Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna, Riyanto, B. et al.

## RECOVERY ENZIM PROTEASE DARI JEROAN IKAN TUNA DENGAN TEKNOLOGI ULTRAFILTRASI DAN REVERSE OSMOSIS

## Recovery of Proteases from Tuna Viscera by Ultrafiltration and Reverse Osmosis
Bambang Riyanto*, Uju, Sofia Halimi
Departemen Teknologi Hasil Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,

## Institut Pertanian Bogor
Diterima 7 Mei 2010/Disetujui 16 Juli 2012

## Abstract
Tuna viscera is highly potential as a source of protease enzyme. A wide enzyme applications requires an economical and efficient enzyme purification techniques and therefore can be applied in a large scale. The ultrafiltration (UF) process is one of the potential technology but has disadvantage due to fouling and concentration polarization. The studies on the operating trans-membrane pressure (TMP), the operating temperature, materials of the membrane and the molecular weight cut off (MWCO) of the membrane to reduce  fouling  and  concentration  polarization  should  be  carried  out.  Reverse  osmosis  (RO)  process  at the next step was used to increase the concentration of the protease enzyme. This study was divided into several stages of preparation of protease enzyme, crude extract, pre-filtration, UF process, RO process and SDS-PAGE analysis. The tests included measurements of protein levels and activity of the protease enzyme. Optimum conditions for the purification of the UF polyacrylonitrile with MWCO 100 kDa was obtain on TMP 55 kPa and a temperature of 40 °C. Flux in both membrane was influenced by the TMP, temperature, the membrane material and MWCO. Rejection of protein and enzyme activity in both membrane is more influenced  by  the  membrane  material  and  MWCO  of  the  membrane.  Estimation  of  protein  molecular weight after the RO from UF polyacrylonitrile with MWCO 100 kDa were 37.53; 27.77; 22.72 and 19.88 kDa while the specific activity of the protease was 1.38 unit/ mg.
Keywords: protease, tuna viscera, ultrafiltration, reverse osmosis.

## Abstrak
Jeroan ikan tuna memiliki potensi yang sangat besar sebagai sumber enzim protease. Aplikasi enzim yang luas menuntut adanya teknik pemurnian enzim secara ekonomis, efisien, dan dapat diterapkan dalam skala besar. Ultrafiltrasi (UF) merupakan salah satu teknologi yang potensial, namun terkendala adanya fouling  dan  polarisasi  konsentrasi.  Kajian  terhadap  bahan  penyusun  membran,  ukuran  pori  (MWCO) membran, tekanan transmembran (TMP) dan suhu operasi perlu dilakukan untuk mengurangi fouling dan polarisasi konsentrasi yang ada. Pemekatan menggunakan reverse osmosis (RO) pada tahap berikutnya berguna untuk meningkatkan kemurnian dari enzim protease yang dihasilkan. Tahapan penelitian meliputi pembuatan ekstrak kasar enzim protease, prefiltrasi, proses UF, proses RO dan analisis SDS-PAGE, sedangkan pengujian  yang  dilakukan  meliputi  pengukuran  kadar  protein  dan  aktivitas  enzim  protease.  Kondisi optimum pemurnian diperoleh dengan UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa pada kondisi operasi TMP 55 kPa dan suhu 40 °C. Nilai fluks pada kedua membran dipengaruhi oleh TMP, suhu, MWCO serta material membran. Nilai rejeksi protein dan aktivitas enzim protease pada kedua membran lebih dipengaruhi oleh MWCO dan material membran. Estimasi bobot  molekul protein setelah proses RO dari UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa adalah sebesar 37,53; 27,77; 22,72; dan 19,88 kDa serta mempuyai aktivitas spesifik enzim protease sebesar 1,38 unit/ mg.
Kata kunci: jeroan ikan tuna, protease, ultrafiltrasi, reverse osmosis.
