Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35
http://dx.doi.org/10.22302/iribb.jur.mp.v91i1.511
p-ISSN: 0125-9318/ e-ISSN: 1858-3768
Accreditation Number: 164/E/KPT/2021

## Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit
Optimization of culture system and media for the in vitro shoot growth of oil palm
Masna Maya SINTA *) , Rizka Tamania SAPTARI, Imron RIYADI & SUMARYONO
Pusat Penelitian Kelapa Sawit Unit Bogor, Jl. Taman Kencana No.1, Bogor 16128, Indonesia
Diterima tgl 5 Okt 2022 / Perbaikan tgl 1 Nov 2022 / Disetujui tgl 16 Jan 2023

## Abstract
Optimization of in vitro shoot growth is necessary to  shorten the culture time and produce vigorous oil palm  plantlets.  This  research  was  conducted  to determine  the  best  media  and  culture  techniques  to accelerate in vitro shoot growth of oil palm. Shoots of oil  palm  derived  from  somatic  embryogenesis  were grown  on  DF  media  with  two  culture  systems  (solid medium  and  double-layer)  combined  with  hormone treatments  (0.5-1  mg  L -1 giberellin/GA 3 and 0.5 mg L -1 Benzyl amino purine/BAP or thidiazuron/ TDZ).  Further  optimization  was  conducted  using different  bottle  closures  (polypropylene  screw  caps and  plastic  wraps)  and  macronutrients  (standard  or double concentrations). This research was conducted using  a  completely  randomized  design  (CRD),  with each treatment consisting of 5 bottle replications and each bottle consisting of 5 shoots. The results showed that  media  with  double-layer  system  combined  with GA 3 (0.5-1  mg  L -1 )  and  TDZ  (0.5  mg  L -1 )  gave  the highest  shoot  height  increment.  The  use  of  double- strength  macronutrient  media  combined  with  screw bottle  caps  increased  shoot  height  (136-167  %)  and decreased  shoot  tip  necrosis  (0-24  %). Plastic  wrap bottle caps increased shoot tip necrosis (STN), while doubling macronutrients reduced STN. The growth of oil palm shoots began to slow down after 5 weeks of culture.  In  conclusion,  the  optimal  conditions  for in vitro shoot  growth  of  oil  palm  were  at  usage  of double-layer media added with GA 3 0.5-1 mg L -1 , TDZ 0.5 mg L -1 , and double macronutrients on bottle jars with polypropylene screw caps.
[Keywords: double-layer, GA 3 , macronutrients, bottle cap, thidiazuron]

## Abstrak
Optimasi  pembesaran  tunas in  vitro perlu dilakukan  untuk  mempersingkat  waktu  kultur  dan menghasilkan  planlet  kelapa  sawit  yang  vigor. Penelitian ini dilakukan untuk menetapkan media dan sistem kultur terbaik untuk mempercepat pertumbuhan tinggi tunas in vitro kelapa sawit. Tunas kelapa sawit yang berasal dari embriogenesis somatik dikultur  pada  media  DF  menggunakan  dua  sistem kultur  (medium  padat  dan double-layer )  yang dikombinasikan dengan perlakuan hormon (GA 3 0,5 - 1  mg  L -1 dan  BAP  atau  thidiazuron  0,5  mg  L -1 ). Optimasi  lebih  lanjut  dilakukan  dengan  penggunaan penutup  botol  yang  berbeda  (tutup  ulir  polipropilen dan plastic  wrap )  dikombinasikan  dengan  perlakuan hara makro (1 atau 2 kali konsentrasi). Penelitian ini dilakukan  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL), dengan masing-masing perlakuan terdiri dari 5  ulangan  botol  dan  tiap  botol  berisi  5  tunas.  Hasil penelitian  menunjukkan bahwa  media dengan sistem double-layer dan  kombinasi  media  GA 3 (0,5-1  mg L -1 ) dan TDZ (0,5 mg L -1 ) memberikan penambahan tinggi  tunas  terbesar. Penggunaan  media dengan dua kali konsentrasi hara makro pada botol kultur dengan penutup  ulir  meningkatkan  penambahan  tinggi  tunas (136-167%) dan menurunkan kejadian nekrosis ujung tunas  (0-24%).  Penggunaan  tutup  botol  plastik  wrap menyebabkan  peningkatan  terjadinya  nekrosis  ujung daun, sedangkan penambahan hara makro menurunkan  persentase  nekrosis  ujung  daun. Pertumbuhan tunas kelapa sawit mulai melambat pada minggu  ke-5  setelah  kultur.  Sebagai  kesimpulan, kondisi  optimum  untuk  pertumbuhan  tunas in  vitro kelapa  sawit  adalah  penggunaan  media double-layer ditambah  GA 3 0,5-1  mg  L -1 ,  TDZ  0,5  mg  L -1 ,  dan dilanjutkan dengan pengkulturan menggunakan media dengan dua kali konsentrasi hara makro pada botol jar dengan penutup ulir.
[Kata kunci: double-layer , GA 3 , hara makro,
penutup botol, thidiazuron]
*) Korespondensi penulis: mayasinta77@gmail.com
0125-9318/ 1858-3768 ©2023 Authors This is an open access article under the CC BY license ( https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ ) Menara Perkebunan is DOAJ indexed Journal and accredited as Sinta 2 Journal ( https://sinta.kemdikbud.go.id/journals/profile/3125 ) How to Cite: Sinta, M. M., Saptari, R. T., Riyadi, I., & Sumaryono. (2023). Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit. Menara Perkebunan , 91 (1), 25–35. http://dx.doi.org/10.22302/iribb.jur.mp.v91i1.511
Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit…………………............. .(Sinta et al.)

## Pendahuluan
Kelapa  sawit  merupakan  salah  satu  tanaman penting  bagi  industri  perkebunan  di  Indonesia. Peningkatan  luas  areal  serta  kegiatan replanting kebun  kelapa  sawit  menyebabkan  peningkatan permintaan bibit kelapa sawit. Tanaman kelapa sawit komersial  merupakan  hasil  persilangan  dari  pohon induk betina (Dura) dan jantan (Pisifera) yang dikenal dengan  nama  Tenera.  Pemenuhan  kebutuhan  bibit kelapa sawit umumnya dilakukan melalui persilangan konvensional  (benih  hibrida  /  Tenera)  atau  dengan perbanyakan in  vitro tanaman  Teneranya  (Setiawan, 2017).
Keunggulan  perbanyakan in  vitro kelapa  sawit yaitu dapat dihasilkannya kelapa sawit klonal ( true to type ),  massal,  tidak  tergantung  waktu,  dan  bebas penyakit (Karim, 2021). Kultur in vitro kelapa sawit dilakukan  melalui  teknik somatic  embryogenesis (SE),  pada  media  padat  ataupun  melalui  sistem perendaman  sesaat  (Jayanthi  et  al.,  2015;  Gomes  et al.,  2016).  Teknik  SE  dilakukan  dengan  menanam bagian  somatik  eksplan  dan  meregenerasikannya menjadi  planlet,  dimana  pada  proses  ini  diawali dengan pembentukan embrio, baik langsung maupun tidak langsung. Keuntungan lain dari SE adalah dapat dimanfaatkan  untuk  pemuliaan  tanaman  modern melalui genome editing (Budiani et al., 2018;  Yarra et  al.,  2020;  Wan-Chin  et  al.,  2021;  Martin  et  al., 2022)  dan  untuk  penyimpanan  plasma  nutfah  (da Silva et al., 2017; Palanyandy et al., 2020).
