Aktivitas Antibakteri dari Jamur Endofit Penicillium oxalicum Hasil Isolasi dari Spons Homaxinella tanitai
Ni Putu Diah Parwita Sari 1 , Bian Dwi Cahyo 2 , Noor Erma Nasution Sugijanto 3 , Suciati 3 *
1 Program Studi Pendidikan Apoteker, Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
2 Rumah Sakit Angkatan Laut Jala Ammari, Makassar, Indonesia
3 Departemen Ilmu Kefarmasian, Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
*Corresponding author: suciati@ff.unair.ac.id
Submitted: 11 Maret 2020 Accepted: 19 Juni 2020 Published: 27 April 2021

## Abstract
Background: Marine-derived fungi have been known as the source of many fascinating metabolites with promising bioactivities, including antibacterial activity. Objective: The aim of this study was to investigate the antibacterial activity  of  the  ethyl  acetate  extract  and  its  fractions  of  an  endophytic  fungus  isolated  from  a  marine  sponge Homaxinella tanitai fungus against Gram positive bacterias Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, as well as Gram negative bacteria Eschericia coli. Methods: Identification of the endophytic fungus was carried out based on 28S rRNA sequences. The fungus was grown in malt extract medium made with artificial sea water. Extraction was carried by liquid-liquid partition with ethyl acetate. Fractionation was carried out by flash chromatography. The  antibacterial  assay  was  conducted  using  both  microdillution  and  disk  diffusion  assays.  Phytochemical screening of the extract was carried out by TLC visualized with dyeing reagents as well as 1 H NMR spectroscopy. Results: Based on 28S rRNA, the fungus was identified as Penicillium oxalicum strain FEC-128. The ethyl acetate extract of P. oxalicum showed antibacterial activity against B. subtilis and E. coli with MIC value of 250 µg/mL, and  against  S.  aureus  with  MIC  value  of  500  µg/mL.  Flash  chromatography  fractions  of  the  extract  at concentration 100 µg/disk showed moderate inhibition against three tested bacterias. Based on TLC and 1 H NMR data the ethyl acetate extract contains terpenoid and polifenol. Conclusion: The endophytic fungus P. oxalicum isolated  from  the  marine  sponge  H.  tanitai  showed  antibacterial  activities  against  Gram  positive  and  Gram negative bacterias.

## Keywords: Penicillium oxalicum, endophytic fungus, antibacterial activity, marine sponge, Homaxinella tanitai

## Abstrak
Pendahuluan : Jamur endofit yang berasal dari biota laut spons diketahui sebagai sumber penghasil berbagai jenis metabolit sekunder. Metabolit sekunder yang dihasilkan telah dilaporkan memiliki beberapa bioaktivitas termasuk sebagai antibakteri. Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak etil asetat dan fraksi dari jamur endofit Penicillium oxalicum yang diisolasi dari spons Homaxinella tanitai terhadap bakteri Gram  positif Staphyloccus  aureus dan Bacillus  subtilis serta  bakteri  Gram  negatif Eschericia  coli . Metode : Identifikasi  jamur  endofit  dilakukan  berdasarkan  sekuensing  dari  28S  rRNA.  Jamur  endofit P.  oxalicum ditumbuhkan  pada  media malt  extract .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  partisi  cair-cair  dengan  pelarut  etil asetat.  Fraksinasi  dari  ekstrak  etil  asetat  dilakukan  dengan  metode  kromatografi  kolom  cepat.  Uji  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi  dilakukan  dengan  metode  mikrodilusi  dan  difusi  agar.  Skrining  golongan senyawa pada ekstrak dilakukan dengan metode KLT yang divisualisasi  dengan berbagai  penampak noda serta menggunakan  spektroskopi 1 H  NMR. Hasil :  Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat P. oxalicum memberikan aktivitas antibakteri terhadap B. subtilis dan E. coli dengan konsentrasi hambat minimum (KHM)  250  µg/mL  dan  menghambat  pertumbuhan S.  aureus dengan  KHM  500  µg/mL.  Hasil  uji  aktivitas antibakteri dari fraksi pada konsentrasi 100 µg/cakram menunjukkan aktifitas penghambatan yang sedang terhadap ketiga bakteri uji. Berdasarkan hasil KLT dan spektroskopi 1 H NMR, dapat diketahui bahwa ekstrak etil asetat P.
oxalicum mengandung senyawa terpenoid dan polifenol. Kesimpulan : Jamur endofit P. oxalicum yang diisolasi dari spons H. tanitai menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif.
Kata kunci : Penicillium oxalicum , jamur endofit, antibakteri, spons, Homaxinella tanitai

