## DAYA ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUAH MAHKOTA DEWA TERHADAP FUSOBACTERIUM NUCLEATUM SEBAGAI BAHAN MEDIKAMEN SALURAN AKAR

## (ANTIBACTERIAL EFFECT OF MAHKOTA DEWA'S FRUIT EXTRACT TO FUSOBACTERIUM NUCLEATUM AS ROOT CANAL MEDICAMENT)
Darwis Aswal, Carolina Monica, Trimurni Abidin
Departemen Konservasi Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Sumatera Utara Jl. Alumni no.2 Kampus USU Medan

## Abstract
Mahkota  dewa's  fruit  extract  or  Phaleria  macrocarpa  [Scheff.]  Boerl.  extract  had  been  choosen  as  an  alternative medicament  solution  because the  low  saponin that obtained on  fruit and other  compound  such  as alkaloid, tannin  and flavonoid that acts as antibacterial agents. Fusobacterium nucleatum is an anaerobic bacteria that mostly found in root canal of teeth that presents with an interappointment flare-up. This study was aimed to know the antibacterial effects of extract  mahkota  dewa's  fruit  by  knowing  the  low  concentration  to  inhibit  and  kill F.nucleatum .  It  was  begun  with extraction 1000 grams mahkota dewa's fruit, then it had been percolated with 5 liters of etanol 96% became 2.5 liters of percolat  liquid.  The  percolat  had  been  evaporated  with  Vacuum  Rotary  Evaporator  and  resulted  extract  viscous consistency of mahkota dewa's fruit. To find the antibacterial effort of this fruit was determined by minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration with the concentration of 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125 and 1.56%. The result of this study showed there was no visible growth of F.nucleatum colonies on extract mahkota dewa's fruit with the  concentration  of  100,  50,  25,  12.5,  6.25,  3.125%  with  the  score  of  MIC  and  MBC  0  CFU/ml,  visible  growth  of F.nucleatum colonies on extract with the concentration of 1.56%  with the score 141.20 CFU/ml. The conclusion of this study  was extract mahkota dewa's fruit with the concentration of 3.125% with the score 0 CFU/ml can be developed as an alternative root canal medicament solution.
Key words: mahkota dewa, Fusobacterium nucleatum , medicament

## Abstrak
Ekstrak  buah  mahkota  dewa  atau  ekstrak  Phaleria  macrocarpa  [Scheff.]  Boerl.  dapat  digunakan  sebagai  bahan medikamen  alternatif  karena  kandungan  saponin  yang  kadarnya  rendah  serta  alkaloid,  tanin  dan  flavonoid  pada  buah yang  berperan  sebagai  agen  antibakteri. Fusobacterium  nucleatum merupakan  bakteri  anaerob  yang  paling  banyak ditemukan  pada  kasus  flare  up  endodonti.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  daya  antibakteri  ekstrak  buah mahkota  dewa  dengan  mengetahui  konsentrasi  minimal  yang  mampu  menghambat  dan  membunuh F.nucleatum . Penelitian dimulai dengan melakukan ekstraksi 1000 gram buah mahkota dewa menggunakan 5 liter pelarut etanol 96% kemudian  disaring  sehingga  menghasilkan  2,5  liter  perkolat.  Perkolat  diuapkan  menggunakan  Vacuum  Rotary Evaporator  sehingga  dihasilkan  ekstrak  kental  buah  mahkota  dewa.  Daya  antibakteri  buah  mahkota  dewa  diketahui dengan melihat konsentrasi hambat minimum dan konsentrasi bunuh minimum pada konsentrasi 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,125  dan  1,56%.    Hasil  penelitian  menunjukkan  pada  konsentrasi  100,  50,  25,  12,5,  6,25  dan  3,125%  tidak  terlihat adanya pertumbuhan koloni bakteri dengan skor KHM dan KBM 0 CFU/ml. Pertumbuhan koloni bakteri terlihat pada konsentrasi  ekstrak  1,56%  dengan  skor  141,20  CFU/ml.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  ekstrak  buah  mahkota dewa dengan konsentrasi 3,125% dengan skor 0 CFU/ml dapat dikembangkan sebagai alternatif medikamen saluran akar.
Kata kunci: mahkota dewa, Fusobacterium nucleatum, medikamen

