## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI ISOLAT BAKTERI TANAH RHIZOSFER TUMBUHAN MANGROVE API-API (Avicennia marina) DI DESA DATA KABUPATEN PINRANG

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF RHIZOSPHERE SOIL BACTERIAL ISOLATE OF MANGROVE API-API PLANT (Avicennia marina) AT PINRANG REGENCY AND DATA VILLAGE
Rusman 1* , Ariadi 1
1 Fakultas MIPA Universitas Islam Makassar Korespondi: rusman.dty@uim-makassar.ac.id

## ABSTRAK
Mangrove memiliki  peranan  penting  dalam  penyediaan  komponen makanan yang  sangat  kompleks dan  potensial  bagi  mikroorganisme  terutama  di  daerah  rhizosfer  karena  dipengaruhi  oleh  eksudat  yang dikeluarkan akar sebagai nutrisi bagi mikroorganisme itu sendiri. Jenis mikroorganisme di rhizosfer sangat melimpah dan jumlahnya berkurang seiring bertambahnya jarak dari akar tumbuhan. Tujuan penelitian untuk mengetahui adanya isolat bakteri dari tanah rhizosfer tumbuhan mangrove api-api ( Avicennia marina ) yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
Metode yang digunakan secara eksperimen kuantitatif dengan cara metode pengenceran menggunakan media nutrient agar , fermentasi dilakukan selama 74 jam menggunakan media nutrient broth dan uji aktivitas menggunakan metode difusi agar.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari 6 isolat yang di uji hanya ada 3 isolat yang memiliki aktivitas antibakteri. Isolat bakteri yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri uji Escherichia  coli adalah isolat dengan kode BTRM 03 memiliki zona hambat 9,97 mm, BTRM 05 dengan zona hambat 12,88 mm dan BTRM 06 dengan zona hambat 11,04 mm. Bakteri uji Staphylococcus aureus adalah isolat dengan kode BTRM 03 dengan zona hambat 12,24 mm, BTRM 05 dengan zona hambat 13,92 mm dan BTRM 06 dengan zona hambat 7,88 mm. Isolat bakteri dari tumbuhan mangrove   api-api ( Avicennia marina ) terdapat 3 isolat bakteri yang memiliki aktivitas antibakteri  terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
Kata Kunci: Antibakteri; Escherichia coli; Mangrove Api-Api; Rhizosfer; Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Mangroves  have  an  important  role  in  providing  very  complex  and  potential  food  components  for microorganisms  especially  in  the  rhizosphere  because  they  are  influenced  by  exudate  released  by  roots  as nutrients for microorganisms themselves. Types of microorganisms in the rhizosphere are very abundant and their number decreases with increasing distance from plant roots. The purpose of the research was to determine the  presence  of  bacterial  isolates  from  the  rhizosphere  soil  of  mangrove  api-api  plants  ( Avicennia  marina ) which have antibacterial activity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria.
The method employed was a quantitative experiment utilizing the dilution method with nutrient agar media. Fermentation was conducted for 74 hours using nutrient broth media, and activity testing was performed using the agar diffusion method.
The results showed that there were 6 isolates tasted there were only 3 isolates that had antibacterial activity. Isolates that have antibacterial activity against Escherichia coli test bacteria are isolates with the code BTRM 03 having an inhibitory zone of 9.7 mm BTRM 05 with an inhibitory zone of 12.88 mm and BTRM 06 with an inhibitory zone of 11.04 mm Staphylococcus aureus test bacteria are isolates with BTRM 03 code with an inhibitory zone of 12.24 mm, BTRM 05 with an inhibitory zone of 13.92 mm and BTRM 06 with an inhibitory zone of 7.88 mm. Bacterial isolates from mangrove api-api plants ( Avicennia marina) there are 3 bacterial isolates that have antibacterial activity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords : Antibacterial; Escherichia coli ; Mangroves Api-Api; Rhizosphere; Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  banyak  disebabkan  oleh  bakteri  seperti Mycobacterium,  Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus dan sebagainya dapat diobati dengan menggunakan antibiotik (Sukmawati and Rosalina,  2020).  Antibiotik  merupakan  bahan  obat  yang  sangat  memegang  peranan  penting  dalam menanggulangi penyakit infeksi. Senyawa antibiotik dapat diperoleh dari mikroorganisme dan secara sintetik. Senyawa  antibiotik  yang  dihasilkan  oleh  mikroba  memiliki  keunggulan  dibandingkan  dengan  antibiotik sintetik karena memiliki sifat yang lebih efektif, sebab targetnya spesifik serta toksisitasnya rendah. Salah satu yang  dilakukan  untuk  memperoleh  antibiotik  dengan  melakukan  penelitian  antibakteri  (Sukmawati  and Rosalina, 2020; Rusman and Irfiyanti, 2022).
