## TIGA PEWARNAAN UNTUK MELIHAT GRANULA METAKROMATIK
Akhmad Sudibya Bagian Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya Kusuma Surabaya

## Abstract
There  are  two  stains  in  addition  to    Neisser’s  Stain  to  detect  metachromatic  granules . The two stains are Albert’s Diphtheria Stain and Loeffler’s Alkalin Methylene Blue Stain for Metachromatic Granules . They should be taught to medical students .
Keywords : Albert’s  Diphtheria  Stain , Loeffler’s  Alkaline  MethyleneBlue  Stain  for Metachromatic  Granules , Neisser’s  Stain,  should  be  taught  to  medical students

## Pendahuluan
Ada tiga  metoda  pewarnaan  untuk  melihat  granula  metakromatik.  Ketiga pewarnaan  tersebut  adalah  Pewarnaan  Loeffler,  Pewarnaan  Albert,  dan  Pewarnaan Neisser.  Pewarnaan  Neisser  diajarkan  pada praktikum mikrobiologi  kedokteran. Pewarnaan  Loeffler  dan  Pewarnaan  Albert  kurang  populer  karena  tidak  diajarkan  pada praktikum mikrobiologi kedokteran. Pewarnaan Albert paling sering dibahas pada buku- buku terbitan WHO.

## Granula Metakromatik
Granula metakromatik disebut juga granula volutin. Granula metakromatik tidak hanya ditemukan pada Corynebacterium diphtheriae tetapi juga di beberapa bakteri selain Corynebacterium  diphtheriae ,  fungi,  algae,  dan  protozoa.  Granula  metakromatik mengandung  polifosfat,  asam  ribonukleat,  dan  protein.  Granula  metakromatik  sangat mungkin  mempunyai  fungsi  sebagai  sumber  cadangan  energi  (Beishir,  1991).  Literatur yang  menyebutkan  keberadaan  granula  metakromatik  sampai  tingkat  spesies  pada
sejumlah bakteri  selain Corynebacterium diphtheriae , fungi, algae, dan protozoa belum ditemukan.
Nama Lain Pewarnaan Albert (Beishir, 1991 ; WHO, 2003)
Nama lain  untuk  Pewarnaan  Albert  adalah Albert’s  Diphtheria  Stain , Albert’s Differential Stain ,  dan Albert Stain (Beishir, 1991 ; WHO, 2003).
Cara Pewarnaan Albert Versi Beishir (Beishir, 1991)
Pertama,  buatlah  sediaan.  Kedua,  tetesilah  sediaan  dengan  Zat  Warna Albert dan biarkanlah selama 5 menit. Ketiga, bersihkan sediaan dari sisa-sisa zat warna (Jangan  dicuci  dengan  air!).  Keempat,  tetesilah  dengan  Larutan  Lugol  dan  biarkanlah selama  1  menit.  Kelima,  miringkan  sediaan  supaya  bersih  dari  sisa-sisa  zat  warna. Keenam, cucilah dengan air yang mengalir. Ketujuh, keringkan sediaan (Beishir, 1991).

