Accredited by Ministry of Research, Technology                          DOI: https://doi.org/10.35799/jis.20.2.2020.28835 and Higher Education No: 28/E/KPT/2019                Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Biji Langsat ( Lansium domesticum var. pubescens ) dan Duku ( Lansium domesticum var. domesticum )
dengan Metode DPPH a
Josepin P Konda 1) , Jainer P Siampa 1) , Trina E Tallei 2) , Billy J Kepel 3) , Fatimawali Fatimawali 1*)
1) Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi, Manado
2) Program Studi Biologi Fakultas Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi, Manado
3) Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi, Manado
* Coresponding author: fatimawali@unsrat.ac.id
(Article History:  Received 15-06-2020; Accepted 18-08-2020; Published 08-10-2020)

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  kandungan fitokimia dan  aktivitas antioksidan  ekstrak biji  langsat  dan  duku  dengan  metode  DPPH.  Biji  buah  langsat  dan  buah  duku  diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  metanol.  Skrining  fitokimia  yang  dilakukan meliputi  uji alkaloid, flavonoid,  tannin, triterpenoid, steroid dan saponin secara kualitatif dengan metode  uji  warna.  Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  dan  vitamin  C  sebagai pembanding,  serapan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 517 nm. Skrining fitokimia pada ekstrak metanol biji langsat  menunjukkan hasil positif terhadap alkaloid,  triterpenoid  dan  saponin,  sementara  pada  ekstrak  metanol  biji  duku  menunjukkan  hasil positif  terhadap  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  triterpenoid,  steroid  dan  saponin.  Aktivitas antioksidan  ekstrak  biji  langsat  dianalisis  menggunakan  persamaan  garis  regresi  Y=  33,143  + 0,2922X,  diperoleh  IC₅₀  57,69  μg/mL.  Sedangkan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji  duku dianalisis  menggunakan  persamaan  garis  regresi  Y  =  29,421  +  0,6554X,  diperoleh  IC₅₀  31,40 μg/mL  dan  pembanding  vitamin  C  diperoleh  IC₅₀  8,03  μg/mL.  Hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  metanol  biji  buah  langsat  memiliki  kandungan  alkaloid,  triterpenoid dan  saponin  serta  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  sedangkan  ekstrak  metanol  biji  buah duku  memiliki  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  triterpenoid  dan  saponin  serta  memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Kata Kunci: Antioksidan, biji duku, biji langsat
Antioxidant Activity of Methanol Extract of Langsat Seeds ( Lansium domesticum var. pubescens ) and Duku Seeds ( Lansium domesticum var. domesticum ) by Using DPPH Method

## ABSTRACT
This study aimed to determine the phytochemical content and antioxidant activity of langsat seed extract  and  duku  seed  extract  by  using  the  DPPH  method.  Langsat  seeds  and  duku  seeds  were extracted by using maceration method with methanol as the solvent. Phytochemical screening was carried  out  including  a  qualitative  test  of  alkaloids,  flavonoids,  steroids/triterpenoids,  saponins, and  tannins  by  using  the  color  test  method.  Antioxidant  activity  was  tested  by  using  the  DPPH method  and  vitamin  C  used  as  comparison,  the  absorption  was  measured  by  using  UV-Vis spectrophotometer  at  517  nm  wavelength.  The  result  of  phytocemical  screening  on  methanol extract  of  langsat  seeds  showed  positive  results  on  alkaloids,  triterpenoids,  and  saponins, meanwhile  methanol  extract  of  duku  seeds  showed  positive  results  on  alkaloids,  flavonoids, triterpenoids,  tannin  and  saponins.  The  antioxidant  activity  of  methanol  extract  of  langsat  seeds was analyzed by using the equation of the regression line  Y= 33,143 + 0,2922X, which obtained IC₅₀ value of 57.69 μg/mL. Meanwhile, the antioxidant activity of methanol extract of duku seeds
was  analyzed  by  using  the  equation  of  the  regression  line  Y  =  29,421  +  0,6554X, obtained  IC₅₀ 31,40 μg/mL. Vitamin C obtained IC₅₀ 8.03 μg/mL. On the basis of all results, it can be concluded that the methanol extract of langsat seeds contained alkaloids, saponins and triterpenoid and has a strong  antioxidant  activity.  Meanwhile,  the  methanol  extract  of  duku  seeds  contained  alkaloids, flavonoids, triterpenoids, tannin and saponins and has a very strong antioxidant activity.
Keywords: Antioxidants, duku seeds, langsat seeds

## PENDAHULUAN
Dalam  kehidupan  sehari-hari,  kita tidak  dapat  terbebas  dari  senyawa  radikal bebas.  Sumber  pembentuk  radikal  bebas antara  lain  asap  rokok,  makanan  yang digoreng dan dibakar, paparan sinar matahari berlebih,  asap kendaraan bermotor, obat-obat tertentu,  racun  dan  polusi  udara  (Umayah  & Amrun,  2007).  Radikal  bebas  adalah  suatu atom  atau  molekul    yang    mempunyai elektron    tidak  berpasangan.    Radikal    bebas dapat    masuk  ke    dalam    tubuh    dan menyerang    sel-sel  yang    sehat    dan menyebabkan    sel-sel  tersebut  kehilangan fungsi dan strukturnya (Liochev, 2013).
