Jl.  Perikanan  No.  13,  Pancoran  Mas,  Depok  16364,  Indonesia. Tel.  +  62  21  7520482 E-mail:    media.fitri@kkp.go.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## PEMBENTUKAN MOTHER PLANT Bacopa australis SECARA IN-VITRO PADA BERBAGAI  DOSIS  ZAT  PENGATUR TUMBUH  DAN  MEDIA  AKLIMATISASI
Media Fitri Isma Nugraha *)# , Rossa Yunita **) , Endang Gati  Lestari **) , dan  Idil Ardi *)
*) Balai Riset Budidaya Ikan Hias
**) Balai Besar Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian Bogor
(Naskah diterima: 6 April 2017; Revisi final: 26 November 2017; Disetujui publikasi: 26 November 2017)

## ABSTRAK
Tanaman air adalah bagian penting dari ekosistem air tawar. Salah satu spesies yang terkenal adalah Bacopa australis. Hobiis aquascape saat ini memiliki ketertarikan tinggi terhadap tanaman air dengan kualitas yang bagus dari setiap spesiesnya. Metode perbanyakan tanaman air tanpa tanah, lahan pertanian dan air perlu dilakukan  untuk  memenuhi  keinginan  tersebut.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mendapatkan formula media kultur jaringan dan zat pengatur  tumbuh yang tepat untuk multiplikasi dalam perakitan mother plant (tanaman induk) Bacopa australis, serta mendapatkan media terbaik untuk aklimatisasi. Media yang  digunakan  adalah  media  Murashige  dan  Skoog  (MS)  A  padat  dengan  perbedaan  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh. Perlakuan  uji dalam  kombinasi zat  pengatur tumbuh  (a) 0,50  mg/L BAP  + 0,50  mg/L kinetin; (b) 0,50 mg/L BAP; dan (c) 0,50 mg/L 2,4-D. Aklimatisasi tanaman induk dilakukan pada berbagai media antara lain 1) pasir silika + pupuk aqua soil amazonia, 2). pasir malang + pupuk aqua soil amazonia, 3) pasir silika + pupuk cair; 4) pasir malang + pupuk. Hasil yang diperoleh, yaitu formula media kultur terbaik untuk multiplikasi tunas tanaman B. australis secara in-vitro adalah media MS (A) yang diperkaya dengan 0,5 mg/L BAP + 0,5 mg/L kinetin, sedangkan aklimatisasi terbaik pada media pasir malang + pupuk aqua soil amazonia.
KATA KUNCI: Bacopa australis; in-vitro; tanaman induk; zat pengatur tumbuh; media aklimatisasi
ABSTRACT: The assembly of mother plant Bacopa australis with in-vitro propagation and aclimatisation in fresh water aquascape. By: Media Fitri Isma Nugraha, Rossa Yunita, Endang Gati Lestari, and Idil Ardi
Water plant is an important part of freshwater ecosystems. One of the famous species is Bacopa australis. Today, many aquascape hobbyists have a high interest in aquatic plant species that have good aesthetic appearances. To answer this challenge, a new method in-vitro propagation of aquatic plants, planted without soil, agricultural land and water was conducted. The aim of this research was to find the best growth regulator hormon formula and aclimatisation medium, in creating the mother plant Bacopa australis. The medium used was MS (Murashige and Skoog, 1974) with different growth regulator hormon, i.e: (a) 0.50 mg L -1 BAP + 0.50 mg L -1 kinetin, (b) 0.50 mg L -1 BAP, (c) 0.50 mg L -1 2.4-D. The aclimatisation of the mother plant candidates used four treatments, i.e: (1) silica sand + aqua soil amazonia fertilizer, (2) malang sand + aqua soil amazonia fertilizer, (3) silica sand + liquid fertilizer, (4) malang sand + liquid fertilizer. The results showed that the best formula for in-vitro multiplication mother plant of Bacopa australis was MS medium with 0.5 mg/L BAP + 0.5 mg/L kinetin (treatment A). The best medium aclimatisation was malang sand + aqua soil amazonia fertilizer medium.
KEYWORDS: Bacopa australis; in-vitro; mother plant; growth regulator hormone; medium aclimatization

