## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KERNEL BIJI BUAH BACANG ( Mangifera foetida

## L.) TERHADAP Escherichia coli
PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIBACTERIA ACTIVITIES OF ETHANOLIC EXTRACT OF BACANG ( Mangifera foetida L.) SEEDS AGAINST Escherichia coli
1 Vera Nurviana
2 Neni Sri Gunarti
1 Tinggi Ilmu Kesehatan Bakti Tunas Husada Tasikmalaya
2 Universitas Buana Perjuangan Karawang vevey06farm@gmail.com neni.gunarti@ubpkarawang.ac.id
Mangifera foetida L. merupakan kerabat Mangifera indica dari genus Mangifera yang diduga  memiliki  kandungan  matabolit  sekunder  dan  efek  farmakologis  yang  hampir  sama. Kernel  biji  buah Mangifera  indica dilaporkan  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli. Berdasarkan  pendekatan  taksomi  maka  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol 96% kernel biji buah Mangifera foetida L. terhadap Escherichia coli. Skrining fitokimia dilakukan dengan menggunakan uji tabung. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar sumuran. Kandungan  metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  96%  kernel  biji  buah Mangifera foetida L. yaitu flavonoid, tanin, polifenol, monoterpen, seskuiterpen, dan kuinon. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak kernel biji buah Mangifera foetida Lour terhadap bakteri Escherichia coli pada beberapa konsentrasi secara berturut-turut 10%, 20%, 30%, 40%, 50%,  60%  70%,  90%  dan  100%  menghasilkan  diameter    secara  berturut-turut  (10,2,  12,03, 14,55, 16,15, 17,18, 18,60, 19,10, 20,20, 21,12) mm yang ditandai dengan terbentuknya zona bening  (bersifat  bakterisid).  Berdasarkan  data  tersebut  maka  Kernel  Biji  Buah Mangifera foetida dinyatakan memiliki aktivitas antibakteri.
Kata  Kunci;  Skrining  Fitokimia,  Kernel  Biji  Buah, Mangifera  foetida ,  Antibakteri, Escherichia coli .

## ABSTRACT
Mangifera  foetida  and  Mangifera  indica  L.  are  relatives  of  the  genus  Mangifera which  allegedly  contains  matabolit  secondary  with  pharmacological  effects  are  almost  the
same. Mangifera indica seeds are reported to have antibacterial activity against Escherichia coli. Based  on  scientific  classification  approach,  the  study  aims  to  determine  the content  of secondary  metabolites  and  the  antibacterial  activity  of  extract  ethanolic  96%  Mangifera foetida L. seeds against Escherichia coli. Phytochemical screening is done by using a test tube method. Antibacterial activity test using agar well diffusion method. The content of secondary metabolites found in Ethanolic extract 96 % of the seed Mangifera foetida L. are flavonoids, tannins, polyphenols, monoterpenes, sesquiterpenes, and Quinones. The Results of testing the extracts  for  antibacterial  activity  of  Mangifera  foetida  Lour  seeds  against  Escherichia  coli bacteria at some concentrations of respectively 10 % , 20 % , 30 % , 40 % , 50 % , 60 % 70 %, 90  % and 100  % have produced diameter in respectively (10.2, 12.03, 14.55, 16:15, 17:18, 18.60,  19:10,  20:20,  21:12)  mm,  are  Characterized  by  the  formation  of  a  clear  zone (bakterisid).  Based  on  of  these  data,  the  seed  of  Mangifera  foetida  fruits  stated  to  have antibacterial activity.
Key  Word: Phytochemical Screening,  Seed of Mangifera foetida Fruit, Antibacteria, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Bacang  ( Mangifera  foetida Lour)  merupakan  salah  satu  spesies  dari  genus mangifera , banyak tumbuh di wilayah Jawa Barat, Indonesia. Buah Mangifera foetida memiliki nilai gizi yang baik, akan tetapi kalah bersaing dengan jenis mangga lainnya, dikarenakan getahnya lebih banyak, seratnya lebih kasar dan rasanya lebih asam. Hal tersebut mempengaruhi kurangnya pemanfaatan maupun penelitian dilakukan terhadap buah Mangifera foetida (Purwaningsih et al. , 2011).
Mangga  ( Mangifera  indica) merupakan  spesies  dari  genus Mangifera yang  telah banyak  diteliti.  Biji  mangga  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  karena  kandungan senyawa fenolik yang tinggi, pitosterol, seperti campesterol, β-sitosterol, stigmasterol, dan juga tocopherol (Ribeiro et al ., 2007; Soong dan Barlow, 2004). Khammuang dan Sarnthima (2011) menjelaskan  bahwa  selain  aktivitas  antioksidan,  ekstrak  biji  mangga  juga  menunjukkan aktivitas  antibakteri  dan  juga  telah  digunakan  sebagai  agen  imunomodulasi  pada  hewan (Pepeira et al. , 2009).
Penyakit infeksi merupakan penyebab angka kematian yang cukup tinggi. Salah satu spesies yang paling sering  menyebabkan infeksi pada manusia adalah Escherichia coli . Escherichia coli merupakan bagian dari flora normal kolon pada manusia dan binatang, tetapi dapat menjadi
patogen  baik  di  dalam  maupun  di  luar  saluran  cerna  (Cornelissen,  2015).  Upaya  untuk penanggulangan  infeksi  oleh  mikroorganisme  adalah  diperlukan  obat  yang  dapat  bekerja optimal  dengan  efek  samping  kecil.  Sehingga  perlu  dilakukan  pengembangan  obat  dan pencarian  sumber  senyawa  antiinfeksi  dari  bahan  alam  untuk  menunjang  peningkatan  taraf kesehatan masyarakat (Maradona, 2013).

