Analisa Histopatologi dan Histomorfometri Lambung pada Mencit Model Kolibasilosis yang Diinduksi Ekstrak Etanol 96%
Oregano Vulgare
Histopathological and Gastric Histomorphometry Analysis in Mice Colibacillosis Model Induced by Ethanol 96% Oregano Vulgare Extract
Yuliana Agustin 1 , Indah Amalia Amri 1* , Fidi Nur Aini Eka Puji Dameanti 1 ,
Ida Bagus Gde Rama Wisesa 1 1 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya . * Corresponding author : indahamaliaamri@ub.ac.id

## Abstrak
Kolibasilosis  merupakan  penyakit  yang  disebabkan Escherichia  coli yang  merupakan  bakteri  flora normal pada organ pencernaan manusia dan hewan. Oregano memiliki kandungan carvacrol dan thymol yang berfungsi  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  pengaruh  ekstrak  oregano  terhadap histopatologi dan histomorfometri organ lambung pada mencit yang diinduksi E. coli . Penelitian menggunakan 20 ekor mencit Balb/C jantan berumur 2-3 minggu dengan berat rata-rata 20-25 gram dan terbagi menjadi 5 kelompok  dengan  4  ulangan  yaitu  kontrol  negatif  (KN),  kontrol  positif  (KP)  diberi streptomycin dosis  20 mg/ekor dan E. coli dosis 3 x 10 9 CFU secara peroral, (P1) diberi streptomycin dosis 20mg/ekor, E. coli dosis 3 x 10 9 CFU , kemudian diberikan ekstrak oregano dosis 5 mg/ekor, (P2) diberi streptomycin dosis 20mg/ekor, E. coli dosis 3 x 10 9 CFU , kemudian diberikan ekstrak oregano dosis 10  mg/ekor, (P3) diberi streptomycin dosis  20mg/ekor, E.  coli dosis  3  x  10 9 CFU , kemudian  diberikan  ekstrak  oregano  dosis  20  mg/ekor.  Data dianalisa  dengan  deskriptif  komparatif.  Hasil  penelitian  histopatologi  pada  KP,  P1,  P2,  dan  P3,  memiliki kerusakan sel epitel yaitu erosi yang disebabkan oleh sel radang. Berdasarkan Uji ANOVA nekropsi hari ke-3 dan  6  pada  P1,  P2,  dan  P3  panjang  dan  lebar  vili  memiliki  panjang  yang  tidak  berbeda  secara  signifikan (p>0,05)  bila  dibandingkan  dengan  KP.  Kesimpulan  Histopalotogi  adanya  erosi  epitel  dengan  dosis  20  mg/ ekor ekstrak oregano mampu meringankan gejala kolibasilosis. Kesimpulan histomorfometri panjang dan lebar vili pada P1, P2, P3 (p>0,05) sehingga tidak berbeda nyata dengan kontrol positif.
Kata kunci: Escherichia coli , lambung , mencit Balb/C , Oregano

## Abstract
Colibacillosis is a disease caused by Escherichia coli which is a normal flora bacterium of the digestive system in humans and animals. Oregano contains carvacrol and thymol which provide an antibacterial. This study was used 20 male Balb/C mice age 2-3 weeks with an average weight of 20-25 grams and were divided into 5 groups with 4 replications: negative control (KN), positive control (KP) given by streptomycin dose of 20 mg/head. E. coli dose of 3 x 10 9 CFU, (P1) was given by streptomycin dose of 20 mg/head, E. coli dose of 3 x 10 9 CFU, then given oreganoextract dose of 5 mg/head, (P2) was given by streptomycin dose of 20 mg/head, E. coli dose of 3 x 10 9 CFU, then given oregano extract dose of 10 mg/head, (P3) was given by streptomycin dose of 20 mg/head, E. coli dose of 3 x 10 9 CFU, then oregano extract was given dose of 20 mg/head. The data were analyzed by descriptive comparative. The histopathology showed epithelial cell damage or erosion caused by inflammatory cells in KP, P1, P2, and P3. In study group given oregano extract dose of 20 mg/head, P3, inflammatory cells and epithelial erosion were lower. Based on the ANOVA test of day 3 and 6 after necropsy, P1, P2, and P3 show insignificant in villi length and width of the vili (p>0,05) compared to KP. The conclusion the result of the histopathology result is epithelial erosion in group with dose of 20mg/head oregano extract was able to relieve the symptoms of colibacillosis. The conclusion of histomorphometry of the length and width of the villi at P1, P2, P3 (p>0.05) was not significantly different from the positive control.
