@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
UJI FITOKIMIA DAN BIOAKTIVITAS DAUN KATUK HUTAN ( Phylanthus reticulatus var. Glaber)
(Bioactive and Phytochemical Testing of Glaber leaf [Phylanthus reticulatus var. Glaber])
ARMANSYAH K. RACHIM 1 , SUSILO BUDI HUSODO 1  , MULIYANA ARIFUDIN 1 Jurusan Kehutanan, Fakultas Kehutanan Universitas Papua Manokwari, Papua Barat, 98314. Tlp/Fax: +62986211065.
 Penulis Korespondensi: Email: husodo2014@gmail.com Diterima: 28 Feb 2020 | Disetujui: 12 Apr 2020
Abstrak. Penelitian  ini  bertujaun  untuk  menguji  kandungan  bahan  fitokimia  dan  bioaktif  dari antioksidan,  antibakteri  dan  toksik  dari  ekstrak  methanol  bahan  daun  katuk  hutan  ( Phylanthus reticulatus var.).  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  fitokimia  dari  daun  katuk  hutan mengandung  bahan  alkaloids,  flavonoids  dan  triterpenoids.  Tes  antioksidan  memperlihatkan  bahwa konsentrasi  25,50%  dan  100  ppm  ekstraksi  dapat  menghambat  radikal  bebas  DPPH  secara  berturut- turut  pada  79,  81  dan  89%.  Selanjutnya  hasil  tes  antibakteri  dari  ekstraksi  daun  katuk  hutan menunjukan  bahwa  tidak  ada  sifat  antibakteri  dimana  hasil  tes  toksik  mengindikasikan  tidak  adanya aktivitas toksisitas.
Kata kunci : Phylanthus reticulatus, fitokimia, bioaktif, antioksida, antibakteri dan toksisitas
Abstract. This  study  aims  to  determine  the  content  of  phytochemical  and  bioactivity  properties  of antioxidant,  antibacterial  and  toxicity  of  the  methanol  extract  of  Phylanthus  reticulatus  var.  Glaber leaf. The testing method used is the phytochemical testing, testing antioxidant, antibacterial testing dan toxicity testing. The test results show that phytochemical extracts of Phylanthus reticulatus var. Glaber leaves contain alkaloids, flavonoids and triterpenoids. Antioxidant test reveals that the concentration of 25, 50 and 100 ppm of the extract at prohibits free radical DPPH respectively around 79, 81 dan 89%. The antibacterial testing extracts of Phylanthus reticulatus var. Glaber leaves shows that it does not have the antibacterial property. The toxicity test show that this extract does not have toxicity activity. Keywords : Phylanthus reticulatus, phytochemical, bioactivity, antioxidant, antibacterial and toxicity

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  hayati  tumbuhan  tropis Indonesia  merupakan  sumber  kekayaan  yang potensial.  Indonesia  dikenal  sebagai  negara tropis  yang  kaya  akan  sumberdaya  alam terutama  tumbuhan.  Indonesia  dikenal  sebagai Megabiodiversity terbesar  kedua  di  dunia setelah  Brazil  (Forest  Watch  Indonesia  2015). Dari keanekaragaman tersebut, Indonesia
mempunyai potensi yang sangat besar untuk pengembangan  dan  penemuan  senyawa- senyawa  baru  yaitu  senyawa  metabolit sekunder  yang  memiliki  bioaktivitas  dan  efek yang ampuh. Diperkirakan dibumi hidup sekitar 40.000  spesies  tumbuhan,  dimana  30.000  jenis tananman  hidup  di  kepulauan  Indonesia. Diantara  30.000  spesies  tumbuhan  yang  hidup dikepulauan  indonesia,  diketahui  sekurang- kurangnya  9.600  spesies  tumbuhan  yang
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
berkhasian  sebagai  obat  dan  kurang  lebih  300 spesies  telah  digunakan  sebagai  bahan  obat tradisional oleh industri tradisional ( Keputusan Mentri  Kesehatan  Republik  Indonesia  2007 ) . Menurut  Kurdi  (2010)  diperkirakan  kurang lebih  300  spesies  tumbuhan  yang  telah digunakan  sebagai  bahan  baku  obat,  namun yang  tercatat  sebagai  produk  fitofarmaka  (bisa diresepkan) sebanyak 5 produk dan obat herbal terstandar sebanyak 28 produk.
Metabolisme  sekunder  merupakan  senyawa dari  hasil  biogenesis  dari  metabolisme  primer. Dalam  proses  metabolit  sekunder  pada  suatu tumbuhan,  tumbuhan  dapat  menghasilkan senyawa-senyawa  yang  bersifat  toksik  dan dapat  digunakan  untuk  mengobati  berbagai jenis  penyakit  pada  manusia.  Golongan senyawa  metabolit  sekunder  adalah  alkaloid, flavonoid,  saponin, tanin, steroid  dan triterpenoid  (Harborne  1987).  Fitokimia  atau kandungan  senyawa  bioaktif  yang  terdapat dalam  tumbuhan  dapat  memberikan  kesehatan pada tubuh manusia.
Saat  ini  berbagai  penelitian  tentang tumbuhan  obat  sering  dilakukan  oleh  para peneliti  untuk  mengetahui  potensi  yang  ada  di berbagai  tumbuhan  obat  tersebut.  Penelitian tersebut banyak dilakukan karena saat ini masih banyak  jenis  –  jenis  tanaman  obat  yang  belum diketahui  potensinya  dan  belum  ada  kajian secara ilmiah mengenai tumbuhan obat tersebut (Agromedia 2008).
Tanaman katuk hutan ( Phylanthus reticulatus var.  glaber)  diduga  berpotensi sebagai  tanaman-tanaman  obat.  Hal  ini diketahui  dari  pengetahuan  lokal  masyarakat papua  yang  menggunakan  tumbuhan  katuk hutan  sebagai  obat  tradisional  yang  cukup ampuh untuk mengobati berbagai jenis penyakit diantaranya  kanker  payudara,  kanker  rahim, miom, kista, asma, dan anti alergi. Oleh karena itu  perlu  dilakukan  penelitian  secara  ilmiah mengenai  tumbuhan  katuk  hutan.  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui
kandungan  fitokimia  serta  mengukur  aktivitas antioksidan,  antibakteri  dan  toksisitas  dari tanaman  katuk  hutan.  Hasil  yang  diharapkan dari  penelitian  ini  adalah  untuk  memberikan informasi  mengenai  kandungan  fitokimia  yang dimilki  oleh  tanaman  katuk  hutan,  agar penggunaannya lebih efektif dalam pengobatan.

