## PEMANFAATAN RADIONUKLIDA 99mTc UNTUK PENGEMBANGAN RADIOFARMAKA PENATAH INFEKSI/INFLAMASI DI PTRR, BATAN, SERPONG
Laksmi Andri Astuti PTRR, BATAN, Serpong.

## ABSTRAK
PEMANFAATAN  RADIONUKLIDA 99m Tc  UNTUK  PENGEMBANGAN  RADIOFARMAKA PENATAH  INFEKSI/  INFLAMASI  DI  PUSAT  TEKNOLOGI  RADIOISOTOP  DAN RADIOFARMAKA,  BATAN,  SERPONG. Salah  satu  pendayagunaan  Reaktor  Serba  Guna G.A.Siwabessy  adalah  sebagai  penghasil  radioisotop,  diantaranya  technicium-99m  ( 99m Tc)  yang merupakan  anak  luruh  dari  radioisotop  Mo-99m. 99m Tc  merupakan  radionuklida  ideal  untuk pencitraan menggunakan kamera gamma.  Saat ini  Pusat Teknologi Radioisotop dan Radiofarmaka – BATAN telah mengembangkan radiofarmaka untuk penatah infeksi menggunakankan Tc-99m , baik antibodi  bertanda 99m Tc,  peptida  bertanda 99m Tc    maupun  antibiotik  bertanda 99m Tc.  Radiofarmaka yang  telah  dikembangkan  antara  lain 99m Tc-EBI, 99m Tc-HYNIC-IgG, 99m Tc-HYNIC-IgM, 99m Tc-IgG,
99m Tc-IgM, 99m Tc-DTPA-INH.  Tujuan  penulisan  makalah  ini  adalah  untuk  menjelaskan pengembangan  radiofarmaka  untuk  infeksi/inflamasi  berbasis 99m Tc,  metoda  analisis  kemurnian radiokimia  dengan  kromatografi  lapis  tipis  dan  kromatografi  kertas,  biodistribusi  dilakukan  dengan hewan  percobaan  mencit.    Hasil  penelitian  menunjukkan  kemurnian  radiokimia  yang  cukup  tinggi, sehingga  bisa  disimpulkan  hasil  penelitian  bisa  digunakan  untuk  radiofarmaka  penatah infeksi/inflamasi, tetapi masih perlu dilanjutkan dengan uji praklinis lanjutan dan uji klinis di rumah sakit.
Kata kunci:   Radionuklida 99m Tc, Radiofarmaka, infeksi, inflamasi.

## ABSTRACT
UTILIZATION  OF  RADIONUCLIDES 99m Tc  FOR  DEVELOPMENT  OF  DIAGNOSTIC RADIOPHARMASEUTICAL  FOR  INFECTION/INFLAMATION  IN  PTRR,  BATAN, SERPONG. One of the utilization of RSG-GAS in PTRR-BATAN is utilization of radionuclide 99m Tc for development of radiopharmaceutical for infection and inflammation imaging agent, which 99m Tc is an  ideal  radionuclide  for  imaging  using  a  gamma  camera.  PTRR-BATAN  has  developed  a radiopharmaceutical  for  the  diagnosis  of  infection  /  inflammation  using 99m Tc  radionuclides,  both 99m Tc labeled antibodies, 99m Tc labeled peptides or 99m Tc labeled antibiotic. Radiopharmaceutical that have  been  developed  in  PTRR-BATAN  such  as 99m Tc-HYNIC-IgG, 99m Tc-HYNIC-IgM, 99m Tc-IgG,- 99m Tc IgM, 99m Tc-DTPA-INH, analysis method for radiochemical purity by thin layer chromatography and  paper  chromatography,  animal  biodistribution  experiments  performed  with  mice,  the  results showed that radiochemical purity is high enough, it can be concluded that the  results can be used for radiopharmaceutical  for infection/inflammation imaging agent, but still need further preclinical  and clinical trials.
Keywords: 99m Tc Radionuclide, Radiopharmaceutical, infection, inflammation.

## PENDAHULUAN
Radiofarmaka
telah menunjukkan manfaat  yang  nyata  dan  spesifik  dalam pelayanan  kesehatan,  terutama  untuk  keperluan diagnosis dan terapi antara lain penyakit  kanker, infeksi / inflamasi dan lain lainnya.
Akhir-akhir  ini  penelitian  pengembangan mengenai  radiofarmaka  penyidik  infeksi  dan inflamasi  berkembang  dengan  pesat,  misalnya monoklonal antibodi bertanda, fragmen antibodi, peptida  kemotaktik  dan  antibiotik  bertanda [1] . Sejak 67 Ga-sitrat diketahui bisa digunakan untuk penyidikan
inflamasi maka
beberapa radiofarmaka untuk penyidikan inflamasi banyak dikembangkan [2] antara lain 111 In-antibodi antigranulosit [3] , 111 In-biotin [4] , 99m Tc-peptida kemotaktik [5] .
