## POTENSI PEMANFAATAN TEKNOLOGI KULTUR JARINGAN DALAM PENYIAPAN BAHAN TANAM KARET UNGGUL
Potential Utilization of  Tissue Culture Technology in Preparation of  Superior Rubber Planting Materials
Fetrina Oktavia
Pusat Penelitian Karet, Jalan Palembang - Pangkalan Balai, Km. 29, Sembawa, Banyuasin 30953, Sumatera Selatan
E-mail: fetrina_oktavia@yahoo.com
Diterima 1 Juni 2021 / Direvisi 10 Juli 2021 / Disetujui 25 Agustus 2021

## Abstrak
Berbagai  upaya  dan  pendekatan  untuk menghasilkan bahan tanam karet unggul baru dengan  kualitas  yang  lebih  baik  perlu  terus dilakukan  baik  secara  konvensional  maupun modern.  Penyediaan  bahan  tanam  unggul secara  konvensional  melalui  teknik  okulasi masih  merupakan  pilihan  terbaik  yang digunakan  saat  ini  di  masyarakat  dengan pertimbangan  efektifitas  dan  aspek  ekonomi ya n g   l e b i h   b a i k   d i b a n d i n g   m e t o d e perbanyakan vegetatif  lainnya. Namun untuk skala  massal,  metode  tersebut  masih menghadapi  berbagai  kendala  seperti keterbatasan batang atas sebagai sumber entres dan  biji  untuk  batang  bawah,  keterbatasan tenaga  okulasi  yang  terampil,  adanya inkompatibilitas batang atas dan batang bawah serta rendahnya juvenilitas sumber mata entres yang  digunakan  yang  dapat  mempengaruhi pertumbuhan  dan  produksi  tanaman. Perkembangan  teknologi  modern melalui kemajuan  dibidang  bioteknologi  kultur jaringan  merupakan  suatu  peluang  bagi p e n ye d i a   b a h a n   t a n a m   k a r e t   u n t u k meningkatkan  mutu  bahan  tanam  yang dihasilkan.  Permasalahan  juvenilitas  akibat menurunnya mutu fisiologis entres karet yang telah  berumur  dan  pengaruh  batang  bawah terhadap  pertumbuhan  dapat  diatasi  melalui embriogenesis somatik. Teknologi microcutting m e m b a n t u   m e n g a t a s i   k e t e r b a t a s a n ketersediaan  biji  sebagai  sumber  batang bawah.  Penggunaan  bahan  tanam  karet  asal
kultur  jaringan  mampu  meningkatkan pertumbuhan  dan  produksi  tanaman  yang mencapai  30–36%.  Melalui  kultur  jaringan penyediaan  klonal  bahan  tanam  karet  dapat dilakukan  secara  massal  dan  seragam  dalam waktu yang cepat serta kualitas bibit yang lebih terjamin.
Kata  kunci: embriogenesis  somatik,  entres, Hevea brasiliensis , juvenilitas, klon, okulasi

## Abstract
Various  efforts  and  approaches  to  produce  the new superior rubber planting materials with better quality have to be carried out both conventional and modern. The provision of  superior planting material by conventional method through grafting techniques is  still  the  best  option  currently  used  with considerations of  effectiveness and economic aspects that  are  better  than  other  vegetative  propagation methods. However, for a mass scale, this method still has some of  problems, such as the limitations of  the scion  as  a  source  of   budwood  and  seed  for  the rootstock,  limitation  of   skilled  grafting  personnel, incompatibility of  the scion and rootstock, and the low juvenility of  the source of  the budwood that can affect  growth  and  production  of   crop.  The development  of   modern  technology  advances  in tissue  culture  biotechnology  is  an  opportunity  for rubber  planting  material  providers  to  increase  the quality of  the planting material produced. Juvenility problems due to the decline of  physiological quality of  budwood which aged and the effect of  rootstock to
growth  could  be  overcome  through  somatic embryogenesis.  Microcutting  technology  helps overcome  the  limitation  of   seed    availability  as  a source  for  rootstocks.  The  use  of   rubber  planting material from tissue culture can increase growth and production of  plant up to 30–36%.Through tissue culture,  the  provision  of   rubber  planting  material can be done in mass and uniformly in short time and the  quality  of   the  planting  material  is  more guaranteed.
