## Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol Daun Cayratia trifolia
terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans
Rizki Endah Sari (a)* , Lisa Soegianto (a) , Liliek S. Hermanu (a)
(a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Indonesia
Cayratia  trifolia merupakan  tumbuhan  liar  yang  mudah  ditemukan  di  dataran  rendah,  daerah  tropis  maupun subtropis. Cayratia  trifolia diketahui  dapat  berkhasiat  sebagai  antibakteri,  antifungi,  antiprotozoa,  hipoglikemia, antikanker dan diuretik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ekstrak etanol daun Cayratia trifolia memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans dan Staphylococcus aureus dengan metode sumuran; mengetahui nilai Kadar Hambat Minimum (KBM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) dengan metode mikrodilusi; serta  mengetahui  golongan  senyawa  dari  ekstrak  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Pada penelitian ini pengujian bioautografi dilakukan untuk menentukan golongan senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba uji. Ekstrak etanol daun Cayratia trifolia (Galing-galing) tidak  memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap Candida  albicans. Nilai  KHM  dari  ekstrak  etanol  daun Cayratia trifolia (Galing-galing)  terhadap Staphylococcus  aureus yaitu  pada  konsentrasi  125  ppm,  sementara  nilai  KBM sendiri  yaitu  pada  konsentrasi  250  ppm.  Golongan  senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus pada  ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia adalah  dari  golongan  polifenol,  sementara golongan senyawa yang memiliki aktivitas terhadap Candida albicans diduga adalah dari golongan flavonoid.
Kata kunci: Cayratia trifolia , antimikroba, KHM, KBM, Bioautografi
Antimicrobial Activity Ethanolic Extract of Cayratia trifolia Leaf against Staphylococcus aureus and Candida albicans
Cayratia trifolia is a wild plant that is easily found in the lowlands, tropical and subtropical regions. Cayratia trifolia is  known  to  be  efficacious  as  an  antibacterial,  antifungal,  antiprotozoa,  hypoglycemia,  anticancer  and  diuretic. This  study  aims  to  determine  whether  the  ethanol  extract  of Cayratia  trifolia leaves  has  antimicrobial  activity against Candida albicans and Staphylococcus aureus using well diffusion method; to determine the value of the Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC)  and  Minimum  Bactericidal  Concentration  (MBC)  using  microdilution method;  and  to  determine  the  secondary  metabolite  groups  which  have  antimicrobial  activity  against Staphylococcus aureus and Candida albicans. In this study bioautography method was carried out to determine the secondary metabolite group that can inhibit microbial growth. Ethanol extract of Cayratia trifolia (Galing-galing) leaves  has  no  antimicrobial  activity  against Candida  albicans .  The  MIC  value  of  the  ethanol  extract  of Cayratia trifolia (Galing-galing)  leaves  against Staphylococcus  aureus is  at  a  concentration  of  125  ppm,  while  the MBCvalue  is  at  a  concentration  of  250  ppm.  The  group  of  compounds  that  have  antibacterial  activity  against Staphylococcus aureus is polyphenol, meanwhile flavonoid suspected has activity against Candida albicans .
