EFEKTIVITAS PERASAN ASAM JAWA ( Tamarindus indica L ) TERHADAP PERTUMBUHAN

## BAKTERI Aeromonas hydrophila DENGAN METODE DIFUSI KERTAS CAKRAM
EFFECTIVENESS OF ThAMARIN JUICE ( Tamarindus indica L ) ON GROWTH OF BACTERIA Aeromonas hydrophila WITH PAPER DISC DIFFUSION METHOD
Rizky Aprilia Chrisanti, Laksmi Sulmartiwi dan Prayogo
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Fish disease  is one of the serious problems that faced by the  farmers potentially to make  high disadvantages as follows, mortality of fish and fish quality decrease, therefore economically will caused price  decrease.  Bacterial  pathogens  were  one  of  the  problems  that  were  faced  by  fish  farmers,  which cause  90%  of  mortality.  Diseases  control  caused  by Aeromonas  hydrophila in  general  using  by antibiotics.  Antibiotics  are  commonly  used  were  tetracycline,  oxolinic  acid,  erytromicin,  streptomycin, and  chloramphenicol.  Using  of  antibiotics  has  shown  good  results,  but  on  the  other  hand  using  of antibiotics or antibacterial cultivation would increased the bacteria number of resistant to antibiotics.
This research was purposed to find the alternative treatment of Motile Aeromonas Septicemia by determination ability of a squeeze of tamarind ( Tamarindus indica L ) and the minimum concentration of tamarind  ( Tamarindus  indica L )  to  inhibit  the  growth  of Aeromonas  hydrophila .  The  function  of tamarind as an antibacterial because they contain antibacterial substance such as flavonoids and saponins.
The results showed that the antibacterial power of tamarind juice has antibacterial power against Aeromonas  hydrophila .  Based  on  a  sentsitivity  test  was  performed  according  to  standard  of  antibiotic concentrations that are common to Aeromonas hydrophila , was Tetracycline inhibition zone with <15 mm diameter (not sensitive), 15-18 mm (moderately susceptible), >18 mm (very sensitive) is A (10%), and B (12.5%), treatment inhibition zone subsequently 13 mm and 14.3 mm (insensitive), C (15%), D (17.5%), with inhibition zone 15.5 mm and 16.6 mm (self-sensitive) and 20% with inhibition zone diameter of 19 mm (highly sensitive). Therefore, it was concluded that A treatment (15%) with inhibition zone 15.5 mm showed the  inhibition ability of Aeromonas hydrophila growth.
Keywords : Tamarindus indica L , Aeromonas hydrophil, Paper disc diffusion method

## Pendahuluan
Bakteri  patogen  merupakan  salah  satu masalah yang dihadapi oleh pembudidaya ikan, yang dapat menyebabkan kematian hingga 90 % (Marlina, 2008). Aeromonas hydrophila merupakan jenis bakteri yang banyak ditemukan di  perairan  tawar,  bakteri  ini  juga  dapat menginfeksi  hewan  air  bahkan  manusia. Aeromonas  hydrophila menyebabkan  penyakit Motile  Aeromonas  Septichemia (MAS)  atau penyakit  bercak  merah.  Bakteri  ini  menyerang berbagai jenis ikan air tawar.
Penanggulangan
penyakit
yang diakibatkan oleh bakteri Aeromonas hydrophila pada  umumnya  menggunakan  antibiotika. Penggunaan  antibiotika  tersebut  menunjukkan hasil  yang  baik, namun dipihak  lain pemakaian antibiotika atau antibakteri pada  budidaya akan meningkatkan  jumlah  bakteri  yang  resisten terhadap  antibiotika  tersebut  (Alderman  dan Michel, 1992 dalam Inglis et al ., 1997)
Salah  satu  alternatif  yang  dapat digunakan  untuk  pengganti  antibiotika  adalah bahan  alami.  Bahan  alami  yang  berpotensi sebagai  antibakteri  adalah  sari  buah  asam  jawa ( Tamarindus  indica  L )  Zat  kimia  dalam  asam jawa  adalah  senyawa  tannin,  saponin,  dan flavonoida (0.35-1.27 %) yang memiliki khasiat sebagai  antibakteri.  Selain  itu,  bahan  alami tersebut  tersedia  di  alam  dalam  jumlah berlimpah dan mudah didapat (Amando, 2011)