Keywords: somatic  embriogenesis,  budwood, Hevea brasiliensis , juvenility, clone, grafting

## Pendahuluan
Tanaman  karet (Hevea  brasiliensis) merupakan salah satu spesies utama penghasil karet  alam  yang  termasuk  kelompok  famili Euphorbiaceae. Program seleksi genetik bahan tanam  karet  diawali  dengan  seleksi  biji  yang dilakukan  oleh  peneliti  Hindia  Belanda diperkebunan  karet  di  Jawa  dan  Sumatera pada  abad  ke  20  (Simmonds,  1989).  Pada kondisi  tersebut  dihasilkan  pertanaman  yang sangat  beragam  baik  dari  sisi  pertumbuhan maupun  produksi.  Hal  ini  mendorong  upaya pengembangan  metode  perbanyakan  klonal secara vegetatif.
Penggunaan bibit unggul merupakan salah satu  komponen  teknologi  penting  yang  akan menentukan  keberhasilan  budidaya  tanaman karet. Upaya menghasilkan bahan tanam karet unggul  baru  dengan  kualitas  yang  lebih  baik perlu  dilakukan  dengan  berbagai  pendekatan b a i k   s e c a r a   k o n v e n s i o n a l   m a u p u n inkonvesional.
Penyediaan  bahan  tanam  unggul  secara konvensional  dapat  dilakukan  dengan menggunakan metode perbanyakan vegetatif. Hingga saat ini metode yang dianggap paling efektif   untuk  perbanyakan  bibit  karet  adalah melalui  metode  okulasi.  Teknik  tersebut membutuhkan dua komponen utama yaitu biji sebagai sumber benih batang bawah dan mata entres sebagai batang atas. Dalam penyediaan bibit karet skala massal, metode tersebut masih
menghadapi  berbagai  kendala  utama  seperti keterbatasan batang atas sebagai sumber entres dan  biji  untuk  batang  bawah,  keterbatasan tenaga  okulasi  yang  terampil,  adanya inkompatibilitas batang atas dan batang bawah serta rendahnya juvenilitas sumber mata entres yang  digunakan  yang  dapat  mempengaruhi pertumbuhan dan produksi tanaman. Hal ini merupakan  tantangan  bagi  produsen  bahan tanam karet kedepannya.
Perkembangan  kemajuan  dibidang bioteknologi kultur jaringan merupakan suatu peluang  bagi  penyedia  bahan  tanam  karet untuk meningkatkan mutu bahan tanam yang d i h a s i l k a n .   M e l a l u i   k u l t u r   j a r i n g a n penyediaan bahan tanam karet secara vegetatif dapat  dilakukan  secara  massal  dan  seragam dalam  waktu  yang  cepat  serta  kualitas  bibit yang  lebih  terjamin.  Dalam  artikel  ini  akan dijelaskan  perkembangan  teknologi  dan potensi pemanfaatan kultur jaringan tanaman karet  dalam  upaya  penyiapan  bibit  karet unggul secara cepat dan massal.

## Perbanyakan Vegetatif Bibit Karet
Berbagai  metode  perbanyakan  bahan tanam  dapat  diaplikasikan  pada  penyediaan bibit  karet,  namun  yang  diharapkan  adalah perbanyakan  secara  vegetatif.  Hal  ini disebabkan  karena  tanaman  karet  memiliki heterozigositas  yang  tinggi  sehingga p e r b a n ya k a n   s e c a r a   g e n e r a t i f   a k a n menghasilkan tanaman yang sangat beragam. Sedangkan  untuk  perkebunan  karet  yang diharapkan  adalah  tanaman  yang  seragam s e c a r a   ge n e t i k   s e h i n g g a   d i p e r l u k a n perbanyakan  secara  vegetatif.  Pemanfaatan teknik  okulasi  telah  sukses  digunakan  untuk penyiapan  bahan  tanam  karet  dalam  skala kecil.  Namun  untuk  memenuhi  kebutuhan skala  besar  masih  menghadapi  kendala, sehingga  teknologi  kultur  jaringan  sangat diperlukan.
