Gambaran Fisiologis Kadar Kolesistokinin Tikus Wistar ( Rattus norvegicus ) Jantan Umur 1 Bulan
The Physiological Overview Levels of Cholecystokinin on 1-Month-Old Male Wistar Rats (Rattus norvegicus)
Amelia Hana * , Claude Mona Airin Departemen Fisiologi Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada. Jl. Fauna No. 2, Karangmalang, Yogyakarta 55281 Tel/Fax: +62 274 560864. *Email : hana_amy@ugm.ac.id
Diterima 27 Februari 2018 / Disetujui 16 Maret 2018

## ABSTRAK
Peran  fisiologis  kolesistokinin  (CCK)  adalah  pengendalian  fungsi  gastrointestinal.  Kolesistokinin  akan disekresikan oleh sel endokrin usus sebagai respons terhadap makan yang kekurangan atau kelebihan lipid dan protein. Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui gambaran fisiologis kadar kolesistokinin tikus  Wistar  umur  1  bulan. Dua  puluh  ekor  tikus  Wistar  ( Rattus  norvegicus )  jantan,  umur  1  bulan, diadaptasikan  selama  7  hari  dalam  kandang  individu  dengan  pakan  AD  II  dan  minum  air ad  libitum . Kemudian dilakukan penimbangan berat badan dan pengambilan darah lewat vena orbitalis untuk pengukuran kadar  CCK  plasma,  kadar  glukosa  darah,  dan  kadar  kolesterol  darah.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa berat badan rata-rata tikus adalah 54,6+3,36 gram, kadar kolesistokinin 259,61+104,60 pg/mL, kadar glukosa darah  125,35+20,36  m g / d L   d a n   k a d a r   kolesterol  74,5+14,73  m g / d L .  Setelah  dianalisis  korelasi disimpulkan bahwa pada tikus jantan normal umur 1 bulan kadar CCK plasma tidak berkorelasi dengan kadar glukosa darah dan kadar kolesterol darah.
Kata kunci : kolesistokinin, glukosa, kolesterol, berat badan, tikus jantan

## ABSTRACT
The  physiological  role  of  cholecystokinin  is  to  control  of  gastrointestinal  function.  Cholecystokinin  (CCK) will  be secreted by intestinal endocrine cells in response to eating that deficient or excess lipid and protein. The purpose of this study was to determine the physiological picture of cholecystokinin level on rats. Twenty rats of male Wistar ( Rattus norvegicus ), 1 month of age, were adapted for 7 days in individual cages with AD II feed and drinking ad libitum water. Then weigh the body weight and blood collection through orbital veins for  measurement  of  plasma  CCK  levels,  blood  glucose  levels,  and  blood  cholesterol  levels.  The  results showed that the average body weight of rats was 54.6 + 3.36 gram, cholecystokinin 259,61 + 104,60 pg/ mL, blood glucose level 125,35 + 20,36 mg/ dL and cholesterol 74 , 5 + 14,73 mg/ dL. After correlation analysis can be concluded that in normal male rat 1 month plasma CCK level not correlated with blood glucose levels and blood cholesterol levels.
Keywords : cholecystokinin, glucose, cholesterol, body weight, male rats

## PENDAHULUAN
Kolesistokinin (CCK) adalah hormon gastrointestinal, mempunyai fungsi terhadap gastrointestinal  dan  imunoregulasi.  Kolesistokinin dapat  digunakan  sebagai  bahan  ajuvan  untuk memodulasi  respon  inflamasi  dan  mencegah komplikasi  sistemik  selama  sepsis.  Peningkatan
kadar  CCK  plasma  pada  syok  endotoksik  untuk mencegah  kardiovaskular  kolap  dan  hipoperfusi jaringan (Saia et al , 2014).