## Metodologi
Sterilisasi Sterilisasi  ditujukan  untuk  membunuh semua  mikroba  pencemar,  baik  mikroba menguntungkan  maupun  merugikan.  Semua peralatan  baik  alat  pembuatan  disterilisasi dengan autoklaf dengan suhu 121 o C tekanan 1,5 atm  selama  15  menit  (Nugroho,  2004), kemudian  dimasukkan  pada oven pada  suhu 180 0 C selama 1 jam, untuk peralatan yang tidak tahan panas hanya dicuci menggunakan alkohol
70%,  untuk  bahan  cairan  yang  tidak  tahan terhadap panas langsung maupun tidak langsung seperti  larutan  gula  –  gula  dan  perasan  buah asam  jawa  proses  sterilisasi  dapat  dilakukan menggunakan  metode  penyaringan  mengguna- kan filter membran.
Pembuatan Perasan Buah Asam Jawa Buah  asam  jawa  ( Tamarindus  indica
L)  diperoleh  dari  koleksi  Taman  Flora Surabaya.  Pembuatan  sari  buah  asam  jawa menggunakan  buah  segar sebanyak 300 g  yang diambil  pada  bagian  buah  yang  masih  muda dengan  ciri-ciri  kulit  buah  berwarna  coklat kehijauan,  kemudian  buah  dicuci  bersih, dikupas,  dipisahkan  dari  kulit  dan  bijinya  dan diambil  sarinya  dengan  menggunakan mortir tanpa ditambahkan Aquadest kemudian disaring dengan  saringan,  cairan  yang  tersaring kemudian  di sentrifuge untuk  mendapatkan supernatant.
Identifikasi Bakteri Aeromonas hydrophila Isolat  bakteri Aeromonas  Hydrophilla diperoleh  dari  Balai  Karantina  Ikan  Juanda. Sebagai  langkah  awal,  dilakukan  peremajaan terhadap koloni
bakteri A eromonas
Hydrophilla. Sebelum  digunakan,  bakteri dibiakkan terlebih dahulu pada media NA pada cawan  petri,  media  NA  yang  telah  diinokulasi dengan  bakteri  diinkubasi  pada  suhu  27-28 0 C selama 24 jam, kemudian dilanjutkan pewarnaan  Gram  dan  uji  biokimia  untuk memastikan  bahwa  isolat  yang  digunakan benar-benar murni Aeromonas hydrophila .
Persiapan Suspensi Bakteri Aeromona hydrophila Bakteri Aeromonas  hydrophila yang akan  digunakan  terlebih  dahulu  disetarakan kekeruhannya dengan standar Mc Farland 1 cara penyetaraan adalah sebagai berikut : mengambil 4-10  koloni  bakteri  kemudian  diencerkan dengan  menggunakan  larutan  NaCl  Fisiologis kemudian    disetarakan  kekeruhannya  dengan Mc  Farland  1,  sehingga  jumlah  bakteri  yang terdapat  didalamnya  setara  dengan  300x10 6 sel/mL,  kemudian  diambil  sebanyak  0,2  ml setara dengan 200 mikroliter dengan menggunakan  mikropipet  terkalibrasi  ukuran 100-1000  mikroliter,  kemudian  diteteskan  pada media agar dan diratakan dengan spatula , begitu seterusnya.
Persiapan  Perasan  Buah  Asam  Jawa  dengan Berbagai Konsentrasi
Metode yang digunakan pada penelitian  ini  metode  difusi  dengan  berbagai kosentrasi perasan buah asam jawa. menyiapkan 6  tabung  reaksi  dari  konsentrasi  10%,  12,5%, 15%, 17,5% dan 20% . Pada tabung konsentrasi 10%  diisi  0,1  ml  sari  buah  asam  jawa  dan ditambahkan  0,9  ml  akuades  steril,  pada konsentrasi 12,5% diisi 0,125  ml perasan buah asam  dan ditambahkan 0,875 ml akuades, pada konsentrasi  15%  tabung  reaksi  diisi  0,15  ml perasan  buah  asam  dan  ditambahkan  0,85    ml akuades,  pada  konsentrasi  17,5% tabung  reaksi diisi    dengan  0,175  ml  perasan  buah  asam  dan ditambahkan    0,825    ml  akuades,  dan  terakhir pada  konsentrasi  20%    tabung  reaksi  diisi dengan  0,2  ml  perasan  buah  asam  dan ditambahkan  0,8  ml  akuades.  Kemudian dilakukan  perendaman  kertas  cakram  sampai jenuh (antara 15-20 menit), setelah itu ditiriskan dan  dikering  anginkan  sampai  tidak  menetes kemudian  kertas  cakram  yang  berisi  bahan antibakteri  ditanam  pada  media  TSA  yang sudah  diberi  suspensi  bakteri  yang  telah diratakan dengan spatel bengkok.
Penentuan Zona Hambat
Cara  pembacaan  hasil  sari  buah  asam jawa terhadap pertumbuhan mikroba Aeromonas  hydrophila dengan  melihat  zona hambat,  menggunakan  luas  zona  bening  yang dihasilkan  di  sekitar  kertas  cakram  yang terbentuk  kemudian  mengukur  diameter  zona hambat  dengan  jangka  sorong.  Diambil  satu titik  pada  tepi  zona  hambat  kemudian  ditarik garis  tengah,  diukur  dengan  menggunakan jangka sorong dilakukan sebanyak tiga kali pada tepi  zona  hambat  tiap  konsentrasi  kemudian diambil  rata-rata  dari  ketiga  pengukuran.  Hasil rata-rata merupakan diameter zona hambat pada konsentrasi  tersebut  (Caroline,  2010).  Hasil pengukuran  zona  hambat  semua  perlakuan kemudian  dibandingkan  dengan  zona  hambat standar.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan  hasil  uji  efektivitas perasan  asam  jawa  dengan  pengamatan    yang secara  visual  menunjukkan  bahwa  konsentrasi perasan  asam  jawa  10%  sampai  20%  zona hambat  yang  dihasilkan  semakin  lebar.  Hasil pengamatan secara visual tersebut menunjukkan bahwa  semakin  besar  konsentrasi  yang diberikan  maka  semakin  besar  zona  hambat yang  dihasilkan  semakin  lebar.  Dapat  dilihat pada Tabel 1.
Hal  ini  dapat  dilihat  pada  konsentrasi tertinggi  yaitu  pada  perlakuan  E  (20%)  zona hambat  yang  terbentuk  sebesar  19  mm,  pada konsentrasi  terkecil  yaitu  pada  perlakuan  A (10%)  zona  hambat  yang  terbentuk  adalah sebesar 13 mm. Hal ini sesuai dengan Jawetz et al (2001)  yang  mengatakan  bahwa  daerah hambatan  yang  terbentuk  setelah  inkubasi  18– 24 jam dianggap sebagai ukuran kekuatan suatu antibiotika  terhadap  kuman  yang  diperiksa. Namun demikian penggunaan bahan antibakteri di  lapangan  hendaknya  digunakan  seminimal mungkin  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri Aeromonas hydrophila . Menurut Bauer dkk (1966) dalam Volk (1992),  Standar  umum  diameter  daerah hambatan pertumbuhan bakteri  yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  menggunakan standar  antibiotika  yang  biasa  digunakan  untuk mengatasi  penyakit  yang  disebabkan  oleh Aeromonas hydrophila yaitu antibiotika Tetracycline  sebagai  pembanding.  Tetracycline dikatakan  peka  apabila  zona  hambat  yang terbentuk  sebesar  15-18  mm  maka  untuk meminimalkan  penggunaan  bahan  dipilih perlakuan  C  (15%)  perasan  asam  jawa,  karena pada  perlakuan  C  (15%)  perasan  asam  jawa sudah mampu menghambat Aeromonas hydrophila sesuai dengan antibiotika
pembanding  yang  biasa  digunakan  yaitu Tetracycline.