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi adalah penyakit yang terjadi akibat keberadaan  dan  pertumbuhan  agen  biologis  patogenik pada  organisme host individu.  Patogen  penginfeksi meliputi  bakteri,  jamur,  virus,  protozoa,  dan  parasit. Penyakit infeksi di Indonesia masih termasuk ke dalam sepuluh  penyakit  terbanyak  (Kemenkes  RI,  2019). Upaya  pengobatan  terhadap  penyakit  infeksi  telah banyak  dilakukan,  penanganan  yang  umumnya digunakan  adalah  penggunaan  antimikroba.  Tetapi, penggunaan  antimikroba  secara  tidak  rasional  baik dalam  dosis  maupun  jangka  waktu  penggunaan  dapat memicu  terjadinya  resistensi  terhadap  antimikroba sehingga  menyebabkan  terjadinya  morbiditas  dan mortalitas. Pada tahun 2014 dilaporkan angka kematian akibat resistensi antimikroba adalah 700.000 orang per tahun  (Kemenkes  RI,  2016).  Dalam  rangka  mencari alternatif  pengobatan  penyakit  infeksi,  eksplorasi terhadap aktivitas antimikroba dari bahan alam baik dari tumbuhan,  biota  luat  maupun  mikroorganisme  masih menjadi pilihan.
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut  yang dilaporkan  menghasilkan  berbagai  senyawa  bioaktif diantaranya sebagai antimikroba, antikanker, analgesik, antibakteri  dan  antijamur  (Blunt  dkk., 2018).  Schmidt dkk.,  (2000)  menyatakan  kebanyakan  bioaktivitas  dari spons  dapat  berasal  dari  mikroorganisme  yang berasosiasi  dengannya,  misalnya  jamur  dan  bakteri endofit.  Spons  dari  genus Homaxinella diketahui memiliki  berbagai  macam  bioaktivitas,  termasuk antimikroba.  Umeyama  dkk.  (1998)  telah  mengisolasi senyawa  alkaloid,  longamide  dari Homaxinella sp. Senyawa  yang  juga  diisolasi  dari  spons Agelas longissima tersebut  dilaporkan  memiliki  aktivitas antibakteri (Cafieri dkk., 1995).
Pada penelitian sebelumnya telah dilakukan isolasi tiga  jamur  endofit  yang  berasal  dari  spons  genus Homaxinella yang diambil dari perairan Pulau Barrang Lompo,  Makassar,  Sulawesi  Selatan.  Ketiga  jamur endofit tersebut diduga berasal dari kelas Deuteromycetes.  Jamur  endofit  tersebut  ditumbuhkan pada  media  padat malt  extract agar  dan  diekstraksi dengan  etanol  96%.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  jamur  endofit kode F17-5-14-3 memiliki aktivitas antibakteri terhadap
Staphyllococcus aureus (60 µg/cakram), Eschericia coli (120 µg/cakram) dan Vibrio cholerae (120 µg/cakram) (Suciati  dkk., 2014).  Pada  penelitian  ini  dilakukan identifikasi jamur endofit F17-5-14-3, selanjutnya jamur ditumbuhkan  pada  media  cair malt  extract ,  dan dilakukan  ekstraksi  dengan  pelarut  etil  asetat. Selanjutnya  dilakukan  fraksinasi  terhadap  ekstrak  etil asetat  tersebut  dengan  metode  kromatografi  kolom cepat. Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak etil asetat dan hasil fraksinasinya dilakukan terhadap bakteri S. aureus, E.  coli dan B.  subtilis dengan  metode  mikrodilusi  dan difusi agar.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan

## Jamur endofit dan bakteri uji
Jamur Endofit kode F17-5-14-3 diisolasi dari spons genus Homaxinella yang  diambil  dari  perairan  sekitar Pulau  Barrang  Lompo,  Makassar,  Sulawesi  Selatan sesuai prosedur pada Suciati dkk, 2014.  Bakteri uji yang digunakan adalah: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633 dan Eschericia coli ATCC 25922.
Bahan kimia
Media malt  extract , nutrient  broth ,  etil  asetat p.a , air  laut  buatan,  DMSO, n -heksana p.a ,  metanol p.a , MTT  (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2-5-difenil  tetrazolium bromid, siprofloksasin pharmaceutical grade . Alat
Ultrasonik  (Branson), rotary  evaporator (Buchi), laminary air flow cabinet (LAFC) (Dalton), mikropipet (Soccorex),  timbangan  analitik  (Alsep,  Adventura OHAUS),  autoklaf  (Huxley  HL-340  speedy),  96- well microtiter  plate steril,  kertas  cakram  steril,  inkubator (Memmert), flash chromatography Sepacore® (Buchi), spektrofotometer (Bausch and Lomb).

