* Staf Pengajar Departemen Teknologi Hasil Perikanan, FPIK- IPB
** Staf Pengajar Departemen Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian, IPB
*** Alumnus Departemen  Teknologi Hasil Perikanan, FPIK-IPB
48
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## PENAPISAN  INHIBITOR PROTEASE YANG DIHASILKAN OLEH SPONGE  ASAL KEPULAUAN SERIBU
Tati Nurhayati*, Pipih Suptijah*, Maggy T. Suhartono** dan Irman Febrian***

## Abstract
Several  medicines  showing  protease  inhibitor  mechanism  are  widely  available  in  the  markets. Among marine organisms, sponge is the big  producer  of bioactive compound, include protease inhibitor. The purpose of this research was to screen of protease inhibitor produced by sponge. Screening was be conducted using agar diffusion methods on ten of sponge which be extracted with methanol and distilled water. As test bacteria were used three species of pathogenic bacteria that is Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa , and Staphylococcus aureus .  The result of research showing that sponge which be extracted using methanol have low  protease  inhibitory  activity  ( ≤  30%),  while  that  which  be  extracted  using  distilled  water  have  high protease inhibitory, that is extract of Jaspis stellifera and extract of Plakortis nigra ( ≥ 50%).  The extract of Jaspis  stellifera was  inhibited  of  protease  from Escherichia.coli and Staphylococcus  aureus by  minimum inhibitory  concentration  (MIC)  0.08%,  while  that  extract  of Plakortis  nigra was  inhibited  protease  from S. aureus by  MIC  0.12%.  Ethylene  dyamine  tetraacetic  acid  (EDTA)  was  inhibited S.  aureus and E.  coli by MIC 0,16%.  Based on the data, can be concluded that both the extract of sponge were potential as protease inhibitor.
Keywords: Bacteria, protease inhibitor, screening, sponge

## PENDAHULUAN
Dalam dasawarsa terakhir ini perhatian terhadap protease sebagai target senyawa obat  bagi  penyakit  asal  bakteri  (seperti  pneumonia,  kolera, typhus , gonorrhoe) ,  virus (seperti influenza dan HIV), dan malaria serta kanker, bahkan penyakit degeneratif seperti Alzheimer meningkat  pesat,  karena  semakin  jelasnya  keterlibatan  enzim  ini  dalam mekanisme molekular penyakit-penyakit tersebut.
Obat-obatan yang beberapa diantaranya mempunyai mekanisme inhibitor protease telah  tersedia  luas  di  pasaran,  seperti   Elafin  (inhibitor  elastase  dari  kulit manusia), antileuko protease, inhibitor serum ayam, inhibitor protease alkaline dari Streptomyces , dan lain-lain.
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Sponge  yang  hidup  di  laut  mempunyai  metabolit  sekunder  yang  aktif  secara biologis.  Di antara organisme yang hidup di laut, sponge mengandung komponen bioaktif terbesar, termasuk inhibitor protease (Mayer dan Lehmann, 2000).
Metabolit  sekunder  seperti  terpenoid,  alkaloid,  peptida,  bioaktif  asam  lemak  dan steroid  merupakan  komponen  yang  umum  terdapat  di  dalam  sponge  (Faulkner,  2003), termasuk pula inhibitor protease, seperti tethya protease inhibitor (TPI) yang bersifat toksik terhadap  sel  tumor  (O’Keefe et  al. ,  1997),  adociavirin  yang  merupakan  inhibitor  HIV (O’Keefe et al. , 1998), juga inhibitor kitinase.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa bakteri yang berasosiasi dengan sponge juga menghasilkan komponen bioaktif.  Ini berarti bahwa mikroorganisme  yang  bersimbiose  disini  mempunyai  peranan  dalam  mempertahankan sponge sebagai inangnya  (Webster et al ., 2003).