Antibakteri adalah zat yang membunuh atau menekan pertumbuhan atau produksi bakteri. Antibakteri terbagi atas dua berdasarkan mekanisme kerjanya, yaitu bakteriostatik yang bersifat menghambat pertumbuhan bakteri dan bakterisidal yang bersifat membunuh bakteri (Brooks et al . 2014). Bakteri Escherichia coli adalah salah satu penyebab terjadinya diare, bakteri ini pun dapat mengakibatkan infeksi pada sistem saluran kemih. Staphylococcus aureus adalah salah satu bakteri penyebab peradangan, nekrosis dan pembentukan abses pada jerawat dan bisul serta menyebabkan berbagai infeksi lain yaitu salah satunya keracunan makanan (Jawetz et al. , 2008; Brooks et al. , 2014). Pengobatan penyakit infeksi yang disebabkan bakteri yang resisten terhadap antibiotik  memerlukan  pengembangan  strategi  alternatif  dalam  memerangi  penyakit  infeksi  bakteri  yaitu dengan  memanfaatkan  senyawa  yang  berasal  dari  tumbuhan  yang  dapat  menunjukkan  aktivitas  antibakteri (Alam et al. , 2022) .
Tanah salah satu tempat pertumbuhan bagi mikroorganisme, dalam satu gram tanah terdapat jutaan mikroorganisme.  Populasi  mikroorganisme  per  gram  tanah  yang  subur  meliputi,  bakteri  (2.500.000.000) Actinomicetes (700.000), Algae (50.000)  dan Protozoa (30.000).  Akar  merupakan  bagian  tanaman  yang berhubungan langsung  dengan  tanah  sehingga terdapat  unsur  hara  dan  bakteri. Tanah  rhizosfer  merupakan bagian tanah yang berada disekitaran perakaran tanaman (Hasanuddin et al., 2023). Populasi mikroorganisme di  rhizosfer  umumnya  lebih  banyak  dan  beragam  dibandingkan  pada  tanah  non  rhizosfer.  Aktivitas mikroorganisme  rhizosfer  dipengaruhi  oleh  eksudat  yang  dihasilkan  dari  perakaran  tanaman.  Beberapa mikroorganisme rhizosfer berperan dalam siklus hara dan proses pembentukan tanah, pertumbuhan tanaman mempengaruhi aktivitas mikroorganisme serta sebagai pengendali hayati terhadap petogen akar (Pujiati, 2014; Rusman and Yasnidar, 2020).
Tanah memiliki beberapa bagian, salah satunya ialah Rhizosfer yang merupakan bagian zona tanah yang mengelilingi akar dari suatu tanaman, dimana sifat biologi dan sifat kimia tanah dipengaruhi oleh akar. Beberapa mikroba yang berada di daerah rhizosfer meliputi Azospirillum Sp., Azotobacter sp., Actinomicetes sp., dan Enterobacter sp., yang dapat memberikan efek antibakteri (Fatmawati et al. , 2014; Hasanuddin et al. , 2023).
Alhadead et al ., (2019) melakukan penelitian tentang tentang Analisis Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun  Mangrove Avicennia  marina Dari  Kabupaten  Trenggalek  Dan  Kabupaten  Pasuruan  Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Vibrio  alginolyticus hasil  rata-rata  diameter zona  bening  berkisar antara  4,43-5,79  mm  dan  4,25-5,48  mm  untuk V . alginolyticus , yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun mangrove A. marina dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan V. alginolyticus (Setyati et al. , 2022), juga  melakukan  penelitian  tentang  Aktivitas  Antibakteri Actinomycetes di  Hutan  Mangrove  Wonorejo Surabaya  yang  Antagonis  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus menunjukkan  bahwa  dari  3  lokasi pengambilan  yang  dilakukan  replikasi  sebanyak  2  kali  didapatkan  38  isolat Actinomycetes namun  hanya  1 isolat Actinomycetes yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphyococcus  aureus dengan membentuk zona bening 14, 44 mm (Alhaddad et al. , 2019).
Berdasarkan  latar  belakang  diatas,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  terkait  isolat  bakteri  tanah rhizozsfer tumbuhan mangrove ( Avicennia marina) mempunyai aktivitas sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini  untuk  mengetahui  adanya  isolat  bakteri  dari  tanah  rhizosfer  tumbuhan  mangrove  api-api  ( Avicennia mariana ) yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini berupa eksperimen kuantitatif dengan cara pengenceran menggunakan media nutrient agar , fermentasi dilakukan selama 74 jam menggunakan media nutrient broth dan uji aktivitas menggunakan metode difusi agar

