Pengaruh Pemberian Ekstrak Okra ( Abelmoschus Esculentus ) terhadap Peningkatan Eritrosit dan Hemoglobin (Hb) Darah Tikus Putih Jantan
( Rattus Norvegicus ) Anemia yang Diinduksi Natrium Nitrit (NaNO 2 )
Endah Setyarini 1* , Enrico Kuswahyuliawan 2 , Diah Hermayanti 3 , Bragastio Sidharta 4
1) Rumah Sakit Haji Provinsi Jawa Timur, setyarini@umm.ac.id
2) Universitas Muhammadiyah Malang, enrico_k1@gmail.com
3) Universitas Muhammadiyah Malang, hermayanti@umm.ac.id
4) Universitas Muhammadiyah Malang, bragastyo@umm.ac.id

## ABSTRAK
Anemia hemolitik adalah suatu keadaan jumlah eritrosit dan tingkat hemoglobin yang kurang dari nilai normal karena perpendekan usia, pemecahan dan kehancuran dari eritrosit. Salah satu faktor penyebab pecah dan kehancuran dari eritrosit  karena  stres  oksidatif. Okra  mengandung  flavonoid  antioksidan  yang  dapat  melawan  dan  mencegah  stres oksidatif.  Penelitian  ini  untuk  menentukan  efektivitas  ekstraksi  okra  (abelmoschus  esculentus)  pada  peningkatan angka dari eritrosit dan hemoglobin (Hb) maupun darah anemia tikus putih jantan (rattus norvegicus) disebabkan oleh natrium  nitrit  (NaNO 2 ).  Percobaan  dengan  posttest  hanya  diadakan.  desain  kelompok  kontrolJumlah  sampel  yang digunakan 24 tikus putih jantan (rattus norvegicus) terbagi menjadi 4 kelompok; positif, kelompok kontrol yang hanya diberi  NaNO 2 dan  yang  lain  tiga  kelompok  diberi  NaNO 2 dan  okra  mengekstrak  (abelmoschus  esculentus)  di 200mg/kgbw/hari,  300mg/kgbw/hari,  dan  400mg/kgbw/hari  selama  28  hari.  Sampel  darah  diambil  dan  kemudian jumlah eritrosit dan tingkat hemoglobin dihitung menggunakan sebuah hematoanalyzer.hasil uji Anova yang diperoleh menunjukkan  nilai  yang  signifikan  (sig=0.000)  di  antara  kelompok.  Dapat  disimpulkan  Okra  (abelmoschus esculentus)  ekstrak  yang  berhasil  menambah  jumlah  eritrosit  dan  hemoglobin  (Hb)  tingkat.  Okra  (abelmoschus esculentus)  ekstrak  memiliki  efek  pada  meningkatkan  jumlah  eritrosit  dan  tingkat  hemoglobin  darah  anemia  tikus putih jantan.
Kata Kunci : Okra, sodium nitrat, anemia hemolitik

## ABSTRACT
Hemolytic anemia is a condition which the number of erythrocytes and hemoglobin levels are less than normal due to shortening of life span, rupture and destruction of erythrocytes. One of the factors causing the rupture and destruction of  erythrocytes  is  oxidative  stress.  Okra  contain  flavonoid  antioxidants  that  can  counteract  and  prevent  oxidative stress.  This  research  to  determine  the  effectiveness  of  okra  (Abelmoschus  Esculentus)  extract  on  increasing  the number  of  erythrocytes  and  hemoglobin  (Hb)  levels  in  the  blood  of  anemia  male  white  rats  (Rattus  Norvegicus) induced by sodium nitrite (NaNO 2 ). Experiment with Posttest Only Control Group Design was held. The number of samples  used  were  24  male white  rats  (Rattus  norvegicus)  which  were  divided  into  4  groups; the positive  control group, which was only given NaNO 2 and the other three groups were given NaNO 2 and okra extract (Abelmoschus Esculentus) at 200mg/kgBW/day,  300mg/kgBW/day, and 400mg/kgBW/day  for 28 days. Blood  samples were  taken and then the number of erythrocytes and hemoglobin levels were calculated using a hematoanalyzer. Anova test results obtained a significant value (sig, 0.000) between groups. Okra (Abelmoschus Esculentus) extract was able to increase the  number  of  erythrocytes  and  hemoglobin  (Hb)  levels.  Okra  (Abelmoschus  Esculentus)  extract  has  an  effect  on increasing the number of erythrocytes and blood hemoglobin levels of anemic male white rats.
