## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK ETANOL AKAR KELAKAI (Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli
Rezqi Handayani 1 , Heni Rusmita 2
1 Dosen Program Studi D-III Farmasi Universitas Muhammadiyah Palangkaraya
2 Mahasiswa Program Studi D-III Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Palangkaraya
Email : rezqi.handayani@gmai.com , hrrusmita@gmail.com

## ABSTRAK
Kekayaan alam hutan tropis Indonesia menyimpan berbagai tumbuhan yang berkhasiat sebagai  obat  dan  dihuni  oleh  berbagai  suku  dengan  pengetahuan  pengobatan  tradisional yang  berbeda.  Indonesia  memiliki  lebih  dari  1.000  jenis  tumbuhan  yang  dapat  digunakan sebagai obat dan sekitar 300 jenis yang sudah dimanfaatkan untuk pengobatan tradisional. Salah  satu  tumbuhan  khas  Kalimantan  yang  berkhasiat  sebagai  obat  tradisional  adalah Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.). Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.) merupakan tumbuhan yang lazim dikonsumsi oleh masyarakat sehari-sehari sebagai sayuran.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Handayani et  al. (2016)  tentang Potensi  Tumbuhan  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  sebagai  Afrodisiaka, kandungan  kimia/zat  aktif  pada  simplisia  dan  ekstrak  etanol  akar  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  adalah  alkaloid,  saponin  dan  tanin.  Alkaloid,  saponin  dan  tanin merupakan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat  ditemukan  di  dalam  tanaman  dan diketahui dapat memiliki aktivitas antibakteri.
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakognosi  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas  Muhammadiyah  Palangkaraya.  Kegiatan  penelitian  yang  dilakukan  dimulai dengan  pembuatan  ekstrak  etanol  akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) dengan  metode  ekstraksi  sokletasi  dan  uji  daya  hambat  ekstrak  etanol  akar  Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dengan metode penanaman kertas cakram ( paper disc) Kirby-Bauer . Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  kemampuan  daya  hambat  ekstrak  etanol  akar  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli serta untuk mengetahui konsentrasi ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.)  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli .  Hasil  penelitian rata-rata diameter zona hambat ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.)  Bedd.)  terhadap  bakteri Escherichia  coli baik  pada  konsentrasi  1%,  5%,  10%,  dan  15% yaitu  0  mm,  yang  artinya  ekstrak  etanol  akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.) Bedd.) tidak mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
Kata kunci :Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.), Daya hambat, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Menurut  Undang-Undang  Republik Indonesia  Nomor  36  Tahun  2009  tentang Kesehatan,  pengertian  obat  tradisional ialah merupakan bahan atau ramuan yang berupa  bahan  tumbuhan,  bahan  hewan, bahan  mineral,  sediaan  sarian  (galenik)
atau campuran dari bahan tersebut secara umum  turun  menurun  telah  digunakan untukpengobatan  dan  dapat  diterapkan sesuai  dengan  norma  yang  berlaku  di masyarakat.
Kekayaan alam hutan tropis Indonesia menyimpan berbagai tumbuhan
yang  berkhasiat  sebagai  obat  dan  dihuni oleh  berbagai  suku  dengan  pengetahuan pengobatan  tradisional  yang  berbeda. Indonesia  memiliki  lebih  dari  1.000  jenis tumbuhan  yang  dapat  digunakan  sebagai obat  dan  sekitar  300  jenis  yang  sudah dimanfaatkan untuk pengobatantradisional (Hariana, 2004 dalam Takoy, 2013).
Obat  tradisional  di  Indonesia  sangat besar peranannya dalam pelayanan kesehatan masyarakat di Indonesia, sehingga obat tradisional sangat berpotensi untuk dikembangkan.
Indonesia  kaya  akan  tanaman  obat- obatan, yang mana masih belum dimanfaatkan secara optimal untuk kesehatan.  Obat  tradisional  merupakan warisan  budaya  bangsa  yang  perlu  terus dilestarikan  dan  dikembangkan  untuk menunjang pembangunan kesehatan sekaligus untuk meningkatkan
perekonomian rakyat (Notoatmodjo, 2007).
Kalimantan merupakan pulau di Indonesia yang terkenal dengan kekayaan keanekaragaman  hayatinya.  Tak  hanya itu,  kekayaan  pengetahuan  pengobatan tradisional dengan menggunakan tumbuhan  yang  diwariskan  secara  lisan dari  generasi  ke  generasi  pada  etnis  asli di Kalimantan juga sangat banyak. Etnis di Kalimantan  memanfaatkan  berbagai  jenis tumbuhan  untuk  pengobatan  tradisional dengan mengandalkan dari habitat alaminya. Sangat jarang Tumbuhan Hutan Berkhasiat  Obat  (THBO)  ditanam  secara khusus untuk dibudidayakan. Selain
mereka  belum  terbiasa  dengan  kegiatan budidaya  THBO,  terdapat  kepercayaan yang  mereka  yakini  bahwa  THBO  yang dibudidayakan  tidak  memiliki  khasiat sebaik  yang  diambil  secara  langsung  dari alam.  Karena  itu  hutan  merupakan gudang herbal bagi etnis asli di Kalimantan.  Berdasarkan  data  Pusat Informasi  Kehutanan  (2007)  terdapat sekitar  1.260  jenis  THBO  di  berbagai formasi  hutan  Indonesia  dan  180  jenis diantaranya  telah  dieksploitasi  dalam jumlah  yang  besar  untuk  digunakan sebagai bahan baku industri obat tradisional (Handayani et al ., 2016).
