Eksplorasi Dan Karakterisasi Cendawan Entomopatogen Strain Metarhizium sp. Lokal Di Beberapa Kabupaten Di Kalimantan Timur
Exploration and Characterization of Entomopathogenic Fungi Metarhizium sp. Local In Several Districts In East Kalimantan
Ni’matuljannah Akhsan 1 , Surya Sila 1 , Sofian 1 , E. A. Syaifudin 1
Article Submitted : 23-12-2021 Article Accepted : 15-06-2021
1) Laboratorium Hama dan Penyakit Tumbuhan Fakultas Pertanian Unmul
*) Alamat korespondensi: Fakutas Pertanian Universitas Mulawarman Jl. Pasir Balengkong Kampus Gn Kelua Samarinda. Kalimantan Timur Email; nimatuljannah@faperta.unmul.ac.id

## ABSTRACT
Entomopathogenic  fungi  are  microorganisms  that  can  be  used  as  bioinsecticides.  The  effectiveness  of  fungi  is influenced  by  the  surrounding  environment  so  that  it  is  necessary  to  explore  specific  local  entomopathogenic  fungi. Larva of Tenebrio molitor Linn was used as the insect bait, to isolate the fungi. The Soil  for trapping entomopathogenic fungi was taken by purposive sampling from the field of staple food, horticulture, and estate crops in six districts of the East Kalimantan. The observation showed that ten isolates of Metarhizium sp. were very high pathogenicity, five isolates were moderates, and three isolates were very low. The characteristics of Metarhizium sp. isolates grown in GYA medium were 0.25 cm per day of colony growth, initially white colonies, 3-7 days started green from the edges, 14 days the entire colony was dark green. Hyaline hyphae, insulated, rigid conidiophoreser, cylindrical and  single-celled conidia. The T. molitor larvae attacked by Metarhizium sp. were stiff in three days after application (daa), grew white hyphae in 6 daa, and grew dark green colony in 9 daa.
Keyword s: Entomopathogenic fungi, Metarhizium, East Kalimantan isolate

## PENDAHULUAN
Entomopatogen  merupakan  mikroorganisme yang  dapat  digunakan  sebagai  bioinsektisida. Pemanfaatan  bioinsektisida  sebagai  pengendali hama  tanaman  sangat  ramah  lingkungan,  karena tidak  memberikan  dampak  negatif  terhadap ekosistem  maupun  ekonomi  petani.  Kelompok entomopatogen yang telah dikembangkan, dimanfaatkan  dan  memberikan  hasil  yang  positif, diantaranya  adalah  jamur,  bakteri  dan  nematoda. Diantara mikroorganisme tersebut kelompok jamur yang paling sering dimanfaatkan sebagai entomopatogen  (Junianto,  2000;  Sudarmadji  dan Gunawan, 1994). Pada tanaman pangan, pemanfaatan  cendawan  entomopatogen  untuk pengendalian  hama  masih  menemui  berbagai kendala,  antara  lain  kondisi  lingkungan  mikro yang  kurang  kondusif  bagi  perkembangbiakan mikroorganisme tersebut (Steinkraus dan Slaymaker  1994;  Glare  dkk.  1995;  Lacey  dan Goettel  1995;  Oduor  dkk.  1996  dalam  (Prayoga, 2006).
Setiap jenis cendawan entomopatogen mempunyai  inang  yang spesifik  dan  dapat ditemukan  bersama  hama  yang  menjadi  inangnya. Melalui upaya pengamatan hama yang  menyerang tanaman,  secara  tidak  langsung  dapa t  diketahui pula  jenis  cendawan  entomopatogen  yang  sesuai untuk tindakan pengendalian. Cendawan Metarhizium  anisopliae misalnya,  diketahui  dapat menginfeksi  beberapa  jenis  serangga  dari  ordo
Coleoptera,  Lepidoptera,  Homoptera,  Hemiptera, dan Isoptera (Kanga et al., 2003; Luz et al., 1998) Namun M.  anisopliae paling  efektif  bila digunakan  untuk  mengendalikan  hama  dari  ordo Isoptera.  Hal  ini  karena  adanya  hubungan  perilaku antara serangga inang dengan keefektifan cendawanentomopatogen. Fenomena tersebut ditunjukkan  oleh  hasil  uji  infeksi  ulang.  Dari beberapa  jenis  cendawan  entomopatogen  yang diperoleh  dari  ulat  grayak Spodoptera  litura dan Helicoverpa armigera (Herlinda dkk., 2008).
Pertanian  di  Kalimantan  Timur  tidak  luput  dari serangan  hama  contohnya  ulat  gerayak  ( Spodoptera litura) yang  mempunyai  sifat  polipage.  Hama  ini dapat  menyerang  tanaman  pangan,  hortikultura maupun  perkebunan.  Selama  ini  pengendalian  masih menggunakan  insektisida  sintetik,  yang  tentunya memberikan  dampak  negatif  terhadap  ekosistem  dan terjadinya  resistensi  hama  terhadap  insektisida.  Baru sebagian kecil petani yang menggunakan entomopatogen  dalam  mengendalikan  hama  dengan mendatangkan  dari  daerah  pulau  Jawa.  Hal  ini dikarenakan  ketersediaan  produk  entomopatogen belum ada. Upaya untuk mengeksplorasi jamur-jamur entomopatogen  lokal  di  Kalimantan  Timur  belum dilakukan  dan  menjadi  faktor  penting  untuk dikembangkan. Ketersediaan isolat cendawan, metode  perbanyakan,  ketersediaan  formulasi  di pasaran,  dan  teknis  aplikasi  yang  tidak  mudah, menjadi faktor pembatas penyebab kurang berkembangnya  cendawan M . anisopliae sebagai
bioinsektisida yang kompetitif. Penggunaan entomopatogen terkendala karena harus mendatangkan dari pulau Jawa dengan resiko isolat yang didatangkan sudah mendekati masa kadaluarsa,  akan  terjadi  perubahan  virulensi  dari cendawan  tersebut  karena  perlu  waktu  relatif  lama untuk  sampai  ke  petani.  Selain  itu  ketersediaannya sangat terbatas, sehingga petani sulit mendapatkannya. Entomopatogen  merupakan  mikroorganisme
yang habitatnya sangat dipengaruhi oleh lingkungan di sekitarnya, tentunya akan berpengaruh kepada efektivitasnya, sehingga perlu dilakukan
eksplorasi mikroorganisme entomopatogen  lokal  spesifik.  Penelitian  ini direncanakan  dalam  tiga  tahun.  Tahun  pertama adalah  mengeksplorasi  cendawan  entomopatogen dengan  melakukan  isolasi,  karakterisasi  dan identifikasi cendawan Metarhizium sp, yang ada di lahan  pangan,  hortikultura  dan  perkebunan  pada beberapa kabupaten di Kalimantan Timur.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  adalah  tanah  pada lahan tanaman pangan, hortikultura dan
perkebunan untuk mengeksplor cendawan Metarhizium sp.  Larva Tenebrio  molitor Linn. (ulat  hongkong)  untuk  memerangkap  cendawan Metarhizium sp.. Media glucose yeast agar (GYA) dan Media Potato dextrose agar (PDA),
Streptomicin  dan  Tetrasiklin  untuk  isolasi  dan pengayaan  cendawan Metarhizium sp..  Alkohol 70%,  sepritus,  pewarna  methelin  blue.  Alat  yang digunakan  adalah  cangkul,  kantong  plastik, ayakan,  baki  plastic,  toples  plastik  dengan diameter  10  cm  dan  tinggi  20  cm.  Oven, outoclave, erlenmeyer, gelas beaker, tabung reaksi, pisau,panci  dan  alat  pemanas,  laminar  airflow, Jarum  ose,  objek  gelas  dan  cover  gelas, mikroskop,  Opti-lab.  Penelitian  ini  dilakukan dalam  2  metode  yaitu;  1.  Metode  diskriptif  yang merupakan  hasil  survei  dan  eksplorasi  cendawan entomopatogen. 2. Metode  eksperimental  yaitu uji patogenesitas  invitro  yang  dirancang  dalam rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  18 perlakuan (isolate Metarhizium) dan 5 ulangan.

## Survei dan Eksplorasi
Tanah  yang  digunakan  untuk  memerangkap jamur  entomopatogen  diambil  secara  purposive sampling  di  6  Kabupaten/kota  di  Kalimantan Timur.  Tanah  diambil  dari  pertanaman  tanaman pangan,  hortikutura  dan  perkebunan.  Tanah  digali sedalam  ±20  cm  kemudian  diambil  sebanyak  1000 g,  dimasukan  ke  dalam  kantung  plastik,  dibawa  ke laboratorium.  Tanah  kemudian  diayak  dengan ayakan  600  mesh.  Sebanyak  500  g  tanah  tersebut dimasukkan  ke  dalam  toples  plastik.  Isolasi cendawan  entomopatogen  menggunakan  umpan
serangga  ( insect  bait  method )  (Hasyim  dan  Azwana, 2003). Serangga umpan yang digunakan ialah larva T. molitor Linn.  (ulat  hongkong).Dua  puluh  ekor  larva T.  molitor dimasukan  ke  dalam  toples  plastik tersebut.  ditutup  dengan  kain  puring  hitam.  Kegiatan ini  diulang  5  kali. Tiga  hari  kemudian  ulat  diperiksa, ulat yang mati atau terinfeksi cendawan diisolasi.
Isolasi dan Identifikasi .
Larva T.molitor yang  terinfeksi  jamur,  dicuci dengan air steril. Permukaan larva disterilkan dengan alkohol  70%  selama  1  menit  dan  dibilas  lagi  dengan air  steril,  selanjutnya  dikeringanginkan  di  atas  kertas tissue  steril.  Serangga  tersebut  diletakkan  dalam cawan  petri  (diameter  9  cm)  berisi  tissue  lembab steril dan diinkubasikan untuk merangsang tumbuhnya  hifa.  Larva T.  molitor berhifa  diletakkan di  media  GYA  ( Glucose  Yeast  Agar )  secara  aseptik. Setelah  berbagai  koloni  hifa  berkembang  maka dilakukan  pemurnian  pada  media  GYA  dan selanjutnya  diinkubasikan  selama  tujuh  hari  pada suhu  kamar.  Cendawan  tersebut  lalu  diidentifikasi berdasarkan bentuk morfologinya, identifikasi menggunakan  buku  identifikasi  (Barnett  and  Hunter 1972).

## Seleksi Isolat Cendawan Metarhizium
Cendawan entomopatogen yang telah ditemukan melalui  eksplorasi,  diisolasi  dan  diidentifikasi  serta seleksi.  Hanya  isolat-isolat  cendawan Metarhizium dari  berbagai  lokasi  sampel  yang  dilanjutkan  dengan pengujian. Setelah biakan isolat cendawan Metarhizium tersedia,  lalu  dilanjutkan  dengan  uji patogenesitas.  Uji  patogenesitas  isolat  cendawan Metarhizium ini  dilakukan  dengan  cara  sebagai berikut:  100  g  Tanah  dan  bahan  organik  steril dicampur dengan perbandingan 1:1 dan 20  ekor larva T.  molitor dimasukkan  ke  dalam  toples  plastik, digoyang-goyang supaya tercampur merata. Selanjutnya  1  ml  suspensi  cendawan Metarhizium dengan kerapatan konidia 1x10 8 ml -1 diinokulasi pada toples  plastik  dan  ditutup  dengan  kain  puring  hitam. Hal  yang  sama  diulang  sebanyak  lima  kali  untuk setiap  isolat Metarhizium .  Pengamatan  dilakukan pada 6, 9 dan 12 hari setelah aplikasi. Dicatat jumlah larva yang mati, berhifa (warna putih) dan berkonidia (warna  hijau).  Isolat  cendawan Metarhizium yang direkomendasikan  untuk  uji  efektivitas  pada  hama adalah  isolat  yang  menunjukkan  paling  tinggi kematian  dan  terbentuknya  konidia  cendawan Metarhizium pada  larva T.  molitor (Herlinda  dkk., 2008).

## Analisis Data
Isolat  jamur  entomopatogen  yang  ditemukan dianalisis  secara  diskriptif.  Karakterisasi  morfologi larva terserang, berhifa, berspora, koloni pada media GYA  dan  spora  ditampilkan  dalam  bentuk  gambar. Data jumlah larva yang mati, dianalisis
menggunakan  Analisis  Keragaman  ( Analysis  of Variance ).  Apabila    berbeda  nyata  pada  taraf  5% maka akan  dengan uji BNT (Beda Nyata Terkecil) pada  taraf  5%.  Larva  yang  berhifa  dan  yang berkonidia  cendawan  Metarhizium  dianalisis dengan  persentase  antara  larva  yang  berhifa  dan berkonidia  dengan  jumlah  larva  yang  yang  diberi perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Diskripsi Lokasi Pengambilan Sampel Tanah
Pengambilan sampel tanah dilakukan  di lahan tanaman  pangan  (diwakili  tanaman  padi,  jagung dan  singkong),  hortikultura  (diwakili  tanaman cabai,  sawi,  papaya,  terong  dan  buah  naga)  dan perkebunan  (diwakili  tanaman  kelapa  sawit  dan karet).  Lokasi  pengambilan  sampel  di  enam kabupaten/kota  yaitu:  Kota  Samarinda,  Kabupaten Kutai  Kartanegara,  Kutai  Timur,  Penajam  Paser Utara,  Paser  dan  Berau.  Lahan  sampel  umumnya merupakan  lahan  yang  sudah  digarap  bertahun tahun,  yang  telah  perlakuan  pupuk  anorganik  dan organik,  umum  menggunakan  pestisida  dalam pengendalian  organisme  pengganggu  tanaman. Iklim  setempat  bervariasi  dengan  suhu  udara berkisar  antara  22-30 0 C,  kecuali  di    Kabupaten Kutai  Timur  suhu  udara  34-36 0 C.  Umumnya Kelembaban udara berkisar antara 86-96%, kecuali di Kabupaten Kutai Timur 77-86%.

## Diskripsi Isolat Cendawan Metarhizium
Semua  sampel  tanah  yang  diambil  dari  lahan tanaman  pangan,  hortikultura  dan  perkebunan, ditemukan Metarhizium .  Menurut  Sapieha  dkk. (2005),  keberadaan  cendawan  entomopatogen didalam  tanah  sangat  tergantung  pada  teknik budidaya  dan  penggunaan  pestisida.  Pengaruh langsung pestisida terhadap aspek-aspek mikrobiologi  salah  satunya  adalah  perubahan aspek  kuantitatif  beberapa  mikroorganisme  dalam
tanah yang mengganggu keseimbangan mikrobiologis  (Rao,  2010.  Apabila  dilihat  dari kondisi  habitat  lahan  sampel  maka,  keberadaan Metarhizium kemungkinan  dipengaruhi  dari  jenis tanaman, pemupukan organik maupun anorganik dan pengendalian  OPT  dengan  pestisida.  Kebaradaan cendawan  ini  dilahan,  juga  karena  didukung  oleh adanya sumber makanan, suhu udara yang mendukung  dan  kelembapan  udara  yang  cukup tinggi. Larva yang terinfeksi Metarhizium
memperlihatkan  bentuknya  kaku,  berwarna  coklat terang.  Pada  3  hari  setelah  inkubasi  di  kertas  tissue steril, ditubuh larva akan keluar  hifa  berwarna putih. Larva yang terlihat kaku diletakkan  di media GYA, 3 hari kemudian akan tumbuh hifa cendawan dari tubuh larva yang meluas ke media GYA. Hifa yang tumbuh dimurnikan  kembali  untuk  dipisahkan  dari  cendawan lainnya.  Koloni  cendawan  Metarhizium  pada  media GYA  diawali  dengan  berkembangnya  hifa  berwarna putih, koloni meluas dengan kecepatan sangat lambat yaitu 0,25 cm per hari dan perkembangan luas koloni akan  terhenti  pada  umur  koloni  7  hari.  Pada  bagian tengah  koloni  agak  menonjol  sedangkan  bagian  tepi koloni  akan  terjadi  sporulasi  dengan  spora  berwarna hijau  gelap.  Pada  pertumbuhan  cendawan  di  cawan petri  yang  lain  koloni  kecil-kecil,  banyak  dan tersebar.  Ciri  khas  koloni  sama  yaitu  diawali  dengan warna  putih  dan  setelah  umur  koloni  7  hari  dibagian tepi  akan  terjadi  sporulasi.  Pada  isolat  lainnya, pertumbuhan  Metarhizium  di  media  GYA  di  awali dengan  warna  putih  dan  berkembang  seperti  kerak berwarna  kuning,  kemudian  bagian  tepinya  juga terjadi  sporulasi.  Pertumbuhan  koloni  dimulai  dari titik  tengah  berwarna  putih  hasil  perkecambahan konidia, kemudian meluas secara radial dengan empat zona  warna,  yaitu  bagian  tengah  berwarna  putih, hijau  gelap,  putih  dan  terakhir  hijau  gelap.  Pada  usia biakan  14  hsa  maka,  seluruh  permukaan  koloni  akan berwarna hijau gelap.
Pada  gambar  berikut  ini  adalah  berbagai  gambaran koloni isolat Metarhizium di media GYA.
Gambar 2. Bentuk Konidia Metarhizium Perbesaran 400x Pengamatan mikroskopis cendawan Metarhizium sp.,  hifa  bersekat,  bentuk  konidia silendris,  bersel  satu,  tersusun  dalam  rantaian  dan jumlahnya  sangat  banyak.  Bentuk  konidia  relatif sama  antar  isolat  (Gambar  2),  namun  demikian kerapatan spora pada media biakan GYA di cawan petri  berbeda-beda  antar  18  isolat  Metarhizium lokal Kaltim (Tabel 1). Hifa Metarhizium bersekat, spora  merupakan  sel  tunggal  dengan  bentuk lonjong  silendris,  membentuk  rantai,  konidiofor kaku  bersekat.  Hal  tersebut  sesuai  dengan pernyataan  Barnett  &  Hunter  (1972)  yang menyebutkan  bahwa
Metarhizium  ber  sel  satu,  hialin  dan    berbentuk bulat  silender  (Trizelia  et  al.,  2015;  Barnett  and Hunter,  1972).  Dari  18  isolat  yang  ditemukan, bentuk spora relatif sama, hanya ada beberapa isolat yang  terlihat  lebih  gemuk  seperti  pada  isolat  AH cabai,  AK  sawit,  BH  terong,  BK  sawit,  CP  jagung dan FH cabai, sedangkan yang lainnya terlihat lebih langsing.  Kerapatan  spora  Metarhizium  sangat bervariasi,  5  isolat  (FK  sawit,  AP  singkong,  BP Jagung, EP singkong dan  AH cabai ) mencapai 109 dan  1  isolat  10 7 (CK  sawit)  dan  12  isolat  lainnya 10 8 .
Tabel 1. Kerapatan Spora 18 isolat Metarhizium sp. Lokal Kalimantan Timur.
Lokasi Kerapatan Spora Lokasi Kerapatan spora Lokasi Kerapatan spora 1.(AP)Singkong 2,3 x 10 9 7.(CP)Jagung 3,1 x 10 8 13.(EP)Singkong 1,3 x 10^9 2.(AH)Cabai 1,2 x 10 9 8.(CH)Pepaya 8,7 x 10 8 14.(EH)Sawi 5,2 x 10^8 3.(AK)Sawit 7,9 x 10 8 9.(CK)Sawit 7,4 x 10 7 15.(EK)Karet 6,1 x 10^8 4.(BP)Jagung 1,6 x 10 9 10.(DP)Jagung 4,9 x 10 8 16.(FP)Padi 7,4 x 10^8 5.(BH)Terong 5,6 x 10 8 11.(DH)Bh Naga 6 x 10 8 17.(FH)Cabai 3,5 x 10^8 6.(BK)Sawit 8,2 x 10 8 12.(DK)Sawit 6,9 x 10 8 18.(FK)Sawit 2,7 x 10^9
Keterangan: Samarinda (A), Kutai Kartanegara (B), Kutai Timur (C), Penajam Paser Utara (D), Paser (E) dan Berau (F).
Lahan tanaman pangan (P), lahan tanaman hortikultura (H), lahan tanaman perkebunan (K).

## Patogenesitas Metarhizium
Data  persentase  kematian  ulat  pada  uji patogenesitas  ditransformasi  ke  Arcsin√x.  Hasil analisis keragaman dari uji patogenesitas cendawan Metarhizium dari 18 isolat pada ulat uji T.  molitor, persentase  kematian  larva  berbeda sangat  nyata  antar  isolat.  Rata-rata  persentase kematian  ulat  uji  dapat  dilihat  pada  tabel  berikut ini.  Dari  hasil  uji  BNT  5%  terlihat  bahwa persentase  kematian  ulat  uji  tertinggi  akibat aplikasi Metarhizium pada pengamatan pertama (6 hsa) adalah pada perlakuan isolat EH Sawi (97%), dan tidak berbeda nyata dengan isolat DH Bh naga dan  DK  sawit  (93%  dan  94%).  Pada  pengamatan kedua  (9  hsa)  persentase  kematian  tertinggi  pada perlakuan isolat DH bh naga (97 %) dan DK sawit
(96%),  dan  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan isolat  BP  jagung  (93%),  AP  singkong  (91%),  ,  FP padi  (91%),  EK  karet  (91%),  FK  sawit  (89%),  EH sawit  (93%)  dan  EP  singkong  (84%).  Persentase kematian  ulat  uji  tertinggi  pada  pengamatan  ketiga (12 hsa) adalah perlakuan  isolat EH  sawi (99%)  dan tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  isolat  DH  bh naga (97%), DK sawit (97%), BP jagung (93%),  FK sawit  (94%),  AP  singkong  (92%),  FP  padi  (91%), EK karet (91%) dan BK sawit (90%).
Rata-rata persentase larva berhifa  dan berspora pada  setiap  pengamatan  umumnya  berbanding  lurus dengan  persentase  kematian  larva.  Pada  hari  3  hsa beberapa  ulat  uji  sudah  mengalami  kematian,  tetapi belum  terlihat  pertumbuhan  hifa  pada _ tubuh _ larva.
Tabel 2. Rata-rata Persentase Kematian Ulat Uji Setelah Aplikasi 18 Isolat Metarhizium sp. Lokal pada 6,9 dan 12 Hari Setelah Aplikasi (hsa)
Persentase kematian ulat uji (%) pada hari ke Isolat (Lahan) 6 has 9 has 12 has data asli data transf. data asli data transf. data asli data transf. 1.(AP)Singkong 86 68,59 de 91 74,70 fg 92 75,80 cdef 2.(AH)Cabai 51 48,69 bc 61 54,55 c 78 64,86 c 3.(AK)Sawit 75 63,35 d 79 65,78 cdef 83 66,43 cd 4.(BP)Jagung 75 61,48 d 93 78,38 fg 93 78,38 def 5.(BH)Terong 35 38,80 b 69 56,82 cd 81 64,64 cd 6.(BK)Sawit 63 52,74 bc 71 58,42 cde 90 75,54 cdef 7.(CP)Jagung 15 22,25 a 37 37,35 a 46 42,66 b 8.(CH)Pepaya 15 25,50 a 41 39,51 b 59 50,27 b 9.(CK)Sawit 0 28,64 a 1 25,49 a 9 20,58 a 10.(DP)Jagung 17 23,53 a 35 35,00 a 81 66,41 cd 11.(DH)Bh Naga 96 81,11 ef 97 83,70 g 97 83,70 ef 12.(DK)Sawit 92 77,70 ef 96 81,11 g 97 83,70 ef 13.(EP)Singkong 82 67,99 de 84 69,96 defg 88 74,74 cdef 14.(EH)Sawi 97 83,70 f 93 78,27 fg 99 87,38 f 15.(EK)Karet 62 52,65 bc 91 72,87 efg 91 72,87 cdef 16.(FP)Padi 71 58,02 c 91 74,35 fg 91 74,35 cdef 17.(FH)Cabai 51 45,03 bc 59 53,29 bc 74 65,97 c 18.(FK)Sawit 86 68,59 de 89 70,90 defg 94 77,43 cdef
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama, menyatakan tidak berbeda nyata pada uji BNT taraf 5 % (BNT 6 hsa = 18,89; 9 hsa = 14,84; 12 hsa = 13,12).
Pada  6  hsa  terlihat  banyak  larva  yang  sudah berhifa,  pada  9  hsa  ulat  yang  berhifa  akan bertambah  dan  beberapa  menurun  pada  12  hsa
karena  sudah  mengalami  sporulasi,  lebih  jelasnya dapat dilihat pada Gambar 3.
(3 has) (6 has) (9 has)
Gambar  3.  Kondisi  Larva  Setelah  Diaplikasi  Metarhizium.  Larva  mati,  Kaku,  Warna Coklat  Cerah  (3  has),  Larva  Berhifa,  Warna  Putih  (6  hsa)  dan  Larva Berspora, hijau Gelap (9 hsa).
Larva yang berspora pada 6 hsa sedikit sekali, hanya  1  isolat  (2%),  namun  terus  bertambah  yang berspora  pada  9  dan  12  hsa. Pada Tabel  di  bawah ini  adalah  persentase  larva  yang  berhifa  dan berspora  pada  pengamatan  kesatu,  kedua  dan ketiga  (6,  9  dan  12  hsa).  Hasil  uji  patogenesitas Metarhizium terhadap  ulat  uji T.monilitor terlihat bahwa  kematian  larva  9  -    99%     pada     12    hsa. Isolat  yang    terbaik  dari  pengamatan  6,  9  dan  12 hsa  adalah  adalah  isolat  EH  sawi,  DK  sawit  dan DH  buah  naga.  Isolat  lainnya  yang  tidak  berbeda nyata  adalah  BP  jagung,  FK  sawit,  FP  padi,  BK sawit,  EK  karet  dan  AP  singkong.  Selain menyebabkan  kematian  larva,  Metarhiziun  juga dapat  berkembang  menghasilkan  hifa  dan  konidia pada  larva  yang  terinfeksi.  Pada  pengamatan  12 hsa  terlihat  isolat-isolat  dengan  kematian  larva yang  tinggi  juga  menghasilkan  persentase  konidia
yang tinggi pula. Persentase mulai yang tertinggi ulat yang  membentuk  konidia  adalah  dari  isolat  DH (94%),  DK  (93%),BP  (73%),  EH  (73%),  AP  (72%), EK (71%), AK (71%), FK (71%), EF (68%) dan AH (50%)  dimana  tingginya  persentase  larva  berkonidia seiring  dengan  persentase  kematian - ulat.  Perbedaan persentase  kematian  ulat  uji  yang  sangat  nyata diduga  karena  daya  patogenitas  berbeda-beda  dan adanya  perbedaan  species Metarhizium .  Adapun klasifikasi Metarhizium dalam  sistematika  jamur, menurut  Alexopoulus  dkk.  (1996)  adalah  sebagai berikut; Kingdom: Fungi; Divisio: Amastigomycotina;  Classis:  Deuteromycetes;  Ordo: Moniliales; Famili: Moniliaceae; Genera: Metarhizium; Species: Metarhizium sp (
Alexopoulos et al. 1996).
Genus Metarhizium awalnya  terdiri  dari  empat varietas yaitu M. anisopliae, M. taii, M. pingshaense,
Tabel 3. Rata-rata Persentase Ulat Uji yang Berhifa dan Berspora Setelah Aplikasi 18 Isolat Metarhizium sp. Lokal pada pengamatan 6, 9 dan12 hsa (%).
