EFEK ANTIPIRETIK EKSTRAK JERUK NIPIS (Fructus Citrus aurantifolium) PADA MENCIT (Mus musculus)
Nur Syamsi 1* , Angelia Andilolo 2
1 Bagian Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tadulako
2 Dokter Umum Rumah Sakit Elim, Rantepao
*E-mail :nursyamsiyusuf@gmail.com

## ABSTRAK
Demam ditandai dengan kenaikan suhu tubuh di atas suhu tubuh normal yaitu 36-37 o C. Demam menempati urutan kedua dari gejala yang sering dikeluhkan masyarakat setelah nyeri. Masyarakat umum, telah lama mengenal bahan tradisional yang  digunakan  untuk  menurunkan  demam.  Salah  satu  jenis  bahan  tradisional  yang  sering  digunakan  sebagai  pereda demam  adalah  jeruk  nipis.  Tanaman  jeruk  nipis  berpotensi  sebagai  antipiretik  dikarenakan  mengandung  flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya efek antipiretik ekstrak  jeruk nipis ( Fructus Citrus aurantifolia ) pada mencit ( Mus musculus ) yang telah diinduksi demam dengan penyuntikan vaksin DPT-Hb. Penelitian ini bersifat true eksperimental  dengan  rancangan pre  test-post  test  with  control  group  design .  25  mencit  berumur  kurang  lebih  3  bulan dibagi dalam 5 kelompok  yaitu kelompok kontrol negatif (aquades), kelompok kontrol positif (parasetamol), kelompok dosis I (ekstrak jeruk nipis 1%), kelompok dosis II (ekstrak jeruk nipis 2%), dan kelompok dosis III (ekstrak jeruk nipis 4%).  Kelima  kelompok  ini  kemudian  diinduksi  demam  dengan  penyuntikan  Vaksin  DPT-Hb  0,2  cc  intramuskular. Pengukuran suhu dilakukan di awal penelitian 2 jam setelah induksi demam, dan setiap 15 menit berikutnya sampai menit ke-120 setelah perlakuan. Hasil dianalisis dengan uji one-way ANOVA dilanjutkan dengan uji post hoc . Hasil uji one-way ANOVA diperoleh nilai p = 0,001 yang artinya terdapat perbedaan penurunan suhu yang bermakna pada kelima kelompok perlakuan. Kemudian dari hasil uji post hoct dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan penurunan suhu yang bermakna antara kelompok kontrol positif dengan kelompok kontrol negatif (p = 0,000) dan kelompok dosis I (p = 0,002), kelompok dosis II dengan kelompok kontrol negatif (p = 0,001) dan kelompok dosis I (p = 0,038), dan kelompok dosis III dengan kelompok kontrol negatif (p = 0,000) dan kelompok dosis I (p = 0,013). Tidak terdapat perbedaan penurunan suhu yang bermakna antar kelompok kontrol positif dengan kelompok dosis II (p =  0,267) dan dosis III (p = 0,510). Ekstrak jeruk nipis  ( Fructus  Citrus  aurantifolia )  memiliki  efek  antipiretik  terhadap  mencit  ( Mus  musculus )  yang  diinduksi  demam menggunakan vaksin DPT-Hb.
