## EFEK KOLAGEN DARI BERBAGAI JENIS TULANG IKAN TERHADAP KUALITAS MIOFIBRIL PROTEIN IKAN SELAMA PROSES DEHIDRASI
[Effect of Various Fish Bone Collagens on the Quality of Myofibril Fish Protein During Dehydration Process]

## Yudhomenggolo Sastro Darmanto*, Tri Winarni Agustini, dan Fronthea Swastawati
Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Semarang
Diterima 16 Juni 2010 / Disetujui 14 Maret 2012

## ABSTRACT
Increase in fish fillet export in Indonesia has caused an increase in its waste such as bones, spines, skin and entrails of fish. Fish bones can be processed by demineralization to produce collagen, an important food additive. The effect of addition of 5% of collagen obtained from fresh water, brackish  water  and  sea  water  fish  bone  on  the  fish  protein  miofibril  of  grouper  was  investigated  in  this  research.  Water  sorption  isotherm,  Ca- ATPase activity, gel strength, water holding capacity, folding test and viscosity during dehydration process were evaluated. The results showed that collagens made from various fish bones have different Ca-ATPase activity. The reduction rate of Ca-ATPase activity were in accordance with the reduction of water sorbtion isotherm, gel forming ability, water holding capacity, viscosity and folding test during dehydration process.
Key words : dehydration process, fish bones collagen, myofibril protein

## PENDAHULUAN
1
Berdasarkan  data  nasional  Departemen  Kelautan  dan Perikanan (2007), produksi ikan Nila sebesar 169,390 ton, ikan Bandeng 212,883 ton dan ikan  Tengiri 131,225 ton per tahun. Limbah  tulang  ikan  yang  dihasilkan,  ikan  Nila  15,5%,  ikan Tengiri  12,5  %,  dan  ikan  Bandeng  12%.  Tulang  ikan  dapat diolah menjadi kolagen melalui proses demineralisasi dan dapat dimanfaatkan  sebagai  bahan  tambahan  pangan  yang  ber- kualitas.
Kolagen merupakan komponen struktur utama dari jaringan pengikat  meliputi  30%  dari  total  protein  pada  jaringan  organ tubuh  vertebrata  dan  invertebrata  (Poppe,  1997).  Pada mamalia,  kolagen  terdapat  pada  kulit,  tulang  rawan,  dan jaringan  pengikat  (Johns,  1977).  Menurut  Trimmerinda  (2007), kolagen merupakan komponen utama lapisan kulit dermis yang terbuat  dari  sel  fibroblast  yang  tersusun  dari  berbagai  asam amino.  Menurut  Poedjiadi  (1994),  kolagen  merupakan  jenis protein  yang  mempunyai  struktur heliks  triple dan  terdiri  atas glysin,  proline  dan  hidroksi  proline,  tetapi  tidak  mengandung sistein,  sistin  dan  tripthopan.  Balian  dan  Bowes  (1997),  me- nerangkan  bahwa  kolagen  banyak  mengandung  asam  amino dasar berbentuk glutamin dan aspargin.
Beberapa  tahun  terakhir  ini  semakin  meningkat  industri pengolahan ikan berbasis protein gel seperti sosis ikan, nugget ikan, pasta ikan, fish cake , kamaboko, chikuwa , bakso ikan, kaki naga  dan  lain  sebagainya.  Berbagai  produk  pangan  berbasis gel protein tergantung dari jumlah  miofibril protein yang ada di dalamnya. Suzuki (1981) menyatakan bahwa protein pada ikan 65–75% tersusun dari miofibril protein, sehingga miofibril protein merupakan objek penelitian  yang sangat dominan bagi produk pangan yang berbasis protein gel.
* Korespondensi Penulis :
E-mail : darmanto_thp@undip.ac.id
Peneliti  ingin  mengetahui  efektivitas  kolagen,  dengan  cara mengaplikasikan  pada  produk  pangan  yang  berbasis  miofibril protein.  Penambahan  kolagen  pada  miofibril  protein,  diharap- kan mempunyai fungsi untuk mempertahankan daya awet serta menambah nutrisi yang terdapat dalam produk tersebut.
