## PENAPISAN DAN POLA PERTUMBUHAN BAKTERI KITINOLITIK DARI
CANGKANG RAJUNGAN ( Portunus pelagicus )
Sudin 1 ; Rieny Sulistijowati* 1 ; Rita Marsuci Harmain 1
1 Jurusan Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl.Jenderal Sudirman No.06, Kota Gorontalo 96128, Gorontalo, Indonesia
* Korespondensi: rienysulistijowati@ung.ac.id (Diterima 09-05-2020; Direvisi 10-09-2020; Dipublikasi 14-05-2020)

## ABSTRAK
Penapisan  bakteri  kitinolitik  dari  cangkang  rajungan (Portunus  pelagicus) telah  dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh isolat bakteri kitinolitik, mengetahui zona aktivitas kualitatif kitinase  serta  pola  pertumbuhan  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  kitinolitik  dari  cangkang  rajungan ( Portunus  pelagicus ).  Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah  metode  penelitian  deskriptif. Penelitian ini terdiri atas 3 tahap, yaitu skrining bakteri kitinolitik (isolasi dan identifikasi makroskopis dan mikroskopis), penentuan zona aktivitas kualitatif kitinase serta pola kurva pertumbuhannya. Isolat bakteri  kitinolitik  yang  berhasil  ditumbuhkan,  diperoleh  indeks  kitinolitik  tertinggi  sebesar  1.  Hasil identifikasi  makroskopis  dan  mikroskopis  menunjukkan  isolat  bakteri  kitinolitik  merupakan  bakteri gram negatif berbentuk batang. Awal fase logaritmik terjadi pada waktu inkubasi 2 jam hingga 10 jam.
Kata kunci : Bakteri Kitinolik; Kitinase; Logaritmik; Portunus pelagicus

## ABSTRACT
Screening of chitinolytic bacteria from crab shells ( Portunus pelagicus ) was carried out. This study aims  to  obtain  chitinolytic  bacterial  isolates,  determine  the  zone  of  chitinase  activity  qualitative produced  and  growth  pattern  by  chitinolytic  bacteria  from  crab  shells  ( Portunus  pelagicus ).  The research  method  used  is  descriptive  research  method.  This  study  consisted  of  3  stages,  namely screening  for  chitinolytic  bacteria  (isolation  and  macroscopic  and  microscopic  identification), determination of the zone of chitinase activity qualitative and growth curve produced by chitinolytic bacteria. Chitinolytic bacterial isolates that were successfully grown, obtained the highest chitinolytic index of 1. Macroscopic and microscopic identification results showed that chitinolytic bacterial isolates were gram-negative rod-shaped bacteria. Logaritmic gowth at 2 nd to ten th hours incubation.
Keywords : Chitinolic bacteria;Chitinase;Logaritmic; Portunus pelagicus .
DOI: https://doi.org/10.37905/jfpj.v2i1.5961
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch

## PENDAHULUAN
Penerapan  bioteknologi  terhadap  kitin yang  terus  berkembang  adalah  pemanfaatan enzim dari mikroorganisme untuk biodegradasi. Dalam biodegradasi, enzim dari mikroorganisme  berperan  untuk  memecah molekul besar atau polimer kitin menjadi produk yang dapat dimanfaatkan. Secara umum enzim yang  mendegradasi  kitin  adalah  jenis  enzim kitinase (Purkan dkk . 2016).
Bakteri  penghasil  enzim  kitinase  atau bakteri kitinolitik dapat ditemukan pada habitat- habitat  yang  mengandung  kitin  yang  tinggi, salah  satunya  adalah  cangkang  rajungan. Cangkang rajungan ( Portunus pelagicus ) dapat diperoleh dari limbah hasil pengolahan maupun segar. Cangkang rajungan segar diduga dapat ditemukan  bakteri  kitinolitik  karena  belum mengalami  proses  pengolahan,  sedangkan limbah  hasil  pengolahan (perebusan), dimungkinkan  bakteri  yang  dimaksud  sudah mengalami kematian (Chasanah dkk. 2009).
