Jurnal Pharmascience, Vol. 9, No. 2, Oktober 2022, hal: 234-247 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Hasil Uji Toksisitas Subkronis Temulawak Terhadap Nilai Hemoglobin, Hematokrit, dan Leukosit Tikus
Akhmad Endang Zainal Hasan*, Husnawati Husnawati, Siti Wachidatun Zulaikha
Department of Biochemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, IPB University, Bogor, West Java, Indonesia Email: zainalhasan@apps.ipb.ac.id

## ABSTRAK
Herbal  yang  berperan  sebagai  antioksidan  dan  antikanker  diantaranya temulawak.  Penelitian  pengaruh  ekstrak  temulawak  terhadap  hematologi  tikus  pada pengujian  keamanan  subkronis  dilakukan  pada  penelitian  ini.    Parameter  hematologi yang ditentukan adalah nilai hemoglobin, hematokrit, dan jumlah leukosit. Hewan coba yang digunakan adalah tikus jantan dan betina dari galur Sprague Dawley. Herbal yang diberikan  sebagai  pengobatan  adalah  ekstrak  etanol  70%  temulawak  yang  diberikan sebanyak 5 hari dalam seminggu selama 28 hari dengan dosis bertingkat mulai dari 45 mg/Kg BB hingga 5.625 mg/kg BB. Hasil yang diperoleh adalah perlakuan terakhir tidak ada tikus yang mati. Berdasarkan pengukuran diperoleh nilai hemoglobin antara 12,57- 17,97  g/dL,  nilai  hematokrit  antara  31,77-51,57%,  dan  jumlah  leukosit  antara  5,01- 23.22x10 3 sel/μL (normal). Kesimpulan dari penelitian ini adalah bahwa dosis lebih besar dari  5625  mg/kg  BB  merupakan  nilai  LD 50 untuk  ekstrak  etanol  70%  temulawak. Pemberian ekstrak etanol 70% temulawak hingga dosis 5.625 mg/kg BB selama 28 hari pada tikus jantan dan betina memberikan efek penurunan terhadap nilai hemoglobin, hematokrit,  dan  leukosit,  namun  nilainya  masih  dalam  batas  normal.  Tidak  ada perbedaan nyata antara tikus jantan dan betina pada hasil pengukuran nilai hemoglobin, hematokrit, dan leukosit.
Kata Kunci: Dosis, Hematologi, Subkronis, Temulawak, Tikus

## ABSTRACT
Herbs that act as antioxidants and anticancer include temulawak. Research on the effect of temulawak extract on rat hematology in subchronic safety testing was carried out in  this  study.  The  determined  hematological  parameters  were  the  value  of  hemoglobin, hematocrit and the  number  of  leukocytes.  The experimental animals used were male and female rats from the Sprague Dawley strain. The herbs given as treatment were an ethanolic
extract of 70% temulawak which was given 5 days a week for 28 days with a graduated dose ranging from 45 mg/Kg BW to 5625 mg/kg BW. The results obtained are the last treatment no  rat  died.  Based  on  the  measurement  of  hemoglobin  values  obtained  between  12.57  to 17.97  g/dL,  hematocrit  values  obtained  between  31.77  to  51.57%  and  leukocyte  counts obtained between 5.01 to 23.22x103 cells/μL were still in the normal range. The conclusion of this study is that a dose greater than 5,625 mg/kg BW is the LD50 value for the ethanol extract of 70% temulawak. Giving 70% ethanol extract of temulawak until a dose of 5,625 mg/kg  BW  for  28  days  to  male  and  female  rats  had  a  decreasing  effect  on  hemoglobin, hematocrit, and leukocyte values, but the values were still within normal limits. There is no significant  difference  between  male  and  female  rats  in  the  measurement  results  of hemoglobin, hematocrit, and leukocyte values.
Keywords: Dose, Hematology, Rats, Subchronic, Temulawak

## I. PENDAHULUAN
Penggunaan  herbal  sebagai  obat tradisional mengalami peningkatan berbarengan dengan meningkatnya pengetahuan  masyarakat  terhadap  efek samping  dari  obat  sintetik  (Adipratama 2009).  Menurut  Linda et  al .  (2014), masyarakat  mencari  alternatif  pengobatan dengan  menggunakan  tumbuhan  dalam menyembuhkan  penyakitnya.  Penggunaan tumbuhan  obat  yang  tidak  tepat  dapat berpotensi  menimbulkan  efek  samping yang dapat merugikan tubuh. Uji toksisitas perlu  dilakukan  untuk  mendeteksi  adanya efek  toksik  terhadap  pemakaian tumbuhan obat.  Pengujian  toksisitas  terhadap  hewan coba dilakukan untuk menjamin keamanan ketika diaplikasikan pada manusia.
Tahapan  pengujian  toksisitas  dimulai  dari akut, subkronis, dan kronis (BPOM 2014).
Famili  tumbuhan  obat  terbanyak berasal  dari  kelompok  Zingiberaceae. Sebagian besar tumbuhan tersebut digunakan  untuk  mempertahankan  daya
tahan tubuh, mengurangi gangguan pencernaan, dan gangguan pada pernafasan (Nisa  dan  Astana  2018).  Temulawak merupakan  tanaman  obat  yang  memiliki banyak kegunaan dan membuat tanaman ini terkenal.  Seperti pada umumnya kelompok Zingiberaceae,  kandungan  kurkumin  atau kurkuminoid merupakan bahan aktif utama (Cahyono et  al .,  2011).    Namun  dalam temulawak kandungan xantorizol merupakan komponen paling utama, selain kukumin  tersebut  (Purwakusumah et  al ., 2016).