*Korespondensi:  Jln.  Lingkar  Akademik,  Kampus  IPB Dramaga.  Telp.  +622518622915  Fax.  +622518622916 e-mail: bambangriyanto.ipb@gmail.com

## PENDAHULUAN
Industri  pengolahan  tuna  menghasilkan limbah dalam jumlah besar, dimana sebanyak 25-30% merupakan limbah padat yang terdiri atas  kepala,  kulit  dan  jeroan,  serta  sebesar 30-35%  merupakan  limbah  cair  yang  terdiri atas darah, konsentrat, dan minyak ikan tuna (Prasertsan et  al .  1988).  Jeroan  ikan  tuna juga  memiliki  potensi  yang  besar  sebagai sumber  enzim  protease  (Gildberg  1992; Guerard et  al. 2002;  Klomklao et  al. 2005). Protease  merupakan  kelompok  enzim  yang sangat  penting  dalam  industri  enzim  dunia saat ini dan tercatat hampir sekitar 50% dari total penjualan industri enzim diperoleh dari kelompok enzim ini (Rao et al . 1998). Aplikasi enzim  yang  luas  menuntut  adanya  teknik pemurnian enzim yang ekonomis, efisien dan dapat diterapkan dalam skala besar. Proses ultrafiltrasi (UF) merupakan salah satu proses pemisahan dan pemurnian protein serta berbagai bentuk makromolekul lainnya yang  memiliki  keunggulan  retensi  tinggi (Saxena et al . 2008). Li et al. (2006) berhasil memisahkan  enzim  protease  dari  ekstrak limpa  tuna  dengan  teknologi  membran  UF ini, namun tercatat ada beberapa kekurangan yaitu  timbulnya fouling dan  konsentrasi polarisasi yang tinggi. Fouling dan konsentrasi polarisasi  pada  membran  umumnya  sangat dipengaruhi  oleh  karakteristik  membran yaitu ukuran pori atau molecular weight cut off (MWCO) dan material (bahan penyusun) dari membran. Fouling dan konsentrasi polarisasi dapat  juga  dipengaruhi  oleh  karakteristik umpan  dan  kondisi  operasi  yang  meliputi tekanan  transmembran  (TMP),  suhu  serta laju alir (Noordmand et al. 2002). Pemilihan karakteristik  membran  dan  pengoperasian parameter  yang  tepat  pada  proses  UF diharapkan akan dapat meningkatkan kinerja proses  membran  dalam  memisahkan  dan memurnikan enzim protease dari jeroan ikan tuna. Tujuan  penelitian  ini  adalah:  (1) memurnikan  ekstrak  enzim  protease  dari jeroan  ikan  tuna  dengan  proses  ultrafiltrasi
(UF) dan reverse osmosis (RO), (2) mempelajari pengaruh  MWCO,  material  membran  serta kondisi  operasi  (TMP  dan  suhu)  terhadap fluks dan rejeksi dari membran UF,  (3) serta menganalisis  tingkat  kemurnian  dari  enzim protease  dan  menentukan  bobot  molekul protein yang terkandung dalam ekstrak enzim protease yang dihasilkan.

## MATERIAL DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  meliputi jeroan ikan tuna, es batu, bufer tris base, HCl, NaN 3 , CaCl 2 , akuades, dan NaOH, sedangkan bahan  untuk  pengujian  meliputi  selenium, heksana, H 2 SO 4 , NaOH 40%, H 3 BO 2%, brom cresol  green  methyl  red, HCl  0,1  N, bovine serum albumin (BSA), comassie brilliant blue G-250, etanol 95%, asam fosfat 85%, tirosin, TCA (0,1 M), kasein, bufer Tris HCl (pH 8, 0,2 M),  akuades  steril,  Na 2 CO 3 ,  folin,  akrilamid, bis-akrilamid, SDS, amonium persulfat, glisin, gliserol,  2-merkaptoetanol, bromofenol  blue , metanol, asam asetat, formalin, akuades bebas ion, Na 2 S 2 O 3 , AgNO3, N 2 CO 3 , dan asam asetat glasial. Alat-alat  yang  digunakan  terdiri  atas UF  poliakrilonitril  dengan  MWCO  100  kDa, membran  UF  polisulfon  dengan  MWCO  50 kDa, membran reverse osmosis , termostat, nilon ukuran  225  mesh  dan  375  mesh,  timbangan digital, pH meter, pompa vakum, kertas saring, pengaduk  magnetik  dan  pemanas  listrik. Peralatan untuk pengujian meliputi oven, tanur, desikator, labu Kjeldahl, pembakar (destruksi), destilator, sokhlet (kondensor dan labu lemak), vorteks, sentrifuge, inkubator, neraca analitik, spektrofotometer, tabung reaksi dan peralatan gelas lainnya.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  dalam beberapa tahapan yang meliputi preparasi dan analisis  proksimat  jeroan  ikan  tuna  (AOAC 2007), pembuatan ekstrak enzim protease dari jeroan  ikan  tuna  dengan  penambahan  bufer Tris HCl (pH 8,0; 0,02 % NaN 3 ; 5 mM CaCl 2 )
JPHPI 2012, Volume 15 Nomor 2
Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna, Riyanto, B. et al.
