Analisis Flavonoid Total Ekstrak Etanol Daun Seligi (Phyllanthus Buxifolius Muell. Arg ) Dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis Analysis of total flavonoid of ethanolic extract of seligi leaf (Phyllanthus buxifolius Muell. Arg) using UV-Vis Spectrophotometry Method
Diah Kemala Sari 1 , Siwi Hastuti 2 1,2 Politeknik Kesehatan Bhakti Mulia, Sukoharjo diahkemalasari10@gmail.com , siwihastutiapt@gmail.com
Abstract : Seligi plants (Phyllanthus buxifolius Muell.  Arg) have long been empirically used by the community  as  pain medications  in sprained  joints  and  to  treat  rheumatism.  Apart  from  being  anti- pain,  seligi  leaves  are  also  known  to  be  used  as  antioxidants,  antipyretics  and  anti-inflammatory. Various  benefits  of  seligi  leaves  indicate  that  seligi  leaves  contain  large  flavonoids,  the  more benefits  produced  by  a  plant,  the  greater  the  flavonoid  content  contained  by  these  plants.  This study  aims  to  analyze  the  total  flavonoid  levels  contained  in  the  ethanol  extract  of  seligi  leaves. Isolate  the  extract  using  maceration  methods.  Determination  of  total  flavonoid  levels  of  ethanol extract of seligi leaves using a comparison of quercetin with a series of concentrations of 50, 100, 200,  300,  400  ppm  with  a  wavelength  of  480  nm.  absorbance  values  were  measured  by  UV-Vis spectrophotometer. The absorbance value was analyzed using a linear regression equation so that the total flavonoid levels obtained from the ethanol extract of seligi leaves. The results obtained by quercetin  concentration  from  each  series  of  concentrations  of  50  ppm  (0.165),  100  ppm  (0,250), 200 ppm (0.362), 300 ppm (0.468) and 400 ppm (0, 893), and total flavonoid extract levels ethanol leaves  seligi  at  13,  70%.  The  results  obtained  by  the  total  flavonoid  levels  of  ethanol  extracts  of seligi leaves were (13.86 ± 1, 27)%.
Keywords: UV-Vis spectrophotometry, Seligi, Phyllanthus buxifolius, total flavonoid.
Abstrak: Tanaman seligi (Phyllanthus buxifolius Muell. Arg ) sejak lama secara empiris digunakan masyarakat sebagai obat nyeri pada sendi terkilir dan untuk mengobati rematik. Selain sebagai anti nyeri, daun seligi juga diketahui dapat digunakan sebagai antioksidan, antipiretik dan antiinflamasi. Berbagai  manfaat  dari  daun  seligi  menandakan  bahwa  daun  seligi  mengandung  flavonoid  yang besar,  semakin  banyak  manfaat  yang  dihasilkan  oleh  suatu  tanaman,  maka  semakin  besar  pula kandungan  flavonoid  yang  dikandung  oleh  tanaman  tersebut. Penelitian  ini  bertujuan  untuk menganalisis  kadar  flavonoid  total  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  daun  seligi.  Isolasi ekstrak  menggunakan  menggunakan  metode  maserasi.  Penentuan  kadar  flavonoid  total  ekstrak etanol daun seligi menggunakan pembanding kuersetin dengan seri konsentrasi 50, 100, 200, 300, 400  ppm  dengan  panjang  gelombang  480  nm.  nilai  absorbansi  diukur  dengan  spektrofotometer UV-Vis.  Nilai  absorbansi  dianalisis  menggunakan  persamaan  regresi  linier  sehingga  didapatkan hasil  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  seligi. Hasil  penelitian  diperoleh  konsentrasi kuersetin dari masing-masing seri konsentrasi 50 ppm (0,165), 100 ppm (0,250), 200 ppm (0,362), 300  ppm  (0,468)  dan  400  ppm  (0,  893),  dan  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  seligi sebesar  13,  70  %.  Hasil  penelitian  diperoleh  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun  seligi sebesar (13,86 ± 1, 27)%.
Kata kunci: Spektrofotometri UV-Vis, Seligi, Phyllanthus buxifolius , Flavonoid total

## I. PENDAHULUAN
Tanaman  berkhasiat  di  Indonesia  yang dapat  digunakan  untuk  pengobatan  secara tradisional  salah  satunya  adalah  daun  seligi dengan  nama    ilmiah Phyllanthus  buxifolius Muell.  Arg.  Sejak  dulu  tanaman  seligi  sudah digunakan  sebagai  obat  nyeri  karena  terkilir oleh  masyarakat.  Namun  tidak  banyak  orang mengenal  tentang  tanaman  ini.  Tanaman  ini memiliki  banyak  manfaat  yang  baik  bagi kesehatan. Daun seligi mempunyai efek
farmakologi dan memiliki aktivitas immunodulator serta dapat digunakan sebagai  analgetik  pada  sendi  terkilir  (Dirjen POM, 2000).
