## PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK HASIL ISOLAT BAKTERI NON PATOGEN DALAM BERBAGAI JENIS MEDIA

## Endah Rita Sulistya Dewi
Jurusan Pendidikan Biologi FPMIPA IKIP PGRI Semarang
FPMIPA IKIP PGRI Semarang email: endahrita@yahoo.co.id

## PROBIOTICS CULTURE GROWTH OF ISOLAT NON PATHOGENS BACTERIA IN VARIOUS TYPES OF MEDIA

## ABSTRACT
Application  of  probiotics  as  biosecurity  is  the  safest  way  to  tackle disease  in  fish  and  shrimp  farming  because  of  bacteria  used  are organisms  that  can  degrade  toxic  organic  material  in  the  water . Bacillus sp is a type of bacteria that can be used as a probiotic agent because  of  its  ability  to  degrade  organic  compounds  for  the  sake  of growth .
This  study  aims  to  determine  type  appropriate  media  types  for  the growth  of  probiotic  bacteria Bacillus  sp .  The  method  used  in  this research that completely randomized design (CRD) with 4 treatments and repeated 4 times. The treatments were the addition of soy extract, sprouts, and potatoes.
The  results  showed  that  there  were  significant  differences  on  each treatment with the addition of soy extract, sprouts, and potatoes in the probiotic culture medium.
The  conclusion  of  this  study  indicate  that  the  type  of  media  that  is most  optimal  to  extract  the  green  bean  sprouts  reach  a  value  of  OD (Optical Density) 0.68.
Keyword: Probiotics, Bacillus sp .

## ABSTRAK
Aplikasi  probiotik  sebagai  biosecurity  merupakan  cara  yang  paling aman  untuk  mengatasi  serangan  penyakit  pada  ikan  maupun  udang budidaya  karena  bakteri  yang  digunakan  merupakan  organisme  yang mampu  mendegradasi  bahan  organik  yang  bersifat  racun  dalam  air. Bacillus  sp merupakan  jenis  bakteri  yang  dapat  digunakan  sebagai agen  probiotik  karena  kemampuannya  dalam  mendegradasi  senyawa organik untuk kepentingan pertumbuhan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  jenis  media  yang  sesuai untuk  pertumbuhan  bakteri  probiotik  jenis Bacillus  sp. Metode  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  rancangan  acak  lengkap  (RAL) dengan  4  perlakuan  dan  diulang  4  kali.  Perlakuan  yang  diberikan adalah  dengan  penambahan  ekstrak  kedelai,  kecambah  kacang  hijau, dan kentang.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ada  perbedaan  yang  signifikan pada masing - masing perlakuan dengan penambahan ekstrak kedelai, kecambah, dan kentang pada media kultur probiotik.
Kesimpulan dari penelitian ini menunjukkan bahwa jenis media  yang paling  optimal  yaitu  dengan  pemberian  ekstrak  kecambah  kacang hijau  dengan  mencapai  nilai  OD  (Optical  Density/Kerapatan  Optik) 0,68.
Kata Kunci : Probiotik, Bacillus sp .

