## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI EKSTRAK POLAR DAN NON POLAR BIJI SELASIH ( Ocimum sanctum Linn)
[Antioxidant and Antibacterial Activities from Polar and Non Polar Basil ( Ocimum sanctum Linn) Seed Extracts]
Agustina D. R. Nurcahyanti 1) *, Lusiawati Dewi 2) , dan Kris H. Timotius 3)
1) Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Matematika Universitas Pelita Harapan
2) Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Matematika Universitas Kristen Krida Wacana
3) Fakultas Kedokteran Universitas Krida Wacana, Jakarta
Diterima 19 Maret 2010 / Disetujui 07 Juni 2011

## ABSTRACT
The aims of this study were to determine total phenolic content, antioxidant activity and antibacterial activity of polar and nonpolar extracts of basil (O. sanctum L. ) seed. Seeds of basil (O. sanctum L. ) were extracted using a soxhlet extractor using four types organic solvent, i.e. chloroform, ethyl acetate, acetone, and methanol for eight hours each. The total phenolic content was determined using Folin Ciocalteu method, antioxidant activity was determined using reducing power and DPPH  (1,1-diphenyl,2-picrylhydrazyl) scavenging  activity methods,  while antibacterial activity was tested using agar diffusion method. The result showed that the highest total phenolic content and antioxidant activity was obtained in methanol extract with 3.63 ± 0.21 mgGAE/g phenolic total, 58.39 ± 3.81  ek/g using reducing power method and 85.73 ± 0.86% free radical scavenging activity. Furthermore the result of antibacterial activity testing showed that the highest diameter of inhibition zone was observed in ethyl acetate extract inhibition on E.coli, P.aeruginosa, B.subtilis, and S.aureus where its inhibition zone were 13.53 ± 0.63; 10.67 ± 1.05; 14.93 ± 0.80, and 13.46 ± 0.79 mm, respectively. This result suggests that both polar and nonpolar basil seed extracts possess specific biological activity. This data provide valuable and strong database for exploration of natural antibacterial agents and antioxidant for food and health industry application.
Key words : basil seed, antioxidant, antibacterial, phenolic total, seed extract

## PENDAHULUAN
1
Perkembangan  penelitian  tumbuhan  pada  sisi  aktivitas biologis  seperti  aktivitas  antioksidan  dan  antibakteri  menjadi perhatian yang menarik dalam upaya penggalian senyawa baru potensial  yang  bermanfaat  bagi  kesehatan  manusia  dan manfaatnya di bidang industri pangan. Dalam kaitannya dengan manfaat  di  bidang  kesehatan,  sifat  antioksidan  suatu  senyawa mampu  menghambat  atau  menunda  terjadinya  reaksi  radikal bebas  akibat  adanya  oksigen  reaktif  sehingga  sifat  tersebut menjadi  penting  dalam  pencegahan  berbagai  penyakit,  seperti kanker dan jantung koroner (Leong, Shui, 2002).
Beberapa  jenis  tumbuhan,  khususnya  dari  keluarga Lamiaceae ,  seperti sage,  oregano dan thyme mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi (Hirasa dan Takemasa, 1998). Salah  satu  tumbuhan  dari  keluarga Lamiaceae yang  juga diduga  memiliki  aktivitas  antioksidan  adalah  selasih.  Selasih merupakan  tumbuhan  yang  berasal  dari  India  dan  banyak tumbuh di Suriname (Anonim 1 , 2005). Selasih Ocimum  sanctum Linn  berhubungan  sangat  erat dengan  tumbuhan  kemangi, Ocimum  basilicum Linn.  Selasih umumnya  tumbuh  secara  liar  di  tepi-tepi  jalan  dan  dapat ditemukan  di  daerah  dataran  rendah  sampai  ketinggian  450 meter dan kadang-kadang ditanam sampai 1.100 meter di atas permukaan  laut  (Wijayakusuma,  2005).  Secara  tradisional, selasih  telah  digunakan  sebagai  obat  untuk  menyembuhkan
* Korespondensi Penulis : Email : agustina.nurcahyanti@staff.uph.edu
beberapa penyakit seperti, sakit kepala, batuk, diare, sembelit, penyakit kulit, penyakit cacing dan gagal ginjal. Kegunaan lain, tanaman  ini  sering  digunakan  sebagai  penambah  aroma  pada makanan (Simon et al ., 1999). Simon et al. (1990) melaporkan  bahwa selasih merupakan sumber  minyak  atsiri  dan  senyawa  aromatik.  Minyak  aromatik yang  terkandung  dalam  selasih  dipercaya  cukup  berpotensi untuk membunuh serangga dan mencegah menyebarnya jenis bakteri  tertentu  (Loha,  2005).  Hasil  dari  penelitian  yang  telah berkembang  menyebutkan  bahwa  selasih  memiliki  mekanisme perlawanan  terhadap Mycobacterium  tuberculosis dan Staphylococcus  aureus in  vitro  (Anonim 2 ,  2005).  Aktivitas biologis  lainnya  ditujukkan  melalui  beberapa  penelitan  yang melaporkan bahwa selasih mengandung senyawa yang bersifat insektisida (Deshpande, Tipnis, 1997), nematisida (Chatterjee et al ., 1982), fungisida (Reuveni et al ., 1984) atau mempunyai sifat antimikroba (Ntezurubanza et al ., 1984).