Xanthorrhizol merupakan
komponen terpenoid yang berperan sebagai antikanker,  anti-inflamatori,  antimikrobial antihiperlipedemia, antioksidan, antihipertensi, berpengaruh terhadap estrogenik  dan  antiestrogenik  (Oon et  al. ,
2015). Secara tersendiri xanthorizol ini juga berperan sebagai antiproliferasi (Noomhorm et  al .,  2014).    Menurut Anggakusuma et  al .  (2009),  aktivitas luciferase  Gal-4/ER  ditingkatkan  oleh
xanthorrhizol  dan  menginduksi  interaksi ER-estrogen  response  element  (ERE) endogen  di  sel  MCF-7,  dan  xanthorrhizol secara  signifikan  meningkatkan  ekspresi gen  pS2.  Penelitian  lain  yang  dilakukan oleh  Cheah et  al .  (2006)  menunjukkan bahwa  xanthorrhizol  dapat  meninduksi apoptosis  pada  protein  bcl-2  PARP-1  dan p53 sehingga bersifat sebagai antiproliferatif pada sel MCF-7.
Kurkumin digunakan dalam berbagai  obat  yang  berpotensi  sebagai antioksidan, antiinflamasi, antibakteri, antivirus, antijamur, antitumor, dan hepatoprotektif  (Anggoro et  al .,  2015).
Menurut  Farida et  al .  (2018),  dalam penelitian  yang  menggunakan  metode penghambatan denaturasi protein disimpulkan  bahwa  ekstrak  temulawak mmemupunyai aktivitas antiinflamasi.
Ekstrak  kurkuminoid  temulawak  memiliki LC 50 lebih  kecil  dari  1000  μg/mL  yaitu sebesar  213,24 µg/mL (Riki et  al ., 2017a) dan mampu menghambat pertumbuhan sel HeLa,  sehingga  berpotensi  sebagai  obat antikanker  serviks    (Riki et  al .,  2017b).
Ekstrak  temulawak  tergolong  sebagai antioksidan  yang  bagus  karena  memiliki aktivitas  sebesar  87,01  µg/mL  (Rosidi et al. ,  2017).    Peran  kurkumin  sebagai antikanker  telah  dijelaskan  oleh  (Wang et al .,  2016).    Target  kerja  kurkumin  dalam mengatasi  kanker  diuraikan  oleh  (Song et al .,  2019).  Peran  kurkumin  dalam  bentuk
nanopartikel  sebagai  antikanker  telah diuraikan  oleh  Ombredane et  al .  (2021). Secara  rinci,  Mansouri et  al .  (2020) menguraikan  peran  kurkumin  sebagai senyawa  yang  dapat  digunakan  dalam pengujian secara klinis pada manusia dalam mengatasi  kanker.  Penggunaan  kurkumin ini  menjadikan  kemotrapi  kanker  akan menjadi  efisien  (Farghadani  &  Naidu, 2022).
Sesuai  dengan  tahapan  mengujian dalam  rangka  penilaian  suatu  bahan  dapat digunakan  sebagai  obat,  BPOM  (2014) memberikan  tahapan  uji  akut,  subkronis dan kronis. Pada pengujian secara akut akan diperoleh  dosis  letal  median  (LD 50 ), sedangkan  pengujian  subkronis  akan terlihat  peran  bahan  dalam  mengganggu komponen  lain  dalam  tubuh  sehingga penggunaan  bahan  tersebut  aman  dalam rentang  waktu  pengujian  (BPOM,  2014). Belum terdapat riset terkait efek  toksisitas subkronis  ekstrak  etanol  70%  temulawak hasil  produksi  skala  industri  terhadap hematologi  tikus.  Walaupun  pengujian terhadap  mencit  sudah  pernah  dilakukan oleh  (Listyawati,  2006).  Oleh  karena  itu penentuan  keamanan  akut  dan  subkronis dilakukan dari ekstrak etanol 70% temulawak.  Dengan  menggunakan  tikus Sprague Dawley jantan dan betina diamati nilai  hemoglobin,  hematokrit,  dan  jumlah leukosit.

## II. METODE

## A. Bahan
Tikus  sebagai  hewan  uji  yang digunakan  adalah  dari Sprague  Dawley berbobot  badan  sekitar  150-200  gram diperkirakan  berusia  sekitar  8  minggu. pakan  merk HI-PRO-VITE ,  ketamin- xylazin,  ekstrak  etanol  70%  temulawak yang telah terstandar oleh PT.
Phytochemindo  Reksa,  CMC  1%,  dan bahan  lain  untuk  pengujian  hemoglobin, hematokrit, dan leukosit.

## B. Preparasi Sampel
Ekstrak  temulawak  yang  telah terstandar diperoleh dari
PT.
Phytochemindo  Reksa.  Preparasi  sampel dilakukan  di  Laboratorium  Penelitian Biokimia.  Ekstrak  temulawak  dibuat dengan  dosis  45,  225,  1125,  dan  5625 mg/kg bobot badan.

## C. Perlakuan Hewan Coba
Persiapan  hewan  coba  mulai  dari pemeriksaan  dan  siap  untuk  dilakukan pengujian  disesuaikan  dengan  aturan (BPOM,  2014).    Setelah  dilakukan aklimatisasi  tikus  dilakukan  perlakuan sesuai  dengan  dosis  yang  diberikan. Pemberian  sampel  dilakukan  5  hari  dalam seminggu secara berturut-turut menggunakan sonde yang diberikan secara oral. Penelitian sudah memperoleh
persetujuan  dari  Komisi  Etik  IPB  dengan nomor 174-2020 IPB.
Pengamatan gejala klinis dilakukan setiap  terhadap  sistem  kardiovaskuler, pernafasan,  mata,  dan  bulu.  Pengamatan lain  adalah  melihat  gejala  toksik  atau terjadinya  kematian.    Perhitungan  LD 50 diperoleh dari jumlah tikus yang mengalami kematian dalam waktu 24 jam.

