Pengaruh komposisi biopolimer terhadap viabilitas Trichoderma sp. sebagai seed coating benih jagung
Effect of biopolymer composition on the viability of Trichoderma sp. as maize-seed coating
Ahmad Arsyadmunir 1 * Gita Pawana 1 , Kaswan Badami 1 , Nuriatus Sholikhah 1 , Yenny Wuryandari 2
1 Program studi Agroekoteknologi Universitas Trunojoyo Madura, Jl. Raya Telang PO BOX 2  Kamal Bangkalan, 69162.
2 Program studi Agroekoteknologi Universitas Pembangunan Nasional Veteran Jawa Timur, Jl. Rungkut Madya No.1, Gunung
Anyar, Kec. Gunung Anyar, Surabaya, Jawa Timur 60294.
*E-mail korespondensi: ahmadarsyadmunir@trunojoyo.ac.id
Diterima: 18 September 2022 / Disetujui: 27 Januari 2023

## ABSTRACT
Trichoderma spp., is a fungus with the ability to control disease and promote plant growth. The mechanism is through the activity of microparasites, antimicrobial secondary metabolites, phytohormones and mobilization of plant nutrients for plant growth and production. The purpose of this study was to examine the biopolymer composition as a seedcoating formula on corn seeds with Trichoderma as the active ingredient, namely to obtain a biopolymer composition that is able to maintain viability and  inactivate  Trichoderma  during  storage.  Completely  randomized  design  was  used  with  a  single  treatment  factor  for  the composition of the formula, i.e.; K1 : control 1 (suspension of conidia Trichoderma sp.); K2 : xanthan gum 2.5% + Na alginate 2.5% + conidia suspension Trichoderma sp. + talk; K3 : xanthan gum 5% + Na alginate 5% + conidia suspension Trichoderma sp. + talk; K4 : xanthan gum 2.5% + CMC 2.5% + conidia suspension Trichoderma sp. + talk; K5 : xanthan gum 5% + CMC 5% + conidia suspension Trichoderma sp. + talk; K6 : Na alginate 2.5% + CMC 2.5% + Trichoderma sp. conidia suspension. + talk; K7 : Na alginate 5% + CMC 5% + conidia suspension Trichoderma sp. + talk; K8 : control 2 (suspension of conidia Trichoderma sp. + Talc). The results obtained showed that the composition of the seedcoating formula consisting of 5% xanthan gum + 5% Na alginate + Trichoderma conidia suspension + talc up to 60 days after application of seedcoting on seeds could inactivate Trichoderma reproduction, but could not suppress the decrease in viability.
Keywords: Inactive, biopolymer, formulation, composition, Trichoderma, viability.

## ABSTRAK
Trichoderma spp., adalah cendawan dengan kemampuan sebagi pengendali penyakit dan pemacu pertumbuhan tanaman. Mekanismenya melalui aktivitas mikroparasit, metabolit sekunder antimikroba, fitohormon dan mobilisasi nutrisi tanaman untuk pertumbuhan dan produksi tanaman. Tujuan penelitian ini adalah mengkaji komposisi biopolymer sebagai formula seedcoating pada  benih  jagung  dengan  Trichoderma  sebagai  bahan  aktif,  yaitu  mendapatkan  komposisi  biopolymer  yang  mampu mempertahankan viabilitas dan meng-inaktifkan Trichoderma selama dalam masa penyimpanan.  Digunakan rancangan acak lengkap  dengan  factor  perlakuan  tunggal  komposisi  formula  yaitu;  K1  :  kontrol 1 (suspensi  konidia  Trichoderma  sp.);  K2  : xanthan gum 2.5% + Na alginate 2.5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk;  K3 : xanthan gum 5% + Na alginate 5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk;  K4 : xanthan gum 2.5% + CMC 2.5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk; K5 : xanthan gum 5% + CMC 5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk; K6 : Na alginate 2.5% + CMC 2.5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk; K7 : Na alginate 5% + CMC 5% + suspensi konidia Trichoderma sp. + talk; K8 : Kontrol 2 (suspensi  konidia  Trichoderma  sp.  +  Talk).  Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  komposisi  formula  seedcoating  yang tersusun dari 5% xanthan gum+ 5% Na alginate+ suspensi konidia Trichoderma+ talk sampai dengan 60 hari setelah aplikasi seedcoting pada benih dapat meng-inaktif-kan reproduksi Trichoderma, namun tidak dapat menekan penurunan viabilitasnya.