Peran  utama  CCK  sebagai  hormon  dan neuropeptida, secara perifer dalam sistem gastrointestinal  dan  secara  sentral  pada  sistem saraf  dalam  pengaturan  kenyang,  kecemasan,  dan sistem neuroendokrin, dalam penyesuaian parakrin
dari sekresi aldosteron (Malendowicz et al., 2001; Poosti et al ., 2000). Peran fisiologis lain dari CCK adalah pengendalian fungsi gastrointestinal melalui integrasi penyerapan nutrisi dan metabolisme  nutrisi  melalui  stimulasi  sekresi endokrin  pankreas  dan  pertumbuhan  pankreas (Chowdhury dan Rayford, 2001).
Pada mamalia, kolesistokinin (CCK) disekresikan  dalam  berbagai  jaringan,  termasuk saluran  pencernaan  (duodenum  dan  usus  halus) dan  sistem  saraf  perifer  dan  pusat  (Sekiguchi, 2016; Agersnap dan Rehfeld, 2015). Kolesistokinin  yang  bekerja  pada  serabutt  aferen vagal  memediasi  berbagai  fungsi  fisiologis. Aktivasi  vagal  afferent  CCK  meningkatkan ingatan afektif terkait viseral (Cao et al., 2012).
Pengukuran  kadar  kolesistokinin  normal pada  tikus  jantan  umur  1  bulan  disertai  dengan berat  badan,  kadar  glukosa  darah  dan  kadar kolesterol  darah  belum  lengkap  dilaporkan, sehingga  data  yang  diperoleh  dapat  menjadi informasi  untuk  penelitian  terhadap  perubahan pemberian  lemak  dan  protein  dalam  makanan tikus.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  kandang  tikus individu  ukuran  13x24x16  cm 3 lengkap  dengan tempat  makan  dan  tempat  minum; Rat CCK (Cholecystokinin)  Elisa  kit, Finetest ,  China,  No. Katalog  ER0372  untuk  menentukan  kadar  CCK plasma  tikus;  Accu-chek®  Advantage,  Roche Diagnostic,  Germany  untuk  menentukan  kadar glukosa  darah;  dan  Cholesterol  FS.  DiaSys Diagnostic  Systems  GmbH.  Germany  untuk menentukan kadar kolesterol darah.
Bahan yang digunakan adalah 20 ekor tikus Wistar  ( Rattus  norvegicus )  jantan,  umur  1  bulan yang  diperoleh  dari  Unit  Pengembangan  Hewan Percobaan  (UPHP)  UGM;  pakan  tikus  AD  II (comfeed  Pars  53%  dengan  kandungan  air  12%, protein  11%,  lemak  4%,  serat  7%,  abu  8%,  Ca 1,1%,  fosfor  0,9%,  antibiotika,  coccidiostat  53%, tepung  terigu  23,5%,  dan  air  23,5%,  produksi  PT Japfa Comfeed Indonesia, Sidoharjo).

## Cara Perlakuan Hewan Uji
Dua  puluh  ekor  tikus  jantan,  umur  1  bulan diadaptasikan  selama  7  hari  dalam  kandang individu  pada  suhu  rata-rata  sekitar  24-26°C, kelembaban rata-rata 58-62%, dan diterangi lampu neon.  Pakan  yang  diberikan  adalah  pakan  AD2A (produksi  PT  Japfa  Comfeed  Ind,  Tbk  Unit Sidoharjo)  dalam  bentuk  pelet  dan  air  bersih  ad libitum.  Setelah  adaptasi  dilakukan  penimbangan berat  badan  dan  pengambilan  darah  lewat  vena orbitalis  untuk  pengukuran  kadar  kolesistokinin (CCK) plasma, dan pengambilan darah lewat vena coccigea  untuk  mengukur  kadar  glukosa  darah, dan kadar kolesterol darah.

## Analisis Data
Data berat badan, kadar CCK plasma, kadar glukosa  darah,  kadar  kolesterol  darah  dianalisis korelasi  dengan  menggunakan  uji  PearsonSPSS 16.

