## Aktivitas Antifungi Ekstrak Daun Teh Terhadap Pertumbuhan Aspergillus flavus
Putriana Indah Lestari
Rumah Sakit Penyakit Infeksi Prof. Dr. Sulianti Saroso
Abstrak. Aspergillus  flavus merupakan  jamur  patogen  penghasil  racun  aflatoksin  yang  banyak  mengontaminasi komoditi hasil pertanian dan bahan pangan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antifungi ekstrak daun  teh  terhadap  pertumbuhan A.  flavus dan  konsentrasi  ekstrak  daun  teh  yang  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan A.  flavus .  Perlakuan  yang  dicobakan  terdiri  atas  7  konsentrasi  ekstrak  daun  teh  yang  yaitu  0 (kontrol);  0,5;  1,0;  1,5;  2,0;  2,5;  3,0  dan  3,5  mg/ml.  Variabel  bebas  berupa  konsentrasi  ekstrak  daun  teh  dan variabel  tergantung  berupa  persentase  penghambatan  ekstrak  daun  teh  terhadap A.  flavus .  Parameter  yang diamati  adalah  diameter  pertumbuhan A.  flavus ,  pH  media  dan  suhu  ruang.  Data  dianalisis  dengan menggunakan Analisis Ragam (uji F) pada tingkat kepercayaan 95 dan 99%, jika berpengaruh nyata dilanjutkan dengan  uji  Beda  Nyata  Jujur  (BNJ)  5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  teh  mampu menghambat  pertumbuhan A.  flavus dan  konsentrasi  2,5  mg/ml  merupakan  konsentrasi  efektif  menghambat pertumbuhan A.  flavus .  Kandungan  metabolit  sekunder  daun  teh  yang  dapat  dideteksi  yaitu  golongan  alkaloid, flavonoid, terpenoid, tanin dan asam lemak.
Kata kunci : Aktivitas antifungi, Ekstrak daun teh, Konsentrasi, Aspergillus flavus
Korespondensi :Putriana Indah Lestari, Direktorat Pengkajian PI & PM, RSPI Prof. Dr. Sulianti  Saroso,  Jl.  Baru  Sunter  Permai, Papanggo, Tanjung Priok, Jakarta Utara Telp : (021) 6506559 ext.5001 Email : arsiputri@gmail.com

## PENDAHULUAN
Aspergillus  flavus merupakan  salah satu  jamur  mikroskopis  patogen  yang menghasilkan  metabolit  sekunder  berupa racun  (mikotoksin)  yang  disebut  dengan aflatoksin.
Aflatoksin
banyak mengontaminasi berbagai jenis komoditas pertanian seperti kacang-kacangan, jagung  dan  beras.  Hasil  pertanian  yang terkontaminasi  aflatoksin  dengan  kadar yang melebihi batas yang telah ditetapkan dapat membahayakan ternak jika tanaman tersebut  dijadikan  sebagai  pakan.  Ternak yang  memakan  pakan  ternak  yang  telah terkontaminasi aflatoksin dapat mengalami penurunan berat badan, peningkatan  berat  limfa  dan  ginjal  serta terjadinya atropi pada hati 1 . Sisa aflatoksin juga akan terdapat pada beberapa produk ternak  seperti  telur,  daging  dan  hati 2 . Produk ternak tersebut dapat
membahayakan kesehatan apabila
dikonsumsi oleh manusia. Bahaya aflaktosin  bagi  manusia  telah  dilaporkan oleh  Pitt  dan  Hocking  pada  tahun  1997 3 . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa aflatoksin  menyebabkan  kerusakan  hati akut,  sirosis  hati,  induksi  tumor  dan  efek teratogenik.  Hasil  penelitian  tersebut didukung oleh pernyataan
Purwijantiningsih et  al. bahwa  aflatoksin pada  manusia  erat  kaitannya  dengan hepatotoksisitas 4 .
Berdasarkan  kerugian  dan  bahaya yang  disebabkan  oleh  aflatoksin  maka perlu dilakukan suatu upaya penanggulangan yang efektif. Upaya yang telah dilakuka para petani untuk menekan kerugian  akibat  kontaminasi  aflatoksin yaitu  dengan  cara  mengendalikan A. flavus .  Para  petani  mencuci  hasil  panen menggunakan  air  garam  1-2,5%,  namun upaya  tersebut  belum  berhasil  karena hanya  mampu  menekan  kerusakan  tidak lebih  dari  5% 5 .  Berdasarkan  hal  tersebut, beberapa peneliti berusaha mencari solusi yang  lebih  efektif  yaitu  dengan  cara  fisik (pemanasan) dan kimiawi (fungisida sintetik). Kedua cara tersebut dinilai masih kurang  efektif  karena  memiliki  beberapa kelemahan. Pengendalian A. flavus secara fisik dapat menyebabkan hilangnya zat-zat gizi pada bahan pangan,
sedangkan  penggunaan  zat-zat  kimia sintetik  tidak  mudah  dan  kurang  aman dilakukan pada bahan-bahan yang dikonsumsi  manusia  serta  tidak  ramah lingkungan.
