## PENETAPAN KADAR FLAVONOID TOTAL EKSTRAK ETANOL KULIT
BUAH ALPUKAT (Persea americana Mill .) DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
Aminah 1 , Nurhayati Tomayahu, Zainal Abidin Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
1 aminah.aminah@umi.ac.id

## ABSTRACT
Avocado  plant  (Persea  americana  Mill.),  belongs  to  Lauraceae  family  which  have  medicinal  properties. Avocado peel contains flavonoid compounds that can be used to protect and reduce the skin damage against UV rays. This study aimed to determine the total flavonoids content of the ethanol extract of the avocado peel using UV-Vis spectrophotometry.  The  ethanol  extract  of avocado  peel  was  obtained  by  maceration  with  ethanol.  The  qualitative analysis used FeCl 3 by forming green complex. The determination of total flavonoids content is conducted based on AlCl 3 method with total flavonoids expressed in QE (Quercetin equivalent) at the maximum wavelength of 435 nm. The result showed that the average content of flavonoid total is 4.0122 mgQE/g extract.
Keywords: Flavonoid  Total, Caucasian avocado (Persea americana Mill.), UV-Vis spectrophotometry

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki kekayaan  alam  dengan  berbagai  jenis  tanaman  yang dapat  berkhasiat  sebagai  obat  tradisional.  Obat tradisional semakin banyak diminati oleh masyarakat karena bahan nabatinya mudah didapat, mudah diracik dan  harganya  terjangkau,  sehingga  bahan  yang digunakan  harus  ditingkatkan  mutu  dan  kualitasnya sesuai dengan kebutuhan masyarakat.
Salah  satu  tumbuhan  yang  menarik  untuk diteliti  adalah  buah  alpukat  dari  family Lauraceae yang  merupakan  tanaman  yang  dapat  berkhasiat sebagai  obat,  tanaman  ini  dapat  tumbuh  di  daerah tropis  dan  subtropis  (Katja,  Suryanto  &  Wehantouw 2009, h. 58).
Alpukat  secara empiris berkhasiat mengobati penyakit  seperti  sariawan,  kencing  batu,  sakit  gigi, muka  kering,  bengkak  karena  peradangan  dan  juga kencing manis (Katja, Suryanto & Wehantouw 2009, h. 58). Kulit alpukat mengandung senyawa flavonoid yang dapat digunakan untuk melindungi kulit terhadap sinar  UV  atau  mampu  mengurangi  kerusakan  kulit, karena  senyawa  ini  bekerja  sebagai  bahan  aktif  tabir surya ( Mokodompit, Edy dan Wiyono 2013, h. 85). Flavonoid  merupakan  salah  satu  senyawa golongan  fenol  alam  terbesar  yang  terdapat  dalam semua  tumbuhan  hijau  (Markham,  K.R  1988). Menurut (Pourmorad, F 2006, h. 1143) mengemukkan bahwa  salah  satu    golongan  senyawa  polifenol  ini diketahui  memiliki  sifat  sebagai  penangkap  radikal bebas,  penghambat  enzim  hidrolisis,  oksidatif,  dan juga bekerja sebagai antiinflamasi.
Berdasarkan  uraian  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  yang  lebih  intensif  mengenai pengujian  kadar  flavonoid  total  dari  ekstrak  etanol
kulit buah alpukat (Persea americana Mill .) , sehingga potensi tumbuhan ini  sebagai  bahan baku obat untuk pencegahan  maupun  pengobatan  berbagai  penyakit dapat lebih dikembangkan dengan maksimal.

## II. METODE PENELITIAN A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Pengambilan  Sampel  buah  alpukat (Persea americana Mill .) dilakukan  pada  pagi  hari  sekitar pukul  10.00  WITA  di  Malino,  Sulawesi  selatan. Kemudian disortasi basah untuk menghilangkan tanah dan  pengotor  lainnya  yang  masih  menempel  pada sampel.  Kemudian  buah  alpukat  dipisahkan  dari daging buah dan kulit buahnya lalu di bersihkan. Kulit buah  alpukat (Persea  americana Mill .) yang  telah dibersihkan  dilakukan  pengubahan  bentuk  dengan cara  dipotong-potong  kecil,  selanjutnya  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  selama  beberapa  hari pada  udara  terbuka  dengan  tidak  terkena  sinar matahari  langsung.  Setelah  kering  sampel  ditimbang dan  dicatat  berat  keringnya  kemudian  diserbukkan setelah  itu  ditimbang  kembali  berat  sampel  serbuk yang di peroleh (Dahlia & Ahmad 2016, h. 16).
