## EFFECTIVENESS OF ROBUSTA COFFEE BEAN EXTRACT GEL ON COLLAGEN FIBERS DENSITY IN POST-GINGIVECTOMY WOUND HEALING
Tantin Ermawati*, Happy Harmono*, Dania Kartikasari*

## ABSTRACT
Background: Gingivectomy is a periodontal surgical procedure that eliminates excess gingival tissues by excision, usually to remove a gingival pocket which leads to scars and recontours the gingival to its proper anatomical form. Wound healing is a process to restore the missing functions and structures of a tissue due to injuries or inflammations. Robusta coffee bean contains many bioactive compounds that can accelerate the wound healing process. The study aimed to  determinate  the  effectiveness  of  robusta  coffee  bean  extract  gel  with concentration  40%,50%,60%  on  collagen  fibers  density  in  post-gingivectomy wound healing Method: 36  Wistar  rats  were  divided  into  9  groups:  control,  gingivectomy without  therapy,  gingivectomy  +40%  robusta  coffee  bean  extract  gel, gingivectomy  +50%  robusta  coffee  bean  extract  gel,  and  gingivectomy+60% robusta coffee bean extract gel. The last 4 groups were divided again into day 3  and  7  euthanasia.  The  results  were  processed  by  Trichrome  Mallory  to visualized the collagen fibers and then measured by ImageJ software.
Result: Robusta coffee beans extract gel therapy with concentration 40%, 50% and 60% had higher average collagen fibers density compared to group without therapy.
Conclusion: Robusta coffee bean extract gel increased the density of collagen fibers in post-gingivectomy wound healing

## PENDAHULUAN
Gingiva  adalah  bagian  dari  mukosa  mulut yang  memiliki  fungsi  utama  sebagai  perlindungan pertama rongga mulut, sehingga membuat gingiva mudah  terkena  luka 1 .  Luka  pada  gingiva  salah satunya  dapat  disebabkan  oleh  perawatan  pasca bedah  gingivektomi 2,3 .  Gingivektomi  adalah  teknik bedah  periodontal  dengan  cara  mengeksisi jaringan gingiva yang membesar sehingga mendapatkan  bentuk  anatomis  yang  baru  dan menghilangkan poket gingiva yang mengakibatkan suatu  jejas  luka.  Penyembuhan  luka  merupakan proses biologis makhluk hidup untuk mengembalikan  struktur  dan  fungsi  suatu  jaringan akibat  dari  cidera  atau  inflamasi 4,5 .  Proses penyembuhan luka pada rongga mulut memerlukan waktu yang lebih cepat. Proses penyembuhan luka
terdiri  dari  tiga  fase  yang  saling  terintegrasi  yaitu inflamasi,  proliferasi,  dan remodelling 6,7 .  Proses penyembuhan  luka  dapat  dilihat  dari  berbagai indikator, salah satunya adalah kepadatan serabut kolagen. Pada proses penyembuhan luka, kolagen dibentuk  sejak  hari  ke-3  dan  akan  tampak  nyata jumlahnya di hari ke- 7 setelah luka 7,8 .
Kepadatan  kolagen  merupakan  salah  satu parameter  dan  indikator  penting  dalam  proses penyembuhan  luka 9,10 .  Kolagen  yang  terbentuk akan membentuk jaringan ikat yang menghubungkan  tepi-tepi  luka  dengan  erat  serta dengan  adanya  kolagen  dapat  meningkatkan pertautan  antar  jaringan  baru  sehingga  dapat memperkuat area penyembuhan 11 .
Bahan  yang  dijual  di  pasaran  yang  biasa digunakan  untuk membantu proses penyembuhan
* Departemen Biomedik Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember
Correspondence: tantin.ermawati@unej.ac.id
Keywords:
Gingivectomy, coffee bean, collagen, wound healing
luka  pasca  gingivektomi  adalah Periodontal Dressing .  Kelemahan Periodontal  Dressing yaitu ketika digunakan oleh pasien akan kurang nyaman, harus  dilakukan  penggantian  berkala  oleh  dokter gigi serta harganya cenderung mahal 1 . Oleh karena itu saat ini perlu dikembangkan alternatif pemanfaatan tanaman herbal. Penggunaan tanaman  herbal  diharapkan  dapat  mempercepat proses  penyembuhan  luka  dengan  efek  samping minimal 12 .  Salah  satu  tanaman  yang  dijumpai  di Indonesia  adalah  kopi.  Salah  satu  jenis  tanaman kopi  yang  paling  banyak  di  Indonesia  ialah  kopi robusta ( Coffea canephora ) 4 .
