## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN
MEKAI ( Pycnarrhena cauliflora DIELS.) TERHADAP Staphylococcus aureus
Submitted : 28 Juni 2020 Edited : 22 Desember 2020 Accepted : 29 Desember 2020
Yayuk Bulam Sarifati 1 , Sjarif Ismail 2,3 , Khemasili Kosala 2
1 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda Indonesia
2 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda Indonesia
3 Layanan Komplementer Klinik Universitas Mulawarman, Samarinda Indonesia Email : yayukbulamsarifati03@gmail.com

## ABSTRACT
Mekai  leaves  (Pycnarrhena  cauliflora  Diels.)  (P.  cauliflora).  Are  known  to  contain flavonoid compounds, tannins and phenolics that act as antibacterial agents and are used in the treatment  of  eye  pain.  Staphylococcus  aureus  (S.  aureus)  is  one  of  the  examples  of  bacterial diseases  of  eye  pain  and  also  a  major  cause  of  many  infections  in  communities  and  health facilities with cases of resistance to various antimicrobial agents. The purpose of this study was to prove the antibacterial activity of mekai leaves ethanol extract against S. aureus bacteria. This research  is  an  experimental  research.  The  stages  of  this  research  began  by  extracting  mekai leaves using maceration method with 96% ethanol solvent. Antibacterial activity was tested by the disc method (Kirby-Bauer) using ethanol extract concentrations of mekai leaves (EPC) 20%, 30%,  40%,  50%,  60%,  70%,  and  80%,  positive control  using 25  μg  amoxicillin  and  negative control  using  DMSO  10%.  The  measurement  results  of  inhibition  zones  of  mekai  leaf  ethanol extract 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% and 80% respectively were 8.32 mm, 8.32 mm, 8.32 mm, 8.67 mm, 9.00 mm, 8.67 mm, and 8.33 mm. While the positive control measurement of 25 μg amoxicillin against S. aureus is 28.67 mm and the measurement of 10% negative DMSO control does not produce inhibitory zones, so it can be concluded that the ethanol extract of mekai leaves has antibacterial activity, but the area of inhibition zone produced is smaller than amoxicillin 25 µg. The results of statistical tests using Mann Whitney between negative controls with all  EPC concentrations obtained significant differences with p values <0.05, it can be concluded that there is antibacterial activity produced at all EPC concentrations.
Keywords: Antibacterial, Staphylococcus aureus, Pycnarrhena cauliflora, extract

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  merupakan  salah  satu hasil  pemanfaatan  hutan.  Banyak  tanaman obat telah diidentifikasi dan didokumentasikan melalui penelitian, sebagian besar telah digunakan secara turun- temurun  oleh  masyarakat  lokal.  Bagian tanaman yang digunakan sebagai obat adalah akar,  batang,  kulit,  daun,  bunga,  buah  dan
biji.  Terdapat  berbagai  tanaman  obat  di Indonesia  maupun  di  Kalimantan,  salah satunya  adalah  daun  mekai,  digunakan masyarakat  Dayak  di  Kabupaten  Malinau sebagai  obat  sakit  mata (1) .  Sakit  mata  dapat disebabkan  bakteri,  jamur,  virus,  parasit, benda asing atau reaksi autoimun. Salah satu bakteri  yang  dapat  menginfeksi  saluran  air mata,  kelopak  mata,  konjungtiva,  kornea,
ruang  anterior  dan  posterior,  dan  ruang vitreous  adalah S.  aureus .  Berdasarkan  data epidemiologi S. aureus merupakan penyebab utama  infeksi  di  komunitas  dan  fasilitas kesehatan  dengan  kasus  resistensi  terhadap berbagai  agen  mikroba (2) .  Kasus  resistensi obat meningkat menjadi dasar pengembangan  obat-obat  baru  baik  dengan modifikasi struktur maupun dengan penemuan  bahan  yang  berasal  dari  alam. Hasil  penelitian  telah  diketahui  bahwa senyawa flavonoid, alkaloid, tanin dan fenol dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan cara mengganggu komponen dinding sel bakteri, mengganggu metabolisme bakteri dan mengganggu sintesis DNA-RNA bakteri (3) sehingga  diduga  daun  mekai  yang digunakan sebagai obat sakit mata juga dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  karena memilki  kandungan  senyawa  flavonoid, alkaloid, tanin dan fenolik (4,5) .