## METODE PENELITIAN

## Alat
Peralatan  yang  digunakan  adalah    gelas  kimia,  kasa  asbes,  kaki  tiga,  spiritus,  tabung reaksi,  rak  tabung,  batang  pengaduk,  pipet  tetes,  cawan  uap,  spatula,  corong,  Erlenmeyer, cawan petri, autoklaf (Hirayama), oven (Memmert), inkubator (Memmert), pinset,  maserator, mortar,  stamper,  timbangan  analitik  (Mettler  Toledo), rotary  evaporator (Eyela),  jangka sorong, gelas ukur, termometer, penggaris.

## Bahan
Kernel biji buah bacang ( Mangifera foetida Lour), bakteri Escherichia coli ,metanol, n- heksan, etil asetat, amonia encer, kloroform, media Nutrient Agar (NA), Mueller-Hinton Agar (MHA), NaCl fisiologis, larutan standar Mc.  Farland, pereaksi Mayer, pereaksi Dragendrof, HCl  ,  amil  alkohol,  logam  Zn,  besi  (III)  klorida,  aquadest,  gelatin  1%,  eter,  vanillin-sulfat, pereaksi Lieberman-Burchard, NaOH 2N, kertas saring.

## Penyiapan Sampel
Kernel biji buah bacang dilepaskan dari cangkang/pembungkus bijinya dan dibersihkan dari  pengotornya.  Bahan  di  iris  tipis  untuk  selanjutnya  dikeringkan  dibawah  sinar  matahari hingga kering dan kemudian diserbukan.

## Ekstraksi
Serbuk  kernel  biji  buah Mangifera  foetida ditimbang  sebanyak  250  gram  kemudian direndam  dengan  menggunakan  etanol  96%  sebanyak  1L  Proses  ini  dilakukan  dengan perendaman biji buah Mangifera foetida kering yang telah diserbukan selama 3x24 jam dalam maserator  penggantian  pelarut  setiap  24  jam.  Ekstrak  ditampung  dalam  labu  Erlenmeyer kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  60°C.  Rendemen  ekstrak dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
Rendemen =       Berat ekstrak kental
Berat sampel x 100%

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dari  serbuk  simplisia  meliputi  pemeriksaan  golongan  senyawa alkaloid, flavonoid, tannin dan polifenol, saponin, monoterpenoid dan seskuiterpenoid, steroid dan triterpenoida, kuinon.

