Research Article

## UNPAD

## IDENTIFICATION OF ESSENTIAL OILS FROM THE BARK OF
BALIK ANGIN ( Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. ex Kurz )
Dyera Forestryana 1 , Hafiz Ramadhan 1 *, Putri I. Sayakti 1 , Tika Nurjanah 1 , Nella Faradillah 1 , Nafila 2 1 Department of Pharmacy, University of Borneo Lestari, South Borneo, Indonesia 2 Department of health science and science technology, University of Borneo Lestari, South Borneo, Indonesia Submitted 22 October 2022; Revised 2 November 2022; Accepted 22 December 2022; Published 31 December 2022
*Corresponding author: hafizramadhan14@gmail.com

## Abstract
One of the components that make up essential oils is phenolic compounds which are widely contained in the leaves and bark of the Balik Angin plant ( Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. ex Kurz ). This study aimed to identify phenolic compounds and antioxidant activity of essential oils from the bark of the Balik Angin plant. The essential oils isolation using hydrodistillation and the compounds were  analyzed  using  gas  chromatography-mass  spectroscopy  (GC-MS).  Qualitatively  antioxidant activity test used thin layer chromatography (TLC) and quantitatively by measuring the absorbance of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radicals residue that did not react against compounds reducer. The results showed the essential oils contain major compounds which are methyl salicylate followed by methyl palmitate, 2,2-Dimethyl-1,3-dioxane-4,6-dione, and methyl 12-acetoxyoleate. Qualitative test results of antioxidant activity with TLC there were four yellow spots on a purple background. The scavenging activity showed the essential oils had an IC 50 of 229.056 ppm, while the gallic acid as a comparative standard obtained an IC 50 of 0.618 ppm. The conclusion is the essential oils of Balik Angin bark that produces very weak antioxidant activity. Keywords: Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. ex Kurz ; Antioxidant; Balik Angin bark; Essential oils.

## IDENTIFIKASI MINYAK ATSIRI DARI KULIT KAYU BALIK ANGIN
( Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz )

## Abstrak
Salah satu komponen penyusun minyak atsiri adalah senyawa fenolik yang banyak terkandung dalam daun dan kulit batang tanaman Balik Angin ( Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. ex Kurz ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  senyawa  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  minyak atsiri dari kulit batang tanaman Balik Angin. Isolasi minyak atsiri menggunakan hidrodistilasi dan senyawanya dianalisis secara kromatografi gas-spektroskopi massa (GC-MS). Uji aktivitas antioksidan secara kualitatif menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dan secara kuantitatif dengan mengukur absorbansi residu radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) yang tidak bereaksi terhadap senyawa pereduksi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  minyak  atsiri  mengandung  senyawa  utama  yaitu  metil salisilat  diikuti  oleh  metil  palmitat,  2,2-dimetil-1,3-dioksan-4,6-dion,  dan  metil  12-asetoksioleat. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan dengan KLT terdapat empat bercak kuning berlatar belakang ungu. Aktivitas penangkalan radikal menunjukkan minyak atsiri memiliki IC50 sebesar 229.056 ppm, sedangkan asam galat sebagai standar pembanding diperoleh IC 50 sebesar 0.618 ppm. Kesimpulannya adalah minyak atsiri kulit batang Balik Angin menghasilkan aktivitas antioksidan yang sangat lemah. Kata Kunci: Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. Kurz ; Antioksidan; Kulit kayu Balik Angin; Minyak atsiri.
1. Pendahuluan
Perkembangan penggunaan obat tradisional khususnya yang berasal dari tumbuh-tumbuhan
untuk membantu meningkatkan derajat kesehatan masyarakat sudah cukup meluas, sehingga penelitian ke  arah  obat-obatan  tradisional  semakin meningkat, hal ini disebabkan karena keterjadian efek samping oleh obat tradisional tergolong rendah. Minyak atsiri atau minyak eteris ( essential oil ) adalah salah satu obat tradisional yang banyak memiliki khasiat dan kebutuhannya semakin tahun semakin meningkat seiring dengan meningkatnya perkembangan industri modern seperti industri parfum, kosmetik, makanan, farmasi, aromaterapi  dan  obat-obatan 1 .  Minyak  atsiri merupakan metabolit sekunder yang termasuk dalam golongan terpena yang disintesis melalui jalur asam mevalonat 2 .  Selain  itu, komponen lain di balik kelompok triterpenoid yang menyusun minyak atsiri adalah senyawa fenolik 3 .  Senyawa  fenol  memiliki  gugus hidroksil  yang  terikat  pada  cincin  benzena, yang berpotensi besar sebagai antioksidan 4,5 . Minyak  atsiri  dapat  dihasilkan  dari berbagai bagian tanaman, seperti akar, batang, ranting, daun, bunga, atau buah dan merupakan campuran dari senyawa–senyawa volatil yang dapat diperoleh dengan distilasi, pengepresan  atau  pun  ekstraksi.  Penghasil minyak atsiri berasal dari berbagai spesies tanaman  yang  sangat  luas.  Minyak  atsiri tanaman diperoleh dari tanaman beraroma yang tersebar diseluruh dunia 6 . Salah satu ciri utama minyak atsiri yaitu mudah menguap dan beraroma khas 7 .  Tanaman  yang  diduga mengandung minyak atsiri karena pada bagian kulit batang berbau harum yaitu Alphitonia incana (Roxb.) Teijsm. & Binn. ex Kurz .  Tanaman  ini  dikenal  sebagai  kayu Balik Angin dan dapat tumbuh bebas di hutan Kalimantan  dan  dapat  berpotensi  sebagai antioksidan alami 8 . Kalimantan  Selatan  memiliki  Hutan Pendidikan yang dimiliki oleh univeritas Lambung  Mangkurat,  yang  dikenal  dengan nama Hutan Pendidikan Lambung Mangkurat (LMEF). LMEF tergolong hutan hujan tropis dengan keanekaragaman flora dan faunanya.