Keywords: Cayratia trifolia , antimicrobial, MIC, MBC, Bioautography
*Corresponding  author:  Fakultas  Farmasi Universitas  Katolik  Widya  Mandala  Surabaya,  Jl.  Raya  Kalisari Selatan No. 1 Surabaya, e-mail: Rizkiendahsari25@gmail.com

## PENDAHULUAN
Penyakit      infeksi      dan      resistensi      obat antimikroba      merupakan  permasalahan    yang memerlukan    perhatian    besar,  sehingga penelitian    untuk  mencari      antimikroba      baru diharapkan  bisa      menjadi      pemecah      masalah- masalah  tersebut.  Dewasa      ini,     berbagai      jenis antimikroba      telah      tersedia      untuk  mengobati penyakit  yangdisebabkan  oleh  mikroorganisme. Zat antimikroba yang berguna  untuk terapi  harus menghambat    mikroorganisme  infektif  dan bersifat      toksik      hanya      terhadap      patogen infektif,      tetapi      tidak      terhadap  inangnya (Harmita  dan  Radji,  2008).  Sumber  antimikroba baru bisa berasal dari tumbuhan yang berpotensi sebagai  antimikroba  di  Indonesia,  masyarakat secara  tradisional  sudah  banyak  menggunakan berbagai tanaman untuk mengobati segala macam penyakit  infeksi,  namun  penggunaan  tanaman obat  masih  belum  banyak  didukung  oleh  data penelitian ilmiah (Nuraina, 2015). Salah satu jenis tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  kandidat antimikroba  adalah Cayratia  trifolia (galing- galing) . C.  trifolia merupakan  tanaman  merambat yang  memiliki  bentuk  daun trifoliate dengan petiole yang panjangnya 2-3 cm. bentuk daunnya bujur sampai bujur telur dengan panjang 2-8 cm, lebar 1,5-5 cm dan tajam pada ujung daun. Daun berwarna hijau dengan bau yang khas dan rasanya sedikit  pahit  (Kumar et  al .,  2012).  Tanaman  ini diketahui mempunyai kandungan steroid, terpenoid,  flavonoid  dan  tanin  (Gupta and Sharma, 2007; Kumar et al ., 2012). Galing-galing diketahui berpotensi sebagai antibakteri, antifungi,  antiprotozoa,  hipoglikemia,  antikanker dan diuretik (Gupta and Sharma, 2007; Kumar et al ., 2012).
Penelitian  tentang  aktivitas  antimikroba pada tanaman galing-galing sebelumnya dilakukan  oleh  Cruz,  Alcantara and Cruz  (2014). Penelitian tersebut menunjukkan aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  galing-galing terhadap  bisul  yang  sebagian  besar  disebabkan oleh  bakteri Staphylococcus  aureus dengan metode difusi cakram. Ekstrak etanol daun galing- galing memberikan daerah hambatan pertumbuhan  (DHP)  sebesar  18,33  mm,  20,67 mm, 23,67 mm dan 25,67 mm . Pengujian aktivitas terhadap Candida  albicans dilakukan  dengan pertimbangan  salah  satu  tanaman  yang  masih dalam  satu  familia  dengan Cayratia  trifolia adalah  Anggur  merah  ( Vitis  vinifera) yang diketahui juga dapat digunakan sebagai antifungi karena  memiliki  kandungan  flavonoid  dan  tanin (Suryaningsih,  Chumaeroh  dan  Benyamin,  2015). Uji    aktivitas  antifungi        terhadap Candida albicans dilakukan        oleh        Suryaningsih, Chumaeroh dan Benyamin (2015) dengan metode difusi  agar  menunjukkan  bahwa      uji      aktivitas antifungi      dari  ekstrak      etanol      buah      anggur merah memiliki  daya  hambat  dengan  DHP 0,8 mm,    1,26    mm,    1,65    mm    dan    2,1  mm  pada
konsentrasi  uji  12,5  %,  25  %,  50  %  dan  100  %. Candida albicans merupakan  fungi  yang  paling sering    menyebabkan    infeksi    terutama    jika terjadi    infeksi    sistemik    pada    pasien    yang terganggu    sistem    kekebalannya  akan meningkatkan      morbiditas    dan      mortalitasnya (Sudrajad   dan   Azar, 2011).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui apakah  ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans dan Staphylococcus  aureus dengan metode sumuran, mengetahui nilai Kadar Hambat Minimum  (KHM)  dan  Kadar  Bunuh  Minimum (KBM)  dengan  metode  mikrodilusi  serta mengetahui  golongan  senyawa  dari  ekstrak  yang memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albicans .

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  gelas,  seperangkat  alat  uji antimikroba,  inkubator  (Binder,  Jerman),  oven (Binder,  Jerman),  autoklaf  (All  American, Amerika), laminar  air  flow (V-130,  Indonesia), pipet mikro , plat KLT, pipa kapiler, microplate 96 well steril. Bahan Daun Cayratia  trifolia ,  Etanol  96%  teknis, akuades,  Amoksisilin,  Ketokonazol, dimethyl sulfoxide (DMSO), NaCl  0,9  %,  larutan  ½  Mc Farland  I,  media Sabouraud  Dextrose  Agar (Merck,  Jerman) ,  Sabouraud  Dextrose  Broth (Merck,  Jerman), Mueller  Hinton  Agar (Merck, Jerman), Mueller Hinton Broth (Merck, Jerman), Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Candida albicans .