## Menentukan kadar kolesistokinin
Metode  pengukuran  CCK  menggunakan enzym-linked  immunosorbent  assay (Elisa)  sesuai prosedur manual Fine test rat CCK ( Cholecystokinin )  Elisa  Kit  Cat.  No.  ER0372 sebagai  berikut  :  Larutan  0,1  mL  standard  1000 pg/mL,  500  pg/mL,  250  pg/mL,  125  pg/mL,  62.5 pg/mL,  31.25  pg/mL,  15.6  pg/mL  dimasukkan  ke dalam  standard  sumuran.  Ditambah  0.1  mL sampel/ standard  dilution  buffer ke  dalam  kontrol (zero)  well.  Ditambah  0.1  mL  plasma  ke  dalam sampel sumuran. Plate ditutup dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 o C selama 90 menit. Penutup dan  isi  plate  dibuang,  plate  ditepuk  di  atas  kertas saring  penyerap.  0.1  mL  Larutan Biotin-detection antibody yang  telah  diencerkan  ditambahkan  ke atas sumuran (standard, sampel dan zero sumuran). Plate  ditutup  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  60  menit.  Penutup  dibuang,  dan  plate dicuci 3x dengan larutan Wash Buffer . Ditambahkan  0.1  ml  larutan  SABC  yang  telah diencerkan  ke  dalam  masing-masing  sumuran, plate ditutup dan diinkubasi 37 o C selama 30 menit. Penutup  dibuang  dan  dicuci  5x  dengan  larutan Wash  Buffer ,  dan  pada  tiap  kali  pencucian larutan
dibiarkan  berada  di  sumuran  selama  1-2  menit. Ditambahkan 90µL larutan TMB substrat ke dalam setiap  sumuran,  plate  ditutup  dan  diinkubasi  37 o C pada ruang gelap selama 15-30 menit. Ditambahkan 50 µL larutan stop ke dalam masing- masing  sumuran  dan  dicampur  merata.  Warna akan  segera  berubah  menjadi  kuning.  Absorbansi O.D.  dibaca  pada  450nm  dengan elisa  reader segera  setelah  penambahan  larutan  stop.  Untuk kalkulasi,  (O.D.  450  relatif)  =  O.D.450  setiap sumuran  -  O.D.450  sumuran  kontrol.  Kurve standard  dapat  diplott  sebagai  O.D.  450  relatif setiap  larutan  standard  (Y)  vs.  Masing-masing konsentrasi larutan standard (X). Konsentrasi CCK sampel dapat diinterpolasi dari kurva standar.

## Menentukan kadar glukosa darah
Metode  pengukuran  kadar  glukosa  darah sesuai prosedur manual Roche REF 0 5234441021ACCU-Chek Active  Blood  Glucose Meter sebagai berikut : sampel darah yang diambil lewat  vena  orbitalis  disentuhkan  pada  strip
glukometer  digital.  Setelah  5  detik  kadar  glukosa darah  akan  terbaca  di  layar  glukometer  digital. Satuan  kadar  glukosa  darah  dinyatakan  dalam mg/dL (Anonimus, 2008).

## Menentukan kadar kolesterol darah
Metode  pengukuran  kadar  kolesterol  sesuai dengan prosedur CHOD-PAP : Enzymatic Photometric  Test sebagai  berikut  :  larutan  blank dan  larutan  standar/sampel  disiapkan  sebagai berikut  :  larutan  blank  dibuat  dengan  cara mencampur  10  µL  aquasdes  dengan  1000  µL reagen  kolesterol;  Larutan  standar  disiapkan dengan  mencampur  10  µL  larutan  standar  dengan 1000 µL reagen; Larutan sampel disiapkan dengan mencampur 10 µL larutan sampel dengan 1000 µL reagen.  Larutan  blank,  larutan  standar,  larutan sampel  diinkubasi selama  20 menit pada suhu 20- 25 o C.  Absorbansi  larutan  blank,  larutan  standar dan larutan sampel dibaca pada panjang gelombang 500 nm.

