## PENDAHULUAN
Pemberantasan  larva Aedes  spp. merupakan  salah  satu bentuk  pengendalian  vektor  dalam  upaya  pencegahan
penyakit.  DBD.  Pengendalian  vektor  tergantung  pada jenis  insektisida  yang  digunakan.  Salah  satu  jenis insektisida  yang  sering  diaplikasikan  sebagai  larvasida adalah temefos karena memiliki efektifitas tinggi dalam
UJI EFEK LARVASIDA EKSTRAK DAUN GAMAL ( Gliricida sepium ) TERHADAP LARVA NYAMUK Aedes aegypti
Effect of Larvicidal Gamal Leaf (Gliricidia sepium) Against Aedes aegypti Larvae
Rundito 1*
Dody Novrial 2
Eman Sutrisna 3
*1 Program Pascasarjana Magister Ilmu Biomedis, Fakultas Kedokteran,
Universitas Jendral Soedirman, Jalan Dr. Gumbreg Nomor 1, Mersi, Purwokerto, Banyumas, Jawa Tengah, Indonesia
2 Fakultas Kedokteran, Universitas Jendral Soedirman, Jalan Dr. Gumbreg Nomor 1, Mersi, Purwokerto, Banyumas, Jawa Tengah, Indonesia
3 Fakultas Kedokteran,
Universitas Jendral Soedirman, Jalan Dr. Gumbreg Nomor 1, Mersi, Purwokerto, Banyumas, Jawa Tengah
*email: prundito@yahoo.co.id

## Abstrak
Daun  Gamal  ( Gliricidia  sepium )  selain  digunakan  sebagai  pupuk  organik  cair,  juga diketahui  berpotensi  sebagai  larvasida  nabati  karena  terdapat  senyawa  flavonoid, triterpenoid, coumarin, asam coumaric, asam melitotik, dan  glukosida stigmastanol yang  dapat  diidentifikasi  dan  diisolasi  dari  berbagai  bagian  tubuh  tanaman  Gamal. Tujuan penelitian ini adalah menguji efek larvisidal ekstrak daun Gamal ( G. sepium ) terhadap  larva  nyamuk Aedes  aegypti .  Penelitian  dilakukan  menggunakan  desain eksperimental  dengan  rancangan Post  test  only  control  group  design dan  Rancangan Acak  Lengkap  yang  terdiri  atas  6  kelompok  perlakuan.  Dua  kelompok  sebagai kontrol  (kontrol  positif  dan  negatif)  sedangkan  4  kelompok  lainnya  mendapat perlakuan pemberian ekstrak daun Gamal ( G. sepium ) dosis 50 ppm (P1), 150 ppm (P2), 250 ppm (P3), dan 350 ppm (P4). Tidak terjadi mortalitas larva Ae. aegypti dari galur murni setelah pemberian ekstrak daun Gamal, namun mortalitas hanya terjadi pada  larva Ae.  aegypti kelompok  kontrol  positif  yang  berasal  dari  lapangan.  Tidak diketahui  LC 50 dan  LC 90. Sebanyak  13  ekor  (52%)  larva Ae.  aegypti galur  murni tergolong toleran sedangkan sebanyak 19 ekor (76%) larva Ae. aegypti yang berasal dari lapangan tergolong resisten
Kata Kunci:

## Aedes aegypti
Gamal Gliricidia sepium LC 50 LC 90
Keywords :
Aedes aegypti Gamal Gliricidia sepium LC 50 LC 90

## Abstract
Gamal leaves (Gliricidia sepium) well known as liquid organic fertilizer, are also known to have  potential  as  vegetable  larvicides  because  there  are  flavonoids,  triterpenoids, coumarin, coumaric acid, mitotic acid, and stigmastanol glucoside which can be identified and isolated from various parts from Gamal. The aim of this study was to examine the larvicidal  effect  of  Gamal  (G.  sepium)  leaf  extract  against  larvae  of  Aedes  aegypti mosquitoes. The study was conducted using an experimental design with a posttest only control  group  design  and  a  completely  randomized  design  consisting  of  6  treatment groups.  Two  groups  as  control  (positive  and  negative  control),  while  4  other  groups received treatment of Gamal leaf extract (G. sepium) at doses of 50 ppm (P1), 150 ppm (P2),  250  ppm  (P3),  and  350  ppm  (P4).  There  was  no  mortality  of  larvae  Ae.  aegypti from pure lines after giving Gamal leaf extract, but mortality only occurred in Ae. aegypti larvae positive control group originating from the field. Unknown LC50 and LC90. A total of 13 (52%) Ae. aegypti strain classified as tolerant, while as many as 19 (76%) larvae of Ae. aegypti originating from the field are classified as resistant
©  year  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.  This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.vxix.xxx .
menurunkan  jumlah  vektor  nyamuk,  namun  dapat menyebabkan  resistensi  insektisida  bagi  larva Ae. aegypti bila digunakan secara berulang. Insektisida yang efektif,  efisien,  ramah  lingkungan,  dan  tidak memberikan efek toksisitas tinggi  diperlukan terhadap organisme  non  target  (Astriani  &  Widawati,  2016; Tikar et al., 2008).