Tujuan  penelitian  adalah  mempelajari  efek  penambahan kolagen  dari  tulang  ikan  air  tawar,  air  payau,  dan  air  laut  ter- hadap mutu miofibril selama proses dehidrasi.

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Bahan penelitian adalah kolagen yang diperoleh dari tulang ikan Nila (air tawar), Bandeng (air payau) dan Tenggiri (air laut). Tingkat  kualitas  kolagen  yang  dihasilkan  melalui  proses demineralisasi  diketahui  dengan  cara  menganalisa  kandungan fosfor  dan  kalsium  pada  kolagen.  Disamping  itu,  dilakukan analisa proksimat serta jumlah rendemen dari kolagen tersebut.
Preparasi kolagen (Peranginangin et al ., 2006) Tulang ikan setelah dicuci, dihilangkan lemaknya, kemudian dikeringkan.  Selanjutnya  tulang  ikan  direndam  dalam reagen 4%  HCl  1N  selama  4  x  24  jam,  dan  dinetralkan  dengan  air distilasi sampai pH 7,00. Setelah itu tulang ikan dikeringkan dan dihaluskan dengan mortar.

## Preparasi miofibril protein (Darmanto, 1999
a )
Ikan setelah dipisahkan dari isi perut, kepala, duri dan kulit, dagingnya dicuci dengan reagen 0,1 M KCl, 20 mM trismaelate buffer (pH 7,0) sebanyak 3 kali. Selanjutnya daging ikan dipress dengan  alat  pengepres  hidrolik  agar  kadar  air  menjadi  80%. Daging ikan diencerkan lagi dengan reagen 0,1 M KCl, 20 mM trismaelate  buffer (pH  7,0),  kemudian  dihomogenkan  dengan Waring  blender dan  disaring  dengan  net  nilon  #16.  Larutan
daging ikan yang dihasilkan ditambahkan dengan 1% triton X- 100,  dan  didiamkan  selama  30  menit  dalam  ruangan  dengan suhu 5°C. Langkah selanjutnya larutan daging ikan disentrifuse dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Substrat  yang dihasilkan  diencerkan  dengan reagen 0,1  KCl,  20  mM trismaelate  buffer (pH  7,0)  dan  disentrifuse  dengan  3000  rpm selama  10  menit.  Proses  ini  dilakukan  beberapa  kali  sampai supernatan  menjadi  jernih.  Setelah  jernih,  substrat  diencerkan lagi dengan air distilasi dingin dan disentrifuse dengan kecepat- an 5000 rpm selama 10 menit. Terakhir, substrat yang dihasil- kan disentrifuse lagi dengan kecepatan 10,000 rpm selama 20 menit, endapan yang diperoleh adalah miofibril protein.

## Proses dehidrasi miofibril protein
Sejumlah  100  g  miofibril  protein  ditambah  5%  kolagen, kemudian  diatur  sedemikian  rupa  sehingga  pH  6,8,  dengan menambah  NaOH  atau  HCl.  Kemudian  miofibril  protein  dan kolagen  dilumatkan  dengan  mortar  selama  10  menit  dalam ruangan 5°C. Supaya terjadi dehidrasi, lumatan miofibril protein tersebut  dimasukkan  dalam  plastik  selofan,  dan  ditempatkan dalam kotak yang berisi silika gel, dengan interval waktu 2 jam dalam  suhu  70°C  miofibril  protein  dianalisa  kadar  air,  aktivitas air dan aktivitas enzim Ca-ATP.