Perbanyakan  kelapa  sawit  melalui  SE  diawali dengan induksi kalus, proliferasi kalus, induksi kalus embriogenik,  maturasi  embrio,  perkecambahan, pembesaran tunas, dan induksi akar. Tanaman kelapa sawit  merupakan  tanaman  rekalsitran,  sehingga perbanyakan in  vitro kelapa  sawit  lebih  sulit dibandingkan tanaman lain (Karim, 2021). Penelitian optimasi kultur in vitro telah banyak dilakukan mulai dari  tahap induksi  kalus, proliferasi, induksi  embrio, hingga  induksi  akar  (Yusnita  &  Hapsoro,  2011; Marbun  et  al.,  2014;  Jayanthi  et al.,  2015;  Gomes  et al. , 2016;  Padua  et  al.,  2017;  Karyanti  et  al.,  2021; Sulaksono et al., 2021).  Pembesaran tunas merupakan tahapan persiapan tunas sebelum masuk fase induksi akar dan aklimatisasi. Kecepatan pertumbuhan tunas merupakan hal penting terutama dalam produksi bibit komersial.  Tinggi  tunas  merupakan  salah  satu parameter  kesiapan  planlet  untuk  masuk  ke  tahap aklimatisasi. Sumaryono & Riyadi (2011) mengemukakan  bahwa  kondisi  terbaik  planlet  siap aklimatisasi  adalah  memiliki  tinggi  9,5  cm  dengan 2-3  daun.  Namun  penelitian  mengenai  optimasi percepatan  penambahan  tinggi  tunas in  vitro kelapa sawit  secara  terpadu  mencakup  aspek  media  dan lingkungan mikro masih jarang dilakukan.
Optimasi  media  kultur in  vitro umumnya dilakukan dengan mengatur penggunaan zat pengatur tumbuh tanaman (ZPT) (Mahmad et al., 2014; Correa et  al.,  2016;  Ahmad  et  al.,  2022),  keseimbangan nutrisi (Weckx et al., 2019; da Silva et al., 2020), dan sistem kultur yang digunakan (padat, cair, atau sistem perendaman sesaat) (Sumaryono et al., 2007; Tarmizi et al., 2008; Marbun et al., 2014; Gomes et al., 2016; Monteiro  et  al.,  2018).    Sedangkan  optimasi lingkungan mikro dapat dilakukan dengan pengaturan suhu,  penggunaan  penutup  botol,  serta  pengaturan penyinaran (Sinta et al., 2011; Manoh et al., 2021).
Jenis  dan  konsentrasi  ZPT  pada  kultur in  vitro bergantung  pada  jenis  tanaman  serta  tahapan pertumbuhan  tanaman.  Beberapa  ZPT  yang  umum digunakan  pada  kultur in  vitro seperti  auksin, sitokinin,  giberelin  (GA 3 ),  dan  asam  absisat  (ABA) baik diaplikasikan secara tunggal maupun kombinasi. Sitokinin  merupakan  ZPT  yang  berperan  dalam pembelahan  dan  diferensiasi  sel  (Feng  et  al.,  2017). Beberapa jenis sitokinin yang umum digunakan pada kultur in  vitro adalah  kinetin, benzylaminopurine (BAP), dan thidiazuron (TDZ). BAP dan TDZ umum digunakan dalam pembesaran tunas in vitro (Azwin et al.,  2006;  Jafari  et  al., 2011; Lavakumaran &  Seran, 2014;  Singh  &  Dwivedi,  2014;  Hutchinson  et  al., 2015),  namun  pengaruhnya  bergantung  pada  jenis tanaman  dan  konsentrasi  yang  digunakan.  Selain sitokinin,  GA 3 dilaporkan  juga  berperan  dalam pertumbuhan  tunas in  vitro (Sudrajad  et  al.,  2016; Padròn  et  al.,  2020).  Oleh  karena  itu,  tujuan  dari penelitian  ini  adalah  mencari  komposisi  media  dan sistem kultur  terbaik secara terpadu yaitu media dan lingkungan  mikro  untuk  mempercepat  pertumbuhan tinggi tunas in vitro kelapa sawit.

## Bahan dan Metode

## Bahan
Bahan tanam yang digunakan adalah tunas in vitro kelapa sawit Tenera asal perbanyakan in vitro melalui teknik  SE  dari  Laboratorium  Biak  Sel  dan Mikropropagasi  PPKS  Unit  Bogor.    Penelitian  ini dibagi menjadi  2 tahap, perlakuan terbaik  dari tahap satu  selanjutnya  digunakan  sebagai  dasar  untuk penelitian  tahap  2.  Pada  percobaan  1  dilakukan optimasi pertumbuhan tunas dengan perlakuan sistem kultur (media padat dan double layer ) dikombinasikan dengan penggunaan ZPT yaitu GA 3 , BAP, dan TDZ. Pada  percobaan  2  dilakukan  optimasi  pembesaran tunas dengan penggunaan makromineral (1 dan 2 kali konsentrasi) serta penutup botol yang berbeda (tutup ulir berbahan polipropilena dan plastik wrap berbahan polietilen). Bahan tanam yang digunakan pada kedua percobaan berasal dari sumber yang sama.
Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35

## Percobaan 1: sistem kultur dan ZPT
Tunas  aksenik  kelapa  sawit  (tinggi  1,8  cm) ditanam  pada  media  dasar  DF  (de  Fossard,  1974), sukrosa  3%,  arang  aktif  0,5  g  L -1 ,  gelzan  3,5  g  L -1 dengan  perlakuan:  sistem  kultur  (padat  dan double- layer ), ZPT GA 3 (0,5 dan 1 mg  L -1 ) dikombinasikan dengan  hormon  sitokinin  yaitu  BAP  dan  TDZ (masing-masing 0,5 mg L -1 ) dalam botol jar (masing- masing 5 tunas per botol jar). Perlakuan pembesaran tunas (percobaan 1) ini tersaji pada Tabel 1 (G1-G8), dimana G1 digunakan sebagai media kontrol (Sinta et al.,  2011).    Masing-masing  perlakuan  terdiri  dari 5  ulangan,  sehingga  pada  penelitian  ini  digunakan 200  tunas.  Media double-layer dibuat  dengan menambahkan  media  cair  dengan  komposisi  yang sama  di  atas  media  padat  (sebanyak  5  mL)  setelah tunas  ditanam  pada  media.  Volume  media  padat 30  mL  per  botol  jar.  Media  sebelumnya  telah disterilisasi  dengan  diautoklaf  pada  suhu  121 o C  dan tekanan  1  kg  cm -2 selama  20  menit.  Pertambahan tinggi tunas diamati pada minggu ke 6 setelah kultur. Tinggi  tunas  dihitung  pada  awal  kultur  dan  minggu keenam  setelah  kultur  dengan  mengukur  panjang tunas dari pangkal tunas hingga daun tertinggi. Selisih tinggi  tunas  pada  minggu  keenam  dan  tinggi  tunas awal  tanam  merupakan  penambahan  tinggi  tunas. Sistem kultur dan media terbaik yang diperoleh pada penelitian  ini  digunakan  sebagai  media  dasar  untuk optimasi pembesaran tunas pada percobaan 2.