Efek  negatif  radikal  bebas  terhadap tubuh  dapat  dicegah  dengan  senyawa  yang disebut  antioksidan.  Antioksidan  memiliki kemampuan  memberikan  elektron,  mengikat dan  mengakhiri  reaksi  berantai  radikal  bebas (Halliwell,  2012).  Antioksidan  merupakan senyawa  yang  dapat  menstabilkan  radikal bebas dalam melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki  radikal bebas dan menghambat terjadinya  reaksi  berantai  dari  pembentukan radikal bebas (Selawa et al. , 2013). Untuk menguji adanya aktivitas antioksidan  dapat  menggunakan  metode
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl).
Pengamatan  terhadap  penangkapan  radikal DPPH  dapat  dilakukan  dengan  mengamati penurunan  absorbansi  (Yu et  al. ,  2002).
Parameter yang
digunakan untuk
penangkapan radikal DPPH adalah IC₅₀ yaitu konsentrasi  ekstrak  atau  fraksi  uji  yang dibutuhkan  untuk  menangkap  radikal  DPPH sebanyak 50% (Zou et al ., 2004).
Langsat merupakan salah satu tanaman obat  yang  dapat  dijumpai  di  Indonesia. Beberapa bagian dari langsat banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat  antara  lain untuk  mengobati  berbagai  penyakit,  antara lain  sebagai  obat  cacing,  obat  demam,  obat diare,  dan  bahkan  kulit  batang  juga  sebagai anti kanker (Mokosuli, 2008).
Duku  termasuk  jenis  buah  tropis  yang dikenal  di  Indonesia,  sangat  digemari  karena
rasanya yang manis dan aromanya yang enak. Duku  memiliki  kandungan  gizi  dan  serat ( dietary  fiber )  yang  tinggi  dan  sangat bermanfaat  untuk  memperlancar  pencernaan dan  mencegah  kanker  usus  besar  (colon) (Zulkarnain,  2017).  Rasa  pahit  pada  biji sering dikaitkan dengan  senyawa  antioksidan yang  dikandungnya  yang  dapat  mencegah serangan  radikal  bebas,  sehingga  dapat menurunkan  risiko  penyakit    jantung, diabetes dan kanker.
Sebagai  salah  satu  upaya  untuk mengoptimalkan  pemanfaatan  bahan  alam hayati  Indonesia,  maka  perlu  dilakukan penelitian  dengan  tujuan  untuk  menguji aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji  duku  dan langsat.  Pengungkapan  potensinya  sebagai sumber antioksidan berkaitan dengan senyawa  kimia  yang  dikandungnya  sehingga perlu dilakukan skrining fitokimia.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2019  sampai  dengan  bulan  April 2020  di  Laboratorium advance (lanjut) Program  Studi  Farmasi,  Universitas  Sam Ratulangi, Manado.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorium.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  timbangan  analitik, oven,  blender, alumuium  foil ,  toples,  corong, ayakan,  kertas  saring, vacuum  evaporator , beaker  glass ,  labu  takar,  pipet  tetes, mikropipet,  tabung  reaksi,  rak  tabung,  gelas ukur, batang pengaduk, hotplate dan spektrofotometer UV-Vis.
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  biji  duku  ( Lansium domesticum var. domesticum) ,  biji  langsat ( Lansium domesticum var. pubescens) , vitamin  C  p.a,  metanol,  CH 3 COOH  glasial, aquades,  FeCl 3 ,  pereaksi  Mayer,  pereaksi
Dragendorf,  pereaksi  Wagner,  amonia,  asam klorida,  serbuk  magnesium,  asam  sulfat, etanol  96  %,  kloroform  dan 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) (Sigma-Aldrich).

## Penyiapan Sampel
Biji  duku  dan  langsat  dipisahkan  dari kulit  dan  daging  buahnya,  dicuci  bersih dibawah air mengalir. Sampel biji langsat dan biji duku diangin-anginkan selama 3 hari dan dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu  40°C hingga  kadar  airnya  berkurang  hingga mencapai  5%.  Biji  langsat  dan  duku  yang kering  dihaluskan  dengan  blender,  kemudian diayak dengan ayakan mesh 40.

## Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi  tumbuhan  dilakukan  di
Laboratorium Taksonomi Tumbuhan
Program  Studi  Biologi  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas
Sam Ratulangi.