## D. Penentuan Hematologi Darah
Pengambilan darah tikus dilakukan sesuai dengan petunjuk dalam Hasan et al .
(2016)  ,  dengan  melakukan  pengambilan pada  hari  ke-0,  7,  28,  dan  42  (kelompok satelit).
Pengukuran hemoglobin, hematokrit, dan leukosit menggunakan alat
Hematology Analyzer Abaxis HM5).
Pengukuran hemoglobin berdasarkan absorbansi  cahaya  oleh  foto  detektor, sedangkan  pengukuran  hematokrit  dan leukosit menggunakan prinsip flowsitometri ( Hematology Analyzer
Abaxis HM5).

## E. Analisis Data (Farida et al., 2018)
Data  yang  diperoleh  dilakukan analisis menggunakan ANOVA pada  taraf kepercayaan 5% (α=0.05).  Kelompok yang berbeda diuji lanjutan dengan uji Duncan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala  klinis  pada  tikus  diamati pada 24 jam (H0) dan hari pengamatan ke- 7 (H7). Gejala klinis yang muncul pada H0 adalah semua tikus berperilaku aktif, mata merah muda menyala, dan bulu lebat putih halus (Tabel I). Hasil pengamatan pada H7 menunjukkan  kelompok  dosis  1,  2,  dan  3 tidak  menunjukkan  gejala  toksik  karena kenampakannnya  sama  dengan  kelompok
normal, sedangkan untuk dosis 4 dan satelit menunjukkan  gejala  yang  berbeda  dengan kelompok  normal.  Gejala  klinis  yang muncul pada kelompok  dosis  4  dan  satelit yaitu  penurunan  keaktifan  tikus  dan  bulu yang  mengusam  berwarna  kekuningan disertai  kerontokan  rambut  pada  beberapa bagian.  Gejala  klinis  yang  berbeda  pada kelompok  dosis  4  dan  satelit  tidak menyebabkan kematian pada tikus.
Tabel I. Pengamatan gejala klinis tikus akibat pemberian sediaan
Kelompok perlakuan Jumlah hewan yang mati Gejala klinis yang timbul H0 H7 Normal 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Dosis 1 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Dosis 2 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Dosis 3 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Dosis 4 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Pasif, mata normal, bulu kuning rontok Satelit 0 Aktif, agresif, mata normal, bulu putih halus lebat Pasif, mata normal, bulu kuning rontok
Berdasarkan pengamatan pada tikus di hari ke-0 dan ke-7 semua kelompok tidak mengalami  kematian,  bahkan  pada    dosis tertinggi yaitu  5625 mg/kgBB  tikus  masih dalam kondisi hidup. Hasil ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  70% temulawak  mempunyai  nilai  LD 50 lebih besar dari 5625 mg/kgBB. Menurut Katrin
et  al .  (2011),  bahwa  LD 50 ekstrak  etanol temulawak  pada  mencit  dosisnya  lebih besar  dari  7500  mg/kgBB.  Sedangkan menurut Nugroho (2015), ekstrak temulawak  yang  dikombinasikan  dengan sambung  nyawa  dengan  perbandingan  1:4 tidak memiliki potensi toksik hingga dosis 2000 mg/kg. Kombinasi temulawak dengan
beberapa  tanaman  obat  lain  menurut penelitian Winarno et al . (2015) mempunyai nilai LD 50 yang lebih dari 5000 mg/kgBB.
Pada  pengamatan  hari  ke-7,  terjadi penurunan  keaktifan  tikus  dan  bulu  yang mengusam  berwarna  kekuningan  disertai kerontokan  pada  beberapa  bagian  dari kelompok  dosis  4  dan  satelit.  Warna kekuningan  yang  muncul  disebabkan  oleh faktor  pemberian  ekstrak  temulawak  yang berwarna kuning.  Sesuai pendapat Kawiji et  al .  (2010)  bahwa  kurkumin  merupakan zat pemberi warna kuning pada temulawak. Perubahan gejala klinis ini tidak menimbulkan  kematian,  sehingga  dapat dikatakan bahwa temulawak dalam kategori tidak toksik.
Nilai hemoglobin yang terukur pada tikus  jantan  dan  betina  selama  28  hari pemberian  ekstrak  berada  pada  rentang 12,57–17,50  g/dL.  Hasil  tersebut  masih berada  dalam  rentang  normal  menurut Hidayat et  al .  (2017).  Semua  tikus  jantan mengalami  peningkatan  nilai  hemoglobin dari  H0  menuju  H7  kecuali  kelompok normal yang mengalami penurunan sebesar 0,92%  (Tabel  II).  Nilai  hemoglobin  hari pengamatan  ke-28  (H28)  mengalami penurunan  kecuali  pada  kelompok  normal yang mengalami kenaikan sebesar 11,58%. Kelompok  dosis  4  dan  satelit  tikus  jantan pada H28 memiliki nilai hemoglobin yang lebih  rendah  daripada  kelompok  lain
(p<0,05).  Nilai  hemoglobin  kelompok satelit  tikus  jantan  pada  hari  pengamatan ke-42  (H42)  yaitu  14,43  g/dL,  mengalami peningkatan sebesar 14,80% dari H28.
Nilai hemoglobin tikus betina pada H7 mengalami penurunan, kecuali kelompok  satelit  mengalami  kenaikan sebesar  6,45%  (Tabel  III).    Nilai hemoglobin yang terukur pada tikus betina di  H7  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05).  Hasil pengukuran  nilai  hemoglobin  pada  tikus betina  di  H28  mengalami  penurunan kecuali  pada  kelompok  dosis  4  yang mengalami  kenaikan  sebesar  1,74%.  Nilai hemoglobin tikus betina kelompok dosis 1 dan  2  pada  H28  berbeda  nyata  terhadap kelompok normal, dosis 3, dan 4 (p<0,05). Nilai  hemoglobin  yang  diperoleh  antara tikus  jantan  dan  betina  pada  H0,  H7,  dan H28 menunjukkan nilai yang hampir sama secara statistik (p>0,05).