Lima puluh enam spesies yang termasuk dalam 37 famili tanaman obat ditemukan di  LMFE.  Jumlah  ini  lebih  tinggi  dari  jenis tumbuhan yang dilaporkan dari beberapa Kawasan  Hutan  Dengan  Tujuan  Khusus (KHDTK)  di  Indonesia.  Namun,    jumlah tersebut relatif kecil karena spesies tanaman obat yang diperoleh hanya 0,12% dari total luas  LMFE  dan  spesies  yang  dikategorikan sebagai  tanaman  obat  di  LMFE  tetapi  tidak ditemukan  di  area  pengambilan  data.  Salah satu tumbuhan yang tidak terdapat dikoleksi data adalah tanaman Balik Angin 9 . Balik angin merupakan spesies tumbuhan yang belum banyak diketahui memiliki khasiat sebagai tumbuhan obat 9 . Balik angin dikenal dengan sebutan “ soap tree ” 10 , memiliki potensi antara lain untuk pencegahan dan pengobatan infeksi saluran kemih, penyakit autoimun, dan perdarahan saluran cerna. Balik Angin adalah spesies dari genus Alphitonia yang banyak ditemukan di daerah tropis Asia Tenggara, Australia, dan Pasifik,  dengan  beberapa  spesies  tersebar luas dan yang lainnya endemik di suatu wilayah 11 .  Hampir  setengah  dari  spesies genus Alphitonia telah dilaporkan untuk penggunaan obat tradisional (tradisional dan kontemporer), termasuk untuk pengobatan kulit, sakit kepala, sakit perut, peradangan, dan nyeri tubuh seperti nyeri sendi dan nyeri saat melahirkan 12 . Kandungan senyawa dalam genus Alphitonia teridentifikasi  antara  lain alphitolic acid, betulinic acid, ceanothic acid, alphitexolide, trans-coumaroyl alphitolic acid, cis-coumaroyl alphitolic acid, betulin dan emmolic acid acetate 13,14 yang mana pada bagian batang Balik Angin berhasil diisolasi triterpenoid lupeol, betulinic acid, ceanothic acid 8.  Senyawa ceanothic acid, alphitolic acid, dan batulinic acid terbukti memiliki aktivitas sitotoksik secara in vitro , aktivitas antiinflamasi dan antimikroba 13 . Tanaman Balik Angin ini memiliki kandungan fenolik pada bagian daun dan kulit batang serta memberikan bau khas aromatik dari kulit batangnya, sehingga kemungkinan mengandung minyak atsiri yang dapat dikembangkan dalam alternatif pengobatan 15 . Kandungan  tersebut  menguatkan  penelitian
Sutomo  dkk. 16 yang membuktikan bahwa ekstrak etanol 70% kulit batang Balik Angin memiliki aktivitas antioksidan secara kualitatif  menggunakan  metode  DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil),  akan  tetapi kandungan  spesifik  dan  bioaktivitas  minyak atsiri dari kulit batangnya ini belum pernah dilaporkan  sebelumnya.  Berdasarkan  latar belakang tersebut penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan minyak atsiri dari kulit batang tanaman Balik Angin. Pada penelitian ini akan dilakukan analisis senyawa metabolit sekunder minyak atsiri tanaman Balik Angin dari  desa  Mandi Angin  Kalimantan  Selatan menggunakan GC-MS untuk mengidentifikasi senyawa fenolik dan melakukan uji aktivitas antioksidan terhadap minyak atsiri dari kulit batang tanaman Balik Angin menggunakan metode DPPH.

## 2. Metode
2.1. Alat Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini terdiri dari seperangkat alat gelas antara lain seperangkat alat gelas labu erlenmeyer , labu ukur, chamber , pipa kapiler, serangkaian alat destilasi, neraca analitik, pipet volume, mikropipet, termometer ,  lampu  UV  254  nm dan  366  nm, spektrofotometer UV-Vis  (PG instrument  T60  ®),  Gas Chromatography- Mass Spectrometer (GC-MS) (Shimadzu ®).
2.2. Bahan Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian ini antara lain simplisia segar kulit batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz (hasil determinasi di Pusat Riset Biologi BRIN No. B-208/V/DI.05.07/1/2022), asam  asetat  (Merck®),  methanol  p.a. (Merck®),  aquades,  etil  asetat  (Merck®), DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)  (Sigma Aldrich®) dan plat KLT silica gel 60 GF254 (Merck®).
2.3. Prosedur
2.3.1. Pembuatan Simplisia Tanaman Balik Angin di peroleh dari  Mandi  Angin  Timur  yang  terletak  di Kecamatan Karang Intan, Kabupaten Banjar,
Kalimantan  Selatan  dimana  sampel  yang digunakan  adalah  bagian  kulit  batangnya. Kulit batang yang telah dikumpulkan, dicuci, ditiriskan,  dipotong-potong  dan  dikeringkan di bawah sinar matahari dan ditutup dengan kain hitam serta waktu pengeringan sampai jam  11.00  pagi.    Bahan    yang  telah  kering, digiling, hingga diperoleh simplisia 16 .
