## JIPK JURNAL ILMIAH PERIKANAN DAN KELAUTAN

## Research Article
Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Api-Api  ( Avicennia  alba )  terhadap Vibrio  harveyi Penyebab Vibriosis secara Invitro
In  Vitro Antibacteria  Activity  of  Api-Api  ( Avicennia  alba )  Leave  Extract  Against Vibrio harveyi Causes Vibriosis
Zurica Melati Fitri 1 , Kismiyati 2 dan Ahmad Shofy Mubarak 3*
1 Program Study of Aquaculture, Faculty of Fisheries and Marine, Universitas Airlangga, Surabaya, East Java, Indonesia 60115
2 Departement of Fish Health Management and Aquaculture, Faculty of Fisheries and Marine, Universitas Airlangga, Surabaya, East Java, Indonesia 60115
3 Department of Marine, Faculty of Fisheries and Marine, Universitas Airlangga, Surabaya, East Java, Indonesia 60115

## ARTICLE INFO
Received: September 03, 2018 Accepted: November 20, 2018
*) Corresponding author: E-mail: shofy.ua@gmail.com
Kata Kunci :
Avicennia alba , Antibakteri, Vibrio harveyi , In vitro
Keywords :
Avicennia alba , Antibacterial, Vibrio harveyi , In vitro

## Abstrak
Budidaya udang dihadapkan pada berbagai kendala penyakit yang timbul dan dapat  menyebabkan  kematian  masal  pada  larva  udang  windu,  salah  satunya vibriosis yang   disebabkan oleh bakteri Vibrio harveyi. Zat antibakteri yaitu :  flavonoid,  saponin  dan  tanin  terbukti  dapat  membunuh  beberapa  bakteri patogen.    Daun  api  –  api Avicennia  alba mengandung  zat  anti  bakteri sehingga  berpotensi  digunakan  untuk  membunuh bakteri Vibrio  harveyi . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi optimum ekstrak daun api-api  ( Avicennia  alba )  dalam  menghambat  dan  membunuh  pertumbuhan bakteri Vibrio  harveyi. Penelitian  ini    mengunakan  metode  eksperimental dengan  perlakuan konsentrasi ekstrak daun api-api ( Avicennia alba ) sebesar 100%,  90%  80%,  70%,  60%,  50%,  40%.  30%,  20%,  10%,  0%.    Parameter yang diamati  dalam penelitian ini  adalah Minimum Inhibitory Concentration (MIC)  dan  pertumbuhan  koloni    pada  uji Minimum  Bacteria  Concentration (MBC).  Hasil penelitian menunjukan bahwa pada  konsentrasi 60% ekstrak daun Avicennia alba dapat menghambat pertumbuhan V.harveyi. Sedangkan pada  konsentrasi  90%  ekstrak  daun Avicennia  alba menyebabkan    bakteri V.harveyi terbunuh.

## Abstract
Shrimp  culture  has various obstacles such  as  the emergence  of diseases that can  cause  deaths  in  tiger  shrimp  larvae  such  as  vibriosis  caused  by Vibrio harveyi . Some antibacterial substances such as: flavonoid, saponin and tanin inhibit and kill of several pathogenic bacteria. Avicennia alba leaves contain anti-bacterial  substances  that  have  the  potential  to  be  used  to  kill Vibrio harveyi bacteria.  This  study  was  aims  to  determined  the  minimum concentration  of  of Avicennia  alba leaves  extract  for  inhibit  and  kill  the growth  of Vibrio  harveyi .  This  study  used  an  experimental  method,  using Avicennia  alba leaves  extract  concentration  treatment  of  100%,  90%  80%, 70%, 60%, 50%, 40%. 30%, 20%, 10%, 0%. The parameters observed in this study  were  Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC)  and  bacteria  colony growth in Minimum Bacteria Concentration (MBC) test. The results showed that at a concentration of 60% Avicennia alba leaves extract could inhibit the growth of V.harveyi. While at a concentration of 90% Avicennia alba leaves extract, Vibrio harveyi bacteria was killed.
Cite  this  as: Zurika  M.  F.,  Kismiyati  &  Shofy  M.,    (2018). Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Api-Api  ( Avicennia  alba )  terhadap Vibrio harveyi Penyebab Vibriosis secara Invitro. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 10(2):131–136. http://doi.org/10.20473/jipk.v10i2.10527