Salah satu tumbuhan khas Kalimantan  yang  berkhasiat  sebagai  obat tradisional  adalah  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.).  Kelakai
( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) merupakan tumbuhan yang lazim dikonsumsi oleh masyarakat sehari-sehari sebagai  sayuran.  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  termasuk tumbuhan  yang  sangat  mudah  ditemukan di  daerah  Kalimantan.  Tumbuhan  ini banyak  sekali  terdapat  di  lingkungan tempat  tinggal  masyarakat  suku  Dayak. Masyarakat dapat dengan mudah memperolehnya  tanpa  harus  membelinya di  tempat  tertentu.  Selain  sebagai  bahan makanan, masyarakat suku Dayak percaya  bahwa  tumbuhan  ini  memiliki khasiat sebagai obat tradisional. Sebagian kecil  masyarakat  suku  Dayak  menjadikan akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris
(Burm.  f.)  Bedd.)  sebagai  obat  tradisional yaitu  sebagai  obat  kuat.  Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Handayani et  al. (2016)  tentang  Potensi  Tumbuhan Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)
Bedd.)  sebagai  Afrodisiaka,  kandungan kimia/zat  aktif  pada  simplisia  dan  ekstrak
etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.) adalah alkaloid, saponin dan tanin.
Alkaloid, saponin dan tanin merupakan  senyawa  metabolit  sekunder yang dapat ditemukan di dalam tumbuhan serta  memiliki  aktivitas  biologi  dan  salah satunya sebagai antibiotik.
Escherichia  coli merupakan  flora normal  saluran  pencernaan.  Flora  normal adalah  mikroba  yang  secara  alamiah menghuni  tubuh  manusia  (Pelczar  dan Chan,  2008).  Akan  tetapi  mempunyai potensi  menimbulkan  penyakit  dalam keadaan  yang  cocok  (Volk  dan  Wheeler, 1989). Escherichia  coli menjadi  patogen jika  jumlah  bakteri  ini  dalam  saluran pencernaan meningkat atau berada di luar usus dan menghasilkan enterotoksin yang dapat  menyebabkan  diare  (Volk  dan Wheeler, 1989).
Aktivitas antibakteri dari suatu senyawa metabolit sekunder dapat diamati secara mikrobiologi dengan memperhatikan zona hambat (zona bening  di  sekitar  kertas  cakram/ paper disc )  yang  terbentuk  setelah  dilakukan pengujian secara mikrobiologi salah satunya  dengan  metode  penanaman  disk (kertas cakram) yaitu menggunakan
metode  Kirby-Bauer.  Kepekaan  bakteri terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri dapat  diamati  dengan  terbentuknya  zona hambat (daerah bening di sekeliling sumur atau  kertas  cakram/ paper  disc )  (Kairupan et al ., 2014).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di
laboratorium Mikrobiologi dan Farmakognosi  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. Waktu penelitian ini selama
2 bulan, kegiatan penelitian ini dimulai dari pengambilan tumbuhan Kelakai, pembuatan  ekstrak  dan  uji  daya  hambat ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.) terhadap bakteri
Escherichia coli .

## Pembuatan Simplisia
Akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  yang  dipilih  untuk digunakan pada penelitian ini adalah akar tumbuhan Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  yang  tumbuh  di  lahan gambut  dan  diambil  di  Jl.  Anggrek Komplek
Kampus
II Universitas
Muhammadiyah Palangkaraya.
Proses pembuatan simplisia akar Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.) Bedd.)  diawali  dengan  pengumpulan bahan baku berupa akar Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.), kemudian dilakukan sortasi basah dengan cara  dicuci  dengan  air  mengalir,  setelah
itu  dilakukan  perubahan  bentuk  akar
dengan cara dirajang. Kemudian dikeringkan    dengan  cara  mengangin- anginkan  simplisia  hingga  kering,  setelah kering simplisia kemudian disortasi kering. Akar  yang  telah  kering  kemudian  di blender hingga  halus  dan  diayak  dengan menggunakan  ayakan  nomor  40  agar lebih  memudahkan  saat  digunakan  dalam penelitian.