Hasil  analisis  kimia  dari  daun  seligi menunjukkan bahwa daun seligi mengandung senyawa  flavonoid,  saponin  dan  polifenol. Salah satu kandungan kimia daun seligi yang berperan penting sebagai obat adalah flavonoid.  Flavonoid  adalah  senyawa  fenol
alam  yang  terdapat  hampir  di  semua tumbuhan.  Sejumlah  tanaman  obat  yang mengandung flavonoid telah dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan,  antibakteri, antivirus,  antiradang,  antiinflamasi,  antialergi, dan antikanker. Flavonoid mempunyai banyak efek  yang  baik  terhadap  kesehatan  tubuh manusia (Neldawati et al , 2013).
P.  buxifolius Muell.  Arg  memiliki  nama lain yaitu Scepasma buxifolius BI dan memiliki nama  daerah  yaitu  jawa  seligi  (Dirjen  POM, 2000).  Kegunaan  dan  manfaat  dari  tanaman seligi  ( P.  buxifolius Muell.Arg)  yaitu  sebagai obat  sendi  terkilir,  karena  memiliki  efek farmakologi dan memiliki aktivitas immunodilator  sehingga  dapat  digunakan sebagai  analgetik  atau  anti  inflamasi  pada sendi terkilir (Dirjen POM, 2000).
Kandungan  kimia  yang  terdapat  pada daun  seligi  antara  lain  yaitu  flavonoid, saponin,  polifenol  (Dirjen  POM,  2000). Flavanoid  adalah  senyawa  polar  karena memiliki  gugus  hidroksil  yang  tidak  tersulih atau suatu gula sebagai glukosida dan aglikon flavonoid.  Uji  warna  yang  penting  dalam larutan  alkohol  adalah  direduksi  dengan serbuk  Mg  dan  HCl  pekat.  Diantara flavonoid hanya  flavonol  yang  menghasilkan  warna merah  ceri  kuat  (Harborne,  1987).  Flavonoid berfungsi    sebagai    anti  inflamasi,  mencegah keropos  tulang,  melindungi  struktur  sel, meningkatkan  efektivitas  vitamin  C  serta untuk antibiotik (Harborne, 1987).
Flavonoid  umumnya  terdapat  pada tumbuhan  sebagai  glikosida.  Gugusan  gula bersenyawa  pada  satu  atau  lebih  kelompok hidroksil  fenolik.  Flavanoid  terdapat  pada seluruh  bagian  di  tanaman  termasuk  pada buah,  tepung  sari  dan  akar.  Kegunaan  dari Flavanoid bagi tumbuhan yaitu untuk menarik serangga  yang  membantu  untuk  proses penyerbukan, untuk menarik perhatian binatang  yang  dapat  melakukan  penyebaran biji.  Kegunaan  flavanoid  bagi  manusia  yaitu sebagai  stimulan  pada  jantung,  hesperidin mempengaruhi  pembuluh  darah  kapiler  pada dosis  kecil,  flavon  terhidroksililasi  bekerja sebagai  diuretik  dan  sebagai  anti  oksidan pada lemak (Sirait, 2007).
Maserasi  adalah  cara  ekstraksi  yang paling sederhana. Bahan simplisia dihaluskan sesuai  dengan  syarat  farmakope  kemudian dimaserasi.  Maserasi,  kecuali  dinyatakan  lain lakukan  sebagai  berikut  :  10  bagian  simplisia atau  campuran  simplisia  dengan  derajad halus  yang  cocok  dimasukkan    ke  dalam sebuah  bejana,  dituangi  dengan  75  bagian cairan penyari , ditutup, dibiarkan selama lima hari  terlindung  dari  cahaya  sambil  sering diaduk,  diserkai,  diperas,  dicuci  ampas
dengan  cairan  penyari  secukupnya  hingga diperoleh 100 bagian. Maserat dipindahkan ke dalam  bejana  tertutup,  biarkan  di  tempat sejuk,  terlindung  cahaya,  selama  dua  hari, dienap  tuangkan  atau  saring  (Dirjen  POM, 1986).
Pemilihan larutan penyari larut mempertimbangkan  banyak  faktor.  Etanol dapat  bercampur  dengan  air  pada  segala perbandingan,  panas  yang  diperlukan  pada saat  pemekatan  lebih  baik  dan  selektif. Kekurangan  etanol  yaitu  dapat  melarutkan alkaloid  basa,  minyak  menguap,  glikosida, kurkumin, antrakinon, flavanoid, steroid, damar  dan  klorofil.  Lemak,  malam,  tanin  dan saponin  hanya  sedikit  larut,  sedangkan  zat penggangu  yang  larut  hanya  terbatas  (Dirjen POM, 1986).
Fenomena    yang    terjadi  pada  proses inflamasi  meliputi    kerusakan    mikrovaskular, meningkatnya permeabilitas kapiler dan migrasi  leukosit  menuju  jaringan    radang. Tanda-tanda    dari    proses  inflamasi  antara lain  rubor,  kalor,  tumor,  dolor,  dan  functio laesa.  Proses  berlangsungnya    fenomena inflamasi  ini banyak  mediator  kimiawi  yang dilepaskan  secara lokal  seperti  histamin, 5- hidroksitriptamin  (5HT)  atau  serotonin,  faktor kemotaktik,    bradikinin,  leukotrien,  dan prostaglandin  (Tanu,  2002).  Lima  ciri  khas dari  inflamasi  yang  dikenal  sebagai  tanda- tandanya  yaitu  eritema,  edema,  panas,  nyeri, hilangnya  fungsi.  Eritema  atau  kemerahan adalah  tahap  pertama  dari  proses  inflamasi. Darah  berkumpul  pada  daerah  yang  cedera jaringan  akibat  terlepasnya  mediator  kimia tubuh  (kinin,  prostaglandin,  dan  histamin) medilatasi arteriol.
