UJI AKTIVITAS ANTIMALARIA EKSTRAK ETANOL DAUN COCOR BEBEK ( Kalanchoe blossfeldiana Poelln.) pada Plasmodium falciparum 3D7
Faizal Hermanto 1* , Yenny Febriani Yun 2,3 , Lilis Siti Aisyah 2,3 ,Tri Reksa Saputra 2 , Arif Rahman Hakim 2 , Ade Kania Ningsih 3 , Tati Herlina 2 , Euis Julaeha 2 , Achmad Zainuddin 2 , Unang Supratman 2
1 Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani
2 Kelompok Kimia Bahan Alam, Fakultas MIPA, Universitas Padjadjaran
3 Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Jenderal Achmad Yani faizalhermanto@gmail.com

## ABSTRAK
Malaria merupakan salah satu masalah serius yang dialami oleh beberapa  negara tropis karena meningkatnya parasit malaria ( Plasmodium ) yang resisten terhadap obat-obat antimalaria. Oleh sebab  itu  perlu  dicari  obat  antimalari  baru,  salah  satunya  tanaman  cocor  bebek  ( Kalanchoe blossfeldiana Poelln.) digunakan  secara  luas  oleh  masyarakat  indonesia  sebagai  tanaman  obat dan  tanaman  hias.  Penelitian  ini  diawali  dengan  proses  pembuatan  ekstrak  etanol  daun  cocor bebek  menggunakan  alat  maserator  dan  etanol  96%  sebagai  pelarut. Plasmodium  falciparum 3D7 yang akan digunakan dalam uji, terlebih dahulu dilakukan kultur sinambung sesuai metoda Trager  and  Jansen . P.  falciparum ditempatkan  ke  dalam  lempeng  sumur  24  masing-masing berisi 1 mL dengan tingkat  parasitemia ± 1% dalam medium RPHS. Diseluruh sumur, medium RPHS  diganti  dengan  medium  RPHS  yang  mengandung  ekstrak  etanol  daun  cocor  bebek berbagai  konsentrasi  (1  sampai1x10 -7 µg/mL).    Kultur  diinkubasi  selama  48  jam,  setelah inkubasi parasit dipanen dan dibuat sediaan apusan darah tipis yang diberi pewarnaan Giemsa. Uji  aktivitas  antimalaria  ditentukan  dengan  parasitemia,  persen  pertumbuhan  dan  hambatan parasit. Data dianalisis secara statistika menggunakan metode analisis probit untuk menghitung hambatan  parasit  sebesar  50%  ( IC 50 ).  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun cocor bebek memiliki efek antimalaria dengan nilai IC 50 sebesar 0,022 µg/mL.
Kata kunci : Cocor  bebek, Kalanchoe  blossfeldiana Poelln.,  Antimalaria, Plasmodium falciparum

## ABSTRACT
Malaria  is  one  of  the  serious  problems  experienced  by  some  tropical  countries  because  of increased  malaria  parasite  ( Plasmodium )  that  is  resistant  to  antimalarial  drugs.  Therefore  it  is necessary  to  find  new  drugs  antimalarial,  some  of  the  plants  are  tom  thumb  ( Kalanchoe blossfeldiana Poelln.)  mostly  used  by  Indonesian  society  especially  as  herbal  medicines  and ornamental  plants.  This  study  begins  with  extraction  tom  thumb  leave  using  maserator  and ethanol  96%  as  a  solvent. Plasmodium  falciparum 3D7  which  will  be  used  in  the  test,  first performed  continuous  culture  appropriate  techniques  Trager  and  Jensen.  The  culture  of P. falciparum 3D7 was placed into 24 well plates, each filled with 1 mL of ± 1% parasitemia culture  in  the  medium  RPHS.  The  medium  RPHS  was  replaced  by  medium  RPHS  containing ethanol extract of tom thumb leave of various concentrations (1 to 1x10 -7 mg/mL). The cultures were incubated for 48 hours before harvested, then the blood smears were prepared, followed by Giemsa  staining.  Test  antimalarial  activity  is  determined  by  parasitaemia,  percent  growth  and inhibition of parasites. Data were analyzed statistically using probit analysis method to calculate the  parasitic  inhibitory  concentration  50  (IC 50 ).  The  results  showed  that  the  ethanol  extract  of tom thumb leaves have antimalarial effect with IC 50 values of 0.022 µg/mL.
