Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 4.No.2 Desember 2018 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN : 2598-9979
Isolasi  Dan  Identifikasi  Fungi  Endofit  Daun  Jambu  Mete  (Anacardium occidentale L.) Sebagai Antibakteri Terhadap Salmonella typhimurium
Adi Rianto 1,2 , Muhammad Isrul 1 , Sri Anggarini 3 , Ahmad Saleh 1 1 Program Studi Farmasi STIKES Mandala Waluya Kendari
2 Akademi Bina Husada Kendari
3 Program Studi Analis Kesehatan STIKES Mandala Waluya Kendari

## ABSTRAK
Gastroenteritis  adalah  suatu  penyakit  usus  yang disebabkan oleh bakteri Salmonella typhimurium yang terjadi lebih dari 18 jam setelah bakteri ini masuk ke tubuh  host.  Salah  satu  tanaman  yang  memiliki aktivitas antibakteri terhadap Salmonella typhimurium yang telah banyak diteliti adalah daun jambu mete. Usaha  untuk  mengurangi  eksploitasi  alam  adalah dengan  mengisolasi  fungi  endofit  pada  bagian tanaman  yang  dapat  memproduksi  senyawa aktif. Fungi  endofit  merupakan  fungi  yang  hidup pada  sistem  jaringan  tanaman  yang  tidak menyebabkan  gejala  penyakit  pada  tanaman inangnya  serta  dapat  menghasilkan  senyawa metabolit  sekunder  seperti  antibakteri,  antivirus, antifungi dan sebagainya. Hasil penelitian diperoleh 3  isolat  fungi  endofit  daun  jambu  mete yaitu  fungi
endofit  putih,  hitam  dan  hijau. Fungi  endofit  putih menghasilkan  zona  hambat  terhadap  bakteri Salmonella typhimurium rata-rata 20% = 4,36 mm, 40% =  4,82  mm,  60%  =  5,87  mm,  kontrol  positif  sebesar 12,81 mm dan kontrol negatif tidak memberikan zona hambat.  Sedangkan  jamur  endofit  hitam  dan  hijau daun jambu mete tidak memberikan zona hambat.
Kata  Kunci  :  Fungi  Endofit,  Daun  Jambu Mete,Antibakteri

## Penulis Korespondensi:
Adi Rianto Program  Studi  Farmasi  STIKES  Mandala  Waluya Kendari.
E-mail : riantoadi30@gmail.com

## PENDAHULUAN
Penyakit
gastroenteritis masih menjadi masalah kesehatan bagi masyarakat di negara berkembang seperti Indonesia. Di Indonesia  diperkirakan  penderita  diare sekitar  60  juta  keadaan  setiap  tahunnya, sebagian  besar  (70-80%)  dari  penderita  ini adalah  anak-anak  dibawah  umur  5  tahun (Suraatmaja, 2007).
Gastroenteritis  adalah  suatu  penyakit usus  yang  disebabkan  oleh  bakteri Salmonella  typhimurium  yang  terjadi  lebih
dari  18  jam  setelah  bakteri  ini  masuk  ke tubuh  host  (penjamu).  Gejala  klinis gastroenteritis adalah demam, muntah, sakit kepala,  diare,  dan  sakit  pada  abdomen (abdominal pain) yang terjadi selama 2–5 hari (Prihandani,  2015).  Salmonella  typhimurium digolongkan  dalam  Enterobacteria  Tribe  III yang  merupakan  bakteri  parasit  pada hewan  dan  manusia.  Bakteri  ini  bersifat patogen  pada  manusia,  habitat  bakteri Salmonella typhimurium adalah didalam alat
pencernaan  manusia,  hewan,  dan  bangsa burung. Oleh karena itu cara penularannya melalui  makan  dan  minum  yang  masuk kedalam  alat  pencernaan  manusia,  dimana sudah    tercemar  oleh  bakteri  Salmonella typhimurium (Dharmojono, 2001).
Pertolongan  pertama  yang  dapat dilakukan  untuk  penyakit  gastroenteritis yaitu  dengan  menggunakan  bahan  alam, salah  satunya  yaitu  pemanfaatan  Jambu mete  yang  mengandung  senyawa  kimia seperti  tanin,  anacardic  acid  dan  cardol, yang  bermanfaat  sebagai  antibakteri  dan antiseptik (Herbie, 2015). Daun jambu mete memiliki  banyak  manfaat  bagi  kesehatan, sehingga  masyarakat  indonesia  banyak memanfaatkanya  sebagai  obat  herbal  sejak zaman  dahulu.  Air  rebusan  daun  muda jambu mete dikonsumsi sebagai obat untuk tekanan  darah  tinggi  (hipertensi),  kencing manis  (diabetes  militus),  malaria,  rematik, sariawan  dan  ruam  kulit.  Daun  tua  jambu mete dimanfaatkan sebagai obat untuk luka bakar, antidiabetes dan obat sakit perut. Di dunia farmakologi infusa daun muda jambu mete diketahui memiliki efek antifungi dan antibakteri (Dalimartha, 2006)
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Melati  Puspita  Sari  (2013), dikatakan  bahwa  ekstrak  etanol  70%  daun jambu  mete  dengan  konsentrasi  2% mempunyai  efek  antibakteri  terhadap Salmonella typhimurium.
