## IDENTIFIKASI PERUBAHAN FENOTIP PADI BERAS HITAM ( Oryza sativa L.) var CEMPO IRENG HASIL PERLAKUAN KOLKISIN
Putu Shantiawan Prabawa 1 , Jhon Hardy Purba 1
E-mail : putushantiawan@gmail.com
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Panji Sakti Jl. Bisma, No 22 Singaraja 81116, Bali, Indonesia
Abstract. The use of colchicine chemical mutagens as ingredients to induce polyploidies in plants provides an opportunity for increased production of black rice, which until now has low productivity. This is related to the many  benefits  of  black  rice  for  health,  thus  causing  increased  consumer  demand.  It  is  hoped  that  the  various doses of colchicine can increase gene doses, so plants have a better appearance and production. The purpose of this study  was to identify phenotype changes in the genotype of black rice (Oryza  sativa L.) var Cempo Ireng due  to  the  treatment  of  various  doses  of  colchicine.  The  study  used  a  single  plot  design  with  four  colchicine concentration treatments (0, 250, 500 and 750 ppm) on two black rice genotypes (Ungaran and Cempo Ireng). Data  analysis  used  a  significant  independent  t-test  level  of  5%.  The  results  showed  that  the  treatment  of colchicine with a concentration of 750 ppm was effective in inducing mutations that caused phenotypic changes in most plant characters in both genotypes.
Keywords: Black rice, colchicine, phenotype changes, qualitative and quantitative characters.
Abstrak. Penggunaan  mutagen  kimiawi  kolkisin  sebagai  bahan  untuk  menginduksi  poliplodi  pada  tanaman, memberikan  peluang  bagi  peningkatan  produksi  beras  hitam  yang  sampai  saat  ini  produktivitasnya  masih rendah.  Hal  ini  berkaitan  dengan  banyaknya  manfaat  beras  hitam  untuk  kesehatan,  sehingga  menyebabkan meningkatnya permintaan konsumen. Perlakuan berbagai dosis kolkisin diharapkan mampu meningkatkan dosis gen,  sehingga  tanaman  mimiliki  penampilan  dan  produksi  yang  lebih  baik.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengidentifikasi  perubahan  fenotip  pada  genotip  padi  beras  hitam  ( Oryza  sativa L.)  var  Cempo  Ireng akibat  perlakuan  berbagai  dosis  kolkisin.  Penelitian  menggunakan  desain  petak  tunggal  dengan  4  perlakuan konsentrasi colchicine (0, 250, 500 dan 750 ppm) pada 2 genotipe padi beras hitam (Ungaran dan Cempo Ireng). Analisis  data  menggunakan  independent  t-test  level  signifikan  5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  perlakuan kolkisin  dengan  konsentrasi  750  ppm  efektif  dalam  menginduksi  mutasi  sehingga  menyebabkan  perubahan fenotip pada sebagian besar karakter tanaman pada kedua genotip.
Kata kunci: Beras hitam, kolkisin, perubahan fenotip, karakter kualitatif dan karakter kuantitatif.

## PENDAHULUAN
Kesadaran  masyarakat  yang  kian meningkat terhadap kesehatan, berdampak pada  semakin  meningkatnya  permintaan beras  hitam  sebagai  sumber  karbohidrat alternatif  bagi  penderita  diabetas.  Beras dengan  pigmen  warna  memiliki  indeks glikemik  yang  lebih  rendah  dibandingkan beras pada umumnya, salah satu faktornya ialah  kandungan  serat  yang  lebih  tinggi sehingga  baik  untuk  penderita  diabetes (Larasati,  2013).  Warna  hitam  tersebut menunjukkan terjadi akumulasi kandungan antosianin  (Maeda  et  al.,  2014)  yang merupakan  senyawa  fenolik  kelompok flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan. Peningkatan permintaan masyarakat  berbanding  terbalik  terhadap produksi  beras  hitam.  Hal  ini  disebabkan oleh  varietas  lokal  padi  beras  hitam  yang dibudi  dayakan  petani  umumnya  memiliki
produksi  yang  rendah  dan  umur  panen yang lama.