## Waktu Dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  Mikrobiologi  Farmasi  Universitas  Muslim  Indonesia  pada bulan September sampai Desember 2022.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf (ALP KT-23) , cawan petri (Iwaki) , gelas erlenmeyer (Iwaki), gelas kimia (Iwaki), gelas ukur (Iwaki), inkubator (Memmert, INC 108med) , jarum Ose, kaca objek, kertas cakram (Oxoid) , laminar air flow (LCB-1803B-A2) , mikroskop (OLYMPUS CX23) , Shaker Incubator (SKI4), timbangan analitik (PIONEER PA213) , oven (Memmert BE-200) , tabung reaksi (PYREX) . Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah   aquades, bakteri Esceherhicia coli (ATCC 10798) , dan bakteri Staphylococcus aureus (ATCC 335910) ., cat gram A (kristal violet), cat gram B (yodium), cat gram C  (Aseton) dan cat gram D (safranin), Etanol 70%, nutrient agar (Merck KGaA, Germany) , nutrient broth (Merck KGaA, Germany) ,  kertas cakram, NaCl 0,9%, tanah rhizosfer akar pohon mangrove api-api dan tissue . Prosedur Penelitian

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dicuci  menggunakan  sabun  kemudian  dibilas  dengan  air  mengalir. Setelah itu alat-alat gelas dikeringkan disterilkan dengan menggunakan oven pada suhu 180 o C selama 2 jam. Alat-alat gelas yang berskala dan tidak tahan terhadap pemanasan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit, sedangkan yang terbuat dari plastik direndam dalam alkohol 70%, jarum ose disterilkan pada lampu spiritus (Rusman and Yasnidar, 2020)

## Pengambilan Sampel
Sampel  tanah  diambil  di  sekitaran  akar  tumbuhan  mangrove  api-api  ( Avicennia  mariana) pada kedalaman  kurang  lebih  15  cm  dari  permukaan  tanah  dengan  menggunakan  sendok  stainless  steel  secara aseptik  kemudian  sampel  dimasukkan  ke  dalam  botol  steril  dan  dimasukkan  kedalam  cool  box. selanjutnya cool box berisi sampel dibawa ke laboratorium.

## Pembuatan Medium Nutrient Agar (NA)
Sebanyak 10 gram nutrient agar   dilarutkan ke dalam 500 mL aquades kemudian dipanaskan hingga larut. Bahan yang telah homogen, selanjutnya disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. kemudian  di ukur pH (pH 6,5-7).