2.3.2. Proses Destilasi
Tahap ini dilakukan dengan cara memasukan simplisia segar kulit batang Balik Angin sebanyak 200 g dan pelarut aquadest 1000 ml kedalam labu alas bulat pada rangkaian alat destilasi, kemudian dilakukan proses destilasi kurang lebih 4 jam. Kemudian destilat minyak atsiri dipisahkan dari hidrolit dengan partisis cair-cair menggunakan corong pisah  dengan  natrium  sulfat.  Pemanasan distilasi  dipertahankan  pada  suhu  60°-90°C agar panas tetap stabil 17 .
2.3.3. Pemeriksaan Organoleptik Pemeriksaan organoleptik dilakukan dengan mengamati bentuk, bau dan rasa dari isolat minyak atsiri kulit batang dan simplisia kulit batang Balik Angin.
2.3.4. Identifikasi  Gugus  dengan Gas Chromatography-Mass Spectrometry
(GC-MS) Pengujian dengan GC-MS dilakukan di Balai Standarisasi dan Pelayanan Jasa Industri Banjarbaru 18 .
2.3.5. Identifikasi  Aktivitas  Antioksidan menggunakan KLT
Fase  gerak  berupa  etil  asetat,  metanol dan asam asetat dengan perbandingan 6:3:1  dijenuhkan  dalam chamber .  Minyak atsiri  ditotolkan  pada  plat  KLT  dengan menggunakan  pipa  kapiler.  Bercak  diamati dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm serta sebagai penampak bercak disemprotkan pereaksi  DPPH  0,4  mM.  Noda  bercak  pada kromatogram diukur dan dihitung nilai Rf 19 .
2.3.6. Uji Aktivititas Antioksidan dengan Metode DPPH
Aktivitas antioksidan secara kuantitatif
menggunakan  uji  DPPH  dilakukan  pada konsentrasi  50,  100,  150,  200,  dan  250 ppm  dalam  metanol.  Standar  asam  galat juga  dibuat  konsentrasi  0,2;  0,4;  0,6;  0,8; dan  10  ppm.  Satu  mL  larutan  DPPH  (0,4 mM)  ditambahkan  ke  masing-masing  4  mL larutan sampel maupun standar pembanding dan ditempatkan di ruangan gelap selama 30 menit setelah itu diukur absorbansinya pada panjang gelombang 515 nm. Persentase penghambatan DPPH dihitung hasilnya untuk mendapatkan nilai IC 50 (ppm) 20 .
3.  Hasil
3.1.  Identifikasi  Gugus  dengan Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) Minyak  atsiri  adalah  minyak  yang bersifat volatil sehingga dalam identifikasinya digunakan  GC-MS.  Hasil  identifikasi menunjukkan bahwa isolat minyak atsiri mengandung  senyawa-senyawa  antara  lain metil palmitat yang muncul pada waktu retensi 1,175 menit diikuti oleh metil salisilat (11,561 menit),
2,2-dimetil-1,3-dioksan-4,6-dion
(21,784  menit),  dan  metil  12-asetoksioleat (23,068 menit) seperti yang ditampilkan pada Gambar 1.
Hasil  pengujian  dengan  GC-MS juga  dapat  menyediakan  data  m/z  yang menunjukkan bobot molekul dari hasil analisis  pada  senyawa  uji.  Berdasarkan nilai tersebut dapat diprediksi kebenaran kandungan senyawa yang diidentifikasi. Pada tabel 1 dapat dilihat bahwa metil salisilat yang memiliki nilai m/z basepeak yaitu 152 (kode a) sesuai dengan bobot molekul yang dimilikinya serta senyawa tersebut merupakan senyawa komponen utama tertinggi penyusun minyak atsiri pada kulit batang Balik Angin dengan konsentrasi 52,472%.
Hasil  prediksi  senyawa  utama  pada isolat minyak atsiri dari kulit batang Balik angin yaitu metil salisilat dapat dibuktikan dengan anilisis fragmentasi pada spektrum massa  yang  terbentuk  pada  Gambar  1. Nilai  m/z  yang  ditunjukkan  pada  analisis fragmentasi dari gambar tersebut juga memberikan kesesuaian dengan ion molekul dan ion fragmen dari metil salisilat.
3.2.  Identifikasi  Aktivitas  Antioksidan menggunakan KLT
Aktivitas antioksidan dari minyak atsiri kulit batang Balik Angin secara kualitatif diujikan  dengan  kromatografi  lapis  tipis
Tabel 1. Dugaan Senyawa yang teridentifikasi dalam kulit Batang Balik Angin
Kode Waktu Retensi (menit) (m/z) Mass Peak Base Peak Konsentrasi a 11,561 120,05 208 152 52,427 b 1,175 42,95 152 58 6,606 c 21,784 74,051 280 270 8,133 d 23,068 55,00 292 296 1,641
Gambar 1. (a) Profil Kromatogram Minyak Atisiri Kulit Batang Balik Angin, (b) Spektrum Massa dan Analisis Fragmentasi Senyawa Metil Salisilat 21 .
