## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , March 2022, 20(1): 83-90
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v20i1.56667

## Original Article

## Deteksi coronavirus pada kelelawar di Kabupaten Lamongan
Muhammad Badrut Tamam, Aisyah Hadi Ramadani, M. Ainul Mahbubillah *
Program Studi S1 Biologi, Fakultas Sains, Teknologi dan Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Lamongan, 62218 * Correspondence: ainul.mahbubillah@hotmail.com
Received: November 11 th , 2021; Accepted: March 14 th , 2022; Published online: March 24 th , 2022

## Abstrak
Tujuan: Memperoleh  informasi  keberadaan  coronavirus  pada  kelelawar  untuk  mencari kemungkinan  munculnya  reservoir  penyakit  baru  maupun  reservoir  penyakit  yang  belum dilaporkan  di  Kabupaten  Lamongan.  Penelitian  ini  dapat  digunakan  oleh  pemangku  kebijakan sebagai dasar perencanaan dan evaluasi program pengendalian penyakit serta bagi peneliti dapat digunakan untuk desain vaksin dan obat, filogenetika virus, analisis sebaran virus, dan database virus. Metode: Pengambilan sampel dilakukan di 3 titik yang mewakili tipe habitat berbeda. Titik pertama di Gua Pucakwangi Babat lamongan, yang kedua adalah di daerah pantai Paciran Lamongan, dan yang terakhir adalah di Hutan Mantup Lamongan. Pengambilan sampel dilakukan menggunakan mist  net dengan  bantuan  tenaga  lokal.  Kelelawar  yang  terjaring  ditangkap  dan  dimasukkan  pada kantong kain blacu. Parameter yang diamati meliputi jenis kelamin, morfometri, spesies, dan deteksi keberadaan coronavirus. Deteksi virus menggunakan metode swab orofaring yang kemudian RNA sampel diuji RT-PCR dan sekuensing. Adapun primer yang digunakan untuk mendeteksi coronavirus yakni  primer forward 5′-CACGCAACTTGTTGTAATGCGTCAGAGA-3′  dan  primer reverse 5′- CACGTGCTTTTGCAGGCACTATACGAC-3′. Hasil: Lima  spesies  kelelawar  didapatkan  dari  3  titik  sampling  yaitu Taphozous  melanopogon, Chaerophon sp ., Hipposideros sp ., Cynopterus sp ., dan Macroglossus sp. Pengujian RT-PCR pada sampel G1, G6, G8, P1, P2, P3, H1, H3, dan H6, menunjukkan bahwa tidak ada fragmen DNA Coronavirus yang teramplifikasi.
Kesimpulan: Hasil  negatif  pada  deteksi  Coronavirus  dengan  uji  molekuler  bukan  merupakan indikator bahwa tidak  ada potensi spesies Taphozous melanopogon , Chaerophon sp., Hipposideros sp., Cynopterus sp., Macroglossus sp.  sebagai  reservoir  Coronavirus.  Penambahan  jumlah  sampel  dan perluasan wilayah studi masih diperlukan untuk memperoleh data yang lebih lengkap.
Kata Kunci: Coronavirus; Genom; Kelelawar; Lamongan

## Abstract
Objective: To obtain information about the presence of coronavirus in bats to find potential of new disease reservoir as well as not yet reported disease reservoir in Lamongan District. This research can be used by the government as a basis for planning and evaluating disease control programs and for researchers  it  can  be  used  for  vaccine  and  drug  design,  viral  phylogenetic,  analysis  of  viral distribution, and viral databases.
Methods: Sampling was carried out at 3 points representing different habitat types. The first point is at Pucakwangi Cave Babat Lamongan, the second is at Paciran Lamongan beach area, and the last is
at the Mantup Forest Lamongan. Sampling was carried out using a mist net with the help of local workers.  The  netted  bats  were  caught  and  put  in  a  bag.  Parameters  observed  included  gender, morphometry, species, and detection of the presence of coronavirus. Detection of the virus using the oropharyngeal swab method, then the RNA samples were tested by RT-PCR and sequencing. The primer  used  to  detect  the  coronavirus  is  primer  forward 5′-CACGCAACTTGTTGTAATGCGT CAGAGA-3′ and primer reverse 5′- CACGTGCTTTTGCAGGCACTATACGAC-3′.
Results: Five  species  of  bats  obtained  from  3  sampling  locations  namely Taphozous  melanopogon, Chaerophon sp. , Hipposideros sp ., Cynopterus sp ., Macroglossus sp. RT-PCR test of sample G1, G6, G8, P1, P2, P3, H1, H3, and H6, shows that no coronavirus from DNA sample amplified. Conclusions: Negative result of Coronavirus detection by molecular analysis is not an indicator of no potential of species Taphozous melanopogon , Chaerophon sp., Hipposideros sp., Cynopterus sp., and Macroglossus sp.  as  a  Coronavirus  reservoir.  Increasing  the  number  of  samples  and  expansion  of study area still needed to obtain more comprehensive data.
Keywords: Bat; Coronavirus; Genome; Lamongan

