## UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN KUBIS
( Brassica Oleracea var Capitata L )  DENGAN METODE Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Nur Hasanah*Ariefa Urbach*
*D3 Farmasi STIKes Kharisma Persada Pamulang, Tangerang Selatan, 15417, Indonesia Nurhasanahbik51@gmail.com

## ABSTRAK
Daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ) merupakan salah satu tumbuhan obat yang tumbuh di Indonesia. Daun ini mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin, fenolik, triterpenoid, steroid dan alkaloid. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas ekstrak daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ), menentukan  fraksi  yang  memiliki  nilai toksisitas paling tinggi, dan  mengidentifikasi  senyawa kimia  yang terkandung  dalam  ekstrak  daun  Kubis  ( Brassica  Oleracea  var  Capitata  L ).  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Penelitian ini menggunakan hewan uji larva Artemia salina Leach yang dibagi dalam 6 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 10 ekor, dengan replikasi 2 kali tiap kelompok. Konsentrasi ektrak daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ) yang digunakan yaitu 50ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600, dan 1000ppm dan dilakukan partisi ekstrak dengan pelarut etanol, n-Heksan, dan Etil Asetat. Pengamatan terhadap larva yang mati dilakukan 24 jam setelah pemberian ekstrak. Berdasarkan data, LC50 ekstrak daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ) ditentukan dengan analisis probit. Hasil dari analisis probit menunjukkan LC50  fase Etanol  menunjukkan nilai 131 ppm,  fase n-Heksan  menunjukan nilai LC50 457 ppm, dan  fase Etil  Asetat  memiliki  nilai LC50 457 ppm. Hasil  itu  menunjukan bahwa semua  fase ekstrak daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ) mempunyai potensi toksik, hal ini ditunjukkan dengan harga LC50 > 1000 ppm.
Kata Kunci : Toksisitas, ekstrak daun Kubis ( Brassica Oleracea var Capitata L ), Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## ABSTRACT
Brassica  Oleracea  var  Capitata  L  is  one  kind  of  medical  plant  in  Indonesia.  The  leaves  contains flavonoids,  saponins,  tannin,  phenolics,  triterpenoids,  steroid  and  alkaloids.  The  aims  of  the  research  is determine  the  lethal  toxicity  value  of  Brassica  Oleracea  var  capitata  L,  determine  the  fraction  that  has  the highest toxicity value, and identify the chemical compounds contained in the leaf extract Brassica Oleracea var Capitata L. The method used in this research is Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. This research use larva Artemia salina Leach that devided into 5 groups. Each group consist of 10 larva with two replications. Brassica Oleracea var Capitata L concentration used are 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm, and 1000 ppm and done extract partition with ethanol, n-Hexane, and Ethyl Acetate. Observations were made during 24  hours  of  Artemia  salina  Leach  mortality.  Based  on  the  data,  LC 50 Brassica  Oleracea var  Capitata  L determined by  probity  analysis. The  result  of  probity  analysis  shows ethanol  extract  is  131 ppm,
LC 50 n-Hexaneextract is 457 ppm, and Ethyl Acetate extract is LC 50 457 ppm. The result indicates all extract having toxic value. In this case indicates with LC 50 > 1000 ppm.
