UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI PERASAN DAUN KEMANGI ( Ocimum sanctum Linn.) TERHADAP Aspergilllus terreus SECARA IN VITRO
ANTIFUNGAL ACTIVITY TEST OF BASIL LEAVES JUICE ( Ocimum sanctum Linn.) AGAINST Aspergilllus terreus BY IN VITRO
Tyfany Imanu Sabrina, Sudarno dan Hari Suprapto
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Aspergillus terreus is a fungus that causes aspergillosis disease. The infected fishes showed grey white  patches  over  the  body.  Haemorrhagic  ulceratic  patches  were  observed  on  the  gill  and  skin.  The infections resulted in the death of the fishes. The use of chemicals to control fungal attack A. terreus can harm fish, the environment and humans who eat them.  Treatment  of  fungal  diseases  that  use  a  lot  of chemicals that can harm the fish, the environment and humans who eat them. The use of medicinal plants is a safe way to inhibit and kill fungus growth as well as environmentally friendly. One of them uses the basil plant ( Ocimum sanctum ).
The purpose of this study was to determine the minimum concentration of activity and basil leaf juice ( O. sanctum Linn) as antifungal against A. terreus growth in vitro . The experiment was conducted at the Laboratory of the Faculty of Fisheries and Marine Airlangga University in July 2013. The method used  in  this  research  that  the  paper  disc  diffusion  method  and  diffusion  pitting.  The analysis used in this study is descriptive statistica.
The results of research using the juice of basil leaves ( O. santum ) of juice concentration of 50% (2,5  ml  juice  of  basil  leaves  +  2,5  ml  NaCl)  to  concentration  100%  (5  ml  juice  of  basil  leaves)  did  not produce a clear zone around the paper discs and pitting, it is the same as the negative control. The positive control did not show fungus growing on Sabouraud Dextrose Agar medium (SDA).
Keywords : Basil Leaves, Aspergillus terreus , Diffusion Sensitivity Test

## Pendahuluan
Penyakit  ikan  merupakan  salah  satu masalah serius yang harus dihadapi dalam usaha budidaya  perikanan.  Salah  satu  penyakit  yang menyerang  ikan  budidaya  adalah  aspergillosis yang  disebabkan  oleh  jamur A.  terreus . Aspergillus    terreus mampu  menginfeksi Channa  punctatus , Heteropneustes  fossilis dan Clarias  batrachus di  Gobindgarh tank  of Rewa (Madhya  Pradesh),  India  pada  tahun  1990 (Shrivastava, 1996).
Aspergillus  terreus juga  menghasilkan mikotoksin  yang  merupakan  racun  yang dikeluarkan oleh jamur dan bersifat mengganggu  kesehatan.  Adapun  mikotoksin yang  dihasilkan  oleh A.  terreus adalah citrinin dan terrein (Youssef et  al .,  2003)  serta patulin (Hashem,  2011).  Upaya  pencegahan  dan pengobatan  yang  biasanya  dilakukan  pada  ikan yang terkena penyakit jamur adalah menggunakan  obat-obatan  kimia.  Penggunaan bahan  kimia  menimbulkan  efek  negatif  yaitu resistensi mikroorganisme, bahaya yang ditimbulkan  terhadap  lingkungan  sekitarnya,
ikan  yang  bersangkutan  dan  manusia  yang mengonsumsinya (Sugianti, 2005).
Penggunaan  tanaman  obat  merupakan cara  yang  aman  untuk  menghambat  dan membunuh  pertumbuhan  mikroba  serta  ramah lingkungan. Salah satunya menggunakan tanaman  kemangi  ( Ocimum  sanctum Linn.). Bagian  yang  dapat  digunakan  adalah  bagian daunnya. Kandungan senyawa minyak atsiri   di dalam  daun  kemangi  yang  didugasebagai antifungi  adalah methyl  chavicol dan linalool yang  bereaksi  dengan  membran  sel  dan pengurangan  yang  signifikan  pada  jumlah ergosterol (Kadian and Parle, 2012).
