Uji Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak Etanol Daun Pacar Air ( Impatiens balsamina L.) terhadap Bakteri Escherichia coli
Hardiana 1* , Yuni Dewi Safrida 2 , Rizki Khana Maulianda 3
1,2,3 Akademi Analis Farmasi dan Makanan Banda Aceh * Koresponden email : hardiana7011@gmail.com
Diterima: 02 Oktober 2020 Disetujui: 12 Oktober 2020

## Abstract
( Impatiens  balsamina L.)  is  an  ornamental  plant  that  has  been  widely  developed  as  a  medicinal  plant. Secondary metabolites of water henna plant ( Impatiens balsamina L.) are known to contain flavonoids. In the field of pharmacology this plant is often used because it has antibacterial agents. This study aimed to determine the inhibitory effect and the optimum antibacterial concentration of the ethanol extract of the leaves  of  water  henna  ( Impatiens  balsamina L.)  against  the  growth  of Escherichia  coli bacteria  with treatment  concentrations  those  are  25%,  50%,  75%,  and  100%.  This  research  was  conducted  at  the Akafarma  Microbiology  Laboratory  in  Banda  Aceh.  The  method  used  was  experimental  with  disk diffusion  (disc  method).  The  results  showed  that  in  repetition  I  and  II  with  concentrations  of  25%,  50 percent, 75 percent, and 100 percent, the zone of inhibition was obtained respectively those are  23 mm, 26 mm, 29.5 mm, and 31 mm. The optimum result of the ethanol extract of Impatiens balsamina L. leaves in  inhibiting  the  growth  of Escherichia coli is  at  the  concentration  of  100%  with  an  inhibition  zone diameter of 31 mm.
Keywords: activity test, escherichia coli, ethanol extract, disk diffusion, water henna leaves,

## Abstrak
Tanaman  hias  Pacar  air  ( Impatiens  balsamina L.)  merupakan  tumbuhan  yang  banyak  dikembangkan sebagai  tanaman  obat.  Metabolit  sekunder  dari  tumbuhan  pacar  air  ( Impatiens  balsamina L.)  diketahui mengandung  flavonoid.  Dibidang  farmakologi  tanaman  ini  sering  digunakan  karena  memiliki  sifat antibakteri. Tujuan penelitian untuk memahami berapa daya hambat dan konsentrasi optimum antibakteri dari  ekstrak  etanol  daun  pacar  air  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dengan  perlakuan konsentrasi, yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100%. Metode yang digunakan yaitu eksperimental secara difusi disk  (cara  cakram).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pada  pengulangan  I  dan  II  untuk  konsentrasi 25%, 50%, 75%, dan 100% didapatkan zona hambat secara rata-rata berturut-turut, yaitu 23mm, 26 mm, 29,5  mm,  dan  31  mm.  Hasil  optimum  ekstrak  etanol  daun Impatiens  balsamina L.  dalam  mencegah pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli adalah dalam  konsentrasi  100  %  dengan  diameter  zona  hambat sebesar 31 mm.
Kata Kunci : daun pacar air, difusi disk, escherichia coli, ekstrak etanol, uji aktifitas

