## PENDAHULUAN
Isolat  protein  mempunyai  peran  yang sangat penting dalam memberikan karakteristik  fungsional  dari  suatu  produk pangan  dan  berbagai  olahan  pangan lainnya, antara lain water holding capacity , solubilitas, daya emulsi, gelasi dan karakteristik buih (Kinsella, 1976). Penelitian terkait produksi dan pemanfaatan isolat  protein  dari  tanaman  saat  ini  sedang banyak dikembangkan karena ingin mengurangi  penggunaan  protein  hewani sebagai  sumber  isolate  protein.  Hal  ini terkait  dengan  isu  peningkatan  populasi manusia  yang  sangat  tinggi,  berkorelasi dengan  meningkatnya  permintaan  sumber protein  dari  hewani  (Henry dan Kettlewell, 1996).
Sorghum
( Sorghum bicolor ) merupakan  serealia  ke-5  yang  popular  dan banyak  dikonsumsi  masyarakat  di  dunia,
terutama  di  daerah  asalnya  Afrika.  Di Indonesia  sendiri,  sorghum  merupakan tanaman  serealia  yang  cukup  potensial dikembangkan  di  Indonesia,  terutama karena  kemampuan  tumbuhnya  di  lahan kering dan kritis. Nilai gizi sorghum sendiri pun  cukup  memadai  sebagai  bahan  pangan utama, yaitu mengandung 83% karbohidrat, 3,05%  lemak  dan  10%  protein  (basis kering). Kandungan protein sorghum cukup tinggi dibandingkan serealia lainnya seperti beras  (7%)  dan  gandum  (8,9%).  Demikian pula  dengan  kandungan  asam  aminonya tidak  kalah  dengan  bahan  makanan  nabati lainnya,  terutama  kandungan  leusin  dan alanin (Sirappa, 2003). Taylor et al. (2006) dan Awika et al . (2003) menyatakan bahwa sorghum merupakan sumber pangan fungsional  yang  sangat  potensial  untuk dikembangkan  dalam  berbagai  produk makanan dan minuman. Hal ini

## PENGARUH SUPLEMENTASI ISOLAT PROTEIN SORGHUM TERHADAP SIFAT KIMIA,  BIOLOGIS DAN ORGANOLEPTIK BISKUIT SORGHUM
Effect of Supplementation Isolate Sorghum Protein to Chemical, Biological and Organoleptic Properties of Biscuits Sorghum
Fatim Illaningtyas 1) , Sri Istini 1) , Sri Peni W 1) , Iim Sukarti 1) , Fajarwati Utami 1)
1) Teknologi Bioindustri BPPT, Gedung II BPPT Lantai15 Jalan M.H Thamrin No 8 - Jakarta , E-mail: fatim_illaningtyas@yahoo.com

## ABSTRACT
The  aims  of  the  research  were  to  determine  the  potential  of  isolate  sorghum  protein  as ingredient functional food which focused on the effect of supplementation isolate sorghum protein to chemical, biological and organoleptic properties of biscuits sorghum. First phase of the application was  made  biscuit  formula  with  a  mixture  of  various  wheat  flour  and  sorghum  flour  (0:  100,  0:75, 0:50 and 0:25). The best formula biscuit from organoleptic test was added isolate sorghum protein 5,  10  and  15%,  then  the  biscuit  were  analyzed  of  the  chemical,  biological  and  organoleptic properties. The results showed that the panelists preferred the formula biscuits with 25% sorghum flour.  Chemical  analysis  showed  that  biscuit with sorghum isolate protein increase protein, amino acid,  phenolic,  and  antioxidant  activity.  There  were  characteristic  of  biscuits  with  15%  isolate sorghum  protein  3.8%  fiber,  11.87%  protein,  7.96%  amino  acid,  0.808  mg  TAE/mg  phenolic  and 40.675 g/g BHA antioxidant activity. Suplementation of isolate shorgum protein increase the fiber, antioxidants  and  proteins  content.  Further  more  could  be  applied  in  to  functional  food  products, such as food products for hypoglycemic, antioxidant, diabetes mellitus or for KEP patients.
Keywords : isolate sorghum protein, sorghum, biscuits, antioxidants, functional food
dikarenakan sorghum  terbukti mengandung komponen  fenolik  dan  antioksidan  yang cukup tinggi.
Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  sorghum  juga  berpotensi  sebagai sumber β- glukan dan mempunyai aktivitas sebagai immunomodulator dengan kemampuannya  meningkatkan  proliferasi sel  imun  manusia  (Salimi et  al .,  2011).
Tepung  sorghum  dan  proteinnya  pun  telah banyak  dikaji  dan  diaplikasikan  untuk pangan karena aman bagi penderita “celiac disease”  karena  bebas  kandungan  gluten (Stonestreet,  2010).  Di  bidang  bioindustri, sorgum  dan  proteinnya  dapat  diaplikasikan dalam  industry  asam  laktat,  etanol  dan platik biodegradable (Bean, 2006).
Secara  keseluruhan  penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui efek suplementasi isolat protein sorghum terhadap  sifat  kimia,  fungsional,  nutrisi, biologis  dan  organoleptik  dari  biskuit sorghum.

## METODE PENELITIAN
Bahan Sorghum yang dipilih adalah sorghum  varietas  Numbu,  diperoleh  dari Balai  Besar  Teknologi  Pati,  BPPT  di Lampung.  Biji  sorghum  dihaluskan  hingga menjadi tepung menggunakan disc mill dan diayak  dengan  ayakan  60  mesh.  Tepung disimpan  di  suhu  4°C  sebelum  digunakan. Kandungan protein tepung sorghum Numbu sebesar 9,52%, kandungan total fenol 0,376 mg  TAE/mg  ekstrak,  aktivitas  antioksidan 1919,952  µg ekuivalen BHA/g sampel dan indeks proliferasi sel sebesar 240,74%.