Persentase kematian larva pada hari ke Isolat (Lahan) Larva berhifa Larva berspora 6 has 9 has 12 has 6 has 9 has 12 has 1.(AP)Singkong 40 16 13 0 72 72 2.(AH)Cabai 6 32 24 0 6 50 3.(AK)Sawit 4 3 7 0 24 71 4.(BP)Jagung 40 35 9 0 54 79 5.(BH)Terong 4 34 23 0 6 33 6.(BK)Sawit 34 32 43 2 16 17 7.(CP)Jagung 2 7 15 0 0 8 8.(CH)Pepaya 4 20 6 0 2 3 9.(CK)Sawit 0 1 9 0 0 0 10.(DP)Jagung 0 5 8 0 3 13 11.(DH)Bh Naga 88 2 2 0 94 94 12.(DK)Sawit 84 0 0 0 93 93 13.(EP)Singkong 48 60 21 0 15 68 14.(EH)Sawi 20 42 3 0 27 73 15.(EK)Karet 21 44 14 0 38 71 16.(FP)Padi 10 43 40 0 4 7 17.(FH)Cabai 0 4 5 0 1 1 18.(FK)Sawit 10 25 3 0 52 71
dan M.  guizhouense (  Kimberly  and  Seow, 2017),namun diklasifikasi ulang  oleh Bischoff et al (2009)  menjadi  9  spesies,  yaitu M.  anisopliae,  M. acridum,  M.  guizhouense,  M.  pingshaense,  M. lepidiotae,  M.    majus,  M.  robertsii,  M.  brunneum, dan M.  globosum ( Bischoff  et  al.,  2008) .  Hasil monitoring  di  perkebunan  tebu  di  Brazilia  yang mengisolasi  Metarhizium  dari  akar,  tanah  dan serangga,    teridentifikasi  4    species    yaitu M. robertsii,  M.  anisopliae dan M.  brunneum, Metarhizium sp.  Pada  tanah  ditemukan  60% M. robertsii , 21% M. anisopliae , 16% M. brunneum. 3 % Metarhizium  sp. Pada  Akar  ditemukan  57% M. anisopliae dan 43%  M.  brunneum. Pada  serangga ditemukan  100% M.  anisopliae ( Natasha  et  al., 2019) . Hal ini menggambarkan bahwa Metarhizium  yang  berhasil  diisolasi  di  Kalimantan Timur  pada  saat  ini  belum  dapat  dipastikan  dari species M.  anisopliae, tetapi  penelitian  tentang M. anisopliae yang  paling  banyak  dilakukan  karena cendawan  species  inilah  yang  pertama  ditemukan sebagai entomopatogen.
Proses  penetrasi M.  anisopliae pada  serangga hama  melibatkan  sekresi  protein  seperti  subtilisin, tripsin,  chymotrypsins,  dan  carboxypeptidases, yang  mencerna  prokutikula  yang  kaya  protein  dari arthropoda  (Wang  et  al.,  2008).  Jenis  dan  jumlah protein  yang  diproduksi  oleh M.  anisopliae ditemukan  spesifik  untuk  setiap  inang,  hal  ini menjelaskan  bahwa M.  anisopliae mempunyai kemampuan  menginfeksi  yang  luas  terhadap  inang yang  berbeda.  Contohnya  tripsins  adalah  protein yang  dihasilkan  pada  inang  tertentu  seperti  kecoa dan kumbang (Santi et al., 2010).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  eksplorasi  dan  karakterisasi morfologi cendawan entomopatogen strain Metarhizium sp.  lokal  di  6  kabupaten/kota  pada wilayah  Kalimantan  Timur,  dapat  disimpulkan sebagai berikut:
1. Sebanyak  18  sampel  yang  diteliti,  ditemukan seluruh  sampel  terdapat Metarhizium spp. Sepuluh isolat memiliki daya
patogenesitasnya  sangat  tinggi,  5  isolat sedang dan 3 isolat sangat rendah.
2. Pertumbuhan koloni Metarhizium pada media GYA  0,25  cm  per  hari,  awalnya  koloni berwarna  putih  dan  umur  3-7  hari  berwarna hijau dimulai dari tepi  dan pada  umur 14 hari seluruh  koloni  berwarna  hijau  gelap.  Secara mikroskopis  hifa  hialin,  bersekat,  konidiofor bersekat,  konidia  berbentuk  silindris,  bersel tunggal  berwarna  hijau  gelap.  Hasil  uji patogenitas  terlihat  larva  yang  terserang Metarhizium awalnya  kaku  pada  3  hari setelah aplikasi, selanjutnya berhifa pada hari ke 6 dan berwarna hijau gelap pada hari ke 9.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada  Dekan dan  Wakil-Wakil  Dekan  Fakultas  Pertanian  yang memberi kesempatan kepada kami untuk mendapat dana  hibah  Riset  tahun  2020.  Terima  kasih  juga kepada seluruh dosen dan para mahasiswa/i bidang HPT yang membantu penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alexopoulos,C.J.; C.W.Mims M.M. ; Blackwell.