## 1. Pendahuluan
Udang  merupakan  komoditas  budidaya  yang memberi kontribusi besar dalam perolehan devisa dari ekspor  komoditas  perikanan  dimana  menyumbang devisa  negara  sebesar  7,6  milyar  dolar  Amerika (Kusumastanto,  2002).  Budidaya  udang  dihadapkan pada  berbagai  kendala,  salah  satu  adalah  terjangkit berbagai penyakit udang yang menyebabkan kegagalan  panen,  diantara  vibriosis,  yang  disebabkan oleh  infeksi Vibrio  Harvey. Vibriosis ini  banyak menyerang larva udang.  Larva udang yang terserang Vibrio  harveyi terlihat  bercahaya  pada  kondisi  gelap, sehingga penyakit ini sering disebut penyakit kunang- kunang  atau luminescent  vibriosis (Lightner,  1996). Mortalitas  akibat  serangan  bakteri  ini  mencapai  80 persen  dalam  beberapa  hari  (Isarangkura  and  Sae- Hae, 2002).
Upaya  telah  dilakukan  untuk  menanggulangi vibriosis  pada  udang,  yakni  dengan  menggunakan obat  kimia  dan  antibiotik.  Pengunaan  obat  kimia  dan antibiotik dapat membawa dampak yang serius karena menimbulkan    residu    pada  udang  dan  menyebabkan timbul  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik    tersebut (Muliani et al . , 2003). Pengendalian penyakit bakerial pada  budidaya  udang  diarahkan  pada  penggunaan bahan  yang  ramah  lingkungan  yang  mudah  didapat sehingga  tidak menimbulkan resistensi.
Burhanuddin et  al .,  (2007)  mengemukakan bahwa Avecenia sp.  yang  terdapat  di  Indonesia mengandung  senyawa    alkaloid,  saponin,  tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, dan glikosida  dimana senyawa  tersebut  dapat    bertindak  sebagai    anti inflamasi,  antioksidan,  antibakteri,  dan  antivirus (Withanawasam,  2002). Hasil  analisis  fitokimia  daun Avicennia  alba diketahui  mempunyai  bahan  kimia aktif  yaitu  flavonoid,  saponin,  dan  tanin. Senyawa saponin  dapat  merusak  membran  sitoplasma  dan membunuh  sel  bakteri  (Assani,  1994).  Senyawa flavonoid  dapat  menyebabkan  denaturasi  protein  sel bakteri  dan  merusak  membran  sel  tanpa  dapat diperbaiki  lagi (Pelczar et al ., 1998). Mulyadi  (1996) membuktikan  bahwa  tanin  mempunyai  kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Zat  aktif  tanin,  saponin,  dan  flavonoid  ekstrak daun  api-api  ( Avicennia  alba )  diharapkan  dapat menjadi  alternatif  untuk  menghambat  pertumbuhan vibriosis,  sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai pengendalian Vibrio  harveyi yang  ramah  lingkungan dan tidak menimbulkan residu pada udang.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Bakteriologi  Balai  Karantina  Ikan  Kelas  I  Juanda. Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  Api-Api ( Avicennia  alba ),  suspensi  bakteri Vibrio  harveyi. Tryptic Soy Broth (TSB), aquades, etanol,  DMSO 5%.  Sedangkan Alat  yang  digunakan  ini  adalah cawan  petri,  tabung  reaksi,  bunsen,  jarum  ose, mikro  pipet,    sparel  bengkong,  erlenmeyer, laminary  air  flow, gelas  volume,  autoklaf, inkubator, rotary vacuum evaporator .

## 2.2 Metode Penelitian

## 2.2.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental. Penelitian dilakukan secara in vitro dengan  menggunakan  metode  pengenceran  berseri ( dilution  method ).  Penelitian  ini  mengunakan  11 perlakuan  konsentrasi  ekstrak  yaitu  0%  hingga 100% dengan masing masing  3 ulangan.  Variabel yang  diamati  dalam  penelitian  ini  adalah konsentrasi  pengenceran  terendah  dari  ekstrak Avicennia  alba berupa  kekeruhan  dari  hasil  uji (MIC)  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Vibrio  harveyi serta  pertumbuhan  koloni (MBC) bakteri Vibrio harveyi pada media agar.

## 2.2.2 Prosedur Penelitian
a) Strerilisasi Alat dan Bahan
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  disterilisasi dengan  autoklaf  suhu  120  ℃  dan  tekanan  uap  air tinggi  salam 15 menit. Sedangkan untuk alat yang tidak  taham  panas  cukup  dibilas  dengan  alkohol 70%.