B. Proses ekstraksi kulit alpukat (Persea americana Mill .)
Sebanyak 50 gram sampel kulit buah alpukat ( Persea  americana Mill.)  dimasukkan  kedalam wadah  maserasi.  Kemudian  ditambahkan  dengan etanol 96% 200 mL sampai seluruh sampel terendam, kemudian  ditutup  dan  dibiarkan  selama  24  jam. Maserat disaring dengan menggunakan kertas saring. Filtrat diperoleh melalui penyaringan dengan corong, kemudian  ampas  dimaserasi  kembali  dengan  etanol 96% 200 mL, sehingga filtrat hampir tidak berwarna.
Semua  filtrat  disatukan  dan  dipekatkan  dengan menggunakan rotavapor sampai tidak ada lagi cairan yang menetes sehingga diperoleh ekstrak etanol kulit buah  alpukat  ( Persea  americana Mill.).  Ekstrak kental  kulit  buah  alpukat  ( Persea  americana Mill.) yang  didapatkan  digunakan  untuk  dianalisis  lebih lanjut (Gustandy, M dan Soegihardjo, C,J 2016).

## C. Analisis Kuantitatif Kandungan Flavonoid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  kulit  buah alpukat  ( Persea  americana Mill.)  ditambahkan dengan 2 tetes FeCl 3 . Terbentuknya warna hijau atau hijau  biru  menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid dalam bahan (Harborne, J.B 1987).
D. Analisis Kualitatif Kandungan Flavonoid 1. Penentuan  panjang  gelombang  maksimum (ƛ maks ) kuersetin
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum kuersetin dilakukan dengan running larutan kuersetin pada  range  panjang  gelombang  400  -  450  nm.  Hasil running menunjukkan panjang gelombang maksimum standar  baku  kuarsetin  berada  pada  panjang gelombang  435  nm.  Panjang  gelombang  maksimum tersebut yang digunakan untuk mengukur serapan dari sampel  ekstrak  etanol  kulit  buah  alpukat (Persea americana Mill .).

## 2. Pembuatan kurva standar kuarsetin
Ditimbang  sebanyak  25  mg  baku  standar kuersetin dan dilarutkan dalam 25 mL etanol. Larutan stok dipipet sebayak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai  10  mL  dengan  etanol  sehingga  diperoleh konsentrasi  100  ppm.  Dari  larutan  standar  kuersetin 100 ppm, kemudian dibuat beberapa konsentrasi yaitu 6  ppm,  8  ppm,  10  ppm,  12  ppm  dan  14  ppm.  Dari masing-masing  konsentrasi  larutan  standar  kuersetin dipipet 1 mL. Kemudian ditambahkan 1 mL AlCl 3 2% dan 1 mL kalium asetat 120 mM. Sampel diinkubasi selama  satu  jam  pada  suhu  kamar.  Absorbansi ditentukan  menggunakan  metode  spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum 435 nm (Stankovic, M.S., 2011, h. 65).
3. Penetapan kadar flavonoid total ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea americana Mill .) Ditimbang 15  mg ekstrak, dilarutkan dalam 10  mL  etanol,  sehingga  diperoleh  konsentrasi  1500 ppm.  Dari  larutan  tersebut  dipipet  1  mL    kemudian ditambahkan 1 mL larutan AlCl 3 2% dan 1 mL kalium asetat  120  mM.  Sampel  diinkubasi  selama  satu  jam pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis pada panjang  gelombang  maksimum  435  nm.  Sampel dibuat  dalam  tiga  replikasi  untuk  setiap  analisis  dan
diperoleh nilai rata-rata absorbansi ( Stankovic, M.S., 2011, h. 65).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Tumbuhan alpukat (Persea americana Mill .) yang digunakan dalam penelitian ini yaitu hanya pada bagian  kulit  buahnya.    Kulit  buah  alpukat (Persea americana Mill .) dapat digunakan sebagai bahan aktif tabir surya yaitu untuk melindungi kulit terhadap sinar UV  atau  mampu  mengurangi  kerusakan  kulit,  karena mengandung  senyawa  flavonoid  ( Mokodompit,  Edy dan Wiyono 2013, h. 85).
