Abdullah et al., Pengaruh Air Kelapa Muda terhadap Pertumbuhan Kalus secara in Vitro Dua Varietas Tanaman Tebu (Saccaharum officinarum L.)

## PENGARUH AIR KELAPA MUDA TERHADAP PERTUMBUHAN KALUS
SECARA IN VITRO DUA VARIETAS TANAMAN TEBU ( Saccaharum officinarum L.)
Effect of Young Coconut Water on Callus Growth in vitro for Two Varieties of Sugarcane  (Saccaharum officinarum L. )
Abdullah Abdullah * , Cindy Lestari, Sudirman Numba
Progran Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Muslim Indonesia, Makassar Jl. Urip Sumohardjo KM. 05; telp. 446940 fax. 440412 Corresponding author: * Abdullah.abdullah@umi.ac.id , aripiimam511@gmail.com , sudirman.numba@umi.ac.id

## ABSTRACT
This work aimed to study the in vitro effect of young coconut water in Murashige and Skoog (MS) media on  callus  growth  of  two  varieties  of  sugarcane  (Saccaharum  officinarum  L.).  This  research  was conducted at the Tissue Culture Laboratory of the research and development unit of PTPN XIV Camming Sugar  Factory,  Bone  Regency,  and  using  a  Completely  Randomized  Design  (CRD).  The  treatment consisted of young coconut water concentrations of 0%, 10%, 20%, and 30%, as well as two varieties of sugarcane, namely PSBM 901 and Kidang Kencana. Data were analyzed statistically by F-test and BNJ α 0.5%.  The  results  showed  that  the  growth  of  callus  from  sugarcane  explants  of  the  Kidang  Kencana variety  was  better  than  that  of  the  PSBM  901  variety  in  the  basic  culture  medium  of  Murashige Skoog(MS)  with  the  addition  of  various  concentrations  of  coconut  water.  The  addition  of  30%  young coconut  water into the basic medium of tissue culture of Murashige Skoog (MS) can increase the callus growth of sugarcane explants of PSBM 901 and Kidang Kencana varieties.
Keywork: callus; sugar cane; young coconut water;  In Vitro; Murashige and Skoog (MS)

## PENDAHULUAN
Tanaman  tebu  ( Saccharum  officinarum
L.)  merupakan  salah  satu  jenis  tanaman perkebunan penting  penghasil nira untuk bahan baku  gula  putih(Hapsoro,  2019).  Menurut  data FAO  (2022),  Indonesia  penghasil  gula  terbesar ke-9  dunia  dengan  produksi  rata-rata  28,9  juta ton/tahun.  Namun  demikian,  produksi  gula dalam  negeri  belum  dapat  mengimbangi peningkatan  konsumsi  gula  masyarakat  dan industri.  Penyebab  produksi  gula  tidak optimum adalah adanya permasalahan manajemen  pengelolaan  pertanaman  tebu, terutama  penyediaan  bibit  tebu  unggul  dan bermutu  baik,  yang  belum  tertangani  secara baik.    Selama  ini  pada  tingkat  petani penggunaan  dan  ketersediaan  bibit  bermutu masih  terbatas  (Ardiyansyah  &  Purwono, 2015), sehingga petani menggunakan bibit yang tidak jelas kualitasnya.
Pengadaan  sumber  bibit  tebu  berkualitas dengan  skala  besar    sangat  diperlukan  dalam pengelolaan pertanaman tebu.  Teknologi terapan
yang  telah  banyak  dilaporkan  dan  terbukti memberikan  keberhasilan dalam penyediaan bibit berkualitas  adalah  melalui  teknik  kultur  jaringan (Bacchetta et al., 2008; Damiano et al., 2005; Garrison  et al., 2013;  Durroh & Winarti, 2020). Teknologi  propagasi  ini  dapat  menjadi  solusi dalam  permasalahan  penyediaan  bibit  tanaman tebu  berkualitas  (Minarsih  dkk.,  2013).  Namun demikian, penerapan teknologi ini dapat berbeda untuk setiap jenis tanaman, sehingga masih perlu diujikan pada tanaman tebu.