## PENDAHULUAN
Penyakit  pulpa  dan  jaringan  sekitar  akar  gigi  se- cara  langsung  maupun  tidak  langsung  ada  hu- bungannya  dengan  mikroorganisme. Bakteri  yang
paling  banyak  diisolasi  dari  saluran  akar  yang  ter- infeksi  dengan  pulpa  terbuka  adalah  obligat  anae- rob. 1 Menurut Sundqvist, Fusobacterium nucleatum merupakan  salah  satu  bakteri  yang  paling  banyak ditemukan pada infeksi saluran akar dengan persen-
tase insidens sebesar 48%. 2 F.nucleatum adalah bakteri  anaerob  gram  negatif, dan  mengadakan  perlekatan  terhadap  struktur  gigi melalui  interaksi  spesifik  antara  lipopolisakarida yang dihasilkannya yang mampu larut dalam saliva. Lipopolisakarida  memiliki  kemampuan  untuk  me- ngadakan  perlekatan  pada  struktur  hidroksiapatit, serum, dan sementum. Hal ini menunjukkan bahwa lipopolisakarida  dari F.nucleatum memegang  pe- ranan  penting  dalam  proses  perlekatannya,  bukan hanya pada epitel, tetapi juga pada struktur gigi. 3 F.nucleatum sering ditemukan pada kasus flare up endodonti,  dan  keberadaan  bakteri  ini  dapat  me- nyebabkan  rasa  sakit  yang  parah  disertai  dengan pembengkakkan. 4 Kombinasi F.nucleatum , Prevo- tella sp ., dan Porphyromonas sp . merupakan faktor risiko terjadinya flare up endodonti, hal ini disebab- kan  karena  adanya  sinergisme  antara  bakteri  ter- sebut,  sehingga  meningkatkan  intensitas  terjadinya reaksi inflamasi pada jaringan periapeks. 5 Selain itu F.nucleatum bersama  dengan P.gingivalis meme- gang  peranan  penting  pada  lesi  endo-perio  melalui agregasi kedua bakteri tersebut. 6
Perawatan  kasus  endodonti  membutuhkan  peng- gunaan  bahan  medikamen  yang  mampu  meng- eliminasi  endotoksin  bakteri  yang  melekat  pada struktur  gigi  yang  tidak  tereliminasi  sempurna  saat proses  instrumentasi  saluran  akar. 3 Penggunaan  ba- han  medikamen  saluran  akar  selama  perawatan endodonti harus dapat mensterilkan dan mengurangi jumlah mikroorganisme patogen dalam saluran akar. Berbagai bahan  medikamen  yang  sering digunakan antara lain kalsium hidroksida (Ca(OH) 2 ), antibiotik, non-phenolic , biocides phenolic biocides , dan bahan iodin.  Medikamen  saluran  akar  digunakan  dengan tujuan  mengeliminasi  bakteri  yang  tidak  dapat  di- hancurkan dengan proses chemo-mechanical seperti instrumentasi dan irigasi. 7
Bahan  alami  yang  mungkin  dapat  dikembangkan sebagai  alternatif  medikamen  saluran  akar  adalah tanaman mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa ). 8,9
Efek terapeutik buah mahkota dewa erat hubungan- nya  dengan  senyawa  kimia  yang  terkandung  di dalamnya.  Telah  diketahui  bahwa  biji  mahkota dewa  bersifat  toksik  sedangkan  daging  buahnya tidak.  Potensi  penghambatan  daging  buah  mahkota dewa  lebih  besar  jika  dibandingkan  dengan  akar, kulit  batang,  maupun  daunnya. 10 Komposisi  aktif buah mahkota dewa adalah tanin, flavonoid, saponin dan  alkaloid. 8-10 Dalam  bidang  kedokteran  gigi, penelitian  mengenai  zona  hambat  infusum  daun mahkota   dewa   pada   pertumbuhan Streptococcus mutans memperlihatkan bahwa semakin tinggi kon- 0sentrasi  infusum  daun  mahkota  dewa,  maka  se- makin  besar  zona  inhibisnya.  Penelitian  infusum
daun mahkota dewa terhadap Staphylococcus aure- us menunjukkan  kemampuan  antibakteri  diperoleh dengan  nilai  KHM  3,125%  dan  KBM  6,25%. 9 Penelitian  mengenai  daya  antibakteri  ekstrak  buah mahkota  dewa  dalam  menghambat  pertumbuhan Enterococcus  faecalis ,  disimpulkan  bahwa  ekstrak buah  mahkota  dewa  memiliki  kemampuan  daya antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri Enterococcus faecalis dengan nilai KHM dan KBM 12,5%. 11
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  daya antibakteri  ekstrak  etanol  daging  buah  mahkota dewa terhadap bakteri F.nucleatum .