## Tahapan Penelitian
Pembuatan  Serbuk  Simplisia  Kering  Daun Cayratia trifolia (Galing-Galing)
Daun  galing-galing  disortasi,  dicuci sampai  bersih  dengan  air  mengalir  dan dikeringkan secara diangin-anginkan dan terlindung  dari  sinar  matahari  langsung, kemudian daun dihaluskan dengan cara diblender sehingga diperoleh serbuk simplisia kering.

## Standarisasi  Serbuk  Simplisia  dan  Ekstrak Etanol Daun Cayratia trifolia (Galing-Galing)
Standarisasi  yang  dilakukan  pada  serbuk simplisia  antara  lain,  organoleptis,  penetapan kadar air,  kadar abu total, kadar sari larut air dan kadar  sari  larut  etanol,  serta  skrining  fitokimia. Untuk  standarisasi  ekstrak  meliputi  penetapan organoleptis, kadar air dan kadar abu total (Dirjen POM RI, 2000).

## Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun  Cayratia trifolia (Galing-Galing)
Serbuk kering simplisia daun dibuat ekstrak dengan  cara  maserasi  menggunakan  etanol  96% sebagai  pelarut  dan  dilakukan  remaserasi sebanyak 2 kali. Maserat yang diperoleh diuapkan sampai menjadi ekstrak kental (Depkes RI, 2008).

## Penentuan Aktivitas Antimikroba dengan Metode Difusi Sumuran
Sebanyak  0,1  mL  suspensi  mikroba Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans 24 jam yang telah disetarakan dengan ½ McFarland I  ditambah  dengan  media  sebanyak  10  ml  lalu dituang ke cawan petri dan dilakukan prainkubasi selama 1,5-2 jam. Media MHA untuk
Staphylococcus  aureus dan SDA untuk Candida albicans. Sumuran  ditetesi  larutan  uji  dengan konsentrasi  100000  ppm,  250000  ppm  dan 400000  ppm  sebanyak  20  µl.    Larutan Amoksisilin  dan  Ketokonazol  digunakan  sebagai pembanding  dengan  konsentrasi  masing-masing 500  ppm  dan  750  ppm.  Cawan  petri  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  24  jam  untuk Staphylococcus  aureus dan  pada  suhu  ruang selama  3  hari  untuk Candida  albicans .  Aktivitas antimikroba dapat diamati dari zona hambat yang terbentuk di sekeliling lubang.

## Penentuan  Kadar  Hambat  Minimum  (KHM) dengan Metode Mikrodilusi
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dengan metode  mikrodilusi  dilakukan  pengenceran berderet  dalam microplate  96  well.  Microplate berisi  ekstrak  konsentrasi  4  –  2000  ppm,  media MHB  dan  suspensi  bakteri  dengan  konsentrasi setara  1,5  x  10 5 CFU/ml  dengan  pengulangan masing-masing  3  kali.  Selanjutnya  dilakukan inkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Microplate diamati  pada microplate  reader pada panjang  gelombang  500  nm.  Setelah  diperoleh data absorbansi masing-masing sampel, selanjutnya  dilakukan  perhitungan  KHM  dan KBM  dari  ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia terhadap bakteri uji.
