Jambura Jounal of Animal Science.
DETEKSI DINI KEBUNTINGAN PADA SAPI BALI MENGGUNAKAN ASAM SULFAT (H 2 SO 4 ) .
Suparmin Fathan, Fahrul Ilham, Indah Isnwaty
Animal Husbandry Departmen, Agriculture Faculty, Gorontalo State Unversity suparminfathan@ung.ac.id

## ABSTRAC
The purpose of this study was to determine the appropriate dosage, time and method of diagnosing  pregnancy  in  Balinese  cattle  using  a  mixture  of  urine  and  aquadest  which was  reacted  with  Sulfuric  Acid  (H2SO4).  This  research  was  conducted  in  February  - March  2018  in  Bongo  village,  Wonosari  sub-district,  Boalemo  Regency,  Gorontalo Province.  The  material  used  is  urine  urine  samples,  which  have  been  artificially inseminated. Concentrated sulfuric acid (H2SO4) of 0.3 ml, 0.5 ml, 0.7 ml, 0.9 and 0.11 ml (according  to  treatment).  The  variables  observed  were  fluorescence  gas  in  solution, change  in  color  of  solution,  time  of  change  in  solution.  Data  were  analyzed  using unidirectional  variance  analysis.  The  results  showed  pregnancy  detection  in  Balinese cows who had been on IB in each treatment gave a very significant effect (P <0.01. The results of the BNT test revealed that the age of 6 days had the fastest time in detecting pregnancy  with  ±  6  seconds,  at  age  11  and  16  days  have  the  fastest  time  in  detecting pregnancy, with an average time of ± 5 seconds the pregnancy can be detected.
Key words : Sulfuric acid, pregnancy detection, Bali cattle, urine

## PENDAHULUAN
Deteksi  kebuntingan  dini  pada sapi  sangat  penting  ditinjau  dari  segi ekonomi  hal  ini  akan  mempengaruhi pendapatan peternak. Dengan mengetahui  ternaknya  bunting  atau tidak  dalam  waktu  yang  lebih  cepat dan  akurat maka peternak dapat lebih cepat mengambil tindakan selanjutnya yakni  memperbaiki  pakan  apabila ternaknya bunting atau dapat dijadikan  petunjuk  untuk  memotong atau  menjual  ternaknya  apabila  tidak terdeteksi kebuntingan sehingga dapat menekan  masa  produksi  yang  hilang akibat  infertilitas  sehingga  peternak tersebut tidak akan mengalami kerugian  akibat  biaya  pemeliharaan yang dikeluarkan, selain itu pemeriksaan kebuntingan sangat penting  dilakukan  setelah  ternak dikawinkan.  Secara  umum,  deteksi kebuntingan dini diperlukan dalam hal mengidentifikasi  ternak  yang  bunting dan  tidak  bunting  segera  setelah
Jambura Jounal of Animal Science.
P- Issn: 2655-4356
perkawinan  atau  IB,  sehingga  waktu produksi yang hilang karena infertilitas  dapat  ditekan  melalui pemeriksaan  kebuntingan  awal,  tepat dan  akurat.  Pemeriksaan  kebuntingan pada  sapi  yang  paling  umum dilakukan  oleh  peternak  adalah dengan mengamatiapakah sapi mengalami birahi/estrus kembali setelah  dikawinkan  baik  secara  alam maupun IB yakni disebut dengan (Non Return  to  Estrus),  namun  ketepatan metode  ini  tergantung  ketepatan deteksi birahinya. Banyak metode/cara yang  dapat  digunakan  untuk  deteksi kebuntingan  tergantung  spesies,  umur kebuntingan,  biaya,  ketepatan  dan kecepatan diagnosa.
Tujuan  dalam  pemeriksaan kebuntingan adalah menentukan status  kebuntingan  dengan  ketepatan 100  %,  dan  kebuntingan  lebih  awal, usia  kebuntingan,  keberlangsungan kebuntingan, jenis kelamin fetus. Salah satu cara untuk mendeteksi  kebuntingn  pada  ternak sapi  dengan  menggunakan  asam sulfat(H 2 SO 4 )  menjadi  alternatif  yang murah  dan  mudah  dilakukan,  tanpa harus  memiliki  keterampilan  khusus. Semua orang sepertinya bisa melakukan  test  kebuntingan  sapi dengan  metode  ini,  hanya  perlu  hati- hati  saat  menggunakan  asam  sulfat pekat  karena  sifatnya  yang  keras  dan bisa  melukai  kulit.Asam  sulfat  dapat digunakan untuk mendeteksi kebuntingan.  Menurut  Satriyo  (2001) bahwa, metode  deteksi  ini  telah diterapkan untuk mendeteksi kebuntingan  ternak  sapi,  karena  di dalam urine sapi yang sedang bunting mengandung  hormon  estrogen  yang dihasilkan oleh plasenta.
METODE PENELITIAN Penelitian ini telah di laksanakan  di  bulan  Februari-Maret 2018 di Kecamatan Wonosari,
Kabupaten Boalemo, Provinsi Gorontalo. .  S ampel  urin  berasal  dari sapi  bali  yang  telah  di  inseminasi buatan  sebanyak  15  ekor  sapi. Parameter  yang  diukur  adalah  hasil respon  sensitivitas    Asam  Sulfat (H 2 SO 4 )  dengan  dosis  berbeda  (0.3  ml ,0.5 ml, 0.7 ml, 0.9 dan 0.11 ml) sebagai berikut:
1. fluorenscence terlihat pada masing- masing perlakuan
2. Waktu terjadinya fluorenscence
3. Perubahan  warna  larutan  dihitung dengan menggunakan stopwatch.