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Teknologi  Hasil  Hutan  Fakultas  Kehutanan Universitas  Papua  dan  Laboratorium  Kimia Kayu Universitas Mulawarman Samarinda yang dikerjakan  selama  2  bulan  lebih  yang  dimulai pada  tanggal  28  Maret  sampai  dengan  11  Juni tahun 2016.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  bagian  daun  dari  jenis  tumbuhan  katuk hutan  ( Phylanthus  reticulatus var.  glaber), lakban,  kantong  plastik,  kapas,  kertas  saring, nutrein  broth ,  glukosa,  agar-agar,  alumunium foil.  Bahan  kimia  yang akan  digunakan  adalah metanol,  etanol,  aquades  H 2 O,  amonia  NH 3 , asam  sulfat  H 2 SO 4 ,  pereaksi  meyer,  pereaksi dragendrof,  pereaksi  wagner,  asam  cuka CH 3 COOH,  asam  klorida  HCL,  etanol, magnesium Mg, natrium clorida NaCl, gelatin, ferrum  clorida  FeCl,  benzena.  TTC,  DPPH. Bahan  uji  yang  digunakan  adalah  bakteri P.acnes , S.mutans , S. sobrinus , dan E. coli . dan organisme  yang  digunakan  adalah  larva Cyprinus carpio .

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah  metode  penelitian  deskriptif  dangan teknik analisis laboratorium.

## Variabel Pengamatan
Variabel yang akan diamati dalam penelitian ini  ialah  golongan  senyawasenyawa  fitokimia yang  terkandung  dalam  bagian  daun  dari tanaman katuk hutan. Serta mengukur aktivitas
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
antioksidan,  antibakteri  dan  toksisitas  dari
tanaman katuk hutan.

## Gambar 1 . Bagan alir prosedur penelitian

## Pengambilan Sample dan Penyiapan Simplisia
Sample  uji  merupakan  bagian  daun  dari tumbuhan  katuk  yang  diperoleh  dari  kawasan hutan sekunder pantai aipiri Manokwari. Lokasi pantai  aipiri  dipilih  dikarenakan  pada  kawasan tersebut  terdapat  banyak  lahan  terbuka  (hutan sekunder) daerah dataran rendah dengan tekstur
tanah berpasir yang merupakan tempat tumbuh dari jenis tanaman katuk hutan. Sample yang di ambil  hanya  berupa  bagian  daun,  bagian  daun yang di ambil disortir agar bebas dari serangga seperti  semut  dan  sarang  laba–laba.  kemudian bagian  daun  dikeringkan  melalui  proses penjemuran  yang  dilakukan  dengan  cara menjemur  terkena  cahaya  matahari  yang
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
bertujuan  untuk  mengurangi  kadar  air  pada bagian  tanaman  tersebut  tanpa  merusak senyawa–senyawa yang terkandung didalamnya. Setelah melalui
proses penjemuran,  bagian  tanaman  tersebut  digiling menggunakan  mesin  penggiling  ( hammermill ) dan  kemudian  ditimbang  sebanyak  500  gram untuk  dilakukan  proses  maserasi  pada  tahap selanjutnya.

## Proses Ekstraksi

## Maserasi
Sample sebanyak 500 gram dari bagian daun tumbuhan P.  reticulatus dimasukkan  ke  dalam toples yang berbeda dan kemudian direndam/dimaserasi  dengan  larutan  metanol sebanyak  1500  ml  dengan perbandingan metanol  berbanding  sample  3  :  1  yang kemudian diaduk tiap 12 jam selama 1 hari (24 jam). Sample akan dimaserasi secara berulang- ulang  kali  hingga hasil  pencampuran  metanol dan sample tidak berwarna/bening.

## Penyaringan
Larutan hasil maserasi/hasil ekstrak metanol disaring  secara  bertahap  diawali  dengan menggunakan  corong  penyaring  ( gough  filter ) nomor  1  dan  kemudian  hasil  saringan  tersebut akan  disaring  kembali  menggunakan  corong penyaring nomor 4.

## Evaporasi
Hasil  ekstrak  yang  telah  disaring  akan dilakukan  proses  pemisahan  antara  larutan methanol  dan  ekstrak  tumbuhan  larut  metanol dengan  mengunakan  alat  evaporator.  Alat evaporator  akan  memisahkan  larutan  metanol dan  ekstrak  tumbuhan  larut  metanol  dengan cara  pemanasan  menggunakan  air  panas  yang bersuhu  <  50  °C  dibawah  dari  titik  didih metanol agar metanol dapat menguap sehingga terpisah  dari  hasil  ekstrak  tanpa  merusak golongan  struktur  senyawasenyawa  fitokimia yang terkandung dalam hasil ekstrak.

## Rendemen
Rendemen  adalah  perbandingan  jumlah (kuantitas)  ekstrak  yang  dihasilkan  dari tanaman yang diekstraksi. Adapun rumus yang digunakan  untuk  menghitung  rendemen  sebgai berikut :

## Pengujian Fitokimia

## Alkaloid
Sebanyak 1 ml ekstrak kental daun tanaman katuk  hutan  dari  pelarut  metanol  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  dan  ditambah  dengan  5 tetes ammonia NH 3 pekat. Setelah itu, disaring kemudian  ditambah  2  ml  asam  sulfat  2N (H 2 SO 4 2N)  dan  dikocok  hingga  memberi lapisan atas dan bawah. Larutan dibagi menjadi 2  bagian,  pada  tabung  pertama  ditambahkan  1 tetes  mayer,  adanya  alkaloid  ditandai  dengan terbentuknya  endapan.  Pada  tabung  kedua ditambah  1  tetes  pereaksi  Dragendorf  dan terbentuknya  endapan  menandakan  adanya alkaloid (Harborne 1987).

## Steroid dan Triterpenoid
Sebanyak 2 ml ekstrak kental daun tanaman katuk  hutan  dari  pelarut  metanol  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan Asam  cuka  CH 3 COOH  glasial  sebanyak  10 tetes dan asam sulfat (H 2 SO 4 ) pekat sebanyak 2 tetes.  Larutan  dikocok  perlahan  dan  dibiarkan selama  beberapa  menit.  Adanya  steroid ditunjukan  oleh  warna  biru  atau  hijau, sedangkan  triterpenoid  akan  membentuk endapan  atau  memberikan  warna  merah  atau ungu (Harborne 1987).

## Saponin
Sebanyak  2-3  mL  ekstrak  kental  daun tanaman  katuk  hutan  dari  pelarut  metanol dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  10  mL  air  panas  H 2 O  lalu didinginkan,  kemudian  dikocok  kuat-kuat
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
selama 10 detik lalu ditambahkan 1 tetes asam klorida HCL 2 N. Uji positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil setinggi 1-10 cm selama tidak kurang dari 10 menit.

