Motilitas dan Viabilitas Spermatozoa  Itik Lokal ( Anas platyrhyncos ) Setelah Penyimpanan dalam Medium Berbeda Dikombinasi Krioprotektan Kuning Telur Berbagai Konsentrasi
Yusni Atifah 1 , Dadang Mulyadi Saleh 2 , Hendro Pramono 1 , dan Yulia Sistina 1
1 Fakultas Biologi, 2 Fakultas Peternakan, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto Kampus Karangwangkal Jl Dr Suparno PO Box 130 Purwokerto 53123 Email: yuliaunsoed@gmail.com ; yulia.sistina@unsoed.ac.id

## Diterima Maret 2013 disetujui untuk diterbitkan Mei 2013

## Abstract
The  purpose  of  this  study  is  to  asses  motility  and  viability  of  domestic  duck  (Anas platyrhyncos)  spermatozoa  after  6  day  storing  in  preservation  medium  of  different  egg  yolk cryoprotectant  concentration  in  three  different  medium  Tris,  PBS  or  Ringer  lactate.  In  this experiment,  we  applied  3  combination  of  factors  as  treatments  :  extender  (Tris,  PBS  or  Ringer lactate),  egg  yolk  (EY)  concentration  (0,  5,  10,  15  or  25%)  and  storage  time  (0,1,2,3,4,5,6  days). Spermatozoa was obtained by massage technique, ejaculate then were swup  up in the extender, the swup-up sperm then were incubated in preservation medium as each treatments subjected to motility  and  viability  assesment  before  and  after  storage  at  refrigerator  temperature  (5 0 C).  The results  showed  that  sperm  motility  and  viability  were  highly  significantly  different  (P<0.01)  among 107 treatments. Extender factor as well as storage duration time were highly significantly different (P<0.01) affected the motility and  viability of the treated sperm.  EY concentration was significantly (P<0.05)  affected  viability,  however  there  were  no  factor  (P>0.05)  affected  motility  of  the  sperm. The  best  treatment  resulted  in  promising  quality  having  the  highest  motility  of  46,67  ±  32,15  5 motile  was  from  the  treatment  of  10%  EY  in  PBS  stored  for  4  days.  The  best  viability  result  was from  the  tretament  of  25%  EY  in  PBS  after  4  days  storage resulted  in 50,00  ±  36,05 %  of  viabie sperm. In conclusion t his protocol could be applied for artificial insemination trial.
Key words: Egg yolk; preservation medium; domestic duck spermatozoa; motility; viability

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  untuk  menilai  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  itik  lokal  ( Anas platyrhyncos )  setelah  penyimpanan  6  hari  dalam  medium  penyimpanan  kombinasi  berbagai konsentrasi  krioprotektan  kuning  telur  (egg  yolk  /EY)  dengan  tiga  ekstender  berbeda  Tris,  PBS atau Ringer lactat. Penelitian eksperimen ini menerapkan tiga kombianis factor sebagai perlakuan: ekstender  (Tris,  PBS  or  Ringer  lactate),  kuning  telur  (EY)  konsentrasi  0,  5,  10,  15  atau  25%  and waktu penyimpanan (0,1,2,3,4,5,6 hari). Spermatozoa diperoleh dengan metode urut, ejakulat atau sperma yang diperoleh di-swup up dalam ekstender, spermatozoa hasil swimp up digunakan untuk perlakuan  dalam  medium  penyimpanan  sesuai  perlakuan  dan  dinilai  motilitas  dan  viabilitasnya, sebelum  dan  sesudah  penyimpanan  dalam  temperatur  refrigerator  (5 0 C).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  sabgat  nyata  ( P <0.01)  berebda diantara107  perlakuan.  Faktor  ekstender  juga  factor  lama  penyimpanan  secra  sangat  nyata ( P <0.01)  mempengaruhi  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  perlakuan.  Konsentrasi  EY  secara nyata  ( P <0.05)  mempengaruhi  viabilitas,  namun  tidak  nyata  ( P >0.05)  menentukan  motilitas spermatozoa.  Perlakuan  terbaik  menghasilkan  kualitas  yang  berpotensi  yaitu  motilitas  tertinggi  of 46,67 ± 32,15 5 dari 10% EY dalam PBS disimpan selama 4 hari.  Viabilitas terbaik dari perlakuan 25%  EY  dalam  PBS  pasca  4  hari  disimpan,  reratanya 50,00  ±  36,05 %.  Disimpulkan  bahwa spermatozoa  penyimpanan  perlakuan  protokol  ini  dapat  diujicobakan  dalam  pembuahan  buatan atau AI artificial insemination.