## PENDAHULUAN
Penggunaan  probiotik  dalam  sistem  aquakultur  telah  dikenal  masyarakat  secara luas sebagai salah satu alternatif dalam menanggulangi penyakit yang disebabkan oleh virus maupun bakteri yang bersifat pathogen bagi ikan dan  udang budidaya.
Cowan (1974) dalam Mayanti, dkk (2010) menyatakan bahwa Bacillus sp . merupakan  bakteri  berbentuk  batang,  tergolong  bakteri  gram  positif  pada  kultur muda  dan  akan  menjadi  bakteri  gram  negatif  ketika  memasuki  fase  stasioner dalam  pertumbuhannya,  bersifat  motil,  memproduksi  spora  (endospora)  yang biasanya resisten pada panas, aerob (beberapa spesies anaerob fakultatif), katalase positif,  dan  oksidasi  bervariasi,  serta  termasuk  bakteri  heterotrof  saprofit  yang memerlukan  bahan  organik  untuk  memenuhi  sumber  energinya.  Sebagian  besar Bacillus  termasuk  dalam  kelompok  bakteri  mesofil  yang  tumbuh  dengan temperatur optimal antara 25 -45°C.
Dalam  sistem  akuakultur, Bacillus sp.  dimanfaatkan  sebagai  agen  bio- kontrol  (probiotik)  karena  memiliki  kemampuan  dalam  mendegradasi  senyawa organik dan menggunakannya untuk menunjang pertumbuhan. Hal ini disebabkan karena, Bacillus sp.  memiliki  enzim  proteolitik  yang  dihasilkan  secara ekstraseluler yang berperan dalam menguraikan protein dan juga memiliki enzim lipolitik yang berperan dalam menguraikan lemak sehingga mampu mendegradasi
Bioma , Vol. 3, No. 1, April 2014
sampah-sampah  organik  yang  dipecah  menjadi  senyawa-senyawa  yang  lebih sederhana.
Media adalah substrat yang komposisinya terdiri atas nutrisi tertentu yang diperlukan  untuk  menumbuhkan  dan  mempelajari  sifat-sifat  bakteri.  Komposisi nutrisi  media  yang  lengkap  mengandung  sumber  karbon,  nitrogen,  belerang, fosfat, logam mikro, vitamin, penyubur, NaCl dan air ( Nur Hidayat, dkk. 2008).
Penggunaan  probiotik  akan  memambah  biaya  produksi,  karena  probiotik komersial  yang beredar  dipasaran  cukup mahal.  Oleh karena itu, untuk  menekan biaya  yang  harus  dikeluarkan,  maka  perlu  dilakukan  perbanyakan  probiotik dengan cara kultur .
Hal  penting  yang  harus  diperhatikan  saat  kultur  berlangsung  yaitu ketersediaan  nutrisi  yang  menunjang  kehidupan  bakteri  probiotik.  Pemberian ekstrak  kedelai,  kecambah,  dan  kentang  bertujuan  untuk  mengetahui  asupan nutrisi  yang  tepat  bagi  pertumbuhan  bakteri,  sehingga  kultur  dapat  berlangsung dengan maksimal.

## MATERIAL DAN METODE

## 1. S UBJEK P ENELITIAN
Subjek penelitian yaitu bakteri probitik jenis Bacillus sp.

## 2. ALAT YANG D IGUNAKAN
Alat yang digunakan dalam penelitian adalah: fotometer, ember, blower, selang air, batu Aerasi, pipet tetes 10 mL, gelas ukur 250 mL, neraca atau timbangan, kuvet, kran aerasi, DO meter, dan pH meter.

## 3. BAHAN YANG D IGUNAKAN
Bahan  yang  digunakan  meliputi  :  kentang,  kedelai,  kecambah  kacang  hijau, kaporit,  air  PAM,  yeast  (fermipan),  tepung  ikan,  molase,  Probiotik  ( Bacillus sp ), dan aquades.
Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK

## 4. DESAIN E KSPERIMEN
Desain  penelitian  yang  digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan suatu  faktor  yaitu  penambahan  ekstrak  kedelai,  kecambah  kacang  hijau,  dan kentang,  dengan  4  taraf  perlakuan  yang  masing-masing  dilakukan pengulangan 4 kali.
Perlakuan pada penelitian ini:
Perlakuan A : ekstrak  kedelai + tepung ikan + yeast + molase. Perlakuan B : ekstrak  kecambah  kacang  hijau +  tepung ikan +  yeast  + molase.
Perlakuan C : ekstrak  kentang + tepung ikan + yeast + molase.
Perlakuan D (kontrol)   : tepung ikan + yeast + molase.

## 5. PROSEDUR / C ARA K ERJA
Prosedur atau langkah - langkah penelitian adalah sebagai berikut.
a. Persiapan media kultur bakteri
Persiapan  awal  yang  harus  dilakukan  yaitu  menyediakan  semua  alat  dan bahan yang dibutuhkan dalam proses pengkulturan.
Bahan  yang  dibutuhkan  yaitu  kacang  kedelai  (1,5  kg),  kecambah kacang  hijau  (1,5  kg),  kentang  (1,5  kg),  molase  (3  L),  bakteri  probiotik ( Bacillus sp ), yeast (60 gram), tepung ikan (2,4 kg), air (140 L), dan aquades (1,3  L),  sedangkan  alat  yang  dibutuhkan  dalam  proses  pengkulturan  berupa 12 buah ember air, 1 buah neraca, 1 buah gelas ukur, 1 buah beaker glass, 1 buah pipet, 1 buah blower, 20 meter selang air, 12 buah kran aerasi, 12 buah batu aerasi, 12 kuvet, dan 1 buah fotometer. Alat pendukung yang digunakan untuk pengukuran pH, DO, dan suhu yaitu pH meter dan DO meter.
b. Persiapan bakteri probiotik
Bakteri yang digunakan yaitu jenis Bacillus sp.
Bioma , Vol. 3, No. 1, April 2014