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  menentukan kadar  total  fenolik,  menentukan  aktivitas  antioksidan  dan antibakteri  dari  ekstrak  biji  selasih  khas  Indonesia.  Dengan diketahuinya aktivitas antioksidan dan antibakteri pada ekstrak biji  selasih,  maka  senyawa  aktif  spesifik  yang  bertang- gungjawab pada aktivitas biologisnya dapat selanjutnya diisolasi dan dikarakterisasi.
Penemuan  senyawa  aktif  tersebut  selanjutnya  dapat  di- manfaatkan sebagai bahan sintetis maupun semi sintesis bahan pengawet maupun obat-obatan.

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Bahan  utama  dalam  penelitian  ini  adalah  biji  selasih  ( O. sanctum L)  yang  diperoleh  dari  pasar  Salatiga.  Bahan  kimia yang  digunakan  untuk  ekstraksi  adalah  kloroform,  etil  asetat, aseton dan metanol. Bahan kimia untuk pengukuran kadar total fenolik adalah aseton 60%, reagen Folin-Ciocalteu dan sodium karbonat.
Bahan kimia untuk pengukuran aktivitas antioksidan metoda kemampuan  mereduksi  dan  aktivitas  penghambatan  radikal DPPH adalah K 3 Fe(CN) 6 , K 4 Fe(CN) 6 , TCA, FeCl 3 , buffer fosfat 0,2 M pH 6,6, etanol, DPPH, dimethyl sulphoxide (DMSO) dan buffer Tris-HCl 100 mM pH 7,4.
Bakteri yang digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri adalah Bacillus subtillis ATCC 6051, Staphylococcus aureus ID 784, Escherichia coli 0091 IFO, dan Pseudomonas aeruginosa FNCC  0063.  Sedangkan  medium  yang  digunakan  adalah Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth (NB) dan agar Muller Hinton (MH).
Piranti  yang  digunakan  meliputi  blender, soxhlet , rotary evaporator ,  spektrofotometer  UV-Vis  Shimadzu  1240,  neraca analitik dan peralatan gelas.
Ekstraksi (Negi et al ., 2005)
Biji  selasih  kering  dihaluskan  menggunakan  mortar  dan kemudian  diayak  menggunakan  ayakan  ukuran  35  mesh. Serbuk  selasih  sebanyak  50  g  diekstrak  menggunakan  soklet selama  8  jam  menggunakan  masing-masing  200  ml  pelarut kloroform, etil asetat, aseton dan metanol secara berturut-turut.

## Pengukuran  kadar  total  fenolik  (Spanos  dan  Wrolstad, 1990; Lister dan Wilson, 2001)
Sebanyak 0,5 ml ekstrak yang telah dilarutkan dalam aseton : air = 6: 4 (v:v) ditambah dengan 2,5 ml reagen Folin-Ciocalteu 10% dan 2 ml larutan sodium karbonat 7,5%. Setelah diinkubasi pada  suhu  45 0 C  selama  15  menit,  absorbansi  larutan  diukur pada  panjang  gelombang  765  nm.  Sebagai  blanko  digunakan aseton  :  air  =  6:  4  (v:v)  sebagai  pengganti  sampel.  Sebagai standar  digunakan  asam  galat  pada  berbagai  konsentrasi. Kadar total fenolik dinyatakan dalam satuan mg ekuivalen asam galat/g sampel (mg GAE/g).
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  dengan  metoda kemampuan  mereduksi  ion  besi  (III)  menjadi  ion  besi  (II) (Modifikasi Oyaizu, 1986)
Volume  larutan  dan  reagen  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  merupakan  dua  kali  dari  volume  pada  metode yang  dikemukakan  Oyaizu  (1986).  Sebanyak  1  ml  ekstrak ditambah dengan 2,5 ml buffer fosfat 0,2 M pH 6,6  dan 2,5 ml K 3 Fe(CN) 6 1% kemudian diinkubasi pada suhu 50 0 C selama 30 menit.
Larutan  ditambah  dengan  2,5  ml  TCA  10%  dan  diputar dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Sebanyak 2,5 ml larutan atas dicampur dengan 2,5 ml akuades dan 0,5 ml FeCl 3 0,1 %.
Larutan  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  10  menit. Absorbansi  larutan  diukur  pada  panjang  gelombang  700  nm.
Sebagai blanko digunakan akuades sebagai pengganti sampel. Sebagai  standar  digunakan  K 4 Fe(CN) 6 pada  berbagai konsentrasi dan aktivitas antioksidan dinyatakan dalam satuan  ek g -1 .
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  metoda  aktivitas  peng- hambatan radikal dpph (modifikasi blois, 1958)
Volume  larutan  dan  reagen  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  merupakan  dua  kali  dari  volume  pada  metode yang dikemukakan Blois (1958). Sebanyak 0,5 ml ekstrak yang telah  dilarutkan  dalam dimethyl  sulphoxide (DMSO)  ditambah dengan 2,5 ml DPPH 0,5 mM. Volume total larutan digenapkan menjadi 5 ml dengan buffer Tris HCl 100 mM pH 7,4.
Larutan  diinkubasi  pada  suhu  ruang  dan  gelap  selama  20 menit. Absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang 517 nm.  Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dalam  persentase penghambatan radikal bebas DPPH.
