## Karakteristik  kimiawi Zn-Organik  dan Cu-Organik  Hasil Bioproses Saccharomyces cerevisiae dan Monolia sitophila
(Chemical  Characteristics of  Zn-organic  and  Cu-organic

## Results of Saccharomeces  cereviseae  and  Monolia  sitophila
Bioprocess)
U Hidayat Tanuwiria, D.C. Budinuryanto, S. Darodjah dan W.S Putranto Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran, Jatinangor, 40600 E-mail : uhtanuwir@yahoo.co.id

## Abstrak
Penelitian  bertujuan  untuk  mempelajari  pembuatan Zn-organik dan Cu-organik hasil bioproses Saccharomyces  cerevisiae (Sc)  dan Monolia  sitophila (Ms) dilihat  dari karakteristik  kimiawi. Karakteristik  kimiawi  didasarkan pada kadar, kelarutan, fermentabilitas di rumen dan kecernaan di pascarumen in vitro. Penelitian dilakuan secara eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) empat perlakuan yaitu Zn-organik.Sc, Zn-organik.Ms,  Cu-organik.Sc  dan  Cu-organik.Ms,  masing-masing  diulang  lima  kali. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kadar  Zn  dalam  Zn-organik.Sc dan Zn-organik.Ms masing-masing 3741  93,5 ppm dan 3726  32,1 ppm; kadar  Cu  dalam  Cu-organik.Sc dan Cu-organik.Ms masing-masing 1126  58,8 ppm dan 1129  11,38 ppm. Kelarutan Zn dan Cu pada kedua bioproses relative rendah yaitu 1,64  0,74% vs 2,14  0,68% dan 1,32  0,55% vs 2,26  0,44%.  Fermentabilitas semua produk  tidak  berbeda  nyata,  sedangkan  kecernaan bahan kering dan bahan organik dari Cu-organik.Ms lebih rendah. Kata kunci : Zn-organik, Cu-organik, kelarutan, fermentabilitas, kecernaan

## Abstract
The  research aims to study  the Zn-oganic  and Cu-organic results  of Saccharomyces cerevisiae (Sc) and Monolia sitophila (Ms) bioprocess  seen  from  the chemical characteristics. Chemical characteristics are based on  the content  and solubility,  in  vitro fermentability in  the rumen and  digestibility in pascarumen.  The experimental  arranged with Completely  Randomized Design (CRD) of four  treatments  i.e  Zn-organic.Sc, Zn- organic.Ms, Cu-organic.Sc and Cu-organic.Mn,  each repeated five times. The  results showed that  Zn contain in Zn-organic.Sc and Zn-organic.Ms is 3741  93.5  ppm and 3726  32.1 ppm respectively; Cu contain in Cu-organic.Sc and Cu-organic.Ms, is 1126  58.8 ppm and 1129  11.38 ppm respectively. Zn and Cu solubility of all bioprocess product are relatively low at 1.64  0.74% vs 2.14  0.68% and 1.32  0.55% vs 2.26  0.44%. Fermentability of all products are not significantly different, whereas the digestibility of dry matter and organic matter from the Cu-organic.Ms is lower.
Keywords: Zn-organic, Cu-organic, solubility, fermentability, digestability

## Pendahuluan
Seng  (Zn)  sebagai  komponen  metaloenzim banyak  terlibat  dalam  enzim  polimerase  DNA, peptidase karboksi A dan B dan fosfatase alkalis. Enzim-enzim  tersebut  berperan  dalam  proliferasi DNA,  sintesis  protein,  proses  pencernaan  protein dan  absorpsi  asam  amino,  serta  metabolisme energi  (Larvor,  1983).  Kebutuhan  Zn  bagi ruminansia  sekitar  40-50  mg.kg -1 (NRC,  2001) dan  mikroorganisme  rumen  antara  130  dan  220 mg.kg -1 .    Menurut  Little  (1986),  Zn  pada  pakan ruminansia di Indonesia berkisar antara 20 dan 38 mg.kg -1 ,  dengan  demikian  secara  alami  ternak yang dipelihara di Indonesia berpotensi defisiensi Zn.
