## PENGARUH  PEMUPUKAN NITROGEN DAN  STRES AIR TERHADAP BUKAAN  STOMATA,  KANDUNGAN  KLOROFIL DAN AKUMULASI PROLIN
TANAMAN RUMPUT GAJAH ( Penunisetum purpureum Schum)
(The effect of nitrogen fertilization and water stress on stomatal aperture, chlorophyll content and proline accumulation of Napier grass ( Pennisetum purpureum Schum)

## Budiman
Fakultas Peternakan Universitas  Hasanuddin, Jl. Perintis Kemerdekaan Km.10, Tamalanrea, Makassar (90245) e-mail : budiman_ek58@yahoo.com

## ABSTRACT
The objective of the study was to determine the effect of nitrogen fertilization and water stress on the stomatal aperture, chlorophyll and proline accumulation of Napier grass ( Pennisetum purpureum Schum.) The effect of water stress and nitrogen fertilizer levels were evaluated within an arrangement of Completely Randomized Design with factorial pattern (2x3). The variables observed were stomatal aperture, total chlorophyll and proline content. The results showed interaction between water stress and the level of fertilization. Interaction between water stress with nitrogen fertilization showed that the stomatal openings were more narrow (P<0.05) in water stressed plants compared to plants  with  excess  water  and  that  decreased  stomatal  aperture  was  not  significant (P>0.05)  with  increasing  levels  of nitrogen  fertilization  either with  sufficient  water  or with  water  stress.  The  exception  is  treatment  of  enough  water  and  fertilizer  250  kg N/ha  (P<0.05)  where  stomatal  aperture  decreased  compared  with  no  fertilizer.  The total chlorophyll content of both the sufficiently watered and the water stressed Napier grass  on  nitrogen  fertilizer  rose  with  increasing  doses  of  nitrogen  fertilizer.  The conditioning of water stress with  fertilizer dose of 0 kg N/ha and 150 kg N/ha did not increase the total chlorophyll, however a dose of  250 kg N/ha resulted in an increase of  total  chlorophyll  (P<0.05).  Interaction  between  water  stress  and  nitrogen  fertilizer levels  showed  that  the  content  of  proline  rose  (P<0.05)  with  increasing  levels  of nitrogen  fertilization,  as  well  as  with  water  stress  treatment  (P<0.05).  It  is  concluded that water stress on Napier grass plants lowers stomatal aperture width, but increases proline  accumulation  and  nitrogen  fertilizer  increases  total  chlorophyll  and  proline accumulation. There was an interaction between nitrogen fertilizer with water stress.
Key words : Chlorophyll, Proline,  Napier grass, Stomata,  Water stress

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemupukan  nitrogen  dan stres  air    terhadap    bukaan  stomata,  klorofil  dan  akumulasi  prolin  tanaman  rumput gajah ( Pennisetum purpureum Schum). Pengaruh stres air dan tingkat pemberian pupuk
nitrogen  disusun  dalam  Rancangan  acak  lengkap  pola  faktorial  (2x3).  Peubah  yang diamati  terdiri  dari  bukaan  stomata,  total  klorofil  dan  kandungan  prolin.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  terdapat  interaksi  antara  stres  air  dengan  tingkat pemupukan.  Interaksi  antara    stres  air  dengan  pemupukan  nitrogen  memperlihatkan bahwa  bukaan  stomata (P<0,05)  lebih  sempit  pada  tanaman  yang  stres air  dibanding dengan tanaman yang kelebihan air dan bukaan stomata menurun tidak nyata (P>0,05) dengan  bertambahnya  level  pemupukan  nitrogen  baik  yang  cukup  air maupun  yang stres air, kecuali  pada perlakuan cukup air dengan dosis pupuk 250 kg N/ha  (P<0,05) menurun dibanding dengan tanpa pupuk. Total klorofil  tanaman rumput gajah yang diberi  pupuk  nitrogen  meningkat    dengan  meningkatnya  dosis  pupuk  nitrogen,  baik yang stres air maupun yang air cukup. Pemberian stres air  dengan dosis pupuk 0 kg N/ha dan 150 kg N/ha tidak meningkatkan total klorofil, tetapi dengan dosis 250 kg N/ha  meningkatkan total klorofil (P<0,05). Interaksi antara  stres air dan level pupuk nitrogen  memperlihatkan  bahwa  kandungan  prolin  tanaman  rumput  gajah  (P<0,05) meningkat  dengan  meningkatnya  level  pemupukan    nitrogen,  demikian  juga  pada perlakuan stres air meningkatkan kadar prolin secara nyata (P<0,05) untuk semua level pemupukan nitrogen. Dapat disimpulkan bahwa stres air pada tanaman rumput gajah menurunkan  lebar  bukaan  stomata,  tetapi  meningkatkan  akumulasi  prolin  dan pemberian  pupuk  nitrogen  meningkatkan  total  klorofil  dan  akumulasi    prolin. Terdapat interaksi antara pemupukan nitrogen dengan stres air.
Kata kunci : Klorofil, Prolin,  Rumput gajah, Stomata,  Stres air