Inflamasi  jaringan  dengan  atau  tanpa infeksi  merupakan  gangguan  yang  bersifat heterogen  dan  dapat  melibatkan  berbagai  organ dalam  tubuh  dengan  manifestasi  klinik  yg bervariasi.  Inflamasi  adalah  suatu  respon  yang terjadi  pada  jaringan  yang  terluka  untuk membawa  molekul  dan  sel  dari  sistem  imun  ke tempat  terjadinya  kerusakan,  sedangkan  infeksi adalah inflamasi yang disertai dengan kontaminasi  mikro-organisme [6] .  Pada  umumnya diagnosis  infeksi  tidak  sulit  terutama  apabila sudah  terbentuk  abses,  namun  demikian  pada keadaan  tertentu  diagnosis  menjadi  sulit  seperti pada penderita dengan keluhan, gejala klinik dan dari pemeriksaan fisik ditemukan gambaran yang tidak  khas.  Pada  keadaan  demikian  modalitas pencitraan  untuk  deteksi  dan  penentuan  lokasi inflamasi/infeksi menjadi suatu hal yang penting dalam klinik, karena dapat memberikan informasi  yang  penting  dalam  pengelolaan penyakit sekaligus dapat memberikan konfirmasi eradikasi infeksi setelah pemberian antibiotik [7] .
Pada saat ini beberapa modalitas diagnostik  dapat  digunakan  untuk  deteksi  dan lokalisasi  infeksi.  Teknik  diagnostik  tersebut dapat  dikelompokkan  menjadi  dua  kelompok,
yaitu kelompok yang didasarkan pada perubahan anatomis dan fisiologis. Kelompok yang didasarkan  pada  perubahan  anatomis  misalnya pencitraan  menggunakan  sinar-x  konvensional, USG,  CT  dan  MRI,  sedangkan  kelompok  yang didasarkan  pada  perubahan  fisiologis  adalah pencitraan  menggunakan  teknik  kedokteran nuklir.Pada pencitraan menggunakan radionuklida  akan  diperoleh  informasi  berupa perubahan yang terjadi dalam proses patofisiologi  dan  patobiokimia  pada  penderita. Kelebihan  pencitraan  dengan  teknik  kedokteran nuklir  dibandingan  dari  pencitraan  anatomis adalah,  tidak  dipengaruhi  oleh  perubahan anatomi  dan  secara  rutin  dapat  diakukan  pada seluruh tubuh tanpa memberikan paparan radiasi tambahan [7] . 67 Ga sitrat merupakan radiofamaka pertama  yang  digunakan  untuk  pencitraan inflamasi/infeksi pada
tahun 1970-an,
radiofarmaka  ini  mempunyai  waktu  paruh  fisis 3,26  hari.  Keuntungan      penggunaan 67 Ga-sitrat adalah  akumulasi  yang  tinggi  di  jaringan  proses inflamasi/infeksi, sehingga pencitraan menggunakan  radiofarmaka  ini  sangat  sensitif untuk  deteksi  dan  sekaligus  dapat  menunjukkan lokal proses inflamasi/infeksi. Namun 67 Ga-sitrat selain harganya mahal, juga memberikan paparan radiasi pada pasien relatif tinggi.
Penandaan  monoklonal  antibodi  dengan 111 In  diperkenalkan  oleh  Locker  dan  kawan- kawan [3] dan  Rusckowski  dan  kawan-kawan [4] , tetapi  secara  umum  prosedur  penandaan  dengan 111 In  cukup  rumit.  Pencitraan  dengan 111 In lamban  sampai  24  jam  serta  menghasilkan kualitas  pencitraan  yang    sub-optimal [8] .  Adanya kelemahan  penggunaan 111 In  telah  memotivas peneliti  untuk  menggunakan 99m Tc  yang merupakan  radionuklida  ideal  untuk  pencitraan menggunakan  kamera  gamma.  Dibandingan dengan 111 In, 99m Tc  memberikan  beberapa keuntungan seperti paparan radiasi yang diterima penderita relatif lebih rendah, kualitas pencitraan lebih baik dengan masa pencitraan lebih pendek, serta  diagnostik  dapat  ditegakkan  lebih  cepat
dalam beberapa jam dengan akurasi cukup tinggi dibandingkan    dengan 111 In  yang  memerlukan waktu 24 jam [9] .
Tujuan  penulisan  makalah  ini  adalah untuk  menjelaskan  pengembangan  radiofarmaka untuk  infeksi/inflamasi  berbasis 99m Tc,  metoda analisis kemurnian radiokimia dengan kromatografi  lapis  tipis  dan  kromatografi  kertas, biodistribusi dilakukan dengan hewan percobaan mencit.    Diharapkan  hasil  pengembangan radiofarmaka  untuk  infeksi/inflamasi  di  Pusat Teknologi Radioisotop dan Radiofarmaka (PTRR-BATAN)  Serpong  ini  bisa  memberikan sumbangan  yang bermanfaat  untuk  masyarakat pada  umumnya  dan  kedoktean  nuklir  pada khususnya.

## TINJAUAN PUSTAKA
Definisi  radiofarmaka  terus  berkembang dari  tahun  1930-an  sampai  dengan  sekarang seiring  dengan  perkembangan  ilmu  pengetahuan dan teknologi di bidang kimia, instrumentasi dan teknologi  informasi,  yang  pada  akhirnya  juga mempengaruhi  jenis  maupun  teknik  pembuatan radiofarmaka.