Percobaan  2:  Penggunaan  jenis  penutup  botol  dan hara makro
Media  terbaik  dari  penelitian  sebelumnya digunakan  sebagai  media  dasar  untuk  optimasi pembesaran  tunas  kelapa  sawit  tahap  2.  Pada
perlakuan ini dilakukan optimasi dengan penggunaan penutup  botol  (tutup  ulir  dan plastic  wrap ) dikombinasikan dengan 1 dan 2 kali konsentrasi hara makro.  Tutup  ulir  berbahan  plastik  polipropilen berwarna  putih,  memiliki  ketebalan  ±  1,2  mm sedangkan plastic  wrap berbahan  plastik  polietilen bening,  dengan  ketebalan  ±  17  µm.  Perlakuan optimasi  pembesaran  tunas  (U1,  U2,  W1,  dan  W2) disajikan pada Tabel 2, dengan perlakuan U1 sebagai kontrol.
Hara  makro  media  DF  terdiri  dari:  KNO 3 (1.020 mg L -1 ), NH 4 NO 3 (800 mg L -1 ), NaH 2 PO 4 .H 2 O (138  mg  L -1 ),  MgSO 4 .7H 2 O  (369  mg  L -1 ),  dan CaCl 2 .2H 2 O  (294  mg  L -1 )  (de  Fossard,  1974), sehingga  untuk  perlakuan  2  kali  hara  makro  maka konsentrasinya  digandakan.  Tunas  sebanyak  5  buah ditanam pada media dalam botol jar. Masing-masing perlakuan  terdiri  dari  5  ulangan,  sehingga  pada penelitian  ini  digunakan  100  tunas.  Pertumbuhan tunas  diamati  dengan  mengukur  tinggi  tunas  (dari pangkal  batang  hingga  ujung  daun  tertinggi)  setiap minggu  hingga  minggu  ke-6.  Persentase  daya  hidup dan  kejadian  nekrosis  ujung  tunas  diamati  pada minggu  keenam.  Tunas  kelapa  sawit  aksenik  pada kedua percobaan diinkubasi pada ruang kultur terang dengan pencahayaan lampu TL 20 watt selama 12 jam per hari dan suhu ruangan diatur pada  26 o C.

## Analisis data
Penelitian ini dilakukan dengan Rancangan Acak Lengkap  (RAL).  Analisis  data  dilakukan  dengan analisis ragam ( analysis of variance ), perbedaan antar perlakuan  diuji  lanjut  dengan  uji  jarak  berganda Duncan Multiple Range Test pada  = 5%.
Tabel 1. Perlakuan pembesaran tunas 1: sistem kultur dan hormon Table 1. Shoot growth treatment 1: culture system and hormone
Kode media Media code Sistem kultur Culture system GA 3 (mg L -1 )
Sitokinin / Cytokinin BAP (mg L -1 ) TDZ (mg L -1 ) G1 Padat / Solid 0,5 0,5 - G2 Padat / Solid 0,5 - 0,5 G3 Padat / Solid 1 0,5 - G4 Padat / Solid 1 - 0,5 G5 Double-layer 0,5 0,5 - G6 Double-layer 0,5 - 0,5 G7 Double-layer 1 0,5 - G8 Double-layer 1 - 0,5
Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit………………….............. (Sinta et al . )
Tabel 2. Perlakuan pembesaran tunas 2: jenis  tutup botol jar dan konsentrasi hara makro Table 2 . Shoot growth treatment 2: bottle jar closure and macronutrient
Kode Code Jenis tutup botol jar Bottle jar closure type Konsentrasi hara makro Macronutrient concentration U1 Ulir / Screw cap 1 kali ( standard ) U2 Ulir / Screw cap 2 kali ( double ) W1 Plastic wrap 1 kali ( standard ) W2 Plastic wrap 2 kali ( double )
Gambar 1.  Pengaruh sistem kultur dan hormon terhadap tinggi tunas in vitro kelapa sawit setelah 6 minggu
Figure 1.   In vitro culture system and hormone effect on in vitro shoot height of oil palm after 6 weeks
*) Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada α = 0,05
*) The same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at α = 0.05

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  sistem  kultur  dan  ZPT  terhadap  tinggi tunas
Penambahan tinggi tunas terbesar pada penelitian ini  didapatkan  pada  perlakuan  G6  dan  G8  dimana setelah  diinkubasi  selama  6  minggu  terdapat penambahan  tinggi  tunas  sebesar  1,40-1,44  cm. Penambahan  tinggi  tunas  paling  rendah  didapatkan pada media G3 (0,43 cm) (Gambar 1). Media G6 dan G8 merupakan media dengan sistem double-layer dan TDZ  (0,5  mg  L -1 ).  Sistem double-layer mampu menambah  tinggi  tunas  rerata  0,27  cm  lebih  tinggi dari media padat, sedangkan tunas dengan penambahan  TDZ  rerata  0,22  cm  lebih  tinggi  dari media  dengan  penambahan  BAP  setelah  6  minggu. Penggunaan  sistem  kultur double-layer telah digunakan  baik  untuk  meningkatkan  vigor  planlet seperti  pada  stevia  dan  anthurium  (Saptari  & Sumaryono, 2016; Saptari et al., 2017), maupun untuk
menumbuhkan  tanaman  akuatik  (Mahmad  et  al., 2014).  Sistem  ini  meningkatkan  ketersediaan  hara yang mampu diserap oleh tanaman.