Secara  genetik  tidak  terdapat  perbedaan pada  bibit  yang  diperbanyak  secara  vegetatif dengan  berbagai  metode  yang  berbeda  baik melalui  okulasi,  stek,  sambung  cangkok, maupun melalui kultur jaringan. Namun pada
perbanyakan  bibit  menggunakan  okulasi terdapat  pengaruh  batang  bawah  terhadap fisiologis  batang  atas  yang  akan  menentukan genetik  dari  bibit  yang  dihasilkan.  Beberapa penelitian  menunjukkan  bahwa  pengaruh tersebut  terjadi  akibat  adanya  perbedaan tingkat kompatibilitas antara batang atas dan batang  bawah  yang  dapat  mempengaruhi keberhasilan okulasi, pertumbuhan bibit hasil okulasi  serta  pertumbuhan  dan  produksi tanaman di lapangan (Goncalves dan Martin 2002; Cardinal et al ., 2007 ; Gireesh et al ., 2017;
dan  Yao et  al .,  2017).  Penggunaan teknik perbanyakan bibit karet dengan kultur jaringan dapat  mengatasi  permasalahan  tersebut. Kongsawadworakul et  al .  (2009)  menyatakan bahwa  bibit  asal  kultur  jaringan  memiliki toleransi yang lebih baik terhadap kering alur sadap akibat berkurangnya masalah fisiologis yang  terkait  dengan  inkompatibilitas  batang bawah  dan  batang  atas.  Tabel  1  menunjukan perbedaan karakteristik bibit karet asal okulasi dengan asal kultur jaringan.

## Perkembangan  Kemajuan  Kultur  Jaringan Tanaman Karet
Studi kultur jaringan tanaman karet mulai dilaporkan pada tahun 80-an. Berbagai bagian organ  tanaman  dilaporkan  telah  digunakan sebagai  sumber  eksplan  untuk  induksi embryogenesis  somatik  diantaranya  adalah anther  (Wang et  al .,  1980;  Wan et  al.. 1982;
Tahardi,  1998;  Jayasree et  al .,  2003),  dinding integumen dalam (Carron dan Enjarlic, 1985; Montoro et al ., 2004), akar (Zhou et al ., 2010), kotiledon  (Tiandai et  al .,  2005;  Yuwei,  2011; Dickson et  al .,  2011),  ovul  (Jayashree et  al ., 2011),  serta  nodus,  tunas  aksilar  dan  apikal (Mayati  dan  Jamnah,  2014).  Setiap  jenis eksplan  dilaporkan  memberikan  respon  yang
berbeda,  dan  diantara  semua  jenis  ekplan tersebut,  eksplan  anther  dan  dinding integumen memberikan respon yang lebih baik dalam  hal  keberhasilan  menginduksi  kalus embriogenik dan embrio somatik (Mignon dan Werbrouck,  2018).  Hal  ini  kemungkinan disebabkan  karena  kedua  organ  yang digunakan sebagai sumber eksplan berasal dari jaringan  muda  dan  secara  ontogeni  tingkat juvenilitasnya  sangat  tinggi  sehingga  dapat meningkatkan kualitas juvenilitas planlet yang dihasilkan (Lardet et al ., 2009; Monteuuis et al ., 2016).  Selanjutnya  kedua  sumber  eksplan t e r s e b u t   s a a t   i n i   d i g u n a k a n   p a d a pengembangan  embriogenesis  somatik  pada berbagai  klon  karet  di  berbagai  Lembaga penelitian  yang  melakukan  kegiatan  kultur jaringan tanaman karet.
Salah  satu  tantangan  dalam  perbanyakan bahan  tanam  melalui  kultur  jaringan  adalah peluang  terjadinya  perubahan  genetik  pada planlet  yang  dihasilkan.  Variasi  somaklonal tersebut  dapat  bernilai  positif   apabila perbanyakan  bertujuan  untuk  mendapatkan tanaman dengan variasi genetik baru. Namun akan bernilai negatif  apabila bertujuan untuk perbanyakan tanaman yang seragam, sehingga perlu  dilakukan  pengujian  kestabilan  genetik planlet yang dihasilkan. Berbagai studi analisis variasi  somaklonal  telah  dikembangkan menggunakan  teknik  molekuler  seperti RAPD, SSR, AFLP dan RFLP, dan beberapa primer  telah  berhasil  mengidentifikasi genotipe  tanaman  (Meszaros et  al .,  2007; Minano et  al .,  2009;  Srichuay  &  Te-chato, 2014).  Evaluasi  stabilitas  genetik  melalui analisis tingkat ploidi dan jumlah kromosom diketahui bahwa tidak terjadi perubahan ploidi dan jumlah kromosom, dimana kalus, embrio, dan planlet karet yang diinduksi dari eksplan anther memiliki ploidi dan jumlah kromosom yang  sama  (diploid=2n=36)  dengan  pohon induk (Srichuay & Te-chato, 2015; Wang et al ., 2017).  Variasi  genetik  lokus  EST-SSR ditemukan  pada  planlet  karet,  namun persentase  variasi  masih  tergolong  rendah, yaitu  <2,61%,  sehingga  tidak  berpengaruh
terhadap fenotipe (Srichuai & Te-chato, 2015; Huang et al ., 2017).
