Uji Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) ekstrak daun kirinyuh ( Chromolaena odorata ) dari geothermal Ie Seum Aceh Besar terhadap Staphylococcus aureus Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) extract of kirinyuh leaves (Chromolaena odorata) from the geothermal Ie Seum Aceh Besar area against Staphylococcus aureus
Munira 1 , Muhammad Nasir 2

## Abstract
Background: Chromolaena odorata plant is a weed that grows abundantly in various places, including geothermal areas. Its leaves contain chemical compounds such as alkaloids, flavonoids, steroids, and tannins that can function as antibacterials.
Objectives : The study aims to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of ethanol extract of Chromolaena odorata leaves grown in the geothermal area of Ie Seum Aceh Besar against Staphylococcus aureus . Methods : The study was conducted at the Fundamental Microbiology Laboratory of Aceh Besar in June 2022. The MIC and MBC tests of ethanol extract of Chromolaena odorata leaves from the geothermal area of Ie Seum Aceh Besar were performed using  the  liquid  dilution  method.  The  concentrations  of  the  extract  used  were  1%,  3%,  5%,  7%,  and  10%.  The  MIC  was determined  based  on  the  turbidity  or  clarity  of  the  test  solution,  while  the  MBC  was  determined  by  streaking  each concentration of the extract/test solution on agar media. Data analysis was performed descriptively in terms of the lowest concentration of the extract that could inhibit and kill Staphylococcus aureus . Results : The results showed that the ethanol extract of Chromolaena odorata leaves from the geothermal area of Ie Seum Aceh Besar had a MIC value of 5% and an MBC value of 7% in inhibiting the growth of Staphylococcus aureus.
Conclusion : Based on the study, it can be concluded that the ethanol extract of Chromolaena odorata leaves from the  geothermal  area  of  Ie  Seum  Aceh  Besar  is  able  to  inhibit  the  growth  of Staphylococcus  aureus from  a concentration of 5% and able to kill Staphylococcus aureus from a concentra tion of 7%.

## Keywords
Chromolaena odorata, MIC, MBC, geothermal

## Abstrak
Latar  belakang: Tanaman  Kirinyuh  (Chromolaena  odorata)  merupakan  gulma  yang  banyak  tumbuh  di  berbagai  tempat termasuk di dalam kawasan geothermal (panas bumi). Daun kirinyuh mengandung senyawa kimia seperti alkaloid, flavonoid, steroid dan tanin. Senyawa-senyawa tersebut dapat berfungsi sebagai antibakteri.
Tujuan : Penelitian bertujuan untuk menentukan Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh MInimum (KBM) dari ekstrak etanol daun kirinyuh yang tumbuh dalam kawasan geothermal Ie Seum Aceh Besar terhadap Staphylococcus aureus. Metode : Penelitian dilakukan di Laboratoium Mikrobiologi Fundamental Sains Aceh Besar pada Juni 2022. Uji KHM dan KBM dari ekstrak etanol daun kirinyuh dari kawasan geothernal Ie Seum Aceh Besar dilakukan dengan menggunakan metode dilusi
1 Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: munira.ac@gmail.com
2 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Syiah Kuala, Aceh, Indonesia. E-mail: m_nasir@unsyiah.ac.id
Penulis Koresponding: Munira Munira: Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia, E-mail: munira.ac@gmail.com
SAGO: Gizi dan Kesehatan 2023, Vol. 4(2) 179-185 © The Author(s) 2023
DOI: http://dx.doi.org/10.30867/gikes.v4i2.1107 https://ejournal.poltekkesaceh.ac.id/index.php/ gikes Poltekkes Kemenkes Aceh
cair. Konsentrasi ekstrak yang digunakan adalah 1%, 3%, 5%, 7% dan 10%. KHM ditentukan berdasarkan kekeruhan atau kejernihan larutan uji, sedangkan KBM ditentukan dengan menggoreskan masing-masing konsentrasi ekstrak/larutan uji pada media agar. Analisis data dilakukan secara deskriptif berupa konsentrasi terendah dari ekstrak yang mampu menghambat dan membunuh Staphylococcus aureus.