Edema  (pembengkakan)  adalah  tahap kedua dari inflamasi. Plasma masuk ke dalam jaringan  intestinal  pada  tempat  cedera.  Kinin medilatasi  asteriol,  meningkat  permeabilitas kapiler.  Panas,  dapat  disebabkan  oleh pertamabahan  penggumpalan  darah  atau juga dapat disebabkan oleh pirogen (substansi  yang  menyebabkan  demam)  yang menggangu  pusat  pengaturan  panas  pada hipotalamus.
Nyeri  adalah  perasaan  sensoris  dan emosional  yang  tidak  nyaman,  berkaitan dengan  (ancaman)  akibat  dari  kerusakan jaringan. Keadaan psikis sangat mempengaruhi  nyeri,  tetapi  dapat  pula menghindarkan  sensasi  rangsangan  nyeri. Nyeri  juga  disebut  dengan  sesuatu  perasaan subjektif  pribadi  dan  ambang  toleransi  nyeri yang  berbeda-beda  bagi  tiap  orang.  Batas nyeri  untuk  suhu  adalah  konstan,  yakni  pada 44-45 o C (Tjay & Raharja, 2002).
Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa  fenol  yang  terbesar  ditemukan  di alam.  Senyawa  ini  terdiri  dari  lebih  dari  15 atom  karbon  yang  sebagian  besar  bisa ditemukan  dalam  kandungan  tumbuhan. Lebih  dari  4.000  jenis  flavonoid  telah diidentifikasi,    dan  beberapa  diantaranya berperan dalam pewarnaan bunga, buah, dan daun. Flavonoid merupakan kelompok molekul  organik  yang  tersebar  hampir  di seluruh  bagian  tanaman.  Hampir  semua bagian  tanaman  yaitu  daun,  akar,  kayu, tepung  sari,  nektar,  bunga,  buah  dan  biji dapat  mengandung  flavonoid  (Markham, 1988).  Bagian  tanaman  yang  bertugas  untuk memproduksi  flavonoid  adalah  bagian  akar yang dibantu oleh rhizobia, bakteri tanah yang bertugas  untuk  menjaga  dan  memperbaiki kandungan  nitrogen  dalam  tanah  (Rahayu, 2012).  Penyebaran  jenis  flavonoid  terbesar terdapat  pada  angiospermae  (tumbuhan berbiji  tertutup).  Struktur  kimia  flavonoid terlihat pada gambar 2.
Flavonoid  mempunyai  banyak  efek yang baik terhadap kesehatan tubuh manusia. Umumnya  Sejumlah  tanaman  obat  yang mengandung flavonoid telah dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan,  antibakteri, antivirus, antiradang, antialergi, dan antikanker.  Efek  antioksidan  senyawa  ini disebabkan  oleh  penangkapan  radikal  bebas melalui  donor  atom  hidrogen  dari  gugus hidroksil flavonoid.  Beberapa  penyakit  seperti arteosklerosis,  kanker,  diabetes,  parkinson, alzheimer,  dan  penurunan  kekebalan  tubuh telah diketahui dipengaruhi oleh radikal bebas dalam tubuh manusia (Neldawati, 2013). Flavonoid  memiliki  efek  antihistamin dengan menghambat pelepasan histamin oleh sel  mast.  Flavonoid  sebagai  antibakteri adalah membentuk senyawa kompleks dengan  protein  ekstra  seluler  dan  terlarut sehingga dapat merusak membran sel bakteri dan  diikuti  dengan  keluarnya  senyawa intraseluler.  Flavonoid  sebagai  antiinflamasi dapat  melalui  beberapa  jalur  yaitu  dengan penghambatan aktivitas enzim siklooksigenase  (COX)  dan  lipooksigenase, penghambatan akumulasi leukosit, penghambatan  degranulasi  neutrofil,  dan penghambatan pelepasan histamin. Flavonoid sebagai  antivirus  yaitu  pada  kadar  rendah akan  menyebabkan  denaturasi  protein  dan pada  kadar  tinggi  menyebabkan  koagulasi protein  sehingga  sel  akan  mati.  Kemampuan flavonoid  sebagai  antikanker  dihubungkan dengan  keberadaan  gugus  hidroksi  yang tersubstitusi  pada  flavonoid,  adanya  rantai samping  gugus  prenil,  dan  adanya  resonansi (Agrawal, 2011).
