## AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK DAUN SIRIH DAN BELIMBING WULUH DENGAN METODE HIDROEKSTRAKSI
Dara Pranidya Tilarso 1* , Afidatul Muadifah 1 , Windu Handaru 1 , Putri Indah Pratiwi 1 , Mursyidah Lathifatul Khusna 1
1 Program Studi S1 Farmasi, STIKes Karya Putra Bangsa, Tulungagung, Indonesia e-mail: * 1 dptilarso@stikes-kartrasa.ac.id
Diterima: 23 November 2023; Disetujui: 03 Januari 2023; Dipublikasi online: 28 Februari 2023 DOI: 10.22437/chp.v6i2.21736

## ABSTRAK
Zat antibakteri merupakan zat yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara mengganggu metabolisme mikroba yang merugikan. Tanaman yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri antara lain buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dan daun sirih (Piper betle). Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dan daun sirih (Piper betle) terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Penelitian ini dilakukan menggunakan metode hidroekstraksi pada suhu 40,50,60, dan 90  C dan pengujian aktivitas bakteri menggunakan metode difusi cakram.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kombinasi  memiliki  aktivitas  daya  hambat optimum pada suhu 50  dengan diameter hambat Staphylococcus aureus sebesar 19,75 mm dan pada suhu 60  dengan diameter hambat Escherichia coli sebesar 11,75 mm..
Kata  kunci:  Staphylococcus  aureus;  Escherichia  coli;  Averrhoa  bilimbi  L.;  Piper  betle; hidroekstraksi

## ABSTRACT
Antibacterial substances are substances that can inhibit the growth of bacteria by interfering with  the metabolism of harmful microbes. Plants that have  antibacterial activity include star fruit (Averrhoa bilimbi L.) and betel leaf (Piper betle). The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the combination of star fruit extract (Averrhoa bilimbi L.) and betel leaf (Piper betle)  against Escherichia coli  and Staphylococcus  aureus bacteria. This research was conducted using the hydro extraction method at temperatures of 40,50,60, and 90°C and activity testing using the disc diffusion method. The results showed that the combination had optimum inhibitory activity at 50° with an inhibition diameter of 19.75 mm for Staphylococcus aureus and 11.75 mm for Escherichia coli.
Keywords:  Staphylococcus  aureus;  Escherichia  coli;  Averrhoa  bilimbi  L.;  Piper  betle;  hydro extraction

## PENDAHULUAN
Zat  antibakteri  adalah  suatu  zat  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan cara mengganggu metabolisme mikroba yang merugikan (Rustanti et al ., 2013). Zat antibakteri  yang  berasal  dari  bahan  sintetik  mampu  mencegah  terjadinya  infeksi  bakteri, akan tetapi tidak sedikit yang memiliki efek samping seperti iritasi. Permasalahan tersebut mendorong  beralihnya  penggunaan  zat  antibakteri  dari  bahan  sintesis  ke  bahan  alam. Ekstrak bahan alam dengan kandungan antibakteri, dapat diformulasikan menjadi sediaan antiseptik  dalam  bentuk hand  sanitizer atau  sabun  cuci  tangan.  Tanaman  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  adalah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi  L.) dan  daun  sirih ( Piper  betle ).  Tanaman  tersebut  bermanfaat  sebagai  obat  tradisional  yang  telah  lama
digunakan oleh nenek moyang kita. Belimbing wuluh berkhasiat untuk mengatasi berbagai penyakit seperti batuk, diabetes, rematik, gondongan, sariawan, sakit gigi, gusi  berdarah, jerawat, diare sampai tekanan darah tinggi (Maryam et al. , 2015). Kandungan senyawa yang terdapat dalam belimbing wuluh diantaranya adalah saponin, flavonoid, steroid/triterpenoid dan  tannin.  Senyawa  tersebut  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  dengan  cara menghambat  sintesis  protein  (Ferdyani et  al., 2020).  Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan oleh Aifianti (2014) menjelaskan bahwa ekstrak buah belimbing wuluh memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan konsentrasi ekstrak 10%. Konsentrasi ekstrak 10% atau konsentrasi paling rendah dapat menghambat pertumbuhan bakteri dan menghasilkan diameter zona hambat (Ngajow et al ., 2013). Sedangkan daun sirih berkhasiat untuk mengatasi keputihan, menghilangkan bau mulut, mengobati luka, menghentikan gusi berdarah, sariawan, dan menghilangkan bau badan  (Inayatullah,  2012).  Kandungan  kimia  yang  terdapat  dalam  tanaman  sirih  adalah saponin, flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri (Noventi & Carolia, 2016). Senyawa saponin bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  merusak  membran  sitoplasma  dan  membunuh  sel. Senyawa  flavonoid  bekerja  dengan  cara  mendenaturasi  protein  sel  bakteri  (Triyani et  al ., 2021).  Ekstrak daun sirih dengan konsentrasi ekstrak 40% mampu menghambat bakteri Staphylococcus  aureus dengan  diameter  zona  hambat  17,33  mm  (Bagus et  al .,  2022).