## Flavonoid
Sebanyak 1 ml ekstrak kental daun tanaman katuk  hutan  dari  pelarut  metanol  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  Kemudian  ditambahkan dengan  5  tetes  etanol,  lalu  dikocok  sampai homogen.  Setelah  itu  ditambah  dengan  serbuk magnesium  Mg  dan  tambahkan  5  tetes  asam klorida  HCl  pekat  Jika  reaksi  yang  terjadi menghasilkan warna kuning, orange, dan merah menandakan  adanya  flavonoid  (Harborne 1987).

## Tanin
Sebanyak 1 ml ekstrak kental daun tanaman katuk  hutan  dari  pelarut  metanol  dimasukkan dalam  tabung  reaksi.  Kemudian  ditambah  5 tetes FeCl 3 10%, lalu dikocok sampai homogen. Diamkan  sejenak  dalam  beberapa  menit  dan apabila  terbentuk  warna  hijau  menandakan adanya tanin (Harborne 1987).

## Pengujian Antioksidan
Metode  uji  antioksidan  yang  digunakan berdasarkan  metode  Shimizu  et  al. (2001).  Uji dilakukan  dengan  menggunakan  UV/VIS  1200 spektrometer dengan temperatur 25 °C. siapkan tabung reaksi kemudian larutkan ekstrak kental daun dengan dimetilsulfoksida (DMSO) (larutan  100  ppm  dan  50  ppm).  Masukkan sebanyak  33  μl  ekstrak  daun  yang  telah dilarutkan  dengan dimetilsulfoksida (DMSO) kedalam  tabung  reaksi.  Setelah  itu,  tambahkan 467  μl  etanol,  lalu homogenkan  antara  pelarut dan sample. kemudian tambahkan 500 μl DPPH (konsentrasi  0,0027  %  pada  pelarut  etanol) setelah  itu  inkubasi  selama  20  menit dalam suhu  ruang  tanpa  cahaya.  Sample  yang  telah diinkubasi dimasukkan ke dalam cuvette untuk melakukan  perhitungan  perendaman  DPPH menggunakan spektrofotometer. Aktivitas antioksidan
dapat ditentukan melalui
dekolorisasi  dari DPPH  pada  panjang gelombang 515 nm.
Dimana : ABS. Kontrol = Nilai absorbansi tanpa ekstrak ABS. Sample = Nilai absorbansi dengan ekstrak
Kemudian  dibuat  regresinya  sehingga  dapat dihitung harga EC 50 ( Effektive Contcentration = Konsentrasi  yang  efektif  untuk  menghambat atau  meredam  50% jumlah  radikal  bebas) (Joyeux et al. 1995).

## Pengujian Antibakteri

## Pembuatan Stok Sample Uji
Sampel  uji  diukur sebanyak  5  μl,  kemudian ditambahkan larutan etanol 40% sebanyak 1 ml untuk  membuat  stok  dengan  konsentrasi sebesar 5000 ppm.

## Pembuatan Kultur Media Bakteri
Media  bakteri  yang  digunakan  dalam pengujian  ini  adalah  media  cair  dan  padat. Sebanyak  8  gr nutreint  broth, 10  gr  glukosa, dan 20 agar-agar dimasukkan kedalam 1000 ml aquades dan  dididihkan  sampai  melarut sempurna, lalu dimasukkan kedalam gelas piala untuk  disterilisasi  dengan autoclave pada  suhu 121 °C selama 20 menit (Thiel 1999).

## Pembuatan Larutan Suspensi Bakteri
Bakteri yang digunakan dalam pengujian ini adalah P.acnes , S.  mutans,  S.  sobrinus, dan E. coli . Bakteri dimasukkan kedalam akuades lalu dihomogenkan. Bakteri  yang  digunakan  di sesuaikan dengan standar Mc. Farland skala 0,5 atau pada  transmitan  74  %  dengan  panjang gelombang 600 nm (Prolab Diagnostics 2012).

## Pengujian Antimikroba
Metode  uji  antibakteri  yang  digunakan berdasarkan  metode  Elkhair  et  al.  (2010)  yang sudah  dimodifikasi.  Stok  sampel  dimasukkan kedalam microplate  96  wells sebanyak  50  μl
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk dan dilakukan pengenceran. kemudian tambahkan  media cair nutrient  broth sebanyak 100  μl  dan  50  μl  larutan  bakteri  yang  telah disuspensi dengan aquades . Microplate yang telah  diinokulasi  dengan  bakteri  diinkubasi selama 24 jam pada incubator dengan suhu 37 °C.  Satu  jam  sebelum  proses inkubasi  selesai, ditambahkan  50  μl  larutan  2,  3,  5- triphenyl tetrazolium  chloride (TTC).  Proses  akhir  dari pengujian  ini  adalah  timbulnya  warna  merah yang mengindikasikan  masih  hidupnya  bakteri yang diuji pada masing–masing sampel.

## Pengujian Toksisitas
Pengujian Brine shrimp lethality bioassay Pengujian brine  shrimp  lethality  bioassay secara  luas  digunakan  dalam  bioassay  untuk senyawa bioaktif. Pengujian Toksisitas dilakukan  pada  Larva Cyprinus  carpo dengan delapan  konsentrasi  7,  8,  15,  6,  31,  25,  62,5, 125,  250,  500  dan  1000  ppm.  Semua  dosis dihitung  dengan  teknik  pengenceran  serial. Pengamatan  akan  dilakukan  selama  24  jam, Jumlah Larva yang mati setelah 24 jam dicatat (data  kematian)  dan digunakan  untuk menghitung  LC 50 dengan  Program  Analisis Probit Finney. LC 50 lebih besar dari 1000 ppm dianggap tidak aktif (Hairani et al. 2012).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengamatan akan dianalisis secara desktipif dan ditampilkan secara  tabulasi  dan  grafik  pada  pengujian fitokimia  dan  Antibakteri.  sedangkan  analisis regresi  akan  digunakan  pada  pengujian Toksisitas dan Antioksidan di tampilkan dalam kurva regresi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi
Metode  ektraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  maserasi  dengan menggunakan  larutan  polar  metanol.  Hasil ekstraksi  dari  sample  tumbuhan  katuk  hutan melalui maserasi menggunalan pelarut diperoleh nilai MF sebesar 0,87. Nilai moisture factor  merupakan  koreksi  berat  sampel berdasarkan  nilai  kadar  air  dari  sampel. Berdasarkan  tabel  3.  diperoleh  hasil  berat ekstrak  kental  sebesar  136,26  gram  dengan rendemen  yang  diperoleh  mencapai  27,06  %. Nilai rendemen menunjukan presentasi banyaknya  hasil  ekstrak  yang  diperoleh  dari proses  maserasi.  Nilai  rendemen  berfungsi untuk  menduga  berapa  banayak  sampel  yang diperlukan  untuk  menghasilkan  hasil  ekstraksi yang  ingin  diperoleh.  Menurut  Arifin  et  al. (2006),  maserasi  menggunakann  pelarut metanol  dinilai  lebih  menguntungkan  karena sifat metanol yang mudah melarutkan senyawa- senyawa yang bersifat nonpolar, semi-polar dan polar. Nilai rendemen merupakan perbandingan jumlah  hasil  estraksi  tanaman.  Semakin  tinggi nilai  rendemen  yang  dihasilkan  menandakan nilai ekstraksi yang dihasilkan semakin banyak.

