AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT DAN BIJI KELENGKENG ( Euphoria longan (Lour.) Steud) TERHADAP Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus SERTA TOKSISITASNYA TERHADAP Artemia salina Leach
ANTIBACTERIAL ACTIVITY ETHANOL EXTRACT OF LONGAN SEED AND PEEL ( Euphoria Longan (Lour.) Steud) AGAINST Escherichia coli AND Staphylococcus aureus AND ALSO TOXICITY AGAINST Artemia salina Leach
Retno Nur Santi, Muhtadi * , Peni Indrayudha Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta pmuhtadi@gmail.com

## ABSTRAK
Berdasarkan penelitian sebelumnya daun, batang, dan cabang kelengkeng Euphoria longan (Lour.)  Steud)  aktif  sebagai  antibakteri,  antioksidan,  dan  toksik  terhadap Artemia  salina Leach. Pada  kulit  dan  biji  kelengkeng  dilaporkan  mengandung  senyawa  fenolik.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit dan biji kelengkeng terhadap E. coli dan S.  aureus ,  menentukan  efek  toksik  terhadap  larva  udang Artemia  salina L.,  serta  memberikan informasi  golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  kulit  dan  biji kelengkeng.Penelitian ini didahului dengan optimasi penyari etanol 50%, 70%, dan 95%. Kulit dan biji  kelengkeng  dimaserasi  menggunakan  penyari  etanol  95%  terdestilasi.  Ekstrak  tersebut digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dan S.  aureus serta  diuji ketoksikannya  terhadap Artemia  salina L.  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ).  Selanjutnya  dilakukan kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  dari  ekstrak  etanol  kulit  dan biji  kelengkeng.  Bioautografi  dilakukan  untuk  mengetahui  senyawa  dalam  ekstrak  yang bertanggung  jawab  terhadap  kematian  bakteri  uji.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  kulit  kelengkeng  hingga  konsentrasi  4%  belum  berpotensi  terhadap E.  coli dan S.  aureus, sedangkan pada ekstrak etanol biji kelengkeng memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus dengan  KBM  berturut-turut  sebesar  4%  dan  2%.  Uji  ketoksikan  ekstrak  etanol  kulit kelengkeng  terhadap Artemia  salina L.  memberikan  nilai  LC 50 sebesar  942  µg/mL,  sedangkan pada  ekstrak  etanol  biji  kelengkeng  sebesar  3429  µg/mL.  Hasil  KLT  menunjukkan  bahwa  pada ekstrak  etanol  kulit  kelengkeng  mengandung  senyawa  golongan  fenolik  dan  saponin.  Sementara dalam  ekstrak  etanol  biji  kelengkeng  mengandung  senyawa  golongan  fenolik,  flavonoid,  saponin, dan minyak atsiri. Senyawa pada ekstrak etanol biji kelengkeng yang memiliki aktivitas antibakteri adalah senyawa fenolik dan flavonoid.
Kata  kunci : Kelengkeng  ( Euphoria  longan (Lour.)  Steud), Escherichia  coli , Staphylococcus aureus , Brine Shrimp Lethality Test , KLT .

## ABSTRACT
Previous research showed that leaves, stems, and branches Euphoria longan (Lour.) Steud active as antibacterial, antioxidant, and toxic to the Artemia salina Leach. Peel and seed of  longan was  reported  contain  phenolic  compounds.  The  aims  of  this  research  is  to  determine  the antibacterial activity of ethanol extract of the peel and seed of  longan to the E. coli and  S. aureus, and the toxic effects against shrimp Artemia salina L., and also provide information about the class of compounds  which is contained in the ethanol extract of the peel and seed of  longan. Peel and seed  of  longan  was  macerated  using  95%  ethanol  solvent  in  the  destilation.  The  extracts  were used to test the antibacterial activity to the E. coli and S. aureus as well as toxicity against Artemia salina L  (Brine  Shrimp  Lethality  Test).  Then  performed  thin  layer  chromatography  (TLC)  to determine  the  content  of  compounds  from  ethanol  extract  of  the  peel  and  seed  of  longan. Bioautografi  conducted  to  determine  the  compounds  in  the  extract  which  is  responsible  for  the death of the test bacteria. The results showed that ethanol extract of peel of longan  up to 4% has no  effect  to  the E.  coli and S.  aureus. The  other  hand  the  ethanol  extract  of  seed  longan  has antibacterial  activity  against  the E.  coli and S.  aureus with  MBC  4%  and  2%  respectively.The ethanol extract of peel and seed of longan could inhibit the larca of Artemia salina Leach with LC 50 942 ug/mL and 3429 ug/mL respectively. Thin Layer Chromatography analysis showed the ethanol extract  of  the  peel  longan  contain  phenolic  compounds  and  saponins.  While  the  seed  ethanol extract  group  longan  contain  phenolic  compounds,  flavonoids,  saponins,  tanin  and  essential  oils. Flavonoid  and  phenolic  compound  of  ethanolic  extract  of  seed  of  longan  have  potency  as antibacterial effect against S.aureus and E.coli.
