## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI JAMUR ENDOFIT PADA DAUN DAN BATANG TUMBUHAN KUMIS KUCING (Orthosiphon aristatus) TERHADAP BAKTERI
Escherichia coli DAN staphylococcus aureus
Excel Pangow 1) , Jimmy Posangi 2) , Widya Astuti Lolo 1) , Robert A. Bara 3)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Program PASCASARJANA UNSRAT Manado
3) Program Studi Perikanan Ilmu Kelautan Unsrat Manado

## ABSTRACT
Endophytic fungi are fungi that live in plant tissues and do not harm the plants. Endophytic fungi can produce compounds that have the potential to be antibacterial. This study aims to examine the antibacterial activity of endophytic fungi isolated from the leaves and stems of the cat's whiskers plant (Orthosiphon aristatus) against Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  bacteria.  Cat's  whiskers  contain  essential  oils  which  are  used  as antibacterial  against  some  pathogenic  bacteria  such  as  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli.  The method  used  is  experimentally  in  the  laboratory  to  test  the  antibacterial  activity  of  endophytic  fungi  isolates derived  from  cat's  whiskers  (Orthosiphon  aristatus)  on  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  bacteria using the hole / well method. In the research results obtained four samples of endophytic fungi extract isolated from  the  leaves  and  stems  of  the  cat's  whiskers  plant  (Orthosiphon  aristatus)  .  The  results  of  antibacterial research  showed  that  endophytic  mushroom  extract  isolated  from  cat's  whiskers  were  more  effective  in inhibiting  Escherichia  coli  bacteria  compared  to  Staphylococcus  aureus.  In  Escherichia  coli  bacteria  the average value of inhibition is 5 mm whereas in Staphylococcus aureus bacteria the average value of inhibition is  only  2  mm.  So  it  can  be  seen  that  the  endophytic  fungus  from  the  leaves  of  cat's  whiskers  has  a  better antibacterial  effect  than  the  endophytic  fungus  from  the  stems  of  the  cat's  whiskets.  Conclusion,  etidophytic fungi isolated from leaves and stems of cat's whiskers (Orthosiphon aristatus) have an antibacterial effect on the growth of E. coli bacteria and are not effective against S. aureus bacteria.
Keywords: Cat's  whiskers  (Orthasiphan aristatus),  antibacterial  activity,  Escherichia  coli  and  Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Jamur endofit ialah jamur yang hidup di dalam jaringan tumbuhan dan tidak membahayakan tumbuhan tersebut. Jamur endofit dapat menghasilkan senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk menguji  aktivitas  antibakteri  jamur  endofit  yang  diisolasi  dari  daun  dan  batang  tumbuhan  kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus. Kumis  kucing mengandung  minyak  atsiri  yang  digunakan  sebagai  antibakteri  terhadap  beberapa  bakteri  patogen  seperti Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Metode  yang  dipakai  yakni  secara  eksperimen  di  laboratorium untuk menguji adanya aktivitas antibakteri dari isolat jamur endofit  yang diberasal dari tumbuhan kumis kucing (Orthosiphon  aristatus) pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dengan  menggunakan metode lubang/sumuran. Pada hasil penelitan didapatkan empat sampel ekstrak jamur endofit yang diisolasi dari daun  dan  batang    tumbuhan  kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) .  Hasil  penelitian  antibakteri  menunjukkan bahwa  ekstrak  jamur  endofit  yang  diisolasi  dari  tumbuhan  kumis  kucing  lebih  efektif  menghambat    bakteri Escherichia coli dibandingkan dengan bakteri Staphylococcus aureus. Pada bakteri Escherichia coli nilai rata- rata daya hambat  yaitu 5  mm sedangkan pada bakteri Staphylococcus aureus nilai rata-rata daya  hambat  yaitu hanya 2 mm. Sehingga dapat diketahui bahwa jamur endofit dari daun kumis kucing memiliki efek antibakteri yang lebih baik dibandingkan dengan jamur endofit dari batang kumis kucing. Kesimpulan, Jamur endofit yang diisolasi  dari  daun    dan  batang  kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) memiliki  efek  antibakteri  terhadap pertumbuhan bakteri E. coli dan tidak efektiv terhadap bakteri S. aureus .
Kata Kunci: Tumbuhan kumis kucing (Orthosiphon aristatus) , aktivitas antibakteri, Escherichia coli dan Staphylococcu saureus.