## Ekstraksi
Sebanyak 300 g serbuk kering simplisia ditambahkan pelarut metanol sebanyak  900  mL  dan  dibiarkan  terendam selama 5 hari terlindung dari cahaya. Selama perendaman  dilakukan  pengadukan  setiap hari.  Ekstrak  kemudian  disaring  dengan menggunakan kertas saring kemudian residunya dimaserasi dengan metanol sebanyak  450  mL  menggunakan  prosedur yang sama, maserasi dilakukan selama 2 hari. Selanjutnya  maserat  metanol  dipekatkan menggunakan  oven  pada  suhu  40°C  sampai diperoleh ekstrak kental.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  yang  dilakukan meliputi  uji  alkaloid,  flavonoid,  tannin, triterpenoid,  steroid  dan  saponin    yang berdasar pada metode Harborne.
a. Pemeriksaan Alkaloid Sebanyak 0,2 gram ekstrak dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan kloroform
secukupnya, selanjutnya ditambahkan 5 mL amonia dan 5 mL  kloroform  lalu  ditambahkan  10  tetes H 2 SO 4 2N.  Campuran  dikocok  dan  dibiarkan hingga  membentuk  2  lapisan.  Lapisan  atas dipindahkan  dalam  3  tabung  reaksi  dengan volume  masing-masing  1  mL.  Kemudian masing-masing  tabung  tersebut  ditambahkan beberapa  tetes  pereaksi  Mayer,  Wagner  dan Dragendorff.  Apabila  terbentuk  endapan menunjukkan bahwa sampel tersebut
mengandung alkaloid, dengan pereaksi Mayer  memberikan  endapan  putih,  dengan pereaksi Wagner memberikan endapan berwarna  coklat  dan  pereaksi  Dragendorff memberikan endapan berwarna jingga. b. Pemeriksaan Flavonoid Sebanyak 0,2 gram ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan  5  mL  etanol  dan  dipanaskan selama  5  menit  dalam  tabung  reaksi. Selanjutnya  ditambahkan  beberapa  tetes  HCl pekat.  Kemudian  ditambahkan  0,2  gram serbuk  Mg.  Adanya  flavonoid  ditunjukkan oleh timbulnya warna merah tua.
c. Pemeriksaan Tanin Sebanyak 0,2 gram ekstrak
ditambahkan  dengan  etanol  secukupnya. Kemudian  ditambahkan  2-3  tetes  larutan FeCl₃  1%.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya  warna  hitam  kebiruan  atau hijau.
d. Pemeriksaan Steroid dan Triterpenoid Sebanyak 0,2 gram ekstrak
ditambahkan  CH 3 COOH  glasial  secukupnya, dibiarkan selama 15 menit   kemudian 6 tetes larutan  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi dan  ditambahkan  2-3  tetes  H 2 SO 4 pekat. Adanya  triterpenoid  ditunjukkan  dengan terjadinya  perubahan  warna  menjadi  warna merah atau ungu, sedangkan steroid ditunjukkan  dengan  terjadinya  perubahan warna menjadi warna biru atau hijau. e. Pemeriksaan Saponin Sebanyak 0,2 gram ekstrak
ditambahkan  dengan  akuades  secukupnya kemudian  didihkan  2-3  menit.  Selanjutnya didinginkan  dan  dikocok  kuat.  Hasil  positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  buih  yang stabil.

## Pembuatan Larutan DPPH
Serbuk DPPH sebanyak 4 mg dilarutkan  dengan  metanol  hingga  mencapai 100 mL dalam labu ukur. Larutan dijaga pada suhu  kamar,  terlindung  dari  cahaya  untuk segera digunakan.

## Pengukuran Larutan Kontrol DPPH
Pengukuran
dilakukan dengan memipet 1 ml larutan DPPH lalu ditambahkan  dengan  larutan  ekstrak  hingga volume  5  ml  dan  dicukupkan  volumenya sampai  5  ml.  Campuran  dikocok  dan dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu  kamar kemudian diukur absorbansinya pada panjang
gelombang  517  nm,  dilakukan  sebanyak  3 replikasi.

## Pengukuran Aktivitas Antioksidan Sampel
Sebanyak  10  mg  ekstrak  dilarutkan dengan  metanol  dalam  labu  takar  10  mL sampai  batas,  diperoleh  larutan  stok  dengan konsentrasi  1000  µg/mL.  Dibuat  masing- masing  konsentrasi  5  µg/mL,  10  µg/mL,  15 µg/mL, 20 µg/mL dan 25 µg/mL sebanyak 5 mL.
Pada masing-masing konsentrasi dipipet sebanyak 1 mL dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  dan  ditambahkan  2  mL  larutan DPPH  sehingga  larutan  menjadi  3  mL kemudian  divortex  selama  5  detik  dan dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu  kamar. Masing-masing larutan tersebut diukur serapannya pada panjang gelombang 517 nm, dilakukan sebanyak 3 replikasi.
Pengukuran Aktivitas Antioksidan

## Vitamin C
Ditimbang vitamin C p.a  sebanyak 10 mg  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  10 ml, diperoleh larutan stok dengan konsentrasi 1000  µg/mL.  Dari  larutan  stok  masing- masing dipipet 25 µL, 50 µL, 75 µL, 100 µL dan  125 µL,  kemudian  ditambahkan  metanol hingga  5  mL  sehingga  diperoleh  masing- masing  konsentrasi  5  µg/mL,  10  µg/mL,  15 µg/mL,  20  µg/mL  dan  25  µg/mL.  Pada masing-masing  konsentrasi dipipet 1 mL dan dimasukan  ke dalam tabung reaksi  kemudian ditambahkan 2 mL larutan DPPH. Setelah itu, divortex selama 5 detik dan dibiarkan selama 30  menit  pada  suhu  kamar.  Masing-masing larutan  tersebut  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  517  nm,  dilakukan sebanyak 3 replikasi.