Upaya  pengendalian  yang  aman  dan tidak berbahaya yaitu pengendalian secara hayati. Pengendalian hayati merupakan suatu cara mengurangi jumlah atau  menghambat  aktivitas  metabolisme organisme  patogen  menggunakan  agen hayati.  Pendekatan  pengendalian  hayati yang dapat menjadi alternatif yang efektif, aman dan efisien untuk mengendalikan A. flavus adalah  pemanfaatan  bahan  nabati sebagai  biofungisida  (fungisida  nabati). Bahan  nabati  yang  digunakan  berupa metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada ekstrak tumbuhan.
Metabolit  sekunder  merupakan  hasil metabolisme tumbuhan yang tidak digunakan untuk pertumbuhan dan banyak  terdapat  pada  jaringan  akar, batang  dan  daun  yang  sudah  tua. Beberapa jenis metabolit sekunder tumbuhan adalah tanin, flavonoid, terpenoid  dan  alkaloid.  Senyawa  tersebut dipercaya  dapat  menghambat  beberapa jenis  mikroba  dan  mempunyai  efek samping  yang  lebih  rendah  dibandingkan senyawa  kimia  sintetik 6,7 .  Kemampuan metabolit  sekunder  tumbuhan  dalam menghambat pertumbuhan mikroba dengan  efek  samping  yang  lebih  kecil dibandingkan  senyawa  kimia  sintetik menjadikan  metabolit  sekunder  tumbuhan berpotensi  untuk  dimanfaatkan  sebagai agen  pengendali  mikroba  yang  terdapat dalam bahan pangan. Kemampuan metabolit sekunder tumbuhan untuk menghambat pertumbuhan jamur patogen disebut sebagai aktivitas antifungi.
Salah  satu  tumbuhan  yang  memiliki beragam  metabolit  sekunder  adalah  teh ( Camellia sinensis (L.) Kuntze).
Pemanfaatan teh sebagai bahan minuman hanya menggunakan pucuk daun teh yang masih  muda,  sedangkan  daun  teh  yang sudah  tua  masih  belum  termanfaatkan secara  optimal  padahal  jaringan  daun  teh yang  tua  memiliki  kandungan  metabolit sekunder  yang  tinggi.  Metabolit  sekunder utama  yang  terdapat  pada  daun  teh berasal  dari  golongan  fenol  di  antaranya yaitu flavonol, flavonoid dan tanin 8 .
Hasil  studi  pustaka  menunjukkan bahwa  dibutuhkan  sebanyak  3  mg/ml ekstrak  daun  teh  untuk  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus 8 . Berbeda dengan bakteri, penelitian  mengenai  pemanfaatan  ekstrak daun teh untuk menghambat jamur belum banyak  dilakukan,  bahkan  belum  pernah ada  laporan  mengenai  uji  penghambatan ekstrak  daun  teh  terhadap  pertumbuhan A. flavus . Laporan mengenai pemanfaatan ekstrak  daun  teh  terhadap  pertumbuhan jamur, baru dilakukan terhadap Trichophyton  mentagrophytes dan T. rubrum .  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak daun teh yang efektif  untuk  menghambat  kedua  jamur tersebut adalah 2,5 mg/ml 9 .
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  ekstrak  daun  teh  terhadap pertumbuhan A.  Flavus dan  konsentrasi ekstrak  daun  teh  yang  efektif  dalam menghambat pertumbuhan A. flavus . Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan  informasi  ilmiah  tentang aktivitas  antifungi  ekstrak  daun  teh terhadap A.  flavus .  Informasi  tersebut dapat membantu pemecahan solusi pengendalian A.  flavus yang  efektif  dan efisien.

## BAHAN DAN METODE
Ekstraksi daun teh (Modifikasi Gramza- Michalowska et  al., dan  N’guessan et al. ) 10,11
Tanaman  teh  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah tanaman teh varietas assam  ( Camellia  sinensis (L.)  Kuntze  var assamica )  milik  Unit  Perkebunan  PPTK Gambung,  Bandung.  Daun  teh  yang digunakan  merupakan  daun  teh  yang yang  berasal  dari  tanaman  teh  yang  tua. Tanaman  teh  yang  tua  adalah  tanaman teh  yang  sudah  berumur  lebih  dari  5 tahun 12 .  Daun  teh  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  teh  yang berasal  dari  tanaman  teh  berumur  20 tahun.
Daun  teh  dikeringkan  pada  suhu kamar  selama  7  hari,  kemudian  daun  teh kering dihaluskan  dengan blender selama 2  x  1  menit  hingga  menjadi  serbuk. Sebanyak 25 g serbuk daun teh direndam dan  dihomogenkan  dalam  100  ml  etanol
95%  dengan menggunakan shaker orbital pada  suhu  ruang  selama  24  jam.  Larutan disaring  menggunakan  kertas saring Whatman No.41, kemudian etanol diuapkan menggunakan rotary evaporator . Ekstrak daun teh disimpan pada suhu 4°C hingga digunakan.