Berdasarkan kandungan senyawa di dalam kedua tanaman yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri  maka  kedua  tanaman  tersebut  memiliki  potensi  untuk  dimanfaatkan  sebagai antiseptik alami. Pengkombinasian kedua ekstrak diharapkan dapat memberikan hasil yang lebih  baik  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Kombinasi  ekstrak  memungkinkan dapat memberikan aktivitas yang sinergis antara senyawa (Kholifah, 2018).
Teknik ekstraksi merupakan proses perpindahan suatu zat atau solut dari larutan asal atau  padatan  ke  dalam  pelarut  tertentu  (Aji  &  Bahri,  2017).  Teknik  ekstraksi  secara maserasi,  soxhlet  dan  hidrodistilasi  dapat  menghasilkan  antibakteri  yang  sangat  efektif namun  memerlukan  pelarut  yang  sangat  mahal.  Oleh  karena  itu,  dipilih  metode hidroekstraksi menggunakan air panas dengan cara perebusan dan kukusan karena metode ini  dinilai  lebih  ekonomis  (Ahmed et  al., 2005).  Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  dengan  membandingkan  aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan  dari kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  buah  belimbing  wuluh  menggunakan  teknik hidroekstraksi.  Ekstrak  yang  diperoleh  diharapkan  lebih  efektif  dan  ekonomis  sebagai antiseptik dalam menghambat pertumbuhan bakteri Stapylococcus aureus dan Escherichia coli.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat-alat yang digunakan adalah pisau, nampan, kain penyari, kompor, panci, beaker glass, termometer, cawan petri, gelas ukur, pipet tetes, tabung reaksi, rak tabung, timbangan analitik, lampu spiritus, plat tetes, erlenmeyer.
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  sirih,  belimbing  wuluh,  bakteri  uji  adalah bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Media  uji  adalah Nutrient  agar (NA), Nutrient  broth (NB).  Bahan  tambahannya  aquadest (H 2 O ),  pereaksi  mayer,  pereaksi dragendroff, asam klorida pekat (HCl P), Besi (III) Klorida (Fe Cl 3 ), etil asetat ( C 4 H 8 O 2 ), asam asetat anhidrat ( C 4 H 6 O 3 ), asam sulfat pekat ( H 2 SO 4 ), air panas, asam klorida (HCl).

## Pembuatan Ekstrak
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun sirih hijau ( Piper betle ), buah belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  yang  diperoleh  dari  desa  Bendiljati  Wetan, Tulungagung dan dideterminasi di Materia Medica Batu, Malang. Pembuatan ekstrak dimulai dengan  memilih  beberapa  buah  belimbing  wuluh  berwarna  kuning  segar  dan  daun  sirih hijau yang berwarna hijau segar, dicuci dengan air bersih, kemudian ditiriskan pada suhu ruang sampai kering. Setelah kering, sampel dipotong-potong kecil ± 0,5 cm dan ditimbang hingga berat 100 gram.  Metode yang digunakan adalah metode hidroekstraksi dengan cara rebus  pada  suhu  40  C,  50  C,  60  C  dan  kukus  pada  suhu  90  C  (Rahayu et  al .,  2016).