Agar
dapat meningkatkan pengembangan  budidaya  dan  produksi tanaman  obat  maka  diperlukan  berbagai usaha  penelitian  terhadap  tanaman  obat yang tumbuh di Indonesia agar mengurangi
eksploitasi  alam.  Karena  telah  banyak terjadi  eksploitasi  bagian  tanaman  sebagai tanaman  obat  yang  terus  meningkat menyebabkan semakin berkurangnya sumber daya alam. Salah satu usaha untuk mengurangi  eksploitasi  tersebut  adalah dengan  mengisolasi  jamur  endofit  pada bagian  tanaman  yang  dapat  memproduksi senyawa  aktif.  Beberapa  mikroba  endofit dapat  terkandung  oleh  setiap  tanaman tingkat  tinggi,  yang  dapat  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  atau  senyawa biologi yang diduga merupakan akibat dari koevolusi  atau  transfer  genetik  oleh tanaman  inang  ke  dalam  mikroba  endofit (Tan  Rx.,  dkk.  2001).  Jambu  mete merupakan tanaman tingkat tinggi dimana tumbuhan tersebut sudah memiliki struktur batang,  akar,  dan  daun  sejati,  yang  dapat menghasilkan  fungi  endofit.  Fungi  endofit merupakan  fungi  yang  hidup  didalam jaringan  tumbuhan  tanpa  menimbulkan gejala  penyakit  pada  tumbuhan  inangnya. Fungi  endofit  mampu  menghasilkan senyawa  bioaktif  misalnya senyawa antibakteri, antifungi, antivirus, antikanker, antimalaria dan sebagainya (Prihatiningtias., dkk, 2011). Fungi endofit yang tumbuh pada jaringan  tumbuhan  obat    dapat  memiliki jenis senyawa yang sama atau berbeda yang tumbuhan  inangnya  namun  memiliki khasiat  aktivitas  yang  sama.  Bahkan,  tidak jarang  ditemukan  bahwa  senyawa  yang dihasilkan  fungi  endofit  mempunyai aktivitas yang lebih besar daripada aktivitas tumbuhan inangnya. (Prihatiningtias, 2005). Dari  latar  belakang  diatas,  penulis  tertarik mengambil  judul  “Isolasi  dan  Identifikasi
Jamur Endofit daun Jambu Mete (Anacardium occidentale L.) Sebagai Antibakteri Terhadap Salmonella
typhimurium”.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  digunakan adalah  penelitian  eksperimen.  Eksperimen merupakan  suatu  penelitian  dengan melakukan  kegiatan  percobaan  yang bertujuan  untuk  mengetahui  gejala  atau pengaruh  yang  timbul,  sebagai  akibat  dari adanya perlakuan tertentu atau eksperimen tersebut (Notoatmodjo, S. 2012).
Alat
Autoklaf (Mammert),
Batang pengaduk, Cawan petri, Gelas kimia (Pyrex), Gelas  ukur  (Pyrex),  Inkubator  (Yenaco), Jangka sorong, Jarum ose, LAF (laminar air flow),  Lampu  spiritus,  Magnetic  stirrer (HMS-79),  Mikroskop,  Mikropipet,  Oven (Yenaco),  Pingset,  Centifuge  (80-1),  Shaker incubator  (Health),  Tabung  reaksi  (Pyrex) dan Timbangan analitik.
Bahan Aquadest, Etanol 70%, Kloramfenikol ® ,  Larutan NaCl 0,9%, media PDA (Potato Dextrose Agar) (Oxoid) ® , Media PDY (Potato Dextrose Yeast) (Oxoid) ® media NA  (Nutrient  Agar)(Pronadisa) ® ,  NaOCl 5,25  %,  Salmonella  typhimurium  dan  Daun Jambu Mete.
Prosedur  Kerja  Pembuatan  Media  Potato Dextrose Agar (PDA)
Pembuatan  media  Potato  Dextrose Agar  (PDA)  dilakukan  dengan  cara menimbang  media  Potato  Dextrose  Agar (PDA)  sebanyak  14,04  gram  dilarutkan dengan  360  mL  aquades  (39  g/1000  mL)
dalam  Erlenmeyer.  Kemudian,  dipanaskan menggunakan  hot  magnetic  strirer  hingga mendidih  dan  diperoleh  larutan  jernih. Disterilkan  dalam  autoklaf  dengan  suhu 121ºC selama 15 menit (Arleine., dkk, 2017). Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Pembuatan  media  Nutrient  agar (NA)  dilakukan  dengan  cara  menimbang media  Nutrient  agar  (NA)  sebanyak  2,8 gram dilarutkan dalam 100 mL aquadest (28 g/1000  mL)  menggunakan  erlenmeyer. Setelah itu dipanaskan dengan hot magnetic stirrer  sampai  mendidih  dan  diperoleh larutan jernih. Kemudian, disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121ºC  selama  15 menit (Arleine., dkk, 2017).