Keywords: Escherichia coli, gastric, Balb/C mice, Oregano
Received: 15 March 2022 Revised: 12 August 2022 Accepted: 14 September 2022

## PENDAHULUAN
Escherchia  coli merupakan  bakteri  gram negatif,  memiliki  bentuk  kokobasil,  bakteri  ini dapat  menyebabkan  penyakit  pencernaan  pada manusia  dan  hewan,  melalui  makanan  yang terkontaminasi (Donnenberg, 2013). E. coli dapat menyebabkan  diare  pada  manusia  dengan  cara melalui  makanan  yang  terkontaminasi  masuk dalam tubuh, E. coli enteropathogenic merupakan serotip  yang  memiliki  efek  toksin  yang menyebabkan  diare  yaitu  bakteri  jenis  ini memiliki  fimbria  yang  sedikit  dan  eksotoksin tahan  panas  (ST)  serta  tidak  tahan  panas  (LT), kemudian menggunakan adhesin untuk mengikat sel inang usus dan menyebabkan radang (Prasetya et  al. ,  2019). E.  coli  enteropathogenic termasuk penyakit zoonosis yaitu  penyakit  yang  dapat menular  dari  hewan  ke  manusia  ataupun sebaliknya (Donnenberg, 2013).
Mencit  memiliki  lambung  monogastrik. Lambung  merupakan  organ  pencernaan  yang memiliki  fungsi  yaitu  untuk  memecah  makanan dan mencampurnya dengan cairan lambung, serta sebagai proses pencernaan protein oleh karena itu perlu dilakukan
pencegahan
dengan
menggunakan  ekstrak  oregano  sebagai  herbal karena
penggunaan antibiotik dapat menyebabkan resisten. Penelitian ini menggunakan mencit Balb/C jantan sebab mencit Balb/C  merupakan  mencit  yang  biasanya digunakan untuk penelitian imunologi, sedangkan menggunakan mencit jantan karena mencit jantan memiliki  hormon  yang  stabil,  karena  jantan memiliki  hormon  esterogen  yang  relatif  sedikit atau  tidak  memiiki  hormon  esterogen,  karena mencit betina relatif memiliki masa estrus, masa kebuntingan,  dan  masa  menyusui,  serta  mencit betina mudah mengalami stress.
Oregano memiliki kandungan carvacrol dan thymol yang  berfungsi  sebagai  antibakteri  dan antijamur. Carvacrol memiliki  fungsi  untuk menghambat  mobilisasi  bakteri  pada  membran mitokondria  yang  mampu  menghasilkan  ATP yang  diinisiasi  oleh  proton. Carvacrol akan mengurangi produksi ATP yang dapat menghambat pergerakan flagella dan menyebabkan berkurangnya patogenisitas
bakteri.  Sebagai  antijamur carvacrol dapat mengeliminasi  pertumbuhan  vegetatif  jamur dengan  denaturasi  protein  (Shalihat,  2018). Berdasarkan  pemaparan  diatas  maka  perlu dilakukan penelitian mengenai pengaruh pemberian ekstrak oregano terhadap mencit yang diinduksi E. coli .

## METODE PENELITIAN

## Persiapan Hewan Coba
Hewan coba yang digunakan pada penelitian ini  adalah  20  ekor  mencit  berkelamin  jantan, umur  3-4  minggu  dengan  berat  rata-rata  20-25 gram berjumlah 20 ekor mencit yang bersertifikat sehat  berasal  dari  Laboratorium  Biomedik Universitas  Muhammadiyah  Malang.  Peneliti sudah  mendapatkan  sertifikat  laik  etik  dari Komisi  Etik  Penelitian  Universitas  Brawijaya. Mencit  diaklimitisasi  selama  7  hari.  Setiap kelompok mencit ditempatkan satu kandang yang berisi 4 ekor mencit. Kandang mencit berukuran standar,  pakan  dan  minum  diberikan  secara  ad libitum. Alas kandang menggunakan serbuk kayu dan dibersihkan satu hari sekali.