Key word :  Tom  thumb, Kalanchoe  blossfeldiana Poelln.,  Antimalarial, Plasmodium falciparum

## PENDAHULUAN
Malaria masih merupakan masalah kesehatan  di  dunia  dan  di  Indonesia. Penyakit ini disebabkan oleh parasit protozoa,  yaitu  genus Plasmodium .  Malaria terutama  malaria  falciparum  merupakan penyakit parasitik terpenting dengan morbiditas  dan  mortalitas  tinggi  di  dunia pada  umumnya  dan  di  negara  tropik  seperti Indonesia pada khususnya (WHO 2010).
Prevalensi  malaria  dari  tahun  ke  tahun cendrung  terus  meningkat.  Negara  indonesia merupakan  salah  satu  negara  endemik malaria di daerah Asia  tenggara selain  India, Bangladesh  dan  Myanmar.  Menurut  laporan WHO  (World  Health  Organization)  pada tahun 2010 terjadi 2,4 juta kasus malaria dan terjadi 2426 kasus kematian (WHO, 2011).
Kendala yang dihadapi dalam pengobatan malaria  adalah  timbulnya  resistensi  parasit malaria  terhadap  antimalaria  yang  tersedia, peningkatan  kekebalan  nyamuk  anopheles terhadap bahan-bahan kimia, dan ditemukannya  efek  samping  dari  obat tersebut  sehingga  mendorong  penelitian untuk mencari antimalaria baru.
Indonesia yang memiliki keanekaragaman hayati terbesar di dunia dengan lebih dari 30 ribu  spesies  tumbuhan  memiliki  khasiat sebagai  obat,  menjadikan  alasan  masyarakat untuk  mengobati  berbagai  penyakit  secara tradisional  dengan  pemanfaatan  tanaman obat  tersebut  termasuk  pengobatan  malaria terutama  untuk  mengatasi  demam  yang ditimbulkannya.  Salah  satu  tumbuhan  yang digunakan untuk mengatasi demam dan sakit kepala  adalah  daun  cocor  bebek  (Taylor,  L., 2005).
Selain  mengatasi  demam  dan  sakit kepala,  secara  tradisional  cocor  bebek bermanfaat  pula  untuk  membunuh  bakteri, virus,  jamur,  relaksasi  otot,  menyembuhkan batuk, melegakan saluran pernafasan, menurunkan  kadar  kolesterol,  memperlancar haid,  obat  luka,  sakit  dada,  bisul,  dan penyakit  kulit  lainnya  (Taylor,  L.,  2005). Cocor  bebek  sangat  popular  dijadikan tanaman hias sehingga penyebarannya sangat
luas  dan  mudah  didapat,  termasuk  di Indonesia.
Secara  ilmiah  beberapa  penelitian  telah dilakukan  untuk  mendapatkan  manfaat  dari tanaman  cocor  bebek  diantaranya  berpotensi sebagai  antitumor,  anti  inflamasi  dan antialergi,  serta  mempunyai  sifat  insektisida. Sebagian besar senyawa aktif yang terkandung  dalam  beberapa  spesies  cocor bebek adalah senyawa – senyawa bufadienolida  dan  flavonoid,  terutama  pada bagian  daun.  (Biswas, et  al., 2011; Supratman, et al., 2001).

## METODE
Penyiapan tanaman cocor bebek. Cocor bebek  didapatkan  dari  lembang,  Bandung- Jawa Barat. Kemudian dilakukan determinasi di LIPI Cibinong-Bogor.
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  cocor bebek. Sebanyak 18  kg  daun  cocor  bebek segar dipotong-potong lalu diekstraksi dengan  alat  maserator  dan  etanol  96% sebagai  pelarutnya  kemudian  didiamkan selama  24  jam.  Proses  ekstraksi  dilakukan pengulangan  sebanyak  lima  kali.  Filtrat ditampung kemudian disaring lalu dipekatkan menggunaka rotary evaporator .
Kultur Sinambung P. falciparum . Plasmodium  falciparum 3D7 dikultur dalam Medium  RPMI  1640  yang  mengandung  sel darah  merah  dengan  hematokrit  5%,  dapar HEPES,  serum  tipe  AB  dan  NaHCO 3 sesuai teknik Trager dan Jensen.
