BIOTROPIKA Journal of Tropical Biology
https://biotropika.ub.ac.id/
Vol. 9   |   No. 2   |   2021  |   DOI: 10.21776/ub.biotropika.2021.009.02.01

## POTENSI DAN EFEKTIVITAS Salmonella Typhimurium HASIL REKAYASA GENETIKA SEBAGAI TERAPI ANTIKANKER GLIOBLASTOMA

## POTENTIAL AND EFFECTIVENESS GENETIC ENGINEERING OF Salmonella Typhimurium AS ANTICANCER THERAPY OF GLIOBLASTOMA
Muhamad Ananda 1) , Fiska Ivana Pratami Putri Tokede 1) , Srigika Natalia Boru Ginting 1) , Rani Nurlina Tifen 1) , Delfania Apang Madao 1) , Ellen Nur Endah Pangesti 1) , Wahyu Irawati 1)*

## ABSTRAK
Kanker adalah penyakit mematikan karena perkembangan sel yang abnormal sehingga tidak  terkendali  oleh  tubuh.  Penyakit  kanker  telah  menyerang  laki-laki  maupun perempuan dengan jenis kanker berbeda, seperti kanker paru-paru, kolorektum, kanker serviks. Pengobatan kanker terdapat beberapa cara salah satunya terapi. Pengobatan ini banyak  diimplementasikan  di beberapa jenis  kanker,  termasuk  kanker otak,  yaitu glioblastoma.  Penelitian  beberapa  tahun  terakhir  menunjukkan  bahwa  pendekatan terapi  dengan  bakteri  Salmonella  Typhimurium  berhasil  memproduksi  enzim antikanker,  dan  mensekresikan  antigen  sekaligus  antibodi  spesifik  kanker  untuk mengobati  penyakit  ini.  Penulisan  ini  bertujuan  mengkaji  potensi  dan  efektivitas Salmonella  Typhimirium  sebagai  agen  terapi  antikanker  melalui  rekayasa  genetika galur gen VN20009 yang dilemahkan. Pengkajian dilakukan secara kualitatif dengan memaparkan  secara  deskriptif  melalui  kajian  literatur.  Hasil  kajian  menunjukkan bahwa Salmonella Typhimurium merupakan bakteri Gram negatif, fakultatif anaerob, dan  bersifat  motil.  Bakteri  ini  berikatan  secara  spesifik  pada  sel-sel  kanker  dengan mentransferkan  RNA  onkogen  serta  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker. Pengembangan  bakteri  Salmonella  menjadi  kandidat  terapi  sebagai  strategi  terapi utama  dalam  pengobatan  kanker  karena  spesifik  menargetkan  sel  kanker  sehingga menghambat  pertumbuhannya  dan  meningkatkan  kelangsungan  hidup  penderita kanker. Hasil kajian menunjukkan bahwa Salmonella Typhimurium memiliki prospek yang menjanjikan untuk penyembuhan penyakit kanker serta menjadi referensi untuk penelitian  selanjutnya  dalam  pengembangan  dan  pemanfaatan  Salmonella Typhimurium sebagai antikanker.
Kata  kunci: antikanker,  glioblastoma,  pendekatan  terapi,  Salmonella  Typhimurium, gen VN20009

## ABSTRACT
Cancer  is  a  deadly  disease  due  to  abnormal  cell  development.  Cancer  has  attacked anybody with different types of cancer, such as lung cancer, colorectal cancer, cervical cancer. There are several ways to treat cancer, one of which is therapy. This treatment is widely implemented in several types of cancer, including brain cancer, glioblastoma. Research in the last few years, a therapeutic approach with Salmonella Typhimurium bacteria  can  produce  anticancer  enzymes  and  secrete  cancer-specific  antigens  and antibodies.  This  paper  aims  to  examine  the  characteristics  of  the  potential  and effectiveness’s  Salmonella  Typhimurium  as  an  anticancer  agent  through  genetic engineering of the attenuated VN20009 gene strain. The method is done qualitatively by  describing  through  a  literature  review.  Salmonella  Typhimurium  is  facultatively anaerobic, motile, and gram-negative. These bacteria bind specifically to cancer cells by  transferring  oncogenes  RNA  to  inhibit  cancer  cell  growth.  The  development  of Salmonella bacteria is a therapeutic candidate as an anticancer because it specifically targets cancer cells to inhibit their growth and increase the survival of cancer patients. That means Salmonella typhimurium has a promising prospect for curing cancer in the future. This could be a reference for further research in the development of Salmonella typhimurium as a more utilized anticancer.
Keywords: anticancer,  glioblastoma,  therapy,  Salmonella  Typhimurium,  VN20009 gene

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyakit  yang  mematikan dan berbahaya. Kanker terjadi karena pertumbuhan
dan  penyebaran  sel  yang  abnormal  secara  tidak terkendali.  Menurut  Badan  Kesehatan  Dunia (WHO) terdapat beberapa jenis kanker pada pria di
Diterima   : 16 Desember 2021
Disetujui   : 4 Agustus 2021

## Afiliasi Penulis:
1) Pendidikan  Biologi,  Fakultas Ilmu  Pendidikan,  Universitas Pelita Harapan

## Email korespondensi:
*wahyu.irawati@uph.edu

## Cara sitasi:
Ananda,  M,  FIPP  Tokede,  SNB Ginting,  RN  Tifen,  DA  Madao, ENE  Pangesti,  W  Irawati.  2021. Potensi dan efektivitas Salmonella Typhimurium hasil rekayasa genetika sebagai terapi antikanker glioblastoma . Journal of Tropical Biology 9 (2): 96-104.
antaranya  kanker  paru-paru,  kanker  kolorektal, kanker  hati,  sedangkan  pada  wanita  ditemukan kanker  payudara,  kanker  kolorektal,  paru-paru, kanker  serviks,  dan  kanker  ovarium.  Pada  tahun 2012  terdapat  14  juta  kasus  baru  kanker  dan  8,2 juta  kematian  yang  diakibatkan  oleh  kanker  di dunia  [1].  Kanker  merupakan  perkembangan  sel- sel  dalam tubuh  yang tidak  terkendali.  Salah satu perkembangan  dari  sel-sel  yang  tidak  terkendali tersebut  dapat  terjadi  pada  otak  yang  memicu penyakit  glioblastoma.  Glioblastoma  merupakan tumor  otak  ganas  yang  paling  umum  dan  agresif pada  orang  dewasa  [2].  Penyakit  ini  tergolong tumor  otak  ganas  primer,  dengan  16%  terjadi  di semua  otak  primer  dan  neoplasma  sistem  saraf pusat  [3].  Dari  beberapa  jenis  jenis  kanker, glioblastoma  merupakan  salah  satu  kanker  yang cukup  ganas  dan  sulit  untuk  diobati.  Sebuah penelitian di Amerika Serikat, diperkirakan 12.120 pasien  didiagnosis  dengan  kanker  glioblastoma pada  tahun  2016  dengan  tingkat  kelangsungan hidup lima tahun sebesar 5% [4].
