## Indonesian Journal of Pure and Applied Chemistry
journal homepage: http://jurnal.untan.ac.id/index.php/IJoPAC
EKSTRAKSI DAN PENENTUAN GUGUS FUNGSI ASAM HUMAT DARI PUPUK KOTORAN SAPI
Nurlina 1* , Intan Syahbanu 1 , Mirna Tersiana Tamnasi 1 , Chyntia Nabela 1 , Maria Desi Furnata 1
1 Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura, Kalimantan Barat, Indonesia
* Corresponding author: nurlina@chemistry.untan.ac.id ARTICLE INFO

## ABSTRACT
Article history: Received 21 May 2018 Accepted 28 May 2018 Available online 26 June 2018 Keywords: Extraction Humic acid Cow manure Fertilizer Total acidity Cow manure fertilizer was used as raw material for the extraction of  humic  acid  in  this  research.  The  aim  of  this  research  were extraction  of  humic  acid  from  cow  manure  fertilizer, characterization of  functional  groups  based  on FTIR  spectra,  and determination  of  humic  acid  functional  groups.  Humic  acid extraction from cow manure used 0.050 M; 0.100 M; 0.250 M dan 0.500 M KOH solution. A cow manure fertilizer were shaken with KOH solution for 1; 2; 4 and 6 h. The quantitative determination of oxygen-containing functional groups of humic acid was conducted by titrimetri.  The  FTIR  spectrum  showed  the  presence  of –OH group and N-H stretching (bands 3361.46 cm -1 ); C-H aliphatic for CH 2 ,  CH 3 (2946.52  cm -1 and  1442.24  cm -1 );  C=C  aromatic components (1626.48 cm -1 ); COO- symmetric stretching (1521.71 cm -1 );  C-O  stretching  from –COOH  (1229.74  cm -1 ).  Total  acidity value  was  500  cmole.kg -1 (Baryta  Absorption  Method);  carboxyl groups  content  was  250  cmole.kg -1 (Ca-Acetate  Method);  and phenol (OH) concentration was 250 cmole.kg -1 . It can be concluded that humic acid successfully extracted from cow manure fertilizer using 0.250 KOH solution as extractant for 2 h, which has  yield of 4.486% humic acid.
© 2018 IJoPAC. All rights reserved

## 1. Pendahuluan
Asam humat merupakan salah satu fraksi dari senyawa humat yang termasuk dalam bahan organik tanah ( natural organic matter ). Senyawa ini berasal dari degradasi biologis (enzimatis), kimia maupun abiotik dari material organik yang ada di atas tanah [1] . Asam humat larut pada pH tinggi (keadaan basa) namun tidak larut pada pH rendah (keadaan asam).
Berbagai  publikasi  penelitian  telah  membuktikan  bahwa  asam  humat  bertanggungjawab dalam peningkatan produksi dan kualitas tanaman pangan, misalnya padi, gandum, dan brokoli [2],  [3],  [4], [5] . Asam  humat  terbukti  mampu  memberikan  perbaikan  secara  biologis  dan  fisiologi tanaman [6] , [7] .  Asam  humat  berperan  dalam  memaksimalkan  fungsi  akar  sehingga  tanaman dapat  menyerap  unsur  hara  yang  lebih  banyak  [8].  Pengaplikasian  asam  humat  pada  tanah berperan  dalam  meningkatkan  penyerapan  fosfor  (P),  kalium  (K),  magnesium  (Mg),  natrium (Na), tembaga (Cu) dan seng (Zn) [9] .
Asam humat dapat diisolasi dari tanah gambut, namun peran ekosistem gambut yang dapat mempertahankan  hidrologi  dan  cadangan  karbon  untuk  lingkungan  hidup  menyebabkan kepentingan  melindungi  ekosistem  gambut  lebih  penting  sehingga  fungsinya  dapat
dipertahankan  dimasa  yang  akan  datang.  Eksplorasi  asam  humat  dapat  dilakukan  dengan mencari sumber daya alam lainnya yang dapat dijadikan sumber asam humat.