## 1. Pendahuluan
Indonesia adalah negara megadiversity di dunia memiliki berbagai jenis tumbuhan yang berkhasiat sebagai  obat,  sehingga  bisa  digunakan  untuk  mengobati  penyakit.  Dalam  pengobatan  tradisional, umumnya memakai racikan dari tumbuhan, baik berupa daun, bunga, biji, buah, batang, dan akar. Hal ini dilakukan karena tumbuhan mengandung  metabolit sekunder yang  memiliki potensi seperti antioksidan, antibiotik,  antikanker,  dan  dapat  menghambat  efek  karsinogenik  [1] . Kemampuan  meracik  tumbuhan yang  berkhasiat  sebagai  obat  biasanya  didapatkan  secara  turun  temurun  berdasarkan  pengalaman (kearifan  lokal).  Di  Indonesia  banyak  menggunakan  tanaman  herbal  yang  bermanfaat  sebagai  obat tradisional  dalam  pengobatan  alternatif.  Beberapa  dari  jenis  tanaman  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat alternatif,  salah  satu  jenis  tanaman  tersebut  yaitu Impatiens  balsamina L.  atau  dalam  bahasa  daerah dikenal dengan sebutan pacar air.
Impatiens  balsamina L.  awalnya  merupakan  tumbuhan  hias  [2].  Namun  seiring  perkembangan zaman,  tanaman  pacar  air  mulai  dikenal  luas  sebagai  ramuan  obat  dan  banyak  digunakan  sebagai  obat herbal  di  seluruh  dunia  [3].  Tanaman  ini  secara  tradisional  digunakan  untuk  mengobati  luka  duri  atau tusukan kaca, abses [4], skrofulosis, bisul, disentri [5], rematik, nyeri otot dan tulang, patah tulang, infeksi superfisial, radang kuku [6], tumor, persalinan yang sulit, dan nyeri nifas [7].
Menurut ref. [8] daun pacar air memiliki kandungan flavonoid, saponin, kuinon, steroid dan tanin yang  merupakan  metabolit sekunder dari tanaman tersebut. Metabolit sekunder tersebut bersifat sebagai anti  bakteri.  Ref.  [9,10]  juga  melaporkan  bahwa  flavonoid  merupakan  senyawa  polifenol  yang  umum terkandung  dalam  tumbuhan  dalam  jumlah  yang  signifikan.  Berbagai  penelitian  telah  menunjukkan bahwa  flavonoid  dalam  tumbuhan  memiliki  efek  yang  berpotensi  menguntungkan  sebagai  agen antimikroba  [9].  Sementara  itu,  pacar  air    mengandung  senyawa  aktif  antimikroba,  yaitu  antioksidan, antidiabetes,  antiinflamasi,  antibakteri,  antijamur,  antivirus,  dan  antikanker  yang  berfungsi  untuk mencegah pertumbuhan bakteri. Di dalam dunia medis, penggunaan senyawa antibakteria adalah sebagai obat dalam penyembuhan berbagai jenis penyakit infeksi oleh bakteri pathogen.
Escherichia  coli adalah  anaerob  fakultatif  yang  dominan  dari  flora  kolon  manusia  [11,12]  dan merupakan jenis bakteri gram negatif fakultatif anaerobik yang mempunyai alat gerak berupa flagel [13]. Tiga sindrom klinis yang umum terjadi akibat infeksi strain Escherichia coli yang bersifat pathogen, yaitu infeksi  saluran  kemih,  sepsis  /  meningitis,  gagal  ginjal  akut,  dan  penyakit  enterik  /  diare  [14-16].  Di bidang  farmakologi  banyak  dilakukan  penelitian  untuk  menemukan  antibiotik  dari  berbagai  jenis tumbuhan yang berkhasiat obat karena cenderung lebih aman untuk dikonsumsi tubuh dibandingan obat sintetik.  Penggunaan  antibiotik  sintetik  dalam  jangka  panjang  dapat  menyebabkan  resistensi  mikroba terhadap  antibiotik  dan  juga  dapat  menyebabkan  efek  samping  pada host seperti  hipersensitivitas, penipisan  mikroorganisme  mukosa  dan  usus,  dan  reaksi  alergi  [17].  Oleh  karena  itu  pentingnya penggalian sumber antimikroba dari bahan alam [18].
Ref.  [19]  melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  bunga  pacar  air  mampu  menghalangi perkembangan  bakteri Escherichia  coli dengan  berbagai  konsentrasi,  yaitu  10  persen,  20  persen,  40 persen,  dan  80  persen  diperoleh  zona hambat  berturut-turut  7,83  mm;  10,16  mm;  14,00  mm;  dan 19,00 mm. Sementara itu, pada biji dengan konsentrasi yang sama diperoleh zona hambat yaitu 3,66 mm; 5,16 mm; 6,66 mm; dan 8,33 mm. Penelitian yang dilakukan oleh Ref. [20] menyatakan bahwa efektivitas dari pemberian  ekstrak  etanol daun pacar  air dalam mencegah pertumbuhan bakteri Candida albicans pada konsentrasi  25%,  50%,  75%,  dan  100%  diperoleh  zona  hambat,  yaitu  8,66  mm;  11,66  mm;  13,66  mm; dan 6,00 mm. Menurut ref. [21] semakin besar konsentrasi ekstrak etanol daun pacar air yang diberikan maka akan meningkatkan rata-rata diameter zona hambat pada perkembangan bakteri. Karenanya, penting dilakukan  penelitian  untuk  menyelidiki  kemampuan  senyawa  aktif  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak daun pacar air dalam menghalangi perkembangan bakteri Escherichia coli .

