e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume VIII No 1 Oktober 2019 p-ISSN: 2302-3600, e-ISSN: 2597-5315

## TREATMENT OF VIBRIOSIS DISEASE (Vibrio harveyi) IN VANAME
SHRIMP (Litopenaeus vannamei, Boone 1931) USING Avicennia alba

## LEAVES EXTRACT
Dian Rusadi* 1 , Wardiyanto, dan Rara Diantari 2

## ABSTRACT
Avicennia alba is a mangrove plant that often ued by coastal society as a traditional  medecine,  it  is  potential  to  be  dveloped  as  the  sources  of pharmaceutical. The aim of the research is to examine the effect of Avicennia alba leaves extract various concentrations to Vibrio harveyi infection on vaname shrimp. The addition of the extract is thought to be used as an antibacterial so that it can give effect to the attack of V. harveyi in vaname shrimp. Vaname shrimps (total of 120  shrimps)  with  a  weight  of  10±2g/ind  were  injected  intramuscularly  with  V. harveyi  bacteria  in  107  CFU/ml  density.  After  the  occurrences  of  clinical symptoms,  the  shrimps  were  immersed  into  A.  alba  leaves  extract  with concentration  0  ppm,  150  ppm,  250  ppm,  and  350  ppm  for  21  days.  The  results showed that the addition leaves extract can increase shrimp’s survival rate as much as 46.67% and increase the shrimp’s ability to prevent (RPS) V. harveyi infection untill of 70±15%. The mean time of death (MTD) was 106±18.33 hours, it caused there  ar  active  compounds  contained  such  as  saponin,  tannin,  and  steroid  be suspected  antibacterial  so  that  they  can  protect  shrimp  from  the  effect  of  Vibrio infection damage. Giving a concentration of 250 ppm Avicennia alba leaves extract can  treat  vaname  shrimp  which  was  attacked  by  V.  harveyi  better  than  other treatments.
Keyword: Avicennia alba leaf, Litopenaeus vanname, antibacteri, Vibrio harveyi

## Pendahuluan
Infeksi bersama umumnya ditemukan  pada  budidaya  udang  dan mengakibatkan masalah serius dibanding  dengan  infeksi  tunggal (Phouc et al ., 2009; Martorelli et al ., 2010;  Chen et  al .,  2012).  Infeksi bersama  pada  udang  umumnya disebabkan  oleh  penyakit  virus  dan bakteri.  Menurut  Rangkuti  (2017)
1 E-mail: rusadidian47@yahoo.com
2 Jurusan Perikanan dan Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jl. Prof. S. Brodjonegoro No.1 Gedong Meneng Bandar Lampung, 35145
udang yang terinfeksi WSSV mampu melemahkan imunitas dan menyebab- kan  udang  mudah  terinfeksi  patogen oportunistik seperti Vibrio yang dapat mengakibatkan kematian lebih tinggi dibanding  dengan  infeksi  tunggal WSSV.  Salah  satu  bakteri  yang dominan  ditemukan  ketika  adanya infeksi  WSSV  adalah Vibrio  harveyi (Jithendran et al ., 2010).
Vibrio harveyi merupakan bakteri  penyebab  penyakit  vibriosis yang meresahkan pembudidaya udang  sebab  dapat  menyebabkan kematian  udang  hingga  80%  dalam beberapa  hari  (Isarangkura  &  Sae- Hee,  2002).  Penyakit  ini  juga  dapat menyebabkan  kematian  massal  baik pada pembenihan maupun pembesaran  udang  vaname  didunia karena sifatnya yang virulen (Soonthornchai et  al .,  2010).  Gejala klinis udang yang terinfeksi penyakit vibriosis menunjukkan berwarna hitam kemerahan, dan beberapa organ luar  tampak  merah,  terutama  pada insang dan anggota badan (Septiani et al ., 2012). Berbagai usaha dalam
pengobatan  penyakit  vibriosis  telah banyak dilakukan, namun hingga saat ini  kematian  udang  masih  terjadi. Pengobatan  yang  umum  dilakukan adalah  dengan  aplikasi  antibiotik. Penggunaan  antibiotik  atau  bahan kimia  dengan  konsentrasi  yang kurang  tepat  dapat  menimbulkan dampak  negatif  bagi  lingkungan perairan, menyebabkan resistensi, dan membahayakan  kesehatan  konsumen karena  residu  dari  bahan  kimia  yang digunakan  akan  terakumulasi  secara berkala pada tubuh udang (Defoirdt et al ., 2007).
Salah  satu  pendekatan  yang dapat  diterapkan  adalah  penggunaan senyawa  bioaktif  alami  dengan spektrum  yang  luas  tanpa  efek samping  yang  berbahaya.  Beberapa spesies  mangrove  juga  digunakan untuk  menghambat  vibriosis  seperti Avicennia  marina  dan  Sonneratia caseolaris  (Maryani et  al .,  2002; Zulham,  2004).  Prabhu et  al .  (2012) menyebutkan  daun Avicennia  alba mengandung  senyawa  bioaktif  yang
dapat digunakan sebagai antioksidan,
anti inflammatory , dan anti cholinergic .  Kemampuan  ekstrak daun Avicennia alba dalam menghambat  dan  membunuh V.
harveyi disebabkan  memiliki  tiga senyawa  metabolit  sekunder  yaitu saponin,  flavonoid,  dan  tanin  yang dapat  bekerja  merusak  membran sitoplasma (Fitri et al ., 2018). Namun penelitian mengenai konsentrasi ekstrak  daun Avicennia  alba yang tepat  dalam  menghambat  serangan bakteri V. harveyi pada udang vaname perlu  diteliti  lebih  lanjut.  Pemberian ekstrak diduga dapat dijadikan sebagai  antibakteri  sehingga  dapat memberikan pengaruh terhadap serangan V.  harveyi pada  udang vaname.
Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  menguji  pengaruh ekstrak  daun Avicennia  alba dengan berbagai konsentrasi terhadap serangan Vibrio  harveyi pada  udang vaname.