Aspek penting dalam perbanyakan tanaman secara kultur jaringan adalah kemampuan sumber eksplan  untuk  berkem-bang  menjadi  kalus maupun  planlet  baru.      Kalus  merupakan sekumpulan  sel  aktif  dan  tidak  terorganisir  yang berkembang  dari  jaringan  tanaman  atau  eksplan (Ali,  2007)  dan  selanjutnya  setiap  sel  dari  kalus dapat dikembangkan menjadi planlet.
Pembentukan kalus dapat terinduksi dari berbagai bagian  tanaman,  seperti  akar,  batang  dan  daun, serta  bagian  lain  tanaman.    Kalus  yang  telah
Abdullah et al., Pengaruh Air Kelapa Muda terhadap Pertumbuhan Kalus secara in Vitro Dua Varietas Tanaman Tebu (Saccaharum officinarum L.)
terbentuk  dapat  diregenerasikan  menjadi  planlet dan selanjutnya menjadi bibit tanaman siap tanam di lapang.    Menurut Suhesti, dkk (2015) teknik induksi  kalus  digunakan  untuk  menghasilkan kalus  dari  sumber  eksplan  yang  diisolasi  dan ditumbuhkan  dalam  lingkungan  terkendali  serta media  kultur  yang  sesuai.    Jenis  media  dasar dan  penambahan  pengatur  pertumbuhan  akan berpengaruh  terhadap  keberhasilan  daya regenerasi  kalus  secara  kultur  jaringan (Prando,  et  al.2014;  Klimek-Chodacka,  et  al. 2020). Selain itu, adanya suplemen organik(seperti  ekstrak  tanaman)  dan    faktor genetik  eksplan  tanaman  (Munggarani,  2018; Arsam dkk., 2022).
Penambahan  senyawa  organik  air  kelapa ke dalam media kultur telah digunakan secara luas  sebagai  komponen  pelengkap  pengatur pertumbuhan bersama sitokinin dalam mendukung pembelahan sel atau pertumbuhan kalus secara  cepat (Arditti, 2008; Yong et al., 2009).  Beberapa  penelitian  telah  dilakukan dan  menunjukkan  keberhasilan  yang  berbeda. Prisillah  (2017)  pada  tanaman  indarung menambahkan air kelapa 15% ke dalan media kultur  dan  dapat  menginduksi  kalus  lebih cepat  dengan  tekstur  kalus  remah  serta  berat segar  kalus  lebih  tinggi.  Prando,  et  al.  (2014) menggu-nakan air kelapa 20% untuk mendukung  proliferasi  sel  dan  tunas  tanaman kacang  hasel  secara in  vitro .  Hanafi  (2022) pembe-rian 10% air kelapa mampu membentuk kalus dengan berat basah tertinggi,  tekstur  kompak  dengan  warna  hijau kekuningan  dari  tanaman  porang.  Secara umum,  konsentrasi  penggunaan  air  kelapa dalam  kultur  jaringan  tanaman  antara  2  – 30%(v/v)  (Liya  Ge,  et  al.,  2005;  Ang  dan Yong, 2005).
Air  kelapa  potensial  digunakan  sebagai suplemen organik dalam induksi dan regenerasi  kalus  tebu  secara  in  vitro  (Darlina dkk., 2016; Kasi dkk. 2021).   Dalam  air  kelapa mengandung  kadar  sitokinin  tinggi  dari:  tipe Z-cytokinin    (trans-zeatin  riboside,  trans-
zeatin  O-glucoside,  dihydrozeatin-O-gluco- side,  trans-zeatin,  dihydrozeatin,  trans-zeatin riboside-5’-mono-phosphate), iP-type cytokinin  (N6-  isopentenyladenine),  kinetin, kinetin  riboside  and  ortho-topolin,  serta tambahan  gula,  vitamins,  minerals  dan  asam amino(Aguilar  et  al.,  2009;    Yong  et  al., 2009).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  pengaruh  penambahan  air  kelapa muda  sebagai  suplemen  dalam  media  kultur Murashige dan Skoog (MS) terhadap pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus  dari dua  varietas  tanaman  tebu  ( Saccaharum officinarum L.),  yakni    varietas  PSBM  901 dan Kidang Kencana.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  eksperimental  dilakukan  di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Riset  dan Pengembangan,  PTPN  XIV  Pabrik  Gula Camming, Kabupaten Bone, Sulawesi-selatan. Bahan  eksplan  yang  digunakan  berasal  dari dua  varietas  tebu,  yakni      varietas  PSBM  901 dan  varietas  Kidang  Kencana  (KK).    Bagian tanaman tebu yang dijadikan sumber eksplan adalah pucuk  tanaman  dan  disterilisasi  menggunakan sabun  cuci,  bayclin,  alcohol  75%  dan bethadin.