## PENDAHULUAN
Genus Bacopa adalah anggota terkenal dari famili Scrophulariaceae.  Beberapa  jenis  spesies  Bacopa  yang telah  banyak  diperdagangkan  di  dunia  tanaman  air,
antara  lain:  B.  caroliniana,  B.  ianigera,  B. myriophylloides,  B.  monnieri,  B.  rotundifolia,  B. chamaedryoides  (Kunth)  Wettst  (Syn.  Herpestis chamaedryoides  Kunth),  B.  australis.  Genus  Bacopa memiliki banyak keunggulan, salah satunya B. monnieri L.,  yang  memiliki  zat  aditif  sebagai  stimulan  otak alami. B. chamaedryoides (Kunth) Wettst. (Syn. Herpestis chamaedryoides  Kunth)  juga  telah  digunakan  dan dianggap  sebagai  tanaman  obat  penting  di  India.
Secara  historis,  suku,  masyarakat,  dan  komunitas modern, orang-orang umum India, telah menggunakan ramuan  obat  tradisional  ini  sebagai  neuro-stimulan dan untuk tujuan lain (Haque & Ghosh, 2013).
Di antara banyaknya jenis spesies Bacopa, spesies yang diminati sebagai tanaman hias dalam air adalah B.  australis.  B.  australis  ditemukan  di  Brasil  Selatan (australis = selatan: bahasa Brazil). B. australis bukan berasal  dari  Australia,  seperti  anomim  dari  nama spesies  ini.  B.  australis  juga  mudah  tumbuh  di akuarium seperti spesies Bacopa lainnya, dalam kondisi tertentu merayap di bagian bawah untuk membentuk sebuah bantalan hijau yang elegan dan dekoratif. B. australis  ketika  tumbuh  dalam  cahaya  yang  baik, daunnya menjadi kemerahan, mempunyai  tinggi 7-30 cm, lebar batang tubuh 2-4 cm, dapat beradaptasi pada suhu 15°C-30°C dengan tingkat kesadahan air 1-30 dH, serta pertumbuhan yang cepat (Tropica.com, 2017).
Nugraha  et  al.  (2016)  memaparkan  hasil penelitiannya dari tahun 2010 tentang tanaman air yang ditanam  secara  konvensional  di  area  tanah,  yang berlokasi  di  Balai  Riset  Budidaya  Ikan  Hias  (BRBIH) Depok, hasil yang didapatkan tidak maksimal. Tanaman air melakukan pertumbuhan tetapi tidak melakukan reproduksi/perbanyakan. Hal ini dikarenakan kondisi lingkungan dan iklim yang tidak sesuai dengan tanaman air  ini.
Bacopa  sp.,  diminati  sebagai  tanaman  eksotik untuk  penghias  akuarium  air  tawar.  Meningkatnya permintaan  terhadap  spesies  tanaman  air, menyebabkan keberadaan spesies ini mulai terancam. Perbanyakan spesies ini secara menjalar dan melalui biji, namun perkecambahan biji sangat rendah sekali dan tanaman berkualitas tinggi tidak mudah tersedia karena  benih  bersifat  heterozigositas  (Haque  & Ghosh,  2013).  Teknologi  budidaya  mutakhir dibutuhkan untuk perbanyakan somaklonal dalam skala besar,  serta  pasokan  yang  stabil  sepanjang  tahun. Metode  mutakhir  yang  dapat  diaplikasikan  adalah perbanyakan  secara  in-vitro  (mikropropagasi).  Teknik tersebut dapat mempersingkat siklus pemuliaan untuk menghasilkan tanaman dengan kualitas yang lebih baik sehingga  dapat  memenuhi  permintaan  pasar (Kie³kowska & Havey, 2012; Haque & Ghosh, 2013).
Pada  penelitian  ini  perbanyakan  tanaman  air dilakukan dengan bioteknologi secara in-vitro melalui pemanfaatkan sifat totipotensi sel tanaman. Metode ini  dinamakan  teknik  tissue  culture/kultur  jaringan. Kultur  Jaringan  adalah  sebuah  metode  penanaman protoplas, sel, jaringan, dan organ tanaman pada me- dia  buatan  dalam  kondisi  aseptik  sehingga  dapat beregenerasi menjadi tanaman lengkap (Verdeil et al., 2007; Fehér, 2014).
Berdasarkan hasil temuan morel pada tahun 1960 melalui  sifat  totipotensi  sel,  tanaman  yang  sedikit dapat  menghasilkan  tanaman  baru  yang  jumlahnya berpuluh ribu kali lipat dalam waktu singkat (Lestari, 2008).
Pertumbuhan  in-vitro  perlu  di  support  oleh  zat pengatur tumbuh, yang merupakan komponen penting dalam  menyokong  pertumbuhan  tanaman.  Zat Pengatur tumbuh mutlak ditambahkan dalam media kultur, karena berfungsi sebagai kontrol organogen- esis dan morfogenesis dari eksplan dalam membentuk tunas, akar, dan kalus. Keseimbangan dari zat pengatur tumbuh  beserta  jenis  yang  digunakan  harus disesuaikan dengan kondisi fisiologis tanaman, guna memacu  arah  pertumbuhan  yang  diinginkan  dari eksplan (Lestari, 2008).
Terdapat tiga golongan zat pengatur tumbuh yang banyak digunakan dalam kultur jaringan yaitu: auksin, sitokinin, dan giberelin. Golongan auksin adalah zat pengatur tumbuh yang berfungsi dalam merangsang pertumbuhan meristematik ujung tunas/batang. Jenis auksin  yang  banyak  di  gunakan  adalah  2,4-D  (2.4- dichlorophenoxy acetic acid), IAA (indole acetic acid), NAA (naphtalene acetic acid), dan IBA (indole butiric acid).  Sitokinin  adalah  zat  pengatur  tumbuh  yang berfungsi  dalam  merangsang  pertumbuhan  ujung merestematik  akar.  Jenis  sitokinin  yang  banyak digunakan  adalah  BAP  (Benzile  Amino  Purin), thidiazuron, zeatin, kinetin. Giberelin merupakan zat pengatur tumbuh yang hanya digunakan pada tanaman keras,  berguna  untuk  memecahkan  dormansi  pada tanaman  tersebut.  Jenis  giberelin  yang  umum digunakan adalah giberalat acid (GA1, GA2, dan GA3) (Santner et al., 2009).
Setelah eksplan tumbuh membentuk tanaman mini dalam media in-vitro perlu dilakukan aklimatisasi untuk menyesuaikan proses fisiologis dan adaptasi eksplan dari media in vitro ke alam terbuka sebagai lingkungan baru tempat hidupnya. Kondisi yang umum disesuaikan selama aklimatisasi adalah suhu, pH, kadar O2. Lama aklimatisasi bervariasi tergantung jenis dan respons fisiologis tanaman (Lestari, 2008).
Berdasarkan keuntungan dari perbanyakan kultur jaringan maka, penelitian in vitro pada tanaman hias air tawar, tanpa lahan tanah, bebas patogen, serta sehat bagi ikan di dalam akuarium perlu dilakukan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan formula media kultur jaringan dan zat pengatur tumbuh yang tepat untuk multiplikasi dalam perakitan mother plant (tanaman induk) Bacopa australis, serta mendapatkan media terbaik untuk aklimatisasi.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  kultur  in-vitro  B.  australis  dilakukan  di laboratorium sel dan jaringan Balai Besar Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, Badan Penelitian dan Pengembangan, Kementerian Pertanian Republik Indonesia  dari  bulan  Maret-Juli  2016.  Penelitian aklimatisasi hasil kultur jaringan B. australis dilakukan di CV Cahaya Baru, Bintaro, Jakarta Selatan, pada bulan Juli-November 2016.

