© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586

## ANALISIS RESIDU ANTIBIOTIK TETRASIKLIN PADA DAGING AYAM BROIlER DAN DAGING SAPI
Siti Nur Aniza 1) , Ary Andini 1)* , Indah Lestari 2)
1 Program Studi D-IV Analis Kesehatan, Universitas Nahdlatul Ulama Surabaya
2 Program Studi D-IV Analis Kesehatan, Poltekkes Kemenkes Surabaya
e-mail : aryandini@unusa.ac.id

## ABSTRACT
Tetracycline  are  antibiotics  with  broad-spectrum  that  used  routinely  in  veterinary medicine  for  animal  treatment  and  prevention  from  infectious  diseases.  But,  consuming antibiotics  for  long  time  and  exceeding  standards  can  lead  to  accumulation  of  antibiotic residues  in  the  body.  Based  on  SNI  01-6366-2000,  the  maximum  residual  limit  (BMR)  of tetracycline  antibiotic  is  0.1  mg/kg  in  meat.The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the concentration of tetracycline residues in broiler chicken meat and beef that obtained in East Surabaya  namely  Manyar  market,  Sinar  Baru  market,  Ampengan  Batu  market,  Tenggilis Mejoyo  market,  Krempyeng  market,  Soponyono  market,  and  Gunung  Anyar  market.  This study  used  Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  as  qualitative  test  and  Spectrophotometric method as a quantitative test to determine the residual levels of tetracycline antibiotics. This study  was  conducted  on  March  15  onto  May  2  2019.  Based  on  the  study,  about  32  broiler chicken and 13 beef samples detected by the TLC method showed that had negative results, there  was  no  containing  tetracycline  residues  in  samples.  Awhile  the  results  of  the spectrophotometric  method  showed  that  as  many  as  31  samples  of  broiler  chicken  and  13 beef samples showed that had positive results containing residues of tetracycline antibiotics that  exceed  of  the  standard.  Based  on  the  results  obtained  that  average  concentration  of tetracycline  in  samples  of  broiler  chicken  meat  about  1,7  mg/kg  and  0,8  mg/kg  in  beef samples. Descriptively,tetracycline residues in broiler chicken meat were higher than beef. Keywords:  Tetracycline,  Chicken,  Cow,  Thin  Layer  Chromatography,  Spectrophotometric

## PENDAHULUAN
Daging  merupakan  bahan  pangan yang berasal dari hewan yang menjadi salah satu  kebutuhan  pokok  bagi  kehidupan manusia  karena  memiliki  kandungan  gizi dan  sebagai  sumber  protein  hewani.  Protein hewani  mengandung  asam-asam  amino esensial yang dibutuhkan manusia dan lebih mudah untuk dicerna (Iwantoro dan Etikaningrum,  2017).  Produk  hewan  yang
berkualitas  akan  mampu  mempunyai  nilai jual  yang  tinggi  dan  berkompetisi  di  dalam perdagangan secara luas. Namun, dewasa ini masih  banyak  permasalahan  yang  berkaitan dengan  mutu  dan  keamanan  produk  hewan diantaranya yaitu tingginya kasus keracunan  makanan,  adanya  produk  yang tidak  memenuhi  syarat  mutu  dan  keamanan karena  tercemar  bahan  kimia  dan  mikroba,
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
dan penanganan rantai produksi yang kurang baik (Dewi, 2014).
Salah  satu  bahan  kimia  yang  dapat mencemari  produk  hewan  adalah  residu antibiotik.  Residu  antibiotik  dalam  pangan dapat  mengancam  kesehatan  masyarakat. Ancaman  tersebut  berupa  dampak  negatif yang berakibat kepada masyarakat, diantaranya yaitu terjadinya resistensi bakteri,  alergi  terhadap  pangan  dan  juga keracunan.  Masalah  residu  antibiotik  timbul pada produk pangan hewan diakibatkan oleh pengaplikasian  antibiotik  yang  kurang  tepat pada hewan-hewan ternak. Antibiotik digunakan  untuk  pengobatan  dan  juga pemacu  pertumbuhan  ternak,  sehingga apabila  penggunaan  antibiotik  yang  tidak memperhatikan  masa  henti  obat,  maka  akan menimbulkan terbentuknya residu  antibiotik pada produk pangan hewan (Dewi, 2014).
Jenis  antibiotik  yang  paling  sering ditemukan  pada  produk  ternak  khususnya daging  ternak  adalah  antibiotik  dari  jenis tetrasiklin.  Dalam  industri  peternakan, antibiotik seringkali digunakan untuk pengobatan  penyakit  pernafasan  dan  dalam dosis  rendah  dapat  digunakan  sebagai pemicu  pertumbuhan  hewan  ternak.  Pada dasarnya golongan tetrasiklin hanya diperbolehkan sebagai obat hewan dan tidak termasuk dalam daftar zat aditif pakan yang diizinkan  di  Indonesia,  namun  karena harganya  yang  murah  dibandingkan  dengan antibiotik  yang  diperbolehkan  menjadi imbuhan  pakan,  maka  golongan  tetrasiklin juga  banyak  digunakan  sebagai  zat  aditif imbuhan pakan (Iwantoro dan Etikaningrum,  2017).  Badan  Standarisasi Nasional  (BSN,  2000)  menetapkan  bahwa waktu  henti  pemakaian  antibiotik  golongan tetrasiklin adalah lima hari menjelang ternak dipotong dan batas cemaran residu tetrasiklin pada daging sebesar 0,1 mg/kg.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar residu antibiotik tetrasiklin  pada  daging  ayam  broiler  ( G.
domesticus )  dan  daging  sapi  ( B.  taurus ) yang di jual di kawasan Surabaya Timur.

