## ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL) DARI YOGHURT DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI
Escherichia coli DAN Salmonella typhi
Suryani M.F Situmeang, Musthari , Selamat Riadi Politeknik Kesehatan Kemenkes RI Jurusan Analis Kesehatan Medan Email : selamat.riadi.ssi.msi@gmail.com

## ABSTRAK
Yoghurt  dikenal  dan disukai sebagian masyarakat karena bila dikonsumsi: 1) dapat memperbaiki proses pencernaan protein dan lemak, 2) merangsang sekresi cairan yang diperlukan untuk proses pencernaan seperti  air  liur,  cairan  lambung,  empedu  dan  pancreas  serta  3)  mengurangi  timbulnya  reaksi  alergi terhadap  laktosa.  Keberadaan  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  pada  yoghurt  sebagai  probiotik  berpotensi dalam  meningkatkan  fungsi  fisiologis  usus,  mikroflora  usus  yang  berperan  dalam  mengoptimalkan kondisi  kesehatan  tubuh.  Keberadaan  bakteri  probiotik  dapat  mencegah  pertumbuhan  bakteri  patogen seperti Escherichia coli dan Salmonella typhi. Bakteri Escherichia coli merupakan penyebab penyakit diare, sedangkan Salmonella typhi merupakan bakteri patogen pada manusia yang menyebabkan penyakit tifus. Tujuan  Penelitian  ini  untuk    mengetahui  kemampuan  bakteri  asam  laktat  yang  diisolasi  dari  yoghurt dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Salmonella typhi. Metode penelitian secara eksperimen, waktu penelitian dilaksanakan pada bulan Juni s/d  September 2017 di laboratorium terpadu Poltekkes Kemenkes RI Jurusan Analis Kesehatan Medan. Jenis data adalah data primer yang diambil dari hasil  uji  Bakteri  Asam  Laktat  terhadap  bakteri  patogen  menentukan  besarnya  zona  hambat  dan  diuji menggunakan  uji  Anova.  Hasil  penelitian  zona  hambat  tertinggi  pada  isolat  bakteri  Sp4  dan  Sp3  yaitu sebesar  1,36  cm  dan  dapat  menekan  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli, sedangkan  zona  hambat terbesar  ditunjukkan  oleh  Isolat  Sp4  yaitu  sebesra  1,26  cm  sehingga  dapat  dinyatakn  dapat  menekan pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi .  Hasil  ketahanan  terhadap  PH  pada  isolat  bakteri  Sp4  dapat tumbuh  sebanyak  45  koloni  pada  PH3,  sedangkan  untuk  variasi  kadar  garam  isolat  bakteri  Sp3  dapat tumbuh sebanyak 88 koloni yang merupakan koloni tertinggi pada konsentrasi garam 0,5 %.
Kata Kunci : Yoghurt, Bakteri Escherichia coli, Salmonella typhi.

## ISOLATION AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF LACTIC ACID BAKTERIA (BAL) FROM YOGHURT
INHIBITION GROWTH of Escherichia coli and Salmonella typhi.

## ABSTRACT
Yoghurt  is  known  and  liked  by  some  people  because  when  consumed:  1)  can  improve  protein digestion process and fat, 2) stimulate secretion of fluid needed for digestion process like saliva, stomach fluid, bile and pancreas and 3) reduce allergic reaction to lactose. The presence of lactic acid bacteria (bal) in yoghurt as a probiotic has the potential to improve the physiological function of the intestine, intestinal microflora  that  play  a  role  in  optimizing  the  health  condition  of  the  body.  The  presence  of  probiotic bacteria  can  prevent  the  growth  of  pathogenic  bacteria  such  as Escherichia  coli and Salmonella  typhi . Bacteria Escherichia coli is a cause of diarrheal diseases, while Salmonella typhi is a pathogenic bacteria in humans  that  cause  typhoid.  The  purpose  of  this  study  to  determine  the  ability  of  lactic  acid  bacteria isolated  from  yoghurt  in  inhibiting  the  growth  of Escherichia  coli and Salmonella  typhi bacteria. Experimental research method, the time of research conducted on june to sunday 2017 at laboratorium poltekkes kemenkes RI Department of Health Analyst Medan. Types of data are primary data taken from lactic  acid  bacteria  test  results  against  pathogen  bacteria  determining  the  size  of  the  inhibit  zone  and tested using anova test. The highest inhibition zone research results on sp4 and sp3 bacteria isolate is 1.36 cm and can suppress Escherichia coli bacteria growth, while the largest inhibition zone is indicated by sp4 isolate is 1.26 cm so it can be stated can suppress the growth of Salmonella typhi bacteria. The results of resistance to ph in bacterial isolate sp4 can grow as many as 45 colonies on ph3. While for the variation of
salt  content  of  bacteria  sp3  can  grow  as  many  as  88  colony  which  is  the  highest  colony  at  salt concentration 0,5%
Keyword :Yoghurt, Escherichia coli Bacteria, Salmonella typhi
Pendahuluan Produk  yoghurt  telah  dikenal has  dan  disukai sebagian  masyarakat  karena  bila  dikonsumsi:  1) dapat memperbaiki proses pencernaan protein dan lemak,  2)  merangsang  sekresi  cairan  yang diperlukan  untuk  proses  pencernaan  seperti  air liur, cairan lambung, empedu dan pancreas serta 3) mengurangi  timbulnya  reaksi  alergi  terhadap laktosa (Roginsky, 1988).