Key  words :    Longan  ( Euphoria  longan (Lour.)  Steud), Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus , Brine Shrimp Lethality Test, TLC.

## PENDAHULUAN
Infeksi merupakan masalah penting yang banyak  dijumpai  pada  kehidupan  sehari-hari. Penyakit infeksi yang banyak diderita masyarakat  di  antaranya  infeksi Enterobacteria dari  golongan Escherichia  coli dan  infeksi  kulit karena Staphylococcus aureus (Anonim, 2004). Penelitian  zat  yang  berkhasiat  sebagai antibakteri  perlu  dilakukan  untuk  menemukan produk  antimikroba  yang  berpotensi  untuk menghambat  dan  membunuh  bakteri  dengan harga yang terjangkau. Alternatif untuk menemukan produk antimikroba adalah dengan memanfaatkan zat aktif yang terkandung dalam tanaman (Widjajanti, 1999).
Berdasarkan  hasil  beberapa  penelitian ilmiah,  kulit  dan  biji  kelengkeng  memiliki berbagai  senyawa  kimia.  Penelitian  Jaitrong et al. (2006)  melaporkan  bahwa  kandungan  kimia dalam  kulit  kelengkeng  adalah  asam  galat, glikosida  flavon,  dan  hidroksinamat  dengan kandungan  utama  flavon  berupa  kuersetin  dan kaemferol. Fraksi eter, kloroform, dan etil asetat daun  dan  cabang  kelengkeng  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri,  antioksidan,  dan toksik terhadap Artemia salina L. (metode BST) (Ripa et  al .,  2010).  Ekstrak  kloroform  batang kelengkeng  (100  µg  disk -1 )  juga  memiliki potensi  terhadap  jamur Candida  albicans dan Aspergillus niger (Rahman et al ., 2007). Soong dan Barlow (2005)
mengemukakan  bahwa  pada  biji  kelengkeng mengandung  senyawa  fenolik  seperti corilagin , asam  galat,  asam  ellagat,  dan  mempunyai senyawa  bioaktif.  Hal  ini  diperkuat  oleh penelitian  Syarifah  (2010)  yang  menyebutkan bahwa  minyak  dari  biji  kelengkeng  berpotensi sebagai  antibakteri terhadap Escherichia  coli dengan nilai KHM sebesar 45,74%.
Berdasarkan penelitian tersebut, tanaman kelengkeng terbukti mempunyai senyawa  bioaktif  yang  dapat  dimanfaatkan, terutama  pada  bagian  kulit  dan  bijinya.  Namun sampai saat ini, kulit dan biji kelengkeng belum banyak  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  dan hanya berakhir sebagai limbah. Oleh karena itu, perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap kulit  dan  biji  kelengkeng  ( Euphoria  longan (Lour.)  Steud)  untuk  membuktikan  adanya aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dan  uji  toksisitas terhadap Artemia salina Leach serta mengetahui golongan senyawa yang terkandung di dalamnya.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan Alat: Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  maserator, vacuum  rotary  evaporator (Heidolph), inkubator (Memmert), oven (Memmert),  bunsen,  pipet  ukur,  mikropipet (Socorex), autoklav (All American),  ultrasonik TM (Cleaner),  alat  timbang  (Precisa),  bejana kromatografi,  lampu  UV,  flakon,  pH  universal,
akuarium  termodifikasi,  lampu,  dan  alat-alat gelas lainnya (Pyrex).
Bahan: Bahan  yang  digunakan  adalah  serbuk kulit  dan  biji  kelengkeng  yang  diperoleh  dari daerah  Bandungan,  etanol 96%  (teknis) terdestilasi, bakteri E. coli dan S. aureus, media BHI  (Brain  Heart  Infusion)  (Oxoid),  media  MH (Mueller Hinton) (Merck), DMSO
(Dimetilsulfoksida)  2%  dan  2,5%  (teknis),  silika gel  GF 254 (Merck),  etanol  (pa),  kloroform  (p.a), metanol  (p.a),  pereaksi  penampak  bercak antara  lain  FeCl 3 ,  Liebermann-Burchard  (LB), vanilin-H 2 SO 4 , dan sitroborat.

## Jalannya Penelitian Determinasi tanaman
Determinasi tanaman kelengkeng dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  Farmasi Fakultas  Farmasi  Universitas  Muhammadiyah Surakarta

## Penyiapan tanaman
Kulit  dan  biji  kelengkeng  yang  telah terkumpul,
dibersihkan
dari kotoran menggunakan air bersih yang mengalir. Kemudian  dikeringkan  di  bawah  sinar  matahari secara  tidak  langsung  dengan  ditutupi  kain hitam.  Selanjutnya  kulit  dan  biji  kelengkeng yang telah kering dihaluskan dengan menggunakan  blender.  Serbuk  yang  diperoleh kemudian diayak dan ditimbang.

