## UJI POTENSI ANTIKANKER LEUKEMIA EKSTRAK METANOL DAUN Selaginella delicatula DAN Pteris vittata
Meivani Ngama 1) , Dingse Pandiangan 1) , Marhaenus j. Rumondor 1)
1) Jurusan Biologi, FMIPA, UNSRAT, Manado

## ABSTRACT
Reasearch  test  potential  anti-cancer  methanol  extract  of  the  leaves Selaginella delicatula and Pteris vittata have been done. This research aims for determine the amount of 50% inhibition growth of P388 leukemia cancer cell from  methanol extract of the leaves S. delicatula and P.  vittata and  to  know  the  potential  of  this  plants  as  the  anti-cancer.  Extract method that the use is meceration with methanol solvent to get the crude extract. The crude extract    tested  the  potential  anticancer  with  the  MTT  ( microculture tetrazolium  technique ) methods on  P388 leucemia  cancer cell. The  growth of  cells measured by  absorbance  of the cange  of  colour  MTT  with  respiratory  enzyme  of  cells  at  a  wavelengt  540  nm  at  a concentration of 0,1 µg/mL to 100 µg/mL sample extract. IC 50 is determined by the aquation between  the  absorbance  value    of  the  extract  concentration.  Data  processing  using  the originlab program 9.0 32-bit ( Originlab Corporation USA ). The result showed the methanol extract from the leaves S. delicatula has a value of inhibition is 16,76  µg/mL and methanol extract of the leaves P. vittata is 82,81 µg/mL.  Provision stating the greater the value of IC50 the  compounds  are  less  potential  as  anticancer.  With  the  results  of  this  research,  the S. delicatula potential to be developed as an anticancer leukemia than P. vittata.
Keyword: Selaginella delicatula , Pteris vittata, Leukemia P388, MTT assay, Citotoxic

## ABSTRAK
Penelitian  uji  potensi  antikanker  ekstrak  metanol  daun Selaginella  delicatula dan Pteris vittata telah  dilakukan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  berapa  besar penghambatan  pertumbuhan  sel  kanker  leukemia  P388  dari  ekstrak  metanol    daun S. delicatula dan P.  vittata untuk  mengetahui  adanya  potensi  dari  tumbuhan  ini  sebagai antikanker. Metode ekstraksi yang digunakan adalah  maserasi dengan pelarut metanol untuk mendapatkan ekstrak kasar. Kemudian ektrak kasar diuji antikankernya dengan metode MTT ( microculture tetrazolium  technique )  pada  sel  kanker  leukemia  P388.  Pertumbuhan  sel ditentukan  melalui  absorbansi  perubahan  warna  MTT  dengan  enzim  respirasi  sel  pada panjang gelombang 540 nm pada konsentrasi ektrak dari 0,1 µg/mL sampai 100 µg/mL. IC 50 ditentukan  dengan  persamaan  logaritma  antara  nilai  absorbansi  dengan  konsentrasi  ekstrak. Pengolahan  data  menggunakan  program  Originlab  9.0  32-bit  ( Originlab  Corporation  USA ). Hasil penelitian menunjukan ekstrak metanol daun S. delicatula memiliki nilai penghambatan pertumbuhan  50  %  (IC50)  sebesar  16,76  µg/mL  dan  ekstrak  metanol  daun Pterris  vittata sebesar 82,81 µg/mL.    Ketentuan  yang menyatakan  semakin besar nilai  IC 50 maka senyawa tersebut semakin tidak berpotensi sebagai antikanker. Dengan hasil uji ini maka S. delicatula berpotensi untuk dikembangkan sebagai antikanker leukemia dari pada P. vittata .
Kata Kunci: Selaginella delicatula , Pteris vittata, Leukemia P388, MTT assay,Sitotoksik