Ternak ruminansia membutuhkan juga mineral tembaga (Cu) untuk sejumlah enzim yang terlibat  dalam  sejumlah  fungsi  (Underwood, 1977).  Tembaga  dibutuhkan  untuk  sintesis hemoglobin  yang  normal.  Peran  biologis  Cu diantaranya sebagai komponen dari seruloplasmin,  superoksida  dismutase  (SOD), oksidase lisil dan oksidase sitokrom (NRC 2001). Defisiensi  Cu  dapat  menyebabkan  berkurangnya kecepatan  pertumbuhan  (Mills et  al.,  1976)  dan menurunnya  ketahanan  terhadap  penyakit  (Suttle dan Jones, 1986).
Mineral  Zn  dan  Cu  memiliki  ketersediaan hayati  yang  tinggi  jika  tersedia  dalam  bentuk organik. Ketersediaan hayati Zn dalam bentuk Zn- proteinat  lebih  tinggi  daripada  ZnSO 4, atau
ketersediaan hayati mineral dalam bentuk organik lebih  tinggi  daripada  bentuk  anorganik  (Schell dan Kornegay, 1996). Demikian pula ketersediaan hayati Cu dalam bentuk Cu-proteinat lebih  tinggi  daripada  CuSO 4 bagi  anak  sapi. Anak sapi yang diberi Cu proteinat menyebabkan Cu dalam plasma dan hati lebih tinggi (Kincaid et al., 1986).
Teknologi  proteksi  nutrien  pakan  adalah salahsatu  bentuk  manipulasi  pakan  di  rumen dalam  rangka  memaksimumkan  suplai  nutrien  ke induk  semang.    Asam  amino  pakan  dapat ditingkatkan  ketersediaan  hayatinya  melalui reaksi  khelasi  dengan  mineral  seng  (Zn)  atau tembaga (Cu) membentuk mineral organik.
Penelitian  ini  bertujuan  mempelajari  Zn- organik  dan  Cu-organik hasil  bioproses.  Zn- organik  dan  Cu-organik  dibuat  melalui  proses fermentasi dengan melibatkan aktivitas Saccharomyces  cerevisiae dan  jamur  oncom (Monilia  sitophila).    Ragi  atau  jamur  tersebut memiliki  beberapa  enzim  diantaranya  proteolitik dan amilolitik. Kedua enzim tersebut dimanfaatkan  untuk  menghidrolisis  protein  dan karbohidrat substrat menjadi protein dan karbohidrat  sederhana.  Melalui  reaksi  hipotesis maka mineral Zn dan Cu yang ditambahkan dalam substrat  akan  ikut  termetabolisasi,  atau  berikatan dengan  gugus  karboksil  protein  atau  poliskarida sederhana  hasil  hidrolisis  enzim  ragi  atau  jamur. Produk  yang  dihasilkan  berupa  ikatan  kompleks mineral-protein yang sulit dirombak oleh mikroba rumen,  sehingga  menjadi  penyedia  protein  atau mineral di pascarumen.

## Metode
Kompleks Zn-organik dan Cu-organik Prinsip  pembuatan  Zn-organik  dan  Cu- organik  adalah  terinkorporasinya  Zn  atau  Cu  ke dalam  protein yeast S cerevisiae atau jamur Monolia sitophila.    Substrat  dasar  untuk pertumbuhan M sitophila dan S cerevisiae berupa campuran  onggok  dan  bulu  ayam  hidrolisis  pada rasio  19:1  (Tanuwiria,  2004).  Substrat  dicampur dengan  larutan  (NH 4 NO 3 0,5%,  KCl  0,05%, MgSO 4 .7H 2 O 0,05%, FeSO 4 .7H 2 O 0,001%, CuSO 4 .5H 2 O  0,0001%  dalam  1000  ml)  dan larutan ZnCl 2 0,1M serta CuCl 2 0,1M.
Substrat  disterilisasi  dalam  autoklav    pada suhu 121 o C, 15 psi selama 15 menit.  Diinokulasi pada suhu 39 o C oleh inokulum S cerevisiae atau M sitophila dengan dosis 2% atau 2g dalam 100g substrat. Diinkubasi selama empat hari pada suhu kamar.  Produk  yang  diperoleh  dikeringkan  pada oven 60 o C  dan digiling.