Penderita kanker dapat mengupayakan pengobatan dengan kemoterapi maupun konsumsi obat. Pengobatan untuk penderita kanker glioblastoma juga  dapat melalui kemoterapi,  oleh sebab  itu,  banyak  dilakukan  penelitian  mengenai efek  samping  dan  resistensi  terhadap  kemoterapi. Kanker  glioblastoma  adalah  tumor  ganas  pada sistem  sarat  pusat  primer  (SSPP)  yang  paling umum dan merupakan 78% dari keseluruhan tumor SSP pada orang dewasa [5]. Berkaitan dengan hal tersebut, dikatakan bahwa Glioblastoma Multiforme (GBM) merupakan tumor otak primer yang bersifat agresif dengan angka kejadian lebih kurang  tiga  kasus  per  100.000  penduduk,  dengan usia  rata-rata  64  tahun  [6].  Glioblastoma diklasifikasikan  oleh  WHO  sebagai  astrokitoma tingkat IV dalam penyakit kanker [7]. Peningkatan kasus  gliblastoma  terjadi  pada  pasien  yang didiagnosis pada usia 65 atau lebih, yang sekarang merupakan  hampir  setengah  dari  semua  pasien yang didiagnosis dengan glioblastoma [8].
Para peneliti melakukan penelitian lebih lanjut mengenai  pengobatan  alternatif  terhadap  kanker glioblastoma  menggunakan  imunoterapi  sebagai alternatif  pengobatan  kanker,  yaitu  bakteri  yang digunakan sebagai agen untuk melawan kanker [9]. Pilihan pengobatan saat ini pada diagnosis adalah multimoda  seperti  reseksi  bedah,  radiasi,  dan kemoterapi.  Kemajuan  yang  signifikan  dalam patologi  molekuler  glioblastoma  dan  jalur persinyalan  sel,  menciptakan  peluang terapi  baru. Perawatan  inovatif,  contohnya  penanganan tumor ( TTFields )  dan  imunoterapi,  memberi  harapan untuk kelangsungan hidup yang lebih baik [2].
Sejauh  ini  bakteri  yang  digunakan  sebagai alternatif  pengobatan  kanker  adalah  spesies Salmonella.  Salmonella tergolong  bakteri  Gram
negatif  anaerob  fakultatif  [10]. Salmonella Typhimurium yang  telah  dilemahkan  banyak digunakan  sebagai  antikanker  karena mudah dimanipulasi  secara  genetik  sehingga  dapat memberikan senyawa terapi  atau  modulator imun ke  situs  tumor.  Bakteri Salmonella Typhimurium diperkirakan dapat menghancurkan tumor melalui persaingan  dalam  mendapatkan  nutrisi  dan toksisitas karena pertumbuhan bakteri [11].
Kajian  literatur  ini  bertujuan  untuk  1) menjelaskan  karakteristik  bakteri Salmonella Typhimurium, 2) menjelaskan potensi Salmonella Typhimurium sebagai antikanker glioblastoma, 3) memaparkan mekanisme rekayasa genetika Salmonella Typhimurium sebagai  agen  terapi kanker, dan 4) memaparkan keberhasilan Salmonella Typhimirium dalam mengatasi kanker.

## PEMBAHASAN
Karakteristik  Salmonella  Typhimurium. Terdapat banyak bakteri yang dikembangkan saat ini untuk menjadi suatu pendekatan terapi penyakit pada manusia.  Bahkan,  penelitian  beberapa tahun terakhir  menunjukkan  bahwa  bakteri  yang umumnya dianggap sebagai patogen bagi organisme lain justru memiliki prospek menjanjikan  sebagai  pengobatan  penyakit,  salah satunya Salmonella Typhimurium yang dikembangkan untuk pendekatan terapi antikanker bagi manusia. Salmonella Typhimurium merupakan bakteri berbentuk batang dan termasuk sebagai  bakteri  gram  negatif  dalam  pewarnaan gram.
Iswari  dkk  dalam  [12]  menjelaskan  bahwa, bakteri Salmonella Typhimurium tidak mempunyai  spora,  terdapat  flagel  pada  tubuhnya untuk  membantu  pergerakan  yang  disebut  flagel peritrik. Salmonella Typhimurium bersifat intraseluler  fakultatif  dan  anaerob  fakultatif.
Ukurannya berkisar antara 0,7-1,5x2-5 mikrometer, terdapat antigen somatic (O), antigen flagel (H) dengan dua fase dan antigen kapsul (Vi).
Bakteri  jenis Salmonella tidak  sulit  dalam perkembangan  hidupnya  atau  membutuhkan kondisi khusus supaya dapat hidup secara optimal karena  bakteri  ini  dapat  hidup  dan  berkembang biak  dalam  berbagai  kondisi  lingkungan  di  luar inang  yang  hidup  [13].  Gray  &  Fedorka-Cray dalam [13] menyatakan, sebagian besar jenis dari Salmonella tumbuh  dalam  suhu  lingkungan berkisar 5 – 47 ºC dan memiliki suhu optimal 35 – 37 ºC. Namun, beberapa juga dapat bertahan hidup pada suhu rendah 2 – 4 ºC dan suhu tinggi 54 ºC. Salmonella peka  terhadap  suhu  panas  dan  dapat mati  pada  kondisi  suhu  74 ºC  atau  lebih.  Mereka tumbuh di kisaran pH 4-9 dengan optimum antara 6,5  –  7,5,  membutuhkan  aktivitas  air  yang  tinggi (aw) antara 0,99 – 0,94 (air murni aw = 1,0) tetapi
Salmonella dapat bertahan pada aw<0,2 itu artinya lingkungan  lebih  kering,  contohnya  makanan kering [13].
