EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Profil Fitokimia Ekstrak Metanol Batang Clerodendrum inerme Menggunakan
Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia
Berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya  ekstrak  daun C.  inerme memiliki  potensi  sebagai antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menemukan  sumber  antibakteri  alami  dari  batang mangrove C.  inerme . C.  inerme di  koleksi  dari  perairan  Teluk  Awur  Jepara.  Pelarut  etil  asetat digunakan untuk mengesktrak metabolit sekunder dari batang C. inerme . Metode paper disc diffusion digunakan pada uji antibakteri terhadap beberapa bakteri patogen, seperti Bacillus cereus, B. subtilis dan Escherichia  coli .  Metode  fitokimia  dan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  digunakan  untuk mengkarakterisasi ekstrak kasar batang C. inerme. Berdasarkan hasil karakterisasi metabolit, ekstrak kasar  batang C.  inerme mengandung  tanin,  alkaloid  dan  fenolik.  Studi  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak batang C. inerme tidak potensial sebagai agen antibakteri.
Kata kunci: Antibakteri; Clerodendrum inerme ; Fitokimia; KLT; Metabolit

## Phytochemical Profile of Clerodendrum inerme Bark Methanol Extract Using TLC and
Screening of Its Antimicrobial Activity
ABSTRACT: Clerodendrum inerme is a type of mangrove that is still rarely studied. Previous studies reported  that  C.  inerme  leaf  extract  has  potential  as  an  antibacterial  agent.  This  study  aimed  to investigate the antibacterial activity from C. inerme bark. C. inerme was collected from Teluk Awur Jepara.  Ethyl  acetate  solvent  was  used  to  extract  the  secondary  metabolites.  The  paper  disc diffusion method was utilized in the antibacterial test against several pathogenic bacteria, such as Bacillus cereus, B. subtilis, and Escherichia coli. Phytochemical test and Thin Layer Chromatography (TLC) were performed to characterize the crude extract of C. inerme bark. Based on the results of the metabolite characterization, the crude extract of C. inerme bark contained tannins, alkaloids and phenolics. This study showed that the C. inerme bark extract was not potential as an antibacterial agent.

