Formulasi Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas (Ananas comosus L )

## Inovasi Pengobatan Karies Gigi
Formulation Of Nanomouthwash Pineapple-Skin Extract (Ananas Comosus L) Innovation Dental Caries Treatment
Yasmine Savira Rahmadhani 1 , Rina Ayu Krismonikawati 2 , Risza Widi Octaviana 3 1,2,3 Prodi D3 Farmasi, Politeknik Katolik Mangunwijaya, Semarang savirayasmine@gmail.com
Abstract : The skin of the pineapple (Ananas comosus L) in the form of extracts already researched can inhibit the growth of bacteria cause dental caries i.e. Streptococcus mutans. Pineapple-skin contains an enzyme  bromelin  that  has  easily  degraded  and  lipofil,  therefore  required  a  system  of  delivering medicines  that  can  increase  the  stability  of  the  enzyme  bromelin  in  pineapple-skin  extract,  so  the activities  antibacterial  can  be  improved.  The  system  transfers  that  can  be  developed  is  using nanoparticles with a form of material nanoemulsion. Nanoemulsion in nanomouthwash shape created by  using  spontaneous  nanoemulsification  method.  Nanomouthwash  tested  physical  characteristics include: determination of the particle size, polydispersity index, organoleptic, transmitan test, viscosity, and  weight  of  type.  Furthermore,  nanomouthwash  of  pineapple-skin  extract  tested  activity  against Streptococcus  mutans  bacteria  and  computed  the  diameter  zone  of  inhibition  (DDH).  The  results  the DDH were statistical analysis with Kruskall Wallis's method to see a meaningful difference. The results of the test of the physical characteristics of nanomouthwash of pineapple-skin extract has a particle size 86,16  nm,  polydispersity  index  0,29,  tanned  yellow  liquid,  the  smell  of  oil  typical  sweets  and  have  a sweet taste with mint sensation. Test results of viscosity 13,07 cp; weights types 1,11; and has a value of pH is 5. The antibacterial activity test of nanomouthwash of pineapple-skin extract shows the value of the diameter zone of inhibition to Streptococcus mutans of 8.6 mm smaller than pineapple-skin extract of 13.8 mm.
Keywords : Pineapple-skin,  nanoemulsion,  mouthwash,  physical  characterictics,  Streptococcus mutans
Abstrak : Kulit nanas ( Ananas comosus L) dalam bentuk ekstrak dengan konsentrasi 25% telah diteliti dapat menghambat pertumbuhan bakteri penyebab karies gigi yaitu Streptococcus mutans . Kulit nanas mengandung enzim bromelin yang memiliki sifat mudah terdegradasi dan bersifat lipofil, oleh karena itu diperlukan  suatu  sistem  penghantaran  obat  yang  dapat  meningkatkan  stabilitas  enzim  bromelin, sehingga  aktivitas  antibakteri  dapat  ditingkatkan.  Sistem  penghantaran  yang  dapat  dikembangkan adalah  nanopartikel  dengan  bentuk  sediaan  nanoemulsi.  Sediaan  nanoemulsi  dalam  bentuk nano mouthwash dibuat  dengan  menggunakan  metode  nanoemuslifikasi  spontan.  Nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  diuji  karakteristik  fisiknya  meliputi:  ukuran  partikel,  indeks  polidispersitas, organoleptis,  pH,  viskositas,  dan  bobot  jenis.  Selanjutnya,  nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  diuji aktivitasnya  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans dan  dihitung  diameter  daya  hambatnya  (DDH). Hasil DDH dianalisa statistika dengan metode Kruskall Wallis untuk melihat adanya perbedaan yang bermakna.  Hasil  pengujian  karakteristik  fisik  sediaan  nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  memiliki ukuran  partikel  86,16  nm,  indeks  polidispersitas  0,29,  berbentuk  cairan  jernih  berwarna  jingga kecoklatan, berbau khas mint, dan memiliki rasa manis diikuti sensasi mint. Hasil uji viksositas sebesar 13,07  cp;  bobot  jenis  1,11;  dan  memiliki  nilai  pH  5.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  nano mouthwash ekstrak kulit nanas menunjukkan nilai diameter daya hambat terhadap bakteri Streptococcus mutans sebesar 8,6 mm lebih kecil dibandingkan dengan ekstrak kulit nanas yaitu sebesar 13,8 mm. Kata kunci: Ekstrak kulit nanas, nanoemulsi, mouthwash , karakteristik fisik, Streptococcus mutans