Salmonella merupakan bakteri anaerob fakultatif negatif yang hidup dan bereplikasi bisa di dalam  maupun  di  luar  sel  inangnya  [10]  [13]. Beberapa  jenis  bakteri  ini  mempunyai  sifat intrinsik  dapat  mengolonisasi  sel  tumor  [14]. Pengembangan  terbaru  dari  bakteri Salmonella ditemukan terdapat beberapa jenis dari bakteri ini yang telah di ujicoba untuk terapi yang ditargetkan pada  sel  tumor  atau  sebagai  antitumor,  terutama VNP20009, A1-R, dan CRC2631 [10]. Gen virulen atau VNP20009 merupakan gen yang diekspresikan oleh bakteri
Salmonella
Typhimurium.  Gen  ini  dimodifikasi  melalui rekayasa  genetika  sehingga  disebut  gen  mutan yang digunakan untuk terapi antikanker. Salmonella Typhimurium mampu  tumbuh  pada kondisi  aerobik  and  anaerob  yang  mendasari bakteri  ini  dapat  berkoloni  pada  tumor  besar  dan kecil [15]. Salmonella Typhimurium memiliki sifat unik  dalam  pengembangannya  sebagai  terapi antikanker, yaitu mampu mendeteksi dan menargetkan  sel  tumor,  dapat  tumbuh  secara preferensial  dalam  lingkungan  mikro  khususnya tumor,  dapat  melakukan  penetrasi  intratumoral yang baik, serta programabilitas serbaguna [16].
Salmonella Typhimurium  memiliki  atribut intrinsik yang mampu secara selektif mengintervensi kepadatan tumor dan metastasisnya. Salmonella Typhimurium  mampu menargetkan  dan  menghancurkan  tumor  dalam tiga acara khusus; menginduksi kekebalan respon terhadap keberadaan tumor, memanfaatkan toksin bakteri  untuk  secara  langsung  mengaktifkan caspase -3 (enzim penting dari jalur apoptosis), dan juga  sebagai  vektor  dalam  memberikan  senyawa antikanker ke lokasi kanker. Salmonella Typhimurium  mampu  menembus  jauh  ke  dalam tumor  dan  tidak  terpengaruh  oleh  oleh  strategi penghindaran  berupa  kekebalan  dari  tumor tersebut. Salmonella Typhimurium  bersifat  motil dan  dapat  dengan  mudah  dimanipulasi  secara genetik  [17]. Salmonella Typhimurium  berfungsi sebagai  vektor  yang  cocok  dalam  imunoterapi antitumor [18] dengan ciri-ciri, yaitu; kemampuan kolonisasi  tumor  [19]  [20],  metastasis  [21],  dan afinitas untuk sel penyaji antigen [22].
Potensi  Salmonella  Typhimurium  dalam menghasilkan  antikanker  glioblastoma. Terapi bakteri dengan menggunakan Salmonella Typhimurium  dapat  mengambil  manfaat  dari motilitas dan metabolisme  mikroba  untuk mengatasi  sejumlah  masalah  terkait  penyakit kanker  [23].  Manfaat  motilitas  menyebabkan bakteri tidak hanya mampu mendeteksi kemotaksis yang  terjadi  pada  kanker  tetapi  juga  dapat mengikuti  gradien  kimia.  Hal  ini  kontras  dengan
terapi pasif yang hanya berdifusi ke dalam jaringan dari  sirkulasi.  Bakteri  jauh  mampu  menembus hingga  ke  jaringan  tumor  dan  bekerja  secara spesifik  misalnya  mengekspresikan  protein  atau mentransfer  gen-gen  ke  sel-sel  tumor,  salah satunya kanker yang teralokasi jauh dari pembuluh darah.  Strain Salmonella terbukti  efektif  dan bekerja  secara in  vitro .  Manfaat  metabolisme menyebabkan bakteri bekerja aktif secara metabolik dan mampu melakukan tugas metabolisme  secara  spesifik  di  lokasi  sel  target yang berbeda dengan molekul kimia atau biologis. Bakteri juga dapat mengekspresikan antigen terkait sel target tersebut untuk merangsang sistem imun antikanker sistemik.
Menurut  [24]  terdapat  beberapa  potensi  atau keuntungan yang dapat diberikan oleh Salmonella. Penargetan  pada  sel  tumor  dengan  menggunakan injeksi  sistemik  menyebabkan Salmonella dapat terakumulasi dalam tumor dengan rasio lebih besar yaitu 1:1000 dibandingkan dengan jaringan normal seperti biasa sehingga dapat mengurangi toksisitas pada  inang. Penetrasi  intratumoral  dengan menggunakan Salmonella motil dapat secara aktif bermigrasi  menjauh  dari  pembuluh  darah  ke jaringan  sel  tumor  yang  dalam  sehingga  dapat mengatasi  keterbatasan  penetrasi  kemoterapi . Salmonella memiliki  aktivitas  intrinsik  untuk membunuh sel-sel kanker dengan cara menginduksi  kedua  sel  apoptosis  dan autofag. Salmonella dapat  menghambat angiogenesis tumor.  Infeksi Salmonella dapat  menstimulasi respon  imun  anti  tumor  inang  di  dalam  jaringan tumor  termasuk  respon  imun  inflamasi  dan ketergantungan  sel  T. Salmonella memiliki  sifat patogen  intrinsik  yang  dapat  direkayasa  secara genetis agar  efisien  untuk menghilangkan kemampuan  virulensi  bakteri  dan  meningkatkan kemampuan  penargetan  tumor  sehingga  dapat meningkatkan  efektivitasnya  pada  penerapan terapi  kanker.  Vektor Salmonella dan  regulasi ekspresi  gennya  yang  tepat  dapat  meminimalkan toksisitas  sistemik  dari  inang. Pengobatan Salmonella yang dikombinasikan dengan kemoterapi  atau  radioterapi  akan  meningkatkan efek  anti  tumor  dan  mengurangi  toksisitas dibandingkan dengan pengobatan tunggal.
Pendapat  lain  juga  disampaikan  oleh  [15] mengenai  efektivitas  penggunaan Salmonella Typhimurium untuk mengobati kanker. Sifat yang dimiliki Salmonella Typhimurium  sangat  unik yaitu  menargetkan  sel-sel  tumor,  memiliki pertumbuhan  prefensial  dalam  lingkungan  mikro khusus tumor, memiliki  administrasi intratumoral yang  baik,  serta  sitotoksitas  dan  imunogenisitas yang rendah. Salmonella dapat direkayasa sebagai bagian  dari  pendekatan  terapi  aktif  untuk  kanker dan  memiliki  beberapa  keunggulan  dibandingkan
terapi  konvensional.  Berdasarkan  pernyataan tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa Salmonella Typhimurium  memiliki  banyak  potensi,  salah satunya dapat direkayasa untuk digunakan sebagai terapi anti-kanker. Potensi yang dimiliki Salmonella menurut  [25],  dapat  mengaktifkan makrofag  atau  sel  dendrit  yang  akan  merangsang aktivitas  sel  T  dan  ekspresi  sitokinin.  Bakteri  ini akan menyebabkan kematian sel-sel tumor dengan menginduksi apoptosis dan autofag untuk mengaktifkan  caspase  atau  menurunkan  regulasi jalur persinyalan.