## Keywords: Antibacterial; Clerodendrum inerme; Phytochemical; TLC; Metabolites

## PENDAHULUAN
Mikroorganisme  dapat  menyebabkan  berbagai  macam  permasalahan  kesehatan.    Bakteri merupakan salah satu contoh mikroorganisme yang menyebabkan permasalahan kesehatan pada manusia.  Contoh  bakteri  patogen  yang  merugikan  manusia  yaitu Bacillus  subtilis,  Bacillus  cereus dan Escherichia  coli . B. subtilis yang menyebabkan meningitis  dan  endocarditis, B. cereus dapat menyebabkan  permasalahan  pencernaan, E.  coli dapat  menyebabkan  masalah  pada  sistem pencernaan  (Sudarwati, 2018).   Stres lingkungan,  kondisi sanitasi yang  buruk,  dan stres oksidatif dapat  meningkatkan  pertumbuhan  berbagai  patogen  serta  dapat  menurunkan  sistem  kekebalan tubuh sehingga mempermudah terjadinya berbagai penyakit infeksi pada manusia. Masyarakat akan cenderung mengkonsumsi antibiotik untuk penyakit yang diakibatkan oleh  infeksi mikroorganisme. Penggunaan  antibiotik  yang  tidak  sesuai  dengan  aturan  kesehatan  dapat  menimbulkan  resistan
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro
Metode KLT dan Penapisan Aktivitas Antimikroba
ABSTRAK: Clerodendrum inerme merupakan salah satu jenis mangrove yang masih jarang dikaji.
2 Laboratorium Natural Product, UPT Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegoro
Prasetyana  Ajeng  Refamurty 1,2 ,  Wilis  Ari  Setyati 1 , Mada  Triandala  Sibero 1,2*
*Corresponding author, e-mail: madatriandalasibero@lecturer.undip.ac.id
Journal of Marine Research Vol 12, No. 2 Mei 2023, pp. 177-186
terhadap berbagai patogen atau dikenal dengan terminologi multidrug - resistant (MDR) (Hawkey et al. , 2018). Menurunnya aktivitas berbagai antibiotik komersial saat ini menjadikan eksplorasi senyawa antibiotik baru menjadi penting untuk dilakukan.
Tumbuhan  merupakan  salah  satu  sumber  penghasil  senyawa  metabolit  sekunder  yang berpotensi sebagai sumber antibiotik alami (Gorlenko et al. , 2020). Indonesia sebagai negara maritim tropis  memiliki  kekayaan  sumberdaya  tanaman  pesisir  yang  belum  banyak  dioptimalkan  sebagai sumber antibiotik, salah satunya adalah mangrove (Morip et al. , 2022). Mangrove hidup di kawasan pesisir  pada  daerah  intertidal  yang  dipengaruhi  oleh  pasang  surut  air  laut  sehingga  memiliki ketahanan hidup yang tinggi. Menurut penelitian Prihanto et al. , (2019), mangrove memiliki potensi baik dalam bidang industri, pangan dan farmasi. Hutan mangrove di Indonesia menjadi salah satu hutan bakau terluas di kawasan Asia Tenggara. Luas hutan mangrove di Indonesia yaitu 2,9 juta hektare yang artinya 59,8% dari total luas hutan mangrove di Asia Tenggara (Kotijah dan Ventyrina, 2019).  Kajian  potensi  farmasi  asal  mangrove  di  Indonesia  telah  banyak  dilakukan  pada  genus Rhizophora sp. Bruguera sp. Sonneratia sp. Namun satu jenis mangrove yang jarang dikaji yaitu Clerodendrum inerme yang berasal dari famili Verbenaceae. C. inerme memiliki nama lokal gambir laut. Mangrove ini telah dilaporkan sebagai obat sakit perut  yang  disebabkan  oleh  keracunan  ikan  laut  (Alfaida  dan  Musdalifah,  2013). Clerodendrum inerme banyak  tumbuh  di  kawasan  Cina  Selatan,  India  dan  Asia  Tenggara  hingga  Asia  Utara. Berdasarkan penelitian Xiong et al. , (2019) , mangrove C. inerme dapat mengobati penyakit kulit dan luka. Meningkatnya  kebutuhan  akan  antibiotik  baru  untuk  melawan  infeksi  bakteri  MDR  serta adanya laporan tentang potensi farmasi C . inerme di Indonesia yang belum dioptimalkan menjadikan eksplorasi senyawa antibakteri mangrove ini menjadi penting untuk dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk menemukan sumber antibakteri alami dari batang mangrove C. inerme.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  April  -  September  2021.  Sampel  batang  mangrove diambil  di  Pantai  Teluk  Awur  Jepara,  Jawa  Tengah.  Pengambilan  sampel  mangrove  menggunakan metode  jelajah  ( Cruise  methode ).  Mangrove  diidentifikasi  dengan  cara  mencocokkan  morfologinya dengan buku panduan identifikasi mangrove (Noor et al., 2006). Sampel mangrove dipreparasi dengan cara  dibersihkan  dari  zat  pengotor  yang  menempel  menggunakan  air  dan  dikeringkan  dengan  tisu bersih.  Batang  mangrove  dipotong  kecil-kecil  kemudian  ditimbang  dan  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer .  Sebanyak  105  gram  sampel  batang C . inerme (Gambar  1)  diekstraksi  menggunakan metode  maserasi  tunggal  dengan  pelarut  metanol.  Proses  maserasi  dilakukan  selama  24  jam menggunakan shaker dengan ditutup alumunium foil agar tidak terkena cahaya (Audah et al. , 2018). Sampel  disaring  menggunakan  kertas Whatman ,  setelah  itu  fase  pelarut  organik  dipekatkan menggunakan rotary evaporator dengan suhu 30-45 ֯C. Ekstrak kasar yang diperoleh digunakan untuk tahap selanjutnya.

## Identifikasi Metabolit Sekunder
Uji  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin, triterpenoid dan kuinon.

## Identifikasi Senyawa Turunan Alkaloid
Uji  alkaloid  ekstrak  batang C.  inerme dilakukan  dengan  mengambil  2  mg  ekstrak  ditambah dengan 1 ml asam sulfat (H 2 SO 4 ) 2N dan homogenkan. Kemudian larutan di saring menggunakan kertas  saring whatman 0,45  µm.  Larutan  ditetesi  dengan  Dragendorff.  Adanya  alkaloid  ditandai dengan endapan berwarna orange hingga kemerahan (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019).

## Identifikasi Senyawa Turunan Flavonoid
Ekstrak C.inerme sebanyak 2 mg ekstrak batang ditambahkan 0,4 mg magnesium kemudian ditambah 1 ml HCl amil alkohol lalu dihomogenkan. Hasil positif ditandai dengan adanya perubahan warna  menjadi kuning/jingga hingga kemerahan (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019).
Gambar 1 . Sampel Mangrove C. inerme

## Identifikasi Senyawa Turunan Saponin
Ekstrak C.inerme sebanyak 2 mg sampel batang ditambah dengan 5 ml aquades kemudian panaskan.  Homogenkan  secara  vertikal  hingga  terbentuk  adanya  busa.  Amati  selama  15  menit kemudian tetesi dengan HCl 2 N, busa yang stabil menandakan adanya saponin (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019)

