## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF Liosina paradoxa SPONGE ETHANOL EXTRACT COLLECTED FROM MANTEHAGE ISLANDS
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Liosina paradoxa YANG DIKOLEKSI DARI PULAU MANTEHAGE
Desy Khartika Membri 1)* , Adithya Yudistira 1) , Surya Sumantri Abdullah 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *desykhartika78@gmail.com

## ABSTRACT
Liosina  paradoxa  sponge  is  one  of  the  marine  biota  components  that  make  up  coral  reefs  which  has bioactive  potential  which  has  not  been  widely  utilized.  These  marine  animals  contain  active  compounds whose percentage of activity is greater than those produced by land plants. This study aims to determine the antioxidant  activity  of  the Liosina  paradoxa  sponge.  This research  is  a  laboratory  experiment  with testing the ethanol extract of the sponge Liosina paradoxa with the DPPH [1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl] method to  test  its  antioxidant  activity  using  a  UV-Vis  spectrophotometer  at  a  wavelength  of  517  nm.  The  results showed that the ethanol extract of the Liosina paradoxa sponge was proven to have antioxidant activity in each concentration. The highest concentration has free radical scavenging activity by reaching a percentage of 54.70%.
Keywords : Liosina paradoxa sponge, Antioxidant, DPPH, Mantehage

## ABSTRAK
Spons Liosina  paradoxa merupakan  salah  satu  komponen  biota  laut  penyusun  terumbu  karang  yang mempunyai  potensi  bioaktif  yang  belum  banyak  dimanfaatkan.  Hewan  laut ini mengandung  senyawa  aktif yang  persentase  keaktifannya  lebih  besar  dibandingkan  dengan  senyawa-senyawa  yang  dihasilkan  oleh tumbuhan  darat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari  spons Liosina paradoxa .  Penelitian  ini  merupakan  eksperimental  laboratorium  dengan  pengujian  terhadap  ekstrak  etanol spons Liosina  paradoxa dengan  metode  DPPH  [ 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ]  untuk  menguji  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Hasil penelitian  menunjukkan  ekstrak  etanol  spons Liosina  paradoxa terbukti  memiliki  aktivitas  antioksidan disetiap  konsentrasi  pengujian.  Konsentrasi  tertinggi  memiliki  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dengan mencapai persentase 54,70%.
Kata Kunci : Spons Liosina paradoxa , Antioksidan, DPPH, Mantehage

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan terbesar di dunia yang mempunyai panjang pantai 99.093  km yang  kaya  akan  terumbu  karang  dan biota  laut  lainnya.  Salah  satu  biota  yang  banyak diteliti  adalah  spons.  Wilayah  laut  Indonesia merupakan  salah  satu  pusat  penyebaran  terbesar spons  di  dunia  dan  diperkirakan  terdapat  sekitar 830  spesies  yang  hidup  tersebar  di  wilayah  ini (Badan  Informasi Geospasial, 2015).
Spons  merupakan  salah  satu  komponen biota penyusun terumbu karang yang  mempunyai potensi bioaktif yang belum banyak dimanfaatkan.  Hewan  laut  ini  mengandung senyawa aktif yang persentase keaktifannya lebih besar  dibandingkan  dengan  senyawa-senyawa yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  darat  (Suparno, 2005).
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut yang  sangat  prospektif  sebagai  sumber  senyawa bahan-bahan  alami  antara  lain  peptida,  terpenoid, steroid,  asetogenin,  alkaloid,  halida  siklik  dan senyawa nitrogen. Senyawa-senyawa ini memiliki aktivitas farmakologis seperti antifouling, antitumor,  anti-inflamasi,  antivirus,  antibakteri, dan antimalaria (Pasodung, dkk, 2018).
Radikal  bebas  merupakan  suatu  molekul yang  memiliki  elektron  tidak  berpasangan  dalam orbital terluarnya sehingga sangat reaktif. Senyawa radikal bebas ini cenderung mengadakan reaksi berantai yang apabila terjadi di dalam tubuh maka  dapat  mengakibatkan  kerusakan-kerusakan pada  sel  di  dalam  tubuh  yang  kemudian berlangsung  terus  menerus.  Tubuh  manusia memilki  sistem  pertahanan  alami  terhadap serangan  radikal  bebas  terutama  yang  terjadi melalui  peristiwa  metabolisme  sel  normal  dan peradangan  yang  disebut  antioksidan  endogen. Jumlah  radikal  bebas  dapat  meningkat  karena beberapa  faktor  yang  menjadi  penyebab  seperti stress,  radiasi,  asap  rokok  dan  polusi  lingkungan (Wahdaningsih et al. , 2011).
