Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) 2019; 5 (2): 198 – 205 ISSN : 2442-8744 (electronic) http://jurnal.untad.ac.id/jurnal/index.php/Galenika/index DOI: 10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13935
Toksisitas  Ekstrak  Etanol  dan  Ekstrak  Air  dari  Daun  Jotang  Kuda ( Synedrella  nodiflora (L.)  Gaertn.),  Daun  Gandarusa  ( Justicia  Gendarussa Burm.F.),  dan  Daun  Pulutan  ( Urena  lobata L.)  dengan Brine  Shrimp Lethality Test
( Toxicity of Ethanol Extract and Water Extract of Synedrella nodiflora(L.) Gaertn. Leaves, Justicia  gendarussa Burm.f. Leaves,  and  Urena  lobata  L.  Leaves  with  Brine  Shrimp Lethality Test )

## Agustinus Widodo*, Akhmad Khumaidi, Putri Faradila A. Lasongke
Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu, Indonesia, 94118
Article Info: Received: 10 September 2019 in revised form: 24 September 2019 Accepted: 27 October 2019 Available Online: 27 October 2019

## ABSTRACT
Jotang  kuda  ( Synedrella  nodiflora (L.)  Gaertn.),  gandarusa  ( Justicia gendarussa Burm.f.)  and  pulutan  ( Urena  lobata L.)  leaves  are  used  by several  tribes  in  Central  Sulawesi  for  the  treatment  of  cancer.  This  study aims  to  determine  the  value  of  LC 50 (Lethal  Concentration  50)  of  ethanol and water extracts from the S. nodiflora , J. gendarussa and U. lobata leaves and identify the class of chemical compounds contained in extracts with the highest toxicity. The ethanol extract was obtained by the maceration method using  ethanol  96%  and  the  water  extract  was  obtained  by  the  infusion method.  The  extract toxicity  test  was  carried  out  byBrine  Shrimp  Lethality Test  (BSLT)  and  dentification  test  was  carried  out  by  Thin  Layer Chromatography  (TLC).  The  toxicity  test  results  (LC 50 )  of  96%  ethanol extract  and  water  extract  of S.  nodiflora leaves  were  395.60  µg/ml  and 109.25 µg/ml; J. gendarussa leaves 713.34 µg/ml  and 18.02 µg/ml;  and U. lobata leaves  188.38  µg/ml  and  85.37  µg/ml,  respectively.  The  results  of identification  showed  that  the  water  extract  of  the J.  gendarussa leaves containing  alkaloids,  flavonoids,  phenolics,  saponins,  and  steroids- terpenoids. The results of this study indicated that the extracts of S. nodiflora leaves, J.  gendarussa leaves,  and U.  lobata leaves  are  potential  to  be developed as anticancer.
Keywords :
Synedrella nodiflora (L.) Gaertn
Justicia gendarussa Burm. f. Urena lobata L.
BSLT LC 50

## Corresponding Author:
Agustinus Widodo
Jurusan Farmasi FMIPA Universitas Tadulako
Palu 94118 Indonesia email:
widodoagustinus.untad@gmail.com
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.

## How to cite (APA 6th Style):
Widodo, A., Khumaidi, A., & Lasongke, P. F. A. (2019).Toksisitas Ekstrak Etanol dan Ekstrak Air Dari Daun Jotang Kuda ( Synedrella  nodiflora (L.)  Gaertn.),  daun  Gandarusa  ( Justicia  Gendarussa Burm.F.),  dan  Daun  Pulutan  ( Urena  lobata L.) dengan Brine  Shrimp  Lethality  Test . Jurnal  Farmasi  Galenika  :GalenikaJournal  of  Pharmacy,  5 (2),  198-205. doi:10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13935