Aplikasi  enzim  kitinase  dapat  digunakan sebagai  pengolahan  kitin  secara  enzimatis. Upaya pengolahan kitin dapat dilakukan secara enzimatis  maupun  kimiawi  (Cahyani,  2013). Metode  enzimatis  menggunakan  enzim maupun  bakteri  untuk  deproteinasi  dengan penambahan  enzim  atau  dengan  melibatkan kitinase untuk mendegradasi kitin. Sedangkan kimiawi  yaitu  dengan  cara demineralisasi  dan deproteinasi  melalui  penambahan  asam  atau
basa  kuat  dalam  hal  ini  HCl  dan  NaOH (Younes, dkk, 2012).
Metode  sintesa  kitin  secara  kimiawi merupakan  metode  yang  mudah  dan  murah akan  tetapi  kurang  ramah  lingkungan,  karena sangat banyak menggunakan bahan kimia (HCl dan NaOH) (Soeka dan Triana, 2016). Teknik produksi secara enzimatis dianggap lebih baik dibandingkan  dengan  teknik  secara  kimiawi karena  proses  ini  sangat  mudah,  sederhana, cepat  dan  tidak  menggunakan  pelarut  kimia sehingga  mengurangi  dampak  negatif  bagi lingkungan, serta meminimalkan bahaya yang berhubungan  dengan  penggunaan  bahan kimia.  Kelemahan  dalam  penggunaannya  di bidang  industri  yaitu  harganya  yang  mahal, membutuhkan  kondisi  optimum  agar  enzim bekerja maksimal, mudah terpengaruh kondisi lingkungan (Chasanah, dkk, 2014).
Kebutuhan  terhadap  derivat  kitin  yang semakin meningkat mengakibatkan meningkatnya  kebutuhan  kitinase  (Widyastuti,
2007 dalam Cahyani,  2013),  sehingga  perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui adanya aktivitas  enzim  kitinase  melalui  isolasi  bakteri dari  cangkang  rajungan.  Beberapa  penelitian telah  mencoba  menghidrolisis  kitin  dengan enzim  yang  dihasilkan  oleh Aspergillus  sp ,
Bacillus  sp,  Clostridium  sp,  Serratia  sp , Aeromonas  sp ,  dan Trichoderma  sp .
(Maggadani, 2012 dalam Purkan, dkk , 2014).
Isolat-isolat  bakteri  kitinolitik  memiliki kemampuan mendegradasi kitin yang berbeda.
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
Hal  tersebut  dapat  disebabkan  oleh  jenis bakteri, pola pertumbuhan dan aktivitas enzim. Untuk  memperoleh  kemampuan  degradasi yang baik perlu diketahui aktivitas enzimnya.
Berdasarkan latar belakang diatas, maka penulis  berkeinginan  untuk  melakukan penelitian  mengenai  isolasi  bakteri  dan penentuan  zona  aktivitas  kitinase  bakteri kitinolitik.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  isolasi  bakteri  kitinolitik penghasil  enzim  kitinase  dari  cangkang rajungan  ( Portunus  pelagicus )  dilakukan  di Stasiun Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas I Gorontalo.
Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi  tabung  reaksi,  jarum  Ose,  vorteks (V-1plus),  gelas  ukur, Beaker  glass , Erlenmeyer ,  pH  meter,  pipet  mikro,  tip  mikro,
pengaduk, magneticstirrer (Jisico), cawan petri,
oven,  sendok  bengkok,  lampu  bunsen, inkubator  (IB11E), Laminar  Air  Flow (LAF), timbangan  analitik,  dan  mikroskop  (Olympus Binokuler CX22).
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini antara lain, cangkang rajungan, kitin, koloidal kitin  (kitin,  HCl  pekat Merck 100317  KgaA 64271 Darmstadt, NaOH Merck 106498 KgaA
64271  Darmstadt,  akuades),  media  agar  kitin
(koloidal  kitin,  KH 2 PO 4 Merck 104877  KgaA
64293 Darmstadt, MgSO 4 .7H 2 O Merck 105886 KgaA  64271  Darmstadt,  Ekstrak  yeast Merck LP0021 Oxoid, agar Merck GRMO26 Himedia, aquades),  NA (Nutrient  agar) Merck KgaA 64271 Darmstadt, allumunium foil.