% Penghambatan DPPH =

## Pengujian aktivitas antibakteri (Hostettmann, 1997)
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap  bakteri Gram negatif ( E. coli 0091 IFO dan P. aeruginosa FNCC 0063) dan Gram positif ( B. subtilis ATCC 6051dan S. aureus ID 784) yang diperoleh dari Pusat Antar Universitas (PAU), Universitas Gadjah  Mada.  Sebanyak  3-5  ose  biak  bakteri  yang  telah ditumbuhkan pada Nutrient Agar (NA) dan Nutrient  Broth (NB) selama  24  jam  disuspensikan  ke  dalam  20  ml  larutan  NaCl. Kemudian  suspensi  bakteri  tersebut  diukur optical  density (OD 600 =0,132).
Sebanyak  1  ml  suspensi  bakteri  yang  telah  diketahui absorbansinya  dimasukkan    ke  dalam  cawan  petri  steril  yang berisi 10 ml Muller Hinton agar yang masih cair sambil digoyang agar  bakteri  merata  dan  didiamkan  hingga  medium  memadat pada  suhu  ruang.  Selanjutnya,  cakram  kertas  berdiameter  6 mm  (Schleicher  dan  Schuell  2668  Ref.  No.  10321260, D60222274-1  Dassel,  Germany)  yang  telah  berisi  ekstrak sebanyak 20  l diletakkan pada medium yang telah memadat. Cakram  kertas  antibiotika Tetracycline (TE  30  µg)  sebagai pembanding positif diletakkan pada cawan petri yang berbeda. Kemudian  cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24 jam.
Diameter  daerah  hambatan  diukur  setelah  masa  inkubasi berakhir. Kekuatan aktivitas antibakteri ditentukan berdasarkan standar  yang  dikemukakan  oleh  Conner  dan  Beuchat  (1984); aktivitas kuat memiliki Diameter Daerah Hambatan (DDH) > 1,1 cm,  aktivitas  lemah  memiliki  DDH  0,6  –  1,1  cm  dan  ekstrak dengan DDH < 0,6 cm berarti tidak menghambat pertumbuhan bakteri.

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dari  percobaan  dengan  ulangan sebanyak tiga kali dianalisis menggunakan statistika sederhana dan dijelaskan secara deskriptif.
100% x DPPH Absorbansi Sampel Absorbansi - DPPH Absorbansi

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar  total  fenolik  ekstrak  polar  dan  non  polar  biji selasih
Kadar  total  fenolik  berbagai  ekstrak  biji  selasih  diukur dengan metoda Folin Ciocalteu. Kadar total fenolik berturut-turut dari  ekstrak  metanol,  etil  asetat,  aseton  dan  kloroform  (dalam satuan  mg  GAE/g)  adalah  3,63  ±  0,21;  1,40  ±  0,03;  0,97  ± 0,03; dan 0,14 ± 0,01. Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak  metanol  memiliki  kadar  total  fenolik  paling  tinggi dibanding  tiga  ekstrak  lainnya.  Ozkan et  al. (2003)  meneliti sejumlah tanaman yang tergolong dalam family Lamiaceae dan menemukan  bahwa  kebanyakan  dari  tanaman  tersebut mengandung  senyawa  fenolik  yang  memiliki  aktivitas antioksidan dan antibakteri yang kuat.
Senyawa fenolik utama yang ditemukan di dalam tumbuhan adalah  metabolit  sekunder  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan tinggi  dan  aktivitas  tersebut  tersebar  luas  di  spesies-spesies Lamiaceae (Gang et al. , 2001). Hasil penelitian lain yang serupa dengan  penelitian  biji  selasih  ini  adalah  penelitian  Negi et  al. (2005) yang meneliti biji Hippophae rhamnoides L. Kadar total fenolik tertinggi biji tersebut terdapat pada ekstrak metanol yang kemudian diikuti oleh ekstrak etil asetat, aseton dan kloroform.
Perbedaan  kadar  total  fenolik  dari  masing-masing  ekstrak dapat  disebabkan  oleh  sifat  polaritas  senyawa  fenolik  yang bersifat  polar.  Senyawa  fenolik  merupakan  substansi  yang mempunyai  cincin  aromatik  dengan  satu  atau  lebih  gugus hidroksil  sehingga  sifatnya  mudah  larut  dalam  pelarut  polar. Houghton  dan  Raman  (1998)  menyatakan  bahwa  kompenen fenolik umumnya larut dalam pelarut organik yang bersifat polar, sehingga  sesuai  dengan  pernyataan  tersebut  dan  hasil penelitian ini, pelarut metanol yang dapat mengekstrak senyawa fenolik lebih baik.
Kadar  total  fenolik  tertinggi  setelah  metanol  terdapat  pada ekstrak etil asetat. Ekstrak etil asetat memiliki kadar total fenolik lebih  tinggi  dibanding  ekstrak  kloroform.  Menurut  Harbone (1987)  pelarut  etil  asetat  yang  bersifat  semi  polar  juga  dapat mengangkat senyawa fenolik.
