## FERMENTASI TETES TEBU DARI PABRIK  GULA PAGOTAN MADIUN MENGGUNAKAN Saccharomyces cerevisiae UNTUK MENGHASILKAN BIOETANOL DENGAN VARIASI pH DAN LAMA FERMENTASI

## Fitri Hartina, Akyunul Jannah, Anik Maunatin
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang

## Abstract
Cane molasses is a sugar processing waste that contains high sugar concentration so it is very potential used  as  fermentation  media.    Fermentation  of  cane  molasses  to  produce  bioethanol  becomes  an  alternative  to decrease of waste and sufficient fuel that increase every years. The purpose of this study is to know the influence of  pH and fermentation period towards bioethanol production from cane molasses by fermentation process used Saccharomyces cerevisiae . The sequence of this research were fermentation process and separation of bioethanol from  the  media.  Fermentation  process  was  achieved  with  two  variations  i.e  pH  (pH  4,  4,5,  and  5)  and fermentation  period  variations  (3,  4,  5,  and  6  days).  Bioethanol  separated  from  fermentation  media  used fractional  distillation  and  pure  bioethanol  concentration  can  be  measured  by  gas  cromatography.  The  data obtained  was  analyzed  using  ANOVA  and  will  be  tested  by  LSD  (Least  Significant  Difference)    5  %.  The highest  concentration  of  bioethanol  was  7,76  %,  yield  value  was  89,89  %,  and  efficiency  value  was  78,62  %. The  result  of  ANOVA  (α=5  %)  test  showed  the  treatment  of  pH  and  fermentation  period  effect  bioethanol concentration  was  produced.  The  LSD  test  showed  the  treatments  pH  5  and  6  days  fermentation  period  given concentration  of  bioethanol  7,76  %,  efficiency  value  78,62  %  and  residual  sugar  5,52  %  was  the  significant different of treatments.
Keywords : Cane Molasses, Saccharomyces cerevisiae , pH, Fermentation Period, and Bioethanol

## Abstrak
Tetes  tebu  merupakan  limbah  pengolahan  gula  yang  mengandung  gula  cukup  tinggi  sehingga  sangat potensial dimanfaatkan sebagai media fermentasi. Fermentasi tetes tebu untuk menghasilkan bioetanol menjadi salah  satu  upaya  megurangi  jumlah  limbah  dan  memenuhi  kebutuhan  Bahan  Bakar  Minyak  (BBM)  yang semakin  meningkat.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  pH  dan  lama  fermentasi terhadap  produksi  bioetanol  dari  tetes  tebu  (molase)  dengan  cara  fermentasi  menggunakan Saccharomyces cerevisiae. Penelitian  ini  meliputi  proses  fermentasi  dan  pemisahan  bioetanol  dari  media  fermentasi.  Proses fermentasi dilakukan dengan variasi pH 4, 4,5, dan 5, sedangkan variasi lama fermentasi dilakukan selama 3, 4, 5, dan 6 hari. Bioetanol hasil fermentasi dipisahkan dari media fermentasi dengan metode destilasi fraksinasi dan untuk mengukur kadar bioetanol digunakan metode kromatografi gas. Data yang diperoleh pada setiap perlakuan dianalisis menggunakan analisis varians (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) 5 %. Kadar  bioetanol  tertinggi  diperoleh  sebesar  7,76  %,  nilai yield tertinggi  89,89  %,  dan  nilai  efisiensi  78,62  %. Hasil  analisis  menggunakan  uji  ANOVA  (α=5  %)  menunjukkan  bahwa  pH  dan  lama  fermentasi  berpengaruh nyata  terhadap  kadar  bioetanol  hasil  fermentasi.  Uji  BNT  menyatakan  bahwa  perlakuan  A 3 T 4 (pH  5  dan  lama fermentasi  6  hari)  dengan  kadar  bioetanol  7,76  %  ,  nilai  efisiensi  78,62  %,  dan  kadar  gula  sisa  5,52  % merupakan perlakuan yang berbeda nyata.
