PENGARUH PROPORSI DAUN BELUNTAS ( Pluchea indica less ) DAN TEH HIJAU TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PRODUK MINUMAN
(Effect of beluntas leaves (Pluchea indica less) and green tea proportion on antioxidant activity of beverage product)
Christine Setiokusumo a* , Paini Sri Widyawati a , T. Dwi Wibawa Budianta a
a Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Indonesia
* Penulis korespondensi Email: christinesetio14@gmail.com

## ABSTRACT
Beluntas  has  many  benefits  especially  on  its  leaves  because  of the  phytochemical  contents.  Therefore, beluntas  needs  to  be  combined  with  other  ingredient  that  can  increase  the  antioxidant  activity.  One  of ingredient  that  can  be  combined  with  beluntas  is  green  tea.  Green  tea  is  a  beverage  that  is  often consumed and has various health benefits, because of the polyphenol compound contents from flavonoid group, mainly catechins. This research was aimed to determine the  effect  of beluntas  leaves  and green tea proportion on antioxidant activity of beverage product. The design of this research used single factor randomized  block  design.  Factors  that  were  researched  were  beluntas  leaves  and  green  tea  proportion with  five  level  factors,  which  were  P1,  P2,  P3,  P4  and  P5.  The  results  showed  that  the  proportion  of beluntas leaves and  green tea powder significantly affected  on phytochemical compounds, total phenol, total  flavonoids,  DPPH  scavenging  activity,  and  iron  ion  reducing  power.  Phenolic  content  was  ranged from  451.13-707.63  mg  GAE/L  sample,  flavonoid  content  was  ranged  from  95.73-413.73  mg  CE/L sample,  DPPH  scavenging  activity  was  ranged  from  193.38-277.79  mg  GAE/L  sample,  and  iron  ion reducing  power  was  ranged  from  211.50-499.50  mg  GAE/L  sample.  Total  phenolic  and  total  flavonoid contents were positively correlated with the ability to scavenge free radical DPPH and the ability to reduce iron  ion.  This  means  that  the  higher  of  phenolic  and  flavonoid  contents  in  beluntas  green  tea  beverage had the higher the antioxidant capacity. The results showed that P3 had the highest antioxidant activity.
Keywords : beluntas, green tea, antioxidant activity, beverage

## ABSTRAK
Beluntas  memiliki  berbagai  manfaat  terutama  pada  daunnya,  karena  adanya  senyawa  fitokimia.  Salah satu bahan yang dapat dikombinasikan dengan beluntas adalah teh hijau. Teh hijau merupakan minuman yang  sering  dikonsumsi  masyarakat  dan  memiliki  berbagai  manfaat  untuk  kesehatan,  karena  adanya senyawa  polifenol  golongan  flavonoid,  terutama  katekin.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui pengaruh  proporsi  daun  beluntas  dan  teh  hijau  terhadap  aktivitas  antioksidan  pada  produk  minuman. Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  faktor  tunggal.  Faktor yang diteliti  yaitu  proporsi  beluntas dan teh hijau dengan lima taraf faktor  yaitu P1, P2, P3, P4, dan P5. Hasil  penelitian  menunjukkan  terdapat  pengaruh  proporsi  bubuk  daun  beluntas  dan  teh  hijau  terhadap senyawa  fitokimia,  total  fenol,  total  flavonoid,  kemampuan  menangkal  radikal  bebas  DPPH  dan kemampuan mereduksi ion besi. Kadar total fenol berkisar antara 451,13-707,63 mg GAE/L sampel, total flavonoid  berkisar  antara  95,73-413,73  mg  CE/L  sampel,  kemampuan  menangkal  radikal  bebas  DPPH berkisar  antara  193,38-277,79  mg  GAE/L  sampel  dan  kemampuan  mereduksi  ion  besi  berkisar  antara 211,50-499,50 mg GAE/L sampel. Total fenol dan total flavonoid berkorelasi positif dengan kemampuan
menangkal DPPH dan mereduksi ion besi. Semakin tinggi total fenol dan flavonoid dalam minuman belun tas teh hijau, semakin tinggi pula aktivitas antioksidannya. Perlakuan  yang memiliki aktivitas antioksidan tertinggi adalah perlakuan P3.
Kata kunci : beluntas, teh hijau, aktivitas antioksidan, minuman