Menilik penelitian tentang senyawa fenolik yang diteliti pada beberapa  tumbuhan  dalam  genus Ocimum (bagian  tanaman tidak  disebutkan,  Hakkim et  al. (2008)  meneliti  kandungan senyawa  fenolik  ekstrak  daun  dari  delapan  spesies Ocimum menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi. Dari hasil analisa tersebut, Ocimum  gratissimum memiliki  kandungan  senyawa fenolik  tertinggi  dibanding  ketujuh  spesies  lainnya.  Senyawa fenolik  teridentifikasi  dan  terkuantifikasi  pada  panjang gelombang 330 nm, dimana senyawa-senyawa tersebut adalah senyawa fenolik, hidroksinamat, dan flavonoid. Dalam penelitian tersebut,  senyawa  asam  rosmarinat,  asam  litospermat,  asam vanilat, asam p- koumarat, asam hidroksibenzoat, asam siringat, asam  kafeat,  asam  ferulat,  asam  sinamat,  asam dihidroksifenilaktat, dan asam sinapat mampu diidentifikasi.
Asam  rosmarinat  merupakan  senyawa  fenolik  yang ditemukan  paling  banyak  diantara  spesies Ocimum yang  diuji. Hal tersebut juga sesuai dengan penelitian yang telah dilakukan oleh  Javanmardi et  al. (2002)  yang  menyatakan  bahwa  asam rosmarinat  terdapat  melimpah  di  dalam  keluarga  Lamiaceae, khususnya genus Ocimum .
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  polar  dan  non  polar  biji selasih  melalui  uji  kemampuan  mereduksi  ion  besi  (III) menjadi besi (II)
Aktivitas  antioksidan  berbagai  ekstrak  biji  selasih  diukur dengan  metoda  kemampuan  mereduksi.  Dari  hasil menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan tertinggi terletak pada ekstrak metanol dengan nilai 58,39  ek/g ± 3,81, yang kedua adalah  ekstrak  aseton  sebesar  10,65  ek/g  ±  0,67,  ketiga adalah  ekstrak  etil  asetat  sebesar  9,03  ek/g  ±  0,31 dan aktivitas terendah pada ekstrak kloroform sebesar 0,77  ek/g ± 0,04. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa fenolik yang bersifat antioksidan  pada  biji  selasih  lebih  bersifat  polar  sehingga menghasilkan aktivitas antioksidan tertinggi pada pelarut polar. Hasil  ini  juga  mendukung  penelitian  Juntachote  dan  Berghofer (2005) yang melaporkan bahwa  ekstrak polar yaitu etanol dari selasih  memiliki  peningkatan  aktivitas  antioksidan  yang berbanding  lurus  dengan  jumlah  konsentrasinya.  Aktivitas antioksidan  berhubungan  dengan  sifat  mereduksi  yang  dimiliki masing-masing  ekstrak.  Sifat  mereduksi  secara  umum disebabkan  hadirnya  senyawa  aktioksidan  yang  bersifat sebagai  reduktor.  Gordon  (1990)  menyatakan  bahwa  aktivitas antioksidan dari reduktor akan memecah rantai radikal dengan pemberian  atom  hidrogen.  Kehadiran  reduktan  (antioksidan) dalam  sampel  yang  diuji  akan  menghasilkan  reduksi  komplek Fe 3+ menjadi  bentuk  Fe 2+ (Hakkim et  al. ,  2008).  Dari  hasil menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  memiliki  sifat  mereduksi paling  tinggi.  Hal  ini  erat  kaitannya  dengan  kadar  total  fenolik yang dikandungnya.
Pietta  (2002)  menyatakan  bahwa  senyawa  fenolik  yang merupakan antioksidan dapat bertindak sebagai zat pereduksi, penyumbang  hidrogen  dan  peredam  oksigen  singlet.  Dengan demikian  ekstrak  metanol  yang  memiliki  kadar  total  fenolik tertinggi juga memiliki kemampuan sebagai zat pereduksi yang tertinggi pula.

## Aktivitas  antioksidan  ekstrak  polar  dan  non  polar  biji selasih  melalui  uji  kemampuan  penghambatan  radikal bebas DPPH
Aktivitas  antioksidan  berbagai  ekstrak  biji  selasih  yang diukur  dengan  metoda  penghambatan  radikal  bebas  DPPH disajikan pada Tabel 1. Pada metoda ini, ekstrak kloroform tidak dapat diuji karena mengandung asam lemak tinggi.
Wohlmuth  (2000)  menyatakan  bahwa  biji  selasih mengandung  lima  asam  lemak,  termasuk  di  dalamnya  adalah 17% asam linolenat dan lebih dari 50% adalah asam linoleat.
Menurut  Shahidi  dan  Naczk  (2004),  asam  lemak  bereaksi sebagai  inisiator  proses  autooksidasi  lemak  sehingga  ekstrak kloroform  yang  mengandung  lemak  kurang  efektif  dalam menghambat radikal bebas.
Tabel 1.   Persentase  aktivitas  penghambatan  radikal  DPPH  ekstrak semi polar dan polar biji selasih
Konsentrasi Ekstrak (  g/ml) % Penghambatan DPPH (Rerata ± SE) Etil Asetat Aseton Metanol 20 40 60 80 100 0,67 ± 0,09 5.,45 ± 0,33 31,16 ± 1,92 51,03 ± 1,59 67,80 ± 0,93 1,06 ± 0,09 4,54 ± 0,35 25,03 ± 0,11 26,61 ± 0,59 30,03 ± 1,06 6,64 ± 0,56 28,64 ± 0,84 51,55 ± 1,20 85,73 ± 0,86 81,21 ± 2,42
Data  pada  Tabel  1  menunjukkan  bahwa  beberapa  biji selasih adalah penghambat radikal bebas dan bereaksi sebagai antioksidan  primer.  Hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan metoda  aktivitas  penghambatan  radikal  DPPH  menunjukkan bahwa  ekstrak  metanol  memiliki  kemampuan  penghambatan terhadap  radikal  bebas  DPPH  paling  tinggi  pada  semua konsentrasi  dibanding  ekstrak  etil  asetat  dan  aseton.  Secara umum,  ekstrak  dengan  kandungan  fenolik  yang  tinggi menunjukkan aktivitas penghambatan radikal bebas yang tinggi pula (Anagnostopoulou et al ., 2004).