Uji aktivitas antimalaria ekstrak etanol daun  cocor  bebek. Kultur P.  falciparum ditempatkan  ke  dalam  lempeng  sumur  24 masing-masing  berisi  1  mL  kultur  dengan parasitemia  ±  1%  dalam  medium  RPHS. Medium  RPHS  diganti  dengan  medium RPHS yang mengandung ekstrak etanol daun cocor  bebek  berbagai  konsentrasi  (1  sampai 1x10 -7 mg/mL).  Kultur  diinkubasi  selama  48 jam,  setelah  inkubasi  parasit  dipanen  dan dibuat sediaan apusan darah tipis yang diberi pewarnaan  Giemsa.  Selanjutnya  dihitung persen  parasitemia          dengan  menghitung
jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi  terhadap  500 eritrosit. Pengujian dilakukan
pengulangan sebanyak  dua  kali.  Data  dianalisis  secara statistika  dengan  memakai  metode  analisis probit  untuk  menghitung  hambatan  parasit sebesar 50 ( IC 50 ). HASIL PENELITIAN

## DAN PEMBAHASAN
Efek  ekstrak  etanol  daun  cocor  bebek terhadap Plasmodium falciparum diuji secara in  vitro . P.  falciparum dikultur  dalam medium  RPMI  1640  yang  mengandung  sel darah  merah,  serum  tipe  AB  10%,  dapar HEPES  5,94  g/L,  gentamisin  50  µg/mL  dan NaHCO 3 5%  sesuai  teknik  Trager  dan Jensen.  Subkultur P.  falciparum dilakukan apabila  persen  parasitemia  kultur  telah mencapai  sekitar  6%  dan  penggantian medium dilakukan setiap hari.
Pengujian  aktivitas  antimalaria  ekstrak etanol  daun  cocor  bebek  dilakukan  pada kultur  dan  diinkubasi  selama  48  jam. Inkubasi  selama  48  jam  merupakan  siklus aseksual  parasit  dalam  darah  (skizogoni), sehingga  dapat  dikatakan  pengujian  ini menghitung  besarnya  daya  hambat  senyawa ekstrak pada fasa intraeritrositik.
Aktivitas antimalaria ekstrak etanol daun cocor bebek terlihat dari persentase parasitemia  yang  didapat  dari  menghitung jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi  terhadap  500 eritrosit. Persen pertumbuhan parasit dihitung  dengan  membagi  antara  persen parasitemia  kelompok  uji  dibagi  persen parasitemia  kelompok  kontrol.  Sedangkan Persen  hambatan  dapat  dihitung  dengan rumus:
% hambatan = % parasitemia kontrol−% parasitemia uji % parasitemia kontrol x 100%
Hasil  uji  aktivitas  antimalaria  daun  cocor bebek  disajikan  pada  Tabel  1.  Hasil  uji antimalaria  ekstrak  etanol  cocor  bebek seperti  tampak  pada  Tabel  2  terlihat  bahwa semakin  tinggi  dosis  ekstrak  semakin  besar penghambatan  pertumbuhan P.  falciparum . Semua konsentrasi ekstrak memiliki persentase  penghambatan  yang  berbeda bermakna (p<0,05) bila dibandingkan dengan
kontrol.  Persen  hambatan  pertumbuhan P. falciparum tertinggi  ditunjukan  pada  ekstrak etanol  cocor  bebek  konsentrasi  1  µg/mL yaitu  sebesar  74,91%  sedangkan  persentase penghambatan  pertumbuhan P.  falciparum terendah  ditunjukan  pada  ekstrak  etanol cocor  bebek  konsentrasi  1x10 -7 µg/mL  yaitu sebesar  5,24%.  Grafik  hubungan  konsentrasi uji ekstrak etanol daun cocor bebek terhadap persen  pertumbuhan  dan  persen  hambatan P. falciparum 3D7 disajikan dalam gambar 1 dan 2.
Sebagian  besar  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  beberapa  spesies  cocor bebek adalah senyawa – senyawa bufadienolida.  Struktur  senyawa-senyawa bufadienolida yang memiliki aktivitas insektisida  dan  antitumor  dengan  sisi  aktif orto -asetat  dan α -piron,  memiliki  kemiripan sisi-sisi  aktif  senyawa  antimalaria  pada artemisinin yang dikenal sebagai sesquiterpen lakton endoperoksida, kemungkinan senyawa-senyawa bufadienolida yang bekerja sebagai antimalaria (Vroman et al ., 1999 ; Bhatacharjce et  al., 1999 ; Kumar et  al., 2009).
Dari hasil analisis probit didapatkan nilai konsentrasi  hambat  50  ( IC 50 )  ekstrak  etanol cocor  bebek  yaitu  sebesar                      0,022 µg/mL.