## Konesentrsi kolesterol sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengukuran  berat  badan  tikus,  kadar CCK,  kadar  glukosa  darah  dan  kadar  kolesterol darah  disajikan  pada  Tabel  1  dan  Gambar  1. Menurut  Saia et  al .  (2014),  tikus  Wistar  dengan rata-rata  berat  badan  241,08  +  9,07  gram,  maka kadar  CCK  adalah  28,23  +  13,39  pg/mL,  dan menurut  Johnson-Delaney  (1996)  dan  Sharp  dan Regina  (1998),  kadar  normal  glukosa  darah  tikus adalah  80  -300  mg/dL,  kadar  kolesterol  darah adalah  50-135  mg/dL.  Hasil  penelitian  ini  (Tabel 1)  menunjukkan  bahwa  berat  badan  rata-rata 54,60+3,36 gram, kadar CCK adalah 259,61+104,60,  kadar  glukosa  darah  tikus  adalah 125,35+20,36  m g / d L   d a n   kadar  kolesterol 74,5+14,73  m g / d L .   Adanya  perbedaan  ini, menurut  Prinz  dan  Andreas  (2017),  Perry  dan Wang (2012) disebabkan karena adanya pengaturan  asupan  makanan.  Pengaturan  asupan makanan merupakan faktor terpenting yang terlibat dalam  pengendalian  berat  badan.  Kolesistokinin
disekresikan  sebagai  pengontrol  makanan  di gastrointestinal  yang  sangat  dipengaruhi  oleh nutrisi yang ditelan.
Hasil  analisis  korelasi  antara  berat  badan, kadar  kolesistokinin  plasma,  kadar  glukosa  darah dan  kadar  kolesterol  darah  tikus  menunjukkan, bahwa  CCK  dengan  glukosa  tidak  berkorelasi (p>0,528), Glukosa dengan CCK tidak berkolerasi (p>0,528),  glukosa  dengan  kolesterol  tidak berkorelasi  (p>0,913),  kolesterol  dengan  CCK tidak  berkorelasi  (p>0,0,217),  kolesterol  dengan glukosa  tidak  korelasi  (p>0,913)  Jadi  pada  tikus Wistar normal umur 1 bulan CCk tidak berkorelasi dengan glukosa dan kolesterol.
Kolesistokinin disekresikan oleh sel endokrin usus sebagai respons terhadap pemberian lipid  dan  protein,  serta  bertanggung  jawab  untuk kontraksi  kandung  empedu  dan  sekresi  enzim pankreas  yang  penting  untuk  penyerapan  nutrisi. Kolesistokinin  disekresikan  secara  lokal  atau  ke dalam  darah  mengikat  reseptor  spesifik  pada
kantong empedu, pankreas, lambung, atau berbagai  saraf  untuk  merangsang  kontraksi kandung empedu, sekresi enzim pankreas, menunda  pengosongan  lambung,  mengatur  rasa kenyang, dan mempotensiasi sekresi insulin (King et al. , 2015; Liddle et al . 2017)
Pada  tikus  CCK  penting  dalam  mengatur asupan  makanan,  karena  CCK  mempengaruhi fungsi pankreas sebagai respons terhadap makanan (Chowdhury  dan  Rayford,  2001).  Kurangnya asupan  lemak  atau  protein dalam  diet,  maka  CCK disekresikan  (Washington  et  al.,  2016).  Sekresi CCK  dimulai  saat  makanan  meninggalkan lambung  dan  memasuki  usus  halus  (duodenum) sampai  protein,  lemak,  dan  metabolitnya  telah melewati  usus  halus  bagian  atas  (Liddle et  al ., 2017), sementara  itu  hormon peptide  tyrosine tyrosine ( PYY ) dan Glucagon like peptide 1 (GLP-
1)  dilepaskan  saat  nutrisi  berlanjut  melalui  usus. Hal  ini  mengarah  pada  kontak  langsung  nutrisi dengan sel enteroendokrin untuk memicu pelepasan anorexigenik yaitu peptida. Kolesistokinin  terutama  distimulasi  oleh  lipid  dan protein yang dicerna, sementara glukosa intraduodenal hanya memberikan sedikit peningkatan  CCK  yang  bersirkulasi  pada  hewan yang  sehat.  Lipid  terutama  asam  lemak  dengan lebih dari 12 karbon (oleat) atau protein yang tidak terhidrolisis  dan  sebagian  terhidrolisis  (inhibitor tripsin  atau  penghambat  tripsin)  merangsang sekresi  CCK  (Prinz  dan  Andreas,  2017),  sehingga CCK memainkan peran penting dalam transportasi dan  metabolisme  lipid,  homeostasis  glukosa  dan homeostasis  energi  antara  asupan  makanan  dan pengeluaran energi (King et al. , 2015).