Hasil penelitian ini juga sejalan dengan penelitian Hakkim et al  (2008)  yang  menyebutkan  bahwa  terdapat  korelasi  linear yang  sangat  baik  (R 2 =  0,962)  antara  kandungan  senyawa fenolik  dengan  aktivitas  penghambatan  radikal  bebas  DPPH. Hasil  tersebut  juga  mengindikasikan  bahwa  kemampuan penghambatan  radikal  bebas  dari  masing-masing  ekstrak berhubungan  dengan  konsentrasi  senyawa  fenolik.  Hal  ini terlihat  pada  ekstrak  metanol  yang  mengandung  kadar  total fenolik  tertinggi  juga  memiliki  aktivitas  penghambatan  radikal bebas  yang  tertinggi  diikuti  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak aseton.

## Aktivitas antibakteri ekstrak polar dan non polar biji selasih
Uji  aktivitas  senyawa  antibakteri  dilakukan  dengan  metoda cakram  kertas  untuk  mengetahui  Diameter  Daerah  Hambatan (DDH)  berbagai  ekstrak  biji  selasih  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa , Bacillus subtilis , dan Staphylococcus aureus . Hasil disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2.  Rata-rata  diameter  daerah  hambatan  (DDH)  (mm  ±  SE) ekstrak  polar  dan  non  polar  biji  selasih  ( O.sanctum L) terhadap Escherichia  coli , Pseudomonas  aeruginosa , Bacillus subtilis , dan Staphylococcus aureus
Ekstrak Rata-Rata DDH (mm ± SE) Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Bacillus subtilis  Staphylococcus aureus Kloroform Etil Asetat Aseton Metanol 6,77 ± 0,71 13,53 ± 0,63 10,45 ± 0,84 7,86 ± 0,48 6,94 ± 0,64 10,67 ± 1,05 9,74 ± 0,74 9,35 ± 1,09 6,83 ± 0,19 14,93 ± 0,80 12,88 ± 0,46 9,93 ± 0,38 7,31 ± 0,68 13,46 ± 0,79 10,44 ± 0,92 10,24 ± 0,10
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  dua  bakteri  Gram negatif  ( Escherichia  coli dan Pseudomonas  aeruginosa ) menunjukkan  nilai  DDH  yang  terbesar  pada  ekstrak  etil  asetat yaitu 13,53 mm ± 0,63 dan 10,67 ± 1,05 secara berturut-turut untuk  kedua  bakteri.  Sedangkan,  hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap  dua  bakteri  Gram  positif  ( Bacillus  subtilis dan Staphylococcus aureus ) menunjukkan nilai DDH yang terbesar pada  ekstrak  etil  asetat  yaitu  sebesar  14,93  mm  ±  0,80  dan 13,46 mm ± 0,79 secara berturut-turut untuk kedua bakteri.
Penentuan  kekuatan  aktivitas  antibakteri  berbagai  ekstrak biji  selasih  terhadap  empat  bakteri  patogen  ditentukan berdasarkan  standar  yang  dikemukakan  oleh  Conner  dan Beuchat (1984) dan hasilnya disajikan pada Tabel 3.
Tabel  2.  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  memiliki aktivitas  antibakteri  tertinggi  berdasarkan  ukuran  Diameter Daerah  Hambatan  (DDH)  diikuti  ekstrak  aseton,  metanol  dan kloroform. Menurut Kanazawa et al. (1995) suatu senyawa yang mempunyai  polaritas  optimum  akan  mempunyai  aktivitas
antimikroba  maksimum,  karena  untuk  interaksi  suatu  senyawa antibakteri  dengan  bakteri  diperlukan  keseimbangan  hidrofilik- lipofilik (HLB : hydrophilic lipophilic balance ).
Polaritas  senyawa  merupakan  sifat  fisik  senyawa antimikroba  yang  penting.  Sifat  hidrofilik  diperlukan  untuk menjamin senyawa larut dalam fase air yang merupakan tempat hidup mikroba tetapi senyawa yang bekerja pada membran sel hidrofobik  memerlukan  pula  sifat  lipofilik  sehingga  senyawa antibakteri  memerlukan  keseimbangan  hidrofilik-lipofilik  untuk mencapai aktivitas yang optimal (Branen dan Davidson, 1993).
Tabel 3.  Daya  hambatan  ekstrak  kloroform,  etil  asetat,  aseton  dan metanol  terhadap  bakteri  uji  berdasarkan  Conner  dan Beuchat (1984)
Keterangan : Lemah :  DDH < 0,6 cm Sedang :  DDH 0,6 – 1,1 cm Kuat :  DDH > 1,1 cm
Ekstrak  metanol  memiliki  aktivitas  lebih  rendah  daripada ekstrak etil asetat. Hal ini sesuai dengan penelitian Moshi dan Mbwambo (2005) bahwa ekstrak semipolar (etil asetat) mampu menghambat  bakteri E.coli dan B.anthracis dengan  diameter hambat lebih besar daripada ekstrak polar (metanol). Demikian juga  penelitian  Springfield et  al. (2003)  menyatakan  bahwa ekstrak  etil  asetat  dari  tanaman Carpobrotus  muirii dan C.quadrifidus lebih  berpotensi  dalam  menghambat S.  aureus dan Mycobacterium smegmatis daripada ekstrak air.