## PENDAHULUAN
Beluntas ( Pluchea indica Less ) mengandung  senyawa  fitokimia  yang dapat bermanfaat  bagi  kesehatan  dan  sebagai sumber antioksidan. Berdasarkan penelitian yang  dilakukan  oleh  Harianto  (2015), penambahan  konsentrasi  bubuk  beluntas hingga  2,0%  (b/v)  menunjukkan  adanya penurunan  total  fenol,  total  flavonoid, kemampuan menangkal radikal bebas DPPH,  dan  kemampuan  reduksi  ion  besi. Halim  (2015)  mencoba  mengatasi  masalah tersebut  dengan  mengkombinasikan  daun beluntas dengan teh hitam. Namun, pengkombinasian tersebut juga menurunkan total  fenol,  total  flavonoid,  kemampuan menangkal  radikal  bebas  DPPH,  dan kemampuan  reduksi  ion  besi.  Oleh  karena itu, perlu dilakukan pengkombinasian. beluntas dengan bahan lainnya agar didapati aktivitas  antioksidan  yang  meningkat.  Salah satu  bahan  yang  dapat  digunakan  adalah teh  hijau.  Teh  hijau  mengandung  senyawa polifenol  yang  dapat  berfungsi  sebagai sumber antioksidan.
Sebelumnya, telah dilakukan uji pendahuluan  organoleptik  dengan  berbagai proporsi  beluntas  dan  teh  hijau  dengan  30 panelis. Hasil pengujian menunjukkan minuman beluntas teh hijau memiliki tingkat penerimaan  yang  baik  pada  proporsi tertentu sehingga teh hijau berpotensi untuk disubstitusikan  pada  produk  minuman  teh beluntas. Selain berpengaruh terhadap sifat organoleptik, substitusi daun beluntas dengan  teh  hijau  dalam  pembuatan  produk minuman juga dapat mempengaruhi senyawa fitokimia, total fenol, total flavonoid,  kemampuan  menangkal  radikal bebas  DPPH,  dan  kemampuan  mereduksi ion besi sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah daun beluntas (ruas 1-6 dari  pucuk)  dan  teh  hijau  yang  dibeli  di  PT. Rolas  Nusantara  Mandiri  Surabaya.  Daun beluntas  yang  telah  dikeringkan  dan  teh hijau  dilakukan  pembubukan  menggunakan blender  dan  diayak  dengan  ayakan  rumah tangga  (lolos  ±45  mesh).  Bubuk  daun beluntas  dan  teh  hijau  yang  diperoleh kemudian  dimasukkan  dalam tea  bag dengan berat masingmasing tea bag adalah 2 gram. Setiap tea bag diseduh menggunakan  100  mL  air  pada  suhu  90 o C selama 5 menit.
Bahan  kimia  untuk  analisis  terdiri  atas akuades  (PT.  Megah  Sejahtera  Scientific), metanol  (Fulltime),  etanol  (J.T.  Baker), kloroform  (Merck),  amoniak  (Mallinckrodt), asam sulfat (Merck), merkuri (II) klorida (PT. Brataco), Kalium iodida (Merck), serbuk iodin (Merck),  kristal  natrium  hidroksida  (Merck), eter  (PT.  Brataco),  asam  asetat  glasial (Merck),  asam  klorida  (Merck),  n-amil alkohol, serbuk Mg (Merck), besi (III) klorida (Merck), Kalium
Na-Tartrat-Tetrahidrat
(Sigma-Aldrich),  tembaga  (II)  sulfat  (Merck), natrium karbonat
(Riedel-deHaën), kloroasetat  (Merck),  asam  galat  (Riedel- deHaën), Folin-Ciocalteu (Merck), (+)-katekin (Sigma),  natrium  nitrit  (Merck),  aluminium klorida (Schuchardt OHG), natrium dihidrogen fosfat (Merck), dinatrium hidrogen fosfat  (Merck),  kalium  ferrisianida  (Merck), 2,2-difenil-1-pikrilhidrasil (DPPH)  (Sigma), kertas  saring  kasar,  kertas  lensa  (KOKAii), aluminium foil, dan plastik PE ( polyethylene ).