## METODE PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  menggunakan desain  penelitian    observasional  dengan pendekatan  secara cross-sectional .  Besar sampel  yang  digunakan  adalah  32  sampel daging  ayam  broiler  dan  13  sampel  daging sapi  yang  diperoleh  dari  pasar  yang  berada di  kawasan  Surabaya  Timur,  diantaranya yaitu  :  pasar  Manyar,  pasar  Sinar  Baru, pasar  Ampengan  Batu,  pasar  Tenggilis Mejoyo, pasar Krempyeng, pasar Soponyono, dan pasar Baru Gunung Anyar.
Pada  penelitian  ini  menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis  dan  metode spektrofotometri. Penelitian ini dilaksanakan selama  bulan  Maret  sampai  dengan  bulan Mei 2019.
Adapun  alat-alat  yang  digunakan untuk  pengujian  tetrasiklin  dengan  KLT adalah beaker  glass ,  telenan,  pisau,  spatula, batang  pengaduk,  kaca  arloji,  gelas  ukur, pipet  ukur,  pump,  labu  ukur,  tabung sentrifus,  blender,  neraca  analitik,  chamber, pipa kapiler, vortex dan sentrifus. Sedangkan  alat-alat  yang  digunakan  untuk pengujian kadar tetrasiklin dengan spektrofotometer  UV-Vis  adalah beaker glass ,  telenan,  pisau,  spatula,  batang pengaduk,  kaca  arloji, magnetic  stirrer , hot plate ,  Erlenmeyer,  gelas  ukur,  pipet  tetes, pipet  ukur,  pump,  labu  ukur,  tabung sentrifus,  blender,  neraca  analitik,  dan spektrofotometri UV-Vis ( Thermo Scientific, Madison, USA ).
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk pengujian  dengan  KLT  adalah  air  suling, asam  sitrat  monohidrat,  trinatrium  sitrat, tetrasiklin  hidroklorida  baku  (BPFI),  plat kromatografi lapis tipis, kloroform, methanol,  daging  ayam  broiler  bagian  paha dan  daging  sapi  bagian  lulur.  Sedangkan bahan-bahan  yang  digunakan  untuk  dengan metode  spektrofotometri  adalah  air  suling, asam klorida 0,1 N, asam sitrat monohidrat, dinatrium hydrogen pospat anhidrat,
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
dinatrium EDTA dihidrat, tetrasiklin hidroklorida  baku  (BPFI),  daging  ayam broiler  bagian  paha  dan  daging  sapi  bagian lulur.

## Kromatografi Lapis Tipis
Pengumpulan Sampel
Sampel yang diperiksa dalam penelitian  ini  adalah  daging  ayam  broiler bagian  paha  dan  daging  sapi  bagian  lulur. Sampel  di  ambil  dalam  kondisi  segar kemudian  dibersihkan  dari  kulit  dan tulangnya. Sebelum diperiksa, sampel dihaluskan terlebih dahulu dengan
menggunakan blender.

