## THE EFFECTIVENESS OF PEPPER LEAVES (Piper nigrum L.) AS A LARVACIDE OF Aedes aegypti MOSQUITO
Yuyun Solihat*, Emantis Rosa, Gina Dania Pratami, Nuning Nurcahyani
Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro No. 1, Bandar Lampung, Lampung, 35145
* Email: yuyunsolihat56@gmail.com

## ABSTRACT
Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) cases are quite high in Indonesia. One of the causes of high  dengue  cases  is  the  high  vector  population,  namely  the Aedes  aegypti mosquito. Mosquito control Ae. aegypti one of them uses larvicides to break the chain of reproduction. The use of chemical-based larvicides can be bad because it can pollute the environment and cause resistance. As an alternative, you can use natural larvicides made from plants. One of the  plants  that  have  the  potential  as  larvicides  are  pepper  ( Piper  nigrum L.)  because  it contains compounds that can be toxic to insects such as saponins, flavonoids, alkaloids, and essential oils.  In addition,  pepper plants  are  widely  cultivated  in  Lampung  and are  easy  to obtain.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of  pepper  leaf  ( P. nigrum L.)  as  larvicide  for Ae.  aegypti .  This  study  used  a  completely  randomized  design (CRD).  There  was  1  control  and  5  treatments  in  the  form  of  pepper  leaf  extract  with concentrations of 0.2%, 0.4%, 0.6%, 0.8%, and 1%. The test material used was Ae. aegypti instar III. Each treatment used 25 larvae with 4 repetitions. Observations were made after 24 hours  of  treatment.  The  data  obtained  in  the  form  of  the  number  of  larval  deaths  were analyzed using one-way ANOVA and Post hoc LSD test. The results of this study showed a significant difference (p = 0.000), and it was found that a concentration of 1% was the most effective  concentration  as  a  larvicide  for Ae.  aegypti with  a  larval  mortality  percentage  of 92%.
Keywords: Aedes aegypti , pepper leaves, larvicides

## PENDAHULUAN
Kasus Demam Berdarah Dengue (DBD) di Indonesia cukup tinggi sehingga mendapat perhatian khusus dari pemerintah Indonesia bahkan WHO
mengkategorikan Indonesia sebagai negara  endemis  tinggi  kasus  DBD.
Sebagian besar kabupaten/kota di Indonesia  telah  terinfeksi  penyakit  DBD. Kasus  DBD  tercatat  sebanyak  138.127 kasus pada tahun 2019. Jumlah kasus ini mengalami peningkatan jika dibandingkan dengan  tahun  2018  sebanyak  65.602 kasus. Jumlah kematian yang disebabkan oleh  penyakit  DBD  juga  mengalami peningkatan  dari  tahun  2018-2019  yaitu sebanyak  467  menjadi  919  kematian (Kemenkes RI, 2020).
Angka Kesakitan (IR) per 100.000
penduduk selama tahun 2010-2019 mengalami naik turun. Di Provinsi Lampung,  Angka  Kesakitan  (IR)  DBD pada  tahun  2019  sebesar  64,4  per 100.000  penduduk  dan  Angka  Bebas Jentik  (ABJ)  kurang  dari  95%  (Dinkes Provinsi Lampung, 2020).
DBD  salah  satunya ditularkan  oleh  vektor penyakit  ini  yaitu  nyamuk Aedes  aegypti yang mengandung virus dengue. Nyamuk Ae.  aegypti dikenal  sebagai  serangga yang merugikan dan menularkan penyakit. Nyamuk Ae.  aegypti menularkanpenyakit DBD  melalui  gigitannya  (Yunita  dkk., 2009). Ae.  aegypti mencari  air  yang menggenang untuk  dijadikan tempat perindukannya sebagai tempat
meletakkan  telur  seperti  pada  bak  mandi
yang  tidak  dikuras,  ban  bekas  dan tempurung  kelapa  yang  tergenang  air hujan,  vas  bunga,  tempat-tempat  minum burung  atau  binatang  peliharaan  lainnya, potongan  bambu,  dan  lain  sebagainya (Wahyuni, 2016).
Upaya  pengendalian  nyamuk Ae.  aegypti perlu dilakukan agar penyebaran penyakit DBD dapat dicegah.
