## FORMULATION OF AVOCADO SEED AND EUCALYPTUS LEAVE AS ANTIOXIDANT HERBAL TEA

## Andi Nur Fitriani Abubakar*, Azrini Khaerah
Universitas Muhammadiyah Bulukumba, Jl. Ir. Soekarno No. 9, Ujung Bulu, Bulukumba, Sulawesi Selatan, 92513, Indonesia
*Corresponding author: Andi Nur Fitriani Abubakar ( fitrychemistry20@gmail.com )

## ARTICLE HISTORY
Received: 8 October 2021                       Revised: 23 December 2021                      Accepted: 10 January 2022

## Abstract
Avocado  seeds  are  one  of  the  plants  that  have  high  antioxidant  content.  In  general, Indonesian people drink boiled water of avocado seed extract as herbal medicine in the form  of  tea.  However,  avocado  seeds  do  not  have  a  distinctive  aroma  so  that  other alternatives  are  needed  to  improve  the  organoleptic  properties  of  avocado  seeds, namely  the  addition  of  eucalyptus  leaves  which  are  also  reported  to  have  high antioxidant  content.  The  formulation  of  avocado  seeds  and  eucalyptus  leaves  into herbal teas that have antioxidant functions has not been reported. The purpose of this research  is  to make  herbal  tea  formulations  of  avocado  seeds  and  eucalyptus  leaves which  are  rich  in  antioxidants  and  are  preferred  by  consumers.  The  methods  used include  water  content  test,  phytochemical  screening,  antioxidant  activity  test  using DPPH  method  and  organoleptic  test  using  hedonic  method.  The  water  content  value obtained  indicated  that  the  avocado  seed  simplicia  and  eucalyptus  leaf  used  met  the requirements  as  research  raw  materials.  The  results  of  phytochemical  analysis  using hot  water  extract  showed  that  avocado  seeds  contain  phenolics,  flavonoids,  tannins, saponins  and  alkaloids,  while  eucalyptus  leaves  contain  phenolics,  flavonoids,  and tannins.  The  formulation  of  avocado  seeds  and eucalyptus  leaves  with  avocado  seed treatment  70%  :  eucalyptus  leaf  30%  (F4)  is  the  best  formulation  that  provides  the highest antioxidant activity of 65.29% among other herbal tea formulations. The results of the organoleptic test of the F4 formulation with the addition of honey to the color and aroma  indicators  were  in  the very  like  category,  while  the  taste  indicators  were  in the like category.
Key words: antioxidant, avocado seed, eucalyptus leave, herbal tea, organoleptic

## FORMULASI BIJI ALPUKAT DAN DAUN EUKALIPTUS SEBAGAI TEH HERBAL ANTIOKSIDAN

## Abstrak
Biji  alpukat  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang  memiliki  kandungan  antioksidan tinggi. Pada umumnya masyarakat Indonesia meminum air rebusan ekstrak biji alpukat sebagai  obat  herbal  dalam  bentuk  teh.  Namun  biji  alpukat  tidak  memiliki  aroma  khas sehingga  diperlukan  alternatif  lain  untuk  memperbaiki  sifat  organoleptik  biji  alpukat,
yaitu  penambahan  daun  eukaliptus  yang  juga  dilaporkan  memiliki  kandungan antioksidan tinggi. Formulasi biji alpukat dan daun eukaliptus menjadi teh herbal yang memiliki  fungsi  antioksidan  masih  belum  dilaporkan.  Tujuan  penelitian  ini  untuk membuat  teh  herbal  formulasi  biji  alpukat  dan daun  eukaliptus  yang  kaya  antioksidan dan  disukai  oleh  konsumen.  Metode  yang  digunakan  meliputi  uji  kadar  air,  skrining fitokimia,  uji  aktivitas  antioksidan  metode  DPPH dan  uji  organoleptik  metode  hedonik. Nilai  kadar  air  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  simplisia  biji  alpukat  dan  daun eukaliptus  yang  digunakan  memenuhi  syarat  sebagai  bahan  baku  penelitian.  Hasil analisis  fitokimia  menggunakan  ekstrak  air  panas  menunjukkan  biji  alpukat mengandung fenolik, flavonoid, tanin, saponin dan alkaloid sedangkan daun eukaliptus mengandung  fenolik,  flavonoid,  dan  tanin.  Formulasi  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus dengan  perlakuan  biji  alpukat  70%  :  daun  eukaliptus  30%  (F4)  merupakan  formulasi terbaik  yang  memberikan  aktivitas  antioksidan  tertinggi  sebesar  65,29%  diantara formulasi  teh  herbal  lainnya.  Hasil  uji  organoleptik  formulasi  F4  dengan  penambahan madu terhadap indikator warna dan aroma termasuk kategori sangat suka sedangkan indikator rasa termasuk kategori suka.
Kata kunci: antioksidan, biji alpukat, daun eukaliptus, organoleptik, teh herbal