Penggunaan  insektisida  sintetis  dalam  jangka  waktu lama  dan  berskala  luas  dapat  menimbulkan  terjadinya resistensi.  Berbagai  cara  dapat  dilakukan  untuk mengetahui  resistensi  insektisida,  antara  lain  uji  baku WHO  dengan impregnated  paper ,  uji  molekuler,  uji asetilkolin  esterase  (AChE)  dan  uji  biokima  aktivitas enzim alfa atau beta naphythyl acetate (Enzim esterase).
Uji  biokimiawi  enzim  esterase  memiliki  keunggulan dalam mengetahui mekanisme resistensi pada serangga secara  individu  berdasarkan  kuantifikasi  enzim  yang bertanggung jawab pada proses resistensi. Uji ini sangat cepat dapat menginformasikan status kerentanan yang diperoleh sehingga dapat membantu dalam meramalkan  adanya cross  resistant (Astuti  &  Hastuti, 2017; Hematpoor et al., 2016; Soenjono, 2011).
Penggunaan insektisida nabati saat ini dianggap sebagai alternatif  baru  dalam  penurunan  jumlah  penyakit  yang ditimbulkan oleh vektor nyamuk karena bersifat ramah lingkungan,  mudah  diperoleh,  dan  terbukti  efektif dalam  membunuh  vektor  nyamuk.  Insektisida  nabati dapat  diperoleh  melalui  pemanfaatan  tanaman  di lingkungan  sekitar  pemukiman  yang  berpotensi  untuk membunuh stadium larva maupun nyamuk dewasa Ae. aegypti .  Pembuatan  ekstrak  tanaman  untuk  dijadikan larvasida  menjadi  salah  satu  bentuk  pemanfaatan tanaman  sebagai  insektisida  (Astriani  &  Widawati, 2016; Boesri et al., 2015)
Daun  Gamal  ( Gliricidia  sepium )  merupakan  jenis tanaman  Leguminosae  yang  tumbuh  cepat  di  daerah kering,  namun  efektif  dimanfaatkan  sebagai  pupuk organik  cair  (Mayasari  et  al.,  2012).  Tanaman  ini  juga diketahui berpotensi sebagai larvasida nabati. Berbagai senyawa  yang  ditemukan  pada  tanaman  Gamal,  antara
lain flavonoid, triterpenoid, coumarin, asam coumaric, asam  melitotik,  dan  glukosida  stigmastanol  yang dapat diidentifikasi  dan  diisolasi  dari  berbagai  bagian  tubuh tanaman  Gamal.  Selain  sebagai  larvasida,  daun  Gamal dimanfaatkan  oleh  masyarakat  India  sebagai  repelen, antifungi,  dan  anti  bakteri  (Reddy  &  Jose,  2010). Pelarut  etanol,  iso-propanol,  dan  aseton  pada  ekstrak daun  Gamal  ( G.  sepium )  terbukti  aktif  menyerang Ae. aegypti sedangkan  pelarut  toluen  menunjukkan pengaruh  negatif  terhadap Ae.  aegypti (Krishnaveni  et al., 2015).
Ekstrak daun Gamal ( G. sepium ) terbukti memiliki efek lethal  terhadap  seluruh  larva Anopheles setelah  6  jam pengamatan pada konsentrasi 0, 25, 50, 100, 150, 200, dan 250 ppm. Hasil  analisis probit LC 50 sebesar  70,68 ppm/  6  jam.  Tidak  ditemukan  adanya  efek  lethal  pada organisme non target (Mathew et al., 2015).
Ekstrak etanol G. sepium menyebabkan efek lethal larva Anopheles stephensi pada konsentrasi 250 ppm (96,0 ± 2,4%).  LC 50 sebesar  121,79  ppm  sedangkan  LC 90 sebesar  231,98  ppm.  Ekstrak  etanol G.  sepium diketahui  efektif  dalam  membunuh  telur,  larva,  dan pupa An. stephensi (Krishnappa et al., 2012) .
