Research Article

## UNPAD
In Silico and In Vitro Studies on Compounds in Turmeric ( Curcuma domestica ) as Anti-inflammatory for Cyclooxygenase-2 (COX-2)
Devani O. Winardi1*, Syahla A. Alliyah1, Shafa N. Fadilah1, Jessyca Sirait1, Hafidh B. A. Putra1, Neli Neli1,  Nurhanifah Puspitadewi1, Muchtaridi Muchtaridi2 , Ade Zuhrotun3
1Program Studi S1 Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jawa Barat Indonesia 2Departemen Analisis dan Kimia Medisinal, Fakultas Farmasi,Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia
3Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi,Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia
Submitted 30 May 2023; Revised 06 June 2023; Accepted 24 June 2023; Published 31 July 2023
*Corresponding author: devani20001@mail.unpad.ac.id

## Abstract
Turmeric  contains  curcuminoid  compounds  which  have  been  confirmed  from  various  studies  to have  various  benefits  for  the  body,  including  antiviral,  antibacterial,  antioxidant,  anticarcinogenic, and anti-inflammatory properties. Research on the effectiveness and potential of anti-inflammatory properties of the compounds contained in turmeric was carried out based on in silico and in vitro studies. Methods used are prediction of physicochemical and pharmacokinetic properties, molecular docking, pharmacophore modeling, and toxicity testing using the BSLT method. The results obtained all the test compounds complied with the Lipinski rules of five, but some of the test compounds were mutagens and carcinogens. A compound with high anti-inflammatory potential is dihydrocurcumin, which has a binding energy of -8.25 kcal/mol, Ki of 0.898 µM, and hydrogen bonds similar to those formed between native ligand and COX-2 protein. Based on the results of the BSLT, it was found that the turmeric infusion extract had toxic protectives thus it has a poor potential as an anti-inflammatory for dysmenorrhea.
Keywords: Anti-inflammatory,  BSLT,  Cyclooxygenase-2,  Dysmenorrhea,  Molecular  Docking, Turmeric.
Studi In Silico dan In Vitro Senyawa Aktif pada Rimpang Kunyit ( Curcuma domestica ) sebagai Antiinflamasi pada Cyclooxygenase-2 (COX-2)

## Abstrak
Rimpang  kunyit  mengandung  senyawa  kurkuminoid  yang  telah  dikonfirmasi  dari  berbagai  studi memiliki berbagai khasiat bagi tubuh, diantaranya adalah sebagai antivirus, antibakteri, antioksidan, antikarsinogenik, dan antiinflamasi. Penelitian ini dilakukan untuk menguji keefektifan dan potensi sifat antiinflamasi pada senyawa-senyawa yang terkandung dalam kunyit yang dilakukan berdasarkan studi in silico dan in vitro .  Metode  yang  digunakan  adalah  prediksi  sifat  fisikokimia  dan  sifat farmakokinetik, penambatan molekul, pemodelan farmakofor, dan pengujian toksisitas menggunakan metode  BSLT.  Hasil  yang  diperoleh  adalah  senyawa-senyawa  uji  memenuhi Lipinski  rules  of  five , beberapa senyawa hasil uji bersifat mutagen dan karsinogen. Senyawa dengan potensi antiinflamasi tinggi adalah dihidrokurkumin yang memiliki binding energy sebesar -8,25 kkal/mol, Ki sebesar 0.898 µM,  serta  ikatan  hidrogen  yang  sama  dengan  ikatan  hidrogen  yang  terbentuk  antara native ligand dan protein COX-2 . Dari hasil BSLT, ditemukan bahwa ekstrak infus kunyit memiliki sifat toksik, sehingga memiliki potensi yang kurang baik sebagai antiinflamasi untuk dysmenorrhea.
Kata Kunci: Antiinflamasi, BSLT, Siklooksigenase-2, Dismenore, Penambatan Molekul, Rimpang kunyit.

## 1.  Pendahuluan
Kondisi  manusia  yang  mengalami peralihan  menjadi  remaja  umumnya  terjadi pada usia 11 tahun sampai 20 tahun. Dimana, terjadi perubahan-perubahan fisiologi, psikologi, dan organ-organ reproduksi setiap individu1. Pada perempuan, salah satu tanda dari  perkembangan  organ  reproduksi  adalah terjadinya menstruasi2.
Pada  remaja,  banyak  terjadi  gangguan menstruasi,  salah  satunya  adalah  nyeri menstruasi  atau  dismenore2.  Dismenore, berasal  dari  bahasa  Yunani  dengan  arti abnormal  monthly  flow ,  adalah  kondisi umum pada 90% populasi wanita. Rasa sakit yang  dirasakan  adalah  rasa  kram  pada  otot, seringkali disertai gejala-gejala seperti mual, muntah, diare, sakit punggung bagian bawah, dan  sakit  kepala3.  Dismenore  terjadi  karena pelepasan  prostaglandin  yang  berlebih, menyebabkan kontraksi uterus semakin tinggi, sehingga  menyebabkan  rasa  nyeri  pada  saat menstruasi4. Dismenore digolongkan menjadi dismenore  primer  dan  sekunder.  Dismenore primer adalah dismenore yang sering ditemui pada  remaja,  dimana  tidak  disebabkan  oleh kelainan  pada  organ  reproduksi.  Dismenore sendiri  dapat  diakibatkan  oleh  beberapa faktor, antara lain riwayat keluarga, perokok aktif dan pasif, obesitas, alkohol, kurangnya aktivitas  fisik,  usia  menarche  lebih  awal, volume darah haid banyak, dan stres 5 . Penderita dismenore
umumnya menggunakan obat antiinflamasi non steroid (NSAID)  untuk  meredakan  dismenore.
NSAID  diduga  dapat  menurunkan  tekanan intra-uterin dan menekan frekuensi prostaglandin F2 alpha yang merupakan suatu cyclooxygenase -2  (COX-2)6.  Berbagai  obat NSAID  seperti  ibuprofen,  asam  mefenamat, naproxen,  dan  ketoprofen  terbukti  memiliki efek  menyembuhkan  dismenore  primer dengan  menghambat  siklooksigenase  yang dapat  menurunkan  prostaglandin6.  Namun, obat  NSAID  masih  memiliki  beberapa  efek samping  pada  saluran  pencernaan,  seperti nyeri ulu hati, mual, dan muntah, serta pada ginjal dan hati6.