Keywords: Toxicity, Brassica Oleracea var Capitata L , Brine

## LATAR BELAKANG
Obat  tradisional  adalah  bahan  atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, hewan,  mineral,  sediaan  sarian  (galenik), atau  campuran  dari  bahan  tersebut  yang secara turun temurun telah digunakan untuk pengobatan  dan  dapat  diterapkan  sesuai dengan  norma  yang  berlaku  di  masyarakat (Permenkes RI No. 007 Tahun 2012), bahan- bahan  yang  digunakan  tidak  mengandung bahan  kimia  sintetik.  Obat  tradisional terbuat  dari  campuran  berbagai  tumbuhan yang  dapat  dibuat  menjadi  bentuk  sediaan yang  bervariasi  diantaranya  adalah  kapsul, tablet, pil dan lain-lain. obat tradisional telah digunakan secara luas di dunia sejak hampir 20 tahun. Pada negara-negara seperti Ghana, Mali, Nigeria dan Zambia, penggunaan obat tradisional  mencapai  60%  dan  sekitar  80% populasi  di  banyak  negara  menggunakan obat tradisional sebagai perlindungan kesehatan mereka (Kayne, 2010)
Salah  satu  tumbuhan  yang  dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional  yaitu Kubis  ( Brassica  Oleracea  var  Capitata  L. ) merupakan  sayuran  jenis Cruciferae yang dapat berperan sebagai sumber  antioksidan
alami  melalui  tingginya  kadar  karotenoid, tokoferol,  dan  asam  askorbat.  (  Rahmalia, 2013). Di bidang kesehatan, dapat digunakan  sebagai  pencegah  dan  obat sariawan,  penyakit  beri-beri,  penyakit Xerophthalmia,  radang  syaraf,  lemahnya otot-otot,  luka-luka  pada  tepi  mulut, dermatitis  bibir  menjadi  merah  dan  radang lidah,  kandungan  niacin  dapat  mencegah penyakit palagra dan pembentuk tulang dan gigi.  Kegunaan  kubis  tidak  terlepas  dari senyawa yang ada didalamnya, yang disebut senyawa fitokimia.
Fitokimia adalah bahan – bahan yang ada  didalam  tanaman.  Fitokimia  biasanya bersifat  spesifik  pada  setiap  jenis  atau kelompok jenis tanaman tertentu. Fitokimia terbagi  atas  metabolit  primer  dan metabolit sekunder.  Metabolit  primer  digunakan tanaman  untuk  pertumbuhan  sementara metabolism  sekunder  berperan  penting dalam  menetukan  efek  fisologis  suatu tanaman. Metode skrining fitokimia digunakan  untuk  mengetahui  kandungan metabolit  sekunder,  makromolekul  serta data  yang  diperoleh  untuk  menggolongkan tumbuhan, menentukan ciri atau sifat kimia dari  fitotoksin  dan  fitoaleksin.  Pendekatan skrining fitokimia meliputi  analisis
kualitatif kandungan kimia dalam tumbuhan atau bagian tumbuhan (akar, batang, bunga, buah,  dan  biji),  terutama  kandungan metabolit sekunder, yaitu alkaloid, antrakinon,  flavonoid,  kumarin,  saponin (steroid dan triterpenoid), tannin (polifenolat), minyak atsiri (terpenoid), dan sebagainya. ( Juniarti, 2009)
Efek  fisiologis  yang  diberikan  senyawa fitokimia  membutuhkan  konsentrasi  yang tepat. Untuk itu perlu diadakan uji toksisitas.
Toksisitas merupakan istilah dalam toksikologi  yang  didefinisikan  sebagai kemampuan  senyawa  untuk  menyebabkan kerusakan  atau  injuri.  Istilah  toksisitas merupakan istilah kualitatif yang terjadi atau tidak  terjadinya  kerusakan  tergantung  pada jumlah unsur senyawa toksik yang terabsopsi.  Uji  toksisitas  merupakan  uji hayati  yang  digunakan  untuk  menentukan tingkat  toksisitas  dari  suatu  zat  atau  bahan pencemar.  dilakukan  uji  tokisitas  dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan  pelarut  etanol.  BSLT  adalah  suatu metode  uji  toksisitas  akut  yang  sederhana, mudah  pengerjaannya,  cepat  mendapatkan hasil,  dan  murah  dalam  pelaksanaannya.