## Identifikasi Senyawa Turunan Tanin
Ekstrak C.  inerme sebanyak  2  mg  ekstrak  batang  ditambahkan  dengan  5  ml  aquades. Panaskan  larutan  hingga  mendidih,  kemudian  dinginkan  hingga  mencapai  suhu  ruangan. Tambahkan  FeCl 3 1%  sebanyak  2  tetes.  Hasil  akan  menunjukkan  warna  hijau  gelap  atau  hijau kebiruan jika terdapat tanin (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019)

## Identifikasi Senyawa Turunan Steroid dan Triterpenoid
Uji steroid dan triterpenoid dilakukan dengan mengambil sampel batang sebanyak 2 mg di tambah dengan  1  ml  anhydride  asetat  sebanyak  1  ml.  Panaskan  larutan  hingga  mendidih,  kemudian didinginkan  hingga  suhu  ruangan.  Tambahkan  1  tetes  asam  sulfat  pekat  secara  perlahan  dari dinding  tabung.  Hasil  yang  diperoleh  jika  terdapat  terpenoid  ialah  dengan  adanya  warna  merah sedangkan jika steroid berwarna hijau (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019)

## Identifikasi Senyawa Turunan Kuinon
Uji  kuinon  dilakukan  dengan  mengambil  2  mg  ekstrak  batang  ditambah  5  ml  aquades, kemudian  dipanaskan  hingga  mendidih.  Setelah  itu  dinginkan  hingga  suhu  ruangan.  Tambahkan NaOH sebanyak 2 tetes. Hasil akan menunjukkan warna merah muda hingga kemerahan atau ungu jika terdapat kuinon (Harborne 1987; Sibero et al. , 2019)

## Analisis Metabolite Finger Printing dengan Kromatografi Lapis Tipis
Visulisasi metabolit pada sampel dilakukan dengan menggunakan penyinaran dengan lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm serta 3 reagen yaitu Dragendorfft, FeCl 3 dan Vanillin. Elunen
yang  digunakan  yaitu  n-heksan  dan  etil  asetat  dengan  perbandingan  8:2.  Ekstrak C.  inerme ditotolkan  pada  plat  KLT  dan  dimasukkan  kedalam chamber yang  telah  diisi  eluen  dengan kemiringan 45 ֯C. Plat didiamkan hingga eluen naik hingga garis batas  (Kamar et al. , 2021). bercak yang  timbul  diamati  pada  sinar  UV  untuk  melihat  adanya  bercak  yang  tidak  terlihat  pada  sinar tampak (Maryanto et al ., 2018). Uji dilakukan dengan penyemprotan pereagen yaitu Dragendorff, FeCl 3 dan Vanillin. Nilai Rf dihitung dengan menggunakan rumus (Kamar et al. , 2021):

## 𝑁𝑖𝑙𝑎𝑖 𝑅𝑓 = 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑠𝑒𝑛𝑦𝑎𝑤𝑎 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡

## Uji Antibakteri
Metode yang digunakan adalah paper disc diffusion . Bakteri patogen yang digunakan pada uji  antibakteri  yaitu Bacillus  subtilis,  Bacillus  cereus dan Escherichia  coli .  Bakteri  tersebut diremajakan  menggunakan  media  NA  selama  24  jam.  Setelah  itu  diencerkan  dalam  media  MHB dengan kekeruhan 0.5 McFarland . Bakteri tersebut ditumbuhkan pada media MHA dengan cotton swab. Konsentrasi ekstrak yang digunakan adalah 2 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1 mg/ml, 0,5 mg/ml dan 0,25 mg/ml.  Ekstrak  diencerkan  menggunakan  pelarut  DMSO.  Ekstrak  batang C.  inerme diinjeksikan pada paper  disc dan  ditunggu  hingga  kering. Paper  disc di  letakkan  pada  media  yang  sudah diinokulasi  yang  terbagi  menjadi  menjadi  6  kuadran  dengan  kontrol  positif  (Amoxilin)  dan  kontrol negatif  (DMSO)  kemudian  di  inkubasi  (Sibero et  al. ,  2019).  Pengamatan  dilakukan  dalam  kurun waktu 24, 48 dan 72 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Mangrove  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  merupakan  spesies Clerodendrum  inerme berdasarkan pengamatan morfologinya yaitu daun, bunga dan buah. Pengamatan dilakukan dengan mencocokkan  hasil  pengamatan  dengan  buku  panduan  identifikasi  mangrove  (Noor et  al., 2006). Clerodendrum inerme memiliki ciri khas bunga berbentuk lonceng yang terletak pada ketiak daunnya. Benang sarinya terjuntai panjang melebihi mahkota bunganya.

