Screening and Characterization of Anoxigenic Photosynthetic Bacteria as Carotenoid Pigments Producer from Palm Liquid
Sewages
Skrining dan Karakterisasi Bakteri Fotosintetik Anoksigenik Penghasil Pigmen Karotenoid Dari Limbah Cair Kelapa Sawit
Ummi Mardhiah Batubara 1 *, Fitratul Aini 2 , Manta Mentari Manurung 2 1 Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau, Jl. HR Soebrantas Km 12,5 Simpang Baru, Panam – Pekanbaru, Indonesia 28293
2 Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Jambi, Jl Ma.bulian KM 15, Jambi Luar Kota-Jambi, Indonesia
*Email coresponding: ummimardhiah@lecturer.unri.ac.id
Diterima 05 Maret 2021 dan Disetujui 30 Maret 2021

## Abstrak
Limbah cair kelapa sawit merupakan limbah organik yang memiliki kandungan kompleks seperti air, minyak dan padatan organik. Kandungan organik limbah cair kelapa sawit menjadi indikasi kelimpahan beragam jenis mikroorganisme. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan bakteri fotosintetik anoksigenik (BFA) penghasil pigmen karotenoid yang berasal dari limbah cair kelapa sawit. Isolasi dan skrining BFA dilakukan dari tiga lokasi pembuangan limbah cair kelapa sawit yang  berada  di  Provinsi  Jambi.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  eksperimental menggunakan  media  mineral  modifikasi.  Isolat  BFA  yang  tumbuh  dan  menghasilkan  pigmen karotenoid ditandai dengan  adanya distribusi pigmen berwarna kuning kemerahan pada media kultur. Dari hasil skrining diperoleh 11 isolat BFA yaitu Bg1K201, Bg1K202, Bg2k201, Bg3k201, Mr1k201, Mr1k202,  Sl1k201,  Sl1k202,  Sl2k201,  Sl2k202 dan Sl3k202. Hasil  karakterisari  ciri morfologi dan sifat fisiologi berdasarkan Bergeys Manual of Determinative Bacteriology menunjukkan bahwa dari kesebelas isolat BFA didapatkan 2 jenis genus BFA yang tergolong gram negatif dan memiliki  pigmen  karotenoid  yaitu  genus Rhodobacter (Bg1k201,  Bg1k202,  Bg3k201,  Sl1k201, Sl1k202, Sl2k201, Sl2k202 dan, Sl3k202) dan genus Rhodopseudomonas (Bg2k201, Mr1k201 dan Mr1k202).
Kata Kunci: bakteri fotosintetik anoksigenik, limbah cair kelapa sawit, pigmen karotenoid

## Abstract
Palm  liquid  sewage  is  organic  waste  that  contains  complex  compounds  such  as  water,  oil,  and organic  solids.  The  organic  content  of  palm  liquid  sewages  is  an  indication  of  the  abundance  of microorganisms. This study aims to obtain anoxygenic photosynthetic bacteria (BFA) that produce carotenoid pigments from palm liquid sewages. Therefore, We isolated and screened of BFA from three  palm  liquid  sewage  disposal  sites  in  Jambi  Province.  This  research  was  conducted  by  an experimental method using a modified mineral medium. BFA isolates that growth and produced carotenoid pigments are visible because of the distribution of reddish-yellow pigments on the culture media. Screening results obtained 11 isolates of BFA sequentially Bg1K201, Bg1K202, Bg2k201, Bg3k201, Mr1k201, Mr1k202, Sl1k201, Sl1k202, Sl2k201, Sl2k202 and Sl3k202. The results of morphological and physiological characterization based on the Bergeys Manual of Determinative Bacteriology show that there are two types of BFA genera that have carotenoid pigments, respectively, the  genus  Rhodobacter  (Bg1k201,  Bg1k202,  Bg3k201,  Sl1k201,  Sl1k202,  and  Sl1k202,  and Sl2k202,  and  Sl1k202,  and  Sl2k202,  and  Sl1k202  and  Sl2k202,  and  Sl2k202,  and  Sl2k202. Sl2k202, and) the genus Rhodopseudomonas (Bg2k201, Mr1k201 and Mr1k202).
Keywords: anoxygenic photosynthetic bacteria, carotenoid pigments, palm liquid sewage