## PENDAHULUAN
Air  adalah  komponen  yang  sangat  vital  dan  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan dan  perkembangan  tanaman,  sehingga  tanaman  yang  mengalami  stres  air  akan terbatas  pertumbuhannya.  Stres  air  dianggap  faktor  lingkungan  utama  yang membatasi pertumbuhan dan hasil (Sangakkara et al ., 2001), karena dapat mengurangi hasil  panen  rata-rata  50%  (Wang et  al .,  2003).  Disamping  membatasi  pertumbuhan, stres air akan menyebabkan perubahan morfologi, proses fisiologi dan biokimia pada tanaman.
Penny-Packer et  al .  (1990)  melaporkan  bahwa  salah  satu  respon  awal  tanaman yang  mengalami  stres  air  antara  lain  adalah  penutupan  stomata  untuk  mengurangi konsumsi air melalui transpirasi yang kemudian  mempengaruhi proses fisiologis dan metabolisme  tanaman.  Menurut  Yasemin  (2005),  bahwa  penutupan  stomata  selama terjadi  stres  air  menyebabkan  penurunan  laju  fotosintesis,  transport  elektron  dan kapasitas fosforilasi di dalam kloroplas daun.
Untuk  meningkatkan  produktivitas  tanaman  hijauan  pada  lahan  kering,  perlu pemahaman  terhadap  mekanisme  respon  tanaman  terhadap  kondisi  kekeringan (Mostajeran  dan  Rahimi-Eichi,  2009).  Kultivar  yang  tahan  terhadap  kondisi  stres  air dan  panas  memiliki  kandungan  klorofil  lebih  tinggi  (Sairam et  al. ,  1997).  Respon metabolik tanaman yang mengalami stres air adalah akumulasi prolin (Rhodes, 2009). Prolin  terlibat  dalam  mekanisme  toleransi  terhadap  stres  oksidatif  dan  merupakan strategi  utama  tanaman  untuk  menghindari  efek  merusak  dari  kekurangan  air
(Vendruscolo et  al., 2007).  Tanaman  yang  tahan  terhadap  kekeringan  sangat  penting dan telah diperhitungkan sebagai salah satu faktor pemuliaan (Talebi, 2009).
Nitrogen  meningkatkan  klorofil,  produksi  dan  protein  tanaman  (Vanyine et  al., 2012),  sehingga  pemupukan  nitrogen  pada  tanaman  dapat  meningkatkan  toleransi terhadap stres air. Sehubungan dengan hal tersebut maka dilakukan penelitian untuk mengetahui  pengaruh  pemupukan  nitrogen  dan  pembatasan  air    terhadap    bukaan stomata, klorofil dan akumulasi prolin tanaman rumput gajah ( Pennisetum purpureum Schum).

## MATERI DAN METODE

## Penanaman
Penelitian  ini  dilaksanakan  dalam  rumah  kaca,  menggunakan  pot  yang  diisi dengan media tanah regosol. Penelitian  menggunakan  rancangan acak lengkap pola faktorial (RAL) 2 x 3 x 4.  Faktor pertama adalah pemberian air (A1 = air cukup dan A2 = air terbatas) dan faktor kedua adalah level pemberian pupuk nitrogen dengan dosis masing-masing: 0 (N0), 150 (N1) dan 250 kg N/ha (N2).
Penanaman  dilakukan  dengan  menggunakan  stek  batang  yang  telah ditumbuhkan  selama  4  hari.  Stek  yang  digunakan  sebagai  bahan  penanaman  adalah stek yang  telah mempunyai satu daun dan pertumbuhannya seragam. Setiap pot yang telah diisi dengan tanah ditanami sebanyak 3 stek. Penyeragaman dilakukan seminggu setelah tanam dengan cara memilih salah satu tanaman yang pertumbuhannya relatif sama dan tanaman yang lain dikeluarkan dari pot. Tanaman yang tinggal, dipelihara dan  diamati  sampai  berakhirnya  penelitian.    Pemberian  pupuk  sesuai  dengan  dosis yang  ditentukan  dan  dilakukan  seminggu  setelah  penyeragaman  dan  diberikan dengan cara membenamkan pupuk di sekeliling tanaman.
Tanaman dipelihara dan diberikan air secukupnya sampai mencapai umur satu bulan. Setelah tanaman tumbuh normal, maka tanaman yang mendapat perlakuan air terbatas,  secara  berangsur  dikurangi  pemberian  airnya  sehingga  tanaman  mengalami stres air yang ditandai dengan adanya daun yang mulai menggulung. Pada perlakuan yang  mendapat  air  cukup,  tetap  diberikan  air  sampai  mencapai  kapasitas  lapang. Parameter  yang  diamati  adalah  lebar  bukaan  stomata,  total  klorofil  dan  akumulasi prolin.