## Profil Metabolit Ekstrak Batang C. inerme
Karakterisasi  senyawa  metabolit  pada  ekstrak  metanol  batang C.  inerme dilakukan  dengan  uji fitokimia. Hasil uji alkaloid dengan pereaksi Dragendorff akan menimbulkan reaksi antara ion logam K + dengan alkaloid sehingga menimbulkan endapan (Agustina et al. , 2016). Flavonoid mengandung protein ekstraseluler  yang  bekerja  untuk  mengganggu  fungsi  dinding  sel  bakteri  (Saraswati et  al. ,  2019). Menurut Prayoga et al. , (2019), senyawa fenolik memiliki banyak gugus OH menyebabkan perbedaan keelektronegatifan  yang  tinggi  sehingga  bersifat  polar.  Terbentuknya  ikatan  rangkap  konjugasi menyebabkan  terjadinya  reaksi  oksidasi  sehingga  terjadi  perubahan  warna  pada  uji  triterpenoid berwarna merah atau ungu dan steroid menjadi hijau kebiruan (Manongko et al. , 2020). Timbulnya busa pada  uji  saponin  disebabkan  karena  terdapat  senyawa  hidrofilik  dan  hidrofobik,  sehingga  ketika dihomogenkan  membentuk misel (Manongko et al. , 2020). Berdasarkan  hasil  uji  yang  telah  dilakukan  (Gambar  2.),  ekstrak C.  inerme menunjukkan  hasil positif hanya pada uji tanin, ditandai dengan perubahan warna menjadi kuing kecoklatan. Tanin bersifat polar  karena  mudah  larut  pada  metanol  yang  sama-sama  bersifat  polar.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Akasia et al. ,(2021), yang mengatakan bahwa tanin bersifat polar karena memiliki banyak gugus OH sehingga dia akan tertarik dan terlarut dengan baik oleh pelarut yang bersifat polar juga seperti metanol. Tanin berperan untuk melindungi tumbuhan dari ancaman lingkungan seperti bakteri, jamur dan  predator.  Tanin  kerap  digunakan  sebagai  antibiotik  pada  bidang  kesehatan  karena  tanin  dapat mengganggu  proses  metabolisme  bakteri  patogen  (Saraswati et  al. ,  2019) . Berdasarkan  Uji  yang dilakukan  Arifianti et  al. (2019),  melaporkan  bahwa  ekstrak  daun C.  inerme mengandung  flavonoid, saponin, terpenoid dan tanin.
Tabel 1 . Identifikasi Mangrove
Keterangan Buku Identifikasi Sampel Bentuk bunga seperti lonceng berwarna putih   Benangsari menjuntai melebihi mahkota bunga dengan warna merah keunguan   Bentuk daun elips bulat memanjang   Bentuk  daun  kaku  dan  tertekuk  ke dalam dengan warna daun hijau tua   Tabel 2 . Hasil Uji Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Indikator Ekstrak Batang C. inerme Alkaloid Endapan berwarna putih hingga kuning - Flavonoid Jingga/merah/kuning - Triterpenoid Merah - Steroid Hijau - Tanin Biru hingga hitam + Saponin Buih stabil - Kuinon Merah Muda hingga ungu - Keterangan : + (hasil positif), - (hasil negatif). *Sumber : Sibero et al. , 2020
Gambar 2. Hasil  Uji  Fitokimia;  (a)  uji  saponin;  (b)  Uji  triterpenoid  dan  steroid;(c)  Uji  Alkaloid;  (d)  Uji Flavonoid; (e) Uji tanin; (f) Uji kuinon