## PENDAHULUAN
Kelapa  sawit  merupakan  salah  satu  komoditas  unggulan  yang  terdapat disebagian  besar  wilayah  Indonesia.  Berdasarkan  Data  BPS  tahun  2019,  jumlah komoditas kelapa sawit tertinggi berada di pulau sumatera yaitu Provinsi Riau, Sumatera Utara,  Sumatera  Selatan  dan  Jambi.  Peningkatan  jumlah  komuditas  kelapa  sawit berdampak pula pada jumlah limbah yang dibuang ke lingkungan seperti limbah cair. Menurut Nursanti (2013) , limbah cair pabrik kelapa sawit berwarna kecoklatan, terdiri dari padatan terlarut dan tersuspensi berupa koloid dan residu minyak dengan kandungan COD dan BOD tinggi, bersifat netral sampai asam. Kandungan yang terdapat di dalam limbah cair kelapa sawit terdiri dari 95% air, 4-5% bahan organik terlarut dan tersuspensi (selulosa,protein,lemak) dan 0,5-1% residu minyak yang sebagian besar berupa emulsi (Sinaga  &  Nasution,  2016) .  Karakteristik  limbah  cair  yang  berwarna  gelap,  berbau bahkan  menghasilkan  gas  menjadi  salah  satu  indikasi  adanya  bakteri  fotosintetik anoksigenik.  Bakteri  fotosintetik  anoksigenik  (BFA)  merupakan  kelompok  bakteri autotrof yang mampu bertahan hidup pada kadar sulfur tinggi dan mengandung pigmen keratenoid yang berfungsi dalam proses fotosintesis (Batubara, 2009) .
Saat  ini,  eksplorasi  BFA  dari  berbagai  habitat  telah  banyak  dilakukan  karena kemampuannya  dalam  memproduksi  pigmen  karotenoid.  Karotenoid  merupakan pigmen  berwarna  kuning  sampai  kemerahan  yang  diproduksi  secara  alami  dan terdistribusi  pada  beragam  makhluk  hidup  seperti  archaea,  bakteri,  jamur,  algae, tumbuhan dan hewan (Bawias et al., 2018; Manik et al., 2020) . Berdasarkan struktur kimianya,  karotenoid  merupakan  senyawa  poliena  isoprenoid  yang  terbentuk  dari delapan  unit  isoprene  C  yang  terbagi  dalam  dua  kelompok  utama  yaitu  karoten  dan xantofil.  Terdapat  lebih  dari  750  jenis  karotenoid  yang  ditemukan  di  alam  dengan komposisi yang berbeda pada tiap jenis organisme (Merdekawati et al., 2017) . Pigmen karotenoid  yang  diperoleh  dari  mikroorganisme  memiliki  keunggulan  dibandingkan organisme lain. Selain produksi yang stabil, mikroorganisme juga membutuhkan waktu pertumbuhan yang relatif singkat dengan biomassa yang tinggi. Saat ini, pemanfaatan pigmen  karotenoid  telah  dilakukan  pada  berbagai  bidang  seperti  perikanan,  farmasi, industri tekstil dan kosmetik dan pengolahan limbah.
BFA sebagai penghasil pigmen karotenoid dapat digunakan sebagai pakan ikan alami dan probiotik karena memiliki kandungan protein yang tinggi (Batubara, 2009) . Selain itu, kemampuan BFA dalam memanfaatkan H 2 S juga dapat menurunkan kadar polutan  pada  kolam  budidaya.  Pemanfaatan  BFA  dalam  bidang  industri  juga  telah banyak dilaporkan. Setiyono et al., (2016) menginformasikan biopigmen yang dihasilkan oleh  kelompok  mikroorganisme  laut  dapat  digunakan  sebagai  pewarna  alami  dalam pembuatan kosmetik, pakaian dan makanan. Pigmen Karotenoid yang berasal dari alam dilaporkan pula memiliki kandungan antioksidan yang dapat meningkatkan sistem imun tubuh,  mencegah  kanker  dan  antiobesitas. Carlozzi  et  al.,  (2010) menjelaskan  BFA sebagai  penghasil  pigmen  karotenoid  juga  dapat  digunakan  sebagai  energi  hijau terbarukan (biodisel dan bio-H2). Begitu besarnya pemanfaatan pigmen keratenoid yang
dihasilkan  oleh  BFA  tersebut  dan  kandungan  senyawa  organik  yang  terdapat  pada limbah cair kelapa sawit diduga menjadi habitat yang sesuai untuk pertumbuhan BFA. Informasi  ini  menjadi  dasar  pentingnya  melakukan  penelitan  tentang  skrining  dan karakterisasi BFA indigenous, dimana penelitian ini dikhususkan pada BFA yang berasal dari limbah cair kelapa sawit.

## METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilakukan  mulai  bulan  Agustus-Desember  2017.  Sampel  diperoleh  dari  3 (tiga) lokasi pembuangan limbah perkebunan sawit di Kabupaten Bungo, Sarolangun dan  Merlung,  Provinsi  Jambi  (Lihat  Gambar  1.).  Analisis  sampel  dilakukan  di  dua laboratorium  berbeda  yaitu  Laboratorium  Bioteknologi  dan  Rekayasa Fakultas  Sains dan Teknologi dan UPT Laboratorium Dasar dan Terpadu Universitas Jambi.
Gambar 1. Peta Lokasi Perolehan Sampel Isolat BFA

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf, hotplate, inkubator, lemari pendingin, mikroskop binokuler, gelas beaker ukuran 500 ml dan 1000 ml, termometer raksa,  timbangan  analitik,  pH  meter  digital,  tabung  reaksi,  rak  tabung,  cawan  petri, bunsen, lampu pijar 40 watt, kardus persegi ukuran 25x25 cm, jarum spuit ukuran 1 dan 5 ml, kaca objek, penutup objek, penjepit tabung, jarum ose, tisu, kertas label, pensil, pena dan kamera. Adapun bahan yang digunakan adalah sampel limbah cair, media Sulfide Indol Motility (SIM), Triple Sugar Iron Agar (TSIA), media mineral modifikasi, safranin,  kristal  violet,  lugol,  aseton  alkohol,  ekstrak  yeast,  akuades,  alkohol  70%, minyak imersi dan spritus.

## Prosedur Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan beberapa tahap diantaranya, (1) Pengambilan sampel limbah  cair  kelapa  sawit  yang  berasal  dari  3  (tiga)  lokasi  pembuangan  limbah perkebunan sawit di Kabupaten Bungo, Sarolangun dan Merlung, dengan deskripsi ciri limbah cair yang digunakan berwarna hitam, bergas dan berbau. Selanjutnya limbah cair yang sesuai kriteria sampel diukur faktor fisik dan kimianya (pH, suhu dan warna), dan dibawa  ke  laboratorium  untuk  analisis  lebih  lanjut;  (2)  Persiapan  media  kultur;  (3) Isolasi & skrining BFA; (4) Kultur murni isolat; (5) Karakterisasi morfologi dan sifat fisiologis isolat BFA

## Persiapan media kultur BFA
Media pertumbuhan BFA adalah media mineral modifikasi yang terdiri dari Na-asetat 2,5 gr, (NH 4 )SO 4 1,25 gr, K 2 HPO 4 3H 2 O 0,9 gr, KH 2 PO 4 0,6 gr, Yeast Ekstrak 0,5 gr, MgSO 4 7H 2 O 0,2 gr, Cacl 2 2H 2 O 0,07 mg, FeSO 4 7H 2 O 0,003 mg dan EDTA 0,002 mg. Semua bahan kemudian dicampur dan dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Setelah semua komposisi media homogen lalu media dimasukkan kedalam masing-masing tabung pial sampai  batas  maksimum.  Media  selanjutnya  disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada suhu 121 o C.

## Isolasi dan Skrining BFA
Sebanyak 0,1 ml limbah cair kelapa sawit dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi media mineral modifikasi. Untuk menciptakan kondisi pertumbuhan BFA yang optimum maka  kultur  ditumbuhkan  dalam  kondisi  anaerob  dan  dikultur  dengan  menggunakan cahaya lampu pijar 40 watt. Proses inkubasi dilakukan selama 2 minggu  pada suhu ± 28 O C  hingga  terbentuk  perubahan  warna  media.  Pertumbuhan  BFA  ditandai  dengan adanya perubahan warna media dari bening menjadi kuning atau kemerahan.

## Kultur Murni BFA
Kultur  isolat  BFA  yang  tumbuh  pada  media  mineral  modifikasi  cair  selanjutnya diinokulasi  kembali  pada  media  mineral  modifikasi  agar.  Hal  ini  dilakukan  untuk memudahkan pemurnian dan karakterisasi isolat. Media mineral modifikasi agar dibuat dengan komposisi media mineral modifikasic air dengan penambahan 10 g agar (1000 ml aquades). Sebanyak 0,1 ml kultur BFA kemudian di kultur pada media agar steril dengan menggunakan  teknik  sebar  dan  gores.  Isolat  BFA  selanjutnya  di  inkubasi  selama  2 minggu secara anerobik menggunakan laminar jar .

