## MUTU EDIBLE FILM KARAGINAN KOMPLEKS EKSTRAK BUAH MANGROVE ( Sonneratia alba ) DAN HAMBATANNYA TERHADAP BAKTERI PEMBENTUK HISTAMIN PADA TUNA LOIN
Dwity Wailan Moomin 1 , Rieny Sulistijowati* 1
1 Jurusan Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Negeri Gorontalo Jl.Jenderal Sudirman No.06, Kota Gorontalo 96128, Gorontalo, Indonesia *Korespondensi: rienysulistijowati@ung.ac.id (Diterima 11-01-2021; Direvisi 22-01-2021; Dipublikasi 31-01-2021)

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi  ekstrak  buah  mangrove  ( S.alba ) terhadap  mutu  fisik edible  film karaginan  dan  daya  hambatnya  pada  bakteri  pembentuk  histamin tuna loin. Penelitian ini dirancang dengan menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap (RAL). Faktor perlakuan adalah konsentrasi ekstrak buah mangrove yang terdiri dari 3 taraf, yaitu 1%, 2%, 3%  dengan  dua  kali  pengulangan.  Hasil  analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa  perlakuan konsentrasi ekstrak buah mangrove S.alba berpengaruh nyata (p<t0.05) terhadap mutu fisik edible film karaginan  dan  daya  hambatnnya  terhadap  bakteri  pembentuk  histamin  tuna. Edible  film karaginan dengan penambahan konsentrasi buah mangrove S.alba 1% dan 2% memiliki mutu fisik ketebalan  dan  perpanjangan  yang  memenuhi  standard Japanese  Industrial  Standart ,  serta berpotensi menghambat bakteri pembentuk histamin pada tuna.
Kata Kunci: Kemasan aktif; kuat tarik; perpanjangan; ketebalan; daya hambat
Edible Film Quality Of Caraginane Film Comlpex Of Mangrove Fruit Ectract ( Sonneratia alba ) And Inhibition Of Histamine Forming Bacteria In Loin Tuna
Abstract This  Completely  Randomized  Design  (CRD)  study  is  devoting  to  determine  teh  effect  of  the concentration of mangrove ( S.alba ) extract on the physical quality of carrageenan edible film and its inhibition on histamine-forming bacteria of tuna loin. The treatment factor was the concentration of mangrove fruit extracts consisting of three levels i.e., 1%, 2%, 3% with 2 replications. The results of variance  analysis  reveal  that  the  concentration  treatment  of S.  alba mangrove  fruit  extract  affects significantly (p<t0,05) on the physical quality of carrageenan edible film as well as its inhibitory effect on histamine-forming bacteria. Carrageenan  edible film with the addition of 1% and 2% of S. alba mangrove fruit concentration has the physical quality thickness and extension that meets Japanese Industrial Standards and has the potential to inhibit the histamine-forming bacteria in tuna.
Key Words: Active packaging; tensile strength; elongation; thickness; inhibition
DOI: https://doi.org/10.37905/jfpj.v3i1.9268

## PENDAHULUAN
Industri perikanan di Indonesia tidak lepas dari permasalahan keamanan pangan berupa kasus penolakan dari negara importer. Tuna merupakan komoditi produk perikanan yang mengalami kasus keamanan pangan terbanyak di Uni Eropa sepanjang tahun  2007 sampai 2017. Kasus penolakan tuna  karena  kandungan  histamin  merupakan  penyebab  terbanyak  kedua  setelah  merkuri  dengan jumlah penolakan sebanyak 16 kasus atau 15.2% dari total penolakan (Irawati et al., 2019). Rinto, (2011)  menyatakan  bahwa  sepanjang  tahun  2010  penyebab  terbesar  penolakan  produk  dengan presentase  54%  hingga  80%  disebabkan  oleh  bakteri  patogen  dan  histamin,  yang  terdapat  pada frozen tuna dalam berbagai bentuk produk.