Dengan  demikian  dalam  rangka  memanfaatkan  potensi  yang  ada  di  perairan Indonesia, khususnya di Laut Kepulauan Seribu,  serta dalam rangka menyediakan produk biomedis  alamiah  (inhibitor  enzim)  yang  terkarakterisasi  dengan  baik  dan  berpotensi komersial  tinggi,  maka  penelitian  untuk  menemukan  inhibitor  protease  merupakan  suatu langkah awal yang baik.

## METODOLOGI
Penelitian  meliputi  koleksi    dan  ekstraksi  inhibitor  protease  dari  sponge, penapisan bakteri patogen sebagai penghasil protease, penapisan sponge sebagai penghasil inhibitor protease, serta penentuan MIC (modifikasi Parish dan Davidson, 1993).

## Koleksi  sampel sponge dan Ekstraksi Inhibitor Protease dari Sponge
Sampel sponge sebanyak 10 jenis dikoleksi dari perairan Kepulauan Seribu dengan kedalaman  berbeda  (4-12m).  Pengambilan  sponge  dilakukan  dengan  memotong  bagian tubuh sponge menggunakan pisau cutter , potongan sponge dimasukkan ke dalam keranjang
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
plastik  yang  kemudian  dibawa  ke  permukaan  air  secara  perlahan.  Sponge  hasil pengelompokan dimasukkan ke dalam  air  laut steril,  lalu ditransportasikan dalam keadaan dingin  menggunakan cool  box. Sponge  diidentifikasi  berdasarkan  bentuk  dan  warna (Allen dan Steene, 1994).
Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  akuades  dan  methanol  80%.  Ekstraksi dengan  pelarut  akuades  sebanyak  2  kali  dilakukan  untuk  tiap-tiap  sampel  sponge  yang ditransportasikan  dalam  pelarut  air  laut  steril.  Sebanyak  20-50  g  sampel  ditimbang  sesuai dengan  jumlah  sponge  yang  didapatkan  dari  alam,  kemudian  dihaluskan  dengan  blender. Sampel dimasukkan ke dalam wadah, lalu diberi akuades (b/v = 1:1) dan dimaserasi dalam shaker  bath selama  ±  24  jam  (200  rpm,  24  ºC).  Sampel  disaring  dengan  kertas  saring kemudian  filtrat  ditampung.  Ampas  dari  hasil  ekstraksi  pertama  ditambahkan  akuades (b/v = 1:1) kembali, lalu dimaserasi dalam shaker bath selama   ± 24 jam  (200 rpm, 24 ºC).
Sampel yang telah dimaserasi disaring dengan kertas saring. Filtrat hasil ekstraksi pertama dicampurkan  dengan  filtrat  hasil  ekstraksi  kedua,  kemudian  filtrat  di  keringkan  dengan freeze dryer untuk mendapatkan serbuk ekstrak.
Ekstraksi  dengan  pelarut  metanol  80%  dilakukan  dengan  prosedur  yang  sama seperti  ekstraksi  dengan  pelarut  akuades.  Pada  tahap  pengeringan  untuk  mendapatkan rendemen,  filtrat  hasil  ekstraksi  pertama  dan  kedua  dikeringkan  dengan  cara  aerasi menggunakan aerator.  Untuk mengetahui filtrat sudah bebas metanol atau belum dilakukan pembekuan  sample  dalam  freezer.  Apabila  filtrat  sulit  beku  berarti  masih  mengandung pelarut  metanol.  Perhitungan  rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan  dari  proses  ekstraksi dihitung dengan membandingkan berat ekstrak kering dan berat sponge awal.

## Penapisan bakteri patogen sebagai penghasil protease
Penapisan  bertujuan  untuk  mendapatkan  bakteri  patogen  yang  potensial memproduksi  enzim protease. Penapisan dilakukan dengan  menggunakan  media       Luria
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Bertani  agar  (LA)  skim  2%.  Media  LA  skim  2%  sebanyak  10  ml  dalam  cawan  petri, sebelumnya cawan petri dipilah-pilahkan dengan membuat garis diagonal sehingga terdapat enam  buah  bagian  segitiga.  Tiap-tiap  bagian  diinokulasikan  satu  ose  koloni  satu  jenis bakteri uji. Pengamatan dilakukan dengan  mengukur diameter zona bening  yang dibentuk oleh masing-masing jenis bakteri uji sebagai akibat dari aktivitas protease bakteri uji yang mendegradasi  skim  dalam  media  LA.  Diameter  koloni  juga  diukur  menggunakan  jangka sorong dan dihitung indeks proteolitik yang merupakan rasio perbandingan antara diameter zona bening dengan diameter koloni.