Perlakuan pada metode rebus disiapkan air sebanyak 100 ml kemudian dipanaskan pada waterbath  dengan  pengaturan  suhu  40  C,  50  C,  dan  60  C  serta  ditambahkan  100  gram sampel yang telah dipotong, tunggu selama 30 menit lalu disaring menggunakan plastik kasa untuk  penyaringan  pertama  kemudian  disaring  kembali  menggunakan  kertas  saring. Perlakuan  dengan  metode  kukus,  disiapkan  air  secukupnya  pada  dandang  yang  telah dilubangi  pada  bagian  penutup  dan  dimasukkan  termometer  pada  bagian  yang  dilubangi tersebut untuk pengaturan suhu, dimasukkan sampel sebanyak 100 gram, panaskan pada kompor dengan suhu 90  C, tunggu kurang lebih 30 menit hingga didapatkan ekstrak lalu disaring dengan kertas saring (Indrayati et al ., 2019)

## Skrining Fitokimia
Flavonoid: Sebanyak  1  gr  ekstrak  sampel  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian ditambahkan HCl pekat lalu dipanaskan dengan waktu 15 menit di atas penangas air.  Apabila  terbentuk  warna  merah  atau  kuning  berarti  positif  mengandung  flavonoid (flavon,  kalkon,  dan  auron)  (Mutmainnah,  2017). Tanin: Sebanyak  2  g  ekstrak  ditambah etanol  hingga  sampel  terendam.  Sebanyak  1  mL  larutan  sampel  dipindahkan  ke  dalam tabung  reaksi  dan  ditambahkan  dengan  2-3  tetes  larutan  FeCl3  1%.  Hasil  positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  hitam  kebiruan  atau  hijau  (Harborne,  2006). Alkaloid: Identifikasi  larutan  uji  terhadap  senyawa  golongan  alkaloid  dilakukan  dengan menggunakan  pereaksi  Mayer  dan  pereaksi  Dragendorff  (Zulney et  al, 2008). Terpenoid: Sebanyak 2 gr ekstrak sampel dimasukkan dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan dengan 2  ml  etil  asetat  dan  dikocok.  Lapisan  etil  asetat  diambil  lalu  ditetesi  pada  plat  tetes  dan dibiarkan hingga kering. Setelah kering, ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes  asam  sulfat  pekat.  Apabila  terbentuk  warna  merah  atau  kuning  berarti  positif mengandung terpenoid, sedangkan jika terbentuk warna hijau berarti positif mengandung steroid (Muthmainnah, 2017). Saponin: Setengah gram ekstrak sampel dari hasil ekstraksi
ditambahkan  0,5  mL  air  panas  kemudian  dikocok  selama  1  menit.  Apabila  menimbulkan busa ditambahkan HCl 1N, apabila busa stabil selama 10 menit dengan ketinggian 1-3 cm, maka ekstrak positif mengandung saponin (Lathifah, 2008)
Analisis Ekstrak menggunakan Kromatografi Cair – Spektrometri Massa Resolusi Tinggi (LC-HRMS)
Analisis  ekstrak  kombinasi  daun  sirih  hijau  ( Piper betle )  dan  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) yang disuntikkan ke dalam sistem instrumen Kromatografi Cair, pelarut: A= 0,1% Asam format dalam Air; B= 0,1% Asam format dalam Asetonitril. Kolom analitik: Hypersil GOLD aQ 50 x 1 mm x 1,9 u ukuran partikel. Laju aliran analitik: 40 L/mnt. Gradien aliran: (Tabel 1), Waktu pengoperasian: 30 menit, dan Oven kolom: 30°C. Kondisi analisis HRMS, Pemindaian penuh pada 70.000 Resolusi tergantung data MS2 pada Resolusi 17.500. Waktu berjalan: 30 menit dan Polaritas: Positif dan atau Negatif.