Keberadaan  BAL  pada  yoghurt  yang mengandung Lactobacillusbulgaris
dan
Streptococcus  thermophilus sebagai  probiotik berpotensi  dalam  meningkatkan  fungsi  fisiologis usus,  mikroflora  usus  yang  berperan  dalam mengoptimalkan kondisi kesehatan tubuh (Rahman et  al .,  2012).  Keberadaan  bakteri probiotik  dapat  mencegah  pertumbuhan  bakteri patogen seperti Salmonella sp. dan Escherichia coli (Usmiati  dan  Utami  2008). E.  coli merupakan penyebab  penyakit  diare  (Dwidjoseputro,  2005) sedangkan Salmonella  typhi merupakan  bakteri patogen  pada  manusia  yang  menyebabkan penyakit tifus (Pelczar dan Chan, 2005).
Mikroba  yang  tergolong  bakteri  asam  laktat (BAL)  mempunyai  aktivitas  mikrobial  yang  tinggi karena  produk  yang  dihasilkannya  seperti acidophilin  yang  dihasilkan  oleh Lactobacillus acidophilus dan bulgarican oleh Lactobacillus bulgaricus, juga Bifidobacterium akan menghambat pertumbuhan bakteri patogen baik yang tergolong gram positif atau negatif, diantaranya
Staphylococcus, Salmonella, Shigella dan
Pseudomonas ,  yang  dapat  merusak  permiabilitas membran  sel  dan  akan  berakhir  dengan bocornya/rusaknya dinding sel sehingga berakibat keluarnya hemoglobin dari sel.
Efek  antimikroba  bakteri  asam  laktat  ini disebabkan  oleh  pembentukan  asam  laktat  dan asam  asetat  serta  penurunan  pH  yang  dihasilkan. Selain  itu  bakteri  asam  laktat  juga  menghasilkan senyawa-senyawa penghambat lain seperti hidrogen  peroksida,  diasetil,  karbondioksida, reuterin  dan  bakteriosin  (Vuyst  &  Vandamme, 1994). Bakteri  asam  laktat  dapat  diisolasi  dari berbagai  sumber  antara  lain  dari  susu  hasil fermentasi,  sayuran  yang  telah  busuk  dan  dari saluran  pencernaan  ikan  atau  udang.  Jini et  al., (2011)  berhasil  mengisolasi  bakteri  asam  laktat dari saluran pencernaan ikan air tawar yaitu genus Enterococcus dan Pediococcus .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kedua  genus  bakteri  ini
berpotensi  menghambat  pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella  typhii .  Zona  hambat  yang dihasilkan  oleh Enterococcus dan Pediococcus terhadap E.  coli lebih  tinggi  dibandingkan  dengan zona hambatnya terhadap S. typhii.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan bakteri asam laktat  yang diisolasi dari yoghurt  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Eschericia coli dan Salmonella typhi.

## Bahan dan Metode
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium terpadu  Politeknik  Kesehatan  Kemenkes  RI    Jln Jamin  Ginting  Km  11  Lauchi  Medan,  pada  bulan Juni s/d September 2017.
Bahan  yang  dipakai  pada  penelitian  ini  adalah yoghurt  yang  dijual  di  Supermarket  Kota  Medan. Jenis  data  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah data primer yangdiperoleh dari hasil isolasi bakteri asam laktat dari Yoghurt dan Hasil uji daya hambat  bakteri    asam  laktat  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Salmonella typhi . Metode  pemeriksaan  dilakukan  secara  isolasi bakteri  asam  laktat  menggunakan  media pertumbuhan  dan  reaksi  bio  kimia.  Bakteri  Asam laktat  yang  diuji  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Salmonelle thypi dengan metode Kirby Bauer .