## Ekstraksi Sampel
Sampel  yang  sudah  diperoleh  dari pasar  dibersihkan  dari  kulit  dan  tulangnya, kemudian  dihaluskan  dengan  blender.  Lalu sampel  ditimbang  sebanyak  5  gram  dan ditambahkan  3  ml  buffer  sitrat.  Sampel dihomogenkan  dengan  vortex  selama  5 menit  dan  diinkubasi  selama  5  menit  pada suhu  ruang.  Kemudian  sampel  disentrifus dengan  kecepatan  3500  rpm  selama  10 menit  dan  supernatannya  diambil.  Proses ektraksi diulangi kembali dengan menambahkan  2  ml  buffer  sitrat  pada sampel.

## Penanganan Eluen dan Plat KLT
Eluen yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  kloroform  :  methanol (9:1).  Eluen  dijenuhkan  dalam  chamber selama  ±15-30  menit.  Plat  KLT  dipotong sesuai  ukuran  menggunakan  pensil  secara perlahan. Kemudian larutan standart tetrasiklin  dan  ekstrak  sampel  ditotolkan pada  plat  KLT  menggunakan  pipa  kapiler secara  perlahan.  Plat  KLT  dimasukkan kedalam  chamber  dan  dibiarkan  hingga eluen  sampai  pada  tanda  batas  atas.  Setelah eluen  mencapai  batas  atas,  plat  KLT dikeluarkan  dari  dalam  chamber  dan dikeringkan. Lalu diamati dibawah sinar UV dan dihitung  nilai Rf-nya.

## Spektrofotometer UV-Vis
Pengumpulan sampel Sampel yang diperiksa dalam penelitian  ini  adalah  daging  ayam  broiler bagian  paha  dan  daging  sapi  bagian  lulur.
Sampel  di  ambil  dalam  kondisi  segar kemudian  dibersihkan  dari  kulit  dan tulangnya. Sebelum diperiksa, sampel dihaluskan terlebih dahulu dengan menggunakan blender.

## Pembuatan  larutan  induk  baku  tetrasiklin HCl BPFI
Tetrasiklin  BPFI  sebanyak  ±25,0  mg ditimbang  dengan  seksama  dan  dimasukkan ke  dalam  labu  ukur  50  ml.  Kemudian tetrasiklin  BPFI  dilarutkan  dengan  asam klorida    0,1  N  hingga  mencapai  batas  garis tanda,  sehingga  diperoleh  larutan  dengan konsentrasi  500  µg/ml.  Larutan  ini  disebut larutan induk baku (LIB I).  Dari larutan ini dipipet sebanyak 5,00 ml dan dimasukan  ke dalam labu ukur 50 ml. Lalu 5,00 ml larutan tadi  diencerkan  dengan  asam  klorida  0,1  N hingga  mencapai  garis  tanda  sehingga diperoleh konsentrasi 50 µg/ml (LIB II).

## Penetapan  panjang  gelombang  serapan maksimum
Sejumlah  5,00  ml  LIB  II  dipipet  ke dalam  labu ukur  25  ml,  kemudian diencerkan  dengan  asam  klorida  0,1  N hingga  mencapai  garis  tanda.  Selanjutnya larutan  dikocok  sampai  homogen  sehingga diperoleh  larutan  dengan  konsentrasi  10 µg/ml. Kemudian larutan diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm.

## Ekstraksi sampel
Sampel yang telah dihaluskan ditimbang  sebanyak  20  g.  Ditambahkan  40 ml  buffer  Mcllvaine-EDTA  (pH  4),  lalu dihomogenkan menggunakan magnetic stirrer selama  10  menit.  Kemudia  sampel disenttrifugasi  dengan  kecepatan  3500  rpm selama  10  menit,  dan  supernatan  diambil. Ditambahkan 20 ml buffer Mcllvaine-EDTA dan  disentrifugasi  lagi  dengan  kecepatan
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
3500  rpm  selama  10  menit.  Supernatan diambil  dan  endapan  ditambahkan  lagi dengan  20  ml  buffer  Mcllvaine-EDTA  dan disentrifugasi  dengan  kecepatan  3500  rpm selama 10 menit. Supernatan yang diperoleh kemudian  dikumpulkan  dan  disentrifugasi lagi  dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  20 menit.  Hasilnya  dimasukkan  kedalam  labu ukur  100  ml  dan  dicukupkan  dengan  asam klorida 0,1 N hingga garis tanda.