## Isolasi Jamur Endofit
Daun  jambu  mete  (Anacardium occidentale  L.)  dibersihkan  dengan  cara dicuci  dengan  air  mengalir  untuk menghilangkan sisa tanah dan kotoran yang menempel. Daun dipotong hingga ukurannya  menjadi  2  cm,  kemudian dikeringkan  di  atas  cawan  petri.  Sampel dimasukkan  e  dalam  erlenmeyer  250  mL  , lalu ditambahkan pelarut etanol 70% hingga sampel terendam. Dikocok pelan, kemudian disterilisasi selama 2 menit. Setelah 2 menit, pelarut  etanol  70%  dibuang,  lalu  sterilisasi dilanjutkan kembali dengan (NaOCl 5,25%) selama  2  menit.  Dibilas  dengan  aqua  pro injesi selama 1 menit, dilakukan sebanyak 3 kali.  Sterilisasi  dilakukan  menggunakan autoklaf, lalu dimasukkan ke dalam cawan petri  steril.  Bagian  tersebut  ditanam  pada media  Potato  Dextrose  Agar  didiamkan selama 3 hari dengan suhu kamar (25ºC). Air bilasan  terakhir  diinokulasikan  pada
medium  Potato  Dextrose  Agar  (PDA), sebagai  kontrol.  Setelah  3  hari  terjadi pertumbuhan  fungi,  kemudian  diisolasi untuk  mendapat  morfologi  endofit  murni ( Azdar., dkk, 2016)

## Seleksi Fungi Endofit Penghasil Antibakteri
Fungi  endofit  yang  telah  tumbuh pada  media  isolasi  kemudian  dimurnikan ke  dalam  media  Potato  Dextrose  Agar (PDA)  plate  lain.  Koloni  yang  mempunyai bentuk yang berbeda dengan koloni lainnya dapat  dianggap  sebagai  isolate  yang berbeda.  Kemudian  dilakukan  pemurnian sampai  diperoleh  isolate  murni  (tunggal). Pemurnian dilakukan dengan cara menginokulasikan  sedikit  hifa  dengan  ose atau  pinset  dari  setiap  koloni  endofit  yang berbeda  ke  media  Potato  Dextrose  Agar (PDA)  dan  diunkubasi  selama  7  hari  pada suhu ruang (kumala et al., 2006). Selanjutnya isolate Fungi yang telah murni dipindahkan ke  dalam  media  Potato  Dextrose  Agar (PDA)  lain  untuk  digunakan  sebagai working  culture  dan  media  agar  miring Potato  Dextrose  Agar  (PDA)  yang digunakan  sebagai  stock  culture.  Kultur Fungi endofit  diinkubasi selama 7 hari pada suhu ruang (kumala dan Endro, 2007) Pembuatan Metabolit Sekunder Antibakteri Fungi Endofit Daun Jambu Mete (Anacardium occidentale L.).
Fungi
endofit difermentasi menggunakan media Potato Dextrose Yeast (PDY), diambil masing-masing koloni fungi endofit  dengan  menggunakan  ose  bulat berukuran 1x1 cm, selanjutnya diinokulasikan  ke  dalam  media  Potato
Dextrose  Yeast  (PDY)  sebanyak  100  mL dalam  gelas  Erlenmeyer.    Dishaker  media fermentasi  selama  14  hari,  kemudian dimasukkan ke dalam tabung sentrifus yang berukuran  15  mL,  disentrifugasi  selama  30 menit  dengan  kecepatan  3000  rpm,  hasil dalam  bentuk  supernatant  (metabolit sekunder)  kemudian  diambil  untuk  dibuat pengenceran  20%,  40%  dan  60%  (Azdar., dkk, 2016).
Pembuatan Pengenceran Metabolit Sekunder Fungi Endofit Daun Jambu Mete (Anacardium occidentale L.).
Pengenceran  fungi  endofit  daun jambu mete untuk 20% Dipipet 2 mL, 40% dipipet  4  mL  dan  60%  dipipet  6  mL supernatan kedalam tabung reaksi. Tambahkan  masing-masing  aquadest  steril hingga 10 mL. Aduk hingga homogen, dan diberi label.
Pengujian  Diameter  Zona  Hambatan Metabolit  Sekunder  Fungi  Endofit  Daun Jambu  Mete  (Anacardium  occidentale  L.). Terhadap Pertumbuhan Bakteri Salmonella  typhimurium  dengan  Metode Sumuran agar.
