UJI AKTIVITAS MINYAK ATSIRI RIMPANG KUNYIT ( Curcuma Longa Linn)
Pada TIKUS SPRAGUE DAWLEY MODEL DEMENSIA
(Kajian Penghambat Aktivitas Asetilkolinesterase)
Safwan, Sapto Yuliani, Suwidjiyo Pramono Program Pascasarjana Farmasi Klinik Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta Safwan_afan@yahoo.com

## ABSTRAK
Demensia  merupakan  istilah  pada  penyakit  yang  berkaitan  dengan  penurunan  fungsi  memori. Memori  merupakan  proses  penyimpanan  dan  pengambilan  kembali  informasi  melalui  sinyal- sinyal  saraf  di  otak  oleh  senyawa  asetilkolin  (Ach).  Senyawa  ACh  menjadi  tidak  aktif  oleh aktivitas enzim asetilkolinesterase (AChE). Aktivitas AChE yang tinggi dapat menggambarkan terjadinya  demensia.  Senyawa  yang  dapat  menghambat  aktivitas  AChE  dapat  menggambarkan potensi  sebagai  obat  anti  demensia.  Tanaman  yang  berpotensi  mengandung  senyawa  tersebut adalah kunyit ( Curcuma longa Linn). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi minyak atsiri  rimpang  kunyit  ( Curcuma  longa Linn)  dalam  menghambat  aktivitas  AChE    pada  tikus model  demensia  yang  diinduksi  trimetiltin  (TMT).Minyak  atsiri  diperoleh  dari  hasil  destilasi menggunakan metode destilasi uap air kemudia dianalisis komponen senyawa yang terkandung menggunakan metode GC-MS. Uji penghambatan aktivitas AChE dilakukan pada tikus Sprague dawley jantan umur ±2 bulan. Hewan uji dibagi dalam 6 kelompok. Kelompok I, II, III (normal, kontrot dan citicoline) dan kelompok  IV, V, VI   (diberi minyak atsiri dosis 100, 200, dan 400 mg/kg  BB).  Perlakuan  dilakukan  selama  29  hari.  Pemberian  TMT  i.p  dosis  8  mg/kg  BB dilakukan pada  hari ke-8 kecuali kelompok normal. Otak  tikus diambil dan dipreparasi hingga diperoleh supernatan. Penetapan aktivitas AChE menggunakan reagen kit (katalog #K764-100). Analisis  data  menggunakan  ANOVA  dengan  Post  Hoc  LSD.  Komponen  utama  pada  minyak atsiri  rimpang  kunyit  hasil  analisi  GC-MS  yaitu  ar-tumerone  (49,47%),  alpha  tumerone (19,91%),  dan    alpha  phellandrene  (4,24%).  Hasil  uji  penghambatan  aktivitas  AChE  pada kelompok kontrol berbeda tidak bermakna (P>0.05) dibandingkan kelompok normal. Penurunan aktivitas AChE kelompok pemberian citicoline berbeda bermakna (P<0.05) terhadap kelompok kontrol.  Penurunan  aktivitas  AChE  otak  pada  kelompok  MARK  dosis  200  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB  berbeda  bermakna  (P<0.05)  dibandingkan  kelompok  kontrol  namun  berbeda  tidak bermakna  pada  dosis  100  mg/kgBB.  Pemberian  minyak  atsiri  rimpang  kunyit  mulai  dosis  200 mg/kg BB dapat menghambat aktivitas enzim AChE pada tikus model demensia yang diinduksi TMT.
Kata kunci :  Demensia, Asetilkolinesterase (AChE), Minyak Atsiri Rimpang Kunyit.

