## PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL DARI EKSTRAK ETANOL
BUNGA ROSELLA BERWARNA MERAH ( Hibiscus sabdariffa L.) DENGAN MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis
Sulastri Sam 1 , Abd.Malik dan Selpida Handayani Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
1 atrigita99@yahoo.com

## ABSTRACT
Essential  ingredients  comfounds  in  roselle  (Hibiscus  sabdariffa L. )  petals  is  anthocyanin  pigments  which include flavonoid that acts as an antioxidant. The aim of this research is to determine content of total phenolic of red roselle  flowers  (Hibiscus  sabdariffa L .)  ethanol  extract.  Sample  as  many  one  kilograms  extracted  by  maceration method  using  ethanol  96%.  Resulty  127,03  grams  extract.  Total  phenolic  content  determined  by  UV-Vis spectrophotometer  at  wavelenght  737  nm  with  gallic  acid  equivalent  as  standard  reference  with  Folin-Ciocalteau reagent. The result show the rendamen of ethanolic extract is 12.703% with total phenolic content is 0.1853%.
Keywords : Hibiscus sabdariffa L , Total phenolic, Folin-Ciocalteau method, UV-Vis spectrophotometer.

## I. PENDAHULUAN
Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  merupakan salah satu dari sekian banyak tanaman Indonesia yang memiliki banyak manfaat. Budidaya rosella ( Hibiscus sabdariffa L.)  khususnya  yang  berwarna  merah  di Indonesia sampai saat ini masih memiliki peluang dan prospek  yang  sangat  baik.  Hal  ini  didasarkan  pada kondisi  iklim  dan  tanah  yang  sesuai  dan  didukung dengan  masih  terbukanya  pasar,  baik  untuk  dalam maupun  luar  negeri.  Meskipun  di  Indonesia  rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) belum banyak dimanfaatkan, tetapi  di  negara  lain  telah  dimanfaatkan  sejak  lama. Selain  dimanfaatkan  sebagai  makanan,  rosella ( Hibiscus  sabdariffa L.)  juga  bermanfaat  sebagai pangan  yang  berkhasiat  bagi  kesehatan  (Maryani  dan Kristiana, 2008).
Kelopak  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) mengandung protein, lemak, serat, mineral seperti kalsium,  fosfor,  dan  besi,  serta  vitamin  seperti thiamin,  riboflavin,  niasin,  dan  asam  skorbat.  Selain itu  mengandung  senyawa  karotenoid,  flavonoid,  dan alkaloid. Manfaat ekstrak rosella ( Hibiscus sabdariffa L.)  bagi  kesehatan  adalah  sebagai  antihipertensi, antihiperlipidemia,  hepatoprotektiv,  antikanker,  dan memiliki  aktivitas  antioksidan  (Mahadevan et  al ., 2009).  Pada  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) senyawa  yang  paling  berperan  dalam  pengobatan adalah senyawa fenolik.
Senyawa fenolik merupakan senyawa antioksidan  alami  yang  terdapat  dalam  bentuk senyawa aktif dalam makanan. Senyawa fenolik dapat mencegah berbagai jenis penyakit, seperti kanker dan jantung  koroner.  Senyawa  ini  pun  berperan  sebagai faktor pelindung terhadap bahaya oksidasi pada tubuh manusia  (Widia,  2007).  Secara  umum  senyawa
fenolik sederhana memiliki sifat bakterisidal, antiseptik dan antihelmentik (Seafast, 2012).
Penelitian kadar fenolik total yang terkandung dalam tanaman rosella ( Hibiscus sabdariffa L.)  perlu  dilakukan.  Dengan  demikian pemanfaatan tanaman rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) dapat  lebih  maksimal  untuk  dijadikan  sebagai alternatif  pengobatan  herbal  dalam  penyembuhan berbagai  macam  penyakit,  karena  dengan  melihat kadar  fenolik  total  yang  terkandung  dalam  ekstrak bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  maka  dapat diperkirakan besar aktivitas antioksidannya. Disamping  itu,  penetapan  kadar  fenolik  total  pada kelopak  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  untuk mempertegas  kandungan  fenolik  total  pada  bunga rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  yang  bermanfaat sebagai data penelitian dan pengembangan obat bahan alam.

## II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  berwarna  merah  dikumpulkan  pada  pagi  hari pukul  09.00  dengan  cara  memetik  daun  dari  cabang. Bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  berwarna merah  di  ambil  dari  tanaman  yang  sehat  dan  segar yang  ditunjukkan  dengan  tidak  adanya  kerusakan pada  bentuk  daun.  Sampel  yang  digunakan  diambil dari Kabupaten Kediri, Provinsi Jawa Timur.
Bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) berwarna merah yang telah diperoleh dibersihkan dari kotoran  yang  melekat  dengan  cara  dicuci  dengan  air mengalir kemudian dikeringkan dengan cara diangin- anginkan  pada  tempat  yang  tidak  terkena  sinar matahari  secara  langsung  kemudian  dirajang  kecil- kecil, diserbukkan dan siap untuk diekstraksi.

## B. Ekstraksi Sampel
Ditimbang 170 gram bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) berwarna  merah, kemudian dimasukan serbuk  bunga  rosella  berwarna  merah  yang  akan disari  kedalam  bejana  maserasi.  Dituang  secara perlahan pelarut etanol kedalam bejana maserasi yang berisi serbuk bunga rosella merah. Kemudian biarkan cairan  penyari  merendam  serbuk  simplisia  selama  3 hari  sesekali  dilakukan  pengadukkan,  dilakukan remaserasi  hingga  bening.  Selanjutnya  disaring  ke dalam  wadah  baru  sehingga  diperoleh  ekstrak  cair. Hasil  penyarian  dari  ekstrak  diuapkan  dengan menggunakan  rotavapor  dibawah  titik  didih  hingga diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM, 2000).
C. Pembuatan Reagen Na 2 CO 3 7% Ditimbang  sebanyak  3,5  gram  Na 2 CO 3 kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest  steril  hingga 50 ml.

## D. Penetapan Kadar Fenolik Total
Penetapan  kadar  pada  ekstrak  etanol  bunga rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  berwarna  merah merujuk  pada  prosedur  Chun et  al (2003)  dengan beberapa modifikasi.
1. Penentuan Kadar Fenolik Total
a. Pembuatan larutan standar asam galat.
Larutan standar asam gallat 1000 ppm dibuat dengan  menimbang  10  mg  asam  gallat  dilarutkan dengan  etanol  96%  hingga  volume  10  mL.  Dari larutan  stock  dipipet  sebanyak  0,25  mL  diencerkan dengan  etanol  96%  hingga  volume  25  mL  hingga dihasilkan  konsentrasi  10  ppm.  Dari  larutan  tersebut dipipet  1,  2,  3,  dan  4  mL  dan  dicukupkan  dengan etanol  96%  hingga  10  mL,  sehingga  dihasilkan konsentrasi 1, 2, 3, dan 4 ppm.
b. Pengukuran larutan standar asam galat
Untuk  masing-masing  konsentrasi  1,  2,  3, dan 4 ppm ditambahkan dengan 0,4 mL reagen Folin- Ciocalteau dikocok dan dibiarkan 8 menit, tambahkan 4,0 mL larutan Na 2 CO 3 7% kocok hingga homogen.  Tambahkan  aquades  steril  hingga  10  mL dan  diamkan  selama  2  jam  pada  suhu  ruangan.  Ukur serapan pada panjang  gelombang  serapan  maksimum 730  nm,  lalu  buat  kurva  kalibrasinya,  hubungan antara  konsentrasi  asam  galat  (µg/mL)  dengan absorbansi.
c. Pembuatan larutan ekstrak bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) berwarna merah
Larutan  ekstrak  bunga  rosella  rosella ( Hibiscus  sabdariffa L.)  berwarna  merah  dibuat dengan  cara  menimbang  10  mg  kemudian  dilarutkan dengan 10 mL etanol 96%.
d. Penetapan  fenolik  total  ekstrak  bunga  rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) berwarna merah Dipipet  sebanyak  0,5  mL  larutan  dari ekstrak etanol  bunga rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.) berwarna  merah,  ekstrak  sampel  ditambahkan dengan 0,4 mL  reagen Folin-Ciocalteau (campuran asam  fosfomolibdat  dan  fosfotungstat  )  dikocok  dan dibiarkan  4-8  menit,  tambahkan  4,0  mL  larutan Na 2 CO 3 7%  kocok  hingga  homogen.  Tambahkan aquadest  steril  hingga  10  mL  dan  diamkan  selama  2 jam  pada  suhu  ruangan.  Ukur  serapan  pada  panjang gelombang  serapan  maksimum  750  nm  yang  akan memberikan  komplek  biru.  Lakukan  3 kali pengulangan  sehingga  kadar  fenolik  yang  diperoleh hasilnya  didapat  sebagai  mg  ekuivalen  asam galat/100 mg sampel segar.