Pupuk  kotoran  sapi  merupakan  sumber  bahan  organik  yang  dimungkinkan  mengandung asam  humat,  karena  pupuk  kotoran  sapi  telah  melalui  proses  biodegradasi  melalui pengomposan  yang  merupakan  model  sederhana  proses  humifikasi  bahan  organik.  Pada umumnya, asam humat terbentuk dari proses dekomposisi bahan organik dengan jangka waktu yang  cukup  lama  yang  dibantu  oleh  mikroorganisme  pengurai  Hal  ini  serupa  dengan  teknik pengomposan,  karena  teknik  pengomposan  merupakan  salah  satu  cara  dekomposisi  bahan organik dengan jangka waktu yang bisa diatur, yang mengakibatkan rasio C/N bahan organik menjadi turun (terdegradasi). Ekstraksi asam humat dari serbuk kotoran sapi telah dilakukan menggunakan  larutan  NaOH  0,1  M [10] . Asam  humat  yang  diekstraksi  dari  kotoran  ternak berperan  sebagai auxin-like  compounds untuk  meningkatkan  aktivitas  enzimatik  pada  akar tanaman barley [11] . Penelitian ini akan mengekstrak asam humat dari pupuk kotoran sapi. Pupuk kotoran sapi adalah  kotoran  sapi  yang  telah  dikomposkan  secara  sedehana  kemudian  dijadikan  pupuk. Ekstraksi  dilakukan  dengan  variasi  konsentrasi  larutan  KOH  yang  divariasi  konsentrasinya (0,050-0,500  M)  dan  variasi  waktu  pengocokan  (1-6  jam).  Asam  humat  yang  diperoleh dikarakterisasi  serapan  gugus  fungsinya  dengan  FTIR  dan  ditentukan  kandungan  total keasaman, kandungan gugus karboksilat dan kandungan gugus –OH fenolatnya.

## 2. Material dan Metode

## 2.1. Pengumpulan sampel
Pupuk  kotoran  sapi  diperoleh  dari  salah  satu  tempat  peternakan sapi  di  Kota  Pontianak. Pupuk yang diperoleh sudah dalam keadaan kering.

## 2.2. Ekstraksi Asam Humat
Secara umum, metode ekstraksi asam humat dilakukan dengan merujuk pada metode dari Stevenson [12] .  Variasi  parameter  yang  digunakan  untuk  mengekstraksi  asam humat  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  konsentrasi  larutan  basa  pengekstrak  dan  lama  waktu pengocokan  pupuk  kotoran  sapi  dengan  larutan  basa  pengekstrak.  Larutan  basa  pengekstrak yang digunakan adalah KOH dengan variasi konsentrasi 0,050 M; 0,100 M; 0,250 M dan 0,50 M. Waktu pengocokan pupuk kotoran sapi dengan larutan KOH divariasi dari 1 jam sampai dengan 6 jam.
Pupuk kotoran  sapi  yang  telah  dibersihkan,  dikeringkan  dan dihaluskan,  dimasukkan  ke dalam erlenmeyer yang berisi larutan basa pengekstrak dengan rasio 1:12,5. Campuran dikocok menggunakan shaker . Campuran tersebut didiamkan 24 jam. Setelah 24 jam, campuran disaring untuk memperoleh filtrat dan endapan. Filtrat hasil saringan ditambahkan HCl pekat hingga pH 1,  dikocok  menggunakan shaker , kemudian  didiamkan  selama  24  jam.  Campuran  disaring hingga  diperoleh filtrat  dan  endapan.  Proses  pemisahan  dengan  KOH  dan HCl  ini  diulang dua kali. Endapan yang diperoleh dicuci berulang kali dengan akuades hingga air pencucian bebas ion Cl - , yang dapat dibuktikan dengan tidak adanya pembentukan endapan putih AgNO 3 ketika air pencucian direaksikan dengan larutan AgCl. Setelah dicuci asam humat tersebut dikeringkan pada suhu 60ºC. Asam humat yang diperoleh dikarakterisasi dengan FTIR.