## Penapisan sponge sebagai penghasil inhibitor protease
Penapisan  bertujuan  untuk  mendapatkan  jenis  sponge  yang  berpotensi  sebagai inhibitor  protease.  Media  yang  digunakan  adalah  media  LA  skim  2%.  Ekstrak  masing- masing  jenis sponge  yang didapat dari proses ekstraksi dilarutkan dengan  akuades (steril) sehingga  konsentrasinya  10%  (b/v).  Sebanyak  200 µL  larutan  tersebut  ke  dalam  cawan petri steril, setelah itu media LA skim 2%  dituang sebanyak 10 ml  ke dalam cawan steril tersebut,  kemudian  cawan  digoyang/diputar-putar  sampai  ekstrak  homogen  dengan  media dan  dibiarkan  hingga  membeku,  sedangkan  untuk kontrol  digunakan  campuran  200  µL akuades steril dengan media LA skim 2%.  Bakteri uji yang potensial memproduksi enzim protease,  yaitu Pseudomonas  aeruginosa,  Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus,
diambil  satu  ose  kemudian  ditusukkan  ke  dalam  media  yang  telah  beku.    Selanjutnya diinkubasi selama 12 jam suhu 37 ºC.
% penghambatan =  IPE  x 100%

## IP
Keterangan : IPE =  indeks proteolitik dalam media yang mengandung ekstrak sponge IP =  indeks  proteolitik  dalam  media  yang  tidak  mengandung  ekstrak sponge
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## Penentuan MIC (modifikasi Parish dan Davidson, 1993)
Ekstrak  sponge  hasil  penapisan  yang  mempunyai  aktivitas  penghambatan  protease (inhibitor protease) yang cukup tinggi dilakukan uji lanjutan, yaitu penentuan MIC dengan metode yang digunakan adalah  metode difusi agar . Masing-masing     ekstrak sponge  yang berpotensi  dibuat  larutan  dengan  cara  mengencerkan  dalam  pelarutnya  (b/v),  sebagai kontrol  negatif  digunakan  pelarutnya  sedangkan  sebagai  kontrol  positif  digunakan  EDTA yang  dilarutkan  dalam  buffer  Tris-HCl  0,2  M  pH  8.  Pengenceran  ekstrak  sponge  dengan media LA skim 2% disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengenceran ekstrak sponge dengan media LA skim 2%
Ekstrak sponge (%) Konsentrasi  ekstrak  sponge dalam media agar (%) EDTA (%) Konsentrasi  EDTA  dalam media agar (%) 10 0,2 10 0,2 8 0,16 8 0,16 6 0,12 6 0,12 4 0,08 4 0,08 2 0,04 2 0,04 Kontrol (pelarut) 0 Kontrol (Tris-HCl   0,2 M,pH 8) 0
Suatu  seri  tabung  diisi  dengan  10  ml  media  LA  skim  2%  dengan  suhu  ±  40  ºC, kemud ian dipipet sebanyak 200 µL larutan ekstrak sponge dan larutan EDTA dari tiap -tiap konsentrasinya ke dalam tabung. Media dituang ke dalam cawan petri, campuran digoyang- goyang  hingga  homogen  dan  dibiarkan  membeku.  Setelah  membeku,  pada  setiap  cawan petri dibuat sumur  berdiameter     6 mm sebanyak 6 buah.    Suspensi  bakteri  patogen  hasil prekultur dengan konsentrasi 10 6 koloni/ml dipipet sebanyak 2 µL ke dalam 2 sumur untuk setiap  jenis  bakteri  uji.  Setelah  inkubasi  selama  12  jam  dengan  suhu  37  ºC,  dilakukan pengukuran diameter zona bening dan diameter koloni yang dibentuk oleh masing-masing bakteri uji.
