Formulasi Sediaan Cuka Buah Kopi Menggunakan Ragi ( Saccharomyces cerevisiae ) dan Bakteri ( Acetobacter aceti )
Fathan Said R * , Gita Cahya Eka Darma
Prodi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Islam Bandung, Indonesia.
* fathan021997@gmail.com, g.c.ekadarma@gmail.com
Abstract. Indonesia is the third largest coffee producing country in the world, with a variety of compounds that are beneficial to the body. Vinegar fermentation is one way to add value to the benefits of fruits and vegetables because it can form useful new chemical compounds. Vinegar has a variety of benefits that have been  studied  such  as  reducing  hyperglycemia,  hyperinsulinemia,  hyperlipidemia  and  obesity.  Previous research in 2013 had made acetic acid from Arabica coffee pulp waste. This study aims to obtain a coffee fruit vinegar formula that conforms to the quality standards of acetic acid SNI 01-4371-1996. The material used  is  whole  coffee  with  a  two-stage  fermentation  method,  namely  alcohol  fermentation  using  S. cerevisiae  for  4  days  and  vinegar  fermentation  using  A.  aceti  for  3  days.  The  results  showed  that  the formula  with  25%  coffee  fruit  and  20%  sugar  is  the  best  formula  compared  to  other  formulas  with organoleptic test results in brown, sour and sweet taste and a little distinctive aroma of coffee, 5.03% acetic acid content, 0% alcohol content, pH 3,242.
Keywords: Coffee, Vinegar, Fermentation.
Abstrak. Indonesia merupakan negara ketiga penghasil kopi terbesar di dunia, dengan berbagai kandungan senyawa  yang  bermanfaat  bagi  tubuh.  Fermentasi  cuka  merupakan  salah  satu  cara untuk  menambah  nilai manfaat  dari  buah  dan  sayur  karena  dapat  membentuk  senyawa  kimia  baru  yang  bermanfaat.  Cuka memiliki  berbagai  manfaat  yang  telah  diteliti  seperti  menurunkan  hiperglikemia,  hiperinsulinemia, hiperlipidemia  dan  obesitas.  Penelitian  sebelumnya  pada  tahun  2013  telah  dilakukan  pembuatan  asam asetat dari  limbah cair kulit kopi arabika.  Penelitian  ini bertujuan  untuk mendapatkan  formula  cuka  buah kopi  yang  sesuai  standar  mutu  asam  asetat  SNI  01-4371-1996.  Bahan  yang  digunakan  adalah  buah  kopi secara  utuh  dengan  metode  fermentasi  dua  tahap  yaitu  fermentasi  alkohol  menggunakan  S.  cerevisiae selama 4 hari dan fermentasi cuka menggunakan         A. aceti selama 3 hari. Hasil penelitian menunjukan bahwa  formula  dengan  25%  buah  kopi  dan  20%  gula  merupakan  formula  terbaik  dibandingkan  dengan formula lain dengan hasil uji organoleptis berwarna coklat, rasa asam dan manis serta sedikit aroma khas kopi, kadar asam asetat 5,053%, kadar alkohol 0%, pH 3,242.
Kata Kunci: Buah Kopi, Cuka, Fermentasi.

## A. Pendahuluan
Kopi  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang  banyak  dibudidayakan  di  Indonesia.  Bahkan menurut Pranoto Soenarto Indonesia merupakan negara ketiga penghasil kopi terbesar di dunia setelah Brazil dan Vietnam (Radyjencole, 2011).
Kopi  memiliki  berbagai  senyawa  yang  bermanfaat  bagi  kesehatan  seperti  kafein  dan asam  klorogenat  (Jhonston  dkk,  2003).  Kopi  yang  memiliki  beragam  manfaat  lebih  banyak digunakan  setelah  diproses  dan  dihasilkan  biji  kopi  yang  baik.  Pengembangan  produk  yang dilakukan  pun  pada  umumnya  lebih  berfokus  untuk  menghasilkan  biji  kopi  dengan  cita  rasa yang baik. Untuk menambah nilai manfaat buah kopi dengan berbagai manfaat dapat dilakukan pengolahan  yang  bukan  hanya  berfokus  pada  biji  namun  buah  kopi  secara  utuh.  Salah  satu metode pengembangan yang dapat dilakukan adalah dengan menggunkan metode fermentasi.