Berbagai  teknik in  vitro yang  sudah dikembangkan  untuk  perbanyakan  bahan tanam  karet  melalui  kultur  jaringan  adalah metode  embriogenesis  somatik  (ES)  dan organogenesis  melalui  induksi  tunas  aksilar melalui microcutting .  Melalui  pendekatan metode ES permasalahan yang terkait dengan p e n y e d i a a n   e n t r e s   b e r m u t u   d a n inkompatibilitas  dalam  okulasi  dapat  diatasi. Mignon  dan  Werbrouck  (2018)  menyatakan bahwa  embriogenesis  somatik  merupakan teknologi kunci untuk penyiapan bahan tanam karet  dimasa  depan.  Bahan  tanam  yang dihasilkan  dari  ES  disebut  juga  dengan self- rooting  juvenile  clones karena  memiliki perakaran  sendiri  sehingga  terbebas  dari inkompatibilitas  dengan  batang  bawah  serta memiliki  tingkat  juvenilitas  yang  tinggi sehingga memliki pertumbuhan dan produksi yang  lebih  baik.  Berdasarkan  analisis transkriptom  gen-gen  yang  terlibat  dalam mekanisme produksi lateks melalui sekuensing metode  Ilumina  terlihat  bahwa  terdapat peningkatan  ekspresi  gen-gen  regenerasi  dan durasi aliran lateks antara pada tanaman asal ES  dibandingkan  dengan  tanaman  yang diperbanyak secara okulasi (Li et al ., 2016).
Secara  umum  perbanyakan  tanaman melalui  kultur  jaringan  dilakukan  hanya melalui  metode  embryogenesis  somatik  atau organogenesis  tergantung  jenis  tanamannya. Namun  pada  tanaman  karet,  perbanyakan melalui  kultur  jaringan  menggunakan penggabungan kedua metode tersebut. Hal ini dilakukan karena tingkat keberhasilan induksi embrio  pada  eksplan  tanaman  karet  baik secara langsung ( direct ) maupun tidak langsung melalui  pengkalusan  ( indirect )  masih mengalami  keterbatasan  dalam  hal  jumlah embrio  yang  dihasilkan.  Hal  ini  menjadikan embrio  yang  terbentuk,  dijadikan  sebagai eksplan  lanjutan  untuk  menginduksi  tunas aksilar melalui proses organogenesis. Metode tersebut  dilaporkan  sudah  sukses  digunakan dalam  produksi  bibit  karet  kultur  jaringan
secara massal (Masson dan Monteuuis, 2016; Maene et  al., 2020). Gambar 1 menunjukkan skema  tahapan  penyiapan  bibit  karet  secara
kultur jaringan mulai dari penyiapan eksplan sampai bibit ditanam dilapangan.

## Kendala  Dalam  Penyiapan  Bibit  Karet Melalui Kultur Jaringan
Perbanyakan  massal  bibit  karet  secara kultur  jaringan  masih  menghadapi  berbagai kendala baik terkait dengan proses penyiapan planlet  di  laboratorium  maupun  aklimatisasi di  rumah  kaca  dan  lapangan.  Keberhasilan induksi  embryogenesis  somatik  sangat ditentukan  oleh  berbagai  faktor  seperti  jenis eksplan  dan  klon  yang  digunakan,  jenis  dan komposisi  media  serta  kondisi  lingkungan kultur.  Keberhasilan  proses  embryogenesis somatik  masih  terbatas  pada  klon-klon tertentu  seperti  PB  260,  RRIM  600,  PB  330, BPM 24, dan IRCA 109. Permasalahan yang sering muncul adalah terjadinya browning pada eksplan,  kalus  dan  embrio  yang  terbentuk, abnormalitas  pada  embrio  yang  dihasilkan (pertumbuhan  embrio  tidak  ideal)  serta perbedaan respon setiap klon pada media dan metode yang digunakan. Hal ini sangat terkait
dengan perbedaan genetik dari masing-masing klon  yang  akan  mempengaruhi  fisiologi  dan aktivitas  metabolisme  dari  klon  tersebut. Permasalahan  perbedaan  respon  klon mengakibatkan  kultur  jaringan  baru  dapat diterapkan pada klon-klon tertentu dan tidak semua  klon  dapat  diperbanyak  secara  kultur jaringan  sehingga  diperlukan  pengembangan metode  lebih  lanjut  pada  klon-klon  tersebut. Hal  ini  mengakibatkan  kemajuan  kultur jaringan  tanaman  karet  tidak  semaju  pada tanaman lainnya.
