PENURUNAN KADAR LIGNIN OLEH KAPANG PELAPUK KAYU INDIGENOUS Thermothelomyces guttulata KLUM 2

## SEBAGAI METODE ALTERNATIF UNTUK MENCIPTAKAN KANDIDAT PAKAN TERNAK YANG MUDAH DICERNA
Sindy Oktari Putri 1 , Evi Susanti 1,2*
1 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang
2 Prodi Bioteknologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang
* e-mail: evi.susanti.fmipa@um.ac.id
Received 22 November 2021 Accepted 9 Desember 2021

## Abstrak
Limbah Taman Kampus berupa rumput pahitan berpotensi sebagai pakan ternak ruminansia karena kandungan selulosanya  yang tinggi, namun selulosa tersebut masih dalam bentuk lignoselulosa yang menurunkan ketercernaannya pada rumen ruminansia sehingga bentuk lignoselulosa  tersebut  perlu  didegradasi  untuk  menurunkan  kadar  lignin  sebagai  zat  anti nutrisi. Fermentasi limbah rumput pahitan menggunakan Kapang Pelapuk Kayu Indigenous Thermothelomyces guttulata KLUM 2 merupakan metode alternatif untuk menurunkan kadar lignin dalam menciptakan kadidat pakan ternak yang mudah dicerna dari limbah rumput pahitan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengamati  pengaruh  jumlah  spora  dan  waktu fermentasi terhadap kandungan lignin,  lemak kasar, dan protein  kasar selama fermentasi rumput pahitan oleh kapang pelapuk kayu Thermothelomyces guttulata KLUM 2 . Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimen  laboratories  menggunakan  metode  RAL  dengan variasi jumlah spora (1,23×10 7 ; 3,07×10 7 ; dan 6,14×10 7 sel) dan waktu fermentasi (14 dan 21 hari). Tahapan penelitian ini: (1) Preparasi limbah rumput, (2) Preparasi suspensi spora Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 ,  (3)  Fermentasi  limbah  rumput  pahitan  oleh Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 ,  dan  (4) Analisis  kadar  lignin,  protein  kasar,  dan lemak  kasar.  Hasil  penelitian  yang  dilakukan  menunjukkan  bahwa  fermentasi  limbah rumput  pahitan  dengan Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 mampu  menurunkan  kadar lignin  dan  meningkatkan  kadar  lemak  serta  protein  kasar,  namun  secara  umum  tidak dipengaruhi oleh variasi lama dan jumlah spora. Kondisi optimum yang diperoleh adalah kombinasi  jumlah  spora  6,14x10 7 sel  dan  waktu  fermentasi  21  hari  menghasilkan  kadar lignin,  kadar  lemak  kasar  dan  kadar  protein  kasar  berturut-turut  sebesar  12,20±0,25%; 2,51±0,38%; dan 11,17±0,08%. Berdasarkan hal  tersebut maka fermentasi menggunakan KPK  Indigenous Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 berpotensi  dalam  rangka menciptakan pakan ternak yang mudah dicerna oleh ruminansia.
Kata kunci : Kapang Pelapuk Kayu, KLUM 2 , rumput pahitan, fermentasi, lignin

## Abstract
Campus Park waste like pahitan grass has a potential as ruminant animal feed because of its high cellulose content, but the cellulose is still in the form of lignocellulose which reduces its digestibility in the rumen of ruminants so that the lignocellulosic needs to be degraded to  reduce  levels  of  lignin  as  an  anti-nutrient  substance.  Pahitan  grass  waste  fermentation using  Indigenous  Wood-rot  Fungi Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 is  an  alternative method to reduce lignin content to create digestable animal feed candidates from pahitan grass waste. The purpose of this study was to observe the effect of the number of spores and
fermentation  time  on  the  content  of  lignin,  crude  fat,  and  crude  protein  during  the fermentation  of  bitter  grass  by  the  wood  rot  fungi Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 . This study is a laboratory experimental study using the CRD method with variations in the number of spores (1.23 x 10 7 ; 3.07 x 10 7 ; and 6.14 x 10 7 cells) and fermentation time (14 and 21 days). The stages of this research: (1) Preparation of grass waste, (2) Preparation of spore suspension of Thermothelomyces guttulata KLUM 2 , (3) Fermentation of pahitan grass waste by Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 , and (4) Analysis of lignin content, crude protein, and crude fat. The results of the research showed that the fermentation of pahitan grass waste with Thermothelomyces guttulata KLUM 2 was generally able to reduce lignin levels and increase fat and crude protein levels, but was not affected by variations in duration and  number  of  spores.  The  optimum  conditions  obtained  were  the  combination  of  the number  of  spores  6.14x10 7 cells  and  a  fermentation  time  of  21  days  resulted  in  lignin content,  crude  fat  content  and  crude  protein  content  of  12.20±0.25%;  2.51±0.38%;  and 11.17±0.08%.  Based  on  this,  fermentation  using  KPK  Indigenous Thermothelomyces guttulata KLUM 2 has the potential to be used as an alternative method in creating ruminant feed that has high digestibility.