Kata kunci : Kuning telur, medium penyimpanan, spermatozoa itik lokal, motilitas, viabilitas

## Pendahuluan
Itik  lokal  ( Anas  platyrhyncos )  yang merupakan  jenis  itik  yang  akrab  dengan kehidupan masyarakat,
digemari konsumen  karena  kualitas  daging  dan telurnya yang bagus, sehingga mendorong  peningkatan  produksi  itik lokal.  Produktivitas  itik  lokal  sangat  erat kaitannya dengan sistem perkawinan itik. Pejantan  itik  lokal  sekali  ejakulasi  bisa menghasilkan ejakulat yang banyak yaitu 0,3 – 1,5 ml (Toelihere, 1981) atau 0,5-1 ml  (Rose,  1997).  Sperma  atau  ejakulat bisa digunakan untuk mengawini beberapa betina. Sperma bisa ditampung dan  disimpan  sehingga  sewaktu-waktu bisa  digunakan  untuk  mengawini  betina lain dengan teknik inseminasi buatan (IB) (Campbell et  al .,  2003). Teknik  IB  bisa menggunakan sperma hasil penyimpanan beku ( frozen semen ) maupun cair  ( chilled semen ) (Sahashi et al. , 2011).
Untuk  mempertahankan  kualitas speema selama penyimpanan dibutuhkan medium penyimpanan semen yang mendukung kehidupan
spermatozoa  di  luar  tubuh  induk  serta dibutuhkan  krioprotektan  yang  dapat melindungi  spermatozoa  dari cold  shock akibat perubahan temperatur penyimpanan. Spermatozoa
untuk dipreservasi atau diawetkan untuk beberapa  lama  sesudah  penampungan, perlu  dicampur  dengan  ekstender  atau larutan pengencer dan dikombinasi dengan  krioprotektan  untuk  menjamin kebutuhan  fisik  dan  kimia  spermatozoa selama preservasinya. Krioprotektan dibutuhkan  spermatozoa  di  luar  tubuh untuk  melindungi  dari  temperatur  dingin penyimpanan (Salisbury dan Vandemark, 1985).  Tujuan  penelitian  ini untuk mengetahui motilitas dan viabilitas spermatozoa itik lokal ( Anas platyrhyncos ) selama penyimpanan
dalam  berbagai  medium  penyimpanan kombinasi krioprotektan kuning telur (EY)
berbagai konsentrasi dengan tiga ekstender berbeda.
Materi dan Metode
Penelitian eksperimental pola
faktorial dengan rancangan dasar
Rancangan Acak Lengkap, tiga faktor (1) ekstender tiga taraf yaitu Ringer laktat/RL  (kalsium  klorida  0,2  g/1000  ml, potassium  chloride 0,3  g/1000  ml, sodium  chloride 0,6  g/1000  ml,  sodium laktat 3,1 g/1000  ml), Tris aminometan /T
(6,64  g Tris  hydroxymethyl-aminometan ,
3,72g  asam  sitrat,  2,74g  fruktosa,  0,2g ampicilin,  0,2g  streptonisin  dan  200  ml aquades), dan Phospat
Buffer Saline /PBS  (0,20g  KCl,  0,20g  KH 2 PO 4 , 8g  NaCl,  2,16g  Na 2 PO 4 .7H 2 O  dalam  1 liter  H 2 O).  (2)  krioprotektan  kuning  telur (EY)  lima taraf konsentrasi (0, 5, 10,  15, atau 25 %). (3) lama waktu penyimpanan dengan tujuh  taraf (0, 1, 2, 3, 4, 5 dan 6) hari. Krioprotektan EY dibuat segar pada hari  penelitian,  dibuat  stok  EY  40% dalam  ekstender.  Semen  itik  diperoleh dengan  metode  pengurutan,  ejakulat yang  keluar  ditampung  dalam  spuit, untuk kemudian di swimp-up dalam ekstender.  S wim-up dilakukan  dalam temperatur  ruang  selama  ±  30  menit (Sistina et al , 1993). S wim-up spermatozoa digunakan untuk perlakuan, ditambahkan  stok  EY  sesuai  perlakuan dalam  medium  penyimpanan  yaitu  0,  5, 10,  15  atau  25%  EY  dalam  ekstender. Semua  perlakuan  diberi  label,  disimpan dalam  refrigerator,  untuk  pengamatan motilitas  dan  viabilitas  sebelum  dan sesudah preservasi.
