## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL KLIKA FALOAK (Sterculia quadrifida R.Br) DENGAN METODE DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)
Astuti Amin, Jeanny Wunas, Yuniven Merina Anin Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar Jalan Perintis Kemerdekaan Km.13,7 Daya - Makassar 90242 amin.astuti@gmail.com

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  klika  faloak  dengan metode  DPPH  (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl). Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk menentukan aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol kulit  batang  faloak  terhadap  radikal  bebas  DPPH  berdasarkan  nilai IC 50 . Klika  faloak  diekstraksi  secara  maserasi dengan menggunakan pelarut etanol dan  dibuat dalam 5 seri konsentrasi yaitu 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm. Ekstrak diuji terhadap DPPH (2,2-diphenyl-1-picrihidrazyl) sebagai radikal bebas dan diukur pada panjang gelombang  516  nm  dengan  absorbansi  0,640 menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Kemampuan  antioksidan diukur  sebagai  penurunan  absorbansi  larutan  DPPH  setelah  penambahan  ekstrak. Hasil  penelitian menunjukkan ekstrak etanol klika faloak (S. quadrifida R.Br) mempunyai aktivitas antioksidan kuat dengan nilai IC 50 4, 8101 ppm dan  vitamin  C  sebagai  kontrol  positif mempunyai  aktivitas  antioksidan  kuat  dengan nilai  IC 50 3,4873 ppm. Berdasarkan hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol klika faloak (S. quadrifida R.Br) memiliki aktivitas antioksidan yang lebih lemah dibandingkan dengan vitamin C sebagai kontrol positif.
Kata kunci : Antioksidan, klika faloak (Sterculia quadrifida R.Br), metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)

## I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Radikal bebas  (free  radical)  adalah  suatu senyawa  atau  molekul  yang  mengandung  satu  atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan  senyawa  tersebut  sangat  reaktif mencari  pasangan  dengan  cara  menyerang  dan mengikat elektron  molekul  yang berada disekitarnya. Akibatnya  yaitu  gangguan  fungsi  sel,  kerusakan struktur  sel,  molekul  termodifikasi  yang  tidak  dapat dikenali oleh sistem imun, dan bahkan mutasi. Semua bentuk  gangguan  tersebut  dapat  memicu  munculnya berbagai penyakit seperti penyakit degeneratif hingga kanker. Oleh sebab itu, tubuh kita  memerlukan suatu substansi  penting,  yakni  antioksidan  yang  dapat melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas  dan meredam dampak negatifnya (Winarsi, 2007).
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat  reaksi  oksidasi,  dengan  mengikat radikal  bebas  dan  molekul  yang  sangat  reaktif. Akibatnya,  kerusakan  sel  dapat  dihambat  (Winarsi, 2007).  Berdasarkan  sumbernya,  antioksidan  dapat digolongkan  menjadi  2  jenis  yaitu antioksidan  alami dan antioksidan sintesis. Namun adanya kekhawatiran terhadap efek samping antioksidan sintetik menjadikan antioksidan alami sebagai alternatif  yang terpilih (Trilaksani, 2003).
Berdasarkan penelitian Atta-Ur-Rahman (2001),  senyawa-senyawa yang  mempunyai  potensi sebagai  antioksidan  umumnya  merupakan  senyawa flavonoid,  fenolat  dan  alkaloid.  Senyawa  flavonoid dan  polifenolat  bersifat  antioksidan,  antidiabetes, antikanker,  antiseptik  dan  antiinflamasi,  sedangkan alkaloid  mempunyai  sifat  antineoplastik  yang  juga ampuh menghambat pertumbuhan sel-sel kanker.
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  potensi sebagai  antioksidan  alami  adalah  Faloak (S. quadrifida R.Br) .  Faloak merupakan  salah  satu tanaman  yang  tumbuh  di  provinsi  Nusa  Tenggara Timur  (NTT).  Bagian  pohon  Faloak  yang  sering digunakan  adalah  kulit  batang  (klika).  Oleh masyarakat  NTT,  klika  Faloak  dipercaya  dapat menyembuhkan  berbagai  penyakit  seperti  hepatitis, diabetes  dan  gangguan  pencernaan.  Klika  Faloak mengandung  senyawa  antioksidan  alami  yaitu flavonoid  dan  senyawa  fenolik  yang  mampu melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas (Siswadi et  al,  2013).  Adanya  kandungan  zat  aktif tersebut  maka  diperlukan  suatu  kajian  mengenai aktivitas antioksidan dari klika Faloak.
Pada  penelitian  ini  dilakukan pengujian aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol klika  faloak  (S. quadrifida R.Br) dengan metode  DPPH (2 ,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl).
Metode DPPH merupakan suatu  metode untuk  menentukan aktivitas antioksidan dalam sampel dengan melihat
kemampuannya    dalam    menangkal    radikal    bebas senyawa 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl.
Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  klika  Faloak terhadap radikal bebas DPPH berdasarkan nilai IC 50 .

