http://dx.doi.org/10.20527/bpi.v2i1.40
Nugroho, A (2019) Diterminasi Tipe Pelarut dan Proses Ekstraksi untuk Efektifitas dan Selektifitas Produksi Ekstrak Kaya Polifenol dari Euphorbia supina . Buletin Profesi Insinyur 2(1) 007-011

## Diterminasi Tipe Pelarut dan
Proses Ekstraksi untuk Efektifitas dan Selektifitas Produksi Ekstrak Kaya Polifenol dari Euphorbia supina
Polifenol,  terutama  bioflavonoid  sedang  menjadi  tren dunia  dalam  riset  pengembangan  produk  terutama pada  industri  pangan  fungsional,  suplemen,  dan kosmetika.  Keunggulan  polifenol  terletak  pada potensinya  sebagai  antioksidan  melalui  beberapa mekanisme penangkapan radikal bebas. Peran polifenol  sangat  penting  dalam  mencegah  berbagai potensi  penyakit  degeneratif  karena  perubahan  pola hidup  masyarakat  modern.  Produksi  ekstrak  kaya polifenol  dari  Euphorbia  supina  masih  belum  banyak dikembangkan,  sementara  itu  potensi  pasar  dan pengembangannya cukup besar. Penelitian ini bertujuan  untuk  menentukan  tipe  pelarut  dan  tipe proses  ekstraksi  yang  efektif  dan  selektif  dalam memproduksi  ekstrak  kaya  polifenol  dari  E.  supina. Lima  jenis  pelarut  (MeOH,  EtOH,  70%  MeOH,  30% MeOH,  dan  H2O)  serta  dua  metode  ekstraksi (ultrasonikasi  dan  refluks)  diuji  dalam  penelitian  ini. Metode ekstraksi refluks dengan pelarut EtOH mampu memberikan  kinerja  ekstraksi yang  lebih  baik  ditinjau dari aspek efektifitas, efisiensi, selektifitas, serta aspek toksisitas dan lingkungan. Metode refluks menunjukkan efektifitas dua kali lebih baik dibanding ultrasonikasi.
Kata  kunci : Euphorbia  supina ,  efektivitas,  selektifitas, ekstraksi, polifenol
Diajukan: 2 Juli 2019 Direvisi: 10 Juli 2019 Diterima: 18 Juli 2019 Dipublikasikan online: 20 Juli 2019

## Agung Nugroho
Program Studi Teknologi Industri Pertanian, Bidang Teknologi Proses Bahan Alam, Universitas Lambung Mangkurat
anugroho@ulm.ac.id

## Pendahuluan
Senyawa  polifenol  telah  menarik  perhatian  riset  dunia dalam  beberapa  dasarwarsa  terakhir  ini,  karena aktivitasnya  sebagai  antioksidan  yang  kuat  dan  aman. Sebagai antioksidan, polifenol bekerja melalui beberapa  mekanisme  yaitu  melalu  penangkapan radikal  bebas,  penghambat  peroksidasi  lipid,  pemutus reaksi  oksidasi  dengan  mengikat  radikal  bebas,  serta sebagai pengikat ( chelator ) ion logam yang menggangu proses oksidasi (Hong et al ., 2013). Flavonoid dan asam fenolik  merupakan  dua  golongan  polifenol  yang terkenal  dan  keberadaannya  pada  bahan  alam  lebih dominan  dibanding  komponen  lain  (Nugroho,  2013). Beberapa  studi  telah  membuktikan  kekuatan  aktivitas antioksidan  flavonoid  dibandingkan  asam  askorbat (vitamin  C)  sebagai  antioksidan  yang  paling  dikenal. Menggunakan metode DPPH, Hong et al . (2013), Liu et al .  (2009),  dan  Braca et  al .  (2002)  melaporkan  bahwa aktivitas  flavonoid  (quercitrin)  lebih  kuat  1,5  kali  lipat daripada asam askorbat.