## Prosedur penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan  metode  penelitian  deskriptif.
Sampel  dianalisis  di  laboratorium,  data  yang diperoleh adalah data kualitatif.
Pengambilan  dan  Preparasi  Sampel Cangkang Rajungan (Portunus pelagicus) Sampel cangkang rajungan segar diambil dari  nelayan  penangkap  rajungan  di  Desa Katialada  Kecamatan  Kwandang  Kabupaten Gorontalo Utara. Sampel tersebut dimasukkan ke  dalam coolbox berisi  es  batu  yang  dilapisi plastik kemudian ditutup. Tujuan es batu dilapisi dengan  plastik  adalah  agar  rajungan  dan  es batu tidak bersentuhan secara langsung.

## Pembuatan Koloidal Kitin
Pembuatan  koloidal  kitin  menggunakan metode  hidrolisis  parsial.  Menurut  Arnold  & Solomon  (1986),  Koloidal  kitin  dibuat  dengan melarutkan 10 g kitin dalam 200 ml HCl pekat dalam  gelas  beker,  kemudian  didiamkan semalaman dalam keadaan tertutup pada suhu 4 0 C. Larutan kemudian disaring menggunakan glass wool , lalu filtrat dicampur dengan 100 ml akuades dingin dan ditambahkan NaOH 12 N hingga  pH  mencapai  pH  7  (netral).  Larutan kemudian  disentrifugasi    dengan  kecepatan 8000  rpm  selama  20  menit.  Supernatan dibuang,  endapan  ditambah    akuades,
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
kemudian  disentrifugasi  kembali  dengan kecepatan  8000  rpm  selama  20  menit. Endapan  yang  terbentuk  merupakan  koloidal kitin yang siap digunakan.
Isolasi  Bakteri  Kitinolitik  dari  Cangkang Rajungan (Portunus pelagicus)
Isolasi  bakteri  kitinolitik  dari  cangkang rajungan  dilakukan  dengan  mengambil cottonbud yang sudah disterilkan. Setelah itu, menggoreskan cottonbud pada  cangkang dengan  cara  ditekan  dan  diputar.  Kemudian memasukkan cottonbud ke  dalam  tabung reaksi  pengenceran  10 -1 yang  berisi  9  mL aquades steril. Untuk mendapatkan pengenceran  10 -2 mengambil  1  mL  dari pengenceran  10 -1 dengan  menggunakan mikropipet dilakukan dengan cara  dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  yang    berisi  9  mL aquades  steril,  demikian  seterusnya  sampai dibuat  pengenceran  10 -6 .  Pengenceran  tiga terakhir  diambil,  lalu  diinokulasi  pada  media yang mengandung koloidal kitin (Fitriani et al,
2018).
Proses  isolasi  bakteri  dilakukan  dengan menggunakan media isolasi yang  selektif  yaitu media agar kitin. Proses pembuatan media agar kitin  yaitu  2,5  gram  koloidal  kitin  dilarutkan terlebih dahulu dalam 5 ml akuades. Setelah itu ditambahkan  0,5  gr    MgSO4.7H2O,  0,1  gr KH 2 PO 4, 0,5 gr ekstrak yeast , 7,5 gr agar dan
495  ml  akuades.  Semua  bahan  yang    telah dicampur  kemudian  dididihkan.  Media disterilkan  pada  suhu  121  ºC  selama  15-20 menit.  Setelah  disterilkan,  media  dituang
sebanyak 5 ml dalam tiap cawan petri. Masing- masing tingkat pengenceran tiga terakhir (10 -4 , 10 -5 ,  10 -6 )  diinokulasi  ke  media  agar  kitin masing-masing  sebanyak  1  ml  dengan menggunakan    mikropipet,  selanjutnya masing-masing  cawan  petri  dibungkus  dan diinkubasi pada  suhu 30 0 C selama 2x 24 jam.

