UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAUN MELINJO ( Gnetum gnemon L. )

## TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Streptococcus mutans
The Natalia C Taroreh 1) , Jimmy F.Rumampuk 1) , Krista Veronica Siagian 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Caries is the oral health problems most often occur in Indonesia, which is caused by several factors:  the  hosts,  the  substrate,  microorganisms,  and  time.  One  of  the  leading  causes  of  bacterial caries is Streptococcus mutans. Several studies of various types of herbs have been made to control the growth of harmful bacteria in the oral cavity. Plants in Indonesia is often used as a herbal plant material  that  leaves  melinjo  (Gnetum  gnemon  L)  because  melinjo  leaves  contain  active  compounds such  as  alkaloids, flavonoids,  steroids  and  tannins that  have the  antibacterial  effectivity.  This study was  aimed  to  explore  the  antibacterial  effectivity  extract  of  melinjo  leaves  against  Streptococcus mutans.  This study is  an  experimental  research laboratory,  with  the  design of  post-test  only control group  design.  This  study  is  experimental  with  Kirby-bauer  method  using  filter  paper.  Melinjo  leaf samples  were  extracted  by  maceration  method  using  ethanol  96%.  Streptococcus  mutans  is  a bacterium  pure  stock  of  F.MIPA  Microbiology  Laboratory  of  Pharmacy  University  of  Sam Ratulangi.The results showed melinjo leaf extract (Gnetum gnemon L.) has antibacterial effectiveness in inhibiting the growth of Streptococcus mutans and inhibition zone formed by 10.6 mm.
Keywords : leaves melinjo (Gnetum gnemon L), Streptococcus mutans, inhibition zone

## ABSTRAK
Karies merupakan masalah kesehatan gigi dan mulut yang paling sering terjadi di Indonesia, yang  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  yaitu  host,  substrat,  mikroorganisme,  dan  waktu.  Salah  satu bakteri  penyebab  utama  timbulnya  karies  yaitu Streptococcus  mutans. Beberapa  penelitian  tentang berbagai  jenis  tumbuhan  herbal  telah  dilakukan  untuk  mengendalikan  pertumbuhan  bakteri-bakteri yang merugikan di dalam rongga mulut. Tanaman di Indonesia yang sering digunakan sebagai bahan tumbuhan  herbal  yaitu  daun  melinjo  ( Gnetum  gnemon  L )  karena  daun  melinjo  memiliki  kandungan senyawa aktif seperti alkaloid, flavonoid, steroid, dan tanin yang mempunyai efek antibakteri.Tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui  daya  hambat  ekstrak  daun  melinjo  terhadap  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  mutans .  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium,  dengan rancangan post-test only control group design. Metode pengujian yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan menggunakan metode modifikasi Kirby-Bauer dengan menggunakan paper disk . Sampel daun  melinjo  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Bakteri Streptococcus  mutans merupakan  stok  bakteri  murni  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  F.MIPA Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  daun  melinjo ( Gnetum gnemon L. ) memiliki efektivitas antibakteri dalam menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans dan zona hambat yang terbentuk sebesar 10,6 mm.
Kata kunci : daun melinjo ( Gnetum gnemon L ), Streptococcus mutans, zona hambat

## PENDAHULUAN
Karies  merupakan  masalah  kesehatan gigi dan mulut yang paling sering terjadi di
Indonesia. Berdasarkan data Riset Kesehatan  Dasar  (Riskesdas)  Indonesia tahun 2013 menunjukkan bahwa penduduk
Indonesia dalam 12 bulan terakhir mengalami  masalah  kesehatan  gigi  dan mulut  yaitu  sebesar  25,9%  dan  index DMF-T  ( Decay  Missing  Filling-Teeth ) nasional  mencapai  4,6%  yang  artinya kerusakan gigi penduduk Indonesia mencapai  460  buah  gigi  per  100  orang (Anonim, 2013).
Karies  disebabkan  oleh  beberapa faktor yaitu host, substrat, mikroorganisme dan  waktu.  Salah  satu  bakteri  yang merupakan  penyebab  utama  timbulnya karies  yaitu Streptococcus mutans (Kidd  & Joyston-Bechal, 1992). Streptococcus mutans merupakan  bakteri  kariogenik yang  mampu  melekat  di  permukaan  gigi, meningkatkan kumpulan plak, menghasilkan  glukan  dan  polisakarida, yang  menyebabkan  demineralisasi  email gigi (Lamont RJ & Jenkinson, 2010; Ryan KJ & Ray CG., 2004).