## Karakterisasi Morfologi dan Sifat Fisiologi Isolat BFA
Setelah  bakteri  dikultur  murnikan  maka  tahap  selanjutnya  adalah  karakterisasi  ciri morfologi dan sifat fisiologis isolat BFA. Karakterisasi ciri morfologi BFA yang diamati meliputi  bentuk,  ukuran,  warna,  permukaan,  elevasi  dan  tepi  koloni.  Sedangkan karakteristik  sifat  fisiologis  isolat  BFA  dilakukan  dengan  beberapa  uji  biokimia  yaitu pewarnaan diferensial (Gram), uji katalase, uji gelatin, uji fermentasi gula, uji indol, uji sulfide, uji sitrat dan uji pergerakan bakteri. Hasil analisis karakterisasi ciri morfologi dan sifat  fisiologis  isolat  BFA  selanjutnya  dianalisis  dan  disesuaikan  berdasarkan  kunci identifikasi (Guchanon, 1992) Bergeys Manual of Determinative Bacteriology .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengukuran Faktor Fisik Kimia Limbah Cair
Berdasarkan  hasil  pengukuran  faktor  fisik  dan  kimia  limbah  cair  kelapa  sawit (Tabel 1) diperoleh nilai pH, suhu dan warna limbah yang tidak terlalu berbeda. Hal ini menunjukkan  bahwa  limbah  yang  dihasilkan  dari  aktivitas  industri  kelapa  sawit memiliki karakteristik yang sama yaitu mengandung air, emulsi minyak dan padatan organik seperti H 2 S, Al, Cu dan Fe. Selain itu, warna limbah yang hitam keruh atau kecoklatan mengandung senyawa organik yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri BFA.
Tabel 1. Faktor fisik 3 lokasi perolehan limbah cair kelapa sawit
Lokasi Sampling Kode Isolat Ph Suhu Warna Lokasi I BgK2 7.45 30oC Hitam keruh Lokasi II SlK2 7.41 30oC Hitam keruh Lokasi III MrK2 7.43 30oC Hitam kecokelatan

## Isolasi, Skrining dan Kultur BFA
Dari  hasil  isolasi  dan  skrining  diperoleh  sebelas  isolat  BFA  (Gambar  2)  yang mampu menghasilkan pigmen karotenoid. Produksi karotenoid oleh isolat BFA terlihat dari adanya pigmen kuning kemerahan yang terdistribusi pada media mineral modifikasi setelah limbah cair diinokulasikan pada media.
Gambar 2. a) Kultur BFA  sebelum masa  inkubasi. b) Kultur BFA setelah masa inkubasi ±2 minggu.

