## Uji Bioaktivitas Antibakteri Senyawa murni dari Jamur Endofit Sporothrix sp Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Dewi Yudiana Shinta 1 , Yusmarini 2 , Herix Sonata MS 3 , Hilwan Yuda Teruna 4 and Saryono 4
1 STIKES Perintis Padang, Indonesia
2 Fakultas Pertanian Universitas Riau  Kampus Bina widya Panam KM 12.5 Pekanbaru
3 ITP Padang Indonesia
4 Fakultas FMIPA Universitas Riau  Kampus Bina widya Panam KM 12.5 Pekanbaru
Abstract: Modern medicines that are developing now come from active ingredients isolated from  plants  that  require  large  amounts  of  plants.  The  development  of  new  drugs  from endophytic  fungi  found  obstacles  in  the  amount  of  pure  compounds  produced.  Therefore further research is needed by using endophytic fungi as a new antimicrobial producer. This study  aims  to  see  the  ability  or  activity  of  pure  compounds  produced  by Sporothrix  sp endophytic fungi from Dahlia tuber (Dahlia variabilis). Test the activity of pure compounds produced  by Sporothrix  sp. Endophytic  fungi  on E.  coli and Staphylococcus  aureus determined by disc diffusion method. With doses of 10, 30 and 50μg/disk. In Escherichia coli bacteria doses 10 and 50μg/disk gave significant inhibition of pure compounds from isolation compared  to  the  positive  control  of  ciprofloxacin,  which  was  marked  by  a  statistically significant test result (p <0.05). In contrast to Staphylococcus aureus there was no significant difference in doses of both doses of 10.30 and 50μg/disk. Determination of pure compounds was carried out by HPLC and Infra Red Spectrophotometry.
Key  Words: Dahlia  bulbs  (Dahlia  variabilis),  Endophytic  fungi Sporothrix  sp, E.  coli, Staphylococcus aureus.
Pemakaian obat antibakteri sintesis secara terus- menerus  tidak  hanya  membunuh  bakteri  itu sendiri  namun  juga  mempercepat  terjadinya resistensi  patogen.  Untuk  itu  diperlukan alternatif  obat  antibakteri  yang  aman  yang berasal dari bahan alam.
Sumber bahan baru bioaktif yang banyak dieksplorasi  sekarang  ini  adalah  jamur  endofit. Hal  ini  dikarenakan  jamur  endofit  dapat menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  dapat dikembangkan  menjadi  bahan  baku  obat. Senyawa yang dihasilkan jamur endofit seringkali  memiliki  aktifitas  yang  lebih  besar dibandingkan  aktivitas  dari  senyawa  tumbuhan inangnya(1).  Pembiakan  atau  kultur  jamur endofit  dapat  dilakukan  dalam  jumlah  yang sangat besar tanpa memerlukan lahan yang luas seperti  tumbuhan.  Pemanfaatan  jamur  endofit sebagai  penghasil  sumber  bahan  baku  obat alami  akan  mereduksi  kerusakan  alam  yang disebabkan  oleh  eksploitasi  tumbuhan  obat dalam jumlah yang besar.
Produksi  senyawa  antimikroba  dari  tanaman dalam  jumlah  massal  membutuhkan  tanaman dalam jumlah yang banyak, sehingga diperlukan lahan  yang  luas  serta  waktu  yang  relatif  lebih
lama  menunggu  masa  pertumbuhan  tanaman. Kendala tersebut dapat diatasi dengan mengisolasi  senyawa  metabolit  sekunder  dari mikroba.  Salah  satunya  adalah  mikroba  endofit yang hidup dalam jaringan tanaman(2).
