ANALISIS KANDUNGAN FITOKIMIA DARI UJI TOKSISITAS EKSTRAK METANOL  DAUN SOYOGIK ( Sauraula bracteosa DC ) DENGAN

## MENGGUNAKAN  METODE MASERASI
Morein A. Maukar 1) , Max.R.J Runtuwene 1) , Julius Pontoh 1)
1) Program Studi Matematika FMIPA Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unsrat, Manado 95116 Email: morein_maukar@yahoo.com; max_runtuwene@yahoo.com; pontohjulius@yahoo.com.

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  LC 50 ekstrak  metanol  tanaman  soyogik  yang diekstraksi  secara  maserasi  dan  menganalisis  kandungan  fenolik.  Analisis  kandungan  fitokimia meliputi uji fenolik, uji flavonoid dan uji tanin . Uji toksisitas menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp  Lethality  Test)  dengan  menggunakan  larva Artemia Salina  Leach.  Hasil  yang  diperoleh dan  dianalisis   dengan analisis probit  menggunakan S.PSS 20.0 untuk   mengetahui   nilai  (LC 50 ). Nilai  LC 50 yang  diperoleh  berdasarkan  uji  toksisitas  daun  soyogik  yaitu  sebesar  37,30    ppm. Kandungan fenolik, flavonoid  dan tanin berturut-turut adalah 43,06, 6,52 dan 17,91.
Kata Kunci : Daun soyogik, Fitokimia, Toksisitas, Artemia salin

## FITOCHEMISTRY CONTENT ANALYSIS OF TOXICITY TEST OF
METHANOL EXTRACT OF SOYOGIK LEAVE ( Sauraula bracteosa DC ) USING MASERATION METHOD

## ABSTRACT
The  aims  of  this  research  are  to  measure  the  Lethal  Concentration  50  (LC 50 )  in  toxicity  activity methanol  extracts  from  soyogik  plants  that  were  extracted  by  maceration  and  to  analyzing  its phenolic content. Phytochemical screening include phenolic, flavonoid and tannin test.  Toxicity assay  using  BSLT  (Brine  Shrimp  Lethality  Test)  method  using Artemia  Salina Leach.  Results were  analyzed  by  probit  analysis  using  SPSS  20.0  for  Windows  to  know  the  value  of  (LC 50 ). Screening  phytochemicals  shows  that  there  is  antioxidants  activity  of  Soyogik  leaves.  The  LC 50 values  were  obtained  by  testing  the  toxicity  of  Soyogik  leaves  is  equal  to  37.301  ppm.  The phenolic, flavonoid and tannin content were 43,06, 6,52 and 17,91, respectively.
Keywords : Soyogik leaves, Phytochemical, Toxicity, Artemia salina.

## I.   PENDAHULUAN
Penyakit  kanker  adalah  salah  satu penyakit yang sangat berbahaya bagi manusia.  Sampai  saat  ini  penyakit  kanker masih  menjadi  masalah  kesehatan dunia baik Negara  berkembang  maupun  Negara  maju. Sampai  sekarang  ini  obat-obat  anti  kanker belum juga maksimal dalam proses penyembuhannya.  Obat  tradisional  yang berasal dari tumbuh-tumbuhan banyak digunakan  masyarakat  sebagai  alternatif pengobatan  penyakit,  termasuk  penyakit kanker.
Di  daerah    Silian    Tanaman  soyogik ( Saurauia bracteosa DC) digunakan
masyarakat  sebagai  obat  untuk  mengobati penyakit bisul, tumor dan kanker.
Informasi  ilmiah  tentang  tanaman soyogik belum banyak  di publikasikan. Hasil penelitian  (Kadji,  2013)    daun  soyogik mengandung    aktivitas  antioksidan  yang ditentukan  dengan  nilai  ekstraksi  maserasi IC 50 = 38,01 ppm, nilai ekstrasi soxhlet IC 50 = 28,18  ppm  dan  pada  pengujian  fitokimia mengandung  senyawa  fenolik,  flavonoid, steroid dan saponin.
Uji  toksisitas  dengan  menggunakan Artemia  salina dikenal  dengan  Brine  Shrimp Lethality  Test    (BSLT)  menyampaikan metode  yang  sampai  digunakan  sebagai skrining awal untuk tumbuhan yang
mempunyai aktivitas antikanker. Berdasarkan uraian  di  atas  maka  perlu  dilakukan penelitian  mengenai  toksisitas  menggunakan metode  BSLT  dan  kandungan  senyawa metabolik sekunder.