yang mengacu pada penelitian Li et al . (2006)
dan  prefiltrasi  menggunakan  nilon  ukuran 225  mesh  dan  375  mesh  serta  penyaringan vakum. Tahapan selanjutnya adalah karakterisasi  membran  berupa  penentuan tingkat  permeabilitas  (Uju et  al. 2009), kemudian  dilanjutkan  dengan  proses  filtrasi dengan membran ultrafiltrasi dan penentuan waktu  tunak  ( steady  state ).  Variabel  bebas yang  diteliti  meliputi  MWCO  (membran UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa dan UF polisulfon  MWCO  50  kDa),  TMP  (28  kPa- 280 kPa) dan suhu (30 °C, 35 °C dan 40 °C). Variabel tak bebas yang diamati meliputi fluks dan rejeksi yang terdiri dari pengukuran kadar protein terlarut dan aktivitas enzim protease. Tahapan selanjutnya adalah proses pemekatan menggunakan  membran  reverse  osmosis. Analisis  meliputi  pengukuran  kadar  protein terlarut (Bradford 1976) serta aktivitas enzim protease  (Walter  1988).  Tahapan  terakhir adalah  analisis  kemurnian  dan  penentuan bobot  molekul  protein  menggunakan  SDS- PAGE  (Laemmli  1970).  Data  yang  diperoleh diolah  dan  dimodelkan  menggunakan Microsoft Excel 2007.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Komposisi Kimia Jeroan Ikan Tuna
Hasil  analisis  komposisi  kimia  terhadap bahan baku jeroan ikan tuna yang digunakan adalah  kadar  air  75,42±0,35%;  kadar  abu 1,44±0,06%;  kadar  protein  17,11±0,18%; dan  kadar  lemak  1,63±0,30%.  Hasil  dari proses  ekstraksi  jeroan  ikan  tuna  dengan penambahan  bufer  tris  HCl  (pH  8,0;  0,02% NaN 3 ;  5  mM  CaCl 2 )  memperlihatkan  hasil ekstrak  enzim  protease  yang  masih  keruh dan  banyak  bahan  pengotor  lainnya  yaitu remah  daging  dan  lemak.  Proses  prefiltrasi menggunakan nilon ukuran 225 mesh dan 375 mesh  menghasilkan  ekstrak  enzim  protease yang  lebih  bersih  dari  bahan  pengotor tersebut, sedangkan setelah dilakukan proses penyaringan  vakum  memperlihatkan  bahwa ekstrak enzim protease yang dihasilkan makin terlihat lebih jernih.
Permeabilitas Membran Karakteristik membran ditentukan dengan  penentuan  tingkat  permeabilitas. Permeabilitas merupakan kemampuan membran mengalirkan air destilasi melalui pori yang terdapat didalamnya. Sifat permeabilitas membran dapat dilihat dengan mengukur nilai fluksnya.  Hasil  pengukuran  menunjukkan nilai fluks membran UF polisulfon MWCO 50 kDa dan UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa meningkat secara linier dengan meningkatnya nilai  TMP  dan  suhu.  Nilai  permeabilitas membran  poliakrilonitril  MWCO  100  kDa lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  membran polisulfon MWCO 50 kDa. Hasil selengkapnya pengaruh  TMP  dan  suhu  umpan  air  distilasi terhadap  fluks  membran  pada  membran  UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa dan polisulfon MWCO 50 kDa disajikan pada Gambar 1.
Waktu Tunak ( Steady State ) Fluks Hubungan  antara  fluks  dengan  waktu operasi  pada  membran  UF  poliakrilonitril MWCO 100 kDa dan UF polisulfon MWCO 50 kDa menunjukkan nilai fluks pada proses UF  dengan  membran  UF  poliakrilonitril MWCO  100  kDa  pada  awal  proses  filtrasi mengalami  penurunan  yang  tajam  namun setelah 5 menit fluks mendekati konstan. Fluks pada membran UF polisulfon MWCO 50 kDa tidak  memperlihatkan  terjadinya  penurunan yang tajam diawal proses dan cenderung terus konstan  sepanjang  proses.  Penurunan  fluks yang  tajam  pada  beberapa  menit  pertama membran UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa diduga disebabkan oleh terjadinya konsentrasi polarisasi  pada  membran  tersebut  (Marshal et  al .  1993).  Hasil  selengkapnya  hubungan antara  fluks  dengan  waktu  pada  membran UF  polisulfon  MWCO  50  kDa  dengan  UF poliakrilonitril  MWCO  100  kDa  disajikan pada Gambar 2.