Isolasi Bakteri Asam Laktat Yoghurt Sebanyak  10  ml  sampel  yogurth  dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  steril.  Dilakukan pengenceran  berseri  hingga  10 -5 .  Sebanyak  0,1  ml dari masing-masing tingkat pengenceran diinokulasikan  ke  media  MRSA  dengan  metode cawan sebar. Kultur diinkubasi selama 48 jam pada suhu  ruang  (±  28-30°C).  Isolat  bakteri  yang tumbuh  dengan  variasi  perbedaan  morfologi menyangkut bentuk, warna, tepi dan elevasi koloni selanjutnya dikoleksi. Isolat kemudian ditumbuhkan  kembali  pada  media  yang  sama hingga nanti diperoleh isolat murni.
Karakterisasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Identifikasi bakteri dilakukan berdasarkan ciri- ciri  dan  karakter  morfologis  secara  visual  dan mikroskopis. Identifikasi isolat bakteri berdasarkan  ciri-ciri  awal  tersebut  dicocokkan dengan  buku  identifikasi Bergeys  Manual  of Determinative of Bacteriology . Pengamatan morfologi  secara  visual  dilakukan  dengan mengamati bentuk, tepi, elevasi dan warna koloni.
Pengamatan  morfologi  sel  dilakukan  dengan  cara pengecatan  Gram,  sehingga  dapat  diamati  bentuk, penataan dan penggolongan bakteri.
Uji Biokimia
Pengamatan sifat biokimia mencakup uji sitrat, uji katabolisme gula, uji motilitas, uji gelatin dan uji katalase(Cappuccino & Sherman 1983). Uji Ketahanan Isolat terhadap pH Rendah Pengujian  dilakukan  dengan  menumbuhkan 1%  kultur  berumur  24  jam  ke  dalam  media  MRS broth yang sebelumnya telah dilakukan pengaturan  pH  yaitu  3,0;  2,5  dan  2,0.  Selanjutnya diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37⁰  C.  Pada akhir  inkubasi  dilakukan  perhitungan  jumlah bakteri  dengan  metode total  plate  count pada media MRS agar.
Uji Ketahanan Isolat terhadap Kadar Garam Pengujian dilakukan dengan menginokulasikan 1%  kultur  berumur  24  jam  ke  dalam  5  mL  media MRS  broth  dengan  penambahan  garam  empedu dengan konsentrasi 0,5%; 1,25%; 2,5%; 3,75% dan 5%. Kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 24  jam.  Pada  awal  dan  akhir  inkubasi  dilakukan perhitungan  jumlah  bakteri  dengan  metode totalplate count pada MRS agar.
Uji  Antagonis  Isolat  Bakteri  Asam  Laktat dengan Bakteri Patogen
Pada  uji  antagonis  isolat  bakteri  digunakan media Mueller  Hinton  Agar .  Suspensi  bakteri patogen  dengan  kerapatan  sel  10 8 CFU  dioleskan pada  permukaan  media  uji  dengan  menggunakan cotton  bud steril.  Sebanyak  10  μl  suspensi  bakteri asam laktat diteteskan pada kertas cakram kosong ( oxoid ).  Pengujian  antagonis  isolat  dilakukan dengan  uji  cakram  metode  Kirby-Bauer  (Lay, 1994).  Kertas  cakram  uji  diletakkan  pada  kedua sisi  media  yang  telah  diolesi  bakteri  patogen dengan  jarak  tanam  3,5  cm.  Cawan  uji  diinkubasi pada  suhu  ruang  selama  24  jam.  Aktivitas antagonis bakteri ditunjukkan dengan terbentuknya  zona  hambat.  Pengamatan  dimulai dilakukan  dari  hari  kedua  sampai  hari  kelima setelah  masa  inkubasi.  Zona  hambat  yang terbentuk selanjutnya diukur dan dicatat.
Data  yang  diperoleh  disajikan  dalam  bentuk tabulasi  data  dan  diukur  berdasarkan  lebar  zone hambat.  Data  dianalisis  dengan  rancangan  acak lengkap ANOVA. (Analisa Of Varian)