## Perlakuan
Rancangan Acak Lengkap (RAL) digunakan apabila  ragam  satuan  percobaan  digunakan seragam. Rancangan eksperimental yang digunakan yaitu rancangan eksperimental sederhana,  dengan  subjek  dibagi  menjadi  5 kelompok  dan  terdapat  4  pengulangan  ditiap kelompoknya,  sehingga  mencit  yang  diperlukan berjumlah 20 ekor.
Kelompok  perlakuan  tersebut  antara  lain: (KN)  mencit  tanpa  diberi  ekstrak  oregano, streptomycin ,  dan  bakteri E.  coli ;  (KP)  mencit diberi streptomycin secara peroral menggunakan sonde  lambung  dengan  dosis  20  mg/ekor  dan diinfeksi secara peroral E. coli 3 x 10 9 CFU; (P1) mencit  yang  diinjeksi  streptomicin,  20  mg/ekor dan diinfeksi 0,5 ml bakteri E. coli 3 x 10 9 CFU, diberi  larutan  ekstrak  oregano  dengan  dosis  5 mg/ekor  secara  peroral;  (P2)  mencit  yang diinjeksi  streptomicin,  20  mg/ekor  dan  diinfeksi 0,5 ml bakteri E. coli 3 x 10 9 CFU, diberi larutan ekstrak  oregano  dengan  dosis  10  mg/ekor;  (P3)
mencit  yang  diinjeksi  streptomicin,  20  mg/ekor dan diinfeksi 0,5 ml bakteri E. coli 3 x 10 9 CFU, diberi ekstrak oregano dengan dosis 20 mg/ekor.
Persiapan Bakeri E. coli
Bakteri E. coli didapatkan dari isolat lapang, peternakan  sapi  perah  pada  hewan  yang mengalami diare dilakukan reidentifikasi dengan menggunakan media EMBA, dan Urease. Bakteri yang didapat dilakukan pewarnaan gram dengan larutan  kristal  violet,  lugol,  aceton  alkohol,  dan safranin hasil yang didapat yaitu bakteri berwarna merah  berbentuk  basil.  Bakteri  kemudian diperbanyak menggunakan media Nutrient broth , kemudian  dilakukan  tingkat  kekeruhan  dengan menggunakan Mc Farland 10 atau setara dengan konsentrasi 3 x 10 9 CFU/ml.

## Pembuatan Ekstrak Oregano
Pembuatan  ekstrak  oregano  dilakukan  di Laboratorium  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Brawijaya  dengan  metode  maserasi. Daun  oregano  kering  ditimbang  500  gram, kemudian  direndam  di  dalam  toples  dengan etanol  96%  sebanyak  500ml  selama  24  jam  dan dilakukan pengadukan. Ekstrak cair yang didapat disaring dengan kain, kemudian dimaserat dengan vacum  rotary  evaporator, kemudian  hasil  dari endapan dan cairan dilakukan inkubasi menggunakan  oven  dengan  suhu  40 o Cuntuk menghilangkan sisa etanol.
Pemberian Streptomycin e dan Bakteri E. coli Mencit  setelah  diaklimatisasi  selama  7  hari dilakukan  penimbangan  berat  badan,  kemudian dilakukan  sonde  lambung streptomycin dengan dosis 20 mg/ekor, dengan infeksi bakteri E. coli 3 x  10 9 CFU  selama  24  jam pasca pemberian streptomycin mendapatkan gejala klinis penurunan nafsu makan, berat badan turun, feses memiliki konsistensi lembek padat yang memiliki skor 2, dan berwarna coklat muda.

## Pemberian Ekstrak Oregano
Pemberian ekstrak Origanum vulgare dengan  menggunakan  sonde  lambung  dengan dosis  5  mg/ekor,  10  mg/ekor,  dan  20  mg/ekor selama  4  hari  untuk  meminimalisir  kontaminasi
proses  sonde  dilakukan  di laminar  air  flow di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya.