Radikal  bebas  yang  masuk  ke  dalam tubuh dan menyerang sel-sel yang sehat kemudian terakumulasi dan dari kerusakan tersebut berkontribusi  terhadap  beberapa  penyakit  dan menyebabkan  kondisi  yang  biasa  disebut  sebagai penuaan  dini  (Liochev,  2013).  Selain  penuaan dini,  radikal  bebas  juga  dapat  menyebabkan penyakit  lain  seperti  arteriosklerosis  dan  kanker yang    disebabkan  oleh  kerusakan  jaringan  akibat reaksi oksidasi (Miryanti et al. , 2011).
Antioksidan  sendiri  dapat  didefinisikan sebagai  suatu  senyawa  yang  mampu  menunda, memperlambat, atau menghambat reaksi oksidasi. Senyawa  antioksidan  dapat  melawan  radikal bebas  atau Reactive  Oxygen  Species (ROS)  yang terbentuk  dari  hasil  metabolisme  dalam  tubuh (Miryanti et  al. ,  2011).  Antioksidan  diketahui dapat  menghambat  kerja  radikal  bebas.  Sebagai salah satu upaya untuk mengoptimalkan pemanfaatan bahan alam laut Indonesia, dilakukan  penelitian  dengan  tujuan  awal  menguji aktivitas antioksidan dan mengidentifikasi senyawa  berkhasiat  sebagai  antioksidan  (Hanani, Mun’im dan Sekarini, 2006).
Penentuan nilai aktivitas antioksidan pada penelitian  ini  menggunakan  metode  DPPH. Metode  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ) dipilih karena metode ini  adalah  metode  sederhana,  mudah,  cepat  dan peka  serta  hanya  memerlukan  sedikit  sampel untuk evaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam sehingga digunakan secara luas untuk menguji  kemampuan  senyawa  yang  berperan sebagai pendonor elektron (Ridho, A, dkk, 2013).
Telah  dilaporkan  dalam  beberapa  dekade terakhir  bahwa  telah  ditemukan  50%  senyawa bioaktif  yang  berasal  dari  invertebrata  laut khususnya  dari  filum  porifera  (Asaf,  dkk,  2012). Berbagai  senyawa  kimia  yang  telah  berhasil diisolasi  dari  spons  yaitu  alkaloid,  terpenoid, poliketida,  acetogenin  dan  lain-lain  (Muniarsih, 2003).  Ekstrak  metabolit  sekunder  dari  spons memiliki  sifat  bioaktivitas  sebagai  sitotoksik, antitumor,  antileukimia,  antivirus,  antibakteri, antifungi, immunomodulator ,  dan  antiinflamasi (Suparno, 2005).
Berdasarkan  kajian  Calbiochem,  sebuah perusahaan industri kimia, 30% dari seluruh obat- obatan  antikanker  dan  antitumor  yang  dihasilkan dunia kelak akan berasal dari terumbu karang dan spons  di  wilayah  Indonesia  dan  Australia (Nurhayati,  2009).  Untuk  itulah  maka  penelitian tentang antioksidan menjadi sangat penting dalam upaya  mencari  alternatif  senyawa  alami  yang berfungsi sebagai antioksidan.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober sampai November 2020 di Laboratorium Farmasi  Lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  dan  di
V1.M1 = V2.M2
Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan Fakultas Pertanian, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk dari penelitian ini adalah eksperimental  laboratorium  yang  akan  menguji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode  DPPH  [ 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ]  dari ekstrak  etanol  biota  laut  spons Liosina  paradoxa yang dikoleksi dari pulau mantehage.