## Analisis aktivitas air (Aw) (Akiba, 1961)
Analisa  aktivitas  air  dilakukan  dengan  metode  oil  mono- meter.  pada  suhu  10°C.  Besarnya  aktivitas  air  dapat  dihitung dengan rumus sebagai berikut :
Keterangan: Aw: aktivitas air; ρ: keseimbangan tekanan uap sampel ρo:  keseimbangan  tekanan  uap  air;  RH:  rapat  uap  gas  terhadap udara

## Analisis kadar air (Sikrosi, 1989)
Analisa kadar air dilakukan dengan menghitung berat awal dan berat akhir miofibril protein setelah dimasukkan pada oven pada  suhu  105°C  selama  18  jam  atau  berat  miofibril  protein tersebut menjadi konstan.

## Analisis aktivitas enzim Ca-ATP (Katoh
et al., 1977)
Sejumlah  1  gram  miofibril  protein  dilarutkan  dalam  19  ml reagen 0,1  M  KCl,  20  mM trismaelate  buffer (pH  7,0),  setelah beberapa  saat  dihomogenkan  dengan waring  blender .  Larutan yang  dihasilkan  selanjutnya  sebagian  dianalisa  konsentrasi protein dan yang lain untuk analisa aktivitas enzim Ca-ATP.
Sejumlah 5 ml reagen campuran terdiri dari 3,5 ml reagen Ca-ATP, 1ml sampel dan 0,5 ml 10 M ATP, dimasukkan dalam pemanas  air  selama  5  menit  pada  suhu  25°C,  setelah  terjadi reaksi  beberapa  saat  kemudian  reaksi  dihentikan  dengan menambah 1 ml TCA 30%. Proses selanjutnya reagen diambil 1 ml,  ditambah  dengan  2  ml ammonium  molidate dan  0,5  ml reagen elon ,  setelah  dibiarkan  selama  45  menit,  kemudian disaring  dan  filtratnya  diperiksa  dengan  spektrofotometer  640 nm.  Besarnya  aktivitas  enzim  Ca-ATP  dihitung  dengan  satuan micro moles per menit inorganik pospat (Pi µ mol/menit/mg).
Analisis  data  aktivitas  enzim  Ca-ATP  (Katoh et  al., 1977) Miofibril  protein  adalah  salah  satu  komponen  protein  pada ikan,  oleh  aktivitas  enzim  ATP-ase,  miofibril  dipecah  menjadi ATP (Suzuki, 1981). Besarnya aktivitas enzim Ca-ATP selama proses  dehidrasi  dihitung  dengan  persamaan  adalah  sebagai berikut (Katoh et al., 1977):
Aktivitas enzim Ca-ATP =L n {(1-pi) x (6/5) x (1/31) x (1/5) x 1 (5/A)}
Keterangan: Pi: diperoleh dari persamaan regresi standar phorphorus ; y  =  0,031  x  -0,024;  A:  diperoleh  dari  persamaan  regresi  standar albumin biovine serum; y = 0,043 x – 0,091
Analisis gel strength (Matsumoto et al., 1997) Sejumlah  100  gram  miofibril  protein  ditambah  0,3  %  NaCl kemudian dilumatkan, dicetak dan dipanaskan pada suhu 60°C selama 1 jam. Setelah dingin, miofibril dipotong dengan ukuran diameter 2 cm ketebalan 1,5 cm, ditekan dengan menggunakan alat  Food  checker  type  2141  Sankagaku  Co.  LTD.,  dengan diameter probe 5 mm, dilakukan sampai 6 kali.
Keterangan:  D:  daya  rentang  (g/cm 2 );  L:  luas  bahan  (cm 2 );  K: kemuluran (cm); p: panjang (cm)

## Viskositas miofibril protein (Migata dan Suzuki, 1989)
Miofibril  protein  diencerkan  dengan reagen 0,6  M  KCl,  20 mM trismaelate  buffer (pH  :  7,00),  setelah  disentrifuse  super- natannya  diambil  2  mg/ml  kemudian  diukur  dengan Ostwald Viscometer pada suhu 25°C.