## Pengambilan sampel
Bukaan  stomata :  Daun  tanaman  rumput  gajah  yang  digunakan  adalah  daun pada  bagian  atas,  tengah  dan  bawah  yang  aktif  berfotosintesa.  Setiap  daun  diolesi dengan kutex pada bagian bawah dengan menggunakan kuas kecil, pada jarak kurang lebih  0,5  cm  dari  bagian  dasar.  Olesan kutex tersebut  dikelupas  setelah  mengering untuk  mendapatkan  cetakan  stomata.  Cetakan  stomata  kemudian  diamati  di  bawah mikroskop  dengan  pembesaran  40  x  10  kali.  Jika  lebar  stomata  menempati  2  strip, maka lebar stomata dapat dihitung yaitu : 2 x 1/100 mm x 0,99 = 0,0198 mm, dengan pembesaran  obyektif = 100 mm, okuler = 0,99 mm, 1 strip = 1/100 mm, 1 okuler = 0,99.
Total  klorofil :  Penentuan  total  klorofil  dilakukan  dengan  mengambil  sampel daun  sebanyak 3 helai masing-masing pada bagian bawah, tengah dan ujung batang (daun  yang  masih  aktif  berfotosintesa).  Analisis  klorofil  untuk  menentukan  total klorofil  dilakukan  menurut  Arnon  (1949).  Kadar  klorofil  dihitung  menggunakan rumus : Total klorofil = ( 20,2 x A645 + 8,2 x A663) x 20/1000 x 1 mg/g berat segar Satuan kadar klorofil = mg/g/berat segar daun
Kadar  prolin: Prolin  diekstraksi  dari  0,5  g  jaringan  daun  segar  ke  10  ml  asam sulfosalicylic 3%  dan  disaring  dengan  kertas  filter Whatman No  2.  Prolin  ditentukan dengan metode ninhydrine (Bates et al ., 1973) pada spektrofotometer model  Shimadzu- UV-1201, menggunakan prolin murni sebagai standar.

## Analisis data
Data  lebar  bukaan  stomata,  total  klorofil  dan  kandungan  prolin  ditabulasi  dan dianalisis  dengan  analisis  ragam.  Perlakuan  yang  berpengaruh  nyata  diuji  lanjut dengan uji beda nyata jujur (BNJ) pada taraf  5%  (Steel dan Torrie, 1993).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Bukaan stomata
Hasil penelitian menunjukkan bahwa bukaan stomata dipengaruhi oleh interaksi stres  air  dan  pemupukan  nitrogen.  Interaksi  antara  stres  air  dengan  pemupukan nitrogen memperlihatkan bahwa bukaan stomata lebih sempit (P<0,05) pada tanaman yang  stres  air  dibanding  dengan  tanaman  yang  cukup  air  dan  bukaan  stomata menurun  tidak  nyata  (P>0,05)  dengan  bertambahnya level  pemupukan nitrogen  baik yang cukup air maupun yang stres air, kecuali pada perlakuan cukup air dengan dosis pupuk  250  kg  N/ha    (P<0,05)  menurun  dibanding  dengan  tanpa  pupuk.  Penutupan stomata  pada  tanaman  yang  stres  air  adalah  reaksi  tanaman  untuk  mengurangi pengeluaran air melalui transpirasi. Menurut Rhodes dan Samaras (1994) bahwa salah satu tanggapan awal tanaman yang stres air antara adalah  penutupan stomata untuk mengurangi konsumsi air melalui transpirasi .
Besarnya bukaan  stomata  secara  langsung  mempengaruhi  konduktansi stomata (Lakitan,  1993).  Stres  air  secara  signifikan  menurunkan  konduktansi  stomata  pada rumput  (Akram et  al .,  2007).  Tanaman  yang  tumbuh  di  bawah  kondisi  kekeringan mengalami  konduktansi  stomata  yang  lebih  rendah  dalam  rangka  untuk  menghemat air (Mafakheri et al, 2010). Tanaman akan mengatur derajat konduktansi stomata untuk menghambat  kehilangan  air  lewat  transpirasi  (Mansfield  dan  Atkinson,  1990). Pemberian  pupuk  nitrogen  dengan  dosis 250 Kg  N/ha (P<0,05)  menurunkan  bukaan
ml asam sulfosalisilat x pengenceran
µ mol prolin x ml hasil pengenceran yang direaksikan
g contoh
Prolin   =
stomata pada kondisi cukup air, sebaliknya pada kondisi stres air  penurunan bukaan stomata tidak berbeda nyata (P>0,05).