Pengertian  radiofarmaka  seluas-luasnya pada  saat  ini,  yaitu:  suatu  senyawa  radioaktif yang  digunakan  pada  manusia,  dalam  bentuk sediaan farmasi in-vivo , untuk maksud pemakaian diagnostik atau terapi.
Seperti  kita  ketahui,  sediaan  farmasi harus  memenuhi  persyaratan  yang  ditetapkan dalam Farmakope, yang berarti bahwa radiofarmaka  harus  dapat  memenuhi  syarat sebagai  sediaan  oral  atau  sediaan  parenteral sesuai dengan penggunaannya. Namun selain itu, radiofarmaka  masih  harus  memenuhi  syarat sebagai  sumber  radiasi  terbuka,  yang  berarti bahwa  senyawa  radioaktif  tidak  dikungkung sehingga  dapat  berinteraksi  (secara  kimiawi, biologis ataupun immunologis) dengan komponen di dalam tubuh  manusia, serta radiasi
dapat  mengiradiasi  komponen  di  dalam  tubuh manusia [10]
Radionuklida 99m Tc Radionuklida 99m Tc, adalah suatu radionuklida  yang  sangat  populer  digunakan untuk tujuan diagnostik Sekitar 80%
Radiofarmaka  yang digunakan untuk penyidikan dalam  kedokteran  nuklir  menggunakan 99m Tc untuk  penandaan.  Keunggulan 99m Tc  sebagai radionuklida
untuk penyidikan karena mempunyai  waktu  paruh  fisis  yang  pendek, memberikan  radiasi  gamma  tunggal  dengan energi  yang  relatif  rendah  dan 99m Tc  mudah diperoleh  dari  generator 99 Mo/ 99m Tc  dalam bentuk  larutan  perteknetat  steril,  isotonis  serta bebas pirogen .
Selain  penggunaan  untuk  radiofarmaka penatah infeksi saat ini, Tc-99m telah digunakan secara luas dalam diagnosis dan  telah digunakan secara rutin diberbagai negara. Diantaranya, saat ini,  Tc-99m  telah  digunakan  secara  rutin  dalam bone  scan,  myocardial  perfusion  imaging  serta functional  brain  imaging. Untuk bonescan, digunakan  senyawa 99m Tc-MDP. Myocardial perfusion  imaging adalah  salah  satu  bentuk cardiac  imaging .  Untuk  kebutuhan  ini  telah dikembangkan beberapa
radiofarmaka diantaranya adalah 99mT c-tetrofosmin yang dikenal  dengan  nama Myoview dan 99m Tc- sestamibi yang  dikenal dengan nama Cardiolite. Functional  brain  imaging dapat  dilakukan  pula menggunakan 99m Tc.  Radiofarmaka  yang  telah dikembangkan  untuk  tujuan  ini  adalah 99m Tc- HMPAO [11] .
Generator radioisotop adalah suatu sistem penghasil radioisotop melalui peluruhan radioisotop  induk  menjadi  radioisotop  anak dengan memancarkan radiasi, dimana persyaratan generator radioisotop adalah
Radionuklida  induk  mempunyai  waktu  paruh yang  lebih  panjang  dibandingkan  radionuklida anak.  Disamping  itu  radionuklida  anak  harus
dapat dipisahkan dari radionuklida induk dengan kemurnian  yang  tinggi  dan  tidak  bersifat  toksis. Untuk  keamanan  dan  kenyamanan  pengguna, generator  radioisotop  harus  mudah  dibawa  dan dioperasikan,  dikemas  dalam  kemasan  yang dapat  mengurangi  paparan  radiasi  sekecil mungkin
Generator radioisotop yang rutin digunakan  di  rumah  sakit  di  Indonesia  sekarang ini adalah Generator 99 Mo/ 99m Tc yang diproduksi di  dalam  negeri  (oleh  PT  Batan  Teknologi/PT Industri Nuklir Indonesia). Generator 99 Mo/ 99m Tc terdiri  dari  kolom  alumina  yang  kedalamnya diadsorpsikan  larutan  molibdenat 99 Mo  dan dilengkapi  dengan  botol  berisi  larutan  NaCl fisiologis  yang  berfungsi  sebagai  eluen  yang dihubungkan melalui selang plastik, dan merupakan  rangkaian  tertutup  yang  steril  dan bebas pirogen.
Sifat-sifat generator 99 Mo/ 99m Tc:
99m Tc  yang  dihasilkan  meluruh  secara transisi  isomeric  dan  memancarkan  radiasi gamma  monoenergi  sebesar  140    keV  dengan waktu paruh (t½) 6.02 jam menjadi nuklida 99 Tc yang  waktu  paruhnya  panjang  (t½=  2.13  x  10 5 thn) . 99 Mo merupakan pemancar  - dengan waktu paruh  2.7  hari  Dapat  dielusi  setiap  hari  dengan waktu  elusi  optimum  23  jam    Eluat  yang dihasilkan  berupa  larutan  natrium  perteknetat 99m Tc yang isotonis, steril dan bebas pirogen, pH netral  (4.5  –  7.5)  yang  siap  untuk  dicampurkan ke  dalam  kit  radiofarmaka  untuk  penggunaan diagnostic .[12].