Fitriyah.dkk,(2014)  melaporkan  Jamur endofit umbi tanaman dahlia yang telah diisolasi adalah Monilia sp (LBKURCC 40), Fusarium sp (LBKURCC  41),  Moniliella  sp  (LBKURCC 42),  dan  Sporothrix  sp  (LBKURCC43).  Dari keempat  isolat  diatas  mempunyai  bioaktivitas antimikroba  terhadap  bakteri  Gram  positif, Gram  negatif  serta  jamur.  Fusarium  sp (LBKURCC 41) dan Sporothrix sp (LBKURCC 43)  adalah  jamur  endofit  umbi  dahlia  yang menghasilkan metabolit sekunder yang mempunyai  aktivitas  antimikroba  terhadap E.coli dan Staphylococcus aureus, tapi senyawa metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  belum dimurnikan  dan  belum  ditentukan  struktur kimianya serta bioaktifitasnya terhadap mikroba penyebab penyakit infeksi juga belum dilakukan(3).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat kemampuan  atau  aktivitas  dari  senyawa  murni yang  dihasilkan  oleh  jamur  endofit  Sporothrix
Dinamika Lingkungan Indonesia, Januari 2019, p 37-44 p-ISSN 2356-2226 e-ISSN 2655-8114
sp  dari  umbi  Dahlia.(Dahlia  variabilis).  Dalam penelitian  ini  akan  ditemukan  dosis  berapa  dari senyawa  murni  yang  ditemukan  dari  metabolit sekunder  jamur  Sporothrix  sp  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  E.coli  dan Staphylococcus aureus.

## BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Autoclaf 1925x (Wiconsin Alumnium  Foundry  Co.Inc.Monitowoc),  High Speed  Micro  Centrifuge  Model  CT  15RE, vortex  mixer  H-VM-300,  Water  Bath  Grant SUB28,  incubator  Memmert,  rotary  shaker (Daihan Labtech Co.LTD), spektrofotometer IR Shimadzu  Prestige  2100,  HPLC, oven,  cawan petri, jarum ose, bunsen, kompor gas, pengaduk kaca, pinset, kertas saring, inkubator, aluminium foil, mikroskop, cover glass, gelas obyek, gelas ukur,  tabung  reaksi,  pipet  volume,  erlenmeyer, jangka  sorong,  botol  media,  shaker  incubator, sentrifugasi, timbangan analitik dan silet.
Bahan -bahan  yang  digunakan  adalah media  Potato  Dextrose  Agar  (PDA)  no  Cat 1.10130.0500, Sabouraud Dextrose Broth (SDB)  No  cat  1.08339.0500,  Sabouraud Dextrose  Agar  (SDA),  media  Nutrient  Agar (NA)  No  cat  1.05450,0500,  media  Nutrient Broth (NB) no cat 1.05443.0500. (semua media diproduksi  oleh  Merck  KGaA  Germany), natrium  klorida  (NaCl),  media  Huang et  al (2007),  Kalium  Dihidrogen  Pospat  (KH 2 PO 4 ), Magnesium  sulfat  hepta  hidrat  (MgSO 4 .7H 2 O), dan  besi  sulfat  hepta  hidrat  (FeSO 4 .7H 2 O). Milipore  syringe  filter  0,2  µm  (Puradisc  TM 13mm  cat  no  6786-1302),  kertas  cakram  6mm (macherey-nagel MN827ATD).Isolat jamur endofit Sporothrix sp LBKURCC 43 yang telah diisolasi  dari  umbi  tanaman  dahlia  (Dahlia variabilis) pada penelitian sebelumnya (Lorenita,2011). Mikroorganisme yang digunakan dalam uji antimikroba adalah bakteri Stapylococcus  aureus,  Escherichia  coli yang  di dapat dari koleksi Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Padang.

## Prosedur Penelitian.
Produksi Isolat Fermentasi  dilakukan  pada  kondisi optimum yaitu suhu 37°C, pH 4, aerasi 50vvm, agitasi 150 ppm dengan variasi media Huang et al dengan  ammonium  dan  Na  CMC+sukrosa
dengan  volume  6  liter.  Komposisi  medianya dapat dilihat pada tabel 1 dibawah ini.