## PENDAHULUAN
Demensia  merupakan  istilah  umum  yang menggambarkan  berbagai  penyakit  dan kondisi  ketika  sel-sel  saraf  di  otak  mati  atau tidak  lagi  berfungsi  secara  normal  tanpa disertai  gangguan  kesadaran.  Demensia merupakan  sindrom  penyakit  yang  besifat kronik/progresif  yang  mempengaruhi  fungsi- fungsi  dasar  tubuh  seperti  daya  ingat,  daya fikir,  daya  orientasi,  daya  pemahaman, berhitung,  kemampuan  belajar,  bahasa,  dan kemampuan  menilai  (Hales et  al., 2010). Prevalensi  demensia  semakin  meningkat
dengan bertambahnya usia. Prevalensi demensia  sedang  hingga  berat  bervariasi pada  tiap  kelompok  usia.  Pada  kelompok usia  di  atas  65  tahun  prevalensi  demensia sedang hingga berat mencapai 5%,
sedangkan  pada  kelompok  usia  diatas  85 tahun  prevalensinya  mencapai  20  hingga 40%  (Weuve et  al., 2013).  Hampir  seluruh pasien  demensia  menunjukkan  gangguan memori pada awal gejala timbulnya penyakit.
Memori adalah suatu proses penyimpanan dan  pengeluaran  kembali  informasi  yang didapat dari proses belajar. Penyimpanan dan
pemanggilan  kembali  informasi  yang  telah disimpan  terjadi  melalui  sinyal-sinyal  syaraf yang  dijalankan  melalui  neuron  ke  neuron berikutnya  melalui  batas  antar  neuron ( interneuronal  junction )  yang  disebut  sinaps (Lynch,  2004).  Sinyal-sinyal  diantaraneuron dihantar oleh senyawa neurotransmiter, salah satu  neuotransmiter  adalah    asetilkolin (ACh).  Asetilkolin  disekresi  sebagian  besar di daerah otak. Penyakit Alzheimer merupakan  salah  satu  akibat  dari  ganguan fungsi asetilkolin. Asetilkolinesterase (AChE)  merupakan  enzim  yang  berfungsi sebagai katalisator pada pemecahan asetilkolin  (ACh)  menjadi  bentuk  tidak  aktif yaitu  asetat  dan  kolin.  Pengukuran  aktivitas enzim AChE dapat menggambarkan akumulasi  ACh  dalam  tubuh  (Shah et  al ., 2009).  Hasil  penelitian    Park et  al, (2004)
menunjukan pada penderita demensia aktivitas  enzim  asetilkolinesterase  lebih besar.  Senyawa  yang  dapat  menghambat aktivitas AChE dapat menggambarkan
potensi sebagai obat anti demensia. Tanaman yang berpotensi mengandung senyawa tersebut  adalah  kunyit  ( Curcuma  longa Linn).
Bagian  tanaman  kunyit  yang  paling berpotensi  sebagai  obat  adalah  rimpang. Rimpang kunyit mengandung senyawa fenolik  salah  satunya  yaitu  kurkumin.  Hasil penelitian  Lim et  al, (2001)  menunjukan bahwa kurkumin memiliki kemampuan untuk menghambat inflamasi dan kerusakan oksidatif  pada  tikus  model  Alheimer.  Selain senyawa  kurkumin,  pada  rimpang  kunyit juga mengandung minyak atsiri. Berdasarkan penelitian  oleh  Rathore et  al ,    (2008) menyatakan  bahwan,  minyak  atsiri  rimpang kunyit dosis 250 mg/kg BB, dapat menghambat  apoptosis  sel  otak  dengan menurunkan  aktivitas  kaspase-3  pada  tikus model demensia (Rathore et al ., 2008). Potensi tanaman yang mengandung senyawa  penghambat  aktivitas  AChE,  dapat menjadi alternatif dalam menurunkan patogenesis  dan  pengobatan  demensia.  Oleh sebab  itu,    maka  perlu  dilkukan  penelitian mengenai  aktivitas  penghambat  aktivitas AChE  oleh  senyawa  yang  terkandung  pada minyak  atsiri  rimpang  kunyit  pada  tikus model demensia serta komponen senyawanya.