## Optimasi Penyari
Sebanyak  15  gram  serbuk  kulit  dan  biji kelengkeng  ditimbang  dan  dimasukan  dalam erlenmeyer. Penimbangan ini dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Kemudian  masing-masing ditambahkan penyari etanol dengan konsentrasi  50%,  70%,  dan  95%  sebanyak  75 mL.  Maserasi  ini  dilakukan  selama  tiga  hari sampai terjadi penjenuhan dilakukan remaserasi  sebanyak  satu  kali.  Hasil  maserasi yang  didapat  kemudian  diuapkan  pelarutnya, dihitung  rendemen,  dilihat  profil  kromatografi lapis  tipis,  dan  diuji  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri  uji  dengan  metode  Kirby Bauer.

## Penyarian
Metode yang digunakan adalah maserasi.  Dari  hasil  optimasi  penyari,  dipilih etanol  95%  untuk  menyari  ekstrak kulit  dan  biji kelengkeng.  Serbuk  kulit  kelengkeng  sebanyak 600  mg  dimaserasi  dalam  2  L  etanol 95%(teknis  terdestilasi),  sedangkan  serbuk  biji kelengkeng  dimaserasi  dalam  4  L  etanol  95% (teknis  terdestilasi).  Campuran  diaduk  sampai homogen,  didiamkan  selama  5  hari  dan ditempatkan  dalam  tempat  yang  gelap.  Hasil maserasi disaring menggunakan corong Buchner.  Maserat  yang  diperoleh  ditampung, kemudian  diremaserasi  sebanyak  1  kali  untuk ekstrak  kulit  kelengkeng  dan  remaserasi  2  kali untuk ekstrak biji kelengkeng. Maserat
dievaporasi  dengan rotary  evaporator dan kandungan air dihilangkan menggunakan waterbath dan vacuum  oven dengan  menjaga suhunya <60 o C .
Uji  aktivitas  antibakteri  dengan  metode dilusi padat
Penyiapan  sampel.  Larutan  stok  ekstrak etanol  kulit  dan  biji  kelengkeng  dibuat  sebesar 50%. Pada stok ekstrak kulit kelengkeng dibuat dengan  melarutkan  12,5  gram  ekstrak  kulit kelengkeng dalam 25 mL DMSO 2%, sedangkan untuk ekstrak etanol biji kelengkeng dilarutkan  dalam  25  mL  dalam  DMSO  2,5%. Dari stok 50% ekstrak kulit kelengkeng tersebut dibuat  seri  konsentrasi  sebesar  :  1,25%  b/v; 2,5%  b/v;  5%  b/v;  10%  b/v;  dan  20%  b/v. Selanjutnya  diambil  1  mL  dari  tiap  seri konsentrasi tersebut dan ditambah 4 mL media, sehingga  konsentrasi  akhir  pada  tabung menjadi  0,25%  b/v;  0,5%  b/v;  1%  b/v;  2%  b/v; dan  4%  b/v.  Untuk  ekstrak  biji  kelengkeng dibuat  seri  konsentrasi  sebesar  5%  b/v;  10% b/v;  20%  b/v;  30%  b/v;  dan  40%  b/v.  Dari masing-masing  seri  konsentrasi  diambil  1  mL dan  ditambahkan  media  4  mL,  sehingga konsentrasi akhir pada tabung menjadi 1% b/v; 2%  b/v;  4%  b/v;  6%  b/v;  dan  8%  b/v.  Masing- masing  campuran  dikocok  hingga  homogen dan dipadatkan dalam posisi miring.
Pengujian  antibakteri.  Suspensi  bakteri sebanyak  25 μL dengan  konsentrasi  10 6
CFU/mL  diratakan  pada  permukaan  campuran ekstrak dan media MH menggunakan ose steril, kemudian diinkubasi selama 18-24 jam. Kontrol yang  digunakan  terdiri  dari  tiga  macam  yaitu kontrol  media  yang  berisi  5  ml  media  MH, kontrol pelarut  yang berisi  4 mL media  MH  +  1 mL  DMSO  2%  atau  2,5%,  dan  kontrol  bakteri yang berisi 5 mL media MH.
Penentuan  Kadar  Bunuh  Minimal  (KBM). Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol kulit dan biji dibandingkan dengan kontrol, yaitu dilihat  ada  tidaknya  pertumbuhan  bakteri  pada masing-masing  tabung.  Hasil  dikatakan  positif (+)  jika  ada  pertumbuhan  bakteri,  dan  hasil negatif  (-)  jika  tidak  ada  pertumbuhan  bakteri. Konsentrasi  minimum  ekstrak  yang  masih mampu  membunuh  bakteri  disebut  Kadar Bunuh Minimum (KBM).