Kata kunci: Antipiretik, jeruk nipis, flavonoid, prostaglandin

## ABSTRACT
Fever is characterized by an increase in body temperature above the normal body temperature of 36-37 o C. Fever ranks second  from  symptoms  that  people  often  complain  about  after  pain.  The  general  public,  has  long  known  traditional ingredients used to reduce fever. One type of traditional ingredient that is often used as a fever reliever is lime. Lime plants have the potential as an antipyretic because they contain flavonoids. This study aims to determine the presence or absence of antipyretic effects of lime extract (Fructus Citrus aurantifolia) on fever-induced mice (Mus musculus) by injecting the DPT-Hb  vaccine.  This  research  is  true  experimental  with  a  pre  test-post  test  with  control  group  design.  25  mice  of approximately  3  months  were  divided  into  5  groups  namely  negative  control  group  (aquades),  positive  control  group (paracetamol), dose group I (1% lime extract), dose II group (2% lime extract), and group dose III (4% lime extract). The five  groups  were  then  induced  by  fever  by  injecting  the  DPT-Hb  Vaccine  0.2  cc  intramuscularly.  Temperature measurements were carried out at the beginning of the study 2 hours after fever induction, and every 15 minutes until the 120th minute after treatment. The results were analyzed by one-way ANOVA test followed by post hoc test. The results of the one-way ANOVA test obtained p value = 0.001, which means that there were significant differences in the temperature decrease  in  the  five  treatment  groups.  Then  from  the  results  of  the  post  hoct  test  it  can  be  concluded  that  there  is  a significant difference in temperature decline between the positive control group and the negative control group (p = 0,000) and group I dose (p = 0.002), the dose II group with the negative control group (p = 0.001) and group I dose (p = 0.038), and  group  dose  III  with  negative  control  group  (p  =  0,000)  and  group  I  dose  (p  =  0.013).  There  was  no  significant difference in temperature reduction between the positive control group and the dose II group (p = 0.267) and the third dose (p = 0.510). Lime extract (Fructus Citrus aurantifolia) has an antipyretic effect on fever-induced mice (Mus musculus) using the DPT-Hb vaccine.
Key words: Antipyretic, lime, flavonoid, prostaglandine

## PENDAHULUAN
Demam adalah respons kompleks yang dihasilkan oleh kondisi inflamasi infeksius dan non-infeksius  dan  dimanifestasikan  terutama sebagai peningkatan suhu tubuh sekitar 1 – 4 °C [1] .  Proses  terjadinya  demam  dimulai  dari stimulasi sel-sel darah putih (monosit, limfosit, dan  neutrofil)  oleh  pirogen  eksogen  baik berupa  toksin,  mediator  inflamasi,  atau  reaksi imun.  Sel-sel  darah  putih  tersebut  akan mengeluarkan  zat  kimia  yang  dikenal  dengan pirogen endogen (IL-1, IL-6, TNF-α, dan IFN). Pirogen  eksogen  dan  pirogen  endogen  akan merangsang  endotelium  hipotalamus  untuk membentuk prostaglandin. Prostaglandin yang terbentuk kemudian akan meningkatkan patokan termostat dipusat termoregulasi hipotalamus.  Hipotalamus  akan  menganggap suhu sekarang lebih rendah dari  suhu patokan yang  baru  sehingga  ini  memicu  mekanisme- mekanisme untuk  meningkatkan panas seperti menggigil  akan  terjadi  peningkatan  produksi panas dan penurunan pengurangan panas yang pada  akhirnya  akan  menyebabkan  suhu  tubuh naik kepatokan yang baru tersebut [2-3] . Demam bermanfaat karena timbul dan menetap sebagai respon  terhadap  infeksi  dan  penyakit  lain. Namun,  jika  suhu  terlalu  tinggi,  akan berbahaya [4] .  Gejala  demam  dapat  diatasi dengan  obat  antipiretik.  Ketika  gejala  demam muncul,  umumnya  orang  akan  menggunakan parasetamol,  aspirin  dan  ibuprofen  untuk mencegah kenaikan suhu tubuh lebih lanjut [5] . Vaksin  DPT-Hb  mengandung  antigen  Difteri, Tetanus,  dan whole-cell Pertussis  ( DTwP ). Efek  samping  yang  sering  timbul  setelah pemberian vaksin ini adalah demam [6-7] .