Pengaruh  Tekanan  Transmembran  dan Suhu terhadap Fluks
Fluks  adalah  jumlah  volume  permeat
pada operasi membran per satuan waktu dan luas permukaan membran. Hasil pengukuran nilai fluks permeat akibat pengaruh TMP dan suhu memperlihatkan terjadinya peningkatan nilai  fluks  seiring  dengan  peningkatan  nilai TMP  dan  suhu.  Pola  perubahan  nilai  fluks permeat  pada  membran  UF  poliakrilonitril MWCO  100  kDa  dan  polisulfon  MWCO 50  kDa  menunjukkan  bahwa  TMP  tidak berpengaruh terhadap nilai fluks ketika TMP secara berturut-turut lebih besar dari 110 dan 170  kPa,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada kondisi  tersebut  diduga  telah  terjadi fouling (Ghosh & Cui 2000). Nilai fluks permeat pada membran UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa dan polisulfon MWCO 50 kDa pada TMP dan suhu  yang  berbeda  selengkapnya  disajikan pada Gambar 3.

## Pengaruh Tekanan Transmembran dan Suhu terhadap Nilai Rejeksi
Rejeksi  adalah  kemampuan  suatu membran untuk menahan partikel berukuran tertentu.  Pola  perubahan  nilai  rejeksi  kadar protein terlarut dan aktivitas enzim protease pada  membran  UF  poliakrilonitril  MWCO 100 kDa dan polisulfon MWCO 50 kDa terlihat cenderung berfluktuatif. Hal ini menunjukkan bahwa  TMP  dan  suhu  tidak  berpengaruh terhadap besarnya nilai rejeksi kadar protein terlarut  maupun  aktivitas  enzim  protease. Kecenderungan  ini  dapat  juga  dipengaruhi oleh faktor-faktor lain, yang meliputi MWCO dan berat zat terlarut (Mulder 1996).
Nilai  rejeksi  kadar  protein  terlarut  dan
aktivitas  enzim  protease  pada  membran  UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa terlihat juga lebih rendah dibandingkan dengan membran UF polisulfon MWCO 50 kDa. Hal ini diduga jumlah protein maupun enzim protease yang ada lebih banyak mencemari pori membran, terutama pada membran berukuran pori lebih besar (Marshall et al . 1993). Cheryan (1998) menyatakan  bahwa  material  membran  yang berbeda dengan MWCO yang sama akan dapat menghasilkan  rejeksi  yang  berbeda.  Hal  ini diduga disebabkan adanya pengaruh interaksi antara  larutan  umpan  dan  membran.  Pola perubahan nilai rejeksi kadar protein terlarut dan  aktivitas  enzim  protease  pada  permeat yang  disebabkan  oleh  perubahan  TMP  dan suhu  pada  membran  UF  poliakrilonitril MWCO  100  kDa  dan  polisulfon  MWCO  50 kDa  selengkapnya disajikan pada Gambar 4
a b
Gambar 1 Pengaruh TMP dan suhu umpan air distilasi terhadap nilai fluks pada membran UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa (a) dan polisulfon MWCO 50 kDa (b).
Gambar  2  Hubungan  antara  fluks  dengan  waktu pada membran membran pada membran UF  poliakrilonitril  MWCO  100  kDa dan polisulfon MWCO 50 kDa   pada suhu 30 ° C.
Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna, Riyanto, B. et al.

