## UJI DAYA HAMBAT INFUS DAUN BELIMBING  WULUH (Averrhoa bilimbi) TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus  aureus
Mardiah 1)
1) Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar Alamat Korepondensi: mardiah.diomks77@gmail.com

## Abstrak
Staphylococcus  aureus  adalah  bakteri  kokus  gram  positif  yang  sering  ditemukan  sebagai  flora normal pada kulit dan selaput  lendir manusia. Infeksi Staphylococcus aureus akan menyebabkan penyakit  dengan  tanda-tanda  yang  khas,  yaitu  peradangan,  nekrosis,  pembentukan  abses,  dan furunkel  ringan  pada kulit. Contohnya ialah jerawat  pada wajah. Telah  dilakukan penelitian uji daya  hambat  metode  difusi  agar  berlapis  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri infus  daun  belimbing  wuluh  (Averrhoa  bilimbi)  terhadap  pertumbuhan  Staphylococcus  aureus. Penelitian ini dilakukan secara  eksperimental dengan  menggunakan  4  konsentrasi  infus  daun belimbing  wuluh,  yaitu  20%,  40%,  60%,  dan  80%,  serta  larutan  pembanding  kontrol  positif (Tetrasiklin  30  bpj)  dan  larutan  pembanding  kontrol  negatif  (aquadest  steril)  dengan  masa inkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  infus  daun belimbing  wuluh  dengan  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  dan  80%  tidak  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  Staphylococcus  aureus  karena  tidak  terbentuk  zona  hambat  disekitar pencadang pada media MHA.
Kata  Kunci:  Daun  Belimbing  Wuluh,  Metode  Difusi  Agar  Berlapis, Staphylococcus  aureus

## P ENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara  yang  kaya  akan  tumbuhan  obat dengan  keanekaragaman  hayati  tertinggi ke-2  di  dunia  setelah  Brazili.  Indonesia memiliki  berbagai  jenis  tumbuhan  yang jumlahnya  mencapai  28.000  jenis  dan telah  diketahui  7.000  jenis  bermanfaat sebagai obat-obatan (Pramono, 2002).
Terdapat  20  jenis  tanaman  yang dianjurkan  oleh  Departemen  Kesehatan (Depkes)  sebagai  tanaman  obat  keluarga (toga).  Selain  jambu  biji,  jahe,  kencur, dan  bawang,  belimbing  wuluh  juga termasuk  salah  satu  dari  20  macam  obat terpenting yang perlu ada dalam pekarangan  rumah  (Sarwono,  2001). Salah satu tumbuhan khas Indonesia yang dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional adalah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi).
Selain  digunakan  oleh  ibu-ibu rumah  tangga  sebagai  bumbu  ikan, penyedap  makanan  pengganti  cuka,  dan penghilang  noda-noda  pada  pakaian, belimbing wuluh juga berkhasiat menyembuhkan  beberapa  penyakit  pada manusia. Dalam beberapa literatur disebutkan bahwa belimbing wuluh
berkhasiat  untuk  menurunkan  kadar kolesterol, mencegah kanker, dan memperlancar pencernaan. Bahkan belimbing wuluh sering digunakan sebagai  obat  encok,  hipertensi,  batuk, gondongan,  rematik,  gusi  berdarah,  sakit gigi  berlubang,  sariawan,  panu,  dan menghilangkan noda-noda atau jerawat di wajah (Rukmana, 1996).
Kandungan  kimia  yang  terdapat pada belimbing wuluh adalah asam sitrat, asam  askorbat,  saponin,  tanin,  glikosida, flavanoid,  dan  polifenol  (Mulyani  dan Gunawan,  2001).  Belimbing  wuluh  juga mengandung senyawa kimia asam oksalat dan  kalium.  Di  samping  itu,  daun belimbing wuluh juga mengandung ekstrak  untuk  melawan Staphylococcus (Thomas, 1998). Bakteri Staphylococcus adalah
kuman  yang  sering  ditemukan  sebagai flora normal pada kulit dan selaput lendir pada  manusia.  Salah  satu  spesiesnya adalah Staphylococcus  aureus. Setiap jaringan maupun alat tubuh yang diinfeksi oleh Staphylococcus aureus akan
menyebabkan  penyakit  dengan  tanda- tanda  yang  khas,  yaitu  peradangan, nekrosis, dan pembentukan abses.
Infeksinya  dapat  berupa  furunkel  yang ringan  pada  kulit  sampai  berupa  suatu piemia yang fatal (Chatib, 1994). Furunkel  yang  ringan  pada  kulit  bisa berupa jerawat pada wajah.