Jeruk  nipis  adalah  buah  yang  dekat dengan kehidupan sehari-hari kita. Jeruk nipis sudah dikenal nenek moyang kita sejak berabad silam.  Jeruk  telah  lama  dikenal  sebagai  buah yang sangat kaya akan vitamin dan mineral [8] . Dalam kandungan 100 gr jeruk nipis, terdapat kalori  sebanyak  51  kalori;  protein  0,9;  lemak 0,2  gr;  karbohidrat  11,4  gr;  kalsium  33  mg;
fosfor 23 mg; besi 0,4 mg; hidrat arang 12,4 gr; vitamin  B10,04  mg;  mineral  0,5  gr;  air  86  gr dan  asam askorbat 49 mg [9] . Asam–asam lain yang juga terkandung di dalamnya adalah asam sitrat,  asam  amino  (triotifan,  lisin),  minyak atsiri (sitral, limonen, felandren, lemon kamfer, kadinen,  linali-asetat,  aktilaldehid,  nildehid, sitral), damar, glikosida, asam sitrum [10] . Jeruk nipis  juga  mengandung  senyawa  saponin  dan flavonoid  yaitu  hesperidin  (hesperetin  7- rutinosida), tangeretin, naringin, eriocitrin, dan eriocitrocide. Flavonoid yang dikandung jeruk nipis memiliki efek antipiretik [8] .

## METODE
Penelitian
ini bersifat true eksperimental  dengan  rancangan pre  test-post test  with  control  group  design, menggunakan 25  ekor  mencit  sehat,  berat  20-25  gram. Ekstrak  yang  digunakan  adalah  ekstrak  jeruk nipis  adalah  ekstrak  yang  dibuat  dengan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%, yang  merupakan  pelarut  sempurna  untuk flavonoid. Sebelum pengujian efek antipiretik, mencit  diadaptasikan  selama  6  hari  di  tempat percobaan.  Pada  hari  pengujian,  mencit dipuasakan  6  jam  sebelum  perlakuan.  Mencit kemudian  dibagi  menjadi  5  kelompok  secara acak,  masing-masing  kelompok  terdiri  atas  5 ekor. Temperatur rektal mencit diukur terlebih dahulu  untuk  mengetahui  temperatur  normal kemudian mencit diinduksi demam menggunakan vaksin DPT-Hb 0,2 cc intramuskular.  Untuk  mengetahui  berapa derajat  peningkatan  suhu  tubuh  setelah penyuntikan  vaksin,  maka  2  jam  setelah dilakukan  penyuntikan,  suhu  rektal  mencit diukur  lagi.  Perlakuan  untuk  masing-masing kelompok adalah sebagai berikut: kelompok 1 mendapat  1  ml  larutan  akuades  peroral, kelompok  2  mendapat  larutan  asetaminofen peroral dengan dosis 1,8 mg/20 gr, kelompok 3 mendapat  ekstrak    jeruk  nipis  dengan konsentrasi  dosis  1%,  kelompok  4  mendapat ekstrak  jeruk  nipis  dengan  konsentrasi  dosis
2%, kelompok 5 mendapat ekstrak  jeruk nipis dengan konsentrasi dosis 4%. Lima belas menit setelah  perlakuan,  suhu  rektal  diukur  lagi, sampai  percobaan  pada  menit  ke  120  dengan interval 15 menit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  pengukuran  suhu  rektal mencit  (tabel  1),  suhu  awal  pada  semua kelompok  tampak  relatif  sama.  Setelah dilakukan induksi demam dengan vaksin DPT- Hb,  suhu  meningkat  pada  setiap  kelompok. Terdapat perbedaan antara suhu sebelum injeksi dan setelah injeksi vaksin. Hal ini berarti vaksin bekerja  dengan  baik  dalam  menaikan  suhu
mencit.  Vaksin  DPT-Hb  digunakan  untuk menginduksi  demam  karena  vaksin  ini mengandung  antigen  Difteri,  Tetanus,  dan whole-cell Pertussis  ( DTwP ).  Unsur  pertusis dalam  vaksin  yang  berasal  dari  semua  kuman sel  ( whole  cell )  sering  menyebabkan  efek samping  berupa  demam  tinggi  atau  kejang. Bagian  pertusis  inilah  yang  berperan  sebagai bahan yang meningkatkan terbentuknya sitokin pirogen  seperti  interleukin-1 [6-7] .  Peningkatan interleukin-1 (IL-1) menginduksi pembentukan PGE2 di hipotalamus dan menaikkan set point termostat tubuh sehingga menimbulkan demam [4] .