## BAHAN DAN METODE
Hasil  determinasi  tanaman  di  Lembaga  Ilmu  Pe- ngetahuan  Indonesia,  Pusat  Penelitian  Biologi, Bogor menunjukkan bahwa tanaman  yang akan di- gunakan  adalah  benar  dan  telah  sesuai  dengan tanaman  uji  yang  diperlukan,  yaitu  buah  mahkota dewa  ( Phaleria  macrocarpa ).  Dalam  pembuatan ekstrak etanol buah mahkota dewa, digunakan 1000 gram  buah  mahkota  dewa  (Medan  Polonia, Indonesia),  kemudian  diiris  halus  dan  diambil daging buahnya  tanpa biji. Daging buah  yang  telah diiris  halus  selanjutnya  dikeringkan  di  lemari  pe- ngering  selama  10  hari.  Irisan  yang  telah  kering dihaluskan dengan blender (Panasonic, Japan) sam- pai  menjadi  serbuk  simplisia  sebanyak  100  gram. Serbuk  simplisia  dimasukkan  ke  dalam  wadah  dan diperkolasi  dengan  5  liter  pelarut  etanol  96%,  se- hingga  diperoleh  perkolat  cair  sebanyak  2,5  liter. Seluruh perkolat digabung dan disaring, lalu diuap- kan  dengan  menggunakan Vacuum  Rotary  Eva- porator ( Heildolph VV 2000 , Germany) pada tekan- an  <1  ATM dengan  temperatur  ≤60°C. Hasil  akhir yang  didapat  adalah  ekstrak  kental  buah  mahkota dewa.
Penelitian  eksperimental  labo l44>iuat  P26(m)33(a)(m)14(a)26(h)27(k)45(o)9(t)23(a)44( )07.3 2 t7.67 T /P <<Tm[ 1 70.7249(Pd)27(i)] TJETBT1 0 0 1 284.03wJETBT1 4(e)26(n)45(t)23(a )-94(<)37(1)2(t)23(a )-(a )-50k16(r)42( )-38ul  7>3(ul)42( )-385(7>)9()27(a)44(d)45(o)9(t)2(t)23(a )-(TBT1 0 0 1 520.97 406.9 Tm[(.35 Tc[(  )] TJETBT167 Tm 0 TcBDC BT1 0 0011453.03wJ(  )] TJET7 Tm 0 TcBDC BTf1 0 0 1 20)] TJET9je)44(l)23(i)23(p)9(eg427a)26(k)45(yT7 T40.35 Tc[) 406.9 Tm(a)26(t)42( ] TJETBc[(  )] TJ85(7>)9()27(a)44(d)45(o)9(t)2(t)23(a 27(a)44(m)33(b)9(a)26(t)43(t)23>a86>25<004C>23<009()27(a)4<0003>-76<002B>13<367(6)27(,96>25<004C>23<0(i)2)23(2B>13>23<0(i)2)23(2B>1d)9(a45Tm -0.35 Tc[( 26>31<0011>32<Bm)14(a)26(h)27(k)) h)279()27(a)4<0003>-76<002B>13<3Ah)27(k) danL #° #v°6p`'A5`0'Z`'& °•03P &pbp°bP°P'p &p'p &°Q 'p%5`2`'à°G‚SV@ &pEp &P3ó1p#SP @•05`0P'à°825 356.320a t320ET0 1 32B>13>23<0(i)2lamtrasi
yang  diinkubasi  24  jam).  Selanjutnya,  dilakukan perhitungan  jumlah  bakteri  dengan  menggunakan metode Drop  Plate  Mills  Mesra yang  bertujuan untuk  membuktikan  bahwa  perubahan  tingkat  ke- keruhan  pada  setiap  konsentrasi  menunjukkan  ke- mampuan  bahan  coba  membunuh  bakteri  sebesar 99%-100%,  yang  disebuh  sebagai  Kadar  Bunuh Minimal (KBM).
Selain itu, dilakukan penentuan nilai Kadar Ham- bat  Minimal  (KHM)  pada  kelompok  I  (6  sampel ekstrak  konsentrasi  100%),  kelompok  II  (6  sampel ekstrak  konsentrasi  50%),  kelompok  III  (6  sampel ekstrak  konsentrasi  25%),  kelompok  IV  (6  sampel ekstrak konsentrasi 12,5%), kelompok V (6 sampel ekstrak konsentrasi 6,25%), kelompok VI (6 sampel ekstrak  konsentrasi  3,125%),  kelompok  VII  (6 sampel  ekstrak  konsentrasi  1,56%),  kelompok  VIII (1  sampel  kontrol Mac  Farland ),  kelompok  IX (1 sampel  kontrol  negatif  ekstrak  etanol buah mah- kota dewa tanpa suspensi F.nucleatum ).
Selanjutnya  1  ml  suspensi  bakteri  yang  telah  di- persiapkan sebelumnya diambil dengan mengguna- kan  mikropipet  lalu  dimasukkan  ke  dalam  masing- masing  tabung  bahan  coba  yang  telah  diberi  label kemudian  di vorteks .  Tabung-tabung  tersebut  ke- mudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam pada  inkubator  CO 2 dan  diamati  kekeruhan  yang terjadi  dengan  membandingkan  tabung-tabung  ter- sebut dengan kontrol untuk menentukan nilai KHM dari  masing-masing  bahan  coba.  Tabung  dengan kekeruhan  yang  mulai  tampak  jernih  untuk  setiap kelompok  perlakuan  merupakan  KHM  yaitu  kon- sentrasi minimal ekstrak atau bahan uji apapun yang mampu  menghambat  pertumbuhan F.nucleatum dalam  media  perbenihan  setelah  diinkubasi  24  jam dan tidak tumbuh koloni kuman dalam  perbenihan tersebut.
Pada prosedur penentuan nilai KHM tidak terlihat larutan  yang mulai  tampak  jernih  karena  kesamaan warna  kekeruhan  dengan  kontrol,  sehingga  semua kelompok  larutan dilanjutkan dengan penghitungan jumlah  koloni  bakteri,  yaitu  pada  konsentrasi  100, 50,  25,  12,5,  6,25,  3,125  dan  1,56%  untuk  me- nentukan  nilai  KBM.  Setelah  itu,  bahan  coba  de- ngan konsentrasi tersebut masing-masing di vor-teks dan  diambil  50μl  untuk  tiap  konsentrasi  lalu  di- teteskan  ke  dalam  media  padat  ( Mueller  Hinton Agar )  direplikasi  6  petri,  didiamkan  selama  15-20 menit  sampai  mengering  dan  diinkubasi  dalam  in- kubator CO 2 dengan suhu 37°C selama 24 jam.