## Prosedur penelitian
Urin  ditampung  dari  ternak sapi percobaan digunakan sebanyak : 3 ml,  5  ml,  7  ml,  9  ml  dan  11  ml  di masukan  kedalam  5  tabung  reaksi, kemudian  ditambahkan  aquadest  5 ml.Untuk  mendetesi  kebuntingan, masing-masing larutan
tersebut direaksikan  dengan  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  berdasarkan  masing-masing dosis 0.3 ml, 0.5 ml, 0.7 ml, 0.9 ml dan 0.11 ml. Perlakuan diulang sebanyak 4 kali.
P1  :  Urin  sapi  dosis  3  ml  +  aquadest dosis 5 ml + asan sulfat (H 2 SO 4 ) dosis 0.3 ml.
P2  :  urin  sapi  dosis  5  ml  +  aquadest dosis 5 ml + asan sulfat (H 2 SO 4 ) dosis 0.5 ml.
P3  :  urin  sapi  dosis  7  ml  +  aquadest dosis 5 ml + asan sulfat (H 2 SO 4 ) dosis 0.7 ml.
P4  :  urin  sapi  dosis  9  ml  +  aquadest dosis 5 ml + asan sulfat (H 2 SO 4 ) dosis 0.9 ml.
P5  : urin sapi dosis 11 ml + aquadest dosis 5 ml + asan sulfat (H 2 SO 4 ) dosis 0.11 ml.
Data di analisis regresi, dengan model matematik sebagai berikut  :
Jambura Jounal of Animal Science.
P- Issn: 2655-4356
y ij = μ + τ i + βx ij + ε ij , i = 1, 2, ...a.
j = 1, 2, ...n i dimana:
y ij : nilai peubah respon perlakuan ke-i observasi ke-j
x ij :  nilai covariate pada  observasi  yang bersesuaian dengan yij τ i : pengaruh perlakuan ke-i β   : koefisien regresi linier
ε ij : random error n i : jumlah observasi kategori ke-i