## Metode

## Identifikasi jamur endofit
Identifikasi  mikroba  dilakukan  di  laboratorium penguji BP Bioteknologi BPPT Serpong. Metode yang digunakan adalah isolasi DNA, PCR, DNA sekuensing serta analisa sekuens dari ribosomal  RNA pada daerah gen  28S  rRNA.  Primer  yang  digunakan  untuk memperbanyak daerah 28S rRNA adalah NL1 (5’- GCA TAT  CAA TAA  GCG  GAG  GAA  AAG-3’)  dan  NL4
(5’-  GGT  CCG  TGT  TTC  AAG  ACG  G-3’).  Hasil sekuens  dari  ribosomal  RNA  kemudian  dicocokkan dengan data pada GenBank (NCBI).
Ekstraksi
Jamur  endofit P.  oxalicum ditumbuhkan  pada media malt  extract (500  mL  x  48  Erlenmeyer)  yang dibuat  dengan  air  laut  buatan.  Fermentasi  dilakukan selama enam  minggu  pada suhu 22  - 25°C. Pada akhir minggu keenam sebanyak 24 liter campuran media dan miselium  jamur diekstraksi secara cair-cair dengan etil asetat. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan shaker selama 15 menit  tiap ekstraksi, fase organik  kemudian dipisahkan. Proses ekstraksi dilakukan 3 kali, kemudian filtrat  dikumpulkan.  Selanjutnya  pelarut  organik diuapkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40°C sehingga diperoleh 1,9 gram ekstrak.

## Fraksinasi
Ekstrak  etil  asetat  (0,88  gram)  dilarutkan  dalam 3  mL  etil  asetat.  Fraksinasi  dilakukan  dengan kromatografi  kolom  cepat  Sepacore®  (Buchi)  yang dilengkapi  dengan Fraction  Collector .  Kolom  yang digunakan  adalah Glass  Column 26/100-044035  yang diisi  dengan silica gel 60 for column chromatography , ukuran  partikel  0,040  -  0,063  mm,  sebanyak  35  gram sebagai  fase  diam.  Elusi  dilakukan  dengan  kombinasi pelarut  sebagai  berikut:  isokratik n -heksana:etil  asetat (85:15) selama 20 menit, dilanjutkan dengan gradien n - heksana:etil  asetat  (85:15)  sampai  100%  etil  asetat selama  30  menit,  kemudian  isokratik  100%  etil  asetat selama  7  menit,  dan  gradien  100%  etil  asetat  hingga 100%  metanol  selama  20  menit.  Detektor  yang digunakan  adalah  UV  dengan  panjang  gelombang 270  nm.  Pengumpulan  fraksi  menggunakan  mode collect by volume , dengan volume setiap tabung adalah 20 mL. Fraksi yang diperoleh kemudian dikelompokkan berdasarkan pola kromatografi yang dihasilkan.

## Uji aktivitas antibakteri Pembuatan suspensi bakteri uji
Suspensi  mikroorganisme  dibuat  setara  dengan standar  0,5  McFarland.  Standar  McFarland  ini  dibuat dengan mencampur 0,5 mL barium klorida 0,048 M dan 99,5  mL  asam  sulfat  0,18  M  kemudian  diukur absorbansinya  dengan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang  625  nm.  Rentang  absorban  dari  suspensi standar 0,5 McFarland yang dibuat harus berkisar antara 0,08  -  0,13.  Jumlah  koloni  yang  terkandung  dalam suspensi  dapat  ditentukan  dengan  konversi  terhadap standar 0,5 McFarland dengan jumlah koloni 1-2 x 10 8 CFU (Colony forming unit)/mL (Wikler dkk., 2009).
Untuk uji  dengan metode dilusi  suspensi  mikroba yang  setara  dengan  standar  0,5  McFarland  dipipet sebanyak  1  mL  dan  ditambahkan  dengan  9  mL  media nutrien  broth sehingga  diperoleh  suspensi  mikroba dengan  jumlah  koloni  1-2  x  10 7 CFU/mL.  Suspensi harus  digunakan  kurang  dari  30  menit  setelah pembuatan (Andrews, 2006).