## Rancangan Penelitian

## Preparasi isolat protein dari sorghum
Protein  diekstrak  menurut  metode yang  dijelaskan  oleh  Alu’datt  (2011)yang telah  dimodifikasi,  dari  10  g  tepung sorghum bebas lemak dilarutkan dalam 100 ml  akuades  dan  diatur    pada  pH  11
menggunakan  NaOH  2N  sambil  diaduk selama 1 jam pada suhu ruang, lalu larutan disentrifuse dengan kecepatan 8000 rpm, 20 menit.  Supernatan  yang  terkumpul  diatur pada  pH  4,6  menggunakan  HCl  0,1  N. Protein yang mengendap didapatkan setelah disentrifuse  8000  rpm,  20  menit,  lalu dikeringbekukan untuk analisis lebih lanjut. Protein  yang  didapat  selanjutnya  disebut Isolat Protein Sorghum (ISP sorghum).
Analisa  sifat  fungsional  ISP  sorghum (Budijanto et.al, 2011)
a. Bulk  density (Okezie  dan  Bello,  1988 dalam Budijanto et al. , 2011)
Masukkan  sampel  dalam  gelas  ukur 10  ml  yang  telah  diketahui  beratnya.  Lalu ketuk-ketuk  di  meja  lebih  dari  30  kali hingga  tidak  ada  rongga  ketika  sampel ditempatkan menjadi 10 ml. Timbang gelas ukur dan sampel.
b. Daya serap air Sebanyak  1  g  sampel  ditimbang  dan
ditambahkan  10  ml  akuades  dalam  tabung sentrifuse,  vorteks  2  menit,  diamkan 1 jam pada  suhu  ruang,  lalu  disrntrifuse  3000 rpm, 25 menit. Filtrate dituang dalam gelas ukur  10  ml  secara  hati-hati,  lalu  ukur volumenya.
c. Daya serap minyak Sebanyak 0,5 g sampel ditimbang dan dilarutkan  dalam  3  ml  minyak  wijen,  lalu divorteks  2  menit.  Setelah  didiamkan  di suhu  kamar,  larutan  disentrifuse  pada kecepatan  3000  rpm  selama  25  menit. Supernatan  yang ada dituang ke gelas ukur 10 ml, lalu volume minyak bebas diukur.
Pengaruh Suplementasi Isolat Protein Sorghum terhadap Sifat Kimia...
d. Kapasitas dan stabilitas emulsi
Sebanyak  0,5  g  sampel  dilarutkan dalam 25 ml air, lalu pH diatur hingga pH 8 sambil  diaduk  dengan  magnetic  stirrer selama  5  menit.  25  ml  larutan  sampel selanjutnya  dilarutkan  dalam  25  minyak wijen  dan  blender  selama  1  menit, selanjutnya  disentrifuse  pada  kecepatan 3000  rpm,  10  menit.  Selanjutnya  volume emulsi  pada  jam  ke-0  diukur  dan  dicatat. Selanjutnya  emulsi  disimpan  dalam  suhu ruang  dan  dilakukan  pengukuran  volume emulsi secara berkala, pada jam ke- 0,5; 1 ; 2 ; 4 dan 6.
e. Kapasitas dan stabilitas buih Sebanyak  2  g  sampel  dilarutkan dalam  100  ml  akuades  dan  dihomogenkan dengan  magnetic  stirrer  selama  1  menit. Larutan tersebut kemudian diatur pada pH 8 dan  dikocok  menggunakan  waring  blender selama  2 menit.  Volume buih  sebelum dan sesudah dikocok dicatat, kemudian kapasitas  buih  dihitung  dengan  persamaan berikut:
Vbsd = volume buih setelah dikocok Valp = volume awal larutan protein
Studi  tentang  stabilitas  buih  diamati volume buih mulai jam ke-0; 0,5; 1; 1,5; 2; 3  dan  4  jam,  kemudian  dibuat  kurva stabilitas buih terhadap waktu.
f. Kekuatan gel Pada  analisa  ini  dibuat  suspensi sampel dengan variasi konsentrasi 7,5 ; 10 ; 12,5  –  15%,  lalu  diatur  pH  suspense mencapai  pH  8.  Sebanyak  3  ml  suspense dipipet  dan  dimasukkan  dalam  tabung  lalu dimasukkan  dalam  penangas  air  pada  suhu 100°C,  selama  15  menit.  Selanjutnya tabung  dialiri  dengan  air  mengalir  hingga mencapai  suhu  ruang,  kemudian  disimpan
dalam  refrigerator  bersuhu    4°C  selama  2 jam.  Setelah  2  jam  dilakukan  pengukuran kekuatan  gel  secara  kualitatif    berdasarkan skala kekuatan gel yang telah ditentukan.
0   =   gel tidak terbentuk
1  =  gel  sangat  lemah,  gel  jatuh  jika dimiringkan
2  =  gel  tidak  jatuh  jika  tabung  dibalik vertical
3  =  gel  tidak  jatuh  jika  tabung  dibalik vertical dan dihentakkan 1 x
4 =  gel tidak jatuh jika tabung dibalik dan dihentakkan 5 x
Preparasi substitusi sorghum dan
suplementasi  ISP  sorghum  dalam  tepung terigu
Pada  tahap  substitusi  dilakukan pencampuran  beberapa  proporsi  tepung sorghum  yaitu  menggunakan  0,  25,  50,  75 dan  100%  dari  total  penggunaan  tepung terigu,  selanjutnya  dibuat  biskuit  dari masing-masing tepung substitusi ini.
Pada tahap suplementasi ISP sorghum,  telah  dipilih  satu  perlakuan terbaik  dari  tahap  sebelumnya,  selanjutnya dilakukan penambahan ISP sorghum sebesar  0,  5,  10  dan  15%  dari  total  tepung campuran  yang  digunakan,  lalu  dibuat biskuit dari masing-masing konsentrasi ini.

## Pembuatan  biskuit  sorghum  (modifikasi metode oleh Napitupulu, 2006)
Adonan  biskuit  disiapkan  dengan mencampur 100 g tepung (tepung substitusi atau tepung tersuplementasi) dengan mentega  putih,  mentega,  margarine  dan gula  halus  yang  telah  dihomogenkan sebelumnya.  Selanjutnya  adonan  diaduk hingga  tidak  lengket,  lalu  dicetak  dan dipanggang  dalam  oven  190 o C  selama  15 menit.

## Analisis sifat kimia
Analisis  sifat  kimia  meliputi  analisis proksimat  dan  serat  biskuit  ISP  sorghum sesuai  metode  SNI  biskuit  (SNI  01-2973-
Pengaruh Suplementasi Isolat Protein Sorghum terhadap Sifat Kimia...