## I. PENDAHULUAN
Pemeliharaan  kesehatan  gigi  dan  mulut merupakan salah satu upaya dalam meningkatkan kesehatan, karena kesehatan gigi dan mulut dapat mempengaruhi kesehatan tubuh secara  menyeluruh.  Gigi  mudah  mengalami kerusakan  yang  biasanya  ditandai  dengan adanya  lubang  gigi  yang  dikenal  dengan  istilah karies  gigi  (Chrismirina  dkk,  2011).  Karies  gigi dapat  ditemukan  pada  semua  golongan  umur, sebanyak  98%  dari  penduduk  dunia  pernah mengalami  karies.  Berdasarkan  SKRT  Survei
Kesehatan  Rumah  Tangga  (2004),  di  Indonesia karies  gigi  masih  menjadi  masalah  yang  paling sering terjadi, angka kejadian karies di Indonesia berkisar antara 90,05% (Yusuf, 2011). Penyebab karies  gigi  adalah  adanya  aktivitas  dari  bakteri penghasil  asam  yang  mampu  melakukan fermentasi  karbohidrat  yang  dikonsumsi  oleh manusia.  Salah  satu  bakteri  yang  dianggap sebagai agen utama penyebab karies gigi adalah Streptococcus  mutans (Natarini,  2007).  Untuk mengurangi  perkembangbiakan  bakteri  maka sering  digunakan  antibiotik,  tetapi  perawatan
jangka panjang dengan antibiotik dapat menyebabkan  resistensi  dan tidak jarang  alergi, sehingga banyak masyarakat beralih ke pengobatan herbal sebagai upaya untuk penyembuhan penyakit, termasuk penyakit gigi.
Pada  penelitian  Audies  (2015)  tentang  uji efektivitas antibakteri ekstrak kulit nanas ( Ananas comosus. L) terhadap
pertumbuhan Streptococcus  mutans penyebab  karies  gigi dapat disimpulkan bahwa pada konsentrasi 25% ekstrak  kulit  nanas  efektif  digunakan  sebagai antibakteri.  Penggunaan  ekstrak  kulit  nanas sebagai  obat  perawatan  gigi  dan  gusi  belum dimanfaatkan secara maksimal, sehingga dibutuhkan  suatu  bentuk  sediaan  yang  praktis dan  mudah  digunakan.  Salah  satu  produk perawatan dan pengobatan gigi dan gusi adalah obat  kumur.  Obat  kumur  ( mouthwash )  memiliki beberapa  kelebihan  diantaranya  adalah  dapat menjangkau bagian mulut yang sulit dibersihkan dan praktis dalam pengunaan, sehingga masyarakat  dapat  menggunakan mouthwash sebagai  produk  perawatan  maupun  pengobatan gigi dan gusi.
Menurut  Setiawan  (2015)  kulit  nanas mengandung  beberapa  senyawa  diantaranya adalah enzim bromelin, tannin, saponin, steroid. Enzim bromelin memiliki sifat mudah terdegradasi  dan  bersifat  lipofil,  oleh  karena  itu diperlukan suatu sistem penghantaran obat yang dapat  meningkatkan  stabilitas  enzim  bromelin dalam  ekstrak  kulit  nanas,  sehingga  aktifitas antibakteri dapat ditingkatkan.
Sistem penghantaran yang dapat dikembangkan adalah menggunakan  nanopartikel  dengan  bentuk sediaan nanoemulsi. Nanoemulsi telah diterapkan  dalam  berbagai  industri  farmasi, diantaranya  sebagai  sistem  penghantaran  obat, bahan atau unsur yang potensial dalam beberapa produk  perawatan  tubuh,  dan  pembawa  yang baik  pada  obat  sehingga  dapat  meningkatkan bioavailabilitas obat  dalam  tubuh.    Penggunaan nanopartikel  sebagai  sistem  pengantaran  obat telah  berkembang  beberapa  tahun  terakhir. Kelebihan  sistem  penghantaran  menggunakan nanopartikel  adalah  memiliki  kemampuan  untuk menembus  ruang-ruang  antar  sel,  yang  hanya dapat  ditembus  oleh  ukuran  partikel  koloidal (Buzea    dkk,  2007).  Kurniawan  (2012)  telah meneliti  tentang  preparasi  Dan  Karakterisasi Nanopartikel  Sambung  Silang  Kitosan-Natrium Tripolifosfat Dalam Gel Verapamil Hidroklorida.
