## DETEKSI MIKROFILARIA WUCHERERIA BRANCROFTI DAN BRUGIA SP PADA SPESIES NYAMUK PASCA PEMBERIAN OBAT PENCEGAHAN MASSAL (POPM) DI BEBERAPA KABUPATEN DI INDONESIA
Discovery Microfilariae Wuchereria brancrofti And Brugia Sp Mosquito Species in Post-Grant Of Mass Drug Administration (MDA) in Some Districts in Indonesia
Jusniar Ariati 1 , Dian Perwitasari 1 , Roy Nusa 2 , Rina Marina 1
Pei-Yu Alison Lee 3
1 Puslitbang Upaya Kesehatan Masyarakat, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan
2 Loka Litbang Waikabubak, Kemenkes, Nusa Tenggara Timur
3 GeneReach Biotechnology, Taichung, Taiwan
Email: yusniarariati@yahoo.com
Diterima: 1 Oktober 2020; Direvisi: 21 November 2020; Disetujui: 31 Desember 2020

## ABSTRACT
Efforts  to  break  transmission  of  filariasis  chain,  through  elimination  program  with  preventive  mass  drug administration (POPM) and vector control, which is currently taking place in all provinces in Indonesia. Known  as  elephantiasis  or  lymphatic  filariasis,  it  is  a  filarial  worm  with  the  main  species  being Wuchereria bancrofti and Brugia sp. The aims of study was to identify mosquitoes that have the potential become vector filariasis. Known as elephantiasis (Elephantiasis) or Lymphatic filariasis is a major species of  filarial  worms  with  that  Wuchereria  bancrofti  and  Brugia  sp.  Mosquito  collection  conducted  in  23 districts / cities in Indonesia using modificated Human Landing Collection (HLC) method that is double net to feed humans inside, while the method of Transcription Insulated Isothermal Polymerase Chain Reaction (iiPCR)  was  used  to  detect  the  presence  of  filarial  worms  in  the  mosquitoes.  The  number  of  samples collected  was  26,276  mosquitoes,  38  were  identified.  The  results  of  the  examination  used  iiPCR  showed that positive W. bancrofti was found in 6 districts / cities and positive Brugia sp were found in 9 districts / cities where the study was conducted. There are other mosquito species that are not confirmed as filarial vectors, but found DNA traces both the parasite in mosquitoes that have not been confirmed as vectors.
Keywords: Microfilariae, Wulcheria brancrofti , Brugia malayi , Mass Drug Administration (MDA)

## ABSTRAK
Upaya pemutusan rantai penularan filariasis melalui program eliminasi dengan pemberian obat pencegahan masal  (POPM)  dan  pengendalian  vector,  saat  ini  sedang  berlangsung  di  semua  provinsi  di  Indonesia.  Di kenal sebagai penyakit kaki gajah ( Elephantiasis ) atau Filariasis limfatik merupakan cacing filaria dengan spesies  utama  yaitu Wuchereria  bancrofti , dan  Brugia  sp .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui nyamuk  yang  berpotensi  menjadi  vector  filariasis.  Pengambilan  sampel  nyamuk  dilakukan  di  23 kabupaten/kota  di  Indonesia  menggunakan  metode Modificated Human  Landing  Collection (HLC)  yaitu kelambu ganda dengan umpan manusia, sedangkan metode Transcription Insulated Isothermal Polimerase Chain  Reaction (iiPCR )  digunakan  untuk  mendeteksi  keberadaan  cacing  filaria  dalam  tubuh  nyamuk. Jumlah  nyamuk  yang  berhasil  dikumpulkan  sebanyak  26.276  nyamuk  dengan  38  spesies  yang teridentifikasi. Hasil pemeriksaan DNA menggunakan iiPCR menunjukkan  spesies Wulchereria  bancrofti ditemukan  di  6  kab/kota  dan  spesies Brugia  malayi ditemukan  di  9  kab/kota  tempat  penelitian.  Terdapat spesies  nyamuk  lainnya  yang  tidak  terkonfirmasi  sebagai  vektor  filaria,  namun  ditemukan  jejak  DNA kedua parasite tersebut dalam nyamuk yang belum terkonfirmasi sebagai vektor.
Kata kunci : Mikrofilaria, Wulcheria brancrofti , Brugia malayi , POPM

## PENDAHULUAN
Filariasis  limfatik  atau elephantiasis yang  dikenal  sebagai  penyakit  kaki  gajah merupakan  penyakit  menular    yang  banyak terjadi  didaerah  tropis  yang  disebabkan  oleh infeksi  parasit  cacing  dari  genus  filaria. Penularan penyakit ini terjadi melalui gigitan nyamuk yang berperan  sebagai vektor dalam penyebaran  penyakit  tersebut.  Di  Indonesia yang telah teridentifikasi sebanyak 23 spesies dari  genus  Anopheles,  Culex,  Mansonia, Aedes  dan  Armigeres.  Terdapat  3  jenis parasit  penyebab  filariasis  limfatik  pada manusia  yaitu Wulchereria  brancrofti , Brugia  malayi dan Brugia  timori, yang menyerang  kelenjar  dan  pembuluh  getah bening (Arsin, 2016).
Jenis  parasit  ini  tersebar  di  daerah tropis  dan  subtropis  seperti  Afrika,  Asia, Pasifik  Selatan,  dan  Amerika  Selatan.  Telah diketahui  lebih  dari  200  spesies  filarial  dan dari  200  spesies  tersebut  hanya  sedikit  yang menyerang manusia. Masyarakat yang berisiko  terserang  adalah  mereka  yang bekerja  pada  daerah  yang  terkena  paparan menahun  oleh  nyamuk  yang  mengandung mikrofilaria.    Filariasis  termasuk  penyakit menular  menahun  yang  dapat  menimbulkan kecacatan  dan  penurunan  produktivitas  pada penderitanya(Gordon,  Jones  and  McManus, 2018; Al-Tameemi and Kabakli, 2019).