## Analisis Metabolite Finger Printing dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Analisis  senyawa  metabolit  dengan  menggunakan  KLT  dilakukan  untuk  mengkonfirmasi mengenai  senyawa  metabolit  setelah  melakukan  skrining  menggunakan  uji  fitokimia.  Uji  dilakukan dengan  penyemprotan  plat  KLT  menggunakan  Dragendorfff,  Vanilin  dan  FeCl 3 .  Penyemprotan Dragendorfff dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui adanya alkaloid pada ekstrak (Syarifuddin dan Sulistyan,  2019).  Hasil  positif  menunjukkan  adanya  bercak  berwarna  kuning  hingga  oranye,  merah
(a) (a) (b) (c) (d) (e) (f)
Journal of Marine Research Vol 12, No. 2 Mei 2023, pp. 177-186
hingga coklat dilihat pada sinar tampak. Penggunaan pereagen Vanillin untuk mengetahui kandungan terpenoid  dan  steroid  (Budilaksono et  al. ,  2014).  Adanya  terpenoid  ditandai  dengan  muncul  bercak berwarna ungu hingga merah muda. Penyemprotan FeCl 3 dilakukan untuk mengetahui adanya fenolik pada  sampel  (Arel et  al. ,  2018).  Hasil  positif  menunjukkan  adanya  bercak  berwarna  biru  hingga kehitaman. Eluen yang digunakan pada analisis KLT ekstrak C. inerme yaitu n-heksana dan etil asetat dengan perbandingan 8:2. Pengamatan dilakukan dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 366 nm (Tabel 3). Hasil pengamatan dengan sinar UV menunjukkan bercak noda dengan nilai R f yang berbeda- beda, hal ini menunjukkan tingkat kepolaran yang berbeda pula (Tabel 4).  Bahas hasil uji yang telah dilakukan,  penyemprotan Dragendorff muncul bercak berwarna kuning  pada R f 0.17, 0.23 dan 0.67 yang diduga terdapat senyawa alkaloid (Tabel 5). Penyemprotan vanilin menunjukkan bercak berwarna hijau yang diduga tidak mengandung terpenoid dan steroid. Berdasarkan Tabel 6. menunjukkan bercak berwarna abu-abu pada R f 0.25 dan R f 0.67 yang diduga merupakan senyawa fenolik.
Tabel 3 . Nilai R f ekstrak batang C. inerme pengamatan sinar UV
Ekstrak
Retention ( R f ) Value 0.03 0.12 0.17 0.28 0.33 0.57 0.67 0.7 0.77 0.83 C.
inerme
Tabel 4. Nilai R f ekstrak batang C. inerme penyemprotan Dragendorff
Ekstrak
Retention ( R f ) Value 0.17 0.23 0.67 C. inerme Warna Hijau Hijau Kuning Dugaan - - Alkaloid (Syarifuddin dan Sulistyan, 2019) Tabel 5 . Nilai Rf ekstrak batang C. inerme penyemprotan Vanilin
Ekstrak Retention ( R f ) Value 0.12 0.17 0.25 0.57 0.63 C. inerme Warna Hijau Hijau Hijau Hijau Hijau Dugaan - - - - -
Tabel 6. Nilai R f ekstrak batang C. inerme penyemprotan FeCl 3
Ekstrak Retention ( R f ) Value 0.12 0.25 0.67 C. inerme Warna kuning Abu-abu Abu-abu Dugaan - Fenolik (Suhaenah dan Nuryanti, 2017) Fenolik (Suhaenah dan Nuryanti, 2017)
Gambar 3. Hasil analisis KLT menggunakan ekstrak batang C. inerme dengan eluen n-hexane : etil asetat (8:2) (a) pengamatan dibawah sinar UV 366 nm; (b) penyemprotan dengan Vanillin (c) penyemprotan dengan FeCl 3 ; (d) penyemprotan dengan Dragendorff
Menurut Salamah et al. (2017), melaporkan bahwa bagian tumbuhan seperti daun, kulit batang, bunga, biji dan akar mengandung alkaloid dalam jumlah yang rendah. Alkaloid berfungsi sebagai agen kontrol pada tumbuhan dan melindungi tumbuhan berupa antibakteri dan antiparasit (Widhoyo et al. , 2019).  Senyawa  fenolik  merupakan  senyawa  yang  bersifat  polar,  sehingga  akan  mudah  larut  pada pelarut  yang  bersifat  polar.  Senyawa  ini  sangat  dibutuhkan  oleh  tumbuhan  untuk  menangkal  radikal bebas dan bertindak sebagai antioksidan (Rifai et al. , 2018). Hasil pada uji fitokimia hanya terdapat tanin, sedangkan  pada  KLT  diduga  terdapat  alkaloid  dan  fenolik.  Hal  ini  terjadi  karen  pada  fitokimia menggunakan  jumlah  yang  cukup  banyak,  sehingga  ketika  jumlahnya  kurang  tidak  dapat  terdeteksi. Sedangkan  KLT  menggunakan  silika  sehingga  senyawanya  dapat  terfraksinasi  dengan  baik,  meski dalam jumlah yang rendah.

