# Korespondensi:  Departemen  Budidaya  Perairan,  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Institut  Pertanian  Bogor.
Jl.  Agatis,  Dramaga  Bogor  16680,  Indonesia E-mail:  agusom@apps.ipb.ac.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## KEBERHASILAN  MASKULINISASI  DAN  KINERJA  REPRODUKSI  IKAN  GAPI, Poecilia reticulata DIBERI EKSTRAK SERBUK SARI PINUS MELALUI PAKAN
Eka  Kusuma,  Agus  Oman  Sudrajat # ,  Harton  Arfah,  dan  Alimuddin
Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Jl. Agatis,  Dramaga  Bogor  16680
(Naskah diterima: 2 Agustus 2021; Revisi final: 11 November 2021; Disetujui publikasi: 11 November 2021)

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi efektivitas suplementasi ekstrak serbuk sari pinus melalui pakan  terhadap  maskulinisasi  dan  kinerja  reproduksi  ikan  gapi.  Penelitian  ini  menggunakan  rancangan acak lengkap (RAL) yang terdiri atas lima perlakuan dengan tiga ulangan, yaitu meliputi suplementasi 10 mg ekstrak serbuk sari pinus per kg pakan (SSP10), 50 mg kg -1 pakan (SSP50), 250 mg kg -1 pakan (SSP250), 1 mg 17  -metiltestosteron per kg pakan sebagai kontrol positif (MT atau kontrol-2), dan perlakuan tanpa suplementasi  ekstrak  serbuk  sari  pinus  (kontrol-1).  Ikan  uji  yang  digunakan  adalah  induk  gapi  bunting diberi pakan perlakuan selama 15 hari dan dipelihara sampai anak kelahiran pertama (B1) dan kedua (B2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak serbuk sari pinus mampu meningkatkan persentase nisbah kelamin jantan pada B1, namun tidak pada B2. Suplementasi ekstrak serbuk sari pinus pada induk bunting  tidak  memengaruhi  kinerja  reproduksi.  Persentase  nisbah  kelamin  jantan  B1  pada  perlakuan SSP50 dan SSP250 tidak  berbeda nyata, secara berurutan 63,9% dan 66,4%;  tetapi keduanya lebih tinggi dibandingkan kontrol-1 (31,3%); namun masih lebih rendah dibandingkan perlakuan MT (81,9%) (P<0,05). Perlakuan MT pada B2 memiliki nisbah kelamin jantan tertinggi (48,4%) dan berbeda nyata dengan perlakuan lainnya (P<0,05). Suplementasi ekstrak serbuk sari pinus melalui pakan efektif dalam meningkatkan persentasi nisbah kelamin jantan ikan gapi pada dosis 50 mg kg -1 . Ekstrak serbuk sari pinus dapat digunakan untuk maskulinisasi ikan gapi.
KATA KUNCI: maskulinisasi;  serbuk  sari  pinus;  Poecilia  reticulata;  kinerja  reproduksi;  17  -
metiltestosteron
ABSTRACT: Effectiveness  of  pine  pollen  extract-supplemented  feed  on  masculinization  and reproductive  performance  of  the  guppy,  Poecilia  reticulata.  By:  Eka  Kusuma,  Agus  Oman Sudrajat,  Harton  Arfah,  and  Alimuddin
The  aim  of  this  study  was  to  evaluate  the  effectiveness  of  pine  pollen  extract  supplementation  through  feed on  masculinization  and  reproductive  performance  of  guppy.  This  study  used  a  completely  randomized design  consisting  of  five  treatments  with  three  replications.  The  treatments  were  the  supplementation  of pine  pollen  extract  of  10  mg  kg -1 of  feed  (SSP10),  50  mg  kg -1 of  feed  (SSP50),  and  250  mg  kg -1 of  feed (SSP250).  Control  treatments  consisted  of  the  supplementation  of  1  mg  17  -methyltestosterone  per  kg  of feed  as  a  positive  control  (MT  or  control-2),  and  without  supplementation  pine  pollen  extract  in  feed (control-1).  The  test  fish  used  were  livebearer  guppy  brooders.  The  test  fish  were  given  treatment  feed  for 15  days  and  continued  until  the  first  (B1)  and  second  (B2)  offsprings  were  born.  This  study  showed  that  the administration  of pine  pollen  extract in  feed was  able  to increase  the  percentage of  male sex  ratio  in B1,  but not  in  B2.  Supplementation  of  pine  pollen  extract  did  not  affect  the  tested  fish’s  reproductive  performance. The  percentages  of  male  sex  ratio  B1  in  the  SSP50  and  SSP250  treatments  were  not  significantly  different, 63.9%  and  66.4%,  respectively.  Despite  that,  both  treatments  had  a  higher  male  sex  ratio  than  control-1 (31.3%), yet lower than the MT treatment (81.9%) (P<0.05). The MT treatment at B2 had the highest male sex ratio  (48.4%)  and  was  significantly  different  from  the  other  treatments  (P<0.05).  Supplementation  of  pine pollen  extract  through  feed  at  a  dose  of  50  mg  kg -1 effectively  increased  the  male  sex  ratio  of  guppy.  Pine pollen  extract  can  be  used  for  the  masculinization  of  guppy.