Thidiazuron  merupakan  salah  satu  hormon sitokinin  turunan  urea  tanpa  cincin  purin,  dimana cincin ini umumnya dijumpai pada sitokinin jenis lain seperti  BAP  (Lu,  1993).  TDZ  meningkatkan pertumbuhan  tunas  dengan  meningkatkan  aktivitas ribonukleotida,  sintesis  sitokinin,  atau  melalui penghambatan  degradasi  sitokinin  endogen  (Capelle et  al.,  1983;  Thomas  &  Katterman,  1986).  Analisis metabolomik  menunjukkan  hipotesis  pengaruh  TDZ dalam  meningkatkan  penyerapan  gula  dari  media, meningkatkan  metabolisme  primer,  pengalihan metabolisme terpen, dan mediasi  metabolisme stress (Erland et al., 2020). TDZ dilaporkan berperan dalam pertumbuhan kultur in vitro mulai dari embriogenesis somatik, organogenesis, morfogenesis, hingga regenerasi tunas (Gosh et al., 2018; Mose et al., 2017; Dinani et al., 2018;  Ahmad & Shahzad, 2018; Ahmad et al., 2022).
ab ab b *) ab ab a ab a 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 T in g g i t u n as / S h o o t h ei g h t (c m ) Perlakuan/ Treatment Awal 6 minggu Penambahan tinggi
Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35
Pada  penelitian  ini,  penggunaan  sitokinin  TDZ lebih  baik  dalam  memacu  pertumbuhan  tunas dibandingkan  BAP.  Performa  TDZ  yang  lebih  baik dibandingkan BAP dalam berbagai fungsi di kultur in vitro ,  terutama  morfogenesis  tunas in  vitro juga dilaporkan antara lain pada Aloe vera (Lavakumaran & Seran, 2014), Stevia rebaudiana (Singh & Dwivedi, 2014),  dan Alstroemeria  aurantiaca (Hutchinson  et al.,  2015).  Berdasarkan  beberapa  pustaka  tersebut, pada umumnya penggunaan TDZ hanya memerlukan konsentrasi  yang  sangat  rendah  dibandingkan  BAP untuk  memiliki  efek  pemacuan  pertumbuhan  yang sama  atau  lebih  baik,  atau  pada  BAP  masih  perlu dikombinasikan dengan hormon lain untuk mengimbangi respons perlakuan TDZ.

## Pengaruh penggunaan penutup botol dan hara makro
Penambahan  tinggi  tunas  tertinggi  didapatkan pada perlakuan U2 yaitu  penutup botol ulir dan media dengan  2  kali  konsentrasi  hara  makro  (Gambar  2). Penambahan  terendah  didapatkan  pada  perlakuan penutup plastic  wrap dan  media  dengan  hara  makro standar. Penambahan hara makro pada penelitian ini menunjukkan  efek  positif  terhadap  penambahan tinggi  tunas.  Sedangkan  penambahan  tinggi  tunas pada perlakuan U1 (tutup ulir, 1 kali makro) dan W2 ( plastic wrap , 2 kali makro) memiliki nilai yang tidak berbeda  nyata.  Hal  ini  diduga  karena  tunas  pada perlakuan tutup botol ulir dengan hara makro standar mampu  memanfaatkan  media  untuk  pertumbuhan tunasnya  meski  hanya  dengan  satu  kali  konsentrasi
hara makro, sedangkan pada perlakuan W2, meskipun hara  makro  ditambahkan,  namun  dengan  adanya penguapan  yang  tinggi  selama  proses  kultur menyebabkan media sulit diserap oleh tunas.  Hal ini sesuai  dengan  penelitian  Sinta  et  al.  (2011)  bahwa penggunaan  plastik  wrap  sebagai  penutup  botol  jar menunjukkan pertumbuhan tunas kelapa sawit paling lambat  dibandingkan  menggunakan  tutup  berbahan polipropilen,  aluminium  foil,  atau  plastik  tahan autoklaf  pada  konsentrasi  makromineral  standar. Penelitian  Lekamge  et  al.  (2021)  juga  menunjukkan bahwa  penambahan  beberapa  makromineral  seperti CaCl 2 ,  MgSO 4 ,  dan  KH 2 PO 4 meningkatkan  vigor planlet  kentang  yang  ditandai  dengan  peningkatan pertumbuhan  tinggi  tanaman  dan  daun  yang  besar berwarna gelap.
Graham  &  Thurtell  (1989)  melaporkan  bahwa kenaikan  transpirasi  tanaman  pada  tingkat  tertentu mengakibatkan  penurunan  laju  fotosintesis  yang mengindikasikan  kemungkinan  stress  air  atau kelembaban rendah menyebabkan perubahan konduksi  stomata  yang  memengaruhi  pertumbuhan. Selain itu, tutup plastic wrap memiliki pori besar yang mampu melewatkan uap air dan menyebabkan media tersisa  menjadi  lebih  pekat  (Sinta  et  al.,  2011). Penelitian  Sinta  et  al.  (2011)  membuktikan  bahwa bobot basah media tersisa pada perlakuan tutup plastik wrap  secara  signifikan  paling  rendah  dibandingkan dengan perlakuan penutup lain (ulir, aluminium foil, dan  plastik  tahan  autoklaf).  Media  yang  lebih  pekat mengakibatkan nutrisi pada media lebih sulit terserap oleh sel    tanaman.    Dari    segi   hormonal  tanaman,
Gambar 2.  Pertumbuhan tunas kelapa sawit setelah kultur 6 minggu. Perlakuan: U (tutup botol ulir), W (tutup botol plastic wrap ), 1 (hara makro standar), 2 (hara makro dua kali konsentrasi)
Figure 2.   Shoot  growth  of  oil  palm  after  6  weeks  of  culture.  Treatments:  U  (screw  cap),  W  (plastic  wrap),  1  (standard macronutrients), 2 (double macronutrients)
*) Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada α = 0,05
*) The same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at α = 0.05
ab a *) b ab 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 U1 U2 W1 W2 T in g g i tu n as / S h o o t h ei g h t (c m ) Perlakuan/ Treatment tinggi awal 6 minggu penambahan
Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit …………………..............(Sinta et al.)
dalam keadaan potensial air pada media yang rendah, konsentrasi  asam  absisat  (ABA)  endogen  tanaman menjadi  tinggi  (Sharp  et  al.,  1994).  ABA  banyak ditranspor dari akar ke daun untuk menjalankan fungsi penghambatan  pertumbuhan  daun  dan  tunas,  dalam rangka  regulasi  pertumbuhan  menghadapi  cekaman (Sharp et al., 1994).
Penambahan  tinggi  tunas  naik  secara  tajam  pada minggu  ke-2  hingga  ke-3  (naik  0,5-0,6  cm  selama seminggu),  kecuali  pada  perlakuan  W1  dimana penambahan  tunas  tertinggi  terjadi  pada  minggu pertama hingga ke-2 (naik 0,3 cm pada minggu ke 1- 2,  namun  hanya  naik  0,11  cm  pada  minggu  ke  2-3) (Gambar  3).  Pada  minggu  selanjutnya,  penambahan tinggi  tunas  mulai  melambat.  Pada  mingggu  ke-5 hingga  6,  perlakuan  W1  sudah  tidak  terjadi penambahan  tinggi  tunas  (0  cm),  sedangkan  pada perlakuan U1 masih terjadi sedikit penambahan tinggi tunas  (0,06  cm).  Pada  perlakuan  W2  masih  terdapat penambahan  tinggi  tunas  sebesar  0,10  cm  dan penambahan  tunas  masih  tinggi  pada  perlakuan  U2 (0,12 cm). Penggunaan hara makro 2 kali konsentrasi pada penelitian ini menunjukkan efek positif terhadap penambahan tinggi tunas, hal ini diduga karena masih tersedianya  nutrisi  untuk  pertumbuhan  tunas. Sebaliknya  pada  perlakuan    media  dengan  satu  kali hara makro (W1 dan U1), diduga karena nutrisi sudah mulai  habis  yang  menyebabkan  tidak  ada  lagi
kenaikan  tinggi  tunas,  sehingga  pada  perlakuan  ini harus dilakukan subkultur pada minggu ke-5.
