Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun  Mangga  Arumanis ( Mangifera indica L.) dan Identifikasi Flavonoid dengan KLT
( Antibacterial Activity of Arumanis Mango Leaves (Mangifera indica L.) Purified Extract and Identification of Flavonoid by TLC )
Dewi Andini Kunti Mulangsri 1* , Elya Zulfa 1
1* Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang, Indonesia. E-mail: andini@unwahas.ac.id
Article Info:
Received: 30 Oktober 2019
in revised form: 14 Januari Accepted: 16 Februari 2020 Available Online: 02 Maret 2020

## ABSTRACT
Arumanis mango leaves ( Mangifera indica L.) has antibacterial activity and antifungal,  evidently. E.  coli and S.  aureus are  opportunistic  pathogen bacteria  that  can  cause  gastrointestinal  and  skin  infection.  Purification  of extract was done to eliminate the presence of ballast substances that cannot produce  therapeutic  effects.  This  study  aims  to  acknowledge  the antibacterial  activity  of  purified  mango  Aumanis  leaves  extract  (PMALE) against E.  coli and S.  aureus , flavonoid  compound  content  by  TLC. Arumanis mango leaves powder was extracted with 96% ethanol solvent by maceration  method,  followed  purification  the  extract  was  done  with  hot water-ethylacetate  solvent  by  liquid-liquid  extraction  method.  Antibacterial activity test was done by agar diffusion method against E. coli and S. aureus bacteria  with  the  same  serial  concentration  of  6.25;  12.5;  25;  50;  75  and 100%  and Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  tests  for  detection  flavonoid compounds,  the  stationary  phase  used  silica  gel  60F  254  and  the  mobile phase  used  n-hexane-ethylacetate  (1:3).  The  results  of  PMALE  had antibacterial activity at lower concentrations as 6,25% against both of E. coli and S. aureus . PMALE had flavonoid compounds with Rf values of 0.81.
Keywords : Arumanis mango leaves Mangifera indica L. Purified extract Escherichia coli Staphylococcus aureus Thin Layer Chromatography
Corresponding Author: Dewi Andini Kunti Mulangsri Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim 50232 Semarang Indonesia email: andini@unwahas.ac.id
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style):
Mulangsri, D. A. K., & Zulfa, E. (2020). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Terpurifikasi Daun Mangga Arumanis ( Mangifera indica L.)  dan  Identifikasi  Flavonoid  Dengan  KLT. Jurnal  Farmasi  Galenika:  Galenika  Journal of  Pharmacy  (e-Journal),
6 (1), 55-62. doi:10.22487/j24428744.2020.v6.i1.14044
Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) (e-Journal) 2020; 6 (1): 55 – 62 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i1.14044

## ABSTRAK
Daun mangga arumanis ( Mangifera indica L.) telah terbukti memiliki aktivitas antibakteri dan antijamur. E. coli dan S.  aureus merupakan  jenis  bakteri  patogen  opportunistik  yang  dapat  menyebabkan  penyakit  infeksi  di saluran cerna dan kulit. Purifikasi ekstrak dilakukan untuk menghilangkan adanya zat ballast yang  tidak dapat menghasilkan  efek  terapi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  terpurifikasi daun  mangga  arumanis  (ETDMA)  terhadap E.  coli dan S.  aureus serta  kandungan  senyawa  flavonoid  dengan KLT . Serbuk  daun  mangga  arumanis  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  dengan  metode  maserasi, dilanjutkan  purifikasi  ekstrak  menggunakan  pelarut  air  panas-etilasetat  dengan  metode  ekstraksi  cair-cair.  Uji aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  terhadap  kedua  bakteri  uji dengan  seri  konsentrasi yang  sama  yaitu  6,25;  12,5;  25;  50;  75  dan  100%.  Uji  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  untuk  mendeteksi senyawa flavonoid, fase diam silica gel 60F 254, fase gerak n -heksan-etilasetat (1:3). Hasil penelitian ETDMA memiliki aktivitas antibakteri pada konsentrasi terkecil yaitu 6,25% baik terhadap bakteri E. coli dan S. aureus . ETDMA memiliki kandungan senyawa flavonoid dengan nilai Rf 0,81.
Kata  kunci: Daun  mangga  arumanis; Mangifera  indica L;  ekstrak  terpurifikasi; Escherichia  coli ; Staphylococcus aureus , kromatografi lapis tipis.