Analisis water holding capacity (WHC) (Shimizu et al ., 1981) Miofibril dengan ukuran panjang 1,5 cm, lebar 1,5 cm, tinggi 0,5  cm  diletakkan  diantara  kertas  saring,  kemudian  ditekan dengan  kompresor  dengan  kekuatan  10  kg/cm 2 ,  selama  2 menit. Besarnya water holding capacity dapat dihitung dengan formula sebagai berikut :
Keterangan: Bo: berat sampel; M: kadar air sampel; B1: Berat air pada kertas filter
Analisis f olding test (Matsumoto et al., 1997)
Sejumlah  100  gram  Miofibril  protein  ditambah  0,3%  NaCl kemudian dilumatkan, dicetak dan dipanaskan pada suhu 60°C selama 1 jam. Setelah dingin dipotong dengan ukuran diameter 2 cm ketebalan 0,5 cm, kemudian dilipat menjadi setengah dan seperempat lingkaran dengan kriteria hasil sebagai berikut : AA  :  tidak retak bila dilipat menjadi seperempat lingkaran A    :  tidak retak bila dilipat menjadi setengah lingkaran B   :  retak bila dilipat menjadi setengah lingkaran C :  pecah  menjadi  2  bagian  bila  dilipat  menjadi  setengah lingkaran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Komposisi kolagen tulang ikan Nila, Bandeng dan Tenggiri, tercantum dalam Tabel 1.
Tabel 1. Komposisi kolagen tulang ikan Komposisi Nila Bandeng Tenggiri Protein (%) 25,06 32,99 31,92 Lemak (%) 0,74 1,32 1,41 Abu (%) 50,75 53,41 54,63 Kadar Air (%) 7,46 8,48 5,29 Fosfor (%) 2,06 0,69 0,92 Kalsium (%) 18,33 1,91 3,39 Rendemen (%) 56,45 36,22 49,8
Hasil  analisa  tersebut  menunjukkan  bahwa  kolagen  tulang ikan  air  tawar,  payau  dan  laut,  mempunyai  komposisi  yang berbeda-beda.  Khususnya,  kolagen  dari  ikan  Nila  kandungan fosfor  dan  kalsium  lebih  tinggi  yaitu  nilai  fosfor  lebih  dari  1%, sedangkan  kalsium  lebih  dari  5%.  Hal  tersebut  merupakan indikasi bahwa kualitas kolagen tulang ikan Nila kurang sesuai dengan apa yang diharapkan. Disamping itu, kolagen dari ikan Nila  kandungan  proteinnya  lebih  rendah  jika  dibandingkan dengan kolagen ikan Bandeng dan Tenggiri. Menurut Ward and Courts (1977), jumlah kalsium dan fosfor tinggi harus dihindari untuk mendapatkan hasil kolagen yang berkualitas baik.
Isotherm  absorbsi  air  adalah  hubungan  antara  aktivitas  air dan kadar air suatu bahan. Menurut Winarno (1997), bahwa air terikat  dalam  suatu  bahan  akan  berpengaruh  terhadap  besar kecilnya kadar air dan aktivitas air, sehingga akan berpengaruh terhadap  daya  tahan  bahan  pangan  tersebut.  Sorbsi  isotermis air,  dibagi  menjadi  3  bagian,  yaitu Monolayer  water , Multilayer water dan Capilary water . Disamping itu, keberadaan air dalam satu  bahan  juga  akan  berpengaruh  terhadap  tekstur,  citarasa, perubahan  warna  yang  akan  menyebabkan  kerusakan  bahan pangan tersebut.
Gambar  1.    Sorbsi  isotermis  air  dari  berbagai  kolagen  pada  miofibril protein
Gambar 1 menunjukkan bahwa sorbsi isotermis air kolagen dari  berbagai  jenis  tulang  ikan  berbeda-beda.  Kolagen  tulang ikan  Bandeng  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan  ikan Tenggiri, dan Nila tetapi kolagen tulang ikan  Nila dan Tenggiri kurang  jelas  perbedaanya.  Namun,  apabila  dicermati,  air menunjukkan  grafik  yang  sigmoid  pada  posisi  aktivitas  air antara 0,05 - 0,17 dan 0,75 - 0,83. Demikian juga terlihat bahwa penurunan kadar air lebih banyak pada miofibril tanpa kolagen.