## ABSTRAK
Daun jotang kuda ( Synedrella nodiflora (L.) Gaertn.), daun gandarusa ( Justicia gendarussa Burm.f.), dan  daun  pulutan  ( Urena  lobata L.)secara  empiris  digunakan  oleh  beberapa  suku  di  Sulawesi Tengah  untuk  pengobatan  kanker.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  nilai  LC 50 ( Lethal Concentration50 )dari  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air  dari  daun  jotang  kuda,  daun  gandarusa,  dan daun  pulutan,  dan  mengetahui  golongan  senyawa  kimia  yang  terkandung  pada  ekstrak  dengan toksisitas  tertinggi.Ekstrak  etanol  diperoleh  dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  96%  dan ekstrak  air  diperoleh  dengan  metode  infusa.  Uji  toksisitasekstrak  dilakukan  denganBSLT  ( Brine Shrimp  Lethality  Test ),  dan  uji  identifikasi  golongan  senyawa  dilakukan  dengan  Kromatografi  Lapis Tipis. Hasil uji toksisitas (LC 50 ) ekstrak etanol 96% dan ekstrak air daun jotang kuda secara berturut- turut yaitu 395,60 µg/ml dan 109,25 µg/ml; daun gandarusa 713,34 µg/ml dan 18,02 µg/ml; dan daun pulutan 188,38 µg/ml dan 85,37 µg/ml. Hasil identifikasi golongan senyawa menunjukkan ekstrak air daun  gandarusa  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  fenolik,  saponin,  dan  steroid-terpenoid.  Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  jotang  kuda,  daun  gandarusa,  dan  daun  pulutan memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai antikanker.
Kata  kunci: Synedrella  nodiflora (L.)  Gaertn., Justicia  gendarussa Burm. f., Urena  lobata L.,  BSLT, LC 50 .

## PENDAHULUAN
Penyakit  kanker  adalah  salah  satu  penyakit  yang sangat  berbahaya  bagi  manusia. The  International Agency  for  Research  on  Cancer (IARC)  dan World Health Organization (WHO) tahun 2018, melaporkan angka  kejadian  kanker  di  Indonesia  menempati urutan kedelapan di Asia Tenggara dan urutan kedua puluh tiga di Asia. Kasus kanker di dunia mengalami peningkatan  tiap  tahunnya,  sehingga  saat  ini menjadikan  kanker  sebagai  penyebab  kematian nomor  dua  di  dunia  (WHO,  2018).  Walaupun  telah banyak  ditemukan  obat  antikanker  namun  hasilnya belum  memuaskan  dan  biayanya  juga  sangat  mahal. Hal  inilah  yang  mendorong  masyarakat  untuk melakukan pengobatan menggunakan obat tradisional (Wongkar et.al , 2015).
Hasil  studi  etnofarmasi  pada  Suku  Dampelas  di Kabupaten  Donggala  diketahui  bahwa  daun  jotang kuda  ( Synedrella  nodiflora (L.)  Gaertn.  memiliki khasiat sebagai antikanker, dengan cara penggunaannya ditumbuk dan ditempelkan pada luka atau  benjolan  pada  payudara  (Adisaputra,  2016). Hasil penelitian  yang dilakukan pada  Suku  Moma di Kabupaten  Sigi  diketahui  bahwa  daun  pulutan ( Urena  lobata L.)  memiliki  khasiat  antikanker, dengan cara penggunaannya direbus selama 15 menit kemudian  diminum  2  kali  sehari  (Islami,  2017). Penelitian terbaru  yang dilakukan pada Suku Lalaleo
Kabupaten  Tojo  Una-una  diketahui  bahwa  daun gandarusa  ( Justicia  gendarussa Burm.  f.)  memiliki khasiat  antikanker,  dengan  cara  penggunaanya direbus  kemudian  diminum  3  kali  sehari  (Kadase, 2017).
Penelitian  ini  menguji  potensi  toksisitas  dari  ekstrak etanol  96%  dan  infusa  dari  daun  andengo,  daun bencue,  dan  daun  pulutan.  Metode  awal  yang  umum dipakai  untuk  mengamati  toksisitas  senyawa  dan merupakan  metode  penapisan  untuk  aktivitas antikanker  senyawa  kimia  dalam  ekstrak  tumbuhan adalah Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  dengan menggunakan  larva Artemia  salina Leach.  dan melihat nilai LC 50 (Meyer, 1982) . Hasil penelitian ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi  ilmiah  dari ketiga  ekstrak  tumbuhan  tersebut  yang  potensial sebagai antikanker.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah thermometer, pipet tetes, colony counter , vacum rotary evaporator (Eyela N-1 200B) , neraca  analitik  (Ohaus),  alat  penetas  telur udang,  vial,  wadah  maseras,  lampu  UV  254  nm  dan 366  nm,  chamber.  dan  lempeng  KLT  silika  Gel GF 254 .
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  jotang  kuda, daun  gandarusa,  dan  daun  pulutan,  Etanol  96%, Aquades,  ragi,  plat  silika  gel  GF  254,  serbuk Magnesium, Asam Klorida, FeCl 3, pereaksi Dragendroff , Lieberman-Burchard , air laut, dan larva A. salina .