Tumor  glioma  merupakan  tumor  pada  sistem saraf  pusat  dan  salah  satu  jenisnya  adalah glioblastoma. Sebuah artikel penelitian menyatakan  bahwa  bakteri  jenis Salmonella Typhimurium  A1-R  mampu  menghambat  tumor tersebut.  Strain  penargetan  tumor  oleh  bakteri Salmonella Typhimurium A1-R mampu menghambat  dan  membasmi  glioma  manusia dalam model tikus ortotopik. Bakteri ini diberikan melalui injeksi dengan jendela terbuka kraniotomi atau  intravena  pada  tikus.  Untuk  menetapkan model,  sel  glioma  manusia  2  x  105  U87-RFP disuntikkan  secara  stereotaktik  ke  otak  tikus melalui kraniotomi. Dua minggu setelah implantasi sel  glioma,  tikus  diobati  dengan Salmonella Typhimurium  A1-R  seminggu  sekali  selama  tiga minggu.  Tumor  otak  diamati  dengan  fluoresensi melalui  kraniotomi  dari  waktu  ke  waktu. Salmonella Typhimurium A1-R, mampu menghambat pertumbuhan tumor otak 7,6 kali lipat dibandingkan dengan tikus yang tidak diobati dan meningkatkan kelangsungan hidup 73% [26].
Mekanisme  rekayasa  genetika  Salmonella Typhimurium. Perkembangan  teknologi  biologi molekuler memunculkan banyak metode rekayasa genetika untuk meningkatkan pemanfaatan organisme  hidup.  Salah  satu  teknologi  rekayasa genetika  adalah  modifikasi  bakteri Salmonella Typhimurium  untuk  terapi  antikanker.  Rekayasa genetika adalah teknologi untuk memanipulasi gen mikroba  dalam  rangka  mengatur  tingkat  ekspresi gen dan produksi senyawa tertentu sehingga dapat menghasilkan produk yang bermanfaat [27].
Proses  rekayasa  genetika  bakteri Salmonella Typhimurium terdiri dari beberapa tahapan, yaitu: 1. Modifikasi Salmonella Typhimurium Bakteri Salmonella Typhimurium memiliki sifat strain yang dapat menekan pertumbuhan sel- sel kanker seperti VN20009 (purI−/ msbB−), AR- 1  dan  ∆ppGpp  namun  strain-strain  ini  harus dimodifikasi  secara  genetis  karena  sifatnya  yang patogen. Salmonella Typhimurium yang dilemahkan  dilaporkan  memiliki  kecenderungan untuk  berakumulasi  dan  bereplikasi  secara  alami dalam berbagai macam tumor padat [28]. Sumber lain  mengatakan  bahwa  VN20009  telah  banyak
dipelajari  dalam  model  tumor  hewan  dan  diuji secara  klinik  sehingga  mempertimbangkan  sifat patogen intrinsik bakteri Salmonella Typhimurium ini  maka diperlukan  pelemahan  virulensi  yang efisien  untuk  keamanan  [24].  VNP20009  adalah strain Salmonella Typhimurium yang  memiliki profil  yang  baik  dalam  mengatasi  tumor  namun harus  dilemahkan  secara  genetis  yaitu  dengan penghapusan gen purI dan msbB untuk mengurangi kerentanan  antibioti  [25].  Strain  lain  yang dilemahkan adalah AR-1 2. Pelemahan strain AR-1
Bertujuan  untuk  “menipu”  sel  kanker  dengan cara  masuk  ke  dalam  siklus  sel  dari  G0/G1  ke S/G2/M  sehingga  meningkatkan  sensitivitas terhadap  kemoterapi  dan  menekan  pertumbuhan sel.  Selain  kedua  strain  tersebut,  strain  ∆ppGpp (relA-,  spoT-)  yang  merupakan  avirulen  juga dimodifikasi  dengan  mengatur  ekpresi  gen endoteksin [15].
3. Penyisipan agen anti tumor Terlepas  dari  kemampuan  bakteri  untuk mengobati kanker yang sudah diteliti, kemampuan bakteri  ini  belum  cukup  untuk  mengatasi  kanker secara keseluruhan. Untuk meningkatkan efisiensi terapi antikanker, Salmonella yang telah dilemahkan  digunakan  sebagai  vektor  yang disisipkan  berbagai  agen  anti-tumor  seperti sitokinin,  agen  sitotoksik,  molekul  pengatur, antigen atau antibodi terkait tumor, enzim prodrug, dan  siRNA  yang  akan  diekspresikan  oleh  bakteri (sistem  ekspresi  prokariotik)  atau  diekspresikan setelah  ditransfer  ke  dalam  sel  target  yaitu  sel kanker  atau  sel  makrofag  (sistem  ekspresi eukariotik).
4. Kontrol pemicu ekspresi gen Strategi  yang  digunakan  untuk  regulasi  atau pemicu  ekspresi  gen  sebagian  besar  termasuk dalam  tiga  kategori  di  antaranya  pemicu ekstraseluler,  penginderaan  lingkungan,  dan induksi diri. Misalnya faktor pemicu ekspresi gen ekstraseluler  meliputi  L-arabinose  dan Acetyl Salicylic  Acid (ASA)  yang  merupakan  pemicu biologis  nontoksik  yang  mengontrol  ekspresi  gen di bawah promotor PBAD dan promotor Pm yang mengontrol ekspresi gen sel tumor dan mereduksi pertumbuhan sel-sel tumor [24].
Teknik  pengembangan  yang  digunakan  dalam rekayasa  genetika Salmonella Typhimurium ini cukup rumit dikarenakan meliputi beberapa tahap seperti  proses  melemahkan  beberapa  strain  yang berpotensi sebagai antikanker lalu disisipkan agen- agen anti-tumor hingga kontrol ekspresi gen yang membutuhkan  kerja  spesifik  dan  kompleks. Teknologi  genetika  molekuler  dalam  teknik  ini memanfaatkan strain-strain pada bakteri Salmonella Typhimurium yang  berpotensi  untuk
membunuh sel kanker dan memotong beberapa gen yang bersifat patogen atau bersifat mutan.
Kelebihan  utama  dari  teknik  ini  adalah kemampuan  mengatasi  kanker  yang  merupakan penyakit  yang  sangat  rumit.  Profil  genetik  dan fenotipik bervariasi di antara berbagai jenis tumor yang sering menghasilkan respon berbeda terhadap terapi, oleh sebab itu terapi seluler universal yang dikembangkan belum tentu dapat mengatasi setiap permasalahan  jika  semua  presentasi  tumor  tidak diketahui [10].
