Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 7.No.1 Juni 2021 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN :  2598-9979
Evaluasi toksisitas Madu hasil produksi lebah yang diberi pakan tambahan ekstrak air Moringa oleifera terhadap larva Artemia

## salina
Aliyah 1* , Veni Hadju 2 , Muhammad Dasir 3 , Andi Sadapoto 3 , Budiaman 3 , Muhammad Raihan 1 1 Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia
2 Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia
3 Fakultas Kehutanan Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia

## ABSTRAK
Madu  dan  Moringa  oleifera  merupakan  salah  satu bahan  alam  yang  memiliki  nilai  nutrisi  dan  potensi sebagai  bahan  obat  yang  cukup  besar.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengevaluasi  toksisitas  madu  hasil ternak  lebah  yang  diberi  pakan  sirup  sukrosa  dengan suplementasi M. oleifera menggunakan Artemia salina sebagai hewan model. Komponen madu kelor (MK) dan M. oleifera mula-mula dianalisis dengan menggunakan sistem HPTLC dengan fase gerak terdiri dari n-heksana dan etil asetat dengan perbandingan 2:1. Toksisitas MK kemudian  diuji  menggunakan  A.  salina  sebagai  model organisme dengan konsentrasi antara 10 hingga 2000 μg /  ml  dalam  media  air  laut  buatan.  Tingkat  kematian dilaporkan dalam persentase A. salina jumlah larva yang mati terhadap total larva yang diuji. Nilai LC 50 dihitung
dengan menggunakan analisis probit. Hasil analisis pada penelitian ini menunjukkan bahwa beberapa komponen M. oleifera dapat dideteksi pada MK berdasarkan nilai Rf  yang  diperoleh  dalam  analisis  HPTLC.  Selanjutnya, berdasarkan  nilai  LC 50 dalam  penelitian  ini,  MK dianggap sebagai bahan dengan toksisitas yang rendah. Namun,  penelusuran  lebih  lanjut  pada  komponen fitokimia  yang  bertanggung  jawab  pada  toksisitas  ini perlu  dilakukan  untuk  melihat  korelasinya  dengan toksisitas MK.
Kata  kunci  :  Madu  Kelor,  Toksisitas,  Artemia  salina,

## Moringa oleifera

## ABSTRACT
Honey and Moringa oleifera are both natural products that  have  high  nutritional  and  medicinal  values.  This study  aims  to  evaluate  the  toxicity  of  honey  obtained from  bees  that  were  fed  with  sucrose  syrup supplemented  with  M.  oleifera  juice  using  Artemia salina as the animal model. The component of Moringa Honey  (MH)  and  M.  oleifera  was  initially  examined using HPTLC systems with mobile phase consisted of n- hexane and ethyl acetate at a ratio of 2:1. The toxicity of MH  was  examined  using  Artemia  salina  as  the  model organism  starting  at  the  concentration  of  0  to  2000 μg/ml of MH in a saltwater medium. The mortality rates
were reported in percentages of dead A. salina larvae and the LC50 value was calculated using probit analysis. Our finding suggested that constituents of M. oleifera might be present in MH based on the Rf values obtained in the HPTLC analysis. Furthermore, the LC50 value of MH in this  assay  is  considered  as  low  toxic  and  further investigation  on  the  corresponding  phytochemical  is required to correlate the toxicity of MH.
Keywords:  Moringa  Honey,  Toxicity,  Artemia  salina,
Moringa oleifera Penulis Korespondensi :                                                                                 Informasi Artikel Aliyah Submitted : 20 Juni 2021 Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Accepted : 29 Juni 2021 E-mail : aliyahputranto@yahoo.co.id Published : 30 Juni 2021