Penentuan  Nilai Inhibitory  Concentration
Parameter  yang  bisa  digunakan  untuk menginterprestasikan  hasil  dari  uji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  adalah dengan  nilai
,  yaitu  konsentrasi  yang menyebabkan hilangnya 50% aktivitas DPPH. Untuk menghitung nilai diperlukan data persen inhibisi dari pengujian yang  dilakukan.  Persen  inhibisi  dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Konsentrasi sampel dan persen inhibisi yang  diperoleh  diplot  masing-masing  pada sumbu x dan y pada persamaan regresi linear. Persamaan tersebut digunakan untuk menentukan dari masing-masing sampel dinyatakan  dengan  nilai  y  sebesar  50  dan nilai  x  yang  akan  diperoleh  sebagai (Molyneux,  2004).  Suatu  senyawa  memiliki antioksidan yang sangat kuat bila nilai <
50 µg/mL, kuat bila nilai
bernilai 50-100
µg/mL,  sedang  bila  nilai bernilai  100- 150 µg/mL, dan lemah bila nilai bernilai 151 - 200 µg/mL (Blois, 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Proses ekstraksi simplisia biji duku dan langsat  dilakukan  dengan  metode  maserasi dengan  sistem  remaserasi  atau  maserasi berulang. Metode maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam  karena  dengan  perendaman  sampel tumbuhan  akan  terjadi  pemecahan  dinding dan  membran  sel  akibat  perbedaan  tekanan antara  di  dalam  dan  di  luar  sel  sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang dilakukan (Lenny, 2006).
Metanol  merupakan  pelarut  universal yang  memiliki  gugus  polar  (-OH)  dan  gugus non  polar  (-CH₃)  sehingga  dapat  menarik analit-analit yang bersifat polar dan non polar (Watson, 2009). Tujuan dilakukannya remaserasi  adalah  untuk  menyari  senyawa- senyawa  yang  masih  tertinggal  atau  tidak tersari.  Filtrat  hasil  maserasi  disaring, dikumpulkan dan kemudian pelarutnya diuapkan  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental biji langsat dan duku dengan rendemen 7,2% dan 8,1%.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  bertujuan  untuk mengetahui  kandungan  senyawa  fitokimia pada  ekstrak  metanol  biji  langsat  secara kualitatif. Senyawa fitokimia yang diidentifikasi  meliputi,  senyawa  alkaloid, senyawa  flavonoid,  senyawa  tanin,  senyawa triterpenoid,  senyawa  steroid  dan  senyawa saponin  berdasarkan  McMurray    &  Fay (2004)  dengan  hasil  yang  positif  jika
memperlihatkan  hasil  reaksi  seperti  pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel  1.  Hasil  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Biji Buah Langsat Hasil pengujian fitokimia pada Tabel 1
yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa ekstrak  biji  langsat  memiliki  kandungan metabolit sekunder berupa alkaloid,
triterpenoid dan saponin.
Tabel  2.  Hasil  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Biji Buah Duku Senyawa Metabolit sekunder Hasil Positif Menurut pustaka Hasil Penelitian Alkaloid :  Mayer Terbentuk endapan putih +  Wagner Terbentuk endapan coklat +  Dragendorf Terbentuk endapan jingga + Flavonoid Terbentuk  warna merah tua + Tanin Terbentuk warna hitam kebiruan atau hijau + Triterpenoid Terbentuk warna merah atau ungu + Steroid Terbentuk warna biru atau hijau - Saponin Terbentuk buih stabil +
Hasil pengujian fitokimia pada Tabel 2 yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa ekstrak  biji  duku  memiliki  kandungan metabolit sekunder berupa alkaloid,
flavonoid, tanin, triterpenoid dan saponin.
Uji  alkaloid,  ekstrak  biji  langsat  dan biji  duku  menunjukkan  hasil  positif  pada pereaksi  Mayer,  Wagner  dan  Dragendorff. Prinsip  yang  digunakan  pada  uji  alkaloid yaitu reaksi pengendapan yang terjadi karena adanya  penggantian  logam.  Atom  nitrogen yang  memiliki  pasangan  elektron  bebas sehingga  dapat  digunakan  untuk  membentuk ikatan  kovalen  koordinat  dengan  ion  logam. Hasil ini diperkuat oleh penelitian Tanwirotun, 2015, yang menemukan senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin dalam ekstrak biji duku.
Uji  flavonoid  positif  pada  ekstrak  biji duku.  Penambahan  HCl  pekat  pada  uji flavonoid  digunakan  untuk  menghidrolisis flavonoid  menjadi  aglikonnya,  yaitu  dengan menghidrolisis  O-glikosil.  Glikosil  akan tergantikan oleh H + dari asam karena sifatnya yang elektrofilik. Glikosida berupa gula yang biasa  dijumpai  yaitu  glukosa,  galaktosa  dan raminosa.  Menurut  Robinson  (1995),  warna merah  yang  dihasilkan  menandakan  adanya flavonoid  akibat  dari  reduksi  oleh  asam klorida dan magnesium.