## Pembuatan Medium Nutrient Broth (NB)
Sebanyak 12 gram nutrient broth   dilarutkan ke dalam 1500 mL aquades kemudian dipanaskan hingga larut. Bahan yang telah homogen kemudian di ukur pH hingga pH 7, selanjutnya disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. kemudian  di ukur pH (pH 6,5-7).

## Pembuatan Suspensi Sampel
Sampel  tanah  rhizosfer  ditimbang  1g  lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol  pengencer  dan  dicukupkan dengan  aquades  steril  hingga  10  mL  Suspensi  sampel  kemudian  dibuat  pengenceran  10 -1 ,10 -2 ,10 -3 ,10 -4 dan 10 -5 .

## Pembiakan Bakteri Tanah
Suspensi sampel dari setiap pengenceran diambil 1 ml secara aseptis kemudian dimasukkan kedalam cawan petri lalu ditambahkan nutrient agar sebanyak 10 ml lalu dihomogenkan. Setelah homogen kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 1 x 24 jam.

## Pemurnian Isolat Bakteri Tanah
Setelah  diinkubasi  dilakukan  pengamatan  terhadap  koloni  yang  tumbuh  dimana  bakteri  yang memperlihatkan daerah bening disekitarnya diambil dan ditumbuhkan pada medium nutrient agar yang baru dengan menggunakan metode gores kuadran lalu diinkubasi selama 1 x 24 jam. Diulangi beberapa kali hingga diperoleh isolat bakteri murni.
Penyiapan Bakteri Uji a. Peremajaan bakteri uji Esceherhicia coli dan Staphylococcus aureus dilakukan dengan mengambil satu Ose biakan  bakteri  murni  kemudian  digoreskan  di  atas  permukaan  media  nutrient  agar  kemudian  diinkubasi selama 1 kali 24 jam.
b. Pembuatan suspensi bakteri uji Esceherhicia coli dan Staphylococcus aureus. Bakteri uji hasil peremajaan diambil  dengan  menggunakan  jarum  Ose  dan  disuspensikan  ke  dalam  tabung  berisi  5  mL  larutan  NaCl 0,9%. Kemudian diukur kekeruhannya 25% T pada spektrofotometer UV-VIS Panjang gelombang 580 nm

## Uji Antagonis Antibakteri
Disiapkan  Suspensi  bakteri  uji,  diambil  sebanyak  20 µL  suspensi  bakteri  uji  yang  telah  yang telah diukur serapannya kemudian dimasukkan kedalam vial lalu ditambahkan nutrient agar sebanyak 10 mL dan dihomogenkan. Setalah homogen dimasukkan kedalam cawan petri dan dibiarkan hingga memadat. Setelah
memadat,  isolat  bakteri  hasil  pemurnian  diambil  dan  dipotong  persegi  pada  area  isolat  lalu  di  masukkan kedalam cawan perti yang berisi bakteri uji. Selanjutnya di inkubasi 1x24 jam.

## Fermentasi Isolat Bakteri Murni
Isolat  bakteri    murni  di  fermentasi  dengan  menggunakan  media nutrient  broth .  Media  fermentasi dibuat sebanyak 1500 mL yang dibagi masing-masing 500 mL setiap erlenmeyer. Selanjutnya isolat diambil sebanyak  2  sampai  4  potong  dan  diinokulasikan  ke dalam  masing-masing  Erlenmeyer  yang  berisi  500  mL media nutrient broth . Kemudian dilakukan fermentasi menggunakan Incubator Shaker dengan kecepatan 150 rpm selama 72 jam pada suhu 37 o C. Hasil Fermentasi kemudian disaring menggunakan pompa vacum. Filtrat yang  diperoleh  kemudian  dilakukan  partisi  cair-cair  menggunakan  pelarut  etil  asetat  1:1.  Ekstrak  yang diperoleh kemudian dilanjutkan dengan uji aktivitas antibakteri (Rusman and Yasnidar, 2020)