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental.  Sampel  penelitian  ini  adalah daun P.  cauliflora yang  berasal  dari  Desa Balok Asa, Kabupaten Kutai Barat, Provinsi
Kalimantan Timur. Identifikasi oleh Laboratorium Dendrologi Fakultas Kehutanan Universitas Mulawarman.
Alat  dan  bahan  penelitian  ini  adalah kapas  swab  steril,  lampu  bunsen,  pinset, kertas  cakram,  cawan  petri  90  mm,  tabung reaksi,  spidol,  alat  pengukur  (mm),  standar
McFarland 0.5 , label, pipet mikro, Autoclave , rotavapor,  vortex,  inkubator, oven,  spektrofotometer,  etanol  96%, S. aureus ATCC  33591,  aquades,  NaCl, Brain Heart  Infusion  Broth (BHI  broth) ,  Muller Hinton Agar (agar MH) , amoksisilin disk 25 µg, aquadest steril, Dimettilsulfoksid (DMSO 10%).

## Pembuatan Simplisia
Daun P.  cauliflora sebanyak  1  kg, dicuci  dengan  air  mengalir  kemudian
diangin-anginkan  selama  2-3  hari,  lalu dikeringkan  dalam  oven  suhu  45 0 C  dan kemudian dihaluskan sampai menjadi serbuk. Serbuk  diayak  dengan  ayakan  ukuran  40 mesh dan ditimbang.

## Pembuatan Ekstrak
Serbuk  daun P.  cauliflora diekstraksi dengan etanol 96% secara maserasi selama 3 hari,  setiap  hari  diaduk  selama  10  menit, penyaringan  dengan  vakum  dengan  kertas saring  Whatman  no.1.  Filtrat  yang  telah dikumpulkan  dipekatkan  dengan rotary evaporator dengan suhu 40 o C, lalu dikeringkan lebih lanjut dalam kotak vakum yang  berisi  silika  gel  biru  dan  dimasukan dalam  oven  suhu  70 o C  selama  satu  minggu dan didapatkan kadar air sebesar 12%.

## Pembuatan Media Muller-Hinton Agar
Sebanyak 38 g bubuk MHA dilarutkan ke  dalam  1  liter  air  suling,  kemudian dipanaskan  hingga  agar  larut  sempurna dengan  menggunakan autoclave pada  suhu 121 o C  selama  15  menit.  Saat  suhu  agar  45- 50 o C dituangkan ke dalam cawan petri yang telah disterilkan masing-masing sebanyak 20 ml dan biarkan hingga memadat.

## Suspensi Bakteri
Kultur  murni  bakteri S.aureus yang telah  diremajakan  disuspensi  kedalam  NaCl 0,9% 10mL steril kemudian diinkubasi pada suhu  35±2 o C  sampai  didapat  kekeruhan. Kekeruhan yang didapat disetarakan dengan standar Mc  Farland 0.5  yaitu  setara  dengan jumlah pertumbuhan 1x10 8 .

## Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Mekai
Petri disk yang berisi agar MH ditetesi 20  uL  suspensi  bakteri S.  aureus dengan kepekatan  standar Mc  Farland 0,5  lalu diratakan dengan kapas lidi steril, kemudian ditempel  disk  dengan  konsentrasi  ekstrak daun P.  cauliflora 20%,  30%,  40%,  50%,
60%, 70%, 80%, kontrol positif (amoksisilin
disk  25  µg)  dan  kontrol  negatif  (pelarut ekstrak  DMSO  10%).  Petri  disk  di  inkubasi dalam oven 37 o C selama 24 jam, lalu diukur setiap  zona  bening  disekeliling  cakram menggunakan  digital  jangka  sorong  dengan kepekaan  0,1  mm.  Pengukuran  dilakukan secara  vertikal  dan  horizontal  kemudian dirata-ratakan. (6)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  uji  efek  antibakteri  EPC  20%, 30%,  40%. 50%,  60%,  70%  dan  80%  dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun P. cauliflora terhadap S. aureus
Konsentrasi Ekstrak Daun P. cauliflora Zona Hambat Mean ± SD (mm) 20 % 30 % 40 % 50 % 60 % 70% 80% Kontrol (-) Kontrol (+) 8.32 ± 0.58 *# 8.32 ± 0.58 *# 8. 32 ± 0.58 *# 8.67 ± 0.58 *# 9.00 ± 1.00 *# 8.67 ± 0.58 *# 8.33 ± 0.58 *# 6.00 ± 0.00 28.67 ± 1.53
Keterangan:  Kontrol  (+)  =  Amoksisilin  25 µg; Kontrol (-) = DMSO 10%; Pengulangan tiga  kali. * Berbeda  bermakna  dibandingkan dengan kontrol negarif pada uji mann whitney dengan p<0,05; # Berbeda bermakna
dibandingkan dengan kontrol positif pada uji
mann whitney dengan p<0,05.
Zona hambat yang terbentuk merupakan  petunjuk  kepekaan  bakteri  uji, semakin  besar  zona  hambat  maka  aktivitas antibakteri  semakin  besar  pula (7). Pada kontrol positif (amoksisilin 25 µg) memperlihatkan  diameter  zona  hambat sebesar 28.67 mm, sedangkan kontrol negatif (DMSO  10%)  tidak  memperlihatkan  zona
bening di sekeliling cakram uji sehingga hasil pengukuran  yang  dituliskan  pada  Tabel merupakan  diameter  cakram  uji,  yaitu sebesar 6 mm.
Analisa statistik menggunakan uji non parametrik Mann Whitney menunjukkan zona hambat  pada  semua  konsentrasi  EPC  tidak berbeda signifikan terhadap semua
konsentrasi  EPC  dengan  nilai  <  0.05  dan terdapat  perbedaan  hasil  yang  signifikan antara  kontrol  negatif  dengan  semua konsentrasi  EPC.  Hal  ini  menunjukkan terdapat aktivitas antibakteri yang dihasilkan pada semua konsentrasi EPC.
Pada hasil uji statistik non parametrik mann  whitney pada  semua  konsentrasi  EPC terhadap  kontrol  positif  didapatkan  hasil dengan  nilai  <  0.05,  hal  ini  menunjukkan bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan antara  zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh kontrol  positif  (amoksisilin  25  µg)  dengan zona hambat yang dihasilkan oleh EPC. Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  aktivitas antibakteri amoksisilin lebih besar
dibandingkan EPC (gambar 1). Pada  Gambar  1  memperlihatkan terdapat  peningkatan  zona  hambat  pada konsentrasi EPC 50% dan 60% dimana zona hambat terluas terhadap pertumbuhan S.aureus adalah pada konsentrasi EPC 60%, kemudian terjadi penurunan pada konsentrasi 70%  dan  80%  terhadap  pertumbuhan S.aureus. Hal  ini  tidak  sesuai  dengan pernyataan bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak  yang  diujikan  menghasilkan  zona hambat yang semakin besar pula (8) . Penurunan  zona  hambat  pada  konsentrasi EPC  70%  dan  80%  diduga  oleh  karena ketidakseimbangan  kerja  antar  metabolit pada  konsentrasi  ekstrak  tertentu  sehingga masing-masing bahan aktif yang terkandung dalam daun P. cauliflora tidak bekerja secara sinergis.
Faktor lain yang dapat
menyebabkan penurunan zona hambat adalah variabel  yang  tidak  dapat  dikendalikan  oleh peneliti  seperti  kecepatan  pertumbuhan kuman  yang  diteliti  maupun  sifat  ekstrak yang  kurang  homogen  setelah  diencerkan karena ekstrak tidak larut 100% (9) .
Gambar 1. Hubungan Antara Konsentrasi Ekstrak Daun P. cauliflora (EPC) terhadap Rata-rata Diameter Zona Hambat Bakteri S. aureus
Hasil penelitian menunjukkan terdapat aktivitas  antibakteri  EPC  pada  semua konsentrasi,  namun  luas  zona  hambat  yang dihasilkan  lebih  kecil  dibandingkan  dengan amoksisilin.
Sedangkan apabila dibandingkan  aktivitas  antibakteri  antar konsentrasi EPC 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%  dan  80%  didapatkan  hasil  yang  tidak berbeda signifikan sehingga dapat dikatakan bahwa  aktivitas  antibakteri  pada  masing- masing  konsentrasi  EPC  adalah  sama,  jadi pada  penggunaan  cukup  dengan  EPC konsentrasi kecil.
Kemampuan  antibakteri  EPC diduga berasal  dari  metabolit  sekunder  flavonoid, alkaloid, tanin dan fenol yang bekerja dengan cara merusak dinding sel bakteri, mengganggu metabolisme bakteri dan mengganggu  sintesis  DNA  dan  RNA bakteri (3) . Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri  adalah  dengan  menonaktifkan adhesin  mikroba,  enzim,  protein  transport, dan juga mengganggu membran sel mikroba, akibat dari gangguan berupa cedera maupun inhibisi pada dinding sel bakteri
menyebabnya  sel  bakteri  menjadi  lisis (10,11) . Aktivitas antibakteri alkaloid bekerja dengan merusak  komponen  penyusun  peptidoglikan pada  dinding  sel  bakteri  akibatnya  lapisan dinding  sel  pada  bakteri  tidak  terbentuk secara sempurna sehingga dapat menyebabkan  kematian  sel,  selain  itu alkaloid  mampu  berinteraksi  dengan  DNA dan  RNA  bakteri,  menghambat  enzim esterase  dan  menghambat  respirasi  sel (3,12) . Tanin juga memiliki target pada peptidoglikan  sehingga  dapat  mengganggu pembentukan  dinding  sel  bakteri,  selain  itu tanin  juga  diduga  memiliki  kemampuan menonaktifkan adhesin mikroba, mengganggu transpor protein dan menonaktifkan enzim [13] .
Sedangkan aktivitas  antibakteri  fenol  terhadap  bakteri gram  positif  dan  gram  negatif  dengan  cara merusak membran sel, menginaktifasi enzim dan  mendenaturasi  protein  sehingga  terjadi penurunan permeabilitas membran dan pada akhirnya  merusak  dinding  sel  dan  dapat menyebabkan kematian sel (14) .
Dari  penjelasan  di  atas  kemungkinan aktivitas  antibakteri  EPC  terhadap S.aureus dari  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tanin  dan fenol  yang  terkandung  dalam  daun  tersebut, tetapi  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut dengan bioassay  guided  isolation dan  diuji aktivitasnya untuk aktivitas setiap isolat yang memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  dilakukan elusidasi  struktur  untuk  diketahui  jenis isolatnya.