Flavonoid hampir terdapat pada semua bagian tumbuhan  termasuk  buah,  akar,  daun,  dan  kulit  luar batang.  Flavonoid  merupakan  senyawa  alam  yang berpotensi sebagai antioksidan yang dapat menangkal radikal bebas  yang berperan  pada timbulnya penyakit degeneratif  melalui  mekanisme  perusakan  sistem imunitas  tubuh,  oksidasi  lipid  dan  protein  (Rais,  I.R 2015, h. 103).
Pada  penelitian  ini  buah  alpukat  yang digunakan  diperoleh  dari  Malino,  Sulawesi  selatan. Kotoran ataupun serangga yang menempel pada buah alpukat  harus  dibersihkan  karena  dapat  mengganggu proses dan hasil ekstraksi. Kulit buah alpukat (Persea americana Mill .) dilakukan  pengubahan  bentuk dengan cara dipotong-potong kecil untuk mempercepat proses pengeringan. Proses pengeringan ini dimaksudkan  untuk  mengurangi  kadar  air  yang terdapat  pada  sampel,  sehingga  dapat  mencegah pembusukan oleh bakteri.
Proses  ekstraksi  dilakukan  bertujuan  untuk mengambil  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam sampel. Prinsip ekstraksi didasarkan pada perpindahan masa  komponen  zat  yang  terlarut  ke  dalam  pelarut sehingga terjadi perpindahan pada lapisan antar muka dan  berdifusi  masuk  ke  dalam  pelarut  (Harborne,  J.B 1987).  Pelarut  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  etanol  96%  sebagai  pelarut  polar.  Dalam  hal penyarian,  etanol  memiliki  kelebihan  dibandingkan dengan air dan metanol. Senyawa kimia yang mampu disari  dengan  etanol  lebih    banyak  dari  pada  penyari metanol dan air ( Azizah dan Salamah 2013, h.  24). Untuk  mendapatkan  senyawa  kimia  yang diinginkan digunakan metode ekstraksi yang merupakan  metode  penyarian  zat  berkhasiat  atau  zat aktif dari bagian tanaman dengan menggunakan pelarut yang sesuai (Yuliani & Satuhu, 2012).
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah    maserasi,  karena  metode  ini lebih  sederhana,  mudah  dan  tanpa  pemanasan. Karena  jika  menggunakan  pemanasan  dapat membuat  kadar  flavonoid  berkurang.  Proses maserasi  menggunakan  3  replikasi  dengan  etanol 96%  200  mL  selama  24  jam.  Penambahan  pelarut etanol  dilakukan  sampai  3  kali  proses  ekstraksi.
Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan rotavapor sampai diperoleh ekstrak kental yang berwarna hijau tua.  Kemudian  dilakukan  perhitungan  rendamen, sehingga  diperoleh  rata-rata  persen  rendamen  yaitu 17,28  %.  Penentuan  rendamen  ini  berfungsi  untuk mengetahui  kadar  metabolit  sekunder  yang  terbawa oleh  pelarut  namun  tidak  dapat  menentukan  jenis senyawa yang terbawa oleh pelarut ( Ahmad, Juwita dan Malik 2016, h. 6). Dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstrak etanol dari kulit buah alpukat (Persea americana Mill .)
Analisis kualitatif dilakukan untuk mengetahui komponen kimia pada tumbuhan dengan menggunakan  reagen  besi  (III)  klorida  (FeCl 3 ). Diamati perubahan warna yang terbentuk yaitu warna hijau  (Harborne,  J.B  1987).  Hasil  identifikasi menunjukkan  ekstrak  etanol  kulit  buah  alpukat (Persea  americana Mill .) positif  mengandung flavonoid yang dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil analisis kualitatif ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea americana Mill .)