## dan Gambar 5.
Kadar Protein dan Aktivitas Enzim pada Setiap Tahapan Filtrasi serta Penggunaan RO sebagai Diafiltrasi
Hasil  pengukuran  kadar  protein  dan aktivitas  enzim  protease  memperlihatkan nilai  yang  cenderung  menurun  setelah proses  ultrafiltrasi,  walaupun  ukuran  pori dari  membran  UF  lebih  besar  daripada ukuran  molekul  protein,  sekitar  setengah dari  keseluruhan  protein  masih  ditahan oleh  membran  ini.  Tertahannya  protein  ini diduga disebabkan oleh agregasi protein yang muncul  pada  larutan  atau  pada  mulut  pori di  bawah  kondisi  dinamik  atau  konvektif (Tracey  dan  Davis  1994)  dan  formasi  dari lapisan fouling pada  permukaan  membran. Rembesan  dari  permukaan  bebas  ini  masih memungkinkan  molekul  yang  lebih  kecil untuk  lewat  walaupun  agregasi  protein dan  endapan  partikel  besar  lainnya  pada permukaan  membran  membentuk  lapisan fouling , oleh karena itu enzim dengan bobot
molekul yang kecil (24 kDa untuk tripsin dan 27 kDa untuk kemotripsin) menjaga struktur stabilnya pada bufer Tris HCl yang digunakan pada  penelitian  ini.  Peningkatan  TMP  dan ukuran  pori  membran  dapat  menyebabkan penurunan  aktivitas  enzim  protease  pada permeat yang dihasilkan (Li et al. 2008). Kadar  protein  dan  aktivitas  enzim protease  setelah  proses  RO  memperlihatkan adanya  peningkatan  pada  aktivitas  spesifik enzim  protease  dengan  retentat  membran RO dari permeat UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa dan UF polisulfon MWCO 50 kDa. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemekatan menggunakan  RO  dapat  efektif  untuk digunakan dalam pemekatan enzim protease.

## Penentuan Tingkat Kemurnian Enzim Protease dengan SDS-PAGE
Elektroforesis gel poliakrilamida sodium dodesil  sulfat  (SDS-PAGE)  digunakan  untuk mengetahui  kemurnian  dan  estimasi  bobot molekul  protein  dari  enzim  protease.  Hasil
Gambar  3  Pola  perubahan  nilai  fluks  permeat yang  disebabkan  oleh  perubahan TMP  dan  suhu  pada  membran  UF poliakrilonitril  MWCO  100  kDa  (a) dan polisulfon MWCO 50 kDa (b).
a b a a b
Gambar  4  Pola  perubahan  nilai  rejeksi  kadar protein  terlarut  pada  permeat yang  disebabkan  oleh  perubahan TMP  dan  suhu  pada  membran  UF poliakrilonitril  MWCO  100  kDa  (a) dan polisulfon MWCO 50 kDa (b).
analisis  SDS-PAGE  10%  menunjukkan  profil pita protein enzim protease dari jeroan ikan tuna.  Penyaringan  dengan  kertas  saring meloloskan protein sebesar 100% dan hanya memisahkan pengotor berupa remah daging dan  lemak.  Enzim  protease  murni  berhasil dipisahkan dengan UF dan dipekatkan dengan RO,  akan  tetapi  RO  tidak  mampu  merejeksi protein  sebesar  100%,  hal  ini  dibuktikan dengan permeat RO yang masih mengandung protein. Profil pita protein enzim protease dari jeroan ikan tuna hasil dari analisis SDS-PAGE 10%  disajikan  pada  Gambar  6,  sedangkan estimasi bobot molekul protein enzim protease dari  jeroan  ikan  tuna  hasil  SDS-PAGE  10%
disajikan pada Tabel 1.
Pemurnian  dengan  membran  UF poliakrilonitril  MWCO  100  kDa  kemudian dipekatkan  dengan  RO  menghasilkan protease  dengan  bobot  molekul  37,53; 27,77;  22,72;  dan  19,88  kDa.  Pemurnian menggunakan  membran  UF  polisulfon MWCO 50 kDa kemudian dipekatkan dengan
a b Gambar  5  Pola  perubahan  nilai  rejeksi  aktivitas enzim  protease  pada  permeat  yang disebabkan  oleh  perubahan  TMP  dan suhu pada membran UF poliakrilonitril MWCO  100  kDa  (a)  dan  polisulfon
MWCO 50 kDa (b).
Gambar 6 Profil pita protein enzim protease dari jeroan ikan tuna hasil dari SDS-PAGE 10% pada (A) Ekstrak kasar  enzim  protease  dari  jeroan  ikan  tuna,  (B)  Ekstrak  enzim  protease  hasil  penyaringan nilon  ukuran  225  mesh  dan  375  mesh  serta  penyaringan  vakum,  (C)  Permeat  membran  UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa, (D) Permeat membran UF polisulfon MWCO 50 kDa, (E1) Permeat membran RO dari UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa, (E2) Retentat membran RO dari UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa, (F1) Permeat membran RO dari UF polisulfon MWCO 50 kDa, (F2) Retentat membran RO dari UF polisulfon MWCO 50 kDa, (M) Marker Unstained
Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna, Riyanto, B. et al.