Uji  toksisitas  dengan  metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BST).
Penetasan  telur Artemia  salina Telur udang  ditetaskan  2  hari  sebelum  dilakukan  uji. Penetasan  telur Artemia  salina ini  dilakukan pada  wadah  penetasan  yang  telah  terbagi dalam  dua  bagian,  yaitu  kompartemen  gelap dan  kompartemen  terang.  Kompartemen  gelap dibuat  dengan  menutup  semua  bagian  wadah sehingga  tidak  ada  cahaya  yang  masuk, sedangkan  kompartemen  terang  ini  dibuat dengan  penerangan  menggunakan  lampu
belajar  dan  dalam  keadaaan  terbuka.  Sebagai sekat  antara  kompartemen  gelap  dan  terang diberi  penyekat  plastik  yang  telah    dilubangi dengan  diameter  sekitar  3  mm.  Larva  yang akan ditetaskan ini ditaruh dalam kompartemen gelap  terlebih  dahulu.  Kemudian  larva  akan menetas  setelah  2  x  24  jam.  Larva  yang  sehat akan  menuju  kompartemen  terang  karena bersifat  fototropi,  yaitu  mendekati  sumber cahaya.  Sebelum  air  laut  digunakan,  perlu dilakukan pengecekan pH air laut. Air laut yang baik memiliki pH antara pH 7,3-8,4.
Penyiapan sampel. Pada uji toksisitas ini dibuat stok sebesar 1% yaitu sebanyak 500 mg ekstrak  kulit  dan  biji  kelengkeng  dilarutkan dalam 50 mL metanol pa. Untuk pengujian BST pada  ekstrak  kulit  kelengkeng  ini  dibuat  seri konsentrasi  sebesar  500,  1000,  1500,  2000, dan 2500 µg/mL dari stok 1%, sedangkan pada ekstrak biji kelengkeng ini dibuat seri konsentrasi  sebesar  2000,  3000,  4000,  dan 5000 µg/mL dari stok 1%.
Uji toksisitas. Flakon yang telah disediakan,  ke  dalamnya  di  masukkan  sampel ekstrak kulit kelengkeng sebanyak 250 µL, 500 µL, 750 µL, 1000 µL, dan 1250 µL berturut-turut dari  stok  1%.  Sedangkan  pada  ekstrak  biji kelengkeng  dimasukan  sebanyak  1000  µL, 1500  µL,  2000  µL,  dan  2500  µL  berturut-turut dari  stok  1%.  Sebagai  kontrol  dilakukan  cara kerja  yang  sama,  yaitu  dengan  memasukan  1 mL  pelarut  (metanol  pa)  ke  dalam  flakon. Kemudian  semua  flakon  diuapkan  pada  suhu kamar sehingga tidak berbau pelarut. Selanjutnya 10 ekor larva udang Artemia salina L.  yang  berumur  48  jam  dimasukkan  dalam masing-masing flakon. Satu tetes suspensi ragi ditambahkan  sebagai  makanan,  kemudian ditambahkan  air  laut  sampai  5  mL.  Flakon- flakon  tersebut  diletakan  di  bawah  penerangan selama  24  jam.  Uji  toksisitas  dilakukan  5  kali replikasi.

## Identifikasi  Senyawa  dengan  Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Dibuat  larutan  uji  dengan  konsentrasi 5%. Larutan uji ditotolkan pada fase diam silika GF 254 sebanyak  2  µl,  setelah  totolan  kering, kemudian dielusi dengan fase gerak kloroform : metanol  (9:1)  untuk  ekstrak  kulit  kelengkeng dan  kloroform  : metanol  (9,5:0,5)  untuk  ekstrak biji kelengkeng, dan dengan jarak pengembangan  6  cm.  Setelah  elusi  selesai, kromatogram diangkat, dikeringkan, dan dideteksi  di  bawah  sinar  UV 254 nm  dan  UV 366 nm, serta beberapa pereaksi penampak bercak antara  lain  FeCl 3 ,  Liebermann-Burchard  (LB), vanilin-H 2 SO 4 ,  dan  sitroborat.  Warna  yang timbul  diamati  dan  dibandingkan  dengan pustaka, serta harga Rf bercak dihitung.