Tujuan  penelitian  ini  adalah  menguji  efek  larvisidal ekstrak  daun  Gamal  ( Gliricidia  sepium )  terhadap  larva nyamuk Aedes aegypti.

## METODOLOGI
Penelitian dilaksanakan pada bulan Januari-Maret 2021. Pembuatan  ekstrak  daun  Gamal  dilaksanakan  di Laboratorium  Farmakologi  Farmakologi  Fakultas Farmasi  Universitas  Muhammadiyah  Purwokerto sedangkan  uji  efek  larvasidal  daun  Gamal  ( G.  sepium ) terhadap larva Ae.  aegypti dilaksanakan  di Balitbangkes Kemenkes Kelas 1 Banjarnegara.
Penelitian dilakukan menggunakan desain eksperimental  dengan  rancangan Post  test  only  control group design dan Rancangan Acak Lengkap terdiri atas enam kelompok perlakuan, antara lain
K  +  (Kontrol  positif):  Larva Aedes  aegypti diujikan dengan temefos 1 %
K- (Kontrol negatif)  :  Larva Ae.  aegypti diujikan dengan  ekstrak  daun  Gamal  0 ppm P1 :  Larva Ae.  aegypti diujikan  dengan  ekstrak
daun Gamal 50 ppm
P2 :  Larva Ae.  aegypti diujikan  dengan  ekstrak
daun Gamal 150 ppm
P3 :  Larva Ae.  aegypti diujikan  dengan  ekstrak
daun Gamal 250 ppm
P4 :  Larva Ae.  aegypti diujikan  dengan  ekstrak daun Gamal 350 ppm

## 1. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel  daun  Gamal  ( G.  sepium )  diperoleh  dari Kecamatan  Rembang,  Kabupaten  Purbalingga  dan banyak  dijumpai  di  daerah  tersebut.  Sampel dibersihkan  dari  kotoran  yang  menempel,  dikeringkan dengan  diangin-anginkan  dan  disimpan  dalam  lemari pengering.  Sampel  diblender  hingga  menjadi  serbuk, disimpan dalam wadah dan siap untuk dilakukan proses ekstraksi (Utami et al., 2016) .

## 2. Preparasi Ekstrak Daun Gamal
Daun  Gamal  ( G.  sepium )  kering  selanjutnya  dibuat sediaan bubuk. Pembuatan ekstrak  dibuat dengan cara mencampurkan  40gram  bubuk  daun  Gamal  kemudian dilarutkan  dalam  etanol  96%,  diekstraksi  dengan  cara maserasi  hingga  mendapatkan  konsentrasi  100% kemudian diinkubasi selama 2x 24 jam. Ekstrak disaring dengan  kertas  saring  Whatman  no.  42,  dipekatkan secara  vakum  dengan vacuum  rotary  evaporator kemudian  diencerkan  dengan  aquadest  sehingga mendapatkan  konsentrasi  ekstrak  sebesar  0,150,  250, dan 350 ppm dalam volume 200 mL. Ekstrak disimpan dalam ruang gelap selama 24 jam (Utami et al., 2016).
3. Pemeliharaan Larva Nyamuk
Telur Aedes  aegypti yang  diperoleh  dari  Sekolah  Ilmu dan  Teknologi  Hayati  Institut  Teknologi  Bandung (galur  murni)  dan  Balitbangkes  Kemenkes  Kelas  I Banjarnegara  (lapangan)  diletakkan  dalam  nampan plastik  berisi  air  untuk  pemeliharaan  larva.  Telur menetas  menjadi  larva  dalam  waktu  1-2  hari.  Larva instar I berkembang menjadi larva instar III selama 3-5 hari.  Larva  diberi  pakan  pellet  ikan  atau dog  food selama masa pemeliharaan. Larva instar III dipindahkan ke  dalam paper  cup untuk  dilakukan  uji  aktivitas biolarvasida (Cania & Setyaningrum, 2013; Krishnaveni et al., 2015).
4. Uji Larvasida Ekstrak daun Gamal ( Gliricidia sepium )
Uji  larvasida  dilakukan  dengan  memasukkan  masing- masing konsentrasi uji ke dalam paper cup . Larva Aedes aegypti instar  III  sebanyak  25  ekor  dimasukkan  ke dalam paper  cup menggunakan  pipet  tetes.  Mortalitas diamati pada 1 jam, 2 jam, 4 jam, dan 8 jam. Dilakukan perhitungan  mortalitas  larva Aedes  aegypti untuk mengetahui  dosis  efektif  LC 50 dan  LC 90 .  Berikut  ini perhitungan  mortalitas  terkoreksi  dan  persentase mortalitas  (Cania  &  Setyaningrum,  2013;  Krishnaveni et al., 2015).