Keywords : Wood Rot Fungi, KLUM 2 , pahitan grass, fermentation, lignin

## Pendahuluan
Keterbatasan  pakan  hijauan  untuk ternak ruminansia menjadi masalah klasik bagi  para  peternak  konvensional  di Indonesia.  Pengadaan  pakan  hijauan semakin  lama  semakin  terbatas  akibat berkurangnya jumlah lahan sumber pakan hijauan  terutama  di  daerah  perkotaan, diperparah  dengan  perubahan  musim yang  semakin  tidak  menentu  dan  masih terbatasnya teknologi pengawetan pakan.
Taman  Kampus  Universitas  Negeri Malang merupakan lahan terbuka hijau di area  kampus  yang  berfungsi  untuk menambah  nilai  estetika  kampus,  tempat penghasil  oksigen  dan  penyerap  CO 2 , daerah  resapan  air,  dan  juga  berperan sebagai pembatas bangunaan.
Berdasarkan  hasil  wawancara  dengan Pengelola  Taman  di  Universitas  Negeri Malang  diketahui  bahwa  Pemeliharaan rutin  pada  Taman  Kampus  di  Fakultas Sastra, Universitas Negeri Malang menghasilkan limbah rata-rata sebanyak 1 bak kontainer dengan volume 6.000 Liter setiap minggunya. Limbah Taman Kampus terbanyak berasal dari golongan rumput-rumputan, terutama rumput pahitan ( Axonopus compressus ).
Rumput pahitan memiliki kadar selulosa  42.5%  dan  hemiselulosa  27,1%
(Lee,  2020)  sehingga  membuka  peluang sebagai  bahan  baku  pakan  hijauan ruminansia.  Sayangnya  potensi  tersebut terhalang  untuk  dimanfaatkan  karena adalanya  zat  anti  nutrisi  berupa  lignin. Lignin  pada  hijauan  dapat  menghambat ketercernaan  suatu  pakan  pada  ternak karena  lignin  tahan  terhadap  hidrolisis enzimatik  oleh  mikroba  rumen  (Hattaka, 2000).  Lignin  dalam  hijauan  juga membentuk  ikatan  lignoselulosa  yang kuat dan erat sehingga dapat menghambat ketercernaan  selulosa  dan  hemiselulosa oleh  enzim  selulase  dan  hemiselulase dalam  rumen  (Handayani  et  al.,  2018; Wibowo  et  al.,  2019).  Akibatnya, ketercernaan  pakan  ternak  terbatas  dan nutrisi  yang  diserap  tidak  maksimal. Selain  itu,  pemberian  pakan  pada  ternak harus  memperhatikan  kualitas  maupun kuantitas  pakan  ternak  seperti  kadar protein,  lemak  dan  vitamin  harus  dapat tercukupi dan memenuhi standar (Haryanti, 2009). Berdasarkan SNI 3148- 1-2017  dan  SNI  3148-2-2017  tentang persyaratan mutu pakan ternak ruminansia, kadar lemak kasar yang dapat diterima  oleh  ternak  maksimal  6-12%, kadar protein kasar minimal 12-21%, dan kadar abu maksimal 8-12%.
Kapang pelapuk kayu (KPK) merupakan  salah  satu  mikroorganisme kelompok fungi yang mampu mendegradasi  lignin  pada  kayu  karena kemampuannya  menghasilkan  ligninase (Alesia et al., 2020). Ligninase terdiri dari lignin peroksidase (LiP), mangan peroksidase  (MnP)  dan  fenol  oskidase (lakase)  (Hikam,  2021).  Beberapa  kajian menunjukkan  apabila  KPK  dari  spesies Phanerochaete chrysosporium selain efektif  menghasilkan  ligninase  untuk mendegradasi lignin juga dapat meningkatkan  nilai  gizi  suatu  limbah untuk pakan ternak. Menurut Mulyo et al., (2014) fermentasi oleh P. chrysosporium dapat  menurunkan  kadar  lignin  dan meningkatkan  kadar  protein  kasar  kulit buah  kakao.  Sejalan  dengan  penelitian tersebut, Imsya et al. (2014) menunjukkan bahwa  fermentasi  pelepah  kelapa  sawit oleh P. chrysosporium dapat menurunkan kadar  serat  kasar,  meningkatkan  kadar protein kasar, lemak kasar dan abu.
KLUM 2 merupakan salah satu koleksi isolat  KPK  indigenous  di  Laboratorium Biokimia UM yang telah berhasil diisolasi dari  perkebunan  kakao  Sepawon,  Kediri (Delila  et  al.,  2017).  Isolat  KLUM 2 berhasil diidentifikasi
sebagai
Thermothelomices
guttulata yang
termasuk  ke  dalam  filum Ascomycetes (Iqbal, 2018), yang mana kelompok filum tersebut  diketahui  memiliki  kemampuan dalam mendegradasi lignin dengan melibatkan enzim peroksidase dan lakase (Sánchez-Corzo  et  al.,  2021).  Isolat KLUM 2 berpotensi sebagai sumber enzim ligninolitik  karena  dapat  mereduksi pewarna  metilen  biru  dalam  media selektif (Delila et al., 2017),
menghasilkan LiP, MnP, dan Lakase pada medium Kirk baik dengan sumber karbon glukosa  (Arinta,  2018),  maupun  serbuk gergajian kayu dan alkali lignin (Nurlailiyah,  2020). Dengan  demikian KPK Thermothelomyces guttulata
KLUM 2 berpotensi  digunakan  sebagai metode    alternatif  dalam  menciptakan pakan  ternak  ruminansia  yang  memiliki
ketercernaan tinggi karena kemampuannya dalam mendegradasi lignin.
