## ADDITION OF SUPERIOR HETEROTROF BACTERIA MIXED IN FEED TO IMPROVE HEALTH OF SALINE TILAPIA Oreochromis niloticus
Lewi Maraditha Simanjuntak 1* , Iesje Lukistyowati 2 , F. Feliatra 2
1 Student of The Faculty of Fisheries and Marine Science University of Riau, Pekanbaru
2 Lecturer at The Faculty of Fisheries and Marine Science University of Riau, Pekanbaru *Lewi.maradithasimanjuntak@student.unri.ac.id

## ABSTRACT
This  research  was  conducted  in  May  2019  until  July  2019  which  took  place  at  the Laboratory of Marine Microbiology and the Laboratory of Fish Parasites and Diseases at the Faculty of Fisheries and Maritime Affairs, Riau University. The purpose of this study was to determine  the  effect  of  the  addition  of  superior  heterotrophic  bacterial  isolates  that  were sprayed  on  feed  could  affect  the  health  of  saline  tilapia (Oreochromis  niloticus )  through erythrocyte  and  leukocyte  blood  images.  The  treatments  are  Kn,  Kp,  feed  sprayed  with B.cereus heterotrophic  bacterial  isolate  solution  (0.15%  dose),  feed  sprayed  with heterotrophic V. fluvialis bacterial isolate solution (0.15% dose), feed sprayed with combined Isolate  solution.  The  results  of  the  study  of  the  addition  of  superior  heterotrophic  bacterial isolates sprayed on feed can improve the health of saline tilapia ( Oreochromis niloticus ) after 30 days of maintenance and post-infection of Aeromonas hydrophila bacteria showed that the treatment of P3 (combined isolates) which is the best treatment with a total leukocyte value of  89.67  x  103  cells  /  mm3,  lymphocytes  80.33%,  neutrophils  10.67%,  monocytes  9.66%, total erythrocytes 235.00 x 104 cells / mm3, hematocrit 32.00% and hemoglobin 7.33 g / dL and weight growth absolute 7.05 g, a survival rate of 83.33%.
Keywords: Aeromonas  hydrophila, Erythrocytes, Hematocrit,  Hemoglobin,  Heterotrophic bacteria, Leukocytes, Oreochromis niloticus

## I. PENDAHULUAN
Ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) merupakan  satu  jenis  ikan  air  tawar  yang populer  di  kalangan  masyarakat.  Ikan  nila sangat  potensial  dan  produktif  apabila dibudidaya  di  berbagai  lahan,  bukan  hanya di  kolam  tetapi  juga  dipelihara  di  tambak- tambak air payau, serta di lahan sawah baik sebagai penyelang, palawija maupun minapadi. Hal ini karena ikan nila memiliki batasan  toleransi  yang  cukup  tinggi terhadap  berbagai  kondisi  lingkungan perairan (Aliyas et al., 2016).
Penyakit  yang  timbul  dalam  proses budidaya tambak disebabkan karena
interaksi  antara  ikan,  lingkungan  dan patogen yang tidak berada dalam keseimbangan.  Meningkatnya  intensifikasi budidaya  juga  memiliki  dampak  terhadap serangan penyakit pada ikan nila khususnya Aeromonas  hydrophila .  Penanggulangan penyakit  ikan  pada akuakultur telah  sering dilakukan  dengan  menggunakan  berbagai antibiotik,  tindakan  ini  sangat  merugikan. Penggunaan antibiotik secara terus menerus  dan  bila  penggunaannya  tidak tepat  dapat  menyebabkan  bakteri  patogen menjadi resisten ,  terjadi  penimbunan residu obat-obatan di dalam tubuh ikan dan lingkungan perairan yang akhirnya
berbahaya bagi konsumen yang mengkonsumsinya (Lukistyowati dan
Syawal, 2013).
Menurut  Feliatra et  al .  (2019),  isolat bakteri  heterotrof  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp, Aeromonas sp  dan Pseudomonas sp  dikarenakan  oleh beberapa faktor seperti: produksi antibiotik, bakteriosin,  siderphores,  lisosom,  protease dan hidrogen peroksida
atau mempengaruhi pH media dengan menghasilkan asam organik tertentu.
Berdasarkan  uraian  di  atas  penulis tertarik untuk melakukan penelitian
pengaplikasian bakteri heterotrofik dicampur ke dalam pakan untuk meningkat- kan kesehatan ikan nila salin  ( O. niloticus ). Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  penambahan  isolat  bakteri heterotrof  yang  disemprotkan  pada  pakan dapat  meningkatkan  kesehatan  ikan  nila salin  melalui  gambaran  darah  sehingga tahan  terhadap  penyakit  dan  nilai  produksi dapat meningkat.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Mei sampai Agustus 2019 bertempat di  Laboratorium  Parasit  dan  Penyakit  Ikan
Jurusan Budidaya Perairan dan Laboratorium  Mikrobiologi  Laut  Jurusan
Ilmu  Kelautan,  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Riau.
Metode  penelitian  yang  digunakan adalah  metode  eksperimen  menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL),  lima  taraf perlakuan  dengan  tiga  kali  ulangan  yaitu  : Kn  (pemberian  pakan  tanpa  penambahan bakteri  heterotrof  dan  tanpa  diujitantang), Kp(pemberian  pakan  tanpa  penambahan bakteri  heterotrof  dan  diujitantang),  P1 (Pakan  yang  disemprot  larutan  Isolat bakteri  heterotrof B.  cereus dosis  0,15  %),
P2  (Pakan  yang  disemprot  larutan  Isolat bakteri heterotrof V. fluvalis dosis 0,15 %), dan  P3  (Pakan  yang  disemprot  larutan Isolat  gabungan V.  fluvalis dan B.  cereus dosis 0,15 %).
Alat dan Bahan Alat yang digunakan yaitu autoclave, Timbangan  analitik, erlenmayer,  hot  plate, laminar  flow,  mikropipet ,  lampu  bunsen, gelas  ukur, vortex, wadah  ember    16    L, magnetik  stirrer, cawan  petri,  tabung reaksi, inkubator,  alumunium  foil, jarum ose,  pH  meter, haemositometer,  mikroskop binokuler, hand counter, centrifuse, thermometer, refractometer , penggaris, aerator,  selang,  camera, syringe, objek  dan cover glass
Bahan yang digunakan yaitu akuades, ikan  nila  salin,  alkohol  70%,  minyak cengkeh,  larutan  NaCl,  Larutan Turk , larutan hayem,  HCl 0,1  N, Na Sitrat 3,8% , giemsa dan metanol,  Minyak  Emersi,  GSP ( Glutamact  Starch  Penile ),  NA (Natrium Agar) , NB (Natrium Broth ), Tryptone Soya Agar (TSA), Tryptone  Soya  Broth (TSB),
A.  hydrophila ,  pelet  komersil,  dan  bakteri heterotrof isolat V. fluvialis dan B. cereus