Penilaian
persentase  dan  progresivitas  motilitas (diskor  0-5  sesuai  Sistina et  al ,  1993) menggunakan  mikroskop  inverted  dan viabilitas spermatozoa, setelah
pewarnaan Trypan blue 1%  selama ± 10 menit lalu difiksasi dengan 4%
paraformaldehid, menggunakan
mikroskop cahaya. Data dianalisis dengan  Anova  program  SPSS  ver18 setelah  transformasi  ke  akar  persen kuadrat lalu arc sin.

## Hasil dan Pembahasan
Sperma segar itik lokal ( Anas platyrhyncos ) dinilai  kualitasnya sebelum digunakan  sebagai  sampel  penelitian dan  hanya  semen  dengan  kualitas  baik sesuai  kriteria  Affandy et  al (2004)  yang
digunakan untuk penelitian. Hasil pengamatan  motilitas  spermatozoa  itik lokal dalam medium penyimpanan setelah 6 hari dalam temperatur refrigerator, rerata motilitasnya bervariasi,  tertingginya  5%  motil  dari perlakuan  10  dan  15%  EY  PBS  (Tabel 1). Rerata motilitas spermatozoa tertinggi sebelum  penyimpanan  diperoleh  dari perlakuan  10%  EY  PBS  (100%  motil), menurun  ke  88%  setelah  satu  hari disimpan,  lalu  penyimpanan  2,  3,  4,  5, dan 6 hari penyimpanan, menjadi 80, 60, 46,  36,  dan  5  %,  berturut-turut  yang terbukti  secara  statistik  sangat  nyata ( P <0,01) motilitas spermatozoa
perlakuan  menurun  (Tabel  1).  Faktor ekstender  dan  faktor  lama  penyimpanan sama-sama secara sangat nyata ( P <0,01)  mempengaruhi  nilai persentase motilitas spermatozoa itik lokal perlakuan penyimpanan. Interaksi ekstender dengan  lama  penyimpanan  berpengaruh secara  sangat  nyata  ( P <0,01),  namun interaksi  EY  dengan  ekstender  atau dengan lama penyimpanan tidak berpengaruh nyata ( P >0,05). Pengamatan  motilitas  dilengkapi  dengan pengamatan progresivitas motilitas, hasilnya  bahwa  ekstender  T,  RL,  dan
PBS skor progresivitas dari skor 4 (gerak ke depan lurus cepat) sebelum penyimpanan (hari ke-nol) menjadi menurun namun masih memberikan skor lebih  besar  dari  satu  (gerak  maju  atau berpindah tempat) setelah penyimpanan. Setelah disismpan dua hari, skor progresivitasnya  skor  2  (maju  ke  depan lintasan lingkaran) atau 3 (maju ke depan lintasan kurva). Hari ke enam penyimpanan skor progresivitasnya satu. Hasil  analisis  progresivitas  membuktikan bahwa  secara  sendiri-sendiri,  faktor ekstender  atau  lama  penyimpanan  dan interaksi  medium dan  laam  pentimpanan secara sangat nyata (P<0,01) mempengaruhi  progresivitas  motilitas. Faktor  EY  secara  sendiri,  interaksi    EY secara  nyata  ( P <0,05)  mempengaruhi progresivitas motilitas spermatozoa perlakuan.  Uji  lanjut  membutikan  bahwa RL dan PBS  T dan PBS  berbeda sangat nyata  ( P <0,01)  dengan  PBS,  T  &  RL berbeda  nyata  ( P <0,05).    Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa ekstender  terbaik yang memelihara motilitas spermatozoa itik lokal
penyimpanan  refrigerator  hingga  enam hari adalah ekstender PBS.