## II.   METODOLOGI PENELITIAN

## 2.1. Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  Soyogik  yang diperoleh dari Desa  Tombatu, Larva Artemia Salina ,  aquades,metanol,  Natrium  klorida, reagen folin-Ciocalteu 50 %,
natrium  klorida  2%,  aluminium  klorida 2 %,Vanilin 4%  dan asam klorida.
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  Desikator,  timbangan analitik, satu set alat evaporator, oven, cawan petri,  kertas  saring  wattman  42,  aluminium foil, alat-alat gelas, spektrofotometer, inkubator, dan vortex.

## 2.2.  Metode
a.   Preparasi Sampel
Sampel diambil di Daerah Silian. Selanjutnya Sampel  dicuci  dan  dikering  anginkan  salama 5  hari,  setelah  kering  sampel  diblender hingga  sampel  menjadi  halus  lalu  diayak dengan ayakan 65 mesh.
b.   Ekstraksi daun soyogik Ekstraksi sampel menggunakan pelarut metanol.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara maserasi  3  x  24  jam.  Hasil  ekstraksi Kemudian diuapkan dengan
rotary evaporator pada  suhu  60 0 C  sampai  menjadi endapan  kental,  Kemudian  dioven  pada  suhu 40 0 C sampai menjadi ekstrak padat. c.  Penentuan Kadar Air (AOAC, 1999) Sampel  ditimbang  2  g,  setelah  itu  sampel dimasukan ke dalam  oven pada suhu 105 o C selama  3  jam,  kemudian  dikeluarkan  dari oven dan didinginkan dalam desikator selama 30  menit,  setelah  itu    sampel  ditimbang. Perlakuan  ini  dilakukan beberapa kali  hingga berat  sampel  konstan.  Dan  peesen  kadar  air ditentukan dengan rumus berikut :
d.  Skrining Fitokimia d.1  .    Penentuan  Total    Fenolik (Jeong et al ., 2004)
0,1 mL eksrak 200 ppm ditambahakn
0,1  mL  reagen  folin-Ciocalteu  50  %  dalam tabung  reaksi  dan  kemudian  campuran  ini divortex  selama  3  menit.  Setelah  interval waktu  3  menit,  2  mL  Na 2 CO 3 2% ditambahkan.
Selanjutnya campuran diinkubasi   selama 30  menit. Dan absorbansi ekstrak dibaca dengan spektrofotometer pada λ  750  nm.  Hasilnya  dinyatakan  sebagai ekuivalen asam galat dalam mg/kg ekstrak. d.2. Penentuan Total  Flavonoid (Meda et al ., 2005)
1  mL  ekstrak  200  ppm,  kemudian ditambahkan 2 mL AlCl 3 2 % yang dilarutkan dalam  metanol  kemudian  divortex  selama  3 menit    dan  dibaca  dalam  spektrofotometer pada  λ  415  nm.  Kandungan  total  flavonoid dinyatakan sebagai ekuivalen kuersetin dalam mg/kg eksrak.
d.3. Penentuan Total  Tanin (Julkunen-Tinto, 1985)
0,1  mL  ekstrak  200  ppm,  kemudian ditambahkan 3 mL larutan Vanilin 4% dalam metanol  setelah  itu  divorteks.  Kemudian ditambahkan  1,5  mL  asam  klorida  pekat  dan divortex  lagi  dan  apsorbansi  dibaca  pada  λ 500  nm  setelah  campuran  diinkubasi  selama 20  menit pada suhu  kamar. Kandungan tanin terkondensasi dinyatakan dalam mg katekin/kg ekstrak.