(KLT) yang disemprot dengan larutan DPPH 0,4 mM. Hasil pengamatan terdapat 4 bercak noda yang dapat menghasilkan warna kuning setelah penyemprotan DPPH yang berwarna ungu. Hasil tersebut menunjukkan bahwa spot yang terbentuk memiliki aktivitas antioksidan karena  mampu  mereduksi  DPPH  menjadi bentuk yang lebih netral, sehingga terjadi perubahan warna seperti pada Gambar 2.

## 3.3. Uji Aktivititas Antioksidan dengan Metode DPPH
Aktivitas antioksidan dari isolat minyak atsiri secara kuantitatif juga dilakukan menggunakan  metode  DPPH.  Tujuan  dari pengujian ini untuk mengetahui seberapa besar potensi yang dihasilkan minyak atsiri sebagai antioksidan yang ditunjukkan dengan nilai IC 50. Nilai tersebut didapatkan dari kurva
baku hubungan antara seri konsentrasi uji dan % inhibisi (Gambar 3). Sebagai pembanding digunakan asam galat yang merupakan senyawa bahan alam golongan fenolik yang terbukti memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat seperti ditampilkan pada Tabel 2. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan dari isolat minyak atsiri juga didapat dari kurva baku hubungan antara seri konsentrasi sampel dengan % inhibisi seperti pada Gambar  3.  Persamaan  kurva  baku  yang didapat y = 0,2297x - 2,6141 digunakan untuk mendapatkan nilai IC 50 dari isolat minyak atsiri. Hasil perhitungan menunjukkan isolat minyak atsiri dari kulit batang Balik Angin tergolong sangat lemah sebagai antioksidan seperti pada Tabel 3.

## 4. Pembahasan
Gambar 2. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan dari kulit batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz menggunakan  KLT  :  (a)  Sebelum  Penenyemprotan  dengan  DPPH  0,4  mM  (b) Sesudah Penyemprotan dengan DPPH 0,4 mM dan (c) pencahayaan dibawah sinar UV-254
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah kulit batang dari pohon A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz yang pada awalnya dikumpulkan dan dilakukan proses sortasi basah dengan memisahkan bagian tanaman yang tidak dibutuhkan atau bahan yang  rusak.  Kulit  batang  Balik Angin  yang telah ditimbang kemudian dicuci dengan air bersih yang mengalir untuk menghilangkan kotoran yang masih menempel 22 .  Setelah dicuci kulit batang Balik Angin dipotong kecil-kecil  agar  dapat  masuk  kedalam  labu alas bulat pada alat destilasi. Simplisia segar tersebut diekstraksi dengan menggunakan metode destilasi pada suhu pemanasan 90°C  dengan  pelarut  aquadest  mengacu pada  penelitian  Torres-Martinez  dkk 17 . yaitu  menggunakan  metode  hidrodestilasi. Hidrodestilasi  memungkinkan  terjadinya hidrodifusi uap air kedalam jaringan sel tanaman sehingga pecah dan menyebabkan minyak akan terdorong keluar. Hidrodestilasi adalah proses penyulingan suatu bahan yang berwujud cairan yang tidak saling bercampur dengan tujuan memisahkan kandungan pada suatu bahan tersebut sehingga membentuk dua  fasa  atau  dua  lapisan.  Kelenjar  minyak pada kulit batang Balik Angin akan terbawa dengan mudah oleh uap air setelah dinding sel pada kulit batang pecah atau lisis 23,24 . Setelah itu destilat yang didapatkan ditimbang untuk menghitung nilai % rendemen isolat minyak atsiri terhadap kulit batang Balik Angin yang
diperoleh sebesar 25% b/b. Hasil  pengujian  pada  GC-MS  seperti pada tabel 1 menunjukkan bahwa komponen terpenting yang terkandung dalam isolat minyak atsiri adalah senyawa pada puncak (a) yang diduga adalah metil salisilat. Hasil tersebut ditegaskan dengan perbandingan kromatogram  seperti  pada  gambar  1.  Hasil dari analisis terhadap spektra pada puncak (a) dengan waktu retensi 11,561 pada gambar 1 diduga senyawa metil salisilat dengan rumus C 8H8 O 3.  Hasil  tersebut  sudah  sesuai dengan penelitian Sulistyo dkk 25 .  yang  juga menyebutkan bahwa waktu retensi dari seyawa metil salisilat yaitu pada 11,505 menit. Spektrum masa senyawa (a) memiliki puncak yang paling dulu terdeteksi merupakan ion molekul  dengan  m/z  152  yang  memiliki kesamaan dengan bobot molekul (BM) metil salisilat  menurut  hasil  analisis  fragmentasi. Salisilat, termasuk asam salisilat (SA), metil  salisilat,  saligenin  dan  masing-masing glukosidanya, merupakan produk alami dari metabolisme tanaman yang telah lama diketahui  memiliki  sifat  terapeutik.  Metil salisilat merupakan senyawa turunan dari ester asam  salisilat.  Metil  salisilat  memiliki  efek sebagai  analgesik  dan  antiinflamasi,  namun penggunaan melalui oral akan menyebabkan iritasi pada lambung karena metil salisilat bersifat toksik 26 . Pengujian aktivitas antioksidan secara kualitatif dilakukan dengan menggunakan