PENGEMBANGAN RADIOFARMAKA UNTUK INFEKSI DAN INFLAMASI BERBASIS 99m Tc di PTRR-BATAN
PTRR-BATAN  telah  mengembangkan beberapa  radiofarmaka  untuk  penatah  infeksi/ inflamasi  dengan  memakai  radionuklida 99m Tc,
yaitu  antibodi  bertanda 99m Tc,  peptida  bertanda 99m Tc maupun antibiotik bertanda 99m Tc.
Radiofarmaka  yang  telah  dikembangkan  antara lain 99m Tc-EBI, 99m Tc-HYNIC-IgG, 99m Tc- HYNIC-IgM, 99m Tc-IgG, 99m Tc-IgM, 99m Tc- DTPA-INH,  sedangkan 99m Tc-Ceftriaxon  baru mulai dikembangkan,

## METODA
Pada  pengembangan 99m Tc-EBI  tahapan yang  dilakukan  adalah  penandaan  dengan 99m Tc, analisa  hasil  penandaan,  uji  ikatan  avidin-Shift assay,  uji  biodistribusi  serta  pencitraan  dengan kamera gamma [13]. Penandaan 99m Tc-EBI dilakukan  dengan  cara  mereaksikan  2-5μl larutan yg mengandung 10 mg/ml EBI  dengan 1 mCi 99m Tc    dan  2  µl  larutan  SnCL2.2H2O, diinkubasi  selama  10  menit  dalam  suhu  kamar. 99m Tc-EBI  hasil  penandaan  dianalisis  dengan HPLC  dan  kromatogrfi  lapis  tipis  serta kromatografi kertas untuk mengetahui kemurnian radiokimianya. 99m Tc-EBI  hasil  penandaan dilakukan  uji  ikatan  avidin  untuk  menunjukkan sisi  aktif  dari  EBI  bisa  berikatan  dengan  avidin. Biodistribusi  dilakukan  pada  mencit  yang  pada otot  paha  kanannya  telah  dilakukan  inflamasi buatan.
Pengembangan 99m Tc–Human
ImmunoglobulinG  ( 99m Tc-hIgG)  telah  dilakukan di PTRR-BATAN dari mulai tahap reduksi hIgG, pelabelan  hIgG  yang  telah  direduksi  dengan 99m Tc  beserta  uji  kemurnian  radiokimianya,  uji stabilitas,  serta  uji  biodistribusi  pada  hewan percobaan [14] . Reduksi hIgG menggunakan merkaptoetanol  dengan  perbandingan  molar hIgG terhadap merkaptoetanol 1:2000, pemurnian  melalui  kolom  PD-10.  Pengukuran hasil  pemurnian    dengan  spektrometer  UV  pada panjang  gelombang  280  nm,  pelabelan  hIgG dengan 99m Tc  dilakukan  dengan  menambahkan kit MDP yang mengandung Sn(II) dan co-ligand serta  larutan 99m Tc  perteknetat  dari  generator 99 Mo/ 99m Tc.  Hasil  penandaan  dianalisis  dengan
kromatografi  lapis  tipis/kromatografi  kertas untuk  mengetahui  kemurnian  radiokimianya. Untuk  mengetahui  stabilitas  sediaan  di  dalam tubuh  dilakukan  uji  stabilitas  dalam  serum manusia  selama  1,2  dan  3  jam.  Uji  biodistribusi dilakukan pada mencit normal.
Pengembangan 99m Tc–ImmunoglobulinM ( 99m Tc-IgM)  telah  dilakukan  dari  mulai  tahap reduksi  IgM,  Penandaan  IgM  yang  telah direduksi  dengan 99m Tc  beserta  uji  kemurnian radiokimianya, uji stabilitas, serta uji biodistribusi  pada  hewan  percobaan [15] .  Reduksi IgM menggunakan merkaptoetanol  dengan perbandingan molar IgM terhadap
merkaptoetanol  1:2000  serta  penandaan  IgM dengan 99m Tc.    Penandaan  ini  dilakukan  dengan menambahkan kit MDP yang mengandung Sn(II) dan co-ligand serta larutan 99m Tc perteknetat dari generator 99Mo/99mTc. Hasil penandaan dianalisis dengan kromatografi
lapis tipis/kromatografi  kertas  untuk  mengetahui kemurnian  radiokimianya.  Untuk  mengetahui stabilitas  sediaan    di  dalam  tubuh  manusia dilakukan  uji  stabilitas  dalam  serum  manusia selama  1  dan  2  jam.  Uji  biodistribusi  dilakukan pada mencit normal dan mencit yang dinflamas i.
