Jurnal Lahan Suboptimal: Journal of Suboptimal Lands ISSN: 2252-6188 (Print), ISSN: 2302-3015 (Online, www.jlsuboptimal.unsri.ac.id) Vol. 6, No.2: 150-157 Oktober 2017
Produksi Spora Bacillus Thuringiensis ada Media Limbah dengan Penambahan Tepung Cangkang Keong Mas dan Toksisitasnya terhadap Spodoptera Litura Fabr. (Lepidoptera: Noctuidae)
Production of Bacillus thuringiensis Spores in Agricultural Waste with Addition of Golden Snail Shell Powder and its Toxicity Against Spodoptera litura Fabr.
( Lepidoptera: Noctuidae )
Yulia Pujiastuti 1*) , Triyansyah Triyansyah 1 , Harman Hamidson 1 , E Effendy ffendy 1 , Suparman Suparman 1
1 Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Program Studi Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya, Indralaya 30662
*) Penulis untuk korespondensi: ypujiastuti@unsri.ac.id

## ABSTRACT
Armyworm  or Spodoptera  litura is  an  important  pest  on  the  cultivation  of  plants. Controlling by using biological agents such as Bacillus thuringiensis is an alternative to the use of chemical insecticides which cause a negative impact on insects and environment. B. thuringiensis- based bio insecticide can be reproduced by using agricultural waste with the addition of golden snail shell flour. The study was aimed to investigate the production of B. thuringiensis spores  on agricultural  waste media and the addition  of golden snail shell flour  and  its  toxicity  to  armyworm,  as  well.  The  research  design  was  a  completely randomized  design  with  10  treatments  and  3  replications.  Treatment  were  the  media  of agricultural waste: 50 mL coconut water, 50 mL of tofu liquid waste, 50 mL of rice wash water and mixture of three  media (v/v/v,  1:1:1) with  the addition  of golden shell flour as much as 5 g and mineral salt of CaCl 2 , MgSO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 . The results showed the production  of  bacterial  spores  ranged  from  8.90x10 7 spores/mL  to  9.51x10 7 spores/mL with  the  highest  production  in  the  mixed  treatment  of  the  three  waste  media  (coconut water, tofu waste and rice laundry water). In this treatment the level of toxicity was 40% in larvae  of  armyworm.  The  weight  of  leaf  feed  consumed  by  armyworm  at  various treatments was ranged from 36.33 to 46.67 g/10 larvae. The addition of mashed shell flour to growth media of B. thuringiensis did not increase the number of spores.
Keywords:  armyworm Spodoptera  litura ,  bioinsecticide,  growth  medium,  mortality, toxicity

## ABSTRAK
Ulat  grayak  atau Spodoptera  litura merupakan  hama  penting  pada  budidaya tanaman.  Pengendalian  menggunakan  agens  hayati  seperti Bacillus  thuringiensis merupakan  alternatif  dari  penggunaan  insektisida  kimia  yang  membawa  dampak  negatif pada serangga dan lingkungan. B. thuringiensis bioinsektisida dapat   diperbanyak dengan menggunakan limbah pertanian dan penambahan tepung cangkang keong emas. Penelitian bertujuan  untuk  mempelajari  produksi  spora B.  thuringiensis pada  limbah  pertanian  dan penambahan tepung cangkang keong emas dan toksisitasnya terhadap ulat grayak. Desain penelitian berupa rancangan acak lengkap dengan 10 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan berupa    limbah  pertanian:    50  mL  air  kelapa,  50  mL  limbah  cair  tahu,  50  ml  air  cucian beras  dan  campuran  ketiganya  (vol/vol/vol:  1:1:1)  dengan  penambahan  tepung  cangkang keong  emas  sebanyak  5  g  dan  garam  mineral  berupa  CaCl 2 ,  MgSO 4 ,  K 2 HPO 4 ,  KH 2 PO 4 . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  produksi  spora  bakteri  berkisar  antara  8.90x10 7
spora/mL    sampai  9.51x  10 7 spora/mL  dengan  produksi  tertinggi  pada  perlakuan campuran  ketiga  media  limbah  (air  kelapa,  limbah  cair  tahu  dan  air  cucian  beras).  Pada perlakuan  ini  tingkat  toksisitas  sebanyak  40%  pada  ulat  grayak.  Berat  pakan  daun  yang dikonsumsi  oleh  ulat  grayak  pada  berbagai  perlakuan  berkisar    36.33-46.67  g/10  larva. Penambahan tepung cangkang keong mas pada media pertumbuhan B. thuringiensis tidak meningkatkan jumlah spora.