## 2. Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi,  Akademi  Analis  Farmasi  dan  Makanan (Akafarma) Banda Aceh. Riset ini telah dilaksanakan dari bulan Juni sampai dengan bulan Juli 2020.
Alat  dan  bahan  yang  dipakai  dalam  riset  ini  adalah  cawan  petri,  pipet  tetes,  Erlenmeyer,  tabung reaksi, rak tabung, gelas kimia, jarum ose, gelas ukur, penangas air, timbangan analitis, batang pengaduk, blender,  labu  ekstraksi, rotary  evaporator ,  pinset,  corong  kaca,  autoklaf,  mistar,  lampu  spiritus,  kertas cakram,  aluminium  foil,  pinset,  ayakan  mesh  200,  daun  pacar  air  ( Impatiens  balsamina L.),  bakteri  uji ( Escherichia  coli )  yang  diperoleh  dari  laboratorium  pengujian  mikrobiologi,  etanol,  aquades,  antibiotik (Amoxilin 500 mg), media Mueller hinton agar (MHA), media NB, kertas saring no. 1, kapas, dan kertas label.  Riset  ini  memakai  metode  eksperimental  laboratorium  secara  difusi  disk  dengan  berbagai perlakukan konsentrasi larutan yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100%.

## Prosedur Kerja

## a. Persiapan sampel
Daun pacar air yang masih segar dikumpulkan dan dicuci menggunakan air mengalir hingga bersih. Selanjutnya,  daun  ditiriskan  dan  dikering  anginkan.  Kemudian  dihaluskan  dan  diayak  sampai  menjadi serbuk.

## b. Pembuatan Ekstrak Sampel
Sebanyak 100 gram serbuk daun acar air yang telah ditimbang ditempatkan pada wadah kaca. Lalu direndam dalam etanol 96% sebanyak 500 mL selama 48 jam dan ditutup. Kemudian disaring memakai corong yang telah dilapisi kertas saring untuk memisahkan antara residu dan sari. Kemudian ditambahkan larutan  etanol  96%  sebanyak  500  mL  kedalam  residu  tersebut  dan  dibiarkan  selama  48  jam  dalam keadaan  tertutup,  namun  sesekali  perlu  diaduk.  Setelah  ±  48  jam,  sampel  tersebut  disaring  sampai menghasilkan  dua  filtrat  dan  dua  ampas.  Kemudian  filtrat  pertama  dan  filtrat  kedua  dicampur  dan dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator ,  sehingga  didapatkan  ekstrak  daun  pacar  air  dalam konsistensi yang kental [22].