## PENDAHULUAN
Madu adalah salah satu produk lebah yang  telah  digunakan  selama  berabad- abad  karena  nilai  gizi  dan  potensinya sebagai  obat  bahan  alam.  Berbagai penelitian telah melaporkan bahwa madu dapat menunjukkan aktivitas farmakologis  potensial  terutama  sebagai antioksidan  (Biluca  et  al.,  2020;  Erejuwa et  al.,  2012;  Estevinho  et  al.,  2008), antikanker (Erejuwa et al., 2014)dan agen antimikroba  (Israili,  2014;  Kwakman  & Zaat,  2012).  Meskipun  secara  umum komposisi  utama  madu  sebagian  besar adalah  senyawa  gula  seperti  glukosa  dan fruktosa  tetapi  beberapa  metabolit sekunder  tanaman  seperti  fenolat  dan flavonoid juga dapat ditemukan. Senyawa seperti  asam  caffeic,  asam  caffeic  phenyl ester, pinocembrin, chrysin, dan galangin adalah  beberapa  metabolit  yang  paling sering  dilaporkan  (Oroian  &  Ropciuc, 2017).  Senyawa  ini  dianggap  sebagai  zat dalam madu yang bertanggung jawab atas aktivitasnya. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa komponen fitokimia yang  terdapat  dalam  madu  sangat dipengaruhi  oleh  spesies  tumbuhan  di sekitarnya.  Sebuah  studi  baru-baru  ini juga  menunjukkan  bahwa  DNA  bunga  di sekitarnya dapat dilacak dalam madu yang menunjukkan bahwa komponen tanaman dapat  digabungkan  ke  dalam  madu  yang dikumpulkan  (Olivieri  et  al.,  2012;  Wirta et  al.,  2021).  Lebah  madu  juga  telah dilaporkan  sebelumnya  dapat  membawa
senyawa  fitokimia  tertentu  ke  dalam produk lebah termasuk madu (Rowland et al., 1995).
Sebelumnya telah dilaporkan bahwa kombinasi  madu  dan  M.  oleifera bermanfaat untuk mengurangi risiko stres oksidatif  dan  menghambat  paparan radikal  bebas  pada  wanita  hamil  dan  ibu dengan  bayi  baru  lahir  (Hadju  et  al., 2020).  Tanaman  M.  oleifera  sendiri dianggap sebagai sumber makanan bergizi di  beberapa  negara  di  Asia  dan  Afrika (Shindano  &  Kasase,  2009).  Daun, khususnya, telah dilaporkan mengandung nilai  gizi  tinggi  seperti  mineral  (kalsium, magnesium,  tembaga,  besi,  seng  dan selenium)  (Moyo  et  al.,  2011),  dan antioksidan seperti vitamin B, karotenoid, serta  asam  amino  esensial  yaitu  lisin, leusin,  asam  glutamat  dan  asam  aspartat (Foidl et al., 2001; Gopalakrishnan et al., 2016).  Berdasarkan  nilai  gizi  M.  oleifera dan madu serta potensinya bila digabungkan,  maka  pada  penelitian  ini, dilakukan uji toksisitas Madu Kelor (MK) yang  diproduksi  dengan  menambahkan pakan lebah madu dengan jus M. oleifera.
Meskipun  M.  oleifera  dianggap sebagai  sumber  makanan  di  beberapa negara,  masih  ada  beberapa  penelitian yang  melaporkan  bukti  toksisitas  dalam M. oleifera komponendan dengan demikian lebih lanjut merekomendasikan batas  konsumsinya  (Obi,  2018;  Rajeh  et al.,  2012).  Berdasarkan  hal  tersebut, Artemia  salina  sebagai  salah  satu  hewan
model yang paling sering digunakan dapat digunakan  sebagai  model  pengujian dalam uji toksisitas MK. Telah dilaporkan bahwa toksisitas ekstrak dan produk alami sebanding dengan pengujian pada hewan pengerat seperti  pada  mencit  dan mencit (Parra et al., 2001; Rajeh et al., 2012). Oleh karena  itu,  dalam  penelitian  ini  kami bertujuan  untuk  mengevaluasi  toksisitas madu  yang  diperoleh  dari  lebah  yang diberi makan M. oleifera jusmenggunakan A. salina sebagai hewan model.