Diduga kolagen mempunyai peran penting dalam pengikatan air yang akan menyebabkan terjadinya perubahan posisi air pada miofibril protein. Oleh Nakano et al. (1979), diterangkan bahwa perubahan  posisi  air  diindikasikan  oleh  perubahan monolayer dan multilayer water .
Miofibril protein dalam suatu bahan selama proses dehidrasi maupun pembekuan mengalami denaturasi (Asako et al. , 2005; Yamashita et al. , 2003; Wang et al. , 2009). Darmanto (1999 b ), menjelaskan  bahwa  denaturasi  protein  pada  miofibril  meng- akibatkan daya ikat air rendah, kekuatan gel lemah, dan ikatan lemak  berkurang.  Matsumoto  (1980),  menyatakan  bahwa denaturasi protein menyebabkan protein tidak dapat diekstraksi dengan  larutan  garam.  Hasil  penelitian,  efek  penambahan kolagen  pada  miofibril  terhadap  aktivitas  enzim  Ca-ATP  dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2.  Hubungan antara aktivitas air dan aktifitas relatif Ca-ATP- ase dari berbagai kolagen pada miofibril protein
Grafik 2 tersebut menunjukkan aktivitas enzim Ca-ATP dari berbagai jenis kolagen tulang ikan berbeda-beda. Berturut-turut, kolagen  tulang  ikan  Tenggiri  lebih  tinggi  dari  kolagen  ikan Bandeng dan kolagen tulang Nila. Secara keseluruhan aktivitas enzim Ca-ATP menurun drastis ketika terjadi penurunan Aw dari 1 hingga 0,8 dan tidak terjadi penurunan yang berarti ketika Aw turun  hingga  0,2.  Hal  tersebut  diduga  bahwa  miofibril  protein pada kondisi Aw lebih besar dari  0,8 terjadi denaturasi protein yang  disebabkan  oleh  berbagai  mikroorganisme.  Menurut Winarno  (1997),  denaturasi  protein  mempunyai  2  macam  arti, yaitu:  pengembangan  rantai  peptide  yang  terjadi  pada  rantai polipeptida,  dan  pemecahan  protein  menjadi  unit  yang  lebih kecil.  Salah  satu  indikator  kualitas  miofibril  protein  adalah aktivitas enzim Ca-ATP (Cao et al. , 2006). Menurut Hossain et al. , 2004 aktivitas enzim Ca-ATP merupakan indikasi perubahan struktur  dan  perubahan  posisi  air  selama  proses  dehidrasi. Beberapa metode yang lain untuk mengukur denaturasi protein adalah solubilitas, viskositas, aktivitas enzim ATP dan elektron microscopy  (Suzuki,  1981).  Darmanto  (1985),  menyatakan bahwa  penurunan  kualitas  protein  dari  berbagai  bentuk  dan jenis ikan pararel dengan penurunan viskositas protein tersebut selama proses pembekuan dan dehidrasi. Hal ini sesuai dengan penelitian Ruttanapornvareesakul et al. (2005) dan Zhang et al. (2002),  bahwa  penurunan  aktivitas  enzim  ATP  dari  miofibril protein  pada  berbagai  jenis  udang  selama  proses  dehidrasi. Dari  hasil  penelitian,  penambahan  kolagen  dari  berbagai  jenis tulang  ikan  pada  miofibril  protein,  seperti  terdapat  dalam Gambar 3.