Ikan tuna merupakan ikan dari family Scrombidae yang dapat menghasilkan scromboid toxine yaitu  histamin.  Histamin  pada  ikan  tuna  terjadi  akibat  reaksi  dekarboksilasi  asam  amino  histidin bebas  oleh  enzim  histidin  dekarboksilase  yang  dihasilkan  bakteri  tertentu  (Dewi  et  al ., 2015). Berbagai  jenis  bakteri  yang  dapat  menghasilkan  enzim  HDC  diantaranya  genus Bacillus, Pediococcus,  Shigell,  Streptococcus dan Proteus (Kanki et  al .,  2002) .  Pseudomonas, Staphylococcus, Escherichia, dan Salmonella (Dhanya., 2012). Oleh karena itu diperlukanlah upaya untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri  penghasil  histamin.  Upaya  ini  dapat  dilakukan  dengan pengembangan  kemasan  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  seperti  edible  coating  dan  edible  film. Kemasan  edible  coating  kompleks  kitosan  galaktosa  telah  diteliti  oleh  Sulistijowati et  al ,.  (2019) sebagai anti bakteri dimana mampu menghambat bakteri patogen ikan nila yaitu zona hambat  12 mm.
Edible film dikelompokkan dalam tiga kategori yaitu hidrokoloid, lipid, dan komposit (Dhapanal et al ., 2012). Menurut Kusumawati dan Putri, (2013) edible film yang terbuat dari bahan hidrokoloid memberikan  karakteristik  yang  baik,  dan  menghasilkan  film  yang  lebih  kuat.  Penggunaan  bahan pemlastis  dilakukan  untuk  meningkatkan  sifat  mekanik  edible  film  hidrokoloid.  Salah  satu  jenis pemlastis  yang  paling  banyak  digunakan  adalah  gliserol.  Hal  ini  karena  gliserol  memiliki kompatibilitas dan stabilitas yang lebih baik dengan rantai biopolimer hidrofilik dibandingkan dengan sorbitol, polietilen glikol (PEG), dan gula (Campos et al . , 2011 ).
Pengembangan  kemasan edible  film dapat  dilakukan  dengan  menambahkan  senyawa antibakteri  sebagai  salah  satu  bahan  campuran.  Sebagian  kecil  senyawa  tersebut  nantinya  akan bermigrasi  ke  dalam  bahan  pangan  atau  produk  yang  dikemas  (Zainab,  2009).  Berdasarkan penelitian  pendahuluan, edible  film karaginan  dengan  pemlastis  gliserol  tanpa  penambahan senyawa  antibakteri  menghasilkan  zona  hambat  sebesar  1,6  mm  terhadap  bakteri  pembentuk histamin  tuna.  Kecilnya  zona  hambat  yang  terbentuk  mengindikasikan  bahwa  aktivitas  antibakteri
edible  film karaginan  tergolong  sangat  rendah.  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  penambahan senyawa antibakteri untuk meningkatkan daya hambat yang dihasilkan.
Govindasamy  (2008) dalam Pianusa  et  al.,  (2015)  menyatakan  bahwa  tumbuhan  bakau mengandung  banyak  senyawa  polyphenol  dibandingkan  dengan  tumbuhan  halofit.  Senyawa polyphenol dikenal memiliki berbagai aktivitas biologik termasuk aktivitas antimikroba. Paputungan et  al,  (2017)  menyatakan  buah  mangrove S.alba mengandung  alkaloid,  flavonoid,  fenolik,  tannin, dan  steroid.  Selain  itu,  Banyaknya  tumbuhan  mangrove  ( Sonneratia  alba )  di  daerah  Provinsi Gorontalo  dan  pemanfaatannya  yang  masih  sangat  kurang  oleh  masyarakat  merupakan  alasan utama  untuk  menggunakan  buah  mangrove  ( Sonneratia  alba )  sebagai  bahan  sumber  senyawa antibakteri edible film pada bakteri penghasil histamin tuna loin.

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah refine kappa  karaginan,  buah  mangrove  ( S. alba )  yang  diperoleh  dari  Kabupaten  Gorontalo  Utara,  gliserol,  aquades. Edible  film karaginan dengan  penambahan  ekstrak  buah  mangrove S.  alba di  analisis  mutu  fisik  yakni  uji  kuat  tarik, ketebalan  dan  perpanjangan  dan  analisis  mikrobiologi  berupa  uji  daya  hambat  terhadap  bakteri pembentuk histamin pada tuna loin.