Kata kunci: bioinsektisida, media tumbuh, mortalitas, ulat grayak Spodoptera litura

## PENDAHULUAN
Pengendalian hama
tanaman merupakan salah satu cara untuk mengurangi  penurunan  produksi  tanaman yang  disebabkan  oleh  serangan  serangga hama. Spodoptera  litura merupakan  salah satu  hama  penting  pada  berbagai  jenis tanaman  seperti  kedelai,  tembakau  dan jagung  (Singh et  al .  2015,  Marwoto  dan Suharsono  2008).  Hama  tersebut  bersifat polifag  dan  kosmopolitan,penyebarannya dari  wilayah  subtropis  sampai  tropis. Apabila tidak dikendalikan akan menyebabkan  penurunan  produksi  yang berdampak  pada  kerugian  secara  ekonomi. Arifin (2012) melaporkan bahwa
pengendalian  ulat  grayak  yang  dilakukan sebagian  besar  petani  hingga  saat  ini kebanyakan dengan mengandalkan insektisida  sintetis  yang  diaplikasikan dengan  dosis  yang  cenderung  berlebihan sehingga  berpotensi  menimbulkan  dampak negatif  terhadap  lingkungan.  Pengendalian secara  kimia  sebaiknya  digunakan  sebagai cara  terakhir  dalam  pengendalian  hama terpadu (PHT) (Untung 2006). Oleh karena itu  perlu  dicarikan  cara  alternatif  lain  yang lebih  aman  terhadap  lingkungan,  organism non  target  serta  untuk  manusia.  Salah  satu alternatif  dengan  menggunakan  bakteri yang  bersifat  entomopatogenik Bacillus thuringiensis . Bakteri
Bacillus thuringiensis . bersifat  gram  positif  menghasilkan  spora dan  protein  yang  bersifat  toksik  saat sporulasi.  Cara  mematikan  serangga  target secara selektif melalui pencernaan makanan yang  mempunyai  tingkat  pH  yang  tinggi, sehingga bagi serangga yang tidak memiliki pH  pencernaan  yang  tinggi  (bersifat)  tidak akan  sensitif    terhadap B.  thuringiensis. Oleh  karena  itu  penelitian  tentang B.
thuringiensis ,  terutama  untuk  produksinya, merupakan  obyek  penelitian  yang  masih sangat  terbuka.  Penggunaan  bahan  limah pertanian  banyak  dimanfaatkan  untuk memproduksi  spora  dan  Kristal  protein. Morris et al. (1997) melaporkan penggunaan  30  jenis  limbah  pertanian untuk memproduksi B. thuringiensis. Blondine dan Widyastuti (2013)
menyebutkan  penggunaan  air  kelapa  yang banyak mengandung protein dan karbohidrat dapat merangsang pertumbuhan dan  perkembangbiakan B.  thuringiensis . Sedangkan Sarfat (2010) melaporkan bahwa  limbah  tahu  cair  dapat  digunakan untuk  memproduksi  bioinsektisida  dari bakteri B.  thuringiensis karena  memiliki kandungan protein.
Bacillus  thuringiensis digunakan sebagai    bahan  aktif  untuk  memproduksi bio-insektisida.  Bahan  yang  digunakan adalah  isolat  atau  strain  yang  sudah  teruji secara  laboratorium  terbukti  mematikan serangga  hama  target.  Pada  umumnya kristal    protein  dan  spora  dapat  dipanen setelah  48-72  jam.  Penambahan  bahan lainnya dalam perbanyakan B. thuringiensis masih  sedikit  dilakukan.  Dalam  penelitian ini  dicoba  menambahkan  tepung  cangkang keong  emas  yang  mengandung  chitin  dan bahan  lainnya.  Tujuan  penelitian  adalah untuk  mengetahui  produksi  spora B. thuringiensis yang diperbanyak pada berbagai media tumbuh dari limbah dengan penambahan  tepung  cangkang  keong  emas serta  toksisitasnya  terhadap  ulat  grayak Spodoptera litura di laboratorium.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Entomologi  dan  Fitopatologi Jurusan  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan
Fakultas  Pertanian  Universitas  Sriwijaya, mulai  bulan  Juli  sampai  dengan  September 2017.  Isolat  B.  thuringiensis  kode  SMR-04 yang digunakan merupakan isolat dari tanah di  lahan  rawa  Sumatera  Selatan  dan menjadi koleksi Lab.