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Koleksi  sampel sponge dan ekstraksi komponen inhibitor protease sponge
Hasil  koleksi  mendapatkan  10  jenis  sponge  yang  hidup  pada  kedalaman  antara ± 4 - 12 m. Sponge tersebut, yaitu (1) Jaspis stellifera (4m) , (2) Xetospongia exigua (4m) ,
(3) Gelliodes sp.  (4m) , (4) Callyspongia  muricana (7m) , (5) Callyspongia sp..  (7m) , (6). Xetospongia  testudinaria (12m) , (7). Aplysina sp.  (12m) , (8) Reniochalina  stalagmites (10m) , (9) Plakortis nigra (12m) dan  (10) Jaspis sp.(5m).
Sponge yang telah dikoleksi diekstrak dengan  menggunakan  metanol dan akuades.
Rendemen hasil ekstraksi dengan dua pelarut dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil ekstraksi sponge dengan pelarut akuades dan metanol
Pelarut Akuades Pelarut Metanol NO. Spesies Sponge Berat Awal (gr) Volume Pelarut (ml) Berat Ekstrak (gr) Rendemen (%) Berat Awal (gr) Volume Pelarut (ml) Berat Ekstrak (gr) Rendemen (%) 1 Jaspis stellifera 50 50 0,9100 1,8200 50 50 0,8381 1,6762 2 Xetospongia exigua 50 50 0,5366 1,0732 50 50 1,3735 2,7470 3 Gelliodes  sp. 40 40 0,4584 1,1460 35 35 0,1300 0,3714 4 Callyspongia muricana 50 50 0,8339 1,6678 30 30 0,6704 2,2347 5 Callyspongia sp. 50 50 1,1747 2,3494 50 50 0,7038 1,4076 6 Xetospongia testudinaria 50 50 1,4408 2,8816 50 50 1,1077 2,2154 7 Aplysina sp. 20 20 0,9024 4,5120 20 20 0,2714 1,3570 8 Reniochalina stalagmitis 20 20 0,7340 3,6700 50 50 0,1806 0,3612 9 Plakortis nigra 50 50 1,9025 3,8050 50 50 1,8489 3,6978 10 Jaspis sp. 50 50 1,5607 3,1214 50 50 1,3999 2,7998
Berdasarkan data tersebut dapat dinyatakan bahwa rendemen ekstrak sponge dengan pelarut  akuades  berkisar  1,07-4,52%;  sedangkan  yang  diekstrak  dengan  pelarut  methanol berkisar  0,36-3,70%.
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## Penapisan bakteri patogen penghasil protease
Penapisan bakteri patogen penghasil protease bertujuan untuk mendapatkan bakteri patogen  yang  potensial  memproduksi  enzim  protease  secara  ekstraseluler  atau  yang  biasa disebut bakteri proteolitik. Indeks proteolitik yang dihasilkan oleh enam jenis bakteri dapat dilihat pada Gambar 1.
Berdasarkan  hasil  penapisan  dari  enam  jenis  bakteri  didapatkan  tiga  jenis  bakteri patogen  yang  memproduksi  enzim  protease  ekstraseluler  yang  cukup  tinggi,  yaitu P. aeruginosa, S. aureus dan E. coli dengan indeks proteolitik dari masing-masing tersebut berturut-turut  2,5;  2,0;  2,2.  Berdasarkan  data  tersebut P.  aeruginosa mempunyai  daya proteolitik  yang  paling  besar.  Semua  bakteri  mempunyai  enzim  protease  (proteinase)  di dalam sel, tetapi tidak semua mempunyai enzim protease ekstraseluler.
