Evaluasi Proses Hidrolisis Enzimatis Protein Daging Rusa Sambar (Rusa unicolor) Menggunakan Enzim Pepsin dan Tripsin
Arif Ismanto 1
1 Department of animal science, Agriculture Faculty of Mulawarman University, kampus Gunung Kelua, Jalan Pasir Balengkong, Samarinda 75119.
E-mail : arifisamnto9@gmail.com

## la ABSTRACT
This  research  conducted  to  evaluate  the  hydrolytic  process  of  sambar  deer  (Rusa unicolor)  meat  protein  as  the  first  step  to  produced  bioactive  peptide.  The  proteolytic enzyme  used  were  pepsin  and  trypsin.  Hydrolysis  process  evaluated  using concentration  of  soluble  protein  and  Degree  of  hyrolysis  (DH)  parameters.  Soluble protein  concentration  determined  by  Biuret  methods.  The  result  showed  that concentration of soluble protein (mg/ml) using Biuret  test was 8,33 ±  0,10 while after pepsin  and  trypsin  were  8,08  ±  0,07  and  7,89  ±  0,12  respectively.  The  proximate analysis  of  Sambar  deer  meat,  water  content  73,25%,  protein  22,49  %,  ash  2,35% and fat was 3,35 %.  pH of Sambar deer meat was 7,8 while  after pepsin and trypsin were 2,4 and 6,5 respectively. Degree of hydrolysis Sambar meat protein using pepsin was  29  %  and  using  trypsin  was  23%.It  might  conclude  that  hydrolysis  process  of Sambar  deer  meat  using  pepsin  and  trypsin  was  running  optimally  proved  by  the increase  of  soluble  protein.  Hydrolitic  by  pepsin  was  more  effective  than  the  trpsin based on DH value.
Keywords : Enzymatic hydrolysis, Pepsin, Tripsin,Sambar deer, Soluble protein

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  proses  hidrolisis  protein  daging  rusa Sambar  (Rusa  unicolor)  sebagai  tahap  awal  untuk  menghasilkan  peptida  bioaktif. Enzim  proteolitik  yang  digunakan  yaitu  enzim  pepsin  dan  tripsin.  Proses  hidrolisis dievaluasi  menggunakan  parameter  protein  terlarut,  dan  Degree  of  Hydrolysis  (DH). Konsentrasi  protein  terlarut  ditentukan  dengan  metode  Biuret.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  konsentrasi  protein  terlarut  (mg/ml)  menggunakan  Biuret sebelum proses hidrolisis adalah 8,33 ± 0,10, setelah hidrolisis pepsin adalah sebesar 8,33 ±  0,10 dan setelah hidrolisis trypsin  adalah 7,89 ± 0,12. Hasil  analsis proksimat menunjukkan  bahwa  daging  rusa  Sambar  memiliki  kandungan  air  73,25%,  protein sebesar  22,49%,  abu  2,35%  dan  lemak  3,35%.  Nilai  pH  daging  rusa  Sambar  adalah 7,8,  setelah  hidrolisis  pepsin  dan  tripsin  berturut-turut  adalah  sebesar  2,4  dan  6,5. Degree  of  Hydrolysis  daging  rusa  Sambar  yang  telah  dihidrolisis  oleh  pepsin  adalah sebesar  29%  dan  oleh  trypsin  adalah  sebesar  23  %.  Dapat  disimpulkan  bahwa hidrolisis  menggunakan  pepsin  dan  trypsin  berjalan  secara  optimal,  yang  dibuktikan dengan  peningkatan  kadar  protein  terlarut.  Proses  hidrolisis  menggunakan  pepsin lebih efektif dibandingkan hidrolisis menggunakan trypsin.
Kata kunci: Hidrolisis enzim, Pepsin, Protein, Rusa Sambar, Tripsin