## METODE
Desain  Penelitian .    Penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  ( true experimental )  dengan  desain  studi post  test control group design, dilakukan di laboratorium  Biokimia  Fakultas  Farmasi Universitas  Ahmad  Dahlan  Yogyakarta  dan laboratorium penelitian dan pengujian terpadu  Univesitas  Gajah  Mada  Yogyakarta selama  tiga  bulan,  mulai  dari  bulan  April sampai  dengan  Juni  2014.  Populasi  yang diteliti  adalah  tikus  Sprague  dawley  jantan yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi  Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah  Mada,  Yogyakarta.  Penentuan  besar sampel  berdasarkan  rumus  WHO  yaitu jumlah  sampel  minimal  lima  ekor  tiap kelompok yang diambil secara acak. Penelitian  ini  menggunakan  enam  ekor  tikus tiap  kelompok  sehingga  jumlah  sampel  yang digunakan  sebanyak  36  ekor  dengan  kriteria inklusi  adalah  tikus  Sprague  dawley  jantan, umur 2-2,5 bulan, berat badan 150-300 gram, kondisi  badan  sehat  (aktif  dan  tidak  cacat), sedangkan  kriteria  inklusinya  adalah  tikus sakit,  berat  badan  menurun  hingga  kurang dari  150  gram  atau  tikus  mati  selama penelitian berlangsung.
Sampel  yang  digunakan  adalah  potongan rimpang  kunyit  yang  diperoleh  dari  CV. Merapi Farma, Kaliurang Yogyakarta.

## Isolasi Minyak Atsiri Rimpang Kunyit.
Rimpang  kunyit  segar  dicuci  bersih,  diiris dengan  ketebalan  ±0,2  cm,  kemudian dikeringkan  dengan  cara  dibiarkan  di  tempat terbuka  yang  tidak  terkena  sinar  matahari langsung dan dimasukkan dalam  ketel suling dan  ditutup  dengan  rapat.  Steam  dari  boiler dialirkan  ke  ketel  suling  dengan  tekanan selama  7  jam.  Cairan  yang  keluar  dari kondenser  diamkan  selama  2  jam  untuk memisahkan  air  dan  minyak.  Pada  tahap pemurnian,  minyak  atsiri  rimpang  kunyit ditambahkan  dengan  Na 2 SO 4 diaduk  selama 1 jam, kemudian diamkan selama 15 menit.
Analisis  Komposisi  Senyawa  dengan
Metode Gas Chromatography–Mass Spectrometry . Minyak  atsiri  yang  telah diperoleh diamati komposisinya dan dihitung % rendemennya dengan menggunakan
adalah  GC-MS  QP2010SE  SHIMADZU dengan kolom Rastek Rxi-5MS.
Kondisi operasi dari GC-MS tersebut adalah: Jenis Pengion  :  EI (Electron Impact) Jenis Kolom :  Cp sit 5 CB Panjang :  30 meter Suhu Kolom :  70 o C  (5  menit)  sampai dengan 270 o C Gas Pembawa  :  Helium 10 kpa Injektor Mode  :  Split 1 : 80 suhu 300 o C Suhu Detektor  :  300 o C Pembuatan Larutan Trimethyltin Chloride  (TMT). Larutan  TMT  dibuat dengan  dosis  8  mg/kgBB  dilarutkan  dalam sejumlah  ml  minyak  jagung  sehingga diperoleh  larutan  dengan  dosis  yang  sesuai untuk masing-masing hewan uji.
Perlakuan Hewan Uji. Hewan uji berupa tikus  Sprague  Dawley,  jantan,  umur  2-  2,5 bulan dengan berat badan 150-200 g,  dibagi menjadi  6  kelompok  perlakuan  masing- masing  6  ekor.    Sebelum  mendapat perlakuan,  tikus  diadaptasikan  selama  1 minggu  dengan  kondisi  laboratorum  pada suhu  kamar.  Hewan  uji  mendapatkan  siklus paparan  cahaya  12  jam  terang  dan  gelap dengan  mendapat  pakan  dan  minum  ad libitum.
Hewan uji dibagi menjadi enam kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri dari  6  ekor  tikus.  Semua  kelompok  diberi perlakuanya  masing-masing  selama  6  hari dan  pada  hari  ke-7  semua  kelompok  kecuali kelompok  VI  (kontrol  sehat)  diberi  induksi larutan  TMT  dengan  dosis  8  mg/kg  BB. Selanjutnya semua kelompok diberi perlakuanya  masing-masing  selama  28  hari setelah  pemberian  TMT.  Kelompok  I (kontrol  sehat)  dan  kelompok  II  (kontrol sakit)  diberi  larutan  parafin  cair  secara peroral.  Kelompok  III  (kontrol  obat)  diberi larutan citicoline dosis  200  mg/kg  BB.