## 1992).  Total  karbohidrat  dihitung  secara
“by  difference ”.  Analisis  total  asam  amino (15 asam amino) dari tepung sorghum, ISP sorghum dan biskuit ISP sorghum dilakukan dengan metode HPLC.
Analisis sifat biologis biskuit ISP sorghum a. Ekstraksi  komponen  fenolik  dari  biskuit ISP sorghum
Sebanyak  10  gram  berat  kering  (bk) sampel dimasukkan ke dalam labu erlenmayer  (250  ml).  Tambahkan  100  ml etanol ,  kemudian  di  maserasi  dengan menggunakan  shaker  pada  kecepatan  240 rpm  selama  24  jam,  setelah  itu  larutan  di filtrasi  dengan  kertas  saring.  Ampas  filtrat (endapan) dimaserasi ulang dengan menambahkan 100 ml etanol dengan waktu dua jam  pada kecepatan 240 rpm dan suhu 40 0 C. Endapan di maserasi kembali dengan cara yang sama sebanyak 2 kali pengulangan.  Filtrat  pertama,  kedua,  dan ketiga  sebanyak  300  ml,  digabung  dan dievaporasi (dipekatkan) menggunakan rotary  vacum  evaporator hingga  kering pada suhu 40 0 C. Kemudian ekstrak kering ditambahkan dengan DMSO hingga volume akhir  menjadi  10  ml.  Sehingga  diperoleh ekstrak dengan konsentrasi 1 gram/ml.
b. Penentuan  kandungan  total  fenol  biskuit
ISP sorghum
Penetapan  kandungan  total  fenol  dari sampel  ditetapkan  secara  spektrofotometri dengan  pereaksi  Folin-Ciocateu  (Singleton dan  Rossi,  1965  dalam  Waterhouse,  1999) yang  telah  dimodifikasi.  Disiapkan  kurva standar  menggunakan  larutan  stok  asam tanat  (5  mg/ml).  Sebanyak  10  ml  ekstrak sampel yang mengandung komponen fenolik  diencerkan  dalam  50  ml  akuades, lalu diambil sebanyak 50 µl lalu ditambahkan 3,95 ml akuades dan dilarutkan  ke  dalam  250  µl  larutan  Folin- Ciocalteu.  Campuran  tersebut  dikocok sampai  homogen.  Didiamkan  selama  8 menit,  kemudian  ditambahkan  750  µl larutan Na 2 CO 3, dikocok sampai homogen. Didiamkan  selama  2  jam  pada  suhu  kamar dan  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang  serapan  maksimum  765  nm. Kandungan  total  fenol  dalam  ekstrak sampel  ditetapkan  dalam  satuan  milligram equivalen  asam  tanat  (TAE)  per  gram sampel biskuit (mg TAE /mg ekstrak).
c. Penentuan  aktivitas  antioksidan  biskuit ISP sorghum
Bahan yang digunakan ekstrak tepung sorghum dan biskuit ISP sorghum. Penentuan  aktivitas  antioksidan  sampel
Tabel 1 . Komposisi volume larutan standar, sampel dan blanko Larutan Standar Pelarut Metanol Buffer Tris- HCl Larutan DPPH Pelarut Etanol Standar (St) 200µl - 800µl 1000µl - Sampel (S) 200µl - 800µl 1000µl - Blanko1(B1) - 200µl 800µl 1000µl - Blanko 2 (B2) 200µl - 800µl - 1000µl
Ke  dalam  campuran  larutan  di  atas  ditambahkan  1ml  larutan  DPPH,  kemudian  dikocok,  disimpan dalam ruang gelap pada suhu ruang selama 20 menit, lalu diukur pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas antioksidan (%) dihitung dengan rumus:
Dimana: A st : absorbansi sampel atau standar A B1 : absorbansi blanko 1 A B2 : absorbansi blanko 2
menggunakan  metode  DPPH  menurut metode  Mimura  dalam  Yamagucgi  (1998) yang  telah  dimodifikasi.  Disiapkan  kurva standar  dari  larutan  stok    3-tert-butyl-4- hydroxyanisole (BHA) 5mM dibuat dengan cara  melarutkan  45mg  BHA  dalam  50ml ethanol  dan  metano  l80%.Selanjutnya dilakukan reaksi antara larutan standar atau sampel  dengan  komposisi  volume  larutan standar,  sampel  dan  blanko  dalam  setiap tabung  reaksi  sebagaimana  diringkas  pada Tabel 1.
d. Proliferasi sel imun tepung sorghum dan biskuit ISP sorghum
Aktivitas  imunostimulan  ditentukan dengan  metode  Proliferasi  Sel  Limfosit yang  dikembangkan  Zakaria et  al (1996). Disiapkan  darah  sebanyak  20  ml  dalam tabung  steril  yang  mengandung  EDTA ( Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid ) 10%.
Darah  kemudian  dipindahkan  ke  dalam tabung  sentrifuse  50  ml  secara  aseptis  di dalam laminar  air  flow .  Sampel  darah disentrifuse  dengan  kecepatan  1500  rpm selama  5  menit.  Setelah  disentrifuse terbentuk  tiga  lapisan,  yaitu  lapisan  atas adalah  plasma  darah,  bagian  paling  bawah adalah  sel  darah  dan  lapisan  diantaranya adalah lapisan buffy coat yang mengandung sel  darah  putih.  Lapisan buffy  coat ini diambil  kemudian  dituang  ke  dalam  5  ml media  RPMI  basal  dan  di  homogenkan. Kemudian  dipindahkan  kembali  ke  dalam beberapa tabung sentrifuse yang berisi ficol hypaque menggunakan  pipet  pasteur.  Sel darah  putih  akan  terpisah  berdasarkan perbedaan  densitas  melalui  sentrifugasi pada kecepatan 2500 rpm selama 30 menit. Lapisan  atas  yang  mengandung  limfosit diambil  dan  dimasukkan  ke  dalam  5  ml media  RPMI  basal  sebagai  media  untuk pencucian,  kemudian  campuran  tersebut  di sentrifuse  kembali  dengan  kecepatan  1500 rpm  selama  10  menit.  Setelah  disentrifuse akan  diperoleh  limfosit  bersih  yang  berada dibagian  bawah  tabung  sentrifuse  berupa platelet,  sedangkan  monosit  serta  plasma
darah berada di dalam supernatan. Supernatan  dibuang  kemudian  platelet ditambahkan dengan RPMI tumbuh sebanyak  1  ml.  RPMI  tumbuh  yang mengandung  sel  limfosit  digunakan  untuk penghitungan  jumlah  sel  untuk mengetahui konsentrasi  sel  limfosit  per  ml  yang diperoleh. Suspensi  sel  limfosit  yang diperoleh digunakan untuk pengujian respon  proliferasi  limfosit  dengan  metode MTT. Metode MTT dilakukan dengan cara:
 Preparasi sampel dan media tumbuh Ekstrak  tepung  sorghum  dan biskuit  ISP sorghum  diencerkan terlebih dahulu  dengan  DMSO  sesuai  dengan konsentrasi  yang  diinginkan  yaitu  1 gram/ml.  Kemudian  dibuat  perhitungan kebutuhan variasi konsentrasi yang akan diuji.
Masing-masing  ekstrak  dan  media tumbuh  yang  terdiri  dari  RPMI  basal, serum Foetal  Bovine  Serum (FBS)  dan antibiotik penisilin-streptomisin
disterilkan dengan menggunakan syringe dan  membran  steril  0,2  µm  di  dalam laminar air flow. Sebanyak 40 µl RPMI basal  dimasukkan  ke  dalam  lempeng sumur mikro 96 well kemudian ditambahkan  10  µl  sampel  yang  telah diencerkan  sesuai  dengan  konsentrasi yang ditentukan, kemudian ditambahkan 50 µl sel limfosit  dalam RPMI tumbuh.
Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  10  µl  DMSO  sebgai  pengganti komposisi sampel, kemudian ditambahkan  40  µl  RPMI  basal  dan  50 µl  sel  limfosit    dalam  RPMI  tumbuh. Sedangkan kontrol negatif terdiri dari 10 µl  DMSO,  40  µl  RPMI  basal  dan  50  µl RPMI  tumbuh  tanpa  sel  limfosit.  Untuk membandingkan aktivitas imunostimulan ekstrak digunakan
mitogen  yaitu  concanavalin  A  (Con  A) dan lipopolisakarida (LPS) yang dimasukkan  ke  dalam  lempeng  sumur mikro  96 well sebanyak  10  µl  larutan mitogen  dengan  konsentrasi  0,01  µg/µl
Pengaruh Suplementasi Isolat Protein Sorghum terhadap Sifat Kimia...
dan  0,02  µg/µl.  Kemudian  ditambahkan 10 µl  DMSO, 30 µl RPMI basal dan 50 µl sel limfosit  dalam RPMI tumbuh.
 Uji  respons  proliferasi  limfosit  dengan metode MTT ( Zakaria, 1996 )
Setelah  preparasi  sampel  dan penyajian sel limfosit, kemudian lempeng sumur mikro 96 well di inkubasi dalam  inkubator  37 0 C  5%  CO 2 dan kelembaban  relatifnya  95%  selama  68 jam.  Setelah  masa  inkubasi  berakhir  ke dalam lempeng  sumur  mikro  96 well ditambahkan larutan MTT (3(4,5- dimethylthiazol-2-5-diphenyl- tetrazolium bromide) sebanyak 10 µl dan diinkubasi  kembali  selama  4  jam. Setelah masa inkubasi berakhir
ditambahkan  80  µl  larutan  0,04  HCL- Isopropanol kemudian didiamkan selama 15 menit. Setelah itu dilakukan pembacaan  absorbansi  sampel  dengan menggunakan  alat  mikroplate ELISA microplate reader pada panjang gelombang  570  nm.  Aktifitas  proliferasi dinyatakan sebagai nilai indeks stimulasi (IS) dengan perhitungan sebagai berikut:
Uji  organoleptik  (uji  kesukaan)  formula biskuit  substitusi  tepung  sorghum  dan biskuit ISP sorghum
Uji  organoleptik  tahap  pertama dilakukan  terhadap  biskuit  sorgum  dengan variasi  substitusi  tepung  sorghum,  yaitu  A (tepung  sorghum  0%),  B  (25%),  C  (50%), D  (75%)  dan  E  (100%).  Cara  kerja  uji  ini diawali  dengan  disiapkan  biskuit  sorgum dengan  kode  angka  random  3  digit angka,lalu  dilakukan  uji  organoleptik  (uji kesukaan) terhadap kelima biskuit oleh 25- 30  panelis.  Panelis  diminta  memberikan penilaianterhadap tekstur, rasa, kenampakan,  dan  sifat  secara  keseluruhan dari  masing-masing  perlakuan  berdasarkan kategori  kesukaan yang ditetapkan, yaitu 1
=  sangat  tidak  suka,  2  =  tidak  suka,  3  = cukup  suka,  4  =  suka,  5  =  sangat  suka. Perlakuan terbaik dari uji kesukaan ini akan dipakai  sebagai  formula  standar  dalam pembuatan biskuit dengan variasi persentase suplementasi ISP sorghum.
Uji organoleptik tahap ke-2 dilakukan  terhadap  biskuit  yang  telah disuplementasi ISP sorghum. Variasi perlakuannya  yaitu  A  (suplementasi  ISP sorghum  0%),  B  (5%),  C  (10%)  dan  D (15%).  Uji  organoleptik  yang  dilakukan juga  uji  kesukaan  yang  melibatkan  25-30 panelis.  Parameter  kesukaan  yang  dinilai oleh  panelis  yaitu  warna,  rasa,  tekstur  dan penampakan dari masing-masing perlakuan.