Kontrol Tenggiri  Nila Bandeng
Ka da r A ir (%) 100 80 60 40 20 0 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 Aktivitas Air Ak tiv ita s R el at if C a- AT Pa se (%) Aktivitas Air 100 50 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Tenggiri Nila Kontrol Bandeng
Gambar  3.  Hubungan  antara  aktivitas  air  dan  viskositas  relatif  dari berbagai kolagen pada miofibril protein
Gambar  tersebut  diatas  terlihat  bahwa  penurunan  aktivitas air  bersamaan  dengan  penurunan  viskositas  miofibril  protein selama  proses  dehidrasi.  Miofibril  protein  tanpa  penambahan kolagen  pada  awal  penelitian  viskositas  menurun  dengan drastis  sampai  pada  Aw  0,9,  kemudian  penurunan  viskositas perlahan-lahan  sampai  pada  akhir  penelitian.  Akan  tetapi, dengan  penambahan  kolagen,  penurunan  viskositas  miofibril protein  terjadi  penurunan  secara  perlahan.  Menurut  Darmanto (1999 b ), shellfish protein  hydrolysate  dari  kerang  mutiara ditambahkan  pada  miofibril  ternyata  menghambat  laju penurunan denaturasi. Inada et al . (1992), menerangkan bahwa penurunan  viskositas  protein  paralel  dengan  penurunan solubilitas dan aktivitas enzim Ca-ATP.
Hasil  penelitian Gel  Strength , Water  Holding  Capacity dan Folding Test pada miofibril dengan penambahan berbagai jenis kolagen seperti dalam Tabel 2.
Tabel 2.   Efek penambahan kolagen tulang ikan  Nila, Bandeng, dan Tenggiri pada miofibril protein Parameter Kontrol Jenis Ikan Nila Bandeng Tenggiri Gel s trength (gcm 2 ) 400,01 433,63 577,97 695,00 WHC (%) 80,02 84,20 86,20 86,70 Folding test A AA AA AA
Hasil  penelitian gel  strength dari  ketiga  jenis  ikan,  bahwa kolagen  dari  tulang  ikan  Nila  sangat  rendah  (<  500  gcm 2 ). Sedangkan  untuk  ikan  Bandeng  dan  Tenggiri  >  500  gcm 2 . Menurut  Shimizu et  al .  (1981),  dikatakan  bahwa gel  strength < 500  gcm 2 termasuk  kurang  baik,  500  -  1000  gcm 2 termasuk baik, dan >1000 gcm 2 termasuk sangat baik.
Hasil  penelitian Water  Holding  Capacity menunjukkan bahwa  dari  ketiga  jenis  kolagen  tulang  ikan  berbeda,  berturut- turut  ikan  Tenggiri  lebih  tinggi  jika  dibandingkan  dengan  ikan Bandeng  dan  ikan  Nila. Water  Holding  Capacity adalah  salah satu  kekuatan  untuk  mengikat  air  pada  suatu  bahan  oleh molekul-molekul lain melalui ikatan yang berenergi tinggi seperti protein,  karbohidrat,  garam,  dan  sebagainya  (Winarno,  1997). Suatu  bahan  lebih  banyak  mengikat  air  menunjukkan  kualitas bahan  tersebut  sangat  tinggi  (Ocano-Hiquera et  al. ,  2011). Selanjutnya  hasil  penelitian folding  test menunjukkan  bahwa dengan  penambahan  kolagen  dari  berbagai  jenis  tulang  ikan hasilnya  AA,  sedangkan  tanpa  penambahan  kolagen  hasilnya A.

## KESIMPULAN
Penambahan kolagen dari berbagai jenis tulang ikan dapat menekan laju penurunan aktivitas enzim Ca-ATP pada miofibril protein selama proses dehidrasi, terutama pada saat posisi Aw > 0,8, kemudian menurun secara perlahan-lahan paralel dengan penurunan aktivitas air. Semakin tinggi gel strength , folding test , viskositas  dan water  holding  capacity ,  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  kualitas  miofibril  protein.  Kolagen  dari  jenis tulang ikan air laut mutunya lebih baik jika dibandingkan dengan kolagen tulang ikan air payau dan air tawar.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  atas  bantuan  dana  dari Kementerian  Pendidikan  Nasional  sesuai  dengan  Surat Perjanjian  Pelaksanan  Hibah  Kompetitif  untuk  Publikasi  Inter- nasional tahun Anggaran 2009 Nomor: 693/SP2H/PP/ DP2M/X dan  semua  pihak  yang  ikut  membantu  demi  kelancaran kegiatan tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Akiba  M.  1961.  Studies  on  Bound  water  in  Fish  Muscle. Memoirs  of  the  Faculty  of  Fisheries.  Hokkaido  University, Japan 9: 85-179.