Kata Kunci: Tetes tebu, Saccharomyces cerevisiae , pH, lama fermentasi, Bioetanol

## I. PENDAHULUAN
Kebutuhan  masyarakat  akan  Bahan Bakar  Minyak  (BBM)  yang  semakin meningkat  dari  tahun  ke  tahun  berbanding terbalik dengan ketersediaannya.
Menurunnya  total  cadangan  bahan  bakar minyak tersebut, salah satunya dikarenakan  sumber  penghasil  BBM  yaitu
fosil  semakin  lama  semakin  berkurang (Azizah,  2012).  Pembakaran  BBM  juga menghasilkan  gas  berbahaya  seperti  CO,
NOx,  dan  UHC  ( Unburn  Hydro  Carbon ).
Gas  buang  ini  menyebabkan  gangguan kesehatan  serta  mempercepat  pemanasan global  (Toharisman,  2008).  Keadaan  ini mendorong negara-negara industri mencari
sumber  energi  alternatif  terbarukan  yang lebih  aman  dan  efisien  (Koesoemadinata, 2001).
Energi alternatif yang ramai dikembangkan  saat  ini  adalah  etanol. Etanol menjadi pilihan utama dunia karena senyawa  ini  dapat  terus  diproduksi  baik secara  sintesis  kimiawi  maupun  secara fermentasi (Koesoemadinata, 2001). Bioetanol  hasil  fermentasi  merupakan bahan  campuran  (aditif)  dari  BBM  yang ramah lingkungan
karena hasil pembakarannya  hanya  menghasilkan  H 2 O dan  CO 2 (Azizah,  2012).  Selain  itu  bahan baku yang  dibutuhkan  pada  proses fermentasi  tersedia  secara  melimpah  salah satunya  yaitu  limbah  pabrik  gula  berupa tetes  tebu.  Tetes  tebu  menjadi  pilihan utama  karena  mengandung  gula  cukup tinggi  mencapai  34-54  %,  selain  itu  harga tetes juga relatif murah.
Efisiensi  fermentasi  dipengaruhi  oleh kadar gula tetes, aerasi, suhu, mikroba, pH, dan  lama  fermentasi.  Mikroba  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah Saccharomyces  cerevisiae karena  mikroba tersebut  bersifat  fermentatif  kuat  dan mempunyai  resistensi  tinggi  terhadap bioetanol.  Parameter  yang  diamati  pada penelitian  ini  adalah  pengaruh  pH  dan lama fermentasi terhadap produksi bioetanol hasil fermentasi.

## II. METODOLOGI
1. Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan pada
penelitian  ini  adalah  neraca  analitik,  gelas arloji,    pengaduk  gelas, beaker  glass , jirigen,  erlenmeyer, autoclave , hot  plate , jarum  ose,  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi, shaker ,  pipet  volume,  pipet  ukur, mikropipet, blue  tip,  vortex, pH  meter, penangas air, termometer, seperangkat alat destilasi,  gelas  ukur  50  mL,  botol  kecil, laminar  air  flow ,  lemari  asam, hand  brix refaktrometer,  spektrofotometer  Uv-vis, seperangkat  alat  kromatografi  gas , plastik wrap, bunsen, dan korek api.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah sebagai berikut; Tetes tebu, Saccharomyces
cereviciae yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi  Institut  Teknologi  Bandung , yeast  extract,  pepton, glukosa , agar, H 2 SO 4 ,  urea,  akuades,  kapas,  alkohol  70 %,  fenol,  aluminium  foil,  dan  tissue secukupnya.
2. Pembuatan  Media  YPGA  ( Yeast Extract Pepton Glucose Agar ) (Thontowi dkk., 2007) Media YPGA dibuat dengan menimbang 1 g pepton , 0,5 g yeast extract , 2 g  glukosa,  dan  3  g  agar,  bahan-bahan tersebut kemudian dilarutkan dengan akuades    100  mL  dan  dipanaskan  hingga mendidih. Selanjutnya media YPGA
disterilisasi  dengan autoclave pada  suhu 121 º C  dan  tekanan  15  psi  selama  15 menit. Larutan tersebut kemudian didinginkan  dalam  tabung  reaksi  pada keadaan  miring  hingga  memadat.  Media YPGA  ini  digunakan  untuk  regenerasi
S.cerevisiae .