## E. Analisis Data
Pengolahan  data  yang  dihasilkan terlebih dahulu  dilakukan  dengan  metode  kurva  standar, regresi  linier  y  =  bx  +  a  dibuat  berdasarkan  data absorbansi dan konsentrasi dari larutan standar.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Penelitian Tabel 1. Hasil rendamen ekstrak etanol bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) kelopak berwarna merah
No. Sampel Bobot simplisia (g) Jumlah pelarut (mL) Hasil ekstrak (g) Rendamen ekstrak (%) 1. Kelopak Merah 1000 3500 127,03 12,703
y = 0,2506x - 0,0094 R² = 0,989 0.000 0.500 1.000 1.500 0 2 4 6 a bs o rba n Konsentrasi Asam Galat Series1 Linear (Series1)
Tabel  2 . Hasil  uji  Kualitatif  Adanya  Senyawa  Fenolik  ekstrak  etanol  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  merah
Sampel Uji Fenolik FeCl 3 Hasil Pengamatan Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) Merah Biru Kehitaman +
Keterangan: (+) = Menunjukkan adanya Fenolik.
Tabel 3 . Pengukuran absorbansi baku asam galat.
Gambar 1 . Kurva linear asam galat vs absorbansi.
Tabel 4 . Nilai Absorbansi sampel ekstrak etanol bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) merah.
Tabel 5 . Hasil pengukuran kadar fenolik total ekstrak etanol bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) merah.

## B. Pembahasan
Tanaman Rosella merah ( Hibiscus Sabdariffa L.)  merupakan  tanaman  yang  sering digunakan  masyarakat  pada  umumnya  sebagai tanaman obat. Bagian  yang paling banyak digunakan pada  tananman  Rosella  merah  ( Hibiscus  Sabdariffa
L.)  ini  adalah  kelopaknya.  Pada  penelitian  ini digunakan  kelopak  bunga  Rosella  merah  ( Hibiscus Sabdariffa L.)  yang  diambil  langsung  dari  Lahan Gunung  Pohsarung,  Kecamatan  Semen,  Kabupaten Kediri (Jawa Timur).
No Konsentrasi Asam Galat (ppm) Absorbansi 1 1 0,256 2 2 0,505 3 3 0,723 4 4 0,933 5 5 1,295 No Replikasi Absorbansi (ƛ 737 nm) 1 1 0,4535 2 2 0,4551 3 3 0,4569 Sampel Replikasi Absorbansi (Y) Kandungan Fenolik awal (mg/L) Fenolik total (mg GAE/g eks.) Rata- rata kandungan fenolik total (mg GAE/g eks.) % kadar fenolik Bunga Rosella merah 1 2 3 0,4535 0,4551 0,4569 0,0018471 0,0018535 0,0018607 1,8471 1,8535 1,8607 1,8537 0,1853
Kelopak  bunga  Rosella  merah  ( Hibiscus Sabdariffa L.)  mengandung  senyawa-senyawa  yang banyak  berperan  dalam  proses  pengobatan  seperti senyawa  fenolik.  Kandungan  penting  yang  terdapat pada kelopak bunga rosella adalah pigmen antosianin yang  membentuk  flavonoid  yang  berperan  sebagai antioksidan.  Flavonoid  rosella  terdiri  flavanols  dan pigmen  antosianin.  Antosianin  pada  kelopak  bunga rosella  berada  dalam  bentuk  glukosida  yang  terdiri dari cyanidin-3-sambubioside , delphinidin-3-glucose , dan delphinidin-3-sambubioside .  Sementara  itu, flavonols  terdiri  dari  gossypetin, hibiscetin ,  dan quercetia (Mardiah dkk, 2009). Kelopak  bunga  rosella( Hibiscus  sabdariffa L.)  juga  mengandung  alkaloid ,    L-ascorbic  acid , anisaldehid, antosianin, beta karoten, protocathecuic acid , beta sitosterol, asam sitrat, galaktosa, polifenol, cyaniding-3-rutinoside ,  mukopolisakarida,  pektin, polisakarida,  asam  stearat,  dan  lilin  (Hirunpanich, 2005).  Semakin  pekat  warna  merah  pada  kelopak bunga  rosela,  rasanya  akan  semakin  asam  dan kandungan  antosianin  (sebagai  antioksidan)  semakin tinggi (Setiawan, 2010).