## Metode

## Pengambilan sampel
Pengambilan  sampel  daun  jotang  kuda,  daun gandarusa,  dilakukan  di  Desa  Rerang,  Kecamatan Dampelas,  Kabupaten  Donggala,  dan  sampel  daun pulutan  dilakukan  di  Desa  Lolu,  Kecamatan  Sigi- Biromaru,  Kabupaten  Sigi.  Identifikasi  dilakukan  di Laboratorium  Biodiversitas  Jurusan  Biologi  FMIPA,
Universitas Tadulako (No.: 016/UN28.1.28/BIO/2018).

## Pengolahan Sampel
Daun jotang kuda, daun gandarusa, dan daun pulutan terlebih dahulu dipisahkan dari batangnya, kemudian disortasi  basah,  selanjutnya  dicuci  dengan  air mengalir  untuk  menghilangkan kotoran  yang kemungkinan  masih  menempel  dan  ditiriskan, kemudian  dirajang  kecil-kecil  lalu  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  tanpa  terkena  paparan sinar matahari langsung hingga daun menjadi kering. Setelah kering daun dibersihkan kembali dari kotoran yang  tertinggal  saat  pengeringan.  Sampel  daun selanjutnya diserbukkan dan disimpan.

## Pembuatan Ekstrak Etanol 96%
Ekstrak etanol 96% daun jotang kuda, dibuat dengam menimbang 100 g serbuk simplisia daun jotang kuda, kemudian dimasukkan ke dalam wadah maserasi dan ditambahkan  etanol  96%  sehingga  serbuk  terendam. Diaduk dan didiamkan selama 3x24 jam lalu disaring untuk mendapatkan filtrat. Lalu filtrat yang diperoleh dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  50ºC  dan waterbath untuk  mendapatkan  ekstrak  kasar.  Cara yang  sama  digunakan  untuk  membuat  ekstrak  etanol 96%  daun  gandarusa  dan  ekstrak  etanol  96%  daun pulutan.

## Pembuatan Infusa
Infusa  daun  jotang  kuda,  dibuat  dengan  menimbang 10gram serbuk simplisia daun jotang kuda, kemudian dalam  panci  infus  lalu  ditambahkan  air  sampai  100 ml.  Kemudian  dipanaskan  di  atas  penangas  air
selama 15 menit terhitung mulai suhu mencapai 90ºC sambil  sekali-kali  diaduk.  Kemudian  diserkai  selagi panas  melalui  kain  flanel,  dan  ditambahkan  air melalui ampas sehingga diperoleh volume infusa 100 ml  (DepKes  RI,  1986).  Hasil  dari  proses  infusa (ekstrak  air)  dimasukkan  ke  dalam  wadah  kemudian dikeringkan  dengan freezer  dryer selama  24  jam hingga didapatkan ekstrak kering.
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## Penyiapan Larva Udang
Penetasan  telur  dilakukan  dalam  wadah  plastik bening  dengan  menggunakan  media  air  laut.  Selama penetasan,  tempat  penetasan  diberi  penerangan dengan  cahaya  lampu  5  watt.  Media  air  laut  diberi udara  dengan  menggunakan  aerator.  Setelah  24-36 jam, biasanya telur-telur telah menetas menjadi larva yang  disebut  nauplii.  Nauplii  aktif  yang  telah berumur  48  jam  digunakan  sebagai  hewan  uji  dalam penelitian.