Hasil : Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun kirinyuh dari kawasan geothermal Ie Seum Aceh Besar memilki nilai KHM sebesar 5% dan memiliki nilai KBM sebesar 7% dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus. Kesimpulan :  Berdasarkan penelitian, dapat disimpulkan bahwa ekstrak  etanol  daun  kirinyuh dari kawasan  geothermal Ie Seum Aceh Besar sudah mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus mulai konsentrasi 5% dan mampu membunuh bakteri Staphylococcus aureus mulai konsentrasi 7%.

## Kata Kunci
Chromolaena odorata, KHM, KBM, geothermal

## Pendahuluan
anaman kirinyuh ( Chromolaena odorata L. ) merupakan  salah  satu  tanaman  yang tergolong  gulma  dan  mudah  tumbuh  di berbagai  tempat  (Thamrin  et  al.,  2014).
Kirinyuh juga dapat ditumbuh di daerah geothermal (Hidayat,  2018).  Geothermal  merupakan  suatu daerah yang mempunyai sumber energi panas yang terbentuk  di  dalam  kerak  bumi.  Provinsi  Aceh merupakan salah satu daerah yang banyak memiliki kawasan  geothermal  di  antaranya  adalah  daerah geothermal mata air panas Ie Seum yang terletak di Kabupaten Aceh Besar (Syukri et al., 2014).
Daun  kirinyuh  secara  tradisional  digunakan sebagai  obat  untuk  mengobati  batuk,  antidiare, astringent, antispasmodik, antihipertensi, antiinflamasi,  diuretik,  dan  antipiretik  (Vaisakh  & Pandey, 2012). Daun kirinyuh dapat berfungsi juga sebagai  antipiretik,  analgesik,  dan  antimikroba (Vijayaraghavan et al., 2017). Sebelumnya telah ada beberapa penelitian terhadap ekstrak daun kirinyuh khususnya  sebagai  antibakteri  dan  bahkan  telah diformulasikan  dalam  bentuk  sediaan  krim antibakteri. Ekstrak daun kirinyuh dapat menghambat  pertumbuhan  Escherichia  coli  dan Staphylococcus  aureus  (Priono  et  al.,  2016).  Hasil penelitian  yang  lain menyimpulkan  bahwa  ekstrak daun  kirinyuh  dapat  menghambat  pertumbuhan Staphylocoocus aureus dan Salmonella typii (Fadia et  al.,  2020).  Terdapat  juga  kajian  yang memformulasi krim dari ekstrak daun kirinyuh dan terbukti  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap beberapa bakteri (Dewi et al., 2019).
Daun  kirinyuh  dapat  berfungsi  sebagai antibakteri karena mengandung beberapa senyawa kimia  seperti  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid, triterpenoid dan tanin (Fadia et al., 2020; Priono et al.,  2016).  Kandungan  senyawa  kimia  pada  suatu tanaman  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor
lingkungan  seperti  cahaya,  suhu,  pH,  ketinggian tempat  dan  temperatur  (Sholekah,  2017).  Daerah geothermal mata air panas Ie Seum memiliki kondisi lingkungan  yang  berbeda  dengan  luar  kawasan geothermal  karena  suhu  tanah  di  kawasan geothermal  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan daerah yang jauh dari daerah geothermal (Hidayat, 2018).  Hal  ini  akan  berpengaruh  terhadap kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat  dalam tanaman yang tumbuh dalam kawasan ini. Sehingga perbedaan wilayah tumbuh mengakibatkan kandungan senyawa kimia serta aktivitas farmakologi  yang  berbeda  (Safrina  &  Priyambodo 2018).  Kawasan  geothermal  memiliki  kondisi ekstrim sehingga mendorong tumbuhan menghasilkan  senyawa  aktif  dengan  kandungan yang lebih tinggi (Idroes et al., 2019; Nuraskin et al., 2020).  Hal  ini  terbukti  dari  hasil  penelitian sebelumnya  di  mana  ekstrak  daun  jamblang  dari dalam  geothermal  memiliki  aktivitas  antibakteri lebih  baik  daripada  daun  jamblang  dari  luar geothermal Ie Seum Aceh Besar terhadap S. aureus (Munira et al., 2022a).
