Volume 12, Nomor 3, Tahun 2023, Halaman 232-237 Submitted: 24 Juli 2023 Online di : http://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jnc/ Accepted: 8 Agustus 2023

## PROFIL ASAM AMINO MAKANAN PENDAMPING ASI (MP-ASI) PROTEIN HIDROLISAT IKAN KUNIRAN
Nuryanto 1* , Astrid Rossalia Putri 2 , Ekowati Chasanah 2 , Muhammad Sulchan 1 , Diana Nur Afifah 1 , Pujoyuwono Martosuyono 3 , Nazulatul Asmak 1
1 Departemen Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Indonesia
2 Research Center for Marine and Inland Bioproducts, Research Organization (RO) of Earth and Maritime, National Research and Innovation Agency (BRIN), Indonesia
3. Kementrian Kelautan Republik Indonesia

## ABSTRACT
Background: Kuniran fish is a high source of protein which can be used as complementary feeding (CF). So that the protein digestibility value is high, protein hydrolysate can be used.
Objectives: This study aims to analyze the amino acid content in CF kuniran fish hydrolyzed protein. Methods: Experimental  study  with  a  completely  randomized  design  (CRD)  with  2  replications.  The  sample  of  this research was CF product kuniran fish protein hydrolysate which was divided into three CF formulas, Formulation 1 (F1), Formulation 2 (F2) and Formulation 3 (F3) with the raw material composition of kuniran fish protein hydrolyzed (KFPH), skimmed milk, red rice and green beans, which are different for each formulation. The independent variables in this study were formulations F1, F2 and F3, while the dependent variable in this study was the content of amino acids. Amino acid analysis using the AOAC 2005 method, with HPLC. The data analysis used includes descriptive analysis and is presented in graphical form Results: The FC-KFPH formula contains 15 amino acids consisting of 9 essential amino acids namely histidine, arginine, threonine, valine, methionine, isoleucine, leucine, phenylalanine, lysine and 6 non-essential amino acids namely glutamic acid, aspartic acid, serine , glycine, alanine, and tyrosine. The high content of essential amino acids is leucine and lysine while the highest non-essential amino acids are glutamic acid found in F2.
Conclusion: The highest content of amino acids are leucine, lysine and glutamic acid found in F2. Keywords: Amino acids; Complementary feeding; Hydrolyzate; Kuniran fish; Protein,

## ABSTRAK
Latar belakang: Ikan kuniran merupakan sumber protein yang tinggi yang dapat digunakan sebagai bahan makanan pendamping ASI (MP-ASI). Agar nilai cerna protein tinggi maka dapat dilakukan hidrolisat protein.
Tujuan: Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  kandungan  asam  amino  pada  MP-ASI  protein  hidrolisat  ikan kuniran.
Metode: Penelitian eksperimen dengan design rancangan acak lengkap (RAL) dua kali ulangan. Sampel penelitian ini adalah produk MP-ASI Protein hidrolisat ikan kuniran yang di bagi menjadi tiga formula MP-ASI yaitu formulasi 1 (F1), formulasi 2 (F2) dan Fromulasi 3 (F3) dengan komposisi bahan baku protein hidrolisat ikan (PHIK), susu skim beras merah dan kacang hijau yang berbeda setiap formulasi. Variabel bebas penelitian ini adalah formulasi F1, F2 dan F3, sedangkan  variabel  terikat  penelitian  ini  adalah  kandungan  asam  amino.  Analisis  asam  amino  menggunakan  metode AOAC 2005, dengan HPLC. Analisis data yang digunakan meliputi analisis deskriptif dan di sajikan dalam bentuk grafik Hasil: Formula MP-ASI PHIK mengandung 15 asam amino yang terdiri dari 9 asam amino esensial yaitu histidin, arginin, treonin, valin, metionin, isoleusin, leusin, fenilalanin, lisin dan 6 asam amino non esensial yaitu asam glutamat, asam aspartat, serin, glisin, alanin, dan tirosin. Kandungan asam amino esensial yang tinggi adalah leusin dan lisin sedangkan asam amino non esensial tertinggi yaitu asam glutamat yang terdapat pada F2.