## Hasil dan Pembahasan.
Dari  hasil  isolasi  diperoleh  4  jenis  isolat bakteri  asam  laktat  kandidat  probiotik  yaitu  sp1., sp2.,  sp3.,  dan  sp4  dengan  karakteristik  seperti pada  tabel  1.  Perbedaan  karakteristik  awal berdasarkan  warna  koloni,  tepi  koloni,  bentuk koloni dan elevasi koloni. Tabel 1. Karakteristik isolat bakteri asam laktat Isolat Warna koloni Bentuk Tepi Elevasi sp1 Krem Circular Entire Flat sp2 Krem Circular Entire Convex sp3 Kuning muda Circular Entire Convex sp4 Putih kekuningan Circular Entire Convex
Pada  tabel  1  di  atas  diketahui  bahwa  isolat bakteri  sp1.  dan  sp2.  memiliki  karakteristik warna  krem.  Sedangkan  isolat  bakteri  sp3. berwarna kuning muda dan sp4. berwarna putih kekuningan.  Isolat  bakteri  sp2,  sp3  dan  sp4 memiliki bentuk circular, tepi entire dan elevasi convex. Karakteristik yang membedakan dengan
isolat  bakteri  sp1  adalah  pada  elevasi  koloni. Elevasi  koloni  bakteri  sp1  yaitu  flat. Karakteristik  makroskopis  digunakan  sebagai tahap  awal  dalam  membedakan  koloni  bakteri. Karakteristik  bakteri  dilanjutkan  dengan  cara pegamatan  mikroskopis  melalui  pewarnaan Gram (Tabel 2). Tabel 2. Hasil pewarnaan Gram isolat bakteri asam laktat Isolat Gram positif Gram negatif Bentuk Penataan sp1  - Basil Mono, diplo, strepto sp2  - Basil Mono, diplo, strepto sp3  - Kokus Mono, diplo, strepto, sp4  - Basil Mono, diplo, strepto
Pada  tabel  2  menunjukkan  bahwa  semua  isolat bakteri  asam  laktat  merupakan  kelompok  gram positif  dengan  variasi  bentuk  isolat  yang  terdiri dari  basil  dan  kokus.  Penataan  sel  yaitu  mono,
diplo,  strepto  dan  staphylo.  Isolat  bakteri  sp1, sp2 dan sp3 memiliki karakteristik mikroskopis yang  sama  yaitu  gram  positif,  bentuk  basil dengan  penataan  mono,  diplo  dan  strepto.
Sedangkan  isolat  bakteri  sp3,  memiliki karakteristik  mikroskopis  yaitu  gram  positif, bentuk kokus dengan penataan mono, diplo dan
strepto.
Perbedaan karakteristik yang ditunjukkan menandakan perbedaan jenis isolat yang diperoleh (Gambar 1).
Gambar 1. Pewarnaan Gram isolat bakteri asam laktat (perbesaran 400 kali)
Pewarnaan  gram  merupakan  teknik pewarnaan  differensial  yang  paling  penting  dan paling  luas  digunakan  untuk  identifikasi  bakteri. Bakteri  yang  diwarnai  dengan  metode  gram  ini dibagi  menjadi  dua  kelompok,  yaitu  bakteri  gram positif  dan  bakteri  gram  negatif.  Bakteri  gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna ungu pada pewarnaan gram. Sedangkan bakteri  gram  positif  adalah  bakteri  yang  akan mempertahankan warna ungu gelap setelah dibilas dengan alkohol (Lay, 1994).
Seluruh  genus  bakteri  asam  laktat diketahui  merupakan  kelompok  bakteri  gram
positif.  Sarkono et  al (2010)  mengisolasi  bakteri asam laktat asal induk abalon dan mendapatkan 10 jenis  isolat  yang  merupakan  bakteri  gram  positif berbentuk basil. Hasil penelitian ini sejalan dengan Sujaya et al (2008) yang mengisolasi bakteri asam laktat  dari  susu  kuda  Sumbawa  dan  mendapatkan 35  isolat.  Keseluruhan  isolat  merupakan  bakteri gram  positif  dengan  variasi  bentuk  basil  panjang dan  basil  pendek.  Identifikasi  lanjutan  yang dilakukan  untuk  memastikan  kelompok  bakteri asam laktat adalah uji biokimia (Tabel 3).
Tabel 3. Uji biokimia isolat bakteri asam laktat
Fermentasi sitrat Fermentasi gula
Motilitas H id ro lis is ge la ti n Enzim katalase sp1 + + + - - sp2 + + + - - sp3 + + + - + sp4 + + + - - Uji biokimia dilakukan untuk
mengetahui  sifat  fisiologis  bakteri.  Berdasarkan uji  biokimia  yang  dilakukan  diketahui  bahwa isolat bakteri sp1, sp2, sp3 dan sp4 positif dalam memfermentasi sitrat, gula dan melakukan jejak pergerakan  bakteri  (motilitas).  Keempat  isolat tidak  menghasilkan  enzim  gelatinase  untuk menghidrolisis  gelatine.  Isolat  bakteri  sp3
diketahui  positif  dalam  uji  katalase,  hal  ini mengindikasikan  bahwa  isolat  sp3  mampu menguraiakan  molekul  hidrogen  peroksida dengan  bantuan  enzim  katalase.  Uji  positif katalase ditandai dengan terbentuknya gelembung  pada  isolat  yang  diujikan  (Gambar 2).