Potensi  polifenol  terletak  pada  kekuatan  aktivitas antioksidannya yang merupakan output kinerja simultan  dari  beberapa  gugus  fungsional  yang  pada strukturnya  serta  kelebihan  pada  aspek  keamanan sebagai komponen aktif untuk fungsi pangan fungsional  (Babujanarthanam et  al .,  2010).  Pada umumnya, flavonoid pada bahan alam tersimpan pada
formasi  glikosidanya.  Menurut  Camalada et  al .  (2005), kelebihan  glikosida  polifenol  dibandingkan  dengan aglikonnya, terletak pada kekuatan aktivitas antioksidan secara in vivo serta ketahanan strukturnya untuk  mencapai  bagian  akhir  dari  usus  halus,  di  mana hal  ini  penting  pada  mekanisme  fisiologis  tubuh manusia.
Euphorbia  supina .  merupakan  tanaman  perdu semusim  dari  keluarga  Euphorbiaceae.  Sebagai  ciri utama  adalah  batang  dan  daunnya  yang  berwarna hijau  keunguan  dan  bergetah  (Huang et  al .,  2012). Polifenol  (flavonoid  dan  asam  fenolik)  merupakan senyawa  penciri dari  beberapa keluarga Euphobiaceae (Farmakope  Indonesia,  2014)  yang  keberadaannya lebih  dominan  dibanding  senyawa  metabolit  sekunder lainnya.  Produksi  ekstrak  kaya  polifenol  dari E.  supina memiliki potensi untuk dikembangkan secara komersial  sebagai  diversifikasi  produk  suplemen sumber antioksidan.
Harga  polifenol,  terutama  flavonoid  murni  di pasaran dunia masih sangat tinggi. Untuk pengembangan  polifenol  sebagai  produk  suplemen dalam industri pangan fungsional memerlukan kelayakan bisnis di mana harga bahan baku dan proses produksi  menjadi  faktor  penting.  Untuk  itu  perlu pengembangan teknologi proses ekstraksi yang efektif, selektif,  dan  efisien  dengan  sumber  bahan  baku  yang murah  sehingga  mampu  menurunkan  biaya  produksi.
Bertolak  dari  masalah  tersebut,  penelitian  ini  menguji beberapa  tipe  pelarut  (MeOH,  EtOH,  70%  MeOH,  30% MeOH, dan H 2 O) dan dua proses ekstraksi (ultrasonikasi  dan  refluks)  yang  mampu  menghasilkan kinerja  yang  lebih  efektif,  selektif,  dan  efisien  dalam produksi ekstrak kaya polifenol dari tanaman

## Metodologi
Bagian  tanaman  selain  akar  dari E. dikeringanginkan  pada  suhu  ruang  selama  5  hari dilanjutkan  pengeringan  oven  pada  suhu  40 5  jam  bertujuan  untuk  menyeragamkan  kadar  air sampel.  Sampel  kering  dihancurkan  menggunakan blender untuk  memperluas  bidang  permukaan  dan menyeragamkan  ukuran.  Ekstraksi  dilakukan  dengan metode  ultrasonikasi  dan  refluks  pada  suhu  75 selama 4 jam, di mana setiap perlakuan menggunakan 20 g sampel kering pada 200 ml pelarut.
Gambar 1 Morfologi tanaman Euphorbia supina
Jenis  pelarut  sebagai  variabel  bebas  terdiri  dari lima  jenis  perlakuan,  yaitu  MeOH,  EtOH,  70%  MeOH, 30% MeOH, dan H 2 O. Sementara itu pengujian dengan metode  refluks  dilakukan  dengan  pelarut  MeOH. Ekstrak dalam bentuk solid diperoleh dengan mengevaporasikan  ekstrak  cair  yang  telah  disaring dengan  kertas  saring  pada rotary  vacuum  evaporator yang  dilanjutkan  pengeringan  menggunakan freeze  dryer .  Ekstrak  pada  selanjutnya  dilarutkan dengan  metanol  untuk  menghasilkan  larutan  5000 ppm, yang digunakan untuk analisis kuantitatif.