Fermentasi  merupakan  metode  yang  umum  digunakan  dalam  mengolah  makanan  dan buah-  buahan.  Namun,  tidak  seluruh  hasil  fermentasi  dapat  dikonsumsi  oleh  seorang  muslim diantaranya  adalah  Khomr.  Salah  satu  hasil  fermentasi  yang  diperbolehkan  adalah  fermentasi cuka. Cuka memiliki berbagai manfaat kesehatan seperti antihiperglikemia, antihiperinsulinemia,  antihiper-lipidemia  dan  menurunkan  obesitas  (Mas,  2016).  Fermentasi cuka dilakukan melalui dua tahap yaitu fermentasi alkohol dengan bantuan ragi Saccharomyces cerevisiae dan fermentasi cuka dengan bantuan bakteri Acetobacter aceti
Berdasarkan  latar  belakang  yang  telah  diuraikan,  maka  perumusan  masalah  dalam penelitian ini sebagai berikut: Apakah buah kopi dapat diolah menjadi bahan dasar pembuatan cuka serta bagaimana formulasi yang tepat untuk menghasilkan cuka buah kopi yang memiliki rasa    dan  nilai  manfaat  yang  baik.  Selanjutnya,  tujuan  dalam  penelitian  ini      adalah  untuk menghasilkan produk olahan kopi lain dengan nilai gizi dan manfaat yang lebih baik sehingga dapat  menjadi  alternatif  pangan  fungsional  yang  dapat  meningkatkan  kesehatan  masyarakat sesuai SNI 01-4371-1996.

## B. Landasan Teori
Buah  kopi  tersusun  dari  beberapa  bagian  yaitu  kulit  buah  (pericarp),  daging  buah  atau  pulp (mesocarp) dan kulit tanduk (endocarp). Waktu yang dibutuhkan buah hingga matang selama 7- 12  bulan.  Pada  umumnya,  buah  kopi  memiliki  dua  biji  kopi.  Biji  kopi  dibungkus  kulit  keras disebut kulit tanduk (parchment skin) (Rahardjo, 2017:5-6). Buah kopi mengandung beberapa senyawa  selain  karbohidrat,  protein  dan  lemak  diantaranya  vitamin  B,  tannin,  alkaloid, flavonoid,  kumarin,  fenol,  minyak  atsiri  serta  lebih  dari  700  senyawa  volatil  lainnya  (Gray, 1998;  Gunalan  dkk,  2012).  Secara  umum  kopi  memiliki  berbagai  manfaat  bagi  kesehatan diantaranya  dapat  menurunkan  resiko  diabetes  melitus  tipe  2,  menurunkan  resiko  dan memperbaiki sistem kardiovaskuler, menurunkan asam urat (Lopstara-master et.al., 2011)
Fermentasi  berasal  dari  kata  ferver  yang  berarti  mendidih  menggambarkan  aksi  ragi pada ekstrak  buah  selama  pembuatan  minuman  beralkohol.  Arti  paling  umum  dari  fermentasi adalah  konversi  gula  menjadi  asam  organik  atau  alkohol.  Dalam  pengertian  yang  lebih  luas fermentasi diartikan  sebagai  proses  yang  melibatkan mikroorganisme  seperti  bakteri, ragi  dan jamur untuk membuat produk yang bermanfaat bagi manusia (Paulová, 2014:89).
Fermentasi  etanol  adalah  proses  biologi  yang  melibatkan  mikroorganisme  untuk mengubah  bahan  organik  menjadi  komponen  sederhana.  Selama  proses  fermentasi mikroorganisme  akan  memproduksi  enzim  yang  dapat  menghidrolisis  substrat  menjadi komponen  sederhana  (gula)  selanjutnya  mengubahnya  menjadi  etanol.  Mikroba  yang  sering digunakan dalam proses fermentasi adalah S. cerevisiae ( Lin, 2005).