Gambar 2. Uji positif katalase pada isolat bakteri sp3
Bakteri  asam  laktat  diketahui  memiliki kemampuan  hidup  dalam  kondisi  asam.  Pengujian fernentasi  sitrat  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan  isolat  bakteri  dalam  menggunakan sitrat  sebagai  satu  –  satunya  sumber  karbon.  Jika bakteri  mampu  memfermentasikan  sitrat,  maka asam  akan  dihilangkan  dari  media  uji.  Perubahan pH  akan  menyebabkan  perubahan  warna  media dari hijau menjadi biru.

## Kemampuan Antagonis Isolat Bakteri terhadap Escherichia coli
Hasil  uji  antagonis  isolat  bakteri  asam  laktat terhadap  bakteri  patogen  menunjukkan  keempat isolat  memiliki  kemampuan  yang  berbeda-beda dalam  menghambat  pertumbuhan Escherichia coli. Kemampuan  antagonis  isolat  ditandai  dengan adanya  zona  hambat  yang  terbentuk  pada  daerah pertemuan koloni bakteri dengan bakteri patogen. Zona  hambat  yang  terbentuk  berupa  cerukan penipisan elevasi (Gambar 3).
Gambar  3.  Kemampuan  antagonis  isolat  bakteri  sp3  dan  sp4  dalam  menghambat  pertumbuhan Escherichia coli
Zona  hambat  terbentuk  karena  adanya  interaksi antara  isolat  bakteri  asam  laktat  yang  mendesak pertumbuhan Eschericia coli . Bakteri menghasilkan senyawa  bioaktif  yang  dapat  merusak  komponen struktur dinding sel bakteri patogen. Adanya enzim hidrolitik yang  dihasilkan  oleh  isolat  bakteri  asam laktat mampu mendegradasi komponen dinding sel bakteri  patogen.  Kemampuan  antagonis  bakteri asam  laktat  dalam  menghambat  pertumbuhan Eschericia  coli ditandai  dengan  terhambatnya pertumbuhan  bakteri  tersebut  dan  pembentukan zona jernih di sekitar koloni bakteri patogen.
Perbedaan  kemampuan  masing-masing isolat  bakteri  asam  laktat  dalam  menghambat pertumbuhan Escherichia col i mungkin disebabkan
perbedaan  jenis  senyawa  aktif  yang  dihasilkan. Beberapa  hal  yang  mempengaruhi  besar  kecilnya zona  hambat  yang  dibentuk  oleh  isolat  bakteri asam  laktat  terhadap Eschericia  coli antara  lain: interaksi  antara  kemampuan  bakteri  asam  laktat dalam  menghasilkan  senyawa  aktif  atau  enzim hidrolitik,  umur  biakan  bakteri,  jumlah  senyawa aktif  yang  dihasilkan,  komposisi  medium  dan waktu  inkubasi.  Penurunan  zona  hambat  juga dapat  terjadi  karena  isolat  bakteri  sudah  masuk fase  kematian  disebabkan  sumber  nutrisi  pada media terbatas(Dewi 2011).
Zona  hambat  dapat  diamati  pada  hari kedua  setelah  masa  inkubasi.  Besarnya  nilai  zona hambat yang terbentuk dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Nilai zona hambat isolat bakteri asam laktat (cm) terhadap bakteri Eschericia coli Isolat Ulangan Total Rata2 I II III IV V Σ X X sp1 1 0.9 1.1 1 0.8 4.8 0.96 sp2 0.7 0.8 0.8 0.9 0.8 4 0.8 sp3 1 0.9 1.1 1.1 0.9 5 1 sp4 1.2 1.4 1.5 1.4 1.3 6.8 1.36
Zona  hambat  yang  dibentuk  setiap  isolat bakteri  asam  laktat  menunjukkan  hasil  yang berbeda – beda berkisar anatara 0.7 – 1.5 cm. Hasil uji  antagonis  secara in  vitro menunjukkan  bahwa nilai rata – rata zona hambat tertinggi ditunjukkan oleh  isolat  bakteri  sp4  yaitu  sebesar  1.36  cm. Sedangkan  nilai  rata  –  rata  zona hambat  terendah ditunjukkan  oleh  isolat  bakteri  sp2  yaitu  sebesar 0.8 cm.
Hasil  uji  ANOVA  ( Analisis  of  variance ) menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  asam  laktat berbeda  nyata  dalam  menekan  pertumbuhan Escherichia  coli. Hasil  uji  lanjut  DMRT  ( Duncan Multiple  Range  Test) dapat  dilihat  pada  tabel dibawah ini.
