## IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA DAN
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL 95 % DAUN, KULIT BATANG DAN AKAR  PULAI ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.) TERHADAP MENCIT BALB/C

## Fadhilatul Ismiyah, Begum Fauziyah, Roihatul Muti’ag, A.Ghanaim Fasya
UIN Maulana Malik Ibrahim Malang Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi,

## ABSTRACT
Use  of  traditional  medicine  derived  from  the  active  ingredient  over  a  variety  of  plants  chosen  by  the publicin treating some kinds of diseases. One of the herbs that have been used by people as a medicine is plant Pulai  ( Alstonia  scholaris (L.)  Br.).  This  study  was  conducted  to  support  the  potential  Pulai  as  medicine  by providing information that Pulai plants safe to eat. The purpose of this study was to determine the compound and the  LD 50 value  of  95%  ethanol  extract  of  the  leaves,  bark  and  roots  of  Pulai.  The  study  was  conducted  with  a sample extract leaves, bark and roots Pulai with 95% ethanol. Extracts  were obtained using test phytochemical and identification using Thin Layer Chromatography. After that acute toxicity tests on mice BALB/C. Results of phyto  chemical  test,  95%  ethanol  extract  of  leaves  of  Pulai  give  positive  results  alkaloid  sand  saponins;  95% ethanol extract of the stem bark Pulai gives positive results in alkaloids, saponins, and terpenoids 95% ethanol extract ofthe roots ofPulaigives positive results inalkaloidsandterpenoids.LD 50 valueof95% ethanolextract of the leaves, bark  and roots are >5.000mg/kg bw  which indicates that the plant extract Pulai is practically non-toxic and safe for consumption.
Keywords: Pulai ( Alstonia scholaris (L.) R. Br), identification of compound, toxicity test

## ABSTRAK
Pemakaian obat tradisional yang berasal dari bahan aktif beberapa macam tumbuhan lebih dipilih oleh masyarakat  dalam  mengobati  beberapa  macam  penyakit.  Salah  satu  tumbuhan  yang  telah  dimanfaatkan  oleh masyarakat  sebagai  obat  adalah  tumbuhan  Pulai  ( Alstonia  scholaris (L.)  Br.).  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mendukung  akan  potensi  Pulai  sebagai  obat  dengan  memberikan  informasi  bahwa  tumbuhan  Pulai  aman dikonsumsi. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk  mengetahui  golongan  senyawa dan  nilai  LD 50 dari ekstrak etanol 95 % daun, kulit batang dan akar Pulai. Penelitian ini dilakukan dengan mengekstrak sampel daun, kulit batang  dan  akar  Pulai  dengan  etanol  95  %.  Ekstrak  yang  diperoleh  digunakan  uji  fitokimia  dan  identifikasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis. Selanjutnya uji toksisitas akut terhadap mencit BALB/C. Hasil dari uji fitokimia  ekstrak  etanol  95  %  daun  Pulai  memberikan  hasil  positif  alkaloid  dan  saponin;  ekstrak  etanol  95  % kulit batang Pulai memberikan hasil positif pada alkaloid, saponin, dan terpenoid ekstrak etanol 95 % akar Pulai memberikan hasil positif pada alkaloid dan terpenoid. Nilai LD 50 dari ekstrak etanol 95 % daun, kulit batang dan akar  adalah  >  5.000  mg/Kg  BB  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tumbuhan  Pulai  adalah  praktis  tidak  toksik dan aman untuk dikonsumsi.
Kata kunci : Pulai ( Alstonia scholaris (L.) Br.), identifikasi golongan, uji toksisitas akut