Salah  satu  pengobatan  tradisional untuk  mengobati  jerawat  ialah  dengan menggunakan  daun  belimbing  wuluh, caranya  ialah:  daun  belimbing  wuluh ditumbuk  halus,  kemudian  ditambahkan garam  secukupnya.  Campuran  kedua bahan  tersebut  kemudian  digunakan sebagai  bedak  pada  bagian  wajah  yang berjerawat  (Thomas,  1998).  Penelitian  uji sensitivitas ekstrak daun belimbing wuluh terhadap pertumbuhan bakteri telah banyak dilakukan sebelumnya. Penelitian- penelitian  tersebut  dilakukan  dengan menggunakan  proses  ekstraksi  dengan pelarut-pelarut  organik,  seperti  pelarut etanol dan methanol.
Penelitian uji sensitivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus sebelumnya  telah  dilakukan  oleh Siti  Nur  Aida  (2012),  didapatkan  hasil rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak etanol  daun  belimbing  wuluh  konsentrasi 1mg/sumuran sebesar 9,2 mm, 2 mg/sumuran  sebesar10,3  mm,  dan  4 mg/sumuran sebesar 10,3 mm. Mengingat  adanya  potensi  dari
daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi)
sebagai  antibakteri, maka perlu dilakukan penelitian  uji  daya hambat  bakteri menggunakan sampel yang tidak diekstraksi dengan pelarut organik, melainkan  dengan  cara  lain  untuk memperoleh  ekstrak,  yaitu  dengan  cara direbus (infus). METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat yang digunakan adalah
penangas  air,  beaker  glass,  tabung  reaksi, sendok  tanduk,  corong  steril,  bunsen, batang  pengaduk,  timbangan  analitik, cawan  petri,  pencadang,  autoklaf,  labu ukur,  inkubator,  lemari  es,  mistar  geser, ose, rak tabung, pinset, pipet volume, kain kasa steril, thermometer, dan oven.
Bahan yang digunakan daun
belimbing  wuluh (Averrhoa  bilimbi) ,
koloni Staphylococcus  aureus, Larutan
Mc  Farland  0,5%,  Media NA,  media MHA  (Mueller  Hinton  Agar),  NaCl fisiologis, Aquadest, antibiotik tetrasiklin, dan kapas.
Prosedur Penelitian

## Pembuatan infus
Sampel  daun  belimbing  wuluh (Averrhoa  bilimbi) diambil  dari  pohon  di pagi  hari  sekitar  jam  07.00-09.00  WITA dicuci  bersih  kemudian  dikeringkan dengan cara diangin-anginkan dan dipotong kecil-kecil. Infus  adalah  cairan  yang  dibuat dengan cara mengekstrak simplisia dengan  air  pada  suhu  90 o C  dalam  15 menit.  Pembuatan  infus  daun  belimbing wuluh  dengan  konsentrasi  100%  sesuai tahap:  200  gr  daun  ditimbang  dengan timbangan  analitik  kemudian  diletakkan pada  panci  infus,  lalu  ditambahkan  500 ml  aquadest,  kemudian  dipanaskan  15 menit  pada  suhu  90 o C,  setelah  itu  larutan disaring menggunakan kain flanel steril.
Konsentrasi infusium 100% selanjutnya,  diencerkan  menggunakan aquadest  steril  sesuai  konsentrasi  20%, 40%, 60%, dan 80%. Pembuatan larutan pembanding kontrol negatif (aquadest steril) Larutan pembanding kontrol
negatif  aquadest  steril  dibuat  dengan  cara sebagai  berikut:  dimasukkan  100  ml aquadest  kedalam  erlenmeyer,  ditutup dengan menggunakan alumunium foil dan disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf suhu 121 o C selama 15 menit.
Pembuatan larutan pembanding kontrol positif (tetrasiklin) Larutan  kontrol  positif  (tetrasiklin)
dibuat  dalam  30  bpj  dengan  cara  sebagai berikut:  ditimbang  50  mg  tetrasiklin  dan dilarutkan  dengan  25  ml  aquadest  steril (100  bpj)  sebagai  larutan  stok  I,  dipipet 2,5  ml  larutan  stok  I  dan  dicukupkan volumenya dengan aquadest hingga 25 ml (50  bpj)  sebagai  larutan  stok  II,  dan dipipet  7,5  ml  larutan  stok  II  dan dicukupkan  volumenya  dengan  aquadest hingga 25 ml (30 bpj).