Penghitungan konsentrasi ekstrak induk  yang  dihasilkan  dilakukan  dengan mengambil  1  ml  ekstrak  kemudian  di keringkan menggunakan oven. selanjutnya  ekstrak  kering  ditimbang  dan dihitung jumlah berat seluruh ekstrak yang dihasilkan  dengan  perbandingan  pelarut. Setelah  diketahui  berat  ekstrak  yang dihasilkan,  konsentrasi  ekstrak  induk dihitung menurut persamaan :
Konsentrasi Ekstrak Induk =
% 100 (g) awal serbuk Berat (g) hasil ekstrak Berat 
Selanjutnya  konsentrasi  dikonversi ke  dalam  bentuk  satuan  mg/ml.  Setelah diketahui konsentrasi ekstrak induk, dibuat seri konsentrasi perlakuan dengan persamaan  untuk  pengenceran  menurut Parning  dan  Horale  (2005) 13 sebagai berikut
M 1 x V 1 = M 2 x V 2 M 1 = konsentrasi ekstrak induk (mg/ml) M 2 =  konsentrasi  ekstrak  yang  diinginkan (mg/ml) V 1 = volume ekstrak induk (ml) V 2 = volume ekstrak yang diinginkan (ml)
Rendemen  ekstrak  daun  teh  dihitung dengan menggunakan persamaan menurut Gramza-Michalowska et al . (2007) sebagai berikut:
Rendemen % 100 K K 0 1  
K 0 =  konsentrasi  ekstrak  yang  diperoleh (mg/ml)
K 1 = konsentrasi larutan awal (mg/ml)
Uji  aktivitas  antifungi  ekstrak  daun  teh terhadap A.  flavus (Modifikasi  Al- Mughrabi et al. ) 14
Ekstrak  daun  teh  yang  telah  dibuat dilarutkan  dengan  akuades  steril  dengan konsentrasi  0  (kontrol);  0,5;  1,0;  1,5;  2,0; 2,5;  3,0  dan  3,5  mg/ml,  kemudian sebanyak  2  ml  ekstrak  dituang  ke  dalam cawan  petri  lalu  setelah  itu  medium  PDA
sebanyak 10 ml dituangkan dan diratakan dengan ekstrak kemudian dibiarkan memadat.  Perlakuan  kontrol  diberi  2  ml akuades steril. Medium yang sudah padat didiamkan  24  jam  agar  ekstrak  meresap ke  dalam  medium  dan  untuk  melihat  ada tidaknya kontaminasi pada medium. Isolat A.  flavus yang  telah  ditumbuhkan  selama 3  hari  dipotong  menggunakan  bor  gabus steril dengan diameter 5 mm, kemudian 1 plug  inokulum  diletakkan  dalam  cawan petri  yang  sudah  berisi  medium  dan ekstrak dengan arah miselium menyentuh permukaan  medium.  Semua  perlakuan kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruang. Pengamatan  aktivitas  antifungi  ekstrak daun teh dalam menghambat
pertumbuhan A.  flavus dengan  cara mengamati  diameter  koloni A.  flavus setiap hari. Pengamatan dimulai pada hari pertama  setelah  inkubasi  hingga  salah satu isolat tumbuh memenuhi cawan petri. Pengamatan  diameter  dilakukan  dengan menggaris  bagian  bawah  cawan  petri menjadi 8, sehingga pengukuran dilakukan  dengan  4  arah  berbeda  dan diambil rata-ratanya. Persentase
penghambatan ekstrak daun teh terhadap pertumbuhan A.  flavus dihitung  dengan persamaan    menurut  Mori et  al. (1997) 15 sebagai berikut :
% penghambatan % 100    K P K K = Diameter koloni kontrol (mm) P = Diameter koloni perlakuan (mm)
Karakterisasi  senyawa  aktif  ekstrak daun teh 16
Karakterisasi  senyawa-senyawa  aktif dari  ekstrak  daun  teh  mengacu  pada Harborne  (1987).  Karakterisasi  dilakukan dengan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  di Laboratorium  Kimia  Organik  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Unsoed  untuk mengamati  adanya  senyawa  golongan flavonoid, alkaloid, tanin dan terpenoid.
1.  Uji  flavonoid  dengan  KLT  dilakukan dengan  menggunakan  fase  diam silika  gel  GF  254,  fase  gerak  asam asetat  :  HCl  pekat  :  air  (40:3:10)  v/v. Bercak yang terelusi dideteksi dengan UV 366 nm  dan uap amonia.  Adanya flavonoid ditunjukkan
oleh
terbentuknya  bercak  yang  terlihat
berwarna secara visual atau perubahan fluoresensi bercak dengan uap amonia.
2.  Uji  alkaloid  dengan  KLT  dilakukan dengan  menggunakan  fase  diam silika  gel  GF  245,  fase  gerak  asam asetat  :  HCl  pekat  :  air  (40:3:10)  v/v. Bercak yang terelusi dideteksi dengan UV 254 nm dan 366 nm, serta dengan pereaksi Dragendorff. Adanya alkaloid ditunjukkan  oleh  terbentuknya  bercak berwarna kuning jingga.
3.  Uji  terpenoid  dengan  KLT  dilakukan dengan  menggunakan  fase  diam silika  gel  GF  245,  fase  gerak  asam asetat  :  HCl  pekat  :  air  (40:3:10)  v/v. Bercak yang terelusi dideteksi dengan penyemprotan KMnO 4 0,2 %. Adanya terpenoid ditunjukkan oleh terbentuknya  bercak  berwarna  coklat hitam.
4.  Uji  Tanin  dengan  KLT  dilakukan dengan  menggunakan  fase  diam silika gel GF 245, fase gerak Etanol : asam  asetat  :  air  (14:1:5)  v/v.  Bercak yang  terelusi  dideteksi  dengan  UV 545 - 600 nm. Adanya tanin ditunjukkan  oleh  terbentuknya  bercak yang terlihat berwarna secara visual.