Uji tanin positif pada ekstrak biji duku, dilakukan  dengan  penambahan  FeCl3  yang bereaksi  dengan  salah  satu  gugus  hidroksil yang  ada  pada  tanin.  Fungsi  FeCl3  adalah menghidrolisis  golongan  tanin  sehingga menghasilkan perubahan warna biru kehitaman  dan  tanin  terkondensasi  yang menghasilkan warna hijau kehitaman. Kandungan  tanin  juga  terdapat  pada  biji alpukat (Malangngi et al ., 2012).
Uji  triterpenoid  positif  pada  ekstrak biji  langsat  dan  duku.  Penambahan  H₂SO₄ pekat mengakibatkan  terjadinya  reaksi antara anhidrida  asetat  dengan  asam  sehingga  atom C  pada  anhidrida  membentuk  karbokation. Karbokation  yang  terbentuk  bereaksi  dengan atom  O  pada  gugus  –OH  yang  ada  pada senyawa  triterpenoid.  Reaksi  ini  merupakan reaksi esterifikasi yaitu pembentukan senyawa  ester  oleh  senyawa  triterpenoid dengan  anhidrida  asetat.  Selain  pada  biji langsat  dan  biji  duku  yang  ditemukan  dalam penelitian  ini, triterpenoid juga terdapat pada daun  dan  kulit  batang  duku  (Aldi,  2013; Darma,  2014).    Menurut  Robinson  (1995),
Senyawa Metabolit sekunder Hasil Positif Menurut pustaka Hasil Penelitian Alkaloid :  Mayer Terbentuk endapan putih +  Wagner Terbentuk endapan coklat +  Dragendorf Terbentuk endapan jingga + Flavonoid Terbentuk warna merah tua - Tanin Terbentuk warna hitam kebiruan atau hijau - Triterpenoid Terbentuk warna merah atau ungu + Steroid Terbentuk warna biru atau hijau - Saponin Terbentuk buih stabil +
118 Jurnal Ilmiah Sains Vol. 20  No 2, Oktober 2020
berbagai  macam  aktivitas  fisiologis  yang menarik ditunjukkan oleh beberapa triterpenoid,  dan  senyawa  ini  merupakan komponen  aktif  dalam  tumbuhan  obat  yang telah  digunakan  untuk  mengobati  penyakit termasuk  diabetes,  kerusakan  hati  dan malaria.
Uji  saponin  positif  pada  ekstrak  biji langsat dan duku karena  terbentuk busa yang stabil.  Menurut  Robinson  (1995),  senyawa yang  memiliki  gugus  polar  dan  non  polar bersifat  aktif  permukaan  sehingga  saat saponin dikocok dengan air dapat membentuk misel.  Pada  struktur  misel,  gugus  polar menghadap  ke  luar  sedangkan  gugus  non polarnya  menghadap  ke  dalam,  keadaan inilah  yang  tampak  seperti  busa.  Kandungan alkaloid, flavonoid, tanin, triterpenoid, steroid  dan  saponin  pada  biji  duku,  hal  yang sama  juga  ditemukan  pada  biji  alpukat    oleh Kopon et al. (2020).

## Uji Antioksidan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada sampel  dilakukan  dengan  metode  DPPH. Prinsip  dari  metode  ini  adalah  mengukur aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif  yaitu dengan  pengukuran  aktivitas  perendaman radikal  DPPH  oleh  ekstrak  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm  sehingga  akan  diketahui nilai aktivitas perendaman radikal bebas yang dinyatakan  dengan  nilai  IC₅₀.  Panjang gelombang  517  nm  merupakan  panjang gelombang  maksimum  DPPH.  Menurut Rizkayanti et  al .  (2017),  panjang  gelombang maksimum  akan  memberikan  serapan  paling optimal  dari  larutan  uji  dan  memberikan kepekaan  yang  paling  besar,  sehingga diharapkan  dapat  diperoleh  nilai  absorbansi yang optimal pada sampel.
Sampel yang diuji aktivitas antioksidannya  adalah  ekstrak  metanol  biji langsat,  ekstrak  metanol  biji  duku  dan vitamin  C  sebagai  pembanding.  Vitamin  C digunakan karena berfungsi sebagai antioksidan  yaitu  menangkap  radikal  bebas dan  mencegah  terjadinya  reaksi  berantai.
Menurut Triyem (2010), vitamin C
mempunyai  gugus  hidroksi  bebas  yang bertindak  sebagai  penangkal  radikal  bebas dan jika mempunyai gugus polihidroksi  akan meningkatkan aktivitas antioksidan.