## 1 Pendahuluan
Beberapa tahun terakhir, daging dikembangkan untuk digunakan sebagai sumber peptida  fungsional  yang  dimungkinkan  bermanfaat  bagi  kesehatan  (Zang  et  al.,  2010). Peptida diperoleh dari hidrolisis protein daging secara enzimatis. Hidrolisis protein secara enzimatis  memiliki  beberapa  kelebihan  yaitu  :    tidak  mengakibatkan  kerusakan  asam- asam  amino,  peptida  rantai  pendek  yang  dihasilkan  lebih  bervariasi  (dipeptida  dan tripeptida),  dan  tingkat  kehilangan  asam  amino  esensial  lebih  rendah.  Peptida  yang berasal  dari  proses  hidrolisis  protein  ini  biasanya  inaktif  pada  sekuens  asam  amino protein  asal, tetapi  bioaktivitas  peptida  dapat  dihasilkan  oleh  enzim  proteolitik  pada  saat proses pencernaan atau pada saat pengolahan makanan (Ferreira et al., 2007). Hidrolisat
protein  daging  sudah  digunakan  secara  luas  untuk  beberapa  hal  diantaranya  : antihipertensi (Minervini et al., 2003), kekebalan tubuh, antioksidan (Kim et al., 2009) dan antimikrobia dan anti kanker (Jeong et al., 2007; Song et al., 2000).
Rusa sambar (Rusa unicolor) merupakan rusa terbesar untuk daerah tropik dengan sebaran  di  Indonesia  terbatas  di  pulau  Sumatera,  Kalimantan  dan  pulau  kecil  di  sekitar Sumatera  (Semiadi,  2001).  Rusa  sambar  memiliki  potensi  yang  cukup  baik  untuk dikembangkan sebagai ternak terutama untuk pemanfaatan kebutuhan daging (venison). Daging  rusa  belum  banyak  dimanfaatkan  oleh  masyarakat.  Hal  ini  diantaranya disebabkan  kurangnya  informasi  mengenai  manfaat  daging  rusa.  Berdasarkan  hal tersebut,  perlu  eksplorasi  lebih  jauh  mengenai  potensi  daging  rusa,  baik  itu  kandungan nutrisi  maupun  potensinya  sebagai  sumber  bahan  yang  bermanfaat  untuk  kesehatan. Informasi yang benar akan meningkatkan perhatian masyarakat dan pemerintah terhadap satwa lokal ini
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  keberhasilan  proses  hidrolisis  protein daging  rusa  Sambar  secara  enzimatis  menggunakan  dua  macam  enzim  protease  yaitu enzim  pepsin  dan  enzim  tripsin  serta  dihasilkan  hidrolisat  protein  daging  rusa  Sambar (Rusa unicolor).

## 2 Bahan dan Metode
Bahan  utama  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  daging  rusa  Sambar.    Bahan lainnya  yaitu  :  enzim  pepsin  dan  tripsin  untuk  hidrolisis  protein,  aquabides,  aquades, Na2CO3,  NaOH,  copper  sulfat  (CuSO4),  KNa  tartrate.  Alat-alat  pendukung  yang digunakan dalam penelitian ini antara lain labu 100 ml, labu 250 ml, labu 500 ml, tabung reaksi, waterbath, vortex,spektrofotometer, mikropipet 100 µl sampai 1000 µl, timbangan digital, rak tabungreaksi, oven, dan eppendorf 0,5 ml, sentrifuge.

## 2.1  Prosedur Penelitian

## Preparasi Daging Rusa
Metode preparasi yang digunakan berdasarkan Jang and Lee (2005). Daging rusa disiapkan  dan  ditimbang  sebanyak  100  g,  kemudian    dipotong  menjadi  potongan  kecil- kecil. Daging rusa ditambahkan  200 ml air dan dicampur dengan menggunakan blender kemudian dipanaskan selama 5 menit pada air mendidih.  Sampel hasil preparasi daging rusa siap digunakan untuk pengujian selanjutnya.