Indonesia  sebagai  negara  endemis filariasis,  telah  mengikuti  program  WHO tentang Global Program for the Eliminaation of  Lymphatic  Filariasis  (  GPELF )  sejak tahun 2001 melalui Pemberian Obat
Pencegahan Massal (POPM) Filariasis
(WHO,  2010),    guna  memutuskan  rantai penularan  di  daerah  endemis;  mencegah  dan membatasi kecacatan karena filariasis (Kementerian Kesehatan, 2014).
Berdasarkan
laporan dari kabupaten/kota  di  Indonesia,  jumlah  kasus kronis  filariasis  yang  dilaporkan  sampai tahun  2009  sudah  sebanyak  11.914  kasus. Jumlah  Kabupaten/kota  endemis  filariasis, sampai  akhir  tahun  2016  terdapat  236 kabupaten/kota  endemis  filariasis  dan  dari 236  kabupaten/kota  yang  endemis  sebanyak 55 kabupaten/kota telah melakukan pemberiaan obat pencegahan massal (POPM) filariasis  selama  5  tahun  berturut-turut.
Sisanya  sebanyak  181  kabupaten/kota  akan melaksanakan  POPM  sampai  dengan  tahun 2020  (Purwantyastuti,  2010;  Kemenkes  RI, 2019).
Penularan filariasis melibatkan banyak  faktor  yang  sangat  kompleks  yaitu cacing filaria sebagai agen penyakit, manusia sebagai  inang  dan  nyamuk  dewasa  sebagai vektor serta faktor lingkungan fisik, biologik dan  sosial,  yaitu  faktor  sosial  ekonomi  dan perilaku  penduduk  setempat  (Yanuarini, 2015).
Di  Indonesia  telah  teridentifikasi  23 spesies  nyamuk  vektor    filariasis,  yaitu  dari genus  Mansonia  ( Ma.  bonneae,  Ma.  dives, Ma.  annulata,  Ma.  indiana,  Ma.  uniformis, Ma.  annulifera ),  genus  Anopheles  ( An. nigerimus,  An.  peditaeniatus,  An.  aconitus, An. barbirostris, An. subpictus, An. bancrofti, An.  koliensis,  An.  farauti,  An.  vagus,  An. letifer,  An.  punctulatus,  dan  An.  hyrcanus ), genus  Culex  ( Cx.  quinquefasciatus,  Cx. annulirostris,  Cx.  bitaeniorhynchus )  dan genus Aedes ( Ae. kochi dan Ae.
subalbatus )(Kemenkes RI, 2016).
Seseorang  dapat  tertular  filariasis apabila  telah  mendapatkan  gigitan  nyamuk infektif  yang  mengandung  larva  infektif (larva  stadium  3  –  L3).  Pada  saat  nyamuk menarik  probosisnya,  larva  L3  akan  masuk melalui  luka  bekas  gigitan  nyamuk  dan bergerak  menuju  ke  sistem  limfe.  Penularan filaria  tidak  mudah  dari  satu  orang  ke  orang lain  pada  suatu  wilayah  tertentu,  bahwa orang  yang  menderita  filaria  telah  digigit nyamuk ribuan kali.  Larva L3 Brugia malayi dan Brugia  timori akan  menjadi  cacing dewasa  dalam  kurun  waktu  lebih  dari  3,5 bulan,  sedangkan W.bancrofti memerlukan waktu  kurang  lebih  9  bulan.  Selain  sulitnya penularan dari nyamuk ke manusia, sebenarnya kemampuan nyamuk untuk mendapatkan  mikrofilaria  saat  menghisap darah  yang  mengandung  mikrofilaria  juga sangat  terbatas,  nyamuk  yang  menghisap microfilaria terlalu banyak dapat menyebabkan kematian, tapi jika mikrofilaria yang terhisap terlalu sedikit dapat memperkecil  jumlah  stadium  larva  L3  yang akan  ditularkan.  Di  dalam  tubuh  nyamuk, mikrofilaria berselubung
(yang didapatkannya  ketika  menggigit  penderita filariasis), akan melepaskan selubung
tubuhnya yang kemudian bergerak menembus  perut  tengah  lalu  berpindah tempat  menuju  otot  dada  nyamuk.  Larva  ini disebut  larva  stadium  I  (L1).L1  kemudian berkembang  hingga  menjadi  L3  yang membutuhkan waktu 12–14 hari.L3 kemudian bergerak menuju probisis nyamuk. Ketika  nyamuk  yang  mengandung  L3 tersebut  menggigit  manusia,  maka  terjadi infeksi  mikrofilaria  dalam  tubuh  orang tersebut.  Setelah  tertular  L3,  pada  tahap selanjutnya  di  dalam  tubuh  manusia,  L3 memasuki  pembuluh  limfe  dimana  L3  akan tumbuh menjadi cacing dewasa, dan berkembangbiak  menghasilkan  mikrofilaria baru  sehingga  bertambah  banyak.  Kumpulan cacing  filaria  dewasa  ini  menjadi  penyebab penyumbatan pembuluh limfe. Aliran sekresi kelenjar  limfe  menjadi  terhambat  dan menumpuk di suatu lokasi. Akibatnya terjadi pembengkakan  kelenjar  limfe  terutama  pada daerah  kaki,  lengan  maupun  alat  kelamin yang  biasanya  disertai  infeksi  sekunder dengan  fungi  dan  bakteri  karena  kurang terawatnya  bagian  lipatan-lipatan  kulit  yang mengalami  pembengkakan  tersebut(Arsin, 2016).
Penyakit  kaki  gajah  memang  bukan penyakit  yang  mematikan,  Namun  penyakit ini  merupakan  penyebab  utama  kecacatan, stigma  sosial,  hambatan  psikososial  yang menetap dan menurunkan produktifitas  kerja individu,  keluarga  dan  masyarakat  sehingga menimbulkan  kerugian  ekonomi  yang  besar (Nurjazuli, Dangiran dan Bari’ah, 2018).