Daya  hidup  tunas  pada  penelitian  ini  tinggi  (96- 100%),  namun  beberapa  tunas  mengalami  nekrosis pada  bagian  ujung  ( shoot  tip  necrosis )  (Tabel  3). Penguningan  ujung  daun  tertinggi  terjadi  pada perlakuan  W1  (28%)  disusul  perlakuan  W2  (16%), dimana keduanya menggunakan penutup botol plastic wrap . Meskipun demikian, penggunaan media dengan hara  makro  2  kali  konsentrasi    mampu  menurunkan nekrosis ujung daun tunas in vitro kelapa sawit pada kultur  dengan  penutup plastic  wrap .  Penggunaan penutup  botol  ulir  mampu  mencegah  terjadinya nekrosis ujung daun. Nekrosis ujung daun merupakan kondisi fisiologis yang menyebabkan kematian pucuk tunas,  kondisi  ini  dapat  menyebar  ke  bagian  bawah planlet  hingga  pangkal  dan  menyebabkan  kematian tunas  (da  Silva  et  al.,  2020).  Kondisi  ini  terjadi umumnya akibat defisiensi hara atau ketidakseimbangan nutrisi pada media (da Silva et al., 2020).  Penelitian  yang  dilakukan  Ernayunita  et  al. (2019)  menunjukkan  bahwa  apabila  pada  tunas in vitro kelapa  sawit  memiliki  ciri  ujung  daun  yang mengering  (nekrosis),  akan  terjadi  penurunan  daya hidup  setelah  planlet  diaklimatisasi  hingga  77,8%, kemudian  menurun  menjadi  33,3%  pada  fase  ramet, dan tersisa 12,5% saja  pada fase prenursery .
Gambar 3.  Penambahan tinggi tunas in vitro kelapa sawit selama 6 minggu. Perlakuan: U (tutup botol ulir), W (tutup botol plastic wrap ), 1 (hara makro standar), dan 2 (hara makro 2 kali konsentrasi)
Figure 3 .   In  vitro oil  palm  shoot  height  increment  in  6  weeks  period.  Treatments:  U  (screw  cap),  W  (plastic  wrap),  1 (standard macronutrients), and 2 (double macronutrients)
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 0 1 2 3 4 5 6 Pe n am b ah an t in g g i tu n as (c m ) S h o o t in cr em en t (cm ) Minggu/ Weeks U1 U2 W1 W2
Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35
Tabel 3. Daya hidup dan nekrosis ujung daun tunas in vitro kelapa sawit setelah 6 minggu Table 3. Survival rate and shoot tip necrosis on in vitro shoot of oil palm after 6 weeks
Perlakuan Treatment Daya hidup (%) Survival rate (%) Nekrosis ujung daun (%) Shoot tip necrosis (%) U1 96 a*) 4 b U2 100 a 4 b W1 96 a 28 a W2 100 a 16 ab
*) Angka dalam kolom yang sama diikuti oleh huruf yang sama berarti tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada α = 0,05
*) Means in the same column followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at α =0.05
Gambar 4.  Tunas in vitro kelapa sawit umur 6 minggu, U1= tutup ulir + 1 kali hara makro, U2= tutup ulir + 2 kali hara makro, W1= tutup plastic wrap + 1 kali hara makro, W2= tutup plastic wrap + 2 kali hara makro
Figure 4.   Oil palm in vitro shoot after 6 weeks of culture, U1 = screw cap + standard macronutrients, U2 = screw cap + double  macronutrients,  W1  =  plastic  wrap  +  standard  macronutrients,  W2  =  plastic  wrap  +  double macronutrients
Pada penelitian ini, pengaruh fisik diduga menjadi menyebab  tidak  langsung  terjadinya  nekrosis  ujung daun yaitu akibat penguapan yang tinggi pada kultur dengan  penutup  botol plastic  wrap ,  yang  akhirnya menyebabkan  defisiensi  atau  ketidak-seimbangan nutrisi.  Pada  perlakuan  W2,  kematian  ujung  daun lebih  rendah  dibandingkan  W1  karena  adanya penambahan  hara  makro.  Nekrosis  ujung  tunas dilaporkan  juga  diakibatkan  karena  defisiensi  Ca (Srivastava  &  Joshi,  2013;  Machado  et  al.,  2014; Nezami et al., 2015; Ahmed & Palta, 2017; Kurup et al.,  2018) atau rendahnya hara makro lain seperti K, Mg,  N  (Reed  et  al.,  2013;  Kovalchuk    et  al.  2017; 2018).  Penggunaan  penutup  botol  berventilasi  juga dilaporkan  menyebabkan  kematian  ujung  tunas (Offord  &  Tyler,  2009).  Pada  penelitian  ini,  pori plastik  wrap  yang  lebih  besar  diduga  mirip  dengan sistem  penutup  botol  berventilasi.    Tunas in  vitro kelapa sawit pada penelitian ini tumbuh dengan baik terutama pada perlakuan U2 (Gambar 4).
Perbanyakan in  vitro tanaman  kelapa  sawit melalui teknik somatic embryogenesis (SE)
merupakan  proses  yang  panjang  dan  membutuhkan waktu yang lama. Berbagai optimasi sering dilakukan untuk  percepatan  penyediaan  bibit  unggul  klonal secara  massal,  mulai  dari  induksi  kalus  hingga pembesaran  planlet,  pengakaran,  dan  aklimatisasi (Alves  et  al.,  2011;  Correa  et  al.,  2016;  Lin  et  al., 2017; Kingsley et al., 2018; Sparjanbabu et al., 2020). Berdasarkan  data  penambahan  tinggi  tunas  dapat diprediksi  jumlah  subkultur  yang  diperlukan  hingga planlet  siap  untuk  masuk  fase  berikutnya  (yakni induksi  akar)  sebelum  dilakukan  aklimatisasi  ke lingkungan  luar.  Pada  penelitian  ini,  penambahan tinggi  planlet  dengan  rerata  1,6  cm  (setiap  enam minggu)  dengan  tinggi  awal  tunas  2  cm,  sehingga diprediksi  dibutuhkan  28  minggu  kultur  hingga planlet  siap  diaklimatisasi  atau  25  minggu  apabila subkultur  dilakukan  setiap  5  minggu  (dengan  target tinggi  planlet  siap  aklimatisasi  setinggi  9,5  cm). Namun  penelitian  lanjutan  perlu  dilakukan  untuk melihat  konsistensi  pola  penambahan  tinggi  planlet hingga siap diaklimatisasi.
U1 U2 W1 W2
Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit………………….............. (Sinta et al.)