Kelompok  I,  II,  dan  III  diberi  minyak  atsiri masing-masing  dosis    100,  200,  dan  400 mg/kgBB  yang  terlarut  dalam  parafin.  Pada hari  ke-28  setelah  induksi  TMT  hewan  uji dikorbankan.  Otak  tikus  diabil  dan  diuji aktivitas asetilkolinesterase.
Pengukuran Aktivitas Asetilkolinesesterase. 1. Pengukuran kurva standar asetilkolinesesterase. Pengukuran  kurva standar  asetilkolinesesterase  berdasarkan reaksi  kit  kit  AChE  katalog  #  K764-100 produsi Biovision. Larutan standar asetilkolinesterase  50  mM  diencerkan menjadi  0,5  mM  dengan  mengambil  10 µl dan ditambahkan 990 µl larutan assay buffer. Dari larutan strandar asetilkolinesterase  0,5  mM  diambil masing-masing  0,  2,  4,  6,  8,  10,  12  dan 14  µl  dan  dimasukan  dalam  tabung Eppendorf  kemudian  ditambah  larutan assay  buffer  sampai  volume  50  µl sehingga  dihasilkan  dengan  konsentrasi 0,  1,  2,  3,  4,  5,  6,  dan  7  nmol.  Masing- masing  larutan  yang  telah  dibuat, kemudian  ditambah  campuran  campuran 45 µl assay buffer, 2 µl Choline Oxidase Enzyme Mix, 2 µl AChE Probe , dan 1 µl
AChE Substrat dan diaduk rata kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 20-30 menit dan ukur absorbansinya mengunakan plate  reader pada  panjang gelombang  570  nm.  Hasil  absorbsi kemudian  dibuat  kurva  standar  AChE sehingga  dihasilkan  persamaan  linear hubungan absorbansi dengan konsentraksi larutan. 2. Pengukuran  aktivitas  AChE  pada sampel jaringan otak tikus . Pengukuran aktivitas asetilkolinesesterase  berdasarkan  reaksi kit  AChE  katalog  #  K764-100  produsi Biovision. Jaringan otak dengan berat 25 mg  dihomogenkan  dengan  0,1  ml aquadest  kemudian  disentrifugasi  pada kecepatan  10000  x  g  selama  15  menit. Supernatant  diambil  dan  dikumpulkan. Sebanyak  5  µl  supernatan  dimasukan dalam  tabung  eppendorf  dan  ditambah larutan  buffer  asetilkolin  sampai  50  µl. Sebanyak  5  µl  larutan  ditambahkan kedalam  campuran  45  µl  assay  buffer,  2 µl  Choline  Oxidase  Enzyme  Mix,  2  µl AChE  Probe,  dan  1  µl  AChE  Substrate dan  diaduk  rata  kemudian  diinkubasi pada suhu 37° C selama 20-30 menit dan ukur  absorbansinya  mengunakan  plate reader  pada  λmaks  570  nm.  Aktivitas
enzim  asetilkolinesterase  dapat  dihitung dengan persamaan:
AChE aktivitas
(µU/mg protein) =(B/∆T x VxKadar protein x 1000) x FP
Keterangan :
∆T  = selisiH  waktu  pembacaan  pertama  dan kedua ,
B   = X (nmol),
V   = Volume yang bereaksi (ml) = 0,001ml, FP   = Faktor Pengenceran.

## Pengukuran Kadar Protein Otak Tikus
Pengukuran kadar protein berdasarkan metode biuret.