## Analisis Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang C. inerme
Uji aktivitas antibakteri pada ekstrak C. inerme dilakukan untuk mengetahui senyawa metabolit berupa  antibakteri C.  inerme .  Hasil  uji  antibakteri  ekstrak C.  inerme dengan  pelarut  metanol menunjukkan tidak adanya aktivitas antibakteri pada bakteri patogen uji, ditandai dengan tidak adanya zona hambat (Gambar 4).
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya  Banne et  al. ,  (2017),  melaporkan  bahwa  mangrove C. inerme memiliki  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etanol  dan  etil  asetat.  Uji  tersebut  dilakukan  pada ekstrak  daun,  namun  untuk  pengujian  batangnya  masih  belum  dilaporkan. Sedangkan  untuk  hasil penelitian  ini  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri.  Hal  ini  dilihat  dari  hasil  uji  yang  tidak menunjukkan adanya zona bening. Hal ini terjadi karena ekstrak batang C. inerme tidak mampu untuk menghambat pertumbuhan bakteri patogen.
Bakteri yang digunakan yaitu B. cereus, B. subtilis dan E. coli .  Bakteri patogen B. cereus dan B. subtilis merupakan  bakteri  gram  positif  sedangkan E.  coli merupakan  bakteri  gram  negatif  (Sari  dan Ferdinan,  2017).  Bakteri  gram  negarif  dan  gram  positif  memiliki  susunan  dinding  sel  yang  berbeda, dimana bakteri gram negatif memiliki 3 lapisan ( lapisan luar lipopolisakarida dan protein, lapisan dalam tersusun oleh peptidoglikan, sehingga akan lebih sulit untuk ditembus oleh beberapa senyawa antibiotik (Banne et  al. ,  2017).  Bakteri  yang  bersifat  MDR  ( Multidrug  Resistant ),  diketahui  lebih  sulit  untuk ditangani  karena  bakteri  tersebut  bersifat  resistensi  terhadap  beberapa  golongan  antibiotik.
(c) (d) (a) (b) Rf 1 Rf 2 Rf 3 Rf 4 Rf 5 Rf 6 Rf 7 Rf 8 Rf 9 Rf 10 Rf 1 Rf 3 Rf 2 Rf 2 Rf 3 Rf 4 Rf 5 Rf 1 Rf 2 Rf 3 Rf 1
(Suwandi  dan  Sandika,  2017).  Bakteri  MDR  muncul  akibat  penggunaan  antibiotik  yang    tidak terkontrol dan bertanggungjawab (Pratiwi, 2017). Terjadinya mutasi kromosom atau terjadi transfer material  genetik  melalui  transformasi,  transduksi  dan  konjugasi  melalui  plasmid  menyebabkan bakteri bersifat resisten terhadap antibiotik (Suwandi dan Sandika, 2017). Hal tersebut menjadi sulit ditangani karena kurangnya agen antimikroba baru dan penurunan daya tahan tubuh sehingga lebih mudah terinfeksi.
B.  cereus,  B.  subtilis dan E.  coli merupakan  bakteri  yang  dapat  menyebabkan foodborne disease . Foodborne  disease terjadi  karena  kontaminasi  mikroba  pada  makanan,  yang  kemudian dikonsumsi  oleh  manusia  (Hoelzer et  al. ,  2018).    Bakteri  tersebut  bersifat  toksik  sehingga  akan menyebabkan  gangguan  kesehatan  pada  manusia.  Kontaminasi  makanan  dapat  bersumber  dari kontaminasi  biologis,  kontaminasi  kimiawi  dan  kontaminasi  fisik  (Nurani et  al. ,  2019).  Kontaminasi makanan  disebabkan  oleh  berbagai  faktor,  seperti  kurangnya hygiene pada  peralatan  makan  dan buruknya sanitasi lingkungan tempat makanan dibuat. Perlunya peningkatan standar kebersihan baik pada  peralatan  makan,  metode  penyimpanan  makanan  maupun  lingkungan  untuk  mengurangi terjadinya foodborne disease .
Gambar 4. Hasil uji antibakteri ekstrak batang C. inerme. Keterangan: A-B= uji antibakteri dengan B. cereus; C-D= uji antibakteri dengan B. subtilis ; E-F =  uji antibakteri dengan E. coli
Berdasarkan uji KLT yang telah dilakukan, ekstrak batang C. inerme diduga mengandung alkaloid,  namun  pada  uji  aktivitas  antibakteri  tidak  teridikasi  adanya  aktivitas  antibakteri.  Hal  ini terjadi  karena  senyawa  antibakteri  yang  terkandung  pada  batang C.  inerme tidak  mampu  untuk menghambat pertumbuhan bakteri patogen B. cereus, B. subtilis dan E. coli .

## KESIMPULAN
Pengujian aktivitas antibakteri metabolit ekstrak batang C. inerme menunjukkan bahwa tidak terbentuknya  zona  bening  sehingga  ekstrak  tersebut  disimpulkan  tidak  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri pathogen target. Berdasarkan analisis karakterisasi metabolit ekstrak batang C.  inerme menunjukkan  adanya  senyawa  yang  diduga  turunan  dari  alkaloid,  fenolik  dan  tannin. Dampak dari penelitian ini yaitu memberikan informasi mengnenai mangrove C. inerme .