## Kesimpulan
Peningkatan tinggi tunas kelapa sawit dipengaruhi  oleh  sistem  kultur,  kombinasi  hormon dan  hara  makro  yang  digunakan.  Media  dengan sistem double-layer dan kombinasi media GA 3 (0,5- 1  mg  L -1 )  dan  0,5-1  mg  L -1 (TDZ  atau  BAP) memberikan  pengaruh  terhadap  penambahan  tinggi tunas.  Penggunaan  2  kali  konsentrasi  hara  makro pada  media  dikombinasikan  dengan  penggunaan tutup  botol  ulir  meningkatkan  penambahan  tinggi tunas dan menurunkan kejadian nekrosis ujung tunas.

## Ucapan Terimakasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Sdr M Amir  AM  dan  Sdr  Aliyah  atas  bantuan  teknis pelaksanaan kultur.

## Daftar Pustaka
Ahmad,  A.  &  Shahzad,  A.  (2018).  Thidiazuron influenced  morphogenesis  in  some  medicinal plants.  In:  N.  Ahmad,  M.  Faisal  (Eds.), Thidiazuron:  From  Urea  Derivative  to  Plant Growth  Regulator . https://doi.org/ 10.1007/978- 981-10-8004-3_1
Ahmad,  N.,  Faisal,  M.,  Ahmad,  A.,  Alatar,  A.  A., Qahtan,  A.  A.,  &  Alok,  A.  (2022).  Thidiazuron induced in vitro clonal propagation of
Lagerstroemia  speciosa (L.)  Pers.,  an  important avenue tree. Horticulturae 8 , 359.
https://doi.org/ 10.3390/horticulturae8050359
Ahmed ZFR & JP Palta (2017). Significant variations in  mineral  composition  among  agar  sources: implications in nutrition and abiotic stress studies that use in vitro culture. Acta Horticulturae 1187 , 115–122.
https://doi.org/ 10.17660/ActaHortic.2017.1187.1
4
Alves, S. A. O., De Lemos, O. F., Filho, B. G. S., & Da  Silva,  A.  L.  P.  (2011). In  vitro protocol optimization  for  development  of  interspecific hybrids  of  oil  palm  ( Elaeis  oleifera (H.B.K) Cortés  x Elaeis  guineensis Jacq.). Journal  of Biotechnology and Biodiversity 2 (3), 1-6.
Azwin,  Siregar,  I.  Z.,  &  Supriyanto  (2006).
Penggunaan  BAP  dan  TDZ  untuk  perbanyakan tanaman  gaharu  ( Aquilaria  malaccensis Lamk.). Media Konservasi 11 (3), 98-104.
Budiani,  A.,  Putranto,  R.  A.,  Riyadi,  I.  Sumaryono, Minarsih, H., & Faizah, R. (2018). Transformation of  oil  palm  calli  using  CRISPR/Cas9  System: toward  genome  editing  of  oil  palm. IOP Conference  Series  Earth  Environmental  Science. 183 (012003). https://doi.org/ 10.1088/1755- 1315/183/1/012003
Capelle, S. C., Mok, D. W. S., Kirchner, S. C., & Mok, M. C. (1983). Effects of thidiazuron on cytokinin autonomy  and  the  metabolism  of  N6.  (A2- isopentenyl)[8-'4C] adenosine in  callus tissues of Phaseolus  lunatus L. Plant  Physiology 73 ,  796– 802.
Corrêa,  T.  R.,  Motoike,  S.  Y.,  Andrade,  A.  P.  S., Coser,  S.  M.,  Queiroz,  V.,  Granja,  M.  M.  C., Caetano, D. D. N., Peña, C. N. M., & Picoli, E. A. T. (2016). Accelerated in vitro propagation of elite oil  palm  genotypes  ( Elaeis  guineensis Jacq.)  by substituting  cytokinin  with  putrescine. African Journal of Biotechnology 15 (50), 2767–2775.
Da Silva, J. A., Nezami‐Alanagh, E., Barreal, M. E.,
Kher, M. M., Wicaksono, A., Gulyás, A., Hidvégi, N.,  Magyar‐Tábori,  K.,  Mendler‐Drienyovszki, N., Márton, L., Landín, M., Gallego, P. P., Driver, J. A., & Dobránszki, J. (2020). Shoot tip necrosis of in vitro plant cultures: a reappraisal of possible causes and solutions. Planta 252 , 47
https://doi.org/ 10.1007/s00425-020-03449-4
Da  Silva,  T.  J.  A.,  &  Engelmann,  F.  (2017).
Cryopreservation  of  oil  palm  ( Elaeis  guineensis
Jacq. ). Cryobiology 77, 82–88.
https://doi.org/ 10.1016/j.cryobiol.2017.04.007
De Fossard, R. A., Myint, A., & Lee, E. C. M. (1974). A broad spectrum  tissue culture experiment  with tobacco ( Nicotiana tabacum L.) pith tissue callus. Physiology Plant 30 , 125–130.
Dinani, E. T., Shukla, M. R., Turi C. E., Sullivan, J. A.,  &  Saxena,  P.  K.  (2018).  Thidiazuron: Modulator  in  vitro.  In:  N  Ahmad  &  M  Faisal (eds.), Thidiazuron:  From  Urea  Derivative  to Plant Growth Regulator , Springer plus, Singapura. https://doi.org/ 10.1007/978-981-10- 8004-3_1
Erland, L. A. E., Giebelhaus, R. T., Victor J. M. R., Murch,  S.  J.,  &  Saxena,  P.  K.  (2020).  The morphoregulatory role of thidiazuron: metabolomics-guided  hypothesis  generation  for mechanisms  of  activity. Biomolecules  10 ,  1253. https://doi.org/ 10.3390/biom10091253
Ernayunita, Rahmadi, H., Yenni Y., Setiowati, R. D., & Harahap, I. Y. (2019). Vegetative characterization  to  identify  oil  plam  ( Elaeis quineensis Jacq.)  planlet  abnormalities. AIP Conference
Proceedings 2099, 020004.
https://doi.org/ 10.1063/1.5098409
Feng,  J.,  Shi,  Y.,  Yang,  S.,  &  Zuo,  J.  (2017). Cytokinins. In: J li,C Li & S Smit (Eds.), Hormone metabolism  and  signaling  in  plants .  Elsevier. https://doi.org/ 10.1016/B978-0-12-811562- 6.00003- .
Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35
Gomes,  H.  T.,  Bartos,  P. M.  C.,  Balzon,  T.  A.,  & Scherwinski-Pereira, J. E. (2016). Regeneration of somatic  embryos  of  oil  palm  ( Elaeis  guineensis ) using temporary immersion bioreactors. Industrial Crops and Products 89 , 244–249.
Graham,  M.  E.  D.,  &  Thurtell,  G.  W.  (1989).  The effect of increased transpiration on photosynthesis of corn part II. Comparisons between hydroponically and soil-grown plants.
Agricultural  and  Forest  Meteorology 44 (3–4), 317–326.