Pembuatan Ekstrak Etanol Akar Kelakai (Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.)
Pembuatan  ekstrak  etanol  akar  Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) dengan metode sokletasi dilakukan dengan cara :
a. Serangkaian
alat
soklet
dirangkai/dipasang.
b.  Ditimbang  sebanyak  350  gram  serbuk simplisia akar tumbuhan Kelakai
( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) dan  dimasukkan  ke  dalam  kertas  saring yang  telah  disiapkan,  tiap  ujung  kertas saring diikat dengan menggunakan benang/tali,  kemudian  dimasukkan  ke dalam tabung soklet. c.  Pelarut  yang  akan  digunakan  diukur, kemudian  pelarut  dimasukkan  ke  dalam labu alas bulat.
d. Labu alas bulat yang telah berisi pelarut dipanaskan, uap dari pelarut akan membahasi  kertas  saring  yang  berisi serbuk simplisia akar kelakai. e. Proses ekstraksi dilakukan hingga hasil ekstraksi tidak berwarna lagi.
f.  Kemudian  ekstrak  cair  yang  didapat diambil dan diuapkan ekstrak cair tersebut menggunakan  evaporator  hingga  kadar pelarut berkurang setengah atau ± 50%. g.  Ekstrak  kemudian  diuapkan  di  atas waterbath dengan  menggunakan  cawan porselin  pada  suhu  95o  C  hingga diperoleh ekstrak kental.
h.  Ekstrak  kental  yang  didapat  kemudian ditimbang.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat  dan  bahan  yang  perlu  disterilkan seperti  erlenmeyer,  cawan  petri,  tabung reaksi, kapas lidi steril, dan pinset, dengan cara dimasukkan ke dalam oven selama 1 jam  pada  suhu  180oC,  sterilisasi  media menggunakan  autoklaf  dengan  suhu 121oC selama 15 menit dan sterilisasi ose dilakukan  dengan  cara  dimanaskan  di atas bunsen.

## Pembuatan  Media  BHI  (Brain  Heart
Infusion)
Ditimbang sebanyak 1,85 gram BHI ( Brain Heart  Infusion )  dan  dilarutkan  dalam  50 mL aquadest, dipanaskan diatas hot plate hingga larut dan homogen. Setelah media BHI  ( Brain  Heart  Infusion )  larut  dan homogen,  media  dipipet  sebanyak  5  mL ke  dalam  tabung  reaksi  yang  telah disediakan sebelumnya. Kemudian disterilkan  selama  15  menit  di  autoklaf dengan tekanan udara 1 atm dan dengan suhu 121oC (Pakekong et al ., 2016).
Pembuatan Media EMB (Eosin

## Methylene Blue)
Ditimbang  sebanyak  3,75  gram  EMB ( Eosin  Methylene  Blue )  dilarutkan  dalam 100  mL  aquadest,  dimanaskan  sambil diaduk  sampai  larut  dan  homogen.  Media yang  telah  homogen  tersebut  disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121oC  selama 15 menit (Bhaskara et al ., 2012).

## Pembuatan Media MHA (Mueller Hinton Agar)
Ditimbang  sebanyak  9,5  gram Mueller Hinton agar  dan dilarutkan  dalam  250 mL aquadest,  dipanaskan  diatas hot  plate , kemudian  disterilkan  selama  15  menit  di autoklaf  dengan  tekanan  udara  1  atm, suhu 121oC (Ramadanti, 2008).

## Penanaman Bakteri Escherichia coli
Diambil satu mata ose bakteri Escherichia coli ATCC 25922 dan ditanam pada media
BHI ( Brain Heart Infusion ) dan diinkubasikan pada suhu 37oC selama 24 jam (Pakekong et al ., 2016).

## Isolasi Bakteri Escherichia coli
Diambil satu mata ose bakteri Escherichia coli dari  media  BHI  ( Brain  Heart  Infusion ) yang  telah  diinkubasikan,  kemudian  di streak pada media EMB ( Eosin Methylene Blue ),  diinkubasikan  pada  suhu  37oC selama 24 jam (Pakekong et al ., 2016).
Pembuatan Larutan Standar Mac Farland 0,5
Dicampurkan 0,05 mL BaCl2 1% dan 9,95 mL  H2SO4  1%  didalam  tabung  reaksi. Kemudian  ditutup  rapat  supaya  tidak terjadi  penguapan  dan  larutan  harus dikocok  setiap  akan  digunakan  untuk membandingkan suspensi bakteri (Pakekong et al ., 2016). Pembuatan Suspensi
Bakteri

## Escherichia coli
Dimasukkan  10  mL  larutan  NaCl  0,9% steril  ke  dalam  tabung  reaksi,  koloni bakteri  yang  telah  diisolasi  di  media  EMB ( Eosin  Methylene  Blue )  disiapkan  dan diambil satu mata ose bakteri Escherichia coli dari  media  EMB  ( Eosin  Methylene Blue ),  kemudian  dimasukkan  ke  dalam larutan  NaCl  0,9%  steril  hingga  diperoleh kekeruhan  yang  disesuaikan  dengan standar  kekeruhan  Mac  Farland  0,5.  Jika suspensi  yang  terbentuk  kurang  keruh, maka harus menambahkan koloni, sedangkan  jika  terlalu  keruh  maka  harus ditambahkan larutan NaCl 0,9% steril.