Kandungan  senyawa  lain  dalam  daun kemangi  adalah  alkaloids,  flavonoids,  tannins dan  saponins  (Shafqatullah et  al., 2013).  Pada penelitian  yang  telah  dilakukan  dari  ekstrak minyak  atsiri  daun  kemangi,  memperlihatkan memiliki  aktivitas  antifungi  terhadap Fusarium solani , Penicillium  funicolusum , Rhizomucor auricus dan Trichorderma  reesi (Dharmagadda et  al .,  2005),  serta Aspergillus  fumigatus dan Aspergillus niger (Bansod and Rai, 2008).
Berdasarkan data tersebut maka
penelitian  ini  ingin  mengetahui  pengaruh  dari air  perasan  daun  kemangi  ( O.sanctum Linn.) terhadap  pertumbuhan  jamur A.  terreus secara in vitro .
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah mengetahui pengaruh air perasan daun kemangi ( O. sanctum Linn.) dalam menghambat pertumbuhan  jamur A.  terreus secara in  vitro dan  untuk  mengetahui  konsentrasi  minimum dari  air  perasan  daun  kemangi  ( O.  sanctum Linn.)  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur A. terreus secara in vitro .

## Materi dan Metode
Rancangan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  delapan  perlakuan  dan  tiga  kali ulangan.  Konsentrasi  air  perasan  daun  kemangi yang  digunakan  antara  lain  sebesar  50%,  60%, 70%,  80%,  90%  dan  100%,  kontrol  positif adalah  formalin  sebesar  10%  berdasarkan  pada penelitian  Shathele and Fadlelmula  (2010)  dan kontrol  negatif  yang  tidak  diberikan  tambahan bahan.
Penelitian pendahuluan telah
dilaksanakan pada bulan Maret di Laboratorium Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan.  Metode  yang digunakan  adalah  metode  difusi  sumuran dengan  menggunakan  suspensi  jamur  yang disamakan dengan standar  Mc. Farland 0,5 dan larutan perasan kemangi yang dilarutkan dengan NaCl. Konsentrasi yang digunakan adalah 20%, 40%  dan  60%.  Hasil  dari  uji  pendahuluan menunjukkan  zona  hambat  pada  konsentrasi 60%, sedangkan pada konsentrasi 20% dan 40% tidak  menunjukkan  adanya  zona  hambat. Berdasarkan hasil penelitian  pendahuluan  maka penelitian  ini  menggunakan  konsentrasi  di  atas 40%  untuk  mendapatkan  hasil  konsentrasi minimum  yang  dapat  menghambat  jamur A. terreus . Persiapan  Media Saboroud  Dextrose  Agar (SDA) dan Sterilisasi Alat Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk membuat media SDA steril adalah serbuk SDA, akuades  dan  antibiotik.  Media  SDA  ini  dibuat dengan  cara  menimbang  bahan  (serbuk  SDA) dengan  perhitungan  65  gram/L  kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu Erlenmeyer  dan ditambahkan  akuades.  Bahan-bahan  tersebut diaduk  perlahan  dengan  cara  menggoyangkan labu  Erlenmeyer  agar  dapat  tercampur  rata  dan homogen.  Ujung  labu  yang  berisi  larutan homogen  ditutupi  dengan  kapas  kemudian dibungkus  dengan  kertas  aluminium.  Sterilisasi dilakukan  dengan  menggunakan  autoklaf  pada suhu 121 ˚C tekanan 1,02 atm selama 15 menit.
Bahan  dikeluarkan  dari  autoklaf  dan  ditambah antibiotik ( chloramphenicol ). Hal ini dimaksudkan untuk meminimalisasi dan menghindari adanya kontaminasi bakteri. Bahan SDA  yang  dalam  keadaan  cair  dimasukkan sebanyak 20 ml pada setiap cawan Petri. Media SDA  kemudian  didinginkan,  didiamkan selama 24 jam dan siap digunakan (Sugiawan, 2006). Pembuatan Air Perasan Daun Kemangi
Pembuatan  air  perasan  daun  kemangi dilakukan  dengan  cara  memilih  daun  kemangi yang  segar  dengan  berat  100  gram.  Daun kemangi  dibersihkan  dengan  air  mengalir  lalu dimasukkan ke dalam blender hingga halus. Air perasan  kemudian  disaring  menggunakan  kain dan  kertas  saring  yang  telah  disterilkan  (Hasbi, 2012).  Perasan  daun  kemangi  yang  digunakan dibagi  menjadi  6  konsentrasi  percobaan  sesuai penelitian  pendahuluan,  yaitu  konsentrasi  50%, 60%, 70%, 80%, 90%, dan 100%.