Mortalitas terkoreksi =
𝑀𝑜𝑟𝑡𝑎𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑘𝑒𝑙𝑜𝑚𝑝𝑜𝑘 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 −𝑚𝑜𝑟𝑡𝑎𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑘𝑒𝑙𝑜𝑚𝑝𝑜𝑘 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 100−𝑚𝑜𝑟𝑡𝑎𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 x 100
Persentase mortalitas (%) = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑚𝑎𝑡𝑖 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑛𝑡𝑟𝑜𝑑𝑢𝑘𝑠𝑖 x 100%

## 5. Uji Aktitivitas Enzim Esterase Non Spesifik
Larva nyamuk instar IV digerus individual untuk dibuat homogenate  kemudian  dilarutkan  dengan  0,5  mL larutan Phosphate  Buffer  Saline (PBS)  0,02  M,  pH  =  7. Homogenat dipindahkan ke dalam microplate kemudian ditambahkan  sebanyak  50  µL  substrat α naftil  asetat dalam  aseton  (6  g/L)  dicampur  dengan  50  mL buffer phosphate (0,02  M;  pH  =  7)  dan  dibiarkan  selama  60
detik.  Setiap microplate selanjutnya  ditambahkan sebanyak  50  µL copling  reagent berupa  150  mg  garam Fast  Blue  B  (o-dianisidine,  tetrazotized;  sigma)  dalam 15  mL  aquadest  dan  35  mL aquous (5%;wlv) sodium dodecyl  sulphate (Sigma  B)  selama  10  menit.  Terjadi perubahan warna merah menjadi biru setelah inkubasi 10  menit.  Ditambahkan  sebanyak  50  µL  asam  asetat 10%  ke  dalam  masing-masing microplate yang  berisi homogenate.  Adanya  intensitas  warna  menunjukkan adanya  aktivitas  enzim  esterase  non  spesifik  dan tingkatnnya  dapat  dibedakan  secara  visual.  Aktivitas enzim  secara  kuantitatif  dibaca  melalui  ELISA reader dengan  Panjang  gelombang  450  nm.  Status  resistensi dilihat dari hasil absorbansi, jika AV < 0,700 = rentan (SS), AV 0,700 – 0,900 = toleran (SR), dan AV >0,900 =  resisten  (RR)  (Astuti  &  Hastuti,  2017;  Suryawanshi et al., 2015) .

## Analisis Data
1. Data mortalitas larva Aedes aegypti dianalisis dengan
One Way ANOVA apabila data berdistribusi normal dan  variansinya  sama.  Dilanjutkan  dengan  uji Bonferroni  apabila  beda  nyata  signifikan.  Uji Kruskall-Wallis digunakan sebagai uji alternatif.
2. Analisis  Probit  digunakan  untuk  menganalisis  LC 50 dan LC 90.
3. Aktivitas  Enzim  Esterase  Non  Spesifik  dianalisis dengan Pearson Chi Square.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Mortalitas larva Ae. aegypti lapangan hanya terjadi pada kelompok  kontrol  positif  setelah  1  jam,  2  jam,  dan  4 jam  pemberian  temefos  1%  sedangkan  setelah  8  jam tidak ditemukan mortalitas larva. Tidak ada mortalitas larva  Ae.  aegypti  setelah  pemberian  ekstrak  daun gamal  0  ppm  (K-),  50  ppm  (P1),  150  ppm  (P2),  250 ppm (P3), dan 350 ppm (P4) pada 1 jam, 2 jam, 4 jam, dan  8  jam.  Mortalitas  larva  Ae.  aegypti  galur  murni hanya terjadi pada kelompok kontrol positif setelah 1 jam  pemberian  temefos  1%  sedangkan  kelompok lainnya  tidak  terjadi  mortalitas.  Guna  membuktikan efektivitas  ekstrak  daun  gamal  sebagai  larvasida  Ae. aegypti,  dilakukan  pengulangan  dengan  dosis  5  kali lipat. Hasil pengulangan juga menunjukkan tidak adanya mortalitas  larva.  Tidak  ditemukan  LC50  dan  LC90 dalam  penelitian  ini.  Mortalitas  larva  Ae.  aegypti lapangan  setelah  pemberian  ekstrak  daun  Gamal  (G. sepium)  disajikan  pada  Tabel  1  sedangkan  mortalitas larva Ae. aegypti galur murni disajikan pada Tabel 2.