3. Pembuatan  Media YPGB  ( Yeast
Extract Pepton Glucose Broth ) (Thontowi dkk., 2007) Media YPGB dibuat dengan menimbang  2  g pepton ,  1  g yeast  extract , dan  4  g  glukosa,  kemudian  bahan-bahan tersebut  dilarutkan  dengan  akuades  200  mL dan dipanaskan hingga mendidih.
Selanjutnya  media  YPGB  disterilisasi dengan autoclave pada  suhu  121 º C  dan tekanan  15  psi  selama  15  menit .  Media YPGB  ini  digunakan  untuk  pembuatan  stok inokulum.
4. Regenerasi S.cereviciae
Biakan S.cereviciae diambil  sebanyak dua  ose  dan  dimasukkan  ke  dalam  media YPGA,  kemudian  diinkubasi  selama  2  hari pada  suhu  ruang. S.cereviciae yang  telah diregenerasi  digunakan  untuk  pembuatan stok inokulum.
5. Pembuatan Stok Inokulum (Kultsum,
2009)
Pembuatan  inokulum  ini  dilakukan dengan cara memindakan 2 ose S.cereviciae ke  dalam  100  mL  media YPGB, kemudian di shaker pada kecepatan 150  rpm  selama  32  jam  pada  suhu  30 º C.
Stok
inokulum digunakan untuk
pembuatan kurva pertumbuhan dan produksi  bioetanol.
5. Pembuatan Kurva Pertumbuhan
(Sari dkk., 2013)
Sebanyak  25  mL  stok inokulum dipindahkan  dalam  225  mL  media  YPGB kemudian 4 mL inokulum diambil setiap 8 jam  sekali  sampai  jam  ke-72,  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang 600 nm dengan menggunakan spektrofotometer Uv-vis sehingga
didapatkan  nilai Optical  Density (OD ) . Kurva  pertumbuhan  ditentukan  dengan membuat  plot  antara  waktu  inkubasi  dan absorbansi yang dihasilkan.
6. Preparasi Sampel (Wahyudi, 1997) Tetes yang telah diencerkan hingga 20
% Brix  diambil  sebanyak  300  mL kemudian  dipanaskan  dengan  suhu  70 º C selama  30  menit  dan  disaring  dengan kertas  saring.  Filtrat  yang  diperoleh ditambahkan  urea  sebanyak  0,3  %, kemudian  filtrat  dibagi  menjadi  3  masing- masing            100  mL.  Ditambahkan  larutan H 2 SO 4 0,1  N  untuk  mengatur  pH  yang dikehendaki  yaitu  pH  4,  4,5,  dan  5. Selanjutnya  sampel  disterilisasi  ke  dalam autoclave pada  suhu  121  °C  dan  tekanan 15  psi  selama  2  jam.  Sampel  yang  telah dipreparasi  dianalisis  kadar  total  gulanya dengan metode fenol H 2 SO 4 dan selanjutnya  digunakan  untuk  fermentasi produksi bioetanol.
7. Produksi  Bioetanol  dari  Tetes  Tebu Menggunakan S.cereviciae dengan Variasi pH dan Lama Fermentasi
Tetes  yang  telah  dipreparasi  dengan variasi  pH  4,  4,5,  dan  5  dengan  volume 100 mL ditambahkan inokulum S.cereviciae yang  telah  mencapai  fase  log sebanyak  10  mL,  kemudian  erlenmeyer ditutup dengan kapas dan di shaker dengan kecepatn 150 rpm selama waktu fermentasi yang dikehendaki yaitu 3, 4, 5, dan 6 hari. Setelah proses fermentasi selesai, dilakukan  penyaringan  untuk  memisahkan kotoran  yang  ada,  selanjutnya  kadar  total gula  yang  terpakai  pada  proses  fermentasi dianalisis dengan metode fenol H 2 SO 4 , dan untuk  memisahkan  bioetanol  dari  media
fermentasi  selanjutnya  dilakukan  proses destilasi.