## Digesti Daging Rusa dengan Pepsin
Preparat  daging  rusa  diatur  pH-nya  menjadi  sekitar  2,0  dengan  menambahkan HCl  1  N.  Enzim  Pepsin  sebanyak  0,01  g  ditambahkan  pada  preparat  daging  rusa  dan diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 2 jam. pH larutan preparat daging rusa diatur menjadi pH  netral  dengan  1  M  NaOH,  reaksi  dihentikan  dengan  pemanasan  pada  suhu  95 0 C
selama  10  menit,  diikuti  dengan  pendinginan  pada  es.  Kemudian  preparat  daging  rusa diambil  sebanyak  10  mL  dengan  spuit  yang  dilengkapi  dengan  filter  berukuran  diameter 0,45 µm untuk sampel eksperimen.

## Digesti Daging Rusa dengan Tripsin
Preparat  daging  rusa  yang  sudah  disiapkan  sebelumnya  ditambahkan  tripsin sebanyak 0,01 g. Diinkubasikan selama 2 jam pada suhu 37 ° C. Reaksi dihentikan dengan pemanasan  pada  suhu  95 ° C  selama  10  menit,  diikuti  dengan  pendinginan  pada  es. Selanjutnya diambil preparasi daging rusa sebanyak 10 mL dengan spuit yang dilengkapi dengan filter berukuran diameter 0,45 µm untuk sampel eksperimen.

## Analisis Proksimat
Analisis  komposisi  kimia  daging  rusa  yang  dilakukan  meliputi  :  analisis  kadar  air, kadar  lemak,  kadar  protein  dan  kadar  abu  menurut  metode  analisis  proksimat  (AOAC, 1980).

## Analisis pH
Nilai  pH  diuji  dengan  menggunakan  elektroda  glass  pH  meter  mengikuti  metode yang  telah  dilakukan  oleh  Tan  et  al.  (2007).  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  3  kali ulangan dan nilainya dirata-rata sebagai nilai pH produk daging.

## Pengujian Konsentrasi Protein Terlarut
Konsentrasi protein untuk masing-masing fraksi hidrolisis daging rusa , yang terdiri dari  :  1)  ekstrak  daging  rusa  sebelum  didigesti,  2)  digesta  ekstrak  daging  rusa menggunakan  enzim  pepsin,  dan  3)  digesta  ekstrak  daging  rusa  menggunakan  enzim tripsin,  ditentukan  metode  Biuret  dengan  panjang  gelombang  540  nm  Owusu-Apenten, 2002).  Sebanyak  0,75  gram  CuSO 4 *5H 2 O  (copper  sulfat)  ditambahkan  3  gram NaKC 4 H 4 O 6 (sodium  potassium  tartrate)  dilarutkan  dalam  250  ml  aquades.  Membuat larutan  NaOH(sodium  hydroxide)  10%,  caranya 15 gram  NaOH  dilarutkan  dalam  150 ml aquades.  Selanjutnya  larutan  NaOH  dicampurkan  dengan  larutan  pertama,  tambahkan aquades sampai  500 ml.  Reagen  disimpan  dalam  tempat gelap, kemudian  ditambahkan 0.5 gram KI (potassium iodide). Sampel sebanyak 0.5 ml diambil kemudian ditambahkan dengan  reagen  biuret  2.5  ml,  selanjutnya  diamkan  selama  30  menit,  dan  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  540  nm,  selanjutnya  dengan  larutan  blangko (0.5 ml aquades ditambahkan 2.5 ml reagen Biuret).