## 2.3. Penentuan Total Keasaman
Total keasaman asam humat hasil ektraksi dari pupuk kompos kotoran sapi dihitung dengan metode  barium  hidroksida  ( Baryta  Absorption  Methods ). Sebanyak  20  mg  asam  humat ditambahkan  dengan  10  ml  Ba(OH) 2 0,2  M.  Campuran  ini  dikocok  selama  24  jam  pada temperatur ruangan. Hasil dari pengocokan adalah terbentuknya filtrat dan endapan. Endapan dicuci  dengan  akuades.  Larutan  dititrasi  dengan  HCl  0,25M  hingga  pH  8,4.  Titrasi  dilakukan
secara triplo. Prosedur tersebut juga dilakukan untuk blanko yaitu 10 mL larutan Ba(OH) 2 ) 0,2 N [12] . Total keasaman dihitung dengan persamaan sebagai berikut:
Total keasaman (cmol kg ) = × × ( ) (i)

## 2.4. Penentuan Kandungan Gugus Karboksilat
Penentuan kandungan gugus karboksilat dari pupuk kompos kotoran sapi dilakukan dengan metode  Ca-asetat.  Sebanyak  20  mg  asam  humat  ditempatkan  ke  dalam  erlenmeyer  dan ditambahkan 10 ml Ca(CH 3 COO) 2 0,1 N dan 40 ml akuades. Campuran ini dikocok selama 24 jam pada  temperatur  ruangan.  Hasil  dari  pengocokan  adalah  terbentuknya  filtrat  dan  endapan Endapan dicuci dengan akuades. Larutan dititrasi dengan larutan standar NaOH 0,1 M hingga pH 9,8.  Titrasi  dilakukan  secara  triplo.  Prosedur  diulangi  untuk  blanko  yaitu  campuran  10  ml Ca(CH 3 COO) 2 0,1  N  dan  40  ml  akuades [12] . Kandungan  gugus  karboksilat  dihitung  dengan persamaan sebagai beikut:
Kandungan gugus karboksilat (cmol kg ) = × × ( ) (ii)

## 2.5. Penentuan Kandungan Gugus –OH Fenolik
Kandungan  gugus  fenolik  dihitung  dari  selisih  total  keasaman  dengan  kandungan  gugus karboksilat, seperti pada persamaan berikut ini [12] :
Kandungan gugus fenolik (cmol kg ) = TA (cmol kg ) ─ GK (cmol kg )
(iii)

## 3. Hasil dan Pembahasan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah pupuk kotoran sapi. Pupuk kotoran sapi berasal  dari  kotoran  sapi  yang  telah  melalui  proses  pengomposan.  Hipotesis  penelitian  ini adalah terdapat kandungan asam humat pada pupuk kotoran sapi. Hipotesis ini didasarkan pada konsep pembentukan senyawa humat yang terjadi melalui proses humifikasi yang melibatkan mikroorganisme. Secara umum senyawa humat berasal dari proses biosintesis polisakarida dan senyawa  amino  dengan  melibatkan  serangkaian  proses  oksidasi,  demetilasi  dan  kondensasi dengan  senyawa  nitrogen [11] .  Pengomposan  merupakan  pemodelan  sederhana  dari  proses humifikasi dengan variabel kondisi yang lebih terukur. Komposisi asam humat yang diperoleh dari  proses  pengomposan  tidak  berbeda  signifikan  dengan komposisi  asam  humat  yang diperoleh dari proses humifikasi [13] .