Nilai hemoglobin pada tikus jantan dan  betina  di  H0,  H7,  dan  H28  serta kelompok satelit tikus jantan di H42 masih berada  dalam  rentang  normal  menurut Hidayat et al . (2017).   Hal ini menunjukkan bahwa  tidak  adanya  efek  toksik  tertunda akibat  pemberian  ekstrak  etanol  70% temulawak  terhadap  nilai  hemoglobin. Peningkatan nilai hemoglobin yang terjadi pada  tikus  jantan  sama  sesuai  dengan Ardiyanto et  al .  (2014)  yaitu  pemberian kombinasi  temulawak,  tapak  liman,  dan bayam  merah  mampu  meningkatkan  nilai
hemoglobin. Nilai hemoglobin yang melebihi  nilai  normal  atau  polisitemia dapat  disebabkan  oleh  dehidrasi,  gagal jantung, dan gaya hidup yang kurang sehat. Akibat  yang  ditimbulkan  tidak  berbahaya kecuali  ada  penyakit  bawaan  yang  dapat mengakibatkan  kematian  (Sitasiwi  & Isdadiyanto, 2017).
Perlakuan yang diberikan selama 28 pada  penelitian  ini  memberikan  efek terhadap nilai hemoglobin yang cenderung menurun khususnya pada tikus betina. Hal ini  berkebalikan  dengan  hasil  yang diperoleh  oleh  Listyawati  (2006)  yang menunjukkan peningkatan nilai hemoglobin  setelah  pemberian  ekstrak etanol  95%  temulawak.  Nilai  hemoglobin yang  rendah  merupakan  salah  satu indikator penyakit anemia. Hasil pemeriksaan  hemoglobin,  hematokrit,  dan eritrosit saling berhubungan dan berbanding  lurus  jika  terjadi  perubahan (Wientarsih et al ., 2013).
Faktor  yang  mempengaruhi  nilai hemoglobin  menurut  Arfah  (2015)  adalah karena adanya faktor internal dan eksternal bukan hanya karena factor perlakuan yang diberikan.
Menurut  Sitasiwi  &  Isdadiyanto (2017),  bahwa etanol sebagai pelarut dapat menghasilkan  bahan  aktif  yang  optimal. Kandungan  kalium  yang  terekstrak  dalam pelarut  etanol  70%  berperan  dalam menjaga keseimbangan cairan dan elektrolit tubuh (Moerfiah et al ., 2019).
Flavonoid  yang  terkandung  dalam temulawak dapat memberikan donasi atom hidrogen sehingga mengikat radikal bebas. Akibat  radikal  bebas  ini  akan  terjadi hemolisis  sel  darah  merah  tapi  dapat dicegah  dengan  keberadaan  flavonoid. Senyawa  lain  yang  terkandung  dalam temulawak yaitu fenol. Menurut Muthmainnah et  al .  (2015),  fenol  dapat menangkal  radikal  bebas  dan  mencegah kerusakan sel.
Tabel II. Nilai hemoglobin tikus jantan Kelompok perlakuan Nilai hemoglobin pada hari pengamatan ke-(g/dL) H0 H7 H28 Normal 15,17±2,60 a 15,03±1,50 a 16,77±2,78 c Dosis 1 14,83±1,37 a 16,57±2,04 a 14,93±0,61 b Dosis 2 16,80±1,54 a 17,50±2,20 a 14,53±0,32 b Dosis 3 16,57±1,21 a 16,63±1,55 a 15,10±0,36 c Dosis 4 14,53±0,90 a 16,03±2,39 a 13,57±0,29 a Satelit 14,77±1,37 a 16,20±3,26 a 12,57±1,14 a
Keterangan  :  Nilai  yang  diikuti  dengan  huruf  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  hasil pengujian. (α=0,05) ANOVA
Tabel III. Nilai hemoglobin tikus betina Kelompok perlakuan Nilai hemoglobin pada hari pengamatan ke-(g/dL) H0 H7 H28 Normal 14,77±2,44 a 14,73±0,55 a 14,07±0,21 a Dosis 1 16,17±1,27 a 15,87±0,91 a 15,00±0,87 b Dosis 2 15,77±0,29 a 16,53±1,14 a 15,83±1,62 b Dosis 3 16,53±0,67 a 15,33±0,81 a 12,83±0,23 a Dosis 4 15,80±1,08 a 13,83±1,76 a 14,40±1,31 a Satelit 15,50±1,84 a 16,50±2,21 a 13,20±1,61 a
Keterangan  :  Nilai  yang  diikuti  dengan  huruf  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  hasil pengujian. (α=0,05) ANOVA
Nilai hematokrit yang terukur pada tikus  jantan  dan  betina  selama  28  hari pemberian  ekstrak  berada  pada  rentang 31,77%  hingga  51,57%.  Hasil  tersebut masih  berada  dalam  rentang  normal menurut  (Hidayat et  al .,  2017).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  tidak  adanya  efek toksik  tertunda  akibat  pemberian  ekstrak etanol  70%  temulawak  terhadap  nilai hematokrit.  Perhitungan  nilai  hematokrit pada  hari  H7  mengalami  penurunan dibandingkan dengan H0 kecuali kelompok dosis  1,  4,  dan  satelit  (Tabel  IV). Peningkatan nilai hematokrit tertinggi dari H0  ke  H7  tikus  jantan  terdapat  pada kelompok  satelit  dari  43,03%  menjadi 46,03%.  Kecuali  pada  kelompok  normal, terjadi  penurunan  nilai  hematokrit  tikus jantan  pada  H28.  Kelompok  satelit  tikus jantan pada H28 memiliki nilai hematokrit paling  rendah  daripada  kelompok  lain (p<0,05). Nilai hematokrit kelompok satelit
tikus  jantan  mengalami  peningkatan  pada H42 dari 31,77% menjadi 42,15%.