Penentuan  Golongan  Senyawa  Antimikroba pada Ekstrak dengan Bioautografi
Penentuan  golongan  senyawa  didapat berdasarkan  hasil  bioautografi  kontak  dengan menyemprotkan  penampak  noda  pada  plat  KLT yang  telah  ditempelkan  pada  media  dan memberikan  daerah  jernih  pada  media  uji. Konsentrasi  ekstrak  yang  ditotolkan  yaitu  20000 ppm  sebanyak  10  l.  Fase  gerak  yang  digunakan pada  metode  ini  adalah  Butanol:Asam  Asetat:Air (3:1:5). Waktu kontak plat KLT dan lempeng agar yang  telah  diinokulasi  dengan Staphylococcus aureus dilakukan  selama  1  jam,  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Penentuan  golongan  senyawa  meliputi  alkaloid, fenol,  flavonoid,  terpenoid  dan  steroid  maka digunakan  beberapa  penampak  noda  yaitu  FeCl 3 , AlCl 3 ,  pereaksi Dragendorff dan  pereaksi Liebermann-Burchard.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penetapan standarisasi yang dilakukan  pada  serbuk  simplisia  dan  ekstrak dapat  dilihat  pada  tabel  1  dan  2.  Hasil    dari skrining    fitokimia    menunjukkan  bahwa simplisia    mengandung    senyawa  metabolit
sekunder  golongan  alkaloid,    flavonoid,    tanin, saponin,    steroid  dan  terpenoid  (Tabel    1).  Hasil tersebut tidak berbeda jika  dibandingkan dengan penelitian    sebelumnya    yang    telah    dilakukan oleh    Sowmya et    al .  (2015)  yang  menunjukkan ekstrak  etanol  daun  galing-galing  mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan steroid.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia Daun Cayratia trifolia
Metabolit Sekunder Hasil Uji Ketera- ngan Alkaloid Endapan  berwarna orange + Flavonoid Lapisan amil alkohol  berwarna kuning + Steroid /Terpenoid Berwarna hijau dan merah +/+ Tanin Berwarna hijau kehitaman + Saponin Terdapat busa yang tahan selama 10 menit +
Tabel 2. Hasil standarisasi ekstrak etanol daun Cayratia trifolia Standarisasi Parameter Hasil Uji Spesifik Organoleptis -Bau -Warna Khas Kehijauan Non Spesifik Kadar air (%) Kadar abu total (%) 25,92±0,40 7,75±0,04
Hasil  dari  pengujian  aktivitas  antimikroba dengan  metode  difusi  sumuran  dan  mikrodilusi dapat  dilihat  pada  tabel  3-5.  Dan  gambar  1-3. Penggunaan     metode      difusi      secara      sumuran ini dipilih karena pada  metode  ini terjadi proses osmolaritas  dari  konsentrasi  ekstrak  yanglebih tinggi    dibandingkan    dengan  metode    difusi cakram, setiap  lubang  diisi  dengan  konsentrasi ekstrak    maka    osmolaritas    terjadi  lebih menyeluruh    dan    lebih    homogen    (Misna    dan Diana,    2016).  Dari  hasil  pengamatan  terhadap sumuran yang berisi ekstrak etanol daun Cayratia trifolia terhadap Staphylococcus aureus menunjukkan  hasil  positif  dengan  terbentuknya daerah hambat pertumbuhan di sekitar sumuran. Menurut  Salni  dan  Ratna  (2011),  bakteri  Gram positif memiliki struktur dinding sel dengan lebih banyak peptidoglikan, sedikit lipid dan dinding sel mengandung  polisakarida  (asam  teikoat).  Hasil pengamatan  terhadap  sumuran  yang  berisi ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia terhadap Candida albicans menunjukkan adanya pertumbuhan, tetapi berbeda dengan pertumbuhan blanko positif. Hal ini dapat terjadi diduga  karena  jumlah  senyawa  metabolit sekunder yang terkandung kurang adekuat untuk dapat  menghambat  pertumbuhan Candida albicans, serta  diduga  kandungan  metabolit
sekunder  pada  ekstrak  ini  tidak  spesifik  dapat menghambat Candida  albicans meskipun  dalam ekstrak  tersebut  mengandung  steroid  yang mempunyai potensi sebagai antijamur (Kurniawan, 2015). Dinding sel Candida albicans terdiri  dari  komponen  utama  berupa  glucans, kitin, manoprotein dan komponen lainnya berupa lemak dan garam anorganik. Kitin memiliki peran penting  dalam  menjaga  integritas  dinding  sel Candida  albicans ,  sehingga  zat  antijamur  tidak dapat  masuk  ke  sitoplasma  maupun  nukleus  sel (Tyasrini,  Winata,  dan  Susantina,  2006). Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  dengan  metode difusi  sumuran,  yang  mempunyai  DHP  hanya terhadap Staphylococcus aureus, s ehingga penentuan  nilai  KHM  dan  KBM  hanya  diuji
terhadap Staphylococcus  aureus saja.  Hasil  dari pengujian  menunjukkan  bahwa  nilai  KHM  dari ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia yaitu  pada konsentrasi 125 ppm yang mempunyai persentase reduksi sebesar 89,40 %. KHM secara kuantitatif dilihat  dari  konsentrasi  terkecil  dari  larutan  uji dengan  nilai  persentase  reduksi  pertumbuhan bakteri lebih besar sama dengan 80% (Rosenblatt, 1980). Hasil pengujian menunjukkan bahwa nilai KBM  dari  ekstrak  adalah  pada  konsentrasi  250 ppm  dengan  persentasi  reduksi  sebesar  99,91  %. Hasil KBM ditetapkan sebagai konsentrasi terkecil dari larutan uji dengan persentase reduksi sebesar ≥  99,9  %  dari  inokulum  asal  selama  inkubasi  24 jam (O’Brien-Simpson et al. , 2016).