Tabel 1.  Data berat badan, kadar kolesistokinin plasma, kadar glukosa darah dan kadar kolesterol darah tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan, umur 1 bulan
No. Tks Berat Badan (gram) Kadar  kolesistokinin ( p g / m L ) Kadar glukosa (mg/dL) Kadar Kolesterol ( m g / m L ) 1 53,6 178,39 100 48,7 2 54,2 279,68 104 44,3 3 55,8 456,40 88 58,2 4 55,2 482,15 142 63,8 5 58,8 375,41 115 59,3 6 54,6 289,52 158 76,3 7 57,5 251,80 159 66,6 8 50,4 360,70 157 40,2 9 53,3 296,73 122 85,8 10 45,4 245,89 133 55,4 11 53,5 337,68 139 90,1 12 58,0 273,29 117 66,8 13 54,7 157,39 144 61,4 14 57,1 163,39 135 63,3 15 57,0 127,31 116 75,8 16 51,7 111,48 103 83,7 17 56,1 135,00 106 83,8 18 58,2 227,91 121 62,2 19 60,1 193,37 119 98,9 20 56,3 248,83 129 76,5 X+SD 54,60+3,36 259,61+104,60 125,35+20,36 74,50+14,73
0 10 20 30 40 50 60 70 0 100 200 300 400 500 600 700 800 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920 B E R A T B A D A N
G L U K O SA , K O L E ST E R O L , CCK TIKUS Kadar Kolesterol Kadar glukosa
Gambar 1. Grafik  korelasi  antara  berat  badan,  kadar  kolesistokinin  plasma,  kadar  glukosa  darah  dan  kadar kolesterol darah tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan, umur 1 bulan
Saraf  yang  terlibat  dalam  pengendalian asupan  makanan  dan  berat  badan.  Respons  CCK terhadap  makanan  lipid  diet  penting  untuk transportasi  lipid  dan  pengeluaran  energi  untuk mengendalikan  berat  badan. Apabila  CCK mengalami peningkatan, maka dapat menyebabkan duodenum  menurunkan  produksi  glukosa  dari perubahan peningkatan sirkulasi insulin.
Selanjutnya  CCK  duodenum  memerlukan  aktivasi usus  reseptor  CCK  dan  aksis  saraf  usus-otak-hati untuk  menurunkan  produksi  glukosa  (Bi  dan Moran, 2016).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pada  tikus  normal  kadar  CCK  plasma  tidak berkorelasi dengan kadar glukosa darah dan kadar kolesterol darah. Diharapkan pada penelitian lebih lanjut dengan  pengaturan kekurangan atau kelebihan  asupan  makanan  yang  mengandung lemak  atau  protein  akan  diperoleh  kejelasan keterkaitan  antara  CCK  dengan  glukosa  dan kolesterol.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  berat badan rata-rata tikus adalah 54,6+3,36 gram, kadar kolesistokinin 259,61+104,60 pg/mL, kadar glukosa darah 125,35+20,36  m g / d L   d a n   k a d a r kolesterol  74,5+14,73  m g / d L .  Disimpulkan bahwa pada tikus normal umur 1 bulan kadar CCK
plasma  tidak  berkorelasi  dengan  kadar  glukosa darah dan kadar kolesterol darah.