Simpulan: Kandungan asam amino yang tertinggi adalah leusin, lisin dan asam glutamat yang terdapat pada MP-ASI F2. Kata Kunci: Asam Amino; Hidrolisat; Ikan kuniran; MP-ASI; Protein

## PENDAHULUAN
Malnutrisi  merupakan  salah  satu  masalah gizi  terbesar  yang  hingga  saat  ini  masih  belum teratasi dengan baik di beberapa negara berkembang seperti  Indonesia. 1 Salah  satu  masalah  gizi  dengan prevalensi  tinggi  di  Indonesia  adalah stunting atau perawakan  pendek. Stunting merupakan  gagal
pertumbuhan  pada  bayi  atau  anak,  dimana  tinggi badan  terlalu  rendah  tidak  sesuai  dengan perbandingan  usia  dengan  z-skor  tinggi  badan berdasarkan usia <-2SD. 2,3
Prevalensi  stunting  pada  anak  usia  kurang dari  lima  tahun  secara  global  sebesar  25%.  Jika dilihat dari beberapa kawasan seperti di Afrika Timur
prevalensi stunting sebesar  43%,  Afrika  Barat sebesar 34%, Asia Tengah dan Selatan sebesar 35% dan Asia tenggara sebesar 28%. 4,5 Hasil survei status gizi  Indonesia  tahun  2022,  prevalensi stunting di Indonesia  sebesar  21.6%. 6 Stunting bukan  hanya berdampak terhadap hilangnya potensi petumbuhan fisik, tetapi stunting mempunyai  dampak  yang luas seperti  keterlambatan  perkembangan  kognitif  dan prestasi  sekolah  yang  rendah,  serta  meningkatnya risiko penyakit tidak menular seperti diabetes melitus (DM) dan penyakit jantung koroner (PJK). 7,5 Stunting pada usia setelah enam bulan sering dihubungkan dengan kurang zati gizi dari makanan pendamping  ASI  (MP-ASI)  yang  sangat  rendah. Penelitian di India didapatkan hasil bahwa,  praktek pemberian  MP-ASI  merupakan  prediktor  paling signifikan  terjadinya stunting pada  anak  usia  2 tahun. 8 Protein  dibutuhkan  untuk  pemenuhan kecukupan  asam  amino  dalam  tubuh.  Beberapa penelitian  menyebutkan  bahwa  profil  asam  amino terutama  lisin  dan  leusin  sering  dikaitkan  dengan terjadinya stunting. Hal ini sesuai dengan Penelitian di  Afrika  menunjukkan  bahwa  makanan  yang dikonsumsi anak dengan risiko stunting mempunyai kandungan  asam  amanio  esensial  (tryptophan  dan lisin)  yang  rendah  pada  makanannya. 9 Begitu  juga penelitian  pada  anak  balita  di  Malawi  didapatkan hasil  bahwa  9  asam  amino  esensial  dalam  serum darah  anak-anak stunting ternyata  sangat  rendah yang  berakibat  pada  represi  sintesis  protein  dan lemak  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  sel. 10 Menurut WHO 2012, target global terpenting dalam menurunkan  prevalensi stunting sebesar  40%  pada 2025 adalah dengan memastikan MP-ASI untuk anak usia 6 – 24 bulan yang berkualitas dari segi frekuensi dan nilai zat gizinya. 11 Standar MP-ASI bubuk instan menurut SNI- 01-7111.4-2005,  umumnya  terbuat  dari  campuran tepung  beras,  susu  skim,  gula  halus  dan  minyak nabati.  Supaya  dapat  meningkat  kandungan  gizi maka  MP-ASI  tersebut  dapat  disubstitusi  dengan bahan pangan lain terutama pangan lokal yang ada di Indonesia.  Sumber  pangan  lokal  yang  mengandung protein  tinggi  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan MP-ASI adalah ikan kuniran ( Upeneus moluccensis ). Kandungan  protein  ikan  kuniran  sebesar  21,62%. 