Tabel 1. Mortalitas Larva Aedes aegypti Lapangan Setelah Pemberian Ekstrak Daun Gamal ( G. sepium ) Perlakuan Mortalitas (%) 1 jam 2 jam 4 jam 8 jam K+ (temefos 1%) 64 97,3 100 0 K- (ekstrak daun gamal 0 ppm) 0 0 0 0 P1 (ekstrak daun gamal 50 ppm) 0 0 0 0 P2 (ekstrak daun gamal 150 ppm) 0 0 0 0 P3 (ekstrak daun gamal 250 ppm) 0 0 0 0 P4 (ekstrak daun gamal 350 ppm) 0 0 0 0
Tabel 2 . Mortalitas Larva Aedes aegypti Galur Murni Setelah Pemberian Ekstrak Daun Gamal ( G. sepium ) Perlakuan Mortalitas (%) 1 jam 2 jam 4 jam 8 jam K+ (temefos 1%) 100 0 0 0 K- (ekstrak daun gamal 0 ppm) 0 0 0 0 P1 (ekstrak daun gamal 50 ppm) 0 0 0 0 P2 (ekstrak daun gamal 150 ppm) 0 0 0 0 P3 (ekstrak daun gamal 250 ppm) 0 0 0 0
P4 (ekstrak daun gamal 350 ppm) 0 0 0 0
Sebanyak  13  ekor  (52%)  larva Ae.  aegypti galur  murni tergolong  toleran  sedangkan  sebanyak  19  ekor  (76%) larva Ae.  aegypti yang  berasal  dari  lapangan  tergolong resisten.  Sebanyak  25  ekor  (50%)  dari  50  ekor  larva yang  diujikan  mengalami  resistensi.  Hasil  Analisis Pearson  Chi  Square  (X 2 )  menunjukkan  adanya
hubungan  antara  jenis  sampel  larva Ae.  aegypti dengan status  resistensi  (p<  0,05).  Larva Ae.  aegypti yang berasal  dari  lapangan  terbukti  banyak  yang  mengalami resistensi.  Hasil uji aktivitas enzim esterase non spesifik disajikan pada  Tabel 3.
Tabel 4.2. Hasil Uji Aktivitas Enzim Esterase Non Spesifik
Sampel Larva Ae. aegypti Status Resistensi Nilai p Susceptible Toleran Resisten Murni 6 (24%) 13 (52%) 6 (24%) 0,001 Lapangan 1 (4%) 5 (20%) 19 (76%) Total 7 (14%) 18 (36%) 25 (50%)
Gambar 1. Aktivitas Enzim Esterase Non Spesifik Mortalitas  larva Ae.  aegypti dalam  penelitian  ini  yang hanya terjadi setelah pemberian temefos, namun tidak terjadi  mortalitas  setelah  pemberian  ekstrak  daun Gamal  ( G.  sepium )  berbanding  terbalik  dengan  hasil penelitian  Mathew et  al. yang  menunjukkan  bahwa mortalitas larva Ae. aegypti setelah pemberian ekstrak daun  gamal  konsentrasi  150  ppm  (70,68%),  200  ppm (84,00%),  dan  200  ppm  (93,00%).  Efek  lethal  tidak terlihat  setelah  paparan  1  jam  pada  seluruh konsentrasi,  namun  terlihat  setelah  paparan  3-6  jam. LC 50 diketahui  sebesar  70,  68  ppm  selama  6  jam (Mathew et al. , 2015).
Selaras  dengan  hasil  penelitian  George  yang  juga menunjukkan tidak ada mortalitas larva instar III dan IV Ae.  aegypti setelah  pemberian  ekstrak  aseton  maupun ekstrak  methanol  daun  Gamal  ( G.  sepium )  pada konsentrasi  0,1  mg/mL,  0,2  mg/mL,  dan  0,4  mg/mL (George, 2018).
Studi  yang  dilakukan  oleh  Corpuz  &  Savella menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun G. sepium 0 mg/mL dan 25 mg/mL diketahui tidak efektif, 50 mg/mL sedikit efektif, 75 mg/mL cukup efektif, dan 100 mg/mL efektif dalam menimbulkan mortalitas larva Ae. aegypti . Malathion sangat efektif dalam menyebabkan mortalitas larva Ae.  aegypti .  Mortalitas  paling  tinggi  larva Ae.