Tabel  5.  Hasil  Uji  DMRT  isolat  bakteri  asam  laktat terhadap Escherichia coli Rata²  Perlakuan sp4 1.36 A sp3 1 B sp1 0.96 C sp2 0.8 C Uji  Duncan  isolat  bakteri  asam  laktat  terhadap diameter  zona  hambatbakteri Escherichia
coli untuk  sp4  dan  sp3  menunjukkan  perbedan yang  nyata  ditandai  dengan  huruf yangberbeda. Hal ini berarti isolat bakteri asam laktat sp4 dan sp3  menunjukkan  efek  yang  berbeda  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli .  Sedangkan untuk isolat bakteri sp1 dan sp2 menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang  nyata terhadap  zona  hambat  yang  dihasilkan  ditandai dengan  huruf  yang  sama.  Hal  ini  berarti  isolat bakteri  asam  laktat  sp1  dan  sp2  menunjukkan
efek yang sama dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Kemampuan Antagonis Isolat Bakteri terhadap Salmonella thypi
Isolat bakteri asam laktat juga diujikan terhadap bakteri  patogen Salmonella  thypii. Bakteri Salmonella  thypi juga  merupakan  patogen  yang menyerang  saluran  pencernaan  manusia. Kemampuan  isolat  bakteri  asam  laktat menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella thypi ditandai  dengan  adanya  zona  hambat  yang terbentuk setelah masa inkubasi (Gambar 4).
Gambar 4. Kemampuan antagonis isolat bakteri sp1, sp2, sp3 dan sp4 dalam menghambat pertumbuhan Salmonella thypi
Kemampuan  penghambatan  isolat  bakteri  asam laktat  ditandai  dengan  besaran  zona  hambat
yang  terbentuk.  Zona  hambat  dihitung  setelah hari  kedua  setelah  masa  inkubasi  (Tabel  6).
Tabel 6. Nilai zona hambat isolat bakteri asam laktat (cm) terhadap bakteri Salmonella thypi Isolat Ulangan Total Rata2 I II III IV V Σ X X sp1 0.9 1.1 0.8 1.2 1.0 5.0 1.00 sp2 1.0 1.0 0.8 0.9 1.0 4.7 0.94 sp3 1.2 1.0 1.1 1.3 1.2 5.8 1.16 sp4 1.1 1.3 1.2 1.4 1.3 6.3 1.26
Pada tabel 6. menunjukkan data uji antagonis isolat bakteri asam laktat terhadap Salmonella thypi . Nilai rata – rata zona hambat terbesar ditunjukkan oleh bakteri  asam  laktat  sp4  yaitu  sebesar  1.26  cm. Sedangkan  nilai  zona  hambat  terkecil  ditunjukkan oleh bakteri asam laktat sp2 yaitu sebesar 0.94 cm. Perbedaan  nilai  zona  hambat  yang  terbentuk karena perbedaan jenis isolat.
Hasil  uji  ANOVA  ( Analisis  of  variance ) menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  asam  laktat berbeda  nyata  dalam  menekan  pertumbuhan Salmonella  thypi. Hasil  uji  lanjut  DMRT  ( Duncan Multiple  Range  Test) dapat  dilihat  pada  tabel dibawah ini.
Tabel  7.  Hasil  Uji  DMRT  isolat  bakteri  asam  laktat terhadap Salmonella thypi Rata²  Perlakuan sp1 1.00 B sp2 0.94 B sp3 1.16 A sp4 1.26 A
Uji  Duncan  isolat  bakteri  asam  laktat  terhadap diameter  zona  hambatbakteri Salmonella  thypi untuk  sp4  dan  sp3  tidak  menunjukkan  perbedan yang  nyata  ditandai  dengan  huruf  yang  sama.  Hal ini  berarti  isolat  bakteri  asam  laktat  sp4  dan  sp3 menunjukkan  efek  yang  sama  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Salmonella  thypi .    Jika  kita lihat  perbandingan  efektifitas  zona  hambat  antara isolat  bakteri  sp4  dan  sp2  maka  menunjukkan perbedaan yang nyata ditandai dengan munculnya notasi huruf yang berbeda. Sementara, perbendingan  antara    isolat  bakteri  sp1  dan  sp2 menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang  nyata terhadap  zona  hambat  yang  dihasilkan  ditandai
dengan  huruf  yang  sama.  Hal  ini  berarti  isolat bakteri asam laktat sp1 dan sp2 menunjukkan efek yang  sama  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Salmonella thypi.

## Efektifitas  Penghambatan  Isolat  terhadap Bakteri Patogen
Efektifitas  ditunjukkan  oleh  besaran  zona  hambat yang dihasilkan. Semakin besar zona hambat yang dihasilkan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  isolat bakteri  semakin  efektif  menghambat  bakteri patogen Escherichia coli dan Salmonella thypi .
Perbandingan nilai zona hambat dapat dilihat pada Gambar 5. di bawah ini.
Gambar 5. Diagram batang perbandingan nilai zona hambat yang dihasilkan isolat bakteri asam laktat terhadap Escherichia coli dan Salmonella thypi .