(a)
(b)
(c)
Gambar 1. Zona hambat ekstrak etanol daun Cayratia trifolia terhadap Staphylococcus aureus Keterangan: (a) Replikasi I, (b) Replikasi II, (c) Replikasi III, A: Konsentrasi ekstrak 100000 ppm, B: Konsentrasi ekstrak 250000 ppm, C: Konsentrasi ekstrak 400000 ppm, D: Amoksisilin 500 ppm
(a) (b)
(c)
Gambar 2. Zona hambat ekstrak etanol daun Cayratia trifolia terhadap Candida albicans Keterangan: (a) Replikasi I, (b) Replikasi II, (c) Replikasi III, A: Konsentrasi ekstrak 100000 ppm, B: Konsentrasi ekstrak 250000 ppm, C: Konsentrasi ekstrak 400000 ppm, D: Ketokonazol 750 ppm
Tabel 3. Diameter zona hambat ekstrak etanol daun Cayratia trifolia terhadap pertumbuhan
Staphyloccus aureus Konsentrasi (ppm) Replikasi (mm) Rata- rata (mm) I II III 400000 22,20  25,62  22,15 23,32 ±1,98 250000 21,55 25,65  21,52 22,90 ±2,38 100000 20,00  22,80  20,45 21,08 ±1,50 Amoksisilin 44,50  46,90  46,45 45,95 ±1,28 Blanko (-) 0 0 0 0
Pengujian  bioautografi  terhadap  Candida albicans dilakukan dengan menggunakan
konsentrasi  mikroba  uji  1,5  x  10 5 cfu/ml  dan setelah diinkubasi terdapat pertumbuhan Candida  albicans yang  lebih  sedikit  dibanding pertumbuhan normalnya. Hasil pengujian bioautografi pada  gambar  4  menunjukkan  bahwa pada  ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans . Setelah  proses  pengujian  bioautografi  dilakukan, maka selanjutnya dilakukan identifikasi golongan senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  antimikroba yang  dapat  dilihat  pada  gambar  4.  Setelah dilakukan penyemprotan bercak dengan Dragendorff ,  AlCl 3 ,  FeCl 3 dan Liebermann Burchard, golongan  senyawa  yang  diduga memiliki  aktivitas  terhadap Staphylococcus aureus adalah  golongan  polifenol  harga Rf 0,89.
A  B C  D A  B C  D A  B C D C A  B A  B C  D A  B C  D D
Pada Rf 0,00  dapat  dilihat  jika  memiliki  hasil positif  setelah  disemprot  dengan Dragendorff , AlCl 3 ,  FeCl 3 dan Liebermann  Burchard, sehingga tidak  dapat  ditentukan  golongan  senyawa  apa yang dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus pada Rf tersebut karena diduga  masih  terdapat  senyawa  metabolit sekunder  yang  tertinggal  di  bawah.  Hasil  dari pengujian  bioautografi  ekstrak  diduga  memiliki potensi  terhadap Candida  albicans pada konsentrasi  20000  ppm  karena  pertumbuhan yang  terjadi  berbeda  dengan  pertumbuhan normalnya,  sehingga  golongan  senyawa  yang memiliki  aktivitas  terhadap Candida  albicans diduga  adalah  dari  golongan  flavonoid  dengan harga Rf 0,39. Hal ini terjadi karena kemungkinan adanya  perbedaan  susunan  dinding  sel  pada bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans (Poelongan  dan  Praptiwi, 2010).