Selain itu, BSLT merupakan suatu bioassay- guided  fraktionation  yang  dapat  digunakan untuk  penelusuran  senyawa  bioaktif  yang bersifat  toksik  dari  suatu  bahan  alam.  ( Juniarti, 2009 )
Metode  BSLT  menggunakan  larva  udang ( Artemia  salina  Leach )  sebagai  hewan  coba. Artemia  salina  Leach merupakan  organisme yang  mempunyai  kepekaan  cukup  tinggi terhadap  toksik.  Hasil  uji  toksisitas  dengan metode  ini  telah  terbukti  memiliki  korelasi positif  dengan  daya  toksisitas  senyawa antikanker. Jika pada uji toksisitas menunjukkan LC 50 dibawah 1000 ppm berarti bahan  tersebut  memiliki  potensi  sebagai antikanker. ( Juniarti, 2009 )
Berdasarkan  data  di  atas,  menunjukkan bahwa  tanaman  tradisional  masih  digunakan sebagai  pilihan  untuk  pengobatan  dalam  20 tahun  yang  lalu  hingga  sekarang.  tulisan- tulisan  ilmiah  mengenai  tanaman  kubis  serta manfaat  masih  sulit  ditemui,  oleh  karena  itu peneliti  bermaksud  melakukan  penelitian yang  berjudul  uji  toksisitas  ekstrak  kubis ( Brassica  Oleracea  var  Capitata  L ).  Uji toksisitas  ini  akan  dilakukan  menggunakan metode Brine  Shimp  Lethality  Test (BSLT) pada larva udang tujuanya untuk mengetahui ada  tidaknya  kedungan toxic (racun)  dalam kubis.

## METODE
Instrumen  yang  digunakan  adalah alat-  alat laboratorium  seperti  gelas  ukur,  tabung reaksi,  neraca  analitik,  pipet,  batang pengaduk kaca, cawan , penjepit kayu, oven, water  bath,  kertas  saring  dan  alat-  alat  lain seperti  pisau,  kain  flannel,  dan  aerator merek   Nikita   Star   ,   arus   =3,5   L/menit.
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  Kubis,
Etanol, n-Heksan, Etil Asetat, larva Artemia Salina Leach, dan air laut.
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah daun Kubis yang di beli di pasar Reni Jaya,  Kecamatan  Pamulang  ,  Tangerang Selatan  .  Daun  kubis  segar  seberat  2  Kg dipotog  kecil-kecil  kemudian  dikeringkan dengan  cara  diletakan  di  tempat  yang terbuka  dan  tidak  terkena  langsung  sinar matahari. Karena pada pengeringan langsung  terhadap  sinar  matahari  akan merusak  komponen  aktif  pada  daun  kubis. Selanjutnya  simplisia  daun  kubis  diekstrasi dengan  metode  maserasi,  dengan  cara merendam daun kubis dalam pelarut Etanol 70%  selama  24 jam  ,  lalu  di  saring  dengan kapas  dan  di  rendam  kembali  dalam  etanol 70%  sampai  tersari  atau  terekstraksi sempurna  yang  ditandai  dengan  warna etanol menjadi bening kembali. Setelah itu, pelarut  etanol  yang  tersisa  diuapkan  pada penangas air atau water bath sambil di aduk sehingga didapatkan ektrak kental. (Subekti, N. 2014)
Penyiapan  larva  udang  dilakukan  dengan menetaskan  telur  udang  48  jam  sebelum dilakukan  uji.  Penetasan  dilakukan  dengan cara merendam telur tersebut dalam air laut secukupnya  dengan  menerangi  bagian wadah  yang  tidak  ditempati  telur  udang dengan sinar lampu sebelumnya wadah di
pasang  aerator,  aerator  ini  berguna  untuk menjaga kadar oksigen dalam wadah. Setelah  didapatkan  larva Artemia  salina Leach, dilakukan  pembuatan  larutan  induk dengan  ekstrak  etanol  daun  kubis  dengan konsentrasi 2000 ppm atau sebanyak 400 mg ekstrak  dalam  200  ml  air  laut.  Kemudian dilakukan  pegenceran  dengan  air  laut menjadi  50  ppm,  100  ppm,  200ppm,  400 ppm, 600 ppm, dan 1000 ppm.