Berdasarkan fakta-fakta yang dipaparkan, Peneliti tertarik untuk mempelajari pengaruh jumlah sel dengan lama fermentasi untuk menurunkan kadar lignin  sebagai  zat  anti  nutrisi  dan pengaruhnya  terhadap  perubahan  kadar lemak  kasar  dan  kadar  protein  kasar limbah  rumput  pahitan  selama  proses fermentasi  oleh  kapang  pelapuk  kayu sehingga diharapkan dapat menghasilkan limbah  yang  berpotensi  sebagai  pakan ternak  ruminansia  yang  mudah  untuk dicerna dan memenuhi SNI pakan ternak.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini antara lain berupa peralatan gelas dan peralatan  non  gelas.  Peralatan  non  gelas yang digunakan adalah: timbangan (neraca), plastic  wrap ,  benang,  sarung tangan lateks,  sumbat kapas, siring (berisi kapas  steril),  plastik,  label,  jarum  enten, bola  hisap,  baskom,  kertas  saring, indikator  universal,  kertas  aluminium, mikropipet  10  mL,  Biolo  Mix grinder swing 2000  gram  tegangan  3000  watt voltase  220  Volt,  ayakan  9  Mesh, autoclave , hot  plate  magnetic  stirrer Thermo  Fisher  Scientific  SP88857105 luas pemanas 10,8 x 10,8 cm voltase 120 Volt, hot  plate  magnetic  stirrer Thermo Scientific  Cimarec  SP131015Q  luas pemanas 18,4 x 18,4 cm voltase 230 Volt, oven,  inkubator, almari asam, almari es, vortex ,  Loyang  aluminium,  statif  dan klem, aerator  pump Yamaho  WP-103 tegangan  25  watt  aliran  1300  L/jam, selang  diameter  8  mm,  spektrofotometer UV-Vis,  Peralatan  gelas  yang  digunakan adalah:  botol  kering  berukuran  150  mL dan  1000  mL,  pipet  tetes,  gelas  ukur  10 mL dan 100 mL, spatula, gelas beaker 100 mL,  desikator,  Erlemneyer  250  mL  dan 500  mL,  tabung  reaksi  15  mL,  set  alat Soxhlet  100  mL,  labu  ukur  100  mL  dan 1000 mL, corong kaca 75 mm.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini terbagi atas dua jenis, yaitu bahan berderajat p.a dan bahan berderajat teknis.  Bahan  berderajat  p.a  yaitu  Potato Dextrose  Agar  (PDA)  (Oxoid  kode CM0139),  Petroleum  eter  (Smart  Lab), H 2 SO 4 98%  (Smart  Lab),  Tween  80 (Smart  Lab),  Asam  asetat  (Smart  Lab), dan  Natrium  asetat  (Smart  Lab).  Bahan berderajat  teknis,  yaitu  isolat  kapang pelapuk kayu Thermothelomyces guttulata KLUM 2 , limbah rumput pahitan yang  berasal  dari  dari  taman  Fakultas Sastra Universitas Negeri Malang, akuades,  lysorin,  detergen,  spirtus,  dan alkohol 70%.

## Preparasi Limbah Taman
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam percobaan  yaitu  limbah  rumput  pahitan. Limbah  rumput  yang  akan  digunakan untuk  penelitian,  sebelumnya  dilakukan preparasi. Proses preparasi diawali dengan  dicuci  secara  bersih  limbah rumput  pahitan  sampai  tanah  yang menempel  hilang.  Selanjutnya  rumput dikeringkan  selama  dua  hari  pada  terik matahari selama 5 jam antara pukul 10.00- 15.00. Limbah rumput pahitan yang sudah dikeringkan  di  udara,  lalu  dihaluskan dengan grinder , diayak dengan ukuran 20 mesh,  dan  sampel  yang  digunakan  ialah yang  lolos  penyaringan.  Berikutnya dilakukan  sterilisasi  dengan  autoklaf selama 25 menit dengan suhu 121 0 C dan tekanan  15  lbs.  Sebagian  sampel  yang telah  dipreparasi,  dilakukan  uji  kadar lignin, lemak kasar, protein kasar, dan abu dan sebagian sampel yang lain digunakan untuk  tahap  berikutnya  yaitu  proses fermentasi.
Preparasi Suspensi Spora Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Semua  tahap  preparasi  suspensi  spora dilakukan  secara  aseptik.  Isolat  kapang pelapuk kayu Indigenous
Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 diinokulasi  pada  media  PDA  miring selama 14 hari. Selanjutnya spora diambil
merujuk  pada  Susanti  (2017).  Jumlah spora dihitung berdasarkan konversi yang telah  ditentukan  oleh  Oktavia  (2018) menyatakan bahwa nilai OD660 suspensi spora  KLUM 2 yang  diperoleh  dengan metode tersebut sebesar 4,1 setara dengan densitas standar sebesar 2,6 x 10 6 sel/mL.