Alat dan Bahan Alat
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah scuba diving , sarung tangan, masker,  pisau,  talenan,  kertas  label,  spidol permanen,  tissue  kering, cool  box ,  kamera underwater , zipper  lock  bag ,  labu  ukur  10  mL ( pyrex ),  Erlenmeyer  200  mL,  cawan  petri,  wadah botol, spatula, gelas arloji, timbangan digital (AE ADAM),  spektrofotometer  UV-Vis,  aluminium foil,  corong,  mikro  pipet,  tabung  reaksi, rotary evaporator .

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  kertas  saring,  etanol  95%,  DPPH  [ 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ],  ekstrak  etanol  dari  spons Liosina  paradoxa dan  serbuk  vitamin  C p.a sebagai pembanding.

## Prosedur Penelitian
1. Pengambilan Sampel
Sampel  ini  diambil  di  perairan  Pulau Mantehage,
Provinsi
Sulawesi
Utara menggunakan  alat  bantu  (Masker  dan  Snorkel). Sebelum  diambil  sampel  dipotret  menggunakan kamera  bawah  laut,  setelah  diambil  dimasukan dalam kantong plastik jepit yang sudah disiapkan dan disimpan dalam kotak pendingin lalu dibawah ke  Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## 2. Preparasi Sampel
Spons Liosina  paradoxa yang  sudah diambil dicuci kembali dan dipotong-potong kecil lalu  dimasukkan  ke  dalam  wadah  botol,  sampel
yang  di  dalam  botol  diisi  dengan  etanol  95% sebanyak 200 mL.

## 3. Ekstraksi
Sampel  spons Liosina  paradoxa sebanyak  240  g dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  sebanyak 200  mL  dengan  3  kali  pengulangan  selama  24 jam. Sampel kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil yang diperoleh dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu 40 0 C sehingga menghasilkan ekstrak kental/ekstrak  kasar  dari  sampel  spons Liosina paradoxa .

## 4. Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak  100  mg  ekstrak  spons Liosina paradoxa dilarutkan  dalam  100  mL  etanol  95%. Dengan  masing-masing  konsentrasi  0,5,  0,6  dan 0,7  ppm,  dihitung  dengan  menggunakan  rumus pengenceran, yaitu:
Dari masing-masing hasil yang didapatkan dari hasil V1 dipipet dan ditambahkan etanol 95% hingga mencapai tanda batas (10 mL), kemudian  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi dan  ditutup  dengan  menggunakan  aluminium  foil untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.

## 5. Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan  dalam  etanol  95%  sebanyak  100  mL, diencerkan menggunakan rumus pengenceran dan diuji  menggunakan  spektrofotometer  sampai mendapatkan nilai absorbansiya.
Selanjutnya larutan yang dibuat untuk uji aktivitas  antioksidan  yaitu  ekstrak  etanol  spons Liosina  paradoxa dipipet  sebanyak  2  mL dimasukan kedalam tabung reaksi dengan masing- masing  konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  ppm  dan  di tambahkan 2 mL larutan DPPH ke dalam masing- masing  kosentrasi  dan  divortex  selama  5  detik sebanyak 3 kali pengulangan.

## 6. Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin C p.a ditimbang sebanyak 10 mg dan  dilarutkan  dalam  etanol  95%  sebanyak  10 mL, kemudian buat larutan stok untuk konsentrasi 0,5,  0,6  dan  0,7  ppm  dengan  ditambahkan  etanol 95%  sampai  tanda  batas  (10  mL)  pada  masing-
masing  larutan  sebanyak  3  kali  pengulangan. Sampel  vitamin  C p.a di  pipet  sebanyak  2  mL dimasukan kedalam tabung reaksi dengan masing- masing  konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  ppm  dan  di tambahkan 2 mL larutan DPPH kedalam  masing- masing  kosentrasi  dan  divortex  selama  5  detik sebanyak  3  kali  pengulangan.  diuji  pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
7. Pengujian Larutan Kontrol DPPH dan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Larutan kontrol DPPH diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  517  nm  sebagai  absorbansi  kontrol dalam pengujian ini. Sampel diinkubasi selama 30 menit  pada  suhu  37 0 C.  Untuk  mengetahui aktivitas  dari  penangkal  radikal  bebas  tersebut, diuji  pada  spektrofotometer.  Diukur  absorbansi pada  spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm setelah di inkubasi selama 30 menit  berubahnya  warna  ungu  menjadi  kuning
menunjukkan  bahwa,  masing-masing  konsentrasi menunjukkan efisiensi penangkal radikal bebas. Prinsip  uji  aktivitas  antioksidan  suatu  senyawa dengan  DPPH  ditunjukkan  oleh  penurunan absorban  pada  panjang  gelombang  517  nm. Dimana  DPPH  mempunyai  serapan  yang  kuat pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan  warna violet.  Penurunan  serapan  DPPH    berlangsung pada  saat  elektron  sunyi  menjadi  berpasangan karena  adanya  antioksidan.  Serapan  menjadi menurun  dan  menyebabkan  hilangnya  warna secara stoikiometri sesuai dengan jumlah elektron yang ditangkap (Pratiwi dan Sirumapea, 2012).