Asam asetat dihasilkan dari proses fermentasi etanol menjadi asam asetat menggunakan Acetobacter aceti. Menurut Effendi (2002), fermentasi asam asetat berlangsung dalam keadaan aerob menggunakan bakteri A. aceti dengan substrat etanol. Pertumbuhan A. aceti akan optimal pada kondisi aerob. Hal ini karena bakteri A. aceti termasuk dalam bakteri aerob obligatif yaitu bakteri yang tidak dapat hidup tanpa adanya oksigen.
Saccharomyces cerevisiae merupakan salah satu fungi yang termasuk dalam golongan yeast  (khamir).  S.  cerevisiae  berasal  dari  kata  Saccharo  yang  berarti  sugar  dan  myces  yang
berarti jamur, sehingga disebut cendawan gula (Buckle et al., 2010).
Bakteri  A.  aceti  mempunyai  kemampun  membentuk  asam  cuka  dari  etanol  secara oksidasi diekspresikan ke dalam media. A. aceti termasuk bakteri gram negatif yang bergerak lambat  dengan  flagella  peritrik,  memiliki  toleransi  terhadap  asam  yang  tinggi  dan  aktivitas peptolitik yang rendah.   A. aceti termasuk dalam famili pseudomonadaceae yang memiliki ciri- ciri sebagai berikut: sel berbentuk batang pendek atau bola, bakteri gram negatif, sel bergerak dan tidak bergerak, tidak mempunyai endospora, tidak bersifat patogen, bersifat aerob, energi diperoleh  dari  oksidasi  etanol  menjadi  asam  cuka,  mampu  hidup  dalam  air,  padatan,  daun, buah,  dan  lain-lain.  A.  aceti  digolongkan  menjadi  peroksidan  jika  mampu  menumpuk  asetat (Buckle et al., 2010).

## C. Hasil Penelitian dan Pembahasan
Fermentasi Buah kopi
Fermentasi  buah  kopi  dilakukan  pada  9  formula  yang  berbeda,  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel III.1 berikut,

## Tabel 1. Formulasi Cuka Buah Kopi
Fermentasi dilakukan selama 7 hari hingga dihasilkan cuka yang sesuai dengan standar. Waktu  fermentasi  minimum  untuk  menghasilkan  cuka  berkualitas  menggunakan  ragi  dan bakteri A. aceti adalah 7 hari (Hardoyo, dkk. 2007).
Proses  fermentasi  dilakukan  menggunakan  dua  jenis  starter. S.  cerevisiae sebagai starter  dalam  proses  pembentukan  bioetanol  dan A.  aceti sebagai  starter  pembentukan  asam asetat.  Keduanya  ditambahkan  dengan  jumlah  yang  sama  pada  tiap  formula.  Hal  ini berdasarkan  penelitian  serupa  yang  menunjukan  bahwa  jumlah  starter S.  cerevisiae minimum untuk menghasilkan bioetanol yang optimum adalah 10% dari jumlah total larutan (Putri.2016). Sedangkan jumlah minimum starter A. aceti untuk menghasilkan asam asetat adalah 10% dari jumlah total larutan untuk menghasilkan asam asetat 4 % (Effendi, 2002).
Penggunaan  gula  dalam  proses  fermentasi  bertujuan  sebagai  nutrisi  tambahan  dalam proses  fermentasi.  Gula  digunakan  karena  memiliki  pengaruh  terhadap  kualitas  cuka  yang dihasilkan (Silfia, 2014). Selain itu penggunaan gula pun bertujuan untuk memberi rasa manis pada larutan cuka yang dihasilkan sehingga cuka yang berasa asam dapat nyaman dikonsumsi secara langsung.
Sebelum  proses  fermentasi  dilakukan,  setelah  seluruh  bahan  tercampur  dilakukan pemanasan  terlebih  dahulu  dengan  tujuan  untuk  membunuh  bakteri  patogen  yang  terdapat dalam bahan serta membunuh bakteri yang akan menghambat proses fermentasi.