## b) Identifikasi Bakteri
Isolat  bakteri Vibrio  harveyi diperoleh  dari Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Ikan  BBPAP Jepara. Identifikasi bakteri Vibrio harveyi menggunakan pengamatan morfologi koloni bakteri  dan  pengamatan  secara  miskroskopik menggunakan  pewarnaan  gram  serta  pengujian sifat biokimia dari bakteri tersebut.

## c) Pembuatan Simplisia
Simplisia  adalah  bahan  alamiah  yang dipergunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apa pun. Daun Api-Api sebanyak 1 kg dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  dengan suhu kamar 25ºC. Setelah kering, bahan kemudian dipotong kecil-kecil lalu digiling.
d) Pembuatan Ekstrak Avicennia alba Ekstrak  daun  api-api  ( Avicennia  alba )  yang digunakan sebanyak 500 gram daun kering yang telah digiling  menjadi  serbuk  yang  kemudian  direndam (maserasi) dengan etanol 2,5 liter selama 3 x 24 jam. Hasil  maserasi Avicennia  alba tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  dan  filtrat  ditampung  di dalam  tabung  erlenmeyer.  Filtrat  tersebut  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 30ºC selama 4 jam.
e) Persiapan Larutan Ekstrak Avicennia alba
Penelitian
ini menggunakan sebelas konsentrasi  ektrak  daun  api  api    sebesar    0%,  10%, 20%,  30%,  40%,  50%,  60%,  70%,  80%,  90%,  100% pada  media  TSB.  Pada  konsentrasi  10%  –  90% ditambahkan  1  ml  suspensi  bakteri Vibrio  harveyi dengan formulasi sebagai berikut:
1. Konsentrasi 0%
:   1 ml Vibrio harveyi + l ml  DMSO  5%    +  TSB (kontrol negatif). 2. Konsentrasi 10% :   0,1 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,9 ml TSB 3. Konsentrasi 20% :   0,2 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,8 ml TSB 4. Konsentrasi 30% :  0,3 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,7 ml TSB 5. Konsentrasi 40% :   0,4 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,6 ml TSB 6. Konsentrasi 50% :   0,5 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,5 ml TSB 7. Konsentrasi 60% :   0,6 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,4 ml TSB 8. Konsentrasi 70% :   0,7 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,3 ml TSB 9. Konsentrasi 80% :   0,8 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,2 ml TSB 10. Konsentrasi 90% :   0,9 ml ekstrak Avicennia  alba +  0,1 ml TSB
11. Konsentrasi 100%   :   1  ml  ekstrak Avicennia alba + 1 ml DMSO 5% + TSB (kontrol positif). f) Persiapan Suspensi Bakteri Vibrio harveyi
Suspensi  bakteri  yang  akan  digunakan terlebih  dahulu  disetarakan  dengan  larutan  standar Mc.  Farland 0,5.    Koloni  bakteri  dari  cawan  petri dilarutkan  dalam  aquades  lalu  diratakan  dan diinkubasi  selama  3-4  jam,  kemudian    disetarakan dengan  standar Mc.Farland 0,5 yang  mengandung koloni  10 7 CFU/ml.

## 2.3 Analisis Data
Data  hasil  penelitian  disajikan  secara deskriptif, yaitu penyajian data dalam bentuk tabel dan  grafik  guna  mendapatkan  gambaran  tentang data  penelitian  sehingga  lebih  muda  dibaca  dan dipahami (Dergibson dan Sugiarto, 2002)