## PENDAHULUAN
Tanaman  mangga  arumanis  ( Mangifera  indica L.)  memiliki  kandungan  senyawa  fenol,  selain  itu terkandung senyawa alkaloid, tannin, terpenoid, antrakuinon, asam amino, flavonoid, saponin, kardiak glikosida  dan  resin  (Diso et  al., 2017;  Ningsih et  al., 2017)  serta  klorofil  (Sumenda et  al., 2011). Beberapa  senyawa  tersebut  yang  terkandung  di  dalam  tanaman  mangga  arumanis  memiliki  aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri  Methicillin-Resistant Staphylococcus  aureus (Diso et  al., 2017), Propionibacterium  acnes (Munawwarah et  al., 2017)  dan Candida  albicans (Ningsih et  al., 2017). Penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa daun muda dari mangga arumanis terbukti memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap S.  mutans (Kurniasih,  2016).  Namun  pada  penelitian  ini  akan menggunakan  daun  tua  dari  mangga  arumanis.  Daun  tua  kersen  ( Muntingia  calbura L.)  memiliki aktivitas  antibakteri  lebih  besar  terhadap  bakteri E.  coli dan S.  aureus dikarenakan  kandungan flavonoid  lebih  tinggi  dibandingkan  daun  mudanya  (Pujianingsih et  al., 2018).  Selain  dikarenakan kandungan flavonoid lebih tinggi, daun tua ketersediaannya cukup melimpah.
Suatu  tanaman  dapat  menghasilkan  suatu  komponen  senyawa  yang  memiliki  efek  terapi  dan  tidak. Senyawa yang tidak memiliki efek terapi berupa zat ballast seperti karbohidrat, lemak, protein, resin dan  klorofil  (Balai  Penelitian  dan  Pengembangan  Pasca  Panen  Pertanian).  Dengan  melakukan purifikasi ekstrak akan menyari komponen senyawa yang memiliki efek terapi saja dan meminimalkan zat  ballast  ikut  tersari.  Daun  mangga  Arumanis  mengandung  zat  ballast  seperti  resin  dan  klorofil, sehingga  perlu  dilakukan  purifikasi  ekstrak.  Pada  penelitian  sebelumnya,  purifikasi  ekstrak  dari bee propolis  bertujuan  untuk  mendapatkan  kandungan  flavonoid  lebih  besar  dan  murni  (Puspitasari  & Pramono 2015), sehingga dengan purifikasi ekstrak dari daun mangga Arumanis juga dapat diperoleh kandungan  flavonoid  yang  lebih  besar  dan  murni.  Kadar  flavonoid  yang  lebih  besar  ternyata  dapat mempengaruhi aktivitas antibakteri sebesar 93% dengan analisis korelasi Pearson antara ekstrak etanol dan fraksi-fraksi daun Kersen ( Muntingia calabura L.) (Manik et al., 2014). Jadi besarnya kandungan flavonoid  dalam  sampel  dapat  menghasilkan  aktivitas  yang  besar  pula.  Berdasarkan  latar  belakang tersebut  maka  perlu  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  terpurifikasi  daun  mangga  arumanis (ETDMA) terhadap E. coli dan S. aureus.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian,  seperti  :  oven  simplisia,  alat  penyerbuk  elektrik, seperangkat alat maserasi, rotary evaporator (Heidolph), corong pisah (Pyrex), kompor listrik, bejana KLT,  cawan  petri,  glassware,  autoclave  (All  american),  Laminar  Air  Flow,  kawat  ose.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian,  seperti:  Etanol  96% teknis,  aquadest,  etil  asetat  teknis,  etil asetat  pa, n - heksan, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, antibiotik kloramfenikol disk, media Nutrient Agar dan Nutrient Broth (MERCK ® ), kapas steril, kertas label.