## Proses Fermentasi
Proses fermentasi merujuk Imsya, et al. (2014) dengan modifikasi. Variasi jumlah spora Thermothelomyces guttulata KLUM 2 yang  digunakan  yaitu  1,23x10 7 ; 3,07x10 7 ;  dan  6,14x10 7 sel Masing- masing  diinokulasikan  ke  dalam  media fermentasi  yang  terdiri  dari  5  gram gilingan rumput pahitan ditambah dengan larutan buffer asetat dengan volume akhir 50  mL.  Setiap  variasi  jumlah  spora difermentasi selama 14 dan 21 hari. Hasil fermentasi ditentukan kadar lignin, lemak kasar, dan kadar protein kasarnya.

## Penentuan Kadar Lignin
Kadar lignin ditentukan dengan metode  Klason  dan  dilakukan  sebanyak dua  kali  ulangan.  Sebanyak  0,2  gram sampel  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol selama  12  jam.  Sampel  hasil  estraksi dipindah  ke  dalam  Erlenmyer  dan ditambah  7,5  mL  Asam  sulfat  72%  dan dimasukkan bak perendaman pada temperatur  20  °C  sambil  diaduk  dengan batang  pengaduk  selama  2-3  menit. Erlenmeyer  ditutup  dan  dibiarkan  pada bak  perendaman  selama  dua  jam  sambil sesekali diaduk. Sampel dituang ke dalam Erlenmeyer  dan  diencerkan  dengan aquadest  hingga konsentrasi  Asam  sulfat menjadi  3%  lalu  dilakukan  autoklaf selama  30  menit  dengan  suhu  121 0 C. Didinginkan dan didiamkan selama 2 jam sampai endapan lignin mengendap sempurna.  Disaring  endapan  dengan kertas  saring  yang  telah  diketahui beratnya.  Dicuci  endapan  lignin  dengan air  panas  hingga  netral.  Dicuci  endapan lignin  dengan  air  panas  hingga  netral. Endapan yang diperoleh dioven pada suhu 105 °C selama 30 menit lalu didinginkan
dalam  desikator  dan  dtimbang  hingga didapat  berat  konstan.  Kadar  lignin ditentukan menggunakan persamaan 1.
%Lignin = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑛𝑑𝑎𝑝𝑎𝑛 𝑙𝑖𝑔𝑛𝑖𝑛 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 × 100% ...(1)

## Penentuan Kadar Lemak Kasar
Kadar  lemak  kasar  ditentukan  dengan metode    Soxhletasi  dan  dilakukan sebanyak  dua  kali  ulangan.  Ekstraksi lemak  kasar  pada  sampel  dilakukan dengan  Soxhlet  menggunkan  pelarut lemak yaitu petroleum eter. Langkah awal adalah  sampel  ditimbang  sebanyak  2 gram  setiap  pengujian  dimasukkan  ke dalam  kertas  saring  lalu  dibungkus  rapat dan dipasang tali. Berikutnya labu lemak dan  pecahan  porselen  juga  dilakukan penimbangan.  Sampel  disambungkan pada tabung Soxhlet, ditambah ±150 mL petroleum  eter,  Dirangkai  alat,  dan dilakukan ekstraksi selama ±4 jam. Labu lemak yang berisi sampel dioven dengan suhu  105 0 C  selama  2  jam,  selanjutnya dimasukan  desikator  ±30  menit.  Labu lemak  ditimbang  hingga  diperoleh  bobot tetap.  Rumus  perhitungan  kadar  lemak kasar dapat dilihat pada persamaan 2.
%Lemak kasar= 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑙𝑒𝑚𝑎𝑘 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 ×100% …(2)

## Penentuan Kadar Protein Kasar
Pengujian kadar protein kasar dilakukan menggunakan metode Kjeldahl dengan  jumlah  sampel  sebanyak  1  gram setiap  kali  ulangan.  Proses  ini  dilakukan di  Laboratorium  Pakan  Ternak  Dinas Peternakan  dan  Perikanan  Kabupaten
Blitar yang berlokasi di Jalan
Cokroaminoto No. 22, Kota Blitar.

## Hasil dan Pembahasan
Karakteristik  Kimiawi  Limbah  Rumput Pahitan
Rumput pahitan segar yang merupakan limbah hasil pemangkasan taman kampus tampak  berwarna  hijau  terang.  Setelah dikeringkan,  rumput  tampak  layu  dan berwarna  coklat.  Hasil  preparasi  akhir berupa  serbuk  rumput  kering  yang  lolos melalui ayakan 20 Mesh. (Gambar 1).
Rumput  pahitan  mengandung  kadar lignin  yang  tinggi  sebesar  19,05±0,38%, kadar protein kasarnya sebesar 10,79±0,19% dan kadar 1,12±0,15 (Tabel
1). Hasil ini menunjukkan bahwa rumput pahitan kurang baik jika digunakan secara langsung  sebagai  pakan  hijauan  ternak, selain  kadar  ligninnya  tinggi,  kadar protein  lebih  rendah  daripada  yang ditetapkan dalam SNI.