8. Destilasi  Bioetanol  Hasil  Fermentasi (Kultsum, 2009)
Sampel yang telah difermentasi diambil  sebanyak  100  mL  dan  ditampung dalam  labu  destilasi.  Labu  destilasi dipasang  pada  alat  destilasi  dan  dilakukan proses  destilasi  dengan  suhu  berkisar  0-85 º C  dan  destilat  ditampung  dalam  gelas ukur  50  mL.  Destilat  yang  didapat dimasukkan  dalam  botol  kecil  dan  ditutup rapat.  Selanjutnya  destilat  diukur  kadar bioetanolnya  dengan  metode  kromatografi gas.
9. Analisis  Kadar  Bioetanol  dengan Kromatografi Gas (KG)
Proses  analisis  kadar  etanol  dengan KG  yaitu  sebagai  berikut;  masing-masing destilat  hasil  destilasi  diambil  1µL  dan diinjeksikan  ke  dalam  alat  melalui  tempat injeksi. Luas puncak etanol dari kromatogram  dihitung.  Kadar  bioetanol dalam destilat ditentukan dengan membaca hasil kromatogram.
10. Pengukuran Brix (Kultsum, 2009)
Tetes  dipipet  sebanyak  3  mL  dan dimasukkan  ke  dalam  alat  pengukur hand brix refaktrometer , yaitu pada celah antara prisma penutupnya yang kering dan basah. Diamati  dengan  cermat  batas  tajam  antara garis  terang  dan  gelap  tepat  pada  titik potong  sumbunya.  Dengan  mengatur ketepatan batas tersebut hingga jelas, maka dapat  diketahui  skala  (berupa  angka)  dan tidak  boleh  terlihat  garis  pelangi  di antaranya. Tetes  yang telah diketahui  nilai %  Brixnya  diencerkan  dengan  akuades hingga mencapai 20 % Brix.
11. Pembuatan Kurva Standar Glukosa dengan Metode Fenol H 2 SO 4 (Dubois dkk., 1956) Sebelum melakukan pengujian sampel maka  perlu  diketahui  kurva  standar  fenol yang  digunakan.  Pembuatan  kurva  standar fenol adalah sebagai berikut: 1 mL larutan glukosa standar  yang mengandung 0,  1, 2, 3,  4,  dan  5  ppm  glukosa  masing-masing dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan 0,5 mL larutan fenol 5 % dan
dikocok.  Kemudian  2,5  mL  asam  sulfat pekat  ditambahkan  dengan  cepat.  Biarkan selama  10  menit,  kocok  lalu  tempatkan dalam  penangas  air  selama  15  menit  dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 490 nm.
12. Menghitung  Kadar  Total  Gula
Sampel dengan Metode Fenol H 2 SO 4 (Dubois dkk., 1956)
Total  gula  sampel  dapat  dihitung sebagai  berikut:  1  mL  sampel  dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  0,5 mL  larutan  fenol  5  %  dan  dikocok. Kemudian  2,5  mL  asam  sulfat  pekat ditambahkan dengan cepat. Biarkan selama 10  menit,  kocok  lalu  tempatkan  dalam penangas
air
selama 15 menit.
Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 490 nm.
13. Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian ini adalah kadar bioetanol hasil fermentasi.