Salmonella Typhimurium telah terbukti efektif dapat  mengobati  bukan  hanya  satu  jenis  kanker melainkan  beberapa  jenis  kanker  seperti  kanker prostat,  payudara,  pankreas,  dan  beberapa  jenis kanker  lain.  Selain  itu, Salmonella Typhimurium layak  untuk  diteliti  lebih  lanjut  karena  banyak potensi  keuntungannya  dibandingkan  perawatan anti-tumor konvensional [24]. Penelitian percobaan melalui tikus yang disuntikan sel glioma pada  otaknya, Salmonella Typhimurium  sebagai agen antikanker, dilemahkan dan ditransformasikan  dengan  gen  antitumor  yang dikodekan  plasmid ClyA untuk  melisiskan  sel tumor yang pernah diekspresikan dalam sel kanker. Ekspresi ClyA dikendalikan  oleh  promotor  TetR sebagai respons terhadap doksisiklin ekstraseluler. Gen  bakteri  dapat  dengan  mudah  dimanipulasi, Salmonella Typhimurium dapat direkayasa secara khusus  untuk  terapi  kanker  dengan  memberikan ClyA sebagai protein pembunuh kanker [29].
Jangkauan  yang  luas  dari  tipe  tumor  atau  sel kanker  yang  dapat  ditargetkan  oleh Salmonella Typhimurium hasil rekayasa genetika ini memberikan  jaminan  peningkatan  keberhasilan terapi  kanker  yang  akan  dibahas  pada  pokok bahasan berikut. Selain itu, pengetahuan yang lebih luas mengenai mekanisme ini dapat memfasilitasi pengembangan  teknik  modifikasi  materi  genetik dengan metode yang lebih sederhana dalam bidang bioteknologi modern dan penelitian dan uji secara medis.
Mekanisme Salmonella Typhimurium sebagai agen antikanker glioblastoma. Beberapa penelitian  telah  menunjukkan  bahwa  beberapa mikroba  memiliki  aktivitas  yang  menunjukkan potensi  sebagai  antikanker  karena  sifat  toksisitas dapat bekerja terhadap proses tertentu dalam suatu siklus  tumor.  Dalam  hal  ini,  bakteri Salmonella Typhimurium dapat digunakan untuk
menghancurkan sel-sel kanker dengan menargetkan molekul-molekul antikanker spesifik ke daerah luar hingga masuk masuk ke dalam sel- sel  kanker  yang  tidak  dapat  dicapai  oleh  terapi konvensional.  Salmonella  Typhimurium  dapat menghancurkan  sel-sel  kanker  dengan  tiga mekanisme  spesifik,  yaitu  dengan  mensekresikan komponen anti-kanker, mensintetasi sistem
kekebalan  terhadap  keberadaan  sel  kanker,  dan menggunakan racun bakteri untuk secara langsung mengaktifkan  enzim  apoptosis  spesifik,  yaitu enzim caspase -3 [11].
Glioblastoma  adalah  menentukan  sel  kanker sebagai  target  untuk  menginjeksikan  molekul- molekul  antikanker  dari  bakteri Salmonella Typhimurium . Bakteri Salmonella pada  dasarnya tertarik  pada  model  sel  kanker  yang  membentuk silinder in  vitro yang  terdapat  di  daerah  pusat massa  sel  kanker  di  mana  pada  bentuk  ini keberadaan  sel  nekrotik  yang  dalam  keadaan ‘diam’  memungkinkan  strain  bakteri Salmonella untuk  dapat  bereplikasi  di  dalam  jaringan  tumor. Salmonella Typhimurium merupakan jenis bakteri anaerob yang artinya untuk menentukan sel target, sebagai vektor bakteri perlu menemukan sel target dengan  lingkungan  yang  memungkinkan  bakteri tersebut  dapat  bereplikasi  dengan  baik  dan  kadar oksigen  (O 2 )  merupakan  salah  satu  komponen paling  penting  yang  digunakan  bakteri  untuk menemukan lingkungan mikro-tumor. Penggunaan bakteri Salmonella Typhimurium , konsentrasi oksigen  yang  rendah  akan  sangat  mendukung kolonisasi  spesifik  dan  proliferasi  fakultatif. Mekanismenya  adalah  setelah  diinjeksikan  ke dalam  tubuh  bakteri Salmonella Typhimurium akan menuju ke sel-sel kanker melalui aliran darah. Bakteri  dapat  menargetkan  sel  kanker  pada manusia dengan mendeteksi glikoprotein dari sel- sel karsinoma sehingga bakteri dapat mengikat sel- sel kanke [10].
Selanjutnya, setelah mendeteksi dan menargetkan sel-sel kanker, Salmonella Typhimurium akan  menempel  pada  dinding pembuluh  tumor  dengan  frekuensi  rendah  dan jumlah  bakteri  yang  menempel  pada  pembuluh darah  bergantung  pada  kecepatan  darah  sehingga hemodinamik juga sangat berperan penting dalam interaksi awal bakteri dengan jaringan tumor target [24].  Bakteri  yang  telah  mengikat  tumor  akan mengekpresikan gen asd (aspartate-semialdehyde dehydrogenase) sehingga mengurangi sitotoksisitas  pada  jaringan  normal  [15].  Gen asd menyebabkan  bakteri  lebih  meningkatkan  target terhadap sel-sel kanker secara khusus dibandingkan dengan sel normal.