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang kaya  akan  sumber  daya  alam  dan  hasil bumi  serta  keanekaragaman  hayati,  salah satunya adalah tumbuhan paku (Pteridophyta).  Tumbuhan  ini  banyak ditemukan  di  wilayah  Indonesia,  salah satunya  di  Sulawesi  Utara.  Tumbuhan paku  dapat  ditemukan  di  hutan,  dataran tinggi, dataran rendah, pinggir jalan, kebun tanaman bahkan di daerah lembab maupun basah. Kebanyakan tumbuhan ini digunakan  sebagai  tanaman  hias,  sumber makanan  (sayur)  dan  bahan  obat-obatan tradisional.  Secara  tradisional  tumbuhan paku  digunakan  masyarakat  sebagai  obat antibakteri,  obat  malaria,  pencahar,  obat menghentikan  pendarahan,  obat  pasca persalinan,  obat  penyakit  kulit  dan antiradang  (Arini  dan  Kinho,  2008). Semakin berkembangnya ilmu pengetahuan Tumbuhan digunakan sebagai alternatif  untuk  pengobatan,  salah  satunya sebagai terapi kanker. Beberapa tumbuhan paku  sudah  diuji  potensi  antikankernya antara  lain Drymoglossum  piloselloides (Sahid et al ., 2013).
Penggunaan senyawa aktif tumbuhan obat  tradisional  pada  terapi  kanker semakin  berkembang.  Permasalahan  yang timbul  adalah  uji  hayati  yang  lama  jika menggunakan  uji  pakai  mencit  atau binatang lainnya apalagi harus menjadikan hewan  percobaan  tersebut  menderita. Kemajuan  dalam  bioteknologi  akhir-akhir ini telah memungkinkan untuk uji antikanker  dapat  dilakukan  dengan  cepat dan  tepat.  Teknologi  tersebut  disebut  juga teknik in  vitro .  Teknik in  vitro ini menggunakan  sel line yang  dapat  diuji dengan uji MTT ( microculture tetrozolium technique )  (Pandiangan,  2009)  dengan menggunakan  parameter  IC 50 sehingga
dapat  diketahui  adanya  potensi  tumbuhan sebagai antikanker (Winarno, 2011).
Beberapa  tumbuhan  paku  yang banyak  ditemukan  di  Sulawesi  Utara antara  lain S.  delicatula  dan  P.  Vittata. Hasil  penelitian  Djoronga et  al .,  (2014) penapisan alkaloid menunjukkan bahwa S. delicatula dan  Genus Pteris positif mengandung alkaloid. Alkaloid merupakan suatu  golongan  metabolit  sekunder  yang berpotensi sebagai antikanker (Pandiangan, 2009). Uji potensi antikanker ekstrak  metanol  daun S.  delicatula dan P. vitatta belum  ada  yang  melaporkan. Melalui  penelitian  ini  dengan  teknik in vitro dengan  parameter  IC 50 pada  sel kanker  Leukemia    P388  dapat  diketahui potensi  antikanker  dari  tumbuhan  paku S.delicatula dan P.  vitatta ini  untuk dikembangkan menjadi antikanker
Leukemia di masa yang akan datang.

## III.  METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Konservasi  dan  Ekologi Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi Manado untuk pembuatan ekstrak  dan  uji  sitotoksisitas  ekstrak metanol  daun P.  vittata dan S.  delicatula dilakukan di  Laboratorium Kimia Organik Bahan  Alam  ITB  Bandung.  Tempat pengambilan  sampel  di  Jln  Warembungan sampai  gunung  Mahawu  dan  jln  Budo Kec.  Wori.  Waktu  pelaksanaan  penelitian (Juni-Agustus 2015).

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  timbangan  kasar, timbangan  digital,  gelas  ukur  250  mL  dan 1000  mL,  ayakan,  blender,  stoples  kaca,
wadah ukur, labu Erlenmeyer 250 mL dan 500 mL, aluminium foil, batang pengaduk, sendok,  corong,  pisau,  gunting,  tabung eppendorf,  kain  lap,  tissu,  cawan  petri, kertas  label,  mortar  dan  pastel , kamera digital. Bahan-bahan yang digunakan yaitu daun tumbuhan S. delicatula dan P. vittata yang segar, Metanol analitis, sel Leukemia P388.

## Identifikasi di Lapangan
Sebelum pengambilan sampel, terlebih  dahulu  dilakukan  survey  tempat yang  banyak  terdapat  daun  tumbuhan S. delicatula dan P. vittata dilokasi pengambilan sampel yaitu di jln Warembungan sampai Gunung Mahau dan jln  Desa  Budo.  Untuk  pengambilan  kedua Sampel  tumbuhan  paku  di  identifikasi dengan pengenalan ciri dan tipe morfologinya  menggunakan  buku  tentang paku  seperti  Piggott  dan  Piggott  (1989), van Steenis (1988), Tjitrosoepomo (1989), Parris et  al. (2010),  Serta  dari  media internet.  Identifikasi  dilakukan  dengan membandingkan  ciri  morfologi  sampel dengan  gambar  yang  terdapat  di  buku identifikasi dan media internet.