## UCAPAN TERIMAKASIH
Artikel ini merupakan out put dari Hibah Penelitian Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro pada tahun 2021 yang diterima oleh Dr. Mada Triadala Sibero.
A B C D E F (+) (-)

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  S.,  Ruslan,    Wiraningtyas,  A.  2016.  Skrining  Fitokimia  Tanaman  Obat  Di  Kabupaten Bima. Cakra Kimia, 4(1): 71 –76.
Akasia,  A.I.,  Putra,  I.D.N.N.    Putra,  I.N.G.  2021.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Daun  Mangrove Rhizophora mucronata dan Rhizophora apiculata yang Dikoleksi dari Kawasan Mangrove Desa Tuban, Bali. Journal of Marine Research and Technology , 4(1): 16-22.
Alfaida,  S.M.,    Musdalifah,  N.  2013.  Jenis-Jenis  Tumbuhan  Pantai  di  Desa  Pelawa  Baru Kecamatan  Parigi  Tengah  Kabupaten  Parigi  Moutong  dan  Pemanfaatannya  sebagai  Buku Saku. E-Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi , 1:19 –32.
Arel,  A.,  Wardi,  E.S.    Oktaviani,  Y.  2018.  Profil  Metabolit  Sekunder  Ekstrak  Daun  Berenuk ( Crescentia  cujete L.)Dan  Uji  Sitotoksik  Dengan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test. Jurnal Katalisator , 3(2): 82 –88.
Arifianti,  R.,  Widiastuti,  E.L.    Nurcahyani,  E.  2019.  Efek  Ekstrak  Metanol  Makroalga  Merah ( Eucheuma cottonii ), Gambir Laut ( Clerodendrum inerme ), Dan Taurin Terhadap Profil Protein Plasma  Darah  Mencit  Jantan  ( Mus  musculus L.)  Yang  Diinduksi  Senyawa  Karsinogen Benzo(Α)Piren. Prosiding Seminar Nasional Tumbuhan Obat Indonesia ke-55 , 1(1): 2 –9. Audah, K.A., Amsyir, J., Almasyhur, F., Hapsari, A.M.  Sutanto, H. 2018. Development of extract library from indonesian biodiversity: Exploration of antibacterial activity of mangrove bruguiera cylindrica  leaf  extracts. IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science, 130(1):p.012025
Banne, L.H., Annisa, N.  Ramadhan, A.M. 2017. Identifikasi Metabolit Sekunder Serta Uji Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Daun Nona Makan Sirih ( Clerodendrum thomsoniae ). Proceeding of the 6th Mulawarman Pharmaceuticals Conferences , 1(1):127 –140.
Budilaksono, W., Wahdaningsih, S.  Fahrurroji, A. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Kloroform Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus lemairei Britton dan Rose) Menggunakan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil). Jurnal  Mahasiswa  Farmasi  Fakultas  Kedokteran  UNTAN ,  1(1):1- 11.
Gorlenko, C.L., Kiselev, H.Y., Budanova, E.V., Zamyatnin Jr, A.A.  Ikryannikova, L.N., 2020. Plant secondary metabolites in the battle of drugs and drug-resistant bacteria: new heroes or worse clones of antibiotics?. Antibiotics, 9(4):p.170.
Hawkey,  P.M.,  Warren,  R.E.,  Livermore,  D.M.,  McNulty,  C.A.,  Enoch,  D.A.,  Otter,  J.A.    Wilson, A.P.R  2018.  Treatment  of  infections  caused  by  multidrug-resistant  gram-negative  bacteria: Report of the British society for antimicrobial chemotherapy/healthcare infection society/british infection association joint working party. Journal of Antimicrobial Chemotherapy , 73: iii2 –iii78. Hoelzer, K., Switt, A.I.M., Wiedmann, M.   Boor, K.J. 2018. Emerging needs and opportunities in foodborne disease detection and prevention: From tools to people. Food Microbiology, 75:65 –71 Kamar,  I.,  Zahara,  F.,  Yuniharni,  D.    Umairah, R.U.  2021. Identifikasi  Parasetamol  dalam  Jamu Pegal  Linu  Menggunakan  Metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT). QUIMICA:  Jurnal  Kimia Sains dan Terapan , 3(1):24 –29.
Kotijah,  S.,    Ventyrina,  I.  2019.  Preventive  Regulations  To  Remove  Environmental  Damage  To Mangrove Ecosystem At East Kalimantan, Indonesia. International Journal of Research In Law, Economic and Social Sciences , 1(1): 9 –20.