## Penyiapan sampel uji
Ekstrak (30,0 mg) dilarutkan dengan 3 mL DMSO 2,5%,  kemudian  proses  pelarutan  dibantu  dengan ultrasonik  sampai  larut  sempurna  sehingga  didapatkan larutan induk dengan kadar 10.000 ppm. Larutan induk ini  kemudian  diencerkan  secara  berseri  menjadi konsentrasi  7500,  5000,  1000,  500  dan  200  ppm. Larutan  uji  ini  kemudian  digunakan  untuk  pengujian dengan  metode  mikrodilusi.  Untuk  pengujian  dengan metode  difusi  digunakan  fraksi  dengan  konsentrasi 5000 ppm (dibuat dalam metanol).
Uji antibakteri dengan metode mikrodilusi Larutan uji yang sudah disiapkan masing - masing diambil  sebanyak  50  μL  kemudian  dimasukkan  ke dalam 96-well plates yang telah berisi 10 μL mikroba uji yang  sesuai  dan  40  μL  media  sesuai  dengan  labelnya, sehingga  diperoleh  jumlah  koloni  mikroba  dalan sumuran  sebanyak  1-2  x  10 6 CFU/mL.  Konsentrasi akhir  sampel  uji  di  dalam  sumuran  menjadi  setengah dari  konsentrasi  awal.  Selanjutnya, 96-well  plates diinkubasi  pada  37°C  selama  24  jam.  Kemudian  ke dalam  sumuran  ditambahkan  20  μL  MTT  (3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2-5-difenil tetrazolium bromid) yang dilarutkan  dalam  akuades  steril  lalu  diinkubasi  selama 10  -  60  menit  pada  37°C.  Apabila  terjadi  perubahan warna  menjadi  ungu  setelah  penambahan  MTT menandakan adanya pertumbuhan sel bakteri. Replikasi dilakukan 3 kali, masing-masing secara quadruplo (Ilić dkk., 2015).
Uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar Pengujian  dengan  metode  difusi  agar  dilakukan pada  fraksi.  Replikasi  dilakukan  sebanyak  3  kali. Pengujian dilakukan dengan teknis aseptis pada LAFC. Fraksi  dilarutkan  dalam  metanol  untuk  mendapatkan konsentrasi 5000 ppm. Sebanyak 20 µL sampel dipipet dan diserapkan ke dalam cakram kertas steril (diameter 6 cm). Untuk menghilangkan pengaruh pelarut metanol yang digunakan maka cakram kertas yang sudah berisi larutan  uji  diangin-anginkan  di  dekat  lampu  spiritus selama  kurang  lebih  1  menit.  Cakram  kertas  tersebut kemudian diletakkan pada cawan petri yang sudah berisi media  dan  bakteri  uji.  Siprofloksasin  (50  ppm) digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan  metanol
digunakan  sebagai  kontrol  negatif.  Selanjutnya dilakukan  inkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Hambatan pertumbuhan bakteri oleh sampel ditunjukkan dengan terbentuknya zona bening di sekitar cakram  kertas.  Zona  bening  yang  terbentuk  diukur dengan  jangka  sorong  sebanyak  tiga  kali  pada  tiga bagian yang berbeda, dan dihitung rerata.