## II. METODE PENELITIAN A. Alat dan bahan
Alat yang digunakan adalah bejana maserasi, cawan  porselin,  gelas  piala,  labu  tentukur  10  ml,  25 ml, 50 ml dan 100 ml, beaker gelas, erlenmeyer, vial, pipet mikro, pipet volume, pipet tetes, neraca analitik, tissue,  alumunium  foil,  sendok  tanduk, batang pengaduk dan spektrofotometer UV-VIS.
Bahan  yang  digunakan  diantaranya  adalah klika  faloak,  etanol  70%,  etanol  pro  analisis,  DPPH (2,2 diphenyl-1-picrylhydrazil) dan Vitamin C

## B. Penyiapan sampel
Sampel klika faloak yang diperoleh disortasi basah lalu  dicuci.  Sampel  kemudian  dirajang  dan dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  kemudian dilakukan sortasi kering dan diserbukkan.

## C. Ekstraksi
Sampel  ditimbang sebanyak  250  gram dimaserasi  dan  diekstraksi  dengan  1,75  liter  etanol 70%  selama  5  hari  sambil sesekali  diaduk  kemudian disaring.  Ampas  dari    hasil  ekstraksi,  diremaserasi selama  5  hari.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh dikumpulkan dan diuapkan  hingga diperoleh ekstrak kental.

## D. Uji pendahuluan golongan flavonoid
1 g ekstrak ditambah 5 ml n-heksan dan 5 ml air, dikocok dalam corong pisah. Dibiarkan beberapa saat hingga fase air dan n-heksan memisah kemudian pisahkan  fase  air  dan  fase  n-heksan.  Fase  air ditambah  5  ml  metanol,  dikocok  dalam  corong  pisah dan diambil lapisan metanol dan ditambah 0,5 ml HCl pekat  dan  serbuk  Magnesium.  Positif  flavonoid  jika terbentuk  warna  merah  ungu  atau  jingga.  Fase  n- heksan  ditambah  0,5  ml  HCl  pekat,  dipanaskan, positif jika terbentuk warna merah.