Analisis  kuantitatif  senyawa  flavonoid  total dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis dilakukan  untuk  mengetahui  seberapa  besar  kadar flavonoid  total  yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol kulit buah alpukat (Persea americana Mill .) . Analisis flavonoid dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
karena flavonoid mengandung  sistem  aromatik  yang  terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar ultraviolet dan spektrum sinar tampak (Harborne, J.B 1987).
Pada penelitian ini untuk menentukan kadar flavonoid  total  pada  sampel  digunakan  kuarsetin sebagai larutan standar dengan deret konsentrasi 6, 8, 10,  12  dan  14  ppm.  Digunakan  deret  konsentrasi karena metode yang di pakai dalam menentukan kadar adalah  metode  yang  menggunakan  persamaan  kurva
baku,  untuk  membuat  kurva  baku  terlebih  dahulu dibuat beberapa deret konsentrasi untuk mendapatkan persamaan  linear  yang  dapat  digunakan  untuk menghitung  persen  kadar.  Digunakan  kuarsetin sebagai  larutan  standar  karena  kuersetin  merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus keto  pada  C-4  dan  memiliki  gugus  hidroksil  pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol  ( Azizah  dan    Faramayuda  2014,  h.  48) . Pengukuran  serapan  panjang  gelombang  maksimum dilakukan running dari panjang gelombang 400 – 450 nm. Hasil running menunjukkan panjang gelombang maksimum  standar  baku  kuarsetin  berada  pada panjang  gelombang  435  nm.  Panjang  gelombang maksimum tersebut yang digunakan untuk mengukur serapan dari sampel ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea americana Mill .). Dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil pengukuran absorbansi larutan standar kuersetin  pada  panjang  gelombang  maksimum  435 nm
Gambar 1. Kurva kalibrasi kuersetin pada panjang gelombang maksimum 435 nm
Dari pengukuran tersebut, dapat disimpulkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  yang  digunakan maka semakin tinggi pula  absorban yang di peroleh. Hasil baku kuersetin yang diperoleh  diplotkan antara kadar dan absorbannya, sehingga diperoleh persamaan regresi linear yaitu  y = 0,0438x + 0,0177 dengan  nilai  R 2 yang  diperoleh  sebesar  0,9944  dan nilai  r  adalah  0,997.  Persamaan  kurva  kalibrasi kuersetin dapat digunakan sebagai pembanding untuk menentukan konsentrasi senyawa flavonoid total pada ekstrak sampel.
Pengujian analisis kuantitatif dengan spektrofotometri  UV-Vis  digunakan  larutan  blanko
sebagai  kontrol  yang  berfungsi  sebagai  pemblank (mengkali  nol-kan)  senyawa  yang  tidak  perlu dianalisis (Basset,1994).
Pada  pengukuran  senyawa  flavonoid  total, larutan  sampel  ditambahkan  AlCl 3 yang  dapat membentuk  kompleks,  sehingga  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  ke  arah visible (tampak)  yang ditandai  dengan  larutan  menghasilkan  warna  yang lebih  kuning.  Dan  penambahan  kalium  asetat  yang bertujuan untuk mempertahankan panjang gelombang pada  daerah visible (tampak)  (Chang et  al ,  2002). Perlakuan inkubasi selama 1 jam sebelum pengukuran dimaksudkan agar reaksi berjalan sempurna, sehingga intensitas  warna  yang  dihasilkan  lebih  maksimal ( Azizah dan  Faramayuda 2014, h. 48) . Sehingga dari hasil  penelitian  ini  diperoleh  kadar  flavonoid  total ekstrak etanol  kulit buah alpukat (Persea americana Mill .) sebesar  4,0122  mgQE/g  ekstrak  yang  dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel  4. Hasil  penetapan  kadar  flavonoid  total  % (b/b) pada ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea americana Mill .)