Pembuatan media NA (Nutrient Agar) Media NA sebanyak 0,56 gr dibuat dalam  20  ml  aquadest,  diatur  PH  7,0, larutan  dihomogenkan  menggunakan  hot
plate  pada  suhu  ±  100 o C,  kemudian disterilisasi menggunakan autoclave, selanjutnya larutan kemudian dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  dan  dibiarkan hingga membeku.
Pembuatan media MHA (Mueller

## Hilton Agar)
Media  MHA  sebanyak  4,56  gr dibuat  dalam  120  ml  aquadest,  diatur  PH 7,0,  larutan  dihomogenkan  menggunakan hot  plate  pada  suhu  ±  100 o C,  larutan kemudian dipipet  20  ml, dan dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  dan  dibiarkan hingga membeku.
Sebanyak  20 ml MHA cair ditambahkan  dengan  20µl  bakteri  uji
Staphylococcus  aureus ,  dihomogenkan dan  dituang  ke  dalam  cawan  petri  secara merata.
Pembuatan suspensi uji bakteri
Bakteri  yang  telah  diremajakan pada media NA diinkubasi selama 24 jam pada  suhu  37 o C,  diambil  1  mata  ose  lalu dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  steril yang berisi larutan NaCl 0,9% sebanyak 5 ml,  dihomogenkan.  Suspensi  uji  awal dibuat  setara  kekeruhan  0,5  Mc  Farland (kekeruhan  campuran  Barium  sulfat  dan HCl)  atau  sebanding  dengan  jumlah bakteri  1.10 8 CFU/ml  (Colony  Forming Units)  atau  250-300  koloni  dalam  media padat.
Pengujian  daya  hambat  infus  dengan metode difusi agar berlapis
Media  MHA  dituang  secara  aseptis ke  dalam  cawan  petri  sebanyak  20  ml, dibiarkan  membeku,  sebagai  base  layer. Selanjutnya,  dimasukkan  suspensi  bakteri uji  sebanyak  20µl  ke  dalam  media  MHA cair  dan  dituang  diatas  base  layer, dibiarkan menjadi setengah padat, sebagai lapisan pembenihan (seed layer).
Pencadang  berukuran  ±  8  mm diletakkan  diatas  seed  layer  dengan menggunakan  pinset,  diukur  jarak  antar pencadang  dalam  satu  cawan  petri  ±  2-3 cm. Pengujian aktivitas antibakteri selanjutnya  dilakukan  dengan  pencadang diisi  dengan  masing-masing  konsentrasi infus  daun  belimbing  wuluh,  yaitu  20%, 40%,  60%,  dan  80%,  diisi  juga  dengan larutan pembanding kontrol positif (Tetrasiklin)  dan  larutan  pembanding
kontrol negatif (Aquadest steril).
Selanjutnya,  diinkubasi  selama  1  x 24 jam pada suhu 37 o C dan diukur daerah zona hambatan disekitar pencadang dengan menggunakan mistar geser. Pengujian diulang sebanyak 3 kali.

## Analisis Data
Data dari penelitian ini akan diolah secara  deskriptif  dan  disajikan  dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian berupa pengukuran  diameter  zona  hambat  infus daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) terhadap  pertumbuhan  bakteri
Staphylococcus aureus yang dilakukan di Balai  Besar  Laboratorium Kesehatan (BBLK) Makassar dengan masa inkubasi 24  jam.  Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) dapat dilihat sebagai berikut: Tabel  1.Diameter  Zona  Hamba  Infus Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa  bilimbi)  Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus. Antibakteri Konsentrasi Rata-rata Diameter Zona Bening (mm) Infus Daun Belimbing Wuluh 20% 0.0 40% 0.0 60% 0.0 80% 0.0 Tetracycline 30 bpj 25
Penelitian  uji  daya  hambat  infus daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus dilakukan secara  eksperimental dengan  menggunakan  metode  difusi  agar berlapis yang bertujuan untuk mengetahui kemampuan infus
daun dalam menghambat pertumbuhan bakteri.
Dalam  penelitian  ini,  digunakan infus daun belimbing wuluh, karena daun belimbing  wuluh (Averrhoa  bilimbi) diketahui  mengandung  senyawa-senyawa fenol yaitu flavanoid, tanin, dan triterpenoid  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Contohnya  adalah bakteri Staphylococcus aureus. Bakteri ini
merupakan  bakteri  kokus  gram  positif yang  sering  ditemukan  sebagai  bakteri flora normal pada kulit dan selaput lendir manusia.  Infeksi Staphylococcus  aureus akan  menyebabkan  penyakit  dengan tanda-tanda  yang  khas,  yaitu  peradangan, nekrosis, pembentukan abses, dan furunkel  ringan  pada  kulit.  Contohnya ialah  jerawat  pada  wajah.  Jerawat  pada wajah ini dapat diobati dengan menggunakan  daun  belimbing  wuluh yang telah dihaluskan. Pengujian  daya  hambat  infus  daun belimbing  wuluh (Averrhoa bilimbi) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, dilakukan di Balai Besar Laboratorium Kesehatan Makassar.