Pengujian Suplemen Zn-organik dan Cu-organik Kompleks  Zn-organik  dan  Cu-organik  hasil bioproses S  cerevisiae dan M  sitophila masing- masing  diukur  kadar  Zn  dan  Cu  nya  serta  diukur kelarutannya  di  dalam  larutan  saliva  buatan (buffer)  McDougall  (campuran 58,80g  NaHCO 3 , 48g  Na 2 HPO 4 .7H 2 O,  3,42g  KCl,  2,82g  NaCl, 0,72g  MgSO 4 .7H 2 O,  0,24g  CaCl 2 dalam  6  liter akuades).   Masing-masing diulang sebanyak lima kali.  Kadar Zn dan Cu diukur dengan AAS.
Pengukuran  daya  larut Zn-organik atau  Cu- organik dalam  larutan buffer dilakukan  dengan cara  melarutkan  satu  gram Zn-organik atau  Cu- organik dalam campuran 10 ml cairan rumen dan 40  ml  larutan  McDougall,  pada  pH  6,5-6,8  dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  temperatur  39 o C. Selanjutnya  disaring  dengan  Whatman  41, supernatant  dianalisis  kadar  Zn  atau  Cu  dengan AAS.
Fermentabilitas  produk  diukur  melalui  teknik in  vitro,  peubah  yang  diamati  adalah produksi NH 3 dan  VFA  total.    Kecernaan  produk  diukur melalui  teknik in  vitro,  peubah  yang  diamati adalah kecernaan bahan kering dan bahan organik.
Teknik  pengukuran  fermentabilitas in  vitro dilakukan  dengan  cara  : satu  gram  sampel Zn- organik  atau  Cu-organik dimasukkan  ke  dalam tabung  fermentor,  kemudian  ditambahkan  40  ml larutan  McDougall  dan  10  ml  cairan  rumen  sapi. Kemudian dihembuskan gas CO 2 selama 30 detik untuk menciptakan  suasana  anaerob,  selanjutnya ditutup dengan karet berventilasi yang dimasukan ke dalam air.  Selanjutnya tabung diletakan dalam waterbath dan diinkubasi selama 3 jam pada suhu 39 o C,  setiap  30  menit  dikocok.    Setelah  itu  tutup karet  dibuka  dan  fermentasi  dihentikan  dengan cara  ditetesi  0,2  ml  HgCl 2 jenuh.  Supernatan dipisahkan dengan cara sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 20 menit. Kadar NH 3 supernatan  diukur  dengan  metode  mikrodifusi Conway  dan  VFA  total  dengan  metode  destilasi uap.
Uji  kecernaan  dilakukan  dengan  metode Tilley  dan  Terry  (1963).  Tahapan  analisis  sama dengan yang dilakukan pada inkubasi fermentatif. Setelah 24 jam inkubasi, tabung fermentor dibuka dan ditetesi larutan HgCl 2 jenuh untuk membunuh mikroba.    Selanjutnya  ke  dalam  tabung  tersebut ditambahkan  0,2%  pepsin  (aktivitas  enzim 1:10.000)  dalam  suasana  asam.    Inkubasikan kembali dalam “waterbath” pada suhu 39 o C dalam suasana aerob. Setelah 24 jam, isi tabung disaring dengan  kertas  Whatman  41.    Residu  dianalisis kadar bahan kering dan bahan organik.