## Rancangan Percobaan
Analisa  statistik  dilakukan  terhadap hasil  analisa  organoleptik  substitusi  tepung sorghum  dan  suplementasi  ISP  sorghum. Analisis  menggunakan  program SPSS  ver. 13 for Windows dengan uji Non Parametrik, Kruskal  Wallis-Test  yang  dilanjutkan dengan  uji  perbandingan  Mann-Whitney Test.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sifat Fungsional ISP Sorghum
Sifat  fungsional  ISP  sorghum  dapat dilihat pada Tabel 2 . Densitas kamba ( bulk density) ISP  sorghum  hasil  freeze  drying adalah 0,84 g/ml. Hasil penelitian Budijanto et al ., (2011) menyatakan bahwa ISP  biji  kecipir  hasil  spray  drying  sekitar 0,60 g/ml.Menurut hasil penelitian Rufaizah (2011), tepung sorghum mempunyai  daya  kamba,  daya  serap  air, daya  serap  minyak  masing  masing  sebesar 0,79  g/ml,  1,51%  dan  0,98%.  Dengan demikian, daya kamba ISP sorghum hampir sama  dengan  tepung  sorghum,  dimana bahan ini tidak menyerap air terlalu banyak pada adonan yang disiapkan. Daya serap air ISP  sorghum  cukup  tinggi  dibandingkan daya  serap  minyaknya,  dimana  daya  serap air  mencapai  17,43  ml  air/  g  sampel sementara  daya  serap  minyak  sebesar  4,14 ml  minyak/  g  sampel.  Menurut  hasil penelitian Budijanto et al . (2011) komposisi  asam  amino  suatu  protein mempengaruhi  sifat  daya  serap  air  isolat. Komponen  asam  amino  ISP  sorghum didominasi  oleh asam amino dengan gugus hidrofilik  (asam  glutamate,  asam  aspartat, leusin, dan alanin), sehingga dapat meningkatkan  kemampuan  daya  serap  air. Sifat  daya  serap  air  suatu  isolate  protein bermanfaat untuk memperbaiki karakteristik  produk bakery. Sifat  daya serap  air  adonan  tepung  dapat  meningkat dengan  penambahan  isolat  protein  biji wijen dan biji  bunga matahari, yaitu ketika ditambahkan  5  hingga  10%  isolat  protein
ke  dalam  adonan  (El-Adawy,  1997 dalam Alu’datt, 2011).
Kapasitas  emulsi  ISP  sorghum  cukup tinggi, yaitu sebesar 88%, dan stabil selama 3  jam  pengamatan  awal,  selanjutnya mengalami  penurunan  setelah  3  jam pengamatan  berikutnya.    Kapasitas  emulsi ISP  sangat  terkait  dengan  produk  pangan yang membutuhakn sifat ini untuk pembentukan  emulsi  lemak,  seperti  daging giling,  sosis  dan  sejenisnya.    ISP  sorghum Pada  penelitian  Budijanto et  al .  (2011), kapasitas  emulsi  ISP  biji  kecipir  sebesar 70,5%  dan  stabil  selama  4  jam.  Dengan demikian , ISP sorghum berpotensi sebagai ingridien  pangan  fungsional  untuk  aplikasi daging  dan  olahannya  karena  mempunyai kapasitas  dan  stabilitas  emulsi  yang  baik. Grafik  stabilitas emulsi  ISP sorghum  dapat dilihat pada Gambar 1 .
Kapasitas  Buih  ISP  sorghum  sebesar 55,35%. ISP sorghum memiliki kemampuan membentuk buih dan memiliki stabilitas  buih  yang  cukup  baik.      Grafik stabilitas  buih  dapat  dilihat  pada Gambar 2 .  Menurut  Budijanto  (2011),  kapasitas buih  berkorelasi  dengan  sifat  rheologi protein dalam hal pembentukan gel (gelasi). Dengan karakteristik ini, maka ISP sorghum  cocok  diaplikasikan  pada  produk bakery ,  dimana  sifat  yang  diinginkan  dari kapasitas  buih  adalah  untuk  membentuk lapisan  yang  stabil  dalam  pengembangan adonan  bakery  (Alamanou  dan  Doxastakis, 1997 dalam Budijanto, 2011).
Tabel 2 . Sifat fungsional ISP sorghum Parameter Satuan ISP Sorghum Numbu Bulk Density g/ml 0,84 Daya Serap Air ml air/g sampel 17,43 Daya Serap Minyak ml minyak / g sampel 4,14 Kapasitas dan Stabilitas Emulsi % (jam ke-0, 0,5; 1; 2; 4; 6) 83; 79; 77; 68; 60; 58 Kapasitas dan Stabilitas Buih % (jam ke-0; 0,5; 1; 1,5; 2; 3; 4 55,35; 50,51; 48,57; 41,78; 35,95; 27,21; 23,32 Kekuatan Gel Skala 0 sd 4 (suspensi 7,5; 10; 12,5; 15%) 0 ; 1; 1; 1
Hasil  pengamatan  kekuatan  gel  ISP sorghum  menunjukkan  bahwa  semakin tinggi konsentrasi ISP, maka semakin tinggi daya  gelasinya,  dimana  gel  sudah  mulai terbentuk  pada  konsentrasi  ISP  sorghum sebesar  10%  hingga  15%,  dengan  sifat  gel yang  lemah,  gel  jatuh  ketika  tabung dimiringkan ( Tabel 2. ). Hal ini berhubungan  dengan  kapasitas  buih  ISP sorghum  yang  cukup  baik,  sehingga  pada konsentrasi  ISP  rendah,  yaitu  5%,  sudah terbentuk gel yang diinginkan.