Tabel 1. Elusi Gradien No Waktu Laju Alir (µL/min) % B Kurva 1 0.000 Kesetimbangan 2 0.000 40.000 5.0 5 3 New  Row 4 0.000 Run 5 2.000 40.000 5.0 5 6 15.000 40.000 60.0 5 7 22.000 40.000 95.0 5 8 25.000 40.000 95.0 5 9 25.100 40.000 5.0 5 10 30.000 40.000 5.0 5 11 New Row 12 30.000 Stop Run

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi  Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  dan  Buah  Belimbing Wuluh
Pengujian antibakteri ini diawali dengan pembuatan media nutrient agar. Pembuatan media dilakukan dengan menimbang sebanyak 2 g bubuk agar, kemudian dilarutkan dalam 100  ml  akuades.  Campuran  dihomogenkan,  kemudian  setelah  bening,  media  disterilkan menggunakan  autoclave  dengan  suhu  121  °C  selama  15  menit.  Tahap  berikutnya  adalah membuat perbandingan ekstrak antara buah belimbing wuluh dengan daun sirih hijau yakni 20:10 mg/mL dan kontrol positif Kloramfenikol serta kontrol negatif aquadest. Selanjutnya, menginokulasikan bakteri S. aureus dan E. coli pada masing-masing media agar plate secara merata. Setelah bakteri selesai diinokulasikan, ditambahkan sebanyak 10 μl ekstrak dan 10 μl antibiotik masing -masing ke kertas cakram yang sudah ditentukan. Setelah pemasangan
kertas cakram selesai, bakteri diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam, kemudian diamati dan  dukur  diameter  zona  hambatnya.  Pengukuran  diameter  zona  hambat  menggunakan jangka sorong, kemudian hasilnya dibandingkan dengan kontrol positif, kontrol negatif, dan nilai klasifikasi diameter zona hambat.

## PEMBAHASAN
Sampel  diekstrak  menggunakan  pelarut  aquadest  karena  aquadest  bersifat  netral, tidak memiliki aktivitas antibakteri, tidak mudah menguap dan bersifat polar (Dewi et al ., 2015). Metode yang digunakan adalah metode hidroekstraksi karena metode ini lebih efektif dan efisien sehingga mampu menghemat biaya produksi. Selain itu, metode ini juga lebih mudah diaplikasikan oleh masyarakat (Rahayu et al ., 2016).

## Uji Skrining Fitokimia Ekstrak
Uji skrining fitokimia kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan buah belimbing wuluh perbandingan  (2:  1)  dilakukan  dengan  pewarnaan  reagen  (Harbone,  2006).  Warna  yang terbentuk dalam tabung reaksi menunjukkan kandungan ekstrak. Hasil pengamatan warna yang terbentuk menunjukkan kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan buah belimbing wuluh mengandung senyawa flavonoid, alkaloid dan tannin dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Skrining Fitokimia Penguji Nama Reagen Hasil Keterangan Flavonoid HCl + Ada Alkaloid Mayer + Ada Dragendroff + Ada Tannin FeCl 2 + Ada Saponin HCl - Tidak ada Steroid Etil Asetat - Tidak ada Asam Asetat Anhidrat - Tidak ada Asam Sulfat - Tidak ada Terpenoid Etil Asetat - Tidak ada Asam  Asetat Anhidrat - Tidak ada Asam Sulfat - Tidak ada
Analisis Ekstrak Kombinasi Piper betle L dan Averrhoa bilimbi L menggunakan Kromatografi Cair – Spektrometri Massa Resolusi Tinggi (LC-HRMS)
Hasil  analisis  LC-HRMS  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kombinasi Piper  betle  L dan Averrhoa bilimbi L mengandung senyawa aktif yang berpotensi sebagai antibakteri (Tabel 3).