## Uji Alkaloida
Simplisia ditambah amonia encer lalu digerus dalam mortir. Tambahkan beberapa mL kloroform sambil terus digerus. Filtrat disaring dan dikocok dengan asam klorida 2N. Lapisan asam  dipisahkan  kemudian  dibagi  menjadi  3  bagian.  Bagian  pertama  digunakan  sebagai blanko. Bagian kedua ditetesi dengan larutan pereaksi mayer dan bagian ketiga ditetesi dengan pereaksi  dragendorf.  Terbentuknya  endapan  putih  pada  pereaksi  mayer  dan  endapan  jingga cokelat  pada  penambahan  pereaksi  dragendorf  menunjukkn  reaksi  positif  adanya  alkaloid (Fransworth, 1966).

## Uji Flavonoid
Simplisia  digerus  didalam  mortir  dan  dipanaskan  dengan  air  diatas  penanggas  air, kemudian  disaring.  Filtrat  yang  dihasilkan  kemudian  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi. Setelah  itu  ditambahkan  logam  Mg,  larutan  alkohol:HCl  (1:1)  dan  amil  alkohol.  Kemudian campuran tersebut dikocok kuat-kuat. Adanya flavonoid akan menyebabkan filtrat berwarna merah, kuning atau jingga yang dapat ditarik oleh amil alkohol (Fransworth, 1966).

## Uji Saponin
Simplisia  digerus  didalam  mortir  dan  dipanaskan  dengan  air  diatas  penanggas  air, kemudian disaring. Setelah dingin filtrat dalam tabung reaksi dikocok kuat kuat-kuat selama beberapa menit. Pembentukan busa sekurang-kurangnya setinggi 1 cm dan didiamkan selama beberapa  menit  serta  busa  tidak  hilang  pada  penambahan  1  tetes  asam  klorida  encer menunjukkan bahwa dalam simplisia terdapat saponin (Fransworth, 1966).

## Uji Tanin
Simplisia  digerus  dalam  mortir  dan  dipanaskan  dengan  air  diatas  penanggas  air kemudian disaring.  Filtrat dibagi menjadi 2 bagian, bagian pertama ditetesi dengan pereaksi besi (III) klorida. Terbentuknya warna biru hitam menunjukkan adanya tanin dan polifenolat. Bagian kedua ditambahkan dengan larutan gelatin 1%. Adanya endapan putih menunjukkan bahwa dalam simplisia terdapat tanin (Fransworth, 1966).

## Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida
Simplisia  disari  dengan  eter,  kemudian  sari  eter  diuapkan  (diangin-angin)  hingga kering.  Pada  residu  diteteskan  pereaksi  Lieberman-Burchard.  Terbentuknya  warna  ungu menunjukkan  bahwa  dalam  simplisia  terkandung  senyawa  triterpenoid,  sedangkan  bila terbentuk warna hijau-biru menunjukkan adanya senyawa steroid (Fransworth, 1966).

## Pemeriksaan Monoterpenoid dan Seskuiterpenoid
Simplisia disari dengan eter, kemudian sari eter diuapkan hingga kering. Pada residu diteteskan  pereaksi  anisaldehid-asam  sulfat  vanillin-asam  sulfat.  Penambahan  pereaksi dilakukan  dalam  keadaan  dingin.  Terbentuknya  warna-warna  menunjukan  adanya  senyawa monoterpen dan seskuiterpen (Fansworth, 1966).
Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Kernel Biji Buah Mangifera foetida Masukkan  20  mL  Mueller-Hinton  Agar  yang  steril  ke  dalam  cawan  petri  kemudian tambahkan  0,  2  ml  suspensi  bakteri.  Cawan  digerakan  dengan  gerakan  memutar  supaya tercampur secara homogen, kemudian dibiarkan mengeras dan dibuat lubang-lubang sebanyak 4  lubang  tiap  cawan  petri  dengan  jarak  antar  lubang  yang  sama.  Ke  dalam  tiap  lubang dimasukan ekstrak etanol 96% kernel biji buah Mangifera foetida dengan konsentrasi 0-100 % sebanyak  50  μL  tiap  konsentrasi  diberi  rentang  10. Cawan  petri  kemudian  diinkubasikan selama  18-24  jam  pada  suhu  37 o C.  Kemudian  diukur  diameter  hambat  yang  terjadi  yaitu berupa zona bening.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi.  Maserasi  dipilih  karena merupakan  metode  dengan  proses  perendaman  sampel  menggunakan  pelarut  organik  pada temperatur  ruangan.  Perendaman  sampel  tumbuhan  menyebabkan  terjadinya  pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan di dalam dan di luar sel, sehingga metabolit sekunder  yang  barada  dalam  sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut  organik.  Sebanyak  645 gram simplisia serbuk  kernel biji buah Mangifera foetida diekstraksi dengan 2L etanol 96% diperoleh 171,9116 gram ekstrak kental dengan nilai rendemen sebesar 26,653%.