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kebuntingan  merupakan  suatu keadaan dimana anak sedang berkembang  didalam  uterus  seekor betina,  suatu  rentan  waktu  yang disebut  dengan  periode  kebuntingan yang  terentang  dari  saat  pembuahan (fertilisasi) sampai lahirnya anak. Hasil penelitian deteksi kebuntingan  pada  sapi  Bali  yang  diuji menggunakan cairan asam sulfat pada seluruh perlakuan memberikan respon positif untuk semua sampel pada umur 6,  11  dan  16  hari  setelah  ternak  sapi tersebut mendapatkan IB (Lampiran 1), dari  15  sampel  ternak  sapi  yang  di  uji urinnya  seluruhnya  memberikan  hasil positif  bunting.  Deteksi  kebuntingan dengan  menggunakan  cairan  asam sulfat  (H2SO4)  memiliki  presentase deteksi  kebuntingan  100%  hal  ini dilihat dari munculnya gelembung gas fluorenscence dan warna yang berubah menjadi  pink  keunguan  akan  tetapi satiap  perlakuan  memberikan  respon waktu yang berbeba-bedaDeteksi kebuntingan  dengan  menggunakan asam  sulfat  ini  diperkuat  setelah seluruh  sampel  sapi  diperiksa  dengan teknik  palpasi  rektal  oleh  petugas inseminator,  yang  menyatakan  bahwa seluruh  sampel  sapi  positif  bunting. Toelihere  (1995)  menyatakan  bahwa, cara pemeriksaan kebuntingan dengan palpasi rektal  adalah cara yang paling cepat, tepat, praktis dan murah dengan tingkat  akurasi  95  %  ,  namun  paling dini dilakukan pada umur
kebuntingan  35  hari  dan  cara melakukannya perlu hati-hati , sehingga  hanya  bisa  dilakukan  oleh petugas  yang  terampil  dan  telah mendapat pelatihan dengan baik. Hasil penelitian ini sejalan dengan pernyataan  Setiawati  (2016)  yang menjelaskan bahwa AsamSulfat (H2SO4)  pekatdengan  perlakuan  0,5 ml dan 1,0 ml dapat digunakan. Dalam diagnosis kebuntingan secara sederhana,  praktis  ,  cepat,  akurat  dan jelas  pada  pengambilan  sampel  hari ke-22;ke-32;hari  ke-42  dan  hari  ke-60 memiliki  presentase  kebuntingan(90 %).  Amirudin et  al., (2001)  dalam
Setiawati  (2011)  mendapatkan  akurasi diagnosis  kebuntingan  menggunakan asam  sulfat  >80%  dengan  mendeteksi adanya estrogen didalam urin. Sedangkan Hendri dan Khasrad (2007) dalam  Setiawati  (2016)  pada  sapi  FH diperoleh  akurasi  sebesar  71,7  dan 81,8% masing-masing pada bulan ke 1 dan 2 pasca inseminasi.

## Deteksi Kebuntingan Sapi Bali Umur 6 Hari
Deteksi  kebuntingan  pada  sapi menggunakan  bahan  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  dengan  dosis  yang  berbeda pada  umur  6  hari  setelah  IB  dapat dilihat pada Grafik berikut.

## Gambar 1. Grafik Deteksi Kebuntingan Sapi Bali Pada Umur 6 Hari
Berdasarkan  grafik  di  atas dapat  dijelaskan  bahwa  hasil  deteksi kebuntingan  pada  umur  6  hari
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 P1 P2 P3 P4 P5 9.67  8.54 7.90 7.04  6.40 P ENGU K U R A N P A D A U M U R 6 H A R I PERLAKUAN
Jambura Jounal of Animal Science.
P- Issn: 2655-4356
menggunakan  asam  sulfat  dengan dosis  yang  berbeda-beda  memiliki respon  waktu  yang  berbeda-beda. Respon  urin  setelah  dicampurkan dengan  asam  sulfat  hasil  tercepat dicapai  oleh  P5  yaitu  urin  11  ml  + aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,11  ml dengan  waktu  6,40  detik  diikuti  oleh P4 = 7,04 detik, P3 = 7,90 detik dan P2 =  8,54  detik  sedangkan  hasil  tertinggi terdapat  pada  P1  dengan  dosis  urin  3 ml  +  aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,3 ml dengan waktu 9,67 detik. Pada  perlakuan  P5  mencapai waktu  tercepat  dalam  proses  deteksi kebuntingan menggunakan asam sulfat  karena  P5  memiliki  komposisi campuran  cairan  Asam  sulfat  0,11  ml dan  cairan  urin  sebanyak  11  ml  lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan  lainnya. Hasil  penelitian  ini menunjukan  semakin  banyak  cairan urin yang dibakar dengan cairan asam sulfat  (H2SO4)  akan  memberikan proses deteksi kebuntingan yang lebih cepat hanya hitungan detik. Hal ini sejalan dengan pernyataan  Sayuti, et.,  al (2011)  yang menyatakan  bahwa  dasar  teoritis pemeriksaan  sapi  bunting  adalah terdapatnya  hormon  estrogen  yang disekresikan  melalui  urin.  Hormon estrogen tersebut berasal  dari  plasenta ketika  dicampur  dengan  asam  sulfat maka  estrogen  tersebut  akan  dibakar sehingga  terbentuk  fluoresensi  warna. Dengan demikian semakin banyak urin dan  asam  sulfat  maka  deteksi kebuntingan akan cepat terdeteksi.
Hasil  analisis  data  searah menunjukkan  deteksi  kebuntingan pada  umur  6  hari  menggunkan asamsulfat  (H2SO4)  dan  urine dengan  dosis  berbeda  memberikan pengaruh yang sangat nyata
Hasil  uji  beda  nyata  terkecil berdasarkan Tabel sebelumnya menunjukan  bahwa  P5  terhadap  P4 tidak  memberikan  pengaruh  nyata sedangkan pada P5 dan P4 menunjukan  pengaruh  yang  nyata terhadap  P3  dan  penagruh  sangat nyata  pada  P1  dan  P2.  Dengan demikian  perlakuan  P5  dan  P4 memberikan  hasil  yang  maksimal dalam  mendeteksi  kebuntingan  pada umur  6  hari  dengan  menggunakan campuran  urin  dan  asam  sulfat (H2SO4)  akan  tetapi  jika  ditinjau  dari waktu tercepat perlakuan P5 memberikan hasil yang lebih maksimal dengan  waktu  6,40  detik  saja kebuntingan dari ternak sapi bali pada umur 6 hari sudah bisa terdeteksi.