## Pemurnian  dan  Identifikasi  Kultur  Bakteri Kitinolitik
Pemurnian  kultur  bakteri  kitinolitik menggunakan  metode  gores  kuadran.  Hasil dari isolasi bakteri yang didapatkan kemudian dilakukan  proses  pemurnian  kultur  bakteri untuk  mendapatkan  koloni  isolat  murni. Langkah pertama yang dilakukan dalam proses pemurnian bakteri adalah memilih  koloni-koloni yang berbeda dari hasil isolasi bakteri. Koloni bakteri kemudian diinokulasikan pada permukaan  medium  agar  kitin  menggunakan jarum ose steril  dengan metode gores kuadran untuk  mendapatkan  koloni  yang  terpisah. Setelah itu, diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 48  jam  (Kamil et  al ,  2007).  Selanjutnya dilakukan  pengamatan  secara  makroskopis dan mikroskopis.
Identifikasi secara makroskopis dilakukan secara  langsung,  sedangkan  identifikasi mikroskopis dilakukan dengan cara melakukan pewarnaan Gram. Pengecatan Gram dilakukan dengan  mengambil  sebanyak  1  ose  isolat bakteri diencerkan dalam 3 mL akuades steril dan di ambil 10 µl lalu diletakkan pada gelas obyek  dan  difiksasi.  Selanjutnya  ditambahkan sebanyak 1 tetes kristal violet (Gram A) selama
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
1  menit  kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir dan  di  keringanginkan.  Setelah  kering ditambahkan  1  tetes  larutan  iodine  (Gram  B). Setelah  1  menit  kemudian  dicuci  dengan  air mengalir.  Selanjutnya  isolat  bakteri  ditambah larutan  aseton  alkohol  95%  (Gram  C)  selama 30  detik  dan  dicuci  dengan  air  mengalir. Kemudian  isolat  bakteri  ditambahkan  safranin (Gram D) selama 2 menit dan dicuci dengan air mengalir  dan  dikering  anginkan,  selanjutnya diamati dengan mikroskop. Bakteri Gram Positif berwarna  ungu  dan  bakteri  Gram  negatif berwarna merah (Suryani, 2016).

## Penentuan  Zona  Aktivitas  Kitinase  Bakteri Kitinolitik Kualitatif
Penentuan Zona aktivitas kitinase bakteri kitinolitik dilakukan dengan cara ditotolkan pada media  agar  kitin.  Pada  pengujian  ini    dilihat zona  bening  yang  dihasilkan.  Pengujian  ini dilakukan melalui beberapa tahapan, yaitu: Tahap  pertama  sebanyak    satu    ose    bakteri yang    ada    pada    isolat    murni    diambil  dan dimasukkan ke dalam cawan petri yang berisi media agar kitin yang sudah memadat dengan cara ditotolkan. Tahap kedua bakteri diinkubasi pada suhu 30 0 C  selama 72 jam. Tahap ketiga mengamati  zona  bening  yang  terbentuk  dan mengukur    luasan    zona    bening    yang dihasilkan menggunakan penggaris (Chasanah, 2009).
Zona bening  yang terdapat  pada medium merupakan  respon  dari  bakteri  terhadap koloidal    kitin  yang    ditambahkan    dalam
medium.  Dari  seluruh  isolat murni yang diuji aktivitas  kitinolitik,  diambil  1  isolat  yang menghasilkan indeks kitinolitik terbesar.

## Pola Pertumbuhan Bakteri Kitinolitik
Pola  pertumbuhan  bakteri  ditentukan dengan  membuat  kurva  pertumbuhan  bakteri kitinolitik. Isolat  terpilih dimasukkan ke dalam 20 mL Luria Broth (sebagai larutan inokulum).
Pembuatan  media Luria  Broth dilakukan dengan cara menyiapkan media Tripton 10 gr, yeast extract 10 gr, NaCl 0,1 gr dan akuades 1000  ml.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 30ºC    selama  24  jam  dan  dilakukan shaker dengan  kecepatan  150  rpm.  Sebanyak  2  mL larutan  inokulum  tersebut  ditambahkan  ke dalam  20  mL  media  yang  sama  dalam  labu Erlenmeyer 100 mL dan diinkubasi pada kondisi yang sama, kemudian diambil sebanyak 1 mL setiap 2 jam sekali untuk diukur densitas optik (OD)  bakteri  sampai  fase  awal  kematian. Pengukuran  OD  bakteri  dilakukan  dengan menggunakan  spektrofotometer  dan  dibaca serapannya pada panjang gelombang 600 Nm. Kurva  pertumbuhan  ditentukan  dengan membuat  plot  antara  waktu  inkubasi  dan densitas optiknya (Purkan, 2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi dan Pemurnian Bakteri Kitinolitik Hasil  isolasi  bakteri  setelah  diinkubasi selama 48 jam pada suhu 30 0 C menghasilkan bakteri  yang  tumbuh  pada  media  agar  kitin. Bakteri ditemukan hanya tumbuh pada cawan petri 10 -4 .