Kemudian diamati perbandingannya dengan  vitamin  C  p.a  sebagai  standar.  Aktivitas penangkapan  radikal  bebas  (persen  inhibisi) dihitung  sebagai  persentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan rumus:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Liosina paradoxa dengan vitamin C ( p.a ).
Konsentrasi Pengulangan Rata-rata I II III 0,5 ppm Ekstrak 54,60 % 51,50 % 53,00 % 53,03 % Vitamin C 96,80 % 92,70 % 97,60 % 95,70 % 0,6 ppm Ekstrak 51,80 % 51,80 % 54,40 % 52,67 % Vitamin C 97,50 % 98,60 % 98,80 % 98,30 % 0,7 ppm Ekstrak 51,50 % 56,60 % 56,00 % 54,70 % Vitamin C 98,80 % 99,50 % 98,90 % 99,06 %
Pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol spons Liosina  paradoxa dengan  menggunakan metode  DPPH.  Pada  penelitian  yang  telah dilakukan terdahulu cara ini paling sering dipakai untuk menguji aktivitas antioksidan sampel secara in  vitro serta  merupakan  metode  yang  paling sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka  serta  hanya memerlukan  sedikit  sampel  untuk  mengevaluasi aktivitas  antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam sehingga  digunakan  secara  luas  untuk  menguji kemampuan  senyawa  yang  berperan  sebagai pendonor electron (Molyneux,
2004).
Spektrofotometer UV-Vis digunakan untuk
mengukur  panjang  gelombang  dengan  panjang gelombang optimum 517 nm. Panjang gelombang 517 nm merupakan panjang gelombang maksimum DPPH. Panjang gelombang maksimum  akan  memberikan  serapan  paling optimal dari larutan uji dan memberikan kepekaan yang  paling  besar,  sehingga  diharapkan  dapat diperoleh  nilai  absorbansi  yang  optimal  pada sampel (Rizkayanti et al ., 2017).
Konsentrasi yang digunakan pada pengujian  ekstrak  etanol  spons Liosina  paradoxa adalah  0,5,  0,6  dan  0,7  ppm.  Sebelum  larutan sampel  diuji,  sampel  diinkubasi  terlebih  dahulu
pada suhu  37 0 C  di  tempat gelap  selama  30  menit hal  ini  dilakukan  untuk  menghindari  kontaminasi dan  pengujian  aktivitas  antioksidan  diinkubasi pada suhu 37 0 C karena pada suhu ini reaksi antara radikal DPPH dengan senyawa metabolit sekunder  berlangsung  lebih  optimal  (Aji,  2014). Setelah  sampel  diinkubasi,  kemudian  masing- masing  ekstrak  dilakukan  pengukuran  absorbansi dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis dengan  panjang  gelombang  517  nm.    Pada  tiap konsentrasi dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan. Pembanding yang digunakan sebagai kontrol positif yaitu vitamin C p.a karena berfungsi  sebagai  antioksidan  sekunder  yaitu menangkap  radikal  bebas,  mencegah  terjadinya reaksi  berantai,  aktivitas  antioksidannya  sangat tinggi dan vitamin C lebih polar dari vitamin yang lain. Vitamin C mempunyai gugus hidroksi bebas yang  bertindak  sebagai  penangkap  radikal  bebas (Isnidar et al ., 2011).