Tabel  1.  Rataan  (±SD)  persentase  motilitas  spermatozoa  itik  lokal  ( Anas  platyrhyncos ) selama  preservasi  dalam  refrigerator  5 o C  dalam  medium  penyimpanan kombinasi  konsentrasi  kuning  telur  (EY)  dengan  ekstender  ringer  laktat  (RL) atau tris aminomethan (T), atau Phospat Buffer Saline (PBS).
Table  1.  Average  percentage  (±SD)  of  sperm  motility  of  local  duct  ( Anas  platyrhyncos ) during preservation at refrigerator 5 o C  temperature in preservation medium of egg yolk (EY) combined with extender of ringer laktat (RL) or tris aminomethan (T), or Phospat Buffer Saline (PBS). Perlakuan Lama Penyimpanan (hari) 0 1 2 3 4 5 6 0%EYKT 96,67 ±2,89 76,67  ± 5,77 60,00  ± 0,00 33,33  ± 5,77 8,33 ± 14,43 5,00 ± 8,66 0,00  ± 0,00 5%EYT 90,00 ±10,00 50,00  ± 26,46 38,33  ± 33,29 31,66  ± 12,58 13,33  ± 23,09 13,33  ± 23,09 0,00  ± 0,00 10%EYT 86,67 ±11,55 53,33  ± 32,15 46,66  ± 20,82 40,00  ± 0,00 10,00  ± 17,32 13,33  ± 23,09 0,00  ± 0,00 15%EYT 86,67 ±11,55 53,33  ± 32,15 50,00  ± 26,46 40,00  ± 10,00 13,33  ± 23,09 13,33  ± 23,09 1,67  ± 2,89 25%EYT 93,33 ±5,77 53,33  ± 27,54 40,00  ± 20,00 36,67  ± 11,55 13,33  ± 23,09 13,33  ± 23,09 0,33  ± 0,58 0%KPBS 100,00 68,33  ±  51,67  ±  38,33  ±  23,33  ±  0,00 ±  0,00  ±
Perlakuan Lama Penyimpanan (hari) 0 1 2 3 4 5 6 ±0,00 20,21 16,07 22,55 25,17 0,00 0,00 5%EYPBS 98,33  ± 2,89 78,33  ± 7,64 63,33  ± 15,28 56,67  ± 23,09 46,67  ± 36,17 30,00  ± 26,46 3,67  ± 5,50 10%EYPBS 100,00  ± 0,00 88,33  ± 7,64 80,00  ± 8,66 60,00  ± 17,32 46,67  ± 32,15 36,67  ± 32,14 5,00  ± 5,00 15%EYPBS 100,00  ± 0,00 78,33  ± 16,07 66,67  ± 11,55 51,67  ± 22,55 36,67  ± 25,17 30,00  ± 26,46 5,00  ± 5,00 25%EYPBS 100,00  ± 0,00 83,33  ± 7,64 73,33  ± 11,55 56,67  ± 15,26 41,67  ± 23,63 33,33  ± 28,57 3,67  ± 5,51 0%KRL 98,33  ± 2,89 76,67  ± 23,09 55,00  ± 27,83 23,33  ± 11,55 7,00 ± 5,20 3,33 ± 2,87 0,00  ± 0,00 5%EYRL 96,67  ± 5,77 86,67  ± 14,43 61,67  ± 7,64 31,67  ± 2,89 4,33 ± 1,15 0,00 ± 0,00 0,00  ± 0,00 10%EYRL 96,67  ± 5,77 89,33  ± 16,77 70,00  ± 10,00 46,67  ± 5,77 10,00  ± 5,00 0,00 ± 0,00 0,00  ± 0,00 15%EYRL 100,00  ± 0,00 96,67  ± 5,77 76,67  ± 5,77 43,33  ± 5,77 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00  ± 0,00 25%EYRL 95,00  ± 5,00 93,33  ± 11,55 75,00  ± 13,22 48,33  ± 16,07 6,67 ± 2,89 0,00 ± 0,00 0,00  ± 0,00 Hasil pengamatan viabilitas spermatozoa setelah pewarnaan Trypan blue menunjukkan bahwa setelah penyimpanan, rerata viabilitas spermatozoa  menurun,  paralel  dengan data penurunan motilitas dan progresivitas  motilitas.  Viabilitas  dapat dipelihara  hingga  6  hari  sebanyak  10% populasi  spermatozoa  perlakuan,  data untuk  konsentrasi  EY  10%,  15%  dan 25% eksender PBS (Tabel 2). Spermatozoa perlakuan
