## Isolasi dan Karakterisasi Kitin dan Kitosan dari Pupa Black Soldier Fly (BSF)
Lilis Sulistiawaty 1 , Foliatini 2 , Nurdiani 3 , Fitria Puspita 1,*)
1) Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor, Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
2) Program Studi Nanoteknologi Pangan, Politeknik AKA Bogor, Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
3) Program Studi Pengolahan Limbah Industri, Politeknik AKA Bogor, Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
*) Email: pipitfpuspita@gmail.com (Received: 29 Mei 2022; Accepted: 25 Agustus 2022; Published: 27 Agustus 2022)

## Abstrak
Kitin  dan  kitosan  merupakan  biopolimer  yang  banyak  dimanfaatkan  untuk  berbagai  aplikasi  dan  umumnya diisolasi  dari  berbagai  organisme,  terutama  serangga.  Budidaya  lalat black  soldier  fly ( Hermetica  Illucens ) sedang  menjamur  di  Indonesia,  hewan  ini  dapat  dijadikan  sumber  baru  biopolimer  kitin  yang  dapat  diperoleh dari  selongsong  pupa  BSF.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  kitin  dari  pupa  lalat  BSF  kemudian dikonversi menjadi kitosan. Dari penelitian ini, kitin telah berhasil diekstraksi dengan persen randemen sebesar 30%.  Selanjutnya  melalui  proses  deasetilasi,  kitosan  berhasil  disintesis  dengan  persen  randemen  sebesar  34%. Kitosan  tersebut  selanjutnya  dianalisis  kandungan  air,  abu,  dan  lemaknya  dan  diperoleh  nilai  berturut-turut sebesar  9,14%,  0,95%,  dan  1,30%.  Ketiga  nilai  tersebut  menunjukkan  bahwa  kitosan  yang  disintesis  telah memenuhi  standar  mutu  kitosan.  Karakterisasi  kitosan  menggunakan  metode  FTIR  menunjukkan  keberadaan kitosan  dengan  adanya  serapan  pada  daerah  bilangan  gelombang  3294,44  cm -1 dan  1642,02  cm -1 yang menunjukkan keberadaan gugus hidorksil dan amida. Namun, derajat deasetilasi kitosan yang ditentukan dengan metode titrasi asam basa hanya memberikan nilai DD sebesar 9,09%.
Kata kunci: Kitin; kitosan; pupa; black soldier fly (BSF);

## Abstract
Chitin  and  chitosan  are  biopolymers  that  are  widely  used  for  various  applications  and  isolated  from  various organisms,  especially  insects.  Recently,  the  cultivation  of  black  soldier  fly  (Hermetica  Illucens)  is  booming  in Indonesia. This animal can be used as a new source of chitin biopolymer which can be obtained from the BSF pupa shell. This study aims to isolate chitin from the pupa of BSF flies and then convert into chitosan. From this study,  chitin  has  been  successfully  extracted  with  a  percent  yield  of  30%.  Furthermore,  through  the deacetylation process, chitosan was successfully synthesized with a percent yield of 34%. The chitosan was then analyzed for water, ash, and fat content and obtained values  of 9.14%, 0.95%, and 1.30%, respectively. These values indicate that the synthesized chitosan allows the quality standards of chitosan. Chitosan characterization using the FTIR method showed the presence of chitosan in the wave number region of 3294.44 cm -1 and 1642.02 cm -1 which  indicated  the  presence  of  hydroxyl  and  amide  groups.  However,  the  degree  of  deacetylation  of chitosan determined by the acid-base titration method only gave a DD value of 9.09%.
Keywords: Chitin; chitosan; pupa; black soldier fly (BSF)