Kopi  robusta  mengandung  beberapa  bahan aktif  diantaranya  polifenol,  flavonoid,  kafein, kumarin,  asam  klorogenat,  saponin  trigonelin  dan tokoferol 4,13 . Flavonoid memiliki efek anti  inflamasi dan  bekerja  dalam  meningkatkan  penyembuhan luka  gingiva  tikus  Sprague  Dawley  dengan mempercepat  laju  epitelisasi  melalui  induksi produksi transforming  growth  factor (TGF)-beta. Asam klorogenat,  kafein  dan  saponin  dalam  kopi robusta  memiliki  sifat  antioksidan  yang  mampu meningkatkan  penyembuhan  luka  dengan  cara menetralkan  radikal  bebas  yang  terbentuk  saat proses penyembuhan luka 14 .
Pemberian obat pada proses penyembuhan luka gingiva bisa secara oral maupun topikal. Salah satu bentuk sediaan topikal adalah gel. Pemberian obat secara topikal bersifat lebih selektif di bagian- bagian  yang  spesifik,  dapat  dilakukan  sendiri  oleh pasien,  serta  mudah  dilakukan  penghentian  obat jika  diperlukan 15 .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk melihat  efektifitas  gel  ekstrak  biji  kopi  robusta ( Coffea  canephora )  konsentrasi  40%,  50%  dan 60%  dalam  peningkatan  kepadatan  serabut kolagen pada proses penyembuhan luka gingiva.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian experimental  laboratories pada  tikus  wistar  jantan menggunakan the  post  test  only  control  group design .  Penelitian  dilakukan  di  laboratorium Biomedik  FKG  Universitas  Jember  (UNEJ), laboratorium  Farmasetika  Fakultas  Farmasi  UNEJ dan  Laboratorium  CDAST  UNEJ  menggunakan subjek sebanyak 36 ekor tikus wistar jantan. Subjek diadaptasi  selama  1  minggu  diberi  makanan  dan minum standar ( ad libitium ). Subjek dibagi menjadi 9  kelompok,  yang  dieutanasia  pada  hari  ke-3  dan ke-7  dengan  4  subjek  pada  masing-masing kelompok. Penelitian ini telah mendapat persertujuan dari Komisi Etik Penelitian di Fakultas Kedokteran Gigi UNEJ.

## Tahap persiapan dan pembagian hewan coba
Hewan coba dibagi menjadi 9 kelompok yaitu K  (kontrol)  yakni  kelompok  yang  tidak  diberi perlakuan gingivektomi dan di eutanasia pada hari ke-3, P- adalah kelompok gingivektomi tanpa terapi dan  dieutanasia  pada  hari  ke-3  dan  ke-7,  P40% adalah  kelompok  gingivektomi  yang  diterapi  gel ekstrak biji kopi robusta 40% dan dieutanasia pada hari  ke-3  dan  ke-7,  P50%  adalah  kelompok gingivektomi  yang  diterapi  gel  ekstrak  biji  kopi robusta  50%  dan  dieutanasia  pada  hari  ke-3  dan ke-7,  P60%  adalah  kelompok  gingivektomi  yang diterapi  gel  ekstrak  biji  kopi  robusta  60%  dan dieutanasia pada hari ke-3 dan ke-7.

## Pembuatan Gel ekstrak biji kopi robusta
Kopi  robusta  didapatkan  dari  perkebunan kopi  desa  Sidomulyo,  kecamatan  Silo,  kabupaten Jember.  Sampel  biji  kopi  kering  dihaluskan menggunakan  pencacah  kopi  hingga  menjadi serbuk  dan  ditimbang  sebanyak  1000  gram, selanjutnya  dilakukan  maserasi  dalam  larutan
etanol  96%  selama  72  jam.  Proses  ekstraksi menggunakan  pelarut  etanol  hingga  diperoleh ekstrak pekat 100%.  Pembuatan basis gel dimulai dengan  CMC  2  gram  dikembangkan  dalam  98  ml air  dengan  suhu  70  ºC  dalam  mortar  selama  15 menit. Kemudian diaduk sampai terbentuk sediaan berwarna  jernih.  Selanjutnya,  sediaan  diaduk hingga  homogen  dan  terbentuk  massa  gel. Masukkan  ekstrak  biji  kopi  robusta  menjadi konsetrasi 40%, 50% dan 60% kedalam mortar dan dicampur hingga homogen.