## Analisis Fitokimia
Analisis  Fitokimia  telah  dilakukan  terhadap jenis  tumbuhan  katuk  hutan  ( P.  reticulatus ) dengan menggunakan pelarut methanol sebagai pelarut  nonpolar.  Hasil  pengujian  disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 1 . Hasil Pengujian fitokimia ekstrak metanol katuk hutan Nama latin Bagian tumbuhan Alk Fla Tri Tan Sap Ste Phylanthus reticulatus Daun + + + - - -
Ket: Alk (Alkaloid); Fla (flavonoid); Tri (Triterpenoid); Tan (Tanin); Sap (Saponin); Ste ( Steroid).
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
Gambar 2 . Hasil pengujian fitokimia ekstrak methanol daun P. reticulatus
Metabolit  sekunder  adalah  senyawa  kimia yang  umumnya  mempunyai  kemampuan bioaktivitas  dan  berfungsi  sebagai  pelindung tumbuhan  tersebut  dari  gangguan,  misalnya gangguan  hama.  Senyawa  metabolit  sekunder telah  banyak  digunakan  sebagai  zat  warna, racun,  aroma  makanan,  obat-obatan  dan sebagainya.  Banyak  jenis  tumbuh-tumbuhan yang  digunakan  obat-obatan  yang  dikenal sebagai  obat  tradisional  sehingga  diperlukan penelitian tentang penggunaan tumbuh- tumbuhan  berkhasiat  dan  mengetahui  senyawa kimia yang berfungsi sebagai obat. Identifikasi kandungan  metabolit  sekunder  merupakan langkah  awal  yang  penting  dalam  penelitian pencarian  senyawa  bioaktif  baru  dari  bahan alam yang dapat menjadi bagian untuk sintesis obat  baru  atau  bahan  utama  obat  tertentu (Rasyid 2012).
Alkaloid  dinyatakan  positif  alkaloid  apabila larutan  ekstrak  terbentuk  endapan  setelah
penambahan  amonia  NH 3- pekat,  asam  sulfat 2N  (H 2 SO 4 2N)  serta  penambahan  larutan pereaksi  meyer  ataupun  pereaksi  dragendrof. Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  sample katuk  hutan  positif  memiliki  kandungan alkaloid.
Ningrum  dkk.  (2016)  mengatakan  bahwa senyawa  alkloid  merupakan  senyawa  organik terbanyak  ditemukan  di  alam.  Hampir  seluruh alkaloid  berasal  dari  tumbuhan  dan  ditemukan dalam  berbagai  bagian  tanaman.  Menurut Aniszewki (2007), alkaloid merupakan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba, yaitu menghambat esterase dan juga  DNA  dan RNA  polimerase,  juga  menghambat  respirasi sel  dan  berperan  dalam  interaksi  DNA.  Selain itu,  alkaloid  adalah  senyawa  kimia  organik yang  mengandung  nitrogen  heterosiklik  dan kebanyakan dari senyawa  ini bersifat toksik/beracun  serta  tidak  memiliki  bau  yang sedap.  Alkaloid  dapat  meningkatkan  serapan
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
nutrisi  dan  melancarkan  peredaran  darah, mengurangi rasa sakit dan menstimulasi sistem syaraf. Senyawa alkaloid juga dapat digunakan sebagai anti bakteri dan anti jamur (Rizwana et al. 2010).
Pengujian  flavonoid  pada  jenis  tumbuhan katuk  hutan  menunjukan  hasil  positif  pada tumbuhan  katuk  hutan  .  Flavonoid  merupakan grup fenolik yang tersebar secara luas didalam tumbuhan,  berpotensi  dan  memiliki  aktivitas anti-kanker  yang  tinggi.  Flavonoid  juga  telah terbukti diketahui sebagai senyawa dengan efek farmakologi  yang  cukup  tinggi  misalnnya sebagai antibakteri, antioksidan, anti-inflanmasi dan  anti-jamur  pada  salah  satu  metabolit sekundernya (Mbadianya et al. 2013;  Rahimah et  al.  2013).  Manfaat  lain  dari  flavonid  antara lain adalah melindungi sel, memiliki hubungan sinergis  dengan  vitamin  C  (meningkatkan efektivitas  vitamin  C),  mencegah  keropos tulang,  dan  sebagai  antibiotik  (Subroto  dan Saputro  2008).  Selain  itu,  flavonoid  juga dilaporkan  berperan  dalam  pencegahan  dan pengobatan  beberapa  penyakit  lain  seperti asma, katarak, diabetes, encok/rematik, migrain,  wasir,  dan  periodontitis  (radang jaringan  ikat  penyangga  akar  gigi).  Penelitian- penelitian  mutakhir  telah  mengungkap  fungsi- fungsi  lain  dari  flavonoid,  tidak  saja  untuk pencegahan,  tetapi  juga  untuk  pengobatan kanker (Subroto dan Saputro 2008).
Sampel  uji  dinyatakan  positif  mengandung tanin  apabila  reaksi  yang  terjadi  akibat penambahan  5  tetes  pereaksi  FeCl 3 10% (Harborne  1987).  Pada  ekstrak  kental  katuk hutan membentuk warna hijau. Hasil pengujian senywa tannin memberikan hasil negatif hal ini disebabkan  karena  tidak  terlihat  reaksi pembentukan  warna  hijau  pada  sampel  yang ditetesi  pereaksi  FeCl 3 10%.  Tanin  secara umum didefinisikan sebagai senyawa polifenol yang  memiliki  berat  molekul  cukup  tinggi (lebih  dari  1000)  dan  dapat  membentuk senyawa kompleks dengan protein.
Berdasarkan  strukturnya,  tanin  dibedakan menjadi  dua  kelas  yaitu  tanin  terkondensasi ( condensed  tannins )  dan  tanin  terhidrolisiskan ( hydrolysable  tannins )  (Hagerman  et  al.  1992 dalam Subroto  dan  Saputro  2008).  Disebutkan dalam  Harbone  (1987)  bahwa  tanin  terdapat luas  dalam  tumbuhan  berpembuluh,  sedangkan dalam  angiospermae  terdapat  dalam  jaringan kayu.  Tanin  berfungsi  sebagai  penghambat mikroba  (antimikroba).  Selain  itu  tanin  juga berperan  sebagai  bahan  perekat  kayu, penyamak  kulit,  pengawet  telur  mentah, sebagai  bahan  pewarna  alami.  Tanin  juga berfungsi untuk mengobati diare, menghentikan pendarahan  dan  mengobati  ambeien  (Subroto dan Saputro 2008).
Saponin dinyatakan positif apabila menghasilkan  buih  atau  busa  pada  pemanasan menggunakan aquades. Pada pengujian saponin,  menunjukan  Negatif  mengandung senyawa  saponin  pada  tanaman  katuk  hutan. Padmasari  et  al.  (2013)  menyebutkan  saponin merupakan  metabolit  sekunder  yang  sangat familiar untuk proses glikolisis dan merupakan senyawa aktif permukaan  yang dapat menimbulkan busa jika dikocok dalam air. Hal tersebut terjadi karena saponin memiliki gugus polar  dan  non  polar  yang  akan  membentuk misel.  Pada  saat  misel  terbentuk  maka  gugus polar  akan  menghadap  keluar  dan  gugus  polar akan  mengahdap  kedalam.  Keadaan  ini  yang akan tampak seperti busa. Selain itu juga karena gugus  polar  menghadap  keluar,  hal  ini menyebabkan  senyawa  saponin  mudah  di ekstraksi  di  pelarut  yang  bersifat  polar  seperti etanol.  Rizwana  et  al.  (2010)  juga  melaporkan bahwa senyawa ini dipercaya dapat mengkontrol  kolestrol  pada  proses  diet,  dan juga digunakan sebagai obat beberapa penyakit kuli  (seperti  ruam).  Saponin  juga  bisa digunakan  sebagai  anti  inflamasi  serta digunakan  untuk  proses  penyembuhan  pada penyakit  tuberkolosis.  Selain  itu  saponin  juga
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
dapat  digunakan  dalam  pengobatan  sebagai bahan baku untul sintesa hormone steroid.
Hasil  pengujian  triterpenoid  dan  steroid ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  atau adanya  perubahan  warna.  Apabila  terlihat warna  merah  dan  ungu  maka  uji  dinyatakan positif  untuk  senyawa  triterpenoid  dan  apabila terlihat  warna  hijau  dan  biru  maka  dinyatakan positif  adanya  steroid.  Senyawa  triterpenoid positif terkandung dalam hasil ekstrak metanol daun P. reticulatus . Sedangkan senyawa steroid negatif terkandung dalam hasil ekstrak metanol dari  daun  katuk  hutan.  Senyawa  triterpenoid biasanya mudah diisolasi jika terbentuk minyak atsiri.  Hal  ini  sejalan  dengan  pendapat  Lenny (2006)  yang  menyebutkan  bahwa  triterpenoid adalah  komponen-komponen  tumbuhan  yang mempunyai  bau  dan  dapat  diisolasi  dari  bahan nabati  dengan  penyulingan  disebut  minyak atsiri.
Mbadianya  et  al.  (2013)  melaporkan  bahwa steroid adalah senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri  dan  merupakan  senyawa  yang memiliki  peranan  penting  dalam  perkebangan hormon.  Steroid  juga  sebagai  bahan  baku
pembuatan  pil  kontraseptik.  Steroid  anabolik dapat  mengakibatkan  sejumlah  efek  samping yang  berbahaya  seperti  menurunkan  rasio lipoprotein  densitas  tinggi,  yang  berguna  bagi jantung,  stimulasi  tumor  prostar,  kelainan koagulasi  dan  gangguan  hati,  kebotakan  dan tumbuhnya jerawat (Lenny 2006).