## Pendahuluan
Salah  satu  penyebab  beragam  penyakit  degeneratif,  yaitu  adanya  radikal  bebas yang  menyebabkan  kerusakan  oksidatif.  Radikal  bebas  adalah  molekul  yang kehilangan  elektron  terluarnya  dan  dengan  cepat  bereaksi  terhadap  atom/senyawa dilingkungannya. 1 Stres oksidatif atau kerusakan oksidatif pada jaringan akan berakhir dengan  timbulnya  berbagai  penyakit  seperti  kanker,  radang  sendi,  aterosklerosis  dan penyakit  neurodegeneratif. 2 Sehingga  dibutuhkan  zat  antioksidan  yang  memiliki kemampuan  menetralkan  zat  radikal  bebas  yang  dapat  mencegah  kerusakan  sel. Salah  satu  tumbuhan  yang  mempunyai  kandungan  antioksidan  tinggi  adalah  biji alpukat.
Beberapa penelitian melaporkan biji alpukat mengandung senyawa polifenol yang memiliki aktivitas antioksidan tinggi. 3,4,5 Selain itu, aktivitas antioksidan pada ekstrak biji alpukat lebih tinggi dibandingkan pada daging buahnya menggunakan metode DPPH. 6 Pada  penelitian  lain  juga  dilaporkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  biji alpukat  secara  in  vitro  dapat  membantu  mencegah  atau  memperlambat  kemajuan berbagai oksidatif stres yang berhubungan dengan penyakit. 7
Pada  umumnya  masyarakat  Indonesia  meminum  air  rebusan  ekstrak  biji  alpukat sebagai  obat  herbal  dalam  bentuk  teh.  Namun  biji  alpukat  tidak  memiliki  aroma  khas sehingga  diperlukan  alternatif  lain  untuk  memperbaiki  sifat  organoleptik  biji  alpukat, yaitu penambahan daun eukaliptus pada teh herbal biji alpukat.
Daun  eukaliptus  merupakan  salah  satu  daun  penghasil  minyak  atsiri  yang digunakan  sebagai  obat. 8 Secara  empiris,  air  rebusan  daunnya  digunakan  sebagai inhalansia  dalam  pengobatan  radang  selaput  lendir  hidung,  diabetes,  tuberkulosis, malaria, sakit gigi, dan diare. 9 Daun eukaliptus juga memiliki aroma khas dan bersifat hangat.  Berdasarkan  beberapa  penelitian,  daun  eukaliptus  dilaporkan  memiliki kandungan antioksidan yang tinggi. 10,11,12
Kelebihan daun eukaliptus inilah yang mendorong peneliti untuk memformulasikan biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  sebagai  teh  herbal.  Penambahan  daun  eukaliptus diharapkan  dapat  meningkatkan  antioksidan  yang  terkandung  dalam  teh  herbal  biji alpukat  sehingga  penggunaannya  sebagai  antioksidan  lebih  optimal  serta  mampu
memperbaiki sifat organoleptik berupa rasa, aroma dan warna. Di masa sekarang, teh herbal  menjadi  popular  karena  aromanya,  kandungan  antioksidan  dan  aplikasinya dalam bidang kesehatan.
Pembuatan  teh  herbal  formulasi  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  sebagai antioksidan masih belum dilaporkan, sehingga dalam penelitian ini dilakukan formulasi teh  herbal  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  yang  bertujuan  menghasilkan  teh  herbal yang kaya antioksidan dan disukai oleh konsumen.