## Penetapan  kadar  residu  tetrasiklin  dalam daging ayam broiler dan daging sapi
Larutan  sampel  dipipet  sebanyak  1,6 ml dan dimasukkan kedalam 5 labu ukur 10 ml. Larutan induk baku II ditambahkan 0; 1; 1,5;  2;  dan  2,5  ml,  kemudian  diencerkan menggunakan  asam  klorida  0,1  N  hingga tanda  batas.  Masing-masing  didapatkan larutan tetrasiklin HCl baku dengan konsentrasi  0;  5;  7,5;  10;  dan  12,5  µg/ml. Absorbansi  dari  masing-masing  larutan diukur  pada  panjang  gelombang  289  nm. Selanjutnya  dibuat  grafik  absorbansi  dan konsentrasi  standard  ditentukan  dengan persamaan regresi linier y = bx + a.
Dengan  mengekstrapolasikan  garis pada  sumbu  X  (garis  memotong  sumbu  X) atau  mensubstitusikan  absorbansi  (Y)  =  0 pada  persamaan  regresi  yang  diperoleh maka  akan  diperoleh  konsentrasi  residu tetrasiklin dalam larutan sampel yang diukur (Cx).  Kemudian  hasilnya  dikalikan  dengan faktor  pengenceran  dan  volume  larutan sampel  kemudian dibagi berat penimbangan sampel  daging  sehingga  diperoleh  kadar residu tetrasiklin dengan satuan µg/g sampel atau dapat dinyatakan dalam rumus berikut :
Kadar  Tetrasiklin  =  Cx  (µg/ml)  x  Fakt. Pengenceran x Vol. Sampel (ml)
Berat  Sampel