12 Supaya  kandungan  protein  ikan  ini  mudah  dicerna, maka  protein  ikan  ini  perlu  dihidrolisat.  Bentuk terhidrolisis  (terpotong)  membuat  protein  ikan menjadi mudah dicerna, diserap, dan digunakan oleh tubuh  dibanding  protein  secara  utuh.  Potongan protein  berupa  peptida  dan  asam  amino  bebas  baik untuk  pertumbuhan  bayi  dan  anak  terutama  untuk memenuhi  kebutuhan  zat  gizi  anak  stunting. 13,  14 Selain  ikan,  pangan  lokal  lain  dengan  kandungan protein  tinggi  adalah  kacang  hijau.  Kacang  hijau
mengandung  sekitar  20,97 – 31,32%  protein,  lebih tinggi  dibandingkan  kacang  kedelai  (18 – 22%)  dan kacang  merah  (20 – 30%)  untuk  kandungan  protein. Bahan  lain  yang  digunakan  dalam  MP-ASI  adalah susu skim. 15, 16
Tepung  susu  skim  adalah  produksi  susu berbentuk  bubuk  yang  diperoleh  dengan  proses pengeringan  susu  skim  pasteurisasi.  Susu  jenis  ini kadar  lemaknya  rendah  yaitu  tidak  lebih  dari  1,5% dan  kadar  airnya  tidak  lebih  dari  5%.  Susu merupakan sumber protein dengan mutu yang sangat tinggi. Protein susu dibagi menjadi dua fraksi utama berdasarkan  kelarutannya  yaitu  kasein  dan  protein whey . Kasein, yang terdiri dari sekitar 80% dari total nitrogen  dalam  susu  dan  sekitar  15%  merupakan protein whey dan  sisanya  merupakan  komponen nitrogen  non-protein. 17,18 Penelitian  ini  bertujuan untuk menganalisis kandungan asam amino MP-ASI protein hidrolisat ikan kuniran (PHIK).

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen  dengan  design  rancangan  acak  lengkap (RAL)  2  kali  ulangan.  Sampel  penelitian  yang digunakan adalah produk MP-ASI Protein hidrolisat ikan  kuniran  (PHIK)  yang  di  bagi  menjadi  tiga formula MP-ASI.
Komposisi bahan yang terkandungan dalam pembuatan formula mengacu pada Standar MP-ASI bubuk instan menurut SNI-01-7111.4-2005. Dimana bahan baku terbuat dari campuran tepung beras, susu skim, gula halus dan minyak nabati (Tabel 1). Supaya dapat  meningkat  kandungan  gizi  maka  MP-ASI tersebut dapat diganti atau dapat disubstitusi dengan bahan  pangan  lain.  Adapun  beras  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  tepung  beras  merah, ditambah  dengan  tepung  kacang  hijau  dan  tepung protein hidrolisat ikan kuniran (PHIK).
Pembuatan  PHIK  menggunakan  enzim protease  lokal  dari Bacillus  licheniformis .  Metode mengacu pada penelitian sebelumnya. 14 Daging ikan kuniran  ( fillet  atau  dressed  fish )  dihaluskan menggunakan food processor . Daging dihomogenisasi  dengan  akuades  (termasuk  enzim) dengan  perbandingan  1:2.  Kekuatan  enzim  yang digunakan  adalah  500  U/25  g  daging  ikan.  Proses hidrolisis  dilakukan  pada  suhu  55 o C  selama  6  jam. Setelah  dihidrolisis,  reaksi  enzimatis  dihentikan dengan pemanasan pada suhu 100 o C 10 menit. PHIK cair diperoleh dengan cara memfiltrasi menggunakan saringan  300  mesh  dan  600  mesh,  kemudian  filtrat disimpan  beku  dan  difiltrasi  menggunakan ultrafiltrasi,  lalu  dilanjutkan  dengan  penambahan filler  sebanyak  20%  sebelum  dikeringkan  secara cepat menggunakan spray drier.