Menurut Hamdani (2012) pembuatan konsentrasi dilakukan dengan mengencerkan air perasan  daun  kemangi  dengan  ketentuan konsentrasi pengenceran tiap tabung mempunyai    volume  yang    sama    yaitu    5  ml.
Perlakuan  konsentrasi  100%    adalah  perasan daun  kemangi  sebanyak  5  ml.  Perlakuan konsentrasi  90%  adalah  perasan  daun  kemangi sebanyak  4,5  ml  +  0,5  ml  NaCl  steril  0,85%. Perlakuan konsentrasi 80% adalah perasan daun kemangi  sebanyak    4  ml  +  1  ml  NaCl  steril 0,85%.  Perlakuan  konsentrasi  70%  adalah perasan daun kemangi sebanyak 3,5 ml + 1,5 ml NaCl  steril  0,85%.  Perlakuan  konsentrasi  60% adalah perasan daun kemangi sebanyak 3 ml + 2 ml  NaCl  steril  0,85%.  Perlakuan  konsentrasi 50% adalah perasan daun kemangi sebanyak 2,5 ml + 2,5  ml NaCl steril 0,85%. Pada perlakuan kontrol  positif  digunakan  konsentrasi  formalin 10%  dan  kontrol  negatif  yang  tidak  diberikan tambahan bahan.
Kultur dan Identifikasi A. terreus Jamur A.  terreus didapatkan  dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga. Proses dilanjutkan  pada  pemurnian  dengan  cara mengkultur  ulang  jamur  yang  sudah  tumbuh pada  media  SDA  dengan  menggunakan  Ose (Akbar, 2008).
Isolat yang didapat diidentifikasi kembali  sesuai  dengan  karakteristik A  terreus . Setelah karakteristiknya sama maka isolat dapat digunakan dalam penelitian. Identifikasi dilakukan  secara  makroskopis  yaitu  dengan pengamatan  bentuk  dan  warna  koloni  dan pengamatan secara mikroskopis meliputi bentuk
hifa,  bentuk  spora  dan  letak  spora  dengan menggunakan mikroskop (Yuasa, 2003). Pembuatan suspensi jamur Pembuatan  suspensi  jamur A.  terreus dilakukan dengan mengambil dari biakan murni jamur A.  terreus ,  lalu  dilakukan  perhitungan jumlah  konidia  dan  perhitungan  konidia. Kepadatan konidia yang akan digunakan adalah 10 4 sel/ml (Alves et al. , 2013).
Uji Aktivitas Antijamur Uji  aktivitas  antijamur  menggunakan metode  difusi  kertas  cakram  dimulai  dengan merendam  kertas  cakram  yang  akan  digunakan selama  ±  10  menit  ke  dalam  perasan  daun kemangi dengan konsentrasi 50% hingga 100%. Kontrol  (+)  ditambahkan  larutan  formalin  10% sedangkan  kontrol (-) tidak diberikan tambahan bahan.  Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  25  ˚C selama  48  jam.  Kertas  cakram  tersebut  akan berdifusi  ke dalam  media uji  dan  menghasilkan zona  bening  di  sekitarnya  (Sarjono  dan Mulyani, 2007).
Metode difusi sumuran dimulai dengan membuat  lubang  sumuran  berdiameter  5  mm pada masing-masing cawan Petri. Pada masing- masing  sumuran  diisi  0,2  ml  perasan  daun kemangi dengan konsentrasi yang telah ditentukan.  Selanjunya  diinkubasi  pada  suhu 25˚C  selama  48  jam.  Setelah  diinkubasi dilakukan  pengukur  diameter  daerah  yang bening  (zona  hambatan)  dengan  menggunakan penggaris melewati
pusat sumuran (Suryaningrum, 2011).