## PENDAHULUAN
Indonesia sebagai negara megabiodiversitas memiliki  keanekaragaman  berbagai  fauna. Salah  satu  fauna  mamalia  yang  mampu terbang yakni kelompok kelelawar (Chiroptera). Jumlah  kelawar  di  Indonesia  setidaknya terdapat  238  jenis  [1].  Keberadaan  kelelawar tersebut  secara  ekosistem  memiliki  peranan penting  di  wilayah  tropis  seperti  penyerbuk bunga,  penyebar  biji  dan  mengendalikan populasi  serangga.  Berdasarkan  evolusinya, kemampuan  terbang  kelelawar  membantu proses  aktivasi  sistem  imun  kelelawar  yang mampu merespon infeksi virus [2]. Kelelawar merupakan  reservoir  alami  dari  berbagai macam virus mulai dari virus tidak berbahaya hingga  virus  mematikan  seperti  ebola.  Studi menunjukkan bahwa lebih dari 60 jenis virus ditemukan di kelelawar dan memiliki potensi zoonosis  ke  manusia  [3,4].  Salah  satu kelompok virus yang ditemukan di kelelawar yakni  Rabies  [5],  campak,  gondongan, parainfluenza, hepatitis C [6,7], dan coronavirus. Dalam kurun dua dekade sejak 2002, muncul beberapa  wabah  yang  disebabkan  oleh coronavirus  yakni  SARS-CoV,  MERS-CoV, dan  SARS-CoV-2  yang  semuanya  diduga berasal dari virus di kelelawar.
Permasalahan  kesehatan  di  dunia  selain disebabkan oleh penyakit tidak menular juga penyakit  menular.  Penyakit  menular  yang muncul  memiliki  efek  besar  pada  kesehatan manusia  dan  dapat  menyebabkan  kerugian ekonomi  yang  luar  biasa.  Sebagian  besar penyakit  menular  disebabkan  oleh  zoonosis
dimana  70%  berasal  dari  hewan  liar  [8]. Kelelawar merupakan hewan liar yang memiliki potensi  untuk  menyebabkan  munculnya sejumlah  penyakit  meliputi  rabies,  Hendra virus,  Ebola,  Nipah,  Marburg,  severe  acute respiratory  syndrome  (SARS),  Middle  East respiratory  syndrome  (MERS)  coronaviruses (CoVs)  dan  SARS-CoV  [3],  [9–12].  Data penelitian mengenai coronavirus pada kelelawar  di  Indonesia  masih  sangat  minim sehingga  diperlukan  pemutakhiran  data terkait  coronavirus  pada  mamalia  terbang tersebut.  Keberadaan  coronavirus  pada kelelawar dapat dideteksi dengan menggunakan teknologi reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR)  [13].  Coronavirus  mudah dideteksi dengan teknologi tersebut berkaitan dengan  karakter  virus  yang  tergolong  RNA- virus  dengan  ukuran  genom  16-31  kb,  dari ordo  Nidovirales,  famili  Coronaviridae  [11]. Penelitian  sebelumnya  dilakukan  di  Provinsi Gorontalo  ditemukan  coronavirus  pada kelelawar  jenis Dobsonia  mollucensis dan Pteropus alecto [13,14].
Kabupaten  Lamongan  secara  geografi terletak  di  Pantai  Utara,  Jawa  Timur. Kabupaten  ini  memiliki  bentang  ekosistem yang  kompleks  mulai  dari  ekosistem  pantai, ekosistem  hutan,  ekosistem  lahan  basah  dan ekosistem  karst.  Keberadaan  karst  di Kabupaten Lamongan juga mendukung adanya topografi  gua  yang  umumnya  dihuni  oleh berbagai koloni kelelawar. Kombinasi beragamnya  tipe  ekosistem  di  kabupaten  ini serta  kemampuan  jelajah  kelelawar  yang cukup  jauh  diharapkan  dapat  memberikan
sumbasih  data  keberadaan  coronavirus dari satwa liar tersebut.
Penelitian  ini  bertujuan  memperoleh informasi keberadaan coronavirus yang ada di kelelawar  untuk  mencari  kemungkinan munculnya  reservoir  penyakit  baru  maupun reservoir  penyakit  yang  belum  dilaporkan. Pada penelitian ini juga diharapkan memperoleh manfaat  antara  lain  data  dapat  digunakan oleh  pemangku  kebijakan  sebagai  dasar perencanaan dan evaluasi program pengendalian  penyakit.  Serta  bagi  peneliti dapat  digunakan  untuk  desain  vaksin  dan obat, filogenetika virus, analisis sebaran virus dan database virus.