## I. PENDAHULUAN
Tumbuhan Pulai ( Alstonia scholaris (L.)  R.  Br.)  merupakan  salah  satu  jenis tumbuhan  yang  ada  di  Insonesia.  Manfaat yang biasanya diambil dari tumbuhan Pulai diantaranya  sebagai  obat  demam,  malaria, limpa  membesar,  batuk  berdahak,  diare, disentri,  kurang  nafsu  makan,  sakit  perut, kencing  manis,  hipertensi,  wasir,  anemia, dan  rematik  akut  (Dalimartha,  2001; Khyade, 2008; Zuraida, 2010)..
Kandungan senyawa tumbuhan
Pulai diantaranya golongan triterpen, steroid,  alkaloid  dan  saponin  (Djumidi et al ., 1993; Boaz et al ., 1957; Bader, 1953).
Toksisitas akut adalah efek berbahaya  yang  terjadi  segera  setelah terpapar  dosis  tunggal  atau  berulang  dalam waktu 24 jam (Priyanto, 2010).
Baliga et  al. (2004)  melakukan penelitian  mengenai  uji  toksisitas  akut  dari ekstrak  etanol  85  %  kulit  batang  Pulai  dan
menyebutkan  bahwa  sampai  pada  dosis 2.000  mg/Kg  BB  tidak  menimbulkan kematian  terhadap  hewan  coba.  Namun untuk  nilai  toksisitas  akut  dari  bagian tumbuhan  Pulai  yang  lain  seperti  daun  dan akar masih belum diketahui, sehingga perlu dilakukan penelitian mengenai uji toksisitas akut  dari  tumbuhan  Pulai  untuk  menilai keamanan  penggunaannya  sebagai  obat bahan alam.
Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui senyawa apa saja yang terdapat dalam ekstrak etanol 95 % tumbuhan Pulai. Dan  bagaimanakah  nilai  uji  toksisitas  akut tumbuhan Pulai.

## II. METODE PENELITIAN Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah Rotary  evaporator ,  pipet ukur 5 mL, bola hisap, erlenmeyer  500 mL, gelas  ukur  100  mL,neraca  analitik,  gelas arloji,  penyaring  buchner  dan shakker ,  plat tetes,  pipet  tetes,  plat  KLT  silika  gel  60 F 254 ,  pipa  kapiler,  bejana  pengembang  dan lampu  UV,  kandang  hewan  coba,  botol minum, tempat makan mencit, dan sonde.
Bahan Bahan-bahan yang digunakan antara lain  adalah  daun,  kulit  batang,  dan  akar Pulai (Alstonia  scholaris, (L.)  R.  Br. ) , etanol95 %, larutan CMC ( Carboxy Methyl Cellulose )  Na  0,5  %,  akuades,  HCl  1  %, reagen  dragendorff,  reagen  mayer,  logam Mg,  alkohol,  HCl,  etanol  panas,  eter,  dan pereaksi  lieberman  burchard,  n-hesana,  etil asetat, kloroform, metanol, n-butanol, asam asetat,  dan  amoniak.  Hewan  coba  yang digunakan adalah mencit Balb/C.

## Cara Kerja Ekstraksi
Serbuk  dari  masing-masing  sampel tumbuhan  Pulai  (daun,  kulit  batang  dan akar)  ditimbang  sebanyak  100  gr.  Dibagi dalam  dua  erlenmeyer  (masing-masing  50 gr)dan dimaserasi dengan 350 mL etanol 95 %  selama  24  jam.  Kemudian  disaring  dan dipekatkan dengan rotary evaporator.

## Uji Fitokimia
Uji Alkaloid (Saxena et al. et al , 2012) Sebanyak  0,5  g  ekstrak  tumbuhan Pulai ditambahkan 5 mL HCl 1% kemudian disaring.  Filtrat  yang  diperoleh  dibagi menjadi 2 dimasukkan dalam tabung reaksi. Tabung  reaksi  I  ditambahkan  2  –  3  tetes reagen  Dragendorff,  sedangkan  tabung reaksi  II  ditambahkan  2  –  3  tetes  pereaksi Mayer.  Jika  pada  tabung  I  terbentuk endapan  jingga-coklat  dan  pada  tabung  II terbentuk  endapan  putih  atau  kekuning- kuningan maka ekstrak menunjukkan adanya alkaloid.
Uji Flavonoid (Saxena et al. et al , 2012) Shinoda test: masing-masing ekstrak daun, kulit batang dan akar Pulai dimasukan  dalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan  alkohol  panas  1  –  2  mL.
Selanjutnya
ditambahkan logam magnesium  (Mg)  dan  beberapa  tetes  HCl pekat.  Jika  larutan  berubah  penampilan menjadi  merah,  jingga  atau  ungu  maka menunjukan adanya flavonoid.
Uji Saponin (Saxena et al. et al , 2012) Sebanyak  0,5  g  ekstrak  daun,  kulit batang  dan  akar  Pulai  masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksitertutup, ditambahkan  10  mL  air.Kemudian  dikocok selama  10  detik  dan  dibiarkan  selama 15menit.  Adanya  saponin  ditunjukkan dengan terbentuknya busa/buih yang stabil.