Analisis Data
Data hasil penelitian berupa diameter zona hambat  pertumbuhan  jamur A.terreus oleh antifungi  perasan  daun  kemangi  ( O.  sanctum )
dan  formalin.  Data  tersebut  disajikan  secara deskriptif yaitu penyajian data dengan memaparkan  data  dalam  bentuk  penjelasan, angka  dan  gambar  yang  dideskriptifkan  dan juga disajikan secara grafis, yaitu dalam bentuk tabel  ataupun  grafik  untuk  mendapatkan gambaran  tentang  data-data  penelitian  sehingga lebih  mudah  dibaca  dan  dipahami  (Dergibson dan Sugiarto, 2002 dalam Sari, 2011).

## Hasil dan Pembahasan
Identifikasi  jamur A.  terreus dilakukan dengan  melakukan  pengamatan  makroskopis dan mikroskopis. Pengamatan secara makroskopis  dilihat  dari  karakteristik  koloni yang tampak pada media SDA yang menunjukkan    koloni  jamur  berwarna  coklat, hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Balajee  (2009) yang  menyatakan    bahwa  warna  koloni A. terreus beragam  dari  warna  oranye  muda sampai cokelat.
Pengamatan secara mikroskopis dilihat dari  mikroskop  yang  menunjukkan  morfologi dari A.  terreus yaitu konidiofor tidak  berwarna (hialin),  konidia  berbentuk  bulat,  serta  terdapat aleuroconidia .  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Balajee  (2009)  bahwa  secara  mikroskopis, A. terreus memiliki  ciri  konidiofor  berbentuk panjang,  berkolom,  tidak  berwarna  (hialin)  dan halus. konidia berdinding halus, berbentuk bulat hingga bulat panjang dan striate, sehingga dapat disimpulkan  bahwa  jamur  tersebut  adalah A. terreus Pengamatan  secara  makroskopis  dan mikroskopis dapat dilihat pada Gambar 1.
Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  menggunakan  perasan  daun  kemangi ( Ocimum  sanctum Linn)  tidak  menunjukkan aktivitas  antifungi  terhadap A.  terreus dengan
Gambar  1.  Koloni A.  terreus pada  media Sabouraud  Detroxe  Agar (SDA)  makroskopis  (a). Aspergillus  terreus pada  mikroskop  perbesaran  100x    dengan  keterangan  (1. Hifa,  2. Konidia bulat, 3. Aleuroconidia ) (b).
metode  difusi  kertas  cakram  maupun  metode difusi  sumuran . Pengamatan  hasil  KHM  dilihat secara  visual  dan  hasil  yang  didapatkan  tidak terjadi  daya  hambat  di  sekitar  kertas  cakram Gambar  2  dan  sumuran  Gambar  3,  sedangkan kontrol positif menunjukkan daya hambat.
Pertumbuhan A.terreus terdapat  pada tiap media dengan konsentrasi 50%, 60%, 70%, 80%,  90%  dan  100%.  Pada  kontrol  positif berupa  larutan  formalin  10%  terlihat  tidak
adanya  pertumbuhan  jamur  di  media  SDA, dengan zona hambat sebesar 4,7 cm. Pengamatan  dilakukan  selama  48  jam  dan diketahui  hasilnya  pada  waktu  jam  ke  48.  Pada waktu  jam  ke  48  mulai  terlihat  jelas  adanya jamur  yang  mengelilingi  kertas  cakram.  Hasil pengamatan  Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM) pada Tabel 1.