Asam humat diekstrak dari pupuk kotoran sapi berdasarkan perbedaan kelarutannya dalam asam dan basa untuk memisahkannya dari senyawa humat yang lain (asam fulvat dan humin). Pupuk kotoran sapi dicampurkan dengan larutan basa kuat yaitu KOH. Larutan basa kuat lebih baik dalam mengekstraksi asam humat daripada larutan asam lemah maupun [12] . Pernyataan ini dikuatkan dengan  hasil penelitian  lain  yang membuktikan  bahwa  perolehan  asam humat  dari proses  ekstraksi  dengan  larutan  KOH  menghasilkan  rendemen  sebesar  46%  lebih  banyak daripada perolehan asam humat dari proses ekstraksi dengan larutan NaOH pada konsentrasi yang sama [14] . Alkaline extraction (ekstraksi dengan basa) bertujuan untuk mengekstrak karbon total dan karbohidrat dari kotoran sapi [15] .
Pencampuran  asam  humat  dengan  larutan  KOH bertujuan  melarutkan  asam  humat  dan memisahkannya dari humin. Filtrat yang mengandung campuran asam humat dan asam fulvat kemudian diperlakukan dengan larutan asam yang bertujuan untuk memisahkan asam humat dengan asam fulvat, karena asam humat tidak larut dalam asam. Endapan yang terbentuk dari proses ini disebut sebagai asam humat.
Perlakuan dengan larutan asam (larutan HCl) akan menyisakan kandungan ion Cl, sehingga keberadaan  ion  ini  harus  dihilangkan  dengan  pencucian  berulang  dengan  mengalirkan air demineral. Pengujian keberadaan ion Cl − dilakukan dengan cara menambahkan larutan AgNO 3 ke dalam air yang telah dialirkan ke asam humat. Asam humat dikatakan bebas ion Cl - apabila tidak  terbentuk endapan  putih  setelah  ditambahkan  AgNO 3 ke  dalam  wadah,  berdasarkan persamaan reaksi sebagai berikut:
AgNO 3 + HCl → AgCl ↓ (endapan putih) + HNO 3
Pengaruh variasi konsentrasi larutan KOH yang digunakan terhadap perolehan asam humat dapat dilihat pada Gambar 1. Berdasarkan Gambar 1, perlakuan ekstraksi asam humat dengan larutan  KOH  dengan  konsentrasi  0,050  M  hingga  0,0250  M  sebanding  dengan  peningkatan perolehan asam humat. Perlakuan ekstraksi asam humat dengan konsentrasi larutan KOH 0,250 M menunjukkan perolehan asam humat terbanyak.
Perolehan asam humat dengan ekstraksi dengan konsentrasi larutan KOH lebih besar dari 0,25  M  yaitu  pada  konsentrasi  0,5  M  menunjukkan  terjadinya  penurunan  perolehan  asam humat.  Menurut  Apabila  konsentrasi  KOH  yang  tinggi  menyebabkan  meningkatnya  peluang rusaknya ikatan antara asam fulvat dengan asam humat, seperti ikatan –H atau ikatan tipe-ester [16] . Keadaan tersebut akan mengubah rasio asam humat dan asam fulvat, akibatnya perolehan filtrat  hasil  perlakuan  dengan  larutan KOH  0,5  M  lebih  sedikit  dari  perolehan  filtrat  hasil perlakuan  dengan  larutan  KOH  0,25  M.  Filtrat  mengandung  asam  humat  yang  larut  dalam larutan basa.
Pengaruh  waktu  pengocokan  pupuk  komps  kotoran  sapi  dengan  larutan  KOH  0,25  M terhadap perolehan asam humat dapat dilihat pada Gambar 2. Gambar 2 menunjukkan waktu pengocokan optimum adalah 2 jam, dimana diperoleh massa asam humat paling besar. Hasil uji Anova menunjukkan bahwa perolehan asam humat dengan waktu pengocokan 1 jam dan 2 jam memberikan  perbedaan  hasil  perolehan  asam  humat  yang  signifikan.  Penambahan  waktu pengocokan melebihi 2 jam tidak signifikan terhadap perolehan massa asam humat.