Keseluruhan  isolat  bakteri  asam  laktat  mampu menghambat  kedua  jenis  bakteri  patogen,  dengan besaran  zona  hambat  yang  berbeda  –  beda.  Jika dilihat  dari  perbandingan  histogram  pada  gambar 5,  maka  terlihat  bahwa  bakteri  sp1,  sp2  dan  sp3 lebih  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Salmonella  thypi .  Sementara  bakteri  sp4 lebih  efektif  dalam  menghambat  bakteri  patogen Escherichia coli .

## Ketahanan  Bakteri  Asam  Laktat  terhadap  pH dan Kadar Garam
Kemampuan  isolat  bakteri  asam  laktat  terhadap variasi  pH  dan  kadar  garam  ditandai  dengan jumlah  total  koloni  yang  tumbuh  setelah  masa inkubasi pada media dengan variasi pH dan  kadar garam.  Jumlah  total  koloni  isolat  bakteri  asam laktat  yang  tumbuh  dinyatakan  dengan  metode total plate count (Tabel 6).
Tabel 6. Pertumbuhan total bakteri pada variasi pH dan kadar garam Isolat Jumlah total bakteri (cfu) Variasi pH Variasi kadar garam (%) 3.0 2.5 2.0 0.5% 1.25% 2.5% 3.75% 5% sp1 17 0 0 56 29 0 0 0 sp2 28 17 0 78 56 35 0 0 sp3 33 20 12 88 56 32 0 0 sp4 45 29 0 78 62 35 0 0
Pada  tabel  6  di  atas  diketahui  bahwa  variasi  pH yang  dapat  ditoleransi  oleh  isolat  bakteri  berkisar antara  3.0  –  2.5.  Isolat  bakteri  sp3  masih  dapat hidup pada pH 2.0 dengan jumlah total koloni yang tumbuh  yaitu  12  koloni.  Sedangkan  isolat  bakteri sp1  hanya  mampu  tumbuh  pada  pH  3.0  yaitu sebanyak  17  koloni.  Variasi  pH  menandakan kemampuan isolat bakteri asam laktat hidup dalam kondisi asam.
Sedangkan  variasi  kadar  garam  dilakukan untuk  memastikan  apakah  isolat  bakteri  asam laktat  memang  toleran  terhadap  kehadiran  kadar garam.  Berdasarkan  pengujian  yang  dilakukan, isolat  bakteri  asam  laktat  toleran  terhadap kehadiran  garam  0.5%,  1.25%  an  2.5%.  dapat dilihat dari jumlah total koloni yang tumbuh. Pada konsentrasi 0.5% jumlah koloni tertinggi yaitu sp3 sebanyak  88  koloni  bakteri.  Pada  konsentrasi 1.25%  jumlah  total  koloni  tertinggi  yaitu  sp4 sebanyak 62 koloni bakteri. Pada konsentrasi 2.5% jumlah  total  koloni  tertinggi  yaitu  sp2  dan  sp4 sebanyak 35 koloni bakteri. Keempat isolat bakteri asam laktat tidak mampu tumbuh pada konsentrasi kadar  garam  3.75%  dan  5%.  Hal  ini  dikarenakan terlalu tingginya konsentrasi kadar garam tersebut, sehingga  dapat  menyebabkan  plasmolisi  pada  sel bakteri.

## Kesimpulan
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  diperoleh  4 jenis  isolat  bakteri  asam  laktat  yaitu  sp1,  sp2,  sp3 dan sp4. Seluruh isolat bakteri asam laktat diujikan memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella thypi . Isolat  bakteri  asam  laktat  sp4  merupakan    isolat yang  memiliki  zona  hambat  terbesar  terhadap Escherichia coli dan Salmonella thypi yaitu masing – masing sebesar 1.36 cm dan 1.26 cm. Isolat bakteri asam  laktat  sp2  merupakan    isolat  yang  memiliki
zona hambat terkecil terhadap Escherichia coli dan Salmonella thypi yaitu masing – masing sebesar 0.8 cm dan 0.94 cm. Isolat bakteri asam laktat sp1, sp2 dan  sp3  lebih  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Salmonella  thypi .  Sementara bakteri  sp4  lebih  efektif  dalam  menghambat bakteri patogen Escherichia coli .

## Daftar Pustaka
Besung  INK.  2009.  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak
Kunyit Pada Anak Babi yang Menderita Colibacillosis . UNUD Digita Library . Cappucino JG & Sherman N. 1996. Microbiology: A Laboratory  Manual.  4 th Ed.  Addison- Wesley Publishing Company.
Condon, S. 1987. Responses of Lactic Acid Bacteria to  Oxygen.  FEMS. Microbiol .  Rev.  46:  269- 280.