Identifikasi komponen dilakukan dengan kromatografi gas-spektrometri massa (GCMS) di Laboratorium Instrumen
Fakultas MIPA UGM,
Yogyakarta. Interpretasi spektromassa dilakukan dengan  bantuan  komputer  untuk  mencari nilai Linear  Retention  Indicase (LRI)  dari setiap spektra. Selanjutnya spektra tersebut  juga  dibandingkan  dengan  pola spektra  massa  senyawa  yang  telah diketahui yang terdapat pada data National  Institute  Standard  of  Technology (NIST) Library dan Wiley  Library atau secara  manual  dibandingkan  dengan literatur.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Ekstrak Etanol Daun Teh
Ekstrak  daun  teh  yang  digunakan pada  penelitian  ini  memiliki  rendemen
sebesar  12%  dari  bahan  baku  yang digunakan.  Hasil  ekstraksi  tersebut  lebih sedikit  jika  dibandingkan  dengan  ekstrak daun  teh  yang  dihasilkan  Gramza- Michalowska et  al. (2007)  yaitu  sebesar 12,2  %.  Banyaknya  jumlah  ekstrak  yang dihasilkan  (rendemen)  dipengaruhi  oleh beberapa  hal  di  antaranya  kehalusan bahan  dan  lama  ekstraksi 17 .  Proses menghaluskan  bahan  pada  penelitian Gramza-Michalowska et al. (2007) dilakukan  dengan  cara  maserasi  selama 24  jam,  sedangkan  pada  penelitian  ini hanya dilakukan dengan blender selama 2 x  1  menit.  Selain  kehalusan  bahan  dan lama ekstraksi, keberhasilan suatu proses ekstraksi  juga  dipengaruhi  oleh  frekuensi pengadukan saat perendaman dan pengeringan bahan 18 .
Hasil  uji  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun teh  menunjukkan  hasil  positif  terhadap adanya  metabolit  sekunder  golongan flavonoid,  tanin,  alkaloid  dan  terpenoid. Selanjutnya senyawa-senyawa volatil dalam ekstrak etanol daun teh diidentifikasi  menggunakan  kromatografi gas spektrometri massa (GCMS).
Berdasarkan hasil uji GCMS ditemukan 19 puncak  senyawa  aktif  dalam  ekstrak etanol daun teh, namun hanya diidentifikasi  5  puncak  tertinggi  (Tabel  1). Kromatogram  kelima  puncak  tertinggi tersebut  kemudian  dibandingkan  dengan data National Institute Standard of Technology (NIST) Library dan Wiley Library .
Senyawa-senyawa yang teridentifikasi  yaitu caffeine (waktu  retensi dan  berat  molekul:  22.446  dan  194), hexadecanoic  acid (waktu  retensi  dan berat molekul: 23.100 dan 256), neophytadiene (waktu  retensi  dan  berat molekul:  21.675  dan  278), phytol (waktu retensi  dan  berat  molekul:  24.575  dan 296), dan tetracosahexaene (waktu retensi  dan  berat  molekul:  31.792  dan 410). Kelima senyawa tersebut mempunyai karakter sebagai antifungi 19,20,21,22,23,24 . Beberapa hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak daun  teh  mengandung  fenol,  glikosida, saponin, flavonoid, tanin dan catechin 25 .
Tabel 1.Daftar senyawa Hasil Uji Kromatografi Gas Spektrometri Massa (GCMS) ekstrak etanol daun teh
Peak Number Nama Senyawa Golongan Retention Time (min) Peak Area (%) 11 Kafein alkaloid 22,450 60,35 14 Phytol terpenoid 24,575 9,14 12 Hexadecanoic acid Asam lemak 23,100 7,54 18 Tetracosahexaene terpenoid 31,792 3,62 8 Neophytadiene terpenoid 21,675 2,34 Tidak diidentifikasi 17,01 Jumlah 100
Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Teh terhadap A. flavus Hasil  pengujian  ekstrak  daun  teh dengan konsentrasi yang berbeda menunjukkan  adanya  aktivitas  antifungi terhadap A. flavus . Hal tersebut dilihat dari terhambatnya pertumbuhan A. flavus yang
diberi perlakuan ekstrak daun teh. Persentase  penghambatan  ekstrak  daun teh  terhadap  pertumbuhan A.  flavus ditentukan  dengan  pengukuran  diameter koloni A.  flavus selama  8  hari.  Rata-rata diameter  koloni A.  flavus selama  8  hari terdapat pada Grafik1.
Grafik 1. Rata-rata diameter pertumbuhan koloni A. flavus selama 8 hari
.
Berdasarkan  Grafik  1  dapat  dilihat bahwa  rata-rata  diameter  koloni A.  flavus yang paling tinggi adalah rata-rata pertumbuhan A.  flavus yang  tidak  diberi perlakuan  ekstrak  daun  teh  (kontrol)  dan yang  terendah  adalah A.  flavus dengan perlakuan  ekstrak  daun  teh  sebanyak  3,5 mg/ml.  Rata-rata  diameter  koloni A. flavus semakin menurun
seiring
meningkatnya  konsentrasi  yang  diujikan. Selanjutnya data rata-rata pertumbuhan A. flavus digunakan untuk menghitung
persentase  penghambatan  ekstrak  daun teh terhadap A. flavus .