## MATERI DAN METODE

## Lokasi penelitian
Pengambilan  sampel  kelelawar  dilakukan di  tiga  tipe  habitat  di  Kabupaten  Lamongan antara lain gua, pantai, dan hutan (Gambar 1). Lokasi  gua  berada  di  Gua  Kelelawar  Desa Pucakwangi  Kecamatan  Babat  Kabupaten Lamongan  dengan  koordinat  GPS  -7.130570, 112.171601.  Lokasi  pantai  berada  di  desa
Paciran Kecamatan Paciran
Kabupaten
Lamongan  dengan  koordinat  GPS  - 6.867858,  112.359360.  Sedangkan  lokasi hutan dilakukan di desa Mantup Kecamatan
Mantup  Kabupaten  Lamongan  dengan koordinat GPS -7.270802, 112.358078.

## Penangkapan kelelawar
Penangkapan  kelelawar  menggunakan dua metode yaitu aktif dan pasif. Penangkapan  secara  aktif  dilakukan  pada sampel  gua  dengan  mengambil  kelelawar secara  langsung  di  habitat  gua.  Sedangkan penangkapan secara tidak langsung atau pasif dilakukan pada sampel di habitat pantai dan hutan  dengan  menggunakan  jaring  kabut ( mist  net ).  Jaring  kabut  dipasang  di  lintasan atau jalur terbang kelelawar dengan ketinggian  1-6  meter  dengan  menggunakan bambu  atau  diikatkan  pada  pohon. Pemasangan  jaring  dilakukan  pada  sore  hari sebelum  malam.  Selanjutnya  pemanenan kelelawar dilakukan antara pukul 19.00 - 22.00 WIB. Setiap individu kelelawar yang tertangkap dimasukkan ke kantong kain blacu dan diberi kode [15].

## Pengambilan sampel virus
Sebelum dilakukan pengambilan sampel, kelelawar diperlakukan dibius secara inhalasi. Bahan  pembiusan  menggunakan  isoflurane 0,5  cc  yang  diteteskan  ke  kapas  dan  ditutup dengan tea  ball .  Kelelawar  dalam  kantong blacu diambil satu per satu kemudian dimasukkan
Gambar 1. Lokasi pengambilan sampel di Kabupaten Lamongan (Gua, Pantai, dan Hutan).
ke dalam kotak plastik bersamaan dengan bahan pembiusan  selama  2-3  menit.  Apabila kelelawar  tidak  ada  respon,  maka  telah terbius.  Ketika  kelelawar  dalam  kondisi terbius,  maka  pengambilan  sampel  virus dilakukan secara swab di tenggorokan bagian belakang  ( oropharynx ).  Ujung  stik  swab  steril dimasukkan dengan gerakan memutar dengan  menyentuh  langit-langit oropharynx . Selanjutnya  memasukkan  hasil  ujung  swab stick ke dalam viral transport medium (VTM) dari  Shijiazhuang  Kangweishiji  Medical Equipment  dengan  Nomor  Izin  Kemenkes 10302120916.  Kelelawar  yang  sudah  sadar selanjutnya dilepasliarkan kembali [12].