## Persiapan  Eksplan  dan  Zat  Pengatur  Tumbuh
Alat yang digunakan adalah pinset, batang skapel, petridish,  pisau,  gunting,  dan  botol  kosong  untuk media yang telah disterilkan dalam autoclave dengan suhu  121°C  pada  tekanan  17,50  psi.  Bahan  kultur (eksplan) yang digunakan adalah single node (batang satu  buku)  Bacopa  australis.  Media  yang  digunakan Media MS mengacu pada formula Murashige & Skoog (1962). Perlakuan yang diberikan adalah penambahan zat pengatur tumbuh a) 0,50 mg/L BAP + 0,50 mg/L kinetin,  untuk  pembelahan  sel  dan  merangsang pembentukan pucuk/tunas dan akar; b) 0,50 mg/L BAP untuk pembentukan ujung batang; c) 0,50 mg/L 2,4-D; masing-masing  dengan  ulangan  10  kali  untuk mendapatkan lebih banyak tunas. Bahan-bahan tersebut setelah ditimbang, selanjutnya diaduk sampai larut dan diukur  pH-nya  sampai  menunjukkan  5,80.  Agarosa, kemudian ditambahkan dan dimasak hingga mendidih dan solid.  Setelah media selesai  dibuat, dituangkan kedalam botol-botol yang telah steril, sebanyak 20 cc per botol, kemudian botol ditutup dengan aluminium foil  dan  dikencangkan  sampai  rapat  dan  disterilkan kembali dalam autoclave selama 30 menit pada suhu 121°C pada tekanan 17,50 psi. Media disimpan dulu minimal  tiga  hari  untuk  mengetahui  apakah  terjadi kontaminasi atau tidak sebelum dipakai.

## Sterilisasi  Eksplan
Pada penelitian ini digunakan sterilisasi bertingkat. Sterilisasi  terhadap  eksplan  dilakukan  dengan pencucian  bahan  kultur  dengan  sabun  deterjen sebanyak  2x,  dibilas  dan  dilanjutkan  dengan  sabun pencuci piring 1x kemudian dibilas sebanyak 3x. Bahan kultur kemudian dimasukkan dalam laminair air flow cabinet dan direndam dalam HgCl2 1% selama 30 detik, kemudian dibilas sebanyak 2x dengan aquades steril, sterilisasi dilanjutkan dengan kloroks 15% selama satu menit dan dibilas 2x dengan aquades steril, dilanjutkan dengan kloroks 10% selama satu menit, dibilas 2x dan dilanjutkan  perendaman  dengan  cairan  antiseptik selama satu menit lalu dibilas dengan aquades steril sebanyak  tiga  kali.  Eksplan  yang  sudah  disterilkan
dikultur  pada  media  kultur  yang  telah  disiapkan sebelumnya, setiap botol kultur berisi satu eksplan.
Pengamatan dilakukan dengan mengamati eksplan yang terkontaminasi dan ekspresi pertumbuhan pada setiap tanaman dan ekspresi kontaminasi yang terjadi selama pertumbuhan tanaman kultur. Pengamatan yang dilakukan hanya terhadap eksplan yang hidup dan mati.