Permasalahan utama lainnya adalah terkait proses  aklimatisasi  yang  merupakan  tahapan kritis penentu keberhasilan perbanyakan bibit karet secara kultur jaringan. Optimasi kondisi lingkungan  dengan  cara  pengaturan  kondisi suhu,  kelembapan,  dan  intensitas  cahaya merupakan  hal  utama  yang  perlu  dilakukan agar kemampuan bertahan hidup planlet saat dipindah dari lingkungan in vitro ke lingkungan

## Potensi pemanfaatan teknologi kultur jaringan dalam penyiapan bahan tanam karet unggul
Kondisi aklimatisasi ini sangat penting bagi tahapan  aklimatisasi  tanaman  karet  untuk daerah  tropis  seperti  di  Indonesia.  Penelitian menunjukkan  bahwa  kemampuan  bertahan hidup planlet karet saat aklimatisasi di rumah kaca  pada  kondisi  iklim  yang  sudah  diatur pada  kelembapan  berkisar  73,3%–83,8% (Sumaryono et  al .,  2012;  Sinta et  al., 2013; Oktavia et  al. ,  2020).  Namun  pada  kondisi subtropis,  keberhasilan  aklimatisasi  planlet karet  mencapai  90%,  lebih  tinggi  dibanding pada iklim tropis (Le Conte dan Carron, 1988). Hal  ini  diduga  karena  pengaturan  kondisi agroklimat lingkungan tumbuh (rumah kaca) seperti  tingkat  kelembapan  dan  suhu  yang lebih baik dan sesuai dengan planlet karet serta minimnya  serangan  penyakit,  baik  penyakit gugur daun maupun penyakit akar dan batang pada daerah subtropis.
Kendala  lain  yang  sering  dialami  adalah pada  saat  tanaman  harus  dipindah  ke lapangan.  Kondisi  perubahan  iklim  dan lingkungan  dapat  menjadi  ancaman  bagi pertumbuhan  planlet.  Pada  kondisi  iklim tropis  seperti  di  Indonesia  kondisi  suhu  dan k e l e m b a p a n   ya n g   t i n g g i   b e r p o t e n s i meningkatkan  terjadinya  serangan  penyakit gugur  daun  ( Pestalotiopsis,  Corynespora, Colletotrichum ,  dan Oidium ),  mati  pucuk, kanker batang, serta jamur akar putih. Potensi serangan  penyakit  tersebut  sangat  tinggi, karena adanya penyebaran spora patogen yang terjadi  melalui  udara,  air,  dan  media  tanah yang  digunakan.  Hal  ini  menuntut  perlunya perhatian  yang  intensif   pada  pemeliharaan dan  perlindungan  tanaman.  Gambar  2 menunjukkan  kondisi  aklimatisasi  planlet karet di rumah kaca dan pembibitan ( nursery ).
in  vivo dapat  dipertahankan.  Tabel  2 menunjukkan  kondisi  optimum  rumah  kaca
pada  saat  aklimatisasi  planlet  tanaman  karet (Lavanya et al ., 2009; Oktavia et al ., 2020).
–
,

## Performa Bibit Karet Asal Kultur Jaringan di Pembibitan dan Lapangan
Secara  prinsip  performa  bibit  karet  asal kultur  jaringan  sama  dengan  performa  bibit asal  stek  atau  biji  ( seedling ),  yaitu  tanaman tumbuh lurus dan memiliki perakaran sendiri ( self  rooted-plant ). Hal ini berbeda dengan bibit k a r e t   a s a l   o k u l a s i   y a n g   m e m i l i k i persambungan  batang  atas  dengan  batang bawah seperti yang terlihat pada Gambar 3.
A p a b i l a   d i p e r h a t i k a n   d a r i   s i s t e m perakaran, perkembangan perakaran bibit asal
kultur  cukup  bagus  baik  pada  saat  selesai tahapan  aklimatisasi  maupun  pada  saat  bibit siap ditanam di lapangan. Diharapkan dengan sistem  perakaran  yang  kuat  tanaman  dapat menyerap  nutrisi  dengan  lebih  baik  sehingga pertumbuhan dan produksi dapat meningkat.