Disiapkan sampel pengenceran fungi endofit daun jambu mete 20%, 40% dan 60%, serta  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif, Suspensi  bakteri  Salmonella  typhimurium dimasukkan  ke  dalam  media  kombinasi (PDA+NA).  Di  pipet  20  mL  inokulum  ke dalam  cawan  petri,  tunggu  sampai memadat. Dibuat sumuran pada permukaan  agar.  Dimasukkan  masing- masing  pengenceran  fungi  endofit  daun jambu  mete  kedalam  sumuran  agar  yang telah  dibuat.  Inkubasi  pada  suhu  25°C
selama  1×24  jam,  selanjutnya  amati  dan ukur  zona  hambat  dari  masing-masing sampel pengenceran tersebut (Azdar., dkk, 2016)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Isolat yang didapatkan setelah isolasi fungi endofit  dari  daun  jambu  mete,  dilakukan
pemurnian berdasarkan warna koloni pada medium  PDA  (Potato  Dextrose  Agar).  Hasil yang  diperoleh  dari  pemurnian  dapat dilihat  dari  bentuk  yang  tampak  secara makroskopik dan diperoleh 3 macam fungi endofit,  isolat  tersebut  dapat  dilihat  pada tabel    3.  beserta  ciri  makroskopisnya  pada tabel 3. sebagai berikut:
Tabel 3. Data Hasil isolasi fungi endofit pada daun jambu mete
Jumlah Isolat  Warna Permukaan Bentuk Koloni 1 Putih putih seperti kapas dan terlihat seperti serabut halus 1 Hitam koloni berbentuk bulat, pertumbuhan koloni menyebar dan tebal 1 Hijau koloni berbentuk bulat, pertumbuhan koloni menyebar dan tebal Tabel 4. Data Hasil Penelitian Fungi Endofit Putih Perlakuan Hasil zona hambat (mm) terhadap bakteri Salmonella typhimurium Total (mm) Rata-rata (mm) ± SD I (mm) II (mm) III (mm) Konsentrasi 20% 4,38 4,32 4,38 13,08 4,36 ± 0,03464 Konsentrasi 40% 4,78 4,90 4,77 14,45 4,82 ± 0,07234 Konsentrasi 60% 5,85 5,88 5,88 17,61 5,87 ± 0,01732 Khloramphenikol ® 13,45 13,10 11,87 38,42 12,81 ± 0,82984 Aquadest 0 0 0 0 0
Tabel 5. Data Hasil Penelitian Fungi Endofit Hitam
Perlakuan Hasil zona hambat (mm) terhadap bakteri Salmonella typhimurium Total (mm) Rata-rata (mm) ± SD I (mm) II (mm) III (mm) Konsentrasi 20% 0 0 0 0 0 Konsentrasi 40% 0 0 0 0 0 Konsentrasi 60% 0 0 0 0 0 Khloramphenikol ® 13,20 13,22 13,21 39,63 13,21 ± 0,00816 Aquadest 0 0 0 0 0
Tabel 6. Data Hasil Penelitian Fungi Endofit Hijau
Perlakuan Hasil zona hambat (mm) terhadap bakteri Salmonella typhimurium Total (mm) Rata-rata (mm) ± SD I (mm) II (mm) III (mm) Konsentrasi 20% 0 0 0 0 0 Konsentrasi 40% 0 0 0 0 0 Konsentrasi 60% 0 0 0 0 0 Khloramphenikol ® 13,25 13,27 13,25 39,77 13,26 ± 0,00942 Aquadest 0 0 0 0 0

## Pembahasan
Telah  dilakukan  uji  isolasi  dan identifikasi  fungi  endofit  daun  jambu mete  terhadap  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhimurium.  Pengambilan daun  jambu  mete  dilakukan  secara langsung (pemetikan) pada pukul 08.00- 09.00.  Pada  saat  puncak  fotosintesis,
tanaman mengalami proses metabolisme yang  optimal  sehingga  menghasilkan metabolit yang lebih banyak (Prihatiningtias,  W.  2005).  Penyiapan daun  jambu  mete  yang  dibutuhkan dicuci  bersih  dengan  air  mengalir,  agar semua kotorannya hilang.
Isolasi  fungi  indofit  dari  bagian tanaman  yang  berbeda  atau  dari tanaman  yang  berbeda  tetapi  dari  satu tumbuhan  inang  akan  memiliki  jenis isolat jamur yang  berbeda. Isolasi fungi endofit dilakukan  sterilisasi  permukaan sampel terlebih dahulu sebelum ditanamkan  pada  medium.  Sterilisasi permukaan  sampel  dilakukan  dengan cara  merendam  sampel  dalam  pelarut alkohol  70%,  kemudian  NaOCl  5,25% dan  terakhir  dibilas  dengan  aquadest steril  agar  cairan  NaOCl  yang  masih menempel pada daun jambu mete dapat hilang.  Penggunaan  etanol  70%  dan NaOCl 5,25% karena dengan konsentrasi tersebut efektif menghambat pertumbuhan bakteri (Yan dkk, 2010).
Proses sterilisasi permukaan dilakukan  untuk  menjamin  sterilitas permukaan  sampel  dari  kontaminasi organisme. Sampel yang telah disterilisasi  permukaannya  kemudian dipotong-potong  daun  jambu  mete  1x1 cm agar lebih mudah untuk ditanam ke medium  karena  ukurannya  yang  lebih kecil,  lalu  ditempelkan  pada  medium yang  telah  memadat.  Medium  yang digunakan  saat  isolasi  yaitu    medium PDA  (Potato  Dextrose  Agar),  karena medium  ini  berisi  nutrisi  yang dibutuhkan oleh fungi.
Lalu
ditambahkan kloramfenikol PDAC
(Potato  Dextrose  Agar  Chloramphenicol), hal  ini  dilakukan  untuk  menekan pertumbuhan
bakteri
yang kemungkinan  ikut  tumbuh  saat  isolasi.
Kemudian  diinkubasi  selama  14  hari, agar  fungi  endofit  yang  tumbuh  lebih banyak.