Peremajaan  Isolat  KPK  Indigenous Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Hasil  pengamatan  menunjukkan  jika Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 yang  diinkubasi  selama  14  hari  pada media PDA miring, menghasilkan miselium  berwarna  coklat  dan  kasar seperti  kapas  di  bagian  permukaannya (Gambar  2).  Morfologi  yang  dihasilkan memiliki  kemiripan  dengan  penelitian sebelumnya,  di  mana  hal  tersebut menunjukkan  jika  isolat  yang  dibiakkan dan  digunakan  merupakan  biakan  murni seperti biakan induknya.
Tabel 1 . Kandungan rumput pahitan (%)
sebelum fermentasi Komponen Kadar (%) SNI Pakan Ruminansia (%) Lignin 19,05 ±0,38 - Protein kasar 10,79 ±0,19 Minimal 12–21 Lemak kasar 1,12 ±0,15 Maksimal 6–12
Gambar  1. Tahapan  preparasi  sampel  limbah  rumput  pahitan:  (a)  sebelum preparasi; (b) setelah pengeringann; (c) setelah penggilingan
Gambar  2. Morfologi  secara  makroskopis Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 pada media PDA miring selama 14 Hari (a) Nurlailiyah (2020); (b) Mutmainah (2020); (c) Peneliti.
Kapang Pelapuk Kayu Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Kadar Lignin
Hasil
penelitian menunjukan terjadinya  penurunan  kadar  lignin  dalam limbah  rumput  pahitan  oleh  KPK Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 . Perlakuan  variasi  jumlah  spora  (dengan waktu  yang  tetap)  yang  dipilih  tidak menunjukkan terjadinya penurunan kadar lignin, sedangkan perlakuan variasi waktu fermentasi  (dengan  jumlah  spora  yang tetap) menunjukkan terjadinya penurunan kadar  lignin.  Semakin  lama  waktu fermentasi,  semakin  besar  penurunan kadar lignin yang terjadi (Tabel 2).
Tabel 2. Kadar lignin (%) pada fermentasi limbah rumput pahitan menggunakan Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Jumlah Spora (Sel) Lama Fermentasi 14 Hari 21 Hari 0 18.75±0.00 18.82±0,25 1,23×10 7 16,74±0,10 14,91±0,08 3,07×10 7 17,02±0,40 14,52±0,56 6,14×10 7 17,62±0,78 12,20±0,25
Penurunan  kadar  lignin  yang  terjadi disebabkan  oleh  adanya  perombakan kandungan  lignin  oleh  aktivitas  enzim lignoselulase yang dihasilkan oleh kapang pelapuk  kayu  (Noeferdiman  &  Yani, 2013;  Suningsih  et  al,  2019).  Semakin lama  waktu  fermentasi  maka  semakin banyak  jumlah  enzim  yang  dihasilkan sehingga  penurunan  kadar  lignin  akan semakin besar.
Parameter  ketercernaan  pakan  ternak pada  penelitian  ini  diamati  dari  hasil perubahan  kadar  lignin  yang  terjadi selama proses fermentasi. Merujuk penelitian  sejenis,  Imsya  et  al.  (2014) melakukan  fermentasi  limbah  pelepah sawit oleh P. chrysosporium , menggunakan  kadar  serat  kasar  sebagai parameter ketercernaan pakan ternak. Hal ini menyebabkan penelitian ini tidak dapat dibandingkan  secara  langsung  dengan penelitian tersebut. Pada penelitian Imsya et al. (2014) kadar serat kasar mengalami penurunan tertinggi dari 39,85% menjadi 25,51%.
Serat  kasar  sendiri  terdiri  dari  lignin, selulosa,  dan  hemiselulosa  yang  saling berikatan  erat.  Pada  ternak  ruminansia, selulosa  dan  hemiselulosa  dapat  dicerna
a b
c
a b c
dengan baik di dalam rumen oleh bantuan mikroba  penghasil  enzim  selulase  dan hemiselulase.  Selulosa  dan  hemiselulosa didegradasi  untuk  menghasilkan  energi yang  digunakan  untuk  pertumbuhan mikroba  rumen  maupun  induk  semang (Wandra  et  al.,  2020).  Sementara  lignin yang  berikatan  kuat  dengan  selulosa  dan hemiselulosa  justru  berperan  dalam menghambat  ketercernaan  suatu  pakan ternak (Handayani et al., 2018; Wibowo et al.,  2019).  Keberhasilan  penelitian  ini dilihat dari adanya penurunan kadar lignin yang  artinya  mampu  meningkatkan ketercernaan  suatu  pakan  ternak.  Data penelitian menunjukkan penurunan kadar lignin tertinggi diperoleh pada kombinasi jumlah  spora  6,14x10 7 sel  dan  waktu fermentasi  21  hari,  yaitu  turun  dari 19,05±0,38% menjadi 12,20±0,25%.