Pelaksanaan  pengendalian  filariasis di  Indonesia  mencakup  dua  aspek  yaitu memutuskan  mata  rantai  penularan  filariasis dan  perawatan  terhadap  kecacatan  pada penderita filariasis. Pemutusan rantai penularan  filariasis  dilaksakan  dengan  cara pemberian  obat  pencegahan  masal  (POPM)
dan pengendalian vektor. Pengetahuan tentang  pola  dan  siklus  hidup  vektor  sangat diperlukan  dalam  membuat  perencanaan pengendalian  vektor,  dan  akan  memberikan hasil  maksimal  apabila  terdapat  kesesuaian antara  perilaku  vektor  selaku  sasaran  dan metode pengendalian yang dijalankan. Keberadaan  reservoar  juga  sangat  penting untuk  diketahui  peranannya.  Reservoar dalam  siklus  hidup  cacing  filaria  sangat berpotensi sebagai inang perantara penularan
filariasis, sehingga perlu dilakukan identifikasi  reservoar  dan  peranannya  dalam penularan  filariasis(Rahanyamtel,  Nurjazuli and Sulistiyani, 2019).
Pemutusan transmisi vektor merupakan  unsur  utama  program  eliminasi filariasis  limfatik  sehingga  metode  deteksi untuk  mengetahui  ada  tidaknya  infeksi  pada nyamuk  adalah  sangat  diperlukan.  Selain monitoring  terhadap  infeksi  filariasis  pada manusia,  pengukuran  infeksi  larva  pada populasi nyamuk diperlukan untuk mengevaluasi  keberhasilan    intervensi dalam eliminasi  filariasis  pada  daerah  endemis (Goodman et  al. ,  2003;  Laney et  al. ,  2010;
Lau et al. , 2015) .
Mendeteksi adanya mikrofilaria dalam  tubuh  nyamuk  penting  dilakukan, dengan  metode  pembedahan salivary  gland akan  memerlukan  ketrampilan  yang  khusus dan  waktu  yang  cukup  panjang,  sehingga digunakan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk mengatasi hal tersebut. Kemampuan  teknik  PCR,  dapat  mendeteksi adanya  DNA  parasit  filaria  baik  yang  hidup maupun  mati  dalam  densitas  yang  rendah, sehingga  teknik  ini  dikembangkan  untuk mendeteksi  mikrofilaria  pada  tubuh  nyamuk sebagai  tersangka  vektor  filaria.  PCR  dapat digunakan  untuk  mendeteksi  keberadaan genom  parasite  filaria  pada  darah  manusia dan pada tubuh nyamuk yang di duga sebagai vector (Plichart and Lemoine, 2013).
Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk mendeteksi  keberadaan  parasit  filaria  pada nyamuk secara cepat dan akurat menggunakan  ii  PCR  portable,  di  beberapa wilayah  di  Indonesia  yang  telah  melakukan POPM (Pemberian Obat  Pencegahan Masal) filariasis

## BAHAN DAN CARA
Penelitian dilakukan pada tahun 2017 merupakan bagian dari penelitian Multicenter Studi  Eliminasi  Filariasis  di  Indonesia,  yang telah  mendapat  Persetujuan  Etik  dari  Badan Litbangkes,  Kementerian  Kesehatan  nomor: LB.02.01/2/KE.167/2017  tanggal  4  Mei 2017.    Penelitian  ini    dilakukan  di  23 Kabupaten/kota  di  Indonesia  berdasarkan pada kabupaten /kota yang melakukan POPM Filariasis  yaitu  Kota  Aceh  Jaya,  Pidie,  Nias,
Labuhan  batu,  Pasaman  Barat,  Pesisir
Selatan,  Agam,  Limapuluh  Kota,  Bangka Barat, Belitung, Kuantan Senggigi, Pelalawan, Tangerang, Subang, Kotawaringin  Barat,  Hulu  Sungai  Utara, Enrekang,  Donggala,  Bombana,  Kolaka
Utara, Buton, Tidore Kepulauan dan Merauke. Jenis  penelitian  adalah  deskriptif dengan  melakukan    uji  laboratoris  terhadap keberadaan Brugia  malayi dan Wulchereria brancrofti pada  spesies  nyamuk  yang tertangkap.  Disain  penelitian  adalah cross sectional (potong  lintang)  dengan  populasi adalah  semua  jenis  nyamuk  yang  terdapat  di wilayah penelitian, sedangkan  sampel dalam penelitian  ini  adalah  semua    spesies  nyamuk yang tertangkap dengan menggunakan
metode Modificated Human
Landing Collection (HLC). Kriteria inklusinya adalah semua  nyamuk  betina  yang  tertangkap, sedangkan nyamuk yang tidak dapat diketahui spesiesnya menjadi kriteria eksklusi dalam penelitian ini (Anorital et al. , 2020).

## Penangkapan dan Identifikasi Nyamuk
Penangkapan nyamuk dilakukan sebanyak  2  kali  setiap  kabupaten/kota.  Pada setiap  lokasi  penangkapan  ditentukan    6 titik/pos  penangkapan,  yang  terbagi  di  luar dan  didalam  rumah.    Penagkapan  dilakukan dengan  metode  yang  digunakan  adalah modifikasi human landing collection (umpan orang)  dalam double  bed  net (kelambu ganda).  Penangkapan  dilakukan  sepanjang malam  ( whole  night  collection) mulai  jam 18.00  sampai  dengan    06.00  dengan  8  orang penangkap  nyamuk  yang  tersebar  di  6 titik/pos penangkapan. Penentuan titik penangkapan  berdasarkan  pada  kondisi ekologi  yang  mendukung  keberadaan  vektor (adanya  kobakan  air  tergenang,  kelompok tumbuhan  yang  hidup  di  air,  semak  belukar, hutan sekunder atau tersier).
Peralatan penangkapan nyamuk terdiri dari, kelambu ganda,  aspirator, senter, gelas  kertas  yang  tertutup  kasa  bagian atasnya, microsentrifuse  tube ukuran  1,5  ml. Nyamuk  hasil  penangkapan  di  identifikasi dengan  menggunakan  kunci  identifikasi, untuk selanjutnya dilakukan pengelompokkan  berdasarkan  spesies  dan
kondisi ovari nyamuk dengan kondisi parous dan  nulliparous). Pooling dilakukan  dengan memasukkan  kedalam microsentrifuse  tube sebanyak  1-20 nyamuk.