Tabel 4. Diameter zona hambat ekstrak etanol daun Cayratia trifolia terhadap pertumbuhan

## Candida albicans
Konsentrasi (ppm) Replikasi (mm) Rata- rata (mm) I II III 400000 0 0 0 0
250000 0 0 0 0 100000 0 0 0 0 Ketokonazol 20,68  22,00 19,70 20,79± 1,15 Blanko (-) 0 0 0 0
Polifenol    memiliki    kemampuan    sebagai antibakteri    yang    bekerja  melalui    hambatan enzim    oleh    senyawa    yang    teroksidasi, kemungkinan  melalui    reaksi    dengan    gugus sulfhidril    atau    melalui    interaksi    yang    non spesifik        dengan        protein          mikroorganisme. Polifenol    juga    dapat menyebabkan denaturasi protein  bakteri  (Dewi,  Nur  dan  Hertriani,  2015). Flavonoid    sendiri    memiliki    potensi    sebagai
antijamur,    dimana    dengan  kemampuannya membentuk      kompleks      dengan      protein      dan merusak membran sel dengan cara mendenaturasi ikatan protein pada membran sel, sehingga    membran    sel    menjadi    lisis    dan senyawa    tersebut    menembus    kedalam  inti    sel menyebabkan    jamur    tidak    berkembang (Sulistyawati  dan Mulyati, 2009).
Tabel 5. Hasil Perhitungan Nilai Kadar Hambat Minimum dan Hasil Pengujian Kadar Bunuh Minimum
Konsentrasi (ppm) % Reduksi Amoksisilin % Reduksi Ekstrak Etanol daun Cayratia trifolia 2000 101,60 ±0,001 54,79 ±0,01 1000 100,70 ±0,001 83,46 ±0,06 500 100,12 ±0,004 92,97 ±0,004 250 100,52 ±0,001 99,91 ±0,02 125 100,05 ±0,0002 89,40 ±0,02 62,5 99,59 ±0,0002 31,42 ±0,04 31,25 100,05 ±0,0001 20,99 ±0,02 16 99,87 ±0,001 24,44 ±0,01 8 100,52 ±0,001 34,24 ±0,04 4 99,73 ±0,002 45,65 ±0,002

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia (Galing-galing) tidak memiliki aktivitas antimikroba  terhadap Candida  albicans .  Nilai KHM  dari  ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia (Galing-galing)  terhadap Staphylococcus  aureus yaitu  pada  konsentrasi  125  ppm,  sementara  nilai KBM  sendiri  yaitu  pada  konsentrasi  250  ppm. Golongan  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus pada ekstrak  etanol  daun Cayratia  trifolia adalah  dari golongan  polifenol,  sementara  golongan  senyawa yang  memiliki  aktivitas  terhadap Candida albicans diduga  adalah  dari  golongan  flavonoid.
Gambar 3. Persentase Penghambatan terhadap Staphylococcus aureus
(a) (b)
Gambar 4. Hasil uji bioautografi kontak pada (a) Staphylococcus aureus dan (b) Candida albicans menggunakan fase gerak Butanol:Asam Asetat:Air (3:1:5) pada konsentrasi 20000 ppm
(a) (b)    (c) (d)         (e)           (f)        (g)
Gambar 5. Profil KLT sebelum dan sesudah disemprot dengan penampak bercak: (a) visibel, (b) UV 254 nm, (c) UV 366 nm, (d) Dragendorff , (e) AlCl 3 , (f) FeCl 3 dan (g) Liebermann Burchard

## DAFTAR PUSTAKA
Cruz,  C.P.,  Alcantara,  J.C.  and  Cruz  J.P.  2014,  Antibacterial Property of Cayratia trifolia L. as an Alternative Treatment for Boils, RJSITM, 3(12): 9-12.