## Pembentukan  Planlet
Planlet adalah tanaman mini yang tumbuh secara aseptik  dalam  kondisi  terkontrol  telah  memiliki batang, akar, dan daun, serta sudah melakukan respirasi dan  fotosintesis.  Fotosintesis  dilakukan  dengan bantuan pencahayaan lampu neon dalam ruang simpan hasil  kultur  jaringan.  Planlet  terbentuk  jika  terjadi keseimbangan  antara  auksin  dan  sitokinin,  zat pengatur tumbuh yang diberikan. Jika planlet dalam media  perlakuan  in-vitro  belum  terbentuk  atau terbentuk  kalus,  maka  kalus  tersebut  dipindahkan dalam media perlakuan yang membentuk planlet. Dia- gram  alir  pembentukan  planlet  disajikan  pada Gambar 2.
Secara  singkat  dapat  dijelaskan  metode pembentukan planlet adalah: media kultur dibuat tiga hari  sebelum  ditanam  sesuai  dengan  perlakuan. Tujuannya untuk melihat apakah media bebas patogen atau  terkontaminasi.  Sumber  eksplan  disterilkan sesuai  metode  sterilisasi  di  atas.  Setelah  sumber eksplan steril langsung ditanam pada media tanam di dalam laminair air flow cabinet.

## Pengaturan  Cahaya  Lampu  Neon  di  Dalam Ruangan  Kultur
Lampu  neon  digunakan  sebagai  sumber  cahaya untuk tanaman air berfotosintesis dan diatur waktu pemakaiannya  seperti  intensitas  cahaya  matahari. Penyinaran lampu neon 36 watt sebanyak dua buah pada setiap rak penyimpanan dilakukan selama 12 jam dan 12 jam berikutnya, lampu neon akan mati secara otomatis.  Tanda  keberhasilan  dalam  pembentukan mother plant ini adalah kultur aseptik berupa plantlet utuh (tanaman utuh) dengan batang akar dan daun. Pengamatan dilakukan secara visual dan didapatkan planlet aseptik sebagai mother plant. Tanaman dikultur selama 40 hari kemudian diaklimatisasi di lingkungan non in-vitro. Pertumbuhan dan pengamatan planlet utuh (tanaman utuh) dilakukan setiap minggu (7, 14, 21, 35  hari),  untuk  perlakuan  A  dengan  mengamati pertumbuhan secara visual jenis kontaminasinya, serta membuang eksplan yang terkontaminasi dengan cara membuat non-aktif kontaminan dalam autoclave, agar tidak mencemari udara dan lingkungan laboratorium
Gambar 1. Eksplan single node (satu buku batang) Bacopa australis. Figure 1. Single node explant of Bacopa australis.
Gambar 2. Diagram alir tahapan kultur in-vitro. Figure 2. Flow chart in-vitro propagation step.
Sumber eksplan (Explant source)
Pembuatan media kultur sesuai perlakuan
Reagent preparation based on treatment Proliferasi tunas axilar
Proliferation of axillary buds
Kultur sel tunggal: kultur in-vitro Single cell culture: in-vitro culture
kultur  jaringan.  Pertumbuhan  dan  perkembangan eksplan  Bacopa  australis,  pada  medium  perakaran diamati pada umur 20 dan  35 hari untuk perlakuan B, sedangkan  regenerasi  sel  kalus  pada  perlakuan  C diamati pada umur  14, 21, 28, dan  35 hari.