Hutchinson,  M.  J.,  Onamu,  R.,  Kipkosgei,  L.,  & Obukosia,  S.  D.  (2015). Effect  of  Thidiazuron, NAA  and  BAP  on  in  vitro  propagation of Alstroemeria  aurantiaca CV .  ‘ Rosita’  from shoot tip explants . Journal of Agricultural Science and Technology 16 (2), 58 – 72.
Jafari, N., Othman, R. Y., & Khalid, N. (2011). Effect of  benzylaminopurine  (BAP)  pulsing  on  in  vitro shoot multiplication of Musa acuminata (banana) cv.  Barangan.  A frican  Journal  of  Biotechnology 10 (13), 2446 – 2450.
Jayanthi, M., Susanthi, B., Mohan, M., & Mandal, P.
K.  (2015).  In  vitro  somatic  embryogenesis  and plantlet  regeneration  from  immature  male inflorescence  of  adult  dura  and  tenera  palms  of Elaeis  guineensis  (Jacq.). SpringerPlus 4,  256. https://doi.org/ 10.1186/s40064-015-1025-4
Karim,  S.  K.  A.  (2021).  An  overview  of  oil  palm cultivation  via  tissue  culture  technique.  In: Kamyab,  H  (Ed). Elaeis  guineensis [Internet].
London:  IntechOpen;  2021  [cited  2022  Sep  21]. Available
from: https://www.intechopen.com/chapters/77859. https://doi.org/ 10.5772/intechopen.99198
Karyanti, Khairiyah, H., Sukarnih, T., Hanifah, N. F., Rudiyana, Y., Wahid, A., & Mira, F. R. (2021). In vitro  induction  of  oil  palm  ( Elaeis  guineensis Jacq.)  shoot  roots  and  their  acclimatization  in mycorrhiza-enriched  media. IOP  Conference Series:  Earth  and  Environmental  Science  759 ,
012014. https://doi.org/ 10.1088/1755-1315/759/ 1/012014
Kingsley TM, NN Godswill, TL Brice, NEG Frank &
E Youmbi (2018). Optimization of rhizogenesis in oil  palm  ( Elaeis  guineensis  Jacq .) vitro plantlets derived  from  direct  organogenesis  of  mature zygotic  embryos  (MZE). Advances  in  Plants Agriculture Research 8 (3), 233–235.
Kovalchuk.,  I.  Y.,  Mukhitdinova,  Z.,  Turdiyev,  T., Madiyeva, G., Akin, M., Eyduran, E., & Reed, B. M.  (2017).  Modeling  some  mineral  nutrient requirements  for  micropropagated  wild  apricot
shoot cultures. Plant Cell Tissue Organic Culture 129 ,  325–335. https://doi.org/ 10.1007/  s11240- 017-1180-0
Kovalchuk,  I.  Y.,  Mukhitdinova,  Z.,  Turdiyev,  T., Madiyeva, G., Akin, M., Eyduran, E., & Reed, B. M.  (2018).  Nitrogen  ions  and  nitrogen  ion proportions impact the growth of apricot ( Prunus armeniaca )  shoot  cultures. Plant  Cell  Tissue Organic Culture 133 , 263–273.
https://doi.org/ 10.1007/s11240-018-1379-8
Kurup,  S.  S.,  Purayil,  F.  T.,  Alkhaili,  M.  M.  S.,
Tawfik,  N.  H.,  Cheruth,  A.  J.,  Kabshawi,  M.,  & Subramaniam,  S.  (2018).  Thidiazuron  (TDZ) induced organogenesis and clonal fidelity studies in Haloxylon persicum (Bunge ex Boiss & Buhse): an endangered desert tree species. Physiology and
Molecular Biology Plant 24 , 683–692.
https://doi.org/ 10.1007/ s12298-018-0532-5
Lavakumaran, L. & Seran, T. H. (2014). Effect of 6- benzyl-aminopurine  and  thidiazuron  on  in  vitro shoot  organogenesis  of Aloe  vera (L.)  Burm.  f. Chilean  of  Journal  Agricultural  Research 74 (4), 497–501.
Lemkage,  D.,  Sasahara,  T.,  Yamamoto,  S.  I., Hatamoto, M., Yamaguchi, T., & Maki, S. (2021). Effect of enhanced CaCl 2 , MgSO 4 and KH 2 PO 4 on improved  in  vitro  growth  of  potato. Plant Biotechnology 38 , 401–408.
Lin, Y., Wang, Y., Iqbal, A., Li, J., & Lei, X. (2017). Optimization of culture medium and temperature for  the in  vitro germination  of  oil  palm  pollen.
Science Horticulture 220 , 134–138.
Lu,  C.  Y.  (1993).  The  use  of  thidiazuron  on  tissue culture. In  Vitro  Cellular  and  Developmental Biology  29 , 92–96.
Machado,  M.  P.,  Da  Silva,  A.  A.  L.,  Biasi,  L.  A., Deschamps,  C.,  Filho,  J.  C.  B.,  &  Zanette,  F. (2014).  Influence of calcium content of tissue on hyperhydricity  and  shoot-tip  necrosis  of  in  vitro regenerated  shoots  of Lavandula  angustifolia Mill. Brazilian  Archives  of  Biology  and Technology 57 , 636–643. https://doi.org/ 10.1590/S1516-8913201402165
Mahmad  N., Taha,  R.  M.,  Othman,  R.,  Saleh,  A., Hasbullah,  N.  A.,  &  Elias,  H.  (2014). Effects  of NAA  and  BAP,  double-layered  media,  and  light distance  on in  vitro regeneration  of Nelumbo nucifera Gaertn. (Lotus), an aquatic edible plant.
The Scientific World Journal 745148. https://doi.org/ 10.1155/2014/745148
Manoh,  H.  P.,  Yanti,  &  Toruan-Mathius,  N.  (2021). Growth and development of oil palm shoots under different light qualities. Biotropia 28(1), 21–28.
Optimasi sistem kultur dan media untuk peningkatan tinggi tunas in vitro kelapa sawit………………….............. (Sinta et al.)
Martin, J. J. J., Yarra, R., Wei, L., & Cao, H. (2022).
Oil  palm  breeding  in  the  modern  era:  challenges and opportunities.