KEYWORDS: masculinization;  pine  pollen;  Poecilia  reticulata;  reproduction  performance;  17  - methyltestosterone

## PENDAHULUAN
Ikan gapi termasuk dalam lima jenis ikan hias pal- ing diminati di Indonesia. Kementerian Kelautan dan Perikanan mencatat pada tahun 2015 produksi ikan gapi nasional mencapai 26.613 ekor dan meningkat menjadi  72.229  ekor  pada  tahun  2016  (KKP,  2019). Pada umumnya  ikan gapi  yang diminati  adalah ikan jantan  karena  memiliki  warna  dan  motif  yang  lebih indah dibandingkan gapi betina. Induk gapi mampu melahirkan anak beberapa kali dalam satu kali proses perkawinan, namun budidaya gapi memiliki kendala, yaitu persentase anak jantan lebih rendah dibandingkan betina sehingga dibutuhkan upaya untuk meningkatkan persentase  jantan  dalam  setiap  kelahiran,  misalnya dengan perlakuan hormonal untuk maskulinisasi.
Hormon yang sering digunakan untuk maskulinisasi adalah  hormon  sintetik misalnya  17  - metiltestosteron  (Chakraborty  et  al.,  2012). Efektivitas hormon 17  -metiltestosteron (MT) untuk maskulinisasi sudah terbukti pada berbagai jenis ikan budidaya,  namun  menemui  berbagai  kendala  di antaranya  harus  impor,  harganya  mahal,  dan  sudah dilarang  di  Indonesia  (No.1/Kepmen-KP/2019). Pelarangan  tersebut  terkait  dengan  potensi  residu yang  dapat  memberikan  dampak  negatif  terhadap keamanan  pangan  dan  lingkungan  (Rivero-Wendt  et al., 2020), serta akumulasi pada sedimen (Homklin et al., 2011) dan kolom air sampai 28 hari (Barry et al., 2011).
Tumbuhan  mengandung  hormon  steroid  yang bersifat estrogenik ataupun androgenik, namun belum banyak dipelajari bioaktivitasnya (Tarkowská, 2019). Bahan  alami  yang  mengandung  steroid  khususnya fitoandrogen  di  antaranya  adalah  serbuk  sari  pinus (Pinus sp.), yang dilaporkan mengandung testosteron, androstenedione, dan epitestosteron (Šaden-Krehula et  al.,  1971).  Penggunaan  serbuk  sari  pinus  untuk maskulinisasi telah dilakukan pada ikan nila (Nian et al., 2017) dan lele (Adenigba et al., 2017). Penelitian ini  bertujuan  untuk  menguji  efektivitas  pemberian ekstrak  serbuk  sari  pinus  untuk  maskulinisasi  dan kinerja reproduksi pada ikan gapi.

## BAHAN DAN METODE

## Pembuatan Ekstrak Serbuk  Sari  Pinus  dan Pengukuran  Kadar  Hormon
Pembuatan  ekstrak  serbuk  sari  pinus  (ESSP) menggunakan metode maserasi mengikuti Puspitasari & Proyogo (2017). Bahan yang digunakan adalah serbuk sari pinus komersial murni 100% yang diproduksi oleh Kunming  Yundao  Biotechnology.  Kadar  hormon testosteron dan estradiol-17  diukur menggunakan metode  enzyme-linked  immunosorbent  assay  (ELISA) sesuai petunjuk produsen.

## Rancangan  Penelitian  dan  Persiapan  Pakan Uji
Penelitian ini terdiri atas lima perlakuan dan tiga ulangan dengan  masing-masing ulangan  terdiri atas satu ekor ikan gapi bunting. Perlakuan yang diberikan yaitu  tanpa  suplementasi  ekstrak  serbuk  sari  pinus (kontrol-1),  suplementasi  dengan  dosis  10  (SSP10), 50 (SSP50), dan 250 mg kg -1 pakan (SSP  250), serta suplementasi  17  -methyltestosterone  1  mg  kg -1 pakan sebagai kontrol-2 (MT). Pakan yang digunakan berupa  pelet  komersial  dengan  kandungan  protein 40%.  Suplementasi  ekstrak  serbuk  sari  pinus  pada pakan mengikuti metode Adenigba et al. (2017).