## PENDAHULUAN
Kitosan  merupakan  polisakarida  alami  yang disintesis  dari  kitin  hasil  ekstraksi  dari  cangkang hewan  crustacea,  insecta,  moluska  serta  dari beberapa jenis fungi (Yadav et al ., 2019). Kitin yang berhasil  diekstrak  dapat  diubah  menjadi  kitosan melalui proses deasetilasi. Kitin merupakan homopolimer β (1,4) N-asetil-D-glukosamin sementara  kitosan  merupakan  kitin  yang  kehilangan
gugus  asetilnya  dengan  bentuk  kopolimer  yang terdiri dari unit 2-acetamido-D-glukosa dan 2-amino- D-glukosa  (umumnya  lebih  dari  80%)  yang  saling terhubung  melalui  ikatan  β(1  → 4)  glikosidik. Pembuktian  terbentuknya  kitosan  dapat  dinyatakan dalam  bentuk  derajat  deasetilasi.    Derajat  deasetilasi yang  lebih  besar  dari  50%  pada  umumnya mengkonfirmasi  terbentuknya  kitosan  (Antonino et al .,  2017).  Transformasi  kitin  menjadi  kitosan  dapat diliat pada Gambar 1.
Karakteristik  kitosan  yang  diperoleh  sangat bergantung  pada  efektivitas  tahapan  deasetilasi  serta sumber  kitin  yang  digunakan  (Benhabiles et  al ., 2012).  Pada  umumnya  serangga  yang  dimanfaatkan sebagai  sumber  kitin  adalah  udang  (Antonino et  al ., 2017)  dan  kepiting  (Gadgey  dan  Bahekar,  2017). Namun  terdapat  beberapa  studi  yang  mempelajari ekstraksi  kitin  dari  sumber  lain  seperti  cumi-cumi, sotong,  lobster,  udang  karang  (Abdou et  al .,  2008), laba-laba  (Davies et  al .,  2013),  kumbang  dan  ulat sutra (Dong et al ., 2016).
Gambar 1. Reaksi deasetilasi kitin menjadi kitosan (Yadav et al ., 2019)
Lalat BSF ( Hermetia  illucens )  yang  juga dikenal  sebagai  lalat  serdadu  hitam  merupakan  lalat yang berasal dari Amerika dan larvanya telah banyak dimanfaatkan  sebagai  pengolah  limbah  khususnya limbah  organik.  Lalat  BSF  tersebut  banyak ditemukan di daerah tropis dan  antara daerah dengan temperatur  yang  hangat  (Diener et  al .,  2011).  Fasa hidup  BSF  adalah  dimulai  dari  larva,  prepupa,  pupa hingga menjadi lalat dewasa. Siklus hidup lalat BSF dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Siklus hidup Black Soldier Fly (De Smet et al ., 2018)
Pada fasa prepupa hingga menjadi pupa, lalat BSF  dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber  kitin  yang potensial karena eksoskeleton dari lalat BSF tersebut mengandung kitin sebanyak 35% (Hahn et al ., 2018). Kutikula  serangga  tersebut  mengandung  kitin  yang berada dalam matriks protein, lipid dan senyawa lain (Diener et  al .,  2011).  Wasko  (2017)  menyebutkan bahwa  kitin  yang  diekstrak  dari  lalat  BSF  memiliki sifat  fisikokimia  yang  khas  dibandingkan  dengan
kitin yang pernah ditemukan sebelumnya. Kitin yang diekstrak dari lalat BSF memiliki indeks kristalitinas yang rendah, yaitu sebesar 24,9% untuk lalat dewasa dan  35%  untuk  larva.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kitin  tersebut  berpotensi  untuk  digunakan  sebagai material  biosorption  karena  kitin  dengan  indeks kristalitias yg rendah memiliki kapasitas sorpsi yang tinggi.  Selain  itu,  kadar  kitin  dalam  BSF  juga berbeda  dalam  tiap  tahapan  pertumbuhannya  (larva, prepupa,  pupa,  lalat  dewasa)  mulai  dari  8%  hingga 24%.  Namun,  kandungan  kitin  yang  terdapat  pada shedding dan kepompong (Soetemans et al ., 2020).
Kitosan  banyak  dimanfaatkan  dalam  bidang lingkungan terutama sebagai adsorben (Boudouaia et al .,  2019),  bidang  farmasi  (Ahmed  dan  Aljaeid, 2016), kosmetik (Casadidio et al ., 2019) dan pangan (Manigandan et  al .,  2017).  Kitosan  memiliki  sifat biodegradable dan biokompatibel, antibakteri, antimikroba, antijamur, analgesik, antitumor, bioavailabilitas yang tinggi, permeselektivitas terhadap  air  yang  baik,  serta  ketahanan  terhadap bahan kimia yang tinggi (Yaneva et al ., 2020). Selain itu  kitosan  juga  mudah  dimodifikasi  dan  dibuat menjadi berbagai bentuk, misalnya film (Rizzi et al ., 2017)  dan  nanofiber  (Nthunya et  al .,  2017)  untuk dimanfaatkan  dalam  bidang  pengolahan  limbah (Hahn  dan  Zibek,  2018).  Dengan    banyaknya manfaat  dan  keunggulan  yang  dimiliki  oleh  kitosan, maka penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi kitin dari  pupa  lalat  BSF  yang  selanjutnya  akan dikonversikan menjadi kitosan untuk dapat dimanfaatkan dalam berbagai bidang kehidupan.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  papan  tempat  bertelur  lalat  BSF  dewasa, bak  fiber  (120  x  80  x  40  cm)  sebagai  wadah  untuk kultur  BSF  dari  telur  sampai  larva  berumur  1 minggu, bak fiber (80 x 40 x 40 cm) sebagai wadah pakan,  kain  jaring  lalat  BSF,  timbangan,  alat  ukur kelembababan,  termometer,  neraca  analitik,  oven, hot  plate,  stirrer  dan  magnetic  stirrer,  desikator, mortal  dan  alu,  cawan  porselen,  peralatan  soxhlet, peralatan titrasi, serta peralatan gelas standar lainnya. Sementara  itu,  instrumen  yang  digunakan  adalah spektrometer Fourier Transform Infra Red (FTIR).
Bahan  yang  digunakan  adalah  sampel  pupa BSF  dan  limbah  rumah  tangga  (limbah  sayur  dan buah),  kitin  dan  kitosan  standar  ( Merck ),  HCl, NaOH,  KMnO 4 ,  H 2 C 2 O 4 ,  heksana,  indikator  metil oranye,  etanol  p.a.,  kertas  saring  Whattman  no  42, indikator pH universal, dan akuabides.