## Metode

## A. Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Daun Mangga Arumanis (ETDMA)
Daun mangga arumanis setelah disortasi basah dan dipotong tangkainya kemudian dicuci dengan air. Daun  mangga  arumanis  yang  telah  ditiriskan  kemudian  dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu  50°C. Simplisia  Daun  mangga  arumanis  kemudian  diserbuk.  Sebanyak  1400  gram  serbuk  simplisia  daun mangga  arumanis  digunakan  untuk  membuat  ekstrak.  Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  mangga arumanis dilakukan dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% dengan perbandingan serbuk daun  mangga  arumanis  dan  pelarut  etanol  96%  adalah  1:10.  Maserasi  dilakukan  selama  3  hari  dan remaserasi  selama  2  hari.  Maserat  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  50°C  hingga diperoleh ekstrak kental.
Ekstrak  etanol  daun  mangga  arumanis  (EEDMA)  yang  digunakan  untuk  purifikasi  sebanyak  235 gram.  EEDMA  disuspensikan  dengan  air  panas,  kemudian  di  masukkan  ke  dalam  corong  pisah. Pelarut  etilasetat  ditambahkan  ke  dalam  corong  pisah  kemudian  digojog  sampai  terjadi  2  lapisan. Lapisan etilasetat dipisahkan dan lapisan air difraksinasi lagi dengan pelarut etilasetat sampai pelarut etilasetat  tetap  jernih.  Lapisan  etilasetat  yang  telah  dipisahkan  kemudian  dikentalkan  dengan rotary evaporator pada suhu 50°C. Fraksi etilasetat inilah yang merupakan ekstrak terpurifikasi daun mangga arumanis.

## B. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Terpurifikasi Daun Mangga Arumanis (ETDMA)
Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar dimulai dengan menyiapkan media Nutrient Broth  untuk  suspensi  bakteri  dan  Nutrient  Agar  (NA)  untuk  media  uji. Paperdisk diletakkan  di  atas permukaan  media  NA  yang  telah  mengandung  suspensi  bakteri  secara  aseptis,  kemudian  diteteskan larutan ETDMA sebanyak 10 µL. Konsentrasi larutan ETDMA yang digunakan adalah 6,25; 12,5; 25; 50; 75 dan 100%. Kontrol positif yang digunakan adalah larutan antibiotik Kloramfenikol 30µg/disk dan kontrol negatif yang digunakan adalah larutan DMSO sebagai pelarut ekstrak. Inkubasi dilakukan pada  suhu  37 o C  selama  24  jam.  Diameter  Daerah  Hambat  (DDH)  diukur  berdasarkan  jari-jari penghambatan berupa area bening di sekeliling paperdisk menggunakan jangka sorong.

## C. Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Uji pendahuluan kandungan senyawa kimia dilakukan sebelum uji KLT dengan pereaksi spesifik. Uji flavonoid menggunakan peraksi Mg-HCl. Uji KLT untuk senyawa flavonoid menggunakan fase diam lempeng Silica gel 60 F 254 dan fase gerak terdiri dari campuran n- heksan : etilasetat (1:3)  (Haeria et al., 2013).  Standar  pembanding  yang  digunakan  adalah  kuersetin.  Penampak  bercak  yang  digunakan adalah uap ammonia. Pengamatan dilakukan pada sinar tampak, sinar UV 254 dan UV 365 (Depkes RI, 2000).