## Pemeliharaan  Ikan
Ikan uji yang digunakan adalah ikan gapi jenis plati- num red tail dengan bobot 0,8-1,0 g. Sebelum diberi perlakuan,  induk  betina  bunting  dipelihara  secara terpisah  dengan  jantan  selama  dua  bulan  untuk mengosongkan  embrio  yang  dikandungnya  dan penyeragaman kondisi ikan uji. Ikan dipelihara dalam akuarium  ukuran  30  cm  x  20  cm  x  20  cm  diisi  air sebanyak 9 L yang diberi keranjang dengan diameter lubang 0,5 cm agar anak yang dilahirkan terpisah dengan induknya. Pemberian pakan perlakuan dilakukan tiga kali  sehari  secara  at  satiation  selama  15  hari. Pengukuran  pH  dan  suhu  air  dilakukan  setiap  hari, oksigen terlarut (DO) seminggu sekali, dan total am- monia nitrogen (TAN) pada awal dan akhir penelitian. Kualitas air selama penelitian yaitu suhu 28,2°C-28,5°C; pH  6,9-7,5;  DO  4,2–4,3  mg  L -1 ;  dan  TAN  0,25-0,43 mg L -1 .
Analisis  Kadar  Hormon  Testosteron  dan Estradiol-17 
Sampel  yang  digunakan  untuk  mengukur  kadar hormon  adalah  plasma  tubuh.  Kadar  hormon  pada induk bunting dilakukan pada awal dan pasca pemberian perlakuan, plasma tubuh diambil dari tiga ekor ikan per  perlakuan.  Pengukuran  kadar  hormon  juga dilakukan pada anak gapi kelahiran pertama dari induk gapi  bunting  yang  diberi  perlakuan.  Pengukuran dilakukan pada hari ke-0, 10, 20, 30, dan 40 hari pasca- lahir. Jumlah ikan yang digunakan sebanyak lima ekor tiap ulangan. Sampel ikan (whole body) digerus sampai hancur dalam tabung mikro, kemudian ditambahkan phosphate-buffered  saline  (pH  7,4)  dengan perbandingan 1:4. Sampel disentrifus 5.000 rpm pada suhu 4°C selama 10 menit, kemudian cairan bening dipindahkan ke mikro tube yang  baru dan  disimpan pada  suhu  -20°C  hingga  dilakukan  pengukuran. Pengukuran kadar hormon  dilakukan menggunakan metode ELISA dengan kit testosteron (DRG Diagnos- tic  EIA  1559)  dan  hormon  estradiol-17  (kit  estra- diol-17  DRG  EIA  2693)  sesuai  petunjuk  produsen.
Pengukuran  kadar  hormon  dihitung  menggunakan program MPM 6.

## Parameter  Pengamatan
Parameter  yang  diamati  untuk  menguji  efek penambahan ekstrak serbuk sari pinus dalam pakan terhadap  maskulinisasi  dan  kinerja  reproduksi  ikan gapi adalah:
· Nisbah kelamin jantan anak kelahiran pertama (B1) dan kedua (B2) pada 60 hari pasca lahir (hpl) diamati berdasarkan fisiologi ikan yaitu warna dan adanya gonopodium  pada  ikan  jantan,  dihitung berdasarkan rumus:
· Jumlah anak pada B1 dan kedua B2
·
· Gonadosomatik index (GSI) B1 jantan dan betina Pada 60 hari pasca lahir
· Hepatosomatic index (HSI) betina Pada 60 hari pasca lahir
· Histologi  testis  B1  60  hpl  diidentifikasi berdasarkan  Uribe  et  al.  (2014)  dan  ovarium  B1 diidentifikasi berdasarkan Uribe et al. (2019).
· Jarak kelahiran dari B1 ke B2

## Analisis  Data
Data diolah dengan bantuan Microsoft Excel 2016. Analisis nisbah kelamin jantan dan kinerja reproduksi dilakukan  dengan  analisis  varian  (ANOVA) menggunakan  SPSS  versi  18,  jika  ditemukan perbedaan nyata kemudian dilakukan uji lanjut dengan menggunakan uji  Duncan pada  derajat kepercayaan 95%.