Tabel 1. Komposisi variasi media Huang et al (2007) Komposisi Berat atau volume Na CMC + Sukrosa 42 + 126 g NaNO 3 18 g KH 2 PO 4 9 g Amonium sulfat 9 g KCl 3 g MgSO 4 .7H 2 O 3  g
FeSO 4 .7H 2 O 0,06 g Aquadest 6 L Ekstraksi Isolat Isolat diekstraksi dengan metoda kromatografi  flash.  Pemisahan  lanjut  dari  suatu fraksi sehingga mendapatkan isolat murni dapat dilakukan  dengan  kromatografi  flash.  Besar kolom  kromatografi  flash  yang  digunakan berdiameter 2,5 cm.  Fasa diam  yang digunakan silica  gel  230-400  nm  dengan  perbandingan banyak  silica  gel  kolom  dengan  sampel  adalah 1:50-60.  Silika  gel  dalam  kolom  dibuat  dengan cara  kering  dengan  cara  silica  dimasukkan  ke dalam  kolom  yang  telah  berisi  sedikit  pelarut yang  akan  digunakan  untuk  elusi  kemudian dikocok  sehingga  pelarut  dan  silica  bercampur. Selanjutnya  kolom  ditekan  dengan air  pump agar  silica  memadat.  Kemudian  sejumlah sampel  yang  telah  dilarutkan  dalam  sedikit pelarut yang akan digunakan ditempatkan diatas silica  kolom.  Sampel  sebanyak  2,7  gram  yang telah  diimpregnasi  dengan  3  gram  silica dilakukan  pemisahan  lebih  lanjut  dengan menggunakan kromatografi flash.
Pemisahan  Ekstrak  etil  asetat Sporothrix sp dengan VLC (Kromatografi Vakum Cair)
Kromatografi vakum cair (yang berdiameter  10  cm  dan  tinggi  20  cm)  diisi dengan  silika  gel  60  GF 254 hingga  mencapai ketinggian lebih kurang 10 cm. Pengisian kolom dilakukan dalam keadaan vakum, agar diperoleh kerapatan  kemasan  maksimum.  Sebanyak  2,7  g sampel preadsorpsi  dan kemudian dimasukkan kedalam kolom.  Selanjutnya difraksinasi secara bergradien  menggunakan  pelarut n-heksana- etilasetat perbandingan 70:30 kenaikan kepolaran  10%  sampai  perbandingan  metanol- etil  asetat  (50:50)  kenaikan  kepolaran  10%. Hasil  pemisahan  ditampung  dalam  erlemeyer yang telah diberi nomor dan dipekatkan dengan
rotary  evapaporator,  selanjutnya  dilakukan  uji KLT  untuk  mengetahui  jumlah  komponen  dari masing – masing  fraksi.  Fraksi  yang  memiliki pola noda  yang sama digabungkan. Fraksi F3 – F5  diperoleh  berupa  kristal  kemudian  dicuci dengan  etil  asetat  dan  selanjutnya  dikritalisasi dengan diklorometan, dapat dilihat pada tabel 2 dibawah ini.
Pemisahan  Ekstrak  etil  asetat Sporothrix sp dengan VLC (Kromatografi Vakum Cair)
Tabel 2. Fraksi-fraksi yang memiliki pola noda pada KLT No Fraksi Eluen Berat (g) F1 H:E = 7 :3 0,3174 F2 H:E = 6 :4 0,1311 F3 H:E = 5 :5 0,3024 F4 E = 100 % 0,6880 F5 E:M = 9 :1 0,0,71 F6 E:M = 8 :2 0,1319 F7 E:M = 7 :3 0,511 F8 E:M = 6 :4 0,0637 F9 E:M = 5 :5 0,049
Pemisahan  Ekstrak  etil  asetat Sporothrix  sp dengan Kromatografi Flash
Kolom  dapat  dibuat  dengan  membuat bubur  silika  gel  (230 – 400)  dengan  cara melarutkannya  dengan pelarut n-heksana dan diaduk  rata.  Kemudian  dituangkan  ke  dalam kolom  secara  perlahan-lahan.  Silika  gel  dalam kolom  dibuat  padat  dan  permukaannya  jangan sampai  kering.  Pengelusian  kolom  dilakukan dengan berbagai eluen yang memiliki kepolaran meningkat,  mulai  dari n-heksana  100%, perbandingan n-heksana dengan  etil  asetat sampai  etil  asetat  100%.  Sebanyak  1,5  gram sampel  dipreadsorbsi  terlebih  dahulu  sebelum dimasukan  ke  dalam  kolom,  kemudian  dielusi dengan pelarut hingga terbentuk pita-pita. Hasil fraksinasi  yang  keluar  ditampung  dalam  vial yang telah diberi nomor.