## Persiapan Wadah
Wadah pemeliharaan yang digunakan adalah  ember  yang  berukuran  16  L sebanyak  15  buah.  Sebelum  wadah digunakan  terlebih  dahulu  dibersihkan  dan direndam  menggunakan methylene  blue dengan dosis 1-2 mL untuk 10 L air.

## Persiapan Bakteri Heterotrof
Media NA digunakan untuk peremajaan isolat bakteri heterotrof.
Larutan  media  disterilisasi  menggunakan autoclave pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit,  kemudian  isolat  diinkubasi  pada suhu  28 o C  24  jam.  Setelah  itu,  dilakukan produksi  kembali  ke  dalam  media  NB  dan diencerkan  dengan  kepadatan  10 5 CFU/mL yang diukur menggunakan spektofotometer (Nainggolan, 2018).

## Persiapan Pakan
Pakan  ikan  yang  digunakan  adalah pelet  komersial  kandungan  protein  hingga 39-41%  dan  kadar  lemak  5%  yang disemprot dengan bakteri heterotrof.
Bakteri  heterotrof  sebanyak  15  mL dimasukkan  ke  dalam  250  mL  akuades  + 2,25 mL NaCl pada gelas ukur (Setiawati et al., 2013),  sehingga  didapatkan  volume larutan  masing-masing  perlakuan  sebanyak 267.25 mL/kg pakan.

## Pemeliharaan Ikan Uji
Ikan  uji  yang  digunakan  benih  ikan nila  salin  ( O.  niloticus) berukuran  4-6  cm dengan  kepadatan  1  ekor/L  dengan  jumlah ikan  10  ekor  setiap  wadah.  Pemeliharaan dilakukan  selama  30  hari  dan  selama pemeliharaan  ikan  diberi  pakan  komersial secara ad  satiations. Setiap  10  hari dilakukan  sampling  sebanyak  50%  dan dilakukan  penimbangan  bobot  ikan.  Pada hari  ke  30  dilakukan  pengambilan  darah. Pada  hari  ke  34  dilakukan  uji  tantang dengan menggunakan bakteri A. hydrophila dan  pada  hari  ke  48  dilakukan  kembali pengambilan  darah  untuk  hasil  akhir (Alfian et al., 2017).
Penyediaan Bakteri A.hydrophila Biakan A.  hydrophila merupakan koleksi  Laboratorium  Parasit  dan  Penyakit Ikan  diganaskan  terlebih  dahulu  dengan cara direinfeksi kembali pada ikan kemudian  ditumbuhkan  pada  media  GSP ( Glutamate  Starch  Phenol ).  Koloni  yang tumbuh  berwarna  kuning  diambil  1  koloni kemudian  diisolasi  ke  media  TSA  hingga didapatkan koloni yang seragam dan murni (Lukistyowati dan Kurniasih, 2011).