Flavonoid
merupakan senyawa polifenol  sehingga  bersifat  kimia  senyawa fenol  yaitu  agak  asam  dan  dapat  larut  dalam basa,  dan  karena  merupakan  senyawa polihidroksi  (gugus  hidroksil)  maka  juga bersifat  polar  sehingga  dapat  larut  dalan pelarut  polar  seperti  metanol,  etanol,  aseton, air, butanol, dimetil sulfoksida, dimetil formamida.  Disamping  itu  dengan  adanya gugus  glikosida  yang  terikat  pada  gugus flavonoid  sehingga  cenderung  menyebabkan flavonoid  mudah  larut  dalam  air.  Senyawa- senyawa  ini  merupakan  zat  warna  merah, ungu,  biru,  dan  sebagai  zat  berwarna  kuning yang  ditemukan  dalam  tumbuh-tumbuhan. Perkembangan  pengetahuan  menunjukkan bahwa flavonoid termasuk salah satu kelompok  senyawa  aromatik  yang  termasuk polifenol dan mengandung antioksidan (Harborne, 1987). Kuersetin  adalah  senyawa  kelompok flavonol  terbesar,  kuersetin  dan  glikosidanya berada  dalam  jumlah  sekitar  60-75%  dari flavonoid. Kuersetin dipercaya dapat melindungi tubuh dari beberapa jenis penyakit degeneratif dengan cara mencegah terjadinya proses peroksidasi lemak. Kuersetin memperlihatkan kemampuan mencegah proses oksidasi dari Low Density Lipoproteins (LDL)  dengan  cara  menangkap  radikal  bebas dan  menghelat  ion  logam  transisi.  Ketika flavonol  kuersetin  bereaksi  dengan  radikal bebas, kuersetin mendonorkan protonnya dan menjadi  senyawa  radikal  (Sutir,  2012). Kuersetin  Seringkali  terdapat  dalam  jumlah substansial  dalam  jaringan  tanaman,  sebagai antioksidan  kuat,  penghelat  logam,  peredam radikal, dan mencegah oksidasi dari lipoprotein densitas rendah (Haeria, 2014).
Spektrofotometri  sinar tampak  (UV-Vis) adalah  pengukuran  energi  cahaya  oleh  suatu sistem  kimia  pada  panjang  gelombang tertentu.  Sinar  ultraviolet  (UV)  mempunyai panjang  gelombang  200 – 400 nm, dan sinar tampak (visible) mempunyai panjang gelombang  400 –  750  nm. Pengukuran menggunakan  spektrofotometer  melibatkan energi  yang  cukup  besar  pada  molekul  yang dianalisis,  sehingga  spektrofotometri  UV-Vis lebih  banyak  dipakai  untuk  analisis  kuantitatif dibandingkan  kualitatif  (Rohman,    2007). Keuntungan  utama  metode  spektrofotometri UV-Vis adalah bahwa metode ini memberikan cara  sederhana  untuk  menetapkan  kuantitas zat  yang  sangat  kecil.  Selain  itu,  hasil  yang diperoleh  cukup  akurat,  dimana  angka  yang terbaca  langsung  dicatat  oleh  detektor  dan tercetak  dalam  bentuk  angka  digital  maupun grafik yang sudah diregresikan.
Cara  kerja  spektrofotometri  adalah cahaya  yang  berasal  dari  lampu  deuterium maupun  wolfram  yang  bersifat  polikromatis diteruskan melalui lensa menuju ke monokromator  pada  spektrofotometer  dan filter  cahaya  pada  fotometer.  Monokromator kemudian akan mengubah cahaya polikromatis  menjadi  cahaya  monokromatis (tunggal).  Berkas-berkas  cahaya  dengan panjang  tertentu  kemudian  akan  dilewatkan pada  sampel  yang  mengandung  zat  dalam konsentrasi tertentu. Oleh karena itu, terdapat cahaya  yang  diserap  dan  ada  pula  yang dilewatkan.  Cahaya  yang  dilewatkan  ini kemudian  diterima  oleh  detector,  detector kemudian  akan  menghitung  cahaya  yang diterima dan mengetahui cahaya yang diserap oleh sampel. Cahaya yang diserap sebanding dengan  konsentrasi  zat  yang  terkandung dalam  sampel  sehingga  akan  diketahui konsentrasi zat dalam sampel secara kuantitatif dengan membandingkan absorbansi  sampel  dan  kurva  standar  BSA (Bovine Serum Albumine) (Yahya, 2017).

## II. METODE PENELITIAN
1. Penyiapan Simplisia Daun  seligi (P.  buxifolius Muell.  Arg) yang  masih  segar  yang  dicuci  bersih  dan ditiriskan. Daun seligi yang sudah dibersihkan disortasi  basah  lalu  ditimbang.  Daun  seligi tersebut kemudian dikeringkan didalam lemari pengering  pada  temperatur  50°C  sampai dapat diremas rapuh lalu ditimbang, kemudian dilakukan  perhitungan  susut  pengeringan dengan rumus sebagai berikut :
Susut pengeringan = x 100 Simplisia yang telah dikeringkan
diblender sampai menjadi serbuk lalu disimpan dalam wadah plastik
(Widyaningrum, 2018).
2. Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  seligi dilakukan  dengan  metode  maserasi  dan menggunakan  cairan  penyari  etanol  70%. Ditimbang  serbuk  daun  seligi  sebanyak  300 gram  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  beker gelas ditambah dengan etanol 70% sebanyak 1500  ml  (1:5).  Campuran  tersebut  diaduk selama  enam  jam  dan  didiamkan  selama delapan  belas  jam  serta  pada  bagian  atas ditutup  dengan  plastik  dengan  tujuan  agar tidak  terjadi  penguapan  cairan  penyari. Setelah delapan belas jam, kemudian campuran  diserkai  menggunakan  kain  flanel dan  disaring  dengan  kertas  saring  untuk mendapatkan filtrat kemudian dilakukan remaserasi. Filtrat yang didapatkan kemudian
diuapkan di atas waterbath dengan menggunakan  cawan  porselin  yang  sudah ditara  untuk  menghilangkan  cairan  penyari sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Berat ekstrak  kental  ditimbang  untuk  menghitung hasil rendemen (Widyaningrum, 2018).
3. Pembuatan  Reagen  Untuk  Penetapan
Kadar Flavonoid Total.
a. Pembuatan Larutan ALCL 3 2% Sebanyak 0,2 g serbuk ALCL 3 ditimbang  dan  dimasukkan  ke  dalam  bekker glass  kemudian  dilarutkan  dengan  sebagian aquadest  hingga  larut  sempurna.  Masukkan ke  dalam  labu  ukur  10  ml,  dan  tambahkan aquadest  hingga  batas  tanda  (Depkes  RI, 1995).
b. Pembuatan Asam Asetat 8%
Sebanyak  0,8  ml  Asam  Asetat  diukur dan  dimasukkan  ke  dalam  bekker  glass kemudian dilarutkan dengan sebagian aquadest  hingga  larut  sempurna.  Masukkan ke  dalam  labu  ukur  10  ml,  dan  tambahkan aquadest  hingga  batas  tanda  (Depkes  RI, 1995).
c. Pembuatan Larutan Blangko
Masukkan  1  ml  ALCL 3 2%  dan ditambahkan  8  ml  asam  asetat  5%  ke  dalam labu  ukur  10 ml, tambahkan  aquadest  hingga batas akhir.
4. Pembuatan Larutan Baku Kuersetin
a. Preparasi  larutan  baku  kuersetin  1000 ppm.
Ditimbang  sebanyak  20,0  mg  baku standard dan dilarutkan dengan etanol p.a ad 20  ml,  sehingga  diperoleh  konsentrasi  1000 ppm.
b. Pembuatan  larutan  baku  kerja  kuersetin 80 ppm.
Sebanyak  0,8  ml  larutan  baku  induk dimasukkan  kedalam  labu  ukur  10  ml  dan dilarutkan  dengan  etanol  p.a  sampai  tanda batas.
5. Penentuan Operating Time Kuersetin Sebanyak  1  ml  larutam  kuersetin  50 ppm  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml, lalu  direaksikan  dengan  1  ml  AlCl 3 2%  dan ditambahkan  8  ml  asam  asetat  5%  kedalam larutan.  Larutan  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelomang  maksimal  teoritis  428  nm dengan  interval  waktu  1  menit  sampai diperoleh absorbansi yang stabil.
6. Penentuan Panjang Gelombanag Maksimum Penentuan panjang
gelombang maksimal  dilakukan  menggunakan  3  seri konsentrasi  larutan  baku  kuersetin  yaitu  50 ppm,  200  ppm,  400  ppm.  Sebanyak  1  ml larutan  kuersetin  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  10 ml, lalu  direaksikan  dengn  1 ml  AlCl 3 2%  dan  ditambahkan  8  ml  asam  asetat  5%
kedalam  larutan.  Diamkan  selama  6-8  menit ( operating  time) dan  lakukan  pembacaan pada  rentang  panjang  gelombang  400-500 nm.
7. Penentuan Kurva Baku Kuersetin
Buat  seri  konsentrasi  dari  larutan  baku induk  1000  ppm,  dibuat  dengan  variasi konsentrasi  50,  100,  200,  300,  400  ppm. Sebanyak  1  ml  larutan  dari  berbagai konsentrasi  direaksikan  dengan  1  ml  AlCl 3 2%,  ditambahkan  8  ml  asam  asetat  5% kedalam larutan, kemudian didiamkan selama 6-8 menit.
Masing-masing  larutan  baku  kerja tersebut  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang  maksimum.  Hitung  persamaan regresi  linier  yang  merupakan  hubungan antara konsentrasi dengan absorbansi. Kemudian  dibuat  kurva  kalibrasi  antara konsentrasi dengan absorbansi.
8. Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total Ekstra Daun Seligi
Kandungan  flavonoid  total  merujuk pada prosedur Chang et al , (2002).
Pengukuran  serapan  sampel,  buat  larutan induk  1000  ppm  dengan  menimbang  ekstrak daun  seligi  sebanyak  10  mg  dan  dilarutkan dalam 10 ml etanol p.a.
Kemudian  dari  larutan  ekstrak  etanol daun  seligi  1000  ppm  dipipet  1  ml  dan ditambahkan  1  ml  AlCl 3 2%  dalam  labu  ukur 10  ml.  kemudian  ditambahkan  8  ml  asan asetat  5%  kedalam  larutan.  Diamkan  larutan ditempat  yang  gelap  selama  6-8  menit ( operating time ). Kemudian
diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum.  Larutan  sampel  dibuat  dalam  3 kali replikasi dan triplo.