Ekstrak  kloroform  memiliki  aktivitas  antibakteri  paling rendah  dibanding  tiga  ekstrak  lainnya.  Hal  ini  disebabkan karena ekstrak kloroform mengandung lebih banyak minyak dan lemak daripada ekstrak etil asetat, aseton dan metanol. Minyak dan  lemak  lain  yang  mempunyai  ukuran  molekul  besar, mengganggu  proses  difusi,  menjadi  penghalang  masuknya minyak  atsiri  maupun  senyawa  fenolik  ke  dalam  sel  dan melindungi  bakteri  dari  senyawa  antibakteri,  sehingga  ekstrak kloroform  tidak  cukup  untuk  berdifusi  dan  tidak  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  (Kanazawa et  al .,  1995). Selain itu, kemungkinan lemak dan minyak berinteraksi dengan minyak  atsiri  atau  senyawa  fenolik  sehingga  menurunkan aktivitas antibakteri (Naufalin, 2005).
Aktivitas  penghambatan  terhadap  pertumbuhan  bakteri Gram positif ( Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus ) lebih kuat  dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  negatif  ( Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa ). Hal ini terkait dengan sifat dinding  sel  yang  dimiliki  bakteri  tersebut.  Fardiaz  (1983) menyatakan  bahwa  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif mempunyai  dinding  sel  yang  berbeda  sensitivitasnya  terhadap perlakuan  fisik,  enzim,  dan  antibiotik.  Menurut  Michael  (1987), bakteri Gram positif lebih rentan terhadap senyawa antimikroba dibandingkan  bakteri  Gram  negatif.  Perbedaan  sensitivitas antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif didasarkan pada perbedaan morfologi dinding selnya. Menurut Pelezar dan
Bakteri Ekstrak Kloroform Etil Asetat Aseton Metanol Gram Negatif E. coli P. aeruginosa Sedang Sedang Kuat Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Gram Positif B. subtilis S. aureus Sedang Sedang Kuat Kuat Kuat Sedang Sedang Sedang
Chan  (1986),  struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  positif  relatif lebih  sederhana  sehingga  memudahkan  senyawa  antimikroba untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan  menemukan  sasaran  untuk bekerja.  Sedangkan  struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif relatif lebih komplek, berlapis dua yaitu lapisan luar yang berupa lipoprotein  dan  lipopolisakarida  (memiliki  sistem  seleksi terhadap zat-zat asing) dan lapisan dalam berupa peptidoglikan.
Dari  hasil  yang  diperoleh,  tampak  bahwa  keempat  ekstrak biji  selasih  memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian Ntezurubanza  (1984)  yang  melaporkan  bahwa  selasih  bersifat antimikroba  dan  mampu  melawan Mycobacterium  tuberculosis dan Staphylococcus  aureus in  vitro.  Penelitian  lain  juga dilakukan  oleh  Singh et  al. (2007)  di  India  yang  menyatakan bahwa  ekstrak  minyak  biji  selasih  menunjukkan  aktivitas antibakteri  melawan Staphylococcus  aureus , Bacillus  pumilus dan Pseudomonas  aeruginosa dimana S.  aureus merupakan bakteri  yang  paling  sensitif.  Dibandingkan  dengan  hasil penelitian  ini,  ekstrak  minyak  biji  selasih  dalam  pelarut  etil asetat  mampu  melawan Bacillus  subtilis ,  dengan  diameter daerah  hambatan  paling  tinggi,  diikuti Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus yang memiliki daerah hambatan hampir sama  dan  bakteri  yang  paling  rendah  tingkat  sensitivitasnya adalah Pseudomonas  aeruginosa .  Hal  ini  berbeda  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Singh et  al. (2007)  dimana S. aureus merupakan  bakteri  yang  paling  sensitif.  Perbedaan tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  antara  lain keragaman  varietas  tumbuhan  selasih  yang  dihasilkan  dari tempat tumbuh yang memiliki kondisi geografis dan iklim yang berbeda.  Dalam  penelitian  ini,  biji  selasih  diperoleh  dari tanaman  yang  ditumbuhkan  di  Indonesia,  sedangkan  pada penelitian  lain  di  India.  Ekstrak  minyak  biji  selasih  ini menunjukkan diameter daerah hambatan paling besar terhadap S. aureus dibandingkan minyak wijen dan minyak kedelai. Komponen  antibakteri  yang  terkandung  dalam  ekstrak  biji selasih  dimungkinkan  berasal  dari  golongan  triterpenoid. Hipotesa  ini  ditarik  berdasarkan  sifat  salah  satu  senyawa triterpenoid yang dapat terekstrak pada pelarut heksana dan etil asetat (Naufalin, 2005). Senyawa triterpenoid yang mempunyai aktivitas antimikroba antara lain adalah borneol, sineol, pinene, kamfene  dan  kamfor  (Conner,  1993),  merediol,  linalool,  indol dan  kadinen  (Kubo et  al. ,  1993).  Senyawa  ini  efektif  untuk menghambat  pertumbuhan B.  subtilis,  S.  aureus dan E.  coli . Juliani dan Simon (2002) menyatakan bahwa tumbuhan selasih mengandung  beberapa  senyawa  triterpenoid  seperti  kamfene, borneol,  sineol,  kamfor  dan  linalool.  Sumber  lain  juga melaporkan  bahwa  triterpenoid  yang  terkandung  di  dalam tanaman  selasih  adalah  asam  ursolat.  Roberto et  al. (2003) telah melaporkan secara mendalam bahwa kandungan minyak atsiri  genus Ocimum memiliki  aktivitas  antibakteri  dan kandungan  minyak  atsiri  tersebut  hanya  berpengaruh  dalam aktivitas  antibakteri,  bukan  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas antioksidan lebih dipengaruhi oleh kandungan senyawa fenolik yang berdasarkan pada penelitian ini lebih bersifat polar.