## Uji Tantang
Setelah  pemeliharaan  selama  30  hari dengan perlakuan, ikan diujitantang menggunakan  bakteri A.  hydrophila disuntikkan  secara intramuscular dengan dosis  0,1  mL/ekor  dan  kepadatan  10 5

## CFU/mL.

## Pengamatan Gejala Klinis
Pengamatan  gejala  klinis  dilakukan untuk mengetahui tingkah laku ikan selama pemberian  pakan  mengandung  bakteri heterotrof  dan  juga  setelah  ikan  diinfeksi
A.hydrophila meliputi perubahan morfologi dan tingkah laku.

## Total Leukosit
Menurut  Blaxhall  dan  Daisley dalam Dosin et  al. (2013),  metode pengukuran  total  leukosit  yaitu  sampel darah  dihisap  dengan  pipet  skala  0,5 dilanjutkan  dengan  menghisap  larutan turk's sampai skala 11, kemudian dihomogenkan  dengan  cara  mengoyang- goyangkan  membentuk  angka  delapan. diteteskan  ke  dalam haemositometer dan ditutup  dengan cover  glass .  Penghitungan dilakukan pada 4 kotak besar haemositometer dan jumlahnya dihitung:
Jumlah  Leukosit  =  Jumlah  sel  leukosit terhitung x 50 sel/mm 3

## Diferensiasi Leukosit
Preparat  ulas  darah  pada  kaca  objek lalu  dikeringanginkan,  selanjutnya  difiksasi dengan  larutan  methanol  95%  selama  5 menit,  setelah  itu  dibilas  dengan  akuades, dilanjutkan  dengan    pewarnaan  giemsa, setelah  itu  dicuci  dengan air mengalir, dan diamati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  400x.  Jenis  leukosit  yang diamati    adalah    limfosit,  monosit  dan neutrofil.

## Total Eritrosit
Menurut  Blaxhall  dan  Diesley dalam Dosin et  al. (2013),  metode pengukuran  total  eritrosit,  yaitu  sampel darah  dihisap  dengan  pipet  skala  0,5 dilanjutkan  dengan  menghisap  larutan hayem sampai  skala  101,  kemudian dihomogenkan  dengan  cara  digoyang- goyangkan  membentuk  angka  delapan  dan diteteskan  ke  dalam haemositometer dan ditutup  dengan  cover  glass.  Penghitungan dilakukan pada 5 kotak kecil haemositometer dan  jumlahnya  dihitung dengan rumus :
Jumlah Eritrosit = Jumlah sel eritrosit x 10 4 sel/mm 3

## Kadar Hematokrit
Sampel  darah  dimasukkan  kedalam tabung  mikro  hematokrit  sampai  kira  kira 4/5  bagian  tabung,  sumbat  ujungnya (bertanda merah) dengan kretoseal kemudian  disentrifuse  (Anderson  dan Siwicki dalam Dosin et al., 2013).

## Kadar Hemoglobin
Kadar  hemoglobin  diukur  dengan mengacu  Wedemayer  dan  Yasutake dalam Dosin et  al. (2013)  dengan  cara:  tabung sahlinometer diisi  dengan  larutan  HCL  0,1 N sampai angka 10 lalu darah ikan diambil dari  tabung  mikrotube  dengan  pipet  sahli sebanyak  0,02  mL  dan  didiamkan  3  menit. Kemudian  ditambahkan  akuades  dengan pipet  tetes  sedikit  demi  sedikit  sambil diaduk  dengan  gelas  pengaduk  sampai warnanya tepat sama dengan warna standar.

## Tingkat Kelulusan Hidup
Untuk mengukur kelangsungan hidup ikan uji digunakan rumus dari Zonneveld et al . (1991) sebagai berikut :
Dimana : SR = Tingkat kelulushidupan (%) Nt = Populasi ikan pada masa akhir pemeliharaan N = Populasi ikan pada masa awal pemeliharaan

## Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  diukur adalah suhu, pH, dan oksigen terlarut (DO).

## Analisa Data
Data  yang  diperoleh  berupa  total leukosit, diferensiasi leukosit, total eritrosit, kadar hematokrit, kadar hemoglobin, kelulushidupan,  dan  pertumbuhan  bobot mutlak dimasukkan kedalam tabel, selanjutnya  dilakukan  uji  homogenitas. Sedangkan data kualitas air dianalisa secara deskriptif.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Gejala Klinis
Gejala  klinis  pascaujitantang  bakteri patogen  pada  ikan  nila  salin  yang  diberi pakan  mengandung  bakteri  heterotrof maupun kontrol yaitu pergerakan melambat,  produksi  lendir  berlebih,  nafsu makan berkurang, terlihat berwarna kemerahan ( Hiperemi ) pada bekas suntikan, sisik lepas dan tubuh yang pucat.
Newman dalam Lukistyowati  dan Kurniasih  (2012)  menambahkan  bahwa Ulcer atau  luka  yang  terbentuk  karena aktivitas  proteolitik  dari  bakteri,  dimana keadaan  ini  mungkin  dikarenakan  adanya substansi  produk  ekstraseluler  bakteri seperti protease dan sitokin yang menghidrolisis  dan  melisiskan  jaringan inang. Kp P3 Gambar  1. Gejala  Klinis  Ikan  Nila  Salin  ( Oreochromis  niloticus )  yang  diberi  Pakan Mengandung Bakteri Heterotrof Unggul Pascaujitantang Bakteri A. hydrophila Keterangan: a). Sisik lepas b). Warna tubuh pucat c). Sirip rusak, d). Luka melebar(daging rusak), e). Mata keruh, f). luka pada bekas suntikan mulai menutup
a d c a f b
Ikan  perlakuan  menunjukkan  fase penyembuhan  dengan  luka  yang  mulai menutup.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat
Frandson dalam Lukistyowati dan Kurniasih  (2012)  yang  menyatakan  bahwa fibrinogen keluar  dari  pembuluh  darah  dan menyebabkan  timbulnya  koagulasi  pada jaringan  yang  membantu  dalam  membuat barier  terhadap  menyebarnya  unsur-unsur infeksi sehingga membangun dinding untuk
wilayah yang sedang mengalami kerusakan.