## Karakterisasi dan Identifikasi Bakteri
Berdasarkan hasil pengamatan ciri morfologi yang dilakukan terhadap temuan 11 isolat BFA terlihat bahwa tiap-tiap isolat memiliki ciri morfologi yang berbeda (Tabel 2). Isolat BFA dengan ukuran koloni sedang lebih mendominasi dengan warna koloni dominan putih susu. Untuk bentuk, permukaan, elevasi dan tepi koloni secara berurutan didominasi oleh bentuk bulat, permukaan yang halus, elevasi yang mendatar serta tepi koloni yang rata.
a
b
Gambar 3. Kultur Isolat murni bakteri yang berasal dari limbah cair kelapa    sawit (A) Bg1K201,  (B)  Bg1K202,  (C)  Bg2k201,  (D)  Bg3k201,  (E)  Mr1k201, (F) Mr1k202,  (G)  Sl1k201,  (H)  Sl1k202,  (I)  Sl2k201,  (J)  Sl2k202, (K)Sl3k202
Tabel 2 . Karakteristik ciri morfologi isolat BFA No. Kode Isolat Ciri Morfologi Ukuran Warna Bentuk Permukaan Elevasi Tepi 1.  Bg1K101 Titik Putih Susu Bulat Halus Datar Rata 2.  Bg1K102 Sedang  Putih Tidak beraturan Halus Tidak datar Rata 3.  Bg2K101 Kecil Putih Bulat Kasar Datar Bergelombang 4.  Bg3K101 Sedang Putih Susu Bulat Berkerut Datar Bergelombang 5.  Mr1K101 Titik Putih Susu Bulat Halus mengkilap Datar Rata 6.  Mr1K102 Kecil Putih Susu Bulat Halus mengkilap Datar Rata 7. Sl1K201 Kecil Krem Bulat Halus Tidak datar Rata 8. Sl1K202 Sedang  Putih Tidak beraturan Halus Tidak datar Rata 9. Sl2K201 Titik Putih susu Bulat Halus mengkilap Cembung Rata 10.  Sl2K202 Sedang Putih susu Bulat Halus mengkilap Cembung Rata 11.  Sl3K202 Sedang  Putih Tidak beraturan Halus Tidak datar Rata
Setelah diperoleh hasil berdasarkan ciri morfologi isolat BFA maka selanjutnya menyamakan data dengan hasil karakterisasi fisiologi (Tabel 3). Hal ini perlu dilakukan untuk mencegah kesalahan dalam penentuan genus BFA. Dari hasil uji biokimia yang dilakukan maka diperoleh data sebagai berikut: dari kesebelas isolat yang diamati bentuk dan ukuran selnya maka semua isolat berbentuk batang dengan sifat gram (-). Selain itu, berdasarkan data uji sulfida diperoleh tiga isolat (Bg1k201, Bg1k202 dan Sl1k202) yang mampu  memanfaatkan  sulfida  sebagai  sumber  nutrisinya;  semua  isolat  bersifat anoksigenik dan tidak mampu menghidrolisis indol, enam isolat (Bg1k202, Bg2k201,
Mr1k201,  Mr1k202,  Sl2k201  dan  Sl2k202)  bersifat  motil  dan  hanya  satu  isolat (Bg2k201) yang mampu menghidrolisis sitrat serta sebagian besar bakteri yang mampu memfermentasi  monosakarida  dan  polisakarida  yaitu  (glukosa,  laktosa,  laktosa    dan pati).
Tabel 3 . Karakteristik Sifat Fisiologis isolat BFA No Kode Isolat Bentuk Gram Katalase  Sulfida indol Motility Glu Suk  Lak Gel Sitrat Hidrolisis pati 1  Bg1k201 Batang  - - + - - +  +  +  + - + 2  Bg1k202 Batang  - - + - + +  -  -  + - + 3  Bg2k201 Batang  - - - - + - -  -  - + + 4  Bg3k201 Batang  - - - - - +  -  -  + - + 5  Mr1k201 Batang  - - - - + +  +  +  + - + 6  Mr1k202 Batang  - - - - + +  +  +  + - + 7  Sl1k201  Batang  - - - - - +  -  -  - - - 8  Sl1k202  Batang  - - + - - +  +  +  - - - 9  Sl2k201  Batang  - - - - + +  +  +  - - - 10  Sl2k202  Batang  - - - - + +  +  +  - - + 11  Sl3k202  Batang  - - - - - +  +  +  + - +
Keterangan: (+) Hasil uji positif  dan (-) hasil uji negatif