## c. Sterilisasi Alat
Seluruh  peralatan  kaca  yang  dipakai  pada  riset  seperti  cawan  petri,  gelas  kimia,  labu  ukur, Erlenmeyer,  tabung  reaksi,  corong  kaca,  dan  pipet  ukur  dibungkus  dengan  kertas  buram.  Selanjutnya disterilisasi  dalam  autoklaf  selama  30  menit  dengan  temperatur  121 ℃ .  Sementara  itu,  batang  bengkok dan ose bulat disterilkan menggunakan bunsen. d. Pembuatan Larutan Kontrol negatif
Disiapkan larutan aquades steril (50 ML) untuk dijadikan kontrol negatif sebagai pembanding dan pembuatan larutan uji.

## e. Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Digerus satu tablet obat Amoxilin 500 mg, lalu ditimbang sebanyak 50 mg. Kemudian tablet yang sudah  dalam  bentuk powder ditambahkan  50  mL  aquades  steril.  Selanjutnya  sebanyak  1  mL  larutan tersebut  diambil,  lalu  ditambahkan  aquades  sampai  10  mL  dan  didapat  larutan  Amoxilin  sebesar 5µg/50µL.

## f. Pembuatan Larutan Uji
Ditimbang ekstrak etanol daun pacar air sebesar 0,5; 1; 1,5 dan 2 (gram). Kemudian pada masing- masing  ekstrak  ditambahkan  2  mL  larutan  aquades  steril.  Sehingga  diperoleh  larutan  uji  dengan konsentrasi tertentu (25%, 50%, 75%, dan 100%).

## g. Pembuatan Media
Ditimbang sebanyak 1,3 gram media NB dan ditempatkan ke dalam Erlenmeyer, ditambahkan 10 ml aquades. Larutan dipanaskan hingga menjadi larutan yang homogen, lalu disterilisasi dengan autoklaf. Sementara itu, media Mueller Hinton Agar (MHA) juga ditimbang sejumlah 3,8 gram dan dimasukkan ke erlenmeyer, selanjutnya dimasukkan aquades steril sebanyak 100  ml. Dipanaskan hingga homogen, lalu disterilkan dengan autoklaf.

## h. Peremajaan Bakteri
Diambil  1  koloni  bakteri Escherichia  coli dan  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  yang  berisi media NB dan larutkan menggunakan ose bulat. Koloni diinkubasi dengan suhu ruang (37 o C) selama 24 jam.
i. Uji Aktifitas Ekstrak Daun Pacar Air Terhadap Escherichia coli
Sebanyak 1 mL suspensi Escherichia coli dipipet ke dalam media MHA dengan cara spread plate dan  biarkan  selama  3  menit  sampai  suspensi  bakteri  meresap  kedalam  media.  Diletakkan  1  disk antibiotik,  2 disk  blank (25%,  50%,  70%,  dan  100%)  dan disk  blank kontrol  negatif  pada  permukaan media MHA secara aseptik. Diinokulasi setiap paper disk dengan memperhatikan jarak agar tidak terjadi overlapping zona hambat. Diberi label nama pada dasar cawan petri dan diinkubasi 48 jam. Selanjutnya diameter zona jernih yang terbentuk disekitar paper disk diukur memakai jangka sorong.