Tabel 1. Hasil Pengukuran Suhu Rektal Rata-Rata Mencit Sebelum Dan Setelah Perlakuan
Kelompok Waktu Kontrol (-) Kontrol (+) Dosis I Dosis II Dosis III t a 37,02 36,40 36,26 36,14 36,16 t 0 38,46 38,32 38,48 38,44 38,50 t 15 38,3 38,22 38,72 38,22 38,26 t 30 38,70 37,88 38,58 38,10 37,98 t 45 38,62 37,96 38,35 37,90 38,04 t 60 38,62 37,40 38,36 37,84 37,9 t 75 38,88 37,42 38,18 37,60 37,58 t 90 38,56 37,28 38,06 37,82 37,26 t 105 38,50 36,96 37,86 37,20 37,00 t 120 38,46 36,50 37,74 37,02 36.,72
Keterangan:  Kontrol  (-)  :  Kelompok  kontrol negatif  (Aquadest  1  ml),  Kontrol  (+)  : Kelompok kontrol positif (Parasetamol 1,8 mg), Dosis I : Kelompok ekstrak jeruk nipis dosis I (1%), Dosis II : Kelompok ekstrak jeruk nipis dosis  II  (2%),  Dosis  III  :  Kelompok  ekstrak jeruk nipis dosis III (4%). t a : Pengukutan suhu
rektal sebelum penyuntikan vaksin DPT-Hb, t 0 : Pengukuran  suhu  rektal  2  jam  setelah penyuntikan vaksin DPT-Hb, t 15 -t 120 : Pengukuran  suhu  rektal  menit  ke-15  hingga menit ke-120 setiap 15 menit setelah perlakuan.
Berdasarkan  gambar  1,  pada  kelompok  yang diberikan  parasetamol  terjadi  penurunan  suhu rata-rata  setelah  perlakuan  dimulai  dari  menit ke-30  sampai  menit-ke-120.  Konsentrasi parasetamol  tertinggi  dlm  plasma  dicapai dalam  waktu  30  menit  dan  waktu  praruh plasma  antara  1-3  jam [5,  11] .  Kandungan asetaminofen pada parasetamol memiliki  efek antipiretik yang tinggi dibandingkan efek  analgesik  dan  antiinflamasinya dengan cara menghambat ezim siklooksigenase (COX).  Asetaminofen merupakan penghambat prostaglandin yang lemah dengan cara menghambat  COX-1  dan  COX-2  di  jaringan perifer.  Sifat  antipiretik  dari  asetaminofen dikarenakan efek langsung ke pusat pengaturan panas  di  hipotalamus  yang  mengakibatkan vasodilatasi perifer, berkeringat, dan pembuangan panas [5] .
Pada  kelompok  yang  diberikan  ekstrak jeruk nipis dosis  I, dosis II, dan dosis  III juga terjadi  penurunan  suhu  rata-rata  setelah perlakuan  dimulai  dari  menit  ke-30  sampai menit-ke-120.  Pada  kelompok  ekstrak  dosis  I terjadi  penurunan  suhu  rata-rata  setelah perlakuan  dari  menit  ke-30  dan  pada  menit seterusnya, namun penurunan suhu relatif kecil karena konsentrasinya kecil sehingga metabolit
sulit untuk menghambat pembentukan prostaglandin. Pada kelompok ekstrak dosis II dan  III,  penurunan  suhu  rata-rata  lebih  baik daripada dosis I, tapi pada menit ke-45 terjadi peningkatan  suhu  pada  kelompok  dosis  III karena  kemungkinan  terjadi  karena  pengaruh bias  yang  diakibatkan  oleh  faktor  psikologis seperti  stres  yang  dialami  mencit  akibat pengukuran  suhu  yang  berulang  pada  rektal, sensitivitas  terhadap  zat  yang  telah  diberikan, kondisi  lambung  mencit,  dan  juga  daya absorpsi  terhadap  obat.  Faktor  lain  seperti lingkungan,  keadaan  patologi  yang  dapat mengakibatkan  efek  obat  menjadi  menurun atau  meningkat,  dan  alat  yang  digunakan (pengaruh  baterai  dan  suhu  lingkungan) [12] . Jeruk nipis mengandung senyawa saponin dan flavonoid  yaitu  hesperidin  (hesperetin  7- rutinosida), tangeretin, naringin, eriocitrin, dan eriocitrocide.  Hesperidin  bermanfaat  untuk antiinflamasi,  antioksidan,  dan  menghambat sintesis  prostaglandin [8] .  Flavonoid  sebagai antipiretik  bekerja  seperti  aminobenzen  yaitu dengan  menghambat  enzim  siklooksigenase yang  berperan  dalam  metabolisme  asam arakidonat  menjadi  prostaglandin.  Pengham- batan  enzim  siklooksigenase  menyebabkan penurunan produksi prostaglandin sehingga set point termostat tubuh di hipotalamus
Gbr 1. Grafik rata-rata suhu rektal mencit pada beberapa titik waktu (Sumber : data primer) 34.5 35 35.5 36 36.5 37 37.5 38 38.5 39 39.5 AQUADEST PARASETAMOL DOSIS 1% DOSIS 2% DOSIS 4%
diturunkan  kembali  dan  demam  dapat  turun [2,13] .