Tabel 3. Senyawa Aktif Antibakteri dalam Ekstrak Kombinasi
Nama Formula Bobot Molekul Waktu Retensi (min) Area (max) m/z Apigenin       C15 H10 O5 271.05991 0.870 35,328,318.48 99.2 Piperine      C17 H19 N O3 286.14337 14.602 4,570,066,672.75 98.7 Betaine       C5 H11 N O2 118.0863 20.442 101,427,056.68 98.2
Ket. : m/z = massa/muatan
Gambar 1 . Total Ion Kromatogram
Senyawa  apigenin  pada  ekstrak  kombinasi  daun  sirih  dan  belimbing  wuluh  dapat terelusi pada waktu retensi 0,870 menit (Tabel 3) dengan berat molekul 271,05991 (Tabel 3). Senyawa  apigenin  termasuk  dalam  kelompok  senyawa  Flavonoid.  Mekanisme  flavonoid sebagai antibakteri adalah membentuk senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler dan protein terlarut sehingga dapat merusak membran sel bakteri dan diikuti dengan pelepasan senyawa  intraseluler  (Nuria et  al .,  2009).  Apigenin  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, (Parama et al ., 2019). Apigenin bekerja dengan menghambat enzim glukosiltransferase, sehingga dapat mengurangi perlekatan dan pembentukan bakteri (Isnarianti et al ., 2013).
Senyawa piperin pada ekstrak kombinasi daun sirih dan belimbing wuluh dapat dielusi pada waktu retensi 14,602 menit (Gambar 4) dengan berat molekul 286,14337 (Gambar 5). Senyawa piperin termasuk dalam kelompok senyawa Alkaloid. Mekanisme Alkaloid sebagai antibakteri  adalah  dengan  cara  mengganggu  blok  penyusun  sel  peptidoglikan  bakteri, sehingga mencegah pembentukan dinding sel yang utuh dan menyebabkan kematian pada
bakteri  (Lisdawati et  al .,  2008).  Senyawa  piperin  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus .
Gambar 2. Kromatogram tunggal apigenin dari analisis LC
Gambar 3. Spektrum Massa Apigenin
Mekanisme  antibakteri  dari  piperin  terhadap Staphylococcus  aureus adalah  sebagai inhibitor protein A. Protein A merupakan protein yang hanya terdapat pada permukaan sel bakteri Staphylococcus aureus (Sari et al ., 2014).
Gambar 4. Kromatogram Tunggal Piperine dari Analisis LC

## Gambar 5. Spektrum Massa Piperine
Senyawa  betaine  pada  ekstrak  kombinasi  daun  sirih  dan  belimbing  wuluh  dapat terelusi  pada  waktu  retensi  20,442  menit  (Gambar  6)  dengan  berat  molekul  118,0863 (Gambar  6).  Senyawa  betaine  termasuk  dalam  golongan  senyawa  Tanin.  Mekanisme antibakteri  tanin  memiliki  efek  antibakteri  dengan  menerapkan  penghambatan  sintesis protein. Efek antibakteri tanin melalui reaksi terhadap membran sel, inaktivasi enzim, dan inaktivasi materi genetik. Mekanisme tanin sebagai antibakteri adalah menghentikan reverse transcription  enzyme  dan  topoisomerase  DNA  sehingga  sel  bakteri  tidak  dapat  terbentuk (Nuria et al ., 2009). Senyawa betaine
Gambar 6. Kromatogram Tunggal Betaine dari Analisis LC
Gambar 7. Spektrum Massa Betaine
Uji Antibakteri Kombinasi Ekstrak Daun Sirih Hijau dan Buah Belimbing Wuluh Uji  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  buah  belimbing dilakukan  dengan  metode  difusi  cakram.  Media  perlakuan  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  1  24  jam  (Darsana et  al .,  2012).  Pada  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar piringan,  diameter  zona  hambat  diukur  dengan  menggunakan  jangka  sorong  untuk mengetahui daya hambat optimumnya. Hasil zona hambat bening pada kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan buah belimbing wuluh yang terbentuk di sekitar kertas cakram dapat dilihat pada Gambar 8.