## DAFTAR PUSTAKA
Agersnap,  M.,  Rehfeld,  J.F.  2015.  Nonsulfated cholecystokinins  in  the  small  intestine  of pigs and rats. J . Peptides . 71:121-127
Anonimus.  2008.  ACCU-CHEK  Active  Blood Glucose  Meter.  Roche  Diagnostics  GmbH. Sandhofer  Strasse  116  68305  Mannzheim Germany.
Anonimus. 2009. Cholesterol FS. DiaSys Diagnostic  Systems  GmbH.  Alte  Strasse  9 65558 Holzheim Germany.
Bi,  S.,  Moran,  T.H.  2016.  Obesity  in  the  otsuka long evans tokushima fatty rat: mechanisms and discoveries. Front. Nutr. 3:21.
Cao,  B.,  Zhang,  X.,  Yan,  Ni.,  Chen,  S.,  Li,  Y. 2012.  Cholecystokinin  enhances  visceral pain-related  affective  memory  via  vagal afferent  pathway  in  rats. Molecular  Brain.
2012. 5:19.
Chowdhury, P., Rayford, P.L. 2001. Effect of food restriction  on  plasma  cholecystokinin  levels and exocrine pancreatic function in rats. Ann Clin Lab Sci Fall . 31(4)376-382.
Johnson-Delaney, C. 1996. Exotic animal
companion medicine handbook for veterinarians. Zoological Education Network. http://www.ratfanclub.org/values.h tml
King,  A.,  Yang,  Q.,  Huesman,  S.,  Rider,  T,  Lo,
C.C. 2015. Lipid transport in
cholecystokinin  knockout  mice. Physiology & Behavior. 151:198-206. Liddle,  R.A,  Lamont,  J.T.,  Grover,  2017. Physiology of
cholecystokinin. https://www.uptodate.com/c ontents/physiologycholecystokinin#H13015 1371
Malendowicz,  L.K,  Nowak,  M.,  Gottardo,  L.,
C.T.M., Nussdorfer, G.G. 2001. Cholecystokinin stimulates aldosterone secretion from dispersed rat zona glomerulosa cells, acting through
cholecystokinin  receptors  1  and  2  coupled with the adenylate cyclase-dependent cascade. Endocrinol . 142, 10, 4251–4255.
Perry, B., Wang, Y. 2012. Appetite regulation and weight  control:  the  role  of  gut  hormones.
J.Nutrition and Diabetes , 2, p.26.
Poosti,  R.,  di  Malta,  L.,  Gagne,  D.,  Bernad,  N., Galleyrand,  J.C,  Escrieut,  C.,  Silvente-
Poirot,  S.,  Fourmy,  D.,  Martinez,  J.  2000. The third intracellular loop of the rat and mouse cholecystokinin-A  receptors  is  responsible  for different patterns of gene activation. Molecular Pharmacol 58(6):1381-1388.
Prinz, P., Andreas, A. 2017. control of food intake by  gastrointestinal  peptides:  mechanisms  of action  and  possible  modulation  in  the treatment of obesity. Journal of
Neurogastroenterology  and  Motility,  23(2):
180-196.
Saia,  R.S.,  Mestriner,  F.L.,  Bertozi,  G.,  Cunha, F.Q.,  Cárnio,  E.C.  2014.  Cholecystokinin inhibits  inducible  nitric  oxide  synthase expression by lipopolysaccharide-stimulated peritoneal
macrophages. J.Mediators Inflamm. 2014.
Sekiguchi,  T.  2016.  Comparative  endocrinology for basic and clinical research. Handbook of hormones. P.177–178, e20B-1–e20B-3.
Sharp, P.E., LaRegina, M.C. 1998. The laboratory RAT. CRC Press LLC. Boca Raton, Boston, London, New York, Washington, DC. p.16.
Washington,  M.C.,  Mhalhal.T.R.,  Sayegh,  A.I. 2016 Cholecystokinin-33, but not
cholecystokinin-8 shows gastrointestinal site specificity in regulating feeding behaviors in male  rats. Hormones  and  Behavior .  85:36- 42.