Efek  flavonoid  terhadap  bermacam- macam  organisme  sangat  banyak  macamnya dan  dapat  menjelaskan  mengapa  tumbuhan yang  mengandung  flavonoid  dipakai  dalam pengobatan tradisional. Flavanoid mempunyai efek antipiretik karena kemampuannya dalam menghambat reaksi siklogsigenase yang dapat berpengaruh luas terhadap biosintesis prostaglandin  yang  merupakan  mediator pembentukan demam sehingga dapat menurunkan
demam. Prostaglandin berperan  penting    dalam  peningkatan hypothalamic therm set point. Mekanisme penghambatan  inilah  yang  menerangkan efek antipiretik dari flavonoid [11, 14] .
Tabel 2. Hasil uji post-hoc
Kelompok Kelompok Pembanding p Aquadest parasetamol 0,000 ekstrak 1% 0,164 ekstrak 2% 0,001 ekstrak 4% 0,000 Parasetamol aquadest ekstrak 1% ekstrak 2% ekstrak 4% 0,000 0,002 0,267 0,510 Dosis I aquadest 0,164 Parasetamol 0,002 ekstrak 2% ekstrak 4% 0,038 0,013 Dosis II aquadest parasetamol ekstrak 1% ekstrak 4% 0,001 0,267 0,038 0,648 Dosis III aquadest 0,000 Parasetamol 0,510 ekstrak 1% 0,013 ekstrak 2% 0,648
Data penurunan suhu kemudian dianalisis menggunakan  uji one-way  ANOVA untuk mengetahui  perbedaan  penurunan  suhu  antara kelima kelompok perlakuan dan diperoleh nilai p =  0,001  yang  artinya  terdapat  perbedaan penurunan  suhu  yang  bermakna  pada  kelima kelompok  perlakuan.  Untuk  mengetahui  letak
perbedaan bermakna (p<0,05) antara kelompok perlakuan maka dilanjutkan dengan uji post hoc. Dari  hasil  uji post  hoct (tabel  2)  dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan penurunan  suhu  yang  bermakna  antara kelompok  kontrol  positif  dengan  kelompok kontrol negatif (p = 0,000) dan kelompok dosis I  (p  =  0,002),  kelompok  dosis  II  dengan kelompok  kontrol  negatif  (p  =  0,001)  dan kelompok  dosis  I  (p  =  0,038),  dan  kelompok dosis III dengan kelompok kontrol negatif (p = 0,000) dan kelompok dosis  I (p =  0,013). Hal ini dikarenakan kelompok kontrol negatif tidak memiliki  aktivitas  antipiretik,  sedangkan jumlah  flavonoid  dalam  dosis  I  belum mencukupi untuk memberikan efek penurunan suhu  yang  lebih  signifikan.  Tidak  terdapat perbedaan  penurunan  suhu  yang  bermakna antar  kelompok  kontrol  positif  dengan kelompok dosis II (p = 0,267) dan dosis III (p =  0,510).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa efektivitas dosis II dan III sama dengan kontrol positif  (parasetamol).  Hasil  penelitian  ini senada  dengan  hasil  yang  didapatkan  Amila (2012)  bahwa  jeruk  nipis  memiliki  aktivitas antipiretik  yang  terlihat  dari  kenaikan  suhu yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  positif  walaupun  belum memberikan  perbedaan  penurunan  suhu  yang bermakna  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol positif [15] .