Perbedaan diameter koloni juga menghasilkan  persentase  penghambatan pertumbuhan A.  flavus yang  berbeda- beda.  Adanya  persentase  penghambatan merupakan  indikator  adanya  aktivitas antifungi pada ekstrak daun teh. Persentase  penghambatan  ekstrak  daun teh  terhadap A.  flavus dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Berdasarkan  Grafik  2  dapat dilihat  bahwa  persentase  penghambatan
5.57 5.34
5.1 4.97 4.71 4.48 4.46 4.36
0 1 2 3 4 5 6 0 0.5 1,0 1,5
2,0 2,5 3,0 3,5 Rat a -Rat a Dia met er ( mm )
Konsentrasi (mg/ml)
yang  dihasilkan  oleh  perlakuan  dengan konsentrasi  ekstrak  daun  teh  sebanyak 0,5  mg/ml  merupakan  perlakuan  dengan persentase  penghambatan  paling  rendah yaitu sebesar 4,42%. Persentase penghambatan  terus  meningkat  seiring dengan  semakin  tingginya  konsentrasi
ekstrak daun teh yang dicobakan. Persentase  penghambatan  paling  tinggi terdapat  pada  perlakuan  konsentrasi ekstrak  daun  teh  sebanyak  3,5  mg/ml dengan persentase penghambatan sebesar 21,32 %.
Grafik 2. Persentase penghambatan ekstrak daun teh terhadap A. flavus
Hasil  uji  F  menunjukkan  bahwa perbedaan  konsentrasi  ekstrak  daun  teh memberikan  pengaruh  yang  sangat  nyata (p<0,01)
terhadap persentase penghambatan  pertumbuhan A.  flavus yang  dihasilkannya.  Pengaruh  tersebut perlu  diuji  lebih  lanjut  untuk  mengetahui konsentrasi  yang  memberikan  pengaruh terbaik.  Uji  lanjut  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  uji  Beda  Nyata  Jujur (BNJ) pada tingkat kesalahan 5%. Hasil uji BNJpersentase  penghambatan  ekstrak daun  teh  terhadap A. flavus dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji BNJ presentase penghambatan  ekstrak  daun  teh  terhadap  A. Flavus Konsentrasi Ekstrak Daun Teh (mg/ml) Persentase penghambatan (%)± SD 0(kontrol) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 0,000    ±  0,000  a 4,417    ±  2,710  ab 9,150    ±  0,961  bc 10,370  ±  1,849  bc
15,750  ±  3,006  cd 20,223  ±  1,572  d 20,343  ±  1,106  d 21,323  ±  4,873  d Keterangan : huruf yang sama di belakang angka rata-rata pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan tidak nyata (P>0,05)
Berdasarkan  Tabel  2  dapat  diketahui bahwa perlakuan yang memberikan pengaruh  antifungi  paling  baik  terhadap aktivitas  antifungi  ekstrak  daun  teh terhadap A. flavus adalah  konsentrasi  2,5
-  3,5  mg/ml.  Konsentrasi  ekstrak  yang efektif pada penelitian ini adalah konsentrasi  2,5  mg/ml  karena  dapat memberikan  hasil  yang  sama  secara statistik  dengan  konsentrasi  3,5  mg/ml. Berdasarkan  tabel  klasifikasi  aktivitas antifungi  Mori et  al. (1997) 15 ,  semua konsentrasi  yang  dicobakan  memiliki aktivitas  antifungi  yang  lemah  yaitu dengan  penghambatan  berkisar  antara lebih dari 0 - 25% (Tabel 3).
Tabel 3. Klasifikasi Aktivitas Antifungi (Mori et al. , 1997)
Persentase Penghambatan (%) Tingkat Aktivitas Antifungi PP≥75 Sangat Kuat 75≤PP<50 Kuat 50≤PP<25 Sedang 25≤PP<0 Lemah 0 Tidak aktif 4.42
9.15 10.37
15.75 20.23 20.34 21.32 0 5 10 15 20 25 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 P res ent as e P eng h amb atan (% )
Konsentrasi (mg/ml)
Hasil  analisis  regresi  linier  menunjukkan bahwa  persentase  penghambatan A.
flavus berkorelasi positif dengan konsentrasi  ekstrak  daun  teh  dengan koefisien  determinasi  (R 2 )  sebesar  89%. Hubungan antara persentase penghambatan  dan  konsentrasi  ekstrak dapat dirumuskan melalui persamaan:
Y=1,551+6,369X (persamaan 1) keterangan: Y= persentase penghambatan (%) X=konsentrasi ekstrak (mg/ml)
Berdasarkan  persamaan  1  dapat diketahui bahwa konsentrasi ekstrak daun teh  memberikan  pengaruh  positif  yang sangat nyata (p<0,01) terhadap persentase  penghambatan A.  flavus .
Besarnya  pengaruh  konsentrasi  ekstrak daun teh terhadap persentase penghambatan A.  flavus adalah  89%. Hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak daun teh dengan
persentase penghambatan  menunjukkan  hubungan yang linier dimana peningkatan konsentrasi akan diikuti dengan peningkatan  persentase  penghambatan (Grafik 3). Setiap peningkatan konsentrasi ekstrak daun teh sebesar 1 mg/ml mampu meningkatkan  persentase  penghambatan A. flavus sebesar 6,369%.