medium penyimpanan    25%  EY  eksender  RL pasca  penyimpanan  1,  2  dan  3  hari menunjukkan  berturut-turut  93%,  83%, 70% viabil.  Setelah 4 hari penyimpanan, tertinggi  viabilitasnya  yaitu  50  %  dari perlakuan  25%  EY  ekstender  PBS (Tabel  2).  Setelah  5,  dan  6  hari penyimpanan,  nilai  viabilitas  tertinggi yaitu  40  %  dan  10%,  berturut-turut  dari perlakuan  15%EYPBS  (Tabel    2).  Hasil analisis  membuktikan  bahwa  secara sendiri  faktor  ekstender,  EY  dan  lama penyimpanan secara sangat nyata ( P <0,01)  menentukan,  namun  tidak  ada interaksi  ( P >0,05)  antara  ekstender dengan  EY  dan  lama  penyimpanan. Hasil  analisis  membuktikan  bahwa  ada korelasi erat (koefisien korelasi Pearson=0,92)  antara  motilitas  dan
viabilitas.  Berarti  spermatozoa  yang nampak  motil  berarti  juga  viabil,  atau spermatozoa yang diam tidak motil tidak viabil atau mati. Hasil uji lanjut membuktikan  bahwa  RL  dan  PBS,  juga T  dan  PBS  berbeda  sangat  nyata ( P <0,01), RL  dan T tidak berbeda  nyata ( P >0,05)  mennetukan  viabilitas,  jadi ekstender terbaik adalah PBS.
Ekstender PBS  terbukti paling baik memelihara motilitas dan viabilitas spermatozoa  perlakuan  penyimpanan. Hasil ini tidak sesuai laporan sebelumnya bahwa  ekstender  Tris  baik  memlihara spermatozoa  sapi  (Pratiwi et  al ,  2007). Hasil penelitian ini mengkonfirmasi laporan  Philips  (1939)  menggunakan sperma  cair  yang  disimpan  5 o C  dalam ekstender  PBS  yang  ditambah  dengan kuning  telur  mampu  mempertahankan motilitas  dan  fertilitas  spermatozoa  sapi,
Schafer dan Holzmann (2000)
menggunaan  metode transmigration  and Spermac TM untuk
spermatozoa epididimis kucing menggunakan
ekstender PBS menghasilkan nilai transmigrasi  (pergerakan)  spermatozoa kucing  yang  lebih  baik  dibanding  dalam ekstender lain (medium sodium chloride ), juga.
Menurut  Devireddy et  al .  (1999) untuk  preservasi  spermatozoa  tikus metode rapid  freezing ekstender  PBS dikombinasi  dengan  kuning  telur  15% mampu memelihara motilitas dan viabilitas dengan baik, serta Rifka (1997) untuk spermatozoa ikan dengan ekstender PBS juga. Penambahan krioprotektan  EY  secara  sangat  nyata ( P <0,01)
mempengaruhi viabilitas spermatozoa  itik  lokal,  antar  konsentrasi EY (5, 10, 15, 25%) sama baiknya.
Hasil  ini  berbeda  dari  laporan Pratiwi et  al (2007)  hanya  konsentrasi 10% EY  terbaik untuk preservasi spermatozoa  sapi.  Hasil  penelitian  ini sesuai  laporan  Graham et  al .  (2004) pada spermatozoa gajah ( Elevas maximus ) preservasi spermatozoa
dengan  penambahan  kuning  telur  pada empat  medium  yang  berbeda  pada
temperatur  4 o C  menunjukkan  secara nyata  ( P< 0.05)  menurunkan  viabilitas spermatozoa setelah dua  hari preservasi dibandingkan tanpa penambahan  kuning telur.  Hu et  al .  (2006)  melaporkan Low Density  Lipoproteins kuning  telur  (LDL)
9% sebagai krioprotektan mampu menjaga  motilitas  spermatozoa  babi setelah pembekuan dan thawing .