## PENDAHULUAN
Indonesia memiliki ribuan
tumbuhan  yang  tersebar  di  berbagai daerah.  Keanekaragaman  hayati  tersebut dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  baku obat.  Pemanfaatan  tumbuhan  obat  di indonesia  secara  tradisional  memiliki  efek samping  yang  lebih  kecil  dari  obat  yang dibuat secara sintesis. Penggunaan tumbuhan  obat  di  masyarakat  untuk mencegah  penyakit,  menjaga  kesegaran tubuh  maupun  mengobati  penyakit  lainya (Rohana,  2011).  Jenis  tumbuhan  yang digunakan  sebagai  tumbuhan  obat,  salah satunya  adalah  tumbuhan  kumis  kucing ( Orthosiphon aristatus) .  Daun  kumis kucing  mengandung  senyawa  kimia  yaitu alkaloid, flavonoid, tanin, polifenol, saponin  (Alshaws, et,  all., 2012).  Banyak khasiat  yang  terkandung  dalam  tumbuhan kumis  kucing  ini.  Daun  kumis  kucing basah  maupun  kering  digunakan  untuk menanggulangi berbagai penyakit (Sofiani, 2003).
Bakteri Escherichia coli dan
Staphylococcus
aureus dapat menimbulkan  penyakit  sesuai  dengan organ  yang terinfeksi  (Brook. 2001).  Pada jaringan  tumbuhan,  terdapat  jamur  endofit yang menghasilkan senyawa yang berkhasiat  seperti  tumbuhan  inangnya. Aktivitas  senyawa  yang  dihasilkan  jamur endofit  lebih  besar  daripada  aktivitas senyawa  tumbuhan  inangnya  (Strobel, et , al ., 2003).
Banyak peneliti  yang berhasil mengisolasi jamur  endofit  dan  senyawa  metabolit sekunder  dari  berbagai  jenis  tanaman. Namun,  penelitian  yang  mengisolasi  jenis jamur  endofit  dari  tanaman  kumis  kucing masih  terbatas  di  Indonesia  khususnya  di kawasan  Sulawesi  Utara.  Terbatasnya informasi tersebut, maka penulis melakukan penelitian mengenai isolasi dan aktivitas  antibakteri  jamur  endofit  pada tumbuhan  kumis  kucing  terhadap  bakteri Escherichia  coli  dan  Staphylococcus aureus.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  dengan  melihat  aktivitas jamur endofit terhadap antibakteri .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan April hingga Agustus 2019 di Laboratorium  Biologi  Molekukuler  dan Farmasetika Laut, Fakultas Perikanan Ilmu Kelautan,  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.  Kemudian  di  lanjutkan  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjutan,  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam,  Universitas Sam Ratulangi, Manado.

## Alat dan Bahan Alat
Digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  gunting,  sarung  tangan,  pinset, pemanas  (kompor),  erlenmeyer,  gelas ukur,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, cawan  petri,  timbangan  analitik,  spatula, oven,  pinset,  batang  pengaduk,  pembakar spritus,  pipet  tetes,  jarum  ose,  lemari pendingin, incubatorincucell (N-Biotek), laminary air  flow (Clean Bench), autoklaf (autoklaf  KT-30 S ),  mikropipet,  jangka sorong, dan kamera ponsel.

## Bahan
Digunakan pada penelitian ini yaitu daun  dan  batang  tumbuhan  kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) ,  suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli , potato dextrose agar (PDA), Nutrient Agar  (NA),  alkohol  95%,  aquades, kloramfenikol  kapsul,  beras,  etil  asetat, ekstrak jamur endofit dari tumbuhan kumis kucing, kertas saring, kapas, larutan NaCl, kertas label, aluminium foil dan tissue.