Pengendalian nyamuk Ae.  aegypti dapat  dilakukan dengan cara
memutus rantai
perkembangbiakannya, salah satunya
dengan  menggunakan  larvasida . Menurut Sudarmo (1988)
larvasida adalah pestisida  atau  pembunuh  hama  yang mampu  mematikan  ulat  (larva)  atau serangga yang belum dewasa. Salah satu larvasida yang digunakan untuk membunuh  larva  yaitu  bubuk  temephos (abate)  (Indrayani  dan  Wahyudi,  2018). Upaya pengendalian nyamuk menggunakan  larvasida  berbahan  kimia dalam  kurun  waktu  yang  lama  dapat memberikan  efekresisten  (Astriani  dan Widawati,  2016).  Selain  itu,  penggunaan larvasida  berbahan  kimia  juga  dapat memberikan  efek  buruk  bagi  lingkungan seperti  pencemaran  lingkungan  (Yunita dkk.,  2009),  mengganggu  kesehatan manusia  seperti  rasa  mual,  sakit  kepala, dan  gangguan  saraf  jika  dosis  yang digunakan terlalu tinggi (Ishak dkk., 2020). Akan  tetapi,  larvasida  dianggap  sebagai pengendalian yang efektif untuk mencegah  perkembangbiakan  nyamuk dilihat  dari  banyaknya  kematian  larva (Rumengan,  2010).  Oleh  karena  itu, dibutuhkan  larvasida  berbahan  alami sebagai  upaya  pengendalian  nyamuk yang lebih aman bagi kesehatan dan tidak berdampak pada kerusakan lingkungan.
Salah  satu  tanaman  yang  berpotensi untuk  dimanfaatkan  sebagai  larvasida alami  yaitu  lada  ( Piper  nigrum L.).  Lada termasuk  tanaman  rempah  yang  banyak dibudidaya oleh petani di daerah Lampung sehingga  mudah  didapatkan.  Tumbuhan lada mengandung senyawa seperti alkaloid  piperin  (5,3-9,2%),  kavisin  (1%), metilpirolin,  minyak  atsiri  (1,2-3,5%)  yang mengandung felandren, dipenten, kariopilen, enthoksilin, limonen,
(Hikmawanti dkk., 2016). Senyawa- senyawa tersebut berperan dalam
aktivitas larvasida. Fadmi (2019)
melaporkan  bahwa  ekstrak  biji  lada memiliki aktivitas sebagai larvasida terhadap  nyamuk Ae.  aegypti. Untuk  itu perlu  dilakukan  penelitian  ini  untuk mengetahui  keefektifan  ekstrak  daun P. nigrum L.  sebagai  larvasida  nyamuk Ae. aegypti.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Februari-April 2021, di Laboratotium Zoologi, Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,
Universitas Lampung.  Pembuatan ekstrak daun  lada  dilakukan  di  Laboratorium Botani Jurusan Biologi,
Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Lampung.

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara  lain  blender  untuk  menghaluskan daun  lada  ( P.  nigrum L.),  kertas  saring, gelas  plastik, rotary  evaporator sebagai alat  untuk  menguapkan  solven  etanol , batang  pengaduk,  timbangan,  botol  gelap sebagai  wadah  maserasi,  Erlenmeyer, corong,  pipet  larva,  botol  sebagai  wadah hasil  ekstrak  daun  lada,  gelas  ukur,  dan kamera.

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  daun  lada  ( P.  nigrum L.)  muda hingga  sedang  yang  didapatkan  dari perkebunan di Kecamatan Pugung, Kabupaten Tanggamus, Lampung. Carboxyl  methyl  cellulose (CMC)  yang berfungsi sebagai pelarut dan menstabilkan  emulsi,  larutan  etanol  96% sebagai  pelarut  ekstrak  daun  lada, akuades  sebagai  pengencer  ekstrak,  dan hewan uji penelitian berupa larva nyamuk Ae. aegypti instar III .
Prosedur Penelitian

## Penyediaan larva nyamuk Ae. aegypti
Larva  nyamuk  berasal  dari  telur  nyamuk Ae.  aegypti yang  diperoleh  dari  Fakultas Kedokteran  Hewan  Institut  Pertanian Bogor,  Jawa  Barat  dalam  bentuk  sediaan kering. Penyediaan larva berasal dari telur yang ditetaskan di dalam nampan berukuran  30x15  cm  yang  diisi  air  dalam waktu 1-2 hari. Telur yang sudah menetas kemudian  menjadi  larva  yang  akan melewati  fase  instar  I  hingga  instar  III selama 3-5 hari. Selama masa pemeliharaan,  larva  diberi  makan  dengan peletikan  yang  dihaluskan.  Ketika  larva sudah  sampai  pada  fase  instar  III,  larva tersebut  dimasukkan  ke  dalam  gelas plastik  yang  berisi  larutan  ekstrak  lada dengan berbagai konsentrasi.