a. Analisis NH 3 (Metode Mikrodifusi Conway) Satu ml supernatan diletakkan pada salahsatu sisi sekat  cawan  Conway  yang  diletakan  miring  ke arah  sekat.  Sebelumnya  cawan  Conway  telah diberi  vaselin  pada  kedua  permukaan.  Pada  sisi yang  lain  ditempatkan  satu  ml  larutan  Na 2 CO 3 jenuh, sedangkan pada bagian tengah ditempatkan satu ml asam borat berindikator, kemudian cawan Conway  ditutup  rapat  sehingga  kedap  udara  lalu digoyang-goyang sehingga supernatan dan Na 2 CO 3 bercampur.      Dibiarkan  selama  24  jam pada  suhu  kamar.    Amonia  yang  terikat  dengan asam  Borat  dititrasi  dengan  H 2 SO 4 0,005  N sampai warna berubah kemerah-merahan. Produksi  NH 3 dihitung  dengan  rumus  sebagai berikut :
NH3  =  (ml titrasi x N H2SO4  x 1000) mM Keterangan :  N H 2 SO 4 = Normalitas H 2 SO 4
b. Analisis VFA total (Steam Destilation Method)
Lima  ml  supernatan    dimasukkan  ke  dalam tabung  destilasi  dan  ditambahkan  satu  ml  H 2 SO 4 15% kemudian segera ditutup.  Sebelumnya telah disiapkan  erlenmeyer  yang  berisi  NaOH  0,5N sebanyak  lima  ml  untuk  menangkap  VFA  yang teruapkan.  Tabung  destilasi  dihubungkan  dengan labu  berisi  air  mendidih  dan  dipanaskan  terus selama proses destilasi.  Proses destilasi dianggap selesai  jika  erlenmeyer  berisi  NaOH  telah mencapai volume 300 ml. Selanjutnya ditambahkan  indikator  phenolpthalein  sebanyak
dua tetes dan kemudian dititrasi dengan HCl 0,5 N sampai  warna  titran  berubah  dari  merah  menjadi bening.      Dilakukan  pula  titrasi  blanko  terhadap lima  ml  NaOH.    Produksi  VFA  total  dihitung dengan rumus :
VFA total  =  (b - s)  x  N HCl  x  1000/5 Keterangan :   b = volume titrasi blanko s = volume titran sampel N = normalitas larutan HCl Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental  di laboratorium  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) empat  perlakuan masing-masing diulang sebanyak lima kali. Perlakuan terdiri atas :
T1 = Zn-organik hasil bioproses
Saccharomyces cerevisiae T2  =  Zn-organik  hasil  bioproses Monolia sitophila
T3 = Cu-organik hasil bioproses

## Saccharomyces cerevisiae
T4 =  Cu-organik  hasil  bioproses Monolia sitophila
Peubah yang diamati :
Kandungan  Zn  atau  Cu  serta  kelarutannya  dalam larutan  Buffer. Fermentabilitas  di  rumen  dengan mengukur  Produksi  NH 3 dan  VFA  total  (General Laboratory Procedure,1966). Kecernaan di pascarumen  dengan  mengukur  Kecernaan  Bahan Kering  dan  Bahan  Organik  (Tilley  dan  Terry, 1969). Perbedaan  diantara  perlakuan  diuji stastistik  dengan  Sidik  Ragam  dan  Uji  Jarak Berganda Duncan (Steel dan Torrie, 1981)
Tabel. 1. Kadar Zn dan Kelarutan Zn dalam produk Zn-organik hasil bioproses S cerevisiae dan M sitophila
1. Kadar Zn dan Kelarutan Produk Zn-Proteinat hasil bioproses S cerevisiae Ulangan Zn dalam produk Zn terlarut Kelarutan ---------------------- ppm --------------------- --------- % -------- 1 3790 68 1,8 2 3801 99 2,6 3 3832 31 0,8 4 3625 72 2,0 5 3656 35 1,0 Rataan 3741  93,5 1,64  0,74 2. Kadar Zn dan kelarutan Zn Produk Zn-organik hasil bioproses M sitophila Ulangan Zn dalam produk Zn terlarut Kelarutan (%) ------------------------- ppm ------------------- ---------- % --------- 1 3738 56 1,5 2 3759 120 3,2 3 3749 89 2,4 4 3697 70 1,9 5 3687 64 1,7 Rataan 3726  32,1 2,14  0,68
Tabel 2. Kadar Cu dan Kelarutan Cu dalam produk Cu-organik hasil bioproses S cerevisiae dan M sitophila

## 1. Kadar Cu dan Kelarutan Produk Cu-organik hasil bioproses S cerevisiae
Ulangan Cu dalam produk Cu terlarut Kelarutan (%) ---------------------- ppm ---------------------- ----------- % -------- 1 1030 23 2,3 2 1164 13 1,1 3 1181 14 1,2 4 1137 11 1,0 5 1120 11 1,0 Rataan 1126  58,8 1,32  0,55 2. Kadar Cu dan kelarutan Cu Produk Zn-organik hasil bioproses M sitophila Ulangan Cu dalam produk Cu terlarut Kelarutan ------------------------- ppm --------------------- --------- % ---------- 1 1144 27 2,3 2 1117 17 1,5 3 1127 28 2,5 4 1120 29 2,6 5 1137 27 2,4 1129  11,38 2,26  0,44

## Hasil dan Pembahasan
Kadar  dan  Kelarutan Zn-organik dan  Cu- organik
Bioproses Saccharromyces  cerevisiae dan Monolia sitophila pada  pembuatan mineral- organik  menghasilkan  produk  yang  relatif  sama dilihat dari kandungan Zn dan Cu.  Kadar Zn dan kelarutan  Zn  dalam  produk  hasil  bioproses S cereviseae dan M  sitophila disajikan  pada  Tabel 1. Kadar Cu dan kelarutan Cu dalam produk hasil bioproses S  cerevisiae dan M  sitophila disajikan pada Tabel 2.