## HASIL DAN BAHASAN
Kadar hormon testosteron dan estradiol-17  dalam ESSP  disajikan  pada  Tabel  1.  Hasil  pengujian  kadar hormon menunjukkan bahwa proses ekstraksi serbuk sari  pinus  dapat  meningkatkan  kadar  hormonnya. Serbuk  sari  pinus  tanpa  ekstrak  mengandung testosteron  9,9  ng  mg -1 dan  estradiol-17  tidak terdeteksi. Setelah dilakukan ekstraksi menggunakan alkohol 96% diperoleh kandungan hormon testosteron mencapai 64,6 ng mg -1 dan estradiol-17  2,2 ng mg -1 .
Nisbah kelamin jantan (NKJ) pada perlakuan SSP50 dan  SSP250  adalah  tidak  berbeda  nyata  (63,9%  dan 66,4%),  namun  berbeda  nyata  dengan  perlakuan kontrol-1 tanpa pemberian ESSP yaitu 31,3% (P<0,05). Nisbah  kelamin  jantan  tertinggi  dihasilkan  pada perlakuan  kontrol-2  (MT),  yaitu  81,9%  (Tabel  2). Pemberian  ESSP  pada  induk  gapi  bunting  terbukti mampu meningkatkan NKJ pada anak gapi kelahiran pertama.  Maskulinisasi  terjadi  karena  antara  induk dengan  embrio  dihubungkan  oleh  pembuluh  darah sebagai saluran metabolisme yang membentuk folikel plasenta (Uribe et al., 2019) sehingga testosteron pada induk  dapat  ditransfer  kepada  embrio.  Terjadinya maskulinisasi pada anakan yang dihasilkan dari induk yang  diberi  pakan  mengandung  ekstrak  SSP  karena pada  saat  masih  menjadi  embrio  berumur  14  hari sebelum  lahir  primodial  germ  cells  (PGC)  sudah terbentuk dan pada awal kelahiran sudah berkembang menjadi gonad (Koya et al., 2003).
Maskulinisasi yang terjadi pada suplementasi ESSP melalui  pakan  induk  gapi  bunting  lebih  rendah dibandingkan  dengan  suplementasi  17  - metiltestosteron  dikarenakan  dalam  ESSP mengandung estradiol-17  yang bekerja berlawanan dari testosteron sehingga proses maskulinisasi tidak maksimal.  Hormon  sintetis  17  -metiltestosteron lebih  maksimal  dalam  memaskulinisasi  ikan  karena murni dan sulit  terdegradasi (Homklin et al.,  2011). Hormon  17  -metiltestosteron  dalam  pakan menunjukkan hasil yang stabil beberapa bulan karena ditambahkan gugus metil pada rantai karbon ke-17. Waktu  paruh  dari  17  -metiltestosteron  sekitar  1,1 bulan pada suhu 40°C dan 4,8 bulan pada suhu 22°C (Barry et al., 2007). Bakteri mempunyai kemampuan lebih  untuk  mendegradasi  testosteron  yang  tidak memiliki gugus metil (Fahrbach et al., 2010).
Nilai GSI jantan dan betina pada B1 dan B2 (Tabel 2) seluruh perlakuan tidak  berbeda nyata (P>0,05). Nilai GSI B1 jantan berkisar antara 2,9-3,4 sedangkan GSI  betina  berkisar  antara  2,8-3,5.  Nilai  HSI  betina berkisar antara 2,2-3,7; dan tidak berbeda nyata untuk semua perlakuan (P>0,05).
Nisbah kelamin jantan pada B2 hanya perlakuan MT yang masih terjadi maskulinisasi (48,4%) atau 12% lebih tinggi dibandingkan kontrol, sedangkan pada perlakuan ESSP tidak terjadi maskulinisasi (P>0,05). Terjadinya proses maskulinisasi pada anak kelahiran kedua yang diberi  suplementasi  17  -metiltestosteron  karena diduga masih ada residu yang tersisa di dalam tubuh induk ikan gapi bunting. Residu 17  -metiltestosteron mulai  tidak  terdeteksi  setelah  dua  bulan  penelitian (Dergal  et  al.,  2016)  dan  empat  bulan  setelah pemberian (Suseno et al., 2020).