Keywords: Abelmoschus Esculentus, okra, sodium nitrit, hemolytic anemia
*Korespondensi  Author:  Endah  Setyarini , Rumah  Sakit  Haji  Provinsi  Jawa  Timur, setyarini@umm.ac.id ,  (031) 5924000

## I.  PENDAHULUAN
Anemia  suatu  kondisi  jumlah  eritrosit dan  kandungan  hemoglobin  kurang  dari  batas normal.  Salah  satu  jenis  anemia  adalah  anemia
hemolisis,  dimana  anemia  ini  disebabkan  oleh pemendekan  masa  hidup  akibat  kerusakan disertaihancurnya  sel  darah  merah.  Salah  satu faktor  penyebab  pecah  dan  hancurnya  sel  darah
merah  adalah oxidative  stress .  Natrium  nitrit sendiri adalah senyawa yang banyak dipergunakan  di  masyarakat  sebagai  pengawet makanan khususnya daging. Penggunaan berlebih  dari  natrium  nitrit  pada  makanan berbahaya  karena  mampu  meningkatkan  radikal bebas dan menimbulkankondisi oxidative stress . Oxidative stress akan  memudahkan  terjadinya reaksi  oksidasi  dari  hemoglobin  menjadi methemoglobin  dimana  apabila  terakumulasi dalam  jumlah  besar  dapat  menimbulkan kerusakan  pada  sel  darah  merah.  Untuk menangkal  radikal bebas  dan  mencegah  kondisi oxidative  stress diperlukan  zat  antioksidan. Tanaman  okra  memiliki  kandungan  antioksidan flavonoid khususnya quercetin yang  mampu menangkal  radikal bebas  dan  mencegah  kondisi oxidative stress sehingga mampu mencegah dan memperbaiki  kerusakan  pada  sel  darah  merah akibat dari radikal bebas
II. METODOLOGI
Penelitian ini menggunakan jenis
penelitian Post Test Only Control Group Design .
Jumlah  sampel  sebanyak  24  ekor  tikus  putih
jantan  ( Rattus  Norvegicus )  terbagi  dalam  4 kelompok,  yaitu kelompok  kontrol  positif, yang diberikan  NaNO 2 saja,  dan  tiga  kelompok  lain yang  diberikan  NaNO 2 dan  ektrak  okra (A belmoschus Esculentus ) dengan dosis berbeda (200mg/kgBB/hari, 300mg/kgBB/hari, dan 400mg/kgBB/hari )  selama 28 hari . Pada hari ke-
29  sampel  darah  intracardia  diambil  kemudian keseluruhan  sampel  darah  dihitung  jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin menggunakan alat hematoanalyzer

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  tikus  putih  ( Rattus Norvegicus )  jantan  diinduksi  NaNO 2 kemudian diberikan  ekstrak  buah  okra  ( Abelmoschus Esculentus )  dengan  dosis  yang  berbeda  pada masing-masing  kelompok  selama  28  hari.  Pada hari  ke  29  diambil  sampel  darah  tikus  putih ( Rattus  Norvegicus )  untuk  dihitung  jumlah eritrosit dan kadar hemoglobinmenggunakan alat hematoanalyzer dan  diperoleh  hasil  sebagai berikut.