## ProsedurPenelitian Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  sampel  kumis  kucing
(Orthosiphon  aristatus) diambil  dari  Jalan Teluk Bayur, Kota Manado

## Identifikasi Tanaman
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam,Universitas Sam Ratulangi, Manado.

## Sterilisasi Alat-alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  disterilkan  terlebih  dahulu dengan oven dan autoklaf. Oven digunakan  untuk  mensterilisasi  alat-alat untuk pembuatan media (cawan petri, ose, dan  pinset).  Autoklaf  digunakan  untuk mensterilisasi bahan-bahan  pembuatan media  dan  alat  gelas  (erlenmeyer,  tabung reaksi, dan media).

## Pembuatan Media PDA
Media  PDA  yang  akan  dibuat sesuai dengan kebutuhan penelitian. Sebanyak  15  cawan  petri  yang  akan digunakan  maka  media  PDA  ditimbang dengan  berat  11,7  gr  lalu  ditambahkan natrium  agar  (NA)  sebanyak  3,6  gr  dan dilarutkan  dalam  300  ml  aquades.  PDA tadi  dimasukan  kedalam  autoklaf  untuk disterilisas  dengan  suhu  120ºC  selama  15 menit. Selanjutnya PDA tersebut dituangkan  kedalam  cawan  petri  yang sudah disterilisasi terlebih dahulu.

## Pembuatan Media PDA+ Antibiotik
Proses pembuatan media PDA+AB sama seperti pembuatan media PDA tetapi PDA  ditambahkan  dengan  antibiotik kloramfenikol sebanyak 150 ml.

## Penanaman Sampel
Sebelum ditanamkan kedalam
media PDA+Antibiotik,
dicelupkan terlebih  dahulu  alat  (pinset,  gunting)  dan sampel yang akan digunakan dalam larutan alkohol 95% selama 30  detik. Selanjutnya potongan sampel tersebut diangkat menggunakan  pinset  yg  sudah  direndam
didalam  larutan  alkohol  dan  sudah dipijarkan  di  atas  api  selama  30  detik, potongan  ini  ditanam  pada  media Potato Dextrose  Agar (PDA)  +  Antibiotik    di dalam cawan petri, tiap cawan berisi empat potongan sampel.

## Pemurnian Jamur Endofit
Pada hari ketiga setelah penanaman sampel  akan  diamati  adanya  miselia  yang tumbuh  dipermukaan  media  PDA+AB. Miselia  yang  sudah  tumbuh  diambil koloninya  pada  permukaan  media  dengan kawat ose dan dipindahkan ke media PDA yang  lain  untuk  ditumbuhkan  kembali. Pemurnian ini bertujuan untuk mendapatkan  1  jenis  jamur  endofit  yang murni.

## Pembuatan Media Kulturnasi
Pembuatan media ini menggunakan beras  yang  ditimbang  sebanyak  40  gr  dan aquades  sebanyak  50  ml.  Di  masukkan kedalam Erlenmeyer untuk disterilisasikan    kedalam  autoklaf  selama 10-15  menit  pada  suhu  120ºC.  Setelah  itu didinginkan  untuk  dilakukan  penanaman miselia pada media  nasi.

## Kultivasi dan Ekstraksi Jamur pada Media Nasi
Kultur  jamur  pada  media  nasi  ini dilakukan selama 10 hari pada suhu ruang. Setelah pertumbuhan miselia jamur endofit mencapai bagian dasar dari labu erlenmeyer  dilakukan  ekstraksi.  Proses ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi menambahkan  larutan  etil  asetat  sebanyak 200 ml sampai semua nasi terendam. Lalu diaduk dengan shaker selama 24 jam.

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara maserasi,  yaitu  jamur  yang  telah  dikultur direndam  dengan  cairan  etil  asetat  dan diaduk  diatas  alat shaker selama  24  jam. Sampel  yang  sudah  direndam,  kemudian
disaring  menggunakan  corong  dan  kertas saring  sehingga  menghasilkan  filtrat  1. Filtrat  tersebut  dimasukkan  dalam  labu evaporator.  Evaporator  dinyalakan  dengan mengatur  suhu  selama  40ºC.  Evaporasi dilakukan selama 20 menit dan didapatkan ekstrak.