Sebelum larutan sampel diuji pada alat spektrofotometer  UV-Vis,  sampel  diinkubasi
terlebih  dahulu  pada  suhu  37⁰C  dengan  cara menutup  sampel  dengan aluminium  foil selama 30 menit. Pengujian aktivitas antioksidan  diinkubasi  pada  suhu  37⁰C karena  pada  suhu  ini  reaksi  antara  radikal DPPH  dengan  senyawa  metabolit  sekunder berlangsung lebih optimal (Aji, 2014).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  penambahan  larutan  DPPH  pada sampel  ditandai  dengan  berubahnya  warna ungu  menjadi  warna  kuning  yang  berarti adanya  proses  penangkapan  radikal  bebas. Perubahan    intensitas    warna  ungu  ini  terjadi karena  adanya  peredaman  radikal    bebas yang    dihasilkan    oleh  bereaksinya    molekul DPPH    dengan  atom  hidrogen    yang dilepaskan    oleh    molekul  senyawa    sampel sehingga menyebabkan  terjadinya  peluruhan warna    DPPH    dari    ungu    ke    kuning. Menurut  Saputri  (2019),    DPPH  yang memiliki  elektron  tidak  berpasangan  akan memberikan    warna    ungu  dan  warnanya akan  berubah    menjadi  kuning    saat elektronnya telah berpasangan.
Pada  pengujian  aktivitas  antioksidan, larutan  DPPH  kontrol  berfungsi  untuk mengetahui absorbansi radikal DPPH sebelum direduksi oleh sampel. Selisih antara absorbansi  DPPH  yang  telah  direduksi sampel  dan  absorbansi  kontrol  merupakan sisa  radikal  DPPH  yang  terbaca  pada spektrofotometer UV-Vis. Menurut Meliendari  (2012),  semakin  besar  selisihnya maka  semakin  besar  efektivitas  antioksidan sampel.  Absorbansi  DPPH  kontrol  yang diperoleh  yaitu  0,89.  Hasil  pengujian aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH ditunjukkan pada Tabel 3.
Berdasarkan  Tabel  3  diketahui  bahwa bertambahnya konsentrasi sampel menyebabkan  absorbansi  sampel  semakin menurun  dan  persen  inhibisi  meningkat.  Hal ini  dikarenakan  terjadinya  proses  stokiometri reaksi  reduksi  senyawa  radikal  bebas  DPPH oleh  senyawa  yang  memberikan  donor hidrogen  sehingga  DPPH  menjadi  senyawa yang  stabil.  Menurut  Apak et  al. (2004), senyawa aktif didalam ekstrak yang memiliki kemampuan  penangkal  radikal  umumnya merupakan  pendonor  atom  hidrogen  (H), sehingga  atom  H  tersebut  ditangkap  oleh radikal  DPPH  (hidrazil)  untuk  berubah menjadi bentuk netralnya (hidrazin).
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  pada pengujian DPPH persen inhibisi pada ekstrak
mengalami  peningkatan  pada  konsentrasi tertinggi yaitu 25 μg/mL.
Tabel 3. Hasil Uji Antioksidan Estrak Biji Langsat dan Biji Duku
Sampel Konsen trasi (µg/mL) Absorbansi Rata- rata Inhibisi (%) IC₅₀ (µg/mL) I II II Ekstrak Langsat 5 0,601 0,578 0,565 0,58 34,83 57,69 10 0,538 0,582 0,595 0,57 35,95 15 0,541 0,568 0,569 0,56 37,08 20 0,542 0,539 0,546 0,54 39,32 25 0,518 0,558 0,525 0,53 40,45 Ekstrak Duku 5 0,606 0,570 0,585 0,59 33,67 10 0,525 0,575 0,601 0,57 35,93 15 0,556 0,551 0,535 0,55 38,19 31,40 20 0,495 0,532 0,541 0,52 40,90 25 0,480 0,465 0,447 0,47 47,57 Vit  C 5 0,572 0,570 0,549 0,56 37,08 8,03 10 0,326 0,328 0,328 0,33 62,92 15 0,297 0,318 0,319 0,31 65,17 20 0,213 0,185 0,173 0,19 78,65 25 0,111 0,112 0,113 0,11 87,64
Nilai  IC₅₀  ekstrak  biji  langsat,  duku dan  vitamin  C  didapat  dari  hasil  perhitungan persamaan  regresi  linier.  Variabel  Y  pada persamaan ini adalah sebagai IC₅₀, sedangkan variabel  X  pada  persamaan  ini  adalah konsentrasi  dari  sampel  yang  akan  dicari nilainya,  dimana  nilai  dari  X  yang  didapat merupakan besarnya konsentrasi yang diperlukan  untuk  dapat  meredam  50% aktivitas  radikal  DPPH.  Berdasarkan  data pada  Tabel  3,  diperoleh  persamaan  regresi untuk biji langsat, yaitu: Y=33,143+0,2922X, sedangkan  untuk  biji  duku,  yaitu:  Y=29,421 +  0,6554X.      Nilai  IC₅₀  dapat  dihitung  dari persamaan  regresi  linier  yang  sebelumnya telah  diperoleh  dengan  mengganti  Y  dengan 50  pada  persamaan  tersebut.  Nilai  IC₅₀ merupakan suatu bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel uji yang mampu menghambat  proses  oksidasi  sebesar  50%. Menurut  Zuhra et  al. (2008),  semakin  kecil nilai  IC₅₀  menunjukkan  semakin  tinggi aktivitas antioksidan.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  ekstrak  biji  langsat  dan  biji  duku memiliki aktivitas antioksidan. Hasil pengujian aktivitas antioksidan ekstrak metanol  biji  langsat  dan  biji  duku  diperoleh nilai  IC₅₀  masing-masing  sebesar  57,69 μg/mL  dan  31,40.  Sedangkan  aktivitas antioksidan  vitamin  C  memiliki  nilai  IC₅₀ sebesar 8,03 μg/mL, hasil tersebut menunjukkan  bahwa    ekstrak  biji  langsat
memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat sedangkan  ekstrak  biji  duku  dan  vitamin  C yang digunakan sebagai pembanding termasuk antioksidan yang sangat kuat.