Fraksi-fraksi  hasil  pemisahan  dengan kromatografi  kolom  yang  menunjukkan  adanya kristal  dilakukan  uji  KLT  untuk  mengetahui harga  Rf  (Retardation  factor)  yang  sama sehingga dapat digabung. Kristal yang terbentuk direkristalisasi kemudian kristal hasil rekristalisasi dilakukan uji KLT dan uji HPLC.
Analisis
HPLC ini dilakukan menggunakan  metode  gradien  elusi. Sampel dilarutkan dengan metanol (HPLC grade) (1 mg dalam  1  mL  metanol).  Larutan  kemudian disaring  dengan  penyaring whatman 0,45 µL.
Filtrat  sebanyak  20  µL  diinjekkan  ke  dalam kolom,  kemudian  sampel  dianalisis  selama  20 menit  menggunakan  metode  yang  sesuai. Kolom  yang  digunakan  pada  HPLC  adalah Shim-pack VP-ODS  dengan  panjang  dan diameternya  yaitu  150  x  4,6  mm. Kristal senyawa  murni  dikarakterisasi  menggunakan spektroskopi IR.

## Uji  aktivitas  antimikroba  senyawa  murni
(metoda Kirby Bauer)

## Pembuatan media agar
Media  yang  digunakan  untuk  uji antibakteri  yaitu  NA  (Nutrient  agar)  dan  media uji anti jamur yaitu PDA (potato dextrose agar). NA  sebanyak  20  gram  dilarutkan  dalam  1000 ml  aquadest  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  masing-masing  sebanyak  15  ml.  Media ditutup  dan  distrerilisasi  pada  suhu  121°C  dan tekanan  15  psi  selama  15  menit  (4).  PDA sebanyak  39  gram  dilarutkan  dalam  1000  ml aquadest kemudian media dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  masing-masing sebanyak  15  ml. Media ditutup dan disterilisasi pada suhu 121°C dan tekanan 15 psi selama 15 menit (4).

## Peremajaan Mikroba
Peremajaan  Mikroba  bertujuan  untuk meremajakan  kembali  bakteri  (Staphylococcus aureus dan Escherichia coli) dari agar miring ke dalam larutan NB. Media NB  yang telah dibuat dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  di sterilisasi.  Bakteri  dari  agar  miring  diambil dengan menggunakan jarum ose steril, kemudian  diinokulasikan  ke  dalam  media  NB. Tabung  ditutup  dengan  kapas  kemudian diinkubasi dalam  inkubator  pada  suhu  37°C selama 24 jam.

## Uji Antibakteri
Media  dipanaskan  sampai  mencair  dan didinginkan  pada  suhu  50°C  dalam  waterbath, kemudian  ditambahkan  1  ml  biakan  bakteri E.coli dan S.Aureus (OD 600nm -0,1)(5)  ke  dalam tabung,  kemudian  dihomogenkan  dan  dituang ke  dalam  cawan  petri.  Setelah  media  memadat, kertas cakram yang telah dtetesi dengan sampel uji  (konsentrasi  500µg/ml,  300  µg/ml  dan  100 µg/ml)  diletakkan  diatas  media  agar.  Kontrol positif  yang  digunakan  yaitu  ciproflocaxin dengan  konsentrasi  300µg/ml  dan  kontrol negatif  yaitu  DMSO  yang  digunakan  untuk melarutkan  sampel.  Cawan  petri  diinkubasi
dalam  inkubator  pada  suhu  37°C.  Diameter daerah  hambat  pertumbuhan  bakteri  diukur setelah  diinkubasi  24  jam.  Semua  perlakuan secara  aseptik  dan  diulang  sebanyak  dua kali.(4).