Konsentrasi (ppm)
Rerata % Inhibisi ± SD
IC 50 (ppm) Kategori Aktivitas Antioksidan 0,2 15,819 ± 0,692 0,681 Sangat Kuat 0,4 27,632 ±0,251 0,6 44,919 ± 0,305 0,8 56,387 ± 1,180 1,0 75,211 ± 0,466

## Tabel 2. Nilai Uji Aktivitas Antioksidan pembanding Asam galat
Konsentrasi (ppm) Rerata % Inhibisi ± SD
IC 50 (ppm) Kategori Aktivitas Antioksidan 50 10,2028 ± 1,035 229,0557 Sangat Lemah 100 19,07631 ± 0,069 150 30,47386 ± 0,070 200 44,61604 ± 1,195 250 54,86915 ± 0,196
Tabel 3. Nilai uji Aktivitas Antioksidan Isolat Minyak Atsiri dari Kulit Batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz
Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan pada isolat minyak atsiri dari kulit batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn Ex Kurz . Hasil  pengujian  secara  kualitatif  dengan fase gerak etil asetat: metanol: asam asetat (6:3:1)  pada  silica  gel  60  GF254  terlihat  4 bercak noda dengan nilai Rf yang optimum yaitu  pada  noda  1:  0,75  cm,  noda  2  :  0,58 cm, noda 3 : 0,45 cm, dan noda 4 : 0,16 cm (Gambar 2). Rf yang optimum yaitu berada pada rentang 0,2-0,8 27,28 . Identifikasi senyawa yang berbeda ditunjukkan dengan nilai Rf yang berbeda. Senyawa yang memiliki nilai Rf tinggi dalam sistem pelarut kurang polar memiliki polaritas rendah sedangkan dengan nilai Rf rendah memiliki polaritas tinggi. Hal ini adalah faktor penyebab eluen optimum yang merupakan sistem pelarut atau fase gerak pada penelitian ini cendrung bersifat kurang polar, dikarenakan kandungan dari minyak atsiri kulit batang Balik Angin yang teridentifikasi merupakan senyawa golongan ester yang bersifat nonpolar 29 . Berdasarkan  Gambar  2  isolat  minyak atsiri dari kulit batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz yang diuji secara kualitatif memiliki aktivitas antioksidan yaitu ditunjukkan dengan adanya bercak yang memberikan perubahan warna menjadi kuning dengan latar belakang ungu setelah disemprot dengan larutan DPPH konsentrasi 0,4  mM 30 .  Perubahan  warna  yang  terjadi dikarenakan senyawa antioksidan akan bereaksi  dengan  radikal  DPPH  melalui mekanisme donasi atom hidrogen dan menyebabkan terjadinya peluruhan warna dari ungu ke merah muda sampai kuning 31 . Senyawa antioksidan merupakan inhibitor penghambat  oksidasi.  Cara  kerja  senyawa antioksidan adalah bereaksi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal bebas tak  reaktif  yang  relatif  stabil.  Antioksidan dapat menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas, dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas. Hasil uji aktivitas antioksidan secara kualitatif menunjukkan bahwa minyak
atsiri dari kulit batang Balik Angin berpotensi sebagai  agen  antioksidan.  Kereaktifan tersebut kemungkinan disebabkan terjadinya mekanisme reaksi penghambatan radikal bebas secara sinergis dari beberapa senyawa golongan  asam  karboksilat.  Minyak  atsiri yang  terdiri  dari  asam-asam  lemak  seperti asam palmitat, etil palmitat dan etil stearat, serta turunan asam karboksilat seperti metil heksadekanoat;  etil  oktadeka-14,16-dienoat; metil nonadeka-15,17-dienoat, kemungkinan sebagai pendonor proton ke DPPH sehingga terbentuk DPPH nonradikal 32 . Pada uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif, nilai IC 50 untuk asam galat yang digunakan sebagai kontrol positif mempunyai nilai IC 50  sebesar  0,681  ppm  (Tabel  2)  dan untuk sampel isolat minyak atsiri dari kulit batang A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn . Ex Kurz mempunyai nilai IC 50 sebesar 229,0557 ppm  (Tabel  3).  Hasil  tersebut  menjelaskan bahwa asam galat yang digunakan sebagai kontrol positif memiliki aktivitas antioksidan dengan kategori sangat kuat dikarenakan nilai IC 50 kurang dari 50 ppm. Semakin kecil nilai IC 50 maka aktivitas antioksidannya semakin tinggi 5.  Kekuatan  aktivitas  antioksidan dikategorikan menjadi kategori sangat kuat (IC 50  <  50  ppm),  kuat  (IC50  50-100 ppm), sedang (IC 50  101-150  ppm),  lemah (IC 50  151-200  ppm),  dan  sangat  lemah (IC 50 > 200 ppm) 33 .  Asam  galat  digunakan sebagai senyawa pembanding, karena merupakan salah satu asam fenolik yang banyak  terdapat  pada  tanaman.  Asam  galat merupakan senyawa fenolik dan diketahui sebagai antioksidan yang sangat kuat, sehingga besarnya persentase penghambatan antioksidan pada asam galat disebabkan oleh banyaknya atom hidrogen yang diberikan 3 gugus fenolik kepada radikal DPPH 34 . Pada sampel isolat minyak atsiri dari kulit batang Balik Angin memiliki aktivitas antioksidan dengan kategori sangat lemah dikarenakan nilai IC 50  lebih  dari  200  ppm. Aktivitas antioksidan minyak atsiri dari kulit batang Balik Angin lebih rendah dari aktivitas antioksidan asam galat dikarenakan kemungkinan sedikitnya jumlah kandungan senyawa antioksidan dalam minyak atsiri