## Uji Toksisitas
Pada  pengujian  digunakan  5  seri  konsentrasi  yang berbeda,  dimana  konsentrasi  yang  digunakan  adalah 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm dan 800 ppm. 10  ekor  larva  artemia  yang  telah  berumur  48  jam diambil,  dimasukan  dalam  vial  yang  berisi  ekstrak dengan  konsentrasi  tertentu.  Kemudian  ditambahkan air  laut  sebanyak  3  ml.  Lalu  ditambah  1  tetes suspensi  ragi  sebagai  makanan  dan  air  laut  sampai  5 ml.  Setiap  pengujian  disertai  dengan  kontrol  negatif dan  dibuat  3  kali  replikasi.  Vial  dijaga  agar  selalu mendapat  penerangan.  Setelah  24  jam,  jumlah  larva yang mati dihitung untuk mengetahui nilai probit dan dianalisis untuk mengetahui harga LC 50 (Meyer et al , 1982).
Persen  kematian  dihitung  dengan  rumus  sebagai berikut:
% 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 − 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑎𝑤𝑎𝑙 (10) 𝑥 100%
Nilai  LC 50 diperoleh  dari  hasil  perhitungan  dari persamaan  regresi  linear,  yang  diperoleh  dari  log konsentrasi sebagai sumbu X dan persen kematian A. salina yang  dikonversikan  ke  nilai  probit  sebagai sumbu Y.

## Identifikasi  Golongan  Senyawa  Kimia  Dengan Kromatografi Lapis Tipis

## Uji Alkaloid
Reagen Dragendorf disemprotkan  pada  lempeng KLT,  setelah  disemprot  raeagen Dragendorff akan memberi warna noda oranye berlawanan dengan latar belakang kuning, berdasarkan kompleks alkaloid dan komponen logam bismuth dari reagen
(Waksmundzka et al , 2008).

## Uji Flavanoid
Sampel  disemprot  dengan  pereaksi  AlCl 3. Flavanoid akan berpendar dengan warna kuning, hijau, atau biru kehitaman(Waksmundzka et al , 2008).
Uji Saponin
Plat  KLT  dipanaskan  pada  suhu  110ºC  dalam  oven selama  5  menit.  Positif  jika  terdapat  noda  berwarna coklat  setelah  penyemptotan  Asam  Sulfat  20%.
Positif
saponin ditegaskan
dengan
pereaksi Lieberman-Burchard (Glensk et al , 2005).
Uji Steroid
Plat  KLT  dipanaskan  pada  suku  110ºC.  digunakan pereaksi Lieberman-Burchard .  Positif  steroid  jika noda  yang  dihasilkan  berwarna  hijau  kebiruan  dan biru violet(Kristanti dkk, 2008).

## Uji Terpenoid
Plat  KLT  dipanaskan  pada  suhu  110ºC.  digunakan pereaksi  Anisaldehid-Asam  Sulfat.  Positif  terpenoid jika  noda  dihasilkan  berwarna  ungu  (violet),  biru, merah, abu-abu, hijau(Stahl, 1985).