## HASIL
Hasil penelitian dari metode kromatografi  lapis  tipis  dapat  dilihat  pada tabel  1  dan  tabel  2.  Sampel  yang  sudah diekstrak  ditotolkan  pada  plat  KLT  GF 254 dan  dielusi  dengan  eluen  kloroform  dan methanol  (9:1).  Hasil  penelitian  yang diperoleh  adalah    32  sampel  daging  ayam dan  13  sampel  daging  sapi  adalah  negatif (tidak mengandung antibiotik tetrasiklin). Tabel 1. Hasil uji kualitatif dengan KLT pada sampel daging ayam broiler No. Kode Sampel Daging Ayam Nilai Rf Keterangan 1. M1 - Negatif 2. M2 - Negatif 3. M3 - Negatif 4. M4 - Negatif 5. M5 - Negatif 6. M6 - Negatif 7. M7 - Negatif 8. M8 - Negatif 9. M9 - Negatif 10. T1 - Negatif 11. T2 - Negatif 12. S1 - Negatif 13. S2 - Negatif 14. S3 - Negatif 15. S4 - Negatif
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
No. Kode Sampel Daging Ayam Nilai Rf Keterangan 16. R1 - Negatif 17. R2 - Negatif 18. R3 - Negatif 19. R4 - Negatif 20. R5 - Negatif 21. R6 - Negatif 22. R7 - Negatif 23. R8 - Negatif 24. R9 - Negatif 25. R10 - Negatif 26. R11 - Negatif 27. R12 - Negatif 28. G1 - Negatif 29. G2 - Negatif 30. A1 - Negatif 31. B1 - Negatif 32. B2 - Negatif
Keterangan : Standard untuk nilai Rf tetrasiklin adalah 0,6 (Krismawati, dkk., (2015) dan
Dewi, dkk., (2015). Tabel 2. Hasil uji kualitatif dengan KLT pada sampel daging sapi No. Kode Sampel Daging Sapi Nilai Rf Keterangan 1. M1 - Negatif 2. T1 - Negatif 3. S1 - Negatif 4. S2 - Negatif 5. R1 - Negatif 6. R2 - Negatif 7. R3 - Negatif 8. R4 - Negatif 9. R5 - Negatif 10. R6 - Negatif 11. A1 - Negatif 12. B1 - Negatif 13. B2 - Negatif
Keterangan : Standard untuk nilai Rf tetrasiklin adalah 0,6 (Krismawati, dkk., (2015) dan
Dewi, dkk., (2015).
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Hasil penelitian dari metode spektrofotometri.  Pada  sampel  yang  sudah diekstrak,  sebelum  dilakukan  pembacaan pada  spektrofotometer  UV-Vis,  dilakukan penentuan  panjang  gelombang  terlebih dahulu    untuk  digunakan  pada  tahapan
penetapan  kadar  tetrasiklin  pada  sampel. Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum  menunjukkan  pada    289  nm.
Hasil  yang  diperoleh  dapat  diamati  pada gambar 3.
Gambar 1. Kurva penentuan panjang gelombang tetrasiklin
Berdasarkan penelitian yang dilakukan  diperoleh  hasil  31  sampel  daging ayam  broiler  dan  13  sampel  daging  sapi positif  mengandung  residu  tetrasiklin  yang melebihi batas maksimal residu.kadar tetrasiklin. Hasil tersebut dapat diamati pada tabel  3  dan  tabel  4.  Berdasarkan  hasil  pada tabel  3  dan  tabel  4  maka  diperoleh  rata-rata
kadar  tetrasiklin  pada  sampel  daging  ayam broiler adalah 1,7 mg/kg dan 0,8 mg/kg pada sampel  daging  sapi.  Berdasarkan  ketetapan Badan  Stadarisasi  Nasional  (BSN)  dalam SNI 01-6366-2000 menetapkan batas maksimal  residu  (BMR)  antibiotik  yang sesuai adalah 0,1 mg/kg. Tabel 3. Kadar tetrasiklin dalam daging ayam broiler No. Kode Sampel Jumlah Kadar (mg/kg) Keterangan 1. M1 1,9 Melebihi batas BMR 2. M2 1,8 Melebihi batas BMR 3. M3 1,7 Melebihi batas BMR 4. M4 4,8 Melebihi batas BMR 5. M5 3,1 Melebihi batas BMR 6. M6 2,7 Melebihi batas BMR 7. M7 2,5 Melebihi batas BMR 8. M8 1,7 Melebihi batas BMR 9. M9 3,4 Melebihi batas BMR 10. T1 1,2 Melebihi batas BMR 11. T2 1,5 Melebihi batas BMR 12. S1 2,3 Melebihi batas BMR 13. S2 0,1 Tidak melebihi batas BMR
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
No. Kode Sampel Jumlah Kadar (mg/kg) Keterangan 14. S3 2,3 Melebihi batas BMR 15. S4 1,9 Melebihi batas BMR 16. R1 0,8 Melebihi batas BMR 17. R2 1,9 Melebihi batas BMR 18. R3 1,4 Melebihi batas BMR 19. R4 1,4 Melebihi batas BMR 20. R5 1,4 Melebihi batas BMR 21. R6 0,7 Melebihi batas BMR 22. R7 1,4 Melebihi batas BMR 23. R8 0,6 Melebihi batas BMR 24. R9 0,9 Melebihi batas BMR 25. R10 0,3 Melebihi batas BMR 26. R11 0,3 Melebihi batas BMR 27. R12 1,4 Melebihi batas BMR 28. G1 0,8 Melebihi batas BMR 29. G2 3,0 Melebihi batas BMR 30. A1 1,2 Melebihi batas BMR 31. B1 1,6 Melebihi batas BMR 32. B2 3,2 Melebihi batas BMR Rata - Rata 1,7 Melebihi batas BMR
Keterangan : Badan Stadarisasi Nasional (BSN) menetapkan batas maksimal residu (BMR)
antibiotik,
sesuai  yang tecantum dalam SNI 01-6366-2000 adalah 0,1 mg/kg.
Tabel 4 Kadar tetrasiklin dalam daging sapi No. Kode Sampel Jumlah Kadar (mg/kg) Keterangan 1. M1 1,2 Melebihi batas BMR 2. T1 0,8 Melebihi batas BMR 3. S1 0,7 Melebihi batas BMR 4. S2 0,7 Melebihi batas BMR 5. R1 1,0 Melebihi batas BMR 6. R2 1,1 Melebihi batas BMR 7. R3 0,5 Melebihi batas BMR
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
No. Kode Sampel Jumlah Kadar (mg/kg) Keterangan 8. R4 0,8 Melebihi batas BMR 9. R5 0,2 Melebihi batas BMR 10. R6 0,3 Melebihi batas BMR 11. A1 0,7 Melebihi batas BMR 12. B1 1,1 Melebihi batas BMR 13. B2 0,9 Melebihi batas BMR Rata - Rata 0,8 Melebihi batas BMR
Keterangan  :  Badan  Stadarisasi  Nasional  (BSN)  menetapkan  batas  maksimal  residu  (BMR) antibiotic, sesuai  yang tecantum dalam SNI 01-6366-2000 adalah 0,1 mg/kg.
Jurnal SainHealth Vol. 3 No. 2 Edisi September 2019 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586