## SIMPULAN
Terdapat  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  mekai  ( P.  cauliflora )  terhadap pertumbuhan S.  aureus dengan  kemampuan penghambatan  yang  lebih  rendah  dari  pada amoksisilin  menggunakan  metode  difusi Kirby-Bauer.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Rahayu  YD,  Sutedjo,  Matius  P.  Kajian Potensi  Tumbuhan  Obat  di  Kawasan Malinau  Research  Forest  (MRF)  Cifor
Kabupaten Malinau Kalimantan Timur.
J Kehutan Unmul 2007;3:87–101.
2. Chen, C. J., & Huang, Y. C. (2014, July 7). Clinical Microbiology and Infection.
Retrieved  July  10,  2019,  from  New
Epidemiology of Staphylococcus aureus
Infection: https://www.clinicalmicrobiologyandinf ection.com/article/S1198- 743X(14)61146-0/pdf
3. Juliantina  FR,  Citra  DA,  Nirwani  B, Nurmasitoh  T,  Bowo  ET.  2009.
“Manfaat Sirih Merah (Piper crocatum) sebagai  Agen  Antibakterial  terhadap Bakteri  Gram  Positif  dan  Gram Negatif”. JKKI – Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia.
4. Purba,  D.  M.,  Wibowo,  M.  A.,  &
Ardiningsih,  P.  2014.  “Aktivititas Antioksidan  dan  Sitotoksik  Ekstrak Metanol Daun Sengkubak (Pycnarrhena cauliflora Diels)”. Jurnal Kimia Khatulistiwa , 7-12.
5. Pamuji,  R.  W.  2015.  “Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Sengkubak (Pycnarrhena  cauliflora  Diels)  terhadap Tikus  Betina  Galur  Wistar  dengan Metode OECD 425”. Jurnal Mahasiswa Farmasi  Fakultas  Kedokteran  UNTAN ,
1-11.
6. Hudzicki,  J.  (2009,  December  8).