## Prosedur gingivektomi tikus wistar
Hewan  coba  dianestesi  dengan  ketamin dengan dosis 0,0875-0,1 ml dan Xylazene dengan dosis 0,04-0,05ml. Prosedur gingivektomi dilakukan pada  gingiva  regio  molar  1  kiri  rahang  bawah. Sebelum  gingivektomi,  dilakukan  pengukuran terlebih  dahulu  secara  vertikal  dan  horizontal. Panjang  vertikal  ditentukan  1  mm  dari  margin gingiva  ke  apikal  dan  horizontal  ditentukan  dari lebar  mesial  distal  gigi  molar  satu.  Kemudian dilakukan  pemotongan  gingiva  pada  kelompok perlakuan  dengan  menggunakan blade  scalpel membentuk sudut 45° dengan permukaan gigi.

## Aplikasi Topikal Gel Ekstrak Biji Kopi Robusta
Tikus  yang  telah  dilakukan  gingivektomi selanjutnya dilakukan aplikasi topikal gel ekstrak biji kopi  robusta  dengan  konsentrasi  40%  (P40%), konsentrasi  50%  (P50%),  dan  konsentrasi  60% (P60%).  Gel  tersebut  diaplikasikan  pada  gingiva regio  molar  satu  bawah  kiri  menggunakan disposible  syringe yang  telah  diambil  jarumnya dengan dosis 0,05 ml. Aplikasi topikal gel dilakukan dua kali dalam sehari selama 3 hari dan 7 hari 3,16 . Setelah  pengaplikasian,  gel  dibiarkan  agar  bahan tidak larut dengan tidak memberi makan dan minum pada hewan coba  selama 15-30 menit.

## Eutanasia Subjek
4 ekor tikus wistar dalam setiap kelompok dilakukan  eutanasia  pada  hari  ke-3  dan  ke-7. Dilakukan pengambilan jaringan pada bagian molar satu sampai molar 3 rahang bawah kiri. Setelah itu subjek dimasukkan ke dalam buffer formalin selama 24 jam agar jaringan yang akan diamati tidak rusak.

## Tahap  Histologis  dan  Pengamatan  Serabut Kolagen
Subjek yang telah difiksasi ke dalam buffer formalin
selama 24 jam kemudian didekalsifikasi menggunakan  asam  format  10%  selama  21  hari supaya subjek lebih lunak. Subjek yang telah lunak kemudian  dilakukan  prosedur  histologi  jaringan meliputi  proses  dehidrasi, clearing,  impregnansi, embedding , dan pemotongan jaringan secara buko- lingual .  Selanjutnya  dilakukan  pewarnaan  subjek menggunakan Tricrome  Mallory .  Pengamatan serabut kolagen menggunakan mikroskop binokuler  dengan  perbesaran  400x  dengan  cara melakukan  pengukuran  kepadatan  daerah  yang berwarna  biru  pada  gingiva  yang  mengalami penyembuhan  menggunakan software  ImageJ pada 3 lapang pandang terpilih kemudian hasilnya dijumlah dan dirata-rata.
Pembacaan  preparat  serabut  kolagen dengan kriteria penilaian berdasarkan skor, yaitu:
0 :Tidak tampak gambaran serabut kolagen
1 :Serabut kolagen terlihat tipis atau sedikit sekali
2 :Serabut kolagen terlihat menyebar tipis
3 :Serabut kolagen terlihat menyebar tebal
4 :Serabut kolagen terlihat mengumpul tebal.

## HASIL PENELITIAN
Gambaran  histologis  kepadatan  serabut kolagen kelompok yang dieutanasia pada hari ke-3
ditunjukkan  pada  Gambar  1,  gambaran  histologis kepadatan  serabut  kolagen  kelompok  yang dieutanasia  pada  hari  ke-7  ditunjukkan  pada Gambar 2 sedangkan rata-rata kepadatan serabut kolagen  ditunjukkan  pada  Gambar  3.  Data  yang
diperoleh  dilakukan  uji  normalitas  menggunakan Kolmogorov Smirnov dan uji homogenitas menggunakan  uji Levene dengan  p>0,05.  Hasil menujukkan data terdistribusi normal dan homogen.