Pembuatan  partisi  ekstrak  n-Heksan dilakukan  dengan  menimbang  2  g  ekstrak etanol daun kubis dan disuspensikan dengan air sebanyak 20ml,setelah larut kemudiandimasukan  dalam  corong  pisah dan  ditambahkan  dengan  total  n-Heksan sebanyak  65ml,  lalu  diuapkan  sampai mendapatkan  ekstrak  kental.  Cara  tersebut juga  dilakukan  pad  pembuatan  partisi  Etil Asetat. ( Cahyadi, 2009 )
10  ekor  larva Artemia  salina  Leach dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  yang berisi  10  ml  konsentasi  50  ppm,  10  ml konsentasi 100 ppm, 10 ml konsentrasi 200 ppm,  10ml  konsentrsi  400  ppm,  10  ml konsentrasi  600  ppm,  10  ml  konsentrasi 1000 ppm. Selain itu , dibuat control negatif yang berisi 10 ml air laut  tanpa penambahan ekstrak.  Kriteria  standaruntuk  menilai kematian  larva  udang  adalah  bila  larva udang tidak menunjukan pergerakan selama beberapa detik observasi. Setiap konsentrasi perlakuan  dilakukan  replikasi  sebanyak  2 kali ( duplo ). Data  yang
dikumpulkan  adalah  data  primer  yang didapat dari jumlah larva   udang  yang mati 24   jam   setelah   perlakuan   pada tiap-tiap
konsentrasi ekstrak daun kubis. (Subekti, N. 2014)

## HASIL
Pada  bagian  hasil  penulisan,  tuliskan hasil  temuan  tanpa  membahasnya.
Tabel 1. Distribusi frekuensi
Parameter Ekstrak Etanol Partisi Ekstrak n- Heksan Etil Asetat Jumlah 72,36 gram 0,21 gram 0,24 gram Kadar Air 54,6 % - - Rendemen Ekstrak 44% - - Berdasarkan Tabel 1, diketahui bahwa jumlah ekstrak etanol yang di dapatkan adalah  72,36  gram,  kadar  air  54,6%,
serta rendemen ekstrak  44%,
0,21  gram  didapatkan  dari  partisi ekstrak  n-Heksan  ,  dan  0,24  gram didapat dari partisi ekstrak Etil Asetat Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas
Crude Ekstrak Nilai LC 50 (ppm) Fase Etanol 131 ppm Fase n-Heksan 457 ppm Fase Etil Asetat 851 ppm
Berdasarkan  tabel  2.  Diketahui  bahwa
crude ekstrak  yang  memiliki  nilai toksisitas  paling  tinggi  yaitu  pada  fase etanol  dengan  nilai  LC 50 sebesar  131 ppm,selanjutnya  fase  n-Heksan  memiliki nilai  LC 50 457  ppm,  dan  fase  Etil  Asetat yang memiliki nilai LC 50 sebesar 457 ppm.

## DISKUSI
Dari hasil ekstrak daun kubis menggunakan  pelarut  Etanol  yang  telah dikentalkan  sebesar  72,36  g,  setelah diperoleh ekstrak Etanol maka dilakukan partisi  awal  menggunakan  pelarut  non polar  yaitu  n-Heksan  dan  pelarut  semi polar  yaitu  Etil  Asetat  diperoleh  hasil
partisi  ekstrak  n-  Heksan  sebanyak
0,21
g    dan    partisi    ekstrak    Etil    Asetat
sebanyak  0,24  g  dengan  kadar  air ekstrak Etanol sebanyak 54,6%.
Uji  toksisitas  ekstrak  Kubis  (Brassica Oleracea  var  capitata  L)  bertujuan  untuk mengetahui  ekstrak  dari  fase  mana  yang paling  aktif.  Dengan  cara  mencari  fase mana  yang  memiliki  toksisitas  paling tinggi.  Maka  dilakukan  uji  BSLT  (Brine Shrimp  Lethality  Test).  BSLT  dilakukan terhadap  ekstrak  etanol  dan  fase-fase  nya yaitu  fase  n-Heksana  dan  fase  Etil  Asetat Kubis  (Brassica  Oleracea  var  capitata  L). Suatu  senyawa  dinyatakan  mempunyai potensi  toksisitas  akut  jika  mempunyai nilai  LC 50 kurang  dari  1000  μg/ml.  LC 50
(Lethal  Concentration  50%)  merupakan konsentrasi zat yang menyebabkan terjadinya  kematian  pada  50%  hewan percobaan.  Pada  penelitian  ini  digunakan hewan  percobaan  yaitu  larva  Artemia salina Leach.