Plants 11 , 1395.
https://doi.org/ 10.3390/ plants11111395
Monteiro,  T.  R.,  Freitas,  E.  O.,  Nogueira,  G.  F.,  & Scherwinski-Pereira,  J.  E.  (2018).  Assessing  the influence of subcultures and liquid medium during somatic embryogenesis and plant regeneration in oil  palm  ( Elaeis  guineensis Jacq.). Journal  of Horticultural  Science  and  Biotechnology  93 (2), 196–203.
https://doi.org/ 10.1080/14620316.2017.1360156
Mose, W., Indrianto, A., Purwantoro, A., & Semiarti, E.  (2017). The influence of thidiazuron on direct somatic  embryo formation  from  various  types  of explant  in  Phalaenopsis  amabilis  (L.)  Blume Orchid. HAYATI  Journal  of  Biosciences ,  24(4),
201–205. https://doi.org/ 10.4308/hjb.24.4.201
Nezami,  S.  R.,  Yadollahi,  A.,  Hokmabadi,  H.,  & Eftekhari, M. (2015). Control of shoot tip necrosis and  plant  death  during  in  vitro  multiplication  of Pistachio  rootstock UCB1  ( Pistacia  integrima × P.  atlantica ). Journal  of  Nuts 6,  27–35. https://doi.org/ 10.22034/jon. 2015.515646
Offord,  C.  A.  &  Tyler,  J.  L.  (2009).  In  vitro propagation of Pimelea spicata R.Br
(Thymelaeaceae),  an  endangered  species  of  the
Sydney  region. Plant  Cell,  Tissue  and  Organ Culture 98 , 19–23. https://doi.org/ 10.1007/s11240-009-9534-x
Padròn, I. E. S., Meza, P. M. P., Marcela, C., & Díaz, L. (2020). Evaluation of sucrose and GA, in an in vitro  shoot  culture  of Alpinia  purpurata (Zingiberaceae). Ciencia & Tecnologia Agropecuaria 21 (2), e1193. https://doi.org/ 10.21930/rcta.vol21_num2_art:11 93
Pádua, M. S. S.,  Santos, R. S., Paiva, L. V.,  Stein, V. C., & Silva, L. C. (2017). In vitro rooting of tenera hybrid  oil  palm  ( Elaeis  guineensis Jacq.)  plants. Revista Árvore 41 (4). https://doi.org/ 10.1590/1806-9088201700014
Palanyandy,  S.  R.,  Gantait,  S.,  Subramaniam,  S.,  & Sinniah,  U.  R.  (2020).  Cryopreservation  of  oil palm  ( Elaeis  guineensis Jacq.)  polyembryoids  via encapsulation-desiccation. 3  Biotechnology 10 (1),
9. https://doi.org/ 10.1007/s13205-019-1997-9.
Reed,  B.  M., Wada, S., DeNoma, J., & Niedz, R. P. (2013). Mineral nutrition influences physiological responses  of  pear  in  vitro. In  Vitro  Cellular  and Developmental Biology 49 , 699–709. https://doi.org/ 10.1007/s1162 7-013-9556-2
Saptari, R. T. & Sumaryono (2016). Modifikasi sistem kultur in  vitro untuk  meningkatkan  vigor  planlet stevia ( Stevia rebaudiana Bert.). Menara Perkebunan 84 (2), 61-68.
Saptari,  R.  T.,  Sinta,  M.,  &  Budiani,  A.  (2017). In vitro propagation of Anthurium adreanum cv. nitta through  organogenesis. AGRIVITA  Journal  of Agricultural Science 39 (2), 192–200.
Setiawan,  K.  (2017). Pemuliaan  Kelapa  Sawit . Plantaxia, Yogyakarta.
Sharp, R. E., Wu, Y., Voetberg, G. S. Saab, I. N., & LeNoble, M. E. (1994). Confirmation that abscisic acid  accumulation  is  required  for  maize  primary root elongation at low water potentials. Journal of Experimental Botany 45, 1743–1751.
Singh,  P.  &  Dwivedi,  P.  (2014).  Two-stage  culture procedure using thidiazuron for efficient micropropagation  of Stevia  rebaudiana ,  an  anti- diabetic  medicinal  herb. 3  Biotechnology 4 (4), 431-437. https://doi.org/ 10.1007/s13205-013- 0172-y.
Sinta,  M.  M.,  Riyadi,  I.,  &  Sumaryono  (2011). Pengaruh  jenis  penutup  botol  kultur  terhadap pertumbuhan  planlet  kelapa  sawit  ( Elaeis guineensis Jacq.). Menara  Perkebunan 79 (1), 150-22.
Sparjanbabu,  D.  S.,  Naveenkumar,  P.,  Krisna,  M.  S. R., Ramajayam, D., Susanthi, B., & Prasana, H. S. (2020). Optimizing the acclimatization process of oil palm ( Elais giuneensis Jacq.) in vitro plantlets derived  from  the  mature  zygotic  embyos. Plant Cell  Biotechnology  and  Molecular  Biology  21 , 128-134.
Srivastava, A. & Joshi, A. G. (2013). Control of shoot tip  necrosis  in  shoot  cultures  of Portulaca grandiflora Hook. Notulae Scientia Biologicae 5 , 45–49. https://doi.org/ 10.15835/nsb519009.
Sulaksono,  G.,  Hasmeda1,  M.,  Hanum,  L.,  Wendra, F., Santika, B. & Asmono, D. (2021). The  effect of    culture    media    type    and    plant    growth regulators  on  callus induction of oil palm ( Elaeis guineensis Jacq)  Pisifera  type. Biovalentia: Biological Research Journal 7 (2), 55–60.
Sudrajad, H., Suharto, D. & Widodo, H. (2016). The effect of benzil amino purin (BAP) and gibberellin with  in  vitro  seedling  growth  of  pulesari  ( Alyxia reinwardtii BI). Health  Science  Journal  of Indonesia 7 (2), 93–96.
Sumaryono & Riyadi, I. (2011). Ex vitro rooting of oil palm  (Elaeis  quineensis  Jacq)  plantlets  derived from  tissue  culture.  Indonesian Journal  of Agricultural Science 12(2), 57–62.
Menara Perkebunan 2023, 91(1), 25-35
Sumaryono,  Riyadi,  I.,  Kasi,  P.  D.,  &  Ginting,  G.
(2007).  Pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus embriogenik  dan  embrio  somatik  kelapa  sawit ( Elaeis guineensis Jacq.) pada sistem perendaman sesaat. Menara Perkebunan 75 (1), 32–42.
Thomas, J. C. & Katterman, F. R. (1986). Cytokinin activity induced by thidiazuron. Plant Physiology 81 , 681–683.
Wan-Chin,  Y.,  Khan,  N.  C.  M.,  Jamalludin,  N., Rashdan, M. M., Ross, A. D., & Kulaveerasingam, H.  (2021).  An  efficient  clustered  regularly interspaced
short palindromic
repeat
(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 mutagenesis  system  for  oil  palm  ( Elaeis guineensis ). Frontiers  in  Plant  Science 12 , 773656.
https://doi.org/ 10.3389/fpls.2021.773656
Weckx,  S.,  Inzé,  D.,  &  Maene,  L.  (2019).  Tissue culture  of  oil  palm:  finding  the  balance  between mass  propagation  and  somaclonal  variation.
Frontiers in Plant Science 10 , 722.
Yarra,  Cao,  R.  H.,  Jin,  L.,  Mengdi,  Y.,  &  Zhou,  L. (2020).  CRISPR/Cas  mediated  base  editing:  a practical approach for genome editing in oil palm.
3 Biotechnology 10 (7), 306.
https://doi.org/ 10.1007/s13205-020-02302-5.
Yusnita  &  Hapsoro,  D.  (2011). In  vitro callus induction and embryogenesis of oil palm ( Elaeis guineensis Jacq.)  from  leaf  explants. HAYATI
Journal of Bioscience 18 (2), 61–65. https://doi.org/ 10.4308/hjb.18.2.61.