Berdasarkan latar belakang, maka pada sediaan  nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas yang  merupakan gabungan dari sediaan nanoemulsi dan mouthwash, dibuat dalam sistem nanopartikel  diharapkan  dapat  meningkatkan aktivitas  antibakteri  tanpa  menimbulkan  efek resistensi seperti yang biasa ditimbulkan karena
penggunaan antibiotika, sehingga penggunaannya menjadi lebih efektif.

## II.  METODE PENELITIAN
Bahan –  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah kulit buah nanas tanpa duri. Bahan  yang  digunakan  antara  lain:  tween  80, PEG  400, Virgin  Coconut  Oil ,  sorbitol,  natrium benzoat,  oleum  menthae  piperitae,  etanol  96%, media blood  agar, biakan  murni Streptococcus mutans, kertas cakram, NaCl 0,9% steril, standar Mc.Farland, dan akuades steril. Alat yang dalam penelitian  ini  adalah  rangkaian  alat  untuk membuat mouthwash , waterbath ,  erlenmeyer, gelas  ukur,  timbangan  digital, viscometer ostwald , vortex, piknometer,  tabung  konikal, mikropipet,  spektrofotometer  UV- Vis , Particle Size Analyzer, pH indikator, autoklaf, cawan petri, inkubator,  mistar, swab  cotton,  spuit  5  cc, tourniquete, dan jarum ose. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  untuk  mengetahui  karakteristik fisik sediaan nanomouthwash ekstrak kulit nanas. Rancangan penelitian ini adalah rancangan acak lengkap pola searah.
Kulit  buah  nanas  dipotong  kecil-kecil, kemudian  dikeringkan  dengan  cara  di  oven selama  12  jam  dengan  suhu  40 ℃ .  Kulit  buah nanas  yang  telah  kering,  dihaluskan  dengan blender. Hasil serbuk kulit buah nanas sebanyak 200  gram  dimaserasi  dengan  2  Liter  pelarut etanol  96%  selama  3×24  jam  (tiap  24  jam dikocok), lalu dilakukan penyaringan menggunakan  kain  flanel.  Filtrat  diuapkan menggunakan waterbath hingga diperoleh ekstrak kental.
Sebelum  diformulasi  dengan  ekstrak  kulit nanas, terlebih dahulu dilakukan uji pendahuluan matriks nanoemulsi yang diuji nilai transmitannya pada hari ke-1, 4, dan ke-7.. Nanoemulsi dibuat secara manual dengan metode nanoemulsifikasi spontan dengan menggunakan vortex.
Pembuatan nanoemulsi diawali dengan pembuatan matriks, terdiri dari VCO, Tween 80, PEG  400,  Sorbitol,  Natrium  Benzoat,  dan aquadest.  Tween  80  ditambahkan  dengan  VCO dan  diaduk  menggunakan  vortex  selama  dua menit.  Campuran  surfaktan  dan  fase  minyak selanjutnya  ditambahkan  PEG  400  dan  divortex selama dua menit. Sorbitol dan natrium benzoat yang telah dilarutkan dalam aquadest ditambahkan  ke  dalam  campuran  fase  minyak surfaktan dan kosurfaktan yang telah bercampur dan divortex kembali selama sepuluh menit untuk mendapatkan  ukuran  droplet  yang  lebih  kecil. Hasil  uji  transmitan  matriks  nanoemulsi  dapat dilihat pada tabel 1.