Gambar 2.   Pengamatan  hasil  konsentrasi  hambat  minimum  di  sekitar  kertas  cakram  dengan menggunakan perasan kemangi
Gambar 3. Pengamatan hasil konsentrasi hambat minimum di sekitar sumuran dengan menggunakan perasan kemangi
Tabel 1. Hasil pengamatan pembentukan zona hambat perasan daun kemangi terhadap A. terreus Konsentrasi (%) Diameter zona hambat (cm) 10 0,0 20 0,0 30 0,0 40 0,0 50 0,0 60 0,0 70 0,0 80 0,0 90 0,0 100 0,0 K (-) 0,0 K (+) 4,7
Hasil  uji  aktivitas  antifungi  perasan daun  kemangi  ( O.  sanctum )  terhadap jamur A. terreus telah  dilakukan  secara in  vitro .  Uji aktivitas  antifungi  meliputi  uji  Konsentrasi Hambat  Minimum  (KHM)  dari  konsentrasi 50%  hingga  konsentrasi  100%.  Metode  yang digunakan  adalah  metode  difusi  kertas  cakram dan sumuran  yang menunjukkan perasan daun kemangi  tidak  memiliki  kemampuan  dalam menghambat  pertumbuhan  jamur A.  terreus . Hal ini terlihat dengan tidak terbentuknya zona hambat  jamur  di  sekililing  kertas  cakram maupun  sumuran.  Hasil  ini  sesuai  dengan kontrol negatif  sebagai pembanding yang juga tidak  terlihat  adanya  zona  hambat  di  sekitar kertas cakram dan sumuran.
Hasil  ini  berbeda  dengan  penggunaan formalin  yang  digunakan  sebagai  kontrol positif.  Pada  kontrol  positif  menunjukkan jamur  yang  tidak  tumbuh  di  media  SDA. Formaldehyde  (formalin)  merupakan  bahan kimia  sangat  reaktif  yang  berinteraksi  dengan protein,  DNA,  dan  RNA  secara in  vitro .
Formaldehyde
dianggap
sporicidal
berdasarkan  kemampuannya  untuk  menembus ke  bagian  dalam  spora  bakteri.  Formaldehyde juga  bereaksi  secara  ekstensif  dengan  asam nukleat  (misalnya  DNA  T2  bakteriofag) (McDonnell and A. Denver Russell, 1999). Perlakuan  yang  diberikan  telah  sesuai dengan  prosedur  penelitian,  dilakukan  secara aseptis dan terkontrol. Perasan yang digunakan telah  sesuai  dengan  prosedur  pada  penelitian pendahuluan.  Media  yang  digunakan  dalam semua  perlakuan  telah  sesuai  dengan  prosedur pada  penelitian  pendahuluan.  Kultur  jamur A. terreus juga  berasal  dari  sumber  yang  sama, pemberian suspensi jamur A. terreus juga telah dilakukan dalam volume serta kepadatan jamur yang  sama  dengan  prosedur  pada  penelitian pendahuluan.  Hasil  yang  didapat  dalam penelitian ini tidak menunjukkan hasil penghambatan jamur.
Dalam  penelitian  pendahuluan  telah dicobakan  menggunakan  perasan  yang  sama dengan  penambahan  pelarut  NaCl  0,85% namun  hasil  pada  penelitian  utama  yang diperoleh  tidak  sesuai  dengan  penelitian pendahuluan.  Selain  itu,  juga  telah  dicoba dengan  menggunakan  pelarut  akuades  steril dan  dengan  metode  sumuran  yang  pernah dicobakan pada penelitian pendahuluan namun hasilnya  tetap  tidak  didapatkan  zona  hambat pertumbuhan  jamur A . terreus .  Penelitian pendahuluan  menyatakan  adanya  hasil  zona hambat  pada  sekitar  lubang  sumuran  sesuai hasil yang telah dilaporkan.
Daun kemangi dipilih karena memiliki bahan  aktif  sebagai  antifungi.  Kandungan bahan  aktif  pada  daun  kemangi  yang  sudah diteliti  dapat  melawan  jamur  adalah  minyak atsiri,  flavonoid,  dan  saponin.  Pada  penelitian yang telah dilakukan dari ekstrak minyak atsiri daun  kemangi,  memperlihatkan  memiliki aktivitas  antifungi  terhadap Fusarium  solani , Penicillium  funicolusum , Rhizomucor  auricus dan Trichorderma  reesi (Dharmagadda et  al .,
2005). Menurut Mondal (2009) dalam Rahman
(2011)  Ekstrak air dan aseton dari O. Sanctum juga  sensitif  untuk  jamur  seperti Alternaria tenuis, Helminthosporium  sp. dan Curvularia penniseli .  Pada  penelitian  utama  juga  telah dicobakan  menggunakan  pelarut  air  namun tetap  tidak  bisa  menghambat,  dimungkinkan minyak atsiri tetap tidak bisa keluar dikarenakan metode pembuatan sediaan larutan dari daun kemangi yang berbeda.