Tabel 1. Komposisi Formulasi MP-ASI Protein Hidrolisat Ikan Kuniran
Formulasi Jenis Bahan (g) Beras Merah Susu Skim PHIK Kacang Hijau Minyak Gula F1 21,6 18 7,6 37,8 10 5 F2 16,8 15 7,6 45,6 10 5 F3 15,2 18 6,2 45,6 10 5
.Variabel  bebas  penelitian  ini  adalah formulasi  MP-ASI  Protein  hidrolisat  Ikan  kuniran F1, F2 dan F3. Variabel terikat penelitian ini adalah kandungan  asam  amino.  Asam  amino  adalah senyawa  yang  membentuk  protein.  Analisis  asam amino yang mana dalam pengujiannya menggunakan metode  AOAC  dengan  menggunakan  alat  HPLC. Hasil  analisis  asam  amino  ditingkatkan  dengan memanfaatkan reaksi pra kolom gugus amino dengan pereaksi  tertentu  membentuk  suatu  derivate  yang dapat  menyerap  sinar  UV  atau  berflouresensi. Pereaksi  yang  digunakan  adalah  ortoftalaldehida (OPA),  OPA  akan  bereaksi  dengan  asam  amino primer  dalam  suasana  basa  yang  mengandung merkaptoetanol membentuk senyawa berflouresensi. Analisis kadar asam amino total berdasarkan metode HPLC,  dengan  kondisi  kolom  ultra  techspere,  laju aliran fase mobil : 1 mL/menit, detektor fluoresensi dan fase mobilbuffer A dan buffer B dengan gradien.
Buffer A terdiri dari OPA (50 mg), methanol (4  mL),  merkaptoetanol  (0,025  mL),  Brij-30  30% (0,050  mL),  buffer  borat  1M;  pH  10,4  (1  mL) dilarutkan dalam 1 liter air. Buffer ini harus disaring dengan  kertas  millipore  0,45  μm  dan  akan  stabil selama 5 hari pada suhu kamar bila disimpan dalam botol berwarna gelap yang diisi dengan gas He atau nitrogen. Buffer B terdiri dari methanol 95% dan air. Penyaringan dilakukan dengan kertas Millipore 0,45 μm. Perhitungan persen Asam Amino dalam sampel adalah  :  %  Asam  Amino  =  (µmolAA  x  Mr  AA  x 100)/ µg sampel. Analisis data yang digunakan pada penelitian  ini  meliputi  analisis  deskriptif  dan disajikan dalam bentuk grafik.

## HASIL
Analisis  asam  amino  dilakukan  untuk mengetahui  jenis  dan  kadar  asam  amino  yang terdapat pada formula bubuk instan dengan subtitusi protein hidrolisat ikan kuniran (HPIK) menggunakan High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Formula  bubuk  instan  dengan  subtitusi  PHIK menghasilkan  beberapa  asam  amino.  Asam  amino menentukan  mutu  protein  yang  terkandung  dalam formula. Protein yang bermutu tinggi adalah protein yang  mengandung  semua  jenis  asam  amino  dalam proporsi yang sesuai untuk pertumbuhan.
Asam amino dibagi menjadi dua, yaitu asam amino esensial dan asam amino non esensial. Asam amino  esensial  merupakan  asam  amino  yang  tidak dapat  dibentuk  oleh  tubuh  manusia  ( nutritive  food ) dan asam amino non esensial merupakan asam amino  yang  dapat  dibentuk  oleh  tubuh  manusia. Penelitian  ini  didapatkan  hasil  terdapat  15  asam amino  (  9  asam  amino  esensial  dan  6  asam  amino non-esensial) yang terkandung dalam fromulasi MP- ASI.  Asam  amino  esensial  yang  terdapat  pada formula  MP-ASI  adalah  histidin,  arginin,  treonin, valin,  metionin,  isoleusin,  leusin,  fenilalanin,  lisin (Gambar 1). Asam amino non esensial yang terdapat pada  formula  MP-ASI  adalah  asam  aspartat,  asam glutamat, serin, glisin, alanin, dan tirosin (Gambar 2).