## Uji Fenolik
Uji  senyawa  Fenolik  digunakan  deteksi  pereaksi FeCl 3. Fenol  akan  memberikan  hijau  atau  biru kehitaman jika diamati pada cahaya tampak(Waksmundzka et al , 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  secara  maserasi  diperoleh  rendemen ekstrak etanol 96% daun jotang kuda sebesar14,98%, ekstrak  etanol  96%  daun  gandarusa  sebesar13,96%, dan ekstrak etanol 96% daun pulutan sebesar16,21%. Hasil  ekstraksi  secara  infusa  diperoleh  rendemen
ekstrak  air  daun  jotang  kudasebesar  0,49%,  ekstrak air daun gandarusa sebesar0,76% mg, dan ekstrak air daun  pulutan  sebesar0,48%.  Rendemen  ekstrak  yang diperoleh  secara  maserasi  lebih  tinggi  dibandingkan secara  infusa,  hal  ini  dipengaruhi  oleh  jenis  pelarut yang digunakan dan waktu ekstraksi.
Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  uji praskrining  terhadap  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam  ekstrak  tumbuhan. Lethal  Concentration 50% (LC 50 ) diketahui dengan menghitung jumlah  larva A. salina yang  mati  karena  pengaruh  bahan  uji.    Hasil uji  toksisitas  menunjukkan  ekstrak  etanol  96%  dan ekstrak  air  dari  daun  jotang  kuda,  daun  gandarusa, dan daun pulutan mempunyai nilai LC 50 < 250 µg/ml, kecuali  ekstrak  etanol  96%  daun  jotang  kuda  dan daun gandarusa (Tabel 1). Hasil ini diperoleh setelah melakukan  analisis  probit  dengan  menghubungkan antara  kurva  log  konsentrasi  dan  nilai  probit berdasarkan  nilai    persentase  kematian  sel  (gambar 1). Berdasarkan nilai toksisitas LC 50 tersebut, ekstrak di  atas  dikategorikan  sangat  toksik  karena  berada diantara  0-250  µg/ml  (Anderson et  al .,  1991), sehingga memiliki potensi sebagai antikanker.
Berdasarkan  data  tabel  1,  ekstrak  yang  menunjukan potensi terbesar sebagai antikanker adalah ekstrak air daun gandarusa dengan nilai LC 50 terkecil 24.64µg/ml.  Toksisitas  ekstrak  air  daun  gandarusa karena  adanya  kandungan  metabolit  sekunder. Toksisitas  atau  aktivitas  antikanker  berhubungan dengan  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder, terutama alkaloid (Lu et al ., 2012), flavonoid (Panche et  al .,  2016),  dan  fenolik  (Koddami et  al .,  2013). Hasil  penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa ekstrak  air  dari  jus  daun  gandarusa  mengandung senyawa  alkaloid  dan  flavonoid  (Widiyanti et  al ., 2018).
Hasil  pengujian  golongan  senyawa  kimia  ekstrak  air daun gandarusa  yang  dilakukan  dengan uji Kromatografi Lapis Tipis pada plat silica gel GF 254, dengan fase gerak  yang digunakan  untuk identifikasi golongan  senyawa  flavonoid,  fenolik,  saponin,  dan steroid-terpenoid  adalah n -butanol-asam  asetat-air (3:1:1),  dan  alkaloid  menggunakan  fase  gerak kloroform-etil asetat-metanol (5:2:2). Hasil identifikasi  menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  daun gandarusa  mengandung  senyawa  flavonoid,  fenolik, alkaloid, saponin, dan steroid-terpenoid (Tabel 2).
Gambar 1. Hubungan log konsentrasi ekstrak dan nilai probit (% kematian dari larva A. salina )
y = 2.071x - 0.379 R² = 0.884 y = 4.136x - 3.432 R² = 0.912 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 P ro b it Log Konsentrasi Ekstrak Daun Jotang Kuda Etanol 96% Air Linear (Etanol 96%) Linear (Air) y = 4.913x - 9.045 R² = 0.866 y = 2.203x + 1.933 R² = 0.912 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 P ro b it Log Konsentrasi Ekstrak Daun Gandarusa Etanol 96% Air Linear (Etanol 96%) Linear (Air) y = 4.057x - 4.231 R² = 0.922 y = 3.081x - 0.951 R² = 0.863 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 0.5 1 1.5 2
2.5 3 3.5
P ro b it Log Konsentrasi Ekstrak Daun Pulutan
Etanol 96%
Air Linear (Etanol 96%)
Linear (Air)
Tabel 1. Toksisitas ekstrak etanol 96% dan ekstrak air dari daun jotang kuda, daun gandarusa, dan daun pulutan
Sampel Konsentrasi (µg/ml) Kematian Larva (%) LC 50 (µg/ml)
Jotang Kuda
Ekstrak Etanol 96% 100
16,67
395,60 200 16,67 400 40 600 73,3 800 76,67
Ekstrak Air
100
33,3
109,25 200 86,67 400 100 600 100 800 100 Gandarusa Ekstrak Etanol 96% 100
0 713,34 200
10 400 16,67 600 26,67 800 46,67
Ekstrak Air
100
90 24,64
200 97 400 100 600 100 800 100 Pulutan Ekstrak Etanol 96% 100
13,3 188,38 200
60 400 90 600 93,3 800 100 Ekstrak Air
100
63,3 85,37
200 90 400 90 600 100 800 100