Masyarakat  tradisional  di  berbagai  negara telah memanfaatkan tanaman rosella untuk mengatasi berbagai penyakit dan masalah kesehatan. Pemanfaatan  tanaman  rosela  ini  berkaitan  dengan fungsinya sebagai antiseptik, aprodisiak (meningkatkan gairah  seksual), astringen, demulcent (menetralisir  asam  lambung),  diuretik,  purgatif, anthelmintik, refrigerant (efek mendinginkan), resolvent,  sedatif,  tonik,  serta  mengobati  kanker, batuk, dispepsia, disuria, demam, hangover (kembung perut), hipertensi, neurosis, sariawan,  dan mencegah penyakit  hati  (Mardiah  dkk,  2009).  Kelopak  bunga rosella dapat digunakan untuk mencegah perkembangan atherosklerosis dan komplikasi kardiovaskuler akibat diabetes  (Farombi et al , 2007). Di  antara  banyak  khasiatnya,  kelopak  bunga  rosella diunggulkan sebagai herba antikanker, antihipertensi, dan antidiabetes (Mardiah dkk, 2009).
Kelopak  bunga  Rosella  merah  merah ( Hibiscus  Sabdariffa L.)  yang  telah  diserbukkan sebanyak  1000  gr  kemudian  dimaserasi  dengan menggunakan pelarut etanol 96% sehingga menghasilkan 127,03 gram ekstrak etanol, digunakan pelarut  etanol  karena  etanol  bersifat  semi  polar sehingga memudahkan penarikan senyawa yang polar dan non polar dimana senyawa  fenolik yang ada pada sampel  ada  yang  bersifat  non  polar  dan  ada  yang polar.  Sampel  diekstraksi  dengan  metode  maserasi karena  tekstur  dari  kelopak  bunga  rosella  ( Hibiscus Sabdariffa L.)  lunak,  jadi  diekstraksi  dengan  metode maserasi  (cara  dingin)  sehingga  tidak  merusak kandungan  kimia  dalam  kelopak  bunga  rosella ( Hibiscus  Sabdariffa L.),  dimana  kadar  antosianin
pada  kelopak  bunga  rosella  ( Hibiscus  Sabdariffa L.) berkurang jika dilakukan pemanasan.
Dilakukan uji kualitatif dengan menggunakan  lempeng  KLT  menggunakan  eluen BAA (n-butanol : asam asetat : aquadest) (4 : 1 : 5 ) kemudian  disemprotkan  dengan  FeCl 3 .  Didapatkan hasil  ekstrak  etanol  rosella  merah  ( Hibiscus Sabdariffa L.)  positif  mengandung  senyawa  fenolik yang  ditandai  dengan  adanya  noda  berwarna  biru kehitaman  pada  lempeng.  Terjadi  perubahan  pada lempeng karena adanya komposisi pada larutan FeCl 3 yang  membentuk  kompleks  dengan  senyawa  fenolik sehingga terbentuk warna biru kehitaman.
Dilanjutkan  dengan  uji  kuantitatif  untuk mengetahui  kadar  fenolik  total  pada  ekstrak  etanol kelopak  bunga  Rosella  merah  ( Hibiscus  Sabdariffa L.),  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteau  cara Chun et  al .  (2003),  dan  sebagai  standar  digunakan larutan asam galat atau asam 3,4,5-trihidroksibenzoat (C 6 H 2 (OH) 3 CO 2 H) (Apsari dan Susanti, 2011) karena asam galat merupakan turunan dari asam hidroksibenzoad  yang  tergolong  asam  fenolik sederhana dan juga sebagai standar yang ketersediaan substansi  yang  stabil  dan  murni  (Rahmawati,  2009). Dengan  variasi  konsentrasi  1;2;3;4;5  ppm.  Pada penetapan  kadar  juga  digunakan  Na2CO 3 ,  dalam pembuatan  Na 2 CO 3 ,  ditimbang  sebanyak  3,5  gram Na 2 CO 3 kemudian dilarutkan dengan 20 mL aquadest steril  sampai  larut  senpurna.  Setelah  itu  dicukupkan sampai 50 ml.