## American  Society  for  Microbiology.
Retrieved  April  21,  2019,  from  Kirby- Bauer Disk Diffusion Susceptibility Test Protocol: https://www.asm.org/Protocols/Kirby-
Bauer-Disk-Diffusion-Susceptibility- Test-Pro
7. Panagan,  A.T.,  Syarif,  Nirwan.  2009. “Uji  Daya  Hambat  Asap  Cair  Hasil Pirolisis  Kayu  Pelawan  (Tristania abavata)  terhadap  Bakteri  Escherichia
coli”. JPSMIPAUNSRI. (C) 09:12-06.
8. Octaviani, M., Fadhli, H., & Yuneistya, E.  2019.  “Uji  Aktivitas  Antimikroba
Eksrak Etanol dari Kulit Bawang Merah (Allium cepa L.) dengan Metode Difusi
Cakram”. Pharmaceutical Sciences and
Research (PSR) , 62-68.
9. Multazami,  T.  2013. Sematic  Scholar. Retrieved  January  22,  2020,  from  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Asam  Jawa  (Tamarindus  indica L.)  terhadap  Staphylococcus  aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli ATCC 11229: https://www.semanticscholar.org/paper/ Uji-Aktivitas-Antibakteri-Ekstrak- Etanol-Daun-Asam- Multazami/7d30cbc6c412722e4683bd8
d3ade5033f06d6ed6
10. Kumar,  S.,  &  Pandey,  A.  K.  2013, October  7. Cyberleninka. Retrieved January  14,  2019,  from  Chemistry  and Biological Activities of Flavonoids: An Overview: https://cyberleninka.org/article/n/13065 33/viewer
11. Brooks, G. F., Butel, J. S., & Morse, S. A.  2008. Mikrobiologi  Kedokteran Jawetz,  Melnick  &  Adelberg. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
12. Cowan,  M.  M.  1999,  Oktober. Plant Products  as  Antimicrobial  Agents.
Retrieved Pebruari 13, 2018, from Plant Products  as  Antimicrobial  Agents: https://cmr.asm.org/content/cmr/12/4/5 64.full.pdf 13. Stefanovic, O., Radojevic, I., Vasic, S., &  Ljiljana,  C.  2012.  “Antibacterial Activity of Naturally Occuring Compounds from Selected Plants”. In V. Bobbarala, Antimicrobial Agents (pp. 2-
4). Croatia: InTech.
14. Oliver, S. P., Gillespie, B. E., Lewis, M. J., Ivey, S. J., Almeida, R. A., Luther, D. A., et al. 2001, Januari 19. “Efficacy of a  New  Premilking  Teat  Disinfectant Containing a Phenolic Combination for the  Prevention  of  Mastitis”. Journal  of Diary Science, 84 , 1545-1549.