RO  menghasilkan  protease  dengan  bobot molekul 21,25; 19,88; dan 16,82 kDa. Li et al . (2006)  telah  berhasil  memurnikan  protease dari  limpa  ikan  tuna  dengan  teknik  UF  dan diafiltrasi UF 30 kDa. Ekstrak protease yang diperoleh  dari  hasil  penelitian  memiliki bobot  molekul  25,  80  kDa.  Li et  al. (2008) melaporkan  bahwa  estimasi  bobot  molekul dari tripsin dan kemotripsin dari limpa tuna yellowfin  berturut-turut  adalah  24  dan  27
kDa.
Enzim  jeroan  ikan  tuna  secara  umum terdiri  atas  pepsin  (pada  bagian gastric mucosa ), dan tripsin serta kemotripsin (pada bagian  pankreas, pyloric  caeca ,  dan  usus) (Simpson 2000). Protease yang dihasilkan dari jeroan  ikan  tuna  memiliki  sifat  unik  untuk berbagai  aplikasi  industri  seperti  deterjen (Esposito et al . 2009; Li et al . 2010), makanan diantaranya  digunakan  untuk  meningkatkan kualitas glutenin pada tepung dan coklat (Kara et  al .  2005),  meningkatkan  volume  spesifik dari  brown  rice  bread  (Renzetti  dan  Arendt 2009), farmasi, kulit dan industri tekstil atau
kain sutra (Haard 1992).

## KESIMPULAN
Enzim  protease  dari  jeroan  ikan  tuna dapat dimurnikan melalui proses UF dan RO. Teknik  pemurnian  enzim  dengan  metode UF  bertingkat  serta  karakteristik  bahan  UF untuk  enzim  protease  yang  dihasilkan  perlu dikembangkan  untuk  meningkatkan  hasil yang lebih baik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi  Departemen Pendidikan  Nasional  dan  Direktorat Pendidikan  Diniyah  dan  Pondok  Pesantren Departemen  Agama  yang  telah  mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical and Chemistry. 2007. Official Methods of Analysis. 18th Ed. Maylan: Association of Official Analytical and Chemists Inc.
Tabel 1 Kadar protein terlarut dan aktivitas protease pada ekstrak protease jeroan tuna Sampel (Kode) Kadar Protein (mg/ ml) Aktivitas Enzim Protease (unit/ ml) Aktivitas Spesifik Enzim Protease (unit/ mg) Ekstrak enzim protease kasar (A) 0,42 0,75 1,77 Ekstrak enzim protease hasil penyaringan nilon ukuran 225 mesh dan 375 mesh serta penyaringan vakum (B) 0,15 0,22 1,42 Permeat membran UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa (C) 0,14 0,18 1,29 Permeat membran UF polisulfon MWCO 50 kDa (D) 0,30 0,16 0,53 Permeat membran RO dari UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa (E1) 0,03 0,01 0,25 Retentat membran RO dari UF poliakrilonitril MWCO 100 kDa (E2) 0,13 0,18 1,38 Permeat membran RO dari UF polisulfon MWCO 50 kDa (F1) 0,02 0,02 0,90 Retentat membran RO dari UF polisulfon MWCO 50 kDa (F2) 0,29 0,16 0,55
Bradford. 1976. A rapid and sensitive for the quantitation  of  microgram  quantities of  protein  utilizing  the  principle  of protein-dye  binding. Journal  Analytical
Biochemistry 56(7): 248-254.
Cheryan  M.  1998. Ultrafiltration  and Microfiltration  Handbook. Technomic Publ. New Holland Avenue. Esposito  TS,  Amaral  IPG,  Buarque  DS,
Oliveira  GB,  Carvalho  LB,  Bezerra  RS. 2009. Fish processing waste as a source of alkaline proteases for laundry detergent. Food Chemistry 112: 125-130. Gildberg A. 1992. Recovery of proteinase and protein  hydrolisate  from  fish  viscera. Bioresource Technology 39: 271-276. Ghosh  R,  Cui  ZF.  2000.  Simulation  study of  the  fractionation  of  proteins  using ultrafiltration. Journal  of    Membrane
Science 180: 29-36.