Pemeriksaan  DNA  cacing  filaria dilakukan  di  laboratorium  lapangan  dan  di laboratorium  Entomologi  di  Puslitbang Upaya Kesehatan Masyarakat, Badan Litbang Kesehatan dengan metode Transcription Insulated Isothermal- Polymerase Chain Reaction (iiPCR Methode) (Perwitasari dkk . , 2019).

## Isolasi  DNA
Sampel nyamuk yang telah dikumpulkan  (di pool )  berdasarkan  spesies pada  setiap tube, dihomogenisasi  dengan larutan  500  µL Phospate  Buffer  Saline , kemudian nyamuk digerus/dihancurkan dengan pestle sampai    hancur.  Larutan sampel  disentrifuse  selama  5  menit  untuk memisahkan  protein  dan  asam  nukleat. Setelah  di  sentrifuse,  diambil  supernatannya dan  dimasukkan  kedalam  dalam  microtube 1,5 ml dan sampel DNA siap untuk di uji.
Deteksi
DNA
microfilaria digunakan  untuk  melihat  jejak    keberadaan fragmen  mikrofilaria  di  dalam  nyamuk. Sebagai  kontrol  positif  dalam  penelitian  ini adalah  sampel  positif  yang    berasal  dari Kabupaten  Musi  Rawas,  Provinsi  Sumatera Selatan.
Ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan menggunakan Taco  Preloaded  DNA/RNA Extraction  Kit pada Taco  Mini  Automatic Nucleic  Acid  Extraction  System mengikuti prosedur  kerja  dari  GeneReach,  Taiwan. Supernatant yang telah tersedia,  dimasukkan ke dalam microtube 1.5 ml,  sebanyak 200 µl untuk  dimasukkan  pada  lubang-lubang  yang terdapat pada Kit pack Tacco . Kit pack Tacco dimasukkan  ke  dalam  mesin  Tacco  sesuai dengan petunjuk penggunaan (running sample)  selama  +  25  menit.  Selanjutnya, diambil  pada  bagian  akhir  dari kit  pack  taco sebanyak 150-200 µl DNA hasil ektraksi dan dimasukkan ke dalam microtube 1.5 ml (sisa ekstraksi  berupa  DNA product disimpan dalam freezer dengan suhu -4 o C).

## Amplifikasi
Polimerase chain reaction dilakukan dengan  mesin  rapid PCR mesin  ( GeneReach Biotechnology  Coorperation )  menggunakan primer forward HhaI (5’GCGCATAAATTCATCAGC-3’) dan reverse HhaII (5’GCGCAAAACTTAATTACAAAAGC- 3’). Proses amplifikasi menggunakan premix  pack (dalam  microtube)  yang  telah mengandung  semua primer  spesifik , probe hidrolisis fluoresen dan dNTP , dan Taq DNA polimerase ,  dalam  pellet  kering,  untuk kemudian  dilarutkan  dalam  50  ul  Premix Buffer  B  dan  dicampur  dengan  5  ul  ekstrak DNA.  Selanjutnya  semua  premix  dan  DNA uji diambil sebanyak 50 ul dipindahkan ke R tube  untuk  reaksi  dalam  rapid  PCR  mesin  . R-tube  diletakkan  pada  holder  yang  telah tersedia dengan posisi baik dan benar, karena bagian  bawah  R=tube  berupa  tabung  gelas optikal  yang  akan  berpengaruh dalam  proses deteksi dengan bantuan fluorescent. rangkaian  R-tube  dimasukkan  ke  dalam mesin  Pockit.  Pada  alat  dipilih  panjang gelombang  520  nm  +  550  nm,  selanjutnya mesin  dijalankan  dengan  menekan  tombol ”Run” sesuai dengan petunjuk. Perangkat ini
memungkinkan iiPCR berlangsung, mengumpulkan dan memproses sinyal-sinyal fluoresens  secara  otomatis,  dan  memberikan hasil  kualitatif  (positif  atau  negatif)  dalam satu  jam.  Program  default  mencakup  dua langkah,  50 o C  selama  10  menit  (untuk transkripsi  terbalik  bila  diperlukan)  diikuti oleh  95 o C  selama  sekitar  30  menit  (untuk iiPCR).

## HASIL
Hasil  penangkapan  nyamuk  dengan metode human  landing  collection (HLC) modifikasi  menggunakan  kelambu  ganda, tertangkap  sebanyak  26.276  nyamuk  dari  23 kab/kota wilayah penelitian. Tabel 1 dibawah ini,  memperlihatkan  hasil  penangkapan nyamuk  dengan  metode human  landing collection (HLC)  di  23  kabupaten/kota wilayah  penelitian.  Variasi  spesies  nyamuk terbanyak ditemukan di Kab Aceh Jaya yaitu sebanyak  15  spesies,  Kab  Pidie  13  spesies, Kab  Palelawan  11  spesies,  dan  di  Pasaman Barat  tertangkap  sebanyak  10  spesies, sedangkan  di  Kepulauan  Tidore  dan  Kab. Agam,  masing-masing  hanya  ditemukan  1 spesies  nyamuk  yaitu Cx.  quinquefasciatus . Jenis Culex  quinquefasciatus ini  ditemukan di semua wilayah penelitian.