Media  dasar  untuk  induksi  kalus menggunakan formulasi media Murashige dan Skoog  (MS)  dengan  penambahan    suplemen hormon tumbuh 2,4-D (10 ppm) dan BAP (1,5 ppm),  gula  pasir  (30  g/l),  bahan  pemadat (agar-agar)  7  g/l,  serta  air  kelapa  sebagai perlakuan.  Suplemen  air  kelapa  dibuat  dalam  4 taraf konsentrasi, yaitu: 0%, 10%, 20% dan 30 %. Volume  media  dalam  setiap  botol  kultur sebanyak  25  ml  dan  ditanam  1  eksplan  setiap botol  kultur.  Masing-masing  satuan  perlakuan terdiri  dari  3  botol  kultur  dan  diulang  5  kali. Rancangan  lingkungan  yang  digunakan    adalah rancangan acak lengkap (RAL) dan analisis data pengamatan  secara  statistik  analisis  peragam (anova)  dan  uji  BNJ(α  1%  dan  5%).  Parameter pengamatan:  waktu  terbentuk  kalus  (hst),  bobot
kalus(g)  =  berat  akhir  kalus  –  berat  awal  kalus, struktur  kalus  secara  deskriptif  (Tabel  1),  dan warna  kalus  secara  deskriptif  (skoring  warna)
(Tabel 2).
Tabel 1. Deskripsi Struktur Kalus Deskripsi Keterangan Remah Tekstur  lunak,  tersusun  dari  sel-sel  renggang,  mudah  dipisah  dan  mengandung  sedikit air.
Kompak Tekstur  keras  dan  padat,  tersusun  dari  sel-sel  kecil  yang  rapat,  susah  dipisah  dan mengandung banyak air.
Sumber: Sugiarto dan Paramita (2014); Wulandari dkk., (2021).
Tabel 2. Deskripsi dan skoring  warna kalus Skor Deskripsi Keterangan 5 Putih/Bening p/ph 4 Putih kekuningan p/k 3 Kuning kecoklatan k/c 2 Coklat kehitaman c/h 1 dan 0 Hitam atau mati h/m
Sumber: Kadir (2006); Wulandari dkk., (2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Waktu Terbentuk kalus (hst)
Rata-rata  waktu  terbentuknya  kalus dalam berbagai konsentrasi air kelapa berbeda antara  varietas  tebu  PSBM  901  dan  Kidang Kencana  (KK).    Waktu  pembentukan  kalus lebih  cepat  pada  varietas  Kidang  Kencana dibandingkan  varietas  PSBM  901  dari  semua taraf konsentrasi air kelapa yang dicobakan. Hasil penelitian  ini  mengindikasikan  bahwa  proses
pembentukan  kalus  sangat  dipengaruhi  oleh genotipe  tanaman  dan  dikuatkan  penelitian Gandonou (2005). Selanjutnya, penambahan air kelapa  muda  30%  dapat  mempercepat  waktu terbentuknya  kalus  pada  kedua  varietas  tebu yang  dicobakan  (Tabel  3).  Dalam  penelitian ini  terlihat  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi air  kelapa  yang  ditambahkan,  maka    semakin cepat  pula  terbentuknya  kalus  eksplan  tebu.
Tabel  3.  Rata-Rata  waktu  terbentuk  kalus    eksplan  var.  tebu  Kidang  Kencana  dan  PSBM  901  pada berbagai    konsentrasi air kelapa muda dalam media kultur MS (hst)
Varietas Air Kelapa Muda (%) Rerata 0 10 20 30 PSBM  8,60 7,70 6,80 6,30 7,30 KK 8,40 7,20 6,30 5,20 6,82 Rerata  8,50 7,45 6,55 5,75
Ket.: Angka diikuti huruf  berbeda pada baris (a,  b) dan kolom (x, y), berbeda nyata taraf uji BNJ 5%.