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan cara Difusi Agar menggunakan paper disc . diambil sebanyak 20 µL suspensi bakteri uji yang telah yang telah diukur serapannya kemudian dimasukkan kedalam vial  lalu  ditambahkan  nutrient  agar  sebanyak  10  mL  dan  dihomogenkan.  Setelah  homogen  dimasukkan kedalam cawan petri dan dibiarkan hingga memadat. paper disc yang digunakan berukuran 6 mm. Ekstrak yang diperoleh dilarutkan dengan etil asetat lalu diteteskan pada paper disc . Paper disc diambil menggunakan pinset  dan  diletakkan  secara  aseptis  pada  permukaan  medium  yang  telah  diberi  bakteri  uji.    kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1x24  jam  lalu  dilakukan  pengamatan  dan  pengukuran  diameter  zona hambatan  yang  terbentuk.  Bakteri  yang  memiliki  daya  hambat  kemudian  dilakukan  identifikasi  secara makroskopik dan mikroskopik (Jawetz et al. , 2008). Identifikasi Mikroorganisme
a. Pengamatan Morfologi Secara Makroskopik
Medium nutrient  agar dituang  ke  dalam  cawan  petri  steril  sebanyak  10  mL  kemudian  dibiarkan memadat  setelah  memadat  digoreskan  isolat  bakteri  murni  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  kemudian diinkubasikan  pada  suhu  37 o C  selama  1  x  24  jam.  Pengamatan  dilakukan  dengan  melihat  bentuk  koloni, elevasi, tepi dan warna koloni.
b. Pengamatan Morfologi Secara Mikroskopik dengan Pewarnaan Gram
Disiapkan  objek  glass  dan  deck  glass  yang  telah  dibersihkan  dan  dibebas  lemakkan  dengan  etanol 70%. Aquades diteteskan pada kaca objek, lalu digoreskan biakan murni menggunakan ose dan difiksasi di atas  api.   ditetesi  cat  gram  A  dibiarkan  selama  30  detik  kemudian  dicuci  dengan  aquades  dan  dikeringkan dengan tissue. Selanjutnya perlakuan yang sama seperti cat gram A dilakukkan pada cat gram B (30 detik), cat gram C (30 detik) dan Cat gram D (30 detik).
Tahapan  selanjutnya  dikeringkan  dengan  menggunakan  menggunakan  tissue  lalu  diamati  di  bawah mikroskop. Jika bakteri berwarna merah maka bakteri tersebut adalah bakteri gram negatif yang Jika bakteri berwarna ungu maka bakteri tersebut adalah bakteri gram positif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Isolasi
Sampel  yang  digunakan pada  penelitian ini  adalah  Tanah  Rhizosfer  Tumbuhan Mangrove  Api-Api ( Avicennia marina ). Tanah Rhizosfer yang digunakan adalah tanah yang di ambil dari kedalam 30 cm dari permukaan tanah yang kemudian dimasukkan kedalam botol steril.
Isolasi  dilakukan  aseptis  di Laminar  Air  Flow untuk  meminimalisir  terjadinya  kontaminasi  dari lingkungan. Isolasi yang dilakukan menggunakan metode pengenceran, ditimbang sampel sebanyak   1 gram kemudian dilarutkan dalam 10 ml aquadest steril. Suspensi sampel kemudian dibuat pengenceran  10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 dan 10 -5 .
Gambar 1. Hasil Isolasi Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api-Api ( Avicennia marina )
Identifikasi  isolat  terpilih  dilakukan  dengan  mengamati  isolat    bakteri  yang  memiliki  zona  bening disektitarnya yang kemudian diambil untuk dilanjutkan ke tahap pemurnian. Isolat bakteri terpilih diberi kode Bakteri Tanah Rhizosfer Mangrove (BTRM). Isolat  bakteri terpilih pada pengenceran 10 -2 sebanyak 1 isolat dengan  kode  BTRM01,  pengenceran  10 -3 sebanyak  1  isolat  dengan  kode  BTRM02,  10 -4 sebanyak  1  isolat dengan kode BTRM03, 10 -5 A sebanyak 3 isolat dengan kode BTRM04, BTRM05, dan BTRM06. Selanjutnya dilakukan Pemurnian isolat bakteri secara berulang-ulang bertujuan untuk memperoleh biakan bakteri
Gambar 3.
Hasil  pemurnian  Isolat  bakteri  tanah rhizosfer tumbuhan  mangrove
api-api ( Avicennia marina ) Keterangan
(a) isolat BTRM 01
(b) isolat BTRM 02
(c) isolat BTRM 03 (d) isolat BTRM 04 (e) isolat BTRM 05 (f)  isolat BTRM 06
Gambar 2. Hasil Pemurnian Isolat Bakteri Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api-Api ( Avicennia marina )