Analisis  kuantitatif  dilakukan  menggunakan Performance Liquid Chromatography Instrumen HPLC yang digunakan adalah sebuah Varian HPLC  yang  terdiri  dari  dua  buah  pompa  Prostar  210, sebuah  UV-Vis  detector  Prostar  325,  sebuah  kolom kromatografi  dari  Shiseido  (Tokyo,  Japan)  Capcell  PAK C18  column  (5  μm,  4.6  mm × pengendali  temperaturnya.  Data  yang  dihasilkan dikoleksi  dan  diolah  menggunakan  Varian  Star Workstation.  Pelarut  A  adalah  air  dengan asetat  dan  Pelarut  B  adalah  metanol:CH rasio 60:40 (HPLC grade, J.T.Baker, USA).
Elusi  gradien  dari  fase  gerak  diprog referensi  oleh Nugroho  et  al .  (2013)  dengan  prosedur sebagai  berikut  (A)/(B)  =  85/15  (menit  ke (menit ke-45) → 10/90 (menit ke-46, dan statis sampai
Bertolak  dari  masalah  tersebut,  penelitian  ini  menguji (MeOH,  EtOH,  70%  MeOH,  30% dan dua proses ekstraksi (ultrasonikasi  dan  refluks)  yang  mampu  menghasilkan g  lebih  efektif,  selektif,  dan  efisien  dalam produksi ekstrak kaya polifenol dari tanaman E. supina.
E.  supina (Gambar  1) dikeringanginkan  pada  suhu  ruang  selama  5  hari dilanjutkan  pengeringan  oven  pada  suhu  40°C,  selama 5  jam  bertujuan  untuk  menyeragamkan  kadar  air sampel.  Sampel  kering  dihancurkan  menggunakan untuk  memperluas  bidang  permukaan  dan menyeragamkan  ukuran.  Ekstraksi  dilakukan  dengan refluks  pada  suhu  75°C , di mana setiap perlakuan menggunakan 20 g sampel kering pada 200 ml pelarut.
Euphorbia supina .
Jenis  pelarut  sebagai  variabel  bebas  terdiri  dari MeOH,  EtOH,  70%  MeOH, ra itu pengujian dengan metode  refluks  dilakukan  dengan  pelarut  MeOH. Ekstrak dalam bentuk solid diperoleh dengan mengevaporasikan  ekstrak  cair  yang  telah  disaring rotary  vacuum  evaporator yang  dilanjutkan  pengeringan  menggunakan  sebuah .  Ekstrak  pada  selanjutnya  dilarutkan dengan  metanol  untuk  menghasilkan  larutan  5000 ppm, yang digunakan untuk analisis kuantitatif.
Analisis  kuantitatif  dilakukan  menggunakan High Performance Liquid
Chromatography (HPLC). yang digunakan adalah sebuah Varian HPLC  yang  terdiri  dari  dua  buah  pompa  Prostar  210, Vis  detector  Prostar  325,  sebuah  kolom kromatografi  dari  Shiseido  (Tokyo,  Japan)  Capcell  PAK 250  mm)  beserta ya.  Data  yang  dihasilkan dikoleksi  dan  diolah  menggunakan  Varian  Star air  dengan  0.05%  asam metanol:CH 3 CN  dengan , USA).
Elusi  gradien  dari  fase  gerak  diprogram  mengikuti .  (2013)  dengan  prosedur sebagai  berikut  (A)/(B)  =  85/15  (menit  ke-0)  →  35/65 46, dan statis sampai
menit  ke-50)  →  85/15  (menit  ke52,  dan  dilanjutkan fase  statis  selama  3  menit  untuk Kecepatan  alir  sebesar  1  ml/menit.  UV  detektor dimonitor  pada  panjang  gelombang  254  nm  dan direkam selama 40 menit pada temperatur 40°C.