## Skrining kandungan senyawa
Ekstrak  etil  asetat P.  oxalicum dilarutkan  dalam metanol.  Sampel  kemudian  ditotolkan  pada  plat  KLT kemudian  dielusi  dengan  fase  gerak  kombinasi n - heksana  :  etil  asetat  (6  :  4)  untuk  skrining  senyawa golongan  flavonoid,  antrakinon  dan  terpenoid.  Untuk skrining  senyawa  golongan  alkaloid  digunakan metanol : etil asetat : air (16,5 : 100 : 13,5), sementara skrining senyawa golongan polifenol menggunakan fase gerak n -heksana  :  etil  asetat  (4  :  6).  Visualisasi  noda dilakukan  dengan  pereaksi  penampak  noda  yaitu:  uap amonia  (flavonoid),  larutan  KOH  10%  dalam  metanol (antrakinon), Dragendorff (alkaloid),  anisaldehida- H 2 SO 4 (terpenoid)  dan  FeCl 3 (polifenol)  (Wahab  dkk., 2010). Pengukuran 1 H NMR dilakukan pada instrumen Bruker Avance 500 MHz dengan pelarut CDCl 3 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  identifikasi  dari  daerah  28S rRNA  isolat  jamur  endofit  yang  digunakan  pada penelitian  ini  diidentifikasi  sebagai Penicillium oxalicum strain  FEC-128.  Jamur  endofit  selanjutnya dikultivasi  dalam  media  cair malt  extract selama 6  minggu  dan  dilanjutkan  dengan  ekstraksi  media  dan miselium  jamur  endofit  dengan  pelarut  etil  asetat. Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian  diuji  aktivitas antibakterinya  terhadap  tiga  bakteri  patogen  yaitu: Staphylococcus  aureus ATCC  6538, Bacillus  subtilis ATCC  6633  dan Eschericia  coli ATCC  2592  dengan metode  mikrodilusi.  Metode  mikrodilusi  ini  dipilih karena memiliki beberapa kelebihan yaitu, lebih sensitif dari  metode  difusi,  jumlah  sampel  yang  dibutuhkan lebih sedikit serta dapat memberikan hasil semikuantitatif  hingga  kuantitatif  sehingga  bisa digunakan  untuk  penentuan  kadar  hambat  minimum (KHM)  secara  akurat  (Eloff,  1998).  Penggunaan pereaksi MTT pada uji mikrodilusi ini bertujuan sebagai penanda  adanya  bakteri  hidup.  Pereaksi  MTT  ini akan direduksi  oleh  enzim  suksinat  dehidrogenase  yang terdapat  dalam  mitokondria  sel  hidup.  Hasil  reaksi  ini akan  membentuk  kristal  formazan  berwarna  ungu (McCauley  dkk.,  2013).  Timbulnya  warna  ungu  ini kemudian  menjadi  penanda  adanya  bakteri  hidup.
Berdasarkan  hasil  uji  antibakteri  yang  disajikan  pada Tabel 1 dan Gambar 1 dapat diketahui bahwa ekstrak etil asetat P.  oxalicum dapat  menghambat  bakteri pertumbuhan B. subtilis dan E. coli pada KHM sebesar 250  μg/mL  sedangkan  untuk S.  aureus KHM 500  μg/mL.  Berdasarkan  nilai  KHM  ini  aktivitas antibakteri pada ekstrak etil asetat P. oxalicum termasuk kategori sedang (Marasini dkk., 2015).
Tabel 1. Hasil uji antibakteri ekstrak etil asetat
P. oxalicum Sampel Hasil Pewarnaan S. aureus E. coli B. subtilis 5000 ppm 3750 ppm 2500 ppm 1250 ppm 1000 ppm 500 ppm 250 ppm ✓ 100 ppm ✓ ✓ ✓ Kontrol + Kontrol - ✓ ✓ ✓ Kontrol tumbuh ✓ ✓ ✓ KHM 500 ppm 250 ppm 250 ppm Keterangan:
✓ menunjukkan adanya warna ungu pada sumuran Uji dilakukan dengan tiga kali replikasi masing masing dilakukan secara quadruplo .
Keterangan: 1: sampel 5000 ppm, 2: 3750 ppm, 3: 2500 ppm,  4:  1250  ppm,  5:  1000  ppm,  6:  500  ppm,  7:  250 ppm, 8:  100 ppm, 9:  kontrol  pertumbuhan, 10: kontrol media,  11:  kontrol  negatif  (DMSO  2,5%),  12:  Kontrol positif (siprofloksasin 50 ppm).
Gambar 1. Hasil uji antibakteri dari ekstrak etil asetat P. oxalicum terhadap S. aureus (a) , E.coli (b) dan B. subtilis (c)