Menurut  Molyneux  (2004)  nilai  standart kadar  antioksidan  adalah  50%.  Berdasarkan  hasil yang diperoleh pada Tabel 1 menunjukkan bahwa pengukuran  persen  inhibisi  pada  ekstrak  etanol spons Liosina  paradoxa memiliki  aktivitas antioksidan  dan  mengalami  peningkatan  pada konsentrasi  tertinggi  yaitu  0,7  ppm  sebesar 54,70%. Peningkatan persen inhibisi pada ekstrak menandakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  yang ditambahkan  mempengaruhi  kemampuan  ekstrak dalam  meredam  radikal  bebas.  Artinya  dengan semakin  meningkatnya  konsentrasi  sampel  yang kemudian  ditambahkan  dengan  pereaksi  radikal bebas  tersebut,  maka  diharapkan  nilai  absorbansi yang  dihasilkan  semakin  menurun  dan  persen inhibisi akan naik. Penurunan absorbansi tersebut menandakan  bahwa  sampel  spons Liosina paradoxa mengandung senyawa aktif antioksidan dan  mampu  menunjukkan  perannya  dalam mengoksidasi  senyawa  radikal  bebas  tersebut. Kondisi  ini  dapat  dilihat  dari  perubahan  warna dasar  radikal  DPPH  (ungu)  menjadi  semakin berkurang dengan meningkatnya deret konsentrasi sampel  (Shivapprasad,  dkk.,  2005).  Namun  hal tersebut  tumpang  tindih dari  hasil  yang  diperoleh pada sampel spons Liosina paradoxa menunjukkan nilai persen inhibisi pada konsentrasi  0,5  ppm  lebih  tinggi  yaitu  53,03% dibandingkan konsentrasi 0,6 ppm yaitu 52,67%. Penurunan  persen  inhibisi  dimungkinkan  karena senyawa antioksidan tidak optimal dalam menstabilkan  radikal  bebas.  Kemungkinan  yang terjadi  adalah  senyawa  telah  bersifat  prooksidan. Hal ini sesuai dengan yang dikemukakan Gordon
(1990) yang menyatakan bahwa besar konsentrasi antioksidan yang ditambahkan dapat berpengaruh pada  laju  oksidasi.  Pada  konsentrasi  tinggi, aktivitas  antioksidan  grup  fenolik  sering  lenyap bahkan  antioksidan  tersebut  menjadi  prooksidan. Pengaruh  jumlah  konsentrasi  pada  laju  oksidasi tergantung  pada  struktur  antioksidan,  kondisi  dan sampel yang akan diuji (Kadji, dkk., 2015).
Ketidakstabilan absorbansi yang diperoleh  dari  hasil  tersebut  kemungkinan  karena rentang  variasi  konsentrasi  yang  dipakai  hanya selisih  sehingga  tidak  signifikan  maka  hasil  yang diperoleh  pun hampir  terlihat  seperti  berada  pada nilai yang sama. Hasil absorbansi ini tidak sesuai dengan  hukum  Lambert-Beer  yang  menyatakan semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin  tinggi pula nilai absorbansi suatu sampel (Kristianingrum, 2010).
Hasil  pengujian  perbandingan  aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Liosina paradoxa dan  vitamin  C  (Tabel  1)  juga menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan ekstrak etanol  spons Liosina  paradoxa lebih  rendah dibandingkan  vitamin  C.  Rendahnya  aktivitas antioksidan ini  dikarenakan  vitamin  c  merupakan senyawa  antioksidan  alami  dalam  bentuk  murni sehingga  aktivitas  antioksidannya  sangat  kuat dalam  meredam  radikal  bebas  DPPH  dengan persen inhibisi hampir mencapai 100% sedangkan ekstrak  etanol  spons Liosina  paradoxa masih merupakan  senyawa  campuran  dan  belum diketahui  kandungan  senyawanya  yang  bersifat antioksidan.  Vitamin  C  juga  mempunyai  gugus hidroksi bebas yang bertindak sebagai penangkap radikal  bebas  dan  jika  mempunyai  gugus polihidroksi akan meningkatkan aktivitas antioksidan (Isnidar et al ., 2011).