## Tabel 2. Identifikasi Golongan Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Air Daun Gandarusa
Senyawa Pereaksi Eluen Rf Hasil Flavonoid AlCl 3 n- Butanol-Asam asetat-Air (3:1:1) 0,456 + 0,542 0,220 Fenolik FeCl 3 n-Butanol-Asam asetat-Air (3:1:1) 0,8 + Alkaloid Dragendroff Kloroform-Etil asetat-Metanol (5:2:2) 0,085 + Saponin H 2 SO 4 n-Butanol-Asam asetat-Air (3:1:1) 0,657 + Steroid Lieberman- Burchard n-Butanol-Asam asetat-Air (3:1:1) 0,8 + Terpenoid Lieberman- Burchard n-Butanol-Asam asetat-Air (3:1:1) 0,957 +
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun jotang  kuda,  daun  gandarusa,  dan  daun  pulutan memiliki  potensisebagai  antikanker,  khususnya ekstrak  air  daun  gandarusa  (LC 50 <  50  µg/ml). Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  ekstrak  jotang kuda  memiliki  aktivitas  antimikroba  dan  antioksidan (Wijaya et  al .,  2011).  Ekstrak  daun  gandarusa  telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan ( Mruthunjaya  &  Hukkeri,  2007). )  dan  aktivitas antivirus  ( Widiyanti et  al. ,2018;  Widodo,  2019). Ekstrak  metanol  daun  pulutan  juga  telah  dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan  dan  sitotoksik  (Ali et al .  2013).  Radikal  bebas  dan  virus  erat  kaitannya dengan faktor  pemicu  dari  kanker  ( Noda  and Wakasugi,  2001;  Maldonado et  al. ,  2016),  sehingga bahan  alam  dengan  aktivitas  antioksidan  dan antivirus  dapat  digunakan  sebagai  pencegahan  atau pengobatan  kanker. Hasil  penelitian  ini  sesuai denganhasil  studi  etnofarmasi  dari  ketiga  tumbuhan tersebut,  sehingga  berpotensi  untuk  diteliti  lebih lanjut sebagai agen antikanker.