Berdasarkan penelitian di lapangan terlihat bahwa  sistem  perakaran  tanaman  asal  bibit kultur  jaringan  berkembang  dengan  baik, mengikuti  pertumbuhan  sistem  perakaran tanaman  asal  bibit  okulasi  (Gambar  4). Namun  demikian  masih  terdapat  kelemahan
Potensi pemanfaatan teknologi kultur jaringan dalam penyiapan bahan tanam karet unggul
terutama  terkait  dengan  perkembangan  akar tunggang yang tidak sempurna (akar tunggang semu),  sehingga  beresiko  ditananam  pada daerah  berangin.  Penggunaan  bahan  tanam k a r e t   a s a l   k u l t u r   j a r i n g a n   m a m p u meningkatkan  pertumbuhan  dan  produksi tanaman yang mencapai 30 – 36% (Maene et al . ,  2020;  Mayati et  al .,  2018;  2021).  Namun terkait  dengan  permasalahan  serangan penyakit jamur akar putih pada tanaman karet,
belum  terlihat  perbedaan  ketahanan  bahan tanam  asal  kultur  jaringan  dengan  okulasi. Berdasarkan  hasil  tersebut  diketahui  bahwa perbanyakan bibit karet unggul melalui kultur jaringan  baik  sebagai  tanaman  utuh  dengan sistem  perakaran  sendiri  ( self   rooted-plant ) maupun  sebagai  sumber  batang  bawah ( rootstock ) memiliki prospek yang baik di masa depan.

## Kesimpulan
1. Teknologi  kultur  jaringan  baik  melalui somatic  embr yogenesis (SE)  maupun microcutting memiliki  prospek  yang  bagus dalam  penyiapan  bahan  tanam  karet unggul secara cepat, seragam, dan massal.
2. Bibit karet asal SE memiliki pertumbuhan dan  produksi  30%–36%  lebih  tinggi dibanding  tanaman  asal  okulasi  karena tidak adanya pengaruh kompatibilitas dari batang  bawah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan dan menurunkan produksi.
3. Terdapat  beberapa  kendala  yang  masih dihadapi  dalam  menghasilkan  bibit  karet asal kultur jaringan yaitu respon klon yang berbeda  terhadap  setiap  media  sehingga induksi  kalus  dan  embryogenesis  hanya
berhasil  pada  klon  tertentu  dan  jumlah embrio  yang  masih  terbatas  dihasilkan, tingkat  keberhasilan  aklimatisasi  yang m a s i h   t e r b a t a s   s e r t a   t i d a k berkembangannya  akar  tunggang  dengan baik (akar tunggang semu).

## Daftar Pustaka
Cardinal, A.B.B., Goncalves, P.S., & Martins, A.L.M. (2002). Stock-scion interactions on growth and rubber yield of Hevea brasiliensis. Scientia Agricola , 64(3): 235-240.
Carron,  M.P.,  &  Enjarlic,  F.  (1985).  Somatic embryogenesis  from  inner  integument  of the  seed  of Hevea  brassiliensis Muell.  Arg.
CR. Academia Science, 300: 653-658.
di lapangan
Dickson, I., Okere, A., Elizabeth, J., Mary, O., Olatunde, F., & Abiodun, S. (2011). In-vitro culture  of Hevea  brasiliensis (rubber  tree) Embryo. Journal of  Plant Breeding and Crop Science , 3(9): 185-189.
Gireesh, T., Mercykutty, V.C., & Mydin, K.K. (2017).  Intraclonal  Variability  in  Growth and Yield of Hevea brasiliensis : Role of  Age of  Source Bush Nurseries. Paper presented at  the  International  Rubber  Confrence. Ivory Coast.
Goncalves,  P.S.  &  Martins,  A.L.M.  (2002).
Combining  ability  effect  of   clonal rootstocks  and  scions  in  rubber  trees (Hevea). Crop  Breeding  and  Applied Biotechnology , 2(3): 445-452.
Jayasree,  P.K.,  Asohan,  M.P.,  Sobha,  S.,
Ammal,  S.,  Rekha,  K.,  Kala,  R.G., Jayasree, R., & Thulasepdharan, A. (2003). Somatic  embr yogenesis  and  plant regeneration  from  immature  anthers  of
H e v e a   b ra s s i l i e n s i s ( M u e l l . )   A r g X . h t t p / / w w w. i a s . a c . i n / c u r r s c i / m a y 10/articles 22.htm.