## Total Leukosit
Hasil  pengamatan  terhadap  total leukosit ikan nila salin setelah pemeliharaan  selama  30  hari  berkisar antara  42,00  –  83,33  x  10 3 sel/mm 3 .  Dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Total  Leukosit  pada  Ikan  Nila  Salin  ( O.  niloticus) dengan  Pemberian  Pakan Mengandung Bakteri Heterotrof
Perlakuan Total Leukosit x 10 3 sel/mm 3 Hari ke- 30 Pemeliharaan Hari ke-14 Pascaujitantang Kn Kp P1 P2 P3 43,67±1,53 a 42,00±2,00 a
61,67±1,52 b 72,33±2,51 c
83,33±4,93 d 49,00±1,00 a 60,67±1,15 b
71,00±1,73 c
77,33±1,52 d 89,67±1,52 e
Nilai total leukosit tertinggi ikan nila salin  yang  diberi  pakan  mengandung bakteri  heterotrof  terdapat  pada  perlakuan P 3 (Isolat  gabungan)  sebesar  83,33  x  10 3 sel/mm 3 (Gambar  2)  hal  ini  terjadi  karena pemberian  bakteri  heterotrof  gabungan semakin efektif dalam meningkatkan
kecernaan pakan
dengan  enzim  pencernaan  yang  dihasilkan B.cereus seperti amilase,  protease,  lipase dan selulosa memudahkan  penyerapan nutrien oleh tubuh ikan sehingga pertumbuhan baik dan meningkatkan sistem  imun  yang  memproduksi  antibodi pada tubuh ikan.
Gambar 2. Total leukosit Ikan Nila Salin Perlakuan P3
Total  leukosit  tertinggi pasca- ujitantang  terdapat  pada  perlakuan  P 3 dengan  nilai  89,67  x  10 3 sel/mm 3 berbeda nyata dengan perlakuan Kp sebesar 60,67 x
10 3 sel/mm 3 .  Naiknya  nilai  leukosit  dalam darah  disebabkan  oleh  ikan  stres  akibat serangan  patogen,  dan  fagositosis  terhadap patogen  sehingga  limfosit  terus  mem-
produksi  zat  kebalnya  dan  monosit  ber- diferensiasi menjadi makrofag.
Perlakuan  Kontrol  positif  tanpa pemberian  bakteri  heterotrof  yang  diuji- tantang  juga  mengalami  peningkatan  total leukosit  sangat  tinggi  dikarenakan  ikan mengalami stres dan terus memproduksi zat kebal dalam melawan patogen.
Berdasarkan hasil uji statistik (ANOVA)  menunjukkan  bahwa  nilai  total leukosit  ikan  nila  salin  yang  diberi  pakan mengandung bakteri heterotrof
berpengaruh  nyata  terhadap  total  leukosit ikan  nila  salin  pascaujitantang  dengan A.
hydrophila (P<0,05).  Sehingga  diduga
perpaduan  dua  jenis  bakteri  heterotrof Vagococcus sp dan Bacillus sp ini semakin unggul dalam meningkatkan kesehatan ikan nila salin, senyawa-senyawa yang dihasilkan  seperti  antibiotik, bakteriosin, siderphores, lisosom dan protease.