Penelitian  sebelumnya  telah  dilakukan pengujian  daya  hambat  terhadap  S.  aureus menggunakan  daun  kirinyuh  yang  tumbuh  dalam kawsaan  geothermal  Ie  Seum  Aceh  Besar  dan ternyata ekstrak daun kirinyuh dengan konsentrasi 100%  yang  menggunakan  pelarut  etanol  dan memiliki  diameter  zona  hambat  terbesar  (18,87 mm) dibandingkan pelarut etil asetat dan N hexana (Munira et al., 2022b). Namun sejauh ini belum ada yang mengkaji tentang kadar terendah dari esktrak daun  kirinyuh  ini  yang  mampu  menghambat  atau membunuh  bakteri  S.  aureus.  Oleh  sebab  itu penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  Kadar Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Kadar  Bunuh Minimum (KBM) dari ekstrak etanol daun kirinyuh yang tumbuh dalam kawasan geothermal Ie Seum Aceh Besar terhadap S. aureus.
T
Uji kadar kadar hambat minimum (KHM)....

## Metode
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  laboratorium yang  dilakukan  di  laboratorium  Biologi  Farmasi Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan  Aceh  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Fundamental  Sains  Aceh  Besar  pada  bulan  Juni 2022.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  blender,  timbangan  digital,  gelas  ukur, wadah  maserasi,  batang  pengaduk,  vacum  rotary evaporator,  pipet  mikro,  labu  ukur,  pipet  volume dan  tabung  reaksi.  Bahan  yang  digunakan  adalah daun  kirinyuh  yang  tumbuh  dalam  kawasan geothermal Ie Seum Aceh Besar, etanol 70%, media Nutrien  Broth  (NB),  media  MHA  dan  bakteri Staphylococcus aureus.

## Pengumpulan simplisia
Daun  kirinyuh  dikumpulkan  dari  dalam  kawasan geothermal  Ie  Seum  Aceh  Besar  pada  bulan  Mei 2022.  Sampel  daun  dikoleksi  yang  berjarak  ±  100 meter dari sumber air panas.
Daun  yang  dikoleksi  adalah  daun  ketiga sampai  kelima  dari  pucuk.  Daun  yang  diambil sebanyak  1  kg  lalu  dibersihkan  dengan  cara  dicuci dengan  air  mengalir.  Kemudian  dikeringkan  di dalam  ruangan  atau  diangin-anginkan  sekitar  10 hari.  Daun  kirinyuh  yang  sudah  kering  kemudian diserbukkan menggunakan blender.

## Pembuatan ekstrak secara maserasi
Serbuk daun kirinyuh ditimbang sebanyak 100 g lalu dimasukkan  ke  dalam  maserator  kemudian ditambahkan  1000  mL  etanol  70%.  Kemudian direndam selama 6 jam pertama sambil sekali-sekali diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam.
Selanjutnya maserat dipisahkan dengan cara difiltrasi.  Proses  penyarian  diulangi  sekurang- kurangnya satu kali dengan jenis pelarut yang sama (etanol 70%) dan jumlah volume pelarut sebanyak setengah  kali  jumlah  volume  pelarut  pada penyarian  pertama  (500  mL).  Semua  maserat dikumpulkan, kemudian diuapkan dengan penguap vacuum rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental (Depkes, 2013).

## Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Pada  penelitian  ini  metode  yang  digunakan  ialah metode  serial  dilusi  atau  pengenceran  bertingkat. Metode  pengujian  menggunakan  turbidimetri. Sebanyak  7  tabung  reaksi  steril  disiapkan.  Setiap
tabung  dimasukkan  media  Nutrien  Broth  (NB) sebanyak 3,5 mL dan 0,5 mL bakteri S. aureus ATCC 25923 yang setara dengan standar Mc Farland 0,5. Setiap tabung uji diberi label 1- 5, kemudian tabung 6 diberi label K (+) yang merupakan kontrol positif, yaitu tabung yang berisi antibiotik. Tabung 7 diberi label  K(-)  yang  merupakan  kontrol  negatif,  yaitu tabung  berisi  akuades  steril.  Tabung  1-5 dimasukkan  ekstrak  etanol  daun  kirinyuh  dari kawasan  geothermal  Ie  Seum  Aceh  Besar  dengan konsentrasi  1%,  3%,  5%,  7%  dan  10%  masing- masing sebanyak 1 mL.
Selanjutnya media tabung perlakuan diinkubasi selama 1x24 jam, semua tabung tersebut dilihat kekeruhannya secara visual. Bila kekeruhan masing-masing  tabung  masih  setara  atau  lebih keruh dari tabung K(-) yang berisi suspensi bakteri S. aureus sesuai standar kekeruhan McFarland 0,5 berarti bakteri masih dapat bertumbuh, tetapi bila larutan  dalam  tabung  terlihat  mulai  lebih  jernih daripada  tabung  K(-)  berarti  pertumbuhan  bakteri mulai  terhambat.  Hal  inilah  yang  menunjukkan konsentrasi  hambat  minimum  (KHM).  Kadar hambat  minimum  ditentukan  dengan  konsentrasi ekstrak terkecil pada tabung perlakuan yang sudah mulai menghambat pertumbuhan bakteri.

## Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Sebanyak 15 mL MHA dituangkan ke dalam cawan petri  steril  dan  dibiarkan  selama  beberapa  menit sehingga  menjadi  padat.  Kemudian  dipipet sejumlah  0,1  mL  dari  tiap  -tiap  penegenceran kemudian disebarkan di atas media MHA steril.
Selanjutnya dilakukan inkubasi selama 18-24 jam  pada  suhu  37oC.  KBM  ditentukan  dengan pengamatan  ada  tidaknya  pertumbuhan  bakteri dalam  media  agar  setelah  diinkubasi.  Konsentrasi terendah  yang  memperlihatkan  kematian  bakteri (tidak  ada  pertumbuhan)  merupakan  nilai  KBM. Data  yang  diproleh  dianalisa  secara  deskriptif berupa  konsentrasi  terendah  dari  ekstrak  yang mampu menghambat dan membunuh Staphylococcus aureus.

## Hasil
Berdasarkan hasil uji KHM dan KBM menggunakan metode dilusi berupa uji kekeruhan menggunakan media Nutrient Broth diperoleh bahwa ekstrak 1% sampai 3% masih nampak keruh sementara ekstrak 5% sampai 10% sudah jernih.
Hasil  uji  dapat  dilihat  pada  Tabel  1  dan Gambar  1.  Sementara  hasil  uji  KBM  berupa jumlah  koloni  yang  tumbuh  pada  setiap konsentrasi  ekstrak  daun  kirinyuh  pada  media Mueller  Hinton  Agar  seperti  yang  tersaji  pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Gambar 1. Uji  tingkat  kekeruhan  esktrak  etanol daun  kirinyuh  yang  tumbuh  dalam kawasan  geothermal  Ie  Seum  Aceh Besar terhadap S. aureus
Tabel 1. Uji tingkat kekeruhan esktrak etanol daun kirinyuh  yang  tumbuh  dalam  kawasan geothermal Ie Seum Aceh Besar terhadap S. aureus Bahan uji Konsentrasi Ekstrak Hasil KHM Ekstrak Etanol  Daun Kirinyuh 1% Keruh 3% Keruh 5% Jernih 5% 7% Jernih 10% Jernih Amoxilin Kontrol positif Jernih Aquades Kontrol negatif Keruh
Berdasarkan  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa pada konsentrasi 5% larutan sudah jernih dan ini menunjukkan bahwa konsentrasi bunuh minimum  (KBM)  dari  ekstrak  etanol  daun kirinyuh  dari  kawasan  geothermal  Ie  Seum adalah 5%.