## Aklimatisasi
Aklimatisasi adalah proses adaptasi tanaman hias air dari lingkungan in-vitro ke lingkungan in-vivo. Tahap ini merupakan tahapan yang kritis karena planlet berasal dari kondisi steril, tanpa fotosintesis dengan sumber hara yang tersedia cukup (heterotrof) harus dipindah ke  kondisi  autotrof.  Mother  plant  yang  telah mengalami pertumbuhan optimal dalam media kultur, diaklimatisasi  di  dalam  akuarium  air  tawar.  Guna melihat  kekuatan  tumbuh  dan  adaptasi  planlet  di lingkungan non in-vitro. Hal ini penting dilakukan untuk mengetahui media akuarium yang cocok dan berapa lama tanaman tahan di media akurium guna menunjang desain  aquascape.
Tanaman  bisa  diaklimatisasi  saat  pertumbuhan tanaman sudah memenuhi botol media tanaman kultur jaringan.  Aklimatisasi  di  dalam  akuarium  bertujuan untuk  mengkondisikan  tanaman  air  agar  kuat berdapatasi  dengan  lingkungan  air  tawar  dan subtratnya.  Penyinaran  tanaman  tetap  dilakukan dengan menggunakan lampu TL 25 watt untuk setiap akuarium selama 12 jam/hari. Perlakuan yang digunakan adalah 1) pasir silika + pupuk aqua soil amazonia, 2) pasir malang +  pupuk aqua soil amazonia,  3) pasir silika  +  pupuk  cair  merek  sera,  4)  pasir  malang  + pupuk cair merek sera. Pada tahap aklimatisasi jumlah tanaman yang digunakan sebanyak 100 rumpun (rhi- zome)  untuk  setiap  perlakuan  media  aklimatisasi. Aklimatisasi dilakukan pada akurium berukuran 40 cm x  60  cm  x  80  cm,  dengan  ketinggian  media  pasir malang dan pasir silika 10 cm, sedangkan pupuk aqua soil  amazonia  setinggi  5  cm  ditambahkan  pada perlakuan 1 dan 2. Pupuk amazonia di berikan hanya satu kali saja, karena pupuk ini bersifat padat dan slow realise (penyerapan perlahan). Pada perlakuan dengan menggunakan pupuk cair (3 dan 4) media pasir silika dan pasir malang diatur dengan ketinggian 15 cm dan volume  pupuk  yang  digunakan  20  mL  per  minggu. Volume air pada setiap perlakuan 100 liter. Aklimatisasi dilakukan selama empat bulan dari bulan Februari-Juni 2017. Pengamatan yang dilakukan terhadap ekosistem akuarium adalah pH air dalam akuarium. pH air pada ke-4 perlakuan sebelum diujikan diatur sama dan stabil yaitu 8. Pengecekan pH air dilakukan setiap minggu. Pengamatan  yang  dilakukan  terhadap  pertumbuhan tanaman antara lain jumlah anakan dalam tiap rumpun, panjang  batang  terpanjang  dalam  tiap  rumpun  dan panjang akar terpanjang dalam tiap rumpun dan pada
hari  keberapa  tanaman  mulai  mengalami  kematian. Pengamatan  pertumbuhan  (jumlah  anakan,  panjang batang, panjang akar) dilakukan di akhir pengamatan pada  minggu  ke-16  setelah  penanaman  dalam akuarium. Pengamatan pertumbuhan di antara ketiga perlakuan  (1,  2,  dan  4)  hasil  aklimatisasi  dianalisis secara Manova (Mathew, 1989).

## HASIL DAN BAHASAN
Sumber eksplan berasal dari single node (satu buku batang), di mana bagian ini memberi jumlah tunas yang banyak dibandingkan dengan bagian akar dan daun. Satu  botol  kultur  berisikan  satu  single  node.  Proses pembentukan mother plant tidak seragam, karena zat pengatur tumbuh yang digunakan memiliki perbedaan yang besar, maka pengamatan dilakukan secara visual dan didapatkan planlet aseptik sebagai mother plant.

## Eksplan  Terkontaminasi
Inisiasi  sterilisasi  B.  australis  cukup  sulit,  karena tanaman  air  ini  memiliki  jaringan  sel  batang  yang sangat  lunak,  serta  mengandung  banyak  air.  Tahap sterilisasi  dihadapkan  pada  berbagai  macam kontaminasi. Hasil pengamatan diketahui kontaminasi tertinggi adalah jamur, kemudian bakteri. Usia mate- rial dan musim koleksi merupakan faktor penting yang menentukan  keberhasilan  sterilisasi  aseptik. Desinfektan  yang  digunakan  dengan  konsentrasi tertinggi  cukup  untuk  menghancurkan  setiap kontaminasi mikroba tanpa merusak jaringan eksplan.
Sterilisasi dilakukan secara bertingkat dan hati-hati, akan tetapi masih terdapat kontaminasi berupa jamur, bakteri, kombinasi keduanya, dan eksplan mati karena proses sterilisasi. Eksplan yang tidak terkontaminasi, dijaga  tetap  steril  sebagai  kandidat  mother  plant, hingga pertumbuhan planlet memenuhi wadah kultur. Kontaminasi diduga terjadi karena jamur, bakteri yang berada  dalam  sel  dari  eksplan  tanaman  dan kontaminasi  dari  lingkungan  luar  seperti  adanya kebocoran dari tutup wadah kultur.

## Hasil  Perlakuan  In-Vitro
Hasil Perlakuan A (Media MS + 0,50 mg/L BAP + 0,50 mg/L Kinetin)
Planlet yang dihasilkan pada perlakuan A, berupa pembelahan sel dan merangsang pembentukan pucuk/ tunas dan akar dapat dilihat pada Gambar 3.
Hasil  pengamatan  bahwa  pada  setiap  perlakuan menunjukkan  rata-rata  waktu  inisiasi  adalah  dua minggu setelah tanam, dengan rata-rata jumlah tunas waktu inisiasi adalah tiga tunas, jumlah tunas terus meningkat  hingga  jumlah  tunas  mencapai  50  tunas dalam 35 hari.
Hesar  et  al.  (2011)  menggunaan  kinetin  dalam pembentukan mother plant pada tanaman hias darat Matthiola incana dengan konsentrasi kinetin 0,5-2 mg/ L adalah konsentrasi terbaik dengan jumlah tunas relatif tinggi dibandingkan konsentrasi lainnya.