## Kadar Lemak Kasar
Hasil  penelitian  menunjukan  kadar lemak  kasar  limbah  rumput  pahitan selama fermentasi dapat dikatakan mengalami  peningkatan  meski  hasil datanya fluktuatif (Tabel 3).
Tabel  3. Kadar  lemak  kasar  (%)  pada fermentasi limbah rumput pahitan menggunakan Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Jumlah Spora (Sel) Lama Fermentasi 14 Hari 21 Hari 0 1,395±0,29 1,45±0,31 1,23×10 7 2,49±0,28 5,47±1,67 3,07×10 7 3,435±0,21 6,32±1,72 6,14×10 7 2,435±0,19 2,51±0,38
Perlakuan  penambahan  jumlah  spora (pada  waktu  fermentasi  yang  sama) menunjukkan  adanya  tren  di  mana  kadar lemak  kasar  naik  seiring  penambahan jumlah  spora  1,23×10 7 sel  dan  6,14×10 7 sel  tetapi  mengalami  penurunan  setelah penambahan jumlah spora sebesar 6,14×10 7 sel. Menurut Yasar et al. (2019) penurunan  kadar  lemak  kasar  diduga disebabkan oleh penggunaan lemak untuk
pertumbuhan  fungi  itu  sendiri.  Sejalan dengan pernyataan Pratiwi (2015) penurunan  kadar  lemak  dimungkinkan karena aktivitas mikroba dalam memecah lemak  menjadi  asam  lemak  dan  gliserol sebagai  sumber  energi.  Semakin  banyak jumlah  sel,  semakin  banyak  pula  lemak yang  dibutuhkan  oleh  kapang  untuk menghasilkan  energi,  akibatnya  produksi lemak kasar menurun.
Kadar lemak kasar mengalami peningkatan seiring dengan meningkatnya waktu fermentasi. Kenaikan kadar lemak kasar  diduga  dipengaruhi  oleh  kenaikan jumlah sel kapang, dan produk metabolitnya berupa lemak seperti komponen  membran  organel  sel  kapang itu sendiri tersusun.
Pada  penelitian  ini  juga  dilakukan identifikasi  apakah  ada  perubahan  kadar lemak  kasar,  dan  kadar  protein  kasar selama  proses  fermentasi  berlangsung. Hal tersebut dilakukan untuk mengetahui pada  penurunan  kadar  lignin  tertinggi, apakah parameter lain seperti kadar lemak kasar  dan  kadar  protein  kasar  masih memenuhi kriteria sebagai kandidat pakan ternak  yang  baik  atau  tidak  berdasarkan Standar Nasional Indonesia.
Menurut  standar  pakan  ternak  untuk ruminansia,  maksimal  lemak  kasar  yang diizinkan untuk dikonsumsi ternak berkisar 6-12% tergantung jenis ternaknya.  Lemak  kasar  bagi  ternak dimanfaatkan  sebagai  sumber  penghasil energi, namun apabila dikonsumsi secara berlebihan  dapat  mengganggu  proses pencernaan  dalam  rumen,  diantaranya mengakibatkan lemak akan menyelubungi serat pakan sehingga tidak dapat terdegradasi dengan baik, bahkan adanya lemak  tidak  jenuh  yang  bersifat  toksik dapat  mengganggu  populasi  probiotik  di dalam  rumen  (Wina  et  al.,  2013).  Pada kondisi  optimum  penurunan  kadar  lignin (kombinasi jumlah spora 6,14×10 7 sel dan waktu  fermentasi  21  hari)  kadar  lemak kasar yang dihasilkan sebesar 2,51±0,38%. Kadar lignin yang diperoleh masih  memenuhi  syarat  kriteria  pakan
ternak  yang  layak  dikonsumsi  oleh ruminansia  (6-12%)  berdasarkan  SNI 3148-1-2017  dan  SNI  3148-2-2017 tentang persyaratan mutu pakan ternak.

## Kadar Protein Kasar
Kadar  protein  kasar  yang  dihasilkan dari  penelitian  menunjukkan  terdapat adanya peningkatan meski hasil data yang dihasilkan cenderung fluktuatif, khususnya  pada  fermentasi  hari  ke-21, sedangkan  fermentasi  pada  hari  ke-14 terjadi  peningkatan  kadar  protein  kasar dari  10,82±0,06%  menjadi  11,455± 0,08%.  Peningkatan  kadar  protein  pada hari ke-14 diduga karena pertumbuhan sel kapang  masih  di  fase  eksponensial, sedangkan penurunan kadar protein kasar pada  hari  ke-21  kemungkinan  karena kapang  memasuki  fase  stationer  yang menggunakan  sebagian  protein  yang dihasilkan di fase eksponensial digunakan sebagai sumber energi (Tabel 4).