Vioxx atau rofecoxib telah dikembangkan sebagai NSAID selektif untuk
COX-2 dengan memblokir induksi isoenzim COX-2 secara selektif yang berperan dalam rasa nyeri dan inflamasi tanpa mempengaruhi isoenzim  COX-1  yang  menjaga  integritas mukosa  gastrointestinal  dan  menjaga  fungsi trombosit.  Keselektifan  yang  dimiliki rofecoxib  ini  adalah  alasan  rofecoxib  lebih disukai daripada NSAID non-selektif7. Efek  antiinflamasi  mudah  ditemukan pada  bahan  alami,  contohnya  rimpang kunyit  yang  mengandung  bermacam- macam  senyawa  kimia  yang  terbagi menjadi  2  kelompok  besar,  kurkuminoid dan  minyak  atsiri8.  Kurkuminoid,  terdiri atas  kurkumin,  demetoksikurkumin,  dan bidemetoksikurkumin, merupakan komponen senyawa aktif yang memiliki berbagai khasiat bagi  tubuh,  diantaranya  sebagai  antivirus, antibakteri,  antioksidan,  antikarsinogenik, dan  antiinflamasi9.  Aktivitas  antiinflamasi dari  kurkumin  telah  dibuktikan  dengan kemampuannya  menghambat  pembentukan prostaglandin  dan  menekan  aktivitas  enzim siklooksigenase 27 . Dalam penelitian In Silico , penambatan molekular  dapat  memprediksi  konformasi protein  dan  ligan  digabungkan  bersama struktur  protein  melalui  komputer,  dimana dapat menghitung nilai afinitas suatu ikatan, memprediksi  geometri  dan  sifat  elektronik molekul,  dan  mengidentifikasi  kedudukan ligan 14 . Analisis In Vitro ekstrak infusa kunyit menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).  Metode  BSLT  digunakan sebagai metode skrining tanaman obat untuk menentukan  nilai  toksisitas  menggunakan Lethal Concentration (LC50) 12 .
2. Metode 2.1.  Alat
Uji In Silico . Seperangkat  laptop dengan  spesifikasi Windows 10,  RAM  4,00 GB, Prosesor  Intel (R) Celeron (R)  N4000 CPU @ 1.10GHz 1.10 GHz, 64-bit operating system, x64-based processor melibatkan s oftware  Autodock  Tools , Chemdraw  Ultra 12.0, Chem3D Pro 12.0, dan Discovery Studio 2016.  Laman  internet  sebagai  sumber  data, diantaranya Protein Data Bank ,  PubChem, Preadme, dan SwissADME32.
Uji In Vitro. Peralatan  laboratorium alat-alat  gelas  (Pyrex®), blender, neraca analitik,  cawan  penguap,  pipet  tetes,  sekat kotak  plastik  transparan,  dan  kardus  yang telah dilapisi lakban hitam, botol vial 10 mL, microwell , dan mikroskop binokuler.
2.2.  Bahan
Uji In Silico. Struktur  3D  Vioxx yang  diunduh  dari  laman Protein Data Bank dengan  format  data  .pdb  pada  kode PDB  5KIR,  Struktur  2D  dan  3D  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  rimpang kunyit  (kurkumin,  desmetoksikurkumin, bisdesmetoksikurkumin,  dihidrokurkumin, α-tumeron, seskuiterpen, zingiberene , β-bisabolene,  D-fructose, dan atlanton) yang diunduh dari PubChem dengan format .pdb. Uji In Vitro. Rimpang kunyit ( Curcuma domestica Val. )  dan  didapatkan  dari  toko jamu  Babah  kuya  di  Jalan  Pasar  Barat No.44,  Kelurahan  Kebon  Jeruk,  Kecamatan Andir,  Kota  Bandung.  Telur  udang Artemia salina Leach, aquadest, garam  kasar,  ragi (Fermipan), air minum (Amidis).
2.3.  Prosedur
Prediksi sifat fisikokimia berdasarkan  aturan  Lipinski. Struktur dua  dimensi  (2D)  dan  tiga  dimensi  (3D) pada senyawa-senyawa yang telah dipelajari diunduh  dari  PubChem  dengan  format  .pdb lalu disiapkan menggunakan Chem3D dengan meminimalisasi energi, hasil yang diperoleh disimpan  dalam  format  .mol.  Analisis kemudian  dilakukan  secara online melalui SwissADME (http://www.swissadme.ch/
index.php)  dengan  mengimpor  senyawa dalam format .mol dan menjalankan analisis kesesuaian obat digunakan untuk oral 37 . Prediksi  sifat  farmakokinetik  dan toksisitas. Mengunjungi  laman  https:// preadmet.webservice.bmdrc.org, memilih Drug-likeness prediction untuk memprediksi sifat drug-likeness. Struktur  senyawa  yang akan  diuji  digambar  pada  kolom  yang tertera lalu ditekan pilihan submit atau dapat digunakan struktur senyawa 3D pada file .mol, Dilihat hasil Drug-likeness muncul kemudian diunduh  untuk  menyimpan  hasil  prediksi.