Gambar 8. Penghambatan Kombinasi  ekstrak daun sirih dan buah belimbing wuluh.
(A) Staphylococcus aureus , (B) Escherichia coli
Tabel 4. Diameter zona hambat terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
NO  Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Staphylococcus aureus Escherichia coli R1 R2 R3 Rata- Rata R1 R2  R3 Rata- Rata 1 40° 5 24,5  14,75  14,75  8 10  9 9 2 50° 17 22,5  19,75  19,75  13 9 11 11 3 60° 13 19,5  16,25  16,25  15,5  8 11,75  11,75 4 90° 8,5 20,5  14,5 14,4 8 8 8 8 5 K+ 27,5  25,5  35,5 29,5 33 5,5  28 22,17 6 K- 0 0 0 0 0 0 0 0
R=Replikasi; K+=Kontrol positif (Kloramfenikol); K- = Kontrol negatif (aquades)
Hasil  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kombinasi  memberikan  aktivitas  antibakteri  optimum pada  suhu  50  dengan  diameter  19,75  mm  (terhadap Staphylococcus  aureus )  merupakan respon pertumbuhan bakteri yang kuat dan memberikan aktivitas optimum pada suhu 60  dengan  diameter  11,75  mm  (terhadap Escherichia  coli )  merupakan  respon  pertumbuhan bakteri yang sedang (Tabel 4).
A B
Kombinasi ekstrak buah belimbing wuluh dan daun sirih pada uji skrining fitokimia menunjukkan hasil positif pada  senyawa alkaloid dan tanin. Alkaloid merupakan senyawa bioaktif  yang  berperan  sebagai  senyawa  antibakteri  sama  seperti  senyawa  bioaktif  fenol, flavonoid,  serta  tannin.  Mekanismenya  yaitu  dengan  merusak  metabolisme  sel  sehingga pertumbuhan bakteri terhambat. Menurut haryati et al., 2015 alkaloid memiliki kemampuan sebagai  antibakteri,  diduga  mekanismenya  yaitu  dengan  cara  mengganggu  komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut. Adanya metabolit sekunder memiliki faktor penting terhadap mekanisme bakteri, sedangkan mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri adalah dengan menghambat enzim reverse transcriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel  bakteri  tidak  dapat  terbentuk.  Selain  itu  tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang berhubungan dengan kemampuan menginaktifkan enzim dan mengganggu transport protein pada  lapisan  sel.  Tanin  juga  mempunyai  target  pada  polipeptida  dinding  sel  sehingga pembentukan dinding sel menjadi tidak sempurna, hal tersebut membuat bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotic maupun fisik yang bisa menyebabkan bakteri mati (Ngajow et al ., 2013).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  menunjukkan  bahwa  kombinasi ekstrak  belimbing  wuluh  dan  daun  sirih  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dengan kategori kuat, pada bakteri Escherichia coli dengan kategori sedang dan hasil diameter zona hambat pada kedua bakteri masih di bawah kontrol positif. Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  gram  positif  sedangkan Escherichia  coli adalah bakteri  Gram  negatif.  Struktur  dinding  sel  pada  bakteri  Gram  positif  mengandung  lebih banyak  peptidoglikan,  sedikit  lipid  dan  dinding  sel  mengandung  polisakarida.  Komponen penyusun peptidoglikan antara lain adalah asam amino dan gula. Asam teikoat  berfungsi sebagai transport ion positif untuk keluar atau masuk dan merupakan polimer yang larut dalam air. Sifat larut air menunjukkan bahwa dinding sel bakteri Gram positif bersifat lebih polar.  