## Pembuatan Larutan Suspensi Bakteri
Bakteri  yang  telah  dikultur  pada agar  miring  diambil  koloninya  dengan kawat ose steril dan dimasukkan ke dalam larutan  NaCl  5ml.  Suspensi  bakteri  dibuat dua  buah.  Pertama,  Suspensi  bakteri Staphylococcus aureus dan kedua, suspensi bakteri Escherechia coli,

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Penanaman sampel dilakukan sebanyak  4  ekstrak  sampel  pada  4  tempat dalam  cawan  petri  dan  dengan  jarak  yang sama.  Kemudian  ditambahkan  dengan kontrol  positif  dan  kontrol  negatife, sehingga  sampel  yang  ada  dalam    cawan petri  yaitu  6  (4  sampel  adalah  ekstrak jamur dan 2 sampel control). Metode yang digunakan  yaitu  metode  lubang/sumuran dengan  cara  membuat  lubang  pada  agar yang telah diinokulasi.

## Pengamatan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  1x24  jam masa  inkubasi.  Diameter  zona  hambat diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakan  jangka  sorong  dengan  cara mengukur  jarak  dari  tepi  sumur  uji  ke batas  lingkaran  zona  hambat.  Kemudian diameter zona hambat dikategori kekuatan daya anti bakterinya berdasarkan penggolongan  oleh  Davis  dan  Stout (1971).
Tabel  1.  Klasifikasi  zona  Hambat menurut Davis dan Stout (1971)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolat  Jamur  Endofit  Kumis  Kucing (Orthosiphon aristatus)
Setelah mendapatkan jamur endofit yang  tumbuh  pada  medium  PDA  setelah bebrapa  hari,  kemudian  dimurnikan  lagi dalam medium PDA baru dengan menginokulasi sedikit hifa jamur menggunakan  kawat  ose  steril  dari  setiap koloni  endofit  yang  berbeda.  Potato Dextrose  Agar  (PDA)  berguna  sebagai karbohidrat  yang  merupakan  sumber nutrisi  bagi  pertumbuhan  jamur  (Ariyono, 2014).
Setelah  itu  dilakukan  kultur  jamur endofit  lalu  di  diamkan  selama  3-7  hari pada  suhu  ruang.  Hal  ini  bertujuan  agar dapat  memisahkan  koloni    endofit  dengan morfologi yang berbeda sehingga mendapatkan  isolat  tersendiri  (Tilesky, 2014).
Proses  pengamatan  pada  fase pemisalahan  ini  selama  3-7  hari,akan tetapi  jika  masih  ditemukan  pertumbuhan koloni  yang  berbeda  secara  makroskopis, maka  proses  pemurnian    akan  di  ulang kembali  sampai  diperoleh  isolate  yang murni.  Setelah    berhasil  diisolasi  dari tanaman  menyebabkan  inangnya  dapat menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang  sama  dengan  yang  dihasilkan  oleh tanaman  inangnya.  Jamur  endofit  dikenal sebagai sumber metabolit sekunder berupa enzim  atau  senyawa  bioaktif  lainnya sehingga perlunya mengisolasi dan
mengidentifikasi  jamur  endofit  tersebut dari inangnya (Radji, 2005).
Hasil  isolasi  jamur  endofit  pada  hari pertama  sampai  hari  ke  kelima  dapat dilihat pada Gambar 1 dan 2.
Ket: (A).  Jamur  endofit  pembiakan  dari sampel daun Kumis Kucing (KK 1.2) (B).  Jamur  endofit  pembiakan  dari sampel daun Kumis Kucing (KK.1.3)
(C)    Jamur  endofit  pembiakan  dari sampel  daun  Kumis  Kucing  (KK
1.4)
(D)  Jamur endofit  pembiakan dari sampel  batang  Kumis  Kucing  (KK 1.8)