Entomologi.
Rancangan  percobaan  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  10  perlakuan  dan  setiap  perlakuan diulang  sebanyak  3  kali.  Perlakuan  berupa jenis  media  dan  penambahan  tepung cangkang keong emas sebagai berikut:
Tabel 1. Komposisi media cair pada setiap perlakuan Perlakuan Media tumbuh TA Air Kelapa (50 mL)              + garam mineral TB Limbah Cair Tahu  (50 mL) + garam mineral TC Air Cucian Beras  (50 mL)   + garam mineral TD Nutrient Broth  (50 mL)        + garam mineral TE Air Kelapa  (25 mL) + Limbah Cair Tahu  (25 mL) + Air Cucian Beras (25 mL) + garam mineral CA Air Kelapa (50 mL)              + TCK (5 g) + garam mineral CB Limbah Cair Tahu  (50 mL) + TCK (5 g) + garam mineral CC Air Cucian Beras  (50 mL)   + TCK (5 g) + garam mineral CD Air Kelapa  (25 mL) + Limbah Cair Tahu  (25 mL) + Air Cucian Beras (25 mL)  + TCK (5 g) + garam mineral CE Nutrient Broth  (50 mL)         + TCK (5 g) + garam mineral Keterangan : TCK = Tepung Cangkang Keong Emas

## Persiapan  Tepung  Cangkang  Keong Emas
Keong  emas  dikumpulkan  dari  lahan rawa  lebak  di  desa  Pemulutan  Ulu Kecamatan  Pemulutan  Kabupaten  Ogan Ilir.  Keong  emas  dimasukkan  ke  dalam ember  berukuran  diameter  50  cm  da  tinggi 30 cm dan digenangi air. Setelah dipuasakan  selama  48  jam  keong  mas dibersihkan  kemudian  direbus  sampai mendidih  selama  15-20  menit.  Selanjutnya cangkang,  daging  dan  alat  pencernaanya dipisahkan.  Cangkang  yang  sudah  terpisah dikeringkan kedalam oven pada suhu 100°C selama  18  jam.  Selanjutnya  cangkang dihaluskan  dengan  menggunakan  blender sampai halus dan diayak untuk mendapatkan  hasil  tepung  yang  halus . Tepung cangkang keong emas siap digunakan untuk pembuatan biopestisida.

## Persiapan Serangga Uji
Telur dan larva diperoleh dari kebun kedelai di desa Pelabuhan Dalam Kecamatan  Pemulutan  Kabupaten  Ogan Ilir.  Selanjutnya,  dibawa  ke  laboratorium dan  dipelihara  dalam  wadah  pemeliharaan (diameter  20  cm  dan  tinggi  25  cm). pemberian  pakan  dilakukan  setiap  hari
dengan  menggunakan  daun  kangkung  dan wadah  pemeliharaan  dibersihkan  setiap hari.  Pada  waktu  akan  ulat  mencapai  pre pupa,  ke  dalam  wadah  pemeliharaan dimasukkan  tanah  yg  sudah  disetrilkan sebagai tempat untuk  berkepompong. Apabila  sudah  menjadi  imago,  ngengat S. litura diberi  pakan  berupa  larutan  madu 10%.  Serangga  uji  yang  digunakan  adalah generasi  ketiga  (F2)  pada  saat  larva mencapai  instar ketiga.