Edible  film dibuat  dengan  larutan  karagianan  2%  (b/v),  kemudian  diaduk  dan  dimasukan magnetic stirrer, dipanaskan menggunakan hot plate sampai suhu 85°C selama 45 menit. Setelah itu  ditambahkan  gliserol  sebanyak  1,5%  (v/v) sambil  diaduk  dan  dipertahankan  pada  suhu  80°C selama  15  menit.  Suspensi  hasil  pemanasan  didinginkan  pada  suhu  ruang.  Larutan  edible  film dituang  sebanyak  20  ml  ke  dalam beaker  glass kemudian  ditambahkan  ekstrak  buah  mangrove ( S.  alba )  sesuai  perlakuan  1%,  2%,  3%  (v/v).  Diaduk  hingga  homogen  diatas  hotplate  dengan magnetic  stirer lalu  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri.  Kemudian  dikeringkan  dengan  oven  (pada suhu 50°C selama 15 jam). Lapisan film karaginan tersebut didinginkan lalu dikeluarkan dari cawan petri.
Kuat Tarik ( Tensiless strength ) (ASTM, 2010)
Edible  film yang  telah  dicetak  dipotong  dengan  ukuran  8  cm x  3  cm  uji  menggunakan digital gauge HF 500. Rumus uji kuat tarik sebagai berikut:
Kuat tarik (Mpa) = Gaya tarik saat putus Luas permukaan edible film
Perpanjangan ( Elongasi ) (ASTM, 2010)
Perpanjangan edible  film diuji  menggunakan digital  gauge HF  500.  Rumus  uji  perpanjangan sebagai berikut:
𝐸(%) = 𝑋 1 (𝑐𝑚) − 𝑋 0 (𝑐𝑚) 𝑋 1 (𝑐𝑚) 𝑥 100%

## Ketebalan (Afifah et al., 2018)
Ketebalan  film  diukur  menggunaan  jangka  sorong  digital  dengan  ketelitian  0,01  mm. Pengukuran dilakukan pada 4 bagian yang berbeda kemudian hasil pengukuran dirata-rata sebagai hasil ketebalan film. Data hasil pengujian  dianalisis  dengan Analyze of Variance dan  dilakukan uji lanjut Duncan  apabila hasil yang  dip eroleh berbeda  nyata pada taraf signifikansi p≤0 ,05 terhadap parameter uji. Pengolahan data dilakukan dengan menggunakan bantuan perangkat lunak Statistical Package For Social Science 16 (SPSS 16).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Mutu Fisik Edible film Karaginan Kompleks Ekstrak Buah Mangrove S. alba
Edible film karaginan dengan konsentrasi ekstrak buah mangrove yang berbeda menghasilkan ciri fisik yang berbeda ditinjau dari kekentalan larutan, kekeruhan larutan, kemudahan melepaskan dari cetakan, tingkat kelengketan, transparansi dan tekstur. Edible film karaginan dengan perlakuan konsentrasi ekstrak buah mangrove S.alba dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 Edible film karaginan dengan konsentrasi ekstrak buah mangrove S. alba berbeda
Edible  film yang  dibuat  tanpa  penambahan  ekstrak  memiliki  ciri  yaitu  berwarna  bening,  film mudah dilepaskan dari cetakan, film terasa agak lengket, tipis, transparan dan tekstur halus. Edible film yang  ditambahkan  ekstrak  1%  memiliki  warna  yang  agak  kehijauan,  mudah  dilepaskan  dari cetakan,  agak  lengket,  tipis,  agak  transparan  dan  bertekstur  halus. Edible  film yang  ditambahkan ekstrak  2%  memiliki  warna  yang  agak  keruh  kehijauan,  mudah  dilepaskan  dari  cetakan,  agak
lengket, agak tebal, agak transparan dan bertekstur halus. Edible film yang ditambahkan ekstrak 3% menghasilkan  film  yang  berwarna  buram  kehijauan,  film  agak  sulit  dilepaskan  dari  cetakan,  agak lengket,  lebih  tebal,  hampir  tidak  transparan  dan  bertekstur  halus.  Perbedaan  ciri  yang  sangat nampak dari ketiga perlakuan yaitu terdapat pada warna, ketebalan dan transparansi film. Semakin besar konsentrasi ekstrak buah mangrove yang ditambahkan menghasilkan film yang semakin tebal dengan warna hijau yang semakin pekat, akibatnya kejernihan film semakin berkurang. Hal ini dapat terjadi karena warna ekstrak buah mangrove S.alba berwarna hijau tua.