## Uji Organoleptis
Uji organoleptis yang dilakukan meliputi warna, rasa dan bau dengan pengamatan secara visual yang hasilnya dapat dilihat pada Tabel 2 .
Tabel 2. Hasil Uji Organoleptis
Dari data diatas menunjukan bahwa rata-rata larutan cuka yang diamati berwarna coklat dan  hanya  berbeda  pada  kepekatan  warna.  Kepekatan  yang  berbeda  dipengaruhi  oleh  jenis bahan  yang  digunakan.  Buah  kopi  yang  menjadi  bahan  dasar  memberikan  peran  yang  sangat besar dalam memberikan warna pada larutan. Buah kopi yang terlalu matang lebih cenderung memberikan  warna  larutan  yang  lebih  gelap  sehingga  membuat  warna  pada  tiap  sediaan berbeda.
Data  aroma  asam  yang  bervariasi  pun  dipengaruhi  oleh  buah  kopi  yang  digunakan. Walapun  buah  kopi  diambil  secara  bersamaan  namun  terdapat  beberapa  buah  yang  telah matang  terlebih  dahulu  sehingga  terjadi  fermentasi  sejak  di  pohon  dan  membuatnya memberikan aroma asam lebih kuat dibandingkan dengan yang lainnya.
Rasa manis pada sediaan sangat dipengaruhi oleh penggunaan gula pada tiap formula. Semakin  banyak  konsentrasi  gula  yang  digunakan  maka  semakin  kuat  rasa  manis  yang dihasilkan.  Rasa  asam  yang  dihasilkan  lebih  dipengaruhi  oleh  jumlah  buah  kopi  yang digunakan, semakin banyak buah kopi yang digunkana maka rasa asamnya pun semakin kuat. Hal  ini  berkaitan  dengan  komponen  organik  lain  yang  terdapt  dalam  buah  kopi  yang  bersifat asam sehingga memberikan rasa asam yang lebih pada sediaan.

## Uji pH
Pengukuran pH dilakukan pada tiap formula dengan tujuan untuk mengetahui kualitas larutan cuka. Nilai pH yang terlalu asam akan berbahaya jika dikonsumsi secara langsung. Selain itu, nilai pH mempengaruhi laju pertumbuhan mikroba karena mempengaruhi aktivitas enzim dan komponen  lain  didalamnya.  pH  pun  berpengaruh  terhadap  aktivitas  fermentasi  dan  dapat menghentikan  aktivitas  fermentasi  (Waluyo,  2009).  Hasil  pengamatan  pH  dapat  dilihat  pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji pH
Data  tersebut  menunjukan  bahwa  jumlah  buah  kopi  yang  digunakan  mempengaruhi nilai pH. Untuk formula 1, 4 dan 7 dengan komposisi buah kopi yang paling banyak memiliki pH yang paling rendah jika dibandingkan dengan formula yang lain. Untuk formula 2, 5 dan 8 dengan  komposisi  buah  kopi  40gram  memiliki  nilai  pH  lebih  besar  dari  ketiga  formula sebelumnya  dan  formula  3,  5  dan  9  dengan  komposisi  buah  kopi  paling  sedikit  memiliki  pH dengan nilai yang paling tinggi dari formula lainnya.
Perbedaan  pH  pada  tiap  formula  dipengaruhi  oleh  komposisi  buah  kopi  dan  gula. Semakin  tinggi  komposisi  buah  kopi  maka  semakin  banyak  senyawa  organik  yang  bersifat asam  yang  ikut  terlarut.  Selain  itu  semakin  banyak  buah  kopi  yang  digunakan  maka  semakin banyak  pula  gula  dari  buah  kopi  yang  ikut  terlarut  yang  dihidrolisis  menjadi  alkohol  oleh S. cerevisiae lalu dioksidasi oleh A. aceti. selain itu jumlah gula yang ditambahkan mempengaruhi nilai  pH  sediaan.  Hal  ini  berkaitan  dengan  semakin  banyak  nya  gula  yang  digunakan  maka semakin  banyak  bioetanol  yang  dihasilkan.  Semakin  banyak  bioetanol  yang  dihasilkan  maka semkin  banyak  pula  asam  asetat  yang  dibentuk.  Semakin  banyak  asam  asetat  yang  terbentuk maka pH yang dihasilkan semakin rendah.