Pembuatan Kontrol Positif Cotrimoxazole Digerus tablet Cotrimoxazole hingga halus dan ditimbang sebanyak 15 mg, diasukkan  ke  dalam  labu  ukur  dan ditambahkan  100  mL  aquadest,  dikocok hingga  homogen,  yang  dianggap  sama dengan konsentrasi 15%. Kemudian dilanjutkan  dengan  membuat  konsentrasi
berbeda-beda  yaitu  1%,  5%,  10%  dan 15%.
Pembuatan  Konsentrasi  Ekstrak  Akar Kelakai  (Stenochlaena  palustris  (Burm. f.) Bedd.)
Ditimbang  ekstrak  kental  akar  Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) sebanyak  15  gram  dan  dilarutkan  dalam 100 mL pelarut etanol 96% yang dianggap sama  dengan  konsentrasi  ekstrak  15%. Kemudian  membuat  konsentrasi  ekstrak akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm. f.) Bedd.) yang berbeda-beda yaitu 1%, 5%, 10% dan 15%.

## Uji Daya Hambat
Setelah membuat suspensi bakteri Escherichia  coli yang  telah  disesuaikan dengan  standar  kekeruhan  Mac  Farland 0,5,  kemudian  di streak di  media Mueller Hinton agar  dengan  menggunakan  kapas lidi  steril.  Disk  Cotrimoxazole  dan  disk ekstrak akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm. f.)  Bedd.)  ditanam  sesuai dengan  masing-masing  konsentrasi  yang sudah  ditentukan.  Kemudian  dilakukan inkubasi  pada  suhu  37oC  selama  24 jam. Tahap  selanjutnya  ialah  mengamati  zona hambatan  yang  berupa  daerah  bening yang  terbentuk  di  sekitar  disk  dan melakukan pengukuran terhadap diameter zona  hambat  yang  terbentuk  dengan menggunakan jangka sorong.

## Pengamatan
1. Pengamatan Utama Pengujian bakteri Escherichia coli
menggunakan metode difusi untuk menentukan  aktivitas  agen  antimikroba. Metode  ini  dilakukan  pada  media Mueller Hinton agar.  Aktivitas  mikroba  diuji dengan  menggunakan  penentuan  MIC
( Minimum Inhibitory Concentration ). Minimum Inhibitory
Concentration merupakan  konsentrasi  terendah  yang masih  mampu  menghambat  pertumbuhan organisme  (Sacher et  al .,  2000).  Agen antimikroba  yang  dipakai  adalah  ekstrak akar  Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm. f.)  Bedd.)  dengan  konsentrasi  1%, 5%, 10%, dan 15%. Pengamatan dilakukan dengan cara mengukur diameter  dari  daya  hambat  ekstrak  akar Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.) Bedd.) terhadap bakteri Escherichia coli .
2.  Kontrol  Positif  Obat  yang  Dapat
Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli
Salah satu obat antimikroba yang digunakan adalah
Cotrimoxazole. Cotrimoxazole
merupakan obat antimikroba golongan trimetoprim- sulfametoksazol  dengan  spektrum  luas, obat  tersebut  digunakan  untuk  mengobati penyakit  diare  yang  disebabkan  oleh bakteri, salah satunyaadalah bakteri Escherichia
coli . Konsentrasi Cotrimoxazole yang digunakan antara lain 1%, 5%, 10%, dan 15%.

## Analisis Data
Teknik  analisis  data  dalam  penelitian  ini menggunakan  cara  pengukuran  diameter zona  hambat  ekstrak  etanol  akar  Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) terhadap  bakteri Escherichia  coli pada cawan  petri  menggunakan  jangka  sorong dengan  satuan  milimeter  (mm).  Hasil pengujian dengan cara pengukuran diameter zona hambat ekstrak etanol akar Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)
Bedd.)  terhadap  bakteri Escherichia  coli menggunakan jangka sorong juga disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  foto, serta  hasil  pengukuran  zona  hambat dibandingkan  dengan  klasifikasi  respon hambatan  ekstrak  terhadap  pertumbuhan bakteri dan standar CLSI.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dalam  penelitian  ini  dilakukan  uji daya hambat ekstrak etanol akar tumbuhan Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  terhadap  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli .  Penelitian  ini didasari  dengan  adanya  hasil  penelitian Handayani et al . (2016) yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  akar
Kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.) Bedd.)  positif  mengandung  senyawa metabolit sekunder berupa alkaloid, saponin  dan  tanin  yang  diketahui  dapat memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri. Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini  ialah untuk  mengetahui  apakah  ekstrak  etanol akar  tumbuhan  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd.) dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia  coli dengan  konsentrasi  1%, 5%, 10% dan 15%.
Ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah ekstrak  kental  yang  diperoleh  dengan menggunakan  metode  ektraksi  sokletasi. Sokletasi  adalah  ekstraksi  menggunakan pelarut  yang  selalu  baru  yang  umumnya dilakukan  dengan  alat  khusus  sehingga terjadi  ekstraksi  kontinu  dengan  jumlah pelarut  yang  relatif  konstan  dengan adanya pendingin balik (Istiqomah, 2013). Rendemen  ekstrak  etanol  akar  Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) yang  didapatkan  pada  penelitian  ini  yaitu 0,0434%.  Menurut  Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat  (2000), rendemen  adalah  perbandingan  antara ekstrak  yang  diperoleh  dengan  simplisia awal.
Metode  yang  digunakan  untuk mengetahui  ada  tidaknya  zona  hambat dari ekstrak etanol akar tumbuhan Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.)  Bedd.) ialah  metode  penanaman  kertas  cakram ( paper disc) Kirby-Bauer. Pada metode ini,
penentuan  aktivitas  didasarkan  pada kemampuan  difusi  dari  zat  antimikroba dalam lempeng agar yang telah diinokulasikan  dengan  mikroba  uji.  Hasil pengamatan  yang  akan  diperoleh  berupa ada  atau  tidak  nya  zona  hambatan  yang akan terbentuk disekeliling zat antimikroba pada  waktu  tertentu  masa  inkubasi. Metode  kertas  cakram  ( paper  disc) ini memiliki kelebihan dan kekurangan. Kelebihannya  adalah  mudah  dilakukan, tidak  memerlukan  peralatan  khusus  dan relatif  murah.  Sedangkan  kelemahannya adalah ukuran zona bening yang terbentuk tergantung oleh kondisi inkubasi, inokulum, predifusi dan preinkubasi  serta  ketebalan  medium. Apabila  keempat  faktor  tersebut  tidak sesuai  maka  hasil  dari  metode  kertas cakram  ( paper  disc) biasanya  sulit  untuk diintepretasikan. Selain itu, metode kertas cakram  ( paper  disc) ini  tidak  dapat diaplikasikan  pada  mikroorganisme  yang pertumbuhannya lambat dan mikroorganisme  yang  bersifat  anaerob obligat (Brooks et al., 2008).
Pengujian  ini  dilakukan  dengan perlakuan yang sama antara kontrol positif yang  berupa  antibiotik  Cotrimoxazole  dan ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  dengan  variasi konsentrasi yaitu 1%, 5%, 10%, dan 15%. Cotrimoxazole  adalah  obat  yang  berupa sediaan  kombinasi  yang  terdiri  dari trimetoprim dan sulfametoksazol dengan perbandingan 1:5 yang mempunyai aktivitas  bakterisida  (subtansi/bahan  yang
dapat membunuh bakteri). Antibiotik Cotrimoxazole  dapat  digunakan  untuk mengobati berbagai infeksi, salah satunya adalah  infeksi  saluran  pencernaan  seperti diare  yang  disebabkan  oleh  bakteri Escherichia coli . Escherichia coli merupakan  bakteri  gram  negatif  yang dapat  dihambat  oleh  Cotrimoxazole  yang merupakan  antibiotik  dengan  spektrum luas  (dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri gram positif maupun gram negatif).
Menurut standar Clinical and Laboratory  Standart Institute (CLSI),  zona diameter    antibiotik    Cotrimoxazole (Trimethoprim-Sulfamethoxazole) terhadap  bakteri Escherichia  coli adalah Resistant ≤10  mm, Intermediate 11-  15 mm, dan Susceptible ≥16 mm.
Hasil  uji  daya  hambat  ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  dan  kontrol positif  antibiotik  Cotrimoxazole  terhadap bakteri Escherichia  coli diperoleh  melalui pengamatan yang dilakukan dengan 3 kali pengulangan.  Daya  hambat  ekstrak  yang diuji  ditunjukkan  dengan  adanya  zona bening  di  sekitar  kertas  cakram  ( disc) yang  merupakan  daerah  difusi  ekstrak yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri. Besar  diameter  dari  zona  hambat  yang terbentuk  dapat  menunjukkan  kekuatan antibakteri  dari  ekstrak  yang  digunakan (Oroh et al., 2014).