Gambar  1.  Pengaruh  konsentrasi  KOH  yang  digunakan  dengan  perolehan  asam  humat  dari pupuk kotoran sapi
0.000 1.000 2.000 3.000 4.000 0.050 0.100 0.250 0.500 m as sa pe rol eh an as am h um at (g )
konsentrasi KOH yang digunakan (mol/L)
Gambar 2.  Pengaruh waktu pengocokan terhadap perolehan asam humat dari pupuk kotoran sapi
Ekstraksi pupuk kotoran sapi dengan larutan KOH 0,250 M dengan waktu pengocokan 2 jam  menghasilkan  asam  humat  dengan  perolehan  terbanyak  4,486%.  Asam  humat  yang diperoleh  kemudian  dikarakterisasi  serapan  gugus  fungsinya  dengan  spektrometri  FTIR (Gambar 3). Karakterisasi serapan gugus fungsi asam humat hasil ekstraksi dari pupuk kotoran sapi dibandingkan dengan serapan gugus fungsi asam humat standar dan serapan gugus fungsi asam humat menurut Stevenson [12] . Perbandingan bilangan gelombang yang muncul pada asam humat  hasil  ekstraksi  dari  pupuk  kotoran  sapi  dengan  asam  humat  standar  dan  asam  humat menurut Stevenson disajikan pada Tabel 1.
Gambar 3. Spektrum FTIR asam humat hasil ekstraksi dari pupuk kotoran sapi Berdasarkan interpretasi spektra FTIR, asam humat hasil ekstraksi dari pupuk kotoran sapi mengandung gugus fungsional hidroksil (–OH) dan karboksilat (–COOH). Indikasi keberadaan gugus –OH ditandai dengan munculnya vibrasi perubahan ( deformation ) –OH dari –COOH dan regang–C-O  yang  teridentifikasi  pada  bilangan  gelombang  1229,74  cm -1 . Keberadaan  gugus – COOH ditunjukkan dengan munculnya karakteristik serapan gugus fungsi –OH dari –COOH pada bilangan gelombang 3361,46 cm -1 , meskipun serapan yang menunjukkan adanya gugus karbonil (-C=O-)  yang  umumnya  muncul  pada bilangan gelombang  1725-1720  cm -1 tidak muncul
0.000 1.000 2.000 3.000 1 jam 2 jam 4 jam 6 jam m as sa pe rol eh an as am h um at (g ) waktu pengocokan
dalam spektra asam humat hasil ekstraksi, demikian juga pada asam humat standar. Tidak munculnya  serapan  gugus –C=O  pada  bilangan  gelombang  1700  cm -1 ,  yang  secara  khas menunjukkan keberadaan –COOH, dikarenakan adanya peluang terjadinya ikatan antara gugus – COOH dengan logam yang dimungkinkan terkandung dalam pupuk kotoran sapi [18] . Kandungan logam  dari  kotoran sapi dapat  berasal  dari unsur  hara makro  seperti  kalium  (K),  magnesium (Mg), kalsium (Ca), dan lain-lain.