## PEMBAHASAN
Metode kromatografi lapis tipis merupakan  metode  untuk  mengidentifikasi senyawa  berdasarkan  kelarutannya.  Pada metode KLT terdapat dua fase yaitu fase diam (plat silica  gel )  dan  fase  gerak.  Sampel diekstraksi  dengan  menggunakan  larutan buffer  sitrat.  Nilai  pH  pada  buffer  dapat memberikan  pengaruh  pada  matriks  sampel terhadap  keberhasilan  ekstraksi  tetrasiklin. Menurut  Shama et  al., (2016),  nilai  pH optimum  untuk  ekstraksi  berada  pada  rentang 3,5  dan  4,0.  Interaksi  pertukaran  ion  dari antibiotik  yang  diprotonasi  mampu  meningkat dalam  lingkungan  asam  sehingga  dapat meningkatkan  efikasi  ektraksi  dari  sampel. Sampel  yang  sudah  diekstrak  kemudian ditotolkan  pada  plat  KLT  GF 254 dengan menggunakan  eluen  methanol  dan  kloroform (1:9) dan diamati dengan sinar UV.
Sebagai  pembanding  sampel,  disertai dengan  standart  menggunakan  tetrasiklin hidroklorida.  Adapun  nilai  Rf  yang  terbentuk adalah  0,6.  Hasil  Rf  sampel dinyatakan  positif apabila  warna  bercak  sampel  dan  baku pembanding  sama  atau  saling  mendekati dengan selisih ≤0,2. Senyawa yang mempunyai  nilai  Rf  besar  dikarenakan memiliki  kepolaran  yang  rendah,  begitu  pula sebaliknya  senyawa  yang  memiliki  kepolaran yang  lebih  tinggi  akan  tertahan  kuat  pada  fasa diam  sehingga  menghasilkan  nilai  Rf  yang lebih rendah.
Pengujian tetrasiklin dengan menggunakan  metode  KLT  termasuk    dalam uji  secara  kualititatif  yang  digunakan  hanya sebagai  identifikasi  adanya  tetrasiklin  pada sampel  daging  sapi  dan  daging  ayam.  Hasil negative pada hasil pengujian dapat dikarenakan  senyawa  yang  diujikan  belum terlarut sempurna dalam pelarut yang digunakan  sehingga  tertahan  kuat  pada  fase diam.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  uji  secara kuantitatif  untuk  mengetahui  secara  detail kadar  tetrasiklin  yang  terdapat  di  daging  sapi dan  ayam  dengan  menggunakan  metode spektrofotometri.
Penelitian dengan metode
spektrofotometri  dilakukan  ekstraksi  kembali dengan sampel daging ayam broiler dan daging sapi yang berbeda dari metode KLT sebelumnya.  Berdasarkan  penelitian  yang
dilakukan  oleh  Nurhasnawati  (2016), prosedur ekstraksi  sampel  diadopsi  dari Laboratory Quality  Assurance  Division (2007).  Ekstraksi sampel dimulai dengan pemisahan sampel dari kulit  dan  tulangnya,  dilanjutkan  dengan penghalusan  sampel  dengan  blender  dan kemudian  ditambahkan  buffer  McIlvaine- EDTA pH 4.
Penambahan  EDTA  dalam  larutan buffer  dimaksudkan  untuk  meningkatkan efisiensi ekstraksi sampel. Hal ini  dikarenakan tetrasiklin  mampu  berikatan  dengan  protein dan  membentuk  konjugat,  sehingga  sukar diekstraksi  dari  matriks  sampel.  Kendala  lain dalam  ekstraksi  tetrasiklin  dari  sampel  daging yaitu  terjadinya  pembentukan  kelat  antara tetrasiklin  dengan  ion  logam  yang  terkandung dalam matriks. Oleh karena itu, untuk ekstraksi sampel  dan  deproteinasinya  memakai  pelarut yang  sedikit  asam  untuk  membebaskan tetrasiklin  yang  terikat  nonkovalen  dengan makromolekul  tersebut.  EDTA  juga  mampu bersaing  dengan  tetrasiklin  dalam  membentuk kelat dengan logam.
Sampel  yang  sudah  diekstrak,  sebelum dilakukan  pembacaan  pada  spektrofotometer UV-Vis, dilakukan penentuan panjang gelombang terlebih dahulu. Dalam