Pemulia  tanaman  berupaya  untuk mendapatkan  komoditas  padi  beras  hitam dengan  produksi  tinggi  dan  umur  panen yang  cepat,  namun  masih  terkendala  oleh lamanya  waktu  dan  proses  yang  panjang jika melalui program pemuliaan konvensional.  Pemuliaan  secara  non- konvensional  menjadi  alternatif  karena lebih  efisien  waktu.  Salah  satu  program pemuliaan  non-konvensional  yang  banyak digunakan  ialah  pembentukan  tanaman poliploidi  menggunakan  bahan  kimia kolkisin.  Manipulasi  poliploidi  dilakukan untuk mendapatkan organisme yang mempunyai  lebih  dari  dua  set  kromosom (2n) untuk memperbaiki mutunya. Nura et al (2013)  menyatakan  banyaknya  laporan keberhasilan penggunaan mutagen
kimiawi  dalam  meningkatkan  sifat-sifat tanaman pada beberapa spesies.
Senyawa
kolkisin dapat menghalangi  terbentuknya  benang-benang spindel  pada  fase  anafase,  sehingga terbentuk  individu  yang  memiliki  jumlah kromosom berlipat (lebih dari 2x) sehingga  menjadi  individu  yang  poliploid (Chahal  dan  Gosal,  2002).  Peningkatan jumlah kromosom menyebabkan perubahan pada beberapa karakter (fenotip)  tanaman,  seperti  ukuran  organ yang lebih besar sehingga dapat meningkatkan produksi tanaman.
Pembentukan poliploidi pada tanaman padi sudah  dilakukan  sejak  lama  dan  terus mengalami  perkembangan.  Ghosh  telah melakukan  penelitian  pengaruh  kolkisin pada  tanaman  padi  pada  tahun  1949, dengan  melakukan  perendaman  pada kecambah  padi  pada  larutan  kolkisin dengan  konsentrasi  0,05%,  0,1%,  0,5% dan  1%  selama  2  jam.  Hasil  yang didapatkan  adalah  tidak  ada  kecambah yang dapat bertahan setelah diberi perlakuan 0,1% dan 1% kolkisin.
BAHAN DAN METODE Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Pemuliaan
Tanaman,
Fakultas  Pertanian,  Universitas  Brawijaya dan  kelurahan  Dadaprejo,  kecamatan Junrejo,  kota  Batu.  Penelitian  telah dilaksanakan  pada  bulan  Septermber  2015 –  Maret  2016.  Bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  antara  lain  genotip lokal  padi  hitam  varietas  Cempo  Ireng, bubuk kolkisin, DMSO (dimetil sulfoxide, (CH 3 ) 2 SO),  aquades  (H 2 O),  plastik  dan pasir. Aplikasi pupuk menggunakan pupuk kandang,  pupuk  Urea  (45%  N),  SP-36 (36%  P 2 O 5 )  dan  KCl  (60%  K 2 O). Pengendalian hama dan penyakit menggunakan insektisida dan fungisida.