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
Bakteri  tersebut  kemudian  dipisahkan berdasarkan  kenampakan  koloni,  bentuk  dan warna  yang  berbeda.  Hasil  yang  didapatkan terdapat  3  koloni  yang  berbeda,  yaitu  putih, krem dan kuning.
Hasil  yang  diperoleh  dari  proses pemurnian  setelah  diinkubasi  selama  48  jam pada  suhu  30 0 C  menunjukkan  adanya  zona bening  yang  terbentuk  pada  koloni  bakteri. Akan  tetapi,  zona  bening  hanya  ditemukan pada  bakteri  berwarna  krem  dan  putih. Selanjutnya  kedua  isolat  tersebut  dilakukan identifikasi secara makroskopis dan mikroskopis.
Identifikasi Makroskopis dan Mikroskopis
Berdasarkan hasil identifikasi makroskopis menunjukkan bahwa bakteri kitinolitik berbentuk bulat, berwarna putih dan krem, tepi koloni  utuh  (Gambar  1),  sedangkan  hasil identifikasi  secara  mikroskopis  dengan pewarnaan  gram  menunjukkan  bahwa  bakteri kitinolitik  merupakan  bakteri  gram  negatif berbentuk basil (batang).
Morfologi  koloni  dan  sel  bakteri  kitinolitik dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Morfologi koloni dan sel bakteri kitinolitik
Berdasarkan  Tabel  1  isolat  R1 menunjukkan warna koloni putih dan Isolat R2 menunjukkan  warna  koloni  krem.  Sedangkan
dari  segi  bentuk  dan  elevasi  koloni  tidak  ada perbedaaan antara isolat R1 dan R2. Keduanya memiliki bentuk koloni bulat dan elevasi koloni cembung.
Hasil pewarnaan gram kedua isolat bakteri kitinolitik R1 dan R2 menunjukkan gram negatif. Hal  ini  ditandai  dengan  kedua  isolat  setelah dilakukan  pewarnaan  gram  berwarna  merah. Menurut  Lay  (1994) dalam Dewi  (2008) menyatakan  bahwa  Bakteri  negatif  pada pewarnaan gram berwarna merah disebabkan kompleks zat warna kristal violet larut pada saat pemberian  larutan  aseton,  dan  mengambil warna merah safranin. Umumnya bakteri gram negatif memiliki dinding sel dengan kandungan lipida  yang  tinggi,  sehingga  lipida  larut  oleh larutan aseton.
Aktivitas Kualitatif Kitinase Bakteri Kitinolitik
Aktivitas  enzim  dari  bakteri  kitinolitik ditunjukkan dengan adanya zona bening yang terbentuk disekitar koloni. Zona bening tersebut membuktikan bahwa isolat mampu mendegradasi  substrat  kitin  yang  terkandung pada media agar kitin. Menurut  Harman et al .
(1993)  menyatakan  bahwa  bakteri  kitinolitik merupakan bakteri yang kompeten memproduksi enzim kitinase dan memanfaatkan  kitinase  untuk  asimilasi  kitin sebagai sumber karbon dan nitrogen.
Isolat  bakteri  yang  dihasilkan  dari cangkang rajungan menunjukkan adanya zona bening.  Zona  bening  terbentuk  akibat  enzim
No  Jenis bakteri Warna Koloni Bentuk Koloni Elevasi Koloni Gram Bentuk sel 1 R1 Putih Bulat Cembung  Negatif  Batang 2 R2
Krem  Bulat Cembung  Negatif  Batang
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
kitinase  yang  dibebaskan  keluar  sel  bakteri untuk  memecah  makromolekul  kitin  menjadi molekul kitin yang lebih kecil, sehingga bakteri dapat mengambil nutrisi dalam bentuk molekul- molekul kecil.