Stok  larutan  standar  delapan  komponen  kelompok polifenol  (gallic  acid,  methyl  gallate,  avicularin, astragalin,  juglanin,  isoquercitrin  6´´ 6´´-gallate,  dan  ellagic  acid konsentrasi  1000  ppm  dengan  melarutkan komponen  standar  tersebut  dengan  metanol.  Kurva kalibrasi  diperoleh  dengan  pengukuran  area dari enam konsentrasi serial yang dikorelasikan dengan konsentrasi  masing-masing  dari  delapan  komponen standar.  Larutan  standar  dan  larutan  sampel  difiltrasi menggunakan syringe filter unit (0.50 µm, Dismic Advantec, Japan) sebelum diinjeksi ke da

## Hasil dan Pembahasan

## Linearitas, LOD dan LOQ
Persamaan regresi linear diperlukan untuk menentukan  konsentrasi  senyawa  yang  dianalisis menggunakan  HPLC.  Persamaan  regresi  dari  delapan komponen  polifenol  yang  dianalisis  beserta  nilai linearitasnya ditentukan dengan menentukan luas area dari  enam  tingkat  konsentrasi  bertingkat  mulai  dari 3,91  ppm  –  125  ppm  yang  merupakan  hasil pengenceran  dari  stok  larutan  standar  yang  telah dibuat  sebelumnya.  Tingkat  konsentrasi  terkecil ditentukan  dari nilai Limit of  Quan sebesar    0,44,  sementara  itu Limit  of  Detection diperoleh angka sebesar 0,13. Nilai linearitas diperoleh angka  lebih  dari  0,999  yang  berarti  bahwa  proses penentuan  persamaan  regresi  memiliki  kesetaraan yang  tinggi.  Persamaan  regresi  linear  yang  yang menunjukkan  hubungan  antara  konsentrasi  polifenol dengan  luas  puncak  pada  kromatogram  HPLC  yang dihasilkan pada panjang gelombang 254 nm ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel  1 .  Linearitas  dari  kurva  standar  delapan  komponen polifenol serta nilai LOD dan LOQ
No. Komp. Persamaan Linear Rentang (µg/ml 1 y = 145.021 x +33.587  1.56-50.00
2 y = 228.517 x +56.229  1.56-50.00
3
y = 170.598 x +42.468 1.56-50.00
4 y = 589.979 x +72.816 1.56-50.00
5 y = 255.632 x +54.871 1.56-50.00
6 y = 247.289 x +65.751 1.56-50.00
7 y = 460.649 x +65.398  1.56-50.00
8 y = 182.691 x +58.731  1.56-50.00
Keterangan nomor komponen polifenol: gallate; 3 : avicularin; 4 : astragalin; 5 : juglanin; gallate; 7 : astragalin 6´´-gallate; dan 8 :
menit  ke52,  dan  dilanjutkan fase  statis  selama  3  menit  untuk  pencucian  kolom). ecepatan  alir  sebesar  1  ml/menit.  UV  detektor dimonitor  pada  panjang  gelombang  254  nm  dan direkam selama 40 menit pada temperatur 40°C.
delapan  komponen  kelompok gallic  acid,  methyl  gallate,  avicularin, stragalin,  juglanin,  isoquercitrin  6´´-gallate,  astragalin ellagic  acid)  disiapkan  dengan konsentrasi  1000  ppm  dengan  melarutkan  delapan dengan  metanol.  Kurva kalibrasi  diperoleh  dengan  pengukuran  area  puncak enam konsentrasi serial yang dikorelasikan dengan dari  delapan  komponen .  Larutan  standar  dan  larutan  sampel  difiltrasi menggunakan syringe filter unit (0.50 µm, Dismic-25JP jeksi ke dalam HPLC.
Persamaan regresi linear diperlukan untuk menentukan  konsentrasi  senyawa  yang  dianalisis menggunakan  HPLC.  Persamaan  regresi  dari  delapan komponen  polifenol  yang  dianalisis  beserta  nilai an dengan menentukan luas area dari  enam  tingkat  konsentrasi  bertingkat  mulai  dari 125  ppm  yang  merupakan  hasil pengenceran  dari  stok  larutan  standar  yang  telah dibuat  sebelumnya.  Tingkat  konsentrasi  terkecil
Limit of  Quantitation (LOQ)  yaitu Limit  of  Detection (LOD) diperoleh angka sebesar 0,13. Nilai linearitas diperoleh angka  lebih  dari  0,999  yang  berarti  bahwa  proses penentuan  persamaan  regresi  memiliki  kesetaraan esi  linear  yang  yang menunjukkan  hubungan  antara  konsentrasi  polifenol dengan  luas  puncak  pada  kromatogram  HPLC  yang dihasilkan pada panjang gelombang 254 nm .  Linearitas  dari  kurva  standar  delapan  komponen Rentang (µg/ml) R 2 LOD (µg/ml) LOQ (µg/ml) 50.00  0.9997  0.80 2.68 50.00  0.9997  0.41 1.37 50.00  0.9999  0.63 2.10 50.00  0.9998  0.13 0.44 50.00  0.9999  0.37 1.24 50.00  0.9999  0.34 1.14 50.00  0.9999  0.18 0.61 50.00  0.9998  0.50 1.67
Keterangan nomor komponen polifenol: 1: gallic acid; 2 : methyl : juglanin; 6 : isoquercitrin 6´´- ellagic acid.