## Metode

## Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Daun  mangrovediambil  dari kawasan  Pulau  Pasaran,  Bandar Lampung.  Bagian  mangrove  yang diambil  dipilih  secara  acak  dengan tidak  mempertimbangkan  umur  dan letak  daun.  Kemudian  dibersihkan dari  kotoran  dengan  akuades  dan dikeringanginkan.  Sampel  mangrove dicacah halus dan dimasukkan kedalam erlenmeyer. Sebanyak 100 g ekstrak  kasar  diekstraksi  selama  24 jam  dengan  pelarut  metanol  70%, kemudian  disaring  dengan  kertas saring. Selanjutnya residu diekstraksi berulang kali pada suhu ruang sampai tidak berwarna lagi kembali
Selanjutnya  filtrat  diultrasonifikasi dan dipekatkan menggunakan Vacuum  Rotary  Evaporatror (IKA RV  10  Auto  V-C,  No.  0010003475
Germany) pada suhu 37 °C, sehingga didapatkan  berat  ekstrak  sebanyak 15,36 g.

## Persiapan Bakteri Uji
Bakteri  yang  digunakan  adalah bakteri Vibrio  harveyi yang  berasal dari  koleksi  Balai  Besar  Perikanan Budiaya Air Payau  (BBPBAP)
Jepara. Isolat kemudian dikultur pada media Nutrient  Broth (Merck  No,
12000000-KIM-000061548),  lalu  di inkubasi  pada orbital  shaker selama 24  jam.  Lalu,  diukur  menggunakan Spektrofotometer  (Thermo  scientific Genesys  20)  (625-650  nm)  hingga kepadatan 106 CFU/ml.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Aktivitas  anti  bakteri  ekstrak metanol  daun Avicennia  alba diuji dengan  metode  Difusi  Agar  menurut Kirby-Bauer.  Bahan  ekstrak  daun dilakukan  uji  daya  hambat  terhadap V. harveyi . 20µl isolat bakteri dengan kepadatan  106  cfu/ml  ditanam  pada media Nutrient  Agar (Merck  No. 12000000-KIM-000061548) kemudian diberikan perlakuan masing-masing ekstrak dengan konsentrasi 0, 150, 200, 250, 300, 350 ppm  yang  mengacu  pada  penelitian Suciati et al . (2012) dengan menggunakan ekstrak daun Rhizophora  mucronata dan  kontrol positif  digunakan  larutan  antibiotik Cholaramphenicol 250 mg (SANBE- Bandung)  sebanyak  50  ppm  dengan cara meneteskan larutan ekstrak pada paper disc for antibiotic assay dengan ukuran  8  mm  (Toyo  Roshi  Kaisha Ltd, Japan). Setiap perlakuan
dilakukan  pengulangan  sebanyak  3 kali, selanjutnya diinkubasi pada suhu 33 °C. Pengamatan dan pemeriksaan dilakukan  terhadap  ukuran  diameter zona bening yang terbentuk di sekitar paper  disc ,  pada  jam  ke-24  dan  48 setelah inkubasi.