Hasil  isolasi  dan  seleksi  bakteri  pada media  kitin  diketahui  adanya  bakteri  yang tumbuh  dengan  tingkat  pertumbuhan  bakteri yang ditunjukkan dengan indeks kitinolitik yang berbeda-beda  jumlahnya.  Hal  ini  disebabkan karena  perbedaan  tingkat  adaptasi  bakteri dengan  medium  atau  lingkungan  hidupnya. Pada  media  padat  selektif  diketahui  bahwa bakteri  berpotensi  sebagai  penghasil  kitinase dengan  terbentuknya  zona  bening  di  sekitar koloni. Semakin banyak enzim yang dihasilkan maka  zona  bening  juga  akan  semakin  luas karena kitin yang terdegradasi semakin banyak (Suryani, 2016).
Hasil penelitian menunjukkan isolat IK 11 dari  isolat  R1  mempunyai  indeks  kitinolitik terbesar  yaitu  1.  Berbeda  dengan  hasil penelitian  yang  dilakukan  Suryani  (2016) mengemukakan bahwa  isolat  bakteri  kitinolitik yang  diperoleh  memiliki  indeks  kitinolitik terbesar  yaitu  7,59.  Hasil  penelitian Chasanah dkk. (2009) mengemukakan bahwa isolat bakteri kitinolitik yang diperoleh memiliki indeks  kitinolitik  terbesar  2,58.  Perbedaan indeks  kitinolitik  tersebut  selain  disebabkan perbedaan  tingkat  adaptasi  bakteri  dengan medium atau lingkungan hidupnya, juga dapat disebabkan  perbedaan  jenis  bakteri.Indeks
kitinolitik  menunjukkan  kemampuan degradasi mikroba terhadap kitin. Semakin banyak enzim yang dihasilkan maka zona bening  juga akan semakin  luas  karena  kitin  yang  terdegradasi semakin banyak.

## Pola Pertumbuhan Bakteri Kitinolitik
Pola  pertumbuhan  bakteri  kitinolitik diperlukan  untuk  mengetahui  fase-fase pertumbuhan  pada  isolat  kitinolitik,  sehingga dapat ditentukan fase logaritmik dimana suatu bakteri  dapat  digunakan  sebagai  inokulum. Berdasarkan  pola  pertumbuhan  selama rentang waktu 24 jam (Gambar 1).

## Waktu Inkubasi (jam)
Gambar 1. Kurva Pertumbuhan Bakteri Kitinolitik
Pola  pertumbuhan  bakteri  kitinolitik diperlukan  untuk  mengetahui  fase-fase pertumbuhan  pada  isolat  kitinolitik,  sehingga dapat ditentukan fase logaritmik dimana suatu bakteri  dapat  digunakan  sebagai  inokulum. Berdasarkan  pola  pertumbuhan  selama rentang  waktu  24  jam,  bakteri  isolat  kitinolitik tidak  tampak  mengalami  fase  lag  (adaptasi). Hal  ini  dapat  terjadi  karena  fase  adaptasi
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
bakteri isolat kitinolitik sangat pendek sehingga tidak terlihat.
Menurut
Setyati, dkk (2015) menyatakan  bahwa  singkatnya  fase  adaptasi bakteri  disebabkan  bakteri  tersebut  tumbuh pada  media  yang  sama  dengan  media penyegaran  di  tahap  sebelumnya  maka penyesuaian diri dengan lingkungan yang baru berlangsung cepat. Respati (2017) menambahkan  fase  lag  dapat  berlangsung lambat bahkan cepat, biasanya dalam hitungan menit hingga jam tergantung jenis bakteri, umur biakan, dan nutrisi yang terdapat pada media.
Isolat  bakteri  kitinolitik  ditumbuhkan dalam  medium  media  Luria  Broth  yang mengandung  yeast  ekstrak,  tripton,  NaCl  dan aquades.  Yeast  ekstrak  merupakan  bahan yang mengandung asam amino yang lengkap dan vitamin. Tripton berfungsi sebagai sumber karbon  sekaligus  sumber  nitrogen  bagi pertumbuhan  bakteri,  sedangkan  NaCl digunakan untuk menjaga tekanan osmotik sel bakteri agar tidak pecah.