## Metode
Alat
Alat  yang  digunakan  meliputi:  spektrofotometer  UV-Vis  (PGI  T60, United Kingdom ), oven ( Memmert , Jerman), neraca analitik ( Kern ABJ, Jerman), kompor listrik (Maspion  S300,  Indonesia),  blender  (Miyako,  Indonesia),  eksikator,  cawan  porselin, plat tetes, rak tabung, dan alat-alat gelas (Pyrex).
Bahan
Bahan  yang  digunakan  meliputi:  biji  alpukat,  daun  eukaliptus, reagen DPPH (Sigma), aquades , FeCl 3 1%, NaOH 10%, H 2 SO 4 pekat, metanol, pereaksi liebermant- bourchard, pereaksi dragendorf, pereaksi wagner, pereaksi mayer, dan kantong teh.

## Prosedur

## Pengumpulan dan Determinasi Sampel
Biji  alpukat  yang  digunakan  berasal  dari  Desa  Tonasa,  Kec.  Tombolo  Pao,  Kab. Gowa Sulawesi Selatan, sedangkan daun eukaliptus berasal dari Kel. Pattapang, Kec. Tinggimoncong  Kab.  Gowa  Sulawesi  Selatan.  Sampel  yang  digunakan  dideterminasi terlebih  dahulu  di  Laboratorium  Herbarium  Bogoriens,  Bidang  Botani  Pusat  Penelitian Biologi, LIPI, Bogor.

## Pembuatan Simplisia
Proses  pembuatan  simplisia  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  meliputi  sortasi basah,  pencucian,  perajangan,  pengeringan  pada  suhu  ruang,  sortasi  kering,  dan penggilingan dengan blender. Selanjutnya simplisia disimpan dalam wadah bersih dan tertutup rapat.

## Penentuan Kadar Air
Cawan  porselin  dipanaskan  di  dalam  oven  pada  suhu  105  °C  selama  2  jam, kemudian dinginkan dalam eksikator dan ditimbang bobotnya. Sebanyak 1 g simplisia dimasukkan ke dalam cawan tersebut kemudian dipanaskan di dalam oven pada suhu 105  ºC.  Cawan  yang  berisi  sampel  didinginkan  dalam  eksikator  selama  30  menit, kemudian  ditimbang.  Pemanasan  dan  penimbangan  simplisia  dilakukan  secara berulang  hingga  diperoleh  bobot  tetap. 13 Persentase    kadar  air  dihitung  berdasarkan persamaan berikut:
Kadar air (%) = 𝐴−𝐵 𝐴 x 100%
Keterangan : A = bobot sampel basah (g) B = bobot sampel kering (g)

## Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia untuk golongan senyawa flavonoid menggunakan larutan NaOH 10%  dan  H 2 SO 4 pekat.  Fenolik  menggunakan  FeCl 3 .  Alkaloid  menggunakan  pereaksi dragendorf,  wagner,  dan  mayer.  Saponin  dengan  pengocokan.  Tanin  dengan  FeCl 3 1%, sedangkan steroid dan terpenoid dengan pereaksi libermann-burchard. 14

## Formulasi Teh Herbal Biji Alpukat dengan Penambahan Daun  Eukaliptus
Simplisia  biji  alpukat  ditimbang  dan  ditambahkan  simplisia  daun  eukaliptus. Formulasi penambahan daun eukaliptus menggunakan presentasi sebagai berikut:
Tabel 1. Komposisi Simplisia Formulasi Teh Herbal
Formulasi Simplisia yang ditambahkan Biji Alpukat Daun Eukaliptus F1 100% 0% F2 90% 10% F3 80% 20% F4 70% 30%
Tiap  formulasi  dengan  berat  3  gram  dimasukkan  dalam  kantong  teh  celup. Selanjutnya diseduh dengan air panas sebanyak 150 mL selama 5 menit.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  pada  empat  macam  formulasi  teh  herbal  biji  alpukat  dan daun  eukaliptus  menggunakan  metode  DPPH.  Sampel  diencerkan  menggunakan pelarut  metanol,  kemudian  dipipet  sebanyak  0,4  mL  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan 1 mL reagen DPPH. Selanjutnya volume larutan dicukupkan hingga 5 mL menggunakan metanol, lalu dihomogenkan dan didiamkan pada tempat gelap selama 30  menit.  Selanjutnya  diukur  absorbansinya  dengan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang  maksimum  (515  nm).  Aktivitas  antioksidan  dihitung  menggunakan persamaan berikut:
Aktivitas Antioksidan ( % ) = Absorbansi kontrol − Absorbansi sampel Absorbansi kontrol x 100