## Hasil Perlakuan B (Media MS + 0,50 mg/L BAP)
Hasil perlakuan B, untuk pembentukan ujung batang dapat dilihat pada Gambar 4.
BAP (6-benzilaminopurin) dipilih karena adalah zat pengatur tumbuh golongan sitokinin yang merupakan generasi  pertama  sitokinin  sintetik  yang  fungsinya untuk  stimulasi  dan  regulator  pertumbuhan  dan pembelahan sel, pembentukan tunas dan ujung batang, sebagai inhibitor pada pernapasan tanaman (Da Silva,
2012). Pada perlakuan 0,50 mg/L BAP juga terbentuk perakaran (Gambar 4). Hal ini menunjukkan terdapat auksin endogen yang cukup tinggi di dalam jaringan B.  australis.  Penelitian  ini  sesuai  dengan  yang dilaporkan  oleh  Ribnicky  et  al.  (1996)  pada percobaannya  dalam  pembentukan  embrio  somatik wortel.

## Hasil Perlakuan C (MS + 0,50 mg/L 2-4D)
Regenerasi sel kalus disajikan pada Gambar 5.
2,4-D  (2,4-dichlorophenoxyacetic  acid)  adalah golongan auksin paling kuat dan banyak digunakan dalam induksi kalus embriogenik pada banyak tanaman monokotil. 2,4-D tidak dapat diuraikan di dalam tubuh tanaman,  sehingga  terjadi  konjugasi.  Konjugasi
Gambar 3. Pertumbuhan dan perkembangan eksplan Bacopa australis, a) umur tujuh hari, b) umur 14 hari, c) umur 21 hari, d) umur 35 hari.
Figure 3. Growth and development of explants Bacopa australis, a) seven days old, b) 14 days old, c) 21 days old, d) 35 days old. A                              B                              C                                 D
Gambar 4. Pertumbuhan  dan  perkembangan  eksplan  Bacopa  australis,  pada media perakaran a) umur 20 hari, b) umur 35 hari. Figure 4. Growth and development of explants Bacopa australis, in root medium
a) 20 days old, b) of 35 days old.

## A                                       B
merupakan  respons  tanaman  air  B.  australis  yang diberikan  2,4-D;  membentuk  kalus  sel  yang terkonjugasi (Lestari, 2008).

## Pembentukan  Planlet  dari  Kalus  Bacopa australis
Pada  tahapan  pembentukan  planlet  dari  kalus, dilakukan transfer media dari kalus yang tumbuh pada media C ke media A. Hasil terlihat pada Gambar 6.
Hasil dari perlakuan C terbentuk kalus, kalus dapat dijadikan planlet jika di ganti media pertumbuhannya yang  mengandung  akusin  dan  sitokinin  dengan kombinasi yang sesuai (Haensch, 2007). Perlakuan A merupakan  media  perlakuan  yang  ideal  untuk pembentukan planlet, oleh karena itu, kalus dari me- dia C ditransfer ke media perlakuan A.
Pembentukan kalus memiliki tujuan penting yaitu untuk mendapatkan lebih banyak planlet, karena setiap sel  kalus  memiliki  potensi  pertumbuhan  planlet (Haensch, 2007). Pada penelitian ini sel somatik dibuat secara  tidak  langsung  melalui  proses  pembentukan kalus.
Perlakuan A (0,50 mg/L BAP + 0,50 mg/L kinetin) adalah  media  terbaik  untuk  pembentukan  planlet. Haensch (2007) melaporkan regenerasi pembentukan planlet  dari  kalus  pada  tanaman  Pelargonium  x domesticum cv. Madame Layal dengan BAP terjadi dalam empat  minggu.  Zat  pengatur  tumbuh  BAP, memunculkan embrio dari tahap utama perbanyakan. Regenerasi dari kalus menjadi planlet berkembang dari tahap  globular  sel-sel  sitoplasma  yang  padat. Penambahan kinetin mendukung pembelahan sel dan pembentukan  organ  lebih  cepat  terjadi.  Minggu
Gambar 5. Regenerasi  sel  kalus  a).  umur  14  hari,  b).  umur  21  hari,  c).  umur  28  hari, d). umur 35 hari.
Figure 5. Callus  cell  regeneration  a).  14  days  old,  b).  21  days  old,  c).  28  days  old,
d). 35 days old.

## A                              B                                 C                             D
Gambar 6. Transformasi kalus dari (perlakuan C) ke media induksi planlet (perlakuan A). a) kalus umur dua minggu, b) Kalus umur empat minggu, (c) kalus setelah dipindah pada media perlakukan A.
Figure 6. Callus transformation from (treatment C) to planlet induction at media (treatment A). a callus two weeks old, b callus four week old, c callus after transformation to medium A.