Argumentasi Toelihere (1993)
bahwa  kelebihan  kuning  telur  terletak pada lipoprotein dan lesitin yang terkandung  di  dalamnya  yang  bekerja mempertahankan dan melindungi
integritas selubung lipoprotein sel spermatozoa.  Dengan  demikian,  EY efektif  untuk  memelihara  motilitas  dan viabilitas  spermatozoa  itik  lokal  pasca preservasi atau penyimpanan refrigerator.
Tabel  2.  Rataan  (±SD)  persentase  viabilitas  spermatozoa  itik  lokal  ( Anas  platyrhyncos ) selama  preservasi  dalam  refrigerator  5 o C  dalam  medium  penyimpanan kombinasi  konsentrasi  kuning  telur  (EY)  dengan  ekstender  Ringer  laktat  (RL) atau tris aminomethan (T), atau Phospat Buffer Saline (PBS).
Table  2.  Average  percentage  (±SD)  of  local  duct  ( Anas  platyrhyncos )  sperm  viability during preservation at refrigerator 5 o C  temperature in preservation medium of egg yolk (EY) concentration combined with extender of Ringer laktat (RL) or tris aminomethan (T), or Phospat Buffer Saline (PBS). Perlakuan Lama Penyimpanan (hari) 0 1 2 3 4 5 6 0%EYKT 98,33 ± 2,89 81,67 ± 2,89 33,33 ± 23,09 26,67  ± 20,21 15,00 ± 17,32 6,67 ± 11,55 0,67 ± 1,15 5%EYT 95,00 ± 5,00 70,00 ± 17,32 63,33 ± 15,28 41,67  ± 29,30 22,67 ± 36,67 16,67 ± 28,87 3,33 ± 5,77 10%EYT 95,00 ± 5,00 80,00 ±10,00 75,00 ± 8,67 51,67  ± 24,66 26,33 ± 42,16 20,00 ± 34,64 6,67± 11,55 15%EYT 93,33 ± 5,77 80,00 ± 10,00 70,00 ± 13,29 53,33  ± 27,54 27,67 ± 41,00 20,00 ± 34,64 6,67 ± 11,55 25%EYT 95,00 ± 5,00 76,67 ± 11,55 63,33 ± 15,28 53,33  ± 23,09 24,67 ± 39,26 20,00 ± 34,64 3,33 ± 5,77 0%KPBS 96,67 ± 5,77 71,67 ±10,41 55,00 ± 13,29 33,33  ± 15,28 15,67 ± 25,42 10,00 ± 17,32 1,67 ± 2,89 5%EYPBS 98,33 ± 2,89 90,00 ±0,00 76,67 ± 14,43 78,33  ± 7,64 45,00 ± 35,00 36,67 ± 32,15 2,50± 3,53 10%EYPBS 98,33 ± 2,89 83,33 ± 5,77 76,67 ± 7,64 63,33  ± 29,30 48,33 ± 33,29 33,33 ± 28,87 10,00  ± 10.0 15%EYPBS 96,67 ± 5,77 86,67 ± 2,87 78,33 ± 7,64 63,33  ± 20,82 48,33 ± 33,29 40,00 ± 36,64 10,00  ± 10,0 25%EYPBS 98,33 ± 2,87 90,00 ± 10,00 80,00 ± 10,00 66,33  ± 25,66 50,00 ± 36,05 36,67 ± 32,15 10,00  ± 10,0 0%KRL 98,33 ± 2,89 76,67 ± 23,09 55,00 ± 27,83 23,33  ± 11,55 7,00 ± 5,20 3,33 ± 2,87 0,00 ± 0,00
Perlakuan Lama Penyimpanan (hari) 0 1 2 3 4 5 6 5%EYRL 93,33 ± 2,87 90,00 ± 17,32 63,33 ± 5,77 43,33  ± 20,82 21,67 ± 14,43 6,67 ±5,77 0,00 ± 0,00 10%EYRL 98,33 ± 2,89 93,00 ± 11,27 75,00 ± 13,29 50,00  ± 17,32 28,33 ± 20,21 6,67 ± 5,77 0,00 ± 0,00 15%EYRL 96,67 ±5,77 91,67 ± 10,41 78,33 ± 7,64 56,67  ± 15,28 33,33 ± 20,82 10,00 ± 10,00 0,00 ± 0,00 25%EYRL 100,00  ± 0,00 93,33 ± 11,55 83,33 ± 11,55 70,00  ± 26,46 26,67 ± 15,28 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 Bahwa  lama  penyimpanan  terbukti secara sangat nyata ( P <0,01) menurunkan motilitas dan viabilitas