Tabel 1.  Rata-Rata Persentase Parasitemia, Pertumbuhan, dan Hambatan P. falciparum Galur 3D7 Pada
Pemberian Ekstrak Etanol Daun Cocor Bebek
Konsentrasi (µg/mL) Ekstrak Etanol Daun Kalanchoe %Parasitemia±SD %Pertumbuhan±SD %Hambatan±SD Kontrol 5.34±0.219 100±0 0 Pembanding (Art. 10 ⁻ ³ M) 0.75±0.049 14.04±0.353 85.96±0.353 1x10ˉ ⁷ 5.06±0.367 94.76±2.998 5.24±2.998 1x10ˉ ⁶ 4.73±0.388 88.58±3.648 11.42±3.648 1x10ˉ ⁵ 4.55±0.113 85.21±1.279 14.79±1.279 1x10ˉ ⁴ 4.18±0.049 78.28±2.291 21.72±2.291 1x10 ⁻ ³ 3.74±0.183 70.04±6.328 29.96±6.328 1x10 ⁻ ² 3.09±0.657 57.87±9.956 42.13±9.956 1x10 ⁻ ¹ 2.26±0.586 42.32±9.270 57.68±9.270 1x10 ⁰ 1.34±0.219 25.09±3.082 74.91±3.082
Gambar 1.   Grafik  Hubungan  Konsentrasi  Uji  Ekstrak  Etanol  Daun  Cocor  Bebek  TerhadapPersen Pertumbuhan P. falciparum 3D7
Gambar 2.  Grafik  Hubungan  Konsentrasi  Uji  Ekstrak  Etanol  Daun  Cocor  Bebek  Persen  Hambatan P. falciparum 3D7
Berdasarkan  penelitian    yang  dilakukan oleh  Rosoanaivo  (2004)  dan  Rain  (2007), tanaman berefek antimalaria sebagai berikut: aktivitas  antimalaria  sangat  baik  bila  nilai IC 50 kurang  dari  0,1  µg/mL;  aktivitas
antimalaria  baik/aktif  bila  nilai IC 50 sebesar 0,1-1  µg/mL;  aktivitas  antimalaria  cukup sampai  baik  bila  nilai IC 50 sebesar  1,1-10 µg/mL;  aktivitas  antimalaria lemah  bila  nilai IC 50 sebesar  11-25  µg/mL;  aktivitas
0 20 40 60 80 100 120 % P er tum b uh an Konsentrasi (µg/mL) IC 50 = 0,022 µg/mL 0 20 40 60 80 100 % Ha m b at an
Konsentrasi (µg/mL)
antimalaria  sangat  lemah  bila  nilai IC 50 sebesar  26-50  µg/mL;  serta  tidak  aktif sebagai antimalaria bila nilai IC 50 lebih dari 100  µg/mL.  Berdasarkan  kriteria  tersebut maka  ekstrak  etanol  cocor  bebek  yang digunakan dalam penelitian ini dikategorikan berefek antimalaria sangat baik.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun cocor bebek memiliki aktivitas antimalaria dengan nilai konsentrasi hambat 50 ( IC 5 0 ) sebesar   0,022 µg/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  berterima  kasih  kepada  Dikti  yang telah  mendukung  penelitian  dalam  Hibah Desentralisasi  &  Hibah  Bersaing  Tahun 2013-2014,  Lembaga  Biologi  Molekular Eijkman  sehingga  penelitian  ini  dapat dilaksanakan dan diselesaikan dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Biswas,  S.  K.,  et  al.,  Literature  Review  on Pharmacological  Potentials  of Kalanchoe pinnata ( Crassulaceae ), African J.
Pharmacy  and  Pharmacology ,  5(10):
(2011) 1258-1262 Supratman,  U.,  Fujita,  T.,  Akiyama,  K.,
Hayashi,  H.,  2000,  New  insecticidal bufadienolide, bryophyllin C, from Kalanchoe  pinnata . Biosci.  Biotechnol. Biochem . 64, 1309–1311.
Supratman,  U.,  Fujita,  T.,  Akiyama,  K.,  and Hayashi, H., 2001, Insecticidal compounds from Kalanchoe daigremontiana x tubiflora , Phytochemistry ., 58, 311-314.
Taylor, L. : The Healing Power of Rainforest Herbs,  Raintree  Nutrition,  Inc.,  Carson City, (2005)
Trager  W,  Jensen  J,  1976.  Human  malaria parasites  in  continuous  culture.Science 193:673–675
Vroman  J.  A.,  M.  A.  Gaston,  M.  A.  Avery,
Curr, Pharm. Desygn, 5 (1999) 101-138.
World Health Organisation (WHO). (2010) :
The World Malaria Report ; World Health
Organisation: Geneva, Switzerland
World Health Organisation (WHO). (2011) :
The World Malaria Report ; World Health Organisation: Geneva, Switzerland