## Uji molekuler
Isolasi RNA dilakukan dengan menggunakan  QIAamp  Viral  RNA  Mini  Kit. Mekanisme  isolasi  sesuai  dengan  instruksi yang  tercantum  di  kemasan.  Alikuot  140  μL VTM diberi 560 μL campuran buffer AVL dan carrier  RNA  ke  dalam  tube  1,5  ml. Selanjutnya, dilakukan homogenisasi dengan vortex  selama  15  detik  dan  dilanjutkan inkubasi  suhu  ruang  selama  10  menit. Tahapan  berikutnya  dilakukan spin  dwon singkat  kemudian  diberi  560  μL  etanol  96% dan  dilanjutkan  vortex  selama  15  detik. Larutan selanjutnya dipindahkan ke beberapa QIAamp  Mini  column  sehingga  diperoleh hasil ekstraksi RNA yang disimpan di suhu - 80°C.
Amplifikasi dilakukan dengan menggunakan sembilan  sampel  hasil  ekstraksi  RNA  dari kelelawar. Komponen reaksi transkripsi balik dan  amplifikasi  terdiri  dari  5  μL  template RNA,  8  μL  reagen  RT-PCR  PreMix  Kit (iNtRON Biotechnology, Inc.), 5 μL Rnase-free water , dan primer untuk target gen RdRp dan
gen  helikase  yang  merupakan  region  lestari ( conserve ) pada Coronavirus yang terdiri dari 1 μL primer forward 5′-CACGCAACTTGTTG TAATGCGTCAGAGA-3′  dan  1  μL  primer reverse 5′-CACGTGCTTTTGCAGGCACTATA CGAC-3′  [13].  Proses  transkripsi  balik  RNA dan  amplifikasi  dilakukan  secara  konvensional menggunakan  PCR  Thermal  Cycler  Dice TP600  dengan  tahapan  awal  dimulai  dengan reaksi  transkripsi  balik  pada  suhu  45°C selama  30  menit  untuk  pembentukan  cDNA. Selanjutnya  dilakukan  denaturasi  hibrid RNA:cDNA pada suhu 94°C selama 5 menit. Tahapan berikutnya  proses  amplifikasi sebanyak 40 siklus yang terdiri dari denaturasi (94°C  selama  30  detik),  penempelan  primer
(55°C selama 30 detik), elongasi (72°C selama 1  menit)  dan  pasca  elongasi  (72°C  selama  5 menit) [16]. Elektroforesis hasil PCR menggunakan gel agarose 1,5% dan pewarna GelRed®  Nucleic  Acid  Stain  10000X  Water (Merck). Proses elektroforesis dilakukan pada tegangan  50  volt  selama  30  menit.  Hasil visualisasi  pada  gel  menggunakan  UV illuminator  kemudian  difoto  menggunakan kamera digital.

## HASIL
Jenis-jenis kelelawar yang terdata dalam penelitian ini antara lain pada ekosistem gua didapatkan Taphozous  melanopogon , Chaerophon sp.  dan Hipposideros sp. Ekosistem  pantai didapatkan Taphozous sp.,  sedangkan  pada ekosistem  hutan  didapatkan Cynopterus sp. dan Macroglossus sp. Data jumlah disajikan di Tabel  1  dan  gambar  kelelawar  tiap  jenisnya disajikan di Gambar 2.
Pengujian  sampel  PCR  dilakukan  pada perwakilan genus kelelawar yang diperoleh di
Tabel 1. Data pengambilan sampel kelelawar di 3 lokasi
Spesies Jumlah Lokasi Jumlah sampel yang diuji Taphozous melanopogon 4 Gua 1 Chaerophon sp. 3 Gua 1 Hipposideros sp. 2 Gua 1 Taphozous sp. 13 Pantai 3 Cynopterus sp. 3 Hutan 1 Macroglossus sp. 4 Hutan 2
setiap habitatnya. Sampel cuplikan dari habitat gua (G1, G6, G8), pantai (P1, P2, P3) dan hutan (H1,  H3,  H6)  menunjukkan  bahwa  tidak  ada fragmen  cDNA  dari  gen  pada  Coronavirus yang  teramplifikasi  selama  proses  PCR (Gambar 3).