Kata kunci: Inaktif, biopolymer, formulasi, komposisi, Trichoderma, viabilitas.

## PENDAHULUAN
Trichoderma spp.,  adalah  cendawan  yang  paling banyak  digunakan  sebagai  agen  hayati  pengendali  penyakit
dan  pemacu  pertumbuhan  tanaman,  melalui  mekanisme mikroparasit,  menghasilkan  sejumlah  besar  metabolit sekunder  antimikroba,  fitohormon  dan  memobilisasi  nutrisi tanaman untuk pertumbuhan dan produksi tanaman,  (Shoresh
DOI: https://doi.org/10.21107/agrovigor.v16i1.16950
Agrovigor : Jurnal Agroekoteknologi
Copyright (c) 2023 Author (s) http://journal.trunojoyo.ac.id/agrovigor
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-Share Alike 4.0
ISSN: 1979-5777 ( Print ), 2477-0353 ( Online )
et  al .,  2010;  Mastouri et  al .,  2012).  Aspek  menarik  dari Trichoderma adalah kemampuannya untuk mengkoloni akar dan  menginduksi  ketahanan  sistemik  terhadap  serangan jamur, bakteri, virus dan bahkan serangga pada bagian yang jauh  dari  inokulasi  Trichoderma,  juga  resistensi  tanaman terhadap kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan seperti cekaman abiotic (Contreras et al ., 2016).
Seed coating atau  pelapisan benih adalah penggunaan  bahan  eksogen  pada  permukaan  benih  dengan tujuan  mempermudah  penanganan  dan  memperbaiki penampilannya  misalnya,  berat  dan  ukuran  benih  dan/  atau menghasilkan senyawa aktif (misalnya, zat pengatur tumbuh, mikronutrien,  dan  mikroba  inokulan)  yang  meningkatkan perkecambahan  dan  pertumbuhan  tanaman  dan  dapat melindungi benih dari fitopatogen dan ( Rocha et al ., 2019 ). Saat  ini,  pelapisan  benih  digunakan  untuk  mengaplikasikan warna  dan  pelacak  (misalnya,  pewarna  fluorescent); pelindung  (misalnya,  pestisida);  bahan  pembenah  tanah (misalnya, bahan hidrofilik tanah dan penyerap air); senyawa yang  merangsang  perkecambahan,  pertumbuhan,  dan ketahanan terhadap cekaman (misalnya, asam salisilat, asam giberelat,  dan  asam  absisat);  dan  makronutrien  dan mikronutrien  serta  inokulan  mikroba  bermanfaat  bagi tanaman  (MBT)  (Pedrini et  al .,  2017).  Melapisi  benih tanaman  dengan  MBT  memungkinkan  aplikasi  yang  tepat dalam  jumlah  kecil  inokulan  pada  antarmuka  benih-tanah (Scott, 1989), memastikan bahwa MBT dapat diakses dengan mudah  pada  tahap  perkecambahan  dan  tahap  awal pengembangan  tanaman,  merangsang  pertumbuhan  yang sehat  dan  cepat,  dan  akibatnya  memaksimalkan  produksi tanaman (Colla et al ., 2015; Głodowska et al ., 2016).
Berdasarkan  uraian  ini  maka  tujuan  penelitian  ini adalah  mengaplikasikan  Trichoderma  dalam  bentuk  seed coating pada benih jagung yang diformulasikan dalam bentuk tepung,  selanjutnya  agar  viabilitas Trichoderma sp. selaku agen  biokontrol  penyakit  dapat  bertahan  dan  terlindungi selama  periode  penyimpanan,  maka  dalam  formulasinya diperlukan biopolimer sebagai bahan  pengikat.  Pemilihan  jenis dan konsentrasi  biopolimer yang tepat sangat penting untuk kelangsungan  hidup  inokulan  mikroba  yang  diterapkan, sehingga  permasalahan  penelitian  ini  adalah  bagaimanakah komposisi  biopolimer  yang  terbaik  yang  dapat  melindungi dan mempertahankan viabilitas Trichoderma sp. sebagai seed coating benih jagung.