Tabel 1. menunjukkan bahwa kadar Zn dalam Zn-organik  hasil  bioproses S  cereviseae relatif lebih  tinggi  daripada  hasil  bioproses M  sitophila (3741 vs 3726  ppm),  sedangkan  kelarutan  dalam larutan  buffer lebih  rendah  (1,64 vs 2,14  persen). Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  ketersediaan Zn dalam Zn-organik hasil bioproses S cerevisiae di pascarumen lebih baik. Daya larut yang rendah pada larutan buffer menunjukkan bahwa Zn dalam Zn-organik  hasil  bioproses S  cerevisiae lebih mantap dalam mengikat mineral, sehingga sedikit kemungkinan  dapat  dirombak  oleh  mikroba rumen.
Tabel 2. menunjukkan bahwa kadar Cu dalam Cu-organik  hasil  bioproses S  cerevisiae relatif sama dengan hasil bioproses M sitophila (1126 vs 1129 ppm),  sedangkan  kelarutan  dalam larutan buffer lebih  rendah  (1,32 vs 2,26 persen).    Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  ketersediaan Cu
dalam Cu-organik  hasil  bioproses S  cerevisiae di pascarumen lebih  baik. Daya  larut  yang  rendah pada  larutan buffer  menunjukkan  bahwa Cu dalam Cu-organik  hasil  bioproses S  cerevisiae lebih mantap  dalam  mengikat  mineral,  sehingga sedikit  kemungkinan  dapat  didegradasi  oleh mikroba rumen.
Pemanfaatan yeast S cerevisiae pada bioproses  pembuatan  mineral  organic  memiliki beberapa  keuntungan,  di  samping  meningkatkan nilai manfaat mineral organic, yeast tersebut dapat berperan sebagai probiotik dalam sistem pencernaan  ternak  ruminansia.  Hasil  beberapa peneliti terdahulu menunjukkan bahwa pemberian S  cerevisiae sebanyak  0,1%  dalam  ransum meningkatkan  populasi  bakteri  sebesar  51-61% dan  bakteri  selulolitik  sebesar  16-50%  dari populasi awal (Dawson, 1993, Kumar et al., 1994, Yoon dan Stern, 1996).

## Fermentabilitas dan Kecernaan in vitro
Nilai fermentabilitas pakan di rumen menunjukkan mudah  tidaknya  pakan  tersebut didegradasi oleh mikroba rumen. Nilai fermentabilitas  dicerminkan  oleh  produksi  NH 3 dan  VFA  total  yang  dihasilkan.  Nilai  kecernaan pakan  di  pascarumen  menunjukkan  mudah tidaknya  pakan  tersebut  dicerna  oleh  alat pencernaan  pascarumen.    Fermentabilitas  dan kecernaan mineral  organik  hasil bioproses disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Fermentabilitas dan Kecernaan Kompleks Zn-organik dan Cu-organik in vitro
Perlakuan Zn-org S c Zn-org.M s Cu-org. S c Cu-org. M s NH 3 (mM.g.BK -1 ) 3,24 a 2,94 a 3,07 a 3,52 a VFA total (mM.g BK -1 ) 136 a 120 a
124 a 122 a KcBK (%) 68,1 a 66,3 ab 70,2 a 62,6 b KcBO (%) 68,6 a 67,0 ab 70,8 a 63,1 b
Keterangan : Superskrip yang sama dalam satu baris menunjukkan berbeda tidak nyata (P<0,05)