Gam E D C B A Gambar 1 . Gambaran histologis serabut kolagen dengan pewarnaan Tricrome Mallory dengan  perbesaran  400x  pada  hari  ke-3  pasca  gingivektomi.  Tanda  panah  hitam menunjukkan  serabut  kolagen.  (A)  kelompok  perlakuan  gingivektomi  tanpa  terapi,  (B) kelompok  perlakuan  gel  ekstrak  biji  kopi  robusta  40%,  (C)  kelompok  perlakuan  gel ekstrak biji kopi robusta 50%, (D) kelompok perlakuan gel ekstrak biji kopi robusta 60%, (E) kelompok kontrol.
Tabel 1. Hasil rata-rata perhitungan kepadatan serabut kolagen pada tiap kelompok dalam satuan (pixel)
Kelompok Sampel Hari Ke-3 (Rata-rata) Hari Ke-7 (Rata-rata) K 48,123 48,123 P- 4,997 12,209 P40% 8,936 23,681 P50% 12,402 26,400 P60% 10,768 23,779 A D C B
Gambar  2. Gambaran  histologis  serabut  kolagen  dengan  pewarnaan Tricrome  Mallory dengan perbesaran 400x pada hari ke-7 pasca gingivektomi. Tanda panah hitam menunjukkan serabut kolagen. (A) kelompok perlakuan gingivektomi tanpa terapi, (B) kelompok perlakuan gel ekstrak biji  kopi  robusta  40%,  (C)  kelompok  perlakuan  gel  ekstrak  biji  kopi  robusta  50%,  (D)  kelompok perlakuan  gel ekstrak biji kopi robusta 60%.
Gambar  3. Diagram  rata-rata  kepadatan  serabut  kolagen  pada  setiap  kelompok. *p<0,05 dibandingkan dengan kelompok gingivektomi tanpa terapi (P-).

## DISKUSI
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui efektivitas pemberian aplikasi topikal gel esktrak biji kopi  robusta  terhadap  peningkatan  kepadatan serabut  kolagen  pada  penyembuhan  luka  pasca gingivektomi  pada  tikus  wistar.  Hasil  penelitian menunjukkan rata-rata kepadatan serabut kolagen paling tinggi adalah kelompok kontrol, hal ini karena kelompok  kontrol  merupakan  kelompok  normal sehingga  tidak  dilakukan  perlakuan  apapun. Pada kelompok  perlakuan  yang  dieutanasia  hari  ke-3, yakni  kelompok  P-  yang  merupakan  kelompok gingivektomi  tanpa  terapi  rata-rata  kepadatan serabut  kolagen  (4,997)  lebih  rendah  daripada kelompok  perlakuan  gingivektomi  yang  diterapi dengan gel ekstrak biji kopi robusta 40%, 50%, dan 60%.  Hal  ini  karena  adanya  perbedaan  terapi. Adanya  terapi  menggunakan  gel  ekstrak  biji  kopi robusta  ini  membantu  mempercepat  proses penyembuhan luka yang ditandai dengan semakin meningkatnya  kepadatan  serabut  kolagen.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya  bahwa  kopi
robusta  dapat  mempercepat  penyembuhan  luka karena  beberapa  senyawa  diantarnya  adalah kafein, asam klorongenat, flavonoid dan saponin 14 . Pada kelompok perlakuan hari ke-3, yakni kelompok  P50%3  yang  merupakan  kelompok gingivektomi  yang  diterapi  gel  ekstrak  biji  kopi robusta 50%  memiliki  rata-rata  kepadatan  serabut kolagen  lebih  tinggi  (12,402)  daripada  kelompok P40%  (8,936).  Rata-rata  kepadatan  serabut kolagen  terjadi  penurunan  pada  konsentrasi  60% (10,768).  Hal  ini  dikarenakan  adanya  perbedaan konsentrasi  gel  ekstrak  biji  kopi  robusta  yang diberikan.  Perbedaan  konsentrasi  gel  ekstrak  biji kopi  robusta  akan  mempengaruhi  perbedaan jumlah  kandungan  bahan  aktif  dan  keefektifan  gel dalam  terapi  penyembuhan  luka 17 .  Kandungan bahan aktif yang terlalu tinggi akan mempengaruhi dosis  obat.  Tubuh  akan  merespon  efek  terapeutik suatu  obat  pada  dosis  optimum,  yang  mana merupakan  dosis  terbaik  obat  untuk  diberikan. Kemudian terdapat dosis maksimum yang
0 10.000 20.000 30.000 40.000 50.000 60.000 K P- P40% P50% P60% k epa da ta n ser a bu t k o la g en Kelompok Sampel rata-rata Hari ke-3 rata-rata Hari ke-7
merupakan  dosis  tertinggi  yang  masih  bisa diberikan dan dapat menyembuhan, sedangkan jika dosis sudah melebhi dosis maksimum maka dosis tersebut  menjadi  dosis  toksik  yang  merupakan takaran dosis yang jika diberikan akan menimbulkan kontradiksi dari efek terapeutik 20 .