Menurut  Marliana  (2007)  metabolit sekunder  yang  dapat  berpotensi  sebagai antioksidan,  diantaranya  adalah  alkaloid, flavonoid,  fenol,  steroid,  dan  triterpenoid, sehingga  dapat  diketahui  bahwa  kandungan senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  triterpenoid pada  ekstrak  biji  duku,  berpotensi  sebagai antioksidan  yang  sangat  kuat  dibandingkan dengan  ekstrak  biji  langsat  yang  hanya terdapat  senyawa  alkaloid  dan  triterpenoid dengan aktivitas antioksidan kuat.
Senyawa  alkaloid,  terutama  indol, memiliki  kemampuan  untuk  menghentikan reaksi  rantai  radikal  bebas  secara  efisien. Senyawa radikal turunan dari senyawa amina ini  memiliki  tahap  terminasi  yang  sangat lama.  Beberapa  senyawa  alkaloid  lain  yang bersifat  antioksidan  adalah  quinolon,  kafein yang dapat bertindak sebagai peredam radikal hidroksil  dan  melatonin  yang  berperan penting menjaga sel dari pengaruh radiasi dan toksisitas  obat-obatan  (Yuhernita  &  Juniarti, 2011). Triterpenoid bertindak sebagai antioksidan  karena  memiliki  rantai  ikatan rangkap  terkonjugasi  sehingga  elektronnya dapat  disumbangkan  untuk  menstabilkan muatan molekul reaktif (Capelli & Cisewsky, 2007).  Flavonoid  memiliki  kemampuan antioksidan yang mampu  mentransfer sebuah
elektron  ke  senyawa  radikal  bebas  dan membentuk  kompleks  dengan  logam.  Kedua mekanisme  itu  membuat  flavonoid  memiliki beberapa  efek,  diantaranya  menghambat peroksidasi lipid, menekan kerusakan jaringan  oleh  radikal  bebas  dan  menghambat beberapa  enzim  (Kandaswami  &  Middleton, 1997).

## KESIMPULAN
Skrining fitokimia pada ekstrak metanol  biji  langsat  ( Lansium  domesticum var. pubescens )  menunjukkan  hasil  positif terhadap  alkaloid,  triterpenoid  dan  saponin, sementara ekstrak metanol biji duku ( Lansium  domesticum var. domesticum ) menunjukkan  hasil positif  terhadap alkaloid, flavonoid,  tanin,  triterpenoid  dan  saponin. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak metanol  biji  langsat  ( Lansium  domesticum var. pubescens )  dan  biji  duku  ( Lansium domesticum var. domesticum )  menggunakan metode  DPPH  diperoleh  nilai  IC₅₀  57,69 μg/mL  dan  31,40  μg/mL.  Ekstrak  metanol biji  langsat  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  kuat  dan  ektrak  metanol  biji  duku  dan vitamin  C  murni  yang  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji,  R.M.  2014.  Uji  Aktivitas  Antioksidan pada  Ekstrak  Daging  Daun  Lidah Buaya (Aloe  vera )  Menggunakan Metode DPPH (1,1- Diphenil -2-
Picrylhydrazyl )  [Skripsi].  UIN  Syarif
Hidayatullah, Jakarta. Aldi,  P.  2013.  Isolasi  Dan  Karakterisasi Senyawa Triterpenoid Dan Uji Antioksidan  Dari  Ekstrak  Daun  Duku ( Lansium  domesticum Corr).  Diploma
[Tesis], Universitas Andalas.
Apak,  R.,  G.I.  Kubilai,  M.  Zyrek  &  S.E.
Karademir. 2004. Novel total antioxidant  capacity  index  for  dietary poliphenols and vitamin C ang E, using their  cupric  ion  reducing  in  the presence  neocuproine:  cuprac  method.
J.  Agric.  Food  Chem, 52(26) :  7970- 7981. Blois, M.S. 2005. Antioxidant Determination  by  the  Use  of  Stable Free Radical . Nature, 181 : 1191–1200, Bogor.
Capelli,  B.  &  G.  Cisewsky.  2007. Natural Antaxhantin:  King  of  the  Carotenoids . Cyanotech Corporation, Holualoa.