Lakukan untuk semua senyawa uji 37 . Penambatan Molekul. Enzim cyclooxygenase-2 (PBD  ID:  5KIR)  diunduh dengan  format  .pdb.  Reseptor  dipisahkan dari  ligannya  dan  dihapus  molekul  airnya dengan  menggunakan software  Discovery Studio 2016.  Preparasi  ligan  dilakukan dengan prosedur yang sama dengan reseptor kemudian  disimpan  dengan  format  .pdb. Kemudian  ditambahkan Gasteiger charges, muatan kollman ,  dan  atom  hidrogen polar  dengan  menggunakan Software AutoDockTools-1.5.6 . Ligan disimpan dengan format .pdbqt. Selanjutnya, redocking antara ligan alami dengan protein untuk memvalidasi metode. Running redocking pada command prompt dan ketika proses selesai, file dlg yang terbuat dibuka pada notepad dan nilai RMSD diamati 37 . Preparasi  ligan  uji  dilakukan  pada Software  AutoDockTools-1.5.6 dan  prosedur yang  sama  dengan  ligan  alami.  Setelah ligan  uji  siap, docking ligan  uji  dan  protein dilakukan  pada Software  command  prompt dengan  memasukkan    koordinat GridBox yang  sama  seperti  koordinat  pada  validasi metode kemudian dijalankan 37 . Pemodelan  Farmakofor. Database diunduh  dari  laman  http://dude.docking. org  yaitu  protein  Cox-2  dengan  kode  PDB 3ln1  dengan  format  sdf.gz.  Kemudian  pada software LigandScout buka file  database senyawa active yang  telah  diunduh  dan disimpan  dalam  format  ldb.  Kembalikan default  awal  dengan  menekan  ‘ Restore Factory Defaults’, kemudian  buka  file active .ldb,  tekan  Ligan-set  lalu  kelompokan kumpulan  ligan  sesuai  dengan  karakteristik farmakofor 3D menggunakan tombol Cluster lalu  kelompokkan  dan  atur  sebagai training set. Tabel  diurutkan  dengan  mengklik  tajuk kolom 'Cluster-ID'. Senyawa  dengan  nilai ukuran cluster tertinggi dan memiliki Cluster- ID yang sama diatur dengan memilih molekul cluster yang akan digunakan. File disimpan dalam format .pmz 34 . Untuk  membuat  kurva  ROC,  dibuka file senyawa active dalam  bentuk  .pmz. Kemudian,  masukan  file decoy. sdf  dan active. sdf  lalu  didapatkan  kurva  ROC  yang
kemudian disimpan dengan format PNG lalu tentukan  nilai AUC  tertinggi  dari  10  model senyawa yang akan diskrining. Data senyawa uji  kemudian  dianalisis  dengan  mengamati pharmacophore fit score . Uji  Toksisitas  dengan  Metode  BSLT. Pembuatan  ekstrak  dengan  menghaluskan 30  g  simplisia  kunyit  dan  dilarutkan  dalam 150  mL  aquades  pada  gelas beaker dan dipanaskan pada suhu 90ᵒC selama 30 menit lalu  didinginkan.  Kemudian,  5  mL  ekstrak diuapkan  lalu  dihitung  konsentrasi  ekstrak. Kemudian, dibuat variasi konsentrasi ekstrak sebesar  125,  250,  500,  1000,  2000,  4000, dan 6000 ppm dengan mengencerkan larutan ekstrak dengan aquades 35 . Kemudian, medium dan air laut buatan dibuat  dengan  melarutkan  20  g  garam  laut ke  dalam  500  mL  air  merk  amidis  dan diaduk hingga larut. Air garam disaring dan dimasukkan  ragi  kering  sebanyak  3  mg  ke dalam air garam 35 . Suspensi  larva  disiapkan,  medium  air laut  buatan  dimasukkan  ke  dalam  wadah medium  penetasan.  Telur  Artemia  salina sebanyak 17 g dimasukkan ke dalam bagian wadah yang diberi tutup gelap. Telur dibiarkan menetas menjadi larva pada suhu kamar 2x24 jam  dengan  aerasi  menggunakan  pompa aquarium 35 . Pengujian toksisitas dengan larva udang dilakukan  pada vial dan microwell .  Untuk pengujian pada vial dilakukan dengan 21 vial ditara pada 5 mL dan 10 mL yang dimasukkan 10 ekor larva udang kemudian ditambahkan
5  mL  air  garam  pada  masing-masing vial 35 . Masing-masing  variasi  konsentrasi  ekstrak ditambahkan  ke  dalam  tiga vial yang berisi  larva  udang  dan  air  garam  kemudian didiamkan  selama  24  jam  di  bawah  sinar lampu. Hitung kematian larva pada tiap vial . Untuk  pengujian  pada microwell ,  dilakukan dengan  memasukkan  larva  udang  ke  dalam microwell dengan  menggunakan  micropipet 100 µL 36 . Masing-masing variasi konsentrasi ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tiga  sumur (well) menggunakan  micropipet  100  µL 35 . Microplate didiamkan selama 24 jam di bawah sinar lampu. Setelah 24 jam, hitung kematian larva udang pada tiap sumur. Pada tiap sumur microwell ditambahkan  100  µL  metanol lalu tunggu beberapa menit. Hitung kembali kematian larva udang dengan rumus 36 :

## 3.  Hasil
3.1.  Prediksi  sifat  fisikokimia  berdasarkan aturan Lipinski Terdapat  sepuluh  senyawa  aktif  yang diduga terdapat pada sampel uji berdasar pada literatur  yang  digunakan,  sepuluh  senyawa tersebut dianalisis dengan metode komputasi (Prediksi  Lipinski).  Dari  penelitian  ini, didapatkan  hasil  dimana  sepuluh  senyawa aktif  yang  dianalisis  memenuhi  persyaratan aturan lipinski (Tabel 1).

## 3.2.  Prediksi  Sifat  Farmakokinetik  dan Toksisitas
Nama Senyawa Berat Molekul (<500 Da) Log P (<5) Ikatan Hidrogen Keterangan Donor (<5) Akseptor (<10) Native Ligand 330.48 2.91 1 4 Memenuhi Kurkumin 368.38 3.03 2 6 Memenuhi Dihidrokurkumin 370.40 2.97 2 6 Memenuhi Desmetoksikurkumin 338.35 3.00 2 5 Memenuhi Bisdemethoxycurcumin 308.33 2.83 2 4 Memenuhi Alpha Tumeron 218.33 3.59 0 1 Memenuhi Sesquiterpene 382.40 0.58 2 8 Memenuhi Zingiberene 204.35 4.46 2 6 Memenuhi β-Bisabolene 204.35 4.83 0 0 Memenuhi D-Fructose 180.16 0.52 5 6 Memenuhi Atlanton 218.33 4.03 0 1 Memenuhi
Tabel 1. Prediksi sifat fisikokimia berdasarkan aturan Lipinski
Berdasar Tabel 2, telah diperoleh nilai sifat farmakokinetika seperti absorbsi (HIA, permeabilitas CaCO2), distribusi (PBB, BBB) dan karsinogen sepuluh senyawa yang diuji. Senyawa  bisdemetoksikurkumin, alpha turmeron,  zingiberene,  β-Bisabolene, dan atlanton  menempati  nilai  PPB  yang  baik. Dari  senyawa alpha turmeron, zingiberene, β-Bisabolene, dan  atlanton,  didapatkan  nilai BBB yang baik. Pada toksisitas, sifat mutagen didapatkan  dari  senyawa alpha turmeron, β-Bisabolene, dan D-fructose .  Sedangkan pada cakupan karsinogen, dominan senyawa uji bersifat tidak karsinogen pada mencit dan bersifat karsinogen pada tikus  (Tabel 2).