## Total klorofil
Interaksi  antara  stres  air  dengan  pemupukan  nitrogen  memperlihatkan perbedaan  (P<0,05)  terhadap  total  klorofil  rumput  gajah.  Total  klorofil  tanaman rumput  gajah  yang  diberi  pupuk  nitrogen  meningkat  dengan  meningkatnya  dosis pupuk  nitrogen,  baik  yang  diberi  stres  air  terbatas  maupun  yang  diberi  air  cukup. Pemberian  stres  air  dengan  dosis  pupuk  0  kg  N/ha  dan  150  kg  N/ha  tidak meningkatkan  total  klorofil,  tetapi  dengan  dosis  250  kg  N/ha  meningkatkan  total klorofil  (P<0,05).  Hal  ini  mendukung  pernyataan  Guler  (2009)  bahwa  klorofil  daun meningkat  dengan  meningkatnya  tingkat  pemberian  pupuk  nitrogen.  Menurut  Tam dan  Magistad  (1935)  bahwa  jumlah  nitrogen  yang  tersedia  menentukan  besarnya jumlah  klorofil  terbentuk,  asalkan  persyaratan  lainnya  untuk  pembentukan  klorofil, seperti  cahaya,  pasokan  zat  besi  dan  magnesium  yang  hadir  dalam  jumlah  yang cukup.
Tabel  1 .  Rata-rata  bukaan  stomata,  total  klorofil  dan  kandungan  prolin  tanaman rumput gajah pada level pemupukan dan pemberian air terbatas
Parameter Perlakuan Level pupuk nitrogen Rata-rata N0 N1 N2 Bukaan stomata (mm) A1 A2 0,0093 c 0,0078 a 0,0085 bc 0,0070 a 0,0079 ab 0,0067 a 0,0086 0,0084 Rata-rata 0,0086 0,0078 0,0040 Total klorofil (mg/g daun segar) A1 A2 1,22 a 1,14 a 1,38 b 1,33 b 1,45 b 1,68 c 1,35 1,38 Rata-rata 1,18 1,36 1,57 Kandungan prolin ( µ mol prolin/berat segar) A1 A2 6,83 a 9,78 b 8,20 ab 11,68 c 12,04 c 14,51 d 9,02 11,99 Rata-rata 8,31 9,95 13,28
Superkrip (a.b), (b.c) pada baris yang sama berbeda nyata  (P <0.05) dan (a.c) berbeda sangat nyata (P<0.01)
Total klorofil pada perlakuan yang mendapat air cukup pada dosis pupuk 0 kg N/ha dan 150 kg N/ha tidak berbeda (P>0,05), tetapi dengan dosis 250 kg N/ha, total klorofil  meningkat  (P<0,05)  pada  pemberian  stres  air.  Hal  ini  sesuai  dengan  laporan Akram et  al. (2007)  bahwa  total  klorofil  tanaman  lebih  tinggi  dalam  kondisi  stres  air dibandingkan dengan kondisi cukup air. Menurut Sairam et al. (1997) bahwa kultivar yang  tahan  terhadap  kondisi  stres  air  dan  panas  memiliki  kandungan  klorofil  yang tinggi,  sedangkan  laporan  lain  menyatakan  bahwa  stres  air  tidak  berpengaruh  pada konsentrasi klorofil (Kulshreshtha et al., 1987).