## Deteksi Kebuntingan sapi Bali
Umur 11 Hari .
Deteksi  kebuntingan  pada  sapi menggunakan  bahan  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  dengan  dosis  yang  berbeda pada  umur  11  hari  setelah  IB  dapat dilihat pada Grafik berikut.
Gambar  2 . Grafik  Deteksi  Kebuntingan  Sapi  Bali  Pada Umur 11 Hari Berdasarkan  grafik  di  atas dapat  dijelaskan  bahwa  hasil  deteksi kebuntingan  pada  umur  11  hari menggunakan  asam  sulfat  dengan dosis  yang  berbeda-beda  memiliki respon waktu yang berbeda- beda.Respon urin setelah dicampurkan dengan  asam  sulfat  hasil  tercepat dicapai  oleh  P5  yaitu  urin  11  ml  + aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,11  ml dengan  waktu  5,75  detik  diikuti  oleh P4 = 6,11 detik, P3 = 6,50 detik dan P2 =  8,07  detik  sedangkan  hasil  tertinggi
0.00 5.00 10.00 P1 P2 P3 P4 P5 8.98 8.07 6.50  6.16  5.72 P ENGU K U R A N P A D A U M U R 11 H A R I PERLAKUAN
Jambura Jounal of Animal Science.
terdapat  pada  P1  dengan  dosis  urin  3 ml  +  aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,3 ml dengan waktu 8,96 detik.
Pada  perlakuan  P1  mencapai waktu  tertinggi  dalam  proses  deteksi kebuntingan menggunakan asam sulfat  karena  P1  memiliki  komposisi campuran  cairan  Asam  sulfat  0,3  ml dan  cairan  urin  sebanyak  3  ml  lebih sedikit dibandingkan dengan perlakuan  lainnya. Hasil  penelitian  ini menunjukan  semakin  sedikit  cairan urin yang dibakar dengan cairan asam sulfat  (H2SO4)  akan  memberikan proses deteksi kebuntingan yang lebih lambat.  Illawati  (2009)  yaitu  volume urin yang lebih rendah (1 ml) pada saat pembuatan larutan urin, menyebabkan konsentrasi    estrogen  (estron  dan estradiol  17  alfa.)  yang  ada    tidak optimal  sehingga  lambat  dalam bereaksi denagan AsamSulfat (H2SO4) pekat,  selain  itu,  bisa  akibat  adanya variasi  konsentrasi    estrogen  (estron dan  estradiol  17  alfa.)  individu  ternak sapi  percobaan    itu  sendiri  dalam menghasilkan  hormon . Hasil  analisis searah  menunjukkan  bahwa  deteksi kebuntingan  pada  umur  11  hari menggunkan asam sulfat (H2SO4) dan urin dengan dosis berbeda memberikan  pengaruh  yang  sangat nyata. Hasil  uji  beda  nyata  terkecil berdasarkan Tabel sebelumnya menunjukan  bahwa  P5  terhadap  P4 tidak  memberikan  pengaruh  yang nyata  sedangkan  pada  P5  dan  P4 menunjukan  pengaruh  yang  nyata terhadap  P3  dan  penagruh  sangat nyata  pada  P1  dan  P2.  Dengan demikian  perlakuan  P5  dan  P4 memberikan  hasil  yang  maksimal dalam  mendeteksi  kebuntingan  pada umur  11  hari  dengan  menggunakan campuran  urin  dan  asam  sulfat (H2SO4)  akan  tetapi  jika  ditinjau  dari waktu tercepat perlakuan P5 memberikan hasil yang lebih maksimal
dengan  waktu  5,72  detik  saja kebuntingan dari ternak sapi bali pada umur 11 hari sudah bisa terdeteksi.

