UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK KARANG LUNAK Klyxum Sp YANG DIKOLEKSI DARI DESA TUMBAK KECAMATAN POSUMAEN MINAHASA TENGGARA
Elur Lonteng 1) , Adithya Yudistira 1) , Defny Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Soft Coral Klyxum sp.. is a rich sources in bioactive compounds such as terpenoids, steroids, and steroid glycosides which are commonly used in the health sector. The purpose of this study was to determine  the  activity  of  antioxidant  compounds  from  ethanol  extracts  of  Klyxum  sp.  Klyxum  sp., was  extracted  by  maceration  using  ethanol  as  a  solvent.  As  a  parameter,  testing  of  antioxidant activity  was  carried  out  using  the  DPPH  (1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl)  method,  which  was measured using UV-Vis spectrophotometry at a wavelength of 517 nm. The results showed that the ethanol extracts of soft coral  Klyxum sp., proven to have antioxidant activity in each concentration test.
Keywords : Klyxum sp. Soft Coral, Antioxidants, Extraction, DPPH

## ABSTRAK
Karang  Lunak Klyxum sp.  merupakan sumber  yang kaya  akan senyawa bioaktif seperti terpenoid, steroid,  dan  steroid  glikosida  yang  biasa  dimanfaatkan  dalam  dibidang  kesehatan.  Tujuan  dari penelitian  ini  yaitu,  untuk  mengetahui  aktivitas  senyawa  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  Karang Lunak Klyxum sp.  Karang  Lunak Klyxum sp.  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan etanol sebagai pelarut. Sebagai parameter, pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH  (1,1- diphenil -2- picrylhydarzyl )  yang  diukur  menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang gelombang 517 nm. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol Karang Lunak Klyxum sp. terbukti memiliki aktivitas antioksidan disetiap konsentrasi pengujian.
Kata Kunci : Karang Lunak Klyxum sp., Antioksidan, Ekstraksi, DPPH

## PENDAHULUAN
Tubuh  memiliki  sistem  pertahanan alami  untuk  menetralisir  radikal  bebas  agar tidak  berkembang  dan  menjadi  berbahaya bagi tubuh. Pengaruh  lingkungan  dan kebiasaan  buruk  seperti  radiasi  ultraviolet, polusi, kebiasaan mengonsumsi junk food dan merokok,  dapat  membuat  sistem  pertanahan tubuh tidak mampu menghadapi radikal bebas yang berjumlah besar (Silalahi, 2006).
Senyawa  radikal  bebas  merupakan salah  satu  pemicu  kerusakan  sel  yang  dapat menyebabkan penyakit penuaan dan penyakit- penyakit, seperti katarak, penyakit kardiovaskular, kanker, kelainan saraf, inflamasi,  diabetes,  dan  kelainan  pencernaan. Senyawa  radikal  bebas  umumnya  berbentuk radikal  oksigen  yang  selalu  terbentuk  di semua  sistem  biologi  yang  melibatkan katabolisme  oleh  oksigen  di  dalamnya, termasuk sistem organ manusia (Pham-Huy et al ., 2008).
Antioksidan  berupa  senyawa  kimia yang  dapat  menyumbangkan  satu  atau  lebih elektron  kepada  radikal  bebas,  sehingga reaksi radikal bebas tersebut dapat terhambat.
Penggunaan
senyawa antioksidan
berkembang  dengan  pesat,  baik  untuk makanan maupun
pengobatan.
Penggunaannya sebagai obat semakin meningkat dengan bertambahnya pengetahuan tentang  aktivitas  radikal  bebas  terhadap beberapa penyakit degeneratif seperti penyakit  jantung,  diabetes,  kanker,  inflamasi jaringan,  kelainan  imunitas  dan  penuaan  dini (Jacob dan Burri, 1996).
Berbagai penelitian menunjukan bahwa  biota  laut  memiliki  potensi  yang sangat  besar  dalam  menghasilkan  senyawa- senyawa  aktif  yang  dapat  digunakan  sebagai bahan  baku  obat.  Sejak  tahun  1980-an, perhatikan dunia pengobatan mulai terarah ke biota laut  yang diketahui dapat  menghasilkan senyawa aktif (Ismet, 2007).
Karang lunak merupakan sumber yang kaya akan senyawa bioaktif seperti terpenoid, steroid, dan steroid glikosida. Radhika (2006), dalam  penelitiannya  melaporkan  bahwa sekitar 50% ekstrak karang lunak menunjukan bahwa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan oleh  karang  lunak  memiliki  aktivitas  biologi seperti  antifungal,  sitotoksik,  antineoplastik, antimikroba, inhibitor HIV dan anti- inflamatori.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  yaitu  eksperimen laboratorium  dengan  rancangan  penelitian dimana  sampel  karang  lunak Klyxum sp. disiapkan  dan  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol kemudian  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan terhadap DPPH ( 1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl ).