1. Pengukuran  kurva  standar  albumin . Larutan  standar  albumin  dibuat  dengan 15,00  mg  albumin  ditambah  10,00  ml aquadest.  Dari  larutan  standar,  diambil masing-masing 150, 120, 100, 80, 60, 40, 20,  0  µl  dan  dimasukan  dalam  tabung eppendorf  kemudian  ditambah  aquadest sampai volume 150 µl sehingga dihasilkan  seri  konsentrasi  1,5,  1,2,  1,0 0,8,  0,6,  0,4,  0,2,  0,0  mg/ml.  Masing- masing  larutan  yang  telah  dibuat, kemudian  ditambah  reagen  biuret100  µl dan  diaduk  rata  kemudian  diinkubasi pada  suhu  kamar  selama  30  menit  dan ukur  absorbansinya  mengunakan plate reader pada  λ  maks  540  nm.  Hasil absorbsi  kemudian  dibuat  kurva  standar albumin dan dihasilkan persamaan linear dari hubungan absorbansi dengan konsentraksi larutan.
2. Pengukuran  Kadar  Protein  Pada Sampel  Jaringan  Otak  Tikus. Jaringan otak dengan berat 100 mg dihomogenkan dengan  0,4  ml  aquadest  kemudian
disentrifugasi  pada  kecepatan  8000  x  g selama  15  menit.  Supernatant  diambil dan  dikumpulkan.  Sebanyak  40  µl supernatan  dimasukan  dalam  tabung eppendorf dan ditambah aquadest sampai volume  150  µl  dan  ditambah  larutan reagen  100  µl.  Diaduk  rata  kemudian diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  30 menit dan ukur absorbansinya mengunakan plate  reader pada  λ  maks 540 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari penelitian ini diperoleh 28 komponen utama dengan 3 fraksi relatif yang dominan. yaitu ar-tumerone (49,47 %), alpha tumerone (19,91 %), dan alpha phellandrene (4,24  %).  Telah  dilaporkan  bahwa  teknik analisis  GCMS  telah  digunakan  dalam penentuan  dan  pemisahan  senyawa  aktif minyak  atsiri Curcuma  caesia  roxb (Araujo et  al,  2001) dan  minyak  atsiri Rhizoma ligustici (Liang et al ., 2006).
Terdapat  dua  puluh  delapan  komponen utama  di  dalam  minyak  atsiri  kunyit berdasarkan teknik pemisahan GCMS. Berdasarkan  hasil  analisis  GCMS  seperti pada  kromatogram  (Gambar  1),  terdapat enam  komponen  utama  minyak  atsiri  kunyit sesuai  persentase  fraksi  relatifnya,  diketahui senyawa ar-turmeron 49,47  %  merupakan komponen  yang  dominan  yang  diduga menjadi senyawa aktif minyak volatil kunyit. Senyawa  aktif ar-turmeron diketahui mampu menurunkan kematian sel (apoptosis) pada  tikus  yang  mengalami  struk  emboli (Dohare et al ., 2008).
Gambar 1.   Kromatogram  minyak atsiri kunyit dengan dua puluh delapan komponen utama pengukuran aktivitas asetilkolinesesterase
Pembuatan  kurva  baku  AChE,  untuk mengetahui  hubungan  antara  konsentras larutan  standar  AChE  dengan  serapan.  Dari konsentrasi  0,  1,  2,  3,  4,  5,  6,  dan  7  nmol diperoleh  serapan  0,092  ;  0,201  ;  0,273  ; 0,312  ;  0,403  ;  0,455  ;  0,534  ;  0,610 diporoleh persamaan y = 0,070 x + 0,112 (r) = 0,9931. Menurut teori, untuk n = 7 dengan taraf  kepercayaan  95%  maka  harga  r  tabel  = 0,666, kesimpulannya r = 0,9931 > r = 0,666 ini  berarti  telah  memenuhi  persyaratan, sehingga dapat disimpulkan bahwa persamaan garis yang diperoleh menunjukkan adanya hubungan yang
signifikan  antara  konsentrasi  larutan  standar AChE dengan absorbansi. Data aktivitas AChE otak tikus terdistribusi  normal  p=0,982  (p>0,05)  dan homogen  p=0,728  (p>0,05).  Hasil  uji ANOVA  menunjukkan  berbeda  bermakna p=0,008  (p<0,05).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  perbedaan  perlakuan  menyebabkan perbedaan  aktivitas  AChE  otak  tikus  pada masing–masing  kelompok  perlakuan.  Kadar rata-rata  dan  histogram  aktivitas  AChE  otak tikus  masing-masing  terlihat  pada  Tabel  I dan dan Gambar 2.