Gambar 2. Jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada setiap pengenceran
Tabel 2. Jumlah  Koloni  Bakteri  Staphylococcus aureus  yang  Tumbuh  pada  Setiap Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Kirinyuh dari  Kawasan  Geothermal  Ie  Seum  Aceh Besar Bahan Uji Konsentrasi Ekstrak Hasil Pengulangan KBM Kesatu Kedua Ekstrak Etanol Daun Kirinyuh 1% 8 10 3% 4 3 5% 3 1 7% 0 0 7% 10% 0 0 Amoxilin Kontrol positif 0 0 Aquades Kontrol negatif 56 28
Berdasarkan  Tabel  2  dapat  dilihat  bahwa koloni bakteri mulai tidak tumbuh pada konsentrasi 7% dan ini menunjukkan bahwa konsentrasi bunuh minimum  (KBM)  dari  ekstrak  daun  kirinyuh  dari kawasan  geothermal  Ie  Seum  adalah  7%.  Dapat terlihat  pola  di  mana  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  daun  kirinyuh,  jumlah  koloni  bakteri  S. aureus semakin berkurang.

## Pembahasan
Penetapan  nilai  KBM  dan  KBM  dilakukan  dengan menggunakan  metode  dilusi.  Dipilih  metode  ini karena  memiliki  kelebihan  dibandingkan  dengan metode  difusi.  Metode  delusi  lebih  peka  dan terjamin homogenitas antar media, bahan uji dan suspensi  bakteri.  Bahan  uji  lebih  mudah berinteraksi  dengan  bakteri  karena  suspensi bakteri tersebar merata. Dengan metode ini dapat diketahui Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh  Minimal  (KBM)  terhadap  bakteri  (Pratiwi, 2008).
Hasil  pengujian  KHM  dari  ekstrak  etanol daun  kirinyuh  yang  berasal  dari  kawasan geothermal Ie Seum terhadap S. aureus diperoleh bahwa ekstrak 1% sampai 3% masih nampak keruh sementara  ekstrak  5%  sampai  10%  sudah  jernih. Konsentrasi terendah yang tidak ditumbuhi bakteri (jernih)  ditetapkan  sebagai  nilai  KHM.  Sehingga nilai  KHM  terdapat  pada  konsentrasi  5%. Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  perlu diketahui pada suatu ekstrak tanaman obat karena konsentrasi antibiotik terendah yang masih dapat
Uji kadar kadar hambat minimum (KHM)....
menghambat  pertumbuhan  organisme  tertentu (Saputera  et  al.,  2019).  Sementara  hasil  uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  7%  tidak  menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri S. aureus. Penetapan nilai  KBM  dilakukan  dengan  melihat  konsentrasi terkecil yang menunjukkan tidak adanya pertumbuhan bakteri pada media agar.
Nilai KHM dan KBM dari ekstrak etanol daun kirinyuh  dari  kawasan  geothermal  Ie  Seum  lebih kecil  dibandingkan  dengan  hasil  uji  sebelumnya yang  menggunakan  esktrak  etanol  daun  kirinyuh bukan dari kawasan geothermal di mana nilai KHM sebesar  20%  dan  KBM  sebesar  40%  (Fadia,  et  al, 2020).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kemampuan aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol  daun kirinyuh  dari  kawasan  geothermal  Ie  Seum  lebih baik dibandingkan bukan dari kawasan geothermal.  Ekstrak  daun  kirinyuh  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  Staphylococcus aureus  karena  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  ekstrak  daun kirinyuh yang tumbuh dalam kawasan geothermal Ie  Seum yang  berfungsi  sebagai  antibakteri.  Hasil skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol daun kirinyuh yang tumbuh dalam kawasan geothermal  Ie  Seum  mengandung  senyawa fenolik,  flavonoid,  steroid,  saponin  dan  alkaloid (Munira et  al., 2022). Hal ini sejalan dengan hasil penelitian Fadia et al., (2020) di mana ekstrak daun kirinyuh mengandung senyawa flavonoid, saponin, steroid dan alkaloid.