Setelah 14 hari fungi endofit yang tumbuh  disekeliling  daun  jambu  mete dimurnikan (dipisahkan) hingga memperoleh isolat fungi endofit. Hal ini dilakukan  agar  tidak  mempengaruhi hasil penghambatan dan pengamatan di mikroskop.  Pemisahan  ini  berdasarkan warna  dan  pola  pertumbuhan  koloni fungi.  Fungi  endofit  dipindahkan kembali  dalam  medium  PDAC  (Potato Dextrose  Agar  Chloramphenicol)  yang baru,  dimana  yang  akan  diisolasi  yaitu fungi  dengan  koloni  berwarna  putih, hijau dan berwarna hitam. Fungi endofit yang  didapatkan  hanya  3  jenis  yaitu fungi  endofit  hitam,  putih  dan  hijau. Keberadaan  fungi  endofit  bersifat  acak dan dapat berada dimana-mana. Hal ini sesuai dengan pernyataan Atmosukarto (2006) karena tumbuh didalam jaringan tanaman,  dimana  tanaman  yang  satu tentunya  berbeda  dengan  tanaman lainnya,  maka  biotop  (habitat)  tempat hidup  mikroba  yang  sangat  unik sifatnya.  Bahkan  fisiologi  tumbuhan tingkat tinggi termasuk yang berasal dari spesies  yang  sama  akan  berbeda  di lingkungan yang berbeda.
Isolat  fungi  endofit  dari  daun jambu mete yang telah murni selanjutnya dikarakterisasi untuk melihat ciri-ciri jamur secara
makroskopik.  hasil isolasi fungi endofit dari daun jambu mete (Pluchea indica (L.)
Less.) diperoleh tiga isolat fungi endofit yaitu  isolat  fungi  endofit  putih,  hitam dan  hijau.  Pengamatan  makroskopik pada  isolat  fungi  endofit  putih  yang tumbuh  pada  medium  PDA  (Potato Dextrose  Agar)  koloni  berwarna  putih seperti kapas dan terlihat seperti serabut halus  sedangkan  isolat  fungi  endofit hitam dan hijau koloni berbentuk bulat, pertumbuhan  koloni  menyebar  dan tebal.
Setelah  dipisahkan  antara  fungi  endofit putih,  fungi  endofit  hitam  dan  fungi endofit  hijau,  kemudian  dilakukan proses fermentasi. Fermentasi  dilakukan untuk  memperoleh  senyawa    metabolit sekunder dari isolat fungi endofit. Media yang digunakan adalah media cair PDY (Potato  Dextrose  Yeast).  Media  PDY (Potato Dextrose Yeast) digunakan karena mengandung  nutrisi  yang  dibutuhkan oleh  fungi  endofit.  Fermentasi  fungi endofit  digunakan  media  cair  karena fermentasi  menggunakan  media  cair lebih  efektif  dalam  memproduksi biomassa (Pokhrel and Ohga, 2007) dan senyawa  bioaktif  bila  dibandingkan dengan fermentasi menggunakan media padat  (Yan  dkk,  2010).  Hal  ini disebabkan dalam fermentasi media cair terdapat  proses  agitasi  (pengadukan) yang  memungkinkan  nutrisi  dalam media  dapat  terus  homogen  dan  tidak ada gradient konsentrasi produk/toksin sehingga  fungi  endofit  dapat  lebih optimal  mengabsorbsi  nutrisi  tersebut. fungi endofit yang difermentasi di dalam
media  cair  PDY  (Potato  Dextrose  Agar) diaduk  menggunakan  shaker  incubator selama  14  hari  bertujuan  agar  media tersebar  merata  sehingga  fungi  endofit mendapatkan  nutrisi  yang  cukup,  dan waktu 14 hari diharapkan fungi endofit lebih  banyak  memproduksi  metabolit sekunder. Kemudian disentrifugasi agar endapan  (pelet)  dan  supernatannya terpisah. Setelah terpisah supernatan ini yang  akan  digunakan  dalam  pengujian daya  hambat,  karena  supernatan mengandung senyawa metabolit sekunder.
Pengujian  daya  hambat  fungi endofit ini digunakan adalah supernatannya, pengenceran supernatan yang diambil yaitu 20%, 40% dan  60%  serta  kontrol  positif  yang digunakan  yaitu  Khloramphenikol ® 0,1%  dan  kontrol  negatifnya  aquadest steril. Digunakan Khloramphenikol 0,1% sebagai kontrol positif karena merupakan
Obat  antibiotik  yang mempunyai  spektrum  kerja  yang  luas.
Suspensi bakteri uji Salmonella typhimurium, dimasukkan kedalam cawan  petri  yang  telah  berisi  media kombinasi  (PDA  +  NA),  media dikombinasikan  karena  sampel  yang digunakan fungi endofit beserta bakteri uji  Salmonella  typhimurium.  Dimasukan masing-masing  sampel  pengenceran fungi endofit daun jambu mete 20%, 40% dan 60% Serta larutan kontrol positif dan kontrol  negatif  kedalam  sumuran  agar yang telah berisi media kombinasi (PDA
+  NA)  dan  bakteri  uji  Salmonella typhimurium.  Selanjutnya  diinkubasi pada  suhu  kamar  (37°C  selama  1×24 jam).  Diinkubasi  pada  suhu  dan  waktu tersebut  karena  merupakan  suhu  yang optimal  untuk  pertumbuhan  bakteri serta bakteri sudah dapat tumbuh pada waktu 1x24 jam. Kemudian zona hambat dari  fungi  endofit  daun  jambu  mete diamati    dan  diukur  menggunakan jangka sorong.