## Ekstraksi daun lada (Piper nigrum L.)
Daun  lada  yang  digunakan  adalah  daun yang muda hingga sedang sebanyak 4 kg. Pembuatan  ekstrak  daun  lada  dilakukan dengan  cara  memisahkan  daun  dari tangkainya  lalu  dibersihkan  kemudian dikeringanginkan.  Setelah  kering,  daun lada  ditimbang  dan  dirajang  agar  mudah kering lalu dihaluskan dengan menggunakan  blender  hingga  menjadi serbuk (simplisia).
Simplisia daun lada kemudian dimasukkan ke  dalam  botol  gelap  dan  dimaserasi dengan  etanol  96%,  ditutup  hingga  rapat dan  biarkan  selama  24  jam.  Hasil maserasi  disaring  dan  diambil  filtratnya, lalu endapannya digunakan untuk remaserasi  selama  24  jam.  Remaserasi dilakukan  sampai  3  kali  pengulangan. Seluruh  hasil  maserasi  dimasukkan  ke dalam rotary evaporator sampai dihasilkan ekstrak  pekat  daun  lada  (Mutiarawati, dkk., 2017).

## Uji efektivitas
Uji  efektivitas  dilakukan  dengan  cara menyiapkan kontrol dan ekstrak daun lada ( P.  nigrum L.)  yang  dibuat  dengan berbagai  konsentrasi,  yaitu  0,2%,  0,4%, 0,6.%,  0,8%,  dan1%  yang  dilarutkan dengan CMC 0,5% (aquades + CMC 1 gr) hingga volume larutan 200 ml
(Mutiarawati, dkk., 2017). Setiap konsentrasi  beserta  control  dimasukkan ke  dalam  masing-masing  gelas  plastik. Kemudian  25  ekor  larva  instar  III dimasukkan  ke  dalam  masing-masing gelas  tersebut.  Setiap  perlakuan  diulang sebanyak  4  kali.  Pengamatan  dilakukan dengan menghitung jumlah kematian larva setelah 24 jam. Pengujian dilakukan pada suhu kamar.

## Analisis Data
Data yang diperoleh berupa jumlah larva yang  mengalami  kematian,  kemudian dilakukan analisis menggunakan analysis of  varians (ANOVA)  untuk  mengetahui ada tidaknya perbedaaan jumlah kematian  larva Ae.  aegypti pada  seluruh kelompok  uji.  Jika  terdapat  perbedaan yang  signifikan  maka  dilanjutkan dengan uji Post  hoc LSD  untuk  menentukan rerata  perlakuan  yang  berbeda  secara statistik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian uji efektivitas daun lada ( P. nigrum L.) sebagai larvasida nyamuk
Ae. aegypti didapatkan persentase  rerata  kematian  larva  nyamuk Ae.  aegypti instar  III  setelah  24  jam perlakuan  menggunakan  ekstrak  daun lada  ( P.  nigrum L.)  dengan  konsentrasi 0,2%,  0,4%,  0,6%,  0,8%,  dan  1%  seperti yang terlihat pada Gambar 1.
Gambar 1. menunjukkan grafik yang terus meningkat  seiring  dengan  bertambahnya konsentrasi  ekstrak.  Hal  ini  menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun  lada  ( P.  nigrum L.)  maka  semakin banyak  ditemukan  larva  nyamuk  yang mati. Persentase terendah kematian larva ditemukan pada konsentrasi 0,2% ekstrak daun lada yaitu sebesar 31%. Sedangkan persentase tertinggi kematian larva ditemukan  pada  konsentrasi  1%  ekstrak daun lada yaitu sebesar 92%.
Gambar 1. Persentase kematian larva nyamuk Ae. aegypti setelah perlakuan dengan ekstrak daun lada ( P. nigrum L.).