Jayashree, R., Rekha, K., Sushamakumari, S., Sobha,  S.,  &  Thulaseedharan,  A.  (2011).
Unfertilized ovule - a potential explant for somatic embryogenesis in Hevea brasiliensis. Paper presented at the IRRDB Inter Rubber Conf. 15 – 16 December 2011. Chiang Mai, Thailand.
Kongsawadworakul,  P.,  Viboonjun,  U., Romruensukharom,  P.,  Chantuma,  P., Ruderman,  S.  &  Chrestin,  H.  (2009).  The leaf, inner bark and latex cyanide potential of Hevea  brasiliensis: evidence  for involvement  of   cyanogenic  glucosides  in rubber  yield. Phytochemistry ,  70(6): 730–739.    10.1016/j.phytochem.  2009.03. 020.
Lardet, L., Dessailly, F., Carron, M.P., Rio, M., Ferrière,  N.,  &  Montoro,  P.  (2009). Secondary somatic embryogenesis in Hevea brasiliensis (Müll.  Arg.):  An  alternative p r o c e s s   f o r   l o n g - t e r m   s o m a t i c embryogenesis. Journal  of   Rubber  Research, 12(4): 215-227.
Lavanya, M., Venkateshwarlu, B., & Devi, B.P. ( 2 0 0 9 ) .   A c c l i m a t i z a t i o n   o f   n e e m microshoots  adaptable  to  semi-sterile conditions. Indian  Journal  of   Biotechnology , 8: 218–222.
Leconte.  A.,  &  Carron,  M.P.  (1988). Acclimatization  of   microcuttings  from rubber (Hevea  brasiliensis) :  Problem  and perspective.  In  J.L.  Jacob  &  J.C.  Prevot (eds).  Compte-Rendu  du  Colloque Exploitation-Physiologie  et  Amelioration de  Hevea.  Colloque  Hevea  IRRDB. IRCA/CIRAD. Paris. 2 Novembre 1988. p 499–503.
Li, H.L., Guo, D., Zhu, J.H., Wang, Y., Chen, X.T.,  &  Peng,  S.Q.  (2016).  Comparative Transcriptome  Analysis  of   Latex  Reveals Molecular  Mechanisms  Underlying Increased Rubber Yield in Hevea brasiliensis Self-Rooting  Juvenile  Clones. Frontiers  in P l a n t   S c i e n c e , 7 :   1 2 0 4 - 1 2 0 4 .   d o i : 10.3389/fpls.2016.01204.
Maene,  L.,  Tojal,  C.,  Vandenbussche,  F.,  & Ruth, J. (2020). Hevea Tissue Culture Plant Material: Advancement and Benefits. Paper presented at the Global Rubber Cinfrence, Bangkok, 12–13 November 2020.
Mayati,  N.C.H.,  &  Jamnah,  A.R.  (2014).
Induction  of   shoots  and  roots  from vegetative  tissue  culture Hevea  brasiliensis RRIM  2000. Journal  of   Tropical  Plant Physiology, 6:1-9.
Mayati,  N.C.H.,  &  Ahmad,  A.R.  (2018). Preliminary results of  latex yield profile and growth  performance  of   tissue  culture derived Hevea  brasiliensis trees. Journal  of tropical plant physiology, 10(1): 46-55.
Mayati,  N.C.H.,  Izilawati,  M.,  &  Hadafi, A.S.I. (2021). Growth rates of  tissue culture Hevea  brasiliensis (rubber)  trees. Trans. Malaysian Soc. Plant Physiology, 28: 67-70. Meszaros, K., Karsai, I., Kuti, C., Banyai, J., Lang, L., & Bedo, Z. (2007). Efficiency of different  marker  systems  for  genotype fingerprinting  and  for  genetic  diversity studies in barley ( Hordeum vulgare L.). South African Journal of  Botany , 73: 43-48.

## Potensi pemanfaatan teknologi kultur jaringan dalam penyiapan bahan tanam karet unggul
Minano,  H.  S.,  Gonzalez-Benito,  M.  E.,  & M a r t i n ,   C .   ( 2 0 0 9 ) .   M o l e c u l a r c h a r a c t e r i z a t i o n   a n d   a n a ly s i s   o f somaclonal  variation  in  chrysanthemum cultivars  using  RAPD  markers. Scientia Horticulturae, 122: 238–243.