## Prosedur Penelitian

## Penumbuhan Lalat Black Soldier Fly (BSF)
Lalat Black Soldier Fly dikembangbiakkan di Yayasan  Benua  Lestari,  Kota  Tangerang.  Penelitian ini dimulai dengan persiapan media berupa campuran
dedak dan sayuran untuk penetasan telur. Telur BSF akan  menetas  dalam  waktu  2-3  hari.  Larva  yang muncul dikultivasi selama 6 hari kemudian diberikan pakan  harian  menggunakan  campuran  limbah  sayur dan  buah  selama  21  hari  masa  pemeliharaan  (larva mulai  menjadi  pupa).  Fase  pemeliharaan  dilakukan dalam kontainer pada suhu 27-29 o C dan kelembaban 58-70%.

## Isolaso kitin dari sampel pupa Black Soldier Fly
Sampel pupa BSF yang telah dikeringkan dan dihaluskan diproses melalui beberapa tahapan. Tahap pertama adalah demineralisasi dengan cara merendam sampel dalam HCl 1 M (1:10) pada suhu kamar selama 1 jam kemudian dibilas dengan dengan air  suling.  Tahap  kedua  dilakukan  deproteinisasi dengan  cara  mengekstraksi  sampel  menggunakan NaOH 1 M (1:25) pada suhu 80 o C selama 1 jam (12 kali pengulangan sampai larutan tidak berwarna) dan tahap ketiga adalah penghilangan pigmen pada pupa dengan  cara  merendam  sambel  dalam  larutan KMnO 4 1%  selama  1  jam  dan  kelebihan  KMnO4 dihilangkan  dengan  penambahan  H 2 C 2 O 4 4%. Produk  akhir  berupa  kitin  selanjutnya  disaring, dicuci  hingga  mencapai  pH  netral  dan  dikeringkan pada  suhu  105 o C  selama  48  jam  (Soetemans, et  al ., 2020  dan  Wasko, et  al .,  2016).  Randemen  kitin dihitung dengan menggunakan persamaan 1 berikut.
% 𝑟𝑎𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝑘𝑖𝑡𝑖𝑛 = 𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑘𝑖𝑡𝑖𝑛
𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑝𝑢𝑝𝑎 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 𝑥 100 % (1)

## Deasetilasi Kitin
Kitin  dideasetilasi  menggunakan  basa  kuat dalam  keadaan  panas.  Sampel  kitin  direndam  dalam larutan NaOH 50%  (1:30) pada suhu 90 o C selama 1 hingga  3  jam.  Selanjutnya,  sampel  disaring,  dibilas dengan  aquades  hingga  mencapai  pH  netral,  dibilas dengan  etanol,  dan  dikeringkan  selama  48  jam  pada suhu 105 o C (Soetemans et al ., 2020)

## Analisis Proksimat Kitosan
Analisis  proksimat  yang dilakukan  meliputi analisis  kadar  air  dengan  metode  oven  (AOAC 2005);  analisis  kadar  abu  (AOAC  923.03)  dan analisis kadar lemak dengan metode Soxhlet (AOAC 2005).