## Kadar Air
Analisa kadar air bubuk daun beluntas dan  teh  hijau  sesuai  dengan  AOAC  979.12 (2005).  Sebanyak  0,5  g  sampel  diletakkan
Jurnal Teknologi Pangan dan Gizi Journal of Food Technology and Nutrition Vol 15 (1): 1-6, 2016.
dalam  botol  timbang  dan  dikeringkan menggunakan  oven  vakum  70 o C  selama  2 jam.

## Identifikasi Senyawa Fitokimia
Pengujian fitokimia dilakukan berdasarkan Harborne (1996) untuk mengetahui  keberadaan  senyawa  alkaloid, fenolik, flavonoid, sterol, triterpenoid, sterol, saponin, tanin dan gula pereduksi.

## Total Fenol
Total fenol ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteau (FC) menggunakan spektrofotometri  (Muntana et  al .,  2010). Absorbansi  larutan  diukur  pada λ  760  nm. Hasil  total  fenol  dinyatakan  dalam  mg GAE/L sampel.

## Total Flavonoid
Metode yang digunakan untuk analisa kadar  total  flavonoid  adalah  kolometri aluminium  klorida  (Sultana et  al .,  2009). Absorbansi  larutan  diukur  pada λ  510  nm. Hasil  total  flavonoid  dinyatakan  dalam  mg CE/L sampel.

## Kemampuan  Menangkal  Radikal  Bebas DPPH
Pengujian  kemampuan  menangkal radikal  bebas  DPPH  dilakukan  menurut metode  (Saeed et  al .,  2012).  Absorbansi larutan diukur pada λ 517 nm. Kemampuan menangkal radikal bebas DPPH dinyatakan dalam mg GAE/L sampel.