## Pembahasan

## Isolasi dan Skrining BFA
Sebanyak sebelas isolat diperoleh dari haril skrining BFA yang berasal dari limbah cair kelapa  sawit.  Limbah  cair  yang  memiliki  karakteristik  warna  hitam  dan  kecoklatan diperoleh dari tiga lokasi pembuangan limbah cair kelapa sawit di Provinsi Jambi diduga mengandung  bakteri  belerang  dan  besi  yang  mampu  mereduksi  sulfat  menjadi  H 2 S. Kondisi limbah yang kaya nutrisi organik menjadi indikasi melimpahnya BFA. Secara alami, BFA ditemukan pada lingkungan perairan seperti air laut, payau, sungai, danau serta limbah cair industri dan domestik. Walaupun ditemukan pada beragam lingkungan perairan,  akan  tetapi  BFA  dilaporkan  mampu  melakukan  proses  fotosintesis  tanpa bantuan air, namun menggunakan senyawa organik dan anorganik seperti H 2 S, Nitrit, FeS dan Amonia. Menurut Frigaard, 2016; Madukasi et al., 2011) bahwa BFA mampu memanfaatkan senyawa kimia seperti logam dalam proses pertumbuhannya dengan cara menyerap ion logam Cd2+ (kadmium) yang tinggi dan terakumulasi dalam sel menjadi logam dasar lalu disimpan  kedalam  selnya sehingga lingkungan yang awalnya beracun menjadi  kurang  beracun.  Limbah  cair  mengandung  senyawa  organik  yang  dapat dimanfaatkan oleh aktifitas BFA jenis Rhodopseudomonas sp. dan Rhodobacter sp. Dalam  melakukan  isolasi  dan  skrining  BFA,  proses  kultur  yang  tepat  menjadi salah  satu  penentu  keberhasilan.  Penggunaan  lampu  pijar  40  watt  dan  pengkulturan bakteri  dalam  kondisi  anaerobik  akan  mempermudah  proses  skrining  BFA.  Namun sebaliknya, penggunaan cahaya lampu yang berlebih dapat menghambat pertumbuhan BFA. Menurut Madigan & Jung, (2009) pertumbuhan mikrooganisme terutama bakteri
fotosintetik  anoksigenik  membutuhkan  distribusi  cahaya  yang  sangat  banyak  dan dipengaruhi  kondisi  faktor  fisik  lingkungan.  Selain  itu Zhang  &  Hu,  (2015) juga menjelaskan  bahwa  intensitas  cahaya  merupakan  salah  satu  faktor  penting  yang menentukan  laju   pertumbuhan  BFA.  Berdasarkan  hasil  skrining  BFA  terlihat  bahwa kesebelas isolat yang diperoleh mampu memproduksi pigmen karotenoid yang terlihat dengan  adanya  perubahan  warna  media  dari  bening  menjadi  kemerahan.  Hal  ini membuktikan bahwa pigmen yang terdistribusi pada media pertumbuhan dihasilkan dari metabolisme sel BFA.
BFA  adalah  kelompok  bakteri  penghasil  pigmen  karotenoid  yang  banyak ditemukan  di  alam.  BFA  yang  menghasilkan  pigmen  karotenoid  telah  banyak dimanfaatkan  peneliti  dalam  upaya  pengolahan  limbah.  BFA  berjenis Rhodobacter sp., Rhoseobacter sp., Sandaracinabacter sp.,  dan Erytrhobacter sp.  mampu  menurunkan konsentrasi air limbah yang tinggi ammonia, nitrit, nitrat dan hydrogen sulfide (Lin et al., 2018;  Tang  et  al.,  2018) .  Rhodobacter  mampu  mendegradasi  limbah  cair  organik  dan anorganik sehingga kurang beracun bagi lingkungan dan telah pula dimanfaatkan sebagai biokontrol dan biokondisioner di lingkungan perairan (Madukasi et al., 2011) . Setelah  isolat  BFA  diperoleh  maka  selanjutnya  dilakukan  karakterisasi  ciri morfologi  dan  sifat  fisiologi  yang  merujuk  pada  kunci  determinasi Bergey’s  Manual  of Determinative Bacteriologi (Guchanon, 1992) . Berdasarkan hasil pengamatan ciri morfologi dan pewarnaan diferensial (Gram) menunjukkan bahwa seluruh isolat tergolong Gram negatif dengan sel berbentuk batang. Pada saat pengkulturan terlihat pula cairan lendir (mukus) yang terdapat pada permukaan isolat BFA. Menurut Lunina et al., (2005) BFA menghasilkan  mukus  pada  saat  pertumbuhannya.  Mukus  pada  BFA  berperan  dalam mekanisme pertahanan saat lingkungan kurang mendukung seperti kekeringan. Adanya mukus pada koloni bakteri merupakan salah satu ciri dari BFA. Dari hasil identifikasi dan karakterisasi yang telah dilakukan berdasarkan ciri morfologis dan sifat fisiologis isolat maka diperoleh dua genus BFA penghasil pigmen karotenoid yang berasal dari limbah cair kelapa sawit yaitu Rhodobacter dan Rhodopseudomonas.
Rhodobacter. Menurut Guchanon  (1992) dalam Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriologi ,  genus Rhodobacter memiliki  ciri  berbentuk  batang,  menghasilkan  pigmen karotenoid merah, motil maupun nonmotil, mampu menghasilkan sulfid sebagai donor elektron, menghasilkan mukus (lendir), suhu optimum pertumbuhan sekitar 25 o C - 35 o C dan pH optimum 6,5 – 7,5 (Guchanon, 1992) . Berdasarkan hasil identifikasi pada isolat Bg1k201, Bg1k202, Bg3k201, Sl1k201, Sl1k202, Sl2k201, Sl2k202, Sl3k202 menunjukkan kesamaan  ciri  morfologi  dan  sifat  fisiologis  dengan  genus Rhodobacter .  Ciri  morfologi koloni  yaitu  berukuran  sangat  kecil  ( pin  point ),  warna  putih  susu,  permukaan  halus, elevasi datar dan margin rata. Selanjutnya untuk sifat fisiologi yaitu sel berbentuk batang, tergolong  Gram  negatif,  katalase  negatif,  sulfida  positif  (memproduksi  H2S),  indol negatif, motil maupun nonmotil, TSIA positif maupun negatif, gelatin positif maupun negatif, sitrat negatif, dan starch  agar positif. Hal ini diperkuat oleh penelitian Suresh et al.,  (2017) bahwa  ciri  morfologi  spesies Rhodobacter  azollae dan Rhodobacter  lacus menghasilkan kultur merah, berbentuk batang, motil dan bersifat Gram negatif dan untuk Rhodobacter velkampii tidak menghasilkan mukus (Imhoff, 2015) .
Rhodopseudomonas, Guchanon  (1992) menjabarkan  ciri  morfologi  genus Rhodopseudomonas memiliki  bentuk  batang,  motil  maupun  nonmotil,  Gram  negatif, menghasilkan pigmen karotenoid       merah, hijau hingga cokelat kekuningan, menghasilkan vitamin,  suhu  optimum  pertumbuhan sekitar 25 o C  - 35 o C dan pH optimum 5,5 – 7,5. Berdasarkan hasil identifikasi pada isolat Bg2k201, Mr1k201 dan Mr1k202 menunjukkan kesamaan  ciri  morfologi  dan  sifat  fisiologis  dengan  genus Rhodopseudomonas .  Ciri morfologi koloni yaitu berukuran sangat kecil ( pin point ), warna putih susu, permukaan halus  mengkilap,  elevasi  datar,  margin  rata.  Selanjutnya  untuk  sifat  fisiologi  yaitu  sel berbentuk  batang,  tergolong  Gram  negatif,  katalase  negatif,  sulfida  negatif  (tidak menghasilkan  H 2 S),  indol  negatif,  nonmotil,  glukosa  positif,  laktosa  positif,  sukrosa positif,  gelatin  positif,  sitrat  negatif,  dan starch  agar positif.  Hal  ini  diperkuat  oleh penelitian (Zhang & Hu (2015) yang menyebutkan bahwa Rhodopseudomonas facecalis yang berasal  dari  Sungai  Fenhe di  China  diisolasi  secara  anaerob  dan  dikultur  dengan memanfaatkan cahaya untuk membantu proses fotosintesis, menghasilkan kultur merah, bersifat Gram negatif dan berbentuk batang. Rhodopseudomonas palustris berasal dari air limbah  pengolahan  sagu,  tidak  menghasilkan  mukus  dan  pertumbuhannya  secara anaerob dengan memanfaatkan  cahaya  sebagai proses fotosintesis. Rhodopseudomnas sp. berasal  dari  tanah  terkontaminasi  herbisida sulfonilurea  pirazosulfuron-etil (PSE)  bersifat gram negatif.