## A                              B                               C
keempat  setelah  transfer  media,  tunas  mulai bermunculan dari sel kalus pada media 0,50 mg/L BAP + 0,50 mg/L  kinetin, dan pada minggu  kelima akar mulai tumbuh.

## Aklimatisasi
Hasil pengamatan pH di dalam akuarium air tawar pada perlakuan-3 dan 4 mempunyai pH 8,0; sedangkan pada  perlakuan-1  dan  2  mempunyai  nilai  pH  8,2. Tingkat  kehidupan  tanaman  mencapai  100%  pada perlakuan-1, 2, dan 4, kecuali perlakuan 3 (pasir silika + pupuk cair) di mana pada minggu keenam setelah aklimatisasi  tanaman  mulai  mengalami  kematian sebanyak 10 tanaman mati perminggu, sehingga pada minggu  ke-12  setelah  aklimatisasi  seluruh  tanaman pada perlakuan-3 mati 100% (Gambar 7).
Hasil pengujian statistik terhadap perlakuan yang diberikan  pada  proses  aklimatisasi  disajikan  pada Tabel 1.
Perlakuan-1  (pasir  silika  +  pupuk  aqua  soil amazonia)  adalah  terbaik  untuk  pertumbuhan reproduksi  berupa  jumlah  anakan  dan  bertambah panjang akar, sedangkan perlakuan-2 (pasir malang + pupuk  aqua  soil  amazonia)  baik  untuk  penampilan pertumbuhan morfologi yaitu bertambahnya panjang
batang. Hasil uji multivariat berdasarkan Wilk’s Lambda sebesar 0,098  dan p = 0.000  menunjukkan adanya perbedaan  pertumbuhan  yang  diamati  dari  setiap perlakuaan yang diberikan.
Meningkatnya jumlah anakan dan panjang akar akan memperlihatkan bahwa penyerapan nutrisi dari pupuk aqua soil  amazonia sangat  efektif dan  tekstur pada pasir silika yang berongga memberikan kebebasan dan kemudahan pada pertumbuhan anakan dan panjang akar.
Menurut Walstad (2003), tanaman air tumbuh baik pada sedimen atau tanah dibandingkan pasir. Tanah mendukung secara maksimal pertumbuhan tanaman air.  Kasus  lainnya  tanaman  air  tumbuh  baik  pada sedimen  dengan  24% bahan  organik.  Secara  umum, tanaman air tumbuh baik di berbagai tanah-liat atau tanah lempung dengan beberapa bahan organik. Pada percobaan lain yang dilakukan) pada spesies Vallisneria spiralis tumbuh dengan baik pada substrat alkalin (pH 8,0)  sebagai  top  soil  (tanah  lapisan  atas)  (Walstad, 2003).

## Walstad (2003) melakukan penelitian pada tanaman
B.  monnieri  yang  tergolong  hard  water  plant  dan B.  carolinana  yang  tergolong  softwater  plant menggunakan media dengan kalsium (Ca) dan tanpa
Gambar 7. Aklimatisasi hasil kultur jaringan pada akuarium air tawar umur enam minggu. (A) pasir silika + pupuk aqua soil amazonia, (B) pasir malang + pupuk aqua soil amazonia, (C) pasir silika + pupuk cair, (D) pasir malang + pupuk cair. Figure 7. Tissue culture aclimatization results in freshwater aquariums at six weeks old. (A) silica sand + aqua soil amazonia fertilizer, (B) malang sand + aqua soil amazonia fertilizer, (C) silica sand + liquid fertilizer, (D) malang sand + liquid fertilizer.

## A                                                        B

## C                                                       D
kalsium.  B.  monnieri  yang  ditambahkan  Ca  dapat tumbuh baik, dan mengalami pertumbuhan tidak baik tanpa  Ca,  sedangkan  softwater  plant  (B.  caroliniana) dapat  tumbuh  baik  dan  normal  pada  kedua  media tersebut.

## KESIMPULAN
Perbanyakan  B.  australis  secara  in-vitro  yang menggunakan media MS dengan penambahan 0,5 mg/ L BAP + 0.5 mg/L kinetin (perlakuan A) memberikan perlakuan terbaik. Media aklimatisasi terbaik dari hasil kultur in-vitro dapat dilakukan dengan menggunakan pasir malang yang ditambah pupuk aqua soil amazonia (perlakuan-2) untuk menghasilkan tanaman induk B. australis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini terlaksana berkat kerja sama antara Balai Penelitian dan Pengembangan Budidaya Ikan Hias (BPPBIH) Depok dengan Balai Besar Bioteknologi dan Sumberdaya  Genetik  Pertanian  (BBBIOGEN)  Bogor. Terima kasih yang sebesar-besarnya kami sampaikan pada  Kepala  BBBIOGEN  Bapak  Ir.  Mastur,  Ph.D.  dan seluruh civitas-nya atas kerja sama dan bantuan fasilitas Laboratorium Sel dan Jaringan pada penelitian tanaman air  ini.  Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada  Bapak Prof. Dr. Ir. Hari Eko Irianto, M.Sc. Terima kasih kami kepada pimpinan dan seluruh staf CV Cahaya Baru atas dukungan  sarana  prasarana  dan  kerja  sama  dalam aklimatisasi tanaman air Bacopa australis. Terima kasih kami kepada Bapak Wawan yang telah membantu dalam penyediaan media kultur dan sterilisasi bahan dan alat.