3.3.  Penambatan Molekul Penambatan  molekul  memprediksi geometri dan interaksi protein dalam bentuk kompleksnya  dengan  senyawa  yang  diuji berupa  ligand.  Nilai  energi  ikatan  paling rendah  terdapat  pada  ligan  pembanding dihidrokurkumin  (-10.13  kkal/mol)  dan nilai  konstanta  inhibisi  terendah  pada  ligan pembanding bishdemetoxycurcumin (1.81
μM).  Desmetoksikurkumin  menduduki peringkat pertama ligan uji yang mempunyai ikatan hidrogen terbanyak (Tabel 3)
3.4.  Pemodelan Farmakofor Didapatkan  data  tingkat  kemiripan antara  modifikasi  senyawa  uji  dengan  ligan standar melalui skrining virtual menggunakan model  3D  farmakofor  berbasis  fitur  yang tervalidasi. Dari hasil pemodelan farmakofor didapatkan    senyawa  yang  paling  aktif berikatan dengan reseptornya adalah atlanton dengan  nilai pharmacophore-fit sebanyak 33,11% dan hit rate sebesar 90, 80% seperti yang tertera pada (Gambar 1)
3.5.  Uji Toksisitas dengan Metode BSLT Pada  pengujian  toksisitas  dengan metode BSLT pada vial didapatkan persamaan dari  kurva linear antara  probit  %kematian dan log konsentrasi ekstrak yaitu y = 2,876x- 0,9067  dengan  nilai  R2  =  0,664  (Gambar 2).  Persamaan  ini  digunakan  untuk  mencari nilai LC50 yang didapatkan pada konsentrasi 114,2878 ppm atau 114.287,8 µg/L.
Nama Senyawa Absorbsi Distribusi Toksisitas HIA (%) Caco-2 (nm/sec) PPB (%) BBB Mutagen Karsinogen Native Ligand 96.28 2.27 84.07 0.13 Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : - Kurkumin 94.40 200.73 88.03 0.09 Non Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + Dihidrokurkumin 94.26 201.567 88.49 0.09 Non Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + Desmetoksikurkumin 94.03 21.01 89.91 0.22 Non Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + Bisdemethoxycurcumin 93.75 214.03 93.82 0.78 Non Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + Alpha Tumeron 100 555.77 100 3.79 Mutagen carcino_mouse : + carcino_rat : + Sesquiterpene 76.18 201.43 37.93 0.12 Non Mutagen carcino_mouse : + carcino_rat : + Zingiberene 100 234.04 100 15.19 Non Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + β-Bisabolene 100 23.41 100 15.06 Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : + D-Fructose 22.35 1.59 38.65 0.06 Mutagen carcino_mouse : - carcino_rat : - Atlanton 100 55.69 100 6.08 Mutagen carcino_mouse : + carcino_rat : +

## Tabel 2. Prediksi Sifat Farmakokinetik dan Toksisitas
Pada  pengujian  pada microwell didapatkan  persamaan linear y  =  1,181x- 1,458  dengan  nilai  R2=  0,8367  (Gambar 2).  Didapatkan  nilai  LC50  pada  konsentrasi 998,052 ppm atau 990.852 µg/L.

## 4.  Pembahasan
4.1.  Prediksi Sifat Fisikokimia Berdasarkan Aturan Lipinski Prediksi  sifat  fisikokimia  dilakukan untuk  menentukan  bioavailabilitas  zat  aktif pada sediaan oral yang berhubungan dengan permeabilitas  dan  solubilitas  zat  aktif  pada saluran  pencernaan 38 . Aturan  Lipinski  dapat menentukan  karakter  hidrofilik/hidrofobik suatu senyawa untuk berdifusi pasif melalui membran sel 8 .
Berdasarkan  hasil  prediksi  yang dilakukan,  semua  senyawa  memenuhi kriteria  Lipinski.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  kesepuluh  senyawa  tersebut  telah memenuhi  syarat  pada  lima  parameter  atau yang dikenal dengan “ rule of five ” (Tabel 1)5. Lima parameter tersebut adalah log P dengan syarat ≤ 5, berat molekul dengan syarat ≤ 500 g/mol, donor ikatan hidrogen dengan syarat ≤ 5, dan akseptor ikatan hidrogen dengan syarat ≤ 10 38 .
4.2.  Prediksi  Sifat  Farmakokinetik  dan Toksisitas Prediksi  sifat  farmakokinetik  dan toksisitas  dilakukan  pada website Pre- ADMET yang terdiri dari absorbsi, distribusi,
Senyawa Cluster ∆G (kkal/ mol) Ki (µM) Interaksi dengan asam amino
Ikatan hidrogen Ikatan van der waals Lain-lain Native Ligand 1 -9.54 101.40 nM Conventional Hydrogen Bond: ILE A:517, ARG A:513, PHE A: 518, Carbon Hydrogen bond: HIS A:90, ALA A: 527 - Pi Sulfur: MET A:522 Amide -Pi Stacked: GLY A:526, Pi-Alkyl: VAL A:349, LEU A: 352, Pi-Sigma: A: 523 Kurkumin 1 -9.03 0.242 µM Conventional Hydrogen Bond: ARG A:120, HIS A:356, PHE A:357, Carbon Hydrogen Bond: VAL A:349, ASN A:350, MET A:522, VAL A: 523 - Alkyl dan Pi-Alkyl LEU A:359, LEU A:93, ALA A:527, LEU A:352 Dihidrokurkumin 1 -7.82 1.86 µM Conventional Hydrogen Bond: ARG A:120, ASN A:350, LEU A:93, PHE A:357, Carbon Hydrogen Bond: LEU A:352 - - Desmetoksikurkumin 3 -7.83 1.81 µM Conventional Hydrogen Bond: ARG A:513, PHE A:357, ARG A:120, ASN A:350 - Alkyl: LEU A:93 Bisdemethoxycurcumin 3 -8.25 0.898 µM Conventional Hydrogen Bond: HIS A:90, TYR A:355, ARG A:513, Carbon Hydrogen Bond: SER A:530 - Alkyl dan Pi-Alkyl: VAL A:523, LEU A:352, TRP A:387, VAL A:349, ALA A:527 Alpha Tumeron 1 -7.68 2.34 µM Carbon Hydrogen Bond LEU A:352 - Pi-Sigma: TYR A:385, Alkyl dan Pi-Alkyl: VAL A:523, HIS A:90, PHE A:518, ILE A:517, ALA A:527, TRP A:387, PHE A:381, LEU A:384 Sesquiterpene 2 -6.79 10.53 µM Conventional Hydrogen Bond: HIS A:356, ARG A:513, PHE A:357, LEU A:352 - Alkyl dan Pi-Alkyl: VAL A:349, HIS A:90 Zingiberene 1 -7.82 1.86 µM - - Pi-Sigma: TYR A:385, Alkyl dan Pi-Alkyl: HIS A: 90, ALA A: 516, PHE A:518, VAL A:523, TRP A: 387, ALA A:527, VAL A:349, PHE A: 381, LEU A: 384 β-Bisabolene 1 -7.70 2.26 µM - - Pi-Sigma: TYR A:385, Alkyl dan Pi-Alkyl: VAL A: 349, ALA A: 527, VAL A: 523, PHE A: 518, LEU A: 352, TRP A: 387, LEU A: 384, PHE A: 381 D-Fructose 1 -0.97 195.02 mM Conventional Hydrogen Bond LYS A:215 - - Atlanton 2 -3.48 2.21 mM Conventional Hydrogen Bond : ASN A:144, ARG A:216 - Alkyl dan Pi-Alkyl : PHE A:220, LEU B:238