## j. Pengamatan dan Pengukuran
Pengukuran zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri disekitar kertas cakram dilakukan setelah 24  jam  menggunakan  jangka  sorong.  Cawan  petri  dibalik  agar  mempermudah  untuk  melihat  daerah hambatan yang transparan disekitar kertas cakram. Hasil negatif ditunjukkan jika disekitar kertas cakram tidak  terdapat  zona jernih.  Sementara  itu,  hasil  positif  ditunjukkan  jika  disekitar  kertas  cakram  terdapat zona jernih yang merupakan zona tidak ditumbuhi bakteri.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil riset terhadap uji aktifitas antibakteri dari ekstrak etanol daun pacar air terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dapat dilihat pada Tabel 1 .
Tabel 1. Rata-rata diameter zona hambat dari ekstrak etanol daun pacar air ( Impatiens balsamina L.)
terhadap perkembangan bakteri Escherichia coli Konsentrasi (%) Ekstrak Daun Pacar Air Diameter Zona Hambat Rata-rata (mm) Pengulangan I II 25% 23 23 23 50% 24 28 26 75% 30 29 29,5 100% 31 31 31 Aquadest (-) 0 0 0 Amoxicilin (+) 30 37 33,5 Sumber: Hasil penelitian (2020)
Berdasarkan Tabel 1 , pengukuran rata-rata diameter zona hambat dari ekstrak etanol daun pacar air menunjukkan hasil, yaitu 25 persen (23 mm), 50 persen (26 mm), 75 persen (29,5 mm), dan 100 persen (31  mm).  Zona  hambat  terbentuk  disekeliling  kertas  cakram  yang  ditandai  warna  bening.  Zona  bening yang  terbentuk  tersebut  diasumsikan  bahwa  esktrak  etanol  dari  daun  pacar  air  berhasil  dalam menghambat pertumbuhan patogen Escherichia coli . Variasi perlakukan konsentrasi yang digunakan dari konsentrasi  terendah  hingga  konsentrasi  tertinggi  untuk  melihat  seberapa  besar  efekstifitas  dari  esktrak tersebut.
Konsentrasi  100%  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  merupakan  konsentrasi  optimum  dalam menghalangi  perkembangan  patogen.  Hal  ini  sesuai  dengan  ref.  [23]  yang  melaporkan  bahwa  ekstrak etanol  dari Impatiens balsamina L.  menunjukkan  aktivitas  antimikroba  yang  cukup  tinggi  terhadap Escherichia coli dan Candida albicans .  Hasil  pembentukan  zona  hambat  dari  ekstrak  etanol daun  pacar air terhadap Escherichia coli tampak pada Gambar 1.
(a)
(b)
Gambar 1. Zona hambat yang terbentuk dari ekstrak etanol daun pacar air ( Impatiens balsamina L.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli; (a) Pengulangan 1 dan (b) Pengulangan 2
Sumber: Hasil penelitian (2020)
Berdasarkan Gambar  1 terlihat  bahwa  terbentuk  zona  hambat  bakteri  E. coli pada  seluruh perlakuan,  yaitu  pada  konsentrasi  25%,  50%,  75%,  dan  100%.  Ini  terlihat  dari  munculnya  zona  bening yang  terbentuk  disekeliling  kertas  cakram.  Berdasarkan  Ref.  [24]  respons  hambatan  pertumbuhan menunjukkan bahwa terdapat beberapa kategori zona hambat, yaitu zona hambat <20 mm (sangat kuat), 10-20  mm  (kuat),  5-10  mm  (sedang),  dan  >5  mm  (lemah).  