## Pembuatan Bioinsektisida
Produksi  spora B.thuringiensis pada media  limbah  dimulai  dengan  penyiapan bahan-bahan berupa air  kelapa, limbah cair tahu, air cucian beras. Air kelapa diperoleh dari  pasar  Indralaya,  limbah  cair  tahu diperoleh  dari  industri  rumah  tangga  tahu Sumedang  di  Jalan  Raya  Palembang- Prabumulih  Km  20  sedangkan  air  cucian beras  diperoleh  dengan  cara  merendam beras  selama  5  menit  dan  airnya  diambil sebagai bahan percobaan.  Untuk isolate B. thuringiensis disiapkan dengan cara membuat seed  culture yaitu  dengan mengambil  1  loop  jarum  ose  isolat B. thuringiensis SMR-04  ,  dimasukkan  dalam 10  mL  media Nutrient  Broth (NB)
kemudian  dikocok  dengan  menggunakan shaker  selama  12  jam  dengan  kecepatan 200  rpm.  Selanjutnya  diambil  5  mL  untuk dimasukan  dalam  10  mL  NB,  dikocok dengan  shaker  selama  12  jam  dengan kecepatan  200  rpm seed  culture siap digunakan  untuk  pembuatan  bioinsektisida. Campuran  media  air  kelapa,  limbah  cair tahu,  limbah  cucian  beras  dan  tepung cangkang  keong  mas  pada  masing-masing perlakuan  dimasukkan  ke  dalam  labu Erlenmeyer  250  mL  sebanyak  50  mL, kemudian tambahkan garam-garam mineral mengikuti    prosedur  Dulmage  dan  Rhodes (1971) dalam Pujiastuti  (2013a)  sebanyak 50  mg  CaCl 2 ,  50  mg  MGSO 4, 50  mg K 2 HPO 4 ,  dan  50  mg  KH 2 P0 4. Selanjutnya ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  diikat karet  gelang,  disterilkan  dengan  cara dimasukkan  kedalam  autoclaf  dengan  suhu 121°C selama 20 menit pada tekanan 1 atm. Setelah  dingin,  tambahkan  seed  culture sebanyak 5 mL dimasukan pada setiap labu Erlenmeyer.  Selanjutnya,  dikocok  dengan shaker  selama  72  jam  dengan  kecepatan 200 rpm. Perhitungan spora dilakukan dengan cara mengambil sebanyak 1 mL bioinsektisida,
kemudian
dilakukan pengenceran sampai 10 -7 .
Hasil pengenceran  kemudian  diteteskan  pada haemocytometer dan  ditutup  dengan cover glass .  Selanjutnya  hitung  dan  catat  jumlah sporanya.
Bioassay Uji  mortalitas  menggunakan  daun kangkung  sebagai  pakan.    Daun  kangkung ditimbang sebanyak 5 g, kemudian direndam  dengan  bioinsektisida  sesuai dengan perlakuan selama 1 menit. Selanjutnya dikering anginkan sampai tidak ada  cairan  yang  menempel,  dimasukkan  ke dalam  cawan  plastik  berukuran  (20x10) cm 2 , kemudian dimasukkan 5 ekor S. litura instar 3 untuk setiap perlakuan dan diulang sebanyak  3  kali.  Pengamatan  mortalitas larva  dilakukan  setiap  24  jam,  aplikasi selama  7  hari.  Mortalitas  larva  dihitung dengan rumus:
Keterangan: P =  Persentase mortalitas larva LM  = Jumlah larva yang mati LK  = Jumlah larva uji

## Berat Daun yang dikonsumsi
Pengamatan dilakukan dengan menimbang  berat  daun  kangkung  yang telah  dikonsumsi  oleh  larva Spodoptera litura setelah 24 jam aplikasi selama 7 kali pengamatan.

## Analisis Data
Data tentang produksi spora B. thuringiensis pada  beberapa  media  limbah pertanian, data mortalitas dan data konsumsi  pakan  dianalisis  dengan Analysis of  Variance (ANOVA).  Jika  terdapat pengaruh  perlakuan,  maka  dilakukan  uji lanjut,  sedangkan  nilai  LT 50, dihitung dengan Analisis Probit .