Awal fase logaritmik terjadi pada waktu inkubasi  2  jam  hingga  10  jam,  pada  fase  ini isolat  bakteri  kitinolitik  mengalami  fase pertumbuhan cepat dimana massa dan volume sel  meningkat  karena  nutrisi  pada  media tercukupi  sehingga  dapat  tumbuh  dengan optimal.  Cahyani  (2013)  menyatakan  bahwa pada  fase  logaritmik  aktivitas  metabolisme berada pada kondisi optimum dan metabolisme paling  aktif.  Sintesis  bahan  sel  sangat  cepat
dengan  jumlah  konstan  terjadi  pada  fase  ini, sehingga  pada  fase  ini  bakteri  sangat  baik apabila digunakan sebagai inokulum. Selanjutnya  terjadi  penurunan  pada  waktu inkubasi 12 jam dengan log sel 0,600, meskipun tidak menunjukkan penurunan yang drastis. Hal ini  dapat  disebabkan  mulai  berkurangnya nutrien.  Setelah  itu  meningkat  kembali  pada waktu  inkubasi  14  jam  dengan  log  sel  0,669 yang  merupakan  awal  dimulainya  fase stasioner.
Fase  stasioner  terjadi  pada  waktu inkubasi 14 jam hingga 20 jam, meskipun pada waktu  inkubasi  16  jam  terjadi  penurunan dengan  log  sel  0,538.  Hal  ini  terjadi  karena adanya  senyawa  metabolit  sekunder  hasil aktivitas metabolisme yang memicu terjadinya penurunan.  Metabolit  sekunder  merupakan senyawa  yang  dihasilkan  pada  fase pertumbuhan  stasioner.  Senyawa  yang dihasilkan antara lain antibiotik, toksin, vitamin, pigmen  dan  alkaloid.  Sulistijowati  (2012) mengemukakan  bahwa  pada  fase  stasioner menunjukkan terjadinya penumpukan metabolit hasil aktivitas metabolisme sel dan kandungan nutrien mulai habis. Akibatnya terjadi kompetisi nutrisi sehingga beberapa sel mati dan lainnya tetap tumbuh.
Waktu inkubasi 18 jam hingga 20 jam kembali terjadi peningkatan sel  dengan log sel 0,597  dan  0,642.  Hal  demikian  bisa  terjadi karena  kompetisi  sudah  berkurang  sehingga naik lagi terjadi pembelahan. Selanjutnya pada
http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jfpj/issue/arch
waktu  inkubasi  22  jam  sampai  24  jam  terjadi penurunan secara drastis dengan log sel 0,537 dan 0,324, dimana pada fase ini bakteri akan kehabisan  nutrisi,  jumlah  sel  akan  menurun serta  jumlah  sel  yang  mati  lebih    banyak daripada sel yang hidup. Menurut Setyati, dkk ,
(2015)  mengemukakan  bahwa  fase  kematian terjadi  penurunan  laju  pertumbuhan  yang disebabkan oleh kekurangan materi pertumbuhan seperti vitamin dan unsur mineral. Kematian  juga  dapat  disebabkan  oleh berkurangnya beberapa nutrien esensial dalam media  atau  karena  terjadinya  akumulasi autotoksin  dalam  media  atau  kombinasi  dari keduanya.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa bakteri  kitinolitik  yang  diisolasi  dari  cangkang rajungan  ( Portunus  pelagicus )  memiliki kemampuan dalam mendegradasi kitin, hal ini dibuktikan dengan adanya zona bening dengan indeks kitinolitik sebesar 1. Karakteristik bakteri kitinolitik yang berasal dari cangkang rajungan ( Portunus  pelagicus )  menunjukkan  isolat bakteri  kitinolitik  merupakan  bakteri  Gram negatif berbentuk batang. Awal fase logaritmik terjadi  pada  waktu  inkubasi  2  jam  hingga  10 jam.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnold,  L.S.,  Solomon,  N.A.  1986.  Manual  of Industrial  Microbiology  and  Biotechnology .
American
Society for Microbiology Washington DC :15-36.
Cahyani,  L.  2013.  Pemanfaatan  Tepung Cangkang Udang Sebagai Media Produksi Kitinase  Oleh  Bakteri  Kitinolitik  Isolat  26. Skripsi . Jurusan Biologi. Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam. Universitas Jember. Hal. 1-6.