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  kandungan asam amnino esensial tertinggi adalah pada formula 2.  Jenis  asam  amino  esensial  yang  tertinggi  adalah asam  amino  leusin  (1,47%)  dan  asam  amino  lisin (1,40%) yang ada di formula 2 (F2).
Gambar 1. Asam Amino Esensial Formlasi MP-ASI Protein Hidrolisat Ikan Kuniran
0.44 0.54 0.23 0.94 0.92 0.83 1.34 1.31 0.51 0.61 0.28 1.03 1.02 0.90 1.47 1.40 0.46 0.49 0.26 0.97 0.95 0.88 1.41 1.37 - 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 Histidin Treonin Metionin
Valin Penilalanin I-leusin Leusin Lisin F1 F2 F3
Gambar 2. Asam Amino Non-Esensial Formlasi MP-ASI Protein Hidrolisat Ikan Kuniran
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  kandungan asam  amnino  non-esensial  tertinggi  adalah  pada formula  2.  Jenis  asam  amino  non-esensial  yang tertinggi  adalah  asam  glutamat  (3,25%)  dan  asam aspartat (1,82) yang ada di formula 2 (F2).

## PEMBAHASAN
Penelitian ini didapatkan hasil ada 15 asam amino  yang  terkandung  dalam  formula  MP-ASI protein hidrolisat ikan kuniran, dengan komposisi 9 asam amino esensial yaitu histidin, arginin, treonin, valin,  metionin,  isoleusin,  leusin,  fenilalanin,  lisin dan 6 asam amino non esensial yaitu asam glutamat, asam  aspartat,  serin,  glisin,  alanin,  dan  tirosin. Kandungan  asam  amino  esensial  dan  non  esensial tertinggi terdapat pada formula 2.
Asam amino dapat diklasifikasikan berdasarkan fungsi fisiologi dalam tubuh, yaitu asam amino  esensial  dan  non-esensial.  Asam  amino esensial tidak dapat diproduksi oleh tubuh sehingga harus  disuplai  melalui  makanan,  sedangkan  asam amino  non-esensial  dapat  diproduksi  dalam  tubuh. Asam  amino  esensial  antara  lain  valin,  leusin, isoleusin,  fenilalanin,  triptofan,  metionin,  treonin, histidin, lisin dan arginin. Asam amino non-esensial antara lain glisin, alanin, prolin, serin, sistein, tirosin, asparagin,  asam  glutamat,  asam  aspartat  dan glutamin. 19,20
Protein  terdiri  atas  asam  amino  yang tergabung  melalui  ikatan  peptida.  Protein  memiliki empat jenis struktur, yaitu struktur primer, sekunder, tersier dan kuartener. Sebuah asam amino terdiri dari sebuah gugus amino (NH2), sebuah gugus karboksil (COOH), sebuah atom hidrogen dan gugus R (rantai cabang)  yang  terikat  pada  sebuah  atom  karbon. Sebagian  besar  protein  mengandung  sulfur  dan beberapa  mengandung  komponen  tambahan,  yaitu fosfor, besi dan seng. 19, 21
Penelitian  ini  juga  didapatkan  hasil  bahwa kandungan  asam  amino  esensial  tertinggi  adalah asam amino leusin dan lisin sedangkan asam amino non-esensial  tertinggi  adalah  asam  glutamate  yang ada  di  formula  2.  Tingginya  leusin,  lisin  dan glutamate ini dipengaruhi oleh adanya penambahan protein  hidrolisat  ikan  kuniran.  Penambahan  PHIK pada formula 2 sebanyak 7,6 g menghasilkan kadar asam amino leusin sebesar 1,47%, lisin sebesar 1,4% dan  asam  glutamate  sebesar  3,25%.  Formulasi  3, penambahan  PHIK  di  kurangi  menjadi  6,2  g,  dan kandungan asam amin leusin turun menjadi 1,41%, lisin  menjadi  1,37%  dan  asam  glutamate  menjadi 3,13%.  Pengolahan  ikan  menjadi  hidrolisat  protein bertujuan untuk mengatasi kerusakan ikan dan untuk mendapatkan  bahan  pangan  yang  lebih  mudah dicerna.  Adanya  hidrolisat  menjadikan  protein terpotong  dan  terurai  menjadi  asam  amino  dan peptida-peptida  yang  lebih  sederhana. 20,  22 Produk PHIK  pada  penelitian  ini  menggunakan  bakteri Bacillus  licheniformis yang  menghasilkan  enzyme protease.  Protease  dalam  proses  hidrolisat,  maka enzyme tersebut akan menghidrolisis protein menjadi senyawa  lebih  sederhana  seperti  peptida  dan  asam amino. 23, 24