Gambar 2. Larva nyamuk Ae. aegypti dengan perbesaran 40x (a)  larva  kontrol;  (b)  larva  yang  diberi  perlakuan  1% ekstrak  daun  lada.  1:  Kerusakan  pada  permukaan tubuh,  2:  Kerusakan  pada  bagian  dalam  (Sumber  :
Dokumentasi pribadi, 2021). Berdasarkan  pengamatan  yang  dilakukan dengan  menggunakan  mikroskop  pada larva kontrol dan larva yang diberiperlakuan dengan ekstrak daun lada seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  2. Larva  pada  kontrol  (Gambar  2a.),  masih utuh  dan  tidak  cacat  secara  morfologi, serta ketika diamati pergerakannya sangat aktif,  sedangkan  kondisi  larva  yang  diberi perlakuan  (Gambar  2b.),  pergerakannya semakin  melambat  pada  saat  diamati, terlihat bahwa tubuhnya mengalami kerusakan  seperti  iritasi  pada  permukaan tubuh ditunjukkan oleh angka 1 dan terjadi
perubahan  bentuk  akibat  rusaknya  sel seperti yang ditunjuk oleh angka 2.
Data  jumlah  kematian  larva  yang  telah diperoleh  dari  hasil  penelitian  dianalisis dengan one  way ANOVA  untuk  melihat adanya  pengaruh  dari  masing-masing konsentrasi  ekstrak  daun  lada.  Hasil analisis  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  rerata  jumlah  kematian  larva pada  setiap  perlakuan  secara  signifikan berupa nilai p = 0,000 (p < 0,05) sehingga daun lada( P. nigrum L.) memiliki pengaruh
1 2 1 mm a b
terhadap  larva  nyamuk Ae.  aegypti sebagai  larvasida  kemudian  dilanjutkan dengan Post  hoc LSD  ( least  significant difference )  untuk  mengetahui  perbedaan nyata  pada  masing-masing  konsentrasi sehingga akan diperoleh konsentrasi yang efektif  sebagai  larvasida.  Data  dapat dilihat pada Tabel 1.
Hasil  analisis  dengan Post  hoc LSD
didapatkan  perbedaan  yang  signifikan antara masing-masing
kelompok perlakuan,  kecuali  konsentrasi  ekstrak 0,6%  dan  0,8%  tidak  signifikan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  konsentrasi  ekstrak 0,6%  dan  0,8%  memiliki  pengaruh  yang tidak  jauh  berbeda  terhadap  kematian larva  nyamuk Ae.  aegypti .  Perbedaan nyata  paling  signifikan  terdapat  pada konsentrasi ekstrak lada 1%.
Tabel 1. Hasil Analisis Post hoc LSD Konsentrasi Ekstrak N Mortalitas Larva (Rerata ± St. Dev.) 0% (kontrol) 4 0±0,000 (a) 0,2% 4 7,75±2,217 (b) 0,4% 4 12,25±2,500 (c) 0,6% 4 16,75±2,500 (d) 0,8% 4 19,5±2,646 (d) 1% 4 23±1,414 (e)
Keterangan : Angka yang diikuti dengan huruf yang berbeda menunjukkan nilai antar kelompok yang berbeda nyata (α=5%).
Ekstrak  daun  lada  ( P.  nigrum L.)  memiliki aktivitas  sebagai  larvasida  terutama  pada konsentrasi  1%  yang  dapat  mematikan larva dengan persentase kematian tertinggi. Kematian larva diduga disebabkan  oleh  efek  kandungan  dalam ekstrak  daun  lada  yang  mengandung senyawa-senyawa  kimia  seperti  saponin, flavonoid, dan minyak atsiri yang mengandung felandren, dipenten, kariofilen,  dan,  limonen.  Lada  juga mengandung  piperin  yang  termasuk  ke dalam  golongan  alkaloid  (Hikmawanti dkk.,  2016).  Hal  ini  juga  didukung  oleh Fadmi  (2019)  yang  menjelaskan  bahwa ekstrak  biji  lada  memiliki  kemampuan sebagai  larvasida  terhadap  nyamuk Ae. aegypti karena memiliki kandungan senyawa-senyawa tersebut .