## Hasil Uji Antagonis
Tabel I. Hasil Uji Antagonis Isolat Bakteri Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api-Api (Avicennia marina) terhadap Bakteri Escherichia coli No Kode Isolat Escherichia coli 1 BTRM 01 - 2 BTRM 02 - 3 BTRM 03 + 4 BTRM 04 - 5 BTRM 05 + 6 BTRM 06 + 10 -1 10 -2
10 -3
10 -4 10 -5
Tabel II. Hasil Uji Antagonis Isolat Bakteri Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api-Api (Avicennia marina) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus No Kode Isolat Staphylococcus aureus 1 BTRM 01 - 2 BTRM 02 - 3 BTRM 03 + 4 BTRM 04 - 5 BTRM 05 + 6 BTRM 06 +
Hasil  uji  antagonis  pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus menunjukkan  bahwa isolat baketri yang memiliki aktivitas antibakteri adalah bakteri dengan kode BTRM 03, BTRM 05 dan BTRM 06.  Uji  antagonis  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  isolat  bakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan Escherichia coli dan Staphilococcus aureus

## Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Gambar 3 . Hasil uji aktivitas antibakteri isolat bakteri tanah rhizosfer  tumbuhan mangrove api-api ( Avicennia marina ) terhadap bakteri Escherichia   coli dan Staphylococcus aureus .
Tabel III. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api-Api ( Avicennia marina ) terhadap Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  isolat  bakteri  dari  tanah  rhizosfer  tumbuhan mangrove api-api ( Avicennia marina ) yang memiliki potensi antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  Tanah  Rhizosfer  Tumbuhan Mangrove  Api-Api  ( Avicennia  marina )  yang  diambil  dari  desa  Data,  Kecamatan  Duampanua,  Kabupaten Pinrang.  Tanah  Rhizosfer  yang  di  ambil  pada  kedalam  15  cm  dari  permukaan  tanah  yang  kemudian dimasukkan kedalam botol steril (Ratnakomala et al. , 2016).
Hasil uji aktivitas antibakteri isolat bakteri tanah rhizosfer  tumbuhan mangrove api-api ( Avicennia marina ) terhadap bakteri Escherichia   coli pada isolat BTRM03 memiliki zona hambat sebesar 9,97 mm, isolat  BTRM05 memiliki zona hambat sebesar 12,88 mm, dan isolat BTRM06 memiliki zona hambat sebesar 11,04 mm. Baketeri uji Staphylococcus aureus pada isolat BTRM03 memiliki zona hambat sebesar 12,24 mm, isolat  BTRM 05 memiliki zona hambat sebesar 13,92 mm, dan isolat BTRM06 memiliki zona hambat sebesar 7,88 mm.
Keterangan
+ = Mempunyai aktivitas antagonis terhadap bakteri uji - = Tidak mempunyai aktivitas antagonis terhadap bakteri uji
No Kode Isolat Escherichia   coli Staphylococcus aureus 1 BTRM 03 9,97 mm 12,24 mm 2 BTRM 05 12,88 mm 13,92 mm 3 BTRM 06 11,04 mm 7,88 mm