Perkecambahan benih padi dilakukan  dengan  cara  merendam  benih padi  beras  hitam  var  Cempo  Ireng  selama ±  3  hari.  Kecambah  yang  telah  telah tumbuh  selanjutnya  direndam  kolkisin dengan  perlakuan  konsentrasi  kontrol  (CI- K0),  250  ppm  (CI-K250),  500  ppm  (CI-
K500) dan 750 ppm (CI-K750). Perendaman  dilakukan  selama  6  jam  pada masing-masing  konsentrasi.  Persemaian dilakukan  pada  bak  semai  dengan  media pasir  yang  telah  dicuci  dengan  air  untuk membersihkan  dari  kotoran  atau  jamur yang dapat merusak bibit padi. Persemaian dilakukan  selama  10  –  14  hari  setelah perlakuan  kolkisin.  Setelah  ±  14  hari setelah  semai,  dilakukan  transplanting pada lahan dengan jarak tanam 30 cm x 30 cm,  dan  jarak  antar  perlakuan  200  cm. Penelitian  menggunakan  Rancangan  Petak Tunggal  dengan  menggunakan  metode single  plant yaitu  pengamatan  setiap individu  tanaman  di  lahan.  Data  kualitatif dianalisis menggunakan statistika deskriptif,  sedangkan  data  kuantitatif dianalisis  menggunakan  uji  t-independent pada taraf kepercayaan 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakter Kualitatif
Pemberian  senyawa  kolkisin  dapat mempengaruhi penampilan karakter tanaman. Pemberian kolkisin dengan dosis yang  tepat  dapat  menyebabkan  tanaman menjadi  poliploid,  namun  jika  pemberian konsentrasi  terlalu  tinggi  ataupun  waktu perendaman  kolkisin  terlalu  lama  dapat menyebabkan kerusakan pada sel tanaman hingga  menyebabkan  kematian  tanaman. Hasil  pengamatan  persentase  tanaman hidup  pada  genotip  padi  beras  hitam  var Cempo  Ireng  menunjukkan  hasil  yang bervariasi.  Pada  grafik  terlihat  semakin tinggi  konsentrasi  kolkisin  persentase tanaman  hidup  akan  semakin  menurun, dengan  kata  lain  antara  peningkatan konsentrasi  kolkisin  dengan  persentase tanaman hidup berbanding terbalik. Persentase  tertinggi  ditunjukkan  pada perlakuan kontrol (CI-K0) dengan persentase  90,91%,  diikuti  oleh  perlakuan CI-K250  dengan  nilai  90,45%,  CI-K500 dengan  persentase  73,18%  dan  persentase terendah  ditunjukkan  oleh  perlakuan  CI- K750  dengan  persentase  kelangsungan hidup 55%.
Gambar 1.  Persentase tanaman hidup pada genotip padi beras hitam var Cempo Ireng pada berbagai konsentrasi kolkisin.
Penurunan persentase tanaman hidup  secara  signifikan  pada  kecambah padi  beras  hitam  yang  diberi  perlakuan kolkisin  menunjukkan  telah  terjadinya reaksi  induksi  kolkisin.  Reaksi  tanaman ketika diinduksi kolkisin dalam dosis besar adalah  terjadinya  kerusakan  pada  sel tanaman  yang  menyebabkan  tanaman menjadi kerdil bahkan mati. Hal ini sesuai dengan  hasil  penelitian  Mensah et  al (2007) pada tanaman wijen yang
menunjukkan terjadinya penurunan persentase  perkecambahan  sejalan  dengan peningkatan pemberian konsentrasi kolkisin.  Ajayi et  al (2014)  menyatakan perlakuan  perendaman  kolkisin  dengan konsentrasi yang tinggi cenderung menurunkan  persentase  tanaman  hidup dibandingkan  dengan  tanaman  kontrol yang  disebabkan  oleh  adanya  kerusakan sel tanaman.
Tabel 1. Warna Kulit Ari Beras Genotip Kontrol dan Genotip dengan Perlakuan.