Berdasarkan  hal  tersebut  uji  aktifitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  pacar  air  terhadap  patogen Escherichia  coli pada  konsentrasi  25  persen (23 mm), 50 persen (26 mm), 75 persen (29,5), dan 100 persen (31 mm), dapat dikategorikan mempunyai daya  antibakteri  sangat  kuat.  Namun  demikian,  efektifitas  tertinggi  zona  hambat  yang  terbentuk ditunjukkan  pada  konsentrasi  100  persen  (31  mm).  Hal  tersebut  sesuai  dengan  Ref.  [19],  bahwa  zona hambat  yang  didapat,  yaitu  7,83  mm  (10%),  10,16  mm  (20%),  14,00  mm  (40%),  dan  19,00  mm  (80%) yang  dilakukan  pada  bunga,  sedangkan  pada  biji  dengan  konsentrasi  yang  sama  zona  hambat  yang didapat,  yaitu  3,66  mm,  5,16  mm,  6,66  mm,  dan  8,33  mm.  Ref.  [20]  juga  melaporkan  bahwa  ekstrak etanol daun pacar air mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans dengan konsentrasi 25, 50, 75,
dan 100 (%) dan diameter zona hambat berturut-tutut sebesar 8,66 mm, 11,66 mm, 13,66 mm, dan 6,00 mm.
Menurut  ref.  [25]  tumbuhan  memiliki  kemampuan  yang  hebat  dalam  menghasilkan  metabolit sekunder  seperti  fenolat  dan  polifenol,  alkaloid,  terpenoid  dan  minyak  atsiri,  lektin,  dan  lain-lain.  Hal yang sama dilaporkan oleh  ref [8,26], zona hambat bakteri yang terbentuk pada medium  karena adanya metabolit  sekunder  yang  dimiliki  daun  pacar  air  seperti  alkaloid,  flavonoid, tanin,  saponin,  kuinon,  dan fenol yang bersifat sebagai antibakteri.
Flavonoid  dapat  berfungsi  sebagai  antibakteri,  antiinflamasi,  antialergi,  antimutagenik,  antivirus, antitrombotik,  dan  vasodilatasi.  Kehadiran  senyawa  flavonoid  di  dalam  tanaman  dapat  membantu aktivitas  antibakteri  tanaman  [27],  salah  satunya  tanaman  pacar  air.  Perlakuan  antibakteri  flavonoid melalui  beberapa  cara  yaitu  membunuh  bakteri  secara  langsung,  mengurangi  patogenisitas  bakteri  dan mensinergiskan  antibiotik  [28].  Aktivitas  antibakteri  flavonoid  bergantung  pada  strukturnya  yaitu  pada substitusi  cincin  aromatik.  Pengujian  ekstrak  tumbuhan  dengan  aktivitas  antibakteri  yang  banyak dilakukan, semakin banyak flavonoid yang terbukti efektif sebagai agen antibakteri [29].
Daun  pacar  air  yang  dipakai  pada  penelitian  ini  diekstraksi  sebanyak  100  gram  dan  hasil  ekstrak diperoleh    8  gram  ekstrak  kental,  dengan  ciri-ciri  fisik,  yaitu  berwarna  hitam  dengan  aroma  khas  daun pacar  air.  Hasil  zona  hambat  yang  didapatkan  dari  daun  pacar  air  cenderung  sangat  kuat  karena banyaknya  zat  aktif  yang  terkandung  [21].  Penggunaan  amoxicilin  sebagai  kontrol  positif  karena Amoxicilin  merupakan  antibiotik  golongan  Penicilin dengan  cara  membunuh  dan  menghentikan  bakteri untuk berkembang biak di dalam tubuh, terutama yang disebabkan oleh bakteri gram negatif. Sementara itu,  kontrol  negatif  menggunakan  aquades  steril  untuk  melihat  pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan Escherichia coli , juga sebagai pelarut ekstrak dalam sampel.