Bendini et  al. 2006  melakukan  penelitian  mengenai hubungan  antara  kandungan  fenolik  dengan  aktivitas antioksidan dan antibakteri dari lima spesies Passiflora di Italia. Penelitian tersebut melaporkan bahwa P. nitida , P. foetida , dan
P.  palmeri memiliki  aktivitas  antimikroba  dan  antioksidan  yang tinggi. P.  tenuifila dan P.  coriacea menunjukkan  aktivitas antioksidan namun tidak menunjukkan aktivitas antimikroba.
Tingginya  aktivitas  antioksidan  berhubungan  dengan tingginya  jumlah  senyawa o -diphenol  dan  katekin.  Beberapa komponen  yang  tidak  diketahui,  sementara  diidentifikasi sebagai  struktur  isomer  yang  muncul  dan  senyawa  tersebut berhubungan dengan aktivitas antimikroba yang muncul.  Pada penelitian  ini,  ekstrak  metanol  menunjukkan  aktivitas antioksidan  dan  kandungan  total  fenolik  yang  paling  tinggi diantara  tiga  ekstrak  lainnya.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  yang  ada  disebabkan  karena  kehadiran senyawa  fenolik.  Di  sisi  lain,  aktivitas  antibakteri  tertinggi ditunjukkan  pada  ekstrak  etil  asetat.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa senyawa yang berperan dalam aktivitas antibakteri tidak berasal  dari  senyawa  fenolik  pada  ekstrak  metanol  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi,  namun  berasal  dari senyawa lain yang terdapat pada ekstrak etil asetat.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kadar total fenolik tertinggi terdapat pada ekstrak metanol. Aktivitas  antioksidan  tertinggi  juga  terdapat  pada  ekstrak metanol  berdasarkan  kemampuan  mereduksi  dan  aktivitas penghambatan  radikal  DPPH.  Sedangkan  aktivitas  antibakteri tertinggi  ditunjukan  oleh  ekstrak  etil  asetat.  Saran  yang  dapat diberikan  bagi  kelanjutan  penelitian  ini  adalah  penelitian mengenai isolasi, dan karakterisasi senyawa aktif yang bersifat antioksidan  dari  golongan  fenolik  maupun  golongan  lainnya serta  senyawa  aktif  yang  bersifat  antibakteri.  Disamping  itu penelitian  lain  dapat  dilakukan  dengan  mengidentifikasi  dan mengelusidasi  minyak  atsiri  yang  terkandung  di  dalam  biji selasih  terutama  yang  memiliki  aktivitas  biologis  yang  tinggi. Isolasi  dan  karakterisasi  dari  senyawa  tersebut  akan memberikan  kontribusi  yang  sangat  besar  bagi  dunia kesehatan,  khususnya  penciptaan  senyawa  obat  dari  bahan alam.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim 1 .  2005. Ocimum  sanctum L–Holy  Basil  http:// www.tropilab.com/ holy-bas.html. [5 April 2007].
Anonim 2 . 2005. Ocimum sanctum Ext. (Tulsi) http://www.sbepl. com/ocimum-sanctum.html. [5 April 2007].
Bendini  A,  Cerretani  L,  Pizzolante  L,  Toschi  TG,  Guzzo  F, Ceoldo S, Marconi AM, Andreetta F, Levi M. 2006. Phenol content related to antioxidant and antimicrobial activities of Passiflora  spp.  extracts.  Eur.  Food  Res  Technol  223:102– 109.
Blois MS. 1958. Antioxidant determination by the use of stable free  radicals.  Nature  181:1199-1200.  Dalam.  Negi  PS, Chauhan  AS,  Sadia  GA,  Rohinishree  YS,  Ramteke  RS. 2005. Antioxidant and antibacterial of various seabuckthorn ( Hippophae rhamnoides L.) seed extract. J Food Chem 92 : 119-124.
Chatterjee A, Sukul NC, Laskar  S, Ghoshma Jumdar S. 1982. Nematicidal  principles  from  two  species  of  Lamiaceae.  J Nematol 14 : 118–20.
Conner  DE,  Beuchar  LR.  1984.  Effect  of  essential  oil  from plants on growth of spoilage yeasts. J Food Sci 49:429-434. Dalam.  Elgayyar  M et  al .  2001.  Antimicrobial  Activity  of Essential  Oil  from  Plants  against  Selected  Pathogenic  dan Saprophytic Mikroorganism. J Food Prot 64(7):1019-1024.
Deshpande RS, Tipnis HP. 1997. Insecticidal activity of Ocimum basilicum L.  Pesticides  11:1–12.  Dalam.  Hakkim  FL,  Girija A,  dan  Boopathy  R.  2008.  Antioxidant  property  of  selectd Ocimum  species  and  their  secondary  metabolite  content. JMPR 2(9):250–257.
Fardiaz  S.  1983.  Keamanan  Pangan  Jilid  1.  Jurusan  TPG Fakultas  Teknologi  Pertanian,  IPB,  Bogor  dalam  Zuhud EAM, Rahayu PW, Wijaya CH, dan Pipi PS. 2001. Aktivitas Antimikroba  Ekstrak  Kedawung  ( Parkia  roxburghii G.  Don) Terhadap  Bakteri  Patogen.  J  Teknol  dan  Industri  Pangan 2(1):11.
Hirasa  K,  Takemasa  M.  1998.  Spice  science  and  technology.
Marcel Dekker, New York. Dalam. Javanmardi J, Stushnoff C, Locke E and Vivanco JM. 2003. Antioxidant activity and total phenolic content of Iranian Ocimum accessions. J Food Chem 83:547-550.
Javanmardi J, Khalighi A, Kashi A, Bais HP, Vivanco JM. 2002. Chemical  characterization  of  basil  ( Ocimum  basilicum  L. ) found in local accessions and used in traditional medical in Iran. J Agric. Food Chem 50, 5878-5883.
Javanmardi  J,  Stushnoff  C,  Locke  E,  Vivanco  JM.  2003.
Antioxidant  activity  and  total  phenolic  content  of  Iranian Ocimum accessions. J Food Chem 83:547-550.
Juliani  HR,  Simon  JE.  2002.  Antioxidant  activity  of  Basil.  J. Janick  and  A.  Whipkey  (eds.).  Trends  in  New  Crops  and New Uses. ASHS Press, Alexandria, VA.
Juntachote  T,  Berghofer.  2005.  Antioxidative  properties  and stability  of  ethanolic  extracs  of  Holy  basil  and  Galangal.  J Food Chem 92:193-202.
Kuswandi  M,  Iravanti  S,  Asmini  P,  Hidayati  N.  2001.  Daya Antibakteri Minyak Atsiri Cengkeh ( Syzygium aromaticum L ) Terhadap  Bakteri  yang  Resisten  Antibiotika.  Pharmacom 2(2).
Leong, Shui G. 2002. An investigation of antioxidant capacity of fruits in Singapore markets. J Food Chem 76:69-75.
Loha  K.  2005.  Holy  Basil  :  (bai  gkprow).  http://www. thaifoodandtravel.com/ingredients/basilh.html.
Michael  JT.  1987.  Process  in  Pathology  and  Microbiology. Blackwell Scientific Publication, Oxford, London.
Naufalin  R, et  al .  2005.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Bunga Kecombrang  Terhadap  Bakteri  Patogen  dan  Perusak Pangan. J Teknol dan Industri Pangan 16(2):119-125.
Negi  PS,  Chauhan  AS,  Sadia  GA,  Rohinishree  YS,  Ramteke RS.  2005.  Antioxidant  and  antibacterial  of  various seabuckthorn  ( Hippophae  rhamnoides L.)  seed  extract.  J Food Chem 92:119-124.
Pelezar  MJ,  Chan  ECS.  1986.  Dasar-dasar  Mikrobiologi  1. Penterjemah  Hadioetomo  RS,  Imas  T,  Tjitrosomo  SS, Angka SL, UI Press, Jakarta. Dalam. Zuhud EAM, Rahayu PW,  Wijaya  CH,  dan  Pipi  PS.  2001.  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak  Kedawung  ( Parkia  roxburghii G.  Don)  Terhadap Bakteri Patogen. J Teknol dan Industri Pangan 2(1):11.
Reuveni R, Fleischer A, Putievski E.1984. Fungistatic activity of essential  oils  from Ocimum  basilicum Chemotypes. Phitopatol Z 10:20–22.
Shahidi  F,  Janitha  PK,  Wanasundara  PD.  1992.  Phenolic antioxidants. Critical Reviews of Food Science and Nutrition 32 (1):67-103. Dalam. Javanmardi J, Stushnoff C, Locke E dan  Vivanco  JM.  2003.  Antioxidant  activity  and  total phenolic content of Iranian Ocimum accessions. Food Chem 83:547-550.
Shahidi,  Naczk.  2004.  Phenolics  in  Food  and  Nutraceuticals.
CRC Press LLC, Florida.
Simon  JE,  Morales  MR,  Phippen  WB,  Vieira  RF,  Hao.  1999. Basil: A source of aroma compounds and a popular culinary and ornamental herb. Dalam. Janick J (eds). Perspective on New  Crops  and  New  Uses.  P.  499-505.  ASHS  Press, Alexandria, VA.
Simon JE, Quinn J, Murray RG. 1990. Basil: A sorce of essential oils. Dalam. Janick J and Simon JE (eds.). Advances in New Crops. Timber Press, Portland, OR.
Vani  SR,  Cheng  SF,  Chuah  CH.  2009.  Comparative  study  of volatile compounds from genus Ocimum . Am. J Appl. Sci. 6 (3):523-528.
Wohlmuth  H.  2000.  Sacred  basil  –  an  Ayurvedic  adaptogen.
Information & Research On Botanical Medicine.