## Kemampuan Mereduksi Ion Besi
Pengujian  kemampuan mereduksi  ion besi  dilakukan  menurut  metode  (Saeed et al ., 2012). Absorbansi larutan diukur pada λ 700  nm.  Kemampuan  mereduksi  ion  besi dinyatakan dalam mg GAE/L sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bubuk  daun  beluntas  memiliki  kadar air  sebesar  15,06%  db.  Hal  ini  didukung oleh hasil penelitian Widyawati dkk. (2011),
yang  menunjukkan  bahwa  bubuk  daun beluntas memiliki kadar air 14,29% db. Teh hijau  memiliki  kadar  air  sebesar  4,06%  db. Kadar  air  dapat  mempengaruhi  kualitas seduhan  minuman  beluntas  teh  hijau. Beluntas dan teh hijau saat dalam keadaan segar  masih  memiliki  kandungan  air  bebas yang tinggi sehingga sulit untuk mengekstrak  senyawa  fitokimia.  Seluruh pengujian  sampel  dilakukan  saat  minuman beluntas  teh  hijau  mencapai  suhu  ruang (kurang lebih 10-15 menit setelah penyeduhan).  Hal  ini  dikarenakan  senyawa dalam beluntas dan teh hijau dapat bereaksi membentuk  agregat  dan  menyebabkan terbentuknya  endapan  yang  diduga  dapat mempengaruhi  hasil  pengujian.  Pengujian fitokimia  teh  beluntas  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Pengujian Fitokimia Senyawa Fitokimia Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 Alkaloid +5 +4 +3 +2 +1 Flavonoid +4 +3 +2 +1 +1 Fenolik +5 +4 +3 +2 +1 Saponin +5 +4 +3 +2 +1 Tanin +5 +4 +3 +2 +1 Triterpenoi +5 +4 +3 +2 +1 Sterol +5 +3 +3 +2 +1 Kardiak - - - - - Glikosida +4 +3 +2 +1 +1
Keterangan:
Tanda  (+)  menunjukkan  intensitas  warna. Semakin banyak tanda (+) maka semakin kuat warna. Tanda (-)  menunjukkan  senyawa  fitokimia  tidak terdeteksi.
Identifikasi senyawa fitokimia dilakukan  untuk  mengetahui  keberadaan senyawa  fitokimia  dalam  sampel  secara kualitatif.  Tabel  1.  menunjukkan  bahwa semakin  banyak  proporsi  teh  hijau  yang ditambahkan menunjukkan intensitas senyawa fitokimia alkaloid, flavonoid, fenolik,  saponin,  tanin,  triterpenoid  dan kardiak  glikosida  yang  semakin  menurun sedangkan sterol tidak terdeteksi. Senyawa alkaloid  yang  terkandung  dalam  teh  hijau antara lain kafein, theobromin, dan theanin. Menurut  Irawati  (2013),  senyawa  alkaloid yang  terdapat  daun  beluntas  merupakan
senyawa  dengan  kerangka  dasar  piridin dengan substituen  metil pada posisi para.Senyawa  fenol  yang  terdapat  dalam teh  hijau  sebagian  besar  dari  golongan flavonoid  terutama  katekin.  Senyawa  fenol dan  flavonoid  yang  terkandung  dalam beluntas  adalah  kuersetin,  kaempferol, mirisetin, luteolin, apigenin, asam klorogenat  dan  asam  kafeinat  (Suriyaphan et  al .,  2014;  Andarwulan et  al .,  2010). Beluntas  mengandung  senyawa  terpena seperti  seskuisterpen,  monoterpen  dan triterpen (Luger dkk., 2000 dalam Widyawati
dkk.,  2011).  Tanin  merupakan  senyawa yang  bersifat  polar  karena  memiliki  gugus hidroksil  sehingga  dapat  terlarut  dalam  air. Sterol  merupakan  senyawa  yang  bersifat nonpolar  sedangkan  air  bersifat  polar sehingga  tidak  terdeteksi  pada  uji  fitokimia. Teh hijau mengandung karbohidrat sebesar 5-7%  (Cabrera et  al .,  2006)  sedangkan pada beluntas sebanyak 8,65% yang dapat berperan  sebagai  pereduksi.  Selain  itu dalam beluntas dan teh hijau juga terkandung  vitamin  dan  mineral  yang  juga dapat bertindak sebagai pereduksi.
Tabel 2. Hasil Uji Total Fenol, Total Flavonoid, Kemampuan Menangkal Radikal Bebas DPPH
dan Kemampuan Mereduksi Ion Besi Perlakuan Total Fenol (mg GAE/ L sampel) Total Flavonoid (mg CE/ L sampel) Kemampuan Menangkal Radikal Bebas DPPH Kemampuan Mereduksi Ion Besi P1 538,88±23,50 b 171,33±14,82 b 202,64±2,02 b 220,50±17,47 a P2 606,13±46,39 c 334,27±7,64 d 231,18±1,26 d 419,90±14,71 b P3 707,63±27,26 d 413,73±9,57 e 277,79±1,51 e 499,50±8,73 c P4 587,38±39,56 c 279,33±8,13 c 218,60±0,51 c 404,3±12,82 b P5 451,13±34,43 a 95,73±7,21 a 193,38±3,26 a 211,50±16,52 a
Keterangan: Notasi yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata pada α= 5%.
Kadar total fenol minuman beluntas teh hijau  ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Kadar  total fenol  minuman  beluntas  teh  hijau  berkisar antara  451,13-707,63  mg  GAE/L  sampel. Penambahan  proporsi  teh  hijau  sampai dengan  perlakuan  P3  dapat  meningkatkan total  fenol,  tetapi  pada  perlakuan  P4 mengakibatkan penurunan total fenol. Penurunan  kadar  total  fenol  pada  perlakuan P4  diduga  terjadi  karena  gugus  hidroksil senyawa fenolik daun beluntas dan teh hijau saling berikatan secara glikosida atau ester.
Kadar total flavonoid minuman beluntas teh hijau ditunjukkan pada Tabel 2. Kadar  total  flavonoid  minuman  beluntas  teh hijau  berkisar  antara  95,73-413,73  mg  CE/L sampel.  Pada  perlakuan  P1  hingga  P3 terjadi  peningkat  total  flavonoid  tetapi  pada P4 mengakibatkan penurunan total flavonoid. Hal ini terjadi karena diduga jumlah senyawa makromolekul  yang  terbentuk  karena  reaksi senyawa  flavonoid  pada  beluntas  dan  teh hijau  berkurang  dan  mulai  didominasi  oleh senyawa flavonoid pada beluntas.
Kemampuan  menangkal  radikal  bebas DPPH minuman beluntas teh hijau ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Kemampuan menangkal  radikal  bebas  minuman  beluntas teh  hijau  berkisar  antara  193,38-277,79  mg GAE/L  sampel.  Data  menunjukkan  bahwa bertambahnya proporsi teh hijau meningkatkan
kemampuan menangkal
radikal  bebas  DPPH,  nampun  pada  P4  dan P5 terjadi penurunan.
Kemampuan mereduksi ion besi minuman beluntas teh hijau ditunjukkan pada Tabel  2.  Kemampuan  mereduksi  ion  besi minuman  beluntas  teh  hijau  berkisar  antara 211,50-499,50 mg GAE/L sampel. Kemampuan mereduksi ion besi memiliki pola yang sama dengan total fenol, total flavonoid dan  kemampuan  menangkal  radikal  bebas DPPH.