Dwidjoseputro  D.  2005. Dasar-dasar  Mikrobiologi . Jakarta: Djambatan.
Fardiaz S, Jenie BSL, Solihati A.1997. Isolasi dan Seleksi Bakteri Asam Laktat yang bersifat Antimikroba dari Sauerkraut. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 8(3). Frazier WC  & Westhoff DC. 1988. Food Microbiology  4th ed. Mc Graw Hill Publ. Co. Ltd., New York.
Gildberg,  A.  Mikkelsen,  Sandaker,  E.  and  Ring,  E. 1997.  Probiotic  Effect  of  Lactid  Acid Bacteria  in  The  Feed  on  Growth  and Survival  of  Fry  of  Atlantic  Cod  ( Gadus morhua ) Hydrobiologia. Appl, Microbiology . 352: 279-285.
Ginns  CA,  Benham  ML,  Adams  LM,  Whithear  KG, Bettelheim  KA,  Crabb  BS  &  Browning  GF. 2000 . Colonization o the Respiratory Tract by  a  Virulent  Strain  of  Avian Escherichia
coli Requires  carriage  of  a  Conjugatitive Plasmid. Infection and Immunity . 3(68):16-19. Jawetz  E,  Melnick  J  &  Adelberg  E.  2001. Mikrobiologi Kedokteran. Buku 1. Terjemahan  Bagian  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Jakarta:
Penerbit Salemba Medika.
Jini  R,  Swapna  HC,  Rai  AK,  Vrinda  R,  Halami  PM, Sachindra  NM,  Bhaskar  N.  2011.  Isolation and  Characterization  of  Potential  Lactic Acid  Bacteria  (LAB) from  Freshwater  Fish Processing  Wastes  for  Application  in Fermentative Utilisation of Fish Processing Waste. Brazilian  Journal  of  Microbiology 42: 1516-1525.
Khuzaemah,  S.  2005.  Pengaruh  Aras  Serat  Kasar Ransum  terhadap  Kecernaan  Serat  kasar,
Protein  kasar  dan  Energi  Metabolis  pada Itik  Tegal  Jantan.  Semarang: Skripsi Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro. Kusumawati,  N.  2000.  Peranan  Bakteri  Asam Laktat dalam Menghambat Listeria monocytogenes pada Bahan Pangan. Jurnal teknologi pangan dan gizi . 1(1): 10-15.
Lay  B.  1994. Analisa  Mikroba  di  Laboratorium .  PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta. Ngendaung S. 2001. Study on Bacterion-Producing Lactic  Acid  Bacteria  from  Fermented Foods.  Master  Thesis,  Microbiology, Kasetsart university, Bangkok. Noviana  H.  2004.  Isolasi  dan  Uji  Kepekaan  Isolat
Klinis  ORSA  Dan  Non  ORSA  Terhadap
Vankomisisn  Dan  Antibiotik  Lainnya. J Mikrobiol Indonesia . 9(2): 51-54. Pelczar  JR  &  Chan  ECS.  2008.  Dasar-dasar Mikrobiologi . Jakarta: UI-Press. Rahman DH, Tanziha I, Usmiati S. 2012. Formulasi Produk  Susu  Fermentasi  Kering  dengan Penambahan Bakteri Probiotik Lactobacillus casei dan Bifidobacterium longum Jurnal Gizi dan Pangan 7(1):49-5. Roginsky,  H.,  1988.  Fermented  milk. J.  Dory Industrial Associafion of Auslralia: 163-169. Saleh,  E.  2004.  Teknologi  Pengolahan  Susu  dan Hasil  Ikutan  Ternak.  Program  Studi Produksi Ternak Fakultas Pertanian Universitas  Sumatera  Utara. USU  Digital library.
Salminen,  S.,  Ouwehand,  A.,  Benno,  Y.  &  Lee  Y.K.
1999.  Probiotics:  How  Should  Be  Defined. Trends  in  Food  Science  and  Technology .
Vol.10: 107 – 110.
Usmiati  S,  Utami  T.  2008.  Pengaruh  Bakteri Probiotik terhadap Mutu Sari Kacang Tanah Fermentasi. Jurnal Pascapanen 5(2):27-36. Vuyst,  L.  dan  E.J.  Vandamme.  1994.  Antimicrobial potential  of  lactic  acid  bacteria In: De Vuyst, L. dan  E.J.  Vandamme.  Bacteriocins of  lactic  acid  bacteria:  microbiology, genetic  and  application.  London:  Blackie Academic & Professional.
Widodo,  W.  2002.  Bioteknologi  Fermentasi  Susu.
Pusat Pengembangan Bioteknologi. Universitas Muhammadiyah Malang.