## HASIL
Produksi spora Bacillus thuringiensis Produksi  spora B.  thuringiensis pada media  limbah  pertanian  berupa  air  kelapa, air  limbah  tahu  dan  air  cucian  beras,  pada perlakuan    tanpa  penambahan  tepung cangkang  keong  emas  menghasilkan  spora dengan kisaran 8,90x10 7 spora/mL   sampai 9,07x10 7 spora/ml. Sedangkan pada perlakuan  dengan  penambahan  tepung cangkang,  spora  yang  dihasilkan  berkisar dari  9,02x10 7 spora/mL    sampai    9,51x10 7 spora/mL  (Gambar  1).  Kelompok  dengan penambahan tepung  cangkang keong emas, terlihat  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan kelompok tanpa penambahan tepung cangkang.  Namun  demikian  secara  uji statistik  semua  perlakuan  menunjukkan berbeda  tidak  nyata  satu  sama  lain.  Dalam hal ini penambahan tepung cangkang keong emas  tidak  berpengaruh  terhadap  produksi spora.  Tepung  cangkang  keong  emas banyak  mengandung protein  2,94%,  lemak kasar  0,12%,  Kalsium  (Ca)  29,35%,  dan
phospor  0,19%  (BPTP  Kaltim  2001).  Ada dugaan  bahwa  penambahan  bahan  tepung cangkang tersebut mempengaruhi pembentukan  spora.  Dari  berbagai  media yang  digunakan,  media  campuran  ketiga limbah  tersebut  (air  kelapa  +  limbah  cair tahu  +  air  cucian  beras)  ditambah  dengan tepung cangkang keong emas menunjukkan
produksi B.  thuringiensis yang  tinggi.  Ada kemungkinan  bahwa  dengan  kandungan yang lebih lengkap dalam media perbanyakan tersebut akan lebih mendorong  munculnya  banyak  sel-sel B. thuringiensis (Devi dan Rao, 2005;
Marzban, 2012 ).
Gambar 1. Produksi sel Bacillus thuringiensis pada media limbah pertanian dengan penambahan tepung cangkang keong mas.

## Mortalitas larva Spodoptera litura
Mortalitas  larva  diamati  setiap  12 jam dengan memperhatikan gejala kematian berupa  berkurangnya  jumlah  pakan  yang dikonsumsi, gerakan tubuh menjadi lambat, tidak  aktif  dan  akhirnya  mati.  Tingkat mortalitas  pada  media  limbah  (air  kelapa, air  limbah  tahu,  air  cucian  dan  campuran ketiganya) tanpa penambahan tepung cangkang keong emas menunjukkan kisaran mortalitas dari 44,44-62,22% dengan tingkat  mortalitas  tertinggi  pada  perlakuan media  campuran  ketiga  macam  bahan tersebut  (62,22%).    Pada  perlakuan  dengan penambahan  tepung  cangkang  keong  emas terendah  tingkat  mortalitas  (40%)  pada perlakuan  air  cucian  beras  dan  tertinggi sebanyak 53,33% ditemukan pada perlakuan  NB.  Hasil  perhitungan  analisis statistik menunjukkan bahwa semua perlakuan  berbeda  tidak  nyata.  Data selengkapnya disajikan pada Gambar 2.
Tingkat mortalitas tinggi dipengaruhi  oleh  tingkat  toksisitas  yang tinggi  dari B.  thuringiensis tersebut. Toksisitas  suatu  isolate  B.  thuringiensis dipegaruhi  oleh  adanya  Kristal  protein  dan
spora yang terkandung didalamnya. Apabila terdapat kesesuaian dengan tingkat keasaman  (pH)  pencernaan  (midgut)  suatu spesies serangga, maka kristal protein dapat terurai menjadi protein yang toksik terhadap serangga Pada spora B. thuringiensis yang  mendapatkan  habitat yang  sesuai,  akan  tumbuh  dan  berkembang biak  dalam  pencernaan    larva  serangga (Bravo et al . 2007).

## Berat  pakan  yang  dikonsumsi  oleh Spodoptera litura
Larva  instar  ketiga  yang  digunakan dalam pengujian bioassay, setelah mengkonsumsi  daun  yang  diperlakukan selanjutnya  diberi  pakan  daun  kangkung segar  untuk  menjaga  agar  larva  agar  tidak mati  kelaparan.  Tingkat  konsumsi  pada media  limbah  (air  kelapa,  air  limbah  tahu, air  cucian  dan  campuran  ketiganya)  tanpa penambahan  tepung  cangkang  keong  emas menunjukkan  kisaran  konsumsi  pakan  dari 10,8-11,6  g  dengan  tingkat  konsumsi tertinggi  pada  perlakuan  media  campuran ketiga  macam  bahan  tersebut  (11,6  g). Pada perlakuan dengan penambahan tepung
cangkang keong emas terendah (11 g) pada perlakuan  air  cucian  beras  dan  tertinggi sebanyak 12,5  g ditemukan pada perlakuan air  cucian  beras.  Data  selengkapnya disajikan pada Gambar 3.