Pada pengujian ekstrak daun kubis dengan menggunakan  pelarut  Etanol,  n-  Heksan, dan  Etil  Asetat  diperoleh  bahwa  semakin meningkatnya  konsentrasi  maka  semakin meningkat pula persen kematian larva, hal ini  dapat  dilihat  pada  tabel  2.  Untuk mengetahui besarnya LC 50 kematian larva digunakan analisis probit, yang merupakan hubungan  antara  persen  kematian  larva dengan konsentrasi ekstrak. Untuk menentukan  konsentrasi  ekstrak  yang memiliki kemampuan Lethal dosis (LC 50 ) maka dilakukan  perhitungan
dengan  menggunakan  regresi  linier  yaitu dimana Y (nilai probit dari hasil presentasi kematian ) dan X (log konsentrasi) adalah Y= ax + b
Berdasarkan  analisi  probit  pada ekstrak Etanol diperoleh persamaan yaitu y =  3,2794x  –  1,9831  setelah  dilakukan perhitungan diperoleh hasil LC 50 sebesar 131 ppm. Analisis probit pada fase ekstrak n-Heksan  diperoleh  persamaan  yaitu  y  = 1,7779x  +  0,2601  didapat  hasil  LC50 sebesar  457  ppm.  Pada  analisis  probit ekstrak  fase  pelarut  Etil  Asetat  yaitu  y  = 1,8449x  +  0,08  memperoleh  hasil  LC 50 sebesar 457 ppm. ( Subekti, 2014)
Hasil  uji  toksisitas  crude  ekstrak  dengan metode  BSLT  dapat  dilihat  pada  tabel  3. Berdasarkan  tabel  tersebut  diperoleh bahwa  Etanol,  n-Heksan  dan  Etil  Asetat memiliki  nilai  LC50  <1000  menurut Wegner  et  al  1993  toksik  dibedakan menjadi  3  kategori  yaitu  kategori  sangat toksik  dengan  nilai  LC 50 <30  µg/ml, kategori tengah toksik nilai LC 50 30 - 1000 µg/ml  dan  kategori  tidak  toksik    ialah >1000 µg/ml sehingga hasil penelitian ini dapat  dikatakan  masuk  kedalam  kategori tengah toksik (Ramadhani, 2009)
Berdasarkan  hasil  penelitian  diperoleh bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  kematian larva  (LC 50 )  berada  pada  konsentrasi  131 ppm. Sehingga dapat dikatakan bahwa
senyawa  yang  paling  toksik  berada  pada senyawa  polar.  Senyawa-senyawa  polar dalam Kubis diantaranya flavonoid, tannin dan  polifenol.  Flavonoid  yang  memiliki kemampuan  menghambat  sel  kanker, melalui  beberapa  mekanisme  flavonoid sebagai  antikanker  antara  lain:  pertama, flavonoid  sebagai  oksidan  yaitu  melalui mekanisme pengaktifan jalur apoptosis sel kanker.  Mekanisme  apoptosis  (kematian sel  secara  terprogram)  terjadi  sebagai akibat  fragmentasi  (pemecahan)  DNA. Fragmentasi  (pemecahan)  ini  diawali dengan  dilepasnya  rantai  proksimal  DNA oleh  senyawa  oksigen  reaktif  seperti radikal hidroksil. Kedua, flavonoid sebagai  penghambat  proliferasi  (fase  sel saat  mengalami  pengulangan  siklus  sel tanpa hambatan) tumor/kanker yang salah satunya dengan menginhibisi (menghambat)  aktivitas  protein  kinase sehingga  menghambat  jalur  tranduksi sinyal dari membran sel ke inti sel. Ketiga, dengan  menghambat  aktivitas  reseptor tirosin kinase. (Ramadhani, 2009)
Hasil menunjukan bahwa fraksi n- Heksan  juga  mempunyai  harga  LC 50 kurang  dari  1000  yaitu  sebesar  457ppm. Meskipun  kemampuan  fraksin-Heksan memiliki  nilai  toksisistas  lebih  rendah  di bandingkan  Etanol,  namun  senyawa  yang larut dalam senyawa non polar juga masih
tergolong sebagai senyawa toksik. Menurut Taofik (2010) senyawa yang larut pada pelarut non polar antara lain saponin, triterpenoid.  Saponin  dan  triterpenoid dapat dikatakan memiliki bagian nonpolar dan polar. (Taofik et al., 2010).