Uji transmitan merupakan uji yang dilakukan untuk  mengetahui  kejernihan  dari  formula nanoemulsi  setelah  didispersikan  di  dalam
media,  selain itu  uji  tansmitan merupakan  salah satu  parameter  yang  dapat  digunakan  sebagai gambaran  ukuran  partikel  setelah  proses emulsifikasi.  Semakin  keruh  nanoemulsi  yang dihasilkan  maka  ukuran  partikel  semakin  besar dan  nilai  transmitan  semakin  kecil  (Wohingati, 2017). Hasil uji transmitan terbaik didapatkan dari replikasi 2 dengan hasil transmitan pada hari ke- 7  sebesar  99,60%.  Hasil  pengujian  nilai transmitan dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Transmitan Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas Formula Hari ke-1 Hari ke- 4 Hari ke-7 Replikasi 1 101,037 % 99,62 % 99,20 % Replikasi 2 101,348 % 100,12 % 99,60 % Replikasi 3 101,066 % 100,00 % 99,30 % Nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  dibuat dengan  metode  nanoemulsifikasi  spontan . VCO dicampurkan  dengan  surfaktan  yaitu  tween  80 dan  diaduk  cepat  dengan  menggunakan vortex selama 2 menit. Fase minyak dan surfaktan yang telah tercampur kemudian ditambahkan PEG 400 dan  diaduk  dengan  cepat  menggunakan vortex selama 2 menit. Ekstrak kulit nanas dan natrium benzoat dilarutkan dalam sisa aquadest, bersama  dengan  sorbitol  yang  selanjutnya dicampurkan dan diaduk dengan cepat menggunakan vortex selama  30 menit. Formula nano mouthwash dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2. Formula Nano mouthwash Ekstrak
Kulit Nanas Bahan Konsentrasi (%) Ekstrak Kulit Nanas 25 VCO 2 Tween 80 20 PEG 400 10 Sorbitol 10 Natrium Benzoat 0,02
Pepermint oil 3 tetes Aquadest ad 100 Pemeriksaan mutu sediaan
nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  dilakukan berdasarkan  organoleptis  dengan  panca  indera, viskositas  dengan viscometer  ostwald ,  uji transmitan dengan spektrofotometer UV -Vis , dan bobot  jenis.  Penentuan  ukuran  nanopartikel menggunakan  alat Particle  Size  Analyzer , terbentuk  nanopartikel  jika  ukurannya  masuk dalam  rentang  1-1000  nm.  Untuk  nanoemulsi ukuran  partikel  biasanya  kurang  dari  200  nm. Indeks  polidispersitas  merupakan  parameter yang  digunakan  untuk  menyatakan  distribusi ukuran partikel dari sistem nanopartikel.
Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode  difusi  sumuran  agar  dengan  cara menuang  media  agar  ke  dalam  cawan  petri sampai memadat ± 15 menit. Bakteri Streptococcus  mutans yang  telah  disuspensi sebelumnya sebanyak 1 - 2 ose dari biakan murni bakteri dengan menggunakan NaCl 0,9% sesuai dengan  standar Mc.Farland (1  x  108  CFU/mL) disebar  diatas  medium Blood  Agar dengan menggunakan cotton  swab steril  lalu  dilakukan goresan  secara  rapat  ke  seluruh  permukaan cawan  petri  yang  berisi Blood  Agar .  Kemudian kertas  cakram  berukuran  6  mm  yang  telah direndam  kemudian  diletakan  pada  masing- masing  cawan  petri . Media  tersebut  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  24  jam.  Setelah  itu dilakukan  pengukuran  diameter  zona  hambat dengan menggunakan mistar.

## III.  HASIL
Pengujian  organoleptis  dan  kejernihan menunjukkan  sediaan  nano mouthwash ekstrak kulit nanas memiliki bentuk cairan dengan warna jingga kecoklatan, berbau khas mint, dan berasa manis diikuti sensasi mint. Hasil uji organoleptis dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Oganoleptis Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas Sampel Bau Warna Rasa Kejernihan Replikasi 1 Khas Mint Jingga kecoklatan Manis diikuti sensasi mint Jernih Replikasi 2 Khas Mint Jingga kecoklatan Manis diikuti sensasi mint Jernih Replikasi 3 Khas Mint Jingga kecoklatan Manis diikuti sensasi mint Jernih
Pemeriksaan  pH  sediaan  menunjukkan derajat  keasaman  suatu  sediaan.  Pengujian  pH sediaan nano mouthwash ditunjukkan pada tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji pH Nano mouthwash
Ekstrak Kulit Nanas Formula pH Rata – rata 5
Hasil  pengujian  viskositas  dan  bobot  jenis sediaan dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Viskositas dan Bobot Jenis Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas Formula Viskositas (cP) Bobot Jenis Rata – rata 13,07 1,11
Pengujian  ukuran  partikel  dan  indeks polidispersitas  sediaan  nano mouthwash ekstrak kulit  nanas  menggunakan  alat Particle  Size Analyzer . Hasil uji PSA dapat dilihat pada tabel 6. Tabel 6. Hasil Uji Ukuran Partikel dan Indeks Polidispersitas
Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas Parameter Replik asi 1 Replik asi 2 Replik asi 3 Rat a - rata Ukuran Partikel (nm) 99,3 93.2 66,0 86, 16 Indeks Polidispers itas 0,349 0,150 0,374 0,2 9 Hasil  diameter  daya  hambat  sampel  yang diuji aktivitas
antibakterinya terhadap Streptococcus mutans dapat dilihat pada tabel 7. Analisa statistika dengan metode Kruskall Wallis yang  kemudian  dilanjutkan  dengan Mann Whitney menunjukkan  adanya  perbedaan  yang bermakna  dengan  nilai  signifikasi  (ρ<0,05). Namun  pada  hasil  matriks  nanoemulsi  dan aquadest  steril  tidak  menghasilkan  perbedaan yang  bermakna  karena  memiliki  diameter  daya hambat sebesar 0 cm atau tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans . Hasil pengujian aktivitas antibakteri dapat dilihat pada tabel 7.