Kemudian Salmonella Typhimurium yang telah mengikat  jaringan  tumor  akan  berkembang  biak dan membentuk koloni bakteri pada jaringan tumor dan akan memakan nutrisi dari sel-sel kanker [15]. Salmonella Typhimurium akan  mengekspresikan agen sitotoksik TNF- alpha dan ligan penginduksi apoptosis TRAIL sehingga meningkatkan toksisitas pada jaringan tumor. Bakteri Salmonella Typhimurium yang telah direkayasa akan mentransferkan RNA onkogen untuk menghambat pertumbuhan  jaringan  tumor.  Gen  RNA  spesifik
yang  disebut shRNA akan  digunakan  oleh  enzim untuk  menghasilkan  RNA  kecil  yang  disebut siRNAs yang  dapat  mengganggu  dan  memicu degradasi  RNA  tumor  target  [10].  Selain  itu, injeksi intratumoral dari bakteri Salmonella dapat mendatangkan sel supresor myeloid yang diturunkan secara imunosupresif menjadi sel yang mensekresi  TNF- alpha dengan  karakteristik neutrofil  dan  mengurangi  pembentukan  sel Treg , sehingga secara signifikan menghambat pertumbuhan  tumor  [24].  Bakteri Salmonella Typhimurium juga  dapat  meningkatkan  sistem kekebalan terhadap keberadaan tumor. Salmonella Typhimurium  yang  telah  dilemahkan  dapat mengaktifkan  kekebalan  antikanker,  dimana bakteri menginduksi produksi sitokinin proinflamasi  seperti  agen  sitotoksik  TNF- alpha untuk  meningkatkan  aktivitas  sel  imun,  termasuk sel  dendritic,  makrofag,  dan  sel  T  sehingga mengubah lingkungan mikro-tumor yang awalnya immunosuppressive menjadi immunocompetent [15]. Hal ini berarti, tubuh dapat mencegah adanya pertumbuhan sel-sel kanker terutama pada jaringan yang sebelumnya telah menjadi lokasi pertumbuhan  jaringan  tumor  karena  sistem  imun telah  yang  telah  diaktifkan  oleh  bakteri  mampu mengenali sel-sel kanker sehingga sistem kekebalan dapat langsung mencegah pertumbuhan saat sel-sel kanker kembali terdeteksi.
Selama  proses  penghancuran  sel-sel  kanker oleh  bakteri,  sisa-sisa  dari  jaringan  tumor  akan diambil  oleh  sel-sel  antigen  termasuk  makrofag untuk  membentuk  dan  menstimulus  sel  T  yang khusus  mendeteksi  sel-sel  kanker  [24].  Makrofag adalah  sel  fagositik  yang  sangat  efisien  untuk mengenali  patogen  yang  menyerang  dan  juga  sel yang  rusak,  apoptosis,  atau  ganas  dimana  setelah fagositosis, makrofag menghasilkan produk beracun  seperti  nitrat  oksida  (NO)  dan  hidrogen peroksida  yang  memiliki  sifat  bakterisidal  dan tumorisidal [30]. Hal ini berarti bakteri tidak hanya bekerja  secara  spesifik  untuk  membunuh  sel-sel kanker tetapi juga aktivitas yang dilakukan bakteri Salmonella Typhimurium dapat  merangsang pembentukan  sistem  imun  yang  secara  khusus dapat  mencegah  kembalinya  pertumbuhan  sel-sel kanker.
Salmonella Typhimurium juga dapat merangsang sekresi enzim caspase -3, yaitu enzim spesifik  apoptosis.  Induksi  apoptosis  oleh  bakteri Salmonella dapat  dilakukan  dengan  berbagai mekanisme,  termasuk  persaingan  dengan  sel kanker  untuk  mendapatkan  nutrisi  dan  pelepasan racun  bakteri  [11]. Salmonella Typhimurium secara  khusus  melakukan  ekspresi  efektor  racun yang dapat merangsang sekresikan enzim caspase - 3  bersamaan  dengan  mengeluarkan  antigen  yang tidak  dapat  diatasi  oleh  jaringan  tumor  [24].
caspase -3 yang diaktifkan oleh racun bakteri akan menyebabkan jaringan tumor mengalami peningkatan apoptosis sehingga mematikan sel-sel kanker.  Hal  senada  disajikan  berdasarkan  hasil penelitian  Zheng  dkk.,  penggunaan  bakteri Salmonella sebagai  vektor  dapat  meningkatkan penekanan tumor karena sebagai sarana pengiriman bakteri ini dapat mengangkut berbagai molekul  pensinyalan  atau  racun  ke  dalam lingkungan mikro tumor [31].
Penggambaran terapi kombinasi oleh Salmonella dapat  memengaruhi  glikoprotein  ( P- gp )  melalui  jalur  enzim caspase -3  (casp-3)  sel kanker  untuk  meningkatkan chemosensitivity (Gambar  1) . Salmonella mampu  mengubah lingkungan  mikro  tumor  otak  dengan  hipoksia, stroma,  dan  modulasi  imun  untuk  meningkatkan kerusakan  sel  kanker  yang  diinduksi  radioterapi [32].
Gambar  1. Skema  terapi  kombinasi  dengan Salmonella
Keberhasilan Salmonella Typhimurium dalam  mengatasi  kanker. Sejauh  ini  metode penggunaan  bakteri  yang  dimodifikasi  sebagai agen antikanker menunjukkan tingkat keberhasilan yang  tinggi.  Setelah  melewati  berbagai  uji  klinis dan uji toksisitas, media bakteri cukup menjanjikan sebagai  terapi  antikanker  walau  telah  dilaporkan beberapa  efek  samping  yang  muncul  [33].  Efek samping pada dosis yang lebih tinggi mengakibatkan  pasien  dapat  mengalami  demam, hipotensi,  anemia,  dan  trombositopenia,  hal  ini mungkin  disebabkan  oleh  pelepasan  sitokin. Sebagian  besar  efek  samping  ringan  dan  cepat reversibel,  tetapi  pasien  tidak  mengalami  regresi kanker  objektif. Salmonella aman  diberikan kepada  manusia  dalam  dosis  besar  dan  bahwa toksisitas strain bakteri ini terbatas. Terapi bakteri menciptakan  peluang  untuk  strategi  antikanker baru karena bakteri  memenuhi semua persyaratan untuk  agen  penargetan  tumor  yang  ideal.  Banyak contoh  telah  membuktikan  bahwa  pengobatan kanker  dengan  bakteri  dapat  menentukan  lokasi spesifik dan sangat terfokus pada tumor serta aman untuk  jaringan  lain.  Di  antara  strain  bakteri  yang
dievaluasi  sebagai  terapi  kanker, Salmonella Typhimurium  adalah  salah  satu  yang  paling menjanjikan [23].
Bakteri  yang  dimanipulasi  dapat  mengatasi banyak  keterbatasan  yang  sering  menghambat resimen kanker dengan secara langsung menargetkan sel-sel kanker, membunuh sel-sel ini melalui  toksisitas  bakteri  bawaan,  persaingan dalam  mendapatkan  nutrisi  atau  pengiriman  agen antikanker.  Spesies Salmonella,  Clostridium, Escherichia,  Bifodobacterium,  Caulobacter, dan Listeria semuanya  telah  diuji  untuk  potensi penggunaannya  dalam  terapi  kanker  dengan berbagai tingkat keberhasilan. Salmonella Typhimurium  memiliki  keuntungan  bawaan sebagai  kemoterapi,  bakteri  ini  tertarik  pada  sel kanker  oleh  senyawa  yang  dilepaskan  oleh  sel nekrotik  dan  mereka  dapat  digunakan  untuk menginfeksi  sel  atau  mengirimkan  senyawa langsung  ke  lokasi  tumor  [11].  Di  antara  bakteri yang  digunakan  untuk  pengobatan  kanker, Salmonella menunjukkan  efek  terapi  yang  baik pada  tumor  padat  dan  metastasis. Salmonella dianggap  potensial  karena  lokalisasi  spesifik tumornya,  kemampuannya  untuk  menargetkan berbagai  jenis  tumor,  genom  yang  diurutkan sepenuhnya dan toksisitas alami [25].