## Pengambilan Sampel (Koleksi)
Sampel  yang  digunakan  yaitu  daun S.  vittata dan P.  vittata yang  berwarna hijau.  Daun  dari  kedua  sampel dicuci bersih, ditiriskan dan diiris kecil-kecil, lalu timbang  sebanyak  500  gram.  Hasil penimbangan  tersebut  dinyatakan  sebagai berat  basah.  daun  tersebut  selanjutnya dikeringkan selama kurang lebih 3 sampai 4  minggu.  Setelah  itu,  didinginkan kemudian  berat  kering  diukur  sehingga dapat  ditentukan  parameter  kadar  airnya. Rumus yang digunakan untuk menentukan kadar air sebagai berikut:
Kadar air  =              x 100%
X = berat basah daun (gram) Y = berat kering daun (gram) (Abdillah, 2006).

## Ekstraksi
Sampel  daun S.  velicatula dan P. vittata yang  sudah  kering  dan  ditimbang, dihaluskan  menggunakan  blender.  Hasil blender  diayak  sebanyak  2  kali  sampai didapatkan serbuk halus (simplisia).
Ekstraksi  dilakukan  dengan  maserasi. Serbuk  halus  yang  didapatkan  dari  kedua sampel ditimbang sebanyak 39.1 gram dari masing-masing  sampel.  Sampel  (serbuk halus)  direndam  dalam  stoples  kaca dengan  penambahan  500  mL  metanol analitis (pa) setiap satu sampelnya. Sampel direndam selama 4 kali 24 jam (4 hari) dan setiap  1  kali  24  jam  (1  hari)  dilakukan pengadukan  (Monoarfa,  2011).  Ekstrak disaring  dengan  penyaring  0,2  mesh. Kemudian    ekstrak  hasil  penyaringan dievaporasi  pada  suhu  45 o C  selama kurang  lebih  1  jam  dengan  Evaporator (Steroglass  Strike  300),  Hasil  evaporasi dalam  bentuk  ekstrak  yang  tersisa  sekitar 20  mL  diisikan  dalam  cawan  petri  untuk dikeringkan  pada  suhu  ruang  (24  jam). Ekstrak  yang  sudah  kering  kemudian ditimbang dan dimasukan ke dalam tabung Eppendorf.  Proses  ini  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mendapatkan  ekstrak  kasar dari  daun S.  delicatula dan P.  vittata . Ekstraksi  dilakukan  sebanyak  2  kali.
Ekstrak  kering  kemudian  digunakan  pada uji antikanker pada tahap berikutnya .