## METODE PENELITIAN
A. Sumber madu
Madu yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari  satu koloni Apis  mellifera  yang  dikembangbiakkan secara tertutup dan tidak memiliki akses pada  sumber  flora  secara  bebas.  Madu yang  diperoleh  kemudian  disimpan dalam  wadah  tertutup  dan  dicegah makan  dari  bunga  lain  di  sekitarnya. Lebah  diberi  sirup  sukrosa  (terdiri  dari 85%  b/v  sukrosa)  yang  dikombinasikan dengan  M.  oleifera  jus  daundengan perbandingan masing-masing 80:20. M. oleifera jus disiapkan dengan menggiling 500 g daun segar M. oleifera dengan 20 ml  air  deionisasi.  Pemberian  pakan dilakukan  setiap  hari  selama  14  hari secara ad libitum. Pada hari ke 15, madu dikumpulkan  dan  disimpan  dalam freezer sebelum diuji terhadap A. salina.

## B. Persiapan larva A. salina
Awalnya,  air  laut  buatan  disiapkan dengan melarutkan 38 g NaCl dalam 1 L air steril deionisasi (disesuaikan dengan pH  8,0  dengan  NaOH  1N).  Larutan kemudian disaring, dan dipindahkan ke dalam  bejana  kaca  setelah  disterilisasi menggunakan autoklaf. Medium tersebut  kemudian  didinginkan  hingga suhu  kamar  dan  digunakan  sebagai media untuk menetaskan A. salina telur. Prosedur  penetasan  dilakukan  dengan mendispersikan  25  mg  telur  ke  dalam 500  ml  air  asin.  Telur-telur  tersebut kemudian dibiarkan didispersikan dengan  bantuan  bubble  aerator  selama 24  jam  dalam  ruangan  gelap  kemudian dipindahkan  ke  dalam  kompartemen yang  dilengkapi  dengan  penerangan yang  tersedia  selama  12  jam,  sehingga proses  penetasan  terhitung  selama  36 jam.

## C. Pembuatan konsentrasi MK
Sebanyak  125  mg  MK  diencerkan dalam 25 ml air laut yang telah disiapkan sebelumnya sehingga diperoleh konsentrasi  larutan  stok  5  mg/ml. Kemudian,  larutan  ini  dipindahkan  ke dalam  vial  10  ml  untuk  membuat rangkaian  konsentrasi  100,  250,  500, 1000, 1500 dan 2000 g/ml. Volume total untuk  setiap  konsentrasi  dihitung masing-masing  5  ml,  tetapi  volume dibuat  hanya  menjadi  4  ml  untuk memberikan ruang tambahan untuk 1 ml
air  asin  ketika  larva  dipindahkan  ke dalam  vial.  Kontrol  dilakukan  dengan menggunakan  media  air  asin  tanpa sampel MK.

## D. Uji Udang Air Garam MK
Dalam setiap larutan yang disiapkan, 10  larva  dipindahkan  dan  di  pada  suhu kamar.  Setelah  24  jam,  larva  yang bertahan hidup dihitung dan persentase kematian dihitung
dengan membandingkan rata-rata jumlah kelangsungan hidup dengan total larva. Semua  perlakuan  dilakukan  dalam  tiga replikasi. Nilai LC50 kemudian dihitung menggunakan analisis probit. Selain itu, pemeriksaan morfologi larva yang masih hidup  dan  yang  mati  dilakukan  dengan menggunakan mikroskop standar.
Kategori toksisitas
kemudian ditunjukkan dengan menggunakan interpretasi  dari  kriteria  Clarkson
(2004)  seperti  yang  ditunjukkan  pada Tabel 1 di bawah ini.
Tabel 1. Kriteria toksisitas berdasarkan nilai LC50 dalam g/ml (Clarkson et al.,
2004) Kriteria Toksisitas nilai LC50 (µg/ml) Sangat toksik 0 – 100 Toksisitas sedang 100 – 500
Toksisitas rendah 500 – 1000 Tidak toksik > 1000