menentukan panjang gelombang diukur serapan  pada  panjang  gelombang  200-400  nm dan  diperoleh  panjang  gelombang  289  nm. Berdasarkan penelitian yang dilakukan diperoleh  hasil  kadar  tetrasiklin  dalam  daging ayam  dan  daging  sapi  sesuai  pada  tabel  3  dan tabel  4.  Dari  32  sampel  daging  ayam  broiler yang diuji hampir keseluruhan positif mengandung  residu  tetrasiklin  yang  melebihi batas  maksimal  residu  yang  telah  ditentukan dan hanya satu sampel yang negatif.
Sedangkan  untuk  13  sampel  daging  sapi seluruhnya  juga  positif  mengandung  residu tetrasiklin  yang  melebihi  batas  maksimal residu.
Badan  Stadarisasi  Nasional  (BSN) dalam  SNI  01-6366-2000  menetapkan  batas maksimal residu (BMR) antibiotik yang sesuai adalah  0,1  mg/kg.  Berdasarkan  tabel  3  dan tabel  4  diperoleh  rata-rata  kadar  tetrasiklin pada sampel daging ayam broiler menunjukkan hasil 1,7 mg/kg  dan  pada daging sapi sebesar 0,8  mg/kg.  Secara  analisa  deskriptif  kadar residu antibiotik tetrasiklin pada sampel daging
Jurnal SainHealth Vol. 3 No. 2 Edisi September 2019 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
ayam  broiler  lebih  tinggi  dari  pada  sampel daging sapi.
Apabila  dibandingkan  dengan  hasil  uji secara  kualitatif  menggunakan  KLT  dan  uji secara  kuantitatif  metode  spektrofotometri dapat  diketahui  bahwa  penentuan  kadar tetrasiklikn pada sampel daging sapi dan ayam dengan  metode  spektrofotmetri  lebih  unggul daripada  KLT.  Hal  ini  karena  hasil  uji  KLT hanya  dinyatakan  dalam  positif  (+)  atau negative  (-)  berdasarkan  nilai  Rf  yang didapatkan  dan  hasil  ini  masih  kurang representatif.  Prinsip  kerja  KLT  berdasarkan sifat  kepolaran  suatu  senyawa,  sehingga apabila  suatu  senyawa  yang  ingin  diujikan tidak terlarut sepenuhnya ke pelarut atau encer maka  hasil  yang  didapatkan  bisa  menjadi negative.  Oleh  karena  itu,  hasil  uji  dengan menggunakan  metode  spektrofotometri  lebih dapat diakui jika dibandingkan dengan KLT Penggunaan  antibiotic  pada  hewan ternak baik pada ayam dan sapi diperuntukkan guna meningkatkan pertumbuhan hewan ternak,  dan  perawatan  serta  pengobatan  dari penyakit serius akibat infeksi bakteri dan jamur pada  hewan  ternak  (Siswanto  dan  Sulabda, 2017).
Residu antibiotik pada daging ayam dan sapi  terjadi  akibat  penggunaan  antibiotik  yang digunakan  sebagai  pengobatan  dan  kontrol untuk penyakit infeksi yang tidak memperhatikan  waktu  henti  obat,  penggunaan antibiotik yang melebihi dosis, serta penggunaan  antibiotik  sebagai feed  additive dalam pakan hewan (Martaleni, 2007; Masrianto  dkk,  2013.    Faktor-faktor  yang mempengaruhi  distribusi  obat  dalam  tubuh ternak  yaitu,  perfusi  darah  melalui  jaringan, kadar  gradien,  pH  dan  ikatan  zat  dengan makromolekul,  partisi  ke  dalam  lemak, transpor  aktif,  barier  (sawar)  dan  ikatan  obat dengan protein plasma atau jaringan.
Pakan yang mengandung antibiotik akan berinteraksi  dengan  jaringan  (organ)  dalam tubuh  ternak,  meskipun  dalam  jumlah  yang kecil  pengaruh  yang  ditimbulkan  tidak  secara langsung  tetapi  akan  berefek  kronis  dan  tetap berada dalam tubuh ternak. Senyawa induk dan metabolitnya  sebagian  akan  dikeluarkan  dari tubuh  melalui  air  seni  dan  feses,  tetapi sebagian  lagi  akan  tetap  tersimpan  di  dalam jaringan  (organ  tubuh)  yang  disebut  sebagai residu.  Jika  pakan  dicampur  antibiotik  secara
terus  menerus,  maka  residu  antibiotik  tersebut akan  terakumulasi  di  dalam  jaringan  dengan konsentrasi yang bervariasi antara organ tubuh.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kepada  staff  Laboratorium Kimia Kesehatan, Fakultas Kesehatan, Universitas  Nahdlatul  Ulama  Surabaya  yang telah membantu dalam pelaksanaan penelitian.