Senyawa-senyawa metabolit sekunder tersebut  memiliki  mekanisme  masing-masing dalam  menghambat  atau  membunuh  bakteri  S. aureus. Mekanisme kerja fenol yaitu dengan cara meningkatkan permeabilitas membran sitoplasma sehingga  menyebabkan  kebocoran  komponen intraseluler  dan  koagulasi  sitoplasma  sehingga terjadi  lisis  sel  (Sudarmi  et  al.,  2017).  Senyawa fenol  merupakan  antibakteri  yang  bersifat bakterisidal.  Senyawa  fenol  memiliki  aktivitas antimikroba  berspektrum  luas  terhadap  bakteri Gram posituf dan Gram negatif sehingga senyawa fenol  secara  intensif  dapat  digunakan  sebagai desinfektan  (Putra  &  Sawu,  2022).  Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri yaitu membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein ekstraseluler dan terlarut sehingga dapat merusak membran  sel  bakteri  yang  diikuti  dengan keluarnya  senyawa  intraseluler  (Dwidjoseputro, 2019).
Mekanisme kerja steroid sebagai antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri berhubungan dengan membran lipid dan sensitivitas  terhadap  komponen  steroid  yang menyebabkan  kebocoran  pada  liposom  bakteri (Madduluri  et  al.,  2013).  Steroid  dapat berinteraksi dengan membran fosfolipid sel yang bersifat  permeabel  terhadap  senyawa-senyawa lipofilik sehingga menyebabkan integritas membran menurun serta morfologi membran sel berubah  menyebabkan  sel  rapuh  dan  lisis (Sapara, 2016).
Mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri  yaitu  dengan  mendanaturasi  protein. Karena zat aktif permukaan saponin mirip deterjen maka saponin dapat digunakan sebagai antibakteri dimana  tegangan  permukaan  dinding  sel  bakteri akan  diturunkan  dan  permeabilitas  membran bakteri  dirusak  (Smułek  et  al.,  2022).  Senyawa alkaloid memiliki kemampuan sebagai antibakteri dengan  cara  mengganggu  komponen  penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri  sehingga  lapisan dinding  sel  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan menyebabkan  kematian  sel  tersebut.  Selain  itu, alkaloid  juga  menghambat  pembentukan  sintesis protein sehingga dapat mengganggu metabolisme bakteri  (Huang  et  al.,  2022).  Golongan  senyawa alkaloid dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram  positif  maupun  gram  negatif  (Wang  et  al., 2022).

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  kirinyuh  dari  kawasan geothermal  Ie  Seum  Aceh  Besar  sudah  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  Staphylococcus aureus  mulai  konsentrasi  5%  dan  mampu membunuh  bakteri  Staphylococcus  aureus  mulai konsentrasi 7%.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun kirinyuh  dari  kawasan  geothermal  Ie  Seum  Aceh Besar terhadap bakteri patogen lainnya.

## Deklarasi Konflik Kepentingan
Penulis  menyatakan  bahwa  pada  artikel  ini  tidak terdapat  konflik  kepentingan  baik  dari  penulis ataupun  instansi  sehubungan  dengan  riset  dan publikasi yang dilaksanakan.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  kepada  Poltekkes  Kemenkes  RI  Aceh dan semua pihak yang telah membantu terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Rujukan
Depkes, R. I. (2013). Suplemen III Farmakope Herbal Indonesia,  Edisi  I. Jakarta.  Kementrian Kesehatan RI .