## HASIL
Hasil  pengujian  antibakteri  menunjukkan  bahwa
pada  konsentrasi  100,  50,  25,  12,5,  6,25  dan 3,125%  diperoleh  nilai  jumlah  koloni  0  CFU/ml, sedangkan  pada  konsentrasi  1,56%  terlihat  adanya pertumbuhan koloni bakteri senilai  141,20 CFU/ml pada replikasi 1 (Tabel 1).
Tabel 1.  Rerata  jumlah  koloni  bakteri F.nucleatum ber- dasarkan  bahan  coba  ekstrak  etanol  buah mahkota dewa
Rerata  jumlah  koloni  bakteri F.nucleatum berdasarkan  bahan  coba ekstrak etanol buah mahkota dewa
Konsentrasi 100 % 50 % 25 % 12,5 % 6,25 % 3,125 % 1,56 % Rerata (CFU/ml) 0 0 0 0 0 0 140,20
Jika  dibandingkan  dengan  kontrol Mac  Farland 0,5  (Gambar  1A),  jumlah  koloni  pada  konsentrasi 3,125%  adalah  0  CFU/ml,  hal  ini  berarti  tidak  ter- bentuk  lagi  koloni  bakteri  pada  media  perbenihan yang  ditandai  dengan  tidak  terlihat  adanya  per- tumbuhan  bakteri  dalam  media  perbenihan.  Semua bakteri F.nucleatum mati  pada  media  perbenihan dengan konsentrasi ekstrak etanol 3,125% (Gambar 1B).