Data  dianalisis  dengan  analisis  ragam varian  (One  Way  ANOVA).  Apabila terdapat adanya pengaruh, maka dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata Terkecil  (BNT)  dengan  tingkat  signifikasi 5  %  untuk  mengetahui  perlakuan  yang berpengaruh  atau  berbeda  nyata  di  antara perlakuan yang lain.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Preparasi Sampel
Preparasi  sampel  yang  dilakukan meliputi  pengukuran  kadar  total  gula,  dan pengukuran  nilai  %  Brix.  .  Kandungan gula  dan  %  Brix  tetes  tebu  dipengaruhi oleh  varietas  tebu,  kematangan  tebu, kondisi  iklim,  dan  kondisi  tanah.  Selain itu, proses di dalam pabrik gula juga sangat mempengaruhi.  Hasil  analisa  bahan  baku tetes tebu dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  tetes tebu  mempunyai  nilai  %  Brix  dan kandungan  gula  cukup  tinggi.  Dengan konsentrasi  gula  yang  masih  cukup  tinggi, tetes tersebut kurang baik apabila langsung digunakan  sebagai  media  fermentasi, karena S.cerevisiae akan mengalami tekanan  osmotik  yang  tinggi  dan  akan
menyebabkan
S.cerevisiae tersebut mengalami  stress  dan  pada  akhirnya  akan mempengaruhi kinerja fermentasi (Bafrncová  dkk., 1999  dalam  Ishmayana dkk.,  2011).  Wanto  dan  Soebagyo  (1980) mengatakan  bahwa  tetes  tebu  harus diencerkan  terlebih  dahulu  sehingga  kadar gulanya 12-17 % atau dengan
menambahkan  air  sebanyak  empat  kali volume tetes tebu.
Tabel 1 Hasil Analisa Bahan Baku Komponen Hasil Nilai % Brix 90 % Brix Kadar total gula 42,62 % pH 5,5
Tetes harus diencerkan terlebih dahulu sebelum digunakan pada proses fermentasi sehingga  nilai  %  Brix  menjadi  lebih  kecil dan  tidak  terlalu  kental.  Hasil  analisa bahan  baku  tetes  tebu  setelah  diencerkan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 Hasil Analisa Bahan Baku Setelah
Pengenceran Komponen Hasil Nilai % Brix 20 % Brix Kadar total gula 14,15 % pH 5,2
Tetes  tebu  yang  telah  diencerkan menjadi  20  %  Brix  diatur  pHnya  sesuai dengan  pH  yang  dikehendaki,  yaitu  pH  4, 4,5,  dan  5.  Setelah  pengaturan  pH,  media siap  digunakan  untuk  media  fermentasi dengan menambahkan
inokulum S.cerevisiae yang  berada  pada  fase eksponensial sesuai dengan kurva pertumbuhan.
2. Kurva Pertumbuhaan S.cerevisiae Kurva  pertumbuhan  merupakan  kurva yang  menggambarkan  fase  pertumbuhan dari  mikroorganisme.  Kurva  pertumbuhan ini  digunakan  untuk  mengetahui  fase eksponensial S.cerevisiae yang  akan digunakan pada proses pembuatan inokulum. Fase-fase pertumbuhan
S.cerevisiae pada  penelitian  ini  dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 Kurva

## Pertumbuhan

## Saccharomyces cerevisiae
Kurva  pertumbuhan  di  atas  tidak mengalami fase adaptasi. Hal ini disebabkan karena inokulum yang diinokulasikan ke dalam media pertumbuhan  merupakan  kultur  yang berada dalam fase eksponensial dan media baru  yang  digunakan  komposisisnya  sama dengan  media  yang  lama  sehingga  fase adaptasi dapat dihindari.
Fase eksponensial terjadi pada jam ke- 0  hingga  awal  jam  ke-40.  Pada  fase eksponensial  sel  mulai  membelah  dan masuk  ke  dalam  periode  pertumbuhan, reproduksi  sel  paling  aktif  dan  waktu regenerasinya  konstan,  ini  dibuktikan dengan  nilai  absorbansi  yang  meningkat. Fase  stasioner S.cerevisiae terjadi  pada awal jam ke-40 hingga jam ke-64. Menurut Tortora  dkk.,  (2001)  pada  fase  stasioner laju  pertumbuhan  lambat  sehingga  jumlah S.cerevisiae yang hidup dan mati seimbang dan  populasinya  stabil.  Sedangkan  fase kematian  terjadi  pada  awal  jam  ke-64 hingga  jam  ke-72.  Penyebab  terhentinya pertumbuhan S.cerevisiae pada  fase  ini adalah  ketika  konsentrasi  sel  sangat  besar kekurangan  nutrisi,  akumulasi  produk limbah dan lain-lain.