## 4. Kesimpulan
Hasil riset menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun pacar air  air ( Impatiens balsamina L.) efektif sebagai  agen  antibakteri  untuk  menghalangi  perkembangan  bakteri Escherichia  coli pada  semua konsentrasi. Hasil optimum ekstrak etanol daun Impatiens balsamina L. dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia  coli adalah pada  konsentrasi  100  persen  dengan  diameter  zona  hambat  sebesar  31 mm.

## 5. Ucapan Terima Kasih
Author berterima kasih banyak kepada Akademi Analis Farmasi dan Makanan (Akafarma) Banda Aceh,  keluarga,  dan  rekan-rekan  sejawat  yang  telah  banyak  mendukung  dan  memberi  bantuan  kepada author dalam menyelesaikan penelitian ini.

## 6. Saran
Diharapkan  untuk  penelitian  selanjutnya  agar  dapat  meneliti  bakteri  lainnya  seperti Salmonella Enterica dan juga menguji bakteri Escherichia coli dengan identifikasi lengkap.

## 7. Referensi
[1] J. Yuhernita,  “Analisa  Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak  Metanol  Daun  Surian  Yang berpotensi Sebagai Antioksidan,” Makara Sains ,vol. 15, hal. 48-52, 2011.
[2] Adfa,  “Senyawa  Antibakteri  Dari  Daun  Pacar  air (Impatiens  Balsamica L .) ,”  Jurusan  Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Indonesia,Vol. 4(1), hal. 318-322, 2001.
[3] Gaby, “Bioaktifitas Ekstrak Metanol daun Pacar air ( Impatiens Balsamica L) terhadap Pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus Dan Pseudomonas  Aeruginosa Penyebab  Cantengan,” Skripsi . Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin Makassar, 2007.
[4] A.  Sakunphueak,  P.  Panichayupakaranant,  “Comparison  of  antimicrobial  activities  of naphthoquinones from Impatiens balsamina ,” Nat. Prod , vol. 26, pp. 1119–1124, 2012.
[5] S.C. Kang, & Y. Moon, “Isolation and antimicrobial activity of a naphthoquinone from Impatiens balsamina ,” J. Pharmacogn , vol. 23, pp. 240 – 247, 1992.
[6] Jiangsu New Medical College, The Dictionary of Chinese Herbal Medicines , Shanghai Science and Technology Publisher, Shanghai, China, pp. 278–346, 1984.
[7] X. Yang, D. K. Summerhurst, S. F. Koval, C. Ficker, F. L. Smith, and M. A. Bernards, Isolation of an  antimicrobial  compound  from Impatiens  balsamina L.  using  bioassay-guided  fractionation, Phytother , Res. 15, pp. 676–689, 2001.
[8] R.  Almira,  “Kajian  Aktivitas  Fraksi  Hexsan  Rimpang  Kunyit  ( Curcuma  longa Linn)  Terhadap Proses Persembuhan Luka Pada Mencit ( Musmusculus Albinus ),” Skripsi , FKH IPB, Bogor, 2008.
[9] Y.  Mustapha  &  S.  Hafsat,  “Antibacterial  Activities  of  Anacardium  occidentale  (L.)  Leaf  Extract Against Some Selected Bacterial Isolates,” International Journal of Pure and Applied Science , vol. 1 (1), pp. 40-43, 2007.
[10]  G. Gutiérrez-Venegas, Z. González-Rosas, “Apigenin reduce lipoteichoic acid-induced inflammatory  response  in  rat  cardiomyoblast  cells,” Arch  Pharm.  Res, vol.  40(2),  pp.  240-249, 2017.
[11]  B. S. Drasar & M. J. Hill, Human intestinal flora , Academic Press, United Kingdom, London, Ltd, pp. 36–43, 1974.
[12]  E. Jawetz, Mikrobiologi Kedokteran , Edisi Kedua puluh, EGC, Jakarta, hal, 239-240, 259, 2001.
[13]  Ikmalia,  “Analisa  Profil  Protein  Isolat Escherichia  coli S1  Hasil  Iradiasi  Sinar  Gamma,” Skripsi , Fakultas sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta, 2008.
[14]  James P. Nataro and James B. Kaper, “Diarrhea genic Escherichia coli,” Clin Microbiol , vol. 11(1), pp. 142–201, 1998.