## E. Pemeriksaan  kandungan  MK menggunakan High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC)
Untuk  mengamati  ada  tidaknya komponen  M.  oleifera  dalam  madu  yang diambil, dilakukan identifikasi profil KLT dari  sampel  madu.  Madu  sebanyak  15  g mula-mula dilarutkan dalam air kemudian dipartisi sebanyak tiga kali menggunakan 20  ml  etil  asetat.  Lapisan  organik kemudian  dikumpulkan  dan  pelarut diuapkan  dengan  bantuan  evaporasi putar. Sebanyak 15 g M. oleifera kemudian dihaluskan  menggunakan  mortar  dan pestel kemudian ditambahkan dengan 20 ml  air  dan  disaring  untuk  memisahkan fase  padat.  Cairan  yang  diperoleh kemudian  dipartisi  3  kali  menggunakan 20  ml  etil  asetat  lalu  lapisan  organik digabungkan kemudian diuapkan. Semua sampel kemudian dipartisi dengan metode yang sama masing-masing tiga kali untuk MK  dan  M.  oleifera.  Semua  sampel  yang diperoleh  ditotolkan  pada  lempeng  KLT silika  gel  60  F 254 (Merck ® )  ukuran  5×10 cm.  KLT  kemudian  dikembangkan menggunakan campuran etil asetat dan n- heksana  dengan  perbandingan  2:1. Selanjutnya, pelat dipindai menggunakan CAMAG ® TLC  Scanner  3  di  bawah
panjang gelombang pengamatan 254 nm.
Spot-spot  yang  diidentifikasi  di  setiap sampel dibandingkan dengan menggunakan  faktor  retardasi  (Rf)  yang diperoleh

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dengan  mempertimbangkan  nilai gizi  dan  manfaat  madu  dan  M.  oleifera daun serta pentingnya keamanan produk alami untuk konsumsi manusia, penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi  toksisitas  madu  yang dihasilkan  oleh  lebah  yang  diberi tambahan pakan jus M. oleifera dengan menggunakan  larva  udang  A.  salina sebagai model uji. Pertama-tama, untuk mengamati  ada  tidaknya  komponen  M. oleifera  dalam  madu  yang  diproduksi, maka  dilakukan  skrining  kualitatif menggunakan
HPTLC
dengan membandingkan  profil  KLT  madu dengan  jus  M.  oleifera.  Seperti  yang
ditunjukkan pada Gambar 1, komponen M. oleifera ditemukan dalam madu yang diperoleh. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa senyawa pada nilai Rf 0,83 ± 0,00, 0,38 ± 0,01, 0,26 ± 0,00 dan  0,08  ±  0,00  diidentifikasi  pada kedua  sampel  tetapi  dalam  konsentrasi relatif  berbeda  yang  ditunjukkan  oleh AUC  (Tabel  2.).  Keberadaan  senyawa kimia  dari  tumbuhan  juga  telah dilaporkan  sebelumnya  pada  madu  di sekitar  pulau  Jawa  dan  Sumbawa  di Indonesia  (Yelin  &  Kuntadi,  2019). Meskipun  temuan  ini  menunjukkan bahwa  komponen  M.  oleifera  telah terbukti  dapat  ditemukan  dalam  madu yang  dihasilkan  dalam  penelitian  ini, perlu dilakukan penelusuran lebih lanjut untuk  menentukan  atau  memprediksi struktur  senyawa  di  setiap  komponen yang telah dideteksi.
Tabel 2. Perbandingan profil TLC dalam hal RF dan AUC dari bintik-bintik serupa yang ditemukan pada madu kelor dan jus M.oleifera yang diperiksa di bawah sinar UV 254 nm menggunakan sistem HPTLC.