Air  kelapa  muda  potensial  mempercepat pembentukan  kalus  eksplan  tebu,  karena  kaya akan  kandungan  senyawa  organik  dan  zat pengatur  pertumbuhan,  seperti  kadar  sitokinin tinggi  dari:  tipe  Z-cytokinin  (trans-zeatin riboside,  trans-zeatin  O-glucoside,  dihydro- zeatin  O-glucoside,  trans-zeatin,  dihydro- zeatin,  trans-zeatin  riboside-5’-monophos-
phate),  iP-type  cytokinin  (N6-  isopentenyl- adenine),  kinetin,  kinetin  riboside  and  ortho- topolin,  selain  itu  juga  mengandung  senyawa yang memiliki sifat auksin (difenil urea),serta tambahan  gula,  vitamins,  minerals  dan  asam amino  (Aguilar  et  al.,  2009;  Yong  et  al., 2009).    Senyawa-senyawa  ini  penting  dalam metabolisme sel, sehingga proses pembelahan
Abdullah et al., Pengaruh Air Kelapa Muda terhadap Pertumbuhan Kalus secara in Vitro Dua Varietas Tanaman Tebu (Saccaharum officinarum L.)
dan  perkembangan  sel  jaringan  tanaman berlangsung  lebih  cepat  (Chugh  et  al.  2009), sebagai awal pembentukan kalus.
Selain  itu,  adanya  auksin  dalam  air kelapa  dapat  menyebabkan  meningkatnya permeabilitas  sel  dan  ion  K + sehingga  terjadi meningkatkan  tekanan  osmotic  sel  sehingga air  dari  luar  sel  masuk  dan  menyebabkan  sel mengembang,  serta  meningkatkan  matabo- lisme  RNA  dan  pembentukan  protein  sebagai bahan  dasar  pembentukan  sel  baru  (Abidin, 1989). Namun demikian, respon tanaman tebu terhadap  proses  munculnya  kalus  berbeda berdasarkan varietas tanaman tebu.

## Pertambahan Bobot Basah Kalus (g)
Pertambahan  bobot  basah  kalus  pada
berbagai konsentrasi air kelapa yang ditambahkan ke dalam media dasar kultur MS berbeda  antara  verietas  tebu  PSBM  901  dan Kidang  Kencana  (KK).    Bobot  basah  kalus lebih  tinggi  pada  varietas  Kidang  Kencana dibandingkan  dengan  varietas  PSBM  901  pada semua  taraf  konsentrasi  air  kelapa  yang dicobakan.  Selanjutnya,   penambahan suplemen air kelapa muda 30% dapat meningkatkan bobot basah  kalus pada  kedua  verietas yang dicobakan (Tabel  4).  Dalam  penelitian  ini  juga menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  air  kelapa  yang  ditambahkan, maka    semakin  tinggi  pula  bobot  kalus eksplan tebu.
Table 4.  Rata-Rata bobot basah kalus  eksplan var. tebu Kidang Kencana dan PSBM 901 pada berbagai konsentrasi air kelapa muda dalam media kultur MS (g)
Varietas Konsentrasi Air Kelapa Muda (%) Rerata 0 10 20 30 PSBM  0,430 0,434 0,436 0,440 0,435 KK 0,468 0,470 0,488 0,490 0,479 Rerata 0,452 0,455 0,461 0,460
Ket.: Angka diikuti huruf  berbeda pada baris (a,  b) dan kolom (x, y), berbeda nyata taraf uji BNJ 5%.
Dalam  air  kelapa  terkandung  senyawa sukrosa  yang  dapat  menjadi  sumber  energi dan  sumber  karbon  bagi  sel-sel  untuk  dapat tumbuh dan berkembang. Selain itu, mengandung  beberapa  senyawa  organic, seperti:  asam  amino,  asam-asam  organic, asam  nukleik,  vitamin,  karbohidrat,  zat pengatur tumbuh zeatin, auksin (1,3- Difenilurea) serta ion K + dan H + (Liya Ge et al., 2005;  Yong  et  al.,  2009).    Senyawa-senyawa ini  penting  dan  dibutuhkan  dalam  proses metabolisme perkembangan sel tanaman.