[Depkes  RI]  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, 2008, Farmakope  Herbal  Indonesia ,  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewi,      Z.Y.,      Nur,      A.      dan      Hertriani,      T.      2015,      Efek Antibakteri      dan  Penghambatan      Biofilm      Ekstrak      Sereh ( Cymbopogon      nardus L.)  terhadap    Bakteri Streptococcus mutans , Majalah  Kedokteran  Gigi Indonesia , 1(2): 136-141.
[Dirjen POM RI] Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan   Republik  Indonesia,    2000, Parameter   Standar Umum   Ekstrak Tumbuhan    Obat ,    Jakarta:    Departemen Kesehatan    Republik Indonesia.
Gupta  AK  and  Sharma  M.  2007,  Review  on  Indian  Medical Plants, New  Delhi:  Indian  Council  of  Medical  Research ,  p.
879-882.
Harmita  dan  Radji,  M.  2008, Buku  Ajar  Analisis  Hayati Edisi  3, EGC, Jakarta.
Kumar, D., Kumar, S., Gupta, J., Arya, R. and Gupta, A. 2012, A  Review  on  Chemical  and  Biological  Properties  of Cayratia trifolia Linn.  (Vitaceae), Pharmacognosy  Review, 5(10):  184- 188.
Kurniawan, D. 2015, ‘Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Etanol
Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera Lamk.)  terhadap Candida albicans secara In  Vitro ’, Skripsi ,  Sarjana  Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura, Pontianak.
Misna dan Diana, K. 2016, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Bawang  Merah  ( Allium  cepa L.)  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus, Galenika Journal of Pharmacy, 2(2): 138-144.
Nuraina,  2015,  ‘Uji  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Daun Garcinia  benthami Pierre  dengan  Metode  Dilusi’, Skripsi, Sarjana Farmasi, Unversitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.
O’Brien-Simpson, NM., Pantarat, N., Attard, T.J., Walsh, K.A. and  Reynolds,  E.C.  2016,  A  Rapid  and  Quantitative  Flow Cytometry  Method  for  the  Analysis  of  Membrane  Disruptive Antimicrobial Activity, Plos One , 11(3): 1-15.
Poeloengan,  M.  dan  Praptiwi,  2010,  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Kulit  Buah  Manggis  ( Garcinia  mangostana Linn), Media Litbang Kesehatan , 20(2): 65-69.
Rosenblatt,  J.E.  1980,  Antibiotic  Susceptibility  Testing  For Anaerobes. In: Loriant, V, Antibiotics in Laboratory Medicine ,
First Edition , Wiliams and Wilkins, Baltimore.
Saifudin, A., Rahayu, V. dan Teruna, H.Y. 2011, Standardisasi Bahan Obat Alam, Graha Ilmu, Yogyakarta.
Salni, H.M. dan Ratna, W.M. 2011, Isolasi Senyawa Antibakteri Dari  Daun  Jengkol  ( Pithecolobium lobatum Benth  )  dan Penentuan Nilai KHM-nya, Jurnal Penelitian Sains , 14(1): 38- 41.
Rf = 0,39 Rf = 0,89 Rf = 0,00
Sowmya,     S.,     Perumal,     P.C.     and     Gopalakhrisnan, V.K.          2016,  Chromatographic      and      Spectrophotometric Analysis   of   Bioactive Compounds from Cayratia trifolia (L.) Stem, Interntional Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 8(6): 56-64.
Sudrajad,    H.    dan    Al    Al    Azar,    F.,    2011.    Uji    Aktivitas Antifungi    Minyak  Atsiri  Rimpang  Temulawak  ( Curcuma xanthorriza Roxb.)  Secara  In  VitroTerhadap Candida albicans ,e-Publikasi  Fakultas  Farmasi, pp.84-89.
Suryaningsih,  A.,  Chumaeroh,  S.  dan  Benyamin,  B.  2015.  Uji Efektivitas  Ekstrak  Anggur  Merah  ( Vitis  vinifera ) terhadap Pertumbuhan Candida  albicans secara In  Vitro,  Medali: Media Dental Intelektual Jurnal, 2(1): 5-8.
Tyasrini,  E.,  Winata,  T.  dan  Susantina,  2006,  Hubungan Antara  Sifat  dan  Metabolit Candida  sp .  dengan  Patogenesis Kandidiasis, JKM , 6(1): 52-67.