## D. Analisa Data
Analisis  data  dilakukan  secara  deskriptif  baik  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dan  uji  KLT.  Hasil  uji aktivitas  antibakteri  berupa  ada  tidaknya  zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekeliling paperdisk .  Zona hambat  yang  terbentuk  diukur  DDH  dengan  jangka  sorong.  Hasil  uji  pendahuluan  adanya  senyawa flavonoid  dengan  pereaksi  Mg-HCl  akan  terbentuk  warna  merah.  Hasil  uji  KLT  dengan  penampak bercak uap ammonia akan terbentuk warna kuning intensif yang nampak pada sinar tampak, pada UV 254  nm  terbentuk  bercak  gelap  dan  UV  366  nm  terbentuk  warna  kuning  gelap,  hijau  atau  biru berfluoresensi (Markham, 1975).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  etanol  daun  mangga  arumanis  yang  diperoleh  sebesar  273,5  gram  dengan  rendemen  ekstrak 19,54%; sedangkan ETDMA diperoleh 50,7 gram dari 235 gram EEDMA dengan rendemen 21,57%. ETDMA yang diperoleh memiliki warna hijau kecoklatan, sedangkan EEDMA memiliki warna hijau pekat.  ETDMA  ini  pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  memberikan  hasil  bahwa  ETDMA  memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri E. coli dan S. aureus . Adanya aktivitas antibakteri pada bakteri uji  adalah  terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar paperdisk mulai  konsentrasi  6,25%  sudah menghasilkan zona hambat pada kedua bakteri uji. Zona hambat yang terbentuk dilakukan pengukuran DDH-nya.  Diameter  daerah  hambat  yang  telah  diukur  disajikan  dalam  Tabel  I  dan  II.  Pada  larutan ETDMA  konsentrasi  25-100%  cukup  kental,  hal  ini  mengakibatkan  absorbsi  larutan  ETDMA  ke dalam paperdisk tidak  maksimal  dan  nampak  meluber  di  sekitar paperdisk .  Penggunaan  konsentrasi untuk  uji aktivitas  antibakteri  ETDMA  akan  lebih  baik  di  bawah  konsentrasi  25%.  Pada  konsentrasi 6,25% dan 12,5% larutan ETDMA tidak terlalu kental sehingga dapat terabsorbsi maksimal ke dalam paperdisk dan  tidak  meluber  di  sekitar paperdisk .  Sehingga  dapat  disampaikan  bahwa  ETDMA memiliki aktivitas antibakteri pada konsentrasi terkecil 6,25% terhadap bakteri E. coli dan S. aureus . Sedangkan ekstrak daun manga arumanis ( Mangifera indica L.) pada konsentrasi 100% telah terbukti memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli (DDH 14,6667 mm) dan S. aureus (DDH 16,6667 mm) (Purwanti et  al., 2014)  yang  mana  konsentrasi  100%  masih  lebih  besar  daripada  ETDMA  untuk memperoleh  nilai  DDH  tersebut,  sehingga  ETDMA  memiliki  potensi  lebih  besar  dibandingkan EEDMA. Uji aktivitas antibakteri ETDMA terhadap kedua bakteri uji dapat dilihat pada Gambar 1.
A B
Keterangan : 1. kontrol negatif DMSO 5. konsentrasi 25% 2. konsentrasi 100% 6. konsentrasi 12,5% 3. konsentrasi 75% 7. konsentrasi 6,25% 4. konsentrasi 50% 8. kontrol positif, Kloramfenikol 30ηg/disk
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ETDMA terhadap E. coli (A) dan S. aureus (B), Ø paperdisk : 6 mm
1 1 2 1 3 1 2 1 4 1 2 1 5 1 2 1 6 1 5 1 2 1 7 1 5 1 2 1 8 1 5 1 2 1 1 1 2 1 3 1 2 1 4 1 2 1 5 1 2 1 6 1 5 1 2 1 7 1 5 1 2 1 8 1 5 1 2 1
Tabel I. Nilai DDH pada bakteri E. coli Sampel Diameter Daerah Hambat (mm) Rata-rata±SD I II III 6,25% 15,03 16,52 15,52 15,69±0,76 12,5% 16,64 16,84 17,54 17,00 ± 0,47 25% 17,60 17,52 18,34 17,82±0,45 50% 19,07 18,20 18.76 18,68±0,41 75% 19,65 20,52 20,55 20,24±0,51 100% 23,40 22,06 21,89 22,45±0,18 Kloramfenikol 24,18 24,10 24,18 24,15±0,05 DMSO - - - - Tabel II. Nilai DDH pada bakteri S. aureus Sampel Diameter Daerah Hambat (mm) Rata-rata±SD I II III 6,25% 14,02 12,50 13,02 13,18±1,31 12,5% 15,04 15,52 14,54 15,03±1,33 25% 15,52 16,64 15,52 15,89±0,65 50% 16,19 16,77 14,51 15,82±1,17 75% 17,54 17,44 17,55 17,51±0,06 100% 21,26 18,90 19,64 19,93±1,32 Kloramfenikol 27,11 26,28 27,05 26,81±1,51 DMSO - - - -