Senyawa  alkaloid  dan  tanin  merupakan  bagian  yang  bersifat  polar  sehingga  lebih mudah menembus lapisan peptidoglikan yang bersifat polar daripada lapisan lipid yang non polar.  Hal  tersebut  menyebabkan  aktivitas  penghambatan  pada  bakteri  gram  positif  lebih besar dibandingkan bakteri Gram negatif (Salni dan Ratna, 2011).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Hasil identifikasi senyawa aktif kombinasi ekstrak buah belimbing wuluh dan daun sirih  mengandung  alkaloid  dan  tanin.  Pada  hasil  uji  antibakteri Staphylococcus  aureus memiliki aktivitas optimum pada suhu 50  dengan diameter 19,75 mm, merupakan respon pertumbuhan  bakteri  yang  kuat  dan  dan  memberikan  aktivitas  optimum  pada  suhu  60  dengan  diameter  11,75  mm  terhadap Escherichia  coli merupakan  respon  pertumbuhan bakteri yang sedang. Saran untuk penelitian selanjutnya adalah melanjutkan uji aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak buah belimbing wuluh dan daun sirih secara in vivo.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian  Kepada  Masyarakat  (DRPM) untuk pendanaan penelitian ini dengan nomor kontrak 159 / E5 / P6.02.00.PT / 2022 dari APBN Daftar Isian Pelaksanaan (DIPA) Deputi Bidang Penguatan Riset dan Pengembangan Kementerian Riset dan Teknologi/Nasional Badan Riset dan Inovasi tahun 2022.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji,  A.,  &  Bahri,  S.  (2017).  Pengaruh  Waktu  Ekstraksi  Dan  Konsentrasi  HCl  untuk Pembuatan  Pektin  dari  Kulit  Jeruk  Bali  (Citrus  maxima). Jurnal  Teknologi  Kimia Unimal , 6 (1), 33 – 44.
Arifianti, L., Oktarina, R.D. dan Kusumawati, I. 2014. Pengaruh jenis pelarut pengekstraksi terhadap  kadar  sinesetin  dalam  ekstrak  daun  Orthosiphon  stamineus  benth.  E- Jurnal, 2(1):3
Bagus,  I.,  Suyasa,  O.,  Bekti,  H.  S.,  Rinawati,  L.  P.,  &  Laksmi,  L.  P.  (2022).  Daya  Hambat Ekstrak  Daun  Sirih  dan  Daun  Legundi  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus aureus . 1 (5).
Dewi,  N.  R.  K.,  Kuncoro,  H.,  &  Rijai,  L. (2015).  Potensi  Sitotoksik  Ekstrak  Air  Daun  Sirih Hitam (Piper sp.). Jurnal sains dan Kesehatan , 1 (1), 11-15.
Ferdyani,  S.,  Yuniarto,  P.  F.,  Savitri  Prodi  Farmasi,  L.,  -Universitas  Kadiri,  F.,  Jl Selomangleng  No,  K.,  &  Kediri,  K.  (2020).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Sediaan  Gel Ekstrak  Etanol  Buah  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  Bilimbi  Linn)  terhadap  Bakteri Staphylococcus Aureus Antibacterial Activity Test of Ethanol Extract Gel Preparation of Wuluh Starfruit (Averrhoa Bilimbi Linn) against Stap. Jurnal Kesehatan Mahasiswa UNIK , 2 (1), 30 – 42.
Inayatullah,  S.  (2012).  Efek  Ekstrak  Daun  Sirih  HIJAU  (Piper  betle  L.)  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus  aureus. Skripsi  Program  Studi  Pendidikan Kedokteran UIN Syarif Hidayatullah Jakarta , 50.
Indrayati, A., Farmasi, F., Buana, U., Karawang, P., & Pudding, S. (2019). Formulasi , Uji Stabilitas  Fisik  Dan  Kompatibilitas  Produk  Kosmetik  Anti-Aging  Dalam  Sediaan Serum. Jurnal Ilmiah Farmasi , 4 , 2.