## KESIMPULAN
Ekstrak daun jotang kuda, daun gandarusa, dan daun pulutan memiliki potensi sebagai antikanker, khususnya  ekstrak  air  daun  gandarusa  (LC 50 <  50 µg/ml).  Golongan  senyawa  kimia  yang  terkandung dalam  ekstrak  air  daun  gandarusa  adalah  alkaloid, flavonoid, fenolik, saponin, dan steroid-terpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisaputra, A.D., Syariful Anam., Akhmad Khumaidi. (2016). Studi Etnofarmasi Tumbuhan  Berkhasiat  Obat  Pada  Suku Dampelas  Di  Kabupaten  Donggala  Provinsi Sulawesi Tengah . Skripsi. Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetauan  Alam. Universitas Tadulako, Palu.
Ali,  M.  S.,  Faruq,  K.  O.,  &  Rahman,  M.  A.  A.
(2013).  Antioxidant  and  cytotoxic  activities  of methanol  extract  of  Urena  lobata  (L) Leaves. The Pharma Innovation , 2 (2).
Anderson,  J. E.,  Goetz,  C.  M.,  McLaughlin,  J.  L.,  & Suffness,  M.  (1991).  A  blind  comparison  of simple bench top bioassays and human tumour cell cytotoxicities as antitumor
prescreens. Phytochemical  analysis , 2 (3),  107- 111.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (1986). Sediaan  galenik . Jakarta:  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan .
Gleńsk,  M.,  Włodarczyk,  M.,  Radom,  M.,  & Cisowski,  W.  (2005).  TLC  as  a  rapid  and convenient method for saponin investigation. JPC-Journal of Planar Chromatography-Modern  TLC , 18 (102),  167- 170.
Islami,  M.  Y.,  Ibrahim,  N.,  &  Nugrahani,  A.  W. (2017). Studi Etnofarmasi Suku Kaili Moma di Kecamatan  Kulawi,  Kabupaten  Sigi,  Provinsi Sulawesi  Tengah. Jurnal  Farmasi  Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) , 3 (1), 27-33.
Kadase, R.F., Syariful Anam., & Akhmad Khumaidi.
(2017). Studi Etnofarmasi Tumbuhan Berkhasiat  Obat  Pada  Suku  Lalaleo  Di Kabupaten Tojo Una-Una Sulawesi Tengah.Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetauan Alam. Universitas Tadulako, Palu.
Koddami,  A.,  Wilkes,  &  MA  Roberts  T.H.  (2013). Techniques  for  Analysis  of  Plant  Phenolic Compounds , Molecules 18(2), 2328-2375 .
Kristanti,  A.  N.,  Aminah,  N.  S.,  Tanjung,  M.,  &
Kurniadi,  B.  (2008). Buku  Ajar  Fitokimia . Surabaya: Universitas Airlangga.
Lu, J.J, Bao, J.L., Chen, X.P., Huang, & Wang, Y.T. (2012), Alkaloids Isolated From Natural Herbs As  The  Anticancer  Agents. Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine. 2012, 485042
Maldonado,  J.,  Cao,  S.,  Zhang,  W.,  &  Mansky,  L.
(2016).  Distinct  morphology  of  human  T-cell leukemia virus type 1-like particles. Viruses , 8 (5), 132.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E., Jacobsen, L.B.,  Nichols,  D.E.  &  McLaughlin,  J.L. (1982).  Brine  shrimp:  a  convenient  general bioassay  for  active  plant  constituents. Planta med , 45 (5), 31-34.
Mruthunjaya,  K.,  &  Hukkeri,  V.  I.  (2007). Antioxidant  and  free  radical  scavenging potential  of  Justicia  gendarussa  Burm.  leaves in vitro. Natural Product Sciences , 13 (3), 199- 206.
Noda,  N.,  &  Wakasugi,  H.  (2001).  Cancer  and oxidative  stress. Japan  Medical  Association
Journal , 44 (12), 535-539.
Panche,  A.  N.,  Diwan,  A.  D.,  &  Chandra,  S.  R. (2016).  Flavonoids:  an  overview. Journal  of
Nutritional Science , 5 (47), 1-15.
Stahl,  E.  (1985). Analisis  obat  secara  kromatografi dan  mikroskopi . Penerjemah:  Padmawinata, K. dan I. Sudiro. Bandung: Penerbit ITB.
Wakmundzaka-Hajnos, M., Sherman, J., & Kowalika, T. (2008). Thin Layer Chromatography  in  Phytochemistry .  London: CRC Press.
WHO.  (2018).  https://www.who.int/news-room/fact- sheets/detail/cancer,  diakses  9  September 2019.
Widiyanti,  P.,  Prajogo,  B.,  &  Widodo,  A.  (2018).
Effect  of  varying  incubation  periods  on cytotoxicity  and  virucidal  activities of Justicia gendarussa Burm.  f.  leaf  extract  on  HIV- infected  MOLT-4  cells. African  journal  of infectious diseases , 12 (1S), 133-139.
Widodo,  A.  (2019).  Prediksi  Farmakokinetik, Toksisitas, dan Aktivitas Enzim Protease HIV- 1  Inhibitor  dari  Daun J.  gendarussa . Jurnal Farmasi Sains dan Terapan , 6 (1), 1-5.
Wijaya, S., Nee, T. K., Jin, K. T., Hon, L. K., San, L. H.,  &  Wiart,  C.  (2011).  Antibacterial  and antioxidant  activities  of Synedrella  nodiflora
(L.) Gaertn.(Asteraceae). Journal of Complementary and Integrative Medicine , 8 (1).
Wongkar,  J.  S.,  Runtuwene,  M.  R.,  &  Abidjulu,  J. (2015).  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Daun  Benalu Langsat  (Dendrophthoe  petandra  (L)  Miq) dengan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test. Jurnal MIPA Unsrat Online, 4(2), 157-160