## Preparasi Organ
Mencit  dieuthanasi  dengan  cara  dislokasi cervical kemudian diletakkan pada nampan bedah segera setelah mati dan diposisikan rebah dorsal. Abdomen  mencit  dibuka  dengan dissecting  set dan  diambil  organ  gaster.  Organ  yang  diambil dimasukkan  kedalam  pot  organ  yang  berisi formalin  10%,  ditaruh  pada  suhu  ruang  24-48 jam.  Organ  kemudian  dipindahkan  kedalam alkohol  70%  dan  didehidrasi  kedalam  alkohol 80%-100%  secara  bertingkat.  Organ  dijernihkan dengan xylol dan ditanam dalam parafin, dipotong blok parafin gaster 5um selanjutnya ditempelkan pada obyek glass dibiarkan selama 24 jam. Organ deparafinisasi  dengan xylol I  dan xylol II, kemudian  direhidrasi  dengan  alkohol  secara bertingkat  dari  100%,  95%,  90%,  80%,  70% selama  1x5  menit.  Dicuci  dengan  aquades mengalir dan dikeringkan. Dilakukan pewarnaan rutin  selama  5  menit.  Preparat  kemudian didehidrasi dengan etanol 70%, 80%, 90%, 95%, 100%.  Preparat  di mounting dengan entelan  dan ditutup  dengan cover  glass (Ananda,  2020). Perparat diamati menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 100x.

## Analisis Data
Data  dianalisis  dengan  uji  ANOVA  dan dilanjutkan dengan uji Duncan jika ada perbedaan signifikan (p<0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  histopatologi  organ  lambung  pada kontrol negatif dengan tanpa perlakuan perbesaran  100x,  pada  Gambar  1.  dapat  dilihat terdapat  vili  yang  ditunjukan  oleh  panah  putih, sedangkan pada panah hijau terdapat sub mukosa terlihat normal,  pada  panah  hitam  yaitu  terdapat muskularis eksterna, dan panah biru yaitu serosa. Perlakuan  positif  dengan  pemberian  20  mg/ekor streptomycin ,  bakteri E.  coli 3  x  10 9 tanpa pemberian  ekstrak  oregano  dapat  dilihat  hasil yaitu pada Gambar 2A dengan nekropsi hari ke-3
Tabel 1. Hasil histomorfometri panjang dan lebar vili mencit
Perlakuan Hari ke-3 Hari ke-6 Panjang Vili (µm) Lebar Vili (µm) Panjang Vili (µm) Lebar Vili (µm) KN 333. 179 ± 46 b 28. 324 ± 2 a 458. 309 ± 71 a 29. 858 ± 5 a KP 187.428 ± 48 a 32. 815 ± 9 a 369.908 ± 29 a 36. 782 ± 6 a P1 189.776 ± 39 a 31. 157 ± 7 a 331. 864 ± 41 a 25. 78 ± 7 a P2 228.433 ± 22 a 32. 566 ± 12 a 395. 175 ± 89 a 29. 687 ± 10 a P3 277. 739 ± 83 ab 42. 296 ± 8 a 410. 951 ± 114 a 30. 035 ± 5 a abc notasi berbeda menunjukkan adanya perbedaan nyata antara kelompok perlakuan (p<0,05).
Gambar 1 . Hasil  histopatologi  lambung  kontrol  negatif  dengan  pewarnaan  HE  mengguakan perbesaran  40x  dan  100x.  Gambar  A  yaitu  nekropsi  hari  ke-3  setelah  pemberian bakteri E. coli dan pada Gambar B nekropsi hari ke-6.
Gambar 2 . Hasil  histopatologi  lambung  kontrol  positif  dengan  pewarnaan  HE  mengguakan perbesaran  40x  dan  100x.  Gambar  A  yaitu  nekropsi  hari  ke-3  setelah  pemberian bakteri E. coli dan pada Gambar B nekropsi hari ke-6.
Gambar 3 . Hasil  histopatologi  lambung  perlakuan  1  dengan  pewarnaan  HE  mengguakan perbesaran  40x  dan  100x.  Gambar  A  yaitu  nekropsi  hari  ke-3  setelah  pemberian bakteri E. coli dan pada Gambar B nekropsi hari ke-6.
Gambar 4 . Hasil  histopatologi  lambung  perlakuan  2  dengan  pewarnaan  HE  mengguakan perbesaran  40x  dan  100x.  Gambar  A  yaitu  nekropsi  hari  ke-3  setelah  pemberian bakteri E. coli dan pada Gambar B nekropsi hari ke-6.