Chasanah,  E.,  Ilmi,  M.,  Mangunwardoyo,  W. 2009.  Penapisan  Bakteri  Kitinolitik  dari Limbah  Pengolahan  Udang. Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. 4(1) : 59-61.
Chasanah,  E.,  Fawzya,  Y.N.,  Poernomo,  A. 2014. Enzim Kitinolitik (Fungsi dan Peran). Penerbit ITB. Bandung. Hal. 11-35.
Dewi, I.M. 2008. Isolasi Bakteri dan Uji Aktivitas Kitinase  Termoflik  Kasar  Dari  Sumber  Air Panas  Tingi  Raja,  Simalungun  Sumatera Utara. Tesis. Sekolah  Pascasarjana. Universitas Sumatera Utara Medan. Hal. 6- 31.
Fitriani, V., Maizeli, A., Megahati, R.R.P. 2018. Isolation  and  Identification  Of  Penicillin Acylase  Producing  Bacteria  Originated From Cow Intestine. International Journal of Scientific  and  Research  Publication.  8(3)  : 187-190.
Harman,  G.E.,  Hayes,  C.K.,  Lorito,  M., Broadway,  R.M.,  Dipietro,  A.,  Peterbauer, C., Tronsmo, A. 1993. Chitinolytic Enzymes of  Trichoderma  harzianum:  Purification  of Chitobiosidase and Endochitinase. Phytopathology. Journal Molecular Pathology . 83(3): 1-6.
Kamil,  Z.,  Rizk,  M.,  Saleh,  M.,  Moutafa,  S.. 2007.  Isolation  and  Identification  Soil Chitinolytic  Bacteria  and  their  Potential  in Antifungal  Biocontrol .  Global  Journal Molekular Sciences. 2(2) : 57-66 .
Purkan,  Azizah,  B.,  Baktir,  A.,  Sumarsih,  S. 2014.  Eksplorasi  Bakteri  Kitinolitik  dari Sampah Organik: Isolasi dan Karakterisasi
Enzim  Kitinase. Jurnal  Molekul.  9(2):  129- 133.
Purkan,  P.,  Baktir,  A.,  Sayyidah,  A.R.  2016. Produksi  Enzim  Kitinase  Dari Aspergillus niger Menggunakan  Limbah  Cangkang Rajungan  Sebagai  Induser. Jurnal  Kimia
Riset. 1(1) : 34-38.
Respati,  N.Y.  2017.  Optimasi  Suhu  dan  pH Media  Pertumbuhan  Bakteri  Pelarut Fosfat  dari  Isolat  Bakteri  Termofilik. Jurnal Biologi. 6(7): 423-429.
Setyati, W.A., Martani, E., Triyanto, Subagiyo,
Zainuddin, M. 2015. Kinetika Pertumbuhan dan  Aktivitas  Protease  Isolat  36k  dari Sedimen
Ekosistem Mangrove,
Karimunjawa, Jepara. Jurnal Ilmu Kelautan. 20(3): 163-169
Sulistijowati,  R.  2012.  Potensi Lactobacillus acidophilus sebagai  biopreservatif pada  rebusan  daging  ikan  tongkol. Jurnal IJAS . 2(2): 604 .
Suryani,  W.  2016.  Isolasi  dan  Identifikasi Mikroorganisme  Kitinolitik  Asal  Limbah Cairan  Rumen                Sapi  Serta  Optimasi
Produksi Enzim Kitinase. Skripsi .
Universitas Haluoleo Kendari. Kendari. Hal.
1-26.
Soeka,  Y.S.,  Triana  E.  2016.  Pemanfaatan Limbah  Kulit  Udang  untuk  Menghasilkan Enzim          Kitinase  dari Streptomyces macrosporeus InaCC  A454. Jurnal  of Applied Chemistry. 18(1) : 91-101.
Younes, I., Bellaaj, O.G., Nasri, R., Chaabouni,
M., Rinaudo, M., Nasri M. 2012. Chitin and Chitosan  Preparation  From  Shrimp  Shells Using Optimized Enzymatic Deproteinization. Journal Process Chemistry . 47: 2032-2039 .