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  infus  daun  belimbing  wuluh.
Infus  merupakan  salah  satu  proses penyarian simplisia nabati dengan menggunakan  aquadest  sebagai  pelarut pada  suhu  90 o C  selama  15  menit.  Proses pembuatan  infus  ini  diawali  dengan menimbang  daun  belimbing  wuluh  yang telah  dicuci  dan  dipotong  kecil-kecil sebanyak 200 gram kemudian ditambahkan  dengan  500  ml  aquadest steril. Dipanaskan diatas penangas hingga mencapai  suhu  90 o C  dan  suhu  ini  dijaga tetap  konstan  selama  15  menit.  Setelah proses  tersebut,  filtrat  atau  cairan  infus kemudian  dipisahkan  dari  ampas  daun belimbing  wuluh  dengan  cara  cairan dimasukan  kedalam  wadah  yang  steril. Infus daun belimbing wuluh ini kemudian dibagi  menjadi  4  konsentrasi  yaitu  20%, 40%, 60%, dan 80%.
Kontrol  positif  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah tetrasiklin HCl dibuat  dalam  30  bpj.  Hal  ini  didasarkan bahwa  antibiotik  ini  diketahui  dapat menghambat pertumbuhan sebagian besar bakteri gram positif maupun gram negatif. Kontrol  positif  juga  digunakan  untuk menguji  apakah  kultur  bakteri  yang digunakan  dalam  penelitian  masih  layak untuk di uji atau tidak. Sedangkan kontrol negatif  dalam  penelitian  ini,  larutan pembanding  yang  digunakan  adalah aquadest yang telah disterilkan.
Dalam  penelitian  ini,  metode  yang digunakan  yaitu  metode  difusi  agar
berlapis  yang  merupakan  modifikasi  dari metode difusi Kirby Bauer. Perbedaannya adalah  pada  cara  ini  menggunakan  dua lapis  agar.  Lapis  pertama  ( Base  Layer ) tidak  mengandung  mikroba,  sedangkan lapis  kedua  ( Seed  Layer )  mengandung mikroba  dan  menggunakan  pencadang berdiameter 8 mm. Pada proses pengujiannya  media  yang  digunakan adalah  media  MHA  (Mueller  Hilton Agar). Lapisan Base Layer dibuat dengan cara  menuang  20  ml  media  MHA  cair secara  aseptik  kedalam  cawan  petri  dan dibiarkan  membeku,  kemudian  lapisan
Seed Layer dibuat dengan cara memasukkan 20µl suspensi bakteri
kedalam  10  ml  MHA  cair  dalam  tabung kemudian  dituang  di  atas  lapisan  Base Layer  yang  telah  dibekukan.  Setelah  itu, diletakkan  6  pencadang  diatas  Seed Layer,  masing-masing  untuk  infus  daun dengan  konsentrasi  20%,  40%,  60%, 80%,  larutan  pembanding  kontrol  positif, dan kontrol  negatif.  Setelah  lapisan  beku, kemudian  dimasukkan  masing-masing 200µl  sampel  serta  kontrol  positif tetrasiklin  dan  kontrol  negatif  aquadest steril ke dalam pencadang.
Setelah  dilakukan  pengujian  pada media MHA, kemudian dilakukan inkubasi  selama  1  x  24  jam  pada inkubator  pada  suhu 37 o C.  Setelah  proses inkubasi,  dilakukan  pembacaan  hasil, yaitu  pengukuran  daerah  zona  hambatan yang terbentuk disekitar pencadang dengan  menggunakan  mistar  geser.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa infus daun belimbing  wuluh (Averrhoa    bilimbi) tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylocoocus  aureus. Hal  ini dapat  dilihat  dengan  tidak  terbentuknya zona  hambatan  disekitar  pencadang  yang berisi  masing-masing  konsentrasi  infus daun  belimbing  wuluh,  yaitu  20%,  40%, 60%,  dan  80%,  diameter  zona  hambat yang  dihasilkan  yaitu  sebesar  0,0  mm. Pada  kontrol  negatif  juga  tidak  terbentuk zona hambat disekitar pencadang sedangkan pada kontrol positif tetrasiklin, terbentuk zona hambatan dengan diameter rata-rata 25,0 mm.