Penelitian lain juga membuktikan keberhasilan dari  penggunaan  modifikasi  dari Salmonella Typhimurium  yang  berhasil  sebagai  antikanker otak yang diujicobakan kepada tikus. Penelitian ini dilakukan  oleh  peneliti  Korea,  dimana  mereka melihat  dari  bioluminensi  untuk  melihat  betapa spesifiknya Salmonella Typhimurium  ini  dalam menargetkan sel tumor. Kesimpulan dari penelitian mereka  adalah  bahwa  penggunaan Salmonella Typhimurium  berhasil  karena  terapi  gen  dalam model glioma xenograft . Salmonella Typhimurium yang  direkayasa  secara  genetika  sangat  berguna untuk  evaluasi  pra-klinis  rejimen  terapeutik  baru untuk pengobatan tumor otak [34].
Peningkatan  jumlah  hasil  penelitian  yang relevan  berbasis  sel  hingga  praklinis  jelas menunjukkan bahwa terapi menggunakan Salmonella adalah kandidat terapi yang menjanjikan dan berpotensi menjadi strategi terapi utama  dalam  pengobatan  kanker.  Hal  ini dikarenakan Salmonella dapat  bekerja  secara efisien  dalam  interaksi  yang  beragam  antara peningkatan regulasi molekul imunomodulator dan menurunkan regulasi protein terkait fenotip agresif untuk  menetralkan  berbagai  proses  seluler protumor,  serta  digunakan  untuk  meningkatkan kelangsungan  hidup  pasien  kanker.  Hambatan dalam menggunakan Salmonella telah diatasi atau paling  tidak  dikurangi  melalui  rekayasa  genetika, seperti  potensi  toksisitas  dan  respons  imun  inang terhadap agen bakteri itu sendiri [35]. Berdasarkan
hal  tersebut,  dapat  dikatakan  bahwa  penggunaan Salmonella ini  sebagai  antikaker  sudah  cukup berhasil dan dapat lebih dikembangkan lagi.

## KESIMPULAN
Salmonella Typhimurium  dapat  digunakan sebagai  terapi  antikanker  karena  memiliki penargetan  pada  sel  tumor  yang  baik  dan  dapat membunuh sel kanker. Penetrasi intratumoral juga dapat  dilakukan  untuk  menjauh  dari  pembuluh darah ke jaringan sel tumor agar dapat mengatasi keterbatasan  penetrasi  kemoterapi.  Potensi  lain yang dimiliki bakteri ini yaitu dapat mengaktivasi dengan  cara  sebagai  stimulus  respon  imun  dan dapat  direkayasa  genetik  untuk  terapi  aktif  dan terapi kombinasi.
Terapi  bakteri Salmonella Typhimurium  yang dilakukan  dengan  cara  rekayasa  genetik  dapat dilakukan  dengan  beberapa  tahap  yaitu  pertama, modifikasi Salmonella Typhimurium  dengan melemahkan  bagian  genetiknya  yaitu  VNP20009 yang  baik  untuk  mengatasi  tumor  Kedua, penyisipan  gen  antitumor  seperti  sitokinin,  agen sitotoksi, molekul  pengatur,  antigen atau  antibodi terkait tumor, enzim prodrug, dan RNA yang akan diekspresikan oleh bakteri. Ketiga, kontrol pemicu ekspresi gen yang terdiri dari pemicu ekstraseluler, penginderaan lingkungan, dan induksi diri.
Mekanisme Salmonella Typhimurium  sebagai antikanker glioblastoma dilakukan dengan penghancuran sel-sel kanker glioblastoma dengan mengikat  sel-sel  tersebut  kemudian Salmonella Typhimurium akan  membentuk  koloni  yang  akan memakan  nutrisi  tersebut  dari  sel  kanker.  Bakteri tersebut selanjutnya mentransferkan RNA onkogen sehingga  petumbuhan  jaringan  sel-sel  target menjadi terhambat. Bakteri Salmonella Typhimurium  yang  telah  dilemahkan  dapat mengaktifkan kekebalan antikanker.
Salmonella Typhimurium  cukup  potensial sebagai  terapi  antikanker  karena  dapat  dengan spesifik  menentukan  lokasi  sel-sel  target,  dalam bentuk  terapi  gen  model  glioma xenograft . Hambatan  yang  dialami  pada  saat  menggunakan bakteri  ini  dapat  diatasi  dengan  cara  rekayasa genetika seperti potensi toksisitas dan respon imun inang terhadap bakteri tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Dewi M (2017) Sebaran kanker di Indonesia, riset kesehatan dasar 2007. Indonesian Journal of Cancer 11(1): 1-8.
[2] Davis  M  (2016)  Glioblastoma:  Overview  of disease  and  treatment.  Clinical  Journal  of Oncology Nursing  20 (5): 2-8.
[3] Thakkar  J,  Dolecek  T,  Horbinski  C,  Ostrom Q,  Lightner  D,  Barnholtz-Sloan  J,  Villano  J (2014) Epidemiologic and molecular prognostic  review  of  glioblastoma.  Cancer
Epidemiol  Biomarkers  Prev  23  (10):  1985- 1986.
[4] Alexander  B,  Cloughesy  T  (2017)  Adult glioblastoma.  Journal  of  Clinical  Oncology 35(21): 2402-2407.
[5] Momiyama  M,  Zhao  M,  Kimura  H,  Tran  B, Chishima  T,  Bouvet  M,  Endo  I,  Hoffman  R (2012)  Inhibition  and  eradication  of  human glioma  with  tumor  targeting Salmonella typhimurium  in  an  orthotopic.  Cell  Cycle 11(3): 628-632.
[6] Bestari  R,  Indra  S  (2020)  Recurrent glioblastoma  multiforme.  Jurnal  Kesehatan Andalas 9(15): 210-214.
[7] Chung C, Laperriere N (2013) Update on the current  management  of  glioblastoma.  Clin. Pract 10(2): 157–165.
[8] Balducci L, Colloca G, Cesari M, Gambassi G (2010)  Assessment  and  treatment  of  elderly patients  with  cancer.  Surgical  Oncology 19(3): 117-123.