## Uji Bioautografi
Untuk  mendeteksi  senyawa  aktif  yang bertanggung jawab terhadap aktivitas
antibakteri  digunakan  metode  bioautografi dengan  cara  kromatogram  diletakkan  pada permukaan  media  MH  dalam  cawan  petri  yang telah  diinokulasi  dengan  suspensi  bakteri sebanyak 100 µl selama 20 menit. Kromatogram  diangkat  dan  selanjutnya  media MH  tersebut  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu 37 C. Bila bercak-bercak pada kromatogram tersebut memiliki aktivitas antibakteri, maka dengan adanya difusi senyawa  aktif  akan  membentuk  zona  jernih yang merupakan zona hambatan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri.  Uji  KBM diperoleh  dengan  mengamati  ada  tidaknya pertumbuhan  bakteri  setelah  diinkubasi  selama 18-24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Untuk  membantu melarutkan  ekstrak  etanol  kulit  kelengkeng digunakan  DMSO  2%,  sedangkan  pada  biji kelengkeng digunakan DMSO 2,5%. DMSO 2% dan  2,5%  dipilih  karena  dari  pengujian kelarutan ekstrak etanol kulit dan biji kelengkeng  terhadap  beberapa  pelarut  dan suspending  agent antara  lain  air,  DMSO,  dan CMC-Na  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol kulit  dan  biji  kelengkeng  paling  larut  dalam DMSO  2%  dan  2,5%.  Konsentrasi  ekstrak etanol  kulit  kelengkeng  yang  akan  diuji  adalah 0,5%;  1%;  2%;  4%;  dan  6%.  Dan  pada  biji kelengkeng  seri  konsentrasi  yang  diuji  adalah 1%;  2%;  4%;  6%;  dan  8%  Hasil  uji  aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit dan biji kelengkeng  terhadap E.  coli dan S.  aureus dapat dilihat di Tabel 1 dan 2.
Kulit  dan  biji  kelengkeng  mengandung flavonoid  yang  merupakan  senyawa  fenol (Harborne, 1987). Menurut Dwidjoseputro (1994)  senyawa  fenol  dapat  bersifat  sebagai koagulator protein. Flavonoid berfungsi sebagai antibakteri  dengan  cara  membentuk  senyawa kompleks  terhadap  protein  ektraseluler  yang mengganggu  integritas  membran  sel  bakteri. Mirzoeva et  al. (1997) cit Sabir  (2005)  dalam penelitiannya  mendapatkan  bahwa  flavonoid mampu  melepaskan  energi  tranduksi  terhadap membran  sitoplasma  bakteri  dan  menghambat motilitas  bakteri.  Mekanisme  yang  berbeda dikemukakan  oleh  Di  Carlo et  al. (1999)  dan Estrela et  al. (1995) cit Sabir  (2005)  yang menyatakan  bahwa  gugus  hidroksil  yang terdapat  pada  struktur  senyawa  flavonoid menyebabkan  perubahan  komponen  organik dan  transpor  nutrisi  yang  akhirnya  akan mengakibatkan  timbulnya  efek  toksik  terhadap bakteri.
Selain  flavonoid,  pada  biji  kelengkeng terdapat  tanin  dan  saponin.  Tanin  memiliki aktivitas antibakteri. Secara garis besar mekanisme yang diperkirakan yaitu tanin dapat merusak  membran  sel  bakteri.  Senyawa astringent tanin dapat menginduksi pembentukan kompleks senyawa ikatan terhadap  enzim  atau  substrat  mikroba  dan pembentukan  suatu  kompleks  ikatan  tanin terhadap  ion  logam  yang  dapat  menambah daya toksisitas tanin itu sendiri (Akiyama et al ., 2007 cit Juliantina et al ., 2008).
Tabel 3- Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit kelengkeng terhadap E. coli dan S. aureus
E.coli S.aureus Konsentrasi (% b/v) Pengujian Konsentrasi (% b/v) Pengujian I II III I II III 0,25 ++++ ++++ ++++ 0,25 ++++ ++++ ++++ 0,5 ++++ ++++ ++++ 0,5 ++++ ++++ ++++ 1 ++++ ++++ ++++ 1 ++++ ++++ ++++ 2 ++++ +++ +++ 2
+++
+++ +++ 4 +++ +++ +++ 4 +++
+++
+++ K1 ++++ ++++ ++++ K1 ++++ ++++ ++++ K2 ++++ ++++ ++++ K2 ++++ ++++ ++++ K3 - - - K3 - - -
Tabel 4- Hasil uji aktivitas antibakteri akstrak etanol biji kelengkeng terhadap E. coli dan S. aureus
E.coli S.aureus Konsentrasi (% b/v) Pengujian Konsentrasi (% b/v) Pengujian
I II
III I II III 1 ++ ++ ++ 1 + + + 2 + + + 2 - - - 4 - - - 4 - - - 6 - - - 6 - - - 8 - - - 8 - - - K1 ++++ ++++ ++++ K1 ++++
++++
++++ K2 ++++
++++ ++++
K2 ++++ ++++ ++++ K3 - - - K3 - - -
Keterangan:
(+) : Terdapat pertumbuhan bakteri (-) : Tidak terdapat pertumbuhan bakteri K1 : Kontrol pelarut (4 mL media MH +1 mL   DMSO + 50 μl suspensi bakteri) K2 : Kontrol bakteri (5 ml media MH + 50 μL suspensi bakteri) K3    :  Kontrol media (5 ml media MH)
Hasil Uji Toksisitas. Metode yang digunakan dalam pengujian toksisitas ini adalah metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BST). Metode  BST  merupakan  suatu  metode  untuk menentukan  toksisitas  suatu  senyawa  atau ekstrak  secara  akut  dengan  menggunakan hewan  coba Artemia  salina Leach.  Analisis hasil  ditentukan  dengan  nilai  LC 50 .  Nilai  LC 50 merupakan konsentrasi dimana zat menyebabkan  kematian  50%  yang  diperoleh dengan memakai persamaan regresi linier y = a +  bx.  Suatu  zat  dikatakan  aktif  atau  toksik  bila nilai LC 50 < 1000 µg/mL untuk ekstrak dan < 30 µg/mL untuk suatu senyawa.