Berdasarkan  Tabel  4  isolat  fungi endofit  putih  dari  daun  jambu  mete mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri  uji  Salmonella  typhimurium sehingga  dapat  dikatakan  fungi  endofit putih  dari  daun  jambu  mete  mampu menghasilkan  metabolit  sekunder  yang berfungsi  sebagai  antibakteri.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya oleh  Strobel,  2003  dalam  Prihatiningtias dkk,  2011  menyatakan  fungi  endofit mampu menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif  misalnya  senyawa  antibakteri, antifungi, antivirus, antikanker, antimalaria  dan  sebagainya.  Alasan pemilihan  fungi  endofit  dibanding bakteri endofit adalah hal ini dilihat dari struktur selnya, fungi adalah mikroorganisme  yang  paling  dekat dengan tumbuhan. (Agusta, 2009).
Fungi endofit putih memiliki daya hambat  rata-rata  pada  konsentrasi  20% yaitu  4,36  mm,  40%  yaitu  4,82  mm  dan konsentrasi  60%  yaitu  5,87  mm sedangkan kontrol positifnya 12,81 mm. Menurut  (Pan,  dkk  2009)  konsentrasi
20%, 40% dan 60% masih termasuk daya hambat dalam kategori sedang karena  < 6  mm.  Dari  hasil  rata-rata  zona  hambat kontrol  positif  memiliki  zona  hambatan yang besar dan termasuk dalam kategori kuat  karena  >  6  mm,  hal  ini  berbeda dengan rata-rata zona hambat dari fungi endofit  yang  dikategorikan  sedang, artinya  sampel  belum  bisa  digunakan sebagai  pengganti  antibiotik  yang beredar di pasaran.
Fungi  endofit  putih  memiliki daya hambat karena menurut (Tan RX., dkk,  2001  dalam  Radji,  M.  2005), Beberapa  mikroba endofit yang mampu menghasilkan  senyawa  biologi  atau metabolit sekunder yang diduga sebagai akibat  koevaluasi  atau  transfer  genetik (genetic  recombination)  dari  tanaman inangnya  kedalam  mikroba  endofit, dimana  menurut  (Herbie,  2015)  jambu mete yang mengandung senyawa kimia seperti tanin, anacardic acid dan cardol, yang bermanfaat sebagai antibakteri dan antiseptik.
Mekanisme  aktivitas  antibakteri dari  fenolat  yang  disebut  juga  asam karbolat dapat menyebabkan denaturasi protein  melalui  proses  adsorpsi  yang melibatkan ikatan hidrogen. Pada kadar rendah, terbentukalah kompleks protein- fenol  dengan  ikatan  lemah  dan  segera mengalami penguraian, diikuti penetrasi fenol  kedalam  sel  dan  menyebabkan presipitasi serta denaturasi protein. Pada kadar  tinggi,  fenol  menyebabkan koagulasi  protein  dan  sel  membran
mengalami lisis, mengubah permeabilitas membran
bakteri (Siswandono  dan  Soekardjo,  2000).
Sedangkan
Mekanisme aktivitas antibakteri  chlorhexidine  gluconate adalah dengan cara merusak dinding sel bakteri,  menghambat  sistem  enzimatik dan mengeluarkan lipopolisakarida dari dinding sel bakteri yang mengakibatkan kematian  sel  bakteri  (Kuyyakanond  & Quenel, 1992; Mandel, 1994) Sedangkan berdasarkan tabel 5 dan 6 fungi endofit hitam dan hijau tidak mempunyai daya hambat, hal ini diduga karena metabolit sekunder  yang  dihasilkan  oleh  fungi endofit  hitam  dan  hijau  tidak  sebanyak fungi  endofit  putih  yang  dapat menghambat bakteri Salmonella typhimurium.
Dari  data  pengujian  statistik ANOVA  dapat  disimpulkan  bahwa supernatan  fungi  endofit  daun  jambu mete  memiliki  nilai  signifikan  0,000 (<0,05)  memiliki  daya  antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella  typhimurium..  Berdasarkan hasil  pengujian  Ho  ditolak  dan  Ha diterima  atau  dengan  kata  lain  nilai  F hitung lebih besar dibandingkan dengan F  total.  Uji  One  Way  ANOVA merupakan  uji  yang  digunakan  untuk melihat  ada  tidaknya  pengaruh  pada setiap  kelompok,  tetapi  tidak  dapat digunakan untuk melihat seberapa besar signifikansi  perbedaan  rata-rata  daya hambat  tiap  kelompok  perlakuan sehingga dilakukan uji selanjutnya yaitu
uji  Post  Hoc  Test  Turkey.  Perbedaan rata-rata tiap kelompok perlakuan pada penelitian ini diuji dengan Uji Post Hoc Test  Turkey.  Hasil  yang  didapatkan menunjukkan  bahwa  masing-masing perlakuan  mempunyai  perbedaan  daya hambat antibakteri yang signifikan. Dari hasil  analisis  Post  Hoc  Test  Turkey bahwa  semua  konsentrasi  fungi  endofit 20%,  40%  dan  60%  menunjukkan perbedaan  signifikan  dengan  kontrol negatif,  hal  ini  berarti  bahwa  semua konsentrasi  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri.  Jika  dibandingkan  dengan kontrol  positif  semua  konsentrasi  fungi endofit memperlihatkan perbedaan yang signifikan,  hal  ini  menunjukkan  bahwa semua konsentrasi fungi endofit memiliki  aktivitas  antibakteri  yang kurang baik dari kontrol positif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan diperoleh kesimpulan sebagai berikut :