## Analisis Degree  of Hydrolysis (DH)
Degree  of  hydrolisis  (DH)  ditentukan  berdasarkan  metode  Church,  et  al.  (1983). Diestimasi  dengan  perubahan  konsentrasi  peptide  dan  dihitung  dengan  rumus  sebagai berikut :

## (1)
3 Hasil dan Pembahasan

## Analisis proksimat daging Rusa Sambar (Rusa unicolor)
Berdasarkan Analisis Proksimat yang sudah dilakukan, diketahui bahwa komposisi kimia daging rusa Sambar terlihat seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil analisis proksimat daging rusa sambar (Rusa unicolor) sebelum hidrolisis
No Komponen Persentase 1 Air 73,25% 2 Abu 2,35% 3 Lemak 3,35% 4 Protein 22,49 %
Daging  rusa  mempunyai  kandungan  protein  yang  tinggi  yaitu  sekitar  22,49  %. Kadar  protein  yang  tinggi  tersebut  memungkinkan  penggunaan  protein  untuk  sumber peptida bioaktif. Berdasarkan data skunder diketahui bahwa komposisi asam amino yang terdapat  dalam  daging  rusa  adalah  14  macam  asam  amino  (Jamal,  et  al.  2005). Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  sebelumnya,  jenis  dan  kombinasi  asam  amino sangat  menentukan  peptida  yang  dihasilkan.  Kohama  et  al.,  (1988)  menyatakan  bahwa peptida penghambat ACE telah diisolasi dari ekstrak daging tuna. Peptida tersebut adalah pro-thr-his-ile-lys-trp-gly-asp dan mempunyai nilai IC50 sebesar 1 µ M dan 2 µ M. Arihara et  al.  (2001)  menyatakan  bahwa  hidrolisat  peptida-peptida  dari  protein  otot  babi menunjukkan efek antihipertensif, yaitu myopentapeptida met-asn-pro-pro-lys dan ile-thr- thr-asn-pro,  dan  masing-masing  menunjukkan  aktivitas  (IC50)  sebesar  945,5  dan  549,0 µ M,  serta  enam  tripeptida,  yaitu  met-asn-pro,  asn-pro-pro,  pro-pro-lys,  ile-thr-thr,  thr-thr- asn, dan thr-asn-pro, yang merupakan bagian dari miopeptida tersebut. Nakashima et al. (2002)  menambahkan  bahwa  empat  dari  delapan  peptida  tersebut  (met-asn-pro-pro-lys, ile-thr-thr-asn-pro, met-asn-pro, pro-pro-lys) mempunyai efek antihipertensif pada SHR.

## Pengujian pH
Berdasarkan  pengujian  pH  yang  dilakukan  didapatkan  hasil  seperti  terlihat  pada Tabel 2 berikut :
Tabel  2.  Nilai  pH  ekstrak  daging  rusa  Sambar  (Rusa  unicolor)  sebelum  dan  sesudah  hidrolisis dengan enzim pepsin dan tripsin
No Sampel pH pH awal pH akhir 1 Ekstrak daging mentah - 7,8 ± 0,4 2 Ekstrak daging hidrolisis Pepsin 2,00 2,4 ± 0,4 3 Ekstrak daging hidrolisis Tripsin 7,00 6,5 ± 0,7
Berdasarkan  Tabel  2  di  atas,  terlihat  adanya  peningkatan  nilai  pH  pada  sampel ekstrak  daging hidrolisis pepsin. Nilai pH ekstrak daging meningkat  yaitu dari pH sekitar 2,00 menjadi 2,4. Pada ekstrak daging hidrolisis tripsin terjadi penurunan nilai pH dari pH awal  sebesar  7,00  menjadi  6,5.  Selama  digesti,  perubahan  nilai  pH  kemungkinan disebabkan  oleh  perbedaan  sifat  asam  amino  yang  terkandung  di  dalam  bahan.  Pada proses  hidrolisis  ada  kemungkinan  terjadi  degradasi  asam  amino,  apabila  asam  asam amino yang terdegradasi adalah asam-asam amino yang bersifat asam maka akan terjadi peningkatan pH demikian sebaliknya.