## c. Perlakuan
Tabel 1. Perlakuan  Perbanyakan  Probiotik dengan  Penambahan  Ekstrak Kedelai, Kecambah Kacang Hijau, dan Kentang
Perlakuan A Perlakuan B Perlakuan C Perlakuan D (Kontrol) Kedelai: 0,5 kg Kecambah kh: 0,5 kg Kentang : 0,5 kg Tepung ikan : 0,2 kg Tepung ikan: 0,2 kg Tepung ikan: 0,2 kg Tepung ikan : 0,2 kg Molase : 0,25 L Molase: 0,25 L Molase : 0,25 L Molase : 0,25 L Bacillus sp : 0,2 L Bacillus sp : 0,2 L Bacillus sp : 0,2 L Bacillus sp : 0,2 L Bacillus sp : 0,2 L Yeast: 5 gram Yeast : 5 gram Yeast : 5 gram Yeast : 5 gram
Metode yang digunakan untuk pengkulturan yaitu:
1) Menyiapkan  air  media  dengan  melakukan  sterilisasi,  yaitu  dengan memberikan kaporit  pada air media sebanyak 1  ppm  dan diaerasi  selama 24 jam.
2) Setelah air media diaerasi selama 24 jam, pastikan tidak ada bau kaporit yang masih bersisa.
3) Kemudian  mencampurkan  semua  bahan  tepung  yang  terdiri  dari  dedak, tepung  ikan,  dan  molase  pada  perlakuan  A,  tepung  terigu,  tepung  ikan,  dan molase  pada  perlakuan  B,  tepung  beras,  tepung  ikan,  dan  molase  pada perlakuan C, serta tepung ikan dan molase pada  perlakuan D, tunggu hingga semua  bahan  tercampur  rata  dengan  aerasi  (  ±  5  menit),  setelah  itu memasukkan yeast.
4) Jika semua bahan sudah tercampur rata, memasukkan bakteri probiotik pada masing - masing perlakuan dan membiarkan teraduk sendirinya dengan aerasi yang ada.
5) Selama  proses  fermentasi  berlangsung,  media  kultur  harus  diberikan  aerasi kuat  dan mendiamkan hingga 48 jam.  Aerasi  diberikan dengan tujuan untuk memasok oksigen ke dalam kultur agar ketersediaan oksigen di dalam media kultur tercukupi.

## Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK
6) Melakukan  pengamatan  setiap  8  jam  sekali  hingga  diperoleh  data  yang diinginkan.
6. Teknik Observasi dan Pengumpulan Data
Observasi dan pengambilan data dilakukan secara langsung selama penelitian, meliputi  pola  dan  laju  pertumbuhan  bakteri  probiotik  jenis  Bacillus  sp. Penghitungan  laju  pertumbuhan  bakteri  Bacillus  sp  dilakukan  selama  56  jam pasca kultur bakteri dan diamati setiap 8 jam sekali.
7. Analisis dan Interpretasi Data
Pengukuran  pertumbuhan  sel  dilakukan  melalui  analisa  kerapatan  optic (Optical  Density)  menggunakan  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 550  nm  (Suminto,  2008).  Data  yang  diamati  meliputi  kepadatan  bakteri Bacillus  sp  pada  media  kultur  dan  media  pemeliharaan  lingkungan.  Analisa data  melalui  Analisis  Sidik  Ragam  (ANAVA)  dan  dilanjutkan  dengan  uji wilayah  ganda  dari  Duncan  apabila  diperoleh  perbedaan  yang  signifikan (Srigandono, 1981)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pola  pertumbuhan  bakteri Bacillus  sp pada  media  kultur  dengan  penambahan ekstrak  kedelai,  kecambah  kacang  hijau,  dan  kentang  dapat  dilihat  pada  Gambar 1.  Pertumbuhan  bakteri  yang  terbaik  terdapat  pada  perlakuan  B  yaitu  dengan penambahan ekstrak kecambah kacang hijau.
Setelah  dilakukan  analisis  ragam  (ANAVA)  dapat  diketahui  bahwa  nilai F hitung yang  diperoleh  yakni  sebesar  11,6    bila  dibandingkan  dengan  nilai  F  dari F tabel dengan memperhatikan derajat kebebasan 3  dan 8 pada tingkat  5% dan 1% yaitu 3,49 dan 5,35, maka nilai F hitung > F tabel yang berarti memberikan beda yang sangat  nyata  atau  signifikan  pada  perlakuan  yang  diberikan  terhadap  kerapatan optik atau optical density (OD) media kultur bakteri.
Bioma , Vol. 3, No. 1, April 2014
Gambar 1. Pola Pertumbuhan Bacillus sp Pada Media kultur dengan Penambahan Ekstrak Kedelai, Kecambah Kacang Hijau, dan Kentang
Data  yang  telah  diperoleh  selama  pengamatan  kemudian  dianalisis menggunakan ANAVA, dan disajikan dalam bentuk Tabel 2. berikut:
Tabel 2. Analisis  Ragam  Pertumbuhan  Bakteri Bacillus sp pada  Media Kultur Dengan  Penambahan  Ekstrak  Kedelai,  Kecambah  Kacang  Hijau, dan
Kentang Sumber Keragaman (SK) Jumlah Kuadrat (JK) Derajat Bebas (db) Kuadrat Tengah (KT) F Hitung F Tabel (5%) (1%) Strain 0,0523 3 0,0174 11,6 3,49 5,35 Error 0,012 8 0,0015 Total 0,0643 11 Kk = 9,74% F hitung > F tabel = berbeda sangat nyata atau signifikan pada tingkat 5% dan 1%.
Sebelum  dilanjutkan  dengan  uji  wilayah  ganda  dari  Duncan,  data  yang diperoleh diuji terlebih dahulu menggunakan uji normalitas dan uji homogenitas, masing  -  masing  uji  menunjukkan  distribusi  data  normal  dan  ragam  yang homogeny, yang berarti dapat dilanjutkan dengan uji wilayah ganda dari Duncan. Uji  wilayah  ganda  dari  Duncan  digunakan  untuk  melihat  seberapa  jauh  tingkat perbedaan  tiap  perlakuan  dan  perlakuan  mana  yang  berbeda  itu  (Srigandono, 1981).
Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK
Tabel 3. Uji   Wilayah  Ganda  Duncan  Pertumbuhan  Bakteri Bacillus sp. pada Media Kultur dengan Berbagai Sumber Karbohidrat Strain Nilai Tengah Selisih C 0,48 C B 0,44 0,04 B A 0,37 0,11** 0,07 A D 0,30 0,18** 0,14** 0,07
** = Berbeda sangat nyata pada taraf 5% dan 1%
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang  dilakukan  terhadap  pertumbuhan bakteri Bacillus  sp pada  media  kultur  dengan  penambahan  ekstrak  kedelai, kecambah  kacang  hijau,  dan  kentang  menunjukkan  perbedaan  pada  masing- masing  perlakuan  dan  setelah  dilakukan  dilakukan  analisis  ragam  (ANAVA) menunjukkan  hasil  signifikan  pada  perlakuan  yang  diberikan  terhadap  kerapatan optic atau optical density (OD) media kultur bakteri.