## HASIL
Ekstrak  kental  yang  dihasilkan  dari  proses evaporasi  adalah  2,7  gram  dari  6  liter fermentasi,  dengan  warna  coklat  tua  dan  bau khas  amonia.  Ekstrak  kering  yang  diperoleh setelah proses penguapan adalah 0,3024 gram . Hasil pemurnian 6 liter sampel hasil isolasi ekstrak jamur endofit Sporothrix
sp
(LBKURCC  43)  dilakukan  dengan  metode kromatografi lapis tipis (KLT) dengan berbagai variasi  komposisi  eluen  memperlihatkan  noda tunggal  dan  dilakukan  berulang  pada  setiap komposisi.
Sebanyak 0,3024g sampel preadsorpsi dan kemudian dimasukkan  kedalam kolom. Selanjutnya difraksinasi secara  bergradien menggunakan  pelarutnya heksana - etil asetat perbandingan  70:30  kenaikan  kepolaran  10% sampai perbandingan metanol-etil asetat (50:50) kenaikan  kepolaran  10%.  Hasil  pemisahan ditampung  dalam  erlemeyer  yang  telah  diberi nomor dan dipekatkan dengan rotary evapaporator,  selanjutnya  dilakukan  uji  KLT untuk  mengetahui  jumlah  komponen  dari masing – masing  fraksi.  Fraksi  yang  memiliki pola noda  yang sama digabungkan. Fraksi F3 – F5  diperoleh  berupa  kristal  yang  murni
kemudian  dicuci  dengan  etil  asetat  dan selanjutnya  dikritalisasi  dengan  diklorometan. Senyawa  F3  dilakukan  uji  kemurnian  dengan KLT dan HPLC yang dapat dilihat pada tabel 3 dibawah ini.
Tabel 3. Hasil uji KLT dari masing-masing fraksi. No Fraksi Eluen Berat (g) Jumlah spot F1 H:E = 7 :3 0,3174 6 F2 H:E = 6 :4 0,1311 5 F3 H:E = 5 :5 0,3024 4 F4 E = 100 % 0,6880 4 F5 E:M = 9 :1 0,0,71 5 F6 E:M = 8 :2 0,1319 4 F7 E:M = 7 :3 0,511 5 F8 E:M = 6 :4 0,0637 5 F9 E:M = 5 :5 0,049 6
Pengukuran dengan menggunakan spektrum  IR  (infra  red)  menunjukkan  adanya serapan  yang  khas  dan  tajam  pada  beberapa panjang  gelombang. Hasil  analisis  spektrum infra  merah  senyawa  F3  hasil  isolasi  ekstrak jamur  endofit Sporothrix  sp terlihat  pada Gambar 1.
400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 2400 2800 3200 3600 4000 4400 1/cm 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 %T 34 42 ,1 2 33 63 ,0 3 30 47 ,6 6 29 94 ,6 2 27 99 ,8 0 16 64 ,6 4 14 21 ,6 0 13 71 ,4 5 12 40 ,2 8 10 63 ,7 9 72 2, 37 F3 Sporothrix
Spektrum  infra  merah  menunjukkan adanya  pita- pita  untuk  serapan  untuk  gugus amina N-H pada panjang gelombang 3300-3000 cm -1 ,  Getara  lentur  N-H  terbentang  pada area 1650-1580  cm -1 ,  untuk  amina  juga  dapat terlihat  pada  area  910-665  cm -1. .  Getaran peregangan C – N dari  amina  alifatik  diamati sebagai pita sedang atau lemah di wilayah 1250- 1020cm 1 . Dalam  amina  aromatik,  band  ini biasanya  kuat  dan  di  wilayah  1335-1250 cm -1 . N – H peregangan 3400-3250 cm -1 , 1° amina: dua pita  dari  3400-3300  dan  3330-3250  cm -1 ,  2° amina: satu pita dari 3350-3310 cm -1 , 3° amina: tidak  ada  band  di  wilayah  ini  N – H  bengkokan (hanya  amina  primer)  dari  1650-1580  cm -1 ,
Peregangan  C – N  (amina  aromatik)  dari  1335- 1250  cm -1 ,  C – N  stretch  (aliphatic  amines)  dari 1250 – 1020  cm -1 ,  N – H  wag  (primer  dan sekunder hanya) dari 910-665 cm -1 .