## Tabel 3. Luaran Simulasi Penambatan Molekul
dan  toksisitas.  Absorpsi  terdiri  dari  HIA ( Human  Intestinal  Absorption )  dan  CaCO2. Berdasarkan  hasil  pada  Tabel  2,  hampir semua  senyawa  memiliki  nilai  HIA  yang baik,  dimana  nilai  yang  baik  berada  pada rentang  70–100  % 33 .  Namun  pada  senyawa D-fructose nilai  HIA  tergolong  cukup, menandakan  hampir  semua  senyawa  yang diujikan  memiliki  penyerapan  yang  baik pada  usus  manusia.  Pada  parameter  CaCO2, senyawa D-fructose menunjukkan nilai yang buruk sedangkan senyawa lain menunjukkan nilai  yang  cukup.  Hal  ini  menandakan senyawa  tersebut  memiliki  permeabilitas yang buruk melalui barier antar epitel usus 10 . Permeabilitas yang baik ditunjukkan jika nilai lebih besar dari 70 33 . Parameter  distribusi  terdiri  dari  PPB ( Plasma Protein Binding )  dan  BBB  ( Blood Brain Barrier ).  Nilai  PPB  menunjukkan keterikatan senyawa dengan protein plasma, dimana  jika  nilai  lebih  besar  dari  90%, maka senyawa terikat kuat dengan plasma 33 . Sedangkan BBB menunjukkan absorpsi pada SSP. Terdapat dua golongan nilai BBB, yaitu nilai  lebih  besar  dari  0,3  dapat  dianggap mudah melewati sawar darah otak sedangkan nilai  lebih  kecil  dari  -1  tidak  terdistribusi dengan  baik  ke  otak 38 .  Senyawa  dengan
nilai PPB yang baik, terdapat pada senyawa bisdemetoksikurkumin, alpha turmeron, zingiberene,  β-Bisabolene, dan  atlanton. Sedangkan senyawa dengan nilai BBB yang baik terdapat pada senyawa alpha turmeron, zingiberene,  β-Bisabolene, dan  atlanton (Tabel 2). Pada  toksisitas  terdiri  dari  parameter mutagen  dan  karsinogen.  Senyawa  yang bersifat  mutagen  terdapat  pada  senyawa alpha turmeron, β-Bisabolene, dan D-fructose. Sedangkan  pada  parameter karsinogen,  hampir  semua  senyawa  bersifat tidak  karsinogen  pada  mencit  dan  bersifat karsinogen  pada  tikus.  Namun  senyawa sesquiterpene dan alpha turmeron bersifat karsinogen pada mencit dan tikus serta pada senyawa D-fructose bersifat tidak karsinogen pada keduanya.
4.3.  Penambatan Molekul Molecular docking merupakan metode yang  digunakan  untuk  memprediksi  model pengikatan berbagai ligan dalam alur molekul target,  yang  berguna  dalam  pengembangan suatu  obat  baru  dengan  aktivitas  yang  lebih baik 11 . Molecular docking memerlukan dua  komponen  penting  yaitu  reseptor  dan ligan.  Pada  penelitian  ini  dipilih  struktur
Gambar 1. Kurva Validasi Metode ROC dan Hasil Pemodelan Farmakofor Atlanton
Gambar 2. Grafik kurva linear pengujian toksisitas pada vial (kiri) dan microwell (kanan)
3D  protein  dari  reseptor  siklooksigenase-2 dengan  kode  Pdb  5KIR  dan  resolusi  2.70Å serta  digunakan  10  senyawa  alami  dari rimpang  kunyit  ( Curcuma domestica ), yaitu kurkumin, desmetoksikurkumin, bisdesmetoksikurkumin,  dihidrokurkumin, alpha-tumeron, seskuiterpen, zingiberene, β-bisabolene,    D-fructose, dan  atlanton sebagai ligan uji 31 . Dilakukan  preparasi  dan  pemisahan protein  (reseptor)  dengan native ligand dari  protein  tersebut  yang  bertujuan  untuk menyediakan  ruang  untuk  terjadinya  ikatan atau interaksi 18 . Validasi  metode molecular docking merupakan  tahap  dilakukannya  penambatan ulang native ligand protein  COX-2  dengan protein  COX-2  yang  telah  dipreparasi. Dilakukan  penambahan  hidrogen  agar interaksi antar ligan dan protein terjadi secara optimal dan docking memiliki suasana yang mirip  dengan  pH  dalam  tubuh  manusia (pH=7) 15 .  Selain  penambahan  hidrogen, dilakukan pengaturan grid box agar terbentuk konformasi  antara native ligand dengan protein target 19 . Ligan uji umumnya bersifat fleksibel, karena itu diperlukan metode semi rigid untuk  mencegah  adanya  perubahan binding site . Nilai RMSD diukur untuk mengevaluasi  penyimpangan,  dimana  nilai RMSD  yang  besar  menunjukan  adanya penyimpangan  yang  besar  dan  sebaliknya 18 . Nilai  RMSD  yang  valid  yaitu  <2A ̊21 . Berdasarkan hasil yang diperoleh didapatkan nilai RMSD sebesar 1,46Å (Tabel 3), dengan demikian  metode molecular docking yang
digunakan telah tervalidasi. Metode docking yang  tervalidasi  kemudian  digunakan  untuk men-docking  reseptor  COX-2  pada  masing- masing ligan uji dengan minimalisasi energi dahulu agar ligan menjadi lebih stabil selama proses docking berlangsung 18 . Berdasarkan penelitian yang dilakukan, senyawa  kurkumin  dan  dihidrokurkumin memiliki  nilai binding energy rendah  yaitu -9.03kkal/mol  dan  -8.25  kkal/mol.  Nilai tersebut lebih tinggi jika dibandingkan dengan binding energy native ligand pada  protein COX-2 (Tabel 3). Hal tersebut menunjukkan adanya  kemampuan  untuk  berikatan,  tetapi potensinya  lebih  lemah  daripada native ligand nya.  Selain  itu,  dari  pengujian  yang dilakukan  dapat  diketahui  bahwa  interaksi dihidrokurkumin  dan  protein  COX-2 membentuk ikatan hidrogen dan residu asam amino ARGA5 18 (Gambar  3)  dimana  ikatan tersebut  sama  dengan  ikatan  hidrogen  yang terbentuk  antara native ligand dan  protein COX-2 29 (Tabel 3). Keterlibatan residu asam amino  dalam  interaksi  ligan-reseptor  akan mempengaruhi  kestabilan  konformasi  dari reseptor androgen. Selain itu, sifat residu yang terlibat  juga  dapat  mempengaruhi  stabilitas koneksi antara ligan dengan reseptor.