## KESIMPULAN
Ekstrak  jeruk  nipis (Citrus  aurantifolia  L.) memiliki efek antipiretik terhadap mencit (Mus musculus) yang telah diinduksi demam dengan penyuntikan vaksin DPT-Hb. Terdapat perbedaan  penurunan  suhu  yang  bermakna antara  parasetamol,  dosis  ekstrak  jeruk  nipis 2%,  dan  dosis  ekstrak  jeruk  nipis  4%  dengan kontrol  negatif  (aquades)  dan  dosis  ekstrak jeruk  nipis  1%.  Tidak  terdapat  perbedaan penurunan  suhu  bermakna  antara  parasetamol dengan dosis ekstrak jeruk nipis 2% serta dosis ekstrak jeruk nipis 4%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Saper  C.B.,  Breder  C.D.,  Flier  J.S., Underhill  L.H.  N Engl  J  Med  :  The neurologic  basis  of  fever,  1994; 330:1880–1886.
2. Sherwood,  L.  Fisiologi  Manusia  dari Sel  ke  Sistem  Edisi  9.  2018.  Jakarta  : EGC.
3. Dinarello C.A. and Gelfand J.A. Fever and hyperthermia. Harrisons principles of internal medicine. 2005;16(1):104.
4. Ganong, W.F.
Buku
Ajar Fisiologi Kedokteran  (Edisi 24). 2015. Jakarta : ECC.
5. Katzung,  B.G.,  Masters,  S.B.,  and Trevor  A.J.    Farmakologi  Dasar  dan Klinik Edisi 12. 2014.   Jakarta : EGC.
6. Cahyon,  S.B.,  Verawati,  R.S.,  Lusi R.A.,  Kurniati,  D.  Vaksinasi.  2010. Yogyakarta : Kaninus.
7. World  Health  Organization.  Global Vaccine  Safety  Essential  Medicines  & Health  Products  :  Information  Sheet Observed  Rate  Of  Vaccine  Reactions Diphtheria, Pertussis, Tetanus Vaccines. 2014. Switzerland.
8. Dewi,  D.  Khasiat  dan  Manfaat  Jeruk Nipis. 2012. Surabaya : Stomata.
9. Agoes,  A.H.  Tanaman  Obat  Indonesia Jilid 2. 2010. Jakarta : Salemba Medika.
10. Prasetyono, D.S. Daftar Tanaman Obat Ampuh di sekitar Kita. 2012.
Yogyakarta : FlashBook.
11. Freddy, I.W. Farmakologi dan Terapi : Analgesik,  Antipiretik,  Anti  Inflamasi Non  Steroid  dan  Obat  Pirai  (Edisi  5). 2007:  209-217.  Jakarta  :  Bagian
Farmakologi Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. 12. Zulfa,  NRA.,  Sastramihardja,  HS., Dewi, MK., 2017. Uji Efek Antipiretik Ekstrak Air Umbi Bengkuang (Pachyrhizus erosus) pada Mencit (Mus musculus) Model Hiperpireksia, Bandung Meeting on Global  Medicine &  Health  (BaMGMH),  Vol.  1  No.  1., Bandung.
13. Guyton, A.C. and John, E.H. Buku Ajar Fisiologi  Kedokteran    Edisi  11.  2007. EGC, Jakarta : EGC.
14. Robinson,  T.  Kandungan  Organik Tumbuhan  Tinggi.  Terjemahan  oleh Kosasih Padmawinata. 1995. Bandung : Penerbit ITB.
15. Gadri, A., Rusnadi, R., dan Lukmayani, Y. Uji Efek Antipiretik Jus Jeruk Nipis pada  Tikus  Putih  Galur  Sprague Dawley Sel  kelamin. MIMBAR, Jurnal Sosial dan Pembangunan, 2008; 24(1): 29-35.