Pengembangan 99m Tc-DTPA-INH  telah dilakukan  di  PTRR-BATAN  dari  mulai  tahap konjugasi  DTPA-INH,  penandaan  DTPA-INH dengan 99m Tc,  uji  stabilitas 99m Tc-  DTPA-INH pada  suhu  kamar  serta  uji  stabilitas  konyugat DTPA-INH  dilakukan  untuk  menentukan  waktu kadaluwarsanya [16]. Konyugasi  DTPA-INH dilakukan  dengan  mereaksikan  DTPA  yang sudah dilarutkan dalam DMF dengan INH degan perbandingan  mol  1:3  kemudin  ditambahan triethylamine  sebanyak  2,2  mol.  Kemurnian konyugat  DTPA-INH  dianalisis  dengan  HPLC kolom  C-18  phasa  balik  dengan  menggunakan pelarut  0,5%  TFA  dan  metanol  dengan perbandingan volum 7:3. Penandaan DTPA-INH dengan 99m Tc  dilakukan  dengan  menambahkan SnCl 2 sebagai  reduktor  dan  larutan 99m Tc perteknetat  dari  generator  99Mo/99mTc.  Hasil penandaan  dianalisis  dengan  menggunakan
kromatografi kertas dan  kromatografi lapis tipis. Optimalisasi  hasil  penandaan  dilakukan  dengan memvariasikan jumlah SnCl 2 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  pengembangan 99m Tc  –  EBI  ( EDTA-Biotin), didapat bahwa kemurnian radiokimia 99m Tc-EBI  yang  diperoleh  dari  hasil kromatografi  kertas  dan  kromatografi  lapis  tipis diatas 90%. Hasil uji ikatan avidin menunjukkan bahwa 99m Tc-EBI  -AVIDIN  sudah  terbentuk, untuk profil elusi 99m Tc- EBI- avidin menggunakan  kolom  sephadex      G-50  dapat dilihat  pada  gambar  1.  Uji  biodistribusi menunjukkan  bahwa  cacahan  pada  otot  yg diinflamasi  lebih  tinggi  dari  otot  yang  tidak diinflamasi.  Hasil  uji  biodistribusi  dari 99m TC- EBI  pada  mencit  yg  diinflamasi  dapat  dilihat pada  gambar  2.  Pencitraan  pada  tikus  wistar dengan  menggunakan  kamera  gamma  cukup jelas,  pencitraan 99m Tc-EBI  pada  hewan  tikus menggunakan  kamera  gamma  bisa  dilihat  pada Gambar  3,  dari  seluruh  hasil  yang  dicapai menunjukkan bahwa 99m Tc-EBI hasil pengembangan  PTRR  bisa  digunakan  untuk sediaan  radiofarmaka  penatah  inflamasi,  tetapi masih perlu dilakukan uji klinis di rumah sakit.
Gambar  1 .  Profil  elusi 99m Tc-  EBI-  avidin menggunakan kolom sephadex  G-50 [13] .

## Pemanfaatan Radionuklida 99mTc…(Laksmi Andri A)
Gambar  2 .  Hasil  uji  biodistribusi  dari 99m TC- EBI pada mencit yg diinflamasi [13] .
Gambar  3 .  Pencitraan 99m Tc-EBI  pada  hewan tikus menggunakan gamma kamera [13] .
Gambar 4. Kromatogram HPLC hIgG standar kolom SE250 BIORAD, eluen buffer phospat pH 7 , detektor UV [14] .
Gambar 5. Kromatogram HPLC hIgG hasil reduksi kolom SE250 BIORAD, eluen buffer phospat pH 7 , detektor UV dengan panjang gelombang 280 nm [14].
Gambar 6. Uji stabilitas 99m Tc-hIgG dalam serum manusia dan dalam PBS [14].
Pada  pengembangan 99m Tc  –  Human ImmunoglobulinG ( 99m Tc-hIgG). Hasil pengujian dengan HPLC untuk hIgG standar  menunjukkan puncak  tunggal  ditunjukkan  pada  Gambar  4  dan untuk    hIgG  hasil  reduksi  berupa  2  puncak menunjukkan  bahwa  telah  terjadi  fragmentasi molekul  pada  hIgG  yang  ditunjukkan  pada Gambar  5.  Untuk  mengetahui  stabilitas  sediaan di  dalam  tubuh    dilakukan  uji  stabilitas  dalam serum  manusia  selama  1,2  dan  3  jam.  Uji biodistribusi  dilakukan  pada  mencit  normal. Hasil analisis dengan kromatografi lapis
tipis/kromatografi  kertas  diperoleh  kemurnian radiokimia 99m Tc-hIgG  lebih  besar  95%.  Hasil pengujian  kestabilan  dalam  serum  manusia menunjukkan kemurnian radiokimia masih stabil sampai  3  jam,  hasil  uji  stabilitas 99m Tc-hIgG dalam serum manusia dan dalam PBS ditunjukkan  pada  Gambar  6.  Hasil    uji biodistribusi  menunjukkan  akumulasi  cacahan pada darah ginjal dan hati. Hasil uji biodistribusi Tc-99m-IgG  pada  mencit  normal  ditunjukkan pada  Gambar  7.  Dari  seluruh  hasil  yang  dicapai menunjukkan bahwa
99m Tc-hIgG hasil pengembangan  PTRR  bisa  digunakan  untuk sediaan  radiofarmaka  penatah  inflamasi,  tetapi masih  perlu  dilakukan  uji  praklinis  dengan binatang  percobaan  yang  diinfeksi  dilanjutkan uji klinis  di rumah sakit untuk penggunaan kebih lanjut.