## Kandungan prolin
Interaksi  antara  stres  air  dan  level  pupuk  nitrogen  memperlihatkan  bahwa kandungan  prolin  tanaman  rumput  gajah  (P<0,05)  meningkat  dengan  meningkatnya level  pemupukan    nitrogen,  demikian  juga  pada  pemberian  stres  air  meningkatkan kadar  prolin  secara nyata  (P<0,05)  untuk semua level  pemupukan nitrogen. Menurut Zhoua et  al .  (2011)  bahwa  stres  air  menyebabkan  peningkatan  kadar  prolin  dan penambahan  nitrogen  cenderung  mengurangi  efek  positif  dari  stres  air  pada kandungan  prolin.  Hal  yang  sama  juga  dilaporkan  ASRP  (2012)  bahwa  kandungan prolin tanaman yang diberi pupuk nitrogen meningkat lebih tinggi dibanding dengan tanpa pemupukan dan peningkatan pupuk nitrogen meningkatkan kandungan prolin di bawah kondisi tanah yang kekeringan.
Akumulasi  prolin  pada  tanaman  yang  mengalami  kekeringan  berperan  sebagai osmolyte untuk  menjaga  organel,  sehingga  daun  tetap  hijau  saat  terkena  kondisi kekurangan  air  (Yamada et  al ,  2005;  Sankar et  al ,  2007  dan  Safarnejad,  2008).  Prolin mampu  bertindak  sebagai  agen  pelindung  bagi  enzim-enzim  sitoplasma  dan  enzim- enzim  membran  atau  sebagai  bahan  simpanan  untuk  pertumbuhan  setelah  tanaman mengalami stress (Aspinal dan Paleg, 1981).

## KESIMPULAN
Stres air pada tanaman rumput gajah menurunkan lebar bukaan stomata, tetapi meningkatkan  kandungan  prolin  dan  pemberian  pupuk  nitrogen  meningkatkan  total klorofil dan kandungan prolin. Terdapat interaksi antara pemupukan nitrogen dengan stres air.