## BAHAN DAN METODE
Trichoderma  diperoleh  dari  koleksi  laboratorium proteksi  dan  lingkungan  tanaman  Universitas  Trunojoyo Madura, yang diketahui bersifat antagonis terhadap cendawan pathogen Fusarium  oxysporum dan Coletotrichum sp.  dan bakteri Erwinia caratovora, yang setiap bulan dirawat dengan melaukan rekultur pada media PDA.
Potato  dextrose  broth dibuat  dengan  200  g  kentang yang telah dikupas, dicuci bersih dan dipotong dadu 1x1 cm di  rebus  dalam  1000  ml  aquadest  selama  ±  30  menit, kemudian disaring, air rebusan dipindah kedalam Erlenmeyer 1000 ml. Kemudian ditambahkan 20 g dexstrosa dan aquadest hingga  volume  total  1000 ml  dan  diaduk  hingga  homogen.
selanjutnya  di  sterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu  konstan 121°C selama 20 menit.
Dua  cakram Trichoderma sp. berumur  14  hari  pada media  PDA,  dengan  diameter  1  cm  diambil  menggunakan jarum  ent  dikulturkan  pada  250  ml potato  dextrose  broth . Kemudian diinkubasikan pada suhu kamar selama 5 hari dan mulai  hari  ke  6  disekker  pada  200  rpm  sampai  diperoleh suspensi konidia dengan kerapatan 10 6 konidia/ml.
Digunakan  rancangan  acak  lengkap  dengan  factor perlakuan  tunggal  komposisi  formula  yaitu;  K1  :  kontrol  1 ( Trichoderma sp.);  K2  :  xanthan  gum  2.5%  +  Na  alginate 2.5% + Trichoderma sp. + talk;  K3 : xanthan gum 5% + Na alginate 5%  + Trichoderma sp.  +  talk;    K4  :  xanthan  gum 2.5% +  CMC 2.5% + Trichoderma sp. +  talk; K5 :  xanthan gum  5%  +  CMC  5%  + Trichoderma sp.  +  talk;  K6  :  Na alginate 2.5% + CMC 2.5% + Trichoderma sp. +  talk; K7 : Na alginate 5% +  CMC 5% + Trichoderma sp. +  talk; K8 : Kontrol 2 ( Trichoderma sp. + Talk).
Sebanyak  50  ml  suspensi  konidia Trichoderma sp. dicampur  dengan  biopolimer  sesuai  dengan  masing-masing perlakuan  dan  ditambahkan  dengan  100  gram  tepung  talk. Kemudian  semua  bahan  dihomogenkan  hingga  berbentuk pasta.  Formula  ditipiskan  pada  loyang  kemudian  di dikeringkan  dengan  suhu  30°C  hingga  formula  kering. Formula  yang  telah  kering  diblender  (dihancurkan)  sampai dengan berbentuk tepung.
Benih  jagung  dengan  kadar  air  14%  didisinfektan  natrium hipoklorit  5.25%  selama  1  menit,  kemudian  benih  dibilas dengan  air  steril  sebanyak  tiga  kali  dan  dikering  oven  suhu 40 0 C sampai diperoleh kadar air 14%. Kemudian setiap 100 benih  (30  gram) diberikan pelemban dengan air secukupnya lalu ditambahkan 10 g formula, kemudian diaduk hingga benih terlapisi oleh formula. Benih dikering - anginkan sampai diperoleh kadar air  14%.  Benih  selanjutnya  dikemas  dalam  wadah  plastik polietilen.  Penyimpanan  dilaksanakan  pada  suhu  ruang selama 60 hari (2 bulan). Viabilitas dan pertumbuhan diamati 10, 20, 40 dan 60 hari setelah benih disimpan.
Viabilitas dan pertumbuhan Trichoderma sp
Sebanyak 10 benih benih jagung yang telah dilapisi formula dan  telah  disimpan  10,  20,  40  dan  60  hari,  dimasukkan kedalam 10 ml air steril, kemudian diaduk sampai homogen selanjutnya  dilakukan  penyaringan  untuk  memisahkan suspensi  yang  terbentuk  dengan  benih  jagung.  Selanjutnya pada  suspensi  yang  diperoleh  dipipet  1  ml  dan  dilakukan penghitungan  kerapatan  dengan  metode  cawan  tuang (pour plate ) pada media PDA (potato dextrose agar) dan diinkubasikan 48-120  jam  pada  suhu  kamar  tanpa  penyinaran. Satu koloni yang  tumbuh  diasumsikan  berasal  dari  satu  konidia  yang viabel.