Hasil  ini  serupa  dengan  Mulyadi et  al .,  (2016)  yang  melaporkan  bahwa  penambahan konsentrasi  ekstrak  daun  beluntas  pada edible  film pati  mempengaruhi  nilai  kejernihan  dan ketebalan film. Hal ini disebabkan oleh total padatan terlarut pada setiap konsentrasi berbeda. Hasil ini  berbanding  lurus  dengan  pernyataan  Warsiki et  al .,  (2009)  bahwa  transparansi edible  film dipengaruhi oleh karakter bawaan dari bahan aktif yang ditambahkan, edible film dengan bahan aktif sirih  dan  kunyit  menghasilkan  derajat  transparansi  yang  kecil  dibandingkan  bawang.  Afifah et  al ., (2018)  menyatakan  bahwa  terbentuknya  pori-pori  pada  permukaan  film  disebakan  karena  adanya gelembung udara yang terperangkap dalam film. Perbedaan konsentrasi gliserol juga mempengaruhi transparasi  film.  Sebagaimana  yang  dinyatakan  oleh  Farhan  dan  Hani,  (2017)  bahwa  perbedaan transparasi  film  berkaitan  dengan  mobilitas  rantai  polimer  dan  jarak  antar  molekul  dalam  matriks karagenan dengan plasticizer yang mempengaruhi permeabilitas cahaya melalui film karagenan.
Mutu  fisik  yang  menentukan  kualitas edible  film diantaranya  adalah  kuat  tarik,  perpanjangan dan  ketebalan.  Hasil  pengujian  mutu  fisik  kuat  tarik,  perpanjangan  dan  ketebalan  adalah  sebagai berikut:

## Kuat Tarik
Menurut  Khasanah et  al .,  (2019), edible  film dengan  nilai  kuat  tarik  yang  tinggi  mampu melindungi produk yang dikemas dari gangguan mekanis dengan baik.
Gambar 2. menunjukkan bahwa edible film karaginan dengan konsentrasi ekstrak 1%, 2% dan 3% menghasilkan nilai kuat tarik berturut-turut yaitu 0,073 N/cm 2 , 0,05 N/cm 2 dan 0,013 N/cm 2 . Nilai kuat  tarik  semakin  bertambah  seiring  dengan  penambahan  ekstrak  buah S.alba .  Kuat  tarik edible film pada  ketiga  perlakuan  masih  jauh  dengan  standar  yang  ditetapkan  oleh Japanese  Industrial Standard untuk kuat tarik edible film yaitu 3,92 Mpa (N/mm 2 ) (Rusli et al ., 2017). Menurut Afif (2018) semakin kecil nilai elastisitas amak plastic yang dihasilkan semakin baik.
Hasil  ANOVA  menunjukkan  bahwa  penambahan  konsentrasi  ekstrak  buah S.alba dalam formulasi edible film karaginan berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap kuat tarik film. Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa edible film dengan konsentrasi ekstrak buah S.alba memiliki nilai kuat tarik yang berbeda nyata. Berbeda dengan Kusnadi dan Budyanto, (2015), yang melaporkan bahwa edible film karaginan dengan penambahan ekstrak daun jati memiliki nilai kuat tarik rata-rata berkisar 0,434  N/cm 2 – 1,434  N/cm 2 .  Hal  ini  diduga  karena  konsentrasi  bahan  utama  karaginan  yang digunakan  lebih  rendah  sehingga  menghasilkan  kekuatan  film  yang  lebih  rendah.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Jabar et  al .,  (2013)  bahwa  konsentrasi  karaginan  yang  lebih  tinggi  dapat meningkatkan kekuatan molekul antar-rantai dalam matriks edible film .