## Uji Antikanker
Uji  antikanker  secara in  vitro dilakukan  dengan  bertahab  mengikuti metoda  (KOBA  2013 dalam pandiangan 2010).  Secara  bertahab  penelitian  ini
X –
Y
dilakukan di KOBA  ITB Bandung dengan tahapan  sebagai  berikut  (1).  Pembuatan larutan  sampel,  pembuatan  larutan  uji sampel, persiapan bahan percobaan, persiapan  dan  pembuatan  media  buffer), (2)  sterilisasi  alat  &  medium,  (3)  Kultur sel,  (4)  kuantifikasi  Jumlah  Sel,  (5) perlakuan  Sel  Kanker  dengan  Ekstrak,  (6) Pengukuran  aktivitas  antikanker  dengan MTT  Assay,  (7)  Hasil  pengamatan pengamatan  teknik in  vitro uji  aktivitas antikanker.  Secara  rincih  tahapannya sebagai berikut:
Uji  antikanker    dilakukan  dengan mengunakan  sel  Leukemia  P388,  pada media  RPMI (Roswell  Park  Memorial Institute) dalam “multiwell plate”.
Pengulturan  sel  dilakukan  dalam  kondisi steril.  Sel  Leukemia  P388  dipelihara dengan 5 mL medium pemeliharaan dalam botol kultur 25 cm 2 . Medium pemeliharaan diganti  setiap  2  hari  dan  subkultur dilakukan ketika kultur sel telah memenuhi 80% substrat. Kultur sel  dipelihara sampai memenuhi 80% substrat, kemudian medium pemeliharaan dibuang selanjutnya sel    dicuci  dengan  1,5  mL  FBS (Fetal Bovine Serum) dengan 3x ulangan. Setelah itu    sel    dibilas  dengan  1,5  mL  EDTA 0,02%, kemudian sel diberi 1,5 mL tripsin
0,25%  selanjutnya  sel    diinkubasi  pada suhu  37°C  selama  2  menit.  Setelah  itu medium  dasar  yang  mengandung  50% FBS (Fetal  Bovine  Serum) ditambahkan sebanyak 1,5 mL. Suspensi sel dipindahkan  dalam  tabung  Falcon  15  mL, kemudian  suspensi  sel  disentrifugasi  1000 rpm  selama  5  menit  hingga  diperoleh “pellet sel”.
Selanjutnya medium pemeliharaan sebanyak 3 mL
ditambahkan  ke  dalam  “pellet  sel”,  lalu disuspensikan  hingga  homogen.  Akhirnya
suspensi sel dibagi ke dalam 2 botol kultur dan diperoleh 2 kultur sel yangs baru.
Ekstrak  metanol  kering  sebanyak  1 mg    ditambahkan  dengan  1  mL  DMSO (Dimethyl  sulfoxide) sampai  larut  sebagai stok larutan ekstrak untuk membuat variasi konsentrasi.  Kemudian  dibuat  variasi konsentrasi  ekstrak  mulai  dari  0,1  µg/mL, 0,3 µg/mL, 1 µg/mL, 3 µg/mL, 10 µg/mL,
30  µg/mL,  dan  100  µg/mL.  Masing- masing  ekstrak    dimasukkan  ke  kultur  sel Leukemia  P388.  Sel  yang  telah  diberi ekstrak    dipelihara  pada  medium  dasar yang mengandung 2% FBS dan diinkubasi selama  24  jam  agar  sel  melekat  pada substrat.
Aktivitas  pertumbuhan  sel  setelah perlakuan    diukur  dengan  pemberian larutan  MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-
2,5-difeniltetrazolium  bromid). Medium dibuang  dan  diberi  200  µl  medium  dasar yang  mengandung  2%  FBS (Fetal  Bovine Serum) dan  50  µl  larutan  MTT  untuk setiap  sumur.  Sel  diberi  MTT  untuk mengukur  efek  sitotoksik  sampel.  Sel diinkubasi  selama  4  jam  pada  suhu  37°C dengan kondisi gelap. Setelah itu, medium dibuang  dan  diberi  200  µl  DMSO (Dimethyl sulfoxide) dan 25µl bufer glisin. Intensitas absorbansi warna diukur dengan menggunakan microplate
spectrophotometer (BioRad) pada  panjang gelombang  540  nm.  Intensitas  absorbansi warna dibuat untuk mencari nilai Inhibition  concentration sebanyak  50% (IC 50 )  dari  ekstrak  dari  kedua  daun tumbuhan  paku  tersebut.  Pengukuran dilakukan  3  kali  ulangan  dan  tiap konsentrasi  diukur  3  kali  ulangan  (KOBA ITB : Informasi langsung).