http://dx.doi.org/10.20527/bpi.v2i1.40
Pengaruh tipe pelarut dan metode ekstraksi terhadap konsentrasi polifenol
Pengaruh jenis pelarut dan  tipe  proses  ekstraksi terhadap  konsentrasi  polifenol  pada  ekstrak  dan sampel kering E. supina ditentukan dengan mengetahui luas daerah puncak dari tujuh kromatogram ekstrak pada konsentrasi masing-masing 5000 ppm. Secara keseluruhan, ada enam jenis ekstrak yang  diuji.  Lima  ekstrak  untuk  menentukan  jenis pelarut  yang  efektif  dan  selektif  dalam  mengekstrak polifenol  pada E.  Supina yang  terdiri  dari  ekstrak MeOH,  EtOH,  70%  MeOH,  30%  MeOH,  dan  H2O. Sementara  itu  untuk  menentukan  tipe  ekstraksi  yang efektif  diuji  dua  tipe  proses  ekstraksi,  yaitu  metode ultrasonikasi  dan  refluks,  di  mana  untuk  keduanya digunakan pelarut yang sama yaitu MeOH. Penggunaan pelarut  polar  tersebut  didasarkan  pada  struktur  kimia polifenol  teridentifikasi  yang  bersifat  polar  ke  semi polar  berkat  kehadiran  beberapa  gugus  hidroksida yang  melimpah  serta  beberapa  glikosida  seperti terlihat pada Gambar 2.
Konsentrasi  polifenol  pada  masing-masing  ekstrak dapat  diketahui  berdasarkan  luas  daerah  puncak  dari delapan  komponen  yang  muncul  pada  waktu  retensi  yang sama  dengan  waktu  retensi  komponen  standar.  Gambar  3 menyajikan  kromatogram  dan  posisi  ( retention  time ,  Rf) dari  delapan  komponen  standar  serta  komponen  yang terdeteksi  pada  ekstrak  MeOH.  Mengingat  jenis  kolom yang  digunakan  pada  analisis  HPLC  adalah  C-18  ODS ( octadecylsilane )  yang  bersifat  non  polar,  maka  komponen dengan  polaritas  yang  lebih  tinggi  akan  muncul  lebih  awal atau  memiliki  nilai  Rf  yang  lebih  kecil.  Sebaliknya, komponen  dengan  polaritas  lebih  rendah  akan  terelusi
secara  lebih  lambat.  Terlihat  bahwa  asam  fenolik sederhana dengan bobot molekul rendah seperti gallic acid dan  methyl  gallate  muncul  lebih  awal.  Sementara  itu, flavonoid  glikosida  dengan  struktur  kimia  yang  lebih kompleks  serta  bobot  molekul  yang  lebih  besar,  seperti ellagic  acid  dan  beberapa  flavonoid  glikosida  akan  muncul pada Rf yang lebih besar.
Untuk  mengetahui  pengaruh  jenis  pelarut  serta efektifitas dan selektifitasnya terhadap konsentrasi delapan komponen  polifenol  pada  lima  jenis  ekstrak  yang  berbeda jenis  pelarutnya,  analisis  kuantitatif  menggunakan  metode HPLC dilakukan berdasarkan persamaan regresi linear yang telah ditentukan sebelumnya (Tabel 1). Tabel 2 menyajikan hasil  analisis  kuantitatif  dari  delapan  komponen  polifenol yang  diperoleh  dari  rerata  tiga  kali  pengulangan. Sementara  Tabel  3  menyajikan  perbedaan  efektifitas proses  ekstraksi  antara  metode  ultrasonikasi  dengan metode refluks.