Media kultur bakteri adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat - zat hara  yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri sehingga  faktor - faktor  yang  ada  antara  lain  yaitu  ketersediaan  nutrisi  yang  meliputi  air,  sumber karbon,  sumber  energi,  sumber  akseptor  elektron,  sumber  mineral,  faktor pertumbuhan,  dan  sumber  nitrogen  akan  sangat  mempengaruhi  pertumbuhan bakteri, selain itu  dipengaruhi juga oleh temperatur (suhu), pH, dan kadar oksigen (Suriawiria, 2003).
Penambahan  ekstrak  kedelai,  kecambah  kacang  hijau,  dan  kentang  dapat mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  terjadi  karena,  masing  -  masing ekstrak  yang  diberikan  pada  masing  -  masing  perlakuan  memiliki  kandungan nutrisi yang berbeda dan dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri.
Kedelai  dipergunakan  dalam  kultur  bakteri  karena  di  dalam  biji  kedelai mengandung  kadar  asam  amino  paling  lengkap  yaitu  leucine,  lycine,  isoleucine, sedang  methionine  memberi  kandungan  yang  lebih  kecil.  Bila  dilihat  dari komposisi kacang - kacangan secara umum, maka sekitar 25% dari kalori (energi) yang terdapat pada kacang - kacangan adalah protein.
Biji  kacang  hijau  yang  dikecambahkan  mengalami  peningkatan  nilai  gizi berdasarkan  berat  kering,  protein  kecambah  kacang  hijau  meningkat  menjadi 119%  dibandingkan  dengan  kandungan  awal  pada  biji.  Hal  ini  disebabkan terjadinya sintesa protein selama germinasi.
Kecambah kacang hijau dikenal sebagai tauge. Tanaman ini mengandung zat  -  zat  gizi,  antara  lain  :  amylum,  protein,  besi,  belerang,  kalsium,  minyak lemak,  mangan,  magnesium,  niasin,  vitamin  (B1,  A,  dan  E).  kecambah  kacang hijau (tauge) merupakan sayuran tradisional  yang kaya vitamin C. 60 jam proses perkecambahan  meningkatkan  kadar  vitamin  C  hingga  132  mg/100  g,  sebuah pertimbangan  keuntungan  yang  nyata.  Perkecambahan  itu  juga  meningkatkan kadar  niasin  dan  riboflavin  secara  signifikan.  Menurut  Suprapto  (1992)  dalam Bima  Wibawa  (2010)  pada  kecambah  kacang  hijau  (taoge)  komponen  air merupakan  bagian  yang  terbesar  dibandingkan  dengan  komponen  laiinnya.  Gula pada kacang hijau didapatkan dalam bentuk sukrosa, fruktosa dan glukosa. Asam amino  esensial  yang  terkandung  dalam  protein  kacang  hijau  antara  lain  triptofan 1,35%,  treonin  4,50%,  fenilalanin  7,07%,  metionin  0,84%  ,  lisin  7,94%,  leusin 12,90%,  isoleusin  6,95%  dan  valin  6,25%.  Kandungan  nutrisi  kecambah  kacang hijau  paling  lengkap  sehingga  mampu  memberikan  kondisi  terbaik  untuk pertumbuhan Bacillus sp
Kentang  merupakan  tanaman    sayuran  yang  mengandung  sumber  karbon (karbohidrat),  mineral,  vitamin  C,  dan  karbohidrat  yang  tinggi  dapat  digunakan sebagai sumber energi.
Perbedaan yang terjadi pada masing - masing perlakuan disebabkan karena adanya  perbedaan  nutrisi  yang  terkandung  di  dalam  masing  -  masing.  Terdapat bentuk  granula,  viskositas  dan  terbentuknya  busa  pada  saat  proses  fermentasi berlangsung  selain  karena  agitasi,  juga  sebagai  pengaruh  adanya  protein  dalam substrat (Trismilah dan Wahyuntari, 2009).
Perlakuan  C  dengan  memberikan  ekstrak  kedelai  memberikan  hasil  yang kurang memuaskan meskipun kandungan gizi yang ada dalam biji kacang kedelai cukup  baik.  Hal  ini  dapat  dimungkinkan    karena  ekstrak  kasar  yang  diberikan
Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK
pada  media  kultur  menyebabkan  penyerapan  nutrisi  yang  dilakukan  oleh  bakteri menjadi kurang maksimal.