## Perpanjangan
Perpanjangan merupakan parameter yang penting untuk mengukur seberapa lentur edible film dan ketahanan edible film saat dibentuk tanpa putus (Zaman et al ., 2018).

## Gambar 3 Nilai perpanjangan
Gambar 3 menunjukkan bahwa edible film karaginan dengan penambahan konsentrasi ekstrak buah S.alba 1%, 2%, dan 3% memiliki nilai perpanjangan yang berbeda-beda yaitu 57,89%, 62%, dan 67%. Berdasarkan hasil tersebut diketahui bahwa edible film karaginan dengan ketiga perlakuan tersebut memenuhi standar yang ditetapkan oleh Japanese Industrial Standard yaitu perpanjangan
dikatakan sangat baik apabila nilainya lebih dari 50% dan dikatakan buruk jika nilainya kurang dari 10% (Rusli et al ., 2017).
Hasil  ANOVA  menunjukkan  bahwa  penambahan  konsentrasi  ekstrak  buah S.alba dalam formulasi edible film karaginan berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap nilai perpanjangan edible film karaginan.  Hasil  uji  lanjut Duncan menunjukkan  bahwa  perpanjangan edible  film antarperlakuan berbeda  nyata.  Nilai  perpanjangan edible  film karaginan  konsentrasi  ekstrak  buah S.alba yang dihasilkan berbeda dengan hasil penelitian Mertinez et al ., (2016) yang menyatakan bahwa edible film aloe  vera  memiliki  perpanjangan  yaitu  72,37%  -  122,56%.  Hal  ini  diduga  karena  bahan antibakteri  yang  ditambahkan  berupa  minyak  sehingga  membuat edible  film yang  dihasilkan  lebih elastis. Sebagaimana yang dinyatakan Gonzalez et al ., (2011), penggabungan minyak atsiri dalam matriks  polimer  kontinyu  mengurangi  kekuatan  tariknya  karena  diskontinuitas  struktural  yang disebabkan oleh minyak.

## Ketebalan
Ketebalan film merupakan karakteristik yang penting dalam menentukan kelayakan edible film sebagai  kemasan  pada  produk  pangan  karena  ketebalan  dapat  mempengaruhi  sifat  fisik  dan mekanik edible film lainnya yaitu kuat tarik, pemanjangan, daya larut dan permeabilitas uap air (Rusli et al., 2017).

## Gambar 4 Nilai ketebalan
Gambar 4 menunjukkan bahwa edible film karaginan ekstrak buah S.alba dengan konsentrasi 1%, 2%, 3% memiliki nilai ketebalan rata-rata berkisar  antara 0,119-0,231 mm. Berdasarkan hasil tersebut diketahui bahwa ketebalan edible film karaginan ekstrak buah S.alba tergolong baik karena berada  dibawah  standar  maksimal  ketebalan edible  film yang  ditetapkan  oleh Japanese  Industrial Standard yaitu maksimal 0,25 mm (Rusli et al ., 2017). Hasil tersebut menunjukkan bahwa ketebalan edible  film ekstrak  buah S.alba tertinggi  masih  memenuhi  persyaratan  untuk  dijadikan  sebagai kemasan primer pada bahan pangan.