Tabel 3 menunjukkan  bahwa produksi  NH 3 hasil  degradasi  mineral  organic  oleh  mikroba rumen  berkisar  2,94-3,52  mM,  satu  sama  lainnya tidak  berbeda  nyata  (P<0,05). Secara  umum, produksi  NH 3 hasil  degradasi  Zn-organik  dan  cu- organik  relative  rendah  di  bawah  kebutuhan normal  untuk  pertumbuhan  mikroba  rumen.    Hal tersebut  didasarkan  pada  pernyataan  Sutardi (1979)  bahwa  konsentrasi  ammonia  optimum  di dalam  rurmen  untuk  menunjang  sintesis  protein mikroba  adalah  antara  4  dan  12  mM. Dipandang dari  kualitas  protein,  Zn-organik dan  Cu-organik termasuk pada suplemen bersifat bypass atau sulit didegradasi  di  rumen  (UDP  = undigestible protein). Hal  ini mmberikan  petunjuk  bahwa bioproses  menggunakan S  cerevisiae atau M sitophila menghasilkan  mineral  organic  yang proteinnya  sulit  didegradasi  oleh  mikroba  rumen, atau  dengan  kata  lain  protein  hasil  bioproses berikatan    kuat  dengan  mineral  Zn  atau  Cu, sehingga  mikroba  rumen  menjadi  tidak  mampu mendegradasinya  menjadi  NH 3 .    NH 3 di  rumen berasal  dari  degradasi  protein,  peptide,  bahan  N terlarut,  urea,  asam  urat,  nitrat  dan  asam  nukleat (Preston dan Leng, 1987).
Produksi  VFA  total  berasal  dari  degradasi bahan  organic  pakan  oleh  mikroba  rumen.    Pada Tabel 3,  produksi  VFA  total dari  degradasi  Zn- organik  atau  Cu-organik  hasil  bioproses S cerevisiae atau M  sitophila satu  sama  lainnya tidak  berbeda  nyata  (P<0,05).  Secara  umum produksi  VFA  totalnya berkisar  120-136  mM, sedangkan VFA  yang  baik  untuk  pertumbuhan optimum  mikroba  rumen  adalah  80 – 160  mM (Sutardi,  1979). Hal  ini  memberikan  indikasi bahwa  kecuali  protein,  bahan  organic  lainnya yang  terdapat  dalam  Zn-organik  maupun  Cu- organik  mudah  didegradasi  oleh  mikroba  rumen menjadi  VFA  total.    Berdasarkan  hal  tersebut memberikan petunjuk bahwa proses pembentukan mineral organic melalui bioproses lebih mengarah pada  pembentukan  chelate  Zn-protein  atau  Cu- protein.
Nilai  kecernaan  bahan  kering  dan  bahan organic dapat dijadikan indicator tingkat kemudahan  pakan  didegradasi  di  rumen  dan
dicerna  oleh  enzim  pencernaan  di  pascarumen. Rataan  nilai  kecernaan  bahan  kering  mineral organic  hasil  bioproses S  cerevisiae lebih  tinggi daripada  hasil  bioporses M  sitophila. Kecernaan bahan kering dan bahan organic Cu-organik hasil bioproses M  sitophila lebih  rendah  (P<0,05) daripada  produk  lainnya. Hal  ini  memberikan indikasi  bahwa  bioproses  yang  tepat  untuk menghasilkan  mineral  organic  adalah  dengan menggunakan S cereviseae

## Kesimpulan
Kadar  Zn  dan  Cu  dalam  Zn-organik dan Cu- organik tidak dipengaruhi oleh jenis mikroba yang digunakan pada bioproses. Kelarutan Zn atau Cu dari  produk  Zn-organik  atau  Cu-organik dalam larutan buffer relative  rendah. Fermentabilitas semua  produk  tidak  berbeda  nyata,  sedangkan kecernaan  bahan  kering  dan  bahan  organik  dari Cu-organik hasil  bioproses M  sitophila lebih rendah.
Bioproses  pada  pembuatan  mineral  organic selanjutnya sebaiknya menggunakan S cerevisiae

## Ucapan Terimakasih
Penelitian  ini  merupakan  sebagian  data  dari penelitian HBXIV/1 tahun 2006 yang didanai oleh Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, DEPDIKNAS  no.  013/SP3/PP/DP2M/II/2006, atas  kepercayaan  dan  bantuan  penulis  haturkan terima kasih kepada Ditjen DIKTI.