Montoro,P.,  Teinseree,  N.,  Rattana,  W., Kongsawadworakul,  P.,  &  Michaux- Ferriere,  N.  (2004).  Effect  of   exogenous calcium  on  Agrobacterium  tumefaciens- mediated gene transfer in Hevea brassiliensis (rubber tree) friable calli. Plant Cell Report , 13(8): 851–855.
Monteuuis, O. (2016). Micropropagation and production  of   forest  trees.  In:  Vegetative propagation  of   forest  trees.  Part  1: Development  and  trends  in  vegetative propagation of  forest trees, Eds Y. S. Park, J. M.  Bonga,  H.  K.  Moon,  NIFOS,  Korea, 32–55.
Mosson, A. & Monteuuis, O. (2017). Rubber tree  clonal  plantations:  grafted  vs  self- rooted  plant  material. Bois  Et  Forêts  Des Tropiques , 332(2): 57–68 Mignon, E.,   & Werbrouck, S. (2018). Somatic Embryogenesis as Key Technology for Shaping the Rubber Tree of  the Future. Frontiers Plant Science, 9(1804):  1–9.  doi:  10.3389/  fpls.
2018. 01804
Oktavia,  F.,  Stevanus,  C.T.,  &  Dessaily,  F.
(2020).  Optimasi  kondisi  suhu  dan kelembapan  serta  pengaruh  media  tanam terhadap  keberhasilan  aklimatisasi tanaman karet asal embriogenesis somatik. Jurnal Penelitian Karet , 38(1): 1–15.
Sinta,  M.M.,Nurhaimi-Haris,  &  Sumaryono.
(2013).  Pengaruh  periode  pra-kondisi  dan penutupan  sungkup  terhadap  daya  hidup planlet  karet. Menara  Perkebunan, 81(1): 16–22.
Sumaryono, Sinta, M.M., & Nurhaimi-Haris.
(2012). Daya hidup planlet karet asal in vitro microcutting pada  berbagai  periode penutupan sungkup plastik dan komposisi media  tumbuh. Menara  Perkebunan ,  80(1):
25–31.
Srichuay, W., & Te-chato, S. (2014). Analysis of   somaclonal  variation  from  In  Vitro- derived  plantlets  of   rubber  tree (Hevea brasiliensis Muell.  Arg.)  by  random amplified  polymorphic  DNA  (RAPD). Princess  of   Naradhiwas  University  Journal 6:
117–124
Tahardi,  J.S.  (1998).  Plant  regeneration  in
H e v e a   b r a s i l i e n s i s v i a   s o m a t i c embryogenesis. Menara  Perkebunan, 66(1): 1–8.
Tiandai,  H.,  L.  Weiguo,  H.  Huasun,  &  Zhe. (2005).  Somatic  embryogenesis  and  plant regeneration  from  cotyledon  explants  of Hevea  brasiliensis .  Paper  presented  at International  Natural  Rubber  Confrence, India.
Wan, A.R., Gandhimathi, H., Rohani, O., & Paranjothy K. (1982). Recent development in  tissue  culture  of   Hevea.  COSTED. Singapore.
Wang, Z., Zeng, X., Chen, C., Wu, H., Li, Q., &  Fan,  G.  (1980).  Induction  of   rubber plantlets from anther of Hevea brasiliensis in vitro. China Journal Tropical Crops , 1: 25–26. Huang,  T.D.,  Huang,  H.S.  &  Wang,  T.D. (2017).  Origin  of   Secondary  Somatic Embryos  and  Genetic  Stability  of   the Regenerated  Plants  in Hevea  brasiliensis.
Journal  of   Rubber  Research ,  20  :  101–116 https://doi.org/ 10.1007/BF03449145 Yuwei, H. (2011). Propagation and Plantation of   self-rooting  juvenile  clones  in  China. Paper presented at Breeding Seminar, 12-14 September 2011. Koh Samui, Thailand.
Zhou,  Q.N.,  Jiang,  Z.H.,  Huang,  T.D.,  Li, W.G.,  Sun,  A.H.,  Dai,  X.M.,  &  Li,  Z. (2010).  Plant  regeneration  via  somatic embryogenesis from root explants of Hevea brasiliensis.  African  Journal  of   Biotechnology, 9 ( 4 8 ) :   8 1 6 8 - 8 1 7 3 .   D O I : 10.5897/AJB10.969.