9.  Ananlisis data
a.  Perhitungan Rendemen Ekstrak Rendemen  ekstrak  daun  seligi  dihitung dengan  cara  menimbang  bobot  cawan  dan ekstrak  yang  didapat,  dengan  rumus  sebagai berikut :
% rendemen = x 100%
b.  Penetapan Kadar Flavovoid Total Hitung  kadar flavonoid  total  daun  seligi menggunakan  persamaan  kurva  baku  seperti yang  digunakan  dalam  penelitian  Rosyid 2018.  Analisa  data  yang  digunakan  adalah analisa  data  presentif.  Dari  data  kurva kalibrasi  dapat  diperoleh  nilai  a,  b,  dan  r dengan  menggunakan  regresi  linier.  Nilai  r harus  mendekati  ±  1  agar  kurva  yang dihasilkan  linier  r  yang  baik  yaitu  0,999  yang artinya  korelasi  yang  kuat  diantara  dua variable  yaitu  variabel  X  sebagai  konsentrasi dan  variabel  Y  sebagai  absorbansi.  Setelah itu diolah menggunakan rumus :
Dimana : A = konstanta B = koefesien regresi Y = absorbansi sebagai variable terikat X  =  konsentrasi  sebagai  variable bebas.

## III.  HASIL
Berdasarkan  hasil  penelitian  ekstrak etanol  daun  seligi diperoleh  maserasi  yang dihasilkan  dari  proses  penyarian  dengan menggunakan  etanol  70%.    Maserat  yang diperoleh  dari  penyarian  daun  seligi  kering 300  gram  adalah  28,06  gram.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  perolehan  rendemen sebesar  9,35  %  b/b,  sedangkan  untuk  hasil perolehan  susut  pengeringan  ekstrak  etanol daun seligi sebesar 50 %.
Hasil  pengukuran  flavonoid  ekstrak etanol  daun  seligi  yang  telah  dilakukan dengan  menggunakan  Spektrofotometri  UV- Vis, maka  didapatkan  data  seperti  pada tabel 1.
Tabel 1. Perhitungan Kadar Flavonoid Total Sampel Hasil Rata- rata SD Replikasi 1 12,4 % Replikasi 2 15 % 13,86 % 1,27 Replikasi 3 14,08 %

## IV.  PEMBAHASAN
Tanaman  seligi (Phyllanthus  buxifolius Muell. Arg) merupakan tanaman obat tradisional  untuk menyembuhkan  rematik  dan sendi  terkilir.  Hasil  analisis  kimia  dari  daun seligi  menunjukkan bahwa daun seligi mengandung senyawa flavonoid, saponin dan polifenol.  Salah  satu  kandungan  kimia  daun seligi  yang  berperan  penting  sebagai  obat adalah  flavonoid.  Sejumlah  tanaman  obat yang  mengandung  flavonoid  telah  dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan,  antibakteri, antivirus,  antiradang,  antiinflamasi,  antialergi, dan antikanker. Flavonoid mempunyai banyak efek  yang  baik  terhadap  kesehatan  tubuh manusia.  Penetapan  kadar  flavonoid  total dilakukana  untuk  meningkatkan  pemanfaatan daun seligi sebagai sumber obat.
Daun  seligi  yang  digunakan  dicuci besih dan dikeringkan dalam oven pada suhu 50ºC untuk mencegah pencemaran pencemaran  oleh  mikroba  maupun  pengotor lainnya.  Panas  dalam  oven  dapat  dikontrol sehingga  zat  aktif  yang  terkandung  di dalamnya  tidak  rusak.  Bahan  yang  sudah kering  diserbuk  dan  kemudian  diekstraksi dengan  metode  maserasi.  Pemilihan  metode

## Y = bx + a
ekstraksi  ini  karena  merupakan  metode  yang sederhana,  mudah,  dan tanpa melalui  proses pemanasan  sehingga  kemungkinan  rusaknya komponen senyawa kimia dapat diminimalisir. Proses  penyarian  dilakukan  dengan  cara merendam  sejumlah  serbuk  simplisia  dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus  dinding  sel  dan  masuk  kedalam rongga  sel  yang  mengandung  zat  aktif,  zat aktif  akan  larut  karena  adanya  perbedaan konsentrasi  antara  larutan  zat  aktif  dan  yang ada  diluar  sel,  maka  larutan  yang  terpekat didesak  keluar.  Peristiwa  tersebut  berulang hingga  terjadi  keseimbangan  konsentrasi larutan antara diluar dan didalam sel.
Penyari yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  etanol  70%  yaitu  untuk menyari senyawa flavonoid. Pemilihan pelarut ini  disebabkan  karena  senyawa  flavonoid umumnya  dalam  bentuk  glikosida  yang bersifat  polar  sehingga  harus  dilarutkan dengan pelarut yang bersifat polar.