Tabel  4. Kadar  protein  kasar  (%)  pada fermentasi limbah rumput pahitan menggunakan Thermothelomyces guttulata KLUM 2 Jumlah Spora (Sel) Lama Fermentasi 14 Hari 21 Hari 0 10,82 ±0,06 10,49±0,06 1,23×10 7 11,10 ±0,30 10,895±0,30 3,07×10 7 11,252±0,57 9,87± 0,57 6,14×10 7 11,455±0,08  11,17±0,08
Protein kasar atau N total dimanfaatkan oleh  mikroba  pada  rumen  ruminansia untuk  pertumbuhan  dan  sintesis  protein mikroba dalam mencerna nutrien (Zahera et  al.,  2020).  Kekurangan  protein  akan menurunkan efektivitas pencernaan pakan pada  rumen  karena  pengaruh  jumlah protein  mikroba  yang  dihasilkan.  Kadar
protein  kasar  yang  dihasilkan  pada kondisi  optimim  penurunan  kadar  lignin yaitu  sebesar  11,17±0,08%.  Meskipun kadar  protein  kasar  yang  dihasilkan hampir  mendekati  nilai  minimal  12%, namun  masih  belum  sesuai  dengan standar  pakan  ternak  berdasarkan  SNI 3148-1-2017  dan  SNI  3148-2-2017  (12- 21%).  Untuk  memenuhi  syarat  minimal kadar  protein  kasar  yang  diberikan  pada ruminansia  dapat  dilakukan  dengan penambahan  konsentrat  pada  pakan ternak.

## Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan  bahwa  fermentasi  limbah rumput  pahitan  mampu  menurunkan kadar  lignin  dan  meningkatkan  kadar lemak  kasar  dan  protein  kasar  namun secara  umum  tidak  dipengaruhi  oleh variasi  lama  dan  jumlah  spora.  Kondisi optimum yang diperoleh adalah kombinasi jumlah spora 6,14x10 7 sel dan waktu  fermentasi  21  hari  menghasilkan kadar lignin, kadar lemak kasar dan kadar protein kasar  berturut-turut sebesar 12,20±0,25%; 2,535±0,35%; dan 11,17±0,08%.  Berdasarkan  hal  tersebut maka  fermentasi  menggunakan  KPK Indigenous Thermothelomyces  guttulata KLUM 2 berpotensi  digunakan  sebagai metode  alternatif  dalam  menciptakan pakan  ternak  yang  mudah  dicerna  oleh ruminansia.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terimakasih  atas  pendanaan penelitian  melalui  Hibah  Skripsi  PNBP UM  2021  dengan  nomor  surat  tugas 5.3.1420/UN32.14/LT/2021 oleh l embaga  Penelitian  dan  Pengabdian Masyarakat (LP2M) Universitas
Negeri Malang.

## Daftar Pustaka
Alesia,  M.,  Suwandi,  S.,  Suparman,  S. 2021.  Aktivitas  Pelapukan  Kayu Inokulum Ganodermaboninense pada Tumpangsari Bibit Kelapa Sawit dan Talas-Talasan. Sainmatika:  Jurnal
Ilmiah Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam , 18 (1), 108-115.
Arinta,  A.  2018.  Penentuan  Profil Ligninase dari Kapang Pelapuk Kayu Isolat  Indigenus  KLUM 1 ,  KLUM 2 ,
dan PnUM. Skripsi . Malang: Universitas Negeri Malang.
Delila,  L.,  Susanti,  E.,  Sanjaya,  E.H.
2017.  Isolation  and  Screening  of Indigenous Fungus Producing Lignin Peroxidase from the Cocoa Plantation in Sepawon Kediri Regency Indonesia. KnE  Life  Sciences ,  3(5), 131-138.
Handayani,  S.,  Harahap,  A.E.,  Saleh,  E., 2018.  Kandungan  fraksi  serat  silase kulit pisang Kepok (Musa paradisiaca)  dengan  Penambahan level  dedak  dan  lama  Pemeraman yang  berbeda. J.  Peternakan, 15(1): 1-8.
Hatakka, A. 2000. Biodegration of Lignin.
University of Helsinki, Viikki Biocenter,  Department  of  Applied Chemistry dan Microbiology,
Helsinki.
Hikam,  A.,  Yulianti,  D.,  Ginanjar,  R.
2021.  Diversitas  dan  Potensi  Jamur Lignolitik  Asal  Seresah  Daun. Al- Hayat:  Journal  of  Biology  and Applied Biology , 4(1), 33-42.
Imsya, A., Laconi, E.B., Wiryawan, K.G., Widyastuti,  Y.  2014.  Biodegradasi Lignoselulosa dengan Phanerochaete chrysosporium  terhadap  Perubahan Nilai  Gizi  Pelepah  Sawit. Jurnal Peternakan Sriwijaya , 3(2).
Iqbal,  M.I.  2018.  Analisis  Kekerabatan Kapang  Pelapuk  Kayu  Isolat  Lokal KLUM 1 , KLUM 2 dan PnUM Menggunakan Amplikonr RNA dengan  Primer  Internal  Transcribed Spacer  Its4  -  Its5. Skripsi .  Malang: Universitas Negeri Malang.
Lee, J.T.E., Wang, Q., Lim, Y.E., Liu, Z.,
He, J., Tong, Y.W. 2020. Optimization  of  Bioaugmentation  of The Anaerobic Digestion of Axonopus compressus Cow Grass for The  Production  of  Biomethane. Journal of Cleaner Production , 258. Mulyo, A.M.H., Yakin, E.A. 2014. Lignin Content  in  Fermentation  of  Cocoa Pod  Husk  (Theobroma  Cocoa)  Used Phanerochaete Chrysosporium. International Congresson Challenges of  Biotechnological  Research  in Food  and  Health. Surakarta:  Slamet Riyadi University.