Dewi,  V.  K.,  Putra,  N.  S.,  Purwanto,  B.,  Sari,  S., Hartati,  S.,  &  Rizkie,  L.  (2019).  Pengaruh aplikasi  kompos  gulma  Siam  Chromolaena odorata terhadap produksi senyawa metabolit sekunder  sebagai  ketahanan  tanaman  pada tanaman cabai. Soilrens , 17 (1).
Dwidjoseputro, D. (2019). Dasar-dasar mikrobiologi. Fadia, F., Nurlailah, N., Helmiah, T. E., & Lutpiatina,
L.  (2020).  Efektivitas  ekstrak  etanol  daun kirinyuh  (Chromolaena  odorata  L)  sebagai antibakteri Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus. Jurnal Riset
Kefarmasian Indonesia , 2 (3), 158 – 168.
Hidayat,  M.  (2018).  Analisis  Vegetasi  Dan Keanekaragaman  Tumbuhan  Di  Kawasan Manifestasi  Geotermal  Ie  Suum  Kecamatan
Mesjid  Raya  Kabupaten  Aceh  Besar. BIOTIK: Jurnal Ilmiah Biologi Teknologi Dan Kependidikan , 5 (2), 114 – 124.
Huang, W., Wang, Y., Tian, W., Cui, X., Tu, P., Li, J., …
Liu,  X.  (2022).  Biosynthesis  investigations  of terpenoid, alkaloid, and flavonoid antimicrobial  agents  derived  from  medicinal plants. Antibiotics , 11 (10), 1380.
Idroes,  R.,  Nurisma,  N.  W.,  Mawaddah,  N.,  & Pradysta,  R.  R.  G.  (2019). Skrining  Aktivitas Tumbuhan  yang  Berpotensi  sebagai  Bahan Anti  Mikroba  di  Kawasan  Ie  Brôk  (Upflow Geothermal  Zone)  Aceh  Besar .  Syiah  Kuala University Press.
Madduluri,  S.,  Rao,  K.  B.,  &  Sitaram,  B.  (2013).  In vitro evaluation of antibacterial activity of five indigenous plants extract against five bacterial pathogens of human. International Journal of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences , 5 (4), 679 – 684.
Munira,  M,  Rasidah,  R.,  Zakiah,  N.,  &  Nasir,  M. (2022).  Identification  of  chemical  compunds and  antibacterial  activity  test of  Kirinyuh  leaf extract  (Chromolaena  odorata  L  .)  from  Ie Seum  Geothermal  area,  Regency  of  Aceh
Besar, Indonesia. Rasayan Journal  of Chemistry , 15 (4), 2852 – 2857.
Munira, Munira, Zakiah, N., Handayani, R., & Nasir, M.  (2022). Potensi  Antimikroba  Ekstrak  Daun Jamblang  (Syzygium  cumini  L.)  Dari  Kawasan Geothermal Ie Seum Aceh Besar. Jurnal Insan Farmasi Indonesia , 5 (1), 98 – 107.
Nuraskin, C., Marlina, Idroes, R., Soraya, C., & Djufri. (2020). Identification of secondary metabolite of  laban  leaf  extract  (Vitex  pinnata  l)  from geothermal  areas  and  non-geothermal  of agam mountains in Aceh Besar, Aceh province, Indonesia. Rasayan  Journal  of  Chemistry , 13 (1), 18 – 23.
https://doi.org/10.31788/RJC.2020.1315434 Priono,  A.,  Yanti,  N.  A.,  &  Darlian,  L.  (2016).
Perbandingan  efektivitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  kelor  (Moringa  oleifera  Lamck.) dan  ekstrak  daun  kirinyuh  (Chromolaena odorata L.). AMPIBI: Jurnal Alumni Pendidikan Biologi , 1 (2), 1 – 6.
Putra, S. H. J., & Sawu, E. (2022). Mortalitas Kutu Rambut (Pediculus  humanus)  Pasca  Treatment  Larutan Daun  Kirinyuh  (Chromolena  odorata). Justek:
Jurnal Sains Dan Teknologi , 5 (2), 442 – 449.