Secara  empirik  hasil  penelitian  ini
menunjukkan bahwa semakin tinggi
konsentrasi  air  kelapa  yang  ditambahkan  ke dalam  media  kultur  MS,  maka  pertumbuhan kalus tebu juga semakin meningkat. Kandungan  air  kelapa  kaya  akan  sumber energi  (karbohidrat/sukrosa)  dan  asam-asam amino,  serta  ion  K + yang  dapat  dimanfaatkan
dalam  proses  metabolisme  pertumbuhan  dan perkembangan  sel-sel  dalam  kalus.    Sukrosa atau  gula  dalam  air  kelapa  dapat  berfungsi sebagai  penyedia  energi  dan  sumber  karbon serta mengatur tekanan osmotic sel (Salisbury dan Ross,1995), demikian halnya ion K + dapat mengatur  tekanan  osmotik  sel.    Rahayu,  dkk (2003)  menyatakan  bahwa  kandungan  air yang  tinggi  dalam  sel  menyebabkan  berat basah  kalus  semakin  tinggi.    Selain  itu, asam-asam  amino  dalam  air  kelapa  dapat mendukung membentukan protein sel.

## Struktur  Kalus
Struktur kalus sebagai indikator pertumbuhan kalus dibedakan dalam dua tipe, yaitu  kalus  friable  (remah)  dan  kalus  non- friable  (kompak).  Struktur  kalus  remah memiliki  ruang  antar  sel  lebih  besar  dan ikatan  antar  sel  renggang,  sehingga  kalus mudah  pecah  dan    dipisahkan.    Sedangkan
sturuktur  kalus  kompak  memiliki  ruang  antar sel lebih kecil atau sempit dan ikatan antar sel
lebih  padat  dan  tidak  mudah  terpisah (Wahyuni, dkk. 2020).
Tabel  5.  Struktur  kalus  var.  tebu  Kidang  Kencana  dan  PSBM  901  pada  berbagai  konsentrasi  air  kelapa muda dalam media kultur MS Varietas Konsentrasi Air Kelapa Muda (%) 0 10 20 30 PSBM  Kompak   Remah  Remah Remah KK Remah  Remah  Remah Remah
Struktur  kalus  varietas  tebu  PSBM 901  dan  Kidang  Kencana    (KK)  yang dihasilkan  dalam  penelitian  ini  menunjukkan struktur  kalus  yang  remah  pada  semua konsentrasi  air  kelapa  yang  dicobakan(Tabel 5).  Sugiarto  dan  Paramita  (2014)  mengemu- kakan  bahwa  ciri  kalus  remah  yaitu  tekstur lunak, mudah dipisah dan mengandung sedikit air. Kalus berstruktur remah(friable) menunjukkan  kalus  yang  bersifat  embrio- genik,  yakni  kalus  yang  dapat  dipisahkan menjadi  fraksi-fraksi  sel  tunggal  embrionik (Lizawati,  2012)  dan  selanjutnya  dapat digunakan  untuk  mem-bentuk  embrioso- matik.    Kalus  embriogenik  dicirikan  dengan warna  kalus  putih  kekuningan  dan  mengkilat (Peterson  dan  Smith,1991).  Kalus  embrio somatik    dapat  diregenerasikan  membentuk bibit somatik dalam jumlah besar dengan sifat genetik sama dengan induknya(Purnamaningsih, 2012).

## Warna Kalus
Warna kalus tebu dapat dipengaruhi oleh konsentrasi  air  kelapa  yang  ditambahkan
dalam media kultur dan pengaruhnya berbeda antara  varietas  tebu  PSBM  901  dan  Kidang Kencana (KK). Penambahan  air  kelapa konsentrasi  30%  dapat    meningkatkan  kualitas kalus yang lebih viabel dengan visualisasi warna kuning  kecoklatan  atau  nilai  skoring 3,37  terjadi pada varietas Kidang Kencana.   Namun, pada varietas PSBM kualitas kalus yang dihasilkan lebih  rendah  dengan  visualisasi  warna  coklat kehitaman  atau  nilai  scoring  2,40.    Dalam penelitian  ini  juga  menunjukkan    bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  air  kelapa  yang ditambahkan,  maka    semakin  baik  pula kualitas  kalus  yang  dihasilkan.  Secara visualisasi  perubahan  warna  kalus  semakin putih  kekuningan  atau  kalus  semakin  viabel (Tabel  6).  Tsuro  (1998)  kalus  berwarna  putih kekuningan menandakan bahwa kalus memiliki  pertumbuhan  dan  daya  hidup  yang baik.  Warna  kalus  tebu  yang  lebih  cerah kekuningan  dapat  mengindikasikan  daya hidup  kalus  lebih  baik  (Fatmawati,2008; Mahadi et al. ,2014)).