## Analisis Data
IC 50 ( Inhibition  Concentration 50 ) ditentukan  melalui  persamaan  logaritma
dari  rata-rata  absorbansi  3  ulangan  data setiap  konsentrasi    dengan  konsentrasi ekstrak  sampel.  Analisis  data  digunakan program  Originlab  9.0  32bit (Originlab Corporation  USA) .  Melalui  program tersebut  diperoleh  persamaan  logaritma yang mengandung penghambatan pertumbuhan  sel  50%  (IC 50 ) pada konsentrasi tertentu sesuai data absorbansi hasil  pengukuran  pada  konsentrasi  0,1 sampai 100 µg/mL.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Ekstraksi Daun Selaginella delicatula dan Pteris vittata
Pembuatan  ekstrak  diawali  dengan pengukuran kadar air sampel. Sampel daun S.  delicatula (Gambar  1a)  sebanyak  500 gram  dikeringkan  kemudian  diperoleh
berat  kering  70  gram  (Gambar  1b),  kadar air  sampel  yang  diperoleh  yaitu  86  %  dan sampel P.  vittata (Gambar  2a)  sebanyak 500 gram diperoleh berat kering 101 gram (Gambar  2b)  serta  kadar  airnya  79,8  % .
Pentingnya  pengukuran  kadar  air  yang terkandung  dalam  sampel  yang  diuji dikarenakan  berpengaruh  pada  proses ekstrasi. Ekstrasi merupakan proses pemindahan  senyawa  aktif  dari  dalam  sel yang  ditarik  oleh  pelarut,  sehingga senyawa  aktif  tersebut  menjadi  tercampur dengan  pelarut  tersebut  (Harbone,  1996). Metode  ekstrasi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  maserasi  yaitu  dengan cara  merendam  sampel  dengan  pelarut, pelarut  yang  digunakan  yaitu  metanol. Metode  ini  digunakan  karena  merupakan metode yang umum dan mudah digunakan dalam ekstrasi pada penelitian sebelumnya.
Gambar 1. Sampel S. delicatula yang ditimbang berat basah (1a) dan   berat kering (1b).
1a 1b
Gambar 2. Sampel P. vittata yang ditimbang berat basah (2a) dan berat kering (2b).
Perendaman  sampel  dalam  pelarut mengakibatkan dinding sel daun sampel S. delicatula dan P. vittata keluar dan terlarut dalam  pelarut  yang  digunakan  (Haryadi, 2012).  Sampel  yang  telah  direndam kemudian  disaring  dan  menghasilkan
ekstrak  cair  dan  dievaporasi  sehingga diperoleh ekstrak kering (Gambar 3). Hasil ekstrasi  selanjutnya  diuji  sitotoksisitasnya terhadap sel kanker Leukemia p388 secara in vitro .
Gambar 3. Ekstrak kering hasil Evaporasi S.  delicatula (A) dan P. vittata (B)