Gambar 7. Hasil uji biodistribusi Tc-99m-IgG pada mencit normal [14] .
Pada pengembangan 99m Tc – ImmunoglobulinM ( 99m Tc-IgM). hasil uji stabilitas 99m Tc-IgM    dalam  serum  manusia  dan dalam  PBS  ditunjukkan  pada  Gambar  8.  Untuk mengetahui  stabilitas  sediaan  dalam  suhu  kamar dilakukan  uji  stabilitas  pada  suhu  kamar  selama 1,  2  dan  3  jam,  hasil  uji  stabilitas 99m Tc-IgM pada  suhu  kamar    ditunjukkan  pada  gambar  9. Hasil  uji  biodistribusi 99m Tc-IgM    pada  mencit normal  dan  pada  mencit  yang  diinflamasi ditunjukkan  pada  gambar  10  dan  11.  Uji clearance dilakukan  pada  hewan  percobaan tikus, hasil  uji clearance 99m Tc-IgM pada hewan percobaan  tikus  ditunjukkan  pada  Gambar  12 dan  13.  Hasil  pengujian  kestabilan  dalam  serum manusia  menunjukkan  kemurnian  radiokimia masih  stabil  sampai  2  jam  setelah  penandaan, pengujian kestabilan pada suhu kamar
menunjukkan kemurnian radiokimia masih stabil sampai  3  jam,    uji  biodistribusi  menunjukkan peningkatan  akumulasi  cacahan  pada  daerah yang  diinflamasi  (paha  kanan)  dibandingkan  dg daerah  yang  tidak  diinflamasi  (  paha  kiri).  Dari hasil  uji  clearance  menunjukkan  pada  47  jam setelah  penyuntikan  hanya  sebagian  kecil  dari aktivitas 99m Tc-IgM    yang  tertinggal  dalam tubuh. Dari seluruh hasil yang dicapai menunjukkan bahwa hasil 99m Tc-IgM pengembangan  PTRR,  bisa  digunakan  untuk sediaan  radiofarmaka  penatah  inflamasi,  tetapi masih  perlu  dilanjutkan  uji  klinis  di  rumah  sakit untuk penggunaan kebih lanjut.
85 90 95 0jam 1jam 2jam % Tc -99m Ig M waktu inkubasi Uji Stabilitas Tc-99m- IgM dalam serum dan dlm PBS dlm serum dlm PBS
Gambar 8 . Uji stabilitas 99m Tc-IgM  dalam serum manusia dan  dalam PBS 0,05M [15] .
82.5 91.17 86.6 90.93 78.12 70 75 80 85 90 95 6 minggu 7 minggu 8 minggu 13 minggu 15 minggu % Tc -99m -DTP A -I NH Waktu penyimpanan (minggu)
Hasil uji stabilitas konyugat DTPA-INH pada penyimpanan suhu - 40 derajat celcius
Gambar 9 . Uji stabilitas 99m Tc-IgM  dalam  suhu kamar [15] .
0 10 20 30 p r o se n ta se / g r a m o rg a n organ Biodistribusi Tc-99m-IgM  pada mencit normal  dengan  waktu pembedahan   1jam
Gambar 10 BiodistribusiTc-99m-IgM pada mencit normal untuk pengamatan 1 jam [15].
0 2 4 6 8 10 12 14 16 pro sent a se per g ra m o rg a n organ biodistribusi Tc-99m IgM pada mencit yang dinflamasi pada pengamatan 1jam dan 24
jam 1 jam 24 jam
Gambar 11 . Biodistribusi  Tc-99m-IgM pada mencit yang diinflamasi untuk   Pengamatan 1 jam dan 24 jam [15].
- 200,000 400,000 600,000 800,000 1,000,000 1,200,000 1,400,000 1,600,000 1,800,000 2,000,000 21 25 46 47 70 76 Ak tifit a s (ca ca h a n )/g jam ke Uji clearance ( faeces ) Tc-99m-IgM pada hewan percobaan
Gambar 12. Uji clearance ( faeces ) Tc-99m-IgM pada hewan percobaan [15] . - 500,000 1,000,000 1,500,000 2,000,000 2,500,000 3,000,000 2 21 24 26 46 47 52 70 ak tif (cac ah) /g jam ke Uji urine clearance Tc-99m-IgM pada hewan percobaan
Gambar 13. Uji clearance ( urine ) Tc-99m-IgM pada hewan percobaan [15] .