## Sifat Kimia dan Nutrisi Biskuit

## Nilai nutrisi
Hasil penelitian menunjukkan bahwa suplementasi  ISP  sorghum  meningkatkan nilai  proksimat  biskuit  yang  dihasilkan,
terutama kandungan proteinnya. Kandungan protein biskuit dengan suplementasi  ISP  sorghum  sebanyak  15% paling tinggi, yaitu sebesar 11,87%.
Jika dibandingkan dengan biskuit ISP
0% ataupun dari acuan SNI biskuit, biskuit ISP  sorghum  15%  dapat  dikategorikan sebagai  biskuit  tinggi  protein,  karena kandungan proteinnya lebih tinggi 25% dari nilai  biskuit  acuannya  (BPOM,  2011). Dengan  demikian  biskuit  ISP  sorghum  ini dapat  diterapkan  untuk  memperbaiki  status gizi balita dan anak pra sekolah.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa suplementasi  ISP  sorghum  meningkatkan nilai  proksimat  biskuit  yang  dihasilkan, terutama kandungan proteinnya.
Kandungan protein biskuit dengan
Gambar 1 . Grafik kapasitas dan stabilitas emulsi ISP sorghum
suplementasi  ISP  sorghum  sebanyak  15% paling  tinggi,  yaitu  sebesar  11,87%.  Jika dibandingkan  dengan  biskuit  ISP  0% ataupun dari acuan SNI biskuit, biskuit ISP sorghum  15%  dapat  dikategorikan  sebagai biskuit  tinggi  protein,  karena  kandungan proteinnya  lebih  tinggi  25%  dari  nilai biskuit  acuannya  (BPOM,  2011).  Dengan demikian  biskuit  ISP  sorghum  ini  dapat diterapkan  untuk  memperbaiki  status  gizi balita  dan  anak  pra  sekolah,  terutama penderita KEP (Kekurangan Energi Protein),  karena  balita  KEP  memerlukan asupan protein yang lebih besar dibandingkan balita normal pada umumnya. Pelletier et al . (1995) dalam Kholis (2010). Kandungan  serat  dan  lemak    biskuit semakin  tinggi  dengan  semakin  banyaknya
konsentrasi  ISP  yang  ditambahkan,  yaitu sebesar  3,8%  untuk  biskuit  ISP  15%. Namun  kadar  serat  biskuit  ISP  sorghum masih  tetap  dalam  kisaran  standar  mutu biskuit  balita  yang  ditetapkan  dalam Keputusan
Menkes No. 224/Menkes/SK/II/2007 tentang Spesifikasi Teknis MP-ASI bentuk biskuit balita, yaitu maksimal  5%  (Supari,  2007).  Kandungan nutrisi SNI dan biskuit dengan suplementasi ISP sorgum dapat dilihat pada Tabel 3.