## Karakterisasi Kitosan dengan Metode FTIR
Sampel  kitin  dan  kitosan  dalam  bentuk serbuk  disiapkan  dan  diuji  menggunakan  metode KBr-disk  dan  dengan  mode Attenuation  Total Reflectance (ATR).
Penentuan  Derajat  Deasetilasi  (DD)  Kitosan dengan Metode Titrasi Asam Basa
Sebanyak  5  g  kitosan  dilarutkan  dalam  30 mL    HCl  0,1  M  pada  20 o C  sambil  diaduk  didalam gelas  kimia  250  mL,  ditambahkan  2  tetes  indikator metil  oranyedititrasi  dengan  NaOH  0,1  M.  Titik akhir  titrasi  ditandai  dengan  perubahan  warna  dari pink menjadi kuning-oranye. Selanjutnya, persentase
gugus  NH 2 bebas  dalam  kitosan  dapat  dihitung menggunakan persamaan 2 dan 3.
% NH 2 = [(C 1 V 1 −C 2 V 2 )x 0,016] [G(100−W]x 100 (2)
% NH 2 = % NH 2
9,94 % × 100% (3)
Keterangan:
% NH 2 kitosan teoritis = (16.161) x 100% = 9,94 %
C 1 = Konsentrasi HCl (M)
V 1 = Volume HCl yang ditambahkan (mL)
C 2 = Konsentrasi NaOH (M)
V 2 = Volume NaOH yang digunakan (mL)
G = berat sampel (g)
W = kadar air (%)
0,016 = jumlah NH 2 (g) dalam 1 mL HCl

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penumbuhan larva Black Soldier Fly
Setelah 21 hari masa pemeliharaan larva BSF, pupa  BSF  siap  dipanen  yang  ditandai  dengan perubahan  fisik  larva  dari  warna  kuning  menjadi kecoklatan  disertai  dengan  kulit  yang  mengeras. Foto-foto  kegiatan  mulai  dari  penetasan  telur  lalat BSF  hingga  menjadi  pupa  ( maggot )  dapat  dilihat pada Gambar 3 (a) sampai dengan (f)..
Gambar  3.  (a)  Telur  lalat  BSF;  (b)  peletakan  telur  lalat BSF  di  media  kultur;  (c)  pencacahan  pakan larva  BSF;  (d)  proses  pemberian  makan  larva
a b c d e f

## Isolasi kitin dari sampel pupa Black Soldier Fly
Langkah  awal  yang  dilakukan  adalah membersihkan  pupa  lalat  BSF  dari  kotoran  sisa pakan yang masih menempel kemudian dikeringkan. Hal  ini  bertujuan  untuk  mengurangi  kadar  air sehingga  pupa  BSF  tersebut  lebih  awet  dan mempermudah  dalam  penyimpanan.  Setelah  kering, pupa  BSF  tersebut  digerus  untuk  meningkatkan  luas permukaan  pupa  sehingga  ekstraksi  menjadi  lebih optimal.
Tahap  pertama  isolasi  kitin  adalah  tahap demineralisasi  yang  bertujuan  untuk  menghilangkan senyawa  anorganik  atau  mineral  dalam  sampel. Larutan  HCl  dipilih  sebagai  pelarut  karena  asam  ini dapat  memicu  terjadinya  dekomposisi  kalsium karbonat  dalam  cangkang  pupa  menjadi  garam kalsium  terlarut  disertai  pelepasan  karbondioksida. Proses  tersebut  berlangsung  menurut  persamaan  4 dibawah ini (Khanafari et al ., 2008).
2HCl + CaCO 3 → CaCl 2 + H 2 O + CO 2 ↑ (4)
Pengadukan  diperlukan  selama  proses  maserasi karena  dalam  proses  ini  terbentuk  gas  CO 2 yang ditandai dengan terbentuknya buih diatas larutan.
Tahap selanjutnya adalah tahap deproteinasi yang  bertujuan  untuk  menghilangkan  protein  dalam sampel  pupa  BSF  menggunakan  larutan  NaOH. NaOH  akan  masuk  kedalam  celah-celah  cangkang untuk memutus ikatan protein dan kitin. Reaksi yang terjadi  pada  proses  deproteinasi  dapat  dilihat  pada persamaan 5 dibawah ini.
Cangkang  pupa  +  NaOH(aq) → Cangkang  bebas protein + Na-Proteinat
(5)
Selanjutnya,  ujung  rantai  protein  dengan  muatan negatif  akan  berikatan  dengan  ion  Na + membentuk Na-proteina  yang  larut  dalam  air  dan  akan  terbuang pada  saat  pencucian.  Hal  ini  mengakibatkan perubahan  warna  pada  sampel  pupa  BSF  yang awalnya  berwarna  coklat  tua  menjadi  warna  putih krem,
Tahap  terakhir  adalah  tahap  penghilangan pigmen yang mungkin masih tersisa dalam cangkang sehingga kitin yang dihasilkan memiliki warna yang lebih  putih (Zulfikar dkk., 2006).  Ekstrak  kitin  yang diperoleh  berwarna  kuning  kecoklatan  dengan bentuk serbuk kasar seperti terlihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Kitin hasil ekstraksi dari pupa BSF
Dari  hasil  isolasi  yang  telah  dilakukan, terjadi pengurangan massa  sampel  sebesar 72%. Hal ini  disebabkan  karena  adanya  penghilangan  mineral dan  protein  yang  larut  dalam  pereaksi  yang kemudian  hilang  melalui  pencucian.  Selanjutnya, berdasarkan hasil perhitungan, hasil isolasi kitin dari pupa  BSF  menghasilkan  kitin  sebanyak  30%  (w/w) dari  berat  sampel  total.  Penelitian  yang  sejenis  telah dilakukan  oleh  Kanto,  dkk  (2018)  dengan  sampel lalat  BSF  dewasa  dan  diperoleh  persentase  kitin sebesar  17,93%  (w/w).  Sementara  itu,  dalam penelitian lain, sebanyak 20% kitin berhasil diisolasi dari ulat sutera (Paulino et al , 2006) dan 10,3% kitin diisolasi  dari  lebah  (Kaya et  al .,  2004).  Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  persentasi  kitin yang diperoleh dari pupa BSF cukup tinggi sehingga pupa Black  Soldier  Fly (H.Ilucens)  dapat  dijadikan sumber kitin alternatif yang cukup menarik.