## KESIMPULAN
Kombinasi bubuk beluntas dan teh hijau pada berbagai proporsi berpengaruh
Jurnal Teknologi Pangan dan Gizi Journal of Food Technology and Nutrition Vol 15 (1): 1-6, 2016.
terhadap  senyawa  fitokimia,  total  fenol,  total flavonoid,  kemampuan  menangkal  radikal bebas DPPH dan kemampuan mereduksi ion besi  minuman  beluntas  teh  hijau.  Minuman beluntas teh hijau memiliki total fenol berkisar antara 451,13-707,63 mg GAE/L sampel, total flavonoid  berkisar  antara  95,73-413,73  mg CE/L sampel, kemampuan menangkal radikal bebas  DPPH  berkisar  antara  193,38-277,79 mg GAE/L sampel dan kemampuan mereduksi  ion  besi  berkisar  antara  211,50- 499,50  mg  GAE/L  sampel.  Hasil  penelitian minuman beluntas teh hijau dapat memperbaiki  aktivitas  antioksidan  minuman beluntas pada peneltian sebelumnya. Berdasarkan  hasil  penelitian  perlakuan  yang memiliki  akitvitas  antioksidan  tertinggi  adalah P3. Terbentuknya agregat dan endapan yang disebabkan  oleh  reaksi  antara  komponen dalam beluntas dan teh hijau setelah 15 menit penyeduhan  dapat  mempengaruhi  aktivitas antioksidan minuman beluntas teh hijau. Oleh karena itu perlu penelitian lebih lanjut tentang waktu  yang  tepat  untuk  mengkonsumsi minuman  beluntas  teh  hijau  sehingga mendapat aktivitas antioksidan yang terbaik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Direktorat
Jenderal  Pendidikan  Tinggi,  Kementerian Riset,  Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi yang  telah  membiayai  penelitian  ini  melalui Hibah Bersaing 2015.