## DAFTAR  ACUAN
Da Silva, J.A.T. (2012). Is BA (6-Benzyladenine) BAP (6 Benzyl  amino purin)?.  The  asian and  Australasian Journal of plant science Biotechnology, 6 (special is- sue 1), 121-123.
Tabel 1. Analisis data pertumbuhan Bacopa australis dalam media aklimatisasi Table 1. Data analysis of Bacopa australis growth in acclimatization medium
Fehér,  A.  (2014).  Somatic  embryogenesis–stress-in- duced remodeling of plant cell fate. BBA-Gene Regu- latory  Mechanisms,  p.  1-94.  doi:  10.1016/ j.bbagrm.2014.07.005.
Hesar,  A.A.,  Kaviani,  K.,  Tarang,  A.,  &  Zanjani,  S.B. (2011). Effect of different concentrations of kine- tin  on  regeneration  of  ten  weeks  (Matthiola incana). Plant Omics Journal, 4(5), 236-238.
Haque, S.M. & Ghosh, B. (2013). In-vitro completion of sexual life cycle: production of R1 plants of Ipo- moea quamoclit L. Propag. Ornam. Plants, 13, 19– 24.
http://tropica.com/fr/guide/r%C3%A9ussir-son- aquarium/engrais-et-co2/. Acces 1 Maret 2017. Haensch K.T. (2007). Influence of 2,4-D and BAP on callus  growth  and  the  subsequent  regeneration of  somatic  embryos  in  long-term  cultures  Pelar- gonium xdomesticum cv. Madame  Layal. Electronic Journal of Biotechnology, 10(1), 1-9. doi: 10.2225/ vol 10-issue 1-fulltext-9.
Kie³kowska, A. & Havey, M.J.  (2012). In-vitro  flower- ing and production of viable pollen of cucumber. Plant Cell Tissue Organ Cult, 109, 73–82.
Lestari,  E.G.  (2008).  Kultur  jaringan  menjawab persoalan pemenuhan kebutuhan akan peningkatan kualitas bibit unggul dan perbanyakan secara besar- besaran. Akademia, 60 hlm.
Mathew, T. (1989). Manova in the multivariate com- ponents of variance model. Journal of Multivariate Analysis, 29, 30-38.
Murashige, T. & Skoog, F. (1962).  A revised for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15, 473-497.
Nugraha,  M.F.I.,  Muhammad,  Y.,  &  Sri,  C.  (2016). Karakterisasi  dan  domestikasi  kandidat  hydro- vegetasi akuarium  air tawar pada  berbagai jenis media tanam untuk komersialisasi dan konservasi.

## Perlakuan
Treatments
Rataan jumlah anakan Average number of tillers Rataan panjang batang Average of stem length (cm) Rataan panjang akar Average of root length (cm) Jumlah total individu Total number of individu 1 4.27 ± 2.65 15.1170 ± 6.14341 3.9404 ± 1.80984 47 2 3.61± 1.90 16.8426 ± 5.57524 3.5926 ± 1.50494 54 4 1.98 ± 1.44 15.1218 ± 5.56204 1.6603 ± 0.94145 78 Nilai F F value 22.828 a 1.708 b 50.901 c Nilai probability P-value 0.000 1,184 0.000
Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur. Pusat penelitian  dan  pengembangan  perikanan,  hlm.
549-560.
Ribnicky,  D.M.,  Ilic,  N.,  Cohen,  J.D.,  &  Cooke,  T.J.
(1996).  The  effects  of  exogenous  auxins  on  en- dogenous indole-3-acetic acid metabolism (the im- plications  for  carrot  somatic  embryogenesis). Plant Physiology, 112(2), 549-558. doi: http:/ / dx. doi. org/ 10. 1104/ pp. 112. 2. 549.
Santner, A., Calderon-Villalobos, L.I.A., & Estelle, M.
(2009).  Plant  hormones  are  versatile  chemical
regulators of plant growth. Nature Chemical Biol- ogy, 5(5), 301-307. doi: 10.1038/nchembio.165.
Verdeil, J-L., Alemanno, L., Niemenak, N., & Tranbarger, T.J.  (2007).  Pluripotent  versus  totipotent  plant stem cells: dependence versus autonomy?. Trends in  Plant  Science,  12(6),  245-252.  doi:  10.1016/ j.tplants.2007.04.002.
Walstad, D. (2003). Ecology of the planted aquarium.
A practical manual and scientific treatise for the home  aquarist.  Nort  carolina  USA:  Echinodorus publishing, Chapel Hill, 194 pp.