Perlakuan Kode Warna Warna CI-K0 Pantone 19-3713 Tpx Deep wall CI-K250 Pantone 19-3713 Tpx Deep wall CI-K500 Pantone 19-3713 Tpx Deep wall CI-K750 Pantone 19-3713 Tpx Deep wall
Pada karakter warna kulit ari beras, perlakuan  kolkisin  yang  diberikan  pada Cempo  Ireng  belum  memberi  pengaruh perubahan  warna  secara  nyata.  Hal  ini terlihat  dari  warna  kulit  ari  beras  yang belum  menunjukkan  perubahan  warna antara  tanaman  kontrol  dengan  tanaman perlakuan.    Genotip  Cempo  Ireng,  CI-K0 memiliki  warna  Deep  Wall  (Pantone  19- 3713  Tpx),  tipe  warna  yang  sama  juga ditunjukkan  oleh  perlakuan  CI-K250,  CI- K500  dan  CI-K750.  Malihah  (2011) melaporkan hal yang sama pada penelitian kedelai  hasil  mutasi,  dilaporkan  terjadi
warna  hipokotil,  warna  bunga,  dan  warna daun  yang  sama  antara  tanaman  yang diinduksi kolkisin dengan tanaman kontrol.  Warna  yang  tidak  berubah  pada kulit  ari  beras  pada  tanaman  yang diinduksi kolkisin, dapat disebabkan karena  warna  kulit  ari  beras  adalah karakter  kualitatif  yang  dikendalikan  oleh gen sederhana, sehingga pengaruh perlakuan  kolkisin  yang  menyebabkan mutasi  pada  kromosom  belum  bisa mempengaruhinya,  peran  lingkungan  juga kurang berpengaruh pada perubahan
0 50 100 150 200 250 0 250 500 750 Tan am an H id u p ( % ) Konsentrasi Kolkisin (ppm) Persentase Tanaman Hidup Cempo
karakter  kualitatif  (warna  bulir)  yang diamati (Poespodarsono, 1988).

## Karakter Kuantitatif
Pengaruh induksi kolkisin terhadap karakter tinggi tanaman menunjukkan hasil yang  berbeda  nyata  pada  perlakuan  CI- K250.  Induksi  kolkisin  pada  CI-K250 menunjukkan  adanya  penurunan  nilai rerata  tinggi  tanaman.  Pengaruh  induksi kolkisin  yang  beragam  terhadap  karakter tinggi  tanaman  dilaporkan  pada  hasil
penelitian  lainnya.  Pandey  (2008)  dan Vanous (2011) menyatakan bahwa kolkisin mampu menghambat pertumbuhan tinggi tanaman yang diakibatkan  oleh  terjadinya  kerusakan  sel- sel tanaman ketika proses induksi. Perbedaan  pengaruh  yang  terjadi  setelah diinduksi  kolkisin  dapat  disebabkan  oleh berbagai faktor seperti tingkat konsentrasi, lama perendaman hingga kecepatan tanaman dalam menyerap senyawa kolkisin.
Gambar 2. Perbandingan warna kulit ari beras antara tanaman kontrol dengan tanaman perlakuan genotip Cempo Ireng.
Karakter jumlah daun per rumpun menunjukkan peningkatan nilai rerata pada CI-K500 dan CI-K750. Terjadinya penambahan  jumlah  daun  ini  dapat disebabkan  oleh  terjadinya  penambahan genom  tanaman  dari  diploid  menjadi poliploid  sebagai  efek  pemberian  kolkisin (Wistiani,  2004).  Pada  karakter  panjang malai CI-K500 dan CI-K750 juga
menunjukkan  terjadinya  peningkatan  nilai rerata  panjang  malai.  Menurut  Ghosh (1949)  perlakuan  induksi  kolkisin  pada tanaman  padi  dapat  menyebabkan  malai padi dan daun bendera menjadi lebih besar dan  panjang.  Hal  ini  dapat  disebabkan peningkatan  ploidi  tanaman  dari  diploid menjadi poliploid sehingga ukuran tanaman menjadi lebih kekar dan besar.
Tabel 2. Rerata Karakter Tanaman pada Padi Beras Hitam var Cempo Ireng
No Characteristics CI-K0 CI-K250 CI-K500 CI-K750 1 Tinggi tanaman                  (cm) 97,59 93,44** 96,82 tn 97,46 tn 2 Jumlah daun                       (lembar) 67 69 ns 93** 138** 3 Panjang malai                     (cm) 23,52 23,61 ns 23,79 ns 25,09** 4 Jumlah anakan 19 20 ns 27** 39** 5 Jumlah anakan produktif 19 19 ns 24** 33** 6 Persentase gabah isi            (%) 60,68 61,90 ns 62,54* 65,11** 7 Bobot 100 biji (gram) 2,42 2,37** 2,58**    2,54** 8 Bobot total biji per tanaman  (gram)    32,73 37,01** 51,92**  77,84**
Keterangan: (**) = sangat nyata, (*) = nyata, (tn) = tidak nyata, diuji dengan Uji T taraf 5% dengan kontrol sebagai pembanding.