## Kandungan asam amino
Tabel  4. menunjukkan  komposisi asam  amino tepung sorghum,  ISP sorghum dan  biskuit  yang  telah  disuplementasi  ISP sorghum. Hasil analisa menunjukkan Tabel 3 . Kandungan nutrisi biskuit ISP sorghum Parameter Biskuit Standar (SNI 01-2973- 1992) Biskuit ISP 0% Biskuit ISP 5% Biskuit ISP 10% Biskuit ISP 15% Kadar Air %) Max 5% 1,53 1,35 1,29 1,25 Kadar Abu (%) Max 1,6% 1,3 1,4 1,4 1,2 Protein (%) b/b Min  9% 8,23 8,81 8,85 11,87 Lemak (%) b/b Min 9,5% 21,2 22,3 32,13 33,74 KH (%) Min 70% 67,74 66,14 56,33 51,94 Serat (%)b/b Max 0,5% 2,41 3,32 4,07 3,8 Tabel 4 . Kandungan asam amino tepung sorghum, ISP sorghum dan biskuit ISP sorghum Parameter Asam Amino (% b/b) Tepung Sorghum Numbu ISP Sorghum Numbu Biskuit ISP 0% Biskuit ISP 5% Biskuit ISP 10% Biskuit ISP 15% Asam aspartat 0,64 3,26 0,57 0,61 0,55 0,59 Asam glutamate 2,23 9,27 2,29 2,18 2,20 2,23 Serin 0,45 2,16 0,53 0,54 0,51 0,54 Histidin 0,18 0,96 0,18 0,19 0,20 0,21 Glisin 0,25 1,50 0,26 0,26 0,26 0,29 Threonin 0,26 1,35 0,33 0,35 0,34 0,36 Arginin 0,32 2,32 0,39 0,40 0,40 0,40 Alanin 0,86 3,60 0,42 0,47 0,49 0,55 Tirosin 0,39 1,88 0,28 0,29 0,30 0,32 Methionin 0,21 1,14 0,16 0,19 0,16 0,17 Valin 0,43 2,22 0,41 0,43 0,40 0,42 Fenilalanin 0,65 2,81 0,47 0,48 0,46 0,48 L-leusin 0,38 1,70 0,35 0,36 0,34 0,35 Leusin 1,24 4,73 0,73 0,78 0,82 0,88 Lisin 0,23 1,40 0,30 0,32 0,23 0,18 Total AA 8,73 40,32 7,67 7,83 7,66 7,96
bahwa  asam  amino  penyusun  ISP  sorghum didominasi  oleh asam amino dengan gugus hidrofilik,  terutama  asam  aspartat,  asam glutamate,  alanin  dan  leusin,  masing- masing sebesar 0,64; 2,23; 0,86 dan 1,24% (b/b). Hal ini terkait dengan sifat fungsional ISP  sorghum  yang  mempunyai  daya  serap air  dan daya emulsi yang cukup tinggi.
Total  asam  amino  ISP  sorghum meningkat  hampir  sekitar  lima  kali  lipat dari  total  asam  amino  pada  tepung sorghum. Proses pemekatan dan pemurnian protein,  berkorelasi  dengan  peningkatan total  asam  amino  suatu  bahan.  Semakin baik  proses  pemekatan  dan  pemurnian, akan  semakin  tinggi  pula  konsentrasi  total asam amino penyusunnya.
Kandungan  total  asam  amino  biskuit semakin  meningkat  dengan  meningkatnya ISP  sorghum  yang  ditambahkan  dalam adonan  formula.  Kecenderungan  ini  sama seperti  hasil  penelitian  Alu’datt  (2011) yang  menunjukkan  peningkatan  total  asam amino esensial pada biskuit hasil fortifikasi ISP barley dan tepung barley dalam tepung terigu. Demikian juga dengan hasil penelitian  El-Adawy,  1997 dalam Alu’datt (2011)  yang  menyatakan  bahwa  fortifikasi tepung  terigu  dengan  ISP  biji  wijen meningkatkan kandungan asam amino lisin pada roti.

## Sifat Biologis Biskuit
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan  total  fenol  biskuit  semakin meningkat  seiring  dengan  peningkatan
suplementasi  ISP  sorghum.  Kandungan total fenol biskuit dengan suplementasi ISP sorghum  15%  meningkat  sekitar  delapan kali  lipat  dari  kontrol,  yaitu  sebesar 0,808%.  Kandungan  total  fenol  tertinggi diperoleh  pada  biskuit  ISP  10%,  yaitu sebesar 1,006 mg TAE/mg ekstrak.
Data  terkait  aktivitas  antioksidan biskuit  ISP  sorghum  juga  menunjukkan kecenderungan yang sama, terjadi peningkatan  aktivitas  antioksidan  dengan semakin  tingginya  ISP  sorghum  yang ditambahkan.  Aktivitas  antioksidan  pada biskuit ISP 15% meningkat sekitar dua kali lipat  dari  kontrol.  Aktivitas  antioksidan tertinggi juga didapat dari biskuit ISP 10%, yaitu sebesar 41,499 µg/g sampel eq BHA. Kedua hal ini menunjukkan bahwa suplementasi ISP sorghum akan meningkatkan  kandungan  total  fenol  dan aktivitas antioksidan biskuit yang dihasilkan.  Kandungan  total  fenol  suatu bahan  berkaitan  erat  dengan  aktivitas antioksidan  di  dalamnya.  Senyawa  fenolik akan  mendonorkan  atom  hidrogen  dari gugus  hidroksilnya  kepada  radikal  bebas, sehingga  senyawa  tersebut  mempunyai aktivitas  sebagai  antioksidan  (Awika  dan Lloyd, 2003).
Total  fenol  pada  minuman  coklat hasil  penyeduhan  dengan  air  panas  adalah sebesar  29  mg  GAE/g  (Hartanto,  2012). Total fenol dan aktivitas antioksidan biskuit 15%  ISP  barley  sebesar  369,60  mg/100  g dan 63,30% (Alu’datt, 2011). Hasil ini juga menunjukkan  bahwa  biskuit  ISP  sorghum
Tabel 5 . Kandungan total fenol, aktivitas antioksidan dan proliferasi sel biskuit ISP sorghum
Parameter Biskuit    ISP 0% Biskuit       ISP 5% Biskuit        ISP 10% Biskuit     ISP 15% Total Fenol (mg TAE/mg ekstrak) 0,130 0,567 1,006 0,808 Aktivitas antioksidan (µg/g sampel eq BHA) 17,038 16,360 41,499 40,675 Indeks Proliferasi sel (% IS) 443,79 134,48 141,72 142,41
merupakan  biskuit  kaya  total  fenol  dan antioksidan,  terutama  biskuit  ISP  sorghum 10% yang memberikan nilai total fenol dan aktivitas  antioksidan  tertinggi,  yaitu  1,006 mg TAE/mg ekstrak dan 50% (41,499 µg/g sampel eq BHA).
Data  pada Tabel  5 menunjukkan bahwa perlakuan suplementasi ISP
sorghum  cenderung  menurunkan  indeks stimulasi atau proliferasi sel, yang ditunjukkan  dengan  semakin  rendahnya indeks  stimulasi  sel  dengan  semakin meningkatnya  konsentrasi    ISP  sorghum yang  ditambahkan  pada  formula  biskuit. Kecenderungan  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian Alu’datt (2011)
yang menunjukkan bahwa kandungan total fenol, aktivitas  antioksidan,  aktivitas  inhibitor ACE  dan  aktivitas  inhibitor  amylase semakin meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi fortifikasi tepung barley dan ISP barley pada roti pita .
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa suplementasi  ISP  sorghum  cenderung menurunkan  indeks  stimulasi  sel  imun. Pada  biskuit  kontrol  (ISP  0%),  indeks stimulasi sebesar 443,79%. Indeks stimulasi  menurun  sejak  penambahan  ISP
5%  ,  10%  hingga  15%,  yaitu  menjadi 134,48%  ,  141,72%  dan  142,41% (Tabel 5 .). Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian Sasmito et.al. (2006)  yang  menunjukkan bahwa  penambahan  berbagai  konsentrasi susu  kedelai  tidak  meningkatkan  indeks proliferasi  sel  limfosit  tikus  Balb/c  secara nyata.