Grafik 3. Hubungan regresi antara konsentrasi  ekstrak  daun  teh  terhadap persentase penghambatan A. flavus
Berdasarkan  hasil  analisis  regresi tersebut,  maka  peningkatan  persentase penghambatan  dipengaruhi  oleh  faktor lain  sebesar  11%.  Faktor-faktor  yang mempengaruhi  pertumbuhan A.  flavus adalah kelembapan,  suhu lingkungan dan pH.  Hasil  pengamatan  terhadap  suhu
ruang  pada  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  suhu  ruang  berkisar  antara  26  - 29ºC 26 .  Sumartini  dan  Yusnawan  (2005) menyatakan bahwa A. flavus tumbuh pada kisaran  suhu  10  -  43ºC  dengan  suhu optimum  sebesar  32  -  33ºC,  sehingga suhu  ruang  pada  penelitian  ini  masih memenuhi  syarat  hidup A.  flavus namun belum  mencapai  syarat  tumbuh  optimal. Selain  suhu,  pH  awal  medium  dan  pH akhir medium juga diamati. Hasil pengamatan  pH  medium  menunjukkan nilai pH awal yang sama namun didapatkan  pH  akhir  yang  berbeda-beda antar  tiap  perlakuan. A.  flavus dapat tumbuh  pada  pH  2,73  -  9,9  dengan  pH optimum 6, sehingga pH medium pertumbuhan A.  flavus pada  penelitian  ini masih  memenuhi  syarat  hidup A.  flavus namun  belum  mencapai  syarat  tumbuh optimal 27 .  Berdasarkan  hasil  pengamatan pH, hanya perlakuan kontrol yang mengalami kenaikan pH sedangkan konsentrasi  0,5 –  3,5  mg/ml  mengalami penurunan  pH  medium.  Secara  normal, jika  pertumbuhan A  flavus baik  maka medium pertumbuhan A. flavus akan mengalami kenaikan pH seiring
bertambahnya pertumbuhan A flavus , namun  akan  mengalami  penurunan  pH medium  jika  pertumbuhan  jamur  tidak maksimal 27 .
Adanyapenghambatan pertumbuhan A. flavus oleh ekstrak daun teh menunjukkan  adanya  aktivitas  antifungi dalam  ekstrak  etanol  daun  teh.  Aktivitas antifungi tersebut disebabkan oleh senyawa  antifungi  yang  dikandungnya. Secara umum, mekanisme kerja senyawa antifungi dalam menghambat pertumbuhan jamur dapat melalui
beberapa cara, yaitu menghambat sintesis dinding  sel  jamur,  mengganggu  membran sel  jamur,  menginaktivasi  enzim-enzim metabolik dan menghambat sintesis asam nukleat dan protein 28 .
Ekstrak  daun  teh  yang  digunakan pada penelitian ini mengandung beberapa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antifungi. Masing-masing metabolit sekunder  tersebut  memiliki  mekanisme aktivitas  antifungi  yang  berbeda-beda. Flavonoid mampu berikatan dengan enzim ekstraseluler  dan  protein  terlarut 29 ,  selain itu flavonoid juga dapat merusak membran
sel  jamur 30 .  Rusaknya  membran  sel  akan mempengaruhi proses pertumbuhan jamur karena  membran  sel  merupakan  tempat terjadinya  beberapa  reaksi  enzimatis  sel. Tanin mampu menonaktifkan adhesin dan berikatan  dengan  polisakarida 31 .  Selain itu,  tanin  dapat  menghambat  enzim  dan protein  ekstraseluler  dan  efek  langsung terhadap membran 32 .
Mekanisme  aktivitas  antifungi  alkaloid yaitu  dengan  menyisip  di  antara  dinding sel  dan  atau  DNA  kemudian  mencegah replikasi DNA jamur sehingga pertumbuhan  jamur  akan  terganggu 33,34 . Salah  satu  senyawa  golongan  alkaloid yang ditemukan pada penelitian ini adalah kafein. Kafein dapat mempengaruhi pertumbuhan  jamur  pada  fase  awal germinasi,  siklus  duplikasi  nukleus  dan pembentukan septum pertama 23 .
Berbeda  dengan  flavonoid,  tanin dan  alkaloid,  mekanisme  penghambatan terpenoid terhadap jamur disebabkan oleh perubahan permeabilitas membran. Gangguan permeabilitas tersebut disebabkan karena terpenoid dapat berperan  sebagai  pelarut  yang  mampu memasukkan  metabolit  sekunder  lainnya ke  dalam  membran 35,36 .Berdasarkan  hasil GCMS  diidentifikasi  3  senyawa  dari golongan terpenoid yaitu phytol , tetracosahexaene dan neophytadiene . Phytol memiliki mekanisme aktivitas antifungi tersendiri yaitu mampu berinteraksi dengan bilayer lipid membran sel sehingga memisahkan bagian membran  menjadi  dua  bagian,  yaitu bagian  dalam  dan  bagian  luar.  Adanya rongga  tersebut  menyebabkan  air  dapat masuk  kedalam  sel  sehingga  sel  akan menggelembung  dan  pada  akhirnya  akan terjadi kematian sel atau lisis 37 .
Selain golongan  flavonoid, tanin, terpenoid  dan  alkaloid  ditemukan  juga golongan  asam  lemak  organik  dalam ekstrak daun teh yaitu hexadecanoic acid . Mekanisme  penghambatan  asam  lemak hampir sama dengan mekanisme penghambatan  terpenoid.  Asam  lemak dapat  menghambat  pertumbuhan  dengan cara  menyisip  di  antara  membran  sel jamur, meningkatkan permeabilitas membran bahkan dapat merusak integritas  sitoplasma.  Selain  itu,  asam lemak juga dapat menghambat
morfogenesis jamur dan mencegah pembentukan hifa 38,39 .