Pembanding yang digunakan pada penetapan kadar  ekstrak  etanol  kelopak  bunga  Rosella  merah  ( Hibiscus  Sabdariffa L.  )  adalah  asam  galat.  Selain asam  galat,asam  tanat  juga  bisa  digunakan  sebagai pembanding  pada  penetapan  kadar  fenolik,  karena asam  galat  memiliki  gugus  hidroksil  3  sedangkan asam  tanat  hanya  memiliki  gugus  hidroksil  2, semakin  banyak  gugus  hidroksil,  maka  semakin reaktif digunakan sebagai antioksidan, selain itu asam galat  juga  merupakan  turunan  fenolik  sederhana. Pembuatan  larutan  standar  asam  gallat  dilakukan dengan melarutkan 10 mg asam galat kedalam etanol 96%  menggunakan  labu  takar  10  mL  hinggam menghasilkan  konsentrasi  1000  ppm.  Dari  larutan stock  dipipet  sebanyak  0,25  mL  diencerkan  dengan etanol  96%  hingga  volume  25  mL  hingga  dihasilkan konsentrasi 10 ppm. Dari larutan tersebut dipipet 1, 2, 3,  4  dan  5  mL  dan  dicukupkan  dengan  etanol  96% hingga  10  mL,  sehingga  dihasilkan  konsentrasi  1,  2, 3,  4  dan  5  ppm.  Untuk  pembuatan  kurva  baku masing-  masing  tabung  reaksi.  Selanjutnya  untuk masing- masing larutan standar tersebut ditambahkan dengan  0,4  mL  reagen  Folin-Ciocalteau  dan diinkubasi  selama  4-8  menit,  reagen  folin-Ciocaltaeu ini  merupakan  reagen  pengoksidasi  berupa  larutan berwarna  kuning  kemudian  senyawa  fenolik  pada
sampel  akan  dioksidasi  oleh  molibdat  tungstat  yang merupakan  komponen  dari  folin-ciocalteau  (bekerja mereduksi  gugus  hidroksil)  sehingga  membentuk senyawa  berwarna  biru  yang  dapat  diukur  pada sampai  panjang  gelombang  765  nm.  Kemudian larutan  ditambahkan  dengan  4,0  mL  Na 2 CO 3 7% karena  folin  hanya  bereaksi  disuasana  basa  (dalam suasana  basa  folin  mengalami  batokrom  atau pergeseran panjang gelombang kepanjang gelombang yang lebih maksimal) sehingga ditambahkan  Na 2 CO 3 untuk  membuat  suasana  basa  (folin  bersifat  asam ketika  ditambahkan  pada  sampel  /  ekstrak),  lalu ditambahkan  dengan  aquadest  steril  sampai  batas tanda.  Setelah  2  jam  inkubasi,  absorbansi  larutan diukur  pada  panjang  gelombang  737  nm  dengan larutan blanko air suling dan reagen Folin-Ciocalteau.
Pada  penetapan  kadar  pada  ekstrak  etanol bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  merah dilakukan  dengan  beberapa  modifikasi  yaitu  sampel ekstrak  etanol  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) merah dibuat  dengan  cara  menimbang  10  mg kemudian  dilarutkan  dengan  10  mL  etanol  96%  dan dihomogenisasi. Dipipet  sebanyak  1  mL  kemudian dicukupkan  dengan  10  ml  etanol  96%.  Selanjutnya dipipet 1 ml dari larutan tersebut untuk tiga replikasi. Masing-  masing  larutan ditambahkan dengan 0,4  mL reagen Folin-Ciocalteau dikocok  dan  dibiarkan  4-8 menit, tambahkan 4,0  mL larutan Na 2 CO 3 7%  kocok hingga  homogen.  Tambahkan  aquadest  steril  hingga 10 mL dan diamkan selama 2 jam pada suhu ruangan. Ukur  serapan  pada  panjang  gelombang  serapan maksimum 737 nm yang akan memberikan kompleks biru.  Lakukan  3  kali  pengulangan  sehingga  kadar fenol  yang  diperoleh  hasilnya  didapat  sebagai  mg ekuivalen  asam  galat/100  mg  sampel  segar.  Nilai fenolik  total  dinyatakan  dalam  Gallic  Equivalents (GAE)  tiap  100  g  berat  kering  ekstrak  etanol  bunga rosella merah g GAE/100 g berat kering ektrak etanol bunga rosella merah.
Hasil  pengukuran  absorbansi  pembanding asam  galat  diplotkan  terhadap  konsentrasinya, sehingga  diperoleh  kurva  linear  seperti  pada  gambar 3.  Nilai  R 2 yaitu  0,989  menunjukkan  linearitas  yang cukup  baik,  maka  persamaan  regresi  linear  (y= 0,2506x  -0,0094)  dapat  digunakan  untuk  penetapan kadar  fenolik  total  sampel  bunga  rosella  ( Hibiscus Sabdariffa L.  )  berwarna  merah.  Kadar  fenolik  total bunga  rosella  ( Hibiscus  Sabdariffa L.)  berwarna merah  untuk  daerah  Lahan  Gunung  Pohsarang, Kecamatan  Semen,  Kabupaten  Kediri  (Jawa  Timur) adalah 1,8537 mg GAE / g atau 0,1853 %.