## A                                B
Gambar 1.  (A)  Kontrol Mac   Farland 0,5  Koloni bak- teri F.nucleatum pada  media  perbenihan dengan  konsentrasi  ekstrak etanol 3,125%

## A                              B                              C

## D                               E                                F
Gambar 2.  Koloni  yang  terbentuk  pada  me-dia  MHA pada konsentrasi ekstrak buah  mahkota dewa dengan  pelarut  etanol  1,56%,   dengan   (A) replikasi  1,  (B)    replikasi  2,  (C)  replikasi  3, (D) replikasi 4, (E) replikasi 5, (F) replikasi 5

## PEMBAHASAN
Penelitian  terdahulu  mempelajari  efek  antibakteri ekstrak etanol buah mahkota dewa terhadap Entero- coccus  faecalis ,  di  mana  terlihat  adanya  daya antibakteri  ekstrak  etanol  buah  mahkota  dewa  ter- hadap  bakteri  tersebut. 11 Dalam  penelitian  ini  di- lakukan pengujian terhadap Fusobacterium nuclea- tum dikarenakan  bakteri  ini  mempunyai  daya  per- lekatan  yang  cukup  kuat pada dinding  saluran  akar karena  adanya  interaksi  spesifik  antara  lipopoli- sakarida  yang  dihasilkan  bakteri  dengan  dinding saluran  akar.  Selain  itu, F.nucleatum juga  merupa- kan  isolate  dominan  yang  ditemukan  pada  kasus flare up endodonti.
Penelitian terdahulu menyebutkan bahwa tanaman marga Phaleria umumnya  memiliki  aktifitas  anti- mikroba.  Aktifitas  ini  berkaitan  dnegna  toksisitas tanaman  yang  cukup  tinggi  sebagai  salah  satu bentuk  dan  mekanisme  pertahanan  diri.  Penelitian yang  telah  dilakukan  hingga  saat  ini  menyatakan bahwa  toksisitas  tanaman  berkaitan  erat  dengan kandungan  senyawa  kimia  yang  terkandung  di dalamnya.  Senyawa  aktif  mahkota  dewa  yang  ber- khasiat  sebagai  antibakteri  adalah  saponin,  alkaloid dan tanin. 11
Daya antibakteri dari ekstrak etanol mahkota dewa dengan  konsentrasi  100%  (sangat  kental)  terhadap F.nucleatum akan secara langsung membunuh bak- teri  karena  tingginya  konsentrasi  antibakteri  yang terkandung di dalamnya. Demikian juga yang terjadi pada  konsentrasi  50,  25,  12,5,  6,25  dan  3,125% tidak  ditemui  pertumbuhan  bakteri  (media  steril) dengan jumlah koloni senilai  0 CFU/ml. Sedangkan pada  konsentrasi  1,56%  yang  telah  dilakukan  pe- ngenceran  akan  semakin  mengurangi  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri  dilihat  dari  ter- bentuknya  koloni  bakteri  141,20  CFU/ml  pada replikasi 1.
Hasil penelitian menunjukkan, bahwa bahan coba yaitu  ekstrak  buah  mahkota  dewa  memiliki  efek antibakteri terhadap F.nucleatum dengan pengukur- an  nilai  KHM  dan  KBM  bahan  coba.  Efek  anti- bakteri bahan coba dilihat dari besar nilai KHM dan KBM  bahan  coba  terhadap  pertumbuhan  bakteri, dengan  jumlah  bakteri  yang  sama  untuk  setiap perlakuan  yaitu  10 8 CFU/ml.  Nilai  minimal  di- tunjukkan  pada  bahan  coba  dengan  konsentrasi 3,125%  yaitu  0  CFU/ml.  Ekstrak  etanol  mahkota dewa dengan konsentrasi 3,125% adalah konsentrasi minimal yang dibuktikan dengan diperolehnya nilai KBM  0  CFU/ml  pada  media  perbenihan.  Hal  ini mungkin  terjadi  karena  saat  ekstrak  berkontak dengan  sel  dapat  berdifusi  pada  membran  sel F.nucleatum dan  menghasilkan  efek  antibakteri
yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri F.nucleatum .
Jika  dibandingkan  penelitian  daya  antibakteri ekstrak etanol buah mahkota dewa terhadap bakteri F.nucleatum dengan Enterococcus  faecalis terdapat perbedaan  KHM  dan  KBM  antara  keduanya,  di mana  untuk  bakteri Enterococcus  faecalis KHM dan  KBM  sebesar  12,5%.  Perbedaan  KHM  dan KBM  ekstrak  etanol  buah  mahkota  dewa  terhadap F.nucleatum dan E.faecalis disebabkan  karena  per- bedaan  struktur  dinding  sel  kedua  bakteri  tersebut. F.nucleatum merupakan  bakteri  gram  negatif, sedangkan E.faecalis adalah  bakteri  gram  positif. Pada  bakteri  gram  negatif,  peptidoglikannya  hanya merupakan  lapisan  tipis  yang  berada  di  dalam rongga periplasmik antara lapisan dalam dan lapisan luar  yang  disusun  atas  senyawa  fosfolipid  yang tebal.  Sedangkan  dinding  sel  bakteri  gram  positif dominan  disusun  oleh  senyawa  peptidoglikan  me- lalui  ikatan  peptide,  antar  lapisan  dinding  sel  di- hubungkan  oleh  asam  teichoic,  sehingga  tercipta sebuah lapisan yang sangat padat yang memberikan perlindungan  tambahan  pada  bakteri.  Oleh  karena itu, E.faecalis membutuhkan konsentrasi KHM dan KBM yang lebih tinggi daripada F.nucleatum , sebab dinding  sel  bakteri E.faecalis tersusun  lebih  padat daripada F.nucleatum .
Sebagai kesimpulan, ekstrak etanol buah mahkota dewa memiliki daya  antibakteri dan mampu meng- hambat  pertumbuhan F.nucleatum dan  dapat  di- kembangkan  menjadi  bahan  medikamen  saluran akar. Daya antibakteri dari nilai KBM yang terdapat pada  ekstrak  etanol  buah  mahkota  dewa  pada  kon- sentrasi 3,125% dengan jumlah kolonii 0 CFU/ml.

## Daftar Pustaka
1. Squiera  JF,  Rocasuie0 1 37 0 0 1 325.3 293.8ET .37 0 0 1 325.3 293a 44( )-113(el)33( )32(dga)26(n)r6(n)45( ).1 Tm[(-9(t)487] TJETB )14(j)23(u)40r. oi23(u)40r. oiham oih
principles  and    practice  4 th ed.  Michigan:  Saunders,
2008: 258-81.
8. Rohyami  Y.  Penentuan  kandungan  flavonoid  dari ekstrak methanol daging buah mahkota dewa. J Lo- gika 2008; 5: 1-16.
9. Suryani  L,  Septriani  S.  Daya  antibakteri  infusum daun mahkota dewa terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli . J Mutiara Medika 2007; 7: 23-8.
10. Lisdawati  V.  Berdasar  uji  penapsisan  farmakologi pada  buah  mahkota  dewa.  Bagian  Farmakologi  dan Toksikologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Gajah Mada, Jogjakarta: Universitas Gajah Mada, 2002.
11. Aswal  D,  Beatrice  L.  Efek  antibakteri  ekstrak  buah mahkota  dewa  terhadap Enterococcus  faecalis se- bagai bahan medikamen saluran akar secara in vitro. J Dent 2010; 15(1): 32-6.