Tabel 6. Nilai skoring warna kalus var. tebu Kidang Kencana dan PSBM 901 pada berbagai konsentrasi air kelapa muda dalam media kultur MS
Varietas Air Kelapa Muda (%) Rerata 0 10 20 30 PSBM   1,70 2,20 2,50 3,20 2,40 KK 2,50 3,20 3,30 4,50 3,38 Rerata  2,10 2,70 2,90 3,85
Ket.: Angka diikuti huruf  berbeda pada baris (a,  b) dan kolom (x, y), berbeda nyata taraf uji BNJ 5%.
Perubahan  warna  pada  kalus  dapat menunjukkan tingkat pertumbuhan dan perkembangan  dari  kalus  yang  dikembang- kan.  Perubahan  warna  ini  sangat  dipengaruhi oleh  media  kultur  dan  kondisi  fisiologis jaringan  eksplan  yang  digunakan.    Menurut
Fatmawati  (2008),  perubahan  warna  kalus  ke arah  kehijauan  menunjukkan  kandungan klorofil  dalam  jaringan  masih  banyak. Semakin  tua  umur  kalus,  kandungan  klorfil akan  mengalami  degradasi  secara  perlahan dan pada akhirnya kalus akan mati. Perubahan warna  kalus  menunjukkan  tingkat  kualitas pertumbuhan  kalus,  adanya  pigmen  hijau dan/atau    kuning  menunjukkan  kualitas pertumbuhan kalus baik (Mahadi et al., 2014). Menurut  Prabakti  et  al.  (2017),  kalus embriogenik  akan  menampilkan  warna  putih, kuning muda yang mengarah kepada perkembangan  embrio  somatik.  Sedangkan warna kecoklatan pada kalus dapat diakibatkan oleh peningkatan senyawa fenolat dalam  jaringan  atau  kalus  akibat  terjadinya metabolisme  oksidatif  dari  enzim  oksidase. Senyawa  fenolat  yang  berlebihan    bersifat toksik  dan  dapat  menghambat  pertumbuhan serta mengakibatkan kematian  kalus  (Tabiyah et al., 2006).

## KESIMPULAN
Kemampuan  eksplan  tebu  varietas
Kindang  Kencana  membentuk  kalus  dalam media  dasar  kultur  Murashige  Skoog  (MS) dengan  penambahan  berbagai  konsentrasi  air kelapa  lebih  baik  dibandingkan  dengan varietas  tebu  PSBM  901.  Penambahan  air kelapa  muda  30%    ke  dalam  media  dasar kultur Murashige Skoog (MS) dapat meningkatkan  kemampuan  eksplan  tanaman tebu  membentuk  kalus  dengan  kualitas  kalus lebih viabel.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada kepala
Laboratorium  Kultur  Jaringan  Riset  dan Pengembangan,  PTPN  XIV  Pabrik  Gula Camming,  Kabupaten  Bone,  Sulawesi-selatan atas  fasilitas  laboratorium  kultur  jaringan untuk kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  G.  2007.  Callus  Induction  and  in  vitro
Complete Plant Regeneration of
Different Cultivars of Tobacco ( Nicotiana  tabaccum L.)  on  media  of Different Hormonal Concentration. Biotechnology . 6: 561-566. Ang,S.L.P. and J.W.H. Yong.2005. Plant Cell Tissue. Org.Cult.80:221. Ardiyansyah, B., & Purwono. 2015. Mempelajari Pertumbuhan dan Produktivitas Tebu ( Saccharum Officinarum .  L)  dengan  Masa  Tanam
Sama  pada  Tipologi  Lahan  Berbeda. Bul. Agrohorti. 3 (3), 357–365.
Arditti,  J.,  2008.  Micropropagation  of Orchids,  vol.  II.,  second  ed.  Blackwell Publishing, Oxford, UK.
Arsyam,  A.,  Abdullah,  Netty  S.  Said.  2020.
Daya  regenerasi  kalus  eksplan  embrio kedelai  ( Glycine max L) pada Berbagai Konsentrasi  Hormon  Tumbuh  2,4-D dan  BAP  secara In  Vitro .  Jurnal AgrotekMas.