## Pembuatan Konsentrasi Uji
Pembuatan konsentrasi uji dilakukan  dengan  membuat  larutan stok.  Ekstrak  daun Avicennia  alba ditimbang 1.450 µg, kemudian dilarutkan kedalam air laut sebanyak 1 ml, sehingga didapatkan konsentrasi larutan  stok  1.450  ppm.  Dari  larutan stok, dilanjutkan pada tahap pengenceran untuk mendapatkan konsentrasi  0  ppm,  150  ppm,  250 ppm, dan 350 ppm.

## Persiapan Wadah dan Hewan Uji
Udang vaname (total 120 ekor) dengan  bobot  10±2  g/ekor  yang berasal  dari  tambak  di  desa  Hanura, Kecamatan Teluk Pandan, Kabupaten Pesawaran.  Terdapat  4  perlakuan konsentrasi  ekstrak  daun Avicennia alba yaitu A (0 ppm), B (150 ppm), C (250 ppm), dan D (350 ppm) dengan 3  ulangan.  Wadah  perlakuan  berupa kontainer  plastik  ukuran  63x41x32 cm 3 dengan volume air yang digunakan  45  L  sebanyak  total  12 wadah.  Udang  vaname  sebanyak  10 ekor/wadah  diberi  pakan  tenggelam dengan  bentuk crumble dengan protein  30%.  Jumlah  pakan  yang diberikan  pada  pemeliharaan  udang vaname  sebesar  3%  dari  total biomassa  udang.  Selama  penelitian berlangsung kualitas air meliputi DO, pH, salinitas, dan suhu dikelola sesuai baku  mutu  untuk  kehidupan  normal udang vaname (Badan Standar Nasional, 2006).

## Uji Tantang Udang Vaname
Udang  diinjeksikan  dengan V. harveyi 106  CFU/ml  sebanyak  0,1 ml/ekor.  Injeksi  dilakukan  dibawah karapas. Selama 1 – 96 jam (Huang et al .,  2013)  udang  diamati  gejala abnormalitas yang menunjukkan udang  terinfeksi  penyakit  vibriosis. Jika  gejala  abnormal  pada  injeksi udang  telah terlihat,  udang  direndam menggunakan ekstrak daun Avicennia alba sesuai  konsentrasi  perlakuan selama  15  menit.  Setelah  itu  udang dikembalikan kedalam wadah pemeliharaan.  Kemudian  dilakukan pengamatan gejala klinis dan kematian yang dialami udang vaname setiap  6  jam  selama  21  hari pemeliharaan setelah perendaman.
Parameter Pengamatan Parameter penelitian di antaranya kelangsungan hidup ( Survival  Rate )  (Effendie,  1997), Relative  Percent  Survival (RPS) (Ellis,  1988),  dan  MTD ( Mean  Time to Death ).
Analisis Data
Parameter  kelangsungan  hidup dan  MTD  diolah  melalui One-way Analysis  of  Varians (ANOVA)  dan jika terdapat pebedaan nyata,
dilakukan  uji  lanjut  DMRT  ( Duncan Multiple  Range  Test )  menggunakan alat  bantu  SPSS  22.0.  Sedangkan, RPS  dianalisis  dengan Independent T- Test.