Induksi  kolkisin  memberikan  pengaruh nyata terhadap peningkatan jumlah anakan,  pada  perlakuan  CI-K500  dan  CI- K750.  Terjadinya  penambahan  jumlah anakan  juga  diikuti  oleh  penambahan jumlah anakan produktif. Hal ini dikarenakan  adanya  keterkaitan  antar kedua  parameter  ini.  Ghosh  (1949) menyebutkan  terjadi  peningkatan  jumlah anakan yang signifikan pada tanaman padi yang direndam kolkisin 500 ppm selama 2 jam. Pengaruh kolkisin terhadap peningkatan jumlah anakan juga disebutkan pada tanaman gandum (Siddiqi dan  Marwat,  1983).  Penambahan  jumlah anakan dapat disebabkan oleh meningkatnya  jumlah  akar  pada  tanaman padi  setelah  diberi  perlakuan  kolkisin, sehingga pertumbuhan tunas anakan semakin meningkat. Meningkatnya jumlah anakan    maka  kemungkinan  peningkatan jumlah  anakan  produktif  akan  semakin besar.
Perlakuan kolkisin
mampu meningkatkan  persentase  gabah  isi  pada tanaman  yang  diinduksi  seperti  yang ditunjukkan CI-K500 dan CI-K750. Peningkatan  persentase  gabah  isi  ini berkaitan  dengan  tingkat  fertilitas  polen. Perlakuan induksi poliploid dapat mempengaruhi  tingkat  fertilitas  polen tanaman  melalui  beberapa  mekanisme yaitu  mekanisme  heterosis,  panambahan gen  dan  hilangnya self  incompatibility
serta  keuntungan  dari  reproduksi  aseksual (Comai, 2005).
Bobot  100  biji  dari  tanaman  padi hitam yang diinduksi kolkisin menunjukkan hasil beragam.  Pada  genotip Cempo  Ireng  perlakuan  CI-K250  terjadi penurunan  bobot  100  biji,  sedangkan perlakuan  CI-K500  dan  CI-K750  terjadi peningkatan  nilai  rerata  bobot  100  biji. Siddiqi  dan  Marwat  (1983)  melaporkan bahwa  terjadi  penurunan  nilai  bobot  100 biji  pada  tanaman  gandum  yang  diberi perlakuan  kolkisin.  Kondisi  ini  terjadi karena  perlakuan  induksi  kolkisin  dapat mempengaruhi  proses  metabolisme  dan reaksi  enzim  pada  tanaman  sehingga pengisian biji menjadi tidak optimal. Hasil berbeda  didapat  oleh  Nura et  al (2011) pada  tanaman  wijen  yang  menunjukkan terjadinya  peningkatan  bobot  1000  biji setelah diberi perlakuan kolkisin.
Pemberian kolkisin juga meningkatkan bobot total biji per tanaman pada  semua  perlakuan.  Peningkatan  rata- rata  bobot  total  biji  per  tanaman  yang paling  tinggi  ditunjukkan  pada  CI-K750 sebesar  77,84  g  tanaman-1  (Tabel  1). Peningkatan  bobot  total  biji  per  tanaman akibat  pemberian  kolkisin  dengan  dosis yang  cukup  tinggi  juga  dilaporkan  pada tanaman  kacang  hijau.  Aplikasi  kolkisin sebesar  1000  ppm  menghasilkan  bobot total  biji  per  tanaman  pada  kacang  hijau yang  lebih  tinggi  dibandingkan  tanaman kontrolnya (Herman et al ., 2013).