Menurut  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh kurniasari (2006) menyatakan bahwa sejumlah tanaman  obat  yang  mengandung  flavonoid  telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,  antivirus,  antiradang,  antialergi  dan antikanker.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan  bahwa kadar flovonoid total  dari  ekstrak  etanol  kulit  buah  alpukat (Persea americana Mill .) yaitu 4,0122 mgQE/g ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, A.R., Juwita, J., Ratulangi, S.A.D. dan Malik, A.,  2016.  Penetapan  Kadar  Fenolik  Dan Flavonoid Total Ekstrak Metanol Buah Dan Daun  Patikala  ( Etlingera  Elatior (Jack)  Rm Sm)  Menggunakan  Spektrofotometri  Uv- Vis. Pharmaceutical Sciences And Research (Psr) , 2 (1), Pp.1-10.
Azizah,  B.  dan  Salamah,  N.,  2013.  Standarisasi Parameter  Non  Spesifik  dan  Perbandingan Kadar Kurkumin Ekstrak Etanol dan Ekstrak
Terpurifikasi Rimpang Kunyit.
Pharmaciana , 3 (1).
Azizah,  D.N.  dan  Faramayuda,  F.,  2014.  Penetapan Kadar Flavonoid Metode AlCl 3 Pada Ekstrak Metanol  Kulit  Buah  Kakao (Theobroma Cacao L.). Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi , 2 (2).
Basset, J., R. C. Denney, G.H Jeffrey, J. Mendhom., 1994. Buku  Ajar  Vogel  Kimia  Analisis Kuantitatif Anorganik, Jakarta : EGC. Chang  C.  Yang  M,  Wen  Hand  Chern  J.  2002. Estimation  of  Total  Flavonoid  Content  in Propolis by Two Complementary
Colorimetric Methods, J. Food Drug Anal. Dahlia,  A.A.  dan  Ahmad,  A.R.,  2016.  Penetapan Kadar Flavonoid Total Dari Ekstrak Etanolik Daun Benalu Mangga ( Dendrophthoe Pentandra  L.  Miq) . Jurnal  Fitofarmaka Indonesia , 1(1). pp.14-17.
Gustandy,  M,  dan  Soegihardjo,  C,J  2016,‘Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal 1,  1-Difenil-2-Pikrihidrazil  dan  Penetapan Kandungan  Fenolik  Total  Fraksi  Etil  Asetat Ekstrak  Etanol  Buah  Anggur  Bali  ( Vitis vinifera L.)’, Jurnal  Farmasi  Sains  dan Komunitas , 10(2).
Harborne,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia;  Penuntun Cara  Modern  Menganalisa  Tumbuhan , Terbitan Kedua, Terjemahan Kosasih
Padmawinata  dan  Iwang  Soediro  ITB, Bandung.
Katja, D. G., Suryanto, E., dan Wehantouw, F., 2009.
Potensi  daun  alpukat  ( persea  Americana
Mill.) sebagai
sumber antioksidan alami. Chemistry Progress, 2( 1), pp. 58-64. Kurniasari, I. 2006. Metode cepat penentuan flavanoid total  meniran (Phyllantus  niruri  L) berbasis teknik  spektrofotometri  inframerah  dan kemometrik. Bogor: IPB
Markham,  K.R.  1988. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid . Penerjemah
Kosasih Padmawinata.Bandung: ITB.
Mokodompit,  AN,  Edy,  HJ  dan  Wiyono,  W  2013,
Penentuan  nilai  sun  protective  factor  (spf) secara in vitro krim tabir surya ekstrak etanol kulit alpukat. Pharmacon , 2( 3), pp. 83-85.
Pourmorad, F., Hosseinimehr, S.J. and Shahabimajd, N.,  2006.  Antioxidant  activity,  phenol  and flavonoid  contents  of  some  selected  Iranian medicinal plants. African journal of biotechnology , 5 (11). pp 1142-1145 Rais,  I.  R.,  2015.  Isolasi  dan  penentuan  kadar flavonoid  ekstrak  etanolik  herba  sambiloto
(andrographis paniculata (burm. F.) Ness). Pharmaciana , pp 100:106.
Stankovic,  M.S.,  2011.  Total  phenolic  content,
flavonoid  concentration  and  antioxidant activity  of  Marrubium  peregrinum  L. extracts. Kragujevac J Sci , 33 (2011), pp.63- 72. Yuliani,  S.  dan  Satuhu,  S.,  2012. Panduan  lengkap minyak atsiri . Penebar swadaya: Jakarta. Hal, 46.