Pada  perlakuan  media  campura  air kelapa,  air  limbah  tahu,  air  cucian  beras tanpa  penambahan  tepung  cangkang  keong emas  (TD)  menunjukkan  hasil  tingkat konsumsi  pakan  yang  paling  rendah  (10,8 g/10  ekor).  Hal  ini  bila  dikaitkan  dengan tingkat  mortalitasnya  (Gambar  2)  yang
tertinggi  yaitu  sebanyak  62,2%.  Perlakuan B. thuringiensis yang toksik akan meningkatkan  tingkat  mortalitas,  akibatnya serangga  uji  akan  mengurangi  tingkat konsumsi pakan karena banyaknya serangga  uji  yang  mengalami  gangguan pada  proses  pencernaannya.  Hal  ini didukung oleh pendapat Bravo et al (2007) yang  menguraikan  bahwa  toksin  dari  B. thuringiensis  akan  menyebabkan  kematian pada serangga uji melalui saluran pencernaan.
Gambar  2. Mortalitas  larva  instar  3 Spodoptera  litura pada  perlakuan Bacillus thuringiensis pada  media  limbah  pertanian  dengan  penambahan  tepung cangkang keong mas.
Gambar 3. Berat pakan daun yang dikonsumsi larva Spodoptera litura.
Nilai Lethal Time (LT 50 ) Nilai LT 50 merupakan nilai yang mn pd  perlakuan  enunjukkan  waktu    kematian serangga  uji    sebanyak  50  persen    dari waktu  uji.  Semakin  rendah  nilai  LT 50 berarti  bahan  tsb  semakin  toksik.  Pada percobaan  ini,  nilai  terendah  dihasilkan pada perlakuan media campuran air kelapa,
limbah cair tahu dan air cucian beras  tanpa penambahan tepung  cangkang keong emas, yaitu  sebesar  70,11  jam.  Hal  ini  sesuai dengan tingkat mortalitas yang ditunjuukan sebagai  mortalitas  terting  (62,2%)  dan tingkat  konsumsi  pakan  yang  terendah (10,11  g/10  ekor).  Dalam  kurun  waktu 70,11  jam  sebanyak  50%  serangga  uji
mengalami mortalitas. Dibandingkan dengan  perlakuan  lainnya,  maka  perlakuan dengan  media  campuran  ketiga  bahan tersebut dapat menyebbkan kematian paling cepat,  paling  banyak  mortalitas  dan  paling sedikit konsumsi pakan yang disediakan.
Memilih media perbanyakan bagi B. thuringiensis yang menghasilkan produk B. thuringiensis yang  bersifat  toksik  dan mempunyai  nilai  LT 50 yang  rendah, merupakan
hal yang
harus dipertimbangkan.  Hal  ini  didukung  oleh
pendapat  Palma et  al. (2014)  yang menyebutkan bahwa tingkat toksisitas yang tinggi dan bersifat selektif merupakan salah satu persyaratan dalam pembuatan bioinsektisida.  Penggunaan  bahan-bahan berupa  limbah  pertanian  sangat  dianjurkan untuk memanfaatkan limbah dan menggunakannya untuk menghasilkan bahan  bioinsektisida  yang  bermanfaat dalam  pengendalian  hama  tanaman  secara hayati.