Waktu
inkubasi optimum S.cerevisiae pada penelitian ini didapatkan pada  jam  ke-32,  diasumsikan  bahwa  pada jam  ke-32  pertumbuhan  sel S.cerevisiae mengalami  peningkatan  dan  pembelahan
secara  produktif    ditandai  dengan  nilai absorbansi  yang  tinggi.  Oleh  sebab  itu, pada  penelitian  ini  pembuatan  inokulum dilakukan  selama  32  jam,  dan  inokulum siap diinokulasikan pada media fermentasi.
3. Fermentasi Bioetanol
Proses  fermentasi  dilakukan  dengan menambahkan S.cerevisiae sebanyak  10 mL  ke  media  fermentasi  (sampel)  yang telah  dipreparasi  dan  diinkubasi  selama waktu  3,  4,  5,  dan  6  hari.  Pada  proses fermentasi terjadi konversi sukrosa menjadi  glukosa  dan  fruktosa  oleh  enzim invertase yang dihasilkan oleh
S.cerevisiae. Glukosa  dan  fruktosa  yang telah  terbentuk  selanjutnya  digunakan untuk  proses  metabolisme S.cerevisiae dengan hasil samping berupa bioetanol. 4. Destilasi  Bioetanol  dengan  Destilasi
Fraksinasi
Destilasi yang dilakukan pada penelitian  ini  adalah  destilasi  fraksinasi. Destilasi  fraksinasi  merupakan  salah  satu dari  proses  penyulingan  yang  dilakukan dengan refluks parsial karena luas permukaan  dalam  kolom  fraksinasi  yang digunakan memungkinkan terjadinya keseimbangan uap-cair. Uap hasil destilasi pertama  akan  mengembun  kembali  dan melewati sel berikutnya, kemudian menguap  kembali.  Proses  ini  berlangsung berulang-ulang.  Semakin  banyak  kolom fraksinasi, maka pemisahan semakin sempurna.  Senyawa  yang  berada  pada puncak  kolom  adalah  senyawa  paling volatil/titik  didih  paling  rendah. Destilat hasil destilasi fraksinasi selanjutnya dianalisis  dengan  metode  Kromatografi Gas (KG) dengan tujuan untuk mengetahui kemurnian  dan  kadar  bioetanol  hasil fermentasi.
5. Pengukuran Kadar Bioetanol dengan Metode Kromatografi Gas
Pengukuran  kadar  bioetanol  dengan metode  KG  menggunakan  baku  internal acrylonitril. Pemilihan acrylonitril sebagai baku internal karena acrylonitril mempunyai  titik  didih  yang  hampir  sama dengan  etanol  yaitu  77,3 º C,  mempunyai waktu retensi yang hampir sama,
0 0.5 1 1.5 0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 Abso rb an si Waktu inkubasi (jam) Kurva Pertumbuhan
mempunyai  respon  detektor  yang  hampir sama,  bersifat  stabil,  tidak  terdapat  dalam sampel,  dan  tidak  mempunyai  kemiripan sifat  secara  kimiawi.  Kadar  bioetanol murni  hasil  fermentasi  dapat  dilihat  pada Tabel 3.
Tabel 3 menunjukkan bahwa perlakuan  yang  mempunyai  notasi  yang sama tidak berbeda nyata dengan
perlakuan lain, akan tetapi  perlakuan  yang mempunyai notasi yang berbeda menunjukkan  bahwa  perlakuan  tersebut berbeda nyata diantara perlakuan- perlakuan  yang  lain.  Perlakuan  yang berbeda nyata diantara perlakuan yang lain adalah  perlakuan  A 3 T 4 (pH  5  dan  lama fermentasi 6 hari) dengan notasi d.