Hasil uji aktivitas antibakteri ETDMA menunjukkan bahwa ETDMA berpotensi terhadap bakteri yang bertipe  dinding  sel  Gram  negatif  dan  Gram  positif.  Bakteri  Gram  negatif  ( E.  coli )  memiliki  lapisan paling luar dari dinding selnya yang mengandung lipopolisakarida dengan kandungan lipid A bersifat hidrofobik  (Raetz  &  Whitfield,  2002).  Sedangkan  dinding  sel  bakteri  Gram  positif  ( S.  aureus ) mengandung  peptidoglikan  yang  tebal  yang  terdiri  dari  pengulangan  disakarida  yang  melekat  pada jembatan peptide (Pratiwi, 2008).
Pelarut  etanol  96%  akan  menyari  senyawa-senyawa  seperti  tannin,  polifenol,  poliacetilen,  flavonol, terpenoid, steroid, alkaloid dan saponin (Tiwari et al., 2011;  Rahman et al., 2017 dan Nirwana et al., 2015).  Ekstrak  etanol  daun  mangga  arumanis  (EEDMA)  dilakukan  uji  skrining  fitokimia  juga  dan hasilnya  positif  mengandung  flavonoid,  tannin  dan  saponin.  Senyawa  yang  tersari  dalam  air  panas berupa  karbohidrat,  protein  dan  asam  amino,  fitosterol,  flavonoid,  saponin,  terpenoid,  steroid,  tanin dan  alkaloid  (Itoandon et  al., 2012).  Pelarut  air  sendiri  merupakan  pelarut  universal,  sehingga  dapat menyari  senyawa  dengan  kepolaran  nonpolar  sampai  polar  (Tiwari et  al., 2011).  Namun  air  panas yang  digunakan  ini  dalam  proses  penyarian  bertujuan  untuk  tidak  mengikutkan  zat  ballast  yang bersifat nonpolar (Puspitasari  & Pramono, 2015). Hasil uji skrining fitokimia ETDMA positif hanya mengandung  flavonoid  dan  tanin.  Purifikasi  ekstrak  dengan  pelarut  air  panas  dan  etilasetat  akan menghasilkan  kadar  flavonoid  lebih  tinggi  dan  murni  dibandingkan  dengan  pelarut  etanol  30%  dan kloroform  (Puspitasari  &  Pramono,  2015).  Oleh  sebab  itu  penelitian  ini  menggunakan  dua  pelarut yaitu  air  panas  dan  etilasetat  dalam  proses  purifikasi  ekstrak  agar  diperoleh  kadar  flavonoid  lebih tinggi  dan  murni.  Senyawa  flavonoid  berperan  banyak  terhadap aktivitas  farmokologi,  salah satunya antibakteri.
Uji KLT digunakan  untuk mempertegas  adanya  senyawa  flavonoid  dari hasil  uji  fitokimia.  Hasil  uji KLT senyawa flavonoid pada sampel ETDMA (2) dengan nilai Rf 0,81 sedangkan nilai Rf Kuersetin (3)  adalah  0,85.  Nilai  Rf  EEDMA  tidak  dilakukan  pengukuran  dikarenakan  lebih  fokus  pada kandungan flavonoid pada ETDMA yang ingin dibandingkan karakteristiknya dengan kuersetin (baku pembanding  flavonoid).  Setelah  diuapi  ammonia  pada  sinar  tampak,  kuersetin  nampak  menjadi kuning,  namun  sampel  ETDMA  dan  EEDMA  nampak  sedikit  berwarna  kuning.  Pada  pengamatan sinar  UV  254  nm,  kuersetin  menjadi  gelap  begitu  juga  pada  spot  ETDMA  dan  EEDMA.  Pada pengamatan sinar UV 366 nm, kuersetin nampak berfluoresensi kuning, begitu juga dengan ETDMA, namun pada sampel EEDMA belum nampak begitu jelas. Nilai Rf ETDMA yang mendekati nilai Rf Kuersetin dan warna bercak yang mirip dengan kuersetin dapat ditegaskan bahwa senyawa flavonoid tersebut  adalah  senyawa  flavonoid  kuersetin  atau  memiliki  karakteristik  seperti  kuersetin.  Hasil  uji KLT senyawa flavonoid ditunjukkan pada Gambar 2.
A B                        C Keterangan : 1 : EEDMA A : diamati di sinar tampak 2 : ETDMA B : diamati di sinar UV 254nm 3 : standar Kuersetin C : diamati di sinar UV 366nm Gambar 2. Hasil Uji Klt Senyawa Flavonoid