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% AV = < 700 (Rentan) AV = 700-900 (Toleran) AV = >900 (Resisten) Aktivitas Enzim Esterase Non Spesifik Murni Lapangan
aegypti setelah  24  jam  pemberian  ekstrak  daun G. sepium konsentrasi  100  mg/mL  sebanyak  75,  56% sedangkan  setelah  48  jam  sebanyak  100%.  Adanya kombinasi antara ekstrak daun Gamal dan daun pepaya diketahui  menyebabkan  mortalitas  paling  tinggi dibandingkan ekstrak daun Gamal saja maupun ekstrak daun  pepaya  saja.  Konsentrasi  100  mg/mL  kombinasi ekstrak  daun  gamal  dan  daun  pepaya  mampu menyebabkan  mortalitas  hingga  96,  67%  setelah pajanan  selama  24  jam  dan  100%  setelah  pajanan  48 jam (Corpuz & Savella, 2019).
Ekstrak  etanol G.  sepium dosis  250  ppm  terbukti menyebabkan  mortalitas  paling  tinggi  larva  instar  III Anopheles  stephensi yang  baru  menetas  0-6  jam sebanyak 96,0 ± 2,4 %. Persentase tersebut lebih tinggi bila  dibandingkan  ekstrak  etil  asetat G.  sepium dosis 250  ppm  dengan  mortalitas  sebanyak  92,2  ±  1,2  %. Persentase  mortalitas  larva An.  stephensi setelah pemberian  ekstrak  etanol G.  sepium pada  kelompok kontrol,  50  ppm,  100  ppm,  150  ppm,  200  ppm,  dan 250  ppm  lebih  tinggi  daripada  ekstrak  etil  asetat (Krishnappa et al., 2012).
Mortalitas  larva Ae.  aegypti instar  II  -IV  setelah pemberian  ekstrak  minyak G.  sepium dengan  pelarut methanol  diketahui  lebih  rendah  bila  dibandingkan dengan  ekstrak  sirsak  ( Annona  squamosa ),  namun berbanding  terbalik  dengan  mortalitas  larva  setelah pemberian  ektrak  minyak G.  sepium dengan  pelarut hexane yang cenderung menyebabkan mortalitas lebih tinggi  bila  dibandingkan  dengan  ekstrak A.  squamosa dengan  pelarut  hexane.  LC 50 paling  tinggi  setelah pemberian ekstrak A. squamosa dengan pelarut hexane pada larva instar II (77,62 ppm), instar III (95,40 ppm), instar  IV  (128,82  ppm).  LC 90 paling  tinggi  setelah pemberian  ekstrak  minyak G.  sepium dengan  pelarut hexane  pada  larva  instar  II  (134,89  ppm),  instar  III (346,73  ppm),  instar  IV  (457,08  ppm).  Ekstrak methanol G.  sepium memiliki  efektifitas  tinggi menyebabkan  mortalitas  larva Ae.  aegypti bila
dibandingkan dengan ekstrak minyak G. Sepium (Goyal et al., 2019).
Minyak  esensial  daun G.  sepium dapat  menimbulkan mortalitas  paling  tinggi  pada  konsentrasi  250  mg/mL sejak 0 jam. Konsentrasi 10 mg/mL dapat menimbulkan mortalitas  setelah  24  jam  paparan.  Semakin  tinggi konsentrasi  minyak  esensial  daun G.  sepium ,  maka semakin  cepat  dalam  membunuh  larva Aedes  aegypti (Umadevi & Jaleel, 2020). Hal ini dikarenakan methanol merupakan  pelarut  polar  yang  efektif  dibandingkan aseton  sehingga  banyak  senyawa  fitokimia  aktif  yang mudah larut dalam methanol (George, 2018).
Resistensi  terjadi  akibat  paparan  insektisida  terhadap vektor  yang  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  antara lain cara aplikasi, dosis, dan cakupan intervensi. Adanya peningkatan  aktivitas  total  enzim  menyebabkan senyawa yang sebelumnya bersifat toksik menjadi tidak toksik.  Terjadinya  mutasi  pada  enzim  atau bertambahnya ekspresi enzim menyebabkan meningkatnya aktivitas enzim sehingga terjadi resistensi terhadap  beberapa  senyawa  insektisida,  meliputi organofosfat,  karbamat,  dan  piretroid  (Astuti  & Hastuti, 2017).