Hal  ini  menunjukan  dihidrokurkumin memiliki  sisi  aktif  tempat  berikatan  yang sama  pada  protein  COX-2  dengan native ligand sehingga  akan  menghasilkan  afinitas yang  sama  dengan native ligand nya  dalam menghambat protein COX-2.
4.4.  Pemodelan Farmakofor Farmakofor  merupakan  gugus-gugus
Gambar 3. Interaksi Senyawa dihidrokurkumin dengan COX-2
yang  terdapat  di  dalam  suatu  ligan  yang membentuk posisi 3D yang akan dikenali oleh reseptornya  secara  spesifik  karena  memiliki pola  yang  unik.  Pemodelan  farmakofor dilakukan  untuk  melihat  kemiripan  suatu senyawa  uji  dengan  database active dan decoy 17 . Validasi  metode  dilakukan  sebelum pemodelan  farmakofor  untuk  memastikan reabilitas  farmakofor  pada Ligandscout menggunakan active set dan decoy set . Pada validasi  ini, active set dan decoy set yang digunakan masing-masing sebanyak 100 dan 400. Dari  validasi,  dihasilkan  kurva  ROC ( Receiver Operating Characteristic )  dengan nilai AUC  ( Area  Under  Curve ).  Nilai AUC valid  jika  nilainya  lebih  besar  dari  70%. Selain itu, model farmakofor dikatakan baik jika  model  tersebut  dapat  mengidentifikasi sebagian besar senyawa active dan sebagian kecil  senyawa decoy 20 .  Dari  10  model, nilai  AUC  tertinggi  terdapat  pada  model  1 (Gambar  1)  yaitu  sebesar  73%  dengan  455 hits yang dapat dikatakan valid karena sudah memenuhi persyaratan nilai AUC.
Kemudian, dilakukan pengujian terhadap  10  senyawa  pada  kunyit  dan didapatkan 6 senyawa hit yang diprediksikan dapat  berikatan  dengan  reseptor  COX- 2,  yaitu  bisdemetoksikurkumin,  atlanton, dihidrokurkumin, kurkumin, seskuiterpen, dan demetoksikurkumin.  Nilai pharmacophore fit tertinggi  terdapat  pada  senyawa  atlanton yaitu  sebesar  33,11.  Semakin  besar  nilai pharmacophore  fit ,  maka  semakin  baik efektivitasnya.  Nilai pharmacophore  fit , berkaitan dengan keaktifan suatu fitur untuk berikatan dengan reseptornya 23 .
4.5.  Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Uji  dengan  metode  BSLT  bertujuan untuk mengetahui apakah senyawa berpotensi sebagai racun dengan mengamati tingkat  toksisitas  ekstrak  yang  mengandung senyawa  uji  terhadap  hewan  uji 13 .  Uji toksisitas  dilakukan  pada  larva Artemia salina Linch .  dan  sediaan  infusa  simplisia rimpang kunyit ( Curcumae longae Rhizoma ). Kemampuannya  dalam  beradaptasi  terhadap
kondisi  ekstrem,  menggunakan  beberapa sumber  nutrisi,  dan  ketersediaan  kistanya untuk dikumpulkan, membuat genus Artemia ideal  untuk  digunakan  pada  uji  toksisitas 30 . Infundasi adalah metode untuk mencari dan mendapatkan kandungan zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Digunakan sediaan  infusa  supaya  dapat  menyerupai cara pembuatan jamu oleh masyarakat yaitu dengan cara merebus bahan yang diperlukan 22 . LC50  merupakan  nilai  konsentrasi suatu  ekstrak  yang  dapat  menyebabkan kematian  hingga  50%  pada  suatu  populasi organisme uji 23 . Menurut Meyer et al (1982), suatu ekstrak dikatakan toksik bila nilai LC50 tidak lebih dari 1.000 mg/L dan sangat toksik bila  nilai  LC50  tidak  lebih  dari  30  mg/L. Sedangkan  bila  nilai  LC50    melebihi  1.000 mg/L, maka ekstrak dikatakan tidak toksik 24 . Pada perhitungan kematian larva udang, jumlah larva yang mati dimaksudkan sebagai larva udang yang mati sebelum penambahan metanol,  sedangkan  jumlah  larva  uji dimaksudkan  sebagai  jumlah  larva  udang yang  mati  setelah  penambahan  metanol. Dari  persentase  kematian,  didapatkan nilai  probitnya  yang  kemudian  digunakan untuk  pembuatan  kurva  linear  antara  probit %kematian  dan  log  konsentrasi  ekstrak uji.  Persamaan  yang  didapatkan  dari  kurva linear ini yang digunakan untuk menentukan LC50.   Kandungan  metabolit  sekunder  yang bersifat toksik dalam ekstrak rimpang kunyit merupakan  penyebab  kematian  50%  pada larva udang 28 . Membran kulit udang A.salina yang  sangat  tipis  menyebabkan  terjadinya difusi zat dari lingkungan yang memengaruhi metabolisme  tubuhnya 25 .  Hasil  nilai  LC50 pada vial dan microwell menunjukkan ekstrak bersifat  toksik  serta  tingginya  senyawa bioaktif  pada  ekstrak  rimpang  kunyit. Semakin tinggi senyawa bioaktif maka nilai LC50  akan  semakin  kecil 26 .  Nilai  LC50  yang rendah atau berada di bawah 1000 ppm dapat juga menunjukkan adanya senyawa sitotoksik yang kuat sehingga diperlukan penyelidikan lebih lanjut 23 .