## Diferensiasi Leukosit
Pengamatan  diferensiasi  leukosit bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan persentase  komponen  sel    leukosit.  Nilai diferensiasi leukosit yang diambil merupakan  rata-rata  persentase  tiga  jenis sel  leukosit  yaitu,  limfosit,  neutrofil  dan monosit (Gambar 2).
Gambar 3. Diferensiasi Leukosit 30 Hari pemeliharaan dengan Perlakuan P3
Jumlah  sel  limfosit  ikan  nila  salin setelah  pemeliharaan  selama  30  hari dengan  pemberian  perlakuan  berkisar antara 85,33-88,33%. Nilai limfosit tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  P 3 sebesar  88,33%  hal  ini  dikarenakan B. cereus dan V.  fluvialis meningkatkan kecernaan  dan  penyerapan  nutrien  seperti protein yang berguna untuk imunostimulan.
Pakan mengandung bakteri heterotrof memiliki  pengaruh  terhadap  nilai  limfosit, hal  ini  diduga  karena  limfosit  digunakan untuk menghasilkan antibodi dalam menyerang  sel-sel  asing  yang  masuk  ke dalam  tubuh.  Mundriyanto et  al. (2002), menyatakan  bahwa  mekanisme  kerja  sel limfosit  dalam  peranannya  sebagai  sistem kekebalan tubuh berfungsi menyediakan zat kebal  untuk  pertahanan  tubuh  dengan  cara
mengenali antigen melalui reseptor spesifik pada membran sel.
Jumlah  sel  neutrofil  ikan  nila  salin setelah  pemeliharaan  selama  30  hari dengan  pemberian  perlakuan  berkisar antara 6,00-8,33%. Namun, setelah dilakukan  penginfeksian  terhadap  ikan  uji dengan A. hydrophila didapatkan peningkatan jumlah proporsi neutrofil yang menunjukkan  bahwa  ikan  uji  terserang A. hydrophila .  Persentase  neutrofil  berkisar antara  7,67%-13,33%.  P 3 10,67%,  nilai  ini mengalami  peningkatan  jika  dibandingkan Kn sebesar 7,67%.
Jumlah  sel  monosit  ikan  nila  salin setelah  pemeliharaan  selama  30  hari dengan  pemberian  perlakuan  berkisar antara  5,00-6,33%.  Persentase  monosit pasca  ujitantang  perlakuan  P3  mengalami
kenaikan  monosit  paling  rendah  hal tersebut  dikarenakan  P3  memiliki  sistem imun  yang  tinggi  dari  bakteri  heterotrof sehingga kenaikan monosit tidak drastis.

## Total Eritrosit
Total  eritrosit  selama  pemeliharaan 30  hari  dengan  pemberian  perlakuan berkisar  antara  220,00-278,33  x  10 4 sel/mm 3 .  Hasil  ini  masih  berada  dalam kisaran  normal  sesuai  pernyataan  Irianto
(2005),  jumlah  eriitrosit  ikan  teleostei berkisar antara 105-300 x 10 4 sel/mm 3 . Peningkatan jumlah eritrosit disebabkan  karena  penambahan  bakteri heterotrof yang mampu meningkatkan kerja organ  pencernaan  sehingga  nafsu  makan ikan meningkat, asupan nutrien cukup baik dan sistem imun terbentuk baik pula. Putra (2010),  menambahkan  bahwa  probiotik menghasilkan beberapa enzim untuk pencernaan pakan seperti amilase , protease , lipase dan selulose .
Tabel  2. Total  Eritrosit  pada  Ikan  Nila  Salin  ( Oreochromis  niloticus) dengan  Pemberian Pakan mengandung Bakteri Heterotrof
Perlakuan Total Eritrosit x 10 4 sel/mm 3 Hari ke-30 pemeliharaan sebelum uji tantang Hari ke 14 Pasca Uji Tantang Kn Kp P1 P2 P3
220,00±1,00 a 224,33±2,08 a
243,33±2,51 b 260,00±5,00 c
278,33±11,01 d 239,33±2,64 a 150,00±3,60 b
196,67±3,78 c
203,33±3,60 d 235,00±3,21 e
Total  eritrosit  tertinggi  terdapat  pada perlakuan  P 3, yaitu  dengan  pemberian pakan mengandung bakteri heterotrof isolat gabungan B.  cereus dan V.  fluvialis yang berjumlah  278,33  x  10 4 sel/mm 3 (Gambar 4).  Pemberian  bakteri  heterotrof  mampu meningkatkan  kesehatan  ikan, Bacillus cereus mampu  meningkatkan  pencernaan ikan, meningkatkan penyerapan nutrien dan oksigen  dalam  darah  dan  mengalirkannya
ke  semua  jaringan  dan  organ  sehingga tingkat  ketahanan  tubuh  terus  meningkat. V.  fluvialis bereaksi  dengan  antigen  dalam menghasilkan  antibodi.  Sementara  Kp tanpa  pemberian  bakteri  heterotrof    proses pencernaan  lambat  dan  proses  penyerapan nutrien pun tidak efektif sehingga memiliki sistem  imun  rendah  dilihat  dari  total eritrosit  paling  rendah  namun  masih batasan normal.
Gambar 4. Total Eritrosit Ikan Nila Salin Perlakuan P3
Total eritrosit ikan nila salin mengalami  penurunan  pasca  ujitantang bakteri A.  hydrophila .  Penurunan  eritrosit mengindikasikan  adanya  anemia  pada  ikan dan  senyawa haemolisin yang  diproduksi oleh A.  hydrophila dapat  melisiskan  sel eritrosit.
Menurut  Collins et  al., 1989  Genus bakteri  Vagococcus  diusulkan  pada  tahun 1989  untuk  bakteri  Gram-positif,  katalase- negatif,  motil,  bakteri  berbentuk  coccus yang  bereaksi  dengan  antigen;  Antigen merupakan  zat  yang  merangsang  respons imunitas,  terutama  dalam  menghasilkan antibodi.
Dengan  demikian  pemberian  bakteri heterotrof  isolat  gabungan  yang  terbaik yang  mampu  mempertahankan  jumlah
eritrosit  dalam  darah  ikan  nila  salin pascaujitantang  bakteri  patogen  walaupun terjadi  penurunan  masih  berada  dalam jumlah normal.