## Uji Potensi Antikanker
Hasil  uji  sitotoksik  pada  penelitian ini  bermanfaat  untuk  mengetahui  berapa besar efek sitotoksik dan potensi antikanker dari ekstrak metanol S. delicatula dan P.  vittata terhadap  sel kanker  Leukemia  P388  secara in  vitro .
Hasil  pengujian  uji  antikanker  ekstrak metanol  daun S.  delicatula dan P.  vittata ditentukan  dengan  menghitung  nilai  IC 50
yaitu  nilai  konsentrasi  yang  mampu menekan  pertumbuhan  50%  populasi  sel Leukimia  P388  (Tabel  1).  Data  hasil  uji MTT  pada  tabel  tersebut  digunakan  untuk menentukan nilai IC 50 dengan menggunakan  Originlab  9.0  32  –  bit kemudian hasil perhitungan diperoleh nilai IC 50 ekstrak  metanol  daun S.  delicatula dan P. vittata .
2a 2b A B A B
Tabel  1.  Hasil  uji  sitotoksisitas  dan  nilai  IC 50 ekstrak  metanol  daun S.  delicatula dan P. vittata terhadap sel Leukemia P388 .
Jenis Ekstrak Konsentrasi µg/mL Ulangan Rata- Rata IC 50 µg/mL 1 2 3 Daun S. delicatula 100 -0,00033 -0,00133 -0,00033 -0,0006 16,76
30
0,000667 -0,00133 -0,00133 -0,0006 10 0,209667 0,179667 0,168667 0,186 3 0,190667 0,179667 0,163667 0,178 1 0,153667 0,164667 0,157667 0,158 0,3 0,045667 0,170667 0,171667 0,129 0,1 0,201667 0,081667 0,165667 0,149 Daun P. vittata 100 -0,01 -0,00533 -0,01233 -0,01
82,81
30 1,112 1,426667 1,337667 1,292 10 0,785 1,954667 1,821667 1,52 3 1,008 1,939667 1,933667 1,627 1 1,517 1,633667 1,927667 1,692 0,3 1,254 1,675667 1,588667 1,506 0,1 0,748 1,326667 1,816667 1,297
Hasil analisis data diperoleh nilai IC 50 dari ekstrak  metanol  daun S.  delicatula terhadap  sel  kanker  Leukemia  P388 (Gambar 4). Gambar
tersebut menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  dari S.  delicatula memiliki  efek  sitotoksik terhadap  sel  kanker  Leukemia  P388 dengan  nilai  konsentrasi  hambatan  16,76 µg/mL.  Sedangkan  hasil  analisis  data melalui  program  Origin  Lab  dari  ekstrak metanol P.  vittata diperoleh  nilai  IC50 sebesar 82,81 µm/mL (Gambar 5).
Hasil  tersebut  di  atas  menunjukkan bahwa  IC50  ekstrak S.  delicatula lebih kecil  dari  20  Menurut  Cho et  al (1998) menyatakan bahwa S. delicatula tergolong ekstrak    sangat  aktif,  sedangkan P.  vittata tergolong kurang aktif. Berdasarkan hal ini
maka S. delicatula lebih berpotensi sebagai antikanker  dari P.  vittata .  Pertimbangan lainnya  karena  kemampuan  menghambat pertumbuhan  sel  kanker  Leukemia  P388 sebanyak  50%  terjadi  pada  konsentrasi ekstrak  yang  sangat  kecil  (rendah)  dari ekstrak metanol S. Delicatula dibandingkan  dengan P  vittata yang mempunyai  konsentrasi  ekstrak  yang sangat  besar.  Konsentrasi  ekstrak  yang kecil  tersebut  menunjukkan  daya  hambat pertumbuhan  sel  kanker  Leukemia  P388 lebih besar dari pada ektrak methanol daun P. vittata . Diketahui bahwa penghambatan pertumbuhan  dari P.  vittata sebesar  82,81 µm/mL  mempunyai  daya  hambat  yang lebih kecil dari prtumbuhan penghambatan S. delicatula
Gambar 4. Grafik persamaan logaritma antara rata-rata absorbansi dengan konsentrasi ekstrak dalam menentukan nilai IC 50 ekstrak metanol S . delicatula
Penelitian  sebelumnya  dari  Sahid et  al. (2013),  menyatakan  bahwa  nilai  IC 50 dari ekstrak  metanol  daun D.piloselloides terhadap sel kanker Leukemia P388 adalah sebesar 19, 32 µg/mL, mampu menghambat pertumbuhan sel kanker P388 sebanyak  50%  dan  tergolong  senyawa aktif.  Hal  ini  menguatkan  hasil  analisis dari S. delicatula yang  memiliki nilai  IC 50 sebesar 16,76 µg/mL. Suffnes dan Pezzuto (1990)  juga  menyatakan  suatu  senyawa bersifat  sitotoksik  (bersifat  menghambat
pertumbuhan  sel  kanker)  apabila  aktivitas sel  uji  memiliki  nilai  IC 50 ≤  20  µg/mL untuk  suatu  ekstrak.  Hasil  uji  potensi antikanker  dari P.  vittata memiliki  nilai IC 50 82,81  µg/mL  dengan  hasil  ini  lebih besar  nilai  IC 50 yang  diperoleh.  Menurut Winarno  (2011),  semakin  besar  nilai  IC 50 maka  senyawa  tersebut  semakin  tidak sitotoksik  atau  potensi  antikankernya semakin menurun.
Gambar  5.  Grafik  persamaan  logaritma  antara  rata-rata  absorbansi  dengan      konsentrasi ekstrak dalam menentukan nilai IC 50 ekstrak metanol P.vittata
Konsentrasi µg/mL IC 50 Selaginella delicatula
Konsentrasi µg/mL IC 50 Pteris vittata