## 2.3.  Uji Toksisitas Menggunakan
Metode BSLT Penyiapan larva A. salina Leach
Uji  toksisitas  pada  masing-masing ekstrak  sampel.  Disiapkan  wadah  untuk pengujian,  untuk  masing-masing  konsentrasi ekstrak sampel  membutuhkan 6 wadah  dan 1 wadah  sebagai  kontrol.Selanjutnya  pada  tiap konsentrasi larutan dimasukkan 10 ekor larva udang. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian  larva udang  dimana setiap konsentrasi  dilakukan  dua  kali  pengulangan dan dibandingkan dengan control.
Pengamatan  jumlah  larva  udang  yang  mati dihitung  tiap  selang  waktu  6  jam,  yaitu  pada jam ke-6, 12, 18, dan 24.

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1.  Ekstraksi Dan Kadar Air Daun Soyogik
Tabel 1. Perhitungan Kadar air Daun Soyogik. Sampel Daun Soyogik Ulangan I (%) Ulang an II (%) Ulang an III (%) Rataan (%) 9,73 9,24 9,16 9,37
Dari hasil penelitian ini daun soyogik memiliki  kadar  air  9.37  %.  Penentuan  kadar
air  merupakan    hal  yang  sangat  penting, karena  jumlah  air  yang  terkandung  dalam suatu  materi  akan  berpengaruh  terhadap stabilitas dan kualitas materi. karena menurut (Harjadi  1993), air  yang  terikat  secara  fisik dapat  dihilangkan  dengan  pemanasan  pada suhu 100-105ºC relatif aman untuk mencegah terjadi  kerusakan  pada  senyawa  metabolit sekunder.  Hasil  ini  menunjukkan  daun soyogik  dapat disimpan dalam jangka waktu relatif lama.

## 3.2.  Skrining Fitokimia
Hasil kandungan fenolik, flavonoid dan tanin dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1.  Hasil Uji Fitokimia Daun Soyogik
a.  Penentuan Total  Fenolik Berdasarkan hasil pengukuran, kandungan  total  fenolik  yang  diperoleh adalah  43,06  mg/kg.  Pengukuran  total    fenol pada daun soyogik dilakukan dengan menggunakan reagen Folin-ciocalteau,
dengan  terbentuk  warna  biru  menunjukan adanya  kandungan  senyawa  fenolik  di  dalam daun soyogik sehingga diduga bila kandungan  senyawa  fenolik  di  dalam  sampel tinggi  aktivitas  antioksidannya  akan  tinggi. Hal  ini  didukung  oleh  Sudjadi  dan  Rohman dalam Ukieyanna (2012) yang mengungkapkan  adanya  inti  aromatis  pada senyawa fenolik dapat mereduksi fosfomolibdat fosfotungstat menjadi molibdenum
yang ditandai dengan
terbentuknya warna  biru.  Analisis ini menggunakan kurva standar yang dipersiapkan  dengan  menggunakan  asam galat.

## b. Penentuan Total Flavonoid
Kandungan  total  flavonoid  yang didapat  tidak  berbanding  lurus  dengan kandungan total fenolik. Dari hasil penelitian menunjukan  bahwa  kandungan  flavonoid yang  terdapat  pada  daun  soyogik  yaitu  6,52 mg/kg.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa kandungan  fenolik  dari  setiap  ekstrak  tidak selalu bersumber pada golongan senyawanya. Beberapa senyawa metabolit sekunder maupun  metabolit  primer  yang  dihasilkan oleh  tumbuhan  dapat  menjadi  senyawa antioksidan  ataupun  senyawa  pengganggu aktivitas antioksidan (Ukieyanna, 2012).
c.  Penentuan Total Tanin
Hasil  analisis  total  tannin  daun soyogik  ditunjukan  pada  Tabel  2.    yang menunjukan ekstrak daun soyogik menggandung  tanin  sebesar  17,91  mg/kg. Kandungan  yang  diperoleh  menunjukan bahwa  hasil  yang  diperoleh  memiliki  nilai
yang  kecil,  hal  ini  disebabkan  pelarut  yang digunakan  bersifat  pelarut  polar  yaitu metanol  sedangkan  senyawa  tanin  termasuk dalam golongan polifenol yang pada umumnya larut pada pelarut non-polar. Tanin secara  umum  didefinisikan  sebagai  senyawa polifenol yang memiliki berat molekul cukup tinggi (lebih dari 1000) dan dapat membentuk kompleks dengan protein (Malangingi, 2012).