## Spektroskopi HPLC
Pengukuran  dengan  menggunakan  alat
HPLC (High Performance
Liquid Cromatography).  Hasilnya  dapat  dilihat pada Gambar  2.  Untuk  uji  kemurnian  senyawa terlihat  pada  kromatogram  bahwa  satu  puncak yang muncul, ini menandakan senyawa tersebut murni.
Pengujian senyawa hasil isolasi terhadap uji bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Uji  bioaktivitas  senyawa  F3  Hasil
isolasi  terhadap  bakteri    tersebut  dinyatakan pada Tabel 4.
Tabel 4. Uji Bioaktivitas senyawa F3 hasil isolasi terhadap E.coli dan Staphylococcus aureus dengan berbagai dosis.
Zona hambat yang terbentuk terlihat pada Gambar 3 dibawah ini.
1. Terhadap Bakteri Escherichia coli

## 2. Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 3. Zona hambat yang terbentuk pada variasi media Huang et al(2007)dengan dosis 10, 30 dan 50 µg/disk.

## PEMBAHASAN
Hasil uji daya hambat senyawa murni F3 diatas  terlihat  senyawa  murni  tersebut memberikan  daya  hambat  yang  besar  pada dosis  50µg/disk  yang  terlihat  pada  daya hambat  terhadap  bakteri Escherichia  coli 38,40mm. Pada bakteri Staphylococcus aureus juga memberikan daya hambat sebesar
31,40mm, sedangkan  pada  kontrol  positif ciproploxacin sebesar 47,60mm. Pemilihan ciprrofloxacin sebagai
kontrol positif karena ciprofloxacin merupakan golongan obat flouoquinolon yang berfungsi  untuk  menghambat  sintesis  DNA bakteri  sehingga  menghambat  resistensi mikroba dan merupakan antimikroba berspektrum luas dan resistensi mikroba tidak cepat berkembang. ( 6). Rata-rata diameter hambat (mm) Senyawa murni Dosis yang digunakan F3 hasil isolasi . 10 µg/disk 30 µg/disk 50 µg/disk K+ Escherichia coli 29,10 32,60 38,40 47,60 Staphylococcus aureus 29,40 29,80 31,40 45,10
Pada  bakteri Escherichia  coli dosis  10 dan  50  µg/disk  memberikan  daya  hambat yang bermakna pada senyawa F3 hasil isolasi. Berbeda  dengan Staphylococcus  aureus tidak ada  perbedaan  dosis  yang  bermakna  baik dosis  10,30  dan  50  µg/disk.  Dari  bentuk kromatogram  yang  ditemukan  dari  hasil spektofotometer IR dan HPLC, adanya gugus amina  yang  secara  umum  dapat  berfungsi sebagai antibakteri dan anti jamur.
Dari hasil analisa HPLC dan Spektrofotometer  IR,  senyawa  murni  F3 mengandung senyawa terpenoid yang fungsinya membunuh bakteri dengan mendenaturasi  protein  sel  dimana  terjadinya ikatan  protein  sel  dengan  senyawa  terpenoid yang  mengakibatkan  protein  sel  tersebut rusak.  Ikatan hidrogen  yang  terbentuk  akan menganggu  permebealitas  dinding  sel  dan membran  sitoplasma  yang  keduanya  tersusun dari  protein.  Permeabilitas  dinding  sel  dan membran sitoplasma terganggu akan menyebabkan ketidakseimbangan makromolekul  dan  io  dalam  sel  sehingga terjadi  lisis  sel  .  terpenoid  juga  mampu berikatan  denga  lemak  dan  karbohidrat  yang menyebabkan  permeabilitas    dinding  sel bakteri terganggu (29).