## DAFTAR PUSTAKA
Akram,  M.,  M.  A.  Malik,  M.  Y.  Ashraf,  M.  F.  Saleem  and  M.  Hussain.  2007.  Competitive seedling growth and K+/Na+ ratio in different maize ( Zea mays L.) hybrids under salinity stress. Pakistan Journal of Botany, 39: 2553-2563.
Arnon, D. I. 1949. Copper enzymes in isolated chloroplasts. Polyphenol oxidase in Beta vulgaris. Plant Physiol., 24 (1) : 1 - 15.
Agricultural Science Research Paper. 2012.  Effect of Soil Water and Nitrogen Fertilizer on Some
Physiological Characters, Yield and Quality of Pepper . Artikel online. www.agrpaper.com /tag/nitrogen-fertilizer-rate . (15 Desember. 2012).
Aspinal, D. and L. G. Paleg. 1981. Prolin accumulation : physiological aspects. 201-241. In L.G. Paleg  and  D.  Aspinal  (eds).  The  Physiology  and  Biochemistry  of  Drought  Resistance  in Plants, Academic Press.
Bates, L. S., R. P. Waldren and I. D. Teare. 1973. Rapid determination of free prolin for water- stress studies. Plant Soil, 39(1): 205 -207.
Guler,  S.    2009.    Effect  of  nitrogen  on  yield  and  chlorophyll  of  Potato  ( Solanum  tuberosum L) cultivars. Bangladesh J. Bot., 38(2): 163 – 169.
Kulshreshtha,  S.,    D.  P.  Mishra  and  R.  K.  Gupta.  1987.  Changes  in  content  of  chlorophyll, proteins and lipids in whole chloroplast and chloroplast membrane fractions at different leaf  water  potentials  in  drought  resistant  and  sensitive  genotypes  of  wheat. Photosynthetica, 21(1): 65-70.
Lakitan, B. 1993. Dasar-dasar Fisiologi Tumbuhan. Rajawali Pers, Jakarta.
Mafakheri,  A.,  A.  Siosemardeh,  B.  Bahramnejad,  P.  C.  Struik,  and  Y.  Sohrabi.  2010.  Effect  of drought  stress  on  yield,  proline  and  chlorophyll  contents  in  three  chickpea  cultivars. Australian J. Crop Sci., 4(8): 580 – 585.
Mansfield, T. A. and C. J. Atkinson. 1990. Stomatal behavior in water stressed plants. P. 241-246. In  Alscher  ang  Cumming  (Ed.).  Stress  respons  in  plant:  adaptation  and  acclimation mechanisms. Wiley-Liss, Inc., New York.
Mostajeran, A  and V. Rahimi-Eichi. 2009. Effects of drought stress on growth and yield of rice ( Oryza sativa L.) cultivars and accumulation of proline and soluble sugars in sheath and blades  of  their  different  ages  leaves.  American-Eurasian  J.  Agric.  &  Environ.  Sci.,  5  (2): 264-272.
Penny-Packer, B. W., K. T. Leath., W. L. Stout, and R. R. Hill. 1990. Technique for stimulating field drought stress in the green house.  J. Agr., 82(5): 951–957.
Rhodes, D.  and Y. Samaras. 1994. Genetic Control of Osmoregulation Inplants. In Cellular and Molecular Physiology of Cell Volume Regulation. CRC Press, Boca Raton. pp. 347-361.
Rhodes, D. 2009. Roles of Proline in Plant Adaptation to Environmental Stress. Department of Horticulture & Landscape Architecture Horticulture Building, Purdue University.
Safarnejad,  A.    2008.  Morphological  and  biochemical  responses  to  osmotic  stress  in  alfalfa ( Medicago sativa L.). Pak. J. Bot . , 40: 735-746.
Sairam,  R.  K.,  D.  S.  Shukla  and    D.  C.  Saxena.  1997.    Stress  induced  injury  and  antioxidant enzymes  in  relation  to  drought  tolerance  in  wheat  genotypes.  Biologia  Plantarum, 40: 357–364.
Sankar,  B.,  C.  A.  Jaleel,  P.  Manivannan,  A.  Kishorekumar,  R.  Somasundaram  and  R. Panneerselvam.  2007.  Drought-induced  biochemical  modifications  and  proline metabolism in Abelmoschus esculentus (L.) Moench. Acta. Bot. Croat . , 61: 43-56.
Sangakkara, U. R., M. Frehner and J. Nosberger. 2001. Influence of soil moisture and fertilizer potassium  on  the  vegetative  growth  of  mungbean  ( Vigna  radiata L.)  and  cowpea  ( Vigna unguiculata L.). J. Agro. Crop. Sci., 186(2): 73-81.
Steel, G. D. and J. H. Torrie. 1993. Prinsip dan Prosedur Statistika, Suatu Pendekatan Biometrik. Edisi Kedua. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Talebi, R.   2009.  Effective selection criteria for assessing drought stress tolerance in durum wheat ( Triticum durum Desf.). General and Applied Plant Physiology, 35(1-2): 64-74.
Tam, R. K and O. C. Magistad. 1935. Relationship between nitrogen fertilization and chlorophyll content in Pineapple plants. Plant Physiol., 10: 159 - 168.
Vanyine,  A.  S.,  B.  Toth    and  J.  Nagy.  2012.  Effect  of  nitrogen  doses  on  the  chlorophyll concentration, yield and protein content of different genotype maize hybrids in Hungary. African J. Agr. Res., 7(16): 2546-2552.
Vendruscolo, A. C. G.,  I. Schuster, M. Pileggi,  C. A. Scapim, H. B. C. Molinari, C. J. Marur, and L. G. C. Vieira. 2007. Stress-induced synthesis of proline confers tolerance to water deficit in transgenic wheat, J. Plant. Physiol., 164(10): 1367-1376.
Wang,  W.,  B.  Vinocur,  A.  Altman.  2003.  Plant  responses    to  drougt,  salinity  and  extreme temperatures: towards genetic engineering for stress tolerance. Planta, 218 : 1 – 14.
Yamada, M., H. Morishita, K. Urano, N. Shiozaki,  K. Yamaguchi-Shinozaki, K. Shinozaki and Y. Yoshiba. 2005. Effects of free proline accumulation in petunias under drought stress. J. Exp. Bot., 56: 1975-1981.
Yasemin.  2005.  The  Effect  of  Drought  on  Plant  and  Tolerance  Mechanisms.  G.U.  Journal  of Science, 18(4): 723 – 740.
Zhoua,  X.,    Y.  Zhanga,  J.  Xuehua,  A.    Downing  and  M.  Serpe.  2011.  Combined  effects  of nitrogen  deposition  and  water  stress  on  growth  and  physiological  responses  of  two annual desert plants in northwestern China. Environmental and Experimental Botany, 74: 1-8