Penurunan  tertinggi  terdapat  pada kelompok  dosis  3  dari  51,57%  menjadi 42,59%  (Tabel  V).  Nilai  hematokrit  pada tikus  betina  mengalami  penurunan  pada H28  kecuali  kelompok  dosis  1,  4,  dan satelit. Kelompok dosis 3 pada tikus betina di H28 memiliki nilai hematokrit yang tidak sama  secara  nyata  dengan  kelompok  lain (p<0,05).  Nilai  hematokrit  antara  tikus jantan  dan  betina  pada  H0,  H7,  dan  H28 adalah sama (p>0,05).
Pengaruh  dehidrasi,  pendarahan atau edema akibat dari adanya pengeluaran cairan dari pembuluh darah akan berakibat meningkatnya  hematokrit  (Wientarsih et al .,  2013).  Namun  menurut  Widyastuti
(2013),  darah  yang  encer  akan  berakibat nilai hematokrit yang rendah karena jumlah eritrosit rendah.
Menurut  Zuhrawati et  al .  (2015),
polisitemia  akan  mengakibatkan  tingginya nilai  hematokrit,  sedangkan  anemia  akan mengakibatkan rendahnya hematokrit.
Nilai hematokrit dijadikan sebagai indikator  agregat  kesehatan  (Milenkaya et al ., 2013).
Tabel IV. Nilai hematokrit tikus jantan Kelompok perlakuan Nilai hematokrit pada hari pengamatan ke-(%) H0 H7 H28 Normal 44,89±6,31 a 43,27±2,70 a 48,72±4,45 c Dosis 1 45,31±3,57 a 47,26±4,78 a 40,50±2,30 b Dosis 2 48,83±3,13 a 48,55±7,47 a 38,57±2,66 b Dosis 3 49,98±2,27 a 46,59±3,30 a 43,84±0,61 b Dosis 4 43,19±3,55 a 43,89±5,98 a 40,45±2,15 b Satelit 43,03±4,69 a 46,06±7,15 a 31,77±3,30 a
Keterangan  :  Nilai  yang  diikuti  dengan  huruf  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  hasil pengujian. (α=0,05) ANOVA
Tabel V. Nilai hematokrit tikus betina Kelompok perlakuan Nilai hematokrit pada hari pengamatan ke-(%) H0 H7 H28 Normal 45,73±6,96 a 46,41±2,29 a 41,83±1,87 a Dosis 1 49,05±4,13 a 44,00±1,83 a 45,72±2,55 a Dosis 2 49,84±2,69 a 48,62±4,08 a 44,90±3,39 a Dosis 3 51,57±0,30 a 42,59±2,70 a 37,61±0,68 b Dosis 4 44,26±3,82 a 40,03±8,00 a 42,48±3,24 a Satelit 48,76±5,77 a 43,38±10,44 a 43,27±2,65 a
Keterangan  :  Nilai  yang  diikuti  dengan  huruf  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  hasil pengujian. α=0,05) ANOVA
Jumlah leukosit yang terukur antara 5,01  x10 3 /μL  hingga  23,22  x10 3 sel/μL. Hasil tersebut masih berada dalam rentang normal  menurut  Fahrimal et  al .  (2014).
Perhitungan  jumlah  leukosit  tikus  jantan
pada  H7  mengalami  penurunan  dari  H0 pada  semua  kelompok  kecuali  kelompok dosis  4  yang  mengalami  kenaikan  sebesar 111,44%  yaitu  dari  9,70  x10 3 sel/μL menjadi  20,51  x10 3 sel/μL  (Tabel  VI).
Jumlah leukosit pada tikus jantan mengalami  penurunan  pada  H28  dari  H7 kecuali  pada  kelompok  normal  dan  satelit mengalami  kenaikan  sebesar  7,72%  dan 24,36% (p>0,05). Jumlah leukosit kelompok  satelit  mengalami  penurunan sebesar 48,10% pada H42.
Perhitungan  jumlah  leukosit  tikus betina pada H7 mengalami penurunan dari H0  pada  semua  kelompok  terkecuali kelompok  dosis  4  dan  satelit  mengalami kenaikan  sebesar  64,87%  dan  29,42% (Tabel  VII).  Jumlah  leukosit  kelompok dosis  1  dan  3  pada  tikus  betina  di  H7 berbeda  nyata  dengan  kelompok  lain (p<0,05). Jumlah leukosit pada tikus betina mengalami  penurunan  di  H28  dari  H7 terkecuali  pada  kelompok  dosis  1  yang mengalami kenaikan sebesar 1,53%.
Kelompok  dosis  4  pada  tikus  betina
berbeda nyata dengan kelompok perlakuan lain (p<0,05). Jumlah leukosit antara tikus jantan  dan  betina  pada  H0,  H7,  dan  H28 sama (p>0,05).
Jumlah  leukosit  pada  tikus  jantan dan  betina  di  H0,  H7,  dan  H28  serta kelompok satelit tikus jantan di H42 masih berada  dalam  rentang normal (Fahrimal et al .,  2014).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa tidak  adanya  efek  toksik  tertunda  akibat pemberian  ekstrak  etanol  70%  temulawak terhadap  jumlah  leukosit.  Jumlah  leukosit pada tikus jantan dan betina di H7 dan H28 mengalami  penurunan  dari  H0. Penurunan jumlah  leukosit  dapat  disebabkan  oleh beberapa faktor yaitu ada tidaknya infeksi. Penurunan  jumlah  leukosit  menunjukkan bahwa  tidak  terjadi  infeksi  pada  hewan coba.