## 3.3.    Uji  Toksisitas  Menggunakan  Metode BSLT
Hasil uji toksisitas dapat dilihat pada gambar 2.

## Gambar 2. Angka kematian Larva Atremia salina
Dapat  dilihat  bahwa  tiap  kosentrasi ekstrak  daun  soyogik  memberikan  pengaruh yang  berbeda-beda  terhadap  kematian  larva A. salina Leach. Pada gambar 3. menujukkan bahwa  semakin  tinggi  kosentrasi  ekstrak maka  semakin  besar  angka  presentasi kematian  larva  atau  semakin  banyak  larva yang mati.
Nilai  LC 50 kemudian  ditentukan dengan menggunakan analisis probit Nurhayati et  al ,  (2006).  Dari  data  ekstrak daun  soyogik  dan  jumlah  yang  mati kemudian ditentukan nilai LC 50 menggunakan analisis  probit.  Berdasarkan  kurva  mortalitas Larva Artemia  Salina Leach  pada  ekstrak metanol  daun  soyogik  diperoleh  nilai  LC 50 sebesar    37,30  ppm.  Berdasarkan  nilai  LC 50 yang  diperoleh,  dapat  dikatakan  bahwa semakin  kecil  nilai  yang  didapat  maka semakin toksik.

## IV.  KESIMPULAN
Hasil  pengujian  toksisitas  ekstrak metanol  daun  soyogik  menghasilkan  nilai LC 50 sebesar 37,30 ppm. Nilai ini menunjukan  bahwa  daun  soyogik  bersifat toksik.  Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia
diperoleh  total  kandungan  Fenolik  43,06 ,Flavonoid 6,52, dan Tanin 17,91.

## DAFTAR PUSTAKA
Jeong,  S.M.,  S.Y  Kim.,  S.C  Jo.,  K.C  Nam., D.U  Ahn.,  dan  S.C  Lee.2004.  Efeect of    Heat  Treatment on  the Antioxidant    Activity    of    Extracts from    Citrus    Peels. J.  Agric.  Food Chem . 33: 213-217.
Julkunen-tiito, R. 1985.Phenolic Consctituens in  leaves  of  Northern  Willows: Methods  for  the  Analysis  od  Certain Phenolic. J.Agric.  Food  Chem . 33: 213-217.
Kadji,  H.  M.  2013.  Uji  Fitokimia  dan Aktifitas  Antioksidan  dari  Ekstrak Utanol Daun Soyogi ( Saurauia bracteosa DC) [Skripsi].  FMIPA
UNSRAT,  Manado. Ukieyanna,  E.  2012.  Aktivitas  Antioksidan, Kadar  Fenolik,  dan  Flavonoid  Total Tumbuhan Suruhan ( Peperomia
Pellucida L. Kunth) [Skripsi]. FMIPA
Institut Pertanian, Bogor.
Malangngi,  L.P.,  M,S.  Sangi.,  dan    J.J.E.
Paendong. 2012. Penentuan
Kandungan  Tanin  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat ( Persea  americana  Mill .) .  J. Chem. Prog . 1 : 5 -10
Nurhayati,  A.  P.  D,.  N.  Abdulgani.,  dan    R. Febrianto. 2006. Uji Toksisitas Ekstrak Eucheuma Alvarezii terhadap  Artemia Salina  Sebagai  Studi  Pendahuluan Potensi  Antikanker.  J. Akta  Kimindo . 2 :41-46