Beberapa  penelitian  tentang  berbagai jenis  tumbuhan  herbal  telah  dilakukan untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri-bakteri  yang  merugikan  di  dalam rongga  mulut,  untuk  mendukung  upaya peningkatan  kesehatan  gigi.  Tumbuhan herbal  sudah  sejak  dulu  digunakan masyarakat Indonesia sebagai bahan pengobatan  alami,  karena  penggunaan tumbuhan sebagai pengobatan alami diyakini  memiliki  efek  jauh  lebih  rendah tingkat bahayanya dibandingkan pengobatan  modern,  serta  murah  dan mudah diperoleh(Muhlisah, 2008).
Salah satu  tanaman di  Indonesia  yang sering digunakan sebagai bahan pengobatan  alami  yaitu  melinjo.  Melinjo
( Gnetum  gnemon  L.) merupakan  tanaman yang berasal dari daerah tropis, masyarakat pada  umumnya  memanfaatkan  sebagai bahan  pengolahan  emping  melinjo  dan sayuran  (Setiowati  T  &  Furqonita,  2007; Sunaro, 1991). Melinjo sering dimanfaatkan  untuk  mengobati  berbagai jenis  penyakit  seperti  susah  buang  air kecil,  digigit  anjing,  penyakit  mata, anemia  dan  busung  lapar  (Hariana,  2008). Melinjo  memiliki  kandungan  senyawa aktif  seperti  alkaloid,  flavonoid,  steroid dan  tanin  (Kining,  2015).  Senyawa  kimia seperti  flavonoid  dan  tanin  memiliki  efek sebagai  antibakteri  (Noor  &  Apriasari, 2014).
Penelitian  mengenai  ekstrak  daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. )  pernah dilakukan  Kining  di  Bogor  pada  tahun 2015  menunjukkan  ekstrak  daun  melinjo dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa (Kining,2015). Tetapi  belum  pernah  dilakukan  penelitian mengenai  daya  hambat  ekstrak  daun melinjo terhadap pertumbuhan
Streptococcus mutans. Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,
penulis tertarik untuk melakukan penelitian tentang uji daya hambat ekstrak daun  melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ) terhadap bakteri Streptococcus mutans .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  eksperimental  murni  ( true experimental  desain )  dengan  rancangan post-test  only  control  group  design. Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi F. MIPA Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  pada bulan  Mei  tahun  2016.  Subjek  pada penelitian  ini  ialah  bakteri Streptococcus mutans yang  diperoleh  dari  stok  bakteri
murni  di  Laboratorium  Mikrobiologi
F.MIPA Farmasi Universitas
Sam Ratulangi  Manado.  Ekstrak  daun  melinjo ( Gnetum gnemon L.) yang di dapat dengan cara ekstrasi dengan maserasi menggunakan pelarut etanol 96%.
Sampel  daun  melinjo  diperoleh  dari
Kepulauan  Sangihe.  Sampel  yang  sudah dikeringkan selama beberapa hari, diblender hingga berbentuk serbuk, kemudian  dimaserasi  dengan  etanol  96% selama  5  hari  di  dalam  ruangan  tanpa cahaya  matahari.  Setelah  itu  disaring dengan  menggunakan  kertas  saring  dan diuapkan dengan vacuum rotary evaporator pada temperatur 40 o C selama 2 jam  lalu  tuang  dalam  botol  steril  kaca tertutup dan disimpan di lemari pendingin.
Metode  pengujian  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu metode modifikasi Kirby-Bauer dengan menggunakan paper disk . Bakteri Streptococcus mutans yang telah disimpan di  media  agar  yang  diambil  dengan  jarum ose  steril,  lalu  ditanam  pada  media  agar miring  dengan  cara  menggores.  Bakteri yang  telah  digores  pada  media  agar diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu 37 0 C selama 1x24 jam. Bakteri yang telah diinkubasi  selama  1x24  jam  diambil koloninya  dari  media  agar  miring  dengan menggunakan  jarum  ose  steril  kemudian dimasukkan  ke  dalam  media  BHI-B sampai kekeruhannya sama dengan standar Mcfarland.  Bakteri  lalu  diambil  dengan menggunakan  mikropipet  sebanyak  0,2 mL dan diteteskan  pada  media MHA, lalu diratakan dengan menggunakan drill glass sampai permukaannya tertutupi.