## Deasetilasi kitin menjadi kitosan
Tahap  deasetilasi  sederhananya  merupakan proses transformasi kitin menjadi kitosan. Deasetilasi merupakan  reaksi  pelepasan  gugus  asetil  (-COCH 3 ) pada  kitin  menggunakan  larutan  basa  sehingga terbentuk gugus amino bebas (-NH 2 ) yang merupakan  karakteristik  struktur  kitosan.  Larutan NaOH  pekat  digunakan  untuk  memutus  ikatan  yang kuat  antara  gugus  asetil  dan  dan  gugus  nitrogen (Rasyid et  al .,  ,  2021).  Produk  akhir  dari  reaksi  ini berupa  kitosan  yang  berwarna  lebih  putih  dari  kitin seperti terlihat pada Gambar 5.
Gambar 5. Kitosan hasil sintesis dari kitin pupa BSF
Dari penelitian yang telah dilakukan, dari 5 g  kitin  diperoleh  1,7  g  kitosan  sehingga  diperoleh persen  hasil  sebesar  34%.  Pengurangan  massa  yang terjadi  disebabkan  karena  adanya  gugus  asetil  yang putus dan terlarut dalam NaOH.

## Analisis Proksimat Kitosan

## Analisis Kadar Air
Kadar  air  dalam  kitosan  dipengaruhi  oleh lama pengeringan, jumlah kitosan yang dikeringkan,
dan luas permukaan wadah tempat  kitosan dikeringkan.  Protan  Biopolimer  menetapkan  standar mutu  untuk  kadar  air  kitosan  yaitu ≤ 10%  (EFSA, 2010).  Berdasarkan  analisis  kadar  air  menggunakan metode  oven  (AOAC,  2005)  yang  telah  dilakukan, didapatkan  kadar  air  dalam  kitosan  hasil  sintesis adalah  sebesar  9,14%  nilai  ini  memenuhi  standar mutu kitosan dengan kualitas yang baik.

## Analisis Kadar Abu
Kadar  abu  merupakan  parameter  penting yang  digunakan  untuk  mengetahui  mineral  yang terkandung dalam suau bahan serta menjadi indikator keberhasilan  proses  demineralisasi  yang  telah dilakukan.  Semakin  rendah  kadar  abu  yang diperoleh,  maka  mutu  dan  kualitas  kitosan  yang diperoleh  juga  semakin  baik.  Proses  penghilangan mineral  dipengaruhi  secara  signifikan  oleh  proses pengadukan selama demineralisasi. Proses pengadukan  yang  konstan  menyebabkan  penyebaran panas  menjadi  merata  sehingga  pelarut  HCl  dapat mengikat  mineral  secara  sempurna  (Hartati et  al ., 2002).
EFSA  (2010)  menetapkan  standar  mutu untuk  kadar  abu  kitosan  yaitu ≤ 3%.  Berdasarkan analisis  kadar  abu  (AOAC  923.03)  yang  telah dilakukan, didapatkan kadar abu dalam kitosan hasil sintesis  adalah  sebesar  0,95%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa proses demineralisasi yang dilakukan berjalan dengan optimal dan memenuhi standar mutu kitosan dengan kualitas yang baik.