Enzim  esterase  diketahui  berperan  dalam  mekanisme resistensi  terhadap  insektisida  golongan  organofosfat. Enzim  ini  akan  mengkatalisis  reaksi  hidrolisis komponen  alifatik,  ester  aromatic,  kolin,  dan organofosfor. Terdeteksinya resistensi disebabkan oleh terjadinya  peningkatan  aktivitas  enzim  esterase  ketika menghentikan  komponen  insektisida  untuk  mencapai targetnya.  Terjadinya  toleran  terhadap  insektisida disebabkan  karena  rendahnya  aktivitas  enzim  esterase sehingga kemampuan untuk menghidrolisis karboksilester juga rendah dan berdampak toksik bagi nyamuk (Mulyaningsih et al., 2017; Tomia et al., 2019)

## KESIMPULAN
Tidak terjadi mortalitas larva Aedes aegypti galur murni setelah  pemberian  ekstrak  daun  Gamal  ( G.  sepium ),
namun mortalitas hanya terjadi pada kelompok kontrol positif larva Ae. aegypti dari lapangan. Daun Gamal ( G. sepium )  tidak  dapat  dijadikan  larvasida  nabati  dalam penelitian  ini.  Tidak  dapat  diketahui  LC 50 dan  LC 90 karena tidak ada mortalitas larva Ae. aegypti . Sebanyak 13 ekor (52%) larva Ae.  aegypti galur murni tergolong toleran  sedangkan  sebanyak  19  ekor  (76%)  larva Ae. aegypti yang berasal dari lapangan tergolong resisten.
Perlu dilakukan peningkatan program eliminasi Demam Berdarah  Dengue  karena  banyaknya  larva  yang mengalami resistensi. Perlu dilakukan penelitian serupa dengan ekstrak yang berbeda, seperti daun sirsak, daun pepaya,  dan  lain  sebagainya.  Perlu  dipertimbangkan penggunaan insektisida nabati sebagai  alternatif karena daya mematikan larva tidak terlalu kuat

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Program  Pascasarjana  Magister Ilmu  Biomedis,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Jendral  Soedirman  Purwokerto,  Sekolah  Ilmu  dan Teknologi  Hayati  Institut  Teknologi  Bandung, Balitbangkes  Kemenkes  Kelas  I  Banjarnegara,  dan Laboratorium  Farmakologi  Farmakologi  Fakultas Farmasi  Universitas  Muhammadiyah  Purwokerto  yang telah mendukung penelitian ini.

## REFERENSI
1. Astriani,  Y.,  &  Widawati,  M.  (2016).  Potensi Tanaman  di  Indonesia  Sebagai  Larvasida  Alami untuk Aedes aegypti. SPIRAKEL , 8 (2), 37–46.
2. Tikar, S. N., Mendki, M. J., Chandel, K., Parashar, B.  D.,  &  Prakash,  S.  (2008).  Susceptibility  of immature  stages  of  Aedes  (Stegomyia)  aegypti; vector of dengue and chikungunya to insecticides from India. Parasitology Research , 102 (5), 907–913. https://doi.org/10.1007/s00436-007-0848-5
3. Astuti,  F.  D.,  &  Hastuti,  I.  (2017).  Deteksi Resistensi  Pada  Aedes  aegypti  Dengan  Pengujian Enzim  Esterase  Non  Spesifik. The  5th  URECOL
Proceeding , 388–391.
4. Hematpoor, A., Liew, S. Y., Chong, W. L., Azirun, M.  S.,  Lee,  V.  S.,  &  Awang,  K.  (2016).  Inhibition and  larvicidal  activity  of  phenylpropanoids  from piper  sarmentosum  on  acetylcholinesterase against  mosquito  vectors  and  their  binding  mode of  interaction. PLoS  ONE , 11 (5),  1–27. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0155265
5. Soenjono, S. J. (2011). Status Kerentanan Nyamuk Aedes  sp.(Diptera:  Culicidae)  Terhadap  Malation dan  Aktivitas  Enzim  Esterase  Non  Spesifik  Di Wilayah  Kerja  Kantor  Kesehatan  Pelabuhan Bandar Udara Sam Ratulangi Manado. JKL , 1 (1), 1–
6. https://www.neliti.com/publications/104875/status- kerentanan-nyamuk-aedes-sp-dipteraculicidae- terhadap-malation-dan-aktivit
6. Boesri,  H.,  Heriyanto,  B.,  Handayani,  S.  W.,  & Suwaryono,  T.  (2015).  Uji  Toksisitas  Beberapa Ekstrak  Tanaman  Terhadap  Larva  Aedes  aegypti Vektor Demam Berdarah Dengue. Vektora : Jurnal Vektor  Dan  Reservoir  Penyakit , 7 (1),  29–38. https://doi.org/10.22435/vk.v7i1.4258.29-38
7. Mayasari,  D.,  Purbajanti,  E.  .,  &  Sutarno.  (2012). Kualitas  Hijauan  Gamal  (Gliricidia  sepium)  Yang Diberi  Pupuk  Organik  Cair  (POC)  Dengan  Dosis Berbeda. Animal Agriculture Journal , 1 (2), 293–301.