Tabel 3. Data Umur Berbunga (50%) dan Umur Panen (50%)
Perlakuan Umur Berbunga (hst) Umur Panen (hst) CI-K0 120 150 CI-K250 116 146 CI-K500 117 147 CI-K750 122 152 Karakter umur berbunga
berhubungan  erat  dengan  umur  panen. Pada  CI-K250  dan  CI-K500  pengaruh kolkisin  menyebabkkan  umur  berbunga dan  umur  panen  yang  lebih  cepat
dibandingkan kontrol namun tidak signifikan.  Perbedaan  umur  berbunga  dan umur  panen  antara  kontrol  dan  perlakuan berkisar  2-3  hari.  Hasil  yang  sama dilaporkan  pada  penelitian  Roychowdhury
dan  Jagatpati  (2011)  menunjukkan  umur berbunga  yang  lebih  cepat  pada  tanaman yang diberi perlakuan dibandingkan kontrolnya. Pengaruh yang berbeda ditunjukkan  CI-K750  yang  menunjukkan umur berbunga dan umur panen lebih lama dibandingkan dengan kontrol. Umur berbunga dan umur panen yang lebih lama akibat  induksi  kolkisin  juga  dilaporkan oleh  Ajayi  et.al.,  (2014)  pada  tanaman kacang  tunggak.  Hal  ini  dapat  disebabkan akibat  konsentrasi  kolkisin  yang  tinggi sehingga  merusak  sel  tanaman  ketika mutasi, yang berakibat pertumbuhan tanaman  menjadi  lebih  lambat,  sehingga peralihan  dari  fase  vegetatif  ke  generatif menjadi  lebih  lama.  Secara  umum, tanaman  poliploid  memiliki  ciri  yaitu waktu  berbunga  yang  lebih  lambat  dan bervariasi (Dnyansagar, 1992).

## SIMPULAN
Peningkatan  konsentrasi  induksi kolkisin  dapat  menurunkan  persentase tanaman  hidup  pada  padi  beras  hitam  var Cempo  Ireng.  Tidak  terjadi  perubahan warna kulit ari beras (Deep Wall (Pantone 19-3713  Tpx)  pada  tanaman  yang  diberi perlakuan kolkisin. Induksi kolkisin dengan konsentrasi 250 ppm, 500 ppm dan 750  ppm  menunjukkan  efek  perubahan fenotip  secara  spesifik  pada  beberapa karakter  tanaman.  Perlakuan  CI-K250 menyebabkan  penurunan  karakter  tinggi tanaman  dan  bobot  100  biji  namun menyebabkan  peningkatan  pada  karakter bobot  total  biji  pertanaman.  Perlakuan CI-K500  terjadi  peningkatan  hampir  pada semua karakter tanaman terkecuali karakter tinggi tanaman dan panjang malai. Perlakuan  CI-K750  efek  kolkisin  tidak tampak  hanya  pada  karakter  tinggi tanaman.  Secara  umum,  induksi  kolkisin belum berpengaruh signifikan pada perubahan umur berbunga dan umur panen yang perubahannya hanya 2-3 hari.

## REFERENSI
Maeda,  H.,  T,  Yamaguchi.,  M,  Omoteno.,
T, Takarada., K, Fujita., K, Murata.,
Y, Iyama., Y, Kojima., M,
Morikawa.,  H,  Ozaki.,  N,  Mukaino., Y,  Kidani.,  and  T,  Ebitani.  2014. Genetic  Dissection  of  Black  Grain Rice by The Development of a Near Isogenic  Line.  Breed  Sci.  64:  134- 141.
Chahal,  G.S.  and  S.S.  Gosal,  2002. Principles  and  Procedures  of  Plant Breeding Biotechnological and Conventional  Approaches.  Alpha Science  International  Ltd.  Harrow, U.K, pp.413-428.