## PEMBAHASAN
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa semua  spesies  kelelawar  yang  diperiksa dengan menggunakan uji molekuler hasilnya negatif  terhadap  coronavirus.  Hasil  ini  juga sama dengan penelitian yang dilakukan oleh Anindita et  al .,  [13]  pada  sampel  kelelawar pemakan  buah  di  Surabaya  yang  dekat dengan Kabupaten Lamongan.
Potensi adanya coronavirus pada kelelawar di lokasi penelitian tetap ada karena beberapa  spesies  kelelawar  memiliki  potensi sebagai  reservoir  virus  tersebut.  Sebagai contoh, Cynopterus brachyotis pernah ditemukan jenis  coronavirus  baru  di  Singapura  [17]. Kelelawar Hipposideros sp.  di  Laos  dan Macroglossus sp.  di  Kamboja  juga  pernah terdeteksi coronavirus [18]. Adapun
penelitian  yang  dilakukan  oleh  Maryanto et al .,  [1]  juga  ditemukan  coronavirus  pada kelelawar Cynopterus  brachyotis di  Jawa Tengah dan Yogyakarta. Spesies-spesies yang pernah dilaporkan terdeteksi oleh coronavirus tersebut  juga  ditemukan  di  Kabupaten Lamongan.
Metode PCR dilakukan oleh Nziza et al .,
[19]  berhasil  mengidentifikasi  keberadaan RNA  coronavirus  pada  kelelawar  yang terdistribusi  di  Kenya,  Afrika.  Penelitian tersebut menemukan kelelawar yang berhabitat  di  lahan  pertanian  paling  banyak membawa  coronavirus.  Valitutto et  al .,  [20] menambahkan bahwa dengan PCR dari swab oral,  rectal,  dan  guano  efektif  mendeteksi coronavirus  jenis  baru  di  Myanmar  yang dibawa  oleh  vektor  kelelawar.  Penelitian  ini menggunakan metode PCR untuk mendeteksi coronavirus  dengan  menggunakan  metode RT-PCR  ( reverse  transcription  PCR )  dimana mampu  mendeteksi  keberadaan  coronavirus pada kelelawar.
Keterbatasan penelitian ini adalah jumlah sampel  yang  sangat  terbatas  (sembilan sampel) serta hanya  menggunakan  satu jenis
Gambar 2. Jenis-jenis kelelawar di Kabupaten Lamongan. (a) Taphozous melanopogon , (b) Chaerophon Gambar 2. sp., (c) Hiiposideros sp, (d) Taphozous sp., (e) Cynopterus sp., (f) Macroglossus sp.
primer. Tidak hanya dua faktor tersebut, jenis swab  yang  digunakan  ( rectal  swab atau oral swab ),  jumlah  titik  sampling,  variasi  habitat, dan  cuaca  saat  sampling  juga  menentukan potensi  keberhasilan  mendeteksi  keberadaan virus lebih tinggi [21].