## Spot TLC
Teridentifikasi Nilai  Rf  rata-rata (n=3) Rata-rata AUC (n=3) MK MO MK MO Spot 1 0.83 ± 0.00 0.82 ± 0.01 5726.23 ± 450.4 4819.90 ± 201.0 Spot 2 0.39 ± 0.01  0.38 ± 0.01 587.97 ± 198.8 3874.87 ± 443.4
Spot 3 0.29 ± 0.01 0.26 ± 0.00 2458.53 ± 117.6 10935.57 ± 1253.4 Spot 4 0.07 ± 0.00 0.08 ± 0.00 449.23 ± 188.9 1221.73 ± 82.4

## MK= Madu Kelor, MO= M.oleifera
Gambar  1.  Profil  HPTLC  dari  HPTLC  profiles  of  honey  produced  by  feeding  bees  with M.oleifera juice (A-C, replicated spots) compared to the profiles of M.oleifera juice alone (D- F, replicated spots).
Tahap awal dari toksisitas pengujian  menggunakan  A.  salina dilakukan  dengan  melakukan  uji  pada konsentrasi MK yang meningkat dimulai dengan konsentrasi 0,1, 1, 100, 1000 dan 5000 μg / mL. Data yang diperoleh dari pengujian  awal  menunjukkan  tanda- tanda kematian (Tabel 3)  A. salina larva mulai dari konsentrasi 100 hingga 5000 g/mL.  Khusus  untuk  konsentrasi  1000 g/mL,  kematian  larva  udang  ditemukan 100%. Oleh karena itu, deret konsentrasi kemudian disusun kembali menggunakan deret baru mulai dari 100, 250,  500,  1000  dan  2000  g/mL  untuk mendapatkan  nilai  LC 50 yang  lebih
presisi.  Nilai  LC 50 kemudian  diperoleh dengan menggunakan persamaan regresi dengan  menggunakan  nilai-nilai  probit dari  yang  sesuai  persentase  kematian larva.  Nilai  probit  yang  diperoleh kemudian diplot terhadap skala logaritmik  untuk  konsentrasi  (log  C) seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2.  Dari  kurva  kalibrasi  diketahui  bahwa nilai  probit  persentase  mortalitas  A. salina  larvamenunjukkan  hasil  yang cukup linier (r = 0,961). Dari persamaan ini, LC 50 nilai untuk A. salina larva kelor madu kemudian dihitung dan nilai LC50 diperoleh  pada  614,58  μg  /  mL. Berdasarkan  kategori  toksisitas  pada

