## UJI DAYA  HAMBAT  EKSTRAK  DAUN  KEMBANG  SEPATU
( Hibiscus  rosa-sinensis L. )  TERHADAP  PERTUMBUHAN BAKTERI Porphyromonas gingivalis SECARA IN VITRO
Jessica Lesly Tamboto 1) ,  Heriyannis Homenta 2) ,  Juliatri 1)
1 Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran, UNSRAT Manado, 95115
2 Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran, UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Hibiscus  plant  (Hibiscus  rosa-sinensis  L.)  known  as  ornamental  plants  but  widely  used  as medicinal  plant.  Hibiscus  leaves  contain  a  variety  of  antibacterial  compounds  such  as  alkaloids, glycosides, flavonoids, tannins, phenols and sapponin. Periodontitis is a disease caused by bacterial infection  such  as  Porphyromonas  gingivalis  that  occurs  in  the  gingiva  and  tooth  supporting  tissues with  the  clinical  picture  in  the  form  of  chronic  inflammation  of  the  gingiva,  periodontal  tissue destruction, alveolar bone loss, formation of periodontal pockets and tooth loss. The purpose of this study  to  determine  the  inhibiting  of  hibiscus  leaves  to  the  growth  of  Porphyromonas  gingivalis bacteria  as  the  caused  of  periodontitis  by  measuring  the  diameter  of  the  resulting  inhibition  zone. This study was an experimental study with Kirby-bauer modified method using disk. Hibiscus leaves were  extracted  by  maceration  method  using  ethanol  96%  as  a  solvent.  The  results  showed  with average  diameter  value  of  the  inhibition  zone  that  produced  by  hibiscus  leaves  extract  in  five  petri dishes  are  9.7  mm.  It  can  be  concluded  that  Hibiscus  leaves  extract  can  inhibite  the  growth  of Porphyromonas gingivalis bacteria.
Keywords : Hibiscus plant, Porphyromonas gingivalis, periodontitis, inhibition zone

## ABSTRAK
Tanaman  kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinensis L.)  merupakan  tanaman  yang  dikenal sebagai  tanaman  hias  namun  banyak  dimanfaatkan  sebagai  tanaman  obat.  Daun  kembang  sepatu mengandung berbagai senyawa yang bersifat antibakteri seperti alkaloid, glikosida, flavonoid, tanin, fenol  dan  saponin.  Periodontitis  merupakan  penyakit  akibat  infeksi  bakteri  di  antaranya Porphyromonas  gingivalis yang  terjadi  di  daerah  gingiva  dan  jaringan  pendukung  gigi  dengan gambaran  klinis  berupa  inflamasi  kronis  pada  gingiva,  desktruksi  jaringan  periodontal,  kehilangan tulang  alveolar,  terbentuknya  poket  periodontal,  gigi  goyang  dan  gigi  tanggal. Tujuan  penelitian  ini untuk mengetahui daya hambat daun kembang sepatu terhadap pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis penyebab periodontitis dengan mengukur diameter zona hambat yang dihasilkan. Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  metode  modifikasi  Kirby-bauer  menggunakan disk/cakram.  Daun  kembang  sepatu  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  dan  menggunakan  etanol 96%  sebagai  pelarut.  Hasil  penelitian  menunjukkan  nilai  rata-rata  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan ekstrak daun kembang sepatu pada lima cawan petri sebesar  9,7 mm. Dapat disimpulkan bahwa  ekstrak  daun  kembang  sepatu  memiliki  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Porphyromonas gingivalis .
Kata kunci : Kembang sepatu, Porphyromonas gingivalis , periodontitis, zona hambat

## PENDAHULUAN
Indonesia sebagai negara tropis memiliki  beraneka  tanaman  yang  dapat dimanfaatkan  untuk  kepentingan  manusia. Masyarakat  Indonesia  sejak  zaman  dahulu telah mengenal dan memanfaatkan tanaman  yang  mempunyai  khasiat  obat atau  menyembuhkan  penyakit.  Tanaman tersebut  dikenal  dengan  sebutan  tanaman obat  tradisional  atau  obat  herbal.  Salah satu  tanaman  yang  memiliki  khasiat  obat adalah  kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa- sinensis L.) (Kinho 2011).
Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia yang dilakukan dalam penelitian sebelumnya, ekstrak daun kembang sepatu memiliki  beberapa  kandungan  senyawa kimia seperti alkaloid, glycoside, flavonoid,  tannin,  phenol  dan  saponin. Kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat dalam  daun  tanaman  ini  terbukti  berperan dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus (Tiwari  2015). Penelitian  yang  dilakukan  dalam  uji efektivitas antibakteri ekstrak daun kembang sepatu terhadap bakteri S. aureus menyatakan  bahwa  ekstrak  daun  tanaman ini terbukti memiliki daya  bunuh terhadap bakteri S.  aureus pada  konsentrasi  ekstrak 10%  dalam  uji  KBM  (Nugraha  2015). Pada  penelitian  lainnya  juga  menyatakan bahwa ekstrak daun dari tanaman ini dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella thypi (Uddin 2010).