Tabel VI. Jumlah leukosit tikus jantan Kelompok perlakuan Jumlah leukosit pada hari pengamatan ke-(sel/μL) H0 H7 H28 Normal 13,87 x10 3 ±3,26 a 9,85 x10 3 ±2,08 a 10,61 x10 3 ±4,26 a Dosis 1 12,55 x10 3 ±6,03 a 10,65 x10 3 ±4,29 a 7,06 x10 3 ±2,39 a Dosis 2 18,44 x10 3 ±6,27 a 13,85 x10 3 ±2,83 a 9,57 x10 3 ±6,20 a Dosis 3 23,22 x10 3 ±6,55 a 15,29 x10 3 ±9,14 a 8,13 x10 3 ±1,96 a Dosis 4 9,70 x10 3 ±2,72 a 20,51 x10 3 ±13,63 a 13,09 x10 3 ±4,99 a Satelit 16,01 x10 3 ±2,69 a 13,34 x10 3 ±7,82 a 16,59 x10 3 ±7,83 a
Keterangan : Nilai yang diikuti dengan huruf pada kolom yang sama menunjukkan hasil pengujian. (α=0,05) ANOVA
Tabel VII. Jumlah leukosit tikus betina Kelompok perlakuan Jumlah leukosit pada hari pengamatan ke-(sel/μL) H0 H7 H28 Normal 13,91 x10 3 ±1,36 a 13,91 x10 3 ±5,78 b 5,31 x10 3 ±1,09 a Dosis 1 15,70 x10 3 ±3,38 a 8,47 x10 3 ±4,70 a 8,60 x10 3 ±1,15 a Dosis 2 18,71 x10 3 ±4,23 a 12,55 x10 3 ±0,98 b 5,20 x10 3 ±0,91 a Dosis 3 18,18 x10 3 ±4,13 a 7,79 x10 3 ±1,62 a 5,01 x10 3 ±1,55 a Dosis 4 13,38 x10 3 ±1,16 a 22,06 x10 3 ±8,12 b 14,17 x10 3 ±5,26 b Satelit 11,32 x10 3 ±5,94 a 14,65 x10 3 ±4,86 b 13,59 x10 3 ±6,17 b
Keterangan  :  Nilai  yang  diikuti  dengan  huruf  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  hasil pengujian. (α=0,05) ANOVA
Leukosit diketahui meningkat tajam saat  terjadinya  infeksi  (Toghyani et  al ., 2010).  Menurut  Oliveira et  al. (2017), adanya  benda  asing  dalam  tubuh  akan direspon  dengan  meningkatkan  jumlah leukosit sehingga tidak mengganggu fungsi tubuh.  Penyakit  leukemia  merupakan penyakit  akibat  tingginya  jumlah  leukosit dalam tubuh dan dapat terjadi pada semua usia.    Namun  peningkatan  tersebut  belum mencapai nilai normalnya, oleh karena ada kemungkinan  masih  akan  mengalami perbaikan setelah pemberian ekstrak temulawak.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  70%  temulawak mempunyai  nilai  LD 50 lebih  besar  dari 5.625 mg/kg BB. Pemberian ekstrak etanol 70%  hingga  dosis  5.625  mg/kg  BB  pada pengujian  subkronis  dapat    memberikan efek penurunan terhadap nilai hemoglobin,
hematokrit,  dan  leukosit,  dengan  rerata nilainya  masih  dalam  batas  normal.  Hasil pengukuran  nilai  hemoglobin,  hematokrit, dan  leukosit  pada  tikus  selama  pengujian subkronis  menunjukkan  nilai  yang  tidak ada perbedaan nyata antara tikus jantan dan betina.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  bahwa  tidak ada  konflik  kepentingan  dalam  penulisan artikel ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Rektor IPB yang telah memfasilitasi  pendanaan  penelitian  ini. Penulis  juga  mengucapkan  terima  kasih kepada  Dekan  FMIPA,  IPB  dan  Ketua Departemen  Biokimia,  FMIPA,  IPB  yang telah  memberikan  izin  untuk  tim  kami melakukan  penelitian.  Demikian  juga
penulis mengucapkan  terima kasih  kepada mereka  yang  telah  bekerja  sama  dalam mensukseskan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggakusuma,  Yanti,  Lee,  M.,  &  Hwang, J.  K.  (2009).  Estrogenic  activity  of xanthorrhizol isolated from Curcuma xanthorrhiza  ROXB. Biological  and Pharmaceutical  Bulletin , 32 (11), 1892–1897. https://doi.org/10.1248/bpb.32.1892 Ardiyanto, D., Astana, P. R. W., & Triyono,
A.  (2014).  Efek  Formula  Jamu  Anti Anemia Terhadap Kadar Hemoglobin Pasien Anemia Di Rumah Riset Jamu
“Hortus  Medicus”  Tawangmangu.
Jurnal  Ilmu  Farmasi  Dan  Farmasi
Klinik , 1–4. https://doi.org/10.31942/jiffk.v0i0.11 92 Arfah,  N. M. (2015). Pengaruh Pemberian Tepung Kunyit pada Ransum Terhadap Jumlah Eritrosit, Hemoglobin,  Pcv,  dan  Leukosit Ayam Broiler. In Pengaruh Penggunaan  Pasta  Labu  Kuning (Cucurbita Moschata) Program Studi Kedokteran Hewan Fakultas
Kedokteran  Universitas  Hasanuddin Makassar: Vol. Fakultas Kedokteran, Universitas Hasanuddin Makassar.