kulit batang Balik Angin yang berpotensi sebagai  antioksidan.  Penelitian  Pujiarti dkk. 35 menyebutkan aktivitas antioksidan yang  lebih  rendah  pada  minyak  Kenanga kemungkinan disebabkan adanya kandungan senyawa seskuiterpen hidrokarbon seperti caryophyllene dan seskuiterpen teroksigenasi seperti linalool yang berpotensi sebagai pro- oksidan. Penelitian Ambar dan Salimah 34 juga menyebutkan aktivitas antioksidan minyak atsiri  Kembang  Leson  yang  sangat  lemah dengan nilai IC 50  sebesar  825,78  ppm.  Hal ini dikarenakan minyak atsiri tersusun dari senyawa yang heterogen dan juga dipengaruhi oleh senyawa-senyawa lain yang terkandung didalamnya.  Tingkat  heterogen  tersebut memungkinkan  adanya  senyawa-senyawa yang tidak memiliki aktivitas antioksidan atau menghambat reaksi antioksidan. Metil  salisilat  sebagai  komponen utama penyusun minyak atsiri kulit batang Balik Angin dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan dengan katagori sedang 36 . Suatu senyawa yang mereduksi radikal in vitro tidak serta merta berperilaku sebagai antioksidan dalam sistem in vivo .  Hal  ini  dikarenakan radikal bebas mudah berdifusi dan menyebar. Beberapa radikal bebas memiliki rentang hidup yang sangat pendek pada urutan nanodetik, sehingga sulit bagi antioksidan untuk hadir pada waktu dan tempat dimana kerusakan  oksidatif  sedang  dihasilkan. Selain itu, reaksi antara antioksidan dan radikal bebas adalah reaksi orde kedua. Oleh karena itu, aktivitas antioksidan tidak hanya bergantung pada konsentrasi antioksidan dan radikal bebas tetapi juga tergantung pada faktor-faktor yang berkaitan dengan struktur kimia, media dan kondisi reaksi 37 . Minyak  atsiri  bersifat  nonpolar  dalam keadaan segar dan murni. Umumnya minyak atsiri adalah salah satu hasil sisa proses metabolisme dalam tanaman, yang terbentuk karena reaksi antara berbagai persenyawaaan kimia dengan adanya air 38 .  Sifat  minyak atsiri yang merupakan pelarut nonpolar ini  menyebabkan  senyawa-senyawa  yang tertarik ke dalamnya juga bersifat nonpolar mengikuti prinsip like dissolve like 39 . Semakin tinggi konsentrasi minyak atsiri
yang digunakan maka nilai kelarutannya semakin rendah. Hal ini dikarenakan semakin tinggi tingkat penggunaan minyak atsiri yang bersifat hidrofobik maka akan menurunkan kandungan  gugus  hidroksil  (OH).  Gugus hidroksil  (OH)  yang  lebih  mudah  larut dalam air akan digantikan dengan gugus hidrofobik dari minyak atsiri seperti hasil identifikasi  pada  isolat  minyak  atsiri  dari kulit  batang  Balik  Angin.  Hasil  identifikasi dengan  GC-MS  menunjukkan  minyak  atsiri kulit batang Balik Angin mengandung metil palmitat,  metil  salisilat,  2,2-dimetil-1,3- dioksan-4,6-dion, dan metil 12-asetoksioleat yang mayoritas ester dari asam karboksilat yang sudah mengalami substitusi gugus hidroksil  (OH)  menjadi  alkoksil  (OR)  dan cendrung bersifat hidrofobik, sehingga mengurangi kemampuannya sebagai asam dalam mendonorkan atom hidrogen sebagai antioksidan 34 .
5. Kesimpulan
Berdasarkan Penelitian yang sudah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa isolat minyak Atsiri dari kulit batang Balik Angin ( A. incana (Roxb.) Teijsm & Binn. Ex Kurz )  secara  GC-MS  mengandung  senyawa utama metil salisilat yang berupa fenolik golongan  ester.  Minyak  atsiri  dari  kulit batang Balik Angin juga memiliki aktivitas antioksidan atau penangkal radikal bebas DPPH  yang  diuji  secara  kualitatif  dengan menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT)  akan  tetapi  secara  kuantitatif menghasilkan aktivitas antioksidan yang sangat lemah.

## Daftar Pustaka
1.  Ella,  M.U.E.,  Sumiartha,  K.,  Suniti,
N.W.,  Sudiarta,  I.P.,  Antara,  N.S.  Uji efektivitas konsentrasi minyak atsiri sereh dapur ( Cymbopogon citratus (DC.) Stapf) terhadap pertumbuhan jamur Aspergillus Sp .  secara in vitro .  Jurnal Agroekoteknologi Tropika. 2013;2(1):39- 48.
2.  Bergman, M.E., Davis, B., Phillips, M.A. Medically Useful Plant Terpenoids: Biosynthesis, Occurrence, and Mechanism
of Action. Molecules . 2019;24(21):3961. 3.  Fokou, J.B.H., Dongmo, P.M.J., Boyom,
F.F. Essential Oil’s Chemical Composition and Pharmacological Properties: Essential Oils - Oils of Nature, El-Shemy, H.A. (Eds.). London: IntechOpen ; 2020.