Tabel 1.  Rerata  ±  SEM  Aktivitas  AChE  Otak Tikus Kelompok Dosis (mg/kgBB) Aktivitas (U/mg protein) Normal - 1,759 ± 0,050 Kontrol - 1,959 ±  0,123 ♣ Citicoline 200 1,552 ± 0,123 # Minyak atsiri 100 2,036 ± 0,132♣ Minyak atsiri 200 1,596 ± 0,043 # Minyak atsiri 400 1,524 ± 0,121 # Keterangan: Perbedaan bermakna, #p<0,05
terhadap  kelompok  normal,  *p<0,05  terhadap kelompok  kontrol,  dan  ♣p<0,05  terhadap kelompok citicoline.
Berdasarkan analisis statistik, peningkatan aktivitas  AChE  pada  kelompok  kontrol berbeda tidak bermakna (P>0,05) dibandingkan  kelompok  normal.  Penurunan aktivitas AChE kelompok pemberian citicoline berbeda bermakna (P<0,05)
terhadap  kelompok  kontrol.  Penurunan aktivitas  AChE  otak  pada  kelompok  MARK dosis  200  mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB berbeda  bermakna  (P<0,05)  dibandingkan kelompok  kontrol  namun  berbeda  tidak bermakna pada dosis 100 mg/kgBB.
Gambar 2. Histogram aktivitas AChE otak tikus
Keterangan  :  Perbedaan  bermakna,  #p<0,05  terhadap  kelompok  normal,  *p<0,05  terhadap  kelompok kontrol, dan  ♣p<0,05 terhadap kelompok citicoline
Aktivitas  AChE  rata-rata  pada  kelompok normal  lebih  rendah  dibandingkan  dengan kelompok kontrol, ini menunjukkan pemberian TMT 8 mg/kgBB dapat menaikkan aktivitas AChE otak  tikus namun uji  lanjut  dengan  uji  LSD  didapatkan  hasil bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  bermakna (p>0,05)  antara  kedua  kelompok  tersebut. Berdasarkan  hasil  uji  LSD  juga  didapatkan
perbedaan bermakna antara kelompok kontrol  dengan  kelompok citicoline yang menunjukkan  pemberian citicoline dapat menghambat aktivitas  AChE.  Terdapat
perbedaan bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok minyak atsiri dosis 200  mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB  namun tidak  ada  perbedaan  bermakna  dengan kelompok  100  mg/kgBB.  Pemberian  minyak
atsiri  dosis  400  mg/kgBB  dapat  menurunkan aktivitas  AChE  lebih  besar  dibandingkan dengan dosis 200 mg/kgBB namun tidak ada perbedaan  yang  bermakna  antara  dua kelompok  tersebut,  hal  ini  menunjukkan bahwa  pemberian  minyak  atsiri  rimpang kunyit dosis 200 mg/kgBB dapat menghambat  aktivitas  AChE  pada  tikus model demensia dan peningkatan dosis  lebih dari  200  mg/kgBB  tidak  dapat  menurunkan aktivitas AChE secara signifikan.
Pada penelitian ini, pemberian TMT tidak mampu meningkatkan aktivitas AChE secara signifikan,  hal  ini kemungkinan  karena  jarak pemberian TMT dengan hewan uji dikorbankan  terlalu  singkat  yaitu  21  hari. Hasil  ini  didukung  hasil  penelitian  oleh  Kim et  al., (2011)  dimana  jarak  pemberian  TMT dengan  hewan  uji  dikorbankan  yaitu  selama 48 hari. TMT merupakan senyawa organotoksin dengan efek neurotoksikan kuat yang  sangat  berguna  untuk  mempelajari respon terhadap cedera otak karena pola yang berbeda  dari  degenerasi  saraf  di  otak  tikus (Jung et al ., 2013). TMT dapat menyebabkan gangguan  pada  fungsi  memori.  Gangguan memori  ini  sesuai  dengan  mekanisme  TMT yang  dapat  menyebabkan  perubahan  dalam neurotransmisi  kolinergik  melalui  gangguan reseptor muskarinik dan menyebabkan penurunan  aktivitas  AChE  di  otak  (Kim et al .,  2011).  ACh  dilepaskan  dalam  otak selama  pembelajaran  dan  sangat  penting untuk  pembentukan  memori  baru  sehingga bila terjadi penurunan ACh maka akan terjadi gangguan memori (Buchanan et al ., 2011).