## Tabel 1, madu kelor tergolong toksisitas
rendah.
Tabel 3. Hasil pengamatan setelah uji toksisitas 24 jam menggunakan larva A.salinaprobitnya terhadap MK dan analisis(n=3).
Konsentrasi (μg/mL) Log C Mortalitas Jumlah larva Mortality (%) Rata-rata % Mortalitas Nilai Probit R1  R2 R 3 R1  R2  R3 100 2.00  1 0 0  10 10 0 0 3.33 3.12 250 2.40  1 1 2 10 10 10  20 13.33 3.87 500 2.70  2 3 3 10 20 30  30 26.67 4.39 1000 3.00  5 7 7 10 50 70  70 63.33 5.33 1500 3.18  8 9 9 10 80  90  90 86.67 6.13 2000 3.30  10  9 10  10 100  90  100  96.67 6.88 Negative Control - 0 0 0  10 0 0 0 0.0 3.12
Gambar 2. Kurva kalibrasi nilai probit diperoleh dari persentase mortalitas (n=10) yang diplot terhadap skala logaritmik konsentrasi Madu Kelor (MK) yang diuji.
Untuk  mengamati  pengaruh  MK pada  A.  salina  larva  setelah  24  jam pengujian,  larva  diperiksa  di  bawah mikroskop.  Secara  umum  organ-organ
yang  dapat  diamati  dapat  dilihat  pada Gambar 3. Pada pengamatan mikroskopis,  larva  A.  salina  yang  masih hidup menunjukkan pergerakan aktif dan
y = 2,8903x - 3,059 R² = 0,9615 0 1 2 3 4 5 6 7 8 1,80 2,30 2,80 3,30 3,80 Nilai p ro b it u n tu k
% m o rtali tas log Konsentrasi (μg/mL)
tidak  ditemukan  tanda-tanda  kerusakan organ  dibandingkan  dengan  larva  yang mati.  Selanjutnya  larva  yang  mati menunjukkan  tanda-tanda  kerusakan pada  thorax,  antena  dan  abdomen  yang menunjukkan  perubahan  warna  yang
lebih  gelap  dan  tidak  terlihat  adanya pergerakan.  Perbedaan  morfologi  antara larva  mati  dan  larva  hidup  serta  organ yang  diamati  secara  umum  dapat  dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3.  Pengamatan mikroskopis larva A. salina setelah 24 jam pengujian toksisitas dalam berbagai media yang mengandung Madu Kelor (MK). Larva yang mati diamati tidak bergerak dengan warna lebih gelap di sekitar organ (A), dibandingkan dengan larva yang masih hidup (B) tidak menunjukkan cacat morfologi. Larva yang mati pada bagian A dan B juga dibandingkan dengan gambar pada bagian C yang menunjukkan sekumpulan organ pada A. salina: bagian perut larva yang mati (A1) dan antenanya (A2), toraks (B1) dan perut larva hidup (B2) dapat dibandingkan dengan warna gelap larva thorax mati (C1).
Secara  umum,  madu  dianggap aman untuk dikonsumsi setiap hari. Pada umumnya,  M.  oleifera  juga  telah dikonsumsi  di  beberapa  belahan  dunia. Namun,  penelitian  juga  melaporkan bahwa M. oleifera menunjukkan toksisitas pada A. salina, Biomphalaria glabra dan tikus  yakni  dengan  nilai  LD50  >1  mg/ml (Obi,  2018),  2,37  mg/ml  (Rocha-Filho  et al.,  2015),  1585  mg/kg  (Awodele  et  al.,
2012),  secara  berturut-turut.  Dalam penelitian  ini,  kami  menemukan  bahwa MK memiliki toksisitas yang rendah tetapi komponen utama yang bertanggung jawab atas  toksisitas  MK  ini  masih  belum diketahui.  Telah  dilaporkan  bahwa  M. oleifera  mengandung  tanin  (8,2%), saponin  (1,7%),  alkaloid  (0,42%)  dan senyawa fenolik (0,19%) sebagai metabolit sekundernya (Ojiako, 2014) tetapi
korelasinya  dengan  toksisitasnya  harus diselidiki lebih lanjut. Selanjutnya, dalam uji  antikanker  ekstrak  larut  air  dari M.oleifera, juga dilaporkan bahwa ekstrak dapat menghambat pertumbuhan beberapa jenis sel kanker khususnya pada konsentrasi  sekitar  300  μg  /  ml  (Jung, 2014)  yang  mengindikasikan  bahwa potensi sitotoksik tanaman ini juga perlu menjadi  perhatian.  Adedapo  et.al  (2009) menyarankan  bahwa  ekstrak  air  M. oleifera meningkatkan ALT dan AST tikus pada  perkiraan  dosis  400  hingga  1600 mg/kg  tetapi  tidak  ada  tanda-tanda kematian tikus bahkan setelah pemberian akut  2000  mg/kg  ekstrak  air  M.  oleifera (Adedapo  et  al.,  2009).  Berdasarkan pengetahuan  tersebut,  direkomendasikan pemeriksaan lebih lanjut tentang komposisi kimia dari MK dan hubungannya  dengan  toksisitas  yang ditemukan dalam penelitian ini.