## Deteksi Kebuntingan Pada Sapi Bali Umur 16 Hari.
Deteksi  kebuntingan  pada  sapi menggunakan  bahan  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  dengan  dosis  yang  berbeda pada  umur  16  hari  setelah  IB  dapat dilihat pada Grafik berikut.

## Gambar  3.  Grafik  Deteksi  Kebuntingan  Sapi  Bali Pada Umur 16 Hari
Berdasarkan  grafik  di  atas dapat  dijelaskan  bahwa  hasil  deteksi kebuntingan  pada  umur  11  hari menggunakan  asam  sulfat  dengan dosis  yang  berbeda-beda  memiliki respon  waktu  yang  berbeda-beda. Respon  urin  setelah  dicampurkan dengan  asam  sulfat  hasil  tercepat dicapai  oleh  P5  yaitu  urin  11  ml  + aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,11  ml dengan  waktu  5,20  detik  diikuti  oleh P4 = 5,63 detik, P3 = 6,36 detik dan P2 =  8,25  detik  sedangkan  hasil  tertinggi terdapat  pada  P1  dengan  dosis  urin  3 ml  +  aquadest  5  ml  +  Asam  sulfat  0,3 ml dengan waktu 9,21 detik.
Pada  perlakuan  P5  mencapai waktu  tercepat  dalam  proses  deteksi kebuntingan menggunakan asam sulfat  karena  P5  memiliki  komposisi campuran  cairan  Asam  sulfat  0,11  ml dan  cairan  urin  sebanyak  11  ml  lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan  lainnya. Hasil  penelitian  ini menunjukan  semakin  banyak  cairan urin yang dibakar dengan cairan asam sulfat  (H2SO4)  akan  memberikan
0.00 10.00 P1 P2 P3 P4 P5 9.21 8.25 6.36 5.63 5.20 P ENGU K U R A N P A D A U M U R 16 H A R I PERLAKUAN
Jambura Jounal of Animal Science.
proses deteksi kebuntingan yang lebih cepat.Hal  ini  sesuai    pendapat  Hafez (2000),  menyatakan  bahwa  masing- masing  individu  ternak  mempunyai respon  berbeda  dalam  menghasilkan hormon.  Pada  awal  kebuntingan hormon estrogen konsentrasinya sedikit kemudian  mulai naik pada saat umur  kebuntintingan  mulai  tua.  Pada usia  kebuntingan  4  bulan  akhir  sapi akan  mengekskresikan  10  X  lipat hormon esterogen didalam air seninya dibanding sesudah melahirkan. (Jabour et al. 1993; McG Agro et al. 1994) dalam Setiawati (2011) Hasil analisis searah menunjukkan bahwa deteksi kebuntingan  pada  umur  16  hari menggunkan  asamsulfat(H2SO4)dan urine dengan dosis berbeda memberikan  pengaruh  yang  sangat nyata. Hasil  uji  beda  nyata  terkecil berdasarkan Tabel sebelumnya menunjukan bahwa P5; P4 dan P3tidak memberikan pengaruh nyata sedangkan  pada  P5;  P4  dan  P3 menunjukan  pengaruh  yang  nyata terhadap  P2  dan  pengaruh  sangat nyata  pada  P1.  Dengan  demikian perlakuan  P5;  P4  dan  P3  memberikan hasil yang maksimal dalam mendeteksi kebuntingan  pada  umur  16  hari dengan  menggunakan  campuran  urin dan  asam  sulfat  (H2SO4)  akan  tetapi jika  ditinjau  dari  waktu  tercepat perlakuan  P5  memberikan  hasil  yang lebih  maksimal  dengan  waktu  5,20 detik saja kebuntingan dari ternak sapi bali  pada  umur  16  hari  sudah  bisa terdeteksi.