Terlihat  pada  Tabel  2,  semakin  tinggi  konsentrasi  H 2 O, semakin  tinggi  pula  konsentrasi  total  dari  golongan  asam fenolik sederhana.  Sebaliknya, semakin tinggi kadar MeOH atau  EtOH  dari  pelarut,  maka  golongan  flavonoid  glikosida dan  asam  fenolik  komplek  lebih  banyak  yang  terekstrak. MeOH  dan  EtOH  memiliki  indeks  polaritas  relatif  berturut terhadap  air  (polaritas  relatif:  1)  sebesar  0,762  dan  0,654 (Smallwood, 1996). Perbedaan indeks polaritas memperlihatkan  daya  ekstraksi  MeOH  terhadap  flavonoid glikosida  lebih  kuat  daripada  EtOH,  walaupun  tidak  cukup signifikan. Sementara itu metode refluks dengan temperatur yang lebih tinggi menunjukkan  efektifitas yang lebih baik dibandingkan metode ultrasonikasi.
Gambar 2 Struktur kimia delapan komponen polifenol yang teridentifikasi pada E. Supina ..
Gambar 3 Kromatogram HPLC dari delapan komponen standar serta keberadaannya pada ekstrak MeOH
Tabel  2 .  Perbandingan  konsentrasi  delapan  polifenol  pada lima jenis ekstrak (mg/g) melalui ekstraksi ultrasonikasi
No. Komp. Ekstrak MeOH EtOH 70% MeOH 1 2.62 1.38 2.87 2 3.17 1.22 6.34 3 5.67 6.40 7.98 4 11.16 11.95 10.23 5 0.96 0.68 0.57 6 4.82 4.31 3.78 7 1.25 1.29 0.87 8 0.93 0.63 0.61 Total 30.57 27.84 33.25

## Analisis efisiensi ekstraksi
Dari  sudut  pandang  industri,  efisiensi  proses  produksi menjadi poin penting yang selalu menjadi perhatian utama. Temuan teknologi akan layak untuk dapat diaplikasikan jika mampu memberikan nilai efisiensi yang lebih tinggi. Proses ekstraksi dengan metode ultrasonikasi dan refluks memiliki prinsip dasar yang sangat berbeda. Ultrasonikasi menggunakan  prinsip  getaran  dengan  fr sementara refluks melibatkan temperatur yang lebih tinggi, yaitu sesuai titik didih pelarut dengan disertai tekanan dari pelarut  itu  sendiri  (Nugroho,  2017).  Adanya  proses pemanasan  pada  metode  refluks,  maka  konsumsi  energi

## Kromatogram HPLC dari delapan komponen standar serta keberadaannya pada ekstrak MeOH
.  Perbandingan  konsentrasi  delapan  polifenol  pada
(mg/g) melalui ekstraksi ultrasonikasi Ekstrak 30% MeOH H 2 O 5.51 29.03 10.11 8.44 2.88 0.72 10.20 3.56 n.d. n.d. 3.26 1.63 0.75 0.36 0.36 0.26 32.99 43.94
Dari  sudut  pandang  industri,  efisiensi  proses  produksi menjadi poin penting yang selalu menjadi perhatian utama. teknologi akan layak untuk dapat diaplikasikan jika mampu memberikan nilai efisiensi yang lebih tinggi. Proses ekstraksi dengan metode ultrasonikasi dan refluks memiliki prinsip dasar yang sangat berbeda. Ultrasonikasi menggunakan  prinsip  getaran  dengan  frekuensi  tinggi, sementara refluks melibatkan temperatur yang lebih tinggi, yaitu sesuai titik didih pelarut dengan disertai tekanan dari pelarut  itu  sendiri  (Nugroho,  2017).  Adanya  proses pemanasan  pada  metode  refluks,  maka  konsumsi  energi
menjadi  lebih  tinggi.  Dengan  teknologi  yang  lebih sederhana,  biaya  investasi  metode  refluks  lebih  rendah. Sementara  itu  dari  sudut  pandang  efektifitas,  metode refluks  jauh  lebih  efektif  dalam  menghasilkan  rendemen produk  dua  kali  lebih  tinggi  dibandingkan  ultrasonikasi pada penggunaan pelarut yang sama yaitu MeOH (Tabel 3).