Berdasarkan dari hasil
penelitian,  antibiotik  Cotrimoxazole mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli pada  semua konsentrasi.  Rata-rata  diameter  zona hambat  pada  konsentrasi  1%  sebesar 9,36  mm  dengan  interpretasi  daya hambat  termasuk Resistant ,  pada konsentrasi  5%  sebesar  15,13  mm dengan  interpretasi  daya  hambat
termasuk
Susceptible , pada konsentrasi  10%  sebesar  18,80  mm dengan  interpretasi  daya  hambat termasuk Susceptible , dan pada konsentrasi  15%  sebesar  22,53  mm dengan  interpretasi  daya  hambat termasuk Susceptible . Sedangkan dari hasil  rata-rata  diameter  zona  hambat untuk  ekstrak  etanol  akar  tumbuhan Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)    terhadap  bakteri Escherichia coli baik pada konsentrasi 1%,  5%,  10%,  dan  15%  yaitu  0  mm, yang  artinya  ekstrak  etanol  akar
Kelakai ( Stenochlaena
palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  pada  konsentrasi 1%,  5%,  10%,  dan  15%  tidak
mempunyai
kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri

## Escherichia coli.
Hasil  negatif  yang  didapatkan  pada penelitian  ini  dapat  disebabkan  karena pemilihan  konsentrasi  yang  digunakan dalam  uji  daya  hambat  ini  masih  terlalu rendah  dan  belum  termasuk  ke  dalam Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC) yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia coli .  Pada konsentrasi yang  digunakan  kemungkinan  zat  aktif yang  berperan  sebagai  antibakteri  pada ekstrak  tumbuhan  uji  jumlahnya  sedikit sehingga belum dapat menghambat aktivitas  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli (Sulastrianah et  al ., 2014).    Sehingga untuk penelitian selanjutnyadapat dinaikkan  konsentrasi  ekstrak  tumbuhan yang akan diujikan daya hambatnya untuk mendapatkan Minimum
Inhibitory Concentration (MIC).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa:
1.  Pada  konsentrasi  1%,  5%,  10%,
maupun  15%  ekstrak  etanol  akar Kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.  f.)  Bedd.)  tidak  terdapat  zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli .
2.  Ekstrak etanol akar Kelakai ( Stenochlaena  palustris (Burm.  f.) Bedd.)  pada  konsentrasi  1%,  5%, 10%,  maupun  15%  masih  belum

## mampu menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli.

## DAFTAR PUSTAKA
Adyanastri,  F.  2012.  “ Etologi dan Gambaran  Klinis  Diare  Akut  di  RSUP dr.  Kariadi  Semarang” .  Semarang:
Karya Tulis Ilmiah Universitas
Diponegoro Semarang.
Bhaskara,  B.M.,  Budiasa,  K.,dan  Tono,
P.G.  K.  2012.  “ Uji Kepekaan
Escherichia  coli  sebagai  Penyebab Kolibasilosis pada Babi Muda terhadap  Antibiotika  Oksitetrasiklin, Streptomisin,
Kanamisin, dan Gentamisin ”. Denpasar: Jurnal
Indonesia  Medicus  Veterinus.  2012
1(2): 186-201.
Campbell,  N.A.,  J.B  Reece,  dan  I.G, Mitchell.  2005. Biologi  Edisi  Ke-
5. Jakarta: Erlangga.
Clinical  Laboratory  Standart  Institute.
2013. Performance Standart for Antimikrobial  Susceptibility  Testing; Twentieth  Information  Supplement. USA. Abstrak diunduh dari http://www.techstreet.com/CLSI.htm diakses pada tanggal 10 April 2017.
Darsana,  I.G.O.  2012.  “ Potensi  Daun Binahong (Andredera cordifolia
(tenore)  steenis  dalam  Menghambat Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia  coli Secara  In  Vitro ” . Jakarta:  Jurnal Indonesia  Medicus  Veterinus.  2012 1(3):337-351.
Dalimartha,  S.  2000. Atlas  Tumbuhan Obat Indonesia Jilid I . Jakarta: Trubus Agriwidya. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia edisi IV . Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  1995. Materia  Medika Indonesia Jilid IV . Jakarta.
Desmiaty,  Y.,  Ratih  H.,  Dewi,  M.A.,  dan Agustin, R. 2008. “ Penentuan Jumlah Tanin  Total  pada  Daun  Jati  Belanda (Guazuma  ulmifolia  Lamk)  dan  Daun Sambang  Darah  (Excoecaria  bicolor Hassk.)  Secara  Kolorimetri  dengan Pereaksi Biru Prusia” . Jurnal:
Ortocarpus . 2008 2(8): 106-109.
Dwidjoseputro,  D.  1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi . Jakarta: Djambatan.
Fahmi, F. 2008. “Daya Antibakteri Ekstrak Metanol  Rimpang  Lengkuas  Merah (Alpinia purpurata K. Schum) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcusaureus dan
Escherichia  coli  Secara  In  Vitro” . Pekan Baru: Skripsi Universitas Riau.