Berdasarkan  bahan  aktif  yang  terdapat pada  daun  kemangi  ( O.  sanctum )  maka dimungkinkan dapat menghambat pertumbuhan  jamur A.  terreus namun  tidak pada hasil penelitian ini. Penyebab lain diduga karena  jamur A.  terreus resisten  terhadap bahan  aktif  dalam  perasan  daun  kemangi  ( O. sanctum ).  Diduga  aksesori  konidia  juga berpengaruh  dalam  proses  resistensi  seperti yang  dilaporkan  Deak et  al. (2009)  yang menyatakan bahwa Aspergillus terreus menggunakan aksesori konidianya untuk menginfeksi  jaringan,  hal  ini  berdasarkan identifikasi  aksesoris  konidia  dari  jaringan yang
terinfeksi . Aksesoris konidia dimungkinkan  menjadi  penyebab  penyakit, sehingga  diduga  bahwa  perasan  daun  kemangi ( O.  sanctum )  tidak  mampu  menghambat pertumbuhan  jamur A.  terreus. Hal  ini disebabkan  karena  kemampuan  dari  struktur morfologi A.  terreus yang  terlalu  kuat  dalam menyebabkan penyakit.

## Kesimpulan
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa air perasan daun kemangi ( O.sanctum )tidak dapat menghambat pertumbuhan jamur A. terreus secara in vitro sehingga  tidak  terdapat  aktivitas  antijamur terhadap A.  terreus .  Air  perasan  daun kemangi( O.sanctum ) dari konsentrasi 50% (2,5 perasan  daun  kemangi  +  2,5  ml  NaCl)  hingga konsentrasi  100%  (5  ml  perasan  daun kemangi) tidak mampu menghambat pertumbuhan A.  terreus sedangkan  pada kontrol positif berupa larutan formalin  mampu menghambat pertumbuhan A. terreus .
Dari  hasil  penelitian  ini,  disarankan untuk  tidak  menggunakan  sediaan  air  perasan daun  kemangi  sebagai  penghambatan A. terreus.
Adapun
sebaiknya dilakukan penelitian  lain  menggunakan  selain  daun kemangi  untuk  mengetahui  aktivitas  antifungi yang dapat menghambat jamur A. terreus .

## Daftar Pustaka
Akbar,  J.  2008.  Pemanfaatan  Ekstrak  Bunga
Kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan ) Terhadap Penyembuhan Infeksi  Jamur Saprolegnia  sp .  Pada Ikan Nila Merah. Skripsi. Fakultas Perikanan Universitas Lambung Mangkurat. hal 71 Alves,  J.  L.,  J.  H.  C.  Woudenberg,  L.  L. Duarte,  P.  W.  Crous,  and  R.  W. Barreto.  2013.  Reappraisal  of  The Genus Alternariaster ( Dothideomycetes ).  The  Netherlands. Persoonia. pp. 77–85 .
Balajee,  S.A.  2009. Aspergillus  terreus complex.  Medical  Mycology,  47 (Supplement 1). pp. 42-46.
Bansod,  S.  and  M.  Rai.  2008.  Antifungal Activity of Essential Oils from Indian Medicinal  Plants  Against  Human Pathogenic Aspergillus  fumigatus and
A.  Niger .  World  Journal  of  Medical Sciences 3 (2) : 81 – 88.
Deak E, Wilson SD, White E, Carr JH, Balajee
SA. 2009. Aspergillus terreus
accessory  conidia  are  unique  in surface architecture,
cell wall composition and germination kinetics. Plos  One, 4: 7673.
Dharmagadda,  V.  S.  S.,  M.  Tandonb,  P. Vasudevan.  2005.  Biocidal  activity  of the  essential  oils  of Lantana  camara , Ocimum  sanctum and Tagetes  patula . Journal  of  Scientific  &  Industrial Research. 64: 53-56.