## Pengujian Antioksidan
Dalam pengujian antioksidan masing-masing ektrak  digunakan  spektrofotometer  UV-Vis untuk  melihat  serapan  DPPH  (1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl )  pada  panjang  gelombang  514 nm.DPPH  merupakan  suatu  senyawa  radikal bebas  yang  stabil  dan  dalam  penggunaannya sebagai pereaksi dalam uji penangkapan radikal bebas. Pengujian yang dilakukan menggunakan ascorbic  acid  (vitamin  C)  sebagai  kontrol positif.  Pengujian  antioksidan  menggunakan ekstrak  metanol  daun  katuk  hutan  dengan konsentrasi  berturut-turut  adalah  100  ppm,  50 ppm  dan  25  ppm.  Adapun  hasil  dari  masing- masing  pengujian  yang  telah  dilakukan  dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 3 . Grafik aktivitas estrak metanol terhadap DPPH (%)
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
Gambar  3.  menunjukan  hasil  pengujian antioksidan  dari  tanaman  katuk  hutan  ekstrak metanol  pada  konsentrasi  100,  50  dan  25  ppm dengan  menggunakan  kontrol  positif  (vitamin C). Hasil yang didapatkan menunjukkan bahwa
nilai aktivitas tertinggi ekstrak dau katuk hutan dalam menghambat DPPH mencapai 89%. Pada konsentrasi  50  dan  25  ppm  aktivitas menghambat mencapai 81% dan 78%.