## KESIMPULAN
Deteksi coronavirus pada sampel kelelawar yang diperoleh dari tiga tipe habitat di  Kabupaten  Lamongan  menggunakan  uji molekuler  tidak  berhasil  memperoleh keberadaan  RNA  coronavirus.  Hasil  negatif bukan  indikator  bahwa  tidak  ada  potensi spesies Taphozous melanopogon , Chaerophon sp., Hipposideros  sp ., Cynopterus sp., Macroglossus sp.  sebagai  reservoir  Coronavirus,  masih diperlukan  penambahan  jumlah  sampel  dan perluasan  wilayah  studi  untuk  memperoleh data yang lebih lengkap. Deteksi Coronavirus dengan uji molekuler sebagai upaya peringatan dini untuk mengantisipasi kejadian zoonosis.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  bahwa  tidak  ada konflik  kepentingan  apapun  pada  penulisan paper ini.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Tim  peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  Kementerian  Pendidikan  Kebudayaan, Riset,  Dan  Teknologi  Direktorat  Jenderal
Pendidikan Tinggi, Riset, Dan Teknologi atas pendanaan  yang  diberikan  dengan  Skema PDP  perjanjian  kontrak  nomor  068/E4.1/ AK.04.PT/2021,  Institute  of  Tropical  Disease Universitas  Airlangga,  dan  Laboratorium Universitas Muhammadiyah Lamongan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Maryanto, I., A. A. S. Maharadatunkamsi, S.  Wiantoro,  E.  Sulityadi,  M.  Yoneda,  A. Suyanto, and J. Sugardjito. 2019. Checklist of  the  mammals  of  Indonesia:  Scientific, English, Indonesian name, and distribution area  table  in  indonesia  including  CITES, IUCN  and  Indonesian  category  for conservation. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Bogor.
2. Zhang, G., C. Cowled, Z. Shi, Z. Huang, K. A.  Bishop-Lilly,  X.  Fang,  J.  W.  Wynne,  Z. Xiong, M. L. Baker, W. Zhao, and Tachedjian, M.  2013.  Comparative  analysis  of  bat genomes  provides  insight  into  the evolution of flight and immunity. Science. 339:456–460. Doi: 10.1126/science.1230835
3. Calisher, C. H., J. E. Childs, H. E. Field, K. v  Holmes,  and  T.  Schountz.  2006.  Bats: important  reservoir  hosts  of  emerging viruses.  Clinical  microbiology  reviews. 19:531–545. Doi: 10.1128/CMR.00017-06
4. Luis, A. D., D. T. S. Hayman, T. J. O’Shea, P. M. Cryan, A. T. Gilbert, J. R. C. Pulliam, J. N. Mills, M. E. Timonin, C. K. R. Willis, A. A. Cunningham, and Fooks, A. R. 2013. A  comparison  of  bats  and  rodents  as
Gambar 3. Visualisasi hasil PCR melalui elektroforesis. DNA Ladder promega 100 bp (1) G1 (2),
Gambar 3. G6 (3), G8 (4), P1 (5), P2 (6), P3 (7), H1 (8), H3 (9), H6 (10).
reservoirs  of  zoonotic  viruses:  are  bats special?.  Proceedings  of  the  Royal  Society B:  Biological  Sciences.  280:20122753.  Doi: 10. 1098/rspb.2012.2753.
5. Pawan, J. L. 1936. Rabies in the vampire bat of  Trinidad,  with  special  reference  to  the clinical course and the latency of infection. Annals of Tropical Medicine & Parasitology. 30(4):401-422. Doi: 10.1080/00034983.1936.1 1684948
6. Drexler, J. F., V. M. Corman, M. A. Müller, G.  D.  Maganga,  P.  Vallo,  T.  Binger,  F. Gloza-Rausch, V. M. Cottontail, A. Rasche, S.  Yordanov,  and  A.  Seebens.  2012.  Bats host  major  mammalian  paramyxoviruses. Nature communications. 3(1):1-13. Doi: 10. 1038/ncomms1796
7. Quan, P. L., C. Firth, J. M. Conte, S. H. Williams, C. M. Zambrana-Torrelio, S. J. Anthony, J. A. Ellison, A. T. Gilbert, I. V. Kuzmin, M. Niezgoda,  and  M.  O.  Osinubi.  2013.  Bats are a major natural reservoir for hepaciviruses and pegiviruses. Proceedings of the National Academy  of  Sciences.  110  (20):8194-8199. Doi: 10.1073/pnas.1303037110
8. Cutler, S. J., A. R. Fooks, and W. H. M. der Poel.  2010.  Public  health  threat  of  new, reemerging, and neglected zoonoses in the industrialized  world.  Emerging  infectious diseases. 16:1. Doi: 10.3201/eid1601.081467
9. Field,  H.  E.,  P.  C.  Barratt,  R.J.  Hughes,  J. Shield, and N. D. Sullivan. 2000. Fatal case of Hendra virus infection in a horse in north Queensland:  clinical  and  epidemiological features. Australian veterinary journal.