## KESIMPULAN
Dalam  penelitian  ini  dilaporkan bahwa  madu  yang  dihasilkan  dari pemberian  pakan  A.  mellifera  dengan suplementasi M.oleifera jusmenunjukkan adanya  konstituen  fitokimia  M.oleifera yang  diidentifikasi  dengan  HPTLC kualitatif.  Uji  toksisitas  yang  dilakukan dalam penelitian ini menunjukkan bahwa madu yang dihasilkan dalam penelitian ini memiliki  toksisitas  rendah  dengan  LC 50 berupa  614,58  μg  /  mL.  Oleh  karena  itu, direkomendasikan  penelitian  lebih  lanjut
tentang senyawa yang mungkin ada dalam MK dan untuk menjawab apakah senyawa tersebut  bertanggung  jawab  terhadap profil toksisitas madu ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Adedapo,  A.  A.,  Mogbojuri,  O.  M.,  & Emikpe, B. O. (2009). Safety evaluations of the aqueous extract of the leaves of Moringa oleifera in rats. Journal of Medicinal Plants Research ,
3 (8), 586 –591. Awodele,  O.,  Oreagba,  I.  A.,  Odoma,  S., da Silva,  J.  A.  T.,  & Osunkalu,  V.  O. (2012). Toxicological evaluation of the aqueous  leaf  extract  of  Moringa oleifera  Lam.(Moringaceae). Journal of  Ethnopharmacology , 139 (2),  330 – 336.
Biluca, F. C., da Silva, B., Caon, T., Mohr, E. T. B., Vieira, G. N., Gonzaga, L. V., Vitali,  L.,  Micke,  G.,  Fett,  R.,  & Dalmarco, E. M. (2020). Investigation of  phenolic  compounds,  antioxidant and  anti-inflammatory  activities  in stingless  bee  honey  (Meliponinae).
Food  Research  International , 129 , 108756.
Clarkson,  C.,  Maharaj,  V.  J.,  Crouch,  N.
R.,  Grace,  O.  M.,  Pillay,  P., Matsabisa,  M.  G.,  Bhagwandin,  N., Smith,  P.  J.,  &  Folb,  P.  I.  (2004).  In vitro antiplasmodial activity of medicinal plants native to or naturalised in South Africa. Journal of Ethnopharmacology , 92 (2 –3),  177– 191.
Erejuwa,  O.  O.,  Sulaiman,  S.  A.,  &  Ab Wahab, M. S. (2012). Honey: a novel antioxidant. Molecules , 17 (4),  4400 – 4423.
Erejuwa, O. O., Sulaiman, S. A., & Wahab, M. S. A. (2014). Effects of honey and its  mechanisms  of  action  on  the development  and  progression  of cancer. Molecules , 19 (2), 2497 –2522. Estevinho,  L.,  Pereira,  A.  P.,  Moreira,  L., Dias,  L.  G.,  &  Pereira,  E.  (2008). Antioxidant  and  antimicrobial  effects of  phenolic  compounds  extracts  of
Northeast  Portugal  honey. Food  and Chemical  Toxicology , 46 (12),  3774 – 3779.
Foidl,  N.,  Makkar,  H.  P.  S.,  &  Becker,  K. (2001).  The  potential  of  Moringa oleifera  for  agricultural  and  industrial uses. What Development Potential for Moringa Products , 20 .
Gopalakrishnan,  L.,  Doriya,  K.,  &  Kumar, D.  S.  (2016).  Moringa  oleifera:  A review on nutritive importance and its medicinal  application. Food  Science and Human Wellness , 5 (2), 49 –56.
Hadju,  V.,  Dassir,  M.,  Sadapotto,  A.,
Putranto, A., Marks, G., & Arundhana, A.  I.  (2020).  Effects  of  Moringa Oleifera Leaves and Honey Supplementation  during  Pregnancy on Mothers and Newborns: A Review of  the  Current  Evidence. Open
Access Macedonian Journal of
Medical Sciences , 8 (F), 208 –214.
Israili, Z. H. (2014). Antimicrobial properties of honey. American