1996. Introductory Mycology , 4th Edition.
Copyright © 2000-2019 by John Wiley & Sons, Inc. 880 p.
Barnett  HL  &  Hunter  BB.  1972 .  Illustrated Generaof  Imperfect  Fungi .  Third  Edition. Burgess  Publishing  Company.  Minneapolis, Minnesota.
Bischoff,  J.F.;  Rehner,  S.A.;  Humber,  R.A.  2009. A  multilocus  phylogeny  of  the Metarhizium anisopliae lineage. Mycologia . 101: 512–530.
Hasyim  A  &  Azwana.  2003.  Patogenisitas  isolat Beauveria  bassiana Balsamo)  Vuillemin dalam mengendalikan hama penggerek bonggol pisang, Cosmopolites sordidus Germar. J. Hort. 13(2): 120-130.
Herlinda  S,  Mulyati  SI  &  Suwandi.  2008. Selection  ofisolates  of  entomopathogenic fungi  and  thebioefficacy  of  their  liquid production  against Leptocorisa  oratorius nymphs. J. Microbiol.Indones. 2(3): 141-146.
Junianto,  Y.D.  2000.  Penggunaan Beauveria
bassiana untuk pengendalian hama tanamankopi  dan  kakao.  Workshop  Nasional Pengendalian Hayati OPT Tanaman
Perkebunan,Cipayung,  15−17  Februari  2000.
Balai  Penelitian  Kopi  dan  Kakao,  Jember.  15 hlm
Kanga,  L.B.B.,  W.A. Jones,  and  R.R.  James. 2003.
Field trials using fungal pathogen,
Metarhizium  anisopliae (Deuteromyce  tes: Hyphomycetes)  to  control  the  ectoparasitic mite Varroa  destructor (Acari:  Varroidae)  in honeybee Aphis  mellifera (Hymenoptera: Apididae)  colonies. J.  Environ . Entomol . (96):1.091−1.099
Kimberly  Moon  San  Aw  and  Seow  Mun  Hue.
2017. Review Mode of Infection of Metarhizium spp.  Fungus  and  Their  Potential as  Biological  Control  Agents. J.  Fungi. 3(30): 1-20.
Luz,  C.,  M.S.  Tigano,  I.G.  Silva,  C.M.T. Cordeiro,and  S.M.  Aljanabi.  1998.  Selection of Beauveria  bassiana and Metarhizium anisopliae isolates  tocontrol Triatomainfestans. Memorias  do  instituto  Oswaldo  Cruz (93):

## 839−846
Natasha  Sant′Anna  Iwanicki,  Alessandro  Alves Pereira, Ana Beatriz Riguetti Zanardo Botelho, Janayne  Maria  Rezende,  Rafael  de  Andrade Moral,  Maria  Imaculada  Zucchi  &  Italo Delalibera Júnior. 2019. Monitoring of the feld application  of Metarhizium  anisopliae in Brazil  revealed  high  molecular  diversity  of Metarhizium spp in insects, soil and sugarcane roots. Scientific Reports . 9:4443.
Prayogo Y. 2006. Upaya Mempertahankan Keefektifan  Cendawan  Entomopatogen  untuk Mengendalikan  Hama  Tanaman  Pangan. Jurnal Litbang Pertanian 22 (2).
Rao,  N.  S.  Subba.  2010. Mikroorganisme  Tanah Dan Pertumbuhan Tanaman . Penerbit:
Universitas Indonesia. Jakarta.
Santi,  L.;  Silva,  W.O.B.;  Pinto,  A.F.M.;  Schrank,
A.;  Vainstein,  M.H.  2010.  Metarhizium anisopliae host–pathogen interaction: Differential immuno proteomics reveals proteins  involved  in  the  infection  process  of arthropods. Fungal Biol ., 114, 312–319.
Sapieha-Waszkiewicz  A.,  Marjańska-Cichoń  B.  ,
Piwowarczyk  Z.  2005.  The  occurrence  of entomopathogenic  fungi  in  the  soil  from  the plantations  of  black  currant  and  aronia. EJPAU 8(1):22.
Sudarmadji, D. dan S. Gunawan. 1994. Patogenisitas  fungi  entomopatogen Beauveria bassiana terhadap Helopeltis  antoni .  Balai Penelitian  Kopi  dan  Kakao,  Jember.  Menara Perkebunan 62(1): 11 hlm.
Trizelia,  Neldi  Armon,  Hetrys  Jailani.  2015. Keanekaragaman  cendawan  entomopatogen pada  rizosfer  berbagai  tanaman  sayuran. Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon . 1(5):998-1004.
Wang, C.; Duan, Z.; St Leger, R.J.2008. MOS1 osmosensor  of Metarhizium  anisopliae is required  for  adaptation  to  insect  host hemolymph. Eukaryot.  Cell. (7):302–309