Tidak  terbentuknya  zona  hambat disekitar  pencadang  pada  kontrol  negatif
dan terbentuknya zona hambat berdiameter  rata-rata  25,0  mm  pada kontrol positif menandakan bahwa prosedur penelitian telah dilakukan dengan  sebaik-baiknya  dan  dapat  dilihat bahwa  infus  daun  belimbing  wuluh dengan  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  dan 80%  tidak  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Meskipun  telah  diketahui  bahwa  di dalam  daun  belimbing  wuluh  terkandung senyawa-senyawa  fenol  yang  bersifat antimikroba,  hasil  penelitian  uji  daya hambat  infus  daun  belimbing  wuluh terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa proses penyarian dengan cara infus tidak  efektif  dalam  menghasilkan  ekstrak yang  kaya  akan  zat-zat  aktif  antimikroba dalam suatu simplisia nabati.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan pembahasan,  maka  dapat  disimpulkan bahwa  infus  daun  belimbing  wuluh
(Averrhoa  bilimbi) dengan  konsentrasi
20%,  40%,  60%,  dan  80%  tidak  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus karena  tidak terbentuk zona hambatan disekitar pencadang pada media pengujian. SARAN 1. Diharapkan kepada peneliti selanjutnya  untuk  mengembangkan penelitian bukan hanya menggunakan proses ekstraksi infus tetapi menggunakan  proses  eksraksi  lain dengan pelarut-pelarut organik. 2. Diharapkan kepada peneliti selanjutnya  untuk  mengembangkan penelitian terhadap identifikasi senyawa yang terkandung dalam daun belimbing wuluh yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. DAFTAR PUSTAKA Amriani  Arifin,  N.  2011. Uji  Daya
Hambat  Infus  Daun  Jambu  Biji (Psidium  guajava Linn)  Terhadap Pertumbuhan Escherichia coli (Karya  Tulis  Ilmiah) . Makassar: Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar. Chatib, U. W. 1994. Buku Ajar
Mikrobiologi Kedokteran Edisi Revisi  Staf  Pengajar  Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia . Jakarta: Binarupa Aksara. Dito Chan, 2010. Staphylococcus aureus .(online).  Available  from: http://www.scribd.com/ Dwicahyono, A. 200 Kemampuan Perasan  daun  Belimbing  Wuluh (Averrhoa bilimbi) dalam Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Lactobacillus  sp (Skripsi) . Jember: Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember. Irianto,  K.  2006. Mikrobiologi  Menguak
Dunia  Mikroorganisme, Edisi  1. Bandung: Yrama Widya. Irianto,  K.  2013. Mikrobiologi  Medis
Pencegahan  Pangan  Lingkungan. Bandung: Alfabeta. Jawetz, et al . 2005. Mikrobiologi Kedokteran . Jakarta: Penerbit Salemba Medika. Kathleen  B.  Dan  Sthepen  G.  2007. At  a GlanceMikrobiologiMedis dan Infeksi Edisi Ketiga. Jakarta: Penerbit Erlangga. La  Imala,  M.  2014. Uji  Resistensi
Staphylococcus  aureus  Terhadap Antibiotik Amoxicillin,  Tetracyclin dan  Propolis (Karya  Tulis  Ilmiah) . Makassar: Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar. Mulyani,  S.  Gunawan,  D.  2001. Ramuan Tradisional Untuk Penderita Asma.
Jakarta: Gramedia. Nur  Aida,  S.  2012. Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Belimbing Wuluh  Terhadap  Staphylococcus aureus (Skripsi) . Surakarta: Fakultas Farnasi Universitas Muhammadiyah. Radji,  M.  2010. Buku  Ajar  Mikrobiologi; Panduan  Mahasiswa Farmasi  & Keperawatan . Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Rahmat, R. 1996. Tabulampot Belimbing . Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Syah, A. 2011. Obat Herbal Luar Biasa!.
CV  Surabaya:  Pustaka  Agung Harapan.
Thomas,  A.  N.  S.  1998. Tanaman  Obat
Tradisional. Surabaya:  Penerbit Lentera Tsilatsi, A. 2013. Uji Resistensi Staphylococcus  aureus  Terhadap Antibiotika Amoksilin, Eritromisin, Sefadroksil dan Kloramfenikol (Karya Tulis Ilmiah) . Makassar: Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar Yuwono,  2012. Staphylococcus  aureus . Bandung: Universitas Padjadjaran.
Syarif,  A.  et  al.  1995. Farmakologi dan  Terapi  Edisi  4. Jakarta:  Gaya Baru.