Tabel  2.  Nilai Lethal  time (LT 50 )  larva Spodoptera  litura pada  berbagai    perlakuan penambahan tepung cangkang keong emas
Perlakuan Selang Kepercayaan Persamaan Regresi LT 50 (Jam) Batas Bawah Batas Atas TA 78.81 71.98 85.67 Y = 0.012 X - 2.104 TB 81.23 74.51 88 Y = 0.012 X - 2.169 TC 89.05 82.33 95.79 Y = 0.012 X - 2.377 TD 70.11 62.76 77.5 Y = 0.012 X - 1.872 TE 94.98 88.25 101.77 Y = 0.012 X - 2.535 CA 80.55 73.35 87.82 Y = 0.012 X - 2.150 CB 103.3 96.5 110.13 Y = 0.012 X - 2.758 CC 106.71 100.38 113.07 Y = 0.012 X - 2.849 CD 94.6 88.16 101.068 Y = 0.012 X - 2.525 CE 83.33 76.11 90.662 Y = 0.012 X - 2.224

## KESIMPULAN
Produksi  spora  bakteri  berkisar antara 8,90x10 7 spora/mL  sampai 9,51x10 7 spora/ml  dengan  produksi  tertinggi  pada perlakuan  campuran  ketiga  media  limbah (air kelapa, limbah cair tahu dan air cucian beras).  Pada perlakuan ini tingkat toksisitas sebanyak  40%  pada  ulat  grayak.  Berat pakan  daun  yang  dikonsumsi  oleh  ulat grayak  pada  berbagai  perlakuan  berkisar 36,33-46,67 g. Penambahan tepung cangkang keong mas pada media pertumbuhan B. thuringiensis tidak meningkatkan jumlah spora.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Data yang dicantumkan pada makalah  ini  merupakan  sebagian  data  dari penelitian yang didanai oleh skim penelitian Hibah  Kompetitif  Universitas  Sriwijaya
tahun 2017, dengan nomer kontrak
988/UN.9.3.1/2017, dengan penulis pertama  sebagai  ketua  tim  peneliti.  Untuk itu, penulis mengucapkan terimakasih.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin  M.  2012.  Bioinsektisida S /NPV untuk  mengendalikan  ulat  grayak mendukung    swasembada    kedelai. Jurnal    Pengembangan    Inovasi Pertanian 5(1):19-31.
BPTP  Kaltim  (Balai  Pengkajian  Teknologi
Pertanian Kalimantan Timur). 2001. Keong Mas Sebagai Pakan Alternatif Untuk Ayam Buras . Lembar  Informasi  Pertanian.  BPTP Kalimantan Timur.
Blondine  CP  dan  Widyastuti  U.  2013. Efektivitas Bacillus  thuringiensis H-14  strain  lokal  dalam  buah kelapa  terhadap  larva Anopheles
sp.  dan Culex sp. di Kampung Laut Kabupaten Cilacap. Media Litbangkes 23(2):58-64.
Bravo  A,  Gill  SS,  dan  Soberon  M.  2007. Mode of action of Bacillus thuringiensis Cry  and  Cyt  toxins and their potential for insect control.
Toxicon . 49(4):423-435.
Bravo  A,  Likitvivatanavong  S,  Gillb  SS, and  Soberóna  M.  2011. Bacillus thuringiensis : A story of a successful bioinsecticide. Insect Biochem Mol Biol. 41(7):423-431.
Devi  PSV  dan  Rao  MLN.  2005.  Tailoring
production technology:
Bacillus thuringiensis (Bt) for localized production. Tailoring Biotechnologies 1(2):107-120.
Kalsoven LGE. 1981. The Pests of Crops in Indonesia .  Translated  and  Revised by  PA  van  der  Laan.  PT  Ichtiar Baru, Jakarta.
Marwoto dan Suharsono. 2008. Strategi dan Komponen  teknologi  pengendalian ulat  grayak  ( Spodoptera  litura, Fabricius)  pada  tanaman  kedelai. Jurnal  Litbang  Pertanian 27(4): 131-136.
Marzban  R.  2012.  investigation  on  the suitable  isolate  and  medium  for production of Bacillus thuringiensis .
J. Biopest. 5(2):144-147.
Morris ON, Kanagaratnam P, dan Converse V. 1997. Suitability of 30
agricultural products and by- products  as  nutrient  sources  for laboratory  production  of Bacillus thuringiensis subsp. aizawai
(HD133) Journal  of  Invertebrate Pathology 70:113-120.
Palma    L,  Muñoz    D,  Berry    C,  Jesús Murillo    J,  dan  Caballero  P.  2014. Bacillus  thuringiensis toxins:  An overview  of  their  biocidal  activity. Toxins (6):3296-3325.
Sarfat  MS.  2010.  produksi  bioinsektisida dari Bacillus  thuringiensis subsp. aizawai menggunakan limbah industri tahu sebagai substrat.
Fakultas Teknologi Pertanian,
Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Singh  IK,  Ragesh  PR,  Ganta  S,  dan  Singh AK. 2015. Oviposition behaviour of tobacco caterpillar, Spodoptera litura (Fabricius) (Lepidoptera:
Noctuidae)  on  different  host  plants. Journal of Entomology and Zoology Studies 3(3):40-44.
Untung,  K.  2006.  Pengantar  pengelolaan Hama terpadu. Gadjah Mada University  Press.  Yogyakarta.  Hal. 218 .