4.  Lu, J., Dang, Y., Huang, M., Xu, W., Chen, X., dan Wang, Y. Anti-cancer Properties of Terpenoids Isolated from Rhizoma Curcumae-A Review. J Ethnopharmacol . 2012;143:406-411.
5.  Sayuti,  K.,  dan  R. Yenrina. Antioksidan Alami  dan  Sintetik.  Padang  :  Andalas University Press ; 2015.
6.  Nurhaen.,  Winarsii,  D.,  Ridhay,  A. Isolasi dan Identifikasi Komponen Kimia Minyak  Atsiri  dari  Daun,  Batang  dan Bungan Tumbuhan Salembangu (Melissa sp.). Natural Sciences: Jurnal of Science and Technology. 2016;5(2):149-157.
7.  Effendi,  V.P.  dan  Widjanarko,  S.B. Distilasi dan Karakterisasi Minyak Atsiri Rimpang  Jeringau  ( Acorus calamus ) dengan Kajian Lama Waktu Distilasi dan Rasio Bahan Pelarut. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 2014;2(2):1-8.
8.  Ahmed,  J.,  Salim,  K.A.,  Lim,  L.B.L., Jama,  A.M. Evaluation of Antioxidant Activity and Phytochemical Screening of Leaves, Barks, Stems and Fruits of Alphitonia philippinensis (Rhamnaceae) From Brunei Darussalam. Pharmacogn Journal . 2019;11(5):951-961.
9.  Nugroho, Y., Soendjoto, M.A., Suyanto, S.,  Matatula,  J.,  Alam,  S.,  Wirabuana, P.Y.A.P. Traditional medicinal plants and their utilization by local communities around Lambung Mangkurat Education Forests, South Kalimantan,  Indonesia. Biodiversitas Journal of Biological Diversity. 2022;23(1):306-314.
10. Thompson,  A.,  Munkara,  G., Kantilla, M.,    Tipungwuti,  J. Medicinal  plant use  in  two  TiwiIsland  communities: Aqualitative  research study. J  Ethnobiol Ethnomed. 2019.;15:1-11.
11. Cock,  I.A. Alphitonia excelsa (Fenzl) Benth. leaf  extracts inhibitthe growth of a panel of pathogenic bacteria. Pharmacogn Commn . 2020;10(2):67-74.
12. Al  Omar,  R.,  Micklewright,  R.,  Masud, K.,  Naz,  T.,  Vemulpad,  S.,  Jamie,  J. The genus Alphitonia Reissek ex Endl. (Rhamnaceae): A review of its customary uses, phytochemistry and biological activities. Journal of Ethnopharmacology.
2022;294:115168.
13. Muhammad,  D.,  Hubert,  J.,  Lalun,  N., Renault,  J.H.,  Bobichon,  H.,  Nour,  M., Nazabadioko, L.V. Isolation of Flavonoids and Triterpenoids from the Fruits of Alphitonia neocaledonica and Evaluation of their Anti-oxidant, Antityrosinase and Cytotoxic Activities. Phytochemical Analysis . 2014;26(2):137-44
14. Hadi, S., Maulana, A., Nastiti, K. Skrining Senyawa Aktif dari Balik Angin A. Excels (Fenzl)  Benth  Terhadap Reseptor TNF- alpha convertase (TACE) dengan Metode Docking . Pharmacoscript. 2021;4(2):234- 243.
15. Naz, T. Chemical and Biological Studies of Medicinal Plants Used by the Yaegl Aboriginal Community of Australia. Theses. Departement of Chemistry and Biomolecular Sciences. Macquarie University, Sydney , Australia; 2013.
16. Sutomo, Arnida, Rizki, M.I., Triyasmono, L., Nugroho, A., Mintowati, E., Salamiah. Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Kualitatif Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Asal Rantau  Kabupaten  Tapin  Kalimantan Selatan. Jurnal Pharmascience . 2016;3(1):66-74.
17. Torres-Martínez,  R.,  García-Rodríguez, Y.M., Ríos-Chávez, P., Saavedra-Molina, A.,  López-Meza,  J.E.,  Ochoa-Zarzosa, A., Garciglia, R.S. Antioxidant Activity of the Essential Oil and its Major Terpenes of Satureja macrostema (Moc. and Sessé ex Benth.) Briq. Pharmacogn. Mag. 2018;13:S875-880.
18. Novitasari,  M.R.,  Febrina,  L., Agustina, R., Rahmadani, A., Rusli, R. Analisis GC- MS  Senyawa  Aktif  Antioksidan  Fraksi Etil Asetat Daun Libo ( Ficus variegate Blume ).  Jurnal  Sains  dan  Kesehatan. 2016;1(5):221-225.
19. Walker,  J.M. Methods in Molecular Biology: Natural Product Isolation.
Sarker, S.D. dan Nahar, L. (Eds.). Totowa, New Jersey: Humana Press ; 2012.
20. Ramadhan,  H.,  dan  Forestryana,  D. The Effect  of  Different  Extraction  Methods On the Total Phenolic Content and Antioxidant Activity in Galam Sawdust (Melaleuca Leucadendron Linn.) . Trop J Nat Prod Res. 2021;5(5):805-808. 21. Suratmo,  Retnowati,  R.,  Azzuhro,  D. Sintesis  N,N-dietil-2-hidroksibenzamida Menggunakan Metil Salisilat dari Minyak Gandapura. NATURAL B.  2013;2(1):94- 102.