2.50 1.20 2.00 1.38 2.20 1.11 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 P . a er ug in os a K le bs ie lla s p. S. a ur eu s S. e pi de rm id is E. c ol i P. h yd ro phy li Bakteri patogen In d e k s p ro te o li ti k
Gambar 1. Indeks proteolitik bakteri patogen
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## Penapisan potensi sponge sebagai inhibitor protease
Bakteri  uji  yang  digunakan  dalam  penapisan  potensi  sponge  sebagai  inhibitor protease adalah bakteri yang potensial memproduksi protease. Penapisan dilakukan dengan tujuan  untuk  menentukan  sponge  yang  potensial  sebagai  penghasil  inhibitor  protease. Keberadaan  inhibitor protease dalam  media uji  ditandai dengan  mengecilnya areal  bening di sekeliling koloni.
Hasil  percobaan  penapisan  ekstrak  dari  10  jenis  sponge  terhadap  bakteri
P.  aeruginosa didapatkan  daya  hambat  ekstrak  sponge  berkisar  antara    2,03%  -  27,74% untuk  sponge  yang  diekstrak  dengan  pelarut  metanol,  sedangkan  ekstrak  sponge  hasil ekstraksi  dengan  pelarut  akuades  berkisar  antara    0,00%  -  56,17%.    Potensi  daya  hambat terbesar  dimiliki  oleh    ekstrak  dengan  pelarut  akuades  dari  sponge Plakortis  nigra, yaitu sebesar 56,17% diikuti oleh ekstrak sponge Aplysina sp. sebesar 55,28%, sedangkan daya hambat Jaspis stellifera sebesar 45,50%. Ekstrak sponge dengan pelarut metanol memiliki daya hambat terbesar, yaitu pada sponge Xetospongia  exigua sebesar 27,90% diikuti oleh
Ket : A: Koloni P. aeruginosa B: Koloni Klebsiella sp. C: Koloni S. aureus
D: Koloni S. epidermidis
E: Koloni E. coli F: Koloni A. hydrophyli
Gambar 2. Zona bening yang dibentuk akibat aktivitas protease bakteri patogen
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
ekstrak  sponge Jaspis sp., Callyspongia sp., Plakortis  nigra sebesar  27,74%,  22,38%  dan 20,60% (Gambar 3).
Berdasarkan  hasil  penapisan  ekstrak  dari  10  jenis  sponge  terhadap  bakteri E  .coli didapatkan  daya  hambat  berkisar  antara  0,00%  -  15,37%  untuk  ekstrak  dengan pelarut  metanol,  sedangkan  untuk  ekstrak  dengan  pelarut  akuades  potensi  daya  hambat berkisar antara 0,00% -100,00%. Potensi daya hambat yang relatif besar, yaitu pada ekstrak sponge hasil ekstraksi dengan pelarut akuades. Ekstrak dengan pelarut akuades dari sponge Jaspis stellifera mempunyai potensi daya hambat yang sempurna (100%) terhadap protease bakteri E.  coli, yaitu  sebesar  100%.  Ekstrak  sponge Aplysina sp.  dan Reniochalina stalagmitis memiliki  daya  hambat  berturut-turut  yaitu  39,69%,  20,90%,  sedangkan  daya hambat  terbesar  dari  ekstrak  dengan  pelarut  metanol,  yaitu  ekstrak    sponge Callyspongia muricana yaitu sebesar 15,37% (Gambar 4).
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 Ja sp is s te lli fe ra X et os po ng ia e xi gu a G el lio de s sp . C al ly sp on gi a m ur ic an a C al ly sp on gi a sp .