[9] Hernandez-Luna  MA,  Luria-Perez  R  (2018) Cancer  immunotherapy:  Priming  the  host immune  response  with  live  attenuated Salmonella enterica . Journal of Immunology Research 2018(Article ID 2984247): 1-15.
[10] Wang  C.-Z,  Kazmierczak  R,  Eisenstark  A (2016)  Strains,  mechanism,  and  perspective:
Salmonella -based cancer therapy. International Journal of Microbiology
2016(Article ID 5678702): 1-10.
[11] Wall  DM,  Srikanth  CV,  McCormick  BA (2010)  Targeting  tumors  with Salmonella
Typhimurium: Potential for therapy.
Oncotarget 1(8): 721–728.
[12] Cita YP (2011) Bakteri Salmonella typhi dan demam  tifoid.  Jurnal  Kesehatan  Masyarakat 6(1): 42-46.
[13] Pui  F,  Wong  C,  Chai  C,  Tunung  R, Jeyaletchumi  P,  Hidaya  SN,  Ubong  A, Farinazleen  G,  Cheah  Y,  Son  R  (2011) Salmonella :
A foodborne pathogen.
International  Food  Research  Journal  18  (2). pp. 465-473.
[14] Leschner  S,    Weiss  S  (2010) Salmonella — allies  in the fight  against cancer.  J  Mol Med 88: 763–773.
[15] Zheng  J,  Min  J.-j  (2016)  Targeted  cancer therapy using engineered Salmonella Typhimurium . Chonnam  Medical  Journal 52(3): 173-184.
[16] Forbes  N  (2010)  Engineering  the  perfect (bacterial)  cancer  therapy.    Nature  Reviews Cancer 10(11): 785–794.
[17] Enejiyon SO, Adabara NU, Wuna MM, Fasasi RA  (2020) Salmonella Typhimurium  as  a potential  anticancer  agent:  A  review.  Sri
Lankan Journal of Infectious Diseases 10(2): 98-113.
[18] Wei  M,  Ellem  K,  Dunn  P,  West  M,  Bai  C, Vogelstein  B  (2007)  Facultative  or  obligate anaerobic  bacteria  have  the  potential  for multimodality therapy of solid tumours. Euro J Cancer 43(3): 490-496.
[19] Moreno M, Kramer MG, Yim L, Chabalgoity J  (2010) Salmonella as  live  trojan  horse  for vaccine  development  and  cancer  gene therapy. Curr Gene Ther 10(1): 56-76.
[20] Pawelek  JM,  Low  KB,  Bermudes  D  (1997) Tumor-targeted Salmonella as  a  novel anticancer  vector.  Cancer  Res  57(20):  4537- 4544.
[21] Ganai S, Arenas R, Sauer J, Bentley B, Forbes N (2011) In tumors Salmonella migrate away from  vasculature  toward  the  transition  zone and  induce  apoptosis.  Cancer  Gene  Ther 18(7): 457-466.
[22] Zhang  Y,  Miwa  S,  Zhang  N,  Hoffman  R, Zhao  M  (2015)  Tumor-targeting Salmonella typhimurium  A1-R  arrests  growth  of  breast- cancer  brain  metastasis.  Oncotarget  6(5): 2615–2622.
[23] Chorobik P, Czaplicki D, Ossysek K, Bereta J (2013) Salmonella and cancer: from pathogens  to  theraupetics.  ACTA  ABP BIOCHIMICA POLONICA (60)3: 285-297.
[24] Liang K, Liu Q, Li P, Luo H, Wang H, Kong Q  (2019)  Genetically  engineered Salmonella typhimurium:  recent  advances  in  cancer therapy. Cancer Letters 448(2019): 168-181.
[25] Mi  Z,  Feng  Z.-C,  Li  C,  Yang  X,  Ma  M.-T, Rong  P.-F  (2019) Salmonella -mediated cancer  therapy:  An  innovative  therapeutic strategy.  Journal  of  Cancer  10(20):  4765- 4776.
[26] Momimaya  M,  Zhao  M,  Kimura  H,  Tran  B, Chisima  T,  Bouvet  M,  Endo  I,  Hoffman  R (2012)  Inhibition  and  eradication  of  human glioma  with  tumor-targeting Salmonella typhimurium  in  an  orthotopic  nude-mouse model. Cell Cycle 11(3): 628-632.
[27] Wardani,  Wijayanti  A,   Widyastuti  E (2017) Pengantar bioteknologi. Malang. UB Press.
[28] Nguyen V, Kim H.-S, Ha J.-M, Hong Y, Choy H,  Min  J.-J  (2010)  Genetically  engineered Salmonella typhimurium  as  an  imageable therapeutic probe for cancer. Cancer Research 70(1):18-22.
[29] Chen J.-q, Zhan Y.-f, Wang W, Jiang S.-n, Li X.-y  (2015)  The  engineered Salmonella typhimurium inhibits tumorigenesis in advanced glioma. Onco Targets Ther 8(2015): 2555–2563.
[30] Biller  B,  Dow  S  (2007)  Immunotherapy  of cancer. In: Withrow S, Vail D (eds) Withrow
&  MacEwen's  Small  Animal  Clinical
Oncology.  Elesevier,  Amsterdam,  pp  211- 235.
[31] Gao S, Jung J.-H, Lin S.-M, Jang A.-Y, Zhi Y, Ahn K, Ji H.-J, Lim JH, Guo H, Choy H, Lim S, Seo H (2020) Development of oxytolerant Salmonella typhimurium  using  Radiation
Mutation  Technology  (RMT)  for  cancer therapy. Scientific Reports 10(1): 3764.
[32] Mi  Z,  Feng  Z.-c,  Li  C,  Yang  X,  Ma  M.-T, Rong  P.-F  "  (2019) Salmonella -mediated cancer  therapy:  An  innovative  therapeutic strategy.  Journal  of  Cancer  10(20):  4765- 4776.
[33] M. Shi and L. Sanche, "Convection-enhanced delivery  in  malignant  gliomas:  A  review  of toxicity  and  efficacy,"  Journal  of  Oncology, vol. 2019, pp. 1-9, 2019.
[34] Wen M, Jung S, Moon K.-S, Jiang SN, Li S.- Y,  Min  J.-J  (2014)  Targeting  orthotopic glioma  in  mice  with  genetically  engineered Salmonella typhimurium.  Journal  of  Korean Neurosurgical Society 55(3): 131–135.
[35] Pangilinan  C,  Lee  C.-H  (2019) Salmonella -
based  targeted  cancer  therapy:  Updates  on  a promising and innovative
tumor
immunotherapeutic  strategy.  Biomedicines
7(2):1-8.