Selanjutnya paper disk pertama dicelupkan ke dalam ekstrak daun melinjo, paper disk kedua  dicelupkan  dalam  akuades  sebagai kontrol  negatif,  kemudian paper  disk ketiga dicelupkan dalam larutan
amoksisilin  sebagai  kontrol  positif  dan diletakkan  diatas  media  MHA  yang  telah diletakkan  bakteri Streptococcus  mutans . Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada masing-masing 5  cawan  petri. Selanjutnya itu  cawan  petri  diinkubasi  dengan  suhu 37 0 C selama 1x24 jam di dalam inkubator. Kemudia zona hambat diamati dan diukur.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi F.MIPA Farmasi Universitas Sam Ratulangi
Manado,  yang  terdiri  dari  tiga  kelompok yaitu  ekstrak  daun  melinjo  ( Gnetum gnemon  L. )  sebagai  kelompok  perlakuan, amoksisilin  sebagai  kontrol  positif  dan akuades  sebagai  kontrol  negatif.  Ketiga kelompok menggunakan paper disk dengan  diameter  5  mm.  Konsentrasi ekstrak daun melinjo ( Gnetum gnemon L. ) yang digunakan ialah 100% dan amoksisilin  0,1  %.  Hasil  pengukuran diameter  zona  hambat  ekstrak  daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ),  amoksisilin dan akuades terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Hasil  pengukuran  pada  Tabel  1 menunjukkan bahwa diameter zona hambat terbesar terdapat pada cawan petri ke lima amoksisilin sebagai kontrol positif yaitu sebesar  20,0 mm,  sedangkan diameter  zona  hambat  terbesar  pada ekstrak daun melinjo ( Gnetum gnemon L. ) terdapat  pada  cawan  petri  ke  empat  yaitu sebesar  11,5  mm  dan  memiliki  diameter zona  hambat  terkecil  pada  cawan  petri pertama  yaitu  sebesar  9,5  mm.  Hasil pengukuran  pada  kontrol  negatif  yaitu akuades, tidak terbentuk zona hambat.
Berdasarkan  Tabel  1,  total  diameter zona hambat ekstrak daun melinjo sebesar
53,0  mm  dengan  rata-rata  10,6  mm.  Total
diameter  zona  hambat  amoksisilin sebagai kontrol positif sebesar  96,0 mm  dengan rata-rata 19,2 mm.
Tabel  1 .  Diameter  zona  hambat  ekstrak  daun  melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ),  amoksisilin (kontrol  +),  akuades  (kontrol  -)  dengan  pengukuran  menggunakan  rumus  diameter  zona
hambat
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  pada kelompok  kontrol  positif  amoksisilin memiliki diameter zona hambat yang lebih besar  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ),  hal  ini disebabkan karena MIC amoksisilin terhadap Streptococcus  mutans sudah diketahui yakni sebesar 32µg/mL
sedangkan untuk kemampuan ekstrak daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. )  belum
diketahui MIC ( Minimal inhibitor concentration ) dalam menghambat
Streptococcus  mutans (Jarvine  dkk,1993).
Amoksisilin juga merupakan obat antibiotik turunan penisilin dengan spektrum  luas  yang  aktif  melawan  bakteri gram  positif  dan  merupakan  obat  pilihan utama  untuk  infeksi  kelompok  bakteri Streptococcus viridians (Neal,2006; Brooks dkk,2008).