Xe to sp on gi a te st ud in ar ia Ap ly si na s p. R en io ch al in a st al ag m iti s Pl ak or tis n ig ra Ja sp is s p. Spesies Sponge P o te n s i D a y a H a m b a t (% ) Ekstrak Metanol Ekstrak Akuades
Gambar 3. Potensi    daya  hambat    ekstrak  sponge  terhadap protease P. aeruginosa
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Hasil penapisan ekstrak dari 10 jenis sponge terhadap bakteri S. aureus didapatkan daya  hambat  ekstrak  sponge  berkisar  antara  0,00%  -  6,41%  untuk  ekstrak  dengan  pelarut metanol,  sedangkan  untuk  ekstrak  sponge  dengan  pelarut  akuades  potensi  daya  hambat berkisar  antara    0,00%  -  100,00%.    Ekstrak  dengan  pelarut  akuades  dari  sponge Jaspis stellifera dan Plakortis  nigra mempunyai  potensi  daya  hambat  yang  sempurna  terhadap protease bakteri S. aureus yaitu sebesar 100% dan pada ekstrak sponge Aplysina sp. dengan pelarut akuades mempunyai daya hambat sebesar 33,06%, sedangkan daya hambat ekstrak dengan pelarut metanol yang terbesar yaitu pada sponge Xetospongia exigua yaitu sebesar 6,41% (Gambar 5).
Daya  hambat  ekstrak  akuades    lebih  berpotensi  dibandingkan  dengan  ekstrak methanol.  Hal  ini  menandakan  bahwa  komponen  inhibitor  protease  yang  dapat menghambat  protease  cenderung  larut  pada  pelarut  akuades  dan  bisa  dikatakan  pelarut akuades  potensial  digunakan  sebagai  pelarut  dalam  mengekstraksi  komponen    inhibitor protease  dari  sponge.  Hal  ini  disebabkan  karena  ekstrak  sponge Japis  stellifera dan
0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 Ja sp is st el lif er a
Xe to sp on gi a ex ig ua G el lio de s sp . C al ly sp on gi a m ur ic an a C al ly sp on gi a sp . Xe to sp on gi a te st ud in ar ia Ap ly si na s p.
Re ni oc ha lin a st al ag m iti s Pl ak or tis n ig ra Ja sp is s p. Spesies Sponge P o te n si D a y a H a m b a t (% ) Ekstrak Metanol Ekstrak Akuades
Gambar 4.    Potensi daya hambat ekstrak sponge terhadap protease E. coli
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Plakortis  nigra dengan  pelarut  akuades  dapat  menghambat  sempurna  (100%)  protease E. coli dan S. aureus .

## Penentuan  MIC
Hasil MIC menunjukkan  bahwa  ekstrak  sponge Aplysina sp., Plakortis  nigra dan EDTA  sebagai  inhibitor  komersial  menghambat  protease  bakteri P.  aeruginosa namun tidak  dapat  ditentukan  konsentrasi  hambatan  minimumnya  karena  daya  hambat  kedua ekstrak  tersebut  dan  EDTA  pada  beberapa  konsentrasi  belum  mencapai  50%,  meskipun pada tahapan penapisan kedua ekstrak sponge tersebut menghambat protease P. aeruginosa lebih dari pada 50%. Hal ini diduga karena metode yang digunakan pada tahapan penapisan potensi  ekstrak  sponge  sebagai  inhibitor  protease  dan  tahapan MIC berbeda,  yaitu  pada tahapan  penapisan  digunakan  metode  yang  mudah  sehingga  pekerjaan  efisien,  bakteri patogen  langsung  diinokulasi  ke  dalam  media  yang  sudah  mengandung  ekstrak  sponge tanpa  dilakukan  prekultur  terhadap  bakteri  patogen  seperti  halnya  pada  tahapan MIC