Flavonoid memiliki gugus kromofor dan auksokrom.  Gugus  kromofor  adalah  gugus yang  memiliki  ikatan  rangkapterkonjugasi, sedangkan  gugus  auksokrom  adalah  gugus fungsional  yang  memiliki  pasangan  elektro bebas.  Dengan  adanya  gugus  kromofor  dan auksokrom ini, maka flavonoid dapat ditetapkan  kadarnya  dengan  spektrofotometri Uv-vis karena mampu mengabsorbansi radiasi elektromagnetik pada panjang gelombang  UV.  Penetapan  kadar  flavonoid total  menggunakan  pereaksi  AlCl 3. Prinsip reagen  AlCl 3 adalah  pembentukan  senyawa kompleks.  Reagen  AlCl 3 merupakan  reagen berwarna  bening.  Senyawa  flavonoid  dalam sampel  reagen  pengopling  AlCl 3 akan  terjadi reaksi antara flavonoid dengan AlCl 3 membentuk  senyawa  kompleks  berwarna kuning yang tahan basa dan tidak tahan asam kemudian  terjadi  pergeseran  batokronik. Penambahan  Asam  Asetat  menyebabkan pengionan  pada  gugus  hidroksil  flavonoid yang paling asam.
Pemilihan  kuersetin  sebagai  larutan standard  dikarenakan  kuersetin  merupakan senyawa  yang  paling  luas  penyebarannya yang  terdapat  pada  tumbuhan.  Kuersetin  dan glikosidanya  berada  dalam jumlah  sekitar  60- 75%  dari  flavonoid,  dan  juga  karena merupakan  salah  satu  senyawa  golongan
flavonoid  yang  dapat  bereaksi  dengan  AlCl 3 membentuk kompleks.
Penentuan operating  time (  OT  )  ini berfungsi untuk mengetahui waktu yang stabil saat  sampel  bereaksi  sempurna  membentuk kompleks  dengan  reagen  pembentuk  warna. Absorbansi  absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang  maksimun  428  nm  dari  0-40 menit. Operating time dari kuersetin diperoleh pada  menit  ke  8  yang  artinya  kuarsetin setelah  direaksikan  dengan  ALCL 3 dan  Asam Asetat stabil pada waktu tersebut.
Analisis secara kuantitatif harus dilakukan pada panjang gelombang maksimal yaitu  panjang  gelombang  pada  saat  terjadi serapan  maksimal.  Pada  panjang  gelombang maksimal daya serap relatif konstan sehingga dapat  dilakukan  kondisi  sensitivitas  dan keakuratan  yang  tinggi.  Penentuan  panjang gelombang  maksimal  diukur  pada  saat tercapai operating  time karena  pada  saat operating time larutan sudah stabil.
Penentuan  panjang  gelombang  maksimal dilakukan  pada  rentang  400-500  nm.  Secara teori  hasil  panjang  gelombang  maksimal untuk  suatu  senyawa  pasti  sama  meskipun konsentrasi  yang  digunakan  berbeda  dan tinggi rendahnya konsentrasi akan mempengaruhi  tinggi  rendahnya  serapan, tetapi tidak mempengaruhi panjang gelombang.  Pada  penelitian  ini,  panjang gelombang  yang  digunakan  yaitu panjang gelombang teoritis yaitu 428 nm.
Kurva baku dibuat dari variasi konsentrasi  dari  larutan  1000  ppm  yaitu  50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm. Menurut  Dirjen  POM  (2014)  range  kadar flavonoid total berdasarkan nilai absorbansinya  berkisar  antara  0,2-0,8.  Pada penelitian  ini,  didapatkan  nilai  absorbansi berturut-turut  yaitu  sebesar    0,165,  0,250, 0,362,  0,468,  0,893  yang  berarti  bahwa korelasi  antara  konsentrasi  dan  absorbansi adalah berbanding lurus, yang artinya kenaikan  konsentrasi  diikuti  dengan  kenaikan absorbansi.  Pada  penelitian  ini,  konsentrasi kuersetin  400  ppm  dengan  nilai  absorbansi 0,893  ditolak  karena  adanya  perbedaan  nilai absorbansi  yang  jauh  dari  nilai  absorbansi lainnya.  Kurva  baku  kuersetin  dapat  dilihat pada gambar 1.
y = 0.0012x + 0.1193 R² = 0.9926 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0 100 200 300 400 A b sor b an si 428 Konsentrasi  (ppm) Kurva Baku Kuersetin Series1 Linear (Series1)
Gambar 1. Kurva Baku Linier Kuersetin
Kurva  baku  merupakan  hubungan antara  konsentrasi  dan  absorbansi,  apabila memenuhi  hukum  Lambert  Beer  maka  kurva baku berbentuk garis lurus dengan r ± 1 yang berarti bahwa korelasi antara konsentrasi dan absorbansi  adalah  linier.  Linieritas  hubungan antara  konsentrasi  dan  serapan  dengan memasukkan nilai konsentrasi dan absorbansi dalam  program  regresi  linier  maka  akan diperoleh  harga  A  =  0.1193,  B  =  0.0012,  r  = 0.9926.  Dari  harga  tersebut  dapat  diperoleh persamaan regresi linier kurva baku yaitu Y = 0.0012  x  +  0.1193  yang  akan  digunakan dalam  perhitungan  kadar flavonoid  total  pada ekstrak  daun  seligi (Phyllanthus  buxifolius Muell. Arg).
Kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol daun  seligi  mula-mula  dihitung  rata-rata absorbansi  sampel  yang  telah  dibuat  triplo. Hasil  rata-rata  sampel  yang  telah  didapat dimasukkan kedalam persamaan garis linier Y =  0.0012  x  +  0.1193  dengan  koefesien korelasi  sebesar  0.9926  sehingga  diperoleh kadar  total  flavonoid  untuk  ekstrak  etanol daun  seligi (Phyllanthus buxifolius Muell. Arg) yaitu sebesar (13,86 ± 1,27)% . Penelitian  ini  mendukung  penelitian sebelumnya  dari  Hastuti  dan  Safitri  (2015)
dalam  penelitiannya  membuktikan  bahwa ekstrak  etanol  daun  seligi  mempunyai  efek analgetik pada mencit galur balb/c, sedangkan  Hastuti  dan  Widyaningrum  (2015) dalam  penelitiannya  membuktikan  bahwa ekstrak etil asetat daun seligi mempunyai efek antiinflamasi  pada  mencit jantan  galur  balb/c, berbagai  manfaat  yang  dihasilkan  dari  daun seligi  diduga  adanya  senyawa  flavonoid  yang tinggi dalam daun seligi.
Penelitian  ini  juga  relevan  dengan penelitian  sebelumnya  dari  Rosyid  (2018) dalam  penelitiannya  membuktikan  bahwa kadar  flavonoid  total  dapat  terbaca  pada spektrofotometri  dengan  panjang  gelombang yang  sama  hanya  berbeda  pada  nilai konsentrasi  kuersetin  dan  simplisia  yang digunakan.

## V. SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  seligi (Phyllanthus  buxifolius Muell.  Arg)  memiliki  kadar  flavonoid  total sebesar (13,86 ± 1, 27)%.

## DAFTAR PUSTAKA
Agrawal, A.D. 2011. Pharmacological
Activities  Of  Flavonoids:  A  Review.
International  Journal  of  Pharmaceutical
Sciences and Nanotechnology. Volume 4 Issue 2.
Chang,  C.  C.,  Yang,  M.H.,  Chern,  J.C.  2002. Estimation  of  Total  Flavonoid  Content
in  Propolis  by  Two  Complementary Colorimetric  Methods. Journal  of  Food and Drug Analysis 10: 178-182.
Dirjen POM. 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dirjen  POM.  1986. Sediaan  Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Dirjen  POM.  1991. Analisis  Obat  Tradisional. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Dirjen POM. 1995. Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Dirjen  POM.  2000. Investaris  Tanaman  Obat Indonesia (I) Jilid I. Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial RI.
Haeria. 2014. Kimia Produk Alami. Makassar: Alauddin University Press.
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia, Edisi 2: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB.
Hastuti,  S  dan  I.A.  Safitri.  2015.  Aktivitas analgetik  ekstrak  etanol  daun  seligi (phyllantus buxifolius Muell. Arg )
terhadap  mencit  jantan  galur  balb/c .
IJMS . 2(1) : 11-15.
Hastuti,  S.  dan  N.R.  Widyaningrum.  2015. Aktivitas  analgetik  dan  antiinflamasi ekstrak etil asetat daun seligi (phyllantus  buxifolius  Muell.  Arg )  pada mencit serta ekspresi COX-1 dan COX-
2. Prosiding Seminar Nasional Fakultas Farmasi .  Yogyakarta.  20  Desember 2014.
Markham,  KR.  1988. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid . Bandung: ITB.
Neldawati, Ratnawulan, Gusnedi. 2013. Analisis Nilai Absorbansi dalam
Penentuan  Kadar  Flavanoid  Berbagai Jenis  Daun  Tanaman  Obat.  Padang: Pillar Of Physics , Vol 2 Oktober 2013. Rohman. 2007. Aktivitas Antioksidan, Kandungan Fenolik Total, dan Flavonoid Total Daun Mengkudu . Yogyakarta.  Agritech,  Vol.  27,  No.  4 Desember. Rosyid, F.H. 2018. Penetapan Kadar Flavonoid Total Daun Okra (abelmosclusesculuntus  (L)  Moench). KTI .  D3  Farmasi  Stikes  Nasional Surakarta.
Sirait,  M.  2007. Penuntun  Fitokimia  Dalam Farmasi. Bandung: ITB. Sutir,  Fitriadi.  2012. Analisis  Kandungan Senyawa Flavonoid Total dalam Sediaan Cair Kasumba Turate (Carthamus  tinctorius  Linn.)  secara
Spektrofotometri  UV-Vis. Makassar: Universitas Hasanudin.
Tanu,    I.,    Syarif,    A.,    Estuningtyas,    A.,
Setiawati,  A., Muchtar,  H.A.  dan  Arif, A.    2002. Farmakologi  dan  Terapi,
Jakarta: FKUI, 216-217.
Tjay,  T.H  dan  Rahardja,  K.  2002.  Obat -Obat Penting,  Khasiat,  Penggunaan  dan Efek  Samping. Jakarta:  Elex  Media
Komputindo.
Widyaningrum,  F.P.  2018.  Skrining  Fitokimia dan  Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Fraksinasi  N-Heksana  dari  Ekstrak Etanol Daun Seligi (Phyllanthus buxifolius Muell.  Arg). KTI .  Fakultas
Farmasi Poltekkes Bhakti Mulia Sukoharjo.