Manongko, P.S., Sangi, M.S.  Momuat, L.I. 2020. Uji Senyawa Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Tanaman Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.). Jurnal MIPA, 9(2): 64-69.
Morip, T., Krey, K.  Pattiselanno, F. 2022. Kajian Etnobiologi Kelompok Etnik Dani: Bentuk Interaksi Masyarakat Dengan Taman Wisata Alam Gunung Meja, Manokwari, Papua Barat. Jurnal Ilmu Lingkungan , 20(2): 231 –241.
Nurani,  F.P.,  Nirawati,  L.,  Kriswibowo,  A.    Hikmah,  D.A.  2019.  Evaluasi  Capaian  Implementasi Permenkes No. 1096/ Menkes/ Per/ Vi/ 2011 Tentang Jasa Boga Di Kantin Kampus X Provinsi Jawa Timur. Dinamika Governance : Jurnal Ilmu Administrasi Negara, 9(2):185-198
Pratiwi, R.H. 2017. Mekanisme Pertahanan Bakteri Patogen terhadap Antibiotik. Journal Pro-Life, 4(2): 418 –429.
Prayoga, D.G.E., Nocianitri, K.A.  Puspawati, N.N. 2019. Antioksidan Ekstrak Kasar Daun Pepe ( Gymnema reticulatum Br .) Pada Berbagai Jenis Pelarut. J urnal Ilmu dan Teknologi Pangan, 8(2): 111 –121.
Prihanto, A.A., Ardiansyah, R.F.  Pradarameswari, K.A. 2019. Identifikasi Molekuler Bakteri Endofit Penghasil  L-asparaginase  yang  Diisolasi  dari  Mangrove  Buta-Buta  ( Excoecaria  agallocha ). Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan , 14(1):29-34.
Rifai,  G.,  I.W.R.  Widarta,  dan  K.A.  Nocianitri.  2018.  Pengaruh  Jenis  Pelarut  Dan  Rasio  Bahan Dengan Pelarut Terhadap Kandungan Senyawa Fenolik Dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Alpukat ( Persea Americana Mill. ). Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan , 7(2): 22-32. Salamah, N., Rozak, M. Al Abror, M. 2017. Pengaruh metode penyarian terhadap kadar alkaloid total  daun  jembirit  ( Tabernaemontana  sphaerocarpa .  BL)  dengan  metode  spektrofotometri visibel. Pharmaciana , 7(1): 113-122.
Saraswati, R.A., Safitri, M., Rahmah, D.N.H., Monika, C., Camalia, S., Putri, C.S.  Setyaningsih, E. 2019.  Potensi  Senyawa  Antimikrobia  Dari  Organ  Tanaman  Ramuan  Nginang. Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Saintek , pp.209 –212.
Sari,  R.    Ferdinan,  A.  2017.  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Sabun  Cair  dari  Ekstrak  Kulit  Daun Lidah Buaya Antibacterial Activity Assay of the Liquid Soap from the Extract of Aloe vera Leaf Peel Abstrak. Journal of Pharmaceutical Sciences , 4(3):111 –120.
Sibero,  M.T.,  Sabdaningsih,  A.,  Radjasa,  O.K.,  Sabdono,  A.,  Trianto,  A.    Subagiyo,  S.  2019.
Karakterisasi Senyawa Bioaktif Kapang Laut Trichoderma asperellum MT02 dengan Aktivitas Anti- Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli. Jurnal Kelautan Tropis, 22(1): 9-18. Sibero, M.T., Siswanto, A.P., Murwani, R., Frederick, E.H., Wijaya, A.P., Syafitri, E., Farabi, K., Saito, S.  Igarashi, Y. 2020. Antibacterial, cytotoxicity and metabolite profiling of crude methanolic extract from andaliman ( Zanthoxylum acanthopodium ) fruit. Biodiversitas, 21(9):4147 –4154. Sudarwati, T.P.L. 2018. Aktivitas Antibakteri Daun Pepaya ( Carica Papaya ) Menggunakan Pelarut Etanol Terhadap Bakteri Bacillus subtilis. Journal of Pharmacy and Science, 3(2):13 –16. Suhaenah, A.  Nuryanti, S. 2017. Skrining Fitokimia Ekstrak Jamur Kancing ( Agaricus bisporus ). Jurnal Fitofarmaka Indonesia, 4(1):199 –204.
Suwandi, J.F.  Sandika, J. 2017. Sensitivitas Salmonella thypi Penyebab Demam Tifoid terhadap Beberapa Antibiotik. Jurnal Majority, 6(1): 41-45. Syarifuddin, A.  Sulistyan, N. 2019. Karakterisasi Fraksi Teraktif Senyawa Antibiotik Isolat Kp 13 dengan Metode Densitometri dan Klt-Semprot. J urnal Ilmiah Ibnu Sina, 4(1):156 –166. Widhoyo, H., Kurdiansyah,  Yuniarti. 2019. Uji Fitokimia pada Tumbuhan Purun Danau ( Lepironia articulata ). Jurnal Sylva Scienteae , 2(3):484 –492.
Xiong, Y., Yan, H., Liang, H., Zhang, Y., Guo, B., Niu, M., Jian, S., Ren, H., Zhang, X., Li, Y.  Zeng,
S. 2019. RNA-Seq analysis of Clerodendrum inerme (L.) roots in response to salt stress. BMC Genomics , 20(1): 1 –18.