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  lanjutan (Farmakognosi  Fitokimia  dan  Laboratorium Analisis  Farmasi)  Program  Studi  Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi  pada  bulan Mei 2019 - Juli 2019.

## Alat dan Bahan
Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  masker,  snorkel,  fins, tabung  oksigen,  kamera,  gunting,  pisau, wadah  botol  air  kemasan  600  mL,  cawan porselin, ziplok, sarung tangan, telenan, gelas ukur, erlenmeyer, baker glass , vortex , corong, mikro pipet, timbangan digital, spatula, oven, spektrofotometer UV-Vis.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  karang  lunak Klyxum sp., etanol  96%  kertas  saring,  tissue,  alimunium foil,  kertas  label,  serbuk  Vitamin  C  p.a  dan serbuk DPPH ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl ).

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  karang  lunak Klyxum sp. diperoleh  dari  perairan  Desa  Tumbak, Kecamatan  Posumaen,  Kabupaten  Minahasa Tenggara.

## Identifikasi Tanaman
Identifaksi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium  Farmakognosi,  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sam
Ratulangi, Manado.

## Ekstraksi
Sampel direndam dengan
menggunakan  larutan  etanol  96%.  Metode ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  merendam sampel  dengan  larutan  penyari  selama  3  kali 24  jam  pada  temperatur  kamar  yang dilindungi  dari  cahaya  dan  sesekali  dokocok. Kemudian  diambil  filtratnya  dan  residu dibuang  dan  menghasilkan  3  filtrat  yang kemudian  dicampur  menjadi  satu.  Filtrat tersebut  dipekatkan  dengan  menggunakan oven pada suhu 40 o C sampai etanol menguap.

## Pembuatan Larutan Stok 100 mL
Sebanyak  100  mg  ekstrak  etanol karang  lunak Klyxum sp.  dilarutkan  didalam etanol  96%  ad.  100  mL  (konsentrasi  1000 ppm).  Dengan  masing-masing  konsentrasi 100  µg/mL,  75  µg/L,  50  µg/mL,  dan  25 µg/mL  dihitung  dengan  menggunakan  rumus pengenceran, yaitu :
M 1 •V 1 = M 2 •V 2
Pada  keempat  konsentrasi,  masing- masing  hasil  yang  didapatkan  dari  hasil  V 1 dipipet  dan  ditambahkan  etanol  96%  hingga mencapai  tanda  batas  (5  mL),  kemudian dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditutup  dengan  menggunakan aluminium  foil untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Penentuan  aktivitas  penangkal  radikal bebas  DPPH  menurut  Burda  dan  Olezek (2001).  Sebanyak  4  mg  serbuk  DPPH ditimbangdan  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  100  mL.Selanjutnya  larutan  stok DPPH  dilakukan  pengujian  kontrol,  di  uji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang antara 400-600 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Pengujian Sampel
Setelah pengujian sampel dan pengujian kontrol, dilanjutkan pada pengujian vitamin  C  p.a  sebagai  kontrol  pembanding. Kaca  arloji  ditimbang,  vitamin  C  ditimbang sebanyak  10  mg.  Kemudian,  vitamin  C  p.a dilarutkan  dalam  etanol  96%  sebanyak  10 mL,  buat  larutan  stok  dengan  konsentrasi yang  sama  sebelumnya  yaitu  konsentrasi  100 µg/mL,  75  µg/mL,  50  µg/mL  dan  25  µg/mL dengan  ditambahkan  masing-masing  larutan dengan  etanol  p.a  mencapai  tanda  batas  (5 mL),  dengan  pengulangan  sebanyak  3  kali pada masing-masing konsentrasi. Pada masing-masing konsentrasi di pipet 2 mL dan ditambahkan  larutan  DPPH  2  mL,  di  vorteks selama  2  menit  dan  diinkubasi  selama  30 menit  pada suhu 37 0 C.  Sampel vitamin C p.a diuji  pada  spektrofotometer  UV-Vis  dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan metode DPPH
Penentuan  aktivitas  penangkal  radikal bebas  DPPH  menurut  Burda  dan  Olezek (2001).  Diambil  sebanyak  2  mL  ekstrak etanol  Karang  Lunak Klyxum sp.  dengan konsentrasi 100 µg/mL, 75 µg/mL, 50 µg/mL dan 25 µg/mL ditambahkan masing-masing 2 mL larutan DPPH dalam etanol dan divorteks selama  2  menit.  Berubahnya  warna  ungu menjadi  warna kuning  menunjukkan efisiensi penangkal  radikal  bebas.Diukur  absorbansi pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm setelah diinkubasi selama 30 menit.Kemudian diamati  perbandingannya  dengan  vitamin  C p.a  sebagai  standar.  Setelah  absorbansi didapat,  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas (persen  inhibisi)  dihitung  sebagai  persentase berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan rumus berikut:
% inhibisi = 1- x 100%