## KESIMPULAN
Dari hasil skrining penelitian yang dilakukan ditemukan 11 (sebelas) isolat BFA. Isolat BFA berhasil diidentifikasi sebagai bakteri tergolong yang gram negatif dari genus Rhodobacter (Bg1k201,  Bg1k202,  Bg3k201,  Sl1k201,  Sl1k202,  Sl2k201,  Sl2k202  &, Sl3k202) dan genus Rhodopseudomonas (Bg2k201, Mr1k201 & Mr1k202). Karakterisasi isolat BFE menunjukkan kemampuannya dalam menghasilkan pigmen karotenoid yang berwarna kuning kemerahan.

## DAFTAR PUSTAKA
Batubara, U. M. (2010). Pembuatan Pakan Ikan Dari Protein Sel Tunggal Memanfaatkan Limbah  Cair  Tepung  Tapioka  Yang  Diuji  Pada  Ikan  Nila (Oreochromis  niloticus) . [Skripsi Biologi Universitas Sumatera Utara]. 59 halaman.
Bawias, M., Kemer, K., Mantiri, D., Kumampung, D., Paransa, D., & Mantiri, R. (2018). Isolasi  Pigmen  Karotenoid  Pada  Mikroalga Nannochloropsis sp.  dengan Menggunakan  Beda  Pelarut. Jurnal  Pesisir  dan  Laut  Tropis , 6 (2):  1-8. https://doi.org/10.35800/jplt.6.2.2018.20641
Carlozzi, P., Pintucci, C., Piccardi, R., Buccioni, A., Minieri, S., & Lambardi, M. (2010). Green Energy from Rhodopseudomonas palustris Grown At Low to High Irradiance Values, Under Fed-Batch Operational Conditions. Biotechnology Letters , 32 : 477-481. https://doi.org/10.1007/s10529-009-0183-2
Frigaard,  N.  U.  (2016).  Biotechnology  of  Anoxygenic  Phototrophic  Bacteria.  In Advances  in  Biochemical  Engineering/Biotechnology. Springer  Link  Publisher .