## Cara Pewarnaan Albert Versi WHO (WHO, 2003)
Pertama,  buatlah  sediaan.  Kedua,  tetesilah  sediaan  dengan  Zat  Warna Albert  dan  biarkanlah  selama  3-5  menit.  Ketiga,  cucilah  sediaan  dengan  air  mengalir, letakkanlah sediaan dalam posisi vertikal, dan biarkanlah sampai menjadi kering (WHO, 2003).  Yang  perlu  diperhatikan  adalah  Cara  Pewarnaan  Albert  Versi  WHO  tidak menggunakan Larutan Lugol seperti Cara Pewarnaan Albert Versi Beishir.
Formula Zat Warna Albert Versi Beishir (Beishir, 1991)
Zat Warna Albert mengandung toluidine blue 0,15 g, methyl green 0,2 g, glacial  acetic  acid 1,0  ml,  etanol  95%,  2,0  ml,  dan distilled  water 100,0  ml  (Beishir, 1991).
Formula Zat Warna Albert Versi WHO (WHO, 2003)
Zat Warna  Albert  mengandung toluidine  blue 0,15  g, malachite  green 0,20  g, glacial  acetic  acid (CH 3 COOH)  1  ml,  etanol  (CH 3 CH 2 OH)  96%,  2    ml,  dan distilled  water  q.s. 100    ml  (WHO,  2003).  Ada  perbedaan  sedikit  dengan  formula  Zat
Warna  Albert  Versi  Beishir.  Beishir  memakai methyl  green .  WHO  mempergunakan malachite  green .  Literatur  yang  membahas  mengapa  WHO  lebih  memilih malachite green daripada methyl green belum diperoleh.
Formula Larutan Lugol (Lugol’s Iodine Solution ) Versi Beishir (Beishir, 1991)
Larutan Lugol mengandung C.P. iodine 5,0 g, kalium iodida C.P. 10,0 g, dan distilled water 100,0 ml (Beishir, 1991).
Hasil  Pengamatan  Dengan  Mikroskop  Pewarnaan  Albert  Versi  Beishir (Beishir, 1991)
Granula  metakromatik  tampak  sebagai  bintik  sangat  ungu  ( intense  purple  dots ). Sitoplasma  kelihatan  berwarna  hijau  pucat  ( very  pale  green ).  Sitoplasma  sangat  sering kelihatan  pucat  sehingga  sulit  untuk  diidentifikasi  (Beishir,  1991).  Minyak  imersi  harus digunakan pada waktu memakai mikroskop. Perbesaran yang digunakan adalah 1000 kali.
Hasil Pengamatan Dengan Mikroskop Pewarnaan Albert Versi WHO (WHO, 2003) Corynebacterium  diphtheriae kelihatan  berbentuk  batang  ramping  dan berwarna hijau. Granula metakromatik tampak berwarna hijau-hitam. Susunannya tampak seperti jajaran, formasi V, ataupun huruf Cina (WHO, 2003).
Cara Pewarnaan Biru Metilen Alkalin Loeffler Versi Beishir (Beishir, 1991)
Pertama, buatlah sediaan. Kedua, tetesilah sediaan dengan Zat Warna Biru Metilen Alkalin Loeffler dan biarkanlah selama 5 menit. Ketiga, cucilah dengan air yang mengalir. Keempat, keringkanlah sediaan (Beishir, 1991).
Nama Lain Cara Pewarnaan Biru Metilen Alkalin Loeffler Versi Beishir (Anonim1, 1985 ;  Beishir, 1991)
Nama  lain  untuk  Pewarnaan  Biru  Metilen  Alkalin  Loeffler  adalah Pengecatan  Metilen  Biru  Alkalis  dan Loeffler’s  Alkaline  Methylene  Blue  for Metachromatic Granules (Anonim1, 1985 ;  Beishir, 1991).
Formula Zat Warna Biru Metilen Alkalin Loeffler Versi Beishir (Beishir, 1991) Zat Warna Biru  Metilen  Alkalin  Loeffler  mengandung methylene  blue chloride 0,3 g, etanol 95%, 30,0 ml, dan larutan KOH 0,01 % 100,0 ml (Beishir, 1991).
Hasil    Pengamatan    Dengan  Mikroskop  Pewarnaan  Biru  Metilen  Alkalin  Loeffler Versi Beishir (Beishir, 1991)
Granula  metakromatik  tampak  sebagai  bintik  sangat  biru  ( intense  blue ). Sitoplasma kelihatan berwarna biru pucat (a much  paler blue ) (Beishir, 1991). Minyak imersi  harus  digunakan  pada  waktu  memakai  mikroskop.  Perbesaran  yang  digunakan adalah 1000 kali.
Cara Pewarnaan Neisser (Anonim2, 1991)
Pertama, buatlah sediaan kuman pada gelas obyek, fiksasilah, dan tunggu sampai  dingin.  Kedua,  tuangkan  Neisser  AB  pada  sediaan  kuman  dan  biarkan  selama  1 menit.  Ketiga,  buang  sisa  Neisser  AB  dari  gelas  obyek.  Keempat,  tuangkan  Neisser  C pada  sediaan  dan  biarkan  selama  1,5  menit.  Kelima,  buang  sisa  Neisser  C  dari  gelas obyek.  Keenam,  keringkan  dengan  kertas  pengering.  Ketjuh,  teteskan  satu  tetes  minyak imersi pada sediaan lalu lihatlah di bawah mikroskop dengan lensa obyektif pembesaran 100x (Anonim2, 1991).
Formula Zat Warna Neisser (Anonim2, 1991)
Zat Warna Neisser A mengandung biru metilen 0,1 g, alkohol 96% 2 ml, asam  asetat  pekat  5  ml,  dan  akuades  95  ml.  Zat  Warna  Neisser  B  mengandung  kristal violet  1 g, alkohol 96% 10 ml, dan akuades 300 ml. Zat  Warna Neisser C mengandung crysoidine 2 g dan akuades (panas) 300 ml (Anonim2, 1991).
Hasil  Pengamatan  Dengan Mikroskop Pewarnaan Neisser (Anonim2, 1991)
Granula  metakromatik  tampak  sebagai  bentukan  warna  biru  gelap  atau biru  hitam  dalam  sitoplasma  kuman  yang  tampak  berwarna  kuning  coklat  (Anonim2, 1991).

## Simpulan
Pewarnaan Albert  dan  Loeffler  perlu  diperkenalkan  kepada  para mahasiswa,  sebaiknya  melalui kuliah dan poster di  ruang  praktikum,  sehingga mahasiswa  bisa  langsung  mengetahui  kegunaan  kedua  pewarnaan  itu.  Mahasiswa  harus mengetahui  bahwa  ada  paling  tidak  ada  dua  pewarnaan  lain  selain  Pewarnaan  Neisser yang selama ini diajarkan pada praktikum mikrobiologi kedokteran.

## Daftar Pustaka
Beishir B. Microbiology in Practice : A Self-Instructional Laboratory Course . Edisi V. New York: HarperCollins, 1991. h. 251−258.
WHO. Manual of Basic Techniques for A Health Laboratory . Edisi II.
Geneva: WHO, 2003. 201−202.
Anonim1. Dasar-Dasar Pemeriksaan Mikrobiologi . Yogyakarta: Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, 1985. h. 85−86.
Anonim2. Penuntun Praktikum Mikrobiologi . Edisi VII. Surabaya: Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga,1991. h. 5−22, 68−69.
Reviewer Prof. Dr. dr. Prihatini, Sp. PK.(K)