## Sifat Organoleptik Biskuit
Pada penelitian ini dilakukan dua kali uji organoleptik. Uji pertama merupakan uji kesukaan (hedonik) terhadap biskuit substitusi  tepung  sorghum,  yang  meliputi kesukaan  panelis  terhadap    tekstur,  rasa, warna dan penampakan keseluruhan biskuit.  Hasil  uji  kesukaan  menunjukkan bahwa tekstur, rasa, warna dan penampakan keseluruhan  biskuit  berbeda  secara  nyata terhadap berbagai konsentrasi ISP sorghum yang ditambahkan, dengan taraf kepercayaan  95%.  Skor  tertinggi  terhadap karakteristik  tekstur,  rasa  dan  penampakan keseluruhan  didapat  dari  perlakuan  tepung sorghum  25%.  Sedangkan  skor  tertinggi karakteristik  warna  biskuit  didapat  dari perlakuan kontrol ( Tabel 6 ). Warna biskuit
Tabel 6 . Penilaian panelis terhadap tekstur, rasa, warna dan penampakan keseluruhan biskuit substitusi
tepung sorghum Perlakuan Tekstur Rasa Warna Keseluruhan Tp.Sorghum 0% 3,58 ± 1,39 3,23±1,28 4,61 ± 0,80 3,61 ± 1,09 Tp.Sorghum 25% 4,13 ± 0,85 4,23±1,06 4,03 ± 1,11 4,10 ± 0,98 Tp.Sorghum 50% 3,94 ± 0.96 3,87±0,92 3,90 ± 0,83 3,94 ± 0,81 Tp.Sorghum 75% 2,97 ± 1.33 2,90±1,33 2,90 ± 1,14 3,03 ± 1,11 Tp.Sorghum 100% 3,35 ± 1,20 3,45±1,12 3,29 ± 1,11 3,48 ± 0,85 Tabel 7 . Penilaian panelis terhadap rasa, aroma, tekstur dan penampakan keseluruhan biskuit ISP sorghum
Perlakuan Rasa Aroma Tekstur Keseluruhan ISP Sorghum 0% 4,00±0,98 a 3,80±0,92 a 4,27±1,05 a 4,60±0,62 a ISP Sorghum 5% 3,53±0,86 b 3,53±0,82 a 3,73±1,01 b 3,63±0,99 b ISP Sorghum 10% 3,40±0,86 c 3,67±0,84 a 3,30±1,02 c 2,83±0,98 c ISP Sorghum 15% 3,10±1,03 d 3,20±0,92 a 2,97±0,99 d 2,47±0,89 d
dengan penambahan tepung sorghum kurang  disukai  karena  warna  tepung sorghum  yang  kurang  putih  dibandingkan tepung  terigu,  dan  tekstur  menjadi  lebih berpasir,  kemungkinan  karena  tekstur tepung  sorghum  yang  kurang  halus. Berdasarkan data uji organoleptik, ditetapkan  perlakuan  terbaik  dari  uji  ini adalah  perlakuan  tepung  sorghum  25% karena rata-rata respon konsumen memberi skor  4  (suka)  terhadap  produk  ini  dari seluruh  kriteria  yang  ditetapkan,  yaitu tekstur, rasa, warna dan penampakan secara keseluruhan.
Pada uji organoleptik kedua, dilakukan  uji  kesukaan  (hedonik)  terhadap biskuit  dengan  perlakuan  suplementasi  ISP sorghum,  dengan  formula  dasar  biskuit tepung sorghum 25% (perlakuan terbaik uji organoleptik  sebelumnya).  Hasil  analisa statistik  menunjukkan  bahwa  berbagai perlakuan suplementasi ISP sorghum berbeda  secara  nyata  terhadap  tingkat kesukaan panelis terhadap rasa, tekstur dan penampakan keseluruhan biskuit ISP sorghum.  Namun,  tidak  berbeda  nyata terhadap aroma biskuit. Semakin tinggi ISP sorghum yang ditambahkan ternyata semakin  kurang  disukai  oleh  konsumen. Hal  ini  dimungkinkan  karena  pengaruh warna  ISP  sorghum  yang  berwarna  coklat sehingga warna biskuit menjadi lebih gelap, Selain  itu  ISP  sorghum  juga  menyebabkan biskuit  menjadi  lebih  keras  dan  tekstur seperti  pasir  jika  dibandingkan  dengan kontrol.Panelis  memberikan  skor  kesukaan terhadap rasa, aroma, tekstur dan penampakan keseluruhan pada biskuit ISP 5%  dengan  kisaran  skor  3  (cukup  suka), namun  pada  biskuit  ISP  15%,  panelis memberikan  skor  terendah  untuk  tekstur dan  penampakan  keseluruhan,  yaitu  skor  2 yang bermakna tidak suka ( Tabel 7 ).

## KESIMPULAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek suplementasi isolat
protein  sorghum  terhadap  sifat  kimia, fungsional, nutrisi, biologis dan organoleptik  dari  biskuit  sorghum.Hasil menunjukkan  bahwa  substitusi  tepung sorghum  25%  dan  suplementasi  ISP hingga konsentrasi 15% dapat diaplikasikan  untuk  berbagai  produk pangan  fungsional  (seperti  produk  pangan hipoglikemik,  antioksidan,  antidiabetes, dan  untuk  penderita  KEP).  Kandungan protein,  asam  amino,  total  fenol  dan aktivitas  antioksidan  meningkat  seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  ISP sorghum  yang  ditambahkan,  dari  0% hingga  15%.  Hasil  uji  organoleptik menunjukkan bahwa panelis lebih menyukai formula biskuit dengan substitusi  tepung  sorghum  25%.  Adapun penambahan  ISP  sorghum  sebesar  10% cukup  disukai  panelis  dari  segi  rasa, aroma,  warna,  textur  dan  penampakan umum. Disarankan bahwa substitusi tepung  sorghum  dan  suplementasi  ISP sorghum  pada  tepung  terigu  hingga konsentrasi 15% dapat diaplikasikan untuk berbagai produk pangan setelah ada proses perbaikan  dalam  produksi  isolat  dan karakteristiknya,  meliputi  sifat  kimia, fungsional, nutrisi dan biologis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Kementrian Riset  dan  Teknologi  yang  telah  membiayai penelitian  ini  melalui  program  Insentif PKPP  (Peningkatan  Kemampuan  Peneliti dan Perekayasa) tahun 2012.