## Kulturnasi dan Eksraksi Jamur Endofit
Jamur  endofit  ini  kemudian  di kultur  menggunakan  media  nasi  yang secara  static  kurang  lebih  selama  10  hari
lamanya  pada  suhu  ruang,  pertama  kali dilakukan  pada  sampel  dari  daun  kumis kucing  dengan  kode  (KK.1.2),  (KK.1.3) dan  (KK.1.4)  dan  kemudian  di  lanjutkan sampel  dari  batang  kumis  kucing  dengan kode  (KK.1.8).  Sesudah  pertumbuhan miselia  jamur  endofit  menutupi  bagian- bagian  dari  media  nasi  pada  labu erlenmeyer  kemudian  dilanjutkan  proses ekstraksi  dengan  cara  maserasi.  Maserasi adalah  suatu  proses  perendaman  sampel yang  disertakan  pelarut  organik  pada temperatur ruangan. Pada proses ini sangat menguntungkan  dalam  isolasi  karena senyawa  yang  terdapat  dalam  sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan  membran  sel  yang  diakibatkan  oleh perbedaan  tekanan  antara  di  dalam  dan  di luar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada  dalam  sitoplasma  akan  terlarut  dalam pelarut  organik  dan  ekstraksi  senyawa akan  sempurna  karena  dapat  diatur  lama perendaman yang dilakukan. Pada pemilihan pelarut juga sangat berpengaruh untuk  proses  maserasi  dikarenakan  setiap pelalu berbeda-beda memberikan
efektivitas  pada  kelarutan  senyawa  bahan alam tersebut. Setelah masuk dalam proses ekstraksi  menggunakan  cara  maserasi yaitu  dengan  menambahkan  larutan  etil asetat  sebanyak  200  ml  sampai  semua sampelnya terendam kemudian lalu diaduk menggunakan  alat  shaker  selama  1x24 jam.  Maserasi  digunakan  karena  ini merupakan  metode    ekstraksi  sederhana yang sering digunakan (Mukhriani,  2014). Sehingga dapat menarik senyawa-senyawa aktif  dari  sampel  dengan  maksimal. Perendaaman  sampel  dalam  maserasi dapat  membuat  dinding  sel  dari  sampel pecah sekaligus membuat senyawa- senyawa  yang  ada  dalam  sitoplasma  akan tertarik  oleh  pelarut.  Dinding  sel  pecah dikarenakan adanya perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar sel. Konsentrasi diluar sel  lebih  tinggi  dibandingkan  konsentrasi di dalam sel yang rendah sehingga dinding sel  pecah  karena  tidak  bisa  menahan tekanan dari perbedaan konsentrasi (Harborne, 1996). Waktu proses
Gambar 1. Hasil isolasi jamur endofit pada hari pertama
Gambar 2. Hasil isolasi jamur endofit pada hari kelima
pengocokan diatas alat shaker selama 1x24 jam  menghasilakn  pelarut  larut  ke  dalam sampel lalu akan masuk ke rongga-rongga sampel  karena    keadaan  diam  selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Untuk pelarut etil asetat  ini  merupakan  senyawa  organik dengan  rumus  empiris  CH3COOC2H5. Senyawa ini berwujud cairan tak berwarna,  memiliki  aroma  khas  dan  juga sebagai  pelarut  polar  menengah  yang volatil  (mudah  menguap),  tidak  beracun, dan  tidak  higroskopis.  Setelah  direndam dengan menggunakan etil asetat dilanjutkan disaring setelah itu di evaporasi  menggunakan Rotary  vacuum evaporator pada suhu 40° C (Yohanes, et, al., 2017).  Evaporasi  bertujuan  untuk menguapkan ekstrak, penguapan dalam hal ini dimaksudkan agar air dan pelarut masih terisa  dalam  ekstrak  akan  menguap. Menggunakan  suhu  40ºC  bertujuan  untuk tetap  menjaga  senyawa  bioaktif  dalam filtrate  kerena  biasanya  senyawa-senyawa bioaktif  rentan  terhadap  suhu  tinggi (Kowal, et,  al.,2018 ).  Kulturnasi  jamur endofit  kumis  kucing  dapat  dilihat  pada Gambar  3.  dan  hasil  proses  evaporasi dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 3. Proses kulturnasi dari jamur endofit tumbuhan kumis kucing
Ket :  A. Kulturnasi jamur endofit tumbuhan sampel KK 1.2
B. Kulturnasi jamur endofit tumbuhan sampel KK 1.3
C. Kulturnasi jamur endofit tumbuhan sampel KK 1.4 D. Kulturnasi jamur endofit tumbuhan sampel KK 1.8