Tabel  3 .  Perbandingan  konsentrasi  delapan  polifenol  pada ekstrak  MeOH  yang  dihasilkan  dari  dua  proses  ekstraksi yang berbeda (ultrasonikasi dan refluks)
No. Komp. Konsentrasi polifenol pada ekstrak (mg/ Ultrasonikasi 1 2.62 2 3.17 3 5.67 4 11.16 5 0.96 6 4.82 7 1.25 8 0.93 Total 30.57
Dilihat  dari  aspek  jenis  pelarut  ekstraksi,  nilai rendemen  dari  lima  jenis  ekstrak
(Tabel  2).  Meskipun  demikian,  terdapat  perbedaan  yang signifikan  mengenai  jenis  komponen  atau  selektifitas  dari komponen  yang  terekstrak  pada  pelarut  yang  berbeda. Pelarut  dengan  konsetrasi  H 2 menghasilkan  selektifitas  ekstraksi  yang  baik  untuk komponen  asam  fenolik  sederhana  dengan  berat  molekul
Kromatogram HPLC dari delapan komponen standar serta keberadaannya pada ekstrak MeOH E. supina .
nggi.  Dengan  teknologi  yang  lebih sederhana,  biaya  investasi  metode  refluks  lebih  rendah. Sementara  itu  dari  sudut  pandang  efektifitas,  metode refluks  jauh  lebih  efektif  dalam  menghasilkan  rendemen produk  dua  kali  lebih  tinggi  dibandingkan  ultrasonikasi da penggunaan pelarut yang sama yaitu MeOH (Tabel 3).
.  Perbandingan  konsentrasi  delapan  polifenol  pada ekstrak  MeOH  yang  dihasilkan  dari  dua  proses  ekstraksi yang berbeda (ultrasonikasi dan refluks)
Konsentrasi polifenol pada ekstrak (mg/g) Ultrasonikasi Refluks 5.40 3.12 16.99 15.64 13.72 2.99 2.10 0.99 60.94
Dilihat  dari  aspek  jenis  pelarut  ekstraksi,  nilai rendemen  dari  lima  jenis  ekstrak  tidak  berbeda  signifikan (Tabel  2).  Meskipun  demikian,  terdapat  perbedaan  yang signifikan  mengenai  jenis  komponen  atau  selektifitas  dari komponen  yang  terekstrak  pada  pelarut  yang  berbeda.
2 O  yang  lebih  tinggi ifitas  ekstraksi  yang  baik  untuk komponen  asam  fenolik  sederhana  dengan  berat  molekul
http://dx.doi.org/10.20527/bpi.v2i1.40
rendah,  seperti  gallic  acid  dan  methyl  gallate.  Sementara itu, komponen dengan polaritas yang lebih rendah ditandai dengan  struktur  yang  lebih  kompleks  dan  berat  molekul yang  lebih  tinggi  terbukti  akan  lebih  efektif  dan  selektif untuk  diekstrak  menggunakan  pelarut  dengan  kandungan alkohol tinggi (MeOH atau EtOH). Meskipun harga H 2 O jauh lebih  rendah  dibandingkan  MeOH  atau  EtOH,  akan  tetapi pada  proses  evaporasi  yang  merupakan  proses  ikutan setelah  ekstraksi,  biaya  energi  untuk  proses  evaporasi pelarut H 2 O jauh lebih tinggi disebabkan titik didihnya yang lebih  tinggi  dibandingkan  MeOH  atau  EtOH.  Pada  konteks ini, pelarut MeOH atau EtOH lebih efisien. Selain itu, proses ekstraksi  dapat  menggunakan  pelarut  hasil  siklus kondensasi.