Asako K, Hossain MA,  Kuwahara K, Nozaki Y. 2005.  Effect of trehalse  on  the  gel-forming  ability,  state  of  water  and miofibril  denaturation  of  horse  mackerel Trachurus japonicas surimi  during  frozen  storage.  J  Fisheries  Sci  71:
367-373.
Balian  G,  Bowes  JH.  1997.  The  Structure  and  Properties  of Collagen. In: A. G. Ward and A Courts (Eds). The Science and Technology of Gelatin. Academic Press. London, New York.
Cao MJ, Xin-Jin Jiang, Hui-Chang Zhong, Zhi-Jun Zhang, We- Jin  Su.  2006.  Degradation  of  myofibrillar  proteins  by  a myofibril-bound  serine  proteinase  in  the  skeletal  muscle  of crucian carp ( Carasitus auratus) . J Food Chem 94: 7-13.
Darmanto YS. 1985. The Effect  of Frozen and Storage on the Quality  Protein  of  Various  Morphological  (Roun,  Dressed, Fillet,  Steak,  Chunk)  of  White  Croaker,  Lizard  Fish  an Pacific  Mackerel.  Thesis,  Faculty  of  Fisheries,  Nagasaki University, Japan.
Darmanto YS. 1999 a . Efek hidrolisa protein ikan rucah terhadap “state  of  water”  pada  miofibril  protein  selama  pada  proses dehidrasi.  Majalah  Ilmiah  Perikanan  Ilmu  Kelautan  ISSN: 1410-7155. 2: 17-21.
Darmanto  YS.  1999 b .  Effect  of  shellfish  protein  hydrolysate (SPH)  of  pearl  oyster  meat,  on  the  state  of  water  and denaturation  of  myofibrils  during  dehydration  process.  J Coastal Development ISSN: 1410-5217. 2: 335-345.
Departemen  Kelautan  dan  Perikanan.  2007.  Statistik  Kelautan dan Perikanan 2007. Jakarta.
Kontrol Tenggiri  Nila Bandeng Aktivitas Air Vis ko sit as R ela tif (η r. 2 m g/ m ) 1.6 1.4 1.2 1 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
Hossain  A  Md,  Abu  Alikhan  M,  Tadashi  Ishihara,  Kenji  Hara, Kiyoshi  Osatomi,  Kazufumi  Osaka,  Yukihori  Nazaki.  2004. Effect of proteolytic squid protein hydrolysate on the state of water  and  denaturation  of  Lizardfish  ( Saurida  wanieso ) myofibrillar  protein  during  freezing.  J  Innovative  Food  Sci and Emerging Technol 5: 73-79.
Inada N, Ichikawa H, Nozaki Y, Hiraoka K, Yokoyama T, Tabata Y. 1992. Effect of sugars on hydration and denaturation of fish  myofibrillar  protein  due  to  dehydration  with  silica  gel. Nippon  Shokuhin  Kogyo  Gakkaishi.  Tokyo  Japan  39:  211- 218.
Johns  P.  1977.  The  Structure  and  Composition  of  Collagen Containing Tissue. In: A. G. Ward and A. Courts (Eds). The Science and Technology of Gelatin. Academic Press,  New York. P 564.
Katoh  N,  Uchiyama  H,  Tsukamoto  S,  Arai  K.  1977.  A Biochemical  Study  on  Fish  Myofibrils  ATPase.  Bull.  Jap. Soc. Sci. Fish.