## Hasil Skrining Fitokimia Biji Buah Limus
Skrining fitokimia sangat penting dalam mengidentifikasi sumber-sumber baru terapi dan  industri  (Ankindele,  2007).  Skrining  fitokimia  dilakukan  dengan  cara  memeriksa kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol 96%
Table 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Kernel Biji Buah Limus   ( Mangifera foetida Lour)
Pengujian Hasil Senyawa Metabolit Ekstrak Etanol Sekunder Kernel Biji Buah Bacang Alkaloid - Flavonoid + Tanin + Polifenol + Saponin - Monoterpenoid dan + seskioterpenoid Steroid dan - Triterpenoid Kuinon + **Keterangan: + = Terdeteksi - = Tidak terdeteksi
Berdasarkan hasil penapisan fitokimia (table 1), ekstrak biji buah limus mengandung senyawa  flavonoid,  tanin  dan  polifenol,  monoterpenoid  dan  seskuiterpenoid,  dan  kuinon. Senyawa  yang  diduga  berperan  sebagai  antibakteri  adalah  flavonoid,  tanin  dan  polifenol. Mekanisme flavonoid sebagai antibakteri menurut….. adalah dengan mendenaturasi molekul- molekul protein dan asam nukleat yang menyababkan koagulasi dan pembekuan protein yang akhirnya  akan  terjadi  gangguan  metabolism  dan  fungsi  fisiologis  bakteri.  Jika  metabolism bakteri terganggu maka kebutuhan energi tidak tercukupi sehingga mengakibatkan rusaknya sel bakteri secara permanen yang pada akhirnya menyebabkan kematian bakteri.
Senyawa polifenol memiliki mekanisme kerja dalam menghambat pertumbuhan bakteri dengan  cara  inaktivitas  protein  (enzim)  pada  membrane  sel.  Fenol  berikatan  dengan  protein melalui  ikatan  hidrogen  sehingga  mengakibatkan  struktur  protein  menjadi  rusak.  Dimana sebagian besar struktur dinding sel dan membran sitoplasma bakteri mengandung protein dan lemak. Sehingga sel bakteri menjadi kehilangan bentuknya, dan terjadi lisis (Palczar et al, 1988; Rijayanti, 2014)
Tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  berhubungan  dengan  kemampuannya  untuk menginaktifkan adhesin sel mikroba, menginaktifkan enzim, dan menggangu transport protein
pada lapisan dalam sel (Cowan, 1999).  Tanin juga mempunyai target pada polipeptida dinding sel  sehingga  pembentukan  dinding  sel  menjadi  kurang  sempurna.  Hal  ini  menyebabkan  sel bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotik maupun fisik sehingga sel bakteri akan mati (Sari, 2011).
Gambar 1. Hasil Uji aktivitas antibakteri pada MHA (Mueller Hinton Agar)
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kernel Biji Buah Limus terhadap bakteri