Darma, R.R.  2014.  Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Fraksi  Aktif  Kulit  Batang  Duku ( Lansium  Domesticum Corr)  Terhadap
Brine  Shrimps  Lethality  Bioassay. Diploma. [Thesis] , Universitas Andalas.
Halliwell,  B.  2012.  Free  Radicals  and Antioxidant:  Updating  a  Personal View. Nutrition  Review, 70(5) :  257-
265.
Kadaswami,  C.  &  E.  Middleton,  Jr.  1997. “Flavonoid  as  Antioxidant”.  In:  F. Shahidi.  (Ed),  Natural  Antioxidants: Chemistry, Health Effects, and
Applications . AOCS Press, Illionis. Kopon A.M., A.B. Baunsele & W.G. Boelan.
2020.  Skrining  Senyawa  Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Biji Alpukat  (Persea  americana  Mill.)  Asal Pulau  Timor. Akta  Kimia  Indonesia, 5(1) : 43-52.
Lenny,  S.  2006.  Senyawa  Flavanoida, Fenilpropanida  dan  Alkaloida.  USU Press, Medan.
Liochev,    S.I.    2013.    Reaztive    Oxygen Species and the Free Radical Theory of Aging. Free  Radical  Biology  and Medicine, 60(1) : 1-4. Malangngi,  L.P.,    M.S.  Sangi  &  J.J.E. Paendong. 2012. Penentuan
Kandungan  Tanin  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat ( Persea americana Mill.).
Marliana,  E.  2007.  Analisis  Senyawa
Metabolit Sekunder dari Batang Spatholobus ferrugineus (Zoll & Moritzi)  benth  yang  berfungsi  sebagai antioksidan. Jurnal  Penelitian  MIPA, 1(1) : 23-29.
McMurry, J. & R.C. Fay. 2004. Chemistry 4 th Edition . Prentice Hall, New Jersey.
Meliendari, M. 2012. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Gracia kyda Roxb .  Dengan  Metode  DPPH  dan Identifikasi  Senyawa  Kimia  Fraksi yang Aktif [Skripsi]. Universitas Indonesia, Jakarta.
Mokosuli,  Y.S.  2008.  Aktivitas  antioksidan dan  antikanker  ekstrak  kulit  batang langsat (Lansium  domesticum  L.)
[Tesis].  Sekolah  Pascasarjana  Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Molyneux,  P.    2004.  The  use  of  the  stable free  radical  diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity., Songklanakarin Journal Science Technology, 26(2) : 211-219.
Rizkayanti,  R.,  A.W.M.  Diah  &  M.R.  Jura.
2017. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Air  dan  Ekstrak  Etanol  Daun Kelor ( Moringa Oleifera LAM). Jurnal  Akademika  Kimia, 6(2) :  125- 131.
Robinson,  T.  1995.  Kandungan  Organik Tumbuhan  Obat  Tinggi.  Terjemahan Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro. ITB Press, Bandung.
Saputri,  R.  2019.  Uji  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Mundar ( Garcinia forbesii King.) Menggunakan  Metode  DPPH  ( 2,2- Diphenyl-1-Picrylhydrazil ).
Jurnal
Pharmascience, 6(1) : 74-82. Selawa,  W.,  M.R.J.  Runtuwene,  &  G. Citraningtyas. 2013. Kandungan Flavonoid  dan  Kapasitas  Antioksidan
Total  Ekstrak  Etanol  Daun  Binahong [ Anredera  cordifolia (ten.)  steenis.]., Jurnal  Ilmiah  Farmasi  Pharmacon,
2(1) : 18-22.
Triyem.  2010.  Aktivitas  Antioksidan  dari Kulit  Batang  Manggis  Hutan  ( Garcina cf.  Bancana Miq.)  [Tesis].  Universitas Indonesia, Jakarta.
Umayah, E.U. & Amrun. 2007. Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Buah Naga ( Hylocereus  Undatus (Haw.)  Britt.  & Rose). Jurnal Ilmu Dasar, 8(1) : 83-90.
Watson,  D.G.  2009.  Analisis  Farmasi  Edisi ke-2. EGC, Jakarta.
Yu, L.L., H. Scott, P. Jonathan, H. Mary, W. John  &  Q.  Ming.  2002.  Free  Radical Scavenging Properties of Wheat Extracts. Journal  Agriculture  and Chemistry, 50(6) : 1619-1624.
Yuhernita & Juniarti. 2011. Analisis Senyawa Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak Metanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai  Antioksidan. Makara  Sains, 15(1) : 48-52.
Zou, Y., Y. Lu & D. Wei. 2004. Antioxidant Activity of a Flavonoid-Rich Extract of Hypericum  perforatum L.  in  Vitro. J. Agric. Food Chem, 52(16) : 5032-5039.
Zuhra, C.F., J. Taringan & H. Sihotang. 2008.
Aktivitas Antioksidan Senyawa
Flavonoid  dari  Daun  Katuk  ( Sauropus androgumus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera, 3(1) : 7-10.
Zulkarnain,  H.  2017.  Budidaya  Buah-buahan Tropis. Deepublish, Yogyakarta.