Gambar 5 . Hasil  histopatologi  lambung  perlakuan  3  dengan  pewarnaan  HE  mengguakan perbesaran  40x  dan  100x.  Gambar  A  yaitu  nekropsi  hari  ke-3  setelah  pemberian bakteri E. coli dan pada Gambar B nekropsi hari ke-6.
setelah  pemberian  bakteri E.  coli pada  panah coklat terdapat erosi epitel vili, pada panah abu – abu terlihat adanya infiltrasi sel radang yang dapat merusak lamina propia. Hasil nekropsi hari ke-6 dapat dilihat pada Gambar 2B yaitu, infiltrasi sel radang  yang  semakin  banyak  yang  ditunjukan oleh  panah  berwarna  abu  –  abu  dan  erosi  epitel semakin  banyak,  pada  kontrol  positif  terjadinya erosi  pada  epitel  dikarenakan  adanya  kerusakan yang  disebabkan  banyaknya  infiltrasi  sel radang yang  disebabkan  adanya  infeksi  bakteri E.  coli (Fajeria, 2020).
Perlakuan 1 yang ditunjuk pada Gambar 3A dengan dengan pemberian 20 mg/ekor streptomycin , bakteri E. coli 3 x 10 9 dan ekstrak oregano dengan dosis 5 mg/ekor dengan nekropsi pada  hari  ke-3  banyak  infiltrasi  sel  radang  pada lamina  propria  sehingga  menyebabkan  vili memendek  yang  ditunjuk  oleh  panah  abu-abu, sehingga  menyebabkan  erosi  pada  epitel  yang ditunjukan oleh panah coklat. Nekropsi pada hari ke-6  Sesuai  Gambar  3B  didapatkan  infiltrasi  sel radang mengalami penurunan sehingga erosi pada
epitel  mengalami  penurunan  yang  disebabkan oleh  sel  yang  mulai  melakukan  regenerasi (Wiralaga, 2015).
Perlakuan  ke-2  dengan  pemberian  20 mg/ekor streptomycin , bakteri E. coli 3 x 10 9 dan ekstrak  oregano  dengan  dosis  10  mg/ekor  dapat dilihat pada Gambar 4A dengan nekropsi hari ke- 3  infiltrasi  sel  radang  pada  lamina  propria mengalami  penurunan  sehingga  kerusakan  pada lamina  propria  menjadi  menurun  yang  ditunjuk oleh panah abu-abu, sehingga menyebabkan erosi pada  epitel  yang  ditunjukan  oleh  panah  coklat. Gambar 4B dengan nekropsi hari ke-6 hasil yang didapat  yaitu  infiltrasi  sel  radang  mengalami penurunan  sehingga  erosi  pada  epitel  menurun. Perlakuan  ke-3  pada  mencit  pemberian  20 mg/ekor streptomycin , bakteri E. coli 3 x 10 9 dan ekstrak  oregano  dengan  dosis  20  mg/ekor  pada Gambar 5A nekropsi hari ke-3 infiltrasi sel radang pada  lamina  propria  mengalami  penurunan mengakibatkan  kerusakan  pada  lamina  propria menjadi menurun yang ditunjuk oleh panah abu- abu,  sehingga  menyebabkan  erosi  pada  epitel
yang  ditunjukan  oleh  panah  coklat.  Gambar  5B dengan  nekropsi  hari  ke-6  sehingga  hasil  yang didapat  yaitu  infiltrasi  sel  radang  mengalami penurunan sehingga erosi pada epitel mengalami penurunan  dapat  dilihat  bahwa  kerusakan  yang banyak yaitu terjadi pada perlakuan 1 sedangkan P2 dan P3 mengalami kerusakan yang berkurang pada nekropsi hari ke-3 sedangkan pada nekropsi hari  ke-6  pada  perlakuan  1  terdapat  kerusakan yang disebabkan sel radang namun pada P2 dan P3  mengalami  penurunan  kerusakan  vili  yang disebabkan  oleh  ekstrak  oregano  yang  memiliki kandungan  phenolik  yang  berperan  sebagai antioksidan dan sebagai antiinflamasi (Alekseeva et al. , 2020).