## Penentuan tipe pelarut dan proses ekstraksi
Selain  faktor  efisiensi,  pemilihan  tipe  pelarut  dan  metode ekstraksi  juga  mempertimbangkan  selektifitas  ekstraksi terhadap komponen tertentu, terutama komponen dengan aktivitas  biologis  yang  lebih  baik.  Berbagai  laporan menunjukkan bahwa ellagic acid memiliki aktivitas biologis yang  lebih  kuat  daripada  gallic  acid.  Beberapa  jenis flavonoid  juga  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang lebih  kuat  daripada  asam  askorbat  (vitamin  C)  yang merupakan  antioksidan  yang  paling  dikenal  dan  telah digunakan  secara  komersial  (Hong et  al .,  2013;  Liu et  al ., 2009; Braca et al ., 2002). Pada aspek ini, tentu saja pelarut MeOH  dan  EtOH  lebih  efektif  dan  selektif  untuk  menarik komponen-komponen dengan kriteria tersebut.
Dari  aspek  toksisitas  dan  aspek  lingkungan  pelarut EtOH  memiliki  toleransi  yang  lebih  baik  dibandingkan MeOH.  Dengan  efektifitas  yang  tidak  jauh  berbeda,  serta dengan mempertimbangkan aspek toksisitas dan lingkungan,  pelarut  EtOH  lebih  prospektif  daripada  MeOH. Sementara itu dari segi tipe proses, ekstraksi refluks dinilai lebih efektif dan efisien dibandingkan metode ultrasonikasi.

## Kesimpulan
Metode  ekstraksi  refluks  dengan  pelarut  EtOH  mampu memberikan  kinerja  ekstraksi  yang  lebih  baik  ditinjau  dari aspek  efektifitas,  efisiensi,  selektifitas,  serta  aspek toksisitas  dan  toleransi  terhadap  lingkungan.  Metode refluks  menunjukkan  efektifitas  dua  kali  lebih  baik dibanding ultrasonikasi. Pelarut alkohol lebih selektif dalam
mengekstrak  komponen  dengan  aktivitas  biologis  yang lebih kuat.

## Referensi
Babujanarthanam R., Kavitha P., Pandian M.R., Quercitrin,  A  (2010)  Bioflavonoid  improves  glucose homeostasis  in  Streptozotocin-induced  diabetic tissues  by  altering  glycolytic  and  gluconeogenic Enzymes, Fundamental and Clinical Pharmacology 24 (357-364).
Braca A., Sortino C., Politi M., Morelli I., Mendez J (2002) Antioxidant  Activity  of  Flavonoids  from Licania licaniaeflora , Journal  of  Ethnopharmacology ,  79 (379-381).
Camalada  M.,  Camuesco  D.,  Sierra  S.,  Ballester  S.,  Xaus J., Galvez J., Zarzuelo A (2005) In vivo Quercitrin Anti- Inflammatory  Effect  Involves  Release  of  Quercetin, which Inhibits Inflammation through Down- Regulation  of  the  NF-kB  pathway, European  Journal of Immunology 35 (584-592).
Farmakope  Indonesia  Edisi  V,  Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia, 2014.
Hong  C.O.,  Lee  H.A.,  Rhee  C.H.,  Choung  S.Y.,  Lee  K.W (2013)  Separation  of  the  antioxidant  Compound Quercitrin  from Lindera  obtusiloba Blume  and  Its Antimelanogenic  Effect  on  B16f10  Melanoma  Cells, Bioscience,  Biotechnology,  and  Biochemistry 77  (58- 64).
Huang  L.,  Chen  S.,  Yang  M  (2012) Euphorbia  hirta :  A review  on  its  ethnopharmacology,  phytochemistry and  pharmacology, Journal  of  Medicinal  Plants Research 6 (5176-5185).
Liu  Q,  Zhang  Y.J.,  Yang  C.R.,  Xu  M  (2009)  Phenolic Antioxidants  from  Green  Tea  Produced  from Camellia  crassicolumna var.  Multiplex, Journal  of Agricultural and Food Chemistry , 57 (586-590).
Nugroho  A.,  Lim  S.C.,  Choi  J.,  Park  H.J  (2013) Identification  and  Quantification  of  Sedative  and Anticonvulsant Flavone Glycoside from Chrysanthemum  boreale , Archive  of  Pharmacal Research , 36 (51-50).
Nugroho  A  (1996) Teknologi  Bahan  Alam ,  Lambung Mangkurat University Press, Banjarmasin, 2017.
Smallwood I.M., Handbook of Organic Solvents Properties , Arnold, London.