[15]  R. Maksum, Buku Ajar Mikrobiologi , EGC, Jakarta, Hal 179-185, 2020.
[16]  SF. Antung, 2009. “ Evaluasi Bakteri Indikator Sanitasi ,” Diakses pada Tanggal 09 Oktober 2020 di  http://web.ipb.ac.id/ ∼ Ippm/ID/index.php?  view=jurnal/detail2JIPI&volume=11&no=2&id=91, 2009.
[17]  A. Lopez, J. B. Hudson and G. H. N. Towers, “Antiviral and antimicrobial activities of Colombian medicinal paints,” Journal of Ethnopharmacology , 77: 189-96, 2001.
[18]  Sari  dan  Rafika,  “Aktivitas  Antibakteri  Minyak  Atsiri  Kulit  Jeruk  Pontianak  Terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ,” J.  Penelitian  Pharmacy  Department, Faculty  of Medicine, Universitas Tanjungpura, Pontianak, vol. 18(2), hal.121-126, 2013.
[19]  S.  M.  A.  Budiana,  N.  S.  Kojong,  dan  S.D.  Wewengkang,  “Uji  aktivitas  ekstrak  etanol  tanaman Pacar  Air  ( Impatiens  Balsamica L .) terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus , Pseudomonas aeruginosa dan Escherichia coli secara in vitro,” J. Ilmiah Farmasi UNSRAT , vol. 4 (4), hal. 214-223, 2014.
[20]  N.  Naitullah,  F.  Jamin,  Frengki,  dan  M.  Dewi,  “Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Daun  Pacar  Air ( Impatiens  balsamica L . ) Terhadap  Pertumbuhan Candida  albicans Secara  In  Vitro,” J.  Medika Veterinaria , Fakultas Kedokteran Hewan, Unsyiah, 8 (2) : 125-127, 2014.
[21]  S.F.  Kusuma,  S.  M.  Widyastuti,  dan  B.  Fajar,  “Uji  aktivitas  ekstrak  etanol  sirih  merah  terhadap Trichomonas vaginalis ,” J. Universitas Padjajaran , vol. 115, hal. 11-14, 2009.
[22]  Departemen Kesehatan RI, Sediaan Galenik , Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 1986.
[23]  Suk-Nam  Kang,  Young-Min  Goo,  Mi-Ra  Yang,  Rashid  Ismael  Hag  Ibrahim,  Jae-Hyeon  Cho,  Il- Suk  Kim,  and  Ok-Hwan  Lee,  “Antioxidant  and  Antimicrobial  Activities  of  Ethanol  Extract  from the  Stem  and  Leaf  of Impatiens  balsamina L.  (Balsaminaceae)  at  Different  Harvest  Times,” Molecules , vol. 18, pp. 6356-6365, 2015.
[24]  G. P. Morales, A. Sierra, L. Parades, Loyola, Gallardo, and Borquez, “Secondary Metabolites from four  Medical  Plants  from  Northern  Chile  Antimicrobial  Activity  and  Biotoxicity  Agaist Artemia salina ,” J . chile Chem , 48:2, 2003.
[25]  L.  Othman, A.  Sleiman, and R.  M.  Abdel-Massih,  Antimicrobial  Activity  of  Polyphenols  and Alkaloids  in  Middle  Eastern  Plants,  2019,  Diakses  pada  Tanggal  7  Oktober  2020  di https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.00911/full
[26]  O. O. Temitope and A.  Ayodele, “Antimicrobial, Phytochemical and Proximate Analysis of Four Nigerian Medicinal Plants on some Clinical Microorganisms,” Current Research in Microbiology and Biotechnology , vol. 2 (5), pp. 457-461, 2015.
[27]  Ji – Ae Shin, M. H. Ryu, Ki – Han Kwon, B. Young, Choi, Sung – Dee Cho, “Down-regulation of Akt by methanol extracts of Impatients balsamina L. promotes apoptosis in human oral squamous cell carcinoma cell lines,” J. of oral pathology and Medicine , vol. 44(6), pp. 420-428, 2015.
[28]  T.  P.  T.  Cushnie  &  A.  J.  Lamb,  “Recent  advances  in  understanding  the  antibacterial properties of flavonoids,” Int. J. Antimicrob. Agents , vol. 38(2), pp. 99-107, 2011.
[29]  E. P. Gutiérrez-Grijalva, M. A. Picos-Salas, N. Leyva-López, M. S. Criollo-Mendoza, G. Vazquez- Olivo,  and  J.  B.  Heredia,  “Flavonoids  and  phenolic  acids  from  oregano:  Occurrence,  biological activity and health benefits,” Plants , vol. 7, pp. 2, 2018.