## Uji Kadar Asam Asetat
Pengujian  kadar  asan  asetat  dilakukan  menggunakan  metode  titrasi  asam  basa.  Pengujian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah  asam  asetat  yang  terbentuk  selama  proses  fermentasi sehingga  dapat  diketahui  kualitas  larutan  cuka  yang  dihasilkan.  Cuka  fermentasi  berdasarkan ketetapan  pada  SNI  01-4371-1996  sekurang  kurangnya  harus  mengandung  4%  asam  asetat. Dari hasil percobaan didapatkan kadar asam asetat untuk tiap formula yang dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil pengujian kadar asam asetat
Tabel  diatas  menunjukan  bahwa  jumlah  gula  mempengaruhi  asam  asetat  yang
terbentuk. Formula yang mengandung gula lebih banyak memiliki kadar asam asetat yang lebih banyak  dibandingkan  degan  formula  dengan  gula  lebih  sedikit.  Pada  formula  1,  4  dan  7 memiliki komposisi buah kopi sebanyak 50 gram tetapi berbeda beda pada komposisi gula di tiap  formula.  Formula  1  memiliki  kadar  asam  asetat  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  dua formula lainnya karena memiliki kadar gula lebih tinggi sedangkan formula 7 memiliki kadar asam  asetat  paling  kecil  karena  memiliki  komposisi  paling  sedikit  diantara  dua  lainnya.  Hal serupa  pun terjadi  pada  formula  lainnya  dengan jumlah  kopi  yang  sama  namun  berbeda  pada jumlah gula yang digunakan. Namun dari data diatas, 8 dari 9 formula yang dibuat memenuhi syarat SNI dan hanya 1 yang tidak memenuhi syarat. Hal tersebut terjadi karena bahan kopi dan kandungan gula pada formula 9 paling sedikit diantara yang lainnya sehingga asam asetat yang terbentuk kurang dari seharusnya.
Asam asetat yang terbentuk merupakan hasil proses oksidasi bioetanol oleh bakteri A. aceti .  Selama  proses  fermentasi  khamir  dan  bakteri  melakukan  metabolisme  terhadap  gula sehingga  menghasilkan  asam-asam  organik  seperti  asam  asetat  dan  asam  glukonat  (Afifah, 2010).
Larutan cuka fermentasi dilakukan seacara bertahap hingga dihasilkannya asam asetat. Pada  tahap  awal  ragi  mengkonversi  gula  menjadi  alkohol  secara  anaerob  lalu  setelah  kadar etanol  pada  larutan  menjadi  tinggi  dan  tidak  memungkinkan  lagi  bagi  ragi  untuk  terus  hidup maka etanol dioksidasi oleh bakteri A. aceti secara aerob. Dengan demikian konsentrasi etanol pada  fermentasi  sangat  ditentukan  oleh  kandungan  gula,  sehingga  semakin  banyak  gula  yang digunakan  maka  semakin  banyak  pula  gula  yang  dirombak  menjadi  asam  asetat  (Adam  dan Moss, 2005).