## DAFTAR PUSTAKA
Alu’datt,  M.H.,  Taha  Rababah,  Khalil  Ereifej, Inteaz Alli, Mohammad A. Alrababah, Ali Almajwal, Nather Masadeh and Mohammad N. Alhamad. 2011. Effects of Barley  Flour  And  Barley  Protein  Isolate on  Chemical,  Functional,  Nutritional  and Biological  Properties  of  Pita  Bread. Journal online .
Awika,  Joseph  M.,  Lloyd  W.  Rooney.  2004. Sorghum Phytochemicals and Their
Potencial  Impact  on  Human  Health. J. science  Phytochemistry .  Vol  65:  1199  – 1221.
Budijanto,  S.,  A.B.  Sitanggang  dan  W.
Murdiati.  2011.  Karakterisasi  Sifat  Fisiko Kimia  dan  Fungsional  Isolate  Protein  Biji Kecipir  ( Psophocarphus  tetragonolobus ). J.  Teknol.  dan  Industri  Pangan .  Vol  12 (2): 130-136
Bean,  S.R.,  B.P.  Ioerger,  S.H.  Park  and  H.
Singh. 2006. Interaction
Between
Sorghum Protein Extraction and
Precipitation  Condition  on  Yield,  Purity and  Composition  of  Purified  Protein
Fraction. Cereal Chem . 83 (1): 99 – 107
Hartanto,  H.  2012.  “Identifikasi  Potensi Antioksidan Minuman Cokelat dari Kakao Lindak  ( Theobroma  Cacao  L.) dengan Berbagai  Cara  Preparasi:  Metode  Radikal
Bebas 1,1 Diphenyl-2-Picrylhydrazil
(DPPH)”. Skripsi.  Universitas  Katolik Widya Mandala. Surabaya.
Henry. R. J and P. S. Kettlewell. 1996. In R. J. Henry  and  Kettlewell,  Editors. Cereal
Grain
Quality .Chapman and Hall. London. Kholis,  N.  dan  F.  Hadi.  2010. Pengujian Bioassay Biskuit Balita yang Disuplementasi  Konsentrat  Protein  Daun Kelor  (Moringa  oleifera)  pada  Model Tikus Malnutrisi. Jurnal Teknologi Pertanian , 11(3): 144-151.
Kinsella,  J.  E.  1976.  Functional  Properties  of Protein  in  Foods:  a  Survey. Critical Reviews  in  Food  Science and Nutrition . 7
(1976): 219-280
Mimura,  A. Protocols  for  Measurement  of Antioxidative  Activities. Departement  of Applied  Chemistry  and  Biotechnology, Faculty  of  Engineering,  University  of Yamanashi.
Napitupulu,  A.  2006.  “Kajian  Pemanfaatan Tepung Sorghum dalam Pembuatan Biskuit Marie”. Skripsi. IPB. Bogor.
Rufaizah,  Ummi.  2011.  “Pemanfaatan  Tepung Sorghum  (Sorghum  bicolor  L  moench) pada  Pembuatan  Snack  Bar  Tinggi  Serat
Pangan  dan  Sumber  Zat  Besi  Untuk Remaja Puteri”. Skripsi. IPB. Bogor.
Salimi,  Y.K.  2011.  “Peranan  Ekstrak  dan Tepung  Sorghum  ( Sorghum  bicolor L- Moench)  dalam  Penghambatan  Kanker secara  in  Vitro  dan  in  Vivo  pada  Mencit BALB/c”. Thesis. IPB. Bogor.
Sasmito,  E.,  Sri  Mulyaningsih,  Eka  Kartika Untari    dan  Ratna  Widyaningrum.  2006. Aktivitas  Imunostimulan  Susu  Kedelai terhadap  Imunoglobulin  (IgG,  IgA)  dan Proliferasi Sellimfosit pada Mencit Balb/c yang  Diinduksi  Hepatitis  A. Majalah Farmasi Indonesia, 17(3), 156– 161, 2006.
Sirappa,    M.  P.  2003.  Prospek  Pengembangan Sorgum  sebagai  Komoditas  Alternatif Pangan,  Pakan  dan  Industri. Jurnal Litbang Pertanian, 22(4).
Stonestreet,  N.  J.  M,  S.  Alavi  and  S.  R.  Bean.
2010. Sorghum Proteins: The
Concentration,    Isolation,  Modification and Food Applications of Kafirin. J. Food Science . 75(5):  R90–R104
Supari,  S.F.  2007. Spesifikasi Teknis Makanan Pendamping  ASI  (MP-ASI)  Biskuit  untuk Anak 12-24 Bulan . Keputusan Menkes No 224/Menkes/SK/II/2007, Jakarta.
Taylor, J. R. N., Schober, T. J., & Bean, S. R. 2006. Novel Food and Non-Food Uses for Sorghum  and  Millets . J.  Cereal  Science , 44(3): 252–271.
Yamaguchi,  T.,  Takamura,  T.,Terao,  J.1998.
HPLC Method for Evaluation of The Free Radical-Scavenging  Activity  of  Foods  by Using 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl . Biosci.  Biotechnol.  Biochem.  62:  1201-
1204
Yousif,  A.,  D.  Nhepera  and  S.  Johnson.  2012.
Influence  of  Sorghum  Flour  Addition  on Flat  Bread  in  Vitro  Starch  Digestibility, Antioxidant  Aapacity  and  Consumer Acceptability. Food  Chem .  134  (2012):
880 – 887.
Zakaria,  F.R.  1996. Sintesis  Senyawa  Radikal dan  Elektrofil  dalam  dan  oleh  Komponen Pangan. Dalam  Prosiding  Seminar  dan Sistem Pangan, Reaksi Biomolekul,
Pengaruh Suplementasi Isolat Protein Sorghum terhadap Sifat Kimia...
Dampak Terhadap Kesehatan dan Penangkalannya.  Kerjasama  Pusat  Studi Pangan  dan  Gizi  dengan  Kedutaan  Besar Prancis, Jakarta.
Fransiska, RZ, Sedarnawati  dan  Ratih  Dewantin  (eds.)  4 April 1996, Bogor.