Hamdani,  T.  2012.  Uji  Sensitivitas  Perasan Daun Ceremai ( Phyllanthus acidus L.) terhadap  Pertumbuhan Escherichia coli .  Karya  Tulis  Ilmiah.  Akademis
Analis  Kesehatan.  Banda  Aceh.  hal 14.
Hasbi,  S.  2012.  Uji  Sensitivitas  Perasan  Daun Alpokat  ( Persea  mericana  miller ) terhadap Pseudomonas sp.  Metode In Vitro .  Karya  Tulis  Ilmiah.  Akademis Analis Kesehatan. Banda Aceh. hal 15 Hashem,  M.  2011.  Isolation  of  Mycotoxin- producing Fungi from Fishes Growing in  Aquacultures.  Research  Journal  of Microbiology. ISSN 1816-4935 :  6-8.
Kadian,  R.  and  M.  Parle.  2012.  Therapeutic potential  and  phytopharmacology  of tulsi. International Journal of
Pharmacy  &  Life  Sciences.  32(3):
422-426. McDonnell,  G and A.  Denver  Russell.  1999. Antiseptics and Disinfectants: Activity,  Action,  and  Resistance. Clinical  Microbiology  Reviews.    pp. 153. Rahman,  S.,  R.  Islam,  M.  Kasruzzaman,  K. Alam, A. H. M. Jamal. 2011. Ocimum sanctum L. : A Review of
Phytochemical  and  Pharmacological
Profile.  American  Journal  of  Drug
Discovery and Develpment. pp. 5.
Sari,  F.Y.  2011.  Daya  Antibakteri  Sari  Buah
Majapahit  ( Crescentia  cujete L.) terhadap Bakteri Aeromonas salmonicida secara In  Vitro .  Skrisi.
Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan Universitas Airlangga. hal 104.
Sarjono,  P.  R.  dan  N.  S.  Mulyani.  2007. Aktivitas  Antibakteri  Rimpang  Temu Putih  ( Curcuma  mangga Vall).  Jurnal Sains dan Matematika. 15 (2) : 89-93. Shathele,  M.  S.  and  A.  Fadlelmula.  2010. In vitro Effectiveness of Some Antifungal  Drugs  in  Treatment  of Trichophyton verrucosum ; Dermatophytic  Fungi.  Saudi  Arabia. Asian Journal of Animal and
Veterinary Advances. pp. 180-192. Shrivastava,  A.K. 1996. Record of Aspergillus terreus (Thorn.)  (Fungi)  as  fish pathogen. Indian J. Fish. 43 (2) :  203
– 204.
Sugianti,  Budi.  2005.  Pemanfaatan  Tumbuhan Obat  Tradisional  dalam  Pengendalian
Penyakit Ikan. Institut Pertanian Bogor. hal 702.
Sugiawan,  W.  2006.  Peningkatan  Efektivitas Media  Isolasi  Khamir  Contoh  Kecap dengan  Penambahan  Kecap.  Bogor. Temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian. hal 76-80. Suryaningrum,  E.  R.  2011.  Efek  Antifungi Perasan  Kulit  Jeruk  Purut  (Citrus hystrix) terhadap Pertumbuhan Trichophyton  mentagrophytes  secara in vitro. Fakultas Kedokteran. Universitas  Sebelas  Maret.  Surakarta. hal 35.
Yuasa  K.,  Novita  P.,Meliya  P.,  dan  Edy  B.K. 2003. Teknik Diagnosis Penyakit Ikan Budidaya  Air  Tawar  di  Indonesia. Japan International Cooperation
Agency dan Panduan Diagnosis
Penyakit  Ikan.  Balai  Budidaya  Air Tawar   Jambi. hal 52-53. Youssef,  M.  S.,  N.  F.  Abo-Dahab  and  R.  M.
Farghaly. 2003. Studies on Mycological  Status  of  Salted  Fish “Moloha” in
Upper
Egypt.
Mycobiology. 31 (3) :  166 – 172.