## IV. KESIMPULAN
Dari penelitian yang telah dilakukan didapatkan  hasil  ekstrak  etanol  bunga  rosella  merah
( Hibiscus  Sabdariffa L.)  memiliki  kandungan  fenolik total sebesar 0,1853 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Ditjen  POM.  (1986). Sediaan  Galenik .  Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Farombi,  E.O.,  Ige,  O.O.  2007.  Hypolipidemic  and Antioxidant  effects  of  ethanolic  extract  from dried calyx of Hibiscus sabdariffa in alloxan- induceddiabeticrats. http://pt.wkhealth.com/pt /re/fncp/abstract.00003837_200712000_0000
5 . htm;jsession (11 oktober 2009).
Fessenden.  (1986). Kimia  Organik .  (edisi  2).  jilid  2. Jakarta: Erlangga.
Gritter, Roy J. dkk. (1991). Pengantar Kromatografi .
(Edisi II). Bandung:  Penerbit ITB.
Harborne.  (1996). Metode  Fitokimia :  Penuntun  Cara Modern  Menganalisa  Tumbuhan.  Bandung: ITB.
Hirunpanich,  V.,  Utaipat  A,  Noppawan,  P.  M., Nuntavan,  B.,  Hitoshi,  S.,  Angkana,  H., Chuthamanee, S. 2005. Antioxidant effect of aqueous  extracts  from  dried  calyx  of Hibiscus  sabdariffa  linn  (roselle)  in  vitro using rat low-density lipoprotein (LDL). Bio. Pharm. Bull. 28(3): 481-484 Khopkar,  S.M.  (2008). Konsep  dasar  Kimia  Analitik . Jakarta: UI Press. Laurence,  J.D.  12  Juli  2013. Hibiscus  sabdariffa. 17 September 2013 : http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/Single Rpt?search_topic=TSN&search_value=5030
01
Mahadevan  N,  Shivali,    Kamboj  P    (2009) Hibiscus sabdariffa  Linn.  an  overview.    Natural Product Radiance Vol 8(1):  77-83. Mardiah,  Hasibuan  S,  Rahayu  A,  Ashadi  RW  (2009)
Budi daya  dan  pengolahan  rosela  si merah segudang    manfaat .    AgroMedia  Pustaka, Jakarta.
Maryani  H,    Kristiana    L    (2008) Khasiat  dan manfaat    rosela .  AgroMedia  Pustaka, Jakarta.
Maryani,  H.  &  Kristiana,  L.  (2005). Khasiat  dan
Manfaat Rosela . Jakarta: AgroMedia Pustaka.
Ningsih,  Widia.  (2007 ).  Evaluasi  Senyawa  Fenolik  ( Asam  Ferulat  dan  Asam  P-Kumarat  Pada Biji,  Kecambah  dan  tempe  Kacang  Tunggak (Vigna  Unguiculata) (skripsi).  Bogor  : Institut Pertanian Bogor.
Robinson,  T.  (1995). Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi . (Edisi VI). Penerjemah: K.
Padmawinata. Bandung:  ITB Press.
Seafast.  2012. Biosintesis  Senyawa  Fenolik .  21 September 2013. seafast.ipb.ac.idtpc- projectwp2-biosintesis.pdf. Setiawan, Rudi. (2010). Pengaruh Pemberian Ekstrak Bunga  Rosella  (Hibiscus  Sabdariffa  L) Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa  Gula Putih  Yang  Diinduksi  Aloksan (Skripsi). Surakarta: Universitas Sebelas Maret. Tobo, Fachruddin. (2001). Buku Pegangan Laboratorium Fitokimia I . Makassar: Laboratorium  Fitokimia  Jurusan  Farmasi Unhas. Underwood.  (2001). Analisis  Kimia  Kuantitatif . Jakarta: Erlangga. Widia,  Ningsih.  (2007).  Evaluasi  Senyawa  Fenolik (Asam  Ferulat  dan  Asam  p-Kumarat  )  Pada biji,  Kecambah  &  Tempe  Kacang  Tunggak ( Vigna unguiculata ) (Skripsi). Bogor: Institut Pertanian Bogor.