BPOM.  (2014).  Persyaratan  Mutu  Obat Tradisional. Badan  Pengawas  Obat Dan Makanan , 1–25.
Cheah,  Y.  H.,  Azimahtol,  H.  L.  P.,  & Abdullah, N. R. (2006).
Xanthorrhizol exhibits
antiproliferative  activity  on  MCF-7 breast  cancer  cells  via  apoptosis induction. Anticancer Research , 26 (6 B), 4527–4534.
Anggoro, D., R. S. Rezki, & Siswarni MZ. (2015). Ekstraksi Multi Tahap Kurkumin dari Temulawak (Curcuma xanthorriza  Roxb.)  Menggunakan pelarut  Etanol. Jurnal  Teknik  Kimia
USU ,
4 (2), 39–45.
https://doi.org/10.32734/jtk.v4i2.146 9
Fahrimal,  Y.,  Eliawardani,  Rafina,  A., Azhar, A., & Asmilia,  dan N. (2014). Blood  Profile  of  Rats  (Rattus norvegicus) Infected with
Trypanosoma  evansi  Treated  with Willow  Tree  Bark  Extract  (Salix tetrasperma  Roxb). Perceptual  and Motor Skills , 8 (2), 164–168.
https://doi.org/10.2466/PMS.104.3.7
99-802
Farghadani,  R.,  &  Naidu,  R.  (2022). Curcumin  as  an Enhancer  of Therapeutic Efficiency of Chemotherapy  Drugs  in  Breast Cancer. International  Journal  of Molecular Sciences , 23 (4). https://doi.org/10.3390/ijms2304214 4 Farida, Y., Rahmat, D., & Widia Amanda, A. (2018). Uji Aktivitas Antiinflamasi  Nanopartikel  Ekstrak Etanol Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) dengan Metode Penghambatan Denaturasi  Protein. Jurnal  Ilmu Kefarmasian  Indonesia , 16 (2),  225– 230.
Hasan,  A.  E.  Z.,  Mangunwidjaja,  D., Sunarti,  T.  C.,  Suparno,  O.,  & Setiyono,  A.  (2016).  Antibreast cancer  activity  of  nanopropolis Indonesia  on  induced  mammary gland  tumor  by  dmba  in  virgin sprague-dawley rats. Biotropia , 23 (1),
35–41.
https://doi.org/10.11598/btb.2016.23 .1.473
Hidayat, M., Prahastuti, S. A. D., Dewi, E.,
Safitri, D., Farah, S., & Soemardji, A. A.  (2017). Uji  Toksisitas  Subkronis Kombinasi  Ekstrak  Kedelai  dan JatiBelanda  terhadap  Hematologi Tikus Wistar . Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia.  15 (1); 114- 119.
Katrin, E., Winarno, H., & Susanto. (2011).
The  Acute  Toxicity  of  Ethanol Extract  from  Irradiated  Temulawak
(Curcuma xanthorrizha Roxb.)
Which  Have  Anticancer  Activity Ermin. A  Scientific  Journal  for  The Applications of Isotopes and Radiation , 7 (1), 41.
Kawiji, K., Atmaka, W., & Nugraha, A. A.
(2010).  Kajian  Kadar  Kurkuminoid,
Total Fenol dan Aktivitas Antioksidan  Oleoresin  Temulawak.
Jurnal  Teknologi  Hasil  Pertanian , III (2), 102–110.
Listyawati,  S.  (2006).  Toxicity  studies  of the  rhizome  Curcuma  xanthorrhiza
Roxb. and Curcuma zedoaria Roscoe on hematological and male reproduction  system  of  mice  (Mus musculus  L.). Biofarmasi  Journal  of Natural  Product  Biochemistry , 4 (1), 10–13.
https://doi.org/10.13057/biofar/f0401
03
Mansouri, K., Rasoulpoor, S., Daneshkhah,
A., Abolfathi, S., Salari, N., Mohammadi,  M.,  Rasoulpoor,  S.,  & Shabani, S. (2020). Clinical effects of curcumin in enhancing cancer therapy:  A  systematic  review. BMC
Cancer , 20 (1), 1–11. https://doi.org/10.1186/s12885-020-
07256-8
Milenkaya, O., Weinstein, N., Legge, S., & Walters,  J.  R.  (2013).  Variation  in body  condition  indices  of  crimson finches  by  sex,  breeding  stage,  age, time  of  day,  and  year. Conservation Physiology ,
1 (1), 1–14. https://doi.org/10.1093/conphys/cot0
20
Moerfiah,  Yulianita,  &  Setiawan,  D.
(2019). Efektivitas Stimulansia
Kombinasi  Sari  Umbi  Bit  dan  Buah Apel Terhadap  Ketahanan  Fisik dan
Kadar  Hb  Tikus  Putih  Sprague Dawley .  Ekologia  :  Jurnal  Ilmiah
Ilmu  Dasar  dan  Lingkungan  Hidup. 19 (21); 20-26.
Muthmainnah, N., Trianto, H. F., Bangsawan,  P.  I.,  Belakang,  L.,  & Hassk, A. (2015). Uji Toksisitas Akut
Ekstrak Etanol 70 % Daun
Karamunting
( Rhodomyrtus tomentosa ( Aiton ) Hassk .) terhadap Gambaran Histopatologi Ginjal
Tikus . 1 (November), 277–292.