## Protein terlarut
Kurva  standar  protein  Bovine  Serum  Albumin  (BSA)  pada  metode  Biuret  dibuat berdasarkan  hasil  absorbansi  pada  panjang  gelombang  540  nm.  Data hubungan  antara konsentrasi dan absorbansi protein BSA terlihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kurva Standar Bovine Serum Albumin (BSA) untuk pengujian Biuret.
Kurva standar protein BSA di atas mempunyai nilai r 2 sebesar 0,994. Nilai tersebut lebih besar  ( ≥ )  daripada  nilai  r  tabel  1%  yaitu  sebesar  0,9172.  Hal  ini  merupakan  indikasi bahwa kurva standar yang dibuat adalah kurva yang signifikan untuk digunakan sebagai standar  penghitungan  konsentrasi  protein  terlarut.  Berdasarkan  persamaan  garis  pada grafik  yang  diperoleh,  maka  dapat  dihitung  konsentrasi  protein,  hasilnya  adalah sebagaimana disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil pengujian konsentrasi protein terlarut sebelum, sesudah hidrolisis pepsin dan sesudah hidrolisis tripsin (mg/mL)
Berdasarkan  hasil  penghitungan  konsentrasi  protein  terlarut  sampel  daging  rusa sebelum  dan  sesudah  digesti  menggunakan  enzim  pepsin  dan  tripsin,  diperoleh  hasil protein  terlarutnya  berturut-turut  adalah  8,33  ;  8,08  dan  7,89  (mg/ml).  Sampel  setelah proses  digesti  secara  umum,  memiliki  kandungan  protein  terlarut  yang  lebih  rendah daripada sampel sebelum digesti. Pepsin hanya memulai proses pencernaan protein, dan menghasilkan  10  sampai  20%  dari  pencernaan  total  protein.  Pencernaan  protein  ini merupakan proses hidrolisis yang terjadi pada ikatan peptida di antara asam-asam amino (Guyton dan Hall, 1997). Pepsin memotong ikatan peptida, terutama ikatan peptida pada sisi terminal C dari residu tirosine, fenilalanin, dan triptofan (Eastwood, 1999). Biuret akan merespon  ikatan  peptida,  hidrolisat  mempunyai  ikatan  peptida  yang  lebih  pendek, sehingga kadar protein terlarutnya menjadi lebih kecil apabila dideteksi dengan uji biuret. Uji biuret akan merespon substansi dengan 2 molekul carbamil (-CONH 2 ) yang bergabung secara  langsung  maupun  atom  N  atau  atom  C  secara  individual.  Selain  substansi tersebut,  substansi  yang  mirip,  yang  mengandung  C  pada  tempat  –CONH 2 grup,  – CSNH 3 ,–C(NH)NH 3 ,  atau  –CH 3 NH 3 juga  akan  memberikan  respon  terhadap  uji  ini, termasuk juga substansi nonprotein tetapi mengandung grup yang disebutkan di atas juga akan memberikan respon terhadap uji (Oser, 1976). Hidrolisis protein secaraenzimatisoleh  pepsin  dantripsinakanmemecah  protein  menjadiasam  amino dankomponen lain yang lebihsederhana, selama proses hidrolisisdimungkinkanadaikatan- ikatanpeptida yang terpecah, sehingga karena berkurangnya substansi-substansi tersebut oleh enzim protease akan menyebabkan menurunnya deteksi oleh biuret.