Tidak  semua  gula  dimanfaatkan  oleh S.cerevisiae untuk  pembuatan  boetanol akan  tetapi  ada  sebagian  gula  yang digunakan  unyuk  metabolisme  intraseluler seperti sintesis enzim, DNA, dan sebagainya.  Penggunaan  gula  pada  tiap perlakuan  berbeda-beda,  ini  dipengaruhi oleh  faktor  pH  dan  lama  fermentasi  yang digunakan.
Tabel 3 Kadar Bioetanol Hasil Fermentasi
No Perlakuan Kadar Bioetanol (%) 1 A 1 T 1 5,47 a 2 A 2 T 1 6,40 bc 3 A 3 T 1 5,87 ab
4 A 1 T 2 5,98 ab 5 A 2 T 2 6,47 bc
6 A 3 T 2 6,54 bc 7 A 1 T 3 5,44 a 8 A 2 T 3 6,38 bc 9 A 3 T 3 7,11 cd 10 A 1 T 4 5,32 a
11 A 2 T 4 6,45 bc
12 A 3 T 4

## 7,76 d
Ket:  Notasi  a,  b,  c,  dan  d  menunjukkan  bahwa  pada perlakuan yang mempunyai notasi huruf yang sama tidak berbeda nyata dengan perlakuan yang lain
6. Analisis Kadar Gula Sisa Fermentasi Faktor-faktor yang mempengaruhi proses  fermentasi  salah  satunya  adalah kadar  gula.  Kadar  gula  sisa  setelah
fermentasi  merupakan  kadar  gula  yang belum  digunakan  oleh S.cerevisiae dalam proses  fermentasi.  Kadar  gula  sisa  setelah fermentasi dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 Kadar Gula Sisa Setelah Fermentasi No Perlakuan Kadar Gula (%) 1 A 1 T 1 5,80 2 A 2 T 1 6,30 3 A 3 T 1 7,19 4 A 1 T 2 5,84 5 A 2 T 2 5,41 6 A 3 T 2 6,37 7 A 1 T 3 5,80 8 A 2 T 3 5,31 9 A 3 T 3 5,50 10 A 1 T 4 5,60 11 A 2 T 4 6,09 12 A 3 T 4 5,52

## 7. Efisiensi Fermentasi
Efisiensi  fermentasi  dapat  digunakan sebagai  parameter  keberhasilan  suatu proses  fermentasi.  Semakin  tinggi  nilai efisiensi  fermentasi  maka  akan  semakin tinggi  produk  yang  dihasilkan  (Kultsum, 2009).  Efisiensi  fermentasi  diperoleh  dari perbandingan  bioetanol  hasil  fermentasi dengan kadar etanol teoritis
(Kumalaningsih dan Hidayat (1995) dalam Juariah.,  dkk  (2004)).  Nilai  efisiensi fermentasi  bioetanol  dapat  dilihat  pada Tabel 5.
Tabel 5 Efisiensi Fermentasi Bioetanol
Perlakuan GS
(%) GT (%) Bioetanol (%) Yield (%) EF (%)
A 1 T 1 5,80 8,35 5,47 65,51 55,42 A 2 T 1 6,30 7,85 6,40 81,53 64,84 A 3 T 1 7,19 6,96 5,87 84,34 59,47 A 1 T 2 5,84 8,31 5,98 71,96 60,59 A 2 T 2 5,41 8,74 6,47 74,03 65,55 A 3 T 2 6,37 7,78 6,54 84,06 66,26 A 1 T 3 5,80 8,35 5,44 65,15 55,12 A 2 T 3 5,31 8,84 6,38 72,17 64,64 A 3 T 3 5,50 8,65 7,11 82,20 72,04 A 1 T 4 5,60 8,55 5,32 62,22 53,09 A 2 T 4 6,09 8,06 6,45 80,03 65,35 A 3 T 4 5,52 8,63 7,76 89,92 78,62 Keterangan: GS: Gula sisa GT: Gula terpakai EF: Efisiensi fermentasi
Tabel 5 menunjukkan bahwa perlakuan A 3 T 4 (pH 5 dan lama fermentasi 6  hari)  mempunyai  nilai yield dan  nilai efisiensi  tertinggi  daripada perlakuan  yang lainnya  yaitu  sebesar  89,92  %  dan  78,62 %,  sehingga  perlakuan  tersebut  dapat dikatakan perlakuan yang terbaik.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa variasi pH (4, 4,5, dan 5) dan lama fermentasi (3, 4, 5, dan 6 hari) berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap kadar bioetanol hasil fermentasi. Kadar bioetanol hasil  fermentasi  tertinggi  diperoleh  pada perlakuan pH 5 dan lama fermentasi 6 hari dengan  kadar  bioetanol  sebesar  7,76  % dengan  nilai  efisiensi  fermentasi  tertinggi 78,62 %.