Menurut  hasil  Riset  Kesehatan  Dasar (Riskesdas) tahun 2013, prevalensi nasional masalah kesehatan gigi dan mulut sebesar  25,9%.  Kesehatan  gigi  dan  mulut merupakan  hal  yang  sangat  penting  dan patut  diperhatikan  karena  pada  rongga mulut  terdapat  berbagai  macam  bakteri
yang  dapat  menyebabkan  masalah  bagi kesehatan  gigi  dan  mulut.  Akibat  infeksi yang  disebabkan  oleh  bakteri  ini   tidak hanya   berupa   karies   gigi    tetapi juga dapat menyerang jaringan periodontal atau jaringan  pendukung  gigi  dan  bahkan menyebar  melalui  aliran  darah  ke  organ- organ tubuh penting lainnya.
Salah  satu  penyakit  gigi  dan  mulut yang  disebabkan  oleh  infeksi  bakteri  dan banyak  ditemukan  pada  masyarakat  yaitu penyakit  periodontal  atau  periodontitis. Penyakit  yang  terjadi  di  daerah  gingiva dan jaringan pendukung gigi ini merupakan  penyakit  infeksi  yang  serius dengan  gambaran  klinis  berupa  inflamasi kronis  pada  gingiva,  destruksi  jaringan periodontal,  kehilangan  tulang  alveolar, terbentuknya poket periodontal, gigi goyang  dan  apabila  tidak  dilakukan perawatan yang tepat dapat mengakibatkan gigi  tanggal  (Newman  2012).  Patogenesis penyakit periodontitis pada semua tingkatan  umur  dan  jenis  kelamin  dapat disebabkan  oleh  bakteri  yang  terdapat dalam plak subgingiva di antaranya adalah bakteri anaerob Gram negatif Porphyromonas  gingivalis yang memiliki faktor  virulensi  potensial  meliputi  enzim proteolitik, leukotoksin, endotoksin (lipopolisakarida/LPS),  penghindaran  dari respon inang, invasi ke jaringan inang, dan induksi mediator inflamasi (Kusumawardani 2012). Hal ini dibuktikan dalam  hasil  penelitian  sebelumnya  yang dilakukan  oleh  griffien  dkk  bahwa  bakteri Porphyromonas  gingivalis terdeteksi  pada 79%  penderita  periodontitis  (Griffen 1998).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  laboratorik  secara in  vitro , menggunakan  rancangan  eksperimental murni  ( true  experimental  design) dengan rancangan penelitian post-test only control group  design. Penelitian  dilakukan  pada bulan  Juli-Agustus  2016  di  laboratorium Farmasi FMIPA dan laboratorium
Mikrobiologi  FK  UNSRAT.  Alat  dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Autoclave, vacuum rotary evaporator , timbangan, cawan petri, kertas saring,  tabung  Erlenmeyer,  tabung  reaksi, pinset,  inkubator,  api  bunsen,  jarum  ose, batang  pengaduk,  kapas  lidi  steril,  jangka sorong,  kamera,  spidol,  masker,  sarung tangan,  jas  lab.  Daun  kembang  sepatu, bakteri Porphyromonas  gingivalis ,  etanol 96%, akuades steril, disc/cakram Metronidazol 50 µg, Nutrien Agar, larutan BaCl 2 1%,  larutan  H 2 SO 4 1%,  larutan NaCl.