## Kadar Hematokrit
Hematokrit  merupakan  persentase volume  eritrosit  dalam  darah  ikan.  Hasil pemeriksaan  terhadap  hematokrit  dapat dijadikan  sebagai  salah  satu  patokan  untuk menentukan  keadaan  kesehatan  ikan,  nilai hematokrit  kurang  dari  22%  menunjukkan terjadinya anemia (Putri et al., 2013).
Kadar  hematokrit  dalam  darah  ikan nila  salin  setelah  pemeliharaan  selama  30 hari  dengan  pemberian  pakan  mengandung bakteri  heterotrof  berkisar  antara  30,10%  - 33,33% (Tabel 3).
Tabel 3. Kadar Hematokrit pada Ikan Nila Salin ( Oreochromis niloticus ) dengan pemberian pakan mengandung bakteri heterotrof
Kadar Hematokrit (%) Perlakuan Hari ke-30 pemeliharaan sebelum ujitantang Hari ke 14 Pasca ujitantang Kn Kp P1 P2 P3 30,10±0,57 a 30,33±0,17 a
31,30±0,81 ab 32,00±1,00 b
33,33±0,57 c 31,33±0,57 c 23,00±2,00 a
28,00±1,00 b
29,00±1,00 b 32,00±1,00 c Berdasarkan hasil uji statistik (ANOVA)  menunjukkan  bahwa  pemberian pakan  mengandung  bakteri  heterotrof setelah  30  hari  pemeliharaan  memberikan pengaruh  nyata  terhadap  kadar  hematokrit ikan  nila  salin  (P<0,05)  Kadar  hematokrit ikan  nila  pasca  ujitantang  mengalami penurunan  namun  dalam  kisaran  normal. Penurunan  hematokrit  dikarenakan  adanya penurunan  nafsu  makan  akibat  ikan terinfeksi.

## Kadar Hemoglobin
Rendahnya  konsentrasi  hemoglobin menunjukkan  terjadinya  anemia.  Anemia menunjukkan  kondisi  dimana  konsentrasi hemoglobin  dalam  darah  rendah,  yang disebabkan oleh penurunan jumlah eritrosit.
Kadar  hemoglobin  pada  perlakuan pemberian bakteri heterotrof dapat meningkatkan  pencernaan  dan  penyerapan nutrien  dan  oksigen  yang  kemudian  di  ikat hemoglobin  dan  dialirkan  keseluruh  tubuh dan dapat meningkatkan sistem.
Tabel 4. Kadar Hemoglobin pada Ikan Nila Salin ( Oreochromis niloticus ) dengan Pemberian Pakan Mengandung Bakteri Heterotrof
Kadar Hemoglobin (g/dL) Perlakuan Hari ke-30 pemeliharaan sebelum uji tantang Hari ke 14 Pasca Uji Tantang Kn Kp P1 P2 P3
5,33±0,57 a
5,67±0,57 a
6,33±0,57 a
7,67±0,57 b
9,33±0,57 c
5,67±0,57 b
3,83±0,28 a
4,67±0,57 ab 6,00±1,00 b 7,33±0,57 c Berdasarkan hasil uji statistik (ANOVA) menunjukkan kadar hemoglobin ikan  nila  salin  yang  dipelihara  selama  30 hari  dengan  pemberian  pakan  mengandung bakteri heterotrof berpengaruh nyata (P<0,05). Hal tersebut menunjukkan bahwa pemberian  pakan  mengandung  bakteri heterotrof  mampu  meningkatkan  kadar hemoglobin  ikan  nila  dengan  enzim  dan asam amino yang dihasilkan dapat meningkatkan  kecernaan  ikan  sehingga meningkatkan  ketahanan  tubuh  dan  suplai oksigen yang cukup.
Banyak  faktor  yang  mempengaruhi rendahnya  kadar  hemoglobin,  hal  ini disebabkan  adanya  faktor  stres  yang disebabkan  oleh  adanya  infeksi  bakteri patogen  melisiskan  darah  merah  sehingga menurunkan kadar oksigen.