Dari  hasil  yang  diperoleh,  menunjukkan bahwa  sampel  ini  memiliki  kadar  antioksidan yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  sampel yang  berada  di  pulau  Lembeh. Kadar  antioksidan yang diperoleh dari perairan kepulauan Mantehage memiliki nilai rata-rata pada konsentrasi  0,5  ppm  (53,03%),  konsentrasi  0,6 ppm (52,67%) dan konsentrasi 0,7 ppm (54,70%). Sedangkan  sampel  yang  berada  di  pulau  Lembeh memiliki  kadar  antioksidan  rata-rata  pada konsentrasi  25  mg/L  (20,40%),  konsentrasi  50 mg/L  (21,46%),  konsentrasi  75  mg/L  (23,40%) dan konsentrasi 100 mg/L (24,83%).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol spons Liosina paradoxa dari Perairan Pulau Mantehage  memiliki  aktivitas  antioksidan  pada setiap  konsentrasi  dan  aktivitas  tertinggi  terlihat pada  konsentrasi  0,7  ppm  dengan  mencapai persentase 54,70%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak etanol spons Liosina paradoxa dan pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan  metode lain  FRAP  ( Ferric  Reducing  Antioxidant  Power ), RP  ( Reducing  Power )  dan  FC  ( Folin-Ciocalteu ) untuk membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Asaf, Ruzkiah, dkk. “Variasi Aktivitas Kandungan  Metabolit  Sekunder  Spons Berdasarkan  Kondisi  Habitat”.  Prosiding
Indoaqua. Universitas Hasanuddin, 2012.
Badan  Informasi  Geospasial.  2015.  Pentingnya informasi  geospasial  untuk  menata  laut Indonesia. http:// big.go.id/berita- surta/show/ pentingnya-informasi- geospasialuntuk-menata-laut-indonesia.
Diakses Pada 26 April 2018.
Hanani,  E.  2016.  Analisis  Fitokimia.  Penerbit Buku  Kedokteran  EGC: Jakarta.  Hal.  13- 103
Isnindar.  Wahyuono,  S.,  Setyowati,  E.  P.  2011. Isolasi dan identifikasi senyawa antioksidan  daun  kesemek  ( Diospyros kaki  Thunb. )  dengan  metode  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil).  Majalah  Obat Tradisional. 16(3): 157-164.
Liochev,  S.I.  2013. Reaztive  OxygenSpecies  and the  Free  Radical  Theoryof  Aging.  Free Radical  Biology  and  Medicine .  6:  1- 4.Suparno.  2005. Kajian  Bioaktif  spons laut  (forifera:  Demospongiae)  Suatu
Peluang Alternative Pemanfaatan
Ekosistem  Karang  Indonesia  Dalam
Bidang  Farmasi .  Institute  Pertanian
Bogor. Miryanti, Y. A., Sapei, L., Budiono, K., Indra, S. 2011.  Ekstraksi  antioksidan  dari  kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L.). Laporan  Penelitian  Lembaga  Penelitian dan  Pengabdian  Masyarakat.  Bandung: Universitas Katolik Parahyangan.
Muniarsih, Tutik. 2003. “Metabolit Sekunder dari Spons  sebagai  Bahan  Obat-Obatan”. Oseana 28(3): 27–33.
Nurhayati  T,  dkk.  2009.  “Kajian  Awal  Potensi Ekstrak  Spons  Sebagai  Antioksidan”. Jurnal  Kelautan  Nasional.  Vol  2.  Edisi Khusus Januari 2009
Pasodung,  Aditya,  dkk.  2018.  “Uji  Aktivitas Antibakteri  Spons  Plakortis  sp.  Yang Dikoleksi Dari Perairan Bunaken”. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. 1(1):45
Pratiwi,  D.,  Sirumapea,  L.  2012.  “Kajian  Awal Aktifitas Antioksidan Fraksi Polar Keladi Tikus  (typhonium  flagelliforme.  Lodd) Dengan Metode DPPH”.MJoCE. 2(2):85- 88
Wahdaningsih  S.,  Setyowati  E.  P.,  Wahyuono  S. 2011. Aktivitas Penangkap Radikal Bebas Dari  Batang  Pakis  ( Alsophila  Glauca J. Sm).  Majalah  Obat  Tradisional.  16(3): 156–160.