## Analisis Kadar Lemak
Kadar lemak dalam kitosan dianalisis untuk mengetahui  sisa  lemak  yang  tersisa  setelah  proses deproteinasi. Jumlah lemak yang terlalu tinggi dapat mengakibatkan  koagulasi  dan  denaturasi  protein sehingga menghambat berjalannya proses deasetilasi. Berdasarkan  analisis  kadar  lemak  dengan  metode Soxhlet  yang  telah  dilakukan,  didapatkan  kadar lemak  dalam  kitosan  hasil  sintetis  adalah  sebesar 1,30%.  Sementara  itu,  EFSA  (2010)  menetapkan kadar lemak dalam kitosan yaitu ≤ 1%. Kadar lemak kitosan  hasil  sintesis  sedikit  melewati  standar  yang telah  ditetapkan.  Hal  ini  diduga  disebabkan  karena kondisi tahap deproteinasi (konsentrasi NaOH, suhu, dan  waktu  maserasi)  yang  kurang  optimal.  Semakin tinggi konsentrasi NaOH diharapkan dapat mendenaturasi  protein,  lemak,  pigmen,  dan  bahan organik lainnya.

## Karakterisasi kitosan dengan metode FTIR
Spektrum  FTIR  dapat  digunakan  untuk mengkarakterisasi  senyawa  melalui  analisis  puncak- puncak  pada  spektrum  yang  sesuai  dengan  gugus fungsi  khas  dalam  kitosan.  Ciri  khas  karakteristik kitosan  adalah  pada  gugus  amida  dan  gugus hidroksil.  Letak  serapan  gugus  amida  berada  pada bilangan  gelombang  1650-1310  cm -1 ,  sedangkan gugus  hidroksil  terletak  pada  bilangan  gelombang
3550-3300  cm -1 .  Berikut  adalah  spektrum  FTIR kitosan hasil sintesis yang diperoleh.
Berdasarkan  spektrum  FTIR  pada  Gambar 6,  dapat  terlihat  adanya  pita  serapan  pada  daerah bilangan gelombang 3294,44 cm -1 yang menunjukkan  keberadaan  gugus  hidroksil  dan serapan pada daerah 1642,02 cm -1 yang menunjukkan keberadaan  gugus  amida.  Akan  tetapi, puncak  serapan  yang  dihasilkan  tidak  terlalu  tinggi. Hal ini diduga karena proses deasetilasi berlangsung tidak  optimal  sehingga  gugus  amina  yang  terbentuk hanya sedikit.
Gambar 6. Spektrum FTIR dari kitosan dari pupa BSF