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC. 2005. Method of Analysis. Washingdton: Assosiation of  Official Analytical Chemistry. USA: AOAC International. p. 979.12.
Andarwulan, N., R. Batari, D.A. Sandrasari,
B.  Bolling,  and  H.  Wijaya. 2010.
Flavonoid  Content  and  Antioxidant Activity of Vegetables from Indonesia. Food Chemistry 121:1231- 1235. https://www/academia.edu/18074604 /Flavonoid_content_and_antioxidant_
activity_of_vegetables_from_Indonesi a (11 Desember 2015).
Cabrera,  C.,  R.  Artacho,  and  R.  Gimenez, 2006.  Beneficial  Effects  of  Green Tea —  A  Review. Jornal  of  the American  College  of  Nutrition ,  25(2): 79-99. http://www.jacn.org/content/25/2/79.f ull.pdf+html. (20  September 2015). Halim,  M.  O.  2015.  Pengaruh  Proporsi Tepung  Daun  Beluntas  ( Pluchea
Indica Less) dan Teh Hitam Terhadap  Sifat  Fisikokimia,  Sifat Organoleptik, dan Aktivitas
Antioksidan Produk Minuman, Skripsi S-1 , Fakultas  Teknologi  Pertanian UKWMS, Surabaya. Harborne,  J.B.  1996. Metode  Fitokimia . Penerjemah:  Padmawinata,  K.  dan I.
Soediro.  Bandung:  Institut  Teknologi Bandung-Press. Hal 153.
Harianto,  I.  2015.  Pengaruh  Konsentrasi Tepung  Daun  Beluntas  ( Pluchea Indica Less) Terhadap Sifat Fisikokimia, Organoleptik, dan Aktivitas  Antioksidan  pada  Minuman, Skripsi S-1 , Fakultas Teknologi
Pertanian UKWMS, Surabaya.
Irawati,  S. 2013. Isolasi  Alkaloid dari Daun
Beluntas ( Pluchea  indica Less). Skripsi  S- 1.  Fakultas  Teknik  Kimia Institut Teknologi Sepuluh November, Surabaya (http://digilib.its.ac.id/isolasi-  alkaloid- dari- daun-beluntaspluchea-indica- less-25630.html. (20 desember
2015).
Muntana, N., and  S.  Prasong. 2010. Study on Total Phenolic Contents and Their Antioxidant  Activities  of  Thai  White, Red,  and  Black  Rice  Bran  Extracts.
Pakistan Journal of Biological Sciences (13)4:170174.http://www.res earchgate.net/publication/44568678_ Study_on_Total_Phenolic_Contents_ and_their_Antioxidant_A ctivities_of_Thai_White_Red_and_Bl ack_Rice_Bran_Extracts  (21  Oktober 2015).
Saeed,  N.,  fM.R.  Khan.,  and  M.  Shabbir. 2012. Antioxidant activity, total phenolic  and  total  flavonoid  contents of whole plant extracts Torilis leptophylla  L. BMC  Complementary and  Alternative  Medicine  12:221 . http://www.biomedcentral.com/1472-
6882/12/221 (15 September 2015). Sultana,  B.,  F.  Anwar.,  and  M.  Ashraf.
2009. Effect of Extraction Solvent/Technique on the Antioxidant
Activity  of  Selected  Medicinal  Plant Extracts. Molecules  14: 2167-2180. http://www.mdpi.com/1420- 3049/14/6/2167/pdf (20 Oktober 2015).
Suriyaphan,  O.  2014.  Nutrition , Health Benefits  and  Applications  of Pluchea
indica (L.)  Less  Leaves. Mahidol University  Journal  of  Pharmaceutical Sciences 41(4):1-10.  (12  Desember
2015). Widyawati,  P.  S.,  C.  H.  Wijaya,  P.S. Hardjosworo,  dan  D.  Sajuthi.  2011. Evaluasi Aktivitas Antioksidatif Ekstrak Daun Beluntas( Pluchea indica ) Berdasarkan Perbedaan Ruas Daun. Rekapangan  Jurnal  Teknologi
Pangan 5(1):1-14. http://download.portalgaruda.org/artic le.php?article=180904&val=6221&titl e=Antioksidan%20Beluntas (20 September 2015).