Tabel 1. Hasil Perhitungan Jumlah Eritrosit
Kelompok Perlakuan Jumlah Eritrosit (10 6  L) T-1 T-2 T-3 T-4 T-5 T-6 Rata - Rata SD K (+) - 6,28 6,58 - 7,17 6,88 6,72 0,38 P1 7,57 7,48 7,30 7,62 7,73 7,96 7,61 0,22 P2 8,57 8,06 8,56 8,31 7,69 8,04 8,20 0,34 P3 8,86 9,12 - 8,66 9,24 9,33 9,04 0,28 Tabel 2 Hasil Perhitungan Kadar Hemoglobin Kelompok Perlakuan Kadar Hemoglobin (g/dL) T-1 T-2 T-3 T-4 T-5 T-6 Rata - Rata SD K (+) - 10,3 10,8 - 11,5 11,3 10,97 0,54 P1 11,6 12,3 11,6 12,3 12,1 12,4 12,05 0,36 P2 12,6 12,3 13,3 12,6 12,5 13 12,71 0,37 P3 14,5 13,7 - 13,5 14,4 14,5 14,12 0,48 Keterangan : K (+) : Kelompok yang diberikan NaNO 2 saja. P1 : Kelompok yang diberikan NaNO 2 dan ekstrak buah okra dengan dosis 200mg/kgBB/hari.
P2
: Kelompok yang diberikan NaNO 2 dan ekstrak buah okra dengan dosis 300mg/kgBB/hari.
P3
: Kelompok yang diberikan NaNO 2 dan ekstrak buah okra dengan dosis 400mg/kgBB/hari.
Data  pada  tabel  diatas  menunjukkan bahwa  semua  tikus  putih  ( Rattus  Norvegicus ) jantan memiliki  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemoglobi  yang  berbeda–beda  menunjukkan bahwa  rerata  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemoglobin  terendah  pada  kelompok  K(+) dimana  kelompok  ini  hanya  diberikan  NaNO 2 dengan dosis 1,5 mg/200 gram BB/hari selama 14 hari.  Rerata  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemoglobin tertinggi terdapat pada kelompok P3 dimana  pada  kelompok  ini  diberikan  NaNO 2 dengan dosis 1,5 mg/200 gram BB/hari selama 14 hari  kemudian  diberikan  ekstrakbuah  okra ( Abelmoschus Esculentus ) dengan dosis 400mg/kgBB/hari selama 14 hari. Kelompok P2 dimana  pada  kelompok  ini  diberikan  NaNO 2 dengan dosis 1,5 mg/200 gram BB/hari selama 14 hari  kemudian  diberikan  ekstrak  buah  okra ( Abelmoschus Esculentus ) dengan dosis 300mg/kgBB/hari selama 14 hari memiliki rerata jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin yang lebih tinggi  dari  pada  kelompok  P1  dimana  pada kelompok ini diberikan NaNO 2 dengan dosis 1,5 mg/200  gram  BB/hari selama 14  hari  kemudian diberikan  ekstrak  buah  okra  ( Abelmoschus Esculentus )  dengan  dosis  200mg/kgBB/hari selama 14 hari Pada penelitian
ini hasil dari penghitungan hematoanalyzer didapatkan bahwa kelompok  perlakuan  dengan  ekstrak  okra
( Abelmoschus
Esculentus ) mengalami
peningkatan  jumlah  eritrosit  dan  kandungan hemoglobin  dibandingkan  kelompok  kontrol positif yang hanya diberi natrium nitrit (NaNO 2 ). Berdasarkan hasil uji statistik ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan (0,000)  pada  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemogobin.
Pada kelompok P3 mengalami  kenaikan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin tertinggi, berdasarkan  uji  statistik Post Hoc  LSD didapatkan  juga  bahwa  kelompok  P3  efektif dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan lainnya. Hal ini dapat dilihat dari mean difference atau selisih rata-rata yang membandingkan antar kelompok.  Selisih  rata-rata  yang  paling  besar merupakan  yang  paling  baik  atau  efektif.  Pada kelompok  hasil  jumlah  eritrosit  paling  efektif kelompok  P3  dengan  nilai  2,31450  selanjutnya
kelompok P2 dengan nilai 1,47750 lalu kelompok P1  yaitu  dengan  nilai  0,88250.  Pada  kelompok hasil kadar hemoglobin paling efektif kelompok P3  dengan  nilai  3,14500  selanjutnya  kelompok P2 dengan nilai 1,74167 lalu kelompok P1 yaitu dengan nilai 1,07500.