Pada kelompok perlakuan yang dieutanasia  pada  hari  ke-7  memiliki  rata-rata kepadatan  serabut  kolagen  lebih  tinggi  daripada kelompok perlakuan yang dieutanasia pada hari ke- 3.  Hal  ini  dikarenakan  adanya  perbedaan  fase penyembuhan, kelompok pada hari ke-3 merupakan  tahap  proliferasi  awal,  kelompok perlakuan pada hari ke-7 yang merupakan puncak terbentuknya serabut kolagen pada fase proliferasi 7 .  Kelompok  perlakuan  gingivektomi tanpa  terapi  yang  dieutanasia  hari  ke-3  (P-3) memiliki  kepadatan  serabut  kolagen  yang  lebih rendah dibandingkan kelompok perlakuan gingivektomi  dan  diterapi  gel  ekstrak  biji  kopi robusta 40%, 50% dan 60% yang dieutanasia pada hari ke-7. Hal ini karena kelompok P-3 dieutanasia pada hari ke-3 dimana merupakan tahap proliferasi awal,  sedangkan  P40%7,  P50%7  dan  P60%7 dieutanasia  pada  hari  ke-7  yang  merupakan puncak  terbentuknya  serabut  kolagen  pada  fase proliferasi.  Selain  itu  adanya  perbedaan  terapi yakni pemberian gel ekstrak biji kopi robusta.
Data  hasil  uji  beda  menunjukkan  bahwa terdapat  perbedaan  bermakna  antar  setiap kelompok.  Hal  tersebut  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya  bahwa  biji  kopi  robusta  memiliki senyawa aktif yang dapat meningkatkan kepadatan serabut kolagen pada proses penyembuhan luka. Biji  kopi  robusta  mengandung  zat  flavonoid  dan asam klorogenat yang berperan sebagai antiinflamasi.  Flavonoid  dan  Asam  klorogenat sebagai antiinflamasi bekerja dengan cara mengurangi efek histamin, bradikinin dan
leukotrin 18 . Aktivitas antiinflamasi dari flavonoid dan asam  klorogenat  juga  dapat  mengahambat sikloogsigenase  yang  merupakan  protein  yang bertindak sebagai enzim khusus untuk mempercepat  produksi  prostaglandin.  Penekanan mediator  inflamasi  menyebabkan  berkurangnya nyeri  dalam  pembengkakan  dan  mengurangi terjadinya  vasodilatasi  pembuluh  darah  dan  aliran darah lokal, sehingga migrasi sel radang pada area radang akan menurun. Selanjutnya reaksi inflamasi akan  berlangsung  lebih  singkat  dan  memasuki tahap  proliferasi 9 .  Selain  itu  efek  antiinflamasi  ini juga dapat merangsang makrofag untuk menghasilkan growth  factor seperti  TGF- β  yang berfungsi  menginduksi  proliferasi  dan  migrasi fibroblast  serta  menginduksi  fibroblas  untuk mensintesis kolagen 18 .