5.  Kesimpulan Dari  hasil  penelitian  yang  telah
dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  kunyit memiliki  potensi  yang  kurang  baik  sebagai antiinflamasi  untuk dysmenorrhea .  Hasil penambatan molekul senyawa-senyawa pada kunyit,  memiliki  afinitas  yang  baik  pada reseptor  5KIR.  Namun,  berdasarkan  hasil pemodelan  farmakofor  dan  uji  toksisitas, senyawa  dalam  kunyit  masih  memiliki efektivitas  yang  rendah  serta  masih  bersifat toksik terhadap larva Artemia salina. Sehingga hal ini, masih perlu dilakukan penelitian lebih lanjut.

## Daftar Pustaka
1.  Larasati TA, Alatas F. Dismenore Primer dan  Faktor  Risiko  Dismenore  Primer pada Remaja. Majority. 2016;5(3):79-84.
2.  Nurfadillah  H,  Maywati  S,  Aisyah IS.  Faktor-Faktor  Yang  Berhubungan Dengan  Kejadian  Dismenore  Primer pada  Mahasiswi  Universitas  Siliwangi. Jurnal  Kesehatan  komunitas  Indonesia. 2021;17(1):247-256.
3.  Sima RM, Sulea M, Radosa JC, Findeklee S,  Hamoud  BH,  Popescu  M,  et  al.  The Prevalence,  Management  and  Impact of  Dysmenorrhea  on  Medical  Students’ Lives—A Multicenter Study. Healthcare. 2022;10(157):1-10.
4.  Handayani,  Gamayanti  IL,  Julia  M. Dismenore dan Kecemasan pada Remaja. Sari Pediatri. 2013;15(1):27-31.
5.  Nursamsiar,  Toding  AT,  Awaluddin A.  Studi  In  Silico  Senyawa  Turunan Analog  Kalkon  dan  Pirimidin  sebagai Antiinflamasi: Prediksi
Absorpsi, Distribusi,  dan  Toksisitas.  Pharmacy: Jurnal Farmasi Indonesia (Pharmaceutical Journal  of  Indonesia).  2016;13(1):  92– 100.
6.  Sari  W,  Harahap  D,  Saleh  MMI. Prevalensi  Penggunaan  Obat  Anti- Inflamasinon-Steroid  (Oains)  Pereda Dismenoredi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijayapalembang. Majalah Kedokteran  Sriwijaya.  2018;50(3):154- 165.
7.  McIntyre  W,  Evans,  G.  The  Vioxx® legacy:  Enduring  lessons  from  the  not so  distant  past.  Cardiology  Journal.
2014;21(2):1-3.
8.  Lipinski  C.  Lead-and  Drug-Like Compounds: The
Rule-of-Five Revolution.  Drug  Discovery  Today: Technologies. 2004;1(4):337-341. 9.  Kusbiantoro  D,  Purwaningrum  Y. Pemanfaatan kandungan metabolit sekunder  pada  tanaman  kunyit  dalam mendukung  peningkatan  pendapatan masyarakat. Jurnal Kultivasi. 2018;17(1):544-549.
10. Kelutur F, Mustarichie R, Umar A. Virtual screening kandungan senyawa kipas laut (Gorgonia  mariae)  sebagai  Antiasma. Jurnal Penelitian Kimia. 2020;16(2):199- 210.
11. Pratama  A,  Rifai  Y,  Marzuki  A. Docking  Molekuler  Senyawa  5, 5’-Dibromometilsesamin. Majalah Farmasi  dan  Farmakologi.  2017; 21(3):67-69.
12. Puspitasari  E,  Rozirwan,  Hendri  M.  Uji Toksisitas dengan Menggunakan Metode Brine  Shrimp  Lethality Test  (Bslt)  Pada Ekstrak  Mangrove  (Avicennia  Marina, Rhizophora  Mucronata,  Sonneratia Albadan  Xylocarpus  Granatum)  yang Berasal dari Banyuasin, Sumatera Selatan. Jurnal  Biologi  Tropis.  2018;18(1):91- 103.
13. Muaja AD,  Koleangan  HSJ,  Runtuwene MRJ.    Uji  Toksisitas  dengan  Metode BSLT dan Analisis Kandungan Fitokimia Ekstrak Daun Soyogik (Saurauia bracteosa DC)  dengan  Metode  Soxhletasi.  Jurnal MIPA UNSRAT. 2013;2(2):115-118.
14. Nusantoro  YR,  Fadlan  A.  Analisis Sifat  Mirip  Obat,  Prediksi  ADMET, dan  Penambatan  Molekular  Isatinil-2- Aminobenzoilhidrazon  dan  kompleks logam  transisi  Co(II),  Ni(II),  Cu(II), Zn(II)  Terhadap  BCL2-XL. Akta  Kimia Indonesia. 2020;5(2):114-126
15. Frimayanti  N,  Lukman  A,  Nathania L.  Studi  molecular  docking  senyawa 1,  5-benzothiazepine  sebagai  inhibitor dengue  DEN-2  NS2B/NS3  serine protease.  CHEMPUBLISH  JOURNAL. 2021;6(1):54-62.
16. Fatimah  D,  Oktaviani  D,  Widiyastuti
S, Arnanda,  Q,  Lestari  S,  Ramadhan  S, Megantara  S.  Pemodelan  Farmakofor, Skrining  Virtual,  Dan  Penambatan Molekul  Senyawa  Metabolit  Dalam Ekstrak  Daun  Salam  (Syzygium polyanthum  (Wight)  Walp.)  Sebagai Senyawa  Antihipertensi.  Jurnal  Farmasi Galenika. 2020;7(2):91-107.
17. Susanti  NMP,  Laksmiani  NPL,  Dewi PPP,  Dewi  PYC.  Molecular  Docking Terpinen-4-ol  pada  Protein  IKK  sebagai Antiinflamasi pada Aterosklerosis secara In  Silico.  Jurnal  Farmasi  Udayana. 2019;8(1):44-49.
18. Rachmania  RA,  Supandi,  Cristina FAD.  Analisis  Penambatan  Molekul Senyawa Flavonoid Buah Mahkota Dewa (Phaleria  macrocarpa  (Scheff.)  Boerl.) pada  Reseptor  α-Glukosidase  sebagai Antidiabetes. Pharmacy. 2016;13(2):239- 251.