Berdasarkan  perhitungan  data  yang diperoleh,  diketahui  nilai  LC 50 untuk  ekstrak etanol  95%  kulit  kelengkeng  adalah  sebesar 942  µg/mL  (Tabel  3).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  95%  kulit  kelengkeng memiliki  senyawa  aktif  tertentu  yang  toksik terhadap  larva Artemia  salina Leach,  namun dengan  potensi  yang  lemah.  Profil  KLT  pada ekstrak etanol 95% kulit kelengkeng menunjukkan  bahwa  terdapat  dua  bercak  yang terlihat  jelas  berfluoresensi  pada  UV 366 ,  yaitu pada  hRf  16  dan  90.  Pada  hRf  16  dan  90 dimungkinkan  adalah  senyawa  saponin  dan fenolik. Senyawa ini diprediksi dapat menyebabkan  ketoksikan  pada Artemia  salina Leach.  Dalam  penelitian  Juniarti  dkk.  (2009) menyebutkan  bahwa  senyawa  yang  bersifat toksik adalah seyawa yang tersari pada pelarut yang  bersifat  polar.  Sehingga  sifat  toksik  dari ekstrak etanol 95% kulit kelengkeng diperkirakan disebabkan oleh kandungan senyawa  polar  yang  terdapat  di  dalamnya seperti saponin dan fenolik.
Nilai  LC 50 ekstrak  etanol  95%  biji kelengkeng  sebesar  3429  µg/mL  (Tabel  4). Nilai LC 50 tersebut menunjukkan bahwa senyawa  pada  ekstrak  etanol  95%  biji kelengkeng  kurang  toksik  terhadap  larva Artemia salina Leach. Dalam profil KLT ekstrak etanol  95%  biji  kelengkeng  menunjukkan
bahwa pada hRf 88 terlihat jelas berfluoresensi pada  UV 366. Pada  hRf  tersebut  diprediksi merupakan senyawa minyak atsiri. Senyawa ini diduga  penyebab  ketoksikan  pada Artemia salina Leach.  Namun  berdasarkan  hasil  uji ketoksikan  ini,  dimungkinkan  senyawa  tersebut kurang  poten  atau  kurang  toksik  terhadap Artemia  salina L.  Sehingga  untuk  membunuh 50% larva Artemia salina pada uji ini diperlukan konsentrasi  ekstrak  etanol  95%  biji  yang  lebih besar yaitu 3429 µg/mL.
Hasil  Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis. Pemeriksaan kandungan kimia secara kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dilakukan  untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat dalam  ekstrak  etanol  kulit  dan  biji  kelengkeng. KLT dilakukan dengan menggunakan fase diam silika gel GF 254 . Uji pendahuluan KLT dilakukan untuk  mencari  fase  gerak  yang  tepat  agar pemisahannya  baik.  Dari  hasil  pendahuluan dengan  mencoba  beberapa  fase  gerak  dengan berbagai perbandingan, diperoleh bahwa kloroform  :  metanol  (9:1)  v/v  memberikan  hasil pemisahan  yang  terbaik  untuk  ekstrak  kulit kelengkeng  dan  kloroform  :  metanol  (9,5:0,5) v/v  untuk  ekstrak  biji  kelengkeng,  sehingga dalam  uji  bioautografi  dan  analisis  KLT digunakan fase gerak tersebut.
Analisis  KLT  dilakukan  terhadap  golongan senyawa  yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol kulit  dan  biji  kelengkeng.  Adapun  golongan senyawa  yang  akan  dideteksi  adalah  fenolik, saponin, minyak atsiri, dan flavonoid. Hasil KLT dideteksi  dengan  sinar  UV 254nm dan  UV 366nm , serta  beberapa  pereaksi  penampak  bercak antara  lain  FeCl 3 ,  Liebermann-Burchard  (LB), vanilin-H 2 SO 4 , dan sitroborat. Dari hasil analisis KLT  menunjukkan  ekstrak  etanol  95%  kulit kelengkeng  menunjukkan  adanya spot yang mengandung  senyawa  golongan  fenolik  dan saponin.  Pada  ekstrak etanol 95% biji kelengkeng  menunjukkan  adanya  senyawa golongan  fenolik,  flavonoid,  saponin,  dan minyak atsiri.