Farnsworth,  N.  R.  1966. Biological  and Phytochemical  Screening  of  Plants.
Journal of Pharmaceutical Sciences .
Fitriani. 2011. “Ekstrak  Daun  Kersen (Muntingia calabura)
untuk Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Streptococcus  pyogenes ”.  Palangka
Raya:  Karya  Tulis  Ilmiah  Universitas Muhammadiyah Palangkaraya.
Gaman, P.M., dan Sherrington, K.B. 1992.
Ilmu Pangan: Pengantar Ilmu Pangan, Nutrisi,  dan  Mikrobiologi  edisi  Kedu a.
Yogyakarta: UGM Press.
Ganiswarna  S.G.  1995. Farmakologi  dan
Terapi  edisi  4 .  Jakarta:  Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia.
Gunawan,  D.,  dan  Mulyani,  S.  2004. Ilmu Obat  Alam  (Farmakognosi) .  Jakarta:
Penebar Swadaya.
Handayani,R.,  Fahruni,  dan  Novaryatiin,
S.  2016.  “ Potensi  Tumbuhan  Kelakai (Stenochlaena  palustris  (Burm.  f.)
Bedd.) Sebagai Afrodisiaka” . Palangka  Raya:  Laporan  Penelitian Dosen Pemula Universitas Muhammadiyah Palangkaraya.
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisa Tumbuhan . Penerjemah: Kosasih
Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. Terbitan  Kedua.  Bandung:  Penerbit ITB.
Haryati, N.A., Chairul, S dan Erwin. 2 . “ Uji Toksisitas  Dan  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Daun Merah Tanaman Pucuk Merah  (Syzygium  myrtifolium  Walp.)
Terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus Dan Escherichia coli”.
Samarinda:  Jurnal  Kimia  FMIPA Universitas Mulawarman.
Hembing.  2003. Tanaman  Berkhasiat Obat di Indonesia . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Horvath,  P.  J.  1981.  “ The  Nutrional  and Eculogical Significance of Acer Tanins and Related Polyphenols” . New York:
Thesis Cornell University.
Istiqomah.  2013. “Perbandingan  Metode Ekstraksi  Maserasi  dan  Sokletasi terhadap  Kadar  Piperin  Buah  Cabe Jawa  (Piperis  Retrofracti  Frust us)”.
Jakarta:  Skripsi  Universitas  Islam
Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
Jawetz  E.,  J.L.  Melnick,  E.A.  Adelberg,
G.F.  Brooks,  J.S.  Butel,  L.N  and
Ornston. 1995. Mikrobiologi
Kedokteran  edisi  20 .  San  Francisco:
University of California.
Juffrie, M. 2010. Buku
Ajar
Gastroenterologi  -  Hepatologi  Jilid  1. Jakarta: Balai Penerbit IDAI.
Lenny,  S.  2006.  “ Senyawa  Flavonoid, Fenilpropanoida dan Alkaloida” .
Medan: Karya Tulis Ilmiah Fak. MIPA. Universitas Sumatra Utara.
Kairupan  C.P.  Fatimawali  L.W.A.  2  .  “ Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun Kembang  Sepatu  (Hibiscus  rosa- sinensis L )  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri  Escherichia  coli” .  Manado:
Jurnal  Ilmiah  Farmasi  Universitas Sam Ratulangi.
Khunaifi  M.  2  .  “ Uji  Aktifitas  Antibakteri Ekstrak  Daun  Binahong  (Anredera
cordifolia  (Ten)  Steenis  Terhadap akteri Staphyilococcus aureua 16 dan Pseudomonas  aeruginosa)”. Malang:
Skripsi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang. Maharani,  D.M.,  Haidah,  S.N.,  dan Haiyinah. 2005. “ Studi Potensi Kelakai (Stenochlaena palustris (Burm.f.)  Bedd)  Sebagai  Pangan
Fungsional” . Banjarbaru: Program Kreativitas Mahasiswa Penelitian Jurusan Budidaya Pertanian Universitas Lambung Mangkurat.
MacKinnon.  2000. Ekologi  Kalimantan Edisi III . Jakarta.
Meira,  R.  2014. Obat  Herbal  Tradisional .
Semarang: UM Semarang.
Munif.  2009. Escherichia  coli  Disekitar  Air Minum  Kita. Bogor:  Institut  Pertanian Bogor.
Natasia,  G.  2016.  “ Uji  Daya  Hambat Ekstrak  Etanol  Daun  Sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam. )  Terhadap Escherichia coli”. Palangka Raya: KTI
Universitas Muhammadiyah Palangkaraya.
Ningrum,  H.P.,  Laili,  F.Y,  dan  Eka,  A.  2  .
“ Uji  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Sawo Manila Terhadap E.coli dan Implemantasinya dalam Pembelajaran Peranan Bak teri”.
Pontianak:  Program  Studi  Pendidikan Biologi  FKIP  Universitas  Tanjung
Pura.