## Kesimpulan
Jenis  bahan  antibakteri  yang  terdapat dalam  suatu  tanaman  juga  menentukan kemampuan  bahan tersebut dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Aeromonas  hydrophila disamping  faktor  besarnya  konsentrasi.  Dalam penelitian  ini  penggunaan  buah  asam  jawa karena  didalam  buah  asam  jawa  terdapat beberapa  senyawa  aktif  yang  bersifat  anti bakteri.  Kandungan  kimia  yang  terkandung dalam  daging  buah,  daun    dan  batang  tanaman
buah  asam  jawa    adalah  tannin,  saponin,  dan flavonoida.

## Daftar Pustaka
Alderman,  D.  J.,  and  C.  Michel.  1992. Chemoteraphy  in  Aquaculture  Today. In:  edited  by  C.  Michel  and  D.  J
Alderman, 3-24. Paris; Office
International des Epizooties.
Amando, Rodriguez, J. 2011. Standardization of
The Quality Control Parameters of The Tamarindus  indica  L Soft  extract. Uviversity  of  Oriente.  Santiago  de
Cuba. Cuba. Caroline,  L.  2010.  Daya  Hambat  Ekstrak Tamarindus Indica Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  pada  Recurrent Aphthous  Stomatitis  (RAS).  Skripsi.
Fakultas  Kedokteran  Gigi.  Universitas Airlangga. Surabaya.
Volk, W.A. 1992. Basic  Microbiology, seventh edition.  Harper  Collins  Publisher  Inc. School  of  Medicine.  University  of Virginia. New York.
Jawetz  E,  Melnick  GE,  and  Adelberg  E. A. 2001.  Mikrobiologi  kedokteran.  Edisi
I.  Diterjemahkan  oleh  Penerjemah Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran  Universitas  Airlangga. Salemba  Medika, Surabaya. 224-228 Marlina, L. 2008. Pengaruh Crude Serbuk Sirih ( Piper  batle )  Terfermentasi  Terhadap Penghambatan Bakteri Patogen Aeromonas  hydrophila Pada  ikan Gurame ( O. gouramy ), Skripsi. Program  Studi  Sarjana  Mikrobiologi SITH. Institut Teknologi Bandung. Nugroho,  A.  2004.    Pedoman  Pelaksanaan Teknik  Kultur  Jaringan.  Penebar Swadaya. Jakarta.
Tabel 1.  Hasil Pengukuran Rata-Rata Diameter Zona Hambat yang Terbentuk dari Uji Efektivitas Perasan
Asam Jawa
Konsentrasi Perasan Asam Jawa Diameter Zona Hambat (mm) Kriteria Diameter Zona Hambat Antibiotika Tertracyclin Tidak peka (15< mm) Cukup peka (15-18 mm) Sangat peka (>18 mm) A (10 %) 13 V B (12,5 %) 14,3 V C (15 %) 15,5 V D (17,5 %) 16,6 V E (20 %) 19 V F (0%) 0 V Tetracicline 15 V