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 110.00 Ja sp is st el lif er a Xe to sp on gi a ex ig ua G el lio de s s p. C al ly sp on gi a m ur ic an a C al ly sp on gi a sp . Xe to sp on gi a te stu di na ria Ap ly si na sp . Re ni oc ha lin a st al ag m iti s Pl ak or tis n ig ra Ja sp is sp . Spe s ie s Sponge P o te n si D a y a H a m b a t (% ) Ekstrak Metanol Ekstrak Akuades
Gambar 5. Potensi  daya  hambat  ekstrak  sponge  terhadap protease S. aureus
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
sehingga bakteri patogen dalam hal ini P. aeruginosa yang telah dilakukan prekultur akan lebih  dominan  didalam  pertumbuhan  maupun  produksi  enzim  protease.    Minimum inhibitory concentration (MIC) dari ekstrak sponge dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Minimum inhibitory concentration (MIC)
Potensi Daya Hambat (%) Spesies Sponge Konsentrasi (%) P. aeruginosa E. coli
S. aureus Keterangan 0,2 - 100,00 100,00 0,16 - 100,00 100,00 0,12 -
100,00 100,00 MIC terhadap E.coli 0,08 % 0,08 - 100,00 100,00 0,04 -
0,11 0,18
Jaspis stellifera (ekstrak akuades) 0 - 0,00 0,00 MIC  terhadap S. aureus 0,08 % 0,2 33,84 - - 0,16 30,41 - - 0,12 11,51 - - 0,08 6,29 - -
0,04 0,12 - - Aplysina sp. (ekstrak akuades) 0 0,00 - -
- 0,2 32,66 - 100,00 0,16 13,22 - 100,00 0,12 4,72 - 100,00 - 0,08 1,93 - 3,17
0,04 0,61
- 0,06
Plakortis nigra (ekstrak akuades) 0 0,00 -
0,00 MIC  terhadap S. aureus 0,12 % 0,2 36,81 100,00 100,00 0,16 36,63 100,00 100,00 - 0,12 6,75 16,78 9,41 0,08 1,36 16,58 4,08 MIC terhadap E.coli 0,16 %
0,04 0,36 0,15 0,35
EDTA 0 0,00 0,00 0,00
MIC  terhadap S. aureus 0,16 %
Konsentrasi  minimal  ekstrak  sponge Jaspis  stellifera untuk  dapat  menghambat protease E.  coli adalah  0,08%  (Gambar  6),  sedangkan  EDTA  untuk  dapat  menghambat protease E. coli dibutuhkan konsentrasi minimal yaitu 0,16% (Gambar 9). Ekstrak sponge mempunyai  dosis  yang  lebih  kecil  dibandingkan  EDTA.  Hal  ini  menunjukkan  ekstrak sponge Jaspis stellifera potensial sebagai inhibitor alami terhadap protease E. coli dan lebih efektif dibanding dengan EDTA.   Sponge jenis ini dapat dilihat pada Gambar 7.
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Konsentrasi minimal untuk dapat menghambat protease S. aureus dengan ekstrak sponge Jaspis  stellifera adalah  0,08%  dan  sponge Plakortis  nigra adalah  0,12%  (Gambar 8).    EDTA  untuk  dapat  menghambat  protease S.  aureus dibutuhkan  konsentrasi  minimal, yaitu 0,16% (Gambar 9). Kedua ekstrak sponge tersebut mempunyai dosis yang lebih kecil dibandingkan EDTA dalam menghambat protease S. aureus . Hal ini menunjukkan bahwa kedua  ekstrak  tersebut  potensial  sebagai  inhibitor  terhadap  protease S.  aureus dan  lebih efektif dibanding EDTA.  Sponge jenis ini dapat dilihat pada Gambar 10.