## Uji  Terpenoid  dan  Steroid  (Indrayani, 2006)
Ekstrak  daun,  kulit  batang  dan  akar Pulai  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi, dilarutkan  dalam  0,5  mL  kloroform  dan ditambahkan  dengan  asam  asetat  anhidrat. Campuran ini selanjutnya ditambah dengan 1  –  2  mL  H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding tabung  tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh berupa  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya terpenoid,  sedangkan jika terbentuk warna  hijau  kebiruan  menunjukkan  adanya steroid.

## Identifikasi golongan dengan KLT
Identifikasi golongan senyawa dengan  KLT  dilakukan  pada  golongan senyawa  alkaloid  (ekstrak  daun,  kulit batang dan akar), saponin (ekstrak daun dan kulit  batang)  dan  terpenoid  (ekstrak  kulit batang dan akar).
Masing-masing ekstrak etanol 95 % daun, kulit batang dan akar Pulai ditotolkan pada plat silika gel F 254 . Setelah kering plat dielusi  pada  bejana  pengembang  yang sebelumnya telah dijenuhkan.
Jenis campuran eluen yang
digunakan adalah:
1. Golongan  senyawa  alkaloid:  metanol- amoniak (200:3) (Suryanti et al ., 2005)
dan kloroform-etanol (9 : 1) (Ekasari et al., 2005). Dengan penyemprot
Dragendorff.
2. Golongan  senyawa  saponin:  kloroform :  metanol  :  air  (64:50:10)(Wonohadi, 2006),  dengan  penyemprot  Lieberman Burchard.
3. Golongan
senyawa terpenoid: metanol-kloroform  (2:3)  (Hasballah et al. ,  2006)  dan  n-heksana-etil  asetat
(1:9) (Ismarti, 2011), dengan
penyemprot Lieberman Burchard.

## Uji toksisitas akut
Mencit  diadaptasi selama  satu minggu.  Kemudian  disonde  pada  hari  ke-8 dengan  ekstrak  etanol  95  %  daun,  kulit batang  dan  akar  Pulai.  Variasi  dosis  yang diberikan  adalah  500  mg/Kg  BB,  1.500 mg/Kg  BB,  2.500  mg/Kg  BB  dan  3.500 mg/Kg  BB.  Ekstrak  dilarutkan  dengan CMC-Na 0,5 %.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Hasil  ekstraksi  maserasi  dari  daun, kulit  batang  dan  akar  Pulai  ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen hasil ekstraksi maserasi No. Ekstrak etanol 95 % Rendemen (%) (b/b) 1. Daun Pulai 20,5 2. Kulit batang Pulai 11,47 3. Akar Pulai 10,89

## Uji Fitokimia
Hasil uji fitokimia ekstrak etanol 95 %  daun,  kulit  batang  dan  akar  Pulai ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil uji fitokimia No. Metabolit sekunder Ekstrak etanol 95 % Daun Kulit batang Akar 1. 2. 3. 4. 5. Alkaloid Flavonoid Saponin Terpenoid Steroid + - + - - + - + + - + - - + -