Journal  of  Therapeutics , 21 (4),  304 – 323.
Jung,  I.  L.  (2014).  Soluble  extract  from
Moringa  oleifera  leaves  with  a  new anticancer  activity. PloS  One , 9 (4), e95492.
Kwakman, P. H. S., & Zaat, S. A. J. (2012).
Antibacterial  components  of  honey.
IUBMB Life , 64 (1), 48 –55.
Moyo,  B.,  Masika,  P.  J.,  Hugo,  A.,  &
Muchenje,  V.  (2011).  Nutritional characterization  of  Moringa  (Moringa oleifera Lam.) leaves. African Journal of  Biotechnology , 10 (60),  12925 –
12933. Obi, O. O. O. B. C. (2018). Phytochemical, Anti-nutritional and Toxicity Assessment  of  Moringa  Oleifera Seeds, Stem Bark and Leaves Using
Brine Shrimp (Artemia Salina) Assay.
Jordan  Journal  of  Chemistry  (JJC) ,
13 (3), 171 –178.
Ojiako,  E.  N.  (2014).  Phytochemical analysis  and  antimicrobial  screening of  Moringa  oleifera  leaves  extract.
International  Journal  of  Engineering Science , 3 , 32 –35.
Olivieri, C., Marota, I., Rollo, F., & Luciani, S. (2012). Tracking plant, fungal, and
bacterial  DNA  in  honey  specimens. Journal  of  Forensic  Sciences , 57 (1), 222 –227.
Oroian,  M.,  &  Ropciuc,  S.  (2017).  Honey authentication based on
physicochemical parameters and phenolic compounds. Computers and Electronics  in  Agriculture , 138 ,  148 –
156.
Parra, A. L., Yhebra, R. S., Sardiñas, I. G.,
&  Buela,  L.  I.  (2001).  Comparative study of the assay of Artemia salina L. and the estimate of the medium lethal dose  (LD50  value)  in  mice,  to determine  oral  acute  toxicity  of  plant extracts. Phytomedicine , 8 (5),  395 – 400.
Rajeh, M. A. B., Kwan, Y. P., Zakaria, Z., Latha,  L.  Y.,  Jothy,  S.  L.,  & Sasidharan,  S.  (2012).  Acute  toxicity impacts  of  Euphorbia  hirta  L  extract on  behavior,  organs  body  weight index and histopathology of organs of the mice and Artemia salina. Pharmacognosy Research , 4 (3), 170. Rocha-Filho, C. A. A., Albuquerque, L. P., Silva, L. R. S., Silva, P. C. B., Coelho, L.  C.  B.  B.,  Navarro,  D.  M.  A.  F., Albuquerque, M. C. P. A., Melo, A. M. M. A., Napoleão, T. H., & Pontual, E. V.  (2015).  Assessment  of  toxicity  of
Moringa  oleifera  flower  extract  to Biomphalaria  glabrata,  Schistosoma mansoni and Artemia salina. Chemosphere , 132 , 188 –192.
Rowland,  C. Y., Blackman,  A. J., D’Arcy, B.  R.,  &  Rintoul,  G.  B.  (1995). Comparison  of  organic  extractives found  in  leatherwood  (Eucryphia lucida) honey and leatherwood flowers  and  leaves. Journal  of Agricultural  and  Food  Chemistry , 43 (3), 753 –763. Shindano,  J.,  &  Kasase,  C.  (2009). Moringa  (Moringa  oleifera):  a  source of  food  and  nutrition,  medicine  and industrial products . ACS Publications. Wirta, H., Abrego, N., Miller, K., Roslin, T., &  Vesterinen,  E.  (2021).  DNA  traces the  origin  of  honey  by  identifying plants,  bacteria  and  fungi. Scientific Reports , 11 (1), 1 –14. Yelin, A., & Kuntadi. (2019).
Phytochemical identification of honey from  several  regions  in  Java  and Sumbawa. AIP Conference Proceedings , 2120 (1), 80024.
Copyright (c) 2021 Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ )