p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v6i2.156
Potensi ekstrak etanol kulit jeruk lemon ( Citrus limon L.) sebagai obat alternatif hiperkolesterolemia pada tikus wistar hiperglikemik
Deni Tri Hartanto, Ellen Lydia Kurniasari, Ribka Artha Maria, Puspa Sari Dewi, Vina Septiani
Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Jl. Terusan Jenderal Sudirman, Cimahi, Jawa Barat, 40285 Corresponding author email : skynetdeni@gmail.com

## Abstrak
Jeruk lemon ( Citrus limon L) secara empiris telah digunakan masyarakat untuk menurunkan berat  badan.    Selain  itu  perasan  jeruk  lemon  pun  dipercaya  mampu  menurunkan  kadar kolesterol darah. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan potensi ekstrak etanol kulit jeruk lemon  sebagai  obat  alternatif  hiperkolesterolemia  pada  tikus wistar hiperglikemia  dengan menggunakan  metode  proteksi.  Proses  ekstraksi  kulit  buah  jeruk  lemon  dilakukan  dengan metode  maserasi.    Semua  tikus  diberi  sediaan  uji  sesuai  dengan  kelompoknya  (kontrol, ekstrak  etanol  jeruk  lemon,  pembanding  simvastatin)  bersamaan  dengan  intervensi  fruktosa 60% yang dicampur dalam makanannya selama 6 minggu. Pemeriksaan kadar kolesterol total dilakukan  setiap  minggu.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit  buah lemon  mampu  menghambat  peningkatan  kadar  kolesterol  total  tikus wistar hiperglikemia. Ekstrak etanol kulit buah lemon dosis 70 mg/kg bb menunjukkan hasil terbaik yang berbeda bermakna  dibanding  kelompok  kontrol  (p<0,05)  pada  penelitian  ini.  Dengan  demikian, ekstrak  etanol  kulit  jeruk  lemon  berpotensi  untuk  digunakan  sebagai  obat  alternatif hiperkolesterolemia.
Kata Kunci : Hiperkolesterolemia, Lemon, Fruktosa 60%
Potency of lemon peel ethanolic extract (Citrus limon L.) as alternative drug for hypercholesterolemia in hyperglycemic wistar rat

## Abstract
Lemon (Citrus limon L) empirically has been used by the community to lose weight. Besides lemon juice is also believed to be able to reduce blood cholesterol levels.  This study aims to determine  the  potential  of  ethanol  extract  of  lemon  peel  as  an  alternative  medicine  for hypercholesterolemia in hyperglycemic wistar rats using the protection method. The process of extracting lemon peel is done by maceration method. All rats were given a test preparation according to their group (control, lemon ethanol extract, compared to simvastatin) together with  intervention  of  fructose  60%  mixed  in  the  food  for  6  weeks.  Examination  of  total cholesterol levels is carried out every week. The test results showed that the ethanol extract of  lemon  peel  was  able  to  inhibit  the  increase  of  total  cholesterol  levels  in  hyperglycemic wistar rats. The ethanol extract of lemon peel doses of 70 mg / kg bw showed the best results which  were  significantly  different  than  the  control  group  (p  <0.05)  in  this  study.  Thus,  the ethanol  extract  of  lemon  peel  has  the  potential  to  be  used  as  an  alternative  drug  for hypercholesterolemia.
Keywords : Hypercholesterolemia, Lemon, Fructose 60 %

## Pendahuluan
Meningkatnya  jumlah  penderita  penyakit kardiovaskuler  tidak  saja  karena  adanya gangguan  metabolisme  tetapi  juga  tidak terlepas  dari  pola  makan  dan  gaya  hidup masyarakat  saat  ini.  Prevalensi  penderita penyakit  kolesterol  ini  semakin  meningkat seiring  dengan  bertambahnya  usia,  yaitu berkisar  7%  diderita  oleh  kelompok  usia  20 tahunan  dan  44%  pada  kelompok  usia  60 tahun atau lebih (Saifur, 2007).
Penderita penyakit kolesterol selalu meningkat setiap tahunnya. Tingginya prevalensi penyakit ini mendorong kita untuk mencari obat alternatif yang dapat mengatasi gejala penyakit kardiovaskuler, salah satunya adalah  dengan  kulit  buah  jeruk  lemon. Masyarakat Indonesia telah lama memanfaatkan  jeruk  lemon  ini  sebagai minuman  sari  buah  karena  kandungan vitamin  C  nya  yang  cukup  tinggi.  Secara umum, kandungan metabolit sekunder kelompok  citrus  adalah    flavonoid,  alkaloid, kumarin,  limonoid,  carotenoid,  asam  fenolat dan minyak atsiri (Xinmiao, 2015) . Beberapa penelitian  terhadap Citrus  sp menyebutkan bahwa  semua  kelompok  citrus  mengandung flavonoid.  Kandungan  flavonoid  ini  mampu menurunkan kolesterol. Metoksilasi sempurna pada cincin flavonoidnya berpotensi  pada  optimalisasi  metabolisme lipid hati melalui penekanan sekresi lipoprotein yang mengandung Apo-B dengan mengggunakan  sel  HepG2  (Lin  et  al.,  2011) Penelitian  lain  juga  menyebutkan  bahwa pemberian nobiletin pada mencit yang diberi diet  tinggi  lemak  mampu  menurunkan akumulasi trigliserida intestinal dan trigliserida  hati  serta  dapat  menurunkan LDL-kolesterol dan menormalkan sensitivitas  insulin  (Mulvihill  et  al.,  2010). Selain  itu,  kelompok  citrus  juga  memiliki potensi  untuk  mengatasi  berbagai  masalah metabolisme  seperti  diabetes.  Penelitian yang  dilakukan  di  Semarang  menunjukkan bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  daun  jeruk nipis dapat menurunkan kadar glukosa darah setelah  28  hari  (Serang,  2017).    Selain  itu, penelitian  lain  juga  menunjukkan  bahwa jeruk  lemon  kaya  akan  senyawa  fenol,
vitamin,  mineral,  serat, essensial  oil dan karotenoid.  Karena  kandungan  ini,  jeruk lemon  memiliki  potensi  untuk  mengatasi berbagai  gangguan  kardiovaskuler  (Moreno, 2010).  Berdasarkan  hal  tersebut  di  atas, maka  akan  dilakukan  uji  praklinik  ekstrak etanol  kulit  buah  lemon  sebagai  obat alternatif  hiperkolesterolemia  menggunakan tikus Wistar jantan.  Parameter  yang  akan diukur  diantaranya  adalah  kolesterol  total. Setelah  pengujian  selesai  dilakukan,  kami berharap dapat memberikan informasi ilmiah kepada  masyarakat  tentang  khasiat  ekstrak etanol  kulit  buah  jeruk  lemon  sebagai  obat alternatif mengatasi  pra sindrom metabolik.

## Metode
Alat. Alat  maserasi,  rotary  evaporator, timbangan analitik, timbangan hewan, waterbath, Mikropipet (100 -1000 dan 5 – 10 µL ), sonde oral, spektrofotometer (Microlab 300 ® ) dan peralatan gelas yang digunakan di labolatorium
Bahan. Bahan  uji  kulit  jeruk  lemon  ( Citrus  limon L.)  diperoleh  dari  Manoko Kecamatan  Lembang  Kabupaten  Bandung Barat.  Bahan  lain  yang  digunakan  adalah etanol  96%,  pereaksi  mayer,    kloroform, serbuk  magnesium,  asam  klorida  2N,  amil alcohol,  asam  klorida  2N,  eter,  gelatin1%, vanillin  10%,  asam  sulfat  pekat,  kalium hidroksida,  pereaksi  (Mg/HCL),  pereaksi Liebermann-Burchard, pereaksi Dragendorff, besi(III)  klorida,  Fruktosa  60%,  Simvastatin 10  mg,  reagen  kolesterol  total,  pakan  tikus, aquades, Carboxi methyl cellulosa Na (CMC Na) 0,5%.
Hewan Uji. Hewan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  tikus  jantan  galur Wistar dengan  bobot  bdan  150-200  gram, berumur  2-3  bulan  berada  dalam  keadaan sehat  dan  normal  yang  diperoleh  dari Laboratorium Hewan Pusat Penelitian
Biosains dan Bioteknologi,
Institut Teknologi Bandung.
Prosedur  Penelitian. Pembuatan  ekstrak etanol  jeruk  lemon  dibuat  dengan  metode maserasi.  Uji  praklinik  ekstrak  etanol  kulit buah  lemon  dilakukan  dengan  metode preventif pada  tikus Wistar .    Tikus  diberi
DOI: 10.26874/kjif.v6i2.156
sediaan obat (uji) sesuai dengan kelompoknya  bersamaan  dengan  pemberian fruktosa  60%  yang  dicampur  bersama pakannya  (peroral)  selama  6  minggu  untuk melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak  pada tikus hiperglikemi.
Percobaan  diawali  dengan  penimbangan hewan  dan  dikelompokan  secara  acak. Hewan uji akan di bagi menjadi 5 kelompok yang terdiri dari 3 ekor tikus. Masing masing kelompok terdiri dari:
1. Kelompok  kontrol  positif  mendapatkan CMC  Na  0,5%  dan  pakan  fruktosa, selama 6 minggu.
2. Kelompok  uji  1,2  dan  3    akan mendapatkan  pakan  fruktosa  dan  sediaan ekstrak  etanol  kulit  buah  jeruk  lemon dengan  masing  masing  dosis  1,  2  dan  3 selama 6 minggu.
3. Kelompok pembanding akan mendapatkan  pakan  fruktosa  dan  diberi obat simvastatin selama 6 minggu. Pengambilan  darah  dilakukan  setiap minggu  dari  pembuluh  vena  ekor.    Darah ditampung ke dalam tabung eppendorf  kira- kira  sebanyak  0,2    ml  dan  disentrifugasi selama  10  menit  pada  12.000  rpm.  Plasma diambil untuk dilakukan pengukuran. Penentuan  kadar  kolesterol  total  dilakukan secara  kolorimetri berdasarkan  metode enzimatis  menggunakan  pereaksi  kolesterol, yang  dibaca  ekstrinsiknya  pada  panjang gelombang  546  nm.  Cara  melakukan  reaksi adalah  sesuai  dengan  petunjuk  yang  tertera pada kit pereaksi.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengujian  antikolesterol  dengan metode preventif dapat  dilihat pada  Tabel  1. Hasil menunjukan penurunan kadar kolesterol  darah  yang  bervariasi  sehingga memberikan  standar  deviasi  yang  cukup besar.  Dilihat  secara  umum  kelompok  uji menunjukan adanya penurunan kadar kolesterol  pada  minggu  ke-3  yang  di bandingkan dengan awal penelitian, bedasarkan  data  pada  kelompok  kontrol positif,  hewan  uji  menujukan  keadaan  hiper kolesterol hingga minggu ke 6.
Analisis  data  kadar  kolesterol  total  pada darah tikus diolah secara statistik menggunakan ANOVA dan T-student . Hasil analisa  menggunakan T-student menunjukan bahwa  kadar  kolesterol  total  pada  minggu ke-0  dari  semua  kelompok  tidak  berbeda bermakna  (p>0,05)  yaitu    35,29±4,47 (kontrol), 38,63±22,94 (pembanding), 33,63±4,21 (ekstrak 17,5 mg/kgbb), 32,77±10,14 (ekstrak 35 mg/kgbb), 36.38±9,40  (ekstrak  70  mg/kgbb),  sehingga dianggap  bahwa  data  kadar  kolesterol  awal cukup homogen.
Kadar  kolesterol  total  seluruh  kelompok uji  pada  minggu  ke-1  tidak  menunjukan adanya efek penghambatan kolesterol, dimana tidak ada perbedaan bermakna antara seluruh  kelompok  uji  terhadap  kontrol.  Efek antikolesterol  dari  sediaan  uji  terlihat  pada minggu  ke  -2  dan  ke-3,  ekstrak  etanol  35 mg/kgbb  kadar  kolesterol  total  64,91±14,37 dan 57,10±14,98, ekstrak etanol 70 mg/kgbb kadar  kolesterol  total  64,32±22,85  dan 59,24±28,05,  berbeda  bermakna  secara statistik  terhadap  kelompok  kontrol  dengan kadar kolesterol 80.07±11,51 dan 90.2±18,06. Ketiga sediaan uji tersebut tidak menunjukan  perbedaan  yang  bermakna terhadap kelompok pembanding pada minggu  ke-0  sampai  minggu  ke-6.  Hal  ini menunjukan  bahwa  efek  dari  sediaan  uji setara  dengan  efek  dari  sediaan  simvastatin 0,9mg/kg  bb.  Efek  yang  ditujukan  dari ekstrak etanol pada dosis 17,5 mg/kg bb, 35 mg/kg  bb  dan  70  mg/kg  bb  tidak menunjukan  perbedaan  yang  bermakna (p>0,05)  hal  ini  berarti  bahwa  bila  dilihat secara  statistik  ekstrak  etanol  kulit  jeruk lemon  pada  dosis  17,5  mg/kg  bb,  35  mg/kg bb  dan  70  mg/kg  bb  memiliki  efek  yang setara dengan pembanding.
Peningkatan kadar kolesterol pada kelompok  kontrol  positif  terus  terjadi dikarenakan  tidak  diberikannya  sediaan  uji sehingga  kadar  kolesterol  terus  meningkat seiring dengan bertambahnya minggu.
Tabel 1.   Kadar Rata-rata kolesterol pada minggu ke 0-6 Kelompok Kadar kolesterol (mg/dL) pada minggu ke- 0 1 2 3 4 5 6 Kontrol (+) 35,29±4,47 54,03±4,52 80,07±11,51 90,2±18,06 86,9±20,38 112,4±20,21 112,2±9,44 Simvastatin 38,63±22,94 68,07±12,88 73,28±33,91 86,14±41,19  102,75±30,35  87,37±30,61 98,50±12,58 Ekstrak 17,5 mg/kg bb 33,63±4,21 57,02±13,23 61,97±20,65 64,6±9,27* 85,5±6,61 78,48±5,87*  84,71±20,60* Ekstrak 35 mg/kg bb 32,77±10,14 69,6±12,22 64,91±14,37*  57,10±14,98*  82,03±14,23  70,85±25,64*  87,84±6,17* Ekstrak 70 mg/kg bb 36,38±9,40 57,98±11,29  64,32±22,85*  59,24±28,05*  79,99±11,87 91,77±18,98  71,76±15,63*
*= Berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kontrol positif
Dosis  efektif  dari  sediaan  uji    ekstrak etanol  adalah  17,5  mg/kg  bb  karena  dalam dosis yang rendah dapat menghabat penyerapan  kolesterol  dengan  menunjukan perbedaan yang bermakna terhadap kelompok  kontrol  dan  tidak  menunjukan perbedaan yang bermakna terhadap kelompok pembanding, walaupun jika dilihat dari  rata-rata  tidak  beda  jauh  dengan kelompok pembanding.
Kondisi  hipekolesterolemia  marupakan faktor resiko stroke dan penyakit kardiovaskular, pada peneitian ini dikondisikan  tikus  menjadi  hiperglikemia menggunakan  induksi  fruktosa  60%  (60 ml/100g)  fruktosa  menstimulasi  lipogenesis dengan  menyediaan  atom  karbon  gliserol- 3fosfat dan asil-KoA membentuk trigliserida, Akumulasi trigliserida dalam hepar
menyebabkan resistensi insulin dan meningkatkan pembentukan VLDL.
Kulit  buah  jeruk  lemon  ( Citrus  limon L.) diharapkan dapat menurunkan kadar koleserol total. Pada penelitian yang dilakukan,  intevensi  menunjukan  adanya perbedaan  yang  bermakan  pada  kadar kolesterol  total  kelompok  perlakuan.  Kadar kolesterol total setelah pelakuaan mengalami penurunan. Penurunan kadar kolesterol dapat dipengaruhi  oleh  hesperidin  dalam  kulit jeruk  lemon    berdampak  pada  peningkatan jumlah  reseptor LDL  dan  penurunan aktivitas HMG KoA reduktase dalam sistesis kolesterol  di  hati,  selain  itu,  vitamin  C  pada kulit jeruk lemon membantu dalam metabolisme kolesterol dengan meningkatkan laju pembuangan lemak dalam bentuk  asam  empedu dan membantuk  reaksi dari  hidroksilasi  pembentukan  asam  empedu
maka  meningkatkan  eksresi  kolesterol  dari dalam tubuh. Akibat dari peristiwa ini, maka kadar  kolesterol  total  dalam  darah  akan berkurang.

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  kulit  lemon  berpotensi untuk menghambat peningkatan kadar kolesterol pada tikus hiperglikemia.  Ekstrak etanol  kulit  lemon  dosis  70  mg/kg  bb/hari memiliki  potensi  terbaik  dalam  menurunkan kadar kolesterol total pada tikus hiperglikemia.

## Ucapan Terimakasih
Terimakasih  kepada  Kementrian  Riset Dikti  yang  telah  mendanai  penelitian  ini melalui Program PKM-PE.

## Daftar Pustaka
Aak.  (1994). Budidaya  Tanaman  Jeruk . Yogyakarta: Kanisius.