Tabel 7. Hasil Diameter Daya Hambat Ekstrak Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas Sampel Diameter Daya Hambat (mm) Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rata- rata Betadine  Gargle (K+) 22 22 20 21,3 Nano mouthwash Ekstrak Kulit Nanas 7 9 10 8,67
Matriks Nanoemulsi 0 0 0 0 Ekstrak Kulit Nanas 15 11,5 15 13,83 Aquadest steril (K-) 0 0 0 0

## IV.  PEMBAHASAN
Hasil pengukuran pH dari masing – masing replikasi sediaan mouthwash memiliki nilai pH 5. Nilai pH tersebut masih masuk dalam rentang pH mouthwash atau obat kumur yaitu berkisar antara 5-6.  Jika  pH  <  dari  5  sediaan  terlalu  asam  dan akan menyebabkan semakin banyaknya pertumbuhan  bakteri  dan jika  pH  >  dari  6 maka sediaan  terlalu  basa  dan  akan  menyebabkan pertumbuhan  jamur  sehingga  mengakibatkan timbulnya sariawan (Sopianti dan Novero, 2017). Nilai  pH  yang  dihasilkan  dipengaruhi  oleh komponen penyusun formula (Hapsari, 2017).
Viskositas merupakan gambaran dari tahanan suatu benda cair yang mengalir. Sifat alir akan  mempengaruhi  karakteristik  dari  sediaan. Sifat  alir  yang  baik  akan  mempermudah  dalam produksi  dan  pemakaian  (Hapsari,  2017).  Hasil pengujian  viskositas  sebesar  13,07  cp.  Untuk sediaan cair, rentang viskositas yang disyaratkan adalah  10-30  cp.  Sehingga  sediaan  nano mouthwash  ekstrak  kulit  nanas  memenuhi persyaratan.
Uji bobot jenis adalah untuk mengetahui perbandingan  zat  di  udara  terhadap  bobot  air dengan volume dari suhu yang sama. Dari hasil perhitungan  uji  bobot  jenis  diatas,  didapatlah hasil BJ sampel lebih besar daripada BJ air. Hal tersebut karena pada sampel terdapat zat-zat lain yang terlarut sehingga mempengaruhi bobot jenis sediaan.
Pengukuran  partikel  nanoemulsi  bertujuan untuk  melihat  ukuran  partikel  yang  dihasilkan. Ukuran  partikel  nanoemulsi  penting  untuk diketahui karena untuk menentukan laju pelepasan  obat  dan  absorpsi  obat  (Vilas et  al , 2014). Hasil uji pengukuran partikel menggunakan alat PSA didapatkan sebesar 86,6 nm.  Semakin  kecil  ukuran  partikel  maka  proses absorpsi  semakin  cepat  dan  efek  farmakologis yang  dihasilkan  lebih  cepat.  Ukuran  tersebut sesuai  dengan  teori  yang  dikemukakan  oleh Kumar  dkk  (2010)  bahwa  ukuran  partikel  dalam sistem  nanoemulsi  memiliki  ukuran  kurang  dari 200 nm.
Hasil  pengukuran  indeks  polidispersitas yaitu  sebesar  0,29.  Hasil  tersebut  menunjukkan bahwa  partikel-partikel  nano  di  dalam  formula nanoemulsi minyak atsiri daun kemangi memiliki ukuran yang seragam. Ukuran partikel dikatakan seragam karena nilai indeks polidispersitas yang didapat mendekati angka 0
yang mengindikasikan  dispersi  yang  homogen.  Nilai
yang mendekati 0 mengindikasikan dispersi yang homogen, sedangkan nilai yang lebih besar dari 0,5  mengindikasikan  heterogenitas  yang  tinggi (Wohingati, 2017).
Sediaan  nano mouthwash ekstrak  kulit nanas  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Streptococcus mutans yang ditunjukkan dengan terbentuknya  zona  bening  di  sekitar  cakram dengan  diameter  .  aktivitas  antibakteri  sediaan nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  lebih  kecil daripada aktivitas antibakteri ekstrak kulit nanas, hal  ini  disebabkan  karena  konsentrasi  ekstrak kulit  nanas  yang  nano mouthwash ekstrak  kulit nanas lebih sedikit karena sudah diformulasikan dengan bahan lainnya.