## 3 . Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengamatan  secara  visual  pada  uji MIC diperoleh hasil bahwa ekstrak Avicennia alba memiliki  aktivitas  menghambat  pertumbuhan Vibrio  harveyi .    Berdasarkan  Tabel  1  kontrol positif  terlihat  jernih,  yang  berarti  tidak  ada pertumbuhan bakteri. Kontrol negatif terlihat keruh yang  menandakan  ada  pertumbuhan  bakteri  yang diinukulasikan  pada  media TSB. Pada konsentrasi 60%  hingga  90%  terlihat  suspensi  ekstrak Avicennia  alba jernih  meskipun  diinukulasikan bakteri V.harveyi Hasil  pengujian    MIC menunjukkan  bahwa ekstrak daun Avicennia alba mempunyai  aktivitas  menghambat  pertumbuhan V.harveyi pada konsentrasi 60%.
Daya bunuh ekstrak daun Avicennia alba terhadap Vibrio  harveyi diuji  berdasarkan  pengujian  MBC, yaitu  uji  pertumbuhan  bakteri  yang  telah diinkubasi  dengan  ekstrak  pada  media  agar. Berdasarkan  Tabel  2  bakteri  tumbuh  pada  media agar  dari    inokulan  yang  diinkubasi  dalam  ekstrak daun Avicennia  alba konsentrasi  60%  70%  dan 80%,  meskipun  dalam  uji  MIC  terlihat  jernih. Peningkatan  konsentrasi    ektrak  daun  api  api menyebabkan  penurunan  jumlah  koloni  bakteri Vibrio  harveyi dalam  media  agar . Pertumbuhan koloni  tidak  terlihat  pada  inokulasi  bakteri  setelah diinkubasi  pada  media  dengan  konsentrasi  ektrak daun  api  api  90%.  Dari  hasil  uji  MBC  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak Avicennia  alba memiliki aktifitas membunuh bakteri pada konsentrasi 90%,
Daun  Api-Api  ( Avicennia  alba )  diketahui memiliki  zat-zat  yang  mampu  berfungsi  sebagai zat  antibakteri  (Withanawasam,  2002). Fitokimia daun Avicennia alba mempunyai bahan kimia aktif berupa  flavonoid,  saponin,  dan  tannin (Assani, 1994). Menurut Pelczar dan Chan (1986), semakin tinggi  konsentrasi  antibakteri  yang  digunakan maka akan semakin banyak bakteri yang terbunuh. Namun penggunaan antibakteri dengan konsentrasi
tinggi  dan  terus  menerus  dapat  menyebabkan resistensi dan berbahaya terhadap host (udang). Pertumbuhan koloni tidak terlihat pada konsentrasi 90%. Tidak ada pertumbuhan koloni pada konsentrasi  tersebut  menunjukkan  ekstrak Avicennia alba memiliki  aktifitas  anti  bakteri  dan  membunuh bakteri.    Flavonoid  termasuk  dalam  golongan senyawa  fenol.  Pada  konsentrasi  rendah  dapat merusak  membran  sitoplasma  yang  menyebabkan bocor  metabolit  penting  yang  menginaktifkan  sistem enzim  bakteri,  sedangkan  pada  konsentrasi  tinggi mampu merusak membran sitoplasma dan mengendapkan protein sel.
Flavonoid dapat mendenaturasi sel bakteri dan merusak  membran  sel  tanpa  dapat  diperbaiki  lagi (Pelczar  dan  Chan,  1998).  Flavonoid  menyebabkan perubahan  pada  membran  sel  bakteri  yang  diikuti dengan  masuknya  air  yang  tidak  terkontrol  ke  dalam sel  bakteri,  hal  ini  menyebabkan  pembengkakan  sel bakteri dan pada akhirnya membran sel bakteri pecah. Saponin adalah jenis glikosida yang banyak
ditemukan  dalam  tumbuhan.  Saponin  memiliki karakteristik  berupa  buih.  Dalam  larutan  yang sangat  encer  saponin  sangat  beracun.  Beberapa saponin juga bekerja sebagai antimikroba. Menurut Assani  (1994),  senyawa  saponin  akan  merusak membran sitoplasma dan membunuh sel.
Tanin  tergolong  senyawa  polifenol  dengan karakteristik  yang  dapat  membentuk  senyawa kompleks  dengan  makromolekul  lain.  Tanin  dapat berikatan  dengan  dinding  sel  mikroorganisme  dan dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroorganisme atau  aktivitas  enzim  (Smith et  al. ,  2005). Mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri berhubungan dengan kemampuan tanin menginaktivasi  molekul  yang  menempel  pada inang  yang  terdapat  pada  permukaan  sel,  enzim yang  terikat  pada  membran  sel,  dan  polipeptida dinding  sel.    Tanin  yang  mempunyai  target polipeptida  dinding  sel  menyebabkan  kerusakan dinding  sel,  karena  tanin  merupakan  senyawa fenol.
Tabel 1. Hasil pengamatan uji minimum inhibitory concentration (MIC)
Konsentrasi ekstrak
Avicennia alba % Ulangan I II III 90 Jernih (coklat) Jernih (coklat) Jernih (coklat) 80 Jernih (coklat) Jernih (coklat) Jernih (coklat) 70 Jernih (coklat) Jernih (coklat) Jernih (coklat) 60 Jernih (coklat) Jernih (coklat) Jernih (coklat) 50 Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) 40 Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) 30 Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) 20 Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) 10 Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) Kontrol negatif Keruh (coklat) Keruh (coklat) Keruh (coklat) Kontrol positif Jernih (coklat) Jernih (coklat) Jernih (coklat)
Keterangan : Jernih : Pertumbuhan bakteri terhambat Keruh  : Pertumbuhan bakteri tidak terhambat
Terjadi kerusakan dinding sel bakteri menyebabkan  sel  bakteri  tanpa  dinding  yang  disebut protoplasma  (Jawetz et  al .,  2001).  Kerusakan  pada dinding  sel  bakteri  akan  menyebabkan  kerusakan membran  sel,  yaitu  hilang  sifat  permeabilitas membran  sel,  sehingga  keluar  masuk  zat-zat  antara lain air, nutrisi, enzim-enzim tidak terseleksi.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak daun api-api ( Avicennia alba ) mempunyai  kemampuan  menghambat  bakteri Vibrio harveyi secara in  vitro pada  konsentrasi  minimum 60%.  Konsentrasi  minimum  ekstrak  daun  api-api ( Avicennia  alba )  yang  dapat  membunuh  bakteri Vibrio harveyi adalah 90%