Guerard F, Guimas L, Binet A. 2002. Production of tuna waste hydrolysates by a commercial neutral  protease  preparation. Journal  of
Molecular  Catalysis  B:  Enzymatic 19-20:
489-498.
Haard  NF.  1992.  A  review  of  proteolytic enzymes from marine organisms and their application in the food industry. Journal of
Aquatic Food Products Technology 1: 17-35.
Kara M, Sivri D, Koksel H. 2005. Effects of high protease-activity  flours  and  commercial proteases on cookie quality. Food Research
International 8: 479-486.
Klomklao  S,  Benjakul  S,  Visessanguan W,  Simpson  BK,  Kishimura  H.  2005.
Partitioning and recovery of proteinase from tuna spleen by aqueous two phase system. Process Biochemistry 40: 3061-3067. Laemmli  UK.  1970.  Cleavage  of  structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Natur e 227: 680-685.
Li  ZY,  Youravong  W,  H-Kittikun  A.  2006. Separation  of  proteases  from  yellowfin tuna spleen by ultrafiltration. Bioresource
Technology 97: 2364-2370. Li  ZY,  Youravong  W,  H-Kittikun  A.  2008. Separation  of  proteases  from  yellowfin
tuna spleen extract by ultrafiltration: effect of  hydrodynamics  and  gas  sparging  on flux enhancement and selectivity. Journal of Membrane Science 311: 104-111.
Li  ZY,  Youravong  W,  H-Kittikun  A.  2010.
Protein  hydrolysis  by  protease  isolated from tuna spleen by membrane filtration: a  comparative  study  with  commercial proteases. Journal  of    Food  Science  and Technology 43: 166-172.
Marshall AD, Munro PA, Tragardh G. 1993. The effect of protein fouling in microfiltration and  ultrafiltration  on  permeate  flux, protein  retention  and  selectivity:  A literature review. Desalination 91: 65-108. Mulder M. 1996. Basic Principles of Membrane
Technology . Nederland: Kluwer Academic Publisher. Noordman  TR,  Ketelaar  TH,  Donkers  F, Wesselingh  JA.  2002.  Concentration and  desalination  of  protein  solutions by  ultrafiltration. Chemical  Engineering
Science 57: 693-703. Prasertsan  P,  Wuttijumnong  P,  Sophanodora
P,  Choorit  W.  1988.  Seafood  processing industries  within  Songkhla-Hat  Yai region: the survey of basic data emphasis on  wastes. Songklanakarin  Journal  of Science and Technology 10: 447-451. Rao  MB,  Tranksale  AM,  Ghatge  MS,
Desphande  VV.  1998.  Molecular  and biotechnological  aspects  of  microbial protease. Journal  of    Microbiology  and Molecular Biology Review 62: 597-635. Renzetti S, Arendt EK. 2009. Effect of protease treatment  on  the  baking  quality  of brown  rice  bread:  From  textural  and rheological  properties  to  biochemistry and  microstructure. Journal  of  Cereal Science 50: 22-28.
Saxena A, Tripathi BP, Kumar M, Shahi VK.
2008. Membran-based techniques for the separation  and  purification  of  proteins:
An  overview. Advances  in  Colloid  and Interface Science 145: 1-22. Simpson BK. 2000. Digestive proteinases from marine  animals.  In:  Haard  NF,  Simpson
JPHPI 2012, Volume 15 Nomor 2
Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna, Riyanto, B. et al.
BK  (Eds), Seafood  enzymes:  utilization and  influence  on  postharvest  seafood quality. New York: Marcel Dekker. Tracey EM, Davis RH. 1994. Protein fouling of track-etched polycarbonate microfiltration membrane. Journal  of  Colloid  and Interface Science 167: 104-116. Uju,  Nurhayati  T,  Ibrahim  B,  Trilaksani  W, Siburian  M.  2009.  Karakterisasi  dan recovery  protein  dari  air  cucian  minced fish  dengan  membran  reverse  osmosis. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia 12(2): 115-127.
Walter HE. 1988. Methods with Haemoglobin, Casein and Azool as Substrate. Di dalam: Bergmeter  HU,  Bergmeyer  J  and  Garbi M. Methods of Enzymatic Analysis .3rd Ed. Jerman: Weinhem.