Tabel  1.  Spesies  nyamuk  yang  tertangkap  dengan  metode human  landing  collection (HLC) modifikasi,   di 23 kabupaten/kota di Indonesia, 2017
No  Spesies
Kabupaten/Kota A ce h Ja ya Pi di e N ia s La bu ha n B at u A ga m Li ma pu lu h K ot a Pa sa ma n B ar at Pe si si r S el at an K ua nt an S in gi ng i Pe la la w an B an gk a B ar at B el itu ng K ot a Ta ng era ng Su ba ng K ot aw ar in gi n B ar at H ul u Su ng ai U ta ra
D on gg al a En re ka ng B omb an a K ol ak a U ta ra
B ut on Ti do re M er au ke 1 Ae. aegypti v v  v v v v 2 Ae. albopictus v
3 Ae. cancricom v 4 Ae. limneato
v
5 Ae. linetopennis v 6 Ae. vexans v v v 7 An. barbirostris v v v v v 8 An. barbumbrosus v 9 An. farauti v 10 An. flavirostris v
11 An. hyrcanus v
No  Spesies
Kabupaten/Kota
A ce h Ja ya Pi di e N ia s La bu ha n B at u
A ga m Li ma pu lu h K ot a Pa sa ma n B ar at Pe si si r S el at an K ua nt an S in gi ng i
Pe la la w an B an gk a B ar at B el itu ng K ot a Ta ng era ng Su ba ng K ot aw ar in gi n B ar at
H ul u Su ng ai U ta ra
D on gg al a En re ka ng B omb an a K ol ak a U ta ra B ut on Ti do re M er au ke 12 An. indifinitus v  v 13 An. karwari v 14 An. kochi v v 15 An. letifer v v 16 An. maculatus v 17 An. nigerimus v v v 18 An. sinensis v 19 An. subpictus v  v 20 An. lumbrosus v v  v 21 An. vagus v v v  v v 22 Ar. subalbatus v v  v v v v 23 Cx. annulus v 24 Cx. bitae v v 25 Cx. fusco v v v 26 Cx. gelidus v 27 Cx. hutchinsoni v  v 28 Cx. infula v v 29 Cx. quenquiflasciatu s
v v  v  v  v  v  v v v v v v  v  v  v  v  v v v  v v v v
30 Cx. sitiens
v v v 31 Cx. tritae v v  v
v v v v  v v v
32 Cx. vishnui v v  v  v v  v v v v v v  v  v v  v v v  v v v 33 Ma. boneae v v v  v 34 Ma. annulata v v v 35 Ma. anulifera v v v v v 36 Ma. dives v v v v v  v 37 Ma. indiana v v v 38 Ma. uniformis
v v  v v  v v v v v v  v  v v v
Hasil  pemeriksaan  nyamuk  terhadap mikrofilaria  disajikan  pada  Tabel  2,  pada Tabel  ini  memperlihatkan  bahwa  ditemukan Brugia  malayi pada  spesies  nyamuk  yaitu Mansonia    annulata,  Culex  sitiens,    Ae. vexans,    Ma.  indiana , Cx.  quenquifasciatus, Ma.dives,  Cx.  vishnui,    Ae.  cancricom,  Ae. aegypti dan An.  karwari. Sementara  itu jumlah kabupaten dengan hasil positif Brugia malayi adalah  9  kab/kota.  Spesies Cx. quenqifasilatus dan Cx.  vishnui merupakan spesies  dengan  hasil  positif  terbanyak  di setiap  kabupaten.  Jumlah  nyamuk  diperiksa
sebanyak  766  yang  terbagi  menjadi  38 microtube, dan ditemukan positif Brugia spp. pada tiga spesies Aedes yang berbeda.   Pada Tabel  2    menunjukkan    hasil  pemeriksaan positif  spesies Wuchereria  bancrofti (Wb) pada  spesies  nyamuk  yang  tertangkap,  yaitu terdapat  5  spesies  nyamuk  mengandung mikrofilaria  WB  yaitu  : Ma.  Indiana, Cx. vishnui , An.  karwari , Cx.  quenqifasilatus dan Ma.  uniformis .  Spesies  nyamuk  ini ditemukan  di  6  kabupaten/kota  wilayah penelitian.
Tabel  2.    Spesies  nyamuk  yang  positif  mengandung  mikrofilaria Brugia  malayi  dan Wuchereria  bancrofti hasil  pemeriksaan  metode  cepat  ii  PCR  berdasarkan kabupaten/kota, 2017
No Kabupaten Spesies Brugia malayi Wuchereria bancrofti 1 Aceh Jaya Ma.  annulata + - Ma. indiana - + 2 Pidie Cx. sitiens + - Ae. vexans + - Ma. indiana + - Cx. quenquifasciatus + - 3 Pesisir Selatan Cx. vishnui - + 4 Pasaman Barat Ma. dives + - Cx. vishnui + - Ae. cancricom + - Ae. aegypti + - 5 Pelalawan Cx. quenqifasciatus + - Ma. dives + - 6 Kuantan Sengigi Cx. vishnui + - 7 Bangka Barat An. karwari + + 8 Belitung Cx. vishnui + - 9 Subang Cx. quenqifasciatus + - 10  Tangerang Cx. quenqifasciatus - + 11  Kolaka Utara Cx. vishnui + - 12  Hulu Sungai Utara Ma. uniformis - + 13  Enrengkang Cx. vishnui - +

## PEMBAHASAN
Dalam  rangka    mencapai  eliminasi filariasis di  Indonesia, upaya yang dilakukan pemerintah  adalah      memutuskan  rantai penularan  dengan  pemberian  obat  massal pada  masyarakat  (POPM),  didaerah  endemis dan  memutus  rantai  penularan  pada  nyamuk vektor. Pemutusan transmisi vektor merupakan  unsur  utama  program  eliminasi filariasis  limfatik  sehingga  deteksi  untuk mengetahui  ada  tidaknya  infeksi  pada nyamuk
adalah sangat diperlukan(Purwantyastuti, 2010).
Hasil  pemeriksaan  sampel  yang didapat  dari  23  wilayah  penelitian,  dengan menggunakan iiPCR , sebanyak 13 kabupaten ditemukan    sampel  nyamuk  positif  terhadap spesies Brugia  malayi maupun Wuchereria bancrofti. Beberapa nyamuk yang ditemukan terdapat kesesuaian dengan catatan (Kementerian  Kesehatan,  2014)  yang  telah
terkonfirmasi  sebagai  vector  filariasis.  Di Provinsi  Aceh  telah  terkonfirmasi  sebagai vector  adalah Cx.  quinquinfasciatus,  Ma. Uniformis dan Ma.  Indiana dengan  jenis parasite B.  malayi dan W.  bancrofti . Sedangkan  hasil  penelitian  ini      ditemukan Ma.  annulata , Cx.  sitiens,    Ae.  vexans,  Ma. Indiana dan Cx.  quenquifasciatus. Beberapa spesies  terdapat  kesesuaian  namun  beberapa spesies  belum  terkonfirmasi  sebagai  vector Filariasis.    Seperti  halnya hasil  penelitian
(Fauziah,  Yasmin  and  Dharma,  2011)  yang dilakukan  di  tiga  kecamatan  di  Kabupaten Pidie  NAD,  yang  mendapatkan  nyamuk Cx. quinquefasciatus ditemukan  positif  terhadap W. brancofti .