Pada  pengembangan 99m Tc-DTPA-INH hasil  analisis  dengan  HPLC  kolom  C-18  dapat dilihat  pada  gambar  14,  gambar  15  dan  gambar 16.  Dari  gambar  tersebut  dapat  dilihat  bahwa tidak  terdapat  puncak  yang  sama  dari  DTPA maupun  INH  yang  terdeteksi  di  kromatogram konjugat  DTPA-INH,  dengan  demikian  bisa disimpulkan  bahwa  semua  DTPA  maupun  INH telah  berubah  menjadi  konyugat  DTPA  INH. h . asil kemurnian radiokimia dengan kromatografi kertas/KLT untuk 99m Tc-DTPA-INH pada variasi
jumlah SnCl 2 dapat dilihat pada gambar 17. Hasil optimalisasi  menunjukkan  penambahan  Sncl 2 yang terbaik adalah sebanyak 200  μgram  karena mendapatkan  hasil  % 99m Tc-DTPA-INH  yang terbesar.  Uji  stabilitas  konyugat  DTPA-INH yang  belum  dilabel  terhadap  penyimpanan dilakukan untuk menentukan waktu kadaluwarsanya  ( shelf  life). Uji  stabilitas dilakukan  tiap  minggu  dengan  cara  konjugat ditandai  dengan 99m Tc  dan  dilakukan  analisis efisiensi  pelabelan  dan  kemurnian  radiokimia
menggunakan kromatografi lapis
tipis/kromatografi  kertas.  Hasil  uji  stabilitas sediaan  DTPA-INH  dalam  penyimpanan  dapat dilihat  pada    dan  gambar  18.  Dari  hasil  uji stabilitas  konyugat  ini  bisa  disimpulkan  bahwa konyugat  DTPA-INH  masih  stabil  pada  minggu ke  13.  Hasil  uji  Stabilitas 99m Tc-DTPA-INH pada suhu  kamar dapat dilihat pada  gambar 19, pengamatan  dilakukan  pada  0  jam,  1  jam  dan  3 jam  setelah  waktu  inkubasi.  Hasil  uji  stabilitas pada  suhu  kamar  menunjukkan 99m Tc-DTPA-
INH    masih  stabil  pada    pengamatan  sampai  3 jam  setelah  waktu  penandaan.Dari  seluruh  hasil yang  dicapai  menunjukkan  konyugasi    DTPA- INH  telah  berhasil  dilakukan  oleh  PTRR- BATAN,  kemurnian  radiokimia  bisa  mencapai 91%  didapatkan  pada  penambahan  SnCl 2 sebayak  200µgram.  Radiofarmaka 99m Tc-DTPA- INH    stabil  pada  suhu  kamar  sampai    3  jam setelah  penandaan  serta  konyugat  DTPA-INH stabil  dalam  penyimpanan  sampai  13  minggu pada suhu - 40°C.
[min.] Time 20 40 60 80 100 [mV] V o lt a g e 0.0 0.5 1.0 1.5 kolom C18 (TPB 201) TFA 0.05% :Methanol=7:3 panjang gelombang 220 nm flow  0.5 mL/menit AUFS 0.2 DTPA volume sampel 45 uL dtpa- 486 ( 2009) 2 6 .3 6 7 1 3 2 .0 3 3 2 3 3 .9 0 0 3
Gambar 14. Kromatogram HPLC DTPA kolom C-18 (TPB 201), eluen TFA 0,05%:metanol ( 7 : 3), flow rate 0,5 ml/mnt detektor UV dengan panjang gelombang 220 nm [16]..
[min.] Time 0 20 40 60 80 100 [mV] V o lt a g e 0 20 40 60 80 kolom C18 (TPB 201) TFA 0.05% :Methanol=7:3 panjang gelombang 220 nm flow  0.5 mL/menit AUFS 0.2 INH volume sampel 45 uL inh- 488 ( 2009) 3 7 .5 4 3 1
Gambar 15. Kromatogram HPLC INH kolom C-18 (TPB 201), eluen TFA 0,05%:metanol [16].
[min.] Time 20 40 60 80 [mV] V o lt a g e 0 5 10 15 20 25 kolom C18 (TPB 201) TFA 0.05% :Methanol=7:3 panjang gelombang 220 nm flow  0.5 mL/menit AUFS 0.2 DTPA-INH volume sampel 45 uL dtpa-inh- 479 ( 2009) 1 1 .2 2 7 1 1 2 .6 6 3 2 1 8 .0 5 3 3 2 0 .2 2 3 4
Gambar 16.. Kromatogram HPLC konyugat DTPA-INH kolom C-18 (TPB 201), eluenTFA 0,05% : metanol ( 7 : 3) flow rate 0,5 ml/mnt detektor UV dengan panjang gelombang 220 nm[16].
82.5 91.17 86.6 90.93 78.12 70 75 80 85 90 95 6 minggu 7 minggu 8 minggu 13 minggu 15 minggu % T c- 99m -DT PA -I NH Waktu penyimpanan( minggu) Hasil uji stabilitas konyugat DTPA-INH pada penyimpanan suhu - 40 derajat celcius
Gambar 17. Hasil uji stabilitas sediaan DTPA-INH dalam penyimpanan [16]. 30 40 50 60 70 80 90 0 jam 1 jam 3 jam 72.12 85.55 84.96
% T c- 99m
-D T P A -I N H waktu Hasil uji stabilitas pada suhu kamar Tc- 99m-DTPA-INH
Gambar 18. Hasil uji stabilitas Tc-99m-DTPA-INH pada suhu kamar [16].