Hasil  ANOVA  menunjukkan  bahwa  perlakuan  penambahan  konsentrasi  ekstrak  buah S.alba berpengaruh  nyata  (p<0,05)  terhadap  ketebalan edible  film .  Hasil  uji  lanjut Duncan menunjukkan bahwa  ketebalan edible  film antarpelakuan  berbeda  nyata.  Penambahan  konsentrasi  buah S.alba yang  semakin  tinggi  menghasilkan  f ilm yang  semakin  tebal.  Hal  ini  diduga  karena  konsentrasi ekstrak S.alba yang  semakin  meningkat  menyebabkan  total  padatan  terlarut  dalam  suspensi semakin  bertambah  sehingga  jumlah  polimer  yang  menyusun edible  film pun  semakin  banyak akibatnya film semakin tebal. Berbeda dengan Anggraini et al ., (2018)  yang melaporkan bahwa nilai ketebalan edible  film karaginan  dengan  ekstrak  bawang  putih  berkisar  antara  0,05-0,17  mm. Perbedaan nilai ketebalan ini diduga karena konsentrasi pemlastis gliserol yang digunakan berbeda sehingga menyebabkan volume larutan berbeda. Hal ini sesuai dengan Nemet et al. , (2010) yang menyatakan  bahwa  larutan  pembentuk  film  dengan  konsentrasi  gliserol  yang  lebih  tinggi  memiliki kandungan bahan kering yang lebih tinggi sehingga film yang dihasilkan lebih tebal.

## Daya Hambat
Edible film karaginan dengan penambahan ekstrak buah S.alba memiliki daya hambat terhadap bakteri  pembentuk  histamin  pada  tuna  loin.  Zona  hambat  yang  diperoleh  berkisar  antara  3,38 sampai 5,94 mm. Kategori kekuatan daya antibakteri oleh senyawa antibakteri  berdasarkan Davis and  Stout  (1971)  yaitu  senyawa  antibakteri  yang  menghasilkan  area  penghambatan  <5  mm dikategorikan  lemah,  5-10  mm  dikategorikan  sedang,  10-20  mm  dikategorikan  sebagai  antibakteri kuat,  dan  >20  mm  dikategorikan  sebagai  antibakteri  yang  sangat  kuat.  Berdasarkan  ketentuan tersebut  dapat  diketahui  bahwa edible  film ekstrak  buah S.alba konsentrasi  1%  dan  2%  masih tergolong lemah dan sedang sebagai antibakteri terhadap bakteri HDC pada tuna loin. Sedangkan edible  film ekstrak  buah S.alba konsentrasi  3%  termasuk  kategori  sedang  sebagai  antibakteri terhadap bakteri HDC pada tuna loin. Penyebab rendahnya zona hambat yang dihasilkan oleh edible film karaginan  ekstrak  buah S.alba terhadap  bakteri  HDC  dikarenakan  bakteri  HDC  tidak  hanya terdiri dari bakteri jenis gram positif melainkan terdiri dari jenis gram negatif pula. Menurut Rawdkuen et al ., (2019) umumnya ekstrak yang diperoleh dari rempah-rempah dan bagian tanaman seperti biji, akar, kulit kayu, buah, kuncup, bunga, dan daun lebih efektif terhadap bakteri gram positif daripada bakteri gram negatif karena bakteri gram negatif memiliki struktur sel yang kompleks.
Gambar 5 Zona hambat edible film karaginan ekstrak buah S. alba terhadap bakteri HDC
Zona hambat yang dihasilkan disebabkan karena buah mangrove S.alba mengandung berbagai senyawa yang bersifat antibakteri diantarnya adalah tanin, flavonoid, fenol, saponin, dan steroid. Hal ini  sesuai  dengan  Kusyana,  (2014)  yang  menyatakan  bahwa  simplisia  buah S.alba mengandung bahan bioaktif berupa flavonoid, tanin, saponin dan steroid. Paputungan et al ., (2017) menambahkan bahwa  buah S.alba mengandung  senyawa  fenol.  Senyawa  inilah  yang  berperan  sebagai  zat antibakteri pada edible film karaginan yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri HDC. Hal ini sesuai dengan pernyataan Retnowati et al ., (2011) senyawa fenol dalam menghambat bakteri yaitu akan  merusak  membran  sitoplasma  sehingga  menyebabkan  kebocoran  inti  sel  pada  konsentrasi rendah, sedangkan pada konsentrasi tinggi senyawa fenol berkoagulasi dengan protein seluler. Hal tersebut sangat efektif ketika bakteri dalam tahap pembelahan dimana lapisan fosfolipid yang berada di sekeliling sel dalam kondisi yang sangat tipis sehingga fenol dapat dengan mudah merusak isi sel.