## SIMPULAN

## Hasil uji anti bakteri senyawa murni terhadap
Escherichia  coli memberikan  daya  hambat bermakna  pada  dosis  10  dan  50µg/disk  dan Stapylococcus aureus tidak ada  yang berbeda nyata untuk ketiga dosis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  penulis ucapkan  kepada pihak-pihak  yang  telah  membantu  dalam terlaksananya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Strobel,G  &  Daisy,B.2003. Bioprospecting for  Microbial  Endophytes  and  Their Natural  Products.  Microbiology  and Molecular Biology Reviws 67: 491-502. Saryono,et  al,  2015, Antimicrobial  activity and  molecular  characterization  of endophytic  fungi  strain  isolated  from Dahlia  (Dahlia  variabilis), Journal  of Chemical and Pharmaceutical Research, vol 7((S): 201-208, ISSN 0975-7384.
Elita,  A.,  Saryono,  S.,dan  Christine, J.,  2013,
Penentuan  Waktu  Optimum  Produksi Antimikroba    dan  Uji    Fitokimia Senyawa    uji    fermentasi bakteri endofit    pseudomonas    Sp.    dari    umbi tanaman  Dahlia  (dahlia  variabilis), Journal  Ind.  Che.  Acta  Vol  3  (2)  56 – 62.
Fitriyah,  D.,  Saryono.  S,  dan  C.  Jose.,  2013,
Skrining  aktivitas  antimikroba  dan uji fitokimia dari kapang endofitik tanaman dahlia  (dahlia  variabilis), Journal  Ind.
Che. Acta Vol 3 (2) 50-55
Gan,  V.H.S  dan  Setiabudy,  R.  2000.
Farmakologi  Dan  Terapi.  Edisi  3. Jakarta:  Bagian  Farmakologi  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Guo B, Dai J, Ng S, Huang Y, Leong C, Ong W,  Carte  BK..  2002. Cytonic  acid  A dan  B,    novel    tridepside    inhibitor    of hCMV  protease  from  the  endophytic fungus    Cytonaena  sp. J  Nat  Prod 63:602-604.
Halim,
Jasril, dan Saryono, 2014, Optimalisasi Produksi Senyawa
Metabolit  Sekunder  dari  Pseudomonas sp  Endofit  Tanaman  Dahlia  (Dahlia variabilis), Ind.Che.Acta vol 5(1) 8-14.
Haniah.M,  2008, Isolasi  jamur  Endofit  dari Daun  Sirih  (Piper  betle  L)  Sebagai Antimikroba  Terhadap  Eschericia  coli, Staphylococcus  aureus  dan  Candida albicans,UIN Malang.
Haryani,Y., Siti  Muthmainah  dan  Saryono Sikumbang,  2013, Uji  Parameter  Non Spesifik dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Metanol  dari  Umbi  Tanaman Dahlia (Dahlia variabilis), Jurnal Penelitian  Farmasi  Indonesia  1(2), Maret 2013: 43-46.
Huang,  W.Y.,  Cai,  Y.Z.,  Hyde,  K.D.,  Corke, H.,  &  Sun,  M.  2007. Endophytic  fungi from Nerium oleander L (Apocynaceae) main  constituents  and  antioxidant activity. World Journal of Microbiology and Biotechnology 23(9)1253-1263.
Lorenita,M.,et al, 2013, Screening of Endophytic  Fungi  from  Tubers  of Dahlia  variabilis,  Journal  of  Agricultur Technology, vol 9(3): 565-570.
Lu    H,    Zou    WX,    Meng    JC,    Hu    J,    Tan RX.  2000. New  bioactive  metabolites
produced  by    Colletotrium    sp.,  an endophytic  fungus  in  Artemisia  annua. Plant Sci151:76-73.
Purwantini,  I, Ratna  H,  A. Dan Eka  P. P, 2010, Isolasi  Fungi  Endofit  Penghasil Antifungi  dari Eupatorium  riparium Reg. Dan Identifikasi Senyawa Aktifnya Menggunakan  Bioautografi, Prosiding Seminar  nasional,  Eight  performance Pharmacist,  27  Desember  2010,  UGM Yogyakarta, hal 149. Prihatiningtias,W.  2007. Prospek  Mikrob Endofit  Sebagai  Sumber  Senyawa
Bioaktif,  Majalah  Obat  Tradisional  12 (42). Pratiwi,S.T, 2008. Mikrobiologi Farmasi,Jakarta, Erlangga.