Pemberian citicoline 200 mg/kgBB secara signifikan dapat meningkatkan memori tikus. Hasil  tersebut  dapat  dilihat  dari  data  uji penghambatan  aktivitas  AChE. Citicoline menunjukkan kemampuan untuk meningkatkan kemampuan kognitif, terutama kemampuan  orientasi  spasial  pada  penderita Alzheimer's  disease (Anonim,  2008).  Pada penelitian  ini,  pemberian  minyak  atsiri rimpang  kunyit  dosis  200  mg/kg  BB  secara signifikan dapat menghambat aktivitas AChE. Penghambatan aktivitas
asetilkolinesterase  otak  telah  menjadi  target terapi  dalam  menigkatkan  kadar  ACh  pada penderita  demensia  (Lane et  al. ,    2006). Keseimbangan  kadar  ACh  otak  merupakan tujuan dalam menghambat aktivitas
asetilkolinesterase  pada  penderita  demensia (Amoo et  al .,  2012).  Asetilkolinesterase merupakan  enzim  yang  memecah  asetilkolin menjadi  bentuk  tidak  aktif  (Lane et  al .,
2006). Donepezil, rivastigmine dan galantamine  merupakan  obat  penghambat aktivitas enzim esetilkolinesterase yang telah digunakan  di  Amerika  Serikat  dan  telah direkomendasi oleh Food and Drug Administration (FDA) (Lukiw, 2012; Salomone et al., 2012).

## KESIMPULAN
Pemberian  minyak  atsiri  rimpang  kunyit dosis  200  mg/kg  BB  dapat  menghambat aktivitas  enzim  AChE  pada  tikus  model demensia  yang  diinduksi  TMT.  Komponen utama  pada  minyak  atsiri  rimpang  kunyit hasil  analisi  GC-MS  yaitu  a r-tumerone (49,47%),  a lpha  tumerone (19,91%),  dan alpha phellandrene (4,24%).

## DAFTAR PUSTAKA
Amoo,  S.  O.,  Aremu,  A.  O.,  Moyo,  M.,  & Van  Staden,  J.  (2012).  Antioxidant  and acetylcholinesterase-inhibitory  properties of  long-term  stored  medicinal  plants. BMC  Complementary  and  Alternative Medicine , 12 , 87. doi:10.1186/1472-6882-
12-87
Anonim.  (2008).  Citicoline.  Retrieved  from http://www.biomedsearch.com/article/Alz heimers-disease-amnestic-mild cognitive/181714351.html
Araujo  CAC,  Leon  LL,  Biological  activities of  Curcuma  loga  L, J  Mem  Inst  Oswaldo Cruz 2001;96(5):723-728. Buchanan, K.A., Petrovic, M.M., Chamberlain, S.E., Marrion, N.V.,
Mellor,  J.R.,  2011,  Facilitation  of  long- term  potentiation  by  muscarinic  M1 receptors is mediated by  inhibition of SK channels, Neuron., 69, 1037.
Hales,  Robert  E.,  Stuart  C.  Yudofsky,  Glen O. Gabbard, and Eric D. 2010. Essentials of Psychiatry . American Psychiatric Pub.
Kim,  J.K.,  Choi,  S.J.,  Bae,  H.,  Kim,  C.R.,
Cho,  H.Y.,  Kim,  Y.J.,  Lim,  S.T.,  Kim, C.J.,  Kim,  H.K.,  Peterson,  S.,  And  Shin,
D.H.,  2011,  Effects  of  Methoxsalen  from Poncirus trifoliata on Acetylcholinesterase  and  Trimethyltin- Induced Learning and Memory Impairment, Biosci. Biotechnol. Biochem ., 75, 1984-89.