Ajayi,  Abiola  T.,  Akinlolu  O.  Ohunakin, Oluwatoyin S. Osekita, dan Opeyemi C. Oki. 2014. Influence of Colchicine  Treatments  on  Character Expression  and  Yield  Traits  in Cowpea  ( Vigna  Unguiculata L . Walp ).  Global  Journal  of  Science Frontier  Research:  C  Biological Science.  Akungba-Akoko.  (14):14- 20.
Mensah,  J.K.,  Obadoni  B.O.    Akomeah P.A.,  Ikhajiagbe  B.  dan  Ajibolu  J. 2007.  The  Effects  of  Sodium  Azide and Colchicine Treatments on Morphological  and  Yield  Traits  of Sesame  Seed  ( Sesame  indicum L.). African  Journal  of  Biotechnology. Edo State dan Abuja. 6(5):535-538.
Vanous,  A.E.  2011.  Optimization  of Doubled  Haploid  Production  in Maize  ( Zea  mays L.)  Iowa  State University. 30 pp.
Pandey,  Ram  Milan.  2009.  Genetic Divergence  of  Parents  and  F2 Segregation  in  Grain  Amaranthus.
Cien. Inv. Agr. 36(1) : 77-84.
Luitel,  B.  P.  dan  W.  H.  Kang.  2012.  In- Vivo  Chromosome  Doubling  with Colchicine  in  Haploid  Plants  of Minipaprika ( Capsicum  annuum L.). Journal  of  Agricultural,  Life  and Environmental Sciences . 24(3):1-8.
Rustikawati.,  C.Herison,  dan  H.  Sutjahjo.
2010. Keragaan
Pertumbuhan
Vegetatif  dan  Reproduktif  Hibrida Jagung  Persilangan  Galur  Inbrida
Mutan  (M4)  pada  Latosol  Darmaga. JIPI. 12 (1):55-60. Ghosh, B., N. 1949. Physiological  Studies On  The  Effect  Of  Colchicine  On Rice  II.  Department  Of  Botany. Calcutta University. 3(16):135-145. Siddiqi, Saeedul H. dan Khan Bahadar M. 1983.  Cytomorphological  Effects  of Colchicine  on  Wheat  ( Triticum aestivum). Pakistan J. Agric. Agricultural  University  Peshawar.
2(4): 120–125.
Comai,  L.  2005.  The  Advantages  and
Disadvantages  of  Being  Polyploid. Nature  Publishing  Group.  6  :  837- 846 Nura, S., A.K. Adamu,  S. Mu’ Azu, D.B. Dangora dan L.D. Fagwalawa. 2013.
Morphological  Characterization  of Colchicine-induced
Mutants in
Sesame  ( Sesamum  indicum L.).
Journal  of  Biological  Sciences. Nigeria.13(4): 277-282. Herman.,  I.  N.  Malau,  dan  D.I.  Roslim. 2013.  Pengaruh  Mutagen  Kolkisin Pada  Biji  Kacang  Hijau  ( Vigna radiata L.) Terhadap Jumlah Kromosom dan Pertumbuhan. Prosiding Semnas BioETI. 12 pp.
Suminah.,  Sutarno.,  dan  A.  D.  Setyawan. 2002.  Induksi  Poliploidi  Bawang Merah  ( Allium  ascalonicum L.)
dengan Pemberian Kolkisin. BIODIVERSITAS 3(1): 174-180.
Wistiani,  Jami  Luh  Ayu.  2014.  Induksi
Mutasi  Kromosom  Dengan  Kolkisin Pada  Tanaman  Kesuna  Bali  ( Allium sativum Linn.)  Dan  Analisis  DNA
Dengan  Marka  RAPD.  Program Pascasarjana.  Universitas  Udayana. (Tesis). 108 pp. Pathirana,  R.,  L.A.  Weerasena  and  P. Bandara.  2000.  Development  and Release  of  Gamma  Ray  Induced Sesame  Mutants  in  Sri  Lanka.  Trop. Agric. Res. Ext. 3: 19-24.