Sampel  yang  digunakan  yaitu bagian daun tanaman. Sebanyak 1 kg daun kembang  sepatu  dicuci  dan  ditiriskan. Kemudian  daun  kembang  sepatu  dipotong kecil-kecil  dan  potongan  tersebut  dijemur di  ruangan  sampai  benar-benar  kering sehingga didapatkan sampel kering sebanyak  700  gram.  Setelah  kering, potongan  tersebut  dihancurkan  dengan blender  agar  menjadi  serbuk  ( Simplisia ). Simplisia yang dihasilkan ditimbang sebanyak  100  gram  kemudian  dimaserasi (Perlakuan  maserasi  yaitu  dengan  cara merendam simplisia ke  dalam  pelarut etanol  96%,  kemudian  disaring  dengan kertas penyaring). Proses maserasi dilakukan sebanyak 2 kali, pertama serbuk yang telah ditimbang dicampur etanol 96% sebanyak  1  liter  direndam  selama  5  hari dan  setiap  hari  dilakukan  pengadukan
selama  15  menit.  Hasil  rendaman  tersebut kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring  didapat  filtrat  I.  Kedua,  filtrat  hasil maserasi pertama dicampur kembali dengan  etanol  96%  sebanyak  500  mL  dan direndam  selama  2  hari,  lalu  disaring menggunakan  kertas  saring  sehingga didapatkan  filtrat  II.  Kemudian  hasil maserasi  filtrat  2  yang diperoleh diuapkan dari sisa pelarutnya menggunakan vacuum rotary  evaporator selama  3  jam  dengan suhu 40 o C. Setelah itu ekstrak murni dari daun kembang sepatu tersebut dimasukkan ke  dalam  oven  selama  2  jam  dengan  suhu 40 o C  kemudian  dituang  ke  dalam  botol steril  kaca  tertutup  dan  disimpan  dalam lemari  es.  Kontrol  positif  menggunakkan disc/cakram  Metronidazol  50  µg.  Kontrol negatif menggunakan aquades steril. Pengujian  dilakukan  dengan  cara diambil  1  ujung  ose  koloni  bakteri Porhyromonas  gingivalis dari  media subkultur,  disuspensikan  di  dalam  tabung air  garam  (NaCl)  sampai  kekeruhannya sama  dengan  standard  Mc  Farland. Cara untuk membandingkan kekeruhannya yaitu dengan  memegang  2  tabung  berhimpitan, satu  tabung  standard  Mc  Farland  dan  satu tabung  suspensi  bakteri.  Kemudian  dilihat dan  dibandingkan  kekeruhannya  dengan latar  belakang  kertas  putih  yang  diberi garis  tebal  dengan  spidol  berwarna.  Jika larutan  suspensi  terlihat  kurang  keruh maka  ditambah  koloni  bakteri  sedangkan jika terlihat lebih keruh maka ditambah air garam (NaCl).
Cara  penanaman  pada  Muller Hinton  Agar  plate  yaitu lidi  kapas  steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri yang sudah distandarisasi kekeruhannya kemudian  tunggu  sampai  cairan  dapat meresap  ke  dalam  kapas,  setelah  itu  lidi dapat  diangkat  dan  diperas  dengan
menekankan  pada  dinding  tabung  bagian dalam  sambil  diputar-putar. Lidi  kapas tersebut digoreskan pada permukaan MHA plate  sampai  seluruh  permukaan  tertutup rapat  dengan  goresan,  biasanya  dilakukan 3  kali  penggoresan  permukaan.  Dari goresan  I  ke  goresan  II,  plate  diputar  90 o sedangkan  dari  goresan  II  ke  goresan  III, plate  diputar  45 o . MHA  plate  dibiarkan  di atas  meja  selama  5-15  menit  supaya suspensi  bakteri  meresap  ke  dalam  agar (Soemarno 2000).
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  metode  modifikasi Kirby-Bauer dengan
menggunakan
disc/cakram dan 5 cawan petri.
Penempelan  disc/cakram  pada  MHA  plate yang  sudah  ditanami  bakteri  dengan penggoresan, dilakukan secara manual satu per  satu  dengan  pinset  beralaskan  pola (template),  supaya  jarak  antara  disc  satu dengan  yang  lainnya  tidak  kurang  dari  15 mm. Dengan menggunakan pinset satu per satu  disc  kelompok  perlakuan  dan  kontrol ditekan  sedemikian  rupa  supaya  terjadi kontak  yang  baik  antar  disc/cakram dengan  agar-agar. Selesai  penempelan disc/cakram,  Muller  Hinton  Agar  plate diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menggunakan  metode maserasi  untuk  mengekstraksi  ampas  dari daun  kembang  sepatu.  Sampel  yang digunakan adalah hasil dari daun kembang sepatu  yang  sudah  dikeringkan  dan  di serbukkan  kemudian  direndam/dimaserasi selama  5  hari  dengan  etanol  95%,  lalu dimaserasi  selama  2  hari  setelah  itu  di evaporasi.  Hasil  uji  daya  hambat  bakteri ekstrak  daun  kembang  sepatu  ( Hibiscus rosa  sinensis-L) terhadap  pertumbuhan
bakteri Porphyromonas gingivalis diperoleh melalui pengamatan yang dilakukan dengan 5 kali pengulangan.
Tabel  1.  Diameter  zona  hambat  terhadap pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis .
Data  pada  Tabel  1  menunjukkan diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  di sekitar cakram dengan berbagai perlakuan. Dari  nilai  tersebut  tampak  bahwa  terdapat zona  hambat    yang  terbentuk  di  sekitar cakram  yang diberi ekstrak daun kembang sepatu di setiap pengulangan.  Berdasarkan hasil  pengamatan  yang  dilakukan  pada lima  kali  pengulangan  di  setiap  cawan petri memperlihatkan adanya zona hambat yang terbentuk di sekitar disk/cakram yang diberi ekstrak daun kembang sepatu.  Zona hambat tertinggi ditunjukkan pada
pengulangan  I  yaitu  sebesar  13  mm sedangkan zona hambat terkecil ditunjukkan  pada  pengulangan  IV  dan  V yaitu  sebesar  7,5  mm.  Diameter  zona hambat  di  sekitar  cakram  yang  dihasilkan ekstrak  daun kembang sepatu dengan nilai rata-rata sebesar 9,7 mm. Bila dibandingkan  dengan  zona  hambat  yang terbentuk di sekitar antibiotik Metronidazol,  diameter  zona  hambat ekstrak  daun  kembang  sepatu  lebih  besar.
Hal  ini  disebabkan  konsentrasi  ekstrak daun  kembang  sepatu  telah  mencapai konsentrasi maksimal sehingga
menghasilkan  diameter  zona  hambat  yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  kontrol positif  Metronidazol.  Konsentrasi  kontrol positif  Metronidazol  yang  digunakan dalam penelitian ini merupakan
konsentrasi minimum dari obat Metronidazol dalam menghambat pertumbuhan bakteri anaerob. Pada cakram yang diberi akuades tidak menunjukkan  terbentuknya  zona  hambat. Hal tersebut menandakan bahwa tidak ada pengaruh  akuades  pada  proses  pembuatan media MHA.

## KESIMPULAN
1. Ekstrak daun kembang sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L.)    memiliki  daya  hambat terhadap
pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis.
2.  Zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar cakram yang diberi ekstrak daun kembang sepatu  terhadap  pertumbuhan  bakteri Porphyromonas  gingivalis sebesar  9,7 mm.

## SARAN
1.  Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian lanjutan mengenai efektivitas daun kembang sepatu terhadap bakteri Porphyromonas  gingivalis pada  berbagai konsentrasi  kepekatan  ekstrak,  sehingga dapat diketahui Minimal Inhibitor
Concentration ekstrak  terhadap  bakteri
Porphyromonas gingivalis .
2.  Diharapkan  agar  dilakukan  penelitian lebih lanjut mengenai efektivitas antibakteri  daun  kembang  sepatu  agar dapat  menjadi  penunjang  dalam    terapi periodontitis.

## DAFTAR PUSTAKA
Griffen  AL,  Becker  MR,  Lyons  SR,  dkk.
1998.Prevalence  of  Porphyromonas gingivalis  and  Periodontal  Healt Status.  Ohio: Journal  of  Clinical Microbiology ; 36 (11) 3239-42 .
Kinho  J,  Arini  DID.  2011. Tumbuhan
Obat Tradisional di Sulawesi Utara,
Jilid I. Manado: Kementerian Kehutanan;h.44-6.
Kusumawardani  B.2012. Dampak  Infeksi Porphyromonas gingivalis Pada Jaringan Periodontal Maternal Terhadap Pertumbuhan Janin. [disertasi].  Jogjakarta:  Universitas Gadjah Mada; h.144. Newman  MG,  Takei  HH,  Carranza
FA.2012. Carranza’s Clinical Periodontology ,  11th    ed.  St.  Louis,
Missouri: WB Saunders Company
Nugraha  PG.2015. Daya  Antibakteri Ekstrak  Daun  Kembang  Sepatu (Hibiscus  rosa-sinensis)  terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus  secara  In Vitro. [skripsi]. Surabaya: Universitas Airlangga; h.vi.
Soemarno.2000. Isolasi  dan  Identifikasi Bacteri Klinik. Yogyakarta: Akademi Analisis Kesehatan
Yogyakarta  Departemen  Kesehatan
Republik Indonesia. h.116-7.
Tiwari U, Yadav P, Nigam D.  2015.Study on  Phytochemical  Screening  and Antibacterial Potential of Methanolic Flower and Leaf Extracts of
Hibiscus rosa sinensis . Iran:
International  Journal  of  Innovative and Applied Research ; 3 (6): 9-14.
Uddin  B,  Hossan  T,  Paul  S,  dkk.  2010. Antibacterial  Activity  of  Ethanolic
Extracts  of Hibiscus  rosa-sinensis
Leaves and Flowers Against Clinical Isolates  of  Bacteria.  Bangladesh: Bangladesh  Journal  Life  Sci .  2010; 22 (2) 65-73