## Tingkat kelulushidupan
Rerata  kelulushidupan  ikan  nila pemberian  pakan  mengandung  bakteri heterotrof dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Kelulushidupan Ikan Nila Salin ( Oreochromis niloticus )  dengan Pemberian Pakan
Mengandung Bakteri Heterotrof Kelulushidupan SR(%) Perlakuan Hari ke-30 Pemeliharaan Pascaujitantang Hari ke-14 Pascaujitantang Kn Kp P1 P2 P3 86,67 86,67
83,33
83,33 86,67 83,33±5,77 b 43,33±5,77 a
70,00±10,00 b
73,33±5,77 b 83,33±10,00 b Pemberian pakan mengandung bakteri  heterotrof  yang  dipelihara  selama 30 hari memiliki kelulushidupan yang tidak jauh berbeda. Berdasarkan hasil uji statistik (ANOVA)  menunjukkan  kelulushidupan ikan yang dipelihara selama 30 hari dengan pemberian  pakan  mengandung  bakteri heterotrof terlihat tidak berbeda nyata antar perlakuan (P>0,05)
Kelangsungan  hidup  yang  rendah pada  kontrol  ini  terjadi  karena  ikan  nila kontrol tanpa pemberian pakan
mengandung bakteri heterotrof dan diinfeksi  bakteri  patogen  tidak  dapat melawan  serangan  patogen  karena  sistem imun yang rendah. Pada perlakuan pemberian  pakan  mengandung  bakteri heterotrof dapat mempertahankan
kelangsungan  hidup  dari  serangan  bakteri patogen dengan sistem imun yang dibentuk dari pemberian bakteri heterotrof.

## Kualitas Air
Hasil  pengukuran  kualitas  air  selama penelitian  meliputi  oksigen  terlarut  (DO),
suhu,  dan  pH.  Suhu  air  selama  penelitian berkisar  antara  27-28 0 C.  Sesuai  pendapat Urbasa et  al., (2015)  bahwa  suhu  air berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  dan perkembangan  ikan.  Ikan  nila  dapat  hidup
pada  suhu  air  berkisar  antara  20–30 0 C. Suhu  air  yang  sesuai  akan  meningkatkan aktivitas  makan  ikan,  sehingga  menjadikan ikan nila cepat tumbuh.
Tabel 7 . Kualitas Air Media Pemeliharaan Selama Penelitian Perlakuan Parameter Kn Kp P1 P2 P3 SNI 7550:2009 Suhu ( o C) DO (mg/L) pH 27-28 3,9-5,0 7,0-8,0 28 3,8-5,0 7,0-8,0 27-28 4,0-5,0 7,0-8,0 28 4,0-5,5 7,0-8,0 28 4,0-5,5 7,0-8,0 25-32 >3 6,5-8.5
Kualitas  perairan  selama  penelitian tergolong  baik,  bakteri  heterotrof  mampu mendegradasi  senyawa  organik  dari  air pemeliharaan.  Parameter  kualitas  air  yang menunjukan nilai keasaman dalam air yaitu pH.  Nilai  pH  yang  diperoleh  pada  saat penelitian  yaitu  6,7  –  7,1,  nilai  tersebut masih  tergolong  baik  untuk  budidaya  ikan nila  salin.  Menurut  Effendi  (2003), sebagian  besar  biota  akuatik  sensitif terhadap perubahan pH dan menyukai nilai pH  sekitar  7-8,5.  Nilai  pH  sangat mempengaruhi proses biokimiawi perairan.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Bakteri heterotrof unggul yang disemprotkan pada pakan dapat meningkat-
kan  kesehatan  ikan  nila  salin  ( O.niloticus ). Hasil  pemeliharaan  30  hari  dan  pasca- ujitantang  menunjukkan  bahwa  perlakuan P3  (Isolat  Gabungan)  yang  merupakan perlakuan terbaik dengan nilai total leukosit 89,67  x  10 3 sel/mm 3 ,  limfosit  80,33%, neutrofil  10,67%,  monosit  9,66%,  total eritrosit  235,00  x  10 4 sel/mm 3 ,  hematokrit 32,00%,  dan  hemoglobin  7,33  g/dL  serta tingkat kelulushidupan 83,33%.

## Saran
Selanjutnya perlu dilakukan
penelitian  lebih  lanjut  untuk  melihat gambaran  histopatologi  ikan  nila  salin dengan  pemberian  pakan  mengandung bakteri  heterotrof  dan  pascaujitantang bakteri A. hydrophila .