100 x ikan total Jumlah jantan ikan Jumlah jantan kelamin Nisbah  100 x awal ikan anak Jumlah akhir ikan anak Jumlah hpl 60 B2 dan B1 Sintasan  100 x ikan l Bobot tota gonad Bobot GSI  100% x ikan l Bobot tota hati Bobot HSI 
Kadar hormon testosteron dan estradiol-17  pada induk  betina  disajikan  pada  Gambar  1.  Sebelum perlakuan diberikan, kadar testosteron dan estradiol- 17  pada induk gapi bunting masing-masing adalah 0,5 ng mL -1 dan 1,7 ng mL -1 . Pasca-perlakuan (H-16), kadar  testosteron  pada  induk  betina  meningkat dibandingkan hari ke-0, dan kadar tertinggi diperoleh pada perlakuan MT (7,8 ng mL -1 ), diikuti oleh perlakuan SSP250 (5,2 ng mL -1 ), SSP50 (5,0 ng mL -1 ), SSP10 (3,6 ng mL -1 ), dan terendah adalah kontrol-1 (1,9 ng mL -1 ). Sebaliknya  kadar  estradiol-17  tertinggi  diperoleh pada  perlakuan  kontrol-1  (6,5  ng  mL -1 ),  sedangkan perlakuan lainnya berkisar 0,0-0,3 ng mL -1 . Testosteron dalam  plasma  tubuh  induk  gapi  bunting  setelah diberikan  perlakuan  ESPP  mengalami  peningkatan karena  testosteron  dalam  ESSP  diserap  melalui pencernaan dan masuk ke dalam darah. Berbagai bahan dari serbuk sari terbukti mampu meningkatkan kadar testosteron  misalnya  pemberian  serbuk  sari  kurma (date  palm  pollen)  dapat  meningkatkan  testosteron
dalam  serum  pada  tikus  prapubertas  dan  dewasa (Mehraban et al., 2014).
Kadar hormon testosteron dan estradiol-17  anak gapi  kelahiran  pertama  disajikan  pada  Gambar  2. Hormon  testosteron  B1  berumur  0  hpl  tertinggi diperoleh pada perlakuan MT 7,0 ng mg -1 ; sedangkan estradiol-17  pada anak umur 0 hpl tertinggi diperoleh pada perlakuan kontrol-1 3,6 ng mg -1 .
Pemberian ESSP melalui pakan selama 15 hari pada induk gapi bunting mampu menginduksi testosteron pada anak kelahiran pertama sampai hari ke-30 lebih tinggi dibandingkan estradiol-17  , sedangkan hari ke- 40  relatif  stabil.  Kadar  hormon  testosteron  akan meningkat sesuai dengan bertambahnya umur ikan dan akan mencapai puncaknya ketika ikan matang gonad (Nakamura, 2013).
Kinerja reproduksi berdasarkan parameter jumlah anak, sintasan, dan jarak kelahiran antara B1 dan B2
Tabel 1. Kadar testosteron dan estradiol-17  serbuk sari pinus Table 1. Testosterone and estradiol-17  levels of pine pollen
Keterangan (Note):
* Bahan yang digunakan penelitian (Used in this study)
** Kandungan lebih tinggi dari standar alat untuk membaca kadar hormon (The hormone level was higher than the standard  tool  for  reading  the  hormone  level)
Tabel 2. Nisbah kelamin jantan anak gapi kelahiran pertama (B1) dan kedua (B2) dari induk bunting yang diberi perlakuan ekstrak serbuk sari pinus
Table 2. Sex ratio of the first (B1) and second-born (B2) offspring from female pregnant guppy fed with pine pollen extract supplemented feed
Keterangan: Huruf berbeda di tiap kolom (nilai rata-rata ± SD) menunjukkan berbeda nyata (uji jarak berganda
Duncan; P<0,05)
Note: Different  letters  in  the  same  column  (mean  ±  SD)  indicate  a  significant  difference  (Duncan’s  multiple distance  test;  P<0.05) GSI HSI HSI NKJ (%) Kontrol-1 (Control-1 ) 31.3 ± 2.9 a 2.88 ± 0.1 a 2.23 ± 0.1 a 3.05 ± 0.3 a 36.4 ± 2.9 a MT 81.9 ± 3.6 d 3.56 ± 0.4 a 3.1 ± 0.9 a 2.96 ± 0.2 a 48.4 ± 4.9 b SSP10 54.4 ± 7.3 b 2.96 ± 0.3 a 3.19 ± 0.1 a 3.46 ± 0.5 a 34.7 ± 7.5 a SSP50 63.9 ± 1.2 c 3.02 ± 0.2 a 2.93 ± 0.8 a 3.24 ± 0.3 a 35.0 ± 0.1 a SSP250 66.4 ± 4.5 c 3.37 ± 0.5 a 3.75 ± 1.2 a 3.20 ± 0.0 a 34.7 ± 4.5 a
Perlakuan Treatments Betina (Female ) Jantan (Male ) B2 B1 NKJ (%) Testosteron (Testosterone ) Estradiol-17 β (Estradiol-17 β ) Ekstrak bunga pinus lokal (Pinus merkusii ) > 67.2** 4.9 ± 0.1 Serbuk sari pinus komersial (Commercial pine pollen ) 9.9 ± 0.1 Tidak terdeteksi (Not detected ) Ekstrak serbuk sari pinus komersial* Commercial pine pollen extract * 64.6 ± 2.6 2.2 ± 0.1
Kandungan steroid (Steroid content ) (ng mg -1 ) Bahan (Ingredient )
disajikan pada Tabel 3. Jumlah anak B1 adalah tidak berbeda nyata untuk semua perlakuan yaitu 17-25 ekor/ induk dan B2 (23-25 ekor/induk). Jumlah anak tersebut relatif kecil jika dibandingkan dengan hasil penelitian Shahjahan et al. (2014) yang melaporkan induk gapi mampu menghasilkan anak 40-89 ekor tiap gram bobot induk.