Kopi memiliki kandungan antioksidan yang lebih  banyak  dari  pada  vitamin  C.  Kandungan bahan  aktif  seperti  kafein  dan  saponin  dalam kopi yang  memiliki  efek  antioksidan  juga  berperan dalam  mempercepat  proses  penyembuhan  luka 14 . Aktivitas  Antioksidan  kafein  dapat  menetralkan radikal bebas dan menghambat radikal bebas yang timbul  dalam  proses  penyembuhan  luka.  Pada proses  inflamasi  terjadi  peningkatan  infiltasi  sel inflamasi  yang  akan  menyebabkan  mekanisme fagositosis  terhadap  antigen  sehingga  memicu radikal  bebas.  Radikal  bebas  yang  diaktivasi  oleh sel-sel  inflamasi  tidak  hanya  merusak  sel  yang terpapar  alergen  tetapi  juga  dapat  merusak komponen-komponen matriks ekstraseluler 18 . Antioksidan  dibutuhkan  dan  sangat  penting  untuk mencegah  terjadinya  kerusakan  jaringan.  Selain itu,  antioksidan  mencegah  peningkatan  produksi sitokin  yang  menyebabkan  terjadinya  proses inflamasi  yang  berlanjut.  Oleh  karena  itu,  terapi menggunakan antioksidan sangat diperlukan pada inflamasi kronis seperti penyembuhan luka 19 .
Lama  pemberian dapat berpengaruh terhadap  hasil  penelitian.  Kepadatan  kolagen merupakan  salah  satu  parameter  dan  indikator penting  dalam  proses  penyembuhan  luka.  Pada proses penyembuhan luka, kolagen dibentuk sejak hari ke-3 dan akan tampak nyata jumlahnya di hari ke-7  setelah  luka.  Pembentukan  serabut  kolagen dimulai  pada  hari  ke-3.  Fibroblas  berubah membentuk  matriks  ekstraseluler  dan  mulai memproduksi  tropokolagen  pada  hari  ke-3. Fibroblas  menyimpan  tropokolagen  yang  nantinya akan  diproduksi  menjadi  kolagen 7 .  Pada  hari  ke-7 adalah  hari  puncak  pada  fase  proliferasi  dimana kolagen  akan  terakumulasi  dan  memberikan kekuatan pada daerah yang mengalami perlukaan. pada hari ke-7 pasca gingivektomi epitel akan mulai tumbuh  seperti  semula,  diikuti  penurunan  jumlah sel  radang  disertai  peningkatan  jaringan  ikat. Jaringan ikat yang baru terdiri dari sel-sel, kolagen dan  serat-serat  fiber.  Kolagen  utama  yang diproduksi  pertama  kali  pada  jaringan  granulasi adalah kolagen tipe III, namun dalam beberapa hari akumulasi  kolagen  tipe  I  meningkat  dengan  cepat dan  mencapai  puncak  pada  hari  ke-7  sampai  hari ke-14  pasca  perlukaan  dengan  jumlah  75%  dari total kolagen pada jaringan granulasi 6 .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa pemberian gel ekstrak  biji  kopi  robusta  dengan  konsentrasi  40%, 50%  dan  60%  secara  topikal  dapat  meningkatkan kepadatan serabut kolagen pada proses penyembuhan  luka  pasca  gingivektomi  pada  tikus Wistar. Perlu dilakukan penelitian  lanjutan tentang hari  pengamatan  dari  pemberian  gel  ekstrak  biji kopi  robusta  selain  hari  pengamatan  yang digunakan dalam penelitian dan mengenai gel agar
tetap konsisten melekat dan terjaga dalam rongga mulut tikus wistar

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Newman M G., Takei H.H., Klokkevold P.R., dan Carranza F.A.. Newman and Carranza’s Clinical Periodontology  13th  Edition .  2019.  Canada:
Elsevier.
2.  Solanki G. A general overview of gingiva. IJBR . 2012;3:79 – 82.
3.  Nofikasari  I.,  Rufaida  A.,  Aqmarina  C.D., Failasofia,  Fauzia  A.R.,  et  al..  Efek  aplikasi topikal  gel  ekstrak  pandan  wangi  terhadap penyembuhan luka gingiva. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia. 2016;2: 53 – 59
4.  Artho  L.N.,  Wuisan  J.,  dan  Najoan  J.A..  Efek Serbuk  Kopi  Robusta  ( Coffea  canephora )
Terhadap  Penyembuhan  Luka  Insisi  pada Kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus ). Jurnal  e- Biomedik (eBm). 2015; 3:743-748
5.  Smith  P.C.,  Caceres  M.,  Martinez  C.,  Oyarzun A., dan Martinez J. Gingival Wound Healing: An Essential  Response  Disturbed  by  Aging?. Journal of Dental Research. 2015; 94:395 –402 6.  Larjava  H. Oral  Wound  Healing  :  Cell  Biology and  Clinical  Management  Ed.  1. John  Willey  &
Sons Inc. United Kingdom. 2012;1:157.