## Analisis Data
Aktivitas  antioksidan  di  ukur  dengan menggunakan spektrovotometer UV-Vis kemudian  data  yang  diperoleh  disajikan dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini,  sampel  yang  digunakan adalah  Karang  Lunak Klyxum sp.  Karang Lunak Klyxum sp.  dipotong  kecil  kecil, dikarenakan  semakin  kecil  ukuran  sampel, interaksi  sampel  dengan  pelarut  semakin besar. Ekstraksi yang dilakukan pada penelitian  ini  adalah  maserasi,  dikarenakan maserasi  adalah  cara  ekstraksi  yang  cukup sederhana hanya membutuhkan wadah perendam  dan  prosesnya  relatif  mudah
(Depkes RI, 1986). Menurut Suryanto
(2012), penambahan  pelarut  pada  suatu  bahan  harus didasarkan  pada  sifat  kelarutan  dari  pelarut yang digunakan dan sifat dari komponen yang akan  dilarutkan.  Senyawa-senyawa  yang bersifat  polar,  cenderung  larut  dalam  pelarut polar  sedangkan  senyawa-senyawa  yang bersifat  non-polar  cenderung  dalam  pelarut non-polar.
Pada  penelitian  ini  etanol  digunakan sebagai  pelarut.  Hal  ini  dikarenakan  etanol mempunyai  sifat  selektif,  dapat  bercampur dengan  air  dengan  segala  perbandingan, ekonomis,  mampu  mengekstrak  sebagian besar  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam simplisia  seperti  alkaloida,  minyak  atsiri, glikosida,  kurkumin,  kumarin,  antrakinon, flavonoid,  steroid,  damar  dan  klorofil. Sedangkan lemak, malam, tannin dan saponin, hanya sedikit larut (Depkes RI, 1986). Pelarut etanol  juga  dipilih  karena  pelarut  ini  dapat menyari  hampir  keseluruhan  kandungan senyawa  yang  ada  di  dalam  simplisia,  baik yang  bersifat  polar,  semi  polar  maupun  non polar (Iswanti, 2009).
Tabel 1. Hasil pengujian perbandinganEkstrak Etanol Karang Lunak Klyxum sp. dan Vitamin C p.a
Ekstrak dan Vitamin
C PENGULANGAN RATA-
RATA
I
II III 25 µg/mL 50 µg/mL 75 µg/mL 100µg/m
L
36.10 % 91.50 % 46.60 %
92.70 % 47.40 % 92.80 % 51 % 92.50 % 36.80 % 87.30 % 43.30 % 91 % 43.10 % 91.50 % 44.30 % 92.50 % 39.50 % 86.20 % 40.60 % 88.20 % 67 % 88.50 % 71.60 % 91.60 % 37.46 % 89.90 %
42.83 %
90.30 % 52.50 %
90.93 %
55.63 %
92.20 %
Pengujian aktivitas antioksidan digunakan  perbandingan  1  :  1  dimana  2  mL larutan  DPPH  dicampurkan  dengan  2  mL larutan  sampel  (ekstrak  etanol  karang  lunak Klyxum sp.  atau  vitamin  C)  pada  tiap konsentrasi yang berbeda-beda. Dan campuran  DPPH  serta  ekstrak  dilakukan  di vorteks  selama  2  menit.  Menurut  Rumagit (2015), berkurangnya intensitas warna larutan DPPH  tersebut  dapat  menunjukan  bahwa terjadi  reaksi  antara  atom  hydrogen  yang dilepas oleh bahan uji dengan molekul radikal DPPH  sehingga  terbentuk  senyawa 1,1- difenil-2-pikrihidrazil yang berwarna kuning.
Pengujian  aktivitas  penangkal  radikal bebas ekstrak etanol karang lunak Klyxum sp. dilakukan  dengan  menggunakan  metode DPPH ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl ). Pertimbangan  dari  metode  tersebut  karena metode DPPH merupakan metode yang relatif mudah,  peka  dan  memerlukan  sedikit  sampel serta  proses  pengerjaannya  cukup  sederhana. Pada  metode  ini,  DPPH  bertindak  sebagai model  radikal  bebas  yang  akan  berikatan dengan  senyawa  penangkap  radikal  bebas (Simanjuntak et  al .,  2004).  Pengukuran absorbansi  dalam  penelitian  ini  dilakukan panjang  gelombang  maksimum  DPPH  yang diperoleh,  yaitu  517  nm  dengan  absorbansi sebesar 0,838. Pengujian dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dilakukan untuk mengetahui absorbansi DPPH yang  tersisa  setelah  ditambahkan  sampel  uji dengan  berbagai  konsentrasi.  Jika  suatu senyawa memiliki aktivitas sebagai penangkal radikal  bebas,  maka  akan  terjadi  penurunan nilai absorbasi DPPH pada panjang gelombang  maksimum  517  nm.  Semakin tinggi  konsentrasi,  maka  nilai  absorbansi sampel  uji  akan  menurun  dan  aktivitas perendaman  radikal  bebas  atau  %  inhibisi semakin besar.
Konsetrasi ekstrak etanol karang lunak Klyxum sp. yang digunakan adalah 25 µg/mL,
50  µg/mL,  75  µg/mL,  100  µg/mL.  Masing- masing  konsentrasi  dicampurkan  dengan larutan DPPH dengan perbandingan yang ada. Campuran  dihomogenkan  dan  diinkubasi selama 30 menit pada tempat gelap pada suhu 37ºC.  Inkubasi  dilakukan  untuk  menghindari kontaminasi  dan  mengoptimalkan  aktivitas DPPH agar terjadi reaksi antara DPPH dengan sampel  yang  diuji  (Hatano et al.,  1998). Setelah  diinkubasi,  kemudian  masing-masing ekstrak  dilakukan  pengukuran  absorbansi menggunakan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang  serapan  maksimum  DPPH  517 nm.
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada pengujian  DPPH  persen  inhibisi  pada  ekstrak etanol Karang Lunak Klyxum sp. dan Vitamin C  disajikan  pada  Tabel  1  mengalami peningkatan  pada  konsentrasi  tertinggi  yaitu 100 μg/mL yakni 55.63%. Peningkatan persen inhibisi  ini  pada  ekstrak  menandakan  bahwa semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  maka semakin  besar  persen  inhibisi.  Hal  ini didukung oleh penelitian yang dilakukan oleh Hanani et al., (2005) yang menyatakan bahwa presentase  penghambatan  (persen  inhibisi) terhadap  aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi.  Hasil  pengujian  perbandingan aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  Karang Lunak Klyxum sp. dan Vitamin C menunjukkan  bahwa  kemampuan  penangkal radikal  bebas  dari  Vitamin  C  lebih  kuat dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  Karang Lunak Klyxum sp.
Pembanding yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  vitamin  C.  Dimana  Vitamin  C memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi karena  vitamin  C  memiliki  2  gugus  hidroksil yang  mengakibatkan  lebih  mudah  dalam pendonoran hidrogen (Blois, 2005).

## KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil penelitian yang telah  dilakukan  maka,  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  Karang  Lunak Klyxum sp.  memiliki  aktivitas  antioksidan  disetiap konsentrasi.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  Karang Lunak Klyxum sp.  dan  pengujian  aktivitas antioksidan  dengan  metode  lain  FC  ( Folin - Ciocalteu ), FRAP ( Ferric Reducing
Antioxidant  Power ),  RP  ( Reducing  Power ) PV  ( Peroxide  Value ),  TBA  (2- thiobarbituric acid ) dan sebaiknya membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes RI. 1986. Sediaan Galenik. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Ismet,  M.  S.  2007. Penapisan  Senyawa
Bioaktif  Spons  Petrosia  sp.  dari Lokasi  yang  berbeda .  [Tesis].  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Jacob,  R.  A.,  Burri,  B.  J.  1996.  Oxidative Damage  and  Defense. Am.  J.  Clin.
Nutr . 63 : 985S-990S.
Pham-Huy, L.A., Hua, H., dan C. Pham-Huy,
2008,  Free  Radicals,  Antioxidants  in Diseases and Health. Int J Biomed Sci .
4 ( 2 ): 89-96.
Radhika,  P.  2006.  Chemical  constituens  and biological activities of the soft coral of genus Cladiella: A review. Biochemical Systematics and
Ecological 34 : 781-789.
Simanjutak,  P.,  Pratiwi,  T.,  Leny,  L.  E., Tamat,  S.  R.,  Murwani,  R.  2004. Isolasi  dan  Identifikasi  antioksidan dari  ekstrak  Benalu  The  ( Scurrula oortian a (Korth) Danser). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia . ISSN : 1693 – 1831. 5 (1): 19-24.
Suryanto,  E.  2012.  Fitokimia  Antioksidan. Penerbit  Putra  Media  Nusantara, Surabaya.