8. Reddy,  L.  J.,  &  Jose,  B.  (2010).  Evaluation  of Antibacterial  Activity  of  The  Bark,  Flower,  and Leaf  Extracts  of  Gliricidia  sepium  From  South India. International Journal of Current Pharmaceutical Research , 2 (3), 18–20.7645(12)60124-2
9. Krishnaveni,  K.  V,  Nayaki,  R.  T.,  & Balasubramanian,  M.  (2015).  Effect  of  Gliricidia sepium  leaves  extracts  on  Aedes  aegypti: Larvicidal  activity. Journal  of  Phytology , 7 ,  26–31. https://doi.org/10.19071/jp.2015.v7.2898
10. Mathew, J. J., Vazhacharickal, P. J., Sajeshkumar, N. K.,& Sunil, J. (2015). Larvicidal Activity of Gliricidia sepium  Leaf  Extracts  on  Mosquito  Larvae  and  Its Lethal Effect on NonTargeted Organisms. CIBTech Journal of Biotechnology , 4 (2), 13–19.
11. Krishnappa,  K.,  Dhanasekaran,  S.,  &  Elumalai,  K. (2012). Larvicidal , ovicidal and pupicidal activities of  Gliricidia  sepium  (  Jacq  .)  (  Leguminosae  ) against  the  malarial  vector  ,  Anopheles  stephensi Liston ( Culicidae : Diptera ). Asian Pacific Journal of Tropical Medicine , 5 (8), 598–604. https://doi.org/10.1016/S1995-
12. Utami, W. W., Ahmad, A. R., & Malik, A. (2016). Uji Aktivitas Larvasida Ekstrak Daun Jarak Kepyar (Ricinus  communis  L.)  Terhadap  Larva  Nyamuk
Aedes  aegypti. Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia , 3 (1),
141–145.
13. Cania, E., & Setyaningrum, E. (2013). Uji Efektivitas Larvasida  Ekstrak  Daun  Legundi  (Vitex  trifolia) Terhadap  Larva  Aedes  aegypti. Medical  Journal  of Lampung University , 2 (4), 52–60.
14. Suryawanshi,  R.  K.,  Chandrashekhar,  D.,  Borase, H. P., Narkhede, C. P., Salunke, B. K., & Patil, S. V. (2015).  Mosquito  larvicidal  and  pupaecidal potential of prodigiosin from Serratia marcescens and  understanding  its  mechanism  of  action. Pesticide  Biochemistry  and  Physiology ,  1–16. https://doi.org/10.1016/j.pestbp.2015.01.018
15. Corpuz,  A.  V,  &  Savella,  M.  R.  (2019).  Larvicidal Activity  of  Papaya  (Carica  papaya)  and  Madre  de Cacao  (Gliricidia  sepium)  Leaf  Ex-tracts  Against Aedes  aegypti. International  Journal  of  Scientific  & Engineering Research , 10 (10), 1710–1716.
16. Goyal, M., Shinde, L., & Bayas, R. (2019). Study of chemical  composition  and  larvicidal  efficacy  of secondary metabolites from aromatic
phytoextracts  against  dengue  vector:  Aedes aegypti  (Linn)  (Diptera:  Culicidae). International Journal of Mosquito Research , 6 (1), 26–33.
17. Umadevi, & Jaleel, A. (2020). Larvicidal Activity of Essential Oil of Gliricidia Sepium Leaf. International Journal  of  Current  Pharmaceutical  Research , 12 (1), 26–27. https://doi.org/10.22159/ijcpr.2020v12i1.36827
18. George,  S.  (2018).  Larvicidal  Activity  of  Various Extracts  of  Selected  Plants  Against  the  Dengue Vector  Larvae. International  Journal  of  Current
Pharmaceutical Review and Research , 9 (5), 67–70.
19. Mulyaningsih,  B.,  Umniyati,  S.  R.,  &  Hadianto,  T. (2017). Detection of Nonspesific Esterase activity in  Organophosphate  Resistant  Strain  of  Aedes albopictus  Skuse  (Diptera:  Culicidae)  Larvae  in Yogyakarta, Indonesia. Southeast Asian J  Trop Med Public Health , 48 (3), 552–560.
20. Tomia,  A.,  Hadi,  U.  K.,  &  Retnani,  E.  B.  (2019). The  Detection  of  Aedes  Aegypti  Mosquito Resistance With Biochemical Test Based on Non- specific Esterase Enzyme Activity and Monooksigenase  Enzyme  in  Ternate  City. Journal of  Physics:  Conference  Series , 1364 (2019),  1–6. https://doi.org/10.1088/1742-6596/1364/1/012014