Tabel  1.  Bilangan  Gelombang  Asam  Humat  Standar,  Asam  Humat  Hasil  Ekstraksi  dari  Pupuk Kotoran Sapi dan Asam Humat Menurut Stevenson
Bilangan gelombang (cm -1 )
Gugus Terkait Asam Humat Standar [17] Asam Humat Hasil Ekstraksi dari Pupuk Kotoran Sapi Asam Humat menurut Stevenson [12] 3425,58 3361,46 3400-3300 regang –OH atau N-H 2924,09 2946,52 2940-2900 regang simetri dan asimetri C-H alifatik dari CH 2 atau -CH 3 - - 1725-1720 regang C=O dari gugus -COOH atau keton - - 1660-1630 regang C=O dari gugus amida, -C=O    dari kuinon dan atau –C=O keton - 1626,70 1620-1600 C=C  aromatik,  H  terkonjugasi  dari  gugus C=O dari keton dan atau karboksilat 1573,91 1521,71 1590-1517 regang simetrik COO-, deformation N-H dan vibrasi  ulur –C=N  dari  amida  ikatan rangkap 2 - 1442,24 1460-1450 C-H alifatik 1388,75 - 1400-1390 deformation –O-H, regang C-O dari – OH  fenolik, deformation C-H  dari -CH 2 dan CH 3 - 1229,74 1280-1200 Regang C-O, deformation –OH, ulur -CH 3
Serapan pada bilangan gelombang 2946,52 cm -1 menunjukkan vibrasi C-H alifatik dari CH 2 atau -CH 3 . Serapan khas dari asam humat juga muncul pada bilangan gelombang 1626,70 cm -1 . Keberadaan pita serapan dari regang simetrik COO- atau perubahan vibrasi N-H dan vibrasi ulur –C=N dari amida ikatan rangkap 2 terindikasi pada bilangan gelombang 1521,71cm -1 . Serapan ini mengindikasikan gugus C=C dari cincin aromatik dan atau H terkonjugasi C=O dari gugus karbonil  (karboksilat  dan  keton).  Serapan  pada  bilangan  gelombang  1230  cm -1 menunjukkan perubahan vibrasi C=O dari gugus karboksilat khususnya dari –COOH.
Secara  teoritis,  keberadaan  gugus  fungsi –COOH  dan –OH  dari  enolat/fenolat  pada  asam humat  menyebabkan  asam  humat  bersifat  asam,  karena pelepasan  ion  H + dari  gugus-gugus tersebut. Total keasamaan, kandungan –COOH dan –OH fenolat asam humat hasil ekstraksi dari pupuk  kotoran  sapi  dianalisis  secara  kuantitatif  melalui  serangkaian  metode.  Hasil  uji kandungan gugus fungsional asam humat disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Kandungan Gugus Fungsi Asam Humat Hasil Ekstraksi Pupuk Kotoran Sapi
Gugus fungsi
Kadar gugus dalam asam humat (cmol.kg -1 ) Asam humat menurut Schnitzer [19] Asam humat hasil ekstraksi Total keasaman 560 – 890 500 Gugus karboksilat 150 – 570 250 Gugus fenolik 270 – 350 250
Penetapan  kandungan  total  keasaman  didasarkan  pada  pertukaran  kation  H + dari  asam humat  dengan  kation  Ba 2+ dari  Ba(OH) 2 .  Prinsip  reaksi  juga  dapat  dikatakan  sebagai  reaksi penetralan asam-basa yang menghasilkan garam dan air. Asam humat (ditulis dengan lambang RH, dimana R adalah makromolekul asam humat dan H adalah proton dari gugus –COOH dan – OH  yang  akan  ditransfer/dilepaskan)  akan  bereaksi  dengan  larutan  Ba(OH) 2 berlebih  yang bersifat basa, sehingga ion H + dari asam humat (RH) dilepaskan. Ion R - berikatan dengan ion Ba 2+ dari larurtan Ba(OH) 2 membentuk garam R 2 Ba. Ion H + dari RH bergabung dengan ion OH - dari  larutan  Ba(OH) 2 membentuk  H 2 O.  Ion  OH- yang  berlebih  dari  Ba(OH) 2 dititrasi  dengan dengan  larutan  HCl.  Banyaknya  volume  larutan  HCl  yang  akan  digunakan  untuk  titrasi  akan sebanding  dengan  banyaknya  Ba(OH) 2 sisa,  sehingga  dapat  ditentukan  berapa  banyak konsentrasi ion OH - dari Ba(OH) 2 yang digunakan untuk menetralkan ion H + yang dilepaskan dari RH. Persamaan reaksi yang terjadi dituliskan sebagai berikut:
2 RH + Ba(OH) 2 (berlebih) → R 2 Ba + 2H 2 O
(iv)
Ba(OH) 2 (sisa) + 2HCl → BaCl 2 + 2H 2 O (v)
Penentuan gugus karboksilat dilakukan dengan menggunakan metode Ca-asetat. Prinsip dari metode Ca-asetat adalah prinsip pertukaran kation H + dari asam humat (dilambangan dengan R-COOH)  dengan  kation  Ca 2+ dari  larutan  Ca(CH 3 COO) 2 berlebih.  Banyaknya  Ca 2+ yang dipertukarkan  sebanding  dengan  ion  H + yang  dilepaskan  dari  asam  humat.  Larutan Ca(CH 3 COO) 2 sisa  kemudian  dititrasi  dengan  dengan  larutan  NaOH.  Persamaan  reaksi  yang terjadi adalah sebagai berikut:
2 R-COOH + Ba(CH 3 COO) 2 → Ba(R-COO) 2 + 2CH 3 COOH
(vi)
CH 3 COOH + NaOH → CH 3 COONa + H 2 O (vii)
Penentuan kandungan gugus -OH fenolik atau asam -OH diperoleh dari merupakan selisih antara total keasaman dan kandungan gugus karboksilat. Hanya –OH yang dapat beraksi dengan Ba(OH) 2 yang dapat ditentukan dengan menggunakan pendekatan perhitungan ini. Berdasarkan perhitungan, asam humat hasil ektraksi pupuk kotoran sapi mengandung total keasaman  dan  kandungan  karboksilat  yang  memenuhi  rentang  nilai  yang  diberikan  oleh Schnitzer [19] . Namun nilai gugus –OH fenolik tidak memenuhi rentang nilai yang diberikan oleh Schnitzer [19] . Hal ini dapat disebabkan karena ada ion H + dari asam humat dari yang belum atau tidak bereaksi dengan Ba(OH) 2 dalam penentuan total keasamaan, sehingga nilai total keasaman yang terhitung lebih kecil dari kandungan total keasaman yang sebenarnya.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa asam humat berhasil diekstraksi dari pupuk  kotoran  sapi  larutan  KOH  0,250  sebagai  larutan  pengesktrak  dan  waktu  pengocokan selama  2  jam,  dengan  perolehan hasil  sebesar  4,486%.  Spektrum  FTIR menunjukkan  serapan khas untuk asam humat yaitu pada bilangan gelombang untuk gugus-gugus –OH dan regang N-H (3361,  46  cm -1 );  C-H  alifatik  untuk  CH 2 ,  CH 3 (2946,52  cm -1 dan  1442,24  cm -1 );  C=C  aromatik (1626,48  cm -1 );  regang  simetrik  COO- (1521,71  cm -1 );  C-O  dari –COOH  (1229,74  cm -1 ).  Asam humat dari kompos kotoran sapi mengandung total keasaman sebesar 500 cmol.kg -1 ; kandungan gugus karboksilat sebesar 250 cmol.kg -1 dan kandungan –OH fenolik sebesar 250 cmol.kg -1 .

## Referensi
[1] Wershaw  R. L. Evaluation of Conceptual Models of Natural Organic Matter (Humus) From a  Consideration  of  the  Chemical  and  Biochemical  Processes  of  Humification. Scientific Investigations  Report  2004-5121U.S.  Department  of  the  Interior  and  U.S.  Geological Survey Denver; 2004.
[2] Bashir, M., Qadri, R. W. K., Khan, I., Zain, M., Rasool, A., & Ashraf, U. Humic acid application improves  the  growth,  floret and  bulb  indices of  Gladiolus  ( Gladiolus grandiflorus L.). Pakistan Journal of Science. 2016; 68 (2):121-127.
[3] Xue, X., Xue, Z., Song, Z., Zhang, F., Wang, Z., & Han, Y. Effect of combined application of humic acid and urea on the wheat growth and yield. Asian Agricultural Research. 2016; 8 (9):67-70.
[4] Wang,  X.,  Su,  Y.,  Xu,  X.,  &  Li,  G.  Effect  of  fulvic  acid  on  growth  and  yield  components  of direct seeding rice, Agricultural Science & Technology. 2013; 14 (7):966-972.