## Gambar 4 . Kurva regresi linier aktivitas antioksidan ekstrak daun katuk hutan
Perhitungan  EC 50 dilakukan  dengan  cara meninterpolasikan  persen  perendaman  (50%) kedalam kurva hubungan konsentrasi larutn uji dengan  persen  Aktivitas  penghambatan  DPPH. Dari  gambar  10  diperoleh  persamaan  garis regresi  Y  =  0,0015X  +  0,746.  Berdasarkan persamaan  data  di  atas  maka  aktivitas penghambatan  DPPH  dipengaruhi  oleh  0,0015 dari  konsentrasi  ekstrak  daun  katuk  hutan ditambah faktor koreksi sebesar 0,746. Dengan demikin  dapat  diketahui  nilai  EC 50 dengan memasukkan  nilai  50  sebagai  sumbu  Y, sehingga  dapat  diperoleh  berapa  besar  nilai  X yang  akan  merepresentasikan  besaran  EC 50 yaitu  37,88  ppm.  Berdasarkan  tabel  1. Klasivikasi  Aktivitas  Antioksidan  berdasarkan EC 50. Oleh  karena  itu  dapat  dikatakan  bahwa senyawa antioksidan dalam sampelekstrak daun katuk  hutan  diatas    memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Berdasarkan  hasil  penelitian  Arry  dkk. (2011) nilai EC 50 ekstrak kulit manggis sebesar 11,0825  ppm.  Ekstrak  kulit  manggis  diketahui memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat kuat. Jika dibandingkan dengan nilai EC 50 Yang dimiliki  ekstrak  daun  Katuk  hutan  keduanya berada  dibawah  50  ppm  yang  termasuk  dalam kelas  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat. Oleh karena itu katuk hutan dapat dimanfaatkan sebagai senyawa antioksidan alami.
Gambar 3. memperlihatkan grafik peredaman  DPPH  yang  di  ujikan  pada  ekstrak metanol  tanaman  katuk  hutan  dengan konsentrasi  100,  50  dan  25  ppm,  aktivitas peredaman  DPPH  dari  tanaman  katuk  hutan sebesar  88%,  81%  dan  79%.  Tanaman  katuk hutan P.  reticulatus dimanfaatkan  oleh masyarakat papua sebagai obat-obatan tradisional.  Pada  pengujian  fitokimia, P. reticulatus memiliki  kandungan  alkaloid, flavanoid, dan terpenoid.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk Senyawa flavonoid berperan sebagai penangkap  radikal  bebas.  Flavonoid  mampu bertindak  sebagai  antioksidan  dan  berfungsi menetralisir  radikal  bebas  dengan  demikian meminimalkan  efek  kerusakan  pada  sel  dan jaringan  tubuh.  Radikal  bebas  adalah  molekul yang sangat reaktif dan tidak stabil akibat telah kehilangan  elektron.  Untuk  menstabilkan  diri, radikal  bebas  memerlukan  electron  dan  untuk mencapai  tujuan  ini  kemudian  mengoksidasi sel-sel sehat pada tubuh sehingga menyebabkan kerusakan.  Radikal  bebas  terutama  diproduksi sebagai produk samping dalam berbagai proses biokimia  dalam  tubuh.  Flavonoid  sebagai antioksidan membantu menetralisir dan menstabilkan  radikal  bebas  sehingga  tidak  lagi merusak  sel-sel  dan  jaringan  sehat.  Flavonoid memberi  perlindungan  terhadap  sejumlah penyakit  termasuk  kanker,  penyakit  jantung, diabetes, tumor dan lainlain.
Flavonoid juga  membantu mencegah aterosklerosis  atau  penyakit  yang  ditandai dengan  pengendapan  lemak  dalam  dinding arteri.  Deposisi  tersebut  mempersempit  arteri dengan  demikian  menghambat  aliran  darah keorgan-organ  vital  tubuh  seperti  jantung  dan otak.  Antioksidan  dapat  menurunkan  resiko arthritis, osteoporosis, alergi dan penyakit virus. Flavonoid  mampu  menekan  penggumpalan trombosit  yang  berhubungan  dengan  penyakit seperti aterosklerosis dan pembentukan trombosit akut trombus.
Senyawa  Alkaloid  juga  dapat  berperan dalam menyembuhkan kanker. Kanker merupakan  penyakit  yang  disebabkan  akibat kerusakan  sel-sel  jaringan.  Kerusakan  sel-sel jaringan  disebabkan  oleh  produksi  radikal bebas yang berlebihan dan produksi antioksidan yang  tidak  memadai.  golongan  alkaloid  yang berperan  dalam  menyembukan  kanker  antarai lain adalah vicristin dan vinblastin.
Triterpenoid  dapat  merevitalisasi  pembuluh darah  sehingga  predaran  darah  keotak  menjadi lancar,  memberikan  efek  menenangkan  dan
meningkatkan  fungsi  mental  menjadi  yang lebih  baik.  Menurut  Sukadana  dkk.  (2008) dalam laporannya mengatakan bahwa kandungan  triterpenoid  limonen,  terbukti efektif  untuk  mengatasi  kanker  payudara, kanker  liver,  kanker  paru  dan  juga  leukimia. Terpenoid  lainnya,  betakaroten,  membantu merangsang kelenjar thymus untuk memproduksi lebih banyak sel limfosit T yang dapat  langsung  menghancurkan  sel  kanker. Sedang  asam  ursolat  yang  juga  golongan triterpenoid  dapat  mencegah  pertumbuhan  sel abnormal  (kanker)  sekaligus  menyuruh  sel kanker  yang  sudah  ada  untuk  mematikan dirinya sendiri.