## Daftar Pustaka
Assani,  S.  (1994).  Mikrobiologi  Kedokteran.  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Burhanuddin,  Violet.,  &  Yuliana.  (2007).  Produksi  dan Analisis  Kualitatif  Senyawa  Aktif  Getah  Pohon Api-Api    (Avicennia  marina  Vierh). Jurnal Hutan Tropis Borneo , 8:71-83.
Dergibson,  S.,  &  Sugiarto.  (2002).  Metode  Statistika Untuk  Bisnis  dan  Ekonomi.  PT  Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.  4-6.
Israngkura, A., & Sae-Hae, S. (2002). A Review of The Economic  Impacts  of  Aquatic  Animal  Disease. 253-286.
Jawetz,  E.,  Melnick,  G.  E.,  &  Adelberg,  C.  A.  (2001).
Mikrobiologi kedokteran. Edisi I. Diterjemahkan
oleh Penerjemah Bagian Mikrobiologi Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga. Salemba Medika, Surabaya
Kusumastanto,  T.  (2002).  Reposisi  “Ocean  Policy” dalam  Pembangunan  Ekonomi  Indonesia  di era Otonomi Daerah. Orasi Ilmiah Guru Besar Tetap  Bidang  Ilmu  Kebijakan  Ekonomi Perikanan  dan  Kelautan.  Bogor.  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Institut Pertanian Bogor. 1-  134
Lightner,  D.  V.  (1996).  A  Handbook  of  Shrimp
Pathology  and  Diagnostic  Procedures  for Disease  of  Cultured  Penaeid  Shrimp.  World Aquaculture Society, Baton Rouge, Lousisana, USA.
Muliani, A., Suwanto, & Lala, H. (2003). Isolasi dan Karakterisasi  Bakteri  Asal  Laut  Sulawesi untuk  Biokontrol  Penyakit  Vibriosis  pada Udang Windu (Penaeus monodon Fab)
Mulyadi.  (1996).  Isolasi  Tanin  dari  Daun  Teh  Hijau
Camellia sinensis var. sinensis yang Berpotensi Antibakteri. (Skripsi). Bogor : IPB Press
Pelczar,  M.  J.,  &  Chan,  E.  C.  S.  (1986).  Dasar-dasar Mikrobiologi.  Edisi  1.  Universitas  Indonesia Press. Jakarta.    Hal. 45-49.
Pelczar,  M.  J.,  &  Chan,  E.  C.  S.  (1998).  Dasar-dasar Mikrobiologi  II.  Universitas  Indonesia  Press. Jakarta. 192 hal
Tabel 2. Pengamatan hasil uji minimum bactericidal concentration (MBC)

## Konsentrasi ekstrak
Avicennia alba % Ulangan I II III 90 - - - 80 + + + 70 + + + 60 + + + 50 + + + 40 + + + 30 + + + 20 + + + 10 + + + Kontrol negatif + + + Kontrol positif - - - Keterangan : +
: Ada pertumbuhan bakteri
-
: Tidak ada pertumbuhan bakteri
Smith,  A.  H.,  Zoetendal,  E.,  &  Mackie,  R.  I.  (2005). Bacterial  mechanism  to  overcome  inhibitory effects  of  dietary  tannins. Microbiology  Ecology , 50:197-205 Withanawasam,  D.  M.  (2002).  Preliminary  Invitro Screening  of  Antibacterial  and  Anti-Fungal Compounds  of  Mangrove  Plant  Extracts  for Pathogens From Different Sources