Sintasan B1 tidak berbeda nyata yaitu 84,1%-92,5% dan B2 83,8%-90,0% (P>0,05). Pemberian serbuk sari pinus  dalam  proses  maskulinisasi  ikan  lele  (Clarias gariepinus) juga dilaporkan tidak berpengaruh nyata terhadap nilai sintasan (Adenigba et al., 2017). Jarak kelahiran B1 dan B2 yaitu 23-25 hari juga tidak berbeda
pada semua perlakuan (P>0,05). Shahjahan et al. (2014) menyatakan bahwa masa kehamilan atau gestasi ikan gapi berkisar antara 25-35 hari.
Histologi testis dan ovarium B1 dilakukan pada 60 hpl  (Gambar  4)  menunjukkan  bahwa  testis  semua perlakuan sudah matang ditandai dengan adanya sper- matozoa. Ovarium B1 di semua perlakuan menunjukkan sudah matang (tipe 4) namun demikian, telur ikan gapi tidak matang bersamaan. Kematangan telur bervariasi yaitu tipe-1  ditandai dengan inti yang  besar hampir menempati seluruh sitoplasma, tipe-2 menunjukkan peningkatan  volume  sitoplasma  dan  penurunan  vo- lume  nukleus  (germinal  vesicle),  sedangkan  tipe-3
Gambar 1. Kadar hormon testosteron dan estradiol-17  induk gapi betina bunting awal (H-0) dan pasca perlakuan (H-16).
Figure  1. Testosterone  and  estradiol-17  levels  at  initial  (H-0)  and  post-treatment  (H- 16)  of  female  pregnant  guppy. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Awal (Initial) (H-0) Kontrol-1
(Control-1)
MT SSP10 SSP50 SSP250 K ad ar h o rm o n H or m on e le ve ls (n g m L -1 ) Pasca perlakuan (Post treatments) Testosteron (Testosterone) Estradiol-17 β (17 β -estradiole)
Perlakuan (Treatment)
Gambar 2. Kadar  hormon  testosteron  (kiri)  dan  estradiol-17  (kanan)  pada  anak  gapi  kelahiran pertama (B1).
Figure  2. Testosterone  (left)  and  estradiol-17  (right)  levels  in  the  first-born  guppy  fry  (B1).
Testosteron  (Testosterone) Estradiol-17  (17  -Estradiole)
Awal  (Initial) (H-0) Kontrol-1
Control-1
MT                 SSP10             SSP50             SSP250
0 2 4 6 8 0 10 20 30 40 T es to st er o n B 1
T es to st er o n e B 1 (n g m L -1 ) Pengamatan (hari) / Observation (days) Kontrol-1 Control-1 MT SSP10 SSP50 SSP250 0 2 4 6 0 10 20 30 40 E st ra d io l- 1 7 β B 1 1 7 β - es tr ad io le B 1 (n g m L - 1 ) Pengamatan (hari) / Observation (days) Kontrol-1 (Control-1) MT SSP10 SSP50 SSP250 Kontrol-1 Control-1 (Control-1)
(vitelogenesis)  yaitu  vesikula  kaya  lipid  di  sekitar sitoplasma  dan  tipe-4  yaitu  matang  yang  ditandai dengan sitoplasma yang melimpah dan gumpalan lipid yang besar. Shahjahan et al. (2014) menyatakan ikan gapi mulai matang gonad pada umur 56 hpl.