[5] Dai, M., Chen, Q., Hu, Z., Li, X., Zhang, J., Wang, J., & Feng, H. Effects of humic acid and PASP compound fertilizer application  on growth, quality  and yield  of Broccoli, Agricultural Science & Technology . 2016; 17 (3):535-538.
[6] Zandonadi D. B., Santos M. P., Busato J. G., Peres L.E.P, Façanha, A.R. Plant  physiology as affected by humified organic matter, Theor. Exp. Plant Physiol . 2013;  25 (1):12-25.
[7] Canellas LP,Spaccini R, Piccolo A, Dobbss LB, Façanha ALO, Santos GA, Olivares FL, and Façanha A.R. Relationships Between Chemical Characteristics and Root Growth Promotion of Humic Acids Isolated From Brazilian Oxisols, Soil Science . 2009; 174 (11):611-620.
[8] Wijaya H. and Suwardi. Peningkatan Produksi Tanaman Pangan dengan Bahan Aktif Asam Humat dengan Zeolit sebagai Pembawa, Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia . 2013; 18 (2):79.
[9] Khaled H., and Fawy H.A. 2011. Effect of Different Levels of Humic Acids on the Nutrient Content, Plant Growth, and Soil Properties under Conditions of Salinity, Soil & Water Res . 2011; 6 (1):21-29.
[10] Barot, N.S. and Bagla, H.K. Extraction of humic acid from biological matrix-dry  cow dung powder. Journal Green Chemistry Letters and Review . 2009; 2 (4):217-221.
[11] Nagasawa, K., Wang, B., Nishiya, K., Ushijima, K., Zhu, Q., Fukushima, M., Ichijo, T. Effects of humic acids derived from lignite and cattle manure on antioxidant enzymatic activities of barley root, J Environ Sci Health B. 2016; 51 (2):81-89.
[12] Stevenson, F.J. 1994. Humus Chemistry: Genesis, Composition, Reaction. 2 nd ed. John Wiley & Sons, Inc. New York.
[13] Monedero, M.A.S., Cegarra, J., Garcia, D. and Roig, A. Chemical and structural evolution of humic acids during organic waste composting, Biodegradation. 2002; 13:361–371.
[14] Fong, S.S., Lau S., Wong N.C., Janice A., Muhammad F., and Amira S, 2006, Characterization of the Coal Derived Humic Acids from Mukah Sarawak as Soil Conditioner, J. Braz Chem Soc . 2006; 17(2):582-587.
[15] Bellera, C., Abaalkheel, I., Rovira, P. and Alrefai, J. Obtaining commercial humic products from uncomposted manures: previous acid hydrolysis to enhance yields, Int J Recycl Org Waste Agricult . 2015; 4:219–231.
[16] Asing J , N.C. Wong and S. Lau. Optimization Of Extraction Method And Characterization Of Humic  Acid  Derived  From  Coals  and Composts. J. Trop. Agric. and Fd. Sc. 2009;  37  (2): 211–223.
[17] Astuti,  P.,  Idiawati,  N.,  dan  Destiarti,  L.,  2015.  Validasi  Metode  Pengukuran  Kadar  Asam Humat  Hasil  Ekstraksi  Kalium  Hidroksida  dengan  Spektrofotometri  Ultraviolet, Jurnal Kimia Khatuslitiwa . 2015; 5 (2):69-77.
[18] Mohadi, R., Hidayati, N., Santosa, S.J. Narsito. 2008. Karakterisasi Asam Humat dari Gambut Indralaya, Ogan Ilir Sumatera Selatan, Jurnal Penelitian Sains . 11(1):411-420.
[19] Schnitzer,  M.  1986.  Pengikatan  Bahan  Humat  Oleh  Koloid  Mineral  Tanah,  dalam  buku Interaksi  Mineral  Tanah  dengan  Organik  Alami  dan  Mikroba,  1997,  Huang,  P.  M  dan Schnitzer, M. (editor), Gadjah Mada University Press, Yogakarta, 119-155.