## Escherichia coli
No Konsentrasi Diameter Zona Bening (mm) Ekstrak Etanol 1 10% 10.2 ± 0.63 2 20% 12.03 ± 0.74 3 30% 13.23 ± 0.81 4 40% 14.55 ± 0.99 5 50% 16.15 ± 0.92 6 50% 17.18 ± 0.46 7 70% 18.60 ± 0.14 8 80% 19.10 ± 0.42 9 90% 20.20 ± 0.57 10 100% 21.12 ± 0.76
Hasil  pengujian  yang  disajikan  pada  tabel  2  menujukan  bahwa  penambahan  besar konsentrsasi  ekstrak  etanol  kernel  biji  buah Mangifera  foetida  L. mempengaruhi  perubahan diameter zona hambat yang dihasilkan. Semakin besar jumlah ekstrak maka semakin besar pula zona bening yang ditunjukan.
Berbagai metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman memiliki aktivitas antibakteri dengan  makanisme  kerja  yang  bekerja  secara  sinergis.  Efikasi  dari  ekstrak  herbal  yang digunakan  dalam  pengobatan  disebabkan  adanya  sinergisitas  antara  senyawa  aktif  yang terdapat dalam ekstrak tersebut. Sinergisitas memberikan aktivitas lebih baik serta menurunkan potensi  toksisitas  dari  beberapa  senyawa  tunggal  serta  dapat  mencegah  terjadinya  resistensi obat.  Sinergisitas  dari  berbagai  metabolit  sekunder  juga  diklaim  dapat  mengurangi  efek samping yang tidak diinginkan (Poongothai et al , 2013).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penapisan fitokimia dalam simplisia, ekstrak dan fraksi dari biji buah limus  mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin  dan  polifenol,  monoterpenoid  dan seskuiterpenoid,  dan  kuinon.  Senyawa  yang  diduga  berperan  sebagai  antibakteri  adalah flavonoid, tanin dan polifenol. dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol 96% kernel biji buah Mangifera foetida memiliki aktivitas antibakteri.

## DAFTAR ACUAN
Akindele AJ and Adeyemi OO. 2007, Antiinflammatory ctivity of the aqueous leaf extract of
Byrsocarpus coccineus. Fitoterapia , 78: 25-28.
Cornelissen, C. N. 2015, Ilustrasi berwarna Mikrobiologi (edisi 3). Jakarta: Bina Rupa Aksara. Jilid 1.
Cowan, M.M. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews. 1999; 12: 564 – 582.
Fransworth,  N.R.  1966, Biological  and  Phytocemical  Screening  of  Plants . Journal  of Pharmaceutical Scienes. Vol. 5.
Khammuang, S and R. Sarnthima. 2011, Antioxidant and Antibacterial Activities of Selected Varieties of Thai Mango Seed Extract. Pak. J. Pharm. Sci., Vol.24, (1), 37-42.
Maradona D. 2013, Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun durian (Durio zybethinus L), daun lengkeng, (Dimocarphus longan Lour), dan daun rambutan (Nephelium lappaceum
L)  terhadap  bakteri  staphylococcus  aureus  ATCC  25925  dan  Escherichia  coli  ATCC 25922. Skripsi. Fakultas Kedokteran UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. p.33
Palczar, J.M dan Chan, E.C.S. 1988, Dasar-dasar Mikrobiologi 2. Jakarta: Penerbit UI Press. Pereira, A.  L.  F., T.  F. Vidal., M. C. Teixeira., P.  F.  Oliveira., R. C.  F. Pompeu.,  M. M. M Vieira and J. F. F. Zapata. 2009. Antioksidant effect of mango seed extract and butylated hydroxytoluene  in  bologna-type  mortadella  during  storage .  Scienc.  Technol.  Aliment., Campinas, 31, (1) 135-140.
Poongothai,  P.  Rajan,S.  Antibacterial  Properties  of  Mangifera  indica  flower  extracts  on Urophatogenic  Escherichia  coli,.International  Journal  of  Current  Microbiology  and Aplied Science.2013;2(12): 104-111.
Purwaningsih. E. H., Hanani. E., Amalia. P., Krisnamurti. D. G. B. 2011, Efek Kelasi Ekstrak Air Mangifera foetida.pada Serum Penderita Talasemia. J Indon Med Assoc , Volum: 61, Nomor: 8 (322-325)
Ribeiro, S. M. R., J. H. Queiroz, M. E. L. R. Queiroz, F. M. Campos and H. M. P. Sant’ana. 2007.  Antioxidant  in  mango (Mangifera  indica  L.)  Pulp.  Plant  Foods  for  Human Nutrition , V. 62 (1), 13-17.
Rijayanti,  R.  P.  2014. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangga  Bacang (Mangifera  foetida  L)  terhdapa  Staphylococcus  aureus  secara  In  Vitro. Pontianak: Universitas Tanjungpura Pontianak.
Sari,  F.P.  dan  S.  M.  Sari.  2011,  Ekstraksi  Zat  Aktif  Antimikroba  dari  Tanaman  Yodium (Jatropha  multifida  Linn)  sebgai  Bahan  Baku  Alternatif  Antibiotik  Alami.  Semarang: Fakultas Teknik Universitas Diponegoro.