Bacchetta,  L.,  Aramini,  M.,  Bernardini,  C., Rugini,  E.,  2008.  In  vitro  propagation of  traditional  Italian  hazelnut  cultivars as  a  tool  for  the  valorization  and conservation of local genetic  resources.
HortScience 43, 562–566.
Damiano,  C.,  Catenaro,  E.,  Giovinazzi,  J., Frattarelli,  A.,  Caboni,  E.,  2005. Micropropagation  of  hazelnut  (Corylus avellana). Acta Hortic. 686, 221–226.
Darlina,  Hasanuddin,  &  Rahmatan,  H.  2016.
Pengaruh  Penyiraman  Air  Kelapa ( Cocos nucifera L.) Terhadap Pertumbuhan  Vegetatif  Lada  ( Piper ningrum L.). Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa Pendidikan Biologi . 1(1), 20–28.
Durroh, B., & Winarti, Y. 2020. Pemanfaatan Air Kelapa dan Aplikasi Pupuk Organik untuk  Merangsang  Pertumbuhan  Bibit Tebu  G3  Hasil  Kultur  Jaringan. Agro Bali: Agricultural Journal . 3 (1), 21–27.
[FAO]  Food  and  Agriculture  Organization. 2020. Sugar Cane Production. Food and Agriculture
Organization[Online]. http://www.fao.org/faostat/en/#se arch/Potatoes. [15 Desember 2022].
Gandonou, C., Errabii, T., Abrini, J., Idaomar, M., Chibi, F., & Skali Senhaji, N. 2005. Effect  of  genotype  on  callus  induction and  plant  regeneration  from  leaf explants  of  sugarcane  ( Saccharum sp.).
Abdullah et al., Pengaruh Air Kelapa Muda terhadap Pertumbuhan Kalus secara in Vitro Dua Varietas Tanaman Tebu (Saccaharum officinarum L.)
African  Journal  of  Biotechnology , 4(11), 1250–1255.
Garrison,  W.,  Dale,  A.,  Saxena,  P.K.,  2013. Improved  shoot  multiplication  and development  in  hybrid  hazelnut  nodal cultures  by  ethylenediamine  di-2- hydroxy-phenylacetic acid (Fe- EDDHA).  Can.  J.  Plant  Sci.  93  (3), 511–521 Hapsoro, Dwi. 2019. Kultur In Vitro Tanaman Tebu dan Manfaatnya untuk Mutagenesis  dengan  Sinar  Gamma. Fakultas Pertanian Universitas Lampung: Aura Publishing. Hanafi,  M.  2022.  Pengaruh  Pemberian Beberapa  Konsentrasi  Air  Kelapa terhadap Induksi Kalus Porang (Amorphophallus muelleri Blume) SECARA  IN  VITRO.  Skripsi  [tidak dipublikasikan]. Jurusan Biologi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Andalas Padang. Yong    J.W.H.,    Liya  Ge,  Yan  Fei  Ng  and Swee  Ngin  Tan.  2009.    The  Chemical Composition  and  Biological  Properties of  Coconut  ( Cocos  nucifera L.)  Water. Molecules 2009, 14, 5144-5164; doi:10.3390/molecules14125144 Kadir,  A.  2006.  Induksi  dan  Perbanyakan Populasi  Kalus,  Regenerasi  Tanaman serta  Uji  Respon  Kalus  terhadap Konsentrasi  PEG  dan  Dosis  Iradiasi Sinar  Gamma.  Makassar.  Fakultas Pertanian Universitas Islam Makassar. Kartika,  Yuni  dan  Eka  Adi  Supriyanto.  2019. Pengaruh  Macam  Varietas  dan  Zat Pengatur  Tumbuh  Alami  Terhadap Pertumbuhan  Kalus  Tebu  ( Saccharum officinarum L.)  Secara In  Vitro . Jurnal Ilmiah Pertanain . Vol. 15 No. 2. Klimek-Chodacka, M., D. Kadluczka, A. Lukasiewicz, A. Malec-Pala, R. Baranski,  and  E. Grzebelus.  2020. Effective  callus  induction  and plant regeneration  in callus  and protoplast cultures of Nigella damascena  L.  Plant
Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC) (2020) 143:693–707 https://doi.org/10.1007/s11240-020- 01953-9
Liya  Ge  ,  Jean  Wan  Hong  Yong  ,  Ngoh Khang Goh, Lian Sai Chia , Swee Ngin Tan  ,  Eng  Shi  Ong.2005.  Identification of  kinetin  and  kinetin  riboside  in coconut  ( Cocos  nucifera L.)  water using  a  combined  approach  of  liquid chromatography-tandem mass spectrometry,  high-performance  liquid chromatography, and capillary electrophoresis. Journal of Chromatography B.829: 26-34. Lizawati.  (2012).  Induksi  Kalus  Embrionik Dari  Eksplan  Tunas  Apikal  Tanaman
Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.) Dengan  penggunaan  2,4  D  dan  Tdz. Jurnal  Natural  Science.Vol  1:No.  2 April-Juni 2012.