## Analisis Degree of hydrolysis (DH)
Berdasarkan  analisis  yang  telah  dilakukan  diketahui  Degree  of  hydrolysis  (DH) proses hidrolisis enzymatis protein daging rusa sambar adalah terlihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Persentase Nilai DH Ekstrak daging rusa Sambar
No Sampel Nilai DH (%) 1. Hidrolisis menggunakan pepsin 29% 2. Hidrolisis menggunakan tripsin 23 %
Berdasarkan  data  nilai  DH  sampel  yang  dihidrolisis  menggunakan  pepsin mempunyai  nilai  DH  yang  lebih  kecil  daripada  nilai  DH  sampel  yang  dihidrolisis menggunakan tripsin. Hal ini kemungkinan disebabkan karena pepsin dan tripsin memiliki respon  yang  berbeda  terhadap  asam-asam  amino  yang  dapat  dihidrolisis.  Penelitian sebelumnya  yang  dilkukan  oleh  Cheng  et  al.  (2007)  yang  melakukan  hirolisis  enzimatis pada tulang ayam dengan menggunakan enzim pepsin nilai DH nya adalah sebesar 35 % sedangkan hidrolisis tulang ayam dengan menggunakan enzim tripsin adalah sebesar 55
%.  Perbedaan  nilai  DH  ini  kemungkinan  disebabkan  perbedaan  nilai  protein  bahan. Protein  daging  adalah  sekitar  20  %  (Koeswara,  2009)  dan  protein  pada  Tulang  ayam adalah sekitar 23,54 % (Cheng et al., 2008).

## 4 Kesimpulan
Hidrolisis  enzimatis  daging  rusa  Sambar  (Rusa  unicolor)  menggunakan  enzim pepsin dan dilanjutkan dengan enzim tripsin berjalan dengan optimal. Hal ini dapat dilihat pada parameter nilai protein terlarut. Hidrolisis menggunakan pepsin lebih efektif daripada menggunakan enzim tripsin jika dilihat berdasarkan parameter degree of hydrolysis (DH). Hidrolisat  protein  daging  rusa  (Rusa  unicolor)  mempunyai  potensi  untuk  dikembangkan sebagai sumber peptida yang berfungsi untuk kesehatan.

## 5 Ucapan Terima  Kasih
Pada  kesempatan  ini  penulis  ingin  mengucapkan  terima  kasih  yang  sebesar- besarnya kepada Tim PKM Penelitian dan PIMNAS ke 27 di Universitas Diponegoro dari Jurusan Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Mulawarman.