## Hasil Pengamatan Secara Mikroskopik
Gambar 4. Hasil pengamatan secara mikroskopik isolat bakteri tanah rhizosfer  tumbuhan mangrove api-api (Avicennia marina)
Tabel IV. Hasil Pengamatan Secara Mikroskopik Isolat Bakteri Tanah Rhizosfer Tumbuhan Mangrove Api- Api ( Avicennia marina )
Koloni  bakteri  memiliki  sifat-sifat  khusus  dalam  medium  padat,  dimana  bentuk  koloni  dapat digambarkan sebagai titik, bulat atau sirkulair, filamentus dan tak teratur. Permukaan koloni dapat rata, timbul rata, melengkung, mencembung, membukit dan serupa kawah, sedangkan tepian koloni dapat berbentuk rata atau entire, berbelah atau lobate, berbenang atau filamentus dan keriting (curled). Pada warna, koloni bakteri sebagian besar berwarna keputihan atau kekuningan.
Pengamatan  secara  mikroskopik  pada  isolat  BTRM03  dengan  pembesaran  mikroskop  100x/1,25 diperoleh bentuk bakteri Coccus berwarna ungu yang menandakan bakteri tersebut termasuk jenis bakteri gram positif.  Pada  isolat  BTRM05  dengan  pembesaran  mikroskop  40x/0,65  diperoleh  bentuk  bakteri Coccus berwarna merah yang menandakan bakteri tersebut termasuk jenis bakteri gram negatif. Pada isolat BTRM06 dengan pembesaran mikroskop 10x/0,25 diperoleh bentuk bakteri Bacil berwarna merah yang menandakan bakteri tersebut termasuk jenis bakteri gram negatif. Dapat dilihat pada tabel 5. Bakteri gram positif berwarna ungu  karna  bakteri  gram  positif  akan  mempertahankan  zat  warna  kristal  violet  sehingga  warnanya  tetap berwarna ungu gelap setalah dicuci dengan aseton sedangkan bakteri gram negative berwarna merah karena kompleks zat warna kristal violet larut pada saat dicuci menggunakan aseton sehingga mengambil warna dari safranin (Nugroho, 2015).

## KESIMP ULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  isolat  yang  memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri uji Escherichia   coli adalah isolat dengan kode BTRM 03 dengan diameter zona hambat 9,97 mm, BTRM 05 dengan diameter zona hambat 12,88 mm dan BTRM 06 dengan diameter zona  hambat  11,04  mm.  Bakteri  uji Staphylococcus  aureus adalah  isolat  dengan  kode  BTRM  03  dengan diameter  zona hambat 12,24 mm, BTRM 05 dengan diameter zona hambat 13,92 mm dan BTRM 06 dengan diameter zona hambat 7,88 mm.

## UCAPAN TERIMAH KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  universitas  islam  makassar,  laboratorium  mikrobiologi fakultas  farmasi  universitaas  muslim  Indonesia  beserta  semua  pihak  yang  telah  membantu  dalam menyelesaikan penelelitian ini.
BTRM03 BTRM05 BTRM06 No Kode Isolat Bentuk Warna 1 BTRM 03 Coccus Ungu 2 BTRM 05 Coccus Merah 3 BTRM 06 Bacil Merah