Qadri,  M, et,al,  2013,  Identification  and bioactive  potential  of endophytic  fungi isolated  from  selected  plants  of  the Western Himalayas, Qadriet al.
Springer Plus 2013,2:8, 2-14.
Radji,  M.  2005. Peranan  Bioteknologi  dan
Mikroba  Endofit  dalam  Pengembangan Obat Herbal. Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi. Vol. II. Departemen Farmasi, FMIPA-UI, Majalah Ilmu Kefarmasian, ,No.3,Desember. Rante, H,  Burhanuddin Taebe dan Soendaria
Intan,  2013, Isolasi  Fungi  Endofit Penghasil  Senyawa  Antimikroba  Dari Daun  Cabai  Katokkon  (Capsicum annuum  L  var.  chinensis) dan  profil
KLT
BIOAUTOGRAFI, Majalah Farmasi  dan  Farmakologi,  Vol.  17, No.2 – Juli 2013, hlm. 39 – 46.
Ryan.J.K,  2004, Medical  Microbiology,  An Introduction  to  Infectious  Diseases, Prentice Hall International Inc.
Ristiati,  N.  P.  2000. Pengantar  Mikrobiologi Umum.  Proyek Pengembangan  sekolah menengah IBRD Loan Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi: Departemen Pendidikan Nasional. Saryono S.dkk.2013, Penentuan Waktu Optmum  Produksi  Antimikroba  dan  Uji Fitokimia  Ekstrak  Kasar  Fermentasi Bakteri  Endofit  Pseudomonas  sp  dari Umbi Tanaman Dahlia (Dahlia variabilis),Jurnal.Ind,Che.Acta Vol.3 (2) 2013. Saryono,  Hindersah,2009, Tanaman  Dahlia Potensi Bahan Alam Sumber Karbohidrat  dan  Senyawa  Bioaktif, Unri Press, Pekanbaru. Sadrati,  N, et  al,  2013, Screening  Of Antimicrobial And Antioxidant Secondary Metabolites From Endophytic Fungi Isolated From Wheat (Triticum  Durum),  Journal  Of  Plant Protection  Research    Vol.  53,  No.  2:
128-136.
Selim, KA, El-Beih AA, Abd El-Rahman TM and  El-Diwany  AI,  2012, Biology  of Endophytic  Fungi,  Current  Research  in Environmental  &  Applied  Mycology, 31-81.
Simarmata,  Rumilla.  2007. Isolasi  Mikroba Endofitik  dari Tanaman Obat  Sambung Nyawa Gynura Procumbens) dan Analisis Potensinya sebagai Antimikroba.  Jurnal  penelitian  Hayati
13 : 85-90.
Sinaga,E.  dkk,2009, Daya  antibakteri  Jamur
Endofit  yang  Diisolasi  Dari  Dan  Dan Rimpang  Lengkuas  (Alpinia  galanga sw), Jurnal Farmasi Indonesia vol 4.no4 Juli 2009 :161-170.
Sinaga,E,dkk,  2009, Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Jamur  Endofit  DariDaun Dan  Rimpang  Zingiber ottensii  Val, Jurnal  Farmasi  Indonesia,vol  4.(4)  : 171-176.
Simanjuntak  P,  Parwati  T,  Bustanussalam,
Prana    TK,    Wibowo    S,    Shibuya    H. 2002. Isolasi  dan  kultivasi  mikroba endofit  penghasil  senyawa  alkaloid kinkona  dari    Chinchona  spp.  J Mikrobiol 7:27-30.
Shinta, D.Y, et al, 2015, The Media Variance of Production for Anti Microbe
Homogeny from the Endofite Mushroom of Dahlia Plant Seed (Dahlia variabilis), Journal  of  Chemical  and
Pharmaceutical  Research, 7(9S):  239- 245. Bonjura,S.,dkk, 2015, Uji anti bakteri ekstrak daun Leilem (Clerodendum minahassae.L) Terhadap Bakteri
Streptococcus  mutan,  Jurnal  Ilmiah Farmasi  Unsrat  Vol4  no  4,  ISSN  2302- 2493.