Nilai  OD  yang  paling  rendah  ditunjukkan  oleh  perlakuan  D  yaitu  tanpa penambahan  ekstrak.  Hal  ini  disebabkan  karena  pada  perlakuan  D  bakteri  tidak memperoleh tambahan sumber karbon sehingga kebutuhan sebagai sumber energi menjadi kurang terpenuhi.
Pertumbuhan  bakteri  dapat  digambarkan  dalam  kurva  pertumbuhan  yang meliputi  empat  fase  pertumbuhan  yaitu  fase  lag  atau  fase  permulaan,  fase eksponensial, fase stasioner, dan fase kematian (Pelczar dan Chan, 2008). Fase lag pada  penelitian  ini  tidak  terlihat  pada  8  jam  pertama.  Hal  ini  berarti  bakteri mampu  beradaptasi  dengan  cepat.  Fase  lag  yaitu  fase  dimana  tidak  ada penambahan  populasi,  sel  mengalami  penambahan  dalam  jumlah  komposisi kimiawi dan bertambahnya ukuran.
Fase  eksponensial  pada  perlakuan  dengan  penambahan  ekstrak  kentang dan  kecambah  mampu  bertahan  hingga  berumur  32  jam,  sedangkan  pada perlakuan  dengan  penambahan  ekstrak  kedelai  mampu  bertahan  hingga  berumur 24  jam.  Perlakuan  kontrol  yaitu  tanpa  penambahan  ekstrak,  fase  eksponensial bakteri mampu bertahan hingga 16 jam. Perbedaan waktu yang ditunjukkan pada masing  -  masing  perlakuan  berkaitan  erat  dengan  kemampuan  bakteri  dalam menyerap nutrisinya.
Laju peningkatan biomass dan jumlah individu dalam populasi dipercepat dengan bertambahnya waktu  dan laju percepatan tergantung pada komposisi  dan kondisi  fisik lingkungan pertumbuhan  yang mampu  mendukung mikroorganisme untuk  mensintesis  biomass  baru  pada  laju  yang  diberikan.  Pada  lingkungan  ini kandungan  precursor  protein,  asam  nukleat  dan  makromolekul  lainnya  cukup banyak sehingga pertumbuhan populasi lebih cepat (Nduka Okafor.2007)
Selanjutnya ciri yang ditunjukkan pada fase eksponensial yaitu sel bakteri masih  membelah  dengan  laju  yang  konstan,  aktivitas  metabolik  yang  konstan, massa  menjadi  dua  kali  lipat  dengan  laju  yang  sama,  dan  keadaan  pertumbuhan yang  seimbang  (Pelczar  dan  Chan,  2008).  Pada  fase  inilah,  kultur  bakteri  dapat diaplikasikan  pada  tambak  udang  maupun  ikan  sebagai  probiotik,  karena  pada
Bioma , Vol. 3, No. 1, April 2014
fase eksponensial  bakteri mengalami  fase pertumbuhan tertinggi  sehingga sangat efektif  sebagai  agen bikontrol di  lingkungan  tambak.  Selain  sebagai  agen biokontrol, kultur  probiotik  tersebut  juga  bisa  menjadi  pakan  ikan  atau  udang karena mengandung komposisi nutrisi yang masih lengkap.
Memperlihatkan  nilai  OD  pada  masing  -  masing  perlakuan,  jika  dibuat dalam bentuk kurva pertumbuhan bakteri maka perlakuan D memiliki garis kurva yang  paling  tinggi  pada  fase  eksponensial  jika  dibandingkan  dengan  perlakuan yang  lain,  dengan  demikian  kultur  bakteri  probiotik  pada  penambahan  ekstrak kecambah kacang hijau paling tepat digunakan sebagai kultur probiotik.
Setelah terjadi fase eksponensial yang diikuti dengan periode pertumbuhan cepat,  maka  selanjutnya  akan  terjadi  fase  stasioner  dimana  kurva  pertumbuhan menjadi  statis  karena  terjadinya  penumpukan  produk  beracun,  selain  itu  dapat terjadi  karena  kandungan  nutrien  semakin  sedikit  (William  L.  Hochfeld.  2006). Fase ini bertahan hingga berumur 48 jam pada keempat perlakuan.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  mengenai  pertumbuhan  kultur  probiotik  hasil  isolat bakteri non patogen dalam berbagai jenis media adalah sebagai berikut.
1. Jenis media dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri probiotik jenis Bacillus sp secara signifikan.
2. Penambahan  ekstrak  kecambah  kacang  hijau  merupakan  bahan  yang  paling efektif dalam kultur bakteri probiotik.