## KESIMPULAN
Ekstrak  terpurifikasi  daun  mangga  arumanis  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  Gram negatif E. coli dan Gram positif S. aureus serta hasil uji KLT terdeteksi senyawa flavonoid.
2 1 1 2 1 2 3 3 3

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terimakasih ditujukan kepada Kemenristekditi yang telah memberikan bantuan dana penelitian berupa Penelitian Dosen Pemula (PDP) sehingga penelitian ini dapat terlaksana.

## DAFTAR PUSTAKA
Balai  Besar  Penelitian  Dan  Pengembangan  Pascapanen  Pertanian.  Tanaman  Obat.Teknologi Pascapanen Tanaman Obat. Bogor.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . Jakarta: Dirjen POM.
Diso,  S  U.,  Ali,  M.,  Mukhtar,  S  I.,  &  Garba,  M.  (2017).  Antibacterial  Activity  and  Phytochemical Screening  of Mangifera  indica (Mango)  Stem  and  Leaf  Extracts  on  Clinical  Isolates  of Methicillin  Resistant Staphylococcus  aureus . Journal  of  Advances  in  Medical  and Pharmaceutical Sciences , 13 (1): 1-6.
Haeria.  (2013).  Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total  dan  Uji  Daya  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun Ungu ( Graptophyllum pictum L.) Griff). JF FIK UINAM . 1(1): 3
Itoandon, E. E., Olatope, S. O. A., & Shobowale, O. O. (2012). Preliminary Phytochemical Analysis and Antimicrobial Properties of Crude Extract of Combretodendron macrocarpum Stem Bark.
Nigerian Food Journal. 30(2): 53.
Kurniasih,  R.  (2016). Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangga  Arumanis  Muda (Mangifera  indica  L.)  Terhadap  Hambatan  Pertumbuhan  Bakteri Streptococcus  mutans , Skripsi , Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Manik, D. E., Hertiani, T. & Anshory, H. (2014). Analisis Korelasi Antara Kadar Flavonoid Dengan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Dan Fraksi-Fraksi Daun Kersen ( Muntingia calabura L.)
Terhadap Staphylococcus aureus . Khazanah . 6(2): 1.
Markham,  K.  (1975).  Isolation  Technique  for  Flavonoid,  dalam The  Flavonoid ,  Harborne,  J.B., Mabry, T.J., dan Mabry, H. Academic Press: New York.
Munawwarah, Z. F., Aufia, W., & Masitha, N. (2017). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Mangga ( Mangifera indica L.) Terhadap Propionibacterium acnes. Pharmasipha, 1(1).
Ningsih D. R., Zusfahair & Mantari D. (2017). Ekstrak Daun Mangga ( Mangifera indica L.) Sebagai Antijamur Terhadap Jamur Candida albicans Dan Identifikasi Golongan Senyawanya. Jurnal Kimia Riset . 2 (1): 61-68.
Nirwana, A. P., Astirin, O. P., & Widyani, T. (2015). Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Benalu Kersen ( Dendrophtoe pentandra L. Miq). EL-VIVO .3(2): 9.
Pratiwi, S. T. (2008). Mikrobiologi Farmasi . Jakarta: Erlangga.
Pujianingsih  R.I.  Sulistyanto  B.  &  Sumarsih  S.  (2018).  Observation  of Muntingia  calabura ’s  Leaf Extract as Feed Additive for Livestock Diet. IOP Conference Series : Earth and Enviromental Science.
Purwanti, E., Handijatno, D., Yunus, M. (2014). Efek Antibakteri Ekstrak Daun Mangga ( Mangifera Indica ) Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Veterinaria Medik. 7(3): 266- 271
Puspitasari A. D. & Pramono S. (2015). Perbandingan Metode Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Bee Propolis  Dari  Lebah  Madu  ( Apis  mellifera )  Berdasarkan  Kadar  Flavonoid  Total  Dihitung Sevagai Rutin, Trad. Med. J. , 20(2): 76-81.
Raetz, C. R. H. & Whitfield, C. (2002). Lipopolysaccharide Endotoxin. Annu Rev Biochem . 71: 1.
Rahman,  F.  A.,  Haniastuti,  T.  &  Utami,  T. W.  (2017).  Skrining  Fitokimia  dan Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata L.)  pada Streptocccus  mutans ATCC  35668. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia. 3 (1): 1.
Sumenda,  L.,  Rampe,  H.  L.,  &  Mantiri,  F  R.  (2011).  Analisis  Kandungan  Klorofil  Daun  Mangga ( Mangifera indica L.) pada Tingkat Perkembangan Daun Yang Berbeda, 1-5.
Tiwari,  P.,  Kumar,  B.,  Kaur,  M.,  Kaur,  G.  &  Kaur,  H.  (2011).  Phytochemical  Screening  and Extraction: A Review. International Pharmaceutica Sciencia , 1(1): 101.