spermatozoa, semakin lama waktu preservasi semakin menurun nilai motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  itik lokal. Hasil penurunan
kualitas spermatozoa pasca
penyimpanan diakibatkan  oleh  akumulasi  asam  laktat hasil  proses  metabolisme  sel  selama penyimpanan, menghasilkan kondisi medium  penyimpanan  menjadi  asam, bersifat  racun,  menyebabkan  kematian spermatozoa sesuai
argumentasi Sugiarti et al (2004). Argumentasi Setiadi dan  Julizar  (2001)  bahwa  penurunan motilitas  spermatozoa  pasca  preservasi yang  lama  diakibatkan oleh menurunnya zat  makanan  dan  pengaruh  zat  toksik hasil sampingan dari
proses metabolisme  spermatozoa.  Argumentasi Rizal et  al .  (2003)  bahwa  motilitas spermatozoa  sangat  bergantung  pada suplai energi berupa adenosin triphosphate (ATP)  hasil  dari  proses metabolisme  sel.  Jadi,  semakin  lama waktu preservasi, ketersediaan makanan dalam  medium  semakin  berkurang, menjadi  penyebab  menurunnya  motilitas dan  viabilitas  spermatozoa  itik  lokal. Banyaknya  spermatozoa  yang mati selama proses preservasi dapat berubah menjadi  racun  bagi  spermatozoa  yang masih  hidup  sesuai  Soler et  al (2003).
Oleh  karena  itu  kualitas  spermatozoa makin  menurun  seiring  lama  waktu penyimpanan.
Perlu
dilakukan pengamatan morfologi dan penghitungan konsentrasi  spermatozoa.  Penting  juga dilakukan  uji  coba  untuk  mengetahui fertilitas  spermatozoa  itik  lokal  ( Anas platyrhyncos )  pasca  preservasi  hasil penelitian  ini  dalam upaya inseminasi
buatan  menggunakan  semen  cair  yang diperoleh penelitian ini.

## Simpulan
Ekstender PBS  secara sendiri atau dengan  kombinasi  berbagai  konsentrasi kuning telur yang diujikan (5, 10, 15, dan 25%) terbaik untuk menyimpan spermatozoa itik lokal ( Anas platyrhyncos ) temperatur refrigerator (5 o C)  hingga  6  hari.    Semakin  lama penyimpanan semakin menurunkan kualitas  spermatozoa  itik  lokal.  Untuk dimanfaatkan  dalam  inseminasi  buatan, spermatozoa penyimpanan 3  hari atau  4 hari terbaik diujicoba.

## Ucapan terima kasih
Penelitian  ini  terlaksana  dengan bantuan  berbagai  pihak,  terima  kasih kepada  Arie  Amelia,  Chelsy  Ryrgiyensi, pak  Hartono,  Virgian,  Wigih,  Atang, Ma’ruf,  dan  pak  Sufiriyanto.  Sumber dana LPPM Unsoed kontrak antara Yulia Sistina dan Unsoed no. Kept 435/UN23/PN.01.00/2012.

## Daftar Pustaka
Affandhy,  L.,  D.  Pamungkas,  Mariyono dan  P.  Situmorang.  2004.  Efisiensi penggunaan  semen  cair  melalui suplementasi mineral Zn dan Vitamin  E  pada  sapi  potong: Laporan Penelitian. Loka Penelitian Sapi Potong, Grati, Pasuruan.
Campbell,  J.  R.,  K.  L.  Campbell,  and M.    D.  Kenealy.    2003.    Artificial insemination. In: Anim. Sci . 41h Ed.
Mc Graw-Hill. New York
Devireddy,  R.  V.,  J.  S.  David.,  P.  R. Kenneth  and  C.  B.  John.  1999.