Senyawa  saponin  dan  triterpenoid  pada kadar  tertentu  memiliki  potensi  toksisitas akut  serta  dapat  menyebabkan  kematian larva  Artemia  salina  Leach.  Menurut Cahyadi  (2009)  Mekanisme  kematian larva berhubungan dengan fungsi senyawa triterpenoid  dan  saponin  yang  dapat menghambat daya makan larva (antifedant). Cara kerja senyawa-senyawa tersebut  adalah  dengan  bertindak  sebagai stomach poisoning atau racun perut. Oleh karena  itu,  bila  senyawa-senyawa  ini masuk  ke  dalam  tubuh  larva,  alat pencernaannya akan terganggu. Selain itu, senyawa  ini  menghambat  reseptor  perasa pada  daerah  mulut  larva.  Hal  ini mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan stimulus  rasa  sehingga  tidak  mampu mengenali  makanannya  sehingga  larva mati kelaparan.
Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa fraksi Etil Asetat memiliki daya toksisitas sama  seperti  n-Heksan  yaitu  sebesar  457 ppm.  Namun  nilai  LC 50 <1000  µg/ml masih  tergolong  senyawa  toksik  bagi  sel. Adapun senyawa ekstrak yang berada pada pelarut semi polar antara  lain
dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat yaitu  alkaloid.  Hal  ini  menunjukan  dapat diaplikasikan sebagai senyawa anti kanker. (Harbourne, 1984)
Alkaloid  yang  berasal  dari  tumbuhan memiliki  mekanisme  sitotoksik  yaitu berperan  sebagai  tubulin  inhibitor.  Pada proses siklus sel alkaloid berikatan dengan tubulin yaitu suatu protein yang menyusun mikrotubulus  (organel  sel).  Terikatnya tubulin  pada  alkaloid  mengakibatkan polimerisasi  (reaksi  penggabungan  dua molekul)  protein  menjadi  mikrotubulus (organel  sel)  akan  terhambat  sehingga pembentukan spindle mitotis akan terhambat pula dan siklus sel akan terhenti pada  metafase.  Karena  tidak  dapat melakukan  pembelahan  sel,  sehingga  sel tersebut kemudian akan mengalami
apoptosis (kematian sel secara terprogram).(Bertomi, 2011)

## KE SIMPULAN
Hasil Penelitian menunjukan bahwa Nilai LC 50 fraksi etanol daun kubis berada pada konsentrasi 131 ppm, fraksi n- Heksan dan fraksi Etil Asetat memiliki nilai LC 50 yang sama  yaitu  berada  pada  konsentrasi  457 ppm.  Fraksi  Etanol  memiliki  toksisitas yang  paling  tertinggi  yaitu  dengan  nilai LC 50 =  131  ppm.  Flavonoid  ,  tanin,  dan fenol  yang  merupakan  senyawa  yang paling aktif yang terkandung dalam daun kubis.

## DAFTAR PUSTAKA
Basset,  J.,  .  Denney.,  G.H.  Jeffery.,  J. Mendham.  1994. Buku  Ajar  Vogel Kimia Analisa Kuantitatif
Anorganik .  Edisi  keempat.  Jakarta  :

## EGC
Bertomi  R  .  2011. Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak  Kulit  Batang  Pulasari (Alyxiae  cortex)  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BST) .
[Skripsi]  Program  Studi  Farmasi
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta,
BPOM.  2014.  Pedoman  Uji  Toksisitas Secara  In  Vivo.  Jakarta:  Menteri Hukum Dan HAM
Cahyadi  W.  (2009).  Analisis  dan  Aspek
Kesehatan Bahan Tambahan Pangan. Jakarta: Bumi Aksara Cahyono, Bambang. 1995. Cara Meningkatkan  Budidaya  Kubis.  D), Jakarta : Pustaka Nusatama.