Mahadi,  I.,  Wulandari,  S.,  &  Omar,  A.
(2014).Pengaruh  Naftalen  Acetyl  Acid (NAA)  dan  BenzylAmino  Purin  (BAP) Terhadap  Pertumbuhan  KalusTanaman Rosella  ( Hibiscus  sabdriffa ).  Jurnal Biogenesis. 11(1): 1 – 7 Mentari,  Eka  Ria.  2016.  Kultur  Kalus  Tebu pada  Berbagai  Konsentrasi  2,4-D. Jurnal  Tanaman  Perkebunan .  Vol.1 No.3. Minarsih,  H.,  I.  Riyadi,  Sumaryono,  A.
Budiani.  2013.  Mikropropagasi  Tebu ( Saccharum officinarum L) Menggunakan Sistem Perendaman Sesaat. Jurnal  Menara  Perkebunan .  81
(1): 1-8.
Munggarani, M., E. Suminar, A. Nuraini, dan
S.  Mubarok.  2018.  Multiplikasi  Tunas Meriklon  Kentang  Pada  Berbagai  Jenis dan Konsentrasi Sitokinin. J. Agrologia . 7(2): 80-89. M.A. S. Prando, P. Chiavazza, A. Faggio, and C.  Contessa.  2014.    Effect  of  coconut water and growth regulator supplements  on  in  vitro  propagation  of Corylus avellana L. Scientia Horticulturae 171 (2014) 91–94. Prisilla, Y. 2017. Pengaruh Pemberian Beberapa  Konsentrasi  Air  Kelapa Terhadap Induksi Kalus Pohon Indarung ( Trema orientalis (L.) Blume)
pada  Media  Murashige  dan  Skoog Secara In Vitro. Thesis (tidak dipublikasikan), Padang:  Universitas Andalas.
Suhesti.  S.,  Nurul.  K.,  Muhamad.  S.,  Ali.  H.,
Endang.  H.,  RR.  Sri.  H.  2015.  Induksi Kalus  dan  Regenerasi  Dua  Varietas Tebu ( Saccharum Officinarum L.).Secara In  Vitro . Jurnal  Littri .  Vol. 21 No.2.
Tsuro,  M.  (1998).  Comparative  Effect  of DifferentTypes  of  Cytokinin  for  Shoot Formation  and  PlantRegeneration  in Leaf-derived Callus of Lavender(Lavandula vera DC). Laboratory  of  PlantBreeding  Science, Faculty of Agriculture, Kyoto prefectural University. Wahyuni  A.,  B.Satria,  dan  A.  Zainal.  2020. Induksi Kalus Gaharu dengan NAA dan
BAP Secara In Vitro.  Agrosains: Jurnal Penelitian  Agronomi  22(1):  39-44, 2020.
https://jurnal.uns.ac.id/agrosains/article/
view/36007 Widyawati,  G.  2010.  Pengaruh  Variasi Konsentrasi  NAA  dan  BAP  Terhadap Induksi  Kalus  Jarak  Pagar.  Tesis  tidak dipublikasikan.  Surakarta:  Universitas Sebelas Maret.
Wulandari,  Maulana,  Abdullah,  Netty.  2021. Ketahanan  Kalus  Embrio  Kedelai ( Glycine  Max L)  Terhadap  Tekanan Salinitas  (Nacl)  Secara In  Vitro . Journal  Techno  Eco-Farming .  Vol.  1 No. 1.