## Penentuan Derajat Deasetilasi Kitosan
Derajat  deasetilasi  (DD)  merupakan  suatu parameter  yang  mengukur  banyaknya  gugus  asetil pada  kitin  yang  lepas.  Derajat  deasetilasi  kitosan standar  adalah  sebesar  70-80%.  Semakin  besar  nilai DD,  maka    kualitas  kitosan  yang  dihasilkan  akan semakin baik. Kitosan yang dihasilkan akan semakin reaktif  karena  semakin  banyak  gugus  amina  yang menggantikan gugus asetil (gugus amina lebih reaktif dari  gugus  asetil  karena  adanya  PEB  pada  atom nitrogen dalam struktur kitosan).
Pada penelitian ini, derajat deasetilasi (DD) kitosan ditentukan menggunakan metode titrasi asam basa  dan  diperoleh  nilai  DD  kitosan  yang  disintesis adalah  sebesar  9,09%.  Secara  teoritis,  terbentuknya kitosan  ditandai  dengan  nilai  DD  yang  lebih  besar dari 50% pada umumnya mengkonfirmasi terbentuknya kitosan (Antonino et al ., 2017).
Nilai  DD  dibawah  10%  mengindikasikan bahwa  polimer  masih  dalam  bentuk  kitin,  bukan kitosan.  Benhabiles et al . (2012) menyatakan bahwa karakteristik kitosan yang diperoleh sangat bergantung  pada  efektivitas  tahapan  deasetilasi. Berdasarkan  hal  tersebut  maka  dapat  disimpulkan bahwa  proses  deasetilasi  kitin  yang  telah  dilakukan tidak  berjalan  secara  optimal.  Hal  tersebut  bisa dipengaruhi  oleh  konsentrasi  NaOH  yang  kurang pekat,  suhu  deasetilasi  yang  kurang  tinggi,  atau waktu kontak yang kurang lama.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan, senyawa kitin dan kitosan telah berhasil diisolasi dari pupa Black Soldier Fly melalui tahap demineralisasi, deproteinasi dan deasetilasi dengan persen randemen sebesar  34%.  Analisis  proksimat  yang  meliputi analisis  kadar  air,  kadar  abu,  dan  kadar  lemak  telah dilakukan  terhadap  kitosan  yang  diperoleh  dengan nilai berturut-turut sebesar 9,14%, 0,95%, dan 1,3%. Ketiga  nilai  tersebut  menunjukkan  bahwa  kitosan yang  disintesis  memiliki  standar  mutu  yang  cukup baik (EFSA, 2010).
Kitosan  yang  diperoleh  juga  dikarakterisasi menggunakan  FTIR  untuk  mendeteksi  serapan gugus-gugus  yang  khas  dari  kitosan  (gugus  amina), yaitu serapan pada daerah bilangan gelombang 3400 cm -1 dan  1650  cm -1 .  Dari  spektrum  FTIR  yang diperoleh, dapat terlihat adanya serapan pada daerah bilangan  gelombang  tersebut  walaupun  serapannya tidak  terlalu  tinggi.  Nilai  derajat  deasetilasi  kitosan yang  ditentukan  menggunakan  metode  titrasi  asam basa  juga  menunjukkan  nilai  DD  kitosan  sebesar sebesar 9,09%. Nilai DD dibawah 10% mengindikasikan bahwa polimer masih dalam bentuk kitin,  bukan  kitosan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa proses  deasetilasi  kitin  yang  telah  dilakukan  tidak berjalan  secara  optimal.  Oleh  sebab  itu,  dalam penelitian  selanjutnya  akan  dilakukan  optimasi kondisi  proses  deasetilasi  yang  meliputi  konsentrasi NaOH,  suhu  deasetilasi,  dan  waktu  deasetilasi sehingga diperoleh kitosan dengan kualitas yang jauh lebih baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdou, E.S., Nagy, K.S.A. & Elsabee, M.Z., (2008), Extraction and characterization of chitin and chitosan  from  local  sources. Bioresource Technology , 99(5), 1359 – 1367.
Ahmed  T.A.,  &  Aljaeid  B.M.  (2016).  Preparation, characterization, and potential application of chitosan,  chitosan  derivatives,  and  chitosan metal  nanoparticles  in  pharmaceutical  drug delivery. Drug  Design,  Development  & Therapy , 10, 483 – 507.
Antonino,  R.S.C.M  de  Q.,  Fook,  B.R.P.L.,  Lima, V.A.de Oliveira, Rached, R.I. de Farias,Lima,  E.P.N.,  Lima,  R.J.  da  Silva, Covas,  C.A.P.,  &  Fook,  M.V.L.  (2017). Preparation and Characterization of Chitosan  Obtained  from  Shells  of  Shrimp
( Litopenaeus  vannamei Boone). Marine Drugs ,15(5), 141.
Benhabiles, M.S., Salah, R., Lounici, H., Drouiche, N., Goosen, M.F.A., & Mameri, N. (2012), Antibacterial  activity  of  chitin,  chitosan and  its  oligomers  prepared  from  shrimp shell  waste. Food  Hydrocolloids ,  29(1),