Selain itu kandungan asam amino lisin dan leusin juga dapat dipengaruhi oleh bahan baku lain terutama  kacang  hijau.  Asam  amino  esensial  yang terdapat  pada  kacang  hijau  seperti  leusin,  lisin  dan fenilalanin/tirosin yang dominan, diikuti oleh valin, isoleusin  dan  histidin.  Selain  itu,  kandungan  asam amino  aromatik  adalah  12,1%,  di  mana  fenilalanin dan  tirosin  merupakan  11,3%.  Sebaliknya,  nilai untuk  treonin,  triptofan  dan  asam  amino  yang mengandung sulfur total (metionin dan sistein) yang bergizi tidak memadai. 25
Leusin  juga  merupakan  salah  satu  asam amino  yang  paling  banyak  ditemui  pada  bahan pangan sumber  protein  seperti  ikan.  Hal  ini  diduga
1.65 2.98 0.81 0.52 1.08 0.68 0.57 1.82 3.25 0.88 0.61 1.16 0.77 0.62 1.71 3.13 0.83 0.47 1.06 0.7 0.61 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Asam Aspartat Asam
Glutamat Serin Glisin Arginin Alanin Tirosin F1 F2 F3
karena adanya kandungan HPI yang berbahan dasar ikan  yang  menyebabkan  kandungan  Leusin  pada formula tinggi. Leusin diperlukan dalam perkembangan  anak-anak  yang  mana  asam  amino leusin  dapat  membantu  regulasi  pembentukan  dan pemecahan protein serta menyediakan energi untuk otot  dan  mencegah  kerusakan  pada  otot. 20 Asam amino  merupakan  zat  gizi  yang  dibutuhkan  untuk pertumbuhan.  Hormon  pertumbuhan  seperti growth hormone (GH) dan insulin-like growth factor 1 (IGF- 1)  tersusun  atas asam  amino. 26 Berkurangnya  salah satu  asam  amino  dalam  GH  dan  IGF-1  akan mempengaruhi pertumbuhan seseorang. Asam amino Lisin dan leusin merupakan reseptor GH yang akan meningkatkan  kinerja  dari  IG-1  sehingga  didalam jaringan GH akan meningkatkan fungsi dan ekspresi IGF-1 dalam pembelahan dan diferensiasi sel dengan mekanisme  autokrin  yang  akan  mempengaruhi pertumbuhan tulang. 27 Asam  amino  esensial  merupakan  faktor utama yang menentukan nilai gizi protein makanan. Protein  yang  berasal  dari  sumber  hewani  dianggap lebih baik daripada yang protein nabati hal ini karena sumber hewani mengandung protein dan asam amino esensial  yang  mudah  dicerna.  Daging  ikan mengandung  komposisi  asam  amino  yang  sangat baik  dan  merupakan  sumber  protein  bergizi  dan mudah dicerna. 28, 29

## SIMPULAN
Formula  MP-ASI  hidrolisat  protein  ikan kuniran mengandung 15 asam amino yang terdiri dari 9 asam amino esensial yaitu histidin, arginin, treonin, valin,  metionin,  isoleusin,  leusin,  fenilalanin,  lisin dan 6 asam amino non esensial yaitu asam glutamat, asam  aspartat,  serin,  glisin,  alanin,  dan  tirosin. Kandungan asam amino tertinggi adalah leusin, lisin dan asam glutamat yang terdapat pada formula 2.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Unicef.  MDG  Update.  Accelerate  Progress  For Children.  Toward  a  Post-2015  Development Agenda  For  All  Children  Unicef.  Unit  for Children. 2015
2. Bloem MW, Pee SD, Hop LT, Khan NC, Laillou A,  Minarto,  et.  al.  Key  strategies  to  further reduce stunting in Southeast Asia: Lessons from the  ASEAN  countries  workshop.  Food  and Nutrition Bulletin. 2013;34(S2):8-16 .