30 45 60 75 90 100 μgram 150 μgram 200 μgram 250 µgram 79.42 73.22 86.84 80.95 % T c- 99m -DT P A -I NH Jumlah Sn Hasil variasi jumlah Sn pada penandaan Tc-99m-DTPA-INH
Gambar  19.   Hasil variasi jumlah jumlah Sncl 2 Pada penandaan Tc-99m-DTPA-INH [16].

## KESIMPULAN
Dari  seluruh  hasil  yang  dicapai  terbukti bahwa  semua  radiofarmaka  hasil  pengembangan mempunyai  kemurnian  radiokimia  yg  cukup tinggi  >  90%  dan  dapat      digunakan  untuk sediaan  radiofarmaka  penatah  inflamasi,  tetapi masih  perlu  dilakukan  uji  klinis  lanjutan  di rumah sakit.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kepala Pusat Teknologi Radioisotop & Radiofarmaka    (Ibu  Dra  Siti  Darwati  MSc), Kepala Bidang Teknologi Radiofarmaka (Bp DR Rohadi  Awaludin),    serta  rekan-rekan  lain  di PTRR-BATAN    yang  tidak  bisa  disebutkan  satu persatu  yang  telah  membantu  terlaksananya tulisan ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. H.J.J.M.  Renen,  F.H.M.Corstens,    W.J.G.
Oyen,  et  al.,  "New  concepts  infection /inflamation  imaging  ",  Q  J  Nucl  Med 2001,45:167-73.
2. Lavander  JP,  Lowe  J,Baker  JR,  Burns  JI,
Chaudri  MA,  Gallium-67  citrate  scanning in neoplastic and inflamantory lession. Br J
Rad, 1971 ;44:361-366.
3. Locker  JT,  Seybold  K,  Andres  RY,  et  al. Imaging  of  inflamantory  and  infectious lession  after  injection  of  radioiodinated monoclonal antigranulocyte antibodies.
Nucl Med Commun. 1986;7:659-670.
4. Rusckowski  M,  Fitz  B,  Hnatowich  DJ. Lokalization  of  infection  using  strepavidin and  biotin;  an  alternatiive  to  nonspesific polyclonal  immunoglobulin. J  Nucl  Med. 1992;33:1810-1815.
5. BABICH  j,  Graham  W,  Barrow  S,  et  al. Technetium-99m-labelled chemotactic
peptides;  comparison  with  indium-111- labelled  white  blood  cells  for  localizing acute  bacterial  infection  in  the  rabbit. J Nucl Med. 1993;34:2176-2184.
6. Roitt  IM.  Essential  immunology.  6 th edn. Oxfort: Blackwell Scientifik 1989.
7. A.Hussen  S.  Kartamiharja.  Peranan  Teknik Kedokteran  Nuklir  dalam  Penentuan  fokus
Infeksi.  Kumpulan  Makalah  Pertemuan
Ilmiah Dwi tahunan PKBNI-PKNI- BATAN, Jakarta, 2002, 103-111.
8. Palestro  CJ,  Weiland  FL,  Seabold  JE  et  al. Localizing  infection  with  a  technetium  - 99m-labeled  peptide:  initial  results.  Nuc Med Commun 2001; 22(6):695-701.
9. Fogelman  I.  Bone  scaning  in  clinical Nuclear  Medicine,3 d ed,  Maisey,  Britton and  Coiler  Eds,  Chapman  &  Hall  Medical, London, 1991:147-150.
10. Swasono R Tamat.Radiofarmaka dan
Karakter idealnya. Meteri Pelatihan Radiofarmaka untuk staf pengajar perguruan  tinggi,  PRR-BATAN-Serpong, 2004.
11. Rohadi  Awaludin.  Radioisoop  Teknesium- 99m  dan  Kegunaannya,  Buletin  Alara, volume11 No2 Desember 2011.
12. Widyastuti W. Produksi Sediaan
Radiofarmaka  dan  Senyawa  Bertanda,  .
Materi  Pelatihan  Radiofarmaka  untuk  staf
pengajar  perguruan  tinggi,  PRR-BATAN- Serpong, 2004.
13. Laksmi  dkk, Preparasi dan uji biodistribusi 99m Tc- Human immunoglobulin G,
Prosiding  Seminar Nasional  Penelitian dan
Pengelolaan Perangkat Nuklir , PTAPB- BATAN, Yogyakarta, 5 September 2007.
14. Laksmi dkk, Penandaan 99mTc-EBI yg akan digunakan sebagai Preparat Penatah Inflamasi”, pada PPI Pennelitian Dasar Ilmu Pengetahuan dan Teknologo Nuklir,
PPPTM-BATAN, Yogya. Juli 2004.
15. laksmi dkk, “Stabilitas dan uji biodistribusi 99m Tc- Iimmunoglobulin M, Prosiding
Seminar Nasional  Penelitian dan Pengelolaan Perangkat Nuklir, PTPAB- BATAN, Yogyakarta, 6 Oktober 2009.
16. Laksmi dkk, Preparasi 99m Tc- DTPA-INH untuk diagnosis tuberkulosis, Prosiding Seminar Nasional  Penelitian dan Pengelolaan Perangkat Nuklir , PTPAB- BATAN, Yogyakarta, 28 September 2010.