## Daftar Pustaka
AOAC.  1980.  Official  Methods  of  Analysis,  13 th ed. The  Association  of Official  Analytical Chemist, Washington DC.
Arihara K., Y. Nakashima, T. Mukai, S. Ishikawa, and M. Itoh, 2001. Peptide inhibitors for angiotensin  I-converting  enzyme  from  enzymatic  hydrolysates  of  porcine  skeletal muscle proteins. Meat. Sci 57: 319-324
Cheng,  F.Y.,  Y.T.  Liu,  T.C.  Wan,  L.C.  Lin,  and  R.  Sakata.  2008.  The  development  of angiotensin  I-converting  enzyme  inhibitor  derived  from  chicken  bone  protein.  J. Anim. Sci. 79: 122-128.
Church,  F.  C.,  Swaisgood,  H.  E.,  Porter,  D.  H.,  &  Catignani,  G.  L.  1983. Spectrophotometric  Assay  Using  o-Phthaldialdehyde  for  Determination  of Proteolysis in Milk and Isolated Milk Proteins1. Journal of Dairy Science, 66, 1219– 1227. doi:10.3168/jds.S0022-0302(83)81926-2
Eastwood, M. 1999. Principles of Human Nutrition. Aspen Publisher, Inc. Maryland.
Ferreira, I. M. P. L. V. O., Pinho, O., Mota, M. V., Tavares, P., Pereira, a., Gonçalves, M. P.,  Teixeira,  J.  a.  2007.  Preparation  of  ingredients  containing  an  ACE-inhibitory peptide  by  tryptic  hydrolysis  of  whey  protein  concentrates.  International  Dairy Journal, 17(5), 481–487. doi:10.1016/j.idairyj.2006.06.023
Guyton  dan  Hall.  1997.  Fisiologi  Kedokteran:  Edisi  9.  Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC. Jakarta
Jamal,  Y.,  G.  Semiadi  dan  R.T.P  Nugraha.  2005.  Kualitas  produk  ranggah  muda  rusa sambar tangkaran. Berkala Ilmiah Biologi (UGM) 4: 325 – 336
Jang,  A.,  Lee,  M.  2005.  Purification  and  identification  of  angiotensin  converting  enzyme inhibitory peptides from beef hydrolysates. Meat Science Journal, 69(4), 653-61.
Jeong,  J.  B.,  Jeong,  H.  J.,  Park,  J.  H.,  Lee,  S.  H.,  Lee,  J.  R.,  Lee,  H.  K.,  et  al.  2007. Cancer- preventive peptide lunasin from Solanum nigrum L. inhibits acetylation of
core  histones  H3  and  H4  and  phosphorylation  of  retinoblastoma  protein  (Rb). Journal of Agricultural Food Chemistry, 55, 10707−10713
Kim,  E.,  Lee,  S.,  Jeon,  B.,  Moon,  S.,  Kim,  B.,  Park,  T.,  Park,  P.  2009.  Purification  and characterisation  of  antioxidative  peptides  from  enzymatic  hydrolysates  of  venison protein. Food Chemistry, 114(4), 1365–1370. doi:10.1016/j.foodchem.2008.11.035
Koeswara, S. 2009. Pengolahan unggas. E bookpangan.com http ://
tekpanunimus.ac.id/wp-content/uploads/2013/07/pengolahan unggas.pdf 18
Oktober 2014
Kohama,  Y.,  Matsumoto,  S.,  Oka,  H.,  Teramoto,  T.,  Okabe,  M.,  &  Mimura,  T.  (1988). Isolation of angiotensin-converting enzyme inhibitor from tuna muscle. Biochemical and  Biophysical  Research  Communications,  155,  332–337.  doi:10.1016/S0006- 291X(88)81089-1
Minervini,  F.  F.  A.,  Rizzello,  C.  G.,  Fox,  P.  F.,  Monnet,  V.,  &  Gobbetti,  M.  2003. Angiotensin  I-converting-enzyme-inhibitory  and  antibacterial  peptides  from Lactobacillus  helveticus  PR4  proteinase-hydrolyzed  caseins  of  milk  from  six species. Applied and Environmental Microbiology, 69, 5297-5305.
Nakashima,  Y.,  K.  Arihara,  A.  Sasaki,  H.  Mio,  S.  Ishikawa,  and  M.  Itoh,  2002. Antihypertensive  activity  of  peptides  derived from  porcine  skeletal muscle  myosin in spontaneously hypertensive rats. J. Food Sci. 67(1): 434-437
Oser,  B.  L.,  1976.  Hawk’s  Physiological  Chemistry  Fourteen  Edition.  Tata  McGraw-Hill Publishing Company, New York.
Owusu-Apenten, 2002. Food Protein Analysis, Quantitative Effect on Processing. Marcel Dekker, Inc. Switzerlad.
Semiadi  G.   2001.   Potensi   pengembangan   peternakan   rusa   sambar   di   Kabupaten Paser.Laporan hasil penelitian dan pembinaan
Fase 1. Lokakarya Pengembangan Bioteknology Budidaya Rusa Sambar di Kalimantan  Timur.  Samarinda  6 Nopember 2001.
Song, E. K., kim, H. H., Kim, J. Y., Kang Y. I., Woo, H. J., & Lee, H. J. 2000. Anticancer activity of hydrophobic peptides from soy proteins. Journal of BioFactors, 12,4151- 4155.
Tan, F.J, F.Y. Liao, Y.J. Jhan, & Liu DC. 2007. Effect of replacing pork backfat withyams (Dioscoreaalata)  on  quality  characteristics  of  Chinese  sausage.  Journal  of  Food Engineering, 79, 858–863.
Zhang, W., Xiao, S., Samaraweera, H., Lee, E. J., & Ahn, D. U. 2010. Improving functional value of meat products. Meat science,
86(1), 15–31.
doi:10.1016/j.meatsci.2010.04.01