https://doi.org/10.1177/15648265130342S103
3. UNICEF.  Improving  Child  Nutrition,  The achievable imperative for global progress. 2013.
Available from
www.unicef.org/media/files/nutrition _report_2013.pdf
4. World Health Organization (WHO). Resolution WHA65.6.  Maternal,  infant  and  young  child nutrition. In Sixty‐fifth World Health Assembly, Geneva, 21 – 26 May. Resolutions and decisions, annexes  (WHA65/2012/  REC/1)).  Geneva. Switzerland: WHO. 2012
5. deOnis  M.  Branca  F.  Childhood  stunting:  a global perspective. World Health Organization; licensed by JohnWiley & Sons Ltd. Maternal &
Child Nutrition.
2016;12 (S1):12 – 26. https://doi.org/10.1111/mcn.12231
6. Kemenkes.  Buku  saku  survei  status  gizi Indonesia  tahun  2022.  Direktorat  Gizi Masyarakat  Direktorat  Jenderal  Kesehatan Masyarakat Kementerian Kesehatan. 2023
7. Black RE, Victora CG, Walker SP, Bhutta ZA, Christian  P,  de  Onis  M,  Ezzati  M,  Grantham- McGregor S, Katz J, Martorell R, et al. Maternal and child undernutrition and overweight in low- income  and  middle-income  countries.  Lancet. 2013;382(9890):427 – 451. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(13)60937- X
8. Aguayo VM. Nair R. Badgaiyan N. Krishna V. Determinants of stunting and poor linear growth in children under 2 years of age in india: An in- depth  analysis  of  maharashtra's  comprehensive nutrition  survey.  Maternal  &  Child  Nutrition. 2016;12(S1):121-140. https://doi.org/10.1111/mcn.12259
9. Nus  ET  &  Tanumihardjo  SA.  Quality  protein maize for Africa: Closing the protein inadequacy gap in vurnerable population. American Society for  Nutrition.  Adv.  Nutr.  2011;2(3):217 – 224. https://doi.org/10.3945/an.110.000182
10. Semba  RD,  Shardell  M,  Sakr  FA,  Moaddel  R, Trehan  I,  Maleta  KM,  et  al.  Child  stunting  is associated  with  low  circulating  essential  amino acids . E Bio Med, 2016;6:246 – 52.
https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2016.02.030
11. World Health Organization (WHO). Resolution WHA65.6.  Maternal,  infant  and  young  child nutrition. In Sixty‐fifth World He alth Assembly, Geneva, 21 – 26 May. Resolutions and decisions, annexes  (WHA65/2012/  REC/1)).  Geneva. Switzerland: WHO. 2012 12. Sivaraman G, et al. Proximate composition and fatty acid profiling of four marine fish species of Gujarat Coast.