Pemberian  ekstrak  serbuk  sari  pinus  yang dikombinasikan dengan suhu atau aromatase inhibi- tor diperlukan, serta adanya intensitas penambahan
Tabel 3. Jumlah anak, sintasan, dan jarak kelahiran anak pertama dan kedua dari induk ikan gapi bunting yang diberi perlakuan ekstrak serbuk sari pinus
Table 3. Number  of  offspring,  survival  rate,  and  birth  distance of  the  first  to  second-born  from  female  of pregnant guppy treated with pine pollen extract-supplemented feed
Keterangan: Huruf berbeda di tiap kolom (nilai rata-rata ± SD) menunjukkan berbeda nyata ik (uji jarak berganda Duncan; P<0,05) Note:
Different  letters  in  each  column  (mean  ±  SD)  indicate  a  significant  difference  (Duncan’s  multiple  distance test; P<0.05))
waktu  pemberian  perlakuan  sehingga  maskulinisasi pada ikan dapat meningkat.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  serbuk  sari  pinus  melalui suplementasi  pakan  pada  induk  bunting  ikan  gapi mampu meningkatkan nisbah kelamin jantan pada anak kelahiran pertama. Dosis optimal ekstrak serbuk sari
Keterangan: Sel sertoli (S), spermatogonia (Sg), spermatosit (Sc), spermatid (St), spermatozoa (Sz), saluran sperma (SD). Perbesaran 100x. Oosit tipe-1 (Oi), tipe-2 (Oii), tipe-3 (Oiii), tipe-4 (Oiv),
previtellogenesis (Pf), inisiasi vitelogenesis (Vf), oil droplet (od), yolk (y), saluran darah (v). Perbesaran 40x Note: Sertoly  cells (S),  spermatogonia  (Sg), spermatosit  (Sc), spermatid  (St),  spermatozoa (Sz),  sperm duct (SD). Magnification 100x. Oocyte type-1 (Oi), type-2 (Oii), type-3 (Oiii), type-4  (Oiv), previtellogenesis (Pf), initiation of vitellogenesis (Vf), oil droplet  (od), yolk (y), blood vessel (v). Magnification  40x Gambar 4. Histologi testis (atas) dan ovarium (bawah) anak gapi kelahiran pertama (B1) pada umur 60 hpl.
Figure 4. Histology of testes (top) and ovaries (bottom) of the first-born guppy at 60 days post- born. Jumlah anak (ekor) Number of fish (tail) Sintasan 60 hpl Survival rate 60 hpl (%) Jumlah anak (ekor) Number of fish (tail) Sintasan 60 hpl Survival rate 60 hpl (%) Kontrol-1 (Control-1 ) 23 ± 5 a 86.1 ± 3.7 a 24 ± 1 a 86.2 ± 6.5 a 24 ± 1 a MT 17 ± 6 a 84.1 ± 8.9 a
24 ± 2 a 83.8 ± 11.7 a 24 ± 2 a SSP10 21 ± 12 a 87.9 ± 3.1 a 25 ± 1 a 85.3 ± 5.8 a 25 ± 1 a SSP50 19 ± 3 a 92.5 ± 2.6 a 23 ± 2 a 88.5 ± 6.1 a 23 ± 2 a SSP250 25 ± 8 a 89.8 ± 8.8 a 24 ± 1 a 90.0 ± 6.2 a 24 ± 1 a Jarak kelahiran B1-B2 (hari) Birth distance B1-B2 (day) Perlakuan Treatments B1 B2
pinus  adalah  50  mg  kg -1 pakan  yang  dapat meningkatkan  nisbah kelamin  jantan sebesar  32,6% dan  tidak  berpengaruh  negatif  terhadap  kinerja reproduksi pada induk dan anak ikan gapi kelahiran pertama.

## DAFTAR  ACUAN
Adenigba,  I.,  Tumbokon,  B.L.M.,  &  Serrano,  A.E. (2017). Androgenic and anabolic effects of pinus tabulaeformis carr. Pollen in Clarias gariepinus. Is- raeli Journal of Aquaculture - Bamidgeh, 69, 1-8.
Barry, T.P., Marwah, A., & Marwah, P. (2007). Stability of  17á-methyltestosterone  in  fish  feed.  Aquacul- ture, 271(4), 523-529.
Barry,  T.P.,  Marwah,  P.,  &  Marwah,  A.  (2011).  Trans- formation of 17 á-methyltestosterone in aquatic- sediment systems. Journal of  Applied and  Natural Science, 3(1), 1-9.
Chakraborty, S.B., Molnár, T., & Hancz, C. (2012). Ef- fects of methyltestosterone, tamoxifen, genistein and basella alba extract on masculinization of guppy (Poecilia reticulata). Journal of Applied Pharmaceuti- cal Science, 2(12), 48-52.