Tabel - 3. Perhitungan LC 50 ekstrak etanol 95% kulit kelengkeng ( Euphoria longan (Lour.) Steud) terhadap Artemia salina Leach
Konsentrasi Log Konsentrasi % Kematian rata-rata Angka probit (y) Hasil Regresi Linier LC 50 0,050 -1,30 24 4,29 a: 8,447 b: 3,361 r: 0,9602 942 µg/mL 0,100 -1 46 4,90 0,150 -0,82 50 5 0,200 -0,7 86 6,08 0,250 -0,6 96 6,75
Tabel - 4. Perhitungan LC 50 ekstrak etanol 95% biji kelengkeng ( Euphoria longan (Lour.) Steud) terhadap Artemia salina Leach
Konsentrasi Log Konsentrasi % Kematian rata-rata Angka probit (y) Hasil Regresi Linier LC 50 0,200 -0,69 0 0 a: 15,684 b: 22,988 r: 0,949 3429 µg/mL 0,300 -0,52 20 4,16 0,400 -0,39 46 4,90 0,500 -0,30 100 10
Hasil  Uji  Bioautografi.  Uji  bioautografi dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  biji kelengkeng yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Penotolan sampel (ekstrak  etanol  biji  kelengkeng)  pada  lempeng silika gel GF 254nm sebanyak 2 µl yaitu 1 totolan. Lempeng  kromatogram  diletakkan  di  atas media  MH  yang  telah  diinokulasi  dengan suspensi  bakteri  selama  20  menit  dengan tujuan  agar  senyawa-senyawa  kimia  terpisah berupa bercak-bercak pada kromatogram dapat berdifusi  pada  lapisan  media  MH.  Bila  bercak- bercak  memiliki  aktivitas  antibakteri,  maka dengan  adanya  difusi  tersebut  akan  terbentuk zona  jernih  yang  merupakan  zona  hambatan senyawa kimia dari ekstrak etanol biji kelengkeng.
Hasil  uji  bioautografi  ekstrak  etanol  biji kelengkeng  menunjukkan adanya  zona  jernih pada  media  MH  yang  mengandung S.  aureus. Bila  dilihat  pada  media  MH  pertumbuhan S. aureus pada  hRf  4,  yang  diprediksi merupakan senyawa  golongan  fenolik  dan  flavonoid.  Pada media  yang  mengandung E.  coli ,  terlihat adanya  zona  hambat  pada  hRf  4,  yang dimungkinkan adalah senyawa golongan fenolik dan  flavonoid.  Sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  komponen  golongan  senyawa  dari ekstrak  etanol  biji  kelengkeng  yang  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S . aureus dan E.  coli kemungkinan  merupakan  senyawa golongan fenolik dan flavonoid.
Diketahui bahwa flavonoid yang merupakan golongan senyawa fenol (Harborne, 1987)  bekerja  dengan  cara  mendenaturasi protein  sel  dan  merusak  membran  sel  bakteri. Suatu substansi  yang dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki kembali ( irreversible ) sehingga pertumbuhan  bakteri  terhambat  (Pelczar  dan Chan, 1988).
Senyawa  golongan  fenolik  dan  flavonoid juga  dimungkinkan  memiliki  aktivitas  terhadap
Artemia  salina Leach.  Meskipun  kurang  aktif, potensi  dari golongan flavoniod dan fenol patut diteliti lebih dalam untuk mengetahui aktivitasnya lebih lanjut. Dilakukannya fraksinasi  dan  pengujian  ke  aktivitas  yang  lain perlu  dilakukan  untuk  menambah  data  ilmiah tentang potensi kulit dan biji kelengkeng.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah diperoleh,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  95%  kulit  kelengkeng  hingga konsetrasi  4%  belum  menunjukkan  potensi antibakteri  terhadap  bakteri E.  coli dan S . aureus ,  sedangkan  ekstrak  etanol  95%  biji kelengkeng memiliki aktivitas antibakteri terhadap E.  coli dengan  nilai  KBM  4% dan S . aureus dengan nilai KBM 2%.
Ekstrak  etanol  95%  kulit  kelengkeng memiliki  toksisitas  terhadap Artemia  salina Leach  dengan  nilai  LC 50 sebesar  942 μg/mL, sedangkan  ekstrak  etanol  95%  biji  kelengkeng memiliki  toksisitas  terhadap Artemia  salina L. dengan nilai LC 50 sebesar 3429 μg/mL.
Profil  KLT  untuk  etanol  95%  kulit kelengkeng  menunjukkan  adanya spot yang mengandung  senyawa  golongan  fenolik  dan saponin.  Pada  ekstrak etanol 95% biji kelengkeng  menunjukkan  adanya  senyawa golongan  fenolik,  flavonoid,  saponin,  dan minyak  atsiri.  Senyawa  pada  ekstrak  etanol 95%  biji  kelengkeng  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap E.coli dan S . aureus adalah senyawa flavonoid.