Kandungan pada daun lada ( P. nigrum L.). seperti  flavonoid,  saponin,  dan  alkaloid diduga  berpengaruh  terhadap  larva Ae. aegypti sehingga  berpotensi  digunakan sebagai  larvasida . Hal  ini  juga  didukung
oleh penelitian yang sudah dilakukan oleh Marini  dkk.  (2018)  mengenai  potensi ekstrak daun marigold (Tagetes erecta L.) yang  juga  memiliki  kandungan  seperti daun lada diantaranya flavonoid, saponin, dan  alkaloid  sebagai  larvasida  terhadap larva Ae. aegypti sehingga diperoleh hasil semakin  tinggi  ekstrak  daun  marigold maka semakin banyak larva uji yang mati.
Kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  daun lada  ( P.  nigrum L.).  salah  satunya  yaitu flavonoid. Flavonoid dapat bekerja sebagai  penghambat  saluran  pernafasan atau  sebagai  racun  pernafasan.  Senyawa flavonoid akan menyebabkan melambatnya  respon  dan  pergerakan larva sehingga harus diberi sentuhan agar bergerak. Mekanisme kerja flavonoid yaitu masuk  ke  tubuh  larva  nyamuk  melalui sifon  (saluran  pernapasan)  sehingga mengakibatkan terjadinya kerusakan pada system  pernafasan  larva  (Marini  dkk., 2018).
Daun lada ( P. nigrum L.). juga mengandung  senyawa  alkaloid  berupa piperin.  Piperin  merupakan  senyawa utama  pada  lada  yang  bersifat  racun terhadap larva sehingga dapat
menyebabkan kematian.
Terjadinya kematian  larva  berhubungan  dengan fungsi  dari  senyawa  yang  terdapat  pada ekstrak  daun  lada  itu  sendiri.  Kandungan lain  yang  diduga  berperan  sebagai  toksik terhadap  larva  yaitu  saponin,  dan  minyak atsiri yang dapat menyebabkan kerusakan pada  dinding  traktus  digestivus  (Towaha dan Thajana, 2011).
Kandungan  dalam  daun  lada  ( P.  nigrum
L.)  salah  satunya  saponin  diduga  dapat merusak  membrane  sel  dengan  cara mengubah  struktur  sel  sehingga  dapat mengakibatkan  sel  mengalami  kerusakan dan  pecah  (Marini  dkk.,  2018).  Saponin yang  masuk  dalam  tubuh  larva  dapat mengakibatkan rusaknya tractus digestivus atau saluran pencernaan akibat menurunnya tegangan permukaan selaput mukosa  tractus  digestivus.  Hal  ini  akan menyebabkan  rusaknya  tubuh  larva  dan akan memperlambat gerakan larva (Martini dkk., 2018).
Selain  itu,  daun  lada  ( P.  nigrum L.)  juga mengandung  minyak  atsiri  yang  dapat digunakan  sebagai  larvasida  nyamuk Ae. aegypti .  Kandungan  minyak  atsiri  bersifat toksik terhadap larva nyamuk Ae. aegypti . Senyawa  aktif  yang  ada  pada  minyak atsiri  dapat  mengganggu  susunan  saraf pada  larva  sehingga  akan  menghambat pertumbuhan larva dan dapat menghambat  daya  makan  larva,  serta akan berpengaruh terhadap proses metabolisme larva ( Sulistiyani, 2015 ).
Ekstrak  daun  lada  dapat  mempengaruhi larva  secara  fisiologis  dan  biokimia. Kandungan senyawa yang ada pada daun lada dapat menghambat enzim detoksifikasi  sehingga  kerja  enzim  akan terganggu. Senyawa yang ada pada daun lada dapat mempengaruhi organel sel dan terjadi perubahan histologist yaitu terjadinya kerusakan pada sel epitel usus, kerusakan  ringan  pada  otot,  sehingga
dapat dikatakan bahwa kandungan senyawa dalam daun lada berperan dalam aktivitas  larvasida  (Lija-Escaline et  al, 2015).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  diperoleh  kesimpulan  sebagai berikut.
1.  Ekstrak daun lada ( P. nigrum L.) efektif sebagai larvasida nyamuk Ae. aegypti.
2.  Ekstrak  daun  lada  ( P.  nigrum L.)  yang efektif  ditemukan  pada  konsentrasi  1% dengan  persentase  kematian  larva  uji sebesar 92%.