Hasil    pemeriksaan  sampel  nyamuk yang berasal Sumatera Barat, terdapat  4 jenis nyamuk dengan sampel positif Brugia malayi yaitu Ma.  dives,    Cx.  vishnui,  Ae.  cancricom dan Ae. aegypti . Hal ini berbeda dengan hasil
penelitian  (Hasmiwati.  and  Nurhayati,  2009) di  Kab.  Limapuluhkota,  yang  menemukan nyamuk Mansonia  uniformis dan Anopheles nigerrimus terhadap Brugia  malayi di  dua desa  penelitian,  sehingga  memungkinkan nyamuk  yang  berperan  sebagai  vektor.    Hal ini  sesuai  dalam  (Kemenkes  RI,  2019) disebutkan    bahwa  Filariasis  di  Sumatera Barat    disebabkan  oleh  cacing  filaria  jenis Brugia  malayi dengan  vector  nyamuk Mansonia  uniformis dan An.  nigerrimus . (Hasmiwati. and Nurhayati, 2009; Ichimori et al. ,  2014),  juga  melaporkan  bahwa  untuk kawasan  yang  lebih  luas  di  Indonesia nyamuk Mansonia merupakan vektor filariasis  malayi.  Di  Sumatera  Selatan dilaporkan  bahwa  nyamuk An.  nigerrimus merupakan  vektor  filariasis  dengan  jenis parasite B.  malayi .  Suzuki  et  al.,  (1981) dalam  (Hasmiwati.  and  Nurhayati,  2009) juga menyebutkan  bahwa vektor filariasis B. malayi di Bengkulu adalah nyamuk Mansonia dan An.  nigerrimus .  Sedangkan hasil penelitian (Santoso et al. , 2015) di Kab.
Tanjung  Jabung  Timur,  Jambi  mendapatkan sampel  positif  spesies Brugia  malayi pada nyamuk Ma. Indiana . Beberapa
hasil penelitian menyebutkan bahwa sebaran cacing filaria di
Indonesia  di  wilayah  Sumatera,  Jawa, Kalimantan dan Sulawesi merupakan sebaran terhadap  parasit B.  malayi dan W.  brancrofti sedangkan di wilayah timur Indonesia antara lain  di  Nusa  Tenggara  Timur,    selain  kedua spesies  tersebut  ditemukan  juga Brugia timori .
Menurut Soeyoko 2002 dalam (Yahya,  Salim  and  Arisanti,  2015)  secara epidemiologi  terdapat  6  tipe  filariasis  yang masing-masing ditularkan oleh nyamuk yang berbeda-beda  bionomiknya.  Setiap  daerah endemis umumnya  mempunyai spesies nyamuk  yang  berbeda  sebagai  vektor penularnya
Dalam  penelitian  Arsin,  A  (2016) disebutkan  bahwa  bahwa  sangat  sulit menemukan larva cacing filaria dalam  tubuh nyamuk dengan metode pembedahan. Hal ini diduga  karena  larva  (mikrofilaria)  memiliki periodisitas tertentu di dalam tubuh manusia). Larva  (mikrofilaria)  hidup  pada  aliran  darah dan  terdapat  pada  aliran  darah  tepi  pada waktu-waktu tertentu saja. Misalnya
mikrofilaria Wuchereria bancrofti periodisitasnya  adalah  nokturnal  atau  malam hari,  artinya  mikrofilaria  hanya  terdapat dalam peredaran darah tepi pada malam hari. Pada  siang  hari  mikrofilaria  terdapat  dalam kapiler-kapiler  organ  dalam  seperti  paru- paru,  jantung,  ginjal  dan  lain-lain  (Arsin, 2016).
(Laney et al. , 2010) dalam
(Haryuningtyas and Subekti, 2008)
menyatakan  bahwa  metode  deteksi  untuk mengetahui  terjadinya  infeksi  pada  populasi vektor  adalah  diseksi  dan  PCR.  Diseksi merupakan  standar  emas  untuk  menghitung level infeksi pada nyamuk, namun metode ini sangat mahal dan tidak efisien jika di lakukan pada  area  dengan  prevalensi  infeksi  kecil dibawah  1%.  Pada  filariasis  bancroftian  uji berdasar PCR dikembangkan untuk mengamplifikasi  elemen  DNA  berulang (”SspI  repeat”)  yang  spesifik  untuk  genus Wuchereria  dan  menunjukkan  hasil  yang cukup sensitif untuk mendeteksi 0,1 pg DNA genom W. Bancrofti  dimana < 1% dari DNA parasite  pada  nyamuk Cx.  Pipiens walau hanya  mengandung  1  larva  (Nasution, Adhiyanto and Indahwati, 2018).
Tidak  semua  vektor  potensial  akan positif  mikrofilaria  karena  banyak  faktor yang  mempengaruhi.  Terdapat  beberapa parameter yang terkait dengan siklus transmisi  filariasis  yaitu    manusia  sebagai sumber  infeksi,  (2)  infeksi  pada  vektor,  (3) perkembangan  larva  filarial  dalam  tubuh vektor, (4) efesiensi vektor dalam menginfeksi  populasi  manusia  dan  (5) efisiensi  perkembangan  dan  reproduksi parasit dalam tubuh manusia  [Wharton, R.H. 1978 dalam (Dalilah et al. , 2017)]. Selain itu banyak  faktor  yang  dapat  mempengaruhi peran  nyamuk  sebagai  vektor,    antara  lain adalah umur nyamuk, kontak antara manusia/hospes  dengan  nyamuk,  frekuensi menggigit,  dan  kerentanan  nyamuk  terhadap parasit.  Kapasitas  menjadi  vektor  adalah dipengaruhi  faktor  lingkungan,  tingkah  laku, biokimia  dan  seluler  yang  mempengaruhi hubungan  antara  vektor,  patogen  yang  akan menginfeksi.
