatinin dalam serum darah tikus.
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  n-Butanol daun nusa indah putih mengandung saponin dan flavonoid.
Pada  kadar  kreatinin  dosis  300  mg/kg menurun  pada  keadaan  normal  0,8  mg/dL dimana histopatologi ginjal tikus pada dosis 300 mg/kg  BB  dan  150  mg/kg  BB  sudah  tidak  ada lagi  endapan  kristal  walaupun  glomerulus  dan tubulus masih dalam  keadaan rusak. Penurunan kadar kreatinin dan hilangnya kristal, kemungkinan  karena  kandungan  metabolit sekunder  yang  ada  pada  daun  nusa  indah  putih yang memiliki aktivitas diuretik yang membantu pengeluaran  batu  ginjal  secara  spontan  dengan cara  meningkatkan  volume  urine,  pH  dan aktivitas anti kalsifikasi.

## KESIMPULAN
1. Berdasarkan  hasil  penelitian  ekstrak  n- Butanol  daun  nusa  indah  putih  berpotensi sebagai  antilitiasis  dimana  pada  dosis  150 mg/kg BB dan 300 mg/kg BB tidak terdapat adanya endapan kristal.
2. Ekstrak  n-Butanol  daun  nusa  indah  putih dosis 300 mg/kg lebih baik dapat menurunkan  kadar  kreatinin  dibandingkan dengan dosis 150 mg/kg BB.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Dewoto, Heidi R. 2007. Pengembangan Obat
Tradisional Indonesia Menjadi Fitofarmaka.  (Diakses  pada  tanggal  1 Februari 2017)
2. Gunasekaran, S. Sundaramoorthy, S. Sathiavelu, M.and Arunachalam, S.2015.  The  genus Mussaenda :  A phytopharmacological  review.Journal of  Chemical  and  Pharmaceutical
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 1-7
Research.7(7):1037-1042. (Diakses pada tanggal 1 Februari 2017) 3. Joy, J.W., S. Prathyusha., S. Mohanalakshmi., A.V.S. Praveen Kumar.,  C.K.  Ashok  Kumar.  2012. Potent  Herbal  Wealth  with  Litholytic Activity.  A  Review.Int.  J.  Innovative Drug Discovery. (Diakses pada tanggal 1 Februari 2017).
4. Patra,  Kartika  Chandra.  Ranjit  Harwansh. 2011. In-Vitro Calcium Oxalate Crystallization Inhibition by Achyranthes Indica Linn. Hydroalcoholic Extract : An Approach To Antilithiasis. Diakses pada tanggal
1 Februari 2017 )
5. Pelealu,  J.J.  Tuju,  E.A.  Agu,  J.  2015. Antilithiatic  activity  of artocarpus altilis leaves  ethanol  ektract  in  male albino  rats.1:(1-8).  (Diakses  pada tanggal 1 Februari 2017 ).
6. Setiawan,  D.  2009. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia . Puspa Swara. Jakarta. 7. Sukmasari,  M.  Fatmah,  T.2006.  analisis
Kadar  Saponin  dalam  Daun  Kumis Kucing Dengan Menggunakan Metode
TLC-Scanner. Balai Penelitian
tanaman  Obat  dan  Aromatik.  Bogor. (313-315).  (  Diakses  pada  tanggal  1 Februari 2017).
8. Walean,  M.  2015.  Dna barcode dan  uji efektivitas  antilitiasis  ekstrak  etanol kulit  batang  Pakoba  ( Syzygium  sp ). Tesis.  Program  pasca  sarjana  Jurusan Biologi UNIMA. (Diakses pada tanggal 1 Februari 2017 ) 9. Zuhud,  Ervizal  Amir  M,  1989.  Strategi Pelestarian dan Pemanfaatan Keanekaragaman  Hayati  Tumbuhan Obat  Indonesia.  Fakultas  Kehutanan IPB.  Bogor.  (Diakses  pada  tanggal  1
Februari 2017)