## Pengujian Antibakteri
Pengujian
aktivitas antimiokroba menggunakan  metode  difusi  berdasarkan Elkhair  et  al.  (2010),  yang  sudah  dimodifikasi dengan  menggunakan  aseton  sebagai  kontrol negatif (-) dan chloramphenicol sebagai kontrol (+).  Sampel  ditimbang  5  mg,  dan  kemudian dilarutkan  kedalam  1  ml  etanol  40%  sebagai larutan  stok.  Sebanyak  50  μl  sampel dimasukkan  kedalam microplate 96 wells , kemudian  konsentrasi  diturunkan  hingga mendapat  konsentrasi  akhir  sebesar  50,  125, 250  dan  500  μg/well.  Setelah  itu  masukkan media  agar  dan  larutan  bakteri  yang  telah disuspensi  dengan  akuades  sebanyak  100  dan 50 μl.
Sampel diuji terhadap bakteri Propionibacterium acnes , Streptoccocus mutans , Streptoccocus
sobrinus , dan Escherichia  coli .  Warna  merah  menunjukkan adanya  aktivitas  bakteri  yang  masih  hidup setelah  penambahan Triphrnyl  Tetrazolium Chloride 50 μl 1 jam sebelum proses inkhubasi selesai.  Kemudian masukkan  kedalam  media padat  pada  cawan  petri  dengan  menggunakan metode streak  plate .  Inkhubasi  dilakukan selama  sehari  1  ×  24  jam  untuk  mengetahui tumbuh tidaknya bakteri (presentasi
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
penghambatan  zona  bening)  disajikan  dalam
tabel 2, 3, 4 dan 5 berikut:
Tabel 2 . Aktivitas antibakteri ekstrak katuk hutan terhadap Propionibacterium acnes Sampel Aktivitas antibakteri pada berbagai konsentrasi (μg/well) 50 125 250 500 mm % ZN mm % ZN mm  % ZN mm  % ZN Aseton (-) 0.00 Chloramphenicol (+) 100 Katuk hutan 0 0 0 0 0 0 0 0
Ket : % ZN= Persentase penghambatan zona bening
Tabel 3 . Aktivitas antibakteri ekstrak katuk hutan terhadap Streptoccocus mutans Sampel Aktivitas Antibakteri pada berbagai konsentrasi (μg/well) 50 125 250 500 mm % ZN mm  % ZN mm  % ZN mm  % ZN Aseton (-) 0.00 Chloramphenicol (+) 100 Katuk hutan 0 0 0 0 0 0 0 0
Ket : % ZN= Persentase penghambatan zona bening
Tabel 4 . Aktivitas antibakteri ekstrak katuk hutan terhadap Streptoccocus sobrinus Sampel Aktivitas Antibakteri pada berbagai konsentrasi (μg/well) 50 125 250 500 mm % ZN mm  % ZN mm  % ZN mm  % ZN Aseton (-) 0.00 Chloramphenicol (+) 100 Katuk hutan 0 0 0 0 0 0 0 0
Ket : % ZN= Persentase penghambatan zona bening
Tabel 5 . Aktivitas antibakteri ekstrak katuk hutan terhadap Escherichia coli Sampel Aktivitas Antibakteri pada berbagai konsentrasi (μg/well) 50 125 250 500 mm % ZN mm  % ZN mm  % ZN mm  % ZN Aseton (-) 0.00 Chloramphenicol (+) 100 Katuk hutan 0 0 0 0 0 0 0 0
Ket : % ZN= Persentase penghambatan zona bening
Pemberian  antibakteri  dalam  jumlah  yang berlebihan  dan  secara  terus  –  menerus  akan menyebabkan  sel  bakteri  menjadi  resisten. Pengujian  yang  dilakukan  untuk  mengetahui nilai  konsentrasi  hambat  minimum  dari  suatu sampel  uji  antibakteri  sangat  penting  karena
selain bertujuan untuk meningkatkan efektifitas dari senyawa antibakteri tersebut juga bertujuan untuk  mencegah  timbulnya  masalah  resistensi bakteri  karena  penggunaan  dosis  yang berlebihan  sehingga  sel  bakteri  lama  kelamaan akan menjadi kebal.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
Tabel  2,  3,  4  dan  5  di  atas  menunjukkan hasil yang diperoleh pada pengujian antibakteri dengan menggunakan ekstrak daun katuk yang diujikan pada terhadap bakteri Propionibacterium acnes , Streptoccocus mutans , Streptoccocus
sobrinus , dan Escherichia  coli memberikan  hasil  negatif. Dilihat dari persentase penghambat zona bening tanaman  katuk  hutan  tidak  memberikan  daya hambat terhadap perkembangan bakteri
Propionibacterium
acnes , Streptoccocus mutans , Streptoccocus  sobrinus ,  ataupun Candida  albicans pada  konsentrasi  50,  125, 250  dan  500  μg/well.  Jika  diklasifikasikan penghambat  bakteri  ekstrak  daun  katuk  hutan masuk  dalam  kelas  tidak  ada  aktivitas.  Hasil positif mengandung antibakteri ditunjukan pada control positif yang menggunakan chloramphenicol  presentase  penghambat  zona bening  memberikan  daya  hambat  maksimum hingga 100% pada konsentrasi 50, 125, 250 dan 500  μg/well.  Berdasarkan  tabel  uji  antibakteri tanaman  katuk  hutan  tidak  memiliki  daya menghambat  ataupun  membunuh  bakteri.  Hal ini  terkait  dengan  hasil  pengujian  fitokimia
dimana  ekstrak  daun  katuk  hutan  tidak mengandung  senyawa  saponin.  Sedangkan beberapa  golongan  senyawa  saponin  dapat bekerja sebagai antimikroba.