## V.  SIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah:
1.  Hasil  penelitian  menunjukkan  karakteristik fisik  nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas berbentuk  cairan  dengan  warna  coklat oranye, berbau khas mint, dan berasa manis. Memiliki  nilai  viskositas  8,05  cp  dan  bobot jenis 1,07 dan stabil pada uji nilai transmitan di  hari  ke-7.  Nilai  pH  sediaan  adalah  4. Karakterisasi  dengan  PSA  menghasilkan ukuran  droplet  86,16  nm  dan  nilai  indeks polidispersitas yaitu 0,29. Sediaan nano mouthwash ekstrak kulit nanas memenuhi  persyaratan  pengujian  yang  telah dilakukan
2.  Aktivitas antibakteri sediaan nano mouthwash ekstrak  kulit  nanas  lebih  kecil  daripada aktivitas antibakteri ekstrak kulit nanas, hal ini disebabkan  karena  konsentrasi  ekstrak  kulit nanas  yang  nano mouthwash ekstrak  kulit nanas lebih sedikit karena sudah diformulasikan dengan bahan lainnya..

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti ingin mengucapkan terima kasih kepada pihak  yang  telah  mendanai  yaitu  Direktur Kemahasiswaan, Dirjen Belmawa
Kemenristekdikti, dan Kepala LLDIKTI Wilayah VI selaku pemberi dana PKM-Penelitian Eksakta

## DAFTAR PUSTAKA
Audies,  Annisa.  2015. Uji  Efektivitas  Antibakteri Ekstrak  Kulit  Nanas  (Ananas  comosus.  L)
Terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans  Penyebab  Karies  Gigi. Padang:
Universitas Andalas.
Buzea, C., Blandino, I.I.P., dan Robbie, K., 2007, Nanomaterial  and  nanoparticles:  sources and  toxicity, Biointerphases , 2 :  MR170 – MR172. Chrismirina,  Santi,  Poppy  Andriyani,  Nopi  Yanti
Fitri (2011). Efek Buah Jamblang Terhadap Pertumbuhan Streptococcus Mutans Sebagai  Penyebab  Utama  Karies. Aceh:
Program  Studi  Pendidikan  Dokter  Gigi Fakultas  Kedokteran  Univ.  Syiah  Kuala, Darussalam  Banda  Aceh. Dentika  Journal Vol. 16, No. 2, Hlm. 144-148 . Kumar, A., Sharma, S., & Kamble. R. 2010. Self- Emulsifying Drug Delivery Systems
(SEDDS)  :  Future  Aspects. International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences . 2 (4) : 7-13.
Kurniawan, E. 2012. Preparasi Dan Karakterisasi Nanopartikel  Sambung  Silang  Kitosan- Natrium  Tripolifosfat  Dalam  Gel  Verapamil Hidroklorida. Skripsi .  Jakarta  :  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Indonesia.
Natarini,  Febrina  Whidia.  (2007). Perbandingan Efek  Anti  Bakteri  Jus  Anggur  Merah  (Vitis vinifera) Pada Berbagai Konsentrasi Terhadap Streptococcusmutans. Karya Tulis Ilmiah Universitas Diponegoro Semarang. http://eprints.undip.ac.id/22408/1/Febrina.p df
Setiawan,  Muhammad  Hafiz (2015).  Isolasi  Dan Uji  Daya  Antimikroba  Ekstrak  Kulit  Nanas ( Ananas  Comosus  L.  Merr ).  Semarang: UNNES.
Vilas, P.C., Nayan, G.A., Bhushan, R.R., & Sunil, P.P.  2014.  Preparation  and In  Vitro Evaluation  of  Self-Nanoemulsifying  Drug Delivery  System  (SNEDDS)  Containing Clopidogrel. International Journal of
Pharmaceutical  Sciences  Review  and Research. 25 (1) : 10-15. Wohingati, Klara Yunita. 2017. Formulasi Dan Uji Karakteristik Fisik Nanoemulsi Minyak Atsiri Daun  Kemangi  (Ocimum  basilicum L.).
Semarang: Akademi Farmasi Theresiana. Yusuf, Muhammad (2011). Hubungan
Pengetahuan  Kesehatan  Gigi  Dan  Mulut Dengan Status Karies Dan Ohis Pada Anak Smp. Medan: USU.