## KESIMPULAN
Deteksi kebuntingan menggunakan cairan  asam  sulfat  (H2SO4)  dan  urin dengan  dosis  yang  berbeda  memiliki presentase  deteksi  kebuntingan  100%. Dengan  dosis  urin  11  ml  +  aquadest  5 ml  +  asam  sulfat  0,11  ml  dapat
mendeteksi kebuntingngan dengan waktu 6,40 detik,

## DAFTAR PUSTAKA
Amiruddin, T.N. Siregar, G. Riady, dah H.  Budiman.  2001. Efektifitas beberapa metode diagnosis kebuntingan pada sapi . J. Med. Vet.1 (2) : 45-48.
Broaddus,  B.  and  A.  deVries.  2005.  A comparison  of  methods  for  early pregnancy  diagnosis.  Proceeding 2nd  Florida  Dairy  Road  Show. Florida.
Carey, F. A. dan Sundberg, R. J., 2008,
Advanced Organic Chemistry Part
A: Structure and Mechanism, fifth edition, Springer, New York.
Dewi, Vivian Nanny Lia; Sunarsih, Tri. 2011.  Jakarta  :  Salemba  Medika., Jakarta.
Frandson, 1992, Anatomi dan Fisiologi Ternak,  Gadjah  Mada  University Press,Yogyakarta
Hafez,E.Z.E.,2000.  Reproduction  in Farm Animals. Philadephia.
Hendri  dan  Khasrad.  2007.  Perbaikan Teknologi  Produksi  Bibit  Sapi Potong.  Laporan  Penelitian.  LPM University Andalas, Padang Illawati,  R.  W.  2009.  Efektifitas Penggunaan  Berbagai  Volume Asam Sulfat pekat (H2SO4) untuk Menguji  Kandungan  Estrogen dalam  Urin  Sapi  Brahman  Cross Bunting.  Skripsi.  Sekolah  Tinggi Ilmu Pertanian. Sijunjung.
Imron,  A.  2008.  Biologi  Reproduksi. Universitas Brawijaya. Malang.
Jabbour  H.M.,  Valehuizen  F.A.,  Green .G,  Asher  G.W.,  1993. Endocrine Responses  and  Conception  Votes  In
Jambura Jounal of Animal Science.
P- Issn: 2655-4356
Follow Deer (Dama Dama) Following Oestrous Synchronization  and  Cervical Insemination  With  Fresh  or Frozen-thawed  Spermatozoa.  J.
Reprod. Fert.98 : 495-502.
Lestari,  D.  L.  2006.  Metode  Deteksi Kebuntingan  pada  Ternak  Sapi. Tesis. Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran.  Bandung Lide,  D.R.  2007.  CRC  Handbook  of Chemistry  and  Physics  (88th  ed.), Boca Raton, FL: CRC Press, Taylor & Francis, pp. 8–41 Luqman, M., 1999. Fisiologi Reproduksi.  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  Airlangga Surabaya Macmillan,  K.L.  And  A.J.  Peterson, 1993. A New Intravaginal Progesterone  Realising  Device  For Cattle (CIDR-B) for Estrus Synchronization, Pregnancy  Rate and  The  Treatmen  Postpartrus.
J.anin. Sci. 33 :1-25.
McG  Agro,  Jabbour  C.H.M.,  Goddard P.j.,  Web  R.  London  A.S.I.  1994. Superovulation In Red Deer (Cervus Elaphus)  and  Pare  David-s  Deer (Elapharus Davidianus) and Fertilitation Rates Following Artificial  Insemination  With  Pare David-s  Deer  Semen.  J.  Reprod. Fert. : 629-636. Rosalin, Y. 2002. Diagnosa kebuntingan secara  kimiawi  menggunakan asam  sulfat  pekat  pada  sapi  yang telah diinseminasi.Skripsi. Fakultas  Peternakan  Universitas Andalas, Padang. Partodihardjo.S,  1992.Ilmu  Reproduksi
Hewan,  Mutiara  Sumber  Widya.
Jakarta. Salisbury,  1985.  Fisiologi  Reproduksi Hewan Ternak. Angkasa. Bandung Satriyo,  U.  2001.DeteksiKebuntingan denganAirAki. MajalahInfovent. Edisi086, September. Jakarta. Setiawati, E.N. 2011. Diagnosa Kebuntingan Dengan Menggunakan  Metode  Asam Sulfat.  Tesis.BPKH  Cinagara. Bogor. Toelihere, M.R. 1997. Animal reproduction in Indonesia State of Art. Makalah 4 th International Meeting  on  Biotechnology  in Animal Reproduction.6-9 August 1997. Bogor
Whittier,  J.C.,  G.H  Deutcher,  and  D.C. Clanton.  1986.  Progesterone and prostagladene for estrus.