Selanjutnya  hasil  fraksinasi  ekstrak  etil  asetat P. oxalicum yang  diperoleh  dengan  metode  kromatografi
kolom cepat (Sepacore®) diuji aktivitas antibakterinya dengan metode difusi cakram kertas. Metode ini dipilih karena  kelarutan  sampel  beragam  dan  tidak  semua sampel  dapat  larut  dalam  2,5%  DMSO.  Pada  metode difusi  dengan  cakram  kertas,  sampel  dilarutkan  dalam metanol kemudian dijerapkan pada cakram kertas. Sisa pelarut  metanol  pada  cakram  diuapkan  dengan  cara diangin-anginkan  di  dekat  lampu  spiritus  selama 1 menit. Hasil uji antibakteri dari fraksi disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil uji antibakteri dari fraksi Sample Diameter Zona Hambat (mm)* S. aureus E. coli B. subtilis F1 - - - F2 7,9 ± 0,39 8,5 ± 0,62 9,3 ± 0,10 F3 7,6 ± 0,48 9,3 ± 0,14 8,5 ± 0,63 F4 8,2 ± 0,92 9,2 ± 0,06 10,2 ± 0,16 F5 8,9 ± 0,66 - 8,3 ± 0,19 F6 - 8,3 ± 0,11 9,7 ± 0,58 F7 8,3 ± 0,01 8,8 ± 0,35 9,6 ± 0,54 F8 7,9 ± 0,41 8,2 ± 0,17 9,0 ± 0,43 F9 7,3 ± 0,83 - - Kontrol + 28,9 ± 1,4 22,5 ± 0,80 34,9 ± 0,25 Kontrol - - - - Keterangan:
* rerata zona hambat ± SD dari tiga replikasi
-: Tidak ada zona hambat yang teramati
Hasil uji antibakteri dari kesembilan fraksi ekstrak etil  asetat P. oxalicum menunjukkan bahwa, fraksi 2 - 4  dan  fraksi  6  -  8  dapat  menghambat  pertumbuhan E.
coli dengan zona hambat berkisar antara 8,2 - 9,3 mm.
Fraksi 2 - 8 memberikan zona hambat berkisar antara 8,3 - 10,2 mm terhadap bakteri uji B. subtillis , dan fraksi 2 - 5 dan 7 - 9 memberikan zona hambat berkisar antara 7,3 -  8,9  mm  terhadap  bakteri S.  aureus .  Hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  fraksi  memberikan  aktifitas penghambatan yang sedang terhadap ketiga bakteri uji.
Pada ekstrak etil asetat P. oxalicum juga dilakukan skrining kandungan senyawa kimia dengan metode KLT
hasil yang diperoleh disajikan pada Tabel 3 dan Gambar 2  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat P. oxalicum mengandung senyawa golongan terpenoid dan polifenol.  Hasil  tersebut  juga  dikuatkan  dengan  hasil pengukuran  spektroskopi 1 H  NMR  (Gambar  3)  yang menunjukkan adanya serapan pada 6,0 - 8,0 ppm yang spesifik  menunjukkan  adanya  gugus  aromatik/fenol, juga serapan 0,5  - 4,0 ppm  yang kemungkinan berasal dari  gugus metil dan metilena pada senyawa  terpenoid (Field dkk., 2013).
Tabel 3. Hasil skrining golongan senyawa Golongan senyawa Penampak noda Hasil Warna noda Flavonoid Uap amoniak - - Alkaloid Dragendorff - - Antrakinon KOH dalam 10% MeOH - - Terpenoid Anisaldehid a-H 2 SO 4 + Merah- ungu Polifenol FeCl 3 + Hitam
Gambar 2. KLT skrining golongan senyawa flavonoid (A), alkaloid (B), antrakinon (C), terpenoid (D) dan polifenol (E)
Senyawa  golongan  terpenoid  diketahui  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  Gram  positif maupun  Gram  negatif,  sebagai  contoh  eugenol  dapat merusak  membran  sel  dari  bakteri  tersebut.  Senyawa polifenol juga dilaporkan sebagai antibakteri, misalnya resveratrol  dapat  menghambat Campylobacter  jejuni , Arcobacter  butzleri dan Arcobacter  cryaerophilus . Senyawa  fenolik  lainnya  misalnya  baicalein  dapat menghambat S.  aureus , E.  coli , B.  subtilis dan P. aeruginosa .  Baicalein  juga  diketahui  memiliki  efek sinergisme  bersama  dengan  antibiotik  β-laktam (Khameneh dkk., 2019).