## Saran
Penelitian  lanjutan  yang  disarankan untuk  melengkapi  dan  menyempurnakan penelitian ini adalah menambahkan variasi suhu  dan  variasi  %  Brix  yang  digunakan, penambahan nutrient pada media fermentasi, data kurva pertumbuhan S.cerevisiae diuji dengan uji statistik.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Azizah, N., Al-Baarii, A, N., dan Mulyani,
S. 2012. Pengaruh Lama Fermentasi Terhadap Kadar Alkohol,  pH,  dan  Produksi  gas pada Proses  Fermentasi  Bioetanol dari Whey dengan Substitusi Kulit
Nanas. Jurnal  Aplikasi  Teknologi
Pangan vol 1 no.2. G,  E,  Fogg  and  B,  Thake.  1987. Alga Cultur and Phytoplankton Ecology,  3 rd ed .  Wisconsin:  The
University of Wisconsin Press.
Juariah, S., Susilowati,
A., dan
Setyaningsih, R. 2004. Fermentasi Etanol  Limbah  Padat  Tapioka
(Onggok)  oleh Aspergillus  niger dan Zymomonas  mobilis . Jurnal jurusan Biologi FMIPA
Universitas  Sebelas  Maret  (UNS)
Surakarta . Koesoemadinata, V, C. 2001. Pemanfaatan Gula Hsil Hidrolisis Hemiselulosa Tandan  Kosong Sawit  untuk  Produksi  Etanol Secara Fermentasi . Laporan Hasil Penelitian,  Jurusan  Teknik  Kimia FTI, IPB.
Kultsum,  U.  2009.  Pengaruh  Variasi  Nira Tebu  ( Saccharum  Officinarum ) dari  Beberapa  Varietas  Tebu dengan Penambahan Sumber Nitrogen (N) dari Tepung Kedelai
Hitam  ( Glycine  Soja )  sebagai Substrat Terhadap Efisiensi Fermentasi Etanol. Skripsi Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri. Purwoko,  T.  2007. Fisiologi  Mikrobia . Jakarta: Bumi Aksara Toharisman,  A.  2010.  Sekali Lagi: Etanol dari Tebu. http:/sugarresearch.org. Diakses pada tanggal 6 November 2012.
Sari, P, D., Wuryanti., dan Anam, K. 2013.
Purifikasi  dan  Karakterisasi  α- amilase dari Saccharomyces cerevisiae FNCC 3012 . Semarang: Jurusan Kimia,
Fakultas  Sains  dan  Matematika,
Universitas Diponegoro.
Thontowi,  A.,  Kusmiati.,  dan  Nuswantara, S.  2007.  Produksi β-Glukan Saccharomyces  cerevisiae dalam
Media  dengan  Sumber  Nitrogen Berbeda  pada  Air-Lift  Fermentor. Jurnal Biodiversitas Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(LIPI) . volume 8, no 4, Halm 253- 256.
Wahyudi.  1997.  Produksi  Alkohol  oleh Saccharomyces  cerevisiae dengan Tetes  Tebu  (Molase)  sebagai
Bahan Baku Utama. Skripsi Diterbitkan. Bogor: Fakultas
Teknik Pertanian, Institut
Pertanian Bogor.