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  teh  memiliki  aktivitas antifungi dan mampu menghambat pertumbuhan A. flavus . Konsentrasi ekstrak daun teh yang efektif menghambat pertumbuhan A. flavus adalah konsentrasi sebesar  2,5  mg/ml.  Kandungan  metabolit sekunder daun teh yang berperan sebagai antifungi yaitu golongan alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  tanin  dan  asam lemak.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Huff, W.E., L.F. Kubena,  L.B. Harvey, D.E.  Corrier,  and  H.H.  Mollenhauer. 1986.  Progression  aflatoxicosis  in broiler  chicken. Poultry  Science, 65  :
1891-1899.
2.  Budiarso, L.T. 1995. Dampak mikotoksin terhadap kesehatan.
Cermin Dunia Kedokteran, 103 : 5.
3.  Pitt, J.I and Hocking, A.D. 1997. Fungi and Food Spoilage. Blackie Academic & Professional, London.
4.  Purwijantiningsih,  E.,  R.D.  Hariyadi., C.C.  Nurwitri  dan  Istiana.  2005. Penghambatan  produksi  aflatoksin dari Aspergillus  flavus oleh  kapang dan  khamir  yang  diisolasi  dari  ragi tempe. Biota, Vol. X (3) : 146-153.
5.  Sumartini  dan  E.  Yusnawan.  2005. Upaya  menghambat  perkembangan Aspergillus flavus pada kacang tanah. Jurnal Litbang Pertanian, 24 (3) : 109- 112.
6.  Wink,  M.  1999.  Functions  of  Plant Secondary  Metabolites  and  Their
Exploitation in Biotechnology. Sheffield Academic Press Ltd,
Sheffield.
7.  Cowan,  M.  M.  1999.  Plant  Products as  Antimicrobial  Agents. Clinical Microbiology  Review, Vol  12  No.  4  : 564 – 582.
8.  Hamillton-Miller,
J.M.T. 1995. Antimicrobial properties of tea ( Camellia  sinensis L.). Antimicrobial Agent  and  Chemotherapy ,  39  (11)  :
2375-2377.
9.  Okubo,  S.,  M.  Toda,  Y.  Hara  and  T.
Shimamura.  1991.  Antifungal  and fungicidal  activities  of  tea  extract  and catechin against Trichophyton.
Nippon  Saikingaku  Zasshi ,  46  (2)  : 509-14.
10. Gramza-Michalowska,  A.,  J.  Korczak and  M.  Hes.  2007.  Purification process  influence  on  green  tea extracts’  polyphenol  content  and antioxidant  activity. Acta  Sci.  Pol. Technol. Aliment., 6 (2) : 41-48
11. N’guessan,  J.D.,  M.R.  Dinzedi,  N. Guessennd,  A.  Coulibaly,  M.  Dosso, A.J  Djaman  and  F.  Guede-Guina. 2007.  Antibacterial  activity  of  the aqueous  extract  of    Thonningia sanguinea against Extended- Spectrum- β-Lactamases (ESBL)
producing Escherichia  coli and
Klebsiella pneumoniae
strains.
Tropical  Journal  of  Pharmaceutical Research, 6 (3) : 779-783.
12. Setyamidjaja, D. 2000. Teh: Budidaya dan  Pengolahan.  Penerbit  Kanisius, Yogyakarta.
13. Parning  dan  Horale.  2005.  Kimia. Yudhistira, Jakarta.
14. Al-Mughrabi,  K.I.,  T.A.  Abujai,  G.H. Anfoka  and  W.  Shahrour.  2001. Antifungal activity of olivecake
extracts.
Phytopathologia
Mediterrenea, 40 : 240-244.
15. Mori,  M.,  M.  Aoyama.,  S.  Doi,  A. Kanetoshi  dan  T.  Hayashi.  1997. Antifungal  activity  of  bark  extracts  of deciduous  trees. Holzs  als  Roh  und Werkstoff  Spinger-verlag ,  55  :  130- 132.
16. Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia  :  Penuntun  Cara  Modern Menganalisis  Tumbuhan.  Penerbit ITB. Bandung.
17. Sembiring,  B.B.,  Ma’mun  dan  E.I. Ginting.  Pengaruh  kehalusan  bahan dan  lama  ekstraksi  terhadap  mutu
ekstrak temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb). Bul.  Littro ,  17  (2)  :
53-58.
18. Suparjana, T.B.
2000. Kajian Toksisitas  Beberapa  Fraksi  Ekstraktif Kayu Sonokembang ( Pterocarpus indicus Wild.) dan Nyatoh ( Palaquium
gutta Baill.)  terhadap  Rayap  Tanah dan  Jamur  Pelapuk  kayu.  Thesis.
Tidak Dipublikasikan.
Program
Pascasarjana IPB, Bogor.
19. Goren,  A.  C.,  G.  Bilsel,  M.  Altun,  F. Satil dan T. Dirmenci. 2003. Fatty acid composition  of  seeds  of Satureja thymbra and S . cuneifolia. Z.
Naturforsch , Vol 58 (22) : 502-504.