Isnarianti, R., Wahyudi, I. A., & Puspita, R. M. (2013). Muntingia calabura L leaves extract inhibits  glucosyltransferase  activity  of  Streptococcus  mutans.  Journal  of  Dentistry Indonesia, 20(3), 59-63.
Lathifah,  qurrotu a’yunin. (2008). Antibakteri Pada Buah Belimbing Wuluh Oleh : Qurrotu A ’ Yunin  Lathifah  Nim :  03530015  Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  Dan  Teknologi Universitas Islam Negeri ( Uin ) Malang Malang .
Maryam, S., Juniasti, S., & Kosman, R. (2015). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.) Asal Kota Watampone. Jurnal Ilmiah As-Syifaa ,
7 (1), 60 – 69. https://doi.org/10.33096/jifa.v7i1.21
Muthmainnah. (2017). Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Etanol Buah Delima (Punica Granatum L.) Dengan Metode Uji Warna. Media Farmasi , 13 (3), 1576 – 1580.
Ngajow, M., Abidjulu, J., & Kamu, V. S. (2013). Pengaruh Antibakteri Ekstrak Kulit Batang Matoa  (Pometia  pinnata)  terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus  secara  In  vitro. Jurnal MIPA, 2(2), 128. https://doi.org/10.35799/jm.2.2.2013.3121
Noventi, W. R.-4272-2-P. pdfa., & Carolia, N. (2016). Potensi Ekstrak Daun Sirih Hijau ( Piper betle L .) sebagai Alternatif Terapi Acne vulgaris The Potential of Green Sirih Leaf (
Piper betle L .) for Alternative Therapy Acne vulgaris. Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Lampung , Vol. 5 (1), Hal. 140.
Parama, P. W., Sukrama, I. D. M., & Handoko, S. A. (2019). Uji efektifitas antibakteri ekstrak buah jeruk nipis (Citrus aurantifolia) terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans in vitro. Bali dental journal, 3(1), 45-52.
Putri Ningsih, A., & dan Anthoni Agustien, N. (2013). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kental Tanaman  Pisang  Kepok  Kuning  (Musa  paradisiaca  Linn.)  terhadap  Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal Biologi Universitas Andalas (J. Bio. UA.) , 2 (3), 207 – 213.
Rahayu,  N.  W.  S.,  Prasetyo,  E.  N.,  &  Isdiantoni.  (2016).  Hindroekstraksi  Daun  Ketapang (Terminalia  catappa  L.)  sebagai  Pengendali  Penyakit  Ice-ice  pada  Budidaya Kappaphycus alvarezii. Jurnal Sains Dan Seni Its, 1 – 8.
Rustanti, E., Jannah, A., & Fasya, A. G. (2013). Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa Katekin
Dari Daun Teh (Cameliasinensis L.Var Assamica) Terhadap Bakteri
Micrococcusluteus. Alchemy , 2 (2). https://doi.org/10.18860/al.v0i0.2886
Salni,  H.M.,  dan  Ratna,  W.M.  2011.  Isolasi  Senyawa  Antibakteri  Dari  Daun  Jengkol  ( Pithecolobium  lobatum  Benth  )  dan  Penentuan  Nilai  KHM-nya.  Jurnal  Penelitian Sains. 14 (1 D ) 14109
Sari, D. R. A. P., Yustiantara, P. S., Paramita, N. L. P. V., & Wirasuta, I. M. A. G. (2014). Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Buah  Lada  Hitam  (Piper  nigrum  L.)  Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes. Jurnal Farmasi Udayana , 3 (2), 279831.
Triyani, M. A., Pengestuti, D., Khotijah, S. L., Susilaningrum, D. F., & Ujilestari, T. (2021). Aktivitas Antibakteri Hand Sanitizer Berbahan Ekstrak Daun Sirih dan Ekstrak Jeruk Nipis. NECTAR: Jurnal Pendidikan Biologi , 2 (1), 16-23.