Subzero Water Permeability Parameters of Mouse Spermatozoa in the Presence of Extracellular Ice and Cryoprotective Agents. Biology of Reproduction . 61 : 764–775
Graham.  L. H., J. Bando., C. Gray  and
M.  M.  Buhr.  2004.  Liquid  Stirage of Asian elephant ( Elephas maximus ) Sperm at 4 degrees C.
Anim.Reprod.Sci . 80:329-340
Hu,  J.  H.,  W.  L.  Qing.,  L.  Gang.,  Y.  C. Xiao., Y. Hai., S.  Z. Shu and  Q.W. Li. 2006. The Cryoprotective Effect on  Frozen-thawed  Boar  Semen  of Egg Yolk Low Density Lipoproteins. Asian-Aust.  J.  Anim.  Sci. 19:  486-
494
Phillips, P.  H. 1939. The Preservation of Bull  Semen. J.Biol.Chem .  130: 415Pratiwi, W. C.,  L. Affandhy dan P.  Situmorang.  2007.  Observasi Kualitas Semen Cair Sapi Peranakan Ongole Terhadap Perbedaan  Waktu  Inkubasi  Pada Proses  Pemisahan  Spermatozoa. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. 195-200 Rifka.  1997.  Pengaruh  pengenceran Modifikasi Ringer dan PBS terhadap  Motilitas  Spermatozoa
Ikan  Beronang  ( Sigamus  guttatus ). Tesis . Program Pasca sarjana IPB, Bogor.
Rizal,  M.,  M.  R.  Toelihere.,  T.  L.  Yusuf.,
B.  Purwantara  dan  P.  Situmorang. 2003. Kualitas Semen Beku Domba  Garut  dalam  Berbagai Konsentrasi Gliserol. JITV . 7(3):194-199.
Rose,  S.  P.  1997. Prinsiples  of  Poultry Science .  Harper  Adem  Agricultural College. London. Pp 70-78.
Sahashi,  Y.,  T.    Otsuki,  S.  Hikagi,  M. Nagano,  Y.  Yamashita,  and  M.
Hishinuma. 2011. Effect  of Butylated  Hydroxytoluene  on  Dog Sperm Longevity in Chilling Storage  and  Cryopreservation. J.
Vet. Med. Sci. 73(7): 895–899.
Salisbury,  G.  W.  dan  N.  L  Vandemark.
1985  . Fisiologi  Reproduksi  dan Inseminasi  Buatan  Pada  Sapi . Diterjemahkan  oleh  R.  Djanuar. Gadjah  mada    University  Press. Pp. 350-371.
Schafer, S. and  A. Holzmann. 2000. The use of transmigration and Spermace stain to evaluate epididymal cat spermatozoa.
Animal  Reproduction  Science 59: 201–211
Setiadi,  M.  A  and  Julizar.  2001.  Prediksi kesuburan  spermatozoa  domba melalui  uji  penembusan  lendir estrus. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner . Bogor : Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Sistina,  Y.,  M.  Lin,  K.  Mate,  E.S.
Robinson,  J.C.  Rodger.  1993.  The
Unique  Stability  of  the  Marsupial Sperm Acrosomal Membranes
Examined  by  Unprotected  Freeze-
Thawing and Treatment with Detergent Triton X-100. Reprod.Fertil.Dev . 5: 1-14
Soler,  A.  J.,  M.  D.  P.  Guzman  and  J.  J. Garde.  2003.  Storage  of  red  deer epididymides  for  four  days  at  5 o C : Effects  on  Sperm  Motility,  Viability, and Morphology Integrity . J. Exp.Zool . 295A: 188 – 199.
Sugiarti,  T.,  E.  Triwulanningsih,  P. Situmorang,  R.  G.  Sianturi  dan  D. A. Kusumaningrum. 2004. Penggunaan katalase dalam produksi  semen  dingin  sapi.  Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, 4 – 5 Agustus. Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm. 215 – 220
Toelihere,  M.  R.  1981. Inseminasi Buatan  Pada  Ternak .  Edisi  ke  2,
Penerbit  Angkasa,  Bandung.  pp. 64-75; 265-269
Toelihere,  M.  R.  1993. Inseminasi Buatan  Pada  Ternak .  Angkasa. Bandung