Untuk  mengetahui  hubungan  antar kelompok dilakukan uji statistic korelasi. Pada uji statistik  korelasi  menunjukkan  bahwa  terdapat korelasi yang bermakna antara dosis penambahan ekstrak buah okra ( Abelmoschus Esculentus ) dan jumlah eritrosit maupun kadar hemoglobin (nilai korelasi Pearson 0,737 dan 0,742). Hal tersebut menjelaskan  bahwa  semakin  tinggi  dosis penambahan  ekstrak  buah  okra  ( Abelmoschus Esculentus )  maka  akan  semakin  berpengaruh dalam peningkatan jumlah eritrosit dan kandungan hemoglobin. Untuk melihat pengaruh pada penelitian ini dilanjutkan uji statistic regresi, dan didapatkan hasil sebesar 52,3% untuk jumlah eritrosit  dan  52,9%  untuk  kadar  hemoglobin, dimana  hal  ini  berarti  pemberian  ekstrak  buah okra ( Abelmoschus Esculentus ) pada  tikus putih ( Rattus Norvegicus )  jantan  yang  diinduksi NaNO 2 akan  meningkatkan  jumlah  eritrosit sebesar  52,3%  dan  berpengaruh  terhadap peningkatan  kandungan  hemoglobin  sebesar 52,9%.
Natrium  nitrit  (NaNO 2 )  merupakan  zat yang sering digunakan dalam proses pengolahan daging  karena  bermanfaat  untuk  menghambat tumbuhnya bakteri clostridium botalinum , warna merah  pada  daging  dapat  dipertahankan  agar menarik,  dan  cita  rasa  khas  pada  daging. 1 Natrium nitrit yang digunakan secara berlebihan tenyata menimbulkan
akibat
yang membahayakan bagi kesehatan. Paparan natrium nitrit  berlebih  akan  membentuk  keadaan oxidative  stress yang  akan  memudahkan terjadinya  oksidasi  hemoglobin  yang  akan membentuk  methemoglobin. 2,3 Pada  penelitian menggunakan  natrium  nitrit  diharapan  mampu menurunkan
jumlah eritrosit
dan kadar/kandungan  hemoglobin  karena  menurut Ambarwati  (2012)  pada  hasil  penelitiannya menyebutkan  natrium  nitrit  dengan  dosis  1,5 mg/200gramBB  mampu  menurunkan  jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin dibanding dengan dosis 0,5 mg/200gramBB. 2
Penurunan  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemoglobin ini karena terbentuknya methemoglobin terjadi melalui beberapa mekanisme.  Senyawa  natrium  nitrit  ini  akan masuk ke sel darah merah diperantarai anion dan sebagian  lagi  secara  difus  dimana  hal  ini menyebabkan  hiperpolarisasi  membran  dan oxidase  hemoglobin.  Pada  membran  sel  darah merah ini mengandung Plasma Membrane Redox System (PMRS) merupakan system rantai transfer electron  pada  sel  dimana  berfungsi  sebagai penurun  oxidative  stress,  pertumbuhan  sel, uptake  nutrisi,  dan  besi.  Natrium  nitrit  ini  akan menghambat  aktivitas  PMRS  sehingga  terjadi peningkatan oxidative stress. 4,5,6 Keadaan
oxidative  stress ini  akan  meningkatkan  dan mempermudah terjadinya oksidasi dari hemoglobin  (HbFe 2+ )  menjadi  methemoglobin (HbFe 3+ ) 2,3,5 lebih  lanjut  dijelaskan  dampak methemoglobin  dapat  menyebabkan  rigid  dan pecahnya sel darah sehingga dapat mengarah ke anemia hemolisis. 7
Pemberian  natrium  nitrit  ini  dilanjutkan dengan  pemberian  ekstrak  okra  ( Abelmoschus Esculentus )  yang  bertujuan  untuk  melihat peningkatan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin. Pada hari ke – 29 sampel darah tikus diambil  kemudian  jumlah  eritrosit  dan  kadar hemoglobin dihitung menggunakan alat hematoanalyzer dan  terlihat  bahwa  semua kelompok  perlakuan  dengan  pemberian  ekstrak okra  ( Abelmoschus  Esculentus )  mengalami peningkatan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin  dibandingkan  kelompok  control positif  yang  hanya  diberikan  natrium  nitrit (NaNO 2 ).