## KESIMPULAN
Konsentrasi  ekstrak  buah S.alba 1%  dan  2%  dalam  formulasi edible  film karaginan menghasilkan edible  film dengan  mutu  fisik  perpanjangan  dan  ketebalan  yang  memenuhi  standar Japanese Industial Standart . Dimana keteperpanjangan > 50% dan ketebalan maksimal 0.25. Serta berpotensi  mampu  menghambat  bakteri  pembentuk  histamin  pada  tuna  loin  termasuk  kategori lemah pada konsentrasi 1 dan 2% serta kategori sedang pada konsentrasi 3% yaitu 5.94 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Afif  M,  Wijayati  N,  Mursiti  S.  2018.  Pembuatan  dan  karakterisasi  bioplastik  dari  pati  biji  alpukat- kitosan dengan plasticizer sorbitol. Indonesian Journal of Chemical Science. 7(2): 102-109. Afifah N, Sholichah E, Indrianti N, Darmajana DA. 2018. Pengaruh kombinasi plasticizer terhadap karakteristik edible film dari karaginan dan lilin lebah. Jurnal Biopropal Industri . 9(1): 49-60. Anggraini  TK,  Agustini  TW,  Rianingsih  L.  2018.  Karakteristik edible  film karagenan  dengan penambahan  ekstrak  bawang  putih  ( Allium  sativum )  sebagai  antibakteri.  Journal  of Fisheries Science and Technology. 14(1): 70-76.
[ASTM]  American  Society  for  Testing  and  Materials.  2010.  Standard  test  method  for  tensile properties  of  plastics  D638-14 .  Annual  Book  of  ASTM  Standards .  US  Department  of Defense. 1-17.
Campos  CA,  Gerschenson  LN,  Flores  SK.  2011.  Development  of  edible  films  and  coatings  with antimicrobial activity. Food Bioprocess Technology. 4(6): 849-875.
Davis  WW,  Stout  TR.  1971.Disc  plate  method  of  microbiological  antibiotic  assay.I.  Factors Influencing Variability and Error. Appl Microbiol. 22(4): 659-665.
Dewi  PMP,  Besung  INK,  Mahardika  IGNK.  2015.  Keragaman  spesies  dan  genetik  bakteri staphylococcus pada ikan tuna dengan analisis sekuen 16s rrna. Jurnal Veteriner. 16(3):
409-415.
Dhanya  PR.  2012.Effect  of  Spice  Oleoresins  in  Microbial  Decontamination  and  Their  Potential Application  in  Quality  Stabilization  of  Tuna  (Euthynnus  affinis)  During  Storage. Indian Theses .  School  of  Industrial  Fisheries.  Cochin  University  of  Science  and  Technology. Kochi .
Farhan A, Hani NM. 2017. Characterization of edible packaging films based on semi-refined kappa carrageenan plasticized with glycerol and sorbitol. Journal Food Hydrocoll. 64: 48-58.
Gonzalez  LS,  Chafer  M,  Hernandez  M,  Chiralt  A,  Martinez  CG.  2011.  Antimicrobial  activity  of polysaccharide films containing essential oils. Food Control. 22: 1302-1310.
Irawati H, Kusnandar F, Kusumaningrum HD. 2019. Analisis penyebab penolakan produk perikanan indonesia  oleh  uni  eropa  periode  2007 – 2017  dengan  pendekatan  root  cause  analysis. Jurnal Standardisasi. 21(2): 149-160.
Jabar S, Saleha S, Sulaiman S. 2013. Preparation and characterization edible film packaging from carrageenan. Proceedings  of  The  3rd  Annual  International  Conference  Syiah  Kuala University (AIC Unsyiah) . 3(3): 44-50.
Kanki  M,  Yoda  T,  Tsukamoto  T,  Shibata  T.  2002.  Klebsiella  pneumonia  produces  no  histamine: Raoultella planticola and Roultella ornithinolytica strains are histamine producers. Applied and Environmental Microbiology. 68(7): 3462-3466.