Fadli  M.  2015 .  Uji  Toksisitas  Ekstrak Etanol  Daun  Sambung  Nyawa (Gynura  Procumbens(Luor)  Merr) Terhadap  Gambaran  Hiptopalogis Lambung Pada Tikus Galur Sprague Dawley . [Skripsi]. Fakultas Kedokteran . Lampung
Fatimatuzzahra,  F.  2013. Uji  Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum  Canun  Sims)  Terhadap Larva Artemia Salina Leach Dengan Metode  Brinee  Shrimp  Lethality
Test (BSLT ). [Skripsi].Universitas  Islam  Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta
Hamzah B. 2009. Fitokimia 1 . STIFA PM.
Palu
Hanif  ,  Z  .  2012. Uji  Toksisitas  Ekstrak Kasar  Organospesifik  Acanthaster dengan Metode Brine Shrimp
Lethality  Test  (BSLT) .  [skripsi].
Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Dapartemen Biologi. Depok: Universitas Indonesia.
Harborne J.B. 1984. Phytochemical Methods:  A  Guide  to  Modern Technique  of  Plant  Analysis.  (2nd edn).  Chapman  and  Hall.  London. 19. Pp.37–168.
Juniarti,  Delvi  Osmeli,  Yuhernita.  2009.
Kandungan  Senyawa  Kimia,  uji toksisitas  (Brine  Shrimp  Lethality Test)  dan  Antioksi  dan  (1,1-
Diphenyl Pikrilhydrazyl Dari ekstrak daun saga (Abrus Precatorius L.) Makara Sains Kayne,  S.  B.,  2010, Introduction  to Traditional Medicine
dalam:
Traditional Medicine, Pharmaceutical Press, London, 1-2.
Keputusan  menteri  kesehtan  republik indonesia  nomer  381/  MENKES/
SK/  III/  2007.  mengenai  kebijakan obat tradisional nasional.
Lu, Frank C. 2010. Toksikologi Dasar .
Jakarta : UI Press
Mansur. 2008. Toksikologi dan Distribusi Agent Toksik . Edisi ke−2. Jakarta: UI Press.
Notoatmodjo S. 2012.Metodelogi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta
Pangabean  MG  .  1984. Teknik  penetasan dan  pemanenan  Artemia  salina Leach .  Jakarta:  Pusat  Penelitian Ekologi  Laut,  Lembaga  Oseonologi Nasional – LIPI
Permenkes  Peraturan  Menteri  Kesehatan Republik  Indonesia  Nomor  007 Tahun 2012 Tentang Registrasi Obat Tradisional
Rahmalia A . 2013. Pengaruh Pemberian Jus  Kubis  (Brassica  Oleracea  Var.
Capitata L.) Dosis Bertingkat Terhadap  Gambaran  Makroskopis
Dan  Mikroskopis  Hepar  Tikus Wistar  Jantan  Yang  Diinduksi Kuning  Telur  Ayam .  [Skripsi]  . Semarang: Universitas Diponegoro .
Sari, Permata Wulan. 2010. Uji
Toksisitasakut  Campuran  Ekstrak Etanol  Daun  Sirih  (Piper  Betle
L)Terhadap  Mencit  Putih  Jantan . [Skripsi]  .  Tangerang:  Jurusan Farmasi  Fakultas  Kedokteran  Dan Ilmu  Kesehatan  Universitas  Islam Negeri Syarifhidayatullah
Subekti,  NK  .  2014. Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak Metanol Daun Laban Abang (  Aglaia  Elliptica  Blume)  terhadap Larva  Udang  (Artemia  Salina Leach) dengan Metode Brine Shrimp Lethality  Test  (BSLT). [Skripsi]. Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan. Jakarta: Universitas Islam Negeri Syarifhidayatullah
Tahira  ,  Z.  Riffat,  F,.  et  all.  In-  vitro assessment  of  antibacterial  activity of  methanol  extract  of  brassica oleracea against selected bacterias.
JLUMHS september-Desember vol 12. NO 0 ,2011
Taofik, et al. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa  Aktif  Ekstrak  Air  Daun
Paitan (Thitonia Diversifolia)
Sebagai  Bahan  Insektisida  Botani Untuk  Pengendalian  Hama  Tungau
Eriophydae. Alchemy Vol. 2(1) : 104- 157.
Widyastuti.  Y.  2004. Penanganan  Hasil Panen  Tanaman  Obat  Komersil . Edisi  Revisi.  Surabaya:  Airlangga University Press. Halaman 17.