## N = 𝐧 𝐱 𝐝
Keterangan : N : Kerapatan konidia yang viabel per ml (cfu/mL) n : Jumlah koloni pada cawan biakan 𝑑 ∶ Tingkat pengenceran
Selanjutnya  pada  data  yang  diperoleh  dilakukan  analisa varian dengan α = 0.05 dan jika menunjukkan perbedaan yang
signifikan  dilanjutkan  dengan  uji  beda  nyata  jujur (BNJ)/Tukey pada α = 0.05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rata-rata  viabilitas  Trichoderma  yang  terdapat  pada suspensi seed coating pada benih jagung, yang telah disimpan 10, 20, 40, dan 60 hari yang diinkubasikan selama 48-120 jam disajikan pada table 1, 2, 3 dan 4.
Tabel 1. Kerapatan viabilitas Trichoderma sp. (… × 10⁴) cfu/ml pada benih yang disimpan 10 hari setelah aplikasi seed coating . Perla kuan Lama inkubasi (jam) 48 60 72 84 96 208 120 K1 89  a 116  a 117  a 121  a 127  a 128  a 130  a K2 197  ab 198  ab 199  ab 201  ab 202  ab 202  ab 202  ab K3 79  a 81  a 81  a 81  a 83  a 83  a 85  a K4 328  b 328  b 331  b 334  b 334  b 334  b 334  b K5 258  ab 259  ab 259  ab 262  ab 263  ab 263  ab 263  ab K6 167  ab 190  ab 194  ab 196  ab 196  ab 198  ab 198  ab K7 228  ab 236  ab 241  ab 244  ab 246  ab 264  ab 266  ab K8 222  ab 227  ab 228  ab 229  ab 230  ab 231  ab 231  ab
Keterangan: angka yang diikuti oleh huruf yang sama  pada kolom yang sama  tidak berbeda nyata berdasarkan pada uji beda nyata jujur α = 0.05
Tabel 2. Kerapatan viabilitas Trichoderma sp. (… × 10⁴) cfu/ml pada benih yang disimpan 20 hari setelah aplikasi seed coating . Perla kuan Lama inkubasi (jam) 48 60 72 84 96 208 120 K1 65 67 68 69 69 69 70 K2 180 186 189 190 190 190 191 K3 70 73 74 74 75 75 75 K4 197 200 201 201 201 201 201 K5 249 252 255 256 256 257 258 K6 162 163 166 167 167 173 176 K7 84 104 106 108 109 109 109 K8 114 116 116 116 116 118 120
Tabel 3. Kerapatan viabilitas Trichoderma sp. (… × 10⁴) cfu/ml pada benih yang disimpan 40 hari setelah aplikasi seed coating . Perla kuan Lama inkubasi (jam) 48 60 72 84 96 108 120 K1 20 21 22 22 25 25 25 K2 139 154 159 165 171 172 172 K3 23 27 32 32 33 33 33 K4 75 78 79 79 79 79 79 K5 28 30 30 30 31 32 32 K6 44 46 46 46 46 46 46 K7 30 30 32 32 33 33 33 K8 32 33 33 33 34 34 34
Tabel 4. Kerapatan viabilitas Trichoderma sp. (… × 10⁴) cfu/ml pada benih yang disimpan 60 hari setelah aplikasi seed coating . Perla kuan Lama inkubasi (jam) 48 60 72 84 96 108 120 K1 7 8 8 8 8 8 8 K2 5 5 6 6 6 6 6 K3 18 18 19 19 19 19 19 K4 6 7 7 7 7 7 7 K5 7 7 7 7 7 7 7 K6 7 7 7 7 7 7 7 K7 11 11 11 11 11 11 11 K8 6 6 6 6 6 6 6
Gambar 1. Viabilitas   Tricoderma 10 – 60  hari setelah aplikasi seed coating pada masing-masing perlakuan 120 jamsetelah inkubasi
Berdasarkan hasil annalisa varian pada ke empat table tersebut,  tampak  semua  formula  komposisi  biopolimer sampai  dengan  60  hari  setelah  aplikasi  seedcoating  dapat mempertahankan  viabilitas  Trichoderma  sampai  dengan kerapatan  konidia  10 4 cfu/ml  suspensi.    Komposisi biopolymer  K4  (xanthan  gum  2,5%  +  Na  alginate  2,5%+ Trichoderma+ talk) pada 10 hari setelah aplikasi seedcoating, tampak memberikan viabilitas tertinggi dan berbeda  dengan perlakuan K3 namun sama dengan perlakuan lainnya. Namun demikian pada 20 – 60 hari setelah aplikasi seedcoting semua formula komposisi biopolymer tidak menunjukkan perbedaan viabilitas Trichoderma yang berarti.