## SARAN
Perlu  dilakukan  fraksinasi  dan  uji senyawa  aktif  dari  ekstrak  etanol  95%  biji kelengkeng  terhadap  bakteri E.coli dan S. aureus multiresisten  antibiotik  serta  aktivitas antijamur dan antioksidan yang lebih berpotensi.

## DAFTAR PUSTAKA
Akiyama, H.,  Fujii,  K.,  Yamasaki,  O.,  Oono,  T.,  Iwatsuki,  T.,  2001,  Antibacterial  Action  of  Several Tannins Agains Staphylococcus aureus , Journal of Antimicrobial Chemotherapy , 48, 487-91.
Anonim, 2004, Infeksi Enterobacteria, (online), (www.medicastore.com, diakses 3 Maret 2010).
Carlo, Di, Mascolo N., Izzo, A. A., Capasso, F., 1999, Flavonoids: old and new aspects of a class of natural therapeutic drugs, Life Science , 65 (4), 53-337.
Harborne,  J.  B.,  1996, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan , diterjemahkan oleh Padmawinata, K., dan Soediro, Penerbit ITB, Bandung.
Hendrawati,  A.  R.,  2009,  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Kemangi, Skripsi ,  Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang.
Jaitrong,  S.,  Nithiya  R.  and  John  A.  M.,  2006,  Analysis  of  The  Phenolic  Compounds  in  Longan (Euphoria longan Lour. Steud) Peel , Journal , (online),(http://www.agro.cmu.ac.th/Research/WebAjarn/ppp/nr_0062.pdf,  diakses  tanggal  3  Maret 2010).
Juniarti,  Delvi  O.,  Yuhernita,  2009,  Kandungan  Senyawa  Kimia,  Uji  Toksisitas  ( Brine  Shrimp Lethality  Test )  dan  Antioksidan  ( 1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl )  dari  Ekstrak  Daun  Saga  ( Abrus precatorius L.) ,
Journal,
(online), (http://journal.ui.ac.id/upload/artikel/10_Edit 1_JUNIARTI_KANDUNGAN%20SENYAWA%20KIMIA_Layout.pdf,  diakses  tanggal  25  Desember 2010).
Mirzoeva, O. K., Grishanin, R. N., Calder, P. C., 1997, Antimicrobial action of propolis and some of its  components:  the  effects  on  growth,  membrane  potential,  and  motility  of  bacteria ,  Brazilian Journal of Microbioloy , 152, 239-46.
Pelczar,  M.  J.  dan  Chan,  E.  C.  S.,  1988, Dasar-Dasar  Mikrobiologi ,  diterjemahkan  oleh Hadioetomo, R. S., Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta.
Rahman,  K.  M.,  Kamrun,  N.,  Mohammad,  G.  U.  K.,  Choudhury,  M.  H.,  2007,  Phytochemical  and Biological  Studies  on Nephelium  longan , Boletin  Latinoamericano  y  del  Caribe  de  Plants Madicinales y Aromaticans , 6 (3), 68-72, (online), (http://redalyc.uaemex.mx/pdf/856/85660305.pdf, diakses tanggal 25 Desember 2010).
Ripa,  F.  A.,  Haque,  M.  and  Bulbul,  I.  J.,  2010,  In  Vitro  Antibacterial,  Cytotoxic  and  Antioxidant Activities  of  Plant  Nephelium  longan, Pak  J.  Biol.  Sciences ,  13:  22-27,  (online), (http://scialert.net/qredirect, diakses tanggal 3 Maret 2010).
Sabir, A., 2005, Aktivitas Antibakteri Flavonoid Propolis Trigona sp terhadap Bakteri Streptococcus mutans ( in vitro ), Majalah Kedokteran Gigi ( Dent. J. ), 58 (3), 135-141.
Soong,  Y.  Y. and  Philip  John  Barlow,  2005,  Isolation  and  Structure  Elucidation  of  Phenolic Compounds  from  longan  ( Euphoria  longan Lour.  Steud.)  seed  by  High-Performance  Liquid Chromatography –Electrospray Ionization
Mass
Spectrometry, Journal , (online),
(http://www.sciencedirect.com, diakses tanggal 20 Maret 2010).
Syarifah, M., 2010, Isolasi, Karakterisasi, dan Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Biji Buah Kelengkeng Lokal  dan  Impor  serta  Identifikasi  Asam  Lemak  Penyusunnya, Skripsi, Jurusan  Kimia,  Fakultas MIPA, Universitas Negeri Malang, Malang.
Widjayanti, V. N., 1999, Obat-obatan , Penerbit Kanisius, Yogyakarta.