## Hasil dan Pembahasan
Survival Rate (SR) Pengaruh  pemberian  ekstrak daun Avicennia alba terhadap kelangsungan hidup udang yang diuji tantang V. harveyi dapat memberikan perlindungan terhadap infeksi Vibrio . Pada  konsentrasi  250  ppm  dapat memberikan  46,67%  kelangsungan hidup  secara  signifikan  lebih  tinggi (80±10%) (P<0,05) dibanding dengan perlakuan  kontrol  (33,33±15,27%) (Gambar  1).  Hasil  uji  lanjut  Duncan menunjukkan  pengaruh  pemberian ekstrak  daun Avicennia  alba dengan konsentrasi  250  ppm  tidak  berbeda nyata  dengan  konsentrasi  350  ppm, namun berbeda nyata dengan konsentrasi 0 ppm dan 150 ppm.
Keterangan : huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata ( P<0,05 )
Gambar 1.  Kelangsungan  hidup  udang  vaname  setelah  perendaman  (Rerata  ±
Standar Deviasi) 33,33 ± 15,27 50 ± 10 80 ± 10 70 ± 10 0 20 40 60 80 100 0 ppm 150 ppm 250 ppm 350 ppm
K el an gs u n gan Hi d u p ( % ) Perlakuan ab c bc a
Rata-rata  nilai  kelangsungan hidup terendah terdapat pada perlakuan  A  (udang  sakit)  sebab serangan V.  harveyi menyebabkan perubahan tingkah laku udang menjadi  lemah  dan  kehilangan  nafsu makan  yang  akhirnya  menyebabkan kematian. Hal tersebut sesuai dengan menurut  Sari et  al .  (2015)  Udang yang  terinfeksi V.  harveyi akan mengalami  perubahan  tingkah  laku berupa respon terhadap pakan menurun,  udang  menjadi  pasif, berenang  miring  dan  mendekati aerasi. Pemberian ekstrak sebagai anti bakteri mampu menghambat pertumbuhan V.  harveyi dengan  cara mempengaruhi bakteri dengan merusak  dinding  selnya  sehingga akan  pecah  dan  bakteri  tidak  dapat bertahan terhadap pengaruh luar, atau mengganggu  keutuhan  membran  sel bakteri  sehingga  pertukaran  zat  aktif atau metabolit ke dalam dan keluar sel akan  terganggu  (Pelczar  &  Chan, 1988).
Mekanisme  kerja  tanin  yaitu dengan  mengganggu  proses  sintesa
mukopeptida  dan  berikatan  dengan peptidoglikan  dinding  sel  bakteri sehingga pembentukan sel  baru akan terganggu  (Jawetz et  al .,  2001)  dan akhirnya mengalami kerusakan (Fitriet et  al .,  2018).  Menurut
Triantoet et  al . (2004) bakteri Vibrio merupakan bakteri gram negatif yang mempunyai kandungan peptidoglikan yang  dapat  menentukan  bentuk  sel serta  memberikan  kekakuan  yang dibutuhkan untuk melindungi bakteri dari  perobekan  osmotik.  Saponin akan  merusak  membran  sitoplasma dan  membunuh  sel  (Assani,  1994). Terjadi kerusakan dinding sel bakteri menyebabkan sel bakteri tanpa dinding  yang  disebut  protoplasma (Jawetz et al ., 2001). Kerusakan pada dinding sel bakteri akan
menyebabkan  kerusakan  membran sel,  yaitu  hilang  sifat  permeabilitas membran sel, sehingga keluar masuk zat-zat antara lain air, nutrisi, enzim- enzim tidak terseleksi sehingga dapat meningkatkan kelangsungan hidup.

## Relative Percent Survival (RPS)
Keterangan : huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata ( P<0,05 )
Gambar 2. Relative Percent Survival udang vaname (Rerata ± Standar Deviasi)
25 ± 15 70 ± 15 55 ± 15 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 150 ppm 250 ppm 350 ppm RP S ( % ) Perlakuan a b ab a
Nilai Relative  percent  survival (RPS) tertinggi udang vaname selama pengobatan  dengan  ekstrak  daun Avicennia  alba pada  perlakuan  C sebesar  70±15%  dan  terendah  pada perlakuan B sebesar 25±15%
(Gambar  2).  Hasil  uji  T  diketahui bahwa  pemberian  ekstrak  daun Avicennia  alba terhadap  nilai  RPS udang  vaname  yang  terinfeksi V. harveyi berbeda  nyata  ( P<0,05 ). Dimana, pengaruh pemberian ekstrak daun Avicennia alba dengan konsentrasi  250  ppm  tidak  berbeda nyata  dengan  konsentrasi  350  ppm, namun berbeda nyata dengan konsentrasi  150  ppm.  Sebab  dengan konsentrasi minimum 250 ppm dapat memberikan  perlindungan  diri  pada udang vaname dari infeksi V. harveyi (RPS) yaitu hingga 70%. Pada ekstrak etanol daun Avicennia marina memberikan perlindungan diri terhadap  post  larva  udang  vaname berkisar 34,33 – 80% (Septiani et al ., 2018).  Hasil  tersebut  menunjukkan bahwa  pengobatan  menggunakan ekstrak daun Avicennia alba termasuk kategori  efektif  mengobati  udang
vaname  yang  terinfeksi V.  harveyi , sehingga dapat meningkatkan kelangsungan hidup. Menurut Parenrengi et  al. (2013)  perlakuan dianggap efektif jika nilai RPS>60%.
Mean Time to Death (MTD) Hasil dari nilai MTD selama 21
hari pemeliharaan menunjukkan bahwa rerata waktu kematian terlama (MTD)  terdapat  pada  pemberian ekstrak  daun Avicennia  alba pada konsentrasi 250 ppm, selama
106±18,33  jam,  sedangkan  pada udang  yang  tidak  diberi  ekstrak memiliki  rerata  nilai  MTD  75±3,05 jam  (Gambar  3).  Dari  hasil  uji statistik  diketahui  bahwa  pemberian ekstrak daun Avicennia alba terhadap waktu  kematian  udang  vaname  yang terinfeksi V.  harveyi berbeda  nyata ( P<0,05 ).  Hasil  uji  lanjut  Duncan diketahui  bahwa  adanya  pengaruh pemberian  ekstrak  daun Avicennia alba dengan  konsentrasi  250  ppm tidak berbeda nyata dengan konsentrasi 350 ppm, namun berbeda nyata  dengan  konsentrasi  0  ppm  dan
150 ppm.
Keterangan : huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata ( P<0,05 )
Gambar  3. Mean  Time  to  Death /MTD  (jam)  udang  vaname  setelah  perendaman (Rerata ± Standar Deviasi)
75,33 ±
3,05 77,67± 3,51 106 ± 18,33 96,67 ± 15,14 0 20 40 60 80 100 120 140 0 ppm 150 ppm 250 ppm 350 ppm M TD (Ja m ) Perlakuan a a b ab