## E. Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  dilarutkan  dalam  etanol  p.a  dan dibuat  dalam  berbagai  konsentrasi  yaitu  20,  40,  60, 80,  dan  100  ppm  sebanyak  masing-masing  4  ml.  Ke dalam  masing-masing  larutan  ditambahkan  1  ml larutan DPPH 0,4 mM dan diinkubasi pada selama 30 menit  selanjutnya  diukur  pada  panjang  gelombang 516  nm.  Sebagai  blanko  digunakan  etanol  p.a  dan DPPH  0,4  mM  mM.  Untuk  pembanding  digunakan Vitamin  C  murni  (konsentrasi  2,  3,  4,  5  dan  6  ppm.
Perhitungan  persen  aktivitas  antioksidan  DPPH digunakan rumus sebagai berikut Aktivitas antioksidan (%) =
(A blanko – A sampel) A blanko x 100% A blanko = serapan radikal DPPH 0,4 mM
A  sampel  =  serapan  radikal  DPPH  0,4  mM  setelah diberi perlakuan sampel.
Aktivitas  antioksidan  peredaman  radikal bebas DPPH ekstrak etanol klika faloak serta vitamin C  dianalisis  dan  masing-masing  dihitung  harga  IC 50 nya melalui analisis probit. Selanjutnya, hasil analisis probit  dibandingkan dengan tingkat kekuatan antioksidan (Jun et al, 2003).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Klika  faloak  yang  dipanen  dibersihkan  dan dirajang  kemudian  diekstraksi  dengan  metode maserasi.  Metode  ini  digunakan  karena  metode  ini merupakan  metode  dingin  sehingga  dapat  mencegah kemungkinan  rusaknya  zat  aktif  akibat  pemanasan selain  itu  metode  ini    memiliki  kelebihan  yaitu  cara pengerjaan dan alat yang digunakan sederhana.
Pelarut  yang digunakan  dalam  ekstraksi yaitu  etanol  70%  karena  flavonoid  merupakan senyawa yang larut dalam pelarut polar seperti etanol. Selain itu berdasarkan penelitian terhadap kandungan total  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak klika Ziziphus  mucronata Willd.  Subsp.  yang dilakukan oleh Olajuyigbe et al (2011) menunjukkan bahwa  ekstrak  dengan  pelarut  etanol  memiliki  nilai kandungan  total  fenolik  dan  flavonoid  serta  aktivitas antioksidan  tertinggi  dibanding  ekstrak  dengan pelarut aseton.
Ekstrak  cair  klika  setelah  dipekatkan diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak  24,7232  gram dengan  persentase  rendamen  sebesar  9,89%.  Hasil ekstraksi kemudian di uji kandungan kimia flavonoid dan  didapatkan  hasil  positif  yang  ditandai  dengan terbentuknya warna jingga.
Pengukuran aktivitas  antioksidan  sampel dilakukan  pada  panjang  gelombang  516  nm  yang merupakan panjang gelombang maksimum DPPH.
Adanya  aktivitas  antioksidan  dari  sampel mengakibatkan terjadinya  perubahan warna pada larutan DPPH  dalam  metanol  yang  semula berwarna ungu pekat menjadi kuning pucat (Molyneux,  2004).
Tiap konsentrasi  yang  diperoleh  kemudian diukur  pada  spektrofotometer  UV-Vis  dengan Vitamin  C  murni  sebagai  pembanding  (kontrol positif).  Aktivitas  antioksidan  ditunjukkan  dengan nilai  IC 50 (Inhibitory  Concentration 50%).  Nilai  IC 50 merupakan  nilai  konsentrasi  antioksidan  untuk meredam 50% aktivitas radikal bebas.
Uji aktivitas antioksidan atau penghambatan terhadap  radikal  bebas  menggunakan  metode  DPPH
y = 20,60x - 12,63 R² = 0,997 0 20 40 60 80 100 2 3 4 5 6 Ak tiv it a s p er ed a m a n ( % ) Konsentrasi (ppm)
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  klika  faloak  (S. quadrifida R. Br) memiliki aktivitas antioksidan.
Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  dapat dilihat pada gambar 1 dan gambar 2.
Gambar  1. Hubungan  konsentrasi  ekstrak  etanol klika faloak dengan persen peredaman
Gambar 2. Hubungan  konsentrasi Vitamin C  murni dengan persen peredaman
Berdasarkan  analisis  data  menggunakan anilisis probit diperoleh nilai IC 50 ekstrak etanol klika faloak    sebesar 4,  8101  ppm dan  Vitamin  C  murni sebagai pembanding  mempunyai IC 50 sebesar 3,8279 ppm.  Nilai  IC 50 yang    semakin    kecil  menunjukan aktivitas    antioksidan    pada  bahan    yang    diuji semakin    besar  (Molyneux,  2004).  Nilai  IC 50 ekstrak etanol klika faloak lebih besar dari nilai IC 50 Vitamin C  murni.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  daya antioksidan ekstrak  etanol  klika  faloak  lebih  lemah dibandingkan  antioksidan  Vitamin  C  murni. Hal  ini dapat  disebabkan  karena  Vitamin  C  merupakan senyawa yang sangat murni sedangkan ekstrak etanol klika  faloak  masih  merupakan  ekstrak  kasar  bukan senyawa murni atau isolat.
Senyawa  yang  dicurigai  memiliki  aktivitas antioksidan  pada  ekstrak  klika  faloak  adalah
flavonoid  dan  senyawa  fenolik. Menurut    Kahkonen et  al (1999)    senyawa    fenolik    telah    dilaporkan mempunyai    aktivitas    antioksidan    karena    sifat reduksinya. Flavonoid dapat beraksi sebagai antioksidan dengan menangkap radikal bebas melalui pemberian  atom  hidrogen  pada  radikal  tersebut. Secara    umum,  kemampuan    flavonoid    dalam menangkap    radikal  tergantung  dari  substitusi  gugus hidroksi  dan  kemampuan  stabilisasi  dari  radikal fenolik    melalui    ikatan    hidrogen    atau    melalui delokalisasi    elektron.    Selanjutnya  radikal  fenoksi flavonoid  tersebut  distabilkan  oleh  delokalisasi elektron  yang  tidak  berpasangan    di    sekitar    cincin aromatik.  Stabilitas    radikal    fenoksi    flavonoid (reactive    oxygen)    akan    mengurangi    kecepatan perambatan (propagasi) autooksidasi reaksi berantai.

## IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian uji aktivitas antioksidan ekstrak  etanol  klika  faloak  (S.  quadrifida R.Br) dengan metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picryhydrazyl) maka  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  klika  faloak (S. quadrifida R. Br) mempunyai aktivitas antioksidan kuat dengan nilai IC 50 4,8101 ppm.

## DAFTAR REFERENSI
Atta, U.R., M.I., Choudhary, 2001, Bioactive Natural Product  a  Potential  Pharmacopores,  A Theory  of  Memory, Pure  appl.  Chem,  73,  p 555-560
Jun,    M.H.Y.,    J.,    Fong,    X.,    Wan,    C.S., Yang, C.T.,    Ho.,    2003, Camparison of Antioxidant  Activities  of Isoflavones  Form Kudzu  Root (Puerarua  labata  O), Journal Food Science  Institute  of  Technologist, 68; 2117-2122.
Kahkonen, M., P., et al., 1999, Antioxidant Activity of
Plant Extracts Containing Phenolic Compounds,  Journal  of  Agriculture  and Food Cemistry, 47; 3954-3962
Molyneux,  P., 2004, The  Use  of  The  Stable  Free Radical  Diphenyl picrylhydrazyl    (DPPH) for    Estimating    Antioxidant    Activity, Journal  of Science and Technology Vol. 26 (2): 211-219
Olajuyigbe,  O.,  P.,  and  Afolayan,  J.,  A.,  2011, Phenolic  Content  and  Antioxidant  Property of  the  Bark  Extracts  of  Ziziphus  Mucronata Will. Subsp. Mucronata Will, BMC Complementary and Alternative Medicine
y = 0,196x + 68,20 R² = 0,978 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 120 Ak tiv it a s p er ed a m a n ( % )
Konsentrasi (ppm)
Siswadi,  S.,  S.G.  dan  Rianawati,  H.,  2013 ‘Potential
Distribution  and  Utilization  of  Faloak (Sterculia
quadrifida R.Br
1844)’,
Proceeding  International  Confrence  of Forest  and  Biodiversity Manado, Editor  : Langi.  M,  Manado  Forestry  Institute, Manado. p 165
Trilaksani,  W.,  2003, Antioksidan:  Jenis,  Sumber, Mekanisme dan Peran terhadap Kesehatan
Winarsi,  H.,  2007, Antioksidan  Alami  &  Radikal Bebas, Kasinus, Yogyakarta.