Pada  penelitian  kali  ini  menggunakan empat kelompok yaitu kelompok yang diberikan NaNO 2 saja,  kelompok  yang  diberikan  NaNO 2 dan ekstrak buah okra dengan dosis
200mg/kgBB/hari (P1), kelompok yang
diberikan  NaNO 2 dan  ekstrak  buah  okra  dengan dosis 300mg/kgBB/hari (P2), dan kelompok yang diberikan  NaNO 2 dan  ekstrak  buah  okra  dengan dosis 400mg/kgBB/hari (P3). Penelitian menggunakan dosis ekstrak methanol buah okra untuk  melihat  efek  proteksi testosterone  level pada  tikus  karena  kandungan  antioksidan flavonoid  pada  okra.  Hasil  dari  penelitian
tersebut  menyebutkan  dosis  signifikan  sebesar 200mg/kg dan 400 mg/kg. 8 Antioksidan dari okra ini  memiliki  kemampuan  aktivitas  yang  cukup kuat  berdasarkan  uji  aktivitas  antioksidan  yang telah  dilakukan  menggunakan  metode  DPPH dengan hasil IC 50 sebesar 27,15 ppm. 9 Senyawa antioksidan flavonoid ini akan menghambat atau mengurangi  radikal  bebas  dengan  bertindak sebagai reductant yaitu  menyumbang  atom hidrogen  dari  grup  hidroksilnya  yang  akan menekan pembentukan radikal bebas. Mekanisme reaksi dari flavonoid dengan radikal bebas ini melibatkan penyaluran kation hidrogen dari  flavonoid  ke  radikal  bebas  melalui redox reaction sehingga lebih stabil. 10,11 Flavonoid juga mampu  berikatan  dengan  logam  yang  berperan dalam  metabolism  oksigen  seperti  ion  besi dimana ion  besi bebas  berpotensi meningkatkan radikal  bebas,  sehingga  flavonoid  mampu mereduksi  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ . Sesuai  dengan mekanisme  mekanisme  tersebut  maka  akan terjadi  perbaikan  yang  akan  meningkatkan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin. 12,13
Anemia  merupakan  penyakit  yang memerlukan perhatian khusus karena bila terjadi dalam derajat yang parah dalam waktu yang lama akan  menimbulkan  berbagai  gangguan  atau dampak  yang  mempengaruhi  kehidupan.  Perlu menjadi perhatian lebih jika anemia terjadi pada remaja.  Beberapa  akibat  anemia  pada  remaja, antara lain:
1. Penurunan imunitas
2. Gangguan konsentrasi
3. Penurunan prestasi belajar
4. Mengganggu kebugaran dan produktivitas.
5. Memperbesar resiko kematian saat melahirkan
6. Menjadi salah satu penyebab bayi lahir prematur
7. Berat bayi yang cenderung rendah
Selain daripada itu, jika keadaan anemia tidak segera diatas dapat terjadi komplikasi yang tidak kita harapkan, antara lain:
Jika dibiarkan tanpa penanganan, anemia berisiko menyebabkan komplikasi serius, seperti:
1. Kelelahan
sehingga mengganggu
aktivitas
2. Terjadinya  gangguan  pada  jantung, seperti aritmia (gangguan irama jantung) dan gagal jantung
3. Gangguan pada paru-paru, seperti hipertensi pulmonal 4. Komplikasi kehamilan, antara lain kelahiran prematur atau bayi terlahir dengan berat badan rendah
5. Tumbuh kembang terganggu jika anemia terjadi pada anak-anak atau bayi
6. Mudah terkena infeksi

## IV. SIMPULAN DAN SARAN
Pemberian  ekstrak  okra  ( Abelmoschus Esculentus ) berpengaruh terhadap meningkatnya jumlah  sel  eritrosit  dan  kadar/kandungan hemoglobin darah tikus putih ( Rattus norvegicus ) jantan yang diinduksi natrium nitrit (NaNO 2 ) dan dosis  ekstrak  okra  ( Abelmoschus Esculentus ) sebesar  400mg/kgBB/hari  dapat  meningkatkan jumlah sel eritrosit dan kadar hemoglobin darah tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  jantan  yang diinduksi natrium nitrit (NaNO 2 ).