Society of Fisheries Technologists  (India).  2016;53(4):326 – 329. Available from: https://krishi.icar.gov.in/jspui/handle/12345678 9/41540
13. Nurhayati  T,  Salamah  E  dan  Hidayat  T. Karakteristik  hidrolisat  protein  ikan  selar (Caranx  leptolepis)  yang  diproses  secara
enzimatis.  Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia.  2007;10(1):23-34.  Available  from: https://journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi/article/v iew/966
14. Chasanah E., Fawzya YN., Zilda DS, Susilowati R.  Laporan  Teknis:  Penelitian  Teknologi Produksi  Hidrolisat  Protein  Ikan  (Hpi)  Secara Enzimatis. BBRP2BKP. 2016
15. Anwar  F,  Latif  S,  Przybylski  R,  Sultana  B, Ashraf  M.  Chemical  composition  and antioxidant activity of seeds of different cultivars of  mung  bean.  Journal  of  Food  Science. 2007;72(7):S503-510 . https://doi.org/10.1111/j.1750-
3841.2007.00462.x
16. Purwono dan Hartono, R. Kacang hijau. Penerbit Penebar Swadaya. Jakarta ; 2005
17. Winarno  F  G.  Pangan,  Gizi,  teknologi  dan konsumen.  Jakarta:  PT  Gramedia  Pustaka Utama; 1993.
18. Regan J O, M P Ennis, D M Mulvihill. Handbook of  hydrocolloids  (second  edition):  Woodhead Publishing Series in Food Science, Technology and Nutrition; 2009
19. Luo Y, Jin X, Hao Z, Wang Q, Zhu L, and He Y. Effect  of  sprouting  on  amino  acids,  protein solubility and availability in green and white faba bean  (Vicia  faba  L.).  Adv.  J.  Food  Sci  and Technol. 2014; 4:531-536
http://dx.doi.org/10.19026/ajfst.6.67
20. Grooper SS, Smith JL, Groff JL. Carbohydrates, In:  Down  E,  editor.  Advanced  Nutrition  and Human  Metabolism.  Seventh  Edition.  USA: Wadsworth, Gengange Learning. 2018
21. Kumar V, Rani A, Pandey V, and Chauhan GS. Changes  in  lipoxygenase  isozyme  and  trypsin inhibitor activity in soybean during germination at  different  temperatures.  Food  Chemistry. 2006;99(3):563-568. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2005.08.024
22. Depkes  RI.  Pedoman  Umum  Gizi  Seimbang. Direktorat Jenderal Bina Kesehatan Masyarakat. Jakarta; 2002
23. Nurhayati  T,  Salamah  E,  Hidayat  T. Karakteristik  hidrolisat  protein  ikan  selar (Caranx  leptolepis)  yang  diproses  secara enzimatis.  Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia(JPHI).  2007;10(1):  23-34.  Available from: https://journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi/article/v iew/966
24. Sudaryati Soeka Y, Rahayu SH, Setianingrum N, Naiola  E.  Kemampuan  Bacillus  Licheniformis dalam  memproduksi  enzim  protease  yang bersifat  alkalin  dan  termofilik.  Media  Litbang Kesehatan.  2011;21:89 – 95.  Available  from:
https://www.neliti.com/id/publications/150524/ kemampuan-bacillus-licheniformis-dalam- memproduksi-enzim-protease-yang-bersifat 25. FAO/WHO.  Protein  quality  evaluation.  Joint FAO/WHO. FAO Food Nutr Paper 1991;51:1-66 26. Giustina A, Veldhuis JD. Pathophysiology of the neuroregulation of growth hormone secretion in experimental animals and the human. Endocrine reviews. 1998;19(6):717-797.
https://doi.org/10.1210/edrv.19.6.0353
27. Smith CM, Marks AD, Lieberman MA. Marks' Basic  Medical  Biochemistry:  A  Clinical Approach, 2nd Edition. Lippincot Williams&Wilkins. e-books. 2005.
28. Kristinsson  HG,  Rasco  BA.  Fish  protein hydrolysates :  production,  biochemi cal  ,  and functional  properties.  Critical  Review  in  Food Science  and  Nutrition,  2000;20(1):43 – 81. https://doi.org/10.1080/10408690091189266 29. Hoffman  DJ,  Sawaya  AL,  Verreschi  I,  Tucker KL,  Roberts  SB.  Why  are  nutritionally  stunted children at increased risk of obesity? Studies of metabolic  rate  and  fat  oxidation  in  shantytown children  from  Sao  Paulo,  Brazil.  Am.  J.  Clin.
Nutr. 2007;72:702 – 707.
https://doi.org/10.1093/ajcn/72.3.702