48 – 56.
Casadidio,  C.,  Peregrina,  D.V.,  Gigliobianco.  M.R., Deng,  S.,  Censi,  R.,  &  Di  Martino,  P.
(2019). Chitin and chitosans: characteristics, eco-friendly  processes,  and  applications  in cosmetic science. Marine Drugs , 17(6), 369.
Davies,  G.J.G.,  Knight,  D.P.,  &  Vollrath,  F.  (2013).
Chitin  in  the  silk  gland  ducts  of  the  spider nephila  edulis  and  the  silkworm  bombyx mori. PLOS One , 8(8), e73225, 1-7.
De  Smet,  J.,  Wynants,  E.,  Cos,  P.,  &  Van Campenhout, L. (2018). Microbial community  dynamics  during  rearing  of black  soldier  fly  larvae  (Hermetia  Illucens) and  impact  on  exploitation  potential. Applied  and  Environmental  Microbiology , 84(9).
Diener,  S.,  Zurbrügg,  C.,  Gutiérrez,  F.R.,  Dang, N.H.,  Morel,  A.,  Koottatep,  T.  &  Tockner, K.  (2011).  Black  soldier  fly  larvae  for organic  waste  treatment-prospects  and constraints. Proceedings  of  the  WasteSafe 2011-2nd International Conference on Solid
Waste Management in Developing Countries , 52-59.
Dong,  Z.,  Zhang,  W.,  Zhang,  Y.,  Zhang,  X.,  Zhao, P.,  &Xia,  Q.  (2016).  Identification  and characterization  of  novel  chitin-binding proteins from the larval cuticle of silkworm, bombyx  mori. J.  Proteome  Res ,  15(5),
1435 – 1445.
European  Food  Safety  Authority  (EFSA).  (2010). Scientific  opinion  on  the  safety  chitin- glucan as a novel food ingridient, European Food Safety Authority , 8(7), 1-17.
Hahn,  T.,  Roth,  A.,  Febel,  E.,  Fijalkowska,  M., Schmitt,  E.,  Arsiwalla,  T.,  &  Zibek,  S.
(2018).  New  methods  for  high-accuracy insect  chitin  measurement. J.  Sci.  Food Agric . 98(13), 5069 – 5073.
Hartati,  F.K.,  Susanto,  T.,  Rakhmadiono,  S.  &  Adi Loekito,  S.  (2002).  Faktor-faktor  yang berpengaruh  terhadap  tahap  deproteinasi menggunakan enzim protease dalam pembuatan  kitin  dan  kitosan  dari  cangkang rajungan (Portunus pelagis). Jurnal Biosain , 2(1).
Manigandan,  V.,  Karthik,  R.,  Ramachandran,  S.,  & Saravanan,  R.  (2017).  Chapter  15 –
Chitosan  applications  in  food  industry. Biopolymers  for  food  design,  Handbook  of Food Bioengineering , 469 – 491.
Nthunya,  L.N.,  Masheane,  M.L.,  Malinga,  S.P., Nxumalo,  E.N.,  &  Mhlanga,  S.D.  (2017), Environmentally benign chitosan-based nanofibres  for  potential  use  in  water treatment. Cogent. Chem . 3(1), 1357865.
Rasyid,  F.,  Chadijah,  S.,  Nurhuda,  S.,  &  Ratna. (2021). Synthesis of chitosan-CuO composite  and  it’s  application  as  heavy metal adsorbent. Journal of Physics Conference Series., 1899, 012029.
Rizzi,  V.,  Longo,  A.,  Placido  T., et  al .  (2018).  A comprehensive investigation of dye – chitosan  blended  films  for  green  chemistry applications. J.  Applied  Polym.  Sci ., 135(10), 45945.
Soetemans,  L.,  Uyttebroek,  M.,  &  Bastiaens,  L.
(2020).  Characteristics  of  chitin  extracted from  black  soldier  fly  in  different  life stages. Int.  J.  Biological  Macromlolecus , 165, 3206-3214.
Wasko, A., Bulak, P., Polak-Berecka, M., Nowak, K, Polakowski,  C.,  &  Bieganowski.  (2017). The  first  reporf  of  the  physicochemical structure  of  chitin  isolated  from  Hermetia illucens. Int.  J.  Biological  Macromoleculs , 92, 316 – 320.
Yadav,  M.,  Goswami,  P.,  Paritosh,  K.,  Kumar,  M., Pareek,  N.,  &  Vivekanand,  V.  (2019). Seafood  waste:  a  source  for  preparation  of commercially  employable  chitin/chitosan materials. Bioresources  and  Bioprocessing , 6(8), 1-20.
Yaneva,  Z.,  Ivanova,  D.,  Nikolova,  N.,  &  Tzanova, M.  (2020).  The  21st  century  revival  of chitosan in service to bio-organic chemistry.
Biotechnology & Biotechnological Equipment , 34(1), 221-237.
Zulfikar  &    Ratnadewi,  A.  A.  I.  (2006).  Isolasi  dan karakterisasi  fisikokimia-fungsional  kitosan udang air tawar ( Macrobrachium sintangense  de  Man .). Jurnal  Teknologi Proses , 5(2), 129 – 137.