Pada  seluruh  periode  pengamatan  dari  10  –  60  hari setelah  aplikasi  seedcoating,  semua  komposisi  formulasi cenderung tidak memberikan konsistensi dalam menurunkan bioaktivitas  (tingkat inactive )  Trichoderma,  hal  ini ditunjukkan dengan selalu bergantinya posisi tertinggi  jenis komposisi  biopolymer  (perlakuan)  terhadap  kerapatan viabilitas Trichoderma yang ditunjukkan dalam setiap periode pengamatan.  Namun  demikian  perlakuan  K3  (xanthan  gum 5%+  Na  alginate  5%+  Trichoderma+  talk)  cenderung memberikan tingkat inaktive yang lebih tinggi dari perlakuan lainnya, yaitu dengan tingkat kerapatan viabilitas  1,9 x 10 5 cfu pada 60 hari setelah aplikasi seedcoating.
Kondisi  ini  menunjukkan  bahwa  meningkatnya konsentrasi xanthan gum dan Na alginate dari 2,5% menjadi 5%  cenderung  menekan  viabilitas  namun  memberikan dampak  tingkat  inactive  yang  lebih  lama  (ditunjukkan  pada Gambar  1).  Hal  ini  dapat  dikarena  pengaruh  dari  karakter xanthan gum sebagai exopolisakarida yang berperan sebagai pelindung dari perubahan lingkungan yang tidak menguntungkan (Hasan et al ., 2018) dan dijelaskan oleh Diza et  al .  (2020)    bahwa  Na  alginate  yang  berperan  sebagai pembentuk koloid (hidrokoloid)  atau gel yang stabil.
Kemampuan  komposisi  formula  xanthan  gum+    Na
alginate  dalam  melakukan  peng- inactive -an  terhadap Trichoderma juga ditunjukkan terhadap mikroba lain, seperti dijelaskan oleh Madyasari et al ., (2017) bahwa bahan coating natrium  alginate  dengan  konsentrasi  2.5%,  dan  natrium alginat  konsentrasi  5%  tidak  bersifat  racun  dan  dapat mempertahankan viabilitas dan vigor benih cabai.  Selain itu juga  perlakuan seed  coating dengan  penambahan  natrium alginate dengan konsentrasi 2.5%, terbukti dapat mempertahankan  populasi  rizobakteri  10 4 cfu  g -1 sampai dengan  periode  simpan  24  minggu.  Di  sisi  lain  Subaryono, (2010) menjelaskan bahwa enkapsulasi Na alginat dalam bio- efikasi Trichoderma  harzianum mampu  mempertahankan kelangsungan hidupnya bahkan setelah enam tahun pada suhu kamar, hal ini dikarenakan Na alginate mempunyai viskositas yang lebih rendah jika dibandingkan dengan polimer lain.
Penurunan jumlah konidia diduga juga karena selama penyimpanan  tidak  ada  aktivitas  reproduksi  namun  lebih kearah  membentuk  fase  dorman.  Hal  ini  disebabkan komposisi  bahan  yang  digunakan  untuk  seed  coating  tidak mengandung cukup nutrisi yang dibutuhkan oleh Trichoderma sp.  Sesuai  yang  dijelaskan  oleh  Amaria et  el., (2016),  bahwa Trichoderma sp. dapat  membentuk  fase istirahat (klamidospora) untuk bertahan dari lingkungan yang kurang  mendukung  pertumbuhannya,  seperti  media  yang miskin  nutrisi.  Selain  itu  juga  dijelaskan  bahwa  salah  satu syarat bahan pembawa yang baik untuk formula agens hayati agar  dapat  disimpan  lebih  lama  adalah  selama  masa penyimpanan  agen  hayati  tidak  memperbanyak  diri  dengan bioaktivitas dalam formula lebih rendah dan stabil

## KESIMPULAN
Berdasarkan  pembahasan  dapat  disimpulkan  bahwa komposisi  formula  seedcoating  yang  tersusun  dari  5% xanthan  gum+  5%  Na  alginate+  suspensi  konidia
Trichoderma+  talk  sampai  dengan  60  hari  setelah  aplikasi seedcoting  pada  benih  dapat  meng-inaktif-kan  reproduksi Trichoderma,  namun  tidak  dapat  menekan  penurunan viabilitasnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Amaria,  W.,  Ferry,  Y.,  Samsudin,  S.,  &  Harni,  R.  (2016).