## KESIMPULAN
Analisa  residu  antibiotik  tetrasiklin dengan  metode  KLT  menunjukkan  hasil negatif  pada  32  sampel  daging  ayam  broiler dan 13 sampel daging sapi. Sedangkan dengan metode  spektrofotometri  menunjukkan  hasil rata-rata  1,7  mg/kg  pada  sampel  daging  ayam broiler dan 0,8 mg/kg pada sampel daging sapi. Secara analisa deskriptif kadar residu antibiotik tetrasiklin pada sampel daging ayam broiler  lebih  tinggi  dari  pada  sampel  daging sapi.

## REFERENSI
Badan  Standarisasi  Nasional  (BSN).  2000. Standar  Nasional  Indonesia 01-6366- 2000  :  Batas  maksimal  cemaran  mikroba dan  batas  residu  dalam  bahan  makanan asal hewan .
Dewi, A. A. S. ,Widdhiasmoro,N.P.,
Nurlatifah,I., Riti, N., Purnawati, D. 2014. Residu  Antibiotika  pada  Pangan  Asal Hewan, Dampak, dan Upaya Penanggulangan  nya .  Buletin  Veteriner Vol. XXVI, No. 85
Dewi,  T.  M,  Herawati,  D.,  dan  Hamdani,  S. 2015.  Analisis  Kualitatif  Antibiotika Tetrasiklin pada Madu. Prosiding
Penelitian Sivitas Akademika. Dewi,  T.  M.,  Herawati,  D.  dan  Hamdani  S. 2015. Analisis Kualitatif Residu Antibiotika Tetrasiklin pada Madu.
Prosiding Penelitian SPeSIA hlm. 9-13
Etikaningrum  dan  Iwantoro,  S.  2017.  Kajian Residu  Antibiotika  pada  Produk  Ternak Unggas di Indonesia. Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan Vol. 5 No.1 hlm. 29-33
Jurnal SainHealth Vol. 3 No. 2 Edisi September 2019 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Martaleni.  2007.  Deteksi  Residu  Antibiotika pada  Karkas,  Organ,  dan  Kaki  Ayam Pedaging  yang  di  Peroleh  dari  Pasar Tradisional kabupaten Tangerang. Skripsi. Institut Pertanian Bogor : Bogor
Masrianto.  Fakhrurrazi.Azhari.  2013.  Uji Residu  pada  Daging  Sapi  yang  di Pasarkan di Pasar Tradisional Kota Banda Aceh, Jurnal  Medika  Veterinaria ,  Vol  7, No. 1
Nofita,  Rinawati,  dan  Qudus.  2016.  Validasi Metodematrix  Solid  Phase  Dispersion (Mspd) Spektrofotometri Uv Untuk
Analisis Residu Tetrasiklin Dalam Daging
Ayam  Pedaging. Jurnal  Kesehatan ,Vol. VII, No. 1, hlm 136-143
Nurhasnawati, Henny, Jubaidah Siti, dan Elfia,
N.  2016.  Penentuan  Kadar  Residu
Tetrasiklin HCl pada Ikan Air Tawar yang Beredar  di  Pasar  Segiri  Menggunakan Metode  Spektrofotometri  Ultra  Violet.
Jurnal  Ilmiah  Manuntung .  Vol.  2  No.  2 hlm 173-178
Shama,  S.A.,  El  Sharkawy,  Abd  el  Azim  S., Mahmoud,  A.H.,  Hassan,  Heba  M.,
Nassar,  dan  Shaimaa  H.  2016.  Validation on Modified HPLC Method for Detemination of Oxytetracycline,
Tetracycline  and  Doxycycline  in  Chicken Meat  and  Liver. New  York  Science Journal. Vol. 9 No. 5
Siswanto.  Sulabda,  IN.  2017.  Kadar  Residu Antibiotik  dalam  Daging  Sapi  Bali  di Beberapa  Pasar  di  Bali. Manuskrip . Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas Udayana, Denpasar, Bali