## Uji Organoleptik
Uji organoleptik menggunakan 30 orang panelis tidak terlatih dengan rentang usia 20-60  tahun.  Skala  hedonik  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  skala  9:  (1) Amat sangat tidak suka, (2) Sangat tidak suka, (3) Tidak suka, (4) Agak tidak suka, (5) Netral,  (6)  Agak  suka,  (7)  Suka,  (8)  Sangat  suka,  (9)  Amat  sangat  suka.  Panelis diminta  mengisi  angket  berupa  tabel  pernyataan  mengenai  warna,  aroma  dan  rasa terhadap  formulasi  teh  herbal  yang  memiliki  nilai  aktivitas  antioksidan  tertinggi (formulasi  terpilih),  dengan  perlakuan  penambahan  madu  25  mL  dan  tanpa penambahan  madu.  Data  yang  diperoleh  kemudian  diolah  untuk  menghitung  uji hedonik meliputi warna, aroma, dan rasa.

## Hasil

## Tabel 2. Hasil Determinasi Sampel
No.  No. Kol/Nama Daerah Jenis Suku 1. Alpukat Persea americana Mill. Lauraceae 2. Eukaliptus Eucalyptus botryoides Sm. Myrtaceae Tabel 3. Kadar Air Simplisia Biji Alpukat dan Daun Eukaliptus Sampel Kadar Air (%) Simplisia Biji Alpukat 8,63 Simplisia Daun Eukaliptus 8,14 Tabel  4. Kandungan  Fitokimia  Simplisia  Biji  Alpukat  &  Daun  Eukaliptus  Ekstrak  Air Panas Golongan Biji Alpukat Daun Eukaliptus Fenolik + + Flavonoid + + Saponin + - Tanin + + Triterpenoid/Steroid - - Alkaloid + - Keterangan : + = Hasil Positif - = Hasil Negatif Tabel 5 . Hasil Uji Antioksidan Teh Herbal Formulasi Biji Alpukat dan Daun Eukaliptus
Formula Rerata Aktivitas Antioksidan (%) F1 38,25 F2 49,72 F3 60,75 F4 65,29
Gambar 1. Teh herbal formulasi biji alpukat dan daun eukaliptus (F1-F4)
Gambar 2. Hasil uji organoleptik teh herbal formulasi biji alpukat dan daun eukaliptus (F4)

## Pembahasan

## Kadar Air
Sampel yang sudah dijadikan simplisia kemudian ditentukan kadar airnya dengan prosedur  AOAC.  Menurut  Sudarsi  dan  Rahmah, 15 pertumbuhan  kapang  dan  jasad renik dipengaruhi oleh air yang tersisa dalam simplisia. Kadar air simplisia biji alpukat diperoleh  sebesar  8,63%  dan  daun  eukaliptus  sebesar  8,14%  (Tabel  3).  Sesuai peraturan  BPOM, 16 kadar  air  obat  herbal  sebelum  digunakan  lebih  kecil  atau  sama dengan 10%. Nilai kadar air yang diperoleh menunjukkan bahwa simplisia biji alpukat dan  daun  eukaliptus  yang  digunakan  memenuhi  syarat  sebagai  bahan  baku penelitian.  Kadar  air  simplisia  biji  alpukat  dan  eukaliptus  yang  diperoleh  juga mendekati  nilai  syarat  mutu  teh  kering  dalam  kemasan  (SNI  01-3836:2013)  yaitu maksimal 8%.

## Skirining Fitokimia
Skirining  fitokimia  simplisia  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  dilakukan  secara kualitatif  menggunakan  pereaksi  spesifik  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terdapat dalam produk . Hasil analisis fitokimia menggunakan ekstrak air panas pada Tabel  4  menunjukkan  bahwa  simplisia  biji  alpukat  mengandung  fenolik,  flavonoid,
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Warna Aroma Rasa N ilai Karakteristik Formula F4 Tanpa Madu Formula F4 Dengan Penambahan Madu
tanin,  saponin  dan  alkaloid.  Sedangkan  simplisia  daun  eukaliptus  mengandung fenolik, flavonoid, dan tanin. Adanya senyawa fenolik dan flavonoid pada simplisia biji alpukat dan daun eukaliptus mengindikasikan adanya aktivitas antioksidan.