Dergal,  N.B.,  Scippo,  M.,  Degand,  G.,  Gennotte,  V., Mélard, C., Natural, F., Sciences, L., Ahmed, O., & Bella,  B.  (2016).  Monitoring  of  17á-methyltest- osterone residues in tilapia’s (Oreochromis niloticus) flesh and experimental water after its sex rever- sal.  International  Journal  of  Biosciences,  9(6),  101- 113.
Fahrbach, M., Krauss, M., Preiss, A., Kohler, H.P.E., & Hollender, J. (2010). Anaerobic testosterone deg- radation in Steroidobacter denitrificans: Identifi- cation of transformation products. Environmental Pollution, 158(8), 2572-2581.
Homklin,  S.,  Ong,  S.K.,  &  Limpiyakorn,  T.  (2011). Biotransformation  of  17á-methyltestosterone  in sediment under different electron acceptor con- ditions. Chemosphere, 82(10), 1401-1407.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan  [KKP].  (2019). Data  produksi  nasional  perikanan  dan  kelautan tahun 2018. Diacu 28 Januari 2021. Tersedia pada https://satudata.kkp.go.id/dashboard produksi.
Koya,  Y.,  Fujita,  A.,  Niki,  F.,  Ishihara,  E.,  &  Miyama, H. (2003). Sex differentiation and pubertal devel- opment of gonads in the viviparous mosquitofish, Gambusia affinis. Zoological Science, 20(10), 1231- 1242.
Mehraban,  F.,  Jafari,  M.,  Toori,  M.A.,  Sadeghi,  H., Joodi, B., Mostafazade, M., & Sadeghi, H. (2014).
Effects of date palm pollen (Phoenix dactylifera L.) and  Astragalus  ovinus  on  sperm  parameters  and sex hormones in adult male rats. Iranian  Journal of Reproductive Medicine, 12(10), 705-712.
Nakamura, M. (2013). Morphological and physiologi- cal  studies on  gonadal  sex  differentiation in  te- leost fish. Aqua-BioScience Monograph, 6(1), 1-47.
Nian, C.T., Tumbokon, B.L.M., & Serrano, A.E. (2017). Pinus tabulaeformis pollen as replacement for 17- alpha-methyltestosterone  in  the  diet  of Oreochromis  niloticus  larvae  for  sex  reversal  and growth.  Israeli  Journal  of  Aquaculture  -  Bamidgeh, 69(1), 1-9.
Puspitasari, A.D. & Proyogo, L.S. (2017). Kadar fenolik total  ekstrak  etanol  daun  kersen  (Muntingia calabura).  Jurnal  Ilmiah  Cendekia  Eksakta,  2(1), 1-8.
Rivero -Wendt,  C.L.G.,  Miranda-Vilela,  A.L., Domingues,  I.,  Oliveira,  R.,  Monteiro,  M.S., Moura-Mello,  M.A.M.,  Matias,  R.,  Soares, A.M.V.M., & Grisolia, C.K. (2020). Steroid andro- gen 17 alpha methyltestosterone used in fish farm- ing  induces biochemical  alterations in  zebrafish adults. Journal of Environmental Science and Health - Part A, 55(11), 1321-1332.
Šaden-Krehula,  M.,  Tajiæ,  M.,  &  Kolbah,  D.  (1971). Testosterone,  epitestosterone  and  androstene- dione  in the  pollen  of  scotch pine  P.  silvestris  L. Experientia, 27(1), 108-109.
Shahjahan, R.M., Ahmed, M.J., Begum, R.A., & Rashid, M.A.  (2014).  Breeding  biology  of  guppy  fish, Poecilia reticulata (Peters, 1859) in the laboratory. Journal of the Asiatic Society of Bangladesh, Science, 39(2), 259-267.
Suseno,  D.,  Luqman,  E.,  Lamid,  M.,  Mukti,  A.,  & Suprayudi, M. (2020). Residual impact of 17-me- thyltestosterone and histopathological changes in sex-reversed  nile  tilapia  (Oreochromis  niloticus). Asian Pacific Journal of Reproduction, 9(1), 37-43.
Tarkowská,  D. (2019).  Plants  are  capable of  synthe- sizing animal steroid hormones. Molecules, 24(14), 1-13.
Uribe, M.C., Cruz, G.D.la-R., Alarcón, A.G., Caballero, J.C.C., & Bárcenas, M.G.G.  (2019). Structures as- sociated with oogenesis and embryonic develop- ment during intraovarian gestation in viviparous teleosts (Poeciliidae). Fishes, 4(2), 1-14.
Uribe, M.C., Grier, H.J., & Mejía-roa, V. (2014). Com- parative testicular structure and spermatogenesis in bony fishes. Spermatogenesis, 4(3), 1-13.