1. Ditemukan  fungi  endofit  pada  daun Jambu  Mete  (Anacardium  occidentale L.)
2. Hasil  uji  supernatan  fungi  endofit putih,  memperlihatkan  bahwa  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhimurium  Sedangkan isolat  fungi  endofit  hitam  dan  hijau tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhimurium.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ungkapan terima kasih juga tidak lupa penulis sampaikan kepada Muhammad  Isrul,  S.Si.,  M.Si.,  Apt  dan kepada  Sri  Anggarini  R,  S.Si.,  M.Si  atas semua  waktu,  tenaga  dan  pikiran  yang telah  diberikan  dalam  membimbing, mengarahkan,  memberi  saran  maupun kritik  sehingga  hasil  penelitian  ini menjadi lebih baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Abulude,  Ogunkoya,  &  Adebote,  2009,
Phytochemical And Antibacterial Investigation  Of  Crude  Extracts  Of Leaves And Stem Barks Of Anacardium Occidentale, Continental J. Biological Sciences 2, 12 –16.
Arleine  R.  I.  Tangkuman.,  dkk.  2017.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Kulit Batang Jambu Mete (Annacardium occidentale  L.)  Dalam  Menghambat Pertumbuhan  Bakteri  Dari  Air  Liur Penderita Sariawan. Pharmacon Jurnal Ilmiah  Farmasi, UNSRAT. Azdar,  M,  Setiawan.,  dkk.  2016.  Uji  Daya
Hambat Antibakteri Fungi Endofit Kulit Jeruk   Nipis (Citrus aurantifolia) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal  Sains  Farmasi  &  Klinis,  IAI Sumatera Barat.
Castillo, U.F., Strobel,  G.A.,  Ford, E.J., Hess, W.M .,  Poter, H.,  Jenson, J.B., dkk,
2002,  Munumbicins, Wide Spectrum Antibiotics  Produced  By  Streptomyces NRRL   30562, Endophytic On Kennedia Nigriscans. Microbiology,148:2675-2685. Castillo, U.J., Harper, K.., Strobel, G.A., Sears,
J.,  Alesi,  K.,  Ford,  E., dkk,
2003,Kakandumycins, Novel Antibiotics  From  Streptomyces  Sp. NRRL30566,  anEndo  -  Phyteof Grevillea  Pteridifolia.  FEMS  Lett, 24:183-190.
Dalimartha,S.,  2001,  Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia, Jilid 2, 80,   Pustaka Bunda, Jakarta.
Dalimartha,S.,  2006,  Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia,  Jilid  2,  Trubus  Agriwidya, Jakarta.
Deby.  A.  Mpilah.,  dkk.  2012.  Uji  Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana (Coleus  atropurpureus [L]  Benth)  Terhadap  Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan
Pseudomonas  aeruginosa  Secara  IN- VITRO. Jurnal Penelitian, UNSRAT. Dharmojono.  2001.  Lima  belas  Penyakit Menular  dari  Binatang  ke  Manusia.
Milenia Populer, Jakarta.
Gunawan,  S.G(ed).  2007,  Farmakologi  dan Terapi, edisi 5, UI Press, Jakarta.
Guo, B.,Dai,  J.,Ng,  S.,Huang,  Y.,Leong,  C., Ong,W.,  dkk,  2000,  Cytonicacid  A and  B,  novel  tridepsid  einhibitor  of CMV  protease  from  the  endophytic fungus  Cytonaena  sp.  J.  Nat.  Prod, 63:602-604.
Herbie, T. 2015. Kitab Tanaman Berkhsiat Obat. Octopus, Yogyakarta.
Harrison,L., Teplow,  C.,  Rinaldi,  M.,  and Strobel,G.A. dkk, 1991, Pseudomycins, afamily  of  novel  peptides  from Pseudomonas Syringae, possessing broad spectrum antifungal   activity. J. Gen. Microbiol. 137:2857-2865.
Horn  WS. ,Simmonds  M.S.J.,Schartz,  RE., and  Blaney,  W.M. dkk.  1995, Phomopsichalasin, anovelantimi crobial  agent  from  an  endophytic
Phomopsis Spp.
Tetrahedron,
14:3969-3978.
Jay, J.M, 2000. Modern Food Microbiology, 6th. Ed. Aspen Publisher, Inc., Maryland.
Jawetz, E., J.L. Melnick, and E.A. Adelberg, 2001.  Mikrobiologi  untuk  Profesi Kesehatan (Review of Medical Mikrobiology)  Diterjemahkam  oleh  H. Tomang. Jakarta. Jawetz,  E.,  Melnick,  J.L.  &  Adelberg,  E.A, 2005. Mikrobiologi Kedokteran, diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas  Airlangga,  233-235  & 363-364. Jakarta: Salemba Medika. Kumala  S.,  dkk,    2006,    Aktivitas  Metabolit Bioaktif  Mikroba  Endofitik  Tanaman Trengguli (Cassia fistula L). jurnal  farmasi  Indonesia  3(2)  :  97-
102
LPPM  IPB,  Pusat  Studi  Biofarmaka  dan
Gagas  Ulung,  2014.  Sehat  Alami Dengan Herbal  250  Tanaman  Herbal Berkhasiat  Obat  +  60  Resep  Menu Kesehatan. PT. Gramedia Pustaka Utama,  Jakarta.  Lay,  b.w.,  and  s. Hastowo, 1992. Mikrobiologi. Rajawali
Press, Jakarta.