## DAFTAR PUSTAKA
1.    Alfian,  I.  Lukistyowati,  dan  S.  Henni.  (2017).  Pemberian  Probiotik Bacillus sp  Berasal dari  Udang  Galah  ( Macrobranchium  rosenbergii  De  Man )  dan  Udang  Windu  ( Penaeus monodon) Terhadap Status Kesehatan Ikan  Nila ( Oreochormis niloticus ). Jurnal Online Mahasiswa Fakultas Perikanan dan Ilmu kelautan, Volume 4(1), Pages 1-10.
2.  Aliyas, S. Ndobe., dan Y. Z. Raihani. (2016). Pertumbuhan dan Kelangsungan Hidup Ikan Nila  ( Oreochromis  sp )  yang  Dipelihara  Pada  Media  Bersalinitas.  Jurnal  Sains  dan Teknologi Tadulako,  Volume 5 (1), Pages 19-27.
3.      Blaxhall,  P.C,  and  K.  W.  Daisley.  (1973).  R  Outline  Haemotological  Methods  For  Use With Fish Blood. Journal Of Fish Biology, Volume 5(6) Pages 771-781.
4.   Anderson D. P., A. K Siwicki. (1993). Basic Hematology and Serology  For Fish Health Programs. Aquatuc Animal Health and the Evironment,  Volume 4(1) Pages 24-342.
5.   Dosin, E. H. Hardi., dan Agustina. (2013). Efek Penginjeksian Produk Intraseluler (icp) dan  Ekstraseluler  (ecp)  Bakteri Pseudomonas sp.  terhadap  Gambaran  Darah  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal Ilmu Perikanan Tropis. Volume 19(1) Pages 24-30.
6.  Effendie, M. I.  (1979). Metode Biologi Perikanan . (p. 121). Yayasan Pustaka Nusantara: Yogyakarta
7.    Feliatra,  F.,  R.  Hamdani.,  I.  Lukistyowati.,  and  I.  Nurachmi.  (2019).  Sensitivity  of Heterotrophic  Bacteria  in  the  Low-Salinity  Water  Areas  and  Estuary  in  Siak  District toward Pathogenic Bacteria in Fish. International Journal of Microbiology , Volume 19(1) Pages 1-8.
8.  Frandson, R.D. (1992 ). Anatomi dan Fisiologi Ternak . (p. 578).  Edisi ke 4, Alih Bahasa oleh  Sigandono,  B  dan  Praseno,  K.,  (Judul  Asli  :  Anatomy  and  Physiology  of  Farm Animals). Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
9.    Irianto,  A.  (2005). Patologi  Ikan  Teleostei .  (p.  205).  Gadjah  Mada  University  Press. Yogyakarta.
10.  Lukisyowati  I,  dan  H.  Syawal.  (2013).  Potensi  Pakan  yang  Mengandung  Sambiloto ( Andrographis  paniculata )  dan  Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava )  Untuk Menanggulangi  Bakteri A.  hydrophila Pada  Ikan  Baung  ( Mystus  nemurus ).  Jurnal Akuakultur  Rawa Indonesia, Volume 1(2) Pages 135-147.
11.  Lukisyowati,  I. dan  Kurniasih.  (2012).  Kelangsungan  Hidup  Ikan Mas (Cyprinus carpio L)  yang diberi Pakan Ekstrak Bawang Putih ( Allium sativum ) dan di Infeksi Aeromonas hydrophila . Jurnal Perikanan dan Kelautan, Volume 16(1) Pages 144-160
12.  Nainggolan  A.  H.,  Feliatra.,  I.  Lukistyowati.  (2018).  Uji  Metabolit  Sekunder  Bakteri Heterotrofik dari Muara Sungai Siak Terhadap Bakteri Patogen. Jurnal Online Mahasiswa (JOM) Bidang Perikanan dan Ilmu Kelautan, Volume 5(2) Pages 1-13
13. Newman. S. G. (1982). Aeromonas hydrophila : A Review With Emphasis On Its Role In Fish  Diseases. (pp  87-118)  In:  D.P.  Anderson,  M.Dorson  and  PH.Dubourget  (Eds).  Les Antigens  des  Microorganismes  pathogenes  des  poisson.  Collection  Fondation  Marcel Merieux.
14. Putra,  A.  N.  (2010).  Kajian  Probiotik,  Prebiotik dan  Sinbiotik  Untuk  Meningkatkan Kinerja  Pertumbuhan  Ikan  Nila ( O.  niloticus ). Tesis. Institut Pertanian Bogor.
15.  Sainah.,  Adelina.,  dan  B.  Heltonika.  2016.  Penambahan  Bakteri  Probiotik  ( Bacillus sp) Isolasi dari Giant River Frawn ( Macrobrachium rosenbergii , de man) pada Pakan Buatan untuk  Meningkatkan  Pertumbuhan  Ikan  Baung (Hemibagrus  nemurus). Berkala Perikanan Terubuk, Volume 44(2)  Pages  36-50
16.  Setiawati,  J.E.,  Tarsim.,  Adiputra.,  dan  S.  Hudaidah.  (2013).  Pengaruh  Penambahan Probiotik  Pada  Pakan  Dengan  Dosis  Berbeda  Terhadap  Pertumbuhan  ,  Kelulushidupan, Efesiensi  Pakan  dan  Retensi  Protein  Ikan  Patin  ( Pangasius  hypophthalmus ).  Jurnal Rekaya dan Tekonologi Budidaya Perairan , Volume 1(2): Pages 151-161.
17.  Wedemayer  GA  dan  WT  Yasutake.  1997.  Clinical  Methods  For  The  Assessment  of  the Effect  Environment  Stress  on  The  Fish  Health,  Technical  Papers  of  the  US  Fish  and Wildlife  Service. US  Depart  of  The  Interon  Fish  and  Wildlife  Service .  Volume  89(1) Pages 1-17
18.  Zonneveld,  N.  Huisman  E.  A.  Boon,  J.  H.  (1991). Budidaya  Ikan .  (p.  233).  Gramedia: Jakarta.