10. Memish, Z. A., N. Mishra, K. J. Olival, S. F. Fagb,  V.  Kapoor,  J.  H.  Epstein,  R. AlHakeem, A. Durosinloun, M. Al Asmari, A. Islam, and A. Kapoor. 2013. Middle East respiratory syndrome coronavirus in bats, Saudi  Arabia.  Emerging  infectious  diseases. 19(11):1819. Doi: 10.3201/ eid1911.131172
11. Leroy, E. M., B. Kumulungui, X. Pourrut, P. Rouquet, A. Hassanin, P. Yaba, A. Délicat, J.  T.  Paweska,  J.  P.  Gonzalez,  and  R. Swanepoel. 2005. Fruit bats as reservoirs of Ebola  virus.  Nature.  438(7068):575-576. Doi: 10.1038/438575a
12. Zuckerkandl,  E.  and  L.  Pauling.  1965. Evolutionary divergence and convergence in  proteins.  In  Evolving  genes  and  proteins.
Academic Press. p. 97-166. Doi: 10.1016/B978-1-4832-2734-4.50017-6
13. Anindita, P. D., M. Sasaki, A. Setiyono, E. Handharyani,  Y.  Orba,  S.  Kobayashi,  I.
Rahmadani, S. Taha, S. Adiani, M. Subangkit, and  Nakamura,  I.  2015.  Detection  of oronavirus  genomes  in  Moluccan  naked- backed fruit bats in Indonesia. Archives of virology. 160:1113– 1118. Doi: 10.1007/s007 05-015-2342-1
14. Febriani,  W.  D.,  U.  Saepuloh,  E.  D.  Ayu ningsih, R. S. Saputra, A. Purbatrapsila, M. J.
Nangoy,  T.  A.  Ransaleh,  I.  Wahyuni,  S. Dako, R. Noviana, and D. Iskandriati. 2018. Bat  Coronavirus  of  Pteropus  alecto  from Gorontalo Province, Indonesia. The
International  Journal  of  Tropical  Veterinary and Biomedical Research. 3:36–42. Doi: 10.2 1157/ijtvbr.v3i2.12359
15. Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan  Kementerian  Kesehatan  RI. 2017. Pedoman Pengumpulan Data Reservoir (Kelelawar)  di  Lapangan,  Riset  Khusus Vektor  dan  Reservoir  Penyakit.  Lembaga
Penerbit Badan Penelitian dan
Pengembangan  Kesehatan  Kementerian Kesehatan RI. Jakarta.
16. de Souza Luna, L. K., V. Heiser, N. Regamey, M.  Panning,  J.  F.  Drexler,  S.  Mulangu,  L. Poon, S. Baumgarte, B. J. Haijema, L. Kaiser, and Drosten, C. 2007. Generic detection of coronaviruses  and  differentiation  at  the prototype strain level by reverse transcription -PCR  and  nonfluorescent  low-density microarray.  Journal  of  clinical  microbiology. 45:1049–1052. Doi: 10.1128/ JCM.02426-06
17. Lim, X. F., C. B. Lee, S. M. Pascoe, C. B. How, S. Chan, J. H. Tan, X. Yang, P. Zhou, Z. Shi, O.  M.  Sessions,  and  L.  F.  Wang.  2019. Detection  and  characterization  of  a  novel bat-borne  coronavirus  in  Singapore  using multiple  molecular  approaches.  The Journal of general virology. 100:1363. Doi: 10.1099/jgv.0.001307
18. Lacroix,  A.,  V.  Duong,  V.  Hul,  S.  San,  H. Davun,  K. Omaliss, S. Chea, A. Hassanin, W.  Theppangna,  S.  Silithammavong,  and Khammavong,  K.  2017.  Genetic  diversity of  coronaviruses  in  bats  in  Lao  PDR  and Cambodia. Infection, Genetics and Evolution. 48:10–18. Doi: 10.1016/j.meegid.2016.11.029
19. Nziza, J., T. Goldstein, M. Cranfield, P. Webala, O. Nsengimana, T. Nyatanyi, A. Mudakikwa, A.  Tremeau-Bravard,  D.  Byarugaba,  J.  C. Tumushime,  I.  E,  Mwikarago,  I.  Gafarasi,  J.
Mazet,  K.  Gilardi.  2020.  Coronaviruses Detected  in  Bats  in  Close  Contact  with Humans  in  Rwanda.  EcoHealth.  17:152– 159. Doi: 10.1007/s10393-019-01458-8
20. Valitutto, M. T., O. Aung, K. Y. Naing Tun, M. E. Vodzak, D. Zimmerman, J. H. Yu, Y. T. Win, M. T. Maw, W. Z. Thein, H. H. Win, J. Dhanota, V. Ontiveros, B. Smith, A.
Tremeau-  Brevard,  T.  Goldstein,  C.  K.
Johnson,  S.  Murray,  J.  Mazet.  2020.
Detection of novel coronaviruses in bats in Myanmar.  Plos  One.  15(4):  e0230802.  Doi: 10.1371/journal.pone.0230802
21. Balboni,  A.  L.  Gallina,  A.  Palladini,  S. Prosperi,  M.  Battilani.  2012.  A  Real-Time PCR Assay for Bat SARS-Like Coronavirus
Detection  and  Its  Application  to  Italian Greater  Horseshoe  Bat  Faecal  Sample Surveys.  The  Scientific  World  Journal 2012(989514): 1-8. Doi:10.1100/2012/989514