Ket : 1.AQ.004%
: Ekstrak sponge Jaspis stellifera konsentrasi 0,04% 1.AQ.0,2% :      Ektrak sponge Jaspis stellifera konsentrasi 0,2%
Gambar 6. Zona hambat ekstrak sponge Jaspis stellifera
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan
Gambar 7. Sponge Jaspis stellifera yang memiliki potensi daya hambat terhadap protease S. aureus dan E.coli
Ket : 9.AQ.004%  :  Ekstrak sponge Plakortis nigra konsentrasi 0,04%
9.AQ.0,2%  :  Ekstrak sponge Plakortis nigra konsentrasi 0,2%
Gambar 8. Zona hambat ekstrak sponge Plakortis nigra
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin
Teknologi  Hasil  Perikanan
Ket : EDTA.004% : Media dengan penambahan EDTA konsentrasi 0,04%
EDTA.2%
: Media dengan penambahan EDTA konsentrasi 0,2% P : Koloni P. aeruginosa ,  E : Koloni E. coli ,  S : Koloni S. aureus

## Gambar 9.  Zona  hambat  senyawa  EDTA  terhadap  protease
P.aeruginosa,   E. coli, dan S. aureus
Gambar 10. Sponge Plakortis nigra yang memiliki potensi daya hambat   terhadap protease S. aureus
Vol VIII No. II Tahun 2004
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## KESIMPULAN
Sponge  yang  berasal  dari  Kepulauan  Seribu  telah  berhasil  dikoleksi  dan diekstraksi  komponen  bioaktifnya,  yaitu  inhibitor  protease,  dengan  menggunakan  pelarut akuades dan metanol.  Diantara kedua pelarut tersebut, pelarut akuades merupakan pelarut yang  potensial  untuk  mengekstrak  inhibitor  protease  dari  sponge Jaspis  stellifera dan Plakortis  nigra dengan  potensi  daya  hambat  lebih  dari  50%.    Sponge  yang  pertama mempunyai  MIC  0,08%  terhadap  protease E.  coli dan S.  aureus ,  sementara  itu  sponge yang kedua  mempunyai  MIC 0,12% terhadap protease S.aureus .  Sementara  itu,  inhibitor protease komersial (EDTA) mempunyai MIC terhadap E. coli dan S. aureus sebesar 0,16%.
Ini berarti bahwa ekstrak sponge tersebut potensial sebagai inhibitor protease.

## SARAN
Perlu  penelitian  untuk  mengetahui  komponen-komponen  yang  berperan  sebagai inhibitor  protease.    Selain  itu,  disinyalir  bahwa  komponen  bioaktif    yang  ada  di  sponge dihasilkan pula oleh simbionnya.  Oleh karena itu, diperlukan penelitian tentang komponen bioaktif,  dalam  hal  ini  inhibitor  protease,  yang  berasal  dari  mikroorganisme  yang berasosiasi dengan sponge.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Direktur  Pembinaan  Penelitian  dan Pengabdian Kepada Masyarakat, Dikti yang telah mengusahakan dana untuk penelitian ini melalui HIBAH BERSAING XI.
Buletin Teknologi  Hasil  Perikanan

## DAFTAR PUSTAKA
Allen GR dan Steene R. 1994. Indo-Pasific coral reef field guide. Tropical Reef Research, Singapore, 378 pp.
Faulkner DJ Unson MD dan Bewley CA. 1994 . The chemistry of some sponges and their symbionts. Pure and Appl. Chem . 66 :1983-1990.
Mayer    AMS  dan  VKB  Lehmann.    2000.    Marine  pharmacology.    The  Pharmacological. 42(2):62-69.
Parish  ME  dan  PM  Davidson.  1993.  Methods  for  evaluation. Dalam Antimicrobials  in Foods.  P.M.  Davidson  dan  A.L.  Branen  (Eds.)  2 nd edition.  Marcel  Dekker.  New York.
O’Keefe BR, JA Beutler, JHII Cardellina, TR Prather, RH Shoemaker, RC II  Sowder, LE Henderson, LK Pannell, dan MR Boyd.  1997.  Isolation of a novel kunitz family protease  inhibitor  in  association  with  tethya  hemolysin  from  the  sponge Tethya ingalli .  J. Nat. Prod. 60:1094-1099.
O’Keefe  BR,  T  Erim,  JA  Beutler,  JH  Cardellina  II,  RJ  Gulakowski,  BL  Krepps,  JB. McMahon, RC. Sowder II, DG Johnson, RW Buckheit Jr, S Halliday, MR Boyd. 1998.  Isolation and characterization of adociavirin, a novel HIV-inhibitory protein from the sponge Adocia sp.  FEBS Lett.  431:85-90.
Webster, NS, KJ. Wilson, LL. Blackall, RT. Hill.  2001.  Phylogenetic diversity of bacteria associated  with  the  marine  sponge Rhopaloeides  odorabile .  Appl.  and  Environ. Microb.  67(1):434-444.