7.  Kumar V., Abbas  K., dan. Aster J.C. Buku  Ajar Patologi  Robbins  Edisi  9 .  Singapura:  Elsevier Saunders. 2015.
8.  Sabirin    I.P.R,  Maskoen  M.,  dan  Hernowo  B.S. Peran  Ekstrak  Etanol  Topikal  Daun  Mengkudu (Morinda  citrifolia  L.) pada  Penyembuhan  Luka Ditinjau  dari  Imunoekspresi  CD34  dan  Kolagen pada  Tikus  Galur  Wistar. M.K.B. 2012;45:33- 226.
9. Naba’atin I, Wahyukundari M.A., dan  Harmono H.  Penambahan  Ekstrak  Kulit  Buah  Kakao ( Theobroma  cacao  L .)  Pada  Periodontal Dressing Terhadap  Kepadatan  Kolagen  Luka Gingiva Insisi. BIMKGI . 2015;3:28-38.
10.  Raharyani H D, Istiati, dan Rahayu R.P.. Peran ekstrak  gel  daun  melati  ( Jasminum  sumbac ) dalam peningkatan sabut kolagen pada penyembuhan  luka  sayat  pada  mencit  ( Mus musculus ). Oral  and  Maxillofacial  Pathology Journal . 2015;2:13-18.
11.  Rangaraj  A, Harding K., dan Leaper D. Role of Collagen in Wound Healing. Wounds. 2011 ; 7:54-63.
12.  Yanhendri  dan  Yenny,  S.W.  Berbagai  Bentuk Sediaan  Topikal  dalam  Dermatologi. C.D.K. 2012;39:423-30.
13.  Farhaty  N,  Muchtaridi.  Tinjauan  Kimia  dan Aspek Farmakologi Senyawa Asam Klorogenat pada  Biji  Kopi  :  Review .  Jurnal  Farmaka Suplemen . 2016;14:1
14.  Kenisa  Y  P,  Istiati,  dan  Wisnu  S.J..  Effect  of Robusta coffee beans ointment on full thickness wound  healing. Dent.  J.  (Maj.  Ked.  Gigi) . 2012;45:52 –57
15.  Singla  V,  Saini  S.,  Joshi  B.,  dan  Rana  A.C.. Emulgel:  a  New  Platform  for  Topical  Drug Delivery. I.J.P.B.S. 2012;3:486-98.
16.  Ermawati  T.  Effects  of  Robusta  Coffee  Bean Extract  ( Coffea  robusta )  on  the  Viability  of Neutrophils Exposed by Porphyromonas gingivalis . UNEJ e-Proceeding. 2016;169-172.
17.  Fadlil  N.  I.  P.,  Ermawati  T.,  Hikmah  N. Pengaruh  Pemberian  Gel  Ekstrak  Biji  Kopi Robusta ( Coffea Robusta ) Terhadap Ketebalan Epitel  Gingiva  Pada  Model  Tikus  Periodontitis
Yang  Diinduksi Porphyromonas  Gingivalis . Prosiding The 3th Dentistry Scientific Meeting of Jember . 2015;102-110.
18.  Yuwono  H.  S.  The  New  Paradigm  of  Wound Management  Using  Coffeee  Powder. Global journal of surgery . 2014;2:2.
19. Ojeh N., Stojadinovic O., Pastar I., Sawaya A., Yin  N.,  dan  Tomic-Canic  M.  The  effects  of caffeine on wound healing . Int Wound J . 2014.
20.  Parasuraman P.  2011. Toxicological sreening. J. Pharmacol Pharmacother . 2011;2:74-79.
21.  Afiyah  L.L,  Ana  M..  Efektifitas  Gel  Ekstrak Pithecellobium  lobatum  Benth.  pada  Proses Kesembuhan  Luka  Pasca  Pencabutan  Gigi Studi pada Cavia cobaya dengan Pengamatan Histologis. Mutiara  Medika:  Jurnal  Kedokteran dan Kesehatan . 2017. 17(2):86-91.