Lane, R. M., Potkin, S. G., & Enz, A. (2006).
Targeting acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase  in  dementia.  The International Journal of Neuropsychopharmacology / Official Scientific  Journal  of  the  Collegium Internationale Neuropsychopharmacologicum (CINP),
9(1), 101–124.
Liju,  Vijayastelter  B.,  Kottarapat  Jeena,  dan Ramadasan Kuttan. 2011. “An Evaluation of  Antioxidant,  Anti-inflammatory,  and Antinociceptive Activities of Essential Oil from Curcuma Longa. L.” Indian Journal of Pharmacology 43 (5): 526–31.
Lukiw,  W.  J.  (2012).  Amyloid  beta  (A?) peptide  modulators  and  other  current treatment  strategies  for  Alzheimer’s disease (AD). Expert Opinion on Emerging Drugs . Retrieved from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles
/PMC3399957/
Jung, E.-Y., Lee, M.-S.,  Ahn, C. J., Cho, S.-
H.,  Bae,  H.,  &  Shim,  I.  (2013).  The Neuroprotective  Effect  of  Gugijihwang- Tang  on  Trimethyltin-Induced  Memory
Dysfunction  in  the  Rat. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine :  eCAM , 2013 .  Retrieved  from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles /PMC3687724/
Lim,  Giselle  P.,  Teresa  Chu,  Fusheng  Yang, Walter  Beech,  Sally  A.  Frautschy,  and Greg  M.  Cole.  2001.  “The  Curry  Spice Curcumin  Reduces  Oxidative  Damage dan  Amyloid  Pathology  in  an  Alzheimer Transgenic  Mouse.” The  Journal  of
Neuroscience 21 (21): 8370–77.
Liang YZ, Guo FQ. Analysis of volatil oil in Rhizoma ligustici chuanxiong-radix
paeoniae  rura  by  gas  chromatography- mass  spectrometry  and  chemometric resolution  1. J.  Acta  Phar  Si 2006;
27(4):491-498. Lynch, M. A. 2004. “Long-Term
Potentiation  and  Memory.” Physiological
Reviews 84 (1): 87–136.
Park, Sang Eun, Nam Deuk Kim, and Young Hyun  Yoo.  2004.  “Acetylcholinesterase Plays  a  Pivotal  Role  in  Apoptosome Formation.” Cancer  Research 64  (8):
2652–55.
Rathore,  Priyanka,  Preeti  Dohare,  Saurabh Varma, Aparajita Ray, Uma Sharma, N R Jagannathan,  N  R  Jaganathanan,  and Madhur  Ray.  2008.  “Curcuma  Oil: Reduces Early Accumulation of Oxidative Product  and  Is  Anti-apoptogenic  in Transient  Focal  Ischemia  in  Rat  Brain.” Neurochemical  Research 33  (9):  1672–
82.
Salomone,  S.,  Caraci,  F.,  Leggio,  G.  M., Fedotova,  J.,  &  Drago,  F.  (2012).  New pharmacological  strategies  for  treatment of  Alzheimer’s  disease:  focus  on  disease modifying  drugs. British  Journal  of Clinical Pharmacology , 73 (4), 504–517.
Smart, J., 2006, Curcumin: A Powerful Brain Protection  Supplement,  Available  from: URL:http://accelerating.org/articles/curcu min.html.
Shah,  Nirish,  Sandeep  Khurana,  Kunrong Cheng,  and  Jean-Pierre  Raufman.  2009. “Muscarinic  Receptors  and  Ligands  in Cancer.” American Journal of Physiology - Cell Physiology 296 (2): C221–C232.
Weuve,  Jennifer,  Paul  A  Scherr,  Denis  A
Evans, and liesi Hebert. 2013. “Alzheimer Disease  in  the  United  States  (2010-2050) Estimated  Using  the  2010  Census.” Neurology 80 (19): 1778–83.