Lee,  J. Lobkovsky, E., Pliam  N.B.,  Strobel, G.A., and Cl ardy,J., dkk, 1995,Subglutinols A   and B : immuno suppressive  compounds  from  the endophytic fungus Fusarium subglutinans.  J.  Org.  Chem,  60:7076- 7077.
LiJ.Y., Harper, J.K., Grant, D.M., Tombe, B.O., Basyal,  B.,  Hess,  W.M., dkk,
AmbuicAcid,  a  Highly  Functionalized Cyclohexen  one  With  Antifungal
Activity From Pestalotiopsis
Spp.
And  Monochaetia  Spp.  Pytochemistry, 56:463-468.
Lucky  dkk,  1994.  Batang  Negatif  Gram. Dalam:  Syahrurachman  et  al.  Buku Ajar  Mikrobiologi  kedokteran  Edisi Revisi. Jakarta: Binarupa Aksara Mycek  dkk,  2001,  Farmakologi  Ulasan Bergambar  edisi  2,  Penerbit  Widya Medika, Jakarta
Miller,  RV.,  Miller,  C.M.,  Garton-Kinney,
D.,  Redgrave,  B.,  J.  Sears,  Condron, M. dkk, 1998, Ecomycins, unique antimycotics from
Pseudomonas  virid  flava.  J.  Appl. Microbiol. 84:937-944.
Notoatmodjo,  S.  2012,  Metodologi  Penelitian Kesehatan, Rineka Cipta, Jakarta.
Pan, X., Chen, F., Wu, T., Tang, H., and Zhao, Z.  2009.  The  acid,  Bile  Tolerance  and Antimicrobial  property  of  Lactobacillus acidophilus  NIT.  J.  Food  Kontrol  20  : 598-602
Prihandani,  S,S,.  Poeloengan,  M,.  Noor,
S,M,.  Andriani,  2015.  “Uji  daya
Antibakteri  Bawang  Putih  (Allium sativum l.) Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli,  Salmonella  typhimurium  dan Pseudomonas aeruginosa dalam
meningkatkan  Keamanan  Pangan”. Jurnal. Bogor. 53-58.
Prihatiningtias,W.  2005.  Senyawa  Bioaktif Fungi Endofit Tumbuhan Akar Kuning (Fibraurea  chloroleuca  Miers)  Sebagai
Agensia  Antimikroba.  Tesis.  Program Studi Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana UGM. Pan,  X.,  Chen,  F.,  Wu,  T.,  Tang,  H.,  and Zhao,  Z.  2009.  The  acid,  Bile Tolerance and Antimicrobial property of Lactobacillus
Rianto dkk /Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(2);2018 : 109-121
acidophilus  NIT.  J.  Food  Kontrol 20:598-602
Simanjuntak, P., Parwati, T., Bustanussalam,
Prana, T.K., S. Wibowo, dan Shibuya,
H. 2002, Isolasi  dan  kultivasi mikroba  endofit  penghasil  senyawa alkaloid kinkona dari   Chinchona  spp. J. Mikrobiol. Indon, 7(2) : 27-30.
Strobel,G.A dkk, 1999. Cryptocandin, apotent
antimycotic  from  endophytic  fungus
Cryptosporiopsis quercina.
Microbiology 145 : 1919-1926.
Strobel,  G.  A.  2002,  Microbial  gifts  from  rain
forests. Can. J. Plant Pathol, 24:14-20.
Strobel  G.A.,  and  Daisy  B.  2003,
Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their   Natural Products. Microbiol. and Mol. Biology Rev. 67(4):491-502. Suraatmaja, S, 2007. Kapita Selekta Gastroenterologi  Anak.  Sagung  Seto. Jakarta. Tan, R.X., and Zou, W.X. 2001, Endophytes; a richsource of
functional metabolites. Nat. Prod.
Rep.  18:448-459. Torar. S. S. Toy., dkk. 2015. Uji Daya  Hambat Ekstrak Rumput Laut   Gracilaria  SP
Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus.  Jurnal  e- GIGI, UNSRAT.
Yuniarti,  T.  2008.  Ensiklopedia  Tanaman Obat  Tradisional.  Media  pressindo. Yogyakarta:   65-67.
Wijaya,  A.  2015.  Serbuk  Instan  Ekstrak
Daun Jambu mete (anacardium occidentalel.)   Sebagai Antibakteri Helicobacter  pylori  pada  Penyakit Grastitis. Jurnal Penelitian. Volk,  W.  and  Wheeler,  A.  1988, Mikrobiologi
Dasar, Erlangga, Jakarta. Zhang,  B.,  dkk,  1999,  Discovery  af  small molecule insulin mimetic with antidiabetic activity in mice. Science 284:974-981.
Rianto dkk /Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(2);2018 : 109-121