## Daftar Pustaka
Dawson,  K.A.    1993.    Current  and  future  role  yeast culture in animal production: A review of research over  the  last  seven  years.    In  :  TP.  Lyons  Ed. Biotechnology  in  the  feed  industry.    Altech Technical Publications, Nicholasville, K.Y. Vol.IX:269-291
General  Laboratory  Procedure.    1966.    Department  of Dairy Science, University of Wisconsin
Kincaid,  R.L.,  R.M.  Blauwiekel,  and  J.D.  Cronrath. 1986.  Suplementation  of  copper  sulfate  or  copper proteinate  for  growing  calves  fed  forages containing molybdenum. J. Dairy. Sci.  69:160.
Kumar, U., V.K. Sareen and S.Singh.  1994.  Effect of Sacharromyces cerevisiae yeast culture
supplement  on  ruminal  metabolism  in  Buffalo calves  given  a  high  concentrate  diet.    J.  Anim. Prod. 59:209-215
Larvor,  P.    1983.    The  Pools  as  Celluler  Nutrients  : Mineral.    In  :  Dynamic  Biochemistry  of  Animal Production.  Ed. P.M. Riis, Elsevier, Amsterdam.
Little, D.A.  1986.  The Mineral Content of  Ruminant
Feeds  and  Potential  for  Mineral  Supplementation in  South-East  Asia  with  Particular  Reference  to Indonesia.    Di  dalam  :  R.M.  Dixon,  editor. Ruminant  Feeding  Systems  Utilizing  Fibrous Agricultural Residues 1985.  Canberra :  IDP Mills,  C.F., A.  Dalgarno,  and  G.  Wenham.  1976.
Biochemical and pathological changes in tissue of Freisian  cattle  during  the  experimental  induction of copper eficiency. Br. Nutr. 35:309.
National  Research  Council.    2001.    Nutrient Requirement  of  Dairy  Cattle.    Seven th revised  Ed.
National Academy Press, Washington D.C.
Preston,  T.R,  and  R.A.  Leng.    1987.    Matching Ruminant  Production  System  with  Available Resources  in  The  Tropic  and  Sub-Tropic.
Penambul  Book  Armidale,  New  South  Wales Australia. P.21-28
Schell,  T.C., and  E.T.  Kornegay.    1996.    Zinc concentration  in  tissue  and  performance  of weanling  pigs  fed  pharmacological  levels  of  zinc from  ZnO,  Zn-methionine,  Zn-lysine,  or  ZnSO 4 .
J. Anim. Sci. 74(7) : 1584-1593.
Steel,  R.G.  and  J.H.  Torrie.    1981.    Principles  and Procedure  of  Statistics.  2 nd Ed  McGraw-Hill International Book Co., Singapore
Sutardi,  T.    1979.    Ketahanan  protein  bahan  makanan terhadap  degradasi  oleh  mikroba  rumen  dan manfaatnya bagi peningkatan produktivitas ternak. Di  dalam  :  Prosiding  Seminar  Penelitian  dan Penunjang Peternakan.  Bogor : LPP IPB.
Suttle, N.F., and D.G. Jones. 1986.  Copper and disease resistance in sheep : A rare natural confirmation of interaction  between  a  specific  nutrient  and infection. Proc. Nutr. Soc. 45:317
Tanuwiria,  U.H. 2004.  Suplemen  Seng  dan  Tembaga Organik  serta  Kompleks  Kalsium  Minyak  Ikan dalam  Ransum  berbasis  Limbah  Industriagro untuk  Pemacu  Pertumbuhan  dan  Produksi  Susu pada  Sapi  Perah.    (Desertasi).  Institut  Pertanian Bogor,  Sekolah  Pascasarjana,      Program  Studi Ilmu Ternak.
Tilley, J.M.A. and R.A. Terry.   1967.  A two stage technique for in the in vitro digestion of forage crops. J. Grassland Soc.  18 : 104
Underwood, E..J.  1977.  Trace Elements in Human and Animal Nutrition. 4 th Ed. New York :
Academic Press.
Yoon, I.K and M.D. Stern.  1996.  Effect of Sacharromeces cerevisiae and Aspergillus oryzae culture on ruminal fermentation in dairy cows. J. Dairy. Sci. 79:411-417