## Pengujian Toksisitas
Brine  Shrimp  Lethality  Test (BST)  adalah salah  satu  metode  skrining  untuk  menentukan toksisitas  suatu  senyawa  atau  ekstrak  secara akut dengan menggunakan hewan coba Artemia salina . Pada pengujian ini dimodifikasi dengan mengganti  hewan  uji  larva Arternia  salina menggunakan  larva  ikan  mas  ( Cyprinus carpio ).  Daya  toksisitas  suatu  senyawa  dapat diketahui dengan  menghitung jumlah kematian hewan uji dengan parameter lethal concentration 50  (LC 50 ).  Suatu  ekstrak dinyatakan bersifat toksik menurut metode BST ini jika memiliki LC 50 kurang dari 1000 μg/ml. Jika hasil uji BST menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan bersifat toksik maka dapat dikembangkan  ke  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengisolasi  senyawa  sitotoksik  tumbuhan sebagai  usaha  pengembangan  obat  alternatif anti kanker.
Gambar  11.  kurva  regresi  linier  uji  tokisitas  katuk  hutan  ekstrak  methanol  terhadap  kematian  larva Cyprinus carpio
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
Berdasarkan  hasil  pengujian  toksisitas ekstrak  methanol  katuk  hutan  dapat  dilihat bahwa pada konsentrasi 1000 μg/ml memberikan persentase kematian sebesar 22 %. Oleh  karena  itu  dapat  dikatakan  bahwa kandungan komponen bioaktif yang terkandung pada  ekstrak  methanol  katuk  hutan  tidak memiliki daya racun yang berpotensi merusak. Berdasarkan  hasil  pengujian  nilai  LC 50 dapat diperoleh dari persaman regresi Y = 0.0002X + 0.0189.  Berdasarkan  persamaan  regresi  yang diperoleh  maka  presentasi  tingkat  kematian hewan  uji  dipengaruhi  oleh  0,0002  dari konsentrasi  ekstrak  daun  katuk  hutan  dan ditambahkan  dengan  faktor  koreksi  sebesar 0,0189.  Maka  dengan  demikian  nilai  dosis konsentrasi  yang  mematikan  50%  oraganisme uji atau nilai LC 50 dari  ekstrak methanol katuk hutan  mencapai  2402,748  μg/ml.  Berdasarkan (Meyer et al. 1982 dalam Soemirat 2003) suatu senyawa  uji  dikatakan  bersifat  toksik  dan berpotensi  sebagai  kandidat  antikanker  pada pegujian Brine Shrimp Lethality Tes (BST) jika memiliki  nilai  LC 50-24  jam lebih  kecil  dari  1000 μg/ml.  Hasil  perhitungan  pada  penelitian  ini diperoleh  nilai  LC 50-24  jam mencapai  2402,748 μg/ml lebih besar dari 1000 μg/ml. berdasarkan nilai  LC 50 yang  diperoleh  ekstrak  katuk  hutan tidak  bersifat  toksit.  namun  diduga  hasil pengujian  yang  diperoleh  tidak  akurat.  Hal  ini dikarenakan  standar  pengujian Brine  Shrimp Lethality  Test (BST)  menggunakan  hewan  uji coba berupa larva Artemia salina (larva udang) sedangkan  pengujian  ini,  hewan  uji  yang digunakan  telah  dimodifikasi  menggunakan larva Cyprinus  carpio (larva  ikan  mas).  Maka untuk memperoleh hasil yang lebih akurat perlu dilakukan pengujian kembali mengunakan larva Artemia salina .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  Hasil  peenelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  rendemen ekstraksi  metanol  daun  katuk  hutan  sebesar
27,06  %  dimana  hasil  pengujian  fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak methanol daun P. reticulatus positif  mengandung  senyawa alkaloid,  flavonoid  dan  triterpenoid.  Selain  itu dari  hasil  pengujian  antioksidan  dengan konsentrasi  25,  50  dan  100  ppm  pada  ekstrak methanol  daun P.  reticulatus memiliki  daya hambat yang cukup tinggi mencapai 78%, 81% dan  89%.  Hasil  pengujian  ekstrak  methanol daun P. reticulatus terhadap bakteri P. acnes , S. mutans , S.  sobrinus ,  dan E.  coli menunjukkan hasil negative menghambat zona perkembangan dari  ke  empat  bakteri  yang  digunakan. Selanjutnya  berdasarkan  hasil  pengujian toksisitas  ekstrak  methanol  daun P. reticulatus dengan  metode  BST  diperoleh  nilai  LC 50 mencapai 2402,748 μg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Agromedia.  2008.  Buku  pintar  tanaman  obat. Jakarta: PT. Agromedia Pustaka. Aniszewki, T. 2007. Alkaloid-ecrets of life, Elsevier, Amsterdam, pp.187.
Arifin,  Helmi,  Aggraini,  Nelvi,  Handyani, Dian,  Rasyid,  Roslinda.  2006.  Standarisasi ekstrak  etanol  daun Eugenia  cumini Merr.J. Sains Tek.Far. 11 (2).
Arry  YIP,  Miryanti  dkk.  2011.  Ekstraksi antioksidan  dari  kulit  buah  manggis ( Garcinia  mangostana  L. ),  Universitas Katolik Parahyangan Bandung.
Elkhair  EA,  Fadda  H,  Mohsen  UA.  2010. Antibacterial  activity  and  phytochemical analysis  of  Ssome  medicinal  plants  from Gaza  Strip-  Palestine.  Journal  of  Al  Azhar University.
Forest  Watch  Indonesia,  2015.Nasib  hutan Indonesia. Forest Watch Indonesia. Bogor. Harborne  JB.  1987.  Metode  fitokimia.
Terjemahan: Padmawinata, K dan Soediro, I. Institut Teknologi Bandung, Bandung. Joyeux  M,  Mortier  F,  Fleurentin  J.  1995.
Screening  of  antiradical, antilipoperoxidant and  hepatoprotective  effects  of  nine  plant
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 6 (1) : 47 - 61 (2020)
Rachim,  dkk
extracts  used  in  Caribbean  folk  medicine.
Phytotherapy Research. 9(3): 228-230. DOI:
https://doi.org/10.1002/ptr.2650090316
Keputusan Mentri Kesehatan Republik Indonesia Nomor : 381/Menkes/SK/III/2007. Kebijakan  obat  tradisional  nasional  tahun 2007.  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Tanggal 27 Maret 2007.
Kurdi A. 2010. Tanaman herbal Indonesia; cara mengelolah dan manfaatnya bagi kesehatan.
Hairani,  Rita,  Enih  R,  Kuspradini  H.  2012.
Phytochemical  screening  and  brine  shrimp lethality test of extract from avicennia lanata ridley  leaves  .  Proceeding  the  International Symposium  on  Human  Development  and Sustainable Utilization of Natural Resources in  Asian  Cauntries  and  The  6 th Korea- Thailand-Indonesia  Joint  Symposium  on Biomass Utilization and Renewable Energy, Balikpapan-Derawan Island. Lenny  S.  2016.  Senyawa  terpenoida  dan steroida. Karya Ilmiah. Fakultas Matematika dan  Ilmu  pengetahuan  Alam  Universitas Sumatra Utara.
Mbadiyana  JI,  Echezona  BC,  Ugwuoke  KI,
Wokocha RC. 2013. Phytochemical constituens  of  some  medical  plants. International  Jurnal  of  Science  and
Research. Vol. 2 (4): 18-22.
Ningrum  R,  Purwanti  E,  Sukarsono.  2016.
Identifikasi  senyawa  alkaloid  dari  batang karamunting ( Rhodomyrtus tomentosa ) sebagai bahan ajar biologi untuk SMA kelas X.  Jurnal  Pendidikan  Biologi  Indonesia. 2(3): 231-236.
Padmasari  PD,  Astuti  KW,  Warditani  NK.
2013.  Skining  fitokimia  ekstrak  etanol  70% rimpang  bangle  zigiber  purpureum  Roxb. Jurnal Farmasi Udayana.
Prolab Diagnostics. 2012. McFarland standards. Product  Code  SD2350,  SD2300,  SD2301, SD2302, SD2303, SD2304.
Rahimah,  Sayekti  E,  Jayuska  A.  2013. Karakterisasi  senyawa flavonoid  hasil  isolat dari  fraksi  etil  aset6at  daun  matoa Pometia pinnata J. R. Frost & G. Forst. JKK. Vil. 2 (2): 84-89.
Rasyid A. 2012. Identifikasi senyawa metabolit sekunder  serta  uji  aktivitas  antibakteri  dan antioksidan ekstrak metanol teripang stichopus  hermani.  Jurnal  Ilmu  dan Teknologi  Kelautan  Tropis.  Vol  4  (2):360  - 365.
Rizwana  J.N,  Nazlina  I,  Razehar  ARM, Noraziah  AZS,  Ling  CY,  Muzaimah  SAS, Farina  AH,  Yaacob  WA,  Ahmad  IB,  Din LB.  2009.  A  survey  on  phytochemical  and bioactivity of plant extracts from Malaysian Forest Reserves. Journal of Medicinal Plants Reserch. Vol 4 (3): 203-210.
Shimizu  Y,  Inoue  A,  Tomari  Y,  Suzuki  T, Yokogawa  K,  Nishikawa  K,  Ueda  T.  Cell- free  translation  reconstitute  with  purified components. Nature Biotechnology. 19: 751- 755. DOI: 10.1038/90802
Soemirat J. 2003. Toksikologi lingkungan. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta. Subroto A, Saputro H. 2008. Gempur penyakit dengan  sarang  semut.  www..deherba.com (19 Juni 2016).
Sukadana  I,  Santi  SR,  Juliarti  NK.  2008. Aktivitas  antibakteri  senyawa  golongan triterpenoid dari biji papaya ( Carica papaya L). Jurnal Kimia. 2(1): 15-18.
Tihel  T.  1999.  Science  in  the  real  world. Microbes  in  Action.  Departement  of Biology,  University  of  Missouri.  St.  Louis.