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ini menggunakan  bakteri Escherichia  coli mewakili  Gram  negatif  (Aquades)  dan Staphylococcus  aureus mewakili  gram positif (Kloramfenikol). Pengujian dilakukan  dengan  mengukur  zona  hambat pada  media  agar  setelah  diinkubasi  dalam alat inkubator selama 1x24 jam. Pertumbuhan  bakteri  setelah  inkubasi terlihat menjauhi beberapa lubang sumuran,  ini  berarti  terjadi  pembentukan zona  hambat  di  sekitar  lubang  sumuran yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  kumis kucing  dan  pada  cakram  antibiotik Kloramfenikol.  Pada  cakram  kontrol negatif tidak terlihat adanya zona hambat.
Zona hambat yang terbentuk diukur  diameternya  dengan  menggunakan jangka  sorong  dengan  satuan  milimeter (mm).  Pengukuran  dilakukan  dengan  cara mengukur  diameter  dari  ujung  yang  satu ke  ujung  yang  lain.  Pengujian  aktivitas bakteri  ini  menggunakan  metode  difusi (sumuran)  dimana  masing-masing  ektsrak diujikan  pada  masing-masing  bakteri. Metode difusi digunakan karena prosedurya  sederhana  mudah  dan  praktis untuk  dikerjakan  dan  dapat  melihat sensitivitas berbagai jenis mikroba terhadap antimikroba (Kowal, et al.,2018 ).
Gambar 4. Hasil dari evaporasi
Diameter zona hambat ekstrak dari kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) terhadap  bakteri Escherichia  coli yang paling  besar  dihasilkan  oleh  eksrak  daun kumis  kucing  dengan  kode  KK  1,3  yaitu sebesar    9  mm  dan  termasuk  kategori sedang  menurut  (Davis  dan  Stout  1971). Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat dapat dilihat pada Tabel 2.
Diameter  zona  hambat  ekstrak  dan kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) terhadap Staphylococcus  aureus yang paling  besar  dihasilkan  oleh  daun  kumis kucing  dengan  kode  KK  1,3  yaitu  sebesar 6  mm  dengan  kategori  sedang.  Hasil pengukuran  diameter  zona  hambat  dapat dilihat pada Tabel 3.
Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan terhadap bakteri Escherichia coli danStaphylococcus masing-masing sebanyak tiga kali pengulangan memperlihatkan adanya zona hambat  yang  terbentuk  disekitar  lubang sumuran kecuali eksrak daun dengan kode KK 1,2 dan eksrak batang KK 1,8. Kedua eksrak  ini  tidak  menunjukan  adanya aktivitas  antibakteri  yang  terbentuk,  ini berarti  kandungan  senyawa  antibakteri yang bersifat  non polar  pada kedua  ektrak tersebut  kurang , sedangkan  pada  ekstrak daun  dengan  kode  KK  1,3  dan  KK  1,8 memperlihatkan adanya aktivitas antibakteri  terhadap Escherichia  coli  dan Staphylococcus aureus. Hal ini ditunjukan dengan terbentuknya zona hambat disekitar  lubang  sumuran  sebesar  9  mm pada Escherichia  coli tergolong  sedang dan 6  mm  pada Staphylococcus  aureus juga  tergolong  sedang . Dari  hasil  ini menunjukan  bahwa  ekstrak  daun  dari tanaman  kumis  kucing (Orthosiphon aristatus) memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat digolongkan berdasarkan klasifikasi zona hambat menurut Davis and Stout (Tabel 1). Ekstrak daun dari tanaman kumis  kucing (Orthosiphon  aristatus) merupakan  ekstrak  yang  lumayan  efektif terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus karena  memiliki daya  hambat  mikroba  yang  sedang.  Gram positif  hanya  memiliki  lapisan  tunggal pada dinding selnya (Pelczar.1986).
Sedangkan  struktur  dinding  sel  bakteri Gram  negatif  yang  relatif    kompleks  akan menyebabkan  senyawa  antibakteri  lebih sukar masuk ke dalam sel dan menemukan sasaran  untuk  bekerja  (Siswandono.2000). Hal  ini  menerangkan  bahwa  bakteri  gram positif  lebih  peka  dibandingkan  dengan bakteri gram negatif.
Kontrol  positif  memperlihatkan aktivitas  antimikroba  yang  paling  besar terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus. Kontrol  positif yang digunakan yaitu Kloramfenikol.
Kloramfenikol
merupakan antibiotik  yang  memiliki  spekrum  luas terhadap  bakteri  (Katzung,  2004).  Kontrol positif  yang  memiliki  diameter  daya hambat  lebih  besar  yaitu  36  mm  pada Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus 19.5 mm.
Kontrol  negatif  tidak  menunjukan terbentuknya  zona  hambat.  Hal  tersebut menandakan  bahwa  tidak  ada  pengaruh kontrol negatif terhadap bakteri yang diuji. Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu aquades.
Aktivitas antibakteri yang
terbentuk  disekitar  lubang  sumuran  ini disebabkan  oleh  aktivitas  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  dan  kumis kucing (Orthosiphon  aristatus). Semakin besar    zona  hambat  yang  terbentuk  maka semakin  kuat  senyawa  yang  terkandung dalam kumis kucing (Orthosiphon aristatus ) untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