## V. UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  saya  ucapkan  kepada seluruh  jajaran  dosen  dan  staf  kependidikan Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang atas bantuan, saran, dan masukan selama penelitian ini

## REFERENSI
1. Anggresani a Lia,  Armini  Hadriyati,  Angga a Yuri Syahyara,  Septa a Pratama. Analisis  Kandungan Natrium a Nitrit  pada  Daging  Sapi  Mentah  di Pasar  dan  Supermarket  Kota  Jambi .  Jambi.
Chempublish Journal. 2018.
2. Ambarwati a Rini.  Effect  Of  Sodium  Nitrite  to Erithrocyte and Hemoglobin Profile in White a Rat (Rattus norvegicus). Surabaya. Health Polytechnique a Ministry of Health. 2012.
3. Harwood-Nuss. Clinical Practice Of Emergency Medicine Sixth Edition ; Chapter 335.
Philadelphia. Wolters Kluwer Health. 2014.
4. Hyun  Dong-Hoon  ,  Joe  O.  Hernandez,  Mark  P. Mattson,  Rafael  de  Cabo. Review  The  plasma membrane  redox  system  in  aging .  Baltimore.
Elsevier. 2006.
5. Ansari Fariheen a Aisha, Riaz Mahmood. Sodium nitrite a enhances  generation  of  reactive  oxygen species a that decrease antioxidant power and a inhibit  plasma  membrane  redox a system  of
human  erythrocytes.  Uttar  Prades.  International Federation for Cell Biology. 2016.
6. Singh  Prabhakar,  Rajesh  Kumar  Kesharwani, Krishna  Misra,  Syed  Ibrahim  Rizvi. Research Article  Modulation  of  Erythrocyte  Plasma Membrane Redox  System Activity  by  Curcumin . Allahabad.  Hindawi  Publishing  Corporation Biochemistry Research International. 2016.
7. Umbreit, J. Methemoglobin — It’s Not Just Blue : A  Concise  Review .  American  journal  of hematology. 2007. Vol.82.
8. Suhargo  Listijani,  Brilian  Ratna  Wati,  Sri  Puji Astuti Wahyuningsih. Protective Effect Of Okra Pods  Methanol  Extract  Against  Lead  Acetate- Induced  Testicular  Toxicity  In  Mice. Surabaya. Research Gate EM International. 2019.
9. Faisal a Hendri. Uji a Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol a Buah Okra (Abelmoschus esculentus  L.  Moench)  Dengan  Metode  DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil) dan Metode ABTS (2,2-azinobis-(3-Ethylbenzothiazoline-6- Sulfonic Acid). Regional Development Industry &  Health  Science,  Technology  and  Art  of  Life. 2019.
10. Panche  A.  N.,  A.  D.  Diwan,  S.  R.  Chandra. Review  Article  Flavonoids:  an  overview . Aurangabad.  Journal  of  Nutritional  Science. 2016.Vol. 5.
11. Francenia  Norma  Santos-Sánchez,  Raúl  Salas- Coronado,  Claudia  Villanueva-Cañongo  and Beatriz Hernández-Carlos. Antioxidant
Compounds  and  Their  Antioxidant  Mechanism.
Mexico. Licensee IntechOpen. 2019.
12. Nicole Cotelle. Role of  Flavonoids in Oxidative Stress .  Villeneuve  d’Ascq.  Bentham  Science Publishers Ltd. 2001 .
13. Gülçin  I.lhami. Fe3+–Fe2+  Transformation Method:  An  Important  Antioxidant  Assay. New York  .Advanced  Protocols  in  Oxidative  Stress III,  Methods  in  Molecular  Biology,  vol.  1208. Springer  Science  Business  Media  New  York. 2015.