Matsumoto JJ, Tsuchiya T, Noguchi S, Ohnishi M, Akakane, T. 1997.  Present.  26 th Intern.  Congr.  Pure  and  Applied  Chem Tokyo.
Matsumoto  JJ.  1980.  Chemical  Deterioration  of  Protein. Whitaker  JR,  Fujimaki  M,  (Ed),  J  Am  Chem  Soc  ACS Symposium series 7: 95-124.
Migata  M,  Suzuki  T.  1989.  Study  on  The  Viscosity  of  Fish Actomyosin  II,  Viscosity  Change  of  Carp  Actomyosin Solution on Storage. Bull. Jap. Soc. Fish.
Nakano H, Akiba M, Yasui T. 1979. The water state of myosin gel  during  dehydration.  J  Nippon  Suisan  Gakkaishi  59: 1209-1211.
Ocano-Hiquera  VM,  Maeda-Martnez  AN,  Marquez-Rios  E, Canizales-Rodriquez DF, Castilo-Yanez FJ, Ruiz-Bustos E, Graciano-Verdug  AZ,  Plascencia-Jatomea  M.  2011. Freshness  assessment  of  ray  fish  stored  in  ice  by biochemical, chemical and physical methods. J Food Chem 125: 49-54.
Peranginangin  Hadi  S,  Suryanti.  2006.  Ekstraksi  gelatin  dari tulang ikan kakap merah ( Lutjanus sp) secara asam. Jurnal Pasca  Panen  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan.
Badan Riset Kelautan dan Perikanan, Jakarta. 1: 27-34.
Poedjiadi A. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Poppe  J.  1997.  Gelatin.  In:  Imeson  A  (Ed).  Thikening  ang Gelling Agents for Food. Blackie Academic and Profesional, London. P 123.
Ruttanapornvareesakul  Y,  Ikeda,  Hara  M,  Osaka  K,  Kongpun KO,  Nozaki  Y.  2005.  Effect  of  shrimp  head  protein hydrolysates on the state of water and denaturation of fish myofibrils during dehydration. J Fisheries Sci 71: 220-228.
Shimizu U, Machida R, Takenami S. 1981. Species Variations in The  Gelforming  Characteristics  of  Fish  Meat  Paste,  Bull. Jap. Soc. Fish.
Sikrosi  ZE.  1989.  Seafood  Resources,  Nutritional  Composition and  Preservation.  Dept.  Of  Food  Preservation  and Technical  Microbiology.  Technical  University  Politechnika Gdanska, Gdansk, Poland.
Suzuki  T.  1981.  Fish  And  Krill  Protein:  Processing  Tehnology.
London. Applied Science Publisers. Ltd. P 260.
Trimmerinda. 2007. Kolagen Lebih Keren dari pada Penemuan DNA.http://www.trimmerinda.blogspot.com/2007/10/kolagen -lebih-keren–daripenemuan–dna.Html–100k [31 Mei 2008].
Wang  PA,  Iciar  Martinez,  Ragnar  Ludvig  Olsen.  2009.  Myosin heavy  chain  degradation  during  post  mortem  storage  of Atlantic Cod ( Gadus morhua L). J of Food Chem 115: 1228- 1233.
Ward  AG,  Courts  A.  1977.  The  Science  and  Technology  of Gelatin. Academic Press. London.
Winarno FG. 1997. Kimia  Pangan dan Gizi. Gamedia  Pustaka Utama, Jakarta.
Yamashita  Y,  Zhang  N,  Nozaki  Y.  2003.  Effect  of  chitin hydrolysate  on  the  denaturation  of  lizard  fish  myofibrillar protein and the state of water during frozen storage. J Food Hydrocolloid 17: 569-576.
Zhang  N,  Yamashita  Y,  Nozaki  Y.  2002.  Effect  of  protein hydrolysate  from  antartic  krill  on  the  state  of  water  and denaturation of Lizard Fish Myofibrils during frozen storage. J Food Sci Tech 2002: 200-206.