Safrina,  D.,  &  Priyambodo,  W.  J.  (2018).  Pengaruh Ketinggian  Tempat  Tumbuh  dan  Pengeringan Terhadap  Flavonoid  Total  Sambang  Colok (Iresine herbstii).
Sani, R. N., Nisa, F. C., Andriani, R. D., & Maligan, J. M.  (2013).  Analisis  rendemen  dan  skrining fitokimia  ekstrak  etanol  mikroalga  laut Tetraselmis  chuii  [in  press  april  2014]. Jurnal Pangan Dan Agroindustri , 2 (2), 121 – 126.
Sapara, T. U. (2016). Efektivitas antibakteri ekstrak daun  pacar  air  (impatiens  balsamina  l.) terhadap pertumbuhan porphyromonas gingivalis. PHARMACON , 5 (4).
Saputera,  M.  M.  A.,  Marpaung,  T.  W.  A.,  & Ayuchecaria,  N.  (2019).  Konsentrasi  hambat minimum (KHM) kadar ekstrak  etanol  batang bajakah tampala (Spatholobus Littoralis Hassk) terhadap  bakteri  Escherichia  coli  melalui metode  sumuran. Jurnal  Ilmiah  Manuntung ,
5 (2), 167 – 173.
Sholekah, F. F. (2017). Perbedaan ketinggian tempat terhadap  kandungan  flavonoid  dan  beta karoten buah karika (Carica pubescens) daerah Dieng  Wonosobo.  In Prosiding  Seminar Nasional  Pendidikan  Biologi  dan  Biologi. Fakultas MIPA, Universitas Negeri Yogyakarta. Hal.: B75-B82 .
Uji kadar kadar hambat minimum (KHM)....
Smułek,  W.,  Rojewska,  M.,  Pacholak,  A.,
Machrowicz, O., Prochaska, K., & Kaczorek, E.
(2022).  Co-interaction  of  nitrofurantoin  and saponins surfactants with biomembrane leads to  an  increase  in  antibiotic’s  antibacterial activity. Journal  of  Molecular  Liquids , 364 , 120070.
Sudarmi,  K.,  Darmayasa,  I.  B.  G.,  &  Muksin,  I.  K.
(2017). Uji fitokimia dan daya hambat ekstrak daun  juwet  (Syzygium  cumini)  terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus ATCC. Jurnal Simbiosis , 2 (47 – 51).
Syukri,  M.,  Fadhli,  Z.,  &  Saad,  R.  (2014).  The Investigation  of  Hot  Spring  Flow  Using Resistivity  Method  at  Geothermal  Field  Ie- Seu’um, Aceh– Indonesia. Bund. K , 19 , 2420. Thamrin,  M.,  Asikin,  S.,  &  Willis,  M.  (2014). Tumbuhan  Kirinyu  Chromolaena  odorata (L)(Asteraceae:  Asterales)  sebagai  insektisida
nabati  untuk  mengendalikan  ulat  grayak Spodoptera litura.
Vaisakh,  M.  N.,  &  Pandey,  A.  (2012).  The  invasive weed  with  healing  properties:  A  review  on Chromolaena odorata. International Journal of Pharmaceutical  Sciences  and  Research , 3 (1),
80.
Vijayaraghavan,  K.,  Rajkumar,  J.,  Bukhari,  S.  N.  A.,
Al - Sayed,  B.,  &  Seyed,  M.  A.  (2017).
Chromolaena odorata: A neglected weed with a wide spectrum of pharmacological activities. Molecular  Medicine  Reports , 15 (3),  1007 – 1016.
Wang,  L.,  Linares-Otoya,  V.,  Liu,  Y.,  Mettal,  U.,
Marner, M., Armas-Ma ntilla, L., … Schä berle, T.
F.  (2022).  Discovery  and  biosynthesis  of antimicrobial  phenethylamine  alkaloids  from the  marine  Flavobacterium  Tenacibaculum discolor  sv11. Journal  of  Natural  Products , 85 (4), 1039 – 1051.