## KESIMPULAN
Penghambatan  pertumbuhan  sel kanker  Leukemia  P388  50%  (IC 50 ) dari  ekstrak  metanol S.  delicatula adalah  16,76  µg/mL  dan P.  vittata 82,81  µg/mL.  Ekstrak  daun S. delicatula berpotensi  dikembangkan sebagai antikanker Leukemia, karena memiliki  nilai  IC 50 yang  mampu menghambat pertumbuhan sel kanker Leukemia  P388  daripada  ekstrak P.
vittata tetapi perlu dialakukan penelitian lebih lanjut.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian lebih lanjut dari ekstrak metanol dari daun S.  delicatula dan P.  vittata untuk  dijadikan  sebagai  antikanker Leukemia,  serta  kajian-kajian  lebih dalam  untuk  penerapan  lebih  lanjut di masyarakat.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdillah, A. 2006. Aktivitas
Antiproliferasi  Ekstrak  Air Daun  Sisik  Naga  ( Pyrrosia nummularifolia (Sw.)  Ching) terhadap  Sel  Lestari  Tumor
HeLa secara In vitro [skripsi]. Fakultas  Kedokteran  Hewan
IPB, Bogor. Arini,  D.I.D  dan  Kinho,J.  2008. Keragaman  Jenis  Tumbuhan Paku  (Pteridophyta)  di  Cagar Alam Gunung Ambang Sulawesi  Utara.  Info  BPK Manado Volume 2 No 1, Juni 2012. Djoronga,  M.I,.  D.Pandiangan.,  F.E. Kandou., A.T. Tangapo. 2014.  Penapisan  Alkaloid pada  Tumbuhan  Paku  dari
Halmahera Utara. Bioslogos /
3 (2) : 102-107.
Harbone,  J.  B.  1996.  Metode Fitokimia  :  Penuntun  Cara Modern Menganalisa Tumbuhan.  Cetakan  kedua. ITB, University perss Bandung. Haryadi, D. 2012. Senyawa Fitokimia  dan  Sitotoksisitas Ekstrak  Daun  Surian (Toona sinensis) terhadap  Sel  Vero dan MCF-7. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan IPB Bogor. Monoarfa,  F.  2011.  Uji  Efektivitas Dan  Toksisitas  Ekstrak  Daun Pacar  Cina (Aglaia  odorata L .) Sebagai Insektisida Nabati Terhadap Larva Kubis (Crocidolomia  binotalis Z .)
[skripsi]. Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. UNSRAT, Manado Pandiangan,  D.  2009. Produksi Metabolit  Sekunder  Alkaloid
secara  In  Vitro .  Bandung. UNPAD Press. Pandiangan,  D.  2011.  Produksi Katarantin  Melalui  Kultur Jaringan. Lubuk Agung, Bandung. Pandiangan,  D.,  R.E.  Esyanti.,  E.  de Queljoe. 2008. Aktivitas Antikanker  Katarantin  pada Sel Mouse  Mammary  Cancer MmT06054 .  Jurnal  Ilmiah
Sains. 8 (1): 107-113.
Pandiangan, D.,  H.D. Rompas., H.F. Aritonang., R.E. Esyanti., dan E.  Marwani.  2006.  Pengaruh triptofan terhadap pertumbuhan  dan  kandungan katarantin  pada  kalus C.
roseus.  Jurnal  Matematika
dan Sains (JMS). 11 (4) : 111- 115. Parris.B.S,. R Kiew. R.C.K Chung,.L.G Saw,.E. Soepadmo  2010.  Flora  Of Peninsular Malaysia. Series I: Ferns and Lycophytes. Volume  I.  Forest  Research Institute Malaysia 52109 Kepong, Selangor Darul
Fhsan, Malaysia.
Piggott,  A.G  dan  Piggott,G.J.1988. Ferns  of  Malaysia  In  Colour. Tropical  Press  Sdn.  BHD. Kuala lumpur.
PKPP  Ristek.  2012.  Pemanfaatan Tumbuhan  Hutan  Kurang dikenal  Sebagai  Alternatif
Obat  Kanker  Di  Sulawesi Utara.  Intensif  peningkatan kemampuan Peneliti dan Perekayasa  kementrian  Riset
dan Teknologi.
Sahid, A., D. Pandiangan, P. Siahaan &  M.  Rumondor,.  2013.  Uji Sitotoksisitas  Ektrak  Metanol Daun Sisik Naga (Drimoglossum  Piloselloides presl)  terhadap  Sel  Leukimia p388. UNSRAT  Journal  Of

## Bioslogos
Suffness,  M.,  dan  Pezzuto,  J.M., 1990.  Assays  Related  to Cancer  Drug  discovery  In
Hostettmann  K  (Ed).  Mteode In Plant Biochemistry. Assays
for Bioactivity , london, Academic Press, 71-133
van  Steenis,  C.G.G.J.  1988. Flora . Pradnya  Paramita.  Jakarta.  80-
100.
Winarno,  E.  2011.  Uji  Sitotoksik
Ekstrak  Kapang Aspergillus sp. terhadap  Sel  Kanker Payudara T47D [skripsi]. Program Studi Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas  Indonesia  (UI) Depok