## Kesimpulan
Ekstrak  daun Avicenniaalba pada  konsentrasi  250  ppm  dapat memberikan  pengaruh  nyata  dalam meningkatkan    kelangsungan  hidup, RPS,  dan  MTD  udang  vaname  yang terserang V. harveyi .

## Daftar Pustaka
Assani,  S.  (1994). Mikrobiologi
Kedokteran .  Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia, Jakarta. Chen, Y.B., Zhou, J.F., Wan, X.H., & Gao, S. (2012). Establishment of a multiplex PCR and an investigation  of  co-infection  rate of WSSV and IHHNV in Penaeid vannamei in northern of Jiangsu . J
Anim Vet Adv , 11 (2): 181-185. Davis,  W.  &  Strout,  T.  (1971).  Disc method of microbiological antibiotic assay. Apllied Microbiology , 22 (4): 59 – 73. Defoirdt, T., Boon, N., Sorgeloos, P., Verstraete,  W.,  &  Bossier,  P.
(2007).  Alternatives  to  antibiotics to  control  bacterial  infections: luminescent vibriosis in aquaculture as an example. Trends in Biotechnology , 25: 472 – 479. Effendie.  (1997).  Biologi  Perikanan. Yayasan Pustaka Nusantara, Yogyakarta.
Ellis,  A.  (1988). Fish  Vaccination .
Academic Press, New York.
Fitri,  M.Z.,  Kismiyati,  &  Mubarak, A.S.  (2018).  Daya  Antibakteri Ekstrak Daun Api-Api ( Avicennia alba )  terhadap Vibrio  harveyi Penyebab Vibriosis secara Invitro. Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan Kelautan , 10(2): 131 – 136 Huang,  H.,  Lin,  X.,  Xiang,  J.,  & Wang,  P.  (2013).  Selection  of
Vibrio harveyi - resistant Litopenaeus  vannamei via  three-
round  challenge  selection  with pathogenic strain of Vibrio harveyi. Fish and Shellfish Immunology , 35: 328 – 333. Isarangkura, A. & Sae-Hae, S. (2002). A  Review  of  The  Economic Impacts of Aquatic Animal Disease. FAO Fisheries Technical Paper : 253-286. Jawetz, E., Melnik, J., & Adelberg, E. (2005). Mikrobiologi untuk Profesi Kedokteran (Jilid 1) , diterjemahkan oleh Eddy Mudihard. Salemba Medika, Jakarta. Jithendran,  K.P.,  Poornima,  M., Balasubrmanian, C.P., & Kulasekarapandian,  S.  (2010). Diseases  of  mud  crabs  ( Scylla spp.):  an overview. Indian J Fish , 57 (3): 55 – 63.
Khanjure, P.V. & Rathod, J.L. (2010). Antimicrobial  activity  of  extracts of  Acanthus  ilicifolius  extracted from  the  mangroves  of  Karwar Coast  Karnataka. Rec.  Res.  Sci. Technol , 2(6): 98 – 99.
Martorelli, S.R., Overstreet, R.M., &
Jovonovich,  J.A.  (2010).  First report  of  viral  pathogens  WSSV and IHHNV in Argentine crustaceans. Bull  Mar  Sci ,  86(1): 117 – 131.
Maryani,  Dana,  D.,  &  Sukenda. (2002).  Peranan  ekstrak  kelopak dan  buah  mangrove Sonneratia caseolaris (l)  terhadap  infeksi bakteri Vibrio harveyi pada udang windu  ( Penaeus  monodon fab.). Jurnal  Akuakultur  Indonesia ,  1:
129 – 138.