Penelitian ini menggunakan metode histomorfometri  untuk  mengukur  lambung  pada penelitian  ini  menggunakan  software  image-j dengan  kalibrasi  dengan  perbesaran  100x. Histomorfometri yang dilakukan dengan mengukur tinggi vili dengan mengukur apex vili hingga kripta vili dan lebar vili dengan mengukur tepi  epitel  dengan  tepi  epitel  yang  berlawanan. Pengukuran  histomorfometri  lambung  mencit pada setiap perlakuan dirata- rata. Hasil rata-rata histomorfometri lambung didapatkan panjang vili tertinggi  pada  nekropsi  hari  ke-3  setelah pemberian  bakteri E.  coli pada  P3  dan  terendah pada  kontrol  positif  yang  disebabkan  rusaknya vili  lambung  karena  adanya  sel  radang  yang menandakan adanya infeksi bakteri E. coli . Lebar vili  tertinggi  pada  perlakuan  ke-3  dan  terendah pada  perlakuan  ke-1,  sedangkan  pada  nekropsi hari ke-6 panjang vili tertinggi yaitu pada P3 dan terendah  pada  Perlakuan  ke-1  dengan  dosis ekstrak  oregano  5  mg/ekor  menyebabkan  hasil panjang  vili  masih  rendah.  Lebar  vili  tertinggi pada kontrol positif dan terendah pada perlakuan ke-1  lebar  vili  semakin  lebar  disebabkan  sel radang  karena adanya E.  coli yang  menginfeksi. Hasil dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan uji analisa ANOVA dengan uji Tukey pemberian ekstrak oregano pada P1, P2, P3 tidak  memiliki  perbedaan  yang  signifikan, (p>0,05)  yang  dibandingkan  dengan  kontrol positif.  Kontrol  positif  pada  hari  nekropsi  ke-3 setelah  pemberian  bakteri E.  coli memiliki panjang vili secara nyata sama dengan P1, P2, P3.
Lebar vili pada hari ke-3 kesamaan secara nyata. Panjang  vili  pada  hari  ke-6  pada  memiliki kesamaan secara nyata. Lebar vili pada hari ke-6 pada  P1  memiliki  kesamaan  yang  nyata,  karena ekstrak  oregano  pada  hari  ke-6  memiliki pengaruh yang sama memiliki kandungan sebagai antiinflamasi  dan  senyawa  phenol  sebagai antioksidan  sehingga  membantu  regenerasi  sel yaitu sel yang baru akan menggantikan sel yang mati/  rusak,  regenerasi  sel  berlangsung  1-3  hari yang  diperankan  oleh  sel  epitel  diregulasi  oleh prostaglandin. Hormon gastrin yang disekresikan oleh sel endokrin mendorong pertumbuhan pada mukosa lambung (Wiralaga et al ., 2015).

## KESIMPULAN
Dapat disimpulkan bahwa gambaran histopatologi  lambung  mencit  Balb/C  pada kontrol  positif,  P1,  P2,  dan  P3,  memiliki kerusakan sel epitel yaitu erosi yang disebabkan oleh sel radang namun dengan pemberian ekstrak oregano  dengan  dosis  20  mg/ekor  mampu meringankan  gejala  dari  infeksi E.  coli .  Secara khusus, pada nekropsi hari ke-3 dan ke-6, panjang dan  lebar  vili  kelompok  P1,  P2,  dan  P3  tidak berbeda  signifikan  (p>0,05)  bila  dibandingkan dengan KP.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  pada Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya atas hibah riset yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alekseeva,  M.,  Tzvetelina,  Z.,  Ivan,  A.,  & Krasimir, R . (2020). Origanum Vulgare L. – A Review on Genetic Diversity, Cultivation, Biological  Activities  and  Perspectives  for Molecular  Breeding. Bulgarian  Journal  of Agricultural Science , 26(06).
Ananda,  R.  F.  (2020).  Efek  Gastroprotektif Ekstrak  Etanol  Daun  Bangun-Bangun ( Plectranthus  amboinicus  (lour.)  Spreng. )
Pada  Lambung  Tikus  Putih  Jantan  ( Rattus
norvegicus ) Yang diinduksi Dengan Metode
Stres. Fakultas Farmasi. Universitas
Sumatera Utara.
Aspinall, V., & Cappello, M. (2015). Introduction to  Veterinary  Anatomy  and  Physiology Textbook.  Third  Edition.  Edinburgh ;  New York: Elsevier.
Bukovska,  A.,  Cikos,  S.,  &  Juhas,  S.  (2007).
Effects  of  a  Combination  of  Thyme  and Oregano  Essential  Oils  on  Tnbs-Lnduced
Colitis in Mice. Mediators of Inflammation . pp: 10.
Chevallier,  A.  (2016).  Encyclopedia  of  Herbal Medicine. Third. American: Dorling Kindersley.