## DAFTAR PUSTAKA
Alam, M., Bano.N., Ahmad, T., Sharangi, A.B., Upadhyay, T.K., Alraey, Y., Alabdallah, N.M., Rauf, M.A.,
Saeed, M. 2022. Synergistic Role of Plant Extracts and Essential Oils against Multidrug Resistance and  Gram-Negative  Bacterial  Strains  Producing  Extended-Spectrum  β-Lactamases. Antibiotics , 11(7). doi: 10.3390/antibiotics11070855.
Alhaddad, Z. A., Tanod, W. A. and Wahyudi, D. 2019. Bioaktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Daun Mangrove Avicennia sp. Jurnal Kelautan: Indonesian Journal of Marine Science and Technology . 12(1). 12. doi: 10.21107/jk.v12i1.4752.
Brooks,  G.F.,  Carrol.K.C.,  Butel.  J.S.,  Morse,  S.A.,  Mietzer.T.A.,  2014. Microbiologia  Médica .  Santana: AMGH Editora
Fatmawati,  U.,  Santosa,  S.,  Rinanto,  Y.,  Probosari,  R.M.  2014.  Aktivitas  Antibakteri  Actinomycetes  yang Diisolasi dari Rizosfer Tanaman Solanaceae Antibacterial Activity of Actinomycetes Isolated from Solanaceae  Plants  Rhizosphere. Jurnal  Farmasi  Indonesia.. 11(1).  54–68.  Available  at: http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/.
Hasanuddin, R., Alim, N. and Rahma, N. R. 2023. Characterization of Endophytic Fungi in Robusta Coffee ( Coffea canephora L .) Beans Through 18S rRNA Gene Sequencing and Evaluation of Antioxidant Activity and Chlorogenic Acid Content. Jurnal Penelitian Pendidikan IPA. 9(11), pp. 9964–9972. doi: 10.29303/jppipa.v9i11.5106.
Hasanuddin,  R.,  Jasmiadi,  J.  and  Abdillah,  N.  2023.  The  Analysis  of  the  Chlorogenic  Acid  in  the  Ethanol Fraction  of  Robusta  Coffee  Beans  and  Its  Effect  on  Glucose  Levels  in  Wistar  Rats. Disease Prevention and Public Health Journal .15(2).118. doi: 10.12928/dpphj.v15i2.4705.
Jawetz, Melinick and Aldeberg. 2008. Mikrobiologi keddokteran. Jakarta: EGC. pp. 251–257. Nugroho, W.S. 2015. Penetapan Standar Warna Daun Sebagai Upaya Identifikasi Status Hara (N) Tanaman Jagung  ( Zea  mays L.) pada  Tanah  Regosol.  Planta  Tropika: Journal  of  Agro Science ,  3(1),  8–15. https://doi.org/10.18196/pt.2015.034.8-15
Pujiati, P. 2014. Isolasi Actinomycetes Dari Tanah Kebun Sebagai Bahan Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Florea : Jurnal Biologi dan Pembelajarannya .1(2). 42–46. doi: 10.25273/florea.v1i2.390.
Ratnakomala, S., Apriliana P., Fahrurrozi., Lisdiyanti, P., and Kusharyoto, W., 2016. Aktivitas Antibakteri Aktinomisetes  Laut  Dari  Pulau  Enggano  [Antibacterial  activity  of  marine  actinomycetes  from Enggano Island. Berita Biologi. 15(3)
Rusman  and  Yasnidar,  R.  2020.  Isolasi  Bakteri  Rhizosfer  Penghasil  Antimikroba  Tanah  Disekitaran  Akar. 1(2). 0–4.
Rusman and Irfiyanti, N. A. 2022. Pengaruh Pemberian Hard Candy dari Infusa Kopi Hijau Robusta (Coffea canefora  L.)  Pada  Pasien  Diabetes  Mellitus  (Effect  of  Giving  Hard  Candy  from  Robusta  Green Coffee Bean Infusion (Coffea canefora L .) in Diabetes Mellitus Patients ). J ournal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR).4(2).334-341. doi : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i2.14183
Setyati,  W.  A.,  Arifidyani,  A.  and  Susanto,  A.  2022.  Aktivitas  Antijamur  dari  Bakteri  Sedimen  Mangrove Terhadap Candida albicans dan Malassezia furfur. Jurnal Kelautan Tropis .25(3). pp. 411–420. doi: 10.14710/jkt.v25i3.15114.
Sukmawati,  S.  and  Rosalina,  F.  2020.  Isolasi  Bakteri Dari  Tanah  Sebagai  Penghasil  Senyawa  Antimikrob.
Biospecies . 13(1). 46–51. doi: 10.22437/biospecies.v13i1.8343