Parenrengi,  A.,  Tenriolu,  A.,  & Tampangallo,  B.  (2013).  Uji tantang  udang  windu Penaeus
monodon transgenis menggunakan bakteri  patogen Vibrio  harveyi . Prosiding  Konferensi  Akuakultur Indonesia : 226 - 233 Pelczar,  M.J.,  &  Chan,  E.S.  (1988). Dasar-dasar  Mikrobiologi.  Edisi
1 .  Universitas  Indonesia  Press, Jakarta.
Phouc,  L.H.,  Corteel,  M.,  Thanh,  N.
C.,  Nauwynk,  H.,  Pensaert,  M.,
Alday-Sanz, V., Van Den Broeck, W.,  Sorgeloos,  P.,  &  Bossier,  P.
(2009).  Effect  of  dose  and challenge routes of Vibrio spp. on co-infection  with  white  spot syndrome virus in Penaeus vannamei . Aquaculture , 290: 61 – 68.
Prabhu, V.V. & Guruvayoorappan, C.
(2012).  Phytochemical  Screening of Methanolic Extract of Mangrove Avicenni marina (Forssk.) Vierh.  Der  Pharmacia Sinica , 3(1): 64 – 70. Rangkuti,  R.A.  (2017).  Pencegahan
Penyakit Ko-Infeksi Ringan White
Spot Syndrome Virus (WSSV) dan Vibrio harveyi pada Udang Vaname  ( Litopenaeus  vannamei ) dengan Suplementasi Pakan Mengandung Mikrokapsul Sinbiotik.  Sekolah  Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Sari,  R.,  Sarjito,  &  Haditomo,  A.
(2015). Penambahan Serbuk Daun Binahong  ( Anredera  cordifolia ) dalam Pakan terhadap Kelulushidupan dan Histopatologi Hepatopankreas  Udang  Vaname ( Litopenaeus Vannamei ) yang Diinfeksi  Bakteri Vibrio  harveyi . Journal of Aquaculture Management  and  Technology , 4(1): 26 – 32.
Septiani, G., Priyatno, S., & Anggoro, S. (2012). Antibacterial Activity of
Jeruju ( Acanthus ilicifolius ) Extracts on The In Vitro Growth of The Vibrio  harveyi . J.  Veteriner , 13(3): 257 – 262. Badan  Standar  Nasional.  2006.  SNI 01-7246-2006. Produksi  udang
vaname  ( Litopenaeus  vannamei ) di  Tambak  dengan  Teknologi Intensif . Badan Standarisasi Nasional, Jakarta. Soonthornchai,  W.,  Rungrassamee, W., Karoonuthaisiri, N., Jarayabhand,  P.,  Klinbunga,  S., Soderhall,  K.,  Jiravanichpaisal,  P. (2010).  Expression  of  immune- related genes in the digestive organ of shrimp, Penaeus monodon , after an oral infection by Vibrio harveyi .
Dev Com Immunol , 34: 19 – 28.
Suciati,  A.,  Wardiyanto,  &  Sumino. (2012).  Efektifitas  ekstrak  daun Rhizophora mucronata dalam menghambat pertumbuhan Aeromonas salmonicida dan Vibrio harveyi . e-Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan , 1(1): 1 – 8. Trianto,  A.,  Edi,  W.,  Suryono,  & Rahayu,  S.  (2004).  Ekstrak  daun mangrove Aegiceras corniculatum
sebagai anti bakteri Vibrio harveyi dan Vibrio parahaemolyticus . Jurnal Ilmu Kelautan , 9(4): 186 –
189.
Zulham,  R.  (2004).  Potensi  ekstrak
mangrove Sonneratia  caseolaris dan Avicenia marina untuk pengendalian bakteri Vibrio harveyi pada  larva  udang  windu
( Penaeus  monodon fabr.). Tesis . Institut Pertanian Bogor, Bogor