## Identifikasi dengan KLT
Identifikasi    senyawa  alkaloid  daun dengan  eluen  metanol  :  amoniak  (200:3) memberikan pemisahan
dengan terbentuknya 6 spot, dan nilai Rf 0,16; 0,48; 0,55;  0,63;  0,68;  0,79.  Hasil  pemisahan ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil pemisahan alkaloid daun Pulai
Spot  yang  diduga  sebagai  senyawa alkaloid  adalah  pada  Rf  0,16  dan  0,79. Menurut Harborne (1996) timbulnya bercak coklat  jingga  setelah  disemprot  dengan pereaksi  Dragendorff  menunjukkan  adanya senyawa alkaloid.
Identifikasi  senyawa  alkaloid  kulit batang  dengan  eluen  metanol  :  amoniak (200:3)  menghasilkan  3  spot.  Nilai  Rf  dari spot  yang  terbentuk  adalah  0,14;  0,85;  dan 0,89.  Ketiga  spot  yang  terbentuk  diduga adalah  senyawa  alkaloid.  Hasil  pemisahan ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil pemisahan alkaloid kulit
batang
Pemisahan  alkaloid  dengan  akar Pulai  dengan  kloroform  :  etanol  (9:1) menghasilkan 8 spot dengan Rf 0,16;  0,26; 0,36; 0,42; 0,47; 0,58; 0,68; 0,74. Spot yang diduga  sebagai  alkaloid  adalah  pada  spot 0,16; 0,36; 0,47; dan 0,58. Hasil pemisahan ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3. Pemisahan alkaloid akar Pulai
Pemisahan  senyawa  saponin  daun menggunakan  kloroform  :  aseton  (4:1) menghasilkan  11  spot.  Dengan  nilai  Rf 0,16;  0,21;  0,33;  0,39;  0,44;  0,50;  0,62; 0,66; 0,77; 0,84; 0,97. Yang diduga sebagai senyawa  saponin  adalah  pada  spot  0,44. Sedangkan pada pemisahan senyawa saponin  kulit  batang  dengan  kloroform  : metanol  :  air  (64:50:10)  menghasilkan  8 spot,  nilai  Rf  dari  spot  yang  terbentuk adalah  0,31;  0,53;  0,58;  0,66;  0,71;  0,79; 0,84;  0,89.  Spot  yang  diduga  sebagai senyawa saponin adalah pada spot 0,71 dan 0,79.  Hasil  pemisahan  ditunjukkan  pada Gambar 4.
Gambar 4. Pemisahan daun saponin (a) dan kulit batang saponin (b)
Pemisahan  senyawa  terpenoid  kulit batang  dengan  metanol  :  kloroform  (2:3) menghasilkan 4 spot dengan Rf 0,28;  0,38; 0,47;  0,53;  0,87.  Spot  yang  diduga  sebagai senyawa  terpenoid  ada  pada  spot  0,28; 0,38;  0,47;  dan  0,53.  Pemisahan  senyawa terpenoid  akar  dengan  n-heksana  :  etil asetat (1:9) memberikan pemisahan dengan terbentuknya  4  spot.  Nilai  Rf  dari  masing- masing  spot  adalah  0,18;  0,22;  0,47;  dan 0,95.  Yang  diduga  sebagai  senyawa terpenoid  adalah  pada  spot  0,56.  Hasil pemisahan ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 5. Pemisahan terpenoid kulit batang (a) dan akar (b)
Robinson (1995) menyebutkan bahwa warna biru yang muncul diakibatkan oleh  adanya  reaksi  Lieberman-Burchard pada  senyawa  terpenoid  dan  steroid,  bila sterol  dan  triterpena  alkohol  dicampur dengan  anhidrat  asetat  dan  setetes  asam sulfat  pekat  maka  akan  dihasilkan  warna biru.  Bahri  (2005)  menyebutkan  bahwa senyawa terpenoid dengan pereaksi LiebermanBurchard ditandai dengan (a) (b)
(a) (b)
terbentuknya warna ungu, merah jambu dan ungu kemerahan.

## Uji toksisitas akut
Hasil  pengujian  toksisitas  akut ekstrak  etanol  daun,  kulit  batang  dan  akar Pulai  tidak  membuat  hewan  coba  mati. Bahkan  saat  dosis  dinaikkan  pada  dosis 4.500  mg/Kg  BB  dan  5.000  mg/Kg  BB tetap tidak menimbulkan kematian terhadap hewan coba. Yang terjadi  hanya perubahan tingkah  laku  dari  hewan  coba  seiring dengan  naiknya  dosis  yang  diberikan. Semakin  besar  dosis  yang  diberikan membuat hewan coba / mencit lebih banyak diam  dan  tidak  banyak  makan.  Dari  hasil tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  nilai LD 50 ekstrak  etanol  daun,  kulit  batang  dan akar Pulai adalah > 5.000 mg/Kg BB, yang berarti praktis tidak toksik (Loomis, 1978).