Deteksi  parasit  mikrofilaria  pada nyamuk  di  wilayah-wilayah  yang  telah melakukan POPM penting dilakukan sebagai upaya evaluasi  untuk mendeteksi keberadaan
parasit pada nyamuk penular dalam pemutusan transmisi vektor, sehingga perlunya  upaya-upaya  yang  dilakukan  dalam melengkapi  kegiatan  surveilan.    Surveilans tidak  hanya  dilakukan  pada  manusia  namun juga dilakukan secara komprehensif terhadap vektor penularnya.
Pasca  POPM  perlunya  dilakukan penelitian laboratorium xenomonitoring untuk mendeteksi microfilaria di dalam tubuh nyamuk,  dengan  metode  molekuler(Ichimori et  al. ,  2014).  Hal  ini  sesuai  dengan World Health Health Organization Global Programme to Eliminate Lymphatic Filariasis , pasca
POPM dilakukan xenomonitoring yang bertujuan untuk mengetahui microfilaria dalam tubuh nyamuk (WHO,  2010).  Untuk  mencapai  eliminasi filariasis  tidak  hanya  pada  pengobatan melalui  POPM.  Salah  satu  poin  penting adalah  melihat  kapasitas  vektor  (vector capacity)  di  daerah  endemis  terkait  dengan data vektor yang sudah terkonfirmasi sebagai vektor potensial (Irawan, Boesri and Nugroho, 2018).
Untuk mendukung
eliminasi filasiasis, kegiatan preventif perlu dilakukan, antara  lain  dengan  pengendalian  terhadap serangga  penularnya  (vektor).  Pengendalian vektor  terintegrasi  akan  efektif  apabila daerah  kasus  filariasis  juga  merupakan wilayah  dengan  kasus  malaria  dan  demam berdarah  Dengue,  walaupun  pada  pada beberapa  negara  belum  menunjukkan  hasil yang  memuaskan  (Stone,  Lindsay  and Chitnis, 2014).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Ditemukan  positif  microfilaria  di beberapa spesies  nyamuk yang  ditemukan di beberapa kabupaten/kota di Indonesia.
Wuchereria  bancrofti dan Brugia  sp Positif pada  vector  filariasis  yang  diidentifikasi. Dengan  adanya  microfiaria  pada  beberapa spesies  nyamuk  yang  merupakan  vector filaria  dan  belum  terkonfirmasi  sebagai vector,  menandakan  masih  ada  potensi penularan  filariasis.  Positif  microfilaria Brugia  sp pada  Aedes  Aegypti  dan  spesies lain,  menandakan  potensi  nyamuk  dengan
spesies lain dapat berpeluang menjadi vector filariasis.

## Saran
Diperlukan upaya monitoring terhadap    vector  filariasis  dalam  upaya preventif  dengan  melakukan  surveilan  aktif dengan melakukan pemeriksaan DNA ( xenomonitoring) terhadap  species  yang dapat berpotensi sebagai vector.

## KONTRIBUSI PENULIS
Semua  penulis  dalam  artikel  ini adalah  sebagai  kontributor  utama  (Jusniar Ariati, Dian Perwitasari dan Roy Nusa RES) yang  bertanggung  jawab  terhadap  konsep penulisan artikel, pemeriksaan sampel, editing dan validasi data secara menyeluruh.

## KONFLIK OF INTEREST
Penulis tidak memiliki konflik kepentingan yang terkait dengan materi yang disajikan dalam makalah ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan kepada  Kepala  Puslitbang  Upaya  Kesehatan Badan  Litbangkes,  yang  telah  memberi kesempatan  kepada  tim  peneliti  untuk melakukan  kegiatan  penelitian  ini  sehingga berjalan  dengan  baik,  Drs.  Anorital,  MKes dan Dr. Miko Hananto, SKM, MKes sebagai Ketua  Pelaksana  dan  wakil  ketua  pelaksana, serta seluruh anggota penelitian.

## DAFTAR  PUSTAKA
Al-Tameemi,  K.  and  Kabakli,  R.  (2019)  ‘Lymphatic Filariasis:  an  Overview’, Asian  Journal  of Pharmaceutical  and  Clinical  Research , 12(12), pp. 1–5. doi: 10.22159/ajpcr.2019.v12i12.35646.
Anorital et al. (2020) ‘Endemicity Brugia malayi Status Post  Transmission  Assessment  Survey  in Indonesia-2017’, 22(April  2020).  doi: 10.2991/ahsr.k.200215.090.
Arsin,  A.  A.  (2016) Epidemiologi  filariasis .  doi: 10.1002/dc.21698.
Dalilah et  al. (2017)  ‘Identifikasi  Spesies  Nyamuk Genus  Mansonia  dan  Deteksi  Molekuler terhadap  Mikrofilaria/Larva  Cacing  Brugia malayi pada Nyamuk Genus Mansonia’, Jkk , 4(2), pp. 69–75.
Fauziah, Yasmin, Y. and Dharma, W. (2011) ‘Analisis Nyamuk Vektor Filariasis Di Tiga Kecamatan  Kabupaten  Pidie  Nanggroe  Aceh Darussalam’, Jurnal  Biologi  Edukasi ,  3(1), pp. 26–30.
Goodman,  D.  S. et  al. (2003)  ‘PCR  and  mosquito dissection  as  tools  to  monitor  filarial infection  levels  following  mass  treatment’, Filaria Journal , 2, pp. 1–9. doi: 10.1186/1475-2883-2-11.
Gordon,  C.  A.,  Jones,  M.  K.  and  McManus,  D.  P.
(2018) ‘The history of bancroftian lymphatic filariasis in Australasia and Oceania: Is there a  threat  of  re-occurrence  in  mainland Australia?’, Tropical Medicine and Infectious Disease , 3(2). doi: 10.3390/tropicalmed3020058.
Haryuningtyas,  D.  and  Subekti,  D.  T.  (2008)  ‘Deteksi
Mikrofilaria  /  Larva  Cacing  Brugia  malayi pada  Nyamuk  dengan  Polimerace  Chain Reaction’, Jitv , 13(3), pp. 240–248.