## Aktivitas Antioksidan
Pengujian antioksidan pada empat jenis formulasi teh herbal biji alpukat dan daun eukaliptus  menggunakan  metode  DPPH.  Dari  data  Tabel  5  menunjukkan  bahwa penambahan  daun  eukaliptus  menunjukkan  kenaikan  aktivitas  antioksidan.  Hasil  uji antioksidan  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  proporsi  penambahan  daun eukaliptus,  maka  aktivitas  antioksidannya  semakin  tinggi.  Hal  ini  diduga  karena adanya  senyawa  fenol  dan  flavonoid  pada  daun  eukaliptus  yang  berperan  sebagai sumber antioksidan. Aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada perlakuan teh celup F4 (biji alpukat 70% : daun eukaliptus 30%) sebesar  65,29%. Tahap selanjutnya teh celup F4 dilakukan uji organoleptik.

## Hasil Uji Organoleptik
Nilai akhir untuk ketiga indikator terhadap warna, aroma, dan rasa untuk formulasi F4  dengan  penambahan  madu  dan  tanpa  penambahan  madu  dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Pada  segi  warna  teh  herbal  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  (F4)  sangat disukai  oleh  panelis  baik  tanpa  madu  maupun  dengan  penambahan  madu.  Hal  ini disebabkan  karena  warna  seduhan teh yang  dihasilkan  adalah  warna  khas  teh  yaitu orange  kecoklatan.  Warna  teh  biji  alpukat  berubah  menjadi  orange  kecoklatan disebabkan proses oksidasi dan pengeringan biji alpukat. Pada segi aroma untuk teh herbal  formulasi  F4  tanpa  penambahan  madu  disukai  oleh  panelis  karena  adanya aroma  khas  dari  simplisia  daun  eukaliptus  sehingga  aromanya  tidak  terlalu  dominan ke  biji  alpukat.  Sedangkan  aroma  untuk  teh  herbal  formula  F4  dengan  penambahan madu  sangat  disukai  oleh  panelis  karena  selain  adanya  aroma  khas  dari  daun eukaliptus  juga  terdapat  aroma  madu  pada  teh  herbal  tersebut  sehingga  dapat memancing  selera  panelis.  Pada  segi  rasa  untuk  teh  herbal  formulasi  F4  tanpa penambahan madu agak disukai oleh panelis karena masih memiliki rasa sepat pada seduhan  teh  herbal  meskipun  ada  tambahan  rasa  khas  dari  daun  eukaliptus. Sedangkan  rasa  untuk  teh  herbal  formulasi  F4  dengan  penambahan  madu  disukai oleh  panelis  karena  memiliki  rasa  manis  dari  madu  dan  rasa  khas  dari  daun eukaliptus saat dikonsumsi. Oleh karena itu, teh herbal terbaik yang memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dan disukai konsumen adalah formulasi F4 dengan penambahan madu.

## Kesimpulan
Formulasi  biji  alpukat  dan  daun  eukaliptus  dengan  perlakuan  biji  alpukat  70%  : daun  eukaliptus  30%  (F4)  merupakan  formulasi  terbaik  yang  memberikan  aktivitas antioksidan  tertinggi  sebesar  65,29%.  Hasil  uji  organoleptik  formulasi  F4  dengan penambahan  madu  terhadap  indikator  warna  dan  aroma  termasuk  kategori  sangat suka sedangkan indikator rasa termasuk kategori suka.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  Direktorat  Jenderal  Pendidikan  Tinggi, Riset, dan Teknologi Kemfenterian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi yang telah  memberikan  dana  hibah  penelitian  dengan  surat  perjanjian  kontrak  no 070/SP2H/LT/DRPM/2021.  Selanjutnya  terima  kasih  kepada  ketua  dan  staf  LPPM Universitas Muhammadiyah Bulukumba atas dukungan dan arahannya.