Caw an petri Ekstrak daun melinjo ( Gnetum gnemon L. ) Amoksisilin (kontrol +) Akuades (kontrol-) Diamet er Horizo ntal (mm) Diame ter Vertik al (mm) Diame ter zona hamb at (mm) Diamet er Horizo ntal (mm) Diame ter Vertik al (mm) Diame ter zona hamb at (mm)
Diamet er Horizo ntal (mm) Diame ter Vertik al (mm) Diame ter zona hamb at (mm) 1 2 3 4 5 Tota l Rera ta 10 11 10 11 11 9 10 11 12 11 9,5 10,5 10,5 11,5 11,0 53,0 10,6 18 19 17 20 20 20 19 20 19 20 19,0 19,0 18,5 19,5 20,0 96,0 19,2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Tabel  2 .  Perbandingan  diameter  zona  hambat  ekstrak  daun  melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ), amoksisilin (kontrol +), akuades (kontrol -)
Cawan petri Diameter zona hambat (mm) Ekstra k daun melinjo
( Gnetu m gnemo n L. )
Amoksisili n (kontrol +) Akuade s (kontro
l-)
1 2 3 4 5 Total Rerata Katego ri 9,5 10,5 10,5 11,5 11,00 53,0 10,6 Sedang 19,0 19,0 18,5 19,5 20,0 96,0 19,20 Kuat 0 0 0 0 0 0 0 -
Tabel  2  menunjukkan  perbandingan diameter  zona  hambat  ekstrak  daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ),  amoksisilin (kontrol  +)  dan  akuades  (kontrol  -).  Tabel 2  menunjukkan  ekstrak  daun  melinjo ( Gnetum  gnemon  L. )  memiliki  daya hambat  sedang  terhadap  pertumbuhan Streptococcus  mutans dan  amoksisilin memiliki  daya  hambat  kuat  terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans.
Tabel  2  menunjukkan  kategori  respon zona  hambatan  ekstrak  daun  melinjo ( Gnetum  gnemon  L. )  termasuk  dalam kategori  sedang  dan  amoksisilin  dalam kategori kuat terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans ,  sedangkan akuades  tidak  ada  zona  hambat.  Hal  ini berdasarkan kategori respon zona hambatan  menurut  klasifikasi  David  dan Stout.  Kategori  respon  zona  hambatan digolongkan  menjadi  tidak  ada  zona hambat,  lemah  yaitu  zona  hambat  kurang
dari  5  mm,  sedang  yaitu  zona  hambat  5  – 10 mm, kuat yaitu zona hambat 11-20 mm dan  sangat  kuat  yaitu  zona  hambat  21-30 mm.
Penelitian sebelumnya telah dilakukan Kining  pada  tahun  2015  mengenai aktivitas antibakteri daun melinjo ( Gnetum gnemon L. ) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa menunjukkan  zona  hambat sebesar  11  mm  (Kining,  2015).  Hal  ini menunjukkan zona hambat  yang terbentuk pada  penelitian  ini  lebih  kecil  jika dibandingkan dengan penelitian sebelumnya.
Tabel  2  menunjukkan  ekstrak  daun melinjo memiliki efek antibakteri terdahap bakteri Streptococcus  mutans dengan respon  zona  hambatan  dalam  kategori sedang. Efek antibakteri ini diduga berasal dari  senyawa-senyawa  yang  terdapat  pada daun  melinjo.  Uji  fitokimia  yang  di lakukan Kining pada tahun 2015 menyatakan  bahwa  daun  melinjo  positif memiliki kandungan senyawa yang bersifat antibakteri seperti saponin, alkaloid, tanin dan steroid (Kining, 2015).
Saponin memiliki aktifitas antibakteri, bersifat  lyobipolar  sehingga  senyawa  ini dapat  berinteraksi  dengan  membran  sel dan  dapat  menurunkan  tegangan  di permukaan. Senyawa ini dihasilkan terutama  pada  tanaman  (Thakur  dkk, 2011). Saponin bekerja dengan mengganggu stabilitas membran sel bakteri dan  menyebabkan  sel  bakteri  mengalami lisis  (Cheeke,  2004). Steroid  merupakan senyawa triterpenoid yang diduga mekanisme  kerja  penghambatan  bakteri dengan  cara  merusak  membran  sel sehingga  terjadi  kebocoran  sel  (Cowan,
1999).  Alkaloid  juga  dapat  menyebabkan sel  bakteri  mudah  mengalami  lisis,  yang diduga  memilki  mekanisme  kerja  dengan cara  mengganggu  komponen  penyusun lapisan  dinding  sel  sehingga  dinding  sel tidak  terbentuk  secara  utuh.  Tanin  diduga dapat  mengkerutkan  dinding  sel  bakteri (Retnowati dkk, 2011).