## pp 139-154.  https://doi.org/10.1007/10_2015_5006
Guchanon,  E.  dan  E.  G.  (1992). Bergeys  Manual  of  Deteminate  Bacteriology.  In  The Biochemical journal . San Diego, California. Academic Press. pp 1246.
Imhoff, J. F. (2015).  Rhodobacter . In Bergey’s Manual of Systematics of Archaea and Bacteria. Wiley  Online  Library .  Publisher  by  John  Wiley  &  Sons,  Inc.  pp  342. https://doi.org/10.1002/9781118960608.gbm00862
Lin, S., Mackey, H. R., Hao, T., Guo, G., van Loosdrecht, M. C. M., & Chen, G. (2018).
Biological  Sulfur  Oxidation  in  Wastewater  Treatment:  A  Review  of  Emerging Opportunities. ScienceDirect in Water Research . 143 : 399-415.
https://doi.org/10.1016/j.watres.2018.06.051
Lunina, O. N., Gorlenko, V. M., Solov’eva, O. A., Akimov, V. N., Rusanov, I. I., & Pimenov,  N.  V.  (2005).  Seasonal  Changes  in  The  Structure  of  The  Anoxygenic Phototrophic  Bacterial  Community  in  Lake  Mogilnoe,  A  Relict  Lake  on  Kil’din Island in The Barents Sea. Mikrobiologiya . 76 (3): 416-424.
Madigan,  M.  T.,  &  Jung,  D.  O.  (2009). An  Overview  of  Purple  Bacteria:  Systematics, Physiology,  and  Habitats .  Department  of  Microbiology. USA :  Southern  Ilinois University. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-8815-5_1
Madukasi, E. I., Chunhua, H., & Zhang, G. (2011). Isolation and Application of A Wild Strain  Photosynthetic  Bacterium  To  Environmental  Waste  Management. International  Journal  of  Environmental  Science  and  Technology , 23 (2):  513-522. https://doi.org/10.1007/BF03326237
Manik,  F.  K.  I.,  Paransa,  D.  J.,  Mantiri,  D.  M.,  Ginting,  E.  L.,  Warouw,  V.,  & Moningkey, R. (2020). Isolasi Pigmen Karotenoid Pada Kepiting Metopograpsus sp. Betina. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis , 8 (1): 84-92. https://doi.org/10.35800/jplt.8.1.2020.27494
Merdekawati,  W.,  Karwur,  F.  F.,  &  Susanto,  A.  B.  (2017).  Karotenoid  Pada  Algae: Kajian Tentang Biosintesis, Distribusi Serta Fungsi Karotenoid. Bioma , 13 (1), 23– 32. https://doi.org/10.21009/bioma13(1).3
Nursanti,  I.  (2013).  Karakteristik  Limbah  Cair  Pabrik  Kelapa  Sawit  Pada  Proses Pengolahan  Anaerob  dan  Aerob. Jurnal  Ilmiah  Universitas Batanghari  Jambi , 13 (4): 67–73.
Setiyono, E., Pringgenies, D., Diponegoro, U., Heriyanto, H., & Shioi, Y. (2016). Analisa Pigmen Karotenoid Pada Bakteri Erythrobacter flavus . Marine Drugs , 17 (6): 349-356.
Sinaga,  N.,  &  Nasution,  A.  S.  B.  (2016).  Simulasi  Pengaruh  Komposisi  Limbah  Cair Pabrik  Kelapa  Sawit  (Pome)  Terhadap  Kandungan  Air  Biogas  dan  Daya  Listrik Yang Dihasilkan Sebuah Pembangkit Listrik Tenaga Biogas. Eksergi Jurnal Teknik Energi , 12 (3): 66–72.
Suresh, G., Sailaja, B., Ashif, A., Dave, B. P., Sasikala, C., & Ramana, C. V. (2017). Description  of Rhodobacter  azollae and Rhodobacter  lacus . International  Journal  of Systematic and Evolutionary Microbiology , 67 (9): 463-464.
https://doi.org/10.1099/ijsem.0.002107
Tang, K., Jia, L., Yuan, B., Yang, S., Li, H., Meng, J., Zeng, Y., & Feng, F. (2018).
Aerobic  Anoxygenic  Phototrophic  Bacteria  Promote  The  Development  of Biological Soil Crusts. Frontiers in Microbiology , 9 (3): 1-12.
https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.02715.
Zhang, H., & Hu, Q. (2015). Isolation, Identification And Physiological Characteristics Of High Carotenoids Yield Rhodopseudomonas Faecalis PSB-B. Int J Recent Sci Res ,
6 (5): 3893-3899.