Arisman. (2011). Obesitas, Diabetes Mellitus,  dan  Dislipidemia :  Konsep, Teori dan Penganganan Aplikatif . Jakarta: EGC.
Cronquist,  A.  (1981). An  Integrated  System of Clasification of Flowering Plants . New York: Columbia University Press.
Damayanty, A. E.,  & Suromo,  L.  B. (2015).
Pengaruh pemberian ekstrak jamur merang  (  volvariella  volvacea  )  terhadap kadar  kolesterol  total  ,  enzim  lppla  2  dan mda darah, 4 .
Erejuwa,  O.  O.,  Sulaiman,  S.  A.,  Suhaimi, M.,  &  Wahab,  A.  (2010).  Antioxidant Protective  Effect  of  Glibenclamide  and Metformin in Combination with Honey in Pancreas  of  Streptozotocin-  Induced
Diabetic Rats, 2056–2066. Hidayati,  S.  N.,  &  Syauqy,  A.  (2015). Pengaruh Pemberian Pisang Kepok (Musa Paradisiacal  Forma  Typical)  terhadap Kadar  Kolesterol  Total  Tikus  Sprague Dawley Pra Sindro Metabolik. Journal of Nutrition College , 4 (2), 499–507.
Hippisley-Cox,  J.,  &  Coupland,  C.  (2010). Unintended  effects  of  statins  in  men  and women in England and Wales: population based  cohort  study  using  the  QResearch database. Bmj , 340 (may19  4),  c2197– c2197.
Lazo-de-la-Vega-Monroy, M.-L.,
& Fernndez-Mej,  C.  (2013).  Oxidative Stress  in  Diabetes  Mellitus  and  the  Role
Of  Vitamins  with  Antioxidant  Actions.
Oxidative Stress and Chronic
Degenerative  Diseases  -  A  Role  for
Antioxidants .
Lin,  Y.,  Vermeer,  M.  A.,  Bos,  W.,  Van Buren, L., Schuurbiers, E., Miret-Catalan, S., & Trautwein, E. A. (2011). Molecular structures  of  citrus  flavonoids  determine their  effects  on  lipid  metabolism  in HepG2  cells  by  primarily  suppressing apoB  secretion. Journal  of  Agricultural and Food Chemistry , 59 (9), 4496–4503. Lv, X., Zhao, S., Ning, Z., Zeng, H., Shu, Y., Tao, O., … Lu, C. (2015).
Citrus      fruits  as  a  treasure  trove  of  active natural metabolites that potentially provide  benefits  for  human  health. Chemistry Central Journal , 1–14. Martasari,  C.,  H.  M.  (2008). Teknik
Identifikasi  Varietas  Jeruk (No.4).  Iptek
Hotikultura.
Moreno, D. A. (2010). Journal of Pharmaceutical  and  Biomedical  Analysis Natural  bioactive  compounds  of  Citrus limon for food and health, 51 , 327–345.
Muhtadi,  Eni  Setyowati,  T.  A.  (2012). Aktivitas  Antidiabetes  Melitus  Ekstrak Kulit Buah Jeruk Manis ( Citrus sinensis) dan  Kulit  Buah  Kelengkeng  (Euphoria longan  (Lour.)  Steud  Terhadap  Tikus Putih Jantan Galur Wistar yang diinduksi Aloksan , 13 (1), 21–30.
Mulvihill, E. E., Assini, J. M., Sutherland, B. G.,  Dimattia,  A.  S.,  Koppes,  J.  B., Sawyez,  C.  G.,  …  Huff,  M.  W.  (2010).
Naringenin  Decreases  Progression  of Atherosclerosis
by
Improving
Dyslipidemia  in  High-Fat  –  Fed  Low- Density  Lipoprotein  Receptor  –  Null Mice, 742–748.
Murray, R. K., Bender, D. A., & Botham, K.
(2012). Harper’s Ilustrated Biochemistry . Journal  of  Chemical  Information  and Modeling (27th  ed.,  Vol.  53).  Amerika: The McGraw Hill Companies.
Saifur  R.  Patogenesis  dan  Terapi  Sindrom Metabolik.  Jurnal  Kardiologi  Indonesia. 2007; 28(2):160-168
Serang,  Y.  (2017).  Uji  Aktivitas  Anti-
Hiperglikemik,  dan  Penghambatan  Stres Oksidatif  Ekstrak  Etanol  Daun  Jeruk Nipis, 10 (89