Pengaruh Penambahan Gliserol pada Media
Perbanyakan  terhadap  Daya  Simpan  Biofungisida Trichoderma.
Colla, G., Rouphael, Y., Bonini, P., & Cardarelli, M. (2015).
Coating seeds with endophytic fungi enhances growth, nutrient  uptake,  yield  and  grain  quality  of  winter wheat. Int. J. Plant Prod , 9 (2), 171-190.
Contreras-Cornejo,  H.  A.,L.  Macías-Rodríguez,  E.  del-Val, E., and J. Larsen. (2016).
Ecological  functions  of  trichoderma  spp.  and  their secondary metabolites in the  rhizosphere:  interactions  with  plants.  FEMS Microbiol. Ecol. 92, fiw036.
doi:10.1093/femsec/fiw036.
Diza,  Y.  H.,  Asben,  A.,  &  Anggraini,  T.  (2020).  Isolasi, identifikasi  dan  penyiapan  sediaan  kering  Bakteri Asam  Laktat  yang  berpotensi  sebagai  probiotik  dari dadih  asal  Sijunjung  Sumatera  Barat. Indonesian Journal of Industrial Research , 10 (2), 155-164.
Głodowska,  M.,  Husk,  B.,  Schwinghamer,  T.,  &  Smith,  D.
(2016).  Biochar  is  a  growth-promoting  alternative  to peat  moss  for  the  inoculation  of  corn  with  a pseudomonad. Agronomy for sustainable development , 36 , 1-10.
Hasan, A. E. Z., Yulianto, A., Noviana, I. M. P., & Andini, S.
P. (2018). Produksi Xanthan Gum Skala Pengembangan Menggunakan Limbah Padat Tapioka. Jurnal Ilmiah Teknik Industri , 6 (2). Madyasari, I., Budiman, C., Manohara, D., & Ilyas, S. (2017). Efektivitas  seed  coating  dan  biopriming  dengan rizobakteri  dalam  mempertahankan  viabilitas  benih cabai  dan  rizobakteri  selama  penyimpanan. Jurnal Hortikultura Indonesia , 8 (3), 192-202.
Mastouri,  F.,  Björkman,  T.,  &  Harman,  G.  E.  (2012). Trichoderma harzianum enhances antioxidant defense of  tomato  seedlings  and  resistance  to  water deficit. Molecular  plant-microbe  interactions , 25 (9), 1264-1271.
Pedrini S., D. J. Merritt, J. Stevens , K. Dixon. (2017). Seed coating:  science  or  marketing  spin? Trends Plant Science. 22, 106–116. 10.1016/j.tplants. 2016.11.002 Rocha, I., Y. Ma, P. Souza-Alonso, M. Vosátka, H. Freitas, &
R.  S.  Oliveira.  (2019).  Seed  Coating:  A  Tool  for Delivering Beneficial Microbes to Agricultural Crops. In Frontiers  in  Plant  Science (Vol.  10).  Frontiers Media S.A. https://doi.org/10.3389/fpls.2019.01357. Scott,  J.  M.  (1989).  Seed  coatings  and  treatments  and  their effects on plant establishment. Advances in agronomy , 42 , 43-83.
Shoresh, M., Harman, G. E., & Mastouri, F. (2010). Induced systemic  resistance  and  plant  responses  to  fungal biocontrol
agents. Annual review of
phytopathology , 48 , 21-43.
Subaryono.  (2010).  Modifikasi  Alginat  dan  Pemanfaatan Produknya. Squalen. 5, 1, 1-7.