20. Tewtrakul,  S.,  S.  Yuenyongsawad,  S. Kummee  dan  L.  Atsawajaruwan. 2005.  Chemical  components  and biological  activities  of  volatile  oil  of Kaempferia  galanga Linn. J.  Sci. Technol ., 27(2) : 503-507.
21. Yaili, N., A. Yasar, C. Gulec, A. Usta, S.  Kolayli,  K.  Coskuncelebi  dan  S. Karaoglu.  2005.  Composition  and Antimicrobial  Activities  of  essential oils  from Centaurea  sessilis and Centaurea  armena . Phytochemistry , Vol 66 (2005) : 1741-1745.
22. Abad,  M.  J.,  M.  Ansuategui  dan  P. Bermejo.  2007.  Active  antifungal substances  from  natural  sources. ARKICOV 2007 (vii) : 116-145.
23. Yuvamoto,  P.D.,  dan  Said  S.  2007. Germination,  duplication  cycle  and septum  formation  are  altered  by caffeine,  caffeic  acid  and  cinnamic acid in Aspergillus nidulans . Mikrobiologiia , Vol 76 (6) : 830-833.
24. Saidana,  D.,  M.A.  Mahjoub,  O. Boussaada,  J.  Chriaa,  I.  Cheraif,  M. Daami,  Z.  Mighri  dan  A.N.  Helal. 2008.  Chemical  composition  and antimicrobial activity of volatile compund of Tamarix boveana (Tamaricaceae). Microbiol  Res ,  Vol 163 (4) : 445-455.
25. Paveto,  C.,  M.C.  Guida,  M.I.  Esteva, V.  Martino,  J.  Coussio,  M.M.  Flawia dan H.N. Torres. 2004. Anti-
Trypanosoma  cruzi  Activity  of  Green
Tea  ( Camellia  sinensis )  Catechins. Antimicrobial Agents And Chemotherapy , 48 (1) : 69-74. 26. Sumartini  dan  E.  Yusnawan.  2005. Pengaruh jenis dan konsentrasi bahan nabati terhadap perkembangan Aspergillus  flavus pada  medium  PDA dan  biji  kacang  tanah. Majalah  Ilmiah Biologi Biosfera, 22 (1) : 25-29.
27. Lie,  J.L.  dan E.H. Marth. 1968. Effect Aflatoxin    Formation  by  Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus in a Casein  Substrate  at    Different    pH Values. J.    Dairy    Sci .,    51  (11)  : 1743-1747.
28. Pelczar,  J.  dan  E.C.S.  Chan.  1988. Mikrobiologi  Dasar  Jilid  I.  UI  Press, Jakarta.
29. Al-bayati,  F.  A.  Dan  H.  F.  Al-Mola. 2008.  Antibacterial  and  antifungal activities  of  different  parts  of Tribulus terrestris L.  growing  in  Iraq. J Zhejiang  Univ  Sci  B ,  Vol  9  (2)  :  154- 159.
30. Tsuchiya, H., M. Sato, T. Miyazaki, S. Fujiwara, S. Tanigaki, M. Ohyama, T. Tanaka,  I.  Takase  dan  M.  Linuma. 1996.  Comparative  study  on  the antibacterial  activity  of  phytochemical flavanones against methicillin- resistant Staphylococcus  aureus . J. Ethnopharmacol , 50 : 27-34. 31. Ya, C., S.H. Gafney, T.H. Lilley dan E.
Haslam. 1988. Chemistry and Significance  of  Condensed  Tannins.
Plenum Press, New York.
32. Dayang, F. B, S, Razinah dan Paden. 2005. Antimicrobial activities of ethanol  and  ethyl  acetate  extracts from  the  fruits  Of Solanum  torvum . Malays. Appl. Biol. , Vol 34(1): 31 –36 33. Atta-ur-Rahman, dan M.I. Choudhary.
1995. Diterpenoid and steroidal alkaloids. Nat.  Prod.  Rep .,  12  :  361- 379.
34. Doughari,  J.  H.  dan  J.  S.  Obidah. 2008.  In  vitro  antifungal  activity  of stem  bark  extract  of Leptadenia
lancifolia . IJIB , Vol 3 (2) : 111-117. 35. Haraguchi, H., S. Kataoka, S. Okamoto,  M.  Hanafi  dan  K.  Shibata.
1999.  Antimicrobial  triterpenes  from
Ilex  integra  and  the  mechanism  of antifungal
action. Phytotheraphy Research , Vol 13 (2) : 151-156.
36. Gershenzon,  J.  dan  N.  Dudareva. 2007.  The  function  of  terpene  natural products  in  the  natural  world. Nature Chemical Biology 5 (3) : 408-414.
37. Chuang,  P.,  C.  Lee,  J.  Chou,  M. Murugan,  B.  Shieh  dan  H.  Chen. 2007.  Anti-fungal  activity  of  crude extracts  and  essential  oil  of Moringa
oleifera Lam. Bioresource Technology , 98 (2007) : 232 –236.
38. Tyler,  A.  dan  B.  Richard.  2001.
Specificity  and  mode  of  action  of  the antifungal fatty acid cis-9- heptadecenoic  acid  produced  by Pseudozyma  flocculosa . Applied  and environmental  microbiology ,  67  (2)  :
956-960.
39. McLain, N., R. Ascanio dan C. Baker. 2000. Undecylenic acid inhibits morphogenesis  of Candida  albicans . Antimicrob Agents Chemother ,Vol
2000 (44) : 2873-2875.