22. Khairiah,  K.,  Taufiqurrahman,  I.,  Putri. D.K.T. Antioxidant Activity Test of Ethyl Acetate Fraction of Binjai (Mangifera caesia) Leaf Ethanol Extract. Dental Journal (Majalah  Kedokteran  Gigi). 2018;51(4):164-168.
23. Adani, S.I. dan Pujiastuti, Y.A. Pengaruh Suhu  dan  Waktu  Operasi  Pada  Proses Destilasi Untuk Pengolahan Aquades di Fakultas Teknik Universitas Mulawarman. Jurnal Chemurgy. 2017;1(1):31-35.
24. Putri,  I.A.,  Fatimura,  M.,  Husnah., Bakerie,  M.  Pembuatan  minyak  atsiri kemangi ( Ocimum basilicum L .)  dengan menggunakan metode destilasi uap langsung.  Jurnal  Univpgri  Palembang. 2021;6(2):149-156.
25. Sulistyo,  R.,  Suratmo,  Retnowati,  R. Sintesis  Salisilanilida  Dari  Komponen Utama Minyak Gandapura. Kimia Student Journal . 2015;1(1):805-811. 26. Dasgupta,  A.  dan  Wahed,  A. Common poisonings including heavy metal poisoning: Clinical Chemistry, Immunology and Laboratory Quality Control . London: Elsevier; 2021.
27. Mutaqqin,  F.Z.,  Anne,  Y.,  Astri,  F., Aiyi,  A.  Penetapan  kadar  senyawa metampiron dan diazepam dalam sediaan kombinasi obat menggunakan metode KLT  video  Densitometri. Pharmacy . 2016;13(2):127-136.
28. Samosir, A.S.,  Nurhayati,  B.,  Hendri,  I. Analisis kandungan Rhodamin B pada saos tomat yang beredar dipasar sentral kota  Gorontalo  dengan  menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Jurnal Entropi. 2018;13(1):45-49.
29. Solanki,  S.,  Prasad,  D.,  Singh,  A.K. Antioxidant determination and thin layer chromatography of extract Withania somnifera, Terminalia arjuna, Bacopa monnieri, Ranunculus sceleratus and Acalypha indica. European Journal of Molecular & Clinical Medicine. 2020;7(11):4394-4408.
30. Amin,  S.  Uji  aktivitas  antioksidan  dan telaah  fitokimia Sargassum crassifolium J.G. Agatdh. Rumput laut alam asal pantai  Batu  Karas  kecamatan  Cijulang. Jurnal  kesehatan  Bakti  Tunas  Husada. 2015;14(1):1-7.
31. Handayani,  V.,  Akhmad,  A.R.,  Sudir, M.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Metanol  Bunga  dan  Dan  Patikala ( Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm ) Menggunakan Metode DPPH. Pharm Sci Res. 2014;1(2):86-93.
32. Gunawan,  I.W.G.  dan  Karda,  I.M. Identifikasi  senyawa  minyak  atsiri  dan uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol kulit batang kepuh ( Sterculia foetida L. ).
Chemistry Progress . 2015;8(1):12-16. 33. Ramadhan, H., Baidah, D., Lestari, N.P., Yuliana,  K.A.  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  96%  Daun,  Buah  Dan Kulit Terap ( Artocarpus odorratissimus ) Menggunakan Metode CUPRAC.
Farmasains. 2020;7(1):7-12.
34. Ambar,  P.  dan  Salimah,  I.  Aktivitas Antioksidan  dan  Antibakteri  Minyak Atsiri  Kembang  Leson.  Al-Kauniyah: Jurnal Biologi. 2020;13(2):139-146
35. Pujiarti,  R.,  Widowati,  T.B.,  Kasmudjo, Sunarta,  S.  Kualitas,  Komposisi  Kimia, dan  Aktivitas  Anti  Oksidan  Minyak Kenanga ( Cananga odorata ). Jurnal Ilmu Kehutanan. 2015;9(1):3-11.
36. Ibáñez, M.D., López-Gresa, M.P., Lisón, P.,  Rodrigo,  I.,  Bellés,  J.M.,  González- Mas, M.C., Blázquez, M.A. Essential Oils as Natural Antimicrobial and Antioxidant Products in the Agrifood Indus. Nereis. Interdisciplinary Ibero-American Journal of Methods, Modelling and Simulation. 2020;(12):55-69.
37. Santos-Sanchez,  N.F.,  Salas-Coronado,
R., Villanueva-Cañongo, C., Hernández- Carlos,  B. Antioxidant Compounds and Their Antioxidant Mechanism: Antioxidant . London: IntechOpen ; 2019.
38. Abdullah.  W.,  Runtuwene,  M.R.J., Kamu,  V.S.  Uji  Fitokimia  Dan Penentuan Inhibition Concentration 50%  pada  Beberapa  Tumbuhan  Obat Di  Pulau  Tidore.  Jurnal  Ilmiah  Sains.
2014;14(2):95-99.
39. Ngibad,  K.  dan  Lestari,  L.P.  Aktivitas Antioksidan  dan  Kandungan  Fenolik Total  Daun  Zodia  ( Evodia suaveolens ).
ALCHEMY  Jurnal  Penelitian  Kimia. 2020;16(1):94-109.