## IV. KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  95  %  daun  terdapat senyawa  alkaloid  dan  saponin.  eksrtak etanol  95  %  kulit  batang  terdapat  senyawa alkaloid, saponin dan terpenoid. dan ekstrak etanol 95 % akar terdapat senyawa alkaloid dan  terpenoid.  uji  toksisitas  akut  yang dilakukan  menunjukkan  bahwa  nilai  LD 50 daun,  kulit  batang  dan  akar  Pulai  adalah lebih  dari  5.000  mg/Kg  BB,  yang  berarti praktis tidak toksik.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Baliga  MS,  Jagetia  GC,  Ullor  JN,  Baliga
MP,  Venkatesh  P,  Reddy  R,  Rao KVN  M,  Baliga  BS,  Devi  S,  Raju SK,  Veeresh  V,  Reddy  TK,  Bairy KL.  2004.  The  Evaluation  of  the Acute  Toxicity  and  Long  Term Safety  of  Hydroalcoholic  Extact  of Sapthaparna (Alstonia  Scholaris) in Mice  and  Rats .Toxicology  Letters . 151: 317-326.
Bader.  1953.  Structure  of  Alstonine. Helv.
Chim, Acta 36: 215.
Boaz, et  al. 1957.  Structure  of  Alstonidine From the Bark Of Root  Of Alstonia Constricta. F. Muell. J. Am. Pharm,
Assoc. 46: 508.
Dalimartha  S.  2001. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia  Jilid 1.    Jakarta:  Trubus Agriwidya.
Djumidi  H,  Sugiarso  S,  dan  Gotama  I.
1997. Inventaris  Tumbuhan  Obat Indonesia Jilid IV. Jakarta: Departemen  Kesehatan  Balitbang Kesehatan.
Ekasari,  Wiwied.,  Widyawaruyanti,  Aty dan Hafid, Achmad Fuad. 2005. Uji Antimalaria Hasil Fraksinasi Ekstrak  Kloroform  Daun  Siamea pada Mencit Terinfeksi Plasmodium berghei . Laporan  Penelitian Tidak
Diterbitkan. Surabya: Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. Indrayani  L,  H.  Soetjipto  dan  L.  Sihasale. 2006.  Skrining  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda (Stachytarpheta jamaicensis L. Vahl) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. Jurnal Fakultas  Sains  dan  Matematika .
Salatiga:  Universitas  Kristen  Satya
Wacana.
Harborne  JB.  1987. Metode  Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Penerjemah  Kosasih  Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung: ITB.
Hasballah K, Murniana dan Al-azhar. 2006.
Aktivitas  Antibakteri  dan  Antifungi Dari  Tumbuhan Wedelia  biflora .
Jurnal  Kedokteran  YARSI .  14  (1)  : 38-45.
Ismarti.  2011.  Isolasi  Triterpenoid  dan  Uji
Antioksidan  Dari  Fraksi  Etil  Asetat Kulit Batang Meranti Merah ( Shorea  singkawang (Miq).  Miq). Artikel . Andalas: Kimia
Pascasarjana Universitas Andalas.
Khyade MS and Vaikos NP . 2008. Phytochemical  and  antibacterial properties  of  leaves  of  Alstonia scholaris R. Br.
Loomis  TA.  1978. Toksikologi  Dasar .
Semarang: IKIP Press.
Priyanto. 2010. Toksikologi . Depok: Leskonfi (Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi). Robinson  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi . Bandung: ITB. Saxena N, Shrivastava PN dan Saxena RC. 2012. Preliminary Physico-
Phytochemical  Study  of  Stem  Bark of Alstonia Scholaris (L.) R. Br.  – a  Medicinal  Plant. International
Journal  of  Pharmaceutical  Science and Research. India: UPSR.
Suryanti  V,  Dewi  MS,  Kristinawati,  D. 2005.  Komponen  Kimia  Buah  Pare Belut (Trichosanthes  anguina  L.) . Jurnal Alchemy , 4 (2): 28-34.
Wonohadi  E,  Diah  AP,  Diana  AB,  Sri  L,
Melani.  2006.  Identifikasi  Senyawa
Anti Mikroba Rimpang Temu Giring ( Curcuma Heyneana Val dan Van  Zijp )  secara  Bioautografi. Surabaya: Fakultas Farmasi Universitas Surabaya.
Zuraida,  Effendi  R,  Lelana  NE.  2010.
Prospek Pulai (Alstonia sp) Sebagai
Bahan  Baku  Obat  Anti  Kolesterol.
Bogor: Badan Penelitian dan
Pengembangan Kehutanan..