Noomhorm,  N.,  Chang,  C.  J.,  Wen,  C.  S., Wang,  J.  Y.,  Chen,  J.  L.,  Tseng,  L. M., Chen, W. S., Chiu, J. H., & Shyr, Y.  M.  (2014).  In  vitro  and  in  vivo effects  of  xanthorrhizol  on  human breast  cancer  MCF-7  cells  treated with tamoxifen. Journal of
Pharmacological  Sciences , 125 (4),
375–385.
https://doi.org/10.1254/jphs.14024F
P
Nugroho, F. A. (2015). Uji Toksisitas Akut Per Oral Kombinasi Ekstrak Temulawak  (Curcuma  xanthorrhiza Roxb.) Dan Sambung Nyawa (Gynura  procumbens  (Lour.)  Merr) Pada  Tikus  Betina  Galur  Wistar Universitas Gadjah Mada, Universitas Gadjah Mada
Ombredane, A. S., Silva, V. R. P., Andrade,
L.  R.,  Pinheiro,  W.  O.,  Simonelly, M.,  Oliveira,  J.  V.,  Pinheiro,  A.  C., Gonçalves,  G.  F.,  Felice,  G.  J., Garcia, M. P., Campos, P. M., Luz, G. V.  S.,  &  Joanitti,  G.  A.  (2021).  In Vivo  Efficacy  and  Toxicity  of Curcumin  Nanoparticles  in  Breast Cancer  Treatment:  A  Systematic Review. Frontiers  in  Oncology , https://doi.org/10.3389/fonc.2021.61 2903
Oon,  S.  F.,  Nallappan,  M.,  Tee,  T.  T.,
Shohaimi,  S.,  Kassim,  N.  K., Sa’ariwijaya,  M.  S.  F.,  &  Cheah,  Y. H.  (2015).  Xanthorrhizol:  A  review of  its  pharmacological  activities  and anticancer  properties. Cancer  Cell International , 15 (1), 1–15. https://doi.org/10.1186/s12935-015- 0255-4
Riki,  R.,  Ambarsari,  L.,  &  Nurcholis,  W. (2017). The Anti-Cancerpotential Of Temulawak Curcuminoids Extractsnanoparticles Against Cervical Cancer Line Cells. Indonesia Natural Research
Pharmaceutical Journal , 2 (1), 1–10. Riki, Riki, Kurniatin, P. A., Ambarsari, L., Nurcholis,  W.,  &  Darusman,  L.  K. (2017). Characterization and Toxicity of Temulawak Curcuminoid Nanoparticles. Current Biochemistry ,
3 (1), 43–53. https://doi.org/10.29244/cb.3.1.43- 53
Rosidi, A., Khomsan,  A., Setiawan, B., &
Briawan, D. (2017). Potensi temulawak  (c. Potensi  Temulawak , 1995 . https://jurnal.unimus.ac.id/index.php
/psn12012010/article/view/1219/127 2 Sitasiwi,  A.  J.,  &  Isdadiyanto,  S.  (2017).
Kadar  hemoglobin  dan  Jumlah
Eritrosit  mencit  ( Mus  musculus ) jantan  setelah  perlakuan  dengan ekstrak etanol daun nimba ( Azadirachta indica ) the haemoglobin concentration  and  erythrocyte  level. Buletin Anatomi Dan Fisiologi , 2 (2),
161–167.
https://ejournal2.undip.ac.id/index.p hp/baf/article/view/1718
Sofia  de  Oliveira,  And,  E.  E.  R.,  & Huttenlocher,  A.  (2017).  Neutrophil migration  in  infection  and  wound repair: going forward in reverse. Nat Rev Immunol , 16 (6), 378–391.
https://doi.org/10.1038/nri.2016.49.
Neutrophil
Song,  X.,  Zhang,  M.,  Dai,  E.,  &  Luo,  Y.
(2019). Molecular targets of curcumin  in  breast  cancer  (Review). Molecular  Medicine  Reports , 19 (1), 23–29. https://doi.org/10.3892/mmr.2018.96 65
Toghyani, M., Tohidi, M., Gheisari, A. A.,
& Tabeidian, S. A. (2010). Performance, immunity, serum
biochemical and hematological parameters  in  broiler  chicks  fed dietary  thyme  as  alternative  for  an antibiotic  growth  promoter. African Journal  of  Biotechnology , 9 (40), 6819–6825.
https://doi.org/10.5897/AJB09.1998
Wang, Y., Yu, J., Cui, R., Lin, J., & Ding, X.  (2016).  Curcumin  in  Treating Breast Cancer: A Review. Journal of Laboratory  Automation , 21 (6),  723–
731.
https://doi.org/10.1177/22110682166 55524 Widyastuti,  D.  A.  (2013). Profil  Darah Tikus  Putih  Wistar  pada  Kondisi Subkronis Pemberian Natrium Nitrit . 31 (2), 201–215.
Wientarsih,  I.,  Derthi  Widhyari,  S.,  & Aryanti,  T.  (2013).  the  Combination of  Curcumin  With  Zinc  in  Feed  As Alternatif  Therapy  Collibaciilosis  in Broiler  ). Jurnal  Veteriner , 14 (3),
327–334.
https://jurnalpertanianumpar.com/ind ex.php/jgt/article/download/27/106 Winarno, M. W., Widowati, L., & Sundari,
D.  (2015).  Studi Keamanan  Ramuan Jamu  untuk  Hiperurisemia  dan Hipertensi.
Buletin Penelitian Kesehatan , 43 (3). https://doi.org/10.22435/bpk.v43i3.4 341.137-146
Zuhrawati,  Z.,  Asmilia,  N.,  Rizky,  A., Zuraidawati,  Z.,  Nazaruddin,  N., Adam, M., & Muttaqien,  M. (2015). The  Effect  of  Chayote  (Sechium edule)
Leaves Infusion on Haemoglobin  and  Hematocrit  Level of  Anemic  White  Rat  (Rattus norvegicus). Jurnal Medika Veterinaria , 9 (2). https://doi.org/10.21157/j.med.vet..v
9i2.3945