## KESIMPULAN
Ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi P.  oxalicum menunjukkan  aktivitas  antibakteri terhadap  S.  aureus, B.  subtilis dan E  coli .  Aktivitas  antibakteri  tersebut kemungkinan  disebabkan  adanya  senyawa  terpenoid dan fenolik pada P. oxalicum .

## DAFTAR PUSTAKA
Andrews,  J.  M.  (2006).  Determination  of  Minimum
Inhibitory Concentration . Journal of
Antimicrobial Chemotherapy; 48; 5-16.
Blunt, J. W., Carroll, A. R., Copp, B. R., Davis, R. A., Keyzers, R. A. & Prinsep, M. R. (2018). Marine Natural  Products. Natural  Product  Reports;  35 ; 8-53.
Cafieri, F., Fattorusso, E., Mangoni, A. & Taglialatela- Scafati,  O. (1995). Longamide  and  3,7- dimethylisoguanine, Two  Novel  Alkaloids  from the Marine Sponge Agelas longissima . Tetrahedron letter; 36; 7893-7896.
Eloff,  J.  N.  (1998).  A  Sensitive  and  Quick  Microplate Method  to  Determine  the  Minimal  Inhibitory Concentration  of  Plant  Extracts  for  Bacteria.
Planta Medica; 64; 711-713.
Field,  L.  D.,  Sternhell,  S.  &  Kalman,  J.  R.  (2013) Organic  Structures  from  Spectra  (5th  ed.). Chichester: John Wiley & Sons., Ltd.
Ilić, M. D., Jovanović, V. P. S., Mitić, V. D., Jovanović, O. P., Mihajilov-Krstev, T. M., Marković, M. S.
&  Stojanović,  G.  S.  (2015).  Comparison  of Chemical Composition and Biological Activities of Seseli  rigidum Fruit  Essential  Oils  from Serbia. Open Chemistry; 13 ; 42–51
Kementerian  Kesehatan  (Kemenkes)  RI.  (2019).  Hasil
Utama  Riskesdas  2018  by  Kemenkes  RI.
https://kesmas.kemkes.go.id.  Accessed:  21  Mei 2020.
Kementerian  Kesehatan  (Kemenkes)  RI.  (2016).  Data dan Informasi: Profil Kesehatan Indonesia 2016. https://pusdatin.kemkes.go.id/article/view/17092 000001/profil-kesehatan-indonesia-2016.html. Accessed: 10 Maret 2020.
Khameneh, B., Iranshahy, M., Soheili, V. & Bazzaz, B.
S. F.  (2019). Review on Plant Antimicrobials: a
Mechanistic Viewpoint. Antimicrobial Resistance and Infection Control ; 8 ; 118.
McCauley,  J.,  Zivanovic,  A.  &  Skropeta,  D.    (2013).
Bioassays for Anticancer Activities. In: Roessner U., Dias D. (eds) Methods in Molecular Biology (Methods  and  Protocols ).  Totowa:  Humana Press.
Marasini,  B.  P.,  Baral,  P.,  Aryal  P.,  Ghimire,  K.  R., Neupane, S., Dahal, N., Singh, A., Ghimire, L. & Shresta,  K.  (2015).  Evaluation  of  Antibacterial Activity  of  Some  Traditionally  Used  Medicinal Plants  Against  Human  Pathogenic  Bacteria. BioMed Research International ; 2015 ; 6. Umeyama, A., Ito, S., Yuasa, E., Arihara, S. & Yamada, T. (1998). A New Bromopyrrole Alkaloid and the Optical  Resolution  of  the  Racemate  from  the Marine  Sponge Homaxinella sp. Journal  of Natural Products ; 61 ; 1433-1434
Schmidt,  E.  W.,  Obraztsova,  A.  Y.,  Davidson,  S.  K.,
Faulkner,  D.  J.  &  Haygood  M.  G.  (2000) Identification  of  the Antifungal  Peptide- Containing  Symbiont  of  the  Marine  Sponge Theonella swinhoei as a Novel δ- Proteobacterium,  ‘‘ Candidatus  Entotheonella palauensis ’’. Marine Biology ; 136 ; 969-977. Suciati,  Alrosyidi,  A.  F.  &  Sugijanto,  N.  E.  (2014). Isolasi dan Skrining Antimikroba Jamur Endofit dari Beberapa Spong Indonesia. Planta Husada ;
2 ; 40–43.
Wahab, O. M., Ayodele, A. E. & Moody, J. O. (2010). TLC Phytochemical Screening in Some Nigerian Loranthaceae. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytotherapy ; 2 ; 64-70.
Wikler, M. A., Cockerill, F. R. &  Bush, K. D. (2009). Performance  Standard  for  Antimicrobial  Disk Susceptibility  Test;  Approved  Standard  (10th ed.).  Pennsylvania:  Clinical  and  Laboratory Standards Institute.