Khasanah  NN,  Amalia  V,  Vierai1  BVE,  Sawitri  A.  2019.  Na-alginate  utilization  of  brown  algae ( Sargassum sp.)  as  a  halal edible  film basic  materials.  Indonesian  Journal  of  Halal Research. 1(1): 9-13.
Kusnadi  J,  Budyanto  P.  2015.  Antibacterial  active  packaging edible  film formulation  with  addition teak  ( Tectona  grandis )  leaf  extract.  International  Journal  of  Life  Sciences  Biotechnology and Pharma Research . 4(2): 79-84.
Kusumawati  DH,  Putri  WDR.  2013.  Karakteristik  fisik  dan  kimia edible  film pati  jagung  yang diinkorporasi dengan perasan temu hitam. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 1(1): 90-100.
Mulyadi  AF,  Pulungan  MH,  Qayyum  N.  2016.  Pembuatan edible  film maizena  dan  uji  aktifitas antibakteri  (Kajian  konsentrasi  gliserol  dan  ekstrak  daun  beluntas  ( Pluchea  Indica L.)). Jurnal Teknologi dan Manajemen Agroindustri . 5(3): 149-158.
Nemet NT, Soso VM, Lazic VL. 2010. Effect of glycerol content and ph value of film-forming solution on the functional properties of protein-based edible films. Acta Periodica Technology. 41: 57-64.
Paputungan Z, Wonggo D, Kaseger BE. 2017.Uji fitokimia dan aktivitas antioksidan buah mangrove Sonneratia  alba di  desa  Nunuk  Kecamatan  Pinolosian  Kabupaten  Bolaang  Mongondow Selatan. Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan. 5(3): 190-195.
Pianusa  AF,  Sanger  G,  Wonggo  D.  2015.  Kajian  perubahan  mutu  kesegaran  ikan  tongkol ( Euthynnus Affinis ) yang direndam dalam ekstrak rumput laut ( Eucheuma spinosum ) dan ekstrak buah bakau ( Sonneratia alba ). Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan . 3(2): 66- 74.
Rawdkuen  S.  2019. Edible  film s  Incorporated  with  Active  Compounds:  Their  Properties  and Application. Active Antimicrobial Food Packaging’s Book . 1-21.
Retnowati  Y,  Bialangi  N,  PosangiNW.  2011.  Pertumbuhan  bakteri  staphylococcus  aureus  pada media  yang  di  ekspos  dengan  infus  daun  sambiloto  ( Andrographis  paniculata ).  Jurnal Saintek. 6(2): 7-8.
Rinto.  2011.  Kajian  Penolakan  Ekspor  Produk  Perikanan  Indonesia  ke  Amerika  Serikat. Prosiding seminar  nasional  inovasi  teknologi  pengolahan  produk  dan  bioteknologi  kelautan  dan perikanan  III .  Teknologi  Hasil  Perikanan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Sriwijaya.  Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan.
Rusli  A,  Metusalach,  Salengke,  Tahir  MM.  2017.  Karakterisasi edible  film karaginan  dengan pemLastis gliserol. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 20(2): 219-229.
Sulistijowati,  R.,  Husain,  R.,  Datau,  M.C  &  Kusbidinandri.  2019.  Antioxidant,    antibacterial  and antifungal  activity  of  edible  coating  chitosan-galactose  complex.  In IOP  Conference  Series: Earth and Environmental Science , 370, (1) . IOP Publishing Warsiki  E,  Sunarti  TC,  Martua  RD.  2009.  Pengembangan  Kemasan  Antimicrobial  (AM)  Untuk Memperpanjang  Umur  Simpan  Produk  Pangan. Prosiding  Seminar  Hasil-Hasil  Penelitian Institut Pertanian Bogor .579-588. Bogor.
Zainab F. 2009. Pengembangan Kemasan Antimiroba Berbahan Alami untuk Memperpanjang Umur Simpan  Produk.  [Tesis].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian.  Zaman  NBK  ,  Lin  NK,  Phing  P. 2018.  Chitosan  film  incorporated  with  garcinia  atroviridis  for  the  packaging  of  indian mackerel ( Rastrelliger kanagurta ). Ciênciae Agrotecnologia. 42(6): 666-675.