Berdasarkan  hasil  pembahasan  diatas, hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak daun melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. )  memiliki efek antibakteri untuk menghambat pertumbuhan  bakteri S.mutans ,  namun zona hambatnya kurang kuat jika dibandingkan dengan antibiotik
amoksisilin.  Penelitian  ini  zona  hambat ekstrak daun melinjo ( Gnetum gnemon L. ) terhadap  bakteri Streptococcus  mutans sebesar  10,6 mm.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak daun  melinjo  ( Gnetum  gnemon  L. ) memiliki efek antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Streptococcus  mutans dengan  diameter zona hambat sebesar 10,6 mm.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai  efek  antibakteri  daun  melinjo ( Gnetum  gnemon  L. )  terhadap  bakteri
Streptococcus mutans pada berbagai konsentrasi  kepekatan  ekstrak  sehingga dapat diketahui minimal inhibitor concentration ekstrak  terhadap  bakteri Streptococcus mutans. Selain itu diharapkan  daun  melinjo  dapat  dibuat
dalam formulasi yang tepat untuk dikembangkan  menjadi  obat  antibiotik terhadap bakteri Streptococcus mutans.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2013. Riset  Kesehatan  Dasar 2013 . Jakarta. Kementerian Kesehatan RI; 2013. h. 118 Davis  WW,  Stout  TR.  1971.  Disc  Plate Method of Microbiological Antibiotic Assay. Applied Microbiology 2(4): 659-665
Brooks  GF,  Butel  JS,  Morse  SA.  2008.
Mikrobiologi  Kedokteran Jawetz, Melnick  dan  Adelberg  edisi  23. Jakarta. EGC;. 178-9
Cheeke  RP .  2004.    Saponins:  surprising benefits  of  desert  plants .  [Online]
USA:  Linus  Pailing  Institute;  2004. Tersedia dalam. http://www.Perfectwaters.net/
Saponins.htmL.  Diakses  28  Juni 2016.
Cowan  M.  1999.  Plant  products  as antimicrobial  agents. Clin  Microbio Reviews . 12(4): p. 564-82.
Hariana  HA.2008. Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya  Seri  2. Jakarta.  Penebar Swadaya. h 117-18
Jarvinen H, Tenovuo J, Huovinen P. 1993.
In vitro susceptibility of streptococcus mutans to chlorhexidine and six other antimicrobial  agents. Journal  ASM . 1993; p. 1158-9.
Kidd  EAM,  Joyston-Bechal  S.  1992.
Dasar-dasar  Karies  Penyakit  dan Penanggulanganya. Jakarta.  EGC;  h 1-13.
Kining  E.  2015. Aktivitas  Antibiofilm Ekstrak  Air  Daun  Melinjo,  Daun
Singkong dan Daun Papaya terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa secara In Vitro . [skripsi].
Bogor.  Sekolah  Pascasarjana  Institut
Pertanian Bogor; 2015. h 9-25
Lamont  RJ,  Jenkinson  HF.  2010. Oral Microbiology  at  a  Glance. Oxford.
Wiley-Blackwell;  . p 25-37
Muhlisah F. 2008. Tanaman Obat Keluarga  (toga)/ Fauziah  Muhlisah.
Jakarta. Penebar Swadaya. h 5
Neal  MJ.  2006. At  Glance  Farmakologi Medis  edisi kelim a. Jakarta. Penerbit Erlangga;.h 86
Noor MA, Apriasari ML,2014.  Efektivitas
Antibakteri Ekstrak Methanol Batang Pisang Mauli ( Musa acumuminata )  dan  Povidone  Iodine 10% Terhadap Streptococcus
mutans . Jurnal PDGI . Vol. 63(30). h
78-8
Retnowati  Y,  Bialangi  N,  Posangi  NW.
2011. Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus Pada  Media Yang  Diekspos  Dengan  Infus  Daun Sambiloto ( Andrographis
paniculata ). Saintek. vol  2,  no  2.
2011. h 1-9
Ryan  KJ,  Ray  CG.  Sherris  2004. Medical
Microbiology An introduction
infection  deceases. 4 th ed.  Mcgraw- hill;. p 839
Setiowati  T,  Furqonita  D.  2007. Biologi Interaktif  untuk  SMA/MA  kelas  X . Jakarta. Aska Press; 2007. h 114
Sunarto  H.  1991. Budidaya  Melinjo  dan Usaha Produksi Emping . Yogyakarta. Kanisius;. h 13-8
Thakur M, Melzig MF, Fuchs H, Weng A. 2011. Chemistry  and  pharmacology of  saponins:  special  focus  on cytotoxic properties . p 19-29