Hasmiwati.  and  Nurhayati  (2009)  ‘Kajian  Nyamuk Vector  di  Daerah  Endemik  Filariasis  Di Kenagarian  Mungo  Kabupaten  Lima  Puluh Kota’, Jurnal  Kesehatan  Masyarakat ,  03(2), pp. 58–61.
Ichimori,  K. et  al. (2014)  ‘Global  Programme  to
Eliminate Lymphatic Filariasis: The Processes  Underlying  Programme  Success’, PLoS Neglected Tropical Diseases , 8(12), pp. 1–8. doi: 10.1371/journal.pntd.0003328. Irawan,  A.  S.,  Boesri,  H.  and  Nugroho,  S.  S.  (2018)
‘Program Nasional Untuk Eliminasi Filariasis
Limfatik: Studi Kasus Di Kabupaten Pekalongan,  Jawa  Tengah’, Vektora :  Jurnal Vektor  dan  Reservoir  Penyakit ,  10(2),  pp. 95–102.  doi:  10.22435/vk.v10i2.8812.97- 104.
Kemenkes RI (2016) ‘Infodatin Filariasis’, 2016 , pp. 1– 8.
Kemenkes  RI  (2019)  ‘Situasi  Filariasis  di  Indonesia’,
Infodatin Pusat Data dan Informasi
Kementerian Kesehatan RI , pp. 1–12.
Kementerian  Kesehatan  (2014)  ‘Peraturan  Mentri Kesehatan Republik Indonesia No. 94 Tahun 2014’, Penanggulangan  Filariasis ,  pp.  1– 118.
Laney,  S.  J. et  al. (2010)  ‘Detection  of  Wuchereria bancrofti  L3  larvae  in  mosquitoes:  A  reverse transcriptase  PCR  assay  evaluating  infection and  infectivity’, PLoS  Neglected  Tropical Diseases , 4(2), pp. 1–10.
doi:
10.1371/journal.pntd.0000602. Lau,  Y.  L. et  al. (2015)  ‘Draft  genome  of  Brugia pahangi:  High  similarity  between  B.  pahangi and  B.  malayi’, Parasites  and  Vectors . Parasites  &  Vectors,  8(1),  pp.  1–14.  doi: 10.1186/s13071-015-1064-2.
Nasution, S. F., Adhiyanto, C. and Indahwati, E. (2018) ‘Preliminary  Study  Of  Wuchereria  Bancrofti L3 Larvae Detedtion In Culex
Quinquefasciatus  As  Vector  Potential  Of Filariasis  In  Endemic  Area  Of  South Tangerang, BY Utilizing PCR Assay For L3- Activated  Cuticlin  Transcript  mRNA  Gene AndTPH-1  Gene’, Indonesian  Journal  of Tropical  and  Infectious  Disease ,  7(3),  p.  67. doi: 10.20473/ijtid.v7i3.7352.
Nurjazuli,  N.,  Dangiran,  H.  L.  and  Bari’ah,  A.  A.
(2018) ‘Analisis Spasial Kejadian Filariasi di Kabupaten  Demak  Jawa  Tengah’, Jurnal Kesehatan  Lingkungan  Indonesia ,  17(1),  p. 46. doi: 10.14710/jkli.17.1.46-51. Perwitasari,  D. et  al. (2019)  ‘Detection  of  Dengue Virus Using a Field- Deployable Pcr System : Evaluation  on  Human  Serum  Samples  in Indonesia’, SoutheaSt  aSian  J  trop  Med public health , 50(6).
Plichart,  C.  and  Lemoine,  A.  (2013)  ‘Monitoring  and evaluation of lymphatic filariasis interventions:  An  improved  PCR-based  pool screening  method  for  high  throughput Wuchereria  bancrofti  detection  using  dried blood spots’, Parasites and Vectors , 6(1), pp. 1–5. doi: 10.1186/1756-3305-6-110.
Purwantyastuti  (2010)  ‘Pemberian  Obat  Massal Pencegahan  (POMP)  Filariasis’, Buletin Jendela Epidemiologi , 1(1), pp. 15–19. Rahanyamtel,  R.,  Nurjazuli,  N.  and  Sulistiyani,  S.
(2019)  ‘Faktor  Lingkungan  dan  Praktik Masyarakat  Berkaitan  Dengan  Kejadian Filariasis  di  Kabupaten  Semarang’, Jurnal Kesehatan Lingkungan Indonesia , 18(1), p. 8. doi: 10.14710/jkli.18.1.8-11. Santoso,  S. et  al. (2015)  ‘Deteksi  mikrofilaria  Brugia malayi  pada  nyamuk  Mansonia  spp  dengan pembedahan  dan  metode  PCR  di  Kabupaten Tanjung  Jabung  Timur’, ASPIRATOR  - Journal  of  Vector-borne  Disease  Studies , 7(1), pp. 29–35. doi: 10.22435/aspirator.v7i1.3728.29-35.
Stone,  C.  M.,  Lindsay,  S.  W.  and  Chitnis,  N.  (2014) ‘How  Effective  is  Integrated  Vector Management Against Malaria and Lymphatic Filariasis Where the Diseases Are Transmitted  by  the  Same  Vector?’, PLoS Neglected  Tropical  Diseases ,  8(12),  pp.  1– 12. doi: 10.1371/journal.pntd.0003393.
WHO  (2010)  ‘World  Health  Organization  Global Programme  Global  Programme  To  Eliminate Lymphatic Filariasis’, pp. 1–93.
Yahya, Y., Salim, M. and Arisanti, M. (2015) ‘Deteksi Brugia  malayi  pada  Armigeres  subalbatus dan Culex quinquefasciatusyang diinfeksikan darah  penderita  filariasis  dengan  metode PCR’, ASPIRATOR  -  Journal  of  Vector- borne  Disease  Studies ,  6(2),  pp.  35–42.  doi: 10.22435/aspirator.v6i2.3623.35-42. Yanuarini, C. (2015) ‘Faktor-Faktor Yang Berhubungan  Dengan  Kejadian  Filariasis  Di Puskesmas  Tirto  I  Kabupaten  Pekalongan’, Fikkes Jurnal Keperawatan , 8(1), pp. 73–86.