Notoatmodjo, S. 2007.
Promosi
Kesehatan dan Ilmu Perilaku . Jakarta:
Rineka Cipta.
Notoatmodjo, S. 2010. Metodologi Penelitian Kesehatan . Jakarta: Rineka Cipta.
Oroh,S.B.,  Kandon,  F.E.F.,  Pelealu,  J., dan  Pandiangan,  D.  2014.  “ Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Metanol  Selaginella delicatula  dan  Diplazium  dilatatum Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli” .
Manado: Jurnal Ilmiah Farmasi Universitas Sam Ratulangi. 2014 3(2): 2302-2493. Pakekong, E.D., Homenta, H.,
Mintjelungan,  C.N.  2016.  “ Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Bawang  Bombay (Allium cepa L ) Terhadap
Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus aureus  Secara  In  Vitro” .  Manado: Jurnal  Ilmiah  Farmasi  Universitas Sam  Ratulangi.  2016  1(5):  2302- 2493.
Pan.  X.,  F.  Chen,  T.  Wu,  H.  Tang  dan  Z. Zhao.  2009. The  acid,  Bile  Tolerance and Antimicrobial Property of Lactobacillus  acidophilus  NIT. China:
Jurnal Food Control.
Pelczar,  M.J  dan  Chan,  E.C.S.  2008.
Dasar-Dasar MikrobiologiJilid 2 . Jakarta: UI Press.
Pray oga  E.  2  .  “ Perbandingan  Efek EkstrakDaun  Sirih  Hijau  (Piper  betle L.)  Dengan  Metode  Difusi  Disk  Dan
Sumuran
Terhadap
PertumbuhanBakteri  Staphylococcus
aureus”. Jakarta:  Laporan  Penelitian Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah.
Prihatman,  K.  2001. Saponin  untuk Pembasmi  Hama  Udang .Bandung:
Laporan Hasil Penelitian Pusat
Penelitian Perkebunan Gambung.
Ramadanti,  I.  A.  2008. Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Bawang  Putih (Allium sativum Linn) Terhadap
Bakteri  Escherichia  coli  In  Vitro . Lampung:Karya  Tulis  Ilmiah  Fakultas Kedokteran Universitas Lampung.
Royani,  I.  2012. “Ekstrak  Bawang  Putih (Allium sativum) sebagai Penghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli” .  Palangka  Raya:  Karya  Tulis
Ilmiah  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.
Sastrohamidjojo,  H.  1985. Kromatografi
Edisi I . Yogyakarta: Penerbit Liberty.
Sinthamurniawati.  2006.  “ Faktor-Faktor Risiko  Kejadian  Diare  Akut  Pada Balita” .  Semarang:  Tesis  Universitas
Diponegoro
Smith-Keary P. F. 1988. Genetic Elements in Escherichia coli . London: Macmillan
Molecular Biology series.
Sudirga, S.K. 2012. “ Pemanfaatan Tumbuhan  Sebagai  Obat  Tradisional Di Desa Trunyan Kecamatan
Kintamani Kabupaten Bangli” . Bali: E-
Journal  Bumi  Lestari  Fakultas  MIPA Universitas Udayana.
Sulastrianah Imran  dan Fitria E.S.  2  . “ Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Sirsak (Annona  muricata L )  dan  Daun  Sirih (Piper betle L ) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli” .  Sulawesi  Tenggara:  Skripsi Universitas Halu Oleo.
Syamsuni.  2006. Ilmu  Resep .  Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Takoy,  Damianus,  M.,  Riza  Linda,  Irwan Lovadi.  2013. “Tumbuhan  Berkhasiat Obat  Suku  Dayak  Seberuang  Di Kawasan  Hutan  Desa  Ensabang Kecamatan Sepauk
Kabupaten Sintang” . Pontianak: Jurnal Protobiont Fakultas MIPA Universitas Tanjungpura.
Taufiq,  S.,  Umi,  Y,  dan  Siti H.  2  .  “ Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Biji  Buah  Pepaya  (Carica  papaya  L.) Terhadap Escherichia coli dan Salmonella  typhi”. Bandung:  Karya Tulis Ilmiah
Fakultas MIPA Universitas Islam Bandung.
Thomas,  A.  N.  S.  1989. Tanaman  Obat Tradisional . Yogyakarta: Kanisius.
Tyler,  V.E.  1988. Pharmacognosy.  Ninth Edition . Philadelphia: Lea and Febiger.
Steenis,  V.C.G.G.J.  2003. Flora .  Jakarta: P.T. Pradya Paramita.
Volk,  W.A.,  dan  Wheeler,  M.F.  1989.
Mikrobiologi DasarJilid 2 .Jakarta:
Erlangga.
Westerndarp,  H.  2006. Effect  of  Tanins  in Animal  Nutrition .  Dutsch:  Tieraztl
Wochenschr.