## DAFTAR PUSTAKA
Astriani,  Y.,  &  Widawati,  M.  (2016). Potensi Tanaman di Indonesia
Sebagai Larvasida Alami untuk Aedes aegypti. Jurnal Litbang, 8(2):37- 46. Dinas Kesehatan (Dinkes) Provinsi Lampung (2020). Profil Dinas Kesehatan  Provinsi  Lampung  Tahun
2019 .  Dinas  Kesehatan  Provinsi Lampung. Bandar Lampung.
Fadmi,  F.  R.  (2019).  Analisis  Regresi Pengaruh  Bubuk  Buah  Lada  ( Piper nigrum L.) Sebagai Larvasida Nyamuk Aedes Aegypti. Jurnal
MediLab  Mandala  Waluya, 3(1):63- 70.
Hikmawanti,  N.  P.  E.,  Hariyanti,  C.  A.,  & Viransa,  V.  P.  (2016).  Kandungan Piperin  dalam  Ekstrak  Buah  Lada Hitam  dan  Buah  Lada  Putih  ( Piper nigrum L.)  yang  Diekstraksi  dengan Variasi Konsentrasi Etanol Menggunakan Metode KLT- Densitometri. Media Farmasi , 13(2):173-185.
Indrayani,  Y.  A.,  &  Wahyudi,  T.  (2018). Situasi  Penyakit  Demam  Berdarah  di Indonesia . Info Datin. Jakarta.
Ishak, N. I.,  Kasman., & Chandra. (2020).
Efektifitas  Perasan  Buah  Limau  Kuit ( Citrus amblycarpa ) sebagai Larvasida  Alami  Terhadap  Kematian
Larva Aedes aegypti . Jurnal Kesehatan Masyarakat, 10(1):6-13. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia  (Kemenkes  RI).  (2020). Profil  Kesehatan  Indonesia  tahun 2019 . Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Lija-Escaline, J., Senthil-Nathan, S., Thanigaivel, A., Pradeepa, V., Vasantha-Srinivasan,  P.,  Ponsankar, A.,  &  Abdel-Megeed,  A.  (2015). Physiological  and  biochemical  effects of botanical extract from Piper nigrum Linn ( Piperaceae ) against the dengue vector Aedes  aegypti Liston  (Diptera: Culicidae). Parasitology research , 114(11):4239-4249.
Marini.,  Ni'mah,  T.,  Mahdalena,  V.,
Komariah, R. H., & Sitorus, H. (2018).
Potensi Ekstrak Daun sebagai
Larvasida  Marigold  ( Tagetes  erecta
L.)  terhadap  Larva  di  Laboratorium. Jurnal  Vektor  Penyakit ,  12(2):109- 114.
Martini,  M.,  Astriana,  N.,  Yuliawati,  S., Hestiningsih,  R.,  Mawarni,  A.,  & Purwantisari,  S.  (2018).  Keefektifan ekstrak  daun  kecubung  ( Datura metel L.) dalam menghambat penetasan  dan  siklus  hidup Aedes
aegypti L. Jurnal Entomologi Indonesia , 15(1):50-56. Mutiarawati,  D.  T.,  Indawati,  S.,  & Sasongkowati,  R.  (2017).  Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak ( Annona muricata Linn)  Terhadap  Mortalitas Kutu  Kepala  ( Pediculus  humanus varian capitis ). Analis  Kesehatan Sains , 6(2):507-511.
Rumengan,  A.  P.  (2010).  Uji  Larvasida Nyamuk ( Aedes aegypti ) dari Ascidian ( Didemnummolle ). Jurnal  Perikanan dan Kelautan , 6(2):83-86. Sudarmo,  S.  (1988). Petisida  Tanaman. Kanisius. Yogyakarta.
Sulistiyani,  A.  (2015).  Effectiveness  of Essential  Oil  as  Larvacide  on Aedes aegypti . Jurnal Majority , 4(3):23-28.
Towaha  &  Tjahjana.  Peranan  Senyawa Piperin  Lada. Tanaman  Rempah  dan Industri , 2(10):37-40. Wahyuni,  D.  (2016). Toksisitas  Ekstrak Tanaman  Sebagai  Bahan  Dasar Biopestidsida  Baru  Pembasmi  Larva Nyamuk Aedes aegypti (Ekstrak Daun Sirih,  Ekstrak  Biji  Pepaya,  dan Ekstrak  Biji  Srikaya)  Berdasarkan
Hasil Penelitian. Media Nusa Creative. Malang.