Proses  pembentukan  asetat  dimulai  dari  proses  oksidasi  yang  tidak  sempurna  dimana daya  reduksi  dipindahkan  ke  molekul  oksigen,  tahap  pertama  terjadi  oksidasi  dari  alkohol menjadi  asetaldehid  degan  bantuan  enzim  alkohol  dehidrogenase.  Kemudian  terjadi  hidrasi menjadi asetaldehidrat dan oksidasi kedua oleh asetaldehida dehidrogenase menjadi asam asetat (Effendi, 2002)

## Uji Kadar Alkohol
Pengujian  kadar  alkohol  dilakukan  pada  seluruh  formula  sediaan.  pengujian  kadar  alkohol dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  alkohol  yang  menjadi  salah  satu  faktor  penentu kualitas  larutan cuka  yang  dihasilkan.  Hasil  pengujian  kadar  alkohol  dapat  dilihat  pada Tabel III.5,

## Tabel 5. Hasil Pengujian Kadar Asam Asetat
Penggunaan ragi S. cerevisiae memliki kemampuan yang tinggi untuk menghasilkan alkohol (Gorgie, 2009:8). Namun berdasarkan data diatas kadar alkohol yang diperoleh adalah 0%. Hal ini disebabkan oleh proses pasteurisasi sehinggga menyebabkan alkohol yang  terbentuk  selama  proses  fermentasi  menguap.  Hal  ini  terjadi  karena  titik  didih etanol  lebih  rendah  dari  titik  didih  air  sehingga  pada  saat  dipanaskan,  etanol  menguap lebih dulu  dibandingkan dengan air. Penurunan kadar alkohol dilakukan untuk  mebuat
larutan  cuka  yang  halal  untuk  dikonsumsi  bagi  umat  muslim  sehinggga  manfaat  dari larutan  cuka  ini  dapat  dirasakan  oleh  siapapun  kecuali  pada  beberapa  orang  dengan kondisi pencernaan yang tidak baik.
Jika  membandingkan  dengan  data  kadar  alkohol  dengan  data  kadar  asam  asetat sebelumnya,  maka  akan  terlihat  bahwa  sebenarnya  larutan  cuka  hasil  fermentasi mengandung  alkohol.  Hal  ini  berkaitan  dengan  proses  pembentukan  asam  asetat  yang melibatkan  etanol.  Asam  asetat  yang  terbentuk  merupakan  hasil  oksidasi  etanol  oleh A. aceti . Etanol terbentuk melalui proses hidrolisis. Kadar alkohol pada awal fermentasi meningkat  menjadi  62%  selama  72  jam  dan  menurun  pada  82  jam  konsentrasi  etanol menurun menjadi 40,3% (Raudah dan Ernawati, 2012)..

## D. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa larutan cuka buah kopi  dengan  kandungan  gula  sebanyak  40  g  (20%)  dan  buah  kopi  sebanyak  50  g  (25%) merupakan  formula  terbaik  dengan  kadar  asam  asetat,  pH  dan  kadar  alkohol  yang  memenuhi persyaratan SNI 01-4371-1996 untuk cuka hasil fermentasi serta formula ini memiliki rasa dan bau yang lebih baik dibandingkan dengan formula lainnya.

## E. Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  pengujian  aktifitas  farmakologi  cuka  buah kopi dan dilakukan pula perbandingan cuka buah kopi dengan cuka buah yang dijual dipasaran serta  pengujian  cemaran  mikroba  dan  waktu  simpannya  terkait  dengan  keamanan  dan  nilai manfaat dari sediaan tersebut.

## Daftar Pustaka
[1] Afifah,  N.  2010.  Analisis  Kondisi  dan  Potensi  Lama  Fermentasi  Medium  Kombucha (Teh.  Kopi.  Rosela)  dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri  Pathogen  (Vibrio cholerae dan Bacillus cereus). Skripsi. Malang: Universitas Islam Negeri.
[2] Buckle, K.A. dkk. 2010. Ilmu Pangan. Terjemahan Hari Purnomo A. Jakarta: UI press.
[3] Effendi,  M.S..  2002.  Kinetika  Fermentasi  Asam  Asetat  (Vinegar)  Oleh  Bakteri Acetobacter    aceti  B127  dari  Etanol  Hasil  Fermentasi  Limbah  Cair  pulp  Kakao. Teknologi  da  Industri  Pangan,  Fakultas Teknik Jurusan  Teknologi  Pangan  Universitas Pasundan XIII (2) 2002 : 125-135.