Donnenberg,  M.  S.  (2013). Escherichia  Coli: Pathotypes  and  Principles  of  Pathogenesis. 2nd Edition. Amsterdam: Academic Press.
Fajeria, A. L. (2020). Pengaruh Preventif Ekstrak Daun  Dewandaru  ( Eugenia  Uniflora.  L ) Terhadap  Kadar  Malondialdehyde  (MDA) Dan  Histopatologi  Duodenum  Pada  Tikus
Putih ( Rattus Norvegicus )
Model
Gastroenteritis  Induksi Escherichia  Coli .
Media Kedokteran Hewan , 31(2), 74.
Kaiser, P., Diard, M., Stecher, B., & Hardt, W. D . (2012). The Streptomycin Mouse Model For Salmonella  Diarrhea:  Functional  Analysis Of  The  Microbiota,  The  Pathogen’s
Virulence Factors, And The Host’s Mucosal
Immune  Response: Streptomycin Mouse Model’, Immunological  Reviews ,  245(1), 56–83.
Kartika, A. A., Siregar, H. C. H., & Fuah, A. M.
(2013).  Strategi  Pengembangan  Usaha Ternak  Tikus  (Rattus  Norvegicus)  Dan Mencit  (Mus  Musculus)  di  Fakultas Peternakan  IPB, Jurnal  Ilmu  Produksi  Dan
Teknologi Hasil Peternakan , 01(3).
Miladiyah,  I.  2010.Toksidinamika  Antibiotikka Golongan Aminoglikosida’, Jkki , 2(5).
Muhtadi, S., Andi, W., Nurcahyanti, & Sutrisna . (2014).  Uji  Praklinik  Antihiperurisemia Secara  In  Vivo  Pada  Mencit  Putih  Jantan Galur  Balb-C  Dari  Ekstrak  Daun  Salam (Syzigium  Polyanthum  Walp)  Dan  Daun Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  Bilimbi  L.)’,
Biomedika , 6(1).
Muliani,  H.  (2011).  Pertumbuhan  Mencit  ( Mus Musculus  L. )  Setelah  Pemberian  Biji  Jarak Pagar ( Jatropha Curcas L. )’, 1, 11.
Nugroho,  R.  (2018).  Mengenal  Mencit  Sebagai
Hewan Laboratorium. Samarinda: Mulawarman University Press. París,  J.  R.,  Ana,  R.,  &  Beltran,  N.  (2016). Morphological Mouse Phenotyping:
Anatomy,  Histology  and  Imaging.  Paris:
Elsevier.
Prasetya,  Y.  A.,  Yuyun,  W.  I.,  Aprilia,  P.  K.,
Chorry, H. M., & Nur, R. D . (2019). Deteksi Fenotipik Escherichia Coli Penghasil Extended Spectrum Beta-Lactamases (Esbls)  Pada  Sampel  Makanan  Di  Krian
Sidoarjo’, Life Science , 8(1).
Rejeki, P. S., Cahyaning, P. E. A., & Eka, P. R. (2018).  Ovariektomi  Pada  Tikus  Dan Mencit. Airlangga University Press.
Riedel, S., Jeffery, H., Steve, M., Stephen, M., &
Timothy,  M . (2019).  Jawetz  Melnick  & Adelbergs  Medical  Microbiology,  Twenty- Eighth Edition. 28th Edn. United States: Mc. Grawhill.
Shalihat, H. K. (2018). Potensi Carvacrol Dalam Daun Bangun-Bangun Sebagai Antimikroba dan Imunostimulator, Cermin Dunia Kedokteran , 45(11).
Tarmudji.  (2003).  Kolibasilosis  Pada  Ayam: Etiologi,  Patologi  Dan  Pengendaliannya. Wartazoa , 13(02).
Wiralaga,  I.  P.  A.,  Wayan,  S.  I.,  &  Made,  K.  I.
(2015). Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol
Daun Ashitaba ( Angelica Keiskei ) Terhadap
Histopatologi Lambung Mencit (Mus Musculus) Jantan, 7(1), 7.
Zumrotul, M. (2015). Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia )  Meningkatkan  Respon  Imun Mencit  (Mus  Musculus)  Terhadap  Infeksi Bakteri  Staphylococcus  Aureus, Journal  of Health Sciences , 6(2), 34 .
***