19. Suherman  M,  Prasetiawati  R,  Ramdan D. Virtual Screening Of Tamarind Active Compounds  (Tamarindus  indica  L.)  on Selective  Inhibitor  Siklooksigenase-2.
Jurnal Ilmiah Farmako
Bahari. 2020;11(2):125-136
20. Muttaqin  FZ,  Ismail  H,  Hubbi  NM. Studi  molecular  docking,  molecular dynamic, dan prediksi toksisitas senyawa turunan  alkaloid  naftiridin  sebagai inhibitor  protein  kasein  kinase  2-α  pada kanker  leukemia.  J  of  Pharmacoscript. 2019;2(2):131-151.
21. Muchtaridi M, Syahidah
H, Subarnas  A,  Yusuf  M,  Bryant  S,  dan Langer  T.  Molecular  Docking  and 3D-Pharmacophore  Modeling  to  Study the Interactions of Chalcone Derivatives with Estrogen Receptor Alpha. Pharmaceuticals. 2017;10(4), 81.
22. Depkes RI. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I.  Jakarta: Dirjen Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan-Depkes RI; 2008.
23. Nurcholis W, Priosoeryanto P, Purwakusumah  E,  Katayama  T,  Suzuki T.  Antioxidant,  Cytotoxic  Activities and  Total  Phenolic  Content  of  Four Indonesian  Medicinal  Plants.  Valensi. 2012;2(4):501-510.
24. Meyer B, Ferrigni N, Putnam J, Jacobsen L,  Nichols  D,  Mc  Laughlin  J.    Brine shrimp: A Convenient General Bioassay for  Active  Plant  Constituents.  J.  Planta Medica. 1982;45(5):31-45.
25. Mudjiman  A.  Budidaya  Udang  Putih. Jakarta: Penerbit Swadaya;1989.
26. Sumihe  G,  Runtuwene  M,  Rorong  J. Analisis  Fitokimia  Dan  Penentuan  Nilai Lc50  Ekstrak  Metanol  Daun  Liwas. Jurnal Ilmiah Sains. 2014;14(2):125-128.
27. Khotimah,  SN,  Muhtadi,  A.  Review Artikel: Beberapa Tumbuhan yang  Mengandung  Senyawa  Aktif Antiinflamasi. Jurnal Farmaka. 2021;14(2):28-40.
28. Jannah, DW, Maunatin, A, dan Jannah, A. Identifikasi  dan  Uji  Toksisitas  terhadap Larva Udang (Artemia salina L.) Ekstrak Bekatul  Menggunakan  Variasi  Jenis Pelarut  dan  Lama  Ekstraksi.  Alchemy: Journal of Chemistry. 2020;8(2):16-23.
29. Lingwan,  M.,  Shagun,  S.,  Pant,  Y., Kumari, B., Nanda, R., & Masakapalli, S. K. Antiviral phytochemicals identified in Rhododendron arboreum petals exhibited strong  binding  to  SARS-CoV-2  MPro and  Human  ACE2  receptor  [diunduh  2 Maret  2022].  Tersedia  dari  :  https://doi. org/10.20944/preprints202008.0530.v1 30. Rajabi,  S,  Ramazani,  A,  Hamidi,  M, dan  Naji,  T. Artemia  salina  as  a  model organism  in  toxicity  assessment  of nanoparticles.  DARU  Journal  of Pharmaceutical Sciences. 2015;23(1):20.
31. Orlando,  BJ,  &  Malkowski,  MG. Crystal  structure  of  rofecoxib  bound to  human  cyclooxygenase-2.  Acta Crystallographica  Section  F:  Structural Biology  Communications.  2016;72(10): 772-776.
32. Dewayani  AR,  Ghaliya  S,  Parameswari N,  Pribadi  APA,  Ahadi  HM,  Aulifa DL,  Elaine  AA,  Sitinjak  BDP.  Studi  In Silico  Senyawa  Daun  Sirsak  (Annona muricata  L.)Sebagai  Inhibitor  BRAF V600E  Kinase  Pada  Kanker  Melanoma. 2023;11(2): 30-38.
33. Mardianingrum,  R.,  Bachtiar,  K.  R., Susanti,  S.,  Nuraisah,  A.  N.  A.,  &
Ruswanto, R. Studi In Silico Senyawa 1, 4-Naphthalenedione-2-Ethyl-3-Hydroxy sebagai  Antiinflamasi  dan  Antikanker Payudara. ALCHEMY  Jurnal  Penelitian Kimia. 2021;17(1):83-95.
34. Athharani,  N.  S.,  Sutadipura,  N.,  & Susanti,  Y.  Studi  Penambatan  Molekul Senyawa  Curcuma  longa  pada  Bakteri Resisten  Carbapenem  Acinetobacter baumanii  dengan  Metode  In  Silico.
Jurnal  Integrasi  Kesehatan  dan  Sains. 2021;3(1):124-130.
35. Kurniawan,  H.,  &  Ropiqa,  M.  Uji toksisitas  ekstrak  etanol  daun  ekor kucing  (Acalypha  hispida  Burm.  f.) dengan  metode  Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT). Journal Syifa Sciences and Clinical Research. 2021;3(2):52-62.
36. Jelita,  S.  F.,  Setyowati,  G.  W.,  & Ferdinand,  M.  Uji  Toksisitas  Infusa Acalypha  siamensis  Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Farmaka. 2020;18(1):14-22.
37. Pradani,  T.  C.,  Manampiring,  A.  E., Kepel,  B.  J.,  Budiarso,  F.  D.,  &  Bodhi, W.  Molecular  Docking  Terhadap Senyawa  Kurkumin  dan  Arturmeron pada Tumbuhan Kunyit (Curcuma Longa Linn.)  yang  Berpotensi  Menghambat Virus Corona. eBiomedik. 2021;9(2):14-
22.
38. Apriali,  K.  D.,  Triana,  E.,  Farhani,  M. I.,  Khoirunnisa,  A.,  &  Nur’aini,  Y.  A. Studi Penambatan Molekul dan Prediksi Admet  Senyawa  Metabolit  Sekunder Tanaman  Kelor  (Moringa  Oleifera  L.) Sebagai  Inhibitor  Bace1  Pada  Penyakit Alzheimer.  Fitofarmaka:  Jurnal  Ilmiah Farmasi. 2022:12(1):58-67.
39. Arwansyah,  A.  Simulasi  Molecular Docking  Senyawa  Kurkumin  dan Analognya  Sebagai  Selective  Androgen Receptor  Modulators  (SARMs)  pada Kanker Prostat. Dinamika. 2015;5(2):61- 75.