Mutmainah, S. 2020. Eksplorasi
Ligninase  Dari  Kapang  Pelapuk Kayu  Indigenos Thermothelomyces guttulata KLUM 2 dalam  Medium Kirk-Alkali  Lignin. Skripsi . Malang:
Universitas Negeri Malang.
Noferdiman,  Yani,  A.  2013.  Kandungan
Nutrisi Lumpur Sawit Hasil Fermentasi dengan P. chrysosporium.
Agripet, 13(2). 47-52.
Nurlailiyah, E.P. 2020. Pengaruh Variasi Sumber  Karbon  Terhadap  Produksi Ligninase dari Isolat Kapang Pelapuk Kayu  Indigenous  KLUM 1 ,  KLUM 2 , dan PnUM. Skripsi . Malang: Universitas Negeri Malang.
Pratiwi, I., Fathul, F., Muhtarudin. 2015.
The  Effect  of  Different  Additioning Starter  to  Making  Silage  On  Crude Fiber  Content,  Crude  Fat,  Water Content, and Material Extract Without  Nitrogen  Silag. Jurnal Ilmiah  Peternakan  Terpadu, 3(3): 116-120.
Oktavia,  Jonava.  2018.  Optimasi  Jumlah Sel  Inokulum  dan  Waktu  Inkubasi Kapang  Pelapuk  Kayu  Indigenous Isolat  KLUM 1 ,  dan  KLUM 2 untuk Dekolorisasi  Reactive  Black  5. Skripsi .  Malang:  Universitas  Negeri Malang.
Sánchez-Corzo,  L.D.,  Álvarez-Gutiérrez,
P.E.,  Meza-Gordillo,  R.,  Villalobos-
Maldonado,  J.J.,  Enciso-Pinto,  S., Enciso-Sáenz, S. 2021.
Lignocellulolytic Enzyme Production From  Wood  Rot  Fungi  Collected  in Chiapas,  Mexico,  and  Their  Growth On  Lignocellulosic  Material. J.
Fungi , 7, 450.
Suningsih, N., Ibrahim, W., Liandris, O., Yulianti, R. 201). Kualitas Fisik dan Nutrisi  Jerami  Padi  Fermentasi  pada Berbagai Penambahan Starter. Jurnal Sain Peternakan Indonesia , 14(2).
Wahyono,  T.,  Jatmiko,  E.,  Firsoni,
Hardani,  S.N.W.,  Yunita,  E.  201). Evaluasi  Nutrien  dan  Kecernaan  In Vitro  Beberapa  Spesies  Rumput
Lapangan Tropis di  Indonesia. Sains
Peternakan , 17(2), 17-23. Wibowo, S.A., Christiyanto, M., Nuswantoro, L.K., Pangestu, E. 201).
Kecernaan  Serat  Berbagai  Jenis Pakan Produk Samping Pertanian (By Product)  sebagai  Pakan  Ternak Ruminansia  yang  di  Uji  Secara  In Vitro . Jurnal Litbang Provinsi Jawa
Tengah , 17(2). Susanti, E. 2017. Identifikasi Molekular dan Profil Phanerochaete chrysosporium  Isolat  ITB.  Optimasi Produksi, Karakterisasi dan Eksplorasi Potensi Lignin Peroksidasenya  untuk  Dekolorisasi Reaktif  Black  5. Disertasi .  Malang: Universitas Brawijaya.
SNI-3148-1-2017.  Pakan  Konsentrat- Bagian 2: Sapi Perah. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional SNI-3148-2-2017.  Pakan  Konsentrat- Bagian  2:  Sapi  Potong.  Jakarta:
Badan Standarisasi Nasional
Wandra, F.A. Pranowo, A.K., Hernaman,
I.,  Tanuwiria,  U.H.,  Ayuningsih,  B. 2020.  Fermentabilitas  ransum  yang mengandung ampas bir dalam cairan rumen  (in  vitro).  Jur nal  Sain Peternakan  Indonesia ,  15  (2),  227- 235.
Wina,  E.,  Susana,  I.W.R.  2013.  Manfaat Lemak Terproteksi untuk Meningkatkan Produksi dan Reproduksi Ternak Ruminansia.
WARTAZOA , 23(4), 176-184. Yasar, S., Tosun, R. 2019. Increasing the nutritional qualities of tomato pomace  by  yeast  fermentation. 4th International  conferenceonadvances in  natural  &  applied  sciences
agriculture .
Zahera, R.,  Anggraeni, D., Rahman, Z.A.,
Evvyernie, D. 2020. Pengaruh Kandungan  Protein  Ransum  yang Berbeda  terhadap  Kecernaan  dan Fermentabilitas  Rumen  Sapi  Perah secara In vitro The Effect of Different Feed Protein Contenton Digestibility and  Fermentability  of  Dairy  Rumen using  In  vitro. Jurnal  Ilmu  Nutrisi dan Teknologi Pakan , 18(1): 1-6.