[4] Gorie,  M.B.D.2009.  Pembuatan  Cuka  apel  Fuji  (Malus‘Fuji’)  menggunakan Saccharomyces  cerevisiae  dan  acetobacter  aceti  [Skripsi].  Jakarta:  Faktultas  Teknik, Universitas Indonesia.
[5] Gray,  J.  1998.  Caffein, coffeand health.  Nutrition and  Food  Science.  MCB  University press.
[6] Johnston,  K.  L.,  Clifford  M.N.,  Morgan  L.M.  2003.  Coffee  Acutely  Modifies Gastrointestinal  Secretion  and  Glucose  Tolerance  in  Human  :  Glycemic  Effect  of Chlorogenic Acid and Caffeine [abstract]. Am J Clin Nutr, 78(4):728-33.
[7] Lin, Y. dan Tanaka, S. 2005.  Pengantar Ilmu Komunikasi. Ethanol Fermentation from Biomass  Resoure:  Current  State  and  Prospects  [abstract],  Appl  Microbiol  Biotechno, 69(6):627-42, 6th Dec.
[8] Loopstara-Master,  R.C.  2011.  Associations  Between  The  Intake  Of  Caffeinated  And Decafeinated  Coffee  And  Measure  Of  Insulin  Sensitivity  And  Beta  Cell  Function [abstract], Diabetologia, 54.320-328.
[9] Mas,  A.,MJ  Torija,  AM  Troncoso  and  MC  Garcia-Parilla.2016.  Vinegar.  Spain: Universitat Rovira.
[10] Paulová,Leona    Petra  Patáková,    Tomáš  Brányik.  2014.  Advanced  Fermentation Processes. Prancis: CRC press.
[11] Putri,  A.A.S.I.  M.,  G.P.G.  Putra,  W.  Arnata.  2016.  Pengaruh  Penambahan  Inokulum
Saccharomyces  Cerevisiae  dan  Lama  Fermentasi  Terhadap  Karakteristik  Cuka Fermentasi Dari Cairan pulpa Hasil Samping Fermentasi Biji Kakao (Theobrama cacao L.). Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustr, Vol. 4. No. 3.
[12] Rahardjo,  P.2017.  KOPI  Panduan  Budi  Daya  dan  Pengolahan  Kopi  Arabika  dan Robusta. Jakarta: Penebar Swadaya.
[13] Rosmiati, M. Yunus, Raudah. (2013). Pembuatan Asam Asetat Dari Limbah Cair Kulit Kopi Arabika (Coffea Arabica. Dp), Jurnal Reaksi (Journal of science and Technology), vol. 11, Politeknik Negri Lhokseumawe.
[14] SNI 01-4371-1966. Standar Nasional Indonesia (SNI) Cuka Fermentasi. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional (BSN).
[15] Waluyo,  L.2009.  Mikrobiologi  Umum.  Malang:  Universitas  Muhammadiyah  Malang Prees..
[16] Pedro  M.  Gutierrez,  Aubrey  N  A,  Bryle  Adrian  L.,Eugenio,  and  Santos  MFL.  2014. Larvicidal  Activity  of  Selected  Plant  Extracts  against  the  Dengue  vector  Aedes aegyptiMosquito. Int. Res. Journal BiologicalSci3(4), 23-32.
[17] Pradani F. Y. 2009.Indeks Pertumbuhan Larva Aedes aegyptiL. Yang Terdedah Dalam Ekstrak  Air  Kulit  Jengkol  (Pithecellobium  lobatum).  Jurnal  Kesehatan1(2):  81- 85Widoyono. Penyakit Tropis: Epidemiologi, Penularan, Pencegahan dan Pemberantasannya,II. Jakarta: Erlangga, 2008.
[18] Sutanto, Inge, Ismid, S., Syarifudin P., Saleha, Sungkar. 2008. Parasitologi Kedokteran. Edisi Keempat. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
[19] Widoyono. Penyakit Tropis: Epidemiologi, Penularan, Pencegahan dan Pemberantasannya, II. Jakarta: Erlangga, 2008.
[20] World Health Organization. 2005. Guidelines for Laboratory and Field Testing of Mosquito Larvicides. Geneva