## DAFTAR PUSTAKA
Adiwidjaya,  Darmawan.  2007. Aplikasi  Probiotik  pada  Kegiatan  Usaha Perikanan  Budidaya:  Salah Satu Faktor Untuk  meningkatkan Produktivitas hasil Budidaya Ikan/Udang Yang Berwawasan Lingkungan. Disampaikan dalam rangka kegiatan akselerasi teknologi lingkup UNDIP, Semarang, 7 Desember 2007.
Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK
Amin,  Machluddin,  dan  Abdul  Mansyur.  2010. Pertumbuhan  Plankton  Pada Aplikasi  Probiotyik  Dalam  Pemeliharaan  Udang  Windu  (Penaeus monodon  FABRICUS)  di  Bak  Terkontrol. Laporan  hasil  penelitian.  Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau, Maros.
Bima  Wibawa,  2010. Pengaruh  Ekstrak  Taoge  Kacang  Hijau  terhadap Perkecambahan Seledri (Apium graveolens. L). Biologi Univ. Jambi
Gunarto.  2008. Beberapa  Aspek  Penting  dalam  Budidaya  Udang  Vanamei (Litopenaeus  vannamei)  dengan  Sistem  Pemupukan  Susulan  di  Tambak (Tradisional Plus). Jurnal Media Akuakultur, Vol. 3 (1).
Hatmanti,  Ariani.  2000. Pengenalan  Bacillus  spp. Oseana  (2000),  Vol.25  (1). http://www.oseanografi.lipi.go.id/sites/default/files/oseana_xxv%281%29 31-41.pdf . diakses pada tanggal 20 Juli 2013.
Mansyur,  Abdul  dan  Tangko,  Abdul  Malik.  2008. Probiotik:  Pemanfaatannya Untuk Pakan Ikan Berkualitas Rendah. Media Akuakultur, Vol. 3 (2). Mastantra, Kadek dan Ni Tengah suriadnyani. 2008. Pemeliharaan Larva Udang Vannamei  (Litopenaeus  Vannamei)  dengan  Penambahan  Probiotik Alteromonas sp. BY-9 . Bulletin Teknologi lit. akuakultur, Vol. 7 (2).
Mayanti,  Bening,  dan  Ariesyady,  H.D.  2010. Identifikasi  Keberagaman  Bakteri Pada Comersial-Seed Pengolahan Limbah Cat.
http://www.ftsl.itb.ac.id/kk/rekayasa_air_dan_limbah_cair/wp- content/uploads/2010/11/pe-ww6-bening-mayanti-15305040.pdf .  diakses pada tanggal 29 Maret 2013.
Nur  Hidayat,  Masdiana  C.  Padaga.  Sri  Suhartini.  2008. Mikrobiologi  Industri . Penerbit Andi Yogyakarta.
Nduka Okafor.2007 . Modern Industrial Microbiology and Biotechnology . Science Publisher, Enfieid, NH, USA
Pelczar, Michael J., dan E.C.S. Chan. 2008. Dasar - Dasar Mikrobiologi . Jakarta: Universitas Indonesia Press.
Srigandono,  Bambang.  1981. Rancangan  Percobaan:  Experimental  designs. Semarang: Fakultas Perikanan UNDIP.
Suliasih  dan  Rahmat.  2007. Aktivitas  Fosfatase  dan  Pelarutan  Kalsium  Fosfat oleh  beberapa  Bakteri  Pelarut  Fosfat. Biodiversitas  (2007),Vol.8  (1). http://biodiversitas.mipa.uns.ac.id/D/D0604/D060405.pdf .  diakses  pada tanggal 20 Juli 2013
Suminto.  2008. Pertumbuhan  Bakteri  Probiotik  Alkaligenus sp. Dan Flavobacterium sp. yang  Diisolasi  dari  Usus  Udang  pada  Media  Kultur Molase dan Kaolin. Saintek Perikanan, 4 (1).
Suriawiria, Unus. 2003. Mikrobiologi Air . Bandung: Alumni.
Suwoyo,  H.  Suryanto,  dan  Markus  Mangampa.  2010. Aplikasi  Probiotik  dengan Konsentrasi  Berbeda  pada  Pemeliharaan  Udang  Vaname  (Litopenaeus Vannamei) .  Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur 2010.
Trismilah,  dan  Budiasih  Wahyuntari.  2009. Pemanfaatan  Berbagai  Jenis  Pati sebagai Sumber Karbon untuk Produksi  α-Amilase Ekstraseluler Bacillus sp. SW2 . http://ejurnal.bppt.go.id/index.php/jsti/article/download/876/825 . diakses pada tanggal 20 Juli 2013.
William L. Hochfeld. 2006. Producing Biomolecular Substances with Fermenters, Bioreactors,  and  Biomolecular  Synthesizers .  Taylor  &  Francis  Group. London New York.
Dewi, E.R.S., PERTUMBUHAN KULTUR PROBIOTIK