## Daftar Pustaka
1. Cristina  E,  Veronica  M,  Daniela  M,  Thomas  K,  Patricia  S,  Susana  C,  et  al. Antioxidant  responses  and  cellular  adjustments  to  oxidative  stress.  Redox  Biol 2015;6:183 –97. Available from: 10.1016/j.redox.2015.07.008Get
2. Sharma  N.  Free  radicals,  antioxidants  and  disease.  Biol  Med.  2014;6(3):1 –6. Available from: 10.4172/0974-8369.1000214
3. Francisco  J,  Juan  J,  Corral  P,  Maria  P.  Avocado  seed:  modeling  extraction  of bioactive  compounds.  Ind  Crops  Prod.  2016;85:213 –20.  Available  from: 10.1016/j.indcrop.2016.03.005
4. Ginanjar  R,  I  Wayan  R,  Komang  A.  Pengaruh  jenis  pelarut  dan  rasio  bahan dengan  pelarut  terhadap  kandungan  senyawa  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan ekstrak biji alpukat (persea americana mill.). J ITEPA. 2018;7(2):22 –32.
5. Cardoso  P.  Antibacterial  activity  of  avocado  extracts  (persea  americana  mill.) against streptococcus agalactiae. Fyt J. 2016;85:218 –24.
6. Maha  I,  Wafa  S,  Eman  A,  Manal  E.  Anti-oxidant,  anti-inflammatory  and anticancer  activities  of  avocado  (persea  americana)  fruit  and  seed  extract.  J
King Saud Univ - Sci. 2019;31(4):1358 –62. Available from: 10.1016/j.jksus.2018.10.010
7. Deepti D, Ryan J, Gregory R, Joshua D. In vitro antioxidant and cancer inhibitory activity  of  a  colored  avocado  seed  extract.  Int  J  Food  Scince.  2019;2019:1 –7. Available from: https://doi.org/10.1155/2019/6509421
8. Dimas  B.  Pengaruh  kondisi  daun  dan  waktu  penyulingan  terhadap  rendemen minyak kayu putih. J Teknol Bahan Alam. 2018;2(2):124 –8.
9. Titania,  Puspa.  Aktivitas  antiviral  batang  eucalyptus  globulus  terhadap  virus hepatitis C JFH1a. J Farm. 2014;1(1).
10. Hosam  O,  Mohamed  Z,  Nader  A,  Kowiyou  Y,  Ahmed  A.  In  vitro  antibacterial, antifungal  and  antioxidant  activities  of  eucalyptus  spp.  leaf  extracts  related  to phenolic composition. Nat Prod Res. 2017;31(24). Available from:
10.1080/14786419.2017.1303698
11. Beatriz  G,  Abel  M,  Thelmo  A,  Maria  T,  Juan  M,  Gemma  E.  Green  approaches for  the  extraction  of  antioxidants  from  eucalyptus  leaves.  Ind  Crops  Prod. 2019;138(5). Available from: 10.1016/j.indcrop.2019.111473
12. Wei L, Xiaoying Z, Zeqi H, Yunjiao C, Ziyin L, Tianmen M, et al. In vitro and in vivo  antioxidant  activity  of  eucalyptus  leaf  polyphenols  extract  and  its  effect  on chicken  meat  quality  and  cecum microbiota.  Food  Res  Int.  2020;136.  Available from: 10.1016/j.foodres.2020.109302
13. Association of Official Analytical Chemists (AOAC). Official methods of analysis. 14th ed. Arlington; 2016.
14. Puspa O, Syahbanu I, Wibowo M. Uji fitokimia dan toksisitas minyak atsiri daun pala  (myristica  fragans  houtt)  dari  pulau  lemukutan.  J  Kim  Khatulistiwa. 2017;6(2):1 –6.
15. Sudarsi Y, Rahmah M. Uji aktivitas antioksidan dan sifat organoleptik teh herbal campuran daging buah pare (momordica charantia l.) dan kulit buah naga merah (hylocereus lemairei (hook.) briton & rose). J Phot. 2018;8(2):59 –66.
16. Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) RI. Persyaratan mutu herbal obat tradisional. Food Watch Sistem Pengamanan Pangan Terpadu; 2014.