## KESIMPULAN
Aktivitas  jamur  endofit  yang  di isolasi  dari  daun  dan  batang  tumbuhan kumis kucing (Orthosiphon aristatus) yang baik  terdapat  pada  eksrak  daun  dengan kode  KK  1,3.  Daya  hambat  terhadap bakteri Escherichia  coli adalah  kategori sedang  dan  untuk  bakteri Staphylococcus aureus adalah lemah.

## SARAN
Diharapkan dapat dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efektifitas antibakteri ekstrak kumis kucing (Orthosiphon aristatus) untuk  menunjang dalam terapi pengobatan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alshaws,  M,  A.,  Abdulla,  M,  A.,  Ismail, S.,  Amin,  Z,  A.,  Qader,  S,  W., Hadi,  H,  A.,  Harmal,  N,  S.  2012.
Antimicrobial
and Immuno
modulatory Activities of Orthosiphon  stamineus  Benth. Journal  of  Molecular  medicine .
17(2): 538-539. Brooks.  2001.  Mikrobiologi  Kedokteran. Edisi ke-23. Jakarta. Mukhriani. 2014. Mikrobiologi
Kedokteran  Edisi  ke-20.  Jakarta.
EGC. Strobel,  A.,  Aly,  A,  H.,  Ebel,  R,  A.,  E, Müller, W, E, G., Mosaddak,  M.,
Hakiki,  A.,  Ebel,  R.,  Proksch,  P.
2003. Bioactive Secondary Metabolites from The Endophytic
Fungus Chaetomium sp.  Isolated from  Salvia  Officinalis  Growing in  Morocco. Journal  Biotechnol Agron  So  Environ .  13(2):  229-
234.
Rohana ,O, S. 2011. Karakterisasi Simplisia, Skrining Fitokimia dan Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol Tumbuhan “Rosela” ( Hibiscus sabdariffa L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Esherichia  coli .  Forum  USU.
Meta.
Radji, 2005. Diversitas Jamur Endofit pada Tanaman  Padi  ( Oryza  sativa L.) dan Potensinya Sebagai Pengendali Hama. Fakultas Pertanian. Universitas Mulawarman. Samarinda. Sofiani,  Y,  S.  2003. Isolasi,  Pemurnian, dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Senyawa Sinensetin dari  Ekstrak Daun Kumis Kucing ( Orthosiphonis  aristatus ). Prodi Biokimia FMIPA. Institut Pertanian Bogor. Tilesky Phoamda , 2014. Uji Efek
Antibakteri  Jamur  Endofit  Akar Bakau  (Bruguiera gymnorhiza ) Terhadap  Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia  Coli. Jurnal e-Biomedik. 12 (2) No (1).
Manado.